(57)【要約】  本発明はエストロゲン受容体モジュレーターとなる化合物およびその誘導体、それらの合成、およびそれらの使用に関する。本発明の化合物はエストロゲン受容体のリガンドであり、従って、骨減量、骨折、骨粗鬆症、転移性骨疾患、ページェット病、歯周病、軟骨変性、子宮内膜症、子宮線維腫、のぼせ、ＬＤＬコレステロールレベル上昇、心血管疾患、認識機能の損傷、大脳変性障害、再発狭窄症、女性化乳房、血管平滑筋細胞増殖、肥満、失禁、不安、エストロゲン欠乏が原因の抑鬱、炎症、炎症性腸疾患、性機能不全、高血圧、網膜変性、および、癌、特に乳癌、子宮癌、前立腺癌のようなエストロゲン機能に関係した様々な状態の治療または予防に有用であろう。
2008504263.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量のデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを哺乳動物に投与する段階を含む、治療を要する哺乳動物の疾患の治療方法であって、前記疾患が、骨減量、骨折、骨粗鬆症、転移性骨疾患、ページェット病、歯周病、軟骨変性、子宮内膜症、子宮線維腫、のぼせ、ＬＤＬコレステロールレベル上昇、心血管疾患、高血圧、網膜変性、認識機能の損傷、アルツハイマー病、大脳変性障害、再発狭窄症、女性化乳房、血管平滑筋細胞増殖、肥満、失禁、不安、エストロゲン欠乏が原因の抑鬱、炎症、炎症性腸疾患、性機能不全またはエストロゲン依存性癌である治療方法。
【請求項２】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールと、有機ビスホスホネート；カテプシンＫインヒビター；エストロゲン；エストロゲン受容体モジュレーター；アンドロゲン受容体モジュレーター;破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼのインヒビター；ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビター；インテグリン受容体アンタゴニスト；骨芽細胞同化促進物質；カルシトニン；ビタミンＤ；合成ビタミンＤ類似体；選択的セロトニン再吸収インヒビター；アロマターゼインヒビターおよび医薬的に許容されるそれらの塩および混合物から成るグループから選択された別の薬剤とを含む医薬組成物。
【請求項３】
さらに、有機ビスホスホネート；カテプシンＫインヒビター；エストロゲン；エストロゲン受容体モジュレーター；アンドロゲン受容体モジュレーター;破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼのインヒビター；ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビター；インテグリン受容体アンタゴニスト；骨芽細胞同化促進物質；カルシトニン；ビタミンＤ；合成ビタミンＤ類似体；選択的セロトニン再吸収インヒビター；アロマターゼインヒビターおよび医薬的に許容されるそれらの塩および混合物から成るグループから選択された別の薬剤を含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
疾患がのぼせである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
疾患が抑鬱である請求項３に記載の方法。
【請求項６】
薬剤が選択的セロトニン再吸収インヒビターである請求項５に記載の方法。
【請求項７】
薬剤が有機ビスホスホネートである請求項３に記載の方法。
【請求項８】
有機ビスホスホネートがアレンドロネートである請求項７に記載の方法。
【請求項９】
薬剤がＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビターである請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビターがシンバスタチンである請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
天然産生および合成のエストロゲンは、閉経期症状の軽減、ニキビの治療、月経困難症および機能不全的子宮出血の治療、骨粗鬆症の治療、多毛症の治療、前立腺癌の治療、のぼせの治療および心血管疾患の予防などを含む広い治療用途を有している。エストロゲンは治療的に極めて有効であるため、エストロゲン応答性組織中でエストロゲン様挙動を模倣する化合物を発見することに多大な関心が払われてきた。
【０００２】
エストロゲン受容体は２つの形態：ＥＲαおよびＥＲβを有することが知見されている。これらの２つの形態へのリガンドの結合は異なっており、各々の形態は結合性リガンドに対して異なる組織特異性を有している。このため、ＥＲαまたはＥＲβ選択性であり従って特定のリガンドにある程度の組織特異性を与える化合物を得ることが可能である。
【０００３】
当業界で必要とされるのは、不利な副作用を伴うことなくエストロゲン代償療法と同じ有益な応答を生じさせ得る化合物である。また、身体の種々の組織に選択的効果を及ぼすエストロゲン様化合物も必要とされている。
【０００４】
本発明の化合物はエストロゲン受容体のリガンドであり、従って、骨減量、骨折、骨粗鬆症、転移性骨疾患、ページェット病、歯周病、軟骨変性、子宮内膜症、子宮線維腫、のぼせ、ＬＤＬコレステロールレベル上昇、心血管疾患、認識機能の損傷、大脳変性障害、再発狭窄症、女性化乳房、血管平滑筋細胞増殖、肥満、失禁、不安、エストロゲン欠乏が原因の抑鬱、炎症、炎症性腸疾患、性機能不全、高血圧、網膜変性、および、癌特に乳癌、子宮癌および前立腺癌を含むエストロゲン機能に関係した多様な状態の治療または予防に有用であろう。
【０００５】
本発明は、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールによるエストロゲン機能に関係した様々な状態の治療または予防方法に関する。
【発明の開示】
【０００６】
本発明はデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールによるエストロゲン機能に関係した様々な状態の治療または予防方法に関する。
【０００７】
また、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールと医薬的に許容される担体とから成る医薬組成物も本発明の範囲に含まれる。本発明はまた、医薬的に許容される担体と本願に具体的に開示した化合物のいずれかとから成る医薬組成物を含むことを考察している。本発明はまた、本発明の医薬組成物の製造方法に関する。本発明はまた、本発明の化合物および医薬組成物の製造に有用なプロセスおよび中間体に関する。本発明のこれらの目的およびその他の目的は本文中に含まれている教示から明らかであろう。
【０００８】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールは、エストロゲン受容体の選択的モジュレーターであり、従って、哺乳類、好ましくはヒトのエストロゲン受容体機能に関係した様々な疾患および状態の治療または予防に有用である。具体的には、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールは、ＥＲβの選択的モジュレーターであり、従って、哺乳類、好ましくはヒトのＥＲβ機能に関係した疾患および状態の治療または予防に有用である。
【０００９】
エストロゲン受容体機能に関係した様々な疾患および状態の非限定例は、骨減量、骨折、骨粗鬆症、転移性骨疾患、ページェット病、歯周病、軟骨変性、子宮内膜症、子宮線維腫、のぼせ、ＬＤＬコレステロールレベル上昇、心血管疾患、認識機能の損傷、大脳変性障害、再発狭窄症、女性化乳房、血管平滑筋細胞増殖、肥満、失禁、不安、エストロゲン欠乏が原因の抑鬱、炎症、炎症性腸疾患、性機能不全、高血圧、網膜変性、および、癌特に乳癌、子宮癌および前立腺癌である。このような状態を本発明の特許請求の範囲に記載の化合物で治療する場合、治療必要量は個々の疾患によって違うが、当業者には容易に知ることができよう。本発明の範囲では治療および予防の双方を考察しているが、好ましい使用はこれらの状態の治療である。
【００１０】
本発明はまた、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを投与することによってその必要がある哺乳動物のエストロゲン受容体変調効果を誘発する方法に関する。本発明はまた、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを投与することによってその必要がある哺乳動物のエストロゲン受容体作動効果を誘発する方法に関する。より詳細には、エストロゲン受容体作動効果は、ＥＲβ作動効果である。
【００１１】
本発明はまた、本発明の化合物および医薬組成物を投与することによってその必要がある哺乳動物のエストロゲン機能関連障害、骨減量、骨折、骨粗鬆症、転移性骨疾患、ページェット病、歯周病、軟骨変性、子宮内膜症、子宮線維腫、のぼせ、ＬＤＬコレステロールレベル上昇、心血管疾患、認識機能の損傷、大脳変性障害、再発狭窄症、女性化乳房、血管平滑筋細胞増殖、肥満、失禁、不安、エストロゲン欠乏が原因の抑鬱、炎症、炎症性腸疾患、性機能不全、高血圧、網膜変性、および、癌特に乳癌、子宮癌および前立腺癌を治療または予防する方法に関する。本発明の代表例は、抑鬱の治療または予防方法である。本発明の代表例は、不安の治療または予防方法である。本発明の代表例は、のぼせの治療または予防方法である。本発明の代表例は、癌の治療または予防方法である。本発明の代表例は、心血管疾患の治療または予防方法である。
【００１２】
本発明の１つの実施態様は、本発明の化合物および医薬組成物を投与することによってその必要がある哺乳動物の癌、特に乳癌、子宮癌または前立腺癌を治療または予防する方法である。乳癌、子宮癌または前立腺癌治療におけるＳＥＲＭの効用は、文献から知られている。参考文献：Ｔ．Ｊ．Ｐｏｗｌｅｓ，“Ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，”Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ２００２；７（１）：６０−４；Ｐａｒｋ，Ｗ．Ｃ．ａｎｄ  Ｊｏｒｄａｎ，Ｖ．Ｃ．，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ（ＳＥＲＭＳ）  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．”  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２００２  Ｆｅｂ；８（２）：８２−８；Ｗｏｌｆｆ，Ａ．Ｃ．ら，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ＳＥＲＭｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ−ｓｔａｇｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，”  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．２００１  Ｄｅｃ；９４９：８０−８；Ｓｔｅｉｎｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ，”  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ２００１  Ａｐｒ；５７（４  Ｓｕｐｐｌ  １）：６８−７２。
