(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びｎは、明細書中に定義されたとおりである）の化合物、及びその炎症状態を処置するための医薬組成物の製造における使用に関する。
2008502634.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2008502634.tif 000020
（式中、
Ｒは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択されるハロゲンであり、
Ｒ１は、Ｈ、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択されるハロゲン、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメチル、ニトロ、アミノであり、
Ｒ２は、ｔｅｒｔ−ブチル又はトリフルオロメチルであり、
ｎは、０、１及び２から選択される整数であり、
Ｘは、Ｏ又はＳである）
の化合物。
【請求項２】
ＸがＳであり、
ｎが１であり、
Ｒ２がｔｅｒｔ−ブチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＳであり、
ｎが１であり、
Ｒ２がトリフルオロメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒがヨウ素であり、Ｒ１が水素である、請求項２又は３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒが塩素であり、Ｒ１が水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
医薬品として使用するための、請求項１〜４のいずれか一項に定義されている式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
バニロイド受容体拮抗薬としての、請求項１〜４のいずれか一項に定義されている式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項８】
炎症状態の治療用の医薬組成物を製造するための、請求項１〜４のいずれか一項に定義されている式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項９】
適切な賦形剤及び／又はビヒクルとの混合物中に、請求項１〜４のいずれか一項に定義されている式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はバニロイド受容体の拮抗薬に関し、より詳細には、バニロイドＴＲＰＶ１受容体に拮抗するベンジルアミド類に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
最近の実験的証拠は、炎症状態の経過中、バニロイドＴＲＰＶ１受容体（一過性受容体電位チャネル）の発現が上昇することを例証した。それは、そのような状態、例えば、慢性疼痛又は炎症性痛覚過敏の処置に、バニロイド受容体拮抗薬が有用であり得ることを示唆することに至らせた。
【０００３】
多数のバニロイド受容体拮抗薬が公知であり、その数種はカプサイシンから誘導され、カプサイシノイド拮抗薬と称されている。特に、Sandozは、式（ＩＩ）
【０００４】
【化２】
2008502634.tif 000003
【０００５】
のチオ尿素を開示した（Wrigglesworth, R.et al, J. Med. Chem. 1996, 39, 4941-4951）。
【０００６】
発明の開示
本発明は、式（Ｉ）
【０００７】
【化３】
2008502634.tif 000004
【０００８】
（式中、
Ｒは、ハロゲンであり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロゲン、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメチル、ニトロ、アミノであり、
Ｒ２は、ｔｅｒｔ−ブチル又はトリフルオロメチルであり、
ｎは、０、１及び２から選択される整数であり、
Ｘは、Ｏ又はＳである）
の化合物に関するものである。
【０００９】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択されるハロゲンを示す。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物の好ましい第一の群は、
ＸがＳであり、
ｎが１であり、
Ｒ２がｔｅｒｔ−ブチルであるものである。
【００１１】
中でも、特に好ましくは、Ｒがヨウ素であり、Ｒ１が水素である化合物（Ｉａ）、及びＲが塩素であり、Ｒ１が水素である化合物（Ｉｂ）である。
【００１２】
化合物の好ましい第二の群は、
ＸがＳであり、
ｎが１であり、
Ｒ２がトリフルオロメチルであるものである。
【００１３】
