(57)【要約】  本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤である、Ｃ−プリンヌクレオシド類似体及び所定のその誘導体を提供する。これらの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。これらは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤、ＨＣＶ複製の阻害剤として、及び／又はＣ型肝炎感染の治療に特に有用である。本発明はこのようなＣ−ヌクレオシド化合物を単独で含有するか又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染に対して活性のある他の薬剤と共に含有する医薬組成物についても述べる。本発明のＣ−ヌクレオシド化合物を用いてＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを阻害、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製を阻害、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療する方法も開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉの化合物：
【化１】
2008502685.tif 000083
又は医薬的に許容されるそれらの塩（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ８であり；
Ｙは、ＣＲ１１又はＮであり；
Ｒ１は、水素、フルオロ、アジド、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、メルカプト及びＣ１−３アルキルチオからなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル又は構造式：
【化２】
2008502685.tif 000084
のアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ４は、水素、アジド、メチル、ヒドロキシメチル又はフルオロメチルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、ホスホリル又はそれらの環状プロドラッグエステル、ジホスホリル、トリホスホリル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル又は構造式：
【化３】
2008502685.tif 000085
のアミノアシル残基であり；
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノ、ベンジルアミノ、ジベンジルアミノ又はＣ４−６ヘテロシクロアルキルであり、ここで、アルキル、シクロアルキル、ベンジル及びヘテロシクロアルキルは、非置換であるか又は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから独立に選択される１個から５個の基で置換されており；
Ｒ８は、水素又はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１−５アルキル又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ１０は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；及び
Ｒ１１は、水素、メチル、ハロゲン、アジド又はアミノである。）。
【請求項２】
ＹがＣＨであり、及びＸがＯ、Ｓ又はＮＲ８である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＯである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＮＲ８である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ８が水素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ＹがＮであり、及びＸがＯ、Ｓ又はＮＲ８である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ＸがＯである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
ＸがＮＲ８である、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ８が、水素である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１及びＲ４が両方とも水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２、Ｒ３及びＲ５が水素である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ６及びＲ７が、それぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＹがＮであり；ＸがＮＲ８であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が水素であり；及びＲ６及びＲ７がそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ８が水素である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
ＹがＣＨであり；ＸがＮＲ８であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が水素であり；及びＲ６及びＲ７がそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ８が水素である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
ＹがＮであり；ＸがＯであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が水素であり；及びＲ６及びＲ７がそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ８が水素である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
ＹがＣＨであり；ＸがＯであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５が水素であり；及びＲ６及びＲ７がそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ８が水素である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−フロ［３，２−ｄ］ピリミジン；
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン；
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン；
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；
７−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソオキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン；
５−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソオキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−オン；
７−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン；及び
５−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−オン；
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物又は医薬的に許容されるそれらの塩。
【請求項２２】
請求項１に記載の化合物と及び医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２３】
哺乳動物におけるＣ型肝炎ウイルス感染の治療のための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
哺乳動物におけるＣ型肝炎ウイルス感染の治療のための医薬品の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ−プリンヌクレオシド類似体及び所定のその誘導体、それらの合成及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤としてのそれらの使用に関する。本発明の化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。これらは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、及び／又はＣ型肝炎感染の治療に特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）感染は、肝硬変や肝細胞癌などの慢性肝疾患に至る重大な健康問題であり、感染者は相当数にのぼり、世界人口の２％から１５％と推定される。Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌによると、感染者は米国だけで４５０万人にのぼると推定される。世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）によると、感染者は世界中で２億人を上回り、年間感染者は少なくとも３００万人から４００万人である。一旦感染すると、感染者の約２０％はウイルスを一掃するが、それ以外の感染者は終生ＨＣＶを保有し続ける。慢性感染個体の１０％から２０％は、やがて、肝臓を破壊する肝硬変又は癌を発症する。ウイルス性疾患は汚染血液及び血液製剤、汚染注射針による非経口感染、性的接触、あるいは感染母体又はキャリア母体からその子への垂直感染により伝播される。ＨＣＶ感染の現在の治療法は、組み換えインターフェロン−αの単独療法又はヌクレオシド類似体リバビリンとの併用療法による免疫療法に限られており、臨床効果は限定的なものである。さらに、ＨＣＶのワクチンも確立されていない。従って、慢性ＨＣＶ感染を効果的に治療する治療薬の改良することが急務である。ＨＣＶ感染治療の最新技術は文献で概説されており、以下の刊行物（全体を参照により本明細書に組込む。）を参照されたい。Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，「Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ」，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．１１：７９−９６（２０００）；Ｈ．Ｒｏｓｅｎら、「Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ」，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）；Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ」，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）；Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ、「Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）；Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，「Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，」Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）；Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ、「Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ」，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）；及びＣ．Ｃｒａｂｂ，「Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）。
【０００３】
ＨＣＶ治療に対して様々なアプローチが取られており、その中には、ウイルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼ及びＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害及びワクチンの開発が含まれる。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３，０１０アミノ酸のポリプロテインをコードする約９６００塩基の単一オリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有する、エンベロープのある＋鎖ＲＮＡウイルスである。ＨＣＶ遺伝子の蛋白産物は、構造蛋白質、Ｃ、Ｅ１及びＥ２と、非構造蛋白質、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ及びＮＳ４Ｂ並びにＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂから構成される。非構造（ＮＳ）蛋白質は、ウイルス複製の触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂをポリプロテイン鎖から遊離させる。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶの複製サイクルでテンプレートとして機能する１本鎖ウイルスＲＮＡから２本鎖ＲＮＡを合成するのに必要である。従って、ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶ複製複合体の必須成分であると考えられる（Ｋ．Ｉｓｈｉら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ」，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２９：１２２７−１２３５（１９９９）及びＶ．Ｌｏｈｍａｎｎら、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ」，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）を参照。）。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は、２本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成を阻止するので、ＨＣＶ特異的抗ウイルス療法の開発に対して魅力的なアプローチである。
【０００５】
ＨＣＶ感染治療の可能性のある、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｇポリメラーゼの阻害剤の開発については、Ｍ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら、「Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ」，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１２：１２６９−１２８０（２００３）及びＰ．Ｈｏｆｆｍａｎら、「Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２）」，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ、１３：１７０７−１７２３（２００３）において概説されている。Ａ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｐｕｒｉｎｅ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＣＶ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４）により、ＨＣＶポリメラーゼに対するプリンリボヌクレオシドの活性が報告されている。ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ治療のための治療アプローチとして、構造的に多様なヌクレオシド誘導体が引き続き必要とされている。
【０００６】
本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及び所定のその誘導体が、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の強力な阻害剤であることが今回分かった。これらのＣ−ヌクレオシド化合物の５’−三リン酸誘導体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である。本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染を治療するのに有用である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用な、Ｃ−ヌクレオシド化合物及び所定のその誘導体を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスの複製の阻害剤、特にＣ型肝炎ウイルスの複製の阻害剤として有用な、Ｃ−ヌクレオシド化合物及び所定のその誘導体を提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用な、Ｃ−ヌクレオシド化合物及び所定のその誘導体を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、医薬的に許容される担体と共に本発明のＣ−ヌクレオシド化合物を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として使用するための、本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤、特にＨＣＶ複製の阻害剤として使用するための、本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に使用するための、本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して、特にＨＣＶに対して活性のある他の薬剤と組み合わせて本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害する、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するための方法を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製を阻害する、特にＨＣＶ複製を阻害するための方法を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療する、特にＨＣＶ感染を治療するための方法を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して活性のある他の薬剤と併用してＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療する、特にＨＣＶに対して活性のある他の薬剤と併用してＨＣＶ感染を治療するための方法を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療のための、特にＨＣＶ複製の阻害及び／又はＨＣＶ感染の治療のための医薬品として使用するための、Ｃ−ヌクレオシド化合物及び所定のその誘導体ならびにその医薬組成物を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療のための、特にＨＣＶ複製の阻害及び／又はＨＣＶ感染の治療のための医薬品の製造のための、本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及び所定のその誘導体ならびにその医薬組成物の使用を提供することである。
【００２１】
これらの目的及び他の目的は、以下の詳細な説明から容易に理解されよう。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は、指示される構造化学立体配置の構造式Ｉの化合物：
【００２３】
【化４】
2008502685.tif 000002
又は医薬的に許容されるその塩に関する（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ８であり；
Ｙは、ＣＲ１１又はＮであり；
Ｒ１は、水素、フルオロ、アジド、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、メルカプト及びＣ１−３アルキルチオからなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル又は構造式：
【００２４】
【化５】
2008502685.tif 000003
のアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ４は、水素、アジド、メチル、ヒドロキシメチル又はフルオロメチルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、ホスホリル又はそれらの環状プロドラッグエステル、ジホスホリル、トリホスホリル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル又は構造式：
【００２５】
【化６】
2008502685.tif 000004
のアミノアシル残基であり；
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノ、ベンジルアミノ、ジベンジルアミノ又はＣ４−６ヘテロシクロアルキルであり、ここで、アルキル、シクロアルキル、ベンジル及びヘテロシクロアルキルは、非置換であるか又は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから独立に選択される１個から５個の基で置換されており；
Ｒ８は、水素又はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１−５アルキル又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ１０は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ１１は、水素、ハロゲン、メチル、アジド又はアミノである。）。
