(57)【要約】  チゲサイクリンなどのテトラサイクリンを調製および精製する方法を開示する。また、該方法によって調製されたチゲサイクリン組成物などのテトラサイクリン組成物を開示する。
2008545702.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ）式１：
【化１】
2008545702.tif 000068
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせ、
Ｂ）１５分〜２時間の少なくとも１つの一定時間、０℃〜４０℃で混合して第１の混合物を得、次いで
Ｃ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の精製法。
【請求項２】
Ａ）式１：
【化２】
2008545702.tif 000069
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせ、
Ｂ）一定時間、３０℃〜４０℃で混合して第１の混合物を得、
Ｃ）第１の混合物を１５℃〜２５℃に冷却し、混合することなく第２の一定時間静置し、
Ｄ）第１の混合物を０℃〜６℃に冷却し、混合することなく第３の一定時間静置し、次いで、
Ｅ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の精製法。
【請求項３】
ｎが１であり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである請求項１記載の精製法。
【請求項４】
ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＮと一緒になってピロリジニル基を形成し、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである請求項１記載の精製法。
【請求項５】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせられる式１の少なくとも１つの化合物が固体、スラリー、懸濁液および溶液から選択される形態で提供される請求項１、３または４記載の精製法。
【請求項６】
該精製法から得られた式１の少なくとも１つの化合物が式１の化合物のＣ−４エピマーまたはその医薬上許容される塩を１％未満含有する請求項１、３、４または５記載の精製法。
【請求項７】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒がアセトン、１，２−ジクロロエタン、酢酸メチル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、塩化メチレンおよび酢酸エチルから選択される請求項１、３、４、５または６記載の精製法。
【請求項８】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒がアセトンおよび塩化メチレンから選択される請求項７記載の精製法。
【請求項９】
少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノール、エタノール、イソプロパノールおよびｔ−ブタノールから選択される請求項１、３、４、５、６、７または８記載の精製法。
【請求項１０】
少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノールである請求項９記載の精製法。
【請求項１１】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒がアセトンを含み、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノールを含む請求項１、３、４、５または６記載の精製法。
【請求項１２】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒が塩化メチレンを含み、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノールを含む請求項１、３、４、５または６記載の精製法。
【請求項１３】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒が酢酸メチルを含み、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノールを含む請求項１、３、４、５または６記載の精製法。
【請求項１４】
式１の化合物を等容量の少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせる請求項１および３〜１３のいずれか１項記載の精製法。
【請求項１５】
第１の混合物を３０分〜２時間の第１の一定時間、１５℃〜２５℃で混合し、次いで、３０分〜２時間の第２の一定時間、０℃〜２℃で混合する請求項１および３〜１４のいずれか１項記載の精製法。
【請求項１６】
第１の一定時間および第２の一定時間が各々、１時間である請求項１５記載の精製法。
【請求項１７】
少なくとも１つの一定時間が３０分〜２時間であり、温度が１５℃〜２５℃であり、さらに、混合後に第１の混合物をろ過して固体を得ることを含む、請求項１および３〜１４のいずれか１項記載の精製法。
【請求項１８】
さらに、
Ａ）固体を等容量の少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と、３０分〜２時間の第１の一定時間、１５℃〜２５℃で合わせ、次いで、
Ｂ）ろ過して、第２の固体を得る
工程を含む請求項１７記載の精製法。
【請求項１９】
ＡおよびＢを２〜１５回繰り返す請求項１８記載の精製法。
【請求項２０】
さらに、第１の混合物から固体を得、次いで、該固体を少なくとも１つの極性プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒と合わせて、組み合わせを得ることを含む、請求項１および３〜１４のいずれか１項記載の精製法。
【請求項２１】
組み合わせがメタノールおよび塩化メチレンをメタノール：塩化メチレン容量比  １：５〜１：１５で含む請求項２０記載の精製法。
【請求項２２】
さらに、第２の混合物を３０℃〜３６℃で混合し、次いで、ろ過して、溶液を得ることを含む請求項２０記載の精製法。
【請求項２３】
さらに、溶液中における極性プロトン性溶媒の濃度を５％以下に下げ、０℃〜６℃で３０分〜２時間混合した後、ろ過することを含む請求項２２記載の精製法。
【請求項２４】
一定時間が１０〜２０分である請求項２記載の精製法。
【請求項２５】
一定時間が１５分である請求項２４記載の精製法。
【請求項２６】
第２の一定時間が３０分〜３時間である請求項２、２４または２５記載の精製法。
【請求項２７】
第２の一定時間が１時間〜２時間である請求項２６記載の精製法。
【請求項２８】
第３の一定時間が３０分〜２時間である請求項２および２４〜２７のいずれか１項記載の精製法。
【請求項２９】
第３の一定時間が１時間である請求項２８記載の精製法。
【請求項３０】
式１の化合物が［４Ｓ−（４α，１２ａα）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−９−［［（ｔ−ブチルアミノ）アセチル］アミノ］−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセン−カルボキサミドまたはその医薬上許容される塩である請求項１記載の精製法。
【請求項３１】
式１の化合物が［４Ｓ−（４α，１２ａα）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−９−［［（ピロリジニル）アセチル］アミノ］−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセン−カルボキサミドまたはその医薬上許容される塩である請求項１記載の精製法。
【請求項３２】
Ａ）チゲサイクリン：
【化３】
2008545702.tif 000070
チゲサイクリン
を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせ、
Ｂ）１５分〜２時間の少なくとも１つの一定時間、０℃〜４０℃で混合して第１の混合物を得、次いで
Ｃ）チゲサイクリンを得る
ことを特徴とするチゲサイクリンまたはその医薬上許容される塩の精製法。
【請求項３３】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせられるチゲサイクリンが固体、スラリー、懸濁液および溶液から選択される形態で提供される請求項３２記載の精製法。
【請求項３４】
該精製法から得られたチゲサイクリンが式１の化合物のＣ−４エピマーまたはその医薬上許容される塩を１％未満含有する請求項３２または３３記載の精製法。
【請求項３５】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒がアセトンを含み、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノールを含む請求項３２、３３または３４記載の精製法。
【請求項３６】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒が塩化メチレンを含み、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノールを含む請求項３２、３３または３４記載の精製法。
【請求項３７】
請求項１記載の精製法によって調製された化合物。
【請求項３８】
請求項１記載の少なくとも１つの化合物を含む組成物。
【請求項３９】
さらに少なくとも１つの医薬上許容される担体を含む請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
請求項１記載の少なくとも１つの化合物が式１：
【化４】
2008545702.tif 000071
式１
［式中、ｎは１であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４は各々、メチルである］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩である請求項３８記載の組成物。
【請求項４１】
Ａ）少なくとも１つのニトロ化剤と、式２：
【化５】
2008545702.tif 000072
式２
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩とを反応させて、式３：
【化６】
2008545702.tif 000073
式３
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を含む反応混合物スラリーを調製し、
Ｂ）少なくとも１つの還元剤と該反応混合物スラリーとを合わせて、式４：
【化７】
2008545702.tif 000074
式４
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を調製し、
Ｃ）式４の少なくとも１つの化合物を水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させて、式１：
【化８】
2008545702.tif 000075
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物を得、
Ｄ）式１で示される少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせ、
Ｅ）１５分〜２時間の少なくとも１つの一定時間、０℃〜４０℃で混合して第１の混合物を得、次いで、
Ｆ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法。
【請求項４２】
Ａ）少なくとも１つの還元剤と、式３：
【化９】
2008545702.tif 000076
式３
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を含む反応混合物スラリーとを合わせて、式４：
【化１０】
2008545702.tif 000077
式４
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を調製し、
Ｂ）式４の少なくとも１つの化合物を水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させて、式１：
【化１１】
2008545702.tif 000078
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される化合物を得、
Ｃ）式１で示される少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせ、
Ｄ）１５分〜２時間の少なくとも１つの一定時間、０℃〜４０℃で混合して第１の混合物を得、次いで、
Ｅ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法。
【請求項４３】
Ａ）式４：
【化１２】
2008545702.tif 000079
式４
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させて、式１：
【化１３】
2008545702.tif 000080
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される化合物を得、
Ｂ）式１で示される少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせ、
Ｃ）１５分〜２時間の少なくとも１つの一定時間、０℃〜４０℃で混合して第１の混合物を得、次いで、
Ｄ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法。
【請求項４４】
ｎが１であり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである請求項４１記載の製法。
【請求項４５】
ｎが１であり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである請求項４２記載の製法。
【請求項４６】
ｎが１であり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである請求項４３記載の製法。
【請求項４７】
式１の化合物が［４Ｓ−（４α，１２ａα）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−９−［［（ｔ−ブチルアミノ）アセチル］アミノ］−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセン−カルボキサミド塩酸塩である請求項３０記載の精製法。
【請求項４８】
チゲサイクリンがチゲサイクリン塩酸塩である請求項３２記載の精製法。
【請求項４９】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒がアセトン、１，２−ジクロロエタン、酢酸メチル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、塩化メチレンおよび酢酸エチルから選択される請求項２、および２４〜２９のいずれか１項記載の精製法。
【請求項５０】
少なくとも１つの極性プロトン性溶媒がメタノール、エタノール、イソプロパノールおよびｔ−ブタノールから選択される請求項２、２４〜２９および４９のいずれか１項記載の精製法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮出願番号第６０／６８５，６２６号（２００５年５月２７日出願）の利益を主張し、その内容は、出典明示により本明細書の一部とされる。
本明細書において、式１：
【化１】
2008545702.tif 000003
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法が開示される。
【０００２】
１の具体例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。例えば、チゲサイクリンである。チゲサイクリンは、（９−（ｔ−ブチル−グリシルアミド）−ミノサイクリン，ＴＢＡ−ＭＩＮＯ）、（４Ｓ，４ａＳ，５ａＲ，１２ａＳ）−９−［２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）アセトアミド］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセンカルボキサミドであり、ここに、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。チゲサイクリンは、グリシルサイクリン抗生物質であり、半合成テトラサイクリン、ミノサイクリンの類似体である。チゲサイクリンは、ミノサイクリンの９−ｔ−ブチルグリシルアミド誘導体であり、下記の構造式で示されるとおりである。
【化２】
2008545702.tif 000004
チゲサイクリン
【背景技術】
【０００３】
チゲサイクリンは、抗生物質耐性の出現に対する世界中の脅威に応答して開発された。チゲサイクリンは、イン・ビトロおよびイン・ビボの両方における幅広いスペクトルの抗菌活性を拡大した。テトラサイクリン抗生物質のようなグリシルサイクリン抗生物質は、細菌中の蛋白質翻訳を阻害することによって作用する。
【０００４】
チゲサイクリンは、テトラサイクリンファミリーの既知の抗生物質であり、ミノサイクリンの化学類似体である。それは、薬剤耐性細菌に対する治療として用いることができ、他の抗生物質が働かなかった場所で作用することが示された。例えば、それは、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ペニシリン耐性ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）に対して（D.J. Beidenbach et. al., Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 40:173-177 (2001); H.W. Boucher et. al., Antimicrobial Agents & Chemotherapy 44:2225-2229 (2000); P.A.  Bradford Clin. Microbiol. Newslett. 26:163-168 (2004); D. Milatovic et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 47:400-404 (2003); R. Patel et. al., Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 38:177-179 (2000); P.J. Petersen et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:2595-2601 (2002); and P.J. Petersen et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 43:738-744(1999)）、およびテトラサイクリン耐性の２つの主要な形態、すなわち、排出およびリボソーム保護のいずれかを有する生物に対して（C. Betriu et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 48:323-325 (2004); T. Hirata et. al. Antimicrob. Agents Chemother. 48:2179-2184 (2004); and P.J. Petersen et. al., Antimicrob. Agents Chemother. 43:738-744(1999)）活性である。
【０００５】
