(57)【要約】活性化合物を用いたストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）をモジュレートする方法を開示し、ここで活性化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して低い力価を示し；そしてここで化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関する低いパーセント阻害濃度であるＳＡＰＫモジュレート濃度において接触を行う。更に又、ピルフェニドンの誘導体も開示する。これらの誘導体はストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）系をモジュレートすることができる。
2008544743.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）をモジュレートする方法であって、ｐ３８有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）に化合物を接触させることを含み、
該化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示し；そして、
該化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関するＥＣ５０よりも低いＳＡＰＫモジュレート濃度において接触を行う方法。
【請求項２】
ｐ３８ＭＡＰＫがｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ及びｐ３８δよりなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記化合物によるｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関するＥＣ２０より低いＳＡＰＫモジュレート濃度において接触を行う、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記化合物によるｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関するＥＣ１０より低いＳＡＰＫモジュレート濃度において接触を行う、請求項１記載の方法。
【請求項５】
ＥＣ５０値及びＥＣ３０値を用量応答曲線から得る、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ＳＡＰＫモジュレート濃度が少なくとも１５％全血中ＴＮＦα放出を改変するために有効である、請求項１記載の方法。
【請求項７】
ＥＣ５０が約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記化合物がピリドン環を含む、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が属Ｉａ：
【化６８】
2008544743.tif 000031
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択され；そして、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ及びヒドロキシよりなる群から選択される］である、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物が属Ｉａの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物が属Ｉｂ：
【化６９−１】
2008544743.tif 000032
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ及びＯＨよりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ、ハロゲン及びＯＨよりなる群から選択される］である、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が属Ｉｃ：
【化６９−２】
2008544743.tif 000033
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ、ＯＨ及びＯＣＨ３よりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−グルクロニド、Ｂｒ、ＣＨ３およびＣＨ２ＯＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ及びＯＨよりなる群から選択されるが；
ただし、Ｒ４及びＸ３がＨである場合は、Ｒ２はＣＨ３ではない］である、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が亜属ＩＩ：
【化７０−１】
2008544743.tif 000034
［式中、
Ｘ３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３よりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−グルクロニド、ＣＨ３及びＣＨ２ＯＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ及びＯＨよりなる群から選択されるが、ただしＸ３がＯＨである場合は、Ｒ２はＣＨ３ではない］である、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が亜属ＩＩＩ：
【化７０−２】
2008544743.tif 000035
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ及びＯＨよりなる群から選択され；そして、
Ｒ２はＨ、Ｂｒ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２及びＣＦ３よりなる群から選択される］である、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が亜属ＩＶ：
【化７０−３】
2008544743.tif 000036
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、フェニル、置換されたフェニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択される］である、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が亜属Ｖ：
【化７１−１】
2008544743.tif 000037
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、フェニル、置換されたフェニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択される］である、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が属ＶＩ：
【化７１−２】
2008544743.tif 000038
［式中、
Ａｒはピリジニル又はフェニルであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｘ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＣＨ３又はＯＣＨ３であり；
Ｒ２はメチル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−グルコシル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ブロモ、メチルメトキシ、メチルヒドロキシ又はフェニルであり；そして、
Ｒ４はＨ又はヒドロキシルであるが；
ただし、Ｒ２がトリフルオロメチルであり、ＺがＯであり、Ｒ４がＨであり、そしてＡｒがフェニルである場合は、フェニルはＨ、Ｆ又はＯＨにより４’位において単独で置換されていない］である、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物が属ＶＩＩ：
【化７２−１】
2008544743.tif 000039
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ又はＯＨであり；
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニルよりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ、ハロゲン又はＯＨである］である、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記化合物が：
【化７２−２】
2008544743.tif 000040
である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
対象における疾患状態を治療又は防止する方法であって、下記工程：
炎症性状態及び線維性状態から選択される状態の危険性を有するか、又はその状態を有している対象を特定すること；
その状態を治療又は防止するために有効な量で対象に化合物を投与すること；
を包含し、
該化合物は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示し；そして、
該有効量は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関するＥＣ３０未満の血液又は血清又は他の体液濃度をもたらす方法。
【請求項２１】
前記状態が、線維症、慢性閉塞性肺疾患、炎症性肺線維症、特発性肺線維症、閉塞性細気管支炎症候群、慢性自家移植片線維症、関節リューマチ；リウマチ様脊椎炎；骨関節炎；痛風；敗血症；敗血症性ショック；内毒素ショック；グラム陰性敗血症；毒性ショック症候群；顔面筋疼痛症候群（ＭＰＳ）；細菌性赤痢；喘息；成人呼吸窮迫症候群；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性結腸炎；糸球体腎炎；硬皮症；慢性甲状腺炎；グレーブス病；オーモンド病；自己免疫性胃炎；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性好中球減少症；血小板減少症；膵臓線維症；慢性活動性肝炎；肝線維症；腎疾患；腎線維症、刺激性腸症候群；発熱；再狭窄；脳マラリア；卒中及び虚血傷害；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性及び慢性の疼痛；アレルギー；心臓肥大、慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；らい病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液嚢炎；腱炎；腱滑膜炎；ヘルニア化、破断又は脱出した椎間板症候群；骨粗鬆症；血栓症；珪肺症；肺筋肉異常増殖症；骨再吸収疾患；癌；多発性硬化症；狼瘡；線維筋肉痛；ＡＩＤ；帯状疱疹、単純疱疹；インフルエンザウィルス；重度急性呼吸症候群（ＳＡＲＳ）；サイトメガロウィルス；及び真性糖尿病よりなる群から選択される、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記有効量が前記対象において望ましくない副作用を誘発する量の５０％未満である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物がＳＡＰＫシグナリング経路におけるキナーゼを阻害する、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物がピルフェニドン類縁体である、請求項２０記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物が属Ｉａ：
【化７３】
2008544743.tif 000041
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択され；そして、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルコキシ及びヒドロキシよりなる群から選択される］である、請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物が属Ｉａの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
化合物が属Ｉｂ：
【化７４−１】
2008544743.tif 000042
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ及びＯＨよりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ、ハロゲン及びＯＨよりなる群から選択される］である、請求項２０記載の方法。
【請求項２８】
前記化合物が属Ｉｂの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物が属Ｉｃ：
【化７４−２】
2008544743.tif 000043
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ、ＯＨ及びＯＣＨ３よりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−グルクロニド、Ｂｒ、ＣＨ３およびＣＨ２ＯＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ及びＯＨよりなる群から選択されるが；
ただし、Ｒ４及びＸ３がＨである場合は、Ｒ２はＣＨ３ではない］である、請求項２０記載の方法。
【請求項３０】
前記化合物が属Ｉｃの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物が下記化合物１〜１２及び１４：
【化７５】
2008544743.tif 000044
【化７６】
2008544743.tif 000045
【化７７−１】
2008544743.tif 000046
から選択される、請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物が亜属ＩＩ：
【化７７−２】
2008544743.tif 000047
［式中、
Ｘ３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３よりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−グルクロニド、ＣＨ３及びＣＨ２ＯＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ及びＯＨよりなる群から選択されるが、ただしＸ３がＯＨである場合は、Ｒ２はＣＨ３ではない］である、請求項２０記載の方法。
【請求項３３】
前記化合物が亜属ＩＩの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物が亜属ＩＩＩ：
【化７７−３】
2008544743.tif 000048
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ及びＯＨよりなる群から選択され；そして、
Ｒ２はＨ、Ｂｒ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２及びＣＦ３よりなる群から選択される］である、請求項２０記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物が亜属ＩＩＩの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記化合物が亜属ＩＶ：
【化７８−１】
2008544743.tif 000049
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、フェニル、置換されたフェニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択される］である、請求項２０記載の方法。
【請求項３７】
前記化合物が亜属ＩＶの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記化合物が亜属Ｖ：
【化７８−２】
2008544743.tif 000050
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、フェニル、置換されたフェニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択される］である、請求項２０記載の方法。
【請求項３９】
前記化合物が亜属Ｖの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記化合物が属ＶＩ：
【化７８−３】
2008544743.tif 000051
［式中、
Ａｒはピリジニル又はフェニルであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｘ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＣＨ３又はＯＣＨ３であり；
Ｒ２はメチル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−グルコシル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ブロモ、メチルメトキシ、メチルヒドロキシ又はフェニルであり；そして、
Ｒ４はＨ又はヒドロキシルであるが；
ただし、Ｒ２がトリフルオロメチルであり、ＺがＯであり、Ｒ４がＨであり、そしてＡｒがフェニルである場合は、フェニルはＨ、Ｆ又はＯＨにより４’位において単独で置換されていない］である、請求項２０記載の方法。
【請求項４１】
前記化合物が亜属ＶＩの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
前記化合物が下記化合物１４〜３２：
【化７９】
2008544743.tif 000052
【化８０】
2008544743.tif 000053
【化８１】
2008544743.tif 000054
【化８２−１】
2008544743.tif 000055
から選択される、請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
前記化合物が属ＶＩＩ：
【化８２−２】
2008544743.tif 000056
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、アルコキシ又はＯＨであり；
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニルよりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ、ハロゲン又はＯＨである］である、請求項２０記載の方法。
【請求項４４】
前記化合物が亜属ＶＩＩの化合物の代謝産物、水和物、溶媒和物又はプロドラッグである、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物が：
【化８２−３】
2008544743.tif 000057
である、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項４７】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項４８】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項４９】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項５０】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項５１】
前記選択された化合物の哺乳類毒性を測定することを更に含む、請求項４７〜５０の何れか１項に記載の方法。
【請求項５２】
被験対象に前記選択された化合物を投与することを更に含む、請求項４７〜５０の何れか１項に記載の方法。
【請求項５３】
被験対象が炎症性状態を有するか、有する危険性を有する、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
ｐ３８ＭＡＰＫがｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ及びｐ３８δよりなる群から選択される、請求項４７〜５０の何れか１項に記載の方法。
【請求項５５】
ＥＣ５０を用量応答曲線から得る、請求項４６記載の方法。
【請求項５６】
ＥＣ５０が約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある、請求項４６記載の方法。
【請求項５７】
ＥＣ５０を用量応答曲線から得る、請求項４７記載の方法。
【請求項５８】
ＥＣ５０が約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある、請求項４７記載の方法。
【請求項５９】
亜属ＩＩＩ：
【化８４】
2008544743.tif 000058
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ及びＯＨよりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ及びＣＦ３よりなる群から選択される］の式を有する化合物であって、
化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項６０】
前記化合物が下記化合物８〜１２：
【化８５】
2008544743.tif 000059
から選択される、請求項５９記載の化合物。
【請求項６１】
ｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項５９記載の化合物。
【請求項６２】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６１記載の化合物。
【請求項６３】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６１記載の化合物。
【請求項６４】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６１記載の化合物。
【請求項６５】
属ＶＩ：
【化８６−１】
2008544743.tif 000060
［式中、
Ａｒはピリジニル又はフェニルであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｘ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ又はＯＣＨ３であり；
Ｒ２はメチル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−グルコシル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、メチルメトキシ、メチルヒドロキシ又はフェニルであり；そして、
Ｒ４はＨ又はヒドロキシルであるが；
ただし、Ｒ２がトリフルオロメチルであり、ＺがＯであり、Ｒ４がＨであり、そしてＡｒがフェニルである場合は、フェニルはＨ、Ｆ又はＯＨにより４’位において単独で置換されていない］の式を有する化合物であって、
化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項６６】
前記化合物が下記化合物１４〜３２：
【化８６−２】
2008544743.tif 000061
【化８７】
2008544743.tif 000062
【化８８】
2008544743.tif 000063
【化８９−１】
2008544743.tif 000064
から選択される、請求項６５記載の化合物。
【請求項６７】
