(57)【要約】【課題】脂質代謝不全に関連する遺伝子多型、並びに脂質代謝不全感受性遺伝子（脂質代謝不全の遺伝的素因マーカー）を提供し、さらにこの情報をもとにして個々の被験者について脂質代謝不全ならびにそれに起因する疾患の発症危険度（リスク）を判定するための方法を提供する。当該方法を簡便に実施するために有用な試薬および試薬キットを提供する。  【解決手段】被験者の生体試料を対象として、FABP1（fatty acid binding protein 1, liver [Homo sapiens]）の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出して、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出する。【選択図】なし
2008538893.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の生体試料を対象として、FABP1（fatty acid binding protein 1, liver [Homo sapiens]）の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する工程を含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法。
【請求項２】
上記遺伝子多型が、FABP1遺伝子の遺伝子多型のホモ接合体である、請求項１に記載する方法。  
【請求項３】
脂質代謝不全またはそれに起因する疾患が、肝臓の脂肪酸β酸化能の不全またはそれに起因する疾患である請求項１に記載する方法。
【請求項４】
肝臓の脂肪酸β酸化能の不全に起因する疾患が、非アルコール性脂肪肝炎、脂肪肝、または心筋梗塞である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
以下の工程(a)〜(c)を含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法：
(a)被験者の生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、
(b)抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目の塩基を識別する工程、及び
(c)上記塩基がＡであるかＧであるかを識別する工程。
【請求項６】
さらに下記の工程(d)を含む、請求項５に記載する方法：
(d)上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に、当該被験者が脂質代謝不全またはれに起因する疾患リスクありと決定する工程。
【請求項７】
下記の工程(i)〜(iii)を含む、被験者について脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii) 脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満か、または0.5%/min以上か、識別する方法。
【請求項８】
さらに下記の工程(iv)を有する、請求項７に記載する方法：
(iv)脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患に対してリスクありと、0.5%/min以上の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患に対してリスクなしと、判定する工程。
【請求項９】
ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる１５〜３５塩基長の標識または非標識のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを判定するために用いられる、請求項９に記載する標識または非標識のオリゴヌクレオチドからなるプライマー。
【請求項１１】
ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長の標識または非標識のオリゴ若しくはポリヌクレオチド。
【請求項１２】
脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを判定するために用いられる、請求項１１に記載する標識または非標識のオリゴ若しくはポリヌクレオチドからなるプローブ。
【請求項１３】
請求項１０に記載するプライマー、および／または、請求項１２に記載するプローブを含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出するための試薬、または当該試薬の少なくとも１つを含むキット。
【請求項１４】
被験者の生体試料を対象として、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する工程を含む、肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの検出方法。
【請求項１５】
上記遺伝子多型が、FABP1遺伝子の遺伝子多型のホモ接合体である、請求項１４に記載する方法。
【請求項１６】
上記遺伝子多型の有無を、FABP1の94番目のアミノ酸の変異（T→A）を指標として検出する方法である、請求項１４に記載する方法。
【請求項１７】
以下の工程(a)〜(c)を含む肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを測定する方法：
(a)生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、
(b)抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目の塩基を測定する工程、及び
(c)上記塩基がＡであるかＧであるかを測定する工程。
【請求項１８】
さらに下記の工程(d)を有する、請求項１７に記載する測定方法：
(d)上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであると決定する工程。
【請求項１９】
下記の工程(i)〜(iii)を含む、被験者について肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを測定する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)上記脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満か、0.5%/min以上かを測定する工程。
【請求項２０】
さらに下記の工程(iv)を有する、請求項１９に記載する方法：
(iv)脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満の場合を肝脂肪酸β酸化能不全型NASHと、0.5%/min以上の場合を肝脂肪酸β酸化能正常型NASHであると、決定する工程。
【請求項２１】
肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを検出するために用いられる、下記の標識または非標識オリゴヌクレオチドからなるプライマー：
−ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる１５〜３５塩基長の標識または非標識オリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを検出するために用いられる、下記の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチドからなるプローブ：
−ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチド。
【請求項２３】
請求項２１に記載するプライマー、および／または、請求項２２に記載するプローブを含む、肝脂肪酸β酸化能不全型NASHを検出するための試薬、または当該試薬を含むキット。
【請求項２４】
FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者について、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）を正常な状態（T→A）に戻すか、またはFABP1遺伝子のSNP3513の塩基変異（A→G）を正常な状態（G→A）に戻すことを特徴とする、脂質代謝不全関連疾患発症リスクを低減する方法。
【請求項２５】
FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に、フィブラート系薬剤を投与することを特徴とする、当該被験者についてNASH、特に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの発症リスクを低減する方法。
【請求項２６】
FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に対する、フィブラート系薬剤を有効成分とする、NASHの発症予防剤またはNASH改善剤。
【請求項２７】
下記の工程を有する、脂質代謝不全の改善、または脂質代謝不全に起因する疾患の発症のリスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法：
（ａ）94番目のアミノ酸残基がアラニンである変異FABP1〔FABP1(T94A)〕を発現する細胞に対して被験物質を接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞について、FABP1若しくは変異FABP1の発現量、またはFABP1活性を検出する工程、および
（ｃ）被験物質非存在下で測定した変異FABP1発現細胞のFABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性を陰性コントロールとした場合に、当該陰性コントロールと対比して、上記（ｂ）工程でFABP1の発現量またはFABP1活性の増加が認められた細胞または変異FABP1の発現量の低下が認められた細胞に接触させた被験物質を、候補物質として選択する工程。
【請求項２８】
下記の工程を有する、脂質代謝不全の改善、脂質代謝不全に起因する疾患の発症のリスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法：
(i) ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子、またはその遺伝子の一部であって、少なくとも、塩基Ｇを挟んで5’側及び3’側にそれぞれ配列番号２記載の塩基配列及び配列番号３記載の塩基配列を含有するポリヌクレオチドを含有する細胞に対して、被験物質を投与する工程、及び
(ii) 投与した被験物質の中から、当該細胞中の上記ポリヌクレオチドの配列番号２記載の塩基配列と配列番号３記載の塩基配列に挟まれた塩基ＧをＡに変換させる物質を、候補物質として選択する工程。
【請求項２９】
FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを有する患者に対する治療の、当該疾患に対する治療効果またはリスク軽減効果を評価する方法であって、肝臓の脂肪酸代謝能を治療前と治療後とで対比することを特徴とする方法。
【請求項３０】
肝臓の脂肪酸代謝能の測定を、下記の工程(a)及び(b)を有する方法で行う請求項２９に記載する方法：
(a)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、及び
(b)工程(a)で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸代謝能を測定する工程。
【請求項３１】
下記の工程を有する、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全を有する患者に対する、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患の治療効果または疾患リスク軽減効果を評価する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記工程(i)で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満の場合を治療効果または疾患リスク軽減効果あり、0.5%/min以上の場合を治療効果または疾患リスク軽減効果なしと、決定する工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質代謝不全、またはそれに起因する疾患（以下、「脂質代謝不全関連疾患」ともいう）を発症するリスクを検出し判定する方法に関する。より詳細には、当該方法はヒトゲノムＤＮＡを含む試料から脂質代謝不全に関連したＳＮＰｓ（単一塩基多型）を検出するか、またはその遺伝子変異に基づくアミノ酸配列の相違を検出することにより、被験者が脂質代謝不全を有するか、または脂質代謝不全関連疾患を発症する潜在的な危険を有するか否かを検出し、判定する方法である。
【０００２】
さらに本発明は、かかる検出方法の実施にあたり有効に使用することができる脂質代謝不全診断用プローブやプライマーなどの試薬、並びにこれらの試薬を含むキットに関する。また本発明は、脂質代謝不全若しくは脂質代謝不全関連疾患の改善、または脂質代謝不全関連疾患の発症リスクの低減に有効な成分をスクリーニングする方法に関する。
【０００３】
さらにまた本発明は、遺伝子多型に基づく脂質代謝不全または脂質代謝不全関連疾患に対する、薬剤またはそれ以外の処置の治療効果を評価する方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
メタボリックシンドローム（metabolic disorder syndromeｍ：代謝異常症候群）は、肥満に基づく代謝系のバランス破綻により、高血圧、高脂血症（高トリグリセリド血症、低HDLコレステロール血症）、内臓脂質蓄積、糖代謝異常、インスリン抵抗性などが重積して動脈硬化性疾患が発症しやすくなった病態であり、近年の肥満や脂肪肝を始めとする生活習慣病患者の増加をうけて注目を浴びている。
【０００５】
メタボリックシンドロームの危険因子は多様であり、ＭＯＤＹ遺伝子や倹約遺伝子を始めとする遺伝的要因に加え、肥満などの環境因子が関与して発症すると考えられている。ゲノムワイド連鎖解析の結果を中心として、メタボリックシンドロームの疾患感受性を規定する幾つかの候補遺伝子と染色体領域が徐々に明らかになりつつあるが、こうしたメタボリックシンドロームの遺伝素因の解明は、その正確な診断とそれに基づく効果的な臨床介入に重要であり、特に予防医学の観点から多大な貢献が期待される。
【０００６】
また最近、高血圧や糖尿病、高脂血症とならぶ新しい生活習慣病として、非アルコール性脂肪肝炎（non-alcoholic steatohepatitis、以下、「NASH」ともいう）が注目されている。NASHは、アルコール摂取がないにも関わらず、脂肪肝を背景病変としたアルコール性肝炎と酷似した組織所見を有する肝疾患であり、内臓肥満とインスリン抵抗性を高頻度に伴う疾患である。NASHは、肝硬変や肝ガン等の重篤な疾患に進行することが知られており、NASHからこうした潜在性肝硬変への移行を阻止するには、NASHを早期に発見し内科的治療を施すことが必要である。しかしながら、NASHであるか否かの診断は難しく、その確診には肝生検が必要なこともあって、症例の多くは見過ごされているのが現状である。また、脂肪肝の治療はその原因によって異なり、肥満による脂肪肝の場合は食餌療法等による減量、また飲酒が原因の脂肪肝は禁酒という具合に、その原因を断つこと自体が治療になるものの、NASHの原因は未だ解明されておらず、その有効な治療方法も確立されていない。
【０００７】
ところで、近年のゲノム解析技術の飛躍的進歩に伴って、疾患と遺伝子との関連性が徐々に解明されつつある。例えば、疾患の原因となる遺伝的変異に関するものとして遺伝子多型〔例えば、SNPs(single nucleotide polymorphisms;単一塩基多型)〕が注目されており、遺伝子多型と疾患の関連性の探究が世界中で精力的に行われている。
【０００８】
一塩基多型はヒトゲノムでは、約300塩基対に一つ存在する高密度なDNA多型であり、任意の遺伝子の近傍に高い確率で存在する。近年、SNPを遺伝的疾患マーカーとして利用することによって、連鎖解析によって絞り込まれた領域から疾患原因遺伝子を同定することが可能となりつつある。とりわけ、多数の遺伝子が複雑に関係した多遺伝子疾患では、SNPの遺伝的としての有効性がクローズアップされる。また、SNP自身が遺伝的発現物質の質的・量的な変化をもたらす場合には、SNPは直接診断、治療のターゲットとなり得る。
【０００９】
生活習慣病を含むメタボリックシンドロームもまた多数の遺伝子が関与する多遺伝子疾患であると考えられているが、その基礎は肥満に基づく代謝系のバランス破綻である。
【００１０】
肥満人口の増加に伴う生活習慣病、並びにメタボリックシンドロームの増加が危惧される今日、NASHを含む生活習慣病に対して高感受性の個体識別法を確立し、早期に発見し早期治療することが、その予後の点から特に重要である。
【００１１】
なお、本発明に関連する従来技術を開示する文献としては下記のものを挙げることができる。
【非特許文献１】Saibara Tら、「非アルコール性脂肪肝炎」, Lancet. 354:1299-1300, 1999
【非特許文献２】Yamamura N, et al., 「放射性医薬品として123I-標識中鎖脂肪酸の、β-酸化に基づく肝機能の薬物動態解析（Pharmacokinetic analysis of 123I-labeled medium chain fatty acid as a radiopharmaceutical for hepatic function based on beta-oxidation）」, Ann Nucl Med. 13:235-239, 1999
【非特許文献３】Brouillette C., et al., 「肝臓の脂肪酸結合タンパク質（FABP）T94Aミスセンス変異の、フェノフィブラートによる治療に対する血漿リポタンパク反応性に対する影響（Effect of liver fatty acid binding protein (FABP) T94A missense mutation on plasma lipoprotein responsiveness to treatment with fenofibrate）」, J Hum Genet, 49: 424-432, 2004
【非特許文献４】Lawrence Chan, et al.,「ヒト肝臓の脂肪酸結合タンパク質のｃDNAおよびアミノ酸配列（Human Liver Fatty Acid Binding Protein cDNA and Amino Acid Sequence）」, The Journal of Biological Chemistry, Vol.260, No.5, pp.2629-2632, 1985
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、脂質代謝不全に関連する遺伝子多型、並びに脂質代謝不全感受性遺伝子（脂質代謝不全の遺伝的素因マーカー）を同定し、この情報をもとにして個々の被験者について脂質代謝不全、ならびにそれに起因する疾患の発症リスクを検出または判定するための方法を提供することである。さらに本発明の目的は、当該方法を簡便に実施するために有用な試薬および試薬キットを提供することである。
【００１３】
また本発明は、上記脂質代謝不全に関連する遺伝子多型、並びに脂質代謝不全感受性遺伝子に関する知見をもとに、脂質代謝不全やそれに起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）の予防剤もしくは改善剤の有効成分を探索するための方法を提供することを目的とする。
【００１４】