【００１３】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の転移性骨疾患を治療または予防する方法である。転移性骨疾患の治療におけるＳＥＲＭの効用は、文献から知られている。参考文献：Ｃａｍｐｉｓｉ，Ｃ．ら，“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｏｕｌｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  ｔａｍｏｘｉｆｅｎ，”  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇｙｎａｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  １９９３；１４（６）：４７９−８３。
【００１４】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の子宮内膜症を治療または予防する方法である。子宮内膜症の治療におけるＳＥＲＭの効用は、文献から知られている。参考文献：Ｒｉｂｅｉｒｏ，Ｇ．ａｎｄ  Ｓｗｉｎｄｅｌｌ  Ｒ．，“Ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  ｆｏｒ  ｍａｌｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．”  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １９９２；６５：２５２−２５４；Ｄｏｎｅｇａｎ，Ｗ．，“Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍａｌｅ  Ｂｒｅａｓｔ，”  ＪＧＳＭ  Ｖｏｌ．３，Ｉｓｓｕｅ  ４，２０００。
【００１５】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の閉経後骨粗鬆症、グルココルチコイド骨粗鬆症、悪性の高カルシウム血症、骨減量および骨折を治療または予防する方法である。骨粗鬆症、悪性の高カルシウム血症、骨減量および骨折の治療または予防するためのＳＥＲＭの効用は、文献から知られている。参考文献：Ｊｏｒｄａｎ，Ｖ．Ｃ．ら，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ，”  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ２００１  Ｏｃｔ；９３（１９）：１４４９−５７；Ｂｊａｒｎａｓｏｎ，ＮＨら，“Ｓｉｘ  ａｎｄ  ｔｗｅｌｖｅ  ｍｏｎｔｈ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ａｒｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｅｒｔｅｂｒａｌ  ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｒｉｓｋ  ｄｕｒｉｎｇ  ３  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐｏｓｔｅｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ，”  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔ  ２００１；１２（ｌｌ）：９２２−３；Ｆｅｎｔｉｍａｎ  Ｉ．Ｓ．，“Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｓｔｅｒｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ，”  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２８：６８４−６８５（１９９２）；Ｒｏｄａｎ，Ｇ．Ａ．ら，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｂｏｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｖｏｌ  ２８９，１  Ｓｅｐｔ．２０００。
【００１６】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の歯周病または歯喪失を治療または予防する方法である。歯周病または歯喪失の治療にＳＥＲＭを使用することは、文献から知られている。参考文献：Ｒｏｄａｎ，Ｇ．Ａ．ら，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｂｏｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｖｏｌ  ２８９，１  Ｓｅｐｔ．２０００  ｐｐ．１５０８−１４。
【００１７】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物のページェット病を治療または予防する方法である。ページェット病の治療にＳＥＲＭを使用することは、文献から知られている。参考文献：Ｒｏｄａｎ，Ｇ．Ａ．ら，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｂｏｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｖｏｌ  ２８９，１  Ｓｅｐｔ．２０００  ｐｐ．１５０８−１４。
【００１８】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の子宮線維腫を治療または予防する方法である。子宮線維腫の治療にＳＥＲＭを使用することは、文献から知られている。参考文献：Ｐａｌｏｍｂａ，Ｓ．ら，“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  ｕｔｅｒｉｎｅ  ｌｅｉｏｍｙｏｍａｓ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ，”  Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ．２００１  Ｊｕｌ；７６（ｌ）：３８−４３。
【００１９】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の肥満を治療または予防する方法である。肥満の治療にＳＥＲＭを使用することは、文献から知られている。参考文献：Ｐｉｃａｒｄ，Ｆ．ら，“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ＥＭ−６５２．ＨＣｌ  ｏｎ  ｅｎｅｒｇｙ  ｂａｌａｎｃｅ  ａｎｄ  ｌｉｐｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ  ｒａｔｓ，”  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ  Ｒｅｌａｔ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｏｒｄ．２０００  Ｊｕｌ；２４（７）：８３０−４０。
【００２０】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の軟骨変性、リウマトイド関節炎、骨関節炎を治療または予防する方法である。軟骨変性、リウマトイド関節炎または骨関節炎の治療にＳＥＲＭを使用することは、文献から知られている。参考文献：Ｂａｄｇｅｒ，Ａ．Ｍ．ら，“Ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ，ｉｓ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｄｊｕｖａｎｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．”  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．１９９９  Ｄｅｃ；２９１（３）：１３８０−６。
【００２１】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の子宮内膜症を治療または予防する方法である。子宮内膜症の治療にＳＥＲＭを使用することは、当業界で公知である。参考文献：Ｓｔｅｖｅｎ  Ｒ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，“Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＳＥＲＭｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ，”  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９４９：２３７−２４２（２００１）。
【００２２】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の尿失禁を治療または予防する方法である。尿失禁の治療にＳＥＲＭＳを使用することは、当業界で公知である。参考文献：Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ｒ．，“Ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｏｆ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  ｐｅｌｖｉｃ  ｆｌｏｏｒ  ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ，”  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．２００１  Ｊｕｌ；９８（ｌ）：９１−６。
【００２３】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の心血管疾患、再発狭窄症、ＬＤＬコレステロールレベル低下を治療または予防する方法および血管平滑筋細胞増殖を阻害する方法である。エストロゲンは、コレステロールの生合成および心血管の健康に効果を有すると考えられる。統計的に、心血管疾患の発生率は閉経後女性および男性でほぼ等しい。しかしながら、閉経前女性の心血管疾患の発生率は男性よりもはるかに少ない。閉経後女性はエストロゲンが不足しており、従って心血管疾患の予防にエストロゲンが有効な役割を果していると考えられる。そのメカニズムは十分に解明されていないが、エストロゲンが肝臓の低密度脂質（ＬＤＬ）コレステロール受容体を上方調節して過剰のコレステロールを除去できるという証拠が示されている。心血管疾患、再発狭窄症、ＬＤＬコレステロールレベル低下の治療または予防および血管平滑筋細胞増殖の阻害におけるＳＥＲＭの効用は当業界で公知である。参考文献：Ｎｕｔｔａｌｌ，ＭＥら，“Ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ  ａｎｄ  ｌｏｗｅｒｓ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍｉｚｅｄ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｕｔｅｒｉｎｅ  ｗｅｉｇｈｔ  ｉｎ  ｉｎｔａｃｔ  ｒａｔｓ，”  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９８  Ｄｅｃ；１３９（１２）：５２２４−３４；Ｊｏｒｄａｎ，Ｖ．Ｃ．ら，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ，”  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ２００１  Ｏｃｔ；９３（１９）：１４４９−５７；Ｇｕｚｚｏ  ＪＡ．，“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ−ａ  ｎｅｗ  ａｇｅ  ｏｆ  ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ｉｎ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ？，”  Ｃｌｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２０００  Ｊａｎ；２３（ｌ）：１５−７；Ｓｉｍｏｎｃｉｎｉ  Ｔ，Ｇｅｎａｚｚａｎｉ  ＡＲ．，“Ｄｉｒｅｃｔ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ，”  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  ２０００  Ｊｕｎ；１２（３）：１８１−７。
