(57)【要約】記載なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病、そして心臓疾患、腎不全、眼疾患、ニューロパシー、肥満、他の多くの疾患など、糖尿病と関連する問題の治療および治癒に有効な、インドの強力な薬用植物由来の様々な薬草抽出物の組み合わせを含む製剤に到達するスクリーニング方法。
【請求項２】
前記製剤中に存在する代謝産物が、薬剤分子として個別に使用可能である請求項１記載の請求。
【請求項３】
前記製剤中に存在する代謝産物の全ての組み合わせが、薬剤分子として使用可能である請求項２記載の請求。
【請求項４】
薬剤分子の前記製剤が、異なる代謝産物クラスの組み合わせによって到達可能な請求項３記載の請求。
【請求項５】
種々の特性を示す個々の各薬草抽出物が、糖尿病および糖尿病に関連する問題の治療および治癒において重要な役割を果たすことが可能な請求項１記載の請求。
【請求項６】
抽出物を様々な組み合わせで使用して、糖尿病および関連するリスクの治療において相乗効果をもたらすための有効な役割を果たすことが可能な請求項５記載の請求。
【請求項７】
個々の各抽出物に存在する前記代謝産物が、糖尿病および関連障害を治療するための治療用薬剤として使用可能な請求項５記載の請求。
【請求項８】
前記異なる抽出物由来の様々な代謝産物の組み合わせを糖尿病および関連リスクの治療時の薬剤分子として使用可能な請求項５記載の請求。
【請求項９】
前記採用されたスクリーニング方法が、分離中の分子の分離、同定、特性付けに有効な請求項１記載の請求。
【請求項１０】
前記採用されたスクリーニング方法が、治療クラスの分子の分離、同定、特性付けにおいて有用な役割を果たすことが可能な請求項１記載の請求。
【請求項１１】
前記同定された分子が、類似体の誘導体化に適用可能な請求項９記載の請求。
【請求項１２】
前記誘導体化された分子が、糖尿病および関連障害の治療においてより大きな有効性を示す請求項１１記載の請求。
【請求項１３】
前記製剤を連続投与および／または同時投与可能な請求項１１記載の請求。
【請求項１４】
前記製剤が、皮下、筋内、静脈内、皮内投与を含む、経口および腹膜に適した請求項１３記載の請求。
【請求項１５】
前記調剤を、錠剤、丸薬、粉末、液体、シロップ、懸濁液、乳剤、顆粒、カプセル、坐薬で投与可能な請求項１４記載の請求。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、単離され、糖尿病治療において使用される治療関連分子について特性付けられた、選択された多量の植物に関するものである。植物からの抽出物を標的および非標的スクリーニング方法の対象にした。進行中の標的スクリーニング方法は、多数の植物抽出物の包括的な代謝産物プロファイリングを特徴としており、ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｇｒｉｄの作成を促進すると予測した。個々の植物種と、市販中の既存の薬剤および／または植物抽出物との大規模比較分析によって、個別使用および／または併用される新しい治療用製剤の発見過程を加速させる固有および共通の分子成分の存在が明らかとなっている。本発明は、栄養補助食品として使用可能であり、糖尿病を患う哺乳動物、特にヒトの血糖値の降下にも有用である、１５種類のインドの薬草抽出物を含む食用組成物にも関するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、炭水化物・脂質代謝の恒常性がインスリンによる調節が不適切な状態と定義されることが多い。これは主に空腹時／摂食後血糖値の上昇を招く。仮にこの不均衡な恒常性が正常に戻らず、長期間持続する場合、それはやがて糖尿病と呼ばれる症候群に変化しうる、高血糖症として知られる病気の原因となる。Ｄｉａｂｅｔｅｓという用語は、通過する、即ち、重度の口渇および頻尿のサイクルを示す、ギリシャ語「Ｄｉａｂ」に由来している。Ｍｅｌｌｉｔｕｓは、ラテン語の「ハチミツで甘くなる(sweetened with honey)」に由来しており、尿糖の存在をほのめかす。糖尿病は世界で最も頻度の高い代謝系の異常である。 それは体内において炭水化物の同化異常を招く、血中ホルモンであるインスリンの欠如を特徴とする代謝障害である。糖尿病は、血管疾患に起因する合併症のリスク増大に加えて、高血糖症、脂質、炭水化物、タンパク質の代謝変化を特徴とする症候群の一群と定義できる。非常に多くの場合、疾患の重度は、多くの形（創傷治癒の困難およびニューロパシーなど）で現れる二次的徴候の発現において実感される。現在、全世界において１億４３００万人以上の人々が糖尿病で苦しんでいると推定され、糖尿病で苦しんでいる大半の人々の場合、回復不能な合併症が始まるまで、適切な診断は下されない。
【０００３】
糖尿病は数世紀前からインドで流行していることが知られており、初期に記録された文献において、紀元前１０００年頃にＳｕｓｈｒｕｔａ医師による糖尿病に関する記述、そしてＣｈａｒａｋ医師に関して記録されている。 実際に糖尿病の症候群に関する知識が、有史以前の時代からインドに存在したと考えられる。アーユルヴェーダ(Ayurvedic)文学におけるその最も初期の文献（紀元前１０００年）が神話の形で認められ、Ｄａｋｓｈａ  Ｐｒａｊａｐａｔｉ主催のＹａｇｎａの時にささげ物に使用された特別食であるＨａｖｉｓｈａを食べることで発生したと言われる(Kohli ら, Ayurvedic perspective of Diabetes and allied disorders, Vedic Life sciences)。
【０００４】
しかし、インドを初めとする開発途上国において、その慢性的で、遅い性質のため糖尿病はそれほど注目されていない。さらに、開発途上国の経済では、把握または治療法の探索にその資源を費やすことはできない。世界保健機関は、糖尿病患者が最も急速に増加している国としてインドを推定しており、１９９５〜２０２５年にインドの糖尿病患者が１９５％増加すると予測している。
【０００５】
糖尿病と関連する昔からの多くの臨床症状の中で代表的な症状には、本来なら高血糖症として知られている血糖の増加があり、これは次に糖尿およびアセトン呼吸の他、多尿症（頻尿）、煩渇多飲（過度の口渇）、多食症 （過度の空腹）、体重減少、視覚低下を招く可能性がある。未治療である、または治療効果がない糖尿病から生じる長期間の合併症には、特に網膜症、腎症、末梢性ニューロパシーがある。糖尿病患者は心臓血管疾患および脳梗塞による死亡リスクの上昇に向き合うことになる。
【０００６】
疾病過程の病態生理学的な理解における最近の進歩によって、糖尿病の大発生と戦うための新治療法を特定・開発するためのいくつかの新しい道が開けた。従来の薬用植物から同定された植物化学物質は、新しいタイプの治療法の開発に対して期待を抱かせる。原産の天然資源を同定して、それらを調達し、新しい治療法としてそれらを開発するために、新たに同定された標的に対するそれらの潜在力を詳細に研究することが急務である。
【０００７】
現在の糖尿病治療におけるコスト増は、糖尿病の予防および治療のための別の戦略の開発の高い必要性を示している。開発途上国の農村地域では、住民の９０％近くが依然として一次医療において伝統的医薬に依存しており、これらの伝統的な医薬に関する研究によって少なくとも８８種の薬剤が発見された。実用的かつ費用効果の高い代替物として、再生可能な原産の薬用植物材料の開発を導きうる、合理的に設計された学際的研究プログラムが必要である。いくつかの伝統的な医薬品系の治療アプローチがいっそう全体論的であると考えられる。伝統薬由来の医薬製剤は、様々な様式および機序を通して多様な標的に作用すると考えられる様々な薬草成分および非薬草成分を含んでいる。
【０００８】
古代より全世界の伝統医学は、糖尿病治療のための植物の使用を主張してきた。様々な機序により糖質代謝を操作し、β細胞の完全性および機能の阻害および回復、インスリン放出活性、ブドウ糖取り入れおよび利用の向上、薬草に存在する抗酸化作用など多数の有益な働きは、薬草を新治療薬に開発する期待を抱かせる。
【０００９】
糖尿病の多因子性病原性によってマルチモーダル治療アプローチが必要となる。そのため、未来の治療戦略では様々なタイプの多数の薬剤の併用を必要とする。Ｍｅｄｉｃａｔｒｉｘ  ｎａｔｕｒａｅ、つまり自己保存力または適応力が伝統的な治療習慣のモットーであり、ここでは多くの薬草製剤を処方する。多くの薬草製剤に関する理論には、多様な薬理学作用を有する植物薬品の取り込みに起因して、相乗作用、 強化作用、アゴニスト/アンタゴニスト作用を有する薬剤が含まれる。これらの薬理学的原理が動的に機能して、最小限の副作用で最大限の治療効果を生むことが知られている。伝統薬は、処方箋の一群として取り扱うべきではない。それらは、病気／疾患および個々の成分の治癒力を念頭に置いて調剤・調製される。
【００１０】
糖尿病の場合、目標となる主症状は、口渇、多尿症と糖尿であった(Herbal Drugs as Antidiabetics: An Overview; Sanjay M. Jachak, CRIPS Vol. 3, Number2, April-June 2002)。１２００種を超える植物について、民族薬理学に基づき、あるいは無作為に活性がスクリーニングされた。植物抽出物が特定条件下で、げっ歯動物などの様々な動物がブドウ糖、アロキサン、ストレプトゾトシン負荷された、あるいは生まれつき糖尿病の被験体として検査された。
【００１１】
インド亜大陸は、Ａｙｕｒｖｅｄａ、Ｕｎａｎｉ、Ｓｉｄｄｈａなどの原産の治療薬の一群で有名であり、これらに基づいて新しい治療分子を得ることができる。植物材料由来の多数の薬は二次代謝産物であり、植物代謝において役割を有しないが、植物防御機構において重要な役割を果たすことが期待される。一方、植物と動物の間で基本的な代謝過程における大きな違いは認められない。植物材料由来の約２００種の純粋化合物が存在し、それが血糖降下を示すことが報告されている。
【００１２】
世界中の１２００種を超える植物化合物が、それらの血糖値降下能を確認するために様々なレベルで試験され、動物モデルまたは試験管内で試験された場合、これらの化合物の多くが血糖降下活性を有する化学成分を含むことが判明した。しかし、ヒト被験者を巻き込んだこれらの化合物の研究では、これまでのところ多くの情報はもたらされていない。ヒトを対象に試験された糖尿病に対する薬草が数種類あり、これらは軽度の血糖値降下特性を示した。
【００１３】
