(57)【要約】  本発明は、喘息と閉塞性肺疾患とを区別する方法、肺疾患を治療する方法、咳を治療する方法、閉塞性肺疾患のための治療の有効性を評価する方法、およびＰ２−プリン受容体（Ｐ２Ｒ）の活性化を阻害する方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップ：
（ａ）  喘息または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）であることが疑われる被験体を特定するステップ；
（ｂ）  被験体に対して誘発化合物を投与するステップ；
（ｃ）  前記投与の前後での肺機能の変化を測定するステップ；
（ｄ）  前記肺機能の変化が、（ｉ）喘息または（ｉｉ）ＣＯＰＤの対照被験体における肺機能の変化のどちらとより類似しているかを決定するステップ；および
（ｅ）  被験体を以下のものに分類するステップ：（１）被験体における肺機能の変化が、ＣＯＰＤの対照被験体における肺機能の変化よりも、喘息の対照被験体における肺機能の変化により類似している場合に、喘息の可能性があること；または（２）被験体における肺機能の変化が、喘息の対照被験体における肺機能の変化よりも、ＣＯＰＤの対照被験体における肺機能の変化により類似している場合に、ＣＯＰＤの可能性があること
を含む、診断方法。
【請求項２】
前記肺機能の変化を、努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）における任意に特定された低下を引き起こすために必要とされる誘発化合物の量の関数として測定する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記任意に特定された低下が、約２０％の低下である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記肺機能の変化を、比気道コンダクタンス（ｓＧａｗ）、ボルグスコア、機能的残気量（ＦＲＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）またはピーク呼気流速（ＰＥＦＲ）における任意に特定された変化を引き起こすために必要とされる誘発化合物の量の関数として測定する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記任意に特定された変化が約１０％より大きい低下または増大である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記誘発化合物がアデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記誘発化合物がＡＴＰのアナログである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＡＴＰのアナログがα，β−メチレンＡＴＰ（α，βｍＡＴＰ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＡＴＰのアナログがβ，γ−メチレンＡＴＰ（β，γｍＡＴＰ）である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記誘発化合物がジアデノシン五リン酸（Ａｐ５Ａ）である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与が肺内吸入によるものである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記投与が静脈内ボーラス注射によるものである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
以下のステップ：
（ａ）  請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法を実施するステップ；および
（ｂ）  喘息またはＣＯＰＤについて被験体を治療するステップ
を含む、治療方法。
【請求項１４】
前記治療が、被験体に対して２型プリン受容体（Ｐ２Ｒ）アンタゴニストを投与するステップを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｐ２ＲがＰ２Ｙ受容体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｐ２ＲがＰ２Ｘ受容体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療が、被験体に対する１種以上のコルチコステロイド、１種以上のβ−アドレナリン受容体アゴニスト、または１種以上の鎮咳薬の投与を含む、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記治療が、以下のもの：ピリドキサルリン酸−６−アゾフェニル−２’４’−ジスルホン酸（ＰＰＡＤＳ）；５−｛［３”−ジフェニルエーテル（１’，２’，３’，４’−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アミノ］カルボニル｝ベンゼン−１，２，４−トリカルボン酸；２’，３’−Ｏ−（４−ベンゾイルベンゾイル）−ＡＴＰ（ＢｚＡＴＰ）；テトラメチルピラジン（ＴＭＰ）；および２’，３’−Ｏ−２，４，６−トリニトロフェニル−ＡＴＰ（ＴＮＰ−ＡＴＰ）からなる群より選択される１種以上の薬剤を、被験体に対して投与するステップを含む、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記治療が、被験体に対して１種以上の化合物を投与するステップを含み、各化合物は式（Ｉ）：
【化１】
2008507368.tif 000008
であるかまたはその製薬上許容される塩であり、
式中、
Ａ１およびＡ２はそれぞれ独立に、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、−ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択されるか；または
Ａ１およびＡ２は、それらが結合する炭素原子と共にイオウ原子を含有する五員複素環を形成しているが、ここで該五員複素環は任意によりメルカプトおよびオキソより選択される１個または２個の置換基で置換されており；
Ａ３はアルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択され；
Ａ４、Ａ５、Ａ６およびＡ７はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、シアノ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、−ＮＲＥＲＦ、および（ＮＲＥＲＦ）カルボニルからなる群より選択され；
Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、−ＮＲＥＲＦ、（ＮＲＥＲＦ）カルボニル、およびオキソからなる群より選択され；
ＲＡおよびＲＢはそれぞれ独立に、水素、アルキル、およびシアノからなる群より選択され；
ＲＣは、水素およびアルキルからなる群より選択され；
ＲＤは、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ハロアルコキシ、およびハロアルキルからなる群より選択され；
ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立に、水素、アルキル、アルキルカルボニル、ホルミル、およびヒドロキシアルキルからなる群より選択され；
Ｌ１は、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＮに結合し、かつこの基の右端はＲ１と結合しており；
ｍは０〜１０の整数であり；
ｎは０〜１０の整数であり；
Ｒ１は、アリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択され；
Ｌ２は不在であるか、または共有結合、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｑ−、および−（ＣＨ２）ｐＣＨ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＲ１に結合し、かつこの基の右端はＲ２と結合しており；
ｐは０〜１０の整数であり；
ｑは０〜１０の整数であり；かつ
Ｒ２は不在であるか、またはアリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択される、
請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
喘息またはＣＯＰＤに対する治療の有効性を評価する方法であって、以下のステップ：
（ａ）  請求項１３〜２０のいずれか１項に記載の方法を実施するステップ；
（ｂ）  被験体に対して誘発化合物を投与するステップ；
（ｃ）  前記投与の前後での、肺機能の変化を測定するかまたは少なくとも１種の症状の変化を検出するステップ；
（ｄ）  被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、請求項１３〜２０のいずれか１項に記載の治療の前に測定したか検出した該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化により近いかどうかを決定するステップ；
（ｅ）  被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、請求項１３〜２０のいずれか１項に記載の治療の前に測定したか検出した該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化により近い場合に、前記治療を有効であると分類するステップ
を含む、上記方法。
【請求項２２】
閉塞性肺疾患（ＯＰＤ）に対する治療の有効性を評価する方法であって、以下のステップ：
（ａ）  ＯＰＤについて治療がなされた被験体を特定するステップ；
（ｂ）  被験体に対して誘発化合物を投与するステップ；
（ｃ）  前記投与の前後での、肺機能の変化を測定するかまたは少なくとも１種の症状の変化を検出するステップ；
（ｄ）  被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、ＯＰＤに対する前記治療の前に測定したか検出した該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化により近いかどうかを決定するステップ；
（ｅ）  被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、前記治療の前に測定したか検出した該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化により近い場合に、該治療を有効であると分類するステップ
を含む、上記方法。
【請求項２３】
前記肺機能の変化を、努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）における任意に特定された低下を引き起こすために必要とされる誘発化合物の量の関数として測定する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記肺機能の変化を、比気道コンダクタンス（ｓＧａｗ）、ボルグスコア、機能的残気量（ＦＲＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）またはピーク呼気流速（ＰＥＦＲ）における任意に特定された変化を引き起こすために必要とされる誘発化合物の量の関数として測定する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記任意に特定された変化が約１０％より大きい低下または増大である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記任意に特定された低下が、約２０％の低下である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記誘発化合物がＡＴＰである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記誘発化合物がＡＴＰのアナログである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＡＴＰのアナログがα，βｍＡＴＰである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＡＴＰのアナログがβ，γｍＡＴＰである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記誘発化合物がＡｐ５Ａである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記誘発物質の投与が肺内吸入によるものである、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記投与が静脈内ボーラス注射によるものである、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１種の症状の変化がボルグスコアの変化である、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１種の症状の変化が、咳、胸の圧迫感、喉の圧迫感、喀痰、および喘鳴からなる群より選択される１種以上の症状の変化である、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＯＰＤが喘息である、請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＯＰＤがＣＯＰＤである、請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＯＰＤが慢性的な咳である、請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記治療が、被験体に対してＰ２Ｒアンタゴニストを投与するステップを含む、請求項２２〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記Ｐ２ＲがＰ２Ｙ受容体である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｐ２ＲがＰ２Ｘ受容体である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記治療が、被験体に対する１種以上の薬剤の投与を含み、該薬剤がコルチコステロイド、β−アドレナリン受容体アゴニスト、および鎮咳薬である、請求項２２〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記治療が、以下のもの：ピリドキサルリン酸−６−アゾフェニル−２’４’−ジスルホン酸（ＰＰＡＤＳ）；５−｛［３”−ジフェニルエーテル（１’，２’，３’，４’−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アミノ］カルボニル｝ベンゼン−１，２，４−トリカルボン酸；２’，３’−Ｏ−（４−ベンゾイルベンゾイル）−ＡＴＰ（ＢｚＡＴＰ）；テトラメチルピラジン（ＴＭＰ）；および２’，３’−Ｏ−２，４，６−トリニトロフェニル−ＡＴＰ（ＴＮＰ−ＡＴＰ）からなる群より選択される１種以上の薬剤を、被験体に対して投与するステップを含む、請求項２２〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記治療が、被験体に対して１種以上の化合物を投与するステップを含み、各化合物は式（Ｉ）：