中でも、特に好ましくは、Ｒがヨウ素であり、Ｒ１が水素である式の化合物（Ｉｃ）である。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物は、例えば、式（ＩＩＩ）
【００１５】
【化４】
2008502634.tif 000005
【００１６】
（式中、Ｒは、上記に定義したとおりであり、ヒドロキシ基は、アセチル、ベンジル又はベンゾイル基により保護される）
の化合物を、式（ＩＶ）
【００１７】
【化５】
2008502634.tif 000006
【００１８】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、上記に定義したとおりである）
の化合物と反応させることのような、従来の方法により製造され得る。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物は、バニロイドＴＲＰＶ１受容体を阻害することができ、例えば、慢性疼痛及び炎症性痛覚過敏のような炎症状態の処置のための医薬組成物の製造に使用することができる。これらの製剤は、従来の方法、及び賦形剤、例えば、RemingtonのPharmaceutical Sciences Handbook, XVII ed. Mack Pub., N.Y., U.S.A.に開示されているようなものによって、製造することができる。
【００２０】
以下、本発明を下記の実施例並びにスキーム１及び２により説明する。
【００２１】
実施例
反応をシリカゲル上の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（プレコートされたＦ２４５  Ｍｅｒｃｋプレート）により、規定どおりに監視し、生成物をヨウ素又は過マンガン酸カリウム溶液で視覚化した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、ＣＤＣｌ３、ＣＦ３ＣＯＯＤ又はＤＭＳＯ−ｄ６中で、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ  ２００分光計を用いて記録した。ピーク位置を、内部基準としてのテトラメチルシランから、低磁場への百万分の一（δ）にて与え、Ｊ値は、Ｈｚにて与える。ＩＲスペクトルを、ＫＢｒ  Ｗａｆｅｒ法を使用して、Ｐｙｅ  Ｕｎｉｃａｍ  ＳＰ  ３００分光計上で記録した。質量スペクトルを、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＱＰ５０５０  ＤＩ  ５０分光計により得た。表現“軽油エーテル”は、４０〜６０℃で沸騰する石油留分を指す。融点（Ｍ．ｐ．）は、Ｂｕｃｈｉ−Ｔｏｔｔｏｌｉ機器上で測定され、修正されていない。クロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ６０〜２００メッシュのシリカゲルを使用して行なわれた。合成され化合物は、割り当て構造と一致する１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示した。元素分析は、Ｃ、Ｈ、及びＮの理論値の±０．４%以内であった。
【００２２】
実施例１
１−（４−ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（２−ヨード−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジル）チオ尿素  Ｉａ
１．１  ４−アセチルオキシ−３−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミンの合成
無水酢酸（１mL、１０．５mmol）を塩酸  ４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンジルアミン（０．５g、２．６３mmol）のピリジン（５mL）溶液に加え、混合物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を水（１００mL）中に懸濁させた。水層を酢酸エチル（３×２０mL）で抽出して、一緒にした有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で蒸発させて、表題化合物を白色固体（０．４５g、収率７５%）として得た。
【００２３】
【表１】
2008502634.tif 000007
【００２４】
１．２  ２−ヨード−４−アセチルオキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミンの合成
