(57)【要約】  式(I)のエナンチオピュアな化合物、更にはそれらの合成及び使用の方法が提供される。好ましい化合物は、c-Metプロテインキナーゼの強力な阻害薬であり、異常な細胞増殖障害、例えば癌の治療に有用である。
2008510790.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エナンチオピュアな式1の化合物
【化１】
2008510790.tif 000196
(式中、Yは、N又はCR12であり；
R1は、水素、ハロゲン、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル、3-12員のヘテロ脂環式、-O(CR6R7)nR4、-C(O)R4、-C(O)OR4、-CN、-NO2、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-C(O)NR4R5、-NR4C(O)R5、-C(=NR6)NR4R5、C1-8アルキル、C2-8アルケニル、及びC2-8アルキニルから選択され；並びに、R1の各水素は任意に1又は複数のR3基により置換され；
R2は、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、及びR2の各水素は任意にR8により置換され；
各R3は、独立してハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、R3の各水素は任意にR8により置換され、及び隣接原子上のR3基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく；
各R4、R5、R6及びR7は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリールであるか；又は、同じ窒素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは、それらが結合した窒素と一緒に、任意にN、O及びSから選択された1〜3個の追加のヘテロ原子を含む、3〜12員のヘテロ脂環式もしくは5-12員のヘテロアリール基を形成してもよいか；又は、同じ炭素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは一緒に、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式又は5-12員のヘテロアリール基を形成してもよく；並びに、R4、R5、R6及びR7の各水素は、任意にR8により置換され；
各R8は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-NH2、-CN、-OH、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)又は-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)であり；及び、R8の各水素は、任意にR11により置換され；
各R9及びR10は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり；R9又はR10は、Aの環原子又はAの置換基と一緒に、Aに融合したC3-12シクロアルキル、3-12員のヘテロ脂環式、C6-12アリール又は5-12員のヘテロアリール環を形成してもよく；並びに、R9及びR10の各水素は任意に、R3により置換され；
各R11は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C1-12アルコキシ、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)又は-CNであり、並びにR11の各水素は、任意にハロゲン、-OH、-CN、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-C1-12アルキル、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-O-C1-12アルキル、-CO、-SO又は-SO2により置換され；
R12は、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、及びR12の各水素は任意にR3で置換され；
各R13は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5、-C(O)NR4R5、-(CR6R7)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-(CR6R7)n(C3-12シクロアルキル)、-(CR6R7)n(C6-12アリール)、-(CR6R7)n(5-12員のヘテロアリール)、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、又は-(CR6R7)nC(O)R4であり、隣接原子上のR13基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく、及びR13の各水素は任意にR3により置換され；
各mは独立して0、1又は2であり；
各nは独立して0、1、2、3又は4であり；
各pは独立して1又は2である。)；
又は、それらの医薬として許容できる塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２】
R2は水素である、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
YはNである、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
YはNであり、及びR2は水素である、請求項1記載の化合物。
【請求項５】
YはCR12である、請求項1記載の化合物。
【請求項６】
YはCR12であり、及びR12はHである、請求項1記載の化合物。
【請求項７】
R1は、フラン、チオペン、ピロール、ピロリン、ピロリジン、ジオキソラン、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾール、ピラゾリン、ピラゾリジン、イソオキサゾール、イソチアゾール、オキサゾール、トリアゾール、チアジアゾール、ピラン、ピリジン、ピペリジン、ジオキサン、モルホリン、ジチアン、チオモルホリン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピペラジン、トリアジン、トリチアン、アジチジン又はフェニル基であり、及びR1の各水素は、任意にR3により置換されている、請求項1記載の化合物。
【請求項８】
R1は、7〜12-員の融合環ヘテロアリール基であり、R1の各水素は任意に1個又は複数のR3基により置換される、請求項1記載の化合物。
【請求項９】
R1は、水素である、請求項1記載の化合物。
【請求項１０】
R1は、ハロゲンである、請求項1記載の化合物。
【請求項１１】
式1aのエナンチオピュアな化合物：
【化２】
2008510790.tif 000197
(式中、Yは、N又はCHであり；
R1は、フラン、チオペン、ピロール、ピロリン、ピロリジン、ジオキソラン、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾール、ピラゾリン、ピラゾリジン、イソオキサゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、トリアゾール、チアジアゾール、ピラン、ピリジン、ピペリジン、ジオキサン、モルホリン、ジチアン、チオモルホリン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピペラジン、トリアジン、トリチアン、アジチジン又はフェニル基であり；及び、R1の各水素は、任意にR3により置換され；
各R3は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、R3の各水素は、任意にR8により置換され、及び隣接原子上のR3基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく；
各R4、R5、R6及びR7は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリールであるか；又は、同じ窒素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは、それらが結合した窒素と一緒に、任意にN、O及びSから選択された1〜3個の追加のヘテロ原子を含む、3〜12員のヘテロ脂環式もしくは5-12員のヘテロアリール基を形成してもよいか；又は、同じ炭素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは一緒に、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式又は5-12員のヘテロアリール基を形成してもよく；並びに、R4、R5、R6及びR7の各水素は、任意にR8により置換され；
各R8は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-NH2、-CN、-OH、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)又は-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)であり；及び、R8の各水素は、任意にR11により置換され；
各R9及びR10は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり；R9又はR10は、Aの環原子又はAの置換基と一緒に、Aに融合したC3-12シクロアルキル、3-12員のヘテロ脂環式、C6-12アリール又は5-12員のヘテロアリール環を形成してもよく；並びに、R9及びR10の各水素は任意に、R3により置換され；
各R11は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C1-12アルコキシ、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)又は-CNであり、並びにR11の各水素は、任意にハロゲン、-OH、-CN、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-C1-12アルキル、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-O-C1-12アルキル、-CO、-SO又は-SO2により置換され；
各R13は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5、-C(O)NR4R5、-(CR6R7)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-(CR6R7)n(C3-12シクロアルキル)、-(CR6R7)n(C6-12アリール)、-(CR6R7)n(5-12員のヘテロアリール)、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、又は-(CR6R7)nC(O)R4であり、隣接原子上のR13基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく、及びR13の各水素は任意にR3により置換され；
各mは独立して0、1又は2であり；
各nは独立して0、1、2、3又は4であり；
各pは独立して1又は2である。)；
又は、それらの医薬として許容できる塩、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１２】
5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン；5-ヨード-3-[(R)1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン；5-ブロモ-3-[1(R)-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン；4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-安息香酸；(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-フェニル)-ピペラジン-1-イル-メタノン；4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ベンゾイル)-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル；3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-[4-(ピペラジン-1-イルカルボニル)フェニル]ピリジン-2-アミン；4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-N-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-N-メチルベンズアミド；(4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝フェニル)メタノール；4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-N-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-N-メチルベンズアミド；tert-ブチル4-(4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝ベンゾイル)ピペラジン-1-カルボキシラート；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピリジン-2-イルアミン；1-[4-(4-｛6-アミノ-5-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン；1-[4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピラジン-2-イルアミン；1-[4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ジメチルアミノ-エタノン；3-[(R)-1-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン；又は、それらの医薬として許容できる塩、溶媒和物もしくは水和物からなる群より選択される、エナンチオピュアな化合物。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか1項記載の化合物、塩、水和物又は溶媒和物の治療的有効量を哺乳類へ投与することを含む、哺乳類における異常な細胞増殖を治療する方法。
【請求項１４】
異常な細胞増殖が癌である、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
請求項1〜12のいずれか1項記載の化合物、塩、水和物又は溶媒和物、及び医薬として許容できる担体を含有する、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、一般に新規化学化合物及び方法に関する。より詳細に述べると、本発明は、エナンチオピュアなアミノヘテロアリール化合物、特にタンパク質チロシンキナーゼ活性を有するアミノピリジン及びアミノピラジン、並びにそのような化合物の合成及び使用の方法に関する。好ましい化合物は、癌のような、異常な細胞増殖の治療に有用なc-Met阻害薬である。
【背景技術】
【０００２】
背景
肝細胞増殖因子(HGF)、受容体(c-MET又はHGFR)、レセプター型チロシンキナーゼ(RTK)は、発癌、増強された細胞死及び細胞浸潤を伴う腫瘍の進行に加え、転移に関係することが、多くのヒト癌において示されている(例えば、Ma, P.C., Maulik, G., Christensen, J. & Salgia, R. (2003b). Cancer Metastasis Rev, 22, 309-25；Maulik, G., Shrikhande, A., Kijima, T., Ma, P.C., Morrison, PT. & Salgia, R. (2002b). Cytokine Growth Factor Rev, 13, 41-59参照)。c-MET(HGFR)は、小細胞肺癌(SCLC)を含む様々なヒト癌において過剰発現又は突然変異により活性化することができる(Ma, P.C., Kijima, T., Maulik, G., Fox, E.A., Sattler, M., Griffin, J. D., Johnson, B.E. & Salgia, R. (2003a). Cancer Res, 63, 6272-6281)。
【０００３】
c-METは、Metプロト-癌遺伝子によりコードされたレセプター型チロシンキナーゼであり、肝細胞増殖因子(HGF)の生物学的作用を誘導し、これは細胞分散因子(SF)とも称される。Jiang et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 29. 209-248 (1999)。c-MET及びHGFは、多くの組織において発現されるが、それらの発現は通常、各々、上皮及び間葉細胞起源の細胞に大部分は限定される。c-MET及びHGFは、正常な哺乳類の発達に必要であり、細胞移動、細胞増殖及び生存、形態形成分化、並びに3-次元管構造の組織化(例えば、腎の管細胞、腺形成など)に重要であることが示されている。その上皮細胞に対する作用に加え、HGF/SFは、血管新生因子であることが報告されており、及び内皮細胞におけるc-METシグナル伝達は、血管新生に必要な多くの細胞反応(増殖、死滅、浸潤)を誘導することができる。
【０００４】
c-MET受容体は、多くのヒト癌において発現されることが示されている。c-Met及びそのリガンドHGFは、様々なヒト癌(特に肉腫)において上昇したレベルで同時発現されることも示されている。しかしこの受容体及びリガンドは通常、異なる細胞型により発現されるので、c-METシグナル伝達は、最も一般的には腫瘍-ストロマ(腫瘍-宿主)相互作用により調節される。更に、c-MET遺伝子の増殖、突然変異、及び再配列は、ヒト癌の一部において認められる。c-METキナーゼを活性化する生殖系列系突然変異によるファミリーは、腎臓腫瘍に加え他の組織の腫瘍を多発(multiple)する傾向がある。多くの研究が、c-MET及び/又はHGF/SFの発現を、様々な種類の癌(肺、結腸、乳房、前立腺、肝臓、膵臓、脳、腎臓、卵巣、胃、皮膚、及び骨の癌を含む)の病態の進行と関連付けている。更にc-MET又はHGFの過剰発現は、肺、肝臓、胃及び乳房を含む多くの主要なヒト癌における予後不良及び疾患転帰に相関することが示されている。c-METは、膵臓癌、神経膠腫、及び肝細胞癌のような、良好な治療方式がない癌にも直接関連している。
【０００５】
c-MET(HGFR)阻害薬、それらの合成及び使用の例は、2004年2月26日に出願された、米国特許出願第10/786,610号「Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors」、及び対応する2004年2月26日に出願された同じ名称の国際出願PCT/US2004/005495に開示されており、これらは全体が本願明細書に参照として組入れられているいる。
新規c-MET(HGFR)阻害薬、及び癌のような異常な細胞増殖の治療のためのそのような阻害薬の使用法を有することは、望ましいであろう。
【発明の開示】
【０００６】
概要
ひとつの態様において、本発明は、式1のエナンチオピュアな化合物：
【０００７】
【化１】
2008510790.tif 000003
【０００８】
(式中、Yは、N又はCR12であり；
R1は、水素、ハロゲン、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル、3-12員のヘテロ脂環式、-O(CR6R7)nR4、-C(O)R4、-C(O)OR4、-CN、-NO2、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-C(O)NR4R5、-NR4C(O)R5、-C(=NR6)NR4R5、C1-8アルキル、C2-8アルケニル、及びC2-8アルキニルから選択され；並びに、R1の各水素は任意に1個又は複数のR3基により置換され；
【０００９】
R2は、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、及びR2の各水素は任意にR8により置換されてもよく；
各R3は、独立してハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、R3の各水素は任意にR8により置換され、及び隣接原子上のR3基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく；
【００１０】
各R4、R5、R6及びR7は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリールであるか；又は、同じ窒素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは、それらが結合した窒素と一緒に、任意にN、O及びSから選択された1〜3個の追加のヘテロ原子を含む、3〜12員のヘテロ脂環式もしくは5-12員のヘテロアリール基を形成してもよいか；又は、同じ炭素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは一緒に、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式又は5-12員のヘテロアリール基を形成してもよく；並びに、R4、R5、R6及びR7の各水素は、任意にR8により置換され；
【００１１】
各R8は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-NH2、-CN、-OH、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)又は-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)であり；及び、R8の各水素は、任意にR11により置換され；
各R9及びR10は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり；R9又はR10は、Aの環原子又はAの置換基と一緒に、Aに融合したC3-12シクロアルキル、3-12員のヘテロ脂環式、C6-12アリール又は5-12員のヘテロアリール環を形成してもよく；並びに、R9及びR10の各水素は任意に、R3により置換され；
各R11は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C1-12アルコキシ、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)又は-CNであり、並びにR11の各水素は、任意にハロゲン、-OH、-CN、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-C1-12アルキル、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-O-C1-12アルキル、-CO、-SO又は-SO2により置換され；
【００１２】
R12は、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、及びR12の各水素は任意にR3で置換され；
【００１３】
各R13は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5、-C(O)NR4R5、-(CR6R7)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-(CR6R7)n(C3-12シクロアルキル)、-(CR6R7)n(C6-12アリール)、-(CR6R7)n(5-12員のヘテロアリール)、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、又は-(CR6R7)nC(O)R4であり、隣接原子上のR13基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく、及びR13の各水素は任意にR3により置換され；
各mは独立して0、1又は2であり；
各nは独立して0、1、2、3又は4であり；
各pは独立して1又は2である。)；
又は、それらの医薬として許容できる塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００１４】
この態様の特定の局面において、R2は水素である。
この態様の特定の局面において、YはNである。
この態様の特定の局面において、YはNであり、及びR2は水素である。
この態様の特定の局面において、YはCR12である。
この態様の特定の局面において、YはCR12であり、及びR12はHである。
【００１５】
この態様の別の特定の局面において、及び他の特定の矛盾しない局面のいずれかと組合せて、R1は、フラン、チオペン、ピロール、ピロリン、ピロリジン、ジオキソラン、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾール、ピラゾリン、ピラゾリジン、イソオキサゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、トリアゾール、チアジアゾール、ピラン、ピリジン、ピペリジン、ジオキサン、モルホリン、ジチアン、チオモルホリン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピペラジン、トリアジン、トリチアン、又はフェニル基であり、及びR1の各水素は、任意にR3により置換されている。
【００１６】
この態様の別の特定の局面において、及び他の特定の矛盾しない局面のいずれかと組合せて、R1は、融合環ヘテロアリール基であり、及びR1の各水素は任意に、1個又は複数のR3基により置換される。
この態様の別の特定の局面において、及び他の特定の矛盾しない局面のいずれかと組合せて、R1は水素である。
この態様の別の特定の局面において、及び他の特定の矛盾しない局面のいずれかと組合せて、R1は、ハロゲンである。
【００１７】
別の態様において、本発明は、式1aのエナンチオピュアな化合物：
【００１８】
【化２】
2008510790.tif 000004
【００１９】
(式中、Yは、N又はCHであり；
R1は、フラン、チオペン、ピロール、ピロリン、ピロリジン、ジオキソラン、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾール、ピラゾリン、ピラゾリジン、イソオキサゾール、イソチアゾール、オキサゾール、トリアゾール、チアジアゾール、ピラン、ピリジン、ピペリジン、ジオキサン、モルホリン、ジチアン、チオモルホリン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピペラジン、トリアジン、トリチアン、アジチジン又はフェニル基であり；及び、R1の各水素は、任意にR3により置換され；
【００２０】
各R3は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり、R3の各水素は、任意にR8により置換され、及び隣接原子上のR3基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく；
【００２１】
各R4、R5、R6及びR7は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリールであるか；又は、同じ窒素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは、それらが結合した窒素と一緒に、任意にN、O及びSから選択された1〜3個の追加のヘテロ原子を含む、3〜12員のヘテロ脂環式もしくは5-12員のヘテロアリール基を形成してもよいか；又は、同じ炭素原子に結合したR4、R5、R6及びR7のいずれかふたつは一緒に、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式又は5-12員のヘテロアリール基を形成してもよく；並びに、R4、R5、R6及びR7の各水素は、任意にR8により置換され；
【００２２】
各R8は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-NH2、-CN、-OH、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)又は-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)であり；及び、R8の各水素は、任意にR11により置換され；
各R9及びR10は独立して、水素、ハロゲン、C1-12アルキル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nNCR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5又は-C(O)NR4R5であり；R9又はR10は、Aの環原子又はAの置換基と一緒に、Aに融合したC3-12シクロアルキル、3-12員のヘテロ脂環式、C6-12アリール又は5-12員のヘテロアリール環を形成してもよく；並びに、R9及びR10の各水素は任意に、R3により置換され；
【００２３】
各R11は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C1-12アルコキシ、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-O-C1-12アルキル、-O-(CH2)nC3-12シクロアルキル、-O-(CH2)nC6-12アリール、-O-(CH2)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-O-(CH2)n(5-12員のヘテロアリール)又は-CNであり、並びにR11の各水素は、任意にハロゲン、-OH、-CN、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-C1-12アルキル、部分的又は完全にハロゲン化されてよい-O-C1-12アルキル、-CO、-SO又は-SO2により置換され；
【００２４】
各R13は独立して、ハロゲン、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、C2-12アルキニル、C3-12シクロアルキル、C6-12アリール、3-12員のヘテロ脂環式、5-12員のヘテロアリール、-S(O)mR4、-SO2NR4R5、-S(O)2OR4、-NO2、-NR4R5、-(CR6R7)nOR4、-CN、-C(O)R4、-OC(O)R4、-O(CR6R7)nR4、-NR4C(O)R5、-(CR6R7)nC(O)OR4、-(CR6R7)nOR4、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、-(CR6R7)nNCR4R5、-C(=NR6)NR4R5、-NR4C(O)NR5R6、-NR4S(O)pR5、-C(O)NR4R5、-(CR6R7)n(3-12員のヘテロ脂環式)、-(CR6R7)n(C3-12シクロアルキル)、-(CR6R7)n(C6-12アリール)、-(CR6R7)n(5-12員のヘテロアリール)、-(CR6R7)nC(O)NR4R5、又は-(CR6R7)nC(O)R4であり、隣接原子上のR13基は一緒に、C6-12アリール、5-12員のヘテロアリール、C3-12シクロアルキル又は3-12員のヘテロ脂環式基を形成してもよく、及びR13の各水素は任意にR3により置換され；
各mは独立して0、1又は2であり；
各nは独立して0、1、2、3又は4であり；
各pは独立して1又は2である。)；
又は、それらの医薬として許容できる塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００２５】
別の態様において、本発明は、5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン；5-ヨード-3-[(R)1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン；5-ブロモ-3-[1(R)-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン；4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-安息香酸；(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-フェニル)-ピペラジン-1-イル-メタノン；4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ベンゾイル)-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル；3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-[4-(ピペラジン-1-イルカルボニル)フェニル]ピリジン-2-アミン；4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-N-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-N-メチルベンズアミド；(4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝フェニル)メタノール；4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-N-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-N-メチルベンズアミド；tert-ブチル4-(4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝ベンゾイル)ピペラジン-1-カルボキシラート；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピリジン-2-イルアミン；1-[4-(4-｛6-アミノ-5-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン；1-[4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノン；3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピラジン-2-イルアミン；1-[4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ジメチルアミノ-エタノン；3-[(R)-1-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミンからなる群より選択されるエナンチオピュアな化合物；又は、それらの医薬として許容できる塩、溶媒和物もしくは水和物を提供する。
【００２６】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物のいずれか及び医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物を提供する。そのような組成物の例は、以下に説明されている。
【００２７】
本発明の好ましい化合物は、IC50、Ki、又は阻害率(％I)のいずれかひとつ又は複数により規定されたc-MET阻害活性を有するものを含む。当業者は、適当なアッセイを実行することにより、化合物がそのような活性を有するかどうかを、容易に決定することができ、及びそのようなアッセイの説明は、本願明細書の「実施例」の項に示されている。ひとつの態様において、特に好ましい化合物は、c-MET Kiが5μM未満もしくは2μM未満、又は1μM未満、又は500nM未満、又は200nM未満、又は100nM未満を有する。別の態様において、特に好ましい化合物は、1μMで、少なくとも10％又は少なくとも20％又は少なくとも30％又は少なくとも40％又は少なくとも50％又は少なくとも60％又は少なくとも70％又は少なくとも80％又は少なくとも90％のc-MET阻害を有する。c-MET/HGFR活性を測定する方法は、本願明細書の「実施例」の項に示されている。
【００２８】
別の態様において、本発明は、ヒトを含む哺乳類において異常な細胞増殖を治療する方法を提供し、この方法は、本発明の医薬組成物を哺乳類へ投与することを含む。
【００２９】
本願明細書に説明された本発明の方法のいずれかの特定の態様において、異常な細胞増殖は、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頚部癌、皮膚又は眼内のメラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性又は急性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿道癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系(CNS)の新生物形成、原発性CNSリンパ腫、脊髄癌、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、又は前記癌の1種もしくは複数の組合せを含むが、これらに限定されるものではない癌である。前記方法の別の態様において、該異常な細胞増殖は、乾癬、良性前立腺肥大又は再狭窄を含むが、これらに限定されるものではない、良性増殖性疾患である。
別の態様において、本発明は、ヒトを含む哺乳類においてHGFR媒介型障害を治療する方法を提供し、この方法は、本発明の医薬組成物のいずれかを哺乳類に投与することを含む。
【００３０】
本願明細書において説明された発明的方法の更なる特定の態様において、この方法は更に、抗-腫瘍薬、抗-血管新生薬、シグナル伝達阻害薬、及び抗増殖薬から選択された1種又は複数の物質をある量哺乳類へ投与することを含み、この量は、一緒に該異常な細胞増殖を治療するのに有効である。そのような物質は、PCT国際公開公報WO 00/38715、WO 00/38716、WO 00/38717、WO 00/38718、WO 00/38719、WO 00/38730、WO 00/38665、WO 00/37107及びWO 00/38786において開示されたものを含み、それらの開示は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００３１】
抗-腫瘍薬の例は、有糸分裂阻害薬、例えば、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン及びビンクリスチンなどの、ビンカアルカロイド誘導体；コルチン(colchine)、アロコチン(allochochine)、ハリコンドリン(halichondrine)、N-ベンゾイルトリメチル-メチルエーテルコルヒチン酸、ドラスタチン10、マイスタンシン、リゾキシン、タキサン、例えばタキソール(パクリタキセル)、ドセタキセル(Taxotere)、2'-N-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]グルタメート(タキソール誘導体)、チオコルヒチン、トリチルシステイン、テニポシド、メトトレキサート、アザチオプリン、フルオロウリシル、シトシンアラビノシド、2'2'-ジフルオロデオキシシチジン(ゲムシタビン)、アドリアマイシン及びミタマイシン；アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、イプロプラチン；N-アセチル-DL-サルコシル-L-ロイシンのエチルエステル(Asaley又はAsalex)、1,4-シクロヘキサジエン-1,4-ジカルバミン酸、2,5-ビス(1-アジルジニル)-3,6-ジオキソ-、ジエチルエステル(ジアジコン)、1,4-ビス(メタンスルホニルオキシ)ブタン(ビスルファン又はロイコスルファン)、クロロゾトシン、クロメソン(clomesone)、シアノモルホリノドキソルビシン、シクロジソン、ジアンヒドログラクチトール(dianhydroglactitol)、フルオロドパン、ヘプスルファム(hepsulfam)、マイトマイシンC、ヒカンテオンマイトマイシンC、ミトゾラミド、1-(2-クロロエチル)-4-(3-クロロプロピル)-ピペラジン二塩酸塩、ピペラジンジオン、ピポブロマン、ポルフィロマイシン、スピロヒダントインマスタード、テロキシロン、テトラプラチン、チオテパ、トリエチレンメラミン、ウラシルナイトロジェンマスタード、ビス(3-メシルオキシプロピル)アミン塩酸塩、マイトマイシン、ニトロソ尿素剤、例えばシクロヘキシル-クロロエチルニトロソ尿素、メチルシクロヘキシル-クロロエチルニトロソ尿素、1-(2-クロロエチル)-3-(2,6-ジオキソ-3-ピペリジル)-1-ニトロソ尿素、ビス(2-クロロエチル)ニトロソ尿素、
【００３２】
