(57)【要約】本発明は、有効量の式Iの化合物を対象に投与することを含む対象のVEGF生成または分泌の阻害方法を提供する。本発明は、VEGF生成または分泌レベルの異常と関連する病状を治療または予防する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるVEGF生成または分泌を阻害する方法であって、有効量の式I：
【化１】
2008511549.tif 000012
で示される化合物、またはその異性体、代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【請求項２】
R1の置換が5または6位に生じる請求項1記載の方法。
【請求項３】
該化合物が式II：
【化２】
2008511549.tif 000013
で示されるベンズイミダゾールカルバメートである請求項1または2記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項４】
該化合物が式III：
【化３】
2008511549.tif 000014
で示される化合物である請求項1〜3のいずれかに記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項５】
該化合物がアルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項5記載の方法。
【請求項７】
VEGFが腫瘍細胞から生成または分泌される請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
腫瘍細胞が、卵巣、結腸直腸、肝臓、膵臓、胃、子宮内膜、腎臓、または他の原発性もしくは転移性腫瘍細胞である請求項7記載の方法。
【請求項９】
VEGF生成または分泌が対象の体腔中の液体の蓄積と関連する請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
体腔中の液体の蓄積が腹水または胸水である請求項9記載の方法。
【請求項１１】
VEGF生成または分泌が網膜症血管新生と関連している請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
網膜症血管新生が増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、または黄斑変性と関連している請求項11記載の方法。
【請求項１３】
有効量の、式I：
【化４】
2008511549.tif 000015
で示される化合物、またはその異性体、代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む、対象のVEGF生成または分泌レベルの異常と関連する病状を治療または予防する方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【請求項１４】
R1置換が5または6位に生じる請求項13記載の方法。
【請求項１５】
該化合物が式II：
【化５】
2008511549.tif 000016
で示されるベンズイミダゾールカルバメートである請求項13または14記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項１６】
該化合物が式III：
【化６】
2008511549.tif 000017
で示される化合物である請求項13〜15のいずれかに記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項１７】
該化合物が、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項13〜16のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項17記載の方法。
【請求項１９】
該病状が血管透過性の増加と関連する請求項13〜18のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
該病状が、腹水、肝硬変、胸水、脳水腫、肺水腫、虚血性心疾患、黄斑変性、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、乾癬、子宮内膜症、および関節炎からなる群から選ばれる請求項13〜19のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
関節炎が関節リウマチである請求項20記載の方法。
【請求項２２】
有効量の式I：
【化７】
2008511549.tif 000018
で示される化合物、またはその異性体、代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む、腹水または腹水関連病状の治療または予防方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【請求項２３】
R1置換が5または6位に生じる請求項22記載の方法。
【請求項２４】
該化合物が式II：
【化８】
2008511549.tif 000019
で示されるベンズイミダゾールカルバメートである請求項22または23記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項２５】
該化合物が式III：
【化９】
2008511549.tif 000020
で示される化合物である請求項22〜24のいずれかに記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項２６】
該化合物が、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項22〜25のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項26記載の方法。
【請求項２８】
腹水が悪性腹水である請求項22〜27のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
腹水関連病状が肝硬変である請求項22〜27のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
有効量の式I：
【化１０】
2008511549.tif 000021
で示される化合物、またはその異性体、代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む対象の網膜症疾患の治療または予防方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【請求項３１】
R1置換が5または6位に生じる請求項30記載の方法。
【請求項３２】
該化合物が式II：
【化１１】
2008511549.tif 000022
で示されるベンズイミダゾールカルバメートである請求項30または31記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項３３】
該化合物が式III：
【化１２】
2008511549.tif 000023
で示される化合物である請求項30〜32のいずれかに記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項３４】
該化合物が、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項30〜33のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項34記載の方法。
【請求項３６】
網膜症疾患が増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および黄斑変性から選ばれる請求項30〜35のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
該化合物が全身的または局所的に投与される先の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
該投与が腔内、嚢内、筋肉内、動脈内、静脈内、眼内、皮下、局所、または経口的である先の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
腔内投与が腹腔内または胸膜内である請求項38記載の方法。
【請求項４０】