【化１】
2008507368.tif 000009
であるかまたはその製薬上許容される塩であり、
式中、
Ａ１およびＡ２はそれぞれ独立に、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、−ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択されるか；または
Ａ１およびＡ２は、それらが結合する炭素原子と共にイオウ原子を含有する五員複素環を形成しているが、ここで該五員複素環は任意によりメルカプトおよびオキソより選択される１個または２個の置換基で置換されており；
Ａ３はアルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択され；
Ａ４、Ａ５、Ａ６およびＡ７はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、シアノ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、−ＮＲＥＲＦ、および（ＮＲＥＲＦ）カルボニルからなる群より選択され；
Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、−ＮＲＥＲＦ、（ＮＲＥＲＦ）カルボニル、およびオキソからなる群より選択され；
ＲＡおよびＲＢはそれぞれ独立に、水素、アルキル、およびシアノからなる群より選択され；
ＲＣは、水素およびアルキルからなる群より選択され；
ＲＤは、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ハロアルコキシ、およびハロアルキルからなる群より選択され；
ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立に、水素、アルキル、アルキルカルボニル、ホルミル、およびヒドロキシアルキルからなる群より選択され；
Ｌ１は、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＮに結合し、かつこの基の右端はＲ１と結合しており；
ｍは０〜１０の整数であり；
ｎは０〜１０の整数であり；
Ｒ１は、アリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択され；
Ｌ２は不在であるか、または共有結合、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｑ−、および−（ＣＨ２）ｐＣＨ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＲ１に結合し、かつこの基の右端はＲ２と結合しており；
ｐは０〜１０の整数であり；
ｑは０〜１０の整数であり；かつ
Ｒ２は不在であるか、またはアリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択される、
請求項２２〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物が、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記被験体が鎮咳薬での治療をなされており、かつ前記少なくとも１種の症状が咳である、請求項２２〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
咳の変化を、咳を誘発するのに必要とされる誘発化合物の量の関数として測定する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ＯＰＤまたは咳の治療方法であって、以下のステップ：
（ａ）  ＯＰＤであるか、ＯＰＤに関連した症状を有するか、または咳をしている哺乳動物被験体を特定するステップ；
（ｂ）  １種以上の化合物を含んでなる治療上有効な用量の医薬組成物を被験体に対して投与するステップ、ここで、各化合物は式（Ｉ）：
【化１】
2008507368.tif 000010
であるかまたはその製薬上許容される塩であり、
式中、
Ａ１およびＡ２はそれぞれ独立に、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、−ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択されるか；または
Ａ１およびＡ２は、それらが結合する炭素原子と共にイオウ原子を含有する五員複素環を形成しているが、ここで該五員複素環は任意によりメルカプトおよびオキソより選択される１個または２個の置換基で置換されており；
Ａ３はアルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択され；
Ａ４、Ａ５、Ａ６およびＡ７はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、シアノ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、−ＮＲＥＲＦ、および（ＮＲＥＲＦ）カルボニルからなる群より選択され；
Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、−ＮＲＥＲＦ、（ＮＲＥＲＦ）カルボニル、およびオキソからなる群より選択され；
ＲＡおよびＲＢはそれぞれ独立に、水素、アルキル、およびシアノからなる群より選択され；
ＲＣは、水素およびアルキルからなる群より選択され；
ＲＤは、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ハロアルコキシ、およびハロアルキルからなる群より選択され；
ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立に、水素、アルキル、アルキルカルボニル、ホルミル、およびヒドロキシアルキルからなる群より選択され；
Ｌ１は、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＮに結合し、かつこの基の右端はＲ１と結合しており；
ｍは０〜１０の整数であり；
ｎは０〜１０の整数であり；
Ｒ１は、アリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択され；
Ｌ２は不在であるか、または共有結合、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｑ−、および−（ＣＨ２）ｐＣＨ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＲ１に結合し、かつこの基の右端はＲ２と結合しており；
ｐは０〜１０の整数であり；
ｑは０〜１０の整数であり；かつ
Ｒ２は不在であるか、またはアリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択されるもの、
を含む、上記方法。
【請求項４９】
前記化合物が、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＯＰＤが慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＯＰＤが咳をすることを含む、請求項４８〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＯＰＤが喘息である、請求項４８、４９または５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＯＰＤが、急性気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、および急性喘息からなる群より選択される、請求項４８、４９または５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記化合物が、迷走神経求心性神経末端上のＰ２Ｒにより仲介される迷走神経応答を阻害する能力を有する、請求項４８〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記迷走神経求心性神経末端がＣ線維末端である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記迷走神経求心性神経末端がＡ線維末端である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記Ｐ２ＲがＰ２Ｘ受容体である、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｐ２Ｘ受容体がＰ２Ｘ３受容体である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ｐ２Ｘ受容体がＰ２Ｘ２／３受容体である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記迷走神経応答がＡＴＰに対するものである、請求項５４〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記迷走神経応答がＡＴＰのアナログに対するものである、請求項５４〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＡＴＰのアナログがα，βｍＡＴＰである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＡＴＰのアナログがβ，γｍＡＴＰである、請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
前記迷走神経応答がＡｐ５Ａに対するものである、請求項５４〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記化合物の投与が肺内吸入によるものである、請求項４８〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記化合物の投与が静脈内ボーラス注射によるものである、請求項４８〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記化合物の投与経路が、経口、経皮、直腸内、膣内、鼻内、胃内、気管内、もしくは肺内、皮下、筋内、または腹腔内からなる群より選択される、請求項４８〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
１種以上の化合物を迷走神経感覚神経線維末端に接触させるステップを含む、肺迷走神経感覚神経線維末端上のＰ２Ｒの活性化を阻害する方法であって、各化合物は式（Ｉ）：
【化１】
2008507368.tif 000011
であるかまたはその製薬上許容される塩であり、
式中、
Ａ１およびＡ２はそれぞれ独立に、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、−ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択されるか；または
Ａ１およびＡ２は、それらが結合する炭素原子と共にイオウ原子を含有する五員複素環を形成しているが、ここで該五員複素環は任意によりメルカプトおよびオキソより選択される１個または２個の置換基で置換されており；
Ａ３はアルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルからなる群より選択され；
Ａ４、Ａ５、Ａ６およびＡ７はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、シアノ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、−ＮＲＥＲＦ、および（ＮＲＥＲＦ）カルボニルからなる群より選択され；
Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、−ＮＲＥＲＦ、（ＮＲＥＲＦ）カルボニル、およびオキソからなる群より選択され；
ＲＡおよびＲＢはそれぞれ独立に、水素、アルキル、およびシアノからなる群より選択され；
ＲＣは、水素およびアルキルからなる群より選択され；
ＲＤは、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ハロアルコキシ、およびハロアルキルからなる群より選択され；
ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立に、水素、アルキル、アルキルカルボニル、ホルミル、およびヒドロキシアルキルからなる群より選択され；
Ｌ１は、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＮに結合し、かつこの基の右端はＲ１と結合しており；
ｍは０〜１０の整数であり；
ｎは０〜１０の整数であり；
Ｒ１は、アリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択され；
Ｌ２は不在であるか、または共有結合、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｑ−、および−（ＣＨ２）ｐＣＨ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＲ１に結合し、かつこの基の右端はＲ２と結合しており；
ｐは０〜１０の整数であり；
ｑは０〜１０の整数であり；かつ
Ｒ２は不在であるか、またはアリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択される、
上記方法。
【請求項６９】
前記化合物が、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
