(57)【要約】本発明は疾患及び癌関連の抗原、ＫＩＤ３１を同定及び特性付けを提供する。本発明は又、抗原ＫＩＤ３１に結合するモノクローナル抗体のファミリー、ＫＩＤ３１を発現する種々のヒトの癌及び疾患を診断及び治療する方法を提供する。本明細書に開示される発明は、既知の抗原、カルボキシペプチダーゼＭ（ＫＩＤ３１）が種々のヒト原発及び転移の両方の癌に存在し、抗ＫＩＤ３１抗体はこのような癌を治療するために使用される場合があるという発見に関する。本発明は種々のヒト癌に発現されるＫＩＤ３１に結合するＫＩＤ３１拮抗剤、モジュレーター及びモノクローナル抗体を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＫＩＤ３１に特異的に結合し、以下の特性：
ａ．癌細胞のＫＩＤ３１に結合する能力；
ｂ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで生存細胞の表面に曝露しているＫＩＤ３１の部分に結合する能力；
ｃ．ＫＩＤ３１を発現する癌細胞に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力；及び、
ｄ．ＫＩＤ３１を発現する癌細胞内に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力、
の少なくとも１つ以上を有する、実質的に精製された免疫グロブリンポリペプチド又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記癌細胞が副腎腫瘍、エイズ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞腫、膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）、骨癌（アダマンチノーム、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳及び脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈小体腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、色素嫌性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫、骨外性粘液様軟骨肉腫、線維形成性不完全骨（ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ  ｏｓｓｉｕｍ）、骨の線維性形成異常、胆嚢及び胆管の癌、妊娠性栄養膜疾患、生殖細胞腫瘍、頭部及び頚部の癌、島細胞肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、肝癌（胚芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌線腺腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌腫、甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後ブドウ膜黒色腫、希少な血液学的障害、腎転移癌、杆状腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌及び子宮癌（頸癌、内膜癌及び平滑筋腫）に由来する癌細胞よりなる群から選択される、請求項１に記載の精製された免疫グロブリンポリペプチド又は抗原結合フラグメント。
【請求項３】
請求項１に記載の免疫グロブリンポリペプチド又はその抗原結合フラグメントをコード化する単離された核酸配列。
【請求項４】
前記核酸がプロモーターに作動可能に連結している、請求項３に記載の核酸。
【請求項５】
前記プロモーター及び前記核酸が発現ベクター内に含有されている、請求項４に記載の核酸。
【請求項６】
前記ポリペプチドがモノクローナル抗体である、請求項３に記載の核酸。
【請求項７】
請求項３に記載の核酸を含有するベクターでトランスフェクト、形質転換又は感染されている細胞株。
【請求項８】
実質的に精製された免疫グロブリンポリペプチド又はその抗原結合フラグメントを産生する方法であって、
ａ．該免疫グロブリンポリペプチド又は抗原結合フラグメントが発現される条件下で、請求項３に記載の核酸で形質転換された細胞株を成長させる工程；及び、
ｂ．発現された免疫グロブリンポリペプチド又は抗原結合フラグメントを採取する工程、
を包含する、方法。
【請求項９】
前記細胞株がハイブリドーマである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ハイブリドーマがＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＰＴＡ＃６５１６である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫グロブリンポリペプチドがモノクローナル抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
薬学的に許容される担体と共に、請求項１に記載の精製された免疫グロブリン又は抗原結合フラグメントの治療上有効な量を含む医薬組成物。
【請求項１３】
ＫＩＤ３１に特異的に結合し、以下の特徴：
ａ．癌細胞のＫＩＤ３１に結合する能力；
ｂ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで生存細胞の表面に曝露しているＫＩＤ３１の部分に結合する能力；
ｃ．ＫＩＤ３１を発現する癌細胞に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力；及び、
ｄ．ＫＩＤ３１を発現する癌細胞内に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力、
の少なくとも１つ以上を有するモノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントの治療上有効な量を薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１４】
前記組成物が追加の治療薬部分を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＰＴＡ＃６５１６又はその子孫よりなる単離された細胞株。
【請求項１６】
化学療法剤と会合した抗ＫＩＤ３１抗体を含む組成物を投与する工程を包含する、癌細胞に該化学療法剤を送達する方法であって、該癌細胞が副腎腫瘍、エイズ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞腫、膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）、骨癌（アダマンチノーム、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳及び脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈小体腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、色素嫌性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫、骨外性粘液様軟骨肉腫、線維形成性不完全骨、骨の線維性形成異常、胆嚢及び胆管の癌、妊娠性栄養膜疾患、生殖細胞腫瘍、頭部及び頚部の癌、島細胞肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、肝癌（胚芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌線腺腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌腫、甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後ブドウ膜黒色腫、希少な血液学的障害、腎転移癌、杆状腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌及び子宮癌（頸癌、内膜癌及び平滑筋腫）に由来する癌細胞よりなる群から選択される、方法。
【請求項１７】
前記化学療法剤が個体に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ハイブリドーマがＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＰＴＡ＃６５１６又はその子孫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
化学療法剤と会合した抗ＫＩＤ３１抗体を含む組成物の有効量を個体に投与する工程を包含する、該個体における癌細胞の成長を抑制する方法であって、該癌細胞が副腎腫瘍、エイズ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞腫、膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）、骨癌（アダマンチノーム、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳及び脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈小体腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、色素嫌性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫、骨外性粘液様軟骨肉腫、線維形成性不完全骨、骨の線維性形成異常、胆嚢及び胆管の癌、妊娠性栄養膜疾患、生殖細胞腫瘍、頭部及び頚部の癌、島細胞肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、肝癌（胚芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌線腺腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌腫、甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後ブドウ膜黒色腫、希少な血液学的障害、腎転移癌、杆状腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌及び子宮癌（頸癌、内膜癌及び平滑筋腫）に由来する癌細胞よりなる群から選択される、方法。
【請求項２０】
前記化学療法剤が前記癌細胞に送達される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＫＩＤ３１抗体がハイブリドーマＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＰＴＡ＃６５１６又はその子孫により発現されるモノクローナル抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
個体由来の細胞を抗ＫＩＤ３１抗体に接触させ、該細胞由来のＫＩＤ３１と該抗体との複合体があればそれを検出する工程を包含する、該個体における癌細胞の有無を検出する方法であって、該癌細胞が副腎腫瘍、エイズ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞腫、膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）、骨癌（アダマンチノーム、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳及び脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈小体腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、色素嫌性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫、骨外性粘液様軟骨肉腫、線維形成性不完全骨、骨の線維性形成異常、胆嚢及び胆管の癌、妊娠性栄養膜疾患、生殖細胞腫瘍、頭部及び頚部の癌、島細胞肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、肝癌（胚芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌線腺腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌腫、甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後ブドウ膜黒色腫、希少な血液学的障害、腎転移癌、杆状腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌及び子宮癌（頸癌、内膜癌及び平滑筋腫）に由来する癌細胞よりなる群から選択される、方法。
【請求項２３】
ＫＩＤ３１とＫＩＤ３１結合パートナーとの間の以下の相互作用：
ａ．癌細胞のＫＩＤ３１に結合する能力；
ｂ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで生存細胞の表面に曝露しているＫＩＤ３１の部分に結合する能力；
ｃ．ＫＩＤ３１を発現する癌細胞に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力；及び、
ｄ．ＫＩＤ３１を発現する癌細胞内に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力、
の少なくとも１つをブロックする薬剤。
【請求項２４】
薬学的に許容される担体と共に、請求項２３に記載の薬剤の治療上有効な量を含む医薬組成物。
【請求項２５】
以下の特徴：
ａ．ヒトＫＩＤ３１とネイティブのＫＩＤ３１リガンドの間の相互作用を破壊又はブロックする能力；
ｂ．ヒトＫＩＤ３１と抗ＫＩＤ３１抗体の間の相互作用を破壊又はブロックする能力；
ｃ．ヒトＫＩＤ３１に結合する能力；
ｄ．ヒトＫＩＤ３１のネイティブのリガンドに結合する能力；
ｅ．抗ＫＩＤ３１抗体に結合する能力；
ｆ．ヒトＫＩＤ３１、ネイティブＫＩＤ３１リガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体に結合できる抗体を生じさせることに使用できる抗原部位を含む；
ｇ．ヒトＫＩＤ３１、ネイティブＫＩＤ３１リガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体に結合することができる抗体のスクリーニングに使用できる抗原部位；
ｈ．ヒトＫＩＤ３１とネイティブＫＩＤ３１リガンドの間、又はＫＩＤ３１と抗ＫＩＤ３１抗体の間の相互作用を破壊又はブロックすることができる抗体を生じさせることに使用できる抗原部位を含む；
ｉ．ヒトＫＩＤ３１とネイティブＫＩＤ３１リガンドの間、又はＫＩＤ３１と抗ＫＩＤ３１抗体の間の相互作用を破壊又はブロックすることができる抗体のスクリーニングに使用できる抗原部位を含む；
の少なくとも１つを有するＫＩＤ３１モジュレーター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生物学及び免疫学の分野に属する。より詳細には、既知の抗原であるカルボキシペプチダーゼＭが種々のヒトの癌及び関係する疾患に関連しているという発見に関する。本発明は更に、抗カルボキシペプチダーゼＭ抗体等のカルボキシペプチダーゼＭに結合する拮抗剤、モジュレーター及びペプチドを使用したカルボキシペプチダーゼＭに関連する種々のヒトの疾患及び癌の診断及び／又は治療を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ヒトカルボキシペプチダーゼＭは、ペプチド又はタンパク質からカルボキシ末端のアルギニン又はリジン残基を特異的に切断する膜結合メタロプロテアーゼ−ペプチドである。カルボキシペプチダーゼＭは、分子量約６２ｋＤａの糖タンパク質であり、調節メタロカルボキシペプチダーゼタンパク質のファミリーのメンバーである。
【０００３】
カルボキシペプチダーゼＭは、種々のヒト組織に広範に発現されており、細胞表面のペプチドホルモン及び成長因子の活性の制御において、並びに細胞外タンパク質の膜限局分解において役割を果たしていると考えられている（非特許文献１）。カルボキシペプチダーゼＭ特異的抗体を使用することにより、研究者等はマクロファージ成熟のマーカーとしてカルボキシペプチダーゼＭを同定した。
【０００４】
マクロファージ成熟のマーカーとして説明されているにもかかわらず、カルボキシペプチダーゼＭの発現と癌の間の何れかの相関を示すデータは殆どない。カルボキシペプチダーゼＭの発現は、免疫組織化学的技法及びカルボキシペプチダーゼＭに特異的な抗体を使用して、従来の明細胞腎臓癌内の肉芽腫性の反応を有する患者において報告されている（非特許文献２）。
【０００５】
診断におけるそれらの既知の使用の他に、抗体は治療薬として有用であることがわかっている。例えば免疫療法、即ち治療目的のための抗体の使用は、癌の治療に近年使用されている。受動免疫療法では、癌治療においてモノクローナル抗体を使用する。例えば、非特許文献３を参照されたい。これらの抗体は、腫瘍細胞の成長又は生存の直接の抑制により、並びに身体の免疫系の天然の細胞殺傷活性をリクルートするその能力の両方により、固有の治療上の生物学的活性を有することができる。これらの薬剤は、単独又は放射線照射若しくは化学療法剤と組み合わせて投与することができる。非ホジキンリンパ腫及び乳癌の治療にそれぞれ承認されているリツキシマブ及びトラスツズマブは、そのような治療薬の２つの例である。或いは、抗体が毒性の薬剤に連結され、腫瘍に特異的に結合することによりその薬剤を腫瘍に指向させる、抗体コンジュゲートを作製するために、抗体を使用することができる。ゲムツズマブポゾガマイシンは、白血病の治療に使用される承認された抗体コンジュゲートの一例である。癌細胞に結合し、診断及び治療のための潜在的な用途を有するモノクローナル抗体が、刊行物に開示されている。例えば、特に一部の分子量の標的タンパク質を開示している以下の特許出願、即ち、特許文献１（２００ｋＤ  ｃ−ｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２）及び大きさ４０〜２００ＫＤのその他の未知の抗原）及び特許文献２（５０ｋＤ及び５５ｋＤの癌胎児タンパク質）を参照されたい。臨床治験における、及び／又は固形腫瘍の治療に承認された抗体の例には、トラスツヅマブ（抗原：１８０ｋＤ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、エドレコロマブ（抗原：４０〜５０ｋＤ、Ｅｐ−ＣＡＭ）、抗ヒト乳脂肪小球（ＨＭＦＧ１）（抗原＞２００ｋＤ、ＨＭＷムチン）、セツキシマブ（抗原：１５０ｋＤ及び１７０ｋＤ、ＥＧＦ受容体）、アレムツズマブ（抗原：２１〜２８ｋＤ、ＣＤ５２）及びリツキシマブ（抗原：３５ｋＤ、ＣＤ２０）が含まれる。
【０００６】
乳癌の治療に使用されるトラスツヅマブ（Ｈｅｒ−２受容体）及び数種の癌の治療に関して臨床治験中のセツキシマブ（ＥＧＦ受容体）の抗原は、皮膚、結腸、肺、卵巣、肝臓及び膵臓を含む多数の正常ヒト成人組織にある程度検出可能な量で存在している。これらの治療薬の使用における安全性の限界は、これらの部位における抗体の発現量又は触容易性又は活性の相違によりおそらくは決定される。
【０００７】
免疫療法の別の型には、能動免疫療法、即ち特定の癌に存在する抗原、又は個体における免疫応答を後に惹起する抗原の発現を指向する、即ち自身の癌に対抗する抗体を能動的に産生するように固体を誘導するＤＮＡコンストラクトを使用した、ワクチン投与がある。能動免疫療法は、受動免疫療法又は免疫毒素ほど頻繁には使用されていない。
【０００８】
疾患（癌を含む）の進行の幾つかのモデルが示唆されている。理論は、単一の感染性／形質転換性の事象による誘起から、最終的には完全な病原性又は悪性の可能性をもたらす進行的に「疾患様」又は「癌様」となる組織型の発生にまでわたっている。例えば癌の場合、単一の突然変異の事象が悪性の誘発に十分であるとする説もあれば、その後の改変も必要であるとする説もある。他方では、増大する突然変異性の負荷及び腫瘍の等級が、細胞レベルにおける突然変異の選択事象の継続を介した真生物形成の開始並びに進行の何れにも必要であることも示唆されている。癌の標的は腫瘍組織においてのみ存在するものもあるが、正常組織にも存在し、腫瘍組織でアップレギュレート及び／又は過剰発現されるものもある。このような状況において、過剰発現が悪性疾患の獲得に関連すると示唆する研究者もいれば、過剰発現は増大する疾患状態への過程に沿った傾向のマーカーにすぎないと示唆する研究者もいる。
【０００９】
理想的な診断及び／又は治療用の抗体は、多数の癌に存在するが、如何なる正常組織にも存在しないか、又は少量しか存在しない抗原に特異的であると思われる。癌に特異的に関連する新規の抗原の同定、特性付け及び単離は、多くの方法において有用であると思われる。第一に、抗原は抗原に対抗するモノクローナル抗体を作製するために使用できると思われる。抗体は、癌細胞に対する生物学的活性を有し、外来性抗原に対する免疫系の応答をリクルートできることが理想的とされる。抗体は治療薬単独として、又は現在の治療と組み合わせて投与でき、或いは毒性物質に連結した免疫コンジュゲートを調製するために使用できると思われる。単独で投与された場合に同じ特異性を有するが生物学的活性は低値か皆無である抗体は又、コンジュゲート型が抗原含有細胞に毒素を指向する抗体により生物学的活性を有するような放射性同位体、毒素又は化学療法剤若しくは化学療法剤を含有するリポソームにより免疫コンジュゲートを調製するために抗体が使用できるという点において有用である。
【００１０】
理想的な診断及び／又は治療用の抗体に望まれる一態様には、種々の癌に関連する抗原の同定及び特性付けがある。多数の型の癌に発現される抗原（即ち「汎癌」抗原）であって、非癌細胞での発現が限定されているものは殆どない。このような抗原の単離及び精製は、抗原をターゲティングする抗体（例えば診断用又は治療用）を作製するために有用であると思われる。「汎癌」抗原に結合する抗体は、癌の唯一特定の型にのみ関連する抗原に対する抗体とは対照的に、種々の組織中に存在する種々の癌をターゲティングできると思われる。抗原は又、創薬（例えば小分子）のため、並びに細胞の調節、成長及び分化の更なる特性付けのためにも有用であると思われる。
【００１１】
必要とされているものは、細胞表面の標的を特異的に認識する抗体及びその他の薬剤で疾患及び／又は癌を診断及び治療するために使用される場合がある、そのような疾患及び／又は癌の表面上の新しい標的である。更に必要とされているものは、本明細書に開示した発見に基づくと、カルボキシペプチダーゼＭの疾患誘発活性を低減又は増強することの何れかによりモジュレートすることができる細胞表面上の標的を特異的に認識する新規の抗体及びその他の薬剤である。本発明の目的は、疾患関連の活性を抑制することができるヒトカルボキシペプチダーゼＭの拮抗剤を同定することである。本発明の別の目的は、カルボキシペプチダーゼＭの試験において使用するため、及び免疫原として使用するため、又は抗ヒトカルボキシペプチダーゼＭ抗体を選択するための、新規の化合物を提供することである。
