(57)【要約】本発明は、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬、およびとりわけ、血管運動症状（ＶＭＳ）、慢性疼痛、およびシャイ・ドレーガー症候群を包含する、特定の神経系疾患および病態の治療のためのその使用法に関する。
2008507551.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一の神経系疾患または病態の治療を必要とする対象において少なくとも一の神経系疾患または病態を治療するための方法であって：
前記対象に有効量の少なくとも１種の選択的ドーパミン再取り込み阻害薬を含む組成物の投与の工程を含む；
前記神経系疾患または病態が、血管運動症状、慢性疼痛、シャイ・ドレーガー症候群、またはその組み合わせである、方法。
【請求項２】
前記選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、機能的ノルエピネフリン再取り込み生物学的検定にて約０．５μＭよりも高いノルエピネフリン再取り込み阻害活性を有する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、実質的に、ノルエピネフリン再取り込み阻害活性を有しない、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、機能的セロトニン再取り込み生物学的検定にて約０．５μＭよりも高いセロトニン再取り込み阻害活性を有する、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、実質的に、セロトニン再取り込み阻害活性を有しない、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、機能的ノルエピネフリン再取り込み生物学的検定にて約０．５μＭよりも高いノルエピネフリン再取り込み阻害活性および機能的セロトニン再取り込み生物学的検定にて約０．５μＭよりも高いセロトニン再取り込み阻害活性を二元的に有する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、実質的に、二元的なノルエピネフリンおよびセロトニン再取り込み阻害活性を有しない、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン、または医薬上許容されるその塩、またはその組み合わせからなる群より選択される化合物を含む、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンまたは医薬上許容されるその塩を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンまたは医薬上許容されるその塩を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジンまたは医薬上許容されるその塩を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記神経系疾患または病態が、血管運動症状である、前記請求項のいずれか一に記載の方法。
【請求項１３】
前記血管運動症状が、一過性熱感である、前記請求項のいずれか一に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、ヒトである、前記請求項のいずれか一に記載の方法。
【請求項１５】
前記ヒトが、女性である、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記女性が、閉経前である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記女性が、閉経前後である、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
前記女性が、閉経後である、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒトが、男性である、請求項１４記載の方法。
【請求項２０】
前記男性が、自然に、化学的にまたは外科手術による男性更年期である、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記神経系疾患または病態が、慢性疼痛である、請求項１ないし１１のいずれか一に記載の方法。
【請求項２２】
前記神経系疾患または病態が、神経因性疼痛である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記神経系疾患または病態が、シャイ・ドレーガー症候群である、請求項１ないし１１のいずれか一に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも一の神経系疾患または病態の治療を必要とする対象において少なくとも一の神経系疾患または病態の治療のための医薬調製における選択的ドーパミン再取り込み阻害薬の使用であって、前記神経系疾患または病態が、血管運動症状、慢性疼痛、シャイ・ドレーガー症候群、またはその組み合わせであるところの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年７月２２日付け出願の米国特許出願番号６０／５９０、１０３および６０／５９０、２０３の利益を主張し、その全開示は出典明示により本願明細書の一部とする。
【０００２】
本発明は、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬、およびとりわけ、血管運動症状（ＶＭＳ）および慢性疼痛を包含する、特定の神経系疾患および病態の治療のためのその使用法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血管運動不安定性および一過性熱感は性ステロイド濃度の変動により引き起こされ、女性および男性どちらにおいても破壊的で無気力状態になることがよく知られている。一過性熱感は、最大３０分まで継続し得、頻度は１週間に数回から１日に複数回まで変化し得る。患者は、顔面から胸および背中、次に身体の残りの部分へと急速に広がる突然の熱感として一過性熱感を経験する。これらの発作は、通常、大量の発汗を伴う。かかる発作は、時には、１日に数回起こることもあり、夜に起こることが多い。夜間に起こる一過性熱感および発汗は、睡眠不足の原因となり得る。観察される精神的および感情的症状、例えば、緊張感、倦怠感、興奮、不眠、憂鬱、記憶喪失、頭痛、不安、緊張感、および／または集中力散漫などは、一過性熱感および寝汗後の睡眠不足により引き起こされると考えられる（Ｋｒａｍｅｒ、ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎ：Ｍｕｒｐｈｙ、ｅｔ  ａｌ．、３ｒｄ  Ｉｎｔ’ｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、  Ｐａｒｉｓ、  Ｆｒａｎｃｅ：ＳＣＩ：３−７（１９９２））。
【０００４】
一過性熱感は、乳癌の治療を受けた女性において一層重く、その理由はいくつかある；
（１）乳癌に罹っている多数の患者は、タモキシフェンを服用しており、その最も一般的な副作用が一過性熱感である：
（２）乳癌の治療を受けた多数の女性は、化学療法のために早発更年期を経験する；および
（３）乳癌の病歴を持つ女性は、乳癌の再発の可能性を心配して、通常、エストロゲン療法を拒否する。
（Ｌｏｐｒｉｚｉｎｉ、  ｅｔ  ａｌ．、Ｌａｎｃｅｔ、２０００、３５６（９２４７）、２０５９−２０６３）
【０００５】
男性もまた、ステロイドホルモン（アンドロゲン）停止後により一過性熱感を経験する。これは、加齢に伴うアンドロゲン減少の場合（Ｋａｔｏｖｉｃｈ、ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１９９０、１９３（２）、１２９−１３５）ならびに前立腺癌の治療に伴うホルモン不足の極端な場合（Ｂｅｒｅｎｄｓｅｎ、  ｅｔ  ａｌ．、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、  ２００１、４１９（１）、４７−５４）に当てはまる。これらの患者の３分の１もの人が、有意な不快感および不都合を引き起こすのに十分な重度の持続的かつ頻繁な症状を経験する。
【０００６】
これらの症状の正確なメカニズムは、分かっていないが、通常、体温調節および血管運動活性を制御する正常な恒常性メカニズムのかく乱を意味すると考えられる（Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ、ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９８７、６５：１３１２−１３２４）。
【０００７】
エストロゲン療法（例えば、エストロゲン置換療法）がかかる症状を軽減するという事実により、これらの症状とエストロゲン不足の間の関連性が確立される。例えば、人生の閉経期は前記したように広範囲に及ぶ他の急性症状と関連付けられ、これらの症状が一般に、エストロゲン過敏である。
【０００８】
エストロゲンは、ノルエピネフリン（ＮＥ）機構（Ｐａｎｅｋ、ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１９８６、２３６（３）、６４６−６５２）、セロトニン（５−ＨＴ）機構（ＭｃＥｗｅｎ、Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００２、５７：３５７−３８４）、およびドーパミン機構（Ｂｏｓｓｅ、ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９９６、１６：１９９−２１２．；Ｄａｔｌａ、ｅｔ  ａｉ、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ、２００３、１４：４７−５０．；ＤｅＭａｒｉｎｉｓ、ｅｔ  ａｌ．、Ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９１、２３：３０−４）の活性を刺激し、視床下部において体温調節中枢の正常な活性を維持するこれらの神経伝達物質間の調節に関与しうると示唆される。視床下部から脳幹／脊髄および副腎を経由して皮膚への下行経路は正常な皮膚温度の維持に寄与する。
【０００９】
