(57)【要約】  ここに記載される本発明は、インスリン受容体に対して結合する新規薬学的に活性な分子（新規ペプチド誘導体およびペプチドを含む）、そのような分子を含む組成物；そのような分子および関連するインスリン結合分子の（例えば、インスリン受容体関連疾患、例えば、糖尿病を治療および／または予防することに関連する）送達を具備するインスリン受容体活性を調節する方法；そのようなペプチドをコードする核酸；そのような核酸を含むベクターおよびホスト細胞；およびそのような分子および組成物を製造する方法；を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式６ａ−６ｇの１以上に従うＮ末端ＩＲＢＡＡＳ、および(ａ)式１、（ｂ）式１ａ−１ｇまでの１以上、（ｃ）式２または（ｄ）式２ａに従うＣ末端ＩＲＢＡＡＳを含むＩＲＢＰ。
【請求項２】
式６に従うＮ末端ＩＲＢＡＡＳおよび式１ａ−１ｇまたは式２ａの１以上に従うＣ末端ＩＲＢＡＡＳを含むＩＲＢＰ。
【請求項３】
請求項１または請求項２のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰがＨＩＲに対してヒトインスリンの親和性の少なくとも約１０％である親和性を有するＩＲＢＰ。
【請求項４】
請求項３のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰがＨＩＲに対してヒトインスリンよりも大きい親和性を有するＩＲＢＰ。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか１項に記載のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰがインスリンの少なくとも約５０％で血中グルコース濃度を低下することか可能なＩＲＢＰであるＩＲＢＰ。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰが実質的に２つの異なるダイマーからなり、且つそれぞれサイト１に対するサイト２に方向付けられ、Ｃ−Ｎ末端に結合されたサイト１結合およびサイト２結合ＩＲＢＡＡＳからなるＩＲＢＰ。
【請求項７】
請求項１〜６の何れか１項に記載のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰは約１０〜６０アミノ酸長であるＩＲＢＰ。
【請求項８】
請求項７に記載のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰが約２５〜５０アミノ酸長であるＩＲＢＰ。
【請求項９】
請求項１〜８のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰがＨＩＲ−１１またはＨＩＲ＋１１であるＩＲＢＰ。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れか１項に記載のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰは少なくとも約５０倍強い消化酵素分解に対する抵抗性をＳ５９７に比べて示すＩＲＢＰ。
【請求項１１】
請求項９に記載のＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰが少なくとも約１００倍強い消化酵素分解に対する抵抗性をＳ５９７に比べて示すＩＲＢＰ。
【請求項１２】
治療上有効な量の請求項１〜１１の何れか１項に記載のＩＲＢＰ、および１以上の薬学的に許容される担体を含む薬学的許容されるＩＲＢＰ組成物。
【請求項１３】
を請求項１〜１１の何れか１項に記載のＩＲＢＰの生理学的有効量または請求項１２に記載のＩＲＢＰ組成物の生理学的を患者に対して送達することを具備するＩＲ活性に関連する生理学的活性を患者において調製する方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、当該ＩＲＢＰが、当該患者に対して、ＩＲＢＰをコードする配列を含む核酸を投与されることにより送達され、且つ当該患者において発現される方法。
【請求項１５】
請求項１〜１１の何れか１項に記載のＩＲＢＰの治療上有効な量または請求項１２に記載のＩＲＢＰ組成物をその患者に送達することを具備する患者における糖尿病を治療する方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、当該方法が更に、当該患者において長期活性インスリン類似体を投与することを具備すること、当該ＩＲＢＰの量および長期活性インスリン類似体の量が共に治療学的に有効である方法。
【請求項１７】
請求項１５または請求項１６に記載の方法であって、当該方法が更に、当該患者に対して非インスリンおよび非インスリン類似体抗糖尿病薬を投与することを具備する方法。
【請求項１８】
請求項１５〜１７の何れか１項に記載の方法であって、当該ＩＲＢＰは、当該ＩＲＢＰを請求項１２に記載のＩＲＢＰ組成物を当該患者に対して投与することによって当該患者に対してＩＲＢＰを送達させる方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、当該ＩＲＢＰ組成物は当該患者に対して経肺的な送達により投与される方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法であって、当該ＩＲＢＰ組成物は当該患者に対して経口的な送達により投与される方法。
【請求項２１】
請求項１〜１１の何れか１項に記載のＩＲＢＰまたは請求項１２に記載のＩＲＢＰ組成物または請求項１２に記載のＩＲＢＰ組成物、１型または２型糖尿病の治療において使用される医薬の製造における使用。
【請求項２２】
請求項１〜１１の何れか１項に記載のＩＲＢＰおよびインスリンまたはインスリン類似体を含む組み合わせの１型または２型糖尿病の治療において使用される医薬の製造における使用。
【請求項２３】
請求項１〜１１の何れか１項に従うＩＲＢＰおよび非インスリン抗糖尿病薬を含む組み合わせの１型または２型糖尿病の治療において使用される医薬の製造における使用。
【請求項２４】
請求項２１に従うＩＲＢＰまたは請求項２２若しくは請求項２３の組み合わせの使用であって、当該ＩＲＢＰまたは組み粟が経口または経肺送達のために製剤化された使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ここで記載される本発明は、新規および実用的な薬学的に活性な分子および関連する組成物および方法に関係する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンは強力な代謝性および成長を促進するホルモンであり、細胞において作用し、グルコース、タンパク質および脂質の代謝、並びにＲＮＡおよびＤＮＡ合成を刺激する。インスリンの周知の効果は、身体におけるグルコース濃度の調節である。この効果は主に肝臓、脂肪および筋組織において生じる。肝において、インスリンはグルコースのグリコーゲンへの取り込みを刺激し、グルコースの産生を抑制する。筋および脂肪組織において、インスリンはグルコースの取り込み、貯蔵および代謝を刺激する。グルコース利用における障害は、非常に一般的であり、糖尿病を生じる。
【０００３】
インスリンは、標的細胞におけるシグナル伝達を細胞表面インスリン受容体（ＩＲ）に結合することにより惹起する。ヒトＩＲは、３５０〜４００ｋＤａ（グリコシル化のレベルに依存する）の分子量を有する糖タンパク質である。それは、シングルポリペプチド鎖として合成され、タンパク分解性に切断され、ジスルフィド結合したα−βインスリンモノマーが得られる。２つのα−βモノマーはジスルフィド結合により、αサブユニットの間で連結し、当該受容体の二量体形態（β−α−α−β型立体配置）を形成する。ヒトＩＲα−サブユニットは典型的に７２３アミノ酸から構成され、それは２つの大きな相同のドメイン、Ｌ１（アミノ酸１−１５５）およびＬ２（アミノ酸３１３−４６８）に分割され、システインリッチ領域（アミノ酸１５６−３１２）により分離される（Ward et al., 1995, Prot. Struct. Funct. Genet. 22:141-153）。インスリン結合の多くの決定要因は、当該ヒトＩＲのα−サブユニットに属するようである。当該ヒトＩＲは、リガンドの不在においては二量体形態であると思われる。
【０００４】
ＩＲｓ、例えば、ヒトＩＲなどの結合モデルが示されてきている。このモデルは、各々のα−サブユニットがインスリン結合に関与するような、当該受容体分子の２つの異なる表面に位置する２つのインスリン結合部位を含むＩＲを提唱する。このように、インスリン受容体の活性化は、インスリンによるα−サブユニットのクロスコネクションが必要である考えられている。
【発明の開示】
【０００５】
ここで記載される本発明は、多くの、有効な薬学的活性なＩＲ結合分子を提供する。これらの分子は、これらはＩＲＢＰ誘導体（またはＩＲＢＰＤｓ）を含むＩＲ結合ペプチド（ＩＲＢＰｓ）を含み、中でも、ここで明確に提供される１以上の以下の特許文献において提供される、またはある側面においては、１以上の以下の特許文献において提供される：米国特許出願公開第20030346190および20030195147；米国特許出願US09/538,038；および国際特許出願WO01/72771、WO03/027246およびWO03/070747；１以上のＩＲ結合アミノ酸配列（ＩＲＢＡＡＳｓ）を含むことに基づいて特徴付けることが可能である。これらの書類は、ひとまとめにして、ここに「従来特許文献」と呼ぶ。本発明は、また、例えば、組成物、例えばＩＲＢＰｓをコードする核酸；そのような核酸を含むベクターおよびホスト細胞；およびそのようなＩＲ結合分子を１以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて含む組成物；などに関する。そのような組成物および分子を、生理学的応答、例えば、インビボにおけるＩＲ結合などを誘導する、促進するおよび／または増強するための使用する方法もまた提供される。
【０００６】
「薬学的に活性な」の句は、本発明の方法によって提供される、または本発明の方法において使用されるＩＲ結合分子が、生物学的活性（例えば、ＩＲ結合、ＩＲ活性化、グルコース減少など）を哺乳類ホストにおいて示すことが可能であることを意味する。薬学的に活性なＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＯ組成物は、本発明の有利な側面であるが、非薬学的に活性なＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＰ組成物もまた、本発明により提供され、それらは例えば、例えば、従来の特許文献において記載される方法などによる診断的な適用および／または薬学的に有益な分子の設計などにおいて有益である可能性がある。
【０００７】
便宜上、用語、ペプチド、タンパク質およびポリペプチドは、別な方法で定められない、または文脈において明らかに矛盾しない限り、ここで互いに支持を提供するように解釈されるべきである（従って、ある意味では、ここでは互いに交換可能である）。例えば、ここにおける「タンパク質」対する個々の言及は、仮にそのような理解が合理的であり、矛盾しないのであれば、「ペプチド」（３から約５０アミノ酸残基の一本鎖タンパク質）または「ポリペプチド」（約５０アミノ酸残基長よりも大きい一本鎖タンパク質）に関連する本発明の本質的に同じ側面を文字通り支持する均等物を提供するとして解釈されるべきである。これは、これらのアミノ酸ペプチド結合ポリマー分子がある側面において（例えば、経口デリバリーのための製剤の点から）お互いから顕著に異なってはいない。従って、ここで個々に使用される「タンパク質」および「ペプチド」などの用語は、一般的には、何れの適切なサイズおよび組成（例えば、それにより含まれる関連する鎖の数、およびそこにおいて含まれる個々のアミノ酸残基の数などに関して）、並びに起源（例えば、組換え発現により得られた、天然の供給源からの単離、固相合成による産生など）の何れの適切なアミノ酸ベースのオリゴマー／ポリマー分子を言うと理化されるべきである。典型的には本発明におけるペプチドは、単一第一ペプチド結合でリンクしたアミン酸ポリマー含有分子（例えば、単一アミノ酸鎖またはその誘導体など）をいう。
【０００８】
また、別な方法で定められない、または文脈において明らかに矛盾していない限り、本発明に関して「タンパク質」は、非必須な、非天然に生じる（または、さもなければ特殊な(unusual)）、および／または非Ｌアミノ酸残基を含んでよい。誘導体に含まれ得る特殊なアミノ酸残基の非限定的な例は、例えば、2−アミノアジピン酸；3−アミノアジピン酸；β−アラニン；β−アミノプロピオン酸；2−アミノ酪酸；4−アミノ酪酸；6−アミノカプロン酸；2−アミノヘプタン酸；2−アミノイソ酪酸；3−アミノイソ酪酸；2−アミノピメリン酸；2,4−ジアミノ酪酸；デスモシン；2,2'−ジアミノピメリン酸；2,3−ジアミノプロピオン酸；N−エチルグリシン；N−エチルアスパラギン；ヒドロキシリジン；アロ−イソロイシン；N−メチルグリシン；N−メチルイソロイシン；6−N−メチルリジン；N−メチルバリン；ノルバリン；ノルロイシンおよびオルニチンなどを含む。本発明の詳細な側面に関連する更に都合のよい特殊なアミノ酸は、ここでは更に他の場所で記述する。ここで使用される用語「ペプチド」および「タンパク質」は、他の方法で定められない、または文脈において明らかに矛盾していない限り、誘導体化されたタンパク質を含み、これはここでは他の場所で更に記述する。換言すれば、用語「タンパク質」の最も広い意味において誘導体の「包含」は、そのような分子間の均等物の何れかの種類を意味するというよりは寧ろ、本発明の種々の特徴の記述において便宜の目的においてなされるものである。
【０００９】
ＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＡＡＳｓは、ＩＲに結合することにより特徴付けられる。他の方法で定められない限り、本発明の側面は、ヒトＩＲに関して記述する。しかしながら、本発明により提供されるＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＡＡＳｓは更に、または或いは、他のＩＲｓ、例えば、マウスＩＲ、ラットＩＲ、霊長類ＩＲ、ブタＩＲ、イヌＩＲなどに対して結合してもよい。
【００１０】
Ａ．ＩＲＢＰＳ
既に言及した通り、一つの側面において、本発明は、新規であり、有用なＩＲＢＰｓを提供する。もう一つの側面において、本発明は、ここで開示される、および／または先の特許文献に記載のＩＲＢＰｓの新規であり、有用な使用方法を提供する。ある場合において、本発明は、インスリン受容体結合アミノ酸配列および／または先の特許文献に開示されるペプチドに由来するＩＲＢＰｓを提供する。
【００１１】
ＩＲＢＰｓは、幾つかの適切な方法により製造される。例えば、ＩＲＢＰｓ、特に、非派生的なＩＲＢＰｓは、何れかの適切な発現系において融合タンパク質として産生される。組換え融合タンパク質の産生に関する方法および原理は、当該分野において甚だ周知であり、ここに詳しく記載する必要はない。なお、標準的なペプチド合成をＩＲＢＰｓを生じるために使用することも可能である。そのような組換え産生または合成されたペプチドは更に誘導、コンジュゲーション、多量体化などに供され、更に、本発明の範囲内の複雑な分子を形成することも可能である。多価のＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＰ融合タンパク質はまた、従来のアミノ酸鎖および／または他の部分／置換基分子の化学的な結合により生じてもよい。ＩＲＢＰｓは同様に、何れの適切な技術により精製されてもよい。例えば、特定の精製「ｔａｇｓ」（精製容易化配列または部分）を含むＩＲＢＰ融合タンパク質を公知の方法により生じることが可能であり、また、そのような分子を得るために使用されてもよい。直接的な精製のために、ディファレンシャル電気泳動、クロマトグラフィ、遠心分離などの方法が使用されてもよく、同様に、非融合タンパク質ＩＲＢＰの特徴に向けられる親和性（例えば、抗体ベース）の方法も可能である。多くのそのような技術は、先の特許文献においてＩＲＢＰの製造および精製に関して詳細に記載される。
