(57)【要約】酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質（ＤＣＰ）の組成物、並びにシラジット、すなわちアンモナイト、サンゴ及び他の無脊椎動物の化石からの前記ＤＣＰの単離。より詳細には、酸化ジベンゾ−アルファ−ピロンまたはその配合体、ホスホクレアチン、タンパク質、グリセロールの脂肪酸アシルエステル、並びに他の小さなリガンド、例えばカロテノイド、ステロール及び芳香族酸をコアな構造フラグメントとして含むＤＣＰ組成物と、それらの生物学的機能とについての説明に対して。医薬、栄養、スキンケア及びパーソナルケアの処方もまた説明される。これらの発見は、ＤＣＰをシラジットの主要な生理活性物質として確立する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．ジベンゾ−アルファ−ピロンまたはその誘導体；
ｂ．ホスホクレアチン；
ｃ．約２ＫＤ以下の分子量の色素ペプチド；及び
ｄ．グリセロールの脂肪酸アシルエステルを有する脂質、
を含む、ジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質（ＤＣＰ）の組成物。
【請求項２】
式（Ｉ）の該ジベンゾ−アルファ−ピロンを含む、請求項１に記載の組成物：
【化１】
2008504231.tif 000048
式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル及びＯ−アミノ−アシルからなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、各々独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル、Ｏ−アミノ−アシル及び脂肪酸アシル基からなる群から選択される。
【請求項３】
該ホスホクレアチンは、エステル結合を介して該ジベンゾ−アルファ−ピロンの３位または８位に結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
該色素ペプチドは、
１以上のアミノ酸と；
カロテノイドと；
インディゴイドと、を更に含む請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
該色素タンパク質は、約２〜約２０ＫＤの分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
該色素タンパク質は、メチオニン、アルギニン、グリシン、アラニン、スレオニン、セリン、プロリン及びヒドロキシプロリンからなる群から選択される１以上のアミノ酸を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
該色素ペプチドはカロテノイド部分を含み、該カロテノイド部分はアスタキサンチン及び同等物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
該脂質は、約Ｃ１４〜Ｃ２４の炭素鎖長を有する飽和または不飽和の脂肪酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
多価不飽和脂肪酸の置換基は、１〜６の不飽和度を有する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
該多価不飽和脂肪酸は、エイコサペンタエン酸及び／またはドコサヘキサエン酸である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
該ＤＣＰは、約１〜約５００ｐｐｍレベルの範囲で、鉄、カルシウム、銅、亜鉛、マグネシウム、バナジウム、及び／または金属のイオンを更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
該ＤＣＰは、低分子量のリガンドを更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
約０．０５〜約５０重量％の量で存在する請求項１の組成物を含む、スキンケア、ヘアケア、医薬、または栄養若しくは獣医の製剤。
【請求項１４】
ローション、クリーム、ジェルまたはスプレーの形態であり、該組成物は、約０．０５〜約５重量％の量で存在する、請求項１３に記載のスキンケアまたは保護の製剤。
【請求項１５】
錠剤、シロップ、エリキシル剤またはカプセルの形態である、請求項１３に記載の医薬の製剤。
【請求項１６】
該組成物の約０．５〜約３０％を含む、請求項１３に記載の栄養の製剤。
【請求項１７】
美容上許容される担体、並びにサンスクリーン、抗酸化剤、保存料、セルフ・タンニング剤、香水、オイル、ワックス、高圧ガス、防水剤、乳化剤、増粘剤、保湿剤及び皮膚軟化剤からなる群から選択される１以上の化粧品補助剤を更に含む、請求項１４に記載のスキンケアまたは保護の製剤。
【請求項１８】
製剤上許容される担体を更に含む、請求項１５に記載の医薬の製剤。
【請求項１９】
栄養上許容される担体を更に含む、請求項１６に記載の栄養の製剤。
【請求項２０】
少なくとも０．５％〜１０％ｗ／ｗのジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質を含むシラジット組成物から、請求項１に記載のＤＣＰ組成物を単離する方法であって、
１）天然のシラジットのロック物質を粉末化し、熱い酢酸エチル及びメタノールで順に抽出し、溶解性の低分子量及び中分子量の有機化合物を濾過により除去する段階と；
２）該酢酸エチル及びメタノールに不溶な物質を、熱水、続いてｐＨ５．０のクエン酸バッファーで粉砕する段階と；
３）合わせた抽出混合物を濾過し、重合したフミン物質、ミネラル及び金属イオン塩を含む不溶性物質を除去する段階と；
４）合わせた水性の濾液を、増大する濃度の硫酸アンモニウムで徐々に飽和させ、ＤＣＰの混合物の紫褐色の沈殿を得るか、または合わせた水性溶液を濃縮しアセトンを加えて、ＤＣＰを茶色がかった赤色若しくはオフホワイトの沈殿物として析出させ、該ＤＣＰを濾過し、濾液を蒸発濃縮して、複雑さのより低いＤＣＰの混合物を更に多く得る段階と；
５）セファデックスのゲル濾過、及び電気泳動により、硫酸アンモニウムの飽和から得られる紫褐色の固体残留物を分画し、ＤＣＰ組成物をシラジットから単離する段階と、
を含む、方法。
【請求項２１】
該シラジット組成物は、約１２％〜約４０％ｗ／ｗのジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
アンモナイトの化石から、請求項１に記載のＤＣＰ組成物を単離する方法であって、
１）アンモナイト化石物質を粉末化し、熱い酢酸エチル及びメタノールで順に抽出し、溶解性の低分子量及び中分子量の有機化合物を濾過により除去する段階と；
２）該酢酸エチル及びメタノールに不溶な物質を、０．１ＮのＨＣｌで粉砕する段階と；
３）水性の酸抽出物を濾過し、重合したフミン物質を含む不溶性の物質を除去し、最少量の水中で溶解する段階と；
４）水性溶液を、増大する濃度の硫酸アンモニウムで徐々に飽和させ、ＤＣＰの混合物の紫褐色の沈殿を得るか、または該合わせた水性溶液を濃縮しアセトンを加えて、ＤＣＰを茶色がかった赤色若しくはオフホワイトの沈殿物として析出させ、該ＤＣＰを濾過し、濾液を蒸発濃縮して、複雑さのより低いＤＣＰの混合物を更に多く得る段階と；
５）セファデックスのゲル濾過、及び電気泳動により、硫酸アンモニウムの飽和から得られる紫褐色の固体残留物を分画し、ＤＣＰ組成物をアンモナイトの化石から単離する段階と、
を含む、方法。
【請求項２３】
サンゴの化石から、請求項１に記載のＤＣＰ組成物を単離する方法であって、
１）サンゴ化石物質を粉末化し、熱い酢酸エチル及びメタノールで順に抽出し、溶解性の低分子量及び中分子量の有機化合物を濾過により除去する段階と；
２）該酢酸エチル及びメタノールに不溶な物質を、０．１ＮのＨＣｌで粉砕する段階と；
３）水性の酸抽出物を濾過し、重合したフミン物質を含む不溶性の物質を除去し、最少量の水中で溶解する段階と；
４）水性溶液を、増大する濃度の硫酸アンモニウムで徐々に飽和させ、ＤＣＰの混合物の紫褐色の沈殿を得るか、または該合わせた水性溶液を濃縮しアセトンを加えて、ＤＣＰを茶色がかった赤色若しくはオフホワイトの沈殿物として析出させ、該ＤＣＰを濾過し、濾液を蒸発濃縮して、複雑さのより低いＤＣＰの混合物を更に多く得る段階と；
５）セファデックスのゲル濾過、及び電気泳動により、硫酸アンモニウムの飽和から得られる紫褐色の固体残留物を分画し、ＤＣＰ組成物をサンゴの化石から単離する段階と、
を含む、方法。
【請求項２４】
無脊椎動物から、請求項１に記載のＤＣＰ組成物を単離する方法であって、
１）体肉（ｂｏｄｙ  ｆｌｅｓｈ）を熱い酢酸エチルで抽出し、低分子量の遊離型の有機化合物及び脂質を可溶性画分として除去する段階と；
２）ブライ−ダイアーの溶媒システムで該酢酸エチルを抽出する段階と；
３）該ブライ−ダイアーの溶媒抽出物を減圧下で蒸発濃縮し、最少量の水中で溶解する段階と；
４）該水を、増大する濃度の硫酸アンモニウムで徐々に飽和させ、ＤＣＰの混合物の紫褐色の沈殿を得るか、または該合わせた水性溶液を濃縮しアセトンを加えて、ＤＣＰを茶色がかった赤色若しくはオフホワイトの沈殿物として析出させ、該ＤＣＰを濾過し、濾液を蒸発濃縮して、複雑さのより低いＤＣＰの混合物を更に多く得る段階と；
５）セファデックスのゲル濾過、及び電気泳動により、硫酸アンモニウムの飽和から得られる紫褐色の固体残留物を分画し、ＤＣＰ組成物を無脊椎動物から単離する段階と、
を含む、方法。
【請求項２５】
治療上効果的な量の、請求項１に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、慢性ストレスを治療する方法。
