(57)【要約】  少なくとも２つの異なるマーカーを標的化する多特異的アンタゴニストを用いる、炎症性疾患および免疫調節性疾患の免疫治療のための方法および組成物が開示される。異なる標的としては、（ｉ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクターと、（ｉｉ）凝固因子と、（ｉｉｉ）炎症性障害または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的、または感染性疾患と特異的に関連する標的が挙げられ、この（ｉｉｉ）の群に含まれる標的は、免疫系の炎症促進性エフェクターでも、凝固因子でもない。多特異的アンタゴニストが、炎症性障害または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、または感染性疾患と関連する標的と特異的に反応する場合、これはまた、免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクター、または少なくとも１つの凝固因子と特異的に結合する。従って、多特異的アンタゴニストは、治療されている疾患細胞または状態に関連する少なくとも１つの結合特異性、ならびに免疫系の成分、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中球、単球およびマクロファージのレセプターまたは抗原、および樹状細胞、凝固の調節因子、または炎症促進性サイトカインに対する少なくとも１つの特異性を含有する。多特異的アンタゴニストは、先天的な免疫系の炎症促進性エフェクターまたは凝固因子によって生成されるか悪化されるか、そうでなければそれらに関与する、種々の疾患の治療において用いられる。このような疾患としてはさらに詳細には、急性および慢性の炎症性障害、自己免疫疾患、巨細胞性動脈炎、敗血症、敗血性ショック、血液凝固障害（汎発性血管内凝固を含む）、神経障害、移植片対宿主病、感染性疾患、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、移植片拒絶、喘息、悪液質、心筋虚血、およびアテローム性動脈硬化が挙げられる。他の疾患もこれらの治療に反応性であって、これには、がんおよび病的血管新生を伴う状態が挙げられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストであって、該標的が、（Ａ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクターと、（Ｂ）凝固因子と、（Ｃ）補体因子および補体調節タンパク質と、（Ｄ）炎症性障害または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的であって、後者の標的が（Ａ）でも、（Ｂ）でも、（Ｃ）でもない標的とからなる群より選択され、
（ｉ）前記標的の少なくとも１つが（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）であり、
（ｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、単一の多特異的抗体を含む場合は、ＣＤ７４が前記アンタゴニストの標的として排除され、そして
（ｉｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体の１つがＢ細胞抗原を標的化し、かつもう一方の抗体がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除され、前記抗体の１つがＣＤ２０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせも排除される、多特異的アンタゴニスト。
【請求項２】
２つの別個の抗体の組み合わせである、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３】
多特異的抗体である、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４】
融合タンパク質である、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項５】
前記２つの異なる標的の１つが標的（Ｄ）である、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項６】
前記アンタゴニストが、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の標的の群からの少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項７】
前記アンタゴニストがさらに、標的（Ｄ）と特異的に反応する、請求項６に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項８】
前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体のうちの１つがＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３またはＣＤ８０を標的化し、もう一方の抗体が補体因子を標的化する組み合わせが排除される、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項９】
前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体のうちの１つがＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３またはＣＤ８０を標的化し、もう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせが排除される、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１０】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターサイトカインと特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１１】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターケモカインと特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１２】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターレセプターと特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１３】
前記アンタゴニストが、炎症促進性エフェクターレセプターを含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１４】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの凝固因子と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１５】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの補体因子と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１６】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの補体調節タンパク質と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１７】
前記標的のうちの１つが、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂおよびＣ５ａからなる群より選択される補体因子であり、前記アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせである場合、前記抗体のもう一方がＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３またはＣＤ８０を標的化する標的の組み合わせが排除される、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１８】
前記アンタゴニストが、先天的免疫系の２つの異なる炎症促進性エフェクターと特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項１９】
前記アンタゴニストが、２つの異なる凝固因子と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２０】
前記アンタゴニストが、２つの異なる補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２１】
前記アンタゴニストが、先天的免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクターと、少なくとも１つの凝固因子と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２２】
前記アンタゴニストが、先天的免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクターと、少なくとも１つの補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２３】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの凝固因子と、少なくとも１つの補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２４】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの可溶性レセプターを含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２５】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの抗体に融合された少なくとも１つの可溶性レセプターを含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２６】
前記アンタゴニストが、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターレセプターの細胞外ドメインを含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２７】
前記アンタゴニストが、炎症促進性エフェクターレセプターと反応性である少なくとも１つの分子を含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２８】
前記分子が、前記炎症促進性エフェクターレセプターの天然のアンタゴニスト、または前記レセプターと特異的に相互作用する前記アンタゴニストのフラグメントもしくは変異体である、請求項２７に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項２９】
樹状細胞、顆粒球、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、血小板、または内皮細胞を標的化する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３０】
適応的免疫系の抗原またはレセプターを標的化する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３１】
がん細胞レセプターまたはがん関連抗原を標的化する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３２】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記炎症促進性エフェクターと特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３３】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記凝固因子と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３４】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３５】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記凝固因子と特異的に反応し、少なくとも１つのアームが前記炎症促進性エフェクターと反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３６】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応し、少なくとも１つのアームが前記炎症促進性エフェクターと反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３７】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記凝固因子と特異的に反応し、少なくとも１つのアームが先天的免疫系の炎症促進性エフェクターでも凝固因子でもない前記標的と反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３８】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが前記補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応し、少なくとも１つのアームが前記凝固因子と反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項３９】
前記アンタゴニストが、少なくとも二重特異的である抗体を含み、前記抗体の少なくとも１つのアームが少なくとも１つの標的（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）と特異的に反応し、少なくとも１つのアームが標的（Ｄ）と反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４０】
前記アンタゴニストが、単一の活性成分を含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４１】
先天的免疫系の成分に作用する二次的な治療剤をさらに含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４２】
凝固に作用する二次的な治療剤をさらに含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４３】
適応免疫系の成分に作用する二次的な治療剤をさらに含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４４】
（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）の標的の２つ以上のエピトープと特異的に反応する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４５】
前記少なくとも１つの他の標的が、感染性疾患、急性呼吸窮迫症候群、敗血症または敗血性ショック、移植片対宿主病または移植片拒絶、アテローム性動脈硬化症、喘息、肉芽腫性疾患、神経障害、悪液質、血液凝固障害、座瘡、巨細胞性動脈炎または心筋虚血に関連する、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項４６】
炎症性障害または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、または感染性疾患から選択される状態を治療する方法であって、請求項１に記載の多特異的アンタゴニストの治療上有効な量を、このような状態を有すると診断されている患者に対して投与する工程を含む方法。
【請求項４７】
前記状態が自己免疫疾患でない、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記状態が自己免疫疾患である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記状態がクラスＩＩＩの自己免疫疾患である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記状態が、敗血症または敗血性ショック、感染性疾患、神経障害、移植片対宿主病または移植片拒絶、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、喘息、アテローム性動脈硬化症、悪液質、病的血管新生、がん、血液凝固障害、座瘡、巨細胞性動脈炎または心筋虚血である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記アンタゴニストが、診断物質／検出物質を含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項５２】
前記診断物質／検出物質が、診断用放射性核種、造影剤、蛍光標識および光活性物質からなる群より選択される、請求項５１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項５３】
前記アンタゴニストが、治療剤を含む免疫コンジュゲートである、請求項１に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項５４】
前記治療剤が、放射性核種、ホウ素、免疫調節物質、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素インヒビター、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、細胞毒性剤、抗体、血管新生インヒビター、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項５３に記載の多特異的アンタゴニスト。
【請求項５５】
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患から選択される状態を診断または検出する方法であって、請求項５７に記載の多特異的アンタゴニストの診断上有効な量を、このような状態を有すると疑われている患者に対して投与する工程と；標的部位で多特異的アンタゴニストを融合させる工程と；多特異的抗体が循環して血流から除去されることを待つか、またはクリアリング剤を用いる工程と；検出手段を用いてこのような部位で、前記標識された多特異的アンタゴニストの上昇したレベルを検出することによって、前記標識された多特異的アンタゴニストの付着の部位を位置決めする工程とを含む方法。
【請求項５６】
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患から選択される状態を診断または検出する方法であって、ハプテン結合部位を含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニストの診断上有効な量を、このような状態を有すると疑われている患者に対して投与する工程と；標的部位で多特異的アンタゴニストを融合させる工程と；多特異的抗体が循環して血流から除去されることを待つか、またはクリアリング剤を用いる工程と；診断物質／検出物質で標識されたハプテンを前記被験体に投与する工程と；前記多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に対して前記標識されたハプテンを結合させる工程と；検出手段を用いてこのような部位で、前記標識されたハプテンに結合された前記多特異的アンタゴニストの上昇したレベルを検出することによって、前記多特異的アンタゴニストの付着の部位を位置決めする工程とを含む方法。
【請求項５７】
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患から選択される状態を治療する方法であって、ハプテン結合部位を含む、請求項１に記載の多特異的アンタゴニストの治療上有効な量を、このような状態を有すると疑われている患者に対して投与する工程と；標的部位で多特異的アンタゴニストを融合させる工程と；多特異的抗体が循環して血流から除去されることを待つか、またはクリアリング剤を投与する工程と；治療剤を含むハプテンを前記被験体に投与する工程と；前記多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に対して前記ハプテンが前記治療剤とともに結合することを可能にする工程とを含む方法。
【請求項５８】
少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストの使用であって、前記標的が、（Ａ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクターと、（Ｂ）凝固因子と、（Ｃ）補体因子および補体調節タンパク質と、（Ｄ）炎症性障害または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的であって、前記後者の標的が（Ａ）でも、（Ｂ）でも、（Ｃ）でもない標的とからなる群から選択され、ここで（ｉ）前記標的の少なくとも１つが（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）であり、（ｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、単一の多特異的抗体を含む場合は、ＣＤ７４が前記アンタゴニストの標的として排除され、そして（ｉｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体の１つがＢ細胞抗原を標的化し、かつもう一方の抗体がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除され、前記抗体の１つがＣＤ２０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせも排除され、
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患である状態の治療のための医薬であって、前記医薬が前記多特異的アンタゴニストの治療上有効な量を含む医薬の製造における使用。
【請求項５９】
前記状態が自己免疫疾患ではない、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
前記状態が自己免疫疾患である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６１】
前記状態がクラスＩＩＩ自己免疫疾患である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６２】
前記状態が、敗血症または敗血性ショック、感染性疾患、神経障害、移植片対宿主病または移植片拒絶、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、喘息、アテローム性動脈硬化症、悪液質、病的血管新生、がん、血液凝固障害、座瘡、巨細胞性動脈炎または心筋虚血である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６３】
前記多特異的アンタゴニストが、治療剤を含む免疫コンジュゲートである、請求項５８に記載の使用。
【請求項６４】
前記治療剤が、放射性核種、ホウ素、免疫調節物質、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素インヒビター、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、細胞毒性剤、抗体、血管新生インヒビター、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
ハプテン結合部位を含み、少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストの使用であって、前記標的が、（Ａ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクターと、（Ｂ）凝固因子と、（Ｃ）補体因子および補体調節タンパク質と、（Ｄ）炎症性障害または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的であって、前記後者の標的が（Ａ）でも、（Ｂ）でもまたは（Ｃ）でもない標的とからなる群より選択され、ここで（ｉ）前記標的の少なくとも１つが（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）であり、（ｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、単一の多特異的抗体を含む場合は、ＣＤ７４が前記アンタゴニストの標的として排除され、そして（ｉｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体の１つがＢ細胞抗原を標的化し、かつもう一方の抗体がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除され、そして前記抗体の１つがＣＤ２０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせも排除され、
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患である状態の治療のための医薬であって、前記医薬が前記多特異的アンタゴニストの治療上有効な量を含む医薬の製造における使用。
【請求項６６】
前記多特異的アンタゴニストが、標的部位で融合することを可能にさせ；次いで、循環している多特異的抗体を血流から除去させるか、またはクリアリング剤を投与し；次いで、治療剤を含むハプテンを前記被験体に投与して、前記多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に対する結合を可能にさせる、請求項６３に記載の使用。
【請求項６７】
前記治療剤が、放射性核種、ホウ素、免疫調節物質、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素インヒビター、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、細胞毒性剤、抗体、血管新生インヒビター、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
前記状態が自己免疫疾患ではない、請求項６６に記載の使用。
【請求項６９】
前記状態が自己免疫疾患である、請求項６６に記載の使用。
【請求項７０】
前記状態がクラスＩＩＩ自己免疫疾患である、請求項６６に記載の使用。
【請求項７１】
前記状態が、敗血症または敗血性ショック、感染性疾患、神経障害、移植片対宿主病または移植片拒絶、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、喘息、アテローム性動脈硬化症、悪液質、病的血管新生、がん、血液凝固障害、座瘡、巨細胞性動脈炎または心筋虚血である、請求項６６に記載の使用。
【請求項７２】
少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストの使用であって、前記標的が、（Ａ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクターと、（Ｂ）凝固因子と、（Ｃ）補体因子および補体調節タンパク質と、（Ｄ）炎症性障害または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的であって、前記後者の標的が（Ａ）でも、（Ｂ）でも、（Ｃ）でもない標的とからなる群から選択され、ここで（ｉ）前記標的の少なくとも１つが（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）であり、（ｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、単一の多特異的抗体を含む場合は、ＣＤ７４が前記アンタゴニストの標的として排除され、そして（ｉｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体の１つがＢ細胞抗原を標的化し、かつもう一方の抗体がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除され、前記抗体の１つがＣＤ２０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせも排除され、
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、または感染性疾患である状態の検出のための物質であって、前記物質が診断／検出物質の診断上有効な量で標識されている物質の製造における使用。
【請求項７３】
前記診断／検出が、診断用放射性核種、造影剤、蛍光標識および光活性物質からなる群より選択される、請求項７２に記載の使用。
【請求項７４】
前記多特異的アンタゴニストが、標的部位で融合することを可能にさせ；次いで、循環している多特異的抗体を血流から除去させるか、またはクリアリング剤を投与し；次いで、前記標識された物質の上昇したレベルを、検出手段を用いて融合の部位で検出する、請求項７３に記載の使用。
【請求項７５】
ハプテン結合部位を含み、少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストの使用であって、前記標的が、（Ａ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクターと、（Ｂ）凝固因子と、（Ｃ）補体因子および補体調節タンパク質と、（Ｄ）炎症性障害または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的であって、前記後者の標的が（Ａ）でも、（Ｂ）でも、（Ｃ）でもない標的とからなる群から選択され、ここで（ｉ）前記標的の少なくとも１つが（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）であり、（ｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、単一の多特異的抗体を含む場合は、ＣＤ７４が前記アンタゴニストの標的として排除され、そして（ｉｉｉ）前記多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、前記抗体の１つがＢ細胞抗原を標的化し、もう一方の抗体がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除され、そして前記抗体の１つがＣＤ２０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせも排除され、