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６８記載の化合物。
【請求項６８】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６７記載の化合物。
【請求項６９】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６７記載の化合物。
【請求項７０】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項６７記載の化合物。
【請求項７１】
属ＶＩＩ：
【化８９−２】
2008544743.tif 000065
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、アルコキシ又はＯＨであり；
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニルよりなる群から選択され；
Ｒ４はＨ、ハロゲン又はＯＨである］の式を有する化合物であって、そして、
化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項７２】
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７３】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７４】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７５】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７６】
式：
【化９０】
2008544743.tif 000066
を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７７】
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７８】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項７９】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項８０】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項７１記載の化合物。
【請求項８１】
請求項５９記載の化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項８２】
請求項６５記載の化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項８３】
請求項７１記載の化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項８４】
前記組成物が、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程における患者への投与の為に選択された前記化合物の量を含有する、請求項８１記載の医薬組成物。
【請求項８５】
前記組成物が、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程における患者への投与の為に選択された前記化合物の量を含有する、請求項８２記載の医薬品。
【請求項８６】
前記組成物が、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程における患者への投与の為に選択された前記化合物の量を含有する、請求項８３記載の医薬組成物。
【請求項８７】
前記化合物を、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程で前記対象に投与する、請求項２０記載の方法。
【請求項８８】
前記化合物を、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程で該対象に投与する、請求項２１記載の方法。
【請求項８９】
前記状態が閉塞性細気管支炎症候群である、請求項２１記載の方法。
【請求項９０】
前記状態が慢性自家移植片線維症である、請求項２１記載の方法。
【請求項９１】
前記状態が特発性肺線維症である、請求項２１記載の方法。
【請求項９２】
前記状態が慢性閉塞性肺疾患である、請求項２１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願は、米国仮特許出願第６０／６７９，４７１号（２００５年５月１０日出願）および米国仮特許出願第６０／７３２，２３０号（２００５年１１月１日出願）の優先権を主張し、これらの両出願は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は種々の炎症性状態及び／又は線維性の状態、例えばキナーゼｐ３８の増強された活性に関連するものの治療において有用な化合物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
多数の慢性及び急性の状態が炎症応答の撹乱に関連すると認識されている。ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８及びＴＮＦ−αを包含する多数のサイトカインがこの応答に関与している。炎症の調節におけるこれらのサイトカインの活性は細胞シグナリング経路の酵素、ｐ３８として一般的に知られておりＳＡＰＫ、ＣＳＢＰ及びＲＫとしても知られているＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーの活性に関連している。
【０００４】
ｐ３８の阻害剤の数種、例えばＮＰＣ３１１６９、ＳＢ２３９０６３、ＳＢ２０３５８０、ＦＲ−１６７６５３及びピルフェニドンがインビトロ及び／又はインビボで試験されており、そして炎症応答をモジュレートするのに効果的であることがわかっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
炎症性肺線維症及び／又は特発性肺線維症などの種々の炎症性の状態及び／又は線維性の状態を治療するための安全で効果的な薬剤がなお必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明の１つの実施形態は、ｐ３８有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）に化合物を接触させることを含む、ストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）をモジュレートする方法であって、化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示し；そして化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関するＥＣ３０よりも低値のＳＡＰＫモジュレート濃度において接触を行う方法である。
【０００７】
本発明の別の実施形態は、対象における疾患状態を治療又は防止する方法であって、以下の工程：炎症性状態及び線維性状態から選択される状態の危険性を有するか、又はその状態を有している対象を特定すること；その状態を治療又は防止するために有効な量で対象に化合物を投与すること；を含み、化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示し；そして、有効量はｐ３８ＭＡＰＫ少なくとも１つの阻害に関するＥＣ３０未満の血液又は血清又は他の体液濃度をもたらす方法である。
【０００８】
本発明の別の実施形態は、薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、以下の工程：化合物のライブラリを準備すること；少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関してライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；および、複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、選択された化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；を含む方法である。
【０００９】
本発明の別の実施形態は、薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、以下の工程：化合物のライブラリを準備すること；インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関してライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、選択された化合物はインビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；を含む方法である。
【００１０】
本発明の別の実施形態は、薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、以下の工程：化合物のライブラリを準備すること；インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関してライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、選択された化合物はインビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；を含む方法である。
【００１１】
本発明の別の実施形態は、薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、以下の工程：化合物のライブラリを準備すること；インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関してライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、選択された化合物はインビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；を含む方法である。
【００１２】
本発明の別の実施形態は、薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、以下の工程：化合物のライブラリを準備すること；インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関してライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、選択された化合物はインビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；を含む方法である。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、亜属ＩＩＩの式：
【００１４】
【化３−１】
2008544743.tif 000003
［式中、Ｘ３はＨ、Ｆ及びＯＨよりなる群から選択され；Ｒ２はＨ及びＣＦ３よりなる群から選択される］を有する化合物であって、化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグである。
【００１５】
本発明の別の実施形態は、属ＶＩの式：
【００１６】
【化３−２】
2008544743.tif 000004
［式中、Ａｒはピリジニル又はフェニルであり；ＺはＯ又はＳであり；Ｘ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ又はＯＣＨ３であり；Ｒ２はメチル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−グルコシル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、メチルメトキシ、メチルヒドロキシ又はフェニルであり；そして、Ｒ４はＨ又はヒドロキシルであるが；ただし、Ｒ２がトリフルオロメチルであり、ＺがＯであり、Ｒ４がＨであり、そしてＡｒがフェニルである場合は、フェニルはＨ、Ｆ又はＯＨにより４’位において置換されているのみではない］を有する化合物であって、化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグである。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、属ＶＩＩの式：
【００１８】
【化４】
2008544743.tif 000005
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ又はＯＨであり；Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニルよりなる群から選択され；Ｒ４はＨ、ハロゲン又はＯＨである］を有する化合物であって、化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグである。
【００１９】
本発明の別の実施形態は上記した式を有する化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含有する医薬組成物である。
【００２０】
これら及び他の実施形態は以下に詳述する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
今回、キナーゼｐ３８の増強された活性に関連する種々の疾患の治療における高い治療効果が比較的低力価のｐ３８キナーゼ阻害剤化合物を使用することにより達成され得ることを発見した。
【００２２】
従って、１つの実施形態において、ｐ３８有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）に化合物を接触させることによりストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）をモジュレートする方法を提供する。好ましい化合物は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。ｐ３８ＭＡＰＫに化合物を接触させる濃度は、一般的に、その化合物によるｐ３８の阻害のＥＣ３０より低い。好ましくは、濃度はＥＣ２０より低く、より好ましくは、濃度はＥＣ１０より低い。
【００２３】
「有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）」は、多くの細胞事象の調節に関与する進化的に保存されたセリン／スレオニンキナーゼである。数種のＭＡＰＫグループが哺乳類細胞において特定されており、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８及びＳＡＰＫ／ＪＮＫが包含される。ＭＡＰＫはその特異的ＭＡＰＫキナーゼ（ＭＡＰＫＫ）により、ＥＲＫはＭＥＫ１及びＭＥＫ２により、ｐ３８はＭＫＫ３及びＭＫＫ６により、そしてＳＡＰＫ／ＪＮＫはＳＥＫ１（ＭＫＫ４としても知られている）及びＭＫＫ７（ＳＥＫ２）により、活性化されると考えられている。これらのＭＡＰＫＫはまた、種々のＭＡＰＫＫキナーゼ（ＭＡＰＫＫＫ）、例えばＲａｆ、ＭＬＫ、ＭＥＫＫ１、ＴＡＫ１及びＡＳＫ１により活性化することもできる。
【００２４】
細胞ストレス（酸化ストレス、ＤＮＡ損傷、熱又は浸透圧ショック、紫外線照射、虚血−再灌流）、外因性物質（アニソマイシン、ヒ酸Ｎａ、リポ多糖類、ＬＰＳ）又はプロ炎症サイトカイン、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１βにより活性化されると、他のキナーゼ又は核蛋白質、例えば原形質又は核の何れかにおける転写因子をホスホリル化及び活性化することができる少なくとも１２種のクローニングされた高度に保存されたプロリン指向のセリン−スレオニンキナーゼが、ＭＡＰＫのネットワークに関与していると考えられている（図１）。
ｐ３８ＭＡＰＫ
本明細書において、「ｐ３８ＭＡＰＫ」とは少なくとも４アイソフォーム（α、β、γ、δ）を包含するストレス活性化蛋白質キナーゼファミリーのメンバーであり、その数種は炎症応答及び組織リモデリングに必須な過程において重要であると考えられている（Ｌｅｅら、２０００  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：１８５−２０１）。単球及びマクロファージにおいて優勢なキナーゼであるｐ３８α及びｐ３８βは、ｐ３８γ（骨格筋）又はｐ３８δ（精巣、膵臓、前立腺、小腸、及び、唾液線、下垂体及び副腎）と比較してより広範に発現されていると考えられる。ｐ３８γアイソフォームは筋線維芽に発現され、これはアルファ平滑筋アクチンの発現を含む筋肉細胞との一部の表現型同様性を有している。多くのｐ３８ＭＡＰキナーゼの基質が特定されており、例えば他のキナーゼ（ＭＡＰＫＡＰ、Ｋ２／３、ＰＲＡＫ、ＭＮＫ１／２、ＭＳＫ１／ＲＬＰＫ、ＲＳＫ−Ｂ）、転写因子（ＡＴＦ２／６、筋線維増強因子２、核転写因子−β、ＣＨＯＰ／ＧＡＤＤ１５３、Ｅｌｋ１及びＳＡＰ−１Ａ１）及びサイトゾル蛋白質（スタスミン）が包含され、これらの多くは生理学的に重要である。
【００２５】
Ｊｉａｎｇ，Ｙ．ら、１９９６  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７１：１７９２０−１７９２６は、ｐ３８−αに緊密に関連した３７２アミノ酸蛋白質としてｐ３８βの特性を報告している。ｐ３８α及びｐ３８βは、共に、プロ炎症サイトカイン及び環境ストレスにより活性化され、ｐ３８βは、ＭＡＰキナーゼキナーゼ−６（ＭＫＫ６）により優先的に活性化され、そして活性化転写因子２（ＡＴＦ２）を優先的にホスホリル化する。Ｋｕｍａｒ，Ｓ．ら、１９９７  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  ２３５：５３３−５３８及びＳｔｅｉｎ，Ｂ．ら、１９９７  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７２：１９５０９−１９５１７はｐ３８αに７３％同一性を有する３６４アミノ酸を含有するｐ３８βの第２アイソフォーム、ｐ−３８β２を報告している。ｐ３８βは、プロ炎症サイトカイン及び環境ストレスにより活性化されると考えられているが、第２の報告されたｐ３８βアイソフォームであるｐ３８β２は、ｐ３８αのより偏在する組織発現と比較して、中枢神経系（ＣＮＳ）、心臓及び骨格筋において優先的に発現されると考えられる。更に、活性化転写因子−２（ＡＴＦ−２）がｐ３８αよりもｐ３８β２に対するより良好な基質であると考えられている。
【００２６】
ｐ３８γの特定は、Ｌｉ，Ｚ．ら、１９９６  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  ２２８：３３４−３４０により、そしてｐ３８δの場合はＷａｎｇ，Ｘ．ら、１９９７Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：２３６６８−２３６７４により、そして、Ｋｕｍａｒ，Ｓ．ら、１９９７Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  ２３５：５３３−５３８により報告されている。これらの２つのｐ３８アイソフォーム（γ及びδ）は、それらの組織発現パターン、基質利用、直接及び間接の刺激に対する応答、及びキナーゼ阻害剤に対する感受性に基づいてＭＡＰＫファミリーの独特のサブセットを表す。主要配列の保存に基づくと、ｐ３８α及びβは緊密に関連しているが、相互により緊密に関連しているγ及びδからは偏移している。
【００２７】
典型的には、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ経路は、同属体受容体への特異的リガンド、例えばサイトカイン、ケモカイン又はリポ多糖類（ＬＰＳ）の結合により活性化されている受容体チロシンキナーゼ、ケモカイン又はＧ蛋白質カップリング受容体により直接又は間接的に活性化される。その後、ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、特異的スレオニン及びチロシン残基上のホスホリル化により活性化される。活性化後、ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、他の細胞内蛋白質、例えば蛋白質キナーゼをホスホリル化することができ、そして細胞の核に転座することができ、そこでそれは転写因子をホスホリル化及び活性化し、プロ炎症サイトカイン、並びに炎症応答、細胞接着及び蛋白質分解に寄与する他の蛋白質の発現をもたらす。例えば、骨髄様細胞系統の細胞、例えばマクロファージ及び単球においては、ＩＬ−１βおよびＴＮＦαの両方がｐ３８活性化に応答して転写される。その後のこれら及び他のサイトカインの翻訳及び分泌は、隣接組織において、そして白血球の浸潤を介して、局所的又は全身性の炎症応答を開始させる。この応答は細胞ストレスに対する生理学的応答の正常な部分であるが、急性又は慢性の細胞ストレスは、過剰な、調節不可能な、又は、過剰で調節不可能なプロ炎症サイトカイン発現をもたらす。これが次に組織の損傷をもたらし、疼痛及び消耗をもたらす。
【００２８】
肺胞マクロファージにおいては、ｐ３８阻害剤、ＳＢ２０３５８０によるｐ３８キナーゼの阻害によりサイトカイン遺伝子産物が低減される。炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−５）及びケモカイン（ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン）は慢性気道炎症を調節又は支持することができると考えられている。気道炎症の潜在的メディエーターの多くの生産及び作用は、ストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）又はｓ３８キナーゼのカスケードに依存していると考えられる（Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄら、２００１  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ３１：３４２−３４５）。多くの環境刺激によるｐ３８キナーゼ経路の活性化は、生産が翻訳調節性であると考えられている認知された炎症メディエーターの生成をもたらす。更に、種々の炎症メディエーターがｐ３８ＭＡＰＫを活性化し、次にこれが下流のＭＡＰＫ系の標的、例えば他のキナーゼ又は転写因子を活性化し、これにより肺における増幅された炎症過程の可能性が生じる。
ＭＡＰキナーゼのｐ３８グループの下流の基質
ｐ３８α又はｐ３８βの蛋白質キナーゼ基質：ＭＡＰキナーゼ活性化蛋白質キナーゼ２（ＭＡＰＫＡＰＫ２又はＭ２）、ＭＡＰキナーゼ相互作用蛋白質キナーゼ（ＭＮＫ１）、ｐ３８調節／活性化キナーゼ（ＰＲＡＫ）、有糸分裂促進物質及びストレス活性化キナーゼ（ＭＳＫ：ＲＳＫ−Ｂ又はＲＬＰＫ）。
【００２９】
ｐ３８により活性化される転写因子：活性化転写因子（ＡＴＦ）−１、２及び６、ＳＲＦアクセサリー蛋白質（Ｓａｐ１）、ＣＨＯＰ（生育停止及びＤＮＡ損傷誘導遺伝子１５３即ちＧＡＤＤ１５３）、ｐ５３、Ｃ／ＥＢＰβ、筋細胞増強因子２Ｃ（ＭＥＦ２Ｃ）、ＭＥＦ２Ａ、ＭＩＴＦ１、ＤＤＩＴ３、ＥＬＫ１、ＮＦＡＴ及び高運動性グループボックス蛋白質（ＨＢＰ１）。
【００３０】
他の型のｐ３８基質：ｃＰＬＡ２、Ｎａ＋／Ｈ＋交換アイソフォーム−１、ｔａｕ、ケラチン８及びスタスミン。
【００３１】
ｐ３８基質経路により調節される遺伝子：ｃ−ｊｕｎ、ｃ−ｆｏｓ、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１、ＶＣＡＭ−１、ｉＮＯＳ、ＰＰＡＲγ、シクロオキシゲナーゼ、（ＣＯＸ）−２、コラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、コラゲナーゼ−３（ＭＭＰ−１３）、ＨＩＶ−ＬＴＲ、Ｆｇｌ−２、脳ナトリウム排出ペプチド（ＢＮＰ）、ＣＤ２３、ＣＣＫ、ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼサイトゾル、サイクリンＤ１、ＬＤＬ受容体（Ｏｎｏら、２０００  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ１２：１−１３）。