【００２４】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の認識機能の損傷または大脳変性障害を治療または予防する方法である。モデルでは、エストロゲンが不安および抑鬱の軽減、アルツハイマー病の治療または予防のような認識機能に有益な効果を有していることが判明した。エストロゲンはコリン作動性機能、ニューロトロフィンおよびニューロトロフィン受容体発現を増進することによって中枢神経系に影響を及ぼす。エストロゲンはまた、グルタメート作動性シナプス伝達を増進し、アミロイド前駆体タンパク質のプロセシングを変質させ、神経保護を与える。従って、本発明のエストロゲン受容体モジュレーターは、認識機能の改善または軽度の認識損傷、注意不足症、睡眠障害、短気、衝動、怒りの制御、多発性硬化症およびパーキンソン病の治療に有効であろう。参考文献：Ｓａｗａｄａ，Ｈ  ａｎｄ  Ｓｈｉｍｏｈａｍａ，Ｓ，“Ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，”Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ．２００３  Ｊｕｎ；２１（ｌ）：７７−９；ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ  ＬＤ，ａｎｄ  Ｈｕｍ，ＰＤ，“Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ａｎｄ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ：ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｖｉｅｗ，”  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００３  Ｊｕｌ；１４（５）：２２８−３５。これらの文献の記載内容全部が参照によって本発明に含まれるものとする。認識機能の損傷を予防するためのＳＥＲＭの効用は当業界で公知である。参考文献：Ｙａｆｆｅ，Ｋ．，Ｋ．Ｋｒｕｅｇｅｒ，Ｓ．Ｓａｒｋａｒ，ら．２００１．Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：１２０７−１２１３。
【００２５】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の抑鬱を治療または予防する方法である。抑鬱を予防するためのエストロゲンの効用は、当業界で記載されている。参考文献：Ｃａｒｒａｎｚａ−Ｌｉｒａｍ  Ｓ．，Ｖａｌｅｎｔｉｎｏ−Ｆｉｇｕｅｒｏａ  ＭＬ，“Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ．”  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｇｙｎｎａｅｃｏｌ  Ｏｂｓｔｅｔ  １９９９  Ａｐｒ；６５（ｌ）：３５−８。具体的には、エストロゲン受容体ベータ（ＥＲβ）選択的アゴニストは、抑鬱、更年期抑鬱、分娩後抑鬱、月経前症候群、躁鬱、不安、認知症および強迫観念的行動のような不安または抑鬱病の治療に単一薬剤としてまたは他の薬剤と併用して有効であろう。臨床試験は、種々の形態の抑鬱病を治療するための天然エストロゲン、１７β−エストラジオールの効能を証明した。参考文献：Ｓｃｈｍｉｄｔ  ＰＪ，Ｎｉｅｍａｎ  Ｌ，Ｄａｎａｃｅａｕ  ＭＡ，Ｔｏｂｉｎ  ＭＢ，Ｒｏｃａ  ＣＡ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＪＨ，Ｒｕｂｉｎｏｗ  ＤＲ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐｅｒｉｍｅｎｏｐａｕｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ：ａ  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｒｅｐｏｒｔ．Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １８３：４１４−２０，２０００；およびＳｏａｒｅｓ  ＣＮ，Ａｌｍｅｉｄａ  ＯＰ，Ｊｏｆｆｅ  Ｈ，Ｃｏｈｅｎ  ＬＳ．Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｉｎ  ｐｅｒｉｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ：ａ  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．Ａｒｃｈ  Ｇｅｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．５８：５３７−８，２００１；これらの文献は参照によって本発明に含まれるものとする。Ｂｅｔｈｅａら（Ｌｕ  ＮＺ，Ｓｈｌａｅｓ  ＴＡ，Ｇｕｎｄｌａｈ  Ｃ，Ｄｚｉｅｎｎｉｓ  ＳＥ，ＬｙＩｅ  ＲＥ，Ｂｅｔｈｅａ  ＣＬ．Ｏｖａｒｉａｎ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｍｉｄｂｒａｉｎ  ｏｆ  ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  １１：２５７−６７，１９９９，この文献は参照によって本発明に含まれる）は、背側縫線核に集中したセロトニン含有細胞中のセロトニン合成の調節を介してエストロゲンの抗抑鬱活性が調節され得ることを示唆した。
【００２６】
本発明の別の実施態様は、上記の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量で哺乳動物に投与することによってその必要がある哺乳動物の不安を治療または予防する方法である。不安のような情動プロセスの変調にエストロゲン受容体が果す役割は当業界で記載されている。参考文献：Ｋｒｅｚｅｌ，Ｗ．，ら，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｎｘｉｅｔｙ  ａｎｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００１  Ｏｃｔ  ９；９８（２１）：１２２７８−８２。
【００２７】
本発明の別の実施態様は、炎症または炎症性腸疾患を治療または予防する方法である。クローン病および潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患は、腸（ｂｏｗｅｌ）が炎症を生じ、腹部痙攣および下痢をしばしば繰り返す慢性障害である。炎症および炎症性腸疾患の治療にエストロゲン受容体モジュレーターを使用することは当業界で記載されている。参考文献：Ｈａｒｒｉｓ，Ｈ．Ａ．ら，“Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−β  Ａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，”  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１４４，Ｎｏ．１０  ４２４１−４２４９。
【００２８】
本発明の別の実施態様は、高血圧を治療または予防する方法である。エストロゲン受容体ベータは血管機能および血圧の調節に１つの役割を有すると報告されている。参考文献：Ｚｈｕら，“Ａｂｎｏｒｍａｌ  Ｖａｃｕｌａｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  Ｅｓｔｒｇｏｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒβ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ  ２９５，Ｉｓｓｕｅ  ５５５４，５０５−５０８，１８  Ｊａｎｕａｒｙ  ２００２。
【００２９】
本発明の別の実施態様は、男性または女性の性機能不全を治療または予防する方法である。性機能不全を治療するためにエストロゲン受容体モジュレーターを使用することは当業界で記載されている。参考文献：Ｂａｕｌｉｅｕ，Ｅ．ら，“Ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ（ＤＨＥＡ），ＤＨＥＡ  ｓｕｌｆａｔｅ，ａｎｄ  ａｇｉｎｇ：Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＤＨＥＡｇｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｔｏ  ａ  ｓｃｏｃｉｏｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ｉｓｓｕｅ，”  ＰＮＡＳ，Ａｐｒｉｌ  １１，２０００，Ｖｏｌ．９７，Ｎｏ．８，４２７９−４２８２；Ｓｐａｒｋ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｆ．，“Ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ：ａ  ｓｐｒｉｎｇｂｏａｒｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｆｏｒ  ｆｅｍａｌｅ  ｓｅｘｕａｌｉｔｙ，”  Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ，Ｖｏｌ．７７，Ｎｏ．４，Ｓｕｐｐｌ  ４，Ａｐｒｉｌ  ２００２，Ｓ１９−２５。
【００３０】
本発明の別の実施態様は、網膜変性を治療または予防する方法である。エストロゲンは進行型の加齢関連黄斑変性の危険を低下させるという有益な効果を有することが判明した。参考文献：Ｓｎｏｗ，Ｋ．Ｋ．ら，“Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｈｏｒｍｏｎａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ，”  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３４，Ｉｓｓｕｅ  ６，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００２，ｐｐ．８４２−４８。
【００３１】
本発明の代表例は、その必要がある哺乳動物の骨粗鬆症の治療または予防用医薬の製造にデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを使用することである。本発明のまた別の代表例は、骨減量、骨吸収、骨折、転移性骨疾患またはエストロゲン機能に関係した障害の治療または予防用医薬の製造にデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを使用することである。
【００３２】
