(57)【要約】  ヒトインターロイキン−４特異的抗体ならびにＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患の処置におけるそれらの使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
８００ｐＭ以下の解離定数ＫｄでヒトＩＬ−４に結合する、ヒトＩＬ−４特異的抗体。
【請求項２】
順に超可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む第１のドメインならびに順に超可変領域ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’を含む第２のドメインを有する抗体であって、
ａ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-Met-Hisを有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Phe-Ile-Trp-Asp-Asp-Gly-Ser-Phe-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Glu-Ser-Val-Lys-Glyを有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-Ile-Pheを有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Arg-Alaを有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Serを有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Ileを有する、
ｂ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Leu-Ser-Ser-Phe-Gly-Met-Hisを有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Glu-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Glyを有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-Ile-Pheを有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Arg-Ser-Alaを有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Serを有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Valを有する、
ｃ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Leu-Ser-Ser-Tyr-Gly-Met-Hisを有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asn-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Glyを有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-Ile-Pheを有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Ser-Tyrを有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Serを有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Proを有する、
ｄ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Asp-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-Ile-Serを有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Gly-Ile-Ile-Ile-Pro-Val-Ile-Gly-Thr-Val-Asn-Tyr-Glu-Glu-Arg-Phe-Gln-Asp-Argを有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列GluGlu-Gly-Phe-Leuを有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Ser-Alaを有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Serを有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Leuを有する、
ｅ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Cys-Cys-Gly-Met-Hisを有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Glyを有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Asp-Ser-Ser-Gly-Ser-Phe-Tyr-Glu-Tyr-Pheを有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Asn-Ser-Alaを有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Serを有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Tyrを有する、および
ｆ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Gly-Tyr-Gly-Met-Hisを有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Val-Trp-Tyr-Asp-Gly-Gly-Tyr-Lys-Phe-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Glyを有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Asp-Ser-Ser-Gly-Ser-Phe-Tyr-Glu-Tyr-Leuを有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Ser-Alaを有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Serを有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Hisを有する
抗体からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ａ）配列番号１のポリペプチドおよび配列番号２のポリペプチド、または
ｂ）配列番号９のポリペプチドおよび配列番号１０のポリペプチド、または
ｃ）配列番号１７のポリペプチドおよび配列番号１８のポリペプチド、または
ｄ）配列番号２５のポリペプチドおよび配列番号２６のポリペプチド、または
ｅ）配列番号３３のポリペプチドおよび配列番号３４のポリペプチド、または
ｆ）配列番号４１のポリペプチドおよび配列番号４２のポリペプチド
を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
ａ）配列番号３のポリペプチドおよび配列番号４のポリペプチド、または
ｂ）配列番号１１のポリペプチドおよび配列番号１２のポリペプチド、または
ｃ）配列番号１９のポリペプチドおよび配列番号２０のポリペプチド、または
ｄ）配列番号２７のポリペプチドおよび配列番号２８のポリペプチド、または
ｅ）配列番号３５のポリペプチドおよび配列番号３６のポリペプチド、または
ｆ）配列番号４３のポリペプチドおよび配列番号４４のポリペプチド
を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体。
【請求項５】
ヒトＩＬ−４特異的モノクローナル抗体、それらのフラグメントおよびそれらのアナログからなる群から選択される、請求項１から４のいずれかに記載の抗体。
【請求項６】
請求項１に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項２から５のいずれかに記載の抗体のアミノ酸配列をコードする、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
ａ）配列番号５のポリヌクレオチドおよび配列番号６のポリヌクレオチド、または
ｂ）配列番号１３のポリヌクレオチドおよび配列番号１４のポリヌクレオチド、または
ｃ）配列番号２１のポリヌクレオチドおよび配列番号２２のポリヌクレオチド、または
ｄ）配列番号２９のポリヌクレオチドおよび配列番号３０のポリヌクレオチド、または
ｅ）配列番号３７のポリヌクレオチドおよび配列番号３８のポリヌクレオチド、または
ｆ）配列番号４５のポリヌクレオチドおよび配列番号４６のポリヌクレオチド
を含む、請求項６または７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
ａ）配列番号７および配列番号８のポリペプチド、または
ｂ）配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド、または
ｃ）配列番号２３および配列番号２４のポリペプチド、または
ｄ）配列番号３１および配列番号３２のポリペプチド、または
ｅ）配列番号３９および配列番号４０のポリペプチド、または
ｆ）配列番号４７および配列番号４８のポリペプチド
をコードする、請求項６から８のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項６から９のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項１１】
適合性の宿主細胞中に発現系またはその一部が存在するとき、該発現系またはその一部が請求項１から５のいずれかに記載の抗体を製造できる、請求項６から９のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む発現系。
