(57)【要約】  固定生物組織を調製する方法であって、生物組織を整形すること、生物組織を架橋すること、生物組織を滅菌すること、および、生物組織中のプリオンを不活性化することを含む方法。【選択図】図１
2008526359.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固定生物組織を調製する方法であって、
少なくとも１層の生物組織を採取すること；
生物組織を整形すること；
生物組織を少なくとも部分的に架橋すること；
生物組織を滅菌すること；および、
生物組織の中のプリオンを不活性化すること、
を含む方法。
【請求項２】
前記生物組織が、心膜組織、腹膜組織、および胸膜組織から基本的に成るグループから選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生物組織を整形する工程は、採取された該生物組織の層を所望のサイズに切断し、切断された該生物組織を部材に縫合することを含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記生物組織を少なくとも1種の架橋剤を含む溶液に接触させることによって、該生物組織が少なくとも部分的に架橋されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記架橋剤は、グルタールアルデヒド、フォルムアルデヒド、グリセルアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、ジアルデヒドでん粉、およびそれらの組み合わせから基本的に成るグループから選ばれることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記生物組織をアルコールを含む溶液に接触させることによって、該生物組織が滅菌されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記アルコールは、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、およびそれらの組み合わせから基本的に成るグループから選ばれ、かつ前記溶液中で、容量で約10%から約90%の濃度として存在することを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記生物組織を塩基性溶液に接触させることによって、該生物組織中のプリオンが不活性化されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記塩基性溶液が、約0.5 M から約4.0 Mのモル濃度を有することを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物組織を、該生物組織の細胞の溶解をもたらす少なくとも1種の液に接触させることをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞溶解をもたらす液は、重量で約2%から約8%の塩濃度を持つ高張液であることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記生物組織に少なくとも1種の薬剤を加えることをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
固定生物組織を調製する方法であって、
少なくとも１層の生物組織を採取すること；
採取された該生物組織の層を整形すること；
整形された該生物組織を少なくとも部分的に架橋すること；
少なくとも部分的に架橋された該生物組織を滅菌すること；および、
滅菌された該生物組織の中のプリオンを不活性化すること、
を含む方法。
【請求項１４】
前記固定生物組織に少なくとも1種の薬剤を加えることをさらに含み、該薬剤は、抗炎症剤、抗増殖剤、抗凝固剤、または抗血小板凝集剤の内の、少なくとも1種を含むことを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記整形された生物組織を、該生物組織を架橋する前に、細胞分解液に接触させることをさらに含むことを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記生物組織を少なくとも1種の架橋剤を含む溶液に接触させることによって、該生物組織が少なくとも部分的に架橋され、該架橋剤は、グルタールアルデヒド、フォルムアルデヒド、グリセルアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、ジアルデヒドでん粉、およびそれらの組み合わせから基本的に成るグループから選ばれることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記生物組織をアルコールを含む溶液に接触させることによって、該生物組織が滅菌され、該アルコールは、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、およびそれらの組み合わせから基本的に成るグループから選ばれ、かつ、該溶液中で、容量で約10%から約90%の濃度として存在することを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記プリオンが、前記生物組織を塩基性溶液に接触させることによって不活性化され、該塩基性溶液が、約0.5 M から約4.0 Mのモル濃度を有することを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
固定生物組織を調製する方法であって、
少なくとも１層の生物組織を採取すること；
整形された該層を、細胞の溶解をもたらす少なくとも1種の溶液に接触させること； 
該生物組織を少なくとも部分的に架橋すること；
少なくとも部分的に架橋された該生物組織を滅菌すること；および、
滅菌された該生物組織の中のプリオンを不活性化すること、
を含み、
該生物組織の層は、複数の細胞を含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
前記生物組織を整形することをさらに含むことを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記固定組織に少なくとも1種の薬剤を加えることをさらに含むことを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、一般に組織の固定に関し、詳細には、組織を埋設用／移植用に調製するために該組織を処理する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
循環器プロテーゼを患者の血管に埋め込む外科処置は、多くの血管障害の治療において一般的である。例えば、循環器プロテーゼの一般的タイプの一つは、動脈瘤部位において血管壁を強化するため、または、血管の閉塞部を開放するために使用される、血管内プロテーゼである。
【０００３】
典型的な血管内プロテーゼは、織布製またはポリテトラフルオロエチレン(PTFE)製の、屈曲性の管状部材を含むが、この部材は、ステントという名で知られる１個以上の支持構造に、縫合で固定されるか、または担持されてもよい。一般に、各ステントは、放射方向の拡張を可能とするのに十分な弾性、および、放射方向の圧潰または破裂を防ぐのに十分な強度を持つ材料から形成される。このようなステントは通常、ステンレススチール、チタン、ニチノール、または適当なプラスチックから形成される。
【０００４】
循環器人工器官の分野における共通の努力目標は、プロテーゼの開口率を増すことである。循環器プロテーゼの表面における血栓形成および血小板堆積は、該プロテーゼの開口率を下げる。例えば、血管内プロテーゼ内における血栓形成および血小板堆積は、該血管内プロテーゼによって定められる導管を閉塞することがある。
