(57)【要約】本発明は親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害であり、広範囲の汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため既存の防汚性物質に比べて生産原価を低減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、新規の防汚剤に関する。
2008504377.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物と、
イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物と、
１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物と
の中から選択される、少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する防汚剤。
【請求項２】
樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質およびその他の添加剤とで構成され、前記防汚性物質は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノール、および１−オクタノールからなる群から選択される、１種または２種以上の混合物である親環境性防汚塗料。
【請求項３】
前記樹脂の含量は、重量の２〜２０％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項４】
前記溶剤の含量は、重量の１０〜３０％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項５】
前記防汚性物質の含量は、重量の３〜４０％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項６】
防汚性能向上のために添加されるブースターとして、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅および銀化合物からなる群から選択される、少なくとも１種であって、その使用量が重量の１〜７％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項７】
前記その他の添加剤の含量は、重量の１〜５％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項８】
３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−酢酸ヘキセニル、アセトフェノン、アラカディックアシッド（archadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物と、
イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物と、
１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物と
の中から選択される、少なくとも１種の化合物を有効成分として含有するバイオサイド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害であり、広範囲の汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため既存の防汚性物質に比べて生産原価を低減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、新規の防汚剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
防汚性物質とは、船舶の表面に海洋付着物（微生物および動植物）による着生を防止するために塗料と混合される物質を言う。着生とは、底生生物が人工または自然物体に付着、成長することを言う。底生生物が船舶の表面に付着は摩擦力の増加、船舶の速度の低下、腐食促進、そして燃料使用の増加などを引き起こし、経済的損失をもたらす。
【０００３】
船底部分を６ヶ月間海水に露出させると、約１５０kg／ｍ２の量の生物が底に付着することが知られている。大型船舶の場合、船体表面が着生生物の付着により０．１mm粗くなる度に摩擦力が０．３〜１．０％増加することが報告されており、結果として摩擦力の増加により船舶の速度は約５０％減少する。
【０００４】
このような問題点を解決するために、トリブチルすず（以下、ＴＢＴと称す）のような有機すず化合物を防汚剤として頻繁に使用してきた。しかしながら、ＴＢＴは、海洋環境に悪影響を及ぼすという事実が明らかになったことで、ＵＮ傘下の国際海事機構（ＩＭＯ）の海洋環境保護委員会（ＭＥＰＣ）で有機すず化合物の危険性のため船舶用防汚システムの規制決議を採択された。結果として、２００３年１月１日から防汚剤として使用されてきたＴＢＴの使用が全面禁止され、２００８年には船舶からＴＢＴを完全に除去しなければならないという規則が施行される。
【０００５】
現在、有機すず化合物に代わって一般的に使用されている非すず系防汚物質は、大韓民国公開特許第２００１−００９９０４９号に開示されているような亜酸化銅または亜鉛を含む。非すず系防汚剤は、海藻類である青海苔に対する防汚性が不十分であるという技術的な問題がある。亜酸化銅防汚剤もまた、海洋底質に蓄積され、環境に悪影響を及ぼし、それ故に、２００６年〜２００８年の間に使用が禁止されることが予想される。従って、防汚性が優れているのと同時に環境に無害な防汚剤の開発が急がれている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者は上記の問題を解決し、環境に無害で、卓越した防汚性を有し、生産原価が安価である防汚剤の開発するために多くの研究を実施し、その結果として、植物から抽出された物質が卓越した防汚性を有することを確認し、その結果として本発明に至った。
【０００７】
従って、本発明の目的は、天然物質から抽出することにより、生産原価が安価なだけでなく、親環境的な防汚剤を提供することである。
【０００８】
また、本発明の別の目的は、親環境的防汚塗料を提供することである。
【０００９】
更に、本発明の別の目的は、親環境的バイオサイドを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記目的を達成するために、一の観点においては、本発明は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物；イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択された少なくとも１種のビニル化合物；および、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物の中から選択さるた少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する防汚剤を提供する。
【００１１】
別の観点においては、本発明は、樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質およびその他の添加剤とで構成される防汚塗料であり、前記防汚性物質は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物；イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物；および、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択された少なくとも１種のアルコール化合物の中から選択される１種または２種以上の化合物の混合物を提供する。
【００１２】
更に、前記化合物は、藻類抑制効果および抗菌効果を有するため、防汚剤だけでなくバイオサイドとしても使用が可能である。すなわち、これらの防汚剤およびバイオサイドは、本発明の範囲内にある。
【００１３】
以下より、本発明を更に詳しく説明する。
【００１４】
本発明は、環境に無害であり、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため、既存の防汚性物質に比べて生産原価を低減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、新規の防汚剤に関するものである。
【００１５】
本発明者は、環境に無害な防汚塗料を開発するために、多様な種類の海藻類と陸上植物に対し防汚性の試験を行った。海藻類は、韓国沿岸の日本海沿岸、太平洋海沿岸の数ヶ所の潮間帯に抑制された（inhibited）種と、潜水して採取した種を分類して、同定して、陰干しし、破砕機で粉砕し、粉末試料は、ガラス瓶に保管して必要の度に使用した。陸上植物は、韓国全土に抑制した陸上植物の中から２次代謝産物が防汚性を有する植物を採取して、分類して、同定して、陰干しし、破砕機で粉砕して、抽出した。
【００１６】
付着性海藻類に対する抽出物の付着防止効果は、代表的な付着性海藻類であるスジアオノリとアナアオサの胞子を利用して試験を行った。その試験を通して、多様な海藻類および陸上植物の中、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、セトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールが優れた防汚性を示した。
【００１７】
一方、防汚塗料は、通常、防汚性物質、樹脂、溶媒、顔料、その他の添加剤などから構成され、防汚性を向上させるために、ブースターを添加することもある。
【００１８】
本発明によれば、前記塗料は、前記防汚性物質を重量の３〜４０％の量、更に好ましくは、重量の１０〜３０％の量、含有する。その汚染物質の量が、重量の３％未満の場合には、防汚性が不足し、そして、その汚染物質の量が、重量の３０％を超過する場合には、その他の組成成分との混合性、長期保管性などが低下する。
【００１９】
本発明の防汚塗料に使用される樹脂は、従来の防汚塗料に使用されていた全ての樹脂が含まれる。その例としては、酢酸ビニル樹脂、塩化ビニル樹脂などのビニル系樹脂、ウレタン樹脂、塩化ゴム系樹脂、フタル酸樹脂、アルキド樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、アクリル樹脂、フッ素樹脂、シリコン樹脂などの合成樹脂とロジンなどの天然樹脂を含む。特に、アクリル樹脂は、例えばｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）アクリル酸アルキル［w−（N−isothiazolonyl）alkyl acrylate］、ｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−アクリル酸マレイミドアルキル（w−maleimidoalkyl acrylate）、ｗ−メタクリル酸マレイミドアルキル（w−maleimidoalkyl methacrylate）、ｗ−２，３−アクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−２，３−メタクリル酸ジクロロマレイミドアルキル、ｗ−マレイミドアルキルビニルエーテル、４−アクリル酸マレイミドアルキル、アクリル酸、メタクリル酸、無水マレイン酸、アクリル酸ヒドロキシルアルキル、アクリル酸アルコキシアルキル、アクリル酸フェノキシアルキル、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、[w-(acetoacetoxy)alkyl acrylate]、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルビニルエーテル、ビニルアセトアセトアセテート、Ｎ，Ｎ−アクリル酸ジアルキル、ビニルピリジン、ビニルピロリジン、４−ニトロフェニル−２−ビニルエチラート、２，４−アクリル酸ジニトロフェニル、２，４−メタクリル酸ジニトロフェニル、４−アクリル酸チオシアノフェニル、アクリル酸トリアルキルシリル、アクリル酸モノアルキルジフェニルシリル、アクリル酸ジクロロメチル、メタクリル酸クロロメチル、アクリル酸フェニルメチル、アクリル酸ジフェニルメチル、メタクリル酸ジフェニルメチル、アクリル酸トリアルキル亜鉛、メタクリル酸トリアルキル亜鉛、アクリル酸トリアリル亜鉛、メタクリル酸トリアリル亜鉛、アクリル酸トリアルキル銅、メタクリル酸トリアルキル銅、アクリル酸トリアリル銅、およびメタクリル酸トリアリル銅から選ばれる少なくとも１つのモノマーを含むポリマーである。このポリマーの製造方法は、はっきりと大韓民国特許出願第９５−１５１４９号に記載されている。ポリマーの数平均分子量は、粘度、フィルム形成度および作業性を考慮して１５００〜１００，０００の範囲が好ましい。更に、合成樹脂は、天然樹脂と併用することもできる。塗料中の樹脂含有量は、重量の２〜２０％、好ましくは重量の５〜１５％である。樹脂含有量が重量の２％未満であるならば、塗料の付着性が低下し、含有量が重量の２０％を超えるならば、貯蔵性に問題が生じる。
【００２０】
本発明の防汚塗料に使用される溶剤は、炭化水素と、キシレン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのようなケトン類溶剤および酢酸セロソルブを含み、重量の１０〜３０％の量を使用するのが好ましい。溶剤含有量が重量の１０％未満であるならば、塗料は非常に高い粘度を有し、溶剤含有量が重量の３０％を超えるならば、塗料は、付着性および防汚性の問題を有する。
【００２１】
本発明の防汚塗料に使用される顔料としては、当業界において知られた多様な顔料を含む。例えば、酸化チタン、酸化鉄、酸化亜鉛などの金属酸化物と有機顔料とを単独または混合して使用する。前記顔料は好ましくは、重量の２０〜４０％使用される。前記顔料が重量の２０％未満の量を使用されるならば、範囲未満の変色するという問題があり、重量の４０％を超える量を使用されるならば、塗料の耐候性が悪化する。
【００２２】
塗料の防汚性を更に向上させる必要性がある場合、ブースターを使用することができる。その例は、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３−（３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅および銀化合物などを少なくとも１種使用することができる。ブースターは、好ましくは、重量の１〜７％の量、使用され、より好ましくは重量の２〜４％である。ブースターの含有量が重量の１％未満の量で使用されるならば、防汚性の上昇効果が微々たるもので、重量の７％を超過して使用されるならば、塗量の貯蔵安定性の問題を有する。
【００２３】
更に、本発明の塗料組成物は、公知の多様な添加剤を含有させることができる。添加剤の例は、ポリアミドワックス、ベントナイト、ポリエチレンワックスなどのような増粘剤を含む。これらの添加剤は、好ましくは、重量の１〜５％で使用される。添加剤の含有量が重量の５％を超過する場合は、粘度が非常に高くなってしまう。
【００２４】
また、本発明による３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−酢酸ヘキセニル、アセトフェノン、アラカディックアシッド（archadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択された少なくとも１種のケトン化合物；イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択された少なくとも１種のビニル化合物；および、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールの中からなる群から選択された少なくとも１種のアルコール化合物との中から選択された少なくとも１種の化合物は、藻類運動抑制活性および抗菌活性を有するため、バイオサイドとしても使用可能である。バイオサイドは、好ましくは、有効成分として発明の抽出物または化合物を全体のバイオサイドの全重量に基づき、重量の０．１〜５％の量で含有し得る。また、有効成分に加えて、バイオサイドは、界面活性剤、溶剤、イソチアゾロン系バイオサイドなども含有し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
以下、本発明は、下記実施例に基づいて更に詳しく説明される。しかしながら、本発明が、これらの実施例に限定されるわけではないことは、当業者にとって明らかである。