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、または感染性疾患である状態の検出のための物質であって、前記物質が前記多特異的アンタゴニストの診断上有効な量を含む物質の製造における使用。
【請求項７６】
前記多特異的アンタゴニストが、標的部位で融合することを可能にさせ；次いで、循環している多特異的抗体を血流から除去させるか、またはクリアリング剤を投与し；次いで、診断／検出物質で標識されたハプテンを前記被験体に投与して、前記多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に対する結合を可能し、次いで前記標識された多特異的アンタゴニストの上昇したレベルが、融合部位で検出手段によって検出される、請求項７５に記載の使用。
【請求項７７】
前記診断／検出物質が、診断用放射性核種、造影剤、蛍光標識、および光活性物質からなる群より選択される、請求項７６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年１２月８日に提出された米国仮特許出願第６０／６３４，０７６号の利点を請求する。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は一般に、少なくとも２つの異なるマーカーを標的化する多特異的アンタゴニストを用いる、炎症性疾患および免疫調節不全疾患の免疫療法のための方法および組成物に関する。このマーカーは、リンパ球、マクロファージ、単球または樹状細胞（ＤＣ）に対する抗原および／またはレセプターである。本発明は詳細には、細胞およびそれらのレセプターに結合して、これらの細胞およびそれらのレセプターによって生じるかもしくは悪化され、またはそうでなければそれに関与する種々の疾患の治療を果たすための特異的な抗体および抗体異種コンジュゲートを用いて、免疫標的細胞および免疫プロセシング細胞に対するレセプターを調節するための方法および組成物に関する。このような疾患としてはさらに詳細には、急性および慢性の炎症性障害、自己免疫疾患、敗血症および敗血性ショック、神経障害、移植片対宿主病、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、巨細胞性動脈炎、座瘡、汎発性血管内凝固（ＤＩＣ）、移植片拒絶、喘息、悪液質、心筋虚血、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられる。本方法および組成物はまた、病的血管新生およびがんを治療するのに有用である。本方法および組成物は、がんレセプターまたはがん関連抗原に関する二次治療剤を含み得る。方法および組成物はまた、この疾患の改良された診断／検出について記載される。
【背景技術】
【０００３】
免疫系は、先天的免疫系、および適応性または後天性の免疫系の両方を含む。多くの宿主細胞が、好中球、Ｔリンパ球およびＢリンパ球、マクロファージおよび単球、樹状細胞および形質細胞のような、先天性および適応性の免疫の過程に関与する。それらは、通常、協調して機能し、詳細には、先天性および外因性の有害物（ｎｏｘｉｅｎｔ）の認識および処理に寄与する特定の要因およびサイトカインの調節において互いに影響し、そしてこれらの系は、脊椎動物、哺乳動物およびヒト生物体の発達の数百万年にわたって進化してきた。
【０００４】
免疫療法の主要な目的は、悪性細胞または侵入する微生物のような先天性の有害物または外来の有害物に対して、患者の免疫系を開発または増強することである。この免疫系は、原発性の異常、例えば、がんおよび特定の自己免疫および免疫調節不全疾患に関してよりも、微生物のような外因性の有害物に対する認識および応答に関して、さらに研究されている。なぜなら、詳細には後者は、遺伝的成分および環境的成分の両方を有し得るからである。微生物、例えば、細菌、真菌、寄生生物およびウイルスに対する防御は、特定の生物体に対して先天性であって、免疫系は、これらの微生物の生化学的なパターンを認識して、その微生物に対する事前の曝露の必要なしにそれらを攻撃するように応答するようにプログラムされている。この先天的免疫系としては、直接の呑食および破壊によって侵入している微生物を根絶し得る、例えば、好中球、ナチュラルキラー細胞、および単球／マクロファージが挙げられる。
【０００５】
この先天性の免疫応答はしばしば、より特異的な適応性免疫系が特定の抗体およびＴ細胞を導くことができるまで侵入する外来の有害物を制御する、非特異的な応答と呼ばれる（Ｍｏｄｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  １９９９，３４０：１８３４−１８３５；Ｄａｓ，Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  ２０００；４；２９０−２９６を参照のこと）。非特異的な免疫応答は、リンパ系および食細胞を包含する。このリンパ系は、リンパ球およびマクロファージを含む。マクロファージは、外来の粒子を呑食し、殺傷しそして処理し得る。食細胞としては、好中球およびマクロファージが挙げられ、これはやはり、砕片を摂取し、分解して処理する、そして補体および抗体のレセプターを有する。要するに、先天的免疫系は、遺伝性の特徴のおかげで特定の抗原に対する防御のラインを提供する。
【０００６】
対照的に、適応性または後天性の免疫系は、高度に発達し、そしてその応答は極めて特異的である。これは、適応性の系と呼ばれる。なぜなら、病原体での感染に対する適応として固体の寿命の間に生じるからである。適応性の免疫は、ワクチン（抗原）に応答して、または抗体を投与することによって、人工的に獲得されてもよく、または感染によって自然に獲得され得る。後天性の免疫は、抗体が生成される場合に能動的であり得、または別の供給源から作成された外因性の抗体が注射される場合に、受動的であり得る。
【０００７】
適応性の免疫系は、所与の抗原に特異的な抗体を生成する。抗体が防御を提供する最も簡単でかつ最も直接的な方法は、それらに対する結合によるものであり、そしてそれによって、それらが感染するかまたは破壊し得る細胞に対する接近をブロックする。これは中和として既知である。しかし、抗体による結合は、細胞の外側で増殖する細菌の複製を停止させるには十分ではない。この場合、抗体の１つの役割は、食細胞が細菌を摂取して破壊することを可能にすることである。これは、オプソニン化として既知である。抗体の第三の機能は、補体として既知の血漿タンパク質の系を活性化することである。多くの場合、この適応性免疫系は、同じ病原体との再感染に対して一生にわたる防御免疫を付与する。なぜなら適応性免疫系は、それに対して提示された抗原の「記憶（ｍｅｍｏｒｙ）」を有するからである。
【０００８】
抗体媒介性免疫は、体液性免疫と呼ばれ、Ｂ細胞およびそれが産生する抗体によって調節される。細胞媒介性免疫はＴ細胞によって制御される。体液性および細胞媒介性免疫の両方とも、侵入する生物体から宿主を防御することに関与する。この相互作用によって、外来の生物体の有効な殺傷または制御が生じ得る。しかし、時には、この相互作用は、不安定であり得る。これらの場合には、疾患を生じ得る調節不全が存在する。時には、この疾患は、敗血性ショックおよび特定の自己免疫障害などを伴って、生命を脅かす。
【０００９】
Ｂリンパ球およびＴリンパ球は、特定の免疫応答の重要な成分である。Ｂ細胞は、適応性免疫を媒介する抗原特異的細胞のクローンを生じさせる抗原によって活性化される。ほとんどのクローンは抗体を分泌する形質細胞に分化するが、２〜３のクローンは、形質細胞に復帰する記憶細胞を形成する。その後の再感染の際、記憶細胞は、一次応答よりも短い期間で高レベルの抗体を生じる。形質細胞によって分泌される抗体は、免疫において複数の役割、例えば、外来物質を結合および中和すること、オプソニン（ＩｇＧ）として機能して食作用を生じること、いくつかの生物体の代謝および成長に直接影響すること、補体を活性化する抗原−抗体反応に関与すること、食作用および膜攻撃複合体を生じること、ならびに／またはＴ細胞および他のキラー細胞を活性化する抗原−抗体反応に関与することを果たし得る。
【００１０】
Ｔリンパ球は、ヘルパー細胞およびサプレッサー細胞の両方として機能する。ヘルパーＴ細胞は、抗原特異的なＢ細胞およびエフェクターＴ細胞が増殖および分化するように誘導する。サプレッサーＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞と相互作用して、免疫応答を妨げるかもしくは継続しているものを抑制するか、またはエフェクターＴ細胞を調節する。細胞傷害性Ｔ細胞は標的細胞に結合することによって抗原を破壊する。遅延型の過敏反応では、Ｔ細胞は、抗原を破壊しないが、マクロファージ、好中球および他の細胞を攻撃して、抗原を破壊して処分する。
【００１１】
Ｔ細胞は、細胞内病原体の存在を検出し得る。なぜなら感染した細胞は、病原体タンパク質由来のペプチドフラグメントをその表面に提示するからである。これらの外来のペプチドは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子と呼ばれる、特殊な宿主細胞糖タンパク質によって細胞表面に送達される。ＭＨＣ分子に対して結合した、そして細胞表面に提示された、小ペプチドフラグメントとしての抗原の認識は、Ｔ細胞の最も典型的な特徴の１つである。ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩとして既知の２つの異なるクラスのＭＨＣ分子があり、これはペプチドを種々の細胞区画から、感染した細胞の表面に送達する。細胞質ゾル由来のペプチドは、有核細胞の大部分で発現されるＭＨＣクラスＩ分子に結合され、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は対照的に、ＣＤ４＋Ｔ細胞に提示される飲食運動されるタンパク質抗原をサンプリングするためにリソソームに移動する（Ｂｒｙａｎｔ  ａｎｄ  Ｐｌｏｅｇｈ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４；１６：９６−１０２）。
【００１２】
ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞に分化して細胞を殺傷する。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、２つのタイプのエフェクターＴ細胞に分化する。マクロファージ小胞の内側に多数蓄積する病原体は、ＴH１細胞の分化を刺激する傾向があり、この細胞が、マクロファージを活性化し、そしてＢ細胞がＩｇＧ抗体を作成するように誘導し、ＩｇＧ抗体は食細胞による取り込みの際に細胞外病原体をオプソニン化するのに有効である。細胞外抗原は、ＴH２細胞の産生を刺激する傾向があり、ＴH２細胞がナイーブな抗原特異的Ｂ細胞を活性化することによって体液性免疫応答を開始し、とりわけ、ＩｇＭ抗体を生成する。
【００１３】
先天的免疫系と適応性の免疫系とは、免疫物質を生成し得る特定の細胞を活性化することによって、例えば、白血球のリンパ系のＴ細胞およびＢ細胞を活性化することによって、適応性免疫系と相互作用し得るかまたは適応性免疫系を誘発し得る種々の分子を、先天的免疫系の細胞が発現し得るという点で、相互作用する。初期に誘導されたが、非適応性の応答は、二つの主要な理由で重要である。第一に、それらは、適応性免疫応答が組み込まれ得るまで、病原体を撃退し得るか、またはより高頻度には制御し得る。第二に、これらの初期の応答は、いくつかの方法で適応性の応答に影響する。例えば、先天性の免疫応答は、感染の局所部位に対する新規な食細胞の補充を含むその後の事象において顕著な影響を有する、サイトカインおよび他の炎症性メディエーターを生成する。これらのメディエーターの別の影響は、局所の血管の内皮細胞に対する接着分子の発現を誘導することであり、接着分子は、循環中の単球および好中球の表面に結合して、血管の外側および組織の内側へのこれらの細胞の遊走の速度を大きく増大する。これらの事象は全て、外来物質を隔離、破壊および除去するように局所部位での防御的応答の一部を形成する先天性な免疫系の特徴である、炎症の条件で含まれる。この後に修復が続く。炎症は、急性および慢性の形態に分けられる。
【００１４】
免疫系は、非特異的な組織耐性物質を介して連絡する。これらは、ウイルス、内毒素および特定の細菌に応答して生成されるタンパク質であるインターフェロンを含む。インターフェロンは、ウイルスの複製を阻害し、特定の宿主防御応答を活性化する。感染された細胞は、インターフェロンを産生し、これが感染した細胞を他の隣接する細胞に結合させ、それらに抗ウイルスタンパク質およびウイルスの遺伝子転写およびタンパク質合成を妨害する酵素を産生させる。インターフェロンは、正常な細胞成長に影響し、そして細胞媒介性免疫を抑制し得る。
【００１５】
補体は、別の非特異的な組織耐性物質であって、血漿タンパク質および膜タンパク質を含み、このタンパク質が特異的および非特異的な防御を媒介する。補体は、２つの経路、特異的な防御に関連する古典的な経路、および特異的な抗体の非存在下で活性化され、従って非特異的である別の経路を有する。古典的な経路では、抗原−抗体複合体は、Ｃ１がＩｇＭ、そしてある程度はＩｇＧのような抗体のＦｃと相互作用する場合に認識され、最終的には、多くの機構のうちの１つとして、走化性因子、血管メディエーターおよび呼吸バーストを食細胞中で肥満細胞に放出させる。重要な補体因子としてはＣ３ａおよびＣ５ａが挙げられ、これによって肥満細胞は走化性因子、例えば、ヒスタミンおよびセロトニンを放出し、これが食細胞、抗体および補体などを誘引する。他の重要な補体因子は、外来の細胞の食作用を増強するＣ３ｂおよびＣ５ｂ、ならびに外来の細胞の溶解を誘導する（膜攻撃複合体）Ｃ８およびＣ９である。
【００１６】
がん細胞は、補体活性化を回避することによって、特に、膜結合した補体調節タンパク質、例えば、ＣＤ５５（分解促進因子）、ＣＤ４６（膜補因子タンパク質）およびＣＤ５９（タンパク質）の発現によって免疫サーベイランスを回避し得、そしてがん細胞の膜上のこれらのタンパク質の過剰発現は、補体活性化からこれらのがんを防御すると考えられる（Ｂｒａｓｏｖｅａｎｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６；７４：３３−４２；Ｊａｒｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １９９７；７１：１０４９−１０５５；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；１１５：１３−１８；Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  ２０００；７６：１７６−１８２；Ｄｏｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３；１３１：２５４−２６３）。ＣＤ４６、ＣＤ５５およびＣＤ５９に対する中和抗体の使用による補体媒介性溶解に対する影響の受け易さを増大するための試みは行われているがうまくいっていない（Ｖａｒｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１１３：１７３−１８２  Ｊｕｎｎｉｋｋａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００；１６４：６０７５−６０８ｌ；Ｍａｅｎｐａａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９６；１４８：１１３９−１１６２；Ｇｏｒｔｅｒ  Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９６；７４：１０３９−１０４９）。後者の研究では、ＣＤ４６およびＣＤ５５抗体は、ＣＤ５９抗体と対照的に、有効ではない。このことは、他の標的、または複数の補体調節タンパク質に対する、または補体調節タンパク質および免疫の他のメディエーターの両方に対する抗体の使用が必要であり得ることを示唆する。この一般的な失敗はＦｉｓｈｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３：４０：１０９−１２３）の推測、および抗がん補体固定抗体と組み合わせた膜補体調節タンパク質に対する抗体を用いるがん患者の治療は治療有効性を改善するという他の研究からの示唆と矛盾し、そのため、がん患者においてこのようなストラテジーが最高に実現され得る方法を解明する必要性が残る。
【００１７】
Ｇｅｌｄｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３；４０：１３−２３）は、膜結合した補体調節タンパク質（ｍＣＲＰ）が、同系のラットの結腸直腸がんモデルにおいて免疫療法的ｍＡｂによる補体活性化を阻害することを報告した。腫瘍抗原およびｍＣＲＰに対するｍＡｂの使用は、腫瘍細胞上のｍＣＲＰの観察された効果を克服するが、このアプローチを支持する直接の証拠はない。ＣＤ５５に対する、そして腫瘍抗原（Ｇ２５０またはＥｐＣＡＭ）に対する二重特異的な抗体を用いるさらに他の試みは、親の抗腫瘍抗体の使用に比較してＣ３沈着において２〜１３倍の増大を示したインビトロの研究に基づいて、Ｇｅｌｄｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００２；８２：４８３−４９３；Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２；３２：１２８−１３５）によって示唆されている。しかし、細胞殺傷の増強に関する結果は報告されていない。Ｊｕｒｉａｎｚ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９９９；４２：２０９−２１８）はまた、インビトロにおける抗ＨＥＲ２抗体での腫瘍の併用治療が、膜−補体−調節性タンパク質の抗体−中和での事前治療によって増強され得ることを示唆したが、ここでもやはりインビボの結果は示されなかった。Ｓｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００４；１０９：９００−９０８）は近年、腎細胞癌（Ｍａｂ  Ｇ２５０）の上で発現される抗原およびＣＤ５５に対して作成された二重特異的な抗体が、βグルカンが投与された場合、球状の腎癌細胞の殺傷を増強したことを報告し、これによってＣＲ３プライミングβ−グルカンの存在が必須であることが示唆された。
【００１８】
先天性免疫応答に関与する別の細胞である好中球はまた、砕片を摂取し、分解して、処分する。好中球は補体および抗体のレセプターを有する。補体−レセプター架橋および抗体によって、外来の有害物は、呑食および殺傷のために食細胞に捕獲されて提示され得る。
【００１９】
マクロファージは、外来の抗原物質を継続的に検索する先天性の系の一部である白血球である。先天性の免疫応答の一部として、マクロファージは外来の粒子を呑食し、殺傷し、そして処分する。しかし、それらはまた、体液性または細胞媒介性の免疫応答に関与する、Ｂ細胞およびＴ細胞への提示のために抗原を処理もする。
【００２０】
樹状細胞は、先天性および適応性の免疫系が連絡する主要な手段の１つである（Ｒｅｉｓ  ｅ  Ｓｏｕｓａ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４；１６：２１−２５）。これらの細胞は、微生物分子またはシグナルに対する反応によって適応性免疫応答を先鋭にすると考えられる。樹状細胞は、抗原を捕獲し、処理して、提示し、これによってＣＤ４＋およびＣＤ８＋ナイーブなＴリンパ球を活性化して、一次免疫応答の誘導をもたらし、そしてＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩおよびアクセサリー分子、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＴ細胞活性化サイトカインの発現から、その刺激能力を駆動する（Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  １９９６；２４：８５９−８６２；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  １９９８；３９２：２４５−２５２）。これらの特性によって、がんおよび感染性疾患の免疫療法のための樹状細胞候補物が作成され（Ｎｅｓｔｌｅ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０００；１９：６７３−６７９；Ｆｏｎｇ  ａｎｄ  Ｅｎｇｌｅｍａｎ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００；１８：２４５−２７３；Ｌｉｎｄｑｕｉｓｔ  ａｎｄ  Ｐｉｓａ，Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ２００２；１９：１９７−２１１）、そしてウイルスおよび腫瘍に対する強力な免疫を生じる抗原特異的な細胞傷害性Ｔ細胞を誘導することが示されている（Ｋｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００２；８：３９４−４０）。
【００２１】
また先天性および適応性の免疫系の相互作用に重要なのはＮＫ細胞であって、これは、リンパ球として出現するが、先天的免疫系の一部のように挙動する。ＮＫ細胞は、腫瘍細胞の殺傷に、そして本質的にはウイルス感染に対する応答に関与している（Ｌａｎｉｅｒ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３；１５：３０８−３１４；Ｃａｒａｙａｎｎｏｐｏｕｌｏｓ  ａｎｄ  Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４；１６：２６−３３）。先天的免疫系のさらに別の重要な機構は、感染の存在に対して哺乳動物宿主の他の細胞を変更するサイトカインメディエーターの活性化であり、その重要な成分は転写因子ＮＦ−κＢである（Ｌｉ  ａｎｄ  Ｖｅｒｍａ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２；２：７２５−７３４）。
【００２２】
初期に言及されたとおり、免疫系は、過剰反応し得、それによってアレルギーまたは自己免疫疾患が生じる。これはまた、抑制されるか、欠損されるか、または破壊され得、それによって疾患および死亡が生じる。免疫系が「自己」と「非自己」との間を識別できない場合、これは、身体の細胞および組織に接着して破壊し、自己免疫疾患、例えば、若年性糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、リウマチ関節炎および免疫血小板減少性紫斑病を生じる。免疫不全疾患は、免疫系の１つ以上の部分の欠失または不全から生じ、そして正常な免疫系を有する個体に通常は影響しない疾患に対してその個体を感受性にさせる。免疫不全疾患の例は、重症複合免疫不全疾患（ＳＣＩＤ）および後天性免疫不全疾患（ＡＩＤＳ）である。後者は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）から生じ、そして前者は、酵素または他の遺伝性欠損、例えば、アデノシンデアミナーゼ欠損から生じる。
【００２３】
免疫応答ならびに免疫、自己免疫障害および免疫不全障害の種々の態様の包括的記述は、その全てが引用することにより本明細書の一部をなすものとする、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ  ，ＩＭＭＵＮＯＢＩＯＬＯＧＹ：ＴＨＥ  ＩＭＭＵＮＥ  ＳＹＳＴＥＭ  ＩＮ  ＨＥＡＬＴＨ  ＡＮＤ  ＤＩＳＥＡＳＥ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９９；ｔｈｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｅｄｌｉｎｅ  Ｐｌｕｓ（ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｅｄｌｉｎｅｐｌｕｓ／ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ．ｈｔｍｌ）；そしてインターネットのサイトであるｓｌｉｃ２．ｗｓｕ．ｅｄｕ：８２：ｈｕｒｌｂｅｒｔ／ｍｉｃｒｏｌ０１／ｐａｇｅｓ／ｈａｐｌ５．ｈｔｍｌに提供される。
【００２４】
がんに対する免疫療法の適用は、抗腫瘍反応性Ｔ細胞の養子免疫伝達およびワクチンの使用、ならびに調節性細胞を阻害することによって腫瘍自己抗原に対する耐性を破壊すること、および種々のサイトカインおよびいわゆる免疫増強分子の使用によってＴ細胞免疫を高めることのような、免疫系に関わるかまたは開拓するための多数のアプローチを含む（Ａｎｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４；１６：１３０−１３６）。樹状細胞ワクチンも記載されている。腫瘍細胞抗原／レセプターを標的化することによって患者に投与される抗体の直接および間接的な（宿主エフェクター細胞によって媒介される）作用は現在、リンパ腫および白血病の治療におけるＣＤ２０およびＣＤ５２に対する抗体；多様な固形腫瘍の治療における、抗上皮細胞成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ改変体；そして特定の固形腫瘍の治療のための抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）によって例証されるように、がん治療の全構成に入っている。単独で与えられた場合活性であるが、これらのほとんどは、他の治療様式、例えば、薬物および放射線と組み合わされた場合、抗腫瘍効果の増強を示した。細胞傷害性薬物または同位元素を送達するためにこれらの腫瘍標的抗体を用いることは、免疫療法のさらに別の方法であって、臨床段階にはいっている。がん免疫療法のこれらおよび他の方法は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする、Ｈｕｂｅｒ  ａｎｄ  Ｗｏｅｌｆｅｌ，Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００４；１３０：３６７−３７４に概説されている。しかし、せいぜいこれらのアプローチは、患者の一部における腫瘍の減少および生存の改善を示すだけであり、患者のほとんどは、再発して、これによってその疾患を制御するためには他の治療介入および異なるストラテジーが必要になる。
【００２５】
敗血症は、我々の社会にとって大きな医学的および経済的な負担であり、アメリカで毎年約７００，０００人が罹患し、毎年２００，０００例を超える死者が生じ、そして１年に約１６７億ドルの費用がかかっている（Ａｎｇｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００１；２９：１３０３−１３１０；Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００３；３４８：１５４６−１５５４）。敗血症の定義は難しく、歴史的には、感染に対する全身的な宿主反応として規定された。敗血症の臨床的定義の考察は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症自体、重篤な敗血症、敗血性ショックおよび多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）を包含し、Ｒｉｅｄｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３；１１２：４６０−４６７に含まれる。敗血症は、侵入する微生物に対する宿主の絶大な反応によって生じるということ、そしてその患者は、侵入する微生物よりもこの応答によって危険にさらされるということが共通の観念であり、免疫および炎症性応答の抑制は治療の初期の目標であった。
【００２６】
免疫抑制の、または炎症促進性サイトカインを中和することの、多くのかつ多様な方法は、敗血症および敗血性ショックを有する患者の抗炎症性のストラテジーでは臨床上成功していないことが証明されている。（Ｒｉｅｄｍａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，上記で引用；Ｖａｎ  Ａｍｅｒｓｆｏｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ（Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｒｅｖ  ２００３；１６：３７９−４１４）、例えば、一般的な免疫抑制、非ステロイド性抗炎症性薬物の使用、ＴＮＦ−α抗体（インフリキシマブ）またはＴＮＦ−Ｒ：Ｆｃ融合タンパク質（エターネルセプト）、ＩＬ−１（インターロイキン−１）レセプターアンタゴニスト、または高用量のコルチコステロイド。しかし、成体での敗血症の治療における成功は、ＰＲＯＷＥＳＳ研究（Ｈｕｍａｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｓｅｐｓｉｓ（Ｂｅｒｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００１；３４４：６９９−７０９））であって、ここでは、プラセボ群（３０．８％）においてよりも低い死亡率（２４．７％）が示されている。この活性化されたプロテインＣ因子はおそらく、血栓症および炎症の両方を阻害するが、線維素溶解が助長される。Ｖａｎ  Ａｍｅｒｓｆｏｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ．は、その概説（前出）において、以下のように述べている。「補体および凝固因子を含む多数の他の標的のブロックまたは調節、好中球結合、およびＮＯ放出は、動物においては見込みがあるが、これらの治療アプローチがヒトで有効であるか否かはまだ確認されていない（Ａｌｔｈｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｏｔｈｅｒ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ，ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ａｄｈｅｒｅｎｃｅ，ａｎｄ  ＮＯ  ｒｅｌｅａｓｅ，ａｒｅ  ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌｓ，ｉｔ  ｒｅｍａｉｎｓ  ｔｏ  ｂｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｗｈｅｔｈｅｒ  ｔｈｅｓｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｗｉｌｌ  ｂｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ）」。これは、Ａｂｒａｈａｍによる概説，「Ｗｈｙ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｈａｖｅ  ｎｏｔ  ｗｏｒｋｅｄ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ」(Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １９９９；２５：５５６−５６６）においてさらに強調される。