【０００５】
既知の循環器プロテーゼ表面における血栓形成および血小板堆積には多くの因子が寄与する。もっとも一般的な因子は、血管内プロテーゼの導管内面を形成する一つのまたは複数の材料に依存する。典型的には、該血管内プロテーゼの導管を形成する一つのまたは複数の材料が、患者の体にとって外来の異物であると、血栓形成および血小板堆積が血管内プロテーゼの導管の閉塞を開始する。血栓は、血管内プロテーゼの導管内面に形成し始め、導管の内面周囲に年々拡大する。最終的に、この血栓は、この血管内プロテーゼによって定められる導管を通る血流を大きく制限することがあり、未処置のまま放置すれば、導管を完全に閉塞することがある。
【０００６】
さらに、血栓形成および血小板堆積は、循環器プロテーゼの内面の不規則性によって起こることがある。この不規則性は、循環器プロテーゼを支持するために用いられる内部ステントの構造によって形成されることもあるし、あるいは、プロテーゼのために使用される屈曲性部材の内面によって形成されることもある。
【０００７】
血栓形成および血小板堆積の発生を抑えるために、循環器プロテーゼの内面に、生物組織を張りつけてもよい。血管内プロテーゼの内面に対する生物組織の張りつけは、内因性組織細胞が直ぐに接着し増殖することが可能な既成のタンパクの基礎を提供することによって、血栓形成および血小板堆積を抑えるのに役立つ可能性がある。
【０００８】
生物材料は典型的には埋設の前に安定化される。この、固定または鞣しとも呼ばれる安定化の過程は、通常、一連の化学的工程から成り、それによって、(1)組織の生体力学的性質が安定化され；(2)組織が滅菌され；(3)組織の抗原性が緩和される。
【発明の開示】
【０００９】
本発明は、固定生物組織を調製する方法に関する。本方法では、少なくとも１層の生物組織が採取される。この生物組織は、心膜組織、腹膜組織、および胸膜組織から基本的に成るグループから選ぶことが可能である。生物組織は、例えば、生物組織を切断し、該生物組織を部材（例えば、ポリエチレンプレート）に縫合することによって整形される。生物組織はまた、少なくとも部分的に架橋される。生物組織は、該生物組織をアルデヒドに接触することによって架橋することが可能である。生物組織はさらに、該生物組織を例えばアルコールを含む液に接触させることによって滅菌される。さらに、組織中の、プリオンおよびその他の感染性またはウィルス関連産物が、例えば生物組織を塩基性溶液に接触させることによって、不活性化される。プリオンおよびその他の感染性またはウィルス関連産物は、例えば生物組織を塩基性の溶液に接触させることによって不活化することができる。
【００１０】
要すれば任意に、無細胞性の固定生物組織を形成するために、生物組織を、細胞溶解に作用する液に接触させてもよい。細胞溶解液は、生物組織の細胞の塩濃度よりも高い塩濃度を持つ高張液を含んでもよい。
【００１１】
この方法によって固定された生物組織は、例えば、患者の血管内に配置することが可能な移植片として使用することが可能である。患者の血管内で利用されると、この固定生物組織はすぐに内皮化される。生物組織が直ぐに内皮化されることで、血管内における凝固塊の形成が緩和され、生物組織の生体適合性が増進される。
【００１２】
本発明のもう一つの態様では、本方法は、少なくとも１層の生物組織を採取すること、採取された生物組織の層を整形すること、整形された生物組織を少なくとも部分的に架橋すること、少なくとも部分的に架橋された生物組織を滅菌すること、および、滅菌された生物組織の中のプリオンを不活性化すること、を含んでもよい。本方法はさらに、少なくとも1種の薬剤を固定生物組織に加えることを含んでもよい。薬剤は、抗炎症剤、抗増殖剤、抗凝固剤、または抗血小板凝集剤の内の、少なくとも1種を含む。
【００１３】
（関連出願）
本出願は、2001年7月19日出願の米国特許出願第09/908,764号（現在米国特許第６，579,307号）の分割出願である2003年4月9日出願の米国特許出願第10/409,884に対する、一部継続出願である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の前述の特徴およびその他の特徴は、本発明の関係する技術分野の当業者には、付属の図面を参照しながら下記の説明を読むことによって明白となろう。
【００１５】
本発明は、１層の生物組織を固定または保存する方法、および、前記方法の内の一つによって固定または保存された１層の生物組織に関する。前記方法の内の一つによって固定または保存される１層の生物組織は、障害を修復するために生体の一部に移植または埋設することが可能である。
【００１６】
本発明による方法の内の一つによって固定される生物組織は、内層および外層を含む。内層は漿膜であり、外層は、該漿膜に連結する筋膜である。本発明の生物組織は、幅広い動物種、例えば、ヒト、ウシ、ウマ、ブタ、ネズミ、トリ、およびそれらの組み合わせから得られてもよい。本発明の一つの態様によれば、生物組織は自己組織である。それとは別に、死体組織または異種組織を用いてもよい。
【００１７】
本発明の一つの実施態様によれば、１層の生物組織は腹膜から採取される。別態様として、生物組織は、心膜または胸膜から採取してもよい。１層の天然の生物組織に代わるものとして、腹膜、胸膜、または心膜の特徴を模倣する、人工的に構築された１層の生物組織を用いてもよい。人工的に構築された生物組織は、組織細胞、例えば、ヒトのケラチノサイトを撒いたコラーゲン基礎から形成されてもよい。人工的に構築された生物組織はまた基礎膜を含んでもよい。この基礎膜は、筋膜層、または、別の既知の人工層であってもよい。
【００１８】
本発明による生物組織は、該生物組織の意図される用途に基づいて、適当なサイズの、複数シート、または複数層として採取されてもよい。例えば、生物組織は、最大約20 cmの幅、最大約20 cmの長さ、および約0.1 mmから約3 mmの厚さを持つ複数のシートとして採取されてもよい。生物組織を採取するのに従来技術を用いることが可能である。
【００１９】
本発明によれば、採取された１層の生物組織は、固定法によって、固定または保存することができる。図１４は、固定法200を模式的に説明するフローダイアグラムである。この方法では、生物組織が化学的に固定および滅菌され、そのために、得られる固定生物組織は複数の組織細胞を含む。本固定法200においては、採取された生物組織は、202において、先ず、第１の生理学的正常液によって接触させられるかまたは洗浄される。この第１の生理学的正常液は、例えば、粘膜や生表面を洗浄するとき、体液を補充するとき、および／または、血液容量を回復するときに通常使用されるような、生食液または蒸留水を含有する滅菌された液であってもよい。例示のために述べれば、第１の生理学的正常液は、pHが約7.4であってもよく、約0.9%のリン酸バッファー生食液（PBS）、または等張生食液（例えば、約0.9%の塩化ナトリウム（NaCl）溶液）を含んでもよい。
【００２０】
第１の生理学的正常液との接触の後、204において、１層の生物組織は、例えば所望の形に切断または裁断され、次に第１の生理学的正常液に移されることによって、整形される。固定生物組織が整形されて得られる所望の形は、生物組織が利用される特定の用途に依存してよい。例えば、固定生物組織がパッチとして用いられる場合、1枚の生物組織は、約0.3 cmから約10 cmの厚さと約6 cmから約10 cmの幅を持つように切断または裁断されることができる。生物組織が管状移植片のために使用される場合、1枚の生物組織は、約10 cmから約100 cmの長さと約2 mmから約10 cmの幅を持つように切断または裁断されることができる。固定生物組織が、管状ステントと共に使用される場合、生物組織は、約1 mmから約100 cmの長さと約1 mmから約40 cmの幅を持つように切断または裁断されることができる。