【実施例】
【００２６】
（実際例１）試料採取および抽出
１）柑橘類（Citrus sp.）の抽出
貝類に対する付着阻害効果を実験するために代表的な付着貝類であるムラサキガイ（Mytilus edulis）を選択し、足刺激法（foot−stimulating method）を利用して実験を行った。足刺激法において、ムラサキガイの閉殻筋を除去し、５〜１０分間海水に漬けておく。そして、閉殻を開き、ムラサキガイの閉殻筋に１０μｌの海水を落とす。海水に対して収縮反応を示す個体は除外し、生物由来の抽出物を濃度別に１０μｌずつ閉殻筋に落とし、そして収縮可否が試験された。
【００２７】
メチルアルコール１μｌ／ＥＡは閉殻筋の収縮に影響を及ぼさないことが確認され、抽出物１μｌ（４０ｍｇ／ｍｌ）を滅菌海水１０μｌに溶かし、最終的に濃度４０μｇ／ｍｌとした。
【００２８】
収縮反応を示す個体数を全体個体数で割り、百分率で筋収縮能を表した。試験において、４．５±０．２ｃｍの養殖産個体を選択し、貽貝の休止時間は５分とした。実験は３回繰り返し、試験結果の統計分析はスチューデントｔ−検定にて行った。結果としては、水溶性抽出物は、全般的にメチルアルコールの抽出物に比べて低い効果を表し、下記の表１に示すように、柑橘類がムラサキガイの付着に対し、９０％以上の優れた抑制効果を示した。
【００２９】
【表１】
2008504377.tif 000003
【００３０】
２）アブラナ属植物（Brassica sp．）の抽出
スジアオノリの胞子付着に対して生物由来の抽出物の抑制効果実験を行った。試料の各々のメチルアルコール抽出物を２００μｌ／ｍｌの濃度で付着抑制効果を実験し、結果として、アブラナ属植物の抽出物が優れた胞子付着に対して抑制効果を示した（表２ａ、２ｂ）。
【００３１】
【表２ａ】
2008504377.tif 000004
【００３２】
【表２ｂ】
2008504377.tif 000005
【００３３】
３）長芋（D．batatas）の抽出
長芋を韓国の安東（Andong）、晋陽（Janyang）、栄豊（Youngpung）地方で採取し、植物から異物を除去した。そして、植物を洗浄し、陰干しし、そして粉砕して長芋３０kgの粉末を作った。メタノール５０ｌに試料粉末３０kgを添加し、２４時間保管し、抽出し、そして上澄みのみを集めた。抽出と上澄収集の手順を３回繰り返して、そして上澄みを一緒に混ぜ合わせ、そして３７°Ｃで減圧濃縮器を用いて１／１０の体積まで蒸発させた。残渣物質を０．２２−（ｍフィルターを通して濾過して、−２０°Ｃで保管しながら実験に使用した。
【００３４】
４）植物の抽出
実験に使用したからし葉は韓国の平昌（Pyongchang-gun）、江原道（Kangwon-do）で、レモンとブルーベリーは韓国の宝城（Boseong-gun）、全羅南道（Jeollanam-do）で採取した。採取した陸上植物から異物を除去した。そして、植物を洗浄し、陰干しした。抽出収率を高めるために、植物を粉砕機を用いて粉砕して、実験で使用した。採集した陸上植物を陰干しして粉砕し、からし葉粉末、レモン粉末、ブルーベリー粉末を各々１kg作った。メタノール１０ｌに試料粉末１kgを各々添加して、２４時間保管して、抽出した。抽出および上澄み収集の手順を３回繰り返して、上澄みを一緒に混ぜ合わせ、そして３７（Ｃで減圧濃縮器を用いて１／１０の体積まで蒸発させた。０．２２-（ｍフィルターを通して濾過して、−２０（Ｃで保管しながら実験に使用した。
【００３５】
（実施例２）柑橘類の抽出物の溶媒分画（fractionation）
柑橘類の抽出物から青海苔の胞子の運動性に対して抑制物質を調査するために、有機溶媒分画を製造した。
【００３６】
柑橘類をヘキサン、メチルアルコールそして水を用いて各々抽出した。ヘキサンとメチルアルコール抽出液を濾過し、濾過液を３０（Ｃで減圧濃縮器を用いて濃縮した。水抽出物は凍結乾燥機を用いて凍結乾燥させた。
【００３７】
各抽出物を生理活性について試験し、結果を下記の表３に示す。青海苔の胞子運動性に対する抑制活性試験の結果において、ヘキサン抽出物は１０，０００μｇ／ｍｌ、７，５００μｇ／ｍｌ、そして５，０００μｇ／ｍｌでは強力な抑制効果（９５％以上の抑制：＋＋＋＋）を、２，５００μｇ／ｍｌでは強い活性（９５〜７５％：＋＋＋）を、１，２５０(g／mｌでは中間活性（７５〜５０％：＋＋）を示した。
【００３８】
メチルアルコール抽出物は１０，０００(ｇ／ｍｌ、７，５００(ｇ／ｍｌでは強い活性（＋＋＋）を示したが、１，２５０(ｇ／ｍｌでは活性を示さなかった。また、水抽出物は１０，０００(ｇ／ｍｌおよび７，５００(ｇ／ｍｌで中間活性（＋＋）を、５，０００(ｇ／ｍｌで弱い活性（＋）を示し、２，５００(ｇ／ｍｌと１，２５０(ｇ／ｍｌでは活性を示さなかった。
【００３９】
結果として、ヘキサン抽出物は優れた効果を示し、従って、防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００４０】
【表３】
2008504377.tif 000006
【００４１】
１次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を、ヘキサン中で充填した。ヘキサン抽出物試料を適用し、そしてカラムをヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（７．５：２．５）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（２．５：７．５）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、そしてメチルアルコール（１０）の順番で溶出した。これらの抽出溶媒は、３mｌ／minの流速でヘキサンから塩化メチレンまでの抽出溶媒として１００mｌの体積、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）からメチルアルコールまでの抽出溶媒として３００mｌの体積のカラムに通された（表４）。
【００４２】
【表４】
2008504377.tif 000007
【００４３】
溶出液を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを実施することにより、６個の分画に分画した。６個の分画（Ｉ−ＶＩ）を生理活性について実験して、その結果を以下の表５に示す。
【００４４】
【表５】
2008504377.tif 000008
【００４５】
４，０００μｇ／ｍｌの濃度で、分画Ｖが青海苔の胞子の運動性に対して強力な活性（＋＋＋＋）を示し、分画ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶそしてＶＩでは強い活性（＋＋＋）を示した。２，０００μｇ／ｍｌおよび１，５００μｇ／ｍｌで、分画Ｖは強力な活性（＋＋＋＋）を示し、７５０μｇ／ｍｌと２５０μｇ／ｍｌでは活性が低下したが、強い活性（＋＋＋）を維持した。
【００４６】
結果として、分画（Ｉ〜ＶＩ）中、活性が最も優れていた塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）の範囲内の分画Ｖを２次シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００４７】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で充填した。分画Ｖを試料としてカラムに適用し、カラムをヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（９：１）、ヘキサン：塩化メチレン（８：２）、ヘキサン：塩化メチレン（７：３）、ヘキサン：塩化メチレン（６：４）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（４：６）、ヘキサン：塩化メチレン（３：７）、ヘキサン：塩化メチレン（２：８）、ヘキサン：塩化メチレン（１：９）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（９：１）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（７：３）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（５：５）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（３：７）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、塩化メチレン：酢酸エチル（１：９）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（６：４）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、メチルアルコール（１０）の順番に溶出した。各々の抽出溶媒は、３ｍｌ／ｍｉｎの流速で１００ｍｌの体積のカラムに通された。（表６）そして、各溶出液をヘキサン：メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを行い、６個の分画（Ｖ−ｉ〜Ｖ−ｖｉ）を製造した。６個の分画を胞子運動性に対する抑制活性について実験して、その結果を表７に示した。
【００４８】
【表６】
2008504377.tif 000009
【００４９】
【表７】
2008504377.tif 000010
【００５０】
結果として、分画Ｖ−ｉｉｉが最も優れた活性を示し、従って、Prep-TLによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００５１】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって有機溶媒の濃度勾配を実施することによって得た分画の生理活性実験の中で最も優れた活性を示した分画Ｖ−ｉｉｉ部分を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒を利用してPrep-TLCで展開させ、３個の分画、即ち、Ｖ−ｉｉｉ−ａ、Ｖ−ｉｉｉ−ｂ、Ｖ−ｉｉｉ−ｃを得た。
【００５２】
青海苔の胞子の運動性に対する３個の分画の抑制効果を以下の表８に示した。
【００５３】
【表８】
2008504377.tif 000011
【００５４】
結果として、分画Ｖ−ｉｉｉ−ｂは、希釈率の増加にもかかわらず活性が持続され、従って、Prep−HPLCによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００５５】
Prep−HPLC
Prep-TLCで得た活性分画Ｖ−ｉｉｉ−bをPrep-HPLC C18逆相カラム（microsorb、２１．４×２５０mm）に適用した。移動相を６０％アセトニトリルと４０％水の混合溶媒を使用して１２０分間、流速２０mｌ／minで溶出した。２１３nmで吸光度を測定しながら最高値の吸光度を示す６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）を分取した。
【００５６】
Prep−TLCから得た活性分画Ｖ−ｉｉｉ−ｂのPrep−HPLCから分取した各分画（Ｋ１〜Ｋ６）の青海苔の胞子の運動性の抑制活性について試験をして、その結果を以下の表９に示す。
【００５７】
【表９】
2008504377.tif 000012
【００５８】
結果的として、分取した６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）中、Ｋ４が青海苔の胞子の運動性に対して抑制効果が最も優れ、従って、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳそしてＮＭＲによって構造分析のための試料として使用した。
【００５９】
（実施例３）アブラナ属植物の抽出物の溶媒分画
アブラナ属植物の抽出物から青海苔の胞子の運動性に対する抑制物質を調査するために、有機溶媒分画を作った。
【００６０】
アブラナ属植物の粉末をヘキサン、メチルアルコールそして水の各々を用いて抽出した。ヘキサンとメチルアルコールの抽出液を濾過し、濾過液を３０°Ｃで減圧濃縮器を用いて濃縮し、そして、水の抽出物は、凍結乾燥機を用いて凍結乾燥させた。
【００６１】
各溶媒の抽出物は生理活性のについて実験され、その結果を下記の表１０に示す。青海苔の胞子の運動性に対する性抑制活性の結果において、ヘキサン抽出物は、１０，０００μｇ／ｍｌ、７５，０００μｇ／ｍｌそして５，０００μｇ／ｍｌでは強力な抑制効果（９５％以上の抑制：＋＋＋＋）を、２，５００μｇ／ｍｌでは強い活性（９５〜７５％：＋＋＋）を、１，２５０μｇ／ｍｌでは中間活性（７５〜５０％：＋＋）を示した。
【００６２】
メチルアルコール抽出物は、１０，０００(ｇ／ｍｌと７５，０００(ｇ／ｍｌで強い活性（＋＋＋）を示したが、１，２５０(ｇ／ｍｌでは活性を示さなかった。また、水の抽出物は１０，０００(ｇ／ｍｌおよび７，５００(ｇ／ｍｌで中間活性（＋＋）を、５，０００(ｇ／ｍｌで弱い活性（＋）を示し、２，５００(ｇ／ｍｌと１，２５０(ｇ／ｍｌでは活性を示さなかった。
【００６３】
結果として、ヘキサン抽出物で優れた効果を示し、従って、防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００６４】
【表１０】
2008504377.tif 000013
【００６５】
１次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を、ヘキサン中で充填した。ヘキサン抽出物をカラムに適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（７．５：２．５）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（２．５：７．５）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、そしてメチルアルコール（１０）を順番で溶出した。これらの抽出溶媒は、３ｍｌ／ｍｉｎの流速で、ヘキサンから塩化メチレンまでの抽出溶媒として１００ｍｌの体積、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）からメチルアルコールまでの抽出溶媒として３００ｍｌの体積のカラムに通された（表１１）。
【００６６】
【表１１】
2008504377.tif 000014
【００６７】
溶出液を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを実施することにより、６個の分画に分画した。６個の分画（Ｉ−ＶＩ）を生理活性について実験して、その結果を以下の表１２に示す。
【００６８】
【表１２】
2008504377.tif 000015
【００６９】
分画（Ｉ〜ＶＩ）中、活性が最も優れていた塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）の範囲内の分画ＩＶを２次シリカゲルクロマトグラフィーによって防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７０】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を、ヘキサン中で充填した。分画四を試料としてカラムに適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（９：１）、ヘキサン：塩化メチレン（８：２）、ヘキサン：塩化メチレン（７：３）、ヘキサン：塩化メチレン（６：４）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（４：６）、ヘキサン：塩化メチレン（３：７）、ヘキサン：塩化メチレン（２：８）、ヘキサン：塩化メチレン（１：９）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（９：１）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（７：３）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（５：５）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（３：７）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、塩化メチレン：酢酸エチル（１：９）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（６：４）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、およびメチルアルコール（１０）を順番に溶出した。そして、各溶出液をヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを行い、６個の分画（Ｖ−ｉ〜Ｖ−ｖｉ）を製造した。６個の分画を胞子運動に対する抑制活性について実験して、その結果を表１３に示した。