【請求項２６】
式（ＩＩ）のジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質（ＤＣＰ）を含む組成物：
【化２】
2008504231.tif 000049
式中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル及びＯ−アミノ−アシルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ及びＣＨ３から選択され；
Ｒ３は、Ｈ及び脂肪酸から選択され；
Ｒ４は、Ｈ及び脂肪酸から選択され；並びに
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル、Ｏ−アミノ−アシル及び脂肪酸基からなる群から選択される。
【請求項２７】
該ＤＣＰは、約１〜５００ｐｐｍレベルの範囲で、鉄、カルシウム、銅、亜鉛、マグネシウム、及び／または金属のイオンを更に含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
該ＤＣＰは、低分子量のリガンドを更に含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
約０．０５〜５０重量％の量で存在する請求項２６の組成物を含む、スキンケア、ヘアケア、医薬、または栄養の製剤。
【請求項３０】
治療上効果的な量の、請求項２６に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、慢性ストレス疾患を治療する方法。
【請求項３１】
治療上効果的な量の、請求項１３に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、学習の認知効果を増大させる方法。
【請求項３２】
治療上効果的な量の、請求項１３に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、ストレス疾患を治療する方法。
【請求項３３】
前記疾患は、不安神経症が誘発するストレス、うつ病が誘発するストレス、温覚変化が誘発するストレス、胃潰瘍が誘発するストレス、けいれんが誘発するストレス、及び副腎皮質の誘発するストレスから選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
治療上効果的な量の、請求項１３に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼからなる群から選択される抗酸化防御酵素を増やすことによる、免疫システムの調節方法。
【請求項３５】
治療上効果的な量の、請求項２９に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、学習の認知効果を増大させる方法。
【請求項３６】
治療上効果的な量の、請求項２９に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、ストレス疾患を治療する方法。
【請求項３７】
前記疾患は、不安神経症が誘発するストレス、うつ病が誘発するストレス、温覚変化が誘発するストレス、胃潰瘍が誘発するストレス、けいれんが誘発するストレス、及び副腎皮質の誘発するストレスから選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
治療上効果的な量の、請求項２９に記載の組成物を、必要としている患者に投与することを含む、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼからなる群から選択される抗酸化防御酵素を増やすことによる、免疫システムの調節方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の参照
本願は、２００４年３月１２日に出願された、酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質という名称の米国特許出願第１０／７９９，１０４号の一部継続出願であり、本願全体の参照として引用される。
【０００２】
発明の背景
１．発明の分野
本発明は、酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン  色素タンパク質（ＤＣＰ）の組成物、並びにシラジット（ｓｈｉｌａｊｉｔ）、アンモナイト、サンゴ及び他の無脊椎動物の化石からの単離に関する。より詳細には、本発明は、酸化ジベンゾ−アルファ−ピロンまたはその複合体、ホスホクレアチン、タンパク質、グリセロールの脂肪酸アシルエステル、及びコアの構造フラグメントとしての他の小さなリガンド（例えばカロテノイド、ステロール及び芳香族酸）、並びにそれらの生物学的機能を含む、ＤＣＰ組成物の説明に関する。医薬、栄養、獣医、スキンケア及びパーソナルケアの製剤もまた説明される。これらの発見は、ＤＣＰをシラジットの主要な生理活性物質として確立するものである。
２．関連技術の説明
おそらく、天然に発見されうる何千ものカロテノタンパク質（ｃａｒｏｔｅｎｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）がある。しかし、今日でさえ、ごく少数のこのような化合物の構造しか、タンパク質化学の技術を適用することにより、十分に特徴を明らかにされていない。部分的な解析は、これらの化合物の中には、カロテノイド部分が脂質成分とも会合しているような、多くのリポタンパク質があるということを示している。しかし、カロテノイドとタンパク質との間の化学量論的関係は必ずしも明らかになっているというわけではない。
【０００３】
本願は、ここでの参照によって各々取り入れられている、同一の発明者による米国特許第６，４４０，４３６Ｂ１号及び６，５５８，７１２Ｂ１号に関する。
【０００４】
生存中及び化石の海洋無脊椎動物において発見される多くの色素タンパク質において、カロテノイド及び他の着色化合物（例えば、ピロロイド、ビリベルジン及びインディゴイド−すなわちインディゴティン及びインディルビン）が発見され、複合体の集合の脂質補欠分子族との会合だけでなく、タンパク質部との相互作用を示している。しかし、前記ＤＢＰの３位及び／または８位に結合する酸素リンカーがあり、自由形状か、または色素タンパク質との会合のどちらにおいても、生存中または化石の海洋無脊椎動物において、かつて酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン（ＤＢＰ）の存在が報告されたことは一度もなかった。本発明は、色素タンパク質の１つのこのようなクラスを説明し、ジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質（ＤＣＰと省略される）と名づけられており、シラジット、アンモナイト、サンゴ及び他の海洋無脊椎動物の化石から多量に単離されている。
【発明の開示】
【０００５】
発明の概要
本発明は、ＤＣＰの組成物、単離、及び様々なストレスへの適応力を高める効能がある状態、例えば慢性ストレスを処置することにおけるそれらの使用に関する。
【０００６】
一実施形態において、本発明は、ジベンゾ−アルファ−ピロンまたはそれらの誘導体；ホスホクレアチン；２ＫＤ以下の分子量の色素ペプチド；及びグリセロールの脂肪酸アシルエステルを有する脂質を含むジベンゾ−アルファ−ピロン−色素タンパク質（ＤＣＰ）の組成物を提供する。
【０００７】
本発明の他の実施形態は、式（Ｉ）のジベンゾ−アルファ−ピロンを含み、
【０００８】
【化１】
2008504231.tif 000002
【０００９】
上記式において、
Ｒ１はＨ、ＯＨ、Ｏ−アシル及びＯ−アミノ−アシルからなる群から選択され；並びに、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は各々独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル、Ｏ−アミノ−アシル及び脂肪酸アシル基からなる群から選択される。
【００１０】
本発明の他の実施形態は、ホスホクレアチンがエステル結合を介して、該ジベンゾ−アルファ−ピロンの３位または８位に結合している組成物を含む。また、前記色素ペプチドは、一以上のアミノ酸、カロテノイド及びインディゴイドを含む。前記色素タンパク質は約２〜約２０ＫＤの分子量を有する。
【００１１】
本発明の他の実施形態は、約０．０５〜約５０重量％の量で存在するＤＣＰ組成物を含む、スキンケア、ヘアケア、医薬、獣医または栄養の製剤を提供する。また、前記スキンケアまたは保護の製剤は、ローション、クリーム、ジェルまたはスプレーの形態で存在可能であり、その際、前記ＤＣＰ組成物は、約０．０５〜約５％重量％の量で存在する。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、医薬製剤が錠剤、シロップ、エリキシル剤またはカプセルの形態で存在するＤＣＰ組成物を含む、前記医薬製剤を提供する。
【００１３】
本発明の他の実施形態は、栄養製剤が約０．５〜約３０重量％のＤＣＰ組成物を含む、前記ＤＣＰ組成物を含む、前記栄養製剤を提供する。
【００１４】
本発明の他の実施形態は、獣医製剤が約０．５〜約３０重量％のＤＣＰ組成物を含む、前記ＤＣＰ組成物を含む、前記獣医製剤を提供する。
【００１５】