【００１２】
以下でより詳細に説明する通り、本発明者等は、本明細書に記載した新規の拮抗剤、モジュレーター及び抗体の抗原標的として同定された、本明細書において本発明者等がＫＩＤ３１と称する既知の抗原、カルボキシペプチダーゼＭを発見した。
【特許文献１】米国特許第６，０５４，５６１号明細書
【特許文献２】米国特許第５，６５６，４４４号明細書
【非特許文献１】Ｒｅｖｅｒｔｅｒら、Ｊ.Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．（２００３）Ｖｏｌ．３３８，ｐｐ．２５７−２６９
【非特許文献２】Ｋｏｖａｃｓら、Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓ．，（２００４）Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．ｐｐ．１６９−１７１
【非特許文献３】Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  第６版  （２００１）  Ｃｈａｐｔ．  ２０  ｐｐ．  ４９５−５０８
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
本明細書に開示される発明は、既知の抗原、カルボキシペプチダーゼＭ（ＫＩＤ３１）が種々のヒト原発及び転移の両方の癌に存在し、抗ＫＩＤ３１抗体はこのような癌を治療するために使用される場合があるという発見に関する。本発明は種々のヒト癌に発現されるＫＩＤ３１に結合するＫＩＤ３１拮抗剤、モジュレーター及びモノクローナル抗体を提供する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、ＰＴＡ＃６５１６のＰａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎと共に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎにおいて２００５年１月１２日に寄託された宿主細胞系統ＫＩＤＮＥＹ．５．４Ｂ８．１Ａ４により産生されるモノクローナル抗体抗ＫＩＤ３１である。
【００１５】
更に別の態様において、本発明は、（ａ）免疫原で宿主哺乳類を免疫化する手順；（ｂ）哺乳類からリンパ球を得る手順；（ｃ）リンパ球（ｂ）をミエローマ細胞系統と融合させてハイブリドーマを産生する手順；（ｄ）（ｃ）のハイブリドーマを培養して、モノクローナル抗体を産生する手順；及び（ｅ）疾患性及び／又は癌細胞又は細胞系統には結合するが非癌性又は正常細胞又は細胞系統には結合しないか、低水準又は異なる態様では正常細胞に結合する抗体のみを選択するように抗体をスクリーニングする手順からなる、疾患性及び／又は癌細胞と反応するモノクローナル抗体、抗ＫＩＤ３１を生成する方法である。
【００１６】
別の態様において、本発明は、抗ＫＩＤ３１抗体を生成する方法であって、そのような抗体又はその子孫をコーティングする宿主細胞を、抗体の産生が可能な条件下で培養すること、及び抗ＫＩＤ３１抗体を精製することからなる方法である。
【００１７】
別の態様において、本発明は、好適な細胞において抗体（単一の軽鎖又は重鎖として別個に発現される場合があり、又は軽鎖及び重鎖の両方が１つのベクターから発現される）をコーティングするポリヌクレオチドを１つ以上発現し、その後一般的には目的の抗体又はポリペプチドを回収及び／又は単離することにより、本明細書に記載した抗体（又はポリペプチド）の何れかを作製する方法を提供する。
【００１８】
別の態様において、本発明は、ＫＩＤ３１への抗ＫＩＤ３１抗体の優先的結合を競合的に抑制する（抗体である場合もあれば、抗体でない場合もある）抗ＫＩＤ３１抗体又はポリペプチドである。一部の実施形態において、本発明は、他の抗ＫＩＤ３１抗体と同じか異なるＫＩＤ３１上エピトープに優先的に結合する抗体又はポリペプチド（抗体である場合もあれば、抗体でない場合もある）である。
【００１９】
別の態様において、本発明は、ＫＩＤ３１への抗ＫＩＤ３１抗体の優先的な結合を競合的に抑制するＫＩＤ３１モジュレーター（ポリペプチドである場合もあれば、ポリペプチドでない場合もある）である。一部の実施形態において、本発明は、他の抗ＫＩＤ３１抗体と同じか異なるＫＩＤ３１上エピトープに優先的に結合する小分子又は化学物質であってもよい。
【００２０】
更に別の態様において、本発明は、ＫＩＤ３１のエピトープに対して特異的な抗体により結合されたＫＩＤ３１を含む組成物である。一実施形態において、抗体は抗ＫＩＤ３１である。他の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体は２つ以上投与され、それらの抗体はＫＩＤ３１の複数の異なるエピトープをマッピングしている。一部の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体は、治療薬又は検出可能な標識に連結される。
【００２１】
別の態様において、本発明は、抗ＫＩＤ３１抗体のフラグメント又は領域を含む抗体である。一実施形態において、フラグメントは抗体の軽鎖である。別の実施形態において、フラグメントは抗体の軽鎖及び／又は重鎖の可変領域を１つ以上含有する。更に別の実施形態において、フラグメントは、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１つ以上を含有する。
【００２２】
別の態様において、本発明は、抗ＫＩＤ３１抗体の、（ａ）軽鎖又は重鎖由来の１つ以上のＣＤＲ（又はそのフラグメント）；（ｂ）軽鎖由来の３つのＣＤＲ；（ｃ）重鎖由来の３つのＣＤＲ；（ｄ）軽鎖由来の３つのＣＤＲ及び重鎖由来の３ＣＤＲ；（ｅ）軽鎖可変領域；（ｆ）重鎖可変領域、の何れかを含むポリペプチドである（抗体である場合もあれば、抗体でない場合もある）を提供する。
【００２３】
別の実施形態において、本発明はヒト化抗体である。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体の１つ以上のＣＤＲを含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、他の抗ＫＩＤ３１と同じか又は異なるエピトープに結合する。一般的に、本発明のヒト化抗体は、元の非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体のＣＤＲと同じである、及び／又はそれより誘導したＣＤＲ１つ以上（１、２、３、４、５、６個又はそのフラグメント）を含む。一部の実施形態において、ヒト抗体は、他の抗ＫＩＤ３１抗体と同じか又は異なるエピトープに結合する。別の態様において、本発明は、非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域から誘導された可変領域、並びにヒト抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域から誘導された定常領域を含むキメラ抗体である。
【００２４】
別の態様において、本発明は、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ  Ｎｏ．６５１６の寄託番号を有する宿主細胞又はその子孫により産生される抗体ｍｕ−抗ＫＩＤ３１をコーティングする単離されたポリヌクレオチドである。本発明は、上記の通り特定した抗体の何れかの固有の結合又は生物学的活性有する抗体ポリペプチドを包含する。別の態様において、本発明は、抗体（抗体フラグメントを含む）の何れか並びに本明細書に記載したその他何れかのポリペプチドをコーティングするポリヌクレオチドを提供する。
【００２５】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載したポリペプチド（本明細書に記載した抗体の何れかを含む）又はポリヌクレオチドの何れかを含む医薬組成物、例えば化学療法剤に連結した抗ＫＩＤ３１抗体、抗ＫＩＤ３１抗体のフラグメントを含む抗体、非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体のヒト化抗体、非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体の可変領域から誘導した可変領域及びヒト抗体から誘導した定常領域を含むキメラ抗体、又は化学療法剤（例えば放射活性部分）に連結した本明細書に記載の非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体又は抗ＫＩＤ３１抗体の何れか１つ以上の特性を有するヒト抗体、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である。
【００２６】
一態様において、本発明は、疾患性又は癌細胞に存在するＫＩＤ３１に結合した抗ＫＩＤ３１抗体を含む組成物である。好ましい実施形態において、癌細胞は、腎臓、卵巣、肺、前立腺、膵臓、結腸及び乳房の癌の細胞よりなる群から選択される。一部の実施形態において、癌細胞は単離される。一部の実施形態において、癌細胞は生物学的試料に含まれる。一般的に、生物学的試料は個体、例えばヒトに由来する。
【００２７】
別の態様において、本発明は、個体由来の細胞においてＫＩＤ３１を検出することによる個体における疾患、特に個体における炎症性又は自己免疫性の応答に関連する疾患又は障害を診断する方法である。本発明の他の態様において、方法は個体における炎症性又は自己免疫性の応答をモジュレートすることを可能とする。本発明の組成物及び方法を使用した治療に付される場合がある炎症及び自己免疫障害に起因する疾患及び病態には、例えば多発性硬化症、髄膜炎、脳炎、卒中、その他の大脳外傷、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性結腸炎及びクローン病、重症筋無力症、狼瘡、慢性関節リューマチ、喘息、急性若年発症性糖尿病、エイズ痴呆、アテローム性動脈硬化症、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血及び急性白血球媒介肺傷害が含まれるが、これらに限定されない。
【００２８】
本発明の抗体及びその他の治療薬の治療上の使用の更に別の適応には、臓器又は移植片の拒絶の危険性がある個体への投与が含まれる。近年、組織及び臓器、例えば皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓及び骨髄を移植する外科的技法の効率が大きく向上している。おそらくは、移植された同種移植片又は臓器に対するレシピエントの免疫寛容を誘導する満足できる薬剤が存在しないことが、主な未解決の問題となっている。同種移植片の細胞又は臓器を宿主に移植する（即ち、供与者及び被供与者が同じ種の異なる個体である）場合、宿主の免疫系は、移植片における外来性抗原への免疫応答を上昇させ（宿主対移植片疾患）、移植された組織の破壊をもたらす可能性がある。
【００２９】
別の態様において、本発明は、個体が癌を有しているかどうかを診断する方法であって、個体に由来する選択された細胞においてＫＩＤ３１の発現があるかどうかを測定することからなり、前記細胞におけるＫＩＤ３１の発現が前記癌を示すものとなる方法である。一部の実施形態において、ＫＩＤ３１の発現は、抗ＫＩＤ３１抗体を使用して測定される。一部の実施形態において、この方法は、細胞からのＫＩＤ３１の発現量を検出することを伴う。本明細書で使用される「検出」という用語には、対照の比較参照を伴うかにかかわらず、定性的及び／又は定量的な検出（量測定）が含まれる。
【００３０】
更に別の態様において、本発明は、個体由来の細胞における、又は細胞から放出されたＫＩＤ３１を検出することによって個体の癌を診断する方法であり、ここで、癌は、副腎腫瘍、エイズ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞腫、膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）、骨癌（アダマンチノーム、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳及び脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈小体腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、色素嫌性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫、骨外性粘液様軟骨肉腫、線維形成性不完全骨（ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ  ｏｓｓｉｕｍ）、骨の線維性形成異常、胆嚢及び胆管の癌、妊娠性栄養膜疾患、生殖細胞腫瘍、頭部及び頚部の癌、島細胞肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、肝癌（胚芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌線腺腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌腫、甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後ブドウ膜黒色腫、希少な血液学的障害、腎転移癌、杆状腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌及び子宮癌（頸癌、内膜癌及び平滑筋腫）を含むがこれらに限定されない群から選択される。
【００３１】
別の態様において、本発明は、個体における癌（例えば腎臓、卵巣、肺、前立腺、膵臓、結腸及び乳房の癌を含むがこれらに限定されない）の診断を支援する方法であって、個体由来の生物学的試料中のＫＩＤ３１の発現を測定することからなる方法である。一部の実施形態において、ＫＩＤ３１の発現は、抗ＫＩＤ３１抗体を使用して測定される。一部の実施形態において、この方法は、細胞からのＫＩＤ３１の発現量を検出することである。癌から放出されたＫＩＤ３１は、ＫＩＤ３１又はその一部の上昇した量が体液（例えば身体、唾液又は腸の粘膜の分泌物）中で検出可能となることに寄与する場合がある。
【００３２】
更に別の態様において、本発明は、癌細胞の成長を低減するのに十分なＫＩＤ３１に結合する抗体の有効量を投与することにより癌を治療する方法である。一部の実施形態において、抗体は抗ＫＩＤ３１抗体である。一部の実施形態において、癌細胞は副腎腫瘍、エイズ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞腫、膀胱癌（扁平上皮癌及び移行上皮癌）、骨癌（アダマンチノーム、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳及び脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈小体腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、色素嫌性腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫、骨外性粘液様軟骨肉腫、線維形成性不完全骨（ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ  ｏｓｓｉｕｍ）、骨の線維性形成異常、胆嚢及び胆管の癌、妊娠性栄養膜疾患、生殖細胞腫瘍、頭部及び頚部の癌、島細胞肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、肝癌（胚芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌線腺腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌腫、甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後ブドウ膜黒色腫、希少な血液学的障害、腎転移癌、杆状腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌及び子宮癌（頸癌、内膜癌及び平滑筋腫）を含むがこれらに限定されない群から選択される。特定の好ましい実施形態において、癌細胞は、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肺癌、肉腫、腎転移癌、甲状腺転移癌及び明細胞癌を含むがこれらに限定されない固形腫瘍の群から選択される。
【００３３】
更に別の態様において、本発明は、癌を有する個体における転移の発生を遅延させる方法であって、ＫＩＤ３１に特異的に結合する抗体のファミリーの少なくとも１つの有効量を投与することからなる方法である。一実施形態において、抗体は抗ＫＩＤ３１抗体である。別の態様において、本発明は、方法ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は個体内における癌細胞の成長及び／又は増殖を抑制する方法であって、細胞培養物又は試料又は個体に化学療法剤と会合（連結を含む）した抗ＫＩＤ３１抗体を含む組成物の有効量を投与することからなる方法である。
【００３４】
更に別の態様において、本発明は、ＫＩＤ３１に特異的に結合する抗体のファミリーの少なくとも１つのメンバーの有効量を個体に投与することにより個体の癌細胞に治療薬を送達する方法である。別の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体は、別の治療薬と組み合わせて（連結を含む）個体に送達される。
【００３５】
一部の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体は、本明細書で命名した抗体から誘導したヒト化抗体（必ずではないが一般的には抗体の部分的又は完全なＣＤＲを１つ以上含む）である。一部の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体は、命名した抗体の特性を１つ以上有するヒト化抗体である。一部の実施形態において、化学療法剤（例えば毒素又は放射性分子）は癌細胞に送達される（内在化する）。一部の実施形態において、薬剤はサポリンである。
【００３６】
別の態様において、本発明は、個体における癌を治療する方法であって、個体に化学療法剤と会合（連結を含む）した抗ＫＩＤ３１抗体を含む組成物の有効量を投与することからなる方法である。
【００３７】
本発明は更に、原形質シグナリング相手とのＫＩＤ３１の会合を、増強又は低減の何れかによりモジュレートする方法を提供する。原形質シグナリング相手とのＫＩＤ３１の会合は、ＫＩＤ３１へのシグナリング相手の結合をモジュレートする薬剤に細胞表面に呈示されたＫＩＤ３１分子を接触させることにより影響を与える可能性がある。ＫＩＤ３１のその結合及び／又はシグナリング相手との会合をブロック又は低減する薬剤は、ＫＩＤ３１媒介の炎症又は免疫応答に関与する生物学的又は病理学的な過程をモジュレートするために使用できる。この作用が関与する病理学的過程には、腫瘍関連細胞成長が含まれる。
【００３８】
薬剤は、結合パートナー、例えば抗ＫＩＤ３１受容体抗体とのＫＩＤ３１の会合をブロック、低減、増強又は他の態様でモジュレートするその能力について試験することができる。詳細には、結合パートナー及び被験薬剤と共にＫＩＤ３１相互作用部位を含むペプチドを（一般的には完全な生細胞に存在するネイティブなコンホーメーションとして）インキュベートし、ＫＩＤ３１ペプチドへの結合パートナーの結合を被験薬剤が低減又は増強するかどうか測定することにより、このような相互作用をモジュレートする能力について薬剤を試験することができる。
【００３９】
ＫＩＤ３１機能のアゴニスト、拮抗剤及びその他のモジュレーターは、本発明の適用範囲に明示的に含まれる。これらのアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターは、ＫＩＤ３１に１つ以上の抗原決定部位を含むか、このような部位のフラグメント、このような部位の変異体、又はこのような部位のペプチドミメティックの１つ以上を含むポリペプチドである。これらのアゴニスト、拮抗剤及及びＫＩＤ３１調節化合物は、線形又は環化された形態で提供され、場合により一般的には天然でない少なくとも１つのアミノ酸残基、又は少なくとも１つのアミド同配体を含む。これらの化合物はグリコシル化される場合がある。本発明のＫＩＤ３１機能のアゴニスト、拮抗剤及びその他のモジュレーターは、望ましくは抗体の参考として上で説明した全ての実施形態及び方法において使用される。
【００４０】
本発明のその他の態様は、本明細書において同定されＫＩＤ３１と称される新規の抗原に関する。この抗原は、免疫原としての使用に、及び種々の研究、診断及び治療の目的に好適である。
【００４１】
特定の態様において、本発明は、（ｉ）個体から得た血液又は組織の試料中のＫＩＤ３１の存在を試験する手順；（ｉｉ）正常（非疾患）血液又は組織の試料と比べて増量したＫＩＤ３１マーカーを前記試料が有するかどうか検出する手順；及び（ｉｉｉ）疾患に関して、増量した前記マーカーを陽性診断に相関させるか、又は増量した前記マーカーの非存在を陰性診断に相関させる手順からなる、個体における疾患の診断を支援する方法である。特定の実施形態において、マーカーは抗ＫＩＤ３１抗体を使用して検出される。特定の実施形態において、この方法は、放射性核種画像化、フローサイトメトリー及び免疫組織化学よりなる群から選択される技法により行われる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４２】
（発明の詳細な説明）
本発明は、例えば肺、腎臓、膵臓、卵巣及び結腸癌を含むがこれらに限定されない種々の組織型の癌性細胞に発現される、本明細書においてＫＩＤ３１と称する既知の抗原、カルボキシペプチダーゼＭを提供する。更に、本発明は、ＫＩＤ３１に結合するモノクローナル抗体及びポリペプチド、並びにＫＩＤ３１の発現及び／又は過剰発現に関連する種々の疾患及びヒトの癌を診断及び治療するためにこれらの抗体及びポリペプチドを作製及び使用する方法を提供する。
【００４３】
（Ｉ．一般的技法）