式I、II、またはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む細胞によるVEGF生成または分泌を阻害するのに用いる組成物。
【請求項４１】
式I、II、またはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む腹水または腹水関連病状を治療または予防するのに用いる組成物。
【請求項４２】
式I、II、またはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む網膜症疾患を治療または予防するのに用いる組成物。
【請求項４３】
式I、II、またはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含むVEGF生成または分泌関連病状を治療または予防するのに用いる組成物。
【請求項４４】
1またはそれ以上の候補ベンズイミダゾールカルバメートの存在下および非存在下で対象の血清VEGF濃度をモニターし、血清VEGF濃度の低下を達成するためにベンズイミダゾールカルバメートの同一性または用量を調整することを含む対象に対するベンズイミダゾールカルバメート治療計画の設計方法。
【請求項４５】
請求項44に従って設計したベンズイミダゾールカルバメート治療計画を用いる治療を必要とする対象の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的にはVEGF生成および/または分泌レベルの異常に関連する病状の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管内皮細胞増殖因子(Vascular endothelial growth factor)(VEGF；血管透過性因子(VPF)としても知られる)は、高度に保存された強力な多機能性サイトカインである。VEGF生成および/または分泌レベルの異常は、多くの病的状態と関連している。例えば、高濃度の生物学的に活性なVEGFは、癌患者の胸水および腹水に検出された(Zebrowski et al.、1999a、b)。
【０００３】
腹腔中の体液の蓄積である腹水は、腫瘍および他の病的状態、例えば慢性肝疾患を含む多くの病状から生じうる。肝硬変は腹水症例の大部分の原因であり、一般に予後不良である。
【０００４】
悪性腹水の蓄積は、腹膜癌症の患者の罹病率と死亡率の重要な要因である。悪性腹水形成の要因には、結腸、胃、膵臓、子宮内膜、および卵巣癌がある(Smith and Jayson、2003)。例えば、卵巣癌の悪性進行は、主に腹腔に限定され、腹水形に発展することが多い(Ozols et al.、1980)。腫瘍サイズと腹水の蓄積はともに生存率と反比例する(Hasumi et al.、2002)。進行性卵巣癌の患者の現在の治療法は腫瘍縮小手術と全身化学療法の組み合わせであり、パクリタキセルとシスプラチンの組み合わせがIII期とIV期の初期化学療法と考えられる(Burbridge et al.、1999)。しかしながら、患者の3分の2は、診断時にすでに進行性疾患を有し、予後不良は急速な腹水の蓄積と高度に侵襲性および多形性細胞表現型と関連がある。腹水および腹水関連病状の有効な治療方法が依然として必要である。
【０００５】
腹水は、腹膜および腫瘍の微小血管の透過性亢進と関連があり、種々の研究が血管透過性の増加による腹水形成におけるVEGFの役割を示唆した。より一般的には、VEGFは血管新生の誘導を含む血管内皮に対する多くの重要な作用を示す。VEGFは、強力な血管透過性増加活性を有し、VEGF生成または分泌レベルの異常は微小血管の透過性亢進をもたらす。VEGFは、現在、腫瘍増殖に必要な重要な因子であると認識されており、多くの他の病状、例えば糖尿病、関節リウマチを含む関節炎、乾癬、子宮内膜症、脳水腫、アテローム性動脈硬化症、虚血性心疾患、および網膜症疾患、例えば加齢性黄斑変性に関与する。
【０００６】
腫瘍のVEGF分泌は、腹水の蓄積に必須である。通常、腫瘍細胞はVEGFの主な供給源であるが、腫瘍関連間質も重要なVEGF生成部位である。例えばVEGF阻害剤を用いる腫瘍細胞によるVEGF生成または分泌の阻害が動物試験で示され、腹水形成の阻害をもたらした(Zebrowski et al.、1999a、b；Xu et al.、2000)。VEGF生成および分泌は固形腫瘍に限られず、VEGFおよびVEGFレセプターは種々の白血病および他の血液の悪性腫瘍により発現される証拠も増えつつある。
【０００７】
したがって、VEGFは治療的介入の魅力的標的であり、モノクローナル抗体、VEGFレセプターアンタゴニスト、チロシンキナーゼアンタゴニスト、および可溶性VEGFレセプター(VEGF-トラップ)を含むVEGF活性を阻害する種々の戦略が求められている。しかしながら、VEGF生成および/または分泌を阻害する有効な方法、およびVEGF生成および/または分泌と関連する病状の治療が依然として必要である。
【０００８】
本発明は、ベンズイミダゾールカルバメートアルベンダゾールがin vitroのヒト卵巣癌細胞により分泌されるVEGFレベル、およびin vivoのVEGFレベルに強力な効果を示し、VEGFレベルの異常に関連する多くの病状に対する有意な阻害効果を示すという本願発明者の驚くべき知見に基づく。
(発明の要約)
【０００９】
本発明の最初の局面は、
対象におけるVEGF生成または分泌を阻害する方法であって、有効量の式I：
【化１】
2008511549.tif 000002
で示される化合物、またはその代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む方法を提供する
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【００１０】
ある態様において、R1置換は5または6位に生じる。
【００１１】
該化合物は、
式II：
【化２】
2008511549.tif 000003
で示されるベンズイミダゾールカルバメートであってよい
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【００１２】
該化合物は、
式III：
【化３】
2008511549.tif 000004
で示される化合物であってよい
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【００１３】
該化合物は、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれてよい。
【００１４】
ある態様において、該化合物は、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である。
【００１５】
VEGFは腫瘍細胞により生成または分泌されるかもしれない。腫瘍細胞は、卵巣、結腸直腸、肝臓、膵臓、胃、子宮内膜、腎臓、または他の原発性または転移性腫瘍細胞であってよい。
【００１６】
VEGF生成または分泌は、腹水または胸水のような体腔中の体液の蓄積と関連があるかもしれない。
【００１７】
VEGF生成または分泌は、例えば増殖性網膜症または黄斑変性における網膜症血管新生と関連があるかもしれない。
【００１８】
第二の局面において、本発明は、
有効量の、式I：
【化４】
2008511549.tif 000005
で示される化合物、またはその代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む、対象のVEGF生成または分泌レベルの異常と関連する病状を治療または予防する方法を提供する
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【００１９】
ある態様において、該化合物は、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である。
【００２０】
該病状は、血管透過性の増加と関連があるものであってよい。該病状は、腹水、肝硬変、胸水、脳水腫、肺水腫、虚血性心疾患、黄斑変性、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、乾癬、子宮内膜症、および関節炎、例えば関節リウマチからなる群から選ばれてよい。
【００２１】
該化合物の投与は、治療する病状の性質に応じて全身的または局所的であってよい。投与は、腔内、嚢内、筋肉内、動脈内、静脈内、皮下、局所、または経口的であってよい。腔内投与は腹腔内または胸膜内であってよい。
【００２２】