【００２７】
敗血症における免疫系は、感染または外傷後早期の激しい炎症促進性応答を有し、これが器官損傷をもたらすと考えられる、しかし侵入する微生物を効率的に殺傷することに先天的免疫系はしばしば失敗するとも考えられる（Ｒｉｅｄｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００３；３：３３９−３５０）。敗血症と組み合わせて、マクロファージ遊走阻害性因子（ＭＩＦ）のいくつかの研究があり、ある程度の見込みが示されている。例えば、ＭＩＦの遮断またはＭＩＦ遺伝子の標的化破壊はマウスにおける敗血性ショックのモデルで生存を有意に改善した（Ｃａｌａｎｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ  ２０００；６：１６４−１７０）、そして証拠のいくつかの系列は、敗血性の患者における治療介入のための潜在的な標的としてＭＩＦを指摘している（Ｒｉｅｄｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，上記で引用）。Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第６，６４５，４９３号Ｂ１）は、抗ＭＩＦ抗体が、種々の形態の敗血症、炎症性疾患、急性呼吸器病症候群、肉芽腫性疾患、慢性感染、移植片拒絶、悪液質、喘息、ウイルス感染、寄生生物感染、マラリアおよび細菌感染を含む、サイトカイン媒介性毒性によって生じる状態または疾患を治療するために治療上有効であり得ると主張し、これは、引用文献を含むその全体を引用することにより本明細書の一部をなすものとする。抗ＬＰＳ（リポポリサッカライド）抗体単独の使用は同様に、敗血性ショックを有する患者の治療において入り交じった結果であった（Ａｓｔｉｚ  ａｎｄ  Ｒａｃｋｏｗ，Ｌａｎｃｅｔ  １９９８；３５１：１５０１−１５０５；Ｖａｎ  Ａｍｅｒｓｆｏｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｒｅｖ  ２００３；１６：３７９−４１４）。
【００２８】
ＬＰＳおよびＭＩＦの両方とも敗血症および敗血性ショックの治療において標的として探究されているが、抗体によってＬＰＳまたはＭＩＦ単独を標的化するアプローチは、特に進行型および重篤型では、敗血症の多様な徴候を制御するには十分ではなかった。同様に、敗血症および他のサイトカイン媒介性毒性反応の治療のための抗体の標的としての、ＩＬ−１、ＩＬ−６（インターロイキン６）、ＩＬ−８（インターロイキン８）などのようなサイトカインの使用は、この疾患の意味のある制御に十分であることは証明されていない。従って、敗血症における内因性の応答に関与するサイトカインカスケードのさらなる標的を発見する必要性に加えて、ＭＩＦまたはリポポリサッカライド（ＬＰＳ）のような少なくとも１つのサイトカインまたは原因物質を標的化する二機能的および多機能的な抗体は、特に炎症性応答または免疫応答に従事する宿主細胞（またはそのレセプター）、例えば、Ｔ細胞、マクロファージ、または樹状細胞への結合と組み合わせた場合、有利であることが、今や発見されてきている。ＣＤ７４のようなＭＨＣクラスＩＩ不変鎖標的に対する抗体は、Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．（ＵＳ  ２００３／００１３１２２  Ａ１）によって、ＭＩＦ調節性疾患を治療することについて提唱され、そしてＨａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＵＳ  ２００４／０１１５１９３  Ａ１）は、免疫調節不全疾患、自己免疫疾患、器官移植片拒絶、および移植片対宿主病を治療するための少なくとも１つのＣＤ７４抗体を提唱した。Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．は、このような疾患の治療のためのリンパ球およびマクロファージのような宿主細胞に対する抗原／レセプターと反応する他の抗体と抗ＣＤ７４との融合タンパク質の使用を記載している。しかし、ＣＤ７４以外の標的との組み合わせは、示唆されておらず、その開示は免疫療法の異なる方法に集中している。同様の標的はまた、アテローム斑を治療するために有用である（Ｂｕｒｇｅｒ−Ｋｅｎｔｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２；１０５：１５６１−１５６６）。
【００２９】
感染、自己免疫、器官移植、炎症、および移植片対宿主病（および他の免疫調節性疾患）の治療において、有害物もしく微生物を殺傷もしくは排除するか、または外来の移植片もしくは免疫原に対する宿主免疫応答、または「自己」に対する抗体の宿主の産生を抑制するなどのために多様でかつ相対的に非特異的な細胞傷害性物質を用いる。しかし、これらは通常、リンパ様のそして造血系の他の部分に影響して、骨髄（造血系）および他の正常な宿主細胞に対して毒性の影響を生じる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３０】
従って、がん、ならびに敗血症および敗血性ショック、炎症、アテローム性動脈硬化症、悪液質、移植片対宿主、および他の免疫調節不全障害を含む、多様な免疫疾患の改善された、さらに選択性の療法の必要性が存在する。本発明は、上記で示される問題の１つ以上の影響を克服するかまたは少なくとも軽減することに向けられる。
【課題を解決するための手段】
【００３１】
本発明は、種々の炎症性および免疫調節不全疾患、感染性疾患、病的血管新生およびがんの治療において多特異的アンタゴニストを用いる新規でかつ十分耐えられる方法を提供する。この多特異的アンタゴニストは、これらの条件に関連する唯一の標的と特異的に反応する物質よりも有効である。本発明は、少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストを提供する。この標的は、（Ａ）先天的免疫系の炎症促進性エフェクター、（Ｂ）凝固因子、（Ｃ）補体因子および補体調節タンパク質、ならびに（Ｄ）炎症性障害もしくは免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的、からなる群より選択され、後者の標的は（Ａ）でも、（Ｂ）でも、（Ｃ）でもない。この標的の少なくとも１つは（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）である。この多特異的アンタゴニストが、単一の多特異的抗体を含む場合は、ＣＤ７４はこのアンタゴニストの標的として排除される。さらに、この多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、抗体の１つがＢ細胞抗原を標的化し、かつもう一方の抗体がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除される。抗体の１つがＣＤ２０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する、別個の抗体の組み合わせも排除される。
【００３２】
「特異的に反応する」という用語は、抗原に対する抗体または抗体フラグメントの結合だけでなく、その同族のリガンドに対するレセプターの結合も包含する。例えば、先天的免疫系の炎症促進性エフェクターのレセプターは、その炎症促進性のエフェクター同族リガンドと「特異的に反応し」、従って本発明の範囲内におさまる。いくつかの実施形態では、多特異的アンタゴニストは、２つの別個の抗体の組み合わせである。他の実施形態では、これは多特異的抗体、詳細には融合タンパク質である。
【００３３】
一実施形態では、多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、この抗体のうちの１つがＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３またはＣＤ８０を標的化し、かつもう一方の抗体が補体因子を標的化する組み合わせが排除される。さらに詳細には、多特異的アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせを含む場合、この抗体のうちの１つがＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３またはＣＤ８０を標的化し、かつもう一方の抗体がＣ３ｂまたはＣＤ４０を標的化する組み合わせが排除される。
【００３４】
先天的免疫系の炎症促進性エフェクターは、炎症促進性エフェクターサイトカイン、炎症促進性エフェクターケモカイン、または炎症促進性エフェクターレセプターであってもよい。適切な炎症促進性エフェクターサイトカインとしては、ＭＩＦ、ＨＭＧＢ−Ｉ（高移動度群ボックスタンパク質１）、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−４（インターロイキン４）、ＩＬ−５（インターロイキン５）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２（インターロイキン１２）、ＩＬ−１５（インターロイキン１５）、ＩＬ−１７（インターロイキン１７）、およびＩＬ−１８（インターロイキン１８）が挙げられる。炎症促進性エフェクターケモカインの例としては、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、ＥＮＡ−７８、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０、ＧＲＯＢおよびエオタキシン（Ｅｏｔａｘｉｎ）が挙げられる。炎症促進性エフェクターレセプターとしてはＩＬ−４Ｒ（インターロイキン４レセプター）、ＩＬ−６Ｒ（インターロイキン６レセプター）、ＩＬ−１３Ｒ（インターロイキン−１３レセプター）、ＩＬ−１５Ｒ（インターロイキン−１５レセプター）、ＩＬ−１７Ｒ（インターロイキン−１７レセプター）およびＩＬ−１８Ｒ（インターロイキン−１８レセプター）が挙げられる。
【００３５】
多特異的アンタゴニストはまた、少なくとも１つの凝固因子、詳細には組織因子（ＴＦ）またはトロンビンと特異的に反応し得る。他の実施形態では、多特異的アンタゴニストは、少なくとも１つの補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応する。好ましい実施形態では、その補体因子は、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂおよびＣ５ａからなる群より選択される。これらの実施形態では、標的の組み合わせは好ましくは、上記アンタゴニストが、別個の抗体の組み合わせである場合、他の抗体がＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３またはＣＤ８０を標的化する組み合わせを含まない。このアンタゴニストが補体調節タンパク質と特異的に反応する場合、この補体調節タンパク質は好ましくは、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびｍＣＲＰからなる群より選択される。
【００３６】
一実施形態では、多特異的アンタゴニストは、特異性が異なる２つ以上の抗体であって、その各々が、先天的免疫系の異なる炎症促進性エフェクターと特異的に反応する、抗体を含む。あるいは、この多特異的アンタゴニストは、特異性の異なる２つ以上の抗体であって、その各々が異なる凝固因子と特異的に反応する抗体を含む。別の実施形態では、この多特異的アンタゴニストは、特異性の異なる２つ以上の抗体であって、その各々が異なる補体因子または補体調節タンパク質と特異的に反応する抗体を含む。さらに他の実施形態では、この２つ以上の抗体は、先天的免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクターと、そして少なくとも１つの凝固因子と、または先天的免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクターと、そして少なくとも１つの補体因子または補体調節タンパク質と、または少なくとも１つの補体因子もしくは補体調節タンパク質と、そして少なくとも１つの凝固因子とそれぞれ特異的に反応する。あるいは、この多特異的アンタゴニストは、先天的免疫系の２つ以上の炎症促進性エフェクターと、または２つ以上の凝固因子と、または２つ以上の補体因子もしくは補体調節タンパク質と特異的に反応し得る。
【００３７】
２つ以上の抗体は、先天的免疫系の同じ炎症促進性エフェクターの２つ以上のエピトープ、または同じ凝固因子の２つ以上のエピトープ、または同じ補体因子もしくは補体調節タンパク質の２つ以上のエピトープと特異的に反応し得る。任意のこれらの実施形態では、多特異的アンタゴニストはさらに、炎症性もしくは免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的と反応し得、この標的は、上記で規定されるように、（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）標的ではない。他の実施形態では、多特異的アンタゴニストは、炎症性もしくは免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的、及び上記のような１つ以上の（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）と特異的に関連する標的と反応する。病的血管新生の有用な標的の例は、Ｆｌｔ−１である。
【００３８】
本発明の任意の実施形態では、多特異的アンタゴニストは、多特異的抗体であってもよく、ここでこの抗体の異なるアームが、本明細書に説明された条件下で、異なる標的と反応する。このような多特異的構築物はまた、Ｒｏｓｓｉ（特許出願ＷＯ０４０９４６１３Ａ２）に記載されているように、抗原標的に対する結合を増強するために、同じ抗原エピトープに対して任意のまたは全ての結合アームにおいて多価性を有してもよい。
【００３９】
あるいは、多特異的アンタゴニストは、少なくとも１つの可溶性レセプターを、または少なくとも１つの炎症促進性エフェクターレセプターの少なくとも１つの細胞外ドメインを含んでもよい。一実施形態では、このアンタゴニストは、少なくとも１つの抗体に融合された少なくとも１つの可溶性レセプター、または炎症促進性エフェクターレセプターの少なくとも１つの細胞外ドメインを含む。
【００４０】
多特異的アンタゴニストは、炎症促進性エフェクターレセプターと反応的である少なくとも１つの分子を含んでもよい。この分子は好ましくは、炎症促進性エフェクターレセプターの天然のアンタゴニスト、またはこのレセプターと特異的に相互作用するアンタゴニストのフラグメントもしくは変異体である。一実施形態では、この天然のアンタゴニストは、天然のＩＬ−１レセプターアンタゴニスト、またはこのアンタゴニストのフラグメントもしくは変異体である。
【００４１】
この多特異的アンタゴニストはさらに、樹状細胞、顆粒球、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、血小板、または内皮細胞を標的化し得る。いくつかの実施形態では、この多特異的アンタゴニストは、適応性免疫系の少なくとも１つの抗原またはレセプターと特異的に反応する。他の実施形態では、この多特異的アンタゴニストは、がん細胞レセプターまたはがん関連抗原、例えば、Ｂ細胞系列の抗原（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、など）、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）、テナスシン(tenascin)、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１３８、ＮＣＡ６６、ＭＵＣｌ、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ１６、ＩＬ−６、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ａ３３、ＣＡ１２５、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、葉酸レセプター、ＨＬＡ−ＤＲ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、Ｉａ、ＥＬ−２、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）およびＩＬＧＦレセプター、ＫＳ−１、Ｌｅ（ｙ）、ＭＡＧＥ、壊死抗原、ＰＡＭ−４、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、Ｐｒ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭＡ、Ｓ１００、Ｔ１０１、ＴＡＣ、ＴＡＧ７２、ＴＲＡＩＬレセプター、および炭酸脱水酵素ＩＸと特異的に反応する。増殖性骨髄細胞を標的化するＦｌｔ−３も特定のがんを同定および治療するのに有用である。あるいは、多特異的アンタゴニストは、Ｃ５ａ、第Ｈ因子、ＦＨＬ−１、ＬＰＳ、ＩＦＮγもしくはＢ７のような標的と、またはＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ６４、ＣＤ８３、ＣＤ１４７もしくはＣＤ１５４のような標的と特異的に反応し得る。
【００４２】
多特異的アンタゴニストは、単一の活性成分を含んでもよいし、または複数の活性成分を含んでもよい。単一の活性成分を含む実施形態は、定義によれば２つ以上の活性成分を含む抗体の混合物は包含しない。２つ以上の活性成分を含む多特異的アンタゴニストとしてはまた、先天的免疫系の成分、適応性免疫系の成分、凝固、感染性因子、またはがん細胞に影響する二次治療剤を挙げてもよい。
【００４３】
多特異的アンタゴニストは、感染性疾患、急性呼吸窮迫症候群、敗血症または敗血性ショック、移植片対宿主病または移植片拒絶、アテローム性動脈硬化症、喘息、座瘡、巨細胞性動脈炎、肉芽腫性疾患、神経障害、悪液質、血液凝固障害、例えば、汎発性血管内凝固（ＤＩＣ）または心筋虚血のような特定の疾患および状態と関連する、標的またはマーカーと特異的に反応し得る。
【００４４】
多特異的アンタゴニストは、炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患のような状態を治療するのに有用である。治療は、この状態のうちの１つを有すると診断されている患者に対して、多特異的アンタゴニストの治療上有効な量を投与する工程を含む。一実施形態では、この炎症性または免疫調節不全障害は、自己免疫疾患ではない。多特異的アンタゴニストは、敗血症または敗血性ショック、感染性疾患（細菌、ウイルス、真菌または寄生生物）、神経障害、移植片対宿主病または移植片拒絶、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、喘息、アテローム性動脈硬化症、座瘡、巨細胞性動脈炎、血液凝固障害、例えば、汎発性血管内凝固（ＤＩＣ）または悪液質を治療するために用いられ得る。他の実施形態では、この状態は、自己免疫疾患、特にクラスＩＩＩの自己免疫疾患である。
【００４５】
多特異的アンタゴニストはまた、病的血管新生またはがんを治療するために用いられ得る。がんは、造血系のがん、例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫などであってもよい。あるいは、がんは、固形腫瘍、例えば、癌腫、黒色腫、肉腫、神経膠腫などであってもよい。
【００４６】
多特異的アンタゴニストは、治療剤、例えば、放射性核種、免疫調節物質、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素インヒビター、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、細胞毒性剤、抗体、血管新生インヒビター、およびそれらの組み合わせを含む免疫コンジュゲートであってもよい。治療剤がオリゴヌクレオチドである場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドであってもよい。
【００４７】
他の実施形態では、治療剤は、細胞毒性物質、例えば、薬物または毒素である。薬物は、抗有糸分裂性、アルキル化、代謝拮抗、血管新生阻害、アポトーシス性、アルカロイド、プロテアソームインヒビターおよび抗生物質製剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される薬学的特性を保有し得る。特定の実施形態では、この薬物は、ナイトロジェン・マスタード、ゲムシタビン、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホナート、ニトロソウレア、トリアゼン（ｔｒｉａｚｅｎｅ）、葉酸類似体、アントラサイクリン、ＳＮ−３８、タキサン（ｔａｘａｎｅ）、ＣＯＸ−２インヒビター、ピリミジン類似体（例えば、５−フルオロウラシル）、プリン類似体、抗生物質、酵素、酵素インヒビター、プロテアソームインヒビター、エピポドフィロトキシン、白金配位錯体、ビンカ・アルカロイド、置換ウレア、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモンアンタゴニスト、エンドスタチン、タキソール、カンプトテシン、ドキソルビシンおよびそれらの類似体、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗有糸分裂剤、血管新生阻害剤、アポトーシス剤、メトトレキサート、ＣＰＴ−１１およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。毒素は、動物、植物および微生物供給源からなる群より選択される供給源由来であってもよく、そして好ましくは、リシン、アブリン、α溶血毒、サポリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌性（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）エンテロトキシンＡ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素およびシュードモナス内毒素からなる群より選択される。
【００４８】
他の実施形態では、この治療剤は、免疫調節剤、例えば、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、トロンボポエチンおよびそれらの組み合わせである。リンホトキシンは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）であってもよく、造血因子は、インターロイキン（ＩＬ）であってもよく、コロニー刺激因子は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）であってもよく、このインターフェロンは、インターフェロンα、βまたはγであってもよく、そして幹細胞成長因子は、Ｓ１因子であってもよい。好ましくは、この免疫調節因子は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−γ、ＴＮＦ−α、またはその組み合わせを含む。
【００４９】
あるいは、治療剤は、放射性核種である。好ましくは、この放射性核種は、６０〜７００ｋｅＶのエネルギーを有し、好ましくは、32Ｐ、33Ｐ、47Ｓｃ、125Ｉ、131Ｉ、86Ｙ、90Ｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、111Ｉｎ、111Ａｇ、142Ｐｒ、153Ｓｍ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、177Ｌｕ、198Ａｕ、211Ａｔ、212Ｐｂ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、223Ｒａおよび225Ａｃ、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００５０】
他の実施形態では、治療剤は、光活性治療剤、例えば、色原体およびまたは色素である。治療剤はまた、酵素であってもよい。この酵素は好ましくは、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、δ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼを含む群から選択される。
【００５１】
多特異的アンタゴニストは、診断／検出物質を含んでもよい。この診断／検出物質は、診断用放射性核種、造影剤、蛍光標識および光活性物質からなる群より選択され得る。
【００５２】
本発明はまた、炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患から選択される条件を診断または検出する方法を提供し、この方法は、本発明による多特異的アンタゴニストの診断上有効な量を、このような状態を有すると疑われている患者に対して投与する工程と；標的部位で多特異的アンタゴニストが融合することを可能にする工程と；多特異的抗体が循環して血流から除去されることを待つか、またはクリアリング剤を用いる工程と；検出手段を用いてこのような部位で、標識された多特異的アンタゴニストの上昇したレベルを検出することによって、標識された多特異的アンタゴニストの付着の部位を位置決めする工程とを含む。
【００５３】
炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患から選択される状態を診断または検出する別の方法は、ハプテン結合部位を含む、本発明による多特異的アンタゴニストの診断上有効な量を、このような状態を有すると疑われている患者に対して投与する工程と；標的部位で多特異的アンタゴニストが融合することを可能にする工程と；血流から除去するために多特異的抗体が循環することを待つ工程と；診断物質／検出物質で標識されたハプテンをこの被験体に投与する工程と；多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に対して標識されたハプテンが結合することを可能にする工程と；検出手段を用いてこのような部位で、標識されたハプテンに結合された多特異的アンタゴニストの上昇したレベルを検出することによって、多特異的アンタゴニストの付着の部位を位置決めする工程とを包含する。
【００５４】
本発明はまた、炎症性または免疫調節不全障害、病的血管新生もしくはがん、および感染性疾患から選択される状態を治療する方法を提供し、この方法は、ハプテン結合部位を含む、本発明による多特異的アンタゴニストの治療上有効な量を、このような状態を有すると疑われている患者に対して投与する工程と；標的部位で多特異的アンタゴニストが融合することを可能にする工程と；血流から除去するために多特異的抗体が循環することを待つ工程と；治療剤を含むハプテンを被験体に投与する工程と；多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に対してハプテンがこの治療剤とともに結合することを可能にする工程とを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５５】
定義
以下の説明において、及び引用することにより本明細書の一部をなすものとする文書では、多数の用語が広範に用いられる。以下の定義は、本発明の理解を容易にするために示される。
【００５６】
構造遺伝子とは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に転写され、次いで特定のポリペプチドに特有のアミノ酸配列に翻訳されるＤＮＡ配列である。
【００５７】
プロモーターとは、構造遺伝子の転写を指示するＤＮＡ配列である。代表的には、プロモーターは、構造遺伝子の転写開始部位に近位である、遺伝子の５’領域に位置する。プロモーターが誘導性プロモーターであるならば、転写の速度は、誘導性物質に応答して増大する。対照的に、転写の速度は、プロモーターが構成的プロモーターである場合には誘導性物質によっては調節されない。
【００５８】
単離されたＤＮＡ分子とは、生物体のゲノムＤＮＡに組み込まれていないＤＮＡのフラグメントである。例えば、クローニングされた抗体遺伝子は、哺乳動物細胞のゲノムＤＮＡから分離されているＤＮＡフラグメントである。単離されたＤＮＡ分子の別の例は、生物体のゲノムＤＮＡに組み込まれていない化学的に合成されたＤＮＡ分子である。
【００５９】
エンハンサーとは、転写の開始部位に対するエンハンサーの距離にも方向にもかかわらず、転写の有効性を増大し得るＤＮＡ調節性エレメントである。
【００６０】
相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）とは、逆転写酵素によってｍＲＮＡのテンプレートから形成される一本鎖ＤＮＡ分子である。代表的には、ｍＲＮＡの一部に相補的であるプライマーを逆転写の開始に使用する。当業者はまた、このような一本鎖ＤＮＡ分子およびその相補的なＤＮＡ鎖からなる二本鎖ＤＮＡ分子を指すためにもこの「ｃＤＮＡ」という用語を用いる。
【００６１】
発現という用語は、遺伝子産物の生合成を指す。例えば、構造遺伝子の場合、発現とは、ｍＲＮＡへの構造遺伝子の転写、および１つ以上のポリペプチドへのｍＲＮＡの翻訳を包含する。
【００６２】
クローニングベクターとは、宿主細胞において自立的に複製し得る能力を有する、プラスミド、コスミドまたはバクテリオファージのようなＤＮＡ分子である。クローニングベクターは代表的には、１または少数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位であって、そこで外来ＤＮＡ配列が、ベクターの必須の生物学的な機能の損失なしで検出可能な様式で挿入され得る部位と、クローニングベクターで形質転換された細胞の同定および選択における使用に適切であるマーカー遺伝子とを含む。マーカー遺伝子としては代表的には、テトラサイクリン耐性またはアンピシリン耐性を提供する遺伝子が挙げられる。
【００６３】
発現ベクターとは、宿主細胞中で発現される遺伝子を含むＤＮＡ分子である。代表的には、遺伝子発現は、構成プロモーターまたは誘導性プロモーター、組織特異的調節性エレメントおよびエンハンサーを含む、特定の調節性エレメントの制御下におかれる。このような遺伝子は、調節性エレメントに対して「作動可能に連結される」と言われる。
【００６４】
組み換え宿主は、クローニングベクターまたは発現ベクターのいずれかを含む任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。この用語はまた、宿主細胞の染色体またはゲノム中にクローニングされた遺伝子（単数または複数）を含むように遺伝子操作されている原核生物または真核生物細胞を含む。
【００６５】
本明細書において用いる場合、抗体とは、裸の抗体およびコンジュゲートされた抗体および抗体フラグメントを包含し、これは単一特異性であっても多特異的であってもよい。これは、組み換え抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体および融合タンパク質を含む。
【００６６】
キメラ抗体とは、げっ歯類の抗体に由来する可変のドメインおよび相補性決定領域を含む組み換えタンパク質であるが、残りの抗体分子は、ヒト抗体に由来する。