【請求項１２】
請求項１１の発現系を含む、単離宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１から５のいずれかに記載の抗体の医薬としての使用。
【請求項１４】
請求項１から５のいずれかに記載の抗体のＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患の処置用医薬の製造のための使用。
【請求項１５】
該疾患がアトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息およびアレルギー性鼻炎からなる群から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
抗体がヒトＩＬ−４モノクローナル抗体、それらのフラグメントおよびそれらのアナログからなる群から選択される、請求項１３から１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
請求項１から５のいずれかに記載の抗体と少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤をともに含む、医薬組成物。
【請求項１８】
有効量の請求項１から５のいずれかに記載の抗体を処置の必要な対象に投与することを含む、ＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患の処置法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトインターロイキン−４（ｈＩＬ−４）に特異的な抗体に関する。
【０００２】
アレルギー性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息および食物アレルギーは、特徴として無毒な環境抗原（アレルゲン）に対する過剰なＴｈ２細胞応答に関する。アレルゲンは、抗原提示細胞に捕獲され、処理され、ＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩ分子と関連してアレルゲン−特異的Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞に提示される。アレルゲン特異的Ｔｈ細胞は、Ｔｈ２表現型に属し、インターロイキン−４（ＩＬ−４）の影響下で前駆Ｔ細胞から進展する。Ｔｈ２細胞が活性化すると、それらはＩＬ−４およびインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）を分泌し、それは表面結合シグナルとともに、Ｂ細胞を誘導し、ＩｇＥ生産形質細胞に変化させる。ＩｇＥ分子は肥満細胞上の高親和性ＦｃεＲに結合し、続いてアレルゲンと遭遇後、肥満細胞活性化およびアレルギー反応のメディエーターの放出を誘導する。Ｔｈ２サイトカインはまた、好酸球の生存および肥満細胞の成長を促進し、脱顆粒後にまた、ＩｇＥ製造、Ｔｈ２細胞分化および好酸球生存を増加できるさらなるＴｈ２サイトカインを放出する。したがって、Ｔｈ２細胞は、アレルギー反応の誘発および発生においてきわめて重要な役割を果たし、それゆえ、これらの発生および／またはこれらのエフェクター機能に拮抗することが、アレルギー反応に介入するための効率的な方法であろう。
【背景技術】
【０００３】
ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、両方のサイトカインが、これらの各受容体複合体の要素としてＩＬ−４受容体（ＩＬ−４Ｒ）−α鎖を使用するという事実によって、多数の生物学的活性を共有している。ＩＬ−１３は、ＩＬ−１３結合鎖（ＩＬ−１３Ｒα１）およびＩＬ−４Ｒα鎖からなるヘテロ二量体複合体を介してシグナリングする。ＩＬ−４は、ＩＬ−４Ｒα鎖およびＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５および胸腺間質リンパ球増殖因子（ＴＳＬＰ）の受容体に共有されている共通γ鎖（ｃγ）から成る、Ｉ型ＩＬ−４Ｒの代わりとして、ＩＩ型ＩＬ−４Ｒと呼ばれるＩＬ−４Ｒα／ＩＬ−１３Ｒα１複合体を利用する。Ｔ細胞がＩＬ−１３Ｒα１を発現しないため、ＩＬ−４と対照的にＩＬ−１３は、Ｔ細胞増殖を支持せず、未感作ヒトＴｈ細胞のＴｈ２表現型に向けた分化を誘導できない(例えばJ. E. de Vries et al., Encyclopedia of Hormones and related cell regulators, Academic Press, ２００２参照)。ＩＬ−４は、Ｔ細胞増殖に、そして故にアレルギー性疾患の発症および維持においてきわめて重要な役割を果たす。
【０００４】
ＩＬ−４遺伝子欠損マウスまたはＩＬ−４(例えばKuhn R. et al., Science, １９９１ (５０３２) ７０７:１０参照)もしくはその下流シグナル伝達因子ＳＴＡＴ６(例えばKaplan M.H. et al., Immunity, １９９６ (３) ３１３-９参照)を欠くマウスは、有意な数のＴｈ２細胞を発生せず、ＩｇＥ応答が減少した。
【０００５】
今回、ヒトＩＬ−４に対して高親和性であり、そして未感作ヒトＢ細胞によるＩＬ−４介在ＩｇＥ合成の強力な阻害剤となりうる抗体を見いだした。
【０００６】
一つの局面において、本発明は、８００ｐＭ以下、例えば２００ｐＭ以下の解離定数ＫｄでヒトＩＬ−４に結合する、ヒトＩＬ−４特異的抗体を提供する。
【０００７】
他の局面において、本発明は、順に超可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む第１のドメインならびに順に超可変領域ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’を含む第２のドメインを有する抗体であって、
ａ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-Met-His(GFTFSSYAMH)を有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Phe-Ile-Trp-Asp-Asp-Gly-Ser-Phe-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Glu-Ser-Val-Lys-Gly(FIWDDGSFKYYAESVKG)を有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-Ile-Phe(EGSWSPDIF)を有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Arg-Ala(SQGISRA)を有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Ser(DAS)を有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Ile(FNSYPI)を有する、
ｂ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Leu-Ser-Ser-Phe-Gly-Met-His(GFTLSSFGMH)を有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Glu-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly(VIWYDGSNEYYADSVKG)を有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-Ile-Phe(EGSWSPDIF)を有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Arg-Ser-Ala(SQGIRSA)を有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Ser(DAS)を有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Val(FNSYPV)を有する、
ｃ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Leu-Ser-Ser-Tyr-Gly-Met-His(GFTLSSYGMH)を有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asn-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly(VIWYDGNNQYYADSCKG)を有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-Ile-Phe(EGSWSPDIF)を有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Ser-Tyr(SQGISSY)を有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Ser(DAS)を有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro(FNSYP)を有する、
【０００８】
ｄ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Asp-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-Ile-Ser(GDTFSSYAIS)を有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Gly-Ile-Ile-Ile-Pro-Val-Ile-Gly-Thr-Val-Asn-Tyr-Glu-Glu-Arg-Phe-Gln-Asp-Arg(GIIIPVIGTVNYEERFQD)を有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列GluGlu-Gly-Phe-Leu(EEGFL)を有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Ser-Ala(SQGISSA)を有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Ser(DAS)を有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Leu(FNSYPL)を有する、