第3の局面において、本発明は、
有効量の式I：
【化５】
2008511549.tif 000006
で示される化合物、またはその代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む、腹水または腹水関連病状の治療または予防方法を提供する
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【００２３】
ある態様において、該化合物は、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である。
【００２４】
腹水は悪性腹水であってよい。腹水関連病状は肝硬変であってよい。
【００２５】
該化合物は全身的または局所的(regionally)に投与してよい。該化合物は腹腔内に投与してよい。
【００２６】
第4の局面において、本発明は、
有効量の式I：
【化６】
2008511549.tif 000007
で示される化合物、またはその代謝物、誘導体、または類似体を対象に投与することを含む対象の網膜症疾患の治療または予防方法を提供する
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【００２７】
ある態様において、該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である。
【００２８】
網膜症疾患は、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、または黄斑変性から選ばれてよい。
【００２９】
上記局面および態様のいずれかによれば、該化合物は、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、アジュバント、または希釈剤と共に組成物の形で投与してよい。
【００３０】
第五の局面において、本発明は、式Iの化合物を1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む細胞によるVEGF生成または分泌を阻害するのに用いる組成物を提供する。
【００３１】
第六の局面において、本発明は、式Iの化合物を1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む腹水または腹水関連病状を治療または予防するのに用いる組成物を提供する。
【００３２】
第7の局面において、本発明は、式Iの化合物を1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む網膜症疾患を治療または予防するのに用いる組成物を提供する。
【００３３】
第8の局面において、本発明は、式Iの化合物を1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含むVEGF生成または分泌に関連する病状を治療または予防するのに用いる組成物を提供する。
【００３４】
第9の局面において、本発明は、1またはそれ以上の候補ベンズイミダゾールカルバメートの存在下および非存在下で対象の血清VEGF濃度をモニターし、血清VEGF濃度の低下を達成するためにベンズイミダゾールカルバメートの同一性(identity)または用量を調整することを含む対象に対するベンズイミダゾールカルバメート治療計画の設計方法を提供する。
【００３５】
第10の局面では、第9の局面に従って設計したベンズイミダゾールカルバメート治療計画を用いる治療を必要とする対象の治療方法を提供する。
【００３６】
上記局面および態様内には、式I、II、およびIIIの化合物の立体異性体および幾何異性体、およびその互変異性型を含む異性体も予期される。
定  義
【００３７】
本明細書の文脈において、用語「含む(包含する)(comprising)」は、「唯一にではなく主として含む」ことを意味する。さらに、「comprise(含む)」および「comprises(含む)」のような用語「含む(comprising)」の変形は類似の種々の意味を持つ。
【００３８】
VEGFレベルに関して本明細書で用いる用語「阻害する」は、VEGF生成または分泌を抑制、減少、または改善することを意味する。例えば、治療する病状の性質を含む状況に応じて、阻害は、VEGF生成または分泌の完全な阻害(ブロッキング)を意味する必要はないが、目的とする効果の達成を可能にするのに十分な程度にVEGF生成を低下させる必要がある。
【００３９】
本明細書で用いる用語「治療する」および「治療」は、病状または症状を治療し、病状または症状の確立を予防し、または病状または疾患または他のあらゆる望ましくない症状を予防し、妨げ、または逆転させるあらゆる全ての使用を表す。
【００４０】
本明細書で用いる用語「腹水関連病状」は、腹腔中の過剰な液体の蓄積と少なくとも一部関連する病状を表す。該病状はそのような蓄積を特徴とし、そのような蓄積の結果として直接または間接的に生じるか、または該病状自身が腹腔中の過剰な液体の蓄積をもたらしうる。ある典型的腹水関連病状は肝硬変である。
【００４１】
本明細書で用いる用語「有効量」は、その意味の中に無毒性であるが目的とする効果を得るのに十分な薬剤または化合物の量を含む。必要な正確な量は、治療する種、対象の年齢および一般状態、治療する病状の重症度、投与する特定の薬剤、および投与方法などのような要因に応じて対象ごとに変化するだろう。すなわち、正確な「有効量」を特定することはできない。しかしながら、あらゆる特定の場合において、適切な「有効量」は、日常的実験のみを用いて当業者が決定することができよう。
【００４２】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、その意味の中に一価の飽和、直鎖および分岐鎖炭化水素ラジカルを含む。
【００４３】
本明細書で用いる用語「アルケニル」は、その意味の中に少なくとも1の二重結合を有する一価の直鎖および分岐鎖炭化水素ラジカルを含む。
【００４４】
本明細書で用いる用語「アリール」は、その意味の中に一価の、単一、多核、結合、および融合芳香族炭化水素ラジカルを含む。
(図面の簡単な説明)
【００４５】
本発明を以下の図面を例に参照して説明する。
【００４６】
図1. 腹膜OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスにおける腹水生成に対する腹腔内アルベンダゾール処置(150mg/kg x 3/週、4週間)の効果。コントロールおよびアルベンダゾール(ABZ)処置マウスにおける腹水容量(ml)。各値は、6〜8測定の平均±s.e.を表す。
【００４７】
図2. 腫瘍形成ヌードマウスから吸引した腹水中に存在するOVCAR-3細胞に対するアルベンダゾールの効果。各値は、6〜8測定の平均±s.e.を表す。
【００４８】
図3. ヌードマウスからの腹膜腫瘍の総重量に対するアルベンダゾールの効果。各値は、6〜8測定の平均±s.e.を表す。
【００４９】
図4. OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスにおけるCA-125レベルに対するアルベンダゾールの効果。各値は、6〜8測定の平均±s.e.を表す。
【００５０】
図5. 腹膜OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスの腹水中のVEGFレベル。各値は、6〜8測定の平均±s.e.を表す。
【００５１】
図6. OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスの血漿VEGFレベルに対するアルベンダゾールの効果。各値は、6〜8測定の平均±s.e.を表す。
【００５２】
図7. 腹膜OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスの腹水または腹膜洗浄液から吸引した細胞から抽出した種々のVEGF mRNAアイソフォームを示すRT-PCR。A-Cは、コントロールマウスからの細胞であり、D-Fは、アルベンダゾール腹腔内処置(150mg/kg x 3/週、4週間)動物から抽出した。
【００５３】
図8. in vitroのSKOV-3細胞のVEGF生成に対する6時間アルベンダゾール処置の効果。各値は、4測定の平均±s.e.を表す。A. 種々の濃度(μM)のアルベンダゾール存在下のVEGFレベル(pg/105細胞)。B. 6ng/ml MMP-9で同時処置後の種々の濃度(μM)のアルベンダゾール存在下のVEGFレベル(pg/105細胞)。