【００１２】
このＡの項の残りにおいて、本発明のＩＲＢＰｓの一般的な特徴を最初に記載し、続いて、本発明により提供されるＩＲＢＰｓの代表的な種類を記載し、更に、そのようなＩＲＢＰｓの具体的な例を説明する。
【００１３】
１．一般的特徴
ＩＲＢＰｓは、それらのＩＲの一部位または両サイトに対して特異的に結合する能力に基づいて特徴付けられる。一般的に、ＩＲＢＡＡＳは、ＩＲのサイト１またはサイト２の何れかに結合する。しかしながら、多価のＩＲＢＰｓ、更にとりわけ、例えば、多特異性(multispecific)ＩＲＢＰｓもまた本発明により提供される。そのようなＩＲＢＰｓは、ここにおいては他の場所において更に記述するが、一般的には少なくとも１のサイト１特異的ＩＲＢＡＡＳおよび少なくとも１のサイト２特異的ＩＲＢＡＡＳを含む。
【００１４】
本発明のＩＲＢＰｓは典型的に、インスリンシグナル伝達経路の活性化が可能であり、それは例えば、インビトロの脂質生合成の増加により、およびブタおよび麻酔下のラットに対する静脈内投与(i.v.またはＩＶ)後のグルコース濃度の低下により示される。ＩＲＢＰｓは、例えば、インスリン受容体を生じた脂肪細胞におけるインビトロの脂質生合成をヒトインスリンの効果よりも約１０％（以上）（例えば、ヒトインスリンの効果よりも少なくとも約１５％）、ヒトインスリンの効果よりも約２５％（以上）、ヒトインスリンの効果よりも約３３％、ヒトインスリンの効果よりも約５０％（以上）、ヒトインスリンの効果よりも約６０％(以上)増加する。ＩＲＢＰｓは、用量依存的に、全身でのグルコース処理を、通常のインスリンと同じ範囲の作用強度で増加する。
【００１５】
典型的に、本発明のＩＲＢＰは、約７０アミノ酸以下の長さ、例えば、約６０アミノ酸長、例えば、約５０アミノ酸以下の長さ（例えば、約３０−５０アミノ酸長）のペプチドである。
【００１６】
驚くべきことに、本発明のＩＲＢＰｓに関連するＩＲＢＡＡＳｓは、その各々のアミノ酸配列の何れかの特定の領域における幾つかのアミノ酸残基よりも多くを超えて、インスリンのアミノ酸配列と著しく類似性を示さない。本発明のＩＲＢＰｓに含まれるＩＲＢＡＡＳの組成物におけるインスリンに関する違いは、種々の生物学的特徴に関連し、それは更に、当該ＩＲＢＰｓをインスリンから識別するために役立つ。
【００１７】
一つの例示的な側面において、本発明は、消化力のある哺乳類（例えば、ヒト）の酵素、例えば、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼおよび／またはカルボキシペプチダーゼＡなどに対して改良された安定性を有するＩＲＢＰｓを提供する。特定の側面において、当該発明は、ＩＲＢＰｓを提供するが、当該ＩＲＢＰは、少なくとも約５０倍高い安定性、少なくとも約１００倍高い安定性、少なくとも約１５０倍高い安定性、更に少なくとも約２００倍高い安定性を、１以上のそのようなタンパク分解性の消化酵素に対して、以前に記載されたＩＲＢＰ  Ｓ５９７によってこれらの酵素の１以上に対して示される安定性と比較して（Ｓ５９７の記述のための先の特許文献を参照されたい）示す。当該句「５０倍高い安定性」は、当該関連する酵素が、コントロールペプチド（ここでは、Ｓ５９７）を分解するために必要とする時間と比較したときに、標的サイトで適切なペプチドが分解するために５０倍長い時間がかかることを意味する。一つの側面において、当該安定性は、少なくとも部分的に、分解抵抗性を促進する1以上の特殊なアミノ酸または部分の存在に帰する。この点で、本発明は、１以上の分解抵抗性促進する特殊なアミノ酸残基および／または有機的部分／基を有するＩＲＢＰ誘導体であって、当該残基および／または基の存在が、１以上のそのような酵素による分解に関して、当該残基および／または基を欠いた実質的に同じＩＲＢＰに関して安定性を増加するＩＲＢＰ誘導体を提供する。
【００１８】
もう一つの例示的側面において、本発明のＩＲＢＰｓは、インスリンによるＩＲ結合で観察されるよりも有意に低いＩＲリン酸化レベルを示すことにより特徴付けることが可能である。ＩＲＢＰｓはまた、インスリンとは異なるＩＲリン酸化プロフィールと関連し得る。
【００１９】
ｂ．ＩＲ親和性
本発明のＩＲＢＰｓは、一般的に、ＩＲに対して高い親和性を示す(ｐＭ範囲におけるＫｄ)。更に詳しくは、ＩＲＢＰｓは典型的に、約１０−７〜約１０−１５Ｍ、例えば、１０−８〜約１０−１２Ｍ、更に詳しくは典型的に約１０−１０〜約１０−１２ＭのＩＲへの親和性（Ｋｄ）を有する、または有することが期待される。
【００２０】
詳細な側面において、本発明は、ヒトインスリン受容体（ＨＩＲ）への親和性を有するＩＲＢＰｓを提供する。前記親和性は、ヒトインスリンにより示される親和性の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％以上、例えば、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、または約９５％以上である。もう一つの側面において、本発明は、ＨＩＲに対してインスリンにより示される親和性と同等のＨＩＲへの親和性を有するＩＲＢＰｓを提供する。更なるもう一つの側面において、本発明は、ヒトインスリンよりも高いＨＩＲへの親和性を示すＩＲＢＰｓを提供する。例えば、本発明は、約１１０％以上、約１５０％以上、約１７５％以上、更に約２００％以上のＨＩＲへの親和性をヒトインスリンに比べて有するＩＲＢＰｓを提供する。
【００２１】
ｃ．ＩＲ選択性／特異性
インスリン様成長因子−１(IGF-1)およびインスリンは、拮抗的にＩＧＦ−１ＲおよびＩＲと交差反応する(L.Schaffer,1994,Eur.J.Biochem.221:1127-1132を参照されたい)。更に、全体の４５％のアミノ酸が同一であるにも拘らず、インスリンおよびＩＧＦ−１は、それぞれの他の受容体に対しては弱く結合するのみである。非同種受容体のための各ペプチドの親和性は約３オーダー分、同種受容体のそれよりも低い（Mynarcik,et al.,1997,J.Biol.Chem.272:18650-18655を参照されたい）。結合親和性における差異は、アミノ酸における相違とリガンドの独特な三次構造に寄与する独特のドメインにより、部分的には説明され得る（Blakesley et al.,1996,Cytokine Growth Factor Rev.7(2):153-9）。
【００２２】
ＩＲＢＰｓは典型的にＩＧＦ−１ＲよりもＩＲに対して有意により特異的である。典型的には、ＩＲＢＰｓにより示されるＩＲ／ＩＧＦ−１Ｒ結合親和性の比は約１００以上である。詳細な側面において、本発明は、親和性の比が少なくとも約１，０００；少なくとも約５，０００；少なくとも約１０，０００またはそれ以上により特徴付けられるＩＧＦ−１に対するＩＲ選択性を示すＩＲＢＰｓを提供する。更に詳しい側面において、本発明は、親和性の比が約１０，０００〜約１００，０００で特徴付けられるＩＧＦ−１Ｒに対するＩＲ選択性を示すＩＲＢＰｓを提供する。
【００２３】
ＩＲＢＰｓはその上、または代わりにＩＧＦ−１Ｒを活性化することができないことに基づいて特徴付けられ得る。従って、一つの側面において、本発明は、ＩＲ活性化に有効であるが、ＩＧＦ−１Ｒに関する活性は殆どないか、または有意な活性を有しないＩＲＢＰｓを提供する。
【００２４】
また更なる側面において、本発明はその上、または代わりに他の種に比較して特定の種のＩＲに対して選択的なＩＲＢＳを提供する。従って、例えば、一側面において、本発明は、他の哺乳類ＩＲｓ、例えば、ラットＩＲおよびブタＩＲ（例えば、少なくとも約１．１、１．３、１．５、１．６、１．７、１．８．１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７またはそれ以上の親和性の比により優先に特徴付けられる）と比較して、ヒトＩＲについて有意な優先性を示すＩＲＢＰｓを提供する。
【００２５】
更なる側面において、本発明は、別のアイソフォームを超えて、特定の哺乳類ＩＲのアイソフォームに対して選択的なＩＲＢＰｓを提供する。ＩＲｓのアイソフォームは、幾つかの哺乳類種において存在することが高知である。例えば、ＨＩＲ−１１およびＨＩＲ＋１１は、それぞれエクソン１１のない、およびあるヒトインスリン受容体の二つのアイソフォームであるとみなされている（そのようなアイソフォームは明らか二者択一的な即ち、プライシングメカニズムにより生じる）。これらのアイソフォームはまた、ＨＩＲ  ＡおよびＨＩＲ  Ｂとして知られている。本発明の例示的な側面において、ＨＩＲ＋１１を超えてＨＩＲ−１１に選択性を示すＩＲＢＰｓが提供される。本発明は、同様に、ＨＩＲ−１１を超えてＨＩＲ＋１１に選択性を示すを示すＩＲＢＰｓを提供する。異なる側面において、本発明は、ＨＩＲ−１１を超えてＨＩＲ＋１１に対して選択性を示すＩＲＢＰｓを示す。本発明は、同様に、非ヒト哺乳類種において異なるアイソフォームのためのそのような選択性を示すＩＲＢＰｓを提供する。ＨＩＲ＋１１およびＨＩＲ−１１、並びに他種のＩＲアイソフォームは、異なる組織において異なるレベルで発現される。従って、本発明は、特定のホスト、例えば、ヒト患者などに投与または別な方法で送達された場合に、異なる組織プロフィールと選択的に関連するＩＲＢＰｓを提供する。
【００２６】
選択性、特異性、親和性および結合力は当該技術分野において明確に理解される概念であり（ここにおいて親和性の使用は、多価ＩＲＢＰｓに関する結合力を含むと考えられてもよい）、且つ幾つかの技術は周知であり、特定のＩＲＢＰｓに関してこれらの大きさを評価するために容易に利用できる（各々の他のおよび／または異なる潜在的な結合相手、例えば、異種のＩＲｓと比較して、および／または同種または異種のＩＧＦ−１Ｒと比較した場合の種のＩＲと比較して）。そのような方法の例は、例えば、先の特許文献などにおいて記載される。
【００２７】
ｄ．ＩＲ活性の調節
既に示した通り、ＩＲＢＰｓは典型的にＩＲ調節活性を有する。典型的に、ＩＲＢＰｓはＩＲの部分的なアゴニストまたはアゴニスト活性を示す。
【００２８】
また、上に述べた通り、ＩＲＢＰｓは加えて、または代わりに他の特徴付けをされてもよく、血中グルコース濃度を低下するそれらの能力を基礎にして特徴付けられてもよく、例えば、脂肪細胞脂質生合成アッセイの結果により示されてもよい。ＩＲＢＰｓは、この状況および他の状況において、ヒトインスリン受容体を有する細胞におけるヒトインスリンの少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％以上（例えば、約７０−１００％）の血中グルコース低下能力を示す。
【００２９】
ｅ．ＩＲＢＰｓの安定性
特に有利な側面異おいて、本発明は、インスリンまたは先の特許文献に記載されるＩＲＢＰｓよりも消化性酵素分解に対して高い安定性を示すＩＲＢＰｓを提供する。
【００３０】
従って、例えば、一つの側面において、本発明は、少なくとも１の消化性酵素（例えば、ペプシン、キモトリプシン、その両方、または他の同様な酵素）に対して、インスリンよりもより抵抗性であり、少なくとも１のＩＲＢＡＡＳを有するＩＲＢＰを提供する。ここで、ＩＲＢＡＡＳは、少なくとも１の特殊なおよび消化性酵素分解抵抗性アミノ酸残基または他の適切なおよび酵素分解抵抗性の化学的部分を有する。一つの側面において、当該特殊なアミノ酸残基／部分は、以下から選択される：サルコシン(N-メチルグリシン)；アミノイソ酪酸；4−ビフェニルアラニン；2−アミノインダン−2−カルボン酸；N−Fmoc−8−アミノ−3,6−ジオキサオクタン酸；N−Fmoc−19−アミノ−5−オキソ−3,10,13,16−テトラオキサ−6−アザ−ノナデカン酸；C14−モノカルボン酸：C20−ジカルボン酸；ポリエチレングリコール(PEG)(例えば、分子量(MW)が約5000のPEG)；および1−(4,4−ジメチル−2,6−ジオキソシクロヘキシリデン)エチル。更なる側面において、本発明は、
少なくとも２のＩＲＢＡＡＳｓを含む多価ＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰがＩＲＢＡＡＳｓの間に位置する少なくとも１の特殊な酵素分解抵抗性アミノ酸残基または化学的部分を有する多価ＩＲＢＰを提供する。もう一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰの末端に位置するそのような分解抵抗性残基または部分を有するＩＲＢＰｓを提供する。更なる面において、本発明は、少なくとも２のＩＲＢＡＡＳｓを有する多価ＩＲＢＰであって、当該ＩＲＢＰが少なくとも２のそのような分解抵抗性残基または部分を有する多価ＩＲＢＰを提供する。当該２以上の残基／部分は単一ＩＲＢＡＡＳまたは２以上のＩＲＢＡＡＳにおいて位置する。(ａ)当該ＩＲＢＳの末端、(ｂ)ＩＲＢＡＡＳｓの間、および／または(ｃ)１以上のＩＲＢＡＡＳｓにおいて、幾つかの組み合わせの分解抵抗性部分および／または残基を有するＩＲＢＳが、本発明によって提供される。そのような分解抵抗性残基および部分を有するＩＲＢＰｓの更に詳しい例は、本明細書の他の場所で記載する。
【００３１】
２．ＩＲＢＡＡＳの式
本発明をよりよく説明するために、特定の種類のＩＲＢＡＡＳｓの記述およびその特定の例をここに提供する。ＩＲＢＰｓは、何れか１つのまたは（更に以下に記載する通りの）そのような式の組み合わせ、または種々の配列との組み合わせにおけるそのような式の１以上、および先の特許文献において提供された式を含む。
【００３２】
ａ．式１ａ−１ｇ
一つの側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｘａａ５に従う配列を含む、または当該配列から本質的になるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、（ａ）Ｘａａ１、Ｘａａ５または両方は(ｉ)消化抵抗性特殊アミノ酸残基または消化抵抗性化学的部分、または(ｉｉ)Ｐｈｅ残基、および（ｂ）Ｘａａ３は、消化抵抗性特殊アミノ酸残基、非アミノ酸残基消化抵抗性化学的部分、または何れかの適切な他のアミノ酸残基の何れかを表す（式１ａ）。更なる詳細な側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９に従う配列を含む、または当該配列から本質的になるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ６は、何れかの適切なアミノ酸残基（典型的には、ＡｓｐまたはＡｓｎではない残基）；Ｘａａ７は何れかの適切なアミノ酸残基；Ｘａａ８はＧｌｎ、Ｇｌｕ、ＡｌａおよびＬｙｓから選択される；並びにＸａａ９は疎水性のアミノ酸を現す（式１ｂ）。更なるより詳細な側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｘａａ５  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ（配列番号１）に従う配列を含む、または当該配列から実質的になるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１、Ｘａａ３およびＸａａ５は式１ａにおいて限定された通りである（式１ｃ）。更なるより詳細な側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｘａａ５  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ（配列番号２）に従う配列を含む、又は当該配列から実質的になるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１、Ｘａａ３およびＸａａ５は式１ａで限定した通りである（式１ｄ）。
【００３３】