【００２６】
式Ｉの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用である。これらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用である。
【００２７】
上記化合物を単独で、又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性のある他の薬剤と組み合わせて含有する医薬組成物ならびに、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法も本発明に包含される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明は、指示される構造化学立体配置の構造式Ｉの化合物：
【００２９】
【化７】
2008502685.tif 000005
又は医薬的に許容されるその塩に関する（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ８であり；
Ｙは、ＣＲ１１又はＮであり；
Ｒ１は、水素、フルオロ、アジド、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、メルカプト及びＣ１−３アルキルチオからなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、水素、メチル、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル又は構造式：
【００３０】
【化８】
2008502685.tif 000006
のアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ４は、水素、アジド、メチル、ヒドロキシメチル又はフルオロメチルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、ホスホリル又はそれらの環状プロドラッグエステル、ジホスホリル、トリホスホリル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル又は構造式：
【００３１】
【化９】
2008502685.tif 000007
のアミノアシル残基であり；
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノ、ベンジルアミノ、ジベンジルアミノ又はＣ４−６ヘテロシクロアルキルであり、ここで、アルキル、シクロアルキル、ベンジル及びヘテロシクロアルキルは、非置換であるか又は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから独立に選択される１個から５個の基で置換されており；
Ｒ８は、水素又はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１−５アルキル又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ１０は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ１１は、水素、ハロゲン、メチル、アジド又はアミノである。）。
【００３２】
式Ｉの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として有用である。これらはまた、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。
【００３３】
構造式Ｉの化合物のある実施形態において、ＹはＣＨであり、ＸはＯ、Ｓ又はＮＲ８である。この実施形態のあるクラスにおいて、ＸはＯである。この実施形態の別のクラスにおいて、ＸはＮＲ８である。このクラスのサブクラスにおいて、Ｒ８は水素である。
【００３４】
構造式Ｉの化合物の第二の実施形態において、ＹはＮであり、ＸはＯ、Ｓ又はＮＲ８である。この第二の実施形態のあるクラスにおいて、ＸはＯである。第二の実施形態の別のクラスにおいて、ＸはＮＲ８である。このクラスのサブクラスにおいて、Ｒ８は水素である。
【００３５】
本発明の化合物の第三の実施形態において、Ｒ１及びＲ４は両方とも水素である。この第三の実施形態のあるクラスにおいて、Ｒ２、Ｒ３及びＲ５は水素である。このクラスのサブクラスにおいて、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである。
【００３６】
本発明の化合物の第四の実施形態において、ＹはＮであり；ＸはＮＲ８であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は水素であり；Ｒ６及びＲ７はそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである。この第四の実施形態のあるクラスにおいて、Ｒ８は水素である。
【００３７】
本発明の化合物の第五の実施形態において、ＹはＣＨであり；ＸはＮＲ８であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は水素であり；Ｒ６及びＲ７はそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである。この第五の実施形態のあるクラスにおいて、Ｒ８は水素である。
【００３８】
本発明の化合物の第六の実施形態において、ＹはＮであり；ＸはＯであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は水素であり；Ｒ６及びＲ７はそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである。この第六の実施形態のあるクラスにおいて、Ｒ８は水素である。
【００３９】
本発明の化合物の第七の実施形態において、ＹはＣＨであり；ＸはＯであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は水素であり；Ｒ６及びＲ７はそれぞれ独立に、水素、アミノ、フルオロ又はヒドロキシである。この第七の実施形態のあるクラスにおいて、Ｒ８は水素である。
【００４０】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として有用な構造式Ｉの本発明の化合物の非限定的な具体例としては、次のものが挙げられる：
【００４１】
【化１０】
2008502685.tif 000008
2008502685.tif 000009
又は医薬的に許容されるその塩。
【００４２】
本発明のある実施形態において、本発明のＣ−ヌクレオシド化合物は、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤として、及び／又は＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。この実施形態のあるクラスにおいて、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスは、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ）ウイルス又はピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスである。このクラスのあるサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルスは、ライノウイルス、ポリオウイルス又はＡ型肝炎ウイルスである。このクラスの第２のサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、Ｂａｎｚｉウイルス及びウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）からなる群から選択される。このサブクラスのあるサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルスである。
【００４３】
本発明の別の態様は、構造式Ｉの化合物の治療的有効量を哺乳動物に投与することを含む、治療を必要とする哺乳動物における、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法に関する。
【００４４】
本発明のこの態様のある実施形態において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼは、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼである。この実施形態のあるクラスにおいて、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼは、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼ又はピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼである。このクラスのあるサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼは、ライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼ又はＡ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。このクラスの第２のサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼは、Ｃ型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱病ウイルスポリメラーゼ、デングウイルスポリメラーゼ、西ナイルウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、Ｂａｎｚｉウイルスポリメラーゼ及びウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼからなる群から選択される。このクラスのあるサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼは、Ｃ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
【００４５】
本発明のこの態様の第２の実施形態において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製は、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製である。この実施形態のあるクラスにおいて、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製は、フラビウイルス科ウイルス複製又はピコルナウイルス科ウイルス複製である。このクラスのあるサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルス複製は、ライノウイルス複製、ポリオウイルス複製又はＡ型肝炎ウイルス複製である。このクラスの第２のサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス複製は、Ｃ型肝炎ウイルス複製、黄熱病ウイルス複製、デングウイルス複製、西ナイルウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、Ｂａｎｚｉウイルス複製及びウシウイルス性下痢ウイルス複製からなる群から選択される。このサブクラスのあるサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス複製は、Ｃ型肝炎ウイルス複製である。
【００４６】
本発明のこの態様の第３の実施形態において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染は、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ウイルス感染である。この実施形態のあるクラスにおいて、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染は、フラビウイルス科ウイルス感染又はピコルナウイルス科ウイルス感染である。このクラスのあるサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルス感染は、ライノウイルス感染、ポリオウイルス感染又はＡ型肝炎ウイルス感染である。このクラスの第２のサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス感染は、Ｃ型肝炎ウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、デングウイルス感染、西ナイルウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、Ｂａｎｚｉウイルス感染及びウシウイルス性下痢ウイルス感染からなる群から選択される。このサブクラスのあるサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス感染は、Ｃ型肝炎ウイルス感染である。
【００４７】
本明細書を通して、次の用語は以下に記載する意味を有する。
【００４８】
上記アルキル基は、直鎖又は分枝鎖構造の、指定された長さのアルキル基を含むものとする。このようなアルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどである。
【００４９】
「アルケニル」という用語は、炭素原子総数２から６、又はこの範囲のいずれかの数の、直鎖又は分枝鎖アルケン（例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニルなど）を意味する。
【００５０】
「アルキニル」という用語は、炭素原子総数２から６、又はこの範囲のいずれかの数の、直鎖又は分枝鎖アルキン（例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルなど）を意味する。
【００５１】
「シクロアルキル」という用語は、炭素原子総数３から８、又はこの範囲のいずれかの数の環状アルカン環（即ち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチル）を意味する。
【００５２】
「シクロヘテロアルキル」という用語は、窒素、酸素及びイオウから選択される１又は２個のヘテロ原子を含有する非芳香族複素環を含むものとする。４から６員のシクロヘテロアルキルの例としては、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チアモルホリニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピペラジニルなどが挙げられる。
【００５３】
「アルコキシ」という用語は、指定された炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）又はこの範囲のいずれかの数の、直鎖又は分枝鎖アルコキシドを指す（即ち、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシなど。）。
【００５４】
「アルキルチオ」という用語は、指定された炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルチオ）又はこの範囲のいずれかの数の、直鎖又は分枝鎖アルキルスルフィドを指す（即ち、メチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオなど。）。
【００５５】
「アルキルアミノ」という用語は、指定された炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルアミノ）又はこの範囲のいずれかの数の、直鎖又は分枝鎖アルキルアミンを指す（即ち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノなど。）。
【００５６】
「アルキルスルホニル」という用語は、指定された炭素原子数（例えば、Ｃ１−６アルキルスルホニル）又はこの範囲のいずれかの数の、直鎖又は分枝鎖アルキルスルホンを指す（即ち、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニルなど。）。
【００５７】
「アルキルオキシカルボニル」という用語は、指定された炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル）又はこの範囲のいずれかの数の本発明のカルボン酸誘導体の、直鎖又は分枝鎖エステルを指す（即ち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル又はブチルオキシカルボニル）。
【００５８】
「アリール」という用語は、フェニル、ナフチル及びピリジルを含む。アリール基は、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルコキシ及びＣ１−４アルキルチオから独立して選択される１から３個の基で場合によっては置換されている。
【００５９】
「ハロゲン」という用語は、ハロゲン原子、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含むものとする。
【００６０】
「ホスホリル」という用語は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２−を指す。
【００６１】
「ジホスホリル」という用語は、
【００６２】
【化１１】
2008502685.tif 000010
の構造を有する基を指す。
【００６３】
「トリホスホリル」という用語は、
【００６４】
【化１２】
2008502685.tif 000011
の構造を有する基を指す。
【００６５】
「置換」という用語は、指定された置換基による複数度の置換を含むものとする。複数置換基部分が明細書又は特許請求の範囲で開示又は主張される場合、置換化合物は、開示又は主張されている置換基部分の１以上により、１回以上回、独立に置換され得る。
【００６６】
式
【００６７】
【化１３】
2008502685.tif 000012
において、Ｒ２、Ｒ３及びＲ５のアミノアシル残基実施形態中のＲ９が、水素以外である場合、アミノアシル残基は不斉中心を含有し、個々のＲ及びＳ立体異性体ならびにＲＳ−ジアステレオマー混合物を含むものとする。
【００６８】
「５’−トリホスフェート」とは、次の一般構造式ＩＩを有する本発明のＣ−ヌクレオシド化合物の５’−ヒドロキシル基の三リン酸エステル誘導体を指す：
【００６９】
【化１４】
2008502685.tif 000013
（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１−Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は、上記で定義したとおりである。）。本発明の化合物はまた、三リン酸エステルの医薬的に許容される塩ならびに、医薬的に許容される、構造式ＩＩＩ及びＩＶの、５’−一リン酸エステル誘導体及び５’−二リン酸エステル誘導体をそれぞれ含むものとする。
【００７０】
【化１５】
2008502685.tif 000014
【００７１】
「医薬組成物」における場合、「組成物」という用語は、活性成分と、担体を構成する不活性成分と、を含有する製剤ならびに、任意の２以上の成分の、化合、錯化もしくは凝集又は、１以上の成分の解離又は、１以上の成分の他のタイプの反応もしくは相互作用により、直接又は間接的に得られるあらゆる製剤を含むものとする。従って、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物と医薬的に許容される担体とを混合することにより製造されるあらゆる組成物を含む。
【００７２】
化合物の「投与」及び化合物を「投与する」という用語は、必要とする個体に本発明の化合物又は本発明の化合物のプロドラッグを提供することを意味すると理解されたい。
【００７３】
本発明の別の態様は、ＨＣＶ感染を治療するのに有用な１以上の薬剤と併用して本発明の化合物を用い、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するか、ＨＣＶ複製を阻害するか、又はＨＣＶ感染を治療する方法に関する。ＨＣＶに対して活性があるこのような薬剤には、これらに限定されないが、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンとの併用、ペグインターフェロン−αとリバビリンとの併用、インターフェロン−αとレボビリンとの併用、及びペグインターフェロン−αとレボビリンとの併用が含まれる。インターフェロン−αには、これらに限定されないが、組み換えインターフェロン−α２ａ（例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから市販されているＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ａ（ＰｅｇａｓｙｓＴＭ）、インターフェロン−α２ｂ（例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから市販されているＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ｂ（ＰｅｇＩｎｔｒｏｎＴＭ）、組み換えコンセンサスインターフェロン（インターフェロンαｃｏｎ−１など）及び精製インターフェロン−α製剤が含まれる。Ａｍｇｅｎ社の組み換えコンセンサスインターフェロンは、商品名Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（Ｒ）である。レボビリンは、リバビリンのＬ鏡像異性体であり、リバビリンと類似の免疫調節活性を示している。ビラミジンは、ＷＯ０１／６０３７９（譲受人、ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）で開示されているリバビリンの類似体である。本発明のこの方法によると、併用剤の個々の成分を治療期間中に異なる時点で個別に投与することができ、又は、併用剤を２回以上に分けるか又は１回で同時に投与することもできる。従って、本発明は、このような同時又は交互投与の投与計画全てを含むものとし、「投与する」という用語は、相応に解釈すべきであると理解されたい。当然のことながら、本発明の化合物とＨＣＶ感染の治療に有用な他の薬剤の併用範囲は、原則として、ＨＣＶ感染のあらゆる治療用医薬組成物とのあらゆる併用を含む。本発明の化合物又は医薬的に許容されるその塩をＨＣＶに対して活性のある第２の治療剤と併用する場合、各化合物の用量は、化合物を単独で使用する場合の用量と同一又は異なるものであり得る。
【００７４】