【００５４】
図9. DMSO、PBS、または種々の濃度のアルベンダゾール(2μl中0.1μg、1μg、または10μg)で処置後の、正常酸素(圧)および過酸素(75% O2)状態下のマウスにおける網膜血管新生(血管総数)。
【００５５】
図10. DMSO中アルベンダゾール(A)またはDMSO単独(B)を注射した後のマウス網膜切片(50μm)のヘマトキシリン・エオジン染色の光学顕微鏡写真。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５６】
ベンズイミダゾールカルバメート化合物は、ヒトを含む哺乳動物の寄生虫である蠕虫を制御するために広く用いられる広域駆虫薬である。ベンズイミダゾールカルバメートの主な標的は、チューブリンであると考えられており、該化合物はチューブリンの重合を阻害し、微小管を不安定化するように作用する。そのようなベンズイミダゾールカルバメートの一つにアルベンダゾール(メチル 5-プロピルチオ-1H-ベンズイミダゾール-2-イルカルバメート)がある。他のベンズイミダゾールカルバメートには、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールがある。
【００５７】
本発明者らは、アルベンダゾールがin vitroの種々の癌細胞系および動物モデルおよび臨床試験において癌に抗増殖効果を有することを以前にみいだした(WO 02/076454、この内容は本明細書の一部を構成する。)。本明細書に開示するように、本発明者らは、今回in vitroのヒト卵巣癌細胞により分泌されるVEGFレベル、および腹水生成、網膜血管新生、およびin vivoのVEGFレベルに対する強力な効果を有することを証明した。
【００５８】
したがって、本発明のある局面は、対象における細胞によるVEGF生成または分泌を阻害する方法であって、有効量の式I：
【化７】
2008511549.tif 000008
で示される化合物、またはその類似体、代謝物、または誘導体を対象に投与することを含む方法に関する
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる、BおよびB'は独立してO、S、S(O)、またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R2は、Hまたは置換または非置換アルキルから選ばれる；
R3は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、5または6員の複素環(そのヘテロ原子はO、Sおよび/またはNの1またはそれ以上から選ばれる)、-SR14、-OR15、-SOR16、-SO2R17、-SCN、-C(O)-R18、-OR19、NR20COOR21から選ばれる、ここで、R15〜R21は、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルから選ばれる。］。
【００５９】
典型的には、該化合物は、式II：
【化８】
2008511549.tif 000009
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］
または、式III：
【化９】
2008511549.tif 000010
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］
で示されるベンズイミダゾールカルバメートである。
【００６０】
当業者は、上記化合物の立体異性体および幾何異性体を含む異性体が存在しうること、およびそのような異性体の使用も本発明の範囲に含まれることを容易に理解するだろう。さらに、上記化合物の互変異性型の使用も予期される。例えば、置換ベンズイミダゾール基には、R1置換基が4〜7位のいずれかに存在するものを含む多くの互変異性型で存在しうる。
【００６１】
アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体(例えば、アルベンダゾールスルホキシドまたはアルベンダゾールスルホン)は、本発明の方法および組成物に特に有用なベンズイミダゾールカルバメートである。しかしながら、当業者は、他のベンズイミダゾールカルバメートも使用してよいことを容易に理解するだろう。例えば、他の適切なベンズイミダゾールカルバメートには、限定されるものではないが、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールがある。
病  状
【００６２】
上記化合物は、細胞のVEGF生成を阻害するよう作用し、および/または治療を受ける対象の細胞からのVEGF分泌を阻害することができよう。したがって、本発明は、上記のような化合物を用い、血管透過性の増加に関連する病状を含むVEGF生成または分泌レベルの異常、典型的には増加、と関連する病状を治療または予防するための方法および組成物を提供する。本発明の方法および組成物を適応可能な病状には、限定されるものではないが、腹水、肝硬変および腹水関連病状、胸水、脳水腫、肺水腫、虚血性心疾患、黄斑変性、例えば加齢黄斑変性、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、乾癬、子宮内膜症、および関節炎、例えば関節リウマチがある。
【００６３】
本明細書に開示した本発明者らの知見は、アルベンダゾールの腹腔内投与が血清VEGFレベルを急速に低下させることを示す。すなわち、血清VEGFレベルのモニターは、そのような治療を要する患者に対する適切なベンズイミダゾールカルバメート療法の設計と実施を可能にするだろう。したがって、本発明のある態様は、1またはそれ以上の候補ベンズイミダゾールカルバメートの存在下および非存在下で対象の血清VEGF濃度をモニターし、腫瘍または血清VEGF濃度の低下を達成するためにベンズイミダゾールカルバメートの同一性または用量を調整することを含む対象に対するベンズイミダゾールカルバメート治療療法の設計方法を提供する。
組成物および投与経路
【００６４】
本発明の態様は、対象におけるVEGF生成または分泌を阻害し、VEGFの生成または分泌レベルの異常に関連する病状を治療または予防するための組成物を意図する。
【００６５】
本発明の方法によれば、化合物および組成物はあらゆる適切な経路で、全身的、局所的(regionally)、または局所的(locally)に投与してよい。あらゆる特定の状況で用いる特定の投与経路は、治療する病状の性質、病状の重症度と程度、送達する特定化合物の用量、および該化合物の潜在的副作用を含む多くの要因によるだろう。
【００６６】
例えば、適切な濃度の目的とする化合物が治療する身体の部位に直接送達されることが必要な状況では、投与は全身的より局所的であってよい。局所投与は、非常に高い局所濃度の望ましい化合物を目的とする部位に送達する機能を提供し、化合物が身体の他の臓器を曝露するのを避けることにより副作用の可能性を減らしながら目的とする治療または予防効果を達成するのに適している。
【００６７】
例として、本発明の態様による投与は、腔内、嚢内、筋肉内、動脈内、静脈内、眼内、皮下、局所、または経口を含むあらゆる標準的経路により達成することができよう。腔内投与は、腹腔内または胸膜内であってよい。例えば、腹水の治療では、望ましい化合物を腹腔内に投与してよく、胸水を治療するには投与は胸膜内であってよい。
【００６８】
一般的には、適切な組成物は、当業者に知られた方法に従って製造してよく、医薬的に許容される希釈剤、アジュバント、および/または賦形剤を含んでよい。希釈剤、アジュバント、および賦形剤は、該組成物の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに有害ではないという点で「許容される」必要がある。
【００６９】
医薬的に許容される希釈剤の例には、脱塩水または蒸留水；生理食塩水溶液；植物油、例えばビーナッツ油、ベニバナ油、オリーブ油、綿実油、コーン油、ゴマ油、ラッカセイ油、またはココナッツ油；ポリシロキサン、例えばメチルポリシロキサン、フェニルポリシロキサン、およびメチルフェニルポリソルポキサンを含むシリコン油；揮発性シリコン；鉱油、例えば液体パラフィン、軟パラフィン、またはスクアラン；セルロース誘導体、例えばメチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース；低級アルカノール、例えばエタノールまたはイソプロパノール；低級アルアルカノール；低級ポリアルキレングリコール、または低級アルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、またはグリセリン；脂肪酸エステル、例えば、イソプロピルパルミテート、イソプロピルミリステート、またはエチルオレエート；ポリビニルピロリドン；カンテン；カラギーナン；トラガカントゴムまたはアカシアゴム、および石油ゼリーがある。典型的には、担体(carrierまたはcarriers)は、組成物の1重量%〜99.9重量%を形成するだろう。