【００７１】
【表１３】
2008504377.tif 000016
【００７２】
【表１４】
2008504377.tif 000017
【００７３】
結果として、分画ＩＶ−ｉｉｉが最も優れた活性を示し、従って、Prep-TLCを用いて防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７４】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、有機溶媒の濃度勾配を実施することによって得た分画の生理活性試験の中で、最も優れた活性を示した分画Ｖ−ｉｉｉ部分を、Prep-TLCで展開させ、３個の分画、即ち、ＩＶ−ｉｉｉ−ａ、ＩＶ−ｉｉｉ−ｂ、ＩＶ−ｉｉｉ−ｃを分取した。
【００７５】
各３個の分画は青海苔の胞子の運動性に対する抑制効果について実験して、その結果を以下の表１５に示した。
【００７６】
【表１５】
2008504377.tif 000018
【００７７】
結果的として、分画ＩＶ−ｉｉｉ−ｂは希釈率の増加にかかわらず活性が持続され、従って、Prep-HPLCによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７８】
Prep-HPLC
Prep-TLCで分取した活性分画ＩＶ−ｉｉｉ−bをPrep-HPLC逆相カラム（microsorb、２１．４×２５０mm）に適用し、均等な（isocratic）条件で移動相を６０％アセトニトリルと４０％水の混合溶媒を使用して１２０分間、流速２０mｌ／minで溶出した。２１３nmで吸光度を測定しながら最高値を見せる６個の分画（Ｋ１〜Ｋ５）を分取した。
【００７９】
Prep−TLCで分取した活性分画ＩＶ−ｉｉｉ−ｂのPrep−HPLCで分取した各分画を、青海苔の胞子の運動性に対する運動性抑制活性について実験して、その結果を以下の表１６に示す。
【００８０】
【表１６】
2008504377.tif 000019
【００８１】
結果的として、６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）中、分画Ｋ５が青海苔の胞子の運動性について最も優れた抑制効果を有する。従って、分画Ｋ５は、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳそしてＮＭＲによる構造分析の試料として使用した。
【００８２】
（実施例４）長芋抽出物の溶媒分画
実施例１で得られた長芋抽出物を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて下記の方法により５個（Ａ〜Ｅ）に分画した。
【００８３】
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で、ガラス管カラム（１０ｃｍ×９０ｃｍ、ＰＹＲＥＸ（登録商標））に充填した。その際、カラムを試料の量によって選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍とした。長芋抽出物を試料としてカラムに適用し、カラムを展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５mｌ／minの流速で展開した。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより、溶出液を６個（Ｉ〜ＶＩ）に分画した。
【００８４】
６個の分画（Ｉ〜ＶＩ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、実験において良い活性を示す分画Ｉ、ＩＩを混ぜ合わせ、２次シリカゲルカラムを実施した。その際、混合させた分画をカラムに適用し、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に３mｌ／minの流速で展開した。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより、溶出液を５個に分画した。
【００８５】
汚損生物の定着防止についての陸上植物と海藻類抽出物の効果は、代表的な軟性海藻類のうちの一つであるアナアオサ（Ulva pertusa）をについて実験した。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海藻を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海藻は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。
【００８６】
半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。準備されたチューブに１０(ｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００(g/mｌでの胞子の運動性に対する抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表１７に示した。表１７において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−”は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【００８７】
５個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表１７に示す。
【００８８】
【表１７】
2008504377.tif 000020
【００８９】
前記表１７において分かるように、分画Ａが胞子の運動性に対する最も優れた抑制効果を発揮した。
【００９０】
２次分画
分画Ａを分画採取用高速液体クロマトグラフィーＣ１８逆相カラム（Microsorb、２１．４mm×２５０mm）に適用し、そして安定した条件で８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間流速５mｌ／minで溶出した。２５４nmで吸光度を測定しながら６個（Ｆ１〜Ｆ６）に分画した。各分画（Ｆ１〜Ｆ６）に対するアナアオサの運動性に対する抑制効果について実験して、結果として、分画Ｆ２とＦ５は最も強力な活性を示した（表１８）。胞子の運動性に対する抑制効果を図１に示した。図１に示すように、分画Ｆ２とＦ５は、１０ppmと１００ppmの濃度で７５％の付着抑制を示し、１ppmの濃度で５０％の付着阻害を示した。分画Ｆ１、Ｆ３、Ｆ４およびＦ６は、胞子付着に対する抑制効果を示さなかった。
【００９１】
【表１８】
2008504377.tif 000021
【００９２】
（実施例５）からし葉の抽出物の溶媒分画
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で充填した。その際、カラムは試料の量によって選択して使用し、そしてシリカゲルの量は試料量の５０〜６０倍とした。からし葉抽出物を試料としてカラムに適用し、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５mｌ／minの流速で展開した。（表１９）実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより、溶出液を６個の分画（Ｉ〜ＶＩ）に分画した。
【００９３】
【表１９】
2008504377.tif 000022
【００９４】
汚損生物の付着抑制についての分画（Ｉ〜ＶＩ）の効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサについて実験を行った。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海藻を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海藻は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、８０mol m−２ s−１、２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【００９５】
準備されたチューブに１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００μg/mｌでの胞子の運動性に対する分画の抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表２０に示した。表２０において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−“は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【００９６】
５個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表２０に示す。下記の表２０から分かるように、分画ＩＩＩは強い活性を示した。
【００９７】
【表２０】
2008504377.tif 000023
【００９８】
（実施例６）レモン抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中でガラス管カラム（１０ｃｍ×９０ｃｍ、PTEE end plate付着）に充填した。カラムは試料の量によって選択して使用し、シリカゲルの量は試料量の５０〜６０倍とした。レモン抽出物を試料としてカラムに適用し、そして、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５mｌ／minの流速で展開した（表２１）。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより溶出液を６個の分画（Ａ〜Ｆ）に分画した。
【００９９】
【表２１】
2008504377.tif 000024
【０１００】
汚損生物の付着抑制についての分画（Ａ〜Ｆ）の効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサについて実験を行った。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海藻を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海藻は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、および２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【０１０１】
準備されたチューブに１０(ｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００(g/mｌでの胞子の運動性に対する分画の抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表２２に示した。表２２において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−“は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【０１０２】
６個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表２２に示す。下記の表２２から分かるように、分画Ｂ〜Ｄは強い活性を示した。
【０１０３】
【表２２】
2008504377.tif 000025
【０１０４】
（実施例７）ブルーベリー抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で、ガラス管カラム（１０ｃｍ×９０ｃｍ、PTEE end plate付着）に充填し、カラムは、試料の量によって選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍とした。ブルーベリー抽出物を試料としてカラムに適用し、そして、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５mｌ／minの流速で展開した（表２３）。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより溶出液を６個の分画（ａ〜ｆ）に分画した。
【０１０５】
【表２３】
2008504377.tif 000026
【０１０６】
汚損生物の定着防止についての分画（Ａ〜Ｆ）の効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサについて実験を行った。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海苔を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海苔は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、および２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【０１０７】
準備されたチューブに１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００μg/mｌでの胞子の運動性に対する分画の抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表２４に示した。表２４において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、“＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、“−“は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【０１０８】
６個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表２４に示す。下記の表２４から分かるように、分画ｃとｄは強い活性を示した。
【０１０９】
（表２２）
2008504377.tif 000027
【０１１０】
（実施例８）植物由来の防汚性物質の確認
（１）柑橘類由来物質の分析
実施例３における柑橘類由来分画Ｋ４についてのＧＣ−ＭＳ結果を図２に示し、分画Ｋ４についてのＮＭＲデータを図３に示す。分画Ｋ４は、下記化学式１の構造を有する。
【０１１１】
【化１】
2008504377.tif 000028
【０１１２】
結果として、柑橘類で分離、精製された優れた防汚性を有する防汚性物質は、３，７−ジメチル-２，６−オクタジエナールであることが明らかになった。
【０１１３】
（２）アブラナ属植物由来物質の分析
実施例４におけるアブラナ属植物由来分画Ｋ５についてのＧＣ−ＭＳ結果を図４に示し、分画５についてのＮＭＲデータを図５に示す。分画Ｋ５は、下記化学式２の構造を有する。
【０１１４】
【化２】
2008504377.tif 000029
【０１１５】
結論として、アブラナ属植物で分離、精製された優れた防汚性を有する防汚性物質は、シス−３−酢酸ヘキセニルであることが明らかになった。
【０１１６】
（３）長芋由来物質の分析
ＨＰＬＣ／ＧＣ質量スペクトル
Prep-HPLCにより分画した各分画をPrep-HPLC C18逆相カラム（Microsorb、４．６mm×２５０ｍｍ、Cosmosil）に適用し、安定した条件で８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間、流速１．０ｍｌ／minで溶出させた。２５４nmで溶出した分画Ｆ２およびＦ５の吸光度を測定し、分画Ｆ２およびＦ５の結果を各々図６、７に示した。高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）から活性部分（メタノール濃度８０％）のみを回収して乾燥させ、メタノールに溶かし、１mgの溶媒をＧＣ／ＭＳカラム（Hewlett-Packard、３０m×０．２５mm×０．２５μｍ）に適用し、移動相気体としてヘリウムを使用し、注入率０．６mｌ／minで分割注入法（１：５０）を使用して分析した。