もう一つの詳細な新しい側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｔｒｐ  Ｘａａ５  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｘａａ９  Ｇｌｙ（配列番号３）を含む、または実質的に含むＩＲＢＡＡＳを提供する；ここでＸａａ１はＰｈｅまたは分解抵抗残基／部分であり；Ｘａａ５はＰｈｅまたは分解抵抗部分／残基であり；Ｘａａ９は何れかの適切な残基（および典型的にはＬｅｕ）である（式１ｅ）。
【００３４】
更なる側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｘａａ５  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ（配列番号４）を含む、または当該配列から実質的になるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１およびＸａａ５は式ｅで限定した通りであり、Ｘａａ３はＧＬｙまたはＨｉｓ残基である（式１ｆ）。
【００３５】
更なるもう一つの例示的な側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｘａａ５  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０に従う配列を含む、又は当該配列から実質的になるＩＲＢＢＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１はＰｈｅまたは分解抵抗性残基／部分；Ｘａａ５はＰｈｅまたは分解抵抗性部分／残基；Ｘａａ３は何れかの適切な残基である；Ｘａａ６−Ｘａａ８は何れかの適切な残基である；Ｘａａ９は何れかの適切な残基である、または抜けている；およびＸａａ１０は疎水性残基である（式１ｇ）。詳細な側面において、本発明は、式１ｇに従う配列から実質的になるＩＲＢＡＡＳｓを提供する；ここで、Ｘａａ６−８および更に、またはその代わりとしてＸａａ９（が存在し）の１以上（または全て）が親水性残基（例えば、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、ＬｙｓまたはＡｒｇ残基）である。一つのそのような側面において、多数または全てのそのような残基が親水性である。もう一つの詳細な変形において、本発明は、式１ｇ配列を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳｓを提供する；ここで、当該配列は更にまた、またはその代わりとして分解抵抗性残基または部分を表すＸａａ３により特徴付けられる。そのようなＩＲＢＢＡＳの例は、より詳細な式Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｘａａ３  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕに従うＩＲＢＡＡＳである；ここで、Ｘａａ３は酵素分解抵抗性アミノ酸残基または部分である。前述の当該ＩＲＢＡＡＳの何れかの更なるより詳細な変形において、Ｘａａ３は、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＨｉｓから選択される残基を表す。詳細な側面において、Ｘａａ１０は、ＬｅｕまたはＧｌｙ残基の何れかを表す。一つの側面において、前述の何れかの配列が提供され、ここで、Ｘａａ９およびＸａａ１０は、どちらも親水性残基、例えば、それぞれＬｅｕおよびＧｌｙなどを表す。
【００３６】
ｂ．式２ａ
更なる側面において、本発明は、配列Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ（配列番号５）を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する（式２ａ）。
【００３７】
ｃ．式６ａ−６ｇ
更なる側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｘａａ４  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｘａａ１２  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８（配列番号６）を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１、Ｘａａ４、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１０、Ｘａａ１２、Ｘａａ１５、Ｘａａ１６およびＸａａ１７は何れかの適切なアミノ酸残基であり、Ｘａａ１１、Ｘａａ１８またはその両方が、Ｃｙｓ以外の何れかの適切な残基である（式６ａ）。更なる詳細な側面において、本発明は、式６ａに従う配列を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＢＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１１はＡｌａまたは Ｇｌｕであり、Ｘａａ１８はＡｌａまたはＧｌｕであり、Ｘａａ１１およびＸａａ１８は共に独立してＡｌａまたはＧｌｕ残基である（式６ｂ）。詳細な側面において、Ｘａａ１１および／またはＸａａ１８は、Ａｌａ残基である。更なる詳細な側面において、本発明は、式Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｘａａ１１  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１８（配列番号７）に従う配列を実質的に含むまたは当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１１および／またはＸａａ１８何れかの適切なＣｙｓ以外の残基を表す（式６ｃ）。更なる詳細な側面において、本発明は、式６ｃに従う配列を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１１および／またはＸａａ１８はＡｌａ残基を表す（式６ｄ）。
【００３８】
更なる側面において、本発明は、当該配列のＣ末端は、式Ｘａａ１９  Ｘａａ２０  Ｘａａ２１に従うＣ末端配列に対して結合する式６ａ−６ｄの何れか１以上に従う配列を含む、または実質的に当該配列からなる；ここで、Ｘａａ２１は疎水性または脂肪族残基ではなく、Ｘａａ１９およびＸａａ２０は何れかの適切な残基である。更なる詳細な側面において、Ｘａａ２１はＧｌｕ残基である。更なるもう一つの詳細な側面において、当該Ｃ末端配列は更にまた、またはその代わりにＰｒｏ残基を表すＸａａ１９およびＳｅｒ残基を表すＸａａ２０またはその両方により特徴付けられる。
【００３９】
ＩＲＢＰｓを含む式６ｄＩＲＥＢＡＡＳの例は、ペプチドＳ５７４（ＳＬＥＥＥＷＡＱＩＥＡＥＶＷＧＲＧＡＰＳＥＳＦＹＤＷＦＥＲＱＬＧ−配列番号８）およびＳ７２７（ＡｃＳＬＥＥＥＷＡＱＩＥＡＥＶＷＧＲＧＡＰＳＥＳＦＹＤＷＦＥＲＱＬＧ−ＮＨ２−配列番号９）を含む。
【００４０】
更なる側面において、本発明は、典型的に前段において記述された通りのＣ末端配列の包含を伴う配列６ａ−６ｄの一以上に従う配列を含むまたは実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、当該配列のＮ末端残基（Ｘａａ１）はアシル化、より典型的にはアセチル化されている。典型的に、Ｘａａ１はアセチル化されたＳｅｒ残基である。ペプチドＳ７２７は、例えば、ＩＲＢＡＡＳなどを含むＩＲＢＰの例である。
【００４１】
式１ａ−１ｇおよび同様のＩＲＢＡＡＳｓは、ＩＲサイト１に特異的であるが、式６ａ−６ｄ、同様のＩＲＢＡＡＳｓおよび式２ａ（および同様のＩＲＢＡＡＳｓ）はＩＲサイト２に結合する。
【００４２】
更にもう一つの側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ、Ｘａａ４  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｘａａ１２  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８（配列番号１０）、ここにおいて（ａ）Ｘａａ１１および／またはＸａａ１８はＣｙｓ残基または他の適切なアミノ酸残基であり、（ｂ）Ｘａａ４、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ１５およびＸａａ１７の一以上が分解抵抗性特殊アミノ酸残基および／または部分（式６ｅ）を表す。一つの側面において、そのようなＩＲＢＡＡＳは少なくとも２の分解抵抗性特殊残基または部分を含む。
【００４３】
更なる例示的な側面において、本発明は、式Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１８（配列番号１１）に従う配列を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここでＸａａ１０はＧｌｕまたはＧｌｎであり、Ｘａａ１１およびＸａａ１８は何れかの適切な残基である（式６ｆ）。一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＡＡＳを含むＩＲＢＰＳを提供する；ここで、Ｘａａ１１および／またはＸａａ１８はＣｙｓ残基である。代わりの側面において、Ｘａａ１１およびＸａａ１８の両方は、Ｃｙｓ残基以外の何れかの適切な残基として特徴付けられる。そのような側面の詳細な面において、Ｘａａ１１および／またはＸａａ１８は、例えば、独立してＡｌａまたはＧｌｕ残基である。
【００４４】
更なるもう一つの例示的側面において、本発明は、式Ｘａａ１  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｘａａ４  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｘａａ１２  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８（配列番号１２）に従う配列を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＧＡＡＳを提供する；ここで、Ｘａａ１、Ｘａａ４、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１０、Ｘａａ１２、Ｘａａ１５、Ｘａａ１６およびＸａａ１７は何れかの適切なアミノ酸残基であり；Ｘａａ１８はＣｙｓまたは適切なＣｙｓ以外の適切な残基（例えば、ＡｌａまたはＧｌｕ）であり；およびＸａａ１１はＣｙｓまたはＣｙｓ以外の適切な残基（例えば、ＡｌａまたはＧｌｕ）である（式６ｇ）。一つの変型において、Ｘａａ１８はＣｙｓである。一つの変型において、Ｘａａ１０はその上更に、または代わりにＧｌｕまたはＧｌｎである。
【００４５】
一つの例示的側面において、本発明は、一以上の式６ａ−６ｇに従う配列を含む、または実質的に当該配列からなるＩＲＢＡＡＳを提供する；ここで、当該配列は、内部Ｃｙｓ−Ｃｙｓ結合を形成しないこと、Ｃｙｓ残基を含まないこと、および／または典型的な生理学的な条件下で環式のペプチド構造を形成しないことにより特徴付けられる。
【００４６】
４．ＩＲＢＡＡＳｓの変型
また、本発明の範囲内に含まれるものは、許容されるアミノ酸残基の置換、追加または欠失を含むアミノ酸残基、および同じまたは変更された親和力でＩＲに対して結合するアミノ酸配列である。
【００４７】
一つのそのような点において、本発明は、ＩＲＢＰ「融合タンパク質」およびそれに対して関連する変型を提供する。例えば、配列タグ（例えば、ＦＬＡＧ（登録商標）タグなど）またはアミノ酸、例えば、一以上のリジンなど、を本発明の当該ペプチド配列に対して（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）添加されてもよい。配列タグはペプチド精製または局在化のために使用される。リジンを添加して、溶解度を増すことが可能であり、またはビオチン標識させてもよい。或いは、配列タグ（例えば、ＦＬＡＧ(登録商標)タグなど）を含む、または特定のアミノ酸に対する強力な選択性に関連しないアミノ酸残基を含む、ＯＲＢＡＡＳｓのカルボキシおよびアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基が任意に欠失され、切断された配列を提供してもよいＩＲＢＰ融合タンパク質および関連する原理の更なる特徴は、本明細書の他の場所および先の特許文献において記述される。
【００４８】
変型は、一以上の残基が修飾された(即ち、リン酸化、硫酸化、アシル化、ペグ化(PEGylation)などにより修飾された)アミノ酸配列、および親配列に関連する一以上の修飾された残基を含む変異体を含んでもよい。アミノ酸配列はまた、直接的または非直接的の何れかで検出可能なシグナル、これらに限定されるものではないが、放射性同位元素、蛍光、および酵素標識を含む検出可能なシグナルを提供するように標識可能に修飾されてもよい。傾向標識は、例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ５、アレキシア(Alexa)、ＢＯＤＩＰＹ、フルオレセイン(例えば、フルオＸ、ＤＴＡＦおよびＦＩＴＣなど)、ローダミン(例えば、ＴＲＩＴＣ)、オーラミン、テキサスレッド、ＡＭＣＡブルーおよびルシファイエローなどを含む。好ましい同位元素は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉおよび１８６Ｒｅを含む。好ましい酵素標識は、ペルオキシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−Ｄ−グルコシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼとペルオキシダーゼ、およびアルカリホスファターゼを含む（例えば、米国特許第3,654,090；3、850,752および4,016,043を参照されたい）。酵素は、ブリッジング分子、例えば、カルボジイミド、ジイソシナネート、グルタルアルデヒドなどと反応することにより活用される。酵素標識は、視覚的に検出してもよく、または熱量測定、分光光度測定、蛍光分光光度測定、電流測定、またはガス定量技術により測定されてもよい。他の標識系、例えば、アビジン／ビオチン、チラミドシグナル増幅(Tyramide Signal Amplification、TSA(登録商標))は、当該技術分野において公知であり、商業的に入手できる(例えば、ABCキット、Bector Laboratories,Inc.,Burlingame、CA;NEN(登録商標)Life Science Products,Inc.,Boston,MAを参照されたい)。
【００４９】
従って、一つの側面において、本発明は、一以上の変型ＩＲＢＡＡＳｓを含むＩＲＢＰｓを提供するものであり、当該ＩＲＢＡＡＳｓは、本明細書または先の特許文献(例えば、先の特許文献において明確に開示される一以上の親ＩＲＢＡＡＳｓとは、（例えば、Ｎ末端アセチル化(または他のアシル化)および／またはＣ末端アミド化により、および／または分解抵抗性特殊アミノ酸残基および／または非ＡＡ部分の包含などによるもう一つの原則により修飾されている配列に関して)、一以上のアミノ酸残基の関連する挿入、欠失、付加または置換により異なる。もう一つの点において、本発明は、一以上のＩＲＢＡＡＳｓを含む生物学的に活性なＩＲＢＰ変型を提供するものであり、当該ＩＲＢＡＡＳｓは、本明細書または先の特許文書に開示されるＩＲＢＡＡＳｓとは異なるが、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、約９５％、前記親ＩＲＢＡＡＳｓに対してより同一性を示す。本発明は、本明細書および先の特許文献に開示される全ての前記配列のための前記変型(本明細書に記載される種々の新規側面の一以上により修飾される通り)を含む。