ドーパミン伝達の増加が体温調節の回復をもたらしうるメカニズムは、多面的である。ドーパミンは、概日リズムに関する恒常作用に関与する（Ｗｉｓｏｒ、  ｅｔ  ａｌ．、  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、１９８７、２１：１７８７−９４）。体温調節は、概日リズムの維持によりきちんと制御される。ドーパミンおよびノルエピネフリンは、概日リズムの維持に相互に関連した役割を果たす。そのため、概日リズムの回復は、正常な体温調節を回復するであろうと考えられる。一方、モノアミン伝達阻害薬は、高い選択性を有するけれども、これらのトランスポーターは、それらの基質に対し選択性を有しない（Ｅｓｈｌｅｍａｎ、ｅｔ  ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１９９９、２８９：８７７−８５；Ｈｏｒｎ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９７３、４７：３３２−８．；Ｒａｉｔｅｒｉ、ｅｔ  ａｌ．、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９７７、４１：１３３−４３．）。ノルエピネフリントランスポーター（ＮＥＴ）は、ノルエピネフリンと同様にドーパミンを伝達することができ、ドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）よりもドーパミンにおける高いアフィニティーを有する（Ｇｉｒｏｓ、ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、１９９４、２６９、１５９８５−１５９８８）。したがって、ドーパミンの領域特異的上昇をもたらすドーパミン再取り込み阻害薬の使用は、アドレナリン作動系の神経伝達に影響を及ぼし得る。そのため、血管運動症状の治療に対するドーパミン再取り込み阻害薬の使用は、ノルエピネフリントランスポーターを介した間接的効果と同様に恒常性の維持においてドーパミントランスポーターでの直接的効果を共に及ぼすことも考えられる（Ｇａｉｎｅｔｄｉｎｏｖ、ｅｔ  ａｌ．、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１９９８、２６：１４８−５３）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
体温調節の多面性を考えると、血管運動不安定性を標的とする複数の治療法および取り組みを開発することができる。本発明は、概日体温調節の状態を戻すためのドーパミン再取り込み阻害薬の使用または間接的なノルアドレナリン機構の調節によるドーパミンの活性低下の回復を対象とする方法に焦点を合わせる。本発明は、とりわけ、血管運動症状（ＶＭＳ）、慢性疼痛、およびシャイ・ドレーガー症候群を包含する、神経系疾患および病態の治療におけるこれらおよび他の重要な用途を対象とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む選択的ドーパミン再取り込み阻害薬、およびとりわけ、血管運動症状（ＶＭＳ）および慢性疼痛を包含する神経系疾患または病態の治療のためのその使用法を対象とする。
【００１２】
一の実施形態において、本発明は、少なくとも一の神経系疾患または病態の治療を必要とする対象において少なくとも一の神経系疾患または病態を治療するための方法であって：
前記対象に有効量の少なくとも１種の選択的ドーパミン選択的ドーパミン再取り込み阻害薬を含む組成物の投与の工程を含む；
前記神経系疾患または病態は、血管運動症状、慢性疼痛、シャイ・ドレーガー症候群、またはその組み合わせである、方法を対象とする。
（図面の簡単な記載）
【００１３】
本発明は、下記の詳細な記述および本出願の一部を形成する添付図面より十分に理解され得る。
【００１４】
図１は、卵巣摘出誘導体温調節機能不全のテレメトリーラットモデルにおける、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンの１回量（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下）投与の結果を示す（実施例２参照）。
【００１５】
図２は、卵巣摘出誘導体温調節機能不全のテレメトリーラットモデルにおける、１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９；またバノキセリンとして公知）の１回量（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下）投与の結果を示す（実施例２参照）。
【００１６】
図３は、ラセミ体１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（ビシファジン）、（＋）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、ガバペンチン、およびビヒクルの投与後３０、６０、１００、１８０、および３００分の％反転のプロットである（実施例３参照）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（ＨＣＩ塩として測定される（１Ｓ，５Ｒ）−１−（（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンとしても公知）、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬、およびとりわけ、血管運動症状（ＶＭＳ）、慢性疼痛、およびシャイ・ドレーガー症候群を包含する神経系疾患または病態の治療のためのその使用法を対象とする。
【００１８】
以下の定義は、本明細書に用いられる語および略語を十分に理解するために記載する。
【００１９】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文中に特に記載のない限り、複数も包含する。そのため、例えば、「拮抗薬」なる記載は、複数のかかる拮抗薬を包含し、「化合物」なる記載は、当業者に公知である１以上の化合物およびその等価物などをいう。
【００２０】
量、方法、特性、または化合物の単位に相当する本明細書中の略語は、以下の通りである：「ｍｉｎ」は分、「ｈ」は時間、「μＬ」はマイクロリットル、「ｍＬ」はミリリットル、「ｍＭ」はミリモル、「Ｍ」はモル、「ｍｍｏｌｅ」はミリモル、「ｃｍ」はセンチメートル、「ＳＥＭ」は平均標準誤差および「ＩＵ」は国際単位を意味する。「ＥＤ５０値」は、観察される病態または効果を５０％軽減させる投与量（５０％平均最大終点）を意味する。特に記載のない限り、旋光度は、ＨＣｌ塩型の化合物として測定する。
【００２１】
「ノルエピネフリントランスポーター」をＮＥＴと略記する。
「ヒトノルエピネフリントランスポーター」をｈＮＥＴと略記する。
「セロトニントランスポーター」をＳＥＲＴと略記する
「ヒトセロトニントランスポーター」をｈＳＥＲＴと略記する。
「ノルエピネフリン再取り込み阻害薬」をＮＲＩと略記する。
「選択的ノルエピネフリン再取り込み阻害薬」をＳＮＲＩと略記する。
「セロトニン再取り込み阻害薬」をＳＲＩと略記する。
「選択的セロトニン再取り込み阻害薬」をＳＳＲＩと略記する。
「ノルエピネフリン」をＮＥと略記する。
「セロトニン」を５−ＨＴと略記する。
「皮下」をｓｃと略記する。
「腹腔内」をｉｐと略記する。
「経口」をｐｏと略記する。
【００２２】
本明細書において、「治療」なる語は、防止的（例えば、予防）、治癒的または緩和治療を包含し、本明細書における「処置」もまた予防的、治癒的および緩和治療を包含する。
【００２３】
本明細書において、「有効量」なる語は、剤形で、必要とされる期間中、神経系疾患または病態の治療に対し望ましい結果を得るための効果的な量をいう。特に、血管運動症状において、「有効量」とは、血管運動症状に苦しむ対象におけるステロイド有効性の欠如の一部または全部を補うためにドーパミン濃度を増大させる化合物または組成物の量をいう。ホルモン濃度の変化は、本発明において必要である化合物の量に影響を及ぼすであろう。例えば、閉経前の状態は、閉経前後の状態よりもホルモン濃度が高いため、より低濃度の化合物を必要とし得る。
【００２４】
本発明の成分の有効量は、選択された、特定の化合物、成分または組成物、投与経路およびかかる成分（単独または１以上の複合薬との組み合わせ）が個体において望ましい反応を引き起こす能力だけでなく、病状または緩和される病態の重症度、ホルモン濃度、個体の年齢、性別、体重、その患者の現状、および治療可能な病理学上病態の重症度、同時服用または特定の患者のその後の特別食などの因子、および当業者が分かるだろう他の要因、最終的に、顧問医が判断する適切な用量によってもまた患者ごとに異なることは分かるだろう。用法・用量は、改善された治療効果を得るために調節してもよい。また、有効量は、その成分の毒性または致命的効果よりも治療上有益な効果が勝る場合でもある。
【００２５】
好ましくは、本発明の方法に有用な化合物は、治療開始前のＶＭＳの回数と比較して、ＶＭＳの回数、特に、一過性熱感が軽減するような用量および期間で投与される。このような治療はまた、治療開始前の重度のＶＭＳと比較して、ＶＭＳ、特に、一過性熱感を依然として訴えている場合、全体的重症度または強度分布を有効に軽減させる。慢性疼痛、およびシャイ・ドレーガー症候群に関して、本発明の方法に有用な化合物は、症状または病態の予防、緩和、排除されるような用量および期間で投与される。
【００２６】
例えば、罹患者において、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、好ましくは、約０．１ｍｇ／日から約２００ｍｇ／日、さらに好ましくは、約１ｍｇ／日から約１５０ｍｇ／日、さらに好ましくは、約１ｍｇ／日から約１００ｍｇ／日、そして最も好ましくは約１ｍｇ／日から約５０ｍｇ／日の用量で、神経系疾患または病態、例えば、ＶＭＳの回数および／または重度および／または持続時間および／または慢性疼痛またはシャイ・ドレーガー症候群の重症度を実質的に軽減および／または排除するために十分な期間で投与してもよい。
【００２７】
本明細書において用いられる「化合物の組成物」、「化合物」、「医薬」、「治療薬」、「生理学的に活性な薬剤」および「薬剤」なる語は、本明細書において交換可能に用いられ、対象（ヒトまたは動物）に投与される場合、局所および／または全身性作用により所望の薬理学的および／または生理学的効果を誘発する、化合物（複数でも可）または組成物をいう。