チゲサイクリンは、グラム陰性およびグラム陽性病原菌、嫌気菌、ならびにスタフィロコッカス・アウレウスのメチシリン感受性およびメチシリン耐性の両方の株（ＭＳＳＡおよびＭＲＳＡ）によって引き起こされうる多くの細菌感染、例えば、複雑な腹内感染（ｃＩＡＩ）、複雑な皮膚および皮膚構造感染（ｃＳＳＳＩ）、市中肺炎（ＣＡＰ）、および院内肺炎（ＨＡＰ）適応症の治療において使用されうる。さらに、チゲサイクリンは、ＴｅｔＭおよびＴｅｔＫ耐性決定因子を有する細菌によって引き起こされる温血動物における細菌感染を治療または抑制するために使用されうる。また、チゲサイクリンは、骨および関節感染、カテーテル関連好中球減少症、産婦人科の感染の治療、または他の耐性病原菌、例えば、ＶＲＥ、ＥＳＢＬ、腸内菌、急速増殖性マイコバクテリウムなどの治療に用いられうる。
【０００６】
チゲサイクリンは、エピマー化によって分解しうるといういくつかの欠点を有する。エピマー化は、一般にテトラサイクリン類における既知の分解経路であるが、分解速度はそのテトラサイクリンによって異なる。比較的に、テトラサイクリンのエピマー化速度は、例えば、弱酸性条件および／または軽度に上昇させた温度下であっても、早い。テトラサイクリンの文献は、科学者がテトラサイクリン類のエピマー形成を最小限にする試みに用いた数種類の方法を報告している。いくつかの方法において、テトラサイクリンとカルシウム、マグネシウム、亜鉛またはアルミニウム金属との塩の形成が非水性溶液中、塩基性ｐＨで行った場合、エピマー形成を制限する（Gordon, P.N, Stephens Jr, C.R., Noseworthy, M. M., Teare, F.W., U.K. Patent No. 901,107）。他の方法（Tobkes，米国特許第４，０３８，３１５号）において、金属錯体の形成が酸性ｐＨで行われ、次いで、該薬剤の安定な固体形態が調製される。
【０００７】
チゲサイクリンは、たった一つの点において、構造的にそのエピマーとは異なる。
【化３】
2008545702.tif 000005
【０００８】
チゲサイクリンにおいて、第４炭素におけるＮ−ジメチル基は、上記式Ｉに示されるように隣接する水素に対してシスであり、一方、そのエピマー（すなわち、Ｃ４−エピマー）において、それらは、式ＩＩにおいて示されるように互いにトランスである。チゲサイクリンエピマーは無毒であると考えられるが、ある条件下において、チゲサイクリンの抗菌力を失うことがあり、故に、望まれない分解産物である。さらに、チゲサイクリンを大規模に合成する場合、エピマー化の量が拡大する可能性がある。
【０００９】
エピマー形成を減少させるための他の方法には、製造過程の間のｐＨを約０．６以上に維持すること；ギ酸塩、酢酸塩、リン酸塩またはボロン酸塩などの弱酸のコンジュゲートとの接触を避けること；および水ベースの溶液を包含する水分との接触を避けることがある。水分からの保護に関しては、ＮｏｓｅｗｏｒｔｈｙおよびＳｐｉｅｇｅｌ（米国特許第３，０２６，２４８号）、およびＮａｓｈおよびＨａｅｇｅｒ（米国特許第３，２１９，５２９号）が薬物安定性を改善するために、非水性ビヒクル中においてテトラサイクリン類似体を処方することを提唱した。しかしながら、これらの開示に包含されるビヒクルのほとんどは、非経口使用よりも局所的使用に適する。テトラサイクリンエピマー化は、また、温度依存性であることが知られており、それ故、低温でのテトラサイクリンの製造および貯蔵もまた、エピマー形成の速度を減少させることができる（Yuen, P.H., Sokoloski, T.D., J. Pharm. Sci. 66: 1648-1650, 1977; Pawelczyk, E., Matlak, B, Pol. J. Pharmacol. Pharm. 34: 409-421, 1982）。これらの方法のいくつかは、チゲサイクリンを用いて試みられたが、さらなる分解物（degradant）を導入しないで、エピマー形成および酸化的分解の両方を減少させることに成功したものはない。例えば、金属錯体化は、一般に塩基性ｐＨにおいて、エピマー形成または分解のいずれにもほとんど影響しないことが分かった。
【００１０】
リン酸、酢酸およびクエン酸バッファーの使用は溶液状態の安定性を改善するが、凍結乾燥状態におけるチゲサイクリンの分解を加速するようである。しかしながら、バッファーを用いなくても、エピマー化は、ミノサイクリンなどの他のテトラサイクリン類よりもチゲサイクリンで深刻な問題である。
【００１１】
Ｃ４−エピマー以外の不純物には、酸化副産物がある。これらの副産物のいくつかは、アミノフェノールである該分子のＤ環の酸化によって得られる。式３の化合物（下記スキームＩ参照）は、Ｃ−１１およびＣ−１２ａ位置において容易に酸化されることができる。非溶媒を用いる沈殿による式３の化合物の単離は、酸化副産物および金属塩が生成物と共沈殿し、その結果、非常に低い純度をもたらすという問題を有することがある。式３の化合物の核の酸化および分解は、塩基性反応条件下でより著しく、大規模操作では、処理時間が典型的には長く、化合物がより長時間塩基に接触するので、もっと著しい可能性がある。
【００１２】
さらに、分解産物は、スキームの異なる合成段階の各々の間に得られ、これらの分解産物から必要な化合物を分離するのは面倒である。例えば、シリカゲル上のクロマトグラフィーや分取ＨＰＬＣなどの従来の精製技術は、これらの化合物のキレート化性質のために、これらの化合物を容易に精製するのに使用することができない。いくつかのテトラサイクリンは、ＥＤＴＡなどの封鎖剤を含有する緩衝化固定相で飽和させた珪藻土製のカラムを用いる分配クロマトグラフィーによって精製されたが、これらの技術には、非常に低い分離率、再現性およびキャパシティーという欠点がある。これらの欠点は、大規模合成を妨げる可能性がある。ＨＰＬＣもまた、精製に用いられたが、ＨＰＬＣカラム上での種々の成分の十分な分離には、移動相中におけるイオン対合剤の存在が必要となる。最終産物を移動相中の封鎖剤およびイオン対合剤から分離するのは困難である。
【００１３】
小規模では、沈殿によって得られた不純な化合物を分取逆相ＨＰＬＣによって精製することもできるが、逆相液体クロマトグラフィーによる精製は、キログラム量の物質を扱う場合には効果的ではなく、費用がかかる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、式１で示される少なくとも１つの化合物を以前に達成されたよりも精製された形態で得ることに対する必要性が依然としてある。また、精製のためのクロマトグラフィーの使用を最小限にするために、新規な合成に対する必要性も依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本明細書において、一般に下記のスキームＩに示されるような、チゲサイクリンなどのテトラサイクリン類を製造するための方法が開示される。
【化４】
2008545702.tif 000006
スキームＩ
【００１６】
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である。
【００１７】
式２の化合物は、また、ミノサイクリンまたはミノサイクリン誘導体としても知られている。式２の化合物と少なくとも１つのニトロ化剤との反応により、−ＮＯ２置換基がもたらされ、式３の化合物が形成される。式３における−ＮＯ２置換基は、次いで、例えば水素化によって、アミノに還元されて式４の化合物が形成される。最終的に、式４の化合物のアシル化が式１の化合物をもたらす。
【００１８】
本明細書において、式１の化合物を製造するための反応、例えば、ニトロ化、還元およびアシル化反応を実施するための方法が開示される。また、式１の化合物を精製するための方法が開示される。
【００１９】
本明細書中に開示される方法は、所望の生産物を形成することができ、同時に、最終産物中に存在する少なくとも１つの不純物、例えば、エピマー形成、出発試薬の存在および酸化副産物の量を減少させる。かかる不純物減少は、合成の少なくとも１つの段階で、すなわち、ニトロ化、還元およびアシル化反応のいずれか１つの間に達成されることができる。本明細書中に開示される方法は、また、最終産物の適当な純度を伴う大規模合成を容易にすることができる。
【００２０】
図面
図１は、チゲサイクリンを調製するための例示的スキームを示す。
【００２１】
図２は、チゲサイクリンを調製するための例示的スキームを示す。
【００２２】
図３は、チゲサイクリン調製するための例示的スキームを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
定義
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別に明記しないかぎり、複数の対象を包含することに留意されたい。かくして、例えば、「化合物」を含有する組成物は、２以上の化合物の混合物を包含する。また、「または」なる語は、一般に、別に明記しないかぎり、「および／または」を包含する意味で使用されることに留意されたい。
【００２４】
「チゲサイクリン」なる語は、本明細書中で使用される場合、遊離塩基形態および塩形態、例えば、いずれかの医薬上許容される塩、エナンチオマー、およびエピマーの形態のチゲサイクリンを包含する。チゲサイクリンは、本明細書中で使用される場合、当該分野で既知の方法にしたがって処方されうる。
【００２５】
「化合物」なる語は、本明細書中で使用される場合、中性化合物（例えば、遊離塩基）、およびその塩形態（例えば、医薬上許容される塩）をいう。化合物は無水形態、または水和物として、または溶媒和物として存在することができる。化合物は、立体異性体（例えば、エナンチオマーおよびジアステレオマー）として存在していてもよく、また、エナンチオマー、ラセミ混合物、ジアステレオマー、およびその混合物として単離されることができる。固体形態の化合物は、種々の結晶形態およびアモルファス形態において存在することができる。
【００２６】
「医薬上許容される」なる語は、本明細書中で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応あるいは妥当なリスク／効果比に見合った他の問題または合併症を伴うことなく、患者の組織と接触させて用いるのに適当な化合物、材料、組成物および／または投与形をいう。
【００２７】
「シクロアルキル」なる語は、本明細書中で使用される場合、３〜６個の環メンバーを有する飽和炭素環系をいう。
【００２８】
「複素環」なる語は、本明細書中で使用される場合、少なくとも１個の窒素環メンバーを含有し、かつ、各環に３〜６個の環メンバーを有する単環式複素環基であって、各環が飽和されており、別に置換されていないものをいう。
【００２９】
ニトロ化
１の具体例は、式１：
【化５】
2008545702.tif 000007
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法を開示する。
【００３０】
１の具体例は、ニトロ化産物を単離しないニトロ化反応を開示する。したがって、１の具体例において、該方法は、
（ａ）少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化６】
2008545702.tif 000008
の少なくとも１つの化合物またはその塩とを反応させて、中間体を含む反応混合物を調製し、次いで
（ｂ）さらに、中間体を反応させて式１の少なくとも１つの化合物を生成することを特徴とする。
【００３１】
１の具体例において、中間体は、反応混合物から単離されない。
【００３２】
式２の少なくとも１つの化合物は、遊離塩基または塩として提供されることができる。１の具体例において、式２の少なくとも１つの化合物は、塩である。「塩」なる語は、本明細書中で使用される場合、遊離塩基を適当な酸と反応させることによって、イン・シトゥで、または別に調製されうる。例示的な塩には、限定するものではないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、システイン酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、サルフェート、およびクロロベンゼンスルホン酸塩がある。別の具体例において、塩は、アルキルスルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩から選択することができる。１の具体例において、式２の少なくとも１つの化合物は、塩酸塩または硫酸塩として提供される。
【００３３】
「ニトロ化剤」なる語は、本明細書中で使用される場合、−ＮＯ２置換基を化合物に付加するか、または現存する置換基を−ＮＯ２置換基に変換することのできる試薬をいう。例示的ニトロ化剤には、硝酸および硝酸塩、例えば、アルカリ金属塩、例えば、ＫＮＯ３がある。ニトロ化剤が硝酸である場合、該硝酸は、少なくとも８０％の濃度、例えば、８５％、８８％、９０％、９５％、９９％または１００％の濃度を有することができる。
【００３４】
ニトロ化剤は、当業者によって適当であると考えられるいずれかの溶媒中において、式２の少なくとも１つの化合物と反応することができる。１の具体例において、該反応は、硫酸および／または硫酸塩の存在下で実施される。１の具体例において、使用される硫酸は、濃硫酸、例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％または９５％濃度の硫酸である。
【００３５】
１の具体例において、少なくとも１つのニトロ化剤は、式２の少なくとも１つの化合物に対して、モル過剰で提供される。適当なモル過剰は、当業者によって決定されることができ、限定するものではないが、少なくとも１．０５程度の値、例えば、１．０５〜１．７５当量のモル過剰、例えば、１．０５〜１．５のモル過剰、または１．０５〜１．２５、または１．０５〜１．１当量のモル過剰を包含することができる。別の具体例において、モル過剰は、１．０５、１．１、１．２、１．３または１．４当量である。
【００３６】
１の具体例において、少なくとも１つのニトロ化剤を一定時間をかけて添加することによって、少なくとも１つのニトロ化剤を式２の少なくとも１つの化合物と反応させる。当業者は、ニトロ化剤の全量を添加するための時間を反応条件が最適なるように決定することができる。例えば、ニトロ化試薬の添加は、例えば、ＨＰＬＣによってモニターして、使用される少なくとも１つのニトロ化剤の量を調節することができる。１の具体例において、少なくとも１つのニトロ化剤の全量は、少なくとも１時間、例えば、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも５時間、少なくとも１０時間、少なくとも２４時間、または１時間〜１週間、１時間〜４８時間、１時間〜２４時間、または１時間〜１２時間かけて添加される。
【００３７】
少なくとも１つのニトロ化剤は、連続的に添加することができる。
【００３８】
１の具体例において、ニトロ化剤は、式２の少なくとも１つの化合物と、０〜２５℃、例えば、５〜１５℃、５〜１０℃、または１０〜１５℃の温度で反応させることができる。
【００３９】
「中間体」なる語は、本明細書中で使用される場合、出発物質と最終産物との間に中間体産物として形成される化合物をいう。１の具体例において、中間体は、式２の少なくとも１つの化合物のニトロ化の生産物である。例えば、中間体は、式３：
【化７】
2008545702.tif 000009
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩であることができる。
【００４０】
中間体は、遊離塩基または塩、例えば、本明細書中に開示される塩のいずれかとして存在することができる。１の具体例において、中間体は硫酸塩である。
【００４１】
１の具体例において、中間体は、反応混合物から単離されない。「反応混合物」なる語は、本明細書中で使用される場合、試薬間の化学反応の少なくとも１つの生産物、ならびに副産物、例えば、不純物（望ましくない立体化学を有する化合物を包含する）、溶媒、およびいずれかの残存試薬、例えば、出発物質を含む溶液またはスラリーをいう。１の具体例において、中間体は、ニトロ化の生産物であり、反応混合物中に存在し、該反応混合物はまた、出発試薬（例えば、ニトロ化剤および／または式２の少なくとも１つの化合物）、副産物（例えば、式２または式３のＣ４−エピマー）を含有することができる。１の具体例において、反応混合物はスラリーであり、ここに、スラリーは、少なくとも１つの固体および少なくとも１つの液体（例えば、水、酸または溶媒）を含む組成物、例えば、固体の懸濁液または分散液であることができる。
【００４２】
１の具体例において、ニトロ化反応は、中間体を生成し、同時に、少量の対応するＣ４−エピマーを生じる。例えば、中間体が式３の少なくとも１つの化合物である場合、ニトロ化は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した場合、１０％未満の量におけるＣ４−エピマーの形成をもたらす。別の具体例において、Ｃ４−エピマーは、５％未満、３％未満、２％未満、１％未満または０．５％未満の量で存在する。
【００４３】
各段階、すなわち、ニトロ化、還元およびアシル化のＨＰＬＣパラメーターは、実施例セクションに記載する。
【００４４】
１の具体例において、ニトロ化は、出発物質、すなわち、式２の少なくとも１つの化合物の量が少量になるように行われる。１の具体例において、式２の少なくとも１つの化合物は、ニトロ化産物中、ＨＰＬＣで測定した場合、１０％未満、５％未満、３％未満、２％未満、１％未満または０．５％未満の量で存在する。
【００４５】
１の具体例において、ニトロ化は、大規模に行うことができる。１の具体例において、「大規模」とは、少なくとも１ｇの式２の化合物の使用をいい、例えば、少なくとも２ｇ、少なくとも５ｇ、少なくとも１０ｇ、少なくとも２５ｇ、少なくとも５０ｇ、少なくとも１００ｇ、少なくとも５００ｇ、少なくとも１ｋｇ、少なくとも５ｋｇ、少なくとも１０ｋｇ、少なくとも２５ｋｇ、少なくとも５０ｋｇ、または少なくとも１００ｋｇの使用をいう。
【００４６】
１の具体例において、還元により、式４：
【化８】
2008545702.tif 000010
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩が生成される。
【００４７】
１の具体例において、（ｂ）におけるさらなる反応は、中間体の還元を含む。別の具体例において、該方法は、さらに、還元中間体のアシル化を含む。
【００４８】
本明細書に開示される別の具体例は、式１：
【化９】
2008545702.tif 000011
［式中、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（ａ）少なくとも１つのニトロ化剤を式２：
【化１０】
2008545702.tif 000012
の少なくとも１つの化合物またはその塩と反応させて、中間体を含む反応混合物を調製し、次いで
（ｂ）さらに、該中間体を反応させて式１の少なくとも１つの化合物を生成することを特徴とする方法である。
【００４９】
１の具体例において、中間体は反応混合物から単離しない。
【００５０】
１の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物はチゲサイクリンである。
【００５１】
本明細書中に開示される別の具体例は、式１：
【化１１】
2008545702.tif 000013
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（ａ）少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化１２】
2008545702.tif 000014
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩とを反応させて、スラリーを調製し、
（ｂ）さらに、該スラリーを反応させて、式１の少なくとも１つの化合物を生成することを特徴とする方法である。
【００５２】
１の具体例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。別の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物はチゲサイクリンである。
【００５３】
本明細書中に開示される別の具体例は、式３：
【化１３】
2008545702.tif 000015
［式中、Ｒは、−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに飽和および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択される］
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩の製法であって、