本発明の実施では、特段の指示がない限り、当該技術分野に含まれる分子生物学（組み換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来の技法を使用する。このような技法は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （Ｍ．  Ｊ．  Ｇａｉｔ，  ｅｄ．，  １９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ  （Ｊ．  Ｅ．  Ｃｅｌｌｉｅｓ，  ｅｄ．，  １９９８）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｒ．  Ｉ．  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，  ｅｄ．，  １９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｊ．  Ｐ．  Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｅ．  Ｒｏｂｅｒｔｓ，  １９９８）  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  （Ａ．  Ｄｏｙｌｅ，  Ｊ．  Ｂ．  Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，  ａｎｄ  Ｄ，  Ｇ．  Ｎｅｗｅｌｌ，  ｅｄｓ．，  １９９３−８）  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｄ．  Ｍ．  Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．  Ｃ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，  ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  （Ｊ．  Ｍ．  Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｐ．  Ｃａｌｏｓ，  ｅｄｓ．，  １９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｆ．  Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，  １９８７）；ＰＣＲ：  Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，  （Ｍｕｌｌｉｓら、ｅｄｓ．，  １９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｊ．  Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎら、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  １９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｃ．  Ａ．  Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｔｒａｖｅｒｓ，  １９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｐ．  Ｆｉｎｃｈ，  １９９７）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｄ．  Ｃａｔｔｙ．，  ｅｄ．，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８−１９８９）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｐ．  Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．  Ｄｅａｎ，  ｅｄｓ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ  （Ｅ．  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．  Ｌａｎｅ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｍ．  Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｄ．  Ｃａｐｒａ，  ｅｄｓ．，  Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  １９９５）；及びＣａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  （Ｖ．  Ｔ．  ＤｅＶｉｔａら、ｅｄｓ．，  Ｊ．  Ｂ．  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｒｙ，  １９９３）において詳細に説明されている。
【００４４】
（ＩＩ．定義）
「ＫＩＤ３１」とは、本発明の抗体が指向する相手となる約６０ｋＤａ〜８０ｋＤａの分子量を有するポリペプチド抗原、カルボキシペプチダーゼＭを指す。ＫＩＤ３１は抗ＫＩＤ３１抗体により結合され、皮膚及び膵管及び数種の型の癌に存在する細胞表面タンパク質である。この抗原は、複数の異なるエピトープを有する場合がある。現在、ＫＩＤ３１は特定の癌細胞中において、その正常組織相応物よりも過剰に発現される場合があると考えられている。
【００４５】
機能のアゴニスト、拮抗剤及びその他のモジュレーターは、本発明の適用範囲に明示的に含まれる。これらのアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターは、ＫＩＤ３１に１つ以上の抗原決定部位を含むか、このような部位のフラグメント、このような部位の変異体、又はこのような部位のペプチドミメティックの１つ以上を含むポリペプチドである。これらのアゴニスト、拮抗剤及びＫＩＤ３１調節化合物は、線状又は環化された形態で提供され、場合により一般的には天然でない少なくとも１つのアミノ酸残基、又は少なくとも１つのアミド同配体を含む。これらの化合物はグリコシル化される場合がある。
【００４６】
より詳細には、本明細書で使用される「ＫＩＤ３１モジュレーター」という用語は、（１）ヒトＫＩＤ３１とそのネイティブリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体の間の相互作用を破壊又はブロックすることができ；（２）ヒトＫＩＤ３１及びそのネイティブのリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体に結合することができ；（３）ヒトＫＩＤ３１及びそのネイティブのリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体に結合することができる抗体を生じさせることに使用できる抗原部位を含有し；（４）ヒトＫＩＤ３１及びそのネイティブのリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体に結合することができる抗体のスクリーニングに使用できる抗原部位を含有し；（５）ヒトＫＩＤ３１とそのネイティブのリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体の間の相互作用を破壊又はブロックすることができる抗体を生じさせることに使用できる抗原部位を含有し；（６）ヒトＫＩＤ３１とそのネイティブのリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体の間の相互作用を破壊又はブロックすることができる抗体のスクリーニングに使用できる抗原部位を含有する、何れかの化合物として定義される。ＫＩＤ３１モジュレーターは、その活性が正常なＫＩＤ３１の生物学的活性を増強するか抑制するかに応じて、それぞれ「ＫＩＤ３１アゴニスト」である場合もあれば、「ＫＩＤ３１拮抗剤」である場合もある。
【００４７】
ＫＩＤ３１のアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターには、ＫＩＤ３１の変異体、ＫＩＤ３１のペプチド拮抗剤、ペプチドミメティック及び小分子、抗ＫＩＤ３１抗体及び免疫グロブリン変異体、ヒトＫＩＤ３１のアミノ酸変異体（例えばアミノ酸置換、欠失及び付加変異体）、又はこれらの何れかの組み合わせ及びキメラ免疫グロブリンが含まれる。本発明のＫＩＤ３１アゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターは、ヒトＫＩＤ３１のそのネイティブリガンド又は抗ＫＩＤ３１抗体への結合に関与するＫＩＤ３１ドメインを本発明者等が同定したことに基づいている。即ち、本発明は、ヒトＫＩＤ３１の抗ＫＩＤ３１結合ドメインの１つ以上を複製又は模倣する分子構造を有するＫＩＤ３１のアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターを提供する。
【００４８】
本明細書で使用される「ＫＩＤ３１変異体」とは、アミノ酸置換、欠失及び付加の変異体又はその何れかの組み合わせを含むヒトＫＩＤ３１の何れかのアミノ酸変異体を指す。この定義は、キメラ分子、例えばヒトＫＩＤ３１／非ヒトキメラ及びその他のハイブリッド分子を包含する。更にこの定義には、分子の変異体又はハイブリッドの領域を含むＫＩＤ３１変異体分子の何れかのフラグメントも含まれる。
【００４９】
「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する抗原認識部位の少なくとも１つを介して標的、例えば炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書で使用されるこの用語は、未損傷のポリクローナル又はモノクローナル抗体のみならず、そのフラグメント（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、１本鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、天然の変異体、必要な特異性の抗原認識部位を有する抗体タンパク質を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子のその他何れかの修飾された配置も包含する。
【００５０】
「モノクローナル抗体」とは、モノクローナル抗体が抗原の選択的結合に関与する（天然の及び非天然の）アミノ酸よりなる場合の均質な抗体集団を指す。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向している。「モノクローナル抗体」という用語は、未損傷のモノクローナル抗体及び完全長のモノクローナル抗体のみならず、そのフラグメント（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、１本鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、及び必要な特異性及び抗原に結合する能力の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子のその他何れかの修飾された配置も包含する。抗体の原料又はそれを作製する態様（例えばハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え体発現、トランスジェニック動物等）にリガンドとして限定する意図はない。この用語には、「抗体」の定義に関して上で説明した全体としての免疫グロブリン並びにフラグメント等が含まれる。
【００５１】
「ヒト化」抗体とは、非ヒト種の免疫グロブリンから誘導した抗原結合部位、及びヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づく分子の残余免疫グロブリン構造を有する、組み換え技法により一般的に調製されるキメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常領域に融合した完全な可変ドメイン又は可変ドメインの適切なフレームワーク内にグラフトした相補性決定領域（ＣＤＲ）のみの何れかを含む場合がある。抗原結合部位は、野生型である場合もあれば、１つ以上のアミノ酸置換で修飾される場合もある。これによりヒト個体内の免疫原としての定常領域が排除されるが、外来の可変領域に対する免疫応答の可能性は残存する（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，  Ａ．  Ｆ．ら、（１９８９）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６：  ４２２０−４２２４）。別の手法では、ヒト誘導定常領域を提供することのみならず、ヒトの型に可能な限り近似してそれらを再成形（ｒｅｓｈａｐｅ）できるように可変領域を修飾することにも着目している。重鎖及び軽鎖の両方の可変領域は、所定の種において比較的保存されており、相補性決定領域（ＣＤＲ）のスカホールドを与えると推定される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）でフランキングされた、目的の抗原に応答して変動し、結合能力を決定する３つのＣＤＲを含有することが知られている。特定の抗原に関して非ヒト抗体を調製する場合、可変領域は、修飾するヒト抗体に存在するＦＲ上の非ヒト抗体から誘導されるＣＤＲをグラフトすることにより、「再成形」又は「ヒト化」することができる。種々の抗体へのこの手法の適用については、Ｓａｔｏ，  Ｋ．ら、（１９９３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：  ８５１−８５６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，  Ｌ．ら、（１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：  ３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，  Ｍ．ら、（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：  １５３４−１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｃ．  Ａ．ら、（１９９１）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：  ７７３−３７８３；Ｍａｅｄａ  Ｈ．ら、（１９９１）  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：  １２４−１３４；Ｇｏｒｍａｎ，  Ｓ．  Ｄ．ら、（１９９１）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：  ４１８１−４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，  Ｐ．  Ｒ．ら、（１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：  ２６６−２７１；Ｃｏ，  Ｍ．  Ｓ．ら、（１９９１）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：  ２８６９−２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，  Ｐ．ら、（１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：  ４２８５−４２８９；及びＣｏ，  Ｍ．  Ｓ．ら、（１９９２）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：  １１４９−１１５４において報告されている。一部の実施形態において、ヒト化抗体は全てのＣＤＲ配列（例えばマウス抗体由来の６個全てのＣＤＲを含有するヒト化マウス抗体）を保持している。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体由来の１つ以上のＣＤＲ「から誘導された」１つ以上のＣＤＲとも称される、元の抗体に関して改変されているＣＤＲを１つ以上（１、２、３、４、５、６個）有する。
【００５２】
抗体又はポリペプチドに「特異的に結合」又は「優先的に結合」（本明細書で交換可能に使用される）するエピトープは、当該技術分野で十分理解されている用語であり、このような特異的又は優先的な結合を測定する方法も、当該技術分野でよく知られている。分子は、それが特定の細胞又は物質に対して、別の細胞又は物質に対するよりも、より頻繁に、より急速に、より長い時間にわたり及び／又はより大きな親和性で反応又は会合する場合に「特異的結合」又は「優先的結合」を示すとされる。抗体は、それが標的に対し、他の物質に対するよりも、より大きな親和性、結合力で、より容易に、及び／又はより長い時間にわたり結合する場合に「特異的に結合」又は「優先的に結合」する。例えば、ＫＩＤ３１エピトープに特異的又は優先的に結合する抗体は、そのＫＩＤ３１エピトープへの結合が、他のＫＩＤ３１エピトープ又は非ＫＩＤ３１エピトープへの結合よりも、より大きな親和性、結合力で、より容易に、及び／又はより長い時間にわたり行われる抗体である。更にこの定義の解釈では、例えば、第１の標的に特異的又は優先的に結合する抗体（又は部分又はエピトープ）は、第２の標的に特異的又は優先的に結合する場合もあれば、結合しない場合もあることが理解される。即ち、「特異的結合」又は「優先的結合」は、排他的結合を（包含するが）必ずしも必要としない。一般的に、必ずではないが、結合の言及は優先的結合を意味する。
【００５３】
エピトープの存在に言及する場合の「免疫学的活性を有する」又は「免疫学的活性を維持する」という用語は、異なる条件下における、例えばエピトープが還元又は変性の条件に付された後の、エピトープに結合する抗体（例えば抗ＫＩＤ３１抗体）の能力を指す。
【００５４】
抗ＫＩＤ３１抗体は種々の生物学的機能に関わっており、例えばＫＩＤ３１（例えば、肺癌、腎臓癌、膵臓癌、卵巣癌、及び結腸癌の細胞を含むがこれらに限定されない癌細胞におけるＫＩＤ３１）に結合する能力；ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで生存細胞の表面に曝露されたＫＩＤ３１の部分に結合する能力；ＫＩＤ３１を発現している癌細胞（例えば、肺癌、腎臓癌、膵臓癌、卵巣癌、及び結腸癌の細胞）に化学療法剤を送達する能力；ＫＩＤ３１を発現している癌細胞内に治療薬又は検出可能なマーカーを送達する能力が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で考察される本発明のポリペプチド（抗体を含む）は、これらの特徴の何れか１つ以上を有する場合がある。
【００５５】
「抗ＫＩＤ３１等価抗体」又は「抗ＫＩＤ３１等価ポリペプチド」とは、例えば結合特異性のような抗ＫＩＤ３１抗体が関わっている生物学的機能を１つ以上有する抗体又はポリペプチドを指す。
【００５６】
本明細書で使用される「薬剤」とは、生物学的、薬学的又は化学的化合物を指す。具体例には、単物質又は複合体の有機又は無機の分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素又は化学療法化合物が含まれるが、これらに限定されない。種々の化合物、例えば小分子及びオリゴマー（例えばオリゴペプチド及びオリゴヌクレオチド）及び種々のコア構造に基づく合成有機化合物を合成することができる。加えて、種々の天然の原料、例えば植物性又は動物性の抽出物等がスクリーニングのための化合物を提供することができる。本発明の薬剤の構造的性質については制約がないことは、当業者は容易に認識することができる。
【００５７】
本発明の方法において使用される薬剤は、無作為に選択するか、又は合理的に選択若しくは設計することができる。本明細書で使用される薬剤とは、ＫＩＤ３１のそのネイティブの結合パートナー又は既知の抗体との会合に関与する特定の配列を考慮することなく薬剤が無作為に選択される場合に、無作為に選択されると称する。無作為に選択される薬剤の例には、化学ライブラリ又はペプチドコンビナトリアルライブラリの使用がある。
【００５８】
本明細書で使用される薬剤とは、薬剤の作用との関連において標的部位の配列及び／又はそのコンホーメーションを考慮する非無作為を基本に薬剤が選択される場合に、合理的に選択又は設計されると称する。抗ＫＩＤ３１薬剤に関して、現時点では、抗体を培養する対象となるＫＩＤ３１には少なくとも３つのエピトープが存在し、従ってＫＩＤ３１と抗ＫＩＤ３１の相互作用をブロックする薬剤の作用部位が少なくとも３つ存在すると考えられている。本発明は又、ＫＩＤ３１とそのネイティブの結合パートナーの間の相互作用の部位において作用する薬剤も包含するが、他のリガンド及びその活性ＫＩＤ３１相互作用部位も又、現時点で既知であるか後に同定されるかにかかわらず、本発明の適用範囲に包含されるものとする。薬剤は、受容体／リガンド及び／又はＫＩＤ３１／抗ＫＩＤ３１抗体の複合体の接触部位を構成するペプチド配列を利用することにより、合理的に選択されるか合理的に設計することができる。例えば、合理的に選択されたペプチド薬剤は、そのアミノ酸配列が、ネイティブの環境において生存細胞の表面に曝露されている状態でＫＩＤ３１に発現しているエピトープと同一であるペプチドであってもよい。このような薬剤は、抗ＫＩＤ３１抗体又はネイティブのリガンドへの結合により、所望に応じて、ＫＩＤ３１との抗ＫＩＤ３１抗体の会合、又はＫＩＤ３１のそのネイティブのリガンドとの会合を低減又はブロックする。
【００５９】
本明細書で使用される、抗体に関する「標識された」という用語は、検出可能な物質、例えば放射性物質又は蛍光団（例えばフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）又はフィコエリスリン（ＰＥ））を抗体にカップリング（即ち物理的に連結）することによる抗体の直接の標識、並びに検出可能な物質との反応性によるプローブ又は抗体の間接的な標識を包含するものとして意図される。
【００６０】
本明細書で使用される、抗体に関する「会合」という用語には、薬剤（例えば化学療法剤）への共有結合による及び非共有結合による連結又は結合が含まれる。抗体が結合し、その内部では薬剤は抗体が結合するものと同じ癌細胞にターゲティングされないか、又は薬剤の力価が低減しないように生理学的条件下において抗体及び薬剤が実質的に解離しない、癌細胞への薬剤の局在化を抗体が指向できるように、抗体は直接又は共通のプラットホームへの連結を介して間接的に薬剤（例えば化学療法剤）と会合することができる。
【００６１】
「生物学的試料」は、個体から得た種々の試料の型を包含し、診断又はモニタリングの試験において使用できる。この定義に包含されるものとしては、唾液、血液及びその他の生体起源の液体試料、固体組織試料、例えば生検標本又は組織培養物又はそれらから誘導される細胞、及びそれらの子孫、例えば癌を有していることが疑われる個体から採取した組織試料から、好ましい実施形態においては卵巣、肺、前立腺、膵臓、結腸及び乳房の組織から得た細胞がある。この定義には又、取得後に何れかの方法において、例えば試薬による処理、可溶化、タンパク質又はポリヌクレオチドのような特定の成分のリッチ化、又は切片化目的のための半固体又は固体のマトリックス内への包埋により操作された試料も含まれる。「生物学的試料」という用語は、臨床試料を包含し、更に培養中の細胞、細胞上澄み、細胞溶解物、血清、血漿、生体液及び組織試料も含む。
【００６２】