【００７０】
注射可能な溶液またはサスペンジョンとして投与するための無毒性の非経口的に許容される希釈剤または担体には、リンゲル溶液、中鎖グリセリド(MCT)、等張生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、エタノール、および1,2-プロピレングリコールが含まれ得る。
【００７１】
経口使用に適した担体、希釈剤、賦形剤、およびアジュバントの例には、ピーナッツ油、液体パラフィン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アカシアゴム、トラガカントゴム、デキストロース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、ゼラチン、およびレシチンがある。さらに、これら経口用製剤は、適切な香味料および着色料を含んでよい。カプセル型で用いるときは、カプセルを崩壊を遅らせるグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような化合物でコートしてよい。
【００７２】
アジュバントには、典型的には皮膚軟化剤、乳化剤、増粘剤、保存料、殺菌剤、および緩衝剤がある。
【００７３】
経口投与用の固体型は、ヒトおよび獣医の薬務において許容される結合剤、甘味料、崩壊剤、希釈剤、香味料、コーティング剤、保存料、潤滑剤、および/または時間遅延剤を含んでよい。適切な結合剤には、アカシアゴム、ゼラチン、コーンスターチ、トラガカントゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、またはポリエチレングリコールがある。適切な甘味料には、ショ糖、ラクトース、グルコース、アスパルテーム、またはサッカリンがある。適切な崩壊剤には、コーンスターチ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、グアーガム、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸、またはカンテンがある。適切な希釈剤には、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリン、セルロース、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、または第2リン酸カルシウムがある。適切な香味料には、ペパーミント油、またはウインターグリーン、サクランボ、オレンジ、またはラズベリーの香味油がある。適切なコーティング剤には、アクリル酸および/またはメタクリル酸および/またはそのエステルのポリマーまたはコポリマー、ワックス、脂肪アルコール、ゼイン、セラック、またはグルテンがある。適切な保存料には、安息香酸ナトリウム、ビタミンE、αトコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、または亜硫酸水素ナトリウムがある。適切な潤滑剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、またはタルクがある。適切な時間遅延剤には、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートがある。
【００７４】
経口投与用の液体形は、上記物質に加えて液体担体を含んでよい。適切な液体担体には、水；油、例えばオリーブ油、ピーナツ油、ゴマ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ラッカセイ油、ココナッツ油；液体パラフィン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、グリセロール、脂肪アルコール、トリグリセリド、またはその混合物がある。
【００７５】
経口投与用のサスペンジョンは、さらに分散剤および/または懸濁化剤を含んでよい。適切な分散剤には、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル-セルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、またはアセチルアルコールがある。適切な分散剤には、レシチン；脂肪酸、例えばステアリン酸のポリオキシエチレンエステル；ポリオキシエチレンソルビトールモノまたはジ-オレエート、-ステアレート、または-ラウレート；ポリオキシエチレンソルビタンモノまたはジ-オレエート、-ステアレート、または-ラウレートなどがある。
【００７６】
経口投与用のエマルジョンは、さらに1またはそれ以上の乳化剤を含んでよい。適切な乳化剤には、上記の分散剤、または天然ゴム、例えばグアーガム、アカシアゴム、またはトラガカントゴムがある。
【００７７】
非経口的に投与可能な組成物の製造方法は、当業者に明らかであり、例えばRemington's Pharmaceutical Science、第15版、Mack Publishing Company、Easton、Pa.により詳細に記載されている(この内容は本明細書の一部を構成する。)。
【００７８】
該組成物はあらゆる適切な界面活性剤、例えば陰イオン、陽イオン、または非イオン性界面活性剤、例えばソルビタンエステル、またはそのポリオキシエチレン誘導体がある。懸濁化剤、例えば天然ゴム、セルロース誘導体、または無機物質、例えばケイ素シリカ(silicaceous silica)、および他の成分、例えばラオリンも含まれうる。
【００７９】
該組成物をリポソームの形で投与してもよい。リポソームは、一般にリン脂質や他の脂質物質から誘導され、水性媒質に分散させた単または多層状水和液体結晶により形成される。リポソームを形成することができるあらゆる無毒性の生理学的に許容される代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形の組成物は安定化剤、保存料、賦形剤などを含んでよい。好ましい脂質は、天然および合成のリン脂質およびホスファチジルコリン(レシチン)である。リポソームの形成方法は当該分野で知られており、この具体的参考文献にはPrescott編、Methods in Cell Biology、Volume XIV、Academic Press、New York、N.Y. (1976)、p.33(以下参照)がある(この内容は本明細書の一部を構成する。)。
【００８０】
本明細書に開示した化合物および組成物は、治療的または予防的に投与してよい。治療的適用において、化合物および組成物は、ある病状にすでに罹患した患者に該病状およびその症状および/または合併症を治癒させまたは少なくとも部分的に抑えるのに十分な量で投与される。該化合物または組成物は、該患者を有効に治療するのに十分な活性化合物の量を与えるべきである。
【００８１】
あらゆる特定の対象に対する投与した化合物の有効用量レベルは、治療する病状のタイプと病状の段階；用いる化合物の活性；用いる組成物；患者の年齢、体重、一般健康状態、性別、および食生活；投与時期；投与経路；化合物の隔離(sequestration)速度；治療期間；該治療と組み合わせてまたは同時に、医学分野でよく知られた他の関連因子と一緒に用いる薬剤を含む種々の因子によるだろう。
【００８２】
当業者は、日常的実験により適用可能な病状を治療するのに必要な有効な無毒性用量を決定することができよう。これは、ケースバイケースで決定されることが最も多い。
【００８３】
一般的には、有効用量は、以下の範囲であると予期される：約0.0001mg〜約1000mg/kg体重/24時間；典型的には約0.001mg〜約750mg/kg体重/24時間；約0.01mg〜約500mg/kg体重/24時間；約0.1mg〜約500mg/kg体重/24時間；約0.1mg〜約250mg/kg体重/24時間；または約1.0mg〜約250mg/kg体重/24時間。より典型的には、有効用量の範囲は、約10mg〜約200mg/kg体重/24時間の範囲であると予期される。