実施例１．１のジアセチル誘導体および触媒量のトリフルオロメタンスルホン酸（５〜６滴）を、ＩＰｙ２ＢＦ４１，２（０．６９g、６．９mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（４０mL）溶液に加えた。得られた混合物を室温で５時間撹拌し、ついで、混合物が完全に透明になるまで、１０%チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えた。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×２５mL）で抽出して、有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ２Ｏの混合物から再結晶させて、表題化合物を淡黄色固体（０．３８g、収率６５%）として得た。
【００２５】
【表２】
2008502634.tif 000008
【００２６】
二次元ＮＯＥＳＹ（ＣＤＣｌ３）：７．４４ppmの一重項と２．３３ppmの一重項との間のカップリングは、ヨウ素が芳香環の２位に存在することを裏付ける。
【００２７】
【表３】
2008502634.tif 000009
【００２８】
１．３  塩酸  ２−ヨード−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンジルアミンの合成
【００２９】
２−ヨード−４−アセチルオキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン（０．１g、０．２７mmol）の無水エタノール（５mL）溶液に、３７%塩酸（０．２mL）を加えて、混合物を１２時間還流した。冷却した後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を乾燥アセトンから再結晶させて、表題化合物を淡黄色固体として、定量的収率にて得た。
【００３０】
【表４】
2008502634.tif 000010
【００３１】
１．４  １−（４−ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（２−ヨード−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジル）チオ尿素  Ｉａの合成
試薬：（ｉ）４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルイソチオシアナート３、ＴＥＡ、ＤＭＦ、室温
ＴＥＡ（０．９５mmol、０．１３mL）及び４−ｔｅｒｔ−ブチルイソチオシアナート３（０．４７mmol、０．１g）を、塩酸  ２−ヨード−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジルアミン（０．１５g、０．４７mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０mL）中の懸濁液に加えた。混合物を室温で２０時間撹拌し、残留物に、水（３０mL）を加えた。水層を酢酸エチル（３×２０mL）で抽出し、一緒にした有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した後、減圧下で蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１：１  酢酸エチル／軽油）で精製して、Ｉａを白色固体（６０mg、収率３２%）として得た。
【００３２】
【表５】
2008502634.tif 000011
【００３３】
実施例２
１−（４−ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジル）チオ尿素  Ｉｂの合成
２．１  ２−クロロ−４−アセチルオキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチルベンジルアミン  ２ｂの合成
Ｎ−クロロスクシンイミド（３．１５mmol、０．４２g）を、実施例１．１の４−アセチルオキシ−３−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン（０．５g、２．１mmol）の乾燥ＤＭＦ（６mL）溶液に加え、混合物を０℃で３０分（３０’）、次いで、室温で１６時間撹拌した。
【００３４】
反応物（４０mL）に、水を加えた際、白色沈殿の形成が観察された。
固体を濾過により分離し、冷水（２×２０mL）で２回洗浄した後、Ｐ２Ｏ５上で乾燥して、表題化合物を白色固体（０．４５g、収率８３%）として得た。
【００３５】
【表６】
2008502634.tif 000012
【００３６】
二次元ＮＯＥＳＹ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．２４ppmの一重項と７．２５ppmの一重項との間のカップリングは、塩素が芳香環の２位に存在することを裏付ける。
【００３７】
【表７】
2008502634.tif 000013
【００３８】
２．２  塩酸  ２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンジルアミン  ３ｂの合成