ＨＣＶ感染の治療の場合、本発明の化合物はＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤である薬剤と併用投与することもできる。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは必須のウイルス酵素であり、ＨＣＶ複製の阻害の優れたターゲットであることが述べられている。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の基質型及び非基質型両者の阻害剤は、ＷＯ９８／２２４９６、ＷＯ９８／４６６３０、ＷＯ９９／０７７３３、ＷＯ９９／０７７３４、ＷＯ９９／３８８８８、ＷＯ９９／５０２３０、ＷＯ９９／６４４４２、ＷＯ００／０９５４３、ＷＯ００／５９９２９、ＧＢ−２３３７２６２、ＷＯ０２／４８１１６、ＷＯ０２／４８１７２及び米国特許第６，３２３，１８０号で開示されている。ＨＣＶ複製の阻害剤の開発及びＨＣＶ感染の治療のターゲットとしてのＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼは、Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ、「Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ」，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）に記載されている。
【００７５】
リバビリン、レボビリン及びビラミジンは、細胞内酵素イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介してグアニンヌクレオチドの細胞内プールを調節することによりその抗ＨＣＶ効果を発揮すると思われる。ＩＭＰＤＨはデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）グアニンヌクレオチド生合成における生合成経路の律速酵素である。リバビリンは容易に細胞内でリン酸化され、一リン酸誘導体はＩＭＰＤＨの阻害剤である。従って、ＩＭＰＤＨの阻害は、ＨＣＶ複製の阻害剤の発見に有用な別のターゲットである。従って、本発明の化合物は、ＷＯ９７／４１２１１及びＷＯ０１／００６２２（譲受人Ｖｅｒｔｅｘ）で開示されているＶＸ−４９７などのＩＭＰＤＨ阻害剤；ＷＯ００／２５７８０（譲受人Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）で開示されているものなどの、別のＩＭＰＤＨ阻害剤；又はミコフェノール酸モフェチル（Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ及びＥ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎ，４４（Ｓｕｐｐｌ．）：１６５（１９９３）を参照。）と併用投与し得る。
【００７６】
ＨＣＶ感染の治療の場合、本発明の化合物を抗ウイルス剤アマンタジン（１−アミノアダマンタン）（この薬剤の全般的な説明については、Ｊ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓ．１２：１−３６（１９８３）を参照のこと。）と併用投与することもできる。
【００７７】
ＨＣＶ感染の治療に対して、本発明の化合物は、Ｒ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ’ｋｕｒｕら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：１７５４−１７５９（１９９７）；Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３６：７６１１−７６１４（１９９５）；米国特許第３，４８０，６１３号（１９６９年１１月２５日）；国際公開ＷＯ０１／９０１２１（２００１年１１月２９日）；国際公開ＷＯ０１／９２２８２（２００１年１２月６日）；及び国際公開ＷＯ０２／３２９２０（２００２年４月２５日）及び国際公開ＷＯ０４／００２９９９（２００４年１月８日）；国際公開ＷＯ０４／００３０００（２００４年１月８日）及び国際公開ＷＯ０４／００２４２２（２００４年１月８日）（それぞれ、その内容全体を参照により本明細書に組み込む。）に開示されている抗ウイルス２’−Ｃ分枝リボヌクレオシドと併用することもできる。このような２’−Ｃ分枝リボヌクレオシドには、これらに限定されないが、２’−Ｃ−メチル−シチジン、２’−Ｃ−メチル−ウリジン、２’−Ｃ−メチル−アデノシン、２’−Ｃ−メチル−グアノシン及び９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン及びリボースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルの対応するアミノ酸エステル及び５’−ホスフェート誘導体の対応する、場合によっては置換されている環状１，３−プロパンジオールエステルが含まれる。
【００７８】
本発明の化合物はまた、ＨＣＶ感染の治療のために、ＷＯ０２／５１４２５（２００２年７月４日）（譲渡人、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏｒｐ．）；ＷＯ０１／７９２４６、ＷＯ０２/３２９２０及びＷＯ０２／４８１６５（２００２年６月２０日）（譲渡人、Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ，Ｌｔｄ．）；ＷＯ０１／６８６６３（２００１年９月２０日）（譲渡人、ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＷＯ９９／４３６９１（１９９９年９月２日）；ＷＯ０２／１８４０４（２００２年３月７日）（譲渡人、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）；Ｕ．Ｓ．２００２／００１９３６３（２００２年２月１４日）；ＷＯ０２／１００４１５（２００２年１２月１９日）；ＷＯ０３／０２６５８９（２００３年４月３日）；ＷＯ０３／０２６６７５（２００３年４月３日）；ＷＯ０３／０９３２９０（２００３年１１月１３日）；Ｕ．Ｓ．２００３／０２３６２１６（２００３年１２月２５日）；ＵＳ２００４／０００６００７（２００４年１月８日）；ＷＯ０４／０１１４７８（２００４年２月５日）；ＷＯ０４／０１３３００（２００４年２月１２日）；ＵＳ２００４／００６３６５８（２００４年４月１日）；及びＷＯ０４／０２８４８１（２００４年４月８日）で開示されているものなどの、抗ＨＣＶ特性を有する他のヌクレオシドと併用することもできる。
【００７９】
本発明の化合物はまた、ＨＣＶ感染の治療のために、ＷＯ０１／７７０９１（２００１年１０月１８日）（譲渡人、Ｔｕｌａｒｉｋ，Ｉｎｃ．）；ＷＯ０１／４７８８３（２００１年７月５日）（譲渡人、Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ，Ｉｎｃ．）；ＷＯ０２／０４４２５（２００２年１月１７日）（譲渡人、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＷＯ０２／０６２４６（２００２年１月２４日）（譲渡人、Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  ｄｉ  Ｒｉｃｅｒｃｈｅ  ｄｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅ  Ｐ．Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｓ．Ｐ．Ａ．）；及びＷＯ０２／２０４９７（２００２年３月３日）で開示されているものなどの、ＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤と併用することもできる。
【００８０】
「医薬的に許容される」とは、担体、希釈剤又は賦形剤が製剤の他の成分と融和可能でなければならず、且つその受容者に有害であってはならないことを意味する。
【００８１】
医薬的に許容される担体と共に本発明のＣ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体を含有する医薬組成物も本発明に含まれる。本発明の別の例は、上記化合物のいずれかと医薬的に許容される担体とを組み合わせることにより調製される医薬組成物である。本発明の別の例は、上記化合物のいずれかと医薬的に許容される担体とを組み合わせることを含む医薬組成物の調製方法である。
【００８２】
本発明の化合物の有効量と医薬的に許容される担体とを含有する、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するために有用な医薬組成物も本発明に含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療に有用な医薬組成物、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法及びＲＮＡ依存性ウイルス複製、特にＨＣＶ複製の治療方法も本発明に包含される。さらに、本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性のある別の薬剤の治療的有効量と共に本発明の化合物の治療的有効量を含有する医薬組成物にも関する。ＨＣＶに対して活性な薬剤には、これらに限定されないが、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンとの併用、ペグインターフェロン−αとリバビリンとの併用、インターフェロン−αとレボビリンとの併用及びペグインターフェロン−αとレボビリンとの併用が含まれる。インターフェロン−αには、これらに限定されないが、組み換えインターフェロン−α２ａ（例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから市販されているＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、インターフェロン−α２ｂ（例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから市販されているＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、コンセンサスインターフェロン及び精製インターフェロン−α製剤が含まれる。リバビリンとＨＣＶに対するその活性の考察については、Ｊ．Ｏ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ及びＳ．Ａ．Ｒａｙｂｕｃｋ，「Ｉｎｏｓｉｎｅ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ」，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２０１−２１０（２０００）を参照のこと。
【００８３】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害のための、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療のための医薬品の製造のための、Ｃ−ヌクレオシド化合物及びその誘導体ならびにその医薬組成物の使用を提供する。本発明のさらに別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害のための、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療のための医薬品として使用するための、Ｃ−ヌクレオシド化合物ならびにその誘導体及びその医薬組成物を提供する。
【００８４】
本発明の医薬組成物は、活性成分として構造式Ｉの化合物又は医薬的に許容されるその塩を含み、さらに医薬的に許容される担体及び、場合によっては、他の治療成分も含有し得る。
【００８５】
このような組成物には、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内及び静脈内を含む。）、眼内（眼科）、肺（鼻腔吸入もしくは口腔吸入）又は鼻腔内投与に適した組成物が含まれるが、何らかの所定の症例に最適な経路は、治療する状態の種類及び重症度ならびに活性成分の種類により異なる。この組成物は、単位用量形態で都合よく与えることができ、製薬分野で周知の何らかの方法により製造することができる。
【００８６】
実際の使用では、構造式Ｉの化合物を活性成分として従来の医薬配合技術により医薬担体と緊密に混合することができる。担体は例えば経口又は非経口（静脈内を含む。）などの投与に望ましい製剤形態に応じて多種多様の形態とし得る。経口剤形用の組成物の調製において、通常の医薬担体のいずれかを使用することができ、例えば、懸濁液、エリキシル及び溶液などの経口液体製剤の場合には、水、グリコール、油類、アルコール類、香味剤、防腐剤、着色剤などを使用することができ、あるいは、例えば散剤、硬カプセル剤及び軟カプセル剤及び錠剤などの経口固体製剤の場合には、デンプン、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの担体を使用することができ、液体製剤よりも固体経口製剤が好ましい。
【００８７】
投与し易いという理由から、錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口用量単位形態であり、その場合には当然固体医薬担体が使用される。必要に応じて、標準的な水性又は非水性技術により錠剤にコーティングを施し得る。このような組成物及び製剤は少なくとも活性成分０．１％を含有すべきである。これらの組成物中の活性化合物の割合は、当然のことながら変動させることができ、都合よく、用量単位の重量の約２％から約６０％の間である。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、有効用量が得られるように選択される。活性化合物は、例えば滴剤やスプレーなどとして鼻腔内投与することもできる。
【００８８】
錠剤、丸剤、カプセルなどは、結合剤（トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ又はゼラチンなど）、賦形剤（リン酸２カルシウムなど）、崩壊剤（コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸など）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウムなど）及び甘味剤（スクロース、ラクトース又はサッカリンなど）も含有し得る。用量単位形態がカプセルである場合、上記の種類の材料に加えて脂肪油などの液体担体を含有し得る。
【００８９】
コーティングとして又は用量単位の物理的形状を変えるために他の各種材料を使用し得る。例えば、錠剤は、シェラック、糖又は両者でコーティングし得る。シロップ又はエリキシル剤は、活性成分に加えて、甘味剤としてスクロース、防腐剤としてメチルパラベン及びプロピルパラベン、色素並びに香味料（例えばチェリー又はオレンジ風味）を含有し得る。
【００９０】
構造式Ｉの化合物を非経口投与することもできる。ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合した水中で、これらの活性化合物の溶液又は懸濁液を調製し得る。グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びその油中混合物中で分散液を調製することもできる。通常の保存及び使用条件において、微生物の増殖を防ぐためにこれらの製剤に防腐剤を添加する。
【００９１】
注射に適した医薬形態としては、滅菌水溶液又は分散液及び、滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合も、剤形は滅菌状態でなければならず、容易に注射針を通過できる程度の流動性がなければならない。剤形は、製造及び保存条件下で安定でなければならず、細菌や真菌などの微生物の汚染から防御されなければならない。担体は例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、適当なそれらの混合物及び植物油を含む溶媒又は分散媒であり得る。
【００９２】
哺乳動物、特にヒトに本発明の化合物の有効用量を与えるのに適したあらゆる投与経路を利用することができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼内、肺、鼻腔内などの経路を利用できる。剤形としては、錠剤、トローチ、分散液、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルなどが挙げられる。好ましくは、構造式Ｉの化合物を経口投与する。
【００９３】
ヒトに経口投与する場合、用量範囲は、分割投与で、０．０１から１０００ｍｇ／ｋｇ体重である。ある実施形態において、用量範囲は、分割投与で、０．１から１００ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態において、用量範囲は、分割投与で、０．５から２０ｍｇ／ｋｇ体重である。経口投与では、治療する患者の症状に合わせて用量を調整するために、活性成分１．０から１０００ｍｇ、特に活性成分１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００、及び１０００ｍｇを含有する、錠剤又はカプセルの形態で提供することが好ましい。
【００９４】
使用する活性成分の有効用量は、使用する特定化合物、投与様式、治療する状態及び治療する状態の重症度により変化し得る。このような用量は、当業者により容易に決定され得る。最適治療応答が得られるように、この用法・用量を調節することができる
本発明の化合物は、１以上の不斉中心を含有し、従って、ラセミ化合物及びラセミ混合物、単一の鏡像異性体、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオマーとして存在し得る。本発明は、下記構造式に示すような５員フラノース環に対するβ−Ｄ立体化学配置を有する、Ｃ−ヌクレオシド化合物、即ち５員フラノース環のＣ−１及びＣ−４の置換基がβ−立体化学配置（太線で示す「上向き」方向）を有するＣ−ヌクレオシド化合物を包含するものとする。
【００９５】
【化１６】
2008502685.tif 000015
【００９６】
本明細書に記載の化合物の中にはオレフィン二重結合を含むものがあり、特に指定しない限り、Ｅ及びＺ幾何異性体の両方を含むものとする。
【００９７】
本明細書に記載の化合物の中にはケト−エノール互変異性体などの互変異性体として存在し得るものがある。個々の互変異性体ならびにそれらの混合物も構造式Ｉの化合物に包含される。本発明の化合物に包含されるケト−エノール互変異性体の１例を以下に示す。
【００９８】
【化１７】
2008502685.tif 000016
【００９９】
構造式Ｉの化合物は、例えば、適切な溶媒（例えばメタノールもしくは酢酸エチル又はそれらの混合物）からの分別結晶により、又は光学活性固定相を使用してキラルクロマトグラフィーにより、それらの個々のジアステレオ異性体に分離することができる。
【０１００】
あるいは、公知の立体配置の光学的に純粋な出発材料又は試薬を使用して、立体特異的合成により構造式Ｉの化合物の任意の立体異性体を得ることもできる。
【０１０１】
本発明の化合物は、医薬的に許容される塩の形態で投与することができる。「医薬的に許容される塩」という用語は、無機又は有機塩基及び無機又は有機酸を含む医薬的に許容される非毒性塩基又は酸から調製される塩を意味する。「医薬的に許容される塩」という用語に含まれる塩基性化合物の塩とは、遊離塩基を適切な有機又は無機酸と反応させることにより一般に調製される本発明の化合物の非毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には、これらに限定されないが、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド及び吉草酸塩が含まれる。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、適切な医薬的に許容されるその塩には、これらに限定されないが、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの無機塩基から誘導される塩が含まれる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム及びナトリウム塩が特に好ましい。医薬的に許容される非毒性有機塩基から誘導される塩には、第一、第二及び第三アミン、環状アミン、並びに塩基性イオン交換樹脂（例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなど）の塩が含まれる。
【０１０２】
また、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）、リン酸［−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２］又はアルコール基が本発明の化合物中に存在する場合、カルボン酸誘導体の医薬的に許容されるプロドラッグエステル（例えば、メチル、エチル又はピバロイルオキシメチルエステル）；Ｃ−ヌクレオシドの５’−リン酸誘導体の医薬的に許容されるプロドラッグエステル（５’−一リン酸、５’−二リン酸及び５’−三リン酸のエステルを含む。）；又はリボースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルのプロドラッグアシル誘導体（例えば、Ｏ−酢酸塩及びＯ−マレイン酸塩など）を用いることができる。徐放製剤又はプロドラッグ製剤として使用するために、バイオアベイラビリティー、組織分布、溶解性及び加水分解特性を変化させるための、本技術分野で公知のエステル及びアシル基が含まれる。意図する誘導体は、インビボで所望する化合物に容易に変換可能である。したがって、本発明の治療方法において、「投与する」及び「投与」という用語は、具体的に開示されている化合物を用いた、又は具体的に開示していないかもしれないが、ヒト患者を含む哺乳動物に投与した後に指定された化合物にインビボで変化する化合物を用いた、上述のウイルス感染の治療を包含するものとする。適切なプロドラッグ誘導体の、選択及び調製のための従来法は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５（参照によりその全体を本明細書中に組み込む。）で述べられている。
【０１０３】
本発明の、Ｃ−ヌクレオシド化合物及び誘導体の調製
ヌクレオシド及びヌクレオシド化学の実施においてよく確立された合成方法ならびにそれらの変法を適用して、本発明の、Ｃ−ヌクレオシド化合物及びそれらの誘導体を調製することができる。
【０１０４】
スキーム１及び２で示し、下記で詳述するように、２−Ｃ−Ｍｅ−リボフラノース環のＣ−１位に７−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−３−イル核酸塩基を有するＣ−ヌクレオシド化合物を調製することができる。
【０１０５】
【化１８】
2008502685.tif 000017
【０１０６】