【００８４】
あるいはまた、有効用量は、約5000mg/m2以下であってよい。一般的には、有効用量は、以下の範囲であると予期される：約10〜約5000mg/m2、典型的には約10〜約2500mg/m2、約25〜約2000mg/m2、約50〜約1500mg/m2、約50〜約1000mg/m2、または約75〜約600mg/m2。
【００８５】
さらに、個々の投与の最適な量と間隔は治療する病状の性質と程度、投与経路と部位、および治療する特定の個体の性質により決定されることは当業者に明らかであろう。そのような最適条件も常套的技術により決定することができる。
【００８６】
最適な治療単位、例えば限定した日数について1日あたりの投与する組成物の投与数を治療判定試験の常套的治療単位を用いて当業者が確定することができることは当業者に明らかであろう。
【００８７】
本発明を以下の具体的実施例によりさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００８８】
実施例1：OVCAR-3腹膜腫瘍形成ヌードマウスのアルベンダゾール処置
細胞系NIH:OVCAR-3の細胞(ATCC受託No.HTB161)は雌のヌード無胸腺マウスの腹腔内で増殖する能力がある。腹腔内注射後、動物に臨床的卵巣癌と同様に転移性の拡散が生じる。疾患の進行は、大量の腹水生成、広範囲の腹腔内腫瘍、および肺転移の発現を特徴とする。悪性腹水細胞は、卵巣癌関連抗原CA-125を発現する。該マウスモデルは、ヒトの卵巣癌と同じ組織病理学的および発生学的特徴、ヒトの疾患と似た転移の再現パターン、治療に対する応答を追跡するのに適したマーカー、およびヒト卵巣癌と同様の薬剤感受性プロフィール(Hamilton et al.、1984)を示す。
【００８９】
in vitroで培養したOVCAR-3細胞(13 x 106)をヌードマウスに皮下注射した。8週間後、腫瘍を解剖し、細切し、PBSで3回洗浄した。培養細胞を、20%ウマ血清、ペニシリン(100 u/ml)、ストレプトマイシン(2mg/ml)、およびインスリン3u/ml、EGF 100ng/ml、アスパラギン(0.1mg/ml)、およびDEAEデキストラン0.5mg/mlを添加したRPMI中0.3%Bacto寒天に浮遊させ、細胞密度を5 x 106細胞/mlとした。2-メルカプトエタノールを50μMの濃度で加え、その直後に細胞を播いた。得られた混合物の部分(1mL)を、0.5%Bacto寒天中、鉱油でプライムしたBALB/cマウスの付着脾細胞で順化した培地0.2mLを混合したフィーダー層上に加えた。培養を5% CO2中37℃で培養した。5日間隔で、EGF(10 ng/ml)含有増殖培地0.8mLをアガロース表面上に重層した。3週間後、細胞コロニーを塊で回収し、75cm2フラスコに播いた。次に、これら細胞をマウスに皮下注射した。この皮下腫瘍から回収した50 x 106個の腫瘍細胞を1mLの培地に浮遊させ、各キャリアーヌードマウスに腹腔内注射した。腹水を回収し、無菌生理食塩水で洗浄し、4℃、300gにて5分間遠心した。
【００９０】
腹水から回収し、1.0mLの培地(RPMI1640)に浮遊させた10 x 106個の生腫瘍細胞を各試験動物に腹腔内注射した。すべての実験で、6-8週齢のヌード雌無胸腺Balb c nu/nuマウス(Animal Resources Centre、Perth、Western Australia)を試験動物に用いた。これら動物をBiological Resources Centre of the University of New South Walesの無病原体隔離条件に収容し、オートクレーブしたペレットと水を自由に与えた。動物の一般健康状態を毎日チェックした。用いた全てのプロトコールは、University of New South Wales Animal Ethics Committeeにより承認された。
【００９１】
上記のごとく腹腔内接種したマウスをアルベンダゾール処置またはコントロール群に無作為に分配した。薬剤処置を開始した(x3/週、4週間)。0.5% カルボキシメチルセルロースに懸濁したアルベンダゾールをすべての処置動物に用量150mg/kgで投与した。経口投与用に15mg/mLのサスペンジョンを調製し(0.1ml/10g体重)、腹腔内処置用には3mg/mlのサスペンジョンを用いた(3mg/1ml/20gマウス)。
【００９２】
安楽死直前に動物をペントバルビトンで麻酔し、血液試料を心臓穿刺にて回収した。次に、動物を過剰量の麻酔剤で安楽死させた。腹水を回収するため2mLの生理食塩水を腹腔内に注射し、腹腔内容をニーディング(kneading)により混合した。次に、腹水を回収し、その容量を記録し(図1)、存在する生腫瘍細胞数をカウントした(図2)。血漿および細胞不含腹水を次の分析用に-80℃で保存した。
【００９３】
腹腔中に存在する腫瘍を解剖し、計量し(図3)、次の分析のために保存した。動物を、肺、肝臓、脾臓、胃、および膵臓の転移の存在についても検査した(データ示さず)。腫瘍マーカー(CA-125)レベル(図4)は、St George Hospital Biochemistryラボラトリーで分析した。腹水(図5)および血漿(図6)中のVEGF濃度をElisaキット(Quantikine R& D systems)を用いて測定した。
【００９４】
得られた結果は、OVCAR-3腫瘍形成マウスにおいて、腹腔内アルベンダゾール処置は腹水容量とVEGFレベルの劇的な低下をもたらすことを示した。
VEGFアイソフォーム
【００９５】
腫瘍形成ヌードマウスの腹水から単離したOVCAR-3細胞(上記のごとく)をRT-PCRにより種々のVEGFアイソフォーム(VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206)のmRNAの発現について試験した。細胞を遠心(1500rpmで5分間)して分離し、残る細胞ペレットから総RNAをHigh Pure RNA Isolation Kit(Roche Diagnostics Corporation)を製造者のプロトコールにしたがって用い単離した。RNA濃度をQuartz Spectrophotometer Cell(BioRad)を用い波長260nmで分光光度計にて測定した。
【００９６】
VEGFの増幅用のプライマーをPellizzaro et al 2002に示す配列に基づいて構築した；VEGFセンス：5'-CAC ATA GGA GAG ATG AGC TTC-3'(配列番号1)；VEGFアンチセンス：5'-CCG CCT CGG CTT GTC ACA T-3'(配列番号2)。これらプライマーは以下の生成物を増幅する：VEGF121については100 bp、VEGF165については230 bp、VEGF189については300 bp、およびVEGF206については320bp。β-アクチン遺伝子は、以下のプライマーを用いて内部コントロール(202bp)として用いた：β-アクチンセンス：5'-CTT CCT GGG CAT GGA GTC CT-3'(配列番号3)；β-アクチンアンチセンス：5'-GGA GCA ATG ATC TTG ATC TT-3'(配列番号4)(Marchini et al.、1996)。
【００９７】
250ng/50ngの総RNAを用い、SuperScript(登録商標)一段階RT-PCRおよびPlatinum(登録商標)Taq(Invitrogen)を用いてVEGF/β-アクチンを増幅した。RNAを、1RT-PCR反応用にDEPC処理水で最終容量11μlに希釈した。12.5μl 2x反応混合液(最終濃度1x)、1μlプライマー混合液(40μl DEPC-水、5μl 100μMセンスプライマー、5μl 100μMアンチセンスプライマー；最終プライマー濃度0.2μM)、および0.5μl RT/Platinum(登録商標)TaqをRNA希釈物に加えた(1反応の総容量=25μl)。酵素(RNAse & Taq)を不活性に保つため、すべてのピペット工程を氷上で行った。54℃で30分間初期cDNA合成し、94℃で5分間変性させ、次いでPalm Cycler (Corbett Research)を用いて増幅を行った。これに次いで27サイクル(94℃で1分間変性、60℃で1分間プライマーをアニーリング、72℃で45秒間プライマー伸張)および72℃で10分間最終伸張を実施した。
【００９８】