プロカルバジン、ダカルバジン、ナイトロジェンマスタード-関連化合物、例えばメクロロエタミン、シクロホスファミド、イフォサミド、メルファラン、クロラムブシル、リン酸エストラムスチンナトリウム、ストレプトゾシン、及びテモゾールアミド；DNA代謝拮抗薬、例えば5-フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ヒドロキシ尿素、2-[(3ヒドロキシ-2-ピリノジニル)メチレン]-ヒドラジンカルボチオアミド、デオキシフルオロウリジン、5-ヒドロキシ-2-ホルミルピリジンチオセミカルバゾン、α-2'-デオキシ-6-チオグアノシン、アフィディコリングリシネート、5-アザデオキシシチジン、β-チオグアニンデオキシリボシド、サイクロシチジン、グアナゾール、イノシングリコジアルデヒド、マクベシンII、ピラゾールイミダゾール、クラドリビン、ペントスタチン、チオグアニン、メルカプトプリン、ブレオマイシン、2-クロロデオキシアデノシン、チミジル酸シンテターゼ阻害薬、例えばラルチトレキシド及びペメトレキシド二ナトリウム、クロファラビン、フロクスウリジン及びフルダラビン；DNA/RNA代謝拮抗薬、例えばL-アラノシン、5-アザシチジン、アシビシン、アミノプテリン、及びそれらの誘導体、例えばN-[2-クロロ-5-[[(2,4-ジアミノ-5-メチル-6-キナゾリニル)メチル]アミノ]ベンゾイル]-L-アスパラギン酸、N-[4-[[(2,4-ジアミノ-5-エチル-6-キナゾリニル)メチル]アミノ]ベンゾイル]-L-アスパラギン酸、N-[2-クロロ-4-[[(2,4-ジアミノプテリジニル)メチル]アミノ]ベンゾイル]-L-アスパラギン酸、可溶性ベーカーアンチフォル(Baker's antifol)、ジクロロアリルローソン、ブレキナール、フトラフ(ftoraf)、ジヒドロ-5-アザシチジン、メトトレキサート、N-(ホスホノアセチル)-L-アスパラギン酸四ナトリウム塩、ピラゾフラン、トリメトレキサート、プリカマイシン、アクチノマイシンD、クリプトフィシン、及びクリプトフィシン-52などのアナログ、例えば欧州特許出願第239362号に開示された好ましい代謝拮抗薬、例えばN-(5-[N-(3,4-ジヒドロ-2-メチル-4-オキソキナゾリン-6-イルメチル)-N-メチルアミノ]-2-テノイル)-L-グルタミン酸；増殖因子阻害薬；細胞周期阻害薬；インターカレーション抗生物質、例えばアドリアマイシン及びブレオマイシン；タンパク質、例えばインターフェロン；並びに、抗-ホルモン、例えば抗エストロゲン、例えばNolvadex(商標)(タモキシフェン)又は例えば抗-アンドロゲン、例えばCasodex(商標)(4'-シアノ-3-(4-フルオロフェニルスルホニル)-2-ヒドロキシ-2-メチル-3'-(トリフルオロメチル)プロピオンアニリド)を含む。このような併用療法は、この治療の個々の成分の同時、逐次又は個別投与により実現することができる。
【００３３】
抗-血管新生薬は、MMP-2(マトリックス-メタロプロテアーゼ2)阻害薬、MMP-9(マトリックス-メタロプロテアーゼ9)阻害薬、及びCOX-II(シクロオキシゲナーゼII)阻害薬を含む。有用なCOX-II阻害薬の例は、CELEBREX(商標)(アレコキシブ)、バルデコキシブ、及びロフェコキシブを含む。有用なマトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬の例は、WO 96/33172(1996年10月24日公開)、WO 96/27583(1996年3月7日公開)、欧州特許出願第97304971.1号(1997年7月8日出願)、欧州特許出願第99308617.2号(1999年10月29日出願)、WO 98/07697(1998年2月26日公開)、WO 98/03516(1998年1月29日公開)、WO 98/34918(1998年8月13日公開)、WO 98/34915(1998年8月13日公開)、WO 98/33768(1998年8月6日公開)、WO 98/30566(1998年7月16日公開)、欧州特許公開第606,046号(1994年7月13日公開)、欧州特許公開第931,788号(1999年7月28日公開)、WO 90/05719(1990年5月31日公開)、WO 99/52910(1999年10月21日公開)、WO 99/52889(1999年10月21日公開)、WO 99/29667(1999年6月17日公開)、PCT国際公開公報PCT/IB98/01113(1998年7月21日出願)、欧州特許公開第99302232.1号(1999年3月25日出願)、英国特許公開第9912961.1号(1999年6月3日出願)、米国特許仮出願第60/148,464号(1999年8月12日出願)、米国特許第5,863,949号(1999年1月26日発行)、米国特許第5,861,510号(1999年1月19日発行)、及び欧州特許公開第780,386号(1997年6月25日公開)に開示されており、これらは全て本願明細書に参照として組入れられている。好ましいMMP-2及びMMP-9阻害薬は、MMP-1の阻害活性がほとんど又は全くないものである。より好ましくは、他のマトリックス-メタロプロアナーゼ(すなわち、MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12、及びMMP-13)と比べて、MMP-2及び/又はMMP-9を選択的に阻害するものである。
【００３４】
MMP阻害薬の例は、AG-3340、RO 32-3555、RS 13-0830、及び以下の化合物を含む：3-[[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニル]-(1-ヒドロキシカルバモイル-シクロペンチル)-アミノ]-プロピオン酸；3-エキソ-3-[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-8-オキサ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド；(2R,3R)1-[4-(2-クロロ-4-フルオロ-ベンジルオキシ)-ベンゼンスルホニル]-3-ヒドロキシ-3-メチル-ピペリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド；4-[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-ピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミド；3-[[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニル]-(1-ヒドロキシカルバモイル-シクロブチル)-アミノ]-プロピオン酸；4-[4-(4-クロロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-ピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミド；3-[4-(4-クロロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-ピラン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド；(2R,3R)1-[4-(4-フルオロ-2-メチル-ベンジルオキシ)-ベンゼンスルホニル]-3-ヒドロキシ-3-メチル-ピペリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド；3-[[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニル]-(1-ヒドロキシカルバモイル-1-メチル-エチル)-アミノ]-プロピオン酸；3-[[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニル]-(4-ヒドロキシカルバモイル-テトラヒドロ-ピラン-4-イル)-アミノ]-プロピオン酸；3-エキソ-3-[4-(4-クロロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-8-オキサ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド；3-エンド-3-[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-8-オキサ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド；3-[4-(4-フルオロ-フェノキシ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロフラン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド；並びに、それらの医薬として許容できる塩、溶媒和物及び水和物。
【００３５】
シグナル伝達阻害薬の例は、EGFR(上皮成長因子受容体)反応を阻害することができる物質、例えばEGFR抗体、EGF抗体、及びEGFR阻害薬である分子；VEGF(血管内皮増殖因子)阻害薬；並びに、erbB2受容体阻害薬、例えばerbB2受容体に結合する有機分子又は抗体、例えば、HERCEPTIN(商標)(Genentech, Inc.、サウスサンフランシスコ、CA、米国)などを含む。EGFR阻害薬は、例えば、WO 95/19970(1995年7月27日公開)、WO 98/14451(1998年4月9日公開)、WO 98/02434(1998年1月22日公開)、及び米国特許第5,747,498号(1998年5月5日発行)に開示されている。EGFR-阻害薬は、モノクローナル抗体C225及び抗-EGFR 22Mab(ImClone Systems Incorporated、ニューヨーク、NY、米国)、化合物ZD-1839(AstraZeneca)、BIBX-1382(Boehringer Ingelheim)、MDX-447(Medarex Inc.、Annandale、NJ、米国)、及びOLX-103(Merck & Co.、ホワイトハウスステーション、NJ、米国)、VRCTC-310(Ventech Research)及びEGF融合毒(Seragen Inc.、ホプキントン、MA)を含むが、これらに限定されるものではない。
【００３６】
VEGF阻害薬、例えばSU-5416及びSU-6668(Sugen Inc.、サウスサンフランシスコ、CA、米国)は、本組成物と組合せて又は同時に投与することもできる。VEGF阻害薬は、例えばWO 99/24440(1999年5月20日公開)、PCT国際出願PCT/IB99/00797(1999年5月3日出願)、WO 95/21613(1995年8月17日公開)、WO 99/61422(1999年12月2日公開)、米国特許第5,834,504号(1998年11月10日発行)、WO 98/50356(1998年11月12日公開)、米国特許第5,883,113号(1999年3月16日発行)、米国特許第5,886,020号(1999年3月23日発行)、米国特許第5,792,783号(1998年8月11日発行)、WO 99/10349(1999年3月4日公開)、WO 97/32856(1997年9月12日公開)、WO 97/22596(1997年6月26日公開)、WO 98/54093(1998年12月3日公開)、WO 98/02438(1998年1月22日公開)、WO 99/16755(1999年4月8日公開)、及びWO 98/02437(1998年1月22日公開)に開示されており、これらは全て全体が本願明細書に参照として組入れられている。いくつかの特異的VEGF阻害薬の他の例は、IM862(Cytran Inc.、カークランド、WA、米国)；抗-VEGFモノクローナル抗体ベバシツマブ(Genentech, Inc.、サウスサンフランシスコ、CA)；並びに、リボザイム由来の合成リボザイムであるアンギオザイム(ボールダー、CO)及びChiron(エメリービル、CA)がある。
【００３７】
ErbB2受容体阻害薬、例えばGW-282974(Glaxo Wellcome plc)、及びモノクローナル抗体AR-209(Aronex Pharmaceuticals Inc.、ウッドランド、TX、米国)及び2B-1(Chiron)は、本組成物と組合せて投与することができる。そのようなerbB2阻害薬は、WO 98/02434(1998年1月22日公開)、WO 99/35146(1999年7月15日公開)、WO 99/35132(1999年7月15日公開)、WO 98/02437(1998年1月22日公開)、WO 97/13760(1997年4月17日公開)、WO 95/19970(1995年7月27日公開)、米国特許第5,587,458号(1996年12月24日発行)、及び米国特許第5,877,305号(1999年3月2日発行)に開示されたものを含み、これらは各々それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。本発明において有用なErbB2受容体阻害薬は、1999年1月27日出願の米国特許仮出願第60/117,341号、及び1999年1月27日出願の米国特許仮出願第60/117,346号にも開示されており、これらはそれらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００３８】
使用することができる他の抗増殖薬は、酵素ファルネシルタンパク質転移酵素の阻害薬及びレセプター型チロシンキナーゼの阻害薬PDGFrを含み、これらは以下の米国特許出願において開示され及び請求された化合物：09/221946(1998年12月28日出願)；09/454058(1999年12月2日出願)；09/501163(2000年2月9日出願)；09/539930(2000年3月31日出願)；09/202796(1997年5月22日出願)；09/384339(1999年8月26日出願)；及び、09/383755(1999年8月26日出願)；並びに、以下の米国特許仮出願において開示され及び請求された化合物：60/168207(1999年11月30日出願)；60/170119(1999年12月10日出願)；60/177718(2000年1月21日出願)；60/168217(1999年11月30日出願)、及び60/200834(2000年5月1日出願)を含む。前記特許出願及び特許仮出願の各々は、それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００３９】
本発明の組成物は、抗腫瘍免疫応答を増強することが可能な物質、例えばCTLA4(細胞毒性リンパ球抗原4)抗体、及び他のCTLA4の阻害が可能な物質；並びに、抗-増殖薬、例えば他のファルネシルタンパク質転移酵素阻害薬を含むが、これらに限定されるものではない、異常な細胞増殖又は癌の治療に有用な他の物質と共に使用することもできる。本発明において使用することができる特異的CTLA4抗体は、米国特許仮出願第60/113,647号(1998年12月23日出願)に開示されており、これはその全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００４０】
定義
特に指定しない限りは、本願明細書及び請求項において使用される下記用語は、以下に考察した意味を有する。R、X、nなど本欄において定義された変数は、本欄についてのみ言及され、本定義欄以外で使用される限定の(save)意味を有することを意味するものではない。更に本願明細書において定義された基は、任意に置換することができる、代表的置換基の本定義欄の列記は例証であり、本願明細書及び請求項において別所に定義された置換基を限定することを意図するものではない。
【００４１】
「アルキル」は、1〜20個の炭素原子、好ましくは1〜12個の炭素原子、より好ましくは1〜8個の炭素原子、又は1〜6個の炭素原子、又は1〜4個の炭素原子の、直鎖及び分枝鎖の基を含む、飽和脂肪族炭化水素ラジカルを意味する。「低級アルキル」は、1〜4個の炭素原子を伴うアルキル基を特に意味する。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、2-プロピル、n-ブチル、iso-ブチル、tert-ブチル、ペンチルなどを含む。アルキルは、置換されてもされなくともよい。典型的置換基は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、チオカルボニル、O-カルバミル、N-カルバミル、O-チオカルバミル、N-チオカルバミル、C-アミド、N-アミド、C-カルボキシ、O-カルボキシ、ニトロ、シリル、アミノ及び-NRxRy(式中、Rx及びRyは独立して水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、カルボニル、アセチル、スルホニル、トリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択される)、並びに組合せられた5-又は6-員のヘテロ脂環式環を含む。
【００４２】
「シクロアルキル」は、それらの環の1個又は複数は、1個又は複数の二重結合を含むことができるが、どの環も、完全に共役したπ-電子システムを有さない、3〜8員の全て-炭素の単環、全て-炭素の5-員/6-員又は6-員/6-員融合二環、又は多環式融合環(「融合」環システムは、システムの各環が、システム内の互いの環で炭素原子の隣接対を共有することを意味する)の基を意味する。シクロアルキル基の例は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、アダマンタン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエンなどであるが、これらに限定されるものではない。シクロアルキル基は、置換されてもされなくともよい。典型的置換基は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、チオカルボニル、C-カルボキシ、O-カルボキシ、O-カルバミル、N-カルバミル、C-アミド、N-アミド、ニトロ、アミノ並びに先に定義されたRx及びRyを伴う-NRxRyを含む。例証的シクロアルキルの例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：
【００４３】
【化３】
2008510790.tif 000005
【００４４】
本願明細書に定義された「アルケニル」は、少なくとも2個の炭素原子及び少なくとも1個の炭素-炭素二重結合からなるアルキル基を意味する。代表例は、エテニル、1-プロペニル、2-プロペニル、1-、2-又は3-ブテニルなどを含むが、これらに限定されるものではない。
本願明細書に定義された「アルキニル」は、少なくとも2個の炭素原子及び少なくとも1個の炭素-炭素三重結合からなるアルキル基を意味する。代表例は、エチニル、1-プロピニル、2-プロピニル、1-、2-又は3-ブチニルなどを含むが、これらに限定されるものではない。
【００４５】
「アリール」は、完全に共役されたπ-電子システムを有する6〜12個の炭素原子の全て炭素の単環又は融合-環の多環式基を意味する。アリール基の例は、フェニル、ナフタレニル及びアントラセニルを含むが、これらに限定されるものではない。アリール基は、置換されてもされなくともよい。典型的置換基は、ハロ、トリハロメチル、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、C-カルボキシ、O-カルボキシ、O-カルバミル、N-カルバミル、O-チオカルバミル、N-チオカルバミル、C-アミド、N-アミド、スルフィニル、スルホニル、アミノ並びに先に定義されたRx及びRyを伴う-NRxRyを含む。
【００４６】
「ヘテロアリール」は、N、O及びSから選択された1、2、3又は4個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子はCであり、加えて完全に共役されたπ-電子システムを有する、5〜12個の環原子の単環又は融合環基を意味する。未置換のヘテロアリール基の例は、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、プリン、テトラゾール、トリアジン、及びカルバゾールであるが、これらに限定されるものではない。ヘテロアリール基は、置換されてもされなくともよい。典型的置換基は、アルキル、シクロアルキル、ハロ、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ニトロ、カルボニル、チオカルボニル、スルホンアミドC-カルボキシ、O-カルボキシ、スルフィニル、スルホニル、O-カルバミル、N-カルバミル、O-チオカルバミル、N-チオカルバミル、C-アミド、N-アミド、アミノ並びに先に定義されたRx及びRyを伴う-NRxRyを含む。
【００４７】
医薬として許容できるヘテロアリールは、医薬組成物に製剤され、引き続きそれを必要とする患者へ投与される、本発明の化合物に結合されるのに十分な程安定しているものである。
典型的単環式ヘテロアリール基は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：
【００４８】
【化４】
2008510790.tif 000006
【００４９】
適当な融合環ヘテロアリール基の例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：
【００５０】
【化５】
2008510790.tif 000007
【化６】
2008510790.tif 000008
【００５１】
「ヘテロ脂環式」又は「ヘテロ環」は、3〜12個の環原子の環(複数)を有する、単環式又は融合環式基を意味し、ここで1又は2個の環原子は、N、O、及びS(O)n(ここでnは0、1又は2である)から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はCである。これらの環は、1個又は複数の二重結合を含むこともできる。しかしこれらの環は、完全に共役されたπ-電子システムを有さない。適当な置換ヘテロ脂環式基の例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：
【００５２】
【化７】
2008510790.tif 000009
【００５３】
適当な部分的に不飽和のヘテロ脂環式基の例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：
【００５４】
【化８】
2008510790.tif 000010
【００５５】
ヘテロ環式基は、ハロ、低級アルキル、カルボキシ、エステル、ヒドロキシ、又はモノもしくはジアルキルアミノで置換された低級アルキルから独立して選択された1又は2個の置換基により任意に置換されている。
「ヒドロキシ」は、-OH基を意味する。
「アルコキシ」は、-O-(アルキル)又は-O-(未置換のシクロアルキル)基の両方を意味する。代表例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシなどを含むが、これらに限定されるものではない。
【００５６】
「ハロアルコキシ」は、-O-(ハロアルキル)基を意味する。代表例は、トリフルオロメトキシ、トリブロモメトキシなどを含むが、これらに限定されるものではない。
「アリールオキシ」は、本願明細書に定義された-O-アリール又は-O-ヘテロアリール基を意味する。代表例は、フェノキシ、ピリジニルオキシ、フラニルオキシ、チエニルオキシ、ピリミジニルオキシ、ピラジニルオキシなど、及びそれらの誘導体を含むが、これらに限定されるものではない。
「メルカプト」は、-SH基を意味する。
【００５７】
「アルキルチオ」は、-S-(アルキル)又は-S-(未置換のシクロアルキル)基を意味する。代表例は、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、シクロプロピルチオ、シクロブチルチオ、シクロペンチルチオ、シクロヘキシルチオなどを含むが、これらに限定されるものではない。
「アリールチオ」は、本願明細書に定義されたような、-S-アリール又は-S-ヘテロアリール基を意味する。代表例は、フェニルチオ、ピリジニルチオ、フラニルチオ、チエニルチオ、ピリミジニルチオなど、及びそれらの誘導体を含むが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
「アシル」又は「カルボニル」は、-C(O)R"基を意味し、ここでR"は、水素、低級アルキル、トリハロメチル、未置換のシクロアルキル、低級アルキル、トリハロメチル、低級アルコキシ、ハロ及び-NRxRy基からなる群より選択される1個又は複数の、好ましくは1、2又は3個の置換基により任意に置換されたアリール、低級アルキル、トリハロアルキル、低級アルコキシ、ハロ及び-NRxRy基からなる群より選択される1個又は複数の、好ましくは1、2又は3個の置換基により任意に置換されたヘテロアリール(環炭素を介して結合した)、並びに低級アルキル、トリハロアルキル、低級アルコキシ、ハロ及び-NRxRy基からなる群より選択される1個又は複数の、好ましくは1、2又は3個の置換基により任意に置換されたヘテロ脂環式(環炭素を介して結合された)からなる群より選択される。代表的アシル基は、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイルなどを含むが、これらに限定されるものではない。
【００５９】
「アルデヒド」は、R"が水素であるアシル基を意味する。
「チオアシル」又は「チオカルボニル」は、先に定義されたようなR"を伴う、-C(S)R"基を意味する。
「チオカルボニル」基は、先に定義されたようなR"を伴う、-C(S)R"基を意味する。
「C-カルボキシ」基は、先に定義されたようなR"を伴う、-C(O)OR"基を意味する。
「O-カルボキシ」基は、先に定義されたようなR"を伴う、-OC(O)R"基を意味する。
【００６０】
「エステル」は、R"が水素であることはできない以外は、先に定義されたようなR"を伴う、-C(O)OR"基を意味する。
「アセチル」基は、-C(O)CH3基を意味する。
「ハロ」基は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味し、好ましくはフッ素又は塩素である。
「トリハロメチル」基は、3個のハロ置換基を有するメチル基、例えばトリフルオロメチル基を意味する。
「シアノ」は、-C≡N基を意味する。
「スルフィニル」基は、先に定義されたものに加え、R"は、ヒドロキシ基であってもよい、-S(O)R"基を意味する。
「スルホニル」基は、先に定義されたものに加え、R"は、ヒドロキシ基であってもよい、-S(O)2R"基を意味する。
「S-スルホンアミド」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、-S(O)2NRxRy基を意味する。
「N-スルホンアミド」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、-NRxS(O)2Ry基を意味する。
【００６１】
「O-カルバミル」基は、先に定義されたRx及びRyを伴う、-OC(O)NRxRy基を意味する。
「N-カルバミル」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、RyOC(O)NRx-基を意味する。
「O-チオカルバミル」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、-OC(S)NRxRy基を意味する。
「N-チオカルバミル」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、RyOC(S)NRx-基を意味する。
【００６２】
「アミノ」は、Rx及びRyは両方とも水素である、-NRxRy基を意味する。
「C-アミド」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、-C(O)NRxRy基を意味する。
「N-アミド」は、先に定義されたRx及びRyを伴う、RxC(O)NRy-基を意味する。
「ニトロ」は、-NO2基を意味する。
【００６３】
「ハロアルキル」は、1個又は複数の同じ又は異なるハロ原子、例えば-CH2Cl、-CF3、-CH2CF3、-CH2CCl3などで置換された、アルキル、好ましくは低級アルキルを意味する。
「ヒドロキシアルキル」は、1、2又は3個のヒドロキシ基で置換されたアルキル、好ましくは低級アルキル；例えばヒドロキシメチル、1又は2-ヒドロキシエチル、1,2-、1,3-又は2,3-ジヒドロキシプロピルなどを意味する。
「アラルキル」は、先に定義されたアリール基で置換されたアルキル、好ましくは低級アルキル；例えば、-CH2フェニル、-(CH2)2フェニル、-(CH2)3フェニル、CH3CH(CH3)CH2フェニルなど、及びそれらの誘導体を意味する。
【００６４】
「ヘテロアラルキル」基は、ヘテロアリール基で置換されているアルキル、好ましくは低級アルキル；例えば、-CH2ピリジニル、-(CH2)2ピリミジニル、-(CH2)3イミダゾリルなど、及びそれらの誘導体を意味する。
「モノアルキルアミノ」は、Rがアルキル又は未置換のシクロアルキル基である、ラジカル-NHR；例えば、メチルアミノ、(1-メチルエチル)アミノ、シクロヘキシルアミノなどを意味する。
「ジアルキルアミノ」は、各Rが独立してアルキル又は未置換のシクロアルキル基である、ラジカル-NRR；ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、(1-メチルエチル)-エチルアミノ、シクロヘキシルメチルアミノ、シクロペンチルメチルアミノなどを意味する。
【００６５】
「任意」又は「任意に」は、引き続き説明された事象又は状況が起こり得るが必ずしもではないこと、並びにその説明が、事象又は状況が起こる場合及び起こらない場合を含むことを意味する。例えば「アルキル基で任意に置換されたヘテロ環式基」は、アルキルが、存在することができるが必ずしもではないことを意味し、その説明は、ヘテロ環式基がアルキル基により置換される状況及びヘテロ環式基がアルキル基により置換されない状況を含む。
【００６６】
「医薬組成物」は、本願明細書に説明された1種又は複数の化合物、又はそれらの生理的に/医薬として許容できる塩、溶媒和物、水和物もしくはプロドラッグの、他の化学的成分、例えば生理的に/医薬として許容できる担体及び賦形剤との混合物を意味する。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を促進することである。
本願明細書において使用される「生理的に/医薬として許容できる担体」は、生物へ著しい刺激を引き起こさず、並びに投与された化合物の生物学的活性及び特性を無効にしない担体又は希釈剤を意味する。
「医薬として許容できる賦形剤」は、化合物の投与を更に促進するために、医薬組成物に添加された不活性物質を意味する。賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖質及びデンプン型、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油及びポリエチレングリコールを含むが、これらに限定されるものではない。
【００６７】
本願明細書において使用される用語「医薬として許容できる塩」は、親化合物の生物学的有効性及び特性を保持する塩を意味する。そのような塩は：
(1)親化合物の遊離塩基の、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸などの無機酸、又は酢酸、シュウ酸、(D)もしくは(L)リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸などの有機酸との反応により得ることができる、酸付加塩；又は
(2)酸性プロトンが、金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、又はアルミニウムイオンにより交換されたいずれかの親化合物中に存在する場合か；又は、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、N-メチルグルカミンなどの、有機塩基と配位された場合に形成された塩；を含む。
【００６８】
「PK」は、レセプター型タンパク質チロシンキナーゼ(RTK)、非-レセプター型又は「細胞」チロシンキナーゼ(CTK)及びセリン-トレオニンキナーゼ(STK)を意味する。
「変調」又は「変調する」は、RTK、CTK及びSTKの触媒活性を変更することを意味する。特に、変調するは、RTK、CTK及びSTKの触媒活性の活性化、好ましくはRTK、CTK又はSTKが曝される化合物又は塩の濃度に応じたRTK、CTK及びSTKの触媒活性の活性化又は阻害、より好ましくは、RTK、CTK及びSTKの触媒活性の阻害を意味する。
「触媒活性」は、RTK及び/もしくはCTKの直接もしくは間接の影響下でのチロシンのリン酸化、又はSTKの直接的もしくは間接的影響下でのセリン及びトレオニンのリン酸化の速度を意味する。
【００６９】
「接触」は、直接的、すなわちキナーゼそれ自身との相互作用によるか、又は間接的、すなわちキナーゼの触媒活性を左右する別の分子と相互作用することによるかのいずれかにより、化合物がPKの触媒活性に影響を及ぼすことができるように、本発明の化合物及び標的PKを一緒にすることを意味する。このような「接触」は、「in vitro」、すなわち試験管、ペトリ皿などの中で実現することができる。試験管において、接触は、化合物及び関心のあるPKにのみ関連するか、又はこれは全細胞に関連してもよい。細胞は、細胞培養皿において維持もしくは増殖され及びその環境中の化合物と接触されてもよい。この状況において、特定の化合物がPKに関連した障害に影響を及ぼす能力、すなわち以下に定義される化合物のIC50は、より複雑な生存生物とのin vivoにおける化合物の使用を試みる前に決定することができる。生物の外側の（outside）細胞に関して、PKを化合物と接触するための、複数の方法が存在し、当業者に周知であり、これは直接細胞微量注入技術及び多くの膜貫通担体技術を含むが、これらに限定されるものではない。
【００７０】
「In vitro」は、例えば試験管又は培養培地内などであるが、これらに限定されるものではない、人工的環境で行われる手順を意味する。
「In vivo」は、マウス、ラット又はウサギなどであるが、これらに限定されるものではない、生存生物により行われる手順を意味する。
【００７１】
「PKに関連した障害」、「PKが駆動した障害」及び「異常なPK活性」は全て、不適切な、すなわち下回る、又はより一般的には上回るPK触媒活性により特徴付けられる条件を意味し、ここで特定のPKは、RTK、CTK又はSTKであることができる。不適切な触媒活性は、(1)通常PKを発現しない細胞におけるPK発現、(2)望ましくない細胞増殖、分化及び/もしくは成長につながる、増加したPK発現、又は(3)細胞増殖、分化及び/もしくは成長の望ましくない低下につながる、低下したPK発現のいずれかの結果として生じ得る。PKの過剰な活性は、特定のPKをコードしている遺伝子の増幅、又は細胞増殖、分化及び/又は成長の障害と相関することができるPK活性レベルの産生(すなわち、PKレベルが増加するにつれて、細胞障害の1又は複数の症状の重症度は増大する)のいずれかを意味する。下回る活性は当然、逆であり、ここではPK活性レベルが低下するにつれて、細胞障害の1又は複数の症状の重症度は減少する。
【００７２】
「治療する」、「治療している」及び「治療」は、PK媒介型細胞障害及び/又はその付随する症状を緩和又は排除(abrogate)する方法を意味する。特に癌に関して、これらの用語は単純に、癌に罹患した個体の平均余命が増加するか、又はこの疾患の1又は複数の症状が軽減されることを意味する。
「生物」は、少なくとも1個の細胞で構成されるいずれかの生存している実体を意味する。生存している生物は、例えば、真核単細胞又はヒトを含む哺乳類のような複合体であることができる。
【００７３】
「治療的有効量」は、治療される障害の1又は複数の症状をある程度緩和するであろう投与される化合物の量を意味する。癌の治療に関して、治療的有効量は、以下の作用の少なくともひとつを有する量を意味する：
(1)腫瘍のサイズを縮小する；
(2)腫瘍の転移を阻害する(すなわち、ある程度遅延、好ましくは停止する)；
(3)腫瘍の成長をある程度阻害する(すなわち、ある程度遅延、好ましくは停止する)；及び
(4)癌に関連した1又は複数の症状をある程度緩和する(又は、好ましくは排除する)。
【００７４】
「モニタリング」は、化合物の特定のPKを発現している細胞との接触の作用を観察又は検出することを意味する。観察又は検出された作用は、細胞表現型の変化、PKの触媒活性の変化、又はPKの天然の結合パートナーとの相互作用の変化であることができる。そのような作用を観察又は検出する技術は、当該技術分野において周知である。この作用は、細胞表現型の変化又は変化の非存在、該プロテインキナーゼの触媒活性の変化又は変化の非存在、もしくは本発明の最終局面における、該プロテインキナーゼの天然の結合パートナーとの相互作用の変化又は変化の非存在から選択される。
【００７５】
「細胞表現型」は、細胞もしくは組織の外見又は細胞もしくは組織の機能を意味する。細胞表現型の例は、細胞サイズ、細胞成長、細胞増殖、細胞分化、細胞生存、アポトーシス、並びに栄養の取り込み及び使用であるが、これらに限定されるものではない。そのような表現型特徴は、当該技術分野において周知の技術により測定可能である。
【００７６】
「天然の結合パートナー」は、細胞内の特定のPKと結合するポリペプチドを意味する。天然の結合パートナーは、PK-媒介型シグナル伝達プロセスにおけるシグナル伝播において役割を果たすことができる。天然の結合パートナーのPKとの相互作用の変化は、PK/天然の結合パートナー複合体の濃度の増加又は減少として顕在化され、結果的に、PKのシグナル伝達を媒介する能力の観察可能な変化である。
【００７７】
本願明細書において使用される用語「光学的に純粋」、「エナンチオピュアな」、「純粋なエナンチオマー」、及び「光学的に純粋なエナンチオマー」は、化合物のひとつのエナンチオマーを含み、及びその化合物の逆のエナンチオマーを実質的に含まない組成物を意味する。典型的な光学的に純粋な化合物は、約80質量％よりも多い化合物のひとつのエナンチオマー及び約20質量％未満の化合物の逆のエナンチオマーを、より好ましくは約90質量％よりも多い化合物のひとつのエナンチオマー及び約10質量％未満の化合物の逆のエナンチオマーを、更により好ましくは約95質量％よりも多い化合物のひとつのエナンチオマー及び約5質量％未満の化合物の逆のエナンチオマーを、最も好ましくは約97質量％よりも多い化合物のひとつのエナンチオマー及び約3質量％未満の化合物の逆のエナンチオマーを含む。
【００７８】
詳細な説明
本発明の化合物合成に関する一般的スキームは、本願明細書の「実施例」の欄に認めることができる。
いくつかの一般的手順は、1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)-エトキシ部分が純粋な(R)-異性体である化合物の合成に関して示され、及びいくつかは、該部分がラセミ混合物である化合物に関して示されている。本願明細書の手順は、対応するラセミ体又はエナンチオピュアな出発材料を選択することにより、ラセミ化合物又はエナンチオピュアな(R)異性体を生成するために使用することができることは理解されなければならない。
【００７９】
本願明細書に示された手順は、適当なエナンチオピュアな出発材料を選択することにより、多種多様なエナンチオピュアな化合物を生成するために使用することができる。本願明細書に示された化合物に加え、本発明は、3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン化合物及び3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン化合物に対応する、エナンチオピュアな化合物も提供し、これらは、米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)；2004年8月26日に出願された代理人整理番号PC 32546に割当てられた名称「Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors」の、米国特許出願；並びに、2004年8月26日に出願された代理人整理番号PC 32548に割当てられた名称「Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors」の、米国特許出願に開示されている。これらの文書の開示は、それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００８０】
特に記さない限り、本発明の化合物に関する本願明細書の全ての言及は、それらの塩、溶媒和物、水和物及び複合体、並びにそれらの多形、立体異性体、及び同位体標識された変種を含む、それらの塩の溶媒和物、水和物及び複合体を含む。
医薬として許容できる塩は、酸付加塩及び塩基性塩(二塩(disalt)を含む)を含む。適当な酸付加塩は、無毒の塩を形成する酸から形成される。例は、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、炭酸水素塩/炭酸塩、硫酸水素塩/硫酸塩、ホウ酸塩、カムシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩/塩化物、臭化水素酸塩/臭化物、ヨウ化水素酸塩/ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、2-ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩/リン酸水素/リン酸二水素、サッカラート、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩及びトリフルオロ酢酸塩を含む。
【００８１】
適当な塩基性塩は、無毒の塩を形成する塩基から形成される。例は、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオールアミン、グリシン、リシン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン及び亜鉛の塩を含む。
適当な塩に関する総説は、「Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use」、Stahl and Wermuth (Wiley- VCH, Weinheim, 独国、2002)を参照し、その内容は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００８２】
本発明の化合物の医薬として許容できる塩は、化合物の溶液を、所望の酸又は塩基と適宜混合することにより、容易に調製することができる。塩は、溶液から沈殿され、濾過により収集されるか、又は溶媒の蒸発により回収され得る。塩中のイオン化の程度は、完全にイオン化されたものから、ほとんどイオン化されないものまで変動することができる。
