(57)【要約】  表面の高レベル消毒（明細書中で定義した通り）のための方法および組成物。前記方法は、1％を越える濃度の4級アンモニウム化合物を含む組成物で表面を処理することを含み、処理温度は、30℃〜80℃の範囲である。ミコバクテリウム・テラエ属におけるlog (6)の減少は、表面において10分以内に達成される。前記温度は、物理的カオトロープ、ホウ素またはホウ素化合物もしくは複合体のような化学的カオトロープ、またはカオトロピック剤の併用により産生されてよい。金属イオン封鎖剤および酵素が加えられてもよい。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
4級アンモニウム化合物を含む組成物を用いて表面を処理するステップを含んでなる、表面の高レベル消毒（明細書中で定義した通り）の方法であって、前記4級アンモニウム化合物の濃度が1％ w/wを超え、処理温度が30℃〜80℃の範囲であり、表面にミコバクテリウム・テラエが存在する場合に、結果としてlog6の減少を10分未満で達成する方法。
【請求項２】
請求項1に記載の方法であって、表面にミコバクテリウム・テラエが存在する場合に、log6の減少を前記組成物が5分未満で達成する方法。
【請求項３】
請求項1または2に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物の濃度が2％ w/wを超える方法。
【請求項４】
請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物の濃度が4％ w/wを超える方法。
【請求項５】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物が(R1 R2 R3 R4 N+)X-であって、ここでのR1、R2、R3、およびR4は、独立に、置換型または非置換型の直鎖状もしくは環状の基である方法。
【請求項６】
請求項5に記載の方法であって、前記R1、R2、R3、およびR4は、独立に、アルキル、アリール、アルカリール、アラルキル、またはエーテルである方法。
【請求項７】
請求項5または6に記載の方法であって、前記R1およびR2は、独立に、1〜3の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R3は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R4は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基、アリール基、およびアリール置換アルキル基からなる群より選択され、前記置換アルキル基は1〜3の炭素原子を有し、X-は、前記4級アンモニウム化合物に水溶性を与えるように選択される方法。
【請求項８】
請求項5〜7のいずれか1項に記載の方法であって、前記R1、R2、R3、およびR4の少なくとも1つがC14〜C18アルキル基である方法。
【請求項９】
請求項5〜8のいずれか1項に記載の方法であって、前記R1、R2、R3、およびR4の少なくとも1つがC12アルキル基である方法。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物がグルコン酸クロルヘキシジンである方法。
【請求項１１】
X-が無機または有機対イオンである、請求項5〜10のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１２】
X-がハロゲン化物、水酸化物、テトラフルオロボラート、リン酸塩、または炭酸塩である、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
前記4級アンモニウム化合物が4級アンモニウム化合物の混合物である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
前記温度が40℃より高い、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】
前記温度が50℃より高い、請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１６】
前記温度が60℃を超えない、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１７】
30℃〜80℃の温度が物理的カオトロープにより産生される、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１８】
前記物理的カオトロープが熱である、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記熱が発熱性の化学反応により産生される、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
カオトロピック剤が電磁放射線、超音波、振とう、または撹拌である、請求項17に記載の方法。
【請求項２１】
請求項20に記載の方法であって、前記カオトロピック剤がマイクロ波放射線、紫外線、IR照射、電場、磁場、電子ビーム照射、レーザー、電気分解、電磁撹拌、ボルテックス撹拌、高エネルギー噴射、活性表面および界面における吸着である方法。
【請求項２２】
30℃〜80℃の温度が化学的カオトロープにより産生される、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
【請求項２３】
前期化学的カオトロープが金属もしくは金属イオン、有機イオン、または無機イオンである、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学的カオトロープが臭素または臭素化合物もしくは複合体である、請求項22に記載の方法。
【請求項２５】
カオトロピック剤が組み合わせて用いられる、請求項17〜24に記載の方法。
【請求項２６】
物理的および化学的カオトロピック剤が組み合わせて用いられる、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物がさらに金属イオン封鎖剤を含んでなる、請求項1〜26のいずれか1項に記載の方法。
【請求項２８】
前記金属イオン封鎖剤がEDTAである、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物がさらに酵素を含んでなる、請求項1〜28のいずれか1項に記載の方法。
【請求項３０】
請求項1〜29のいずれか1項に記載の高レベル消毒（明細書中で定義した通り）の方法において用いるための組成物であって、30℃、使用濃度において、1％を超える4級アンモニウム化合物を含む組成物。
【請求項３１】
カオトロピック剤であるが、芽胞開口化学物質でない物質をさらに含む、請求項30に記載の組成物。
【請求項３２】
前記4級アンモニウム化合物の濃度が2％ w/wを超える、請求項30または31に記載の組成物。
【請求項３３】