【００２１】
切断または裁断された1枚の生物組織は、約1時間から約24時間、第１の生理学的正常液の中に置くことができる。この時間、第１の生理学的正常液は、約4℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、生物組織は、切断または裁断後、約4℃において約1時間、約0.9%のPBS(pH7.4)の中に置かれてもよい。
【００２２】
要すれば任意に、切断または裁断された生物組織はまた、整形の過程の一部として、第１の生理学的正常液の中に移す前に、部材（例えば、ポリエチレンプレート）に縫いつけられてもよい。切断または裁断された生物組織を部材に縫いつけることは、固定処置の際、該生物組織を天然の形に維持するのに役立つ。部材は、平坦形、曲面形、またはダウエル（dowel）形であってもよく、部材の形は、固定生物組織の特定の用途に依存してよい。
【００２３】
206において、整形された生物組織を、第１の生理学的正常液から取り出し、少なくとも1種の架橋剤を含む少なくとも一つの液（すなわち、架橋液）に接触させることによって、少なくとも部分的に架橋してもよい。架橋剤は、アルデヒド、例えば、グルタールアルデヒド、フォルムアルデヒド、グリセルアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、ジアルデヒドでん粉、およびそれらの組み合わせを含んでもよい。生物組織を架橋するのに通常用いられる、他のアルデヒド類および架橋剤も使用が可能である。
【００２４】
架橋剤は、生物組織の架橋を促進するには有効な濃度ではあるが、生物組織に対して過剰に有害な作用を及ぼし人工産物を生成するほど高くはない濃度の水溶液として存在してよい。この濃度は、使用される特定の架橋剤に依存する。例示として述べれば、架橋剤水溶液として与えられるグルタールアルデヒドの濃度は、容量で約0.625%から約5.0%の範囲であってもよい。
【００２５】
この架橋剤溶液は、架橋剤の外に、他の添加剤を含んでもよいことが了解されよう。これら他の添加剤としては、例えば、バッファー類、例として、リン酸塩、重炭酸塩、および、カコジル酸塩が挙げられる。これらは、架橋剤液のpHを約7（例えば、約7.4）に維持するのに有効な量として架橋剤液に供給されてよい。
【００２６】
生物組織は、架橋剤液に約2から約72時間接触させることによって架橋されることができる。この時間、架橋剤液は、約4℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、整形生物組織は、約20℃から約25℃の温度において約1時間、約2.5%のグルタールアルデヒド液に接触させられてもよい。
【００２７】
生物組織を少なくとも部分的に架橋した後、208において、生物組織は、第２の生理学的正常液で濯いでもよい。この第２の生理学的正常液は、第１の生理学的正常液と同様、pHが約7.4で、例えば、約0.9%のPBSまたは等張生食液（例えば、約0.9%のNaCl液）を含んでもよい。
【００２８】
少なくとも部分的架橋された1枚の生物組織は、第２の生理学的正常液の中に約1時間から約12時間置くことによって、第２の生理学的正常液によって濯ぐことができる。この時間、第２の生理学的正常液は、約20℃から約25℃に維持されてもよい。例えば、少なくとも部分的に架橋された生物組織は、約20℃から約25℃の温度において約1時間、約0.9%のPBS（ｐH7.4）液の中に置かれてもよい。
【００２９】
第２の生理学的正常液による濯ぎの後、210において、少なくとも部分的に架橋された生物組織は、アルコールを含む少なくとも一つの液に接触させられる。少なくとも部分的に架橋された生物組織を、アルコールを含む溶液に接触させることによって、生物組織は滅菌され、生物組織のさらなる架橋も促進され得る。アルコールを含む液は、水溶液であってもよく、アルコール、例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、およびそれらの組み合わせを含んでもよい。溶液におけるアルコールの濃度は、利用される特定のアルコールに応じて、容量で約10%から約90%の範囲にあってもよい。例えば、エタノールを用いる場合、エタノールは、容量で約50%の濃度で水溶液として提供されることができる。
【００３０】
生物組織は、該生物組織を滅菌し、架橋をさらに増進するために、アルコール含有液に約12時間から約48時間接触させられてもよい。生物組織との接触中におけるアルコール含有液の温度は、通常、約4℃から約20℃に維持される。例示として述べると、生物組織は、20℃から25℃で約24時間、50%エタノール溶液に接触させられてもよい。
【００３１】
212において、滅菌生物組織は、該生物組織中のプリオン、およびその他の感染性およびウィルス関連産物を不活性化するのに使用される、塩基性またはアルカリ性液に接触させられる。塩基性溶液は、少なくとも1種の塩基、例えば、水酸化ナトリウム（NaOH）、水酸化カリウム(KOH)、水酸化アンモニウム（NH4OH）、およびそれらの組み合わせの水溶液を含んでもよい。
【００３２】
塩基性溶液のモル濃度は、約0.5 M から約4.0 Mの範囲であってもよい。約0.5 Mよりも低いモル濃度では、塩基性溶液は、プリオンおよび、その他の感染性およびウィルス関連産物を不活性化するのに無効な強度しか持たないことがある。約4.0 Mを超えるモル濃度では、塩基性溶液は、生物組織を損傷する恐れのある強度を持つ可能性がある。
【００３３】
滅菌生物組織は、プリオンおよび、その他の感染性およびウィルス関連産物の不活性化を促進するために、約12時間から約48時間塩基性溶液に接触させてもよい。生物組織に対する接触の間、塩基性溶液の温度は、通常、約20℃から約25℃に維持される。例示として述べれば、生物組織は、約20℃から約25℃の温度において約2時間、1 M NaOH液に接触させられてもよい。
【００３４】
プリオンの不活性化後、214において、固定生物組織は、第２の生理学的正常液の中に約1時間から約12時間置くことによって、第２の生理学的正常液によって濯いでもよい。この時間、第２の生理学的正常液は約20℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、生物組織は、約20℃から約25℃で約1時間、第２の生理学的正常液によって濯いでもよい。
【００３５】
濯ぎの後、生物組織は保存液中に置かれてもよい。保存液は、例えば、約0.625%グルタールアルデヒド水溶液、0.9% PBS、等張生食液（例えば、0.9% NaCl液）、およびそれらの組み合わせを含んでもよい。保存液のpHは約7.4でもよく、保存液の温度は、約20℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、生物組織は、約5年以下の期間、約20℃から約25℃の温度で、約0.625%のグルタールアルデヒド保存液の中に置かれてもよい。
【００３６】
この方法によって固定される生物組織は、例えば、患者の血管中に配置される移植片として使用することができる。患者の血管内で使用されると、固定生物組織は速やかに内皮化される。生物組織が速やかに内皮化されることで、血管内における凝固塊の形成が緩和され、生物組織の生体適合性が増進される。
【００３７】
当業者であれば、簡単に内皮化される固定生物組織を得るために、整形工程、架橋工程、滅菌工程、およびプリオン不活性化工程は、前述の特定順序で実行する必要はなく、任意の順序で実行が可能であることが了解されよう。しかしながら、前述の工程順序に従うことによって、生物組織の速やかな内皮化の外にも他の利点が得られる。例えば、本発明の工程順序に従うことによって、生物組織の石灰化が抑制される。加えて、架橋工程の前に生物組織を整形することによって、生物組織の立体配座の維持がより簡単になる。さらに、生物組織を滅菌する前に架橋結合することによって、生物組織における細菌増殖が緩和される。