【００２８】
本明細書において用いられる「調節」なる語は、生物学的活性またはプロセスの機能的特性、例えば、受容体結合またはシグナル伝達活性を向上するか、あるいは阻害するかのいずれかの能力をいう。このような向上または阻害は、特定の事象の発生、例えば、情報伝達経路の活性化に付随してもよく、および／または特定の細胞型のみに出現してもよい。調節因子は、所望の化合物、例えば、抗体、低分子、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質、好ましくは低分子、またはペプチドを包含するように意図される。
【００２９】
本明細書において用いられる「阻害薬」なる語は、セロトニン再取り込み活性またはノルエピネフリン再取り込み活性のような特定の活性の阻害、抑制、抑圧、減少による哺乳動物に対する部分的、完全、競合性および／または阻害効果を示し、所望の化合物または薬剤、例えば、抗体、低分子、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質、好ましくは低分子、またはペプチドを包含するように意図される。特定の実施形態において、好ましくはなる語は、ヒトノルエピネフリン再取り込みの阻害薬またはセロトニン再取り込みおよびノルエピネフリン再取り込みの両方の阻害薬をいい、したがって、内因性ノルエピネフリン再取り込みまたはセロトニン再取り込みおよびノルエピネフリン再取り込みの両方の生物学的効果の一部または全部を減少または阻害、好ましくは減少させる。
【００３０】
本発明のうち、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、ドーパミン再取り込み阻害薬は、医薬上許容される塩として調製してもよい。本明細書において用いられる「医薬上許容される塩」なる語は、無機塩、および有機塩を包含する、医薬上許容される無毒性の酸より調製される塩をいう。適当な無毒性塩は、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、イセチオン酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモン酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの無機および有機酸を含む。特に好ましくは、塩化水素酸、臭化水素酸、リン酸、および硫酸であり、最も好ましくは、塩化水素酸塩である。
【００３１】
本明細書において用いられる「投与」なる語は、本発明の化合物または組成物を直接、投与すること、あるいは体内で当量の活性化合物または物質を形成するプロドラッグ、誘導体または類似体を投与することのいずれかを意味する。
【００３２】
本明細書において用いられる「対象」または「患者」なる語は、本発明の組成物および／または方法で治療可能であるヒトを含む動物をいう。「対象（複数でも可）」なる語は、一方の性が特に指定されない限り、男性、女性両性別を意味する。したがって、「患者」なる語は、とりわけ、血管運動症状および／または慢性疼痛を包含する、神経系疾患または病態の治療の恩恵を受け得る哺乳動物、例えば、ヒト、特に哺乳動物がメスであるならば、閉経前、閉経前後、または閉経後のいずれか、を含む。
さらに、患者なる語は、ヒトを含むメスの動物、およびヒトのうち、更年期を過ぎた高齢女性だけでなく、子宮摘出手術を受けたか、または他の理由でエストロゲン産生が抑制された女性、例えば、コルチコステロイドの長期投与を受けている、クッシング症候群を患っている、または性腺機能不全であるといった女性もまた含む。
しかしながら、「患者」なる語は、女性に限定しているわけではない。
【００３３】
本明細書において用いられる「血管運動症状」、「血管運動不安定性症状」および「血管運動性障害」なる語は、とりわけ、体温調節機能不全により惹起される一過性熱感（ほてり）、不眠、睡眠障害、気分障害、興奮、発汗多量、寝汗、倦怠感などを包含するが、これに限定されるものではない。
【００３４】
本明細書において用いられる「一過性熱感」なる語は、該分野において公知の用語であって、典型的には、通常、対象における発汗と関連付けられる、突発性皮膚紅潮からなる、体温における一過性障害をいう。
【００３５】
本明細書において用いられる「早期閉経」または「人工閉経」なる語は、４０歳前に起こり得る原因不明の卵巣障害をいう。かかる障害は、喫煙、高地での生活、または栄養失調に関連し得る。人工閉経は、卵巣摘出、化学療法、骨盤の放射線照射、または卵巣の血液供給を害するいずれかの過程より起こり得る。
【００３６】
本明細書において用いられる「閉経前」なる語は、月経閉止の前を意味し、「閉経前後」なる語は、月経閉止の間を意味し、「閉経後」なる語は、月経閉止の後を意味する。「卵巣摘出」なる語は、１または２個の卵巣の除去を意味し、Ｍｅｒｃｈｅｎｔｈａｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｍａｔｕｒｉｔａｓ、１９９８、３０（３）：３０７−３１６にしたがって行うことができる。
【００３７】
本明細書において用いられる「慢性疼痛」なる語は、本来、激痛、局部的な、鋭痛、または刺痛、および／または鈍痛、疼く痛み、広範性疼痛、燃えるような痛みであり、長期間生じる（すなわち、持続性）中心性または末梢性疼痛をいい、本発明の目的に関して、神経因性疼痛および癌疼痛を包含する。慢性疼痛は、神経因性疼痛、痛覚過敏症、および／または異痛症を包含する。
【００３８】
本明細書において用いられる「神経因性疼痛」なる語は、末梢または中枢神経系の損傷または病理的変化により引き起こされる慢性疼痛をいう。神経因性疼痛に関する病理的変化の例として、長期の末梢または中枢神経感作、神経系の抑制および／または促進機能に対する中心感作関連性損傷および副交感神経系と交感神経系の間の異常な相互作用が挙げられる。広範囲の臨床上の病態は、例えば、糖尿病、切断による外傷後疼痛、腰痛、癌、化学的損傷、または毒素、他の大手術、外傷圧迫による末梢神経損傷、栄養失調、帯状疱疹またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のような感染症を包含する神経因性疼痛に関連しうるまたは基準となりうる。神経因性疼痛は、例えば、糖尿病性腎症、末梢神経障害、ヘルペス後神経炎、三叉神経痛、腰部または頸椎根症、線維筋痛、舌咽神経痛、反射性交感神経性ジストロフィー、視床症候群、神経根剥離、または、幻肢痛のような末梢および／または中枢神経感作を起こす損傷が原因である神経損傷、反射性交感神経性ジストロフィーまたは開胸術後の疼痛、癌、化学療法、毒素、栄養失調、または帯状疱疹またはＨＩＶのようなウイルスまたは細菌感染、またはその組み合わせに関連しうる。さらに、本発明の化合物の使用法は、転移性浸潤に続発する病態、有痛脂肪症、熱傷または視床での病態に関する中心性疼痛の病態、またはその組み合わせである、神経因性疼痛に対する治療を包含する。
【００３９】
本明細書において用いられる「痛覚過敏症」なる語は、典型的には、侵害刺激に対し刺激感受性を増大する疼痛をいう。
【００４０】
本明細書において用いられる「異痛症」なる語は、典型的には、非侵害刺激に対する刺激感受性の増大をいう。
【００４１】
本明細書において用いられる「副作用」なる語は、薬剤または処置において求めるもの以外の結果、例えば、特に、薬剤投与により効果を求められる以外の組織または臓器系に対する、医薬により生じる逆効果をいう。例えば、高用量のＮＲＩｓまたはＮＲＩ／ＳＲＩ化合物単独の場合において、「副作用」なる語は、例えば、嘔吐、吐き気、発汗、およびほてりなどの病態をいってもよい（Ｊａｎｏｗｓｋｙ、ｅｔ  ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１９８４、４５（１０  Ｐｔ  ２）：３−９）。
【００４２】
本明細書において用いられる「（＋）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−  ３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンまたは医薬上許容されるその塩を実質的に含まない」なる句は、組成物の総重量を基礎として、約５重量％未満（ｗ／ｗ）、好ましくは約２重量％（ｗ／ｗ）未満、およびさらに好ましくは約１重量％（ｗ／ｗ）未満の（＋）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンまたは医薬上許容されるその塩を含有する組成物を意味する。
【００４３】
本明細書において用いられる「（＋）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび医薬上許容されるその塩を実質的に含まない」なる句は、組成物の総重量を基礎として、約５重量％未満（ｗ／ｗ）、好ましくは約２重量％（ｗ／ｗ）未満、およびさらに好ましくは約１重量％（ｗ／ｗ）未満の（＋）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（また、（１Ｒ，５Ｓ）−１−（（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンとして公知）または医薬上許容されるその塩を含有する組成物を意味する。
【００４４】
本明細書において用いられる「選択的ドーパミン再取り込み阻害薬」および「選択的ＳＲＩ」なる語は、中枢および／または末梢神経系および／または末梢系のニューロンを通じてＤＡの取り込みを阻害することにより、ドーパミン（ＤＡ）の濃度を変化させ、ＥＣ５０値またはヒトトランスポーターと特異的に結合したＤＡ取り込みの％を測定した場合に、少なくとも約１：１、好ましくは少なくとも約２：１、さらに好ましくは少なくとも約５：１、なおいっそう好ましくは少なくとも約１０：１、その上、なおいっそう好ましくは少なくとも約２０：１、そして、なおいっそう好ましくは少なくとも約５０：１のＤＡＴ：ＮＥＴまたはＤＡＴ：ＳＥＲＴ活性の選択比を有する化合物を意味する。
【００４５】