ｐ３８活性化の生物学的帰結
ｐ３８及び炎症
急性及び慢性の炎症は、関節リューマチ、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）などの多くの疾患の病因の中心であると考えられている。ｐ３８経路の活性化は（１）ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６などのプロ炎症サイトカインの生産；（２）病理学的状態における結合組織のリモデリングを制御するＣＯＸ−２などの酵素の誘導；（３）酸化を調節するｉＮＯＳなどの細胞内酵素の発現；（４）ＶＣＡＭ−１などの接着蛋白質及び多くの他の炎症関連分子の誘導において、中心的役割を果たしていると考えられる。これらに加えて、ｐ３８経路は、免疫系の細胞の増殖及び分化において調節的役割を果たしている。ｐ３８はＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ、ＥＰＯ及びＣＤ４０−誘導細胞増殖及び／又は分化に関与し得る。
【００３２】
炎症関連疾患におけるｐ３８経路の役割は数種の動物モデルにおいて検討されている。ＳＢ２０３５８０によるｐ３８の阻害は、内毒素誘導ショックのネズミモデルにおいて致死率を低減し、そして、マウスコラーゲン誘導関節炎及びラットアジュバント関節炎の発症を抑制している。最近の研究によれば、より強力なｐ３８阻害剤であるＳＢ２２００２５は肉芽腫の血管内密度の顕著な用量依存性低下をもたらしている。これらの結果は、ｐ３８又はｐ３８経路の成分が炎症性疾患の治療標的となり得ることを示している。
ｐ３８及びアポトーシス
ｐ３８及びアポトーシスの同時活性化は、ＮＧＦ中止及びＦａｓライゲーションなどの種々の薬剤により誘導されると考えられる。システインプロテアーゼ（カスパーゼ）はアポトーシス経路の中核であり、そして不活性チモーゲンとして発現される。次にカスパーゼ阻害剤はＦａｓ交差結合を介してｐ３８活性化をブロックすることができる。しかしながら、優性な活性ＭＭＫ６ｂの過剰発現はカスパーゼ活性及び細胞死を誘導することもできる。アポトーシスにおけるｐ３８の役割は細胞型及び刺激に依存している。ｐ３８シグナリングは一部の細胞系統における細胞死を誘発することがわかっているが、異なる細胞系統においては、ｐ３８は生存性、細胞生育及び分化を増強することがわかっている。
細胞周期におけるｐ３８
酵母におけるｐ３８αの過剰発現は増殖の顕著な緩徐化をもたらし、細胞生育におけるｐ３８αの関与を示している。培養哺乳類細胞のより緩徐な増殖が、細胞にｐ３８α／β阻害剤、ＳＢ２０３５８０を投与した場合に観察されている。
ｐ３８及び心筋細胞肥大
心筋細胞肥大におけるｐ３８の活性化及び機能が検討されている。肥大の進行中、ｐ３８α及びｐ３８βの濃度は共に増大し、構成的に活性なＭＫＫ３及びＭＫＫ６誘発肥大応答が筋節組織化及び上昇した心房性ナトリウム排出因子の発現により増強される。更に、心臓におけるｐ３８の低下したシグナリングは、カルシニューリン−ＮＦＡＴシグナリングの関与する機序を介して心筋細胞の分化を促進する。
ｐ３８及び発生
ｐ３８ノックアウトマウスの非生存性とは相反して、発生におけるｐ３８の示差的役割に関する証拠が存在する。ｐ３８は幾つかの研究において胎盤の血管形成に関連付けられているが、心臓血管の発生には関連付けられていない。更に、ｐ３８ｇはエリスロポエチンの発現にも関連付けられており、赤血球形成における役割が示唆されている。ＰＲＡＫは最近、ネズミ移植における細胞発生に関与が示唆されている。ＰＲＡＫｍＲＮＡ並びにｐ３８アイソフォームは、胚盤胞発生の全体を通して発現されることがわかっている。
ｐ３８及び細胞分化
ｐ３８α及び／又はｐ３８βは、数種の細胞型への細胞分化において重要な役割を果たしていることがわかっている。３Ｔ３−Ｌ１細胞から肥満細胞への分化及びＰＣ１２細胞からニューロンへの分化は共にｐ３８α及び／又はβを必要とする。ｐ３８経路は、ヘモグロビン化細胞へのＳＫＴ６の分化並びに筋管におけるＣ２Ｃ１１２分化の為に必要かつ十分であることがわかっている。
老化及び腫瘍抑制におけるｐ３８
ｐ３８は、腫瘍形成及び老化において役割を有する。ＭＫＫ６及びＭＫＫ３の活性化がｐ３８ＭＡＰＫ活性に依存した老化の表現型をもたらすという報告がある。更に、ｐ３８ＭＡＰＫ活性はテロメアの短鎖化、Ｈ２Ｏ２曝露及び慢性ＲＡＳ癌遺伝子シグナリングに応答した老化に関与することがわかっている。腫瘍細胞の共通した特徴は老化の消失であり、そしてｐ３８は特定の細胞における腫瘍形成に関連付けられている。ｐ３８活性化が腫瘍では低減され、そしてＭＫＫ３及びＭＭＫ６などのｐ３８経路の成分の消失は、これらの試験において使用した細胞系統又は腫瘍誘導剤に関わらず、増殖及び腫瘍形成性の変換の尤度を増大したという報告がある。
ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤
「ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤」とはｐ３８の活性を阻害する化合物である。ｐ３８の活性に対する化合物の阻害作用は、当該分野で良く知られている種々の方法で測定してよい。例えば、阻害作用はリポ多糖類（ＬＰＳ）刺激サイトカイン生産の阻害の水準を測定することにより測定してよい（Ｌｅｅら、１９８８  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  １０：８３５−８４３；Ｌｅｅら、１９９３  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．６９６：１４９−１７０；Ｌｅｅら、１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：７３９−７４６；Ｌｅｅら、１９９９  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ８２：３８９−３９７）。
【００３３】
ｐ３８ＭＡＰＬ阻害剤を開発する努力は力価の増大に焦点をあててきた。ＳＢ２０３５８０及び他の２，４，５−トリアリールイミダゾールは、ナノモル範囲にＥＤ５０値を有する強力なｐ３８キナーゼ阻害剤であることがわかっている。例えば、ＳＢ２０３５８０に関して、ＥＣ５０は４８ｎＭであることがわかっている。以下に示すピリジニルイミダゾールＳＫＦ８６００２（Ｐ１）及びＳＢ２０３５８２（Ｐ２）は、ｐ３８阻害剤の大部分に対する鋳型として使用されている。最近の文献（Ｌｅｅら、２０００  Ｉｍｍｕｎｏｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４７：１８５−２０１）では、以下に示すｐ３８阻害剤（Ｐ３−Ｐ６）が開示されている。これらの阻害剤中で注目すべきは、化合物Ｐ４に関して記載された比較的高い力価及び選択性（ｐ３８ＥＣ５０＝０．１９ｎＭ）並びにＳＢ２２００２５（Ｐ６）による炎症駆動型血管形成の阻害である。
【００３４】
臨床開発中と報告されている２種のｐ３８阻害剤は、ＨＥＰ６８９（Ｐ７）及びＶＸ−７４５（Ｐ８）である。ＶＸ−７４５は、関節リューマチの第ＩＩ相治験中であると報告されている。強力な局所抗炎症活性がＨＲＰ６８９に関して開示されており、これは、乾癬及び他の皮膚疾患の治療のための局所用薬剤としてのその可能性を調べるために臨床開発に入ったと報告されている。
【００３５】
【化１１】
2008544743.tif 000006
【００３６】
【化１２】
2008544743.tif 000007
種々のｐ３８阻害剤の別の考察は、Ｂｏｅｈｍら、２０００  Ｅｘｐ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｐａｔ  １０：２５−３７；及びＳａｌｉｔｕｒｏら、１９９９  Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ６：８０７−８２３に記載されている。
【００３７】
本明細書に記載する好ましいｐ３８阻害剤は、ｐ３８阻害の比較的低い力価を示しつつ、意外にも、そのような阻害の結果として比較的高い治療効果（例えばＳＡＰＫ系のモジュレーションに関する）を有するピルフェニドンの誘導体及び類縁体である。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、ｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して、約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。
ピルフェニドン誘導体及び類縁体
ピルフェニドン（５−メチル−１−フェニル−２−（１Ｈ）−ピリドン）自体は既知化合物であり、その薬理学的作用は、例えば日本国特許出願公開８７６７７／１９７４及び１２８４３３８／１９７６に開示されている。全て参照により全体が本明細書に組み込まれる１９７４年１０月１日発行の米国特許第３，８３９，３４６号；１９７６年８月１０日発行の米国特許第３，９７４，２８１号；１９７７年８月１６日発行の米国特許第４，０４２，６９９号；及び１９７７年１０月４日発行の米国特許第４，０５２，５０９号は、５−メチル−１−フェニル−２−（１Ｈ）−ピリドンの製造方法及び抗炎症剤としてのその使用を記載している。
【００３８】
ピルフェニドン及びその誘導体は、ストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）系をモジュレートするための有用な化合物である。
【００３９】
用語「アルキル」は、本明細書において、１〜１０の炭素原子の１価の直鎖又は分枝鎖ラジカルを指し、例えば、限定しないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル等を包含する。
【００４０】
用語「アルケニル」は、本明細書において、炭素二重結合を含有する２〜１０の炭素原子の１価の直鎖又は分枝鎖ラジカルを指し、例えば、限定しないが、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル等を包含する。
【００４１】
用語「ハロゲン」は、本明細書において、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。
【００４２】
用語「ハロアルキル」は、本明細書において、アルキルラジカルに付加した１つ以上のハロゲン基を指す。
【００４３】
用語「ニトロアルキル」は、本明細書において、アルキルラジカルに付加した１つ以上のニトロ基を指す。
【００４４】
用語「チオアルキル」は、本明細書において、アルキルラジカルに付加した１つ以上のチオ基を指す。
【００４５】
用語「ヒドロキシアルキル」は、本明細書において、アルキルラジカルに付加した１つ以上のヒドロキシ基を指す。
【００４６】
用語「アルコキシ」は、本明細書において、−Ｏ−連結部を介して親分子に共有結合した直鎖又は分枝鎖アルキルラジカルを指す。アルコキシ基の例は限定しないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ等を包含する。
【００４７】
用語「アルコキシアルキル」は、本明細書において、アルキルラジカルに付加した１つ以上のアルコキシ基を指す。
【００４８】
用語「カルボキシ」は、本明細書において、場合によりアルキル基に付加した−ＣＯＯＨを指す。カルボキシ基の例は、限定しないが、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ３）等を包含する。
【００４９】
用語「アルコキシカルボニル」は、−（ＣＯ）−（Ｏ）−アルキルを指す。アルコキシカルボニル基の例は、限定しないが、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基等を包含する。
【００５０】
炭水化物は、ポリヒドロキシアルデヒド又はケトン、又は加水分解によりそのような化合物を生じる物質である。炭水化物は、元素である炭素（Ｃ）、水素（Ｈ）及び酸素（Ｏ）を含み、水素の比率は炭素及び酸素のものの二倍となる。
【００５１】
その基本的形態において、炭水化物は単一の糖類又は単糖類である。これらの単一の糖類が相互に組み合わせられてより複雑な炭水化物を形成する。２つの単一の糖類の組合せが２糖類である。２〜１０個の単一の糖類よりなる炭化水素をオリゴ糖、そしてより多数を有するものを多糖類と称する。
【００５２】
用語「ウロニド」は、本明細書において、環の一部ではない炭素上のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）を有する単糖類を指す。ウロニドの名称は単糖類の根源を保持しているが、−オースの糖の接尾辞が−ウロニドに変化している。例えば、グルクロニドの構造はグルコースに相当する。
【００５３】
本明細書において、ラジカルはラジカルを含有する物質種が他の物質種に共有結合することができるように単一の不対電子を有する物質種を示す。従って、この文脈において、ラジカルは必ずしもフリーラジカルではない。むしろ、ラジカルとはより大きい分子の特定の部分を示す。用語「ラジカル」は、用語「基」と互換的に使用できる。
【００５４】
本明細書においては、置換された基は、１つ以上の水素原子の他の原子又は基との交換が起こっている未置換の親構造から誘導される。置換されている場合、置換基はＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０シクロアルキル、アリール、縮合アリール、ヘテロ環、ヘテロアリール、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、Ｃ１−Ｃ１０アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロゲン、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ニトロ、シリル、トリハロメタンスルホニル、トリフルオロメチル及びアミノ、例えばモノおよびジジ置換アミノ基及びこれらの保護された誘導体から個々に独立して選択される。上記置換基の保護誘導体を形成できる保護基は当該分野で知られており、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９などの参考文献に記載されている。置換基を「場合により置換された」と記載する場合は、その置換基は上記置換基により置換されていてよい。
【００５５】
用語「精製された」は、試験した場合に測定される物質の少なくとも９５％を含むように他の化合物から分離されている化合物を指す。
【００５６】
不斉炭素原子が本明細書に記載した化合物中に存在してよい。ジアステレオマー及びエナンチオマー並びにそれらの混合物を包含するそのような異性体の全てが、言及されている化合物の範囲に包含されることを意図している。特定の場合においては、化合物は互変異体の形態で存在できる。全ての互変異体の形態が、言及されている化合物の範囲に包含されることを意図している。同様に、化合物がアルケニル又はアルケニレン基を含有する場合は、化合物のシス及びトランス異性体型が存在する。シス及びトランス異性体の両方、並びに、シス及びトランス異性体の混合物が包含される。即ち、本明細書において化合物に言及する場合は、特段の記載が無い限り上記した異性体型の全てを包含する。
【００５７】
種々の形態、例えば多形型、溶媒和物、水和物、配座異性体、塩及びプロドラッグの誘導体が実施形態に包含される。多形型は同じ化学式を有するが、異なる構造を有する組成物である。溶媒和物は、溶媒和（溶媒分子と溶質の分子又はイオンとの組合せ）により形成される組成物である。水和物は水の取り込みにより形成される化合物である。配座異性体は配座上の異性体である構造である。配座上の異性体形成は同じ構造式を有するが回転性結合に関して原子の異なるコンホーメーションを有する分子（配座異性体）の現象である。化合物の塩は当該分野で知られた方法により製造できる。例えば、化合物の塩は化合物の化学量論的等量に適切な塩基又は酸を反応させることにより製造できる。プロドラッグはその薬理学的作用を示す前に生体変換（化学変換）を起こす化合物である。例えば、プロドラッグとは、即ち、親分子における望ましくない特性を改変又は排除するために一過性に使用される特殊な保護基を含有する薬剤として捉えることができる。即ち、本明細書において化合物に言及する場合は、特段の記載が無い限り上記した形態の全てを包含する。
【００５８】
以下に記載する化合物は本明細書に記載する方法において有用である。ある実施形態において、以下に記載する化合物は、ｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す。
【００５９】
ある実施形態は下記属（属Ｉａ）：
【００６０】
【化１５】
2008544743.tif 000008
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択され；そして、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルコキシ及びヒドロキシよりなる群から選択される］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００６１】
別の実施形態は、下記属（属Ｉｂ）：
【００６２】
【化１６−１】
2008544743.tif 000009
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ及びＯＨよりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ、ハロゲン及びＯＨよりなる群から選択される］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００６３】
別の実施形態は、下記属（属Ｉｃ）：
【００６４】
【化１６−２】
2008544743.tif 000010
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ、ＯＨ及びＯＣＨ３よりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−グルクロニド、Ｂｒ、ＣＨ３およびＣＨ２ＯＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ及びＯＨよりなる群から選択されるが；
ただし、Ｒ４及びＸ３がＨである場合は、Ｒ２はＣＨ３ではない］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００６５】
別の実施形態は、下記亜属（亜属ＩＩ）：
【００６６】
【化１７−１】
2008544743.tif 000011
［式中、
Ｘ３はＨ、ＯＨ及びＯＣＨ３よりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−グルクロニド、Ｂｒ、ＣＨ３及びＣＨ２ＯＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ及びＯＨよりなる群から選択されるが、ただしＸ３がＯＨである場合は、Ｒ２はＣＨ３ではない］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００６７】
別の実施形態は、下記亜属（亜属ＩＩＩ）：
【００６８】
【化１７−２】
2008544743.tif 000012
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ及びＯＨよりなる群から選択され；そして、
Ｒ２はＨ、Ｂｒ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２及びＣＦ３よりなる群から選択される］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００６９】
別の実施形態は、下記亜属（亜属ＩＶ）：
【００７０】
【化１７−３】
2008544743.tif 000013
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、フェニル、置換されたフェニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択される］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００７１】
別の実施形態は、下記亜属（亜属Ｖ）：
【００７２】
【化１８−１】
2008544743.tif 000014
［式中、Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、フェニル、置換されたフェニル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニル、ＣＯ−ウロニド、ＣＯ−単糖類、ＣＯ−オリゴ糖及びＣＯ−多糖類よりなる群から選択される］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００７３】
別の実施形態は、下記属（属ＶＩ）：
【００７４】
【化１８−２】
2008544743.tif 000015
［式中、
Ａｒはピリジニル又はフェニルであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｘ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＣＨ３又はＯＣＨ３であり；
Ｒ２はメチル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−グルコシル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ブロモ、メチルメトキシ、メチルヒドロキシ又はフェニルであり；そして、
Ｒ４はＨ又はヒドロキシルであるが；
ただし、Ｒ２がトリフルオロメチルであり、ＺがＯであり、Ｒ４がＨであり、そしてＡｒがフェニルである場合は、フェニルはＨ、Ｆ又はＯＨにより４’位において置換されているのみではない］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００７５】
属ＶＩは下記亜属ＶＩａ及び亜属ＶＩｂ：
【００７６】
【化１９−１】
2008544743.tif 000016
［式中、Ｚ、Ｘ３、Ｒ２及びＲ４は属ＶＩと同様に定義される］により表される化合物のファミリーを提供する。亜属ＶＩａにより表される構造におけるフェニル環は４位においてＸ３で置換されていると認識される。
【００７７】
別の実施形態は、下記属（属ＶＩＩ）：
【００７８】
【化１９−２】
2008544743.tif 000017
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ及びＯＨよりなる群から選択され；
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニルよりなる群から選択され；そして、
Ｒ４はＨ、ハロゲン及びＯＨよりなる群から選択される］により表される化合物のファミリーを提供する。
【００７９】
本明細書に記載した特定の化合物は、上記した種々の属の１つより多くのメンバーであってよい。本明細書に記載した化合物はストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）系をモジュレートするために有用である。ストレス活性化蛋白質キナーゼ（ＳＡＰＫ）系をモジュレートするために有用である属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び属ＶＩ及びＶＩＩの例示される化合物を以下の表１に示す。化合物１〜６は亜属ＩＩの化合物の例である。化合物７〜１２は亜属ＩＩＩの化合物の例である。化合物１３はピルフェニドン、即ち亜属ＩＩの化合物の例である。化合物１４〜３２は亜属ＶＩの化合物の例である。化合物３３は亜属ＶＩＩの化合物の例である。
【００８０】
【化２０】
2008544743.tif 000018
【００８１】
【化２１】
2008544743.tif 000019
【００８２】
【化２２】