本発明のデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールは哺乳動物、好ましくはヒトに、単独で投与することができ、または好ましくは、標準的製薬方法に従って医薬的に許容される担体または希釈剤および場合によってはミョウバンのような公知のアジュバントと組合せた医薬組成物として投与することもできる。化合物は、経口的または非経口的に、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸内および表在的投与経路で投与できる。
経口使用される錠剤の場合、常用の担体は、ラクトースおよびトウモロコシデンプンを含み、また、普通はステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤が添加される。カプセル形態の経口投与の場合、有用な希釈剤はラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンである。
【００３３】
本発明の治療用化合物を経口投与する場合、選択された化合物を例えば錠剤もしくはカプセルの形態で、または、水溶液もしくは懸濁液として投与するとよい。錠剤またはカプセルの形態で経口投与する場合、有効薬物成分を医薬的に許容される無毒の不活性経口担体、例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどと組合せることができる。液体形態で経口投与する場合、経口薬物成分をエタノール、グリセロール、水などのような医薬的に許容される無毒の不活性経口担体のいずれかと組合せることができる。さらに、所望または所要の場合、適当な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤を混合物に含有させてもよい。適当な結合剤は、デンプン、ゼラチン、グルコースまたはベータ−ラクトースのような天然の糖、トウモロコシ甘味料、アラビアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウムのような天然および合成のガム、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸ナトリウム、ワックスなどである。これらの剤形に使用される滑沢剤は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどである。崩壊剤の非限定例は、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどである。経口使用するための水性懸濁液が必要なときには、有効成分を乳化剤および懸濁化剤と組合せる。所望の場合には、ある種の甘味料または着香料を添加してもよい。筋肉内、腹腔内、皮下および静脈内に使用するためには、有効成分の滅菌溶液を常法で調製し、溶液のｐＨを適正に調節して緩衝する必要がある。静脈内使用するためには、調製物が等張性になるように溶質の全濃度をコントロールする必要がある。
【００３４】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールはまた、小さい単層状小胞、大きい単層状小胞および多層状小胞のようなリポソームデリバリーシステムの形態で投与できる。リポソームはコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンのような様々なリン脂質から形成できる。
【００３５】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールはまた、化合物分子が結合する独立担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達してもよい。本発明の化合物はまた、ターゲット指向性薬物担体となる可溶性ポリマーに結合させてもよい。このようなポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルタミド−フェノールまたはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリシンなどである。更に、本発明の化合物は、薬物の調節放出を行うために有用な生分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、および、ヒドロゲルの架橋または両親媒性コポリマーに結合させてもよい。
【００３６】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールはまた、骨減量、骨折、骨粗鬆症、転移性骨疾患、ページェット病、歯周病、軟骨変性、子宮内膜症、子宮線維腫、のぼせ、ＬＤＬコレステロールレベル上昇、心血管疾患、認識機能の損傷、大脳変性障害、再発狭窄症、女性化乳房、血管平滑筋細胞増殖、肥満、失禁、不安、エストロゲン欠乏が原因の抑鬱、炎症、炎症性腸疾患、および、癌特に乳癌、子宮癌および前立腺癌の治療または予防に有効な公知の薬剤と併用し得る。本文中に開示した障害の治療または予防に有効な他の薬剤と本発明に開示した化合物との組合せは本発明の範囲内である。平均的な技量の当業者は、関与する薬物および疾患の個々の特徴に基づいて有用な薬剤の組合せを鑑別できるであろう。このような薬剤を以下に挙げる：有機ビスホスホネート；カテプシンＫインヒビター；エストロゲンまたはエストロゲン受容体モジュレーター；アンドロゲン受容体モジュレーター；破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼのインヒビター；ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビター；インテグリン受容体アンタゴニスト；ＰＴＨのような骨芽細胞同化促進剤；カルシトニン；ビタミンＤまたは合成ビタミンＤ類似体；選択的セロトニン再吸収インヒビター類（ＳＳＲＩｓ）；アロマターゼインヒビター；並びに医薬的に許容されるそれらの塩および混合物。好ましい組合せは本発明の化合物と有機ビスホスホネートである。別の好ましい組合せは本発明の化合物とカテプシンＫインヒビターである。別の好ましい組合せは本発明の化合物とエストロゲンである。別の好ましい組合せは本発明の化合物とアンドロゲン受容体インビターである。別の好ましい組合せは本発明の化合物と骨芽細胞同化促進剤である。
【００３７】
“有機ビスホスホネート”の非限定例は、化学式
【００３８】
【化１】
2008504263.tif 000003
の化合物であり、式中の、ｎは０−７の整数であり、ＡおよびＸは独立に、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ２、ＳＨ、フェニル、Ｃ１−３０アルキル、Ｃ３−３０分枝状または環状アルキル、２または３個のＮを含有している二環式環構造、Ｃ１−３０置換アルキル、Ｃ１−１０アルキル置換ＮＨ２、Ｃ３−１０分枝状または環状アルキル置換ＮＨ２、Ｃ１−１０ジアルキル置換ＮＨ２、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキル置換チオ、チオフェニル、ハロフェニルチオ、Ｃ１−１０アルキル置換フェニル、ピリジル、フラニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニルおよびベンジルから成るグループから選択され、但し、ｎが０のときはＡおよびＸの双方がＨまたはＯＨから選択されることはなく、または、ＡとＸとはそれらが結合している１つまたは複数の炭素原子と共にＣ３−１０環を形成している。
【００３９】
上記化学式中で、アルキル基は、化学式に十分な数の原子が選択されている限り、直鎖状、分枝状または環状のいずれでもよい。Ｃ１−３０置換アルキルは、多様な置換基を含むことができ、その非限定例は、フェニル、ピリジル、フラニル、ピロリジニル、イミダゾニル、ＮＨ２、Ｃ１−１０ジアルキル置換ＮＨ２、ＯＨ、ＳＨおよびＣ１−１０アルコキシから成るグループから選択されたものを含む。
【００４０】
上記の化学式はまた、ＡまたはＸ置換基に複合炭素環、芳香族およびヘテロ原子構造を含んでもよい。その非限定例は、ナフチル、キノリル、イソキノリル、アダマンチルおよびクロロフェニルチオである。
【００４１】
ビスホスホネートの医薬的に許容される塩および誘導体も本発明に有用である。塩の非限定例は、アルカリ金属、アルカリ性金属、アンモニウム、モノ−、ジ−、トリ−またはテトラ−Ｃ１−３０アルキル置換アンモニウムから成るグループから選択されたものである。好ましい塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアンモニウム塩から成るグループから選択されたものである。ナトリウム塩がより好ましい。誘導体の非限定例は、エステル、水和物およびアミドから成るグループから選択されたものを含む。
【００４２】
本発明の治療薬に関連して本文中に使用した“ビスホスホネート”および“ビスホスホネート類”という用語が、ジホスホネート、ビホスホン酸およびジホスホン酸ならびにこれらの物質の塩および誘導体を含意することに注目されたい。特別な指示がない限り、ビスホスホネートまたはビスホスホネート類に関する特定の命名法の使用は本発明の範囲を限定することを意味しない。
【００４３】
ビスホスホネート類の非限定例は、アレンドロネート、シマドロネート、クロドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、インカドロネート、ミノドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、パミドロネート、ピリドロネート、リセドロネート、チルドロネートおよびゾレンドロネートならびに医薬的に許容されるそれらの塩およびエステルである。特に好ましいビスホスホネートはアレンドロネート、特にアレンドロン酸のナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムまたはアンモニウム塩である。好ましいビスホスホネートの代表例は、アレンドロン酸のナトリウム塩、特にアレンドロン酸の水和ナトリウム塩である。塩は整数モル数の水で水和されてもよくまたは非整数モル数の水で水和されてもよい。さらに好ましいビスホスホネートの代表例は、アレンドロン酸の水和ナトリウム塩、特に水和塩がアレンドロネートモノナトリウム三水和物の場合である。
【００４４】
有機ビスホスホネートの正確な投与量は投与スケジュール、選択された個々のビスホスホネート、哺乳動物またはヒトの年齢、体格、性別および状態、治療すべき障害の種類および重篤度に応じて変更されるであろう。ヒトの場合、ビスホスホネートの経口有効用量は、典型的には体重基準で約１．５−約６０００μｇ／ｋｇ、好ましくは体重基準で約１０−約２０００μｇ／ｋｇである。代替的な投与計画では、ビスホスホネートを毎日ではない間隔で投与でき、例えば、週１回の投与、週２回の投与、隔週の投与、月２回の投与などでもよい。週１回の投与計画では、アレンドロネートモノナトリウム三水和物を３５ｍｇ／週または７０ｍｇ／週の用量で投与する。ビスホスホネートはまた、月１回、６ヵ月毎、年１回、または、もっと少ない頻度で投与してもよい。国際特許ＷＯ０１／９７７８８（２００１年１２月２７日公開）およびＷＯ０１／８９４９４（２００１年１１月２９日公開）参照。
【００４５】
“エストロゲン”の非限定例は、天然産生エストロゲン［７−エストラジオール（Ｅ２）、エストロン（Ｅ１）およびエストリオール（Ｅ３）］、合成共役エストロゲン、経口避妊薬および硫酸化エストロゲンを含む。参考文献Ｇｒｕｂｅｒ  ＣＪ，Ｔｓｃｈｕｇｇｕｅｌ  Ｗ，Ｓｃｈｎｅｅｂｅｒｇｅｒ  Ｃ，Ｈｕｂｅｒ  ＪＣ，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ”  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００２  Ｊａｎ  ３１；３４６（５）：３４０−５２。
【００４６】