少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化１４】
2008545702.tif 000016
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を５〜１５℃で反応させることを特徴とする方法である。
【００５４】
本明細書中に開示される別の具体例は、式１：
【化１５】
2008545702.tif 000017
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（ａ）少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化１６】
2008545702.tif 000018
の少なくとも１つの化合物またはその塩を反応させて中間体を含む反応混合物を調製し、次いで
（ｂ）さらに、該中間体を反応させて式１の少なくとも１つの化合物を生成させ、ここに、（ａ）の反応を５〜１５℃で行うことを特徴とする方法である。
【００５５】
１の具体例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。
【００５６】
還元
１の具体例は、式４：
【化１７】
2008545702.tif 000019
［式中、Ｒ＝−ＮＲ３Ｒ４、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択される］
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩の製法であって、
少なくとも１つの還元剤を、少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化１８】
2008545702.tif 000020
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩との反応から調製された中間体を含む反応混合物、例えば、反応混合物スラリーとを合わせることを特徴とする方法を開示する。
【００５７】
１の具体例において、該方法は、「ワン・ポット」プロセスを表し、ここに、ニトロ化および還元工程は、ニトロ化反応混合物からニトロ化産物を単離することなく行われる。
【００５８】
１の具体例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。
【００５９】
「還元剤」なる語は、本明細書中で使用される場合、化合物に水素を付加する化学剤をいう。１の具体例において、還元剤は水素である。還元は、水素雰囲気下、当業者によって決定される適当な圧力で行うことができる。１の具体例において、水素は、１〜７５ｐｓｉ、例えば、１〜５０ｐｓｉ、または１〜４０ｐｓｉの圧力で提供される。
【００６０】
別の具体例において、還元剤は、少なくとも１つの触媒の存在下に提供される。例示的触媒は、限定するものではないが、希少土類金属酸化物、第ＶＩＩＩ族金属含有触媒、および第ＶＩＩＩ属金属含有触媒の塩を包含する。第ＶＩＩＩ族金属含有触媒の例は、パラジウム、例えば、炭素上のパラジウムである。
【００６１】
触媒が炭素上のパラジウムである場合、１の具体例において、触媒は、少なくとも１つのニトロ化剤との反応前に存在する式２で示される少なくとも１つの化合物の量に対し、０．１〜１部の量で存在する。
【００６２】
１の具体例において、中間体は、式３の少なくとも１つの化合物である。１の具体例において、式３の化合物において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。
【００６３】
当業者は、還元反応に適当な溶媒を決定することができる。１の具体例において、合わせる前に、例えば、還元の前に、反応混合物を少なくとも１つの（Ｃ１−Ｃ８）アルコールを含む溶媒と合わせる。少なくとも１つの（Ｃ１−Ｃ８）アルコールは、例えば、メタノールおよびエタノールから選択することができる。
【００６４】
当業者は、還元反応に適当な温度を決定することができる。１の具体例において、０℃〜５０℃、例えば、２０℃〜４０℃、または２６℃〜２８℃で合わせる、例えば、還元を行う。
【００６５】
１の具体例において、合わせた後、例えば、還元後、得られる反応混合物を（Ｃ１−Ｃ８）分枝鎖アルコールおよび（Ｃ１−Ｃ８）炭化水素を含む溶媒系に加える、または該溶媒系と合わせる。１の具体例において、（Ｃ１−Ｃ８）分枝鎖アルコールは、イソプロパノールである。１の具体例において、（Ｃ１−Ｃ８）炭化水素は、ヘキサン、ヘプタン、およびオクタンから選択される。
【００６６】
１の具体例において、合わせた後、例えば、還元後、０℃〜５０℃、例えば、０℃〜１０℃で、得られる反応混合物を溶媒系に加える。
【００６７】
１の具体例において、該方法は、さらに、式４の少なくとも１つの化合物を固体として、または固体組成物として単離することを含む。１の具体例において、式４の少なくとも１つの化合物は、塩、例えば、本明細書中に記載される塩のいずれかとして沈殿または単離される。
【００６８】
１の具体例において、該固体組成物は、式４のＣ４−エピマーを高速液体クロマトグラフィーによって測定した場合、１０％未満量で含む。別の具体例において、該Ｃ４−エピマーは、５％未満、３％未満、２％未満、１％未満または０．５％未満の量で存在する。
【００６９】
１の具体例において、該固体組成物は、式２の少なくとも１つの化合物を高速液体クロマトグラフィーによって測定した場合、２％未満、例えば、１％未満、または０．５％未満の量で含む。
【００７０】
１の具体例において、還元は大規模に実施することができる。１の具体例において、「大規模」なる語は、式２の少なくとも１つの化合物の少なくとも１ｇの使用、例えば、少なくとも２ｇ、少なくとも５ｇ、少なくとも１０ｇ、少なくとも２５ｇ、少なくとも５０ｇ、少なくとも１００ｇ、少なくとも５００ｇ、少なくとも１ｋｇ、少なくとも５ｋｇ、少なくとも１０ｋｇ、少なくとも２５ｋｇ、少なくとも５０ｋｇまたは少なくとも１００ｋｇの使用をいう。
【００７１】
本明細書中に開示される別の具体例は、式１：
【化１９】
2008545702.tif 000021
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（ａ）少なくとも１つの還元剤を、少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化２０】
2008545702.tif 000022
の少なくとも１つの化合物またはその塩との反応から調製される中間体を含む反応混合物、例えば、反応混合物スラリーと合わせて、第２の中間体を生成し、次いで
（ｂ）さらに、反応混合物中の第２の中間体を反応させて、式１の少なくとも１つの化合物を調製する方法である。
【００７２】
１の具体例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。
【００７３】
１の具体例において、中間体は、式３の少なくとも１つの化合物またはその塩であり、第２の中間体は、式４：
【化２１】
2008545702.tif 000023
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩である。
【００７４】
１の具体例において、（ｂ）におけるさらなる反応は、第２の中間体のアシル化を含む。１の具体例において、アシル化前に、第２の中間体を塩として沈殿または単離することができる。
【００７５】
本明細書中に開示される別の具体例は、式４：
【化２２】
2008545702.tif 000024
［式中、Ｒ＝−ＮＲ３Ｒ４、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択される］
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩の製法であって、
式３：
【化２３】
2008545702.tif 000025
の中間体またはその塩を還元することを特徴とする方法である。
【００７６】
１の具体例において、式３の中間体は、反応混合物スラリー中に存在していてもよい。
【００７７】
１の具体例において、還元は、少なくとも１つの還元剤を反応混合物と合わせることを特徴とする。
【００７８】
本明細書中に開示される別の具体例は、式１：
【化２４】
2008545702.tif 000026
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（ａ）少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化２５】
2008545702.tif 000027
の少なくとも１つの化合物またはその塩とを反応させて反応混合物を調製し、
（ｂ）反応混合物からいずれの固体も単離または沈殿することなく、少なくとも１つの還元剤を反応混合物と合わせて中間体を調製し、次いで
（ｃ）式１の少なくとも１つの化合物を該中間体から調製する
ことを特徴とする方法である。
【００７９】
本明細書中に開示される別の具体例は、式１：
【化２６】
2008545702.tif 000028
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
（ａ）少なくとも１つの第ＶＩＩＩ族金属含有触媒を水素の存在下、少なくとも１つのニトロ化剤と式２：
【化２７】
2008545702.tif 000029
の少なくとも１つの化合物またはその塩との反応から調製された反応混合物、例えば、反応混合物スラリーと合わせることを特徴とする方法である。
【００８０】
１の具体例において、少なくとも１つの第ＶＩＩＩ族金属含有触媒は、少なくとも１つのニトロ化剤との反応前に存在する式２のの少なくとも１つの化合物の量に対して、０．１部〜１部の量で存在する。
【００８１】
本明細書中に開示される別の具体例は、式４：
【化２８】
2008545702.tif 000030
［式中、Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択される］
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を含む組成物であって、ここに、式４のＣ４−エピマーが高速液体クロマトグラフィーによって測定した場合、１０％未満の量で存在する組成物である。
【００８２】
１の具体例において、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、ｎは１である。
【００８３】
アシル化
本発明の１の具体例は、式１：
【化２９】
2008545702.tif 000031
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキル、例えば、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環、例えば、５員環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
式４：
【化３０】
2008545702.tif 000032
で示される少なくとも１つの化合物またはその塩を反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させることを特徴とする方法を提供する。１の具体例において、反応媒体は、水性媒体、および試薬塩基の不在下での少なくとも１つの塩基性溶媒から選択されうる。
【００８４】
１の具体例において、式Ｉの化合物の製法は、チゲサイクリン：
【化３１】
2008545702.tif 000033
チゲサイクリン
またはその医薬上許容される塩の製法である。
【００８５】
１の具体例において、変数ｎは１であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４は各々、メチルである。別の具体例において、変数ｎは１であり、Ｒ１およびＲ２はＮと一緒になって、ピロリジニル基を形成し、Ｒ３およびＲ４は各々、メチルである。式４の少なくとも１つの化合物の塩は、ハロゲン化塩、例えば、塩酸塩であってもよい。
【００８６】
反応媒体は、極性非プロトン性溶媒またはその溶媒混合物であってもよい。１の具体例において、極性非プロトン性溶媒は、アセトニトリル、１，２−ジメトキシエタン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ヘキサメチルホスホルアミド、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレン尿素、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素、塩化メチレン、Ｎ−メチルピロリジノン、テトラヒドロフラン、およびその混合物から選択される。別の具体例において、極性非プロトン性溶媒は、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素、Ｎ−メチルピロリジノン、テトラヒドロフラン、およびその混合物から選択される。少なくとも１つの塩基性溶媒は、アセトニトリルおよびＮ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素の混合物であってもよい。別の具体例において、少なくとも１つの塩基性溶媒は、水およびＮ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素の混合物であってもよい。さらなる具体例において、少なくとも１つの塩基性溶媒は、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレン尿素である。
【００８７】
反応媒体は、水性媒体であってもよい。さらなる具体例において、塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒は、塩基の不在下においける水である。別の具体例において、反応媒体は、試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒であってもよい。塩基性溶媒は、部分的または完全にプロトンを受容することのできる溶媒である。試薬塩基とは、式４の少なくとも１つの化合物および少なくとも１つのアミノアシル化合物と同時または続いて反応の開始時に加えられ、部分的または完全にプロトンを受容することのできる塩基をいう。試薬塩基はまた、反応の間に加えられる塩基も示す。
【００８８】
少なくとも１つのアミノアシル化合物は、アミノアシルハロゲン化物、アミノアシル無水物、および混合したアミノアシル無水物から選択されうる。１の具体例において、アミノアシル化合物は、式６：
【化３２】
2008545702.tif 000034
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；ｎは、１−４であり；Ｑは、フッ化物、臭化物、塩化物およびヨウ化物から選択されるハロゲンである］
で示される少なくとも１つのアミノアシルハロゲン化物である。
【００８９】
さらなる具体例において、Ｑは塩化物である。式６の化合物の塩は、ハロゲン化塩から選択されうる。ハロゲン化塩は、ハロゲンアニオン、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、およびヨウ化水素酸塩との相互作用から形成されるいずれかの塩をいう。１の具体例において、ハロゲン化塩は、塩酸塩である。
【００９０】
式６の少なくとも１つのアミノアシルハロゲン化物は、
Ａ）式７：
【化３３】
2008545702.tif 000035
で示される少なくとも１つのエステルまたはその塩を少なくとも１つのアミン、Ｒ１Ｒ２ＮＨ（ここに、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｘは、臭化物、塩化物、フッ化物およびヨウ化物から選択されるハロゲンであり；Ａは−ＯＲ６であり、ここに、Ｒ６は、直鎖または分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキルおよびアリールアルキル、例えば、アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（例えば、アリールはフェニルである）から選択され；ｎは１−４である］
と反応させて、少なくとも１つのカルボン酸を調製し；次いで、
Ｂ）少なくとも１つのカルボン酸を少なくとも１つの塩素化剤と反応させて、式６の少なくとも１つのアミノアシル化合物またはその塩を得る
ことを特徴とする方法によって得てもよい。
【００９１】
１の具体例において、Ｒ１およびＲ６は、各々、ｔ−ブチルであってもよい。別の具体例において、Ｒ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって複素環、例えば、ピロリジンを形成してもよく、Ｒ６は、アリールアルキル−、例えば、ベンジルであってもよい。別の具体例において、ｎは１である。さらなる具体例において、Ｘは臭化物である。
【００９２】
別の具体例において、式７の少なくとも１つのエステルは、塩酸塩である。式７のエステルと比べて過剰なアミンＲ１Ｒ２ＮＨを反応中に存在させて、少なくとも１つのカルボン酸を調製してもよい。１の具体例において、少なくとも１つの塩素化剤は、塩化チオニルであってもよい。別の具体例において、少なくとも１つのカルボン酸と少なくとも１つの塩素化剤の反応は、触媒量のジメチルホルムアミドの添加を含む。少なくとも１つのカルボン酸に対して過剰な塩素化剤を反応中に存在させて、式６の少なくとも１つのアミノアシル化合物を得てもよい。Ｒ６がアリールアルキル−である場合、式７の少なくとも１つの化合物のアリールアルキル−は、少なくとも１つのアミンとの反応後、水素化によって切断して少なくとも１つのカルボン酸を得てもよい。
【００９３】
少なくとも１つのカルボン酸と塩素化剤の反応は、５５℃〜８５℃、例えば、８０℃〜８５℃、さらには、例えば、５５℃で行ってもよい。１の具体例において、塩素化剤の付加的な量を反応に加えて完了させ、例えば、４％未満のレベルのカルボン酸を達成する。少なくとも１つのカルボン酸と少なくとも１つの塩素化剤の反応後、得られる懸濁をろ過して、塩、例えば、ｔ−ブチルアミン塩酸塩を除去してもよい。式６のアミノアシルハロゲン化物は、ＨＣｌ塩として単離してもよく、または無機酸、例えば、塩酸と反応させてアミノアシルハロゲン化物塩を調製してもよい。
【００９４】
別の具体例において、式６の少なくとも１つのアミノアシルハロゲン化物は、式８：
【化３４】
2008545702.tif 000036
［式中、Ｒ５は、直鎖または分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、ｎは１〜４である］で示される少なくとも１つのカルボン酸またはその塩と少なくとも１つの塩素化剤とを反応させて、式６の少なくとも１つのアミノアシルハロゲン化物またはその塩を得ることを特徴とする方法によって得られる。
【００９５】
別の具体例において、式８の少なくとも１つのカルボン酸は、ハロゲン化物塩、例えば、塩酸塩である。式８の少なくとも１つの化合物と少なくとも１つの塩素化剤を反応させるための時間は、１〜５０時間、例えば、２〜４５時間、さらには、例えば、１〜３時間であってもよい。式８の少なくとも１つのカルボン酸は、１５０ミクロン未満、例えば、１１０ミクロン未満、さらには、例えば、５０〜１００ミクロンの粒径を有していてもよい。所定の粒径を有する式８の化合物は、該化合物を粉砕することによって得られうる。
【００９６】
式４の少なくとも１つの化合物と少なくとも１つのアミノアシル化合物との反応は、０℃〜３０℃、例えば、２０℃〜２５℃、例えば、１０℃〜１７℃、例えば、０℃〜６℃、さらには、例えば、２℃〜８℃で行ってもよい。反応時間は、１時間〜２４時間、例えば、０．５時間〜４時間、さらには、例えば、２時間〜８時間であってもよい。式４の化合物量に対して過剰なアミノアシル化合物を反応に用いてもよい。１の具体例において、過剰は、式４の少なくとも１つの化合物１当量に対して、アミノアシル化合物３当量であってもよい。別の具体例において、式４の少なくとも１つの化合物に対する水性媒体の比率は、６：１ｗ／ｗまたは５：１容量であってもよい。１の具体例において、アミノアシル化合物は、水性媒体中における式４の少なくとも１つの化合物の溶液に加えられるか、または該溶液と合わせる。
【００９７】