本発明の他の実施形態は、ＤＣＰ組成物を、約０．５〜約１０％ｗ／ｗのジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質を含むシラジット組成物から単離する方法を提供し、前記方法は、１）熱い酢酸エチル及びメタノールを用いて連続的にシラジットを抽出し、溶解性の、低分子量または中分子量の有機化合物を濾過によって除去し；２）前記酢酸エチル及びメタノールに不溶な物質を、熱湯、続いてｐＨ５．０のクエン酸バッファーで粉砕し；３）前記合わせた抽出混合物を濾過し、重合したフミン物質、ミネラル及び金属イオン塩を含む不溶性物質を除去し；４）前記合わせた水性の濾液を、増大する濃度の硫酸アンモニウムで徐々に飽和させてＤＣＰの混合物の紫褐色の析出物を得るか、または、前記合わせた水性の溶液を濃縮しアセトンを加えて、茶色がかった赤色若しくはオフホワイトの沈殿物のようなＤＣＰを析出させ、ＤＣＰを濾過し、その濾液を蒸発させて、複雑さのより低い、更に多量のＤＣＰの混合物を得て；５）紫褐色の固体の残留物を分画し、それらはセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）のゲル濾過、及び電気泳動によって硫酸アンモニウムの飽和から得られ、シラジットからＤＣＰ組成物を単離する段階と、を含む。
【００１６】
本発明の他の実施形態は、アンモナイトの化石、サンゴの化石、並びに他の、生存中及び死後の無脊椎動物からＤＣＰを抽出し単離するための類似の方法を提供する。
【００１７】
他の実施形態は、治療上効果のある量のＤＣＰ組成物を、必要としている患者へ投与することを含む、慢性ストレス疾患を処置する方法、及びＤＣＰ組成物を投与することを含む認知学習を増やす方法を提供する。
図面の簡単な説明
図１Ａ及び１Ｂは、ＤＣＰの一般的な構造、及びＤＣＰの複合体集合を示す。
【００１８】
図２は、ＤＣＰを資化するアルビノのラットの赤血球における、時間と共に様々に変化するＤＣＰレベルを示す。
【００１９】
図３は、硫酸アンモニウムの沈殿物に由来するシラジット  ＤＣＰのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【００２０】
図４は、３，８−ジヒドロキシ  ジベンゾ−アルファ−ピロンとタンパク質画分との間の関係を示す。
【００２１】
発明の詳細な説明
オルガノ−ミネラル成分を含むＤＣＰは、トリプトファン部分の組織酸化（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）から得られたキサントフィル及びインディゴイドとして知られる酸化カロテノイドによる橙色、紫色及び黄色を示す。前記シラジットのＤＣＰは、ＵＶの吸収極大、及びλで〜２２５、〜２７５、〜３２０、〜３９２、〜４７０、〜４９２、５００〜５３５、６２０〜６６０ｎｍという可視領域を示す。前記ＤＣＰの水性溶液は、２３０〜４００メッシュを有するシリカゲル上で拡散され、マイクロ波により加熱された場合、結果として部分的なカロテノイドの解離を起こした。前記着色化合物の同一性は、信頼性のあるマーカーを用いたＨＰＬＣによって確立された。しかし、アポタンパク質の部分が本反応から得られ、依然として前記着色部分の大部分を保持した。部分的に分解したタンパク質のゲル濾過、及び単離された化合物のさらなる分析（例えば、化学的分析、クロマトグラフ分析、及び分光が確認された分析）によって、特にＤＢＰ及び同等物においてリッチな、大きな補欠分子族の存在を示した。
【００２２】
前記産物の選択的なリパーゼ分解は、ＤＢＰ、すなわちリン脂質（Ｃ１４−Ｃ２４の脂肪酸を含み、飽和と不飽和共に）を遊離させ、前記タンパク質を色素リポタンパク質と色素アポタンパク質とに部分的に分けた。過酷な酸加水分解でさえ、ＤＢＰ−核からの窒素含有成分を完全に分離することができない。このようにして、古典的な酸加水分解後でさえ、共役ＤＢＰにおける前記リパーゼ分解産物及びあるアミノ酸／小さなペプチドにおいて、前記分解した産物のＨＰＬＣによって決定されるように、より少ない極性画分とより多くの極性画分とを共に含む複合タンパク質は、アミノ酸／小さなペプチド、キサントフィル及びインディゴイドのいくつかを依然として保持した。
【００２３】
けん化の際、ＤＣＰは遊離ＤＢＰ及び小さな共役ＤＢＰ代謝産物、すなわち脂肪酸及びアミノ酸を生成した。けん化によるアシル化化合物の簡易な除去は、いくつかのアミノアシル及び脂肪酸アシルの部分がＤＢＰのフェノール性ヒドロキシル基に結合しているということを示唆した。更に、３−Ｏ−アシルグリシノイルＤＢＰ及び３−Ｏ−アシルアルギノイルＤＢＰからの、３−ＯＨ−ＤＢＰにおけるアミノ酸の小さなＯ−アシル共役の発生、並びにＤＣＰにおけるクレアチンが、式１に示されるＤＣＰのＤＢＰ補欠分子族構造を支持する。
【００２４】
【化２】
2008504231.tif 000003
【００２５】
上記式において、
Ｒ１＝Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル、Ｏ−アミノアシル、またはこれらのアミノ酸のジ−若しくはトリ−ペプチド；
Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３；
Ｒ３＝ＨまたはＣ１４−Ｃ２４の飽和または不飽和の脂肪酸；１〜６の範囲の不飽和度；
Ｒ４＝ＨまたはＣ１４−Ｃ２４の飽和または不飽和の脂肪酸；１〜６の範囲の不飽和度；及び、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アシル、Ｏ−アミノ−アシル及び脂肪酸アシル基からなる群から選択される。
【００２６】
前記色素タンパク質は、２〜２０キロダルトン（ＫＤ）の重量を有し、アミノ酸、これらのアミノ酸のジ−及びトリ−ペプチド、カロテノイド及びインディゴイドを含むが、これらに制限されることはない。
【００２７】
非環式及び環式のカロテノイドまたはキサントフィル及びインディゴイド、例えば、ルテイン、アスタキサンチン及びベータ−カロテンは色素である。
【００２８】
脂肪酸は、分岐状または非分岐状でありえ、１４と２４の間の炭素原子を含み、飽和または不飽和のいずれかでありうる。不飽和度は１と６の間である。
【００２９】
不飽和度は、存在する二重結合の数である。
【００３０】
アシルは、Ｒが分岐または非分岐でありえ、１６と１８の間の炭素原子を含みうる−ＣＯＲであり、飽和または不飽和のいずれかでありうる。
【００３１】
アミノ酸は、アラニン、アルギニン、クレアチン、グリシン、ヒドロキシプロリン、メチオニン、プロリン、セリン、スレオニン及びトリプトファンを含むが、これらに制限されることはない。
【００３２】
ジペプチドは、アミド結合が、１のアミノ酸の−ＮＨ２と第２のアミノ酸の−ＣＯＯＨとの間に形成される場合に生じ；トリペプチドは、２つのアミド結合を介しての３つのアミノ酸の結合に起因する、などである。どんな数のアミノ酸であっても共に結合し、長鎖を形成する。
【００３３】
ジベンゾ−アルファ−ピロンのナンバリングパターンは以下の通りである。
【００３４】
【化３】
2008504231.tif 000004
【００３５】
ＤＣＰにおけるクレアチンの存在は、インビボ及びインビトロでの測定によって立証された。
【００３６】
ＤＣＰにおける色素部分は、極性タンパク質画分と同様、非極性脂質とも会合していることが分かった。リパーゼの分解後に行った、分解部分の特徴づけ（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）及びＨＰＬＣ解析は、異なる状態の結合であっても、色素化合物が２つの異なる画分に属していたことを示した。更なる酸加水分解の際、タンパク質の部分は、同定可能なアミノ酸として、メチオニン、アルギニン、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、プロリン及びヒドロキシプロリンを生成した。
【００３７】
ＤＣＰは、２ＫＤと約２０ＫＤとの間の範囲の分子量のタンパク質を含む。ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）による、ＤＣＰの３つのバンドへの分離は、約１５ＫＤと約２０ＫＤとの間の分子量の共役タンパク質が約２ＫＤを超えて約１２ＫＤまでの量で存在する。しかし、約１２ＫＤから約１５ＫＤまでの分子量範囲の共役タンパク質は、最少量で存在する。
【００３８】
ＤＣＰの構造を解明する間に、以下の特筆すべき相違がシラジットから単離されたＤＣＰとシラジット−前駆−無脊椎動物からのＤＣＰとの間で認められた。
【００３９】
１．アポタンパク質が無色であるＤＣＰ、及び長い補欠分子族（例えば、ＤＢＰ及び脂質）を含む着色化合物は、アセトンまたはエチルアルコールのいずれかを用いてのＤＣＰの水性溶液の単純な処置によって解離しうる。前記無色のアポタンパク質は、単純なＨＰＬＣパターンを示し、酸加水分解の際には、ＤＢＰおよびその共役とは別に、上述のアミノ酸を生成した。これらのＤＣＰは、アンモナイトの化石から単離され、無色のアポタンパク質及び着色物質にすぐに分離され、これらは、抽出される有機溶媒中で溶解する。
【００４０】
２．もう一方のクラスは、カロテノイド及びインディゴイドを含む着色物質がアポタンパク質から通常解離できないＤＣＰを構成する。このクラスのＤＣＰは、シラジット、及びアンモナイトの化石のうちのいくつかの希少種（例えば、赤の胎殻を有するＰｅｒｉｓｐｈｉｎｃｔｅｓ）から単離された。
【００４１】
いくつかの無脊椎動物のタンパク質は、極端なリラクタンスを有する大気／水の界面に広がった。前記アポタンパク質は、補欠分子族（例えば、カロテノイドのような着色物質を含む）から解離する場合には、電気泳動の間に円滑に広がった。このような色素タンパク質におけるカロテノイドは、変性に対するタンパク質の３次または４次構造についての「ロック」として作用するようである。前記無色のアポタンパク質は、色素タンパク質の解離から形成されるが、対照的に迅速な凝固及び部分的な変性を受ける。
【００４２】