“エストロゲン受容体モジュレーター”は、メカニズムにかかわりなく、受容体へのエストロゲンの結合を妨害または阻害する化合物を表す。エストロゲン受容体モジュレーターの非限定例は、エストロゲン、プロゲストゲン、エストラジオール、ドロロキシフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、ＴＳＥ−４２４、タモキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６である。
【００４７】
“カテプシンＫインヒビター”は、システインプロテアーゼカテプシンＫの活性を妨害する化合物を表す。カテプシンＫインヒビターの非限定例は、Ａｘｙｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＰＣＴ出願公開ＷＯ００／５５１２６およびＭｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｃａｎａｄａ  ＆  Ｃｏ．とＡｘｙｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓの国際特許ＷＯ０１／４９２８８に見出される。
【００４８】
“アンドロゲン受容体モジュレーター”は、メカニズムにかかわりなく、受容体へのアンドロゲンの結合を妨害または阻害する化合物を表す。アンドロゲン受容体モジュレーターは、フィナステリドおよびその他の５α−レダクターゼインヒビター、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾールおよびアビラテロンアセテートである。
【００４９】
“破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼのインヒビター”は、破骨細胞の尖端膜に見出され骨吸収プロセスに重要な役割を果すと報告されたプロトンＡＴＰアーゼのインヒビターを表す。このプロトンポンプは、骨粗鬆症および関連代謝疾患の治療および予防に有効となるはずの骨吸収インヒビターの設計に最適のターゲットを表す。参考文献：Ｃ．Ｆａｒｉｎａら“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｖａｃｕｏｌａｒ  ｐｒｏｔｏｎ  ＡＴＰａｓｅ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｂｏｎｅ  ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ，”ＤＤＴ，４：１６３−１７２（１９９９）。この文献はその記載内容全体が参照によって本発明に含まれるものとする。
【００５０】
“ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター”は３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼのインヒビターを表す。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有している化合物は、当業界で公知のアッセイを使用して容易に同定できる。例えば、米国特許第４，２３１，９３８号、コラム６および国際特許ＷＯ８４／０２１３１、ｐｐ．３０−３３に記載または引用されたアッセイを参照するとよい。本文中に使用した用語“ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター”および“ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビター”は同義である。
【００５１】
使用できるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの非限定例は、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（ＲＴＭ）；米国特許Ｎｏｓ．４，２３１，９３８、４，２９４，９２６および４，３１９，０３９参照）、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（ＲＴＭ）；米国特許Ｎｏｓ．４，４４４，７８４、４，８２０，８５０および４，９１６，２３９参照）、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（ＲＴＭ）；米国特許Ｎｏｓ．４，３４６，２２７、４，５３７，８５９、４，４１０，６２９、５，０３０，４４７および５，１８０，５８９参照）、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（ＲＴＭ）；米国特許Ｎｏｓ．５，３５４，７７２、４，９１１，１６５、４，９２９，４３７、５，１８９，１６４、５，１１８，８５３、５，２９０，９４６および５，３５６，８９６参照）、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（ＲＴＭ）；米国特許Ｎｏｓ．５，２７３，９９５、４，６８１，８９３、５，４８９，６９１および５，３４２，９５２参照）およびセリバスタチン（リバスタチン、ＢＡＹＣＨＯＬ（ＲＴＭ）としても知られる；米国特許Ｎｏ．５，１７７，０８０参照）。本発明方法に使用し得るこれらのおよびその他のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの構造式は、Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ，“Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ”，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｐｐ．８５−８９（１９９６年２月５日）の８７ページならびに米国特許Ｎｏｓ．４，７８２，０８４および４，８８５，３１４に記載されている。本文中に使用したＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターという用語は、医薬的に許容されるすべてのラクトンおよび開酸形態（即ち、ラクトン環が開いて遊離酸を形成している場合）ならびにＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有している化合物の塩およびエステル形態を含み、従って、このような塩、エステル、開酸、ラクトン形態の使用が本発明の範囲に包含される。ラクトン部分およびその対応する開酸形態を以下の構造ＩおよびＩＩで示す。
【００５２】
【化２】
2008504263.tif 000004
【００５３】
開酸形態が存在できるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターにおいては、塩およびエステル形態が開酸形態から好ましく形成でき、このような形態のすべてが本文中に使用した“ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター”という用語の意味に含まれる。好ましくは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターがロバスタチンおよびシンバスタチンから選択され、最も好ましくはシンバスタチンである。本文中でＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターに関連して使用した“医薬的に許容される塩”という用語は、一般に遊離酸を有機または無機の適当な塩基と反応させることによって製造され本発明の化合物に使用される無毒性塩を意味する。特に、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛およびテトラメチルアンモニウムのようなカチオンから形成される塩、並びに、アンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、１−ｐ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イル−メチルベンズ−イミダゾール、ジエチルアミン、ピペラジン、および、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンのようなアミンから形成される塩がある。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの塩形態の別の非限定例は、酢酸塩、ベンゼスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カムシラート、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エディシラート、エストラート、エシラート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシル酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシラート、メチル硫酸塩、ムコ酸塩、ナプシラート、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、亜酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクラート、トシラート、トリエチヨージドおよび吉草酸塩である。
【００５４】
記載のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター化合物のエステル誘導体は、温血動物の血流に吸収されると開裂して薬物形態を遊離し、薬物がより高い治療効能を発揮するプロドラッグとして作用し得る。
【００５５】
上記に使用した“インテグリン受容体アンタゴニスト”は、αｖβ３インテグリンへの結合が生理的リガンドと選択的に拮抗、阻害または対抗する化合物、αｖβ５インテグリンへの結合が生理的リガンドと選択的に拮抗、阻害または対抗する化合物、αｖβ３インテグリンおよびαｖβ５インテグリンの双方への結合が生理的リガンドと選択的に拮抗、阻害または対抗する化合物、および、毛様内皮細胞上で発現された特定のインテグリン（類）の活性に拮抗、阻害または対抗する化合物を表す。この用語はまた、αｖβ６、αｖβ８、α１βｌ、α２βｌ、α５βｌ、α６βｌおよびα６β４インテグリンのアンタゴニストを表す。この用語はまた、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１βｌ、α２βｌ、α５βｌ、α６βｌおよびα６β４インテグリンのアンタゴニストを表す。Ｈ．Ｎ．Ｌｏｄｅと彼の共同研究者はＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９６：１５９１−１５９６（１９９９）において、自発的腫瘍転移を根絶するための抗脈管形成性αｖインテグリンアンタゴニストと腫瘍特異的抗体−サイトカイン（インターロイキン−２）融合タンパク質との相乗効果を観察した。かれらの結果は、この組合せに癌および転移性腫瘍増殖の治療能力が潜在することを示唆した。αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニストは、現用のすべての薬物のメカニズムとは異なる新しいメカニズムによって骨吸収を阻害する。インテグリンは細胞−細胞相互作用および細胞−マトリックス相互作用に介在するヘテロダイマー型トランスメンブラン接着受容体である。αおよびβインテグリンサブユニットは、非共有結合的に相互作用し、二価カチオン依存的に細胞外マトリックスリガンドに結合する。破骨細胞に最も豊富なインテグリンは、αｖβ３（＞１０７／破骨細胞）であり、細胞の移動および分極に重要な細胞骨格組織化の律速機能を果すと考えられる。αｖβ３の拮抗作用は、骨吸収の阻害、再発狭窄症の阻害、黄斑変性の阻害、関節炎の阻害、および、癌や転移性増殖の阻害から選択される。
【００５６】