インスリン非依存性糖尿病(NIDDM)としても知られているII型糖尿病は、インスリン依存性糖尿病よりも多く見られ、全糖尿病患者の８０‐９０％を占める。まず、ＮＩＤＤＭは中年期後半に徐々に発症することが多い。この疾患の後期は非常に深刻であり、腎不全、心疾患、眼疾患、神経疾患などの疾患を初めとする長期的合併症を招く。肥満はＮＩＤＤＭにおける重要な要因である。症状はあいまいで、疲労、嘔気、頻尿と異常な口渇が挙げられる。ＮＩＤＤＭは遺伝的素因を有する人において発症する。ＮＩＤＤＭ患者の膵ランゲルハンス島における病変は常に認められるわけではない。多くの患者の血漿インスリン値が通常より高めであることが知られている。これらの症例は、非常に多くの場合、糖尿病はインスリン欠乏からではなく、その標的細胞に対するインスリンの作用を媒介する分子機構における欠陥の結果として生じる。ＮＩＤＤＭは、インスリン抵抗性などの他の機構の破壊、インスリン受容体のダウンレギュレーション、膵臓細胞からのインスリン分泌の欠陥、グルコース輸送体系における他の変化も原因となる。今日まで、患者に対する外見上の毒性なしにＮＩＤＤＭを治療、または治癒するための満足な方法は存在しない。このため、ＮＩＤＤＭの予防および／または治療において効率的な別の治療法の提供が急務である。
【００１４】
糖尿病の予防および治療のための理想的な薬物療法は、以下の特性を組み入れた薬物療法である：インスリン生産に関与する膵ランゲルハンス島およびβ細胞の再生を促進させて、ｃペプチド濃度を上昇させる能力；インスリン生産に関与する細胞の自己免疫性破壊の調節能；糖尿病に関連する脂質血症の矯正能、副作用のほとんどないインスリン耐性の低下能。しかし、既知の製薬的組成物は、糖尿病治療に関するこの基準を満たさない。経口血糖降下薬は、頻繁かつ重度の副作用を伴う、一貫性のない臨床結果をもたらし、そして血糖値の均衡を保つために処方される多数の従来の薬が重度の肝臓障害、一部の症例では、肝不全さえ招く可能性が考えられるため、糖尿病を予防、治療、管理するための選択肢を臨床医に提供するような安全かつ効果的な経口血糖降下薬の必要性が感じられる。糖尿病に対する多くの伝統的な植物治療が存在するが、科学的または医学的な精査を受けたのは少数に過ぎない（Gray & Flatt Insulin‐secreting activity of the traditional anti diabetic plant Viscum album (mistletoe) ‐ Journal of Endocrinology, 1999）。
【００１５】
薬草は、しばしば「自然の薬局（nature's pharmacy）」の一部と言われてきた。漢方薬は現代の薬と類似の１つ以上の方法で作用するが、薬草治療は一般にずっと安全であると見なされる。実際に、「活性を有する薬剤」を単離する代わりに、従来からの医学において使用される薬の多くが薬草に由来している。薬草療法では植物全体を使用する。多くの場合、植物が共に相乗的に機能する成分を含んでおり、そして植物全体の使用は、単離化合物を使用した場合に起こりうる副作用の軽減に役立つことが観察されている。
【００１６】
人類への母なる自然の贈り物である、薬効を有する植物が、糖尿病などの疾患の治療のために、インドでは、Ａｙｕｒｖｅｄａ、Ｕｎａｎｉを初めとする伝統的な医薬システムにおいて数世紀にわたって使用されてきた。それら医薬システムは有効かつ中毒性と考えられている。疾患の治癒および予防の完全なシステムを提供するのは植物医学であり、それは最も古く、薬の最も自然な形である。有効性と安全性の歴史は数世紀にわたり、ほぼ惑星全体に及ぶ。生薬は全体論的な医学であるため、全身のアンバランスに潜在する症状を見透かして、目先の問題に対する真の恒久的解決法を出すことが可能である。
【００１７】
高等植物は我々にとって最も重要な天然資源の１つを構成する。それらは食料、繊維、木材だけではなく、オイル、香料、染料、医薬品などの多くのバイオケミカルを供給する。 植物は再生可能な資源であるが、一部の種については増大する需要を満たすために十分な量を得ることがいっそう困難となっている。生息地の破壊、および栽培が技術的に困難なことも植物の可用性の大幅な減少の原因となっている。例えば、樹木中のパクリタキセル含量は低く（樹皮中40〜100 mg/kg）、生長が遅いため、強力な抗腫瘍化合物であるパクリタキセルの需要は、太平洋イチイ（Taxus brevifolia）の樹木林を危険にさらす可能性があると主張されている。
【００１８】
多くの天然薬品について、石油、石炭、あるいは両方から代替物を合成することは可能である。一方、化学合成における経済的な限界およびこのタイプの化学合成に伴う汚染は、重要な化学物質を生産するための植物の細胞培養および分子工学の開発を導いた。全能性によって植物細胞および器官は、インビトロで有用な第二代謝産物の産生が可能になるため、植物細胞および器官培養が生化学製品の生産のために有望な代替法を提供する。第二代謝産物の分子工学は、生産性を高め、製品組成を改善させる可能性を有する。
【００１９】
代謝は、生体内での協調的な一連の共役酵素転換から成る。 第二代謝産物は、それらを産生する細胞死にとって必須ではないが、生物の体全体の健康状態に寄与する。植物内のこれらの化合物の機能には、害虫および病原体に対する保護が挙げられる。ヒトにとって、植物の二次的代謝産物は、医薬品染料、芳香、殺虫剤および／または香料として有用である。
【００２０】
第二代謝産物の生合成を制御するために、植物はそれらの一次代謝経路を調節する必要がある。これらのプロセス間での同等な制御が観察されているが、調節機構は未知である（Lelslie van der Fits & Johan Memelink, 2000）。第二代謝産物の生産は、発生の組織特異的因子または外部シグナルによって生合成遺伝子の発現レベルで制御される。代謝産物の蓄積は、ストレスに反応して生産される植物ホルモン、（メチル）ジャスモン酸によって誘発される。
【００２１】
植物における多種類の第二代謝産物の生合成は、ストレスホルモンであるジャスモン酸によって誘発される。ＯＲＣＡ‐３、ジャスモン酸反応性ＡＰＥＴＡＬＡ２(AP2)ドメイン転写調節因子の遺伝子が、移動ＤＮＡ（Transferred  DNA）活性化タギングによって単離され、そしてその過剰発現は数種の代謝産物生合成遺伝子の発現増強、そして結果的に、テルペノイドインドールアルカロイドの蓄積増加をもたらした。ジャスモン酸反応性ＡＰ‐２ドメイン転写因子による代謝産物生合成遺伝子の制御は、植物のストレス反応と代謝の変化を関連付ける可能性がある。植物は、一つの転写因子を利用して、二次代謝と協調的に一次代謝経路を制御することができる。多くの第二代謝産物の生合成は、ジャスモン酸によって誘発されるため、ＪＡ反応性代謝に関与する数種の遺伝子の調節因子としてのＡＰ２ドメインタンパク質の同定によって、他のストレス反応性植物代謝経路においても作用可能な制御機構が明らかになる。
【００２２】
米国特許第５９８０９０２号には、Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｅｃａｅ科に属する薬草であるギムネマシルベスタ(Gymnema sylvestre)の葉が、伝統的なインドの開業医によって数世紀の間、糖尿病の症状を治療するために使用されてきたと記載されている。ギムネマシルベスタは、その抗甘味特性、ブドウ糖の小腸吸収の抑制能、そしてブドウ糖投与後の血糖値上昇の抑制能に関して研究されてきた。米国特許第５９００２４０号では、ムラサキフトモモ(Syzgium cumini jamun)、ギムネマシルベスタ、苦瓜(Momordica charantia)およびソラナム・メロンゲーナ(Solatium melongena)に言及しており、これらの成分は植物性の栄養補助食を供給し、これについてはインスリン依存性糖尿病患者が望ましくない副作用もなく耐容性を示し、インスリン投与によって達成可能なレベルにまで血糖値を制御できるであろう。欧州特許国際公開公報第９８４２２１１号が栄養補給剤を申請しており、これは末期の糖尿病に進展する前に、代謝を高めることで、糖尿病の低いグルコース代謝、そして糖尿病予防のための処置として使用可能であった。特許第ＪＰ４０２２６２７号の目的は、インスリンの代わりに、高血糖症、ケトアシドーシスなどに患う患者に対する硬化剤として有用な、インスリン分泌促進薬を得ることであった。
【００２３】
中国特許第１３８００７２号には、糖尿病、他の代謝性疾患およびその合併症を予防・治癒させる薬剤について記載されている。これは、乾燥後の、または新鮮なギムネマシルベスタ植物の抽出物およびＶｏｇｌｅｐｏｔａｎｇ  ｓｕｇａｒを含んでおり、現存の技術と比較して、高い治療効果、低い毒性副作用、長い作用時間という利点を有しており、様々な糖尿病を予防・治療するために使用可能なだけでなく、高脂血症、肥満症、動脈硬化、Ｘ症候群、他を合併症の予防にも使用可能である。
【００２４】
米国特許第５９８０９０２号には、糖尿病、耐糖能異常および糖尿病と関連する様々な症状または糖尿病の症状を伴う患者の治療に有用な、経口、静脈内、皮下、経皮投与可能なギムネマシルベスタ葉材料由来の成分について記載されている。 また、該成分は、多渇症、多尿症、多食症を軽減して、β細胞を含む膵臓ランゲルハンス島を再生させ、内因性インスリン、リパーゼ、アミラーゼの濃度を上昇させ、プロインスリンおよびｃペプチドの生産を増加させて、血中脂質、トリグリセリド、遊離脂肪酸を低下させる。
【００２５】
欧州特許国際公開公報第９５１０２９２号には天然植物由来の炭水化物、即ち、水溶性の水混和性極性溶媒の抽出物を含む製剤、好ましくは各重量比が約２：１〜１：２の範囲の、非代謝性多糖類、好ましくはカラヤ(Sterculia urens)滲出液およびギムネマシルベスタの水溶性エタノール抽出物によって制御される、ヒト患者におけるグルコース代謝について記載している。
【００２６】
ギムネマシルベスタ葉の水抽出物が、一時的に甘味物質の味を抑制すると記載されている。ギムネマシルベスタの生葉が糖尿病を含めた様々な病気に対する民間薬としてインドで使用されていることも報告されている。様々な方法による、ギムネマシルベスタ葉からの約１４、１５種の異なる化合物の分離が報告されている(Stocklin, J. Agr. Food Chem. 17(4):704-708 (1969); Sinsheimer, J. Pharm. Sci. 59(5):622-628 (1970))。しかし、指摘された化学物質のいずれも、個々に、あるいは集合的に、血糖降下薬の特性に寄与するか否かに関する科学的情報について出願人は知らない。しかし、現在、今回の水溶性の水混和性極性溶媒の抽出物がインスリン分泌性の少なくとも４つの分画を含むことが見いだされている。これらの分画のうち２つが実質的に同等であり、比較的強力なインスリン分泌促進活性を示す。