ｅ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Cys-Cys-Gly-Met-His(GFTFSCCGMH)を有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly(VIWYDGSNKYYADSVKG)を有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Asp-Ser-Ser-Gly-Ser-Phe-Tyr-Glu-Tyr-Phe(DSSGSFYEYF)を有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Asn-Ser-Ala(SQGINSA)を有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Ser(DAS)を有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Tyr(FNSYPY)を有する、および
ｆ）該ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Gly-Tyr-Gly-Met-His(GFTFSGYGMH)を有し、
該ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Val-Val-Trp-Tyr-Asp-Gly-Gly-Tyr-Lys-Phe-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly(VVWYDGGYKFYADSVKG)を有し、
該ＣＤＲ３が、アミノ酸配列Asp-Ser-Ser-Gly-Ser-Phe-Tyr-Glu-Tyr-Leu(DSSGSFYEYL)を有し、
該ＣＤＲ１’が、アミノ酸配列Ser-Gln-Gly-Ile-Ser-Ser-Ala(SQGISSA)を有し、
該ＣＤＲ２’が、アミノ酸配列Asp-Ala-Ser(DAS)を有し、
該ＣＤＲ３’が、アミノ酸配列Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-His(FNSYPH)を有する
抗体からなる群から選択される、抗体を提供する。
【０００９】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、このような抗体の重鎖のアミノ酸配列の一部であり、そしてＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’は、このような抗体の軽鎖のアミノ酸配列の一部である。
【００１０】
我々は
−配列番号１の成熟ポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列および配列番号２の成熟ポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列、または
−配列番号９の成熟ポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列および配列番号１０の成熟ポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列、または
−配列番号１７の成熟ポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列および配列番号１８の成熟ポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列、または
−配列番号２５の成熟ポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列および配列番号２６の成熟ポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列、または
−配列番号３３の成熟ポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列および配列番号３４の成熟ポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列、または
−配列番号４１の成熟ポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列および配列番号４２の成熟ポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列
を含む抗体もまた見いだした。
【００１１】
さらなる局面において、本発明は、
ａ）配列番号１のポリペプチドおよび配列番号２のポリペプチド、または
ｂ）配列番号９のポリペプチドおよび配列番号１０のポリペプチド、または
ｃ）配列番号１７のポリペプチドおよび配列番号１８のポリペプチド、または
ｄ）配列番号２５のポリペプチドおよび配列番号２６のポリペプチド、または
ｅ）配列番号３３のポリペプチドおよび配列番号３４のポリペプチド、または
ｆ）配列番号４１のポリペプチドおよび配列番号４２のポリペプチド
を含む抗体を提供する。
【００１２】
我々は、
−さらにリーダー配列を含む配列番号１のポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列(=配列番号３)およびさらにリーダー配列を含む配列番号２のポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列(=配列番号４)、または
−さらにリーダー配列を含む配列番号９のポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列(=配列番号１１)およびさらにリーダー配列を含む配列番号１０のポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列(=配列番号１２)、または
−さらにリーダー配列を含む配列番号１７のポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列(=配列番号１９)およびさらにリーダー配列を含む配列番号１８のポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列(=配列番号２０)、または
−さらにリーダー配列を含む配列番号２５のポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列(=配列番号２７)およびさらにリーダー配列を含む配列番号２６のポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列(=配列番号２８)、または
−さらにリーダー配列を含む配列番号３３のポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列(=配列番号３５)およびさらにリーダー配列を含む配列番号３４のポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列(=配列番号３６)、または
−さらにリーダー配列を含む配列番号４１のポリペプチドの重鎖のアミノ酸配列(=配列番号４３)およびさらにリーダー配列を含む配列番号４２のポリペプチドの軽鎖のアミノ酸配列(=配列番号４４)
を含む抗体をさらに見いだした。
【００１３】
さらなる局面において、本発明は、
ａ）配列番号３のポリペプチドおよび配列番号４のポリペプチド、または
ｂ）配列番号１１のポリペプチドおよび配列番号１２のポリペプチド、または
ｃ）配列番号１９のポリペプチドおよび配列番号２０のポリペプチド、または
ｄ）配列番号２７のポリペプチドおよび配列番号２８のポリペプチド、または
ｅ）配列番号３５のポリペプチドおよび配列番号３６のポリペプチド、または
ｆ）配列番号４３のポリペプチドおよび配列番号４４のポリペプチド
を含む抗体を提供する。
【００１４】
本発明で提供される抗体はまた、下記で“本発明の（による）化合物”と示す。
【００１５】
他の局面において、本発明は、ヒトＩＬ−４特異的モノクローナル抗体（ｈＩＬ−４ｍＡｂ）、それらのフラグメントおよびそれらのアナログからなる群から選択される本発明の化合物を提供する。
【００１６】
ｈＩＬ−４ｍＡｂは、ヒトＩＬ−４を特異的に認識する、すなわちヒトＩＬ−４に特異的な抗原結合部位を含む、そしてヒト免疫グロブリン由来の特にＣＤＲであるが、重鎖および軽鎖の他の部分もまた有する抗体である。
該抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプであり得、好ましくはＩｇＧ１のアイソタイプである。
【００１７】
“それらのフラグメント”とは、フラグメントが由来する分子と同じ抗原結合特異性および／または中和能力を保持している、ｈＩＬ−４ｍＡｂの重鎖および軽鎖可変配列の一部、例えば、ｈＩＬ−４ｍＡｂ由来のＦａｂフラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントを意味する。
【００１８】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖全体および重鎖のアミノ末端部を含む；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ジスルフィド結合で結合した２個のＦａｂフラグメントにより形成したフラグメントである。このようなフラグメントは、慣用の方法、例えば適当なタンパク分解酵素、パパインおよび／またはペプシンでのモノクローナル抗体の開裂、または組換え法により得ることができ、そしてフラグメントそれ自体は、治療および／または予防薬として有用である。
【００１９】
“それらのアナログ”とは、ＣＤＲ領域の外側、例えば重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の外側または軽鎖のＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’の外側の少なくとも１個のアミノ酸で修飾されたアミノ酸配列を有するｈＩＬ−４ｍＡｂを意味する。該修飾体は、１個または数個のアミノ酸、すなわち１０個以下のアミノ酸の化学的修飾、置換または再配置を含み、該修飾は、アミノ酸配列が非修飾配列の生物学的特徴、例えば抗原特異性および親和性を維持することを可能にする。例えばサイレント変異体は、ＣＤＲ領域内または周囲のエンドヌクレアーゼ制限酵素認識部位を創造するための置換により構築できる。