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチドインサートの取り込みのためのベクターのレシピエントであってもよく、又はレシピエントとなっている個々の細胞又は細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は天然、偶発又は意図的な突然変異により元の親細胞と必ずしも完全に同一（形態学的又はゲノムＤＮＡ補体において）ではない場合もある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドでｉｎ  ｖｉｖｏにおいてトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【００６３】
本明細書において「転移の発生を遅滞させる」とは、転移の発生を変化、遮蔽、緩徐化、遅延、安定化、及び／又は延期させることを意味する。この遅滞は、癌の病歴及び／又は治療する個体に応じて、種々の長さの時間であってよい。当業者のよく知る通り、十分又は有意な遅滞は、事実上、個体が転移を発症しないという点において予防を包含してもよい。
【００６４】
一実施形態において、医薬組成物の「有効量」とは、有益又は所望の結果、例えば腫瘍（癌に関しては、例えば乳癌又は前立腺癌）の大きさの縮小、癌細胞の成長の遅延、転移の発生の遅滞、疾患に起因する症状の低減、疾患に罹患した者のクオリティオブライフの向上、疾患を治療するために必要な他の医薬の用量の低減、ターゲティング及び／又は内在化等による別の医薬の作用の増強、疾患の進行の遅滞、及び／又は個体の生存の延長等を起こすのに十分な量である。有効量は１回以上の投与において投与することができる。本発明において、薬剤、化合物又は医薬組成物の有効量は、直接又は間接的に、癌細胞の増殖を低減する（又は破壊する）のに、及び癌細胞の転移の発生又は成長を低減及び／又は遅滞させるのに十分な量である。一部の実施形態において、薬剤、化合物又は医薬組成物の有効量は、別の薬剤、化合物又は医薬組成物と組み合わせて達成される場合もあれば、達成されない場合もある。即ち、「有効量」は、１つ以上の化学療法剤を投与するという意味において考えられる場合があり、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と組み合わせた場合に所望の結果が達成されるかその可能性がある場合に有効量にて与えられると考えられる場合がある。個体の要求は変動するものの、各成分の有効量の最適範囲の決定は、当業者のよく知る通りである。一般的な用量は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。好ましい用量は、１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。最も好ましい用量は、１０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を含む。
【００６５】
本明細書で使用される核酸分子又は薬剤、抗体、組成物又は細胞等は、その核酸分子、薬剤、抗体、組成物又は細胞等がその起源原料に由来する夾雑する核酸分子、抗体、薬剤、組成物又は細胞等から実質的に分離されている場合に「単離された」と称する。
【００６６】
「個体」は脊椎動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトである。哺乳類には、牧場動物、競技用動物、ペット、霊長類、マウス及びラットが含まれるが、これらに限定されない。
【００６７】
「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、何れかの長さのアミノ酸のポリマーを指すものとして本明細書で交換可能に使用される。ポリマーは直鎖又は分枝鎖である場合もあれば、修飾されたアミノ酸を含む場合もあり、非アミノ酸が介在する場合もある。これらの用語は更に、天然に又は介入により、例えばジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ホスホリル化により、又は標識化合物とのコンジュゲート形成のようなその他何れかの操作又は修飾により、修飾されているアミノ酸ポリマーを包含する。この定義に含まれるものとしては更に、例えば、アミノ酸の１つ以上の類縁体（例えば非天然のアミノ酸等）並びに当該技術分野で既知のその他の修飾を含有するポリペプチドがある。本発明のポリペプチドは抗体を基にしているため、ポリペプチドは１本鎖又は会合した鎖として存在できると理解される。
【００６８】
本発明の適用範囲に包含されるものとしては更に、本明細書に記載したＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーター（抗ＫＩＤ３１抗体を含む）のペプチドミメティックもある。このようなペプチドミメティックには、少なくとも１つのアミノ酸残基が一般的には天然でないアミノ酸残基、例えばアミノ酸のＤ異性体又はアミノ酸のＮアルキル化物質種で置換されているペプチドが含まれる。他の実施形態において、ペプチドミメティックは、アミド同配体でＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーター中の少なくとも１つのアミド結合（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）を置き換えることにより構築される。好適なアミド同配体には、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎ＝１又は２）、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（Ｅ又はＺ）、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＮ）−ＮＨ−、−Ｃ（ＯＨ）−ＣＨ２−及び−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−が含まれる。アミド同配体との置き換えのための好適な候補であるＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターにおけるアミド結合には、ＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターの治療を意図する対象の内因性のエステラーゼ又はプロテアーゼにより加水分解される結合が含まれる。
【００６９】
本明細書で使用される「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（即ち夾雑物を含有しない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、より好ましくは少なくとも９８％純粋、より好ましくは少なくとも９９％純粋、又はそれよりも高純度の物質を指す。
【００７０】
「毒素」とは、細胞内部において有害応答を起こす何れかの物質を指す。例えば、癌細胞に指向された毒素は、癌細胞に対して有害な、場合により害毒となる作用を有すると思われる。毒素の例には、放射性同位体、カリシアマイシン及びメイタンシノイド類が含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
本明細書で使用される「治療」又は「治療する」とは、有益又は所望の結果、例えば好ましくは臨床結果を得るための手法である。本発明において、有益又は所望の臨床結果には、例えば、癌細胞の増殖の低減（又は破壊）、癌に存在する癌細胞の転移の低減、腫瘍の大きさの縮小、疾患に起因する症状の低減、疾患に罹患した者のクオリティオブライフの向上、疾患の治療に必要なその他の医薬の用量の低減、疾患の進行の遅滞、及び／又は個体の生存の延長の１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。
【００７２】
（ＩＩＩ．抗体及びポリペプチドの作製方法）
モノクローナル抗体の作製方法は、当該技術分野で知られている。使用される場合がある１つの方法には、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：  ４９５−４９７  （１９７５）の方法又はその変法がある。一般的に、モノクローナル抗体は、非ヒト種、例えばマウスにおいて発現される。一般的に、マウス又はラットが免疫化に使用されるが、その他の動物も使用される場合がある。抗体は、ヒトＫＩＤ３１を含有する細胞、細胞抽出物又はタンパク質調製物の免疫原性量でマウスを免疫化することにより産生される。免疫原は、一次細胞、培養細胞系統、癌細胞、核酸又は組織であってもよいが、これらに限定されない。一実施形態においては、ヒト胎児腎上皮細胞が使用される。別の実施形態においては、ヒト膀胱又は膵臓の先祖細胞が使用される。ヒト胎児腎臓細胞を単離し培養する方法は、実施例１で詳細に記述する。免疫化に使用される細胞、例えばヒト胎児腎臓、膀胱細胞又はヒト膵臓先祖細胞は、免疫原として使用する前の一定時間（少なくとも２４時間）にわたり培養される場合がある。細胞（例えばヒト胎児腎臓、膀胱細胞又はヒト膵臓先祖細胞）はそれ自体として、又は非変性アジュバント、例えばＲｉｂｉと組み合わせて免疫原として使用される場合がある。一般的に、細胞は、免疫原として使用する際には損傷のまま、好ましくは生存状態で保持する必要がある。未損傷の細胞は、破壊された細胞よりも良好に、抗原が免疫化動物により検出できるようになる場合がある。変性又は過酷処理用のアジュバント、例えばフロイントのアジュバントを使用すると、ヒト胎児腎臓又はその他の細胞を破壊する場合があり、従って推奨されない。免疫原は複数回、周期的間隔において、例えば週２回、週１回投与される場合もあれば、動物における（例えば組織組み換え体における）生存性を維持するような態様で投与される場合もある。実施例２は、抗ＫＩＤ３１抗体を生成するために使用される方法を説明しており、ＫＩＤ３１に結合するその他のモノクローナル抗体を生成するために使用される場合がある。
【００７３】
一実施形態において、ＫＩＤ３１に結合するモノクローナル抗体は、免疫原としてＫＩＤ３１を過剰発現する宿主細胞を使用することにより得る。このような細胞には、例えばヒト胎児腎細胞及びヒト結腸癌細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【００７４】
抗体の応答をモニタリングするには、少量の生物学的試料（例えば血液）を動物から採取し、免疫原に対する抗体力価を試験する場合がある。脾臓及び／又は数種の大型のリンパ節を摘出し、解離させて単細胞とすることもできる。所望により、脾細胞は、細胞懸濁液を抗原でコーティングしたプレート又はウェルに適用することにより、（非特異的付着細胞の除去後に）スクリーニングされる場合がある。抗原に特異的なＢ細胞発現膜結合免疫グロブリンは、プレートに結合し、懸濁液の残余と共に洗浄除去されることはない。得られるＢ細胞又は解離した脾細胞は次に、ミエローマ細胞（例えばＸ６４−Ａｇ８．６５３及びＣｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ＣｅｎｔｅｒのＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［米国カリフォルニア州サンディエゴ］より入手できるもの）と融合させることができる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を使用して、脾細胞又はリンパ球をミエローマ細胞と融合させることにより、ハイブリドーマを形成する場合もある。次にハイブリドーマは選択培地（例えば、「ＨＡＴ培地」としても知られる、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン培地）中で培養される。得られたハイブリドーマは、次に限界希釈によりプレーティングされ、ＦＡＣＳ又は免疫組織化学（ＩＨＣスクリーニング）を使用して免疫原（例えばヒト胎児腎細胞表面、癌細胞系統表面、Ａｇ−ＫＩＤ３１、胎児膀胱切片等）に特異的に結合する抗体の産生について試験される。選択されたモノクローナル抗体分泌ハイブリドーマは、次にｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えば組織培養ビン又は中空糸反応器）又はｉｎ  ｖｉｖｏ（例えばマウス腹水）で培養される。実施例２及び３は、抗ＫＩＤ３１抗体を得て、精製し、スクリーニングするために利用される方法に関する更に詳細な説明を提供する。
【００７５】
細胞融合の技法の別の代替法として、ＥＢＶ不朽化Ｂ細胞を使用して、本発明のモノクローナル抗体を産生する場合がある。ハイブリドーマは増殖され、所望によりサブクローニングされた上で、上澄みが従来の試験法（例えばＦＡＣＳ、ＩＨＣ、ラジオイムノアッセイ、酵素免疫試験、蛍光免疫試験等）により抗免疫原活性に関して試験される。
【００７６】
別の代替法においては、モノクローナル抗体抗ＫＩＤ３１及びその他何れかの等価な抗体を配列決定し、当該技術分野で知られる何れかの手段（例えばヒト化、トランスジェニックマウスを使用した完全ヒト抗体の産生、ファージディスプレイ技術等）によって組み換えにより産生することができる。一実施形態において、抗ＫＩＤ３１モノクローナル抗体を配列決定し、次にポリヌクレオチド配列を発現又は増殖用のベクター内にクローニングする。目的の抗体をコーティングする配列が宿主細胞内のベクター中に維持される場合があり、その後宿主細胞を将来の使用のために増殖させ、凍結させることができる。
【００７７】
モノクローナル抗体ＫＩＤ３１及びその他何れかの等価な抗体のポリヌクレオチド配列を遺伝子操作に使用することにより、「ヒト化」抗体を生成したり、親和性又は他の抗体の特徴を向上させる場合がある。抗体のヒト化における一般的な原理は抗体の抗原結合部分の基本配列を保持しつつ、ヒト抗体配列との抗体の非ヒト残余部の交換を行うことを包含する。モノクローナル抗体をヒト化するためには４つの一般的手順が存在する。これらは、（１）開始抗体軽鎖及び重鎖可変ドメインのヌクレオチド及び予測アミノ酸配列を決定する手順、（２）ヒト化抗体を設計する手順、即ちヒト化過程においてどの抗体フレームワーク領域を使用すべきか決定する手順、（３）実際のヒト化方法／技法、及び（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；第５，８０７，７１５号；第５，８６６，６９２号及び第６，３３１，４１５号を参照されたい。
【００７８】
非ヒト免疫グロブリンから誘導された抗原結合部位を含む幾つかの「ヒト化」抗体分子が報告されており、例えばげっ歯類又は修飾げっ歯類Ｖ領域を有するキメラ抗体、及びヒト定常ドメインに融合したその関連の相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：  ２９３−２９９  （１９９１），  Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：  ４２２０−４２２４  （１９８９），Ｓｈａｗら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３８：  ４５３４−４５３８  （１９８７）、及びＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４７：  ３５７７−３５８３  （１９８７）を参照されたい。その他の参考文献では、適切なヒト抗体定常ドメインとの融合の前にヒトサポートフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトさせたげっ歯類ＣＤＲについて記載している。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：  ３２３−３２７  （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：  １５３４−１５３６  （１９８８）及びＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：  ５２２−５２５  （１９８６）を参照されたい。別の参考文献では、組み換え作成されたげっ歯類フレームワーク領域によりサポートされたげっ歯類ＣＤＲについて記載している。例えば、欧州特許公開第５１９，５９６号を参照されたい。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療用途の持続時間及び有効性を制限するげっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望ましくない免疫学的応答を最小限にするように設計されている。同様に利用される場合がある抗体をヒト化するその他の方法については、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９：  ２４７１−２４７６  （１９９１）及び米国特許第６，１８０，３７７号；第６，０５４，２９７号；第５，９９７，８６７号及び第５，８６６，６９２号に開示されている。
【００７９】
本発明は又、ＫＩＤ３１のような本発明の抗体の１本鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を包含する。１本鎖可変領域フラグメントは短い連結ペプチドを使用して軽鎖及び／又は重鎖の可変領域を連結することにより作製する。Ｂｉｒｄら、（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：  ４２３−４２６は１つの可変領域のカルボキシ末端と別の可変領域のアミノ末端の間の約３．５ｎｍを架橋する連結ペプチドの例を記載している。他の配列のリンカーも設計され使用されている（Ｂｉｒｄら、（１９８８））。リンカーも同様に、薬剤の連結又は固体支持体の連結など、付加的機能のために修飾できる。１本鎖変異体は組み換え又は合成により産生することができる。ｓｃＦｖの合成による産生においては、自動合成装置を使用できる。ｓｃＦｖの組み換えによる産生においては、ｓｃＦｖをコーティングするポリヌクレオチドを含有する好適なプラスミドを真核生物、例えばコウボ、植物、昆虫又は哺乳類細胞、又は原核生物、例えばＥ．ｃｏｌｉのような好適な宿主細胞内に導入することができる。目的のｓｃＦｖをコーティングするポリヌクレオチドはポリヌクレオチドのライゲーションのような日常的な操作により作製できる。得られたｓｃＦｖは標準的なタンパク質精製技法を使用して単離することができる。
【００８０】
本発明には、その特性を大きく損なわない抗体の機能的等価物及びポリペプチドを含めたＫＩＤ３１アゴニスト、拮抗剤、モジュレーター及び抗体の修飾、及び増強又は低減された活性を有する変異体が含まれる。ポリペプチドの修飾は、当該技術分野における日常的な慣行であり、本明細書において詳細に説明する必要はない。修飾されたポリペプチドの例には、アミノ酸残基の保存的な置換、機能的活性を大きく悪変させないアミノ酸の１つ以上の欠失又は付加、又は化学的類縁体の使用を行ったポリペプチドが含まれる。相互に保存的に置換できるアミノ酸残基には例えば、グリシン／アラニン；バリン／イソロイシン／ロイシン；アスパラギン／グルタミン；アスパラギン酸／グルタミン酸；セリン／スレオニン；リジン／アルギニン；及びフェニルアラニン／チロシンが含まれる。これらのポリペプチドには又、グリコシル化及び非グリコシル化されたポリペプチド、並びに異なる糖によるグリコシル化、アセチル化及びホスホリル化のようなその他の翻訳後の修飾を有するポリペプチドが含まれる。好ましくは、アミノ酸の置換は保存的であり、即ち置換されたアミノ酸は元のアミノ酸と同様の化学的特性を有する。このような保存的置換は当該技術分野で知られており、上に例が示されている。アミノ酸の修飾は、１つ以上のアミノ酸の変化又は修飾から可変領域のような領域の完全な再設計に渡ってもよい。可変領域の変化は、結合親和性及び／又は特異性を改変する可能性がある。その他の修飾方法には、当該技術分野で知られるカップリング技法、例えば酵素的手段、酸化的置換及びキレート化の使用が含まれる。修飾はイムノアッセイ用の標識の結合、例えばラジオイムノアッセイ用の放射性部分の結合に使用できる。修飾されたポリペプチドは、当該技術分野で確立された手順を使用して作製し、当該技術分野で知られる標準的な試験を使用してスクリーニングすることができる。
【００８１】
本発明は又、本発明のポリペプチド及び抗体のフラグメント又は領域１つ以上を含む融合タンパク質を包含する。一実施形態において、融合ポリペプチドは可変軽鎖領域の少なくとも１０連続アミノ酸及び可変重鎖領域の少なくとも１０アミノ酸を含むものが提供される。別の実施形態において、融合タンパク質は非相同免疫グロブリン定常領域を含有する。別の実施形態において、融合タンパク質は本明細書に記載したＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生された抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含有する。本発明において、抗体融合タンパク質は、抗ＫＩＤ３１ポリペプチド１つ以上及び、それがネイティブの分子においては結合していない別のアミノ酸配列、例えば別の領域に由来する非相同の配列又は相同の配列を含有する。
【００８２】
抗ＫＩＤ３１ポリペプチド及び他のＫＩＤ３１アゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターは当該技術分野で知られる方法、例えば合成又は組み換えにより生成することができる。ＫＩＤ３１アゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターを産生する１つの方法では、ポリペプチドの化学合成、次いでネイティブのコンホーメーション、即ち正しいジスルフィド結合を得るために適切な酸化条件下の処理を行う。これは当業者のよく知る方法を使用して達成することができる（Ｋｅｌｌｅｙ，  Ｒ．  Ｆ．  ＆  Ｗｉｎｋｌｅｒ，  Ｍ．  Ｅ．，  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  Ｓｅｔｌｏｗ，  Ｊ．  Ｋ．，  ｅｄ．，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．  Ｙ．，  Ｖｏｌ．  １２，  ｐｐ．１−１９  （１９９０）；Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｊ．  Ｍ．  ＆  Ｙｏｕｎｇ，  Ｊ．  Ｄ．，  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌ．  （１９８４）を、更に米国特許第４，１０５，６０３号；第３，９７２，８５９号；第３，８４２，０６７号及び第３，８６２，９２５号も参照されたい）。
【００８３】
本発明のポリペプチドは固相ペプチド合成法を使用して好都合に調製される場合がある（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ８５；２１４９  （１９６４）；Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：  ５１３２  （１９８５））。
【００８４】