【００３８】
図１５は、採取した生物組織を無細胞性となるように化学的に固定し滅菌する、本発明による別の固定法250を模式的に示す。本固定法250では、採取された生物組織は、252において、先ず、第１の生理学的正常液によって、接触させられるかまたは洗浄される。この第１の生理学的正常液は、pHが約7.4でもよく、約0.9%のPBSまたは等張生食液（例えば、約0.9%の塩化ナトリウム(NaCl）溶液）を含んでもよい。
【００３９】
第１の生理学的正常液に対する接触後、254において、1層の生物組織は、例えば、所望の形に切断または裁断され、次に、第１の生理学的正常液に移されることによって、整形される。生物組織が整形されて得られる所望の形は、生物組織が利用される特定の用途に依存してよい。
【００４０】
切断または裁断された1層の生物組織は、約1時間から約24時間、第１の生理学的正常液の中に置くことができる。この時間、第１の生理学的正常液は、約4℃から約25℃の温度に維持してもよい。例えば、生物組織は、切断または裁断後、約4℃において約1時間、約0.9%のPBS(pH7.4)の中に置かれてもよい。
【００４１】
要すれば任意に、切断または裁断された生物組織はまた、整形過程の一部として、第１の生理学的正常液に移す前に、部材（例えば、ポリエチレンプレート）に縫いつけられてもよい。切断または裁断生物組織を部材に縫いつけることは、固定処置の際、該生物組織を天然の形に維持するのに役立つ。部材は、平坦形、曲面形、またはダウエル形であってもよく、部材の形は、固定生物組織の特定の用途に依存してよい。
【００４２】
256において、整形された生物組織を、第１の生理学的正常液から取り出し、細胞溶解に作用する液（すなわち、細胞溶解液）に接触させてもよい。細胞溶解液は、生物組織の細胞よりも高張な、あるいは高い浸透圧を持つ溶液を含んでもよい。細胞分解液の一つの例は、溶液の約2%から約8%の重量の溶質（例えば、塩）を含有する水溶液である。生物組織の細胞の溶解は、該生物組織を、約2時間から約72時間、細胞溶解液の中に置くことによって作用させることが可能である。細胞溶解液の温度は、細胞溶解中、約4℃から約25℃に維持されてもよい。例示として述べれば、生物組織は、約20℃から約25℃の温度において約2時間、約3%のNaCl溶液に接触させられてもよい。
【００４３】
細胞溶解後、生物組織は、約1から約12時間、水（例えば、蒸留水）の中で濯いでもよい。濯ぎの間、水の温度は約20℃から約25℃に維持してもよい。例えば、生物組織は、約20℃から約25℃において約1時間、蒸留水で濯いでもよい。その後、生物組織は、約20℃から約25℃の温度で約1から約12時間、第１の生理学的正常液の中で濯いでもよい。
【００４４】
258において、無細胞の生物組織を、第１の生理学的正常液から取り出し、少なくとも1種の架橋剤を含む少なくとも一つの液（すなわち、架橋液）に接触させることによって、少なくとも部分的に架橋してもよい。架橋剤は、アルデヒド、例えば、グルタールアルデヒド、フォルムアルデヒド、グリセルアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、ジアルデヒドでん粉、およびそれらの組み合わせを含んでもよい。生物組織を架橋するのに通常用いられる、他のアルデヒド類および架橋剤も使用が可能である。
【００４５】
架橋剤は、生物組織の架橋を促進するには有効な濃度ではあるが、生物組織に対して有害な作用を及ぼして人工産物を生成するほど高くはない濃度の水溶液として存在してよい。この濃度は、使用される特定の架橋剤に依存する。例示として述べれば、架橋剤水溶液として与えられるグルタールアルデヒドの濃度は、容量で約0.625%から約5.0%の範囲であってもよい。
【００４６】
無細胞生物組織は、架橋剤液に約2から約72時間接触させることによって架橋されることができる。この時間、架橋剤液は、約4℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、無細胞生物組織は、約20℃から約25℃において約1時間、約2.5%のグルタールアルデヒド液に接触させられてもよい。
【００４７】
無細胞生物組織を少なくとも部分的に架橋した後、260において、少なくとも部分的に架橋された無細胞生物組織は、第２の生理学的正常液で濯いでもよい。この第２の生理学的正常液は、第１の生理学的正常液と同様、ｐHが約7.4であってもよく、例えば、約0.9%のPBSまたは等張生食液（すなわち、約0.9% NaCl）を含んでもよい。
【００４８】
少なくとも部分的架橋された無細胞生物組織は、該生物組織を第２の生理学的正常液に約1時間から約12時間置くことによって、第２の生理学的正常液によって濯ぐことができる。この時間、第２の生理学的正常液は、約20℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、少なくとも部分的に架橋された無細胞生物組織は、約20℃から約25℃の温度において約1時間、約0.9%のPBS（ｐH7.4）液の中に置かれてもよい。
【００４９】
第２の生理学的正常液による濯ぎの後、262において、少なくとも部分的に架橋された無細胞生物組織は、アルコールを含む少なくとも一つの液に接触させられる。少なくとも部分的に架橋された無細胞生物組織を、アルコールを含む溶液に接触させることによって、無細胞生物組織は滅菌され、無細胞生物組織のさらなる架橋も促進され得る。アルコールを含む液は、水溶液であってもよく、アルコール、例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、およびそれらの組み合わせを含んでもよい。溶液におけるアルコールの濃度は、利用される特定のアルコールに応じて、容量で約10%から約90%の範囲にあってもよい。
【００５０】
無細胞生物組織は、該生物組織を滅菌し、架橋をさらに増進するために、アルコール含有液に約12時間から約48時間接触させられてもよい。生物組織との接触中におけるアルコール含有液の温度は、通常、約4℃から約20℃に維持される。例示として述べると、無細胞生物組織は、約20℃から約25℃で約24時間、約50%エタノール溶液に接触させられてもよい。
【００５１】
264において、滅菌生物組織は、該無細胞生物組織中のプリオン、およびその他の感染性およびウィルス関連産物を不活性化するのに使用される、塩基性またはアルカリ性液に接触させられる。塩基性溶液は、少なくとも1種の塩基、例えば、NaOH、KOH、NH4OH、およびそれらの組み合わせの水溶液を含んでもよい。
【００５２】
塩基性溶液のモル濃度は、約0.5 M から約4.0 Mの範囲であってもよい。約0.5 Mよりも低いモル濃度では、塩基性溶液は、プリオンおよび、その他の感染性およびウィルス関連産物を不活性化するのに無効な強度しか持たないことがある。約4.0 Mを超えるモル濃度では、塩基性溶液は、生物組織を損傷する恐れのある強度を持つ可能性がある。
【００５３】
滅菌生物組織は、プリオンおよび、その他の感染性およびウィルス関連産物の不活性化を促進するために約12時間から約48時間、塩基性溶液に接触させてもよい。無細胞生物組織に対する接触の間、塩基性溶液の温度は、通常、約20℃から約25℃に維持される。例示として述べれば、生物組織は、約20℃から約25℃の温度において約2時間1 M NaOH液に接触させられてもよい。
【００５４】
プリオンの不活性化後、266において、固定無細胞生物組織は、該生物組織を第２の生理学的正常液に約1時間から約12時間置くことによって濯いでもよい。この時間、第２の生理学的正常液は約20℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、生物組織は、約20℃から約25℃で約1時間、第２の生理学的正常液によって濯いでもよい。