Ｐ２Ｒの活性化を阻害するステップが、Ｐ２Ｒ活性化型カチオン流出入を阻害するステップを含む、請求項６８または６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記接触が、哺乳動物被験体体内でのものである、請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記哺乳動物被験体がヒト被験体である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記接触が、哺乳動物被験体に対して前記１種以上の化合物を含んでなる組成物を投与するステップを含む、請求項６８〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
前記組成物の投与が肺内吸入によるものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記組成物の投与が静脈内ボーラス注射によるものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記組成物の投与経路が、経口、経皮、直腸内、膣内、鼻内、胃内、気管内、もしくは肺内、皮下、筋内、または腹腔内からなる群より選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
前記哺乳動物被験体がＯＰＤである、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７８】
前記哺乳動物被験体が咳をしている、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＯＰＤが咳をすることを含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記ＯＰＤが慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項７７〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＯＰＤが喘息である、請求項７７〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＯＰＤが、急性気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、および急性喘息からなる群より選択される、請求項７７〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記接触をｉｎ ｖｉｔｒｏで行う、請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
前記肺迷走神経感覚神経線維がＣ線維である、請求項６８〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記肺迷走神経感覚神経線維がＡ線維である、請求項６８〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記Ｐ２ＲがＰ２Ｘ受容体である、請求項６８〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記Ｐ２Ｘ受容体がＰ２Ｘ３受容体である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記Ｐ２Ｘ受容体がＰ２Ｘ２／３受容体である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
Ｐ２ＲがＡＴＰにより活性化しうるものである、請求項６８〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
Ｐ２ＲがＡＴＰのアナログにより活性化しうるものである、請求項６８〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＡＴＰのアナログがα，βｍＡＴＰである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記ＡＴＰのアナログがβ，γｍＡＴＰである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記Ｐ２ＲがＡｐ５Ａにより活性化しうるものである、請求項６８〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺疾患に関し、より特定的には、肺疾患（たとえば咳または閉塞性肺疾患）の治療、さらには喘息や慢性閉塞性肺疾患のような肺疾患の診断、モニタリングおよび治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
閉塞性肺疾患（ＯＰＤ）や咳のような肺疾患は、依然として医学的にも経済的にも悲惨な状態にある。たとえば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、現在、米国で第４位の死亡原因であり、２０２０年には第３位になると予想される。推定で１０００万人の米国成人はＣＯＰＤを有し、有病率は上昇している。ＣＯＰＤの直接的および間接的な管理費は、毎年３２０億ドルを超える［Mapel (2004). Manag. Care Interface 17:61-6］。世界保健機関（ＷＨＯ）は、２０００年において全世界で２７４万人の死亡（2.74 deaths）がＣＯＰＤに起因すると推定した［Burney P. (2003) Eur. Respir. J. Suppl. 43:1s-44s］。したがって、ＣＯＰＤ、他のＯＰＤおよび咳を診断、モニタリングおよび治療する方法を開発することが急務となっている
【非特許文献１】Mapel (2004). Manag. Care Interface 17:61-6
【非特許文献２】Burney P. (2003) Eur. Respir. J. Suppl. 43:1s-44s
【発明の開示】
【０００３】
概要
本発明は、部分的には、（ｉ）アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）および関連化合物が、ＯＰＤ、ＯＰＤの症状、または咳に関連する迷走神経感覚神経末端を活性化すること、ならびに（ｉｉ）特定のＰ２−プリン受容体（Ｐ２Ｒ）アンタゴニストを用いてそのような活性化を効果的に阻害しうること、を見いだしたことに基づく。これらの知見は、ＯＰＤの治療の有効性をモニタリングしたり喘息とＣＯＰＤとを区別する試験を行ったりするための基礎となる。そのほかに、本発明は、ＯＰＤおよび咳の治療方法を特徴とする。
【０００４】
より特定的には、本発明は、診断方法を提供する。この方法は、（ａ）喘息または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）であることが疑われる被験体を特定すること；（ｂ）被験体に誘発化合物を投与すること；（ｃ）投与の前後での肺機能の変化を測定すること；（ｄ）肺機能の変化が（ｉ）喘息または（ｉｉ）ＣＯＰＤの対照被験体における肺機能の変化のどちらとより類似しているかを決定すること；および（ｅ）（１）被験体における肺機能の変化がＣＯＰＤの対照被験体における肺機能の変化よりも喘息の対照被験体における肺機能の変化に類似している場合に喘息の可能性があるものとして；または（２）被験体の肺機能の変化が喘息の対照被験体における肺機能の変化よりもＣＯＰＤの対照被験体における肺機能の変化に類似している場合にＣＯＰＤの可能性があるものとして；被験体を分類すること；を含む。肺機能の変化は、たとえば、努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）、比気道コンダクタンス（ｓＧａｗ）、ボルグスコア、機能的残気量（ＦＲＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、およびピーク呼気流速（ＰＥＦＲ）における任意に特定された変化を引き起こすために必要とされる誘発化合物の量の関数として、測定可能である。任意に特定された変化は、約１０％より大きい低下または増大でありうる。たとえば、ＦＥＶ１における任意に特定された低下は、たとえば、約２０％の低下でありうる。誘発化合物は、たとえば、アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）；またはＡＴＰのアナログ、たとえば、α，β−メチレンＡＴＰ（α，βｍＡＴＰ）；β，γ−メチレンＡＴＰ（β，γｍＡＴＰ）；もしくはジアデノシン五リン酸（Ａｐ５Ａ）などでありうる。ＡＴＰのアナログは、誘発物質活性を有する他のアナログを包含する。投与は、たとえば、肺内吸入によるものであるかまたは静脈内ボーラス注射によるものでありうる。
【０００５】
他の態様において、本発明は、治療方法を提供する。この治療方法は、（ａ）上述の診断方法を実施すること；および（ｂ）被験体の喘息またはＣＯＰＤを治療すること；を含む。治療は、２型プリン受容体（Ｐ２Ｒ）アンタゴニスト、たとえば、Ｐ２Ｙ受容体アンタゴニストおよび／またはＰ２Ｘ受容体アンタゴニストを被験体に投与することを含みうる。治療は、１種以上のコルチコステロイド、１種以上のβ−アドレナリン受容体アゴニスト、または１種以上の鎮咳薬を被験体に投与することを含みうる。本方法に有用な薬剤としては、たとえば、ピリドキサルリン酸−６−アゾフェニル−２’４’−ジスルホン酸（ＰＰＡＤＳ）；５−｛［３”−ジフェニルエーテル（１’，２’，３’，４’−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アミノ］カルボニル｝ベンゼン−１，２，４−トリカルボン酸；２’，３’−Ｏ−（４−ベンゾイルベンゾイル）−ＡＴＰ（ＢｚＡＴＰ）；テトラメチルピラジン（ＴＭＰ）；および２’，３’−Ｏ−２，４，６−トリニトロフェニル−ＡＴＰ（ＴＮＰ−ＡＴＰ）が挙げられる。
【０００６】
ＯＰＤの治療に有用な薬剤としては、式（Ｉ）：
【化１】
2008507368.tif 000002
【０００７】
で示される化合物またはその製薬上許容される塩を挙げることができる。式中、Ａ１およびＡ２はそれぞれ独立に、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、−ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルより選択されるか；またはＡ１およびＡ２は、それらが結合する炭素原子と共にイオウ原子を含有する五員複素環を形成しているが、ここで該五員複素環は任意によりメルカプトおよびオキソより選択される１個または２個の置換基で置換されており；Ａ３は、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルより選択され；Ａ４、Ａ５、Ａ６およびＡ７はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、シアノ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、−ＮＲＥＲＦ、および（ＮＲＥＲＦ）カルボニルより選択され；Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、−ＮＲＥＲＦ、（ＮＲＥＲＦ）カルボニル、およびオキソより選択され；ＲＡおよびＲＢはそれぞれ独立に、水素、アルキル、およびシアノより選択され；ＲＣは、水素およびアルキルより選択され；ＲＤは、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ハロアルコキシ、およびハロアルキルからなる群より選択され；ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立に、水素、アルキル、アルキルカルボニル、ホルミル、およびヒドロキシアルキルより選択され；Ｌ１は、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−より選択されるが、ここでこの基の左端はＮに結合し、かつこの基の右端はＲ１と結合しており；ｍは０〜１０の整数であり；ｎは０〜１０の整数であり；Ｒ１は、アリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択され；Ｌ２は、不在であるか、または共有結合、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｑ−、および−（ＣＨ２）ｐＣＨ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＲ１に結合し、かつこの基の右端はＲ２と結合しており；ｐは０〜１０の整数であり；ｑは０〜１０の整数であり；かつＲ２は、不在であるか、またはアリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環より選択される。
【０００８】
式（Ｉ）で示される化合物としては、たとえば、式（ＩＩ）：
【化２】
2008507368.tif 000003
【０００９】
を有する５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）を挙げることができる。
【００１０】
同様に本発明により具現化されるのは、喘息またはＣＯＰＤの治療の有効性を評価する方法である。この方法は、（ａ）上述の治療方法を実施すること；（ｂ）被験体に誘発化合物を投与すること；（ｃ）投与の前後での肺機能の変化を測定するかまたは少なくとも１種の症状の変化を検出すること；（ｄ）被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、治療を行う前に測定または検出された該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化に近いかどうかを決定すること；および（ｅ）被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状（at least symptom）の変化が、治療を行う前に測定または検出された該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化に近い場合に、治療を有効であると分類すること；を含む。
【００１１】
本発明の他の態様は、閉塞性肺疾患（ＯＰＤ）の治療の有効性を評価する方法である。この方法は、（ａ）ＯＰＤの治療がなされた被験体を特定すること；（ｂ）被験体に誘発化合物を投与すること；（ｃ）投与の前後での肺機能の変化を測定するかまたは少なくとも１種の症状の変化を検出すること；（ｄ）被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、ＯＰＤの治療の前に測定または検出された該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化に近いかどうかを決定すること；および（ｅ）被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化が、治療の前に測定または検出された該被験体における肺機能の変化または少なくとも１種の症状の変化よりも、対照正常被験体における肺機能の平均変化または少なくとも１種の症状の平均変化に近い場合に、治療を有効であると分類すること；を含む。肺機能の変化の測定、誘発化合物、および誘発化合物の投与経路は、診断方法に関連して上述したとおりでありうる。少なくとも１種の症状の変化は、たとえば、ボルグスコア；咳；胸の圧迫感；喉の圧迫感；喀痰；または喘鳴の変化でありうる。ＯＰＤは、たとえば、喘息、ＣＯＰＤ、または慢性的な咳でありうる。被験体は、治療方法に関連して先に挙げた治療のいずれかが施されたものでありうる。たとえば、被験体は、式（Ｉ）で示される１種以上の化合物、たとえば、式（ＩＩ）で示される化合物、すなわち、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）などが投与されたものでありうる。被験体は、たとえば、鎮咳薬で治療されたものでありうる。また、少なくとも１種の症状は、咳でありうる。咳の変化は、咳嗽を誘発するのに必要とされる誘発化合物の量の関数として測定可能である。