更に別の代替例においては、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作されている市販のマウスを使用して完全なヒト抗体を得る場合がある。より望ましい（例えば完全ヒト抗体）又はより頑健な免疫応答を得るために設計されたトランスジェニック動物も又、ヒト化又はヒト抗体の生成に使用される場合がある。このような技術の例には、Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉｎｃ．（米国カリフォルニア州フリーモント）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅＴＭ及びＭｅｄａｒｅｘ，  Ｉｎｃ．（米国ニュージャージー州プリンストン）のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）及びＴＣＭｏｕｓｅＴＭがある。
【００８５】
別の例において、抗体は当該技術分野で知られる何れかの方法を使用して組み換えにより作製及び発現される場合がある。宿主動物から作製した抗体をまず単離し、遺伝子配列を獲得し、そして遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞）内で抗体を組み換え発現させることによって、抗体が組み換えにより作製される場合がある。使用される場合がある別の方法は植物（例えばタバコ）又はトランスジェニック乳汁中で抗体配列を発現することである。植物又は乳汁中で組み換えにより抗体を発現させるための方法は開示されている。例えばＰｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５；及びＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ  Ｉｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７を参照されたい。抗体の誘導体、例えばヒト化１本鎖等を作製するための方法は、当該技術分野で知られている。別の代替例において、抗体はファージディスプレイ技術によって組み換えにより作製される場合がある。例えば米国特許第５，５６５，３３２号；第５，５８０，７１７号；第５，７３３，７４３号；第６，２６５，１５０号及びＷｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：  ４３３−４５５  （１９９４）を参照されたい。
【００８６】
目的の抗体又はタンパク質は、該技術分野でよく知られるＥｄｍａｎ分解による配列決定に付される場合がある。質量スペクトル分析又はＥｄｍａｎ分解から得られたペプチドの情報を使用して目的のタンパク質をクローニングするために使用されるプローブ又はプライマーを設計することができる。
【００８７】
目的のタンパク質をクローニングする別の方法は目的の抗体又はタンパク質を発現する細胞に対する精製されたＫＩＤ３１又はその部分を使用する「パニング」によるものである。この「パニング」手順は、目的の抗体又はタンパク質を発現する組織又は細胞からｃＤＮＡライブラリを得て、第２の細胞型においてｃＤＮＡを過剰発現させ、ＫＩＤ３１に特異的な結合について第２の細胞型のトランスフェクトされた細胞をスクリーニングすることにより実施される。「パニング」により細胞表面タンパク質をコーディングする哺乳類遺伝子をクローニングする際に使用される方法の詳細な説明は、当該技術分野で報告されている。例えばＡｒｕｆｆｏ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｓｅｅｄ，  Ｂ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８４，  ８５７３−８５７７  （１９８７）及びＳｔｅｐｈａｎ，  Ｊ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４０：  ５８４１−５８５４  （１９９９）を参照されたい。
【００８８】
抗ＫＩＤ３１抗体及びその他のＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターをコーティングするｃＤＮＡは、当該技術分野における標準的な方法に従って特定の細胞型からｍＲＮＡを逆転写することにより得ることができる。特にｍＲＮＡは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ,  ｅｔ  ａｌ．（同上）に記載される手順に従って種々の分解酵素又は化学溶液を使用して単離するか、又は市販の核酸結合樹脂により、製造元（例えばＱｉａｇｅｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐｒｏｍｅｇａ）が提供する添付の説明書に従って抽出することができる。合成されたｃＤＮＡは次に発現ベクターに導入して、第２の型の細胞内で目的の抗体又はタンパク質を産生する。発現ベクターはエピソームとして、又は染色体ＤＮＡの統合された部分として、宿主細胞内で複製できるものでなければならない。好適な発現ベクターには、プラスミド、ウィルスベクター、例えばアデノウィルス、アデノ関連ウィルス、レトロウィルス及びコスミドが含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターは、エレクトロポレーション；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン又はその他の物質を使用したトランスフェクション；マイクロプロジェクタイルボンバードメント；リポフェクション；及び感染（例えばベクターがワクシニアウィルスのような感染性物質である場合）を含めた幾つかの適切な手段の何れかにより宿主細胞内に導入することができる。ベクター又はポリヌクレオチドの導入の選択は、宿主細胞の特徴により異なる場合が多い。
【００９０】
非相同ＤＮＡを過剰発現できる何れかの宿主細胞を目的の抗体、ペプチド又はタンパク質をコーティングする遺伝子を単離する目的に使用できる。哺乳類宿主細胞の例には、ＣＯＳ、ＨｅＬａ及びＣＨＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、宿主細胞は、宿主細胞内に相当する内因性の目的抗体又はタンパク質が存在する場合はそれよりも約５倍高値、より好ましくは１０倍高値、更に好ましくは２０倍高値の水準でｃＤＮＡを発現する。ＫＩＤ３１への特異的結合に関する宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイ又はＦＡＣＳにより行う。目的の抗体又はタンパク質を過剰発現する細胞を同定することができる。
【００９１】
親ＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーター分子と比べて、得られたタンパク質のアミノ酸配列の付加、欠失又は変化をコーティングする突然変異体のＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターを生成するために現在使用される場合がある種々の技法が存在する。
【００９２】
本発明には、本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれる。本発明のポリペプチドは、当該技術分野で知られる手順により作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解又は他の分解により、上述の組み換え法（即ち単一又は融合のポリペプチド）により、又は化学合成により産生することができる。抗体のポリペプチド、特に約５０アミノ酸までのより短いポリペプチドは、化学合成により好都合に作製される。化学合成の方法は当該技術分野で知られており、市販されている。例えば抗ＫＩＤ３１ポリペプチドは、固相法を使用した自動ポリペプチド合成装置により産生できるとされる。
【００９３】
（ＩＶ．ポリペプチド及びモノクローナル抗体のスクリーニングのための方法）
数種の方法を使用してＫＩＤ３１に結合するポリペプチド及びモノクローナル抗体をスクリーニングする場合がある。「結合」とは、生物学的又は免疫学的に該当する結合、即ち免疫グロブリン分子がコーティングされている対象となる、又は、ポリペプチドが指向されている対象となる独特の抗原に対して特異的な結合を指す。非特異的標的に対して極めて高濃度で免疫グロブリンが使用される場合に起こりえる非特異的な結合を指すものではない。一実施形態において、モノクローナル抗体は標準的なスクリーニング技法を使用してＫＩＤ３１に対する結合に関してスクリーニングされる。この態様においては、抗ＫＩＤ３１モノクローナル抗体が得られた。ブダペスト条約に従って、抗ＫＩＤ３１モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、ＰＴＡ＃６５１６のＰａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎと共に２００３年３月２０日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （ＡＴＣＣ）  １０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，  Ｍａｎａｓｓａｓ  ＶＡ２０１１０−１１０９に寄託されている。
【００９４】
ＫＩＤ３１に結合するモノクローナル抗体は癌性の組織及び非癌細胞への結合に関してスクリーニングする。一実施形態において、ＫＩＤ３１に結合し、そしてヒトの癌細胞又は組織とも交差反応性を有するが正常な細胞又は組織に対してはそれと同程度の反応性を有さないモノクローナル抗体を選択する。スクリーニングに使用される場合がある１つの方法は免疫組織化学（ＩＨＣ）である。標準的な免疫組織化学の技法は、平均的な当業者のよく知る通りである。例えばＡｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  （Ｊ．  Ｐ．  Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｄ．  Ｂａｒｎｅｓ，  ｅｄｓ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｖｏｌ．  ５７，  Ｃｈ．  １８  ａｎｄ  １９，  ｐｐ．  ３１４−３５０，  １９９８）を参照されたい。生物学的試料（例えば組織）は生検試料、剖検試料又は検死試料から得る場合がある。ＫＩＤ３１が癌性の細胞にのみ存在することを確認するためには、抗ＫＩＤ３１抗体を使用して癌保有個体由来の組織上のＫＩＤ３１の存在を検出する場合があり、一方で癌に離間した個体に由来する他の非癌性の組織又は癌を保有しない個体に由来する組織を対照として使用する。組織は凍結の間の損傷を防止する固体又は半固体の物質（例えばアガロースゲル又はＯＣＴ）中に包埋し、次に切片化して染色することができる。種々の臓器及び異なる等級の癌をモノクローナル抗体のスクリーニングに使用できる。スクリーニングの目的に使用される場合がある組織の例には、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨、上部消化管及び膵臓が含まれるが、これらに限定されない。スクリーニングの目的に使用される場合がある種々の癌の型の例には、癌腫、腺癌、肉腫、腺肉腫、リンパ腫及び白血病が含まれる。
【００９５】
更に別の代替例においては、癌細胞系統、例えばＢＴ４７４（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−２０）、ＭＣＦ７（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−２２）、ＥＳ−２（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１９７８）、ＳＫＯＶ３（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−７７）、ＳＫＭＥＳ−１（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−５８）、ＣＡ１３０（Ｒａｖｅｎ専売の肺腺癌細胞系統）、ＣａＬｕ３（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−５５）、９９２６（Ｒａｖｅｎ専売の膵臓腺癌細胞系統）、ＡｓＰＣ−１（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６８２）、Ｈｓ７００Ｔ（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−１４７）、Ｃｏｌｏ２０５（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−２２２）、ＨＴ−２９（ＨＴＢ−３８）、Ｃｏｓ７（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６５１）、ＲＬ−６５（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１０３４５）、Ａ２０４（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−８２）、Ｇ２９２（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１４２３）、ＨＴ１０８０（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１２１）、ＭＧ６３（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１４２７）、ＲＤ（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１３６）、ＲＤ−ＥＳ（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−１６６）、ＳＫＥＳ−１（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−８６）、ＳＫＬＭＳ−１（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−８８）、ＳＫＵＴ−１（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−１１４）、ＳＷ６８４（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−９１）、ＳＷ８７２（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−９２）、７８６−Ｏ（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１９３２）、Ａ４９８（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−４４）、ＣａＫｉ−２（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−４７）、２２ＲＶ１（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−２５０５）、ＤＵ１４５（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ−８１）、ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１７４０）及びその該当する組織に由来する正常細胞を使用して、癌性組織に特異的なモノクローナル抗体を得るためにスクリーニングする場合がある。種々の臓器の正常組織由来の一次、又は低継代の細胞培養物、例えば腎臓、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、大動脈平滑筋及び内皮細胞を陰性対照として使用することができる。癌性又は非癌細胞はスライドガラス又はカバーガラス上で、又は、プラスチック面上で成長させることができ、又は第ＷＯ０１／４３８６９号に記載の通りＣｅｌｌＡｒｒａｙＴＭ中に調製することができ、そして組織に関して上述の通りＩＨＣを使用して抗体の結合に関してスクリーニングすることができる。或いは、非タンパク質分解的な手段を使用して成長表面から細胞を採取し、遠心分離してペレット化し、次にこれを上述のＩＨＣ分析用の組織と同様に包埋して処理する場合がある。細胞は免疫不全動物に接種し、腫瘍を成長させ、次にこの腫瘍を回収し、包埋し、そしてＩＨＣ分析用の組織原料として使用される場合がある。別の代替例において、単細胞は一次抗体、蛍光分子に連結した二次「レポーター」抗体と共にインキュベートし、次に蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）機器を使用して分析することによりスクリーニングされる場合がある。
【００９６】
数種の検出系を利用して組織切片への抗体の結合を検出される場合がある。一般的に、免疫組織化学では一次抗体の組織への結合を行い、次いで一次抗体由来の物質種に対して反応性を有する二次抗体を生成し、そして検出可能なマーカー（例えばセイヨウワサビペルオキシダーゼ、ＨＲＰ、又はジアミノベンジジン、ＤＡＢ）にコンジュゲートした。使用される場合がある１つの代替法はポリクローナル鏡像相補抗体、即ちｐｏｌｙＭＩＣＡである。Ｄ．  Ｃ．  Ｍａｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｉｓａａｃｓｏｎ  （Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  （１９９９）  ３５（２）：  １２９−３３）に記載したｐｏｌｙＭＩＣＡ（ポリクローナル鏡像相補抗体）の技法は、一次抗体（例えば抗ＫＩＤ３１抗体）の正常及び癌性の組織への結合を試験するために使用できる。数種のｐｏｌｙＭＩＣＡＴＭ検出キットが、Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｐ．  Ｏ．  Ｂｏｘ  ４０７３  Ｂｉｒｍｉｇｈａｍ  Ｂ２９  ６ＡＴ  Ｅｎｇｌａｎｄ）より販売されている。製品番号ＨＫ００４．Ｄは、ＤＡＢクロマゲンを使用しているｐｏｌｙＭＩＣＡＴＭ検出キットである。製品番号ＨＫ００４．Ａは、ＡＥＣクロマゲンを使用しているｐｏｌｙＭＩＣＡＴＭ検出キットである。或いは、一次抗体を検出可能なマーカーで直接標識する場合もある。
【００９７】
適切な抗体を選択するためのＩＨＣスクリーニングにおける第１の手順は、１つ以上の免疫原（例えば細胞又は組織の試料）へのマウス中に培養された一次抗体（例えば抗ＫＩＤ３１抗体）の結合である。一実施形態において、組織の試料は種々の臓器に由来する凍結組織の切片である。細胞又は組織の試料は癌性又は非癌性の何れかであることができる。
【００９８】
当該技術分野でよく知られる多くの方法の何れかにより、凍結組織を調製し、固定又は未固定で切片化し、そしてＩＨＣを実施する。例えばＳｔｅｐｈａｎ,  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  ２１２：  ２６４−２７７  （１９９９）及びＳｔｅｐｈａｎ,  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４０：  ５８４１−５４  （１９９９）を参照されたい。
【００９９】
（Ｖ．抗ＫＩＤ３１抗体を特性付ける方法）
数種の方法を使用して抗ＫＩＤ３１抗体を特性付けることができる。１つの方法はそれが結合するエピトープを同定することである。エピトープマッピングは種々の入手元、例えばＰｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５，８２１９ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から販売されている。エピトープマッピングは抗ＫＩＤ３１抗体が結合する配列を決定するために使用できる。エピトープは、線状のエピトープであってもよく、即ちアミノ酸の単一のストレッチ内に含有されてもよく、或いは必ずしも単一のストレッチに含有されない場合があるアミノ酸の三次元相互作用により形成されるコンホーメーションエピトープであってもよい。種々の長さ（例えば少なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドを単離又は合成（例えば組み換えによる）し、そして抗ＫＩＤ３１抗体との結合試験に使用することができる。抗ＫＩＤ３１抗体が結合するエピトープは細胞外配列より誘導したオーバーラッッピングペプチドを使用し、そして抗ＫＩＤ３１抗体による結合を測定することにより、系統的スクリーニングにおいて決定することができる。
【０１００】
抗ＫＩＤ３１抗体を特性付けるために使用できる更に別の方法は、同じ抗原、例えばＫＩＤ３１に結合することが解っている他の抗体を使用した競合試験を使用して抗ＫＩＤ３１抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうか測定することである。ＫＩＤ３１に対する市販抗体の例が利用できる場合もあれば、当該技術分野でよく知られる結合及び競合試験を使用して同定される場合がある。抗ＫＩＤ３１抗体は更にそれが結合する組織、癌の型又は腫瘍の型に関して特性付けることができる。
【０１０１】
抗ＫＩＤ３１抗体を特性付ける別の方法はそれが結合する高原によるものである。抗ＫＩＤ３１抗体は種々のヒト癌由来の細胞溶解物を使用したウエスタンブロットにおいて使用した。当該技術分野でよく知られており、ウエスタンブロットでは変性又は非変性ゲル上で細胞溶解物及び／又は細胞画分を泳動し、ニトロセルロース紙にタンパク質を移行させ、そして次に抗体（例えば抗ＫＩＤ３１抗体）を使用してブロットをプローブすることによりどのタンパク質が抗体により結合されたかを測定する。或は細胞表面上のタンパク質はビオチン化することができ、抗ＫＩＤ３１抗体はビオチン化ＫＩＤ３１を免疫沈降するために使用することができる。次にビオチン化ＫＩＤ３１はＨＲＰ−ストレプトアビジンを使用して可視化できる。この手順は実施例４において詳述する。ＫＩＤ３１は種々の組織の種々のヒトの癌、例えば肺、腎臓、膵臓、卵巣及び結腸に伴っている。ＫＩＤ３１に関する説明は更に実施例５及び６において行う。
【０１０２】
（ＶＩ．抗ＫＩＤ３１抗体及びＫＩＤ３１モジュレーターを使用した癌の診断の方法）
本明細書に記載した方法により作製されたＫＩＤ３１に対するモノクローナル抗体を使用して診断目的のために種々の組織、例えば卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、膵臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨及び上部消化管における癌細胞の有無を同定される場合がある。本明細書に開示した方法により作製されたＫＩＤ３１に対するモノクローナル抗体は又、固形腫瘍から放出された後に血中を循環している癌細胞の有無、又はその量を測定するために使用される場合がある。このような循環している抗原は、未損傷のＫＩＤ３１抗原、又は本発明に記載した方法で検出されるべき能力を保持しているそのフラグメントである場合がある。このような検出は、当該技術分野で一般的に使用されている標準的な方法を使用してＦＡＣＳ分析により行われる場合がある。
【０１０３】