【００２７】
中国特許第１２６８５１５号は、全トリテルペンサポニン、フラボン配糖体、アントシアン、多糖類などを主成分とするギムネマシルベスタの抽出物に関するもので、この中の全トリテルペンサポニン含量は５０〜９９％であり、全トリテルペンサポニンの２５〜４０％は６種類の新しいトリテルペンサポニン化合物である。該抽出物は、血糖値、血中脂質量、抗血栓性凝固の低下の活性機能を有している。
【００２８】
米国特許第６５７２８９７号には、インスリン感受性および健常な血糖値の維持への関与を証明した臨床研究とともに、他の成分および健康に良い賦形薬成分に加えて、アルファリポ酸、クロム、ルテイン、バイオフラボノイド（ケルセチンおよびルチン）、苦瓜抽出物、コロソリン酸と、ギムネマシルベスタ抽出物の必要量を含む化合物について記載されている。
【００２９】
米国特許第５８８６０２９号には、ヒト被験者において糖尿病治療に有用な同量のギムネマ酸で増量させた薬理学的有意量の（‐）Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎを含む医薬組成が記載されている。本発明の医薬組成物は膵島細胞の再生に起因して血清グルコースの有意な低下を誘発させる。医薬組成物の成分における独自の組み合わせは、膵臓細胞の再生を導き、その後これら自身がインスリンを産生し始める。組成が正常な膵臓機能を回復させるため、約４〜１２か月後に治療を中止できる。
【００３０】
米国特許第５１３７９２１号には、ギムネマシルベスタの乾燥葉またはコンズランゴ(Marsdenia condurango)の乾燥樹皮から抽出法によって入手された、血糖値上昇の阻害剤コンデュリトールＡ(Conduritol A)の使用法について記載されている。
【００３１】
Shamnugasundaramらは、インスリン依存性糖尿病での血糖調節におけるギムネマシルベスタ葉抽出物の使用法について研究した(Journal of Ethnopharmacology 30, pp.281-294, 1990)。
【００３２】
Baskaranらは、インスリン非依存性糖尿病においてギムネマシルベスタ葉の抽出物の抗糖尿病効果を研究した(Journal of Ethnopharmacology 30, pp. 295-305,1990)。患者らは、自分たちの通常の薬を中止して、ギムネマシルベスタ(GS4)だけの抽出物で血糖の恒常性を維持可能であった。これらのデータは、ＩＩ型糖尿病患者へのＧＳ４補給時に、β細胞が再生／修復される可能性を示唆した。これは、ＧＳ４補給後の患者における血清インスリン値の上昇の出現によって裏付けられる。
【００３３】
Sugihara Yらは、ギムネマシルベスタ葉由来の化合物であるギムネマ酸ＩＶのストレプトゾトシン‐糖尿病マウスにおける抗高血糖作用について記述している(J Asian Nat Prod Res. 2000; 2 (4):321-7)。ギムネマシルベスタ葉のメタノ‐ル抽出物由来のギムネマ酸は３．４〜１３．４ｍｇ／ｋｇの用量で、投与から６時間後に１３．５〜６０．０％血糖値を下げたが、これはグリベンクラミドの効力に相当する。これらの結果は、ギムネマ酸ＩＶのインスリン放出作用がギムネマシルベスタによる抗高血糖作用に寄与する可能性を示唆している。ギムネマ酸ＩＶは抗肥満・抗高血糖性プロドラッグとなりうる。
【００３４】
Rathiらは、実験的糖尿病におけるタンパク質結合性の多糖類成分およびグリコサミノグリカンに及ぼすギムネマシルベスタの作用を研究した(Indian J. Experimental Biol 19, pp.715-721,1981)。
【００３５】
Shanmugasundaramらは、ストレプトゾトシン‐糖尿病ラットのランゲルハンス島の再生に及ぼす、ギムネマシルベスタ葉の抽出物の生じ得る作用の発見を試みた(Journal of Ethnopharmacology 30, pp.265-279,1990)。
【００３６】
中国特許第１１２２６９９には、Ｂａｌｓｏｍ  ｐｅａｒ、ラゲナリアの皮、中国アンゼリカの根、ツルニチソウなどから作られたカプセルが記載されている。インスリン治療に依存しない糖尿病患者１０００例以上における臨床試験では、最高９２．５％の全奏功率が実証された。インスリンに依存する糖尿病患者における顕著な血糖値降下作用も有している。
【００３７】
Singh SNらは、ストレプトゾトシン誘発性糖尿病ラットの酵素活性に及ぼすニチニチソウ(Catharanthus roseus)の抗糖尿病性抽出物の効果を研究した(J Ethnopharmacol. 2001 Aug;76(3):269-77)。７、１５日目に経口投与された５００ｍｇ／ｋｇ用量の抽出物は、それぞれ４８．６％、５７．６％の血糖降下活性を示した。同用量での３０日間の前治療は、ＳＴＺ攻撃に対して完全な防御をもたらした(75mg/kg/i.p.xl)。結果は、治療済みラットにおけるグルコース代謝の上昇を示している。糖尿病ラットにおける酸化的ストレスの徴候である、２チオバルビツール酸反応性物質(TBARS)として測定された脂質過酸化反応の上昇も抽出物での治療によって正常値に戻された。
【００３８】
米国特許出願第２００１００２１４０１号は、Ｅｕｇｅｎｉａ属の種、具体的にはジャンボラン(Eugenia jambolina)の果肉から抽出された少なくとも１つの血糖降下薬化合物を含む、糖尿病管理用の植物性治療薬、および該治療薬の調製プロセスと関連している。
【００３９】
米国特許出願第２００２００２５３４９号には、糖尿病管理に有用な「Ａｓａｖａｓ」と「Ａｒｉｓｈｔａｓ」に分類される相乗作用を有する薬草の経口液剤が記載されており、該組成物はａ．苦瓜(2〜5%)、ｂ．ギムネマシルベスタ(8〜12%)、ｃ．プテロカルプスマルスピウム(Pterocarpus marsupium) (8〜12%)、ｄ．ジャンボラン(4〜10%)、ｅ．フェヌグリーク(Trigonellafoenum grecum)(1〜3%)から選択される治療的有効量の植物抽出物、そして任意で、Ｗｏｏｄｆｏｒｄｉａ  ｆｒｕｔｉｃｏｓａ(2〜5%)、インドナガコショウ(Piper longum)(0.1〜0.3%)、カルダモン(Elettaria cardamomum)(0.1〜0.3%)、ナツメグ(Myristica fragrans)(0.1〜0.3%)、カルダモン(Ammomum subulatum)(0.1〜0.3%)の抽出物／粉末を含む。
【００４０】
米国特許第５９７２３４２号には、ジャンボラン  Ｌａｍａｒｃｋの粒から分離された混合物、該混合物の調製、該混合物または該混合物の成分を含む薬剤、糖尿病および糖尿病と関連する合併症の治療向け該混合物の使用法について記載されている。
【００４１】
Kelkarは、彼の論文ＸＰ‐０００９４０５３１(Phytomedicine Volume 3 (4) pages 353-359, 1996/97)において、ジャンボランの果肉からの抗糖尿病性化合物の簡単な２段階精製法、タンパク質分解酵素耐性などの特性について記載した。
【００４２】
Rathi SSらは、糖尿病性白内障予防における苦瓜(MC)、ジャンボラン(EJ)、イボツヅラフジ(Tinospora cordifolia) (TC)、ムクナ(Mucuna pruriens)(MP)の有効性を評価した(Phytother Res. 2002 Dec;16(8):774〜7)。 ＭＣ、ＥＪ、ＴＣ、ＭＰ処置群における１２０日目の白内障の発生率はわずか０、０、１、２であった。 １カ月間のＭＣ、ＥＪ、ＴＣ、ＭＰ抽出物の栄養補給剤の経口投与によって、血清グルコース値は、４８時間目の値と比較して、それぞれ６４．３３％、５５．６２％、３８．０１％、４０．１７％低下した。２か月間の処理後、それぞれの値は６６．９６％、５９．８５％、４０．４１％と４５．６３％であった。ＭＣおよびＥＪが白内障の発症を予防したが、予防効果はＴＣおよびＭＰで低く、血漿グルコース値の有意な低下を伴った。
【００４３】
Grover JKらは、植物（ジャンボラン、ムクナ、イボツヅラフジ）抽出物の経口投与後のラットにおける実験的糖尿病性ニューロパシーおよび胃疾患の改善について研究した(Indian J Exp Biol. 2002 Mar;40(3):273-6)。
【００４４】
Anila Lらは、ゴマ(Sesamum indicum)、インドスグリ(Emblica officinalis)、苦瓜由来のフラボノイドの薬効について研究した。 ３つの原料のうち、インドスグリから分離されたフラボノイドが非常に強力な抗高脂血症／血糖降下活性を引き出すことで最高の薬効を発揮した(Phytother Res. 2000 Dec; 14(8):592-5)。
【００４５】
Vikrantらは、果糖給餌ラットの高血糖症および高インスリン血症の予防における苦瓜およびジャンボラン抽出物の有効性を研究した(J.Ethnopharmacol. 2001 Jul;76(2):139-43)。
【００４６】
Sharma SBらは、アロキサン誘発性糖尿病ウサギにおけるジャンボラン種子のエタノール抽出物の血糖降下／脂質降下作用を研究した(J Ethnopharmacol. 2003 Apr; 85(2-3):201-6)。
【００４７】
米国特許第６５５１６２７１５号には、II型糖尿病の予防または治療向け植物性薬用成分について記載されている。該成分は、プテロカルプスマルスピウム、カラヤマグワ(Morus alba)、ネコノヒゲ(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴンジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハマナス(Rosa rugosa)、ツユクサ(Commelina communis)、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)の抽出物を含む。該特許には、治療開始時の血糖値が約２００‐３００ｍｇ／ｄｌの患者での血糖値降下および膵臓β細胞からのインスリン分泌増加における該組成物の効果、複合糖質の単糖類への分解の抑制方法についても記載されている。