【００１２】
本発明の他の態様は、ＯＰＤまたは咳の治療方法である。この方法は、（ａ）ＯＰＤであるか、ＯＰＤに関連した１種以上の症状を有するか、または咳をしている哺乳動物被験体を特定するステップ；および式（Ｉ）で示される１種以上の化合物を含んでなる治療上有効な用量の医薬組成物を被験体に投与するステップ；を含む。化合物は、たとえば、式（ＩＩ）で示される化合物、すなわち、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）でありうる。ＯＰＤは、咳嗽を包含しうるか、またはたとえばＣＯＰＤおよび喘息でありうる。ＯＰＤはまた、急性気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、および急性喘息を包含しうる。また、症状は、たとえば咳でありうる。式（Ｉ）で示される１種以上の化合物、たとえば、式（ＩＩ）で示される化合物（すなわちＡ−３１７４９）は、迷走神経求心性神経末端上のＰ２Ｒにより媒介される迷走神経活性化を阻害する能力を有しうる。迷走神経求心性神経末端は、たとえば、Ｃ線維末端またはＡ線維末端でありうる。Ｐ２Ｒは、Ｐ２Ｘ受容体、たとえば、Ｐ２Ｘ３またはＰ２Ｘ２／３などでありうる。迷走神経活性化は、ＡＴＰまたはＡＴＰのアナログ、たとえば、α，βｍＡＴＰもしくはβ，γｍＡＴＰなどによるものでありうる。１種以上の化合物を含む医薬組成物は、肺内吸入または静脈内ボーラス注射により投与可能である。組成物はまた、次の経路：経口、経皮、直腸内、膣内、鼻内、眼内、胃内、気管内もしくは肺内、皮下、筋内、または腹腔内のいずれかを介して投与することも可能である。
【００１３】
本発明の他の態様は、肺迷走神経感覚神経線維上のＰ２Ｒの活性化を阻害する方法を包含する。この方法は、迷走神経感覚神経線維を１種以上の化合物（各化合物は式（Ｉ）で示される）に接触させることを含む。化合物は、たとえば、式（ＩＩ）で示される化合物、すなわち、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）でありうる。Ｐ２Ｒの活性化の阻害は、Ｐ２Ｒにより活性化されるカチオン流出入を阻害することを包含しうる。迷走神経感覚神経線維と組成物との接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでまたはたとえばヒトなどの哺乳動物被験体内でｉｎ ｖｉｖｏで行われうる。また、哺乳動物被験体に組成物を投与することを含みうる。哺乳動物被験体は、ＯＰＤおよび／または咳を有しうる。組成物は、ＯＰＤの治療方法に関連して上述したように投与可能である。ＯＰＤは、たとえば、ＣＯＰＤ、喘息、または咳を包含しうる。ＯＰＤはまた、急性気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、および急性喘息を包含しうる。迷走神経感覚神経線維は、Ｃ線維またはＡ線維でありうる。Ｐ２Ｒは、Ｐ２Ｘ受容体、たとえば、Ｐ２Ｘ３またはＰ２Ｘ２／３などでありうる。迷走神経活性化は、ＡＴＰまたはＡＴＰのアナログ、たとえば、α，βｍＡＴＰ、β，γｍＡＴＰ、もしくはＡｐ５Ａなどに応答するものでありうる。本発明の目的では、ＡＴＰのアナログは、誘発物質活性を有する。
【００１４】
とくに定義がないかぎり、本明細書中で使用される科学技術用語はすべて、本発明が関係する技術分野の当業者により一般に理解されるのと同一の意味を有する。矛盾を生じた場合には、定義を含む本文書に従うことになろう。好ましい方法および材料を以下に記載するが、本発明を実施または試験する際、本明細書に記載のものと類似したまたは等価な方法および材料を使用することが可能である。刊行物、特許出願、特許、および本明細書に記載の他の引用文献はすべて、それらの全体が参照により組み入れられるものとする。本明細書に開示される材料、方法、および実施例は、例示的なものにすぎず、それらに限定しようとするものではない。
【００１５】
本発明、たとえば、喘息とＣＯＰＤとを区別する試験、の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明から、図面から、および特許請求の範囲から、自明なものとなるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
詳細な説明
求心性神経情報を肺から脳に伝達する３つの主要な感覚経路、すなわち、Ｃ線維、緩徐適応性受容体（ＳＡＲ）含有線維、および迅速適応性受容体（ＲＡＲ）含有線維が存在する。Ｃ線維は、刺激されないかぎり静止状態にある無髄緩徐伝導性線維である。それらの末端は、化学的および機械的な刺激に応答する二モード受容体を含有する。ＳＡＲおよびＲＡＲを含有する線維は、各呼吸周期中に活性化される迅速伝導性有髄線維である。複数の内因性および外因性の化合物は、Ｃ線維およびＲＡＲ含有線維を刺激する。赤トウガラシ中の活性成分カプサイシンは、Ｃ線維を刺激するが、ＲＡＲ含有線維を刺激しない。なぜなら、後者は、カプサイシン受容体（バニロイド（valinoid）受容体、ＶＲ−１）が欠如しているからである。
【００１７】
アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）は、すべての生細胞に見いだされるプリンヌクレオチドであり、細胞代謝およびエネルギー過程で重要な役割を果たす。ＡＴＰは、生理学的および病態生理学的な条件下で細胞から放出され、細胞外ＡＴＰは、局所生理学的レギュレーターとして、さらには閉塞性気道疾患の病態生理で機構的役割を果たす内因性メディエーターとして作用する［Pelleg et al. (2002) Am. J. Ther. 9:454-464］。ＡＴＰは、樹状細胞、好酸球、およびマスト細胞に対して強力な効果を発揮する。たとえば、それは、ヒト肺マスト細胞からのヒスタミンおよび他のメディエーターのＩｇＥ媒介放出を促進する［Schulman et al. (1999) Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 20:530-537］。細胞外ＡＴＰはまた、肺内の迷走神経感覚（求心性）神経末端を刺激してニューロペプチドの放出を刺激することにより、神経原性の気管支収縮および炎症を悪化させる［Pelleg et al. (2002), 上掲; Schulman et al. (1999), 上掲; Katchanov (1998) Drug Dev. Res. 45:342-349］。喘息の患者は、吸入ＡＴＰに対して正常者よりも強い応答（すなわち気管支収縮）を呈し、両方のグループの被験体において、ＡＴＰは、メタコリンおよびヒスタミンよりも強力であることが明らかにされている［Pellegrino et al. (1996) J. Appl. Physiol. 81: 342-349］。
【００１８】
アデノシンは、ＡＴＰの酵素的分解の産物であるプリンヌクレオシドである。エアロゾル化アデノシンは、喘息被験体では気管支収縮を引き起こすが、健常被験体では引き起こさない［Cushley et al. (1983) Br. J. Clin. Pharmacol. 15:161-165］。喘息患者において気管支収縮を誘発する能力に関してアデノシンおよびアデノシン５’−一リン酸（ＡＭＰ）の用量−応答曲線が同一であるので［Mann et al. (1986) J. App. Physiol. 61:1667-1676］、それらは同一の経路により作用すると結論付けられている。ＡＭＰの作用は、おそらく、エクト酵素によるＡＭＰ分解により産生されるアデノシンにより媒介される。そのほか、ＡＭＰは、アデノシンよりもはるかに可溶性であるので、ＡＭＰは、臨床の場でアデノシンの代わりに使用されてきた。気道平滑筋細胞に及ぼすＡＭＰおよびアデノシンの効果は、マスト細胞およびこれらの細胞から放出される炎症性メディエーターにより媒介される。
【００１９】
細胞外ＡＴＰは、Ｐ２プリン受容体（Ｐ２Ｒ）として知られる細胞表面受容体、特定的にはＰ２ＸクラスのＰ２Ｒを活性化することにより、さまざまな組織および器官で多くの細胞型に影響を及ぼす。Ｐ２Ｒは、アデノシン受容体であるＰ１プリン受容体（Ｐ１Ｒ）とは異なる。Ｐ２Ｒは、２つのファミリー、すなわち、リガンド結合性二量体細胞膜貫通カチオンチャネルＰ２Ｘおよび七回細胞膜貫通ドメインＧタンパク質共役受容体Ｐ２Ｙに分けられる。８種のＰ２Ｙ（Ｐ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ２、Ｐ２Ｙ４、Ｐ２Ｙ６、Ｐ２Ｙ１１、Ｐ２Ｙ１２、Ｐ２Ｙ１３、およびＰ２Ｙ１４）、７種のホモ二量体Ｐ２Ｘ受容体サブタイプ（Ｐ２Ｘ１−７）、ならびに５種のＰ２Ｘヘテロ二量体受容体（Ｘ１／２、Ｘ２／３、Ｘ２／６、Ｘ１／５、およびＸ１／６）が同定され、クローニングされている。一般的には、Ｐ２Ｙ受容体を刺激すると細胞内シグナル伝達経路が活性化され、その結果、細胞内カルシウム（Ｃａ２＋）イオンのレベルが増大する。
【００２０】
エアロゾル化ＡＴＰは、健常被験体において気管支収縮を引き起こすが、ＡＭＰ／アデノシンは、引き起こさない。そのほか、ＡＴＰは、肺の迷走神経感覚神経末端（Ｃ線維さらにはＲＡＲ含有線維）を活性化するが、アデノシンは、活性化しない。ＡＴＰは、サブクラスのＰ２Ｘ受容体を介してこの活性を刺激する［Pelleg et al (1996) J. Physiol. 490(1):265-275；米国特許第５，８７４，４２０号；以下の実施例５および６］。
【００２１】
以下の実施例に記載される試験は、ＡＴＰに対する哺乳動物肺の応答とＡＭＰに対する応答との定性的な差、ひいてはＡＴＰに対する肺の応答とアデノシンに対する応答との差についてのさらなる証拠を提供する。これらの試験はまた、特定的にはＡＴＰに応答する迷走神経感覚神経末端上に局在化されたＰ２Ｒの活性化を選択的に阻害する化合物を使用することの論拠を提供する。重要なこととして、これらの試験は、哺乳動物被験体が喘息またはＣＯＰＤのいずれであるかを確定したり、喘息やＣＯＰＤのようなＯＰＤを治療したり、咳を治療したり、ＯＰＤの治療の有効性を評価したりする方法の基礎となる。本発明はまた、肺迷走神経感覚神経線維上のＰ２Ｒの活性化を阻害する方法を包含する。これらの方法について以下で説明する。
【００２２】
診断、治療、および治療の有効性の評価を行う方法
本発明には、（ａ）喘息とＣＯＰＤとを区別する方法；（ｂ）ＯＰＤの被験体を治療する方法；および（ｃ）特定の治療法の有効性を評価する方法；が包含される。治療方法および特定の治療の有効性の評価方法は、喘息とＣＯＰＤとを区別する１種以上の方法を最初に行うことを併用せずにまたは併用して実施可能である。そのほかに、治療の有効性の評価方法は、以下に記載の１種以上の治療方法または当技術分野で公知の任意の他の治療方法を実施した後で使用可能である。
【００２３】
診断方法
診断方法では、喘息またはＣＯＰＤであることが既知である被験体に誘発化合物を投与し、被験体における肺機能に及ぼす化合物の効果を測定する。これに関連して、「肺機能の測定」という用語は、好ましくは、肺機能を客観的に評価する試験（たとえば、スパイロメトリーまたはプレチスモグラフィー）を能動的に実施することを包含するものと解釈される。やや好ましい試験は、咳嗽、喀痰、胸の圧迫感、喉の炎症、喘鳴、またはボルグスコアのような肺の症状を検出することを含む。したがって、「肺機能の変化」の測定とは、上述の試験のいずれかにより測定される肺機能の変化を測定することを意味する。
【００２４】
有用な誘発化合物としては、ＡＴＰおよび関連化合物（アナログ）、たとえば、α，β−メチレン−ＡＴＰ（α，βｍＡＴＰ）；β，γ−メチレン−ＡＴＰ（β，γｍＡＴＰ）；２−メチルチオ−ＡＴＰ；およびジアデノシン五リン酸（Ａｐ５Ａ）が挙げられる。誘発化合物は、単独でまたは組み合わせて、たとえば、２、３、４、もしくは５種を組み合わせて、使用可能である。本明細書中で使用する場合、「誘発化合物」とは、哺乳動物被験体（たとえば、ヒト）に投与したときに肺機能の顕著な低下を引き起こす化合物のことである。誘発化合物は、たとえば、肺の迷走神経線維の末端上のＰ２Ｒ（たとえば、Ｐ２Ｘ２／３受容体）を刺激することにより、作用可能である。「肺機能の顕著な低下」とは、少なくとも５％（たとえば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％）の機能の低下を意味する。肺機能の低下は、たとえば、気管支収縮、咳嗽、喘鳴、または本明細書に挙げた症状のいずれかにより、実証可能である。
【００２５】
被験体は、喘息、ＣＯＰＤ、または慢性的な咳のようなＯＰＤに罹患しやすい任意の哺乳動物種、たとえば、ヒト、非ヒト霊長類（たとえば、サル、ゴリラ、およびヒヒ）、ウマ、ウシ属動物（たとえば、雌ウシ、種ウシ、および去勢ウシ）、ヒツジ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ラット、およびマウスでありうる。被験体は、好ましくは、ヒト患者である。
【００２６】
誘発化合物の投与経路は、化合物と、被験体の体内の化合物の作用部位（すなわち、肺）との接触を生じる任意の経路でありうる。適切な投与経路はとしては、肺内（たとえば、吸入）、経口、局所、下皮、皮内、皮下、経皮、静脈内（たとえば、静脈内ボーラス）、筋内、および非口腔内の投与方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない。投与は、好ましくは、肺内に、たとえば、エアロゾル化肺内パフとして施される。
【００２７】
誘発化合物の用量は、約０．１μｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは約１０μｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろうと考えられる。誘発化合物を含有する医薬組成物は、一回用量、複数回用量で、または持続放出により、投与可能である。誘発化合物は、ボーラスとして投与可能である。当業者であれば、本明細書に記載の教示および当業者の個人的知識に基づいて通常の実験により剤形および量を決定できるであろう。
【００２８】