RT-PCR生成物をエチジウムブロミド含有1xTAE緩衝液中2%アガロースゲル上で電位泳動(120Vで25分間)により可視化した。生成物のサイズを定量するため10Obp DNAラダー(Invitrogen)を試料と共に操作した。腹腔内アルベンダゾール投与がVEGF mRNAの発現の有意な減少をもたらしたことを示す結果を図7に示す。
実施例2：in vitro VEGF分泌に対するアルベンダゾールの効果
【００９９】
American Type Culture Collection から得たSKOV-3ヒト嚢胞腺癌細胞系(ATCC受託No. HTB77)を、10%FCS添加、1.5mM L-グルタミン、100単位/mlペニシリン、および100μg/mlストレプトマイシン含有McCoy's 5a培地に増殖させた。細胞をコンフルエントに増殖させ、0.25mg/mlトリプシン/EDTAでトリプシン処理して回収し、培地に浮遊させ、次いでプレートに播いた。次に、これをプラスチック6ウェルCorning培養プレートに接種した(2x105)。培養を95%O2/5%CO2の加湿雰囲気下、37℃インキュベーター中で維持した。24時間後、培地を除去した。サブコンフルエントの培養をリン酸緩衝液で3回洗浄し、次いで1%エタノールに溶解した種々の濃度のアルベンダゾール(0、0.1、0.25、および1.0μM)を含む培養液で6時間インキュベーションした。処置期間終了後、ウェルから培地を個々に回収し、酵素免疫測定法(ELISA)を用いてVEGF濃度を分析し、可溶性VEGF121およびVEGF165アイソフォームを検出する(Quantikine R&D systems、Minneapolis、USA)。
【０１００】
別の実験セットでは全ての他の条件を一定に保ちながら、マトリック分解酵素(matrix metalloproteinase)MMP-9 (6ng/ml)を用いて細胞を刺激し、アルベンダゾール処置前のVEGF生成を増加させた。MMP-9は卵巣腫瘍細胞の培養液中および卵巣腫瘍形成マウスの腹水中の生物学的に活性なVEGFの増加を誘導するという証拠がある(Belotti et at.、2003)。SKOV-3細胞を組換え活性型のMMP-9を種々の濃度のアルベンダゾール含有細胞培養液に直接加えて曝露した。
【０１０１】
両実験セットの結果を図8に示す。この結果からSKOV-3細胞(構成的にVEGFを放出する)の種々の濃度のアルベンダゾールによる処置は、VEGF分泌の用量依存性低下をもたらすことが明らかである。血球計およびトリパンブルー排除法を用いて各ウェルに存在する細胞の生存率を検査し(処置期間終了時)、VEGF濃度をpg(ピコグラム)/105細胞で計算した。アルベンダゾールの抗増殖作用により細胞は6時間以上インキュベーションできなかったが、VEGF濃度の用量依存性低下が観察された。MMP-9非存在下では用いた最も高いアルベンダゾール濃度(1.0μM)でVEGF濃度が64%低下した(図8A)。細胞のMMP-9による刺激は、6時間でVEGF濃度の44.8%増加をもたらした(図8B)。MMP-9刺激細胞のアルベンダゾール処置は、VEGF濃度の顕著な低下をもたらし、1μMアルベンダゾール処置細胞のVEGF濃度は65%低下した。この細胞において記載した条件下で0.1μMアルベンダゾールはMMP-9刺激により誘導された過剰なVEGF分泌を阻害した。
【０１０２】
この結果は、アルベンダゾールがin vitroのSKOV-3ヒト卵巣癌細胞からのVEGF分泌を顕著に低下させることを明確に示す。
実施例3：増殖性網膜症のネズミモデルにおける血管新生の阻害
【０１０３】
加齢黄斑変性(AMD)の潜在的阻害剤として働くアルベンダゾールの能力をよく確立されたAMD関連網膜血管新生、ROP(未熟児網膜症)のネズミモデルを用いて評価した。
【０１０４】
下記実験は、LJNSW Animal Care and Ethics Committeeにより承認された。
【０１０５】
生後6日(P6)のC57BL/6マウスをQuantum-Air Maxi-Sealedケージ(Hereford、UK)中で4日間、高酸素(75%酸素)に曝露した。P10マウスを正常酸素にもどし、麻酔し(17mg/kgケタミンおよび2.5mg/kgキシラジン)、DMSO中の0.1、1、または10μgアルベンダゾール、DMSOのみ、または1xPBSのみを含む容量2μLのボーラス静脈内注射をマイクロシリンジに取り付けた26ゲージ面取り(beveled)針(SGE International、Melbourne、Australia)を用いて注射した。マウスをさらに7日間大気(room)酸素に維持し、次いで眼を除去し、10%ホルマリン/PBSで固定した。連続横断面(50ミクロン)をヘマトキシリンとエオジンで染色した。各群から得た血管を光学顕微鏡(400x)下でカウントし、平均±SEMで表した。
【０１０６】
図9に示すように、高酸素-正常酸素は網膜血管新生の2〜3倍の増加をもたらした。アルベンダゾールは、薬剤の単回硝子体内注射後に高酸素性網膜血管新生を有意に阻害した。阻害は用量依存性であり、わずか1ugの量で観察された。DMSO単独(アルベンダゾールのビークル)では、高酸素曝露マウスの血管形成に影響を与えず、血管総数はPBS群と差がなかった。
【０１０７】
図9にグラフで示す結果の統計解析は不等分散の両側Student's t検定を用いて行った(表1)。
表1：アルベンダゾール処置の統計的有意差
【０１０８】
【表１】
2008511549.tif 000011
【０１０９】
ヘマトキシリンとエオジンで染色した切片(図10)は、DMSO単独注射群(図10B)とアルベンダゾール+DMSO注射群(図10A)の間に、血管新生以外には検出可能な形態学的な差がないことを示し、この試験の範囲内でアルベンダゾールおよび/またはそのビークルであるDMSOに対する有害または毒性反応がないことを示唆した。
実施例4：治療用組成物
【０１１０】
本明細書に記載の本発明の最良の実施方法にしたがって具体的組成物を以下に概説する。以下は、単に組成物の典型例であり、何ら本発明の範囲を限定するものではないと解釈すべきである。
実施例4(A)：非経口投与用組成物
【０１１１】
10mL〜2Lの1%カルボキシメチルセルロース中0.05mg〜5gの式Iの化合物(例えばアルベンダゾール)を含む非経口注射用組成物を製造してよい。
【０１１２】
同様に、静脈内注入用組成物は250mlの無菌リンゲル溶液と0.05mg〜5gの式Iの化合物を含んでよい。
【０１１３】
注射により投与するのに適した組成物は、10容量%のプロピレングリコールおよび水に化合物を1重量%で混合することにより製造してもよい。該溶液は濾過により滅菌することができる。
実施例4(B)：経口投与用組成物
【０１１４】
カプセル型の式Iの化合物の組成物を、標準的ツーピース硬ゼラチンカプセルに粉末型の500mgの該化合物、100mgのラクトース、35mgのタルク、および10mgのステアリン酸マグネシウムを充填することにより製造してよい。
実施例4(C)：局所投与用組成物
【０１１５】
局所用軟膏として送達するための典型的組成物は、1.0gの式Iの化合物を白色軟パラフィン(合計100.0g)と共に含み、これを分散させて滑らかで均質な生成物を製造する。
実施例4(D)：点眼用組成物
【０１１６】
点眼液として送達する典型的組成物を以下に概説する：
適切な化合物                      0.3g
メチルヒドロキシベンゾエート      0.005g
プロピルヒドロキシベンゾエート    0.06g
精製水を加えて100.00mLとする。
【０１１７】
メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエートを75℃の精製水70mLに溶解し、得られた溶液を冷却する。次に、該化合物を加え、該溶液をメンブランフィルター(ポアサイズ0.22μm)で濾過して滅菌し、次いで無菌的に無菌容器につめる。
(参考文献)
【０１１８】
Belotti、D.、Paganoni、P.、Manenti、L.、Garofalo、A.、Marchini、S.、Taraboletti、G.、and Giavazzi、R. Matrix metalloproteinases (MMP9 and MMP2) induce the release of vascular endothelial growth factor (VEGF) by ovarian carcinoma cells: implications for ascites formation. Cancer Research.、63: 5224-5229、2003.