Ｍ．Ｂｉｏら、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６９：６２５７−６２６６（２００４）で述べられている手段に従い、ジアセトングルコース１−１を３，５−ジ−Ｏ−（ｐ−トルオイル）−２−Ｃ−メチル−Ｄ−リボフラノース１−２に変換することができる。ジオール１−２に存在するＣ−１及びＣ−２ヒドロキシルを、それらのｐ−トルオイルエステル誘導体として保護する。しかし、その他の保護基（例えば様々なエステル、エーテル及びシリルエーテルなど）も使用できる。続く段階において、核酸塩基の骨格の基礎を与えるフラノース環のアノマーＣ−１位でシアノ基を結合させることができる。これは、β立体化学配向においてシアノ基を組み込む手段により遂行することができる。あるいは、クロマトグラフィー法又はその他の適切な方法を用いて、混合物から適正な立体配向を有する異性体を分離することができる。これは、周囲温度、高温又は低温にて、ルイス酸（例えば、三フッ化ホウ素、テトラ塩化スズ及びテトラ塩化チタン）の存在下で、場合によっては溶媒（例えば、ジクロロメタン、１，２−ジクロロメタン及びクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素など）存在下で、シアン化物源（例えば、シアン化トリメチルシリルなど）をテトラエステル１−３と反応させることにより遂行することができる。このような変換の例は、Ｕｔｉｍｏｔｏら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，３９：９６７（１９８３）で見出すことができる。
【０１０７】
続く段階において、シアノ基を対応する酸１−５に、直接又は中間体アミドを介して、加水分解することができる。やや高温での、水の限定量存在下での酸−触媒加水分解により、所望する変換を遂行することができる。次の段階において、標準的条件（ジクロロメタン及びテトラヒドロフランなどの適切な溶媒中での、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の触媒量存在下における、塩化オキサリルによる酸１−５の溶液の処理によるものなど）を用いて、酸１−５を対応する塩化アシル１−６に変換することができる。
【０１０８】
【化１９】
2008502685.tif 000018
【０１０９】
スキーム２で示すようにして、α−ケトニトリル２−１を介して、７−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン環系を構築することができる。このような変換は、科学文献において周知であり、例えば、Ｈｅｒｒｍａｎ，Ｋ．及びＳｉｍｃｈｅｍ，Ｇ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ２０４（１９７９）又はＲｏｓｏｗｓｋｉ，Ａ．，Ｇｈｏｓｈａｌ，Ｍ．，Ｓｏｌａｎ，Ｖ．Ｃ，Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．，１７６：４７−５８（１９８８）を参照のこと。標準的反応条件下でｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホランなどのＷｉｔｔｉｇ剤と、α−ケトニトリル２−１を反応させて（Ｗｉｔｔｉｇ，Ｇ．，Ｓｃｈｏｌｌｋｏｐｆ，Ｕ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，８７：１３１８（１９５４））、エステルニトリル２−２を得ることができる。類似の変換は、Ｌ．Ｋａｌｖｏｄａ、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４３：１４３１−１４３７（１９７８）により、ホルマイシン合成の一部として述べられている。続く段階は、Ｋａｌｖｏｄａの論文で述べられているものと同様である。ジアゾアセトニトリル及び不飽和エステル２−２の両性付加環化は、シアン化水素の除去後、２−４においてピラゾール環系を与える。あるいは、ジアゾアセテートを使用することができるが、２−３など、構造中に存在するエステル基の選択的操作を可能とするエステルを選択することが有利である。次の段階において、標準的な酸性条件下（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｅｈｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，第三版、１９９９で見出されるものなど）でｔｅｒｔ−ブチルエステル基を切断することができる。次に、遊離酸をクルチウス転位に供することができる（Ｃｕｒｔｉｕｓ，Ｔ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，２３：３０２３（１８９０））。中間体アジドの形成に対して、数々の条件が適切であり、ジフェニルホスホリルアジドなどの試薬（Ｍｉｌａｒｉ，Ｂ．Ｌ．，Ｂｅｙｅｒ，Ｔ．Ａ．，Ｓｉｅｇｅｌ，Ｔ．Ｗ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３４：１０１１（１９９１））を使用することができる。イソシアネートを所望するアミン２Ａに変換するか、又はアルコールを用いてウレタン中間体を形成することができる。しかし、ウレタンは、加水分解して所望するアミンを生じなければならない。エタノールなどの適切な溶媒中で、アミノニトリル２−４を酢酸ホルムアミジンと反応させることにより、複素環の構築を完了することができる。類似の変換の例は、Ｂｕｃｈａｎａｎ、Ｊ．Ｇ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．及びＷｉｇｈｔｍａｎ，Ｒ．Ｈ．，Ｔｅｔｒａｈｄｅｒｏｎ，４０：１１９−１２３（１９８４）による、ホルマイシン合成の公表文献で見出すことができる。エステル保護基の加溶媒分解切断により、所望のＣ−ヌクレオシド２−６を得ることができ、これは、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｅｈｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，第三版、１９９９で見出される数々の方法により遂行することができる。エステル切断段階に特に適切である���は、塩基性条件であり、例えば、ナトリウムメトキシドのメタノール性溶液にトリエステル２−５を曝露することなどである。
【０１１０】
２−Ｃ−Ｍｅ−リボフラノース環のＣ−１位に４−アミノフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル核酸塩基を有するＣ−ヌクレオシドは、スキーム３、４Ａ及び４Ｂにおいて示すようにして調製することができ、下記で詳述する。
【０１１１】
【化２０】
2008502685.tif 000019
【０１１２】
出発物質は、ジアセトングルコース１−１であり、Ｍ．Ｂｉｏら、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６９：６２５７−６２６６（２００４）で述べられているようにして、これをベンジルエーテル３−１に変換する。次いで、ジエチルシアノメチルホスホネートを用いてこのラクトール３−１をＷｉｔｔｉｇ反応のＨｏｒｎｅｒ変法に供する（Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，Ｗ．Ｓ．，Ｅｍｍｏｎｓ，Ｗ．Ｄ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８３：１７３３（１９６１））。最初の生成物３−２が自然に閉環し、α及びβ異性体の混合物が生じ、クロマトグラフィー法を用いて、この混合物から所望するβ異性体３−３を単離する。適切な溶媒（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど）中でニトリル３−３をビス（ジメチルアミノ）ｔｅｒｔブトキシメタンに曝露する場合、Ｌｉａｎｇ，Ｃら、Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．，３０３：３３−３８（１９９７）で述べられているものと同様に、縮合が起こる。Ｂａｔｔａｃｈａｒｙａ，Ｂ．Ｅ．，ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，２７：８１５−８１８（１９８６）により述べられているものと同様のエナミン生成物３−４の制御加水分解により、エノールニトリル３−５が生じる。
【０１１３】
【化２１】
2008502685.tif 000020
【０１１４】
クロロアセトニトリルを用いたエノラート３−５のアルキル化により、エーテル４Ａ−１が生じる。スキーム４Ａで示すように、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミドリチウム及びエトキシドナトリウムなどの強塩基にこのニトリルを曝露することにより、中間体カルバニオンが形成され、次いで、閉環が起こる。同様の閉環の例は、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ，２７：８１５−８１８（１９８６）で見出すことができる。これらの条件下で、エステル保護基もまた切断されて、アミノニトリル４Ａ−２が生じる。次いで、２−４の合成に対して上で述べたものと同様にして、アミノニトリル４Ａ−２をフロ［３，２−ｄ］ピリミジン環系に変換する。水素添加分解条件下でベンジル基を除去して、所望の最終化合物４−４を得る。
【０１１５】
あるいは、スキーム４Ｂで示される手段に従い、化合物４−４を調製することもできる。この変法によると、上述のように、ジエチルシアノメチルホスホネートを用いて、ジオール４Ｂ−８をＷｉｔｔｉｇ反応のＨｏｒｎｅｒ変法に供する（Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，Ｗ．Ｓ．，Ｅｍｍｏｎｓ，Ｗ．Ｄ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８３：１７３３（１９６１））。これらの条件下で、塩化ｐ−トルオイルを用いて主要なα異性体をアシル化し、トリエステル４Ｂ−２を得る。次に、スキーム３及び４で述べたものと類似の一連の段階にこの中間体を供し、最終的に中間体４Ｂ−６を得る。この連続段階の最後の段階では、強塩基を使用する必要があり、これにより、リボフラノース環のＣ−１でのエピマー化が誘導される。適切なクロマトグラフィー法により、異性体の混合物から、所望する異性体４Ｂ−６を分離する。複素環核酸塩基の合成及びエステル保護基の除去は、Ｋａｌｖｏｄａの論文（Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４３：１４３１−１４３７（１９７７））に記載されているようにして行う。
【０１１６】
【化２２】
2008502685.tif 000021
【０１１７】
あるいは、下記で詳述する、スキーム４Ｃ、４Ｄ及び４Ｅで示すようにして、２−Ｃ−Ｍｅ−リボフラノース環のＣ−１位に４−アミノフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル核酸塩基を有するＣ−ヌクレオシド（４−４）を得ることもできる。この合成変法によると、酸に不安定な一連の保護基を最初に導入する。スキーム４Ｃで示す合成段階に従い、この変換を行うことができる。
【０１１８】
【化２３】
2008502685.tif 000022
【０１１９】
さらなる変換を促進するために、中間体４Ｂ−８のＣ−１ヒドロキシルを保護することは有利である。多くの保護基が考えられるが（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｅｈｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，第三版、１９９９参照）、Ｃ−１  Ｏ−アリルエーテルは、酸性及び塩基性条件の両方で安定なので、特に魅力的である。４Ｂ−８をアリルアルコールと反応させることにより、Ｃ−１  Ｏ−アリルエーテルを容易に導入することができる。溶媒あり、又はなしで、周囲温度又は高温にて、この反応を行うことができる。通常、酸性触媒を使用して、アセタール形成を促進する。この場合、溶媒としてアリルアルコールを用い、触媒としてｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウムを用いて、高温にて化合物４Ｃ−１の簡易調製を行うことができる。このときに、メタノールを用いた塩基触媒エステル交換によりＣ−３及びＤ−５ヒドロキシルに対するトルオイル保護基を除去して、化合物４Ｃ−２を得ることができる。Ｃ−２及びＣ−３ヒドロキシルを最初に保護することにより、塩基に強い保護基を導入することができる。前と同じように、いくつかの選択肢があるが、５員環状アセタールが特に有利である。したがって、２，２−ジメトキシプロパンをトリオール４Ｃ−２と反応させることにより、化合物４Ｃ−３を得ることができる。ｐ−トルエンスルホン酸などの酸性触媒下で、溶媒あり、又はなしで、この反応を行うことができる。塩基に強い数々の保護基（アリール（又はアルキル）シリル−、（置換）トリチル−又はその他の適切な基など）を用いて、Ｃ−５位の第一ヒドロキシルを保護することができる。非置換トリチル保護基の使用は特に有利であり、例えば、溶媒としてのピリジン中で４Ｃ−３を塩化トリチルと反応させることにより導入することができる。この時点で、Ｃ−１アリル基を除去することができ、数々の条件を利用することができる。アリル基に含有される二重結合を塩基により異性化することができ、次いで、生じたエノール−エーテルを中和条件下で加水分解することができる。このような手段は、文献において周知であり、Ｆ．Ｇｕｉｂｅによる概説が、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５３：１３５０９−１３５５７（１９９７）で与えられている。しかし、特に魅力的なアプローチは、Ｔ．Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ及びＫ．Ｏｇａｓａｗａｒａ、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，１１０：１１３７−１１３９（１９９８）により述べられているものである。この手段に従い、溶媒としてジエチルエーテルを用い、０℃にて、塩化ニッケル（ＩＩ）及びＤＩＢＡＬ−Ｈを用いて、アリル基を効率的に除去することができる。シアノメチレン基の形成における２炭素鎖をこの点で連結することができる。この２炭素を最終的に炭素４個から９個の完全なＣ−ヌクレオシドに変化させるが、上述のＨｏｒｎｅｒ−Ｅｍｍｏｎｓ反応を使用することにより、この変換を行うことができる。糖のオープン（アルデヒド）型を介してこの反応が進むにつれて、自然に起こる閉環により、所望するＣ−１シアノメチル糖が得られる。この閉環により、Ｃ−１において絶対立体化学が混ざり合い、その結果、２種類のＣ−１エピマー、４Ｃ−６及び４Ｃ−７が形成される。必要に応じて、様々なカラムクロマトグラフィー法により、これらを分離することができるが、しかし、この中間体のさらなる操作により、この中心においてエピマー化が起こる。したがって、異性体を分離せずに一連の反応を進めることが有利である。
【０１２０】
様々なＫｉｒｓｃｈ反応により、フラン環の構築を行うことができる（Ｇ．Ｋｉｒｓｃｈら、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，１９：４４３（１９８２））。エピマー混合物、４Ｃ−６及び４Ｃ−７とギ酸メチルとの間のＣｌａｉｓｅｎ縮合を用いて、ニトリル基に対するα−炭素においてヒドロキシメチレン官能基を導入することができる。しかし、この変換を遂行するための代替法もまた公知である（例えば、Ｄｅ  Ｂｅｒｎａｄｏ，Ｓ．，Ｗｅｉｇｅｌｅ，Ｍ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４２：１０９（１９７７））。
【０１２１】
【化２４】
2008502685.tif 000023
【０１２２】
炭酸セシウムなどの塩基を用いて、ＤＭＦ中で、クロロアセトニトリルを用いたエノラート４Ｄ−１のアルキル化を行うことができる。次いで、上述のように、塩基触媒閉環により、フラン環を形成させる。次いで、酸触媒を用いた保護基の除去を行うことにより、最終Ｃ−ヌクレオシドを得ることができる。ジオキサン中の無水の塩化水素など、様々な酸を用いることができる。
【０１２３】
スキーム５Ａ及び５Ｂで示し、下記で詳述するようにして、２−Ｃ−Ｍｅ−Ｄ−リボフラノース環のＣ−１位において７−アミノイソオキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−３−イル核酸塩基を有するＣ−ヌクレオシドを調製することができる。
【０１２４】
化学文献において周知の条件下で、ニトリル３−３をニトロ化して（例えば、Ｃｏｏｋら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，３２２７（１９４９）又はＷａｍｈｏｆら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５８：５１８１（１９９３）を参照のこと。）、オキシム５Ａ−１を形成する。リボフラノース環系のＣ−１位においてエピマー化が起こる場合、適切なクロマトグラフィー法により所望するβ−エピマーを分離することができる。次に、独国特許ＤＥ２８０８３１７（Ｃｉｂａ  Ｇｅｉｇｙ、１９７８）で開示されている方法と類似の方法で、クロロアセトニトリルを用いてオキシム５Ａ−１をアルキル化する。次に、２−４及び４Ａ−４の合成に対して既に述べたようにして、続く段階を行う。５Ａ−２を強塩基に曝露することにより、イソオキサゾール環を構築し、次いで、エチルアルコールなどの適切な溶媒中でアミノニトリル５Ａ−３を酢酸ホルムアミジンとともに加熱することにより、ピリミジン環を形成する。塩基誘導性の環化中にエステル保護基を除去し、水素添加分解により、残りのベンジルエーテル保護基を切断して、所望するイソオキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン５−５を得る。
【０１２５】
【化２５】
2008502685.tif 000024
【０１２６】
あるいは、スキーム５Ｂで説明するようにして、目標とするヌクレオシド５−５を調製することができる。このアプローチによると、Ｈ．Ｗａｍｈｏｆら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５８：５１８１−５１８５（１９９３）により述べられているようにして、トリエステル中間体４Ｂ−２を亜硝酸イソペンチルと反応させ、ニトリル−オキシム５Ｂ−１を得る。残りの合成段階は、スキーム４Ｂで説明した化学に対して述べたものと同様である。
【０１２７】
【化２６】
2008502685.tif 000025
【０１２８】
スキーム６Ａ及びスキーム６Ｂで示し、下記で詳述するようにして、２−Ｃ−Ｍｅ−Ｄ−リボフラノース環のＣ−１位に４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル核酸塩基を有する本発明のＣ−ヌクレオシドを調製することができる。
【０１２９】
酢酸ナトリウムなどの弱塩基存在下で、水及び水性メタノールなどの適切な溶媒中において、調製法をスキーム３で示すα−ヒドロキシメチレンニトリル３−５を、アミノアセトニトリル塩酸塩と反応させる。関連する化学については以下の刊行物を参照のこと：Ｋｌｅｉｎ，Ｒ．Ｓ．，Ｌｉｍ，Ｍ．Ｉ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ，２２：２５−２８（１９８１）及びＬｉａｎｇ，Ｃら、Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．，３０３：３３−３８（１９９７）。
【０１３０】
６Ａ−１におけるアミン官能基をアルキルカルバメート誘導体として保護すことが好ましい（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｅｈｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，第三版、１９９９を参照のこと。）。次いで、ジニトリル６Ａ−２を１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エンなどの塩基で処理し、環化を促進する。必要に応じてクロマトグラフィー法を用いて、所望するβ異性体を得る。アルコール中で弱塩基（例えば炭酸カリウム又は炭酸ナトリウム）に曝露することにより、エステルならびにカルバメート保護基を除去し、６Ａ−４を得る。次いでピリミジン環を上述のように構築する。エーテル保護基を最後に除去して、所望する５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジンヌクレオシド６−６を得る。
【０１３１】
【化２７】
2008502685.tif 000026
【０１３２】
６−６の代替合成をスキーム６Ｂで述べる。このアプローチによると、ジメチルアミノ誘導体４Ｂ−３（調製は、スキーム４Ｂで述べた。）をアミノアセトニトリルと反応させ、エナミン６Ｂ−１を得る。６Ｂ−１における塩基性窒素を保護し、次いで、スキーム４Ｂで述べたものと類似の一連の段階にウレタン６Ｂ−２を供し、所望する５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジンヌクレオシド６−６を得る。
【０１３３】
【化２８】
2008502685.tif 000027
【０１３４】
上述の一連の段階を変化させることにより、Ｃ−ヌクレオシド６−６を調製することもでき、これは、フラン類似体４−４の場合において述べたように、塩基に強い保護基を利用する。この手段をスキーム６Ｃで説明する。
【０１３５】
上述の調製物、シアノメチレン糖４Ｃ−６，７から出発して、Ｄｅ  Ｂｅｒｎａｄｏ，Ｓ．，Ｗｅｉｇｅｌｅ，Ｍ．，Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４２：１０９（１９７７）により述べられる手段に従い、ニトリルに対するジメチルアミノメチレン基αを導入することができる。
【０１３６】
【化２９】
2008502685.tif 000028
【０１３７】
上記の６Ｂ−１に対して述べたように、精製を行わずに進行させ、ジメチルアミノ基をシアノメチルアミノ部分で置換することが有利である。次に、標準的手段に従い、カルバメート６Ｃ−２を合成することができ、ＤＢＵなどの強塩基を使用することにより、続く閉環を行う。残りの段階は、スキーム６Ｂで述べたものと同様のものであり、フラン類似体４−４の場合において詳述したようにして、最終Ｃ−ヌクレオシド６−６を得ることができる。
【０１３８】
一般式７−８の、ピラゾール、フラン、イソオキサゾール、ピロール及びチオフェン環に縮合したアミノピリジノンを含有する本発明のＣ−ヌクレオシドの調製において用いた合成手段をスキーム７Ａ及び７Ｂで詳述する。
【０１３９】
一般式７Ａ−１のそれぞれのアミノニトリル中の３，５−ジオール官能基を適切な保護基、例えば、環状シリルエーテルとして、最初に保護する。このような保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｅｈｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，第三版、１９９９で見出すことができる。次いで、好ましくは弱酸性条件下でニトリル基を加水分解し、芳香族アミノ基をベンゾイルチオイソシアネートと反応させ、一般式７Ａ−４のベンゾイルチオ尿素誘導体を形成させる。ヨウ化メチルを７Ａ−４と反応させる場合、イオウ原子においてメチル化が起こり、チオエノールエーテル７Ａ−５が得られる。極性溶媒中でアンモノリシスを行い、その結果、式７−７において縮合アミノピリミジノン環系が形成され、ベンジルエーテル保護基の水素添加分解後、最終化合物が得られる。
【０１４０】
【化３０】
2008502685.tif 000029
【０１４１】
ピラゾール、フラン、イソオキサゾール、ピロール及びチオフェン環に縮合したアミノピリミジノンに対する代替合成アプローチをスキーム７Ｂで示す。
【０１４２】
【化３１】