２−クロロ−４−アセチルオキシ−５−メトキシ−Ｎ−アセチル−ベンジルアミン２ｂ（０．４５g、１．６６mmol）の無水エタノール（１５mL）溶液に、３７%塩酸（２．５mL）を加えて、混合物を１２時間還流した。反応物を冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を乾燥アセトンから再結晶させて、表題化合物を白色結晶として、定量的収率で得た。
【００３９】
【表８】
2008502634.tif 000014
【００４０】
２．３  １−（４−ｔｅｒｔ−ブチル）−３−（２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジル）チオ尿素  Ｉｂの合成
ＴＥＡ（０．９８mmol、０．１４mL）及び４−ｔｅｒｔ−ブチルイソチオシアナート３（０．５４mmol、０．１１g）を、塩酸  ２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジルアミン３ｂ（０．１１g、０．４９mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０mL）中の懸濁液に加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（４：６酢酸エチル／軽油）により精製して、Ｉｂを淡黄色固体（６５mg、収率４２%）として得た。
【００４１】
【表９】
2008502634.tif 000015
【００４２】
実施例３
１−（４−トリフルオロメチル）−３−（２−ヨード−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジル）チオ尿素  Ｉｃの合成
ＴＥＡ（０．９５mmol、０．１３mL）及び４−トリフルオロメチルイソチオシアナート３（０．４７mmol、０．１０３g）を、塩酸  ２−ヨード−４−ヒドロキシ−５−メトキシベンジルアミン（０．１５g、０．４７mmol）の乾燥ＤＭＦ（１０mL）中の懸濁液に加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１：１酢酸エチル／軽油）により精製して、Ｉｃを淡黄色固体（９０mg、収率４０%）として得た。
【００４３】
【表１０】
2008502634.tif 000016
【００４４】
生物学的アッセイ
新生及び成熟Sprague-Dawleyラット（〜２５０g）を使用した（Harlam, Italy）。全実験は国のガイドラインに従い、また地方の倫理委員会により承認された。
【００４５】
培養ラット三叉神経節内のＣａ２＋蛍光測定
新生ラット（２日齢）に致命的な麻酔をかけ、断頭した。三叉神経節を取り出して、コラゲナーゼ／ディスパーゼ（１mg/mL、Ｃａ２＋−Ｍｇ２＋フリーＰＢＳ中に溶解した）に移す前に、素早く、冷リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に配置し、３７℃で３５分間保った４。
【００４６】
酵素処理後、該神経節をＣａ２＋−Ｍｇ２＋フリーＰＢＳで２回濯ぎ、次いで、１０%ウシ胎児血清（ＦＢＳ、熱不活性化）、２mM  L−グルタミン、１００μ/mペニシリン及び１００mg/mLストレプトマイシンを補充した、冷ＤＭＥＭ２mL中に配置した。次いで、該神経節を一連のシリンジ針（２３Ｇから２５Ｇ）に数回通過させることにより、個々の細胞に分離した。最後に、培地及び該神経節細胞を４０mmフィルターで篩いにかけて、破片を除去し、ＤＭＥＭ培地８mLで取り上げて、遠心分離にかけた（２００×ｇで５分間）。最終的な細胞ペレットをＤＭＥＭ培地（１００ng/mLマウス神経成長因子（マウス−ＮＧＦ−７Ｓ）及びサイトシン−β−Ｄ−アラビノ−フラノシドフリー塩基（ＡＲＡ−Ｃ）２．５mMを補充した）中に再懸濁させた。細胞をポリ−Ｌ−リシン（８．３mM）及びラミニン（５mM）を被覆した、２５mmガラス製カバースリップ上に配置して、５%ＣＯ２及び空気で満たした加湿インキュベーター内にて、３７℃で２〜５日間保持した。プレートした神経細胞に、以下の組成（mM）のＣａ２＋緩衝溶液（：ＣａＣｌ２  １．４、ＫＣｌ  ５．４、ＭｇＳＯ４  ０．４、ＮａＣｌ  １３５、Ｄ−グルコース  ５、ＢＳＡ０．１%とのＨＥＰＥＳ  １０）中のＦｕｒａ−２−ＡＭ−エステル（３μM）を、ｐＨ７．４にて、３７℃で、４０分間負荷し、該Ｃａ２＋緩衝溶液で２回洗浄し、Ｎｉｋｏｎ  ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ３００顕微鏡のステージ上のチャンバに移した。染料を、動的画像分析システム（Laboratory Automation 2.0, RCS, Florence, Italy）で記録したＦ３４０／Ｆ３８０比によって、相対的な〔Ｃａ２＋〕ｉ変化を示す、３４０及び３８０nmで励起させてた。カプサイシン（０．１μM）及びイオノマイシン（５μM）をチャンバに加えた。Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステルおよび決定濃度の遊離Ｃａ２＋を含有する緩衝液を用いる較正曲線を使用して、Ｆ３４０／Ｆ３８０比から得られたデータを〔Ｃａ２＋〕ｉ（nM）に変換した５。