【００６７】
ヒト化抗体とは、モノクローナル抗体のマウス相補性決定領域が、マウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の可変鎖からヒト可変領域ドメインに転移されている組み換えタンパク質である。ヒト化マウス抗体（ＣＤＲ移植片）は、ヒトＩｇＧのＦＲへ移植されたマウスＣＤＲを有する。ＣＤＲ移植されたヒト可変鎖は、ヒト抗体の定常領域に融合されて、インタクトなヒト化ＩｇＧが得られる。
【００６８】
ヒト抗体とは、ヒトから単離されて次いで培養物中で増殖されるか、またはヒト抗体を産生することによって抗原刺激に応答するように免疫系が変更されている動物を用いて作成される抗体である。
【００６９】
抗体フラグメントとは、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆ（ａｂ）2、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖなどのようなインタクトな抗体の一部である。構造にかかわらず、抗体フラグメントは、全長抗体によって認識される同じ抗原と結合する。例えば、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体フラグメントは、ＣＤ２０のエピトープと結合する。「抗体フラグメント」という用語はまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用する任意の合成または遺伝子操作されたタンパク質を包含する。例えば、抗体フラグメントとしては、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメントのような、可変領域からなる単離されたフラグメント、軽鎖および重鎖の可変領域がペプチドリンカーによって接続されている組み換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）、および超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。
【００７０】
野性型抗体の制限されたタンパク質分解によって生成される抗体フラグメントは、タンパク質分解性抗体フラグメントと呼ばれる。これらとしては、限定はしないが、以下が挙げられる。
【００７１】
Ｆ（ａｂ’）2フラグメントは、タンパク質分解性酵素、例えば、ペプシンまたはフィシンに対する抗体の制限された曝露によって抗体から放出される。Ｆ（ａｂ’）2フラグメントは、２つの「アーム（ａｒｍ）」であって、その各々が共通の抗原に向かって、そして特異的に結合する可変領域を含む、アームを含む。この２つのＦａｂ’分子は、重鎖のヒンジ領域における鎖間ジスルフィド結合によって結合される；Ｆａｂ’分子は、同じ（二価）または異なる（二重特異的な）エピトープに対して向けられ得る。
【００７２】
Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆａｂを含む単一の抗結合ドメイン、およびヒンジ領域を通じて重鎖のさらなる一部を含む。
【００７３】
Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは代表的には、Ｆ（ａｂ’）2フラグメントから生成され、これは、Ｆ（ａｂ’）2フラグメントにおけるＨ鎖の間のジスルフィド結合によってお互いに保持される。温和な還元剤、例えば、非限定的な例として、βメルカプトエチルアミンでの処理は、ジスルフィド結合を破壊し、そして２つのＦａｂ’フラグメントが、１つのＦ（ａｂ’）2フラグメントから遊離される。Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、一価でかつ単一特異的である。
【００７４】
Ｆａｂフラグメント（すなわち、抗原結合ドメインを含み、そして軽鎖およびジスルフィド結合によって架橋された重鎖の一部を含む抗体フラグメント）は、インタクトな抗体のパパイン消化によって生成される。好都合な方法は、酵素が容易に除去でき、消化が終わるように、樹脂に固定されたパパインを使用することである。Ｆａｂフラグメントは、Ｆ（ａｂ’）2フラグメントに存在するＨ鎖の間にジスルフィド結合（単数または複数）を有さない。
【００７５】
単鎖抗体は、抗体フラグメントの１タイプである。単鎖抗体という用語は、しばしば、「ｓｃＦｖ」または「ｓＦｖ」と略される。これらの抗体フラグメントは、分子遺伝学および組み換えＤＮＡ技術を用いて生成される。単鎖抗体は、相互作用して抗原結合部位を形成するＶHおよびＶLドメインの両方を含むポリペプチド鎖からなる。このＶＨおよびＶＬドメインは通常、１０〜２５のアミノ酸残基のペプチドによって結合される。「単鎖抗体」という用語は、さらに、２つの単鎖抗体（各々が異なるエピトープに向けられ得る）がジスルフィド結合によって一緒に結合される、ジスルフィド結合されたＦｖ（ｄｓＦｖ）と；異なる特異性の２つの別個のｓｃＦｖｓがペプチドリンカーで接続される二重特異的ｓＦｖと；二重特異性抗体（第一のｓＦｖのＶHドメインが第二のｓＦｖのＶLドメインと会合し、かつ第一のｓＦｖのＶLドメインが第二のｓＦｖのＶHドメインと会合する場合に形成される二量体化ｓＦｖ；二重特異性抗体の２つの抗原結合領域は、同じまたは異なるエピトープへ向けられてもよい）と；三重特異性抗体(triabody)（二重特異性抗体と同様の方式で形成されるが、３つの抗原結合ドメインが単一の複合体中で作成される三量体化ｓＦｖ；３つの抗原結合ドメインは、同じまたは異なるエピトープに向けられてもよい）を含むが、これらには限定されない。従って、ｓｃＦＶ、二重特異性抗体または三重特異性抗体を作製する場合、定常領域は用いられず、ヒト化可変領域がリンカーと結合される。
【００７６】
相補性決定領域ペプチドまたはＣＤＲペプチドは、抗体フラグメントの別の形態である。ＣＤＲペプチド（「最小認識単位」としても既知）とは、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するペプチドであって、目的の抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することによって調製され得る。このような遺伝子は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を用いて抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成することによって、調製される。例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２：１０６，１９９１を参照のこと。
【００７７】
システイン修飾抗体では、システインアミノ酸を遺伝子操作によって抗体の表面上に挿入するかまたは置換して、これを用いて、この抗体を、例えば、ジスルフィド架橋を介して別の分子にコンジュゲートする。抗体についてのシステイン置換または挿入が記載されている（例えば、米国特許第５，２１９，９９６号を参照のこと）。抗体の部位特異的なコンジュゲートにおける使用のためにＩｇＧ抗体の定常領域にＣｙｓ残基を導入するための方法は、Ｓｔｉｍｍｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７５：３３０４４５−３０４５０，２０００）によって記載されている。
【００７８】
本明細書において用いる場合、治療剤とは、治療のために有用なコンジュゲートを生成するために抗体部分にコンジュゲートされた、分子または原子である。これらは、甲状腺新生物において131Ｉと、がん、自己免疫疾患、移植片対宿主病において種々の細胞毒性薬物と、そして器官移植について誘導された免疫抑制においてなどのように、抗体に対してコンジュゲートしなくなった場合に活性にされ得る。治療剤の例としては、治療用放射性核種、ホウ素化合物、免疫調節剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、オリゴヌクレオチド、酵素インヒビター、光活性治療剤、細胞毒性剤、および血管新生インヒビター、ならびにそれらの組み合わせが挙げられ、そしてこれらは、米国公開出願第２００４００５７９０２号に記載されている。好ましい治療的放射性同位体としては、８０〜５００ｋｅＶのｋｅＶ範囲を有するβ、αおよびオージェエミッターが挙げられる。例示的な治療的放射性同位体としては、225Ａｃ、177Ｌｕ、198Ａｕ、32Ｐ、125Ｉ、131Ｉ、90Ｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、67Ｃｕ、67Ｇａ、111Ｉｎ、および211Ａｔが挙げられる。
【００７９】
診断／検出物質とは、本発明による多特異的アンタゴニスト、すなわち、抗体または抗体フラグメントまたはサブフラグメントにコンジュゲートされて投与され、そして抗原を含有する細胞を位置決めすることによって疾患を診断するのに有用である分子または原子である。有用な診断／検出物質としては、限定はしないが、放射性同位体、色素（例えば、ビオチン−ストレプトアビジン複合体を有するもの）、造影剤、蛍光化合物、または磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）のためのそして超音波およびコンピューター断層撮影法のための、分子および造影剤（例えば、常磁性イオン）が挙げられる。
【００８０】
裸の抗体は、治療剤とコンジュゲートされていない抗体である。裸の抗体としては、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方、ならびに特定の組み換え抗体、例えば、キメラ抗体およびヒト化抗体が挙げられる。
【００８１】
コンジュゲートされた抗体とは、診断物質または治療剤とコンジュゲートされた抗体または抗体フラグメントである。
【００８２】
多特異的な抗体とは、異なる構造である少なくとも２つの標的、例えば、同じ抗原上の２つの異なる抗原、２つの異なるエピトープ、あるいはハプテンおよび／または抗原もしくはエピトープに対して同時に結合され得る抗体である。結合アームの２つ以上が、同じ抗原の同じまたは異なるエピトープに向かってもよく、これによって、多価特異性(multispecificity)に加えて多価性(multivalency)が構築される。
【００８３】
二重特異的な抗体とは、異なる構造である２つの標的に対して同時に結合し得る抗体または抗体フラグメント構築物である。
【００８４】
融合タンパク質とは、組み換えにより生成された抗原結合分子であって、同じまたは異なる特異性を有する２つ以上の異なる単鎖抗体または抗体フラグメントセグメントが結合される分子である。種々の二重特異的な融合タンパク質が分子操作を用いて生成され得る。一形態では、二重特異的な融合タンパク質は一価であって、これは、例えば、ある抗原について単独の結合部位を有するｓｃＦｖおよび第二の抗原について単独の結合部位を有するＦａｂフラグメントから構成される。別の形態では、二重特異的融合タンパク質は、二価であって、例えば、ある抗原について２つの結合部位を有するＩｇＧおよび第二の抗原について２つの結合部位を有する２つのｓｃＦｖから構成される。
【００８５】
感染性疾患とは、微生物または寄生生物によって生じる疾患である。
【００８６】
微生物とは、ウイルス、細菌、リケッチア、マイコプラズマ、真菌などの微生物である、
【００８７】
寄生生物とは、感染性であって、一般に顕微鏡でしか見えない、または極めて小さく、多細胞の無脊椎動物、原生動物、またはそれらの卵子もしくは若年型であり、これは抗体誘導性クリアランスに対して、または溶解性もしくは食細胞性の破壊に対して感受性である。
【００８８】
多特異的アンタゴニスト
本発明は、少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応する多特異的アンタゴニストを提供する。異なる標的としては、先天的免疫系の炎症促進性エフェクター、凝固因子、補体因子および補体調節タンパク質、及び炎症性または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、感染性病原体と特異的に関連する標的、または病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的が挙げられ、この後者のクラスの標的は免疫系の炎症促進性エフェクターでも凝固因子でもない。多特異的アンタゴニストが、炎症性もしくは免疫調節不全障害と、病的血管新生もしくはがんと、または感染性疾患と関連する標的と特異的に反応する場合、これはまた、免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクター、少なくとも１つの凝固因子、または少なくとも１つの補体因子もしくは補体調節タンパク質と特異的に結合する。従って、多特異的アンタゴニストは、異常細胞、病的血管新生もしくはがん、または感染性疾患に関連する少なくとも１つの結合特異性、および免疫系の成分、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中球、単球およびマクロファージ、および樹状細胞のレセプターもしくは抗原、または凝固の調節因子、例えば、トロンビンもしくは組織因子、または炎症促進性サイトカイン、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＨＭＧＢ−ＩおよびＭＩＦに対する少なくとも１つの特異性を含む。
【００８９】
多特異的アンタゴニストが単一の多特異的な抗体を含むならば、ＣＤ７４は、このようなアンタゴニストの標的として排除される。さらに、多特異的アンタゴニストが別個の抗体の組み合わせを含む場合、成分の１つがＢ細胞抗原を標的化し、そして他の成分がＴ細胞、形質細胞、マクロファージまたは炎症性サイトカインを標的化する組み合わせが排除される。
【００９０】
本発明は、多特異的タンパク質および抗体、ならびにそのフラグメントを含む組成物に関するとともに、複数の別個のタンパク質もしくは抗体、またはそのフラグメントの組み合わせを含む組成物に関する。従って、一実施形態では、この多特異的アンタゴニストは、抗体融合タンパク質または異種コンジュゲートである。別の実施形態では、この多特異的アンタゴニストは、異なる標的に結合する少なくとも２つの別個の抗体を含む抗体混合物である。この実施形態では、２つ以上の抗体または抗体コンジュゲートは、同時にまたは連続して与えられる。この多特異的アンタゴニストは、裸であってもよいが、また診断用画像化剤（例えば、同位体、放射線学的造影剤）に対して、または放射性核種、ホウ素化合物、免疫調節剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、オリゴヌクレオチド、酵素インヒビター、光反応性治療剤、細胞傷害性物質、血管新生インヒビター、およびそれらの組み合わせを含む治療剤にコンジュゲートされていてもよい。標的に対する多特異的アンタゴニストの結合は、ダウンレギュレートされてもよいし、そうでなければ免疫細胞機能に影響してもよいが、多特異的アンタゴニストはまた、免疫細胞機能に直接影響しない他の標的に結合してもよい。例えば、ＣＤ６６またはＣＥＡＣＡＭ６（例えば、ＮＣＡ９０またはＮＣＡ９５）に対するような、抗顆粒球抗体は、感染した組織で顆粒球を標的化するために用いられてもよく、そしてまたＣＥＡＣＡＭ６を発現するがんを標的化するために用いられてもよい。
【００９１】
一実施形態では、治療剤はオリゴヌクレオチドである。例えば、このオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであっても、または二本鎖の干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）分子であってもよい。このオリゴヌクレオチドは、ｂｃｌ−２またはｐ５３のようながん遺伝子に対するものでもよい。ｂｃｌ−２発現を阻害するアンチセンス分子は、米国特許第５，７３４，０３３号に記載されている。これは、本発明の多特異的アンタゴニストの治療剤部分にコンジュゲートされるか、または本発明の多特異的アンタゴニストの治療剤部分を形成し得る。あるいは、このオリゴヌクレオチドは、本発明の多特異的アンタゴニストと同時にまたは連続して投与されてもよい。
【００９２】
別の実施形態では、この治療剤は、付加されたホウ素であり、そして治療には、治療剤の局在化後に熱中性子または熱外中性子での照射を要する。この治療剤はまた、光活性治療剤、特に色素原または色素であるものであってもよい。
【００９３】
好ましい実施形態では、この治療剤は細胞傷害性物質、例えば、薬物または毒素である。また好ましくは、薬物は、窒素、マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、ゲムシタビン、トリアゼン(triazene)、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン(taxane)、ＣＯＸ−２インヒビター、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、酵素、酵素インヒビター、エピポドフィロトキシン、白金配位錯体、ビンカ・アルカロイド、置換ウレア、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモンアンタゴニスト、エンドスタチン、タキソール、ＳＮ−３８、カンプトテシン、ドキソルビシンおよびそれらの類似体、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗有糸分裂剤、血管新生阻害剤、アポトーシス剤、メトトレキサート、ＣＰＴ−１１およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００９４】
別の好ましい実施形態では、この治療剤は、動物、植物および微生物供給源からなる群より選択される供給源由来の毒素である。好ましい毒素としては、リシン、アブリン、α溶血毒、サポリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅＩ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素およびシュードモナス内毒素が挙げられる。
【００９５】
この治療剤は、免疫調節剤、例えば、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、トロンボポエチンおよびそれらの組み合わせであってもよい。このようなリンホトキシンは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。造血因子は、インターロイキン（ＩＬ）であってもよく、コロニー刺激因子は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）であってもよく、このインターフェロンは、インターフェロンα、βまたはγであってもよく、そして幹細胞成長因子は、Ｓ１因子であってもよい。あるいは、この免疫調節物質は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、インターフェロン−γ、ＴＮＦ−α、またはその組み合わせを含んでもよい。
【００９６】
好ましい治療的な放射性核種としては、８０〜５００ｋｅＶのｋｅＶ範囲を有するβ、αおよびオージェエミッターが挙げられる。例示的な治療的放射性同位体としては、32Ｐ、33Ｐ、47Ｓｃ、125Ｉ、131Ｉ、86Ｙ、90Ｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、189Ｒｅ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、111Ｉｎ、111Ａｇ、142Ｐｒ、153Ｓｍ、161Ｔｂ、166Ｄｙ、166Ｈｏ、177Ｌｕ、198Ａｕ、211Ａｔ、212Ｐｂ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、223Ｒａおよび225Ａｃ、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。例示的な光活性治療剤は、色素原およびまたは色素を含む群から選択される。
【００９７】
さらに好ましくは、この治療剤は、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、δ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼを含む群から選択される酵素である。
【００９８】
多特異的アンタゴニストは、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターサイトカイン、炎症促進性エフェクターケモカインまたは炎症促進性エフェクターレセプターに対して特異的に結合し得る。多特異的アンタゴニストが結合し得る炎症促進性エフェクターサイトカインとしては、限定はしないがＭＩＦ、ＨＭＧＢ−Ｉ、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１８が挙げられる。炎症促進性エフェクターケモカインの例としては、限定はしないが、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質１）、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１Ａ（マクロファージ炎症性タンパク質１Ａ）、ＭＩＰ−１Ｂ（マクロファージ炎症性タンパク質１Ｂ）、ＥＮＡ−７８（上皮好中球活性化ペプチド７８）、ＩＰ−１０、ＧＲＯＢ（ＧＲＯβ）およびエオタキシン（Eotaxin）が挙げられる。炎症促進性エフェクターレセプターとしては、限定はしないが、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１８Ｒが挙げられる。多特異的アンタゴニストはまた、少なくとも１つの凝固因子、例えば、組織因子またはトロンビンと特異的に反応し得る。このリンホカイン／サイトカインは、免疫細胞上のそれらのレセプターを反応して活性化を果たし、そして抗体は、リンホカイン／サイトカインを中和することによって活性化をブロックし得る。あるいは、抗体は、リンホカイン／サイトカインレセプターと反応して活性化をブロックし得る。
【００９９】
多特異的アンタゴニストが特異的に結合する異なる標的は、エフェクターおよび凝固因子の同じまたは異なるクラスに由来し得る。例えば、このアンタゴニストが特異的に結合する２つ以上の異なる標的は、同じクラスのエフェクターまたは凝固因子、例えば、２つ以上の異なる炎症促進性エフェクターサイトカイン、２つ以上の異なる炎症促進性エフェクターケモカイン、２つ以上の異なる炎症促進性エフェクターレセプター、または２つ以上の凝固因子から選択され得る。あるいは、２つ以上の異なる標的は、異なるクラスのエフェクターおよび凝固因子から選択されてもよい。例えば、ある標的は、先天的免疫系の炎症促進性エフェクターであってもよく、そしてある標的は凝固因子であってもよい。または、このアンタゴニストは、２つの異なるクラスの炎症促進性エフェクター、例えば、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターサイトカンおよび少なくとも１つの炎症促進性エフェクターケモカイン、少なくとも１つの炎症促進性エフェクターサイトカインおよび少なくとも１つの炎症促進性エフェクターレセプター、または少なくとも１つの炎症促進性エフェクターケモカインおよび少なくとも１つの炎症促進性エフェクターレセプターと特異的に反応し得る。多特異的アンタゴニストが特異的に反応する２つの異なる標的が、先天的免疫系の同じ炎症促進性エフェクターの２つ以上のエピトープ、または同じ凝固因子の２つ以上のエピトープであるという場合もあり得る。
【０１００】
従って、「２つの異なる標的」とは、２つの異なる抗原を指しても、または同じ抗原の２つの異なるエピトープを指してもよい。複数の抗体は、同じ抗原に対して用いられてもよく、これによって価数が増大する。例えば、ＭＩＦまたはＨＭＧＢ−Ｉを標的化する場合、詳細には敗血症、いくつかのがんおよびアテローム斑の治療について、標的の２つの同一のエピトープに対して結合する２つの抗体は、異なる抗原、例えばＨＬＡクラスＩＩ不変鎖抗原、例えばＣＤ７４に対する１つ以上の結合アームを有する別の抗体と融合され得る。これらは、２つの異なる抗原に結合する二重特異的抗体または二機能性の抗体、例えば、ＭＩＦおよびＣＤ７４に対する抗体；ＨＭＧＢ−ＩおよびＣＤ７４に対する抗体の例である。三価特異的抗体および多特異的融合タンパク質も作成されて用いられてもよく、これによって３つ以上の抗原またはレセプター分子を標的化する。これらは、各々の抗原またはエピトープに対する単一の結合アームを有してもよく、または２つ以上の結合アームを有してもよく、これによって多価性が得られる。
【０１０１】
炎症促進性エフェクターレセプターが標的化される場合、好ましい実施形態では、この実際の標的は、炎症促進性エフェクターレセプターの細胞外ドメインであってもよい。炎症促進性エフェクターレセプターのこの細胞外ドメインは、抗体に融合されてもよい。さらに詳細には、この炎症促進性エフェクターは、抗体に融合される可溶性レセプターまたはレセプターリガンドであってもよい。別の実施形態では、この多特異的アンタゴニストは、炎症促進性エフェクターレセプターと反応性である少なくとも１つの分子を含んでもよい。この分子は、この炎症促進性エフェクターレセプターの天然のアンタゴニスト、またはレセプターと特異的に相互作用するこのアンタゴニストのフラグメントもしくは変異体であってもよい。好ましい実施形態では、この天然のアンタゴニストは、天然のＩＬ−１レセプターアンタゴニスト、またはこのアンタゴニストのフラグメントもしくは変異体である。
【０１０２】
多特異的アンタゴニストが特異的に結合する少なくとも２つの異なる標的のうちの１つは、免疫系の炎症促進性エフェクターでも凝固因子でもない標的であり得る。この場合、多特異的アンタゴニストはまた、免疫系の少なくとも１つの炎症促進性エフェクター、または少なくとも１つの凝固因子と特異的に結合する。一実施形態では、この少なくとも１つの他の標的は、適応性免疫系の抗原またはレセプターである。他の実施形態では、この多特異的アンタゴニストの少なくとも１つの他の標的は、先天的免疫系の細胞、例えば、顆粒球、単球、マクロファージ、樹状細胞、およびＮＫ細胞を標的化する。他の標的としては、血小板および内皮細胞が挙げられる。標的のさらに別の群は、Ｃ５ａ、ＬＰＳ、ＩＦＮγおよびＢ７からなる群である。適切な標的のさらなる群としては、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ６４、ＣＤ８３、ＣＤ１４７、およびＣＤ１５４が挙げられる。ＣＤは、免疫細胞上の標的であって、抗体によってブロックされて免疫細胞応答を予防し得る。ＣＤ８３は詳細には、活性な樹状細胞のマーカーとして有用である（Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．，Ａｕｇ．２３，２００４（Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）；Ｚｉｎｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００（３）：３４５−５１（２００４））。
【０１０３】
特定の標的は、特別な目的のもの、例えば、ＭＩＦ、ＨＭＧＢ−Ｉ、ＴＮＦ−α、補体因子および補体調節タンパク質、および凝固因子である。ＭＩＦは、先天的免疫系における、またはその中心的なサイトカインであり、そして炎症性応答の制御において重要な部分を果たす。マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）として既知のタンパク質である、マクロファージの無作為な遊走を阻害するＴリンパ球由来因子としてもともと記載されていたのは、ほぼ３０年間にわたって、不可解なサイトカインであった。近年では、脳下垂体前葉の生成物としてのＭＩＦの発見、ならびに生物活性の組み換えＭＩＦタンパク質のクローニングおよび発現によって、インビボにおけるその重要な生物学的役割の定義が導かれている。ＭＩＦは、糖質コルチコイドによって刺激されているマクロファージおよびＴリンパ球から放出されるという固有の特性を有する。一旦放出されれば、ＭＩＦは、インビトロにおけるＬＰＳ刺激単球による、ＴＮＦ−α、ＩＬ−Ｉβ、ＩＬ−６およびＩＬ−８産生に対する糖質コルチコイドの阻害性の影響を克服し、そしてインビボにおける致死性内毒素血症に対するステロイドの防御的効果を抑制する。ＭＩＦはまた、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γ産生を回復することによって、インビトロにおけるＴ細胞増殖の糖質コルチコイド阻害に拮抗する。ＭＩＦは、糖質コルチコイドの阻害性の効果に対抗して調節することができ、それによって炎症および免疫の宿主制御に重要な役割を果たすことが同定された最初のメディエーターである。ＭＩＦは詳細には、がん、病的血管新生および敗血症または敗血性ショックを治療するのに有用である。
【０１０４】
核および細胞質のタンパク質に結合するＤＮＡであるＨＭＧＢ−Ｉは、ＩＬ−Ｉβ、ＴＮＦまたはＬＰＳによって活性化されている単球およびマクロファージによって放出される炎症促進性サイトカインである。そのＢボックスドメインを介して、これは、ＤＣの表現型成熟を誘導する。これはまた、炎症促進性サイトカインＩＬ−１α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αおよびＲＡＮＴＥＳの分泌の増大を生じる。壊死性の細胞によって放出されるＨＭＧＢ−Ｉは、組織または細胞の損傷のシグナルであり得、これは、ＤＣによって検出された場合、免疫応答を誘導およびまたは増強する。Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．は、ＨＭＢＧ１が中胚葉性血管芽細胞の遊走および増殖を誘導することを報告する（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，１６４：４４１−４４９（２００４））。
【０１０５】
ＨＭＧＢ−Ｉは、ＴＮＦおよびＩＬ−Ｉβに関して有意に遅れた動態を示す内毒素誘発性の致死性の後期メディエーターである。ＴＮＦおよびＩＬ−Ｉβ単独のような特定の早期炎症性メディエーターを標的化する実験的な治療剤は、臨床的には有効性は示されていないが、本発明による多特異的アンタゴニストは、初期および後期の両方の炎症性メディエーターを標的化することによって応答を改善し得る。
【０１０６】
ＨＭＧＢ−Ｉを標的化する多特異的アンタゴニストは、関節炎、詳細にはコラーゲン誘発性関節炎において特に有用である。ＨＭＧＢ−Ｉを含む多特異的アンタゴニストはまた、敗血症および／または敗血性ショックを治療するのに有用である。Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０１：２９６−３０１（２００４）；Ｋｏｋｋｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４８：２０５２−８（２００３）；Ｃｚｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ，１８７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ３９１−６（２００３）；Ｔｒｅｕｔｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ，２５４：３７５−８５（２００３）。