2008502685.tif 000030
【０１４３】
このアプローチによると、一般式７Ｂ−１のアミノニトリルを慎重に加水分解し、各アミド７Ｂ−２を得て、次いでこれらを、スキーム７Ａで述べた方法と類似の一連の段階に供する。次いで、当業者にとって公知の手段に従い、保護基を除去することにより最終化合物を得る。
【０１４４】
以下の実施例は、本発明の最終化合物の調製に使用する中間体の調製について詳細に記載した公表文献を引用する。以下の実施例で詳述する手段に従って、本発明のＣ−ヌクレオシド化合物を調製した。実施例は本発明の範囲を何ら制限するものではなく、そのように解釈すべきではない。本発明のこれら及び他の化合物を調製するために以下の調製手段の条件及びプロセスの公知の変形を使用できることは、ヌクレオシド及びヌクレオシド合成の技術分野の当業者に容易に理解されよう。別段の断りがない限り、温度は全て摂氏である。以下の条件下で、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａＣ１８逆相カラムを用いて、周囲温度でＨＰＬＣ分析を行った：流速：１．２５ｍＬ／分；溶出液：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）及び水（０．１％ＴＦＡ）（１０％アセトニトリルから開始して第３分に５０％アセトニトリルに到達し、第９分に９０％に到達し、最終的に第１０分に１００％に到達し、第１３分まで維持し、この時点で溶出組成を最初の状態に再設定する、三点勾配）；検出器：２２０ｎｍのＵＶ。カラム温度を３０℃に維持し、Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱマススペクトロメーターと連結したダイオードアレイＡｇｉｌｅｎｔ１１００検出器を用いて検出を行った事を除き、同一条件下でＬＣ−ＭＳ分析を行った。
【実施例１】
【０１４５】
【化３２】
2008502685.tif 000031
【０１４６】
７−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａ：
【０１４７】
【化３３】
2008502685.tif 000032
【０１４８】
０℃の１，２−ジメトキシエタン（２５０ｍＬ）中の、２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（４−メチルベンゾイル）−Ｄ−リボフラノース（Ｍ．Ｂｉｏら、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６９：６２５７−６２６６（２００４）に記載の手段に従い調製。）（２４．００ｇ、６０．００ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．４６ｇ、１２．００ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５５．００ｍＬ、３９６ｍｍｏｌ）の溶液に、約３０分間にわたり塩化ｐ−トルオイル（１７．５０ｍＬ、１３２．００ｍｍｏｌ）を滴下添加した。冷却槽をはずし、室温で１８時間撹拌し続けた。反応混合物を氷（４００ｇ）に注ぎ、氷が全て融解するまで撹拌した。固形物をろ別し、ケーキを水（３ｘ１００ｍＬ）及びメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄した。次いで重量減少が見られなくなるまで白色の固体を真空下で乾燥させた。ＬＣＭＳ：Ｃ３８Ｈ３６Ｏ９に対して、計算値：６３６．２４；実測値６３７．３０［Ｍ＋Ｈ］＋，６５９．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋及び５０１．２０［Ｍ−ＣＨ３ＰｈＣＯＯ］＋。
【０１４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４０ｍ（ｍ，４Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．０（ｄ，Ｊ＝７．３０Ｈｚ，２Ｈ），６，８２（ｓ，１Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｂｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｂｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｂｓ，９Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．８３（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．１，１６５．７，１６４．９，１６４．６，１４４．６，１４４．３，１４４．２，１４３．４，１３０．０，１２９．８，１２９．６，１２９．２，１２８．８，１２７．６，１２６．７，１２６．５，１２６．２，９７．７，８６．５，７８．６，７６．０，６３．７，２１．７，２１．６，１６．８。
【０１５０】
段階Ｂ
【０１５１】
【化３４】
2008502685.tif 000033
【０１５２】
１，２−ジクロロメタン（２００ｍＬ）中の、段階Ａからの２−Ｃ−メチル−１，２，３，５−テトラ−Ｏ−（４−メチルベンゾイル）−Ｄ−リボフラノース（１５．００ｇ、２３．３５ｍｍｏｌ）、シアン化トリメチルシリル（１２．６ｍＬ、９４．２４ｍｍｏｌ）の溶液を、四塩化スズ（ニート、２．７１ｍＬ）で処理し、周囲温度で６時間撹拌し続けた。次いで、暗色の混合物を重炭酸ナトリウム飽和溶液（４００ｍＬ）に注いだ。クロロホルム（３００ｍＬ）を添加し、懸濁液を１時間激しく撹拌し、次いでＣｅｌｉｔｅのプラグに通してろ過した。ケーキをさらなるクロロホルム（３ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、有機層を分離した。水相をクロロホルムで２回洗浄し、有機抽出物を合わせ、飽和塩水溶液（１ｘ２００ｍＬ）で逆洗し、真空濃縮した。暗褐色の残渣（１６．７０ｇ）をシリカゲルでの勾配クロマトグラフィーにより精製した（溶出液としてヘキサン及び酢酸エチルの混合液を用いた。）。開始時０％から分離の最後に５０％となるまで、酢酸エチルの濃度を徐々に上昇させた。適切な分画を蒸発させ、所望の化合物を得た。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ２９Ｏ７に対して、計算値：５２７．１９；実測値５２８．４０［Ｍ＋Ｈ］＋，５５０．４０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８７（ｂｔ，Ｊ＝８．２３Ｈｚ，４Ｈ），７．２３（ｂｍ，６Ｈ），５．６７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｓ，１Ｈ），４．７６（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．２，１６５．２，１６４．９，１４４．７，１４４．０，１２９．９，１２９．８，１２９．３，１２９．２，１２９．１，１２６．６，１２６．５，１２５．８，１１５．３，８３．９，８１．１，７６．１，７２．８，６２．９，２１．７，２１．６，２１．６，１９．８。
【０１５４】
段階Ｃ：
【０１５５】
【化３５】
2008502685.tif 000034
【０１５６】
肉厚の試験管中で、無水１，４−ジオキサン（１０．０ｍＬ）中の段階Ｂからのニトリル（５．３０ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液をジオキサン中のＨＣｌの４Ｎ溶液（５．０ｍＬ）及び水５４０μＬ（３０ｍｍｏｌ）で処理し、４日間５０℃に加熱した。反応混合物を蒸発乾固し、残渣（７．６３ｇ）を分取中圧液体クロマトグラフィーにより精製し（ジクロロメタン＋ＭｅＯＨ、勾配ジクロロメタン：１００％から８５％）、所望する酸を得た。ＬＣＭＳ：Ｃ３１Ｈ３０Ｏ７に対して、計算値：５４６．１９；実測値５４７．３０［Ｍ＋Ｈ］＋、５６９．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９０（ｍ，４Ｈ），７．７０（ｍ，２Ｈ），７．１０（ｂｍ，６Ｈ），５．６（ｂｄ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｂｓ，１Ｈ），４．８０（bｍ，２Ｈ），４．５０（ｂｓ，１Ｈ），２．３５（ｍ，９Ｈ），１．８８（ｂｓ，３Ｈ）。
【０１５８】
段階Ｄ：
【０１５９】
【化３６】
2008502685.tif 000035
【０１６０】
ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の段階Ｃからの酸（１．６５ｇ  ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴中で冷却し、塩化オキサリル（３６８μＬ、４．２２ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３滴を添加した。冷却槽をはずし、周囲温度で１時間撹拌し続けた。溶媒を真空除去し、残渣をトルエン（２ｘ５０ｍＬ）と共蒸発させた。粗製の酸塩化物をさらに精製せずに続く段階Ｅで使用した。
【０１６１】
段階Ｅ：
【０１６２】
【化３７】
2008502685.tif 000036
【０１６３】
段階Ｄからの粗製酸塩化物（３．０１ｍｍｏｌ）を無水トルエン（２０ｍＬ）中で溶解させ、シリンジを介してニートのシアン化トリメチルシリル（１．６０ｍＬ、１２．０５ｍｍｏｌ）を添加した。塩化トリメチルシリル数滴を添加し、反応を開始させ、周囲温度で２時間撹拌し続けた。溶媒を真空除去し、残渣をトルエンと共蒸発（２ｘ１００ｍＬ）させた。粗製生成物をさらに精製せずに次の段階Ｆで使用した。
【０１６４】
段階Ｆ：
【０１６５】
【化３８】
2008502685.tif 000037
【０１６６】
段階Ｅからの粗製α−ケトニトリル（３．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、固形のｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン（２．２６ｇ、６．０２７ｍｍｏｌ）を添加し、周囲温度で一晩撹拌し続けた。溶媒を真空除去し、シリカゲルでの勾配フラッシュクロマトグラフィーを用いて残渣を精製した（溶出液：酢酸エチル−へキサン（酢酸エチル０％から８０％）。適切な分画を蒸発させ、所望の生成物を得た。ＬＣＭＳ：Ｃ３８Ｈ３９Ｏ９に対して、計算値：６５３．２６；実測値６５４．６０［Ｍ＋Ｈ］＋，５９８．５［Ｍ−ｔＢｕ］＋。
【０１６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．０２（ｂｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），５．６８（ｂｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｓ，１Ｈ），４．８６（ｂｄｄ，Ｊ＝１１．９，１．８，１Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｂｓ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ１６６．３２，１３５．２８，１６５．１１，１６１．５８，１４４．２７，１４４．１９，１４３．９５，１３６．７５，１２９．９７，１２９．８０，１２９．６９，１２９．２２，１２９．１６，１２９．０４，１２６．９，１２６．７２，１２６．０８，１２０．９２，１１５．００，１１４．１３，８３．４１，８３．２８，８２．５９，８２．００，７７．１１，６３．４５，２９．６７，２７．９１，２１．７０，２１．６５，２１．６０，１８．６６。
【０１６８】
段階Ｇ：
【０１６９】
【化３９】
2008502685.tif 000038
【０１７０】
ジエチルエーテル（２０ｍＬ）中のアミノアセトニトリル塩酸塩（１．５６ｇ、１６．８０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、水（４．０ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（１．０６ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）の冷却溶液を滴下して処理した。冷却槽をはずし、反応混合物を周囲温度で２時間激しく撹拌した。ジアゾアセトニトリルを含有する黄色の有機相を分離し、塩水で洗浄し、１０ｍＬ未満とならない体積まで慎重に濃縮した。次いで、この溶液をジクロロメタン（４ｍＬ）中の段階Ｆからのエステルニトリル（１．００ｇ、１．５２９７ｍｍｏｌ）の溶液と合わせた。反応混合物を暗所で４週間、周囲温度で維持した。その後、反応混合物全体をシリカゲルカラムに載せ、ヘキサンと酢酸エチルとの混合液（勾配、ＥｔＯＡｃ０から８０％）で溶出した。適切な分画を蒸発させ、所望の生成物を得た。Ｃ３９Ｈ３９Ｎ３Ｏ９に対するＬＣＭＳ、計算値：６９３．２７、実測値６９４．６０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１２．０４（ｂｓ，１Ｈ），８．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），８．０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．２４Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｍ，５Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，０．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｍ，１Ｈ），４．５８（ｄｔ，Ｊ＝９．２，２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．７１（ｓ，９Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ１６５．６，１６５．４，１５９．８，１４４．７，１４４．３，１４４．０，１４３．３，１４４．０，１４３．３，１３０．２，１３０．０，１２９．７，１２９．３，１２９．０，１２６．７，１２６．４，１２５．９，１１２．９，８４．３，８３．１，８３．０，７７．８，７７．２，７７．１，７６．７，６４．１，３１．５，２８．２，２２．６，２１．７，２１．７，２１．６，１９．５，１４．１。
【０１７１】
段階Ｈ：
【０１７２】
【化４０】
2008502685.tif 000039
【０１７３】
ニートのギ酸（４ｍＬ）中の段階Ｇからのｔｅｒｔ−ブチルエステル（３９０ｍｇ、０．５６３ｍｍｏｌ）の溶液を７５℃にて３０分間撹拌した。混合物を周囲温度まで冷まし、トルエンとジオキサンとの混合液（１：１、５０ｍＬ）で希釈し、溶媒を真空除去した。残渣をトルエン／ジオキサン混合液中で再び処理し、揮発物を蒸留除去した。粗製物質をそのまま次の段階で使用した。Ｃ３５Ｈ３１Ｎ３Ｏ９に対するＬＣＭＳ、計算値：６３７．２１、実測値６３８．４７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７４】
段階Ｉ：
【０１７５】
【化４１】
2008502685.tif 000040
【０１７６】
無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の段階Ｈからの酸（２９８ｍｇ、０．４６７３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化オキサリル（６０μＬ、０．７０ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、無水ＤＭＦ３滴で処理した。冷却槽をはずし、反応混合物を２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をトルエン（５０ｍＬ）と２回共蒸留した。粗製の酸塩化物をさらに精製せずに次の段階で使用した。メタノールで試料を不活性化した後、そのメチルエステル誘導体として、ＬＣＭＳで特徴を調べた。Ｃ３６Ｈ３３Ｎ３Ｏ９に対するＬＣＭＳ、計算値：６５１．２２、実測値６５２．６０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７７】
段階Ｊ：
【０１７８】
【化４２】
2008502685.tif 000041
【０１７９】
ジクロロメタン（４ｍＬ）中の段階Ｉの塩化物（１０２ｍｇ、最大０．４６７３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムのスパチュラチップを含有するアジ化ナトリウム（３０３ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）の水溶液（４ｍＬ）及び、冷却下で激しく１時間撹拌した。有機相を分離し、水層をジクロロメタン（３ｘ２５ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機相を塩水で逆洗し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、溶媒を減圧下で除去した。Ｃ３５Ｈ３０Ｎ６Ｏ８に対するＬＣＭＳ、計算値：６６２．２１、実測値６６３．６０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８０】
段階Ｋ：
【０１８１】
【化４３】
2008502685.tif 000042
【０１８２】
トルエン（６ｍＬ）中の段階Ｊからの粗製アジ化アシル（３３８ｍｇ、最大０．４６７３ｍｍｏｌ）の溶液を３時間８０℃に加熱した。溶媒を真空除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン混合液、酢酸エチルの０から６０％勾配）、所望する化合物を得た。Ｃ３７Ｈ３３Ｃｌ３Ｎ４Ｏ９に対するＬＣＭＳ、計算値：７８２．１３、実測値７８５．６１［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９７（ｄ，７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８６（ｂｓ，２Ｈ），７．２０（ｂｍ，６Ｈ），５．６９（ｓ，１Ｈ），５．５４（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｍ，１Ｈ），４．５９（ｍ，１Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４４．８、１４４．７、１４４．５、１２９．９、１２９．８、１２９．７、１２９．４、１２９．３、１２９．２、１２６．４、１２５．８、１２２．２、７６．９、７５．０、６３．７、３１．６、２２．６、２１．７、２１．６、１９．６、１４．０。
【０１８３】
段階Ｌ：
【０１８４】
【化４４】
2008502685.tif 000043
【０１８５】
メタノール（１０ｍＬ）中の段階Ｋからのウレタン（１７０ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）の溶液を塩化アンモニウム（７８７ｍｍｏｌ）及び金属亜鉛（２．００ｇ）で処理した。生じた懸濁液を密封試験管中で８０℃に加熱した。溶媒を蒸発乾固し、スラリーを水（２０ｍＬ）とトルエン（２０ｍＬ）との間で分配した。濃水酸化アンモニウム２．０ｍＬを添加後、有機層を分離し、水層をトルエンでさらに２回抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で逆洗し、乾燥（硫酸マグネシウム）させ、ろ過し、蒸発乾固して、所望する生成物を得た。粗製生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。Ｃ３４Ｈ３２Ｎ４Ｏ７に対するＬＣＭＳ、計算値：６０８．２３、実測値６０９．５０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８６】
段階Ｍ：
【０１８７】
【化４５】
2008502685.tif 000044
【０１８８】
エチルアルコール（４ｍＬ）中の、段階Ｌからのアミノニトリル（１００ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）及び酢酸ホルムアミジン（３００ｍｇ、２．８８ｍｏｌ）の溶液を密封試験管中で１０５℃に４時間加熱した。反応混合物を周囲温度まで冷まし、溶媒を真空除去した。分取ＴＬＣにより、溶出液として酢酸エチルを用いて、粗製生成物をさらに精製した。Ｃ３５Ｈ３３Ｎ５Ｏ９に対するＬＣＭＳ、計算値：６３５．２４、実測値６３６．７０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．４３（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｍ，３Ｈ），４．６５（ｓ，１Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．００，１３５．６９，１４４．５４，１４４．２９，１３０．３２，１３０．１２，１３０．０９，１２９．４０，１２７．６２，１２６．８９，１２６．５９，７９．４７，７７．５４，６４．９１，５１．７７，２１．９７，２１．９３，２１．８９，１９．１５。
【０１８９】
段階Ｎ：
【０１９０】
【化４６】
2008502685.tif 000045
【０１９１】
無水メタノール（６ｍＬ）中の段階Ｍからのトリエステル（１７ｍｇ、０．０２６７ｍｍｏｌ）の溶液をメタノール中のナトリウムメトキシドの溶液（０．５Ｍ、９００μＬ）で処理し、周囲温度で一晩撹拌し続けた。氷酢酸１ｍＬを添加して反応を停止させ、トルエン（２０ｍＬ）を添加し、溶液を蒸発乾固した。水（６ｍＬ）とｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）（２０ｍＬ）との間で残渣を分配した。水相をＴＢＭＥ（１０ｍＬ）でもう一度洗浄し、合わせた有機抽出物を水（６ｍＬ）で逆洗した。合わせた水性抽出物を精密ろ過し、蒸発乾固した。Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ（２１ｘ１５０ｍｍ）カラム及び水とメタノールとの９０：１０混合液（１０ｍＭギ酸アンモニウムで緩衝化）を用いて、質量分離（ｍａｓｓ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ）（ｍ＝２８２）分取ＬＣにより純粋な生成物を得た。生成物を含有する分画を合わせ、蒸発乾固し、繰り返し凍結乾燥させることにより、ギ酸アンモニウムを除去した。Ｃ１１Ｈ１５Ｎ５Ｏ４に対するＬＣＭＳ、計算値：２８１．１１、実測値２８２．４０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）：δ８．１６（ｓ，１Ｈ，２−Ｈ），５．２６（ｓ，１Ｈ，１’−Ｈ），４．２０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，２．１Ｈｚ，１Ｈ，５’’−Ｈ），３．９２（ｄｔ，Ｊ＝８．７，２．１Ｈｚ，１Ｈ，３’−Ｈ），３．７１（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ，５’−Ｈ），０．８２（ｓ，３Ｈ，Ｃ２’−Ｍｅ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）：δ１５２．０（Ｃ６），１５１．６（Ｃ２），１４３．２（Ｃ９），１３８．５（Ｃ４），８４．３（Ｃ１’），８２．８（Ｃ４’），７９．８（Ｃ２’），７３．４（Ｃ３’）及び６０．７（Ｃ５’）。