前記4級アンモニウム化合物の濃度が4％ w/wを超える、請求項30〜32のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項30〜33のいずれか1項に記載の組成物であって、前記4級アンモニウム化合物が（R1 R2 R3 R4 N+）X-であり、ここでのR1、R2、R3、およびR4は、独立に、適切な置換型または非置換型の直鎖状もしくは環状の基である組成物。
【請求項３５】
前記R1、R2、R3、およびR4は、独立に、アルキル、アリール、アルカリール、アラルキル、またはエーテルである、請求項34に記載の組成物。
【請求項３６】
請求項34または35に記載の組成物であって、R1およびR2は、独立に、1〜3の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R3は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R4は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基、アリール基、およびアリール置換アルキル基からなる群より選択され、前記置換アルキル基は1〜3の炭素原子を有し、X-は、前記4級アンモニウム化合物に水溶性を与えるように選択される組成物。
【請求項３７】
R1、R2、R3、およびR4のうちの1つが18未満の鎖長を有するアルキル基である、請求項34〜36のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３８】
R1、R2、R3、およびR4のうちの1つがC14〜C18アルキル基である、請求項34〜37のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３９】
R1、R2、R3、およびR4のうちの1つがC12アルキル基である、請求項34〜38のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記4級化合物がジアルキル4級化合物である、請求項30〜39のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記X-が無機または有機の対イオンである、請求項34〜40のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記X-が、ハロゲン化物、水酸化物、テトラフルオロボラート、リン酸塩、または炭酸塩である、請求項41に記載の組成物。
【請求項４３】
前記4級化合物がグルコン酸クロルヘキシジンである、請求項30に記載の組成物。
【請求項４４】
4級アンモニウム化合物の混合物を含んでなる、請求項30〜43のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４５】
発熱性の化学反応のための1以上の成分を含む、請求項30〜44のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４６】
化学的カオトロープをさらに含む、請求項30〜45のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記化学的カオトロープが、金属イオン、有機または無機アニオンである、請求項46に記載の組成物。
【請求項４８】
前記化学的カオトロープが臭素または臭素化合物もしくは複合体である、請求項47に記載の組成物。
【請求項４９】
前記化学的カオトロープが、尿素、グアニジウム塩、またはテトラアルキルアンモニウム塩である、請求項47に記載の組成物。
【請求項５０】
前記化学的カオトロープがグアニジン塩酸塩である、請求項47に記載の組成物。
【請求項５１】
前記化学的カオトロープが、LiBr、CaCl2、KSCN、NaI、NaBr、ホウ砂、アジ化ナトリウムである、請求項47に記載の組成物。
【請求項５２】
前記化学的カオトロープが、CNS-、I-、Br-、NO3-、Cl-、CH3COO-、またはSO42-から選択されるアニオンである、請求項47に記載の組成物。
【請求項５３】
前記化学的カオトロープが、タンパク質を変性、溶解、または膨張させる傾向を有する種類の有機溶媒である、請求項46に記載の組成物。
【請求項５４】
請求項53に記載の組成物であって、前記化学的カオトロープが、N-ジメチルホルムアミド、ホルムアミド、m-クレゾール、ジオキサン、CHCl3、ピリジン、ジクロロエチレン、または2-クロロエタノールである組成物。
【請求項５５】
前記化学的カオトロープが水素結合を形成する弱い傾向を有する溶媒である、請求項46に記載の組成物。
【請求項５６】
前記化学的カオトロープがアルコールである、請求項55に記載の組成物。
【請求項５７】
前記化学的カオトロープが、エタノール、n-プロパノール、メタノール、エタノール／0.01％HCl、n-プロパノール／0.01％HCl、またはメタノール／0.01％HClである、請求項56に記載の組成物。
【請求項５８】
前記化学的カオトロープが、構造的に崩壊させる溶媒である、請求項46に記載の組成物。
【請求項５９】
前記化学的カオトロープがジメチルスルホキシド(DMSO)、ジクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、または求電子性の溶媒である、請求項58に記載の組成物。
【請求項６０】
カオトロピック剤が組み合わせて用いられる、請求項46〜59のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６１】
金属イオン封鎖剤をさらに含む、請求項30〜60のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６２】
前記金属イオン封鎖剤がEDTAである、請求項61に記載の組成物。
【請求項６３】
酵素をさらに含む、請求項30〜62のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６４】
前記酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ、リピダーゼ、またはセルラーゼである、請求項63に記載の組成物。
【請求項６５】
プロテアーゼおよびホウ砂を含む、請求項30〜64のいずれか1項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、高レベル消毒を提供する方法および4級アンモニウム化合物を含む組成物に関する。
【発明の背景】
【０００２】
「高レベル消毒」は、多数の細菌の芽胞を除いて、全ての微生物を破壊すると期待される化学作用である。
【０００３】