【００５０】
典型的には、変型は、保守的な置換を通して大部分「親」配列とは異なる；例えば、変異型配列における置換の、少なくとも約３５％、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上（例えば、約６５−９９％）が保存性のアミノ酸残基置き換えである。本発明の状況においては、保守性のちか置換えは、以下の表に表されるアミノ酸の種類の範囲内の置換えにより限定される。
【表１】
2008510692.tif 000002
【００５１】
官能基における実質的な変化は、上記で定義された群において示されたものよりも保存的ではない置換を選択することにより形成される。例えば、非保守的な置換がなされることも可能であり、これは、変更の領域おける当該ペプチドの構造、例えば、アルファ−へリックスまたはベータ−シート構造；標的部位の分子の電荷または疎水性；または側鎖の大きさなど、に顕著に影響する。一般的に当該ペプチドの特性において最も大きな変化を生じると予期できる置換は、１）疎水性残基、例えば、セリルまたはスレオニルは、疎水性残基、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルまたはアラニルなどに(または、によって)置換される；２）システインまたはプロリンは何れか他の残基に(または、によって)置換される；３）陽性側鎖を有する残基、例えば、リジル、アルギニル、ヒスチジルなどは、、陰性残基、例えば、リジル、アルギニルまたはヒスチジルなどに(または、によって)置換される；または４）バルキーな側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンなどは、側鎖を持たない残基、例えば、グリシンなどに（または、によって）置換される。従って、これらおよび他の非保守的な置換は、機能／構造における著しい変化が望まれる場所、および構造／機能の維持が望まれる場所を避けた前記変化がペプチド変異体に導入される。
【００５２】
当業者は、ペプチド変異体の設計および選択において有用な更なる原理を知っている。例えば、ペプチドの表面位置における残基は、典型的に、親水性アミノ酸を強く好む。アミノ酸の立体的な特徴は、タンパク質が形をとる、または有利な局在性の構造に大きく影響する。プロリンは、例えば、１つの回転に固定され、水素結合の喪失を伴い、多くの場合、更にタンパク質の表面ループに出現する残基を結果として生ずるペプチド主鎖の構造を導ける少ないねじれ自由を示す。Ｐｒｏに対して、Ｇｌｙは、主ペプチド鎖について完全なねじり自由を有し、そのためそれは多くの場合しっかり固定した回転と当該タンパク質の内部に埋もれた領域（例えば、疎水性ポケットなど）に関連する。そのような残基の特徴は、多くの場合、二次構造におけるそれらの関与を制限する。しかしながら、二次構造の形成に典型的に関係する残基は公知である。例えば、Ａｌａ、ＬｅｕおよびＧｌｕなどの残基（多くの容積および／または極性のないアミノ酸）は、典型的に、アルファ−へリックス形成に関与し、他方では、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、ＡｓｐおよびＡｓｎなどの残基は、アルファヘリックス形成を崩壊する。ベータ−シート構造形成／含有の性質を有する残基は、ＶａｌおよびＩｌｅを含み、回転構造に関連する残基はＰｒｏ、ＡｓｐおよびＧｌｙを含む。当業者は、これらのアミノ酸および同様の公知のアミノ酸の性質を適切なペプチド変異体の設計および選択において考慮し、それによって適切なペプチド変異体がもっぱらルーチン実験法によって製造される。
【００５３】
望ましくは、疎水性親水性指標／親水性性質に関する保存はまた、親ペプチドに比較して変異体ペプチドにおいて維持される（例えば、重量等級、疎水性親水性指標スコアまたは当該配列の両方が、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％またはそれ以上(例えば、約６５％−９９％)維持される）。残基／配列の疎水性親水性指標特性の維持を評価する方法は、当該技術分野において公知であり、入手可能なソフトウェアパッケージ、例えば、SDSC Biology Workbench を通して入手可能な GREASE プログラムに組み込まれている(また、例えば、Kyte and Doolittle et al.,J. Mol. Biol.157:105-132(1982);Pearson and Lipman, PNAS(1988)85:2444-2448,およびPearson(1990)Methods in Enzymology 183:63-98 などＧＲＥＡＳＥおよび同様なプログラムに組み込まれている原理を考察している文献を参照されたい)。
【００５４】
また、変異体ペプチドの構造が親ペプチドの構造と実質的に同様であることは有利である。保存された置換に関してペプチドの類似性を評価するための方法は、例えば、国際特許出願 WO 03/048185、WO03/070747 および WO 03/027246などに記載される。二次構造比較は EBI SSM プログラムを使用して行うことが可能である（現在 http://www.ebi.ac.uk/msd-srv/ssm/ で入手可能である）。当該変異体のどこをコーディネートするかということは公知であり、それらはアラインメント／比較プログラム、例えば、以下のプログラムを使用して行うことが可能である：DALI pair alignment(現在、http://www.ebi.ac.uk/dali/Interactive.html)、COMPARER (現在、http://www-cryst.bioc.cam.ac.uk/COMPARER/で入手可能)、PRIDE pair(現在、http://hydra.icgeb.trieste.it/pride/pride.php?method=pair で入手可能)、PINTS (現在、http://www.russell.embl.de/pints/ で入手可能)、SARF2 (現在、123d.ncifcrf.gov.run2.html で入手可能)、CE Calculate Two Chains Server(現在、http://cl.sdsc.edu/ce/ce_align.html で入手可能)。アブイニシオタンパク質構造予測法(Ab initio protein structure prediction methods)を必要であれば変異体配列に対して適用でき、例えば、HMM-POSETTA または MODELLER プログラムなどを経て、親配列分子と比較した構造を予測する。何れかが適切な他の構造予測法、例えば、スレッディング法なども更に、またはその代わりに使用し、当該変異体および／または親配列タンパク質の構造を予測することが可能である。
【００５５】
同様な残基の維持も更に、またはその代わりに、BLAST プログラム(例えば、BLAST2.2.8、NCBIを経て入手可能)の使用により決定されたような同様なスコアにより測定することが可能である。適切な変異体は、典型的に少なくとも約４５％、少なくとも約５５％、少なくとも約６５％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％またはそれ以上（例えば、約７０−９９％など）で親ペプチドとの類似性を示す。
【００５６】
本明細書の他の場所で考察する通り、他の点の変異体と親の間のバリエーション／ダイバージェンス(variation/divergence)も許容され(例えば、非天然発生アミノ酸、誘導アミノ酸、その配列への挿入、欠失および伸長などを含む)、これは、そのような変化が実質的にその親ＩＲＢＡＡＳと比較したときのＩＲに結合する変異体の能力を損なわないものであるとの条件内での許容である。
【００５７】
本発明のアミノ酸配列の面における同一性は、何れかの適切な技術、典型的に、ニードルマン−バンスク・アラインメント・アナライシス(Needleman-Wunsch alignment analysis、Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol.(1970)48:443-453)により決定することが可能であり、例えば、ＡＬＩＧＮ２．０での分析を介するＢＬＯＳＵＭ５０スコアマトリックスを使用して、初期ギャップペナルティが−１２、伸長ペナルティが−２で提供される(Myers and Miller, CABIOS(1989)4:11-17、ALIGNプログラムにおいて組み込まれる包括的なアラインメント技術の考察を参照されたい)。ＡＬＩＧＮ２．０プログラムのコピーが入手可能であり、例えば、サン・ディエゴ・スーパーコンピューター(ＳＤＳＣ)バイオロジー・ワークベンチ(San Diego Supercomputer(SDSC) Biology Workbench)などを介して得られる。ニードルマン−バンスク・アラインメントが、二つの配列の間の総括的または包括的な同一性を測定するので、より大きなペプチド配列の一部分または続きであり得る標的配列が完全な配列のための方法において使用されてよく、或いは、局所的なアラインメント値を用いて、入手可能なプログラムを経て得られる、例えば、スミス−ウォーターマン・アラインメント(J.Mol.Biol.(1981)147:195-197)などにより決定される配列間の関係を評価することが可能である(同一性を分析するために適切な他の局所的なアラインメント方法は、ヒューリスティック・ローカル・アラインメントを利用するプログラム、例えば、FastA および BLAST プログラムなどを含む)。更に、同一性を評価するために関連する方法は、例えば、国際特許出願 WO 03/048185 などに記載される。ゴトウ・アルゴリズムは、ニードルマン−バンスク・アラインメントを改良するために探索されたものであり、或いは包括的な配列アラインメントのために使用される。例えば、Gotho, J. Mol. Bio. 162: 705-708 (1982)を参照されたい。
【００５８】
典型的に都合のよい配列変化は、（１)タンパク分解に対する感受性を低下するもの、（２）酸化に対する感受性を低下するもの、（３）変異体配列の結合親和性を変えるもの(典型的に望ましくは、親和性の増加)、および／または（４）関連する変異体／類似体ペプチドにおける他の物理化学的または機能的特質を授与または修飾するものである。
【００５９】
アミノ酸配列の変異は、ＩＲＢＡＡＳについて変異体ＩＲＢＡＡＳにおける変更されたグリコシル化パターンに帰着する。ここでは「変更された」は、親ＩＲＢＡＡＳにおいて見られる一以上のグリコシル化部位の除去および／または親ＩＲＢＡＡＳにおいて存在しない一以上のグリコシル化部位の追加を意味する。グリコシル化は典型的にＮ−結合またはＯ−結合の何れかである。Ｎ−結合は、当該炭化水素部分のアスパラギン残基の側鎖に対する付着をいう。トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（ここで、Ｘは、プロリンを除く何れかのアミノ酸である）は、炭水化物のアスパラギン側鎖に対する酵素による付加の共通認識配列である。従って、これらのトリペプチド配列の何れかのポリペプチドにおける存在が、潜在的なグリコシル化部位を生じる。Ｏ−結合のグリコシル化は、糖、例えば、Ｎ−アセチルガラクトサミン(N-aceylgalactosamine)、ガラクトースまたはキシロースなどをヒドロキシアミノ酸、最も一般にはセリンまたはトレオニンに対する付着をいうが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用されてよい。グリコシル化部位のＩＲＢＡＡＳに対する付加は、一以上の上に記述した（Ｎ−結合グリコシル化部位のための）トリペプチド配列または他の適切なグリコシル化部位を含む理由であるように、変異体ＩＲＢＡＡＳのアミノ酸配列を親配列について変更することにより都合よく達成される。当該変更は、また、オリジナルＩＲＢＡＡＳの配列に対して（Ｏ−結合グリコシル化部位のために）、例えば、一以上のセリンまたはトレオニン残基の付加または一以上のセリンまたはトレオニン残基による置換により形成される。
【００６０】
アミノ酸配列変異型は一般的に、例えば、適切なヌクレオチドをＩＲＢＡＡＳコード化核酸への変更を、化学的ペプチド合成または何れかの他の適切な技術によって導入することにより得られる。そのような変異体は、例えば、
親アミノ酸配列における残基の欠失、挿入、（親配列の何れかの末端での）付加および／または置換により異なっている変異体を含む。当該変異体が本発明の方法における実施のために適切な特性を有する条件で（例えば、ＩＲのための親配列親和性の少なくとも実質的な割合の保持など）、欠失、挿入、付加及び置換の何れかの組み合わせを構成して、所望の変異体に到達してもよい。ダイレクテッド・エボリューション（directed evolution）、突然変異誘発技術などを含む変異体を得るために入手可能な多くのより高性能な技術がある。
【００６１】
適切な変異体は、先の特許文献において記載されているスクリーニングアッセイ、例えば、表面プラズモン共鳴アフィニティ分析（例えば、BIAcore(登録商標)分析）；ＩＲ自己リン酸化分析（例えば、ホロ酵素リン酸化分析）；および基質リン酸化分析（例えば、HIRキナーゼアッセイ）；競合アッセイ（例えば、タイム・レゾルブド・フルオレッセンス・レゾナンス・エナジー・トランスファー(Time-resolved fluorescence resonance energy transfer、TR-FRET））及び静脈内血中グルコース試験などを含むアッセイにより評価される。
【００６２】
５．多価およびマルチスペシィフィックＩＲＢＰｓ
上述した通り、一つの側面において、本発明は、ＩＲの一以上のサイト（例えば、サイト１またはサイト２など）に結合する二以上のアミノ酸配列を含むＩＲＢＰｓを提供する。そのような多価の（multivalent）ＩＲＢＰｓは標準的な融合タンパク質発現技術、化学連結または多価ＩＲＢＰを製造するための何れかの他の適切な技術により製造することが可能である。一つの側面において、本発明は、少なくともサイト１結合アミノ酸配列および少なくとも一つのサイト２結合アミノ酸配列を有する多価ＩＲＢＰを提供する。そのようなＩＲＢＰｓは、マルチスペシィフィックとして記載されると同時に多価と記載される。もう一つの側面において、本発明は、ＩＲにおける同じサイトに対して特異的に結合する二以上の配列を有する多価ＩＲＢＰを提供する。
【００６３】
マルチスペシィフィックＩＲＢＰｓは、その中に含まれるサイト１およびサイト２結合ＩＲＢＡＡＳｓの間に競合が殆どない、または競合がないことに基づいて特徴付けられる。
【００６４】
多価リガンドは、個々のサイトに対して別々に結合するアミノ酸配列を発現し、その後、それらが共に共有結合することか、または結合のための特異的アミノ酸配列の組み合わせにおいて含まれる単一アミノ酸配列としての多価リガンドを発現すること何れかにより製造されてよい。
【００６５】
アミノ酸配列の様々な組み合わせが併用されて、特異的な望ましい特性を有する多価リガンドが製造されてよい。従って、アゴニストをアゴニストと組み合わせてもよく、アンタゴニストをアンタゴニストと組み合わせてもよく、アゴニストをアンタゴニストと組み合わせてもよい。多価リガンドを形成するための同じサイトに結合するアミノ酸配列を組み合わせることは、多数の受容体と共にクロスリンクの可能な分子を製造するために有用であってもよい。多価リガンドはまた、異なるサイトに結合するアミノ酸配列と組み合わせて構築されてもよい。
【００６６】
ａ．ＩＲＧＡＡＳｓの方向付け
一つの側面において、本発明は、それらのＮ末端またはＣ末端で共有的に連結してＮ−Ｎ、Ｎ−ＣまたはＣ−Ｎ結合領域またはペプチドを形成する二以上のＩＲＢＡＡＳｓを含むＩＲＢＰｓを提供する。これらは同じＩＲサイト−サイト１−サイト１またはサイト２−サイト２の組み合わせに対して向けられてよい。或いは、サイト１−サイト２またはサイト２−サイト１の組み合わせが提供される。サイト２−サイト１の組み合わせは典型的にＩＲアゴニストである。そのような組み合わせは「ダイマー」と呼ばれる。