【００２０】
アナログはまた、対立遺伝子変異として生じる。“対立遺伝子変異または修飾”は、ＣＤＲの本発明の抗体の外側をコードする核酸配列における変異である。このような変異または修飾は、遺伝コードの縮重によるものであり得、または所望の特徴を提供するために自由に設計し得る。このような変異または修飾は、任意のコードアミノ酸配列の変異をもたらしてももたらなくてもよいが、生物活性、例えば抗原特異性および親和性は維持している。
【００２１】
本発明の化合物をコードするポリヌクレオチドもまた見いだした。
【００２２】
他の局面において、本発明は、本発明の化合物をコードするポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチドを提供する。
【００２３】
他の局面において、本発明は、本発明の化合物のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドならびに本発明の化合物のＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００２４】
他の局面において、本発明は、
ａ）配列番号５のポリヌクレオチドおよび配列番号６のポリヌクレオチド、または
ｂ）配列番号１３のポリヌクレオチドおよび配列番号１４のポリヌクレオチド、または
ｃ）配列番号２１のポリヌクレオチドおよび配列番号２２のポリヌクレオチド、または
ｄ）配列番号２９のポリヌクレオチドおよび配列番号３０のポリヌクレオチド、または
ｅ）配列番号３７のポリヌクレオチドおよび配列番号３８のポリヌクレオチド、または
ｆ）配列番号４５のポリヌクレオチドおよび配列番号４６のポリヌクレオチド
を含むポリヌクレオチドを提供する。
【００２５】
他の局面において、本発明は、
ａ）配列番号７および配列番号８のポリペプチド、または
ｂ）配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド、または
ｃ）配列番号２３および配列番号２４のポリペプチド、または
ｄ）配列番号３１および配列番号３２のポリペプチド、または
ｅ）配列番号３９および配列番号４０のポリペプチド、または
ｆ）配列番号４７および配列番号４８のポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００２６】
配列番号５は、配列番号１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号６は、配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号７は、配列番号３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号８は、配列番号４のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号１３は、配列番号９のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号１４は、配列番号１０のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号１５は、配列番号１１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号１６は、配列番号１２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号２１は、配列番号１７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号２２は、配列番号１８のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号２３は、配列番号１９のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号２４は、配列番号２０のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号２９は、配列番号２５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号３０は、配列番号２６のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号３１は、配列番号２７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号３２は、配列番号２８のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号３７は、配列番号３３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号３８は、配列番号３４のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号３９は、配列番号３５のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号４０は、配列番号３６のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号４５は、配列番号４１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号４６は、配列番号４２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号４７は、配列番号４３のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
配列番号４８は、配列番号４４のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。
【００２７】
本発明の化合物は、組換えＤＮＡ技術により製造され得る。したがって、抗体、それらのフラグメントまたはそれらのアナログをコードする１種以上のＤＮＡ分子を、構築し、適当なベクターの適当な制御配列下に配置し、発現のために適当な宿主（生物）に移動させ得る。本発明の化合物は、本明細書に提供された情報、例えば、超可変領域および／または可変領域のアミノ酸配列およびこれらの領域をコードするポリヌクレオチドの知識により、慣用の方法にしたがい、例えば準じて得ることができる。可変ドメイン遺伝子を構築する方法は、例えばEP ２３９ ４００に記載され、下記のとおり簡潔に要約できる。
【００２８】
対象のポリ核酸配列に操作可能に連結した適当なプロモーターを含む、例えば少なくとも１個のＣＤＲを含む免疫グロブリン重鎖または軽鎖の可変ドメインをコードする複製可能発現ベクターを製造し、適当な細胞系を該発現ベクターで形質転換し、該形質転換細胞系を培養し、対応する免疫グロブリンを得る。
【００２９】
他の局面において、本発明は、本発明の化合物、例えば配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７または配列番号４８の少なくとも１個のポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
当然、発現ベクターは、１以上のポリヌクレオチドを含み得る。
【００３０】
他の局面において、本発明は、
−適合性の宿主細胞中に発現系またはその一部が存在するとき、該発現系またはその一部が本発明の化合物、例えばｈＩＬ−４ｍＡｂを製造できる、本発明の化合物をコードするポリヌクレオチドを含む発現系；および
−上記のとおりの発現系を含む単離宿主細胞
を提供する。
【００３１】
例えば適当なプロモーター（複数を含む）、および重鎖および軽鎖の定常領域をコードする遺伝子を含む発現ベクターは、既知であり、例えば市販されており、そして例えば重鎖ベクターＩｇＧ１および軽鎖ベクターヒトκを含む。慣用の発現ベクターまたは組換えプラスミドは、各ポリヌクレオチドを、宿主細胞中の複製および発現および／または宿主細胞からの分泌の調節をできる慣用の調節制御配列と操作可能な結合で置くことにより製造し得る。調節配列は、プロモーター配列、例えばＣＭＶプロモーター、ＬＣＫプロモーターおよび適当なシグナル配列を含む。
【００３２】
選択された宿主細胞を、目的のベクターで慣用の技術によりトランスフェクションしてトランスフェクトされた宿主細胞を製造でき、それを次いで、本発明の化合物の製造のために慣用の技術により培養し得る。
【００３３】
適当な細胞系は、慣用の方法にしたがって、例えば準じて見いだされ得る。適当な宿主は、既知であるか、または慣用の方法にしたがって、例えば準じて見いだされ得、そして培養細胞または遺伝子組換え動物を含む。
本発明の化合物の発現のための適当な宿主細胞または細胞系は、好ましくは真核細胞、例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、繊維芽細胞細胞（例えば３Ｔ３）および骨髄細胞、とりわけ好ましくは哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞またはＳＰ２／０である。
【００３４】
本発明の化合物は薬理学的活性を示し、それゆえ医薬として有用である。例えば、本発明の化合物は、ＩＬ−４のＩＬ−４受容体への結合を強く妨害し、そしてｈＩＬ−４ｍＡｂ（複数を含む）を含む、本発明のＩＬ−４妨害または中和化合物とも呼ぶ。本発明の化合物は、活性を示し、その活性は実施例１に記載の試験：親和性測定において測定できる。
【００３５】
したがって、本発明の化合物はＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患、例えば
−例えば蕁麻疹、薬物アレルギー反応、鼻炎、例えばアレルギー性鼻炎、結膜炎、例えば鼻結膜炎、皮膚炎、例えばアトピー性皮膚炎、喘息、例えばアトピー性喘息およびアレルギー性喘息、アナフィラキシーショック；好ましくはアトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性鼻結膜炎、例えばアレルギー性喘息またはアトピー性皮膚炎を含む、様々なアレルギー性疾患；
−例えば川崎病、グレーブス病、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｒｇｅｎ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性ブドウ膜炎、重症筋無力症、エリテマトーデスおよび類天疱瘡を含む、自己免疫性疾患；