【００５５】
濯ぎの後、固定された無細胞生物組織は保存液中に置かれてもよい。保存液は、例えば、約0.625%グルタールアルデヒド水溶液、0.9% PBS、等張生食液（例えば、0.9% NaCl液）、およびそれらの組み合わせを含んでもよい。保存液のpHは約7.4でもよく、保存液の温度は、約20℃から約25℃の温度に維持されてもよい。例えば、固定無細胞生物組織は、約5年以下の期間、約20℃から約25℃の温度で、約0.625%のグルタールアルデヒド保存液の中に置かれてもよい。
【００５６】
固定法200によって固定された生物組織同様、固定法250によって固定された無細胞生物組織も、患者の血管内で速やかに内皮化される。生物組織が速やかに内皮化されることで、血管内における凝固塊の形成が緩和され、装置の生体適合性が増進される。
【００５７】
要すれば任意に、図１４および１５に示すように、採取した生物組織の固定後、それぞれ、工程216および268において、少なくとも1種の薬剤を、固定生物組織（細胞性または無細胞性）に加えてもよい。薬剤は、例えば、固定生物組織に薬剤を塗布することによって、または、固定生物組織を薬剤で飽和させることによって、該固定生物組織に加えてもよい。固定生物組織に加える薬剤の例としては、例えば、ワルファリン（COUMADIN）、ヘパリン、およびレピルジン(REFLUDAN)などの抗凝固剤、例えば、アセタミノフェン、チクロピジン(TICLID)、クロピドグレル(PLAVIX)、チロフィバン(AGGRASTAT)、およびエプチフィバチド(INTEGRILIN)などの抗血小板凝集剤、並びに抗増殖剤および抗炎症剤、などが挙げられる。
【００５８】
固定生物組織にはまた、特殊化細胞や非特殊化細胞（例えば、多能性成人幹細胞）などの細胞を撒いてもよい。これらの細胞は、例えば、内皮化を促進したり他の治療効果（例えば、抗増殖および抗炎症作用）を実現することが可能な薬剤またはタンパクを発現するように、遺伝学的に修飾してもよい。
【００５９】
本発明の別の態様によれば、固定生物組織は、血管の移植に用いることが可能な装置の少なくとも1部分を含んでもよい。図１は、血管12（図５）の移植用の装置10を示す。装置10は、本発明の方法によって固定された１層の生物組織14、および拡張可能な支持部材16（例えばステント）を含む。
【００６０】
図２を参照すると、拡張可能な支持部材16は管状であり、第１末端22から第２末端24へ軸方向に伸びる。図１に示す拡張可能支持部材16は、複数の支持ビーム26と、軸方向に伸びる複数の支持ロッド27を含む、メッシュ構造である。
【００６１】
各支持ビーム26は、全体として正弦波の形態を持つ。各支持ビーム26の波長は、隣接する支持ビームの波長と同一であるか、ほぼ同一である。円周方向に隣接する支持ビーム26は、互いに180°位相がずれている。接続バー28（図１）が、各支持ビーム26の頂点30を、隣接する支持ビームと連接した基底32（図１）に接続する。各支持ビーム26の振幅（または高さ）は、全数の支持ビームが、拡張可能支持部材16の円周を形成するように設計される。
【００６２】
軸方向に伸びる支持ロッド27はそれぞれ軸Aに平行に伸びる。支持ロッド27は、拡張可能支持部材16にさらに新たな補強を付け加える。装置10の一つの実施態様は、拡張可能支持部材16の円周上に互いに等距離で隔てられた、8本の支持ロッド27を含む。図１に示される実施態様では、隣接する支持ロッド27の間に、2本の支持ビーム26が配される。
【００６３】
拡張可能支持部材16はまた、複数のアイレット29を含む。図１にはその内の4個が示される。各アイレット29は、支持ロッド27の１つから伸びる。図１に描かれるアイレット29は円形であるが、他の形態を用いてもよい。アイレット29は、１層の生物組織14を外部支持部材16に縫い付けるための手段を提供する。
【００６４】
拡張可能支持部材16は、拡張可能な金属、例えば、ニチノールから形成される。それとは別に、拡張可能部材は、織布層、例えば、Dacron(登録商標)、またはプラスチック材料、例えば、ポリテトラフロオロエチレン（PTFE）から形成されてもよい。
【００６５】
拡張可能支持部材16は、外表面34および内表面36を含む（図２）。外表面34は全体として円筒形であり、軸Aに沿って軸方向に伸びる。内表面36も全体として円筒形であり、外表面34と同軸性である。
【００６６】
それとは別に、拡張可能支持部材16は、拡張が可能であって、内表面および外表面36および34をそれぞれ定めるものであれば、任意の既知のステント構造を含んでもよい。装置10は、円形断面形状を持つ円筒形として描かれているが、装置の断面形状は、別に、楕円形、多角形、または円錐形であってもよい。
【００６７】
図４ａ-４ｆは、本発明の装置10を形成する方法を示す。本方法は、図４ａにおいて、ダウエル38と、固定されて四角形に裁断された1層の生物組織14から始まる。ダウエル38は、ガラスから形成される。図４ａに描かれるダウエル38は、円筒形で、円形断面の外面40を有する。それとは別に、ダウエル38は円錐形であってもよい。ダウエル38の外面40の円周は、生物組織14の幅に等しい。生物組織14の幅は、第１側面42と第２側面44の間の距離と定義される。図４ａは、生物組織14が、ダウエル38の周囲を包みこむ、または巻きつけられるところを示す。
【００６８】
図４ｂは、生物組織14がダウエル38の周囲に完全に巻きつけられたところを示す。ダウエル38の周囲に完全に巻きつけられると、生物組織14の第１側面42は、生物組織14の第２側面44に対し、重複せずに、当接する。第１側面42と第２側面44の合致する場所には、軸方向に伸びるシーム46が定義される。シーム46は、生物組織14の軸長に沿って伸びる。生物組織14の軸長は、第１軸端58と第２軸端60の間の距離と定義される。
【００６９】
第１側面42は、第２側面44に当接するが、その当接は、生物組織14の内層18の内面50（図１−３）によって定められる、装置10の内面48（図１−３）が滑らかで、連続的で、途切れがないように行われる。装置10の内面48は、もしも生物組織14が重複したならば生じたであろう突出部または不規則部を持たないので、シーム46における血栓形成および血小板堆積は抑制される。生物組織14の第１および第２側面42と44とが当接することによって得られるもう一つの利点は、装置10の内面48が滑らかで、連続的で、かつ途切れがないために、装置の中で渦流が形成されないことである。
【００７０】
図４ｃでは、生物組織14の第１側面42が、生物組織14の第２側面44に、縫合52によって付着される。縫合52は、生物組織14を貫いて放射方向内側に伸び、全体として、第１および第２側面42および44の隣接領域の間を円周方向に伸びる。生物組織14は、縫合52が所定の場所に縫いこまれる間は、ダウエル38の上に留まる。１層の生物糊54を、生物組織14の外面56のシーム46の上に設けてもよい。生物糊54は、装置10の内面48が滑らかで、連続的で、途切れがない状態を維持することを確保するのに役立つ。生物糊54はまた、シーム46を通じる漏洩を阻止するようにシーム46を完全に密封することを助ける。
【００７１】
図４ｄは、拡張可能支持部材16が、生物組織14の上に設置されるところを示す。拡張可能支持部材16は、生物組織14のための外部支持体を形成する。拡張可能支持部材16は、装置10の、放射方向に最外側の成分を形成する。装置10の放射方向に最内側の成分は、１層の生物組織14の漿膜層18によって形成される。
【００７２】