さらに本発明は、脂質代謝不全やそれに起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）に対する治療効果、または上記疾患のリスク軽減効果を評価する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、メタボリックシンドロームをもたらす要因となりえる脂質代謝不全に関与する遺伝子を見いだすことを目的として鋭意検討していたところ、肝臓の脂肪酸β酸化能が不全である被験者群は、ヒト第２染色体領域２ｐ１１部位に存在する肝臓型の脂肪酸結合タンパク質（FABP1：fatty acid binding protein 1, liver）の遺伝子（FABP1遺伝子）の塩基配列中に、正常者群と明らかに異なる遺伝子多型（遺伝子異常）を、ホモ接合体として有していることを見いだし、それを同定することに成功した。
【００１６】
また、本発明者らは、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者を対象とした試験で、過半数の症例では肝臓での脂肪酸β酸化が代償性に亢進しているものの、その残りの症例では肝臓での脂肪酸β酸化の代償性亢進がなく脂肪酸を代謝できずにいること見いだし、さらに後者の脂肪酸代謝不全型のNASH患者がおしなべて上記遺伝子多型をホモ接合体として有することを見いだした。すなわち、NASH患者には、肝臓において脂肪酸代謝が正常に機能するタイプ（肝脂肪酸代謝正常型）と脂肪酸代謝が正常に機能しないタイプ（肝脂肪酸代謝不全型）の２タイプあり、肝脂肪酸代謝不全型のヒトは、代償的に肝臓での脂肪酸代謝を亢進することが遺伝的（先天的）にできず、NASHを発症するリスクが高いことを、見いだした。
【００１７】
さらに、本発明者らは、この遺伝子多型（遺伝子異常）が、肝脂肪酸代謝不全型NASHの患者のみならず、心筋梗塞の患者にも高頻度に生じていることを確認し、当該遺伝子多型（遺伝子異常）が肝臓における脂肪酸β酸化の律速段階となっており、肝臓のみならず全身の脂肪酸及び中性脂肪代謝不全の遺伝的素因であることを確認した。
【００１８】
また、当該遺伝子多型（遺伝子異常）は、FABP1遺伝子のエクソン部にあってFABP1のアミノ酸を変異させてFABP1の質的および／または量的な変化をもたらすため、診断や治療の好適なターゲットとなると考えられた。
【００１９】
以上の知見から、本発明者らは、個々の被験者についてFABP1遺伝子の遺伝子多型（遺伝子異常）またはそれに基づくFABP1の質的・量的変化を検出することにより、脂質代謝不全、並びにそれに起因する疾患を発症する潜在的な危険度を、高い確率で検出できることを確信して、本発明を完成するにいたった。
【００２０】
すなわち、本発明には下記に掲げる態様が含まれる。
【００２１】
（１）脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法、及びそれに使用する試薬
(1-1)．被験者の生体試料を対象として、FABP1（fatty acid binding protein 1, liver [Homo sapiens]）の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する工程を含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法。
(1-2)．ヒト第２染色体の遺伝子座2p11に存在する遺伝子多型を検出する方法である、(1-1)記載の方法。
(1-3)．上記遺伝子多型が、FABP1遺伝子の遺伝子多型のホモ接合体である、(1-1)または(1-2)に記載する方法。  
(1-4）．上記遺伝子多型の有無を、FABP1の94番目のアミノ酸の変異（T→A）を指標として検出する方法である、(1-1)乃至(1-3)のいずれかに記載する方法。
(1-5)．脂質代謝不全またはそれに起因する疾患が、肝臓の脂肪酸β酸化能の不全またはそれに起因する疾患である(1-1)乃至(1-4)のいずれかに記載する方法。
(1-6)．肝臓の脂肪酸β酸化能の不全に起因する疾患が、非アルコール性脂肪肝炎、脂肪肝、または心筋梗塞である、(1-5)に記載の方法。
【００２２】
(1-7)．以下の工程(a)〜(c)を含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法：
(a)  被験者の生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、
(b)  抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目の塩基を測定する工程、及び
(c)  上記塩基がＡであるかＧであるかを検出する工程。
(1-8)．さらに下記の工程(d)を有する、(1-7)記載の検出方法：
(d)  上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に、被験者について脂質代謝不全またはこれに起因する疾患リスクありと決定する工程。
【００２３】
(1-9)．下記の工程(i)〜(iii)を含む、被験者について脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出する方法：
(i)  被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に測定する工程、
(ii)  上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)   脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満か、または0.5%/min以上か、測定する方法。
(1-10)．さらに下記の工程(iv)を有する、(1-9)記載の検出方法：
(iv)  脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患リスクありと、0.5%/min以上の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患リスクなしと、決定する工程。
【００２４】
(1-11)．ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる１５〜３５塩基長の標識または非標識オリゴヌクレオチド。
(1-12)．脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを判定するために用いられる、(1-11)の標識または非標識オリゴヌクレオチドからなるプライマー。
(1-13)．ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子において、配列番号１に記載する塩基配列の３０１番目に位置するヌクレオチドを識別するために用いられる、(1-12)に記載するプライマー。
【００２５】
(1-14)．ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチド。
(1-15)．脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを判定するために用いられる、(1-14)の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチドからなるプローブ。
(1-16)．ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子において、配列番号１に記載する塩基配列の３０１番目に位置する塩基を識別するために用いられる、(1-15)に記載するプローブ。
(1-17)．任意の固相に固定してなる固相化プローブである(1-15)または(1-16)に記載するプローブ。
(1-18)．(1-12)または(1-13)に記載するプライマー、または／および、(1-15)乃至(1-17)のいずれかに記載するプローブを含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出するための試薬、または当該試薬を含むキット。
(1-19)．脂質代謝不全またはそれに起因する疾患が、肝臓の脂肪酸β酸化能の不全またはそれに起因する疾患である(1-18)に記載する試薬または試薬キット。
【００２６】
（２）肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの検出方法、及びそれに使用する試薬
上記の肝臓の脂肪酸β酸化能の不全に起因して発症する疾患には、上記(1-6)に記載するように、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）が含まれる。前述するようにNASH患者には、肝臓における脂肪酸β酸化能が正常なタイプ（肝脂肪酸β酸化能正常型）と遺伝的（先天的）に肝臓の脂肪酸β酸化能が低下している肝脂肪酸β酸化能不全型の２タイプがある。肝脂肪酸β酸化能不全型の被験者は、高脂肪食を摂取しつづけた場合などに、肝臓での脂肪酸β酸化を代償的に亢進することができないため、高度の脂肪肝を発症しやすく、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を発症するリスクが高い。このため、この改善（リスク解消）には、肝臓での脂肪酸β酸化を人為的的または強制的に誘発してやることが有効である。一方、肝脂肪酸β酸化能正常型のNASH患者は、肝脂肪酸β酸化能不全型とは発症原因が異なるため、別の治療方法を検討する必要がある。このように、臨床的立場からは、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者については、肝脂肪酸β酸化能正常型のNASHか、肝脂肪酸β酸化能不全型のNASHであるかを区別することが必要である。このため本発明は、下記に掲げるように、NASH患者を対象として肝脂肪酸β酸化能不全型のNASHであるか否かを選別する方法を提供する。
【００２７】
(2-1)．被験者の生体試料を対象として、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する工程を含む、肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの検出方法。
(2-2)．ヒト第２染色体の遺伝子座2p11に存在する遺伝子多型を検出する方法である、(2-1)記載の検出方法。
(2-3)．上記遺伝子多型が、FABP1遺伝子の遺伝子多型のホモ接合体である、(2-1)または(2-2)に記載する検出方法。  
(2-4)．上記遺伝子多型の有無を、FABP1の94番目のアミノ酸の変異（T→A）を指標として検出する方法である、(2-1)乃至(2-3)のいずれかに記載する方法。
(2-5)．以下の工程(a)〜(c)を含む肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを測定する方法：
(a)生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、
(b)抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目の塩基を識別する工程、及び
(c)上記塩基がＡであるかＧであるかを測定する工程。
(2-6)．さらに下記の工程(d)を有する、（2-5）に記載する方法：
(d)上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであると決定する工程。
【００２８】
(2-7)．下記の工程(i)〜(iii)を含む、被験者について肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを測定する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)上記脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満か、0.5%/min以上かを測定する工程。
(2-8)．さらに下記の工程(iv)を有する、（2-7）記載の方法：
(iv)  脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満の場合を肝脂肪酸β酸化能不全型NASHと、0.5%/min以上の場合を肝脂肪酸β酸化能正常型NASHであると、決定する工程。
【００２９】
(2-9)．肝脂肪酸β酸化能不全型NASHを判定するために用いられる、下記の標識または非標識オリゴヌクレオチドからなるプライマー：
−ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる１５〜３５塩基長の標識または非標識オリゴヌクレオチド。
(2-10)．ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子において、配列番号１に記載する塩基配列の３０１番目に位置するヌクレオチドを識別するために用いられる、(2-9)に記載するプライマー。
【００３０】
(2-11)．肝脂肪酸β酸化能不全型NASHを判定するために用いられる、下記の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチドからなるプローブ：
−ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチド。
(2-12)．ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子において、配列番号１に記載する塩基配列の３０１番目に位置する塩基を識別するために用いられる、(2-11)に記載するプローブ。
(2-13)．任意の固相に固定してなる固相化プローブである(2-11)または(2-12)に記載するプローブ。
(2-14)． (2-9)または(2-10)に記載するプライマー、または／および、(2-11)乃至(2-13)のいずれかに記載するプローブを含む、肝脂肪酸β酸化能不全型NASHを検出するための試薬、または当該試薬を含むキット。
【００３１】
（３）脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減方法
(3-1)．FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者について、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）を正常な状態（T→A）に戻すか、またはFABP1遺伝子のSNP3513の塩基変異（A→G）を正常な状態（G→A）に戻すことを特徴とする、脂質代謝不全関連疾患発症リスクを低減する方法。
(3-2)．脂質代謝不全関連疾患が肝脂肪酸β酸化能不全型NASHである(3-1)記載の方法。
【００３２】
(3-3)． FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に、フィブラート系薬剤を投与することを特徴とする、当該被験者についてNASH、特に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの発症リスクを低減する方法。
(3-4)． FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に、フィブラート系薬剤を投与することを特徴とする、当該被験者についてNASH、特に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの発症を予防する方法。
【００３３】
(3-5)． FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に、フィブラート系薬剤を投与することを特徴とする、当該被験者についてNASH、特に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHを改善する方法。
(3-6)．FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に対する、フィブラート系薬剤を有効成分とする、NASHの発症予防またはNASH改善剤。
【００３４】
（４）脂質代謝不全の改善、または脂質代謝不全関連疾患の発症リスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法
(4-1)．下記の工程を有する、脂質代謝不全の改善、または脂質代謝不全に起因する疾患の発症のリスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法：
（ａ）94番目のアミノ酸残基がアラニンである変異FABP1〔FABP1(T94A)〕を発現する細胞に対して被験物質を接触させる工程
（ｂ）被験物質を接触させた細胞について、FABP1若しくは変異FABP1の発現量、またはFABP1活性を検出する工程
（ｃ）被験物質非存在下で測定した変異FABP1発現細胞のFABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性を陰性コントロールとした場合に、当該陰性コントロールと対比して、上記（ｂ）工程でFABP1の発現量またはFABP1活性の増加が認められた細胞または変異FABP1の発現量の低下が認められた細胞に接触させた被験物質を、候補物質として選択する工程。
【００３５】
(4-2)．下記の工程を有する、脂質代謝不全の改善、脂質代謝不全に起因する疾患の発症のリスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法：
(i) ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子、またはその遺伝子の一部であって、少なくとも、塩基Ｇを挟んで5’側及び3’側にそれぞれ配列番号２記載の塩基配列及び配列番号３記載の塩基配列を含有するポリヌクレオチドを含有する細胞に対して、被験物質を投与する工程、及び
(ii) 投与した被験物質の中から、当該細胞中の上記ポリヌクレオチドの配列番号２記載の塩基配列と配列番号３記載の塩基配列に挟まれた塩基ＧをＡに変換させる物質を、候補物質として選択する工程。
(4-3)．脂質代謝不全またはそれに起因する疾患が、肝臓の脂肪酸β酸化能の不全またはそれに起因する疾患である(4-1)または(4-2)に記載するスクリーニング方法。
【００３６】
（５）脂質代謝不全もしくは脂質代謝不全関連疾患に対する治療効果または前記疾患のリスク軽減効果を評価する方法
(5-1)．FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを有する患者に対する治療の、当該疾患に対する治療効果またはリスク軽減効果を評価する方法であって、肝臓の脂肪酸代謝能を治療前と治療後とで対比することを特徴とする方法。
【００３７】
(5-2)．肝臓の脂肪酸代謝能の測定を、下記の工程(a)及び(b)を有する方法で行う(5-1)記載の方法：
(a)  被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、及び
(b)  上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸代謝能を測定する工程。
【００３８】
(5-3)．下記の工程を有する、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全を有する患者に対する、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患の治療効果または疾患リスク軽減効果を評価する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満の場合を治療効果または疾患リスク軽減効果あり、0.5%/min以上の場合を治療効果または疾患リスク軽減効果なしと、決定する工程。
【発明の効果】
【００３９】
本発明によれば、個々の被験者について、脂質代謝不全の有無または脂質代謝不全に起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）を発症する相対的な危険度を簡便に検出し判定することができる。本発明の検出方法は、in vitroでしかも医師等の専門的な知識を要することなく簡単に実施することができる方法である。本発明の検出方法によって脂質代謝不全関連疾患を発症する潜在的な危険度が相対的に高いことが判明した被験者に対しては、その旨を告知し、予め脂質代謝不全関連疾患の発症を防ぐための的確な対策を講じることができる。従って、本発明は、脂質代謝不全関連疾患の発症を予防するための、さらには当該脂質代謝不全関連疾患の進展（進行）を予防するための検査方法として極めて有用である。特に、本発明によれば、NASH患者またはその潜在的な患者について、脂質代謝不全（肝脂肪酸β酸化能の不全）を原因とするか否か、そのタイプを特定することができる。発症原因によって自ずと治療方法が異なるため、脂質代謝不全型のNASHか否かを分類判断することによって、NASHの改善またはその進展を抑制するための的確な対策を講じることができる。