【００４８】
米国特許第６４４８４５０号には、ジフェニルエチレンプテロカルプスマルスピウムについて記述されており、これは経口投与された場合にラットの血糖値を降下させる。該化合物は糖尿病におけるグルコース代謝の異常を軽減可能な効果的な糖尿病薬である。
【００４９】
欧州特許出願国際公開公報第０１７２３１６号には、シナモン(Cinnamomum zeylanicum)、パラミツ(Artocarpus heterophyllus)、サラシアレティキュレータ、イボツヅラフジ、プテロカルプスマルスピウムから成るグループから選択される成分の混合物を含む、ヒト、特に糖尿病患者において血糖値を降下させる食用アーユルヴェーダ薬草組成物について記載されている。選択された５種類の薬草の成分の混合物が、血糖値異常および糖尿病を治療するための混合物の所要強度に応じて、治療上有効な割合で存在する。
【００５０】
米国特許第６５６２７９１号には、プテロカルプスマルスピウムから分離された新しいグルコピラノシドである６−ヒドロキシ−２−ｐヒドロキシベンジルベンゾフラン−７−Ｃ−．β．−Ｄ−グルコピラノシドおよびその分離過程について記載されている。本発明は６−ヒドロキシ−２−ｐ−ヒドロキシベンジルベンゾフラン−７−Ｃ−．β．−Ｄ−グルコピラノシドを含む医薬組成物および該化合物を使用した糖尿病の治療法とも関連している。
【００５１】
Manickam Mらは、プテロカルプスマルスピウム由来フェノールの抗高血糖活性について研究した(J Nat Prod. 1997 Jun;60(6):609-10)。プテロカルプスマルスピウム、Ｍａｒｓｕｐｓｉｎ  （１）、Ｐｔｅｒｏｓｕｐｉｎ  （２）、Ｐｔｅｒｏｓｔｉｌｂｅｎｅ（３）の心材の３つの重要なフェノール系成分のうち、 ＭａｒｓｕｐｓｉｎおよびＰｔｅｒｏｓｔｉｌｂｅｎｅは高血糖性ラットの血糖値を有意に低下させ、その効果は１，１‐ジメチルビグアニド（メトホルミン）に匹敵した。
【００５２】
Sheehan EWは、潜在的な糖尿病薬としてプテロカルプスマルスピウムの成分、（−）‐Eｐｉｃａｔｅｃｈｉｎを発見した(J Nat Prod. 1983 Mar-Apr;46(2):232-4)。（−）‐Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎは、アロキサン投与から２４時間前または２４時間以内に投与される場合、アロキサン糖尿病性ラットの高血糖症を回復に向かわせることが判明した。しかし、（−）‐Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ投与（30mg/kg、腹腔内、1日2回3日間）がアロキサン投与から９２時間後に開始された場合、コントロールラットと（−）‐Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ治療ラット間に血糖値における有意差は認められなかった。
【００５３】
Gupta SSらは、空腹時血糖値、糖耐性、アドレナリン誘発性高血糖に及ぼすイボツヅラフジの効果を研究した(Indian J Med Res.1967Jul;55(7):733-45)。
【００５４】
Prince PSらは、実験的糖尿病においてイボツヅラフジの根の抗酸化活性について研究した(J Ethnopharmacol. 1999 Jun;65(3):277-81)。６週間のＴ．ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａの根抽出物(TCREt)(2.5、5.0g/kg)は、アロキサン糖尿病ラットのチオバルビツール酸反応性物質、セルロプラスミン、αトコフェロールの血漿濃度を低下させた。該根抽出物は、アロキサン糖尿病におけるグルタチオンおよびビタミンＣの濃度の上昇も起こす。５．０ｇ／ｋｇ用量の根抽出物は最も高い効果を示した。ＴＣＲＥｔの効果はグリベンクラミドの効果よりも高かった。
【００５５】
Stanely Pらは、アロキサン誘発性糖尿病ラットにおけるイボツヅラフジの根の血糖降下作用および関連する作用を研究した(J Ethnopharmacol. 2000 Apr;70(l):9-15)。アロキサン糖尿病ラットへの水溶性コルディフォリア(T.cordifolia)根抽出物(TCREt)の経口投与は、血糖および脳脂質を有意に減少させた。該抽出物は体重、総ヘモグロビン、肝ヘキソキナーゼを上昇させた。該根抽出物は、糖尿病ラットにおいて、肝臓グルコース‐６‐ホスファターゼ、血清酸性ホスファターゼ、アルカリ性ホスファターゼ、乳酸脱水素酵素の低下も生じる。
【００５６】
Li Mらは、ハマビシ(Tribulus terrestris)由来サポニンの血糖降下作用について研究した(Zhong Yao Cai. 2002 Jun; 25(6): 420-2)。血清グルコース濃度が、ハマビシ由来サポニンによって有意に低下可能であり、正常マウスおよび糖尿病マウスにおける低下率はそれぞれ２６．２５％と４０．６７％であった。血清トリグリセリド濃度は２３．３５％減少できた。
【００５７】
米国特許第６０４２８３４号には、フェヌグリークの乾燥粉末種子(15重量パーセント)、ニゲラサティバ(Nigella sativa)の乾燥粉末種子(23重量パーセント)、オリガヌムブルガレ(Origanum vulgare)の乾燥粉末葉(10重量パーセント)、ローズマリー(Rosmarinus officinalis)の乾燥粉末樹液(10重量パーセント)、ルピナスターミス(Lupinus termis)の乾燥粉末豆(15重量パーセント)、ローソニアイナーミス(Lawsonia inermis)の乾燥粉末黒葉(12重量パーセント)、ウイキョウ(Foeniculum vulgare)の乾燥粉末種子(15重量パーセント)を含む、糖尿病治療用の薬草組成について記載されている。
【００５８】
インド特許出願第３０５／ＭＡＳ／９９号には、植物(Trichopus zeylanicus、ウィザニア(Withania somnifera)、インドナガコショウ)からの抗糖尿病漢方薬の調製過程が記載されている。
【００５９】
Andallu Bらは、ホオズキ(Withania somnifera dunal)の根の血糖降下／利尿／コレステロール降下作用を研究した(Indian J Exp Biol. 2000 Jun;38(6):607-9)。ウィザニア(ashvagandha)の根の血糖降下／利尿／コレステロール降下作用がヒト被験者において評価された。 血糖降下は経口血糖降下薬による低下と同程度であった。 尿ナトリウム、尿量の有意な増加、血清コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬ（低比重リポタンパク質）、ＶＬＤＬ（超低密度リポタンパク質）コレステロールの有意な増加が認められ、ウィザニアの根が血糖降下薬、利尿剤、コレステロール低下剤となる可能性を示唆している。
【００６０】
米国特許第５４７０８７９号には、フェヌグリーク(Trigonella foenum graecum L)から得られた、実質的に純粋な有効量の４‐ヒドロキシイソロイシン、またはそのラクトン型、またはその混合物の投与によるインスリン分泌促進およびインスリン非依存性糖尿病の治療のプロセスが記載されている。
【００６１】
Vats Vらは、通常のアロキサン糖尿病ラットにおけるフェヌグリーク、ホーリーバジル(Ocimum sanctum Linn)、プテロカルプスマルスピウム  Ｌｉｎｎの抗高血糖作用および血糖降下作用を評価した(J Ethnopharmacol. 2002 Jan;79(l):95-100)。
【００６２】
Abdel-Barry JAらは、健常な志願者においてフェヌグリーク葉の水性抽出物の血糖降下作用を研究した(East Mediterr Health J. 2000 Jan;6(l):83-8)。
【００６３】
Ali Lらは、フェヌグリークの種子の血糖降下作用の特性付けを行った(Planta Med. 1995 Aug; 61(4):358-60)。フェヌグリークの全粉およびその抽出物が通常の糖尿病モデルラットに及ぼす血糖降下作用が試験された。グルコースと同時摂食させた場合、粉末、そのメタノール抽出物、メタノール抽出後の残留物は有意な血糖降下作用を持っていた。
【００６４】
Zia Tらは、健常マウスに経口投与されたフェヌグリーク(methi)の血糖降下作用を評価した(J Ethnopharmacol. 2001 May;75(2-3):191-5)。水溶性のメタノール抽出物における血糖降下作用の存在は、活性のある化合物が天然状態で極性を有することを示唆している。
【００６５】
Gupta Aらは、２型糖尿病における血糖コントロールおよびインスリン抵抗性に及ぼすフェヌグリーク(コロハ)の種子の効果を研究した：二重盲検プラセボ対照試験(J Assoc Physicians India. 2001 Nov; 49:1057-61)。 コロハの種子の補助的使用によって、軽度の２型糖尿病患者において血糖コントロールを改善させて、インスリン抵抗性を軽減させた。 高トリグリセリド血症に及ぼす好ましい効果も認められる。
【００６６】
Sharma RDらは、I型糖尿病における血糖および血清脂質に及ぼすコロハ種子の効果を研究した(Eur J Clin Nutr. 1990 Apr;44(4):301-6)。コロハ食は空腹時血糖を有意に低下させ、ブドウ糖負荷試験の結果を改善させた。２４時間ブドウ糖尿排泄量が５４％減少した。 血清総コレステロール、ＬＤＬ／ＶＬＤＬコレステロール、トリグリセリドも有意に減少した。 しかし、ＨＤＬコレステロール分画に変化はなかった。これらの結果は糖尿病管理におけるコロハ種子の有用性を示している。
【００６７】
米国特許第６３９１８５４号には、苦瓜の水溶性分画、その調製方法、高血糖性障害の治療における使用法が記載されている。特許第ＲＯ１１６０４４号特許出願において、粘性のある産物が得られるまで、未完熟な乾燥・苦瓜の粉末果実のメタノール抽出およびエタノール溶液による濃縮のプロセスは、糖尿病治療において補助薬として使用される内用剤の調製プロセスである。米国特許第６１２７３３８号には、苦瓜の水溶性抽出物、その調製方法、高血糖障害の治療における使用方法が記載されている、また特許国際公開公報第９８４３４８４号にも記載されている。
【００６８】