【００８３】
本発明の化合物は、非溶媒和物及び溶媒和物の両方の形で存在してもよい。用語「溶媒和物」はここでは、本発明の化合物及び1又は複数の医薬として許容できる溶媒分子、例えばエタノールを含む、分子複合体を説明するように使用される。用語「水和物」は、溶媒が水である場合に使用される。本発明の医薬として許容できる溶媒和物は、結晶化の溶媒は、同位体置換された、例えばD2O、d6-アセトン、d6-DMSOなどである水和物及び溶媒和物を含む。
【００８４】
同じく本発明の範囲内に、前記溶媒和物とは対照的に、薬物及びホストが、化学量論的量又は非化学量論的量で存在する、包接化合物、薬物-ホスト包含複合体(drug-host inclusion complex)のような複合体も含まれる。化学量論的量又は非化学量論的量であってよい2種又はそれよりも多い有機成分及び/又は無機成分を含有する薬物の複合体も含まれる。得られる複合体は、イオン化されるか、部分的にイオン化されるか又はイオン化されないことができる。このような複合体の総説については、HaleblianのJ Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288(1975年8月)を参照し、その開示は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
同じく本発明の化合物の多形、プロドラッグ、及び異性体(光学異性体、幾何異性体及び互変異性体を含む)も本発明の範囲内である。
【００８５】
本発明の化合物の誘導体は、それらの薬理学的活性をほとんど又は全く有さないが、患者へ投与した場合に、例えば加水分解的切断により、本発明の化合物へ転換されるものである。そのような誘導体は、「プロドラッグ」と称される。プロドラッグの使用に関する更なる情報は、「Prodrugs as Novel Delivery Systems」、Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella)及び「Bioreversible Carriers in Drug Design」、Pergamon Press, 1987 (E B Roche編集, American Pharmaceutical Association)に認めることができ、これらの内容は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
本発明のプロドラッグは、例えば、本発明の化合物に存在する適当な官能性の、例えば「Design of Prodrugs」H Bundgaard (Elsevier, 1985)に説明されたような「プロ-部分」として当業者に公知のある種の部分との交換により作製することができ、その開示は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００８６】
本発明のプロドラッグのいくつかの例は、以下を含む：
(i)例えば水素が(C1-C8)アルキルと置換した、カルボン酸官能性(-COOH)を含む化合物、それらのエステル；
(ii)例えば水素が(C1-C8)アルカノイルオキシメチルと置換した、アルコール官能性(-OH)を含む化合物、それらのエーテル；及び
(iii)例えば一方又は両方の水素が(C1-C10)アルカノイルと置換した、第1級又は第2級アミノ官能性(-NH2又は-NHR、ここでRはHでない)を含む化合物、それらのアミド。
【００８７】
前述の例に従う置換基の更なる例及び他のプロドラッグ型の例は、前述の参考文献に認めることができる。
最後にある種の本発明の化合物は、本発明の化合物以外のプロドラッグとしてそれら自身作用することができる。
【００８８】
1個又は複数の不斉炭素原子を含む本発明の化合物は、2種又はそれよりも多い立体異性体として存在することができる。本発明の化合物が、アルケニル又はアルケニレン基を含む場合、cis/trans(又はZ/E)幾何異性体が可能である。化合物が、例えばケトもしくはオキシム基又は芳香族部分を含む場合、互変異性体の異性('互変異性')が生じる。単独の化合物が、1種よりも多い異性体型を示してもよい。
【００８９】
本発明の範囲には、本発明の化合物の全ての立体異性体、幾何異性体及び互変異性体が含まれ、1種よりも多い異性体型を示す化合物、それらの1種又は複数の混合物を含む。同じく酸付加塩又は塩基性塩も含まれ、ここでは対イオンは、例えばD-乳酸塩もしくはL-リシンのように光学活性であるか、又は例えばDL-酒石酸もしくはDL-アルギニンのように、ラセミ体である。
Cis/trans異性体は、例えばクロマトグラフィー及び分別結晶のような、当業者に周知の常法により分割することができる。
【００９０】
個々のエナンチオマーの調製/単離のための常法は、適当な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成、又は例えばキラル高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用する、ラセミ体(又は、塩もしくは誘導体のラセミ体)の分割を含む。
あるいは、ラセミ体(又はラセミ前駆体)は、適当な光学活性化合物、例えばアルコールと、又はこの化合物が酸性もしくは塩基性部分を含む場合は、酒石酸もしくは1-フェニルエチルアミンのような酸又は塩基と反応することができる。得られるジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィー及び/又は分別結晶により分離することができ、及び当業者に周知の手段により、ジアステレオマーの一方又は両方は、対応する純粋なエナンチオマー(複数)に転換される。
【００９１】
本発明のキラル化合物(及びそれらのキラル前駆体)は、0〜50％イソプロパノール、典型的には2〜20％、及び0〜5％のアルキルアミン、典型的には0.1％のジエチルアミンを含有する、炭化水素、典型的にはヘプタン又はヘキサンからなる移動相で、不斉樹脂上でのクロマトグラフィー、典型的にはHPLCを用い、エナンチオマー-リッチな形で得ることができる。溶離液の濃縮は、濃厚な混合物をもたらす。
立体異性体のラセミ混合物は、当業者に公知の常法により分離することができ；例えば「Stereochemistry of Organic Compounds」、E L Eliel (Wiley, ニューヨーク, 1994)を参照し、その内容は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００９２】
本発明は、本発明の同位体標識された化合物も含み、ここで1個又は複数の原子は、同じ原子数を有するが、質量又は質量数が通常天然に認められるものと異なるような原子により交換される。本発明の化合物に含むのに適した同位体の例は、水素、例えば2H及び3H、炭素、例えば11C、13C及び14C、塩素、例えば36Cl、フッ素、例えば18F、ヨウ素、例えば123I及び125I、窒素、例えば13N及び15N、酸素、例えば15O、17O及び18O、リン、例えば32P、並びにイオウ、例えば35Sがある。ある種の同位体標識された本発明の化合物、例えば放射性同位体を含んでいるものは、薬物及び/又は基質の組織分布試験において有用である。放射性同位体トリチウム3H、及び炭素-14、14Cは、それらの取り込みの容易さ及び整った検出手段の観点から、この目的に特に有用である。重水素2Hのようなより重い同位体による置換は、例えば増大したin vivo半減期又は低下した必要用量などの、より大きい代謝の安定性から、ある種の治療的利点をもたらし、従ってある状況においては好ましいことがある。11C、18F、15O及び13Nなどの陽電子を放出する同位体との置換は、基質の受容体占拠を試験する陽電子放出断層撮影(PET)試験において有用であることができる。
【００９３】
本発明の同位体-標識された化合物は、一般に当業者に公知の常法又はその他で使用される非標識試薬の代わりに適当な同位体-標識された試薬を使用する、本願明細書に説明されたものに類似したプロセスにより、調製することができる。
本発明の医薬として許容できる溶媒和物は、結晶化の溶媒が、同位体置換されているもの、例えばD2O、d6-アセトン、d6-DMSOを含む。
【００９４】
医薬使用が意図された本発明の化合物は、結晶性又は非晶質生成物として、又はそれらの混合物として投与することができる。これらは例えば、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、又は蒸発乾固などの方法により、固形プラグ(plug)、パウダー、又はフィルムとして得ることができる。マイクロウェーブ又はラジオ波乾燥も、この目的に使用することができる。
これらの化合物は、単独で又は1種もしくは複数の他の本発明の化合物と組合せるか又は1種もしくは複数の他の薬物と組合わせて(又はそれらのいずれかの組合せとして)投与することができる。一般にこれらは、1種又は複数の医薬として許容できる賦形剤と会合した製剤として投与されるであろう。用語「賦形剤」は、本発明の化合物(複数)以外の構成成分を説明するために、本願明細書において使用される。賦形剤の選択は、具体的な投与様式、賦形剤の溶解度及び安定性に対する作用、並びに剤形の性質などの要因に大きく依存するであろう。
【００９５】
本発明の化合物の送達に適した医薬組成物及びそれらの調製法は、当業者には容易に明らかであろう。このような組成物及び調製法は、例えば「Remington's Pharmaceutical Sciences」、第19版(Mack Publishing Company, 1995)に認めることができ、その内容は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００９６】
経口投与
本発明の化合物は、経口投与されてよい。経口投与は、化合物が胃腸管に侵入するための、嚥下に関与するか、又は化合物が口腔から直接血流へ侵入するための、口腔内もしくは舌下投与を使用することができる。
経口投与に適した製剤は、固形製剤、例えば錠剤、粒子を含有するカプセル剤、液剤、又は散剤、トローチ剤(液体-充填型を含む)、咀嚼剤(chews)、マルチ(multi)-又はナノ-粒子、ゲル剤、固溶体、リポソーム、フィルム(粘膜接着剤を含む)、胚珠(ovules)、スプレー剤及び液体製剤を含む。
【００９７】
液体製剤は、懸濁剤、液剤、シロップ剤及びエリキシル剤を含む。そのような製剤は、軟又は硬カプセル剤中の充填剤として使用することができ、典型的には、担体、例えば水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、又は適当な油分、並びに1種もしくは複数の乳化剤及び/又は懸濁化剤を含む。液体製剤は、固形物、例えばサシェ剤からの再構成により調製することもできる。
本発明の化合物は、Liang及びChenのExpert Opinion in Therapeutic Patents, 11(6), 981-986(2001)に説明されたもののような即時崩壊剤形において使用することもでき、これは全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【００９８】
錠剤剤形に関して、投与量に応じ、薬物は、剤形の1質量％〜80質量％、より典型的には剤形の5質量％〜60質量％を占めることができる。この薬物に加え、錠剤は一般に、崩壊剤を含有する。崩壊剤の例は、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微晶質セルロース、低級アルキル-置換されたヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、プレゼラチン化されたデンプン及びアルギン酸ナトリウムである。一般に崩壊剤は、剤形の1質量％〜25質量％、好ましくは5質量％〜20質量％を構成するであろう。
【００９９】
結合剤は一般に、錠剤製剤へ結合力特性を付与するために使用される。適当な結合剤は、微晶質セルロース、ゼラチン、砂糖、ポリエチレングリコール、天然ゴム及び合成ゴム、ポリビニルピロリドン、プレゼラチン化されたデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロースである。錠剤は、希釈剤、例えば乳糖(一水和物、噴霧乾燥した一水和物、無水物など)、マンニトール、キシリトール、デキストロース、ショ糖、ソルビトール、微晶質セルロース、デンプン及び二塩基性リン酸カルシウム二水和物なども含有することができる。
【０１００】
錠剤は、任意にラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート80などの界面活性剤、二酸化ケイ素及びタルクなどの直打用滑沢剤も含有することができる。存在する場合には、界面活性剤は典型的には錠剤の0.2質量％〜5質量％で、及び直打用滑沢剤は典型的には錠剤の0.2質量％〜1質量％である。
錠剤は一般に、滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリルフマル酸ナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムの混合物も含む。滑沢剤は一般に、錠剤の0.25質量％〜10質量％、好ましくは0.5質量％〜3質量％の量で存在する。
【０１０１】
他の通常の構成成分は、抗酸化剤、着色剤、香味剤、保存剤及び苦みマスキング剤を含む。
例証的錠剤は、薬物を最大約80質量％、結合剤約10質量％〜約90質量％、希釈剤約0質量％〜約85質量％、崩壊剤約2質量％〜約10質量％、及び滑沢剤約0.25質量％〜約10質量％を含む。
錠剤配合物は、直接又はローラーにより圧縮し、錠剤を形成することができる。錠剤配合物又は配合の一部は、打錠前の、交互に湿式-、乾式-、又は溶融-造粒、溶融凝結、又は押出であることができる。最終製剤は、1個又は複数の層を含むことができ、被覆されてもされなくともよく；又は、カプセル封入されてもよい。
【０１０２】
錠剤の製剤は、H. Lieberman及びL. Lachmanの「Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets」、Vol. 1 Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X)に詳細に考察されており、その内容は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
経口投与のための固形製剤は、即時及び/又は修飾された放出であるように製剤することができる。修飾された放出製剤は、遅延放出、持続放出、パルス型放出、制御された放出、標的化された放出及びプログラムされた放出を含む。
適当な修飾された放出製剤は、米国特許第6,106,864号に開示されている。高エネルギー分散及び浸透圧及び被覆された粒子のようなその他の適当な放出技術の説明は、Vermaらの「Pharmaceutical Technology On-line」、25(2), 1-14 (2001)に認めることができる。制御された放出を実現するためのチューインガムの使用は、WO 00/35298に開示されている。これらの参考文献の開示は、それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【０１０３】
非経口投与
本発明の化合物は、血流、筋肉、又は内臓へ直接投与することもできる。非経口投与のための適当な手段は、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、脳室内、尿道内、脚内(intrastemal)、頭蓋内、筋肉内及び皮下を含む。非経口投与のための適当な装置は、針(極微針を含む)付き注射器、無針注射器、及び点滴技術を含む。
非経口製剤は典型的には、塩、炭水化物及び緩衝剤(好ましくはpH3〜9)をなどの賦形剤を含むことができる水溶液であるが、一部の適用については、これらは、滅菌非-水溶液又は滅菌したパイロジェン非含有水のような適当な溶媒と組合せて使用される乾燥形で、より適するように製剤することができる。
【０１０４】
例えば凍結乾燥による、無菌条件下での、非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準の医薬技術を使用し、容易に実現することができる。
非経口液剤の調製に使用される本発明の化合物の溶解度は、溶解度増強剤の混入などの、適当な製剤技術の使用により増加することができる。
非経口投与用製剤は、即時及び/又は修飾された放出であるように製剤することができる。修飾された放出製剤は、遅延放出、持続放出、パルス型放出、制御された放出、標的化された放出及びプログラムされた放出を含む。従って本発明の化合物は、活性化合物の修飾された放出を提供する、移植されたデポ剤としての投与のための固形、半-固形、又はチキソトロープ液体として製剤されてもよい。このような製剤の例は、薬物で被覆されたステント及びPGLAミクロスフェアを含む。
【０１０５】
外用(表在局所)投与
本発明の化合物は、皮膚又は粘膜へ外用で、すなわち表皮へ又は経皮的に、投与することもできる。この目的のための典型的製剤は、ゲル剤、ヒドロゲル、ローション、液剤、クリーム剤、軟膏剤、粉剤、包帯、泡剤、フィルム剤、皮膚貼付剤、カシェ剤、インプラント、スポンジ、ファイバー、救急絆、及びマイクロエマルジョンを含む。リポソームを使用することもできる。典型的担体は、アルコール、水、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコールを含む。浸透増強剤も、混入されてよい；例えば、Finnin及びMorganのJ Pharm Sci, 88 (10), 955-958(1999年10月)を参照のこと。外用投与のための他の手段は、電気穿孔、イオントフォレシス、フォノフォレシス、ソノフォレシス及び極微針又は無針注射(例えば、Powderject(商標)、Bioject(商標)など)による送達を含む。これらの参考文献の内容は、全体が本願明細書に参照として組入れられている。
外用投与用製剤は、即時及び/又は修飾された放出であるように製剤することができる。修飾された放出製剤は、遅延放出、持続放出、パルス型放出、制御された放出、標的化された放出及びプログラムされた放出を含む。
【０１０６】
吸入/鼻腔内投与
本発明の化合物は、典型的には乾燥散剤吸入器からの乾燥散剤の形(単独で、又は例えば乳糖との乾燥配合物中の混合物として、もしくは例えばホスファチジルコリンのようなリン脂質と混合された、混合された成分粒子として)で、又は1,1,1,2-テトラフルオロエタンもしくは1,1,1,2,3,3,3-ヘプタフルオロプロパンのような適当な噴射剤の使用を伴うかもしくは伴わずに、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー(好ましくは細かい霧を作製するために電気流体力学を使用するアトマイザー)もしくはネブライザーからのエアロゾル噴霧剤として、鼻腔内又は吸入により、投与することもできる。鼻腔内使用のためには、散剤は、生体粘着剤、例えばキトサン又はシクロデキストリンを含むことができる。
【０１０７】
加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー又はネブライザーは、例えば、エタノール、水性エタノール、又は活性成分の分散、可溶化もしくは延長された放出に適した代替物質、溶媒としての噴射剤(複数)、並びにソルビタントリオレエート、オレイン酸又はオリゴ乳酸のような、任意の界面活性剤を含有する、本発明の化合物(複数)の溶液又は懸濁液を含む。
乾燥散剤又は懸濁剤製剤の使用前に、薬物製品は、吸入による送達に適したサイズ(典型的には5ミクロン未満)へ微小化される。これは、スパイラル噴流摩砕、流動床噴流摩砕、ナノ粒子を形成するための超臨界流体処理、高圧ホモジナイゼーション、又は噴霧乾燥などの、いずれか適当な粉砕法により、実現することができる。
【０１０８】
吸入器又は吹送器において使用するためのカプセル剤(例えばゲル化又はHPMCにより作製)、ブリスター及びカートリッジは、本発明の化合物、乳糖又はデンプンなどの適当な粉末基剤、及びL-ロイシン、マンニトール又はステアリン酸マグネシウムなどの改質剤の粉末混合物を含むように製剤することができる。乳糖は、無水物又は一水和物の形であることができ、好ましくは後者である。他の適当な賦形剤は、デキストラン、グルコース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、果糖、ショ糖及びトレハロースを含む。
【０１０９】
細かい霧を作製するために電気流体力学を使用するアトマイザーにおいて使用するための適当な液体製剤は、1回の作動につき本発明の化合物を1μg〜20mg含有することができ、及びこの作動の容量は、1μL〜l00μLを変動することができる。典型的製剤は、本発明の化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノール及び塩化ナトリウムを含む。プロピレングリコールの代わりに使用することができる別の溶媒は、グリセロール及びポリエチレングリコールを含む。
メントール及びレボメントールなどの適当な香料、又はサッカリンもしくはサッカリンナトリウムのような甘味剤を、これらの吸入/鼻腔内投与が意図された本発明の製剤に添加することができる。
【０１１０】
吸入/鼻腔内投与のための製剤は、例えばポリ(DL-乳酸-コグリコール酸(PGLA)を使用し、即時及び/又は修飾された放出であるように製剤することができる。修飾された放出製剤は、遅延放出、持続放出、パルス型放出、制御された放出、標的化された放出及びプログラムされた放出を含む。
乾燥散剤の吸入及びエアロゾルの場合、単位用量は、測定量を送達するバルブにより決定される。本発明の単位は典型的には、所望の量（mount）の本発明の化合物を含有する測定された投与量又は「パフ」を投与するように配置される。総一日量は、単回投与量として、より一般的には一日を通じての分割投与量として投与される。
【０１１１】
直腸/膣内投与
本発明の化合物は、例えば坐薬、ペッサリー又は浣腸剤の形で、経直腸又は経膣により投与することができる。カカオバターは、伝統的坐薬基剤であるが、様々な代替品を適宜使用することができる。
直腸/膣投与のための製剤は、即時及び/又は修飾された放出であるように製剤することができる。修飾された放出製剤は、遅延放出、持続放出、パルス型放出、制御された放出、標的化された放出及びプログラムされた放出を含む。
【０１１２】
眼内投与
本発明の化合物は、典型的には等張のpH-調節した滅菌生理食塩水中の微小化された懸濁剤又は液剤の液滴の形で、直接眼又は耳に投与することもできる。眼内及び耳内投与に適した他の製剤は、軟膏剤、生分解性(例えば、吸収性ゲルスポンジ、コラーゲン)、及び非生分解性(例えばシリコーン)インプラント、カシェ剤、レンズ及び粒子又は小胞システム、例えばニオソームもしくはリポソームを含む。架橋したポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロース系ポリマー、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、もしくはメチルセルロース、又はヘテロ多糖ポリマー、例えばゲランガムなどのポリマーを、塩化ベンザルコニウムなどの保存剤と一緒に混入することができる。このような製剤は、イオントフォレシスにより送達することもできる。
眼内/耳内投与のための製剤は、即時及び/又は修飾された放出であるように製剤することができる。修飾された放出製剤は、遅延放出、持続放出、パルス型放出、制御された放出、標的化された放出及びプログラムされた放出を含む。
【０１１３】
その他の技術
本発明の化合物は、前述のいずれかの投与様式で使用するための、それらの溶解度、解離速度、苦み-マスキング、生体利用性及び/又は安定性を改善するために、シクロデキストリン及びそれらの適当な誘導体又はポリエチレングリコール-含有ポリマーなどの、可溶性の巨大分子実体と一緒にすることができる。
例えば薬物-シクロデキストリン複合体は、一般にほどんどの剤形及び投与経路について有用であることがわかる。包接複合体及び非包接複合体の両方を使用することができる。薬物との複合体化を指示する代わりに、シクロデキストリンを、補助添加剤として、すなわち担体、希釈剤又は可溶化剤として使用することができる。この目的のために最も一般的に使用されるのは、α-、β-及びγ-シクロデキストリンであり、その例はPCT国際公開WO 91/11172、WO 94/02518及びWO 98/55148に認めることができ、それらの開示は全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【０１１４】
用量
投与される活性化合物の量は、治療される対象、障害又は状態の重症度、投与速度、化合物の素質(disposition)及び処方する医師の判断に応じて決まるであろう。しかし有効用量は典型的には、単回又は分割投与量で、約0.001〜約100mg/kg体重/日の範囲であり、好ましくは約0.01〜約35mg/kg/日である。70kgのヒトについて、これは、約0.07〜約7000mg/日、好ましくは約0.7〜約2500mg/日の量である。場合によっては、前述の範囲の下限を下回る用量レベルがより適しているが、別の場合は、更に大きい投与量を、有害な副作用を引き起こすことなく使用することができ、そのような比較的大きい投与量は典型的には、1日を通じた投与について数回のより小さい投与量へ分割される。
【０１１５】
キット-部品
事実上例えば特定の疾患又は状態の治療を目的として、活性化合物の組合せの投与が望ましい場合、その少なくとも1種は本発明の化合物を含む、2種又はそれよりも多い医薬組成物は、好都合なことに組成物の同時投与に適したキットの形で一緒にすることができることは、本発明の範囲内である。従って本発明のキットは、その少なくとも1種は本発明の化合物を含む、2種又はそれよりも多い個別の医薬組成物、並びに該組成物を個別に保持する手段、例えば容器、分割されたボトル、又は分割されたフォイル小包などを含む。そのようなキットの例は、錠剤、カプセル剤などの包装に使用される馴染みのあるブリスターパックである。
本発明のキットは、個別の組成物を異なる投与間隔で投与するため、又は個別の組成物を互いに対し力価決定するための、例えば経口及び非経口など様々な剤形の投与に特に適している。服薬遵守を補助するために、キットは典型的には、投与の指示書を含むことができ、及び記憶補助物(memory aid)と共に提供されてもよい。
【実施例】
【０１１６】
実施例
下記実施例において、「Et」はエチルを意味し、「Ac」はアセチルを意味し、「Me」はメチルを意味し、「Ms」はメタンスルホニル(CH3SO2)を意味し、「iPr」はイソプロピルを意味し、「HATU」は2-(7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸を意味し、「Ph」はフェニルを意味し、「Boc」はtert-ブトキシカルボニルを意味し、「EtOAc」は酢酸エチルを意味し、「HOAc」は酢酸を意味し、「NEt3」又は「Et3N」はトリエチルアミンを意味し、「THF」はテトラヒドロフランを意味し、「DIC」はジイソプロピルカルボジイミドを意味し、「HOBt」はヒドロキシベンゾトリアゾールを意味し、「MeOH」はメタノールを意味し、「i-PrOAc」は酢酸イソプロピルを意味し、「KOAc」は酢酸カリウムを意味し、「DMSO」はジメチルスルホキシドを意味し、「AcCl」は塩化アセチルを意味し、「CDCl3」は重水素化されたクロロホルムを意味し、「MTBE」はメチルt-ブチルエーテルを意味し、「DMF」はジメチルホルムアミドを意味し、「Ac2O」は無水酢酸を意味し、「Me3SOI」はヨウ化トリメチルスルホキソニウムを意味し、「DMAP」は4-ジメチルアミノピリジンを意味し、「dppf」はジフェニルホスフィノフェロセンを意味し、「DME」はエチレングリコールジメチルエーテルを意味し、「HOBT」は1-ヒドロキシベンゾトリアゾールを意味し、「EDC」は1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミドを意味する。
【０１１７】
下記実施例は、本発明を例証するために提供される。しかし、本発明は、これらの実施例において説明された特定の条件又は詳細に限定されないことは理解されなければならない。
試薬は、本願明細書に説明されたように合成されるか、又は商業的供給者(例えば、Aldrich, ミルウォーキー, WI；Acros, Morris Plains, NJ；Biosynth International, Naperville, IL；Frontier Scientific, Logan, UT；TCI America, ポートランド, OR；Combi-Blocks, サンディエゴ, CA；Matrix Scientific, コロンビア, SC；Acros, Morris Plains, NJ；Alfa Aesar, Ward Hill, MA；Apollo Scientific, 英国；など)から入手可能であるか、又は当該技術分野において公知の手順により合成することができる。
【０１１８】
いくつかの特定の試薬の合成は、2004年2月26日に出願された米国特許出願第10/786,610号、「Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors」、及び2004年2月26日に出願された同じ名称の対応する国際出願PCT/US2004/005495に開示されている。他の試薬は、そこに記載された手順を適合させることにより合成することができ、及び当業者は、これらの手順を、所望の化合物を生成するために、容易に適合することができる。更にこれらの参考文献は、多数のヘテロアリールアミノ化合物の調製に関する一般的手順及び具体例を含み、当業者はそのような手順及び実施例を、本発明の化合物を調製するために、容易に適合することができる。これらの参考文献の開示は、それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【０１１９】
一般的又は例証的合成手順が言及される場合、当業者は、適当な試薬を容易に決定し、指摘されない場合は、一般的又は例証的手順から推定することができる。いくつかの一般的手順は、特定の化合物を調製するための例として示されている。当業者は、他の化合物の合成にそのような手順を容易に適合することができる。一般的手順において示されたR基は、一般的及び非限定的であることを意味し、並びにこの文献の別所のR基の定義に対応しないことは理解されるはずである。そのような各R基は、同じR記号により表される他の化学部分と同じ又は異なることができる、1種又は複数の化学部分を表す。当業者は、例証的合成に適したR基の範囲を容易に理解することができる。更に、一般的手順に示された又は関連した構造の未置換の位置の表示は、便宜上のものであり、本願明細書の別所に記載されたような置換を排除するものではない。存在することができる特定の基については、一般的手順のR基又は示されていない任意の置換基のいずれも、請求項、要約及び詳細な説明を含む本願明細書の残りの説明を意味する。
【０１２０】
いくつかの一般的手順は、1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)-エトキシ部分が、純粋な(R)-異性体である化合物の合成に関して示され、及びいくつかは、該部分はラセミ混合物である化合物に関して示されている。本願明細書の手順を使用し、対応するラセミ又はエナンチオピュアな出発材料を選択することにより、ラセミ化合物又はエナンチオピュアな(R)異性体を生成することができることは理解されなければならない。
【０１２１】
本願明細書に示された手順を使用し、適当なエナンチオピュアな出発材料を選択することにより、多種多様なエナンチオピュアな化合物を生成することができる。本発明は、本願明細書に示された化合物に加え、米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)；2004年8月26日に出願された代理人整理番号PC 32546に割当てられた名称「Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors」の、米国特許出願；並びに、2004年8月26日に出願された代理人整理番号PC 32548に割当てられた名称「Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors」の、米国特許出願に開示されている、3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン化合物及び3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン化合物に対応する、エナンチオピュアな化合物も提供する。これらの文書の開示は、それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【０１２２】
出発材料の選択
5-ブロモ-3-[1-(2.6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(ラセミ体)：
【０１２３】
【化９】
2008510790.tif 000011
【０１２４】
1.  2,6-ジクロロ-3-フルオロアセトフェン(15g, 0.072mol)を、THF(150mL, 0.5M)中で、氷浴を用い0℃で10分間攪拌した。水素化リチウムアルミニウム(2.75g, 0.072mol)をゆっくり添加した。反応液を、周囲温度で3時間攪拌した。反応液を氷浴で冷却し、水(3mL)を少量ずつ(wisely)滴下し、引き続き15％NaOH(3mL)をゆっくり添加した。混合物を、周囲温度で30分間攪拌した。15％NaOH(9mL)、MgSO4を添加し、混合物を濾過し、固形物を除去した。固形物を、THF(50mL)で洗浄し、濾液を濃縮し、1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エタノール(14.8gm, 収率95％)を黄色油状物として得た。
【化１０】
2008510790.tif 000012
【０１２５】
2.  THF(200mL)中のトリフェニルホスフィン(8.2g, 0.03mol)及びDEAD(トルエン中40％溶液13.65mL)の攪拌溶液へ、0℃で、THF(200mL)中の1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エタノール(4.55g, 0.021mol)及び3-ヒドロキシ-ニトロピリジン(3.35g, 0.023mol)の溶液を添加した。得られた明オレンジ色溶液を、窒素大気下で、周囲温度で4時間攪拌し、この時点で、全ての出発材料は消費されていた。溶媒を除去し、粗物質をシリカゲル上に負荷し乾燥し、酢酸エチル-ヘキサン(20:80)で溶離し、3-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-2-ニトロ-ピリジン(6.21g, 0.021mol, 98％)をピンク色固形物として得た。
【化１１】
2008510790.tif 000013
【０１２６】
3.  AcOH(650mL)及びEtOH(500mL)の攪拌混合物へ、3-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-2-ニトロ-ピリジン(9.43g, 0.028mol)及び鉄粉(15.7g, 0.28mol)を懸濁した。反応液をゆっくり還流加熱し、1時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、その後ジエチルエーテル(500mL)及び水(500mL)を添加した。この溶液を、炭酸ナトリウムの添加により、慎重に中和した。一緒にした有機抽出物を、飽和NaHCO3(2x100mL)、H2O(2x100mL)及びブライン(1x100mL)で洗浄し、その後乾燥し(Na2SO4)、濾過、及び減圧下で濃縮乾固し、3-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(9.04g, 0.027mol, 99％)をわずかにピンク色の固形物として得た。
【化１２】
2008510790.tif 000014
【０１２７】
4.  アセトニトリル中の3-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(9.07g, 0.03mol)の攪拌溶液を、氷浴を用い0℃に冷却した。この溶液に、N-ブロモスクシンイミド(NBS)(5.33g, 0.03mol)を少量ずつ滴下した。反応液を0℃で15分間攪拌した。この反応液を、減圧下で濃縮乾固した。得られた暗色油状物を、EtOAc(500mL)に溶解し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。その後溶媒を真空で除去し、5-ブロモ-3-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(5.8g, 0.015mol, 51％)を白色結晶固形物として得た。
【化１３】
2008510790.tif 000015
【０１２８】
5-ヨード-3-｛1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(ラセミ体)：
【０１２９】
【化１４】
2008510790.tif 000016
【０１３０】
アセトニトリル(600mL)及び酢酸(120mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(10.0g, 33.2mmol)の溶液へ、N-ヨードスクシンイミド(11.2g, 49.8mmol)を添加した。この混合物を、室温で4時間撹拌し、反応をNa2S2O5溶液で停止した。蒸発後、残渣を、酢酸エチルと水の間で分配した。有機層を、2N NaOH溶液、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。粗生成物を、シリカゲルカラムで精製し、5-ヨード-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(7.1g, 収率50％)を提供した。
【化１５】
2008510790.tif 000017
【０１３１】
5-ブロモ-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン(ラセミ体)：
【０１３２】
【化１６】
2008510790.tif 000018
【０１３３】
1.  2,6-ジクロロ-3-フルオロアセトフェノン(15g, 0.072mol)を、THF(150mL, 0.5M)中で、氷浴を用い0℃で10分間攪拌した。水素化リチウムアルミニウム(Aldrich, 2.75g, 0.072mol)をゆっくり添加した。この反応液を、周囲温度で3時間攪拌した。反応液を氷浴で冷却し、水(3mL)を滴下し、引き続き15％NaOH(3mL)をゆっくり添加した。この混合物を、周囲温度で30分間攪拌した。5％NaOH(9mL)、MgSO4を添加し、混合物を濾過し、固形物を除去した。固形物を、THF(50mL)で洗浄し、濾液を濃縮し、1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エタノール(14.8gm, 収率95％)を黄色油状物として得た。1H NMR (400MHz, DEMSO-d6)δ1.45(d, 3H), 5.42(m, 2H), 7.32(m, 1H), 7.42(m, 1H)。
【０１３４】
2.  5-ブロモ-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミンを、下記手順2に従い、1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エタノール及び3,5-ジブロモ-ピラジン-2-イルアミンから、調製した。
【化１７】
2008510790.tif 000019
【０１３５】
エナンチオピュアな出発材料
PLEは、ブタ肝臓由来の粗エステラーゼ調製物として、Rocheにより製造され及びBiocatalytics Inc.から販売される、酵素であり、通常PLE-AS(ICR-123としてBiocatalyticsから購入、硫酸アンモニウム懸濁液として販売)として公知である。この酵素は、「カルボン酸-エステル加水分解酵素、CAS番号9016-18-6」としてCAS 登録で分類されている。対応する酵素分類番号は、EC 3.1.1.1である。この酵素は、広範なエステルの加水分解に対し広い基質特異性があることがわかっている。リパーゼ活性は、pH滴定装置における酪酸エチルの加水分解を基にした方法を用いて決定される。1LU(リパーゼ単位)は、22℃pH8.2で1分間に1μmolの滴定可能な酪酸を遊離する酵素の量である。本願明細書に報告された調製物(PLE-AS、懸濁液として)は通常、申告された活性＞45LU/mg(タンパク質含量約40mg/mL)で、不透明な茶-緑色液体として出荷される。
【０１３６】
(1S)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エタノール
下記スキームにおいて化合物(S-1)として示された(1S)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エタノールを、ラセミ体酢酸1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)酢酸エチルの酵素的加水分解、エステル化及びスキームBに従う転位による化学的加水分解の組合せにより調製した。ラセミ体酢酸1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エチル(化合物A2)は、スキームAに従い調製した。
【０１３７】
【化１８】
2008510790.tif 000020
【０１３８】
1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エタノール(A1)：ホウ化水素ナトリウム(90mg, 2.4mmol)を、無水CH3OH 2mL中の2',6'-ジクロロ-3'-フルオロ-アセトフェノン(Aldrich, カタログ#52,294-5)(207mg, 1mmol)の溶液に添加した。反応混合物を、室温で1時間攪拌し、その後蒸発させ、無色の油状残渣を得た。この残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン中0→10％EtOAcで溶離)にかけ、化合物A1を、無色の油状物(180mg；0.88mmol；収率86.5％)として得た。