【００４０】
さらに本発明は上記検出方法において使用される試薬を提供するものであり、これにより上記方法を簡便に実施することが可能となる。
【００４１】
また本発明によれば、本発明によって提供される脂質代謝不全感受性遺伝子ならびに脂質代謝不全に関与する遺伝子多型を利用した脂質代謝不全関連疾患の発症リスクを低減する方法が提供できる。当該リスクの低減は、脂質代謝不全関連疾患の発症を予防したり、また発症した脂質代謝不全関連疾患の改善に有効に利用することができる。さらに本発明は脂質代謝不全関連疾患発症リスクを低減する有効成分のスクリーニング方法を提供するものであり、当該方法によれば有効成分の取得によって、脂質代謝不全関連疾患発症リスクの低減、ひいては脂質代謝不全関連疾患予防又は治療に有効な医薬品を開発することが可能である。
【００４２】
また、本発明はFABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全または脂質代謝不全関連疾患について、その治療効果を評価する方法を提供するものであり、当該方法によれば非侵襲的に投与薬剤や適用療法の効果を評価することができるため、的確な治療を行うことができ、誤った治療による患者の精神的及び肉体的負担を回避することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４３】
１．本発明で使用する用語の定義
本明細書における塩基配列（ヌクレオチド配列）、核酸およびアミノ酸などの略号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔IUPAC-IUB communication on Biological Nomenclature, Eur. J. Biochem., 138; 9 (1984)〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作製のためのガイドライン」（日本国特許庁編）及び当該分野における慣用記号に従うものとする。
【００４４】
本明細書中において「遺伝子」は、特に言及しない限り、ヒトゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡ、及び１本鎖ＤＮＡ（センス鎖）、並びに当該センス鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（アンチセンス鎖）、及びそれらの断片のいずれもが含まれる、また、本明細書で「遺伝子」とは、特に言及しない限り、調節領域、コード領域、エクソン、及びイントロンを区別することなく示すものとする。
【００４５】
また、本明細書中において、「ヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」は、核酸と同義であって、ＤＮＡおよびＲＮＡの両方を含むものとする。また、これらは２本鎖であっても１本鎖であってもよく、ある配列を有する「ヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド」）といった場合、特に言及しない限り、これに相補的な配列を有する「ヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」）も包括的に意味するものとする。さらに、「ヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」）がＲＮＡである場合、配列表に示される塩基記号「ｔ」は「ｕ」と読み替えられるものとする。
【００４６】
本明細書において「遺伝子多型」とは、２つ以上の遺伝的に決定された対立遺伝子がある場合にそれらの対立遺伝子を指す。具体的には、ヒトの集団において、ある一個体のゲノム配列を基準として、他の１または複数の個体ゲノム中の特定部位に、１又は複数のヌクレオチドの置換、欠失、挿入、転移、逆位などの変異が存在するとき、その変異が当該１または複数の個体に生じた突然変異でないことが統計学的に確実か、または当該個体内特異変異でなく、１％以上の頻度で集団内に存在することが家系的に証明される場合、その変異を「遺伝子多型」とする。本明細書で用いる「遺伝子多型」の意味には、単一のヌクレオチドの変化によって引き起こされる多型であるいわゆる１塩基多型〔Single Nucleotide Polymorphism：ＳＮＰ（又はＳＮＰｓ）〕と連続した複数ヌクレオチドにわたる多型の両方が含まれる。「一塩基多型」とは、単一の核酸の変化によって引き起こされる多型である。多型は選択された集団の１％より大きな頻度、好ましくは１０％以上の頻度で存在する。
【００４７】
本明細書において「脂質代謝不全感受性遺伝子」とは、脂質代謝不全及びそれに起因する疾患に罹りやすい体質を決める遺伝子のことをいう。本発明が対象とする脂質代謝不全は、好ましくは肝臓型のFABP1（fatty acid binding protein 1, liver）を発現する臓器、組織または細胞における脂肪酸β酸化能の不全であり、より好ましくは肝臓における脂肪酸β酸化能の不全である。なお、ここで「脂肪酸β酸化能の不全」とは、脂肪酸β酸化能が正常に機能しないことを意味する。例えば、高脂肪食を摂取した場合、正常であれば生じる脂肪酸β酸化能の代償的亢進が生じないか、または生じても極めて少ない場合を挙げることができる。
【００４８】
また、こうした脂質代謝不全、特に肝臓の脂肪酸β酸化能の不全を原因として生じる疾患として、肝脂肪酸β酸化不全症、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）、脂肪肝、及び心筋梗塞を挙げることができる。ここで、「非アルコール性脂肪肝炎（NASH）」には、タモキシフェン誘発性非アルコール性脂肪肝炎とそれ以外の非アルコール性脂肪肝炎が、また「脂肪肝」には非アルコール性脂肪肝及び非肥満性脂肪肝が含まれる。
【００４９】
また、本明細書において「遺伝子頻度」とは、一つの遺伝子の座位について、集団中に存在する全遺伝子数のうち、その対立遺伝子が占める割合をいう。
【００５０】
本明細書において「連鎖不平衡」とは、集団における任意の対立遺伝子の組み合わせの頻度について、偶然によって期待されるよりも、より頻繁に近傍の特定対立と出現する関係のことをいう。例えば、遺伝子座Ｘが対立遺伝子ａ及びｂ（これらの等しい頻度で存在する）を有し、近傍の遺伝子座Ｙが対立遺伝子ｃ及びｄ（これらは等しい頻度で存在する）を有する場合、別の遺伝子多型の組み合わせであるハプロタイプａｃは、集団において０.２５の頻度で存在することが期待される。ハプロタイプａｃがこうした期待値よりも大きい場合、つまりａｃという特定の遺伝子型が頻繁に出現する場合、対立遺伝子ａｃは連鎖不平衡にあるという。連鎖不平衡は、対立遺伝子の特定の組み合わせの自然選択または集団に導入された時期が進化的にみて最近であることによって生じたもので、連鎖する対立遺伝子同士が平衡に達していないことから生じ得る。従って、民族や人種などのように、別の集団においては連鎖不平衡の様式は異なり、ある集団においてａｃが連鎖不平衡である場合でも、別の集団でａｄが連鎖不平衡の関係である場合もある。連鎖不平衡における遺伝子多型の検出は、当該多型そのものが直接疾患を引き起こさないにも拘わらず、疾患に対する感受性を検出するのに有効である。例えば、ある遺伝子座Ｘの対立遺伝子ａについて、それが疾患の原因遺伝子要素ではないが、遺伝子座Ｙの対立遺伝子ｃとの連鎖不平衡により、疾患感受性を示し得ることがある。本明細書において「連鎖不平衡解析」とは、ゲノム領域における連鎖不平衡の強さの度合いを解析することをいう。
【００５１】
なお、本明細書に記載する蛋白質や遺伝子の配列や位置情報は、いずれも米国のＮＣＢＩ（the National Center for Biotechnology Information）のデータベースに基づく。
【００５２】
２．脂質代謝不全感受性遺伝子
細胞内における脂肪酸の輸送と代謝を制御する脂肪酸結合タンパク質１（Fatty acid-binding protein 1、liver、[Homo sapiens]：「FABP1」）の遺伝子（FABP1遺伝子）には、従来より複数のＳＮＰｓが存在することが知られている（例えば、MutDBデータベース参照：http://mutdb.org/AnnoSNP/data/N3/S0/DA/AC.nt.html、及びBrouillette C, Bosse Y, Perusse L, Gaudet D, Vohl MC. Effect of liver fatty acid binding protein (FABP) T94A missense mutation on plasma lipoprotein responsiveness to treatment with fenofibrate. J Hum Genet. 2004;49(8):424-32. Epub 2004 Jul 13.）。
【００５３】
本発明者らは、研究活動の中で、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者には、高脂肪食を摂取した場合に肝臓の脂肪酸β酸化能が代償的に亢進する正常タイプ（肝脂肪酸β酸化正常型）と代償的亢進が生じない不全タイプ（肝脂肪酸β酸化不全型）の２タイプがあり、後者の肝脂肪酸β酸化不全型の患者は、FABP1遺伝子について知られているSNPsのうちの一つを、ホモ接合体として高頻度に有していることを見いだした。
【００５４】
当該SNPは、ヒト第２染色体の遺伝子座2p11に存在するFABP1遺伝子（Genbank Accession No. NM_001443、5069bp）のエクソン２（全長5069bp 中、「3474..3566」に位置するエクソン２領域）に位置しており、上記肝脂肪酸β酸化不全型のNASH患者は非常に高い頻度で、当該FABP1遺伝子の3513位の塩基ａがｇに変異することにより（以下、この変異を「a3513g」とも示す）、その遺伝子産物であるFABP1（蛋白質）の94番目のアミノ酸残基がスレオニン（T）からアラニン（A）に変異していた（以下、この変異を「T94A」とも示す）。
【００５５】
さらに、本発明者らは、上記のFABP1遺伝子の多型（a3513g）（変異遺伝子）をホモ接合体として有する脂肪肝炎患者の肝臓における脂肪酸β酸化能が、ほぼ100％の確率で不全となっていることを確認し、上記FABP1遺伝子の変異（a3513g）ならびにFABP1の変異（T94A）が、脂肪酸β酸化能の不全を原因とする脂質代謝不全と非常に密接に関連していることを確信した。
【００５６】
またさらに本発明者らは、心筋梗塞患者を対象として同様に検討したところ、これらの患者も上記のFABP1遺伝子の多型（a3513g）（変異遺伝子）をホモ接合体として特有に有していることが確認された。このことからFABP1遺伝子の変異（a3513g）ならびにFABP1の変異（T94A）が、肝臓のみならず全身の脂質代謝不全と極めて密接に関連しており、脂質代謝不全ならびにそれに起因して発生する疾患の遺伝的素因マーカーであることを確信した。
【００５７】
以上の結果から、FABP1の変異（T94A）または当該アミノ酸変異をもたらす遺伝子異常若しくは遺伝子多型を検出することによって、個々の被験者について肝臓における脂肪酸β酸化能の不全を原因とする脂質代謝不全、及びそれに起因して生じる各種疾患の罹患リスクを診断することができるものと考えられる。
【００５８】
斯くして得られた知見に基づいて、本発明は脂質代謝不全感受性遺伝子として、ヒトFABP1遺伝子（Genbank Accession No. NM_001443、5069bp）を提供する。なお、FABP1遺伝子（mRNA）の塩基配列を配列番号４に示す（なお、塩基配列中、ｔはｕを意味する）。当該FABP1遺伝子はヒト第２染色体上の2p11遺伝子座に位置する〔ヒト第２染色体（Genbank Accession No. NM_000002）の88261772位から88266840位に位置する〕。
【００５９】
また、脂質代謝不全感受性遺伝子には、上記FABP1遺伝子のみならず、当該FABP1遺伝子の近傍に存在し、この遺伝子と強い連鎖不平衡を示す遺伝子（例えば、P遺伝子やR遺伝子）も含まれる。かかる遺伝子のうち好ましい脂質代謝不全感受性遺伝子は、ヒト第２染色体（好ましくは2p11遺伝子座）を対象とした脂質代謝不全感受性SNPsマーカーに対する連鎖不平衡解析において、当該染色体領域内で連鎖不平衡が認められる領域であって、かつ脂質代謝不全感受性SNPsマーカーを含む領域である「ハプロタイプブロック」にオーバーラップする遺伝子である。なお、「ハプロタイプブロックにオーバーラップする遺伝子」とは、ハプロタイプブロックの一部の領域と同じ塩基配列を有するか、またはハプロタイプブロックの全領域の塩基配列と同じ塩基配列を有する遺伝子の両方を意味する。
【００６０】
かかる脂質代謝不全感受性遺伝子の候補として下記に記載する遺伝子を挙げることができる。好ましくは、FABP1遺伝子に近接して存在するLOC51315遺伝子（hypothetical protein L0C51315）、SMYD1遺伝子（SET and MYND domain containing protein 1）、FLJ10916遺伝子（hypothetical protein FLJ10916）、及びMRPL45P1遺伝子（mitochondrial ribosomal protein L45 pseudogene 1）である。
【００６１】
SIAT9：sialyltransferase 9 (CMP-NeuAc:lactosylceramide alpha-2,3-sialylransferase 9) 
POLR1A：polymerase（RNA) I polypeptide A, 194kDa
FLJ20758：FLJ20758 protein
IMMT：inner membrane protein, mitochondrial (mitofilin)
MRPL35：mitochondrial ribosomal protein L35
C2orf23：chromosome 2 open reading frame 23
JMJD1A：jumonji domain containing 1A
VPS24：vacuolar protein sorting 24 (yeast)
RNF103：ring finger protein 103
FLJ13910：hypothetical protein FLJ13910
CD8A：CD8 antigen, alpha polypeptide (p32)
LOC400965：hypothetical L0C400965
CD8B1：CD8 antigen, beta polypeptide 1 (p37)
MGC4677：
PAFAH1P1：platelet-activating factor acetylhydrolase, isoform 1b, pseudogene 1
PLGL：plasminogen-like
LOC51315：hypothetical protein L0C51315
SMYD1：SET and MYND domain containing 1
FLJ10916：hypothetical protein FLJ10916
MRPL45P1：mitochondrial ribosomal protein L45 pseudogene 1
FLJ25369：hypothetical protein FLJ25369
EIF2AK3：eukarytic translation initiation factor 2-alpha kinase 3
RPIA：ribose 5-phosphate isomerase A (ribose 5-phosphate epimerase)
IGKV4-1：immunoglobulin kappa variable 4-1
IGKV7-3：immunoglobulin kappa variable 7-3
IGKV2-4：immunoglobulin kappa variable 2-4
IGKV3-7：immunoglobulin kappa variable 3-7
IGKV2-10：immunoglobulin kappa variable 2-10
IGKV2-14：immunoglobulin kappa variable 2-14
IGKV3-15：immunoglobulin kappa variable 3-15
IGKV2-18：immunoglobulin kappa variable 2-18
IGKV3-20：immunoglobulin kappa variable 3-20
IGKV6-21：immunoglobulin kappa variable 6-21
IGKV2-23：immunoglobulin kappa variable 2-23
IGKV2-24：immunoglobulin kappa variable 2-24
IGKV2-25：immunoglobulin kappa variable 2-25
IGKV2-26：immunoglobulin kappa variable 2-26
IGKV2-28：immunoglobulin kappa variable 2-28
IGKV2-29：immunoglobulin kappa variable 2-29
IGKV2-30：immunoglobulin kappa variable 2-30
IGKV3-31：immunoglobulin kappa variable 3-31
IGKV3-34：immunoglobulin kappa variable 3-34
【００６２】
３．脂質代謝不全診断マーカー
本発明は、脂質代謝不全、またはそれに起因して生じる疾患の遺伝的素因マーカーを含む遺伝子（またはオリゴもしくはポリヌクレオチド）を、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患の診断マーカーとして提供する。
【００６３】
ここで脂質代謝不全としては、肝臓における脂肪酸β酸化能の不全を好適に例示することができる。「脂肪酸β酸化能の不全」とは、高脂肪食を摂取した場合など、正常であれば生じる脂肪酸β酸化能の代償的亢進が、生じないか、若しくは生じても僅かである状態をいう。こうした脂質代謝不全、特に肝臓の脂肪酸β酸化能の不全に起因して生じる疾患（脂質代謝不全関連疾患）としては、肝脂肪酸β酸化不全症、非アルコール性脂肪肝炎（タモキシフェン誘発性非アルコール性脂肪肝炎、およびその他の非アルコール性脂肪肝炎が含まれる）、非肥満性脂肪肝（非肥満性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝が含まれる）、及び心筋梗塞を挙げることができる。
【００６４】
被験者について、遺伝的素因マーカーを含む遺伝子（またはオリゴもしくはポリヌクレオチド）（診断マーカー）を検出することにより、当該被験者の脂質代謝不全若しくは脂質代謝不全関連疾患の有無、または当該疾患の発症リスク（発症の潜在的可能性）を検出（検査・診断）することができる。
【００６５】
かかる診断マーカーとして、ハプロタイプブロックに存在する少なくとも１つの脂質代謝不全感受性SNPを含み、且つヒトゲノム上で特異的に認識されるオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる。なお、ここでハプロタイプブロックとは、ヒト第２染色体、好ましくはその2p11遺伝子座を対象とした脂質代謝不全感受性SNPに対する連鎖不平衡解析において、当該染色体領域内で連鎖不平衡が認められる領域であって、かつ当該脂質代謝不全感受性SNPを含む領域である。
【００６６】
これらのオリゴまたはポリヌクレオチドの長さ（塩基長）は、ヒトゲノム上で特異的に認識される長さであればよく、その限りにおいて特に制限されない。通常10塩基長以上、好ましくは20塩基長以上である。