【００６７】
特定の態様において、サイト１−サイト２およびサイト２−サイト１の方向付けが可能である。加えて、Ｎ末端に対するＮ末端（Ｎ−Ｎ）；Ｃ末端に対するＣ末端（Ｃ−Ｃ）；Ｃ末端に対するＮ末端（Ｎ−Ｃ）；およびＮ末端に対するＣ末端（Ｃ−Ｎ）連結が可能である。従って、ペプチドはサイト２に対するサイト１またはサイト１に対するサイト２が方向付けられてよく、Ｎ末端に対してＮ末端、Ｃ末端に対してＣ末端、Ｃ末端に対してＮ末端、Ｃ末端に対してＣ末端またはＮ末端に対してＣ末端が連結されてもよい。ある場合には、特定の方向付けが例えば、最高のアゴニストまたはアンタゴニスト活性などのために他よりも望ましい。
【００６８】
モノマーサブユニットの方向付けおよび連結は、ダイマー活性を劇的に買えることが発見されている。特に、あるサイト１／２ヘテロダイマー配列は、ＩＲでアゴニストまたはアンタゴニスト活性を示し、これは当該構成「モノマー」「サブユニット」（ＩＲＢＡＡＳｓ）の方向付けおよび連結に依存する。例えば、サイト１−サイト２の方向付け（Ｃ−Ｎ連結）はＩＲでアンタゴニスト活性を示す。対照的に、サイト２−サイト１の方向付け（Ｃ−Ｎ連結）は強力なアゴニスト活性をＩＲで示す。同様に、サイト１−サイト２（Ｃ−Ｎ連結）ヘテロダイマーはＩＲでアンタゴニスト活性を示し、ところが一方で、サイト１−サイト２（Ｃ−ＣまたはＮ−Ｎ連結）ヘテロダイマーはアゴニスト活性を示す。
【００６９】
組換え遺伝子発現により、または慣習的な化学的な連結技術により製造されようと、当該変異体ＩＲＢＡＡＳｓは種々の長さを通じて結合されてよい。一つの側面において、ＩＲＢＰｓは、ＩＲＢＡＡＳｓの間にリンカーがない包含または非常に短いリンカー（例えば、約５残基未満、例えば、０、１または２残基などからなるリンカー）の包含により特徴付けられる。ＩＲＢＡＡ内「リンカー」は、典型的に１または僅かな小さいおよび／または従順な(flexible)独特なアミノ酸残基（上の表１を参照されたい）、例えば、Ｇｌｙ、Ｖａｌおよび／またはＳｅｒ残基など；一以上の消化酵素分解抵抗性特殊アミノ酸残基；一以上の分解抵抗性非アミノ酸部分；またはその何れかの組み合わせからなる。一以上のＩＲＢＡＡｓが、融合タンパク質と関連して、更なる非ＩＲＢＡＡＳ配列（例えば、ＩＲＢＰの安定化、ターゲティング(例えば、コレラ毒素Ｂ融合パートナーなど）、検出(例えば、緑色蛍光タンパク質(GFP)配列、ホタルルシフェラーゼ配列、エピトープタグ配列、酵素基質配列；または同様な配列など）、安定化(例えば、E.coliにおいて改善された生産のためのユビキチン配列または他の安定化配列など)および/または精製(例えば、ヘキサヒスチジン配列または他のHisタグ；エピトープタグ；など)を促進する配列など、または更なる薬理学的／生物学的機能、例えば、IR以外の第二の標的に対して結合する機能などを与える配列など）に対して結合する場合、これらはまた、本発明により提供されるものであるが、当該ＩＲＢＡＡＳ（ｓ）と非ＩＲＢＡＡＳ（ｓ）との間のリンカーは顕著により長く、特に、融合タンパク質が一以上の第二のリガンド結合配列／ドメインを含む場合においてより長い。そのようなリンカー配列の選択および包含に関する原理および技術は、当該分野において周知である。そのようなＩＲＢＰ融合タンパク質の具体的な例は、ＩＲＰＢ  Ｓ８６０において具体的に表現され、これはＨｉｓタグおよびユビキチン融合パートナー部分を含むものである。
【００７０】
ｂ．Ｎ末端アシル化／Ｃ末端アミド化多価ＩＲＢＰｓ
もう一つの側面において、本発明は、含まれるＩＲＢＡＡＳのＮ末端アシル化、典型的にはアセチル化、および／または含まれるＩＲＢＡＡＳのＣ末端アミド化により特徴付けられるＩＲＢＰｓを提供する。例えば、一つの側面における本発明はＩＲＢＰを提供し、これは。一つのＮ末端およびアセチル化されたＩＲＢＡＡＳおよび異なったＣ末端およびおよびアミド化されたＩＲＢＡＡＳを含む。本発明者らは、そのような修飾が驚くべきことに修飾された分子を安定性および／またはＩＲ結合に関して改善すると判定した。この点において当該ＩＲＢＰは、個々に記載する通りの一以上のＩＲＢＡＡＳまたは先の特許文献に記載される一以上のインスリン結合ペプチドの配列（式）（例えば、US20030236190に記載される通りの「式４」配列など）を含む。典型的に。当該Ｎ末端アセチルおよび／またはＣ末端アミドは、直接にＩＲＢＡＡＳｓの末端に連結される。しかしながら、追加変異体／融合タンパク質の場合において、これらの置換基は非ＩＲＢＡＡＳ残基と関連し、これらは同様に直接的または間接的に「内部」ＩＲＢＡＡＳｓに対して連結される。
【００７１】
詳細な側面において、本発明は、一以上の式６ａ−６ｇに従う配列および（ａ）一以上の１ａ−１ｇに従う配列；（ｂ）先の特許文献式に記載される通りの式１に従う配列；（ｃ）式２ａに従う配列；または（ｄ）先の特許論文に記載される通りの式２に従う配列の何れかを含み、ここで、当該ＩＲＢＰｓはＮ末端アセチル化および／またはＣ末端アミド化によって特徴付けられる。典型的に、そのようなＩＲＢＰは、そのような二つの式６／式６様（即ち、式６または式６ａ−６ｇに従う配列）および非式６様配列（即ち、式２、式２ａまたは式１ａ-１ｇ配列）の「ダイマー」である。典型的に、そのようなＩＲＢＰは直接的に連結される、または非常に短いリンカー（例えば、１−３残基または部分など）により離される。典型的に、そのようなダイマーはサイト２−サイト１（Ｃ−Ｎ結合）に方向付けられる。
【００７２】
従来の特許文献において提供される、そのようなＮ末端アセチル化および／またはＣ末端アミド化修飾による他のＩＲＢＰの修飾（例えば、式１−式４ダイマーなど）もまた、本発明の特徴である。下に様々な式および配列の記述が本発明の新規および有益な側面を説明するためであるので、当該側面に含まれるそのようなＩＲＢＰｓがここに具体的に記されるものではないが、本発明の方法（Ｎ末端アセチル化およびＣ末端アミド化の両方の包含など）を先の特許論文の開示に含まれるＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＡＡＳｓに対して適用することにより容易に提供される。同じ原理が、ここに記載される本発明の幾つかの側面に対して適用される。
【００７３】
ｃ．分解抵抗性多価誘導体
上述した通り、本発明のもう一つの重要な面は分解抵抗性アミノ酸残基および／または部分を含む多価ＩＲＢＰｓである。
【００７４】
一つの側面において、本発明は、分解抵抗性ＩＲＢＰｓであって、一以上の式６ａ-６ｇＩＲＢＡＡＳｓおよび先の特許論文（例えば、US 20030236190など）の少なくとも一つの式２配列または上述の式２ａを含み、サイト２-サイト１の方向付け（Ｃ−Ｎ結合）に配置された分解抵抗性ＩＲＢＰｓを提供する。詳細な側面において、本発明はＩＲＢＰｓを提供し、当該ＩＲＢＰｓは、一以上の式６ａ−６ｇに従う単一ＩＲＢＡＡＳおよび単一式２または式２ａ配列に従う単一ＩＲＢＡＡＳを含み、これはＩＲＢＡＡＳｓの間に位置する一以上の分解抵抗性特殊アミノ酸（ＡＡ）残基および／または非ＡＡ部分を一つまたは両方の当該ＩＲＢＰ末端に含み、または両方とも、ここで、当該配列は任意に更に、それぞれのＩＲＢＡＡＳｓの間に一つまたは二つのリンカー残基を含むことにより特徴付けられ、それは一以上の分解抵抗性部分または残基リンカーの代わりであっても、またはそれに加えられてもよい。
【００７５】
もう一つの面において、本発明は、先の特許論文の一以上において記載された式６ＩＲＢＡＡＳおよび式２ＩＲＢＡＡＳを含む分解抵抗性ＩＲＢＰｓを提供し、ここで、当該ＩＲＢＰはＩＲＢＡＡＳｓの間に、当該ダイマーの何れかの末端または両方の末端に、分解抵抗性特殊残基または部分を含む。そのようなＩＲＢＰｓは典型的にサイト２−サイト１方向（Ｃ−Ｎ結合）を有する。
【００７６】
もう一つの側面において、本発明は、一以上の式１ａ−１ｇに従う少なくとも一つのＩＲＢＡＡｓおよび一以上の式６ａ−６ｇに従う少なくとも一つのＩＲＢＡＡＳを有する。もう一つの側面において、本発明は、先の特許文献の式１に従う少なくとも一つのＩＲＢＡＡＳ、および少なくとも一つの式６ａ−６ｇのＩＲＢＡＡＳを含むＩＲＢＡＡＳを提供する。また更なる側面において、本発明は、先の特許文献に従う少なくとも一つの式６配列および一以上の式１ａ−１ｇに従う少なくとも一つの配列を有するＩＲＢＰＳを提供する。また更なる側面において、本発明は、この段落の前の側面の何れかに従うＩＲＢＰｓを提供し、ここで、当該ＩＲＢＰは、式１または式１様配列（１ａ−１ｇ配列）と式６または式６様（６ａ−６ｇ）配列の間に位置する一以上の分解抵抗性特殊アミノ酸残基および／または分解抵抗性部分を当該ＩＲＢＰの一つの末端若しくは両方の末端、またはその組み合わせで含む。一つの側面において、本発明は、この段落において記載される一以上の特徴を示す「ダイマー」を提供する。そのようなＩＲＢＰｓは典型的にサイト２−サイト１方向（Ｃ−Ｎ結合）を示す。
【００７７】
更なるもう一つの側面において、本発明は、式１ＩＲＢＡＡＳおよび式６ＩＲＢＡＡＳを含むＩＲＢＰを提供し、これは典型的に、先の特許文献に従う（例えば、US 20030236190を参照されたい）その「ダイマー」（典型的にサイト２サイト１で方向付けられた（Ｃ−Ｎ結合））であり、ここで当該ＩＲＢＰは少なくとも一つの分解抵抗性特殊アミノ酸残基および／または部分を当該ＩＲＢＡＡＳｓの間におよび／または当該ＩＲＢＰの一つまたは両方の末端に含む。
【００７８】
詳細な典型的な側面において、本発明は、上述の通りに方向付けられて結合された、式６または式６様配列および式１または式１様配列を含み、ここで、一以上の分解抵抗性部分または残基は、式６または式６様配列の位置５、７および／または８にあり、一つ以上の分解抵抗性部分または残基は式１または式１様配列の位置１または２にあるか、または両方である。そのようなＩＲＢＰｓは更にＮ末端および／またはＣ末端ブロック基を含む（例えば、それぞれアセチル基およびアミド基など）。
【００７９】
ここで記載された当該ＩＲＢＰｓの何れかが、それのアミノ酸配列主鎖に対して（例えば、式２、式６および／または式１配列に対して、および／または一以上の非ＩＲＢＡＡＳ配列に対して）結合している末端および／または内部に位置するアシル誘導体を含むことも可能であり、それはまた、当該ペプチドの安定性を増大してもよい。この場合において、アシル誘導体は、例えば、Ｃ１２−Ｃ２２カルボキシルまたはカルボン酸置換基（それぞれのサブレンジおよびこれについての構成員は個々の側面を表している））。そのようなＩＲＢＰｓは、例えば、高いアルブミン結合／アソシエーションを示すことも可能であり、他のＩＲＢＰｓおよび／またはインスリンに比較して、高いインビボ半減期を与えられることもまた可能である。ＩＲＢＰｓの他のアシル化の他の形態もまた適切である（例えば、本明細書の他の場所に記載する通りである）。
【００８０】
詳細な側面において、本発明は、式１様ＩＲＢＡＡＳおよび式６様ＩＲＢＡＡＳ（典型的に、サイト２−サイト１の方向付け、Ｃ−Ｎ結合により特徴付けられる）を含むＩＲＢＰｓを提供する、ここにおいて、式６様配列のＸａａ７位は分解抵抗性残基または部分（例えば、Ａｉｂ）で置換され、式１様配列のＸａａ１残基は分解耐性残基または部分（例えば、Ｄｉｐ）で置換される。そのようなＩＲＢＰの例はＩＲＢＰ  Ｓ８７３に具体化される。
【００８１】
より一般的な側面において、本発明は、式１様ＩＲＢＡＡＳおよび式６様ＩＲＢＡＡＳ（典型的にサイト１−サイト２の方向付け、Ｃ−Ｎ結合により特徴付けられる）を含むＩＲＢＰｓを提供する、ここで、式６様配列のＸａａ５、Ｘａａ７、および／またはＸａａ８位は分解抵抗性残基または部分で置換され、および式１様は配列のＸａａ１および／またはＸａａ５残基は分解抵抗性残基または部分により置換される。
【００８２】
前述の何れかに関して、当該ＩＲＢＰの当該末端での分解抵抗性残基または部分への言及は、少なくとも二つのＩＲＢＰにより明確にされる領域に対する典型的な言及として理解されるべきである；しかしながら、一つまたは両方の末端での付加により修飾された変異体の場合、そのような分解抵抗性残基／部分は外部のＩＲＢＡＡＳｓ自身の関係「以外の」残基と関係してよい。
【００８３】
特殊な分解抵抗性アミノ酸残基または分解抵抗性部分は、何れかの適切な種類のそのような残基または部分であり得る。特殊な分解抵抗性残基は、サルコシン、ジフェニルアラニン、アミノイソ酪酸、Ｄ−アルギニンおよびＮ−メチル−フェニルアラニンを含む。多価ＩＲＢＰｓにおける包含のために適切なそのような残基および分解抵抗性部分の更なる例は本明細書の他の場所に記載する。
【００８４】
もう一つの例示的側面において、本発明は、（本明細書および／または先の特許文献において提供される通りの）異なる式に従う少なくとも二つの異なるＩＲＢＡＡＳｓを含むＩＲＢＰＳを提供し、当該ＩＲＢＰが当該残基／部分を各同じ配列よりもより分解抵抗性であるように配置および選択された、少なくとも二つの分解抵抗性アミノ酸残基または部分を含むことにより特徴付けられる。
【００８５】
更なる側面において、本発明は、本セクションＡ．５．ｃに記載される側面の何れかに従うＩＲＢＰＳを提供し、ここで当該ＩＲＢＰはまた、典型的には、そこに含まれる種々の式のＩＲＢＢＡＳ残基のＮ−末端アシル化および／またはＣ末端アミド化により特徴付けられる。
【００８６】
同様な分解抵抗性残基または部分の包含は、同じ様式における先の特許文献に記載される他のＩＲＢＰｓ（例えば、式１−式４ダイマーなど）に対して適用され得る。
【００８７】
ｄ．定時的な多価ＩＲＢＰｓ
多くの新規多価ＩＲＢＰｓが本発明と関連して開発されている。そのような多価ＩＲＢＰｓは典型的に一以上の先の分類により特徴付けられ、および／または他の特徴に基づく（例えば、コンセンサス配列の存在、またはここで詳細には開示されていないこれらの配列において見られるモチーフに基づく）他のＩＲＢＰｓに一致する。
【００８８】
以下の表は多くのそのような例示的且つ例証となる配列を示す。
【表２−１】
2008510692.tif 000003
【表２−２】
2008510692.tif 000004
【表２−３】
2008510692.tif 000005
【表２−４】
2008510692.tif 000006
【表２−５】
2008510692.tif 000007
【表２−６】
2008510692.tif 000008
それぞれのこれらのペプチド、その何れかの誘導体、そのようなペプチドをコードする核酸配列、およびそのような核酸、ペプチド、変異体および／または誘導体の使用は、本発明の更なる例証となる側面を表す。
【００８９】
表２に指示される通り、多くのこれらの例示的ＩＲＢＰｓが、ヒトＩＲ親和性について（アッセイ対アッセイの変動を減少／除去するように、同日のヒトＩＲに対するヒトインスリンの親和性について明確にノーマライズされた隣接したカラムにおける、Ｋｄにより示される通り）、および／またはマウス脂肪細胞におけるグルコース取り込みにおける影響について（ＥＣ５０（ＦＦＣ）に関して説明している通り、ＥＣ５０（ＦＦＣ）はマウス脂肪細胞におけるグルコースの半最大取り込み値のために必要とされる濃度；このデータの右隣のカラムは、同日の同じアッセイにおけるヒトインスリンの活性についてノーマライズされたデータを反映することに注意されたい）について分析されており、これらは先の特許文献において詳細に記載された方法により得られた。
【００９０】
これらのデータは、本発明により提供される新規ＩＲＢＰｓのＩＲ結合に関する効果およびまたＩＲ活性調節（特に、アゴニスト作用）に関する効果を反映する。
【００９１】
６．更なるＩＲＢＰ誘導体
上に記載される通り、本発明は、特に酵素分解抵抗性誘導体、アセチル化／アミド化誘導体および特にここの他の場所に記載される他の誘導体を含むＩＲＢＰ誘導体を提供する。
【００９２】