−例えば胃潰瘍、炎症、粘膜炎症、潰瘍性大腸炎、クローン病、炎症性大腸炎、ならびにＩＬ−４および／またはＩｇＥが役割を有する消化器系の他の疾患および障害を含む、ＩＬ−４および／またはＩｇＥが役割を有する消化器系の疾患；
−全身性硬化症（強皮症）、敗血症性関節炎および反応性関節炎を含む、ＩＬ−４および／またはＩｇＥが過剰産生され、病因に関与するとみなされる疾患
に対する治療活性を示す。
【００３６】
他の局面において、本発明は、例えばＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患、例えばアレルギー性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、好ましくはアトピー性皮膚炎に対する医薬としての使用のための、本発明の化合物、例えばｈＩＬ−４ｍＡｂを提供する。
【００３７】
他の局面において、本発明は、ｈＩＬ−４ｍＡｂ、それらのフラグメントおよびそれらのアナログからなる群から選択される本発明の化合物の本発明の使用を提供する。
【００３８】
本発明の化合物の医薬としての使用は、１種以上、好ましくは１種の本発明の化合物、例えば本発明の２種以上の化合物の組合せを含む。
【００３９】
他の局面において、本発明は、ＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患、例えばアレルギー性疾患、例えばアレルギー性鼻結膜炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、好ましくはアレルギー性喘息またはアトピー性皮膚炎、例えばアトピー性皮膚炎の処置用医薬、例えば医薬組成物の製造のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００４０】
さらなる局面において、本発明は、医薬、例えば医薬組成物の製造のための、上記疾患、例えばアトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息およびアレルギー性鼻炎からなる群から選択される疾患の処置用の本発明の化合物の使用を提供する。
【００４１】
さらなる局面において、本発明は、本発明の化合物がｈＩＬ−４ｍＡｂ、それらのフラグメントおよびそれらのアナログからなる群から選択される上記のとおりの使用のための本発明の化合物を提供する。
【００４２】
例えば、本発明の化合物、ｈＩＬ−４ｍＡｂ、それらのフラグメントおよびそれらのアナログの、例えばヒトＩＬ−４に対する親和定数が、８００ｐＭ以下、例えば２００ｐＭ以下、例えば約３０ｐＭから約２００ｐＭ、好ましくは約４５ｐＭから約１７０ｐＭ、例えば約１００ｐＭ、より好ましくは約５０ｐＭ、例えば約４５ｐＭであることが測定されている。
【００４３】
例えばまた、本発明の化合物、ｈＩＬ−４ｍＡｂ、それらのフラグメントおよびそれらのアナログの、例えばヒトＩＬ−４に対する親和定数が、３０ｐＭから２００ｐＭ、好ましくは４５ｐＭから１７０ｐＭ、例えば１００ｐＭ、より好ましくは５０ｐＭ、例えば４５ｐＭであることが測定されている。
【００４４】
そのため、ＩＬ−４介在疾患の処置用として指示されたとき、本発明の化合物は、モノクローナル抗体で従来使用されているのと同様の用量で同様の投与様式により、大型哺乳動物、例えばヒトに投与され得る。
【００４５】
他の局面において、本発明は、２００ｐＭ以下、例えば３０から２００ｐＭの解離定数でヒトＩＬ−４に結合する抗体を提供する。
【００４６】
本発明のさらなる局面において、上記のとおりの使用のための抗体は、２００ｐＭ以下、例えば３０から２００ｐＭの解離定数でヒトＩＬ−４に結合するｈＩＬ−４ｍＡｂ、それらのフラグメントまたはそれらのアナログである。
【００４７】
さらなる局面において、本発明は、ＩＬ−４および／またはＩｇＥ介在疾患、例えばアレルギー性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、好ましくはアトピー性皮膚炎の処置法であり、このような処置の必要な対象に有効量の本発明の化合物を；例えば医薬組成物の形で投与することを含む処置法を提供する。
【００４８】
本発明のさらなる局面において、本発明の化合物は、同時にまたは連続して別の薬学的に活性な薬剤と組合せて投与する。
【００４９】
処置は処置および予防を含む。
このような処置において、適当な用量は、もちろん例えば、使用される本発明の抗体の化学的性質および薬物動態学的データ、宿主の種、投与経路ならびに処置する状態の種類および重症度に依存して変化する。しかし、一般的に、大型哺乳動物、例えばヒトの満足な結果のための指示される一日用量は、例えば約０．１ｎｇ／ｋｇから例えば約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１００ｎｇ／ｋｇから例えば約２ｍｇ／ｋｇの範囲の本発明の化合物であり；簡便には例えば一日に４回までの分割用量で投与される。
本発明の化合物は、任意の慣用の経路、例えば非経腸的、例えば静脈内、皮内、筋肉内、皮下、鼻内投与、注射溶液もしくは懸濁液または粉末吸入により投与され得る。
【００５０】
他の局面において、本発明は、少なくとも１種の医薬賦形剤、例えば適当な担体ならびに／または希釈剤、例えば増量剤、結合剤、崩壊剤、流動剤、滑剤、糖および甘味剤、芳香剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤ならびに／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節用塩ならびに／またはバッファーとともに本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００５１】
他の局面において、本発明は、さらに他の薬学的に活性な薬剤を含む本発明による医薬組成物を提供する。
【００５２】
このような組成物は、例えば慣用の方法、例えば混合、造粒、被覆、溶解または凍結乾燥手段により製造され得る。単位用量形は、例えば約０．５ｍｇから例えば約１０００ｍｇ、例えば１ｍｇから約５００ｍｇである。
【００５３】
本発明の化合物は、本発明にしたがい、単独または１種以上の他の薬学的に活性な薬剤と組合せによって医薬的処置のために使用され得る。このような他の薬学的に活性な薬剤は、例えば他の抗体、例えば中和ＩｇＥ抗体、サイトカインまたはサイトカイン受容体であり、個々の処置される状態によって選択される。
【００５４】
組合せ剤は、２種以上の薬学的に活性な薬剤が同一の製剤である固定組合せ剤；別々の製剤での２種以上の薬学的に活性な薬剤が、例えば共投与のための指示書とともに同一のパッケージで販売されるキット；および薬学的に活性な薬剤が別々にパッケージされているが、同時にまたは連続に投与するための指示書がある自由な組合せ剤を含む。
【００５５】
他の局面において、本発明はまた、
ａ）体液サンプルと本発明の抗体を接触させ、そして
ｂ）該抗体とヒトＩＬ−４の結合の存在をアッセイすること
を含む、ヒトにおける過剰ＩｇＥ生産に関連するアレルギーおよび他の状態の診断法を提供する。
【００５６】
下記の実施例において、すべての温度は、摂氏（℃）であり、そして補正されていない。
【００５７】
下記の略語を使用する：
ＦＡＣＳバッファー  ＰＢＳ、２％  ＦＣＳおよび０．２％  ＮａＮ３
ＦＣＳ              ウシ胎仔血清
ＦＩＴＣ            フルオレセインイソチオシアネート
ＩＣ５０             阻害濃度
ＫＬＨ              キーホールリンペットヘモシアニン
ｍＡｂ              モノクローナル抗体
ＭＴＸ              メトトレキサート
ＰＢＳ              リン酸バッファー生理食塩水
ｓＩｇＤ            表面免疫グロブリンＤ
ｒｍＩＬ−３        組換えマウスインターロイキン−３
ｒｈＩＬ−４        組換えヒトインターロイキン−４
ｒｈＩＬ−１３      組換えヒトインターロイキン−１３
ｒｐｍ              １分間当たりの回転数
ＲＰＭＩ            Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ培地
ＲＴ                室温
ＴＦ−バッファー    ２７２ｍＭ  スクロース、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７ｍＭ  リン酸バ
ッファーｐＨ７．４
【実施例】
【００５８】
実施例１：
ａ）抗体製造
抗体の配列配列番号５または７（＝重鎖）および配列配列番号６または８（＝軽鎖）の可変領域をコードするプラスミドを、ヒトκ軽鎖およびヒトＩｇＧ１重鎖の発現カセットにクローン化する。
特異性決定領域を必要な因子、すなわちプロモーター、リーダー配列および機能的免疫グロブリンタンパク質の発現に必要である抗体定常領域エクソンにスプライシングするためのスプライスドナー部位と結合させ、完全なモノクローナル抗体を生成する。リーダー配列、可変領域および定常領域エクソンＣＨ１−ＣＨ４およびκにスプライシングするための３’スプライスドナー部位をコードする、重鎖および軽鎖抗体の可変領域カセットを哺乳動物の発現ベクターＨＣ（重鎖ベクター、ヒトＩｇＧ１）およびＬＣ（軽鎖ベクター、ヒトκ）に導入する。
【００５９】
軽鎖を含むプラスミドおよび重鎖を含むプラスミドを、共トランスフェクションアプローチでＳｐ２／０細胞に導入する。例えばトランスフェクションのために、約９５％が生存力のある指数増殖期の細胞を使用する。細胞を冷ＴＦ−バッファーで２回洗浄し、細胞濃度を２×１０７細胞／ｍｌにＴＦ−バッファーで調節する。得られた０．８ｍｌの細胞懸濁液をそれぞれ１５μｇの重鎖および軽鎖プラスミドと混合し、氷上に１０分間置く。トランスフェクションをＢｉｏｒａｄ  Ｇｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ（２８０Ｖおよび２５μＦ）を使用してエレクトロポレーションにより行う。エレクトロポレーション後、細胞を氷上に１５分間置き、５０ｍｌの冷培養培地に移し、１日３７℃および５％ＣＯ２でインキュベーションする。クローン増幅のために、得られたＧ４１８抵抗細胞を２００ｎＭ  ＭＴＸの存在下で培養する。異種細胞プールのアリコートを、９６ウェルプレートに１生存細胞／ウェルのクローン密度で２００ｎＭ含有培養培地にまき、増幅細胞のクローン集団の選択を可能にする。限界希釈クローニングを利用し、血清非含有培養条件で増幅および適応後、クローン細胞系を生成する。細胞を２個の９６ウェルプレートに濃度０．５細胞／ウェルでまく。播種１日後、ウェルをクローン分析のために顕微鏡でスクリーニングする。モノクローナル抗体のみをさらなる試験のために使用する。