【００６７】
かかる診断マーカーの一例として、ヒト第２染色体上のFABP１遺伝子（Genbank Sequence Accession IDs: NM_001443、全長5069bp）の塩基配列において、ハプロタイプブロックに存在する遺伝子多型（FABP１遺伝子、1..5069の3513位、以下、これを「SNP3513」ともいう）（塩基ＡまたはＴ）を含むオリゴまたはポリヌクレオチドが例示される。具体的には、ヒト第２染色体上のFABP１遺伝子の塩基配列において、上記遺伝子多型部位「SNP3513」（FABP１遺伝子の3513位）（脂質代謝不全SNP）を中心として塩基長51〜601のオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる〔例えば、51塩基（SNP3513 の5’側及び3’側各25塩基ずつ：配列番号５）、201塩基（SNP3513 の5’側及び3’側各100塩基ずつ：配列番号６）、または601塩基（SNP3513の5’側及び3’側各300塩基ずつ：配列番号７〕。
【００６８】
また、上記のような遺伝的素因マーカーを含む遺伝子（またはオリゴもしくはポリヌクレオチド）そのものでなく、遺伝的素因を反映した遺伝子産物（例えば、mRNAまたはその派生物（cDNA）、蛋白質）も、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患の診断マーカーとして利用することができる。
【００６９】
かかる診断マーカーの一例として、FABP１遺伝子の発現産物であるFABP１（蛋白質）若しくはその部分アミノ酸配列を有するペプチド、またはこれらをコードするオリゴまたはポリヌクレオチド（mRNAまたはcDNA）を挙げることができる。FABP１のアミノ酸配列（127アミノ酸）及びそれをコードするcDNA配列（381bp）を配列番号８に記載する。配列番号８は、変異のないFABP１のアミノ酸配列（94番目がThr）及びそのコード配列を示す。ここでペプチドは、少なくともFABP１遺伝子の上記「SNP3513」に対応するFABP１の94番目のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するオリゴまたはポリペプチドである。
【００７０】
４．脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法
本発明は、また被験者について、脂質代謝不全の有無、または脂質代謝不全に起因して生じる疾患（脂質代謝不全関連疾患）の潜在的発症リスクの有無を検出する方法を提供する。
【００７１】
当該方法は、FABP1の94番目のアミノ酸についてスレオニン（Ｔ）からアラニン（Ａ）への変異（T94A）をもたらす、遺伝子多型を検出することによって実施することができる。
【００７２】
多型とは、遺伝学的には、人口中１％以上の頻度で存在している1遺伝子におけるある塩基の変化と一般的には定義される。しかしながら、本発明の「多型」はこの定義に制限されず、１％未満の塩基の変化であっても「多型」に含む。多型の種類には、一塩基多型（SNP）から数十塩基が欠失、置換あるいは挿入されている多型等があるが、本発明が対象とする多型は、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらすものであればよく、特定の態様の多型に制限されるものではない。さらに、多型部位の数についても特に制限はなく、1個以上の多型を有していてもよい。
【００７３】
かかる遺伝子多型の検出は、具体的には、(1)遺伝子多型を含む領域でPCRを行い、SSCP法で検出する方法、(2)遺伝子多型を含む領域でPCRを行い、PCR産物に対する制限酵素の切断様式から検出する方法、(3)同PCR産物を直接シーケンシングして、配列を決定する方法、(4)遺伝子多型を有する領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプローブとして使用し、個体のDNAとハイブリダイズさせるASO（allele specific oligonucleotide）法、(5) 遺伝子多型を有する領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプローブとして使用して、質量分析装置等で検出する方法など、公知の方法を用いることにより行うことができる。
【００７４】
より具体的な検出方法として、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型の一つである、FABP1遺伝子のSNP3513部位の変異（a→g）を識別する方法を例示することができる。当該検出方法は、以下の工程(a)及び(b)を行うことによって実施することができる：
(a)  被験者の生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、及び
(b)  抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目を識別する工程。
【００７５】
なお、(b)の工程は、実際は抽出したゲノムＤＮＡ上においてFABP1遺伝子を特定して対象とする必要はなく、抽出したゲノムＤＮＡそのものを対象として、その塩基配列に存在する、配列番号２記載の塩基配列と配列番号３記載の塩基配列により挟まれた塩基を識別することによって行うことができる。
【００７６】
ここで、配列番号２で示される塩基配列は、ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子の塩基配列において、前述する脂質代謝不全ＳＮＰ（SNP3513）の塩基（Genbank Sequence Accession IDs: NM_001443の配列中、3513位の塩基）の5’側（上流側）に位置する３００塩基長の塩基配列に該当し、配列番号３で示される塩基配列は、ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子の塩基配列において、上記脂質代謝不全ＳＮＰ（SNP3513）の塩基の3’側（下流側）に位置する３００塩基長の塩基配列に該当する。ここで検出する対象の塩基は、配列番号２及び配列番号３で示される各塩基配列に挟まれた、脂質代謝不全ＳＮＰであるSNP3513である。
【００７７】
当該検出によって、SNP3513の塩基がＧ（グアニン）のホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合、当該ゲノムＤＮＡ試料を提供した被験者は脂質代謝不全を有し、脂質代謝不全に起因する疾患に罹患しやすい（脂質代謝不全に起因する疾患を発症する危険度が相対的に高い）と判断することができる。逆に、SNP3513の塩基がＡ（アデニン）のホモ接合体（Ａ／Ａ）である場合、及びＡ（アデニン）とＧ（グアニン）のヘテロ接合体（Ａ／ＧまたはＧ／Ａ）である場合、当該ゲノムＤＮＡ試料を提供した被験者は脂質代謝不全を有さず、脂質代謝不全に起因する疾患に罹患しにくい（脂質代謝不全に起因する疾患を発症する危険度が相対的に低い）と判断することができる。
【００７８】
上記本発明の方法は、さらに下記の工程(c)および(d)を有することが好ましい：
(c) FABP1遺伝子の塩基配列の3513番目の塩基（すなわち、配列番号２記載の塩基配列と配列番号３記載の塩基配列により挟まれた塩基）がＧであるかＡであるかを識別する工程、
(d)上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に、当該被験者は脂質代謝不全であり、脂質代謝不全関連疾患に罹りやすい（脂質代謝不全関連疾患を発症するリスクあり）と判定する工程。
【００７９】
当該方法によれば、脂質代謝不全の別、並びに脂質代謝不全関連疾患に対する易罹患性及び難罹患性の別、すなわち脂質代謝不全関連疾患の発症リスクを判定することができる。当該脂質代謝不全関連疾患の発症危険度の判定は、SNP3513のＡ→Ｇ変異（ホモ接合体）を判断基準（判断指標）として医師等の専門知識を有する者の判断を要することなく、機械的に行なうことができる。このため、本発明の方法は、脂質代謝不全、または脂質代謝不全関連疾患の発症危険度の検出方法と言うこともできる。
【００８０】
なお、上記工程(a)（ゲノムＤＮＡの抽出）と工程(b)（目的塩基の識別）は、公知の方法〔例えば、Bruce, et al., Geneme Analysis/A laboratory Manual (vol.4), Cold Spring Harbor Laboratory, NY., (1999)〕を用いて行うことができる。
【００８１】
工程(a)においてゲノムＤＮＡの抽出を行う検体は、被験者および臨床検体等から単離されたあらゆる細胞（培養細胞を含む。但し生殖細胞は除く）、組織（例えば、肝臓、腎臓、副腎、子宮、脳など。培養組織を含む）、または体液（例えば、唾液、リンパ液、気道粘膜、精液、汗、尿等）などを材料とすることができる。該材料としては末梢血から分離した白血球または単核球が好ましく、特に白血球が最も好適である。これらの材料は、臨床検査において通常用いられる方法に従って単離することができる。
【００８２】
例えば白血球を材料とする場合、まず被験者より単離した末梢血から常法に従って白血球を分離する。次いで、得られた白血球にプロティナーゼＫとドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を加えてタンパク質を分解、変性させた後、フェノール／クロロホルム抽出を行うことによりゲノムＤＮＡ（ＲＮＡを含む）を得る。ＲＮＡは、必要に応じてＲＮaseにより除去することができる。なお、ゲノムＤＮＡの抽出は、上記の方法に限定されず、当該技術分野で周知の方法（例えば、Sambrook J. et. al., “Molecular Cloning: A Laboratry Manual (2nd Ed.)”Cold Spring Harbor Laboratory, NY）や、市販のＤＮＡ抽出キット等を利用して行なうことができる。さらに必要に応じて、ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子またはそのエクソン２を含むDNAを単離してもよい。当該DNAの単離は、FABP1遺伝子またはそのエクソン２にハイブリダイズするプライマーを用いて、ゲノムＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ等によって行うことができる。
【００８３】
工程(ｂ)において、上記のようにして得られたヒトゲノムＤＮＡを含む抽出物から、脂質代謝不全に極めて関連性の深い脂質代謝不全感受性ＳＮＰ、すなわち上記１および２で詳説したSNP3513の塩基を識別する。なお、当該塩基の識別は、ヒトゲノムＤＮＡを含む試料からさらに単離したヒト第２染色体上のFABP1遺伝子、好ましくはそのエクソン２の塩基配列を直接決定し、当該エクソン２の280番目（Genbank Sequence Accession IDs: NM_001443の配列中、3513位の塩基）に位置する塩基の種類（ＡまたはＧ）を調べる方法によってもよい。
【００８４】
例えば目的の塩基を識別する方法としては、上記のように該当領域の遺伝子配列を直接決定する方法の他に、多型配列が制限酵素認識部位である場合は、制限酵素切断パターンの相違を利用して、遺伝子型を決定する方法（以下、ＲＦＬＰという）、多型特異的なプローブを用いたハイブリダイゼーションを基本とする方法（例えば、チップやガラススライド、ナイロン膜上に特定なプローブを張り付け、それらのプローブに対するハイブリダイゼーション強度の差を検出することによって、多型の種類を決定する、または、特異的なプローブのハイブリダイゼーションの効率を、鋳型２本鎖増幅時にポリメレースが分解するプローブの量を検出することにより遺伝子型を特定する方法、ある種の２本鎖特異的な蛍光色素が発する蛍光を温度変化を追うことにより２本鎖融解の温度差を検出し、これにより多型を特定する方法、多型部位特異的なオリゴプローブの両端に相補的な配列を付け、温度によって該当プローブが自己分子内で２次構造をつくるか、ターゲット領域にハイブリダイズするかの差を利用して遺伝子型を特定する方法など）がある。また、さらに鋳型特異的なプライマーからポリメレースによって塩基伸長反応を行わせ、その際に多型部位に取り込まれる塩基を特定する方法（ダイデオキシヌクレオタイドを用い、それぞれを蛍光標識し、それぞれの蛍光を検出する方法、取り込まれたダイデオキシヌクレオタイドをマススペクトロメトリーにより検出する方法）、さらに鋳型特異的なプライマーに続いて変異部位に相補的な塩基対または非相補的な塩基対の有無を酵素によって認識させる方法などがある。
【００８５】
以下、従来公知の代表的な遺伝子多型の検出方法を列記するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００８６】
(a)ＲＦＬＰ（制限酵素切断断片長多型）法、（b）ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析）〔Biotechniques, 16, 296-297 (1994)、及びBiotechniques, 21, 510-514 (1996)〕、（c）ＡＳＯ（Allele Specific Oligonucleotide）ハイブリダイゼーション法〔Clin. Chim. Acta, 189, 153-157 (1990)〕、（d）ダイレクトシークエンス法〔Biotechniques, 11, 246-249 (1991)〕、（e）ＡＲＭＳ（Amplification Refracting Mutation System）法〔Nuc. Acids. Res., 19, 3561-3567 (1991)；Nuc. Acids. Res., 20, 4831-4837 (1992)〕、（f）変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis；ＤＧＧＥ）法〔Biotechniques, 27, 1016-1018 (1999)〕、（g）ＲＮaseＡ切断法〔DNA Cell. Biol., 14, 87-94 (1995)〕、（h）化学切断法〔Biotechniques, 21, 216-218 (1996)〕、（i）ＤＯＬ（Dye-labeled Oligonucleotide Ligation）法〔Genome Res., 8, 549-556 (1998)〕、（j）ＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法〔Genet. Anal., 14, 143-149 (1999)；J. Clin. Microbiol., 34, 2933-2936 (1996)〕、（k）インベーダー法〔Science, 5109, 778-783 (1993)；J.Biol.Chem., 30,21387-21394 (1999)；Nat. Biotechnol., 17, 292-296 (1999)〕、（l）ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ法（Matrix Assisted Laser Desorption-time of Flight/Mass Spectrometry）法〔Genome Res., 7, 378-388 (1997)；Eur.J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 35, 545-548 (1997)〕、（m）ＴＤＩ（Template-directed Dye-terminator Incorporation）法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 10756-10761 (1997)〕、（n）モレキュラー・ビーコン（Molecular Beacons）法〔Nat. Biotechnol., 1, p49-53 (1998)；遺伝子医学、4, p46-48 (2000)〕、（o）ダイナミック・アレル−スペシフィック・ハイブリダイゼーション（Dynamic Allele-Specific Hybridization；ＤＡＳＨ）法〔Nat.Biotechnol.,1.p.87-88 (1999)；遺伝子医学,4, 47-48 (2000)〕、（p）パドロック・プローブ（Padlock Probe）法〔Nat. Genet.,3,p225-232 (1998) ；遺伝子医学,4, p50-51 (2000)〕、（q）ＵＣＡＮ法〔タカラ酒造株式会社ホームぺージ（http://www.takara.co.jp）参照〕、（r）ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイ（「ＳＮＰ遺伝子多型の戦略」松原謙一・榊佳之、中山書店、p128-135）、（s）ＥＣＡ法〔Anal. Chem., 72, 1334-1341, (2000)〕。
【００８７】
以上は代表的な遺伝子多型検出方法であるが、本発明の脂質代謝不全または脂質代謝不全関連疾患発症リスクの判定には、これらに限定されず、他の公知または将来開発される遺伝子多型検出方法を広く用いることができる。また、本発明の遺伝子多型検出に際して、これらの遺伝子多型検出方法を単独で使用してもよいし、また２以上を組み合わせて使用することもできる。
【００８８】
なお、SNP3513の識別は、簡便には実施例で示すように、順方向のプライマーとして配列番号１１に記載する塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを、逆方向のプライマーとして配列番号１２に記載する塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを用いて、制限酵素HindIIIを用いたＲＦＬＰ（制限酵素切断断片長多型）法を行うことによって実施することができる（実施例参照）。
【００８９】
本発明の方法によって、脂質代謝不全を有し、脂質代謝不全に起因する疾患を発症する潜在的な危険度が相対的に高いことが判明した被験者に対しては、その旨を告知し、予め脂質代謝不全関連疾患の発症を防ぐための的確な対策を講じることができる。従って、本発明は、脂質代謝不全関連疾患の発症を予防するための、さらにはその進展（進行）を阻止するための検査方法として極めて有用である。
【００９０】
本発明の方法は、遺伝子多型の有無を直接検出する方法に限らず、遺伝子異常の結果生じたFABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をそのまま検出する方法であってもよい。かかる方法としては、被験者のFABP1遺伝子の発現産物（例えば、mRNA、FABP1蛋白質）について上記アミノ酸変異が生じているかどうかを測定する方法を挙げることができる。かかる方法としては、FABP1遺伝子の発現産物の配列を決定する方法のほか、FABP1または変異FABP1（T94A）に対する抗体を用いたウエスタンブロッティング法、ドットブロッティング法、免疫沈降法、酵素結合免疫測定法（ELISA）、及び免疫蛍光法、またはFABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）によって生じた（または消失した）活性を測定する方法を例示することができる。
【００９１】
５．脂肪酸β酸化能不全型NASHの検出方法
本発明の方法は、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）の患者またはその潜在的可能性がある被験者を対象として、肝臓での脂肪酸β酸化能が不全（低下）しているか、それとも肝脂肪酸β酸化能が正常であるのかを区別するためにも有効に利用することができる。NASH患者には、先天的に（遺伝的に）FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づいて脂質代謝不全となっているタイプ（肝脂肪酸β酸化能不全型）と、そうでないタイプ〔脂質代謝正常型（肝脂肪酸β酸化正常型）〕の２タイプがあるからである。
【００９２】
よって、本発明は、NASH患者について、当該NASHが肝脂肪酸β酸化能不全型（肝脂肪酸β酸化能不全型）であるか、または脂質代謝正常型（肝脂肪酸β酸化正常型）であるかを検出し、識別する方法を提供する。