拡張可能支持部材16を生物組織14の上に設置するために、拡張可能支持部材16は拡張される。拡張可能支持部材16を拡張するためには、任意の既知の方法、例えば、拡張可能支持部材の加熱またはバルーン膨張を用いてもよい。ダウエル38、および、ダウエル38の上に保持される生物組織14が、図４ｄに示すように、拡張可能支持部材16の第１末端22の中に挿入される。拡張可能支持部材16およびダウエル38は互いに動かされ、最終的には、等量の生物組織14が、拡張可能支持部材16の第１および第２末端22および24の両方から軸方向に外側へ伸びるに至る。
【００７３】
続いて、拡張可能支持部材16は、該拡張可能支持部材16の内面36が、生物組織14の外面56の円周に渡って等しく生物組織14の外面56に嵌合するまで、縮小される。次に、生物組織14は、拡張可能支持部材16に付着される。生物組織14を拡張可能支持部材16に付着させるには、縫合（図示せず）を用いることが好ましい。各縫合糸は生物組織14を貫いて伸び、縫合糸の一部は、拡張可能支持部材16のアイレット29の内の一つに通される。次に、縫合糸は、拡張可能支持部材16の外側で、それぞれのアイレット29の周囲に結ばれる。縫合糸は、生物組織14を、拡張可能支持部材16の内面36に保持する。縫合は、血流と縫合との相互作用から渦流が生じることのないよう十分小さい。それとは別に、生物組織14の外面56は、拡張可能支持部材16の内面36に対して、生物糊を用いて糊づけされてもよい。拡張可能支持部材16に生物組織14を付着するために生物糊を用いる場合、支持ビーム26および支持ロッド27は、生物組織14に接着するのに十分なほど大きい内表面積を持っていなければならない。
【００７４】
生物組織14が拡張可能部材16に付着した後、図４ｅに示すように、生物組織14の第１および第２軸末端58および60は、それぞれ、拡張可能支持部材16の第１および第２末端22および24の上に折り返される。生物組織14の第１軸末端58は、引き伸ばされて、拡張可能支持部材16の第１末端22の上に折り返されて、第１折り返し部分62を形成する。次に、第１折り返し部分62は、拡張可能支持部材16の外面34に縫合（図示せず）によって付着される。生物組織14の第２軸末端60は、引き伸ばされて、拡張可能支持部材16の第２末端24の上に折り返されて、第２折り返し部分64を形成する。第２折り返し部分64も、拡張可能支持部材16に縫合（図示せず）によって付着される。
【００７５】
ダウエル38を含む装置10は、患者に埋め込む時期が来るまで滅菌環境に保存される。装置10は、生物学的溶液に浸し、滅菌性の、真空パック容器（図示せず）中に保存するのが好ましい。それとは別に、ダウエル38は、装置を保存する前に装置10から取り去ってもよい。図４ｆは、装置10からダウエル38が取り去られるところを示す。ダウエル38および装置10は、装置10の内側からのダウエル38の抜去をやり易くするために、生物学的溶液または固定液中に置かれることが好ましい。この溶液は、ダウエル38および生物組織14を十分に潤滑するので、ダウエルは、生物組織14を破ったり傷めることなく、装置10から抜去される。そのため、装置10の内面48は、滑らかで、連続し、途切れがない状態を持続する。それとは別に、装置10を拡張し、拡張した装置10からダウエル38を抜去してもよい。
【００７６】
図５は、血管12の中に埋め込まれた本発明の装置10を示す。血管12は、外面66と内面68を含む。血管12の内面68は、血流の方向を決める導管を形成する。装置10は、従来技術で既知の方法を用いて血管12の中まで送られて配置される。装置10が、血管12の所望の位置に配置されたならば、拡張可能支持部材16が、バルーン（図示せず）によって、または、従来技術で既知の自己拡張方式によって、拡張される。拡張可能支持部材16が拡張すると、装置10の第１末端70は血管12に嵌合するが、その嵌合によって、第１折り返し部分62と、血管12の内面68の間に締まり嵌めが形成される。同様に、装置10の第２末端72は血管12に嵌合するが、その嵌合によって、第２折り返し部分64と、血管12の内面68の間に締まり嵌めが形成される。締まり嵌めはまた、拡張可能支持部材16と血管12の内面68との間にも、第１および第２末端70および72の間に伸びる装置10の軸長に沿って形成される。拡張可能支持部材16と血管12の間の締まり嵌めに加えて、拡張可能支持部材16を血管12に固定するために縫合をさらに用いてもよい。
【００７７】
装置10が、上述のように、血管12の内面68に嵌合し、接着すると、漿膜の内層18が、第１および第２折り返し部分62および64における最外側面を形成する。この内層18は、通常の組織治癒方式に従って血管12の内面68に接着し、炎症組織の進入を防ぐ。そのため、第１および第２折り返し部分62および64における内層18の漿膜と、血管12の内面68との間の接着は、狭窄または閉塞の再発を阻止する。さらに、第１および第２折り返し部分62および64における内層18の漿膜と、血管12の内面68との間の治癒的接着は、筋膜層20と血管12の内面68との間の接着よりも速やかに形成される。
【００７８】
血管12に埋め込まれた場合、生物組織14の内面50によって形成される導管は、血管12の内面68と、流体に関して一体である。血管12の内面68と、生物組織14の内面50との間の移行部はきわめて滑らかであり、そのため血栓形成および血小板堆積は抑制され、血流は装置10を通過する際にも制限されない。拡張可能支持部材16は、装置10を通過する血流によって引き起こされる内圧に抗する十分な支持を与え、さらに、血管の放射方向の圧潰も抑制する。
【００７９】
図６は、本発明に従って構築される装置10aの第２実施態様の長軸断面図である。図６に示す実施態様の構造は、図１−３の構造と近似するが、接尾語”a”をつけた同じ参照数字を持つ。装置10aは、図６の実施態様の１層の生物組織14aは１層の漿膜18aしか含まないことを除いて、図１−３の装置10と同じである。
【００８０】
生物組織層14aは、漿膜層18aしか含まないように採取される。漿膜層18aだけを採取する方法は、従来技術で既知である。
【００８１】
装置10aの組立は、図４ａ−４ｆに示す装置10の組立と同じである。１層の生物組織14aは、所望の形に裁断されると、それぞれ、第１および第２側面42aおよび44a、および第１および第２軸末端58aおよび60aを含む。
【００８２】
組み立てられた装置は、第１および第２側面42aおよび44aの当接によって形成されるシーム46aを含む。組立装置10aはまた、第１および第２折り返し部分62aおよび64aを含む。第１折り返し部分62aは、生物組織層14aの第１軸末端58aを、拡張可能支持部材16aの第１末端22aの上に折り返すことによって形成される。第２折り返し部分64aは、生物組織層14aの第２軸末端60aを、拡張可能支持部材16aの第２末端24aの上に折り返すことによって形成される。
【００８３】
組立られた装置10aの内面48aは、漿膜層18aの内面50aによって定められる。装置10aの内面148aは滑らかで、連続しており、途切れがない。装置10aの、滑らかで、連続的で、途切れのない内面48aは、血栓形成および血小板堆積を抑える。
【００８４】
図７は、本発明の第３実施態様に従って構築される装置10bの長軸断面図である。図７に示す実施態様の構造は、図１−３の構造と近似するが、接尾語”b”をつけた同じ参照数字を持つ。
【００８５】
図７に示す装置10bは、１層の生物組織14bおよび拡張可能支持部材16bを含む。生物組織層14bは、漿膜層18bおよび連結する筋膜層20bを含む。拡張可能支持部材16bは、図１に示したものと同様の構造を持つ。生物組織層14bは、装置10bの最内側成分を形成する。
【００８６】
生物組織層14bは、生物組織14bの第１および第２側面42bおよび44bを、シーム46bにおいて当接することによって、管状部分を形成する。第１および第２側面42bおよび44bをシーム46bで縫い合わせ、生物組織14bの外面56bに生物糊（図示せず）を塗布するのが好ましい。
【００８７】