【化１９】
2008510790.tif 000021
【０１３９】
酢酸1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エチル(A2)：無水酢酸(1.42mL, 15mmol)及びピリジン(1.7mL, 21mmol)を、CH2Cl2 20mL中の化合物A1(2.2g, 10.5mmol)の溶液に逐次添加した。反応混合物を、室温で12時間攪拌し、その後蒸発させ、黄色がかった油状残渣を得た。この残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン中7→9％EtOAcで溶離)にかけ、化合物A2を無色の油状物(2.26g；9.0mmol；収率85.6％)として得た。
【化２０】
2008510790.tif 000022
；
【０１４０】
【化２１】
2008510790.tif 000023
【０１４１】
pH電極、オーバーヘッド攪拌子及び塩基添加ライン(1M NaOH)を装着した50mLのジャケット付きフラスコに、100mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)1.2mL及びPLE AS 懸濁液の0.13mLを添加した。その後化合物A2(0.13g, 0.5mmol, 1.00当量)を滴下し、得られた混合物を、室温で20時間、反応液のpHを1M NaOHを用い7.0に維持しながら、攪拌した。反応の転化及び鏡像体過剰率(ee)の両方を、RP-HPLCによりモニタリングし、出発材料の50％が消費された後(これらの条件下で約17時間)停止した。その後混合物を、酢酸エチル10mLで3回抽出し、R-1及びS-2の混合物としてエステル及びアルコールの両方を回収した。
【０１４２】
塩化メタンスルホニル(0.06mL, 0.6mmol)を、窒素大気下で、ピリジン4mL中のR-1及びS-2の混合物の溶液(0.48mmol)へ添加した。反応混合物を、室温で3時間攪拌し、その後蒸発させ、油状物を得た。水(20mL)をこの混合物へ添加し、その後EtOAc(20mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。有機層を一緒にし、乾燥し、濾過し、蒸発させ、R-3及びS-2の混合物を得た。この混合物を、更に精製することなく、次工程反応に使用した。
【化２２】
2008510790.tif 000024
【０１４３】
酢酸カリウム(0.027g, 0.26mmol)を、DMF 4mL中のR-3及びS-2の混合物(0.48mmol)へ窒素大気下で添加した。この反応混合物を、100℃で12時間加熱した。水(20mL)を反応混合物に添加し、EtOAc(20mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。一緒にした有機層を、乾燥し、濾過し、蒸発させ、S-2の油状物物(72mg, 2工程で収率61％)を得た。キラリティ ee：97.6％。
【化２３】
2008510790.tif 000025
【０１４４】
ナトリウムメトキシド(19mmol；メタノール中0.5M)を、化合物S-2(4.64g, 18.8mmol)へ、窒素大気下0℃でゆっくり添加した。得られた混合物を、室温で4時間攪拌した。この溶媒を蒸発させ、H2O(100mL)を添加した。冷却した反応混合物を、酢酸ナトリウム-酢酸緩衝液でpH7に中和した。酢酸エチル(100mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。一緒にした有機層を、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、蒸発させ、白色固形物(4.36g, 収率94.9％)を得た。
【化２４】
2008510790.tif 000026
【０１４５】
3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-2-ニトロピリジン
【０１４６】
【化２５】
2008510790.tif 000027
【０１４７】
3-ヒドロキシ-2-ニトロピリジン(175mg, 1.21mmol)及びトリフェニルホスフィン(440mg, 1.65mmol)を、THF(10mL)中の(1S)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エタノール(229.8mg, 1.1mmol)の攪拌溶液に窒素大気下で逐次添加した。反応混合物を室温で1時間維持し、その後ジイソプロピルアゾジカルボキシラート(0.34mL, 1.65mmol)を0℃で添加した。この混合物を、更に12時間攪拌した。反応混合物を、減圧下で蒸発させ、油状物を得た。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン中20→25％EtOAcで溶離)により精製し、標題化合物を白色固形物として得た(321.5mg；0.97mmol；収率88.3％)；
【化２６】
2008510790.tif 000028
【０１４８】
3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-2-アミン
【０１４９】
【化２７】
2008510790.tif 000029
【０１５０】
鉄(365mg)を、EtOH(2mL)及び2M HCl(0.2mL)の混合物中の3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-2-ニトロピリジン(321mg, 0.97mmol)の攪拌溶液に0℃で添加した。得られた溶液を85℃で2時間加熱した。セライト(0.5g)を、冷却した反応混合物に添加した。この混合物を、セライト床上で濾過し、蒸発させ、標題化合物を暗色油状物として得た。MS (APCI) (M+H)+ 301。
【０１５１】
5-ブロモ-3-[1(R)-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン：
【０１５２】
【化２８】
2008510790.tif 000030
【０１５３】
エナンチオピュアなR異性体を、このラセミ体について先に説明されたように、しかし先に説明したエナンチオピュアな出発材料を使用し、調製した。
【化２９】
2008510790.tif 000031
【０１５４】
5-ヨード-3-[(R)1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン：
【０１５５】
【化３０】
2008510790.tif 000032
【０１５６】
過ヨウ素酸(60mg, 0.24mmol)、ヨウ素(130mg, 0.5mmol)、及び硫酸(0.03mL)を、酢酸(3mL)及びH2O(0.5mL)の混合物中の3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-2-アミン(0.97mmol)の攪拌溶液へ逐次添加した。得られた溶液を、80℃で5時間加熱した。冷却した反応混合物を、Na2SO3(80mg)で反応停止し、飽和Na2CO3(2x100mL)によりpH7へ塩基性とした。CH2Cl2(2x50mL)を添加し、水溶液を抽出した。一緒にした有機層を、Na2SO4上で乾燥し、その後濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン中35→40％EtOAcで溶離)で精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(254mg；0.6mmol；収率61.6％)；
【化３１】
2008510790.tif 000033
【０１５７】
5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン：
【０１５８】
【化３２】
2008510790.tif 000034
【０１５９】
標題化合物を、手順2に従い、(1S)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エタノールから調製した。
【化３３】
2008510790.tif 000035
【０１６０】
一般的スキームI  5-アリール-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(6)の合成に関する：
【０１６１】
【化３４】
2008510790.tif 000036
【０１６２】
一般的手順1  5-ブロモ-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(5)の合成に関する：
1.  3-(置換された-ベンジルオキシ)-2-ニトロ-ピリジン(3)の調製：3-ヒドロキシ-4-ニトロ-ピリジン(Aldrich, 1.0モル当量)を含有するDMF(0.2M)中のCs2CO3 (1.0モル当量)の溶液へ、N2大気下で、置換された臭化ベンジル(1.0モル当量)を添加した。この混合物を6時間周囲温度で攪拌した。その後反応液をEtOAcで希釈し、H2Oで分配した。水層をEtOAcで2回抽出した。次に有機層を一緒にし、H2O及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し乾固させ、3-(置換された-ベンジルオキシ)-2-ニトロ-ピリジン(3)を固形物として得た。
【０１６３】
2.  3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(4)の調製：AcOH及びEtOH(1.3:1)の攪拌混合物へ、3-(置換された-ベンジルオキシ-2-ニトロ-ピリジン(1.0モル当量, 1M)及び鉄粉(1.0モル当量)を懸濁した。この反応液を、ゆっくり還流加熱し、1時間攪拌した。反応液を室温へ冷却し、その後セライトパッドを通して濾過した。得られた濾液を、濃NH4OHで中和し、その後EtOAcで3回抽出した。一緒にした有機抽出物を、飽和NaHCO3、H2O、及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固し、3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(4)を固形物として得た。
【０１６４】
3.   5-ブロモ-3-(置換されたベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(5)の調製：アセトニトリル中の3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(4)(1.0モル当量)の攪拌溶液を、氷浴を用いて0℃に冷却した。この溶液に、N-ブロモスクシンイミド(Aldrich, 1.0モル当量)を少量ずつ添加した。反応液を、0℃で15分間攪拌した。反応液を、減圧下で濃縮乾固した。得られた暗色油状物を、EtOAc中に溶解し、H2Oで分配した。その後有機物を、飽和NaHCO3で2回及びブラインで1回洗浄した。有機層へ活性炭を添加し、還流加熱した。その後溶液を室温に冷却し、セライトパッドを通して濾過した。有機物を次に、減圧下で当初の容量の1/3に濃縮乾固した。その後固形物を濾過し、5-ブロモ-3-(置換されたベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン(5)を固形物として得た。
【０１６５】
一般的スキームII  5-アリール-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピラジン-2-イルアミンの合成に関する
【０１６６】
【化３５】
2008510790.tif 000037
【０１６７】
一般的手順2  5-ブロモ-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピラジン-2-イルアミンの合成に関する
【０１６８】
【化３６】
2008510790.tif 000038
【０１６９】
置換されたベンジルアルコール(1.0モル当量)及び無水テトラヒドロフラン(0.14M)の氷冷した溶液へ、水素化ナトリウム(1.0モル当量)を窒素大気下でゆっくり添加した。30分間攪拌した後、テトラヒドロフラン(0.56M)中の3,5-ジブロモピラジン-2-イルアミン(1.0モル当量)を、追加の漏斗により速い滴下速度で添加した。一旦添加が完了したら、氷浴を取り外し、反応液を窒素下で還流し、逆相HPLCでモニタリングした。18時間後、HPLCは、出発3,5-ジブロモピラジン-2-イルアミンのほとんどが消費されたことを示し、この反応液を室温に冷却した。この反応混合物を濃縮し、酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルを用い、1:1酢酸エチル/ジクロロメタンで溶離し、精製し、5-ブロモ-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピラジン-2-イルアミンを白色固形物として収率60〜90％で得た。
【０１７０】
一般的手順3  5-アリール-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン及び5-アリール-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピラジン-2-イルアミンの合成に関して
【０１７１】
【化３７】
2008510790.tif 000039
【０１７２】
エチレングリコールジメチルエーテル及び水(10:0.5, 0.03M)を溶媒とする5-ブロモ-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン又は5-ブロモ-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピラジン-2-イルアミン(1モル当量)、ボロン酸アリール又はエステル(1.2モル当量)、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムIIクロリド(0.03モル当量)及び炭酸ナトリウム(3.0モル当量)の混合物を、脱気し、3回窒素でチャージし、その後一晩窒素下で加熱した。反応液を周囲温度に冷却し、酢酸エチルで希釈した。混合物を、水、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、シリカゲルカラム上で精製し、5-アリール-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン、又は5-アリール-3-(置換された-ベンジルオキシ)-ピラジン-2-イルアミンを得た。
【０１７３】
一般的手順4  6-アミノ-5-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-安息香酸のアミド化反応に関して：
【０１７４】
【化３８】
2008510790.tif 000040
【０１７５】
DMF(0.2M)中の6-アミノ-5-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]安息香酸(1モル当量)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(HOBT, 1.2モル当量)、及び1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(EDC, 1.2モル当量)の溶液へ、アミン(1.2モル当量)を添加した。この反応溶液を、室温で一晩攪拌し、その後EtOAcで希釈し、H2Oで分配した。有機物を、分離し、水性液をEtOAcで抽出した。有機層を一緒にし、飽和NaHCO3で洗浄し、減圧下で濃縮乾固した。この物質を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル, 99:1から95:5 CH2Cl2/MeOH)を用い精製した。生成物を含有する画分を、減圧下で濃縮し、アミド生成物を得た。
【０１７６】
一般的手順5  3-(置換された-ベンジルオキシ)-5-(3-ジアルキルアミノメチル-1H-インドール-5-イル)-ピリジン-2-イルアミンの調製に関して：
【０１７７】
【化３９】
2008510790.tif 000041
【０１７８】
ジクロロメタン(0.2M)中のベンゾトリアゾール(1.0モル当量)の溶液に、アミン(1.0モル当量)を添加した。この反応液を、室温で5分間攪拌し、その後ホルムアルデヒド(37質量％, 1.0モル当量)を添加し、反応液に蓋をし、室温で3時間攪拌した。一旦TLC(10％酢酸エチル:ジクロロメタン)が出発ベンゾトリアゾールの消費を示したならば、この反応液を、無水硫酸マグネシウム(10g)で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を、1:1酢酸エチル:ジクロロメタンで溶離するシリカゲルカラムで精製し、所望の生成物を白色固形物として得た。
【０１７９】
ジクロロメタン(0.43M)中のアミノメチルベンゾトリアゾール中間体(1.0モル当量)の溶液へ、塩化アルミニウム(2.0モル当量)を添加し、引き続き3-(2,6-ジクロロ-ベンジルオキシ)-5-(1H-インドール-5-イル)-ピリジン-2-イルアミン(1.1モル当量)を添加した。反応液に蓋をし、4O℃で攪拌しながら3〜4時間加熱した。その後反応液を、熱から外し、室温に冷却した。反応混合物を、水酸化ナトリウム(0.2M)及びクロロホルムで希釈し再度蓋をし、室温で激しく撹拌し、バイアル中の残渣を溶解した。クロロホルムを、水性液から抽出除去し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルカラムで精製し、最初に1:1の酢酸エチル:ジクロロメタンで溶離し、より極性の少ない不純物を溶離し、その後90:9:1のクロロホルム:メタノール: 水酸化アンモニウムで生成物を溶離した(収率10〜67％)。
【０１８０】
一般的手順6  3-(3-メトキシ-ベンジルオキシ)-5-フェニル-ピリジン-2-イルアミンを使用する3-(置換された-ベンジルオキシ)-5-フェニル-ピリジン-2-イルアミンの合成に関して：
【０１８１】
【化４０】
2008510790.tif 000042
【０１８２】
メタノール(30mL)中の3-ベンジルオキシ-5-フェニル-ピリジン-2-イルアミン(実施例I-87, 3.27g, 11.8mmol)の溶液へ、Pd(OH)2 (2.5g, 2.37mmol)を添加した。この混合物を脱気し、水素を3回チャージし、その後水素バルーン下で5時間攪拌した。反応液を、セライトパッドを通して濾過し、メタノールで洗浄し、濃縮した。高真空乾燥後、2-アミノ-5-フェニル-ピリジン-3-オールを得た(2.04g, 収率93％)。 MS m/z 187 [M+1]。
THF(無水物, 30mL)中の2-アミノ-5-フェニル-ピリジン-3-オール(2.04g, 10.95mmol)の溶液へ、NaH(1.31g, 32.85mmol)をゆっくり添加した。混合物を、窒素下で20分間攪拌し、その後トリチルクロリド(3.66g, 13.14mmol)を添加した。反応液を、室温で一晩窒素下で攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンに溶解し、水で洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。濾過及び濃縮後、粗生成物を、シリカゲルカラム上で、EtOAc-ヘキサン(1:10)で溶離し精製し、5-フェニル-2-(トリチルアミノ)-ピリジン-3-オール(1.09g, 収率23％)を得た。MS m/z 427 [M+1]。
【０１８３】
THF(3mL)中の5-フェニル-2-(トリチルアミノ)-ピリジン-3-オール(100mg, 0.24mmol)の溶液へ、Cs2CO3 (79mg, 0.24mmol)を添加した。混合物を室温で20分間攪拌し、その後3-メトキシ臭化ベンジル(0.037mL, 0.26mmol)を添加した。この反応液を、室温で一晩攪拌し、ジクロロメタン(5mL)で希釈し、濾過し、これらの塩を除去した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタン(2mL)中の10％トリフルオロ酢酸に溶解した。この反応液を、2時間攪拌し、蒸発させた。残渣を、ジクロロメタンに溶解し、飽和NaHCO3で洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。濾過及び濃縮後、粗生成物を、シリカゲルカラム上で、メタノール-ジクロロメタン(3％から15％勾配)で溶離し精製し、3-(3-メトキシ-ベンジルオキシ)-5-フェニル-ピリジン-2-イルアミンを白色固形物(43.5mg, 収率60％)として得た。
【０１８４】
一般的手順7  5-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-3-(3-ニトロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミンを使用する3-(置換された-ベンジルオキシ)-5-アリール-ピリジン-2-イルアミンの合成に関して：
【０１８５】
【化４１】
2008510790.tif 000043
【０１８６】
DMF(3mL)中の2-アミノ-5-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-ピリジン-3-オール(米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)の実施例I-88の2-アミノ-5-フェニル-ピリジン-3-オールの手順に従い調製)(45.5mg, 0.14mmol)の溶液へ、0℃でNaH(油中60％)(5.6mg, 0.14mmol)を添加し、混合物を0℃で20分間攪拌した。その後1-ブロモメチル-3-ニトロ-ベンゼンを添加し、混合物を0℃で1時間及び室温で2時間攪拌した。冷1N水性HCl(0.1mL)を添加し、溶媒を減圧下で除去した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH2Cl:MeOH:NH4OH=100:3:0.3)で精製し、5-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-3-(3-ニトロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミンを黄色固形物として得た(44mg, 68％)。
【０１８７】
一般的手順8  ｛4-[6-アミノ-5-(4-フルオロ-2-トリフルオロメチル-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-[(2R)-2-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル]-メタノンを使用する｛4-[6-アミノ-5-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-[(2R)-2-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル]-メタノンの合成に関して：
【０１８８】
【化４２】
2008510790.tif 000044
【０１８９】
1.  6-アミノ-5-ベンジルオキシ-ニコチン酸を、3-ベンジルオキシ-5-ブロモ-ピリジン-2-イルアミン及び4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-安息香酸から、手順3に従い調製した。MS m/z321 (M+1)。
2.  [4-(6-アミノ-5-ベンジルオキシ-ピリジン-3-イル)-フェニル]-[(2R)-2-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル]-メタノンを、6-アミノ-5-ベンジルオキシ-ニコチン酸及び(2R)-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン(米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)の実施例I-39に従い調製)を使用し、手順4に従い調製した。MS m/z 457 (M+1)。
【０１９０】
3.   メタノール(25mL)中の[4-(6-アミノ-5-ベンジルオキシ-ピリジン-3-イル)-フェニル]-[(2R)-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル]-メタノン(2.28g, 5.00mmol)の溶液へ、10％Pd/C(100mg)を添加した。混合物を脱気し、水素を3回チャージし、その後水素バルーン下で一晩攪拌した。反応液を、セライトパッドを通し濾過し、メタノールで洗浄し、濃縮した。高圧乾燥後、[4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-フェニル]-[(2R)-2-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル)-メタノンを得た(1.74g, 収率95％)。
【化４３】
2008510790.tif 000045
【０１９１】
4.  無水DMF(15mL)中の[4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-フェニル]-[(2R)-2-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル]-メタノン(100mg, 0.27mmol)の攪拌溶液へ、0℃、N2大気下で、水素化ナトリウム(鉱油中60％分散体, 11mg, 0.49mmol)を添加した。この混合物を、0℃で30分間攪拌した。1-(ブロモメチル)-4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンゼン(0.046mL, 0.27mmol)を添加した。混合物を室温で2時間攪拌した。反応液を、EtOAcで希釈し、H2Oで分配した。水層を、EtOAc(2x25mL)で抽出した。有機層を一緒にし、H2O(1x15mL)、ブライン(1x15mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム上で精製し、｛4-[6-アミノ-5-(4-フルオロ-2-トリフルオロメチル-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-[(2R)-2-ピロリジン-1-イルメチルピロリジン-1-イル]-メタノンを乳-白色結晶として得た。
【０１９２】
一般的手順9  2-ジエチルアミノ-エタンスルホン酸 ｛4-[6-アミノ-5-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-アミドを使用する2-ジアルキルアミノ-エタンスルホン酸[6-アミノ-5-(置換された-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル-アミドの合成に関して：
【０１９３】
【化４４】
2008510790.tif 000046
【０１９４】
1.  ジクロロメタン(120mL)中の4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニルアミン(5g, 22.8mmol)の溶液へ、N-メチルモルホリン(7.5mL, 68.4mmol)を添加した。この混合物を、窒素大気下で0℃に冷却した。その後ジクロロメタン(60mL)中の2-クロロエタンスルホニルクロリド(2.5mL, 23.9mmol)を、撹拌しながら滴下した。一旦添加が完了した後、フラスコを0℃で1時間、その後室温で攪拌しながら、TLC(1:1酢酸エチル:ヘキサン)でモニタリングし、ニンヒドリンで染色した。4時間攪拌後、一部の出発ボロン酸エステルが依然残存し、追加のジクロロメタン(25mL)中の2-クロロエタンスルホニルクロリド0.2当量(0.5mL)を室温で滴下した。1時間後、ボロン酸エステルは、TLCにより消費されたことが示され、総反応容量を、回転蒸発により1/2に減少した。内容物を、酢酸エチル(200mL)で希釈し、50％ブライン(2x100mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル(120g)を用いて精製し、10％酢酸エチル、ジクロロメタンで精製し、エテンスルホン酸[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-アミドを白色固形物として得た(6.2g, 20.2mmol, 収率89％)。
【化４５】
2008510790.tif 000047
【０１９５】
2.   メタノール(5mL)中のエテンスルホン酸[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-アミド(0.500g, 1.6mmol)の溶液へ、メタノール(5mL)中のジエチルアミン(0.707g, 4.0mmol)を添加し、この反応液を室温で攪拌し、TLC(1:1酢酸エチル:ヘキサン)でモニタリングした。2時間後、反応液を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチル(50mL)と水(50mL)の間で分配した。その後酢酸エチルを、50％ブライン(1x50mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を、10gの予め充填されたシリカゲルカラムを用いて精製し、1:1酢酸エチル:ジクロロメタンで溶離し、2-ジエチルアミノ-エタンスルホン酸[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-アミドを白色固形物として得た(0.346g, 0.90mmol, 56％)。
【化４６】
2008510790.tif 000048
【０１９６】
3.  2-ジエチルアミノ-エタンスルホン酸｛4-[6-アミノ-5-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-アミドを、5-ブロモ-3-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-2-イルアミン及びパート2で調製した2-ジエチルアミノ-エタンスルホン酸[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-アミドから、全般的Suzukiカップリング手順3に従い、白色固形物として、収率60％で調製した。
【０１９７】
一般的手順10：
1:4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)アニリン(3g, 0.013mol)を、ジクロロメタン(350mL)に溶解し、これにピリジン(1.02g, 0.013mol)及び4-ニトロフェニルクロロギ酸を添加した。この反応液を、13時間攪拌し、TLC分析は、全ての出発材料が消費されたことを示した。この溶液を、飽和NaHCO3 (3x50mL)、水(3x50mL)及びブライン(3x50mL)で洗浄した。有機層を、Na2SO4上で乾燥し、溶媒を除去し、白色結晶固形物[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-カルバミン酸フェニルエステル4.45g, 91％を得た。
【化４７】
2008510790.tif 000049
【０１９８】
【化４８】
2008510790.tif 000050
【０１９９】
2：[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-カルバミン酸フェニルエステル(500mg, 1.3mmol)を、無水ジクロロメタン(0.5mL)及びトリエチルアミン(0.187mL, 1.3mmol)に溶解した。この攪拌溶液へ、1-メチルピペラジン(又はいずれか他のアミン)(0.144mL, 1.3mmol)を添加した。溶液は直ぐに黄色へ変色し、TLC分析は、全ての出発材料が消費されたことを示した。この反応液を、水(3x500mL)、飽和炭酸水素ナトリウム(2x200mL)で洗浄し、乾燥し、その後溶媒を真空で除去した。ボロン酸エステルを、精製せずに使用した。
【０２００】
3：2.1mLのDME及び2.8mLの2N Na2CO3の混合物へ、臭化物足場100mg、ボロン酸1当量、及び5mol％のPd(PPh3)4を添加した。反応液を、2ドラムバイアル中で、80℃で一晩攪拌加熱した。粗混合物を、セライトを通して濾過し、EtOAc(2x100mL)で抽出した。一緒にした抽出物を、NaHCO3(1x100mL)、その後水(1x100mL)、その後飽和ブライン(1x10OmL)で洗浄した。得られた混合物を、真空で濃縮した。残渣を、ヘキサン中で溶解し、カラムクロマトグラフィーにより精製した。
【０２０１】
一般的手順11：
【０２０２】
【化４９】
2008510790.tif 000051
【０２０３】
1：アセトニトリル(600mL)及び酢酸(120mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(10.0g, 33.2mmol)の溶液へ、N-ヨードスクシンイミド(11.2g, 49.8mmol)を添加した。この混合物を、室温で4時間攪拌し、反応をNa2S2O5溶液で停止した。蒸発後、残渣を、酢酸エチルと水の間で分配した。有機層を、2N NaOH溶液、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。粗生成物を、シリカゲルカラム上で精製し、3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-ヨード-ピリジン-2-イルアミン(7.1g, 収率50％)を得た。MS m/z 427 [M+1]。
【０２０４】
2：THF(60mL)及びEt3N (60mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-ヨード-ピリジン-2-イルアミン(7.1g, 16.6mmol)及びプロピ-2-イニル-カルバミン酸tert-ブチルエステル(3.1g, 20.0mmol)の溶液へ、CuI(63mg, 0.3mmol)及びPd(PPh3)4 (384mg, 0.3mmol)を添加した。混合物を、窒素下で攪拌し、反応が完了するまで、TLCでモニタリングした。混合物を、EtOAcで抽出し、水で洗浄した。粗生成物を、ヘキサン中の20-40％EtOAcで溶離し、シリカゲルカラム上で精製し、(3-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-プロピ-2-イニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た(2.2g, 収率29％)。
【０２０５】
3：ジクロロメタン中の25％TFAを溶媒とする(3-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-プロピ-2-イニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステルの溶液を、2時間攪拌し、その後2N NaOH、水で2回、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。濾過及び蒸発後、5-(3-アミノ-プロピ-1-イニル)-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミンを、収率93％で得た。
【０２０６】
4：無水ジクロロメタン(10mL)中の5-(3-アミノ-プロピ-1-イニル)-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(0.282mmol, 1当量)及び4-ニトロフェニルクロロギ酸(1当量)の溶液へ、ピリジン(1当量)を添加した。反応液を、窒素下で4時間攪拌し、その後選択されたアミン(1当量)及びトリエチルアミン(1当量)を添加した。混合物を5分間還流し、室温に冷却した。反応混合物を水で洗浄した。有機層を蒸発させ、予め充填したシリカカラム上でジクロロメタン中0-20％メタノールで溶離し、シリカゲルカラム上で精製した。最終収率は、24％〜71％であった。
【０２０７】
一般的手順12：
【０２０８】
【化５０】
2008510790.tif 000052
【０２０９】
1：ジクロロメタン(17mL)中の5-(3-アミノ-プロピ-1-イニル)-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(手順11において調製)(400mg, 1.1mmol)の溶液へ、クロロアセチルクロリド(153mg, 1.4mmol)を添加した。反応液を、室温で撹拌し、反応の完了をTLCでモニタリングした。完了後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を得た。
【０２１０】
2：アセトニトリル(5当量)中のN-(3-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-プロピ-2-イニル)-2-クロロアセトアミド(1当量)の溶液へ、個々のアミン(5当量)を添加した。この混合物を、窒素下で一晩還流した。溶媒の蒸発後、残渣を、ジクロロメタン中の1-10％メタノールで、シリカゲルカラム上で精製し、生成物を47％〜97％を変動する収率で得た。
【０２１１】
一般的手順13：
【０２１２】
【化５１】
2008510790.tif 000053
【０２１３】
1.  CH3CN(600mL)中の2-アミノ-3-ベンジルオキシピリジン(42.0g, 0.21mol)の攪拌溶液へ、0℃で、N-ブロモスクシンイミド(37.1g, 0.21mol)を30分間かけて添加した。混合物を0.5時間攪拌し、その後反応液をEtOA (900mL)で希釈し、H2O (900mL)で分配した。有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、減圧下で濃縮乾固し、3-ベンジルオキシ-5-ブロモ-ピリジン-2-イルアミン(31.0g, 0.11mol, 53％)を得た。
【化５２】
2008510790.tif 000054
【０２１４】
2.   DME(600mL)及びH2O(600mL)の混合物中の3-ベンジルオキシ-5-ブロモ-ピリジン-2-イルアミン(31.0g, 0.11mol)の攪拌混合物へ、4-カルボキシメチルボロン酸(29.9g, 0.11mol)、Pd(PPh3)4 (6.4g, 5.55mmol)、及びNa2CO3(82.0g, 0.78mol)を添加した。反応液を、ゆっくり加熱還流し、3時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、その後CH2Cl2 (1.5L)で希釈し、H2O (700mL)で分配した。有機層を、飽和NaHCO3(700mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル, 1:1〜4:1 EtOAc:ヘキサン)で精製し、生成物を含有する画分を一緒にし、真空で濃縮し、4-(6-アミノ-5-ベンジルオキシ-ピリジン-3-イル)-安息香酸メチルエステル(29.4g, 0.086mol, 79％)を得た。
【化５３】
2008510790.tif 000055
【０２１５】
3.  EtOH:H2O(95:5, 600mL)中の4-(6-アミノ-5-ベンジルオキシ-ピリジン-3-イル)-安息香酸メチルエステル(10.0g, 0.03mol)の攪拌溶液に、Pd/C(15.9g, 0.015mol)(反応液を減圧下で脱気した)に添加した。この溶液を、H2大気下で22時間攪拌した。溶液を、湿ったセライトを通して濾過し、セライトをEtOHで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-安息香酸メチルエステル(2.3g, 9.3mmol, 31％)を得た。
【化５４】
2008510790.tif 000056
【０２１６】
4.  CH2Cl2(180mL)中の4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-安息香酸メチルエステル(2.3g, 9.3mmol)の攪拌溶液へ、N,N-ジイソプロピルエチアミン(3.2mL, 0.019mol)、4-メチル-ベンゼンスルホニルクロリド(2.66g, 0.014mol)、及びPS-DMAP(触媒量)を添加した。反応液を、周囲温度で6時間攪拌し、その後濾過し、樹脂を除いた。樹脂を、CH2Cl2(3x20mL)で洗浄し、一緒にした画分を10％クエン酸(100mL)、飽和NaCl(100mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。得られた粗物質を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル, 100％CH2Cl2から95:5 CH2Cl2: MeOH)により精製し、所望の生成物を含有する画分を一緒にし、真空で濃縮し、4-[6-アミノ-5-(トルエン-4-スルホニルオキシ)-ピリジン-3-イル]-安息香酸メチルエステル(3.3g, 8.2mmol, 88％)を得た。
【化５５】
2008510790.tif 000057
【０２１７】
5.  無水DMF(500mL)中の1-(3-フルオロ-2-トリフルオロメチル-フェニル)-エタノール(2.0g, 9.6mmol)の攪拌溶液へ、0℃でN2大気下で、NaH (0.38g, 9.6mmol)を添加した。反応液を、0.5時間攪拌した。無水DMF(30mL)中の4-[6-アミノ-5-(トルエン-4-スルホニルオキシ)-ピリジン-3-イル]-安息香酸メチルエステル(3.8g, 9.6mmol)の溶液を、反応混合物に添加し、これをゆっくり周囲温度とし、この温度で21時間攪拌した。反応液を、EtOAc(500mL)及びH2O (100mL)で希釈した。有機層を分離し、更に水性液を、EtOAc(1x200mL)で抽出した。有機層を一緒にし、ブライン(1x100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮乾固した。粗混合物を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル, 40:60から70:30 EtOAc:ヘキサン)で精製し、生成物を含有する画分を一緒にし、真空で濃縮し、4-｛6-アミノ-5-[1-(3-フルオロ-2-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-安息香酸メチルエステル(1.4g, 3.2mmol, 34％)を得た。