【０１０７】
ＴＮＦ−αは、全身性の炎症および急性期の応答に関与する重要なサイトカインである。ＴＮＦ−αは、刺激された単球、線維芽細胞および内皮細胞によって放出される。マクロファージ、Ｔ細胞およびＢリンパ球、顆粒球、平滑筋細胞、好酸球、軟骨細胞、骨芽細胞、肥満細胞、グリア細胞およびケラチノサイトはまた、刺激後にＴＮＦαを生じる。その放出は、例えば感染による損傷の経過において、いくつかの他のメディエーター、例えば、インターロイキン１および細菌の内毒素によって刺激される。それは、一般にはインターロイキン１およびインターロイキン６と一緒に、種々の器官系に対する多数の作用を有する。ＴＮＦ−αの作用の１つは、食欲抑制であり；それによって、悪液質を治療するための多特異的アンタゴニストは好ましくはＴＮＦ−αを標的化する。これはまた、肝臓の急性期反応を刺激し、Ｃ反応性タンパク質および多数の他のメディエーターの増大をもたらす。これはまた、敗血症または敗血性ショックを治療する場合に有用な標的である。
【０１０８】
補体系は、細胞レセプターによってしばしば活性化される血清糖タンパク質のタンパク質分解性切断に関与する複雑なカスケードである。「補体カスケード」は、構成的で、かつ非特異的であるが、機能するためには活性化されなければならない。補体活性化は、一方向性の順序の酵素的および生化学的反応を生じる。このカスケードでは、特異的な補体タンパク質Ｃ５は、２つの高度に活性な炎症性副産物Ｃ５ａおよびＣ５ｂを形成し、これが一緒に白血球を活性化する。これが次に、傷害性のサイトカイン、炎症性酵素および細胞接着分子を含む、多数の他の炎症性副産物を惹起する。まとめると、これらの副産物は、多くの炎症性疾患でみられる組織の破壊をもたらし得る。このカスケードは最終的に、炎症性応答、食細胞走化性、およびオプソニン化および細胞溶解の誘発を生じる。
【０１０９】
補体系は、２つの異なる経路、古典的経路および代替経路を介して活性化され得る。ほとんどの補体成分は番号付けされる（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３など）が、いくつかは「因子(factor)」と呼ばれる。いくつかの成分は、その機能を活性化するためには酵素的に切断されなければならない；その他は単に組み合わさって活性である複合体を形成する。古典的経路の活性成分としては、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４ａ、およびＣ４ｂが挙げられる。代替の経路の活性な成分としては．Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、第Ｂ因子、第Ｂａ因子、第Ｂｂ因子、第Ｄ因子およびプロペルジンが挙げられる。各々の経路の最後の段階は、同じであって、膜攻撃複合体への成分のアセンブリに関与する。膜攻撃複合体の活性成分としては、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９ｎが挙げられる。
【０１１０】
補体系の任意のこれらの成分は本発明による多特異的アンタゴニストによって標的化され得るが、特定の補体成分が好ましい。Ｃ３ａ、Ｃ４ａおよびＣ５ａは、肥満細胞に、ヒスタミンおよびセロトニンのような走化性因子を放出させ、これが食細胞、抗体および補体などを誘引する。これらは、本発明による好ましい標的の一群を形成する。好ましい標的の別の群としては、Ｃ３ｂ、Ｃ４ｂおよびＣ５ｂが挙げられ、これが外来細胞の食作用を増強する。標的の別の好ましい群は、これらの二つの群についての先行の成分であり、すなわち、Ｃ３、Ｃ４およびＣ５、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９が、外来細胞の溶解を誘導し（膜攻撃複合体）、そして標的のさらに別の好ましい群を形成する。
【０１１１】
補体Ｃ５ａはＣ３ａと同様に、アナフィラトキシンである。これは、炎症を媒介し、そして、抗菌プロテアーゼおよび酸素ラジカルの好中球の放出の誘導の走化性誘引物質である。従ってＣ５ａおよびその前任者Ｃ５は、特に好ましい標的である。Ｃ５を標的化することによって、Ｃ５ａが影響されるだけでなく、Ｃ５ｂも影響され、これが膜攻撃複合体のアセンブリを開始する。従ってＣ５は、別の好ましい標的である。Ｃ３ｂおよびそれに先行するＣ３はまた、Ｃ３ｂに依存する古典的および代替的な補体経路の両方として、好ましい標的である。３つのタンパク質が、この因子、Ｃ１インヒビター、プロテインＨおよび第Ｉ因子のレベルに影響し、そしてこれらはまた、本発明による好ましい標的である。補体調節タンパク質、例えば、ＣＤ４６、ＣＤ５５およびＣＤ５９は、多特異的アンタゴニストが結合する標的であり得る。
【０１１２】
凝固因子はまた、本発明による好ましい標的、詳細には組織因子（ＴＦ）およびトロンビンである。ＴＦはまた、組織トロンボプラスチン、ＣＤ１４２、第ＩＩＩ凝固因子、または第ＩＩＩ因子としても既知である。ＴＦは膜内在性レセプター、糖タンパク質およびサイトカインレセプタースーパーファミリーのメンバーである。ＴＦのリガンド結合細胞外ドメインは、２型サイトカインレセプターのメンバーとしてＴＦの分類と一致する特徴を有する２つの構造的モジュールからなる。ＴＦは血液凝固プロテアーゼカスケードに関与して、ＴＦの細胞外ドメインと循環中の凝固因子、セリンプロテアーゼ第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子との間で高親和性の複合体を形成することによって、外因性および内因性の両方の血液凝固カスケードを開始する。次いで、これらの酵素的に活性な複合体は、第ＩＸ因子および第Ｘ因子を活性化して、トロンビン生成および血餅形成をもたらす。
【０１１３】
ＴＦは、単球、マクロファージおよび血管内皮細胞を含む種々の細胞タイプによって発現され、そしてＩＬ−１、ＴＮＦ−αまたは細菌のリポポリサッカライドによって誘導される。プロテインキナーゼＣは、内皮細胞ＴＦ発現のサイトカイン活性化に関与する。エンドトキシンおよびサイトカインによるＴＦの誘導は、グラム陰性の敗血症を有する患者でみられる、播種性血管内凝固症候群の開始の重要な機構である。ＴＦはまた、炎症、がん、脳機能、免疫応答および腫瘍関連血管新生を含む種々の非止血性機能に関与すると考えられる。従って、ＴＦを標的化する多特異的アンタゴニストは、血液凝固障害の治療においてだけでなく、敗血症、がん、病的血管新生、ならびに本発明による他の免疫および炎症性の機能不全疾患の治療においても有用である。凝固経路とサイトカインネットワークとの間の複雑な相互作用は、いくつかのサイトカインが種々の細胞におけるＴＦ発現に影響する能力によって、そしてレセプターに対するリガンド結合の影響によって示唆される。リガンド結合（第ＶＩＩａ因子）は、細胞内カルシウムシグナルを与えることが報告され、これによってＴＦが真のレセプターであることが示される。
【０１１４】
トロンビンは、凝固因子ＩＩ（プロトロンビン）の活性化型である。これは、フィブリノーゲンをフィブリンに変換する。トロンビンはマクロファージの強力な走化性因子であって、それらのサイトカイン産生およびアラキドン酸代謝を変更し得る。これは敗血症を伴う血液凝固障害では特に重要である。多くの研究によって、敗血症患者における、または動物モデルでのＬＰＳ投与後のいずれかにおける凝固系の活性化が実証されている。３０年を超える研究にもかかわらず、ＬＰＳ誘発性肝毒性の機構は、十分に理解されていないままである。それらは細胞性メディエーターと体液のメディエーターとの間の複雑かつ連続的な相互作用に関与することがいまや明らかである。同じ期間に、グラム陰性の全身性の敗血症およびその続発症は、大きな健康上の懸念になり、ＬＰＳまたは種々の炎症性メディエーターに対するモノクローナル抗体を用いる試みは、本明細書においていずれかに注記されているとおり、治療上失敗しか生じていない。トロンビンおよび少なくとも１つの他の標的を標的化する本発明による多特異的アンタゴニストは、敗血症治療における臨床的な失敗に取り組む。
【０１１５】
他の実施形態では、多特異的アンタゴニストは、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩまたはアクセサリー分子、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０またはＣＤ８６に結合する。この多特異的アンタゴニストはまた、Ｔ細胞活性化サイトカインに、またはサイトカインメディエーター、例えば、ＮＦ−κＢに結合し得る。
【０１１６】
特定の実施形態では、少なくとも２つの異なる標的のうち１つが、がん細胞レセプターまたはがん関連抗原であってもよく、詳細には、Ｂ細胞系列の抗原（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、など）、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）、テナスシン(tenascin)、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１３８、ＮＣＡ６６、ＣＥＡＣＡＭ６（がん胎児性抗原関連細胞接着分子６）、ＭＵＣｌ、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ１６、ＩＬ−６、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ａ３、ＣＡ１２５、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、葉酸レセプター、ＨＬＡ−ＤＲ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、Ｉａ、ＥＬ−２、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）およびＩＬＧＦレセプター、ＫＳ−１、Ｌｅ（ｙ）、ＭＡＧＥ、壊死抗原、ＰＡＭ−４、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、Ｐｒ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｓ１００、Ｔ１０１、ＴＡＣ、ＴＡＧ７２、ＴＲＡＩＬレセプター、および炭酸脱水酵素ＩＸからなる群より選択されるものである。
【０１１７】
敗血症および免疫機能不全および他の免疫障害に関連する標的としては、ＭＩＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＤ７４、ＣＤ８３、およびＣ５ａＲが挙げられる。抗体およびＣ５ａＲに対するインヒビターは、敗血症を有するげっ歯類（Ｈｕｂｅｒ−Ｌａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００２；１６：１５６７−１５７４；Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００２；１１０：１０１−１０８）ならびにサルでの敗血性ショックおよび成人呼吸窮迫症候群（Ｈａｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  １９８９；４６：１９５−１９９；Ｓｔｅｖｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９８６；７７：１８１２−１８１６）において生存を改善することが見出されている。従って、敗血症については、少なくとも２つの異なる標的のうちの１つが好ましくは、ＬＰＳ／Ｃ５ａのような、感染に関連している標的である。他の好ましい標的としては、その各々が敗血症または敗血性ショックに関連するＨＭＧＢ−Ｉ、ＴＦ、ＣＤ１４、ＶＥＧＦ、およびＩＬ−６が挙げられる。好ましい多特異的アンタゴニストは、ＭＩＦ／ＴＦ、およびＨＭＧＢ−Ｉ／ＴＦのようなＨＭＧＢ−Ｉ、ＴＦおよびＭＩＦ由来の２つ以上の標的を標的化するアンタゴニストである。
【０１１８】
さらに他の実施形態では、少なくとも２つの異なる標的のうちの１つが、ＭＩＦのような、移植片対宿主病または移植片拒絶に関連する標的であってもよい（Ｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，３０（６）：３７５−８０（２００２））。この少なくとも２つの異なる標的のうちの１つはまた、ＩＬ−８のように急性呼吸窮迫症候群と（Ｂｏｕｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＭＣ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ，４（１）：６（２００４）、ＭＩＦのようにアテローム性動脈硬化症または再狭窄と（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，２４（４）：７０９−１４（２００４）、ＩＬ−１８のように喘息と（Ｈａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ｏｃｔ．１１，２００４、印刷前にＥｐｕｂ（電子公開））、ＴＮＦαのように肉芽腫症と（Ｕｌｂｒｉｃｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，５０（８）：２７１７−８（２００４）、カルバミル化ＥＰＯ（エリスロポエチン）のように神経障害と（Ｌｅｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０５（５６８１）：１６４−５（２００４）、またはＩＬ−６およびＴＮＦ−αのように悪液質と、関連する標的であってもよい。
【０１１９】
他の標的としては、Ｃ５ａ、ＬＰＳ、ＩＦＮ−γ、Ｂ７；ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ６４、ＣＤ８３、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４が挙げられる。ＬＰＳを含む、特定の微生物抗原による単核球の活性化は、ＣＤ１８、ＣＤ１１ｂ、またはＣＤ１１ｃに対する抗体によってある程度まで阻害され得、これによってβ2−インテグリンにかかわる（Ｃｕｚｚｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０００；１６４：５８７１−５８７６；Ｍｅｄｖｅｄｅｖ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１６０：４５３５−４５４２）。ＣＤ８３は、中程度および大きいサイズの動脈、主に大動脈弓の頭蓋外枝または大動脈自体に影響する全身性の脈管炎である、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）においてある役割を果たし、これが血管狭窄症および引き続く組織虚血、ならびに重篤な合併症である失明、脳卒中および大動脈弓症候群を生じることが見出されている（Ｗｅｙａｎｄ  ａｎｄ  Ｇｏｒｏｎｚｙ、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００３；３４９：１６０−１６９；Ｈｕｎｄｅｒ  ａｎｄ  Ｖａｌｅｎｔｅ、Ｉｎ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  Ｖｅｓｓｅｌｓ．Ｇ．Ｓ．Ｈｏｆｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｍ．Ｗｅｙａｎｄ、ｅｄｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００２；２５５−２６５）。ＣＤ８３に対する抗体は、ヒトＧＣＡのＳＣＩＤマウスモデルにおける脈管炎を抑止することが見出され（Ｍａ−Ｋｒｕｐａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００４；１９９：１７３−１８３）、これによって、活性化された場合にＣＤ８３を発現する樹状細胞が、ＧＣＡにおける重要な抗原処理細胞であるということがこれらの研究者らに示唆された。これらの研究では、彼らは、マウス抗ＣＤ８３モノクローナル抗体（Ｍａｂ）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓのＩｇＧＩクローンＨＢ１５ｅ）を用いた。ＴＮＦファミリーのメンバーであるＣＤ１５４は、ＣＤ４−陽性Ｔリンパ球の表面上で発現され、そしてＣＤ１５４に対するヒト化モノクローナル抗体は、活発な全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者において有意な臨床的利点を生じたということが報告されている（Ｇｒａｍｍａｒ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３；１１２：１５０６−１５２０）。この抗体は他の自己免疫疾患で有用であり得ることも示唆される（Ｋｅｌｓｏｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３；１１２：１４８０−１４８２）。実際に、この抗体はまた、難治性の免疫性血小板減少症を有する患者において有効であることも報告された（Ｋｕｗａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００４；１０３：１２２９−１２３６）。
【０１２０】
関節リウマチでは、組み換えインターロイキン−１レセプターアンタゴニスト、ＩＬ−１Ｒａまたはアナキンラ（ａｎａｋｉｎｒａ）（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））が、活性を示す（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２００４；６３：１０６２−８；Ｃｏｈｅｎ，Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２００４；３０：３６５−８０）。メトトレキサートでの同時の治療が必要なこれらの患者の治療における改善は、抗炎症促進性エフェクターサイトカインまたは抗炎症促進性エフェクターケモカイン（上記に列挙されるような）のうちの１つ以上とアナキンラを組み合わせることである。実際、関節リウマチのための抗体治療の概説において、Ｔａｙｌｏｒ（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００３；３：３２３−３２８）は、ＴＮＦに加えて、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８などのサイトカインに対する他の抗体が有用であることを示唆している。
【０１２１】
いくつかのさらに好ましい標的組み合わせとしては以下が挙げられる。
【表１】
2008523083.tif 000002
上記の各々において、多特異的とは、さらなる標的、例えば、第三の標的およびさらなる標的を含み得る。これは、好ましい組み合わせの例の列挙であるが、網羅的であることは意図しない。
【０１２２】
多特異的アンタゴニストは、少なくとも２つの別個の抗体および／またはレセプターまたは異なる標的に結合するそれらのリガンドを含む混合物であってもよいが、１つの好ましい実施形態では、このアンタゴニストは、少なくとも二重特異的である抗体であり、この抗体の異なるアームは、少なくとも２つの異なる標的と特異的に反応し、この標的は、先天的免疫系の炎症促進因子エフェクター、凝固因子、補体因子および補体調節タンパク質、ならびに炎症性または免疫調節不全障害と特異的に関連する標的、病的血管新生もしくはがんと特異的に関連する標的、または感染性疾患と特異的に関連する標的からなる群より選択される。
【０１２３】
多特異的アンタゴニストが少なくとも二重特異性である抗体である場合、特定の利点が存在し、これには血液からの急速なクリアランスが挙げられる。例えば、二重特異性抗体は、レポーターに対して、またはその標的分子、例えば、ＬＰＳ、ＩＬ−１、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＦ、ＨＭＧＢＩ、ＴＮＦ、ＩＦＮ、組織因子、トロンビン、ＣＤ１４、ＣＤ２７、およびＣＤ１３４に結合し得る。これらの多くは、レセプターとしておよび可溶性型としての両方で、血液中に存在する。二重特異的な抗体による結合は、血液からの急速なクリアランスを生じ、次いで、細胞、詳細にはリソソームによる輸送および分解のために、マクロファージのような別の細胞に対して融合タンパク質の第二のアームによる標的化を生じる。これは、第二の標的化アームがマクロファージおよび樹状細胞によって発現される、ＣＤ７４のようなインターナライズする抗原に対する場合に特に有効である。これは、Ｈａｎｓｅｎの発明米国特許第６，４５８，９３３号と一致するが、そこでは、炎症性サイトカインおよび他の免疫調節分子および免疫調節不全疾患のレセプター、ならびにこれらのがんの免疫療法のためのがん抗原に集中している。
【０１２４】
多特異的アンタゴニストは、単独の活性成分を含んでもよいし、または複数の活性成分を含んでもよい。例えば、多特異的アンタゴニストが複数の別個の抗体を含む場合、これらは、複数の活性な成分を構成する。あるいは、多特異的アンタゴニストは、単独の活性成分、例えば、多特異的抗体であってもよく、これは可溶性レセプターに融合された少なくとも２つの異なる標的または単一特異的もしくは多特異的な抗体と特異的に反応する。多特異的アンタゴニストはまた、下に記載されるような他の二次的な治療モダリティとともにパッケージされてもよい。活性成分は、１つ以上の不活性成分、例えば、担体または希釈剤と、その成分が組み合わされる方式を説明する説明書とともにパッケージされてもよい。全ての成分は、キット成分の組み合わせおよび投与に関する説明書とともにキット形式で一緒に都合よくパッケージされる。この成分および物質はまた、別々にパッケージされて供給されてもよい。
【０１２５】
がんの治療のための好ましい多特異的アンタゴニストとしては、ＣＤ５５に、そして上記のがん抗原のいずれかに対する抗体、ＣＤ４６にそして上記のがん抗原のいずれかに対する抗体、ＣＤ５９にそして上記のがん抗原のいずれかに対する抗体、ＭＩＦにそして上記のがん抗原のいずれかに対する抗体、ＮＦ−κＢにそして上記のがん抗原のいずれかに対する抗体、ならびにＩＬ−６にそしてＩＬ−６以外の上記のがん抗原のいずれかに対する抗体が挙げられる。がんを治療するためのこれらの多特異的アンタゴニストは、一緒にまたは別々に与えられる、抗体の組み合わせまたは融合タンパク質であってもよい。
【０１２６】
多特異的アンタゴニストは、１つ以上の二次治療剤と組み合わせて用いられ得る。この二次治療剤は、先天的免疫系の成分に影響するものであってもよい。あるいは、これは、適応性免疫系の成分に影響し得る。この二次治療剤はまた、細胞傷害性薬物のような、凝固、がん、または自己免疫疾患に影響する成分であってもよい。
【０１２７】
診断または治療物質を有する多特異的アンタゴニストは、薬学的に許容可能な注射ビヒクル、好ましくはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）における、生理学的なｐＨおよび濃度でのヒトまたは哺乳動物の治療および診断用途のためのキットとして提供され得る。調製は好ましくは、特にヒトにおける使用を意図する場合、無菌である。このようなキットの選択的な構成要素としては、安定化剤、緩衝液、標識試薬、放射性同位体、常磁性化合物、クリアランス向上のための第二の抗体、および従来のシリンジ、カラム、バイアルなどが挙げられる。
【０１２８】
モノクローナル抗体、ヒト化抗体、霊長類抗体およびヒト抗体の生成
入手可能な抗原に対するげっ歯類モノクローナル抗体は、当業者に既知の方法によって得ることができる。一般には、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５（１９７５）、ならびにＣｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１，２．５．１−２．６．７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９１）［「Ｃｏｌｉｇａｎ」］を参照のこと。要するに、モノクローナル抗体は、抗原を含む組成物をマウスに注射するステップと、血清サンプルを取り出して抗体産生の存在を検証するステップと、脾臓を取り出してＢリンパ球を得るステップと、このＢリンパ球を骨髄細胞と融合してハイブリドーマを生成するステップと、このハイブリドーマをクローニングするステップと、注射された抗原に対する抗体を生成する陽性クローンを選択するステップと、抗原に対する抗体を生じるクローンを培養するステップと、ハイブリドーマ培養物から抗体を単離するステップとによって得ることができる。
【０１２９】
モノクローナル抗体は、種々の周知の技術によって、ハイブリドーマ培養物から単離および精製され得る。このような単離技術としては、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅによるアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ２．７．１−２．７．１２  ａｎｄ  ｐａｇｅｓ  ２．９．１−  ２．９．３．を参照のこと。また、Ｂａｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ（ＩｇＧ）」ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１０，ｐａｇｅｓ  ７９−１０４（Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９２）も参照のこと。
【０１３０】
抗体の産生のための十分特徴付けられた抗原の適切な量は、標準的な技術を用いて得ることができる。例としては、ＣＤ２２は、Ｔｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，４８４，８９２号（１９９６）に記載される沈殿された抗体を用いてＢリンパ球タンパク質から免疫沈降され得る。あるいは、抗原タンパク質は、目的の抗原を過剰産生する、トランスフェクトされた培養された細胞から得ることができる。これらのタンパク質の各々をコードするＤＮＡ分子を含む発現ベクターは、公開されたヌクレオチド配列を用いて構築され得る。例えば、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７（１９９１）；Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５０１３（１９９３）を参照のこと。目的の抗原をコードするＤＮＡ分子は、長いオリゴヌクレオチドを交互にプライミングすることを用いてＤＮＡ分子を合成することによって得ることができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，ｐａｇｅｓ  ８．２．８  ｔｏ  ８．２．１３（１９９０）［「Ａｕｓｕｂｅｌ」］を参照のこと。また、Ｗｏｓｎｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ６０：１１５（１９８７）；およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ（ｅｄｓ．），ＳＨＯＲＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ８−８  ｔｏ  ８−９（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９５）も参照のこと。ポリメラーゼ連鎖反応を用いる確立された技術によって、１．８キロダルトンの長さ程度の大きさの遺伝子を合成する能力が得られる。Ａｄａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１：１１３１（１９９３）；Ｂａｍｂｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ２：２６６（１９９３）；Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｕｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｇｅｎｅｓ」ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｖｏｌ．１５：ＰＣＲ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ：ＣＵＲＲＥＮＴ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＡＮＤ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｗｈｉｔｅ（ｅｄ．）、ｐａｇｅｓ  ２６３−２６８（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９３）。
【０１３１】
別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体の可変領域がげっ歯類抗体の可変領域によって置き換えられているキメラ抗体である。キメラ抗体の利点としては、免疫原性の低下およびインビボ安定性の増大が挙げられる。
【０１３２】
キメラ抗体を構築するための技術は、当業者に周知である。例えば、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １３：４６９（１９９４）は、ＬＬ２モノクローナル抗体のＶκおよびＶHドメインをコードするＤＮＡ配列を、それぞれヒトκおよびＩｇＧ1定常領域ドメインと組み合わせることによってＬＬ２キメラを生成した方法を記載している。この刊行物はまた、ＬＬ２の軽鎖および重鎖の可変領域、それぞれ、ＶκおよびＶHのヌクレオチド配列も提供する。
【０１３３】
別の実施形態では、本発明の抗体は、人間ではない霊長類の抗体である。ヒヒにおいて治療上有用な抗体を惹起させるための一般的技術は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｔｅ  ａｌの国際特許公開Ｎｏ．ＷＯ９１／１１４６５（１９９１）に、そしてＬｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．のＩｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４６：３１０（１９９０）に見出され得る。
【０１３４】
さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、「ヒト化」モノクローナル抗体である。すなわち、マウス相補性決定領域（ＣＤＲ）は、マウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の可変鎖からヒト可変ドメインへ移され、その後に、マウスの対応物のフレームワーク領域におけるいくつかのヒト残基の置換が続く。本発明によるヒト化モノクローナル抗体は、治療法における使用に適切である。マウス免疫グロブリン可変ドメインをクローニングするための一般的技術は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６：３８３３（１９８９）の刊行物によって記載される。ヒト化モノクローナル抗体を生成するための技術は、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６），Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２），Ｓａｎｄｈｕ，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２：４３７（１９９２）、およびＳｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎ  １５０：２８４４（１９９３）によって記載される。Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：１４１３（１９９５）の刊行物は、ヒト化ＬＬ２抗体の構築物を記載する。
【０１３５】
別の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。このような抗体は、抗原のチャレンジに応答して特異的なヒト抗体を生成するように「設計されている(engineered)」トランスジェニックマウスから得られる。この技術では、ヒトの重鎖および軽鎖の遺伝子座のエレメントが、内因性の重鎖および軽鎖の遺伝子座の標的化された分裂を含む胚性幹細胞株由来のマウスの株に導入される。このトランスジェニックマウスは、ヒト抗原に特異的であるヒト抗体を合成し得、このマウスを用いて、ヒト抗体分泌ハイブリドーマを生成し得る。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ７：１３（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６（１９９４），およびＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６：５７９（１９９４）によって記載されている。
【０１３６】
完全なヒト抗体はまた、その全てが当分野で既知である遺伝的または染色体トランスフェクション法、そしてファージディスプレイ技術によって構築され得る。例えば、免疫されていないドナー由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからの、インビトロにおける、ヒト抗体およびそのフラグメントの産生については、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０）を参照のこと。この技術では、抗体可変ドメイン遺伝子は、糸状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーのいずれかのコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上の機能的な抗体フラグメントとして提示される。糸状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づく選択によってまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択が生じる。この方法では、このファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、種々の形式で行うことが可能で、それらの概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３：５５６４−５７１（１９９３）を参照のこと。
【０１３７】
異種間の抗体が本発明において用いられ得るが、宿主から免疫応答を誘導する抗体自体の確率を減らすために同種間の抗体を用いることが好ましい。本発明の特定の実施形態では、ヒト抗体が用いられる。ヒト被験体における使用のために完全ヒト抗体を作成するための方法としては、その全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする、米国特許第５，９６９，１０８号に記載のような、大きいヒト抗体ライブラリーから抗原特異的な抗体を選択するためのファージディスプレイ技術の使用が挙げられる。計画的なヒト抗体ライブラリーからヒト抗体を作成するための他のファージディスプレイ方法は、その全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする、米国特許第６，３００，０６４号に記載される。また以下も参照のこと：Ｍａｒｋｓ，ｅｔ  ａｌ「Ｂｙ−Ｐａｓｓｉｎｇ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ：Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  Ｃｈａｉｎ  Ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ」（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１０：ｐ．７７９−７８３．（１９９２）），Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，ｅｔ  ａｌ．「Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｒｏｍ  Ｔｈｅｉｒ  Ｇｅｎｅｓ．」（Ｒｅｖ  Ｆｒ  Ｔｒａｎｓｆｕｓ  Ｈｅｍｏｂｉｏｌ，ｖｏｌ．３６：ｐ．１９−４７（１９９３））；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ｅｔ  ａｌ「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  Ｌａｒｇｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ」、ＥＭＢＯ  Ｊ，ｖｏｌ．１３：ｐ．３２４５−３２６０（１９９４））；Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ「Ｍａｎ−Ｍａｄｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．」（Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．３４９：ｐ．２９３−２９９（１９９１））；Ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ，ｅｔ  ａｌ．，「Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｓｅｍｉ−ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｗｉｔｈ  Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＣＤＲ３  Ｒｅｇｉｏｎｓ」，（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，ｖｏｌ．２４８，ｐｐ．９７−１０５（１９９５））ならびにＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｓｅｍｉｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ：Ａ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｐｒｏｂｌｅｍ」，（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｄ  ＵＳＡ，ｖｏｌ．８９，ｐｐ．４４５７−４４６１（１９９２））。完全ヒト抗体を作成するための他の方法としては、ヒト抗体レパートリーの大きい部分をコードするトランスジェニックマウスを用いる、いわゆる「ゼノマウス(xenomouse)」技術の使用が挙げられる。これらの方法は、例えば、Ａｂｇｅｎｉｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ  ＣＡ）およびＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＮＪ）によって商業的に提供される。また、米国特許第６，０７５，１８１号；Ｌｏｎｂｅｒｇ，「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏ���ｉｅｓ．」Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３（１９９４）：４９−１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ．」Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３（１９９５）：６５−９３を参照のこと。
【０１３８】
多特異的抗体の産生
本発明による多特異的アンタゴニストは、多特異的抗体または抗体フラグメント、特に二重特異的抗体（ｂｓＡｂ）または二重特異的抗体フラグメント（ｂｓＦａｂ）であってもよい。これらの多特異的アンタゴニストは、少なくとも２つの異なる標的に特異的に結合するアームを有し、この標的は、先天的免疫系の炎症促進性エフェクター、凝固因子、および炎症性もしくは免疫機能不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生と特異的に関連する標的からなる群より選択され、この後者の標的は、免疫系の炎症促進性エフェクターでも、凝固因子でも、またはがん細胞レセプターでも、またはがん関連抗原でもない。
【０１３９】
本発明は、プレターゲティングストラテジーを使用し得、ここで多特異的抗体またはフラグメントの１つのアームが標的化可能なコンジュゲートに結合する。アビジンまたはストレプトアビジンおよびビオチンに基づくプレターゲティングストラテジーは、「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｌｅｓｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｂｉｏｔｉｎ／Ａｖｉｄｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．」と題されたＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇの米国特許第５，５２５，３３８号に記載されるように用いられ得る。アビジン／ストレプトアビジン系は、高度に多用途であり、そしていくつかの構成で用いられている。抗体は、第一の標的化物質とともに用いられるストレプトアビジンまたはビオチンとカップリングされ得る。この後に、それぞれ、ビオチンとまたはアビジン／ストレプトアビジンとコンジュゲートされている治療物質が時には続く。別の構成は、ビオチンコンジュゲートされた抗体を最初に標的化する３ステップアプローチに依存し、その後にストレプトアビジン／アビジンによる架橋が続き、次いでビオチンコンジュゲートされた治療剤が与えられる。抗体および他の種に対するビオチンおよびアビジン／ストレプトアビジンコンジュゲートの説明は、当分野において周知である。例えば、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，８４６，７４１号；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，９６５，１１５号、およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第６，１２０，７６８号を参照のこと。アビジン−ビオチン系は、極めて高い親和性を有し、臨床的な経験によって、約２０〜３０％の患者がアビジンに対して抗体応答をマウントし、そして最大７０％までがストレプトアビジンに対する抗体を生成することが示されている。従って、低分子量ハプテンがより好ましい。
【０１４０】
本実施形態では、多特異的アンタゴニストは、治療剤がコンジュゲートされるかまたは融合される低分子量ハプテンに特異的なアームを含む多特異的抗体である。この場合、抗体は細胞をプレターゲティングし、付着した治療剤を有する低分子量ハプテンは、抗体が標的に結合された後に投与される。認識可能なハプテンの例としては、限定はしないが、キレート剤、例えば、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、フルオレセイン・イソチオシアネート、ビタミンＢ１２および特定の抗体が惹起され得る他の部分が挙げられる。引き続いて注射されるハプテンは、異なる診断剤または治療剤を担持し得る。各々が同じハプテンを認識するアームを含む、２つ以上の多特異的抗体も用いられてもよい。多特異的抗体の使用および多特異的抗体の組み合わせは、腫瘍および他の疾患組織における抗原不均一性を克服するのに特に有効である。
【０１４１】
疾患標的に対する治療剤の局在化のためのハプテン−治療物質コンジュゲートの使用は、いくつかの異なる利点を有する。同じハプテンがいくつかの異なる治療物質に結合されてもよい。さらに、１つの治療物質に対する免疫応答が見られなければならず、これは、ベクターを標的化する開発された非免疫原性抗体がハプテン−治療物質に基づく系において用いられる能力を破壊しない。これによってまた、任意の標的化抗体および治療剤の組み合わせとともに用いられ得る一般的な標的系の使用が可能になる。ハプテン認識系を用いることにおいて、設計する化学者は、ハプテンがどのように治療物質に結合されるかを制御し、そして特定の細胞外もしくは細胞内酵素に対する不安定性、またはわずかに低いｐＨのような特定のセットの状態に対する不安定性のような特徴を組み込むことができる。
【０１４２】
担体部分は、先天的免疫系の炎症促進性エフェクター、凝固因子、あるいは先天的免疫系の炎症促進性エフェクターでも凝固因子でもない炎症性もしくは免疫機能不全障害と特異的に関連する標的、または病的血管新生と特異的に関連する標的に対してコンジュゲートされる。標的可能なコンジュゲートに特異的に結合する少なくとも１つのアームを有する多特異的な抗体およびフラグメントの使用によって、各々の適用について、新規な多特異的抗体を生じることなく、種々の治療適用を行うことが可能になる。
【０１４３】
ＭＡｂは、当業者に既知のｍＡｂを作製する標準的な方法によって任意のハプテンまたは薬物に対して惹起され得る。例えば、免疫原性刺激因子またはアジュバント、例えば、キーホール・リンペット・ヘモシアニンに対して、ＨＳＧ（ヒスタミン−スクシニル−グリシン）のようなハプテンを結合して、免疫応答性の動物にこのコンジュゲートを注射することが可能である。複数の注射がしばしば使用される。このようなアプローチは、ＨＳＧのような該当のハプテンに対するわずかに異なる特異性を有するいくつかの異なる抗体をもたらし得ることが理解されるべきである。ＭＡｂは、ＨＳＧ構造の異なる小部分、または異なる構成を認識し得る。単にＨＳＧ分子自体よりもわずかに多く認識するＭＡｂ、例えば、リジンのεアミノ基に結合された場合にのみＨＳＧ部分を認識するＭＡｂも得ることができるが、必要に応じて、ＨＳＧは、後者の免疫原性タンパク質上のεリジルアミノ基に対する結合によってＫＬＨ（例えば）に最初に結合された。排他的であることは望まないが、これらの一般的な手順および結果は、当分野で周知である。次いで、これらの免疫された動物から抗体を産生する脾臓細胞の単離、そして抗ハプテン抗体を分泌するハイブリドーマを生成するためのそれらの骨髄細胞株への引き続く融合については周知である。Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：５１１−９（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：２９２−５（１９７６）；ならびにＫｏｈｌｅｒ  Ｇ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−７（１９７５）を参照のこと。
【０１４４】
多特異的標的タンパク質は、周知の反応によって、種々の特異性を有する抗体から化学的に調製され得る。代表的には、１つのＭＡｂは、架橋剤との反応によって活性化され、後に、第一のＭＡｂのリジン、還元されたシステインまたは酸化された炭水化物残基で反応するように選択される。精製後、活性化された第一のＭＡｂは、第二のＭＡｂと混合され、次いでこれが元の架橋剤の第二の官能基と；最も顕著には、第二のＭＡｂのリジン、還元されたシステインまたは酸化された炭水化物残基を介して、特異的に反応する。多特異的な標的タンパク質はまた、クアドローマ技術によって体細胞性に調製され得る。このクアドローマ技術は、二重特異的抗体の両方のアームを発現する細胞株が生成されて、培養物中で増殖されて、ｂｓＭＡｂを分泌する技術である。最終的にｂｓＭＡｂはまた、分子生物学の現代の技術によって好都合に生成され得る。例えば、Ｃｏｌｍａｎ，Ａ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｓｙｍｐ  ６３：１４１−１４７（１９９８）；米国特許第５，８２７，６９０号；および公開米国出願第２００２０００６３７９号を参照のこと。
【０１４５】
本発明は、抗体および抗体フラグメントを包含する。抗体は一般に、二価であるか、または頻度は低いが多価であり、そしてこの二価性が、細胞表面に対する抗体の付着の強度を増強する。しかし、この抗体の二価性は時には、標的細胞が抗原性調節を受けるように誘導し、それによって細胞が細胞傷害性物質、エフェクター細胞および細胞−抗体相互作用に関与する補体を回避し得る方法が得られる。このような改変を防止する手段としては、単価抗体または抗体フラグメントが用いられ得る。単価抗体は完全な、機能的な免疫グロブリン分子であって、ここでは軽鎖の一方のみが抗原に結合する。このような抗体を調製する一つの方法は、米国特許第４，８４１，０２５に開示される。
【０１４６】
単価性は、抗体フラグメントを用いることによって達成され得る。これらの実施形態において有用な例示的な単価抗体フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’などである。単価抗体フラグメントであって、代表的には、約２５ｋＤ（Ｆｖ）〜約５０ｋＤ（Ｆａｂ，Ｆａｂ’）に及ぶ分子量を示すフラグメントは、抗体全体よりも小さく、従って、一般には、より大きく標的部位に浸透し得る。さらに、単価結合は、標的表面で結合する担体の制限がより少なくなり（二価抗体の使用の間に生じ、これが強力に結合して、標的細胞部位に結合して、それによって標的組織の副層にさらに出て行くために障壁を作成する）、それによって、標的の均質性が改善される。さらに、分子が小さいほど、レシピエントからより急速に排出され、それによって、投与された低分子コンジュゲートの免疫原性が減少する。抗体全体のコンジュゲートと比較して標的に局在する単価フラグメントコンジュゲートの投与された用量の割合はより低い。しかし、減少された免疫原性によって、単価フラグメントコンジュゲートで投与される最初の用量は大きくなり得る。さらに、単価抗体フラグメントは一般には、標的細胞上に二価抗体または抗体全体がある限り、標的細胞上には存在しない。
【０１４７】
この抗体フラグメントは、抗体の抗原結合部分、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）2、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどである。この抗体フラグメントは、インタクトな抗体によって認識される同じ抗原に結合する。例えば、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体フラグメントは、ＣＤ２２のエピトープに結合する。本発明のｂｓＡｂとしては、限定はしないが、ＩｇＧ×ＩｇＧ、ＩｇＧ×Ｆ（ａｂ’）2、ＩｇＧ×Ｆａｂ’、ＩｇＧ×ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）2×Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’×Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’×Ｆａｂ’、Ｆａｂ’×ｓｃＦｖおよびｓｃＦｖ×ｓｃＦｖ  ｂｓＭａｂが挙げられる。また、ｓｃＦｖ×ＩｇＧ×ｓｃＦｖおよびＦａｂ’×ＩｇＧ×Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ×Ｆ（ａｂ’）2×ｓｃＦｖおよびＦａｂ’×Ｆ（ａｂ’）2×Ｆａｂ’のような種も含まれる。
【０１４８】
上で注記されたとおり、「抗体フラグメント」という用語はまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する任意の合成または遺伝子操作されたタンパク質を含む。例えば、抗体フラグメントとしては、単離されたフラグメント、重鎖および軽鎖の可変領域からなる、「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖および重鎖の可変領域がペプチドリンカーによって接続される組み換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓＦｖタンパク質」）、および超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。
【０１４９】
融合タンパク質の生成
多特異的アンタゴニストを生成するための別の方法は、２つ以上の異なる単鎖抗体または必要な多特異性を有する抗体フラグメントセグメントを連結する組み換え融合タンパク質を操作することである。例えば、Ｃｏｌｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １５：１５９−１６３，１９９７を参照のこと。例えば、種々の二重特異性融合タンパク質は、分子操作を用いて生成され得る。１つの形態では、二重特異性融合タンパク質は、単価であって、これは、例えば、一つの抗原について単一の結合部位を有するｓｃＦｖ、および第二の抗原について単一の結合部位を有するＦａｂフラグメントからなる。別の形態では、この二重特異性融合タンパク質は二価であって、これは例えば、１つの抗原について２つの結合部位を有するＩｇＧおよび第二の抗原について２つの結合部位を有する２つのｓｃＦｖからなる。
【０１５０】
機能的な二重特異性単鎖抗体（ｂｓｃＡｂ）はまた、二重特異性抗体とも呼ばれ、組み換え方法を用いて哺乳動物細胞において生成され得る。例えば、Ｍａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，９２：７０２１−７０２５，１９９５を参照のこと。例えば、ｂｓｃＡｂは、組み換え方法を用いて、グリシン−セリンリンカーを介して２つの単鎖Ｆｖフラグメントを連結することによって生成される。目的の２つの抗体のＶ軽鎖（ＶL）ドメインおよびＶ重鎖（ＶH）ドメインは、標準的なＰＣＲ法を用いて単離される。次に各々のハイブリドーマから得られるこのＶLおよびＶHのｃＤＮＡを連結して、２段階の融合ＰＣＲにおいて単鎖フラグメントを形成する。この第一のＰＣＲ工程は、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒｌ）3リンカーを導入し、そして第二の工程は、ＶLおよびＶHアンプリコンを連結する。次いで、各々の単鎖分子を細菌の発現ベクターにクローニングする。増幅後、単鎖分子の１つを切り出して、目的の第二の単鎖分子を含む、他のベクターにサブクローニングする。得られたｂｓｃＡｂフラグメントを、真核生物の発現ベクターにサブクローニングする。機能的なタンパク質発現は、チャイニーズハムスター卵母細胞にこのベクターを移入することによって得ることができる。組み換え方法を用いて種々の融合タンパク質を生成してもよい。
【０１５１】
免疫コンジュゲートの産生
本発明の任意の多特異的アンタゴニストは、１つ以上の治療剤または診断／検出物質とコンジュゲートされ得る。一般には、１つの治療物質または診断／検出物質は、各々の抗体、その融合タンパク質またはフラグメントに結合されるが、２つ以上の治療物質および／または診断／検出物質が、同じ抗体または抗体フラグメントに結合されてもよい。Ｆｃ領域が存在しない場合（例えば、免疫コンジュゲートの抗体成分として用いられる抗体が抗体フラグメントである場合）、全長抗体または抗体フラグメントの軽鎖可変領域に炭水化物部分を導入することが可能である。例えば、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５４：５９１９（１９９５）；Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，４４３，９５３号（１９９５），Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第６，２５４，８６８号を参照のこと。治療物質または診断／検出物質に結合するために、操作された炭水化物部分を用いる。
【０１５２】
抗体の炭水化物部分を介して抗体成分にペプチドを結合するための方法は、当業者に周知である。例えば、Ｓｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４１：８３２（１９８８）；Ｓｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４６：１１０１（１９９０）；およびＳｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，０５７，３１３号を参照のこと。この一般的な方法は、少なくとも１つの遊離アミン官能基を有し、そして複数のペプチドを有する担体ポリマーとの、酸化された炭水化物部分を有する抗体成分の反応を包含する。この反応によって、最初のＳｃｈｉｆｆ塩基（イミン）結合が生じ、これが、二級アミンへの還元によって安定化されて、最終的なコンジュゲートが形成され得る。
【０１５３】
治療物質または診断／検出物質は、ジスルフィド結合形成を介して還元された抗体成分のヒンジ領域に結合され得る。代替として、このような物質は、Ｎ−スクシニル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）のような、異種二官能性架橋を用いて抗体成分に結合され得る。Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ５６：２４４（１９９４）。このようなコンジュゲートのための一般的な技術は、当分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ，ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＣＯＮＪＵＧＡＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９９１）；Ｕｐｅｓｌａｃｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」，ｉｎ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ  ＡＮＤ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｂｉｒｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ  １８７−２３０（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９９５）；Ｐｒｉｃｅ，「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ，ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ  ＡＮＤ  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ，Ｒｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ  ６０−８４（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５）を参照のこと。あるいは、治療物質または診断／検出物質は、抗体のＦｃ領域における炭水化物部分を介してコンジュゲートされ得る。この炭水化物基は、チオール基に結合される同じ物質の負荷を増大するために用いられてもよく、またはこの炭水化物部分は、異なるペプチドに結合するために用いられてもよい。
【０１５４】
脂肪乳剤に対する抗体のカップリング
ポリ（エチレングリコール）修飾ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）で安定化された、長期循環のミクロン未満の脂肪乳剤を、本発明の抗体の薬物担体として用いてもよい。このエマルジョンは、２つの主な部分からなる。油状のコア、例えば、乳化剤、例えば、リン脂質で安定化されたトリグリセリド。リン脂質の乳化に劣る特性は、ポリソルベート８０のような生体適合性の共乳化剤を添加することによって増強され得る。好ましい実施形態では、この抗体は、ポリ（エチレングリコール）ベースの、異種二官能性カップリング剤、ポリ（エチレングリコール）−ビニルスルホン−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミジルエステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ−ＶＳ）と脂肪乳剤小球の表面に対してコンジュゲートされる。
【０１５５】
ミクロン未満の脂肪乳剤を、上記のように調製して、特徴付ける。Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ，８３：７２（１９９３）；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ，１３４：１１９（１９９６）。脂肪乳剤の基礎的な組成物はトリオレインである。ＤＰＰＣ：ポリソルベート８０，２：１：０．４（ｗ／ｗ）。指示される場合、ＰＥＧ−ＤＰＰＥを、ＤＰＰＣで計算された２〜８モル％の量で脂質混合物に添加する。
【０１５６】
カップリング手順は、ＮＨＳ−ＰＥＧ−ＶＳのＮＨＳエステル基とジステアロイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）のアミノ基との反応で開始する。２５μモルのＮＨＳ−ＰＥＧ−ＶＳを、２３μモルのＤＳＰＥおよび５０μモルのトリエチルアミンと、１ｍｌのクロロホルム中で、４０℃で６時間反応させて、ポリ（エチレングリコール）鎖（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＶＳ）の遠位端でビニルスルホン基を有するホスファチジル−エタノールアミンのポリ（エチレングリコール）誘導体を生成する。抗体コンジュゲートのために、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＶＳが、２モル％のＤＰＰＣの脂肪乳剤に含まれる。この成分を−２０℃でストック溶液からバイアルに分散させ、その溶媒をエバポレートさせて、減圧下で乾燥させる。リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を添加して、その混合物を５０℃に加熱して、３０秒間ボルテックスして、ＭＳＥプローブ超音波処理機で１分間超音波処理する。エマルジョンは４℃で保管してもよく、そして好ましくは２４時間以内にコンジュゲートに用いる。