シラジット−ＤＣＰにおいては、色素分子及びアポタンパク質の会合は通常解離できない。前記２つの部分についての、特異的で強固な化合はありうることである。この前提条件と首尾一貫して、シラジット−ＤＣＰにおける前記色素化合物は、脂質画分とアポタンパク質画分の両方と会合していることが分かった。リパーゼを伴うＤＣＰの選択的な分解の後に行ったＨＰＬＣがこの点を立証した。シラジット−ＤＣＰの安定な４次構造は、更に以下の実験により示唆された。スターチ−ウレアのゲル中で電気泳動を行うと、２つの色素タンパク質、オレンジ−ピンク色（Ｍｗ≦５ＫＤ）のＤＣＰ−、及び黄色がかった茶色（ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ−ｂｒｏｗｎ）の（ＤＣＰ−で存在するよりも多量のＤＢＰを好適に含む；Ｍｗ≦１４ＫＤ）ＤＣＰ−が分離された。これらの特性は、いくつかの着色（色素）分子が前記アポタンパク質及びリポタンパク質の成分のいくつかの部分と共有結合する。前記アミノ酸部分同士の間の緊密な会合は、カロテノイド及びインディゴイドとの相互作用を可能とし、前記会合の強さを与える場合があり、前記強さは、深い深色移動（λ５００ｎｍからλ６６０ｎｍへ）、及びＤＣＰ着色発色団の可視スペクトルにおける濃色効果に実際、反映される。
【００４３】
上記に基づき、ＤＣＰの一般的な構造（図１Ａ）及びＤＣＰの共役集合（図１Ｂ）が明らかとなった。
【００４４】
ＤＣＰのタンパク質量は、ラウリ（Ｌｏｗｒｙ）の方法により測定され、５７．１３％であった；だが、ブラッドフォード法によると５９．３％であった。タンパク質のより高い割合は、後者の方法によって測定され、おそらく、前記ＤＣＰにおける相当量のアルギニンに対するより高い感度に起因していた。
【００４５】
前記式１に存在する脂質部分の一部は、前記補欠分子族と共有結合している。このことは、以下の研究により示唆された。ブライ−ダイアー（ＢｌｉｇｈとＤｙｅｒ）の溶媒システムによるＤＣＰの完全な抽出は、脂質の抽出に適しており、遊離脂肪酸を全く生じることなく、少量のアシル化されたＤＣＰを与えた。リパーゼとの反応の際の主な不溶性残留物が、Ｃ１６：０、Ｃ１８：０、及びＣ１８：１が表１に示されているように主要な成分である、Ｃ１４からＣ２４の脂肪酸を生成した。このようにして、リポタンパク質は前記ＤＣＰの不可欠な部分を構成しているようである。
【００４６】
【表１】
2008504231.tif 000005
【００４７】
シラジット−ベアリング  マウンテン（シラジット−ｂｅａｒｉｎｇ  ｍｏｕｎｔａｉｎｓ）の多くは、海洋無脊椎動物の化石、例えば顕生代時代の節足動物門（Ａｒｔｈｒｏｐｏｄａ）、腕足動物門（Ｂｒａｃｈｉｏｐｏｄａ）及び軟体動物門（Ｍｏｌｌｕｓｃａ）のリッチな宝庫であると分かった。このシラジット及び無脊椎動物の化石の共出現は、表２に示されているように、首尾一貫した現象である。
【００４８】
【表２−１】
2008504231.tif 000006
【００４９】
【表２−２】
2008504231.tif 000007
【００５０】
【表３】
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【００５１】
また、これらの化石及びシラジットにおいて発見された有機化合物は、表３〜６に示されたものと非常に類似している。
【００５２】
【表４】
2008504231.tif 000009
【００５３】
【表５】
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【００５４】
【表６−１】
2008504231.tif 000011
【００５５】
【表６−２】
2008504231.tif 000012
【００５６】
【表６−３】
2008504231.tif 000013
【００５７】
【表７】
2008504231.tif 000014
【００５８】
これらの発見は、海洋無脊椎動物がシラジットの形成に寄与するということを示唆する。
【００５９】
前記海洋無脊椎動物（表２）が調査され、続いてシラジットにおけるＤＣＰの単離及び特徴づけを行った。非常に類似するＤＢＰ−カロテノタンパク質及び他の低Ｍｗの有機成分及び着色成分（例えば、インディゴイド）が、前記海洋無脊椎動物のサンプルで発見された（表３〜６）。
【００６０】
シラジット及びアンモナイト（表２）から単離されたＤＣＰの混合物のＩＲスペクトルは非常に似ていた。また、主なピーク及びそれらのＰＤＡスペクトルについてのＨＰＬＣの保持時間も似ていた。完全な有機溶媒抽出物についての前記ＤＣＰ画分の後に行った通常の作業は、アスタキサンチン、アスタキサンチン脂肪酸アシル誘導体及びカナキサンチンを生じた。３、８−ジヒドロキシ  ジベンゾ−アルファ−ピロン、及びシラジット−ＤＣＰから単離されたアミノ酸もまた、それらの酸加水分解により、前記アンモナイトの化石（表２）から単離された。
【００６１】
前記アンモナイトからの、前記ＤＢＰ−色素タンパク質の着色成分は、モノ−Ｎ−ベンゾイル  インディゴティン、インディルビン及びイサティンを含んでおり、おそらく前記ＤＣＰに存在するトリプトファン部分の代謝から得られたものである。酸化ストレスによる、タンパク質の糖化によるタンパク質の褐変もまた、シラジット及び前記アンモナイトの化石の両方のＤＣＰにおいて認識された。
【００６２】
無脊椎動物の化石に関するカラーパターンの維持は珍しい現象であるが、顕生代を通して記録されている。カロテノイド、インディゴイド、及びＭａｉｌｌａｒｄ反応によるタンパク質産物の糖化を含む、前記着色分子は、金属イオンとの調整により、安定な複合体を形成しうる。このような内部結晶性生体分子は、バイオミネラル化に対する核生成として作用する。死亡した海洋動物の手足の筋肉が腐敗している場合、空のスペースはミネラル、例えばパイライト（ＦｅＳ２、ＣａＳｉＯ３）で満たされ、その後それらを囲む薄い有機クチクラが破壊し腐敗するための時間を有する。前記有機物質は、パイライト（及び他のミネラル）の核生成に対する基質を形成し、海洋堆積物中に遍在している。Ｆｅ及びＳの細胞への拡散の結果として、沈殿が発生する。パイライトは直接、前記組織の代替とはならないが、表面上及びスペース内で沈殿する。前記アンモナイトの化石だけでなく、前記着色分子及びシラジットにおけるタンパク質の相互安定化は、ＤＢＰの式（Ｉ）の関与によって増大した。これは、色素タンパク質との複雑な会合における、ＤＢＰの自然な出現についての最初の実証である。この会合が生存中の人間及び動物においても一般的な現象であるかどうかもまた、評価された。シラジットからのＤＣＰの対応する画分と比較した場合に、アルビノのラットのプラズマから単離されたＤＣＰの混合物（ピンクに着色）は、ＨＰＬＣのピーク及びそれらのＰＤＡスペクトルの点でいくつかの特筆すべき類似性を示した。より優れた類似性さえ、セファデックス  Ｇ−５０を用いたゲル濾過による半精製のＤＣＰ成分の間に見られ、シラジット及び有志の人間のプラズマから得られた。類似の一般的なＨＰＬＣパターンが、何人かの健康な人間の被験者で見られた。
【００６３】
ＤＣＰは、実験動物に投与された場合、キーとなる成分（図２）のいくつかについて、活発な代謝回転を示した。同様に、ＤＢＰもラットに経口投与（ｐ．ｏ．）した場合、直ちに吸収し、それらをＤＣＰ及び関連する配合体の合成に利用した。酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン（ＤＢＰ）は、ＥＰＡから動物の生態系で合成される際、いくつかのＤＢＰ−配合体（ＨＰＬＣ−ｔＲ：２．３１、２．９９、３．４６及び３．８６分）に変換される。これらの成分は、ＤＣＰ中でも検出され、シラジットから単離された。これらの成分の活発な代謝回転は、アルビノのラットに対するＤＣＰ（２００ｍｇ／Ｋｇ  ｂ．ｗ．）の経口投与に関して見られ（図２）、引き続いて対応するＲＢＣにおける前記成分のＨＰＬＣ解析が行われた。この観察及び他の観察から、ＤＣＰは、動物組織の成分でもあり、いくつかの生物学的機能を調節し実現させることにおいて、酵素及びホルモンの形態で作用するということは、非常に明白である。
【００６４】
ＤＣＰは、放射、電子輸送、及び酵素活性からの保護を提供する保護色を含む生産者生物（ｐｒｏｄｕｃｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）、並びにそれらの栄養及び発達における多様な機能に関与する。ＤＣＰは、シラジットのフルボ酸（ＦＡｓ）の場合と似た輸送特性を有し、受容細胞内に入り、遊離ＤＢＰよりもずっと顕著な生物学的反応を誘引させることができる。ＤＣＰについての広範な薬理学的及び免疫学的な評価は、ＤＣＰが適応促進薬及び免疫賦活剤のような他のいかなる成分よりも２〜５倍の潜在性があることを実証している。
【００６５】
３−ヒドロキシ−及び３，８−ジヒドロキシジベンゾ−アルファ−ピロン（ＤＢＰ）の、アルギニン及びグリシンのリン脂質複合体への体系的な（ｓｙｓｔｅｍｉｃ）転換、それらの結果としての代謝、及びＤＣＰの体系的な同化作用／代謝回転は、経口ルートを通じてラットに給餌する場合、生態系でのエネルギーの貯蔵におけるこれらの化合物の役割を示唆する。アルギニンホスフェートは、無脊椎動物におけるエネルギーの貯蔵において重要な役割を果たし；同じ役割は、無脊椎動物におけるアルギニンホスフェート及びグリシンホスフェートの組み合わせから生成されるクレアチンによって果たされる。クレアチンホスフェート及びアルギニンホスフェートは、高いエネルギーのポテンシャルを有するホスフェートの備蓄であるが、「ホスファゲン（ｐｈｏｓｐｈａｇｅｎｓ）」という名称は、スキーム１に示されるようなこれらの化合物に対して与えられる。
【００６６】
【化４】