これらの使用においては、ＫＩＤ３１とＫＩＤ３１に特異的に結合する抗体の間の複合体の形成を行うことができる。このような抗体の例には、ＰＴＡ＃６５１６の標記を有するＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマにより産生される抗ＫＩＤ３１モノクローナル抗体が含まれる。このような複合体の形成はｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで行うことができる。理論に制約されないが、モノクローナル抗体の抗ＫＩＤ３１は、ＫＩＤ３１の細胞外ドメインを介してＫＩＤ３１に結合することができ、その後内在化する場合がある。
【０１０４】
本発明の診断方法の好ましい実施形態において、抗体は検出可能な標識を担持する。使用される場合がある標識の例には、放射活性物質又は蛍光団、例えばフルオロイソチオシアネート又はフィコエリスリンが含まれる。
【０１０５】
診断及び治療の目的で商業的に使用されているその他の既知の抗体の場合と同様に、本発明の標的抗原は、正常組織において広範に発現される。一部の腫瘍においてはアップレギュレートされる。従って、診断又は治療薬に使用される場合の本発明の抗体の特定の送達用量及び送達経路は、対象となる特定の腫瘍又は疾患状態並びに治療中の特定の個体に適合される。
【０１０６】
診断のために抗体を使用する１つの方法は放射活性又は放射線不透明の物質に抗体を連結すること、抗体を個体に投与すること、及び、Ｘ線又は他の画像化装置を使用して抗原を発現している癌細胞の表面の標識された抗体の局在化を可視化することによる、ｉｎ  ｖｉｖｏの腫瘍の画像化である。抗体は生理学的条件において結合を促進する濃度において投与する。
【０１０７】
ＫＩＤ３１を検出するｉｎ  ｖｉｔｒｏの技法は、当該技術分野で日常的なものであり、例えば酵素連結免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、酵素免疫試験（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及びウエスタンブロット分析が含まれる。
【０１０８】
本発明の態様において、腫瘍又は新生物の放射線画像化の方法、又は放射標識抗体を使用した治療方法の有効性を測定する方法は、放射標識腫瘍特異的抗体を本発明の実施に従って固体に投与する手順を含む。放射標識された抗体は、好ましくはテクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１１、ヨウ素−１３１、レニウム−１８６、レニウム−１８８、サマリウム−１５３、ルテチウム−１７７、銅−６４、スカンジウム−４７、イットリウム−９０よりなる群から選択される放射標識を含むモノクローナル又はポリクローナル抗体である場合がある。抗体の免疫反応性を犠牲にせず、ｉｎ  ｖｉｖｏで分解されない、ヨウ素−１３１、レニウム−１８８、ホルミウム−１６６、サマリウム−１５３及びスカンジウム−４７のような治療用の放射性核種で標識されたモノクローナル抗体が特に好ましい。その他の放射性同位体も知られており、特定の用途に適している場合があることを、当業者は理解する。放射線画像化は、単一光子発光コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、陽電子発光断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）又は磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）を使用して実施される場合がある。放射線免疫画像化により特定される転移の位置のより優れた解剖学的定義を可能にする相関性画像化も意図される。
【０１０９】
別の方法においては、癌細胞を摘出し、当該技術分野でよく知られる方法により免疫組織化学用に組織を調製する（例えば凍結用化合物中に包埋し、凍結し、そして固定化を行うか行うことなく切片化する；固定化及び抗原の開腹及び逆染色の種々の方法を使用するか使用することなく包埋する）。モノクローナル抗体は又、発生の種々の段階における癌細胞を同定するために使用される場合もある。抗体は又、どの個体の腫瘍が予め決定された量でその表面に抗原を発現し、そしてそのため、該抗原に対して指向された抗体を使用した免疫療法のための候補となりえるかを測定するために使用される場合もある。抗体はＫＩＤ３１を発現する腎臓、卵巣、前立腺及び膵臓の原発癌及び転移癌の両方及び肺の原発癌を認識する場合がある。本明細書において、検出は定性的及び／又は定量的な検出を含む場合もあれば、測定された量を癌細胞におけるＫＩＤ３１の発現の増大した量に関して正常細胞と比較することを含む場合もある。
【０１１０】
本発明は又、ＫＩＤ３１に結合する何れかの抗体を使用して個体における癌（例えば卵巣癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸癌又は乳癌）の診断を支援する方法、及び、ＫＩＤ３１発現量を決定するために使用できる他の方法を提供する。本明細書において「診断を支援する」方法とは、これらの方法が癌の分類又は性質に関する臨床的判断を行う場合に補助を行うことを意味し、最終的診断に関して決定的である場合もあれば、決定的でない場合もある。従って、癌の診断を支援する方法は、個体から得た生物学的試料中のＫＩＤ３１の量を検出する手順及び／又は試料中のＫＩＤ３１の発現量を測定する手順を含んでもよい。抗原又はその部分を認識する抗体も又、血液、唾液、肺の流体又は腹水を含むがこれらに限定されない体液中の生存又は死滅している癌細胞から放出又は分泌された抗原を検出する診断イムノアッセイを作成するために使用される場合がある。
【０１１１】
目的の特定の腫瘍中の細胞が全てＫＩＤ３１を発現するわけではなく、他の組織の癌細胞がＫＩＤ３１を発現する場合があり、即ち、個体は個体における免疫療法の有用性を測定するために癌細胞におけるＫＩＤ３１の有無についてスクリーニングしなければならない。本明細書に記載した方法で作製された抗ＫＩＤ３１抗体は、癌を有すると診断された個体がＫＩＤ３１に対して指向された抗体を使用した免疫療法の対象候補と見なされるかどうかを決定するために使用される場合がある。一実施形態において、癌性の腫瘍又は生検試料は、ＫＩＤ３１に対して指向された抗体を使用してＫＩＤ３１の発現に関して試験される場合がある。ＫＩＤ３１を発現する癌細胞を有する個体はＫＩＤ３１に対して指向された抗体を使用した免疫療法の対象候補と適している。抗ＫＩＤ３１抗体による染色も又、正常組織から癌性組織を判別するために使用される場合がある。
【０１１２】
診断目的のために抗ＫＩＤ３１抗体を使用する方法は抗癌治療の何れかの形態、例えば化学療法又は放射線療法の前及び後の両方において、どの腫瘍が所定の治療に応答する可能性が最も高いかについて、癌を有する個体の予後について、腫瘍のサブタイプ又は転移疾患の起源について、そして、疾患の予後又は治療への応答について判断するために有用である。
【０１１３】
本発明の組成物は又、その他の疾患（非癌）細胞に適用する一般的に上に記載する方法を使用した、癌以外の疾患状態の診断にも好適である。本発明の方法での使用に好適な疾患状態には、個体における炎症又は自己免疫の応答に関連する疾患又は障害が含まれるが、これらに限定されない。上述の方法は個体における炎症又は自己免疫の応答をモジュレートするために使用される場合がある。本発明の組成物及び方法を使用した診断及び／又は治療に付される場合がある炎症及び自己免疫の障害に起因する疾患及び病態には、例えば、多発性硬化症、髄膜炎、脳炎、卒中、その他の大脳外傷、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性結腸炎及びクローン病）、重症筋無力症、狼瘡、慢性関節リューマチ、喘息、急性若年発症性糖尿病、エイズ痴呆、アテローム性動脈硬化症、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血及び急性白血球媒介肺傷害が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１４】
本発明の抗体及びその他の治療薬の診断及び／又は治療上の使用のための更に別の適応症には、臓器又は移植片の拒絶の危険性がある個体への投与が含まれる。近年、組織及び臓器、例えば皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓及び骨髄を移植する外科的技法の効率が大きく向上している。おそらくは、移植された同種移植片又は臓器に対するレシピエントの免疫寛容を誘導する満足できる薬剤が存在しないことが、主な未解決の問題となっている。同種移植片の細胞又は臓器を宿主に移植する（即ち、供与者及び被供与者が同じ種の異なる個体である）場合、宿主の免疫系は、移植片における外来性抗原への免疫応答を上昇させ（宿主対移植片疾患）、移植された組織の破壊をもたらす可能性がある。
【０１１５】
抗ＫＩＤ３１抗体への使用について言及する本出願の何れかに記載された使用は又、本明細書に記載されるその他のＫＩＤ３１のアゴニスト、拮抗剤及びモジュレーターの使用を包含する。そのような実施形態において、ＫＩＤ３１のアゴニスト、拮抗剤又はその他の非抗体モジュレーターは、上述の手順においてＫＩＤ３１抗体の代替となり、当業者の技術の範囲内の改変は、代替されたＫＩＤ３１調節組成物に対してこの方法を適合させるために行われる。
【０１１６】
（ＶＩＩ．本発明の組成物）
本発明は又、抗ＫＩＤ３１抗体、抗ＫＩＤ３１抗体から誘導したポリペプチド、抗ＫＩＤ３１抗体をコーティングするポリヌクレオチド、及び本明細書に記載したその他の物質を含む医薬組成物のような組成物も包含する。本明細書で使用される組成物は更に、ＫＩＤ３１、ＫＩＤ３１アゴニスト、拮抗剤、モジュレーターに結合する抗体、ポリペプチド及び／又はタンパク質の１つ以上、及び／又はＫＩＤ３１に結合する抗体、ポリペプチド及びタンパク質の１つ以上をコーティングする配列を含むポリヌクレオチドの１つ以上を含む。
【０１１７】
本発明は更に、何れかのＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターと特定のＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターの意図する機能を支援する別の化学的構造のコンジュゲートを提供する。これらのコンジュゲートには、本明細書において考察する診断、スクリーニング又は精製手順で使用される何れかの不溶性の固体支持体マトリックスのような巨大分子と共有結合したＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターが含まれる。好適なマトリックス物質には、化学的に不活性であり、高い多孔性を有し、ペプチドリガンドと共有結合を形成できる官能基多数を有する何れかの物質が含まれる。マトリックス物質及びマトリックス−リガンドコンジュゲートの調製手順の例については、Ｄｅａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ）  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：  Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８５）；Ｌｏｗｅ，  ”Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”，  ｉｎ  Ｗｏｒｋ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ）  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ７，  Ｐａｒｔ  ＩＩ，  Ｎｏｔｒｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ  （１９７９）；Ｐｏｒａｔｈら、”Ｂｉｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”，  ｉｎ  Ｎｅｕｒａｔｈ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ），  Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｖｏｌ．  １，  ｐｐ．  ９５−１７８  （１９７５）；及びＳｃｈｏｔｔ，  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  Ｄｅｋｋｅｒ  （１９８４）に記載されている。
【０１１８】
本明細書では又、本明細書において考察する診断手順で使用されるＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターと何れかのレポーター部分のコンジュゲートも提供される。
【０１１９】
抗ＫＩＤ３１抗体を含めた本発明のＫＩＤ３１ペプチドアゴニスト、拮抗剤又はモジュレーターの薬剤、ポリペプチド及びタンパク質は更に、以下の基準、即ち、（ａ）ＫＩＤ３１（卵巣、前立腺、膵臓、肺、結腸又は乳癌細胞を含むがこれらに限定されない癌細胞のＫＩＤ３１を含む）に結合する能力；（ｂ）元の抗体が優先的に結合するものと同じＫＩＤ３１エピトープに優先的に結合する能力を含めた、ＫＩＤ３１への既知の抗ＫＩＤ３１抗体の優先的結合を競合的に抑制する能力；（ｃ）ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで生存細胞の表面に曝露しているＫＩＤ３１の部分に結合する能力；（ｄ）卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、結腸癌又は乳癌の細胞を含むがこれらに限定されない生存癌細胞の表面に曝露しているＫＩＤ３１の部分に結合する能力；（ｅ）ＫＩＤ３１を発現している癌細胞（例えば卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、結腸癌又は乳癌の細胞を含むがこれらに限定されない）に化学療法剤又は検出可能なマーカーを送達する能力；（ｆ）ＫＩＤ３１を発現している癌細胞（例えば卵巣癌の細胞を含むがこれらに限定されない）内に治療薬を送達する能力の何れか（１つ以上）により同定及び特性付けられる。
【０１２０】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、寄託番号ＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＰＴＡ＃６５１６を有する宿主細胞又はその子孫により産生される抗体である。本発明は又、これらの寄託されたハイブリドーマにより産生される抗体及び等価な抗体又はポリペプチドのフラグメント（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、１本鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、及び、必要な特異性の抗原（ＫＩＤ３１）認識部位を含むこれら及び等価な抗体のその他何れかの修飾された配置の種々の製剤を包含する。本発明は又、抗ＫＩＤ３１ファミリーメンバーの生物学的特性１つ以上をディスプレイするヒト抗体を提供する。抗ＫＩＤ３１ファミリー（ヒト化抗体及びヒト抗体を含む）の等価な抗体、ポリペプチドフラグメント及びこれらのフラグメントの何れかを含むポリペプチドは上述の５つの基準の何れか（１つ以上）により同定し、特性付ける。
【０１２１】
一部の実施形態において、ＫＩＤ３１に結合する本発明の抗体、ポリペプチド及びタンパク質はＫＩＤ３１への本明細書に特定した抗ＫＩＤ３１抗体の優先的結合を競合的に抑制する抗体、ポリペプチド及びタンパク質である。一部の実施形態において、抗体、ポリペプチド及びタンパク質は抗体ｍｕ−抗ＫＩＤ３１が優先的に結合するものと同じＫＩＤ３１上エピトープに優先的に結合する。
【０１２２】
従って、本発明は（ａ）上記の寄託番号を有する宿主細胞又はその子孫により産生される抗体；（ｂ）そのような抗体のヒト化形態；（ｃ）そのような抗体の軽鎖及び／又は重鎖１つ以上を含む抗体；（ｄ）そのような抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域と相同又はそれより誘導された可変領域及びヒト抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域と相同又はそれより誘導された定常領域を含むキメラ抗体；（ｅ）そのような抗体の軽鎖及び／又は重鎖のＣＤＲの１つ以上（少なくとも１、２、３、４、５又は６個）を含む抗体；（ｆ）そのような抗体の重鎖及び／又は軽鎖を含む抗体；（ｇ）そのような抗体に等価なヒト抗体の何れか（又はこれらの何れかを含む医薬組成物のような組成物）を提供する。抗体のヒト化形態は元の抗体又は上記寄託番号を有する宿主細胞により産生される抗体と同一のＣＤＲを有する場合もあれば、有さない場合もある。ＣＤＲ領域の決定は当該技術分野でよく知られている。一部の実施形態において、本発明は、上で同定した寄託ハイブリドーマの１つにより産生される抗体、又は、上記寄託番号を有する宿主細胞により産生される抗体の少なくとも１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つのＣＤＲに実質的に相同である（或いは、一部の実施形態において、これらの抗体の１つの、又はこれらの抗体の１つより誘導された、全６ＣＤＲに実質的に相同である）ＣＤＲ少なくとも１つを含む抗体を提供する。その他の実施形態には、本明細書で同定された寄託ハイブリドーマから産生された抗体の、又はそのような抗体から誘導された少なくとも２，３、４、５又は６個のＣＤＲに実質的に相同である少なくとも２，３、４、５又は６個のＣＤＲを有する抗体が含まれる。本発明において、結合特異性及び／又は全体的活性（癌細胞の成長及び／又は増殖を低減するため、癌細胞のアポトーシス細胞死を誘導するため、転移の発生を遅滞させるために化学療法剤を送達すること、及び／又は待機的に治療することという意味におけるものである場合がある）は一般的に保持されるが、活性の範囲は寄託ハイブリドーマにより産生される抗体と比較して変動する場合がある（増減する場合がある）。本発明は又これらの抗体の何れかを作製する方法を提供する。抗体の作製方法は当該技術分野で知られており、本明細書に記載する通りである。
【０１２３】
本発明は又本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。一部の実施形態において、ポリペプチドは抗体の軽鎖及び／又は重鎖の可変領域を１つ以上含む。一部の実施形態において、ポリペプチドは抗体の軽鎖及び／又は重鎖のＣＤＲ１つ以上を含む。一部の実施形態において、ポリペプチドは抗体の軽鎖及び／又は重鎖の３つのＣＤＲを含む。一部の実施形態において、ポリペプチドは、元の抗体の配列の少なくとも５連続アミノ酸、少なくとも８連続アミノ酸、少なくとも１０連続アミノ酸、少なくとも１５連続アミノ酸、少なくとも２０連続アミノ酸、少なくとも２５連続アミノ酸、少なくとも３０連続アミノ酸の何れかを有する抗体のアミノ酸配列を含み、ここでアミノ酸の少なくとも３つは抗体の可変領域由来である。一実施形態において、可変領域は元の抗体の軽鎖に由来する。別の実施形態において、可変領域は抗体の重鎖に由来する。別の実施形態において、５つ（又はそれより多い）の連続アミノ酸が抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する。
【０１２４】
本発明の一部の実施形態においてＫＩＤ３１、ＫＩＤ３１の部分、抗ＫＩＤ３１抗体又は本発明の他のＫＩＤ３１結合ポリペプチドを発現する本発明の細胞を個体に直接投与することにより、そのｉｎ  ｖｉｖｏのＫＩＤ３１生物学的活性をモジュレートする。
【０１２５】
（ＶＩＩＩ．治療目的のためにＫＩＤ３１モジュレーター及び抗ＫＩＤ３１抗体を使用する方法）
ＫＩＤ３１に対するモノクローナル抗体は、癌又はその他の疾患を有する個体において治療の目的に使用される場合がある。抗ＫＩＤ３１抗体を使用した治療では、上述の通りｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で複合体を形成することができる。一実施形態において、モノクローナル抗体抗ＫＩＤ３１を癌細胞に結合させ、その増殖を低減することができる。抗体は生理学的（例えばｉｎ  ｖｉｖｏ）条件において結合を促進する濃度で投与するものとする。別の実施形態において、ＫＩＤ３１に対するモノクローナル抗体を肺、腎臓、膵臓、卵巣及び結腸及び他の型の癌、例えば肉腫のような種々の組織の癌細胞に指向させた免疫療法に使用できる。別の実施態様においては、モノクローナル抗体抗ＫＩＤ３１単独を癌細胞に結合させて、その細胞分裂を低減することができる。別の実施形態においてモノクローナル抗体抗ＫＩＤ３１を癌細胞に結合させて、転移の発生を遅滞させることができる。更に別の実施形態にいては、癌を有する個体に抗ＫＩＤ３１抗体を使用した待機的治療を行う。癌個体の待機的治療では、疾患の有害な症状又は癌の進行に直接影響しない疾患に対して行われる別の治療に起因する医原性の症状を治療又は縮小させる。これには疼痛の軽減、栄養補給、性的問題、心理学的苦痛、抑鬱、疲労、精神障害、嘔気、嘔吐の治療が包含される。
【０１２６】
そのような状況において、抗ＫＩＤ３１抗体は個体自身の免疫応答を増強又は指向する薬剤、例えば抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を強化する薬剤と共に投与される場合がある。他の実施形態において、ＡＤＣＣを増強するような修飾として抗ＫＩＤ３１抗体に存在する少なくとも１つのフコース残基をその抗体のオリゴ糖から除去する。同様の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体に存在するフコース残基を修飾することにより元の修飾されない抗体に比べＡＤＣＣを増強するために必要な程度その組成を改変する。
【０１２７】
更に別の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体を放射性分子、毒素（例えばカリケミシン）、化学療法剤分子、リポソーム又は化学療法化合物を含有する他の小胞とコンジュゲート又は会合させ、そしてこのような治療を必要とする個体に投与することにより、これらの化合物を、抗体により認識される抗原を含有する癌細胞にターゲティングし、これにより、癌性又は疾患の細胞を排除する。特定の理論に制約されないが、抗ＫＩＤ３１抗体は表面にＫＩＤ３１を担持した細胞により内在化され、これによりコンジュゲート部分を細胞に送達して治療効果を誘導する。更に別の実施形態において、抗体は転移の発生を遅滞させるために抗原を発現する癌の外科的除去の際に補助的治療として使用できる。抗体は又、腫瘍の大きさを低減し、これにより手術の単純化、手術中の組織の節約及び／又は生じる傷跡の低減のために、抗原を発現する腫瘍を有する個体における手術の前に投与することもできる（ネオアジュバント療法）。
【０１２８】