１の具体例において、反応媒体が水性媒体である場合、水性媒体のｐＨは、４〜９、例えば、５〜７．５、例えば、６．３〜６．７、例えば、７．０〜７．５、さらには、例えば、６．５、またさらには、例えば、７．２に調整してもよい。ｐＨ調整の前に水を加えてもよい。ｐＨ調整は、限定するものではないが、水酸化アンモニウムを包含する塩基の添加を含んでいてもよい。水酸化アンモニウムの濃度は、２５％〜３０％であってもよい。別の具体例において、酸、例えば、塩酸を用いてｐＨを調整してもよい。ｐＨ調整の間、反応媒体は、−５℃〜２５℃、例えば、５℃〜８℃、さらには、例えば、０℃〜５℃にあればよい。
【００９８】
ｐＨ調整後、少なくとも１つの有機溶媒または溶媒混合物を水性媒体に加えてもよい。１の具体例において、少なくとも１つの有機溶媒または溶媒混合物は、メタノールおよび塩化メチレンを含んでいてもよい。メタノールの濃度は、５％〜３０％、限定するものではないが、２０％または３０％であってもよい。別の具体例において、少なくとも１つの有機溶媒または溶媒混合物は、テトラヒドロフランを含む。混合物の温度は、１５℃〜２５℃であってもよい。
【００９９】
１の具体例において、水性媒体は、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒の混合物で抽出されてもよい。１の具体例において、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒は塩化メチレンを含み、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒はメタノールを含む。別の具体例において、水性媒体は、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒、例えば、塩化メチレンで抽出される。抽出は、−５℃〜２５℃、さらには例えば、０℃〜５℃で行ってもよい。さらなる具体例において、各抽出後、水性媒体のｐＨを７．０〜７．５、例えば、７．２に調整する。抽出過程は、例えば、最高で１０回、繰り返してもよい。
【０１００】
１の具体例において、合わせた有機抽出物を乾燥剤、例えば、硫酸ナトリウムで処理してもよい。有機抽出物は、また、炭、例えば、Ｎｏｒｉｔ  ＣＡ−１で処理してもよい。固体をろ過によって除去して、溶液を得る。１の具体例において、該溶液を濃縮して、式１の化合物を得てもよい。
【０１０１】
該反応から得られた式１の化合物は、少なくとも１つの有機溶媒または溶媒混合物中で結晶化してもよい。１の具体例において、有機溶媒混合物は、メタノールおよび塩化メチレンを含む。結晶化は、例えば、−１５℃〜１５５℃、例えば、０℃〜１５℃、さらには例えば、２℃〜５℃で起こりうる。
【０１０２】
別の具体例において、抽出後、得られた少なくとも１つの極性プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒の有機混合物を濃縮してスラリーを得、ろ過して、式１の少なくとも１つの化合物を得てもよい。濃縮およびろ過は、例えば、０℃〜５℃で行ってもよい。
【０１０３】
式１の化合物の製法は、５ｇ以上の式４のアミン、例えば、１０ｇ以上、例えば、５０ｇ以上、例えば、１００ｇ以上、例えば、５００ｇ以上、例えば、１ｋｇ以上、さらには例えば、１０ｋｇ以上を用いて行ってもよい。
【０１０４】
１の具体例は、限定するものではないが、式１の化合物、式４の化合物、式６の化合物、式７の化合物、式８の化合物およびその塩を包含する本明細書に記載の方法のいずれかによって調製された化合物を開示する。別の具体例は、本明細書に記載の方法のいずれかによって調製された化合物を含む組成物を開示する。該組成物は、さらに、医薬上許容される担体を含んでいてもよい。
【０１０５】
１の具体例において、該組成物は、式１：
【化３５】
2008545702.tif 000037
式１
［式中、ｎは１であり、Ｒ１およびＲ２はＮと一緒になって、ｔ−ブチル基を形成し、Ｒ３およびＲ４は各々、メチルである］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩を含んでいてもよい。別の具体例において、該組成物は、式１：
【化３６】
2008545702.tif 000038
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩、および０．５％未満の式１の少なくとも１つの化合物のＣ−４エピマーまたはその医薬上許容される塩を含んでいてもよい。
【０１０６】
さらなる具体例において、該組成物は、チゲサイクリン：
【化３７】
2008545702.tif 000039
チゲサイクリン
またはその医薬上許容される塩、および０．５％未満のチゲサイクリンのＣ−４エピマーまたはその医薬上許容される塩を含んでいてもよい。
【０１０７】
１の具体例において、本明細書中に記載される方法のいずれかによって調製された式１の化合物は、高速液体クロマトグラフィーによって測定された場合、１０．０％未満の不純物、例えば、５％未満の不純物、例えば、２％未満の不純物、さらに例えば、１−１．４％の不純物を含有する。さらなる具体例において、式１の化合物は、Ｃ４−エピマーを高速液体クロマトグラフィーによって測定された場合、１．０％未満の量で含有し、例えば、０．５％未満のＣ４−エピマー、さらには例えば、０．２％未満のＣ４−エピマーを含有する。１の具体例において、式１の化合物は、高速液体クロマトグラフィーによって測定された場合、１％未満のミノサイクリン、例えば、０．６％未満のミノサイクリンを含有する。別の具体例において、式１の化合物は、５％未満のジクロロメタン、例えば、２−３％のジクロロメタンを含有する。
【０１０８】
該開示の１の具体例は、式１：
【化３８】
2008545702.tif 000040
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
Ａ）少なくとも１つのニトロ化剤を式２：
【化３９】
2008545702.tif 000041
式２
の少なくとも１つの化合物またはその塩と反応させて、式３：
【化４０】
2008545702.tif 000042
式３
の少なくとも１つの化合物またはその塩を含む反応混合物スラリーを調製し、
Ｂ）少なくとも１つの還元剤を反応混合物スラリーと合わせて、式４：
【化４１】
2008545702.tif 000043
式４
の少なくとも１つの化合物またはその塩を調製し、次いで
Ｃ）式４の少なくとも１つの化合物を水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させる
ことを特徴とする方法を包含する。
【０１０９】
該方法によって調製される式１の化合物は、チゲサイクリンであってもよい。
【０１１０】
本発明の開示の別の具体例は、式１：
【化４２】
2008545702.tif 000044
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
Ａ）少なくとも１つの還元剤を式３：
【化４３】
2008545702.tif 000045
式３
の少なくとも１つの化合物またはその塩を含む反応混合物スラリーと合わせて、式４：
【化４４】
2008545702.tif 000046
式４
の少なくとも１つの化合物またはその塩を調製し、
Ｂ）式４の少なくとも１つの化合物を水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させる
ことを特徴とする方法を包含する。
【０１１１】
別の具体例において、上記の方法によって調製された式１の化合物はチゲサイクリンであってもよい。
【０１１２】
精製
本発明の開示の１の具体例は、式１：
【化４５】
2008545702.tif 000047
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の精製法であって、
Ａ）式１の少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせて、第１混合物を得、
Ｂ）該第１混合物を少なくとも１つの一定時間、例えば、１５分〜２時間、０℃〜４０℃で混合し、次いで
Ｃ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする方法を提供する。
【０１１３】
本明細書中で使用される場合、「得る」なる語は、化合物を限定するものではないが、９０％以上、９５％、９６％、９７％、９８％および９９％を包含する有用な純度で単離することをいう。純度は、高圧液体クロマトグラフィーによって測定されうる。
【０１１４】
１の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物の精製法は、
Ａ）式１の少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせて、第１混合物を得、
Ｂ）該第１混合物を一定時間、３０℃〜４０℃で混合し、
Ｃ）該第１混合物を１５℃〜２５℃に冷却し、該混合物を第２の一定時間、混合することなく静置させ、
Ｄ）該第１混合物を０℃〜６℃に冷却し、該混合物を第３の一定時間、混合することなく静置させ、
Ｅ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
工程を含む。
【０１１５】
１の具体例において、該方法は、ｎが１であり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである式１の少なくとも１つの化合物を包含しうる。別の具体例は、ｎが１であり、Ｒ１およびＲ２がＮと一緒になってピロリジニル基を形成し、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである式１の少なくとも１つの化合物を包含する。少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせる式１の少なくとも１つの化合物は、固体、スラリー、懸濁液および溶液から選択される形態で提供されうる。
【０１１６】
１の具体例において、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒は、アセトン、１，２−ジクロロエタン、酢酸メチル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、塩化メチレン、および酢酸エチルから選択されうる。さらなる具体例において、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒は、アセトンおよび塩化メチレンから選択されうる。別の具体例において、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、およびｔ−ブタノールから選択されうる。さらなる具体例において、少なくとも１つの極性プロトン性溶媒は、メタノールであってもよい。
【０１１７】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒の組み合わせは、アセトンおよびメタノールを包含しうる。別の具体例は、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒塩化メチレン、および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒メタノールの組み合わせを提供する。さらなる具体例において、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒の組み合わせは、酢酸メチルおよびメタノールを包含しうる。式１の化合物は、例えば、等容量の少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせてもよい。
【０１１８】
１の具体例において、第１混合物は、例えば、３０分〜２時間の第１一定時間、１５℃〜２５℃で混合し、次いで、３０分〜２時間の第２一定時間、０℃〜２℃で混合してもよい。１の具体例において、第１一定時間および第２一定時間は、各々、１時間である。別の具体例において、該方法は、第１混合物を少なくとも３０分〜２時間の一定時間、１５℃〜２５℃で混合し、次いで、第１混合物をろ過して固体を得ることを含んでいてもよい。該方法は、さらに、該固体を、例えば等容量の、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と、３０分〜２時間の第１一定期間、１５℃〜２５℃で合わせ、次いで、ろ過して第２の固体を得ることを含んでいてもよい。さらなる具体例において、これら合わせる工程およびろ過する工程は、２〜１５回繰り返してもよい。
【０１１９】
式１の化合物の精製法は、さらに、第１混合物から固体を得、固体を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒都合わせて第２混合物を得ることを含んでいてもよい。第２混合物は、さらに、メタノールおよび塩化メチレンを１：５〜１：１５  メタノール：塩化メチレンの容量比で含んでいてもよい。１の具体例において、第２混合物を３０℃〜３６℃で混合し、次いで、ろ過して、溶液を得てもよい。さらなる具体例において、該溶液中における極性プロトン性溶媒の濃度は、５％以下に下げてもよく、該溶液を例えば０℃〜６℃にて、一定時間、例えば、３０分〜２時間混合した後、ろ過してもよい。
【０１２０】
１の具体例において、第１混合物の混合は、１０〜２０分間、例えば、１５分間行ってもよい。１の具体例において、第１混合物の１５℃〜２５℃への冷却および該混合物の混合することのない静置は、３０分〜３時間、例えば、１時間〜２時間の第２一定時間行ってもよい。第１混合物は、さらに、０℃〜６℃に冷却し、３０分〜２時間の第３一定時間、例えば、１時間混合することなく静置してもよい。
【０１２１】
式１の化合物を得る工程は、本明細書に記載のいずれかの混合物を、パイロジェン減少フィルターおよび浄化フィルターから選択される少なくとも１つのフィルターによってろ過することを包含しうる。
【０１２２】
本明細書に開示されるように、混合は、機械的混合装置、例えば、スターラーまたはアジテーターを用いて行ってもよい。混合は、また、溶媒系中における式１の化合物の溶解性によって達成されうる。温度上昇は溶解性を上げうる。
【０１２３】
１の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせようとするとき、式１の少なくとも１つの化合物は、その医薬上許容される塩の形態で用いてもよい。式１の少なくとも１つの化合物が本発明の方法の生成物として得られる場合、式１の少なくとも１つの化合物は、その医薬上許容される塩の形態で回収されうる。
【０１２４】
別の具体例において、式１の化合物が本発明の方法によって得られる場合、該化合物は、酸の付加によってその医薬上許容される塩に変換されうる。
【０１２５】
１の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物は、［４Ｓ−（４α，１２ａα）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−９−［［（ｔ−ブチルアミノ）アセチル］アミノ］−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセン−カルボキサミド、例えば、医薬上許容される塩、例えば、ＨＣｌ塩であってもよい。別の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物は、［４Ｓ−（４α，１２ａα）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−９−［［（ピロリジニル）アセチル］アミノ］−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセン−カルボキサミド、例えば、医薬上許容される塩、例えば、ＨＣｌ塩であってもよい。
【０１２６】
式１の少なくとも１つの化合物の精製法は、
Ａ）チゲサイクリンを少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせて、第１混合物を得、
Ｂ）該第１混合物を少なくとも１つの一定時間、例えば、１５分〜２時間、０℃〜４０℃で混合し、次いで
Ｃ）チゲサイクリンを得る
ことを特徴とするチゲサイクリンの精製法であってもよい。
【０１２７】
少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせられるチゲサイクリンは、固体、スラリー、懸濁液および溶液から選択される形態で提供されてもよい。１の具体例において、該方法から得られたチゲサイクリンは、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定された場合、１％未満のチゲサイクリンのＣ−４エピマーまたはその医薬上許容される塩を含有しうる。
【０１２８】
該方法によって得られた式１の少なくとも１つの化合物は、ＨＰＬＣによって測定した場合、３．０％未満の不純物、例えば、１．０％未満の不純物、例えば、０．７％未満の不純物を含有しうる。別の具体例において、式１の少なくとも１つの化合物は、ＨＰＬＣによって測定した場合、２％未満の式１の化合物のＣ−４エピマーまたはその医薬上許容される塩を含有していてもよく、例えば、１％未満のＣ−４エピマー、例えば、０．５％未満のＣ−４  エピマーを含有していてもよい。
【０１２９】
該方法は、５ｇ以上の式１の少なくとも１つの化合物、例えば、５０ｇ以上、例えば、１００ｇ以上、例えば、５００ｇ以上、例えば、１ｋｇ以上、さらには例えば、１０ｋｇ以上で行ってもよい。
【０１３０】
１の具体例は、限定するものではないが、式１の化合物およびチゲサイクリンを包含する、本明細書中に記載の方法のいずれかによって調製された化合物を開示する。別の具体例は、本明細書中に記載される方法のいずれかによって調製された化合物を含む組成物を包含する。該組成物は、さらに、医薬上許容される担体を含んでいてもよい。
【０１３１】
１の具体例において、該組成物は、式１：
【化４６】
2008545702.tif 000048
式１
［式中、ｎは１であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２はｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４は各々、メチルである］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩を含んでいてもよい。
【０１３２】
該開示の１の具体例は、式１：
【化４７】
2008545702.tif 000049
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
Ａ）少なくとも１つのニトロ化剤を式２：
【化４８】
2008545702.tif 000050
式２
の少なくとも１つの化合物またはその塩と反応させて中間体、例えば、式３：
【化４９】
2008545702.tif 000051
式３
の少なくとも１つの化合物またはその塩を含む反応混合物、例えば、反応混合物スラリーを調製し、
Ｂ）少なくとも１つの還元剤を反応混合物スラリーと合わせて、第２の中間体、例えば、式４：
【化５０】
2008545702.tif 000052
式４
の少なくとも１つの化合物またはその塩を調製し、次いで
Ｃ）第２の中間体を反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させて、式１の少なくとも１つの化合物を得る
ことを特徴とする方法を包含する。１の具体例において、反応媒体は、水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される。さらなる工程は、例えば、
Ｄ）式１の少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせて、第１混合物を得、
Ｅ）第１混合物を少なくとも１つの一定時間、例えば、１５分〜２時間、ある温度で、例えば、０℃〜４０℃で混合し、
Ｆ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
工程の少なくとも１つを含んでいてもよい。１の具体例において、開示される方法の中間体のいずれかを単離または沈殿させてもよい。別の具体例において、開示される方法のいずれかの２以上の工程は、「ワン・ポット」法である。
【０１３３】
該開示の別の具体例は、式１：
【化５１】