【化５６】
2008510790.tif 000058
【０２１８】
6.  温かいIPA(72mL)中の4-｛6-アミノ-5-[1-(3-フルオロ-2-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-安息香酸メチルエステル(1.4g, 3.2mmol)の攪拌溶液へ、LiOH (0.68g, 16.2mmol)を含有するH2O (38mL)を添加した。反応液を、3.5時間還流加熱した。反応液を、中和し、EtOAc(200mL)で希釈し、冷却時に抽出した。有機層を、ブライン(50mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、減圧下で濃縮し、4-｛6-アミノ-5-[1-(3-フルオロ-2-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-安息香酸(1.2g, 2.8mmol, 88％)を得た。
【化５７】
2008510790.tif 000059
【０２１９】
7.  アミド化合物の調製：DMF(2mL)中の4-｛6-アミノ-5-[1-(3-フルオロ-2-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-安息香酸(50mg, 0.12mmol)、EDC(27.0mg, 0.13mmol)及びHOBt(18.0mg, 0.13mmol)の攪拌溶液を、NHR1R2 (0.12mmol)を含有する2ドラムバイアルへ添加した。反応液を、室温で18時間攪拌した。その後反応液を、CH2Cl2 (3mL)で希釈し、H2Oで分配した。有機物を分離し、飽和NaCl (1x2mL)及び飽和NaHCO3 (1x2mL)で洗浄した。有機物を、減圧下で濃縮乾固した。この物質を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル, 99:1から95:5 CH2Cl2/Me0H)を用いて精製した。生成物を含有する画分を、減圧下で濃縮し、アミド化合物を得た。
【０２２０】
一般的手順14：
【０２２１】
【化５８】
2008510790.tif 000060
【０２２２】
1：DMF(6mL)中の1-(2-クロロエチル)ピロリジン塩酸塩(200mg, 1.18mmol)及び4-[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フェニル]-1H-ピラゾール(229mg, 1.19mmol)の混合物へ、Cs2CO3を添加した。混合物を、室温で一晩攪拌した。その後水(10mL)を、この混合物へ添加した。生成物を、EtOAc(3x10mL)で抽出した。一緒にした抽出物を次に、ブライン(5x10mL)で洗浄し、DMFを除去し、その後Na2SO4上で乾燥し、濃縮した(142mg, 収率41％)。
2：マイクロウェーブ反応容器内で、水(1.25mL)、及びジメチルエチルグリコール(3.75mL, 0.1M)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-ヨード-ピリジン-2-イルアミン(200mg, 0.468mmol)、ピナコールボロン酸エステル(1.2当量)、Na2CO3 (149mg, 1.41mmol)の混合物に、Pd(PPh3)2Cl2 (16mg, 0.020mmol)を添加した。このシステムを、脱気し、窒素をチャージした。混合物を、マイクロウェーブ装置内で160℃で15分間攪拌した。混合物を、室温に冷却し、その後水(10mL)を添加した。生成物を、EtOAc(3x20mL)で抽出し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、水及びアセトニトリル中0.1％TFAによる逆相HPLCで精製した。
【０２２３】
一般的手順15：
【０２２４】
【化５９】
2008510790.tif 000061
【０２２５】
1：アセトニトリル(600mL)及び酢酸(120mL)中の3H-オキサゾール[4,5-b]ピリジン-2-オン(13.6g, 100mmol)の溶液へ、N-ブロモスクシンイミド(21.4g, 120mmol)を添加した。混合物を、室温で4時間攪拌し、反応をNa2S2O5溶液で停止した。蒸発後、残渣を、酢酸エチルと水で分配した。有機層を、2N NaOH溶液、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。粗生成物を、シリカゲルカラム上で精製し、6-ブロモ-3H-オキサロ[4,5-b]ピリジン-2-オン(11.5g, 収率55％)を得た。
2：6-ブロモ-3H-オキサロ[4,5-b]ピリジン-2-オン(21.5g, 100mmol)を、NaOH溶液(2N, 250mL, 500mmol)に懸濁した。混合物を、一晩還流し、透明な溶液を得た。室温へ冷却後、反応溶液を、pH〜7に中和した。大量のCO2が発生し、沈殿も認めた。生成物を濾過し、水で洗浄し、高真空下で乾燥し、2-アミノ-5-ブロモ-ピリジン-3-オールを乳-白色固形物(17.8g, 収率98％)として得た。
【０２２６】
3：DMF(8mL)中の2-アミノ-5-ブロモ-ピリジン-3-オール(358mg, 1.89mmol)の溶液へ、Cs2CO3 (620mg, 1.89mmol)を添加した。混合物を、室温で窒素下で1時間攪拌した。反応混合物を、DMF(5mL)中のブロモ-化合物(0.9当量)にゆっくり添加した。反応溶液を、窒素下で5時間攪拌し、その後水と酢酸エチルの間で分配した。有機層を、ブラインで3回洗浄し、MgSO4上で乾燥した。粗生成物を、シリカゲルカラム上で精製し、ヘキサン-酢酸エチル(4:1)で溶離し、生成物を収率70％〜80％で得た。
【０２２７】
一般的手順16  米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)の実施例I-488を使用：
【０２２８】
【化６０】
2008510790.tif 000062
【０２２９】
1.  ジメチルスルホキシド (7mL)中の3-ベンジルオキシ-5-ブロモ-ピリジン-2-イルアミン(1g, 3.58mmol)の溶液へ、ビス(ピナコラト)ジボラン(1.0g, 3.94mmol)、酢酸カリウム(1.05g, 10.7mmol)、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロシン]ジクロロパラジウム(II)、ジクロロメタンとの複合体(1:1)(146mg, 0.18mmol)を逐次添加した。混合物を、80℃で16時間加熱し、その後室温に冷却した。反応混合物を、酢酸エチル(50mL)で希釈し、濾過した。濾液を、水(2X50mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空での濃縮は、粗ボロン酸塩を茶色固形物(1.13g, 97％)として得た。
【化６１】
2008510790.tif 000063
2.  18mLの反応容器に、粗3-ベンジルオキシ-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン(161mg, 0.49mmol)、ジメトキシエタン(3mL)及び2-ブロモピリジン(117mg, 0.74mmol)をチャージした。この溶液に、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロシン]ジクロロパラジウム(II)、ジクロロメタンとの複合体(1:1)(20mg, 0.05mmol)及び水を溶媒とする炭酸セシウム2M溶液(0.75mL, 1.5mmol)を添加した。反応器を、80℃で66時間、窒素大気下で温め、その後室温に冷却した。反応混合物を、酢酸エチル(5mL)と水(5mL)の間で分配した。有機層を、追加の水(5mL)で温め、ジメチルホルムアミド(5mL)で希釈した。ポリマー-結合したスルホン酸(0.5g, 2.1mmol)を、オレンジ色溶液に添加し、得られた混合物を穏やかに2時間攪拌した。樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、メタノール及び塩化メチレン(各溶媒3X5mL)で洗浄した。その後ポリマーを、メタノール中の2Mアンモニアと1時間反応した。樹脂を濾過し、更にメタノール中の2Mアンモニア(2X5mL)で洗浄し、一緒にした濾液を真空で濃縮した。粗生成物のフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製は、黄褐色固形物として生成物52.2mg(収率38％)を得た。
【０２３０】
一般的手順17：
【０２３１】
【化６２】
2008510790.tif 000064
【０２３２】
1.  t-ブチルアルコール(50mL)中の3-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-ベンジルオキシ)-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン(手順16)(10.0g, 24.3mmol)の溶液へ、boc無水物(5.83g, 26.7mmol)を添加し、反応液を、室温で一晩攪拌した。追加のboc無水物(2.25g, 10.3mmol)を添加し、反応液を再度一晩攪拌した。物質を、粘性の黒色油状物に濃縮し、そのまま使用した。
2.  THF(150mL)中の粗ボロン酸エステル(24.3mmol理論量)を、水(150mL)及びアセトン(23mL)中の炭酸水素ナトリウム(16.3g, 194mmol)溶液へ添加した。混合物を、2℃に冷却し、温度を8℃以下に維持しながら、オキソン(13.5g, 21.9mmol)をゆっくり添加した。添加の完了時に、反応液を5分間攪拌し、その後水(28mL)中の亜硫酸水素ナトリウム(14.2g)で停止した。酢酸エチルを添加し(200mL)、相を分離した。水層を、6N HClで中和し、酢酸エチル(2x200mL)で抽出した。一緒にした有機物を、水(250mL)及びブライン(250mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮し、粗黒色油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン)は、生成物を明茶色泡状物として得た(4.78g, 49.0 ％)。
【化６３】
2008510790.tif 000065
【０２３３】
3.  2ドラムバイアル中の炭酸セシウムへ、無水DMF(1mL)中の[3-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-ベンジルオキシ)-5-ヒドロキシ-ピリジン-2-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(100mg, 0.25mmol)、引き続き臭化ベンジル(89.2μL, 0.75mmol)を添加した。バイアルに蓋をし、90℃で一晩攪拌した。反応液を、水(3.5mL)で予め温めた5mL Chem-Elutチューブを通して濾過し、1:1酢酸エチル:塩化メチレンで溶離した。分縮後、ジオキサン(1〜2mL)中の4N HClを添加し、溶液を濃縮した。逆相クロマトグラフィー(水:アセトニトリル, 0.05％TFA)、引き続きの凍結乾燥は、所望の生成物を乳白色非晶質固形物(25.3mg, 20.0％)及び黄褐色の非晶質固形物としてのビス-付加産物(35.2mg, 23.7％)を得た。
【０２３４】
一般的手順18：
【０２３５】
【化６４】
2008510790.tif 000066
【０２３６】
ホウ化水素ナトリウム(1.5モル当量)を、窒素大気下で、エタノール10mL中のケトン(3.89mmol)の溶液に添加した。得られた混合物を、室温で12時間攪拌した。その後この混合物を、氷浴に入れ、希HCl水溶液で反応停止した。エタノールを蒸発させ、EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を、濾過し、濾液を蒸発させ、油状残渣として化合物A5を得た。残渣を更に精製することなく使用した。
3-ヒドロキシ-2-ニトロピリジン(1.1モル当量)及びトリフェニルホスフィン(1.5モル当量)を、THF 10mL中の化合物A5(1.1mmol)の溶液へ添加した。その後反応混合物を、氷浴に入れ、ジイソプロピルアゾジカルボキシラート(1.5モル当量)を添加した。氷浴を取り外し、混合物を室温で12時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、黄色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中EtOAcで溶離)にかけ、化合物A1を得た。
【０２３７】
エタノール2mL中の化合物A1(0.97mmol)の溶液へ、2M HCl(0.2mL)を添加した。その後混合物を氷浴へ入れ、Fe粉末(365mg)をゆっくり添加した。反応液を、85℃で1時間加熱し、室温へ冷却した。セライト(0.5g)を撹拌しながら添加し、得られた混合物を、セライト床を通して濾過し、エタノールで洗浄した。濾液を蒸発させ、茶色油状残渣として化合物A2を得た。残渣を更に精製することなく、使用した。
過ヨウ素酸(0.25モル当量)、ヨウ素(0.5モル当量)、H2O(0.5mL)、及び濃硫酸(0.03mL)を、酢酸3mL中の化合物A2の溶液へ添加した。反応混合物を、85℃で5時間加熱した。その後反応混合物を、氷浴で冷却し、飽和Na2CO3 水溶液でpH3〜4へ塩基性とした。酢酸エチルを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc及びヘキサンで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物A3を得た。
【０２３８】
一般的手順19：
【０２３９】
【化６５】
2008510790.tif 000067
【０２４０】
ボロン酸エステル又はボロン酸(1.3モル当量)を、DME 5mL中の化合物A3(0.47mmol)の溶液へ添加した。この混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。H2O 1mL中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を、反応混合物に添加し、得られた溶液を85℃で12時間加熱した。反応混合物へ水を添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc及びヘキサンで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物A4を得た。
【０２４１】
一般的手順20：
【０２４２】
【化６６】
2008510790.tif 000068
【０２４３】
化合物A6を、一般的手順19を用いて調製した。O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムペンタフルオロリン酸塩(HATU)(1.1モル当量)、ジイソプロピルエチルアミン(5モル当量)及びアミン(1.3モル当量)を、窒素大気下でDMF 3mL中の化合物A6(0.17mmol)の溶液に添加した。反応液を、室温で12時間攪拌した。飽和NaHCO3を、反応混合物へ添加し、反応を停止した、その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc及びヘキサンで溶離)により精製し、所望のアミド生成物である化合物A7を黄色油状物として得た。
【０２４４】
一般的手順21：
【０２４５】
【化６７】
2008510790.tif 000069
【０２４６】
酸(16モル当量未満)を、化合物A7(0.13mmol)へ室温で添加した。得られた溶液を、室温で攪拌し、又は60℃に加熱し12時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、EtOAc及びCH2Cl2で溶離)にかけ、所望のアミド生成物である化合物A8を、黄味がかった白色固形物として得た。
【０２４７】
一般的手順22：
【０２４８】
【化６８】
2008510790.tif 000070
【０２４９】
化合物A9を、一般的手順19を用いて調製した。ジカルボン酸ジ-tert-ブチル(3モル当量)及び4-(ジメチルアミノ)ピリジン(0.14モル当量)を、DMF 20mL中の化合物A9(3mmol)の溶液へ添加した。反応混合物を、室温で12時間攪拌した。反応混合物へ水を添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、茶黄色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中25→30％EtOAcで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物A10を黄色油状物として得た(収率87.8％)。オゾンを、-78℃のCH2Cl2 50mL中の化合物A10の溶液を通して泡立たせ、硫化ジメチルを添加し、反応を停止した。飽和塩化ナトリウムを、反応混合物に添加し、EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。一緒にしたEtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、黄色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中35→40％EtOAcで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物A11を黄味がかった油状物として得た(収率58.4％)。
【０２５０】
一般的手順23：還元的アミノ化
【０２５１】
【化６９】
2008510790.tif 000071
【０２５２】
アミン塩酸塩(1.2モル当量)、酢酸ナトリウム(アミン塩酸塩に対し2モル当量)を、CH3OH 4mL中の化合物A11(0.45mmol)の溶液に、窒素大気下で添加した。この反応混合物へ分子篩(0.5g)を添加し、その後シアノホウ化水素ナトリウム(2モル当量)を添加した。得られた混合物を、室温で12時間、窒素大気下で攪拌した。反応混合物を、セライト床を通して濾過し、濾液を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、EtOAc、及びCH2Cl2で溶離)にかけ、所望の生成物である化合物A12を油状物(収率52.6％)として得た。酸(16モル当量未満)を、化合物A12(0.17mmol)へ室温で添加した。得られた溶液を、室温で攪拌し、60℃で12時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、EtOAc及びCH2Cl2で溶離)にかけ、所望の生成物である化合物A13を得た。
【０２５３】
一般的手順24：
【０２５４】
【化７０】
2008510790.tif 000072
【０２５５】
O-フェニルジアミン(1.2モル当量)及び亜硫酸水素ナトリウム(2.1モル当量)を、DMA 5mL中の化合物A11(0.41mmol)の溶液へ添加した。得られた溶液を、110℃で12時間加熱した。水を反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、茶黄色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中EtOAcで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物A14を得た。酸(16モル当量未満)を、化合物A14(0.16mmol)へ室温で添加した。得られた溶液を室温で攪拌し、60℃で12時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、EtOAc及びCH2Cl2により溶離)で精製し、所望のアミド生成物である化合物A15を得た。
【０２５６】
一般的手順25：
【０２５７】
【化７１】
2008510790.tif 000073
【０２５８】
ジカルボン酸ジ-tert-ブチル(3モル当量)、4-(ジメチルアミノ)ピリジン(0.14モル当量)を、DMF 10mL中の化合物A3b(2mmol)の溶液へ添加した。反応混合物を、室温で12時間攪拌した。水を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、茶黄色油状残渣(化合物a16)を得た。残渣を更に精製することなく、使用した。
ビス(ピナコラト)ジボロン(1.2モル当量)及び酢酸カリウム(3.4モル当量)を、DMSO 4mL中の化合物a16の溶液へ添加した。混合物に、窒素を数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。得られた溶液を、80℃で12時間加熱した。反応混合物へ水を添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中30％EtOAcで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物A17(収率76％)を得た。HCl(5モル当量)を、CH2Cl2 4mL中の化合物A17(0.43mmol)の溶液へ添加した。得られた混合物を、50℃で12時間加熱した。飽和NaHCO3を、反応混合物へ添加し、反応液を中和した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、所望の生成物(化合物A18)を黄色固形物として得た(収率75％)。
【０２５９】
一般的手順26：
【０２６０】
【化７２】
2008510790.tif 000074
【０２６１】
化合物A17(1.3モル当量)を、DME 3mL中のハロゲン化アリール(0.36mmol)の溶液へ添加した。混合物を、数回窒素で掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。0.8mL H2O中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を、反応混合物へ添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。反応混合物へ、水を添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中EtOAcで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物A19(収率74.4％)を得た。HCl(5モル当量)を、イソプロピルアルコール10mL中の化合物A19(0.26mmol)の溶液へ添加した。得られた混合物を、50℃で12時間加熱した。溶媒を蒸発させ、所望の生成物である化合物A20を得た。
【０２６２】
一般的手順27：
【０２６３】
【化７３】
2008510790.tif 000075
【０２６４】
化合物A18(1.3モル当量)を、DME 3mL中のハロゲン化アリール(0.21mmol)の溶液に添加した。混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。H2O 0.6mL中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を、反応混合物へ添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。水を反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物A21を得た。
【０２６５】
一般的手順28：
【０２６６】
【化７４】
2008510790.tif 000076
【０２６７】
アミン(1.5モル当量)及びK2CO3(1.5モル当量)を、トルエン2mL中の4-ハロベンジルハライド(1.0モル当量)溶液に添加した。得られた混合物を、Smithsynthesizer(150℃, 1時間)を用いてマイクロウェーブ処理した。反応混合物へ、水を添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、所望の生成物である化合物A23を得た。残渣を、更に精製することなく、手順11を使用し、化合物A22を合成した。
【０２６８】
一般的手順29：
【０２６９】
【化７５】
2008510790.tif 000077
【０２７０】
アミン(1.2モル当量)及びジイソプロピルアミン(5モル当量)を、CHCl3 5mL中の4-ブロモベンゼンスルホニルクロリド(0.77mmol)の溶液へ、窒素大気下で添加した。得られた混合物を、室温で4時間攪拌した。反応混合物へ、水を添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、所望の生成物である化合物A25を得た。残渣を、更に精製することなく、手順11を使用し、化合物A24を合成した。
【０２７１】
一般的手順30：
【０２７２】
【化７６】
2008510790.tif 000078
【０２７３】
ボロン酸エステル又はボロン酸(1.2モル当量)を、10mL (DME)中の1-クロロ-4-ヨードベンゼン(0.84mmol)の溶液へ、窒素大気下で添加した。混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。H2O 1.8mL中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を、反応混合物へ添加し、得られた溶液を85℃で12時間加熱した。水を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層を、Na2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンにより溶離)で精製し、所望の生成物である化合物A27を得た。化合物A27を、手順11において使用し、化合物A26を合成した。
【０２７４】
一般的手順31  ラセミ体のキラル分離のため：
ラセミ体試料を、分取超臨界流体クロマトグラフィーSFC-MSを用いて精製した。精製条件の例は以下である：カラム−Chiralpak AD-H、250x21mm、5μm、100Aカラム(カラム#:ADHOCJ-C1003)；カラム温度35℃；移動相35％メタノール(0.1％イソプロピルアミンを含む)−修飾された（modified）CO2；分取流量52mL/分；120barで定圧。
【０２７５】
一般的手順32：(4-｛6-アミノ-5-[1-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-(3,5-ジメチル-ピペラジン-1-イル)-メタノンの使用
【０２７６】
【化７７】
2008510790.tif 000079
【０２７７】
DMF(2mL)中の4-[4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-ベンゾイル]-2,6-ジメチル-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(100mg, 0.23mmol)及び1-(1-ブロモ-エチル)-3-トリフルオロメチル-ベンゼン(64mg, 0.25mmol)の混合物へ、NaH(12mg, 0.47mmol)を0℃で添加した。混合物を一晩攪拌した。LCMSは、この反応が完了したことを示し、DMF及び水を除去した。TFA(2mL)を、残渣へ添加し、室温で3時間攪拌した。TFAを除去し、引き続きメタノールを添加した。残渣を、分取-HPLCで精製し、(4-｛6-アミノ-5-[1-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-(3,5-ジメチル-ピペラジン-1-イル)-メタノン(30mg, 収率25.7％)を得た。
【０２７８】
一般的手順33：(4-｛6-アミノ-5-[1-(2-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-(3,5-ジメチル-ピペラジン-1-イル)-メタノンの使用
【０２７９】
【化７８】
2008510790.tif 000080
【０２８０】
DMF(2mL)中の4-[4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-ベンゾイル]-2,6-ジメチル-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(50mg, 0.12mmol)及び1-(1-ブロモ-エチル)-2-トリフルオロメチル-ベンゼン(32mg, 0.12mmol)の混合物へ、2M Cs2CO3 (0.18mL, 0.35mmol)、引き続き水(0.5mL)を添加し、混合物を一晩攪拌し、その後70℃で8時間加熱した。LCMSは、反応が完了したことを示した。DMF及び水を除去した。TFA(2mL)を残渣へ添加し、室温で3時間攪拌した。TFAを除去し、引き続きメタノールを添加した。残渣を、分取-HPLCにより精製し、(4-｛6-アミノ-5-[1-(2-トリフルオロメチル-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-(3,5-ジメチル-ピペラジン-1-イル)-メタノン(20mg, 収率34.2％)とした。
【０２８１】
一般的手順34：｛4-[6-アミノ-5-(2-メチル-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-(3,5-ジメチル-ピペラジン-1-イル)-メタノンの使用
【０２８２】
【化７９】
2008510790.tif 000081
【０２８３】
DMF(2mL)中の(2R,6S)-4-[4-(6-アミノ-5-ヒドロキシ-ピリジン-3-イル)-ベンゾイル]-2,6-ジメチル-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(100mg, 0.23mmol)及び1-ブロモメチル-2-メチル-ベンゼン(47mg, 0.25mmol)の混合物へ、2M Cs2CO3(0.35mL, 0.7mmol)、引き続き水(0.5mL)を添加した。混合物を、室温で一晩攪拌した。LCMSは、反応が完了したことを示し、DMFを除去し、引き続きジオキサン(2mL)中の4N HClを添加し、反応液を室温で3時間攪拌した。揮発物を除去し、その後メタノールを添加した。この溶液を、分取-HPLCにより精製し、｛4-[6-アミノ-5-(2-メチル-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-フェニル｝-(3,5-ジメチル-ピペラジン-1-イル)-メタノン(47mg, 収率46.6％)とした。
【０２８４】
一般的手順35：(6-アミノ-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキシ-3-イル)-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-メタノンの使用
【０２８５】
【化８０】
2008510790.tif 000082
【０２８６】
DME(2mL)中の[3-(4-ヨード-ベンゾイル)-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキシ-6-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(100mg, 0.234mmol)及び3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン(100mg, 0.234mmol)の混合物へ、Pd(dppf)2Cl2-CH2Cl2 (10mg, 0.012mmol)及びCs2CO3 (351mg, 0.702mmol)を添加した。混合物を、窒素で10分間泡立て、その後150℃で30分間マイクロウェーブ処理した。LCMSは、反応が完了したことをチェックした。粗反応混合物を、酢酸エチルで希釈し、引き続き水及びブラインで洗浄した。溶液を、MgSO4上で乾燥した。分取-HPLCによる精製は、固形物を得た。この固形物を、4N HCl/ジオキサン(3mL)と共に、室温で3時間攪拌した。揮発物を除去し、残渣を分取-HPLCにより精製し、(6-アミノ-3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキシ-3-イル)-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-メタノン(30mg, 収率26％)を得た。
【０２８７】
一般的手順36：5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-6'-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-[3,3']ビピリジニル-6-イルアミンの使用
【０２８８】
【化８１】
2008510790.tif 000083
【０２８９】
6'-アミノ-5'-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-[3,3']ビピリジニル-6-オール(78mg, 0.20mmol)、トリフェニルホスフィン(63mg, 0.24mmol)及び2-モルホリン-4-イル-エタノール(0.026mL, 0.22mmol)の混合物へ、DEAD(0.034mL, 0.22mmol)を添加した。一晩攪拌後、より多くのPPh3(63mg, 0.24mmol)及びより多くのDEAD(0.034mL, 0.22mmol)を添加した。更に数時間後、より多くのアルコール(0.026mL, 0.22mmol)を添加した。数時間後、より多くのPPh3(63mg, 0.24mmol)及びより多くのDEAD(0.034mL, 0.22mmol)を添加した。一晩攪拌後、混合物を、ジクロロメタンと半-飽和ブラインの間で分取した。これらの相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。一緒にした有機相を、Na2SO4上で乾燥し、回転蒸発で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、メタノール溶離勾配を用いる、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-6'-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-[3,3']ビピリジニル-6-イルアミン(53mg, 53％)を得た。
【０２９０】
一般的手順37：米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)の実施例I-650の使用
【０２９１】
【化８２】
2008510790.tif 000084
【０２９２】
3-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-5-チアゾール-2-イル-ピリジン-2-イルアミン：攪拌棒を装着したマイクロウェーブチューブへ、ヨード-ピリジル出発材料(300mg, 0.702mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(40mg, 5mol％)及びテトラヒドロフラン(無水物, 6mL)を添加した。バイアルに蓋をし、窒素を5分間掃流した。その後臭化2-チアゾリル亜鉛(THF中0.5M, 1.4mmol, 2.8mL)を、シリンジにより添加した。バイアルを、マイクロウェーブで10分間、120℃に加熱した。TLC(1:1酢酸エチル:塩化メチレン)は、大量の出発材料が残存していることを示した。追加の臭化2-チアゾリル亜鉛(THF中0.5M, 500μl)を添加し、バイアルをマイクロウェーブで20分間、120℃に加熱した。TLC(1:1酢酸エチル:塩化メチレン)は、大量の出発材料が依然残存していることを示した。更なる臭化2-チアゾリル亜鉛(THF中0.5M, 500μl)を添加し、バイアルをマイクロウェーブで60分間、120℃に加熱した。TLC(1:1酢酸エチル:塩化メチレン)は、大量の出発材料が依然残存しているが、既に非常に散乱している(messy)ことを示した。このバイアル内容物を、飽和NH4Cl溶液(10mL)に注ぎ、この溶液を、酢酸エチル(2x30mL)で抽出した。一緒にした酢酸エチル層を、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を、10gの予め充填されたシリカゲルカラムに負荷し、1:1 酢酸エチル:塩化メチレンを使用し、所望の生成物(40mg, 15％)を溶離した。
【０２９３】
一般的手順38：米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)の実施例I-652の使用
【０２９４】
【化８３】
2008510790.tif 000085
【０２９５】
3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-メチル-1H-イミダゾール-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン：N-メチルイミダゾール(92mg, 1.1mmol)を、50mL丸底フラスコ中のテトラヒドロフラン(無水物, 4mL)に溶解した。フラスコを、窒素大気下のドライアイス/アセトン浴で冷却した。N-ブチルリチウム(2.5M, 562μL, 1.4mmol)を、シリンジにより100μLずつ5分間かけて添加した。この反応液を、-70℃で30分間攪拌した。固形塩化亜鉛(無水物, 383mg, 2.8mmol)を添加し、反応液を15分間攪拌した。その後氷浴を外し、反応液を室温に温めた。一旦全ての塩化亜鉛を、溶液に入れ、反応を室温で進め、テトラヒドロフラン(無水物, 4mL)中ヨード足場(400mg, 0.936mmol)を添加し、引き続きテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(108mg, 10mol％)を添加し、この反応液を加熱還流した。出発ヨード足場が全て消費されるまで、反応を、LC/MSでモニタリングした。反応液を冷却し、飽和NH4Cl溶液(20mL)で希釈した。この溶液を、酢酸エチル(2x50mL)で抽出した。一緒にした酢酸エチル層を、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を、10gの予め充填されたシリカゲルカラムに負荷し、10％メタノール:酢酸エチルを用い、所望の生成物(25mg, 7％)を溶離した。
【０２９６】
一般的手順39：米国特許出願第10/786,610号(PCT/US2004/005495)の実施例I-657の使用
【０２９７】
【化８４】
2008510790.tif 000086
【０２９８】
70mL無水メタノール中の6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ニコチノニトリル(400mg, 1.23mmol)に、0℃で、気体HClを3分間泡立てた。3℃で一晩攪拌した。揮発物を除去し、固形物をジエチルエーテルで洗浄し、イミダートを定量的に得た。メタノール4mL中のイミダート200mgに、0℃で、THF(837μL)中の2Nメチルアミンを添加した。0℃で約1時間攪拌し、その後一晩室温で温めた。揮発物を除去し、残渣を10-20％メタノール/ジクロロメタンによるクロマトグラフィーにかけ、生成物70mgを得た。
【０２９９】
一般的手順40:
【０３００】
【化８５】
2008510790.tif 000087
【０３０１】
1.  6-ニトロ-5-ヒドロキシニコチン酸(B2)：濃H2SO4中の5-ヒドロキシニコチン酸(B1)(7.0g, 50mmol)の溶液へ、9mLの発煙HNO3(90％)(9mL)を添加した。反応混合物を、密閉したチューブ中で55〜60℃で4日間攪拌した。その後混合物を、氷へ注ぎ、pHを、50％NaOHで3に調節した。MgSO4を添加し、水性混合物を飽和させ、その後イソプロピルアルコール(4x45mL)で抽出した。減圧下でイソプロピルアルコールを除去後、B2の5.93g(収率64％)を、黄色固形物として得た。
【化８６】
2008510790.tif 000088
【０３０２】
2.  2,6-ジクロロベンジル-6-ニトロ-5-[(2,6-ジクロロベンジル)オキシ]ニコチン酸塩(B3)：6-ニトロ-5-ヒドロキシニコチン酸(B2)(3.4g, 18.5mmol)、2,6-ジクロロ臭化ベンジル(8.88g, 37mmol)、DIPEA(5.5g, 42.5mmol)を、250mLの丸底フラスコ中でDMF (25mL)に溶解し、この反応液を、室温で4.5時間攪拌し、その後減圧下で濃縮した。得られた混合物を、氷に注ぎ、濾過した。固形物を収集し、減圧下で乾燥し、B3の4.25g(収率46％)を得た。
【化８７】
2008510790.tif 000089
【０３０３】
3.  2,6-ジクロロベンジル-6-アミノ-5-[(2,6-ジクロロベンジル)オキシ]ニコチン酸塩(B4)：2,6-ジクロロベンジル-6-ニトロ-5-[(2,6-ジクロロベンジル)オキシ]ニコチン酸塩(B3)(5.5g, 10.96mmol)、鉄粉(0.92g, 16.43mmol)、氷酢酸(20mL)及びメタノール(17mL)の混合物を、85℃で3時間攪拌した。反応混合物を、乾固近くまで濃縮し、水酸化アンモニウム(30％)を添加し、混合物を中和した。最小量のDMFを添加し、この反応混合物を溶解し、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(溶離液：EtOAc-EtOH, 9:1)で精製し、B4を淡黄色固形物として4.5g(87％)得た。MS(APCl) (M+H)+473.