細胞周期の投与は本発明の実施において意図される。このような実施形態において、化学療法剤を使用することにより、所定の段階において腫瘍又は他の標的疾患細胞の細胞周期と同調する。その後、本発明の抗ＫＩＤ３１抗体（単独又は別の治療部分と共に）の投与を行う。別の実施形態において、第２ラウンドの治療の前に細胞周期と同調し、細胞分裂を低減するために抗ＫＩＤ３１抗体を使用し；第２ラウンドは、抗ＫＩＤ３１抗体及び／又は別の治療部分の投与である場合がある。
【０１２９】
化学療法剤には、放射性分子、細胞毒又は細胞毒性の薬剤とも称される毒素が含まれ、これには癌細胞の生存性を妨害する何れかの薬剤、及び化学療法化合物を含有するリポソーム又はその他の小胞が含まれる。好適な化学療法剤の例には、１−デヒドロテストステロン、５−フルオロウラシルデカバジン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アルキル化剤、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、アンスラマイシン（ＡＭＣ）、抗有糸分裂剤、シスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン、ジアミノジクロロ白金、アントラサイクリン、抗生物質、代謝拮抗物質、アスパラギナーゼ、ＢＣＧ生菌（嚢内）、リン酸ベタメタゾンナトリウム及び酢酸ベタメタゾン、ビカルタミド、硫酸ブレオマイシン、ブスルファン、カルシウムロイクオリン、カリケマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、クロランブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルヒチン、コンジュゲートエストロゲン、シクロホスファミド、シクロソスファミド、シタラビン、シタラビン、シトカラシンＢ、シトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、塩酸ダウノルビシン、クエン酸ダウノルビシン、デニロイキンジフチトックス、デキスラゾキサン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドセタキセル、ドラセトロンメシレート、塩酸ドキソルビシン、ドロナビノール、Ｅ．ｃｏｌｉＬ−アスパラギナーゼ、エメチン、エポエチンアルファ、エルイニアＬ−アスパラギナーゼ、エステル化エストロゲン、エストラジオール、リン酸エストラムスチンナトリウム、臭化エチジウム、エチニルエストラジオール、エチロロネート、エトポシドシトロロラム因子、エトポシドホスフェート、フィルグラスチン、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビンホスフェート、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、塩酸ゲムシタビン、グルココルチコイド、酢酸ゴセレリン、グラミシジンＤ、塩酸グラニセトロン、ヒドロキシ尿素、塩酸イダルビシン、イフォスファミド、インターフェロンアルファ−２ｂ、塩酸イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、塩酸レバミソール、リドカイン、ロムスチン、マイタンシノイド、塩酸メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、塩酸メルファラン、メルカプチプリン、メスナ、メトトレキセート、メチルテストステロン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、酢酸オクトレオチド、塩酸オンダンセトロン、パクリタキセル、パミドロネート２ナトリウム、ペントスタチン、塩酸ピロカルピン、プリマイシン、カルムスチンインプラントを有するポリフェプロサン２０、ポルフィマーナトリウム、プロカイン、塩酸プロカルバジン、プロプラノロール、リツキシマブ、サルグラモスチン、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タキソール、テニポシド、テノポシド、テストラクトン、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、チオグアニン、チオテパ、塩酸トポテカン、クエン酸トレミフェン、トラスツズマブ、トレチノイン、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン及び酒石酸ビノレルビンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３０】
好ましい実施形態において、非分裂細胞が相対的に毒性作用から免れるように、細胞毒は細胞の分裂又は急速分裂において特に有効となる。
【０１３１】
本発明の抗体は、それらが結合する疾患又は癌腫の細胞内に内在化することができ、従って治療用途のため、例えば有害な活性のために内在化が必要である毒素を細胞内に送達するために特に有用である。このような毒素の例には、サポリン、カリケマイシン、オーリスタチン及びマイタンシノイドが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３２】
本発明の抗体又はポリペプチドは、放射性分子、毒素若しくはその他の治療薬、又は共有結合又は非共有結合により、直接又は間接的に治療薬を含有するリポソーム又はその他の小胞に会合（コンジュゲート又は連結を含む）させることができる。抗体は、抗体がその標的ＫＩＤ３１に結合できる限り、抗体の任意の位置において放射性分子、毒素又は化学療法剤分子に連結される場合がある。
【０１３３】
毒素又は化学療法剤は、直接又は間接的に（例えばリンカー基を介するか、又は適切な結合部位を有する連結分子、例えば米国特許第５，５５２，３９１号に記載のプラットホーム分子を介して）好適なモノクローナル抗体にカップリング（例えば共有結合）させることができる。本発明の毒素又は化学療法剤は当該技術分野で知られる方法を使用して特定のターゲティングタンパク質に直接カップリングできる。例えば、薬剤と抗体の間の直接の反応は、各々が他方と反応することができる置換基を保有している場合に可能である。例えば一方にある親核基、例えばアミノ又はスルフィドリル基は他方にあるカルボニル含有基、例えば無水物又はハロゲン化酸と、又は、良好な脱離基（例えばハライド）を含有するアルキル基と反応することができる。
【０１３４】
抗体又はポリペプチドは又、マイクロ担体を介して化学療法剤に連結することができる。マイクロ担体は水中で不溶性であり、約１５０、１２０又は１００ｍｍ未満の大きさ、より一般的には約５０〜６０μｍ未満、好ましくは約１０、５、２．５、２又は１．５μｍ未満の大きさを有する生体分解性又は非生体分解性の粒子を指す。マイクロ担体には、約１μｍ未満、好ましくは約５００ｎｍ未満の大きさを有する「ナノ担体」が含まれる。このような粒子は当該技術分野で知られている。固相マイクロ担体は生体適合性のある天然のポリマー、合成ポリマー又は合成コポリマーから形成された粒子であり、アガロース又は交差結合アガロース並びに当該技術分野で知られるその他の生体分解性の物質から形成されたマイクロ担体を含む場合もあれば、含まない場合もある。生体分解性の固相マイクロ担体は、哺乳類の生理学的条件下において分解性（例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びそのコポリマー）又は腐食性（例えばポリ（オルトエステル）例えば３，９−ジエチリデン−２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５．５］ウンデカン（ＤＥＴＯＳＵ）又はポリ（無水物）例えばセバシン酸のポリ（無水物））であるポリマーから形成される場合がある。マイクロ担体は又、液相（例えば油脂系又は脂質系）、そのようなリポソーム、抗原を含有しないｉｓｃｏｍ（免疫刺激複合体、即ちコレステロール及びリン脂質、アジュバント活性サポニンの安定な複合体）、又は、液相マイクロ担体が生体分解性である限りｏ／ｗ又はｗ／ｏエマルジョン中に存在する液滴又はミセルである場合もある。生体分解性の液相のマイクロ担体は、一般的に生体分解性の油脂を配合しており、これらの多くは当該技術分野で知られており、スクワレン及び植物油が含まれる。マイクロ担体は、一般的に球状であるが、球状から外れたマイクロ担体も許容される（例えば楕円、棒状等）。その不溶性の性質（水に関して）のため、マイクロ担体は水及び水系（水性）溶液から濾別することができる。
【０１３５】
本発明の抗体又はポリペプチドは、毒性の薬剤又は化学療法剤にカップリングすることができる基及び抗体にカップリングすることができる基の両方を含有する２官能性のリンカーを含む場合がある。リンカーは結合能力の妨害とならないように薬剤から抗体を隔たらせるためのスペーサーとして機能する場合がある。リンカーは切断性又は非切断性であってもよい。リンカーは又薬剤又は抗体上の置換基の化学的反応性を増大させ、これによりカップリング効率を上昇させる役割を果たす。化学的反応性の増大は更に、通常ではありえない薬剤又は薬剤上の官能基の使用を容易にする。２官能性のリンカーは当該技術分野で知られる手段により抗体にカップリングできる。例えば活性エステル部分、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含有するリンカーはアミド結合を介して抗体中のリジン残基にカップリングするために使用できる。別の実施例においては、親核アミン又はヒドラジン残基を含有するリンカーを、抗体の炭水化物残基の解糖酸化により生成するアルデヒド基に結合させることができる。これらの直接的なカップリング方法の他に、リンカーはアミノデキストランのような中間担体を使用して抗体に間接的にカップリングすることができる。これらの実施形態において、修飾された結合はリジン、炭水化物又は中間担体を介する。一実施形態において、リンカーはタンパク質の遊離のチオール残基に部位選択的にカップリングする。タンパク質上のチオール基への選択的カップリングに適する部分は当該技術分野でよく知られている。例としてはジスルフィド化合物、α−ハロカルボニル又はα−ハロカルボキシル化合物及びマレイミドが包含される。親核アミン官能基がα−ハロ又はカルボキシル基と同じ分子中に存在する場合は、アミンの分子内アルキル化を介して環化が起こる可能性が存在する。この問題を回避するための方法は、当該技術分野でよく知られており、例えば望ましくない環化を立体化学的に不利とするようなアリール基又はトランスアルカンのような非柔軟性の基によりアミンとα−ハロ官能基が分離されている分子の調製による等の方法がある。ジスルフィド部分を介したマイタンシノイドと抗体のコンジュゲートの調製に関しては、例えば米国特許第６，４４１，１６３号を参照されたい。
【０１３６】
抗体−薬剤コンジュゲートの調製に使用できる切断可能なリンカーの１つは、受容体媒介エンドサイトーシスの間に遭遇するエンドソーム及びリソソームのような異なる細胞内コンパートメントの酸性環境を利用したシス−アコチン酸に基づく酸不安定性リンカーである。例えば巨大分子担体とのダウノルビシンのコンジュゲートの調製に関しては、Ｓｈｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ，  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ，  １２０：  １０４８−１０５４  （１９８１）；抗黒色腫抗体へのダウノルビシンのコンジュゲートの調製に関しては、Ｙａｎｇら、Ｊ．  Ｎａｔｌ，  Ｃａｎｃ．  Ｉｎｓｔ．  ８０：  １１５４−１１５９  （１９８８）；抗Ｔ細胞抗体とのダウノルビシンのコンジュゲートを調製するための同様の態様における酸不安定性リンカーの使用に関しては、Ｄｉｌｌｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４８：  ６０９７−６１０２  （１９８８）；ペプチドスペーサーアームを介した抗体へのダウノルビシンの連結に関しては、Ｔｒｏｕｅｔら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ７９：  ６２６−６２９  （１９８２）を参照されたい。
【０１３７】
本発明の抗体（又はポリペプチド）は当該技術分野で知られる何れかの方法により放射性分子にコンジュゲート（連結）する場合がある、抗体を放射標識するための方法に関する考察は、”Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＴ”，  Ｄ．  Ｍ．  Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，  ｅｄ．  （ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  １９９５）を参照されたい。
【０１３８】
或いはＳｅｇａｌの米国特許第４，６７６，９８０号に記載の通り、抗体を第２の抗体にコンジュゲートして抗体ヘテロコンジュゲートを形成することができる。交差結合抗体の形成は特定の細胞型、例えばＫＩＤ３１を発現する癌又は疾患の細胞に免疫系をターゲティングすることができる。
【０１３９】
本発明は化学療法剤に連結した抗ＫＩＤ３１抗体又はＫＩＤ３１に結合する他の実施形態を使用して癌（例えば肺癌、腎臓癌、膵臓癌、卵巣癌及び結腸癌）を有する個体における転移の発生を遅滞させる方法を提供する。一部の実施形態において、抗体は非ヒト抗ＫＩＤ３１抗体のヒト化又はキメラの形態である。
【０１４０】
更に別の実施形態において、抗体は転移の発生を遅滞させるために抗原を発現する癌の外科的摘出の時点において補助的治療として使用することができる。抗体又は化学療法剤に結合した抗体は又、腫瘍の大きさを低減し、これにより手術の単純化、手術中の組織の節約及び／又は生じる傷跡の低減のために、抗原を発現する腫瘍を有する個体における手術の前に投与することもできる（ネオアジュバント療法）。
【０１４１】
更に別の実施形態において、本明細書に記載したＫＩＤ３１結合実施形態の何れかをＫＩＤ３１発現癌細胞に結合させ、ＫＩＤ３１を発現する癌細胞に対する能動免疫応答を誘導することができる。一部の場合において、能動免疫応答は癌細胞の死滅を誘発（例えばアポトーシスによる細胞死を誘導する癌細胞への抗体の結合）、又は、癌細胞の成長を抑制（例えば細胞周期の進行をブロック）することができる。他の場合においては、本明細書に記載した何れかの新しい抗体を癌細胞に結合させ、そして抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）は抗ＫＩＤ３１が結合する癌細胞を排除することができる。従って、本発明は本明細書に記載した組成物の何れかを投与することを含む免疫応答を刺激する方法を提供する。
【０１４２】
一部の場合において、抗体の結合は又、細胞性及び体液性の免疫応答の両方を活性化してより多くのナチュラルキラー細胞又は個体の免疫系を更に活性化して癌細胞を破壊するサイトカイン（例えばＩＬ−２、ＩＦＮ−ｇ、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−ａ，ＴＮＦ−ｂ等）の増大した産生をリクルートすることができる。更に別の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体は癌細胞に結合することができ、そしてマクロファージ又は他の貪食細胞が癌細胞をオプソニン作用に付すことができる。
【０１４３】
抗ＫＩＤ３１抗体又はそのフラグメントの種々の製剤が投与に使用される場合がある。一部の実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体又はそのフラグメントがそのまま投与される場合がある。薬理活性を有する薬剤の他に、本発明の組成物は、薬理学的に有効な物質の投与を促進するか、又は、作用部位への送達のために薬学的に使用できる製剤への活性化合物の加工を容易にする、当該技術分野でよく知られており、比較的不活性な物質を含む好適な薬学的に許容される担体を含有する場合がある。例えば、賦形剤は形状又は一体性を与え、或いは、希釈剤として機能する。好適な賦形剤には、安定化剤、水和及び乳化剤、浸透圧調節のための塩類、カプセル化剤、緩衝剤及び皮膚浸透性増強剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４４】
非経腸投与に好適な製剤には、水溶性の形態、例えば水溶性の塩としての活性化合物の水溶液が含まれる。更に、油性の注射懸濁液のために適切な活性化合物の懸濁液も投与される場合がある。好適な親油性の溶媒又はベヒクルには、油脂類、例えばゴマ油、又は合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル又はトリグリセリドが含まれる。水性の注射用懸濁液は懸濁液の粘度を増大させるための物質を含有する場合があり、例えばカルボキシセルロースナトリウム、ソルビトール及び／又はデキストランが含まれる。場合により、懸濁液は又安定化剤を含有する場合もある。リポソームは又、細胞内への送達のために薬剤をカプセル化するためにも使用できる。
【０１４５】
本発明の全身投与のための医薬品製剤は、経腸、非経腸又は局所投与用に製剤化される場合がある。実際、製剤の３種類全てを同時に使用して、活性成分の全身投与を達成する場合がある。非経腸及び経腸の薬剤送達のための賦形剤並びに製剤については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に記載されている。
【０１４６】
経口投与用の好適な製剤には、ハード又はソフトゼラチンカプセル、丸薬、錠剤、例えばコーティング錠剤、エリキシル、懸濁液、シロップ又は吸入剤及びそれらの制御放出形態が含まれる。
【０１４７】
一般的に、これらの薬剤は注射（例えば腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内等）による投与のために製剤されるが、その他の投与形態（例えば経口、粘膜など）も使用できる。従って、抗ＫＩＤ３１抗体は、好ましくは薬学的に許容されるベヒクル、例えば生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液等と組み合わせる。
【０１４８】
特定の用量用法、即ち、投与量、時期及び反復度は特定の個体及びその個体の病歴により変動する。一般的に少なくとも約１００ｕｇ／ｋｇ体重、より好ましくは少なくとも約２５０ｕｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは少なくとも約７５０ｕｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量を投与する。
【０１４９】
実験的な検討事項、例えば半減期は一般的に用量の決定に寄与する。ヒト免疫系と適合する抗体、例えばヒト化抗体又は完全ヒト抗体は、抗体の半減期を延長し、そして宿主の免疫系による抗体が攻撃されることを防止するために使用される場合がある。投与の頻度は、治療の過程にわたって決定され調整される場合があり、癌細胞の数の低減、癌細胞の低減の維持、癌細胞の増殖の低減、又は、転移の発生の遅滞に基づいている。或いは、抗ＫＩＤ３１抗体の除放持続性の製剤が適している場合がある。除放性を達成するための種々の製剤及び考案物が当該技術分野で知られている。
【０１５０】
一実施形態において、抗ＫＩＤ３１抗体の投与量は、投与を一回以上受けている個体において実験的に決定される場合がある。個体は抗ＫＩＤ３１抗体の漸増量を投与される。抗ＫＩＤ３１抗体の薬効を評価するためには、特定の癌の疾患状態のマーカーを追跡することができる。これらには触診又は目視による観察を介した腫瘍の大きさの直接の測定、Ｘ線又は他の画像化技法による腫瘍サイズの間接的測定；腫瘍試料の直接の腫瘍生検及び顕微鏡観察により評価される改善度；間接的な腫瘍マーカー（例えば前立腺癌のＰＳＡ）の測定、疼痛又は麻痺の低減；会話、視野、呼吸又は他の腫瘍に関連する障害の改善；食欲の改善；又は許容性試験により測定されるクオリティオブライフの上昇又は延命が包含される。当業者が知る通り、用量は個体、癌の種類、癌の段階、癌が個体の他の位置への転移を開始しているかどうか、及び過去及び現在併用中の治療により変動する。
【０１５１】
その他の製剤には、リポソームのような当該技術分野で知られる好適な送達形態が含まれる。例えば、Ｍａｈａｔｏら、(１９９７)  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ４：  ８５３−８５９を参照されたい。リポソーム製剤には、サイトフェクチン、多層小胞及び単層小胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５２】
一部の実施形態において、複数の抗体が存在する場合がある。抗体はモノクローナル又はポリクローナルであってもよい。このような組成物は、癌腫、腺癌、肉腫又は腺肉腫に対して反応性を有する少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個の異なる抗体を含有する場合がある。抗ＫＩＤ３１抗体は例えば卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、骨、上部消化管及び膵臓のような臓器における癌腫、腺癌、肉腫又は腺肉腫に対して反応性を有する１つ以上の抗体と混合することができる。一実施形態において、種々の抗ＫＩＤ３１抗体の混合物を使用する。抗体の混合物は、当該技術分野でよく指摘される通り、個体の集団のより広範な範囲を治療する場合に特に有用である。
【０１５３】
以下の実施例は本発明を説明するものであり、限定する意図はない。
【実施例】
【０１５４】
実施例１．免疫原としてのヒト腎細胞の調製
胎生期１０〜１８週のヒト胎児腎をＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（米国カリフォルニア州アラミダ）から入手した。腎臓は湿潤氷上の組織培養用培地中において入手し、実験室に送付した。到着直後、腎臓を洗浄用培地（ペニシリン／ストレプトマイシン及びゲンタマイシンを含有する冷ＰＢＳ）に移した。外膜をピンセットで除去し、腎臓を７０％エタノール中で短時間洗浄し、次に洗浄用培地で２回漱いだ。１００ｍｍの乾燥培養皿中で手術用ハサミを使用して腎臓を１ｍｍ角に粉砕した。組織片は、本明細書においてＩ／３Ｆと称する所定の血清非含有の培地１０ｍｌ中にプレーティングした。この培地は、参考として本明細書に組み入れられる米国特許暫定出願第６０／５０４，６７４号に記載されている。一般的に使用されている細胞培養用の培地の種々のものを本発明の実施において使用される場合があるが、現時点で好ましい実施形態は血清非含有のフラクトース系の細胞培養用培地を使用する。
【０１５５】
組織片は１５ｍｌの遠沈管内に移し、組織片を５分間１０００ｘｇで遠心分離した。組織片はインスリン（１０ｕｇ／ｍｌ）、トランスフェリン（１０ｕｇ／ｍｌ）、表皮成長因子（２０ｎｇ／ｍｌ）、ソマトトロピン（０．００５ＩＵ／ｍｌ）、ブタ下垂体抽出物（０．２％）、ニワトリ血清（０．１％）、ゲンタマイシン（１００ｕｇ／ｍｌ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（１ｘ）及びコラゲナーゼ／ジスパーゼ（０．１％）を含有するＩ／３Ｆ培地中に再懸濁し、一夜４℃でインキュベートした。翌日、消化した組織片を５分間１０００ｘｇで遠心分離し、Ｉ／３Ｆ培地で２回洗浄した。インスリン（１０ｕｇ／ｍｌ）、トランスフェリン（１０ｕｇ／ｍｌ）、表皮成長因子（２０ｎｇ／ｍｌ）、ソマトトロピン（０．００５ＩＵ／ｍｌ）、ブタ下垂体抽出物（０．２％）及びニワトリ血清（０．１％）を含有するＩ／３Ｆ培地１０ｍｌにペレットを再懸濁し、そしてフィブロネクチン予備コーティング１０ｃｍプレート中で培養した。