投与経路が肺内である場合、１種以上の誘発化合物を含有する組成物は、当技術分野で公知のさまざまな吸入器のいずれか、たとえば、携帯型噴射剤利用吸入器を用いて、投与可能である。他の選択肢として、たとえば、コンプレッサーに結合されたネブライザーにより、微細スプレー状組成物の形態で投与可能である。
【００２９】
誘発化合物組成物中で、化合物は、たとえば、溶液または懸濁液の形態で、溶媒中に分散可能である。それらは、適切な生理溶液中、たとえば、生理食塩水中に分散可能である。組成物はまた、１種以上の賦形剤を含有可能である。賦形剤は、当技術分野で周知であり、例としては、緩衝剤（たとえば、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、および重炭酸緩衝剤）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（たとえば、血清アルブミン）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム、リポソーム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、またはプロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールのようなグリコールが挙げられる。溶液または懸濁液は、リポソーム中または生分解性マイクロスフェア中にカプセル化可能である。好適な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン、およびクロロブタノールが挙げられる。医薬製剤は、当技術分野で公知である。たとえば、Gennaro Alphonso（編）, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第１８版, (1990) Mack Publishing Company, Easton, PAを参照されたい。
【００３０】
本発明に係る診断法では、肺機能に及ぼす化合物の効果は、当技術分野で公知のさまざまな方法のいずれかにより測定可能である。肺機能は、誘発化合物の投与前および投与後、任意により投与中に測定される。それは、誘発化合物の投与直後または投与から顕著な時間が経過した後、測定可能である。したがって、肺機能は、必要に応じて、誘発化合物の投与の１もしくは２秒後〜数ヶ月後（たとえば、１０秒後、２０秒後、３０秒後、４５秒後、１分後、２分後、５分後、１０分後、２０分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、３時間後、５時間後、８時間後、１０時間後、１２時間後、１５時間後、１８時間後、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、１０日後、２週間後、３週間後、１ヵ月後、２ヶ月後、３ヶ月後、４ヶ月後、５ヶ月後、または６ヶ月後）に測定可能である。
【００３１】
肺機能の測定は、定量的、半定量的、または定性的でありうる。したがって、それは、たとえば、離散値として測定可能である。他の選択肢として、それは、当技術分野で公知のさまざまな半定量的／定性的システムのいずれかを用いて評価し表現することが可能である。したがって、肺機能は、たとえば、（ａ）「優」、「良」、「満足」、「不満足」、および／もしくは「劣」の１つ以上；（ｂ）「極高」、「高」、「並」、「低」、および／もしくは「極低」の１つ以上；または（ｃ）「＋＋＋＋」、「＋＋＋」、「＋＋」、「＋」、「＋／−」、および／もしくは「−」の１つ以上；で表現可能である。
【００３２】
次に、誘発化合物の作用に基づく被験体における肺機能のレベルの変化は、喘息またはＣＯＰＤのいずれかの対照患者集団から得られる肺機能のレベルの平均変化と比較される。被験体における肺機能のレベルの変化が、対照ＣＯＰＤ患者における肺機能のレベルの平均変化よりも対照喘息患者における肺機能のレベルの平均変化に近い場合には、被験体は、喘息である可能性がある。一方、被験体における肺機能のレベルの変化が、対照喘息患者における肺機能のレベルの平均変化よりも対照ＣＯＰＤ患者における肺機能のレベルの平均変化に近い場合には、被験体は、ＣＯＰＤである可能性がある。
【００３３】
したがって、たとえば、１秒間の努力呼気肺活量（ＦＥＶ１；最大吸気後の最大呼気の最初の１秒間で呼出された量）のレベルに及ぼす誘発化合物の効果は、当技術分野で公知の任意の手段により試験可能である。たとえば、肺機能の変化は、ＦＥＶ１の任意に特定された低下を引き起こすのに必要とされる誘発化合物の濃度（または量）として表すことが可能である（たとえば、実施例２参照）。ＦＥＶ１の任意に特定された低下は、たとえば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％の低下でありうる。これとの関連で使用する場合、「約」とは、ＦＥＶ１の任意に特定された低下が指定のパーセントから１〜４パーセントポイント変動しうることを意味する。したがって、たとえば、約２０％の低下は、１６％〜２４％の低下でありうる。
【００３４】
他の選択肢として、たとえば、ＦＥＶ１レベルに及ぼす誘発化合物の一定用量の効果を測定することが可能である。そのほかに、ＦＶＣ（努力肺活量；努力動作時に呼出しうる最大空気量）のパーセントとしてＦＥＶ１値を表すことが可能である。
【００３５】
肺機能を示す他のパラメーター、たとえば、比気道コンダクタンス（ｓＧａｗ）、ボルグスコア、機能的残気量（ＦＲＣ）、努力呼気流量（ＦＥＦ）、およびピーク呼気流速（ＰＥＦＲ）は、第１の手法（対象のパラメーターのレベルの任意の変化を引き起こすのに必要な誘発化合物の量を測定する）または上述の第２の手法（対象のパラメーターのレベルに及ぼす一定用量の誘発化合物の効果を測定する）のいずれかを用いて、利用可能である。当業者は、これらのパラメーターの測定方法に精通している。変化は、測定されるパラメーターに応じて、低下または増大である。パラメーターの任意に特定された変化は、たとえば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％の変化でありうる。
【００３６】
治療方法
治療方法は、診断方法で列挙された哺乳動物被験体のいずれかにおいて、咳またはＯＰＤ、たとえば、喘息、ＣＯＰＤ、または慢性的な咳を治療する任意の方法でありうる。有用な治療薬としては、たとえば、経口および／または吸入コルチコステロイド、βアドレナリン受容体アゴニスト、抗コリン作動薬、ロイコトリエンアンタゴニスト、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）に特異的な抗体（たとえば、ポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体、たとえば、ヒト化モノクローナル抗体）、チロシンキナーゼ阻害薬、テオフィリン、または鎮咳薬が挙げられる［Tamul et al. (2004) Crit. Care. Med. 32 (4 Suppl):S137-S145; Frew (2004) Clin. Allergy Immunol. 18:561-566; Allen-Ramey (2004) Ann. Epidemiol. 14:161-167; Wong et al. (2004) Biochim. Biophys. Acta. 1697:53-69; Hansel et al. (2004) Drugs Today (Barc) 40:55-69; Vignola (2003) Drugs.63 (Suppl 2):35-51; Creticoa Drugs 63 (Suppl 2):1-20］。それらはまた、たとえば、咳またはＯＰＤ、たとえば、喘息、ＣＯＰＤ、または慢性的な咳の被験体にＰ２−プリン受容体（Ｐ２Ｒ）アンタゴニストを投与する方法を包含する。
【００３７】
本明細書中で使用する場合、「Ｐ２Ｒアンタゴニスト」という用語は、（ａ）Ｐ２Ｒを発現する細胞のＰ２Ｒアゴニストによる活性化を阻害する薬剤、または（ｂ）Ｐ２Ｒを発現する細胞の活動を阻害する薬剤を包含する。そのようなＰ２Ｒアンタゴニストは、関連するアゴニストのＰ２Ｒでの結合部位に結合することによりＰ２Ｒへのアゴニストの結合を完全にまたは実質的に阻害することによって、作用することが可能であるか、またはそれらは、アゴニストのＰ２Ｒでの結合部位以外の部位で結合して、Ｐ２Ｒへのアゴニストの結合が完全には阻害されないにしても実質的に阻害されるようにＰ２Ｒのコンホメーション変化を引き起こすことによって、アロステリックに作用することが可能である。他の選択肢として、Ｐ２Ｒアンタゴニストは、アゴニスト結合部位または別の部位でＰ２Ｒに結合して阻害シグナルを細胞に送達することによって、Ｐ２Ｒを発現する細胞の活動を阻害することが可能である。他の選択肢として、Ｐ２Ｒアンタゴニストは、Ｐ２Ｒにより開始される関連するシグナル伝達の１つ以上の過程を妨害することによって、Ｐ２Ｒの下流の部位で作用することが可能である。
【００３８】
本発明に有用なＰ２Ｒアンタゴニストとしては、Ｐ２Ｘ受容体アンタゴニストおよびＰ２Ｙ受容体アンタゴニストが挙げられる。Ｐ２Ｘ阻害薬の例としては、たとえば、ピリドキサルリン酸−６−アゾフェニル−２’４’−ジスルホン酸（ＰＰＡＤＳ）；５−｛［３”−ジフェニルエーテル（１’，２’，３’，４’−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アミノ］カルボニル｝ベンゼン−１，２，４−トリカルボン酸；２’，３’−Ｏ−（４−ベンゾイルベンゾイル）−ＡＴＰ（ＢｚＡＴＰ）；テトラメチルピラジン（ＴＭＰ）；２’，３’−Ｏ−２，４，６−トリニトロフェニル−ＡＴＰ（ＴＮＰ−ＡＴＰ）が挙げられる。重要なこととして、ＰＰＡＤＳは、ＡＴＰをイヌに投与することにより誘導される迷走神経活動電位の数を減少させることが明らかにされた（米国特許第５，８７４，４２０号（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるものとする）を参照されたい）。
【００３９】
Ｐ２Ｙ受容体アンタゴニストはまた、喘息、ＣＯＰＤ、および／または慢性的な咳を治療するのに有用でありうる。たとえば、Ｎ６−メチル−２’−デオキシアデノシン３’，５’−二リン酸、β，γ−イミド−ＡＴＰ、およびジアデノシン−ｎ（４〜６）−リン酸は、Ｐ２Ｙ１のアンタゴニストである。ＡＴＰは、Ｐ２Ｙ４のアンタゴニストであり、化合物ＡＲ−Ｃ６９９３１ＭＸ（Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）およびＡＲ−６６０９６（Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）は、Ｐ２Ｙ１２受容体の強力なアンタゴニストである［Shaver SR(2001) Curr. Opin. Drug Disc. Dev. 4:665-70］。化合物２，２’−ピリジルイサトゲントシレート（ＰＩＴ）もまた、Ｐ２Ｙ受容体のアンタゴニストおよびアロステリック改変剤である［Spedding (2000) J. Auton. Nerv. Sys. 81:225-7］。ＩｇＥにより活性化される肺マスト細胞によるヒスタミン放出を促進するＡＴＰの先に挙げた能力は、Ｐ２Ｙ受容体により媒介されるので、Ｐ２Ｙ受容体アンタゴニストは、喘息の治療にとくに有効である可能性がある。
【００４０】
ＯＰＤまたは咳を治療するうえで同様に興味深いのは、Ｐ２Ｒの特定の非ヌクレオチドアンタゴニストである。たとえば、Ｐ２Ｘ３およびＰ２Ｘ２／３受容体をブロッキングするために高い親和性および選択性を有して神経障害性および炎症性の動物疼痛モデルにおいて痛覚を用量依存的に減少させる非ヌクレオチドアンタゴニストのファミリー（たとえば、Jarvis et al. (2002) PNAS. 99(26):17179-17184および米国特許第６，８３１，１９３Ｂ２号（いずれも参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられるものとする）を参照されたい）は、とくに興味深い。これらの化合物のうちの１つであるＡ−３１７４９１は、α，βｍＡＴＰにより活性化されるＣ線維およびＡ線維の迷走神経感覚神経応答を阻害するのにきわめて有効であることが確認された（以下の実施例６を参照されたい）。
【００４１】
とくに興味深いのは、Ｐ２Ｘ３およびＰ２Ｘ２／３受容体アンタゴニストである。そのような化合物の例は、米国特許第６，８３１，１９３号に記載されるものであり、式（Ｉ）：
【化３】
2008507368.tif 000004
【００４２】
で示される化合物またはその製薬上許容される塩である。式中、Ａ１およびＡ２はそれぞれ独立に、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、−ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルより選択されるか；またはＡ１およびＡ２は、それらが結合する炭素原子と共にイオウ原子を含有する五員複素環を形成しているが、ここで該五員複素環は任意によりメルカプトおよびオキソより選択される１個または２個の置換基で置換されており；Ａ３は、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲＡＲＢ）カルボニル、ＮＲＣＳ（Ｏ）２ＲＤ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、およびテトラゾリルより選択され；Ａ４、Ａ５、Ａ６およびＡ７はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、シアノ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、−ＮＲＥＲＦ、および（ＮＲＥＲＦ）カルボニルより選択され；Ａ８、Ａ９、Ａ１０およびＡ１１はそれぞれ独立に、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキニル、アリール、カルボキシ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、−ＮＲＥＲＦ、（ＮＲＥＲＦ）カルボニル、およびオキソより選択され；ＲＡおよびＲＢはそれぞれ独立に、水素、アルキル、およびシアノより選択され；ＲＣは、水素およびアルキルより選択され；ＲＤは、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、ハロアルコキシ、およびハロアルキルからなる群より選択され；ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立に、水素、アルキル、アルキルカルボニル、ホルミル、およびヒドロキシアルキルより選択され；Ｌ１は、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ−、および−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−より選択されるが、ここでこの基の左端はＮに結合し、かつこの基の右端はＲ１と結合しており；ｍは０〜１０の整数であり；ｎは０〜１０の整数であり；Ｒ１は、アリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環からなる群より選択され；Ｌ２は、不在であるか、または共有結合、アルケニレン、アルキレン、アルキニレン、−（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＳ（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｑ−、および−（ＣＨ２）ｐＣＨ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｑ−からなる群より選択されるが、ここでこの基の左端はＲ１に結合し、かつこの基の右端はＲ２と結合しており；ｐは０〜１０の整数であり；ｑは０〜１０の整数であり；かつＲ２は、不在であるか、またはアリール、シクロアルケニル、シクロアルキル、および複素環より選択される。