2008545702.tif 000053
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
Ａ）少なくとも１つの還元剤を、式３：
【化５２】
2008545702.tif 000054
式３
の少なくとも１つの化合物またはその塩を含む反応混合物、例えば、反応混合物スラリーと反応させて、少なくとも１つの中間体、例えば、式４：
【化５３】
2008545702.tif 000055
式４
の化合物またはその塩を調製し、
Ｂ）中間体を水性媒体から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させて、式１の化合物を得る
ことを特徴とする方法を包含する。１の具体例において、反応媒体は、試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択されてもよい。付加的な工程は、例えば、
Ｃ）式１の少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせて、第１混合物を得、
Ｄ）第１混合物を少なくとも１つの一定時間、例えば、１５分〜２時間、ある温度で、例えば、０℃〜４０℃で混合し、
Ｅ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
工程の少なくとも１つを含んでいてもよい。
【０１３４】
該開示のさらなる具体例は、式１：
【化５４】
2008545702.tif 000056
式１
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、およびシクロアルキルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、Ｎと一緒になって、複素環を形成し；Ｒは−ＮＲ３Ｒ４であり、ここに、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ならびに直鎖および分枝鎖（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択され；およびｎは、１−４である］
で示される式１の少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩の製法であって、
Ａ）式４：
【化５５】
2008545702.tif 000057
式４
の少なくとも１つの化合物またはその塩を反応媒体中、例えば、水性媒体、および試薬塩基の不在下における少なくとも１つの塩基性溶媒から選択される反応媒体中、少なくとも１つのアミノアシル化合物と反応させて、式１の化合物を得る
ことを特徴とする方法を包含する。付加的な工程は、例えば、
Ｂ）式１の少なくとも１つの化合物を少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒および少なくとも１つの極性プロトン性溶媒と合わせて、第１混合物を得、
Ｃ）第１混合物を少なくとも１つの一定時間、例えば、１５分〜２時間、ある温度で、例えば、０℃〜４０℃で混合し、
Ｄ）式１の少なくとも１つの化合物を得る
工程の少なくとも１つを包含しうる。
【０１３５】
式１の化合物を調製するために開示されるこれらの方法のいずれも、ｎが１であり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がｔ−ブチルであり、Ｒ３およびＲ４が各々、メチルである式１の化合物の製法でありうる。
【０１３６】
医薬組成物
「医薬組成物」なる語は、本明細書中で使用される場合、医療組成物をいう。医薬組成物は、少なくとも１つの医薬上許容される担体を含有していてもよい。
【０１３７】
「医薬上許容される賦形剤」なる語は、本明細書中で使用される場合、本明細書中で提供される化合物の投与に適当な医薬担体またはビヒクルをいい、特定の投与様式に適当であることが当業者に知られているいずれかの担体を包含する。例えば、非経口、皮内、皮下または局所的塗布に用いられる溶液または懸濁液は、滅菌希釈剤（例えば、注射用水、セーライン溶液、固定油など）；天然植物性油（例えば、ゴマ油、ココナツ油、落花生油、綿実油など）；合成脂肪性ビヒクル（例えば、他の合成溶媒を包含する、オレイン酸エチル、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールなど）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコール、メチルパラベン類など）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、重亜硫酸ナトリウムなど）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；バッファー（例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩など）；および／または等張調整剤（例えば、塩化ナトリウム、デキストロースなど）；またはその混合物を包含することができる。さらなる例示により、静脈内投与の場合、適当な担体は、生理学的セーライン、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）、および増粘剤および可溶化剤、例えば、グルコースを含有する溶液、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど、およびその混合物を包含する。
【０１３８】
非限定的例示により、チゲサイクリンは、１以上の医薬上許容される賦形剤と合わせてもよく、錠剤、カプセル、分散性粉末、顆粒、または懸濁液（例えば、約０．０５〜５％の懸濁化剤を含有する）、シロップ（例えば、約１０〜５０％の糖を含有する）およびエリキシル（例えば、約２０〜５０％のエタノールを含有する）などの形態で経口投与されてもよく、または約０．０５〜５％の懸濁化剤を等張性媒体中に含有する滅菌注射溶液または懸濁液の形態で非経口投与されてもよい。かかる製剤は、例えば、約２５〜９０％の活性成分を通常約５重量％〜６０重量％の担体と共に含有していてもよい。他の処方は、米国特許第５，４９４，９０３号および第５，５２９，９９０号において考察されており、これらは出典明示により本明細書の一部とされる。
【０１３９】
「医薬上許容される塩」なる語は、本発明の開示において、化合物の酸付加塩または塩基付加塩をいう。医薬上許容される塩は、親化合物の活性を維持し、かつ、投与された対象において、その投与に関連して、いずれの有害または望ましくない効果をもたらさないいずれかの塩である。医薬上許容される塩は、金属錯体ならびに無機酸および有機酸の両方の塩を包含する。医薬上許容される塩は、アルミニウム、カルシウム、鉄、マグネシウム、マンガンおよび錯塩などの金属塩を包含する。医薬上許容される塩は、酢酸、アスパラギン酸、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アキセチル（axetil）、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、重硫酸、重酒石酸、酪酸、エデト酸カルシウム、カムシル酸（camsylic）、カルボン酸、クロロ安息香酸、シレキセチル（cilexetil）、クエン酸、エデト酸、エジシル酸（edisylic）、エストリック（estolic）酸、エシル（esyl）酸、エシリック（esylic）酸、ギ酸、フマル酸、グルセプト（gluceptic）酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコリルアルサニル酸、ヘキサミン酸、ヘキシルレソルシノイック（hexylresorcinoic）酸、ヒドラバミック（hydrabamic）酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、メチル硝酸、メチル硫酸、粘液酸、ムコン酸、ナプシリック（napsylic）酸、硝酸、シュウ酸、ｐ−ノトロメタンスルホン酸、パモ（pamoic）酸、パントテン酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、フタル酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファミン酸、スルファニル酸、スルホン酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、テオクル（teoclic）酸、トルエンスルホン酸等を包含する。医薬上許容される塩は、限定するものではないが、システインを包含するアミノ酸から誘導されうる。他の許容される塩は、例えば、Stahl et al., Pharmaceutical Salts:  Properties, Selection, and Use, Wiley-VCH; 1st edition (June 15, 2002)に見出すことができる。
【０１４０】
該例示以外にも、別記する場合、本明細書および特許請求の範囲において使用される全ての数は、全ての場合において、「約」なる語によって修飾されるものと理解されるべきである。したがって、別記しない限り、本明細書および特許請求の範囲に示される数値パラメーターは、本発明の開示によって得ようとする所望の特性によって変化しうる近似値である。最低限でも、均等論の適用を特許請求の範囲にまで限定しようとするものではなく、各数値パラメーターは、有効数字および通常の四捨五入法の見地から、解釈されるべきである。
【０１４１】
本発明の開示の幅広い範囲を示している数値範囲およびパラメーターが近似値であるにもかかわらず、具体的な実施例に示される数値は、可能な限り正確に報告されている。しかしながら、いずれの数値も、本質的に、必然的に各測定試験に見出される標準偏差に由来するある程度の誤差を含んでいる。
【０１４２】
下記の実施例は、本発明を非限定的に説明するためのものである。
【実施例】
【０１４３】
ミノサイクリンは、米国特許第３，２２６，４３６号に記載の方法を用いて調製された。
【０１４４】
ＨＰＬＣ分析は、下記の条件下で行った。
【表１】
2008545702.tif 000058
【０１４５】
比較例１：９−ニトロミノサイクリンの調製
該実施例は、ミノサイクリンのニトロ化を記載し、ここに、ニトロ化生成物は単離された。
【０１４６】
１３．４４ｇのミノサイクリンｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩（すなわち、［４Ｓ−（４アルファ，１２ａアルファ）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセンカルボキサミドｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩）をゆっくりと、攪拌しながら、５０ｍＬの濃硫酸に加えた。該溶液を０−１５℃に冷却した。硝酸（９０％，０．６ｍＬ）をゆっくりと加え、ＨＰＬＣによって測定した場合に反応が完了するまで、該溶液を０−１５℃で１−２時間攪拌した。中間体９−ニトロミノサイクリン硫酸塩（すなわち、［４Ｓ−（４アルファ，１２ａアルファ）−９−ニトロ］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセンカルボキサミド硫酸塩）を含有する該溶液を攪拌しながら、３００ｇの氷および水に２０分かけて加えた。温度を０−８℃に維持しながら、２８％水性水酸化アンモニウムを用いてクエンチのｐＨを５．０〜５．５に調整した。沈殿をろ過し、水（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。固体を窒素流下、真空乾燥させて、粗９−ニトロミノサイクリン硫酸塩を得た（９ｇ）。
【０１４７】
ＨＰＬＣによる分析（面積％）は、Ｃ４−エピマー含量１．５％を伴う純度９０％を示した。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５０３（Ｍ＋Ｈ），５０２（Ｍ＋）。生成物を水性溶液から、その等電点での沈殿によって単離した。該粗硫酸塩のモル収率は、４５％であった。
【０１４８】
下記の表１は、他のニトロ化プロセスのデータを示す。
【表２】
2008545702.tif 000059
【０１４９】
９−ニトロミノサイクリンの単離が多量の不純物をもたらしたことが分かる。
【０１５０】
比較例２：９−ニトロミノサイクリンの調製
該実施例は、ミノサイクリンのニトロ化を記載し、ここに、ニトロ化生成物は単離された。
【０１５１】
２Ｌの多口ガラスフラスコに、機械的スターラー、熱電対、液体添加チューブ、窒素ラインおよび３０％（ｗｔ）苛性（caustic）スクラバーへのガス吹き出し口を取り付けた。該フラスコに硫酸６６°Ｂｅ（１，５０７ｇ，８１９ｍＬ，１５モル）を充填した。該溶液を０〜２℃に冷却した。ミノサイクリン・ＨＣｌ（９２．７％強度，３１１ｇ，０．５８モル）を攪拌しながら０〜１４℃にて、０．７時間かけて該硫酸に加えた。添加後、該混合物を０℃で０．５時間攪拌して黄色溶液を得た。硝酸（９５．９％硝酸塩含量，４８ｇ，３２ｍＬ，０．７３モル，１．２５モル当量）を、混合物を０〜２℃に維持しながら、３時間かけて加えた。該混合物を０℃で０．３時間攪拌した（暗赤色／黒色溶液）。ＨＰＬＣによる分析（面積％）は、０％ミノサイクリン、７５．６％９−ニトロミノサイクリン、８．２％最大単一不純物（ＬＳＩ）を示した。ミノサイクリンまでの相対的保持時間（ＲＲＴ）＝２．０８
【０１５２】
２２Ｌの多口ガラスフラスコに、機械的スターラー、熱電対、および窒素保護を有するコンデンサーを取り付けた。該フラスコに、６，７０４ｇ（８，５４０ｍＬ）のイソプロパノール（ＩＰＡ）および１，０２６ｇ（１，５００ｍＬ）のヘプタンを充填した。該溶液をついで、０〜５℃に冷却した。該９−ニトロミノサイクリン反応混合物を０〜３９℃にて、２時間かけて２２−Ｌのフラスコに移して、黄色スラリーを得た。該スラリー温度を２時間、３４〜３９℃に維持し、次いで、２０〜３４℃に冷却し、２０〜３４℃で１４．６時間攪拌した。
【０１５３】
イソプロパノール３，０２８ｇ（３，８５７ｍＬ）およびヘプタン６６０ｇ（９６５ｍＬ）の溶液を調製し、２０〜２５℃で維持した（４：１，ＩＰＡ：ヘプタン（容量基準））。該スラリーを３０ｃｍ径のブフナー漏斗にて、＃１  Ｗｈａｔｍａｎろ紙を用いて、真空下および窒素保護下でろ過した。得られた湿潤ケークを、機械的スターラーおよび窒素保護を備え付けた４−Ｌのガラス三角フラスコに移した。該ケークを、１，６０８ｍＬの調製したＩＰＡ／ヘプタン溶液を２３〜２６℃で０．５時間加えることによってスラリー化した。
【０１５４】
該スラリーを再び、上記のとおりにろ過した。湿潤ケークを上記のとおり、さらに２回再スラリー化した（全部で３回再スラリー化）。最後のろ過後、ケークを真空下、窒素保護下で０．２時間維持した。生成物を２３〜１１ｍｍＨｇの真空下、４０℃で４８時間、乾燥減量（ＬＯＤ，８０℃，１時間，＞４９ｍｍＨｇ真空）値が１．５４になるまで乾燥させた。得られた９−ニトロミノサイクリン硫酸塩の重量は、３８０．１０ｇであり、ＨＰＬＣ強度＝７６．３％（二硫酸塩として）、全不純物＝３４．６％、最も大量の単一不純物（ＬＳＩ）９．４６％（ＲＲＴ＝０．９４）であった。ミノサイクリン／ＨＣｌからの収率＝８６％。生成物および出発物質の強度に対して補正された収率は、７１％であった。
【０１５５】
９−ニトロミノサイクリン化合物の単離が大きな割合で不純物を有する生成物をもたらしたことが分かる。
【０１５６】
実施例１
下記の表２は、比較例２に概説された手法を用いて行ったニトロ化実験を概説する。ここに、下記の変数が変更された：硝酸添加時間、反応温度、硝酸のモル当量（ミノサイクリンＨＣｌに相対的）、および攪拌速度。本明細書に開示される方法にしたがって、これらの反応のいずれも、クエンチせず、または生成物を単離するような後処理もしなかった。使用された唯一の分析ツールは、ＨＰＬＣ分析であった。
【表３】
2008545702.tif 000060
１  容器サイズのために、浴温度のみをこれらの反応においてモニターした。
２  反応は、最初のミノサイクリン濃度５０ｗｔ％であった。
３  攪拌は、全ての他の実験と比べて勢い良く行った。
４  ＨＮＯ３は、Ｈ２ＳＯ４中における５０ｗｔ％として添加した。
【０１５７】
種々の条件を試みたにもかかわらず、開始ミノサイクリンの量が１０％未満の量で存在し、ある条件下で実質的に除去されたことが分かる。
【０１５８】
実施例２
ニトロ化反応、反応クエンチ、およびニトロ化反応の後処理を変更した実験も行った。該実験は、比較例２に概説される手法を用いて、下記の変数を変更して行った：硝酸添加時間、反応温度、硝酸のモル当量（ミノサイクリンＨＣｌに相対的）、クエンチの温度、クエンチ溶液の組成、反応混合物のクエンチ溶液への添加時間、および単離ケークの洗浄法。下記表３にデータを示す。使用された唯一の分析ツールは、ＨＰＬＣ分析であった。
【表４】
2008545702.tif 000061
１  容器サイズのために、浴温度のみをこれらの反応においてモニターした。
２  ＩＰＡをクエンチとして用いた場合、次いで、ヘプタンを加えて、最初のクエンチ混合物の組成を得た。
３  洗浄法１：湿潤ケークをフィルター上で４：１  ＩＰＡ：ヘプタン（容量）を用いて洗浄した。洗浄法２：湿潤ケークを４：１  ＩＰＡ：ヘプタン（容量）で３回スラリー化した。洗浄法＃２は、洗浄法＃１より２０％多い洗浄溶液を用いた。
４  収率は、生成物および最初の材料の強度に対して補正する。
５  クエンチは、０℃で開始して、すぐに、３４℃に加熱し、クエンチの残りの間、３４℃で維持した。
【０１５９】
表３のデータから、収率が少なくとも５０％であったことが分かる。
【０１６０】
実施例３
該実施例は、ニトロ化工程に必要とされる硝酸の量（当量）を変更した結果を示す。硝酸は、８９．５％で滴定され、したがって、補正した量を用いた。
【０１６１】
３回試験を行った。試験１は、１．２５当量の硝酸を用い、試験２は、１．０９当量を用い、試験３は、１．００当量の硝酸を用いた。
【０１６２】
試験１のＨＰＬＣ完了試験は、ミノサイクリンのシグナルを示さなかったが、試験２の完了試験は、２．５％の未反応出発物質を示した。どちらの反応も水素化し、次いで、ＳＬＰ手法を用いて、アミノミノサイクリン塩酸塩に変換した。
【０１６３】
水素化産物１（試験１由来）は、ミノサイクリン含量０．３７％、強度＝８３．０％、全不純物＝３．２０％、単一不純物＝０．５２％、エピマー含量＝１．１％を示した。
【０１６４】
水素化産物２（試験２由来）は、ミノサイクリン含量１．６％、強度＝８４．２％、全不純物＝４．００％、単一不純物＝０．３５％、エピマー含量＝１．０％を示した。
【０１６５】
試験３：強度＝８３．０％；全不純物＝５．０％；単一不純物＝２．７％；エピマー含量＝１．１％
【０１６６】
還元
ＨＰＬＣ分析は、下記の条件下で行った。
【表５】
2008545702.tif 000062
【０１６７】
実施例１
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離されなかった。
【０１６８】
１０．１ｇのミノサイクリンｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩をゆっくりと、攪拌しながら、２７ｍＬの濃硫酸に加えた。該溶液を０〜２℃に冷却した。硝酸（０．６ｍＬ，９０％）をゆっくりと加え、ＨＰＬＣによって測定した場合に反応が完了するまで、該溶液を０〜２℃で１〜２時間攪拌した。ニトロ化完了後、温度を１０〜１５℃以下に維持しながら、中間体９−ニトロミノサイクリン硫酸塩を含有する該溶液を攪拌しながら、１５０ｍＬのイソプロパノールおよび１２００ｍＬのメタノールに加えた。該溶液を２６〜２８℃にて、４０ｐｓｉで３時間、炭素上の１０％Ｐｄ触媒（５０％湿潤）の存在下で水素化した。水素化完了後、触媒をろ去し、溶液をゆっくりと、０〜５℃で攪拌しながら、２５０ｍＬイソプロパノール中に注ぎ入れた。固体（３．４ｇ）をろ過した。ＨＰＬＣによる粗純度（面積％）は、９０％であった。Ｃ４−エピマーは、０．９％の量で存在していた。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４７３（Ｍ＋Ｈ），４７２  （Ｍ＋）
【０１６９】
実施例２
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離されなかった。
【０１７０】