本発明は、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（（１Ｒ，５Ｓ）−１−（（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンとしても公知）、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９；バノキセリンとしても公知）を含む、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬、およびとりわけ、血管運動症状（ＶＭＳ）および慢性疼痛、特に、神経因性疼痛、およびさらには慢性背痛を除く神経因性疼痛を包含する、神経系疾患または病態の治療のための薬剤の使用法を対象とする。前記の本発明が、とりわけ、血管運動症状、慢性疼痛、特に、神経因性疼痛、およびさらには慢性背痛を除く神経因性疼痛、シャイ・ドレーガー症候群、またはその組み合わせを包含する、神経系疾患および病態の治療、緩和、抑制および／または予防の分野において十分な飛躍的進歩を遂げていると考えられる。
【００４６】
一の実施形態において、本発明は、少なくとも一の神経系疾患または病態の治療を必要とする対象において少なくとも一の神経系疾患または病態を治療するための方法であって：
前記対象に有効量の少なくとも１種の選択的ドーパミン再取り込み阻害薬を含む組成物の投与の工程を含む；
前記神経系疾患または病態は、血管運動症状、慢性疼痛、シャイ・ドレーガー症候群、またはその組み合わせに関する。
好ましい実施形態において、神経系疾患または病態は、血管運動症状または慢性疼痛、特に、神経因性疼痛、およびさらには慢性背痛を除く神経因性疼痛である。
【００４７】
神経因性疼痛は、例えば、糖尿病性腎症、ヘルペス後神経痛、三叉神経痛、複合性局所疼痛症候群、腰部または頸部神経根症、繊維筋痛、舌咽神経痛、反射性交感神経性ジストロフィー、灼熱痛、視床症候群、神経根剥離、意義不明単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）神経障害、サルコイド性多発性神経障害、ＨＩＶの治療に使用される薬剤のような様々な原因により生じるＨＩＶ関連神経障害、結合組織病を伴う末梢神経障害などの末梢神経障害、腫瘍随伴性感覚性ニューロパシー、家族性アミロイドポリニューロパシー、後天性アミロイドポリニューロパシー、遺伝性ニューロパシー、腎不全に伴うニューロパシー、遺伝性感覚性ニューロパシー、ファブリー病、セリアック病または幻肢痛などの末梢および／または中枢神経感作を起こす損傷が原因である神経損傷、反射性交感神経性ジストロフィーまたは開胸術後の疼痛、化学療法薬剤またはその病気の治療に使用した他の薬剤が原因であるニューロパシーを含む癌、化学的損傷、ヒ素による神経障害などの毒素、栄養失調、または帯状疱疹またはＨＩＶ関連神経障害などのウイルスまたは細菌感染、またはその組み合わせに関連し得る。さらに、本発明の化合物の使用法は、転移性浸潤に続発する病態、有痛脂肪症、熱傷、または視床の病態に関する中枢性疼痛の病態である神経因性疼痛の治療を包含する。
【００４８】
前記に記載の神経因性疼痛はまた、状況に応じ、特発性小径線維疼痛性感覚性ニューロパシーのような「疼痛性小径線維ニューロパシー」、または脱髄性ニューロパシーまたは軸索ニューロパシーのような「疼痛性大径線維ニューロパシー」、またはその組み合わせとして分類され得る。そのようなニューロパシーは、例えば、Ｊ．  Ｍｅｎｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．２００３、３４８：１２４３−１２５５により詳細に記載されており、その全体を出典明示により本明細書の一部とする。
【００４９】
特定の実施形態において、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、機能的ノルエピネフリン再取り込み生物学的検定にて約０．５μＭよりも高いノルエピネフリン再取り込み阻害活性を有し、好ましくは、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、実質的に、ノルエピネフリン再取り込み阻害活性を有さず、すなわち、機能的ノルエピネフリン再取り込み生物学的検定にて約１μＭよりも高い活性を有する。
【００５０】
特定の実施形態において、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、機能的セロトニン再取り込み生物学的検定にて約０．５μＭよりも高いセロトニン再取り込み阻害活性を有し、好ましくは、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、実質的に、セロトニン再取り込み阻害活性を有さず、すなわち、機能的セロトニン再取り込み生物学的検定にて約１μＭよりも高い活性を有する。
【００５１】
特定の実施形態において、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、機能的ノルエピネフリンおよびセロトニン再取り込みの生物学的検定にて、約０．５μＭよりも高いノルエピネフリンおよびセロトニンの再取り込み阻害活性を二元的に有し、好ましくは、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬は、実質的に、二元的なノルエピネフリンおよびセロトニンの再取り込み阻害活性を有さず、すなわち、機能的ノルエピネフリンおよびセロトニン再取り込みの両生物学的検定にて約１μＭよりも高い活性を有する。
【００５２】
好ましくは、選択的ドーパミン再取り込み阻害薬が、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メイルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９；バノキセリンとしても公知）、または、医薬上許容されるその塩である。選択的ドーパミン再取り込み阻害薬の化合物は、当業者における公知技術を用いて同定され得る。例えば、下記の実施例の項目の記載のような、ドーパミン取り込みトランスポーター結合試験、膜結合試験、および放射性リガンド結合試験を包含する試験において化合物を試験することである。
【００５３】
本発明は、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、ドーパミン再取り込み阻害薬のプロドラッグを包含する。本明細書において用いられる「プロドラッグ」なる語は、代謝手段（例えば、加水分解）によりインビボにて選択的ドーパミン再取り込み阻害薬に変換可能な化合物を意味する。プロドラッグの様々な形態は、当業者に公知である。例えば、Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、（ｅｄ．）、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）；Ｗｉｄｄｅｒ、ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ．  ４、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ、ｅｔ  ａｌ．、ｅｄ）．“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、”Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ５、１１３−１９１（１９９１）、Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、ｅｔ  ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１９９２、８：１−３８、Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９８８、７７：２８５  ｅｔ  ｓｅｑ．；  ａｎｄ  Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｓｔｅｌｌａ（ｅｄｓ．）  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９７５）参照。
【００５４】
さらに、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、マジンドール、メチルフェニデート、および１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）を含む、ドーパミン再取り込み阻害薬は、溶媒和されていない形態、および医薬上許容される溶媒、例えば、水、エタノールなどで溶媒和された形態として存在しうる。
【００５５】
本発明の方法における有益な化合物を、当業者に公知な多数の方法により調製してもよい。化合物を、例えば、下記に記載の方法、または当業者に理解されるようにその変法により合成することができる。本発明の化合物の調製に用いる試薬は、商業的に入手可能であるか、または文献に記載されている標準的手順により調製できるかのいずれかである。本発明に関して開示されている全ての方法は、ミリグラム、グラム、マルチグラム、キログラム、マルチキログラムまたは商業的規模を包含する、いずれかの規模で実施することが考えられる。
【００５６】
容易に理解されるだろうけれども、存在する官能基は、合成の間に保護基を含有していてもよい。保護基は、ヒドロキシル基およびカルボキシル基などの官能基に選択的に付加することができ、これから除去することができる、それ自体公知な化学官能基である。これらの基は、化合物がさらされる化学反応条件に対してかかる官能基を不活性にするために、化合物中に存在する。様々な保護基を本発明に用いることができる。本発明にしたがって用いることができる保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、Ｔ．Ｗ．およびＷｕｔｓ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２ｄ．  Ｅｄ．、Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９１において記載されている。
【００５７】
（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩は、例えば、出典明示により本明細書の一部とする、ＵＳ−Ａ−４、１３１、６１１、ＵＳ−Ａ−４、４３５、４１９、ＵＳ−Ｂ−６、２０４、２８４、ＵＳ−Ｂ−６、３７２、９１９、ＵＳ−Ｂ−６、５６９、８８７、およびＵＳ−Ｂ−６、７１６、８６８の明細書の記載により調製してもよい。
【００５８】