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【００６７】
ＡＴＰが過度に存在する場合、エネルギーのカップリングは前記エネルギー貯蔵反応を示し、反対に、細胞がＡＴＰを必要としている場合、逆反応によりＡＴＰの形成を示す。生存中の生物におけるＤＢＰ−ホスファゲン複合体の生合成及びバランスをそのエネルギー状態の指数とみなすならば、これらホスファゲンの欠乏の場合に、シラジットの投与（ｐ．ｏ．）はそれらを補充するものでありうる。
【００６８】
前記色素タンパク質（ＤＣＰ）は、動物の生態系における様々な機能に関与する。ＤＣＰは、動物（他の海洋無脊椎動物及びシロアリの血リンパにおける有孔虫）の中で最も下等な形態、高等動物（げっ歯類、ビーバー、チンパンジー、羊）、及び人間において遭遇する。
【００６９】
ＤＣＰは、電子輸送［ＤＣＰによる体系的なＡＴＰ合成は、ＤＢＰの経口投与がクレアチン及び共役産物を生成したので、想像できる］及びオキシド−レダクターゼ反応に関与し；他の酵素活性（例えば、１９６７年にＣｈｅｅｓｍａｎにおいて説明されたようなＡＴＰアーゼの機能）を触媒し；雄の方と比較して、ジュラシック時代の雌の無脊椎動物の化石（例えば、Ｉｄｉｏｃｙｃｌｏｃｅｒｕｓ及びＫａｍｐｔｏｋｅｐｈａｌｉｔｅｓ  ｓｐｐ．）（表２）におけるより多量のＤＣＰが、現在の研究で発見され、胚の発達及び保護におけるそれらの役割を示唆する。ＥＰＡ／ＤＨＡから形成されたＥＰＡ、ＤＨＡ及び遊離ＤＢＰの場合と比較して、ＤＣＰの優れた（質的及び量的）生物学的機能が続いて説明されている。
【００７０】
かかるに、ＤＣＰの単離及び使用の特徴は以下の通りである。
【００７１】
１．様々な形態のストレスや攻撃に対抗する、タンパク質並びに前記着色分子、すなわち、カロテノイド（例えばアスタキサンチン及び誘導体）及びインディゴイド（例えば、インディゴティン及びインディルビン）の安定化。
【００７２】
２．保護色、すなわち被食者捕食者機能からの隠蔽の手段としての色の使用；放射線の有害な効果からの抗酸化性の強い色素の利用；例えば、脂質の光酸化、及び酸化フリーラジカル。
【００７３】
３．生産者生物（ｐｒｏｄｕｃｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）の発達。無脊椎動物の卵巣で発見された多量の色素タンパク質、及び雄と比較して雌の種におけるより多量のこれらの化合物は、種の発達におけるそれらの機能を示唆している。多くの無脊椎動物の血／血リンパにおいて記録されてきたリポタンパク質複合体は、前記カロテノイド及び他の色素分子の輸送に関わりうる；脂肪可溶性色素を水溶性にするタンパク質への結合。しかし、ＤＣＰにおける色素分子は、前記複合体分子のタンパク質画分と同様、脂質とも会合すると分かった。
【００７４】
４．無脊椎動物における胚の発達は、カロテノタンパク質を要求する。
【００７５】
５．生体エネルギー論のシミュレータ／代替物、例えばＡＴＰ；クレアチン合成、として。
【００７６】
６．免疫のモジュレーター。
【００７７】
７．酸化フリーラジカルの魅惑物（ｃａｐｔｉｖａｔｏｒｓ）、反応酸素種（ＲＯＳ：Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ）、反応窒素種（ＲＮＳ：Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ）。
【００７８】
８．遊離した（ｌｏｏｓｅ）金属イオン（Ｆｅ，Ｃｕ，Ｍｎ，Ｗ）のスカベンジャー／キレート剤。
【００７９】
９．ＤＣＰは、地球上の生命の進化以来、全ての生物において重要なバイタライザー（ｖｉｔａｌｉｚｅｒ）の役割を果たす。
【００８０】
ＤＣＰの単離及び使用の特徴は、約０．０５〜約５０重量％の量で存在しているＤＣＰ組成物を含むスキンケア、ヘアケア、医薬、または栄養の製剤を提供する。また、前記スキンケアまたは保護の製剤は、ローション、クリーム、ジェルまたはスプレーの形態で存在可能であり、その際、前記ＤＣＰ組成物は、約０．０５〜約５重量％の量で存在している。
【００８１】
本発明の特徴は、ＤＣＰ組成物を含む医薬製剤を提供し、その際、前記医薬製剤は、錠剤、シロップ、エリキシル剤またはカプセルの形態で存在する。
【００８２】
本発明の特徴は、ＤＣＰ組成物を含む栄養製剤を提供し、その際、前記栄養製剤は約０．５〜約３０重量％の前記ＤＣＰ組成物を含む。
【００８３】
本発明の特徴は、ＤＣＰ組成物を含む獣医製剤を提供し、その際、前記獣医製剤は、約０．５〜約３０重量％の前記ＤＣＰ組成物を含む。
【００８４】
本発明の特徴は、約０．５〜約１０％ｗ／ｗのジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質を含むシラジット組成物からＤＣＰ組成物を単離する方法を提供し、前記方法は、１）シラジットを、熱い酢酸エチル及びメタノールで連続的に抽出し、可溶性の低分子量及び中分子量の有機化合物を濾過により除去する段階と；２）酢酸エチル及びメタノールに不溶な物質を、熱湯、続いてｐＨ５．０のクエン酸バッファーで粉砕する段階と；３）合わせた抽出混合物を濾過して、重合したフミン物質、ミネラル及び金属イオン塩を含む不溶性物質を除去する段階と；４）合わせた水性の濾液を、増大する濃度の硫酸アンモニウムで徐々に飽和させ、ＤＣＰの混合物の紫褐色の沈殿を得るか、または合わせた水性溶液を濃縮しアセトンを加えて、ＤＣＰを茶色がかった赤色若しくはオフホワイトの沈殿物として析出させ、前記ＤＣＰを濾過し、濾液を蒸発濃縮して（ｅｖａｐｏｒａｔｅ）、複雑さのより低いＤＣＰの混合物を更に多く得る段階と；５）セファデックスのゲル濾過、及び電気泳動により、硫酸アンモニウムの飽和から得られる、紫褐色の固体残留物を分画し、ＤＣＰ組成物をシラジットから単離する段階と、を含む。
【００８５】
本発明の特徴は、アンモナイトの化石、サンゴの化石、及び無脊椎動物からＤＣＰを抽出し単離するための類似した方法を提供する。
【００８６】
前記特徴は、治療上効果のある量のＤＣＰ組成物を、必要としている患者へ投与することを含む慢性ストレス疾患を治療する方法、及びＤＣＰ組成物を投与することを含む認知学習を増やす方法を提供する。
【００８７】
以下の例は、本発明の本質を更に特徴付けるために提供するものである。
【００８８】
例１
シラジットのＤＣＰの抽出及び単離
シラジット（岩石粉末）が、熱い酢酸エチル及びメタノールで連続的に抽出され、その後に総合的に解析された遊離有機化合物を除去した（表３〜６）。マーク（ｍａｒｃ）（酢酸エチル及びメタノールに不溶な物質）は、熱湯及びクエン酸バッファー（ｐＨ５．０）で粉砕され、その後濾過された。前記マークは、無機のミネラル及びフミン物質に対して解析された。前記水性溶液は、異なる複雑さを有するＤＣＰが紫褐色の固体として沈殿する場合、硫酸アンモニウム（２５％、５０％、７５％及び１００％）で各々異なって飽和した。固体残留物は、ＤＣＰの更なる精製のためにセファデックスのゲル濾過、及び電気泳動を受けた。同様の一般的な手段は、海洋サンプルからのＤＣＰの単離を目的として行われた。しかし、水性溶液からのＤＣＰの沈殿においては、１つのバリエーションは、硫酸アンモニウムの代わりに、従来方法におけるアセトン不溶性及び可溶性の画分からＤＣＰを単離するために、アセトンの付加を構成した。
【００８９】
例２
海洋無脊椎動物の化石のＤＣＰの抽出及び単離（一般的な手段）
典型的な実験において、Ｎｕｍｍｕｌｉｔｅの化石（ｆｏｒａｍｉｎｉｆｅｒａ、ＧＳＩタイプ  第１０７７２）が乾燥され、見事に粉末化され、その後熱い酢酸エチルで抽出され低Ｍｗの有機化合物（遊離の酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン、ヒドロキシアセトフェノン、芳香族酸など、ｃｆ．表３〜６）を前記酢酸エチル可溶性画分として除去した。前記マーク（酢酸エチルに不溶）は、更に０．１ＮのＨＣｌで抽出された。前記水性の酸抽出物は蒸発濃縮された。その残留物は、最少量の蒸留水で溶解した。前記水性溶液は、２つの部分に分かれた。１つの部分は、硫酸アンモニウムとは別に飽和し、もう一方の部分では、アセトンが徐々に加えられた。硫酸アンモニウムとアセトンの両方の添加は、酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質（ＤＣＰ）の混合物を薄茶色の固体として沈殿させた。蒸発濃縮の際の、アセトン可溶性画分もまた、複雑さのより低いＤＣＰの更なる回収が可能であった。これらの化合物は、その後クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）及びスペクトル（ＩＲ、１Ｈ−ＮＭＲ）の解析を受け、ＤＣＰを伴う一般的な同一性を立証した。
【００９０】
例３
生存中の海洋無脊椎動物の抽出（一般的な手段）
生存中の海洋無脊椎動物、主に軟体動物（Ｔｅｌｅｓｃｏｐｉｕｍ、Ｃｅｒｅｔｈｅｄｉａなど）は、ベンガル湾の沿岸水域から採集され、実験室に生きた検体として運ばれた。各検体は犠牲となり、体肉（ｂｏｄｙ  ｆｌｅｓｈ）が貝から取り出された。体肉はその後、熱い酢酸エチルで抽出され、低分子量の有機化合物や脂質を除去した。前記マーク（ＥｔＯＡｃに不溶な部分）は、更にブライ−ダイアーの溶媒システム［初期の溶媒としてＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１：２）；中間の溶媒としてＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：２：０．８）、最終の溶媒としてＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１：２）］を用いて抽出された。前記ブライ−ダイアー（Ｂ＆Ｄ）の溶媒は、減圧下で蒸発濃縮された。前記Ｂ＆Ｄの抽出物は、最少量の蒸留水で溶解された。前記水性溶液は、２つの部分に分かれた。１つの部分は、硫酸アンモニウムで徐々に飽和され、もう一方についてはアセトンが徐々に加えられた。硫酸アンモニウム及びアセトンの両方の添加は、ＤＣＰの混合物（酸化ジベンゾ−アルファ−ピロン色素タンパク質）をオフホワイトの固体として沈殿させた。これらの化合物は、異なるクロマトグラフ（ＨＰＬＣ）及びスペクトル（ＩＲ、１Ｈ−ＮＭＲ、ＧＣ−ＭＳ）の技術によって解析され、シラジットのＤＣＰとの同一性を立証した。