【０１１７】
各々の分画Ｆ２およびＦ５の分子量は、ＧＣ／ＭＳにより測定され、分画Ｆ２およびＦ５についてのＧＣ／ＭＳの結果を図８および９に各々示す。Ｒｔ：２．８〜７．１６３min、７１．５６min；分子イオン：Ｍ＋ −３６９、−３４２であった。
【０１１８】
核磁気共鳴スペクトル（Nuclear Magnetic Resonance）
ＨＰＬＣにより分画された分画Ｆ２およびＦ５を水素−核磁気共鳴および炭素−核磁気共鳴によって分析した。分析結果を図１０から１５に示す。図１１において、分画Ｆ２の１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは、δ２．０５で単一信号のカルボニルを基にしたメチル基を示し、これはアセトキシメチルプロトン（acetoxy  methyl proton）であると考えら。δ７．５３およびδ７．７２で、複雑な形態で４個の芳香族プロトンを示した。芳香族ケト化合物である分画Ｆ２の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、δ１７１．４でアセトキシ炭素（acetoxy carbon）、また別の芳香族炭素（aromatic carbon）はδ１８〜１３１で示された。これらのデータから、分画Ｆ２はアセトフェノンと判明した（化学式３）。分画Ｆ５の１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは、δ０．９５〜１．０３で３双（pair）からなる６個のメチルプロトンを示し、δ１．２５で単一信号においてメチルプロトンを示した。また、δ３．４５で複雑な信号においてヒドロキシルプロトンとヒドロキシル酸を示した。これらのデータから、分画Ｆ５は、複雑な長い鎖で連結されたアルコールと酸と判明された。分画Ｆ５の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、δ３．４５でメチルとメチレン、そしてアセチルカルボニル基を示した。上記の全てのデータから、分画は１−オクタデカノールとアラカディックアシッド（arachadic acid）（エイコサン酸）の混合物と判明した（化学式４、５）。
【０１１９】
【化３】
2008504377.tif 000030
【０１２０】
【化４】
2008504377.tif 000031
【０１２１】
【化５】
2008504377.tif 000032
【０１２２】
（４）からし葉由来物質の分析
実施例５において得たからし葉由来分画ＩＩＩに対するＨ−ＮＭＲおよびＣ−ＮＭＲによる分析がされ、分析結果を各々図１６および１７に示す。結果として、分画ＩＩＩは、下記の化学式６の構造を有するアリルイソチオシアネートと判明した。
【０１２３】
【化６】
2008504377.tif 000033
【０１２４】
（５）レモン由来物質分析
実施例６において得たレモン由来分画Ｂ、ＣおよびＤはＨ−ＮＭＲおよびＣ−ＮＭＲにより分析され、その結果を図１８〜２３に示す。分画Ｂ、ＣおよびＤは、各々１−オクタノール、メチルカポレート（methyl caporate）、ヘプタン酸エチルと判明した。これらの化合物は、各々下記の化学式７〜９の構造を有する。
【０１２５】
【化７】
2008504377.tif 000034
【０１２６】
【化８】
2008504377.tif 000035
【０１２７】
【化９】
2008504377.tif 000036
【０１２８】
（６）ブルーベリー由来物質の分析
実施例７において得たブルーベリー由来分画ｃおよびｄは、Ｈ−ＮＭＲおよびＣ−ＮＭＲにより分析され、その結果を図２４〜２７に各々示す。分画ｃは、下記の化学式１０の構造を有するベータ−ミルセン、分画ｄは、下記の化学式１１の構造を有するユージノールと判明した。
【０１２９】
【化１０】
2008504377.tif 000037
【０１３０】
【化１１】
2008504377.tif 000038
【０１３１】
（実施例９）安全性実験
３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナールは、明るい黄色の液体であり、レモンのような香りを有する。この化合物の物理的な特性は、溶点が１０°Ｃ未満で、沸点が２２０〜２４０°Ｃで、比重が０．８８５〜０．８９３であり、水には殆ど溶解されない。この化合物をマウスの口腔に投与し、毒性について検査した。その結果は、ＬＤ５０＞４，９６０mg／kg、ＯＲＡＬ−ＭＵＳ ＬＤ５０＞６，０００mg／kg、そして、ＩＰＲ（Intraperitoneal）−ＲＡＴ ＬＤ５０＞４６０mg／kgであった。
【０１３２】
シス−３−酢酸ヘキセニルは明るい黄色の液体であり、沸点が８６°Ｃであり、水には溶解せず、有機溶媒に溶解しない性質を有している。この化合物をウサギの口腔と皮膚に投与し、毒性ｎ検査いついて検査した。その結果は、ＬＤ５０＞５g／kg(経皮投与)、ＬＤ５０＞５g／kg（口腔）であった。
【０１３３】
アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールを各々ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、水で希釈した。そして、各々の希釈液１０mg／kgをマウス群（１０匹からなる）に投与し、マウスを７日間観察した。観察結果として、死亡したマウスはなかった。
【０１３４】
（実施例１０〜２６）防汚塗料の製造
樹脂およびロジンをキシレンと少量のメチルイソブチルケトンに完全に溶解させた。溶液に顔料として酸化亜鉛および酸化鉄を添加し、サンドミルを利用して２回分散させた。この混合物に、下記の表２５に与えられる防汚剤と増粘剤を添加した。高速攪拌器を用いて３５００rpmで６０分間攪拌した。そして、残ったケトン類溶媒を添加して攪拌することで防汚塗料を製造した。
【０１３５】
【表２５】
2008504377.tif 000039
【０１３６】
（実施例２７）ブースター添加塗料の製造
ピリチオン亜鉛をブースターとして実施例１４と同一組成の混合物に添加し、防汚塗料を製造した。ブースターの添加は、分散工程の前に顔料と共に実行した。
【０１３７】
（実施例２８）防汚性物質が混合された塗料の製造
防汚塗料を実施例１５と同様の方法で製造したが、防汚性物質の半分をフタル酸ジオクチルに代替し、防汚塗料を製造した。
【０１３８】
（比較例１）
実施例１０と同様の方法で製造したが、防汚性物質は、１重量部で使用された。
【０１３９】
（比較例２）
実施例１１と同様の方法で製造したが、防汚性物質は、１重量部で使用された。
【０１４０】
（比較例３）
実施例１３と同様の方法で製造したが、防汚性物質は、１重量部で使用された。
【０１４１】
（試験例１）
ＫＳＤ３５０１の圧延鋼板（３００×３００×３．２mm）によりＫＳＭ５５６９法に従って製造した各々の防汚塗料の３枚の試料をタール／ビニル樹脂で防錆塗装した。そして、各々の試料を実施例１０〜２８および比較例１〜３において製造された各々の防汚塗料を用いて乾燥厚さが１５０μｍとなるようにスプレー塗装をした。
【０１４２】
塗装されたパネルを相対湿度７５％、２５°Ｃで１週間乾燥させ、日本海の２Ｍ水深域に沈積させた。１２ヶ月後にパネルを観察した。試料の上端から７０mmの距離下がった線、下端から３０mm上がった線および左右両端から２０mm内部の線により規定される有効面積５２，０００mm２を基準に３枚の試料の汚染面積の算術平均を算出した。算出された算術平均を５％の範囲で四捨五入し、その結果を下記の表２６に示す。
【０１４３】
【表２６】
2008504377.tif 000040
【０１４４】
上記の結果から分かるように、本発明の防汚塗料は、既存の有機スズ化合物を含む防汚塗料に比べて同等以上の防汚性能を有する。
【０１４５】
（試験例２）
２倍連続希釈法によって希釈したＰＡＧＳによって得られた液体培地が９６−マルチウェルプレート（multi well plate）上に置かれ、１０４cfu／mｌの微生物を植菌した。液体培地を30°Ｃで48時間培養し、その後、ＰＡＧＳの最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、微生物の成長可否を、濁度を基準として視覚的に判断することにより測定された。試験で使用された液体培地は、栄養培養液（nutrient broth）（Difco）であった。試験に使用した抗菌物質はＰＡＧＳ−１であり、そして、その結果を表２７に示す。
【０１４６】
【表２７】
2008504377.tif 000041
【産業上の利用可能性】
【０１４７】
上記から分かるように、本発明による親環境性防汚剤は、環境に無害であり、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、天然物から抽出でき、その結果として製造原価が低減し、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】胞子の定着に対する長芋溶媒の分画Ｆ１〜Ｆ６の抑制効果を示すグラフである。
【図２】３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナールに対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図３】３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナールに対するＮＭＲデータを示す。
【図４】シス−３−酢酸ヘキセニルに対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図５】シス−３−酢酸ヘキセニルに対するＮＭＲデータを示す。
【図６】長芋由来の分画Ｆ２のＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図７】長芋由来の分画Ｆ５のＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図８】アセトフェノンに対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図９】１−オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）に対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図１０】アセトフェノンの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１１】アセトフェノンの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１２】アセトフェノンの２次元ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１３】オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１４】オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）の１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１５】オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）の２次元ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１６】アリルイソチオシアネートの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１７】アリルイソチオシアネートの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１８】１−オクタノールの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１９】１−オクタノールの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２０】メチルカポレート（methyl carporate）の３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２１】メチルカポレート（methyl carporate）の１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２２】ヘプタン酸エチルの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２３】ヘプタン酸エチルの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２４】ベータ−ミルシンの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２５】ベータ−ミルシンの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２６】ユージノールの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２７】ユージノールの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１】
2008504377.tif 000042
【図２】
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【図３】
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【図４】
2008504377.tif 000045
【図５】
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【図６】
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【図７】
2008504377.tif 000048
【図８】
2008504377.tif 000049
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
2008504377.tif 000060
【図２０】
2008504377.tif 000061
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
2008504377.tif 000066
【図２６】
2008504377.tif 000067
【図２７】
2008504377.tif 000068
【手続補正書】
【提出日】平成18年1月17日(2006.1.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックエイド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物と、
イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物と、
１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物と
の中から選択される、少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する海水用の防汚剤。
【請求項２】
樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質およびその他の添加剤とで構成され、前記防汚性物質は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックエイド（arachadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノール、および１−オクタノールからなる群から選択される、１種または２種以上の混合物である海水用の親環境性防汚塗料。
【請求項３】
前記樹脂の含量は、重量の２〜２０％である、請求項２に記載の海水用の親環境性防汚塗料。
【請求項４】
前記溶剤の含量は、重量の１０〜３０％である、請求項２に記載の海水用の親環境性防汚塗料。
【請求項５】
前記防汚性物質の含量は、重量の３〜４０％である、請求項２に記載の海水用の親環境性防汚塗料。
【請求項６】