化合物１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９；バノキセリン）、または医薬上許容されるその塩は、一般的合成により調製してもよく、例えば、シグマ化学社（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）（セントルイス、ミズーリ州）より商業的に入手可能である。化合物マジンドール、メチルフェニデートは、商業的に入手可能である。
【００５９】
本発明の方法に有益である（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびキラル塩の形成および結晶化を包含する、当業者に公知であるいずれかの方法により、ラセミ混合物より単離され、または本明細書に記載の方法により調整してもよい。例えば、ＵＳ−Ｂ−６、３７２、９１２；Ｊａｃｑｕｅｓ、ｅｔ  ａｌ．、Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ、Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８１）；Ｗｉｌｅｎ、Ｓ．Ｈ．、ｅｔ  ａｌ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、３３：２７２５（１９７７）；ＥＮｅＩ、Ｅ．Ｌ  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ＮＹ、１９６２）；Ｗｉｌｅｎ、Ｓ．Ｈ．Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．  Ｅｌｉｅｌ、Ｅｄ．、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ、ＩＮ  １９７２）参照。
【００６０】
いずれかの実施形態において、（−）−１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンまたは（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンは、多糖類系キラル固定相および有機溶離液を用いて、ラセミ型１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンまたはラセミ型１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンを分離することにより得られる。好ましくは、多糖類が、澱粉または澱粉誘導体である。キラルＨＰＬＣカラムは、例えば、ダイセル（Ｄｉａｃｅｌ）で製造されたＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ  ＡＤ  ＨＰＬＣカラムなどを使用でき、Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｅｘｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａより商業的に入手可能であり、さらに好ましくは１ｃｍｘ２５ｃｍ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＴＭ  ＡＤ  ＨＰＬＣカラムを使用することができる。好ましい溶離液は、合した極性有機溶媒により極性化された炭化水素溶媒である。好ましくは、有機溶離液は、約９５％ないし約９９．５％（ｖｏｌｕｍｅ／ｖｏｌｕｍｅ）含有の非極性、炭化水素溶媒および約５％ないし約０．５％（ｖｏｌｕｍｅ／ｖｏｌｕｍｅ）含有の極性有機溶媒を包含する。好ましい実施形態において、炭化水素溶媒はヘキサンであり、合した極性有機溶媒は、イソプロピルアミンである。
【００６１】
本発明の方法に有益な、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬は、適当な組成物、または少なくとも一の医薬上許容される担体を含む組成物として用いてもよい。一般に、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩は、医薬組成物の総重量を基礎として、約０．１重量％から約９０重量％の濃度で存在するであろう。好ましくは、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩は、医薬組成物の総重量を基礎として、少なくとも約１重量％の濃度で存在するであろう。さらに好ましくは、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩は、医薬組成物の総重量を基礎として、少なくとも約５重量％の濃度で存在するであろう。なおいっそう好ましくは、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩は、医薬組成物の総重量を基礎として、少なくとも約１０重量％の濃度で存在するであろう。その上、なおいっそう好ましくは、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩は、医薬組成物の総重量を基礎として、少なくとも約２５重量％の濃度で存在するであろう。
【００６２】
このような組成物は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、ｅｄ．  Ａｌｆｏｎｏｓｏ  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８５）に記載されているような許容される調製法にしたがって調製される。医薬上許容される担体は、その構成における他の成分と互換性を有する担体であり、生物学的に許容されるものである。
【００６３】
本発明の化合物は、そのまま、または慣用の医薬担体との組み合わせにおいて、経口または非経口投与してもよい。適当な固体担体は、矯味矯臭剤、潤滑剤、可溶化剤、懸濁化剤、賦形剤、流動性促進剤、圧縮助剤、接着剤または錠剤崩壊剤または封入物質としても作用できる１以上の物質を包含し得る。散剤において、担体は、微粉砕された有効成分との混合物である微粉砕された固体である。錠剤において、有効成分は、適当な比率で必要な圧縮特性を有する担体と合し、所望の形状および大きさに圧縮される。散剤および錠剤は、好ましくは、最大９９％までの有効成分を含有する。適当な固体担体は、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、デキストリン、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリジン、低融点ワックス、およびイオン交換樹脂を包含する。
【００６４】
液体担体は、液剤、懸濁液、乳化剤、シロップおよびエリキシル剤の調製において使用してもよい。本発明の有効成分は、水、有機溶媒、両方の混合物または医薬上許容される油脂などの、医薬上許容される液体担体で溶解または懸濁され得る。液体担体は、可溶化剤、乳化剤、緩衝液、保存料、甘味料、矯味矯臭剤、懸濁化剤、増粘剤、着色料、粘性調節剤、安定化剤、または浸透圧調節剤などの、他の適当な医薬添加剤を包含し得る。経口および非経口投与における液体担体の適当な例として、水（特に、前記添加剤、例えば、セルロース誘導体、好ましくはカルボキシルメチルセルロースナトリウム溶液を包含する）、アルコール類（一価アルコールおよび多価アルコール、例えば、グリコースを包含する）およびその誘導体、および油類（例えば、ヤシ油およびラッカセイ油）が挙げられる。非経口投与において、担体はまた、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの、油性エステル類であり得る。無機液体担体が非経口投与用無菌液体組成物において用いられる。
【００６５】
無菌溶液または懸濁液である液体医薬組成物は、例えば、筋肉内、腹腔内または皮下注射により投与される。無菌溶液は、静脈内投与することもできる。経口投与は、液体または固体の組成物形態のいずれかであってもよい。
【００６６】
好ましくは、医薬組成物は、単位投与形態、例えば、錠剤、カプセル、散剤、液剤、懸濁液、乳化剤、顆粒、または坐剤である。このような形態において、組成物は、適当な量の有効成分を含有する単位投与量に細分され；単位投与形態は、包装された組成物、例えば、パック入り散剤、バイアル、アンプル、あらかじめ充填されたシリンジまたは液体を含有する小袋であり得る。単位投与形態は、例えば、カプセルまたは錠剤それ自体であるか、あるいはパッケージ形態中の適当な数の所望のかかる組成物であり得る。
【００６７】
本発明のもう一つ別の実施形態において、本発明の方法において有益な化合物は、１以上の他の医薬上活性薬剤、例えば、哺乳動物に存在する他の医学的病態を治療するために使用される薬剤とともに、哺乳動物に投与してもよい。このような医薬上活性薬剤の例として、鎮痛剤、血管新生阻害剤、抗癌剤、抗糖尿病剤、抗感染症剤、または胃腸薬、あるいはその組み合わせが挙げられる。
【００６８】
１以上の他の医薬上活性薬剤を、治療的に有効な量で、１以上の本発明の化合物と同時に（例えば、個別に同時に、または医薬組成物中で一緒に）、および／または連続して、投与してもよい。
【００６９】
「併用療法」なる語は、本明細書に記載の治療上の疾患または病態、例えば、一過性熱感、発汗、体温調節に関連する病態または疾患などを治療するために、２以上の治療薬または化合物を投与することをいう。このような投与は、各種類の治療薬を同時に使用することを包含する。いずれの場合においても、治療の投薬計画は、本明細書に記載の病態または疾患の治療において医薬の併用の有用な効果をもたらすであろう。
【００７０】
投与経路は、アザビシクロヘキサンを含む、活性ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩を、適当または所望の作用部位に効率よく輸送する所望の経路、例えば、経口、鼻腔、肺、経皮、例えば、受動またはイオン導入的送達、または非経口、例えば、直腸、持続性薬剤、皮下、静脈内、尿道内、筋肉内、鼻腔内、点眼剤または軟膏であってよい。さらに、アザビシクロヘキサンを含む、ドーパミン再取り込み阻害薬、または医薬上許容されるその塩と、他の有効成分との投与は、並行して、または同時であってよい。
【００７１】
さらに、本発明は、以下の実施例に示され、特に記載しない限り、全ての部分およびパーセンテージは重量基準であり、度は摂氏度である。これらの実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すが、単なる例示として示されることを認識すべきである。前記およびこれらの実施例より、当業者は、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明の様々な変更および修正を様々な用法および条件に適合させることができる。