８４．３ｇのミノサイクリンｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩をゆっくりと、攪拌しながら、３６８ｇの濃硫酸に加えた。該溶液を１０〜１５℃に冷却した。硝酸（６．０ｍＬ，発煙）をゆっくりと加えた。ＨＰＬＣによって測定した場合に反応が完了するまで、該溶液を１０〜１５℃で１〜２時間攪拌した。ニトロ化完了後、温度を１０〜１５℃以下に維持しながら、中間体９−ニトロミノサイクリン硫酸塩を含有する該溶液を攪拌しながら、０．３ｋｇのメタノールに加えた。該溶液を２６〜２８℃にて、５０ｐｓｉで２〜３時間、炭素上の１０％Ｐｄ触媒（５０％湿潤）の存在下で水素化した。水素化完了後、触媒をろ去し、溶液をゆっくりと、０〜５℃で攪拌しながら、０．６ｋｇイソプロパノールおよび０．３ｋｇのｎ−ヘプタン中に注ぎ入れた。
【０１７１】
該湿潤固体を０〜５℃にて、１００ｇの水中に溶解した。該混合物を攪拌し、有機相を分離し、廃棄した。水相に、１４．４ｇの濃ＨＣｌを加えた。該溶液のｐＨを水酸化アンモニウムで４．０±０．２に調整した。１００ｍｇの亜硫酸ナトリウムを加え、該溶液を１００ｍｇの９−アミノミノサイクリンを種晶として加えた。該混合物を０〜５℃で４時間攪拌し、生成物をろ過し、乾燥させて固体を得た（２８．５ｇ）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）は、９６．５％であり、０．９％のＣ４−エピマーを伴った。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ４７３（Ｍ＋Ｈ），４７２（Ｍ＋）。収率：５４．２％。
【０１７２】
比較例１
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離された。
【０１７３】
５２．０ｋｇのミノサイクリン・ＨＣｌ（９２．４％強度）を０〜１５℃にて、３００ガロン容器中における４．８部（２５１ｋｇ）の硫酸６６°Ｂｅに加え、攪拌してＨＣｌを除去した。７．４８ｋｇの発煙硝酸１００％（９５．９％硝酸塩含量，１．２６当量）を３時間２０分かけて加えた。
【０１７４】
ＨＰＬＣ分析は、＞１％ミノサイクリン残留を示した。したがって、０．３１ｋｇの発煙硝酸１００％（９５．５％硝酸塩含量，０．０５当量）を加えた。ＨＰＬＣ分析は、まだ、＞１％ミノサイクリン残留を示した。さらに０．７４ｋｇの発煙硝酸１００％（９５．５％硝酸塩含量，０．１２当量）を加えた。ＨＰＬＣ試験をもう一度行い、＞１％ミノサイクリン残留を示し、さらに１．１１ｋｇの発煙硝酸１００％（９５．５％硝酸塩含量，０．１９当量）を加えた後、＜１％ミノサイクリン残留を示した。
【０１７５】
ニトロ化反応混合物を０〜３６℃にて、２１．５部ＩＰＡ／３．３部ヘプタン（１１２０ｋｇ  ＩＰＡ／１７１ｋｇヘプタン）の溶液に加えた。該スラリーをろ過し（長いろ過時間）、ＩＰＡ／ヘプタン  ４：１で洗浄し、ＮＭＴ４０℃にて、ＮＭＴ６％のＬＯＤになるまで乾燥させて、還元反応に用いるための硫酸塩を得た（７０．９ｋｇ，９７％粗収率）。
【０１７６】
実施例３
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離されなかった。
【０１７７】
２５．０ｋｇのミノサイクリン・ＨＣｌ（９４．４％強度）を５〜１５℃にて、１００ガロン容器中における７．３部（１８３ｋｇ）の硫酸６６°Ｂｅに加え、攪拌してＨＣｌを除去した。２．５０１５ｋｇの硝酸８５％（８６．６％硝酸塩含量，１．２５当量）を９〜１５℃にて、７８分かけて該容器に加えた。
【０１７８】
ＨＰＬＣ分析は、＞１％ミノサイクリン残留を示した。さらに０．２６１ｋｇの硝酸８５％（８６．６％硝酸塩含量，０．１３当量）を加えた。ＨＰＬＣがもう一度＞１％ミノサイクリン残留を示したので、さらに０．２６１ｋｇの硝酸８５％（８６．６％硝酸塩含量，０．１３当量）を加えた。ＨＰＬＣ分析はまだ、＞１％ミノサイクリン残留を示したので、さらに０．１７４ｋｇの硝酸８５％（８６．６％硝酸塩含量，０．０９当量）を加え、その後、反応は１．７％ミノサイクリン出発物質でプラトーに達したようであった。
【０１７９】
ニトロ化反応混合物を−２０〜１０℃にて、４．２部（１０６ｋｇ）メタノールに加えた。該クエンチしたバッチを４〜１０℃に調整し、そのまま還元反応に用いた。
【０１８０】
比較例２
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離された。
【０１８１】
１０４ｋｇのミノサイクリン・ＨＣｌ（９０．３％強度）を０〜１０℃にて、３００ガロン容器中における４．８部（５０２ｋｇ）の硫酸６６°Ｂｅに加え、攪拌してＨＣｌを除去した。１５．２ｋｇの発煙硝酸（１００．４％，１．２５当量）を０〜６℃、１００ｒｐｍにて、３時間かけて加えた。ＨＰＬＣ試験が＞１％ミノサイクリン残留を示したので、さらに０．６９ｋｇの発煙硝酸（１００．４％，０．０６当量）を加え、その後、ミノサイクリン＜１％を示した。ニトロ化反応混合物を０〜３６℃にて、２１．５部ＩＰＡ／３．３部ヘプタン溶液に加えた。
【０１８２】
該スラリーをろ過し（長いろ過時間）、ＩＰＡ／ヘプタン  ４：１で洗浄し、４０℃以下にて６％以下のＬＯＤになるまで乾燥させて、還元反応に用いるための硫酸塩を得た（１４０ｋｇ，９５％粗収率）。
【０１８３】
実施例４
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離されなかった。
【０１８４】
１０４ｋｇのミノサイクリン・ＨＣｌ（９０％強度）を５〜１５℃にて、７．３部（７６３ｋｇ）の硫酸６６°Ｂｅに加え、攪拌してＨＣｌを除去した。１４．９ｋｇの発煙硝酸（１００％，１．２５当量）を５〜１５℃、１２０ｒｐｍにて、１時間かけて加えた。ＨＰＬＣ分析が＞１％ミノサイクリン残留を示したので、さらに０．６９ｋｇの発煙硝酸（１００％，０．０６当量）を加え、その後、ミノサイクリン＜１％を示した。
【０１８５】
ニトロ化反応混合物を−１０〜−２０℃にて、４．２部（４４０ｋｇ）メタノールに加えた。該クエンチしたバッチを４〜１０℃に調整し、そのまま還元反応に用いた。
【０１８６】
比較例３
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離された。溶媒／試薬の割合は、ニトロ化反応前のミノサイクリンの最初の充填量に相対的に表す。
【０１８７】
比較例４の９−ニトロミノサイクリン硫酸塩反応混合物を、バッチ温度を０〜３６℃に維持しながら、２２４０ｋｇ（２１．５部）イソプロパノールおよび３４２ｋｇ（３．３部）ヘプタン中に、１時間かけてクエンチした。得られたスラリーを３０〜３６℃で２時間攪拌し、次いで、冷却し、１９〜２５℃で１時間攪拌した。スラリーの半分をろ過し、３ｘ２０５ｋｇのＩＰＡ／ヘプタン（４：１）ｖ／ｖで洗浄し、４０℃以下にて６％以下のＬＯＤになるまで乾燥させた。ろ過および乾燥に１６日かけ（これらの日数のうち７日間、該湿潤ケークは、計画的な運休停止の間、窒素下で放置された）、硫酸塩を得た（５８ｋｇ）。残りの半分のスラリーは、ろ過に利用するまで、ドラム缶に入れ、冷蔵した。１２日間冷蔵し、次いで、容器に戻し、０〜６℃で２日間攪拌し、次いで、１９〜２５℃に調整し、ろ過し、３ｘ２０５ｋｇのＩＰＡ／ヘプタン（４：１）ｖ／ｖで洗浄し、４０℃以下にて６％以下のＬＯＤになるまで乾燥させた。ろ過および乾燥に６日間かけ、硫酸塩を得た（８２ｋｇ）。
【０１８８】
９−ニトロミノサイクリン硫酸塩の両サブロットを６７２ｋｇ（６．５部）のメタノールおよび８．４ｋｇ（０．０８部）の注射用水（ＵＳＰ）中に、１９〜２５℃にて溶解し、７０ｐｓｉｇ水素ガスおよび２．７４ｋｇ（０．０２６部）の炭素上のパラジウム（１０％（ｗ／ｗ）湿潤）を用いて、９−アミノミノサイクリン硫酸塩に還元した。水素化反応に１０．５時間かけ、その結果、出発物質は検出できなかった。
【０１８９】
９−アミノミノサイクリン硫酸塩反応混合物をろ過して触媒を除去し、１６６０ｋｇ（１６部）ＩＰＡ／７１０（６．８部）ヘプタン溶液中に、０〜２７℃で１時間かけてクエンチした。反応混合物を１９〜２５℃に調整し、１時間攪拌した。
【０１９０】
９−アミノミノサイクリン硫酸塩スラリーをＮｕｔｓｃｈｅフィルター上でろ過し、２ｘ１６２ｋｇ（各１．５部）のＩＰＡ／ヘプタン（４：１）ｖ／ｖで洗浄し、４０℃にて、４％未満のＬＯＤになるまで乾燥させた。ろ過、洗浄および乾燥に１０日かけ、９−アミノミノサイクリン硫酸塩を得た（９４．０ｋｇ）。ろ過後、母液中に固体が観察された。これらをろ過し、１１３ｋｇのＩＰＡ／ヘプタン（４：１）ｖ／ｖで洗浄し、４０℃にて、４％未満のＬＯＤになるまで乾燥させた。２４．１ｋｇを回収し、別のロットとして維持した。９−アミノミノサイクリン硫酸塩のミノサイクリンからの全粗収率は、８４％であった。
【０１９１】
乾燥させた９−アミノミノサイクリン硫酸塩の９４．０ｋｇ「第１収穫」および０．０８４ｋｇ（０．０００８部）亜硫酸ナトリウムを５３８ｋｇ（５．１７部）の注射用水（ＵＳＰ）に溶解し、０〜６℃に冷却した。９−アミノミノサイクリン硫酸塩溶液のｐＨを１．１＋／−０．１にするには、最初のｐＨが１．１６だったので、０ｋｇの塩酸、２０°Ｂｅが必要とされた。４８．３ｋｇ（０．４６部）の塩酸試薬を該９−アミノミノサイクリン溶液に加え、９−アミノミノサイクリンＨＣｌを調製した。５６ｋｇ（０．５４部）の水酸化アンモニウム、２８％および４．０ｋｇ（０．０３９部）の塩酸試薬を該溶液に加えて、バッチｐＨ４．０＋／−０．２を得た。
【０１９２】
次いで、ｐＨを４．０＋／−０．２に維持しながら、該バッチを０〜６℃で９０分間攪拌した。最終ｐＨは、４．０５ｐＨ単位であった。該バッチをＮｕｔｓｃｈｅフィルター上でろ過し、予め２〜８℃に冷却した２ｘ３３ｋｇ（各０．３部）の注射用水（ｐＨを４．０に調整）で洗浄し、次いで、２ｘ２６．１ｋｇ（０．２５部）のアセトン（予め２〜８℃に冷却）で洗浄し、４０℃以下にて、水分が７．０％以下になるまで乾燥させた。４３．２ｋｇの９−アミノミノサイクリンＨＣｌを単離し、ミノサイクリンＨＣｌからの収率は４０％であった。
【０１９３】
乾燥させた９−アミノミノサイクリン硫酸塩の２４．１ｋｇ「第２収穫」の塩変換による処理は、比例量の試薬を用いる上記の４つのパラグラフに記載された方法と同様に行った。付加的な９．９ｋｇの９−アミノミノサイクリンＨＣｌを回収し、９．２％のさらなる収率増加が示された。両方の収量を包含する全バッチ収率は、５３．１％であった。
【０１９４】
実施例５
該実施例は、水素化反応を記載し、ここに、９−ニトロミノサイクリン中間体は単離されなかった。溶媒／試薬の割合は、ニトロ化反応前のミノサイクリンの最初の充填量に相対的に表す。
【０１９５】
実施例７の９−ニトロミノサイクリン硫酸塩反応混合物を、バッチ温度を−２０〜−１０℃に維持し、攪拌速度を１３０ＲＰＭに維持しながら、４４０ｋｇ（４．２部）のメタノール中に９０分かけて加えた。
【０１９６】
該クエンチしたバッチを４〜１０℃に調整し、５０ｐｓｉｇ水素ガスおよび５２ｋｇ（０．５部）の炭素上のパラジウム（１０％（ｗ／ｗ）湿潤）を用いて、９−アミノミノサイクリン硫酸塩に還元した。水素化反応に５時間かけ、その結果、出発物質は検出できなかった。９−アミノミノサイクリン硫酸塩反応混合物をろ過して触媒を除去し、１２４１ｋｇ（１２部）ＩＰＡ／５３７ｋｇ（５．２部）ヘプタン溶液中に、１７〜２３℃で３０分かけてクエンチした。得られた反応混合物を次いで、−１８〜−１２℃に冷却し、１時間攪拌した。
【０１９７】
得られた９−アミノミノサイクリン硫酸塩スラリーをＮｕｔｓｃｈｅフィルター上で２部分に分けてろ過し、予め０〜６℃に冷却した３．６部のＩＰＡ／ヘプタン（２：１）ｖ／ｖおよび５０６ｋｇ（４．９部）の冷却したヘプタンで洗浄した。ろ過および洗浄に両方の部分で９９時間かけた（フィルターのサイズ限界のため、２部分に分けてろ過した）。９−アミノミノサイクリン硫酸塩湿潤ケークを１５０ｋｇ（１．４部）の注射用水（ＵＳＰ）に０〜６℃で溶解し上層の有機層を廃棄物として分離した。
【０１９８】
２５．７ｋｇ（０．３部）の塩酸、２０°Ｂｅを０〜６℃にて該９−アミノミノサイクリン硫酸塩溶液に加えて、９−アミノミノサイクリンＨＣｌに変換した。水酸化アンモニウム２８％を反応混合物に加えて、バッチｐＨ４．０＋／−０．２を得た。これには、４９．５ｋｇ（０．４８部）必要であった。０．１５ｋｇの亜硫酸ナトリウム（０．００１４部）を反応混合物に加えた。
【０１９９】
バッチに、５ｇの９−アミノミノサイクリンＨＣｌを種晶として加え、水酸化アンモニウム２８％（０．０５部必要であった）を用いてｐＨ４．０＋／−０．２を維持しながら、３時間攪拌した。該バッチをＮｕｔｓｃｈｅフィルター上でろ過し、予め２〜８℃に冷却した注射用水（ｐＨ４．０に調整）１部で洗浄し、次いで、イソプロパノール（予め２〜８℃に冷却）０．２部で洗浄し、５０℃以下にて、１０．０％以下のＬＯＤおよび８．０％以下の水分量になるまで乾燥させた。
【０２００】
６３．１ｋｇの９−アミノミノサイクリンＨＣｌを単離し、ミノサイクリンＨＣｌからの収率は５９％であった。
【０２０１】
下記の表４は、比較データを示す。
【表６】
2008545702.tif 000063
１  サイクル時間は、ミノサイクリン・ＨＣｌから９−アミノミノサイクリンＨＣｌまでである。
２  第１および第２収穫を合わせた収率
３  過程中に起こった７日間の運転停止を含まず、第２収穫を処理するための時間を含む。
【０２０２】
表４は、単離しない反応混合物の水素化が少量の不純物およびＣ４−エピマーと共に生成物をもたらすことを示す。
【０２０３】
アシル化
下記の条件下でＨＰＬＣ分析を行った。
【表７】
2008545702.tif 000064
【０２０４】
実施例１
Ｎ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩
ｔ−ブチルアミン（１．５７Ｌ）およびトルエン（１．３５Ｌ）の混合物に、４５〜５０℃にて、ブロモ酢酸ｔ−ブチル（４２０ｍＬ）を加える。該混合物を５０〜６０℃で１時間攪拌し、１時間かけて温度を７５℃に上昇させる。７５℃で２時間後、該混合物を−１２±３℃に冷却し、１時間静置させる。固体をろ過によって収集し、ろ液を蒸留（３０〜４０℃，２５〜３５ｍｍＨｇ）によって８２５ｍＬ容量まで濃縮する。得られた濃縮物を２０〜２５℃に冷却し、６Ｎ  ＨＣｌ（１．４５ｋｇ）を加える。３時間後、相を分離し、水相を蒸留（３０〜４０℃，２５〜３５ｍｍＨｇ）によって５９０ｍＬ容量まで濃縮する。イソプロパノール（２．４Ｌ）を加え、混合物を蒸留（１５〜２０℃，１０〜２０ｍｍＨｇ）によって９９０ｍＬ容量まで濃縮する。得られるスラリーを３０分かけて−１２±３℃に冷却し、１時間静置する。固体をろ過によって収集し、ｉ−ＰｒＯＨで洗浄し、２４時間乾燥させて（４５±３℃，１０ｍｍＨｇ）、所望の生成物を得る（４０７．９ｇ，８６％）。
【０２０５】
実施例２
Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩
粉砕したＮ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩（２５０．０ｇ）、トルエン（１．１４Ｌ）およびＤＭＦ（７．１ｇ）の混合物に、２０分かけて塩化チオニル（１４３ｍＬ）を加える。該混合物を８０〜８５℃にし、攪拌しながら３時間加熱する。２０℃に冷却後、固体をＮ２下でろ過によって収集し、トルエンで洗浄し、１６時間乾燥させて（４０℃，１０ｍｍＨｇ）、所望の生成物を得る（２６０．４ｇ，９３．８％）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．１２％。
【０２０６】
実施例３
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリン・ＨＣｌ（１４０．０ｇ）および冷（０〜４℃）水（８４０ｍＬ）の混合物に、攪拌しながら、Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩（１５４．０ｇ）を１５分かけて加える。該混合物を０〜４℃で１〜３時間攪拌する。温度を０〜１０℃に維持しながら、水酸化アンモニウム（１２６ｇ，３０％）を加えてｐＨを７．２にする。メタノール（９３０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（８４０ｍＬ）を加え、水酸化アンモニウム（１３．５ｇ，３０％）の添加によってｐＨを７．２に維持しながら、該混合物を２０〜２５℃で１時間攪拌する。相を分離し、固体を有機層と合わせる。水層をＣＨ２Ｃｌ２（１ｘ８４０ｍＬ，３ｘ４２０ｍＬ）で抽出し、各抽出の間、混合物のｐＨを７．２に調整する。合わせた有機層に、メタノール（２００ｍＬ）を加えて、溶液を得る。該溶液を水（２ｘ１４０ｍＬ）で洗浄し、次いで、攪拌しながら、硫酸ナトリウム（１４０ｇ）で３０分間乾燥させる。混合物をろ過し、ろ液を蒸留（２０℃，１５〜２５ｍｍＨｇ）によって４２５ｍＬ容量まで濃縮する。該混合物にＣＨ２Ｃｌ２（１．４Ｌ）を加え、蒸留を２回繰り返す。得られる懸濁液を０〜２℃に冷却し、１時間攪拌する。固体をろ過によって収集し、０〜５℃のＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１５０ｍＬ）で洗浄し、２４時間乾燥させて（６５〜７０℃，１０ｍｍＨｇ）、所望の生成物を得る（１２０．０ｇ，７５％）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．９％およびＣ−４エピマー０．１２％。
【０２０７】
実施例３Ａ
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリン・ＨＣｌ（１００．０ｇ）および冷（０〜４℃）水（６００ｍＬ）の混合物に、攪拌しながら、Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩（１１０．０ｇ）を５０分かけて加えた。該混合物を０〜４℃で１．５時間よく攪拌した。温度を０〜５℃に維持しながら、水酸化アンモニウム（１１２ｇ，２８％）を加えてｐＨを７．２にした。塩化メチレン（６００ｍＬ）、次いでメタノール（４４０ｍＬ）を加え、水酸化アンモニウム（１０．０ｇ，２８％）の添加によってｐＨを７．２に維持しながら、混合物を０〜５℃で３０分間攪拌した。該混合物を２０〜２５℃に１５分かけて加温した。メタノール（２４４ｍＬ）を加え、相を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（１ｘ６００ｍＬ，３ｘ３００ｍＬ）で抽出し、各抽出の間、混合物のｐＨを７．２に調整した。合わせた有機層に、メタノール（１４４ｍＬ）を加えて溶液を得た。該溶液を水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、次いで、攪拌しながら、硫酸ナトリウム（１００ｇ）で３０分間乾燥させた。混合物をろ過し、ろ液を蒸留（２０℃，８０〜１２０ｍｍＨｇ）によって４００ｍＬ容量まで濃縮した。該混合物にＣＨ２Ｃｌ２（１．０Ｌ）を加え、蒸留を２回繰り返した。得られた懸濁液を０〜２℃に冷却し、１時間攪拌した。固体をろ過によって収集し、０〜５℃のＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ１１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて（６５〜７０℃，２０ｍｍＨｇで１８時間、次いで、３〜５ｍｍＨｇで１６時間）、所望の生成物を得た（８２．４ｇ，７１．７％）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．５％およびＣ−４エピマー０．２８％。
【０２０８】
実施例４
Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩
ｔ−ブチルアミン（８８ｇ）を３００ｍＬのトルエン中に溶解した。該混合物を４５〜５０℃に加熱し、温度を５０〜６０℃に維持しながら、１１７．５ｇのブロモ酢酸ｔ−ブチルを１時間かけて加えた。該混合物を７５℃に２時間加熱した。次いで、反応混合物を１２〜１５℃に冷却し、１時間攪拌した。固体をろ過し、冷トルエンで洗浄した。ｔ−ブチルアミン臭化水素酸塩である該固体を廃棄した。ろ液を１０〜１２℃に冷却し、ＨＣｌガスを０．５時間通気した。該混合物を１０〜１２℃で３時間攪拌し、次いで、生成物をろ過によって収集し、冷トルエンで洗浄した。生成物を真空下、４０〜５０℃で乾燥させて、Ｎ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩（１０７ｇ）を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ１８７（Ｍ＋）