基準は、「滅菌」、ならびに「低い」、「中間の」、および「高い」レベルの消毒に対して確立されている。これらの基準は、ある特定の微生物によるある特定の医療機器の既知のまたは起こり得る汚染のリスク、その生物の病原性、および感染制御における他の原理に基づく。前記基準は、典型的に、ある特定の試験微生物のパネルに対する滅菌および／または消毒の証明を必要とし、集合的に、既知のまたは起こり得る感染および汚染のリスクを表す。試験パネルおよび基準は、「低い」、「中間の」、または「高レベル消毒」によって異なる。これらの用語はここにおいて、消毒のレベルに対する現在の食品医薬品局（FDA）基準に従って用いられ、Premarket Notification [510(k)] Submissions for Liquid Chemical Sterilants and High Level Disinfectants FDA 1997：「ラベルに従って使用した場合、多数の細菌内生芽胞を除く全ての微生物病原体を不活化する殺菌剤」において詳細が述べられている。簡単に言うと、高レベル消毒に対してFDAが規定する要求には、最も努力を必要とする試験として、定量的な結核菌殺菌性の試験において2％のウマ血清の存在下、400p.p.mの硬水中で、ウシ型結核菌（またはミコバクテリウム・テラエ属（Mycobacterium terrae）のような適切な代用としてのある特定の菌株）を100％死滅させることが含まれる。
【０００４】
ウシ型結核菌は、ほとんどの殺菌性の化合物によって処理することに対して抵抗性を有する微生物である。加えて、高レベル消毒に対するFDAの規定には、特定のグラム陰性ならびにグラム陽性の細菌、真菌、およびウイルスに対する有効性が含まれる。関連するAOAC殺胞子性、結核菌殺菌性、殺ウイルス性、および殺菌性の試験については、ここにおいて付属資料 1で述べる。高レベル消毒に対するFDAが規定する付加的な要求は、消毒措置時間よりも長い暴露時間が許容されるが、滅菌を達成しなければならないことである。滅菌は、バチルス属またはクロストリジウム属の芽胞を利用した殺胞子性の活性試験を用いて試験される。化学的な滅菌剤に対して最も耐性のある微生物は、バチルス属の枯草菌およびスポロゲネス菌であることが示されている。滅菌は、菌類胞子および細菌の芽胞を含む全ての形態の微生物の生命を完全に除去または破壊する方法である。高レベル消毒として用いられるために、化学物質は、FDA（USA）またはTGA(オーストラリア)のような適切な取締り当局に登録される必要がある。
【０００５】
高レベル消毒（「HLD」）は、中間および低レベルの消毒の殺菌効力の基準も同様に満たすことが既知である。低レベル消毒の遂行が中間または高レベルの消毒の遂行を予測できないことは、一般的に容認されている。実際に、試験するより前に、低レベル消毒はより高いレベルの消毒の基準を達成することができないと想定される。
【０００６】
高レベル消毒は、例えば内視鏡、腎臓透析装置、ならびに他の医療用具および装置、特に熱により損傷を受けやすいものに対して、保健医療および医療産業において広範に用いられる。多くの器具が、それらを作成する際にゴムまたはプラスチックを組み込んでおり、損傷なく繰り返し60℃以上に加熱することができないため、診療所および歯科医によっても広く用いられる。
【０００７】
通常、商業的に入手可能な高レベル消毒剤には、0.3〜3.4％の間のグルタルアルデヒド溶液が含まれ、一般的に、使用する直前にアルカリ性緩衝液を用いて活性化することが必要である。酸性(pH 1.6〜2.0)、7.5％、sup.w/v過酸化水素溶液（スポロックス（Sporox：登録商標）, レキット・アンド・コルマン社製）および1.0％過酸化水素と0.08％過酢酸（「PAA」）の酸性(pH 1.87)混合物（ペラクト(Peract：商標)20, ミンテック(Minntech)社製またはシデックス(Cidex OPA：登録商標), ジョンソン＆ジョンソン社製）も入手可能である。25分および20℃における高レベル消毒のためのPAAの最小有効濃度は、0.05％(500ppm)(ペラクト：商標)である。30分および20℃における高レベル消毒のための過酸化水素の最小有効濃度は、6.0％（スポロックス：登録商標）である。
【０００８】
高レベル消毒剤として受け入れられるために、組成物は、微生物学的な有効性の規定基準を満たすことに加え、ゴム、プラスチック、エラストマー、および金属のような医療器具において使用される構成材料に適合しなければならず、さらに使用するのが容易であるべきである。消毒剤の毒性が低く、容易に水ですすぐことができる場合、明らかに都合がよい。それは、単純なモニタリングおよび確認が可能であるべきである。それは、商業的に十分な有効期間および保存性を有するべきである。望ましくは、製造において経済的であり、比較的短時間で高レベル消毒が達成されるべきである。
【０００９】
これら全ての要求を満たす高レベル消毒剤は知られていない。グルタルアルデヒド、過酢酸、およびフェノールは、不快であり、且つ有毒である。加えて、いくつかのアルデヒドの器具上の残留物は、生検試料と不都合に反応することがみられ、内視鏡を受ける患者に対して化学的に誘発されるアナフィラキシーショックさえ引き起こす。過酸化水素残留物は、消毒された膀胱鏡を介して摂取する膀胱鏡試料および内視鏡を介して摂取する生検試料に干渉することが見られる。最も穏和な高レベル消毒剤でさえ皮膚刺激またはアレルギー反応を引き起こす傾向があり、他のものは潜在的な発癌物質とみなされる。
【００１０】
4級アンモニウム化合物（「quats」）は、何年もの間、産業的および家庭的な消毒のために広く用いられており、簡単に使用できる。遺憾ながら、4級アンモニウム化合物を含む製剤は、連鎖球菌およびブドウ球菌のようなグラム陽性菌に対して有効であることが既知であるが、単独で用いた場合、最も効果の少ない消毒剤の1つである。4級アンモニウム化合物は、グラム陰性菌に対して相対的に無効であり、殺胞子性の効果がないことで有名であり、実質的に、結核菌殺菌性の活性を有しないと広く報告されている（例えば、”Disinfection, Sterilization, and Preservation”, Seymour S. Block, Fifth edition, page 306を参照されたい）。4級アンモニウム化合物は、典型的に、p.p.m.〜0.25％ w/wの範囲の濃度で用いられる。
【００１１】
多くの研究者は、より高い消毒レベルへとそれらの有効性を上昇させる可能性を持つような、異なるように置換された4級アンモニウム化合物をスクリーニングし、および／または補助剤を探してきた。
【００１２】
例えば、米国特許第6,245,361は、600〜800p.p.m.の4級化合物と次亜塩素酸塩のような塩素含有化合物またはジイソシアナートとの組み合わせについて開示しており、塩素化合物が結核菌殺菌性の活性を提供する。塩素化合物はそれ自体優れた滅菌剤であり（特許において特定されたレベルにおいて）、4級アンモニウム化合物の添加は、塩素単独の場合と比較して、殺胞子性／結核菌殺菌性の効力において改善をもたらさない。権利請求する改善点は、4級アンモニウム化合物と組み合わせることにより、塩素化合物のみの場合よりも「低い」毒性且つ「低い」皮膚刺激性を有すると言われていることである。しかしながら、塩素化合物の存在は、前記組成物に多くの構成材料に対する腐食性を与える可能性があり、前記組み合わせは、先行技術の不都合のほとんどを占める。この例のような活性成分の組み合わせを含む消毒剤は、規制方法に関しても不都合である。いくつかの領域において、活性成分のそれぞれが毒性学および物質適合性に関して周知であっても、その組み合わせは、規制の目的に対してこれまでに未知の実体であり、新しいものとして扱う必要がある。