【０３０４】
4.  6-アミノ-5-[(2,6-ジクロロベンジル)オキシ]ニコチン酸(B5)：2,6-ジクロロベンジル-6-アミノ-5-[(2,6-ジクロロベンジル)オキシ]ニコチン酸塩(B4)(3.5g, 7.4mmol)、水酸化リチウム8(0.41g, 17mmol)、水(22mL)及びメタノール(30mL)の混合物を攪拌し、85℃で5時間還流した。混合物を、減圧下で濃縮乾固した。得られた残渣を、水に溶解し、Et2O/ヘキサン(1:1, 4x25mL)混合液で抽出し、1N HClで中和し、泡状白色沈殿とし、これを濾過し、減圧下で乾燥して、B5を白色固形物として1.83g(79％)得た。
【化８８】
2008510790.tif 000090
【０３０５】
【化８９】
2008510790.tif 000091
【０３０６】
96-ウェルプレート内のDMF中の様々なアミンの0.2M溶液400μLのアレイへ、4-[6-アミノ-5-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-ベンジルオキシ)-ピリジン-3-イル]-安息香酸400μL(DMF中0.2M)、トリエチルアミン(DMF中1M)80μL及びHATU(DMF中0.5M)160μLを添加し、これらの反応液を、70℃で2時間攪拌した。SpeedVac装置を用い溶媒を除去し、粗反応混合物を、DMSOに溶解し、液体ハンドラーを用い、1mLの96-ウェルプレートへ移し、最終理論濃度〜10mMとした。反応液を分析し、陽性の生成物同定を、LC/MSを用いて行った。母ストック液を、50nMに希釈し、c-MET阻害率について50nMでアッセイした。
【０３０７】
一般的手順41：
【０３０８】
【化９０】
2008510790.tif 000092
【０３０９】
96-ウェルプレート内のDMF中の様々なアミンの0.2M溶液400μLのアレイへ、6-アミノ-5-[(2,6-ジクロロベンジル)オキシ]ニコチン酸400μL(DMF中0.2M)、トリエチルアミントリエチルアミン(DMF中1M)80μL及びHATU(DMF中0.5M)160μLを添加し、これらの反応液を、70℃で2時間攪拌した。SpeedVac装置を用い溶媒を除去し、粗反応混合物を、DMSOに溶解し、液体ハンドラーを用い、1mLの96-ウェルプレートへ移し、最終理論濃度〜10mMとした。反応液を分析し、陽性の生成物同定を、LC/MSを用いて行った。母ストック液を、1μMに希釈し、アッセイした。
【０３１０】
一般的手順42  2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-N-(3-ジメチルアミノ-プロピル)-イソブチルアミドを使用
【０３１１】
【化９１】
2008510790.tif 000093
【０３１２】
DMF(85mL)中の4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(5g, 25.77mmol)及び2-ブロモ-2-メチル-プロピオン酸メチルエステル(12.6g, 27.06mmol)の溶液へ、Cs2CO3 (12.6g, 38.65mmol)を添加した。反応混合物を、油浴中で90℃で一晩加熱した。反応溶液を室温に冷却し、水と酢酸エチルの間で分配した。一緒にした酢酸エチル溶液を、水で5回洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮し、生成物2-メチル-2-[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピラゾール-1-イル]プロピオン酸メチルエステル(4.776g, 収率63％)を得た。
【０３１３】
DME(27mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-ヨード-ピリジン-2-イルアミン(6.363g, 14.901mmol)及び2-メチル-2-[4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピラゾール-1-イル]プロピオン酸メチルエステル(4.6g, 15.64mmol)の溶液へ、水(9.3mL)中のCsF(6.79g, 44.7mmol)溶液を添加した。反応混合物を、N2で3回脱気した。Pd(dppf)CH2Cl2を添加し、反応混合物を、N2で3回脱気した。この反応液を、マイクロウェーブで120℃に加熱した(反応が完了するまで、引き続きPdを30分間隔で添加した)。水を添加し、反応液を、EtOAcで抽出し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮し、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-2-メチル-プロピオン酸メチルエステルを得た。この粗生成物を、25％-50％ EtOAc/ヘキサン勾配による、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-2-メチル-プロピオン酸メチルエステル(1.46g, 収率21％)を、Rf 0.11 (50％ EtOAc/ヘキサン)で得た。
【０３１４】
MeOH(31mL)中のメチルエステル(2.92g, 6.25mmol)の溶液へ、水(6.25mL)中のLiOH(450mg, 18.76mmol)の溶液を添加した。LCMSが完全な加水分解を示すまで(約45分間)、反応液を、60℃で加熱した。MeOHを、真空で除去し、MeOH(2.5mL)及び水(1mL)を添加した。pHを、1N HClでpH5に調節し、この生成物を析出した。2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-2-メチル-プロピオン酸生成物を、濾過後に得た(2.825g, 定量的)。
【０３１５】
DMF(5.5mL)中の2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-2-メチル-プロピオン酸(1.00g, 2.20mmol)の溶液へ、HOBT(300mg, 2.20mmol)、EDC(633mg, 3.30mmol)、及びN,N-ジメチル-プロパン-1,3-ジアミン(225mg, 2.20mmol)を添加した。反応液を、一晩室温で攪拌した。その後反応液を、0.1％酢酸を含むアセトニトリル/水で溶離する逆相C-18分取HPLCで精製し、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-N-(3-ジメチルアミノ-プロピル)-イソブチルアミド(170mg, 収率14％)を得た。
【０３１６】
一般的手順43  3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(3-メチル-ピラゾール-1-イル)-ピリジン-2-イルアミンの使用
【０３１７】
【化９２】
2008510790.tif 000094
【０３１８】
DMSO(1mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-ヨード-ピリジン-2-イルアミン(100mg, 0.23mmol)及び3-メチル-1H-ピラゾール(59mg, 0.70mmol)の攪拌溶液へ、K3PO4 (101mg, 0.47mmol)、ドデカン(0.015mL, 0.05mmol)、シクロヘキサンジアミン(0.009mL, 0.07mmol)及ヨウ化銅(CuI)(14mg, 0.07mmol)を添加した。この溶液を、窒素で5分間泡立て、その後マイクロウェーブを150℃で2時間照射し、LCMSで、反応が完了したことをチェックし、混合物を、分取-HPLCにより精製し、3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(3-メチル-ピラゾール-1-イル)-ピリジン-2-イルアミン(30mg)を収率34.2％で得た。
【０３１９】
一般的手順44
【０３２０】
【化９３】
2008510790.tif 000095
【０３２１】
2,5-ジブロモピリジン(1モル当量)を、無水トルエン(0.085M)に溶解し、-78℃に冷却した。n-BuLi(1.2モル当量)を、5分間かけてゆっくり添加し、その後得られた混合物を、-78℃で攪拌させた。2時間後、R1COR2 (1.3モル当量)を添加し、この溶液を-78℃で維持した。1時間後、飽和NH4Cl水溶液を添加し、この溶液を室温に温めた。生成物を、EtOAc(3X)で抽出し、有機抽出物を一緒にし、乾燥し(Na2SO4)、濃縮し、カラムクロマトグラフィー(10％ EtOAc/ヘキサン-100％ EtOAc)で精製し、粗生成物を得た。これを直接一般的手順27で使用し、25を得た。
【０３２２】
一般的手順45
【０３２３】
【化９４】
2008510790.tif 000096
【０３２４】
DMF(48mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(1.8g, 6.04mmol)、シアン化亜鉛98％(2.07g, 12.07mmol)及び1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)-フェロセン97％(0.4g, 0.712mmol)の溶液へ、ジクロロメタンとの[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)-フェロセン]ジクロロパラジウム(II) (1:1)複合体(0.25g, 0.30mmol)を添加した。この反応混合物を、窒素大気下で150℃で一晩加熱した。反応液を、EtOAc(50mL)で希釈し、4:1:4飽和NH4Cl/28％NH4OH/H2O (2x28mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。粗混合物を、25％-50％(EtOAc/ヘキサン)の直線勾配により溶離シリカゲルカラムで精製し、2-[1-(2-アミノ-ピリジン-3-イルオキシ)-エチル]-3-クロロ-4-ジメチルアミノ-ベンゾニトリルを黄色固形物(収率37％)及び2-[1-(2-アミノ-ピリジン-3-イルオキシ)-エチル]-4-ジメチルアミノ-イソフタロニトリルを暗茶色固形物(収率33％)として得た。
【０３２５】
一般的手順46
【０３２６】
【化９５】
2008510790.tif 000097
【０３２７】
ジクロロメタン(7mL)中の4-ブロモ-イミダゾール(995mg, 6.77mmol)、水酸化カリウム(380mg, 6.77mmol)、炭酸カリウム(936mg, 6.77mmol)及びテトラ-n-ブチルアンモニウムブロミド(109mg, 0.339mmol)の混合物へ、ブロモ酢酸tert-ブチル(0.50mL, 3.4mmol)を添加した。一晩攪拌後、反応液を濾過した。濾液を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、酢酸エチルの溶離勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、(4-ブロモ-イミダゾール-1-イル)-酢酸tert-ブチルエステル(696mg, 79％)を得た。
【０３２８】
一般的手順47 
【０３２９】
【化９６】
2008510790.tif 000098
【０３３０】
ジオキサン中の4M塩酸(0.22mL, 0.89mmol)の溶液を、ジクロロメタン(2mL)中の(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-イミダゾール-1-イル)-酢酸tert-ブチルエステル(86mg, 0.18mmol)の溶液に添加した。2日間撹拌後、反応液を、回転蒸発により濃縮し、残渣を最小量のメタノールに溶解した。この溶液を、エーテルに滴下し、得られる混合物を一晩静置した。混合物を濾過し、沈殿をエーテルで洗浄し、風乾し、(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-イミダゾール-1-イル)-酢酸(83mg, 93％)を得た。
【０３３１】
一般的手順48
【０３３２】
【化９７】
2008510790.tif 000099
【０３３３】
ジメチルホルムアミド(5mL)中の4-ブロモ-イミダゾール(217mg, 1.48mmol)及び炭酸セシウム(875mg, 2.69mmol)の混合物を、30分間攪拌した。4-(2-クロロ-エチル)-モルホリン塩酸塩(250mg, 1.34mmol)を添加し、混合物を50℃に加熱した。一晩加熱後、反応液を、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン及びメタノールの混合物中に懸濁し、濾過した。濾液を、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、メタノールの溶離勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、4-[2-(4-ブロモ-イミダゾール-1-イル)-エチル]-モルホリン(148mg, 42％)を得た。
【０３３４】
一般的手順49
【０３３５】
【化９８】
2008510790.tif 000100
【０３３６】
イソオキサゾール(0.64mL, 10mmol)を、トリフルオロ酢酸(20mL)中のN-ヨードスクシンイミド(2.3g, 10mmol)の溶液へ添加した。一晩攪拌後、反応液へ、水(50mL)、ヘキサン(50mL)及び亜硫酸水素ナトリウムを添加した。これらの相を分離し、有機相を、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、回転蒸発により濃縮し、4-ヨード-イソオキサゾール(218mg, 11％)を得た。
【０３３７】
一般的手順50
【０３３８】
【化９９】
2008510790.tif 000101
【０３３９】
トリフルオロ酢酸(5mL)を、ジクロロメタン(15mL)中の6'-ブロモ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-[3,3']ビピリジニル-6-イル-ビス-(tert-ブトキシカルボニル)-アミン(1.3g, 2.0mmol)の溶液に添加した。3時間後、等量の水及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を添加した。これらの相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。一緒にした有機相を、Na2SO4上で乾燥し、回転蒸発により濃縮し、6'-ブロモ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-[3,3']ビピリジニル-6-イルアミン(968mg, 106％)を得た。
チューブに、6'-ブロモ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-[3,3']ビピリジニル-6-イルアミン(92mg, 0.20mmol)、4-ピロリジン-1-イル-ピペリジン(0.62g, 4.0mmol)及びN-メチルピロリジノン(0.8mL)をチャージした。チューブを密封し、混合物を80℃で一晩加熱した。温度を100℃に上げ5.5時間維持し、その後加熱を停止した。反応液を、酢酸エチルと水の間で分配した。これらの相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機相を、MgSO4上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、メタノール、水酸化アンモニウムの溶離勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、5"-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-4-ピロリジン-1-イル-3,4,5,6-テトラヒドロ-2H-[1,2',5',3"]ターピリジン-6"-イルアミン(53mg, 50％)を得た。
【０３４０】
一般的手順51
【０３４１】
【化１００】
2008510790.tif 000102
【０３４２】
水素化ナトリウム(56mg, 2.3mmol)を、DMSO(8mL)中のピペリジン-4-オール(214mg, 2.11mmol)の溶液へ添加した。30分間攪拌後、2,5-ジブロモピリジンを添加した。24時間攪拌後、水素化ナトリウム(56mg, 2.3mmol)を添加した。更に24時間攪拌後、反応液を、酢酸エチルと水の間で分配した。これらの相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機相を、MgSO4上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、メタノール、水酸化アンモニウムの溶離勾配を使用する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、5-ブロモ-2-(ピペリジン-4-イルオキシ)-ピリジン(316mg, 58％)を得た。
【０３４３】
一般的手順52 
【０３４４】
【化１０１】
2008510790.tif 000103
【０３４５】
チューブに、2,5-ジブロモピリジン(0.24g, 1.0mmol)、4-アミノ-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.22g, 1.1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(0.19mL, 1.1mmol)及びN-メチルピロリジノン(1.0mL)をチャージした。このチューブを密封し、混合物を80℃で一晩加熱した。温度を120℃に上昇し、一晩加熱した。反応液を、酢酸エチルと水の間で分配した。これらの相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機相を、MgSO4上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。残渣を、酢酸エチル及びヘキサンの溶離勾配を使用する、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、4-(5-ブロモ-ピリジン-2-イルアミノ)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(36mg, 10％)を得た。
【０３４６】
一般的手順53
【０３４７】
【化１０２】
2008510790.tif 000104
【０３４８】
4-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-エトキシ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ベンゾイル)-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル：DMSOの4mLへ、エタノール0.124mL、その後NaH 32mgを添加した。30分間攪拌後、250mg 4-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ベンゾイル)-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルの250mgを添加し、この反応液を、40℃に加熱した。3時間後、反応液を冷却し、水に注ぎ沈殿させた。pH6へ中和後、黄褐色固形物200mgを単離した(77％)。
【０３４９】
一般的手順54
【０３５０】
【化１０３】
2008510790.tif 000105
【０３５１】
(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-ヒドロキシ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-フェニル)-ピペラジン-1-イル-メタノン：4-[4-(6-アミノ-5-｛1-[2,6-ジクロロ-3-(2,4,6-トリメトキシ-ベンジルオキシ)-フェニル]-エトキシ｝-ピリジン-3-イル)-ベンゾイル]-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(一般的手順53から)の140mgへ、1mL TFAを添加し、この溶液は、直ぐに赤く変色し、引き続き3秒後にトリエチルシラン100μLを添加した。この溶液は黄変した。4時間撹拌後、トルエン5mLを添加し、溶媒を真空で除去した。10％MeOH/CH2Cl2から0.5％〜1％NH4OH/9.5〜9％MeOH/90％ CH2Cl2によるクロマトグラフィーは、白色固形物55mgを収率62％で得た。
【０３５２】
一般的手順55
【０３５３】
【化１０４】
2008510790.tif 000106
【０３５４】
2-(4-ブロモ-2-メトキシフェノキシ)エタノール(8a)：  炭酸カリウム(1.4g, 10mmol)を、不活性大気下でトルエン5mL中のエチレンカーボネート(1.8g, 20mmol)及び4-ブロモ-2-メトキシフェノール(1.05g, 5mmol)の溶液へ添加した。反応液を、115℃で12時間加熱した。水(50mL)及び酢酸エチル(2x100mL)を、撹拌している反応混合物へ添加した。有機層を一緒にし、乾燥し、濾過し、蒸発させ、黄色油状残渣を得た。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン中40→45％EtOAcで溶離)により精製し、化合物8aを明茶黄色油状物(1g；4.13mmol；収率82.6％)として得た。
【化１０５】
2008510790.tif 000107
【０３５５】
4-ブロモ-1-(2-クロロエトキシ)-2-メトキシベンゼン(8b)：  チオニルクロリド(0.3mL)を、氷浴中でピリジン1mL中の化合物1の溶液へ添加した。反応液を、氷浴中で10分間攪拌し、その後100℃で2時間加熱した。反応液を、室温に冷却し、希HCl(1M)で中和した。CH2Cl2 (2x100mL)を添加し、水溶液を抽出した。一緒にした有機層を、Na2SO4上で乾燥し、その後減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン中10→15％ EtOAcで溶離)で精製し、化合物8bを無色の油状物(485mg；1.84mmol；収率50.3％)として得た。
【化１０６】
2008510790.tif 000108
【０３５６】
化合物9：  式9の化合物を、下記の例証的手順に従い形成することができる：化合物A18(1.3モル当量)を、DME 7mL中のハロゲン化アリール(0.51mmol)の溶液に添加した。この混合物に、窒素を数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。H2O 1.5mL中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を、この反応混合物へ添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。反応混合物へ水(20mL)を添加し、反応を停止した。その後EtOAc(50mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物9を得た。
【０３５７】
化合物10：  式10の化合物を、下記の例証的手順に従い形成することができる：アミン(7モル当量)を、2-メトキシエタノール3mL中の化合物9(0.17mmol)の溶液に添加した。得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。反応混合物へ水(20mL)を添加し、反応を停止した。その後EtOAc(50mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物10を得た。
【０３５８】
一般的手順56
【０３５９】
【化１０７】
2008510790.tif 000109
【０３６０】
化合物14：  式14の化合物を、下記の例証的手順に従い形成することができる：リチウムヘキサメチルジシラジド(1.2モル当量；THF中1M)を、THF 2mL中のアルコール(1mmol)の溶液に添加した。混合物を、室温で窒素大気下で30分間攪拌し、その後5-ブロモ-2-クロロピリミジン(1モル当量)を添加した。得られた溶液を、75℃で12時間加熱した。反応混合物へ水(20mL)を添加し、反応を停止した。その後EtOAc(50mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中EtOAcで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物14を得た。
【０３６１】
化合物11：  化合物A18(1.3モル当量)を、DME 24mL中の5-ブロモ-2-クロロピリミジン又は化合物14(1mmol)の溶液に添加した。混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。反応混合物へH2O 3mL中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。反応混合物へ水(50mL)を添加し、反応を停止した。その後EtOAc(100mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中40→55％EtOAcで溶離)により精製し、化合物11を得た。
【０３６２】
化合物12：  アミン(2モル当量)を、n-ブタノール3mL中の化合物11の溶液に添加した。反応混合物を、マイクロウェーブで120℃で30分間照射した。得られた混合物を、H2O及びEtOAc(100mL；v:v:1:1)の混合物へ注いだ。有機層を乾燥し、濾過し、蒸発させ、明茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物12を得た。
【０３６３】
化合物13：  酸(16モル当量未満)を、化合物12(0.14mmol)へ室温で添加した。得られた溶液を、室温で攪拌し、60℃で12時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、EtOAc及びCH2Cl2で溶離)精製し、所望のアミド生成物である化合物13を、黄味がかった白色固形物として得た。
【０３６４】
一般的手順57
【０３６５】
【化１０８】
2008510790.tif 000110
【０３６６】
化合物15：  水素化ナトリウム(1.3モル当量)及びRX(1.1モル当量)を、DMF 3mL中の2-アミノ-5-ブロモピリジン(0.84mmol)溶液に添加した。反応混合物を、マイクロウェーブで100℃で20分間照射した。得られた混合物を、H2O及びEtOAc(100mL；v:v:1:1)の混合物へ注いだ。有機層を乾燥し、濾過し、蒸発させ、明茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物15を得た。
【０３６７】
化合物16：  化合物A18(1.3モル当量)を、DME 5mL中の化合物15(0.25mmol)の溶液に添加した。混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。反応混合物へH2O 0.8mL中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。反応混合物へ水(50mL)を添加し、反応を停止した。その後EtOAc(100mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)により精製し、所望の生成物である化合物16を得た。
【０３６８】
化合物17：  酸(16モル当量未満)を、化合物16(0.114mmol)へ室温で添加した。得られた溶液を、室温で攪拌し、60℃で12時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、EtOAc及びCH2Cl2で溶離)精製し、所望のアミド生成物である化合物17を、黄味がかった白色固形物として得た。
【０３６９】
一般的手順58
【０３７０】
【化１０９】
2008510790.tif 000111
【０３７１】
1-(t-ブトキシカルボニル)アゼチジン-3-カルボン酸(1-1)(AXL016917, 1000mg, 4.97mmol)を、MeOH(5mL)/トルエン(20mL)に溶解し、その後0℃に冷却した。その後TMSCHNN(トリメチルシリルジアゾメタン)(7.45mmol)を、15分かけて滴下し、若干の泡立ちを認めた。その色は透明になり始め、次第に黄色に変色した。溶液を0℃で10分間攪拌し、その後室温で30分間温めた。その後溶液を濃縮し、ポンプにかけ、トルエンを除去し、1-t-ブチル3-メチルアゼチジン-1,3-ジカルボキシラート(1-2)1.055gを得、これを精製せずに次工程に直接使用した(粗収率99％)。
【０３７２】
1-tert-ブチル3-メチルアゼチジン-1,3-ジカルボキシラート(1055mg, 4.90mmol)を、THF(17mL)に溶解し、その後0℃に冷却した。MeOH(0.397mL, 9.80mmol)及びLiBH4(14.7mmol)を逐次添加した。反応液を、室温へ3時間温めた。次に10％水性酒石酸ナトリウムカリウム四水和物(ロッシェル塩)(30mL)及びEtOAc(30mL)を添加し、溶液を室温で30分間攪拌した。有機層を分離し、その後乾燥し(Na2SO4)、濃縮し、t-ブチル3-(ヒドロキシメチル)アゼチジン-1-カルボキシラート(1-3)674mgを、粗生成物(透明な油状物)として得た。生成物を精製せずに次工程に直接使用した。
【０３７３】
CH2Cl2(13mL, 0.25M)中にt-ブチル3-(ヒドロキシメチル)アゼチジン-1-カルボキシラート(674mg, 3.60mmol)を溶解し、その後Et3N (1.0mL, 7.20mmol)、DMAP(44mg, 0.360mmol)、及び塩化メタンスルホニル(0.31mL, 3.96mmol)を0℃で逐次添加し、MsCl添加をゆっくり行った。溶液を室温で1時間温めた。15時間後、飽和NaHCO3水溶液(50mL)を添加し、次に生成物をCH2Cl2 (2x50mL)で抽出し、一緒にした有機抽出物を、ブライン(50mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(Biotage Horizon−10％EtOAc/ヘキサン−100％ EtOAc)で精製し、(1-4)962mgを油状物として得た(定量的)。
【０３７４】
NaH(95％, 96mg, 3.99mmol)を、N2下、室温で、DMF(10mL)中で一緒にした。その後4-ブロモピラゾール(533mg, 3.63mmol)を添加し、混合物を室温で攪拌した。30分後、(1-4)を添加し、溶液を95℃に加熱した。2時間後、飽和NH4Cl水溶液(50mL)を添加し、次にEtOAc(50mL)を添加した。有機抽出物を乾燥し(Na2SO4)、濃縮し、その後短いシリカゲルパッドを通し、50％EtOAc/ヘキサンで溶離し、粗(1-5)846mgを得、これを次工程に直接使用した(74％粗収率)。
【０３７５】
(1-5)(846mg, 2.68mmol)、(1-6)(815mg, 3.21mmol)、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)-フェロセン)ジクロロパラジウム(108mg, 0.133mmol)、及びKOAc(893mg, 9.10mmol)を、DMSO中で一緒にし(10mL, N2で10分間掃流)、その後溶液を80℃に温めた。16時間後、溶液を、セライトを通して濾過し、その後H2O (50mL)及びEtOAc (50mL)を添加した。有機相を抽出し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮し、その後50％EtOAc/ヘキサンと共にシリカプラグを通した。この溶媒を濃縮し、粗(1-7) 1.22gを得、これを次工程で直接使用した。
【０３７６】
ボロン酸エステル(1-7)(4144mg, 11.4mmol)、(1-8)(2890mg, 7.60mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(534mg, 0.760mmol)、DME (40mL, 30分間N2で脱気した)、及び1N Na2CO3 (40mL, 30分間N2で脱気した)を一緒にし、80℃で加熱した。16時間後、反応液を室温に冷却し、EtOAc (80mL)を添加した。溶液を、セライトを通して濾過し、その後水(80mL)を添加した。有機層を分離し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、(1-9)1486mgを黄褐色固形物として得た(36％)。
【０３７７】
DOWEX 50WX2-400イオン交換樹脂1gを、H2O (500mL)、1:1 H2O/MeOH、MeOH (5X 250mL)、CH2Cl2 (500mL)、及びヘキサン(500mL)で洗浄することにより調製した。その後DOWEXを、真空炉で40℃で1日乾燥した。(1-9)を、MeOHに溶解し、次にDOWEX(588mg, 1.096mmol)を添加した。溶液を室温で2時間攪拌した。溶液を次に濾過し、樹脂をMeOH(3X200mL)で洗浄し、洗浄液を廃棄した。その後樹脂を、3.5M NH3/MeOHで洗浄し、収集した。次に溶液を濃縮し、(1-10) 374mgを粘着性固形物として得た(78％)。
【０３７８】
式(1-11)の化合物を形成するために、下記の例証的手順に従うことができる。(1-10)1モル当量を、DMF又はCH2Cl2に溶解し、次に塩基(3モル当量)及び/又はカップリング剤(1.5モル当量)を添加した。この溶液へ、X-R(1.1モル当量)を添加し、ここでXは、例えばCl、Br、I、OMs、COCl、CO、COOH、エチレン又はカーボネートであり、及びRは、本願明細書の実施例に示されたような所望の基又は同様の基である。得られた溶液は、室温で4時間攪拌した。H2O及びEtOAcを添加し、有機相を抽出し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮した。粗生成物を、分取HPLC又は当該技術分野において周知の他の方法により精製することにより、精製し、生成物(1-11)を得た。
【０３７９】
一般的手順59
【０３８０】
【化１１０】
2008510790.tif 000112
【０３８１】
3-アゼチジノール(2-2)： MeOH 50mL中のN-ベンズヒドリルアゼチジン-3-オール塩酸塩(2.76g, 10.0mmol)の水酸化パラジウム、炭素に担持された20％Pd(無水塩基)(400mg)の反応混合物を、55psiで48時間水素化した。反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、MeOHで洗浄した。濾液を減圧下で室温水浴で濃縮した。残渣を、エーテル(3x30ml)で処理し、溶媒を廃棄した。固形物を風乾し、塩酸塩生成物(2-2)571mgを白色固形物として得た(収率52％)。
【化１１１】
2008510790.tif 000113
【０３８２】
3-ヒドロキシ-アゼチジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(3-3)：EtOH 10mL中の化合物(2-2)(570mg, 5.20mmol)の冷(0℃浴)で攪拌した溶液に、Et3N (1.8mL, 13.0mmol)及びジカルボン酸ジ-tert-ブチル(1.702g, 7.38mmol)を添加した。得られた透明な溶液の混合物を、室温で一晩攪拌した。この反応混合物を、真空で濃縮した。残渣を、EtOAc(200mL)と0.5Nクエン酸溶液(30mL)；ブライン(30mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、次に真空で濃縮し、 (2-3) 899mgを透明な油状物として得た(52％)。
【化１１２】
2008510790.tif 000114
【０３８３】
3-メタンスルホニルオキシ-アゼチジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(2-4)：CH2Cl2 10mL中の化合物(2-3)(466mg；2.69mmol)のEt3N(0.75mL；5.38mmol)及び4-(ジメチルアミノ)-ピリジン(33mg, 0.269mmol)との0℃の溶液へ、塩化メタンスルホニル(0.25mL 3.23mmol)を添加した。得られた茶色溶液の混合物を、0℃から室温で一晩攪拌した。この反応混合物を、NaHCO3で反応停止し、その後CH2Cl2(200mL)と飽和NaHCO3溶液(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、次にシリカゲルパッドを通して濾過し、ヘキサン:EtOAc/1:1で溶離し；濾液を真空で濃縮し、 (2-4) 614mgを黄色油状物として得た(収率91％)。
【化１１３】
2008510790.tif 000115
【０３８４】
1-(3-アゼチジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル)-4-ブロモピラゾール(2-6)：5mLのマイクロウェーブチューブに、DMF 2mLを含む鉱油(73mg, 1.82mmol)中の化合物(2-4)(304mg, 1.21mmol)；4-ブロモピラゾール(2-5, 178mg, 1.21mmol)及びNaH 60％を充填した。得られた混合物を、110℃で30分間マイクロウェーブ処理した。反応混合物を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)；ブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、次に真空で濃縮し、(2-6) 360mgを黄色油状物として得た(98％)。
【化１１４】
2008510790.tif 000116
【０３８５】
tert-ブチル3-[4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3-ジオキソボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール-1-イル]アゼチジン-1-カルボキシラート(2-8)：化合物(2-6)(225mg, 0.74mmol)及びビス(ピナコラート)ジボロン(2-7, 227mg, 0.89mmol)のDMSO 3mL中のKOAc(247mg, 2.52mmol)との反応混合物を、N2で15分間掃流し、その後PdCl2(dppf)2CH2Cl2(30mg, 2.52mmol)を添加した。得られた混合物を、80℃でN2下で一晩攪拌した。これを室温に冷却した後、混合物を、セライトパッドを通して濾過し、EtOAcで十分洗浄した。濾液を、H2O (2x50mL)、ブライン(50mL)で抽出した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、次に真空で濃縮した。その後残渣を、シリカゲルパッドを通して濾過し、ヘキサン:EtOAc/3:2で溶離した。濾液を真空で濃縮し、(2-8)250mgを透明な油状物(収率97％)として得た。
【化１１５】
2008510790.tif 000117
【０３８６】
tert-ブチル3-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-1H-ピラゾール-1-イル)アゼチジン-1-カルボキシラート(2-10)：無水エチレングリコールジメチルエーテル(DME)13mL中の化合物(2-8)(459mg；1.31mmol)及び3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-ヨードピリジン-2-アミン(2-9)(374mg； 0.88mmol)の反応混合物を、N2で15分間掃流し、その後Pd(ll)(PPh3)2Cl2 (46mg, 0.07mmol)を添加し、続けてN2で更に15分間掃流した。別の1.0N Na2CO3溶液(3.9mL；3.9mmol)を、N2で15分間掃流後添加した。得られた混合物を、85℃、N2下で一晩攪拌した。反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、MeOHで十分洗浄した。濾液を、真空で濃縮した。残渣を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)；ブライン(50mL)間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、その後真空で濃縮した。残渣を、Biotageシステム(25M, 100％CH2Cl2；100％CH2Cl2 から10％MeOHを伴う90％CH2Cl2へ)により精製し、所望の画分を収集し、(2-10) 421mgを茶色のグリースとして得た(収率92％)。