【００９１】
例４
ＤＣＰ（及び）の分離及び部分的特徴づけ
ドデシル硫酸ナトリウムのポリアクリルアミドゲル電気泳動が、ＷｅｂｅｒとＯｓｂｏｒｎ（１９６９）の方法により、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳの存在において１０％アクリルアミドを用いて実行された。前記サンプルは、２−メルカプトエタノール及び３％ＳＤＳの存在において、１００℃で３分間、事前加熱された。０．１％ＳＤＳ（ｐＨ８．４）を含むトリス−グリシンバッファーは、ランニングバッファーとして使用された。ブロモフェノールブルーは、追跡用色素（ｔｒａｃｋｉｎｇ  ｄｙｅ）として使用された。電気泳動は、１２０Ｖ、４０ｍＡの定電流で９０分間実行された。ピンクがかったオレンジ色のバンドが、その後にブロモフェノールブルーが続くトップ（ＤＣＰ−）の方に出現し、その後、黄色のバンド（ＤＣＰ−）の方に出現した。ランの終了後、これら３本のバンドは、鋭い刃で切断され、乳鉢と乳棒で１．５ｍｌの蒸留水中で、別個にホモジナイズした。各ホモジネートは、微小遠心管中でデカンタされ、７０００ｒｐｍで１０分間遠心された。各上澄みは２つの部分に分けられ、バキュームの下、蒸発濃縮した。前記サンプル（ｃａ．５０μｇ）の１つの部分は、ＨＰＬＣのランニング溶媒（水：アセトニトリル：オルトリン酸＝６７：３２：１）で溶解され、ＨＰＬＣで解析された。もう一方の部分は、リパーゼ反応（例５を参照）を受けた。
【００９２】
前記ＤＣＰ−化合物は、ピンク色に着色した粉末として得られた；ｐＨ（１％水性溶液）８．０２；Ｎ、１７．８％；金属イオン（ｐｐｍで）Ｆｅ、１８６．３；Ｃｕ、８．８；Ｚｎ、２３．４。
【００９３】
前記ＤＣＰ−化合物は、薄茶色の粉末として得られ、ｐＨ（１％水性溶液）７．８；Ｎ、１６．４％；金属イオン（ｐｐｍで）Ｆｅ、２６２．４；Ｚｎ、４８．７。
【００９４】
前記２つの色素タンパク質の更なる精製は、リン酸バッファー（ｐＨ７．２）を用いた、ＤＥＡＥ−セファデックス  Ｇ−５０でのセファデックスのイオン交換によって実行された。ゲル電気泳動（１０％ＳＤＳ、厚み１．５ｃｍ；定電流２０ｍＡ、トリス−グリシンバッファー、ｐＨ８．３）は、各々ＤＣＰ−、２〜５ＫＤ及びＤＣＰ−、１０〜１４ＫＤにおいて、２本の主要なバンドを示した；より高いＭｗの範囲でいくつかのより軽いバンドを伴う。
【００９５】
ＤＣＰ−及びＤＣＰ−は共に、ＨＰＬＣ、及びＤＢＰ−カロテノタンパク質に典型的なスペクトル（ＩＲ、１Ｈ−ＮＭＲ）特性を示した。
【００９６】
例５
ＤＣＰのリパーゼ反応
前記サンプル（ｃａ．５０μｇ）は、ｐＨ８．０の１Ｍトリスバッファー０．５ｍｌで溶解された。ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（２．２％）１００μｌ、及び胆汁塩（１％）２５０μｌが各サンプルに加えられた。リパーゼの希釈標準溶液（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（２ｍｌのトリスバッファー中、Ｓｉｇｍａ社のブタの膵臓のリパーゼ１ｍｇ）がその後、各サンプルに加えられた。前記混合物は、マグネティックスターラーで３７℃３時間攪拌された。インキュベーション後、１ｍｌのエタノール及び１ｍｌの６ＮのＨＣｌが、前記反応を停止するために、混合物に加えられた。前記加水分解された産物は、ジエチルエーテルによって抽出され、無水硫酸ナトリウムで乾燥された。残りの部分は、磁器ボール（ｐｏｒｃｅｌａｉｎ  ｂａｓｉｎ）中で、ウォーターバスの上で濃縮された。前記残留物は、最少量のＨＰＬＣ溶媒（水：アセトニトリル：オルトリン酸＝６７：３２：１）で溶解され、２０μｌが解析用にＨＰＬＣへと注入された。回収したエーテル抽出物も、リパーゼの加水分解後、脂質化合物の本質の特徴付けを行うために、同じ溶媒システムにおけるＨＰＬＣで解析された。
【００９７】
ＤＣＰのＨＰＬＣクロマトグラムにおいて、多数のピークが、硫酸アンモニウムを用いて別個に飽和させることにより、シラジットの水性溶液から析出され、７５及び１００％飽和した画分に出現した（図３）。この観察は、シラジットのＤＣＰが比較的低いＭｗの（カイロミクロン／リポカリンのような）リポタンパク質でいっぱいであることを示唆した。しかし、ｔＲ１．５分のシグナル（図３）は、Ｂ−４８のようなより高いＭｗのタンパク質もまたＤＣＰ中に発生しうることを示唆した。接着性リガンド、特にＤＢＰの存在もまた示唆された。
【００９８】
別の観察は、ＤＣＰ中での、リガンドとしてのＤＢＰの会合であった（図４）。この図において、ＰＲ−２５、−５０、−７５及び−１００は、各々、硫酸アンモニウムが析出したタンパク質画分を意味する。ＰＲ−５０及び−７５において、多量の３，８−ジヒドロキシジベンゾ−アルファ−ピロンは、ＤＢＰが低／中ＭＷのリポタンパク質と選択的に会合しているということを非常によく示唆していることに留意されたい。
【００９９】
例６
アミノ酸の決定
ＤＣＰの酸加水分解において生成されるアミノ酸の混合物は、トリメチルシリル誘導体（Ｏ−／Ｎ−ＴＭＳ）に転換され、その後、対応するマーカーを用いることにより、ＧＣ−ＭＳ解析を受け、標準アミノ酸とともに同様にして調製された。
【０１００】
例７
クレアチンの決定
本法は、ジアセチル及びアルファ−ナプトールの存在においてクレアチンによって発達される色の反応に基づき、Ｂａｒｒｅｔｔ（１９３６）によって説明された。端的には、６０μｇ以下のクレアチンを含むテストサンプルの中性溶液に対して、アルカリ中での２ｍｌの１％アルファ−ナプトール、その後１ｍｌのジアセチル（使用前に１：２０に希釈された１％溶液）が加えられた。前記溶液は攪拌され、その色は５２５ｍμで３０分後に測定された。
【０１０１】
例８
アルギニンの決定
アルギニンは、選択的な分解（リパーゼ）によりＤＣＰから単離され、アルギナーゼ（５〜１０ユニット／ｍｌ）によってオルニチン及びウレアに分解され、比色分析でアッセイされた（酸混合物、すなわち、１ｖｏｌのＨ２ＳＯ４；３ｖｏｌのシロップ状Ｈ３ＰＯ４；１ｖｏｌのＨ２Ｏ；Ｈ２Ｏ中に５０μｇ／ｍｌのウレアスタンダード；及び９５％エチルアルコール１００ｍｌ中にアルファ−イソニトロソプロピオフェノン４ｇ、を使用する）。
【０１０２】
例９
慢性ストレスに関するシラジット成分の効果についての比較研究
ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＤＢＰ及びＤＣＰからのシラジットの生理活性成分についての比較研究が実行され、アルビノのラットにおける慢性ストレス（ＣＳ）に対する適応力を高める効能を決定した。動物が立ち向かうことのできない、温暖だが予測できない自然のＣＳ（逃れられないストレス）は、急性ストレスが自然界では厳しいものである場合でさえ、医学的には急性ストレスよりも関連があるということが、現在では日増しに証拠となりつつある。慢性で、予想不可能で、逃れられないストレスは、究極的には、慢性ストレスが誘発する生理学的な心配及び病気という結果になる個体に直面する状況に似ていると信じられている。
【０１０３】
動物。調査は、一方の性で、大気の温度が２５±２℃、１２時間が明るく１２時間が暗いというサイクルのコロニーかごで生活するＣＦ緊張性アルビノラット（１４０〜１８０ｇ）で実行された。実験は、０９００時間と１４００時間との間で行われた。
ＥＰＡ、エイコサペンタエン酸
ＤＨＡ、ドコサヘキサエン酸
ＤＢＰ、３−ヒドロキシ−及び３，８−ジヒドロキシジベンゾ−アルファ−ピロンの１：１の混合物
ＤＣＰ、ＤＢＰ−色素タンパク質
慢性ストレスの誘発
Ａｒｍａｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ  （１９９３）の手法に従った。端的に言うと、ラットは、コントロールまたはストレスのグループにランダムに割り当てられた。ストレスグループに割り当てられたラットは、１４日の間毎日、グリッド床を通して、１時間のフットショックを受けた。各ショック（２ｍＡ）の持続時間、及び前記ショック同士の間の間隔は各々、３〜５秒と１０〜１１０秒との間でランダムにプログラム化し、前記ストレスを予測不可能とした。前記ショックのチャンバーは、ショックからの逃避を不可能にする高い壁を有した。
【０１０４】
テスト化合物及びビヒクル
ＥＰＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗ．）、ＤＨＡ（Ｓｉｇｍａ）、ＤＢＰ及びＤＣＰは、別々に、蒸留水中の０．３％のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）で懸濁／溶解され、１４日間経口投与し（ｐ．ｏ．）、１日目（ｄａｙ１）に、開始６０分後に電気ショックを行った。コントロールの動物は、２．５ｍｌ／ｋｇの体積のｐ．ｏ．で同じ期間に、ストレスの無いまたは有るラットにおいて、ビヒクルのみを受けた。評価は１４日目（ｄａｙ１４）に、最終のストレス手法後１時間、及び最終のテスト化合物またはビヒクルが投与された後２時間行われた。
【０１０５】
慢性ストレス効果の強さの決定
Ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒａｔｉｏｎｓ  （Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）。１４日目（ｄａｙ１４）に、ラットは首をはねて殺され、その胃はまさに見事な曲線に沿ってパックリと裂け、潰瘍の数が書き留められた。組織学的な確認の後に、前記潰瘍の重度さが、０＝潰瘍なし；１＝詰まりのない粘膜の表層に限り変化する；２＝粘膜の厚さの半分が壊死の変化を示す；及び、４＝出血を伴う粘膜の完全な破壊、としてスコア化された。その後、プールされた潰瘍のスコアが、Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）の方法により計算された。
【０１０６】
副腎皮質機能亢進症の活性
副腎のアスコルビン酸（ＺｅｎｋｅｒとＢｅｒｎｓｔｅｉｎ，１９５８）及びコルチコステロン（ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ）濃度（Ｓｅｌｙｅ，１９３６）、及びプラズマコルチコステロンレベル（Ｓｅｌｙｅ，１９３６）が決定され、選ばれたストレス手法の有効性及び強度を実証した。
【０１０７】
結果及び考察
慢性ストレス（ＣＳ）は、胃潰瘍の発生率、数及び重症度を顕著に増大させた。４つのテスト化合物全てが、たとえ異なる程度であっても、ドーズ関連の抗潰瘍発生効果を有した。抗潰瘍発生効果の程度は、以下の表７にあるように、ＤＣＰ＞ＤＢＰ＞ＤＨＡ≒ＥＰＡという順序であった。
【０１０８】
【表８】
2008504231.tif 000016
【０１０９】
慢性ストレス（ＣＳ）は、副腎のアスコルビン酸及び付随物を伴うコルチコステロン濃度の著しい減少の原因となっており、プラズマコルチコステロンレベル中で増加する。これらの発見もまた、本研究で用いられたストレスのプロトコールが顕著なストレスを誘発したということを示唆している。予想されるように、４つのテスト化合物（ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＤＢＰ、ＤＣＰ）全てが、異なる程度で、ドーズ関連手法におけるこれらのストレス誘発の逆効果を逆転させ；ストレス軽減作用は、用いられるドーズにおいて、表８において以下のように調査されたストレスの指数に関するｓｅ当たりの効果（ｐｅｒ  ｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ）が全くなかった。
【０１１０】
【表９】
2008504231.tif 000017
【０１１１】
慢性ストレスが誘発する、ラット（表９）並びにラットの大脳の前頭皮質ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＧＰｘ及びＬＰＯ活性（表１０）における体液性免疫の抑制に関する、ＤＢＰ及びＤＣＰの効果は、ＤＣＰのシラジットに対する主要な生理活性寄与を確立した。
【０１１２】
【表１０】
2008504231.tif 000018
【０１１３】
テスト薬は、ストレス手段と付随して１４日投与された。
【０１１４】
【表１１】
2008504231.tif 000019
【０１１５】
（カイ二乗テスト）。動物は、１日目（ｄａｙ１）のＳＲＢＣを用いた感作後に、１４日目（ｄａｙ１４）で出血した。
【０１１６】
例１０
アラキドン酸代謝に関するＤＣＰの効果
シラジット及びその主要な生理活性成分であるＤＣＰの抗炎症効果は、アラキドン酸（ＡＡ）代謝を用いて評価された。ＡＡ代謝に関するシラジットの効果は、単離されたヒトの好中球で試験された。シラジット及びＤＣＰはともに、ＡＡ−リポキシゲナーゼ経路の産物、いわゆるロイコトリエン（ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ）−Ｂ４（ＬＴＢ４）、５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（５−ＨＥＴＥ）、１２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１２−ＨＥＴＥ）の生合成を示し、ドーズ依存手法で、シクロキシゲナーゼ産物、すなわち１２−ヒドロキシヘプタデカトリエン酸（１２−ＨＨＴ）の生合成も示した。ＤＣＰの場合にはたった１０μｇ／ｍｌであった一方、最大の阻害効果が、５０μｇ／ｍｌの濃度のシラジットで観察された。１：４の組み合わせの３，８−ジヒドロキシジベンゾ−アルファ−ピロン（ＤＢＰ）及びｆｕｓｏｍは、２０μｇ／ｍｌの濃度で同等の活性を示した。シラジットのｆｕｓｏｍは、効果的でシステミックな医薬運搬剤として用いられている（Ｇｈｏｓａｌ、２００３）。これらの発見は、シラジット及びその主要な生理活性物質（ＤＣＰ）によるロイコトリエン（及び同等物）の合成の阻害は、治療行為、例えば気管支ぜんそくの治療に効果があるということを示唆している。
【０１１７】
表７及び８に示されているように、上記の結果は、ＤＣＰがシラジットの生理活性剤の中で最も活性がある一方で、ＤＢＰ（３−ヒドロキシ−及び３，８−ジヒドロキシベンゾ−アルファ−ピロンの１：１の混合物）は、その前駆体、すなわちＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）またはＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）の一方よりも生物学的に活性があるということを示唆している。ＤＢＰ及びＤＣＰの類似した勾配効果（ｇｒａｄｅｄ  ｅｆｆｅｃｔ）は、ラットの脳の抗酸化酵素及びＬＰＯ活性における慢性ストレス（ＣＳ）誘発性摂動（表９）、並びにラットにおける体液性免疫のＣＳ誘発抑制（表１０）で観察された。生体系におけるＤＣＰの意義、及び実験動物への経口投与後のＤＣＰの運命もまた示されている。
【０１１８】
例１１
ＤＣＰの抗酸化作用
Ｆｅ−ＡＤＰ−アスコルビン酸塩が誘発する、ＤＢＰ及びＤＣＰによるラットの脳における過酸化脂質（ＬＰＯ）の阻害
アルビノのラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ  ｓｔｒａｉｎ）は、頚椎の脱臼及び断頭により犠牲となった。脳が完全に解剖され、１０％（ｗ／ｖ）のホモジネートが０．１５ＭのＫＣｌ中で調製された。前記脳のホモジネートが１５００ｒｐｍで１０分間遠心され、上澄みが本研究に使用された。インキュベーション混合物は、最終体積１ｍｌに、脳のホモジネート（５００μｌ）、蒸留水（１００μｌ）、または異なる濃度（最終体積１０〜１００μｇ／ｍｌ）で溶媒中に溶解したテスト化合物を含んでいた。過酸化は、ＦｅＣｌ３（１００μＭ）、ＡＤＰ（１ｍＭ）及びアスコルビン酸塩（１００μＭ）を加えることにより開始され、先述の最終濃度を与えた。３７℃で３０分間のインキュベート後、前記反応は、酢酸バッファー（１．５ｍｌ、ｐＨ３．５）及びチオバルビツール酸溶液（１．５ｍｌ、ｐＨ７．４）をＬＰＯ混合物１ｍｌ中に加えることにより終了した。前記反応混合物は、８５℃で３０分間加熱し、冷却し、遠心分離（２０００ｒｐｍで１０分間）し、その上澄みの吸光度は５３２ｎｍで測定された。ＩＣ５０価は、ＬＰＯの阻害割合に対する前記テスト化合物の濃度をプロットすることにより、通常の方法で計算された。
【０１１９】
例１２
ＤＣＰに関する金属イオンのキレート及び掃気の作用
これは、ＤＣＰについての金属イオンの複合体（ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）／配合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）の安定性、及び掃気する（ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ）／キレートする遊離の（ｌｏｏｓｅ）金属イオンに対するそれらのキャパシティーによって決定された。
【０１２０】
ＳｃｈｎｉｔｚｅｒとＳｋｉｎｎｅｒのイオン交換平衡法（１９６６）は、上述の決定用に用いられた。端的に言うと、１０〜５０ｍｇの範囲のＤＣＰ量は、５０ｍｌ容のフラスコ中で秤量され、およそ４０ｍｌの蒸留水中で溶解された。各フラスコに対して、５ｍｌの１Ｎ−ＫＣｌ溶液が加えられた。１ｇ量のＫ−飽和Ｄｏｗｅｘ−５０樹脂（２０〜５０メッシュ、Ｂｉｏ−ＲＡＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が、１２５ｍｌの、すりガラスのストッパーを有するＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中で秤量された。天然のＤＣＰ−金属イオン配合体（Ｆｅ、Ｃｕ、Ｚｎ）を含む溶液が、ＫＣｌと混合され、これらのフラスコへ移され、２４±１℃で１時間攪拌された。別個の実験において、公知の量（約５００μｇ）の、ＭｎＣｌ２、ＭｏＣｌ３及びＷＣｌ４の水性溶液が別々に、前記ＤＣＰ−ＫＣｌの水性溶液に加えられた。前記混合物は、前記と同様に攪拌され、安定度定数は以下の通りに決定された。その後、交換樹脂は、濾過により除去された。前記濾液及び洗浄液は、金属イオン、すなわちＦｅ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋を含み、前記の加えられた金属イオンを有するそれらは、原子吸光分光法（Ｔｅｃｈｔｒｏｎ  ＡＡ−３  Ａｔｏｍｉｃ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）で解析された。
【０１２１】