【００９３】
NASH患者またはその潜在的可能性がある被験者について、脂質代謝不全型（肝脂肪酸β酸化能不全型）であるか否かを検出する方法としては、NASH患者またはその潜在的可能性がある被験者の生体試料を対象として、上記と同様に、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する方法を挙げることができる。FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型の存在の有無を測定し、例えばゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子の3513番目の塩基（SNP3513）がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合を脂質代謝不全型（肝脂肪酸β酸化能不全型）、Ａのホモ接合体（Ａ／Ａ）またはＡＧのヘテロ接合体（Ａ／ＧまたはＧ／Ａ）である場合を脂質代謝正常型（肝脂肪酸β酸化能正常型）と判断することができる。
【００９４】
NASH患者について、脂質代謝不全型と判断された場合は、人為的または強制的に肝臓の脂肪酸β酸化能を代償してやることによって（例えば、肝臓の脂肪酸β酸化能を亢進させる薬剤の投与など）、NASHの症状を改善することができる。また、NASHの潜在的可能性がある被験者について、脂質代謝不全型と判断された場合は、人為的または強制的に肝臓の脂肪酸β酸化能を代償する方法によって（脂肪酸β酸化能を亢進させる薬剤の投与など）、NASHの発症を抑制・予防することができる。脂肪酸β酸化能を亢進させる薬剤として、例えば、FABP1遺伝子の上流に位置するPPRE（peroxisome proliferetor response element）に結合する生体内物質を介してPPREを刺激してFABP1（または変異FABP1(T94A)）の産生を亢進する薬剤、例えばフィブラート系薬剤（例えば、クロフィブラート、クロフィブラートアルミニウム、シンフィブラート、クリノフィブラート、ベザフィブラート）を挙げることができる。
【００９５】
すなわち、これらのフィブラート系薬剤は、FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である被験者に対して、NASHを改善するため、またはNASHの発症を予防するため薬剤として有効に使用することができる。
【００９６】
また、以下説明する、脂質代謝不全または脂質代謝不全関連疾患の罹患性を検出するための試薬（プローブ、プライマー、及びその標識物）及びこれを含むキットは、NASH患者またはその潜在的可能性がある被験者について、脂質代謝不全型（肝脂肪酸β酸化能不全型）であるか否かを検出するための試薬（プローブ、プライマー、及びその標識物）及びこれを含むキットとして、同様に使用することができる。
【００９７】
６．脂質代謝不全または脂質代謝不全関連疾患の発症リスクを検出するための試薬、これを含むキット
（１）プローブ
目的とする遺伝子多型（脂質代謝不全感受性ＳＮＰ、例えばSNP3513）並びに当該塩基を含むヌクレオチドの検出には、ヒト第２染色体に存在する脂質代謝不全感受性遺伝子上の脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（遺伝子多型）を含むオリゴまたはポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズし、当該ＳＮＰを検出することができるオリゴまたはポリヌクレオチドが用いられる。かかるオリゴまたはポリヌクレオチドは、脂質代謝不全感受性遺伝子上において当該ＳＮＰを含む１６〜５００塩基長、好ましくは２０〜２００塩基長、より好ましくは２０〜５０塩基長の連続した遺伝子領域と特異的にハイブリダイズするように、上記塩基長を有するオリゴまたはポリヌクレオチドとして設計される。
【００９８】
ここで「特異的にハイブリダイズする」とは、通常のハイブリダイゼーション条件下、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下（例えば、サムブルックら、Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, USA, 第２版、1989に記載の条件）において、他のＤＮＡとクロスハイブリダイゼーションを有意に生じないことを意味する。好適には当該オリゴまたはポリヌクレオチドは、上記検出するＳＮＰを含む遺伝子領域の塩基配列に対して相補的な塩基配列を有することが望ましいが、かかる特異的なハイブリダイゼーションが可能であれば、完全に相補的である必要はない。
【００９９】
かかるオリゴまたはポリヌクレオチドとして、ヒト第２染色体に存在する脂質代謝不全感受性遺伝子（FABP1遺伝子）上の脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（SNP3513）を含むオリゴまたはポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズし、当該ＳＮＰを検出することができるオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる。具体的には、ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴまたはポリヌクレオチド（但し、当該ヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長のオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる。
【０１００】
当該オリゴまたはポリヌクレオチドは、被験者について脂質代謝不全、またはそれに起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）に対する易罹患性の有無を判定するために、ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子上に位置する脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（SNP3513）を含むオリゴヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするオリゴまたはポリヌクレオチド「プローブ」として設計される。なお、これらのオリゴまたはポリヌクレオチドは、FABP1遺伝子の塩基配列に基づいて、例えば市販のヌクレオチド合成機によって常法に従って作成することができる。
【０１０１】
さらに好ましくは、後述するように、当該プローブは、SNP3513を含むオリゴヌクレオチドが検出できるように、放射性物質、蛍光物質、化学発光物質、または酵素等で標識される。
【０１０２】
上記プローブ（オリゴまたはポリヌクレオチド）は任意の固相に固定化して用いることもできる。このため本発明はまた、上記プローブ（オリゴまたはポリヌクレオチド）を固定化プローブ（例えばプローブを固定化した遺伝子チップ、ｃＤＮＡマイクロアレイ、オリゴＤＮＡアレイ、メンブレンフィルター等）として提供するものである。当該プローブは、好適には脂質代謝不全感受性遺伝子検出用のＤＮＡチップとして利用することができる。
【０１０３】
固定化に使用される固相は、オリゴまたはポリヌクレオチドを固定化できるものであれば特に制限されることなく、例えばガラス板、ナイロンメンブレン、マイクロビーズ、シリコンチップ、キャピラリーまたはその他の基板等を挙げることができる。固相へのオリゴまたはポリヌクレオチドの固定は、予め合成したオリゴまたはポリヌクレオチドを固相上に載せる方法であっても、また目的とするオリゴまたはポリヌクレオチドを固相上で合成する方法であってもよい。固定方法は、例えばＤＮＡマイクロアレイであれば、市販のスポッター（Amersham社製など）を利用するなど、固定化プローブの種類に応じて当該技術分野で周知である〔例えば、photolithographic技術(Affymetrix社)、インクジェット技術(Rosetta Inpharmatics社)によるオリゴヌクレオチドのin situ合成等〕。
【０１０４】
ＡＳＯ法の一例であるTaqMan PCR法〔Livak KJ. Gene Anal 14, 143 (1999), Morris T et al., J Clin Microbiol 34, 2933 (1996)〕の場合、脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（SNP3513）を含む領域に相補的な20塩基長程度のオリゴヌクレオチドがプローブとして設計される。当該プローブは、5’末端を蛍光色素、3’末端を消光物質により標識され、検体ＤＮＡと特異的にハイブリダイズするが、そのままでは発光せず、別に加えられたＰＣＲプライマーの上流からの伸長反応により5’側の蛍光色素結合が切断され、遊離した蛍光色素により検出される。
【０１０５】
ＡＳＯ法の別の１例であるInvade法〔Lyamichev V. et al., Nat Biotechnol 17, 292 (1999)〕では、多型部位に隣接する配列（3’側と5’側の２種）に相補的なオリゴヌクレオチドがプローブとして設計される。検出は、これら２種のプローブと検体とは無関係な第３のプローブによって達成される。 
【０１０６】
（２）プライマー
本発明は、またヒト第２染色体に存在する脂質代謝不全感受性遺伝子上の脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（遺伝子多型、例えばFABP1遺伝子のSNP3513）を含む配列領域を特異的に増幅するためのプライマーとして用いられるオリゴヌクレオチドを提供する。このようなプライマー（オリゴヌクレオチド）は、脂質代謝不全感受性遺伝子において、脂質代謝不全感受性ＳＮＰ部位のヌクレオチドを含む連続したオリゴまたはポリヌクレオチドの１部に特異的にハイブリダイズし、当該オリゴまたはポリヌクレオチドを特異的に増幅するための１５〜３５塩基長、好ましくは１８〜３０塩基長程度のオリゴヌクレオチドとして設計される。増幅するオリゴまたはポリヌクレオチドの長さは、用いられる検出方法に応じて適宜設定されるが、一般的には１５〜１０００塩基長、好ましくは２０〜５００塩基長、より好ましくは２０〜２００塩基長である。
【０１０７】
かかるプライマーとして、ヒト第２染色体に存在する脂質代謝不全感受性遺伝子（FABP1遺伝子）において、脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（SNP3513）部位のヌクレオチドを含む連続したオリゴまたはポリヌクレオチドの１部に特異的にハイブリダイズし、当該オリゴまたはポリヌクレオチドを特異的に増幅するための１５〜３５塩基長、好ましくは１８〜３０塩基長程度のオリゴヌクレオチドを例示することができる。具体的には、ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴまたはポリヌクレオチド（但し、当該ヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴまたはポリヌクレオチドを特異的に増幅するための１５〜３５塩基長、好ましくは１８〜３０塩基長程度のオリゴヌクレオチドを例示することができる。
【０１０８】
なお、これらのオリゴヌクレオチドは、FABP1遺伝子などの脂質代謝不全感受性遺伝子の公知の塩基配列に基づいて、例えば市販のヌクレオチド合成機によって常法に従って作成することができる。
【０１０９】
Ｍａｓｓ Ａｒｒａｙ法にＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ／ＭＳ（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry）を応用した方法〔Haff LA et al. Genome Res 7, 378 (1997), Little DP et al., Nature Medicine vol.3, No.12, 1413-1416, (1997)〕を例にとって、プライマーの具体的な利用方法を説明する。この場合、シリコンチップ上に固定した検体ＤＮＡに前記プライマーをハイブリダイズさせ、ｄｄＮＴＰを添加して一塩基だけを伸長させる。次いで、一塩基伸長産物を分離し、質量分析法により多型を検出する。この方法では、プライマーは通常１５塩基長以上で可能な限り短く設計することが望ましい。
【０１１０】
（３）標識プローブおよび標識プライマー
上記本発明のプローブまたはプライマーには、遺伝子多型検出のための適当な標識物、例えば蛍光色素、酵素、タンパク質、放射性同位体、化学発光物質、ビオチン等が付加されたものが含まれる。
【０１１１】
なお、本発明において用いられる蛍光色素としては、一般にヌクレオチドを標識して、核酸の検出や定量に用いられるものが好適に使用でき、例えば、ＨＥＸ（4,7,2’,4’,5’,7’-hexachloro-6-carboxylfluorescein、緑色蛍光色素）、フルオレセイン（fluorescein）、ＮＥＤ（商品名、アプライドバイオシステムズ社製、黄色蛍光色素）、あるいは、６−ＦＡＭ（商品名、アプライドバイオシステムズ社製、黄緑色蛍光色素）、ローダミン（rhodamin）またはその誘導体〔例えば、テトラメチルローダミン（TMR）〕を挙げることができるが、これらに限定されない。蛍光色素でヌクレオチドを標識する方法は、公知の標識法のうち適当なものを使用することができる〔Nature Biotechnology, 14, 303-308 (1996)参照〕。また、市販の蛍光標識キットを使用することもできる（例えば、アマシャム・ファルマシア社製、オリゴヌクレオチドＥＣＬ  ３’−オリゴラベリングシステム等）。
【０１１２】
また、本発明のプライマーには、その末端に多型検出のためのリンカー配列が付加されたものも含まれる。このようなリンカー配列としては、例えば、前述したインベーダー法で用いられるオリゴヌクレオチド５’末端に付加される、フラップ（多型近傍の配列とは全く無関係な配列）等が挙げられる。
【０１１３】
本発明の１つの実施形態である、遺伝子多型検出法としてＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法を用いる場合、ヒト第２染色体のFABP1遺伝子上の、脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（SNP3513）を含む塩基配列を検出するためのフォワードプライマー（順方向のプライマー）としては、好適には配列番号１１に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの他、配列番号７に示す塩基配列において１〜３００番の領域に位置する塩基配列にハイブリダイズする１５塩基長以上（好ましくは１５〜３５塩基長）の連続した塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを例示することができる。また、リバースプライマー（逆方向のプライマー）としては、好適には配列番号１２に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの他、配列番号７に示す塩基配列において３０２〜６０１番の領域に位置する塩基配列にハイブリダイズする１５塩基長以上（好ましくは１５〜３５塩基長）の連続した塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを例示することができる。
【０１１４】
以上の、プローブまたはプライマー（標識されていてもよい）は、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患の易罹患性または疾患リスクを検出するための試薬として利用することができる。
【０１１５】
（４）脂質代謝不全、または脂質代謝不全関連疾患の発症リスク検出用試薬キット
本発明はまた、上記脂質代謝不全または脂質代謝不全関連疾患の易罹患性または発症リスクを検出するための試薬をキットとして提供するものである。当該キットは、上記プローブまたはプライマーとして用いられるオリゴまたはポリヌクレオチド（なお、これらは標識されていても、また固相に固定化されていてもよい）を少なくとも１つ含むものである。本発明のキットは上記プローブまたはプライマーの他、必要に応じてハイブリダイゼーション用の試薬、プローブの標識、ラベル体の検出剤、緩衝液など、本発明の方法の実施に必要な他の試薬、器具などを適宜含んでいてもよい。
【０１１６】
７．脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減方法
上記に説明するように、本発明により、脂肪酸結合タンパク質１（FABP1）のアミノ酸配列中、94番目のアミノ酸の変異（Ｔ→Ａ）がヒトの脂質代謝不全に深く関わっていることが判明した。このことから、当該アミノ酸の変異を正常な状態に戻す（Ａ→Ｔ）か、または当該アミノ酸の変異によって生じるFABP1機能の変動（例えば、脂肪酸β酸化能の代償的亢進機能の不全または低下）を正常な状態に修復することによって、脂質代謝不全を改善し、また脂質代謝不全に起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）の発症リスクを低減することができる。
【０１１７】
また、上記FABP1のアミノ酸の変異（T94A）には、ヒト第２染色体のFABP1遺伝子に位置する脂質代謝不全感受性ＳＮＰ（SNP3513）（Genbank Sequence Accession IDs: NM_001443の配列中、3513位の塩基）に位置する塩基の変異（Ａ→Ｇ）が関係している。このことから、当該SNP3513部位の変異（Ａ→Ｇ）を正常な状態に戻す（Ｇ→Ａ）ことによっても、脂質代謝不全を改善するか、または脂質代謝不全に起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）の発症リスクを低減することができる。
【０１１８】
こうした考えのもとで、本発明は脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減方法、並びに当該脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減に有効な成分を提供するものでもある。なお、脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減方法は、同様の考えのもと、脂質代謝不全関連疾患の発症を予防する方法（脂質代謝不全関連疾患予防方法）並びに脂質代謝不全関連疾患を改善する方法（脂質代謝不全関連疾患改善方法）として規定することもできる（本発明における「脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減方法」には、「脂質代謝不全関連疾患予防方法」及び「脂質代謝不全性疾患改善方法」がいずれも含まれるものとする）。
【０１１９】
なお、これらの方法は、上記目的が達成できる方法であれば、具体的な手法は特に制限されず、従来公知の方法並びに将来開発される手法をいずれも使用することができる。
【０１２０】
また、上記方法に代えて、正常なFABP1または正常なFABP1遺伝子を投与することによっても、脂質代謝不全を解消し、脂質代謝不全関連疾患の発症リスクを低減することもできる。この観点から本発明は、FABP1またはFABP1遺伝子を有効成分とする脂質代謝不全改善剤を提供する。FABP1を有効成分とする当該脂質代謝不全改善剤は、好ましくはFABP1が肝臓に移送されて肝臓において機能するような投与形態として調製される。またFABP1遺伝子を有効成分とする当該脂質代謝不全改善剤は、好ましくは肝臓に移送されて肝臓において発現し機能するような、投与形態として調製される。
【０１２１】
さらにまた、上記方法に代えて、人為的または強制的に肝臓の脂肪酸β酸化能を代償してやることによって（脂肪酸β酸化能を亢進させる薬剤の投与など）、脂質代謝不全を解消し、脂質代謝不全関連疾患の発症リスクを低減することができる。脂肪酸β酸化能を亢進させる薬剤として、前述するように、例えばフィブラート系薬剤（クロフィブラート、クロフィブラートアルミニウム、シンフィブラート、クリノフィブラート、ベザフィブラート）を挙げることができる。