【化１１６】
2008510790.tif 000118
LCMS C24H26C24Cl2FN5O3  (M+H)の計算値523、実測値523。
【０３８７】
5-(1-アゼチジン-3-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]イリジン-2-アミン(2-11)：CH2Cl25mL中のジオキサン(2.0mL；8.1mmol)中の4.0M HClを伴う化合物(2-10)(421mg；0.81mmol)の反応混合物を、室温で2.0時間攪拌した。反応混合物を、真空で濃縮した。残渣を、EtOAcで処理した。沈殿した固形物を濾過し、EtOAc、ヘキサンで十分洗浄し、その後減圧下で乾燥し、(2-11) 275mgを砂色固形物の塩酸塩として得た(収率81％)。
【化１１７】
2008510790.tif 000119
LCMS C19H18Cl2FN5O  (M+H)の計算値423、実測値423。
【０３８８】
式2-12の化合物を、以下の例証的手順に従い調製することができる：DMF 2.0mL中のEt3N(2.0当量)を伴う化合物(2-11)(1.0当量)の反応混合物に室温で、臭化アルキル(1.1当量)を添加した。得られた混合物を、N2下で室温で一晩攪拌した。反応混合物を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)；ブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、その後真空で濃縮した。残渣を、Dionexシステム(5％から95％MeCN:H2O w 0.1％HOAc緩衝液)により精製し、所望の画分を収集し、(2-12)を得た。
あるいは、式2-12の化合物を、以下の例証的手順に従い調製することができる：アルキルアミン(1.0当量)のDMF 2.0mL中のiPr2EtN(ジイソプロピルエチルアミン)(3.0当量)との反応溶液へ、HATU(1.5当量)を添加した。30分間攪拌後、化合物(2-11)(1.0当量)を添加した。得られた混合物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)とブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮した。残渣を、Dionexシステム(5％〜95％McCN:H2O w 0.1％HOAc)により精製し、所望の生成物を収集し、(2-12)を得た。
【０３８９】
一般的手順60：
【０３９０】
【化１１８】
2008510790.tif 000120
【０３９１】
tert-ブチル1-オキサ-6-アザスピロ[2.5]オクタン-6-カルボキシラート(3-2)：ジメチルスルホオキソニウムメチリドの溶液を、鉱油(440mg；11.0mmol)中のNaH 60％分散体及び無水DMSO 5mL中のトリメチルスルホオキソニウムヨージド(2.421g；11.0mmol)から、N2下で調製した。DMSO 5mL中の1-Boc-4-オキソ-1-ピペリジンカルボキシラート(3-1, 1.993g；10.0mmol)の別の溶液を滴下した。得られた混合物を、55℃で6時間攪拌した。冷却した反応混合物を、氷-H2Oへ注ぎ、EtOAc(2x200mL)で抽出した。一緒にした有機層を、H2O(50mL)；ブライン(50mL)で洗浄し、その後乾燥し(Na2SO4)、次に真空で濃縮し、(3-2)1.4791gを黄色油状物として得た(収率69％)。
【化１１９】
2008510790.tif 000121
【０３９２】
tert-ブチル4-ヒドロキシ-4-｛[4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール-1-イル]メチル｝ピペリジン-1-カルボキシラート(3-4)：DMF 3mL中の化合物(3-2)(214mg；1.0mmol)及び4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(3-3, 194mg；1.0mmol)の、鉱油(60mg；1.5mmol)中のNaH 60％分散体との反応混合物を、90℃で3時間攪拌した。反応混合物を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(50mL)とブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮し、(3-4) 361mgを黄色グリースとして得た(収率89％)。
【化１２０】
2008510790.tif 000122
LCMS C20H34BN3O5(M+H)の計算値408、実測値408。HPLC純度85％。
【０３９３】
tert-ブチル4-[(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-1H-ピラゾール-1-イル)メチル]-4-ヒドロキシピペリジン-1-カルボキシラート(3-6)：無水エチレングリコールジメチルエーテル(DME) 9.0mL中の化合物(3-4)(361mg；0.89mmol)と3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-ヨードピリジン-2-アミン(3-5)(378mg；0.89mmol)の反応混合物に、N2を15分間掃流し、その後Pd(II)(PPh3)2Cl2 (32mg, 0.05mmol)を添加し、連続してN2を更に15分間掃流した。別の1.0N Na2CO3溶液(3.9mL；3.9mmol)を、N2を15分間掃流後添加した。得られた混合物を、N2下85℃で一晩撹拌した。反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、MeOHで十分洗浄した。濾液を真空で濃縮した。残渣を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)；ブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、その後真空で濃縮した。残渣を、Dionexシステム(25％〜95％MeCN:H2O w 0.1％ HOAc緩衝液)により精製し、所望の画分を収集し、(3-6) 147mgを白色固形物として得た(収率28％)。
【化１２１】
2008510790.tif 000123
LCMS C27H32Cl2FN5O4 (M+H)の計算値581、実測値581。HPLC純度87％。
【０３９４】
4-[(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-1H-ピラゾール-1-イル)メチル]ピペリジン-4-オール(3-7)：CH2Cl2 5mL中での化合物(3-6)(145mg；0.25mmol)の、ジオキサン(2.0mL；8.1mmol)中の4.0M HClとの反応混合物を、室温で2.0時間攪拌した。反応混合物を、真空で濃縮した。残渣を、Dionexシステム(5％〜95％MeCN:H2O w 0.1％ HOAc緩衝液)により精製し、所望の画分を収集し、(3-7) 76mgを黄色グリースとして得た(収率63％)。
【化１２２】
2008510790.tif 000124
LCMS C22H24Cl2FN5O2 (M+H)の計算値481、実測値481。HPLC純度98％。分析(C22H24Cl2FN5O2x2.2HOAcx2.3H2O)C,H,N。
【０３９５】
一般的手順61：
【０３９６】
【化１２３】
2008510790.tif 000125
【０３９７】
エチル2-[(4-ブロモ-1H-ピラゾール-1-イル)メチル]シクロプロパンカルボキシラート(4-3)：CH2Cl2 12mL中のエチル2-(ヒドロキシメチル)シクロプロパンカルボキシラート(4-1)(577mg；4.0mmol)の、Et3N(1.1mL；8.0mmol)及びDMAP(49mg；0.4mmol)との0℃での反応溶液へ、塩化メタンスルホニル(0.4mL；4.8mmol)を添加した。得られた茶色懸濁液の混合物を、0℃から室温で、N2下で一晩攪拌した。反応混合物を、NaHCO3で反応停止し、その後CH2Cl2(200mL)と飽和NaHCO3溶液(50mL)；ブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、その後シリカゲルパッドで濾過し、ヘキサン:EtOAc/1:1で溶離した。濾液を、真空で濃縮し、エチル2-｛[(メチルスルホニル)オキシ]メチル｝シクロプロパンカルボキシラート880mgを黄色油状物として得た(収率99％)。
【化１２４】
2008510790.tif 000126
【０３９８】
DMF 3.0mL中のエチル2-｛[(メチルスルホニル)オキシ]メチル｝シクロプロパンカルボキシラート(880mg；4.0mmol)、4-ブロモピラゾール(4-2, 588mg, 4.0mmol)及び鉱油(240mg, 6.0mmol)中のNaH 60％の反応混合物を形成した。得られた混合物を、90℃でN2下で4時間攪拌した。反応混合物を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)；ブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、その後真空で濃縮し、(4-3) 812mgを黄色油状物として得た(74％)。
【化１２５】
2008510790.tif 000127
LCMS C10H13BrN2O2(M+H)の計算値274、実測値274。HPLC純度95％。
【０３９９】
エチル2-｛[4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3-ジオキソボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール-1-イル]メチル｝シクロプロパンカルボキシラート(4-4)：化合物(4-3)(812mg, 2.97mmol)及びビス(ピナコレート)ジボロン(906mg, 3.57mmol)の、DMSO 10.0mL中のKOAc(991mg, 10.10mmol)との反応混合物を、N2で15分間掃流し、次にPdCl2(dppf)2 CH2Cl2 (122mg, 0.15mmol)を添加した。得られた混合物を、80℃でN2下で一晩攪拌した。室温に冷却した後、混合物をセライトパッドを通して濾過し、EtOAcで十分に洗浄した。濾液を、H2O (2x50mL)、ブライン(50mL)で抽出した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、その後真空で濃縮した。その後残渣を、シリカゲルパッドを通して濾過し、ヘキサン:EtOAc/3:1で溶離した。濾液を、真空で濃縮し、(4-4) 945mgを黄色油状物として得た(収率98％)。
【化１２６】
2008510790.tif 000128
【０４００】
エチル2-[(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-1H-ピラゾール-1-イル]メチル)シクロプロパンカルボキシラート(4-6)：無水エチレングリコールジメチルエーテル(DME) 20.0mL中の化合物(4-4) (643mg；2.01mmol)及び3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-ヨードピリジン-2-アミン(4-5)(572mg；1.34mmol)の反応混合物を、N2で15分間掃流し、次にPd(II)(PPh3)2Cl2 (71mg, 0.1mmol)を添加し、続けてN2で更に15分間掃流した。別の1.0N Na2CO3溶液(6.0mL；6.0mmol)を、N2で15分間掃流した後に添加した。得られた混合物を、85℃でN2下で一晩攪拌した。反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、MeOHで十分洗浄した。濾液を、真空で濃縮した。残渣を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)；ブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、次に真空で濃縮した。残渣を、Biotageシステム(25M CH2Cl2 100％；CH2Cl2 100％〜90％CH2Cl2:10％MeOH)により精製し、所望の画分を収集し、(4-6) 600mgを茶色グリースとして得た(収率91％)。
【化１２７】
2008510790.tif 000129
LCMS C23H23Cl2FN4O3 (M+H)の計算値494、実測値494。HPLC純度95％。
【０４０１】
2-[(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-1H-ピラゾール-1-イル)メチル]シクロプロパンカルボン酸(4-7)：MeOH 5.0mL中の化合物(4-6)(377mg, 0.76mmol)の反応溶液に、室温で、N2下で、別の2.0N NaOH(2)(1.5mL, 3.04mmol)溶液を添加した。得られた混合物を、80℃で3時間攪拌した。反応混合物を、真空で濃縮し、MeOHのほとんどを除去し、2M HClでpH4.0に酸性とした。この混合物をCH2Cl2 (2x200mL)で抽出し；有機層をブライン(50mL)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮し、(4-7) 324mgを黄色固形物として得た(収率92％)。
【化１２８】
2008510790.tif 000130
LCMS C21H19Cl2FN4O3 (M-H)の計算値463、実測値463。HPLC純度87％。
【０４０２】
2-[(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-1H-ピラゾール-1-イル)メチルN-メチルシクロプロパンカルボキシアミド(4-8)(R=Me, R’=H)：DMF 1.0mL中での(4-7)(1.0当量)のiPr2EtN (2.0当量)との反応溶液へ、HATU(1.5当量)を添加した。30分間攪拌後、アルキルアミン(1.1当量)を添加した。得られた混合物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(2x50mL)とブライン(50mL)の間で分配した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮した。試料を、EtOAc(200mL)と飽和NaHCO3溶液(50mL)とブライン(50mL)の間で分配することにより、遊離塩基とした。この有機層を乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮した。残渣を、H2O 1.0mLで処理し、凍結乾燥し、(4-8)を得た。
【０４０３】
一般的手順62：
【０４０４】
【化１２９】
2008510790.tif 000131
【０４０５】
無水DMF(100mL)中の5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(12.83g, 33.76mmol)の溶液へ、ジカルボン酸ジ-tert-ブチル(21.25g, 97.35mmol)及び4-ジメチルアミノピリジン(0.793g, 6.49mmol)を添加した。反応液を、窒素下、周囲温度で18時間攪拌した。この混合物へ、飽和NaHCO3溶液(300mL)を添加し、EtOAc(3x250mL)で抽出した。一緒にした抽出物を、水(5x100mL)、飽和NaHCO3、及びブラインで洗浄し、その後Na2SO4上で乾燥した。濾過、蒸発及び高圧乾燥後、ジ-boc保護された5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミンを、乳-白色泡状固形物として得た(19.59g, 収率100％)。
【化１３０】
2008510790.tif 000132
【０４０６】
DMSO(68mL)中のジ-boc保護された5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(19.58g, 33.76mmol)の溶液へ、酢酸カリウム(11.26g, 114.78mmol)及びビス(ピナコラト)ジボロン(10.29g, 40.51mmol)を添加した。混合物を脱気し、窒素で3回チャージし、その後Pd(dppf)Cl2・CH2Cl2(1.38g, 1.69mmol)を添加した。反応混合物を脱気し、窒素で3回チャージし、その後80℃の油浴で、窒素下で12時間攪拌した。反応液を周囲温度に冷却し、酢酸エチル(100mL)で希釈し、セライトパッドを通して濾過し、これを酢酸エチルで洗浄した。一緒にした酢酸エチル溶液(700mL)を、水(5x100mL)、ブライン(100mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。濾過及び濃縮後、残渣を、シリカゲルカラム上で、EtOAc/ヘキサン(0％〜50％)で溶離し、ジ-boc保護された3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミンを、泡状固形物として得た(20.59g, 収率97％)。
【化１３１】
2008510790.tif 000133
【０４０７】
CH2Cl2(80mL)中のジ-boc保護された3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン(20.34g, 32.42mmol)の溶液へ、ジオキサン中の無水HCl(4N, 40.5mL, 162mmol)溶液を添加した。反応溶液を、40℃の油浴で、窒素下で12時間攪拌した。反応混合物を周囲温度へ冷却し、EtOAc(400mL)で希釈し、その後水層が塩基性となるまで(pH＞8)、慎重にしかし迅速に飽和NaHCO3で洗浄した。有機層を、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥した。濾過、蒸発及び高圧乾燥後、3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミンを、乳-白色泡状固形物として得た(13.48g, 収率97％)。
【化１３２】
2008510790.tif 000134
【０４０８】
DME(40mL)中の3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン(4.2711g, 10.0mmol)及び4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(手順11参照)(3.9628g, 12.0mmol)の攪拌溶液へ、水(10mL)中のNa2CO3(3.1787g, 30.0mmol)溶液を添加した。この溶液を脱気し、窒素を3回チャージした。この溶液へ、Pd(PPh3)2Cl2(351mg, 0.50mmol)を添加した。反応溶液を脱気し、再度窒素を3回チャージした。反応溶液を、87℃の油浴で約16時間(又はボランピナコールエステルが消費されるまで)攪拌し、周囲温度に冷却し、EtOAc (200mL)で希釈した。反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、EtOAcで洗浄した。EtOAc溶液を、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルカラム上で、EtOAc/ヘキサンシステム(0％EtOAc〜100％EtOAc)により精製し、4-(4-｛6-アミノ-5-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(3.4167g, 収率65％, 純度〜95％)を得、Rfは0.15であった(50％ EtOAc/ヘキサン)。 MS m/e 550 (M+1)+。
【０４０９】
メタノール(5mL)又はジクロロメタン(30mL)中の4-(4-｛6-アミノ-5-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(566.7mg, 1.03mmol)の溶液へ、4N HCl/ジオキサン(15mL)を添加した。溶液を、約1時間又は脱-保護が完了するまで、攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、メタノール中で溶解し、逆相C-18分取HPLCで、0.1％酢酸5％〜30％の直線勾配を伴うアセトニトリル/水により溶離し、精製した。凍結乾燥後、3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン酢酸塩を、白色固形物として得た(410mg, 収率78％, HPLC純度100％, 鏡像体過剰率96.4％)。
【化１３３】
2008510790.tif 000135
【０４１０】
一般的手順63：
【０４１１】
【化１３４】
2008510790.tif 000136
【０４１２】
CH2Cl2(2mL)中の塩酸塩(手順6)としての3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン(150mg, 0.288mmol)の懸濁液へ、NEt3(0.121mL, 0.863mmol)を添加し、30分間室温で攪拌した。反応液を、0℃に冷却し、酢酸クロロカルボニルメチルエステルを添加し、1時間室温で攪拌した。反応液を、LC-MSによりモニタリングし、完全に所望の生成物へ転化後、水(2mL)を添加した。反応液を、EtOAc (4x10mL)で抽出し、Na2SO4上で乾燥し、濃縮し、定量的収率の酢酸2-[4-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-オキソ-エチルエステル(164mg, 定量)を得た。
【０４１３】
MeOH(4mL)中の酢酸2-[4-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-オキソ-エチルエステル(164mg, 0.298mmol)の溶液へ、水1mLに溶解したLiOH(7mg, 0.298mmol)を添加した。反応液を、室温で30分間攪拌し、LC-MSは、1-[4-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノンへの完全な転化を示した。この生成物を、逆相C-18分取HPLCで、0.1％酢酸を有するアセトニトリル/水10％〜40％で溶離することにより精製した。
【０４１４】
一般的手順64：
【０４１５】
【化１３５】
2008510790.tif 000137
【０４１６】
攪拌棒が入った100mLのフラスコを、炉で乾燥し、乾燥した窒素大気中で冷却した。このフラスコに、ゴム製シリンジキャップを装着した。フラスコを、窒素下で氷-水浴中に浸漬し、THF中の1.0Mボラン溶液1.6mL(1.6mmol)を投入した。その後無水THF(1.0mL)中の2-(4-｛5-アミノ-6-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-2-メチル-プロピオン酸(手順5)(0.1g, 0.221mmol)を投入した。得られた混合物を、窒素下周囲温度で5時間攪拌し、6N HCl(1.1mL)でゆっくり添加し、その後H2O (1.1mL)及びMeOH(7.4mL)を投入した。反応混合物を、連続して一晩攪拌した。ほとんどの溶媒を、真空で蒸発させ、その後1N NaOH溶液を使用し、pHを11に調節した。水を添加し、溶液を、EtOAc(3x30mL)で抽出し、Na2SO4上で乾燥した。濾過及び濃縮後、粗生成物を、逆相分取HPLCで、0.1％酢酸を含有するアセトニトリル/水10％〜60％により溶離し、精製した。純粋な画分の凍結乾燥後、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-2-メチル-プロパン-1-オール酢酸塩を、白色固形物として得た(21mg, 収率22％)。
【０４１７】
一般的手順65：
【０４１８】
【化１３６】
2008510790.tif 000138
【０４１９】
CH2Cl2(100mL)中の4-ヒドロキシ-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(7.94g, 39.45mmol)の0℃に冷却した攪拌溶液へ、NEt3(5.54mL, 39.45mmol)をゆっくり添加し、引き続き塩化メタンスルホニル(3.06mL, 39.45mmol)及びDMAP(48mg, 0.39mmol)を添加した。混合物を、室温で一晩攪拌した。この混合物へ、水(30mL)を添加した。CH2Cl2(3x30mL)で抽出し、引き続き乾燥し(Na2SO4)、溶媒を真空で除去し、4-メタンスルホニルオキシ-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを白色固形物として得た(11.00g, 収率＞99％)。
【化１３７】
2008510790.tif 000139
【０４２０】
無水DMF(96mL)中の4-ブロモ-ピラゾール(10.44g, 71.03mmol)の0℃に冷却した攪拌溶液へ、NaH(鉱油中60％)(3.13g, 78.133mmol)ゆっくり添加した。この溶液を、0℃で1時間攪拌した。4-メタンスルホニルオキシ-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(19.82g , 71.03mmol)を、ゆっくり添加し、この反応液を100℃で一晩又はNMRによりピラゾールが消費されるまで、加熱した。この反応液を室温へ冷却し、水を添加し(20mL)、引き続きEtOAcで抽出した。一緒にした抽出物を、飽和水性NaCl(4x20mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルをオレンジ色油状物として得た。この油状物を、シリカゲルクロマトグラフィーを用い、10％EtOAc/ヘキサンから25％EtOAc/ヘキサンで溶離して精製し、4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを白色固形物として得(10.55g, 収率45％)、これはRf=0.4(25％EtOAc/ヘキサン、ヨウ素染色使用)であった。
【化１３８】
2008510790.tif 000140
【０４２１】
CH2Cl2(3mL)中の4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(500mg, 1.515mmol)の溶液へ、TFA(3mL)を添加した。反応液を、室温で、LCMSが反応の完了を示すまで、攪拌した。溶媒を、真空で除去し、残渣をMeOH(15mL)に溶解した。溶液のpHを、水酸化物樹脂で9に調節し、4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-ピペリジンを得た。
DMF(3.26mL)中の4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン(375mg, 1.63mmol)の溶液へ、NEt3(230μL, 1.63mmol)を添加し、5分間攪拌した。ヨウ化メチル(MeI)(1.63mL, DMF中の1M MeI, 新たに作製)を添加し、反応液を一晩室温で攪拌した。水を添加し、溶液を、EtOAc(4x10mL)で抽出した。有機溶液を、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、真空で乾燥し、4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-1-メチル-ピペリジン(251mg, 収率63％)を得た。
【０４２２】
一般的手順66：
【０４２３】
【化１３９】
2008510790.tif 000141
【０４２４】
無水DMF(4mL)中の3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン(295mg, 0.80mmol)の溶液へ、NaH(鉱油中60％, 30.7mg, 0.80mmol)を添加した。この混合物を、窒素下周囲温度で0.5時間攪拌し、その後4-メタンスルホニルオキシ-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(223.5mg, 0.80mmol)を投入した。反応混合物を、90℃の油浴で0.5時間、窒素下で加熱し、周囲温度へ冷却した。水を、混合物へゆっくり添加し、これをEtOAcで抽出し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。粗生成物を、シリカゲルカラム上で精製し、4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを白色固形物として得た(265mg, 収率59％)。
【０４２５】
CH2Cl2中の4-(4-｛5-アミノ-6-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(265mg, 0.48mmol)の溶液へ、4N HCl/ジオキサン(4mL)を添加した。この混合物を、周囲温度で1時間撹拌した。蒸発後、残渣をメタノール(2.5mL)に溶解し、逆相C-18分取HPLCで、0.1％酢酸を含有するアセトニトリル/水の直線勾配10％-40％で溶離し精製した。凍結乾燥後、3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン酢酸塩を、白色固形物として得た(125mg, 収率51％)。
【０４２６】
一般的手順67：
【０４２７】
【化１４０】
2008510790.tif 000142
【０４２８】
O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムペンタフルオロリン酸塩(HATU)(66mg, 0.17mmol)を、DMF 1.6mL中の 2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-プロピオン酸(69mg, 0.16mmol)、トリエチルアミン(0.024mL, 0.17mmol)及び3-ジメチルアミノ-プロピルアミン(0.022mL, 0.17mmol)の溶液へ添加した。3時間攪拌後、反応液を、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、メタノール、水酸化アンモニウムの溶離勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-N-(3-ジメチルアミノ-プロピル)-プロピオンアミドを得た(41mg, 50％)。
【０４２９】
一般的手順68：
【０４３０】
【化１４１】
2008510790.tif 000143
【０４３１】
ジエチルアザジカルボキシラート(0.48mL, 3.1mmol)を、THF(20mL)中のトリフェニルホスフィン(0.80g, 3.1mmol)の0℃溶液へ添加した。5分間攪拌した後、4-ブロモ-ピラゾール(0.30mg, 2.0mmol)を添加した。更に5分間攪拌後、(2-ヒドロキシエチル)-メチル-カルバミン酸tert-ブチルエステル(0.45g, 2.6mmol)を添加した。反応液を室温に温め、一晩攪拌した。反応液を0℃に冷却し、濾過した。濾液を、回転蒸発により濃縮した。残渣を、ジクロロメタン、酢酸エチルの溶離勾配を用いる、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、[2-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-エチル]-メチル-カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た(541mg, 87％)。
【０４３２】
一般的手順69：
【０４３３】
【化１４２】
2008510790.tif 000144
【０４３４】
水素化ナトリウム(0.12g, 4.9mmol)を、DMF(10mL)中4-ブロモ-4H-ピラゾール(0.60g, 4.1mmol)の溶液に添加した。10分間攪拌後、DMF(4mL)中の2-クロロ-プロピオン酸メチルエステルの溶液を添加した。4時間攪拌後、反応液を、酢酸エチルと水の間で分配した。これらの相を分離し、水相を、酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機相を、MgSO4上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。残渣を、酢酸エチル及びヘキサンの溶離勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、2-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-プロピオン酸メチルエステル(733mg, 77％)を得た。
【０４３５】
一般的手順70：
【０４３６】
【化１４３】
2008510790.tif 000145
【０４３７】
水(0.4mL)中のLiOH(34mg, 1.4mmol)の溶液へ、THF(1.5mL)及びMeOH(0.4mL)混合液中の、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-プロピオン酸メチルエステル(70mg, 0.15mmol)の溶液を添加した。一晩攪拌後、反応液を、ジクロロメタンと半-飽和ブラインの間で分配した。少量のエタノールを添加し、1M HClでpHを7に調節した。これらの相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。一緒にした有機相を、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、回転蒸発により濃縮し、2-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-プロピオン酸を得た(69mg, 100％)。
【０４３８】
一般的手順71：
【０４３９】
【化１４４】
2008510790.tif 000146
【０４４０】
THF(5mL)中の4-(3-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピロリジン-2-カルボン酸メチルエステル(105mg, 0.21mmol)の攪拌溶液へ、THF(1.06mL, 2.12mmol)中の2M CH3NH2を添加し、混合物を攪拌し、55℃で18時間加熱し、LCMSで、反応が完了したことをチェックし、THFを除去し、残渣を、分取-HPLCにより精製し、4-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピロリジン-2-カルボン酸メチルアミド(30mg)を収率28.6％で得た。
【０４４１】
一般的手順72： 
【０４４２】
【化１４５】
2008510790.tif 000147
【０４４３】
tert-ブチル4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール-1-カルボキシラート(21-1)：ジカルボン酸ジ-tert-ブチル(7.2モル当量)、4-(ジメチルアミノ)ピリジン(0.84モル当量)を、DMF 40mL中の4,4,5,5-テトラメチル-2-(1H-ピラゾール-4-イル)-1,3,2-ジオキサボロラン(6mmol)の溶液へ添加した。反応混合物を、室温で12時間加熱した。水を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAcを添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、茶黄色の油状残渣を化合物21-1として得た(1.32g；4.56mmol；76％)。
【化１４６】
2008510790.tif 000148
残渣を、更に精製することなく、次工程反応に使用した。
【０４４４】
化合物21-3、3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-(1H-ピラゾール-4-イル)ピリジン-2-アミン(21-3a)の具体例で示す：
【０４４５】
【化１４７】
2008510790.tif 000149
【０４４６】
化合物21-1(1.0モル当量)を、DME 20mL中の化合物21-2a(R置換基を伴う化合物21-2は、2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニルを生じる)(1.92mmol)の溶液へ添加した。この混合物を、室温で窒素大気下で30分間攪拌し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。4mLのH2O中の炭酸ナトリウム(3モル当量)を、反応混合物へ添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。使用した代わりの塩基は、1又は2当量のホウ酸エステルを伴うCsF及びCs2CO3が、室温(CsF)又は80℃(全て)であった。水を反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAc(150mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色の油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(溶離液酢酸エチル中0→10％MeOHで溶離する)で精製し、所望の生成物である化合物21-3a(2.05g, 収率53.6％)を得た。
【化１４８】
2008510790.tif 000150
【０４４７】
式21-4の化合物を作製するために、下記の例証的手順を使用することができた：水素化ナトリウム(1.2モル当量)を、DMF 10mL中の化合物21-3(0.87mmol)の溶液へ添加した。混合物を、窒素大気下で室温で30分間攪拌し、その後化合物21-6(1モル当量)を添加した。得られた溶液を、85〜90℃で12時間加熱した。水(20mL)を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAc(50mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色の油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中EtOAcで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物21-4(収率20-50％)を得た。
一般的手順73：
【０４４８】
【化１４９】
2008510790.tif 000151
【０４４９】
L=Br、Cl、COOH、COCl、OMs、炭酸エチレン、アルデヒド 
式22-3の化合物を、下記の例証的手順を使用し調製することができた：化合物22-2(1.2モル当量)を、DMF 5mL中の化合物22-1(0.24mmol)及び塩基(3-5モル当量)及び/又はカップリング剤(1モル当量)の溶液へ添加した。混合物を、窒素大気下で12時間攪拌した。水(20mL)を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAc(50mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させた。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物22-3(収率20-50％)を得た。
【０４５０】
一般的手順74：