2008544743.tif 000020
【００８３】
【化２３】
2008544743.tif 000021
【００８４】
【化２４】
2008544743.tif 000022
別の実施形態は、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩにより示される精製された化合物に関する。純度の程度は上記したパーセントとして表示してよい。好ましい実施形態においては、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩにより表される精製された化合物は、精製された化合物を含む組成物の総重量に基づいて約９６％以上、より好ましくは約９８％以上の純度を有する。例えば、ある実施形態は、精製された化合物３を提供する（表１）。
【００８５】
属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物は種々の反応により合成できる。合成の例は、合成スキーム１、２及び３と標記される以下のものを包含する。
合成スキーム１
【００８６】
【化２６】
2008544743.tif 000023
合成スキーム２
【００８７】
【化２７−１】
2008544743.tif 000024
Ｕｌｌｍａｎｎ反応：Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４５（４）：７１９−７２１。標的Ｎ−アリール−ピリジン−２−オンは、２−ヒドロキシピリジンのアリール化を介して得た。Ｕｌｌｍａｎｎ反応は開示した化合物の製造に有用であるが、例外として５−ブロモ類縁体及び化合物３３は例えば合成スキーム３により得られる。
【００８８】
ＤＭＦ（３ｍｌ）中の２−ヒドロキシピリジン（１ミリモル）、ヨウ化又は臭化アリール（２ミリモル）、ＣｕＩ（０．１〜０．５ミリモル）及び無水炭酸カリウム（１ミリモル）をアルゴン雰囲気下１３５℃で一夜攪拌した。深色の反応混合物を酢酸エチル及び１０％水酸化アンモニウム中に回収した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。カラムクロマトグラフィーにより２５〜６０％収率でオフホワイトの固体として標的化合物を得た。
合成スキーム３
【００８９】
【化２７−２】
2008544743.tif 000025
標的Ｎ−アリール−２−ピリドンは、アルキルボロン酸を用いた２−ヒドロキシピリジンのアリール化を介して得ることができる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，４２（２００１）３４１５−３４１８）。アルキルボロン酸経路は、開示した化合物の製造において有用である。ジクロロメタン（２５ｍｌ）中の２−ヒドロキシピリジン（５ミリモル）、アリールボロン酸（１０ミリモル）、酢酸銅（ＩＩ）（０．５〜１ミリモル）、ピリジン（１０ミリモル）及びモレキュラーシーブ４Ａ（０．５〜１ｇ）の混合物を大気開放下に室温で２４〜４８時間攪拌した。反応混合物をＥＤＴＡと共に飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、有機層を硫酸ナトリウム上に乾燥した。標的Ｎ−アリール−２−ピリドンは、８５〜１００％収率で白色固体としてカラムクロマトグラフィーにより単離した。
【００９０】
ピルフェニドン誘導体として、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物はまた、全て参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第３，８３９，３４６号；第３，９７４，２８１号；第４，０４２，６６９号；及び第４，０５２，５０９号に開示されているようなピルフェニドンのための知られた合成スキームに基づいて当該分野で知られた何れかの従来の反応により合成してもよい。
【００９１】
本明細書に記載した出発物質は市販品であるか、既知物質であるか、又は当該分野で知られた方法により製造できる。更に、本明細書に記載していない出発物質は市販品であるか、既知物質であるか、又は当該分野で知られた方法により製造できる。
【００９２】
出発物質は適切な置換基を有することにより最終的に相当する置換基を有する所望の生成物を与えることができる。或いは、置換基は合成の何れかの時点において付加することにより最終的に相当する置換基を有する所望の生成物を与えることができる。
【００９３】
合成スキーム１〜３は、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物を製造するために使用できる方法を示している。当業者の知る通り、多くの異なる合成反応スキームを使用して属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物を合成することができる。更に、当業者の知る通り多くの異なる溶媒、カップリング剤及び反応条件を合成反応において使用することにより同等の結果を得ることができる。
【００９４】
順序の変更は当業者の知る通りであり、そして更に、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物を作成するための、上記した過程において適切に使用してよい記載した又は別途既知である類似の反応からの適切な反応条件の変更も、当業者の知る通りである。
【００９５】
属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物の製造のための本明細書に記載した過程において、保護基の使用は有機化学の当業者の知る通りであり、従って、適切な保護基の使用は、一部の場合においては、そのような基を標記上は明記しないものの、本明細書に記載したスキームの過程において意図される場合がある。そのような適当な保護基の導入及び除去は有機化学の当該分野で良く知られており；例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ，”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｗｉｌｅｙ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），１９９９を参照できる。本明細書に記載した反応の生成物は抽出、蒸留、クロマトグラフィー等の従来の手段により単離してよい。
【００９６】
属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物の塩、例えば製薬上許容可能な塩は、化合物の化学量論的等量に適切な塩基又は酸を反応させることにより製造できる。同様に、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物の製薬上許容可能な誘導体（例えばエステル）、代謝産物、水和物、溶媒和物及びプロドラッグは当該分野で知られた方法により製造してよい。即ち、他の実施形態は、活性化合物のプロドラッグである化合物を提供する。一般的に、プロドラッグはインビボで代謝（例えば脱アミノ化、脱アルキル化、脱エステル化等による）されることにより活性化合物を与える化合物である。「製薬上許容可能なプロドラッグ」とは、調和の取れた医学的判断の範囲内において、予定外の毒性、刺激、アレルギー応答等を伴うことなく患者における薬学的使用に適し、そして、意図する用途の為に有効な化合物を意味し、本実施形態の化合物の製薬上許容可能なエステル並びに可能な場合は両性イオン型を包含する。製薬上許容可能なプロドラッグ型は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖｏｌ．１４，Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ及びＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７に記載されており、これらは両方とも参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【００９７】
本明細書に記載した化合物及び組成物は、代謝産物であってもよい。本明細書においては、用語「代謝産物」は、実施形態の化合物又は製薬上許容可能なその塩、類縁体又は誘導体と同様のインビトロ又はインビボ活性を示す実施形態の化合物の代謝の生成物を意味する。本明細書に記載した化合物及び組成物はまた、水和物及び溶媒和物を包含してもよい。本明細書においては、用語「溶媒和物」は、溶質（本明細書において、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物）及び溶媒により形成される複合体を指す。実施形態の目的のためにはこのような溶媒は、好ましくは溶質の生物学的活性を妨害してはならない。溶媒は、例えば、水、エタノール、又は酢酸であってよい。上記を鑑みれば、特定の化合物又は化合物の属の本明細書における言及は、特段の記載が無い限り、上記した種々の形態、例えば製薬上許容可能な塩、エステル、プロドラッグ、代謝産物及び溶媒和物を包含するものと理解する。
ｐ３８ＭＡＰキナーゼの阻害方法
ある実施形態においては、インビトロ及びインビボでＳＡＰＫ系をモジュレートするための方法が提供される。方法は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫに化合物のＳＡＰＫモジュレート濃度を接触させること（例えば少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫを含有する細胞又は組織に化合物を接触させることによる）を包含し、ここで化合物は、化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害のための比較的高い阻害剤濃度に相当する、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害剤のための比較的低い力価を有する。
【００９８】
「細胞を接触させる」とは、化合物又は他の要件組成物を細胞又は組織に直接接触させるか、又は細胞又は組織において所望の生物学的活性を誘導するために十分接近させる状態を指す。例えば、化合物にｐ３８ＭＡＰＫ含有細胞又は組織を接触させることは、ｐ３８ＭＡＰＫと化合物との間の相互作用を可能にし、これにより細胞内で所望の生物学的作用をもたらす何れかの態様において行ってよい。細胞又は組織を接触させることは、例えば、化合物（例えば属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物、及び／又は、その塩、エステル、プロドラッグ及び／又は中間体、及び／又は、上記の１つ以上を含む医薬組成物）の相互混合又は投与により達成してよい。
【００９９】
或いは、細胞又は組織を接触させることは化合物が直接又は間接的にｐ３８ＭＡＰＫ含有細胞又は組織にターゲティングされるような態様において化合物を導入することにより達成してよい。細胞又は組織の接触は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫに化合物が結合する条件下で行ってよい。そのような条件は、化合物とｐ３８含有細胞又は組織との接近、ｐＨ、温度、又は、ｐ３８ＭＡＰＫへの化合物の結合に影響する何れかの条件を包含してよい。
【０１００】
特定の実施形態においては、細胞はインビトロで化合物に接触させ、別の実施形態においては、細胞はインビボで化合物に接触させる。
【０１０１】
細胞をインビボで接触させる場合、化合物の有効濃度（ＥＣ）は、その化合物による特定のエンドポイントの最大観察可能低減と相対比較した場合に、ある標的パーセント（例えば５０％、４０％、３０％、２０％、１０％）まで特定のエンドポイントの低減をもたらす濃度である。このようなエンドポイントは、生理学的応答、例えば血液又は他の体液中のＴＮＦα濃度の低減であってよい。例えば、ＥＣ５０、ＥＣ４０、ＥＣ３０、ＥＣ２０及びＥＣ１０は、用量応答曲線上の、最大観察可能低減と相対比較した場合のそれぞれ５０％、４０％、３０％、２０％及び１０％までの血清中ＴＮＦα濃度の低下をもたらす濃度として測定される。
【０１０２】
細胞をインビトロで接触させる場合、細胞系試験を除き、有効濃度（ＥＣ）は所定のパーセント（例えば５０％、４０％、３０％、２０％、１０％）まで特定の標的の活性の低下をもたらす濃度である。例えば、ＥＣ５０、ＥＣ４０、ＥＣ３０、ＥＣ２０及びＥＣ１０は、用量応答曲線上の、それぞれ５０％、４０％、３０％、２０％及び１０％までの特定の標的の活性の低下をもたらす濃度として測定される。特定の標的の完全な阻害が得られない場合は、化合物の有効濃度（ＥＣ）は、その化合物による標的活性の最大低減と相対比較した場合に、あるパーセント（例えば５０％、４０％、３０％、２０％、１０％）まで標的活性の低下をもたらす濃度である。
【０１０３】
細胞をインビトロで接触させる場合、細胞系の試験においては、化合物の有効濃度（ＥＣ）は、その化合物による特定のエンドポイントの最大観察可能低減と相対比較した場合に、ある標的パーセント（例えば５０％、４０％、３０％、２０％、１０％）まで特定のエンドポイントの低減をもたらす濃度である。このようなエンドポイントは、生理学的応答、例えば、細胞培地中のＴＮＦα濃度により測定した場合のＴＮＦαの分泌の低減であってよい。例えば、ＥＣ５０、ＥＣ４０、ＥＣ３０、ＥＣ２０及びＥＣ１０は、用量応答曲線上の、最大観察可能低減と相対比較した場合のそれぞれ５０％、４０％、３０％、２０％及び１０％までのＴＮＦα濃度の低下をもたらす濃度として測定される。
【０１０４】
ＳＡＰＫ系モジュレート化合物のＥＣ５０は、好ましくは少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、より好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある。即ち、例えば、ＳＡＰＫ系のモジュレーションは、インビボの用量応答曲線上で求めた場合に、化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して、ＥＣ４０より低い、好ましくはＥＣ３０より低い、より好ましくはＥＣ２０より低い、更に好ましくはＥＣ１０より低い少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫに化合物（例えば、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物）を接触させることを包含する。
【０１０５】
特定の実施形態においては、化合物は製薬上許容可能な担体と共に医薬組成物の形態で提供される。
低力価ｐ３８阻害剤を得るための化合物ライブラリのスクリーニング
別の態様において、薬学的活性化合物を特定するため、例えば化合物が、例えば炎症性状態（例えばｐ３８又はサイトカイン関連状態）の防止又は治療のための治療薬として潜在的に有用であるかどうかを調べるための方法が提供される。方法は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して複数の化合物を試験すること、及び、ｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して比較的低力価を示す化合物を選択することを包含する。好ましくはそのような低力価ｐ３８阻害剤化合物のＥＣ５０は、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある。試験すべき複数の化合物は、好ましくは潜在的化合物のライブラリから選択する。ライブラリの複数の化合物の試験は種々の方法で実施してよい。例えば、一部の実施形態においては、方法は更に複数の化合物に少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫを接触させること、及び、化合物がサイトカインの活性を阻害するかどうか調べることを含む。ｐ３８ＭＡＰＫは、好ましくは、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ及びｐ３８δよりなる群から選択される。好ましい実施形態においては、接触工程はインビトロで行われ；特定の好ましい実施形態においては、接触工程はｐ３８ＭＡＰＫを含む細胞を化合物に接触させることを含む。
【０１０６】
更に別の実施形態においては、インビトロ又はインビボにおいて細胞中のｐ３８ＭＡＰＫの活性を阻害する方法が提供される。一般的に、そのような方法は、細胞におけるｐ３８活性が阻害される条件下、化合物（例えば、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物）の有効なｐ３８阻害量に少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫを含有する細胞を接触させることを包含する。このような方法の例は後述する実施例のセクションに示す。化合物は、好ましくは少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。化合物に少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫを接触させることは、好ましくは、化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して、ＥＣ３０より低い、好ましくはＥＣ２０より低い、より好ましくはＥＣ１０より低いＳＡＰＫ系モジュレート濃度において実施する。
【０１０７】
インビボの方法は例えば、種々の濃度の目的の化合物（例えば、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物）を経口又は注射により動物群に導入することを包含する。化合物の注射の後、リポ多糖類を静脈内投与する。血清中ＴＮＦα濃度を測定し、対照動物のものと比較する。好ましい化合物はＴＮＦαの放出を阻害し、これにより、試験動物の血液試料中のＴＮＦα濃度を低下させる。化合物は、好ましくはＴＮＦαの放出の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。
【０１０８】
薬学的に活性な化合物を特定する方法は、更に、選択された化合物の哺乳類毒性を測定することを包含してよい。このような方法は一般的に当業者の知る通りである。薬学的に活性な化合物を特定する方法は、哺乳類毒性測定と組み合わせるか、他の理由の為に、選択された化合物を被験対象に投与することを包含してもよい。ある実施形態においては、被験対象は炎症性状態を有するか、有する危険性を有している。好ましくは、被験対象は哺乳類であり、そしてヒトであってよい。
治療及び／又は防止の方法
別の実施形態は、疾患状態、例えば炎症性状態及び／又は及び線維性状態を治療又は防止するための方法を提供する。方法は、炎症性状態及び線維性状態から選択される状態少なくとも１つの危険性を有するか、又はその状態を有している対象を特定すること、及び、炎症性状態及び／又は線維性状態を治療又は防止するために有効な量で対象に化合物を投与することを包含する。好ましい実施形態においては、化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。好ましい実施形態においては、有効量は、化合物による少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して、ＥＣ３０より低い、好ましくはＥＣ２０より低い、より好ましくはＥＣ１０より低い血液又は血清又は他の体液濃度をもたらす。好ましい実施形態においては、化合物はＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。別の実施形態においては、有効量は、化合物による体液中のＬＰＳ刺激ＴＮＦα放出の阻害に関して、ＥＣ３０より低い、好ましくはＥＣ２０より低い、より好ましくはＥＣ１０より低い血液又は血清又は他の体液濃度をもたらす。有効量は、好ましくは、例えば限定しないが眠気、吐き気、寒気、胃腸不快感及び光感受性発疹などの対象における望ましくない副作用を誘発する量の約７０％以下、より好ましくは約５０％未満である。治療又は防止の為に使用される化合物は、好ましくは属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物である。
【０１０９】
炎症性状態の危険性を有するか、その状態を有している対象を特定するための方法は当業者の知る通りである。本明細書に記載した方法により治療又は防止してよい炎症性状態の例は、ｐ３８関連状態、例えば改変されたサイトカイン活性に関連する状態、ＳＡＰＫ系のモジュレーションに関連する状態、自己免疫疾患及び急性及び慢性の炎症に関連する疾患を包含する。サイトカインは好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８及びＴＮＦαよりなる群から選択されるがこれらに限定されない。ある実施形態においては、炎症性状態を治療又は防止するために使用する化合物は、ＳＡＰＫシグナリング経路におけるキナーゼを阻害する化合物である。好ましい化合物の例は、属Ｉａ〜ｃ、亜属ＩＩ〜Ｖ及び／又は属ＶＩ及びＶＩＩの化合物を包含する。
【０１１０】
用語「ｐ３８関連状態」は、直接又は間接的にｐ３８ＭＡＰキナーゼシグナリング経路の関与が考えられる疾患又は他の有害な状態を意味する。ｐ３８関連状態の例は、ｐ３８活性の持続、延長、増強又は上昇した水準に起因するＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＬ−６又はＩＬ−８の調節不全又は過剰発現により誘発される状態を包含する。このような状態は、限定しないが、炎症性疾患、自己免疫疾患、線維性疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染性疾患、神経変性疾患、アレルギー、卒中における再灌流虚血、心臓発作、血管形成障害、臓器低酸素賞、血管肥大、心臓肥大、トロンビン誘導血小板凝集、及び、プロスタグランジン又はシクロオキシゲナーゼ経路に関連する状態、例えばプロスタグランジンエンドパーオキシドシンターゼの関与する状態を包含する。ｐ３８関連状態は、ｐ３８のアイソフォームの関連する、又はこれにより媒介される何れかの状態を包含することができる。
【０１１１】
「線維性状態」、「線維増殖性状態」、「線維性疾患」、「線維増殖性疾患」、「線維性障害」及び「線維増殖性障害」は、線維芽細胞の調節不全の増殖又は活性及び／又はコラーゲン製組織の病的又は過剰な蓄積を特徴とする状態、疾患又は障害を指すために互換的に使用される。典型的には、何れかのこのような疾患、障害又は状態は、抗線維活性を有する化合物の投与による治療に適している。線維性障害は限定しないが、肺線維症、例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）及び既知の病因から生じる肺線維症、肝線維症及び腎線維症を包含する。他の例示される線維性状態は、筋骨格線維症、心線維症、手術後癒着、硬皮症、緑内障及びケロイドなどの皮膚患部を包含する。
【０１１２】
用語「ＳＡＰＫ系をモジュレートする」は、例えば、インビトロ又はインビボにおいてｐ３８活性を阻害することにより、ストレス活性化蛋白質キナーゼ活性の活性を増大又は低減することを意味する。特定の実施形態において、ＳＡＰＫ系は、細胞におけるｐ３８活性が、未治療の対照細胞のｐ３８活性と比較して、約５０％、好ましくは約４０％、より好ましくは約３０％、更に好ましくは約２０％、又は、更により好ましくは約１０％阻害される場合にモジュレートされる。
【０１１３】
改変されたサイトカイン活性に関連する状態とは、本明細書においては、非疾患状態と比較してサイトカイン活性が改変されている状態を指す。これには、限定されないが、ｐ３８活性に関連し得るサイトカイン活性の持続、延長、増強又は上昇した水準をもたらすＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＬ−６又はＩＬ−８の過剰生産又は調節不全により誘発される状態を包含する。このような状態は、限定されないが、炎症性疾患、自己免疫疾患、線維性疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染性疾患、神経変性疾患、アレルギー、卒中における再灌流／虚血、心臓発作、血管形成障害、臓器低酸素症、血管肥大、心臓肥大、トロンビン誘導血小板凝集、及び、プロスタグランジンエンドパーオキシドシンターゼなどのシクロオキシゲナーゼ及びリポキシゲナーゼシグナリング経路に関連する状態を包含する。サイトカイン関連状態は、ＩＬ−１（特にＩＬ−１β）、ＴＮＦα、ＩＬ−６又はＩＬ−８又はｐ３８により調節できる何れかの他のサイトカインに関連するか、これにより媒介される何れかの状態を包含できる。好ましい実施形態においては、サイトカイン関連状態はＴＮＦαに関連する状態である。