“骨芽細胞同化促進剤”は、ＰＴＨのような骨を造成する薬剤を表す。上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）またはそのアミノ末端フラグメントおよび類似体の断続的投与は、骨減量を防止、停止、部分的に逆行させ、動物およびヒトの骨形成を刺激することが判明した。これに関しては、Ｄ．Ｗ．Ｄｅｍｐｓｔｅｒら，“Ａｎａｂｏｌｉｃ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｎ  ｂｏｎｅ，”  Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｖ  １４：６９０−７０９（１９９３）に論議されている。複数の研究が、骨形成を刺激しこれによって骨の質量および強度を増加する上皮小体ホルモンの臨床効果を証明した。結果は、ＲＭ  Ｎｅｅｒらによって、Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４４  １４３４−１４４１（２００１）に報告された。
【００５７】
更に、ＰＴＨｒＰ−（１−３６）のような上皮小体ホルモン近縁のタンパク質フラグメントまたは類似体は、強力な抗カルシウム尿効果を示し［Ｍ．Ａ．Ｓｙｅｄら，“Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ−（ｌ−３６）  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｒｅｎａｌ  ｔｕｂｕｌａｒ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｒｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍｏｒａｌ  ｈｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ，”  ＪＣＥＭ  ８６：１５２５−１５３１（２００１）］、また、骨粗鬆症治療用同化促進剤の能力を潜在させている。
【００５８】
カルシトニンは、カルシウムおよびリンの代謝に関与することが知られた主として甲状腺から産生される３２アミノ酸のペプチドである。カルシトニンは、破骨細胞の活性を阻害することによって骨吸収を抑制する。従って、カルシトニンは骨芽細胞をより効果的に機能させ骨を造成する。
【００５９】
“ビタミンＤ”は、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）およびビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を含むがこれらに限定されない。これらは、ビタミンＤのヒドロキシル化生物活性代謝産物：ｌα−ヒドロキシビタミンＤ；２５−ヒドロキシビタミンＤおよびｌα，２５−ジヒドロキシビタミンＤの生物学的に不活性の天然産生前駆物質である。ビタミンＤ２およびビタミンＤ３はヒト体内で同じ生物学的効能を有している。ビタミンＤ２またはＤ３は循環にはいると、シトクロムＰ４５０−ビタミンＤ−２５−ヒドロキシラーゼによってヒドロキシル化されて２５−ヒドロキシビタミンＤとなる。２５−ヒドロキシビタミンＤ代謝産物は、生物学的に不活性であり、腎臓でシトクロムＰ４５０−モノオキシゲナーゼ、２５（ＯＨ）Ｄ−１α−ヒドロキシラーゼによってさらにヒドロキシル化されて１，２５−ジヒドロキシビタミンＤとなる。血清カルシウムが減少すると、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）の産生量が増加し、これがカルシウムホメオスタシスを調節し、２５−ヒドロキシビタミンＤから１，２５−ジヒドロキシビタミンＤへの変換を増進することによって血漿カルシウムレベルを上げる。
【００６０】
カルシウムおよび骨の代謝作用に対するビタミンＤの効果は１，２５−ジヒドロキシビタミンＤに因ると考えられる。１，２５−ジヒドロキシ代謝産物は、カルシウム吸収および骨格団結を維持するために必要な活性ホルモンである。カルシウムホメオスタシスは、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤが単球幹細胞を誘発して破骨細胞に分化させカルシウムを正常範囲に保つことによって維持される。その結果として骨表面にカルシウムヒドロキシアパタイトが沈着して骨のミネラル化が生じる。参考文献：Ｈｏｌｉｃｋ，ＭＦ，Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＤｅＧｒｏｏｔ  Ｌ，Ｂｅｓｓｅｒ  Ｈ，Ｂｕｒｇｅｒ  ＨＧら，ｅｄｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄｅｄ．，９９０−１０１３（１９９５）。しかしながら、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のレベルが上昇すると、その結果として血中のカルシウム濃度が増加し、骨代謝によるカルシウム濃度の異常コントロールが生じて高カルシウム血症になる。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３はまた、骨代謝における破骨活性を間接的に調節し、そのレベル上昇は骨粗鬆症において過剰な骨吸収を増進すると予想される。
【００６１】
“合成ビタミンＤ類似体”は、ビタミンＤ同様に作用する天然産生でない化合物を包含する。
【００６２】
選択的セロトニン再吸収インヒビターは、大脳中のセロトニンの量を増加させることによって作用する。米国では１０年前からＳＳＲＩを抑鬱の治療に使用して成功を収めている。ＳＳＲＩの非限定例には、フルオキセチン、パロキセチン、セルトラリン、シタロプラムおよびフルボキサミンがある。ＳＳＲＩはまた、月経前症候群および月経前異形性障害のようなエストロゲン機能に関係した障害の治療に使用されている。参考文献：Ｓｕｎｄｓｔｒｏｍ−Ｐｏｒｏｍａａ  Ｉ，Ｂｉｘｏ  Ｍ，Ｂｊｏｒｎ  Ｉ，Ｎｏｒｄｈ  Ｏ．，“Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ  ｔｏ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｅｍｅｎｓｔｒｕａｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎａｅｃｏｌ  ２０００  Ｄｅｃ；２１（４）：２０５−ｌｌ。
【００６３】
本文中に使用した“アロマターゼインヒビター”という用語は、アロマターゼを阻害できる化合物、例えば、アミノグルテミド（ＣＹＴＡＮＤＲＥＮ（ＲＴＭ））、アナストラゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（ＲＴＭ））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（ＲＴＭ））、フォルメスタン（ＬＥＮＡＴＲＯＮ（ＲＴＭ））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（ＲＴＭ））、アタメスタン（ｌ−メチルアンドロスタ−ｌ，４−ジエン−３，１７−ジオン）、ファドロゾール（４−（５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［ｌ，５−ａ］ピリジン−５−イル）−ベンゾニトリル，モノ塩酸塩）、フィンロゾール（４−（３−（４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−プロピル）−ベンゾニトリル）、ボロゾール（６−［（４−クロロフェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルメチル］−１−メチル−１Ｈ−ベンゾトリアゾール）、ＹＭ−５１１（４−［Ｎ−（４−ブロモベンジル）−Ｎ−（４−シアノフェニル）アミノ］−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール）などのような市販のインヒビターを包含する。
【００６４】
固定用量剤（ｆｉｘｅｄ  ｄｏｓｅ）として配合されたとき、このような組合せ製品には、本発明のデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールが以下に記載の用量範囲内で使用され、他の医薬的に活性の（１種類または複数の）薬剤がその認可用量範囲内で使用される。あるいはこのような組合せ配合物が適切でないときには本発明の化合物を医薬的に許容される公知の（１種類または複数の）薬剤と順次に使用してもよい。
【００６５】
本発明の化合物に関して使用された“投与”という用語およびその変形（例えば、化合物を“投与する”）は、治療を要する動物の系に化合物または化合物のプロドラッグを導入することを意味する。本発明の化合物またはそのプロドラッグが１種または複数の別の活性薬剤（例えば、ビスホスホネートなど）と組合せて提供されるとき、“投与”およびその変形の各々は化合物またはそのプロドラッグと別の薬剤との同時および順次の導入を包含すると理解されたい。本発明はその範囲内に本発明の化合物のプロドラッグを含む。一般にこのようなプロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで所要化合物に容易に変換できる本発明の化合物の機能的誘導体であろう。従って、本発明の治療方法において、“投与する”という用語は、具体的に開示した化合物によってまたは具体的に開示しないが患者に投与された後で特定した化合物にｉｎ  ｖｉｖｏで変換する化合物によって記載した様々の状態を治療することを包含する。適当なプロドラッグ誘導体を選択および調製する慣用の手順は例えば“Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，”  ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。該文献の記載内容全部が参照によって本発明に含まれるものとする。これらの化合物の代謝産物は、本発明の化合物を生物環境に導入したときに産生された活性種を含む。
【００６６】
本発明はまた、治療有効量のデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを医薬的に許容される担体または稀釈剤を伴うかまたは伴わずに投与する段階を含む、骨粗鬆症またはその他の骨障害の治療に有用な医薬組成物を包含する。本発明の好適な医薬組成物は、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールと生理食塩水のような薬理学的に許容される担体とを含む例えばｐＨレベル７．４の水溶液である。溶液は局部ボーラス注射によって患者の血流に導入し得る。
【００６７】
本発明の化合物をヒト患者に投与するとき、１日用量は処方する医師によって決定されるのが普通であり、この用量は一般に、個々の患者の年齢、体重およびレスポンスや患者の症状の重篤度次第で変更される。
【００６８】