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【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】腹膜OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスにおける腹水生成に対する腹腔内アルベンダゾール処置(150mg/kg x 3/週、4週間)の効果を示す。
【図２】腫瘍形成ヌードマウスから吸引した腹水中に存在するOVCAR-3細胞に対するアルベンダゾールの効果を示す。
【図３】ヌードマウスからの腹膜腫瘍の総重量に対するアルベンダゾールの効果を示す。
【図４】OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスにおけるCA-125レベルに対するアルベンダゾールの効果を示す。
【図５】腹膜OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスの腹水中のVEGFレベルを示す。
【図６】OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスの血漿VEGFレベルに対するアルベンダゾールの効果を示す。
【図７】腹膜OVCAR-3腫瘍形成ヌードマウスの腹水または腹膜洗浄液から吸引した細胞から抽出した種々のVEGF mRNAアイソフォームを示すRT-PCRである。
【図８】in vitroのSKOV-3細胞のVEGF生成に対する6時間アルベンダゾール処置の効果を示す。
【図９】DMSO、PBS、または種々の濃度のアルベンダゾール(2μl中0.1μg、1μg、または10μg)で処置後の、正常酸素および過酸素(75% O2)状態かのマウスにおける網膜血管新生(血管総数)を示す。
【図１０】DMSO中アルベンダゾール(A)またはDMSO単独(B)を注射した後のマウス網膜切片(50μm)のヘマトキシリン・エオジン染色の光学顕微鏡写真を示す。
【図１】
2008511549.tif 000024
【図２】
2008511549.tif 000025
【図３】
2008511549.tif 000026
【図４】
2008511549.tif 000027
【図５】
2008511549.tif 000028
【図６】
2008511549.tif 000029
【図７】
2008511549.tif 000030
【図８】
2008511549.tif 000031
【図９】
2008511549.tif 000032
【図１０】
2008511549.tif 000033
【配列表】
2008511549000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成18年3月9日(2006.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるVEGF生成または分泌を阻害する方法であって、有効量の式II：
【化１】
2008511549.tif 000035
で示されるベンズイミダゾールカルバメートを対象に投与することを含む方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項２】
該化合物が式III：
【化２】
2008511549.tif 000036
で示される化合物である請求項1に記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項３】
該化合物がアルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項3記載の方法。
【請求項５】
VEGFが腫瘍細胞から生成または分泌される請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
腫瘍細胞が、卵巣、結腸直腸、肝臓、膵臓、胃、子宮内膜、腎臓、または他の原発性もしくは転移性腫瘍細胞である請求項5記載の方法。
【請求項７】
VEGF生成または分泌が対象の体腔中の液体の蓄積と関連する請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
体腔中の液体の蓄積が腹水または胸水である請求項7記載の方法。
【請求項９】
VEGF生成または分泌が網膜症血管新生と関連している請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
網膜症血管新生が増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、または黄斑変性と関連している請求項9記載の方法。
【請求項１１】
有効量の、式II：
【化３】
2008511549.tif 000037
で示されるベンズイミダゾールカルバメートを対象に投与することを含む、対象のVEGF生成または分泌レベルの異常と関連する病状を治療または予防する方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項１２】
該化合物が式III：
【化４】
2008511549.tif 000038
で示される化合物である請求項11に記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項１３】
該化合物が、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項11または12に記載の方法。
【請求項１４】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項13記載の方法。
【請求項１５】
該病状が血管透過性の増加と関連する請求項11〜14のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
該病状が、腹水、肝硬変、胸水、脳水腫、肺水腫、虚血性心疾患、黄斑変性、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、乾癬、子宮内膜症、および関節炎からなる群から選ばれる請求項11〜15のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
関節炎が関節リウマチである請求項16記載の方法。
【請求項１８】
有効量の式II：
【化５】
2008511549.tif 000039
で示されるベンズイミダゾールカルバメートを対象に投与することを含む、腹水または腹水関連病状の治療または予防方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項１９】
該化合物が式III：
【化６】
2008511549.tif 000040
で示される化合物である請求項18に記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項２０】
該化合物が、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項18または19に記載の方法。
【請求項２１】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項20記載の方法。
【請求項２２】
腹水が悪性腹水である請求項18〜21のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
腹水関連病状が肝硬変である請求項18〜21のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
有効量の式II：
【化７】
2008511549.tif 000041
で示されるベンズイミダゾールカルバメートを対象に投与することを含む対象の網膜症疾患の治療または予防方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる、
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である；
R21は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、またはアリールアルキルである。］。
【請求項２５】
該化合物が式III：
【化８】
2008511549.tif 000042
で示される化合物である請求項24に記載の方法
［式中、R1は、H、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキル、-SR7、-SOR8、-SO2R9、-SCN、B'(CH2)nBR10、-C(O)-R11または-OR12、COOR13、-NO2、NR13aCOOR13b、イソチオシアネート、または-CNから選ばれる；
ここで、R7〜R13bは、それぞれ独立してH、置換または非置換の、直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アリールアルキルから選ばれる；
BおよびB'は独立してO、S、S(O)またはSO2から選ばれ、nは1〜4である。］。
【請求項２６】
該化合物が、アルベンダゾール、アルベンダゾールスルホキシド、メベンダゾール、フルベンダゾール、トリクラベンダゾール、オキシフェンベンダゾール、ルクサベンダゾール、カムベンダゾール、オキシベンダゾール、パーベンダゾール、チアベンダゾール、シクロベンダゾール、ドリベンダゾール、エチベンダゾール、およびフェンベンダゾールからなる群から選ばれる請求項24または25に記載の方法。
【請求項２７】
該化合物が、アルベンダゾール、またはその代謝物、誘導体、または類似体である請求項26記載の方法。
【請求項２８】
網膜症疾患が増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および黄斑変性から選ばれる請求項24〜27のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
該化合物が全身的または局所的に投与される先の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
該投与が腔内、嚢内、筋肉内、動脈内、静脈内、眼内、皮下、局所、または経口的である先の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
腔内投与が腹腔内または胸膜内である請求項30記載の方法。
【請求項３２】
式IIまたはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む細胞によるVEGF生成または分泌を阻害するのに用いる組成物。
【請求項３３】
式IIまたはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む腹水または腹水関連病状を治療または予防するのに用いる組成物。
【請求項３４】
式IIまたはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含む網膜症疾患を治療または予防するのに用いる組成物。
【請求項３５】
式IIまたはIIIの化合物を、1またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、またはアジュバントと共に含むVEGF生成または分泌関連病状を治療または予防するのに用いる組成物。
【請求項３６】
1またはそれ以上の候補ベンズイミダゾールカルバメートの存在下および非存在下で対象の血清VEGF濃度をモニターし、血清VEGF濃度の低下を達成するためにベンズイミダゾールカルバメートの同一性または用量を調整することを含む対象に対するベンズイミダゾールカルバメート治療計画の設計方法。
【請求項３７】
請求項36に従って設計したベンズイミダゾールカルバメート治療計画を用いる治療を必要とする対象の治療方法。
【手続補正書】
【提出日】平成19年4月24日(2007.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2008511549000001.app
【国際調査報告】
2008511549.tif 000043
2008511549.tif 000044
2008511549.tif 000045