当該用語誘導体は、一般的に、当該ペプチドの一以上のアミノ酸残基が化学的に修飾（例えば、アルキル化、アシル化、エステル形成、アミド形成または他の同様な種類の修飾など）された、または共有結合的に一以上の異種置換基（例えば、親油性置換基、ＰＥＧ部分、適切な有機部分リンカーにより連結されているペプチド側鎖など）と結合しているタンパク質をいう。誘導体の第二の主対は、個々に複合体として記述される。誘導体は、それらの「裸の（naked）」タンパク質対応物から著しく変化するので、それらは多くの場合、本発明の独特な側面が考えられる。
【００９３】
一般的に、ここで記載されるＩＲＢＰｓは、何れかの適切な多くのそのような修飾されたアミノ酸の包含により、および／またはそのような複合置換基との結合により修飾される。この関係における適合性一般は、少なくとも実質的なＩＲ選択性を維持する能力により決定され、および／または非誘導化された親ＩＲＢＰ／ＩＲＢＡＡＳと特異的に関連する。一以上の修飾されたアミノ酸の包含は、例えば、以下の場合において有利であってよい；（ａ）ポリペプチドの血清半減期の増大、（ｂ）ポリペプチドの抗原性の減少、または（ｃ）ポリペプチドの貯蔵安定性の増加。アミノ酸は、例えば、翻訳と共に、または翻訳後の組換え産生の間に修飾されたり（例えば、哺乳類細胞における発現中のＮ−Ｘ−Ｓ／ＴモチーフでのＮ−連結グリコシル化など）、または合成手段により修飾される。非限定的な例である修飾されたアミノ酸は、グリコシル化アミノ酸、硫酸化アミノ酸、プレンリー化(prenlyated)（ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化など）アミノ酸、アセチル化アミノ酸、アシル化アミノ酸、ＰＥＧｙｌ化アミノ酸(PEGylated amino acid)、ビオチン化アミノ酸、カルボキシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸などを含む。当該アミノ酸の修飾において当業者を先導するために十分な参考が、文献の至るところにある。例示的なプロトコールは、例えば、ワルカーの文献に見ることができる(Walker(1998)PROTEIN PROTOCOLS ON CD-ROM Humana Press, Towata, NJ.)。典型的に当該修飾されたアミノ酸は、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧｙｌ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂肪部分に対して複合化しているアミノ酸および有機誘導体化剤と複合化しているアミノ酸から選択される。
【００９４】
ＩＲＢＰｓは、ポリマーに対して共有結合的に複合化することにより化学的に修飾され、例えば、それらの循環半減期を増大する。そのようなポリマーをペプチドに対して付着させるための例示的なポリマーおよび方法は、例えば、U.S. Pat. Nos. 4,766,106; 4,179,337; 4,495,285; および 4,609,546などに説明されている。更なる例証となるポリマーは、ポリオキシエチル化ポリマーおよびポリエチレングリコール(PEG)部分を含む（例えば、IRPBは分子量が約1,000から約40,000、例えば、約2000から約20,000、例えば、約3,000から12,000、更に詳細には約5,000のPEGに対して複合化される）。
【００９５】
従って、本発明の当該ペプチドは、当該分野に公知の一以上の修飾に供してもよく、それは、貯蔵安定性、薬物動態、および／または当該ペプチドの生理活性の何れかの側面、例えば、有効性、選択性および薬物相互作用などを操作するために有用であってもよい。当該ペプチドが供されてもよい化学的修飾は、これに限定するものではないが、ペプチドに対する、一以上のポリエチレングリコール(PEG)、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、デキストラン、ポリ−（N-ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロールなど）およびポリビニルアルコール、コロミン酸または他の炭化水素ベースのポリマー、アミノ酸のポリマー、およびビオチン誘導体の複合を含む。タンパク質のＣｙｓ残基でのＰＥＧ複合体は、例えば、以下に開示される；Goodson, R. J. & Katre, N. V. (1990)Bio/Technology 8, 343 および Kogan, T. P. (1992) Synthetuc Comm. 22, 2417。
【００９６】
他の有用な修飾は、これに限定するものではないが、上述したとおりのアシル化、特に、ＩＲＢＡＡＳのＮ末端アシル化(例えば、Ｎ末端に位置する式６または式６ａ−６ｇＩＲＢＡＡＳなど)を含み、これは例えば、米国特許第6,251,856 およびWO 00/55119 などに記載されるような方法および組成物を使用して得ることが可能である。
【００９７】
Ｂ．ＩＲＢＰをコードする核酸および関連する組成物
もう一つの面において、本発明はＩＲＢＰをコードする核酸を提供する。
【００９８】
ＩＲＢＰをコードする核酸は、何れか適切な特質を有し、何れか適切な特徴を含む。従って、例えば、ＩＲＢＰをコードする核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそのハイブリッドの形態であってもよく、非天然塩基またはヌクレオチド類似体、糖部分の置換、更なる部分（例えば、取り込み促進分子など）の複合、二次構造プロモーティング配列またはそのような特徴の組み合わせを含んでもよい。核酸は典型的に有利に、標的ホスト細胞における所望の発現、複製および／または選択をプロモートする特徴を含む。そのような特徴の例は、複製成分の起源、選択遺伝子成分、プロモーター成分、エンハンサーエレメント成分、ポリアデニル化配列成分、ターミネーション成分などを含み、その多数の適切な例が知られている。
【００９９】
更なる側面において、本発明はＩＲＢＰをコードする核酸を含むベクターを提供する。ベクターはデリバリー媒体と呼ばれ、ＩＲＢＰをコードする核酸の発現、ＩＲＢＰペプチドの産生、標的細胞のトランスフェクション／トランスフォーメーション、ＩＲＢＰをコードする核酸の複製を促進したり、当該核酸および／またはトランスフォーム／トランスフェクションされた細胞の検出を促進したり、または他に、有利な生物学的および／または生理化学的な機能を当該ＩＲＢＰをコードする核酸に与えたりする。本発明の状況におけるベクターは、何れかの適切なベクターであればよく、染色体性、非染色体性、および合成核酸ベクター（発現制御エレメントの適切なセットを含む核酸配列）を含む。そのようなベクターの例は、ＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドおよびファージＤＮＡに由来するベクター、およびウイルス核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）ベクターを含む。一つの例示的な側面において、ＩＲＢＰをコードする核酸は、裸のＤＮＡまたはＲＮＡベクターに含まれてもよく、それは、例えば、線状発現エレメント(a linear expression element、例えば、以下に記載される；Sykes and Johnston (1997) Nat Biotech 17: 355-59)、コンパクト核酸ベクター(compacted nucleic acid vector、例えば、以下に記載される；米国特許6,077,835および／または国際特許出願 WO 00/70087など)、プラスミドベクター、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９／１８またはｐＵＣ１１８／１１９、「ユスリカ」最小サイズ核酸ベクター("midge" minimally-sized nucleic acid vector、例えば、以下に記載される；Schakowskiら,(2001) Mol Ther 3:793-800)、または沈殿核酸ベクター構成物(precipitated nucleic acid vector construct)、例えば、ＣａＰＯ４沈殿構成物(例えば、以下に記載される；国際特許出願 WO 00/46147、Benvenisty and Reshef(1986)Proc Natl Acad Sci USA 83:9551-55、Wiglerら(1978), Cell 14:725 およびCoraro and Pearson (1981)Somatic Cell Genetics 7:603)を含む。そのような核酸ベクターおよびその使用は当該分野において周知である(例えば、米国特許5,589,466および5,973,972を参照されたい)。
【０１００】
一つの側面において、当該ベクターは細菌細胞におけるＩＲＢＰの発現に適切である。そのようなベクターの例は、例えば、容易に精製される融合タンパク質の高レベルの発現を方向付けるベクター(例えば、BLUESCRIPT(Stratagene)などの多機能E.coliクローニングおよびベクターの発現、pINベクター(Van Heeke & Schuster, J Biol Chem 264:5503-5509(1989);pETベクター(Novagen, Madison WI)；など)を含む。
【０１０１】
発現ベクターはその上更に、またはそれに変わって、例えば、酵母系において発現するために適切なベクターであってよい。酵母系における発現に適切な何れのベクターも使用される。例えば、サッカロミセス・セレビシアエ(Saccharomyces cerebisiae)などにおいて使用するために適切なベクターは、例えば、構成的なまたは誘導性のプロモーター、例えば、アルファファクター、アルコールオキシダーゼおよびＰＧＨなどを含むベクターを含む(例えば、前出のAusubel, および Grantら, Methods in Enzymo 153: 516-544(1987)に概説されている)。
【０１０２】
核酸および／またはベクターはまた、分泌／局在化配列をコードする核酸配列を含んでよく、それらはポリペプチド、例えば、新生ポリペプチド鎖などを所望の細胞コンパートメント、膜またはオルガネラに向ける、またはポリペプチド分泌を細胞膜周辺腔に対してまたは細胞培養の培地に方向付ける。そのような配列は当該分野において公知であり、分泌リーダーまたはシグナルペプチド、オルガネラターゲッティング配列(例えば、核局在化配列、ER保持シグナル、ミトコンドリアトランジット配列、クロロプラストトランジット配列など)、膜局在化／アンカー配列(例えば、ストップトランスファー配列、GPIアンカー配列など)、などを含む。
【０１０３】
ＩＲＢＰをコードする核酸ベクターは、何れか適切なプロモーター、エンハンサーおよび他の発現促進エレメントを含んでも、または関連付けてもよい。そのようなエレメントの例は、強い発現プロモーター(例えば、ヒト CMV IE プロモーター／エンハンサー、RSVプロモーター、SV40プロモーター、SL3-3プロモーター、MMTVプロモーターまたはHIV LTR プロモーターなど)、有効ポリ（Ａ）ターミネーション配列、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるプラスミド生成物のための複製の起源、選択可能なマーカーとしての抗生物質耐性遺伝子、および／または簡便なクローニングサイト(例えば、ポリリンカーなど)を含む。一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰをコードする配列を含む核酸を提供し、当該ＩＲＢＰは組織特異的プロモーター(例えば、当該ＩＲＢＰがＩＲアイソフォーム特異性を基礎とする選択性を示す組織にと区的なプロモーターなど)に機能可能に連結される。
【０１０４】
もう一つの側面において、当該核酸は、ホスト細胞またはウイルスベクターを介してホスト動物に位置し、および／またはホスト細胞またはウイルスベクターを介してホスト動物に送達される。何れかの適切なウイルスベクターはこの点で使用され、幾つかが当該技術分野において公知である。ウイルスベクターは、幾らかのウイルス性ポリヌクレオチドを単独、または一以上のウイルスタンパク質と組み合わせて含まれ、所望のホスト細胞における本発明の核酸の送達、複製および／または発現を促進する。当該ウイルスベクターは全てまたは一部分のウイルスゲノム、ウイルスタンパク質／核酸複合体、ウイルス様粒子(ＶＬＰ)、米国特許 5,849,586および国際特許出願 WO 97/04748に記載されるものと同じベクター、ウイルス核酸および本発明の当該核酸を含むインタクトなウイルス粒子を含むポリヌクレオチドである。ウイルス粒子ウイルスベクターは、複製および／または発現のためのもう一つのベクターまたは野生型ウイルス(即ち、ウイルスベクターはヘルパー依存性ウイルスである)、例えば、アデノウイルスベクター単位複製配列など、の存在を要求するベクターである。典型的には、そのようなウイルスベクターは、本質的に野生型ウイルス粒子、またはそのタンパク質および／または核酸内容物において修飾されて、導入遺伝子の能力または当該核酸のトランスフェクションおよび／または発現における援助を増大するウイルス粒子を含む（そのようなベクターの例は、ヘルペスウイルス／ＡＡＶ単位複製配列を含む）。典型的に、ウイルスベクターは正常にヒトに感染するウイルスに同じ、またはそれに由来する。この点で適切なウイルスベクター粒子は、例えば、アデノ関連ウイルスベクター粒子（ＡＡＶベクター粒子）または他のパルボウイルスベクター粒子、パピローマウイルスベクター粒子、フラビウイルスベクター、アルファウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター(lentiviral vectors)を含むベクターなどを含む。そのようなウイルスおよびウイルスベクターは、例えば、以下の文献に記載される；Fields et al., eds., VIROLOGY RAVAN Press, Ltd., New York(3rded.,
1996 and 4thed.,2001);FUNDAMENTAL VIROLOGY, Fields et al., eds., Lippincott-Raven(3rded.,1995), Levine,"Viruses," Scientific American Library No.37(1992), MEDICAL VIROLOGY, D.O. White et al.,eds., Acad. Press(2nd ed. 1994), and INTRODUCTION TO MODERN VIROLOGY, Dimock, N.J. et al., eds., Blackwell Scientific Publication, Ltd.(1994)。
【０１０５】
本発明のポリヌクレオチドおよび他の核酸並びにここで記載された方法と共に使用できるウイルスベクターは、従って、例えば、アデノウイルスウイルスベクター；アデノ関連ウイルス(AAV)ベクター；パピローマウイルスベクター；ヘルペスウイルスベクター；レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、ワクシニアウイルスベクター)を含む；などを含む。
【０１０６】
本発明はまた、組換え細胞、例えば、酵母、細菌および哺乳類細胞(例えば、不死化された哺乳類細胞など)などであって、ＩＲＢＰをコードする核酸、ベクターまたはその何れかまたは両方の組み合わせを含む組換え細胞を提供する。例えば、一つの例示的な側面において、本発明は、本発明のＩＲＢＰの発現のためにコードする配列を含む細胞のゲノムに安定に統合された核酸を含む細胞を提供する。もう一つの側面において、本発明は、非統合の核酸、例えば、プラスミド、コスミド、ファージミド、または線状発現エレメントなど、を含み、ＩＲＢＰの発現のためにコードする配列を含む細胞を提供する。
【０１０７】