１つの代表的用途では、適正量の化合物を治療対象の哺乳動物に投与する。指示された効果を得るために使用されるとき、本発明の経口用量は、１日あたり体重基準で約０．０１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／日）から約１００ｍｇ／ｋｇ／日までの範囲、好ましくは０．０１−１０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．１−５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であろう。経口投与の場合には治療対象患者の症状次第で用量を調節できるように、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００および５００ミリグラムの有効成分を含有する錠剤の形態で組成物を提供するのが好ましい。医薬は典型的には約０．０１ｍｇ−約５００ｍｇの有効成分、好ましくは約１ｍｇ−約１００ｍｇの有効成分を含有している。静脈内投与の場合には、最も好ましい用量は一定速度の注入中に約０．１−約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲であろう。デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールには、１日用量を１回で投与してもよく、全１日用量を１日に２、３または４回に分割して投与してもよいという利点がある。さらに、デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールは適当な鼻腔内ビヒクルの表在使用を介して鼻腔内形態で投与してもよく、または、平均的な技量の当業者に周知の経皮貼付薬の形態を使用して経皮経路で投与してもよい。経皮デリバリーシステムの形態で投与する場合にはもちろん、投与計画期間の用量投与は断続的でなく連続的であろう。
【００６９】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールは、エストロゲンが介在する状態の治療に有用な他の薬剤と併用できる。このような組合せの個々の成分は、治療過程で別々の時点で投与してもよく、または、別々の形態もしくは組合せた単一形態で同時に投与してもよい。従って本発明は、このような同時的または交互的な治療方式をすべて包含しており、“投与する”という用語もそれに応じて解釈されるべきであることを理解されたい。デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールとエストロゲンが介在する状態の治療に有用な他の薬剤との組合せの範囲が、原則としてエストロゲン機能に関係した障害の治療に有用ないかなる医薬組成物との組合せをも包含することは理解されよう。
【００７０】
従って本発明の範囲は、有機ビスホスホネート；カテプシンＫインヒビター；エストロゲン；エストロゲン受容体モジュレーター；アンドロゲン受容体モジュレーター;破骨細胞プロトンＡＴＰアーゼのインヒビター；ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビター；インテグリン受容体アンタゴニスト；骨芽細胞同化促進物質；カルシトニン；ビタミンＤ；合成ビタミンＤ類似体；選択的セロトニン再吸収インヒビター；アロマターゼインヒビターおよび医薬的に許容されるそれらの塩および混合物から選択された第二薬剤と組合せたデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールの使用を包含する。
【００７１】
本発明のこれらの目的およびその他の目的は本文中の教示から明らかであろう。
【００７２】
定義
本文中に使用した“組成物”という用語は、特定した成分を特定した量で含む製品、および、特定した量の特定した成分の組合せから直接または間接に得られたすべての製品を含意する。
【００７３】
本文中に使用した“治療有効量”という用語は、組織、系、動物またはヒト体内に研究者、獣医師、内科医または他の臨床医が求める生物学的または医学的レスポンスを誘発する活性化合物または医薬剤の量を意味する。
【００７４】
本文中に使用した疾病“を治療する”または疾病の“治療”という用語は、疾病の予防、即ち、疾病に曝されたかまたは病因素質はあるけれども疾病症状をまだ経験しないかまたは示さない哺乳動物で疾病の臨床症状を進行させないこと；疾病の阻止、即ち、疾病またはその臨床症状の進行を停止または減速すること；または、疾病の軽減、即ち、疾病またはその臨床症状の退行を生じさせること、を含む。
【００７５】
本文中に使用した“骨吸収”という用語は、破骨細胞が骨を分解するプロセスを表す。
【００７６】
デルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを使用する投与計画は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および病状；治療すべき状態の重篤度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；ならびに、使用される特定化合物またはその塩、のような様々な要因に従って選択される。平均的な技量の内科医、獣医師または臨床医は状態の進行を防止、対抗または停止させるために必要な薬剤の有効量を容易に決定し処方できる。
【００７７】
本発明の方法において、本文中に詳細に記載したデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールは、有効成分を形成でき、典型的には経口錠剤、カプセル、エリキシル剤、シロップなどの所期の投与形態に基づいて適切に選択された適正な医薬稀釈剤、賦形剤または担体（本文中ではまとめて“担体”材料と呼ぶ）と慣用の製薬手順に従って混合されて投与される。本発明の化合物は市販品でもよくまたは当業界で公知の手順に従って調製することもできる。
【００７８】
アッセイ
エストロゲン受容体結合アッセイ
エストロゲン受容体リガンド結合アッセイは、トリチウム化したエストラジオールと組換え発現したエストロゲン受容体との使用を用いるシンチレーション近接アッセイとして設計されている。全長組換えヒトＥＲ−αおよびＥＲ−βタンパク質をバキュロウイルス発現系で産生させる。ＥＲ−αまたはＥＲ−βエキスを、６ｍＭのα−モノチオグリセロールを含有しているリン酸塩緩衝生理食塩水で１：４００に希釈する。希釈受容体調製物の２００μＬのアリコートを９６−ウェルのＦｌａｓｈｐｌａｔｅの各ウェルに加える。プレートをサランラップで覆って４℃で一夜インキュベートする。
【００７９】
翌朝、１０％ウシ血清アルブミンを含有しているリン酸塩緩衝生理食塩水の２０μｌのアリコートを９６ウェルプレートの各ウェルに添加し、４℃で２時間インキュベートする。次に、２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．２）、１ｍＭのＥＤＴＡ、１０％のグリセロール、５０ｍＭのＫＣｌおよび６ｍＭのα−モノチオグリセロールを含有している２００ｕｌのバッファでプレートを洗浄する。これらの受容体被覆プレート中でアッセイを開始するために、９６ウェルプレートの各ウェルに１７８ｕｌの同じバッファを加える。次いで、プレートの各ウェルに２０ｕｌの３Ｈ−エストラジオールの１０ｎＭ溶液を加える。
【００８０】
被験化合物を０．０１ｎＭから１０００ｎＭまでの濃度範囲で鑑定する。被験化合物の予製液は、１００％ＤＭＳＯ中で１００×というアッセイの試験に望ましい最終濃度に調製しなければならない。９６ウェルプレートの試験ウェル中のＤＭＳＯの量は１％を超過してはならない。アッセイプレートに最後に添加するのは、１００％ＤＭＳＯで希釈した被験化合物の２ｕｌアリコートである。プレートを密閉し、次いで室温で３時間平衡させる。９６ウェルプレートをカウントするために配備したシンチレーションカウンターでプレートをカウントする。
【００８１】
実施例１−３の化合物は、ＩＣ５０＝７５−＞１００００ｎｍの範囲でエストロゲン受容体α−サブタイプに結合親和性を示し、ＩＣ５０＝５−２５０ｎｍの範囲でエストロゲン受容体β−サブタイプに結合親和性を示す。
【００８２】
マウス強制水泳試験
２０−２５ｇ重の雄のＳｗｉｓｓ  Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（Ｂａｎｔｉｎ  ａｎｄ  Ｋｉｎｇｍａｎ，Ｈｕｌｌ，ＵＫ）を９匹ずつのグループに分け、湿度および温度を調整した室に入れて餌と水は自由に摂取できるようにした。これらのマウスをｔ０７００時に光源で１２時間毎の明／暗サイクルに維持し、使用前に少なくとも３日間動物を馴化させた。すべての手順は、英国動物法ＵＫ  Ａｎｉｍａｌｓ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）Ａｃｔ（１９８６）およびその付則の指針を遵守して行った。
【００８３】
深さ１４ｃｍまで水（２４−２５℃）を入れたガラスシリンダー（高さ＝２５ｃｍ、直径＝１０ｃｍ）にマウスを入れて試験した。動物が管から脱出を試み、静止し、動き回る（水泳）までに要した時間を１分のタイムビンに５分間記録した。
【００８４】
ＥＲβ選択的アゴニストをゴマ油に溶解する。試験の３０分前に被験化合物を１０ｍＬ／ｋｇの量でＳＣ注射する。強制水泳試験で静止時間を短縮する被験化合物には抑鬱の治療に使用できる可能性が潜在する。
【００８５】
ネズミの大脳プロゲスチン受容体（ＰＲ）ＩＣＣアッセイ
動物への投与および組織採取
販売業者の手で雌のマウス（１２−１６週齢）の卵巣を摘出し（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ販売のＣ５７ＢＬ／６ｓ）、１週後に発送する。Ｍｅｒｃｋ動物病院に到着した動物に大豆非含有の齧歯類飼料を給餌し、この病院にさらに１週間おいて新しい環境に適応させる。０．２ｃｃのビヒクル（２０％エタノール：３０％ポリエチレングリコール：５０％水）または化合物（用量曲線用０．１−３０ｍｐｋ；単回投与実験用１０ｍｐｋ）を午前中にマウスに経口投与する（１日１回で３日間）；エストラジオール１７−ベータはゴマ油中の０．２ｍｐｋで皮下投与する（０．１ｃｃ）。最終投与の約２４時間後、動物をケタミン／キシラジンで深く麻酔し、０．１Ｍのリン酸ナトリウムバッファ（ＰＢ），ｐＨ７．４中の５０ｍｌの３．５％アクロレインおよび２％のパラホルムアルデヒドで心潅流する。大脳を直ちに摘出し、氷冷した０．１ＭのＰＢに入れ、４℃で一夜保存する。０．１ＭのＰＢ中の振動ミクロトーム上で大脳の４０μｍ切片を作製し、凍結保護剤（０．１ＭのＰＢ，ｐＨ７．４中の３０％のショ糖；３０％のエチレングリコール）に移し入れ、免疫組織化学処理を行うまで−２０℃で保存する。
【００８６】
免疫組織化学
自由浮動している４０μｍ切片を低温の０．１Ｍリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ），ｐＨ７．４で洗浄して凍結保護剤を完全に除去する。動物全体への一様な免疫標識を確保するために、底部にふるいの付いた２４ウェル組織ホルダーおよびこれにぴったり合った固体ルーサイトのバッファ収容トレーを使用して実験を行う。従って、実験全期間中にすべての切片が同じ溶液／条件で同時にインキュベートされる。アクロレイン固定組織中の非特異的染色を防止するために、切片をＰＢＳ中の１％ホウ水素化ナトリウム（ＮａＢＨ４）で３０分間洗浄し、ＰＢＳで８−１０回すすぐ。内在ペルオキシダーゼ活性は、ＰＢＳ中の０．３％過酸化水素および１０％メタノールで組織を１５分間洗浄することによって阻害する。切片をＰＢＳで洗浄し、（１）０．０５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ中の２％正常ヤギ血清で１時間ブロックするか、または、（２）マウス−オン−マウスＩｇブロッキング試薬（Ｖｅｃｔｏｒ）で１時間ブロックし、次いで、マウスタンパク質濃縮物（Ｖｅｃｔｏｒ）で３０分間ブロックする。切片を１％正常血清に希釈したブロッキングバッファ中のＰＲ抗体と共に、室温で一夜および４℃で一夜、または、４℃で３夜インキュベートする。２つのＰＲアイソフォームを認識する３つの抗体：（１）ウサギポリクローナル［ＤＡＫＯ，１：２５００］；（２）マウスモノクローナル［Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｂｉｏｒｅａｇｅｎｔｓ，１：７００］；（３）ウサギモノクローナル［Ｌａｂ  Ｖｉｓｉｏｎ，１：４００に希釈した“既製の”ＳＰ２クローン］を使用した。我々が一般的に使用しているのはＳＰ２である。陰性対照切片は一次抗体を含まないバッファ中でインキュベートする。
【００８７】