【００１３】
米国特許第5,444,094号では、4級アンモニウム塩製剤は殺菌剤として長い間使用されてきたが、結核菌殺菌性の活性を示さないと認めている。グリコールエーテルも同様である。しかしながら、米国特許第5,444,094号は、0.1％〜0.2％ w/wの4級アンモニウム化合物と少なくとも8％ w/wのグリコールエーテルとの組み合わせは結核菌殺菌性であるが、6％グリコールエーテルとの組み合わせは結核菌殺菌性ではないと示す。これは驚くべきことであり、60％の脂質で構成されるミコバクテリアの三層の細胞壁の、グリコールエーテルによる破壊に起因する。
【００１４】
グリコールエーテルは強い溶媒であり、高濃度において、構成材料として用いられるプラスチックおよびゴムの大部分と適合しない。米国特許第5,444,094号に記載の組成物のもう1つの不都合な点は、生成物が殺胞子性の性質を示さず（AOAC Official Methods of Analysis(1995) 殺胞子性試験, 文献番号966.04による）、それ故、高レベル消毒剤（「HLD」）ではないことである。
【００１５】
増殖性の芽胞を死滅させるために、消毒剤を超音波といっしょに使うことが提案されてきた。0.25％の濃度且つ60℃以上の温度の塩化ベンゼトニウムを使用することが提唱されてきた。しかしながら、ここで示したように、そのような処理ではミコバクテリウム属に対して不十分であり、前記処理は高レベル消毒として適切ではない。
【００１６】
独自の短い洗浄および消毒のステップと時間、ならびに再使用可能な溶液を使うのは、セミクリティカルの医療機器（すなわち、内視鏡、歯科用具等のような無傷の皮膚および粘膜に接触するようなもの）を実際に用いる、現在の医療機器ユーザーである。より長い浸漬洗浄または消毒の時間および頓用溶液は、現在の医療または歯科の業務において、大部分は非経済的且つ非実用的である。
【００１７】
本明細書中の先行技術に関する検討は、そのような先行技術が周知であるか、またはその分野における普通の一般的な知識の一部を形成するということを認めるものであると見なされるべきではない。
【００１８】
本発明の1つの目的は、少なくともいくつかの先行技術の不都合を回避または改善するような高レベル消毒剤を提供することである。本発明の好ましい実施形態の1つの目的は、保存性があり、短時間で有効であり、職業的な健康の脅威を有意に減少させることを示す、高レベル消毒剤を提供することである。
【００１９】
本発明の好ましい実施形態は、高レベル消毒に対するFDAの規定により、AOAC結核菌殺菌性試験において、ミコバクテリウム・テラエ属の集合は2〜10分間の間に、枯草菌およびスポロゲネス菌の芽胞は、5時間未満の間に、規定されたlog6の減少を生じる（Premarket Notification [510(k)] Submissions for Liquid Chemical Sterilant and High Level Disinfectants, FDA 1993において定義されている）。
【発明の概要】
【００２０】
第1の側面によれば、本発明は、表面の高レベル消毒（先に定義した通り）の方法であって、4級アンモニウムを含んでなる組成物で表面を処理するステップを含み、前記4級アンモニウム化合物の濃度は1.0％ w/wを超えるように選択され、処理温度は30℃〜80℃の範囲となるように選択され、それにより、表面に結核菌があったとしても、10分未満でlog6の減少を達成する方法を提供する。
【００２１】
本発明の好ましい実施形態において、4級アンモニウム化合物（「quat」）の濃度は、2％を超え、好ましくは4％ w/wより高い。温度は、30℃より高く、好ましくは40℃より高く、より好ましくは約50℃より高い。しかしながら、望ましい温度は、器具の損傷の点から約60℃を超えないが、耐熱性の物質は80℃まで上げてもよい。選択された濃度および温度で、ミコバクテリウム・テラエ属におけるlog6の減少を5分未満で達成することが好ましい。
【００２２】
当業者は、4級アンモニウム化合物は高レベル消毒を提供することが不可能であると今までに報告されていることを認識するであろう。Block（上記を引用）は、消毒の分野において認知されたマニュアルであるが、4級アンモニウム化合物について「それらは、高濃度において、結核菌殺菌性も殺胞子性も親水性ウイルスに対する殺ウイルス性も持たない」と述べる。低レベルの「殺菌剤」として用いる場合、4級アンモニウム化合物は、典型的に、外界温度および約0.1％〜約0.25％の濃度で表面に適用される。先行文献には、4級アンモニウム化合物が任意の濃度で室温において結核菌を死滅させることができるという記載はなく、30℃以上に温度を上昇させることにより、4級アンモニウム化合物の殺菌効果に有利な効果があるということも記載されていない。
【００２３】
実際に、本発明者は、外界温度および1％ w/wまでの濃度において、4級アンモニウム化合物は高レベル消毒の能力はなく、2％ w/w未満においても、事実上短時間の間にそのレベルには到達しないことがわかっている。それ故、高レベル消毒が、4級アンモニウム化合物を利用することならびに適切な濃度および処理条件を選択することにより事実上短時間で達成できたことは、驚くべきことであった。
【００２４】
選択された温度30℃〜80℃は、熱または他の物理的カオトロープにより作り出されてよい。例えば、温度上昇は、熱の適用（カオトロープ）、または電磁放射線（例えば超音波、マイクロ波、UV、IR、または他の放射線）のような物理的カオトロピック剤の適用、電場もしくは磁場、または振とうもしくは撹拌の適用の結果として生じてよい。エネルギーを適用する他の方法には、電磁線、または磁気もしくはボルテックスによる撹拌のような機械的方法によるエネルギー的な振動が含まれる。エネルギーは、電子ビーム照射法、レーザー、電気分解、または高エネルギー噴射から供給されてよい。このようなカオトロピック作用の組み合わせを選択することは、有利に利用され得る。温度上昇は、例えば発熱性の化学反応のような他の方法によって産生されてもよい。
【００２５】
第2の側面によれば、本発明は、第1の側面に従った方法であって、前記組成物がさらに化学的カオトロープを含む方法を提供する。好ましいカオトロープは、ホウ素またはホウ素化合物もしくは複合体である。望ましくは、前記組成物には、例えばEDTAのような金属イオン封鎖剤も含まれる。
【００２６】
カオトロープは、4級アンモニウム化合物および微生物の混合物の物理的または化学的相互作用であり、水溶液における疎水性粒子の溶解性を増大させる傾向にし、または無極性溶質粒子およびミセルの凝集を不安定化の傾向にし、または（折りたたみもしくは変性）タンパク質を変性させる。本発明における使用のための物理的なカオトロープは、上記で述べられている。金属イオン、有機および無機アニオン、尿素等のようなある一定の化学的カオトロープは、4級アンモニウム化合物とともに単独で、または物理的カオトロープと組み合わせて用いられてよい。好ましくは、カオトロピック剤は組み合わせて用いられる。