【０２０９】
上記のように調製された物質由来のＮ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩（７ｇ）を３５ｍＬのトルエンに加えた。塩化チオニル（１１．６ｍＬ）を加え、スラリーを７５〜８０℃で１時間加熱した。該懸濁液を２０℃に冷却し、固体をろ過によって収集し、２Ｘ１５ｍＬのトルエンで洗浄した。得られた混合物を真空下、４０℃で乾燥させて、生成物を得（４．４ｇ、６５％収率）、それを水分から保護し、すぐに次工程に用いる。
【０２１０】
実施例５
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリン（１０．００ｇ）を０〜５℃の水６０ｍＬに徐々に加えた。温度を０〜５℃に維持しながら、ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩（１０．９８ｇ）を徐々に加えた。４０〜６０分間攪拌後、温度を０〜５℃に維持しながら、３０％水酸化アンモニウムを反応混合物に滴下してｐＨを７．２に調整した。該溶液に、８３ｍＬのメタノールを加え、次いで、６０ｍＬの塩化メチレンを加えた。１５分間攪拌後、相を分離した。水相を、各抽出前にｐＨ７．２に調整して、４Ｘ４０ｍＬの塩化メチレンで抽出した。合わせた有機層に、１０ｍＬメタノールを加え、該溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過後、該溶液を濃縮して懸濁液を得た（正味重量５１ｇ）。該懸濁液を５〜１０℃で１時間攪拌し、次いで、ろ過した。該固体を２Ｘ１０ｍＬの冷塩化メチレンで洗浄し、次いで、乾燥させて生成物を得た（８．８０ｇ、７６．８％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．４％およびＣ−４エピマー０．１％。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５８６（Ｍ＋Ｈ）；５８５（Ｍ＋）。
【０２１１】
実施例６
Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩
ｔ−ブチルアミン（１．５ｋｇ）を１．３５Ｌのトルエン中に溶解した。該混合物を４５〜５０℃に加熱し、温度を５０〜６０℃に維持しながら、５４８ｇのブロモ酢酸ｔ−ブチルを１時間かけて加えた。該混合物を７５℃で３時間加熱した。次いで、反応混合物を１２〜１５℃に冷却し、１時間攪拌した。固体をろ過し、冷トルエンで洗浄した。ｔ−ブチルアミン臭化水素酸塩である該固体を廃棄した。溶媒を蒸留することによって、ろ液を〜８００ｍＬに濃縮した。濃縮物を２５℃に冷却し、９００ｍＬの６Ｎ  ＨＣｌを混合物に加えた。２０〜２５℃で３時間攪拌後、相を分離した。有機層を廃棄し、水相を６００ｍＬ容量まで濃縮した。イソプロパノール（２．４Ｌ）を濃縮物に加えた。該スラリーを−１２〜−９℃に冷却し、０．５時間維持した。生成物をろ過によって収集し、冷イソプロパノールで洗浄し、次いで、真空下、４０〜５０℃で乾燥させて、固体を得た（４０８ｇ）。ＮＭＲによる純度＞９５％。ＭＳ：ｍ／ｚ１８７（Ｍ＋）。
【０２１２】
上記のように調製された物質由来のＮ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩（２５０ｇ）を１．３Ｌのトルエンおよび７．５ｍＬのＤＭＦに加えた。塩化チオニル（１４３ｍＬ）を加え、スラリーを８０〜８５℃で３〜４時間加熱した。該懸濁液を２０℃に冷却し、固体をろ過によって収集し、２Ｘ２５０ｍＬのトルエンで洗浄した。固体を真空下、４０℃で乾燥させて、生成物を得た（２６０ｇ、８２％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．２％。
【０２１３】
実施例７
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリン（１４０．０ｇ）を０〜４℃の水８４０ｍＬに徐々に加えた。温度を０〜４℃に維持しながら、ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩（１５４ｇ）を、よく攪拌しながら、１５分かけて加えた。該溶液を１〜３時間攪拌した。温度を０〜１０℃に維持しながら、混合物のｐＨを３０％水酸化アンモニウムで７．２±０．２に調整した。該溶液に、メタノール（９３０ｍＬ）および塩化メチレン（８４０ｍＬ）を加え、次いで、２０〜２５℃で１時間攪拌した。相を分離した。水相を、３Ｘ６００ｍＬの塩化メチレンで抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、約５００ｍＬ容量まで濃縮した。得られた懸濁液を０〜２℃に１時間冷却した。固体をろ過し、乾燥させて生成物を得た（１２０ｇ、７５％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８％、Ｃ−４エピマー０．１％。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５８６（Ｍ＋Ｈ）；５８５（Ｍ＋）
【０２１４】
実施例８
ピロリジニル酢酸塩酸塩
ピロリジン（１４．２ｇ）を４０ｍＬのメチルｔ−ブチルエーテル中に溶解した。該溶液を０〜−５℃に冷却した。ブロモ酢酸ベンジル（２２．９ｇ）を攪拌しながら滴下した。濃厚な白色スラリーを０〜５℃で０．５時間攪拌した。固体をろ過し、メチルｔ−ブチルエーテルで洗浄した。ろ液を濃縮して、酢酸ピロリジニルベンジルを得た（２１．３ｇ）。該ベンジルエステル（２１．０ｇ）を２００ｍＬのメタノール中に溶解し、４．０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ触媒（５０％湿潤）を加えた。該溶液を４０ｐｓｉで６時間水素化した。触媒をろ去し、メタノールで洗浄した。ろ液を濃縮して、ピロリジニル酢酸を無色油として得た（１１．８ｇ）。１５．８ｇのピロリジニル酢酸を１５ｍＬのメチル−ｔ−ブチルエーテル中でスラリー化した。アセトニトリル（１５ｍＬ）を加え、懸濁液を０〜５℃に冷却した。エーテル性ＨＣｌ（１２０ｍＬ，１．０Ｍ）を攪拌しながら加えた。得られた白色沈殿をろ過し、メチルｔ−ブチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、ピロリジニル酢酸塩酸塩を得た（１５ｇ）。ＧＣ／ＭＳによる純度（面積％）：９８％。ＭＳ：ｍ／ｚ１２９（Ｍ＋）。
【０２１５】
実施例９
［４Ｓ−（４α，１２ａα）］−４，７−ビス（ジメチルアミノ）−９−［（ピロリジニル）アセチル］アミノ］−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，１０，１２，１２ａ−テトラヒドロキシ−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセン−カルボキサミド
ピロリジニル酢酸（７．７ｇ）を７ｍＬのアセトニトリル中に懸濁した。０〜５℃に冷却後、５．３ｍＬの塩化チオニルを攪拌しながらゆっくりと加えた。該懸濁液を５５℃に加熱した。該暗色溶液を５５℃で０．５時間維持し、次いで、室温に冷却して、ピロリジニルアセチルクロリド塩酸塩を得た。上記の実施例４に記載のように調製された９−アミノミノサイクリン塩酸塩（５．０ｇ）を５．０ｍＬの水中に懸濁した。該懸濁液を−１５℃に冷却した。該懸濁液に、温度を２２℃以下に維持しながら、上記のように調製されたピロリジニルアセチルクロリド塩酸塩の溶液を滴下した。暗色反応混合物を２２〜２５℃で３時間攪拌した。水（２ｍＬ）を混合物に加え、３０％水酸化アンモニウムでｐＨを６．５±０．２に調整した。該溶液を６Ｘ１５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出物をプールし、４０℃で濃縮した。無水エタノール（１０ｍＬ）を濃縮物に加え、スラリーを５〜７℃で１時間攪拌した。固体をろ過し、真空下、４０℃で乾燥させて生成物を得た（３．５ｇ）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．７％、Ｃ−４エピマー０．４％。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５８６（Ｍ＋Ｈ）；５８５（Ｍ＋）。
【０２１６】
実施例１０
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリン（４．０ｇ）を１０ｍＬのアセトニトリルおよび５ｍＬのＤＭＰＵに１０〜１５℃で徐々に加えた。ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩（４．４ｇ）を、温度を１０〜１５℃に維持しながら徐々に加えた。２時間攪拌後、温度を１０〜１７℃に維持しながら、１０ｍＬのＭｅＯＨおよび１７ｍＬの水をゆっくりと反応混合物に加えた。温度を５〜８℃に維持しながら、水酸化アンモニウム（３０％）を反応混合物に滴下して、ｐＨを７．２に調整した。該溶液に、塩化メチレン（１５ｍＬ）を加えた。１５分間攪拌後、相を分離した。水相を、各抽出前にｐＨを７．２に調整して、２Ｘ２０ｍＬの塩化メチレンで抽出した。合わせた有機相に、７００ｍｇのＮｏｒｉｔ ＣＡ−１（炭）および１０ｇの硫酸ナトリウムを加え、次いで、混合物をろ過した。ケークを２Ｘ２０ｍＬの塩化メチレンで洗浄した。該溶液を濃縮し、得られた懸濁液を５〜８℃で１６時間攪拌した。ろ過後、固体を２Ｘ１０ｍＬの冷塩化メチレンで洗浄し、次いで、乾燥させて、生成物を得た（２．３ｇ、５０％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９５．２％、Ｃ−４エピマー：０．５％。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５８６（Ｍ＋Ｈ）；５８５（Ｍ＋）。
【０２１７】
実施例１１〜１９
チゲサイクリン
実施例１１〜１９は、下記に示される溶媒変更を用いて、実施例１０の手法にしたがった。
【表８】
2008545702.tif 000065
１  純度は、ＨＰＬＣ面積によって評価された。ｓｍ＝出発物質９−アミノミノサイクリン
２  反応混合物をイソプロパノール−酢酸エチルでクエンチし、次いで、水とＣＨ２Ｃｌ２の間に分配した。有機相を濃縮し、次いで、トルエンで希釈した後、生成物を単離した。
【０２１８】
実施例２０
Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩
機械的スターラー、熱電対、３０％（ｗｔ）苛性スクラバーへの窒素ラインを有するコンデンサー、および２５０ｍＬ均圧添加漏斗を備えた５Ｌの多口フラスコに、粉砕したＮ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩（４３６ｇ，２．６０モル，ｄ（０．５）＝１０３μｍ）、トルエン（１，９５８ｇ，２，２６３ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１３．６ｇ，１４．４ｍＬ，０．１９モル）を加えた。２５０−ｍＬ添加漏斗を用いて、塩化チオニル（４０５ｇ，２４８ｍＬ，３．４０モル）を２０〜２３℃で３３分かけてオフホワイト色スラリーに加えた。該スラリーをゆっくりと、１時間かけて８０℃に加熱し、次いで、８０℃で３時間攪拌した。３時間後、薄層クロマトグラフィーによって反応が完了した（＜２％出発物質）。黄色−オレンジ色懸濁液を３２分かけて２０℃に冷却し、次いで、１５〜２０℃で３２分間攪拌した。＃４２  Ｗｈａｔｍａｎろ紙を用いる１５ｃｍのブフナー漏斗上で、固体を真空ろ過によって収集した。ケークを２０〜２５℃にて、トルエンで３回（２７２ｇ，３１４ｍＬ各洗浄）洗浄した。該湿潤ケークを窒素保護下で２０分間、吸引を用いて乾燥させた。次いで、生成物をオーブン中、２３ｍｍＨｇおよび３８℃の真空下で２１．２時間乾燥させて、乾燥減量１．２３％を得た。得られたｔ−ブチルアミノアセチルクロリドＨＣｌの重量＝４６２ｇ、ＧＣ強度＝９１．０％、ＩＲ同定＝陽性。ｔ−ブチルアミノ酢酸ＨＣｌからの収率＝９６％。生成物および出発物質の強度に対して補正した収率＝８７％。
【０２１９】
実施例２１
Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩
機械的スターラー、熱電対、２５％（ｗｔ）苛性スクラバーへの窒素ラインを有するコンデンサー、および２５０ｍＬ均圧添加漏斗を備えた５Ｌの多口フラスコに、粉砕したＮ−ｔ−ブチルグリシン塩酸塩（４５０ｇ，２．６８モル，ｄ（０．５）＝６６４μｍ）、トルエン（２，８６３ｇ，３，３１０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｇ，１５ｍＬ，０．２１モル）を加えた。２５０ｍＬの添加漏斗を用いて、塩化チオニル（４２２ｇ，２５９ｍＬ，３．５４モル）を１９〜２２℃で１９分かけて白色スラリーに加えた。該スラリーをゆっくりと、７．１時間かけて７９℃に加熱し、次いで、７９〜８２℃で４４時間攪拌した。反応を３時間後にチェックし、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって不完全であることが分かった。さらに２６ｍＬ（４２ｇ、０．３５モル）の塩化チオニルを加えた。全部で２７時間後、反応はまだＴＬＣによって不完全であり、さらに２６ｍＬ（４２ｇ、０．３５モル）の塩化チオニルを加えた。全部で４４時間後、７９〜８２℃にて、ＴＬＣによって反応が完了したことが分かった（＜４％出発ｔ−ブチルアミノ酢酸ＨＣｌ）。焦げ茶色懸濁液を１７分かけて２５℃に冷却し、次いで、２１〜２５℃で３７分間攪拌した。２Ｌの粗い焼結ガラス漏斗上で、固体を真空ろ過によって収集した。ケークを２０〜２５℃にて、トルエンで６回（２８２ｇ，３２５ｍＬ各洗浄）洗浄した。該湿潤ケークを窒素保護下で１６分間、吸引を用いて乾燥させた。次いで、生成物をオーブン中、２３ｍｍＨｇおよび３８℃の真空下で２６．１時間乾燥させて、乾燥減量０．７５％を得た。得られたｔ−ブチルアミノアセチルクロリドＨＣｌの重量＝３９５ｇ、ＧＣ強度＝８９．５％、ＩＲ同定＝陽性。ｔ−ブチルアミノ酢酸ＨＣｌからの収率＝７９％。生成物および出発物質の強度に対して補正した収率＝７１％。
【０２２０】
実施例２２
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリンＨＣｌ（４３．０ｋｇ）を２５８ｋｇ（６．０部）の注射用水中に０〜６℃で溶解した。Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリドＨＣｌ（４７．３ｋｇ，１．１部，３．０１当量）をバッチ溶液にゆっくりと加え、同時に、バッチ温度を０〜６℃に維持した。反応混合物を１時間攪拌し、０．２％の出発物質を有することが分かった（さらなるＮ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリドＨＣｌは必要ない）。次いで、３２ｋｇ（０．７部）の水酸化アンモニウム２８％および２ｋｇの試薬塩酸（行きすぎた時に再調整するため）を用いて、ＧＡＲ−９３６反応混合物をｐＨ７．２＋／−０．２に調整した。最初のｐＨは０．４２に等しく、最後のｐＨは７．３４に等しかった。塩化メチレン（３４２ｋｇ，８部）および１４８ｋｇ（３．４部）のメタノールを反応混合物に０〜７℃で加えた。ｐＨが７．０９の場合、調製は必要なかった。バッチを１９〜２５℃に加温した。メタノール（８３ｋｇ，１．９部）を加え、下層の有機相を分離した。次いで、水酸化アンモニウム２８％でｐＨを７．２＋／−０．２に維持しながら、１ｘ３４２ｋｇ（８部）および３ｘ１７２ｋｇ（４部）の塩化メチレンを用いて、水相に残っている生成物を有機相中に抽出した。メタノール（４９ｋｇ，１．１４部）を得られた塩化メチレン／メタノール溶液に加え、それを２ｘ４３ｋｇ（１部）の注射用水で洗浄した後、４３ｋｇ（１部）の硫酸ナトリウムで乾燥させた。次いで、３回の真空蒸留を行って（第２および第３の蒸留の前に５６８ｋｇ（１３．２部）の塩化メチレンを追加した）、メタノールを除去した。母液中におけるメタノールの残留レベルは、０．２１％であった。バッチをろ過し、２ｘ６０ｋｇ（１．４部）の予め冷却した（０〜６℃）塩化メチレンで洗浄した。得られた粗物質は乾燥させずに、湿潤ケークとして単離し（７２．５ｋｇ，乾燥減量から計算された乾燥重量３８．２ｋｇ）、９−アミノミノサイクリンＨＣｌから７７％収率を得た。湿潤ケーク分析結果：ミノサイクリン＝１．２６％、単一の最大不純物＝０．３７％、Ｃ−４エピマー＝０．５０％。
【０２２１】
実施例２３
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリンＨＣｌ（６１．０ｋｇ）を２５８ｋｇ（６．０部）の注射用水中に０〜６℃で溶解した。Ｎ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリドＨＣｌ（６７．１ｋｇ，１．１部，３．０１当量）をバッチ溶液にゆっくりと加え、同時に、バッチ温度を０〜６℃に維持した。反応混合物を３．５時間攪拌し、０．１３％の出発物質を有することが分かった（さらなるＮ−ｔ−ブチルグリシン酸クロリドＨＣｌは必要ない）。次いで、４５ｋｇ（０．７部）の水酸化アンモニウム２８％を用いて、反応混合物をｐＨ７．２＋／−０．２に調整した。最初のｐＨは０．８２に等しく、最後のｐＨは７．０７に等しかった。塩化メチレン（４８５ｋｇ，８部）および２１０ｋｇ（３．４部）のメタノールを反応混合物に０〜６℃で加えた。ｐＨはまだ範囲（７．０４）にあったので、調整は必要なかった。バッチを１９〜２５℃に加温した。メタノール（１１８ｋｇ，１．９部）を加え、下層の有機相を分離した。次いで、水酸化アンモニウム２８％でｐＨを７．２＋／−０．２に維持しながら、１ｘ４８５ｋｇ（８部）および３ｘ２４４ｋｇ（４部）の塩化メチレンを用いて、水相に残っている生成物を有機相中に抽出した。メタノール（７０ｋｇ，１．１４部）を得られた塩化メチレン／メタノール溶液に加え、次いで、それを２ｘ６１ｋｇ（１部）の注射用水で洗浄した後、６１ｋｇ（１部）の硫酸ナトリウムで乾燥させた。次いで、３回の真空蒸留を行って（第２および第３の蒸留の前に８０５ｋｇ（１３．２部）の塩化メチレンを追加した）、メタノールを除去した。母液中におけるメタノールの残留レベルは、０．０５％であった。バッチをろ過し、２ｘ８５ｋｇ（１．４部）の予め冷却した（０〜６℃）塩化メチレンで洗浄した。得られた粗物質は乾燥させずに、湿潤ケークとして単離し（１０３ｋｇ，乾燥減量から計算された乾燥重量５３．４ｋｇ）、９−アミノミノサイクリンＨＣｌから７６％収率を得た。
【０２２２】
比較例２４
チゲサイクリン一塩酸塩
実施例２４Ａ：９−クロロアセトアミドミノサイクリン
機械的スターラー、熱電対および１Ｌの添加漏斗を備えた３Ｌの丸底フラスコ中、塩化メチレン（１．３Ｌ）を０〜２℃に冷却した。再結晶化された９−アミノミノサイクリン塩酸塩（４００ｇ）を攪拌しながら徐々に加えた。温度を０〜２℃に維持しながら、トリエチルアミン（４２８ｍＬ）を１０分かけて加えた。反応混合物を１０分間攪拌し、次いで、−２２℃に冷却した。次いで、５４０ｍｌの塩化メチレン中における２８０ｇの無水クロロ酢酸の溶液を、温度が５℃を超えないような速度で加えた。さらに１３２ｍｌの塩化メチレンを用いて添加漏斗をリンスした。無水物添加開始の１５分後、反応混合物をＨＰＬＣによってアッセイした。存在する出発物質の量が２％未満になったとき、反応を６８０ｍＬの０．０５Ｍ重炭酸ナトリウム溶液でクエンチした。混合物を１５分間攪拌し、次いで、５Ｌの分離漏斗に移した。相を分離させた。塩化メチレン相を分離し、さらに６８０ｍＬの０．０５Ｍ重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。洗浄した塩化メチレン溶液をｎ−ヘプタンおよびイソプロパノールの１０：１混合液１７Ｌ（１５．４Ｌのｎ−ヘプタンおよび１．５４Ｌのイソプロパノール）中に滴下した。スラリーを５分間攪拌し、次いで、１０分間静置させた。上清をデカントし、沈殿を粗多孔性ガラス漏斗（fritted-funnel）でろ過した。固体を２Ｌの１０：１  ｎ−ヘプタン：イソプロパノールで洗浄した。固体を真空下、４０℃で乾燥させて、粗生成物を得た（５５０ｇ）。
【０２２３】
実施例２４Ｂ：チゲサイクリン