【０１５７】
エマルジョン小球に対する抗体のカップリングは、この小球の表面上の遠位ＰＥＧ末端のビニルスルホン基と、抗体上の遊離チオール基との間の反応を介して行なわれる。ビニルスルホンは、チオール基に対する選択的カップリングのための魅力的な誘導体である。ほぼ中性のｐＨでは、ＶＳは、チオール基を含有するタンパク質に対して１５〜２０分の半減期でカップリングする。ＶＳの反応性は、マレイミドの反応性よりもわずかに小さいが、ＶＳ基は、水中でより安定であって、安定な結合はチオール基との反応から生じる。
【０１５８】
コンジュゲート前に、５０ｍＭの２−メルカプトエタノールによって４℃で１０分間、０．２ＭのＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．７）中で抗体を還元する。還元された抗体を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５スピンカラムで過剰の２−メルカプトエタノールから分離して、５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝化０．９％生理食塩水（ｐＨ５．３）中で平衡にする。この生成物を、２８０ｎｍでその吸光度を測定すること（そして１ｍｇ／ｍｌ抗体溶液で１．４であると仮定する）によって、または125Ｉ標識抗体の定量によって、タンパク質濃度についてアッセイする。チオール基は、３４３ｎｍの吸光度の変化によるＡｌｄｒｉｔｈｉｏｌ（登録商標）、そして標準としてシステインを用いて決定される。
【０１５９】
カップリング反応を、アルゴン下で、室温で一晩、ＨＥＰＥＳ緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）中で行う。過剰のビニルスルホン基を２ｍＭの２−メルカプトエタノールを用いて３０分間クエンチして、過剰の２−メルカプトエタノールおよび抗体を、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＣＬ４８カラム上のゲルクロマトグラフィーによって除去する。この免疫コンジュゲートを、カラムの空隙容量付近で収集して、０．４５μｍの滅菌フィルターを通過させることによって滅菌して、４℃で保管する。
【０１６０】
カップリング効率は、125Ｉ標識抗体を用いて算出する。エマルジョンの回復は、平行実験における［14Ｃ］ＤＰＰＣの測定値から見積もる。表面が移植されたＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＶＳのＶＳ基に対する還元ＬＬ２のコンジュゲートは、８５％近い代表的な効率で極めて再現性である。
【０１６１】
単一および多様なレジメンにおける多特異的アンタゴニストの治療用途
本発明は、先天的免疫系または適応性（後天的）免疫系の免疫応答に関与する種々の宿主細胞に対して結合するための特定の抗体および抗体異種コンジュゲートを有することによって、そしてアゴニストもしくはアンタゴニスト作用によって重要な細胞およびレセプターの作用を調節することによって、多様な急性および慢性の炎症性および免疫調節不全疾患、ならびに特定のがんの治療に関する。特に有利なのは、これらの細胞／レセプターを標的化する二機能性および多機能性（二重特異性または多特異的）抗体、ならびに疾患の細胞／組織の標的分子の使用である。引用することにより本明細書の一部をなすものとする、Ｈａｎｓｅｎの米国特許第６，４５８，９３３号を参照のこと。Ｈａｎｓｅｎは、病原体（感染性生物体およびがん）の宿主をクリアリングすること、治療物質または診断物質、自己抗体、または抗移植片抗体に集中しているが、本発明は、免疫に関与する適切な宿主細胞および疾患の細胞によって発現される標的細胞／レセプターを標的化することによって、特定の疾患に対する宿主免疫の変更を可能にする。
【０１６２】
多特異的アンタゴニストは、薬学的に有用な組成物を調製するために既知の方法に従って処方され、ここで治療タンパク質は、薬学的に許容可能な担体との混合物に含有される。組成物は、「薬学的に許容可能な担体」と言われ、その投与は、レシピエントの患者によって耐容され得る。滅菌リン酸緩衝化生理食塩水は、薬学的に許容可能な担体の１例である。他の適切な担体は、当業者に周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ  Ｅｄ（１９９５）および後の版を参照のこと。
【０１６３】
治療目的のために、多特異的アンタゴニストを、単独で、またはリポソームとコンジュゲートして、患者に、薬学的に許容可能な担体中で治療上有効な量で投与する。これに関しては、「治療上有効な量」とは、生理学的に有意である量である。ある物質は、その存在がレシピエントの患者の生理学において検出可能な変化を生じる場合に、生理学的に有意である。本発明の文脈では、ある物質は、その存在が標的化された細胞の不活性化または殺傷を生じる場合に、生理学的に重要である。
【０１６４】
裸の多特異的アンタゴニストでの治療を用いる場合、これは単に、このような治療の必要な被験体にこのアンタゴニストを投与すること、およびその標的に対してこのアンタゴニストが結合するために十分な時間を置くことを伴う。治療が、ハプテン結合部位を含む多特異的アンタゴニストを含む場合、この被験体は、最初に多特異的アンタゴニストを投与され、次いでアンタゴニストが局在するために、そして未結合のアンタゴニストが被験体の血流から排出されるのに十分な時間待った後に、治療物質を含む担体分子が、被験体に投与されて、多特異的アンタゴニストのハプテン結合部位に結合する。あるいは、クリアリング剤は、アンタゴニストが標的に結合された後に投与され得る。このようなプレターゲティング方法は、例えば、Ｇａｕｔｈｅｒｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，８０（１２Ｓｕｐｐｌ）：２６１８−２３（１９９７）；Ｋａｒａｃａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１１：８４２−５４（２０００）；Ｓｈａｒｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６３：３５４−６３（２００３）；Ｓｈａｒｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎ  Ｒｅｓ，９（１０  Ｐｔ  ２）：３８９７Ｓ−９１３Ｓ；ならびに米国特許出願第２００３０２３２０１１号Ａ１および米国特許出願第２００４０２４１１５８号Ａ１に詳細に記載される。二次的な治療剤が治療レジメンの一部を形成する場合、これは、多特異的アンタゴニストが投与される前、同時または後に投与され得る。
【０１６５】
本明細書に記載される多特異的アンタゴニストは、自己免疫疾患の治療に、詳細にはクラスＩＩＩ自己免疫疾患の治療に有用であり、この自己免疫疾患としては、免疫媒介性血小板減少症、例えば、急性特発性血小板減少性紫斑病および慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シデナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、狼瘡腎炎、リューマチ熱、多腺性症候群、類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、連鎖球菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アディソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス（類肉腫症）、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、バージャー病（thromboangitis ubiterans）、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変症、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡(pamphigus vulgaris)、ヴェグナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、および線維化性肺胞炎が挙げられる。
【０１６６】
多特異的アンタゴニストはまた、自己免疫疾患以外の炎症性または免疫調節不全障害を治療するのに有用である。本発明による組成物で治療され得るこれらの他の炎症性または免疫調節不全障害の例としては、敗血症または敗血性ショック、感染病、神経障害、移植片対宿主病、移植片拒絶、急性呼吸窮迫症候群、肉芽腫性疾患、喘息、座瘡、汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられる。
【０１６７】
自己免疫疾患を含む、炎症性および免疫調節不全障害の治療における使用に加えて、治療組成物はまた、病的血管新生およびがんを治療するのに有用である。がんとしては、造血性のがん、例えば、白血病、リンパ腫および骨髄腫、ならびに固形癌、例えば、癌腫、黒色腫、神経膠腫などの両方が挙げられる。白血病としては、骨髄性白血病、例えば、ＡＭＬおよびＣＭＬ、リンパ性白血病、例えば、ＡＬＬおよびＣＬＬ、ならびにＴ細胞白血病が挙げられる。リンパ腫としては、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫およびＴ細胞リンパ腫が挙げられる。この治療組成物はまた、がん、感染およびいくつかの自己免疫疾患を伴い得る悪液質を治療するのに有用である。特には、本発明による多特異的アンタゴニストとしては好ましくは、この実施形態における標的としてのＩＬ−６またはＴＮＦ−αが挙げられる。
【０１６８】
多特異的アンタゴニストはまた、感染性疾患に関連する炎症を治療するのに用いられることがあり、この感染性疾患としては、ウイルス感染、細菌感染、寄生生物感染および真菌感染が挙げられる。例示的なウイルスとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、シミアンウイルス４０、呼吸器合胞体ウイルス、マウス乳がんウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、デングウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、マウス白血病ウイルス、ムンプスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、疣ウイルス、ブルー・タングウイルスが挙げられる。例示的な細菌としては、Ａｎｔｈｒａｘ  ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、ライム病スピロヘータ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓおよび破傷風毒素が挙げられる。例示的な原生動物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒａｎｇｅｌｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐａｎｉｃｕｍ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｂｏｖｉｓ、Ｅｌｍｅｒｉａ  ｔｅｎｅｌｌａ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ  ｐａｒｖａ、Ｔａｅｎｉａ  ｈｙｄａｔｉｇｅｎａ、Ｔａｅｎｉａ  ｏｖｉｓ、Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓまたはＭｅｓｏｃｅｓｔｏｉｄｅｓ  ｃｏｒｔｉである。例示的なマイコプラズマは、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ａｒｔｈｒｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｏｒａｌｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ａｒｇｉｎｉｎｉ、Ａｃｈｏｌｅｐｌａｓｍａ  ｌａｉｄｌａｗｉｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓａｌｉｖａｒｕｍ、およびＭｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである。この真菌は、小胞子菌（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ）、白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）、表皮菌（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ）の種、Ｓｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｃｙｒｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、またはＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ由来であり得る。例示的な菌類としては、小胞子菌、白癬菌、表皮菌（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ）の種、Ｓｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｃｙｒｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、またはＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓが挙げられる。例示的な寄生生物としては、マラリア寄生生物、スピロヘータなどが挙げられ、これには蠕虫が含まれる。本発明における使用のために抗体が開発され得る代表的な疾患を引き起こす感染性生物体の列挙は、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ（Ｈａｒｐｅｒ  ＆  Ｒｏｗ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７３およびその後）の第二版およびその後の版に含有され、そして当業者に周知である。これらの実施形態では、多特異的抗体は好ましくは、微生物または寄生生物に関連する抗原を標的化する。
【０１６９】
敗血症および敗血性ショックは、抗し難い炎症および免疫応答によって特徴付けられ、これが、本発明による多特異的アンタゴニストでの治療に特に感受性にする。本発明によるこれらの条件の治療は、異なる機構を介して、そして好ましくは、この免疫調節不全、炎症性疾患の病原性に関与する２つ以上の標的分子に対して機能するアンタゴニストまたはアゴニストメディエーターまたは抗体の融合タンパク質を投与することによって作用する物質を組み合わせることを要する。Ｖａｎ  Ａｍｅｒｓｆｏｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（前出）によって提唱されるように、「炎症促進性応答と抗炎症促進性応答との間のバランスを回復するようにある試みが行われなければならない」。本発明は、少なくとも２つの異なる標的に特異的な多特異的アンタゴニストを用いることによって、バランスを回復して、敗血症を有する患者におけるＴＮＦまたはＩＬ−１のような炎症促進性サイトカインを中和する、単独の物質の使用を上回る明らかな改良技術を提供し、この標的は、先天的免疫系の炎症促進性エフェクター、凝固因子、および敗血症または敗血性ショックと特異的に関連する標的からなる群より選択される。
【０１７０】
敗血症または敗血性ショックの治療のための一実施形態では、種々の抗炎症性因子が、活性プロテインＣと、そして抗凝固因子と組み合わされて、そしてこの複数の物質による治療の少なくとも１つの成分は、補体経路アンタゴニストを含む、炎症または凝固の少なくとも１つの標的レセプターまたはメディエーターに対するアゴニストまたはアンタゴニスト抗体である。重篤な敗血症および敗血性ショックを有する患者を治療するために用いられる選択された抗炎症性物質および免疫調節性物質の列挙は、Ｂｏｃｈｕｄ  ａｎｄ  Ｃａｌａｎｄｒａ（Ｂｒｉｔ  Ｍｅｄ  Ｊ  ２００３；３２６：２６２−２６６）に見出され、そしていくつかの敗血症および敗血性ショックのほとんどのこれらの免疫調節性治療の臨床的トライアルは、Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２００２；３４：１０８４−９３に概説される。
【０１７１】
敗血症および敗血性ショックの治療において有用な特に好ましい物質は、標的の１つとして、ＭＩＦ、ＬＰＳ、ＴＮＦ−α、Ｃ５ａレセプター（Ｃ５ａＲ）、ＴＬＲ２またはＨＭＧＢ−Ｉを標的化する多特異的アンタゴニストである。他の標的はまた、これらから、そして他の炎症促進性サイトカインまたはレセプター、例えば、インターロイキンＩＬ−１、ＴＳＳＴ−１（毒素性ショック症候群毒素１）、ＮＣＡ−９０、ＮＣＡ−９５、およびＨＬＡ−ＤＲから選択されてもよい。いくつかの敗血症または敗血性ショックの治療のための物質または融合タンパク質の好ましい組み合わせとしては、ＭＩＦとＣ５ａレセプター（Ｃ５ａＲ）、ＭＩＦとＩＬ−６、ＬＰＳとＭＩＦ、ＴＮＦ−αとＨＭＧＢ−Ｉ、ＴＬＲ２（トール様レセプター−２）とＬＰＳ、ＴＬＲ２とＩＬ−６、ＴＬＲ２とＣ５ａＲを標的化する組み合わせが挙げられる。抗−ＭＩＦ／抗−ＮＣＡ−９０または抗−ＭＩＦ／抗−ＨＬＡ−ＤＲの多特異的アンタゴニストを用いて、毒素性ショックの初期の証拠を有する患者においてＭＩＦを中和する血液／感染性の沈着における顆粒球を標的化してもよい。好ましくは、これらは、ヒト化抗体またはヒト抗体構築物である。これらは、利用可能な抗体から当業者によって、容易に組み合わされるかまたは構築される。例えば、Ｔ２．５Ｍａｂは、ＴＬＲ２細胞外ドメインを用いてＴＬＲ２ｎｅｇマウスを免疫することによってＴＬＲ−２に対するアンタゴニストとして開発され、そしてこの抗体は、ＴＮＦ−αのような炎症性メディエーターの遊離を阻害して、マウスにおいて致死性のショック様の症候群を妨げる（Ｍｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００４；１１３：１４７３−１４８１）。好ましい実施形態では、組み換え活性化プロテインＣは、抗体混合物および融合タンパク質と組み合わせて二次的な治療剤として用いられる。
【０１７２】
補体調節性因子、例えば、ＣＤ４６、ＣＤＳ５５および／またはＣＤ５９および腫瘍関連抗原の両方を標的化する多特異的アンタゴニスト、そしてさらに詳細には少なくとも二重特異性の抗体であって、１つのアームが補体調節性因子を標的化し、そして第二のアームが腫瘍関連抗原を標的化する抗体が、これらの抗原の１つだけを標的化する抗体よりもがんを治療するのに有効であるということが本発明によってみいだされている。さらに、Ｓｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（前出）の教示に反して、βグルカンの使用は、抗がん抗体単独の使用を上回る多特異的アンタゴニストのような改善された有効性についてインビボで必須ではないこと、そしてがんおよび補体調節タンパク質（例えば、ＣＤ５５）を標的化する二重特異性抗体は、特に、補体調節タンパク質の高い発現を有する（これによって、抗体による補体媒介性細胞傷害性をブロックする）腫瘍に対して、それ自体で用いられる抗体よりもがん細胞殺傷を増大することが発見されている。
【０１７３】
中和抗体について別の好ましい補体関連標的は、補体の別の経路に関与する補体因子Ｈ（およびその改変体ＦＨＬ−１）である。なぜなら特に第Ｈ因子は、いくつかのがんで過剰発現され得るからである（Ａｊｏｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４；６４：６３１０−６３１８，およびそこに引用される参考文献）。従って、多特異的アンタゴニスト、および詳細には、補体因子Ｈおよび因子ＦＨＬ−１に対する多特異的抗体の使用は、特に重要である。補体因子Ｈおよびその改変体ＦＨＬ−１に対する多特異的アンタゴニストはさらに、ＣＤ５５、ＣＤ４６および／またはＣＤ５９、ならびに他の補体因子を標的化し得る。これらの多特異的アンタゴニストおよび腫瘍関連抗原およびレセプターに対して標的化することは、腫瘍細胞に対する補体抗体の特異的な標的化を増強して、単独の抗原またはエピトープを標的化する抗体の使用を上回る利点を提供することが見出されている。これは、現在までに公開された文献における矛盾を克服している。
【０１７４】
悪性でない状態では、異なるアプローチが存在する。これは、血管内皮に対する炎症性細胞の接着を媒介し得る、補体由来アナフィラトキシンＣ５ａまたは補体レセプター３（ＣＲ３、ＣＤ１８／１１ｂ）を含む他の補体レセプターまたは因子での中和または妨害を含む。このような状況では、ＣＤ４６、ＣＤ５５および／またはＣＤ５９の発現の増大は、補体媒介性免疫を緩和するために、そしてまた、器官移植片拒絶におけるような超急性拒絶を減弱するために所望される。従って、このような補体調節性因子のアゴニストの使用は有利である。
【０１７５】
アテローム性動脈硬化症の治療において有用な特に好ましい物質は、ＭＩＦ、低分子量リポタンパク質（ＬＤＬ）およびＣＥＡＣＡＭ６（例えば、ＮＣＡ−９０）を標的化する多特異的アンタゴニストである。他の標的はまた、これらから、そして他の炎症促進性サイトカインから選択されてもよい。アテローム性動脈硬化症の治療のための物質または融合タンパク質の好ましい組み合わせは、ＭＩＦと低分子量リポタンパク質修飾エピトープ、ＮＣＡ−９０とＭＩＦ、ＮＣＡ−９０と低分子量リポタンパク質（ＬＤＬ）エピトープ、またはＬＤＬとＣＤ８３を標的化する。これらは、市販の抗体から当業者によって容易に組み合わされるかまたは構築される。例えば、Ｍａｂ  ＭＤＡ２、プロトタイプＭａｂは、酸化の豊富なアテローム性動脈硬化病変内で（Ｔｓｉｍｉｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  １９９９；６：８１−９０に記載されるように）、マロンジアルデヒド溶解エピトープ（例えば、マロンジアルデヒド修飾ＬＤＬ中）を認識する。
【０１７６】
敗血症およびアテローム性動脈硬化症に加えて、ＭＩＦは、アテローム性動脈硬化症を有するウサギで発現されることが報告され（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓ  ２０００；８７：１２０２−１２０８）、このことは、これがこの状態では重要なサイトカインであることを示す。ＭＩＦが関与している他の疾患としては、糸球体腎炎、動脈炎、遅延型過敏症、胃炎および急性心筋虚血が挙げられる（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．によって概説される、Ｊ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ  ２００３；６２５−６３１）。従って、ＭＩＦを標的化する多特異的アンタゴニストはこれらの任意の状態を治療するのに有用である。
【０１７７】
米国で５００，０００例ほどの多くの個体が毎年敗血症を発症し、集団の加齢化とともに発症する数は増えている。最高の抗生物質療法および心肺のサポート、そして炎症および敗血症の凝固の理解の進歩にもかかわらず、これらの症例の半分ほどが死に至る。感染の間、炎症促進性サイトカインが放出されて活性化される。これらとしては、ＴＮＦα、ＩＬ−１およびＩＬ−６が挙げられる。ＩＬ−４およびＩＬ−１０を含む抗炎症性メディエーターは、重篤な敗血症における炎症促進性サイトカインを調節するのには不十分であるようである。
【０１７８】
敗血症の応答の顕著な特徴としては、制御されない炎症および凝固が挙げられる。血管内皮の損傷は、内毒素、組織因子、壊死性細胞または羊水のいずれで生じても誘発性の事象であって、誘発性の事象になる。この内皮の損傷によって、組織因子の遊離がもたらされ、これが凝固系を活性化して、過剰なトロンビン生成を生じる。その後の血餅形成は、微小血管内皮の機能不全をもたらし、そしてそのままにされれば、低酸素症、臓器機能不全および続発性の器官不全を生じる。
【０１７９】
内皮の損傷およびプロトロンビン環境へのシフトによって、トロンビン、すなわち、トロンボモジュリンおよびプロテインＣ、すなわち、内皮のプロテインＣレセプター（ＥＰＣＲ）について発現の減少および内皮レセプターの機能障害がもたらされる。トロンボモジュリンおよびＥＰＣＲの両方ともプロテインＣをその活性化型ＡＰＣに変化させるのに必要である。従って、トロンビン形成、血餅増加およびプロテインＣ活性化の調節の主なシステムは失われる。
【０１８０】
重篤な敗血症を有するほぼ全ての患者がプロテインＣを欠く。低いプロテインＣレベルは、ショックおよび予後不良を伴い、これにはＩＣＵ滞在、人工呼吸器依存および死亡が挙げられる。重篤な敗血症において外因的に活性化プロテインＣを供給することで、ある患者では炎症の調節および凝固の応答が回復され、良好な生存率の利点がもたらされる。しかし、凝血促進応答を軽減し、敗血性の器官損傷を妨げる新規な治療モダリティの明白な必要性が存在する。
【０１８１】
敗血症前の凝血促進応答のブロック開始は、非ヒト霊長類において死亡を減少することが確認されている。外部の凝固の開始をブロックするために有効なストラテジーは、ＴＦに対するモノクローナル抗体、天然のＴＦ経路インヒビター、およびＦＶＩＩａの不活性類似体の使用を含む。ヒヒでの近年の研究では、敗血症の発現時にＦＶＩＩａｉを有するＴＦ−ＶＩＩａ複合体のブロックは、敗血症誘発性多臓器損傷を減弱し、そして肺および腎臓を劇的に保護したということが実証された。補体活性化産物、特にアナフィラトキシンを阻害するアンタゴニストはまた、敗血症死亡を減少する見込みがある。Ｃ３ａ、Ｃ４ａおよびＣ５ａは、敗血症の間に出現し、そして上昇したアナフィラトキシン血漿レベルは、多臓器不全の発生と高度に相関する。敗血症では、補体は、凝血促進活性を直接促進するか、またはサイトカイン産生を間接的に誘導し得る。インビトロのＣ５ａおよび補体の末端複合体Ｃ５ｂ−９は、内皮細胞および単球上での組織因子発現を誘導し、そして血小板の表面上でのＣ５ｂ−９のアセンブリは、プロトロンビナーゼ活性を刺激することが示されている。本発明は、凝固因子、炎症促進性サイトカイン、および補体活性化産物のうちの２つ以上を標的化する多特異的アンタゴニストを提供することによって、敗血症を治療するための改善された治療剤を提供する。
【０１８２】
さらなる薬学的方法が、治療適用において抗体の作用期間を制御するために使用され得る。徐放性調製物は、複合体に対するポリマーの使用を経て調製されてもよいし、または抗体を吸収してもよい。例えば、生体適合性ポリマーとしては、ポリ（エチレン−コ−ビニルアセテート）のマトリックス、およびステアリン酸二量体およびセバシン酸のポリアンヒドリドコポリマーのマトリックスが挙げられる。Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１４４６（１９９２）。このようなマトリックスからの抗体の放出の速度は、タンパク質の分子量、マトリックス内の抗体の量、および分散した粒子のサイズに依存する。Ｓａｌｔｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｊ  ５５：１６３（１９８９）；Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ，ｓｕｐｒａ。他の固体剤形は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ  ｅｄ．（１９９５）に記載される。
【０１８３】
本発明による多特異的アンタゴニストは、炎症および他の免疫調節不全疾患（血管内凝固および心筋虚血を含む）の生成に関与する種々の免疫または他の宿主細胞に結合する。それらはまた、がんの治療または防止のためのがんに対する宿主の免疫応答を増強するために用いられてもよい。さらに、炎症促進性サイトカインを中和する、ＬＰＳのような、微生物毒素を中和するため、そして凝固の異常を克服するために、組成物および治療方法が提供される。この方法は、重篤な敗血症、敗血性ショックおよび種々の他の免疫調節不全疾患をもたらすカスケードに関与する種々の因子に対する適切な抗体組成物および融合タンパク質を用いる。
【０１８４】
一般には、投与された抗体の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身の医学的状態および既往歴のような要因に依存して変化する。代表的には、約１ｐｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重あたりの物質の量）の範囲である用量の抗体成分、免疫コンジュゲートまたは融合タンパク質をレシピエントに提供することが所望されるが、それより低いかまたは高い用量も状況によっては投与されてもよい。これらの用量は、必要に応じて繰り返されてもよい。
【０１８５】
患者（ヒトまたは家畜）に対する抗体の投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、くも膜下腔内、局所カテーテルを通じた灌流によって、または直接の病巣内注射によってであってもよい；これはまた、喘息のような特定の疾患における、吸入、エアロゾル、または経鼻適用を含んでもよい。注射によって治療タンパク質を投与する場合、投与は、連続的注入によっても、または単回もしくは複数回のボーラスによってもよい。静脈内注射は、急速に分布する抗体では循環が完全であるおかげで有用な投与方式となる。
【０１８６】
コンジュゲートされていない多特異的抗体および抗体フラグメント、ならびにコンジュゲートされていない抗体および抗体フラグメントの混合物が本発明による治療のための好ましい一次的な治療組成物であるが、このような治療の有効性は、本明細書に記載される他の治療を多特異的アンタゴニストに追加することによって増強され得る。このような多様式のレジメンでは、補充的な治療組成物は、多特異的アンタゴニストの投与の前、同時または後に投与され得る。例えば、Ｍクラスの自己免疫疾患の多様な治療は、Ｔ細胞、形質細胞またはマクロファージに対して標的化される治療剤、例えば、Ｔ細胞エピトープに対する抗体、さらに詳細にはＣＤ４およびＣＤ５エピトープに対する抗体の同時投与を含み得る。γグロブリンも、同時投与されてもよい。ある場合には、副腎皮質ステロイドのような免疫抑制薬物、そしてまた可能性としては細胞傷害性薬物を同時投与することが所望され得る。この場合、従来の治療において用いられる用量に比較した場合、副腎皮質ステロイドおよび細胞傷害性薬物の用量が低くてもよく、これによってこれらの治療剤の負の副作用が軽減される。治療されるべき疾患ががんである場合、種々の化学療法薬物、免疫療法において用いられる裸の抗体、および放射線（外部または内部）の使用が、本発明による治療と組み合されてもよい。同様に、感染および／または敗血症または敗血性ショックが治療されている場合、抗菌性薬物を、多特異的アンタゴニストと組み合わせて用いてもよい。
【０１８７】