【０１２２】
８．脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法
また、本発明は、上記の脂質代謝不全関連疾患発症リスク低減方法（脂質代謝不全関連疾患予防方法、脂質代謝不全関連疾患改善方法）を実現するために有用な医薬品や食品を開発するために有効な方法、具体的には脂質代謝不全を改善して脂質代謝不全関連疾患の発症リスクを低減するために（脂質代謝不全関連疾患を予防するために、または脂質代謝不全関連疾患を改善するために）有効な候補物質を選別するための方法（スクリーニング方法）を提供する。
【０１２３】
（８−１）当該スクリーニングは、例えば下記の工程によって実施することができる：
（ａ）94番目のアミノ酸残基がアラニンである変異FABP1〔FABP1(T94A)〕を発現する試験細胞（変異FABP1発現細胞）に対して被験物質を接触させる工程
（ｂ）被験物質を接触させた細胞について、FABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性を検出する工程
（ｃ）被験物質非存在下で測定した変異FABP1発現細胞のFABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性を陰性コントロールとした場合に、当該陰性コントロールと対比して、上記（ｂ）工程でFABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性の増加が認められた細胞に接触させた被験物質を、候補物質として選択する工程。
【０１２４】
本方法で用いられる試験細胞は、94番目のアミノ酸残基がスレオニンに替えてアラニンである変異FABP1〔FABP1(T94A)〕を発現して産生する細胞であればよく、変異FABP1遺伝子〔変異FABP1遺伝子(a3513g)〕の由来は内因性であっても外因性であってもよい。なお、外因性の変異FABP1を発現する細胞は、通常その蛋白質をコードする変異FABP1遺伝子(a3513g)が発現可能な状態で組み込まれた発現ベクターを宿主細胞に導入することによって作成することができる。なお、この限りにおいて細胞の由来も特に制限されないが〔例えば、細菌（例えば、酵母などの真核生物）、昆虫細胞及び動物細胞の別など〕、ヒト、サル、マウス、ラット、ウシ、ブタ、イヌなどの動物細胞が好適である。当該細胞は、脂質代謝不全を改善し脂質代謝不全性疾患の発症リスクを低減させるのに有効な候補物質を選別するための方法（スクリーニング方法）においてスクリーニングツールとして有効に利用することができる。
【０１２５】
当該方法で用いられる被験物質としても特に制限されない。例えば、天然化合物、有機化合物、無機化合物、タンパク質及びペプチド等の単一化合物；並びに化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等の組成物を例示することができる。
【０１２６】
変異FABP1発現細胞への被験物質の「接触」は、例えば、変異FABP1発現細胞の培養液に被験物質を添加することによって行うことができるが、この方法に限定されない。被験物質がタンパク質等の場合には、当該タンパク質を発現するように構築されたDNAベクターを、該細胞へ導入することにより、「接触」を行うこともできる。
【０１２７】
本方法においては、次いで、該被験物質を接触させた変異FABP1発現細胞について、FABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性を検出する。FABP1若しくは変異FABP1の発現量は、制限されないが、例えばFABP1または変異FABP1に対する抗体を用いたウエスタンブロッティング法、ドットブロッティング法、免疫沈降法、酵素結合免疫測定法（ELISA）、及び免疫蛍光法などを用いて測定することができる。また、FABP1活性の測定は、例えばFABP1に結合する物質を用いたScatchard plot解析や、FABP1に結合する物質を用いた結合阻害実験、あるいは結合増強実験として測ることができる。FABP1に結合する物質としては、例えば、オレイン酸などの脂肪酸やフィブラート系薬剤（例えば、クロフィブラート、ベザフィブラートなど）、胆汁酸など多数の疎水性物質が知られている。
【０１２８】
（８−２）また、本発明のスクリーニング方法は、下記の工程によっても実施することができる：
(1)ヒト第２染色体のFABP1遺伝子、またはその遺伝子の一部であって、少なくとも塩基ｇを挟んで5’側及び3’側にそれぞれ配列番号２記載の塩基配列及び配列番号３に記載の塩基配列を含有するポリヌクレオチドを含有する細胞に対して、被験物質を投与する工程、及び
(2)投与した被験物質の中から、当該細胞中の上記ポリヌクレオチドの配列番号２記載の塩基配列と配列番号３記載の塩基配列に挟まれた塩基ｇをａに変換させる物質を、候補物質として選択する工程。
【０１２９】
上記(2)の工程（候補物質の選択工程）は、ヒト第２染色体のFABP1遺伝子に位置する脂質代謝不全性疾患感受性ＳＮＰ（SNP3513）（Sequence Accession IDs: NM_001443の配列中（全長5069bp）、3513位）の塩基の変換（ｇ→ａ）を直接評価する方法に限らず、間接的にそれが評価できる方法であればよい。例えば、当該SNP3513部位の塩基がｇからａに変換することによって、生じる（増加する）〔または消失（低下）する〕機能、活性または特定の蛋白質量を測定する方法を例示することができる。
【０１３０】
上記工程(1)で使用される細胞は、ヒト第２染色体のFABP1遺伝子、または少なくともFABP1遺伝子のエクソン２領域を含む遺伝子を導入することができ、且つそれを安定に保有し得る細胞であればよく、その由来〔例えば、細菌（例えば、酵母などの真核生物）、昆虫細胞及び動物細胞の別など〕は特に制限されない。好ましくは前述するように動物細胞である。なお、遺伝子導入や細胞培養等は、当業界において従来公知の方法を任意に使用して実施することができる〔例えば、Maniatis, T. et al., “Molecular Cloning- A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratry, NY, 1982; ＷＯ2002-52000；「新生化学実験講座１８  細胞培養技術」日本生化学会編、東京化学同人、1990等〕。当該細胞は、脂質代謝不全性疾患発症リスクを低減させるのに有効な候補物質を選別するための方法（スクリーニング方法）においてスクリーニングツールとして有効に利用することができる。
【０１３１】
当該方法で用いられる被験物質としても特に制限されない。例えば、天然化合物、有機化合物、無機化合物、タンパク質及びペプチド等の単一化合物；並びに化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等の組成物を例示することができる。
【０１３２】
（８−３）さらにまた、本発明のスクリーニング方法は、下記の工程によっても実施することができる：
(ｉ)被験物質の存在下で、変異FABP1とFABP1結合性物質との結合性を測定する工程、
(ii)被験物質の非存在下で測定した変異FABP1とFABP1結合性物質との結合性を陰性コントロールとした場合に、当該陰性コントロールに比して、(i)の工程で変異FABP1とFABP1結合物質との結合性を増加させた被験物質を、候補物質として選択する工程。
【０１３３】
ここでFABP1結合物質としては、生体内でFABP1と結合する性質を有する物質を挙げることができる。例えば、オレイン酸などの脂肪酸や、フィブラート系薬剤（例えば、ベザフィブラートなど）、胆汁酸などの疎水性物質を挙げることができる。
【０１３４】
変異FABP1は、例えば次のようにして調製することができる。変異FABP1遺伝子を有するヒト肝組織より市販のmRNA精製キットを用いてmRNAを精製し、次いで逆転写酵素を用いてmRNAに対応する一本鎖DNAを作成する。この一本鎖DNAを鋳型として上流primer(GGCAGAGCCGCAGGTCAGTCGTG)（配列番号９）と下流primer (ATAATATGAAATGCAGACTTGTT)（配列番号１０）を用いて、FABP1の全長を含むcDNAを作成し、このcDNAを市販の蛋白発現ベクターに組み込み、市販の無細胞系蛋白発現キットを用いて遺伝子組み換え変異ヒトFABP1を作成する。次いで精製カラムを用いて遺伝子組み換え変異ヒトFABP1を精製、取得する。
【０１３５】
変異FABP1とFABP1結合物質との結合性は、制限されないが、例えば標識されたオレイン酸などFABP1に結合することが公知の物質の結合反応などを用いて測定することができる。また、例えば変異FABP1に対する抗体を用いたウエスタンブロッティング法、ドットブロッティング法、免疫沈降法、酵素結合免疫測定法（ELISA）、及び免疫蛍光法などを用いても測定することができる。例えば、変異FABP1に被験物質を接触させた後、FABP1結合物質を用いたScatchard plot解析や、FABP1結合物質を用いた結合阻害実験、あるいは結合促進実験を行うことにより、被験物質の変異FABP1に対する結合性を測定することができる。
なお、被験物質を変異FABP1蛋白と接触させるのは、測定前に限定されるものではなく、競合試験のように同時添加、あるいは事後添加による測定も可能である。
【０１３６】
なお、当該方法で用いられる被験物質としても特に制限されない。例えば、天然化合物、有機化合物、無機化合物、タンパク質及びペプチド等の単一化合物；並びに化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等の組成物を例示することができる。
【０１３７】
以上、(c)、(2)または(ii)の工程（候補物質の選択工程）で選択された候補物質は、必要に応じてさらに他の薬理試験や臨床試験並びに毒性試験を経ることによって、よりヒトに対して有効で且つ安全な脂質代謝不全性疾患発症のリスク低減剤（脂質代謝不全関連疾患予防薬、脂質代謝不全関連疾患の改善薬、健康食品）の有効成分として取得することができる。
【０１３８】
斯くして得られる候補物質は、公知の方法によって処方並びに製剤化することによって脂質代謝不全関連疾患発症のリスク低減剤（脂質代謝不全関連疾患予防薬、脂質代謝不全関連疾患の改善薬、または健康食品）として提供することができる。
【０１３９】
９．治療効果またはリスク軽減効果の評価方法
本発明は、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づいて生じる脂質代謝不全またはそれに起因する疾患（脂質代謝不全関連疾患）に対して、薬物またはその他の療法の治療効果または罹患リスクの軽減効果を評価する方法を提供する。当該方法は、肝臓の脂肪酸代謝能（肝脂肪酸β酸化能）を測定する工程を備えることを特徴とする。
【０１４０】
本発明は、下記の知見に基づく：
FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型（a3513g）をホモ接合体（G/G）として有する者は、高い頻度で肝臓の脂肪酸代謝能、より詳細には肝臓の脂肪酸β酸化能が不全となっている。その結果、その者は、脂質代謝不全となり、脂質代謝不全に起因する疾患〔例えば、脂質代謝不全症、非アルコール性脂肪肝炎（非アルコール性脂肪肝炎、タモキシフェン誘発非アルコール性脂肪肝炎など）、脂肪肝（非肥満性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝）、心筋梗塞など〕にかかりやすい。
【０１４１】
すなわち、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有する者に対しては、人工的または強制的に、肝臓における脂肪酸の代謝、より詳細には肝臓における脂肪酸βの酸化能を亢進増加させることにより、本来生体が有する脂質代謝能を補償して脂質代謝不全（低下）を解消することができ、これによって脂質代謝不全に起因する疾患〔例えば、脂質代謝不全症、非アルコール性脂肪肝炎（非アルコール性脂肪肝炎、タモキシフェン誘発非アルコール性脂肪肝炎など）、脂肪肝（非肥満性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝）、心筋梗塞など〕の発症を予防し、または発症している場合には改善することができる。言い換えれば、こうした治療効果は、治療前後で肝臓における脂肪酸の代謝、より詳細には肝臓における脂肪酸β酸化能を対比し、治療後の亢進増加の有無を評価することによって行うことができる。
【０１４２】
本発明の治療効果（または罹患リスク軽減効果）の評価方法は、例えば下記の工程によって実施することができる：
(1)FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを有する被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与する工程、
(2)当該被験者の肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、及び
(3)上記で得られる放射能の経時的変化から、当該被験者について肝臓の脂肪酸代謝能を評価する工程。
【０１４３】
なお、上記方法は、下記の工程により実施することもできる。
【０１４４】
(1’) 放射性同位元素標識脂肪酸が投与された、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することによって脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを有する被験者を対象として、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、及び
(2’)上記で得られる放射能の経時的変化から、当該被験者について肝臓の脂肪酸代謝能を評価する工程。
【０１４５】
本発明は、脂肪酸が、脂肪酸代謝が営まれる肝臓に集積することを利用したものである。具体的には、例えば、放射性同位元素で標識された脂肪酸をイメージング剤として生体に投与し、当該イメージング剤が集積された肝臓で発せられる放射能をシンチカメラ等で検出し、その放射能の減衰から、脂肪酸の代謝挙動を非侵襲的に画像として測定する方法によって行うことができる（シンチグラフィー）。
【０１４６】
ここで、放射性同位元素で標識された脂肪酸（放射性同位元素標識脂肪酸）としては、肝臓細胞に取り込まれた後、できるだけ長く留まるように構成された、例えば、15-(p-ヨードフェニル）-9-メチルペンタデカン酸（9MPA）、15-(p-ヨードフェニル）-ペンタデカン酸（IPPA）、15-(o-ヨードフェニル）-ペンタデカン酸（OPPA）、15-(p-ヨードフェニル）-3-メチルペンタデカン酸（BMIPP）、及び16-ヨード-3-メチルヘキサデカン酸（IMHA）などのヨウ素を放射性ヨウ素（例えば、123I）で置換した脂肪酸を挙げることができる。好ましくは123I- BMIPPである。
【０１４７】
被験者への投与経路は、特に制限されないが、静脈投与が好ましい。
【０１４８】
放射性同位元素標識脂肪酸を投与後、一定時間後（通常５分後）、肝臓部を対象としたダイナミックイメージを収集する。具体的には、肝臓に相当する部分の身体表面に、シンチカメラを近づけ撮像して、画像データを収集し、得られた画像データを解析してシンチグラム像を作成する。シンチカメラとしては、投与剤に使用する放射性同位元素の種類に応じて適宜選択することができ、特に制限されないが、ガンマカメラ、好ましくは低エネルギー用平行型コリメータを装着したガンマカメラを例示することができる。次いでシンチグラム像から時間−放射能曲線を作成する。時間−放射能曲線は肝臓から生じる放射能の経時的減衰を示すものであり、当該時間−放射能曲線またはその解析結果から、肝臓からの脂肪酸の代謝挙動を評価することができる。
【０１４９】
このため、被験者について治療前に測定されたシンチグラムから得られる時間−放射能曲線またはその解析結果と、治療後のシンチグラムから得られる時間−放射能曲線またはその解析結果とを対比することによって、当該被験者における治療前後の肝臓の脂肪酸代謝能を容易に比較することができ、斯くして肝臓の脂肪酸代謝に対する治療効果（代謝亢進）の有無を評価することができる。
【０１５０】
ここで被験者の肝臓の脂肪酸代謝能を数字として客観的に評価する方法として、肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める方法を挙げることができる。肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）は下記のようにして求めることができる。
(a)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与する、
(b)放射性同位元素標識脂肪酸が投与された被験者の肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する、
(c)上記の検出結果から時間−放射能曲線を作成し、標識脂肪酸投与後300秒から1800秒間、好ましくは500秒から1800秒間の検出結果から、最小自乗法により最尤直線（横軸：投与からの経過時間、縦軸：放射能）を作成する、および
(d)最尤直線から外挿して得られる放射性同位元素標識脂肪酸投与時の推定放射能を脂肪酸保持率100％と設定して、上記の時間−放射能曲線を時間−脂肪酸保持率曲線に標準化し、この標準化曲線に基づいて上記最尤直線の傾き（%/min）を求める。
【０１５１】
斯くして求められる最尤直線の傾きの正数値（%/min）を、肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）として設定する。
【０１５２】
後述する実施例に示すように、治療後、脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満の場合は治療効果なし、0.5%/min以上の場合を治療効果ありと判断することができる。
また、この肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を用いることによって、被験者の肝臓の脂肪酸代謝能（脂肪酸β酸化能）を評価することができ、同様に、脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満の場合は脂質代謝異常またはそれに起因する疾患に対してリスクありと、0.5%/min以上の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患に対してリスクなしと判断することができる。
【実施例】
【０１５３】
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明する。但し、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【０１５４】
実施例１
Bruntの所見（Brunt EM. Am J Gastroenterol 1999;94:2467）によって非アルコール性脂肪肝炎（NASH）と診断された患者（女性15名、男性22名、計37名）について、123Ｉ−BMIPP〔123I標識−15-(4-ヨードフェニル)-3(R,S)−メチルペンタデカン酸〕を用いて肝臓の脂肪酸β酸化能を測定した。また、これらの患者について、FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型を調べた。なお、対象としたこれらの患者（計37名）はいずれも、一日に20ｇ以上のアルコールを摂取せず、またウイルス肝炎、ヘモクロマトーシス、ウイルソン病、及び自己免疫肝疾患といった非アルコール性脂肪肝炎（NASH）以外の肝臓疾患に罹患していない。また、これらの患者は、メトトレキサート、コルチコイドまたはインスリンによる治療はなされていない。
【０１５５】
（１）123Ｉ−BMIPPシンチグラム及び画像解析
123Ｉ−BMIPP〔123I標識−15-(4-ヨードフェニル)-3(R,S)−メチルペンタデカン酸〕は、局所心筋脂肪酸代謝を評価することによって心疾患の有無を診断するために用いられる体内投与放射性医薬品（心疾患診断薬）である。インフォームドコンセントの後、37名の患者（女性15名、男性22名）に対して、123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーを行って、肝臓における123Ｉ−BMIPPクリアランス能を評価した。