防汚性能向上のために添加されるブースターとして、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅および銀化合物からなる群から選択される、少なくとも１種であって、その使用量が重量の１〜７％である、請求項２に記載の海水用の親環境性防汚塗料。
【請求項７】
前記その他の添加剤の含量は、重量の１〜５％である、請求項２に記載の海水用の親環境性防汚塗料。
【請求項８】
シス−３−酢酸ヘキセニル、アセトフェノン、アラカディックエイド（archadic acid）、メチルカポレート（methyl caporate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物と、
ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物と、
１−オクタデカノールと
の中から選択される、少なくとも１種の化合物を有効成分として含有するバイオサイド。
【手続補正書】
【提出日】平成18年10月26日(2006.10.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物と、
ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物と、
１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物と
の中から選択される、少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する防汚剤。
【請求項２】
樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質およびその他の添加剤とで構成され、前記防汚性物質は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノール、および１−オクタノールからなる群から選択される、１種または２種以上の混合物である親環境性防汚塗料。
【請求項３】
前記樹脂の含量は、重量の２〜２０％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項４】
前記溶剤の含量は、重量の１０〜３０％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項５】
前記防汚性物質の含量は、重量の３〜４０％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項６】
防汚性能向上のために添加されるブースターとして、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅および銀化合物からなる群から選択される、少なくとも１種であって、その使用量が重量の１〜７％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項７】
前記その他の添加剤の含量は、重量の１〜５％である、請求項２に記載の親環境性防汚塗料。
【請求項８】
３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−酢酸ヘキセニル、アセトフェノン、アラカディックアシッド（archadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物と、
イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物と、
１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物と
の中から選択される、少なくとも１種の化合物を有効成分として含有するバイオサイド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】  明細書
【発明の名称】  親環境性防汚剤
【技術分野】
【０００１】
本発明は親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害であり、広範囲の汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため既存の防汚性物質に比べて生産原価を低減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、新規の防汚剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
防汚性物質とは、船舶の表面に海洋付着物（微生物および動植物）による着生を防止するために塗料と混合される物質を言う。着生とは、底生生物が人工または自然物体に付着、成長することを言う。底生生物が船舶の表面に付着は摩擦力の増加、船舶の速度の低下、腐食促進、そして燃料使用の増加などを引き起こし、経済的損失をもたらす。
【０００３】
船底部分を６ヶ月間海水に露出させると、約１５０kg／ｍ２の量の生物が底に付着することが知られている。大型船舶の場合、船体表面が着生生物の付着により０．１mm粗くなる度に摩擦力が０．３〜１．０％増加することが報告されており、結果として摩擦力の増加により船舶の速度は約５０％減少する。
【０００４】
このような問題点を解決するために、トリブチルすず（以下、ＴＢＴと称す）のような有機すず化合物を防汚剤として頻繁に使用してきた。しかしながら、ＴＢＴは、海洋環境に悪影響を及ぼすという事実が明らかになったことで、ＵＮ傘下の国際海事機構（ＩＭＯ）の海洋環境保護委員会（ＭＥＰＣ）で有機すず化合物の危険性のため船舶用防汚システムの規制決議を採択された。結果として、２００３年１月１日から防汚剤として使用されてきたＴＢＴの使用が全面禁止され、２００８年には船舶からＴＢＴを完全に除去しなければならないという規則が施行される。
【０００５】
現在、有機すず化合物に代わって一般的に使用されている非すず系防汚物質は、大韓民国公開特許第２００１−００９９０４９号に開示されているような亜酸化銅または亜鉛を含む。非すず系防汚剤は、海藻類である青海苔に対する防汚性が不十分であるという技術的な問題がある。亜酸化銅防汚剤もまた、海洋底質に蓄積され、環境に悪影響を及ぼし、それ故に、２００６年〜２００８年の間に使用が禁止されることが予想される。従って、防汚性が優れているのと同時に環境に無害な防汚剤の開発が急がれている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者は上記の問題を解決し、環境に無害で、卓越した防汚性を有し、生産原価が安価である防汚剤の開発するために多くの研究を実施し、その結果として、植物から抽出された物質が卓越した防汚性を有することを確認し、その結果として本発明に至った。
【０００７】
従って、本発明の目的は、天然物質から抽出することにより、生産原価が安価なだけでなく、親環境的な防汚剤を提供することである。
【０００８】
また、本発明の別の目的は、親環境的防汚塗料を提供することである。
【０００９】
更に、本発明の別の目的は、親環境的バイオサイドを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記目的を達成するために、一の観点においては、本発明は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物；イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択された少なくとも１種のビニル化合物；および、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択される少なくとも１種のアルコール化合物の中から選択さるた少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する防汚剤を提供する。
【００１１】
別の観点においては、本発明は、樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質およびその他の添加剤とで構成される防汚塗料であり、前記防汚性物質は、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種のケトン化合物；イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択される少なくとも１種のビニル化合物；および、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールからなる群から選択された少なくとも１種のアルコール化合物の中から選択される１種または２種以上の化合物の混合物を提供する。
【００１２】
更に、前記化合物は、藻類抑制効果および抗菌効果を有するため、防汚剤だけでなくバイオサイドとしても使用が可能である。すなわち、これらの防汚剤およびバイオサイドは、本発明の範囲内にある。
【００１３】
以下より、本発明を更に詳しく説明する。
【００１４】
本発明は、環境に無害であり、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため、既存の防汚性物質に比べて生産原価を低減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、新規の防汚剤に関するものである。
【００１５】
本発明者は、環境に無害な防汚塗料を開発するために、多様な種類の海藻類と陸上植物に対し防汚性の試験を行った。海藻類は、韓国沿岸の日本海沿岸、太平洋海沿岸の数ヶ所の潮間帯に抑制された（inhibited）種と、潜水して採取した種を分類して、同定して、陰干しし、破砕機で粉砕し、粉末試料は、ガラス瓶に保管して必要の度に使用した。陸上植物は、韓国全土に抑制した陸上植物の中から２次代謝産物が防汚性を有する植物を採取して、分類して、同定して、陰干しし、破砕機で粉砕して、抽出した。
【００１６】
付着性海藻類に対する抽出物の付着防止効果は、代表的な付着性海藻類であるスジアオノリとアナアオサの胞子を利用して試験を行った。その試験を通して、多様な海藻類および陸上植物の中、３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−ヘキセニルアセテート、セトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールが優れた防汚性を示した。
【００１７】
一方、防汚塗料は、通常、防汚性物質、樹脂、溶媒、顔料、その他の添加剤などから構成され、防汚性を向上させるために、ブースターを添加することもある。
【００１８】
本発明によれば、前記塗料は、前記防汚性物質を重量の３〜４０％の量、更に好ましくは、重量の１０〜３０％の量、含有する。その汚染物質の量が、重量の３％未満の場合には、防汚性が不足し、そして、その汚染物質の量が、重量の３０％を超過する場合には、その他の組成成分との混合性、長期保管性などが低下する。
【００１９】
本発明の防汚塗料に使用される樹脂は、従来の防汚塗料に使用されていた全ての樹脂が含まれる。その例としては、酢酸ビニル樹脂、塩化ビニル樹脂などのビニル系樹脂、ウレタン樹脂、塩化ゴム系樹脂、フタル酸樹脂、アルキド樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、アクリル樹脂、フッ素樹脂、シリコン樹脂などの合成樹脂とロジンなどの天然樹脂を含む。特に、アクリル樹脂は、例えばｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）アクリル酸アルキル［ｗ−（N−isothiazolonyl）alkyl acrylate］、ｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−アクリル酸マレイミドアルキル（w−maleimidoalkyl acrylate）、ｗ−メタクリル酸マレイミドアルキル（w−maleimidoalkyl methacrylate）、ｗ−２，３−アクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−２，３−メタクリル酸ジクロロマレイミドアルキル、ｗ−マレイミドアルキルビニルエーテル、４−アクリル酸マレイミドアルキル、アクリル酸、メタクリル酸、無水マレイン酸、アクリル酸ヒドロキシルアルキル、アクリル酸アルコキシアルキル、アクリル酸フェノキシアルキル、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、[w-(acetoacetoxy)alkyl acrylate]、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルビニルエーテル、ビニルアセトアセトアセテート、Ｎ，Ｎ−アクリル酸ジアルキル、ビニルピリジン、ビニルピロリジン、４−ニトロフェニル−２−ビニルエチラート、２，４−アクリル酸ジニトロフェニル、２，４−メタクリル酸ジニトロフェニル、４−アクリル酸チオシアノフェニル、アクリル酸トリアルキルシリル、アクリル酸モノアルキルジフェニルシリル、アクリル酸ジクロロメチル、メタクリル酸クロロメチル、アクリル酸フェニルメチル、アクリル酸ジフェニルメチル、メタクリル酸ジフェニルメチル、アクリル酸トリアルキル亜鉛、メタクリル酸トリアルキル亜鉛、アクリル酸トリアリル亜鉛、メタクリル酸トリアリル亜鉛、アクリル酸トリアルキル銅、メタクリル酸トリアルキル銅、アクリル酸トリアリル銅、およびメタクリル酸トリアリル銅から選ばれる少なくとも１つのモノマーを含むポリマーである。このポリマーの製造方法は、はっきりと大韓民国特許出願第９５−１５１４９号に記載されている。ポリマーの数平均分子量は、粘度、フィルム形成度および作業性を考慮して１５００〜１００，０００の範囲が好ましい。更に、合成樹脂は、天然樹脂と併用することもできる。塗料中の樹脂含有量は、重量の２〜２０％、好ましくは重量の５〜１５％である。樹脂含有量が重量の２％未満であるならば、塗料の付着性が低下し、含有量が重量の２０％を超えるならば、貯蔵性に問題が生じる。
【００２０】
本発明の防汚塗料に使用される溶剤は、炭化水素と、キシレン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのようなケトン類溶剤および酢酸セロソルブを含み、重量の１０〜３０％の量を使用するのが好ましい。溶剤含有量が重量の１０％未満であるならば、塗料は非常に高い粘度を有し、溶剤含有量が重量の３０％を超えるならば、塗料は、付着性および防汚性の問題を有する。
【００２１】
本発明の防汚塗料に使用される顔料としては、当業界において知られた多様な顔料を含む。例えば、酸化チタン、酸化鉄、酸化亜鉛などの金属酸化物と有機顔料とを単独または混合して使用する。前記顔料は好ましくは、重量の２０〜４０％使用される。前記顔料が重量の２０％未満の量を使用されるならば、範囲未満の変色するという問題があり、重量の４０％を超える量を使用されるならば、塗料の耐候性が悪化する。
【００２２】
塗料の防汚性を更に向上させる必要性がある場合、ブースターを使用することができる。その例は、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３−（３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅および銀化合物などを少なくとも１種使用することができる。ブースターは、好ましくは、重量の１〜７％の量、使用され、より好ましくは重量の２〜４％である。ブースターの含有量が重量の１％未満の量で使用されるならば、防汚性の上昇効果が微々たるもので、重量の７％を超過して使用されるならば、塗量の貯蔵安定性の問題を有する。
【００２３】
更に、本発明の塗料組成物は、公知の多様な添加剤を含有させることができる。添加剤の例は、ポリアミドワックス、ベントナイト、ポリエチレンワックスなどのような増粘剤を含む。これらの添加剤は、好ましくは、重量の１〜５％で使用される。添加剤の含有量が重量の５％を超過する場合は、粘度が非常に高くなってしまう。
【００２４】