【００２７】
第3の側面によれば、本発明は、第1または第2の側面に従った方法であって、前記組成物がさらに酵素を含む方法を提供する。
【００２８】
第4の側面によれば、本発明には、上記側面のいずれか1に記載の高レベル消毒（先に定義した通り）の方法における使用のための組成物であって、30℃、使用濃度において、1％を超える4級アンモニウム化合物を含んでなる組成物が含まれる。
【００２９】
高レベル消毒を達成するための要件は、前記方法がウシ型結核菌におけるlog6の減少の達成に加えて、FDAによって定義された他の要件を満たすことができなければならないことを意味すると理解されるであろう。本発明による好ましい方法は、枯草菌およびスポロゲネス菌の芽胞においても、5時間未満でlog6の減少を達成することができ、これはFDA試験法（24時間未満と規定）と一致する。
【００３０】
第5の側面によれば、本発明は、高レベル消毒剤であって、作用強さにおいて1％より高い濃度であり、且つ芽胞開口化学物質でないがカオトロピック剤である1以上の化学物質との組み合わせとしての4級アンモニウム化合物を含んでなる消毒剤を提供する。
【００３１】
他に断らない限り、説明および特許請求の範囲において、「含んでなる」等の言葉は、排他的または徹底的な意味ではなく、包含的な意味であると解釈されるべきであり；すなわち、「含む、限定するものではない」の意味である。
【本発明の好ましい実施形態】
【００３２】
本発明は、実施例によって、さらに述べられるであろう。
【００３３】
本発明は、高レベル消毒を達成するために、選択された条件下で4級アンモニウム化合物を用いる。商業的に入手可能ないくつかの4級化合物は、本発明に適している。
【００３４】
4級アンモニウム化合物は、一般式（R1 R2 R3 R4 N+）X- によって表すことができる。R1、R2、R3、およびR4は、独立に、アルキル、アリール、アルカリール、アラルキル、エーテル等のような、適切な置換型または非置換型の直鎖状もしくは環状の基であってよい。
【００３５】
好ましくは、本発明において、R1およびR2は、独立に、1〜3の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R3は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R4は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基、アリール基、およびアリール置換アルキル基からなる群より選択され、前記置換されたアルキル基は1〜3の炭素原子を有し、X-は、前記4級アンモニウム化合物に水溶性を与えるように選択される。適切な4級化合物が使われてよいが、好ましくは、本発明において用いられる4級化合物は、ジアルキル4級化合物であり、より好ましくは、アルキルの1つが18未満の鎖長を有する4級化合物である。望ましくは、少なくとも1のアルキルは、C14〜C18アルキルであり、C12がより好ましい。4級アンモニウム化合物は、1より多くのアルキル鎖を有するか、またはアリール4級アンモニウム化合物であってよい。4級アンモニウム化合物は、例えばCHGである。
【００３６】
対イオンX-は、任意の適切な対イオンであってよく、有機または無機でよい。X-の適切な例には、これに限定するものではないが、ハロゲン化物（フッ化物、塩化物、臭化物、もしくはヨウ化物）、水酸化物、テトラフルオロボラート、リン酸塩、または炭酸塩が含まれてよい。
【００３７】
ここで用いられる場合、4級アンモニウム化合物という用語は、4級アンモニウム化合物の混合物も包含する。
【００３８】
本発明の好ましい形態において、選択された条件にはカオトロピック剤の組み合わせの適用も含まれる。例えば、4％ w/wの4級アンモニウム化合物は、例えば50℃において、ホウ素化合物と組み合わせて、熱または熱および超音波とともに用いられる。または、もう1つの例を使用するために、5％ w/wの4級アンモニウム化合物は、界面活性剤および／または適切な溶媒と組み合わせて、温度を40℃まで上昇させることのようなエネルギーの供給と共に用いられてよい。加熱のようなエネルギーの供給が、芽胞外膜およびミコバクテリウム属の細胞膜のタンパク質／リポタンパク質を変性させる方向に折りたたみ／変性の平衡を促進することを助けるのかどうか、または単に、芽胞表面のどちらかと言えば「接近しにくい」部分への4級アンモニウム化合物分子の一時的な接近を提供することを助けるのか、もしくはタンパク質により4級アンモニウム化合物に固有の失活を克服するのかどうか、または他の方法で4級アンモニウム化合物もしくは標的微生物の活性化に有効なのかどうかは不明である。本発明のかなり好ましい形態において、4級アンモニウム化合物は、ホウ砂の存在下且つ高温で、プロテアーゼと共に用いられる。
【００３９】
選択された条件には、温度を30℃〜80℃、好ましくは40℃以上60℃未満に上昇させる、エネルギーの供給が含まれる。温度感受性の医療用具の構成材料における温度による有害な影響のため、60℃以上の温度は望ましくない。温度は、加熱の適用によって上昇させてよいが、エネルギー供給は、超音波エネルギー、赤外線もしくはマイクロ波、高圧、電場および／または磁場の作用、ならびに振とうもしくは撹拌によってなされてよく、これらは全て、変性（再折りたたみ）を促進するのに有効な可能性がある。
【００４０】
4級アンモニウム化合物と併用してよい化学的カオトロープには以下が含まれる：
(1)タンパク質を変性させ、溶解し、または膨張させる傾向がある種類の有機溶媒が選択される。一般的に、生成物は完全には変性せず、天然状態とは異なる整然とした高次構造を有する。らせん状の高次構造（すなわち変性）を支持する溶媒は、例えば、N-ジメチルホルムアミド、ホルムアミド、m-クレゾール、ジオキサン、CHCl3、ピリジン、ジクロロエチレン、および2-クロロエタノールである。この群には、アルコール、エタノール、n-プロパノール、メタノール（特に0.01％HClとの混合物として）のような水素結合を形成する弱い傾向を有する溶媒も含まれる。また、例えば高濃度のジメチルスルホキシド(DMSO)、ジクロロ酢酸、およびトリフルオロ酢酸、ならびに他の求電子性の溶媒のような構造を解体する傾向を有する溶媒も含まれる。これらの化合物の大多数が、実際に、芽胞開口剤として作用するのとは反対に、芽胞の外膜を強化することに注意すべきである。
【００４１】
(2)尿素またはグアニジンヒドロクロリド(GuHCl)のような、ある一定の有機溶質およびカオトロピック剤。ランダムならせん状のポリペプチドへの移行は、いくつかの例外的に安定なタンパク質を除いて、室温で6〜8MのGuHClを用いることにより完全になされた。これらの薬剤は、温度、pH、他の試薬、および条件によって顕著に影響される。
【００４２】