【実施例２】
【０１９２】
【化４７】
2008502685.tif 000046
【０１９３】
７−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソオキサゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン
段階Ａ：
【０１９４】
【化４８】
2008502685.tif 000047
【０１９５】
無水１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２．３８ｇ、５９．６１ｍｍｏｌ、油中６０％分散液）の懸濁液を冷却槽中で冷却し、３０分間、無水１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）中のジエチルシアノメチルホスホネート（１１．７３ｇ、６６．２５ｍＬ）の溶液を滴下して処理した。冷却下でさらに３０分間撹拌し続けた。反応混合物に、無水１，２−ジメトキシエタン（２０ｍＬ）中の２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（４−メチルベンゾイル）−Ｄ−リボフラノース（６．６３ｇ、１６．５６ｍｍｏｌ）の溶液を４５分間滴下添加した。添加終了後、冷却槽をはずし、反応混合物をさらに２時間撹拌した。水１００ｍＬに注ぐことにより反応を停止させ、粗製生成物をＭＴＢＥ（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせたエーテル抽出物を塩水で逆洗し、蒸発乾固し、勾配フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン、０％から１００％）により粗製物質（１３．７ｇ）を精製した。このようにして、リボフラノース部分のＣ−１におけるα及びβ−異性体両方を得た。
【０１９６】
α−異性体：ＬＣＭＳ：Ｃ２４Ｈ２６Ｏ６に対して、計算値：４２３．１７；実測値４２４．３０［Ｍ＋Ｈ］＋，４４６．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．４２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｍ，１Ｈ），４．５０（ｍ，２Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８３（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｄ，Ｊ＝１７．０，６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），１．５０（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．２１，１６５．５２，１４４．７８，１４３．８２，１２９．８６，１２９．６４，１２９．３１，１２９．０６，１２６．８０，１２５．８４，１１７．３０，８０．４２，７７．８９，７７．５６，７７．１９，６４．０３，２３．２４，２１．７０，２１．６２，１７．９０。
【０１９７】
β−異性体：ＬＣＭＳ：Ｃ２４Ｈ２６Ｏ６に対して、計算値：４２３．１７；実測値４２４．３０［Ｍ＋Ｈ］＋，４４６．２０［Ｍ＋Ｎａ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．３０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝５．０，１Ｈ），４．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，５．３Ｈｚ，２Ｈ），４．４１（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｄｄ，Ｊ＝７．６，５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．６７（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．５９（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５６（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．２３，１６６．１０，１４４．６６，１４３．９１，１２９．７９，１２９．６６，１２９．２７，１２９．０３，１２６．７３，１２５．９９，１１６．８８，８０．０２，７８．３９，７６．９５，６３．６２，２１．６７，２１．６０，２０．８４，１８．５２。
【０１９８】
段階Ｂ：
【０１９９】
【化４９】
2008502685.tif 000048
【０２００】
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の塩化ｐ−トルオイル（４５１μＬ、３．４１５ｍｍｏｌ）の溶液を、１，２−ジメトキシエタン（２０ｍＬ）中の、段階Ａからのα−異性体（１．２０５１ｇ、２．８４６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．１９ｍＬ、８．５４ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（３４７ｍｇ、２．８４５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下添加し、生じた混合物を７５℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空除去し、重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）の飽和溶液に残渣を吸収させ、ジクロロメタン（４ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で逆洗し、乾燥（無水硫酸マグネシウム）させ、溶媒を真空除去した。勾配カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン（０％から６０％））により粗製物質を精製し、所望する生成物を得た。ＬＣＭＳ：Ｃ３２Ｈ３１ＮＯ７に対して、計算値：５４１．２１、実測値５４２．６０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，８．０Ｈｚ，２Ｈ）ｍ７．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，３．４Ｈｚ，１Ｈ，４．６９（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｓ，６Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），１．９５（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．２３，１６５．１８，１６４．９５，１４４．４３，１４３．９３，１２９．７７，１２９．６１，１２９．２４，１２９．２１，１２９．１４，１２６．８０，１２６．６４，１２６．０６，１１６．９６，１１４．９８，８３．３１，８１．３６，７６．９２，６３．６８２２．８６，２１．６６，２１．６４，１９．１６。
【０２０２】
段階Ｃ：
【０２０３】
【化５０】
2008502685.tif 000049
【０２０４】
Ｈ．Ｗａｍｈｏｆら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５８：５１８１−５１８５（１９９３）により述べられているものと同様の手段を用いて、段階Ｂの中間体からこの化合物を合成する。
【０２０５】
段階Ｄ：
【０２０６】
【化５１】
2008502685.tif 000050
【０２０７】
Ｂ．Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，２７：８１５−８１８（１９８６）により述べられているものと同様の手段を用いて、段階Ｃの中間体からこの化合物を合成する。
【０２０８】
段階Ｅ：
【０２０９】
【化５２】
2008502685.tif 000051
【０２１０】
Ｂ．Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，２７：８１５−８１８（１９８６）により述べられているものと同様の手段を用いて、段階Ｄの中間体からこの化合物を合成する。リボフラノース部分のＣ−１でのα−及びβ−異性体をシリカゲルでのクロマトグラフィーを用いて単離する。
【０２１１】
段階Ｆ：
【０２１２】
【化５３】
2008502685.tif 000052
【０２１３】
Ｌ．Ｋａｌｖｏｄａ、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４３：１４３１−１４３７（１９７７）により述べられているものと同様の手段を用いて、段階Ｅの中間体からこの化合物を合成する。
【０２１４】
段階Ｇ：
【０２１５】
【化５４】
2008502685.tif 000053
【０２１６】
Ｌ．Ｋａｌｖｏｄａ、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４３：１４３１−１４３７（１９７７）により述べられているものと同様の手段を用いて、段階Ｆの中間体からこの化合物を合成する。
【実施例３】
【０２１７】
【化５５】
2008502685.tif 000054
【０２１８】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−フロ［２，３−ｄ］ピリミジン
段階Ａ：
【０２１９】
【化５６】
2008502685.tif 000055
【０２２０】
ＴＨＦ（３ｍＬ）中の実施例４の段階Ｆからのニトリル（主要ではない方の異性体、２３２ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＬＤＡ（ジイソプロピルアミン１４２μＬ及びｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ）４００μＬから生成）の−７８℃の冷却溶液に添加し、冷却下で３０分間撹拌し続けた。次いで、シリンジを介してニートのギ酸メチル（６０μＬ、１ｍｍｏｌ）を添加し、−７８℃でさらに１時間撹拌し続けた。冷却槽をはずし、氷水浴を用いて反応混合物の温度を平衡化し、この温度を１５分間維持した。クエン酸水溶液（１０ｍＬ、１０％）で反応を停止させ、生成物をクロロホルム（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を塩水（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、溶媒を真空除去した。粗製生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。Ｃ３１Ｈ３１ＮＯ５に対するＬＣＭＳ、計算値：４９７．２２、実測値４９８．３０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２２１】
段階Ｂ：
【０２２２】
【化５７】
2008502685.tif 000056
【０２２３】
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の段階Ａからの粗製生成物（２６０ｍｇ、最大０．５０ｍｍｏｌ）の溶液をクロロアセトニトリル（３００μＬ）で処理した。炭酸セシウム（７００ｍｇ）を添加し、周囲温度で一晩撹拌し続けた。反応混合物を水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＴＢＭＥ（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を塩水で逆洗し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、溶媒を蒸発乾固した。粗製生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。Ｃ３３Ｈ３２Ｎ２Ｏ５に対するＬＣＭＳ、計算値：５３６．２３、実測値５５９．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２２４】
段階Ｃ：
【０２２５】
【化５８】
2008502685.tif 000057
【０２２６】
−７８℃のＴＨＦ（６ｍＬ）中の、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、２．１ｍＬ、５．２０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルアミン（７３０μＬ、５．２０ｍｍｏｌ）から、リチウムジイソプロピルアミドの溶液を生成させた。この溶液に、シリンジを介してＴＨＦ（４ｍＬ）中の段階Ｂからの粗製ジニトリル調製物（４６５ｍｇ、０．８６７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を−７８℃でさらに２時間撹拌し、その後、塩化アンモニウム飽和溶液（２０ｍＬ）で反応停止させた。粗製生成物をＴＢＭＥ（４ｘ３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を塩水（１ｘ３０ｍＬ）で逆洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空除去した。残渣をシリカゲルカラムに通し、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配（０．５から７０％）を用いて、２種類の各Ｃ−１エピマーを得た。
【０２２７】
主要な（低Ｒｆ）エピマー：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．４８（ｍ，６Ｈ），７．３５（ｍ，６Ｈ），７．３０（ｍ，４Ｈ），４．７４（ｓ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｍ，３Ｈ），３．３８（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，５．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５２（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１４５．６２，１４４．６９，１４３．３６，１２８．６７，１２８．５８，１２７．９２，１２７．８２，１２７．２４，１２７．１７，１１３．８４，１１３．１３，１１２．７６，１１０．４１，９０．３４，８８．１２，８７．３３，８３．３５，８０．８７，６３．４８，３１．５２，２７．８３，２７．５６，２２．４０。Ｃ３３Ｈ３２Ｎ２Ｏ６に対するＬＣＭＳ、計算値：５３６．２３、実測値５５９．２０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２２８】
主要ではない（高Ｒｆ）エピマー：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４８（ｍ，６Ｈ），７．３４（ｍ，６Ｈ），７．２８（ｍ，３Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｓ，１Ｈ），４．３１（ｍ，３Ｈ），３．４１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，４．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４３．６１，１４３０５４，１４３．４４，１２８.７０，１２７．８５，１２７．２０，１１５．４３，１１４．７６，１１２．８１，８９．００，８７．００，８６．９１，８２．７７，８１．００，６３．５４，２９．６７，２８．１１，２６．５３，１９．５５。Ｃ３３Ｈ３２Ｎ２Ｏ６に対するＬＣＭＳ、計算値：５３６．２３、実測値５５９．２０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２２９】
段階Ｄ：
【０２３０】
【化５９】
2008502685.tif 000058
【０２３１】
エタノール（３ｍＬ）中の段階Ｃからのアミノニトリル（主要ではないエピマー、３７ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）の溶液を酢酸ホルムアミジン（２１４ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）で処理し、密封試験管中で８５℃にて１２時間加熱した。溶媒を真空除去し、分取ＴＬＣ（ジクロロメタン＋ＭｅＯＨ／９：１）により粗製生成物を精製し、所望する生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．２４（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｍ，６Ｈ），７．３１（ｍ，６Ｈ），７．２５（ｍ，３Ｈ），５．１７（ｓ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｄ，Ｊ＝５．０４Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１５４．４２，１４８．５１，１４５．２３，１２９．９５，１２８．８７，１２８．２５，１２０．０４，１１５．８５，９０．７０，８９．１８，８８．２３，８３．７８，８２．６５，６５．２１，２８．６４，２７．３１，２１．６９。Ｃ３４Ｈ３３Ｎ３Ｏ５に対するＬＣＭＳ、計算値：５６３．２４，実測値５６４．４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３２】
段階Ｅ：
【０２３３】
【化６０】
2008502685.tif 000059
【０２３４】
メタノール（３ｍＬ）中の段階Ｄからの保護したヌクレオシド（１５．７ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）の溶液を、ジオキサン中のＨＣｌ溶液（４Ｎ、１ｍＬ）で処理し、周囲温度で２時間撹拌した。溶媒を真空除去し、水（１０ｍＬ）とジクロロメタン（２０ｍＬ）との間で残渣を分配した。水相をジクロロメタンでさらに２回抽出し、合わせた有機層をチャコールで処理し、Ｃｅｌｉｔｅに通してろ過した。約５ｍＬの体積までろ過液を濃縮し、精密ろ過した。ろ過液を蒸発乾固し、アセトニトリルとともに残渣を摩砕した。結晶化後、上清をピペットで除去し、固形物をアセトニトリル少量で洗浄し、高真空下で乾燥させた。Ｃ１２Ｈ１５Ｎ３Ｏ５に対するＬＣＭＳ、計算値：２８１．１０、実測値２８２．５０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．４７（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），５．０９（ｓ，１Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｂｓ，１Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１１.７Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．００（ｓ，３Ｈ）。
【実施例４】
【０２３５】
【化６１】
2008502685.tif 000060
【０２３６】
４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン
段階Ａ：
【０２３７】
【化６２】
2008502685.tif 000061
【０２３８】
アリルアルコール（１０ｍＬ）中の、２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（４−メチルベンゾイル）−Ｄ−リボフラノース（Ｍ．Ｂｉｏら、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６９：６２５７−６２６６（２００４）で調製法が述べられている。）（２．００ｇ、５．００ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（６２７ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃に２４時間加熱した。揮発性アリルアルコールを真空除去し、溶媒として酢酸エチル（ＥＡ）とヘキサンとの混合液（ＥＡ：０から３０％）を用いて、勾配カラムクロマトグラフィーにより残渣を精製した。このようにして、純粋な生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．８５（ｍ，１Ｈ），５．５６（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２６（ｄｄ，Ｊ＝１７．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８８（ｓ，１Ｈ），４．４３から４．６０（ｂｍ，３Ｈ），４．２５（ｄｄｔ，Ｊ＝１３．３，５．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０（ｄｔ，Ｊ＝１３．３，５．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．２９，１６５．５７，１４４．４１，１４３．５４，１３３．７６，１２９．８３，１２９．７３，１２９．２２，１２８．９３，１２７．０２，１２６．２８，１１９．９８，１０７．０１，７９．６４，７８．３２，７７．１６，６８．２３，６５．２２，２１．６６，２１．５９，２０．００。
【０２３９】
段階Ｂ：
【０２４０】
【化６３】
2008502685.tif 000062
【０２４１】
無水メタノール（２０ｍＬ）中で段階Ａからのジエステル（３．５５ｇ、８．０５９ｍｍｏｌ）を溶解させ、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（５ｍＬ、０．５Ｍ溶液）で処理した。室温で２時間撹拌し続け、その後、１Ｎ  ＨＣｌ（３ｍＬ）を添加することにより反応を停止させた。溶媒を真空除去し、フラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し（ＳｉＯ２カラム、１００％酢酸エチル、定組成）、白色粉末の形態で所望する生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．８８（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｄｄ，Ｊ＝１７．２，１．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｓ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｍ，３Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，３．７Ｈｚ，１Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１３３．７３，１１７．４６，１０７．２４，８３．６４，７９．１８，７４．８６，６８．９７，６２．９７，１９．３３。
【０２４２】
段階Ｃ：
【０２４３】
【化６４】
2008502685.tif 000063