ｐＨ３．５で、前記の異なるＤＣＰ−金属イオン複合体に対する対数安定度定数は、ＤＣＰ−Ｃｕ、３．４４；ＤＣＰ−Ｆｅ、２．８３；ＤＣＰ−Ｚｎ、１．４７であった。前記の異なる金属イオンの安定度の順序は、（減少していく順序で表された）：Ｃｕ２＋＞Ｆｅ２＋＞Ｍｎ３＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｏ３＋＞Ｗ４＋。
【０１２２】
表７及び８で示されているように、結果は、ＤＣＰがシラジットの生理活性剤の中で最も活性がある一方で、ＤＢＰ（３−ヒドロキシ−及び３，８−ジヒドロキシジベンゾ−アルファ−ピロンの１：１の混合物）がその前駆体、すなわちＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）またはＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）の一方よりも生物学的に活性があるということを示唆している。ＤＢＰ及びＤＣＰの類似した勾配効果（ｇｒａｄｅｄ  ｅｆｆｅｃｔ）は、ラットの脳の抗酸化酵素及びＬＰＯ活性における慢性ストレス（ＣＳ）−誘発性摂動（表９）、並びにラットにおける体液性免疫のＣＳ−誘発抑制（表１０）で観察された。ＤＣＰの抗酸化作用は、生体系におけるＤＣＰの意義、及び実験動物への経口投与後のＤＣＰの運命を示す表１１及び１２に示されているように明白である。
【０１２３】
【表１２】
2008504231.tif 000020
【０１２４】
【表１３】
2008504231.tif 000021
【０１２５】
例１３
パーソナルケア／化粧品処方
Ａ．  肌の若返り（Ｏ／Ｗ）ローション
【０１２６】
【表１４】
2008504231.tif 000022
【０１２７】
手法
Ａを混合し、攪拌し、６５℃まで加熱せよ。Ｂを混合し、攪拌し、６５℃まで加熱せよ。攪拌中にＡをＢに加えよ。中庸の速度でホモジナイズし、泡立ちを避ける一方で、混合物温度を４０℃まで冷却せよ。Ｃを加え、ホモジナイズせよ。混合物が均質になるまで穏やかに攪拌せよ。
Ｂ．  日焼け止め剤  Ｏ／Ｗ  ローション（ＳＰＦ  １５）
【０１２８】
【表１５】
2008504231.tif 000023
【０１２９】
手法
Ａを混合し、攪拌し、８０℃まで加熱せよ。Ｂを混合し、攪拌し、８０℃まで加熱せよ。プロペラミキサーでの攪拌中にＡをＢに加えよ。７０〜７５℃の温度を維持しながら２０分間Ａ／Ｂを攪拌し続けよ。Ｃを混合し、溶解するまで攪拌し、４５℃まで加熱せよ。攪拌しながらＣをＡ／Ｂに加えよ。Ｑｓ水。Ａ／Ｂ／Ｃを穏やかにホモジナイズし、混合物を室温まで冷却せよ。高せん断スプレー装置を用いて調製せよ。
Ｃ．  液体ファンデーション
以下の処方を有する液体ファンデーションが、以下の方法により調製された。
【０１３０】
【表１６】
2008504231.tif 000024
【０１３１】
手法
Ａ．  （１）〜（４）の成分が混合され、ともに溶解した。
Ｂ．  （９）〜（１２）の成分が、前述の混合物Ａと混合され、均一に混合された。
Ｃ．  （５）〜（８）の成分が、ともに均一に溶解し、結果混合物は７０℃に維持された。
Ｄ．  前述の混合物Ｃが、前述の混合物Ｂに加えられ、均一に混合され、エマルジョンを与えた。
Ｅ．  前述の混合物Ｄの冷却後に、（１３）〜（１５）の成分がそこへ混合され、液体ファンデーションを与えた。
例３で調製された液体ファンデーションは、長期間優れた安定性を有することが分かった。本ファンデーションの肌への適用は、太陽が誘発するあらゆるしわの出現を防止することができる。
Ｄ．  水分回復ボディーローション
【０１３２】
【表１７】
2008504231.tif 000025
【０１３３】
手法
１．  相Ａ中の原料同士を組み合わせ、混合しながら８０℃まで４５分間加熱せよ。
【０１３４】
２．  相Ｂ中の原料同士を組み合わせよ。７５〜８０℃まで加熱し、混合せよ。
【０１３５】
３．  ホモジナイゼーションの下で、相Ｂを相Ａに加えよ。均一になるまでホモジナイズせよ。
【０１３６】
４．  相Ｃを相Ａ及びＢに加えよ。ホモミックス（ｈｏｍｏｍｉｘ）から取り出し、冷却を開始せよ。プロペラ混合を４０℃に転換せよ。
【０１３７】
５．  相Ｄの原料を１つずつ４０℃で加え、各添加の間に十分混合せよ。
【０１３８】
６．  相Ｅを３５℃で加えよ。水の損失に対するＱＳ。
Ｅ．  髪の光沢オイル
【０１３９】
【表１８】
2008504231.tif 000026
【０１４０】
手法
１．  小さな混合容器中で、ＤＣＰをＬａｕｒｙｌ乳酸塩に加えよ。混合物を６０〜７０℃で加熱せよ。均一になるまでゆっくり攪拌しながら十分に混合せよ。攪拌しながら３０〜３５℃まで冷却せよ。
【０１４１】
２．  アルコールを別の、より大きな容器に加えよ。
【０１４２】
３．  相Ａが３０〜３５℃にある時に、相Ａをアルコールに加えよ。均一になるまで十分に混合せよ。均一になるまで、各々の間に、混合中を通じて、残りの原料を順番に加えよ。
【０１４３】
４．  保存料を加えよ。均一になるまで十分に混合せよ。
Ｆ．  顔用の、肌の光沢／美白ローション
【０１４４】
【表１９】
2008504231.tif 000027
【０１４５】
手法
Ａを組み合わせ、７０〜７５℃まで加熱せよ。Ｂを組み合わせ、７０〜７５℃まで加熱せよ。攪拌中、ＢをＡに加えよ。相Ｃを３０℃で加えよ。相Ｄを用いて、ｐＨを５．０〜６．０に調節せよ。相Ｅを加えよ。均一になるまで混合せよ。
例１４
医薬／栄養の処方
Ａ  本発明の錠剤及びカプセル
【０１４６】
【表２０】
2008504231.tif 000028
【０１４７】
Ｂ．  本発明の抗ストレスサポートの錠剤／カプセル
【０１４８】
【表２１】
2008504231.tif 000029
【０１４９】
Ｃ．  本発明の心臓−血管のサポート錠剤
【０１５０】
【表２２】
2008504231.tif 000030
【０１５１】
Ｄ．  本発明のマルチ−ビタミン及びミネラルのサプリメント錠剤
【０１５２】
【表２３】
2008504231.tif 000031
【０１５３】
他の原料、及び植物の抗酸化剤：Ｎ−アセチルシステイン、コハク酸（遊離形態）、コリン（酸性酒石酸塩）、イノシトール（ヘキサニコチネート及びイノシトール）、Ｎ−アセチルグルコサミン、ＤＭＡＥ（酸性酒石酸塩）、Ｎ−アセチル  Ｌ−チロシン、コエンザイムＱ１０、アルファリポ酸、ケルセチン、Ｍｉｌｋ  Ｔｈｉｓｌｅの種子抽出物、グレープの種子抽出物、イチョウ葉、ビルベリー抽出物。
Ｅ．  本発明の抗糖尿病サポート錠剤／カプセル
【０１５４】
【表２４】
2008504231.tif 000032
【０１５５】
Ｆ．  本発明の体重の減量サポート錠剤
【０１５６】
【表２５】
2008504231.tif 000033
【０１５７】
Ｇ．  本発明のチュワブル錠剤
【０１５８】
【表２６】
2008504231.tif 000034
【０１５９】
手法  ６以外の全ての原料を２０分間、ブレンダーでブレンドせよ。６中で選別し、更に５分間ブレンドせよ。標準的な凹形の工具で、７／１６を用いた錠剤に押し付けよ。
Ｈ．  本発明のシロップ
【０１６０】
【表２７】
2008504231.tif 000035
【０１６１】
Ｉ．  本発明の経口の液体
【０１６２】
【表２８】
2008504231.tif 000036
【０１６３】
Ｊ．  本発明を用いるスナックバー
【０１６４】
【表２９】
2008504231.tif 000037
【０１６５】
Ｋ．  本発明を用いたシリアル
【０１６６】
【表３０】
2008504231.tif 000038
【０１６７】
Ｌ．  本発明を用いたビバレッジ
【０１６８】
【表３１】
2008504231.tif 000039
【０１６９】
例１５
獣医用処方
Ａ．  本発明のチュワブル錠剤
【０１７０】
【表３２】
2008504231.tif 000040
【０１７１】
Ｂ．  本発明のビタミン錠剤（ピーナッツバターフレーバー）
【０１７２】
【表３３】
2008504231.tif 000041
【０１７３】
Ｃ．  本発明の顆粒
【０１７４】
【表３４】
2008504231.tif 000042
【０１７５】
Ｄ．  本発明の造血粉末
【０１７６】
【表３５】
2008504231.tif 000043
【０１７７】
Ｅ．  本発明の液体カプセル
【０１７８】
【表３６】
2008504231.tif 000044
【０１７９】
Ｆ：  本発明の経口液体
【０１８０】
【表３７】
2008504231.tif 000045
【０１８１】
Ｇ．  本発明のサスペンション
【０１８２】
【表３８】
2008504231.tif 000046
【０１８３】
Ｈ．  本発明の注入物質
【０１８４】
【表３９】
2008504231.tif 000047
【図面の簡単な説明】
【０１８５】
【図１Ａ】ＤＣＰの一般的な構造、及びＤＣＰの複合体集合を示す。
【図１Ｂ】ＤＣＰの一般的な構造、及びＤＣＰの複合体集合を示す。
【図２】ＤＣＰを資化するアルビノのラットの赤血球における、時間と共に様々に変化するＤＣＰレベルを示す。
【図３】硫酸アンモニウムの沈殿物に由来するシラジット  ＤＣＰのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４】３，８−ジヒドロキシ  ジベンゾ−アルファ−ピロンとタンパク質画分との間の関係を示す。
【図１Ａ】
2008504231.tif 000050
【図１Ｂ】
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【図２】
2008504231.tif 000052
【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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