得られた抗体は、配列番号１および配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【００６０】
ｂ）親和性測定
本発明のヒトｍＡｂｓの親和性測定を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標登録）２０００装置で行う。定義の量のヒトｍＡｂｓの適用がこの準備された表面上への捕獲をもたらし、したがって不応特性（refractory property）の変化が測定できるように、抗−ヒトＩｇＧをＢＩＡｃｏｒｅ  ｓｅｎｓｏｒｃｈｉｐ  ＣＭ−５（ＢＩＡｃｏｒｅ）でコーティングする。ｒｈＩＬ−４のその後の適用が不応特性のさらなる変化をもたらし、それによりＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ３．０ソフトウェアによる会合速度（Ｋｏｎ、近づく速度）および解離速度（Ｋｏｆｆ、離れる速度）ならびにこれら２個の積である親和性（Ｋｄ、解離定数、ｐＭで得られる）の測定ができる。ＢＩＡバッファーにおける各濃度のｒｈＩＬ−４を使用して、請求項２ａ）に記載のとおりのＣＤＲにより定義されるｍＡｂの４３ｐＭの親和性を測定する。
【００６１】
ｃ）ＩＬ−４介在ＩｇＥにおける阻害潜在能の測定
ｃ１）細胞源
ヒトＢ細胞を各々、Ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ密度遠心法、次いでＡｕｔｏＭＡＣＳデバイスでヒトＣＤ１９またはヒトＣＤ２２に特異的なＭＡＣＳビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の磁気分離により末梢血、軟膜から単離する。
未感作ヒトＢ細胞を、同様に抗−ヒトｓＩｇＤ  ＦＩＴＣ標識ヤギＦ（ａｂ’）２抗体、次いで抗−ＦＩＴＣ  ＭＡＣＳビーズを使用して単離する。
【００６２】
ｃ２）細胞培養／維持
形質転換体（ＩＬ−４ＲαおよびＩＬ−１３Ｒα１を有するＢａＦ／３形質転換体）を、Ｇｌｕｔａｍａｘ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンおよび１０ｎｇ／ｍｌ  ｒｈＩＬ−４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）補完ＲＰＭＩ  １６４０培地で培養する。細胞を１：１に１週間に２回分け、ｒｈＩＬ−４非含有新鮮培地で洗浄し、このような培地中で一晩維持する（＝飢餓細胞）。
ヒトｅｘ  ｖｉｖｏ（未感作）Ｂ細胞培養物を９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中、Ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン補完Ｘ−Ｖｉｖｏ培地（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＸＶ１５）でインキュベーションする。
【００６３】
ｃ３）ＢＡＦ細胞増殖アッセイ
ｂ）に記載のとおりの飢餓細胞を回収し、新鮮培地で洗浄し、カウントし、２×１０５細胞／ｍｌに調節し、その１００μｌ／ウェルを９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に分配する。力価測定シリーズのために、サイトカインｒｈＩＬ−４、ｒｈＩＬ−１３およびｒｍＩＬ−３を同じ培地中、所望の最終濃度の４倍で生成する。
【００６４】
力価測定シリーズのために、抗体を、ＥＬＩＳＡで濃度測定した細胞培養上清物としてまたは同じ培地中、所望の最終濃度の４回倍で精製した物質からのいずれかを使用する。サイトカインの前希釈物および抗体を等用量で混合し、１００μｌの前混合物を細胞で調製したウェルに移す。対照を背景増殖（サイトカイン非含有および抗体非含有培地＝１００％阻害）および最大増殖（サイトカインのみ含有する培地＝０％阻害）のために設定する。
【００６５】
５％ＣＯ２の存在下、一晩３７℃でインキュベート後、［メチル−３Ｈ］チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＴＲＫ１２０）１μＣｉ／ウェルを１０μｌの培地に加え、８時間インキュベーションする。凍結／融解サイクルに続いて、細胞をＴｏｍｔｅｋ  ｈａｒｖｅｓｔｅｒを使用して、フィルターマット上に、プレートから回収する。フィルターマットを２分間にわたって６５０Ｗ電子レンジで乾燥させ、Ｍｅｌｔｉｌｅｘ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｗａｘ（Ｗａｌｌａｃ）のシートとともにサンプルバッグに移す。Ｗａｘをフィルターを介して溶かし、得られたフィルターを適当なカセット内に置き、３０秒／フィールドで測定し、カウント／分に外挿するプログラムを使用するシンチレーション測定用マイクロ−ベータ・リーダー（Ｗａｌｌａｃ）に挿入する。
３０ｐＭのＩＣ５０を抗体についてこの試験システムで測定する。
【００６６】
ｃ４）Ｂ細胞に対するＩＬ−４誘導ＣＤ２３の上方調節
ＭＡＣＳ分離Ｂ細胞をＸＶ１５中、０．５−１×１０６細胞／ｍｌに調節し、９６ウェル丸底プレートのウェルあたり１００μｌでプレートする。サイトカイン（最終濃度１ｎｇ／ｍｌ）およびｍＡｂ（最終濃度２μｇ／ｍｌ−２ｎｇ／ｍｌ）を、前記のとおり前希釈および前混合し、１００μｌに加え最終容積２００μｌにする。
５％ＣＯ２の存在下、一晩３７℃で培養後、細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に移し、２２００ｒｐｍ（〜１０００×ｇ）で１分間遠心分離し、上清を払った後、ＦＡＣＳバッファーで洗浄する。
【００６７】
Ｆｌｏｒｏｃｈｒｏｍｅ標識ｍＡｂｓ［ＨＬＡ−ＤＲ  ＦＩＴＣ（Ｃａｌｔａｇ＃ＭＨＬＤＲ０１  １：８００）、ＣＤ１９  ＰＥ（Ｃａｌｔａｇ＃ＭＨＣＤ１９０４  １：２００）およびＣＤ２３  ＡＰＣ（Ｃａｌｔａｇ＃ＭＨＣＤ２３０５  １：２００）］をＦＡＣＳバッファー中で生成し、５０μｌ／ウェルに分配する。室温で３０−６０分インキュベーション後、ウェルをＦＡＣＳバッファーで満たし、遠心分離し、得られた残渣をＦＡＣＳバッファーで洗浄する。細胞をＦＡＣＳバッファー中、２μｇ／ｍｌプロピジウムアイオダイドで再懸濁し、デュアルレーザーＦａｃｓＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析する。細胞をこれらの前方散乱および側方散乱特性ならびにプロピジウムアイオダイド排除能およびこれらのＣＤ１９発現にしたがって門を開閉する。ＣＤ２３発現における、任意の基準値（非誘導性細胞に対して設定）を超える細胞の平均蛍光強度およびパーセントを測定する。基準発現（１００％阻害）をサイトカインなしの細胞で測定し、一方０％阻害をサイトカインはあるがｍＡｂなしでインキュベーションした細胞で測定する。
【００６８】
７０ｐＭ組換えヒトＩＬ−４の存在下、この抗体の３３４ｐＭのＩＣ５０は、上記のとおりの細胞における、ＩＬ−４誘導ＣＤ２３発現から測定する。
【００６９】
ｃ５）未感作Ｂ細胞によるＩＬ−４誘導ＩｇＥ製造
磁気で分類された未感作Ｂ細胞をＸＶ１５中、３×１０５細胞／ｍｌに調節し、５％ＣＯ２の存在下、３７℃で１０日間培養中、ＰＢＳで満たされたウェルに囲まれる、１００μｌ／ウェルで９６ウェルプレートのプレートの中央部の６×６アレイにまく。各非誘導および誘導対照、ならびに、最初７μｇ／ｍｌから出発し、２９ｎｇ／ｍｌの最終濃度まで３倍希釈する、５０μｌ４倍濃縮前希釈溶液に添加された、ｍＡｂ力価測定の５回繰り返しからなる、３ウェルからなる各１プレートを試験すべきｍＡｂごとに調製する。誘導条件は、ｒｈＩＬ−４に加えて、５０μｌの４倍濃縮前希釈溶液に添加された最終濃度２０ｎｇ／ｍｌの０．５μｇ／ｍｌの抗−ＣＤ４０ｍＡｂ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。ＩｇＥ濃度を標準サンドウィッチＥＬＩＳＡ法により培養後に測定する。
【００７０】
この抗体の２８０６ｐＭのＩＣ５０は、上記のとおりの細胞における、ＩＬ−４誘導ＩｇＥから測定する。
【００７１】
実施例２から６：
抗体は、実施例１に記載と同様に得られ、以下のアミノ酸配列を含む：
実施例２は、配列番号９および配列番号１０のアミノ酸配列を含む抗体である。
実施例３は、配列番号１７および配列番号１８のアミノ酸配列を含む抗体である。
実施例４は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列を含む抗体である。
実施例５は、配列番号３３および配列番号３４のアミノ酸配列を含む抗体である。
実施例６は、配列番号４１および配列番号４２のアミノ酸配列を含む抗体である。
【００７２】
表１は、実施例１ｂからｃに記載のとおりの様々な試験システムにおける、抗体のＩＣ５０値の要約である。
【表１】
2008507985.tif 000002
【００７３】
配列表
配列番号１
（重鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する）
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVTFIWDDGSFKYYAESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGSWSPDIFDIWGQGTMVTVSS
配列番号２
（軽鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’に対応する）
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISRALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFGQGTRLEIKRT
配列番号３
（リーダー配列を有する配列番号１のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表２】
2008507985.tif 000003
配列番号４
（リーダー配列を有する配列番号２のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表３】
2008507985.tif 000004
【００７４】
配列番号５