【０２４４】
ジクロロメタン（６ｍＬ）中の段階Ｂからのトリオール（１．１２５ｇ、５．５１ｍｍｏｌ）の溶液を２，２−ジメトキシプロパン（４ｍＬ）及びｐ−トルエンスルホン酸（１８７ｍｇ）で処理し、生じた混合物を室温で２時間撹拌した。次いで反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２０ｍＬ）に注ぎ、ジクロロメタン（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ、周囲温度にて減圧下で溶媒を除去した。生じた揮発性生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．９０（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，１．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｓ，１Ｈ），４．２６（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，３．７Ｈｚ，１Ｈ），１．４６（ｂｓ，６Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ）。
【０２４５】
段階Ｄ：
【０２４６】
【化６５】
2008502685.tif 000064
【０２４７】
ピリジン（６ｍＬ）中の、段階Ｃからのアルコール（１．７７ｇ、最大５．５１ｍｍｏｌ）及び塩化トリチル（１．５３６ｇ、５．５１ｍｍｏｌ）の溶液を６０℃で一晩撹拌した。溶媒を真空除去し、酢酸エチルとヘキサンとの混合液（酢酸エチルの０％から３０％）を用いて、勾配クロマトグラフィーにより残渣を精製した。Ｃ−１エピマー混合物（２：１）の形態で所望する生成物を得た。Ｃ３１Ｈ３４Ｏ５に対するＬＣＭＳ、計算値：４８６．２４、実測値５０９．４０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２４８】
段階Ｅ：
【０２４９】
【化６６】
2008502685.tif 000065
【０２５０】
ジエチルエーテル（１６ｍＬ）中の、段階Ｄからのアリルエーテル（８００ｍｇ、１．６４４１ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン塩化ニッケル（ＩＩ）（２７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、Ｄｉｂａｌ−Ｈ（２ｍＬ、ヘキサン中の１Ｍ溶液）を滴下添加した。混合物を冷却下で３０分間撹拌し、次いで水２ｍＬで反応停止させた。これを周囲温度で３０分間撹拌し、無水硫酸マグネシウム（約２ｇ）を添加し、さらに３０分間撹拌し続けた。乾燥剤をろ過し、溶媒を真空除去し、溶出液として酢酸エチル及びヘキサンを用いて勾配カラムクロマトグラフィーにより残渣を精製した（ＥＡ０％から７０％）。Ｃ−１エピマー混合物の形態で所望する生成物を得た。Ｃ２８Ｈ３０Ｏ５に対するＬＣＭＳ、計算値：４４６．２１、実測値４６９．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２５１】
段階Ｆ：
【０２５２】
【化６７】
2008502685.tif 000066
【０２５３】
ジメトキシエタン（ＤＭＥ、５ｍＬ）中の水素化ナトリウム（１２０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、鉱物油中６０％）の懸濁液を０℃に冷却した。ＤＭＥ中のジエチルシアノメチルホスホネート（５５０μＬ、３．４０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加し、０℃にて１０分間撹拌し続けた。次いで、ＤＭＥ（５．０ｍＬ）中の段階Ｄからの保護したリボース（７６０ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、冷却をやめて、４時間撹拌し続けた。水（２０ｍＬ）とＴＢＭＥ（６０ｍＬ）との間で反応混合物を分配し、水相をＴＢＭＥでさらに２回抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、溶媒を真空除去した。溶出液として酢酸エチル及びヘキサン（ＥＡ０％から５０％）を用いて、勾配クロマトグラフィーにより、粗製生成物を精製した。２種類のＣ−１エピマーを得た：
【０２５４】
主要なエピマー：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４６（ｍ，６Ｈ），７．３５（ｍ，６Ｈ），７．２７（ｍ，３Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｔ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，５．７Ｈｚ，１Ｈ），３．２９（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｄｄ，Ｊ１０．３，４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６８（ＡＢｑ，Ｊ＝１６．７，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．５０（ｓ，３Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４３．３７，１２８．６２，１２７．９４，１２７．２１，１１７．５９，１１３．３２，８９．２１，８９．０７，８７．３９，８３．５６，８１．６２，６３．６８，２７．７３，２７．３２，２２．９８，２７．３２，２２．９７，１８．６０。Ｃ３０Ｈ３１Ｏ４に対するＬＣＭＳ、計算値：４６９．２３、実測値４９２．２６［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２５５】
主要ではないエピマー：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４８（ｍ，６Ｈ），７．３４（ｍ，６Ｈ），７．２８（ｍ，３Ｈ），４．２０（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝７．８，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６１（ｄｄ，Ｊ＝１６．７，５．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝１６．７，８．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４３．５８，１２８．７３，１２７．８３，１２７．１２，１１６．９５，１１４．５６，８７．６１，８７．３２，８７．００，８２．２８，８０．９４，６３．５２，２８．１１，２６．６２，１８．６９，１８．３９。Ｃ３０Ｈ３１Ｏ４に対するＬＣＭＳ、計算値：４６９．２３、実測値４９２．２６［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２５６】
段階Ｇ
【０２５７】
【化６８】
2008502685.tif 000067
【０２５８】
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の段階Ｆからのニトリル（主要な異性体、２．２７ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）の溶液をビス（ジメチルアミノ）メチル−ｔｅｒｔ−ブチル−エーテル（５．０５ｇ、２９ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃にて３０分間撹拌した。水（３０ｍＬ）で反応を停止させ、生成物をＴＢＭＥ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で逆洗し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、溶媒を真空除去した。このようにして得た生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。
【０２５９】
段階Ｈ：
【０２６０】
【化６９】
2008502685.tif 000068
【０２６１】
段階Ｇからの粗製生成物（２．５０ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ、酢酸及び水（１：１：１）の混合液中で１時間激しく撹拌した。混合物をクロロホルムで希釈し、重炭酸ナトリウム飽和溶液で洗浄した。水相をクロロホルムで逆洗し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、溶媒を真空除去した。粗製生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。
【０２６２】
段階Ｉ：
【０２６３】
【化７０】
2008502685.tif 000069
【０２６４】
段階Ｈからの粗製生成物（２．１９ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍＬ）中で溶解させ、水（２．０ｍＬ）を添加し、次いで酢酸ナトリウム（５４０ｍｇ、６．６０ｍｍｏｌ）及びアミノアセトニトリル塩酸塩（６１０ｍｇ、６．６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を周囲温度で週末の間撹拌した。次いでこれをクロロホルムで希釈し、水で洗浄した。水相をクロロホルムで逆洗し、合わせた有機相を乾燥させ、溶媒を真空除去した。粗製生成物を精製せずに次の段階で使用した。
【０２６５】
段階Ｊ：
【０２６６】
【化７１】
2008502685.tif 000070
【０２６７】
段階Ｉからの粗製生成物（２．４４ｇ、４．４０ｍｍｏｌ）の溶液をジクロロメタン（２０ｍＬ）中で溶解させ、ＤＢＵ（１．３４ｇ、８．８０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物に、シリンジを介してクロロギ酸エチル（７１６μＬ、６．６０ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２時間撹拌し続けた。このときに、ＬＣ−ＭＳによりウレタンが完全に形成されたことが示され、さらなるＤＢＵ（１．３４ｇ、８．８０ｍｍｏｌ）を添加し、環化を誘導した。室温で一晩撹拌し続けた。反応混合物をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、クエン酸の水溶液（１０％、２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた水相をクロロホルムで洗浄し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、溶媒を真空除去した。溶出液としてジクロロメタンとジエチルエーテルとの混合液（９８：２）を用いて、カラムクロマトグラフィーにより粗製生成物を精製した。２種類のエピマーを分離することができた：
主要なエピマー（低Ｒｆ）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４８（ｍ，６Ｈ，７．３４（ｍ，６Ｈ），７．２６（ｍ，３Ｈ），５．３１（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｍ，３Ｈ），４．３３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，５．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），１．４５（ｍ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４３．３９，１２８．６１，１２７．９４，１２７．２５，１２３．５５，１２３．００，９０．４０，８８．０７，８７．３５，８３．１９，８２．５９，６４．２９，６３．３７，２７．６３，２７．５３，１４．０８。Ｃ３６Ｈ３７Ｎ３Ｏ６に対するＬＣＭＳ、計算値：６０７．２７、実測値６３０．５０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２６８】
主要ではないエピマー（高Ｒｆ）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．５２，（ｍ，６Ｈ），７．３６（ｍ，６Ｈ），７．３０（ｍ，３Ｈ），４．７６（ｓ，１Ｈ），４．５７（ｂｓ，２Ｈ），４．４４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝２．５０Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．４３（ｓ，３Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４６．１１，１４３．５７，１２８．７２，１２７．８１，１２７．１５，１２２．２０，１１４．６９，８９．１５，８６．９５，８６．９０，８２．６８，８１．６８，６４．１８，６３．７８，３１．５４，２８．０８，２６．５０，２２．６０，１９．６２，１４．１０，１４．０７。Ｃ３６Ｈ３７Ｎ３Ｏ６に対するＬＣＭＳ、計算値：６０７．２７、実測値６３０．４０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２６９】
段階Ｋ：
【０２７０】
【化７２】
2008502685.tif 000071
【０２７１】
エタノール（６ｍＬ）中の段階Ｊからのウレタン（主要ではない異性体、２０７ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ）の溶液を炭酸カリウム（１００ｍｇ）で処理し、周囲温度で１時間撹拌した。８５：１５クロロホルム／ｉＰｒＯＨ（１０ｍＬ）で反応混合物を希釈し、水（５ｍＬ）とともに振り混ぜた。水層を分離し、８５：１５クロロホルム／ｉＰｒＯＨで２回抽出した。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空除去した。粗製生成物をさらに精製せずに次の段階で使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．０（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｍ，６Ｈ），７．３３（ｍ，６Ｈ），７．２７（ｍ，３Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｓ，１Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝２．８０，１Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），４．１２（ｓ，２Ｈ），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３５（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，４．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ），１．２１（ｓ，３Ｈ）.１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１４３．６８，１４１．７２，１２８．７３，１２７．８３，１２７．１３，１２０．８４，１１４．９４，１１４．５１，１０９．４７，８９．５４，８７．０４，８６．８９，８６．４３，８２．５９，８２．４１，６３．７１，３１．５７，２８．２１，２６．６９，２２．６３，１９．８０，１４．１０。
【０２７２】
段階Ｌ
【０２７３】
【化７３】
2008502685.tif 000072
【０２７４】
密封試験管中で撹拌しながら、エタノール（６ｍＬ）中の、段階Ｋからのアミノニトリル調製物（１８２ｍｇ、０．３３９ｍｍｏｌ）、酢酸ホルムアミジン（３５４ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ）の溶液を９０℃に５時間加熱した。反応容器を周囲温度まで冷まし、反応混合物を１０ｍＬフラスコに移し、溶媒を真空除去した。水（１０ｍＬ）とＴＢＭＥ（３０ｍＬ）との間で残渣を分配し、水相をＴＢＭＥ（３ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機抽出物を塩水で逆洗し、乾燥させ、溶媒を真空除去し、粗製の所望する生成物を得た。分取ＴＬＣ（溶出液として９：１ジクロロメタン／メタノール）により、これをさらに精製し、純粋な生成物を得た。Ｃ３４Ｈ３４Ｎ４Ｏ４に対するＬＣＭＳ、計算値：５６２．２６、実測値５６３．４０［Ｍ＋Ｈ］＋。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．１６（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｍ，６Ｈ），７．３２（ｍ，６Ｈ），７．２６（ｍ，４Ｈ），５．２９（ｓ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１４９．９２，１４５．２２，１２９．９５，１２９．９０，１２９．１９，１２８．８８，１２８．２５，１１５．８４，１１２．４１，９０．６６，８９．０７，８８．２６，８３．３１，８３．２２，６５．２７，２８．５９，２７．２９，２１．７７。
【０２７５】
段階Ｍ：
【０２７６】
【化７４】
2008502685.tif 000073
【０２７７】
段階Ｌからの保護されたヌクレオシド（１０５ｍｇ、０．１９６６ｍｍｏｌ）の溶液を無水メタノール（２．０ｍＬ）中で溶解させ、塩化水素のジオキサン溶液（４Ｎ、２００μＬ）で処理した。周囲温度で２４時間撹拌し続け、その後、溶媒を真空除去した。水（６ｍＬ）とクロロホルム（２０ｍＬ）との間で残渣を分配し、分離後、水相をクロロホルムでさらに３回抽出した。チャコールのスパチュラチップとともに水相を短時間還流加熱し、精密ろ過し、溶媒を蒸発乾固した。残渣をアセトニトリル２ｍＬに拾い上げ、結晶化後、上清をピペットで除去した。固形物をアセトニトリルでさらに２回洗浄し、高真空下で乾燥させ、所望する生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．３６（ｓ，１Ｈ，２−Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ，８−Ｈ），５．１１（ｓ，１Ｈ，１'−Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，２．５Ｈｚ，１Ｈ，５’’−Ｈ），３．９７（ｄｔ，Ｊ＝７．７，２．５Ｈｚ，１Ｈ，４’−Ｈ），３．９３（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，２．６Ｈｚ，５’−Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，３’−Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ，Ｃ２’−ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１５４．５０（Ｃ６），１４５．９１（Ｃ７），１３３．５９，１３０．４９（Ｃ２），８４．６６（Ｃ１’），８３．８７（Ｃ４'），７９．１４（Ｃ２’），７５．３６（Ｃ３’），６１．１６（Ｃ５'），２２．６０（Ｃ２’−ＣＨ３）。Ｃ１２Ｈ１６Ｎ４Ｏ４に対するＬＣＭＳ、計算値：２８０．１２、実測値２８１．３０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【実施例５】
【０２７８】
【化７５】
2008502685.tif 000074
【０２７９】
５−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−オン
段階Ａ：
【０２８０】
【化７６】
2008502685.tif 000075
【０２８１】
実施例１、段階Ｃで述べたものと同様の手段に従い、実施例１、段階Ｈの中間体からこの化合物を合成する。
【０２８２】
段階Ｂ：
【０２８３】
【化７７】
2008502685.tif 000076
【０２８４】
Ｌ．Ｂ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１０４：１０７３−１０７７（１９８２）により述べられたものと同様の手段に従い、段階Ａの中間体からこの化合物を合成する。
【０２８５】
段階Ｃ：
【０２８６】
【化７８】
2008502685.tif 000077
【０２８７】
Ｌ．Ｂ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１０４：１０７３−１０７７（１９８２）により述べられたものと同様の手段に従い、段階Ｂの中間体からこの化合物を合成する。
【０２８８】
段階Ｄ：
【０２８９】
【化７９】
2008502685.tif 000078
【０２９０】
Ｌ．Ｂ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１０４：１０７３−１０７７（１９８２）により述べられたものと同様の手段に従い、段階Ｃの中間体からこの化合物を合成する。
【０２９１】
段階Ｅ：
【０２９２】
【化８０】
2008502685.tif 000079
【０２９３】
Ｌ．Ｋａｌｖｏｄａ、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４３：１４３１−１４３７（１９７７）により述べられたものと同様の手段を用いて、段階Ｄの中間体からこの化合物を合成する。
【実施例６】
【０２９４】
【化８１】
2008502685.tif 000080
【０２９５】
５−アミノ−３−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソオキサゾロ［４,５−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−オン
実施例５に対して述べた方法に従い、実施例２、段階Ｅの中間体からこの化合物を合成する。
【実施例７】
【０２９６】
【化８２】
2008502685.tif 000081
【０２９７】
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
実施例５に対して述べた方法に従い、実施例３、段階Ｄの中間体からこの化合物を合成する。
【実施例８】
【０２９８】
【化８３】
2008502685.tif 000082
【０２９９】
２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン
実施例５に対して述べた方法に従い、実施例４、段階Ｃの中間体からこの化合物を合成する。
【０３００】
（生物学的アッセイ）
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ及びＨＣＶ複製の阻害を測定するために使用したアッセイを以下で説明する。
【０３０１】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）の阻害剤としての本発明の化合物の有効性を以下のアッセイで測定した。
【０３０２】
Ａ．ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害アッセイ：