細胞株、培養試薬、および試験
【００７２】
ヒトｈＮＥＴで安定にトランスフェクトされたＭＤＣＫ−Ｎｅｔ６細胞（Ｐａｃｈｏｌｃｚｙｋ、Ｔ．、Ｒ．Ｄ．  Ｂｌａｋｅｌｙ、およびＳ．Ｇ．Ａｍａｒａ、Ｎａｔｕｒｅ、１９９１、３５０（６３１６）：ｐ３５０−４）を、高グルコースＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１１９９５）、１０％ＦＢＳ（透析、熱不活性、ＵＳ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌｏｔ  ＦＢＤ１１２９ＨＩ）および５００μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１０１３１）を含有する成長培地中で培養してもよい。細胞を、３０００００個／Ｔ７５フラスコでプレートし、細胞を毎週２回分裂させた。ＪＡＲ細胞株（ヒト胎盤絨毛癌）をＡＴＣＣより入手してもよい（Ｃａｔ  Ｎｏ．ＨＴＢ−１４４）。細胞を、ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ．Ｎｏ．７２４００）、１０％  ＦＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ、Ｃａｔ．Ｎｏ．３０００）、１％ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ．Ｎｏ．１１３６）および０．２５％グルコースを含有する成長培地中で培養してもよい。細胞を、２５００００個／Ｔ７５フラスコでプレートし、毎週２回分裂させた。全試験において、細胞を、Ｗａｉｌａｃ  ９６ウェル滅菌プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｃａｔ．  Ｎｏ．３９８３４９８）中にプレートしてもよい。
ドーパミン取り込みトランスポーター結合試験
【００７３】
ヒト組み換えドーパミントランスポーター（ｈＤＡＴ）を用いたドーパミン取り込みトランスポーター結合試験は、ドーパミントランスポーターに対する結合アフィニティーを評価するために用いてもよい。
【００７４】
単一濃度スクリーニングにおいて、化合物溶液（１０ｍＭ）を調製し、溶媒（すなわち、ＤＭＳＯ、５０％  ＤＭＳＯ：水、エタノール、水）で１ｍＭ濃度に希釈した。さらに、化合物は、結合緩衝液（２．１μｌの１ｍＭストックをアッセイ緩衝液で１００μｌに）で連続希釈し、ｈＤＡＴ膜を含有する９６ウェルテストプレートのウェルに５μｌアリコートで供給し、最終試験濃度を１μＭにした。さらに、３Ｈ−ＷＩＮ  ３５４２８結合を少なくとも６０％まで阻害する化合物を、ＩＣ５０値を測定するために評価する。
【００７５】
ＩＣ５０値の測定において、多数の濃度のストックを、１０ｍＭのストックから、連続希釈により調製する。さらに、化合物を、結合緩衝液で希釈し、９６ウェルテストプレートのウェルに５μｌアリコートで供給し、全対数または半対数インクリメントで最終濃度を１−１０００ｎＭにする。
【００７６】
選択的ドーパミン再取り込み阻害薬（ＤＲＩ’ｓ）であるＳ−５１４（マジンドール）およびＳ−２６６（メチルフェニデート）、ならびに選択的ノルエピネフリン再取り込み阻害薬（ＮＲＩ）であるＡＨＲ−９５４３（デシプラミン）を、本試験を検証するための対照化合物として用いる。選択的ＤＲＩ’ｓおよび選択的ＮＲＩを、対照化合物として選択してこの試験の２種類の化合物間を識別する能力を明らかにした。全対照化合物は商業的に入手可能である。
【００７７】
非特異的結合は、１０μＭのマジンドール存在下で測定する。マジンドールのＤＭＳＯストック溶液（１ｍＭ）を調製し、アッセイ緩衝液で希釈し、９６ウェルテストプレートのウェルに５μｌアリコートで供給し、最終濃度を１０μＭにする。
【００７８】
本試験で用いた放射性リガンドは、３Ｈ−ＷＩＮ  ３５４２８（パーキンエルマー  Ｃａｔ．  Ｎｏ．ＮＥＴ１０３３、ＳＡ  ６０−８７  Ｃｉ／ミリモル）であり、単純試験および競合試験の両方で最終濃度を１５−２０ｎＭにて供給する。
細胞膜：
【００７９】
ヒト組み換えドーパミントランスポーターを発現する細胞より調製される細胞膜は、１００アッセイウェル用のタンパクを含有するチューブにて購入する（パーキンエルマー、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＲＢＨＤＡＴＭ）。各チューブは、結合緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣＩ、ｐＨ７．４；１００ｍＭ  ＮａＣＩ）で７．５ｍｌに希釈し、組織破砕装置（ポリトロンＰＴ  １２００Ｃ、Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ  ＡＧ）で均質化し、細胞膜を、ポリプロピレン９６ウェルテストプレートの各ウェルに７５μｌの容量で供給した。個々の細胞膜のロットに応じて、得られるタンパク濃度はウェル当たり約３０μｇとなる。
放射性リガンド結合試験：
【００８０】
この操作は、市販の細胞膜（パーキンエルマー  Ｃａｔ．Ｎｏ．ＲＢＨＤＡＴＭ）［１、２］と共に得られるプロトコル情報を修正したものである。修正プロトコルの詳細な記述は以下の通りである。
【００８１】
結合反応は、ポリプロピレン９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  Ｃａｔ．Ｎｏｓ．３３５９、３９３０）中で行う。均質化した細胞膜の調製物を、テストプレートの各ウェルに７５μｌの容量で供給する。数種の濃度の化合物溶液を、１０ｍＭストックの連続希釈により作製する。さらに、化合物溶液を、前記の好ましい輸送濃度に結合緩衝液で希釈する。化合物の希釈スキームに従い、各濃度の溶媒溶液およびアッセイウェルを標準化する。試験化合物を、均質化した細胞膜を含有する反応ウェルに５μｌアリコートで添加する。均質化した細胞膜および化合物を、結合反応の開始前に、４℃で２０分間プレインキュベートする。結合反応は、３Ｈ−ＷＩＮ  ３５４２８（２５μｌ）の添加により開始され、結合緩衝液で１５−２０ｎＭの最終反応濃度に希釈する。反応は、４℃で２時間、加振台上で低速でテストプレートを振盪することによりインキュベートする。
【００８２】
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ−ＦＢ  ｏｐａｑｕｅ  ９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ  Ｂ、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＭＡＦＢＮＯＢ）を用い、放射性リガンドを遊離型と結合型に分離する。フィルタープレートは、結合反応の開始前に、非特異的放射性リガンド結合を減少させるために室温で最低２時間、７５μｌ／ウェルの０．５％ポリエチレンイミン／Ｈ２０（ＰＥＩ；  Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｐ−３１４３）とプレインキュベートする。反応プレートを集菌する前に、ＰＥＩ溶液を、真空マニホールド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＭＡＶＭ０９６０Ｒ）を用いてフィルタープレートより吸引する。各反応のアリコート（各１００μｌ反応ウェル中９０μｌ）を、Ｚｙｍａｒｋ  Ｒａｐｉｄ  Ｐｌａｔｅ−９６自動ピペットステーションを用いて反応プレートからフィルタープレートに移す。結合反応はフィルタープレートを通じて真空濾過（５−１０Ｈｇ）により終了する。プレートは１２チャネル吸引／洗浄システム（１２  ｃｈａｎｎｅｌ  ａｓｐｉｒａｔｅ／ｗａｓｈ  ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭトリス−ＨＣＩ、０．９％ＮａＣＩ、ｐＨ７．４）２００μｌで９回洗浄し、非結合放射性リガンドを除去する。プラスティックの底板を、フィルタープレートから取り外し、プレートをプラスティックホルダーに設置する。プレートを、５０μｌ／ウェルのシンチレーション流動体（Ｐａｃｋａｒｄ  ＵｌｔｉｍａＧｏｌｄ、Ｃａｔ．  Ｎｏ．６０１３３２９）添加前に、１０分間風乾させる。各プレートの上部は、接着フィルム（Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＳｅａｌ−Ａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．６００５１８５）で密封し、シンチラント(scintillant)の適当な分解を確実にするために、プレートを１０ないし１５分間激しく振盪する。プレートは、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計測器（パーキンエルマー）を用いて計測し、ｃｐｍｓ／ウェルはマイクロソフトエクセル形式にデータストリームとして収集する。
【００８３】
単一濃度（１μＭ）で試験した化合物の場合、各テストプレートは全結合（単独アッセイ緩衝液の存在下の結合として定義）を測定するために最低３個のウェルを有し、非特異的結合（１０μＭのマジンドール存在下の結合として定義）を測定するために最低３個ウェルを有する。化合物活性は、３Ｈ−ＷＩＮ  ３５４２８結合の阻害率（％ｌ）で表し、下記の式を適用したマイクロソフトエクセル表計算ソフトを用いて各薬物ウェルを計算する：
阻害率（％ｌ）＝（（全結合ウェルのｃｐｍ−薬物ウェルのｃｐｍ）／（全結合ウェルのｃｐｍ−非特異的結合ウェルのｃｐｍ））＊１００
３Ｈ−ＷＩＮ  ３５４２８結合の少なくとも６０％を阻害する化合物は、１μＭ濃度で試験した場合、さらに、ＩＣ５０値の測定により評価されるであろう。
【００８４】