【００４３】
式（Ｉ）で示される化合物に関連して以上で（ならびに本明細書および添付の特許請求の範囲を通して）使用される化学命名法は、米国特許第６，８３１，１９３Ｂ２号（その全体が本明細書に組み入れられるものとする）で、たとえば、第１８欄の第５７行〜第２４欄の第２２行で使用されるものである。
【００４４】
式（Ｉ）で示される化合物としては、たとえば、式（ＩＩ）で示される化合物、すなわち、５−（｛（３−フェノキシベンジル）［（１Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフタレニル］アミノ｝カルボニル）−１，２，４−ベンゼントリカルボン酸（Ａ−３１７４９１）：
【化４】
2008507368.tif 000005
【００４５】
が挙げられる。
【００４６】
本発明に係るこれらの方法に有用である式（Ｉ）で示される追加の化合物は、米国特許第６，８３１，１９３Ｂ２号（その開示内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられるものとする）に列挙されている。
【００４７】
治療薬は、単独でまたは組み合わせて、たとえば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、１８、２０、もしくは２５種を組み合わせて、投与可能である。被験体、投与経路、および治療方法に使用するための薬剤組成物（たとえば、医薬組成物）の処方は、診断方法（上記参照）のときと同一である。
【００４８】
たとえば、医薬組成物は、肺内に（たとえば、吸入により）、経口的に、経直腸的に、非経口的に、膣内に、腹腔内に、局所的に（粉末剤、軟膏剤、もしくは滴剤として）、頬腔内に、または経口スプレーもしくは経鼻スプレーとして、投与可能である。非経口投与としては、静脈内、筋内、腹腔内、胸骨内、皮下、および関節内の注射および注入が挙げられうる。組成物の経口投与は、固体または液体の製剤を含む。組成物の固体投与は、たとえば、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、および顆粒剤を含み、一方、液体投与は、エマルジョン剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤を含みうる。
【００４９】
薬剤を含有する医薬組成物は、粉末剤、スプレー剤、軟膏剤、および吸入剤の形態で投与可能である。医薬組成物の１種以上の薬剤は、製薬上許容される担体および任意の必要とされる保存剤、緩衝剤、または噴射剤と無菌条件下で混合可能である。医薬組成物はまた、１種以上の医薬賦形剤を含有可能である。そのような組成物では、化合物は、たとえば、溶液または懸濁液の形態で、溶媒中に分散可能である。医薬賦形剤は、当技術分野で周知であり、例としては、緩衝剤（たとえば、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、および重炭酸緩衝剤）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（たとえば、血清アルブミン）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、塩化ナトリウム、リポソーム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、またはプロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールのようなグリコールが挙げられる。
【００５０】
上述の医薬組成物の「治療上有効な用量」は、特定の被験体で所望の治療応答を達成するのに有効な量の活性化合物が取得されるように投与用量を変化させることにより決定可能である。所望の治療効果は、たとえば、本発明に記述される１種以上の薬剤による治療の施された被験体におけるＯＰＤ、ＯＰＤに関連する症状、もしくは咳の重症度の低減または完全な根絶でありうる。選択される用量は、特定の化合物の活性、投与経路、治療されるＯＰＤまたは咳の症状の重症度、治療を受ける被験体の状態および既往歴、治療される被験体の年齢、体重、全般的健康状態、性別、および食事、治療の継続期間、利用される特定の化合物と組み合わせてもしくは同時に使用される薬物ならびに医学および獣医学の分野で公知であったものをはじめとするさまざまな因子に依存するであろう。治療方法で使用される治療薬の用量は、約０．１μｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは約１０μｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内であろうと考えられる。状況により、一日用量を、たとえば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４回、もしくはそれ以上の回数に分けて投与して送達することが必要になることもある。しかしながら、被験体は必ずしも薬剤を毎日摂取する必要があるとは限らないであろう。２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、１週間に１回、１０日に１回、２週間に１回、３週間に１回、または１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、もしくは３ヶ月に１回、さらには６ヶ月に１回だけ薬剤を投与することが必要になることもある。医薬組成物は、一回用量、分割用量で、または持続放出により、投与可能である。当業者であれば、通常の実験により剤形、量、および投与頻度を決定できるであろう。
【００５１】
本明細書中で使用する場合、「治療薬」である薬剤は、疾患の症状の完全な消失または疾患の症状の重症度の減少を引き起こす薬剤である。「防止」とは、疾患（たとえば、ＣＯＰＤ、喘息、または咳）の症状が本質的に不在であることを意味する。本明細書中で使用する場合、「予防」とは、疾患の症状の完全な防止、疾患の症状の出現の遅延、または後続的に現れる疾患症状の重症度の減少を意味する。
【００５２】
本文書に記載されているすべての治療方法に有用である治療剤は、咳またはＯＰＤ、たとえば、喘息、ＣＯＰＤ、慢性的な咳、または本明細書中に開示される任意の他の病理学的状態を治療するための医薬の製造に使用可能である。
【００５３】
Ｐ２Ｒの活性化を阻害する方法
本発明はまた、肺迷走神経感覚神経線維上のＰ２Ｒの活性化を阻害する方法を包含する。この方法は、１種以上の上述のＰ２Ｒアンタゴニスト（たとえば、式（Ｉ）で示される化合物）に迷走神経感覚神経線維を接触させること（たとえば、Ｐ２Ｒを接触させることによる）を包含する。接触は、哺乳動物被験体中、たとえば、診断方法に関連して上述したいずれかの被験体中で行いうる。そのようなｉｎ ｖｉｖｏ法では、Ｐ２Ｒアンタゴニストを含有する組成物、そのような組成物の処方、ならびに組成物の投与の経路および頻度は、治療方法に関して上述したものと同一である。迷走神経感覚神経線維を上述の化合物と接触させる哺乳動物被験体は、ＯＰＤ、ＯＰＤに関連する症状、または咳を有しうる。ＯＰＤは、たとえば、ＣＯＰＤ、喘息、急性気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、および急性喘息でありうる。また症状としては、たとえば、咳嗽、息切れ、および喘鳴が挙げられる。Ｐ２Ｒは、本明細書に挙げたいずれか（たとえば、Ｐ２Ｘ２／３受容体）でありうる。
【００５４】
肺迷走神経感覚神経線維上のＰ２Ｒの活性化を阻害する方法はまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法でありうる。本方法のｉｎ ｖｉｔｒｏ適用は、神経の活動、迷走神経活動電位および求心性神経情報伝達の開始の機序、ならびにＰ２Ｒの活性化および／またはシグナリングの機序に関する基礎科学研究に有用でありうる。ｉｎ ｖｉｔｒｏ法はまた、肺迷走神経感覚線維上のＰ２Ｒの活性化を阻害する能力に関する他の化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングまたは試験における「陽性対照」になりうる。本発明に係るｉｎ ｖｉｔｒｏ法では、１種以上の阻害剤を単離された神経線維に直接適用することが可能である。したがって、たとえば、実施例６に記載される標本のように適切な哺乳動物被験体から取得されるｉｎ ｖｉｔｒｏ灌流神経・肺標本の気管または肺動脈を介して、たとえば、１種以上の薬剤を注射または注入することが可能である。
【００５５】
治療の有効性を評価する方法
ＯＰＤの治療の有効性を評価する方法は、定義上、関連するＯＰＤの治療に準拠する。被験体は、本明細書中に列挙されたいずれかでありうる。また、ＯＰＤは、任意のＯＰＤ、たとえば、喘息、ＣＯＰＤ、または慢性的な咳でありうる。そのような治療は、上述のいずれかでありうる。有効性の評価は、治療を施してから１分〜１年以内で、たとえば、治療から１分〜１時間以内、１時間〜２４時間以内、１日〜１週間以内、１週間〜１ヶ月以内、１ヶ月〜６ヶ月以内、または６ヶ月〜１年以内で、実施可能である。評価は、１回で行うか、または直前に列挙されたいずれかの時間間隔により隔てられた複数回で行うことが可能である。
【００５６】
診断方法に関連して上述したように、１種以上の上述の誘発化合物を被験体に投与する。次に、肺機能（診断方法に関連して述べた）の決定および／あるいは症状（たとえば、ボルグスコア、咳、喀痰、喘鳴、胸の圧迫感、もしくは喉の炎症）または誘発化合物の作用に基づくこれらのいずれかの症状の変化の決定を行う。次に、被験体レベルを複数の適切な対照正常被験体から得られた平均レベルと比較する。本明細書中で使用する場合、「対照正常被験体」とは、被験体と同一生物種でありかつＯＰＤでない被験体のことである。適切な対照正常被験体は、他のいかなる特性をも問わずこの定義に包含される任意の被験体でありうる。他の選択肢として、たとえば、年齢、性別、および喫煙状態のような他の特性に基づいて、対照正常被験体をサブグループに分類することが可能である。したがって、たとえば、被験体が喫煙者である場合、対照正常被験体は、ＯＰＤでない喫煙者でありうる。同様に、被験体が非喫煙者である場合、対照正常被験体は、ＯＰＤでない非喫煙者でありうる。必要に応じて、対照正常被験体を、たとえば、重度、軽度、長期、および／または短期の喫煙者にさらに細分することが可能である。
【００５７】
被験体から取得されたレベルが、関連するＯＰＤの被験体から得られた平均値の方向に平均対照正常レベルから顕著に外れるのであれば、関連する治療によりＯＰＤの症状が除去されなかったことが示唆される。そのような知見から、被験体の予後不良および／または被験体のさらなる治療の必要性を示すことが可能である。一方、被験体から得られたレベルが、治療前に被験体から得られたレベルよりも平均正常対照レベルに近いかまたは平均正常対照レベルとの有意差がみられないのであれば、治療がそれぞれ部分的に有効または完全に有効であったことが示唆されよう。
【００５８】
代替的または追加的に、「治療後」レベルと比較される対照レベル（肺機能または咳のような症状の対照レベル）は、治療前の対象となる被験体のレベルでありうる。したがって、たとえば、咳を抑制する薬剤（すなわち、鎮咳薬）で治療された被験体は、咳を引き起こす誘発物質の相対能力に関して治療の前後で試験可能である。そのような試験は、たとえば、実施例２に記載したのと類似の試験でありうる。咳が起こるまで漸増濃度の誘発物質を被験体に投与可能である。治療前よりも治療後のほうが高い濃度の誘発物質が咳の誘発に必要とされるのであれば、治療が有効であったと結論付けることが可能である。一方、治療前と治療後で同一の濃度または治療前よりも治療後のほうが低い濃度の誘発物質が咳の誘発に必要とされるのであれば、治療が有効でなく有害である可能性があると結論付けることが可能である。
【００５９】
肺機能の測定および症状の評価は、定量的、半定量的、または定性的でありうる（診断方法の項を参照されたい）。さらに、症状の評価は、関連する症状の「存在」または「不在」に関するものでありうる。
【００６０】
以下の実施例を用いて本発明について説明するが、本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００６１】
材料および方法
実施例２〜４に記載の臨床試験における患者
健常非喫煙者（年齢４１±３歳、ｎ＝１０、男性６名）、間欠性喘息患者（年齢３９±３歳、ｎ＝１０、男性７名）、健常現喫煙者（年齢４０±４歳、ｎ＝７、男性５名）、ＣＯＰＤを発症するリスクのある喫煙者（年齢５０±４歳、ｎ＝７、男性４名）、および軽度〜中等度ＣＯＰＤ患者（年齢５８±４歳、ｎ＝７、男性４名、軽度２名、および中等度５名）をこの試験に組み入れた（表１）。
【表１】
2008507368.tif 000006
【００６２】
健常な非喫煙者および喫煙者は、いかなる呼吸器症状の病歴も呼吸器感染の病歴も有しておらず、可逆性（reversibility）のない正常な肺機能を有していた。喫煙被験体は、＞１０タバコパック・年（すなわち、１日１パック超で１０年間）の喫煙歴を有していた。ＣＯＰＤおよびリスク喫煙者の診断は、ＧＯＬＤガイドライン［Pauwels et al. (2001) Am. J. Respir. Crit Care Med. 163:1256-1276］に準拠した。また、喘息患者を規定するために、ＧＩＮＡガイドライン［Liard et al. (2000) Eur. J. Respir. 16:615-620］を使用した。喘息およびＣＯＰＤの患者は、臨床的に安定しており、症状や投薬の変化はなく、気道感染はなく、かつ過去４週間わたりステロイドは使用されなかった。
【００６３】
試験は、the Royal Brompton Hospital and Harefield NHS Trust, London, Englandの倫理委員会により承認され、被験体はすべて、書面によるインフォームドコンセントを提出した。
【００６４】