【０１５６】
詳細には、一晩断食した患者に、111Mbqの123Ｉ−BMIPPを含む20mLの生理食塩水を静脈投与し、ガンマ・カメラを備えたベッドに横臥させた。123Ｉ−BMIPP投与部でダイナミックプラナースキャニング（1秒×60フレーム、30行×60フレーム）を開始し、123Ｉ−BMIPPの肝臓への取り込みを測定した。なお、ガンマ・カメラ（GCA9300A/HG、東芝製）は低エネルギーの高解像度コリメータと組み合わせて使用した（エネルギー窓：159keV±10%）。
【０１５７】
右腎臓に対する123Ｉ集積の影響が少ない全左心室、及び心臓に対する123Ｉ集積の影響が少ない肝右葉S8（the anterioir superior subsequent）部位を、それぞれ血液プールのインジケーター及び肝臓プールのインジケーターとして使用して、ROIs（regions of interests）を平面画像上に設定した。ガンマ・カメラで、ROIs（(1)心臓、(2)肝臓）のガンマ線量（1cm２領域、30秒間あたり）を経時的に測定した結果（画像）を、図１に示す。図１中、(1)で示す領域が心臓のROIsであり、(2)で示す領域が肝臓のROIs（肝右葉S8部位）である。この結果から、123Ｉ−BMIPPは投与後１分以内に肝臓に移行すること、5分前後でピークに達し、その後徐々に減衰することがわかる。
【０１５８】
ガンマ・カメラで測定した肝臓のROIs（肝右葉S8部位）のガンマ線量（1cm２領域、30秒間あたり）を、投与から30秒間隔で1830秒間、経時的にプロットして、時間−放射能曲線（横軸：123Ｉ−BMIPP投与後の経過時間、縦軸：放射能）を作成した。全患者の時間−放射能曲線から、上記画像（図１）で示された通り、123Ｉ−BMIPPは投与後60秒以内に肝臓に移行すること、肝臓中の123Ｉ−BMIPP量は、投与後500秒以内にピークに達し、次の1400秒の間、直線的に低下することがわかった。そこで直線的低下を示す領域である123Ｉ−BMIPP投与後510秒から1830秒間のデータを集積し、最小自乗法により最尤直線を作成し、123Ｉ−BMIPP投与時における123Ｉ−BMIPP量を外挿し、これを123Ｉ−BMIPP保持率（123Ｉ−BMIPP retention）100％と設定した。肝臓からの123Ｉ−BMIPPのクリアランスを示す「123Ｉ−BMIPPクリアランス率（%/min）」は、123Ｉ−BMIPP投与時における上記の推定123Ｉ−BMIPP量を123Ｉ−BMIPP保持率100％として標準化して算出した。
【０１５９】
123Ｉ−BMIPP投与後から1830秒までの肝臓の123Ｉ−BMIPP保持率（％）を示した結果を図２に示す（時間−BMIPP保持率曲線）。その結果、NASH患者（37名）には、高いクリアランス率（123Ｉ−BMIPPクリアランス率：0.5 %/min以上）を示すタイプ（図２中、白丸（○）で示す）（37名中27名）と、低いクリアランス率（123Ｉ−BMIPPクリアランス率：0.5 %/min未満）を示すタイプ（図２中、黒丸（●）で示す）（37名中10名）の２つのタイプがあることがわかった。
【０１６０】
（２）FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型の検討
上記37名のNASH患者（女性15名、男性22名）について、末梢静脈より抗凝固剤を含む採血管に採血し、市販のDNA精製キットを用いて、定法に従ってゲノムDNAを調製した。調製したゲノムDNAを鋳型として、primer 1 (AGTTGGAAGGTGACAATAAACTGGTGAAA)（配列番号１１）とprimer 2 (GTAGGAGGGTGGAGGGGTGGCATTAGGGTA) （配列番号１２）を用い、annealing temperature 59℃で、PCR(polymerase chain reaction)を行い、遺伝子を増幅した。次いで制限酵素Hind IIIを用いたRFLP(restriction fragment length polymorphism)法により、増幅された遺伝子の遺伝子型を決定した。具体的には、増幅された遺伝子が制限酵素（Hind III）により全く切断されなかった場合には遺伝子型をA/A、完全に切断された場合には遺伝子型をG/G、増幅された遺伝子産物の半量のみが切断された場合には遺伝子型をA/Gと判定した。
【０１６１】
NASH患者（37名）のうち、123Ｉ−BMIPPクリアランス率が0.5%/min未満の異常低値を示したNASH患者（10名）は、FABP1遺伝子の3513番目がすべて遺伝子型G/Gとなっており、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体（G/G）として有することが明らかとなった（T94A polymorphism ：AA）。これに対して、123Ｉ−BMIPPクリアランス率が0.5%/min以上の値を示したNASH患者（27名）は、FABP1遺伝子の3513番目が遺伝子型A/G（G/A）（T94A polymorphism：AT）またはA/A（T94A polymorphism：TT）のいずれかであった（図３）。
【０１６２】
（３）治療及びその効果の評価  
NASH患者（37名）のうち、上記のFABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体（G/G）として有するNASH患者（以下、「FABP1変異NASH患者」という）に対して、300日間に亘って、フィブラート系薬剤である“ベザフィブラート”を１日あたり400mg投与した。投与開始から246日目に、上記（１）と同様にして123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーを行い、時間−放射能曲線および時間−BMIPP保持率曲線を作成して123Ｉ−BMIPPクリアランス率（%/min）を求めた。その結果の一例を図４に示す。図４中、黒丸（●）で示すグラフは、フィブラート系薬剤投与前に測定した時間−BMIPP保持率曲線であり、白丸（○）で示すグラフは、フィブラート系薬剤投与後に測定した時間−BMIPP保持率曲線である。図４に示すように、FABP1変異NASH患者のすべてについて、フィブラート系薬剤の投与により、123Ｉ−BMIPPクリアランス率（%/min）は、0.5%/min未満（図４の場合、平均0.216 %/min）から0.5%/min以上（図４の場合、平均0.614 %/min）に回復し、フィブラート系薬剤の投与開始から8〜10ヶ月後には、脂肪肝の改善に伴いNASHに対する改善効果（治療効果）が得られた。
【０１６３】
実施例２
エストロゲンの強力なアンタゴニストであるタモキシフェン（tamoxifen）は、乳ガンの治療・予防に使用される薬剤であるが、その反面、乳ガン患者にしばしば非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を引き起こすことが知られている（タモキシフェン誘発非アルコール性肝脂肪炎）。
【０１６４】
タモキシフェンの投与によって、タモキシフェン誘発非アルコール性肝脂肪炎（タモキシフェン誘発性NASH）と診断された患者3名を含む、タモキシフェン誘発性脂肪肝の患者10名について、実施例１（１）の方法に従って、123Ｉ−BMIPP〔123I標識−15-(4-ヨードフェニル)-3(R,S)−メチルペンタデカン酸〕を用いて肝臓の脂肪酸β酸化能を測定した。また、これらの患者について、実施例１（２）の方法に従って、FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型を調べた。なお、対象としたこれらの患者（計10名）はいずれも、一日に20ｇ以上のアルコールを摂取せず、またウイルス肝炎、ヘモクロマトーシス、ウイルソン病、及び自己免疫肝疾患といった非アルコール性脂肪肝炎（NASH）以外の肝臓疾患に罹患していない。また、これらの患者は、メトトレキサート、コルチコイドまたはインスリンによる治療はなされていない。
【０１６５】
タモキシフェン誘発性NASH患者3名を含むタモキシフェン誘発性脂肪肝の患者（全10名）について調べたFABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型を表１に示す。
【０１６６】
【表１】
2008538893.tif 000003
【０１６７】
タモキシフェンは抗エストロゲン作用を介して脂肪酸β酸化を抑制する作用を有している。このため、表１に示すようにFABP1遺伝子の3513番目の遺伝子多型にかかわらず、すべての症例（10例）で123Ｉ−BMIPP クリアランス率が0.5%/min未満の異常低値を示した。
【０１６８】
実施例３
実施例１で被験者とした非アルコール性脂肪肝炎の患者（女性15名、男性22名、計37名）、および実施例２で被験者としたタモキシフェン誘発NASH患者（女性3名）の計40名を対象として、さらに下記の検査を行った。
【０１６９】
＜検査＞
（１）光学顕微鏡検査（肝小葉中の脂肪面積の測定）
患者から採取した肝生検標本を、定法に従って10％リン酸緩衝-ホルマリン（pH7.4)に固定し、パラフィンに埋設して切片とし、ヘマトキシリンとエオシンで染色した。肝小葉中の脂肪滴を有する面積（脂肪面積）を、NIHソフト（National Institutes of Health）“image 16.2”（http://rsb.info.nih.gov/nih-image/））を用いて計算した。
【０１７０】
（２）コンピューター断層撮影（内臓脂肪面積及び皮下脂肪面積の測定）
全患者に対してコンピューター断層撮影（CT）を行った。ＣＴ画像は、10mm間隔で輪切りにした10mm厚の切断像として取得し、helical-CTを用いてWL 30及びWW300に固定した（ProSeed、 General Electric Yokogawa  Medical Systems）。肝臓の８つのcouinaud区域並びに脾臓の一領域について、血管を避けて10mm径の関心領域（ROI：region of interest）に対して、non-enhancedスキャンを行い、ＣＴ減衰値を求めた。肝臓の最低CT値を用いて、肝臓／脾臓の比を算出した。ＮＩＨ画像を用いて臍高部での内臓脂肪面積及び皮下脂肪面積を求めた。
【０１７１】
（３）肥満度係数（BMI）の測定
全患者について体重と身長を測定し、肥満度係数（BMI）〔体重(kg)÷[伸長(m)]２〕を求め、WHOの定義に従って、BMI値が30以上の患者を肥満患者、30未満の患者を非肥満患者として分類した。
【０１７２】
（４）フィブラート系薬剤投与による治療効果
前述するように、エストロゲンの強力なアンタゴニストであるタモキシフェンは、乳ガン患者にしばしば非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を引き起こすが、これらの患者（タモキシフェン誘発NASH患者）の脂肪肝は、PPAR-α（peroxisome proliferator activated receptor-α）の活性剤として公知のフィブラート系薬剤（例えば、ベザフィブラート）で成功裏に改善することが知られている（Saibara T, Onishi S, Ogawa Y, Yoshida S, Enzan H. Bezafibrate for tamoxifen-induced non-alcoholic steatohepatitis. Lancet. 999; 353 (9166) : 1802）。
【０１７３】
実施例２で、タモキシフェン誘発NASH患者はすべて肝臓の脂肪酸β酸化能が低下していることが示された（123Ｉ−BMIPP クリアランス率が0.5%/min未満）。そこで、これらのタモキシフェン誘発NASH患者（3名）に対して、インフォームドコンセントの後、フィブラート系薬剤（ベザフィブラート）（400mg/day）を１年間に亘って投与した。投与前と投与してから１年後の、ＣＴ（コンピューター断層撮影）及び123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーからそれぞれ求めた、肝臓の脂肪蓄積状態及び123Ｉ−BMIPP クリアランス率を比較して、フィブラート系薬剤の治療効果を評価した。
【０１７４】
＜結果＞
（ａ）肥満度と123Ｉ−BMIPP クリアランス率との関係
非アルコール性脂肪肝炎（NASH）の患者（37名）は、実施例１で測定した123Ｉ−BMIPP クリアランス率と、上記（３）で求めた肥満度係数（BMI）から、次の４つのグループに分類することができた（図５）。なお、123Ｉ−BMIPP クリアランス率が0.5%/min以上の場合を、高123Ｉ−BMIPPクリアランス率と、0.5%/min未満の場合を、低123Ｉ−BMIPPクリアランス率と規定した。また、肥満度係数（BMI）が30以上を肥満患者、30未満を非肥満患者とした。
Ａ群：高123Ｉ−BMIPPクリアランス率を有する肥満型NASH患者（12名）
Ｂ群：高123Ｉ−BMIPPクリアランス率を有する非肥満型NASH患者（15名）
Ｃ群：低123Ｉ−BMIPPクリアランス率を有する非肥満型NASH患者（9名）
Ｄ群：低123Ｉ−BMIPPクリアランス率を有する肥満型NASH患者（1名）
上記で分類するように、非肥満型NASH患者24名（B群、C群）のうち、9名については123Ｉ−BMIPPクリアランス率が低く（C群）、一方、肥満型NASH患者13名（A群、D群）のうち1名は123Ｉ−BMIPPクリアランス率が低かった（D群）。
【０１７５】
（ｂ）臨床的特徴と123Ｉ−BMIPPクリアランス率
上記Ａ〜Ｃ群の臨床的特徴を表２に纏めた。
【０１７６】
【表２】
2008538893.tif 000004
【０１７７】
表２に示すように、非肥満型NASH患者から構成されるＢ群と比べて、肥満型NASH患者から構成されるＡ群には皮下脂肪の蓄積（p<0.01）と内臓脂肪の蓄積（p<0.01）が有意に認められた（いずれも高123Ｉ−BMIPPクリアランス率を有する）。しかしながら、これらの２つの群は、いずれも内臓肥満、脂肪肝、及び空腹時の高インスリンを伴うHOMA-IR（homeostasis model of assessment of insulin resistance）の増加を含むメタボリックシンドロームの特徴の多くを有していた。
【０１７８】
非肥満型NASH患者から構成されるＣ群（低123Ｉ−BMIPPクリアランス率）において、内臓脂肪面積、肝生検標本中の脂肪面積、及びHOMA-IR（homeostasis model of assessment of insulin resistance）は、それぞれ138.7±51.8 cm２、67.8±12.0 %、及び2.71±2.2cm２と高かった。それに対して、Ｃ群は肥満型NASH患者から構成されるＡ群と違って、BMIが25.4±2.9と低かった。
【０１７９】
また、共に非肥満型NASH患者から構成されるＢ群とＣ群とでは（但し、Ｂ群は高123Ｉ−BMIPPクリアランス率、Ｃ群は低123Ｉ−BMIPPクリアランス率）、臨床的所見は殆ど変わらないのに対し、肝臓／脾臓の平均比、及び脂肪面積が明らかに異なっていた（p<0.02）。
【０１８０】
（ｃ）肝標本の病理学的特徴とBMI（肥満度係数）との関係
図６に、37名のNASH患者について、肝生検標本から求めた脂肪面積（％）と肥満度係数（BMI）との関係を示す。
【０１８１】
符号●はＣ群の患者（低123Ｉ−BMIPPクリアランス率（<0.5%/min）を有する非肥満NASH患者）の結果を示す。この群の患者はいずれも、肝生検標本の脂肪面積の占める割合が50％を超えていた。しかし、この研究において、３つのグループに肝臓の炎症及び線維化に関する有意な差異は認められなかった。
【０１８２】
（ａ）〜（ｃ）に示すように、１例(D群)を除いて肥満型NASH患者の123Ｉ−BMIPPクリアランス率は、0.5%/min以上であった（A群）。一方、非肥満型NASH患者24名中9名（38％）の123Ｉ−BMIPPクリアランス率は、0.5%/min未満であった（C群）。これらの患者の肝臓には多量の脂肪が蓄積していることが観察された。このことから、123Ｉ−BMIPPクリアランス率が低値を示す症例（C群、D群）では、過度に存在する遊離脂肪酸が、競合的に123Ｉ−BMIPPクリアランスを阻害することに基づいて、肝細胞中における脂肪蓄積が進展することと説明することができる。
【０１８３】
Ｃ群の９名中、５名の患者の肥満度指数は、25以下と低値であった。しかし、NASHにおいて肝細胞のミトコンドリアはしばしば障害を受けるので、これらの５名が将来ミトコンドリア障害に罹ったとしても不思議ではない。Ｃ群の９名中２名は、タモキシフェンの投与によってNASHを発症した患者（タモキシフェン誘発性NASH）であり、残りの７名はすべて変異FABP１遺伝子（a3513ｇ）をホモ接合体（G/G）として有していた、また、肥満型NASH患者（13名、A群＋D群）のうち、2例は変異FABP１遺伝子（a3513ｇ）をホモ接合体（G/G）として有しており、そのうち1例（D群）の123Ｉ−BMIPPクリアランス率は0.5%/min未満を示した。
【０１８４】
123Ｉ−BMIPPクリアランス率が0.5%/min未満であるＣ群の非肥満型NASH患者（9名）と123Ｉ−BMIPPクリアランス率が約0.5%/min以上であるＢ群の非肥満型NASH患者（15名）との間には、臨床的に有意な相違はないにも関わらず、前者には後者より重篤な脂肪肝が観察された（p<0.02）（表２）。この結果は、123Ｉ−BMIPPクリアランスの評価が、肝臓の脂肪酸代謝の重篤な低下を背景とする非肥満型NASH患者群を同定する非常に有効な方法であること示している。そして、重度に肝臓の脂肪酸β酸化能が低下した肥満型NASH患者は、過度な脂肪酸を十分に酸化することができずに蓄積するため、NASHが急速に進行するにちがいない。このことから、こうした患者に対して、β酸化促進剤（例えば、フィブラート系薬剤）が非常に効果的であると考えられる。
【０１８５】
（ｄ）タモキシフェン誘発NASH患者に対するフィブラート系薬剤の治療効果
3名のタモキシフェン誘発NASH患者に対して、ベザフィブラートを投与する前と投与後（１年後）とで、肝臓の脂肪の蓄積状況をＣＴで測定した結果を図７に示す。図７の上図はベザフィブラートを投与する前、下図は投与後の結果を示す。
図７に示すように、肝臓の脂肪の蓄積は、ベザフィブラート処理によって有効に減少した。ベザフィブラート処理前の各患者（3名）の123Ｉ−BMIPPクリアランス率はそれぞれ0.237%/min、0.304%/min、及び0.306%/minであったが、ベザフィブラートでの処理後、肥満度指数を変化することなく、123Ｉ−BMIPPクリアランス率が著しく増加した（0.625%/min、0.917%/min、及び0.818%/min）。このことから、ベザフィブラートの投与によって肝臓の脂肪酸β酸化能が上昇することがわかる。代表的な結果を図８に示す。黒丸●はベザフィブラート投与前の時間−BMIPP保持率曲線、白丸○はベザフィブラート投与前後の時間−BMIPP保持率曲線を示す。  この結果は、ベザフィブラートによる１年間の治療によって重篤な肝脂肪が回復することを示した以前の論文と一致した（Saibara T, Onishi S, Ogawa Y, Yoshida S, Enzan H. Bezafibrate for tamoxifen-induced non-alcoholic steatohepatitis. Lancet. 999; 353 (9166) : 1802）。またこの結果は、123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーを用いて123Ｉ−BMIPPクリアランス率を評価することによって、NASH患者の各種薬物や療法による治療効果を、再現性よく且つ半定量的に評価することができることを示す。
【０１８６】
＜実施例１〜３の考察＞