核酸、ベクターおよび細胞は、本発明のＩＲＢＰタンパク質の代理として、ここに記載される大抵の本発明の方法の使用され、それにより一以上のＩＲＢＰｓを培養中の細胞またはホストに「送達(deliver)」される。従って、例えば、本発明は、哺乳動物においてＩＲ活性を調節する方法であって、ＩＲＢＰをコードする核酸を適切な細胞に対して当該核酸の発現およびＩＲＢＰの産生に適切な条件下で導入し、それによって発現されたＩＲＢＰをそこにおいてＩＲ活性を調節するようにそれに対するＩＲｓ反応性を含む細胞に接触させることを具備する方法を提供する。
【０１０８】
本発明はまた、トランスジェニック生物体であって、ＩＲＢＰをコードする核酸またはそれと同じ物を含むベクターを含むトランスジェニック生物体を提供する。適切なトランスジェニック生物体は、マウス、ラット、ニワトリ、植物、ウシ、ヤギ、モルモット、サルおよび他のヒト以外の霊長類を含む。トランスジェニック動物は、ＩＲＢＰをコードする核酸の標準的な技術に従う安定した導入により産生される。
【０１０９】
Ｃ．ＩＲＢＰ組成物
ＩＲＢＰｓは同種(homogenous)の組成物において、または他の活性および／または不活性な成分との組み合わせにおいて提供される(例えば、一つの側面において、本発明は、ここにおいて開示された一以上のＩＲＢＰｓおよび一以上の第二の作用物質、例えば、一以上のインスリン分泌促進物質、アルファ−グルコシダーゼインヒビターおよび／またはインスリン増感剤(例えば、一以上のグリタゾン(glitazones)、例えば、ロシグリタゾン(rosiglitazone)および／またはピオグリタゾン(pioglitazone)など)などを含む組成物を提供する)。
【０１１０】
ＩＲＢＰｓは典型的に、少なくとも実質的に純粋な形態で使用および提供される。実質的に純粋な分子は、当該組成物において主な種である分子であり、ここにおいて、それはそれが属する分子の種類に関して見出されるものである（例えば、実質的に純粋なタンパク質が当該組成物において主な種であることがここにおいて見出される）。実質的に純粋な種は、重量で少なくも約５０％の当該組成物における分子の種類を構成し、および典型的には、少なくとも約７０％、少なくとも８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％またはそれ以上のパーセントの当該組成物における当該分子種を構成するであろう。通常、ＩＲＢＰを含む組成物は、少なくとも約９８％、９８％または９９％の均一性のＩＲＰＢを当該組成物中に存在する全てのペプチド種という面において示し、または少なくとも実施的な活性ペプチド種について提案された使用の面において示す。例えば、ペプチド安定剤／緩衝剤、例えば、アルブミンなどは、意図的に最終薬学的製剤に、当該ＩＲＢＰｓの活性を妨げることなく含まれてよく、従って、そのような純度計算から除かれてよい。基本的な活性を妨げない不純物の存在もまた、実質的に純粋な組成物という面において許容され得る。純度は、当該問題の化合物に適切な方法により測定される(例えば、クロマトグラフィー法；アガロースおよび／またはポリアクリルアミドゲル電気泳動；HPLC分析；など)。
【０１１１】
単離された分子は、何れかの外来および望ましくない生物学的分子の顕著なレベル（例えば、約１％以上、約２％以上、約３％以上または約５％以上など）に関連のない分子をいい、何れかの外来および望ましくない生物学的分子は、細胞、細胞培養物、化学培地、または動物に含まれる非ＩＲＢＰ生物学的分子などである。単離された分子はまた、有意な長さの時間（例えば、少なくとも約１０分、少なくとも約２０分、少なくとも約１時間またはそれ以上）に亘るヒトの介入（自動、手動またはその両方）のためそのような精製段階を通して変化した何れかの分子をいう。本発明により提供される多くの種類の組成物において、例えば、一以上の薬学的に許容される担体を含む組成物において、ＩＲＢＰは、当該組成物の総分子種の数の点から見ると比較的小さい量で存在する（例えば、多くの量の薬学的に許容される担体、安定剤および／または保存剤を含む組成物の場合など）。幾つかの場合、更なるペプチド、例えば、ＢＳＡなどは、予め精製されたＩＲＢＰを伴うそのような組成物に含まれる。しかしながら、当該組成物のそのような更なる成分が意図される適用のために許容される場合、そのような組成物はなお、単離されたＩＲＢＰを含むと記述することが可能である。換言すれば、用語「単離された」は、他の化合物または物質を伴う人工または合成混合物、例えば、薬学的に許容される製剤の一部分を形成してよい混合物など、を除外することを意味するものではない。
【０１１２】
一つの側面において、本発明は、他のＩＲ結合分子を実質的に含まないＩＲＢＰｓを提供する。
【０１１３】
もう一つの側面において、本発明は異なる特異性および特徴を有する幾らかのＩＲＢＰｓを含む組成物を提供する（例えば本発明は一つの側面において、異なる親和性、安定性、特異性および／または選択性特性を有するＩＲＢＰｓの「カクテル」を提供する）。
【０１１４】
医薬品への使用のためのＩＲＢＰ組成物は、ＩＲＢＰ、ＩＲＢＰｓの組み合わせまたは一以上のＩＲＢＰ(s)および更なる活性／治療薬の少なくとも生理学的に有効な量を含み、一般的に望ましくは治療上有効な量を含む。
【０１１５】
「治療上有効な量」は、生物学的に活性な化合物または組成物の量をいい、適切な用量で、適切な期間に亘り、典型的に当該化合物または組成物に対して応答性のホストに対して送達される場合に、ホストにおける所望の治療結果を達成するために十分である、および／または典型的に実質的に同様なホスト（例えば、治療されるべき患者と同様な特徴を有する患者など）におけるそのような治療結果を達成できる。ＩＲＢＰの治療上有効な量は、個々の疾病の状態、年齢、性別および体重、並びに当該ＩＲＢＰの個々における所望の応答を引き出す能力などの要素に従って変わる。治療上有効な量はまた、当該作用薬の何れの有毒性または有害性の効果よりも、その治療上の有益な効果の方が上回るものである。代表的な治療効果は、例えば以下を含む；（ａ）特定の対象または実質的に同様な対象の集団における疾患、障害または関連する状態の重症度の低減；（ｂ）一以上の症状または疾患、障害または状態と関連する生理的な状態の減少；および／または（ｃ）予防的な効果。疾患の重症度の提言は、例えば以下を含む；（ａ）障害の広がりにおける測定可能な減少；（ｂ）対象における正の結果の機会の増加（例えば、少なくとも約５％、１０％、２０％、２５％以上など）；（ｃ）生存または寿命を増やす変化；および／または（ｄ）疾患状態の存在に関連する一以上の生物マーカーにおける測定可能な減少（例えば、糖尿病性症状の量および／または重症度の減少）。治療上有効な量は、個々の対象と関連して、より一般的には実質的に同様な対象の集団（ＩＲＢＰ組成物にかかわる臨床試験に登録された同様の障害を有する多くのヒト患者、または、非臨床試験の面におけるＩＲＢＰを試験するために使用される同様な特徴セットを有する多くの非ヒト哺乳動物）に関連して、測定される。
【０１１６】
ＩＲＢＰｓはまた、予防上有効な量でホストに送達されてもよく、疾患／障害予防プログラムの一環として、さもなければ一般的な健康を増進のためであってよい。「予防上有効な量」は、活性化合物または組成物の量をいい、それは、そのような化合物または組成物に典型的に応答するホストにおいて必要な用量且つ時間に亘って有効な量であり、ホストにおいて所望の予防結果が達成される、または実質的に同様なホストにおいてそのような結果が典型的に達成できる量をいう。例示的な予防効果は、当該予防療法を受けていない同様の患者と比較して、障害の進展の可能性を低下すること、障害の強さまたは広がりを低下すること、切迫した障害の間の生存の可能性を増加すること、疾患状態の徴候を怒らせること、切迫した状態の広がりを減少することを含む。典型的には、予防用量は、疾患に先駆けてまたは疾患早期段階で使用されるため、当該予防上の有効量は、特定のＩＲＢＰの治療上有効な量よりも少ないであろう。予防効果はまた、ＩＲＢＰ組成物を受けていない実質的に同様な対象に比較して、発病を予防すること、発病時間を遅らせること、当該疾患の結果的な重症度を低下することを含む。
【０１１７】
もう一つの側面において、ＩＲＢＰｓは、生理学的に有効な量でホストまたは細胞に対して送達される。生理学的に有効な量は、活性薬剤の量であり、標準的にそのような薬剤に対して応答するホストに対する投与において、ＩＲ活性の調節（例えば、ＩＲリン酸化の調節、血中グルコースレベルの低下および／またはＩＲ関連情報伝達など）に関連する少なくとも一の生理学的な結果を誘導、促進および／または増強する量である。
【０１１８】
「治療」とは、本発明の治療学的に活性な化合物の有効量を、何れかの症状または疾患段階が進展することを防止するという目的を持って、またはすでに発展したそのような症状または疾患段階を緩和すること、寛解することまたは根絶すること（治すこと）の目的を持って送達するこという。当該用語「治療」は、従って、予防的な治療を含むことを意味する。しかしながら、本発明の治療法および予防法はまた、個々に、本発明の独立した側面と考えられる。
【０１１９】
１．薬学的に許容される担体
ＩＲＢＰは、一以上の意図される投与経路に適切な一以上の担体（希釈剤、賦形剤など）と組み合わせて、一以上のＩＲＢＰｓを含む薬学的に許容される組成物を製造する状況において、薬学的に許容される組成物を提供する。
【０１２０】
ＩＲＢＰｓは、通常の投与のために、例えば、乳糖、ショ糖、パウダー（例えば、デンプンパウダーなど）、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カルシウム、硫酸ナトリウムおよび硫酸カルシウム、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンおよび／またはポリビニルアルコールなどと混合されてもよく、並びに任意に更に錠剤化されてもよく、またはカプセルに包まれてもよい。或いは、ＩＲＢＰは生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド水溶液、エタノール、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、トラガカントゴム、および／または種々のバッファーに溶解されてもよい。他の担体、補助剤および投与様式は医薬品の分野において周知である。担体または希釈剤は、時期を遅らせる物質、例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレート単独または蝋若しくは他の機能的に同様な物質と共に含んでもよい。
【０１２１】
薬学的に許容される担体は、一般的に何れかおよび全ての適切な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌性および抗真菌性の薬剤、等張性および吸収遅延剤など、生理的にＩＲＢＰに適合するものが含まれる。薬学的に許容される担体は、水、生理食塩水、リン酸バッファー食塩水(ＰＢＳ)、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、並びにその何れかの組み合わせを具組む。多くの場合において、望ましくは等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムなどをそのような組成物中に含む。薬学的に許容される物質、例えば、湿潤剤または少量の補助剤、例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤またはバッファー、望ましくは当該ＩＲＢＰ、関連する組成物または組み合わせの貯蔵寿命または有効性を高める。医薬組成物生物の担体および他の成分のための適合性は、当該ＩＲＢＰ、関連する組成物または組み合わせの所望の生物学的性質における著しい負の影響がかけていることに基づいて決定できる（例えば、約２０％、１５％、１０％、５％または１％未満のＩＲ結合および／または活性化；または標的ホストにおける血中グルコースを低下する能力における低下）。
【０１２２】
本発明に従うＩＲＢＰ組成物、関連する組成物および組み合わせは、種々の適切な形態で与えられ、製造されおよび／または投与されてよい。そのような形態は、例えば、液体、半固体および固体投与量形態、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）など、分散系または懸濁液、乳液、ミクロエマルジョン、錠剤、丸剤、パウダー、リポソーム、デンドリマー(dendrimers)および他のナノ粒子（例えば、Baek et al.,Methods Enzymol.2003;362:240-9；Nigaverkar et al.,Pharm Res.2004 Mar;21(3):476-83を参照されたい）、微小粒子および坐薬を含む。何れかのＩＲＢＰ関連組成物のための最適な形態は、意図される投与様式、その組成物または組み合わせの性質、および治療学的な適用または他の意図される使用に依存する。剤形はまた、例えば、パウダー、ペースト、軟膏、ゼリー、蝋、油、脂質、脂質（陽イオンまたは陰イオン）含有ベシクル、ＤＮＡ複合体、無水吸水ペースト、水中油形および油中水形乳液、乳液、カーボワックス(登録商標)（種々の分子量のポリエチレングリコール）、カーボワックスを含む半固体ゲルおよび半固体混合物などを含む。何れの前述の混合物も、
同種のＩＲｓに対する当該ＩＲＢＰの結合がその剤形により著しく阻害されず、その剤形が生理学的に適合し、投与経路に耐えられるとの条件で、本発明に従う処置および療法に適切であってよい。例えば、パウエルらの文献（Powell et al."Compendium of excipients for parenteral formulation" PDA J Pharm Sci Technol.52:238-311(1998)）、およびその中の製薬化学者に周知の賦形剤および担体に関する更なる情報のための引用を参照されたい。
【０１２３】
詳細な側面において、ＩＲＢＰｓはリポソーム中で投与される。もう一つの側面において、ＩＲＢＰｓは、リポソーム中で一以上の第二の薬剤、例えば、一以上の抗糖尿病薬などと共に投与される。
【０１２４】
ＩＲＢＰ組成物はまた、ＩＲＢＰペプチドおよび適切なそのための適切な塩の何れかの適切な組み合わせを含む組成を含む。何れかの適切な塩、例えば、何れかの適切な形態（例えば、バッファー塩など）のアルカリ土塁金属塩をＩＲＢＰｓの安定化において使用される（好ましくは、典型的に塩の総計は、当該ＩＲＢＰの酸化および／または沈殿が回避されるような量である）。適切な塩は典型的に、塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、および塩化カルシウムを含む。塩基および一以上のＩＲＢＰｓを含む組成物もまた提供される。
【０１２５】
ＩＲＢＰ組成物の送達の典型的な様式は、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内および／または筋肉内投与など）による。一つの側面において、ＩＲＢＰはヒト患者に対して静脈内注入、により投与される。もう一つの側面において、ＩＲＢＰは筋肉内または皮下注射により投与される。上述した通り腫瘍内投与もまた、ある治療方において有用であってよい。
【０１２６】
従って、ＩＲＢＰｓは、例えば、固体製剤（例えば、顆粒、パウダー、噴出性粒子、または坐薬などを含む）、半固体形態（ゲル、クリームなど）、または液体形態（例えば、溶液、懸濁液または乳液など）に製剤化されてもよい。ＩＲＢＰｓは多様な溶液に適用されてもよい。本発明に従う使用に適切な溶液は、典型的に、滅菌、溶解された十分な量のＩＲＢＰおよび当該組成物の他の成分で、製造および貯蔵のための状態において安定なものであり、提案された適用のための対象に対して有害ではない。ＩＲＢＰは、通常の製薬操作、例えば、滅菌などに供してもよく、および／または通常の補助剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、バッファー等を含んでもよい。組成物はまた、溶液、ミクロエマルジョン、分散系、パウダー、マクロエマルジョン、リポソームまたは他の要求される高薬物濃度のために適切な構造として製剤化される。溶液の所望の流動特性は、例えば、コーティング、例えば、レクチンの使用により、分散系の場合において必要とされる粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用によって維持されてよい。延長された吸収の注射可能な組成物は、当該組成物に吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアレート塩およびゼラチンなどを含ませることにより凡そ齎される。本発明の薬学的に許容される組成物のこれらおよび他の成分が、有利な特性、例えば、改善された移行、送達、耐久力などを与える。