無機塩は、タンパク質において高次構造上の移行を引き起こすことができる。例えば、LiBr、CaCl2、KSCN、NaI、NaBr、ホウ砂、アジ化ナトリウムが強い変性剤である。これらの塩は、必ずしも完全に変性したタンパク質には導かないが、残された秩序正しい構造は、例えば温度上昇のようなエネルギー供給によって乱されてよい。CNS-＞I-＞Br-＞NO3-＞Cl-＞CH3COOH-＞SO42-のようなアニオンは、グアニジウム塩およびテトラアルキルアンモニウム塩と同様の作用を示す。しかしながら、(GuH)2SO4は、変性に対してある一定のタンパク質を保護することが観察されている。ホウ素は、化合物または複合体の形態で用いられてよい。
【００４３】
ゼオライトを含む一定の表面（空気／液体界面を含む）における、ゼオライトによる吸着。
【００４４】
(3)例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、リピダーゼ、セルラーゼ等の酵素。
【本発明の実施例】
【００４５】
以下の表において、他に特定しない限り、「死滅時間」とは、関連するAOAC試験（より詳細には、付属試料 1において確認される）において定義されているように、完全な死滅を達成するために必要な時間を意味する。「死んでいない」とは、最初の集合から2 log未満の減少を意味する。他に特定しない限り、「QUAT」は、塩化ベンザルコニウム、特にガージクオート（Gardiquat） NC-50（アルブライト＆ウィルソン社製）である。増殖性細菌（ミコバクテリウム・テラエ属）に対する試験点は、2，5，10，20、および60分であった。芽胞に対する試験点は、0.5，1，2，4，16，24，48時間であった。それぞれの表の最後の欄は、試験された組み合わせが高レベル消毒に対するFDAの要件を満たしている（「HDL」）か、または満たしていない（「F」）かを示す。
【表１】
2008504910.tif 000002
【００４６】
表1は、先行技術に従った4級アンモニウム化合物の使用例を示し、0.025％〜0.25%の範囲の濃度のものが外界温度で用いられている。0.25％に上昇させても（これは、4級アンモニウム化合物の製剤にとって高濃度であると考えられる）、ミコバクテリウムの「死滅時間」は25℃において1時間を越え、枯草菌およびスポロゲネス菌の死滅時間は24時間を越えることが分かる。試験1.3が示すように、その結果は62℃において、超音波の存在下でさえも同様である。表1において、高レベル消毒に対して有用であると考えられる例はない。
【００４７】
表2は、本発明によるいくつかの例を示す。
【表２】
2008504910.tif 000003
【００４８】
驚いたことに、表1の例と比較して、1％以上の4級アンモニウム化合物は、40℃において、ミコバクテリウム・テラエ属の死滅時間を5分未満にすることを達成でき、枯草菌およびスポロゲネス菌は2時間未満であり、5％で50℃または1％で80℃の場合は1時間未満に減少させることができる。表2の例は、全て高レベル消毒を示す。
【００４９】
本発明者は、温度を25℃から60℃まで上げることは、超音波の有無にかかわらず、先行技術の濃度0.25％ w/wの4級アンモニウム化合物がミコバクテリウム・テラエ属を死滅させる能力に有益な影響を与えないことを示した（表3 試験3.1〜3.3）。
【表３】
2008504910.tif 000004
【００５０】
同様に、試験3.5〜3.9は、0.25％（400分の1）から5.0％（20分の1）まで濃度を上昇させて、先行技術において用いられた上記の濃度の約20倍に増加させても、25℃において有意な効果は見られないことを示す。
【００５１】
本発明者は、それ故、約50℃、0.6％以上の濃度において、ミコバクテリウム・テラエ属の死滅時間が、突然且つ鋭く60分から20分に下がったこと、ならびに枯草菌およびスポロゲネス菌が16時間未満になったことを発見し、驚いた。これらの時間は、実際的な高レベル消毒に対しては十分でない。実際的な高レベル消毒には、1％より高い濃度および室温以上の温度上昇であって好ましくは30℃以上、より好ましくは40℃以上（またはカオトロピック効果に相当するもの）の組み合わせが選択されるべきである。
【００５２】
表4は、ホウ素の場合の化学的カオトロープの効果を例示している。
【表４】
2008504910.tif 000005
【００５３】
試験4.1および4.2は25℃であり、それ故本発明の選択範囲外である。しかしながら、本発明に従って選択された試験4.3〜4.7の結果は、試験4.1および4.2の結果とはっきりと対照的である。
【００５４】
表5は、超音波の効果を示す。
【表５】
2008504910.tif 000006
【００５５】
試験5.2を試験2.2および2.3と比較すると、熱と組み合わせた超音波の有益な効果を示し、一方、試験5.5〜5.7は、化学的および物理的なカオトロープとの組み合わせの効果を示す。例5.5〜5.7の組み合わせは、ミコバクテリウム・テラエ属に対する死滅時間を2分未満に低下させる。実験5.7は、プロテアーゼの存在下において得られる結果を示す。
【００５６】
表6の2列目は、0.2％のプロテアーゼと組み合わせた4級アンモニウム化合物の濃度を示し、3列目は、温度、ホウ砂濃度（もしあれば）、および超音波の存在または非存在を示す。再び、25℃においては、濃度を2％まで上げても、プロテアーゼ、ホウ砂、および超音波は有意な利益を有することが示されないが、より高温においては、2％において、死滅時間に驚くべき且つ劇的な変化が起こる。
【表６】
2008504910.tif 000007
【００５７】
＊サビナーゼ（Savinase） 16L
表7は、他の4級アンモニウム化合物を用いて同様の結果が得られることを示す。
【表７】
2008504910.tif 000008
【００５８】
(Quat1)は、ジデシルジメチルアンモニウムクロリド双鎖（ロンザ（Lonza）製のBardac 2280）であり、
(Quat2)は、ジオクチルジメチルアンモニウムクロリド-双鎖4級アンモニウム化合物（ロンザ製のBardac LF-80）であり、
(Quat3)は、バークオート(Barquat) MB-50（N-アルキルジメチルアンモニウムクロリド, C14-50％, C12-40％, C16-10％）であり、
(Quat4)は、ドジゲン(Dodigen) 228 LF（N-アルキルジメチルアンモニウムクロリド, C14-60％, C12-30％, C10-10％）単鎖4級アンモニウム化合物である。
【００５９】
ここでの教示から当業者に対して自明であるので、これらの例示されたもの以外の4級アンモニウム化合物が用いられてよく、または本発明の目的のために4級アンモニウム化合物が併用されてよい。好ましい実施形態において、4級アンモニウム化合物は、例えばホウ素またはホウ素化合物、酵素、および／または界面活性物質のような選択された範囲の濃度の1以上のカオトロープと共に配合されてよく、実際に使用する希釈液において選択された濃度を有するように、希釈することを意図された濃縮物として配合されてよい。温度上昇は直接のカオトロピック効果を有するが、マイクロ波、超音波、赤外線、または他の電磁放射線が、単独でまたは化学的カオトロピック剤と組み合わせて用いられてよい。
【００６０】
付属資料 1