（配列番号１のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGACATTTATATGGGATGATGGAAGTTTTAAATATTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATTTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGCAGCTGGTCTCCTGATATATTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号６
（配列番号２のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGAGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACT
配列番号７
（配列番号３のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGAGTTTGGGCTGAACTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTCAGAGGTGTCCACTGTCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGACATTTATATGGGATGATGGAAGTTTTAAATATTATGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATTTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGCAGCTGGTCTCCTGATATATTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号８
（配列番号４のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGAGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACT
【００７５】
配列番号９
（重鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する）
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTLSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNEYYADSVKGRFTTSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGSWSPDIFDIWGQGTMVTVSS
配列番号１０
（軽鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’に対応する）
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRSALAWYQQNPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPVTFGQGTRLEIKRT
配列番号１１
（リーダー配列を有する配列番号９のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表４】
2008507985.tif 000005
配列番号１２
（リーダー配列を有する配列番号１０のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表５】
2008507985.tif 000006
【００７６】
配列番号１３
（配列番号９のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
CAGGTGCAACTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTAAGTAGCTTTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATGAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCACCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGCAGCTGGTCTCCTGATATTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号１４
（配列番号１０のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGGGCATTCGCAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAACCCCGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCCGTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACT
配列番号１５
（配列番号１１のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGTCAGGTGCAACTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTAAGTAGCTTTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATGAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCACCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGCAGCTGGTCTCCTGATATTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号１６
（配列番号１２のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGGGCATTCGCAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAACCCCGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCCGTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACT
【００７７】
配列番号１７
（重鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する）
QVQLVESGGGMVQPGRSLRLSCAASGFTLSSYGMHWVRQAPGKGLEWVTVIWYDGNNQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGSWSPDIFDIWGQGTMVTVSS
配列番号１８
（軽鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’に対応する）
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFGQGTRLEIKRT
配列番号１９
（リーダー配列を有する配列番号１７のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表６】
2008507985.tif 000007
配列番号２０
（リーダー配列を有する配列番号１８のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表７】
2008507985.tif 000008
【００７８】
配列番号２１
（配列番号１７のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCATGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCCTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGACAGTTATATGGTATGATGGAAATAATCAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGAGGGCAGCTGGTCTCCTGATATTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号２２
（配列番号１８のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACT
配列番号２３
（配列番号１９のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGTCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCATGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCCTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGACAGTTATATGGTATGATGGAAATAATCAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGAGGGCAGCTGGTCTCCTGATATTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
配列番号２４
（配列番号２０のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCCATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACT
【００７９】
配列番号２５
（重鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する）
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGDTFSSYAISWVRQAPGQGFEWMGGIIPVIGTVNYEERFQDRVTITADNSTSTAYMELTSLRSEDTAVYFCGREEGFLDYWGQGTLVTVSS
配列番号２６
（軽鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’に対応する）