実施例２〜４に記載の臨床試験のデザイン
実施例２〜４に記載の臨床試験は、無作為方式、二重盲検方式、交差方式、かつ比較対照方式とした。各被験体は、検査室に３回通った。初期スクリーニングのための通院時の手順は、試験に関する情報の取得ならびに以下の順序のいくつかの検査：病歴、肺機能、可逆性、および皮膚プリック試験を含んでいた。２〜７日間の間隔の２回目および３回目の通院では、被験体は、無作為方式でＡＴＰまたはＡＭＰのいずれかのチャレンジを受け、試験の終了までに各患者が両方の化合物で試験されるようにした。チャレンジの前、直後、および３０分後、肺機能と呼吸困難に関するボルグスコアとを測定し、呼吸困難以外の症状を記録した。
【００６５】
皮膚プリック試験
実施例２〜４に記載の臨床試験のすべての被験体で、４種の一般的な空中アレルゲン（ハウスダストダニ、花粉、ネコの毛、およびアスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus fumigatus）、ならびに陰性対照および陽性対照；ＳｏｌｕｐｒｉｃｋＴＭ， ALK-Abello A/S, Hoersholm, Denmarkを使用）に対する皮膚感受性を調べた。１５分後に膨疹サイズを測定し、陰性対照よりも３ｍｍ大きい少なくとも１個の膨疹が存在した場合、陽性反応と記録した。
【００６６】
ＡＴＰ／ＡＭＰチャレンジ前の肺機能試験の評価
実施例２〜４に記載の臨床試験において、乾式肺活量計（Vitalograph Ltd., Buckingham, England）を用いて肺活量試験を行い、３回の呼気動作の最良値をリットルおよび予測値に対するパーセントとして表した。次に、スペーサーを介して定量噴霧式吸入器により被験体にサルブタモール（２００μｇ）を投与して、１５分後に肺機能測定を反復し；２００ｍｌ超かつ１２％超のＦＥＶ１の増大は、可逆性であるとみなした［Pauwels et al., 上掲］。
【００６７】
ボルグスコア
実施例２〜４に記載の臨床試験において呼吸困難を定量化するために使用した改変ボルグ尺度は、息切れの程度を記述する用語を０〜１０の数に割り振ったカテゴリー尺度であった。息切れの間隔を最も適切に記述する用語に対応する数を選択するように被験体に依頼した。チャレンジの前後のボルグスコアの差であるΔＢｏｒｇとして呼吸困難の変化を表した［Rutgers et al. (2000) Eur. Respir. J. 16:486-490; Burdon et al. (1982) Am. Rev. Respir. Dis. 126:825-828］。ボルグスコアの評価に使用される用語および結び付けられる数は、次のとおりである：０，「まったくなし」；０．５，「きわめてわずか」；１，「非常にわずか」；２，「わずか」；３，「中程度」；４，「いくらかひどい」；５，「ひどい」；７，「非常にひどい」；９，「きわめてひどい」（ほぼ最大）；および１０，「最大」［Burdon et al. (1982)］。
【００６８】
吸入チャレンジ試験
実施例２〜４に記載の試験のために、ＡＴＰでは０．２２７〜９２９μｍｏｌ／ｍｌおよびＡＭＰでは０．１３８〜１１５２μｍｏｌ／ｍｌの範囲内の倍加濃度を作製するように、ＡＴＰおよびＡＭＰ（Sigma, Gillingham, Dorset, England）を通常の生理食塩溶液に新たに溶解させ、ただちに気管支チャレンジに使用した。吸入１回あたり１０μｌの排出量で呼吸作動式薬量計（Mefar, Bovezzo, Italy）を用いて溶液を投与した［Prieto et al. (2003) Chest 123:993-997］。被験体は、ノーズクリップを着用した状態で、５回の呼吸で通常生理食塩水を吸入し（マウスピースを介して）、続いて、連続倍加濃度のＡＴＰまたはＡＭＰを機能的残気量から全肺気量まで吸入した。通常生理食塩水を５回吸入した２分後から、生理食塩水の吸入後に記録された値の２０％以上のＦＥＶ１低下を生じるまで、または最大濃度のＡＴＰもしくはＡＭＰのいずれかを吸入するまで、ＦＥＶ１を測定した。対数用量応答曲線を補間することにより、ＦＥＶ１の２０％低下を引き起こす誘発用量（ＰＤ２０）を計算した。
【００６９】
統計的手法
実施例２〜４に記載の分析から得られたすべてのデータをソフトウェアパッケージ（GraphPad Prism Software, Inc., USA）で処理した。スチューデントのｔ検定によりグループ間の差の有意性を評価し、カイ二乗検定によりカテゴリー変数の分析結果を検査した。ピアソン相関係数および線形回帰分析を用いて、ＦＥＶ１の減少パーセントとボルグスコアとの関係を分析した。ＡＴＰおよびＡＭＰに対するＰＤ２０値を対数変換してそれらの分布を正規化し、幾何平均として表示した。すべての他の数値変数を平均±ＳＥＭとして表し、有意性をｐ＜０．０５として規定した。
【００７０】
イヌ迷走神経活性化実験
実施例５に記載の実験は、基本的には、Pellegら [(1996) J. Physiol. 490(1):265-275]および米国特許第５，８７４，４２０号（いずれも参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられるものとする）に記載されているように行った。簡潔に述べると、麻酔（ペントバルビトンナトリウム、３０ｍｇ・ｋｇ−１＋３ｍｇ・ｋｇ−１・ｈ−１、静脈内）の施されたイヌに人工呼吸器で室内空気を人為的に供給しながら行った。米国特許第５，８７４，４２０号に記載されているように、動脈血ｐＨ、ＰＯ２、ＰＣＯ２、体温を維持した。生理食塩水および維持用量の麻酔薬を投与するために、末梢静脈にカニューレを挿入した。試験溶液を投与するために、大腿静脈および左心耳を介してカテーテルを挿入し、右心房および左心房に配置した。縦方向胸骨切開術により胸部を切開した。皮膚を頸部中央で縦方向に切開して頸筋と結合組織とを注意深く切断することにより、右頸部迷走神経交感神経幹を露出させた。切開された皮膚の縁部を持ち上げて固定することによりトラフを形成し、トラフに温めた（約３７℃の）鉱油を充填した。迷走神経交感神経幹の一部を黒色ＰｅｒｓｐｅｘＴＭ製の小皿上に配置し、顕微手術用具および解剖顕微鏡（Model F212, Jenopik Jena, GmbH, Germany）を用いて注意深く切断することにより、微細分枝を主線維束から分離した。
【００７１】
シールドケーブルを介して高インピーダンス第一段差動増幅器（model AC8331, CW, Inc., Ardmore, PA）に接続された２本の白金イリジウム線（１．２５ｃｍ×０．０１２５ｃｍ）を含有する特注双極電極を用いて、細胞外神経活動電位を記録した。第一段増幅器の出力を第二段差動増幅器（model BMA-831/C, CWE, Inc.）に供給した。単離された線維を１対の白金イリジウム線上に置いた。化学感受性末端を有する迷走神経Ｃ線維は、心臓周期や呼吸周期に関係しないまばらな不規則発火を行う。線維タイプの確認は、第１に、カプサイシン（１０μｇ・ｋｇ−１、右心房内ボーラス）に対する応答をモニタリングし、第２に、ピンセットで軽く突いて肺を機械的に刺激することおよび一回換気量の２〜３倍に肺を膨張させることに対する応答をモニタリングし、そして第３に、当初の記録部位の遠位に配置された刺激電極を用いて伝導速度を決定することにより行った。肺末端上にＲＡＲを有する神経線維は、各呼吸周期中のピーク気管圧力に関連する活動電位の短い（すなわち短時間持続する）ボレイで自発的に発火する。
【００７２】
ＡＴＰ（３μｍｏｌｅ・ｋｇ−１）およびカプサイシン（１０μｇ・ｋｇ−１）を急速ボーラスとして右心房に投与した（５ｍｌ試験溶液＋５ｍｌ生理食塩水フラッシュ）。全身性副作用を回避するために、α，βｍＡＴＰおよびβ，γｍＡＴＰを低用量で１回だけ投与した（０．７５μｍｏｌ・ｋｇ−１）。体積対照は、５ｍｌ＋５ｍｌまたは１ｍｌ＋３ｍｌのいずれかの生理食塩水から構成されるものとした。注射はすべて、同一人物により同一の様式で行った。記録された神経活動中の圧受容体の関与を除外するために、ニトログリセリンのボーラス（１ｍｇ；静脈内）の前後で後者をモニタリングした。
【実施例２】
【００７３】
ＦＥＶ１の変化として測定されるＡＭＰおよびＡＴＰに対する気道応答性
試験された４０名の被験体のうちの１９名（４７．５％）はＡＴＰに応答し、１３名（３２．５％）はＡＭＰに応答した。ＡＴＰおよびＡＭＰに対するＰＤ２０幾何平均は、それぞれ、気道応答性を有する被験体において７２．９（２．９〜８０８．７）μｍｏｌ／ｍｌおよび８２．９（０．９〜５７６．０）μｍｏｌ／ｍｌであった。健常非喫煙者におけるＡＴＰまたはＡＭＰのチャレンジのいずれかに対する応答は、陰性であった。すなわち、ＦＥＶ１の変化がみられないか、または２０％未満のＦＥＶ１の低下がみられた。１０名（１００％）の喘息患者、４名（５７％）の健常喫煙者、１名（１４％）のリスク喫煙者、および４名（６７％）のＣＯＰＤ患者は、ＡＴＰに応答し、一方、９名（９０％）の喘息患者、１名（１４％）の健常喫煙者、１名（１４％）のリスク喫煙者、および２名（３３％）のＣＯＰＤ患者は、ＡＭＰに応答した（表２および図１）。１９名の喫煙被験体（７名の健常喫煙者、７名のリスク喫煙者、および５名のＣＯＰＤ患者）において、ＡＴＰは、ＡＭＰと比べて２倍の患者で気管支収縮を引き起こした。すなわち、それぞれ、４２％および２１％（ｐ＜０．０５）。
【００７４】
重要なこととして、喘息患者はすべて、低濃度のＡＴＰに応答したが、ＣＯＰＤ患者のうちの２名は、最高濃度のＡＴＰのときでさえも応答しなかった。また、ＡＴＰに応答するＣＯＰＤ患者における平均ＰＤ２０（１７８．５μｍｏｌ／ｍｌ）は、喘息患者の場合（４８．７μｍｏｌ／ｍｌ）よりも有意に高かった（ｐ＜０．０５）（図１および表２）。これらの知見は、ＣＯＰＤ患者と喘息患者とを区別するための診断試験の基礎となる。
【００７５】
ＣＯＰＤ患者の大多数（ｎ＝５）は、現喫煙者であった。試験された健常非喫煙対照被験体は全員、ＡＴＰに応答しなかったが、７名の健常喫煙対照被験体のうちの３名は、応答した（図１および表の２）。したがって、非喫煙ＣＯＰＤ患者は、平均的にみて、ＡＴＰに対する応答が喫煙ＣＯＰＤ患者よりも高くないことは確かであり、おそらくそれよりも少ないと思われる。したがって、ＡＴＰ応答性の試験により、喘息患者は、喫煙ＣＯＰＤ患者および非喫煙ＣＯＰＤ患者のいずれとも区別されるであろう。
【表２】
2008507368.tif 000007
【実施例３】
【００７６】
呼吸困難および他の症状に及ぼすＡＴＰおよびＡＭＰのチャレンジの効果
ボルグスコアにより評価される呼吸困難の感覚は、喘息患者（０．１→３．３、ｐ＜０．００１）、健常喫煙者（０→１．３、ｐ＜０．０３）、リスク喫煙者（０．１→１．９、ｐ＜０．０１）、およびＣＯＰＤ患者（０．１→２．７、ｐ＜０．０１）において、ＡＴＰのチャレンジ後、有意に増大した（図２）。これとは対照的に、ＡＭＰのチャレンジ後、喘息の患者においてのみ有意な増大がみられた（０．２→２．５、ｐ＜０．００１）。喘息患者にＡＭＰ（ＰＤ２０）を投与した後のボルグスコアは、ＣＯＰＤ患者のときよりも高かったが（それぞれ、ボルグスコア＝２．５および０．８、ｐ＜０．０２）、ＡＴＰ（ＰＤ２０）のチャレンジ後の２つの患者グループでは同等であった（それぞれ、ボルグスコア＝３．３および２．７、ｐ＞０．０５）（図３）。
【００７７】
ＡＴＰおよびＡＭＰのチャレンジ後のボルグスコアの変化（ΔＢｏｒｇ）を比較することにより、ΔＢｏｒｇは、すべてのグループにおいてＡＴＰ後のほうが高く、この増大は、喘息患者（ΔＢｏｒｇＡＴＰ＝３．２、ΔＢｏｒｇＡＭＰ＝２．３、ｐ＜０．０２）およびＣＯＰＤ患者（ΔＢｏｒｇＡＴＰ＝２．６、ΔＢｏｒｇＡＭＰ＝０．６、ｐ＜０．０１）において、ＡＴＰのチャレンジ後は、有意であることが明らかにされた（図４）。ＡＭＰ（ｒ＝−０．６６９４、ｐ＜０．００１）およびＡＴＰ（ｒ＝−０．６５２１、ｐ＜０．００１）の両方のチャレンジ（ＰＤ２０）の後、ＰＤ２０自体とボルグスコアとの間に負の相関がみられた。
【００７８】
３６名（９０％）の被験体は、ＡＴＰのチャレンジ後、咳をしたが、ＡＭＰのチャレンジでは、１９名（４８％）の被験体で咳が誘発された（ｐ＜０．０１）。また、喉の炎症および喀痰を有する被験体の割合は、ＡＭＰのチャレンジ（それぞれ、５３％および１０％）と比較した場合、ＡＴＰの後（それぞれ、７５％および２８％）のほうが有意に高かった（いずれもｐ＜０．０４）（図５）。
【００７９】
ＡＴＰおよびＡＭＰの非応答者または応答者を切り離して考えた場合、ＡＴＰに非応答性である被験体は、ＡＭＰ非応答者よりも多くの咳および喀痰を有していた（それぞれ、ｐ＜０．０１およびｐ＜０．０１）。また、ＡＴＰ応答者は、ＡＭＰ応答者よりも多く咳をし（ｐ＜０．０３）、ＡＴＰ非応答者よりも多くの胸の圧迫感および喘鳴を有していた（それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．０２）。ＡＭＰに応答する被験体は、ＡＭＰ非応答者よりも多くの胸の圧迫感および喀痰を報告した（それぞれ、ｐ＜０．０４およびｐ＜０．０１）。
【実施例４】
【００８０】
気道内径に及ぼすＡＴＰおよびＡＭＰのチャレンジの効果
ＡＴＰにより誘発されるＦＥＶ１の低下は、ベースラインＦＥＶ１に対する割合（ΔＦＥＶ１）で表したとき、すべてのグループにおいてＡＭＰのチャレンジにより引き起こされた低下よりも大きかった。この差は、喘息患者において統計学的に有意であった（ΔＦＥＶ１ＡＴＰ＝２９％、ΔＦＥＶ１ＡＭＰ＝２２％、ｐ＜０．０３）。ＰＤ２０のＡＴＰ（ｒ＝０．６０６、ｐ＜０．００１）およびＡＭＰ（ｒ＝０．５６７、ｐ＜０．０１）のチャレンジ後、ΔＦＥＶ１とボルグスコアとの間に正の相関がみられた（図６）。
【実施例５】
【００８１】
細胞外ＡＴＰは、イヌ肺内のＣ線維だけでなくＲＡＲ含有線維をも刺激する
実施例１に記載の手順を用いて、種々の薬剤の投与後、末端上にＲＡＲを有するイヌ肺線維の活動電位を測定した。ＲＡＲの活性化により、ＡＴＰの投与後だけでなく投与前にも観測される各呼吸周期に関連する活動電位の短いボレーが生じた（図７）。ＡＴＰ（６μｍｏｌ／ｋｇ、急速静脈内ボーラス）の投与後、ＲＡＲ含有線維の活動は、神経活動電位のバーストが呼吸周期間の時間内に伸長する形で延長された。したがって、ＡＴＰは、ＲＡＲ含有線維の活動を変化させ、迅速適応特性を一時的に喪失させる。
【００８２】
試験した線維が実際にＲＡＲ含有線維であることを確認するために、カプサイシンの静脈内ボーラスの投与の前後で同一標本の記録を行った。図８からわかるように、カプサイシンは、ＡＴＰにより活性化される同一ＲＡＲ含有線維の発火パターンを変化させなかった。このことは、これらの神経末端上のバニロイド（valinoid）受容体（すなわち、カプサイシン受容体、ＶＲ−１）が欠如しているためにカプサイシンがＲＡＲ含有神経線維末端を刺激することができないという十分に立証された観測結果に一致する。
【００８３】