粗９−クロロアセトアミドミノサイクリン（１００ｇ）を室温（２５〜２８℃）でゆっくりと、十分に攪拌しながら、スターラーおよび熱電対を備えた１Ｌの二口丸底フラスコ中における５００ｍＬのｔ−ブチルアミンに加えた。ヨウ化ナトリウム（１０ｇ）を加え、反応混合物を室温で７．５時間攪拌した。反応をＨＰＬＣによってモニターし、＜２％の出発物質が残存する場合、１００ｍｌのメタノールを加え、溶媒をロータリーエバポレーターにおいて４０℃で除去した。残渣に、４２０ｍＬのメタノールおよび６８０ｍＬの水を加えた。該溶液を０〜２℃に冷却し、濃ＨＣｌ（９１ｍｌ）でｐＨ７．２に調整して、反応混合物容量１３００ｍＬを得た。水で６．５Ｌに希釈し、濃ＨＣｌ（１２ｍＬ）でｐＨを４．０〜４．２に調整した。洗浄ＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍＲ（登録商標）（ＣＧ１６１ｃｄ）（８６０ｇ）を該溶液に加え、混合物を３０分間攪拌し、ｐＨを４．０〜４．２に調整した。該樹脂をろ過し、使用した水溶液をＨＰＬＣによって生成物についてアッセイし、４〜８℃で保存した。該樹脂を水中における２０％メタノール４．８Ｌ（４Ｌメタノール＋１６Ｌ水）中でスラリー化した。該懸濁液を１５分間攪拌し、ｐＨを４．０〜４．２に調整した。該樹脂をろ過し、ろ液を生成物についてアッセイした。該樹脂の抽出を、水中における２０％メタノール４．８Ｌで３回以上繰り返した。上記の樹脂抽出物および使用した水溶液の全てをプールし、３０％水酸化アンモニウムでｐＨを７．０〜７．２に調整した。該水溶液を６Ｘ２．８Ｌの塩化メチレンで抽出し、抽出の間にｐＨを７．０〜７．２に調整した。プールした塩化メチレン抽出物を２５０ｇの無水硫酸ナトリウムでろ過し、５００ｍＬに濃縮し、０〜３℃に冷却した。生成物の結晶化後、スラリーを０〜３℃で１時間攪拌した。固体をろ過し、２Ｘ５０ｍＬの冷塩化メチレンで洗浄し、真空下、４０℃で乾燥させて、固体を得た（２６ｇ）。
【０２２４】
実施例２４Ｃ：チゲサイクリン一塩酸塩
チゲサイクリン（４９ｇ，０．０８４モル）を攪拌しながら、５００ｍＬの注射用水中に徐々に溶解させた。該溶液を中程度の多孔性漏斗でろ過し、４２０ｍＬの注射用水で洗浄した。該溶液を０〜２℃に冷却し、温度を０〜２℃に維持しながら５．６ｍＬの濃ＨＣｌを滴下した。最初のｐＨは８．０であり、最後のｐＨは６．０であった。試料を−３０℃で冷凍し、−１５℃で凍結乾燥することによって、溶液を凍結乾燥させた。貯蔵温度を２１℃に２時間上昇させた。得られた固体（４９．６ｇ）を破砕し、４〜５℃で保存した。
元素分析：Ｃ（５２．９２％理論値，５１．７５％実測値）；Ｈ（６．７３％理論値，６．７５％実測値）；Ｎ（１０．６５％理論値，１０．３２％実測値）；Ｃｌ（５．４％理論値，５．５％実測値）
【０２２５】
比較例２５
チゲサイクリン一塩酸塩
実施例２５Ａ：９−クロロアセトアミドミノサイクリン
塩化メチレン（３２５ｍＬ）を−５〜０℃に冷却し、９−アミノミノサイクリン塩酸塩（１００ｇ）を１０分かけて徐々に加えた。温度を−１０〜−５℃に維持しながら、トリエチルアミン（７７．６ｇ）を加えた。９７％無水クロロ酢酸（７０ｇ）の塩化メチレン（１３３ｍＬ）中溶液を２０〜２５℃で攪拌することによって調製し、混合物温度を−１０〜−２℃に維持しながら、４５分で反応混合物に加えた。該無水クロロ酢酸溶液を含有するフラスコを３１ｍＬの塩化メチレンでリンスし、該リンス液を反応混合物に加えた。３０分間攪拌後、反応をＨＰＬＣによってアッセイして、反応が完了したかを決定した。反応混合物を０〜５℃に維持しながら、水性重炭酸ナトリウム（１８５ｍＬ，０．０５Ｍ）を３０分かけて加えた。１０分間攪拌後、層を分離し、硫酸ナトリウム（１５ｇ）を有機層に加えた。混合物を０〜５℃で１５分間攪拌し、ろ過した。得られたケークを塩化メチレン（２ｘ３８ｍＬ）でリンスし、合わせたろ液を４．１９Ｌの１０：１  ヘプタン：イソプロパノール中に２０分かけて加え、次いで、ろ過フラスコを１５ｍＬの塩化メチレンでリンスした。得られた懸濁液を２０〜２５℃で１５分間攪拌し、次いでろ過した。ケークを６８０ｍＬの１０：１  ヘプタン：イソプロパノールでリンスし、３７〜４０℃（５〜１０ｍｍＨｇ）で２４時間乾燥させた。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：７８．１。
【０２２６】
実施例２５Ｂ：チゲサイクリン
スターラー、熱電対およびコンデンサーを備え付けた２Ｌの多口丸底フラスコ中、０〜１０℃にて、９−クロロアセトアミドミノサイクリン（１００ｇ）を勢い良く攪拌しながら４８３ｍＬのｔ−ブチルアミンに加えた。ヨウ化ナトリウム（１６ｇ）を加え、反応混合物を３３〜３８℃で４時間攪拌した。反応混合物を完了についてＨＰＬＣによってアッセイし、次いで、５〜１０℃に冷却した。メタノール（３００ｍＬ）を１０分かけて加え、次いで、反応溶液を蒸留（１０−１７℃，６８ｍｍＨｇ）により３５０ｍＬに濃縮した。さらにメタノール（６００ｍＬ）を濃縮物に加え、混合物を蒸留によって３５０ｍＬに濃縮した。反応温度を３０℃以下に維持しながら、メタノール（４６ｍＬ）および冷水（５６５ｍＬ）を加えた。該溶液を０〜５℃に冷却し、１００ｍＬのＨＣｌ２０°Ｂｅを用いてｐＨを４．０に調整した。該溶液を、５００ｍＬの水でリンスした５Ｌの多口フラスコに移し、次いで、１Ｌの水で希釈した。０〜５℃で１時間攪拌後、洗浄したＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍＲ（ＣＧ１６１）樹脂３を加え、得られた懸濁液を２０〜２５℃で３０分間攪拌した。該懸濁液をろ過し、得られた湿潤ケークを３４０ｍＬの５：１  水：メタノール溶液に加えた。ろ液を取りよけた。２０〜２５℃で３０分間攪拌後、懸濁液をろ過し、得られた湿潤ケークを第２の３４０ｍＬの５：１  水：メタノール溶液に加えた。該第２のろ液を取りよけた。該懸濁液をろ過し、得られた湿潤ケークを第３の３４０ｍＬの５：１  水：メタノール溶液に加えた。ろ過後、第３のろ液を第１および第２のろ液と合わせ、０〜５℃に冷却した。１１ｍＬの２８％水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．０に調整した。該溶液を必要に応じてｐＨを７．０に調整しながら、０〜５℃で１６時間攪拌し、次いで、必要に応じてｐＨを７．０に調整しながら、２２〜２５℃で１時間攪拌した。該水溶液を塩化メチレン（５Ｘ９８０ｍＬ）で抽出し、各抽出のためにｐＨを７．０に調整した。合わせた有機相を分離漏斗に移し、水層を分離した。有機層を１００ｇの硫酸ナトリウムと合わせ、２０〜２５℃で１時間攪拌した。該懸濁液をセライトパッドでろ過し、ケークを２５０ｍＬの塩化メチレンでリンスした。ろ液を蒸留（−５〜５℃，１５０ｍｍＨｇ）により１５０ｍＬに濃縮し、次いで、０〜５℃に１時間冷却した。得られた懸濁液をろ過し、ケークを０〜５℃の塩化メチレン（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。該湿潤ケークを塩化メチレン（３３５ｍＬ）およびメタノール（３７ｍＬ）中、２６〜３２℃で、溶液が得られるまで攪拌した。該溶液をセライトでろ過し、セライトを塩化メチレン（２ｘ１５ｍＬ）でリンスし、蒸留（−５〜５℃，１５０ｍｍＨｇ）により５４ｍＬに濃縮した。該濃縮手法は２回繰り返し、最初に３３５ｍＬの塩化メチレンを加え、容量を５５〜７０ｍＬに減らし、次いで、２５４ｍＬの塩化メチレンを加え、容量を９０〜１０５ｍＬに減らした。得られた懸濁液を０〜５℃で１時間攪拌し、次いで、ろ過し、−１０℃の塩化メチレン（２ｘ２５ｍＬ）で洗浄した。固体を３５〜４０℃で１６時間乾燥させ、次いで、４５〜５０℃で２７時間乾燥させた。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９７．７％，Ｃ−４エピマー１．���３％。
３  洗浄したＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍＲ（ＣＧ１６１）樹脂は、１８３ｇのろ過し、ホモジナイズしたＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍＲ（ＣＧ１６１）樹脂を３４０ｍＬの５：１水：メタノール溶液に加えることによって調製された。２２〜２５℃で１時間攪拌後、該懸濁液をろ過して湿潤ケークを得、それを吸引乾燥させた。該湿潤ケークを３４０ｍＬの５：１水：メタノール溶液中、２０℃で１時間攪拌し、次いで、ろ過した。該工程を１回以上繰り返して、洗浄した樹脂を得た。
【０２２７】
精製
実施例１
チゲサイクリン
粗チゲサイクリン（１１０．０ｇ）および酢酸メチル（１．６５Ｌ）の混合物を攪拌し、３０〜３５℃に加熱し、メタノール（５５０ｍＬ）を１５分かけて加えた。３０〜３５℃で維持した後、該温かい溶液を滴虫土（３６ｇ）でろ過し、ケークを酢酸メチル（２ｘ１０６ｇ）で洗浄した。ろ液を蒸留（２０℃，１５０ｍｍＨｇ）により５５０ｍＬに濃縮した。酢酸メチル（１．１Ｌ）を加え、得られた懸濁液を蒸留（２０℃，１５０ｍｍＨｇ）により５５０ｍＬに濃縮した。該工程を繰り返し、次いで、濃縮物を０〜４℃に１時間冷却した。得られた固体をろ過によって収集し、０〜５℃の酢酸メチル（２ｘ１５０ｍＬ）で洗浄した。固体を真空下（６５〜７０℃，１０ｍｍＨｇ）で１００時間乾燥させて、所望の生成物を得た（９８．０ｇ、８９．１％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．８％およびＣ−４エピマー０．５５％。
【０２２８】
実施例２
チゲサイクリン
９−アミノミノサイクリン・ＨＣｌ（１４０．０ｇ）を０〜４℃の水８４０ｍＬに徐々に加えた。温度を０〜４℃に維持しながら、ｔ−ブチルグリシン酸クロリド塩酸塩（１５４ｇ）を１５分かけてよく攪拌しながら加えた。該溶液を１〜３時間攪拌した。温度を０〜１０℃に維持しながら、該混合物のｐＨを３０％水酸化アンモニウムで７．２±０．２に調整した。メタノール（９３０ｍＬ）および８４０ｍＬの塩化メチレンを該溶液に加え、それを２０〜２５℃で１時間攪拌した。相を分離した。水相を３Ｘ６００ｍＬの塩化メチレンで抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、約５００ｍＬ容量に濃縮した。得られた懸濁液を０〜２℃に１時間冷却した。固体をろ過し、乾燥させて、生成物を得た（１２０ｇ、７５％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８％、Ｃ−４エピマー０．１％。ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｚ５８６（Ｍ＋Ｈ）；５８５（Ｍ＋）。
【０２２９】
実施例３
チゲサイクリン
実施例２に記載のように調製されたチゲサイクリン（１５．００ｇ）を１１３ｍＬのアセトンおよび１１３ｍＬのメタノールに加えた。該懸濁液を２０〜２５℃で１時間攪拌し、次いで０〜２℃に冷却した。１時間攪拌後、該懸濁液をろ過し、洗浄して、生成物を得た（１２．５５ｇ、８３．７％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）＞９９％、Ｃ−４エピマー０．４％。
【０２３０】
実施例４
チゲサイクリン
実施例２に記載のように調製されたチゲサイクリン（１０５ｇ）を８００ｍＬのアセトンおよび８００ｍＬのメタノールに加えた。該懸濁液を攪拌し、３０〜３５℃に１５分間加熱した後、２０〜２５℃に冷却した。２０〜２５℃で１時間維持後、該懸濁液を０〜４℃に冷却し、１時間維持した。固体をろ過し、洗浄し、乾燥させて、生成物を得た（８３ｇ、７９％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）＞９９％、Ｃ−４エピマー０．４％。
【０２３１】
実施例５
チゲサイクリン
機械的スターラーおよび窒素保護を備え付けた１Ｌの多口フラスコに、９４．３ｇの湿潤粗チゲサイクリン４、メタノール（３０５ｇ，３８６ｍＬ）およびアセトン（２９１ｇ，３６８ｍＬ）を加えた。該混合物を１６〜２３℃で４時間攪拌した。該スラリーを、＃１  Ｗｈａｔｍａｎろ紙を用いて９ｃｍのブフナー漏斗でろ過した。湿潤ケークを２０〜２５℃にて、メタノール（８７ｇ，１１０ｍＬ）で洗浄した。該湿潤ケークを吸引および窒素保護を用いて０．１時間乾燥させた。該湿潤ケーク（７５．３ｇ）を１Ｌの多口フラスコに戻し、メタノール（２３３ｇ，２９５ｍＬ）およびアセトン（２４４ｇ，３０９ｍＬ）の溶液を加えた。該スラリーを１５〜２０℃で５．５時間攪拌した。スラリーを＃１  Ｗｈａｔｍａｎろ紙を用いて９ｃｍのブフナー漏斗でろ過した。湿潤ケークを１８〜２４℃にてメタノール（７０ｇ，８８ｍＬ）で洗浄した。該湿潤ケークを吸引および窒素保護を用いて０．１時間乾燥させた。該湿潤ケーク（５９．０ｇ）を１Ｌの多口フラスコに戻し、メタノール（１９５ｇ，２４７ｍＬ）およびアセトン（１８７ｇ，２３６ｍＬ）の溶液を加えた。該スラリーを１８〜２４℃で３時間攪拌した。該スラリーを＃１  Ｗｈａｔｍａｎろ紙を用いて９ｃｍのブフナー漏斗でろ過した。湿潤ケークを２０〜２５℃にてメタノール（５５ｇ，７０ｍＬ）で洗浄した。該湿潤ケークを吸引および窒素保護を用いて０．１時間乾燥させた。該湿潤ケーク（４８．９ｇ）を高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析のサンプルとした（全不純物＝０．６２％，ミノサイクリン＝０．１７％，Ｃ−４エピマー＝０．３５％，最大の他の単一不純物＝０．０５％）。
４  粗チゲサイクリンは、供給元Ｉｎｔｅｒｃｈｅｍから入手したミノサイクリン・ＨＣｌから調製された。
【０２３２】
該湿潤ケーク（４８．９ｇ）を、真空蒸留セットを備えた２Ｌの多口フラスコに移した。該湿潤ケークに、メタノール（９０ｇ，１１４ｍＬ）およびジクロロメタン（１，０２３ｇ，７７２ｍＬ）のプレミックス溶液を加えた。該スラリーを１５〜２０℃にて攪拌して、赤色溶液を得た。該溶液を１３〜１７℃にて、３３０ｍｍＨｇの真空下、０．８時間かけて１６０ｍＬに蒸留して、オレンジ色スラリーを得た。該２Ｌフラスコ中に、ジクロロメタン（８１８ｇ，６１７ｍＬ）を加え、スラリーを６〜１３℃にて、８１７ｍｍＨｇの真空下、０．７時間かけて１８３ｍＬに再蒸留した。ジクロロメタン（６３５ｇ，４７９ｍＬ）を加え、スラリーを６〜７℃にて、８１７ｍｍＨｇの真空下、０．６時間かけて１８３ｍＬに再蒸留した。得られたオレンジ色スラリーを０〜５℃に冷却し、攪拌しながら０〜５℃で２時間維持した。該スラリーを＃１  Ｗｈａｔｍａｎろ紙を用いて７ｃｍのブフナー漏斗でろ過した。湿潤ケークを０℃にて、６９ｇ（５２ｍＬ）のジクロロメタンで２回洗浄した。該湿潤ケークを窒素保護下で５分間、吸引乾燥させた。該湿潤ケーク（４８．７ｇ）の試料をＨＰＬＣ分析に付した（全不純物＝０．４９％，ミノサイクリン＝０．１２％，Ｃ−４エピマー＝０．３２％，他の不純物＝０％）。次いで、該湿潤ケークを２５℃にて、＜１０ｍｍＨｇの真空下、ジクロロメタンレベル２．２％まで５７．５時間乾燥させて、チゲサイクリンを得た（３２．３ｇ、３４．２％収率）。
【０２３３】
供給元ＨｏｖｉｏｎｅおよびＮｉｐｐｏｎ  Ｋａｙａｋｕから入手したミノサイクリン・ＨＣｌから調製された粗チゲサイクリンを用いて、該手法にしたがった。ミノサイクリン・ＨＣｌ出発物質の各供給源を用いる上記方法から得られたチゲサイクリン中に存在する不純物の比較を、表１および２に示す。これらの表は、該方法が高収率のチゲサイクリンを少量の不純物と共に提供することを示す。
【表９】
2008545702.tif 000066
【表１０】
2008545702.tif 000067
１．無水物、溶媒不含を基準とする。
２．エピマーを除く。
３．Ｃ−４エピマーおよびミノサイクリンを除く最大の単一不純物（ＬＳＩ）。ＧＡＲ−９３６に対する相対的保持時間（ＲＲＴ）
４．ｂｒｌ：報告する限界未満（below reporting limit），ＨＰＬＣの場合、０．０５％未満。
５．０．０００５％のｂｒｌ。
６．０．０００３％のｂｒｌ。
７．０．００３０％のｂｒｌ（単一試料）。
８．２ｐｐｍのｂｒｌ。
９．６３ｐｐｍのｂｒｌ。
１０．出発物質および生成物の強度に対して補正した。
【０２３４】
実施例６
チゲサイクリン
粗チゲサイクリン湿潤ケーク（７２．５ｋｇ，乾燥重量３８．２ｋｇ５）を１９１ｋｇ（５部）のアセトンおよび１９１ｋｇ（５部）のメタノール中で攪拌し、スラリー化した。次いで、該スラリーを３０〜３６℃に加温し、すぐに１９〜２５℃に冷却し、１９〜２５℃で２時間維持した。次いで、該スラリーを０〜６℃に冷却し、０〜６℃で１時間維持した。ろ過および２ｘ３４ｋｇ（０．９部）のアセトン／メタノール（１：１）で洗浄後、湿潤ケークをミノサイクリン（０．２３％）、９−アミノミノサイクリン（０％）、およびＣ−４エピマー以外の最大の単一不純物（０．０９％）について試験した。Ｃ−４エピマー含量は１．１２％であった。該分析データに基づいて、追加の再スラリー化は実施しなかった。湿潤ケークに、４４０ｋｇ（１１．５部）の塩化メチレンおよび３９．３ｋｇ（１．０部）のメタノールを加え、該混合物を３０〜３６℃に加熱して溶解させた。該バッチ溶液を０．３ミクロンのパイロジェン減少フィルターおよび０．２ミクロンの浄化フィルターでろ過した。次いで、真空蒸留を３回行ってメタノールを除去した。第２および第３回目の蒸留の前に、塩化メチレン（各々、４４０ｋｇおよび３３９ｋｇ）を追加した。残留メタノールレベルは０．３％であった。該バッチを０〜６℃に冷却し、１時間攪拌した。該バッチをろ過し、２ｘ４２．１ｋｇ（１．１部）の予め冷却した（−１３〜−７℃）塩化メチレンで洗浄し、６０℃以下にて、乾燥減量＜２．５％まで乾燥させた。該物質を粉砕して、チゲサイクリンを得た（２２．３ｋｇ、５８％収率）。ＨＰＬＣによる純度（面積％）：９８．２％，Ｃ−４エピマー：１．５５％，ミノサイクリン０．１％，９−アミノミノサイクリン０％，単一の最大の他の不純物＝０．０８％。
５  乾燥減量データから算出された乾燥重量。
【０２３５】
実施例７
チゲサイクリン
粗チゲサイクリン湿潤ケーク（１０３．５ｋｇ，乾燥重量５３．４ｋｇ６）を１９１ｋｇ（５．１部）のアセトンおよび１９１ｋｇ（５．１部）のメタノール中で攪拌し、スラリー化した。次いで、該スラリーを３０〜３６℃に加温し、すぐに１９〜２５℃に冷却し、１９〜２５℃で２時間維持した。次いで、該スラリーを０〜６℃に冷却し、０〜６℃で１時間維持した。ろ過および２ｘ３４ｋｇ（０．９部）のアセトン／メタノール（１：１）で洗浄後、湿潤ケークをミノサイクリン（０．１２％）、９−アミノミノサイクリン（０％）、およびＣ−４エピマー以外の最大の単一不純物（０．１３％）について試験した。Ｃ−４エピマー含量は０．３７％であった。該分析データに基づいて、追加の再スラリー化は実施しなかった。湿潤ケークに、４４０ｋｇ（１１．７部）の塩化メチレンおよび５５．７ｋｇ（１．０部）のメタノールを加え、該混合物を３０〜３６℃に加熱して溶解させた。該バッチ溶液を０．３ミクロンのパイロジェン減少フィルターおよび０．２ミクロンの浄化フィルターでろ過した。次いで、真空蒸留を３回行ってメタノールを除去した。第２および第３回目の蒸留の前に、塩化メチレン（各々、６２４ｋｇおよび４８１ｋｇ）を追加した。残留メタノールレベルは１．０７％であった。該バッチを０〜６℃に冷却し、１時間攪拌した。該バッチをろ過し、３ｘ５９．７ｋｇ（各１．１部）の予め冷却した（−１３〜−７℃）塩化メチレンで洗浄し、６０℃以下にて乾燥減量＜２．５％まで乾燥させた。該物質を粉砕して、チゲサイクリンを第１収穫として得た（３１．７ｋｇ）。晶析装置中の残留生成物からなる第２収穫がさらに２．５ｋｇを提供された。両方の収穫物は、粗チゲサイクリンからの６４％収率を示す。
６  乾燥減量データから算出された乾燥重量。
【０２３６】
本発明を本発明の具体例およびその非限定的な実施例の考察によって記載したが、当業者ならば、本明細書および特許請求の範囲を読んで、本発明の意図される範囲内にある他の具体例およびバリエーションを想像することができる。したがって、添付の特許請求の範囲は、単に本発明の範囲を理解させ、明らかにするだけである。
【図面の簡単な説明】
【０２３７】
【図１】チゲサイクリンを調製するための例示的スキームを示す。
【図２】チゲサイクリンを調製するための例示的スキームを示す。
【図３】チゲサイクリン調製するための例示的スキームを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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