ＩＣ５０を測定する場合、未修正のｃｐｍ値を、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計測器からデータストリームとして得る。そのデータは、推定ＩＣ５０値を計算する、マイクロソフトエクセル統計応用プログラムでダウンロードする。ＩＣ５０値の計算は、計量生物学分野おいて作成された、ロジスティック用量反応プログラムを用いて行う。統計プログラムは、最大結合値（全結合）を測定するために緩衝液のみを含むウェルおよび最小結合値（非特異的結合）を測定するために１０μＭマジンドールを含むウェルを用いる。ＩＣ５０値の推定は、対数スケールより得られ、曲線を最大値と最小値の間の結合値に適合する。マイクロソフトエクセルを用いたデータの評価が、より優れた適合がデータの対数変換により得ることができることを示すならば、データは、曲線適合前に対数変換されるであろう。最大試験濃度の結合阻害が５０％を超えない場合には、データは試験した最大濃度の最大阻害率として報告されるであろう。
１．Ｐｒｉｓｔｕｐａ、Ｚ．Ｂ．、ｅｔ  ａｌ．、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｌｏｎｅｄ  ａｎｄ  ｎａｔｉｖｅ  ｈｕｍａｎ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ：  ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ［３Ｈ］ＷＩＮ  ３５４２８  ａｎｄ  ［３Ｈ］ＧＢＲ  １２９３５  ｂｉｎｄｉｎｇ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９９４、４５（１）：１２５−１３５．
２．Ｓｈｉｍａｄａ、Ｓ．、ｅｔ  ａｌ．、Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｏｃａｉｎｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ＤＮＡ  ［ｅｒｒａｔｕｍ  ａｐｐｅａｒｓ  ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９２  Ｍａｒ  ６；２５５（５０４９）：１１９５］．  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９１、２５４（５０３１）：５７６−５７８．
ノルエピネフリン（ＮＥ）取り込み実験
【００８５】
第１日に、細胞を、３０００個／ウェルで成長培地中にプレートし、細胞培養器（３７℃、５％ＣＯ２）で保存する。第２日に、成長培地を、０．２ｍｇ／ｍｌアスコルビン酸および１０μＭパルギリンを含有するアッセイ緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ；１２０ｍＭ  ＮａＣＩ；５ｍＭ  ＫＣＩ；２．５ｍＭ  ＣａＣＩ２；１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４；２ｍｇ／ｍｌグルコース（ｐＨ７．４、３７℃））２００μｌと置換する。アッセイ緩衝液２００μｌの細胞を含有するプレートを、化合物添加前に、３７℃で１０分間平衡化する。デシプラミンのストック溶液は、ＤＭＳＯ（１０ｍＭ）中で調製し、最終試験濃度１μＭにするために細胞を含有する３個のウェルに供給する。これらのウェルより得たデータを用いて、非特異的ＮＥ取り込み（最小ＮＥ取り込み）を規定する。試験化合物を、ＤＭＳＯ（１０ｍＭ）中で調製し、試験範囲（１−１００００ｎＭ）にしたがってアッセイ緩衝液で希釈する。アッセイ緩衝液（最大ＮＥ取り込み）２５マイクロリットルまたは試験化合物は、アッセイ緩衝液２００μｌ中の細胞を含有する３ウェルに直接、添加する。アッセイ緩衝液中の細胞を、３７℃で２０分間、試験化合物と一緒にインキュベートする。ＮＥ取り込みを開始するために、アッセイ緩衝液で希釈した［３Ｈ］ＮＥ（１２０ｎＭ最終試験濃度）を、各ウェルに２５μｌアリコートで供給し、プレートを５分間（３７℃）インキュベートする。上清をプレートからデカントすることにより、反応を停止させる。細胞を含有するプレートは２００μｌのアッセイ緩衝液（３７℃）で２回洗浄し、遊離放射性リガンドを除去する。それから、プレートを反転させ、２分間乾燥し、次いで、再度反転させ、さらに１０分間風乾させる。０．２５Ｎ  ＮａＯＨ溶液（４℃）２５μｌ中に溶解した細胞を、加振台上に静置し、５分間激しく振盪する。細胞溶解後、７５μｌのシンチレーションカクテルを各ウェルに添加し、プレートをフィルムテープで密封した。プレートを加振台に戻し、最低１０分間激しく振盪して、有機および水性溶液の適当な分配を確実にする。未修正ｃｐｍデータを収集するために、プレートをＷａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計測器（パーキンエルマー）で計測する。
セロトニン（５−ＨＴ）取り込み実験
【００８６】
ＪＡＲ細胞株を用いた５−ＨＴ機能的再取り込み方法を、先の文献報告（Ｐｒａｓａｄ、  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｃｅｎｔａ、１９９６．１７（４）：２０１−７）を用いて修正する。第１日に、細胞を、成長培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０）を含有する９６ウェルプレート中に１５０００個／ウェルでプレートし、細胞培養器（３７℃、５％ＣＯ２）で保存する。第２日に、細胞を、スタウロスポリン（４０ｎＭ）で刺激し、５−ＨＴトランスポーター発現を増加させる。第３日に、試験２時間前に、細胞を細胞培養器から取り出し、室温で維持して、成長培地を周囲の酸素濃度に合わせる。その後、成長培地を、０．２ｍｇ／ｍｌアスコルビン酸および１０μＭパルギリンを含有する、２００μｌのアッセイ緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ；１２０ｍＭ  ＮａＣｌ；５ｍＭ  ＫＣＩ；２．５ｍＭ  ＣａＣＩ２；１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４；２ｍｇ／ｍｌグルコース（ｐＨ７．４、３７℃））で置換する。パロキセチン（ＡＨＲ−４３８９−１）ストック溶液を、ＤＭＳＯ（１０ｍＭ）で調製し、細胞を含有する３個のウェルに供給し、最終試験濃度を１μＭにする。これらのウェルから得たデータを用いて、非特異的５−ＨＴ取り込み（最小５−ＨＴ取り込み）を規定する。試験化合物は、ＤＭＳＯ（１０ｍＭ）中で調製し、試験範囲（１ないし１０００ｎＭ）にしたがってアッセイ緩衝液で希釈する。２５μｌのアッセイ緩衝液（最大５−ＨＴ取り込み）または試験化合物を、２００μｌのアッセイ緩衝液中に細胞を含有する３個のウェルに直接、添加する。細胞を、化合物と１０分間（３７℃）インキュベートする。かかる反応を開始するために、アッセイ緩衝液で希釈した［３Ｈ］ヒドロキシトリプタミンクレアチニン硫酸塩を、各ウェルに２５μｌアリコートで供給し、最終試験濃度を１５ｎＭにする。細胞を、３７℃で５分間反応混合物とインキュベートする。５−ＨＴ取り込み反応を、アッセイ緩衝液をデカントすることにより終了する。細胞を２００μｌアッセイ緩衝液（３７℃）で２回洗浄し、遊離放射性リガンドを除去する。プレートを反転させ、２分間乾燥させ、次いで、再度反転させ、さらに１０分間風乾させる。その後、細胞を、０．２５Ｎ  ＮａＯＨ（４℃）２５μｌ中に溶解し、次いで、加振台上に静置し、５分間激しく振盪する。細胞溶解後、７５μｌのシンチレーションカクテルをウェルに添加し、プレートをフィルムテープで密封し、最低１０分間、加振台上で置き換える。プレートを、未修正ｃｐｍデータを収集するために、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計測器（パーキンエルマー）で計測する。
結果の評価
【００８７】
各実験において、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ計測器より収集したｃｐｍ値のデータストリームを、マイクロソフトエクセル統計応用プログラムにダウンロードする。ＥＣ５０値の計算は、ワイスの計量生物学部門において作成された、変形両面ロジスティック用量反応プログラムを用いて行う。その統計プログラムは、最大の結合または取り込み（アッセイ緩衝液）を表すウェルより得た平均ｃｐｍ値および最小の結合または取り込み（（１μＭデシプラミン（ｈＮＥＴ）または１μＭパロキセチン（ｈＳＥＲＴ））を表すウェルより得た平均ｃｐｍ値を使用する。ＥＣ５０値の推定は、対数スケール上で完了し、曲線を最大値と最小値の間の結合または取り込み値に適合する。全グラフデータ表現を、各データポイントを最大および最小の結合または取り込み値に基づく平均パーセントに標準化することにより得る。複数の実験より報告されたＥＣ５０値を、各実験からの未修正データをプールし、プールされたデータを１つの実験として分析することにより計算する。
【００８８】
テレメトリーモデル：このモデルは、日周の尾皮膚温度（ＴＳＴ）型のエストロゲン制御について記載する、先に報告されたプロトコルより修正したものである（Ｂｅｒｅｎｄｓｅｎ、ｅｔ  ａｌ．、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００１、４１９（１）：４７−５４）。２４時間にわたり、無傷のサイクルラットは、活性（暗）期中ＴＳＴを減少し、不活性（明）期中ＴＳＴを上昇させ続ける。卵巣摘出（ＯＶＸ）ラットにおいて、ＴＳＴは、２４時間全体にわたり上昇し、そのため、活性（暗）期中のＴＳＴの通常の減少は失われ、したがって、活性期中にこのＴＳＴの低下の回復をもたらす化合物の能力を分析した。体温および物理的活性伝達物質（ＰｈｙｓｉｏＴｅｌ  ＴＡ１０ＴＡ−Ｆ４０、Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を、肩甲背部の皮下に注入し、温度プローブの先端を尾の底部を超えて皮下２．５ｃｍに設置した。７日間の回復期間後、残りの実験におけるＴＳＴ測定値を、連続して記録した。尾皮膚温度測定値を、１０秒のサンプリング時間で得られる数値で５分間毎に各動物から収集した。試験日前に、平均基礎ＴＳＴ値を、１２時間の活性（暗）期中に記録した体温測定値を平均することにより各動物について計算した。これらの実験において、暗サイクルに入る約４０分前に動物に投薬した。
【００８９】