米国特許第６０４３８２４号には、カプセル内にフェヌグリーク、ニゲラサティバ、オリガヌムブルガレ、ローズマリー、ルピナスターミス、ローソニアイナーミス、ウイキョウを含む、糖尿病治療用の薬草の組成物が出願されている。米国特許第５８８６０２９号は医薬品の発明に触れており、これは膵臓島細胞の再生に起因する血清グルコースの有意な減少をもたらす。医薬の組成には、ギムネマ酸、タマラニッケイ(Cinnamomum tamala)、ムラサキフトモモ(Syzgium cumini)、フェヌグリーク、ニーム(Azardichta indica)、フィカス(Ficus racemosa)、イボツヅラフジが含まれる。この併用によって、膵臓細胞の再生が導かれ、細胞自身がインスリン産生を開始する。
【００６９】
特許出願国際公開公報第０１７２３１６号には、セイロンシナモン(Cinnamomum zeylanicum)、パラミツ、サラシアレティキュレータ、イボツヅラフジ、プテロカルプスマルスピウムから成るグループから選択される成分の混合物を血糖値異常および糖尿病を治療するための治療上有効な割合で含む、糖尿病患者の血糖値を降下させる食用アーユルヴェーダ 薬草組成物について記載されている。
【００７０】
米国特許第５９１７０５２号には、Ｃｒｙｐｔｏｌｅｐｉｓ  ｓｐの血糖降下活性または抽出物に関して記述した研究は過去になく、ＣｒｙｐｔｏｌｅｐｉｎｅまたはＱｕｉｎｄｏｌｉｎｅといったＱｕｉｎｄｏｌｉｎｅアルカロイドが血糖降下剤として有用となり得ると記載されている。本発明は、特に糖尿病の被験者における血糖降下剤またはトリグリセリド降下剤として、Ｃｒｙｐｔｏｌｅｐｉｓ  ｓｐの抽出物およびＱｕｉｎｄｏｌｉｎｅ、ＣｒｙｐｔｏｌｅｐｉｎｅなどのＱｕｉｎｄｏｌｉｎｅ族のアルカロイドの化合物、そしてこれらの製薬的に許容される塩の使用法を提供する。
【００７１】
米国特許第５８３７２５５号には、Ｈａｒｕｎｇａｎａ  ｓｐｐまたはＶｉｓｍｉａ  ｓｐｐの抽出物の血糖降下活性について記述した研究は過去になく、またＨａｒｕｎｇａｎｉｎまたはＶｉｓｍｉｎなどのアントラセノン化合物の血糖降下剤としての有用性も過去に示唆されていないとしている。本発明は、特に糖尿病の被験者における血糖降下剤または血糖降下剤として、Ｈａｒｕｎｇａｎｉｎ  ｓｐｐまたはＶｉｓｍｉａ  ｓｐｐの抽出物の使用法、ＨａｒｕｎｇａｎｉｎおよびＶｉｓｍｉｎなどのアントラセノン化合物、そしてこれらの製薬的に許容される塩の使用法を提供する。
【００７２】
米国特許第２００２０４１９０４号では、近年、抗糖尿病薬に分類される治療薬のうち、αグルコシダーゼを阻害するαグルコシダーゼ阻害剤が、糖尿病および前糖尿病の治療において広く使用されていることが言及されている。インドおよびスリランカでの古代医学においては昔からサラシアレティキュレータ(Salacia reticulata)が使用されてきた。本発明の目的は、よじのぼり植物(woody climbing plant)であるサラシアプリノイデス(Salacia prinoides)やサラシアオブロンガ(Salacia oblonga)から抽出され、αグルコシダーゼ活性を阻害する特性（本明細書において「αグルコシダーゼ阻害剤」と呼ばれる化合物）において優れた新規化合物を提供することである。米国特許第５，６９１，３８６号では、サラシア属の植物が糖尿病の治療に使用されていると報告されている。インドでは、サラシアプリノイデスの植物全体を熱湯抽出物が、抗糖尿病薬として経口で服用されている(P.N. Mehra ら, Res. Bull Punjab University Sci 20: 487-502 1969)。スリランカでは、サラシアレティキュレータの根の水抽出物が、糖尿病治療において使用されている(E.H. Karunanayake ら, J. Ethnopharmacol 13 (2):227-228 1985)。本発明では、血糖降下活性を有する、新規トリテルペノイド化合物３−ｂｅｔａ，３０−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌｕｐ−２０−２９−ｅｎ−２、そしてその製薬的に許容できる塩、精製された新規トリテルペノイド化合物を含む血糖降下組成物の提供、そして血糖降下剤としてのそれらの使用法を出願する。本発明はさらに糖尿病治療に有用な精製されたトリテルペノイド化合物を含む組成物、または血糖降下剤として使用される製薬的に許容できる塩を含む。
【００７３】
米国特許第５９１６５６７号は、植物性の糖尿病治療薬と関連しており、Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓｅａ族の植物の種子から加工される治療薬と関連しており、その繊維は食物と腸・胃内膜の間の未かくはん層の粘性を増大させて、炭水化物の吸収を遅らせることで血糖値に影響を及ぼす。
【００７４】
米国特許第５４７０８７３号には、糖尿病動物の血糖値調節には効果的ではあるが、それ自体は、グルコース値を正常値に戻すには不十分であり、また治療中止後に持続的効果の測定されない、朝鮮人参の根から得られたマルトールおよびネコノヒゲから得られた抽出物を含むＮＩＤＤＭ治療用の組成物が開示されている。
【特許文献１】米国特許第５９８０９０２号明細書
【特許文献２】米国特許第５９００２４０号明細書
【特許文献３】国際公開第９８４２２１１号パンフレット
【特許文献４】特許第４０２２６２７号公報
【特許文献５】中国特許第１３８００７２号公報
【特許文献６】国際公開第９５１０２９２号パンフレット
【特許文献７】中国特許第１２６８５１５号公報
【特許文献８】米国特許第６５７２８９７号明細書
【特許文献９】米国特許第５８８６０２９号明細書
【特許文献１０】米国特許第５１３７９２１号明細書
【特許文献１１】中国特許第１１２２６９９号公報
【特許文献１２】米国特許出願第２００１００２１４０１号明細書
【特許文献１３】米国特許出願第２００２００２５３４９号明細書
【特許文献１４】米国特許第５９７２３４２号明細書
【特許文献１５】米国特許第６５５１６２７１５号明細書
【特許文献１６】米国特許第６４４８４５０号明細書
【特許文献１７】国際公開第０１７２３１６号パンフレット
【特許文献１８】米国特許第６５６２７９１号明細書
【特許文献１９】米国特許第６０４２８３４号明細書
【特許文献２０】インド特許出願第３０５／ＭＡＳ／９９号公報
【特許文献２１】米国特許第６３９１８５４号明細書
【特許文献２２】米国特許第６１２７３３８号明細書
【特許文献２３】国際公開第９８４３４８４号パンフレット
【特許文献２４】米国特許第６０４３８２４号明細書
【特許文献２５】米国特許第５８８６０２９号明細書
【特許文献２６】国際公開第０１７２３１６号パンフレット
【特許文献２７】米国特許第５９１７０５２号明細書
【特許文献２８】米国特許第５８３７２５５号明細書
【特許文献２９】米国特許出願第２００２０４１９０４号明細書
【特許文献３０】米国特許第５６９１３８６号明細書
【特許文献３１】米国特許第５９１６５６７号明細書
【特許文献３２】米国特許第５４７０８７３号明細書
【非特許文献１】Kohli ら, Ayurvedic perspective of Diabetes and allied disorders, Vedic Life sciences
【非特許文献２】Herbal Drugs as Antidiabetics: An Overview; Sanjay M. Jachak, CRIPS Vol. 3, Number2, April-June 2002
【非特許文献３】Gray & Flatt Insulin‐secreting activity of the traditional anti diabetic plant Viscum album (mistletoe) ‐ Journal of Endocrinology, 1999
【非特許文献４】Lelslie van der Fits & Johan Memelink, 2000
【非特許文献５】Stocklin, J. Agr. Food Chem. 17(4):704-708 (1969)
【非特許文献６】Sinsheimer, J. Pharm. Sci. 59(5):622-628 (1970)
【非特許文献７】Journal of Ethnopharmacology 30, pp.281-294, 1990
【非特許文献８】Journal of Ethnopharmacology 30, pp. 295-305,1990
【非特許文献９】J Asian Nat Prod Res. 2000; 2 (4):321-7
【非特許文献１０】Indian J. Experimental Biol 19, pp.715-721,1981
【非特許文献１１】Journal of Ethnopharmacology 30, pp.265-279,1990
【非特許文献１２】J Ethnopharmacol. 2001 Aug;76(3):269-77
【非特許文献１３】Phytomedicine Volume 3 (4) pages 353-359, 1996/97
【非特許文献１４】Phytother Res. 2000 Dec; 14(8):592-5
【非特許文献１５】J.Ethnopharmacol. 2001 Jul;76(2):139-43
【非特許文献１６】J Ethnopharmacol. 2003 Apr; 85(2-3):201-6
【非特許文献１７】J Nat Prod. 1997 Jun;60(6):609-10
【非特許文献１８】J Nat Prod. 1983 Mar-Apr;46(2):232-4
【非特許文献１９】Indian J Med Res.1967Jul;55(7):733-45
【非特許文献２０】J Ethnopharmacol. 1999 Jun;65(3):277-81
【非特許文献２１】J Ethnopharmacol. 2000 Apr;70(l):9-15
【非特許文献２２】Zhong Yao Cai. 2002 Jun; 25(6): 420-2
【非特許文献２３】Indian J Exp Biol. 2000 Jun;38(6):607-9
【非特許文献２４】J Ethnopharmacol. 2002 Jan;79(l):95-100
【非特許文献２５】East Mediterr Health J. 2000 Jan;6(l):83-8
【非特許文献２６】Planta Med. 1995 Aug; 61(4):358-60