現在のFDA基準において定義されている高レベル消毒の判定のためのAOAC試験（詳細は、「Premarket Notification [510(k)] Submissions for Liquid Chemical Sterilants and High Level Disinfectants FDA 1993」に述べられている。）：
AOAC 殺胞子性試験：AOAC Ref No 966.04, AOAC 公定分析法（Official Methods of Analysis）
AOAC 消毒剤の結核菌殺菌性活性
AOAC Ref No 965.12, AOAC 公定分析法 (1995)
AOAC 硬質表面キャリアー(Hard Surface Carrier)試験10
AOAC Ref No 991.47, 991.48、および991.49, AOAC 公定分析法 (1995)
AOAC 殺菌性のスプレー生成物(Germicidal Spray Products)試験11
AOAC Ref No 961.02, AOAC 公定分析法 (1995)
AOAC 殺真菌性試験
AOAC Ref No 955.17, AOAC 公定分析法 (1995)
【手続補正書】
【提出日】平成18年5月5日(2006.5.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
4級アンモニウム化合物を含む組成物を用いて表面を処理するステップを含んでなる、表面の高レベル消毒（明細書中で定義した通り）の方法であって、前記4級アンモニウム化合物の濃度が1％ w/wを超え、処理温度が30℃〜80℃の範囲であり、表面にミコバクテリウム・テラエが存在する場合に、結果としてlog6の減少を10分未満で達成する方法。
【請求項２】
請求項1に記載の方法であって、表面にミコバクテリウム・テラエが存在する場合に、log6の減少を前記組成物が5分未満で達成する方法。
【請求項３】
請求項1または2に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物の濃度が2％ w/wを超える方法。
【請求項４】
請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物の濃度が4％ w/wを超える方法。
【請求項５】
請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物が(R1 R2 R3 R4 N+)X-であって、ここでのR1、R2、R3、およびR4は、独立に、置換型または非置換型の直鎖状もしくは環状の基である方法。
【請求項６】
請求項5に記載の方法であって、前記R1、R2、R3、およびR4は、独立に、アルキル、アリール、アルカリール、アラルキル、またはエーテルである方法。
【請求項７】
請求項5または6に記載の方法であって、前記R1およびR2は、独立に、1〜3の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R3は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R4は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基、アリール基、およびアリール置換アルキル基からなる群より選択され、前記置換アルキル基は1〜3の炭素原子を有し、X-は、前記4級アンモニウム化合物に水溶性を与えるように選択される方法。
【請求項８】
請求項5〜7のいずれか1項に記載の方法であって、前記R1、R2、R3、およびR4の少なくとも1つがC14〜C18アルキル基である方法。
【請求項９】
請求項5〜8のいずれか1項に記載の方法であって、前記R1、R2、R3、およびR4の少なくとも1つがC12アルキル基である方法。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法であって、前記4級アンモニウム化合物がグルコン酸クロルヘキシジンである方法。
【請求項１１】
X-が無機または有機対イオンである、請求項5〜10のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１２】
X-がハロゲン化物、水酸化物、テトラフルオロボラート、リン酸塩、または炭酸塩である、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
前記4級アンモニウム化合物が4級アンモニウム化合物の混合物である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
前記温度が40℃より高い、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】
前記温度が50℃より高い、請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１６】
前記温度が60℃を超えない、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１７】
30℃〜80℃の温度が物理的カオトロープにより産生される、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１８】
前記物理的カオトロープが熱である、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記熱が発熱性の化学反応により産生される、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
カオトロピック剤が電磁放射線、超音波、振とう、または撹拌である、請求項17に記載の方法。
【請求項２１】
請求項20に記載の方法であって、前記カオトロピック剤がマイクロ波放射線、紫外線、IR照射、電場、磁場、電子ビーム照射、レーザー、電気分解、電磁撹拌、ボルテックス撹拌、高エネルギー噴射、活性表面および界面における吸着である方法。
【請求項２２】
30℃〜80℃の温度が化学的カオトロープにより産生される、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
【請求項２３】
前期化学的カオトロープが金属もしくは金属イオン、有機イオン、または無機イオンである、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学的カオトロープが臭素または臭素化合物もしくは複合体である、請求項22に記載の方法。
【請求項２５】
カオトロピック剤が組み合わせて用いられる、請求項17〜24に記載の方法。
【請求項２６】
物理的および化学的カオトロピック剤が組み合わせて用いられる、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物がさらに金属イオン封鎖剤を含んでなる、請求項1〜26のいずれか1項に記載の方法。
【請求項２８】
前記金属イオン封鎖剤がEDTAである、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物がさらに酵素を含んでなる、請求項1〜28のいずれか1項に記載の方法。