統計分析：テレメトリーモデルにおけるＴＳＴの低下の回復をもたらす化合物の能力の評価を、各動物について記録時間にわたり５分毎に得られる１２個の体温測定値を平均することにより計算した時間当たりのＴＳＴ値を用いて分析した。テレメトリーモデルにおけるΔＴＳＴを分析するため、２要因を繰り返し測定するＡＮＯＶＡを実行した。分析に用いたモデルは、ΔＴＳＴ＝ＧＲＰ（群）＋ＨＲ（時間）＋ＧＲＰ＊ＨＲ＋基礎値であった。したがって、両群が同じ基礎値を有していたかのように、報告された最小二乗平均値は、期待した平均値を示す。時間当たりのＧＲＰ＊ＨＲサンプルの多重比較は、各時間における群間の差異のｔ−検定である。慎重を期すために、ｐ値が＜０．０２５でなければ、結果を有意であると考えなかった。分析は、全てＳＡＳ  ＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤ（ＳＡＳ、Ｃａｒｅｙ、ＮＣ）を用いて行った。
【実施例１】
【００９０】
（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）の機能的再取り込み生物学的検定
【００９１】
ドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）におけるドーパミン再取り込み阻害、ノルエピネフリントランスポーター（ＮＥＴ）におけるノルエピネフリン再取り込み阻害、およびセロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）におけるセロトニン再取り込み阻害に対するＩＣ５０は、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）（ＧＢＲ１２９０９）における均質化したラットの脳でインビトロにて測定した。結果は以下の通りであった。
【表１】
2008507551.tif 000003
【実施例２】
【００９２】
（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）のテレメトリー実験
【００９３】
ラットに、ビヒクル（２％Ｔｗｅｅｎ／０．５％メチルセルロース）にて皮下注射するか、または２％Ｔｗｅｅｎ／０．５％メチルセルロース中に溶解した試験化合物３０ｍｇ／ｋｇにて皮下注射した。試験化合物の効力を、このモデルにおける以下の変数を評価することにより測定する：作用の発現、ＴＳＴに対する効力の持続時間、ＴＳＴの最大変化および化合物の効力持続時間の間のＴＳＴの平均変化。
【００９４】
（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）は、ＯＶＸ誘導体温調節機能不全テレメトリーモデル（テレメトリーモデル）３０ｍｇ／ｋｇの皮下注射において正常なＴＳＴの回復をもたらした。
【００９５】
卵巣摘出誘導体温調節機能不全のテレメトリーラットモデルにおける、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよび１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９）の１回量（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下）投与の結果を、各々、図１および図２に示す。
【実施例３】
【００９６】
神経因性疼痛の脊髄神経結紮（ＳＮＬ）モデルに対する試験化合物の評価
原料および方法
【００９７】
動物の管理および研究は、実験動物の管理と使用に関する指針における実験動物の取り扱いおよび使用に関する米国学術研究会議の規定および指針にしたがって行われた。実験室施設は、米国農務省により認可され、実験動物管理認定協会により正式認可を受けた。研究プロトコルは、ＩＡＳＰの研究および倫理問題に関する委員会（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ、１９８３）の指針に従うワイス社内動物管理使用委員会（Ｗｙｅｔｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
【００９８】
対象．到着時の体重が１５０ないし２００ｇの雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（インディアナポリス、ＩＮ）を、個々に、環境調節室のステンレス製の飼育かごで飼育した。１２時間の明／暗サイクル（０６３０に点灯）が実施され、食物および水は適宜利用可能にした。
【００９９】
手術−脊髄神経結紮．ラットに、１Ｌ／分でＯ２中３．５％ハロタンを麻酔し、手術中Ｏ２中１．５％ハロタンを維持した。Ｌ５およびＬ６神経の結紮は、左傍脊柱筋群を通る切開により取り出した。脊柱に隣接する左側のＬ５およびＬ６脊髄神経を、取り出し、後根神経節のすぐ末梢側で６−０絹縫合によりしっかり結紮した。その傷を４−０絹縫合および創傷クリップを用いて皮膚で縫合した。実験は、手術の７日後に開始した。
【０１００】
触覚過敏の評価．動物を、高貴なステンレス製の飼育かごに置き、実験室に慣れさせるために４５ないし６０分放置した。基礎触覚感度を、手術の０ないし３日前に、一連の測定したフォンフレイ（ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ）モノフィラメント（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ；Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ、ＩＬ）を用いて評価した。フォンフレイモノフィラメントを、逐次的な上向きまたは下向きの刺激における中央足底の後肢に適用し、必要に応じて、できるだけ近似の反応閾値に近づけた。閾値を、刺激に対する活発な離脱反応を引き起こす最小エネルギーにより示した。そのため、離脱反応は、次のより弱い刺激を提示し、離脱反応の欠乏は、次のより強い刺激を提示した。基礎閾値＜１０ｇ重量を伴うラットは、本実験より除外した。前記手術３ないし４週間後、触覚感度を再評価し、その後の触覚過敏（閾値≧５ｇ）を示さない動物を、さらに、実験より除外した。対象を、平均基礎値および術後感度が群間で同様になるように、疑似無作為に７の実験群に分類した。従来の過敏性を変化させるための試験化合物の１回量の効力を、経時変化方法を用いて評価した。本方法の下で、試験化合物３０ｍｇ／ｋｇまたはビヒクルを腹腔内投与し、感受性を、投与後３０、６０、１００、１８０および３００分に再評価した。
【０１０１】
結果を、毒性ノンパラメトリック検定により推定した５０％閾値（ｇ重量に対する５０％閾値）として示す。１５ｇ重量を、最大重量として使用した。個々の触覚過敏の閾値を平均し、平均応答（±１ＳＥＭ）を得た。統計分析を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて行った。さらに、有効な主作用を、次の最小相違分析により分析した。有意差の基準は、ｐ＜０．０５であった。
【０１０２】
触覚過敏の反転を、触覚感度の基礎値への回復として規定し、下記の方程式にしたがって計算した。
【数１】
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５０％閾値薬物＋術後は、神経損傷した対象の薬剤投与後のｇ重量に対する５０％閾値、５０％閾値術後は、神経損傷した対象のｇ重量に対する５０％閾値であり、５０％閾値術前は、神経損傷前のｇ重量に対する５０％閾値である。１００％反転の最大効果は、実験状況における対象の平均の術前閾値への回復を表す。
【０１０３】
ラセミ体１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（ビシファジン）、（＋）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、ガバペンチン、およびビヒクルに関する結果を図３に示し、それは、ラセミ体１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（ビシファジン）、（＋）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、ガバペンチン、およびビヒクルの投与後３０、６０、１００、１８０、および３００分の％反転のプロットである。
【０１０４】
本明細書において、分子量などの物理的特性または化学式などの化学的特性に関して範囲が使用される場合、本明細書中の特定の実施形態における全組み合わせおよび副結合が範囲内に含まれるであろう。
【０１０５】
本明細書において記載される各特許、特許出願および刊行物の開示は、その全体を出典明示により本発明の一部として参照される。
【０１０６】
当業者らは、本発明の好ましい実施形態に種々の変更および修正を加えることができ、このような変更および修正は、本発明の範囲から逸脱することなくなすことができることが分かるであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の精神および範囲内にあるこのような等価なバリエーションをすべて網羅するように意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】卵巣摘出誘導体温調節機能不全のテレメトリーラットモデルにおける、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサンの１回量（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下）投与の結果を示す。
【０１０８】
【図２】卵巣摘出誘導体温調節機能不全のテレメトリーラットモデルにおける、１−［２−［ビス（４−フルオロフェニル）メトキシ］エチル］−４−（３−フェニルプロピル）ピペラジン（ＧＢＲ１２９０９；またバノキセリンとして公知）の１回量（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下）投与の結果を示す。
【０１０９】
【図３】ラセミ体１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン（ビシファジン）、（＋）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、（−）−１−（４−メチルフェニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン、ガバペンチン、およびビヒクルの投与後３０、６０、１００、１８０、および３００分の％反転のプロットである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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