【０１１４】
本明細書に記載した方法はまた、自己免疫疾患及び急性及び慢性の炎症に関連する疾患を治療するために使用してもよい。これらの疾患は、限定されないが、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、閉塞性細気管支炎症候群、慢性自家移植片線維症、炎症性肺線維症（ＩＰＦ）、関節リューマチ；リューマチ様脊椎炎；骨関節炎；痛風、他の関節炎状態；敗血症；敗血症性ショック；内毒素ショック；グラム陰性敗血症；毒性ショック症候群；顔面筋疼痛症候群（ＭＰＳ）；細菌性赤痢；喘息；成人呼吸窮迫症候群；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性結腸炎；糸球体腎炎；硬皮症；慢性甲状腺炎；グレーブス病；オーモンド病；自己免疫性胃炎；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性好中球減少症；血小板減少症；膵臓線維症；慢性活動性肝炎、例えば肝線維症；急性及び慢性の腎疾患；腎線維症、刺激性腸症候群；発熱；再狭窄；脳マラリア；卒中及び虚血傷害；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性及び慢性の疼痛；アレルギー、例えばアレルギー性鼻炎及びアレルギー性結膜炎；心臓肥大、慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；らい病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液嚢炎；腱炎；腱滑膜炎；ヘルニア化、破断又は脱出した椎間板症候群；骨粗鬆症；血栓症；珪肺症；肺筋肉異常増殖症；骨再吸収疾患、例えば骨粗鬆症又は多発性骨髄腫関連骨障害；癌、例えば転移性乳癌、結腸直腸癌、悪性黒色腫、胃癌及び非小細胞肺癌；対宿主性移植片反応；及び自己免疫疾患、例えば多発性硬化症、狼瘡及び線維筋肉痛；ＡＩＤＳ及び他のウィルス性疾患、例えば帯状疱疹、単純疱疹Ｉ又はＩＩ、インフルエンザウィルス、重度急性呼吸症候群（ＳＡＲＳ）及びサイトメガロウィルス；及び真性糖尿病を包含する。更に、実施形態の方法は、増殖性疾患（良性及び悪性の過形成の両方を包含する）、例えば、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、カポジ肉腫、転移性黒色腫、多発性骨髄腫、乳癌、例えば転移乳癌；結腸直腸癌；悪性黒色腫；胃癌；非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）；骨転移等；疼痛障害、例えば神経筋疼痛、頭痛、癌疼痛、歯痛及び関節痛；血管形成障害、例えば固形腫瘍血管形成、眼の血管新生、及び乳幼児血管腫；シクロオキシゲナーゼ及びリポキシゲナーゼシグナリング経路に関連する状態、例えばプロスタグランジンエンドパーオキシドシンターゼ−２に関連する状態（例えば浮腫、発熱、痛覚消失及び疼痛）；臓器低酸素症；トロンビン誘導血小板凝集を治療するために使用できる。更に、本明細書に記載した方法は、動物、例えば哺乳類における原生動物疾患の治療に有用である。
【０１１５】
対象は、細胞又は組織又は生物の１つ以上を包含してよい。好ましい対象は哺乳類である。哺乳類は何れかの哺乳類を包含してよい。非限定的な例として、好ましい哺乳類はウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラクダ、バッファロー、ネコ、イヌ、ラット、マウス及びヒトを包含する。高度に好ましい対象哺乳類はヒトである。化合物は当該分野で知られた何れかの薬物送達経路を介して対象に投与してよい。特定の例示される投与経路は経口、眼球、直腸内、口内、局所、経鼻、眼内、皮下、筋肉内、静脈内（瞬時及び注入）、脳内、経皮及び肺への投与を包含する。
【０１１６】
用語「治療有効量」及び「予防有効量」は、本明細書においては、特定された疾患を治療、軽減又は防止するために、又は、検出可能な治療、予防又は阻害作用を示すために十分な化合物の量を指す。作用は例えば以下の実施例において開示する試験により検出できる。対象に対する厳密な有効量は、対象の体重、体格及び健康状態；状態の性質及び範囲；及び投与の為に選択された治療薬又は治療薬の組合せに応じて変動する。ある状況に対する治療及び予防有効量は、医師の技量及び判断の範囲内の日常的実験により決定できる。好ましくは、実施形態の化合物の有効量はｐ３８ＭＡＰキナーゼの阻害に関するＥＣ３０、ＥＣ２０又はＥＣ１０未満の血液又は血清又は他の体液濃度をもたらす。
【０１１７】
何れかの化合物に対して、治療及び予防有効量はまず、例えば新生物細胞の細胞培養試験において、又は動物モデル、通常はラット、マウス、ウサギ、イヌ又はブタにおいて、推定することができる。動物モデルは又、適切な濃度範囲及び投与経路を決定するために使用してもよい。次にこれらの情報を用いてヒトにおける投与のための有用な用量及び経路を決定できる。
【０１１８】
治療／予防の薬効及び毒性、例えばＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）及びＬＤ５０（集団の５０％において致死的な用量）は、細胞培養又は実験動物における標準的な薬学的操作法により測定してよい。治療作用と毒性作用との間の用量比は治療指数であり、それは比ＥＤ５０／ＬＤ５０で表示できる。大きい治療指数を示す医薬組成物が好ましい。しかしながら、狭小な治療指数を示す医薬組成物も実施形態の範囲に包含される。細胞培養試験及び動物試験から得られたデータをヒトにおける使用のための用量範囲の設定において使用してよい。このような組成物中に含有される用量は好ましくは毒性を僅かしか、又は全く伴わないＥＤ５０を包含する循環系中濃度の範囲内である。用量はこの範囲内において、使用する剤型、患者の感受性及び投与経路により変動してよい。
【０１１９】
より詳細には、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）は投与経路に応じて、約６５μＭ〜約１１５μＭ、又は約７５μＭ〜約１０５μＭ、又は約８５μＭ〜約９５μＭ、又は約８５μＭ〜約９０μＭに変動してよい。特定の用量及び送達方法に関する指針は文献に記載されており、そして一般的に当業者が入手できるものである。一般的に用量は、体重約４０〜約１００ｋｇの患者に対して、単回、分割又は連続用量において、約１００ｍｇ／日〜約１０ｇ／日、又は約２００ｍｇ／日〜約５ｇ／日、又は約４００ｍｇ／日〜約３ｇ／日、又は約５００ｍｇ／日〜約２ｇ／日の範囲であり得る（これらの用量は、この体重範囲より高い又は低い患者、特に４０ｋｇ未満の小児に対しては調節してよい）。一般的に、用量は一日当たり約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり得る。
【０１２０】
厳密な用量は、治療を必要とする対象に関連した要因に鑑みて専門家により決定される。用量及び投与は活性剤の十分な濃度が得られるように、又は、所望の作用が維持されるように調節する。考慮してよい要因は、疾患状態の重症度、対象の全身状態、対象の年齢、体重および性別、投与の時間及び頻度、薬剤の組合せ、反応感受性及び治療に対する耐容性／応答性を包含する。長時間作用性の医薬組成物は特定の製剤の半減期及びクリアランス率に応じて、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回、３〜４日毎又は毎週、投与してよい。例えば、ある実施形態においては、医薬組成物は１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程による患者への投与の為に選択された本明細書に記載した化合物の量を含有する。
【０１２１】
当然ながら、本明細書に記載した治療は、疾患の防止、症状の軽減、疾患進行の緩徐化、損傷の逆行、又は疾患の治癒を包含する。
【０１２２】
１つの態様において、炎症状態を治療することは、未治療の対象の集団と比較した場合の治療対象の集団の平均生存期間の増大をもたらす。好ましくは、平均生存期間は約３０日超；より好ましくは約６０日超；より好ましくは約９０日超；そして更に好ましくは約１２０日超、増大する。集団の生存期間の増大は何れかの再現性のある手段により測定してよい。好ましい態様においては、集団の平均生存期間の増大は、例えば活性化合物を用いた治療の開始後の生存の平均の長さを集団について計算することにより測定してよい。別の好ましい態様においては、集団の平均生存期間の増大は、例えば活性化合物を用いた治療の第１ラウンドの終了後の生存の平均の長さを集団について計算することにより測定してよい。
【０１２３】
別の態様においては、炎症性状態を治療することは、担体のみ投与されている対象の集団と比較した場合の治療対象の集団の死亡率の低下をもたらす。別の態様において、炎症性状態を治療することは、未治療集団と比較した場合の治療対象の集団の死亡率の低下をもたらす。更に別の態様においては、炎症性状態を治療することは、実施形態の化合物又は製薬上許容可能なその塩、代謝産物、類縁体又は誘導体ではない薬剤で１剤療法を受けている集団と比較した場合の治療対象の集団の死亡率の低下をもたらす。好ましくは、死亡率は約２％超；より好ましくは約５％超；より好ましくは約１０％超；そして最も好ましくは約２５％超、増大する。好ましい態様において、治療対象の集団の死亡率の低下は、何れかの再現性のある手段により測定してよい。別の好ましい態様においては、集団の死亡率の低下は、例えば活性化合物を用いた治療の開始後の単位時間当たりの疾患関連死亡の平均数を集団について計算することにより測定してよい。別の好ましい態様においては、集団の死亡率の低下は、例えば活性化合物を用いた治療の第１ラウンドの終了後の単位時間当たりの疾患関連死亡の平均数を集団について計算することにより測定してよい。
【０１２４】
別の態様においては、炎症性状態を治療することは腫瘍生育速度の低減をもたらす。好ましくは、投与後、腫瘍生育速度は投与前の数値と相対比較して少なくとも約５％低下し；より好ましくは、腫瘍生育速度は少なくとも約１０％低下し；より好ましくは少なくとも約２０％低下し；より好ましくは少なくとも約３０％低下し；より好ましくは少なくとも約４０％低下し；より好ましくは少なくとも約５０％低下し；更により好ましくは少なくとも約６０％低下し；そして最もより好ましくは少なくとも約７５％低下する。腫瘍生育速度は測定の何れかの再現性のある手段により測定してよい。好ましい態様においては、腫瘍生育速度は単位時間当たりの腫瘍直径の変化に従って測定する。
【０１２５】
別の態様において、炎症性状態を治療することは細胞増殖速度の低減をもたらす。好ましくは、投与後、細胞増殖速度は少なくとも約５％低下し；より好ましくは少なくとも約１０％低下し；より好ましくは少なくとも約２０％低下し；より好ましくは少なくとも約３０％低下し；より好ましくは少なくとも約４０％低下し；より好ましくは少なくとも約５０％低下し；更により好ましくは少なくとも約６０％低下し；そして最もより好ましくは少なくとも約７５％低下する。細胞増殖速度は測定の何れかの再現性のある手段により測定してよい。好ましい態様においては、細胞増殖速度は、例えば、単位時間当たりの組織試料中の分裂細胞の数を測定することにより測定する。
【０１２６】
別の態様において、炎症性状態を治療することは増殖細胞の比率の低減をもたらす。好ましくは、投与後、増殖細胞の比率は少なくとも約５％低下し；より好ましくは少なくとも約１０％低下し；より好ましくは少なくとも約２０％低下し；より好ましくは少なくとも約３０％低下し；より好ましくは少なくとも約４０％低下し；より好ましくは少なくとも約５０％低下し；更により好ましくは少なくとも約６０％低下し；そして最もより好ましくは少なくとも約７５％低下する。増殖細胞の比率は測定の何れかの再現性のある手段により測定してよい。好ましい態様においては、増殖細胞の比率は、例えば、組織試料中の非分裂細胞の数と相対比較しながら分裂細胞の数を定量することにより測定する。別の好ましい態様において、増殖細胞の比率は有糸分裂指数と等価である。
【０１２７】
別の態様において、炎症性状態を治療することは増殖細胞の領域又は区域のサイズの低減をもたらす。好ましくは、治療後、増殖細胞の領域又は区域のサイズは治療前のそのサイズと相対比較して少なくとも約５％低下し；より好ましくは少なくとも約１０％低下し；より好ましくは少なくとも約２０％低下し；より好ましくは少なくとも約３０％低下し；より好ましくは少なくとも約４０％低下し；より好ましくは少なくとも約５０％低下し；更により好ましくは少なくとも約６０％低下し；そして最もより好ましくは少なくとも約７５％低下する。増殖細胞の領域又は区域のサイズは測定の何れかの再現性のある手段により測定してよい。好ましい態様においては、増殖細胞の領域又は区域のサイズは、細胞増殖の領域又は区域の直径又は幅として測定してよい。
【０１２８】
本明細書に記載の方法は、治療の必要な対象を特定することを包含してよい。好ましい実施形態においては、方法は治療の必要な哺乳類を特定することを包含する。高度に好ましい実施形態においては、方法は治療の必要なヒトを特定することを包含する。治療の必要な対象を特定することは治療から利益を被ることができる対象を示す何れかの手段により達成してよい。例えば、治療の必要な対象を特定することは、臨床診断、検査、又は当該分野で知られた何れかの他の手段、例えば特定のための手段の何れか組合せにより行ってよい。
【０１２９】
本明細書の他の箇所に記載するとおり、本明細書に記載の化合物は、所望により医薬組成物中に製剤してよく、そして、疾患又は状態の治療を可能とする何れかの経路により投与できる。好ましい投与経路は経口投与である。投与は単回投与の形態であってよく、又は、実施形態の化合物はある期間に渡って、分割用量において、又は、連続放出の製剤又は投与方法（例えばポンプ）において、投与することができる。しかしながら、実施形態の化合物を対象に投与する場合、投与される化合物の量及び選択される投与経路は疾患状態の有効な治療を可能にするように選択しなければならない。
【０１３０】
実施形態の方法はまた、疾患状態の治療のための１つ以上の付加的治療薬と共に本明細書に記載の化合物を使用することを包含する。即ち、例えば、活性成分の組合せは、（１）複合製剤において同時製剤し、そして同時に投与又は送達するか；（２）別個の製剤として交互に、又は平行して送達するか、又は；（３）当該分野で知られた何れかの別の複合療法用法により行ってよい。交互療法において送達する場合、本明細書に記載の方法は、活性成分を逐次的に、例えば別個の溶液、乳液、懸濁液、錠剤、丸薬又はカプセルにおいて、又は、別個のシリンジでの異なる注射により、投与又は送達することを包含してよい。一般的に、交互療法の間、各活性成分の有効用量を逐次的に、即ち、連続的に投与するが、同時療法の場合は、２種以上の活性成分の有効用量を共に投与する。間欠的複合療法の種々の順序も使用してよい。
【０１３１】
診断試験は本明細書に記載した方法の部分として意図される。例えば、組織生検試料を炎症性状態、例えばｐ３８関連又はサイトカイン関連の状態に罹患した対象から採取してよい。生検試料を試験することにより試料中に存在するｐ３８活性（又はサイトカイン濃度）を測定することができ；次に試料を実施形態の選択された化合物と接触させることができ、そしてｐ３８活性（又はサイトカイン濃度）を測定することにより化合物が所望の作用（例えば約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０でｐ３８又はサイトカインの活性を阻害すること）を有するかどうか調べる。このような試験を用いることにより、そのような化合物による治療が対象において奏功するかどうか判断してよい。或いは、試料を標識された化合物（例えば蛍光標識化合物又は放射標識化合物）と接触させ、そして次に試料を検査して蛍光又は放射線のシグナルを検出することにより組織試料中のｐ３８の分布を調べてよい。治療の過程において反復して採取された生検試料もまた、治療の有効性を検討するために使用してもよい。本明細書に記載した化合物を使用する他の診断試験は本明細書の教示を鑑みれば当業者の知る通りである。
【０１３２】
即ち、例えば、ある実施形態は、細胞又は組織試料におけるｐ３８蛋白質の存在、位置、又は量、又はその何れかの組合せを測定するための方法を提供する。方法は、ａ）細胞又は組織試料を、実施形態の化合物に、少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫに化合物が結合できるような条件下において、接触させること；及びｂ）細胞又は組織試料中の化合物の存在、位置、又は量、又はその何れかの組合せを測定することにより細胞又は組織試料中の少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの存在、位置、又は量、又はその何れかの組合せを測定することを包含する。細胞又は組織試料中の化合物の存在、位置、又は量、又はその何れかの組合せを測定することは、細胞又は組織中の化合物の存在、位置、又は量、又はその何れかの組合せを明らかにする何れかの手段により実施してよい。例えば、上記した通り、放射性又は蛍光標識方法を使用してよい。化合物の存在、位置、又は量、又はその何れかの組合せを測定する別の方法は当業者の知る通りである。
【０１３３】
別の実施形態は、（１）化合物が炎症性状態に罹患した対象の治療のための有用な治療薬となるかどうか、又は（２）疾患の重症度、又は、（３）疾患変性剤を用いた治療中の疾患の過程を調べるための方法を提供する。方法は、ａ）本明細書に記載した化合物又は別の疾患変性剤を用いた治療の前、治療中、又は終了後において、対象から細胞又は組織試料を得ること；ｂ）試料を化合物に接触させること；及びｃ）試料に結合する化合物の量を測定することであって、化合物によるｐ３８ＭＡＰＫへの結合は試料中のｐ３８ＭＡＰＫの量に関連するものであることを包含する。
本明細書に記載した化合物及び方法により治療されることを意図した疾患の特定の例
ＣＯＰＤ
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は慢性の炎症過程を特徴とし、これは（１）気道及び実質組織における炎症性細胞（好中球、マクロファージ及びＳＤ８＋Ｔ細胞）の数の増大、（２）増大した炎症性サイトカイン及びケモカインの発現、及び（３）プロテアーゼ（エラスターゼ、カテプシン及びマトリックスメタロプロテイナーゼ、ＭＭＰ）の数の増大を包含する。気道炎症の潜在的メディエーターの多数の生産及び作用はストレス誘導ＭＡＰＫ又はｐ３８キナーゼカスケードに依存していると考えられる。幾つかの報告によれば、多くの肺の事象、即ち、肺微小血管内皮細胞上のＬＰＳ及びＴＮＦ−α誘導細胞内接着分子−１発現、ＭＭＰ−９活性化、肺動脈細胞の低酸素誘導刺激、気管支上皮細胞における浸透圧亢進誘導ＩＬ−８発現、及び、増強された好酸球の移動及び生存性等へのｐ３８キナーゼ活性化の関連が裏付けられている。
【０１３４】
Ｔｒｕｆｕｋｕｅｆｆら（２００５  Ｂｒｉｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １４４：１００２−１０）は、ＣＧＨ２４６６、複合アデノシン受容体拮抗剤、ｐ３８ＭＡＰＫ及びホスホジエステラーゼ４型阻害剤が喘息及びＣＯＰＤなどの疾患における強力なインビトロ及びインビボの抗炎症活性を示すことを報告している。Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄら（２０００  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７９：Ｌ８９５−Ｌ９０２）は、強力で選択的なｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤、ＳＢ２３９０６３が、線維芽細胞増殖及びマトリックス生産を調節する能力を有することから気道線維症に関連付けられていたＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６又はＩＬ−８を包含するプロ炎症性サイトカイン生産を低減することを明らかにしており；これは肺における低減した好中球の移動及び活性化をもたらす。より早期においては、同様の化合物がブレオマイシンにより誘導された慢性線維症に関連する応答を改変できることがわかっている。この阻害的な活性はｐ３８のα及びβアイソフォームに対して選択的であった。本明細書に記載した化合物及び方法はＣＯＰＤの治療において有用である。
肺線維症
肺線維症はまた、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、間質性びまん性肺線維症、炎症性肺線維症又は線維形成性肺胞炎とも称され、炎症性の肺障害であり、そして線維症をもたらす肺胞隔壁内への炎症性細胞浸潤を含む肺胞炎により引き起こされる肺胞間の線維性組織の異常形成を特徴とする状態の不均質なグループである。ＩＰＦの作用は、慢性的、進行性及びしばしば致死性となる。ｐ３８ＭＡＰＫの活性化は、肺線維症を有する患者の肺において明らかにされている。肺線維症に関する研究の多くによれば、肺における一部のサイトカインの持続性で増強された発現は炎症性細胞のリクルートメント及び細胞外マトリックス成分の蓄積とその後の肺構造のリモデリングに関連することが示されている。特に、プロ炎症性のサイトカイン、例えばＴＮＦ−α及びインターロイキンＩＬ−１βは、肺炎及び肺線維症の形成において主要な役割を果たしていることが明らかにされている。更に、プロ線維性のサイトカイン、例えばＴＧＦβ及びＣＴＧＦもまた肺線維症の発症において重要な役割を果たしている。Ｍａｔｓｕｏｋａら（２００２  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８３：Ｌ１０３−Ｌ１１２）は、ｐ３８阻害剤、ＦＲ−１６７６５３がネズミブレオマイシン誘導肺線維症を軽減することを示している。更に、ピルフェニドン（５−メチル−１−フェニル−２−（１Ｈ）−ピリドン）、即ち複合的な抗炎症、抗酸化及び抗線維作用を有する化合物が肺線維症の実験モデル並びに臨床試験において有効であることが判った（Ｒａｇｈｕら、１９９９  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５９：１０６１−１０６９；Ｎａｇａｉら、Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  ４１：１１１８−１１２３；Ｇａｈｌら、２００２Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ  ７６：２３４−２４２；Ａｚｕｍａら、２００２  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６５：Ａ７２９）。本明細書に記載した化合物及び方法は、ＩＰＦなどの肺線維症の治療において有用である。
閉塞性細気管支炎及び閉塞性細気管支炎症候群
閉塞性細気管支炎及びその相関する臨床状態である閉塞性細気管支炎症候群は、肺の小型気道の閉塞を介した肺経路の遮断を特徴とする。閉塞性細気管支炎においては、病理学的検査は特徴的に、肺の小型気道を遮断又は閉塞させる患部を発見する。これらの患部は顆粒状の線維粘液様組織及び緻密な粘膜下瘢痕組織である。患部はＴＮＦ−αなどの前炎症性サイトカインにより媒介される延長した異常又は迷走性の上皮の炎症及び小型気道の上皮局在構造から進行し、過剰な線維増殖に到る。肺小型気道の閉塞は進行性に気流の遮断をもたらし、これは１秒当たりの努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）の進行性の低下を特徴とし、そして下部気道の再発性の感染症及び病原性微生物による肺組織のコロニー形成を伴う場合が多い。
【０１３５】