【請求項３０】
請求項1〜29のいずれか1項に記載の高レベル消毒（明細書中で定義した通り）の方法において用いる場合の組成物であって、30℃、使用濃度において、1％を超える4級アンモニウム化合物を含む組成物。
【請求項３１】
カオトロピック剤であるが、芽胞開口化学物質でない物質をさらに含む、請求項30に記載の組成物。
【請求項３２】
前記4級アンモニウム化合物の濃度が2％ w/wを超える、請求項30または31に記載の組成物。
【請求項３３】
前記4級アンモニウム化合物の濃度が4％ w/wを超える、請求項30〜32のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項30〜33のいずれか1項に記載の組成物であって、前記4級アンモニウム化合物が（R1 R2 R3 R4 N+）X-であり、ここでのR1、R2、R3、およびR4は、独立に、適切な置換型または非置換型の直鎖状もしくは環状の基である組成物。
【請求項３５】
前記R1、R2、R3、およびR4は、独立に、アルキル、アリール、アルカリール、アラルキル、またはエーテルである、請求項34に記載の組成物。
【請求項３６】
請求項34または35に記載の組成物であって、R1およびR2は、独立に、1〜3の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R3は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基からなる群より選択され、R4は、8〜20の炭素原子を有するアルキル基、アリール基、およびアリール置換アルキル基からなる群より選択され、前記置換アルキル基は1〜3の炭素原子を有し、X-は、前記4級アンモニウム化合物に水溶性を与えるように選択される組成物。
【請求項３７】
R1、R2、R3、およびR4のうちの1つが18未満の鎖長を有するアルキル基である、請求項34〜36のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３８】
R1、R2、R3、およびR4のうちの1つがC14〜C18アルキル基である、請求項34〜37のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項３９】
R1、R2、R3、およびR4のうちの1つがC12アルキル基である、請求項34〜38のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記4級化合物がジアルキル4級化合物である、請求項30〜39のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記X-が無機または有機の対イオンである、請求項34〜40のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記X-が、ハロゲン化物、水酸化物、テトラフルオロボラート、リン酸塩、または炭酸塩である、請求項41に記載の組成物。
【請求項４３】
前記4級化合物がグルコン酸クロルヘキシジンである、請求項30に記載の組成物。
【請求項４４】
4級アンモニウム化合物の混合物を含んでなる、請求項30〜43のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４５】
発熱性の化学反応のための1以上の成分を含む、請求項30〜44のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４６】
化学的カオトロープをさらに含む、請求項30〜45のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記化学的カオトロープが、金属イオン、有機または無機アニオンである、請求項46に記載の組成物。
【請求項４８】
前記化学的カオトロープが臭素または臭素化合物もしくは複合体である、請求項47に記載の組成物。
【請求項４９】
前記化学的カオトロープが、尿素、グアニジウム塩、またはテトラアルキルアンモニウム塩である、請求項47に記載の組成物。
【請求項５０】
前記化学的カオトロープがグアニジン塩酸塩である、請求項47に記載の組成物。
【請求項５１】
前記化学的カオトロープが、LiBr、CaCl2、KSCN、NaI、NaBr、ホウ砂、アジ化ナトリウムである、請求項47に記載の組成物。
【請求項５２】
前記化学的カオトロープが、CNS-、I-、Br-、NO3-、Cl-、CH3COO-、またはSO42-から選択されるアニオンである、請求項47に記載の組成物。
【請求項５３】
前記化学的カオトロープが、タンパク質を変性、溶解、または膨張させる傾向を有する種類の有機溶媒である、請求項46に記載の組成物。
【請求項５４】
請求項53に記載の組成物であって、前記化学的カオトロープが、N-ジメチルホルムアミド、ホルムアミド、m-クレゾール、ジオキサン、CHCl3、ピリジン、ジクロロエチレン、または2-クロロエタノールである組成物。
【請求項５５】
前記化学的カオトロープが水素結合を形成する弱い傾向を有する溶媒である、請求項46に記載の組成物。
【請求項５６】
前記化学的カオトロープがアルコールである、請求項55に記載の組成物。
【請求項５７】
前記化学的カオトロープが、エタノール、n-プロパノール、メタノール、エタノール／0.01％HCl、n-プロパノール／0.01％HCl、またはメタノール／0.01％HClである、請求項56に記載の組成物。
【請求項５８】
前記化学的カオトロープが、構造的に崩壊させる溶媒である、請求項46に記載の組成物。
【請求項５９】
前記化学的カオトロープがジメチルスルホキシド(DMSO)、ジクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、または求電子性の溶媒である、請求項58に記載の組成物。
【請求項６０】
カオトロピック剤が組み合わせて用いられる、請求項46〜59のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６１】
金属イオン封鎖剤をさらに含む、請求項30〜60のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６２】
前記金属イオン封鎖剤がEDTAである、請求項61に記載の組成物。
【請求項６３】
酵素をさらに含む、請求項30〜62のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６４】
前記酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ、リピダーゼ、またはセルラーゼである、請求項63に記載の組成物。
【請求項６５】
プロテアーゼおよびホウ砂を含む、請求項30〜64のいずれか1項に記載の組成物。
【国際調査報告】
2008504910.tif 000009
2008504910.tif 000010
2008504910.tif 000011