また、本発明による３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナール、シス−３−酢酸ヘキセニル、アセトフェノン、アラカディックアシッド（archadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）およびヘプタン酸エチルからなる群から選択された少なくとも１種のケトン化合物；イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセンおよびユージノールからなる群から選択された少なくとも１種のビニル化合物；および、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールの中からなる群から選択された少なくとも１種のアルコール化合物との中から選択された少なくとも１種の化合物は、藻類運動抑制活性および抗菌活性を有するため、バイオサイドとしても使用可能である。バイオサイドは、好ましくは、有効成分として発明の抽出物または化合物を全体のバイオサイドの全重量に基づき、重量の０．１〜５％の量で含有し得る。また、有効成分に加えて、バイオサイドは、界面活性剤、溶剤、イソチアゾロン系バイオサイドなども含有し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
以下、本発明は、下記実施例に基づいて更に詳しく説明される。しかしながら、本発明が、これらの実施例に限定されるわけではないことは、当業者にとって明らかである。
【００２６】
【実施例】
（実際例１）試料採取および抽出
１）柑橘類（Citrus sp.）の抽出
貝類に対する付着阻害効果を実験するために代表的な付着貝類であるムラサキガイ（Mytilus edulis）を選択し、足刺激法（foot−stimulating method）を利用して実験を行った。足刺激法において、ムラサキガイの閉殻筋を除去し、５〜１０分間海水に漬けておく。そして、閉殻を開き、ムラサキガイの閉殻筋に１０μｌの海水を落とす。海水に対して収縮反応を示す個体は除外し、生物由来の抽出物を濃度別に１０μｌずつ閉殻筋に落とし、そして収縮可否が試験された。
【００２７】
メチルアルコール１μｌ／EAは閉殻筋の収縮に影響を及ぼさないことが確認され、抽出物１μｌ（４０ｍｇ／ｍｌ）を滅菌海水１０μｌに溶かし、最終的に濃度４０μｇ／ ｍｌとした。
【００２８】
収縮反応を示す個体数を全体個体数で割り、百分率で筋収縮能を表した。試験において、４．５±０．２cmの養殖産個体を選択し、貽貝の休止時間は５分とした。実験は３回繰り返し、試験結果の統計分析はスチューデントｔ−検定にて行った。結果としては、水溶性抽出物は、全般的にメチルアルコールの抽出物に比べて低い効果を表し、下記の表１に示すように、柑橘類がムラサキガイの付着に対し、９０％以上の優れた抑制効果を示した。
【００２９】
【表１】
2008504377.tif 000069
【００３０】
２）アブラナ属植物（Brassica sp．）の抽出
スジアオノリの胞子付着に対して生物由来の抽出物の抑制効果実験を行った。試料の各々のメチルアルコール抽出物を２００μｌ／ｍｌの濃度で付着抑制効果を実験し、結果として、アブラナ属植物の抽出物が優れた胞子付着に対して抑制効果を示した（表２ａ、２ｂ）。
【００３１】
【表２ａ】
2008504377.tif 000070
【００３２】
【表２ｂ】
2008504377.tif 000071
【００３３】
３）長芋（D．batatas）の抽出
長芋を韓国の安東（Andong）、晋陽（Janyang）、栄豊（Youngpung）地方で採取し、植物から異物を除去した。そして、植物を洗浄し、陰干しし、そして粉砕して長芋３０kgの粉末を作った。メタノール５０ｌに試料粉末３０kgを添加し、２４時間保管し、抽出し、そして上澄みのみを集めた。抽出と上澄収集の手順を３回繰り返して、そして上澄みを一緒に混ぜ合わせ、そして３７°Ｃで減圧濃縮器を用いて１／１０の体積まで蒸発させた。残渣物質を０．２２−（ｍフィルターを通して濾過して、−２０°Ｃで保管しながら実験に使用した。
【００３４】
４）植物の抽出
実験に使用したからし葉は韓国の平昌（Pyongchang-gun）、江原道（Kangwon-do）で、レモンとブルーベリーは韓国の宝城（Boseong-gun）、全羅南道（Jeollanam-do）で採取した。採取した陸上植物から異物を除去した。そして、植物を洗浄し、陰干しした。抽出収率を高めるために、植物を粉砕機を用いて粉砕して、実験で使用した。採集した陸上植物を陰干しして粉砕し、からし葉粉末、レモン粉末、ブルーベリー粉末を各々１kg作った。メタノール１０ｌに試料粉末１kgを各々添加して、２４時間保管して、抽出した。抽出および上澄み収集の手順を３回繰り返して、上澄みを一緒に混ぜ合わせ、そして３７°Ｃで減圧濃縮器を用いて１／１０の体積まで蒸発させた。０．２２μｍフィルターを通して濾過して、−２０°Ｃで保管しながら実験に使用した。
【００３５】
（実施例２）柑橘類の抽出物の溶媒分画（fractionation）
柑橘類の抽出物から青海苔の胞子の運動性に対して抑制物質を調査するために、有機溶媒分画を製造した。
【００３６】
柑橘類をヘキサン、メチルアルコールそして水を用いて各々抽出した。ヘキサンとメチルアルコール抽出液を濾過し、濾過液を３０°Ｃで減圧濃縮器を用いて濃縮した。水抽出物は凍結乾燥機を用いて凍結乾燥させた。
【００３７】
各抽出物を生理活性について試験し、結果を下記の表３に示す。青海苔の胞子運動性に対する抑制活性試験の結果において、ヘキサン抽出物は１０，０００μｇ／ｍｌ、７，５００μｇ／ｍｌ、そして５，０００μｇ／ｍｌでは強力な抑制効果（９５％以上の抑制：＋＋＋＋）を、２，５００μｇ／ｍｌでは強い活性（９５〜７５％：＋＋＋）を、１，２５０μg／ｍｌでは中間活性（７５〜５０％：＋＋）を示した。
【００３８】
メチルアルコール抽出物は１０，０００μg／ｍｌ、７，５００μg／ｍｌでは強い活性（＋＋＋）を示したが、１，２５０μg／ｍｌでは活性を示さなかった。また、水抽出物は１０，０００μg／ｍｌおよび７，５００μg／ｍｌで中間活性（＋＋）を、５，０００μg／ｍｌで弱い活性（＋）を示し、２，５００μg／ｍｌと１，２５０μg／ｍｌでは活性を示さなかった。
【００３９】
結果として、ヘキサン抽出物は優れた効果を示し、従って、防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００４０】
【表３】
2008504377.tif 000072
【００４１】
１次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を、ヘキサン中で充填した。ヘキサン抽出物試料を適用し、そしてカラムをヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（７．５：２．５）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（２．５：７．５）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、そしてメチルアルコール（１０）の順番で溶出した。これらの抽出溶媒は、３ｍｌ／minの流速でヘキサンから塩化メチレンまでの抽出溶媒として１００ｍｌの体積、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）からメチルアルコールまでの抽出溶媒として３００ｍｌの体積のカラムに通された（表４）。
【００４２】
【表４】
2008504377.tif 000073
【００４３】
溶出液を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを実施することにより、６個の分画に分画した。６個の分画（Ｉ−ＶＩ）を生理活性について実験して、その結果を以下の表５に示す。
【００４４】
【表５】
2008504377.tif 000074
【００４５】
４，０００μｇ／ｍｌの濃度で、分画Ｖが青海苔の胞子の運動性に対して強力な活性（＋＋＋＋）を示し、分画ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶそしてＶＩでは強い活性（＋＋＋）を示した。２，０００μｇ／ｍｌおよび１，５００μｇ／ｍｌで、分画Ｖは強力な活性（＋＋＋＋）を示し、７５０μｇ／ｍｌと２５０μｇ／ｍｌでは活性が低下したが、強い活性（＋＋＋）を維持した。
【００４６】
結果として、分画（Ｉ〜ＶＩ）中、活性が最も優れていた塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）の範囲内の分画Ｖを２次シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００４７】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で充填した。分画Ｖを試料としてカラムに適用し、カラムをヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（９：１）、ヘキサン：塩化メチレン（８：２）、ヘキサン：塩化メチレン（７：３）、ヘキサン：塩化メチレン（６：４）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（４：６）、ヘキサン：塩化メチレン（３：７）、ヘキサン：塩化メチレン（２：８）、ヘキサン：塩化メチレン（１：９）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（９：１）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（７：３）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（５：５）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（３：７）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、塩化メチレン：酢酸エチル（１：９）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（６：４）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、メチルアルコール（１０）の順番に溶出した。各々の抽出溶媒は、３ｍｌ／minの流速で１００ｍｌの体積のカラムに通された。（表６）そして、各溶出液をヘキサン：メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを行い、６個の分画（Ｖ−ｉ〜Ｖ−ｖｉ）を製造した。６個の分画を胞子運動性に対する抑制活性について実験して、その結果を表７に示した。
【００４８】
【表６】
2008504377.tif 000075
【００４９】
【表７】
2008504377.tif 000076
【００５０】
結果として、分画Ｖ−ｉｉｉが最も優れた活性を示し、従って、Prep-TLによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００５１】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって有機溶媒の濃度勾配を実施することによって得た分画の生理活性実験の中で最も優れた活性を示した分画Ｖ−ｉｉｉ部分を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒を利用してPrep-TLCで展開させ、３個の分画、即ち、Ｖ−ｉｉｉ−ａ、Ｖ−ｉ−ｂ、Ｖ−ｉｉｉ−ｃを得た。
【００５２】
青海苔の胞子の運動性に対する３個の分画の抑制効果を以下の表８に示した。
【００５３】
【表８】
2008504377.tif 000077
【００５４】
結果として、分画Ｖ−ｉｉｉ−ｂは、希釈率の増加にもかかわらず活性が持続され、従って、Prep−HPLCによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００５５】
Prep−HPLC
Prep-TLCで得た活性分画Ｖ−ｉｉｉ−bをPrep-HPLC C18逆相カラム（microsorb、２１．４×２５０mm）に適用した。移動相を６０％アセトニトリルと４０％水の混合溶媒を使用して１２０分間、流速２０ｍｌ／minで溶出した。２１３nmで吸光度を測定しながら最高値の吸光度を示す６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）を分取した。
【００５６】
Prep−TLCから得た活性分画Ｖ−ｉｉｉ−ｂのPrep−HPLCから分取した各分画（Ｋ１〜Ｋ６）の青海苔の胞子の運動性の抑制活性について試験をして、その結果を以下の表９に示す。
【００５７】
【表９】
2008504377.tif 000078
【００５８】
結果的として、分取した６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）中、Ｋ４が青海苔の胞子の運動性に対して抑制効果が最も優れ、従って、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳそしてＮＭＲによって構造分析のための試料として使用した。
【００５９】
（実施例３）アブラナ属植物の抽出物の溶媒分画
アブラナ属植物の抽出物から青海苔の胞子の運動性に対する抑制物質を調査するために、有機溶媒分画を作った。
【００６０】
アブラナ属植物の粉末をヘキサン、メチルアルコールそして水の各々を用いて抽出した。ヘキサンとメチルアルコールの抽出液を濾過し、濾過液を３０°Ｃで減圧濃縮器を用いて濃縮し、そして、水の抽出物は、凍結乾燥機を用いて凍結乾燥させた。
【００６１】
各溶媒の抽出物は生理活性について実験され、その結果を下記の表１０に示す。青海苔の胞子の運動性に対する性抑制活性の結果において、ヘキサン抽出物は、１０，０００μｇ／ｍｌ、７５，０００μｇ／ｍｌそして５，０００μｇ／ｍｌでは強力な抑制効果（９５％以上の抑制：＋＋＋＋）を、２，５００μｇ／ｍｌでは強い活性（９５〜７５％：＋＋＋）を、１，２５０μｇ／ｍｌでは中間活性（７５〜５０％：＋＋）を示した。
【００６２】
メチルアルコール抽出物は、１０，０００μg／ｍｌと７５，０００μg／ｍｌで強い活性（＋＋＋）を示したが、１，２５０μg／ｍｌでは活性を示さなかった。また、水の抽出物は１０，０００μg／ｍｌおよび７，５００μg／ｍｌで中間活性（＋＋）を、５，０００μg／ｍｌで弱い活性（＋）を示し、２，５００μg／ｍｌと１，２５０μg／ｍｌでは活性を示さなかった。
【００６３】
結果として、ヘキサン抽出物で優れた効果を示し、従って、防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００６４】
【表１０】
2008504377.tif 000079
【００６５】
１次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を、ヘキサン中で充填した。ヘキサン抽出物をカラムに適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（７．５：２．５）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（２．５：７．５）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、そしてメチルアルコール（１０）を順番で溶出した。これらの抽出溶媒は、３ｍｌ／minの流速で、ヘキサンから塩化メチレンまでの抽出溶媒として１００ｍｌの体積、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）からメチルアルコールまでの抽出溶媒として３００ｍｌの体積のカラムに通された（表１１）。
【００６６】
【表１１】
2008504377.tif 000080
【００６７】
溶出液を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを実施することにより、６個の分画に分画した。６個の分画（Ｉ−ＶＩ）を生理活性について実験して、その結果を以下の表１２に示す。
【００６８】
【表１２】
2008504377.tif 000081
【００６９】
分画（Ｉ〜ＶＩ）中、活性が最も優れていた塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）の範囲内の分画ＩＶを２次シリカゲルクロマトグラフィーによって防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７０】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィー
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）を、ヘキサン中で充填した。分画四を試料としてカラムに適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（９：１）、ヘキサン：塩化メチレン（８：２）、ヘキサン：塩化メチレン（７：３）、ヘキサン：塩化メチレン（６：４）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（４：６）、ヘキサン：塩化メチレン（３：７）、ヘキサン：塩化メチレン（２：８）、ヘキサン：塩化メチレン（１：９）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（９：１）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（７：３）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（５：５）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（３：７）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、塩化メチレン：酢酸エチル（１：９）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（６：４）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、およびメチルアルコール（１０）を順番に溶出した。そして、各溶出液をヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒中でＴＬＣを行い、６個の分画（Ｖ−ｉ〜Ｖ−ｖｉ）を製造した。６個の分画を胞子運動性に対する抑制活性について実験して、その結果を表１３に示した。
【００７１】
【表１３】
2008504377.tif 000082
【００７２】
【表１４】
2008504377.tif 000083
【００７３】
結果として、分画ＩＶ−ｉｉｉが最も優れた活性を示し、従って、Prep-TLCを用いて防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７４】
２次シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、有機溶媒の濃度勾配を実施することによって得た分画の生理活性試験の中で、最も優れた活性を示した分画Ｖ−ｉｉｉ部分を、Prep-TLCで展開させ、３個の分画、即ち、ＩＶ−ｉｉｉ−ａ、ＩＶ−ｉｉｉ−ｂ、ＩＶ−ｉｉｉ−ｃを分取した。
【００７５】
各３個の分画は青海苔の胞子の運動性に対する抑制効果について実験して、その結果を以下の表１５に示した。
【００７６】
【表１５】
2008504377.tif 000084
【００７７】
結果的として、分画ＩＶ−ｉｉｉ−ｂは希釈率の増加にかかわらず活性が持続され、従って、Prep-HPLCによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７８】
Prep-HPLC
Prep-TLCで分取した活性分画ＩＶ−ｉｉｉ−bをPrep-HPLC逆相カラム（microsorb、２１．４×２５０mm）に適用し、均等な（isocratic）条件で移動相を６０％アセトニトリルと４０％水の混合溶媒を使用して１２０分間、流速２０ｍｌ／minで溶出した。２１３nmで吸光度を測定しながら最高値を見せる６個の分画（Ｋ１〜Ｋ５）を分取した。
【００７９】
Prep−TLCで分取した活性分画ＩＶ−ｉｉｉ−ｂのPrep−HPLCで分取した各分画を、青海苔の胞子の運動性に対する運動性抑制活性について実験して、その結果を以下の表１６に示す。
【００８０】
【表１６】
2008504377.tif 000085
【００８１】
結果的として、６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）中、分画Ｋ５が青海苔の胞子の運動性について最も優れた抑制効果を有する。従って、分画Ｋ５は、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳそしてＮＭＲによる構造分析の試料として使用した。
【００８２】
（実施例４）長芋抽出物の溶媒分画
実施例１で得られた長芋抽出物を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて下記の方法により５個（Ａ〜Ｅ）に分画した。
【００８３】
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で、ガラス管カラム（１０cm×９０cm、ＰＹＲＥＸ（登録商標））に充填した。その際、カラムを試料の量によって選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍とした。長芋抽出物を試料としてカラムに適用し、カラムを展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５ｍｌ／minの流速で展開した。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより、溶出液を６個（Ｉ〜ＶＩ）に分画した。
【００８４】
６個の分画（Ｉ〜ＶＩ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、実験において良い活性を示す分画Ｉ、ＩＩを混ぜ合わせ、２次シリカゲルカラムを実施した。その際、混合させた分画をカラムに適用し、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に３ｍｌ／minの流速で展開した。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより、溶出液を５個に分画した。
【００８５】
汚損生物の定着防止についての陸上植物と海藻類抽出物の効果は、代表的な軟性海藻類のうちの一つであるアナアオサ（Ulva pertusa）をについて実験した。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海藻を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海藻は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。
【００８６】
半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。準備されたチューブに１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００μg/ｍｌでの胞子の運動性に対する抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表１７に示した。表１７において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−”は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【００８７】
５個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表１７に示す。
【００８８】
【表１７】
2008504377.tif 000086
【００８９】
前記表１７において分かるように、分画Ａが胞子の運動性に対する最も優れた抑制効果を発揮した。
【００９０】
２次分画
分画Ａを分画採取用高速液体クロマトグラフィーＣ１８逆相カラム（Microsorb、２１．４mm×２５０mm）に適用し、そして安定した条件で８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間流速５ｍｌ／minで溶出した。２５４nmで吸光度を測定しながら６個（Ｆ１〜Ｆ６）に分画した。各分画（Ｆ１〜Ｆ６）に対するアナアオサの運動性に対する抑制効果について実験して、結果として、分画Ｆ２とＦ５は最も強力な活性を示した（表１８）。胞子の運動性に対する抑制効果を図１に示した。図１に示すように、分画Ｆ２とＦ５は、１０ppmと１００ppmの濃度で７５％の付着抑制を示し、１ppmの濃度で５０％の付着阻害を示した。分画Ｆ１、Ｆ３、Ｆ４およびＦ６は、胞子付着に対する抑制効果を示さなかった。
【００９１】
【表１８】
2008504377.tif 000087
【００９２】
（実施例５）からし葉の抽出物の溶媒分画
カラムにシリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で充填した。その際、カラムは試料の量によって選択して使用し、そしてシリカゲルの量は試料量の５０〜６０倍とした。からし葉抽出物を試料としてカラムに適用し、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５ｍｌ／minの流速で展開した。（表１９）実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより、溶出液を６個の分画（Ｉ〜ＶＩ）に分画した。
【００９３】
【表１９】
2008504377.tif 000088
【００９４】
汚損生物の付着抑制についての分画（Ｉ〜ＶＩ）の効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサについて実験を行った。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海藻を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海藻は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、８０mol m−２ s−１、２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【００９５】
準備されたチューブに１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００μg/ｍｌでの胞子の運動性に対する分画の抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表２０に示した。表２０において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−“は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【００９６】
５個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表２０に示す。下記の表２０から分かるように、分画ＩＩＩは強い活性を示した。
【００９７】
【表２０】
2008504377.tif 000089
【００９８】
（実施例６）レモン抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中でガラス管カラム（１０cm×９０cm、PTEE end plate付着）に充填した。カラムは試料の量によって選択して使用し、シリカゲルの量は試料量の５０〜６０倍とした。レモン抽出物を試料としてカラムに適用し、そして、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５ｍｌ／minの流速で展開した（表２１）。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより溶出液を６個の分画（Ａ〜Ｆ）に分画した。
【００９９】
【表２１】
2008504377.tif 000090
【０１００】
汚損生物の付着抑制についての分画（Ａ〜Ｆ）の効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサについて実験を行った。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海藻を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海藻は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、および２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【０１０１】
準備されたチューブに１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００μg/ｍｌでの胞子の運動性に対する分画の抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表２２に示した。表２２において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−“は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【０１０２】
６個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表２２に示す。下記の表２２から分かるように、分画Ｂ〜Ｄは強い活性を示した。
【０１０３】
【表２２】
2008504377.tif 000091
【０１０４】
（実施例７）ブルーベリー抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン中で、ガラス管カラム（１０cm×９０cm、PTEE end plate付着）に充填し、カラムは、試料の量によって選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍とした。ブルーベリー抽出物を試料としてカラムに適用し、そして、カラムを、展開溶媒として、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０の順番に５ｍｌ／minの流速で展開した（表２３）。実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーにより溶出液を６個の分画（ａ〜ｆ）に分画した。
【０１０５】
【表２３】
2008504377.tif 000092
【０１０６】
汚損生物の定着防止についての分画（Ａ〜Ｆ）の効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサについて実験を行った。アナアオサは、韓国の鏡浦台（Kyongpodae）、江陵（Kangrung-city）、Kangwon-Doで採集した。採集された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、分類された海苔を１分間超音波による処理を３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。洗浄された海苔は、１％ベタジン（betadine）および２％トリチオンＸ−１００（trition X-100）の混合溶液に１分間浸すことにより簡単な滅菌処理を行い、その後半乾燥した。半乾燥したアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、および２０°Ｃ培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【０１０７】
準備されたチューブに１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を置き、胞子が放出された海水を添加した。様々な濃度５００、１０００、１５００、２０００、４０００μg/ｍｌでの胞子の運動性に対する分画の抑制効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）で１００Ｘの倍率で観察し、その結果を下記の表２４に示した。表２４において、“＋＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が１００％を示し、“＋＋＋”は、胞子の運動性の抑制が９５〜７５％を示し、”＋＋”は、抑制が７５〜５０％を示し、“＋”は、胞子の運動性の抑制が５０〜２０％を示し、”−“は、胞子の運動性の抑制効果が全くないことを示す。各希釈濃度で各分画を接種前に、海水内の胞子の運動状態を対照として使用するために調査した。
【０１０８】
６個の分画（Ａ〜Ｅ）を胞子の運動性に対する抑制活性について実験し、その結果を下記の表２４に示す。下記の表２４から分かるように、分画ｃとｄは強い活性を示した。
【０１０９】
（表２２）