【非特許文献２７】J Ethnopharmacol. 2001 May;75(2-3):191-5
【非特許文献２８】J Assoc Physicians India. 2001 Nov; 49:1057-61
【非特許文献２９】Eur J Clin Nutr. 1990 Apr;44(4):301-6
【非特許文献３０】P.N. Mehra ら, Res. Bull Punjab University Sci 20: 487-502 1969
【非特許文献３１】E.H. Karunanayake ら, J. Ethnopharmacol 13 (2):227-228 1985
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００７５】
本発明の目的は、食用の植物性栄養補助食品を提供することである。本発明は、インスリン活性を増強させて糖尿病患者を治療するための方法および組成物に関する。該組成物は、グルコース値の変動を取り除く効果を有する。
【課題を解決するための手段】
【００７６】
インスリン増強剤は、植物の抽出物由来の天然物質であり、ヒトが安全に摂取できる。この天然由来の薬剤は、副作用を起こさないという利点を有する。これらの薬剤は、経口血糖降下薬またはインスリンなどの従来の薬物療法と併用可能である。
【００７７】
植物性製剤に関して報告されている主な問題の１つは、混合物に存在する全ての検出可能な成分の包括的な定性的／定量的特性付けにおける不明瞭さである。植物性抽出物に関するこれらの情報の利用は、治療効果およびこれらの植物性抽出物に存在する成分の両方の科学的検証・標準化において主な役割を果たす。
【００７８】
代謝産物プロファイリングは、オートメーションにおいて迅速で、信頼でき、高感度で、適切な強力ツールとして出現しており、かなりの数の代謝産物を対象とする。一連の分析技術は、クロマトグラフ分離による質量分析における感度および普遍性を向上させる。マルチターゲットプロファイリングの利用は、初期にはヒト疾患の迅速な臨床検出に限られていたが、現在では質量分析法を利用した代謝スクリーニング法が植物研究においてますます使用されている。質量分析法の主な利点は、未知のピークを、それらの正確な化学構造に関する予備知識なしに、既知の標的検体と同程度に確実に判定できることである。ガスクロマトグラフィー／質量分析法(GC/MS)を利用した研究では、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａの葉抽出物由来の３２６種類の異なる化合物が自動的に定量されている。これらの化合物の約半数に化学的構造を割り当てることが可能である。Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓの４つの遺伝子型（２つのホモ接合性の生態型および各生態型の変異体）の比較によって、各遺伝子型が異なる代謝プロファイルを有することが示された。主成分分析などのデータマイニングツールによって、これらの大きなデータセットを使用して「代謝表現型」の割り当てが可能となった。本研究の結果によって、２つの生態型の代謝表現型が、単一遺伝子座の変異体およびそれらの親の生態型の代謝表現型よりも分岐していることが示された。これらの結果は、既存の機能的ゲノムアプローチの威力を大幅に拡大、向上させるためのツールとしての代謝産物プロファイリングの使用を実証している。高等植物における代謝産物レベルでの化学的複雑性および多様性の増大に起因して、細胞の全ての代謝産物を同時にプロファイリングするための単独の技術は存在しない。この問題は、代謝産物を主なプロファイリング分類（トリテルペノイド、フェノール、脂質、炭水化物、アミノ酸、炭水化物）に分けることで対処できる。ＧＣ／ＬＣ／ＥＳＩ‐ＭＳといったハイフン付きの質量分析技術は、化学的同定に利用可能な、相対的な定量的元素組成および具体的情報を提供する。植物の代謝産物のプロファイリング向けの連続タンデム質量分析の可能なイオントラップ質量分析計と適合したＨＰＬＣを使用した方法(HPLC-ESI-MSn)が開発されている。このアプローチは、ムラサキウマゴヤシの複数の品種におけるサポニン配糖体のプロファイリング、そしてそれに続くマメ科植物モデルタルウマゴヤシ(M.truncatula)とこれらプロファイルとの比較に利用されている。この技術を利用して、今日までにタルウマゴヤシにおいて２７種類の新しいサポニン配糖体が同定されている。ムラサキウマゴヤシおよびタルウマゴヤシにおける新しいマロン酸サポニン配糖体の同定にもこの技術は利用された。
【００７９】
代謝産物グリッド(Metagrid)
糖尿病治療に使用される、治療と関連した抽出物／分子（「Yezdex」）の分離用に選択された植物は、標的・非標的スクリーニング法の対象となっている。進行中の標的スクリーニング法は、多数の植物抽出物の包括的な代謝産物プロファイリングを特徴としており、代謝産物グリッドの作成を促進させると予測された。市販されている既存の薬剤および／または植物抽出物の製剤による個々の植物種の広範な比較分析によって、個別使用および／または併用可能な固有／共通の分子成分の存在が明らかにされており、新しい治療用製剤の発見を加速させている（図８）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００８０】
スクリーニング方法：
抽出（図９及び１０参照）
方法１：ソックスレー抽出器を使用して様々な薬用植物の部分から連続抽出を実施した。使用した溶媒は、非極性から始まり極性となる連続極性に基づいており、石油エーテル（植物ステロール、不揮発性油と脂）、ベンゼン（不揮発性油と脂）、クロロホルム（アルカロイド）、アセトン（植物ステロール、フェノールとタンニン）エタノール（アルカロイド、炭水化物、グリコシド、植物ステロール、サポニン、フェノール、タンニン、タンパク質とアミノ酸）、水（アルカロイド、炭水化物、グリコシド、サポニン、フェノール、タンニン、タンパク質、アミノ酸、ゴムと粘質物）によって６５℃で様々な代謝産物が抽出される。これらの分画は、凍結乾燥させ、４℃で琥珀色のボトル内に保存した。
【００８１】
アルカロイドのＭａｙｅｒ＆ Ｄａｇｅｎｄｏｒｆ試験、炭水化物のモリッシュ／フェーリング／ベネディクト試験、植物ステロールおよびトリテルペンのＬｉｅｂｅｒｍａｎ  Ｂｕｃｈａｒｄ試験、不揮発性油および脂のスポット試験、フェノール化合物およびタンニンの塩化第二鉄・酢酸鉛試験、タンパク質およびアミノ酸のニンヒドリン・ビウレット試験、ゴムおよび粘液のアルコール沈殿およびそれに続くモリッシュ試験などの様々な試験を使用して、これらの抽出物について植物化学的調査も実施した。
【００８２】
方法２：特定のクラスの代謝産物を特性付けするために、分画抽出法を採用した。この方法では、薬用植物の各部に存在する多糖、テルペノイド、フェノール、アルカロイド、オイル、脂肪、ろう状物質などの様々な代謝産物がスクリーニングされた（図１１）。
【００８３】
高速液体クロマトグラフィー（「HPLC」）プロファイリング
抽出した分画をμＢｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８カラム(Waters Alliance 2695 Separation Module)を使用したＨＰＬＣにかけて、成分の代謝産物を分離させた。メタノール：水／アセトニトリル：水(80:20、60:40、50:50、40:60、20:80)の混液を使用して分画を溶出させた。必要な場合には勾配分離も実施した。５〜１０μＬのサンプルを流速１ｍＬ／分で注入して、ＨＰＬＣを３０分間実施した。フォトダイオードアレイで検出して、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ（商標）ソフトウェアを使用して結果を分析した。
【００８４】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦによる精製／部分精製した抽出物の同定・特性付け
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  Ｖｏｙａｇｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ４２６６を使用して代謝産物を同定・特性付けした。使用したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ用マトリクスはα‐シアノ‐４‐ヒドロキシ桂皮酸であった。構造解明のためにＭｅｔａｇｉｄの固有／共通の副産物について核磁気共鳴分析(NMR)を実施予定である。
【００８５】
包括的成分プロファイリングおよびＭｅｔａｇｒｉｄの作成
治療用製剤およびその各成分の比較プロファイルに取り組んでいる。ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１（表１参照）治療用製剤は、約１５種類の薬用植物を含んでおり、質量分析法(MALDI-TOF MS)を利用してそれらの比較分析に着手している。製剤に加えて、ＨＰＬＣを利用して５１種類の各植物抽出物（表２参照）を包括的にプロファイリングした。これまでに実施された生化学的プロファイリングの代表的な分析データを以下に示している。
【実施例１】
【００８６】
製剤ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１および成分植物の包括的成分プロファイリングに基づく質量分析
実施例１：Ｔｆｇ、Ｅｊ、Ｇｓのメタノール／エタノール抽出物を先述のスクリーニング方法１を使用して分析した。メタノール抽出物ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５とクロロホルム抽出物ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿ＭＬ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３を比較した場合に、両方の溶媒において共通の質量スペクトル(m/z 104、112、176、184、212、228、241、496、522、592、606)が明らかになった（表３、図１参照）。分子質量スペクトルのピーク(m/z 203、267、337、634、694)はメタノール抽出物に固有であり、分子質量スペクトルのピーク(m/z 190、336、340、390、520、621)はクロロホルム抽出物に固有であった。