最近、世界中に肥満が広まり、非アルコール性脂肪肝や非アルコール性脂肪肝炎を含むメタボリックシンドロームが世界中の社会的な問題となっている。深刻な肝脂肪がNASHに不可欠な臨床的特徴であるので、肝臓における脂肪酸の代謝を調べることが早急に求められている。心筋のミトコンドリアで代謝され難い特徴を有する123Ｉ−BMIPPは従来より、心筋の障害部位を画像化するのに、最も良いイメージング剤として使用されているが、肝細胞のミトコンドリアでは容易に代謝されるため急性並びに慢性肝臓疾患のミトコンドリア機能を評価するために、123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーを使用する試みは今までなされていない。
【０１８７】
実施例１及び２に示すように、123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーを用いて肝臓の123Ｉ−BMIPPクリアランスを調べたところ、時間−放射活性曲線から、123Ｉ−BMIPP投与後１分以内に123Ｉ−BMIPPが肝臓に取り込まれることが確認された。肝臓中の123Ｉ−BMIPP濃度は、123Ｉ−BMIPP投与後500秒以内にピークになり、次の1400秒の間直線的に低下した。また、この実験データは３ヶ月後に繰り返しても再現性を有していた。このことは、肝臓中の123Ｉ−BMIPPクリアランス率が、123Ｉ−BMIPPシンチグラフィーを用いて再現性を有して分析可能であることを示す。123Ｉ−BMIPPを用いた体内の脂肪酸β酸化能の評価は、肝臓における脂肪酸の代謝の低下を定量的かつ再現性よく測定するのに使用でき、臨床的にも非常に簡単であるため、一般の医師が簡単に使用することができる。
【０１８８】
コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、超音波検査法（ＵＳ）、及び各磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）といった画像診断療法は、単に肝臓の柔組織への脂肪浸潤の存在を視覚化するに過ぎず、肝臓の動的機能を示すことはできない。これに対して、上記の方法は、脂肪酸の代謝に基づく肝臓の能力を示し、肝臓の脂質代謝能によって２タイプに分類されるNASH患者に対して適切な治療を選択することを可能とするものと考えられる。同様の原理に基づく脂肪酸解析はPETやポジトロンCTでも、標識薬剤が開発されれば容易に行うことができると思われる。
【０１８９】
実施例４
NASH患者92名と健常者198名を対象として、実施例１（２）の方法に従って、FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型を調べた。そして、NASH患者（92名）と健常者（198名）について、FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型のホモ接合体（G/G）の出現頻度、および変異FABP1遺伝子（a3513g）の保有頻度を比較した。
【０１９０】
その結果、NASH患者の、FABP1遺伝子の3513位がグアニンであるホモ接合体（G/G）の出現頻度は、odds値4.81 (95%信頼区間2.40-9.62)、危険率p=2.53x10-6であり、NASH患者においてはその出現頻度が有意に高いことが分かった。また、NASH患者の、変異FABP1遺伝子（a3513g）の保有頻度は、odds値2.18 (95%信頼区間1.51-3.15)、危険率p=2.62x10-5であり、健常者に比してNASH症例が変異FABP1遺伝子（a3513g）を保有する確率が有意に高いことが分かった。このことから、FABP1遺伝子の3513位（SNP3513）がグアニンであるホモ接合体（G/G）が非アルコール性脂肪肝炎（NASH）の危険因子であると考えられた。
【０１９１】
実施例５
心筋梗塞の既往のある58名と健常者198名を対象として、実施例１（２）の方法に従って、FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型を調べた。そして、心筋梗塞既往患者（58名）と健常者（198名）について、FABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型のホモ接合体（G/G）の出現頻度、および変異FABP1遺伝子（a3513g）の保有頻度を比較した。
【０１９２】
その結果、心筋梗塞症例の、FABP1遺伝子の3513位（SNP3513）がグアニンであるホモ接合体（G/G）の出現頻度は、odds値5.51 (95%信頼区間2.42-12.53)、危険率p=1.10x10-5であり、心筋梗塞症例においてはその出現頻度が有意に高いことが分かった。また、心筋梗塞症例の、変異FABP1遺伝子（a3513g）の保有頻度は、odds ratio 3.03 (95%信頼区間1.89-4.85)、危険率p=2.05x10-6であり、健常者に比して心筋梗塞症例が変異FABP1遺伝子（a3513g）を保有する確率が有意に高いことが分かった。このことから、FABP1遺伝子の3513位（SNP3513）がグアニンであるホモ接合体（G/G）は、心筋梗塞の危険因子であると考えられた。
【図面の簡単な説明】
【０１９３】
【図１】実施例１（１）において行った123I-BMIPPシンチグラフィーの結果を示す。具体的には、(1)心臓（全左心室）、及び(2)肝臓（肝右葉S8部位）のガンマ線量を経時的（1分、5分、10分、30分）に測定した画像である。
【図２】非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者（37名）について調べた、123I-BMIPP投与後から1830秒までの肝臓の123I-BMIPP保持率(%)を示す、時間−BMIPP保持率曲線である（実施例１（１））。123I-BMIPPクリアランス率が0.5%/min 未満（平均0.27%/min）の患者（●）と123I-BMIPPクリアランス率が0.5%/min以上（平均0.79%/min）の患者（○）に明確に分類された。
【図３】非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者（37名）について、123I-BMIPPクリアランス率（%/min）とFABP1遺伝子の3513番目の遺伝子型（FABP1の94番目のアミノ酸の多型）との相関関係を示す図である（実施例１（２））。図中、「AA」は、FABP1の94番目のアミノ酸の変異（T→A）をもたらす遺伝子多型（SNP3513）をホモ接合体（G/G）として有する患者、「AT」は、FABP1の94番目のアミノ酸の変異（T→A）をもたらす遺伝子多型（SNP3513）をヘテロ接合体（A/GまたはG/A）として有する患者、「TT」は、FABP1遺伝子の3513番目がA/A（ホモ接合体）である患者（FABP1の94番目のアミノ酸がTTである患者）を示す。
【図４】実施例１（３）において測定した、FABP1変異NASH患者に関する、フィブラート系薬剤投与前の時間−BMIPP保持率曲線（●）、及びフィブラート系薬剤投与後の時間−BMIPP保持率曲線（○）である。
【図５】非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者（37名）について、123I-BMIPPクリアランス率（%/min）と肥満度係数（BMI）との相関関係を示す図である（実施例３）。
【図６】非アルコール性脂肪肝炎（NASH）患者（37名）について、肝生検標本から求めた脂肪面積(%)と肥満度係数（BMI）との相関関係を示す図である（実施例３）。
【図７】タモキシフェン誘発NASH患者に対して、フィブラート系薬剤を投与する前（上図）と投与後（１年後）（下図）とで、肝臓の脂肪の蓄積状況をＣＴで測定した結果を示す図である（実施例３）。
【図８】タモキシフェン誘発NASH患者について、ベザフィブラートを投与する前（●）と投与後（１年後）（○）に測定した時間−BMIPP保持率曲線を示す。
【図１】
2008538893.tif 000005
【図２】
2008538893.tif 000006
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2008538893.tif 000011
【図８】
2008538893.tif 000012
【配列表】
2008538893000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成19年2月28日(2007.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の生体試料を対象として、FABP1（fatty acid binding protein 1, liver [Homo sapiens]）の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する工程を含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法。
【請求項２】
上記遺伝子多型が、FABP1遺伝子の遺伝子多型のホモ接合体である、請求項１に記載する方法。  
【請求項３】
脂質代謝不全またはそれに起因する疾患が、肝臓の脂肪酸β酸化能の不全またはそれに起因する疾患である請求項１に記載する方法。
【請求項４】
肝臓の脂肪酸β酸化能の不全に起因する疾患が、非アルコール性脂肪肝炎、脂肪肝、または心筋梗塞である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
以下の工程(a)〜(c)を含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクの検出方法：
(a)被験者の生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、
(b)抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目の塩基を識別する工程、及び
(c)上記塩基がＡであるかＧであるかを識別する工程。
【請求項６】
さらに下記の工程(d)を含む、請求項５に記載する方法：
(d)上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に、当該被験者が脂質代謝不全またはれに起因する疾患リスクありと決定する工程。
【請求項７】
下記の工程(i)〜(iii)を含む、被験者について脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii) 脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満か、または0.5%/min以上か、識別する方法。
【請求項８】
さらに下記の工程(iv)を有する、請求項７に記載する方法：
(iv)脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患に対してリスクありと、0.5%/min以上の場合を脂質代謝異常またはそれに起因する疾患に対してリスクなしと、判定する工程。
【請求項９】
ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる１５〜３５塩基長の標識または非標識のオリゴヌクレオチドからなる、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスク判定用のプライマー。
【請求項１０】
ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長の標識または非標識のオリゴ若しくはポリヌクレオチド。
【請求項１１】
脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを判定するために用いられる、請求項１０に記載する標識または非標識のオリゴ若しくはポリヌクレオチドからなるプローブ。
【請求項１２】
請求項９に記載するプライマー、および／または、請求項１１に記載するプローブを含む、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを検出するための試薬、または当該試薬の少なくとも１つを含むキット。
【請求項１３】
被験者の生体試料を対象として、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型を検出する工程を含む、肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの検出方法。
【請求項１４】
上記遺伝子多型が、FABP1遺伝子の遺伝子多型のホモ接合体である、請求項１３に記載する方法。
【請求項１５】
上記遺伝子多型の有無を、FABP1の94番目のアミノ酸の変異（T→A）を指標として検出する方法である、請求項１３に記載する方法。
【請求項１６】
以下の工程(a)〜(c)を含む肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを測定する方法：
(a)生体試料からゲノムＤＮＡを抽出する工程、
(b)抽出したゲノムＤＮＡに含まれるFABP1遺伝子を対象として、その塩基配列の3513番目の塩基を測定する工程、及び
(c)上記塩基がＡであるかＧであるかを測定する工程。
【請求項１７】
さらに下記の工程(d)を有する、請求項１６に記載する測定方法：
(d)上記塩基がＧのホモ接合体（Ｇ／Ｇ）である場合に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであると決定する工程。
【請求項１８】
下記の工程(i)〜(iii)を含む、被験者について肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを測定する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)上記脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満か、0.5%/min以上かを測定する工程。
【請求項１９】
さらに下記の工程(iv)を有する、請求項１８に記載する方法：
(iv)脂肪酸クリアランス率（%/min）が0.5%/min未満の場合を肝脂肪酸β酸化能不全型NASHと、0.5%/min以上の場合を肝脂肪酸β酸化能正常型NASHであると、決定する工程。
【請求項２０】
肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを検出するために用いられる、下記の標識または非標識オリゴヌクレオチドからなるプライマー：
−ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる１５〜３５塩基長の標識または非標識オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
肝脂肪酸β酸化能不全型NASHであるか否かを検出するために用いられる、下記の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチドからなるプローブ：
−ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子に含まれる配列番号１に記載する塩基配列において、３０１番目に位置するヌクレオチドを含む１６〜５００塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチド（但し、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドがＲＮＡである場合、配列表中の塩基記号「ｔ」は「ｕ」に読み替えるものとする）にハイブリダイズする１６〜５００塩基長の標識または非標識オリゴ若しくはポリヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項２０に記載するプライマー、および／または、請求項２１に記載するプローブを含む、肝脂肪酸β酸化能不全型NASHを検出するための試薬、または当該試薬を含むキット。
【請求項２３】
FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者について、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）を正常な状態（T→A）に戻すか、またはFABP1遺伝子のSNP3513の塩基変異（A→G）を正常な状態（G→A）に戻すことを特徴とする、脂質代謝不全関連疾患発症リスクを低減する方法。
【請求項２４】
FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に、フィブラート系薬剤を投与することを特徴とする、当該被験者についてNASH、特に肝脂肪酸β酸化能不全型NASHの発症リスクを低減する方法。
【請求項２５】
FABP1遺伝子のSNP3513がＧのホモ接合体（G/G）を有する被験者に対する、フィブラート系薬剤を有効成分とする、NASHの発症予防剤またはNASH改善剤。
【請求項２６】
下記の工程を有する、脂質代謝不全の改善、または脂質代謝不全に起因する疾患の発症のリスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法：
（ａ）94番目のアミノ酸残基がアラニンである変異FABP1〔FABP1(T94A)〕を発現する細胞に対して被験物質を接触させる工程、
（ｂ）被験物質を接触させた細胞について、FABP1若しくは変異FABP1の発現量、またはFABP1活性を検出する工程、および
（ｃ）被験物質非存在下で測定した変異FABP1発現細胞のFABP1若しくは変異FABP1の発現量またはFABP1活性を陰性コントロールとした場合に、当該陰性コントロールと対比して、上記（ｂ）工程でFABP1の発現量またはFABP1活性の増加が認められた細胞または変異FABP1の発現量の低下が認められた細胞に接触させた被験物質を、候補物質として選択する工程。
【請求項２７】
下記の工程を有する、脂質代謝不全の改善、脂質代謝不全に起因する疾患の発症のリスク低減に有効な成分をスクリーニングする方法：
(i) ヒト第２染色体上のFABP1遺伝子、またはその遺伝子の一部であって、少なくとも、塩基Ｇを挟んで5’側及び3’側にそれぞれ配列番号２記載の塩基配列及び配列番号３記載の塩基配列を含有するポリヌクレオチドを含有する細胞に対して、被験物質を投与する工程、及び
(ii) 投与した被験物質の中から、当該細胞中の上記ポリヌクレオチドの配列番号２記載の塩基配列と配列番号３記載の塩基配列に挟まれた塩基ＧをＡに変換させる物質を、候補物質として選択する工程。
【請求項２８】
FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全またはそれに起因する疾患リスクを有する患者に対する治療の、当該疾患に対する治療効果またはリスク軽減効果を評価する方法であって、肝臓の脂肪酸代謝能を治療前と治療後とで対比することを特徴とする方法。
【請求項２９】
肝臓の脂肪酸代謝能の測定を、下記の工程(a)及び(b)を有する方法で行う請求項２８に記載する方法：
(a)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、及び
(b)工程(a)で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸代謝能を測定する工程。
【請求項３０】
下記の工程を有する、FABP1の94番目のアミノ酸変異（T→A）をもたらす遺伝子多型をホモ接合体として有することに基づく脂質代謝不全を有する患者に対する、脂質代謝不全またはそれに起因する疾患の治療効果または疾患リスク軽減効果を評価する方法：
(i)被験者に放射性同位元素標識脂肪酸を投与し、肝臓に集積した放射性同位元素標識脂肪酸から生じる放射能を経時的に検出する工程、
(ii)上記工程(i)で得られる放射能の経時的変化から肝臓の脂肪酸クリアランス率（%/min）を求める工程、および
(iii)脂肪酸クリアランス率が0.5%/min未満の場合を治療効果または疾患リスク軽減効果あり、0.5%/min以上の場合を治療効果または疾患リスク軽減効果なしと、決定する工程。
【国際調査報告】
2008538893.tif 000019
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2008538893.tif 000021