生物組織層14bの外面56bは、拡張可能支持部材16bの内面36bに付着される。拡張可能支持部材16bは生物組織14bの上に置かれるが、その際、拡張可能支持部材16bの第１および第２末端22bおよび24bから、等量の生物組織14bが伸びるように行われる。生物組織14bの第１および第２軸末端58bおよび60bは、図１−３の実施態様に関して前述したように拡張可能支持部材16bの上に折り返される代わりに、拡張可能支持部材16bの第１および第２末端22bおよび24bを超えて、軸方向に伸びる。従って、装置10bを組み立てる際は、工程4eに示した工程は省略される。
【００８８】
組織14bの第１および第２軸末端58bおよび60bは、患者の血管に埋め込まれると、拡張可能支持部材16の拡張によって血管の内面と嵌合し、接着する。生物組織14bの第１および第２軸末端58bおよび60bの、拡張可能支持部材16bの第１および第２末端22bおよび24bを超えた軸方向の伸長によって、生物組織の第１および第２軸末端を血管の内面に直接縫合することが可能になる。
【００８９】
図８は、本発明に従って構築される装置10cの第４実施態様の長軸断面図である。図８に示す実施態様の構造は、図７の構造と近似するが、接尾語”b”の代わりに接尾語”c”をつけた同じ参照数字を持つ。装置10cは、図８の実施態様の１層の生物組織14cは１層の漿膜18cしか含まないことを除いて、図７の装置10bと同じである。
【００９０】
装置10cの組立は、装置10bの組立と同じである。１層の生物組織14cは、所望の形に裁断されると、それぞれ、第１および第２側面42cおよび44c、および第１および第２軸末端58cおよび60cを含む。
【００９１】
組み立てられた装置は、第１および第２側面42cおよび44cの当接によって形成されるシーム46cを含む。組み立てられた装置10cの内面48cは、漿膜層18cの内面50cによって定められる。装置10cの内面48cは滑らかで、連続しており、途切れがない。装置10cの、滑らかで、連続的で、途切れのない内面48cは、血栓形成および血小板堆積を抑える。
【００９２】
図９は、本発明に従って構築される装置10dの第５実施態様の長軸断面図である。図９に示す実施態様の構造は、図７の構造と近似するが、接尾語”b”の代わりに接尾語”d”をつけた同じ参照数字を持つ。
【００９３】
図９の装置10dも循環器移植片である。装置10dは、漿膜の内層18dおよび、該漿膜に連結する筋膜の外層20dを含む、１層の生物組織14dを含む。生物組織層14dは四角く、それぞれ、第１および第２側面42dおよび44d、および第１および第２軸末端58dおよび60dを含む。漿膜の内層18dは、内面50dを含む。筋膜の外層20dは、外面56dを含む。
【００９４】
図９に描かれる装置10dは円筒形で、生物組織層14dによって形成される。生物組織層14dの第１および第２側面42dおよび44dは当接され、互いに固定されてシーム46dを定める。縫合52dが、第１および第２側面42dおよび44dをシーム46dにおいて付着する。シーム46d上において、外層20dの外面56dに対して１層の生物糊（図示せず）が塗布される。生物糊は、シームを通じる漏洩を阻止するようにシーム46dを完全に密封することを助ける。
【００９５】
装置10dを形成するためには、図４ａから４ｃに示した、図１−３の装置10に関連して詳細に論じた工程に従う。図４ｃに示した工程の後、装置10dは、患者に埋め込む時期が来るまで滅菌環境に保存される。患者への埋め込み前に、ダウエルは装置から抜去される。
【００９６】
外層20dの外面56dは、装置10dの最外側成分を形成する。漿膜から成る内層18dの内面50dが、装置10dの最内側成分を形成する。内層18dの内面50dは滑らかで、連続しており、途切れがない。そのため、装置10dの内面48dは、滑らかで、連続的で、途切れがなく、血栓形成および血小板堆積を抑える。
【００９７】
患者の中に外科的に埋め込まれる場合、装置10dは縫合によって付着される。例えば、血管の中に使用される場合、装置10dは、血管の内面に縫合される。そのため、内層18dの連続的で、途切れのない内面50dは、血管の内面と、流体に関して一体である。
【００９８】
装置10dは、支持構造を含まないので、それの付着される血管の形に対して適応、または合致する。従って、血管の内面が楕円の断面形を持つ場合には、装置10dは、血管の内面に付着されると、楕円の断面形を持つ。
【００９９】
図１０は、本発明に従って構築される装置10eの第６実施態様の長軸断面図である。図１０に示す実施態様の構造は、図９の構造と近似するが、接尾語”d”の代わりに接尾語”e”をつけた同じ参照数字を持つ。装置10eは、図１０の実施態様の１層の生物組織14eは１層の漿膜18eしか含まないことを除いて、図９の装置10dと同じである。
【０１００】
装置10eの組立は、装置10eの組立と同じである。１層の生物組織14eは、所望の形に裁断されると、それぞれ、第１および第２側面42eおよび44e、および第１および第２軸末端58eおよび60eを含む。
【０１０１】
組み立てられた装置は、第１および第２側面42eおよび44eの当接によって形成されるシーム46eを含む。組み立てられた装置10eの内面48eは、漿膜層18eの内面50eによって定められる。装置10eの内面48eは滑らかで、連続しており、途切れがない。装置10eの、滑らかで、連続的で、途切れのない内面48eは、血栓形成および血小板堆積を抑える。
【０１０２】
図１１は、本発明に従って構築される装置100の第７実施態様の斜視図を示す。図１１の装置100は、血管の一部、または、人体の循環器系内の他の膜を修復するためのパッチである。
【０１０３】
パッチ100は、１層の生物組織102および外部支持部材104を含む。生物組織層102は、漿膜層106および、連結する筋膜層108を含む。漿膜層106は、生物組織102の内膜（図示せず）を形成し、連結する筋膜108は、生物組織102の外面110を形成する。生物組織層102は、四角形として描かれているが、所望の任意の形態を取ってよい。
【０１０４】
外部支持部材104は、生物組織102と同じ形を持つが、サイズがやや小さい。外部支持部材104は、血管の内面または外面のような曲面に適合するよう、図１１に例示するように、曲面状のプロフィールを持ってもよい。
【０１０５】
図１１の外部支持部材104は四角形で、外部フレーム112と内部支持ビーム114を含む。外部フレーム112は、外部支持部材104の形状を定め、生物組織102の辺縁近傍を支える。外部支持部材104の内部支持ビーム114は、生物組織102の内部部分を支える。アイレット118が設けられて、生物組織102を外部支持部材104に付着する際に、縫合糸（図示せず）がそこに通されてもよい。
【０１０６】
生物組織102の外面110は、外部支持部材104に付着される。生物組織102は、外部支持部材104に縫合されるのが好ましい。生物組織102の辺縁部は、外部支持部材104から外側に伸長する。それとは別に、生物組織102の辺縁部分は、外部支持部材104の外部フレーム112の上に折り返されてもよい。
【０１０７】
血管内に埋め込まれる場合、パッチ100の外部支持部材104の外面116は、動脈瘤、または、血管の脆弱部分の上に置かれる。外部支持部材104のサイズは、動脈瘤、または血管の脆弱部分よりも大きいことが好ましく、それによって、外部支持部材104の外部フレーム112が、血管内面の健常部分に接触する。次に、生物組織102の外周が、血管の内面に、好ましくは縫合によって、付着される。別態様として、パッチ100は、血管の外面に置かれてもよいし、あるいは、循環器系の別の膜の上に使用されてもよい。
【０１０８】
図１２は、本発明に従って構築される装置100aの第８実施態様の図である。図１２に示す実施態様の構造は、図１１の構造と近似するが、接尾語”a”をつけた同じ参照数字を持つ。