【実施例２】
【００８７】
実施例２：上記の方法２を利用して、治療用製剤ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１および上記のその各成分の比較プロファイリングを実施して、テルペノイド／フェノールを分離した。製剤のクロロホルム分画ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０３とその成分ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０３との質量分析での比較結果によって、いくつかの共通した質量スペクトルのピーク(m/z 104、138、172、184、336)が判明し、疾患の治療において重要な役割を果たす可能性のあるテルペノイド／フェノールの存在を示唆している。製剤に存在するが、これまで分析された薬用植物の部分の少数にも固有に存在するm/z２１２、２８８、３３８、４９６．３、５２０．３９、６２３．４８などの質量スペクトルのピークは、これらの特定化合物の起源を、治療用製剤に到達するために使用された特定植物または植物の部分にまで遡るためにこのシステムを利用可能であることを示唆している（図２参照）。
【実施例３】
【００８８】
実施例３：塩基性アルカロイドを方法２で抽出して、ＨＰＬＣおよび質量分析によってプロファイリングした。製剤のクロロホルム‐メタノール分画ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５：０３とその成分ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５：０３との質量分析での比較結果によって、共通の質量(m/z 104、138、172、184、336)が判明し、疾患の治療に重要な役割を果たす可能性のある塩基性アルカロイドおよびその前駆体の存在を示唆している。例２に記載のとおり、製剤に存在するが、これまで分析された薬用植物の部分の少数にも固有に存在するm/z- m/z １１２、１５５、２１２、２８６、２８８、３３８、３５２．１６、４９６．３８、５２０．３９、６２３．４８などの質量スペクトルのピークは、これらの特定化合物の起源を、治療用製剤に到達するために使用された特定植物または植物の部分にまで遡るためにこのシステムを利用可能であることを示唆している（表４ 及び 図３参照）。
【実施例４】
【００８９】
実施例４：第４級アルカロイドを方法２で抽出して、ＨＰＬＣおよび質量分析によってプロファイリングした。製剤のメタノール分画ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５とその成分植物ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５との質量分析での比較結果によって、共通の質量スペクトルのピーク(m/z 104、172、190、212、228、294、379)の存在が判明し、第４級アルカロイド、Ｎ酸化物、およびその前駆体を示唆している。例２、３に記載のとおり、製剤に存在するが、これまで分析された薬用植物の部分の少数にも固有に存在するm/z-１１８．１、１３８．０６、２４１．１７、２５０．１、２６５．９７、２９６、３４５、４４１．０５、４４３．０４、４９２．９８などの質量スペクトルのピークは、これらの特定化合物の起源を、治療用製剤に到達するために使用された特定植物または植物の部分にまで遡るためにこのシステムを利用可能であることを示唆している（表５ 及び 図４参照）。
【００９０】
各植物抽出物のＨＰＬＣによる包括的な成分プロファイリングおよび代謝産物フィンガープリンティング
抽出した分画をμＢｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８カラム(Waters Alliance 2695 Separation Module)を使用したＨＰＬＣにかけて、成分の代謝産物を分離させた。メタノール：水／アセトニトリル：水(80:20、60:40、50:50、40:60、20:80)の混液を使用して分画を溶出させた。必要な場合には勾配分離も実施した。５−１０μＬのサンプルを流速１ｍＬ／分で注入して、ＨＰＬＣを３０分間実施した。フォトダイオードアレイで検出して、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ（商標）ソフトウェアを使用して結果を分析した。
【００９１】
５１種類の各植物抽出物（表２参照）の包括的な成分プロファイリングおよび代謝産物フィンガープリンティングを実施した（表６及び 図５参照）。
【００９２】
包括的な代謝産物フィンガープリンティング解析によって、同様の条件下で抽出された各植物抽出物に存在する共通／固有の成分の存在が判明した（図７参照）。
【００９３】
表７にまとめられているデータ（保持時間および吸収極大の組み合わせ照合を利用）に到達するために使用された直感的方法が、図６、７に示す２、３の代表例を使用して解説されている。
【００９４】
ＨＰＬＣおよび質量分析によって抽出物の代謝産物を無作為にスクリーニングして、その結果から、ＭＳｎおよびＮＭＲによる構造解明および特性付けのさらなる対象となりうる、大半の抽出物において共通の代謝産物群および一部の固有の分子量も認められることが明らかになった。さらに、これらの特性付けされた分子について、合成化学的アプローチを利用した誘導体化法を実施した。
【００９５】
溶媒の消費量が少なく、抽出時間が短い効率的な抽出を期待して、従来の抽出方法に対して二酸化炭素抽出法を実施されうる。
【００９６】
抽出物の生物活性スクリーニング：
５１種類の各抽出物およびこれらの組み合わせは、糖尿病の一次、二次アッセイシステムに使える状態にある。
【００９７】
一次アッセイにおいて抽出物を試験する：
ａ．特性付けされた植物抽出物による治療に反応した、インスリン分泌レベルにおける変化をモニターするために、マウスの膵島細胞株(HIT、HIP、RIN、α‐TC、β‐TC)を使用。
ｂ．特性付けされた植物抽出物による治療に反応した、マウスの脂肪細胞株３Ｔ３−Ｌ１のインスリン耐性における変化もモニターする。
【００９８】
植物抽出物を検証するために、マウスモデルを使用した二次アッセイを実施する。この目的のために、異なる種類のマウスを使用する。
ａ．ストレプトゾトシン(STZ)／アロキサン誘発糖尿病マウス
ｂ．遺伝子改変マウスモデル(db/db、db/ob、ob/ob)
【００９９】
糖尿病および関連障害の治療において数種の代謝産物生合成遺伝子の発現を増強させて、結果的に、目的の二次代謝産物の蓄積増加をもたらすことを期待して、ＯＲＣＡ‐３遺伝子、ジャスモン酸反応性ＡＰＥＴＡＬＡ２(AP2)ドメイン転写調節因子を移入ＤＮＡ活性化タギングによって単離して、これらの治療用植物において発現させることができる。
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明は、１５種類の異なるインドの伝統薬用植物の混合物と関連しており、その化合物は、糖尿病の治療効果、より具体的には非中毒性の薬用植物に由来する組成物によるII型糖尿病の治療効果の確認のために同上をスクリーニングするために同定・分離されており、ＮＩＤＤＭの予防、治療、治癒に有効である。
【０１０１】
製剤ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１に達するために使用される薬用植物の一覧。
【表１】
2008523380.tif 000002
【０１０２】
個々の植物由来の抽出物の一覧。
【表２】
2008523380.tif 000003
【０１０３】
個々の抽出物に共通または固有の化合物を示す、比較質量スペクトルピーク解析を使用して到達した代表的な質量スペクトルピークグリッド。
【表３】
2008523380.tif 000004
【０１０４】
製剤ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５：０３およびその成分ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿ＴｆｇＬ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５：０３＆ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５：０３のクロロホルム‐メタノール分画の質量分析における比較結果（製剤および成分植物の集団の両方に生じる共通の質量スペクトルピークを示す） 
【表４】
2008523380.tif 000005
【０１０５】
製剤ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５およびその成分植物ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５のメタノール分画の質量分析における比較結果
【表５】
2008523380.tif 000006
【０１０６】
ＨＰＬＣ代謝産物フィンガープリンティングを利用して特性付けされた数種の個々の植物抽出物に含まれる成分の推定総数
【表６】
2008523380.tif 000007
【０１０７】
２、３の代表例（Ｍａ＿Ｌｅ＿Ｗａ＿０１ｖ／ｓＷｓ＿Ｒｏ＿Ｗａ＿０１、Ｃａ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１ｖ／ｓＷｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０ｌｖ／ｓＴｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１）を用いた、異なる植物抽出物において実施された比較ＨＰＬＣフィンガープリンティング解析のまとめ
【表７】
2008523380.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１−１】（Ａ‐Ｆ）メタノール抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５）およびクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿ＭＬ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３）の代表的な質量スペクトル。