下記手順を使用し、ピペリジン-ピラゾール-2-アミノピリジン誘導体を調製した。
【０４５１】
【化１５０】
2008510790.tif 000152
【化１５１】
2008510790.tif 000153
【０４５２】
tert-ブチル 4-(4-ヨード-1H-ピラゾール-1-イル)ピペリジン-1-カルボキシラート(23-1a)
NaH(1.2当量, 0.68mmol)を、DMF(2L)中4-ヨードピラゾール(0.57mmol)の攪拌溶液へ、4℃で少量ずつ添加した。得られた混合物を、1時間4℃で攪拌し、その後化合物23-4(1.1当量, 0.63mmol)を添加した。得られた混合物を、100℃で12時間加熱した。反応を、H2Oで停止し、EtOAcで数回抽出した。一緒にした有機層を乾燥し、濾過し、濃縮し、オレンジ色油状物を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ペンタン中5％EtOAcで溶離)で精製し、化合物23-1を白色固形物として得た(140g, 66％)。
【０４５３】
tert-ブチル-4-[4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール-1-イル]ピペリジン-1-カルボキシラート(23-1b)
ビス(ピナコラト)ジボロン(1.4当量, 134g, 0.52mol)及び酢酸カリウム(4当量, 145g, 1.48mol)を、DMSO 1.5L中の化合物23-1a(140g, 0.37mol)溶液へ逐次添加した。混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05当量, 12.9g, 0.018mol)を添加した。得られた混合物を、80℃で2時間加熱した。この反応混合物を、室温に冷却し、セライト床を通して濾過し、EtOAcで洗浄した。濾液を、飽和NaCl(500mLx2)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、濾過し濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中5％EtOAcで溶離)により精製し、化合物23-1bを白色固形物(55g, 40％)として得た。
【０４５４】
化合物23-2(1.0モル当量)を、DME 15mL中の化合物23-1b(1.3モル当量)の溶液へ添加した。混合物を、窒素で数回掃流し、その後ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05モル当量)を添加した。H2O 4mL中の炭酸セシウム(3モル当量)を、反応混合物へ添加し、得られた溶液を、85℃で12時間加熱した。水(10mL)を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAc(150mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、暗茶色油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(溶離液ヘキサン中75→100％EtOAcで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物23-3a(収率61％)を得た。
【０４５５】
MeOH(4mL)中の化合物23-3a(0.63mmol)の溶液へ、塩酸(19当量, 12mmol)を添加した。混合物を、室温で12時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、H2O(10mL)を添加した。飽和NaHCO3(水溶液)を添加し、溶液をpH7に中和した。酢酸エチル(100mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。一緒にした有機層を、Na2SO4上で乾燥し、濾過し、蒸発させ、化合物23-5aを固形物残渣(0.6mmol, 収率95％)として得た。
【０４５６】
式23-7の化合物を、下記一般的手順に従い調製することができる：化合物 23-8(1.2モル当量)を、DMF 5mL中の化合物23-5a(0.24mmol)及び塩基(3-5モル当量)及び/又はカップリング剤(1モル当量)の溶液へ添加した。混合物を、窒素大気下で12時間攪拌した。水(20mL)を、反応混合物へ添加し、反応を停止した。その後EtOAc(50mLx2)を添加し、水溶液を抽出した。EtOAc層をNa2SO4上で乾燥した。Na2SO4を濾過し、濾液を蒸発させ、油状残渣を得た。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(CH3OH、CH2Cl2、EtOAc、及びヘキサンで溶離)で精製し、所望の生成物である化合物23-7aを得た。
【０４５７】
一般的手順75：
【０４５８】
【化１５２】
2008510790.tif 000154
【０４５９】
3-メトキシ化合物を、下記の一般的手順により、対応する3-フッ化化合物から調製することができる。DMSO 4mLに、エタノール0.124mL、引き続きNaH 32mgを添加した。30分間攪拌した後、24-1 250mgを添加し、反応液を40℃に加熱した。3時間後、この反応液を冷却し、水へ注ぎ、沈殿させた。pH6へ中和後、生成物24-2を単離した。
【０４６０】
一般的手順76：
【０４６１】
【化１５３】
2008510790.tif 000155
【０４６２】
THF(3mL)及びH2O(2mL)中の3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(2,2-ジメチル-[1,3]ジオキソラン-4-イルメチル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピリジン-2-イルアミン(150mg, 0.31mmol)の攪拌溶液へ、TFA(2mL)を0℃で添加し、混合物を攪拌し、室温まで温め、その後50℃で5時間加熱し、LCMSで反応が完了したことを確認し、THFを除去し、残渣を、分取-HPLCにより除去し、3-(4-｛6-アミノ-5-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-プロパン-1,2-ジオール(102mg)、収率74.2％を得た。
【０４６３】
一般的手順77：
【０４６４】
【化１５４】
2008510790.tif 000156
【０４６５】
DMF中の4-ブロモ-1H-ピラゾールの攪拌溶液へ、水素化ナトリウムを室温で添加した。混合物を30分間攪拌し、[1,3]ジオキソラン-2-オンを添加し、この混合物を撹拌し、室温にゆっくり温めた。反応を、TLCによりモニタリングした。この反応を行った後、EtOAcを添加し、飽和NaHCO3、水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、溶離液EtOAc及びDCM 10％でシリカゲルにより精製し、2-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-エタノール0.22g、収率34％を得た。
【化１５５】
2008510790.tif 000157
【０４６６】
実施例1：5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン
【０４６７】
【化１５６】
2008510790.tif 000158
【０４６８】
標題化合物を、手順2に従い、(1S)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エタノールから調製した。
【化１５７】
2008510790.tif 000159
【０４６９】
実施例2：4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-安息香酸
【０４７０】
【化１５８】
2008510790.tif 000160
【０４７１】
標題化合物を、手順3に従い調製した。
【化１５９】
2008510790.tif 000161
【０４７２】
実施例3：(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-フェニル)-ピペラジン-1-イル-メタノン
【０４７３】
【化１６０】
2008510790.tif 000162
【０４７４】
標題化合物を、手順4に従い調製した。
【化１６１】
2008510790.tif 000163
【０４７５】
実施例4：4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ベンゾイル)-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【０４７６】
【化１６２】
2008510790.tif 000164
【０４７７】
標題化合物を、手順16、それに続く20に従い調製した。
【化１６３】
2008510790.tif 000165
【０４７８】
実施例5：3-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]-5-[4-(ピペラジン-1-イルカルボニル)フェニル]ピリジン-2-アミン
【０４７９】
【化１６４】
2008510790.tif 000166
【０４８０】
標題化合物を、手順20、それに続く21に従い、実施例119の対応するS エナンチオマーとのラセミ混合物として調製し、その後キラルクロマトグラフィーにより分割した。標題化合物は、キラル出発材料から出発するエナンチオピュアな化合物としても調製した。
【化１６５】
2008510790.tif 000167
【０４８１】
実施例6：4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-N-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-N-メチルベンズアミド
【０４８２】
【化１６６】
2008510790.tif 000168
【０４８３】
標題化合物を、手順20に従い調製した。
【化１６７】
2008510790.tif 000169
【０４８４】
実施例7：(4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝フェニル)メタノール
【０４８５】
【化１６８】
2008510790.tif 000170
【０４８６】
標題化合物を、手順27に従い調製した。
【化１６９】
2008510790.tif 000171
【０４８７】
実施例8：4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝-N-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-N-メチルベンズアミド
【０４８８】
【化１７０】
2008510790.tif 000172
【０４８９】
標題化合物を、手順27に従い調製した。
【化１７１】
2008510790.tif 000173
【０４９０】
実施例9：tert-ブチル 4-(4-｛6-アミノ-5-[(1R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロフェニル)エトキシ]ピリジン-3-イル｝ベンゾイル)ピペラジン-1-カルボキシラート
【０４９１】
【化１７２】
2008510790.tif 000174
【０４９２】
標題化合物を、手順20に従い調製した。
【化１７３】
2008510790.tif 000175
【０４９３】
実施例10：3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピリジン-2-イルアミン
【０４９４】
【化１７４】
2008510790.tif 000176
【０４９５】
標題化合物を、手順62に従い、3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン及び4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-1-メチル-ピペリジン(一般的手順11に従い調製)を用いて調製した。
【化１７５】
2008510790.tif 000177
【０４９６】
実施例11：1-[4-(4-｛6-アミノ-5-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-3-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノン
【０４９７】
【化１７６】
2008510790.tif 000178
【０４９８】
標題化合物を、手順63に従い調製した。
【化１７７】
2008510790.tif 000179
【０４９９】
実施例12：3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン
【０５００】
【化１７８】
2008510790.tif 000180
【０５０１】
標題化合物を、手順62に従い、3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピリジン-2-イルアミン及び4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-1-シクロペンチル-ピペリジン(アルキル化剤としてブロモシクロペンタンを用い一般的手順11に従い調製)を用い、調製した。
【化１７９】
2008510790.tif 000181
【０５０２】
実施例13：3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン
【０５０３】
【化１８０】
2008510790.tif 000182
【０５０４】
標題化合物を、手順62に従い調製した。
【化１８１】
2008510790.tif 000183
【０５０５】
実施例14：3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン
【０５０６】
【化１８２】
2008510790.tif 000184
【０５０７】
標題化合物を、手順66に従い調製した。
【化１８３】
2008510790.tif 000185
【０５０８】
実施例15：3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミン
【０５０９】
【化１８４】
2008510790.tif 000186
【０５１０】
標題化合物を、手順3に従い、5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン及び4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-ピラゾール-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを用いて調製した。
【化１８５】
2008510790.tif 000187
【０５１１】
実施例16：1-[4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ヒドロキシ-エタノン
【０５１２】
【化１８６】
2008510790.tif 000188
【０５１３】
標題化合物を、手順62及び63に従い、5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミンを出発材料として調製した。
【化１８７】
2008510790.tif 000189
【０５１４】
実施例17：3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-[1-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-ピラジン-2-イルアミン
【０５１５】
【化１８８】
2008510790.tif 000190
【０５１６】
標題化合物を、手順62に従い、5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミン及び4-(4-ブロモ-ピラゾール-1-イル)-1-メチル-ピペリジン(一般的手順11に従い調製)を用いて調製した。
【化１８９】
2008510790.tif 000191
【０５１７】
実施例18：1-[4-(4-｛5-アミノ-6-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イル｝-ピラゾール-1-イル)-ピペリジン-1-イル]-2-ジメチルアミノ-エタノン
【０５１８】
【化１９０】
2008510790.tif 000192
【０５１９】
標題化合物を、手順63に従い、出発材料として5-ブロモ-3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピラジン-2-イルアミンを用い、手順5に説明されたようにDMF中でHOBt/EDC/トリエチルアミンの存在下で、ジメチルアミノ-酢酸にカップリングされた3-[(R)-1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピラジン-2-イルアミンを用い、調製した。
【化１９１】
2008510790.tif 000193
【０５２０】
実施例19：3-[(R)-1-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-フェニル)-エトキシ]-5-(1-ピペリジン-4-イル-1H-ピラゾール-4-イル)-ピリジン-2-イルアミン
【０５２１】
【化１９２】
2008510790.tif 000194
【０５２２】
標題化合物を、手順62に従い、出発材料として5-ブロモ-3-[(R)-1-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン(SynChem, Inc.から入手した(S)-1-(2-クロロ-3,6-ジフルオロ-フェニル)-エタノールからの5-ブロモ-3-[1-(2,6-ジクロロ-3-フルオロ-フェニル)-エトキシ]-ピリジン-2-イルアミン合成法に従う)を用い、調製した。
【化１９３】
2008510790.tif 000195
【０５２３】
生物学的実施例
いずれか所定の化合物シリーズにおいて、一連の生物学的活性が認められることは明らかであろう。その現在好ましい局面において、本発明は、プロテインキナーゼ活性を変調、調節及び/又は阻害することが可能である新規化合物に関連している。下記アッセイは、最適な程度の所望の活性を示すそのような化合物を選択するために使用することができる。
【０５２４】
アッセイ手順
下記のin vitroアッセイを使用し、本発明の様々な化合物の活性レベル及び1又は複数のPKに対する作用を決定することができる。同様のアッセイは、当該技術分野において周知の技術を使用するいずれかのPKと同じラインに沿ってデザインすることができる。参考文献が提供されている(Technikova-Dobrova Z, Sardanelli AM, Papa S FEBS Lett. 1991 Nov 4; 292: 69-72)。
全般的手順は、以下である：化合物及びキナーゼアッセイ試薬を、試験ウェルへ投入する。アッセイは、キナーゼ酵素の添加により開始される。酵素阻害薬は、測定された酵素活性を低下する。
【０５２５】
連続カップリングされた分光光度アッセイにおいて、キナーゼによるADPの時間-依存型の生成は、340nmでの吸光度の低下の測定による、NADH消費速度の分析により決定される。PKがADPを生成するにつれ、これはホスホエノールピルビン酸とピルビン酸キナーゼとの反応によりATPへ再転換される。ピルビン酸も、この反応において生成される。引き続きピルビン酸は、乳酸デヒドロゲナーゼとの反応により、乳酸へ転換され、これは同時にNADHをNADへ転換する。NADHは、340nmで測定可能な吸光度を示すのに対し、NADは示さない。
特異的PKに関する連続カップリングされた分光光度実験を実行するための現在好ましいプロトコールを、以下に示す。しかし他のRTK、更にはCTK及びSTKに対する化合物の活性を決定するためにこのプロトコールを適合することは、十分に当業者の知識の範囲内である。
【０５２６】
HGFRの連続カップリングされた分光光度アッセイ
本アッセイは、HGFRの活性化ループに由来したペプチドである、Met-2基質ペプチドに対するHGFRのチロシンキナーゼ活性を分析する。
材料及び試薬：
1. UpstateからのHGFR酵素(Met, 活性) カタログ番号14-526
2. Met-2ペプチド(HGFR活性化ループ) Ac-ARDMYDKEYYSVHNK (MW=1960)。200mM HEPES(pH7.5)中に10mMストック液で溶解。
3. 200mM HEPES(pH7.5)中の1M PEP(ホスホ-エノール-ピルビン酸)
4. 200mM HEPES(pH7.5)中の100mM NADH (B-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、還元型)
5. ddH2O中4M MgCl2 (塩化マグネシウム)
6. 200mM HEPES(pH7.5)中1M DTT(ジチオスレイトール)
7. 15単位/mL LDH (乳酸デヒドロゲナーゼ)
8. 15単位/mL PK(ピルビン酸キナーゼ)
9. ddH2O中に溶解した5M NaCl
10. Tween-20(タンパク質等級) 10％溶液
11. 1M HEPES緩衝液：(N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N-[2-エタンスルホン酸])ナトリウム塩、ddH2O中に溶解し、pH7.5に調節し、容量を1Lとし、0.1μmフィルターで濾過
12. HPLC等級水；Burdick and Jackson #365-4、1X4L(又は同等物)
13. 100％ DMSO (SIGMA)
14. Costar #3880 −Ki決定及び阻害率のための黒色透明な平底ハーフ領域プレート
15. Costar #3359−96ウェルポリプロピレン製プレート、丸底、連続希釈用
16. Costar #3635-UVプレート、透明平底プレート、阻害率用
17. Beckman DU-650w/マイクロセルホルダー
18. Beckman 4−ポジションマイクロセルキュベット
【０５２７】
手順：
酵素の希釈緩衝液(DB)の調製(30mL調製物)
1. DB最終濃度は、2mM DTT、25mM NaCl2、5mM MgCl2、0.01％Tween-20、及び50mM HEPES緩衝液(pH7.5)である。
2. 1M HEPES1.5mLを、ddH2O 28.1mLへ添加することにより、50mM HEPESを作製する。残りの試薬を添加する。50mLの三角バイアルへ、1M DTT 60μL、5M NaCl2 150μL、1M MgCl2 150μL及び10％Tween-20 30μLを添加し、総容量30mLとする。
3. 5〜10秒間激しく攪拌する。
4. DBを1mL/チューブでアリコートとし、チューブに「DB HGFR」のラベルを貼る。
5. 注意：これは前もって調製し、貯蔵しておくことができる。
6. 使用しなかったアリコートは遠心チューブに入れ、-20℃のフリーザー内で凍結する。
【０５２８】
化合物調製
1.化合物希釈プレートに関して、10mMストック液4μLを、プレートのカラム1に添加し、100％DMSOで容量を100μLとした。
2. Precision 2000希釈法を設定した。50％DMSO、100mM HEPES中200μM化合物の最終濃度(1:2連続希釈)。
【０５２９】
カップリングされた酵素緩衝液の調製：
1. アッセイにおける最終濃度：
試薬(ストック濃度)          アッセイでの最終濃度
a.PEP (1 M)                 1mM 
b. NADH (100mM)             300μM
c. MgCl2 (4 M)              20mM
d. DTT (1 M)                2mM
e. ATP (50OmM)              300μM
f. HEPES 200mM (pH7.5)      100mM
g. ピルビン酸キナーゼ(PK)    15単位/mL
h. 乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)  15単位/mL
i. Met-2 ペプチド(10mM)        0.500mM
j. HGFR                         50nM 
2. 10mL反応緩衝液について、100mM HEPES緩衝液(pH7.5)へ1M PEP 10μL、100mM NADH 33μL、4M MgCl2 50μL、1M DTT 20μL、500mM ATP 6μL、及び10mM Met-2ペプチド500μLを添加し、並びに激しく撹拌/混合する。
3. カップリング酵素、LDH及びPKを、反応混合液に添加する。穏やかに倒置し混合する。
【０５３０】
試行試料
1. 分光光度計設定：
i. 吸収度波長(A)：340nm
ii. インキュベーション時間：10分間
iii. 試行時間：10分間
iv. 温度：37℃
2. CE反応混合物85μlを、アッセイプレートの各ウェルに添加する。
3. 希釈した化合物5μLを、アッセイプレートのウェルに添加する。
4. 陰性対照のために50％DMSO 5μLをアッセイプレートの最終カラムに添加する。
5. マルチ-チャンネルピペッター又は回転式振盪機で混合する。
6. 37℃で10分間プレインキュベーションする。
7. 500nM HGFR 10μLをアッセイプレートの各ウェルに添加し；最終HGFR濃度を、最終総容量100μL中で50nMとする。
8. 活性を、λ=340nm及び37℃で、10分間測定する。
【０５３１】
下記in vitroアッセイを使用し、活性レベル及び様々な本発明の化合物の1又は複数のPKに対する作用を決定することができる。同様のアッセイを、当業者に周知の技術を用いてPKに関する同じラインに沿ってデザインすることができる。
【０５３２】
本願明細書に説明されたいくつかのアッセイは、ELISA(酵素免疫吸着サンドイッチアッセイ)フォーマット(Voller, et al., 1980, "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay," Manual of Clinical Immunology, 第2版, Rose and Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., pp. 359-371)で行う。一般的手順は以下である：化合物を、選択された期間、天然又は組換えのいずれかにより、被験キナーゼを発現している細胞へ導入し、その後被験キナーゼが受容体である場合は、受容体を活性化することがわかっているリガンドを添加する。細胞を溶解し、溶解液を、酵素リン酸化反応の基質を認識する特異的抗体で予め被覆されたELISAプレートのウェルに移す。細胞溶解液の非-基質成分を洗浄除去し、基質に対するリン酸化の量を、被験化合物と接触していない対照細胞と比較して、ホスホチロシンを特異的に認識する抗体により検出する。
【０５３３】
特異的PKに関するELISA実験を行うための現在好ましいプロトコールを以下に示す。しかし他のRTK、更にはCTK及びSTKに対する化合物の活性を決定するためのこのプロトコールの適合は、十分に当業者の知識の範囲内である。
【０５３４】
本願明細書に説明された他のアッセイは、被験キナーゼの活性化に反応し生成されたDNA量を測定し、これは増殖反応の一般的測定である。このアッセイの一般的手順は、以下である：化合物を、選択された期間、天然又は組換えのいずれかにより被験キナーゼを発現している細胞へ導入し、その後被験キナーゼが受容体である場合は、受容体を活性化することがわかっているリガンドを添加する。少なくとも一晩インキュベーションし、5-ブロモデオキシウリジン(BrdU)又はH3-チミジンなどのDNA標識試薬を添加する。標識されたDNA量を、抗-BrdU抗体によるか、又は放射活性の測定のいずれかにより検出し、被験化合物と接触していない対照細胞と比較する。
【０５３５】
METリン酸転移反応アッセイ
このアッセイを使用し、ポリ(グルタミン酸:チロシン, 4:1)基質に対するホスホチロシンレベルを測定し、基質のmetリン酸転移反応のアゴニスト/アンタゴニストを同定する。
材料及び試薬
1. Corning 96-ウェルELISAプレート、Corningカタログ番号25805-96。
2. ポリ(グルタミン酸-チロシン), 4:1 , Sigma, カタログ番号；P 0275。
3. PBS, Gibcoカタログ番号450-1300EB
4. 50mM HEPES
5. ブロック用緩衝液：25gウシ血清アルブミン(Sigmaカタログ番号A-7888)をPBS 500mLに溶解し、4μmフィルターを通して濾過
6. Metキナーゼドメインを含む精製したGST融合タンパク質、SUGEN1 Inc.
7. TBST緩衝液
8. 10％水性(MilliQue H2O) DMSO
9. 10mM水性(dH2O)アデノシン-5'-三リン酸、Sigmaカタログ番号A-5394
10. 2Xキナーゼ希釈緩衝液：100mLにつき、dH2O 88.4mL中、1M HEPES(pH7.5) 10mLを、5％BSA/PBS 0.4mL, 0.1Mオルトバナジン酸ナトリウム0.2mL及び5M塩化ナトリウム1mLと混合。
11. 4X ATP反応混合物：10mLにつき、dH2O 9.56mL中、1M塩化マグネシウム0.4mL及び0.1M ATP 0.02mLを混合。
12. 4X 陰性対照混合物：10mLにつき、dH2O 9.56mL中、1M塩化マグネシウム0.4mL混合。
13. NUNC 96-ウェルV底ポリプロピレンプレート、Applied Scientificカタログ番号S-72092
14. 500mM EDTA
15. 抗体希釈緩衝液：100mLにつき、TBST 88.4mL中、5％ BSA/PBS 10mL、PBS中の、 5％ Carnation（登録商標）インスタントミルク0.5mL、及び0.1Mオルトバナジン酸ナトリウム0.1mLを混合。
16. ウサギポリクローナル自己ホスホチロシン抗体、SUGEN, Inc.
17. ヤギ抗-ウサギホースラディッシュペルオキシダーゼ複合抗体、Biosource, Inc.
18. ABTS溶液：1L混合液について、クエン酸19.21g、Na2HPO4 35.49g及びABTS 500mgを、十分なdH2Oと混合し、1Lとする。
19. ABTS/H2O2：使用前に、15mL ABST溶液を、2μL H2O2 と5分間混合する。
20. 0.2M HCl
【０５３６】
手順：
1. ELISAプレートを、PBS 100μL中のポリ(グルタミン酸-チロシン) 2μgで被覆し、4℃で一晩維持する。
2. プレートを、5％BSA/PBS 150μLで60分間ブロックする。
3. プレートを、PBSで2回、その後50mM Hepes緩衝液(pH7.4)で1回洗浄する。
4.希釈したキナーゼ50μLを全てのウェルに添加する。(精製したキナーゼは、キナーゼ希釈緩衝液で希釈する。最終濃度は10ng/ウェルでなければならない。)
5.被験化合物(4％DMSO中)又は対照のためにDMSO単独(in dH2O中4％)25μLを、プレートへ添加する。
6.キナーゼ/化合物混合物を15分間インキュベーションする。
7.陰性対照ウェルへ、40mM MnCl2 25μlを添加する。
8. ATP/MnCl2混合物25μLを、全ての他のウェル(陰性対照を除く)に添加する。5分間インキュベーションする。
9.500mM EDTA 25μLを添加し、反応を停止する。
10. プレートを3xTBSTで洗浄する。
11.抗体希釈緩衝液に1:10,000希釈したウサギポリクローナル抗-Ptyr100μLを、各ウェルに添加し、振盪しながら室温で1時間インキュベーションする。
12. プレートを3xTBSTで洗浄する。
13. 抗体希釈緩衝液で、Biosource HRP複合した抗-ウサギ抗体を、1:6,000希釈する。各ウェルに100μL添加し、振盪しながら室温で1時間インキュベーションする。
14. プレートを1X PBSで洗浄する。
15. ABTS/H2O2溶液100μlを各ウェルへ添加する。
16. 必要ならば、100μL 0.2M HCl/ウェルの添加により、呈色反応を停止する。
17.プレートを410nmの試験フィルター及び630nmの参照フィルターで、Dynatech MR7000 ELISAリーダーで読み取る。
【０５３７】
BrdU取り込みアッセイ
下記アッセイは、選択された受容体を発現するよう操作された細胞を使用し、その後、DNAへのBrdU取り込みを決定することにより、関心のある化合物のリガンド-誘導したDNA合成の活性に対する作用を評価する。下記材料、試薬及び手順は、下記のBrdU取り込みアッセイの各々に一般化される。特定のアッセイの変数に注意。
【０５３８】
一般的材料及び試薬
1. 適当なリガンド
2. 適当に操作された細胞
3. BrdU標識試薬：PBS(pH7.4)中10mM (Roche Molecular Biochemicals, インディアナポリス, IN)。
4. FixDenat：固定液(Roche Molecular Biochemicals, インディアナポリス, IN)
5. 抗-BrdU-POD：ペルオキシダーゼに複合したマウスモノクローナル抗体 (Chemicon, テメキュラ, CA)
6. TMB基質溶液：テトラメチルベンジジン(TMB, そのまま使用, Roche Molecular Biochemicals, インディアナポリス, IN)
7. PBS洗浄液：1XPBS(pH7.4)
8. アルブミン、ウシ(BSA)、画分V粉末(Sigma Chemical Co., 米国)
【０５３９】
一般的手順：
1. 細胞を、96ウェルプレートにおいてDMEMを溶媒とする10％ CS、2mM Gln中に、8000個細胞/ウェルで播種する。細胞を、5％ CO2下で、37℃で一晩インキュベーションする。
2. 24時間後、細胞をPBSで洗浄し、その後血清非含有培地(0.1％ BSAを含む0％CS DMEM)で24時間血清-飢餓とする。
3. 3日目に、適当なリガンド及び被験化合物を、細胞へ同時に添加する。陰性対照ウェルには、0.1％BSAを含む血清非含有DMEMのみを入れ；陽性対照細胞は、リガンドは入れるが被験化合物は入れない。被験化合物は、96ウェルプレート内のリガンドを含む血清非含有DMEM中に調製し、7種の試験濃度に連続希釈する。
4. リガンド活性化の18時間後、希釈したBrdU標識試薬(DMEM中1:100, 0.1％BSA)を添加し、細胞をBrdUで1.5時間インキュベーションした(最終濃度は10μMである)。
5. 標識試薬とのインキュベーション後、媒体を、デカントし、ペーパータオル上に倒置したプレートを軽く叩いて除去する。FixDenat溶液を添加し(50μl/ウェル)、プレートを室温で45分間プレート振盪機上でインキュベーションする。
6. FixDenat溶液を、デカントし、ペーパータオル上に倒置したプレートを軽く叩いて除去する。ブロック液としてミルクを添加し(PBS中5％脱水したミルク, 200μl/ウェル)、プレートを、30分間室温でプレート振盪機上でインキュベーションする。
7. ブロック液をデカントにより除去し、ウェルを、PBSで1回洗浄する。抗-BrdU-POD溶液を添加し(PBS中1:200希釈, 1％ BSA, 50μL/ウェル)、プレートを、90分間室温でプレート振盪機上でインキュベーションする。
8. 抗体複合体を、デカントにより除去し、ウェルをPBSで5回すすぎ、プレートを、ペーパータオル上に倒置し軽く叩いて乾燥する。
9. TMB基質溶液を添加し(100μl/ウェル)、発色が光度計検出に十分となるまで、プレート振盪機上で20分間室温でインキュベーションする。
10. 試料の吸光度を、Dynatech ELISAプレートリーダー上410nm(「デュアル波長」モードで、参照波長として490nmフィルターで測定)で測定する。
【０５４０】
HGF-誘導したBrdU取り込みアッセイ
材料及び試薬：
1. 組換えヒトHGF(カタログ番号249-HG, R&D Systems, Inc. 米国)
2. BxPC-3細胞(ATCC CRL-1687)
他の材料及び試薬は前述のものである。
【０５４１】
手順：
1. 細胞を、9000個細胞/ウェルで、96ウェルプレート内、RPMI 10％ FBS中に播種する。細胞を5％CO2下、37℃で一晩インキュベーションする。
2. 24時間後、細胞を、PBSで洗浄し、その後100μL血清-非含有培地(0.1％BSAを含むRPMI)で24時間血清飢餓とする。
3. 3日目に、リガンド(0.1％BSAを含むRPMI中1μg/mLで調製；最終HGF濃度は200ng/mL)及び被験化合物を含む25μLを、細胞へ添加する。陰性対照ウェルは、0.1％ BSAを含む血清-非含有RPMI 25μLのみを投入し；陽性対照細胞は、リガンド(HGF)は投入するが、被験化合物はしない。被験化合物は、96ウェルプレートにおいてリガンドを伴う血清-非含有RPMI中でそれらの最終濃度の5倍で調製され、連続希釈され、7種の試験濃度を生じる。典型的には、被験化合物の最高最終濃度は、100μMであり、1:3希釈を使用する(すなわち最終被験化合物濃度は、0.137〜100μMの範囲である)。
4. 18時間のリガンド活性化の後、希釈したBrdU標識試薬(0.1％BSAを含むRPMI中1:100)12.5μLを、各ウェルに添加し、細胞を、BrdU(最終濃度は10μMである)と共に1時間インキュベーションする。
5. 一般的手順と同じ。
6. 一般的手順と同じ。
7. ブロック液を、デカントすることにより除去し、ウェルを、PBSで1回洗浄する。抗-BrdU-POD溶液(0.1％BSAを含むRPMI中1:100希釈)を添加し(100μL/ウェル)、このプレートをプレート振盪機上で室温で90分間インキュベーションする。
8. 一般的手順と同じ。
9. 一般的手順と同じ。
10. 一般的手順と同じ。
【０５４２】
細胞HGFR自己リン酸化アッセイ
A549細胞(ATCC)をこのアッセイにおいて使用した。細胞を、96ウェルプレートで、増殖培地(RPMI+10％FBS)中に播種し、接着のために37℃で一晩培養した。細胞を、飢餓培地(RPMI+0.05％BSA)に曝した。阻害薬の希釈物を、これらのプレートへ添加し、37℃で1時間インキュベーションした。その後細胞を、40ng/mL HGFを15分間添加することにより刺激した。細胞を、HBSSを溶媒とする1mM Na3VO4で1回洗浄し、その後溶解した。溶解液を、HBSSを溶媒とする1mM Na3VO4で希釈し、抗-HGFR抗体(Zymed Laboratories)で予め被覆された、96ウェルのヤギ抗-ウサギコートしたプレート(Pierce)へ移した。これらのプレートを、4℃で一晩インキュベーションし、PBSを溶媒とする1％Tween 20で7回洗浄した。HRP-PY20(Santa Cruz)を、希釈し、30分間のインキュベーションのためにプレートへ添加した。その後プレートを再度洗浄し、TMBペルオキシダーゼ基質(Kirkegaard & Perry)を添加し、10分間インキュベーションした。その後この反応を、0.09N H2SO4を添加することにより停止した。プレートを、分光光度計を使用し、OD-450nmで測定した。IC50値を、4-パラメータ解析を用い、合致する曲線により計算した。
【０５４３】
本発明の化合物は、HGFR阻害活性について測定し；このデータは、各実施例において示している。Kiデータは、HGFR連結分光光度計アッセイを用いて得、IC50データは、細胞HGFR自己リン酸化アッセイを用いて得、両方とも先に説明している。
【０５４４】
本発明は、特定の及び好ましい態様について例示されているが、当業者は、本発明の慣習的実験及び実践を通じて、変更及び修飾を行うことができることを認めるであろう。従って本発明は、前記説明に限定されることを意図するものではないが、添付された「特許請求の範囲」及びそれらの同等物により限定される。
先行する文献を含む、本願明細書に引用された全ての参考文献は、それらの全体が本願明細書に参照として組入れられている。
【国際調査報告】
2008510790.tif 000198
2008510790.tif 000199
2008510790.tif 000200