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLLTFGGGTKVEIKRT
配列番号２７
（リーダー配列を有する配列番号２５のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表８】
2008507985.tif 000009
配列番号２８
（リーダー配列を有する配列番号２６のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表９】
2008507985.tif 000010
【００８０】
配列番号２９
（配列番号２５のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGACACCTTCAGCAGTTATGCTATCAGTTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGTTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTGTCATTGGTACAGTAAATTATGAAGAGAGATTCCAGGACAGAGTCACGATTACCGCGGACAATTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGTTGACTAGTCTGAGATCTGAAGACACGGCCGTGTATTTTTGTGGGAGAGAAGAGGGCTTCCTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号３０
（配列番号２６のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCTCTTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG
配列番号３１
（配列番号２７のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACTGGACCTGGAGGTTCCTCTTTGTGGTGGCAGCAGCTACAGGTGTCCAGTCCCAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGACACCTTCAGCAGTTATGCTATCAGTTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGTTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTGTCATTGGTACAGTAAATTATGAAGAGAGATTCCAGGACAGAGTCACGATTACCGCGGACAATTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGTTGACTAGTCTGAGATCTGAAGACACGGCCGTGTATTTTTGTGGGAGAGAAGAGGGCTTCCTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号３２
（配列番号２８のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCTCTTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG
【００８１】
配列番号３３
（重鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する）
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSCCGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATDSSGSFYEYFQHWGQGTLVTVSS
配列番号３４
（軽鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’に対応する）
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIKRT
配列番号３５
（リーダー配列を有する配列番号３３のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表１０】
2008507985.tif 000011
配列番号３６（リーダー配列を有する配列番号３４のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表１１】
2008507985.tif 000012
【００８２】
配列番号３７
（配列番号３３のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTTGCTGTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGACAGATAGTTCGGGGAGTTTTTATGAATACTTCCAGCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号３８
（配列番号３４のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAACAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACT
配列番号３９
（配列番号３５のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGTCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTTGCTGTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGACAGATAGTTCGGGGAGTTTTTATGAATACTTCCAGCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号４０
（配列番号３６のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAACAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACT
【００８３】
配列番号４１
（重鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応する）
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLDWVAVVWYDGGYKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSSGSFYEYLQHWGQGTLVTVSS
配列番号４２
（軽鎖の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、下線のアミノ酸は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’およびＣＤＲ３’に対応する）
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPHFWPGDQAGDQTNCG
配列番号４３
（リーダー配列を有する配列番号４１のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表１２】
2008507985.tif 000013
配列番号４４（リーダー配列を有する配列番号４２のポリペプチドのアミノ酸配列、太字のアミノ酸は、リーダー配列に対応する）
【表１３】
2008507985.tif 000014
【００８４】
配列番号４５
（配列番号４１のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
CAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAGGGGGCTGGACTGGGTGGCAGTTGTGTGGTATGATGGAGGTTATAAGTTCTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTTCGGGGAGTTTTTATGAATACTTACAACATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号４６
（配列番号４２のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACT
配列番号４７
（配列番号４３のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTCGTTGCTCTTTTAAGAGGTGTCCAGTGTCAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAGGGGGCTGGACTGGGTGGCAGTTGTGTGGTATGATGGAGGTTATAAGTTCTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTTCGGGGAGTTTTTATGAATACTTACAACATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号４８
（配列番号４４のアミノ酸をコードするヌクレオチド配列）
ATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTTCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCAGTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAATAGTTACCCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACT
【配列表】
2008507985000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成19年3月9日(2007.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2008507985000001.app
【国際調査報告】
2008507985.tif 000037
2008507985.tif 000038
2008507985.tif 000039
2008507985.tif 000040