【０１５６】
これらの培養条件下において、ヒト胎児腎細胞は基盤コーティングプレートに結合し、単層として成長した。培地は週二回交換した。
【０１５７】
細胞を採取するために、細胞の単層をカルシウム及びマグネシウム非含有のＨａｎｋｓ食塩水溶液で一回漱ぎ、１５分間３７℃でＨａｎｋｓ食塩水溶液中１０ｍＭＥＤＴＡ中でインキュベートした。穏やかなピペッティングにより細胞を培養表面から脱着させた。５分間１０００ｘｇで遠心分離することにより細胞懸濁液をペレット化した。上澄みを除去し、適宜、非変性アジュバントと共に細胞を血清非含有培地（Ｉ／３Ｆ培地）に再懸濁した。
【０１５８】
実施例２．モノクローナル抗体の生成
非変性アジュバント（Ｒｉｂｉ、Ｒ７３０、Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ＭＴ）をリン酸塩緩衝食塩水中２ｍｌとなるように再水和させた。次にこの再水和アジュバント１００μｌを免疫化に使用する実施例１の細胞ペレットの一部と穏やかに混合した。マウス当たり約１０６個のヒト胎児腎細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに脚部手掌を介して概ね週１又は２回注射した。厳密な免疫化の日程は、以下の通りとした。第０日、免疫化＋Ｒｉｂｉ。第３日、免疫化＋Ｒｉｂｉ。第７日、免疫化＋Ｒｉｂｉ。第２４日、免疫化−Ｒｉｂｉ。第２９日、免疫化−Ｒｉｂｉ。第３２日、免疫化−Ｒｉｂｉ。第３６日、免疫化−Ｒｉｂｉ。第４４日、免疫化−Ｒｉｂｉ。第５１日、免疫化−Ｒｉｂｉ。第６９日、力価試験用採血。第７１日、免疫化＋Ｒｉｂｉ。第７４日、免疫化＋Ｒｉｂｉ。第８１日、免疫化＋Ｒｉｂｉ。第９１日、灌流ブースト（Ｒｉｂｉ非存在）。第１０４日、融合用の結節回収。
【０１５９】
第６９日において、各免疫化動物の尾部から血液を一滴採取し、ＦＡＣＳ分析を使用してヒト胎児腎細胞に対する抗体の抗体価を試験した。力価が１：２０００に達した時点で、マウスをＣＯ２で屠殺し、その後頚椎脱臼断首した。リンパ節を採取してハイブリドーマの調製に付した。
【０１６０】
マウスのリンパ球は３５％ポリエチレングリコール４０００を使用してマウスミエローマ系統Ｘ６３−Ａｇ８．６５３と融合させた。融合後の第１０日に、ハイブリドーマの上澄みを、ヒト胎児腎細胞特異的モノクローナル抗体の存在について、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を使用してスクリーニングした。各ハイブリドーマのコンディショニングした培地を少量のヒト胎児腎細胞と共に３０分間インキュベートした。インキュベーションの後、細胞試料を洗浄し、０．１ｍｌ希釈液中に再懸濁し、そして４℃で３０分間ヤギ抗マウスＩｇＧのＦＩＴＣコンジュゲートＦ（ａｂ’）２フラグメント１μｇ／ｍｌとともにインキュベートした。細胞を洗浄し、０．２ｍｌのＦＡＣＳ希釈液中に再懸濁し、ＦＡＣＳｃａｎ細胞分析器（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ［米国カリフォルニア州サンホゼ］）を使用して分析した。更に増殖、クローニング及びＦＡＣＳによるヒト胎児腎細胞の表面へのその結合に基づいて特性付けるためにハイブリドーマクローンを選択した。ＫＩＤ３１と命名された抗原に結合するｍｕ−抗ＫＩＤ３１と命名されたモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマを選択した。
【０１６１】
実施例３．ｍｕ−抗ＫＩＤ３１等の抗ＫＩＤ３１抗体の精製
免疫化細胞又は細胞株に対して反応性であり続ける抗体を産生するハイブリドーマを抗体の精製のためにスケーリングする。以下の方法を使用するが、当該技術分野で一般的に知られるその他の方法も適用可能である。陽性のハイブリドーマをＴ７５フラスコ３本にスケーリングした。コンフルエントとなった時点で、細胞及び上澄みを５０ｍｌの三角試験管に収集し、遠心分離した。上澄みを吸引し、細胞ペレットをＦ１２／ＤＭＥ（５０：５０）培地で洗浄し、再度遠心分離した。細胞ペレットを１％超低濃度ＩｇＧＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）、１０μｇ／ｍｌｒｈインスリン及び１０μｇ／ｍｌトランスフェリンを含有する成長培地Ｆ１２／ＤＭＥ（５０：５０）５０ｍｌに再懸濁した。次に細胞をＣＬ１０００（ＩＢＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）のパウチ中に接種し、外部チャンバーを同じ成長培地５００ｍｌで充填した。外部チャンバーは第７日及び第１４日に新鮮な成長培地と交換する。
【０１６２】
抗体含有培地は第２１日に細胞パウチから採取した。採取した物質２５ｍｌをロード緩衝液（３ＭＮａＣｌ、１．５Ｍグリシン、ｐＨ９．０）と１：１混合した。プロテインＡ樹脂（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の調製済み５ｍｌカラムに物質を流動させた。次にカラムを２０カラム容量のリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。抗体は０．１Ｍグリシン、ｐＨ２．８で溶離させ、そして２０μｌの３ＭトリスｐＨ９．０中で中和した。次に抗体を透析し、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＤＵ５３０スペクトル分析器上のＡ２８０読み取り値によりタンパク質濃度を求めた。
【０１６３】
他の実験において、ＫＩＤ３１へのｍｕ−抗ＫＩＤ３１抗体の結合は生細胞ＥＬＩＳＡを使用して試験した。以下の方法を使用するが、当該技術分野で一般的に知られるその他の方法も適用可能である。細胞（ＨＴ−２９、ＳＫＯＶ３、ＳＫＭＥＳ−１、ＳＷ４８０、ＳＫＢＲ−３及びＨＰＡＦＩＩ）を組織培養処理９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）上でコンフルエントとなるまで１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有培地中で成長させた。細胞をＰＢＳで洗浄し、次に室温で１時間１％ＢＳＡ及び０．１％アジ化ナトリウムを含有するＨａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）中で所望の濃度の所望の抗体５０μｌと共にインキュベートした。次に細胞をＨＢＳＳウェル当たり１００μｌで３回洗浄した後に、室温で３０分間セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）二次抗体（ＨＢＳＳ中希釈してウェル当たり５０μｌ）と共にインキュベートした。細胞は最終的にＨＢＳＳで３回洗浄し、変色基質（ＴＭＢ基質、ＫＰＬ）をウェル当たり１００μｌで各ウェルに添加した。変色反応は１Ｍリン酸をウェル当たり１００μｌ添加することにより停止した。次にプレートをＯＤ４５０ｎｍで読み取った。
【０１６４】
実施例４．癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５及びＥＳ−２におけるＫＩＤ３１の発現のビオチン化免疫沈降分析
結腸直腸腺癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５及び卵巣癌細胞株ＥＳ−２を１７５ｃｍ２の培養皿上でコンフルエントとなるまで成長させた。コンフルエントの単層をＨａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（重炭酸ナトリウム又はフェノールレッド非含有のＨＢＳＳ＋、１０ｍＭＨＥＰＥＳで緩衝、ｐＨ７．４；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で３回洗浄し、室温で３０分間スルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｅｎｄｏｇｅｎ）２００μｇでビオチン化した。次に細胞を０．１ＭＴｒｉｓ含有のＨＢＳＳ＋、ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で洗浄し、室温で１５分間０．１ＭＴｒｉｓ含有ＨＢＳＳ＋、ｐＨ７．４中でインキュベートした。最後に細胞をＨＢＳＳ＋で３回洗浄し、そして溶解緩衝液（２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、２ｍＭＰＭＳＦ、０．１％アジ化ナトリウム及び溶解緩衝液５ｍｌ当たり１錠のＥＤＴＡ非含有完全ミニプロテアーゼカクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含有するＨＢＳＳ＋）中氷上で５分間インキュベートすることにより溶解した。
【０１６５】
細胞を溶解緩衝液中で掻き取り、溶解物を収集した。溶解物は４℃で１時間１４０００ｘｇで遠心分離した。清澄化した溶解物を次にヒトＩｇＧコンジュゲート（１ｍｇ／ｍｌ）ＣＮＢｒ４ＭＢセファロースビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）５μｌと共に４℃で２時間予備清浄化した。ヒトＩｇＧビーズを遠心分離して除去し、次に予備清浄化した溶解物を４℃で２時間ＣＮＢｒ４ＭＢセファロースビーズにコンジュゲートしたモノクローナル抗体ｍｕ−抗ＫＩＤ３１（１ｍｇ／ｍｌでコンジュゲート）と共にインキュベートした。２時間のインキュベーションの後にｍｕ−抗ＫＩＤ３１ビーズを遠心分離して除去した。ヒトＩｇＧ及びｍｕ−抗ＫＩＤ３１ビーズの両方を個々に３回溶解緩衝液１ｍｌで洗浄し、次に１ｍｌのＨＢＳＳ＋で３回洗浄した。洗浄したビーズはＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液３０μｌを添加し、５分間９９℃で煮沸することにより溶出させた。
【０１６６】
次に試料を４〜２０％Ｎｏｖｅｘ勾配ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で分割し、０．２μｍのニトロセルロースメンブレン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移行させ、５μｇ／ブロットのｍｕ−抗ＫＩＤ３１を使用したウエスタンブロットにより可視化した。
【０１６７】
ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンを検出するためには、ニトロセルロースをまずブロッキング緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有Ｔｒｉｓ緩衝食塩水（ＴＢＳＴ，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）中５％無脂肪乾燥乳）で１時間ブロッキングした。ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンを１μｇ／ｍｌでＴＢＳＴ中に希釈し、室温で３０分間ニトロセルロースに曝露した。次にニトロセルロースを３回ＰＢＳＴで洗浄し、その後、ＥＣＬ＋で可視化した。
【０１６８】
このプロトコル及びｍｕ−抗ＫＩＤ３１抗体を使用した場合の結果は還元条件下における約６０ｋＤａ〜８０ｋＤａにおける分子量バンドのスミアを示している。ｍｕ−抗ＫＩＤ３１特異的バンドのスミアのパターン及び分子量は約６２ｋＤａの分子量を有する糖タンパク質であるカルボキシペプチダーゼＭの分子量と合致している。
【０１６９】
実施例５．免疫組織化学的方法
癌患者より得た凍結組織試料をＯＣＴ化合物に包埋し、ドライアイスを使用してイソペンタン中に急速凍結した。低温切片はＬｅｉｃａ３０５０ＣＭミクロトームを使用して厚さ８〜１０μｍとなるように切り出し、ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓスライド（ＶＷＲ＃４８３１１−７０３）に解凍搭載した。切片は７５％アセトン／２５％エタノールを使用して１０℃で固定し、室温で２〜４時間風乾した。固定したセクションは使用時まで−８０℃で保存した。
【０１７０】
免疫組織学的分析のためには、組織の切片を回収し、Ｔｒｉｓ緩衝０．０５％Ｔｗｅｅｎ（ＴＢ−Ｔ）中で洗浄し、室温で３０分間ブロッキング緩衝液（ＴＢ−Ｔ、５％正常ヤギ血清及び１００μｇ／ｍｌアビジン）中ブロッキングした。次にスライドを室温で６０〜９０分間ブロッキング緩衝液中希釈（１μｇ／ｍｌ）したｍｕ−抗ＫＩＤ３１及び対照モノクローナル抗体と共にインキュベートした。次に切片を３回ブロッキング緩衝液で洗浄した。結合したモノクローナル抗体は０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５．０５及び０．００３％過酸化水素（Ｓｉｇｍａ  ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｈ１００９）中ヤギ抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）Ｆ（ａｂ’）２−ペルオキシダーゼコンジュゲート及びペルオキシダーゼ基質のジアミノベンジジン（１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ  ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｄ５６３７）を使用して検出した。染色したスライドはヘマトキシリンで逆染色して、Ｎｉｋｏｎ顕微鏡で観察した。
【０１７１】
一部の場合においては、適切な抗原回収法を使用した後に、パラフィン包埋ホルムアルデヒド固定組織を免疫組織化学的分析に使用した。このような抗原回収法の１つはＭａｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｉｓａａｃｓｏｎ，  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ３５：  １２９−３３  （１９９９）に記載されている。抗原回収及び／又は検出の別の方法も当業者の知る通り使用される場合がある。凍結組織、又は抗原回収及びポリＭＩＣＡ検出と共に適宜固定組織を使用して実施した同様の実験の結果を実施した。種々の正常及び癌組織への抗ＫＩＤ３１抗体の結合を試験した。全ての場合において、対照の固定組織における抗体の結合は、凍結組織のものと相関していた。凍結組織の結果は２者が対照において合致しない場合にのみ使用した。
【０１７２】
簡便のために、異なる原料から得た凍結外科的組織を使用した数種の実験の複合的結果をまとめて表１及び表２に示す。
【０１７３】
【表１】
2008526256.tif 000002
実施例６．免疫細胞化学的結果
モノクローナル抗体ｍｕ−抗ＫＩＤ３１を使用して組織の種々の型に由来する種々の細胞株に対する反応性を試験した。結果は弱い陽性染色に対しては「＋」、中等度の陽性染色に対しては「＋＋」、強度の陽性染色に対しては「＋＋＋」そして陰性染色に対しては「−」と評点した。
【０１７４】
免疫組織化学的結果はＷＯ０１／４３８６９に記載の通りＣｅｌｌＡｒｒａｙＴＭ技術を使用して得た。種々の樹立細胞株由来の細胞をプロテアーゼを使用することなく成長表面より採取し、充填し、ＯＣＴ化合物中に包埋した。細胞を凍結して切片化し、次に標準的なＩＨＣプロトコルを使用して染色した。
【０１７５】
種々の樹立ヒト正常及び腫瘍細胞株へのｍｕ−抗ＫＩＤ３１抗体の結合結果を、便宜上表３にまとめる。表３に示す実験には、本明細書に記載の方法を使用した生細胞ＥＬＩＳＡ及びＣｅｌｌＡｒｒａｙＴＭ結合実験が含まれる。
【０１７６】
【表２】
2008526256.tif 000003
【０１７７】
【表３】
2008526256.tif 000004
実施例９．癌細胞株Ｈ３２２Ｍに対するｍｕ−抗ＫＩＤ３１の作用
単層として成長させた場合のｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞数を低減させる抗体の能力は被験又は対照の精製抗体の種々の量の存在下又は非存在下において成長させた細胞単層を使用して評価することができ、そして細胞数の変化はＭＴＴを使用して評価できる。ＭＴＴはミトコンドリア酵素の活性を測定する染料であり、そして相対的生細胞数と相関している。目的の細胞を９６ウェルプレート中１０％ウシ胎児血清を添加したＦ１２／ＤＭＥＭ（１：１）成長培地中にプレーティングして成長させた。Ｈ３２２Ｍ細胞は９６ウェルディッシュの３連のウェル中５００、１０００、２０００又は４０００個／ウェルでプレーティングした。プレーティング直後、ｍｕ−抗ＫＩＤ３１を添加した。細胞は５日間５％ＣＯ２において湿潤インキュベーター中で３７°Cでインキュベートした。試験終了時にＭＴＴをＰＢＳに溶解（５ｍｇ／ｍｌ）し、１：１０希釈度でウェルに直接添加した。プレートは４時間インキュベーターに戻した。インキュベーションの後、培地を除去し、１００μｌのＤＭＳＯを添加してＭＴＴ沈殿物を溶解した。プレートはＯＤ５４０ｎｍで読み取った。
【０１７８】
２０μｇ／ｍｌにおいて、ｍｕ−抗ＫＩＤ３１は、１０００及び２０００個／ウェルのプレーティング密度の癌細胞株Ｈ３２２Ｍの成長を約１０％抑制した。
【０１７９】
実施例１０．腎臓下被膜腫瘍モデルにおけるｍｕ−抗ＫＩＤ３１抗体の抗腫瘍作用
本試験は非小細胞肺癌由来細胞株であるＨ３２２Ｍ、及び、腎腫瘍由来細胞株であるＣａｋｉ−２を使用した腎臓下被膜腫瘍モデルにおける抗ＫＩＤ３１抗体に関する用量応答性の抗腫瘍データを試験するために設計されている。Ｈ３２２Ｍ及びＣａｋｉ−２細胞を培地ｍｌ当たり１億個の細胞密度で再懸濁した。
【０１８０】
１型ラット尾部コラーゲンを標準的方法により調製した。慨すれば、成熟育種ラット由来の尾部を採取し、７０％エタノールに浸積することにより滅菌した。尾部皮膚を除去し、腱を単離し、計量した。１グラムの腱から１００ｍｌのコラーゲン溶液を生成し、そして各尾部は約１〜１．５グラムの腱を与える。コラーゲンを抽出するために、腱をペニシリン、ストレプトマイシン及びフンジゾンを含有する希酢酸溶液（水１００ｍｌ中腱グラム当たり氷酢酸２００μｌ）中に入れ、そして少なくとも１週間４℃において穏やかに攪拌した。次に溶液を遠心分離し、コラーゲン上澄みを使用時まで４℃で保存した。
【０１８１】
この試験のために、Ｅａｒｌｅ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  （ＥＢＳＳ）、ＮａＯＨ及びＮａＨＣＯ３を含有する硬化溶液中においてラット尾部コラーゲンを重合させることにより５０μｌのコラーゲンボタンを調製した。重合の後、５×１０５個の細胞をコラーゲンボタン当たり添加した。細胞を３７℃で一夜コラーゲン中でインキュベートした後に移植に付した。
【０１８２】
腎臓被膜下に細胞を移植するために、マウスをトリブロモエタノールで完全に麻酔した。細胞の設置ができるように腎臓被膜内にポケットを形成し、これは右及び／又は左の腎臓への腰近傍の外科的処置を介して行った。一部の試験においては、両方の腎臓に異種移植片を入れた。外科的処置の後、動物を加温面上で回復させ、麻酔から完全に回復するまで観察した。創傷のクリップは外科的処置の１０日後に取り外した。
【０１８３】
各投与用量群につき、ｍｕ−抗ＫＩＤ３１はＰＢＳで希釈することにより０．０１ｍｌ／ｇ体重を投与するために適切な濃度とした。対照群にはＰＢＳ（０．０１ｍｌ／ｇ体重）を投与した。投薬は移植後第２日に開始し、ｍｕ−抗ＫＩＤ３１又はＰＢＳ対照の用量は腹腔内への単回瞬時注射により週３回投与した。
【０１８４】
投薬期間の終了時に、動物を安楽死させ、腫瘍及び隣接する組織を摘出し、５５℃で一夜、プロテイナーゼＫ（１．４５ｍｇ／ｍｌ）及びＲＮａｓｅＡ（０．０７ｍｇ／ｍｌ）を含有する消化緩衝液中でインキュベートすることによりＰＣＲ分析に付した。
【０１８５】
ＰＣＲ分析のための鋳型を生成するために、Ｗｉｚａｒｄ  ＳＶ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して製造元の説明書に従って腫瘍からゲノムＤＮＡを単離した。各ＤＮＡ試料を終容量２００μｌとなるように再懸濁した。
【０１８６】
腫瘍内のヒトＤＮＡの量はヒトリボソーム遺伝子ＲＰＬ１９に特異的なプライマー及びプローブを使用しながら、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＳＤＳ７０００システム上のリアルタイムＰＣＲを使用しながら定量した。
【０１８７】
各試料を先ずＢｓｔＸ１で消化することにより効率的な増幅を確保した。各反応混合物は鋳型ＤＮＡ５μｌ、Ｔａｑｍａｎ  Ｇｏｌｄ  １０ｘ反応緩衝液（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）５μｌ、５単位のＢｓｔＸ１、４ｍＭＭｇＣｌ２、２．５ｍＭの各デオキシヌクレオチド混合物、２５０ｎＭの各プライマー、１５０ｎＭのプローブ、１．５単位のＴａｑｇｏｌｄポリメラーゼ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び水を終容量５０μｌとなる分含有していた。使用した熱サイクリング条件は３０分４５℃でＢｓｔＸ１消化、１０分９５℃でＢｓｔＸ１不活性化及びＴａｑホットスタート、その後、４０サイクルの９５℃２０秒（変性）及び６０℃１分（伸長）を行った。
【０１８８】
４００〜０．０９ｎｇＤＮＡ／反応の範囲のヒトゲノムＤＮＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ）の４倍連続希釈を使用して標準曲線を作成した。試料ＤＮＡ濃度は標準曲線から補間した。各腫瘍試料を３連のＰＣＲ反応において分析し、平均のＤＮＡ濃度を求めた。結果を図１に示す。これらの実験から、ｍｕ−抗ＫＩＤ３１を投与したＨ３２２Ｍ腫瘍は対照ＰＢＳ投与腫瘍と比較してヒトＤＮＡ量の７０．４％減少を示していた。ｍｕ−抗ＫＩＤ３１を投与したＣａｋｉ−２腫瘍は対照ＰＢＳ投与腫瘍と比較してヒトＤＮＡ量の２０．６％減少を示していた。
【０１８９】
本明細書に記載した実施例及び実施形態は、説明のみを目的としたものであり、それらを参照しながら種々の改変又は変更が当業者には示唆されるが、それは本出願の趣旨及び適用範囲に包含されるものである。本明細書において引用した全ての出版物、特許及び特許出願は、個々の出版物、特許及び特許出願が特別に、そして個別に参考として組み入れられるように指示される程度と同じ範囲まで、全ての目的のために参考として全体が本明細書に組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【０１９０】
【図１】Ｈ３２２Ｍ細胞系統及びＣａｋｉ−２細胞系統を使用した腎臓下の腫瘍モデルに対するｍｕ−抗ＫＩＤ３１のｉｎ  ｖｉｖｏ活性のグラフ化した結果を示す。
【図１】
2008526256.tif 000005
【国際調査報告】
2008526256.tif 000006
2008526256.tif 000007