一次抗体インキュベーション後、切片をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中で種に対して適切なビオチニル化二次抗体（ＩｇＧ）（ポリクローナルに対しては抗ウサギ［１：６００］、モノクローナルに対しては抗マウス［１：２５０］、双方ともＶｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡから入手）およびブロッキング試薬に１時間接触させる。ＰＢＳで数回洗浄後、切片をＰＢＳ中でアビジン−ビオチン複合体（ＡＢＣ  Ｅｌｉｔｅキット，Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に３０分間接触させる。切片をＰＢＳ、次いで、０．１７５Ｍの酢酸ナトリウムバッファ（ｐＨ７．０；Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で洗浄する。０．１７５Ｍの酢酸ナトリウムバッファ中で切片を基質３，３’−ジアミノベンジジンテトラクロリド（ＤＡＢ）、硫酸ニッケルおよび過酸化水素に３分間接触させることによって発色反応を行う。反応生成物は主として細胞核に濃い黒青色の斑点状しみとして出現する。酢酸ナトリウムバッファで１回、ＰＢＳで数回すすいだ後、切片を０．０５ＭのＰＢＳ中でゼラチンコートしたスライドに固定し、一夜風乾し、漸増濃度のエタノールで脱水し、キシレンで透明にし、ＤＰＸ封入培地のカバーグラスで覆う。
【００８８】
分析
全部のスライドについて最初に組織学の品質検査を行う。組織学の表れが少ない大脳はすべて像撮影および分析の前に除去する。各大脳から、背側縫線核の吻側から尾側までの範囲を表す切片を分析用に選択する。各切片から、背側縫線核の腹側正中部分（ステロイド受容体発現性セロトニンニューロンを最高密度で含有する領域）をＮｉｋｏｎ  Ｅ−８００顕微鏡で確認する。この視野をＮｉｋｏｎディジタルカメラ、映像ソフトウェア（ＡＣＴ−Ｉ）で倍率２００×で撮影し、ＰＣに保存する。明白なＰＲ−免疫応答性を示す細胞の数を手持ち細胞カウンターを使用して手動で、または、ＩｍａｇｅＰｒｏＰｌｕｓソフトウェアを指令するＶｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃプログラム（Ａｎｉｌ  Ｔａｒａｃｈａｎｄａｎｉ  ａｎｄ  Ｉによる設計）で定量する。細胞カウント数を、ＣＭＧ統計的ソフトウェア（１元配置ＡＮＯＶＡ，Ｍｅｒｃｋ）を使用して分析する。ビヒクル（陰性対照）グループの平均細胞カウント数を全グループの平均細胞カウント数から減算し、データを“エストロゲン（陽性対照）アゴニズムのパーセント”として表す。
【００８９】
各大脳の海馬を通る切片のＰＲ−免疫応答細胞を観察する。この大脳領域では、ＥＲ−αだけがＰＲ遺伝子を調節する。ビヒクル処置動物では、ＰＲイムノラベルが全く存在しないが、エストロゲン処置マウスは明白な核ＰＲ染色を示す。これを、“−”（染色なし）から“＋＋＋”（濃い明白な核ＰＲ−免疫応答性をもつ細胞を示す）の範囲で定性的に報告する。
【００９０】
ネズミの縫線ＴＰＨ１  ＴａｑＭａｎアッセイ
動物および処置グループ
雌のマウス（１３−１６週齢）の卵巣を摘出する（Ｃ５７／Ｂ１６、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから入手）。動物に大豆非含有齧歯類飼料を給餌し、発送前に外科手術からの回復期間を最低１週間与える。０．１ｃｃのビヒクル（ゴマ油）または化合物（指定化合物を３、１０または２０ｍｐｋ）を午前中にマウスに皮下投与する（１日１回ずつ４日間）。４回目の投与の約６時間後に、マウスをケタミン／キシラジンで深く麻酔し、頭蓋から大脳を摘出し、腹側を上向きにして氷上のマウス大脳ブロックに載せ、氷冷したカミソリ刃を１ｍｍ間隔でブロックに挿入する。第一カミソリ刃を置く解剖マーカーとして海馬の尾側範囲を使用し、吻側に向って継続するスロットに４枚のカミソリ刃を配置する。４つの切片を検査し、背側縫線の最大範囲を含む２つをＲＮＡ−ｌａｔｅｒを収容した管に入れ、４℃で一夜維持する。２４時間後にＲＮＡＬａｔｅｒから大脳切片を取り出し新しい管に入れて−８０℃で保存する。
【００９１】
ネズミのＴＰＨ  ＴａｑＭａｎ（ＲＴＭ）プライマーおよびプローブ配列
ネズミのＴＰＨ１順方向プライマーをｍＴＰＨ−８７４Ｆと命名する。その対応配列は：５’−ＣＡＣ  ＡＧＴ  ＴＣＡ  ＧＡＴ  ＣＣＣ  ＣＴＣ  ＴＡＣ  ＡＣＴ−３’であり、これはヌクレオチド８７４から８９７までの範囲である。ネズミのＴＰＨ１逆方向プライマーはｍＴＰＨ−９６２Ｒと命名され、その対応配列は：５’−ＧＣＡ  ＡＡＡ  ＣＴＧ  ＧＧＴ  ＴＣＡ  ＧＣＣ  ＡＡ−３’であり、これはヌクレオチド９４３から９６２までの範囲である。ネズミのＴＰＨ１プローブはｍＴＰＨ−９２６Ｔと命名され、その対応配列は：５’−ＡＧＧ  ＡＧＴ  ＴＣＡ  ＴＧＧ  ＣＡＧ  ＧＴＧ  ＴＣＴ  ＧＧＣ  ＴＣＴ−３’であり、これはヌクレオチド９００から９２６までの範囲である。これらのプライマーおよびプローブを設計するためにネズミのＴＰＨ１  ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｊ０４７５８を参照した。従ってヌクレオチド番号はこの配列に基づいて付けたものである。
【００９２】
ネズミの縫線切片からのＴａｑｍａｎ（ＲＴＭ）分析用全ＲＮＡの単離
切片を−８０℃から取り出し、ＦａｓｔＰｒｅｐ（ＲＴＭ）プロセシング管に入れた１．０ｍｌのＴＲＩゾール試薬に入れる。ＦａｓｔＰｒｅｐ（Ｒ）１２０ホモジナイザー中でビーズマトリックスと共にＬｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｄ管を使用し、切片に設定６で３０秒間の処理を１回行い、次いで全部のサンプルを処理した後で設定６で２０秒間の処理を行って均質化する。サンプルを室温で５分間静置して核タンパク質複合体を完全に解離させ、次いでサンプルを４℃、１２，０００×ｇで５分間遠心する。ホモジェネートを１．５ｍｌ容の微量遠心管に移し、１００μｌのＢＣＰ（ブロモ−３−クロロプロパン）を添加し、サンプルを１５秒間渦流させ、室温で２−３分間静置する。サンプルを４℃、１２，０００×ｇで１５分間遠心する。水相を取り出して、ＲＮＡアーゼ非含有の１．５ｍｌ容の新しい微量遠心管に入れる。５μｌの５ｍｇ／ｍ１のグリコーゲンを各サンプルに添加し、サンプルを渦流させる。５００μｌのイソプロパノールを各サンプルに添加し、サンプルを１５秒間渦流させ、室温で１０分間静置し、次いで、４℃、１２，０００×ｇで１５分間遠心する。上清を傾瀉し、５００μｌの氷冷した７５％エタノールでペレットを洗浄する。サンプルを４℃、１２，０００×ｇで１５分間遠心し、エタノールを傾瀉し、ペレットを１０分間風乾する。ペレットを３０μｌの予温したＲＮＡＳｅｃｕｒｅ（６０℃）に再懸濁させ、サンプルを６０℃で１０分間加熱する。ＤＮＡアーゼ処理およびｃＤＮＡ合成を行うまでサンプルを−８０℃で保存する。
【００９３】
ｗｔネズミの縫線切片由来のＴａｑｍａｎ（ＲＴＭ）分析用全ＲＮＡによるＤＮＡアーゼ処理およびｃＤＮＡ合成：
ＤＮＡ非含有キット（Ａｍｂｉｏｎ）を使用するＤＮＡアーゼ処理
全ＲＮＡサンプルの５μｇのアリコートを９６ウェルプレートの各ウェルに入れる。１×のＤＮアーゼＩ溶液を各サンプルに加える（ＤＮアーゼＩバッファ、ＤＮアーゼＩ、Ｈ２Ｏ）。反応混合物を混ぜ合せ、３７℃で３０分間インキュベートする。ＤＮアーゼＩ不活化試薬ビーズを加えて反応混合物を失活させ、室温で３分間よく混ぜ合せ、４℃、２，５００ＲＰＭで１分間遠心する（２５μｌの反応混合物を処理し１／１０量の不活化試薬で失活させる）。
【００９４】
逆転写
ＤＮアーゼＩ処理した１０μｌの全ＲＮＡを４０μｌの１×逆転写反応ミックス（ＤＥＰＣ  Ｈ２Ｏ，ＲＴバッファ，ＭｇＣｌ２，ｄＮＴＰミックス，ランダムヘキサマー，ＲＮアーゼインヒビターおよびＭｕｌｔｉＳｃｒｉｂｅ  ＲＴ）に添加し、２５℃で１０分間、４８℃で３０分間および９５℃で５分間インキュベートする。ＥＤＴＡを加えて逆転写を停止させる。サンプルを保存プレートに移して−２０℃で保存する。
【００９５】
ネズミのＴＰＨ  ｍＲＮＡの相対的レベルを定量するための縫線切片ｃＤＮＡのＴａｑＭａｎ（ＲＴＭ）分析
９６ウェルプレートの各ウェルに、２．５μｌのｃＤＮＡを、２２．５μｌのＴａｑＭａｎ（ＲＴＭ）反応ミックス（１×のＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（ＡＢＩ）、２０ｎＭの順方向および逆方向１８Ｓ  ｒＲＮＡ対照プライマー、１００ｎＭの１８Ｓ  ｒＲＮＡ対照プローブ、３００ｎＭのｍＴＰＨ１−８７４ＦおよびｍＴＰＨ１−９６２Ｒプライマー、２００ｎＭのｍＴＰＨ１−９２６Ｔプローブと共に加える。サンプルをＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（ＲＴＭ）７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）で処理し、集めたデータをＭｅｒｃｋ  Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ  ＴａｑＭａｎＰｌｕｓプログラムを使用して解析する。
【００９６】
医薬組成物
本発明の特定実施態様として、１００ｍｇのデルタ−５−アンドロステン−３−ベータ−１７−ベータ−ジオールを十分量の微細分割ラクトースと配合して全量５８０−５９０ｍｇとし、サイズ０の硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】１７β−エストラジオール（Ｅ２、０．２ｍｇ／ｋｇ）、Δ５−アンドロステン３β，１７β−ジオール（Ａ、５または１０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ゴマ油）で処置後の野生型マウスおよびエストロゲン受容体ベータノックアウト（βＥＲＫＯ）マウスの背側縫線核のプロゲステロン受容体（ＰＲ）タンパク質。動物（ｎ＝５／グループ）を３日間処置し、最終処置の２４時間後に大脳および子宮を集めて、免疫組織化学処理を行った。ＥＲαおよびＥＲβの双方が背側縫線核で発現されるが、ＥＲβのほうが多量に存在しており、この大脳領域のＥ２によるＰＲの誘発は主としてＥＲβによって調節されている。機能性ＥＲβの欠如したβＥＲＫＯマウスでは、Ｅ２によるＰＲの誘発が減退しまたＡによるＰＲ誘発が完全に喪失していることに注目されたい。ＰＲがＥＲαだけによって調節されている海馬のＰＲ免疫応答細胞の検査は、Ｅ２−処置した野生型マウスおよびβＥＲＫＯマウスで高度の発現が観察されるが、ビヒクルまたはＡ（５ｍｇ／ｋｇ）で処置したグループのＰＲ免疫応答が全く見られないこと、また、高用量Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）グループでは軽度に染色された細胞がときおり見られるだけであることを示した。これらのデータは総合的に、この試験で試験した用量でＡの作用がＥＲβによって介在されることを示す。
【図２】１７β−エストラジオール（Ｅ２、０．２ｍｇ／ｋｇ）、Δ５−アンドロステン３β，１７β−ジオール（Ａ、５または１０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（ゴマ油）で処置後の野生型マウスおよびエストロゲン受容体ベータノックアウト（βＥＲＫＯ）マウスの子宮重量。動物（ｎ＝５／グループ）を３日間処置し、最終処置の２４時間後に大脳および子宮を集めた。Ｅ２は野生型マウスおよびβＥＲＫＯマウスの双方の子宮重量を高度に増加させた。この応答はＥＲαによって介在されるからである。しかしながら、Ａの効果は極めて僅かであった。総合すると、試験した用量のＡは大脳中で十分なＥＲ−β活性を示すが、末梢のＥＲαに対しては極めて僅かな活性を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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