【図１−２】（Ａ‐Ｆ）メタノール抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５）およびクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿ＭＬ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３）の代表的な質量スペクトル。
【図２−１】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０３）および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０３）のクロロホルム分画間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図２−２】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０３）および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０３）のクロロホルム分画間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図２−３】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０３）および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０３）のクロロホルム分画間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図３−１】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５：０３）および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５：０３）のクロロホルム‐メタノール分画間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図３−２】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５：０３）および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５：０３）のクロロホルム‐メタノール分画間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図３−３】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５：０３）および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５：０３、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５：０３）のクロロホルム‐メタノール分画間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図４−１】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５）のメタノール分画および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５）の間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図４−２】（Ａ−Ｅ）製剤（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｆｏｒ＿０００１＿０５）のメタノール分画および数種の成分のクロロホルム抽出物（ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｍｃｈ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｅｊ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｔｆｇ＿Ｓｅ＿０５、ＡＧＴ＿Ｄ＿Ｇｓ＿Ｍｌ＿０５）の間での比較質量分析における代表的な質量スペクトル。
【図５−１】選択された波長での抽出物Ｍａ＿Ｌｅ＿Ｗａ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｗａ＿０１のクロマトグラム。
【図５−２】選択された波長での抽出物Ｍａ＿Ｌｅ＿Ｗａ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｗａ＿０１のクロマトグラム。
【図５−３】選択された波長での抽出物Ｍａ＿Ｌｅ＿Ｗａ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｗａ＿０１のクロマトグラム。
【図５−４】選択された波長での抽出物Ｍａ＿Ｌｅ＿Ｗａ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｗａ＿０１のクロマトグラム。
【図５−５】選択された波長での抽出物Ｍａ＿Ｌｅ＿Ｗａ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｗａ＿０１のクロマトグラム。
【図６−１】選択された波長での抽出物Ｃｒ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１のクロマトグラム。
【図６−２】選択された波長での抽出物Ｃｒ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１のクロマトグラム。
【図６−３】選択された波長での抽出物Ｃｒ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１のクロマトグラム。
【図６−４】選択された波長での抽出物Ｃｒ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１のクロマトグラム。
【図６−５】選択された波長での抽出物Ｃｒ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１のクロマトグラム。
【図６−６】選択された波長での抽出物Ｃｒ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１、Ｗｓ＿Ｒｏ＿Ｅｔ＿０１のクロマトグラム。
【図７−１】選択された波長での抽出物Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０１、Ｔｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１のクロマトグラム。
【図７−２】選択された波長での抽出物Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０１、Ｔｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１のクロマトグラム。
【図７−３】選択された波長での抽出物Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０１、Ｔｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１のクロマトグラム。
【図７−４】選択された波長での抽出物Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０１、Ｔｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１のクロマトグラム。
【図７−５】選択された波長での抽出物Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０１、Ｔｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１のクロマトグラム。
【図７−６】選択された波長での抽出物Ｅｊ＿Ｓｅ＿Ｍｅ＿０１、Ｔｔ＿Ｆｒ＿Ｍｅ＿０１のクロマトグラム。
【図８】適切な治療用抽出物／分子を達成するＡｖｅｔｈａ'ｓ  Ｍｅｔａｇｒｉｄ
【図９】Ｍｅｔａｇｒｉｄに至る抽出プロセス
【図１０】逐次抽出プロセス
【図１１】分画抽出方法
【図１−１】
2008523380.tif 000009
【図１−２】
2008523380.tif 000010
【図２−１】
2008523380.tif 000011
【図２−２】
2008523380.tif 000012
【図２−３】
2008523380.tif 000013
【図３−１】
2008523380.tif 000014
【図３−２】
2008523380.tif 000015
【図３−３】
2008523380.tif 000016
【図４−１】
2008523380.tif 000017
【図４−２】
2008523380.tif 000018
【図５−１】
2008523380.tif 000019
【図５−２】
2008523380.tif 000020
【図５−３】
2008523380.tif 000021
【図５−４】
2008523380.tif 000022
【図５−５】
2008523380.tif 000023
【図６−１】
2008523380.tif 000024
【図６−２】
2008523380.tif 000025
【図６−３】
2008523380.tif 000026
【図６−４】
2008523380.tif 000027
【図６−５】
2008523380.tif 000028
【図６−６】
2008523380.tif 000029
【図７−１】
2008523380.tif 000030
【図７−２】
2008523380.tif 000031
【図７−３】
2008523380.tif 000032
【図７−４】
2008523380.tif 000033
【図７−５】
2008523380.tif 000034
【図７−６】
2008523380.tif 000035
【図８】
2008523380.tif 000036
【図９】
2008523380.tif 000037
【図１０】
2008523380.tif 000038
【図１１】
2008523380.tif 000039