閉塞性細気管支炎症候群は、肺移植手術後の５年生存患者の５０〜６０％で発生し、そして閉塞性細気管支炎症候群の発症後の５年生存率は僅か３０〜４０％である。閉塞性細気管支炎症候群を経験する肺移植患者は、増強免疫抑制に対する応答が不良である場合が多い。特発性肺線維症を有する患者においては、閉塞性細気管支炎症候群後の生存は気腫患者よりも短い。本明細書に記載の化合物及び方法は閉塞性細気管支炎症候群の治療において有用である。
慢性自家移植片線維症
自家移植片不全は移植の管理における深刻な問題である。自家移植片不全の主要原因の１つは慢性自家移植片機能不全である。慢性自家移植片機能不全の特徴は慢性の炎症及び慢性の線維症であり、これらは共に炎症性サイトカイン及び成長因子の生産と関連している。特にコラーゲン及びＴＧＦ生産の中断をもたらす炎症性サイトカイン及び成長因子の媒介は慢性自家移植片線維症の治療において有用である。用語「慢性自家移植片線維症」は、本明細書においては、慢性自家移植片線維症に関連する慢性の炎症及び慢性の線維症の両方を包含することを意図している。本明細書に記載の化合物及び方法は慢性自家移植片線維症の治療において有用である。
腎線維症
初回発症の性質とは無関係に、腎線維症は腎疾患が末期段階の腎不全にまで進行する共通の最終的経路であると考えられる。Ｓｒａｍｂｅら（２００４  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １５：３７０−３７９）は腎線維症のラットモデルにおいてＳｃｉｏｓ  Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）により開発されたＮＰＣ３１１６９というｐ３８の活性型（ホスホリル化）の阻害剤を試験し、そして、間質容量、コラーゲンＩＶ付着及び結合組織生育ｍＲＮＡレベルから評価した場合の腎線維症の顕著な低減を報告している。本明細書に記載の化合物及び方法は腎線維症の治療において有用である。
平滑筋腫
子宮平滑筋腫又は類線維腫は、長期間有効な薬剤療法が行えなかった女性における最も一般的な骨盤の腫瘍である。平滑筋腫は増大した細胞増殖及び組織の線維症を特徴とする。培養された子宮筋及び平滑筋腫の平滑筋細胞における細胞増殖及びコラーゲン発現に対してピルフェニドンが試験されており、そして子宮筋及び平滑筋腫の細胞増殖の有効な抑制剤であることがわかっている（Ｌｅｅら、１９９８  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８３：２１９−２３３）。本明細書に記載の化合物及び方法は平滑筋腫の治療において有用である。
心内膜心筋線維症
心内膜心筋線維症（ＥＭＦ）は拘束型心筋症の発症を特徴としている。ＥＭＦはレフラー心内膜炎（非発熱性好酸球性心内膜線維症、又は好酸球増加症を伴った線維形成性の部分的心内膜炎）を包含する単一の疾患過程のスペクトルの部分とみなされる場合がある。ＥＭＦにおいては、伏在する過程が心臓の内膜表面の斑状の線維症を形成し、低減したコンプライアンスをもたらし、そして最終的には心内膜心筋表面がより全般的に関わってくるに従って生理学的特徴となる。心内膜心筋線維症は左右心室の流入管に主に関わっており、そして房室弁に影響する場合があり、三尖及び僧帽逆流をもたらす場合がある。ＭＡＰＫ活性化はＥＭＦにおける不整脈誘発性の辛抱構造のリモデリングに寄与することがわかっている。本明細書に記載の化合物及び方法は心内膜心筋線維症の治療において有用である。
他の炎症性疾患
多くの自己免疫疾患及び慢性炎症に関連する疾患、並びに、急性の応答は、ｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化又は炎症性サイトカインの過剰発現又は調節不全に関連付けられている。これらの疾患は、限定されないが、関節リューマチ；リウマチ様脊椎炎；骨関節炎；痛風、他の間接の状態；敗血症；敗血症性ショック；内毒素ショック；グラム陰性敗血症；毒性ショック症候群；喘息；成人呼吸窮迫症候群；慢性閉塞性肺疾患；慢性肺炎症；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性結腸炎；膵臓線維症；肝線維症；急性及び慢性の腎疾患；刺激性腸症候群；発熱；再狭窄；脳マラリア；卒中及び虚血傷害；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性及び慢性の疼痛；アレルギー性鼻炎；アレルギー性結膜炎；慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；らい病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液嚢炎；腱炎；腱滑膜炎；ヘルニア化、破断又は脱出した椎間板症候群；骨粗鬆症；血栓症；癌；再狭窄；珪肺症；肺筋肉異常増殖症；骨再吸収疾患、例えば骨粗鬆症；対宿主性移植片反応；及び自己免疫疾患、例えば多発性硬化症、狼瘡及び線維筋肉痛；ＡＩＤＳ及び他のウィルス性疾患、例えば帯状疱疹、単純疱疹Ｉ又はＩＩ、インフルエンザウィルス及びサイトメガロウィルス；及び真性糖尿病を包含する。
【０１３６】
多くの試験がｐ３８ＭＡＰキナーゼ、その上流の活性化物質又はその顆粒のエフェクターの活性を遺伝子又は化学的手段のいずれかを介して低減すると、炎症応答が中断され、組織の損傷を防止又は最小限化できることを示している（例えばＥｎｇｌｉｓｈら、２００２  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ  ２３：４−４５；及びＤｏｎｇら、２００２  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０：５５−７２参照）。即ち、過剰又は未調節のサイトカイン生産を阻害し、そして単一のプロ炎症性サイトカインより多くを阻害する可能性のあるｐ３８活性の阻害剤は、抗炎症性の薬剤及び治療薬として有用であり得る。更に、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ関連炎症応答に関連する疾患の大多数がこれらの症状を治療するための有効な方法が必要とされていることを示している。
【０１３７】
心臓血管疾患。炎症及び白血球の活性化／浸潤はアテローム性動脈硬化症及び心疾患を包含する心臓血管疾患の開始及び進行において主要な役割を果たしている。急性のｐ３８有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路の阻害は、心筋虚血及び／又は再灌流傷害における組織損傷及び白血球蓄積を減衰する。本明細書に記載の化合物及び方法は心臓血管疾患の治療において有用である。
【０１３８】
多発性硬化症。中枢神経系の炎症は多発性硬化症などの疾患において生じ、そして軸索の機能不全及び破壊をもたらす。インビトロ及びインビボの観察の両方が炎症性軸索症の媒介において酸化窒素（ＮＯ）の重要な役割を示している。ｐ３８ＭＡＰキナーゼはＮＯ曝露により活性化され、そしてｐ３８シグナリングの阻害はニューロン及び軸索の生存効果をもたらすことがわかっている。ＯＣＭ及びＩＧＦ−１は、ＮＯ曝露皮質ニューロンにおけるｐ３８活性化を低減し、そして有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ／細胞外シグナル関連キナーゼシグナリングに依存する過程であるＮＯに曝露された培養物中の軸索生存性を改善している。本明細書に記載の化合物及び方法は、多発性硬化症の治療において有用である。
【０１３９】
原発性移植片機能不全。非特異的炎症は原発性移植片機能不全（ＰＮＦ）に関連している。炎症性の膵島損傷はプロ炎症性のサイトカイン、例えばレジデント膵島マクロファージにより生産されるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）により少なくとも部分的に媒介される。ｐ３８経路は単球−マクロファージ細胞系列の細胞におけるサイトカイン生産に関与することが知られている。化学的ｐ３８阻害剤、ＳＢ２０３５８０によるｐ３８経路の阻害は、リポ多糖類（ＬＰＳ）及び／又は炎症性サイトカインに曝露されたヒト膵島におけるＩＬ−１β及びＴＮＦ−αの生産を抑制する。ＩＬ−１βは主にレジデントマクロファージにより生産されるが、管細胞及び膵島血管内皮細胞は、単離されたヒト膵島においてＩＬ−１βの別の細胞源であることがわかっている。ＳＢ２０３５８０はまた、治療される膵島における誘導型の酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の発現も阻害する。更に、移植前１時間にＳＢ２０３５８０で処置されたヒト膵島は顕著に改善された移植片機能を示している。本明細書に記載の化合物及び方法は、臨床膵島移植における移植片生存の改善の為に有用である。
【０１４０】
急性腎傷害。シスプラチンは重要な化学療法剤であるが、急性の腎傷害を起こす場合がある。この急性人傷害の一部は腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）により媒介される。シスプラチンはｐ３８ＭＡＰＫを活性化し、そして、癌細胞におけるアポトーシスを誘発する。ｐ３８ＭＡＰＫの活性化は虚血傷害及びマクロファージにおけるＴＮＦ−αの生産の増大をもたらす。インビトロでは、シスプラチンは近位の管細胞においてｐ３８ＭＡＰＫの用量依存的活性化を誘発する。ｐ３８ＭＡＰＫ活性化の阻害はＴＮＦ−α生産の抑制をもたらす。インビボでは、シスプラチンの単回投与を受けたマウスは重度の腎不全を発症し、これは腎ｐ３８ＭＡＰＫ活性の増大及び浸潤白血球の増大を伴っていた。しかしながら、シスプラチンと共にｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤ＳＫＦ８６００２で処置された動物は、シスプラチン＋ベヒクル投与動物と比較して、より低い腎機能不全、より低い重症度の組織学的損傷及びより少ない白血球を示している。本明細書に記載の化合物及び方法は急性腎傷害の防止の為に有用である。
【０１４１】
歯周病。プロ炎症性のメディエーターであるブラジキニン（ＢＫ）は、インビトロでヒト歯肉線維芽細胞におけるインターロイキン−８（ＩＬ−８）を刺激し、そして歯周炎を含む種々の炎症性疾患の発症において重要な役割を果たす。特異的ｐ３８有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）阻害剤ＳＢ２０３５８０は、ＢＫとＩＬ−１βとの組合せにより刺激されるＩＬ−８生産、並びに、ＩＬ−１β刺激ＩＬ−８生産を低減している。本明細書に記載の化合物及び方法は歯周炎の治療又は防止において有用である。
医薬組成物
本明細書に記載の化合物は単独で投与することが可能であるが、化合物を医薬組成物に製剤することが好ましい場合がある。即ち、更に別の態様においては、本発明の方法において有用な医薬組成物が提供される。より特には、本明細書に記載する医薬組成物はとりわけ、炎症性状態、例えばｐ３８活性又はサイトカイン活性又はその何れかの組合せに関連する状態を治療又は防止するために有用である。医薬組成物は状態を治療又は軽減するために対象にインビトロ又はインビボ又は両方で投与してよい何れかの組成物である。好ましい実施形態においては、医薬組成物はインビボで投与してよい。対象は細胞又は組織、又は生物の１つ以上を包含してよい。好ましい対象は哺乳類である。哺乳類は何れかの哺乳類、例えば限定されないが、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラクダ、バッファロー、ネコ、イヌ、ラット、マウス及びヒトを包含する。高度に好ましい対象はヒトである。
【０１４２】
ある実施形態においては、医薬組成物は、特定の投与様式及び剤型に応じて、製薬上許容可能な賦形剤、例えば担体、溶媒、安定化剤、補助剤、希釈剤などと共に製剤してよい。医薬組成物は一般的に生理学的に適合性のあるｐＨを達成するように製剤しなければならず、そして製剤及び投与経路に応じて、約ｐＨ３〜約ｐＨ１１、好ましくは約ｐＨ３〜約ｐＨ７の範囲であってよい。代替の実施形態においては、ｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０の範囲に調節することが好ましい場合がある。より特には、医薬組成物は製薬上許容可能な１つ以上の賦形剤と共に本明細書に記載した化合物少なくとも１つの治療上又は予防上有効な量を含んでよい。場合により、医薬組成物は本明細書に記載した組合せを含んでよく、或いは、細菌感染の治療又は防止において有用な第２の活性成分（例えば抗細菌又は抗微生物剤）を包含してよい。
【０１４３】
例えば、非経腸又は経口投与のための製剤は最も典型的には固体、液体溶液、乳液又は懸濁液であるが、肺投与のための吸入可能な製剤は一般的に液体又は粉末であり、粉末製剤が一般的には好ましい。好ましい医薬組成物はまた、投与前に生理学的に適合する溶媒で希釈再生される凍結乾燥した固体として製剤してもよい。別の医薬組成物は、シロップ、クリーム、軟膏、錠剤等として製剤してよい。
【０１４４】
用語「製薬上許容可能な賦形剤」は、本明細書に記載の化合物などの薬学的物質の投与のための賦形剤を指す。用語は予定外の毒性を伴うことなく投与してよい何れかの薬学的賦形剤を指す。
【０１４５】
製薬上許容可能な賦形剤は、部分的には投与される特定の組成物により、並びに、組成物を投与するために使用される特定の方法により決定される。従って、医薬組成物の適当な製剤には広範な種類が存在する（例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ参照）。
【０１４６】
適当な賦形剤は大型の緩徐に代謝される巨大分子、例えば蛋白質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸共重合体及び不活性のウィルス粒子を包含する担体分子であってよい。他の例示される賦形剤は、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；キレート形成剤、例えばＥＤＴＡ；炭水化物、例えばデキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸；液体、例えば油脂類、水、食塩水、グリセロール及びエタノール；湿潤又は乳化剤；ｐＨ緩衝物質等を包含する。リポソームもまた製薬上許容可能な賦形剤の定義内に包含される。
【０１４７】
本明細書に記載の医薬組成物は、投与の意図する方法の為に適する何れかの形態に製剤してよい。例えば経口使用を意図する場合、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性又は油性の懸濁液、非水性の溶液、分散性粉末又は顆粒（ミクロ化粒子又はナノ粒子を包含する）、乳液、ハード又はソフトカプセル、シロップ又はエリキシルを製造してよい。経口使用を意図する組成物は医薬組成物の製造のための当該分野で知られた何れかの方法に従って製造してよく、そしてそのような組成物は、服用しやすい調製品が得られるように、甘味剤、フレーバー剤、着色剤及び保存料を包含する１つ以上の作用物質を含有してよい。
【０１４８】
錠剤に関連して使用するのに特に適する製薬上許容可能な賦形剤は、例えば不活性の希釈剤、例えばセルロース、カルシウム又はナトリウムの炭酸塩、乳糖、カルシウム又はナトリウムのリン酸塩；錠剤崩壊剤、例えば交差結合ポビドン、トウモロコシ澱粉又はアルギン酸；バインダー、例えばポビドン、澱粉、ゼラチン又はアカシア；及び潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクを包含する。
【０１４９】
錠剤は未コーティングとするか、又は、胃腸管内の崩壊及び吸収を遅延させ、これにより、より長時間に渡る持続的作用を与えるマイクロカプセルを包含する既知の手法によりコーティングしてよい。例えば、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートの単独又はワックスとの組合せなどの時間遅延物質を使用してよい。
【０１５０】
経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、例えばセルロース、乳糖、リン酸カルシウム又はカオリンと混合されたハードゼラチンカプセルとして、又は、活性成分が非水性又は油性の媒体、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ピーナツ油、流動パラフィン又はオリーブ油と混合されたソフトゼラチンカプセルとして提示してもよい。
【０１５１】
別の実施形態においては、医薬組成物は懸濁液の製造の為に適する、少なくとも１つの製薬上許容可能な賦形剤との添加混合物として実施形態の化合物を含む懸濁液として製剤してよい。
【０１５２】
更に別の実施形態においては、医薬組成物は適当な賦形剤の添加による懸濁液の製造に適する分散性粉末及び顆粒として製剤してよい。
【０１５３】
懸濁液に関連した使用に適する賦形剤は、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アカシアガム、分散又は湿潤剤、例えば天然に存在するホスファチド（例えばレシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えばポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えばヘプタデカエチレンオキシエタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸及び無水ヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）；多糖類及び多糖類様化合物（例えばデキストランサルフェート）；グリコアミノグリカン及びグリコアミノグリカン様化合物（例えばヒアルロン酸）；および増粘剤、例えばカーボマー、蜜蝋、硬質パラフィン又はセチルアルコールを包含する。懸濁液はまた、１つ以上の保存料、例えば酢酸、メチル及び／又はｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート；１つ以上の着色剤；１つ以上のフレーバー剤；及び１つ以上の甘味剤、例えばスクロース又はサッカリンを含有してよい。
【０１５４】
医薬組成物はまた、水中油エマルジョンの形態であってもよい。油相は植物油、例えばオリーブ油、鉱物油、例えば流動パラフィン又はこれらの混合物であってよい。適当な乳化剤は、天然に存在するガム、例えばアカシアガム及びトラガカントガム；天然に存在するホスファチド、例えば大豆レシチン、脂肪酸から誘導したエステル又は部分エステル；無水ヘキシトール、例えばソルビタンモノオレエート；及びこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを包含する。エマルジョンはまた、甘味剤及びフレーバー剤を含有してもよい。シロップ及びエリキシルは甘味剤、例えばグリセロール、ソルビトール又はスクロースを用いて製剤してよい。このような製剤はまた、鎮痛剤、保存料、フレーバー剤又は着色剤を含有してもよい。
【０１５５】
更に、医薬組成物は、滅菌注射用調製品、例えば滅菌注射用水性乳液又は油性懸濁液の形態であってよい。この乳液又は懸濁液は、上記した適当な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて当該分野で知られるとおり製剤してよい。滅菌注射用調製品はまた、非毒性の非経腸許容希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液又は懸濁液、例えば１，２−プロパンジオール中の溶液であってよい。
【０１５６】
滅菌注射用調製品はまた、凍結乾燥粉末として調製してもよい。使用してよい許容可能なベヒクル及び溶媒に含まれるものは、水、リンゲル液及び等張性塩化ナトリウム溶液である。更に、滅菌された固定油を溶媒又は懸濁媒体として使用してよい。この目的のためには、何れかの銘柄の固定油、例えば合成のモノ又はジグリセリドを使用してよい。更に、オレイン酸などの脂肪酸を同様に注射剤の製造に使用してよい。
【０１５７】
医薬組成物の安定な水溶性剤型を得るためには、本明細書に記載の化合物の製薬上許容可能な塩を有機又は無機酸の水溶液中、例えばコハク酸、又はより好ましくはクエン酸の０．３Ｍ溶液中に溶解してよい。可溶性の塩の形態が得られない場合は、化合物を適当な共溶媒又は共溶媒の組合せに溶解してよい。適当な共溶媒の例は、総容量の約０〜約６０％の範囲の濃度のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール３００、ポリソルベート８０、グリセリン等を包含する。１つの実施形態において、活性化合物はＤＭＳＯ中に溶解し、水で希釈する。
【０１５８】
医薬組成物はまた、適切な水性ベヒクル、例えば水又は等張性食塩水又はデキストロース溶液中の活性成分の塩形態の溶液の形態であってもよい。同じく意図されるものは例えばエステル化、グリコシル化、ＰＥＧ化等により送達のためにより適するもの（例えば増大した溶解度、生物活性、服用し易さ、低下した有害反応等）とする化学的又は生化学的部分を置換又は付加することにより修飾されている化合物である。
【０１５９】
好ましい実施形態においては、本明細書に記載の化合物は、低溶解度の化合物に適する液体系の製剤中で経口投与するために製剤してよい。液体系製剤は一般的にそのような化合物の経口バイオアベイラビリティを増強することができる。
【０１６０】
即ち、好ましい医薬組成物は、中鎖脂肪酸又はそのプロピレングリコールエステル（例えばカプリル酸又はカプリン酸などの食用脂肪酸のプロピレングリコールエステル）及び製薬上許容可能な界面活性剤、例えばポリオキシル４０水添ヒマシ油よりなる群から選択される製薬上許容可能な少なくとも１つの賦形剤と共に本明細書に記載の化合物の治療又は予防有効量を含む。
【０１６１】
代替の好ましい実施形態においては、シクロデキストリンを水溶性増強剤として添加してよい。好ましいシクロデキストリンは、α−、β−及びγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グリコシル、マルトシル及びマルトトリオシル誘導体を包含する。特に好ましいシクロデキストリン溶解性増強剤は、ヒドロキシプロピル−ｏ−シクロデキストリン（ＢＰＢＣ）であり、これは実施形態の化合物の水溶性の特性を更に向上させるために上記した組成物の何れかに添加してよい。１つの実施形態において、組成物は約０．１％〜約２０％のヒドロキシプロピル−ｏ−シクロデキストリン、より好ましくは約１％〜約１５％のヒドロキシプロピル−ｏ−シクロデキストリン、そして更に好ましくは約２．５％〜約１０％のヒドロキシプロピル−ｏ−シクロデキストリンを含む。使用する溶解性増強剤の量は、組成物中の実施形態の化合物の量に応じたものである。
【０１６２】
医薬組成物は、意図する治療効果を達成するために十分な活性成分の総量を含有する。より詳細には、一部の実施形態においては、医薬組成物は治療有効量（例えば炎症性疾患又は状態の症状の防止又は治療において有効なＳＡＰＫモジュレート化合物の量、化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す）を含有する。統一された剤型を製造するための担体材料と組み合わせてよい化合物の総量は、治療される宿主及び投与の特定の様式により変動する。好ましくは、ＳＡＰＫモジュレート化合物０，０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量が組成物を受け取る患者に投与されるように組成物を製剤する。
【実施例】
【０１６３】
（実施例１）
インビトロのｐ３８ＭＡＰキナーゼによるＡＴＦ２ホスホリル化を抑制する能力について化合物をスクリーニングする。このインビトロの試験においてＡＴＦ２ホスホリル化を抑制する化合物の能力はインビボのｐ３８ＭＡＰキナーゼ及びＴＮＦα発現の抑制に相関し、従って、潜在的なインビボの治療活性のインジケーターとなる（Ｒａｉｎｇｅａｕｄ，Ｊ．ら、１９９５  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７４２０−７４２６；Ｂｒｉｎｋｍａｎ，Ｍ．Ｎ．，ら、１９９９  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：３０８８２−３０８８６；及びＦｕｃｈｓ，Ｓ．Ｙ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１２５６０−１２５６４，２０００）。