別の実施形態では、治療に用いられる多特異的アンタゴニストは、薬物、毒素、酵素、オリゴヌクレオチド、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、免疫調節剤、ホウ素化合物または治療用放射性同位体にコンジュゲートされる。多特異的アンタゴニストが別の抗体の混合物を含む場合、抗体の１つだけがコンジュゲートされてもよいし、または抗体の２つ以上がコンジュゲートされてもよい。さらに好ましい実施形態では、治療剤がコンジュゲートまたは融合される低分子量ハプテンに特異的であるアームを含む抗体が用いられる。この場合、この抗体は、Ｂ細胞をプレターゲティングし、そして結合された治療剤を有する低分子量ハプテンは、抗体がＢ細胞標的に結合された後に投与される。認識可能なハプテンの例としては、限定はしないが、キレート剤、例えば、ＤＴＰＡおよびＤＯＴＡ、フルオレセイン・イソチオシアネート、ビタミンＢ１２および特定の抗体が惹起され得る他の部分が挙げられ、これにはまたペプチドおよびオリゴヌクレオチドも含む。好ましいペプチドは、ヒスタミン−スクシニル−グリシン（ＨＳＧ）である。
【０１８８】
治療上有用な免疫コンジュゲートは、抗体融合タンパク質に対して光活性物質または色素をコンジュゲートすることによって得ることができる。フルオレセイン組成物、例えば、蛍光色素および他の色素原、または色素、例えば、可視光に感受性のポルフィリンは、病変に対して適切な光を向けることにより病変を検出し、治療するために用いられている。治療では、これは、光放射、光線療法または光線力学療法と名づけられている（Ｊｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ＰＨＯＴＯＤＹＮＡＭＩＣ  ＴＨＥＲＡＰＹ  ＯＦ  ＴＵＭＯＲＳ  ＡＮＤ  ＯＴＨＥＲ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ（Ｌｉｂｒｅｒｉａ  Ｐｒｏｇｅｔｔｏ  １９８５）；ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈ，Ｃｈｅｍ  Ｂｒｉｔａｉｎ  ２２：４３０（１９８６））。さらに、モノクローナル抗体は、光線療法を行うために光活性化色素とカップリングされている。Ｍｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：１４７３（１９８３）；ｉｄｅｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４５：４３８０（１９８５）；Ｏｓｅｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８３：８７４４（１９８６）；ｉｄｅｍ．，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ  ４６：８３（１９８７）；Ｈａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｓ  ２８８：４７１（１９８９）；Ｔａｔｓｕｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｓｅｒｓ  Ｓｕｒｇ  Ｍｅｄ  ９：４２２（１９８９）；Ｐｅｌｅｇｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ６７：２５２９（１９９１）。従って、本発明は、光活性物質または色素を含む免疫コンジュゲートの治療的用途を意図する。
【０１８９】
Ｂ細胞、形質細胞および／またはＴ細胞に作用することが知られている薬物は、多特異的アンタゴニストにコンジュゲートされても、または多特異的アンタゴニストと組み合わせて別の成分として投与されても、本発明によれば特に有用である。これらとしては、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、メトトレキセート、ドキソルビシン、フェニルブチラート、ブリオスタチン、シクロホスファミド、エトポシド、ブレオマイシン、ドキソルビシン、カルムスチン、ビンクリスチン、ダカルバジン、プロカルバジン、タキソール、プラチナ誘導体、デキサメタゾン、ロイコボリン、プレドニゾン、マイタンシノイド、例えばＤＭ１、カリケアマイシン、ラパマイシン、レフルノミド、ＦＫ５０６、イムラン、フルダラビン、アザチオピン（azathiopine）、ミコフェノレート、カンプトテシン（例えば、ＣＰＴ−１１、ＳＮ３８）、プロテアソームインヒビター（例えば、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））およびシクロスポリンが挙げられる。Ｂ細胞上およびＴ細胞上の両方で作用するイムラン、ドキソルビシン、メトトレキサートおよびフルダラビンのような薬物が特に好ましい。本発明に従って適切に使用される毒素の例は、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓエンテロトキシン−Ａ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ内毒素およびＲＮＡｓｅ、例えば、オンコナーゼである。例えば、Ｐａｓｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，ＣＡ−Ａ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ  ４４：４３（１９９４）を参照のこと。他の適切な薬物および毒素が当業者に既知である。
【０１９０】
多特異的アンタゴニストの診断用途
本発明による多特異的アンタゴニストはまた、種々の状態の診断または検出において有用である。本出願の状況では、「診断」または「検出」という用語は、交換可能に用いられ得る。診断とは通常、組織特異的な組織学的状態を規定することをいうが、検出は、特定の抗原を含有する組織、病変または生物体を認識および位置決めする。これらの実施形態では、多特異的アンタゴニストは、診断／検出物質にコンジュゲートされる。この構築物および診断／検出物質の投与は、ＷＯ  ０４０９４６１３および米国特許公開出願第２００４  ００５７９０２号に記載されている。
【０１９１】
診断／検出物質は、分子または原子であって、これは、多特異的アンタゴニストに対してコンジュゲートされて投与されてもよく、そして本発明による疾患または状態の部位に位置する細胞上の抗原に対する結合によって、診断または検出において有用である。有用な診断／検出物質としては、限定はしないが、放射性同位体、色素（例えば、ビオチン−ストレプトアビジン複合体を有する）、放射線不透過物質（例えば、ヨウ素、バリウム、ガリウムおよびタリウムの化合物など）、造影剤、蛍光化合物または分子および磁気共鳴画像（ＭＲＩ）の造影剤（例えば常磁性イオン）、ならびにＸ線、超音波およびコンピューター断層撮影法（ＣＴ）が挙げられる。
【０１９２】
好ましくは、診断／検出物質は、核画像化、内視鏡および血管内検出のための放射性同位体、磁気共鳴画像化におけるまたは超音波検査における使用のための造影剤、Ｘ線およびコンピューター断層撮影のための放射線不透過および造影剤、ならびに内視鏡的蛍光透視を含む蛍光透視のための蛍光化合物からなる群より選択される。抗体に対してコンジュゲートされるか、または二重特異性、プレターゲティング法において用いられる蛍光物質および放射性物質は、詳細には、γ−エミッター、β−エミッターおよびポジトロンエミッターで、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇの米国特許第５，７１６，５９５号および同第６，０９６，２８９号に開示されるように、悪性腫瘍のような、細胞の疾患の組織または塊に関連する標的抗原の内視鏡的な、術中のまたは血管内の検出のために特に有用である。内視鏡適用は、胃腸管を画像化するためにも用いられる経口挿入カメラを含む、結腸のような、内視鏡を可能にする構造に展開される場合に用いられ得る。
【０１９３】
本発明による多特異的アンタゴニストは、疾患の組織を検出するために有用な１つ以上の放射性同位体を含み得る。特に有用な診断用の放射性核種としては、限定はしないが、110Ｉｎ、111Ｉｎ、177Ｌｕ、18Ｆ、52Ｆｅ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｚｒ、94mＴｃ、94Ｔｃ、99mＴｃ、120Ｉ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、154-158Ｇｄ、32Ｐ、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、51Ｍｎ、52mＭｎ、55Ｃｏ、72Ａｓ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、82mＲｂ、83Ｓｒ、または他のγ−エミッター、β−エミッターもしくはポジトロンエミッターであって、好ましくは２０〜５，０００ｋｅＶの範囲、より好ましくは２５〜４，０００ｋｅＶの範囲、そしてさらにそれより好ましくは２５〜１，０００ｋｅＶの範囲、そしてなおそれより好ましくは、７０〜７００ｋｅＶの範囲の崩壊エネルギーを有するものが挙げられる。ポジトロンエミッショントモグラフィーのために有用な放射性核種としては以下が挙げられるが、これらには限定されない。18Ｆ、51Ｍｎ、52mＭｎ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、68Ｇａ、72Ａｓ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、82mＲｂ、83Ｓｒ、86Ｙ、89Ｚｒ、94mＴｃ、110Ｉｎ、120Ｉ、および124Ｉ。有用なポジトロンを放射する放射性核種の総崩壊エネルギーは、好ましくは、２，０００ｋｅＶ未満、さらに好ましくは１，０００ｋｅＶ未満、そして最も好ましくは７００ｋｅＶ未満である。γ線検出を利用する診断／検出物質として有用な放射性核種としては、以下が挙げられるが、これらには限定されない。51Ｃｒ、57Ｃｏ、58Ｃｏ、59Ｆｅ、67Ｃｕ、67Ｇａ、75Ｓｅ、97Ｒｕ、99mＴｃ、111Ｉｎ、114mＩｎ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、169Ｙｂ、197Ｈｇ、および201Ｔｌ。有用なγ線照射放射性核種の崩壊エネルギーは好ましくは２０〜２０００ｋｅＶ、より好ましくは６０〜６００ｋｅＶ、そして最も好ましくは１００〜３００ｋｅＶである。放射性同位体は、多特異的アンタゴニストに対して直接または中間の官能基を用いることによって間接的に結合され得る。
【０１９４】
放射性標識ＭＡｂを用いる診断画像化の方法は周知である。免疫シンチグラフィーの技術では、例えば、抗体を、γ線を放射する放射性同位体で標識して患者に導入する。γカメラを用いて、γ線放射する放射性同位体の位置および分布を検出する。例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ（ｅｄｓ．），ＲＡＤＩＯＬＡＢＥＬＥＤ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＦＯＲ  ＩＭＡＧＩＮＧ  ＡＮＤ  ＴＨＥＲＡＰＹ（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９８８），Ｃｈａｓｅ，「Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ」，ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２４−６５２（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９０）およびＢｒｏｗｎ，「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，ｉｎ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ  ｐｐ．２２７−４９，Ｐｅｚｚｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａｌｌ  １９９３）を参照のこと。患者に送達された放射線量は、検出および正確な測定を可能にする最小の半減期、身体中の最小保持時間、および同位体の最小量の最良の組み合わせについて同位体の選択を通じて、できるだけ低レベルに維持される。
【０１９５】
金属はまた、磁気共鳴画像化技術のための物質を含む、診断／検出物質において有用である。これらの金属としては、以下が挙げられるが、これらには限定されない。ガドリニウム、マンガン、鉄、クロム、銅、コバルト、ニッケル、ジスプロシウム、レニウム、ユーロピウム、テルビウム、ホルミウムおよびネオジミウム。抗体成分に放射性金属、常磁性イオンまたは他の検出可能部分を装着（load）するためには、これを長いテールを有する試薬と反応させて、ここにイオンに結合するためのキレート基の多価性を結合する必要があり得る。このようなテールは、ポリマー、例えば、ポリリジン、ポリサッカライドまたはペンダント基を有する他の誘導体化されるかまたは誘導体化可能な鎖であってもよく、ここにキレート基、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’−四酢酸（ＤＯＴＡ）、ｐ−ブロモアセトアミド−ベンジル−テトラエチルアミン四酢酸（ＴＥＴＡ）、またはＮＯＴＡまたは他の適切なペプチド、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビスチオセミカルバゾン、ポリオキシムなどのこの目的に有用であることが既知である基が結合され得る。キレートは、標準的な化学的方法を用いて抗体に結合される。このキレートは、免疫反応性の損失が最小で、凝集および／または内部架橋が最小であって、分子に対する結合の形成を可能にする基によって抗体に通常は結合される。他のさらによくあるものではない、抗体に対してキレートをコンジュゲートするための方法および試薬は、１９８９年４月２５日発行の「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」と題されたＨａｗｔｈｏｒｎｅの米国特許第４，８２４，６５９号に開示される。特に有用な金属キレートの組み合わせとしては、放射線イメージングのための、６０〜４，０００ｋｅＶの一般的エネルギー範囲における診断用同位体、例えば、125Ｉ、131Ｉ、123Ｉ、124Ｉ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、18Ｆ、111Ｉｎ、67Ｇａ、68Ｇａ、99mＴｃ、94mＴｃ、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、76Ｂｒとともに用いられる、２−ベンジル−ＤＴＰＡおよびそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体が挙げられる。同じキレートは、マンガン、鉄およびガドリニウムのような非放射性金属と複合体化された場合、本発明の抗体とともに用いられるとき、ＭＲＩに有用である。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡおよびＴＥＴＡのような大環状キレートは、種々の金属および放射性金属とともに、最も詳細には、それぞれガリウム、イットリウムおよび銅の放射性核種とともに用いられる。このような金属キレート複合体は、目的の金属に対して環のサイズを調整することによって極めて安定にされ得る。ＲＡＩＴのための223Ｒａのような、安定に結合する核種のための目的である、大環状ポリエーテルのような他の環型のキレートは、本発明に包含される。
【０１９６】
造影剤としては、磁気共鳴画像化における使用のための造影剤、ならびにＣＴの造影剤および超音波造影剤が挙げられる。本発明による検出および診断において安定な常磁性イオンとしては、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）およびエルビウム（ＩＩＩ）が挙げられる。好ましい常磁性磁気画像化剤としては、例えば、非放射性金属、例えば、本発明の抗体とともに用いられる場合、２−ベンジル−ＤＴＰＡおよびそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体を含む金属キレート組み合わせと複合体化されたマンガン、鉄およびガドリニウムが挙げられ、ここでガドリニウムが特に好ましい。米国特許第６，３３１，１７５号は、ＭＲＩ技術およびＭＲＩ造影剤にコンジュゲートされた抗体の調製を記載する。好ましい超音波造影剤は、超音波画像における使用のために２つ以上の画像造影剤を含んでもよい。好ましい実施形態では、この造影剤はリポソームである。好ましくは、リポソームは、リポソームの外面に共有結合された二価ＤＴＰＡペプチドを含む。好ましくはこのリポソームはガス充填される。
【０１９７】
Ｘ線画像化のような他の状況で有用なイオンとしては、限定はしないが、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、および特にビスマス（ＩＩＩ）が挙げられる。蛍光標識としては、ローダミン、フルオレセインおよびレノグラフィン(renographin)が挙げられる。ローダミンおよびフルオレセインはしばしば、イソチオシアネート中間体を介して結合される。
【０１９８】
放射線不透過物質および造影剤は、Ｘ線およびコンピューター断層撮影を強化するために用いられ、そしてこれには、ヨウ素化合物、バリウム化合物、ガリウム化合物、タリウム化合物などが挙げられる。特定の化合物としては、バリウム、ジアトリゾエート、エチオダイズド油（ethiodized oil）、クエン酸ガリウム、イオカルム酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、イオグラミド（iogulamide）、イオヘキソール、イオパミドール、イオパノ酸、イオプロセム酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスルアミドメグルミン（iosulamide meglumine）、イオセメト酸（iosemetic acid）、イオタズル（iotasul）、イオテトル酸、イオタラム酸、イオトロクス酸、イオキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポダート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾアート、プロピリオドンおよび塩化第一タリウムが挙げられる。
【０１９９】
本発明の多特異的アンタゴニストはまた、蛍光化合物で標識されてもよい。蛍光標識ＭＡｂの存在は、適切な波長の光に対して抗体を曝すことおよび得られた蛍光を検出することによって決定される。蛍光標識化合物としては、フルオレセイン・イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒドおよびフルオレスカミンが挙げられる。
【０２００】
治療モダリティにおけるように、診断のための多特異的アンタゴニストの投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、くも膜下腔内、局所カテーテルを通じた灌流、または直接の病巣内注射によって哺乳動物において達成され得る。注射によって抗体を投与する場合、投与は、連続注入によっても、または単独もしくは複数のボーラスによってもよい。診断はさらに、既知の技術で、結合したタンパク質を検出する工程を要する。単独の多特異的アンタゴニストは、同時に治療および診断／検出のために用いられ得る。
【０２０１】
診断および検出の目的のために、多特異的アンタゴニストを、患者に対して、診断上有効な量で、薬学的に許容可能な担体中で投与する。これに関して、「診断上有効な量」とは、一旦アンタゴニストが局在して、過剰のアンタゴニストが血流から排除されれば、検出に関連する装置によって検出され得る量である。
【０２０２】
本発明は、このように一般に記載され、以下の実施例を参照してさらに容易に理解されるが、この実施例は、例として提供され、本発明を限定することは意図しない。この実施例によって、本発明による多特異的アンタゴニストが動物モデルにおいて敗血性ショックを妨ぐことができ、そしてがん関連悪液質、自己免疫疾患、およびアテローム斑を有する患者における徴候および症状を改善することが実証される。
【実施例１】
【０２０３】
敗血性ショックの治療
ＪＲは、７２歳の白人男性であって、種々の細胞傷害性薬物、副腎皮質、そしてＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）で過去に治療されている非ホジキンリンパ腫の既往歴を有し、そして長期の抗生物質治療を要する、安定なリンパ腫および過去のいくつかの感染の既往歴を示している。彼の診療医によって、高温（４０．７℃）、悪寒、呼吸困難、動悸、動揺、ある程度の混乱および四肢の冷感と診断された後、彼は救急部門に入院させられる。検査によって、頻脈（＞９０／分）、高血圧（９５／６０ｍｍ  Ｈｇ）が特に立位でみられ、そして尿排泄量の減少（８００ｍＬ／日）および肺炎の徴候が明らかである。試験によって、低酸素圧およびアシドーシスが示され、血液カウントでは感染は検出されないが、代わりに、好中球減少（３，５００ＷＢＣ／ｍＬ、１０％バンドで）、４８，０００の血小板、６ｇ／ｄＬのＨｇが示され、胸部Ｘ線によって、全身性の肺炎が明らかになり、血液試験は、腎機能の低下を示し、異常な血清クレアチニン（３ｍｇ／ｄＬ）およびＢＵＮレベルを伴い、そして血清乳酸の上昇によって、組織の低灌流が示される。血液培養によって、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびグラム陰性細菌の存在が明らかになり、これによって敗血症の診断が支持される。患者を、重篤な敗血症および敗血性ショックについて集中治療室で治療し、これには一般的な対症療法（酸素）、循環血液量を回復する液体注入による血行動態サポート（５００ｍＬの０．９％塩化ナトリウムおよび乳酸リンゲル溶液であって、最初の２〜３時間にわたって最大２Ｌまで）、ドーパミンによる昇圧補助療法（Ｉｎｔｒｏｐｉｎ、３ｍｃｇ／ｋｇ／分、ｉｖ）、およびシプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏ）の１２時間ごとの４００ｍｇのＩＶによる抗生物質療法を含む。患者はまた、ドロテコギン・α（ｄｒｏｔｅｃｏｇｉｎ  ａｌｆａ）（活性化プロテインＣ）を２４ｍｉｃｒｏｇ／ｋｇ／時間で、全部で９６時間にわたって与えられる。入院の５日後、患者は安定しているが、徴候も症状も有意な改善は示さず、わずかに尿排泄が良くなり、血圧のわずかな上昇、および３９．３℃への温度のわずかな低下のみが示される。次いで患者には、３００ｍｇの抗ＭＩＦおよび４００ｍｇの抗ＬＰＳ抗体からなる、２つのヒト化モノクローナル抗体の組み合わせが、３週間にわたって毎週２回連続して、両方とも４時間にわたる緩徐な注入によって与えられる。２週間の間、この患者が示す錯乱は少なくなり、体温のさらなる低下、頻脈の減少、呼吸困難および肺炎の軽減が、理学的検査および胸部ｘ線の両方によって示される。三週目の終わりに、彼の腎機能試験によってまた、いくつかの改善（ＢＵＮおよび血清クレアチニン値）が示され、そして彼は集中治療室から感染病病棟に戻り、対症療法を調節される。２ヵ月後、この患者は、活性プロテインＣおよび抗ＭＩＦおよび抗ＬＰＳ抗体の反復サイクル、ならびに広範なスペクトルの抗生物質の反復コースを受け、次いで、さらなる改善を示し、その結果彼は、退院可能になり、そして実際に正常な精神機能、および肺炎の全体的な８０％を超える減少、および３８．５℃の熱、そして約８０％の正常な尿排泄量になる。
【実施例２】
【０２０４】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療
Ｓ．Ｒ．は、３２歳齢のアフリカ系アメリカ人女性であって、５年前に、彼女が、糸球体腎炎（ＷＨＯの３級）、漿膜炎、多発性関節炎および脈管の発疹（vasculitic rash）を示した時に、ＳＬＥと診断された。彼女は、持続性の疾患のせいで、副腎皮質ステロイド（１日あたり１５〜６０ｍｇの範囲）およびヒドロキシクロロキン（２００ｍｇ／日）、そして後の時点ではまた、アザチオプリン（１００ｍｇ／日）およびシクロホスファミドのコースによって、以前に治療を受けた。数年間にわたって、彼女は、多発性関節炎、こん睡状態、皮膚発疹および漿膜炎を示す、ＳＬＥの悪化を経験している。彼女は、現在、持続性の活動性の疾患を示し、従来の治療に対しては非応答性であるが、毎日４０ｍｇのプレドニゾンが維持されている。彼女にはヒト化抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、エプラツズマブ（epratuzumab）をｉ．ｖ．で４００ｍｇ、１時間にわたって与え、続いて２週間各々を１回繰り返す。三番目の注入の４週後、彼女の循環するＢリンパ球は、治療前にベースラインから４０％まで減少されるが、彼女のＨｇレベルは８ｇ／ｄＬから１０ｇ／ｄＬに上昇している。彼女の発疹および多発性関節炎は、ある程度の改善を示すが、彼女は、さらなる治療を要する。彼女の抗ＣＤ２２抗体治療の８週後、彼女には、抗ＣＤ８３および抗ＴＮＦα抗体の組み換え異種コンジュゲートからなる二重特異性抗体融合タンパク質の１コースを、毎週５００ｍｇのｉ．ｖ．の用量で４週間与える。２ヵ月後の評価の時点で、彼女は、全ての器官系において、ほとんどＢＩＬＡＧ  ＣおよびＤ状況に対して、顕著な改善を有し、そして彼女のプレドニゾン用量は１日あたり７．５ｍｇまで漸減され得る。３ヶ月の追跡時には、彼女の器官の症状のほとんどが安定なままで、彼女は、悪化なしにこの低用量のプレドニゾンを続ける。
【実施例３】
【０２０５】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療
ＳＬは、６６歳齢の白人男性であって、ＣＨＯＰおよびリツキシマブでの治療後に再発されたびまん性大細胞ＮＨＬの既往歴があり、現在は、発熱、肺および縦隔の浸潤物、頸のリンパ節および腋窩リンパ節の拡張、ならびに吸引および細胞学に基づく骨髄障害の証拠を示している。彼は、２つのヒト化抗体であって、１つはＴＮＦαに対するもの、そしてもう１つはＭＩＦに対するものであって、各々が同じ日に連続して与えられる抗体を、各々について３〜４時間の注入にわたって、各々４５０ｍｇの用量で、６週間毎週注入される。最後の注入の２４時間後、彼の試験によって、彼はこの治療に対して大きな毒性を有さないこと、そして彼の頸のリンパ節および腋窩リンパ節のある程度の明らかな軟化が示される。８週間の次の追跡試験では、ほぼ全ての彼の頸のリンパ節そして約半分のこれらの腋窩リンパ節が消失し、そして彼の胸部Ｘ線およびＣＴスキャンによって、彼の肺および縦隔の浸潤物の約６０％収縮という証拠が示される。約４ヵ月後、彼の試験によって、彼のリンパ節および肺の障害は安定であるが、骨髄障害の増大および彼のＨｇの８ｇ／ｄＬへの低下が示唆されることが明らかになる。次いで、彼に、ＭＩＦに対するそしてＩＬ−６に対する融合されたヒト化抗体からなる二重特異性抗体を与え、これは、緩徐なｉ．ｖ．注入あたり５００ｍｇの用量で３週間にわたって毎週２回与えた。３ヶ月の評価の時点で、彼のＨｇは、１１ｇ／ｄＬへの上昇を示し、骨髄吸引物中でＮＨＬ細胞の顕著な減少があり、そして明白なリンパ節も放射線学的試験によって胸部で可視の疾患もない。患者の応答はさらに６ヶ月にわたって安定なままである。
【実施例４】
【０２０６】
がん関連悪液質の治療
ＮＲは、５８歳齢のアフリカ系アメリカ男性であって、重度の喫煙歴ならびに左肺にそして両側の傍大動脈および傍気管支リンパ節に罹患している手術不能な非小細胞性肺がんの既往歴を有する。彼は、併用化学療法を受け、これは、骨髄毒性、および全ての測定可能な容積の４０％未満である、ある程度のわずかな腫瘍収縮の証拠を示している。彼は、かなりの体重減少を示し、ほぼ２ｍの身長で現在の体重は６８ｋｇであり、がん関連の悪液質に罹患している。彼は、ＩＬ−６およびＴＮＦαの両方を標的化するヒト化二重特異性融合抗体構築物を毎週６００ｍｇの用量で８週間にわたって毎週注入される。最後の３週間の間、彼の食欲は改善して、彼は、治療後７週間で７５ｋｇまで体重増加を示し、筋肉がさらに強くなり、そして全般的に活力が改善され、次に、彼が悪性疾患の進行を示し始めたとき、次の２ヶ月間にわたって７５ｋｇ〜８０ｋｇで安定なままである。彼のサイクルの化学療法以外では、抗体療法の間に副腎皮質ステロイドは与えられず、彼は、悪液質についてこの治療に対して応答したとみなされる。
【実施例５】
【０２０７】
腎細胞癌の治療
ＪＲは、４５歳例の白人女性であって、彼女の左腎臓に塊を、そして左側の傍動脈リンパ節の障害、そして左肺上部に３×４ｃｍの疾患病巣を示している。彼女は、左腎臓の完全な切除を受け、隣接するリンパ節の排除を受けている。６週後、彼女には、ＩＬ−２サイトカインと融合されたヒト化ＩＬ−６抗体の７週毎週のｉ．ｖ．注入を、５００ｍｇ（抗体タンパク質）の用量で与え、これを後に４ヶ月繰り返す。最後の治療後３ヶ月の彼女の追跡試験では、彼女の試験によって、彼女の肺転移の６０％低下が明らかになり、新規な疾患はどこにも証明されない。
【実施例６】
【０２０８】
腎癌の治療
ＰＳは、７０歳齢の白人女性であって、直腸腺癌（Ｔ３Ｎ２）の直腸腸間膜全摘出およびアジュバント化学放射線療法（連続的な注入の５−フルオロウラシルおよび細分された１．８Ｇｙの用量、５週半の期間にわたって１週あたり５日間、総線量４５Ｇｙの外放射線療法）の既往歴を有する。彼女には、術後化学療法を行っておらず、６ヵ月後に、肝臓の右葉下部に２〜４ｃｍの直径に及ぶ３つの転移を、そして１６．４ｎｇ／ｍＬの血清ＣＥＡ力価を示す。原発性直腸癌は、免疫組織学によって評価され、そしてＣＤ５９およびＣＥＡＣＡＭ６の両方の高い発現を示す。次いで、彼女は、組み換え的に融合されたヒト化抗ＣＤ５９抗体およびヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ６抗体からなる二重特異性抗体の３５０ｍｇを、投与され、これは、８週間にわたって毎週１回、５週間の期間にわたって、平行してフルオロウラシルの連続注入を与えられる。最後の抗体注入後２ヶ月の追跡時点で、患者の血液ＣＥＡ力価は、１２ｎｇ／ｍＬまで低下し、ただし肝臓の転移のサイズではＣＴスキャンによる変化はない。さらに３ヶ月後、血液ＣＥＡは７ｎｇ／ｍｌであり、そしてＣＴスキャンによって最小の肝臓転移が消失し、他の２つは約５０％まで縮小している。この疾患は、さらに２ヶ月間安定なままであって、その時点で血液のＣＥＡレベルは、１０ｎｇ／ｍＬまで上昇するが、肝臓転移のサイズではまだ変化はない。
【０２０９】
このように、本発明による炎症および免疫調節不全疾患およびがんの免疫療法の方法および組成物が記載されている。多くの改変およびバリエーションが、本明細書において記載および例示された技術および構造に対して、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくなされ得る。従って、本明細書に記載される組成物および方法は、例示のみであって、本発明の範囲に基づいて限定されないことが理解されるべきである。
【０２１０】
上記の全ての文書、参考文献および引用文献であって、その参考文献を含むものの内容は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする。
【国際調査報告】
2008523083.tif 000003