2008504377.tif 000093
【０１１０】
（実施例８）植物由来の防汚性物質の確認
（１）柑橘類由来物質の分析
実施例３における柑橘類由来分画Ｋ４についてのＧＣ−ＭＳ結果を図２に示し、分画Ｋ４についてのＮＭＲデータを図３に示す。分画Ｋ４は、下記化学式１の構造を有する。
【０１１１】
【化１】
2008504377.tif 000094
【０１１２】
結果として、柑橘類で分離、精製された優れた防汚性を有する防汚性物質は、３，７−ジメチル-２，６−オクタジエナールであることが明らかになった。
【０１１３】
（２）アブラナ属植物由来物質の分析
実施例４におけるアブラナ属植物由来分画Ｋ５についてのＧＣ−ＭＳ結果を図４に示し、分画５についてのＮＭＲデータを図５に示す。分画Ｋ５は、下記化学式２の構造を有する。
【０１１４】
【化２】
2008504377.tif 000095
【０１１５】
結論として、アブラナ属植物で分離、精製された優れた防汚性を有する防汚性物質は、シス−３−酢酸ヘキセニルであることが明らかになった。
【０１１６】
（３）長芋由来物質の分析
ＨＰＬＣ／ＧＣ質量スペクトル
Prep-HPLCにより分画した各分画をPrep-HPLC C18逆相カラム（Microsorb、４．６mm×２５０ｍｍ、Cosmosil）に適用し、安定した条件で８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間、流速１．０ｍｌ／minで溶出させた。２５４nmで溶出した分画Ｆ２およびＦ５の吸光度を測定し、分画Ｆ２およびＦ５の結果を各々図６、７に示した。高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）から活性部分（メタノール濃度８０％）のみを回収して乾燥させ、メタノールに溶かし、１mgの溶媒をＧＣ／ＭＳカラム（Hewlett-Packard、３０m×０．２５mm×０．２５μｍ）に適用し、移動相気体としてヘリウムを使用し、注入率０．６ｍｌ／minで分割注入法（１：５０）を使用して分析した。
【０１１７】
各々の分画Ｆ２およびＦ５の分子量は、ＧＣ／ＭＳにより測定され、分画Ｆ２およびＦ５についてのＧＣ／ＭＳの結果を図８および９に各々示す。Ｒｔ：２．８〜７．１６３min、７１．５６min；分子イオン：Ｍ＋ −３６９、−３４２であった。
【０１１８】
核磁気共鳴スペクトル（Nuclear Magnetic Resonance）
ＨＰＬＣにより分画された分画Ｆ２およびＦ５を水素−核磁気共鳴および炭素−核磁気共鳴によって分析した。分析結果を図１０から１５に示す。図１１において、分画Ｆ２の１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは、δ２．０５で単一信号のカルボニルを基にしたメチル基を示し、これはアセトキシメチルプロトン（acetoxy  methyl proton）であると考えら。δ７．５３およびδ７．７２で、複雑な形態で４個の芳香族プロトンを示した。芳香族ケト化合物である分画Ｆ２の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、δ１７１．４でアセトキシ炭素（acetoxy carbon）、また別の芳香族炭素（aromatic carbon）はδ１８〜１３１で示された。これらのデータから、分画Ｆ２はアセトフェノンと判明した（化学式３）。分画Ｆ５の１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは、δ０．９５〜１．０３で３双（pair）からなる６個のメチルプロトンを示し、δ１．２５で単一信号においてメチルプロトンを示した。また、δ３．４５で複雑な信号においてヒドロキシルプロトンとヒドロキシル酸を示した。これらのデータから、分画Ｆ５は、複雑な長い鎖で連結されたアルコールと酸と判明された。分画Ｆ５の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、δ３．４５でメチルとメチレン、そしてアセチルカルボニル基を示した。上記の全てのデータから、分画は１−オクタデカノールとアラカディックアシッド（arachadic acid）（エイコサン酸）の混合物と判明した（化学式４、５）。
【０１１９】
【化３】
2008504377.tif 000096
【０１２０】
【化４】
2008504377.tif 000097
【０１２１】
【化５】
2008504377.tif 000098
【０１２２】
（４）からし葉由来物質の分析
実施例５において得たからし葉由来分画ＩＩＩに対するＨ−ＮＭＲおよびＣ−ＮＭＲによる分析がされ、分析結果を各々図１６および１７に示す。結果として、分画ＩＩＩは、下記の化学式６の構造を有するアリルイソチオシアネートと判明した。
【０１２３】
【化６】
2008504377.tif 000099
【０１２４】
（５）レモン由来物質分析
実施例６において得たレモン由来分画Ｂ、ＣおよびＤはＨ−ＮＭＲおよびＣ−ＮＭＲにより分析され、その結果を図１８〜２３に示す。分画Ｂ、ＣおよびＤは、各々１−オクタノール、カプロン酸メチル（methyl caproate）、ヘプタン酸エチルと判明した。これらの化合物は、各々下記の化学式７〜９の構造を有する。
【０１２５】
【化７】
2008504377.tif 000100
【０１２６】
【化８】
2008504377.tif 000101
【０１２７】
【化９】
2008504377.tif 000102
【０１２８】
（６）ブルーベリー由来物質の分析
実施例７において得たブルーベリー由来分画ｃおよびｄは、Ｈ−ＮＭＲおよびＣ−ＮＭＲにより分析され、その結果を図２４〜２７に各々示す。分画ｃは、下記の化学式１０の構造を有するベータ−ミルセン、分画ｄは、下記の化学式１１の構造を有するユージノールと判明した。
【０１２９】
【化１０】
2008504377.tif 000103
【０１３０】
【化１１】
2008504377.tif 000104
【０１３１】
（実施例９）安全性実験
３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナールは、明るい黄色の液体であり、レモンのような香りを有する。この化合物の物理的な特性は、溶点が１０°Ｃ未満で、沸点が２２０〜２４０°Ｃで、比重が０．８８５〜０．８９３であり、水には殆ど溶解されない。この化合物をマウスの口腔に投与し、毒性について検査した。その結果は、ＬＤ５０＞４，９６０mg／kg、ＯＲＡＬ−ＭＵＳ ＬＤ５０＞６，０００mg／kg、そして、ＩＰＲ（Intraperitoneal）−ＲＡＴ ＬＤ５０＞４６０mg／kgであった。
【０１３２】
シス−３−酢酸ヘキセニルは明るい黄色の液体であり、沸点が８６°Ｃであり、水には溶解せず、有機溶媒に溶解しない性質を有している。この化合物をウサギの口腔と皮膚に投与し、毒性ｎ検査いついて検査した。その結果は、ＬＤ５０＞５g／kg(経皮投与)、ＬＤ５０＞５g／kg（口腔）であった。
【０１３３】
アセトフェノン、アラカディックアシッド（arachadic acid）、カプロン酸メチル（methyl caproate）、ヘプタン酸エチル、イソチオシアン酸アリル、ベータ−ミルセン、ユージノール、１−オクタデカノールおよび１−オクタノールを各々ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、水で希釈した。そして、各々の希釈液１０mg／kgをマウス群（１０匹からなる）に投与し、マウスを７日間観察した。観察結果として、死亡したマウスはなかった。
【０１３４】
（実施例１０〜２６）防汚塗料の製造
樹脂およびロジンをキシレンと少量のメチルイソブチルケトンに完全に溶解させた。溶液に顔料として酸化亜鉛および酸化鉄を添加し、サンドミルを利用して２回分散させた。この混合物に、下記の表２５に与えられる防汚剤と増粘剤を添加した。高速攪拌器を用いて３５００rpmで６０分間攪拌した。そして、残ったケトン類溶媒を添加して攪拌することで防汚塗料を製造した。
【０１３５】
【表２５】
2008504377.tif 000105
【０１３６】
（実施例２７）ブースター添加塗料の製造
ピリチオン亜鉛をブースターとして実施例１４と同一組成の混合物に添加し、防汚塗料を製造した。ブースターの添加は、分散工程の前に顔料と共に実行した。
【０１３７】
（実施例２８）防汚性物質が混合された塗料の製造
防汚塗料を実施例１５と同様の方法で製造したが、防汚性物質の半分をフタル酸ジオクチルに代替し、防汚塗料を製造した。
【０１３８】
（比較例１）
実施例１０と同様の方法で製造したが、防汚性物質は、１重量部で使用された。
【０１３９】
（比較例２）
実施例１１と同様の方法で製造したが、防汚性物質は、１重量部で使用された。
【０１４０】
（比較例３）
実施例１３と同様の方法で製造したが、防汚性物質は、１重量部で使用された。
【０１４１】
（試験例１）
ＫＳＤ３５０１の圧延鋼板（３００×３００×３．２mm）によりＫＳＭ５５６９法に従って製造した各々の防汚塗料の３枚の試料をタール／ビニル樹脂で防錆塗装した。そして、各々の試料を実施例１０〜２８および比較例１〜３において製造された各々の防汚塗料を用いて乾燥厚さが１５０μｍとなるようにスプレー塗装をした。
【０１４２】
塗装されたパネルを相対湿度７５％、２５°Ｃで１週間乾燥させ、日本海の２Ｍ水深域に沈積させた。１２ヶ月後にパネルを観察した。試料の上端から７０mmの距離下がった線、下端から３０mm上がった線および左右両端から２０mm内部の線により規定される有効面積５２，０００mm２を基準に３枚の試料の汚染面積の算術平均を算出した。算出された算術平均を５％の範囲で四捨五入し、その結果を下記の表２６に示す。
【０１４３】
【表２６】
2008504377.tif 000106
【０１４４】
上記の結果から分かるように、本発明の防汚塗料は、既存の有機スズ化合物を含む防汚塗料に比べて同等以上の防汚性能を有する。
【０１４５】
（試験例２）
２倍連続希釈法によって希釈したＰＡＧＳによって得られた液体培地が９６−マルチウェルプレート（multi well plate）上に置かれ、１０４cfu／ｍｌの微生物を植菌した。液体培地を30°Ｃで48時間培養し、その後、ＰＡＧＳの最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、微生物の成長可否を、濁度を基準として視覚的に判断することにより測定された。試験で使用された液体培地は、栄養培養液（nutrient broth）（Difco）であった。試験に使用した抗菌物質はＰＡＧＳ−１であり、そして、その結果を表２７に示す。
【０１４６】
【表２７】
2008504377.tif 000107
【産業上の利用可能性】
【０１４７】
上記から分かるように、本発明による親環境性防汚剤は、環境に無害であり、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、天然物から抽出でき、その結果として製造原価が低減し、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】  胞子の定着に対する長芋溶媒の分画Ｆ１〜Ｆ６の抑制効果を示すグラフである。
【図２】  ３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナールに対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図３】  ３，７−ジメチル−２，６−オクタジエナールに対するＮＭＲデータを示す。
【図４】  シス−３−酢酸ヘキセニルに対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図５】  シス−３−酢酸ヘキセニルに対するＮＭＲデータを示す。
【図６】  長芋由来の分画Ｆ２のＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図７】  長芋由来の分画Ｆ５のＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図８】  アセトフェノンに対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図９】  １−オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）に対するＧＣ−ＭＳの結果を示す。
【図１０】  アセトフェノンの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１１】  アセトフェノンの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１２】  アセトフェノンの２次元ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１３】  オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１４】  オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）の１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１５】  オクタデカノールおよびアラカディックアシッド（arachadic acid）の２次元ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１６】  アリルイソチオシアネートの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１７】  アリルイソチオシアネートの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１８】  １−オクタノールの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図１９】  １−オクタノールの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２０】  カプロン酸メチル（methyl caproate）の３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２１】  カプロン酸メチル（methyl caproate）の１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２２】  ヘプタン酸エチルの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２３】  ヘプタン酸エチルの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２４】  ベータ−ミルシンの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２５】  ベータ−ミルシンの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２６】  ユージノールの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【図２７】  ユージノールの１Ｈ ＮＭＲスペクトルのプロフィール（profile）を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成19年2月21日(2007.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
【表１】
2008504377.tif 000108
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
２）アブラナ属植物（Brassica sp．）の抽出
スジアオノリの胞子付着に対して生物由来の抽出物の抑制効果実験を行った。試料の各々のメチルアルコール抽出物を２００μｇ／ｍｌの濃度で付着抑制効果を実験し、結果として、アブラナ属植物の抽出物が優れた胞子付着に対して抑制効果を示した（表２ａ、２ｂ）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
【表２ａ】
2008504377.tif 000109
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
【表２ｂ】
2008504377.tif 000110
【国際調査報告】
2008504377.tif 000111
2008504377.tif 000112