【００４７】
Ｉａ、Ｉｂ及びＩｃの効果を、カプサイシン誘導によるカルシウム流動に対して試験した。サプサイシンのチャレンジに先だって、Ｉａ、Ｉｂ及びＩｃを１０分間インキュベートした。参照ＴＲＰＶ１拮抗薬、カプサゼピンの阻害効果も試験した。
【００４８】
ラットの拭い試験
ラットの結膜上に、カプサイシン０．１%（５０μL）を適用することにより、カプサイシンの刺激効果（拭い動作の誘導）を評価し、適用後６０秒の期間中、拭いの動作の回数を記録した。別の実験の一組では、ラットを、異なる投与量のＩａ及びＩｃで腹腔内処置して、カプサイシン誘導による拭いを研究した。
【００４９】
薬物及び溶解度
薬物及び試薬を、以下に示す会社より得た。Sigma, Italyより、カプサイシン、イオノマイシン、ラミニン、ポリ−Ｌ−リシン及びカプサゼピン；Roche Diagnostics, Italyより、マウスＮＧＦ−７Ｓ、及びコラゲナーゼ／ディスパーゼ；Gibco, Italyより、Dulbeccoの修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）、熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ−グルタミン（２００mM）、ペニシリン／ストレプトマイシン（１０，０００IU/mL±１０，０００UG/mL）、Ｃａ２＋−Ｍｇ２＋フリーリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）；Societae、Italiana Chimici, Italyより、Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステル。カプサイシン（１０mM）の保存液を、１００%エタノール中で調製した。Ｉａ（１００mM）、Ｉｂ（１００mM）、Ｉｃ（１００mM）、Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステル（１００mM）及びイオノマイシン（１００mM）の母液を、ＤＭＳＯ中で調製した。次いで、Ｋｒｅｂｓ緩衝溶液で、適切な希釈を行った。
【００５０】
結果
Ｃａ２＋蛍光
大部分（９５%）のラット三叉神経細胞にて、カプサイシン（０．１μM）は、〔Ｃａ２＋〕ｉを増大させ、従って、これらはＴＲＰＶ１発現神経細胞として同定された。阻害効果を生成したＩａ、Ｉｂ及びＩｃの閾値濃度は、それぞれ、０．１nM、０．１nM及び１nMであった。カプサイシンに対する応答の完全なる阻害は、０．１μM  Ｉａ及び３μM  Ｉｃにより得られた。カプサイシン誘起による〔Ｃａ２＋〕ｉ流動(mobilixation)を阻害する、Ｉａ、Ｉｂ及びＩｃのＩＣ５０値は、それぞれ、３．４８（１．４６〜８．３０）nM、３．８６（２．１３〜７．０）nM及び７０（５０〜９８）nMであった。参照ＴＲＰＶ１拮抗薬、カプサゼピンは、２３４４（２０９０〜２６５９）nMのＩＣ５０で、カプサイシン応答を阻害した。５mM  ＫＣｌにより誘起された〔Ｃａ２＋〕ｉ流動は、Ｉａ、Ｉｂ及びＩｃの影響を受けなかった。結果を、平均（Ｍｅａｎ）及び９５%信頼限界として表す。
【００５１】
ラットの拭い試験
カプサイシンのチャレンジの１５分前の腹腔内Ｉａ及びＩｃは、ラットのカプサイシン誘導による拭いを有意に低下させた。ＥＤ５０値は、Ｉａについては、２．７６（２．０５〜３．３５）mg/kgおよびＩｃについては、７．２０（６．３４〜７．８９）mg/kgであった。
【００５２】
結論
インビトロ及びインビボ研究において、Ｉａ、Ｉｂ及びＩｃは、カプサゼピンの親和性よりも、有意に大きな親和性をもって、ＴＲＰＶ１活性化応答を阻害することができた。従って、これらは、疼痛処置用の医薬品の製造に、都合よく使用することができる。
【００５３】
スキーム１
【化６】
2008502634.tif 000017
【００５４】
試薬：ｉ）無水酢酸、ピリジン、室温、ｉｉ）ＩＰｙ２ＢＦ４、ＣＦ３ＳＯ３Ｈ又はＮＣＳ、ＤＭＦ、ｉｉｉ）ＨＣｌ  ３７%、ＥｔＯＨ、還流
ａ  Ｒ＝Ｉ、ｂ  Ｒ＝Ｃｌ
【００５５】
スキーム２  Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃの合成
【化７】
2008502634.tif 000018
【００５６】
試薬：ｉ）４−ｔｅｒｔ−ブチルイソチオシアナート又は４−トリフルオロメチルイソチオシアナート３、ＴＥＡ、ＤＭＦ、室温
Ｉａ：Ｒ＝Ｉ、Ｒ２＝ｔｅｒｔ−ブチル
Ｉｂ：Ｒ＝Ｃｌ、Ｒ２＝ｔｅｒｔ−ブチル
Ｉｃ：Ｒ＝Ｉ、Ｒ２＝トリフルオロメチル
【００５７】
【表１１】
2008502634.tif 000019
【国際調査報告】
2008502634.tif 000021
2008502634.tif 000022
2008502634.tif 000023