【０１０９】
図１２の装置100aも、血管の一部、または、人体の循環器系内の他の膜を修復するためのパッチである。パッチ100aは１層の生物組織102aを含む。図１２のパッチ100aは、図１１に示した外部支持部材104のような支持構造を含まない。
【０１１０】
生物組織層102aは、漿膜層106aおよび、連結する筋膜層108aを含む。漿膜層106aは、生物組織102aの内膜（図示せず）を形成し、連結する筋膜108aは、生物組織102aの外面110aを形成する。生物組織102aの内面は滑らかで、連続しており、途切れがない。生物組織層102aは、四角形として描かれているが、所望の任意の形態を取ってよい。
【０１１１】
血管内に埋め込まれる場合、生物組織層102aの、連結する筋膜108aの外面110aは、動脈瘤、または、血管の脆弱部分の上に置かれる。次に、生物組織102aは、血管の内面に、好ましくは縫合によって、付着される。パッチ100aは構造的支持体を含まないので、パッチ100aは、それが付着される血管または膜の形状に容易に適応し、パッチ100aと血管または膜との間に十分な接触面積を確保する。別態様として、パッチ100aは、血管の外面に置かれてもよいし、あるいは、循環器系の別の膜の上に使用されてもよい。
【０１１２】
図１３は、本発明に従って構築される装置100bの第９実施態様の斜視図である。図１３に示す実施態様の構造は、図１２の構造と近似するが、接尾語”a”の代わりに接尾語”b”をつけた同じ参照数字を持つ。装置100bは、図１３の実施態様の１層の生物組織102bは１層の漿膜106bしか含まないことを除いて、図１２の装置100aと同じである。
【０１１３】
生物組織層102bの外面110bは、漿膜層106bの外面によって形成される。生物組織の内面（図示せず）は、漿膜層106bの内面によって形成され、滑らかで、連続しており、途切れがない。
【０１１４】
以上の本発明についての記載から、当業者であれば、改良点、変更点、および修正点に気づくであろう。例えば、本明細書に記載される方法によって固定される生物組織14は、様々な用途、例えば、心臓弁や静脈弁のようなその他の血管弁、動脈のパッチやその他の心臓成分、および血管の置換または移植などを含む用途に、ただしこれらに限定されないが、使用が可能であることが思量される。当業者の熟練の範囲内にある、このような改良点、変更点、および修正点は、本願の特許請求の範囲によって包含されるものであることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】図１は、本発明に従って構築された装置の斜視図である。
【図２】図２は、図１の直線２−２に沿って得られた図である。
【図３】図３は、図２の直線３−３に沿って得られた図である。
【図４】図４ａ−４ｆは、図１の装置を形成する方法を示す。
【図５】図５は、血管の中に埋め込まれた図１の装置を示す断面図である。
【図６】図６は、本発明に従って構築された装置の第２実施態様の長軸断面図である。
【図７】図７は、本発明に従って構築された装置の第３実施態様の長軸断面図である。
【図８】図８は、本発明に従って構築された装置の第４実施態様の長軸断面図である。
【図９】図９は、本発明に従って構築された装置の第５実施態様の長軸断面図である。
【図１０】図１０は、本発明に従って構築された装置の第６実施態様の長軸断面図である。
【図１１】図１１は、本発明に従って構築された装置の第７実施態様の斜視図である。
【図１２】図１２は、本発明に従って構築された装置の第８実施態様の斜視図である。
【図１３】図１３は、本発明に従って構築された装置の第９実施態様の斜視図である。
【図１４】図１４は、本発明の一態様による固定法の模式的なフローダイアグラムである。
【図１５】図１５は、本発明のもう一つの態様による固定法の模式的なフローダイアグラムである。
【図１】
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【図２】
2008526359.tif 000004
【図３】
2008526359.tif 000005
【図４ａ】
2008526359.tif 000006
【図４ｂ】
2008526359.tif 000007
【図４ｃ】
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【図４ｄ】
2008526359.tif 000009
【図４ｅ】
2008526359.tif 000010
【図４ｆ】
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【図５】
2008526359.tif 000012
【図６】
2008526359.tif 000013
【図７】
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【図８】
2008526359.tif 000015
【図９】
2008526359.tif 000016
【図１０】
2008526359.tif 000017
【図１１】
2008526359.tif 000018
【図１２】
2008526359.tif 000019
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年9月7日(2007.9.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固定生物組織を調製する方法であって、
少なくとも１層の生物組織を採取すること、
採取された該生物組織の層を整形すること、
整形された該生物組織を少なくとも部分的に架橋すること、
少なくとも部分的に架橋された該生物組織を滅菌すること、および、
滅菌された該生物組織の中のプリオンを不活性化すること、
を含む方法。
【請求項２】
前記固定生物組織に少なくとも1種の薬剤を加えることをさらに含み、該薬剤は、抗炎症剤、抗増殖剤、抗凝固剤、または抗血小板凝集剤の内の、少なくとも1種を含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記整形された生物組織を、該生物組織を架橋する前に、細胞分解液に接触させることをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記生物組織を少なくとも1種の架橋剤を含む溶液に接触させることによって、該生物組織が少なくとも部分的に架橋され、該架橋剤は、グルタールアルデヒド、フォルムアルデヒド、グリセルアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、ジアルデヒドでん粉、およびそれらの組み合わせから成るグループから選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記生物組織をアルコールを含む溶液に接触させることによって、該生物組織が滅菌され、該アルコールは、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、およびそれらの組み合わせから成るグループから選ばれ、かつ、該溶液中で、容量で約10%から約90%の濃度として存在することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記プリオンが、前記生物組織を塩基性溶液に接触させることによって不活性化され、該塩基性溶液が、約0.5 M から約4.0 Mのモル濃度を有することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【国際調査報告】
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2008526359.tif 000024
2008526359.tif 000025