【０１６４】
全てのキナーゼ及び基質ＡＴＦ２は、Ｕｐｓｔａｔｅ（Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）より入手する。ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、これより精製したアミノ末端ＧＳＴ融合部を有する組み換えヒト完全長蛋白質である。ＡＴＦ２は大腸菌において発現されたヒトＡＴＦ２のアミノ酸１９〜９６を含有するＧＳＴ融合蛋白質である。全蛋白質は−８０℃において小分けにして保存する。
【０１６５】
ｐ３８ＭＡＰキナーゼ試験は、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのβ−グリセロホスフェート、０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、４０μＭのＡＴＰ及び１．２５μＭのＡＴＦ２を含有する試験緩衝液、及びｐ３８α蛋白質６ｎｇ、ｐ３８β蛋白質１２ｎｇ、ｐ３８γ１．５ｎｇ、又は０．４ｎｇのＪＮＫ２α２を用いながら実施する。化合物をＤＭＳＯ中連続希釈し、そして種々の濃度の被験化合物２μＬを使用する。ベヒクル対照はＤＭＳＯのみを投与する。
【０１６６】
被験化合物を１５分間室温でキナーゼ緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのβ−グリセロホスフェート及び０．１ｍＭのＮａ３ＶＯ４）中酵素２０μｌと共に予備インキュベートする。反応はキナーゼ緩衝液中４０μＭのＡＴＰ及び１．２５μＭのＡＴＦ２の終濃度となるように基質溶液３０μｌを添加することにより開始する。反応混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、２００ｍＭのＥＤＴＡ１８ｍｌを添加することにより停止させる。ＥＬＩＳＡ法を使用してＴｈｒ６９におけるＡＴＦ２のホスホリル化を測定する。高結合９６ウェルプレートを３７℃で１時間、キナーゼ反応５０μｌでコーティングする。コーティングされたプレートを２００μｌの洗浄緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ８．３、１９２ｍＭのグリシン、０．１％のＳＤＳ及び０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄する。次にプレートをＴＢＳ中ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋで３回洗浄する（Ｐｉｅｒｃｅ，３７５３５）。ブロッキングの後、プレートを３７℃で３０分間ウサギ抗ホスホＡＴＦ２抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，９２２１Ｌ，１：５００）５０μＬと共にインキュベートする。
【０１６７】
プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した後、３７℃で３０分間ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ウサギ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，７０７４，１：５００）５０μＬと共にインキュベートする。次にプレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した後、室温で８分間ＵｌｔｒａＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，３４０２８）５０μｌと共にインキュベートする。最後に、リン酸５０μｌ（１Ｍ）を添加して反応を停止し、プレートの吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０プレートリーダー上で４５０ｎｍにおいて読み取る。
【０１６８】
化合物はこのインビトロ試験においてＡＴＦ２のホスホリル化を抑制する。好ましい化合物は約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。
【０１６９】
（実施例２）
インビトロでリポ多糖類（ＬＰＳ）によって刺激されるＴＨＰ−１細胞からのＴＮＦα放出を阻害する能力について化合物をスクリーニングする。このインビトロの試験においてＴＮＦα放出を阻害する化合物の能力は、ｐ３８活性及びＴＮＦαの阻害に相関し、従って、潜在的なインビボの治療活性のインジケーターとなる（Ｌｅｅ  Ｊ．Ｃ．ら、１９９３Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９６：１４９−１７０；及び１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：７３９−７４６）。
【０１７０】
ＡＴＣＣから入手したＴＨＰ−Ｉ細胞（ＴＩＢ２０２）を１０％ウシ胎児血清、１％のペニシリン／ストレプトマイシン及び５０μＭのβ−メルカプトエタノールを添加した４．５ｇ／Ｌグルコース含有ＲＰＭＩ１６４０培地（ＭｅｄｉａＴｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）中３７℃、５％ＣＯ２下に維持する。
【０１７１】
被験化合物を先ず１％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）添加ＲＰＭＩ培地中に溶解する。次に化合物をＲＰＭＩ培地中に連続希釈して全ての後続の希釈液を作成する。試験は滅菌条件下に行う。培養細胞密度６〜８×１０５個／ｍｌのＴＨＰ−１細胞を収集し、１０６個／ｍｌでＲＰＭＩ培地に再懸濁する。再懸濁細胞１００μｌを、被験化合物１００μｌを含む各ウェルに添加する。被験化合物は終濃度の２倍に調製する。最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％（ｖ／ｖ）を超えないようにする。細胞を３７℃５％ＣＯ２下で６０分間、化合物と共に呼びインキュベートした後、リポ多糖類（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ  Ｌ−２８８０、４ｍｇ／ｍｌのＰＢＳ中保存溶液）で刺激する。各ウェルのＬＰＳ終濃度は、ＴＮＦα及びＩＬ−１β放出に関し、それぞれ１０又は３０μｇ／ｍｌとする。未刺激の対照細胞の懸濁液にはＰＢＳベヒクルのみを投与する。細胞混合物はＴＮＦα及びＩＬ−１β放出に関し、それぞれ１８又は４８時間インキュベートする。上澄み１５０μＬを採取し、新しいプレートに移し、後の分析まで−２０℃で保存する。ＴＮＦα及びＩＬ−１βのレベルはＥＬＩＳＡキットを用いて測定する。ルミネセンスをプレートリーダーとして使用する。分析は非線形回帰により行い、用量応答曲線を作成する。計算されたＥＣ５０値はＴＮＦα及びＩＬ−１βのレベルの５０％低下をもたらす被験化合物の濃度である。
【０１７２】
化合物は、このインビトロ試験においてＴＮＦα、ＩＬ−１β又はＴＮＦα及びＩＬ−１βの両方を阻害する。好ましい化合物は、ＴＮＦα及び／又はＩＬ−１βに対して約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を示す。データを以下の表２に示す。
表２
【０１７３】
【化５６】
2008544743.tif 000026
【０１７４】
【化５７】
2008544743.tif 000027
１：化合物番号は表１に示す通り。
２：Ａ≦２０００、Ｂ：＞２０００；Ｃ：無確定（例えばデータが無いか、活性が観察されない）。
３：Ｄ：無確定（例えばデータが無いか、活性が観察されない）。
４：化合物２５は表１に示す通り、即ち２−ピリドン窒素に結合しているアリール基はＮ−メチルピリジニウム部分である。
５：化合物３３は表１に示す通り、即ち２−ピリドン環の５及び６位に融合したブロモアリール基である。
【０１７５】
（実施例３）
インビトロでリポ多糖類（ＬＰＳ）によって刺激される一次ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＴＮＦα放出を阻害する能力について化合物をスクリーニングする。このインビトロの試験においてＴＮＦα放出を阻害する化合物の能力はｐ３８活性の阻害に相関し、従って、潜在的なインビボの治療活性のインジケーターとなる（２００２  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｃａｒｔｉｌａｇｅ  １０：９６１−９６７；及びＬａｕｆｅｒ，Ｓ．Ａ．ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，Ｇ．Ｋ．２００２  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：２７３３−２７４０）。
【０１７６】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を３〜８個体の血液ドナーのプール血清からＦｉｃｏｌｌ−ＨｙＰａｑｕｅ密度勾配を用いた示差的遠心分離により単離する。単離したＰＢＭＣは約１０％のＣＤ−１４陽性単球、９０％のリンパ球及び＜１％の顆粒球及び血小板を含有する。ＰＢＭＣ（１０６／ｍｌ）をポリスチレンプレート中で培養し、血清非含有のＧＩＢＣＯ（商標）ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中３７℃で２４時間、２連で、連続希釈した被験化合物の存在下又は不在下にリポ多糖類（ＬＰＳ；５０ｎｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で刺激する。細胞上澄み中のＴＮＦαのレベルを市販のキットを用いてＥＬＩＳＡで測定する（ＭＤＳＰａｎａｌａｂｓ＃３０９７００）。
【０１７７】
好ましい化合物は、この試験においてＴＮＦαの放出を約１μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０で阻害する。
【０１７８】
（実施例４）
インビボの動物モデルにおいてＴＮＦαの放出を阻害する能力について化合物をスクリーニングする（例えば、Ｇｒｉｓｗｏｌｄ  Ｄ．Ｅ．ら、１９９３  Ｄｒｕｇｓ  Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．１９：２４３−２４８；Ｂａｄｇｅｒ，Ａ．Ｍ．ら、１９９６  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２７９：１４５３−１４６１；Ｄｏｎｇ，Ｃ．ら、２００２  Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：５５−７２（及びその引用文献）；Ｏｎｏ，Ｋ．ａｎｄ  Ｈａｎ，Ｊ．２０００  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  １２：１−１３（及びその引用文献）；及びＧｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊ．Ｂ．ら、１９９９  Ｃｕｒｒ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｒｅｐ．１：１３９−１４８参照）。
【０１７９】
特定の理論に制約されないが、このモデルにおけるＴＮＦαの阻害は化合物によるｐ３８ＭＡＰキナーゼの阻害によるものと考えられる。
【０１８０】
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（０．２〜０．３５ｋｇ）を６匹以上の群に無作為に分割し、注入又は瞬時注射により静脈内投与によるか、又は、経口投与により、各場合において適当な製剤中で化合物を投与する。注入又は瞬時注射の終了後３０分、及び、経口投与後１〜２時間に、リポ多糖類、大腸菌／０１２７：Ｂ８（０．８ｍｇ／ｋｇ）をＩＶ投与する。血液試料はＬＰＳの投与後１．５時間に収集する。血清のＴＮＦαレベルはＢｉｏｓｏｕｒｃｅ（ＫＲＣ３０１１Ｃ）のＥＬＩＳＡキットを用いて測定し、ベヒクル投与対照のものと比較する。
【０１８１】
好ましい化合物は、このインビボの試験においてＴＮＦαの放出を阻害する。好ましい化合物は、５００ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは４００ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは２００ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは５０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは４０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは３０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＣ５０を示す。
【０１８２】
化合物によるｐ３８の阻害のＥＣ５０を測定する方法は、上記したｐ３８ＭＡＰＫの下流の基質の何れかの定量的検出を可能にする当該分野で知られた何れかの方法を包含する。従って、これらの方法は更に、例えば限定されないが、ｐ３８により調節されることがわかっている遺伝子の発現の、個別の、又は遺伝子アレイによる検出を包含する。
【０１８３】
（実施例５）
以下の方法は、（１）ＥＣ５０の測定のためのキナーゼ試験、（２）ＥＣ５０の測定のための非放射能測定によるキナーゼ試験、（３）ＴＮＦα発現の誘導のモジュレーション、（４）細胞毒性に関する試験、及び（５）コラーゲン生産に対する化合物の作用を調べる試験のために使用できる。
キナーゼ試験
Ｐ３８キナーゼのアイソフォームＰ３８γ及びＰ３８αを３２Ｐ−γ−ＡＴＰの存在下ＡＴＦ−２のホスホリル化により測定する。阻害剤の存在下又は不在下の３２ＰのＡＴＦ２への取り込みを測定する。ピルフェニドン及びその種々の誘導体をこの生化学的試験においてＰ３８γ及びＰ３８αキナーゼの活性の阻害に関して試験する。化合物をＤＭＳＯ中に溶解し、希釈用及びベヒクル対照として適切な溶媒を使用しながら、０〜１０ｍＭの主種々の濃度において試験する。酵素Ｐ３８γ及びＰ３８αは、活性化された状態で入手し、そして組み換え蛋白質を精製する（Ｕｐｓｔａｔｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）。活性化された酵素は最終反応において２４．８ｎＭで使用する。酵素は希釈した後、以下の緩衝液（１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５００ｍＭのＤＴＴ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１０ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ）中で反応させる。反応は２倍保存溶液として調製した以下の溶液（１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５００ｍＭのＤＴＴ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００）中で実施し、非放射性ＡＴＰは、６．２５μＭのＡＴＰで反応中に存在する（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）。ＡＴＦ−２のホスホリル化を測定するために、γ−［３２Ｐ］−ＡＴＰ  ３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌを７．５μＭの濃度で各反応混合物に添加する。キナーゼ基質としてのＡＴＦ−２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）は３μＭで使用する。酵素反応を設定する第１段階として、活性化キナーゼ及び阻害剤又は適切なベヒクル対照を反応緩衝液に添加し、室温で３０分間インキュベートする。キナーゼ反応はＡＴＦ−２及びＡＴＰの混合物を添加することにより開始する。各反応の最終容量は２０μｌとし、３０分間室温で実施する。３０分インキュベート後、Ｌａｅｍｍｌｉｅ緩衝液８０ｕｌを添加する。その後、反応混合物の２０％をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）により還元条件下に分離する。電気泳動の後、ゲルをホスホイメージャープレートに露光し、ホスホイメージャーを用いて分析する（Ｓｔｏｒｍ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）。得られたシグナルをバックグラウンド補正の後に定量し、ベヒクル対照による未阻害キナーゼ活性を０％阻害とした場合のパーセント阻害として計算する。種々の濃度の阻害剤の存在下のキナーゼ活性をＫａｌｅｉｄａｇｒａｐｈ（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｓｏｆｔｗａｔｅｒ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＰＡ）を用いてプロットし、各化合物及び被験Ｐ３８キナーゼに関するＥＣ５０を求める。
非放射能測定によるキナーゼ試験
代替法として、非放射能測定によるキナーゼ試験を用いてＰ３８の阻害に関するＥＣ５０を定義した。この試験においては、ｐ３８キナーゼはＡＴＰからＥＧＦ−Ｒペプチド基質にホスフェートを転移させ、ＡＴＰからＡＤＰへの変換と同時にホスホリル化されたＥＧＦ−Ｒペプチドを形成する。非カップリング反応において、ｐ３８はまたペプチド基質の不在下により緩徐な速度でＡＴＰを加水分解し（Ｆｏｘら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  １９９９）、これはＡＴＰ消費に僅かに寄与するのみである。即ち、消費されたＡＴＰの量はｐ３８活性に直接比例する。キナーゼ反応の終了時に、残存するＡＴＰの量をＫｉｎａｓｅ−ＧｌｏＰｌｕｓ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて測定する。これらの試薬は残存ＡＴＰを使用することによりカブトムシルシフェリンからオキシルシフェリンへのＡＴＰ依存性酵素的変換を支援し、同時に光を発生し、これをルミノメーターで検出する。
【０１８４】
キナーゼ反応は、試験緩衝液中、ｐ３８α又はｐ３８γの何れか、及びＥＧＦ−Ｒペプチド基質（ＡｎａＳｐｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）と化合物（ＤＭＳＯ及び試験緩衝液中に希釈）とを混合することにより実施する。次に、反応をＡＴＰ添加により開始し、室温で４５分間進行させる。最終緩衝液条件は：２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２ｍＭのＤＴＴ、０．１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％のグリセロール、１２．５ｍＭのｐ３８α又はｐ３８γ（Ｕｐｓｔａｔｅ，Ｃｈａｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）、５０μＭのＥＧＦ−Ｒペプチド基質及び１０μＭのＡＴＰとする。最終試験容量は１０μＬとする。対照反応は化合物の不在下で実施する。ｐ３８不在の別の対照反応を各化合物濃度において実施する。全反応は３連で実施する。
【０１８５】
キナーゼ反応の開始後４５分に、Ｋｉｎａｓｅ−ＧｌｏＰｌｕｓ試験試薬１０μＬを添加することにより反応をクエンチする。ルシフェラーゼ反応を１５分間平衡化させた後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）上で読み取る。データはルミネセントシグナルｖｓ対数化合物濃度としてＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＰＡ）においてプロットする。ｐ３８の不在下に対照反応から求められた固定上限を用いてデータを４パラメーター結合式にフィットさせることによりＥＣ５０値を求める（ルミネセンスはキナーゼ活性に逆関係であるため）。
ＴＮＦα誘導の阻害
ＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）をＡＴＣＣの推奨する通常の組織培養条件下に生育させる。実験の１８時間前に、１％血清を含有する通常の培地及びウェル当たり５００，０００個の細胞密度における０．２５ｍｌの培養容量中、９６ウェルのフォーマットで細胞をプレーティングした。化合物を３連で各ウェルに添加し、適切な溶媒対照を書く試験において使用する。１μＭ／ｍｌのｐ３８阻害剤ＳＢ２０３８５０（Ｕｐｓｔａｔｅ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を各試験において陽性対照として使用する。ＴＮＦα発現の誘導の為に、１μｇ／ｍｌのＬＰＳを化合物の添加後３０分に各ウェルに添加する。組織培養条件下に４時間インキュベートした後、細胞を遠心分離（１０分間、１０００ｒｐｍ、Ｂｅｃｋｍａｎ卓上遠心分離機）により沈降させ、細胞非含有の上澄み画分を収集し、１０倍希釈してＴＮＦα特異的ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）における定量に付す。ＴＮＦαのＥＬＩＳＡは製造元の指示に従って実施する。ＴＮＦαはｐｇ／ｍｌ単位で検出し、溶媒対照におけるＴＮＦα発現に対して企画化した活性率としてプロットする。
細胞系試験における化合物の毒性試験
破壊された細胞膜に起因するＬＤＨの放出は細胞毒性の尺度として適用される。ＬＤＨは市販の診断キット（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｃａｔ＃１６４４７９３）を用いてその酵素活性により検出する。前記した実験における誘導ＴＮＦα発現と合致させるためにＴＨＰ−１細胞を細胞毒性の測定の為に使用する。ＴＮＦα誘導の抑制の試験に関して前述した通り、細胞を１％血清及び通常の組織培養条件下に９６ウェルのフォーマットにおいて培養する。化合物を種々の濃度において３連で添加する。適切な溶媒対照を各試験において使用する。化合物添加の後、細胞を通常の組織培養条件下に１８時間培養する。このインキュベーション時間の後、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００（２％ｖ／ｖ）を未治療細胞に添加することにより陽性対照を開始し、完全な細胞溶解となるまで更に１０分間インキュベートする。その後、細胞を遠心分離により沈降させ、上澄み画分を取り出し、製造元の説明書に従ってＬＤＨ酵素活性を分析する。データは典型的には１００％細胞毒性としてのＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００溶解細胞に対して規格化された％細胞毒性として報告する。
【０１８６】
毒性データはまた、市販のＡＴＰ試験（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＰｒｏｂｅｓのＡＴＰ測定キットＡ２２０６６、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手）及び／又はＭＴＴ試験を用いて得られる。ＡＴＰ及びＭＴＴ試験の両方とも細胞の代謝能力を測定する。ＭＴＴ試験は、代謝能力（即ち生存性）に関連するマーカー物質を低減させる細胞の能力を測定する。ＡＴＰ試験は、化合物の存在下及び不在下の細胞のＡＴＰ濃度を測定する。毒性化合物はＡＴＰ濃度の低下をもたらす代謝活性低下をもたらす。
コラーゲン生産に対する化合物の作用に関する試験