本発明のヌクレオシド誘導体がヘテロマーＲＮＡテンプレートにおいてＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の酵素活性を阻害する能力を測定するために、このアッセイを使用した。
【０３０３】
手順：
アッセイ緩衝液条件：（合計５０μＬ／反応）
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．５
５０μＭ  ＥＤＴＡ
５ｍＭ  ＤＴＴ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
８０ｍＭ  ＫＣｌ
０．４Ｕ／μＬ  ＲＮＡｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ストックは４０単位／μＬ）
０．７５μｇ  ｔ５００（Ｃ型肝炎ゲノムのＮＳ２／３領域からの配列を用いてＴ７ランオフ転写を使用して調製した５００−ｎｔＲＮＡ）
１．６μｇ  精製Ｃ型肝炎ＮＳ５Ｂ（２１アミノ酸Ｃ末端短縮形）
１μＭ  Ａ、Ｃ、Ｕ、ＧＴＰ（ヌクレオシド三リン酸混合液）
［α−３２Ｐ］−ＧＴＰ又は［α−３３Ｐ］−ＧＴＰ。
【０３０４】
最終濃度１００μＭ以下の各種濃度で化合物を試験した。
【０３０５】
酵素及びテンプレートｔ５００を含む適切な体積の反応緩衝液を調製した。９６ウェルプレートのウェルに本発明のヌクレオシド誘導体をピペットで添加した。放射性標識ＧＴＰを含むヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）の混合液を調製し、９６ウェルプレートのウェルにピペットで添加した。酵素−テンプレート反応溶液を添加して反応を開始させ、室温で１時間から２時間反応を進行させた。
【０３０６】
０．５Ｍ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）２０μＬを添加することにより反応を停止させた。反応緩衝液の添加前に反応停止溶液をＮＴＰに添加したブランク反応も実験に含めた。
【０３０７】
反応停止させた反応液５０μＬをＤＥ８１フィルターディスク（Ｗｈａｔｍａｎ）にスポットし、３０分間風乾した。フィルターを０．３Ｍギ酸アンモニウム、ｐＨ８で洗浄した（洗浄液１ｍＬ中のｃｐｍが１００未満になるまで、１５０ｍＬ／回で、通常は６回洗浄）。シンチレーションカウンターでシンチレーション液５ｍＬ中にて、フィルターのカウントを行った。
【０３０８】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］ｘ１００に従って阻害％を計算した。
【０３０９】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼアッセイで試験した代表的化合物のＩＣ５０は、１００マイクロモル未満であった。
【０３１０】
Ｂ．ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害アッセイ：
サブゲノムＨＣＶレプリコンを含有する培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞において本発明の化合物がＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの複製に影響を及ぼす能力も評価した。アッセイの詳細を下記で述べる。このレプリコンアッセイは、Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎ，Ｆ．Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ−Ｏ．Ｋｏｃｈ，Ｕ．Ｈｅｒｉａｎ，Ｌ．Ｔｈｅｉｌｍａｎｎ及びＲ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ、「Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｕｂ−ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ａ  Ｈｅｐａｔｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１１０（１９９９）に記載されているアッセイの変法である。
【０３１１】
プロトコール：
アッセイは、インシトゥのリボヌクレアーゼ保護シンチレーション近接型プレートアッセイ（ＳＰＡ）であった。９６ウェルＣｙｔｏｓｔａｒプレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）において、０．８ｍｇ／ｍＬ  Ｇ４１８を含有する培地１００から２００μＬに１０，０００から４０，０００個の細胞をプレーティングした。０から１８時間の時点で１％ＤＭＳＯ中１００μＭ以下の各種濃度で化合物を細胞に添加し、２４時間から９６時間培養した。細胞を固定し（２０分、１０％ホルマリン）、透過処理し（２０分、０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウイルスゲノムに含まれる（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（又は他の遺伝子）に相補的な１本鎖３３Ｐ  ＲＮＡプローブとハイブリダイズさせた（一晩、５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、６５℃に加熱し、Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔでカウントした。１分あたりのカウント（ｃｐｍ）の減少として複製の阻害を読み取った。
【０３１２】
サブゲノムレプリコンを含むように選択したヒトＨｕＨ−７肝癌細胞は、ＨＣＶ５’非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択マーカー、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）、ＨＣＶ非構造蛋白質ＮＳ３からＮＳ５Ｂ及び３’ＮＴＲから構成される細胞質ＲＮＡを有する。
【０３１３】
複製アッセイで試験した代表的化合物のＥＣ５０は、１００μＭ未満であった。
【０３１４】
下記のカウンタースクリーニングにおいて、本発明のヌクレオシド誘導体の細胞毒性及び抗ウイルス特異性も評価した。
【０３１５】
Ｃ．カウンタースクリーニング：
本発明のＣ−ヌクレオシド誘導体がヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイで測定した。
【０３１６】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼα及びβの阻害：
反応条件：
５０μＬ反応体積。
【０３１７】
反応緩衝液成分：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５
２００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミン
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  β−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０３１８】
酵素及びテンプレート：
０．０５ｍｇ／ｍＬギャップのある魚精子ＤＮＡテンプレート
０．０１Ｕ／μＬ  ＤＮＡポリメラーゼα又はβ。
【０３１９】
ギャップのある魚精子ＤＮＡテンプレートの調製：
１Ｍ  ＭｇＣｌ２５μＬを活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ７００７６）５００μＬに添加する；
３７℃に温め、６５Ｕ／μＬエキソヌクレアーゼＩＩＩ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ１８０１３−０１１）３０μＬを添加する；
３７℃で５分間インキュベートする；
１０分間６５℃に加熱することにより、反応を終了させる；
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で平衡化したＢｉｏ−ｓｐｉｎ６クロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ７３２−６００２）に５０から１００μＬの一定分量を載せる；
１，０００ｘｇで４分間遠心して溶出させる；
溶出液をプールし、２６０ｎｍの吸光度を測定して濃度を決定する。
【０３２０】
適切な体積の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５でＤＮＡテンプレートを希釈し、２ｍＭ  β−メルカプトエタノール及び１００ｍＭ  ＫＣｌを含有する適切な体積の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで酵素を希釈した。マイクロ遠心管又は９６ウェルプレートに、テンプレート及び酵素をピペットで添加した。それぞれ酵素希釈緩衝液及び試験化合物溶媒を用いて、酵素を含まないブランク反応液及び試験化合物を含まない対照反応液も調製した。上記成分を含有する反応緩衝液を用いて反応を開始させた。反応液を３７℃で１時間インキュベートした。０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ２０μＬを添加することにより反応を停止させた。反応停止させた溶液５０μＬをＷｈａｔｍａｎＤＥ８１フィルターディスクにスポットし、風乾した。洗浄液１ｍＬが＜１００ｃｐｍになるまで、０．３Ｍギ酸アンモニウム（ｐＨ８）１５０ｍＬでフィルターディスクを繰り返し洗浄した。無水エタノール１５０ｍＬで２回及び無水エーテル１５０ｍＬで１回、ディスクを洗浄し、乾燥させ、シンチレーション液５ｍＬ中でカウントした。
【０３２１】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］ｘ１００に従って阻害％を計算した。
【０３２２】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）、２ｍＭ  β−メルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含有する緩衝液中に０．５ｎｇ／μＬ酵素；１０μＭ  ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ及びＴＴＰ；２μＣｉ／反応液［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰ及び０．４μｇ／μＬ活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入）を含む反応液において、ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害能を測定した。３７℃で１時間反応を進行させ、１４２ｍＭの最終濃度になるまで０．５Ｍ  ＥＤＴＡを添加することにより反応を停止させた。陰イオン交換フィルター結合及びシンチレーションカウントにより生成物形成を定量した。５０μＭ以下の濃度で化合物を試験した。
【０３２３】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］ｘ１００に従って阻害％を計算した。
【０３２４】
ＨＩＶ感染性及びＨＩＶ拡散に対する本発明のヌクレオシド誘導体の阻害能を以下のアッセイで測定した。
【０３２５】
ｃ．ＨＩＶ感染性アッセイ
β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現においてバックグラウンドが低いものを選択した、ＣＸＣＲ４とＣＣＲ５の両者を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異体でアッセイを実施した。細胞を４８時間感染させ、組み込まれているＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を化学発光基質（Ｇａｌａｃｔｏｌｉｇｈｔ  Ｐｌｕｓ、Ｔｒｏｐｉｘ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）で定量した。１００μＭから出発して２倍の連続希釈で阻害剤の力価を（各２回ずつ）測定し、対照感染に対して各濃度の阻害％を計算した。
【０３２６】
ｄ．ＨＩＶ拡散の阻害
米国特許第５，４１３，９９９号（１９９５年５月９日）及びＪ．Ｐ．Ｖａｃｃａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：４０９６−４１００（１９９４）（全体を参照により本明細書中に組み込む。）に記載されている方法により、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の拡散に対する本発明の化合物の阻害能を測定した。
【０３２７】
さらに、以下のアッセイで述べるＭＴＳ細胞を用いたアッセイでサブゲノムＨＣＶレプリコンを含有する培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞毒性についても本発明のＣ−ヌクレオシド誘導体をスクリーニングした。ＨｕＨ−７細胞株は、Ｈ．Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４２：３８５８（１９８２）に記載されている。
【０３２８】
ｅ．細胞毒性アッセイ：
適当な培地において、３日間インキュベーションの懸濁培養の場合は細胞約１．５ｘ１０５個／ｍＬの濃度で、及び３日間インキュベーションの接着培養の場合は、細胞５．０ｘ１０４個／ｍＬの濃度で、細胞培養物を調製した。細胞培養液９９μＬを９６ウェル組織培養処理プレートのウェルに移し、ＤＭＳＯ中１００倍最終濃度の試験化合物１μＬを添加した。３７℃にて５％ＣＯ２下でプレートを指定時間インキュベートした。インキュベーション時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ試薬（ＭＴＳ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）２０μＬを各ウェルに添加し、３７℃にて５％ＣＯ２下で最長でさらに３時間、プレートをインキュベートした。プレートを振盪して十分に混合し、プレートリーダーを使用して４９０ｎｍの吸光度を読み取った。ＭＴＳ試薬添加の直前に、既に分かっている細胞数を用いて、懸濁培養細胞の標準曲線を作成した。代謝活性細胞は、ＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは４９０ｎｍで吸収する。化合物の存在下の４９０ｎｍの吸光度を、化合物を添加しない細胞中の吸光度と比較した。参考文献：Ｃｏｒｙ，Ａ．Ｈ．ら、「Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ／ｆｏｒｍａｚａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｓｓａｙｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．３：２０７（１９９１）。
【０３２９】
他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対する本発明の化合物の活性を測定するために以下のアッセイを使用した。
【０３３０】
ａ．ライノウイルスに対する化合物のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（細胞変性効果阻害アッセイ）：
アッセイ条件は、Ｓｉｄｗｅｌｌ及びＨｕｆｆｍａｎの論文「Ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ」、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：７９７−８０１（１９７１）に記載されている。
【０３３１】
ウイルス：
２型ライノウイルス（ＲＶ−２）ＨＧＰ株をＫＢ及びＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献で述べられている培地（０．１％ＮａＨＣＯ３、抗生物質不含）と共に使用した。ＡＴＣＣから入手したウイルスは、軽度急性発熱性上気道疾患の成人男子の咽頭スワブ由来であった。
【０３３２】
９型ライノウイルス（ＲＶ−９）２１１株及び１４型ライノウイルス（ＲＶ−１４）Ｔｏｗ株も、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手した。ＲＶ−９は、ヒト咽頭うがい液由来であり、ＲＶ−１４は上気道疾患の若年成人の咽頭スワブ由来であった。これらのウイルスは両者とも、ヒト子宮頸部上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（Ｄｒ．Ｆｒｅｄ  Ｈａｙｄｅｎ，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  ＶＡ）と共に使用した。５％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）及び０．１％ＮａＨＣＯ３を添加したＭＥＭ（イーグル最少必須培地）を増殖培地として使用した。
【０３３３】
全３種類のウイルス型の抗ウイルス試験培地は、５％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３、ゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬ及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を添加したＭＥＭであった。
【０３３４】
本発明の化合物をアッセイするために使用した最高濃度は、２０００μｇ／ｍＬであった。試験化合物の約５分後にウイルスをアッセイプレートに添加した。適正な対照も試験した。加湿空気及び５％ＣＯ２下で３７℃にて、アッセイプレートをインキュベートした。顕微鏡を用いて対照細胞において形態変化を観察して、細胞毒性をモニタリングした。ウイルスＣＰＥデータ及び毒性対照データの回帰分析により、ＥＤ５０（５０％有効用量）及びＣＣ５０（５０％細胞毒性濃度）を求めた。式：ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０により選択指数（ＳＩ）を計算した。
【０３３５】
ｂ．デング、Ｂａｎｚｉ及び黄熱病に対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は、上記のＳｉｄｗｅｌｌ及びＨｕｆｆｍａｎの参考文献に記載されている。
【０３３６】
ウイルス：
２型デングウイルス、ニューギニア株をＣｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌから入手した。２種類のアフリカミドリザル腎細胞株を使用してウイルス（Ｖｅｒｏ）を培養し、抗ウイルス試験（ＭＡ−１０４）を実施した。感染マウス脳から調製した黄熱病ウイルス１７Ｄ株及び南アフリカの熱病少年の血清から単離したＢａｎｚｉウイルスＨ３３６株は両者ともＡＴＣＣから入手した。Ｖｅｒｏ細胞をこれらの両ウイルスと共に使用し、アッセイに使用した。
【０３３７】
細胞及び培地：
５％ＦＢＳ及び０．１％ＮａＨＣＯ３を添加した抗生物質不含の培地１９９中でＭＡ−１０４細胞（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）及びＶｅｒｏ細胞（ＡＴＣＣ）を使用した。
【０３３８】
デング、黄熱病及びＢａｎｚｉウイルスのアッセイ培地は、ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、０．１８％ＮａＨＣＯ３及びゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬであった。
【０３３９】
Ｓｉｄｗｅｌｌ及びＨｕｆｆｍａｎの文献に従い、上記ライノウイルス抗ウイルス試験と同様に、本発明の化合物の抗ウイルス試験を行った。５日から６日後にこれらの各ウイルスに対して、十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読み取りを行うことができた。
【０３４０】
ｃ．西ナイルウイルスに対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は、上記で引用したＳｉｄｗｅｌｌ及びＨｕｆｆｍａｎの参考文献に記載されている。カラス脳に由来する西ナイルウイルスＮｅｗ  Ｙｏｒｋ株をＣｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌから入手した。上述のように、Ｖｅｒｏ細胞を増殖させ、使用した。試験培地は、ＭＥＭ、１％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３及びゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬであった。
【０３４１】
ライノウイルス活性をアッセイするために使用したものと同様の、Ｓｉｄｗｅｌｌ及びＨｕｆｆｍａｎの方法に従い、本発明の化合物の抗ウイルス試験を行った。５日から６日後に、これらの各ウイルスに対して、十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読み取りを行うことができた。
【０３４２】
ｄ．ライノ、黄熱病、デング、Ｂａｎｚｉ及び西ナイルウイルスに対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（ニュートラルレッド取込みアッセイ）
上記ＣＰＥ阻害アッセイの実施後に、「Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ：Ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔ」、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：３５−３８（１９７６）に記載されている、さらなる細胞変性検出法を使用した。モデルＥＬ３０９マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用してアッセイプレートの読み取りを行った。上記のようにＥＤ５０及びＣＤ５０を計算した。
【０３４３】
医薬処方物の例
本発明の化合物の経口組成物のある特定の実施形態として、実施例１又は実施例２の化合物５０ｍｇを総量５８０から５９０ｍｇとなる十分な微粉砕ラクトースとともに配合し、サイズＯの硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０３４４】
特定の実施形態を参照しながら、本発明を説明し、例示してきたが、当業者に自明の通り、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の変更、変形及び置換が可能である。例えば、治療対象のヒトの応答はＨＣＶ感染の重症度により異なるので、上記のような好ましい用量以外の有効用量も適用し得る。同様に、観察される薬理応答は、選択する特定活性化合物又は医薬担体の有無ならびに製剤のタイプ及び使用する投与様式により変動し得、結果としてこのような予想変動又は相違は、本発明の目的及び実施に従って予測される。従って、本発明は特許請求の範囲によってのみ限定され、特許請求の範囲は妥当な範囲で広義に解釈すべきものである。
【国際調査報告】
2008502685.tif 000086