カプサイシンは肺内のＣ線維神経末端を刺激することが知られているので、カプサイシン、ＡＴＰ、およびＡＴＰのアナログに対するＣ線維ならびにＲＡＲ含有線維の応答を同時にモニターすることは興味深いことであった。図９は、試験化合物の投与前後における２つのタイプの線維の同時記録の例である。予想どおり、ＡＴＰは、Ｃ線維およびＲＡＲ含有線維の両方を刺激したが、カプサイシンは、前者だけを刺激した。そのほか、エクト酵素で容易には分解されないＡＴＰの２種のアナログ（α，βｍＡＴＰおよびβ，γｍＡＴＰ）は、ＡＴＰと同じように作用した。この知見から、ＡＴＰの作用は、その酵素的分解の産物であるアデノシンにより媒介されないことが示唆された。
【００８４】
図９からわかるように、α，βｍＡＴＰは、ＡＴＰよりも効力が高かった。このことから、ＡＴＰおよび２種のアナログによるＲＡＲ含有線維の活性化が特定のＰ２Ｘ受容体サブタイプにより媒介されることが示唆された。７種のＰ２ＸＲのうち、Ｐ２Ｘ１、Ｐ２Ｘ３、およびヘテロ二量体Ｐ２Ｘ２／３だけが、α，βｍＡＴＰに対して感受性である［Virginio et al. (1998) Mol. Pharmacol. 53:969-973］。Ｐ２Ｘ１およびＰ２Ｘ３は、アゴニストによる刺激の後、急速に脱感作する。しかしながら、本実験では、ＡＴＰおよび同程度に活性なそのアナログの反復投与は、脱感作を伴わなかった。これらの知見から、（ａ）Ｐ２Ｘ１およびＰ２Ｘ３は、少なくとも、ＡＴＰによるＲＡＲ含有線維の活動誘発に関与する排他的またはさらには支配的な受容体ではなく；かつ（ｂ）Ｐ２Ｘ２／３は、少なくとも、ＡＴＰのこの刺激作用を媒介する排他的ではないにしても支配的な受容体サブタイプであることが示唆された。
【００８５】
これらのデータから、末端上にＲＡＲを有する肺の線維を内因性化合物であるＡＴＰがどのように刺激して、これらの線維により媒介されることが知られている中枢性咳反射を引き起こしうるかが示唆される。たとえば、ＡＴＰは、ＲＡＲのＰ２ＸＲ（主にＰ２Ｘ２／３Ｒ）を活性化し、それにより中枢性咳反射を引き起こす。
【実施例６】
【００８６】
α，βｍＡＴＰによる肺迷走神経求心性ＣおよびＡ神経線維の活性化の阻害
灌流神経・肺標本
モルモット肺に投射する迷走神経感覚ニューロンの活動の細胞外記録法については、既に、Canningら[(2004) J. Physiol. 557:543-545]（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるものとする）に詳細に記載されている。簡潔に述べると、ＣＯ２吸入および瀉血により雄ハートレイ系モルモット（１００〜２００ｇ）を屠殺した。クレブス重炭酸塩溶液（ＫＢＳ；１１８ｍＭ ＮａＣｌ、５．４ｍＭ ＫＣｌ、１．０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４、１．９ｍＭ ＣａＣｌ２、２５．０ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１１．１ｍＭデキストロースを含み、ｐＨ７．４において９５％Ｏ２−５％ＣＯ２でガス処理されている）をｉｎ ｓｉｔｕ灌流することにより、肺循環血液を洗浄除去した。ＫＢＳは、感覚線維活動に及ぼす組織プロスタノイドの間接的影響を低減させるために３μＭのインドメタシンを含有させた。たとえば右頸静脈神経節および右節状神経節を含めることにより、インタクトな右側外因性迷走神経支配を有して、気管および右肺を瀉血されたモルモットから摘出し、二区画組織槽中に入れた。右節状神経節および右頸静脈神経節を吻側迷走神経と一緒に組織槽の一方の区画に入れ、肺および気管を組織槽の第２の区画に入れた。２つの区画にＫＢＳを別々に灌流した（６ｍｌ・ｍｉｎ−１、３７℃）。
【００８７】
肺動脈および気管にポリエチレン（ＰＥ）チューブのカニューレを挿入し、ＫＢＳを連続的に灌流した（それぞれ、４ｍｌ・ｍｉｎ−１および２ｍｌ・ｍｉｎ−１）。灌流前に２６ゲージ針で肺の表面を貫通させて１０個の穿刺孔を設けた。したがって、ＫＢＳは、肺静脈を介するだけでなくこれらの穿刺孔を介しても、肺から流出可能とした。
【００８８】
単一線維活動の分離および伝導速度の算出
記録電極を操作して節状神経節に導入した。非尖鋭端で肺表面に機械的刺激を加えて神経活動電位のバーストを観測することにより（フォンフライ触毛、１８００〜３０００ｍＮ）、機械的刺激感受性受容域を特定した。
【００８９】
機械的刺激感受性受容域を特定した後、線維の伝導速度を決定するために、機械的刺激感受性受容域の一領域に配置された小型同心電極により、短い［＜１ミリ秒（ｍｓ）の］電気的刺激を加えた。活動電位が誘起されるまで、漸増電圧（５Ｖから開始）の矩形パルス（０．５ｍｓ）により受容域を電気的に刺激した。神経の走行に沿った距離を、ショック性アーチファクトと機械的刺激感受性受容域の電気的刺激により誘起された活動電位との間の時間で割り算することにより、伝導速度を算出した。
【００９０】
既に報告されているように、気管を介する灌流速度を増大させることにより肺膨張に対する応答を調べた［Canning et al. (2004)］。灌流速度を２倍にしたところ、近似的に、活動電位発火に対する閾値膨張圧を生成した。特定の線維が緩徐適応性または迅速適応性のいずれで応答するか（すなわち、特定の線維がＣ線維またはＡ線維のいずれであるか）を確認するために、灌流速度を再び２倍にして５〜１０秒間保持した。最初の５秒間にわたる刺激の適応指数が＞９０％であれば、迅速適応性であるとみなし、対応する線維は、肺の末端上にＲＡＲを有する線維、すなわちＡ線維であるとみなした。＜１ｍｓ−１の伝導速度を有する神経線維は、迷走神経複合活動電位の伝導速度に関する以前の分析に基づいて、かつ当業者に認知または公知のＣ線維の特性に従って、Ｃ線維であるとみなした。
【００９１】
神経・肺標本へのＰ２Ｘ受容体アゴニストα，βｍＡＴＰおよびＰ２Ｘ３／Ｐ２Ｘ２／３受容体アンタゴニストＡ−３１７４９１の投与
Ｐ２Ｘ受容体アゴニストであるα，βｍＡＴＰおよびＰ２Ｘ３／Ｐ２Ｘ２／３受容体アンタゴニストであるＡ−３１７４９をＫＢＳで別々に希釈した。標本を以下のように順に処理した：
（ａ）ＫＢＳで３０分間灌流した後、１０μＭのα，βｍＡＴＰの１ｍｌボーラスを灌流溶液中に加え、応答を記録した（図１０：「対照」）。
【００９２】
（ｂ）１μＭのＡ−３１７４９を含有するＫＢＳで標本を３０分間灌流し、１０μＭのα，βｍＡＴＰの１ｍｌボーラスを灌流溶液中に加え、応答を記録した（図１０；「Ａ３１７４９ １μＭ」）。
【００９３】
（ｃ）１０μＭのＡ−３１７４９を含有するＫＢＳで標本を３０分間灌流し、１０μＭのα，βｍＡＴＰの１ｍｌボーラスを灌流溶液中に加え、応答を記録した（図１０；「Ａ３１７４９ １０μＭ」）。
【００９４】
（ｄ）ＫＢＳで標本を３０分間灌流し、１０μＭのα，βｍＡＴＰの１ｍｌボーラスを灌流溶液中に加え、応答を記録した（図１０；「洗浄」）。
【００９５】
α，βｍＡＴＰおよびＡ−３１７４９の両方を５０μｌ・ｓ−１の速度で注入した。受容域（肺）に達することをより確実にし、「偽陰性」の観測される可能性を低減させるために、両方の経路を介して（すなわち、気管灌流および肺動脈灌流を介して）、α，βｍＡＴＰおよびＡ−３１７４９１を注入した。気管だけを介してまたは肺動脈だけを介してエバンスブルー色素を投与した場合、それは投与経路に関係なくすべての組織区画中を迅速に浸入しうるが、一部の場合には、気管経路内または血管経路内のいずれかの障害物により、その分布は妨害された。
【００９６】
データ解析
肺内気道および肺を支配する求心性ニューロンの電気生理学的測定では、ほとんどの場合、単一ニューロンの活動を記録した。稀ではあるが、２単位を同時に記録した場合、直接的波形解析ソフトウェア（TheNerveOflt; PHOCIS, Baltimore, MD, USA）を用いて２つのピークを区別した。
【００９７】
マイクロピペットプラー（Sutter Instrument Company P-87, Novato, CA, USA）で延伸して作製され、３Ｍ塩化ナトリウム（約２ＭΩの抵抗）で充填されたガラス微小電極を用いて、ニューロン活動を記録した。シグナルを増幅し（Microelectrode AC amplifier 1800; A-M systems, Everett, WA, USA）、フィルターをかけ（低カットオフ、０．３ｋＨｚ；高カットオフ、１ｋＨｚ）、オシロスコープ（TDS 340; Tektronix, Beaverton, OR, USA）上およびチャートレコーダー（TA240; Gould, Vallley View, OH, USA）上に表示し、そしてオフライン解析用のＭａｃＩｎｔｏｓｈコンピューター（TheNerveOflt; PHOCIS, Baltimore, MD, USA）中に記録した（サンプリング周波数３３ｋＨｚ）。気道平滑筋収縮を反映する気管灌流圧を圧力変換器（P23AA; Statham, Hata Rey, PR, USA）により測定し、圧力をチャートレコーダー（TA240）により記録した。
【００９８】
所与の濃度のアゴニストにより誘発されたすべての活動を１秒時間域で記録し、オフライン解析した。α，βｍＡＴＰに対する応答は、活動電位発火が停止したとき、または発火がベースライン観測値の２倍未満であるとき、終了したものとみなした。データは、平均±標準偏差（ＳＤ）として表す。スチューデントの対応のあるおよび対応のないｔ検定を統計解析に使用し、有意性はｐ＜０．０５により判定した。ｎ値は、試験された線維の数を表し；灌流神経・肺標本あたり、１本の線維だけを試験した。
【００９９】
ＡＴＰは肺迷走神経求心性ＣおよびＡ線維末端を刺激する
Ｐ２Ｘ３／Ｐ２Ｘ２／３受容体の強力な選択的アゴニストであるα，βｍＡＴＰを投与することにより誘発されたＣ線維（ｎ＝４）およびＡ線維（ｎ＝７）の活動電位（ＡＰ）を発火数／秒として定量化した。図１０からわかるように、α，βｍＡＴＰ（１０μＭ、１ｍＬボーラス）の投与により、灌流神経・肺標本の節状ＣおよびＡ線維末端で神経ＡＰが誘発された。α，βｍＡＴＰは、両方のタイプの線維で脱感作を伴わずＡＰを誘発した。発生したＡＰの頻度は、Ｃ線維では１４６±２９、Ａ線維では１５４３±２８５であった。
【０１００】
Ｐ２Ｘ３／Ｐ２Ｘ２／３受容体選択的アンタゴニストＡ−３１７４９１は、α，βｍＡＴＰによる肺迷走神経求心性ＣおよびＡ線維の活性化を阻害する
Ａ−３１７４９１（１および１０μＭ、３０分間）の存在下でα，βｍＡＴＰ（１０μＭ、１ｍｌ、ボーラス）により誘発されるＣ線維（ｎ＝４）およびＡ線維（ｎ＝７）のＡＰを、先に記載したように測定した。Ａ−３１７４９１（１０μＭ）は、α，βｍＡＴＰに対するＣ線維およびＡ線維の応答を、それらの対応する対照と比較して、それぞれ、６２±５％（ｐ＜０．０５）および８８±５％（ｐ＜０．０５）だけ低下させた。１μＭにおいて、Ａ−３１７４９１は、Ａ線維ではα，βｍＡＴＰの作用を有意に５９±１２％阻害したが、Ｃ線維に対しては阻害作用を示さなかった。
【０１０１】
本発明のいくつかの実施形態について説明してきた。しかしながら、当然のことであろうが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく種々の変更を加えることが可能である。したがって、他の実施形態が以下の特許請求の範囲内に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、ＡＭＰ（図１Ａ）またはＡＴＰ（図１Ｂ）でチャレンジした後における個々のヒト被験体（ｘ軸上に示される分類に属する）で得られたＰＤ２０の値を示す散布図である。水平実線は、幾何平均を示し、破線は、被験体に投与されたＡＭＰまたはＡＴＰの最高濃度を示す。ＡＭＰまたはＡＴＰの最高濃度に反応しない患者のデータは、幾何平均の計算に含めなかった。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、ＰＤ２０濃度のＡＭＰ（図２Ａ）またはＡＴＰ（図２Ｂ）（「ＰＤ２０」）でチャレンジする前（「Ｂ／Ｌ」；ベースライン）、チャレンジした直後、およびチャレンジの３０分後における個々の被験体（指定の分類に属する）から得られたボルグスコアを示す一連の線グラフである。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、ＡＭＰ（図３Ａ）またはＡＴＰ（図３Ｂ）でチャレンジした後における喘息患者（「喘息患者」）またはＣＯＰＤ患者（「ＣＯＰＤ」）の平均ボルグスコアを示す１対の棒グラフである。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、ＡＭＰ（図４Ａ）またはＡＴＰ（図４Ｂ）でチャレンジした後における被験体（ｘ軸上に示される分類に属する）のボルグスコアの平均変化（「ΔＢｏｒｇ」）を示す１対の棒グラフである。
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、ＡＭＰ（図５Ａ）またはＡＴＰ（図５Ｂ）でチャレンジした後におけるｘ軸上に列挙された症状を有する被験体（線で囲まれた凡例中に列挙された分類に属する）の割合を示す１対の棒グラフである。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、ＰＤ２０用量のＡＭＰ（図６Ａ）またはＡＴＰ（図６Ｂ）が投与された被験体におけるＦＥＶ１の変化（「ＦＥＶ１の低下％」）とボルグスコア（「ＰＤ２０でのボルグスコア」）との関係を示す１対の散布図である。
【図７】図７は、イヌをＡＴＰに曝露する前および曝露した後におけるイヌ肺迅速適応性受容体（ＲＡＲ）含有求心性神経線維の活動電位を示すレコーダートレースである。イヌをＡＴＰに曝露した時点は、逆三角形上の「ＡＴＰ」という用語により示される。個々の呼吸周期に基づく活動電位ボレーは、上向き矢印により示される。
【図８】図８は、イヌをカプサイシンに曝露する前および曝露した後におけるイヌＲＡＲ含有求心性神経線維の活動電位を示すレコーダートレースである。イヌをカプサイシンに曝露した時間は、逆三角形上の「カプサイシン」という用語により示される。個々の呼吸周期に基づく活動電位ボレーは、上向き矢印により示される。
【図９】図９は、イヌをＡＴＰ、カプサイシン、β，γｍＡＴＰ、またはα，βｍＡＴＰに曝露する前および曝露した後におけるイヌＲＡＲ含有迷走神経線維および迷走神経Ｃ線維の活動電位を示す一連のレコーダートレースである。イヌが種々の誘発化合物に曝露された時点は、逆三角形により示される。個々の呼吸周期に基づく活動電位ボレーは、下向き矢印により示される。ＲＡＲ関連応答およびＣ線維応答に対応するトレースの区域は、括弧とそれぞれ「Ａδ」および「Ｃ」とにより示される。
【図１０】図１０は、α，βｍＡＴＰ単独（対照）または１μＭもしくは１０μＭの選択的Ｐ２Ｘ３／Ｐ２Ｘ２／３受容体アンタゴニストＡ−３１７４９１との併用による処理に応答してモルモット灌流神経・肺標本で測定されたＡ線維（左側グラフ）およびＣ線維（右側グラフ）の末端の活動電位数を示すグラフである。活動電位は、発火数／秒として定量化され、平均＋標準偏差（ＳＤ）として表される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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