ＨＦＬ−１細胞（ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）を含有する完全培地中で通常の組織培養条件下に生育させた。早期の継代分の細胞を６ウェルプレートにプレーティングした。細胞がコンフルエントに達した後、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、そして細胞を０．１％ＦＢＳ含有完全培地中で一夜保持した。次に培地を新鮮培地＋０．１％ＦＣＳ、１０μＭのＬ−プロリン（ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、２０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸（ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）と交換した。ＤＭＳＯ中の１００Ｘ保存溶液から終濃度１ｍＭとなるように３連のウェルに化合物を添加した。化合物添加の１時間後、ＴＧＦ−β１（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によって終濃度１０ｎｇ／ｍｌ（合計２５ｎｇ）となるように細胞を処置した。ＴＧＦ−β添加の３日後に、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、次に溶解させた。溶解した細胞の総コラーゲン含有量は適切な標準曲線を用いながら染料系コラーゲン試験（Ｓｉｒｃｏｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｓｓａｙ，Ｎｅｗｔｏｗｎａｂｂｅｙ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｉｒｅｌａｎｄ）及びμＱｕａｎｔプレート系分光光度計（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）により試験した。試験のダイナミックレンジはＴＧＦ−βの存在下及び不在下において擬似処置（化合物を含有しない１％ＤＭＳＯ）された細胞により定義される。データは以下の式により求められるＴＧＦ−β誘導コラーゲンのパーセント阻害として表３において報告する。
％阻害＝１００＊［（コラーゲン、擬似／＋ＴＧＦ−β）−（コラーゲン、処置／＋ＴＧＦ−β）］／［（コラーゲン、擬似／＋ＴＧＦ−β）−（コラーゲン、擬似／−ＴＧＦ−β）］
表３
【０１８７】
【化６３】
2008544743.tif 000028
（実施例６）
１−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリドン（化合物１０）の製造：５−（トリフルオロメチル）−２−（１Ｈ）−ピリドン（８１５．５ｍｇ、５ミリモル）、４−ヨードアニソール（２．３４ｇ、１０ミリモル）、ＣｕＩ（９５２ｍｇ、５ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（６９１ｍｇ、５ミリモル）及びＤＭＦ（５ｍｌ）の混合物を一晩中１３５℃で加熱した。反応混合物を１０％アンモニア（１５ｍｌ）で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー精製（３０％酢酸エチル−ヘキサン）により１−（４−メトキシフェニル）−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリドン５２６ｍｇ（３９．２％）を得た。この化合物（２６８．２ｍｇ、１ミリモル）を０℃で２時間、ＤＣＭ（５ｍｌ）中のジクロロメタン（ＤＣＭ，２ｍｌ）中の１ＭのＢＢｒ３溶液で処理した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で３回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上に乾燥し、蒸発させた。残存物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル−ＤＣＭ）で分離し、オフホワイトの固体として標題化合物２２６ｍｇ（８９％）を得た。１ＨＮＭＲスペクトルは化合物１０の構造と合致していた。
【０１８８】
（実施例７）
１−フェニル−５−アセチル−２−ピリドン（化合物１６）の製造：２−メトキシ−５−アセチルピリジン（１．５１ｇ、１０ミリモル）を５時間１００℃で６ＮのＨＣｌで処理した。反応混合物を水酸化ナトリウムでｐＨ７に中和し、次にＤＣＭで数回抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上に乾燥し、蒸発させ、残存物を酢酸エチルから結晶化させて白色固体として５−アセチル−２（１Ｈ）−ピリドン１．０６ｇ（７８％）を得た。この化合物（６８５．７ｍｇ、５ミリモル）を一晩中１３５℃でＣｕＩ（９５ｍｇ、０．５ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（６９１ｍｇ、５ミリモル）の存在下にヨードベンゼン（０．８４ｍｌ、７．５ミリモル）と反応させた。反応混合物を１０％アンモニア（１５ｍｌ）で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル−ＤＣＭ）により白色固体として標的化合物４０７ｍｇ（３８％）を得た。１ＨＮＭＲスペクトルは化合物１６の構造と合致していた。
【０１８９】
（実施例８）
１−（４−ピリジニル）−５−メチル−２−ピリドン（化合物２２）の製造：化合物２２２は一晩中１３５℃でＣｕＩ（６０ｍｇ、０．３ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（１．３６ｇ、１０ミリモル）の存在下、５−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン（３２７．４ｍｇ、３ミリモル）と塩酸４−ブロモピリジン（７７８ｍｇ、４ミリモル）の縮合により合成した。反応混合物を１０％アンモニア（１５ｍｌ）で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ−ＤＣＭ）により黄色味を帯びた固体として標的化合物１９７ｍｇ（３５％）を得た。１ＨＮＭＲスペクトルは化合物２２の構造と合致していた。
【０１９０】
（実施例９）
１−フェニル−５−メチル−２−ピリジンチオン（化合物１８）の製造：１−フェニル−５−メチル−２−ピリジノン（５５５．７ｍｇ、３ミリモル）を９０℃でトルエン（５ｍｌ）中Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬（６０６．７ｍｇ、１．５ミリモル）と反応させた。反応混合物を蒸発させ、標的化合物をカラムクロマトグラフィー（２０〜３０％酢酸エチル−ヘキサン）で単離し、次いでメチル−ｔ−ブチルエーテルから結晶化させた。収量４０３ｍｇ（６７％）、黄色固体。１ＨＮＭＲスペクトルは化合物１８の構造と合致していた。
【０１９１】
（実施例１０）
化合物３３は以下の合成スキームに従って製造した。
【０１９２】
【化６５】
2008544743.tif 000029
市販のエチル３，３−ジエトキシプロピオネート（９．７ｍｌ、５０ミリモル）、水酸化ナトリウム（１０Ｍ、６ｍｌ、６０ミリモル）及び水（１５ｍｌ）の混合物を均質になるまで（約３０分間）還流した。０℃に冷却した後、溶液のｐＨを２〜３とするために６Ｎ塩酸を添加した（〜１０ｍｌ）。混合物をジクロロメタンで抽出し、有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を真空下で除去し、得られた酸１を更に精製することなく使用した。
【０１９３】
０℃のＤＣＭ（１００ｍｌ）中の組成の酸１（約５０ミリモル）の溶液に、４−ブロモアニリン（１０．３ｇ、６０ミリモル）、ＨＯＢＴ（６７５ｍｇ、５ミリモル）及び最後にＤＣＣ（１２．４ｇ、６０ミリモル）を順次添加した。反応混合物を１時間０℃で攪拌し、次に更に４時間還流した。固体を濾去し、濾液を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を真空下で除去し、僅かに黄色の固体としてアミド２を得た。この固体を０℃で硫酸（９６％、５０ｍｌ）に溶解した。溶液を同じ温度で更に３時間保持した後、氷水（５００ｍｌ）に注ぎ込んだ。固体を濾過し、水で洗浄し、熱アセトニトリル（１００ｍｌ）と共に攪拌した。キノリノン３を濾過し、真空下で乾燥した。終了は１０ｇ（９１％）であった。
【０１９４】
化合物３（３０９ｍｇ、１．３８ミリモル）、フェニルボロン酸（３３６ｍｇ、２．７６ミリモル）、Ｃｕ（ＯＡｃ）２（３６ｍｇ、０．２ミリモル）、モレキュラーシーブ４ａ（０．３ｇ）、ピリジン（０．２４ｍｌ）及びＤＣＭ（１０ｍｌ）の混合物を２日間室温で攪拌した。反応混合物をセライトで濾過し、ＥＤＴＡと共に飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、そして、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥した。化合物３３はクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル−ヘキサン−酢酸エチル）で単離した。収量は３５２ｍｇ（８５％）であった。
【０１９５】
（実施例１１）
ピルフェニドン、ピルフェニドン類縁体及び誘導体の薬物動態（ＰＫ）特性を二重挿管（右頸静脈／左頚動脈）ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）において試験した。体重約２７５〜３００ｇの雄性ラットに適切な製剤において化合物の静脈内（５ｍｇ／ｋｇ）又は経口（５０ｍｇ／ｋｇ、胃管栄養法）用量を投与した。抗凝固剤としてＥＤＴＡを用いながら投与後２４時間のうちの所望の時点において動脈内カニューレを介して血漿試料を採取した。各化合物につき３匹の動物を使用した。全実験は、適切なＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインに従って熟練担当者が実施した。
【０１９６】
化合物濃度は、ＤｕｒａｇｅｌＧＣ１８ガードカートリッジ（Ｐｅｅｋｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｅｄｗｏｏｄ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）に装着したＳｈｉｍａｄｚｕＶＰＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｃｏｒｐ．，，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）に連結したＭＤＳＳＣＩＥＸＡＰＩ３０００質量スペクトル分析器（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いたＬＣ−ＭＳにより試験した。カリブレーション試料はピルフェニドン、ピルフェニドン類縁体又は誘導体の既知量をラット血漿と混合することにより製造した。標準曲線は同じマトリックスにおいてカリブレーション試料の連続希釈により作成した。標準及び分析試料の両方とも、血漿試料の少区分を３倍容量の内標準含有氷冷アセトニトリルと混合することによりＨＰＬＣ注入用に調整した。次に試料を遠心分離した。得られた上澄みの小区分を次に５倍容量の水中０．２％ギ酸と混合し、ＨＰＬＣに注入し、メタノール勾配（０．１８〜０．２％ギ酸含有）で分割した。積分した分析対象シグナルを内標準のものに対して補正し、適切な標準曲線と比較することにより分析対象の濃度を決定した。
【０１９７】
表４に示す薬物動態パラメーターはＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウエアパッケージ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて誘導した。
表４
【０１９８】
【化６７】
2008544743.tif 000030
本発明を明確化及び理解を目的として一部詳細に説明したが、当業者の知る通り、形態及び詳細の種々の変更が本発明の範囲から外れることなく行える。上記した全ての図、表、付録、特許、特許出願及び出版物は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１９９】
【図１】図１はｐ３８ＭＡＰＫシグナリングカスケードの模式的表示である（従来技術、Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄら、２００１Ｐｒｏｇ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ  ３１：３４２−３４５の図１）。これは、種々の刺激によるｐ３８シグナリングカスケードの活性化、並びに転写活性化及び翻訳／ｍＲＮＡ安定化を介した炎症応答に対するｐ３８活性化の下流作用を模式的に示している。
【図２】図２は化合物の濃度の関数としての種々のピルフェニドンの代謝産物及び類縁体によるｐ３８γの小数表示の阻害を示すプロットである。これらの化合物のＥＣ５０濃度はプロットの右に示す。試験の詳細な説明は実施例５に記載する。
【図３】図３は化合物の濃度の関数としての種々のピルフェニドンの代謝産物及び類縁体によるｐ３８αの小数表示の阻害を示すプロットである。これらの化合物のＥＣ５０濃度はプロットの右に示す。試験の詳細な説明は実施例５に記載する。
【図４】図４は種々のピルフェニドンの代謝産物及び類縁体に関する生化学的データの総括である。図２、３、５及び６において言及するピルフェニドンの代謝産物及び類縁体は、図４に示す置換パターンにより説明される。総括はｐ３８α及びｐ３８γの阻害に関するＥＣ５０濃度に対する３位置における置換の作用を示す。
【図５】図５は各化合物の濃度の関数としての種々のピルフェニドンの代謝産物及び類縁体の小数表示の活性（ＬＰＳに応答したマクロファージからのＴＮＦα放出）を示すプロットである。試験の詳細な説明は実施例５に記載する。
【図６−１】図６は化合物の種々の濃度における種々のピルフェニドンの代謝産物及び類縁体の細胞毒性を示す棒グラフシリーズである。細胞毒性は、化合物の存在下に細胞をインキュベートした後のＬＤＨ放出を測定することにより調べた。放出されたＬＤＨの量はＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００処理により放出されたものに対して規格化し、化合物濃度に対してプロットした。
【図６−２】図６は化合物の種々の濃度における種々のピルフェニドンの代謝産物及び類縁体の細胞毒性を示す棒グラフシリーズである。細胞毒性は、化合物の存在下に細胞をインキュベートした後のＬＤＨ放出を測定することにより調べた。放出されたＬＤＨの量はＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００処理により放出されたものに対して規格化し、化合物濃度に対してプロットした。
【図１】
2008544743.tif 000067
【図２】
2008544743.tif 000068
【図３】
2008544743.tif 000069
【図４】
2008544743.tif 000070
【図５】
2008544743.tif 000071
【図６−１】
2008544743.tif 000072
【図６−２】
2008544743.tif 000073
【手続補正書】
【提出日】平成20年4月3日(2008.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物は少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項２】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試
験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項３】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項４】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項５】
薬学的に活性な化合物を特定する方法であって、下記工程：
化合物のライブラリを準備すること；
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して該ライブラリ由来の複数の化合物を試験すること；
該複数の化合物から少なくとも１つの化合物を選択することであって、該選択された化合物はインビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示すこと；
を含む方法。
【請求項６】
前記選択された化合物の哺乳類毒性を測定することを更に含む、請求項２〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
ｐ３８ＭＡＰＫがｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ及びｐ３８δよりなる群から選択される、請求項２〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＥＣ５０を用量応答曲線から得る、請求項１記載の方法。
【請求項９】
ＥＣ５０が約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
ＥＣ５０を用量応答曲線から得る、請求項２記載の方法。
【請求項１１】
ＥＣ５０が約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲にある、請求項２記載の方法。
【請求項１２】
亜属ＩＩＩ：
【化８４】
2008544743.tif 000074
［式中、
Ｘ３はＨ、Ｆ及びＯＨよりなる群から選択され；
Ｒ２はＨ及びＣＦ３よりなる群から選択される］の式を有する化合物であって、
化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項１３】
前記化合物が下記化合物８〜１２：
【化８５】
2008544743.tif 000075
から選択される、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
ｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項１２記載の化合物。
【請求項１５】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項１４記載の化合物。
【請求項１７】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項１４記載の化合物。
【請求項１８】
属ＶＩ：
【化８６−１】
2008544743.tif 000076
［式中、
Ａｒはピリジニル又はフェニルであり；
ＺはＯ又はＳであり；
Ｘ３はＨ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ又はＯＣＨ３であり；
Ｒ２はメチル、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−グルコシル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、メチルメトキシ、メチルヒドロキシ又はフェニルであり；そして、
Ｒ４はＨ又はヒドロキシルであるが；
ただし、Ｒ２がトリフルオロメチルであり、ＺがＯであり、Ｒ４がＨであり、そしてＡｒがフェニルである場合は、フェニルはＨ、Ｆ又はＯＨにより４’位において単独で置換されていない］の式を有する化合物であって、
化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項１９】
前記化合物が下記化合物１４〜３２：
【化８６−２】
2008544743.tif 000077
【化８７】
2008544743.tif 000078
【化８８】
2008544743.tif 000079
【化８９−１】
2008544743.tif 000080
から選択される、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項１８記載の化合物。
【請求項２１】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２０記載の化合物。
【請求項２３】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２０記載の化合物。
【請求項２４】
属ＶＩＩ：
【化８９−２】
2008544743.tif 000081
［式中、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、アルコキシ又はＯＨであり；
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３及びＹ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ニトロアルキル、Ｃ１−Ｃ１０チオアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシ、フェニル、置換されたフェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０カルボキシ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシカルボニルよりなる群から選択され；
Ｒ４はＨ、ハロゲン又はＯＨである］の式を有する化合物であって、そして、
化合物はｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を示す化合物；又は該化合物の製薬上許容可能な塩、エステル、溶媒和物又はプロドラッグ。
【請求項２５】
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項２６】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項２７】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項２８】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項２９】
式：
【化９０】
2008544743.tif 000082
を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項３０】
少なくとも１つのｐ３８ＭＡＰＫの阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項３１】
約５０μＭ〜約６５０μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項３２】
インビボの体液中のＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項３３】
インビトロの培養細胞によるＴＮＦα分泌の阻害に関して約１μＭ〜約１０００μＭの範囲のＥＣ５０を有する、請求項２４記載の化合物。
【請求項３４】
請求項１２記載の化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３５】
請求項１８記載の化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３６】
請求項２４記載の化合物及び製薬上許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３７】
前記組成物が、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程における患者への投与の為に選択された前記化合物の量を含有する、請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記組成物が、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程における患者への投与の為に選択された前記化合物の量を含有する、請求項３５記載の医薬品。
【請求項３９】
前記組成物が、１日２回、１日１回、２日毎に１回、週３回、週２回及び週１回から選択される日程における患者への投与の為に選択された前記化合物の量を含有する、請求項３６記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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