【０１２７】
医薬使用のための組成物は、種々の希釈剤、充填剤、塩、バッファー、界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−８０など）、安定剤（例えば、糖またはタンパク非含有アミノ酸など）、保存剤、組織固定剤(tissue fixatives)、可溶化剤および／または医薬市長のための組成物への包含に適切な他の物質を含む。適切な成分の例はまた、以下の文献、例えば、Berge et al., J. Pharm. Sci.,6661)1-19(1977); Wang and Hanson, J. Parenteral. Sci. Tech: 42, S4-S6(1988); 米国特許6,165,776および6,225,289；およびここで引用される他の文献に記載される。そのような医薬組成物生物はまた、保存剤、酸化防止剤または当業者に公知の他の添加剤を含む。更なる薬学的に許容される担体は、当該分野において公知であり、例えば、次の文献に記載される；Urquhart et al., Lancet,16,367(1980), Lieberman et al., Pharmaceutical Dosage Forms-Disperse Systems(2nd ed., vol. 3,1998); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms & Drug Delivery Systems(7th ed. 2000); Martindale, The Extra Pharmacopeia(31st edition),Remington's Pharmaceutical Sciences(16th-20th editions); The Pharmacological Basis Of Therapeutics, Goodman and Gilman, Eds.(9th ed.-1996); Wilson and Gisvolds'TEXTBOOK OF ORGANIC MEDICINAL AND PHARMACEUTICAL CHEMISTRY, Delgado and Remers, Eds.(10th ed. -1998) および米国特許5,708,025および5,994,106。薬学的に許容される組成物を製剤化するときの原則も、例えば、以下の例に記載される；Platt, Clin. Lab Med., 7:289-99(1987), Aulton, Pharmaceutics: The Science Of Dosage Form Design, Churchill Livingstone(New York)(1988), EXTEMPORANEOUS ORAL LIQUID DOSAGE PREPARATIONS, CSHP(1998),および"Drug Dosage", J. Kans. Med. Soc,. 70(1), 30-32(1969)。ＩＲＢＰ組成物および関連する組成物（例えば、ＩＲＢＰをコードする核酸またはベクターを含むＩＲＢＰをコードする核酸など）の特に投与に適切な追加の薬学的に許容される担体は、例えば、国際特許出願 WO 98/32859に記載される。
【０１２８】
ＩＲＢＰ組成物は、迅速な放出を防ぐであろう担体、例えば、制御された放出製剤、例えば、インプラント、経皮的パッチ、およびマイクロカプセルに入れられた送達系などと共に製造される。生分解性のある生物的適合性のポリマーも使用され、それらは例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物(polyanhydrides)、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル(polyorthoesters)およびポリ乳酸、並びにそのような組成物を提供するようなその何れかの組み合わせである。そのような組成物の製造方法は公知である。例えば、以下の文献を参照されたい：Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
【０１２９】
もう一つの側面において、本発明の組成物は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体（特定の経口投与製剤および方法はまた、本明細書の他の場所に個々に記載される）と共に経口投与される。当該化合物（および、もし所望なら他の成分）もまた、硬ゼラチンカプセルまたは軟シェルゼラチンカプセルに封入されてもよく、錠剤に加圧されてもよく、対象の食事に直接に混ぜてもよい。治療上の経口投与のために、当該化合物が賦形剤と共に組み込まれて、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、カシュ剤などの形態で使用される。本発明の化合物を非経口投与により投与するために、当該化合物をそれの不活性化を予防するための物質でコートする、またはそれの不活性化を予防するための物質と当該化合物を共投与することが必要かもしれない。
【０１３０】
活性生物としてのペプチドを含む医薬組成物の製造は、当該分野においてよく理解されている。典型的に、そのような組成物は注射可能な液体溶液または懸濁液の何れにでも製造されるが、注射に先駆けて液体に、溶液または懸濁液に適切な固体形態が製造されてもよい。当該製造はまた、乳液化されてもよい。当該活性治療用成分は、多くの場合、薬学的に（即ち、生理学的に）許容され、当該活性成分に適合する賦形剤と混合される。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびその組み合わせである。加えて、もし所望であれば、当該組成物は少量の補助物質、例えば、潤滑剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤を含み、これらは当該活性成分の効力を高める。
【０１３１】
ＩＲＢＰは医薬組成物に対して中和された生理学的に許容される塩形態として配合される。適切な塩は、酸付加塩（即ち、当該ペプチド分子の遊離型のアミノ基と形成される）を含み、無機酸、例えば、塩化水素酸またはリン酸、または有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などと形成された酸付加塩を含む。遊離型のカルボキシル基から形成された塩はまた、無機塩基、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄など、および有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、2-エチルアミンエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導される。
【０１３２】
（ここにおいて更に考察する）組み合わせ組成物の場合において、ＩＲＢＰｓは一以上の更なる治療剤（例えば、抗糖尿病薬、例えば、インスリン、インスリン類似体、目とホルモンまたは他の抗糖尿性ビグアナイド、グルカゴン受容体アンタゴニスト、スルホニルウレア、チアゾリジンジオン、アルファ−グルコシダーゼインヒビター、メグリチニド(meglitinide)、グルカゴン様ペプチド-1(GLP-1)、ＧＬＰ−１アナログなど）と共製剤化することも、および／または共投与することも可能である。そのような組み合わせ療法は、より低用量の当該ＩＲＢＰおよび／または共投与される薬剤が必要とされ、これは多様な単剤療法に関連する可能な毒性または合併症を回避するためである。
【０１３３】
Ｄ．治療的な適用
上述したように、ＩＲＢＰｓは個々に、または他の薬理学的な活性薬剤と組み合わせて投与される。そのような組み合わせ療法は異なる治療剤を含むと理解され、これに限定するものではないが、例えば、単一投与量形態または異なる、個々の投与量形態中で一緒に多剤を投与することを含む。当該薬剤が異なる投与量形態、異なる、個々の投与量形態に存在する場合、投与は、同時または略同時であってもよく、または何れかの予め決定された療法、当該異なる薬剤の投与を含む療法、に従えばよい。
【０１３４】
例えば、糖尿病または他の疾患、またはインスリン応答若しくは産生の低下、高脂血症、肥満、食欲関連症候群などに関連する症状の治療のために使用する場合、本発明の当該ペプチドは都合よくは、一以上の薬剤、これに限定するものではないが、インスリン、インスリン類似体、インスリン誘導体、グルカゴン様ペプチド-1または-2（GLP-1、GLP-2）、（例えば、WO 00/55119に開示されるような）ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−２の誘導体または類似体を含む薬剤、との組み合わせ療法において投与されてよい。ここで使用されるインスリン、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−２の「類似体」とは、適応できるような、インスリン、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−２の天然の配列に対応する一以上のアミノ酸の置換を含むペプチドをいい；ここで使用されるインスリン、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−２の「誘導体」とは、そのアミノ酸配列の一以上の更なる化学的修飾を受けた天然または類似体のインスリン、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−２ペプチドをいい、特に天然配列に対応するペプチドをいう。インスリン誘導体および類似体は、例えば、次の文献に開示される；U.S. Patent Serial No.5,656,722, 5,750,497, 6,251,856および6,268,335。幾つかの態様において、当該組み合わせ薬剤は、ＬｙｓＢ２９（ε-ミリストイル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９（ε-テトラデカノイル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンおよびＢ２９−Ｎε−（Ｎ−リトコリル−γグルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンからの一つである。また、適切な組み合わせ療法は、非ペプチド抗高血糖剤、抗高脂血症剤などの当該分野で公知の薬剤である。
【０１３５】
一つの態様において、本発明は、糖尿病または関連する症候群または関連する状態（例えば、グルコースレベルの割合の減少関連(reducing the rate of glucose level-related)および／または糖尿病関連脳卒中、心疾患、腎疾患、失明、および／または四肢の感覚損失など）を治療する方法であって、少なくとも一つのＩＲＢＰの有効量を(遺伝子発現により、同種ペプチドの送達により、または典型的には上述したとおりの一以上のＩＲＢＰｓおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的に許容される組成物の投与により)送達することを具備する治療方法を含む。もう一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物（例えば、組み合わせ組成物など）の、１型または２型糖尿病の治療において使用される医薬の製造における使用を提供する。
【０１３６】
ＩＲＢＰｓは一般的に１型および２型、即ち、インスリン依存性糖尿病(IDDM)およびインスリン非依存型糖尿病(NIDDM)の両方の治療において使用できる。
【０１３７】
例示的な組み合わせ治療の側面において、本発明は、糖尿病を治療する（例えば、ホストにおいて関連する一以上の症状を減少すること、および／またはホストに対して、同様なホスト集団の少なくとも実質的な割合において治療的に有効であることが示された組成物の量を提供する）方法であって、第一の量のＩＲＢＰおよび第二の量の長時間作用型インスリン類似体、例えば、ＬｙｓＢ２９（ε-ミリストイル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９（ε-テトラデカノイル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンまたはＢ２９−Ｎε−（Ｎ−リトコリル−γグルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンを送達することを具備する方法、ここで、当該第一および第二の量は共に当該症候群の治療に有効である、を提供する。ここで使用される通り、長時間作用型インスリン類似体は、天然のヒトインスリンに比較して遅延性のプロファイルを示すものであり、例えば、U.S.Patent Serial No.6,451,970に開示される通りである。もう一つの側面において、本発明は、治療学的に有効な少なくとも一のＩＲＢＰおよび少なくとも一つのインスリンまたはインスリン類似体の組み合わせを含む組み合わせ組成物の糖尿病の治療、例えば、１型若しくは２型糖尿病の治療になどにおいて使用される医薬の製造における使用を提供する。一以上のＩＲＢＰｓおよび一以上の長時間および／または短時間作用型インスリン類似体の組み合わせ含む同様の組成物はまた、治療学的方法、例えば、糖尿病の治療などのために適している。
【０１３８】
一つの側面において、本発明は、それを必要とする患者における２型糖尿病関連する症候群および／または基礎をなす状態を治療する方法を提供する方法であって、（当該糖尿病および／またはその進展の実質的な危険性の診断のために）当該患者に対して治療的および／または予防的有効量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を送達し、それによりそのような症状および／または状態を治療することを具備する方法を提供する。詳細な側面において、本発明は、２型糖尿病および高インスリン血中レベル(高インスリン血症)を有する患者を治療する方法を提供する。一つのそのような側面において、当該患者は肥満している。もう一つの側面において、当該患者はまた、または当該患者は或いはインスリン抵抗性の遺伝子型／突然変異を含んでいる。
【０１３９】
もう一つの側面において、本発明は、インスリン／ＩＲ関連高血圧を有する患者における血圧を低下する方法であって、治療上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を投与、または別な方法により送達し、それにより当該患者における血圧を減少することを具備する方法を提供する。
【０１４０】
もう一つの側面において、本発明は、
Ｘ症候群に症状および／または基礎をなす状態または患者におけるその様相（例えば、高脂血症、高血圧および／または肥満など）を治療する方法であって、治療上および／または予防上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を投与または別な方法により送達し、それによりＸ症候群またはＸ症候群状態を治療することを具備する方法を提供する。
【０１４１】
更なるもう一つの側面において、本発明は、患者における非糖尿病性ＩＲ媒介状態、障害、または疾患、例えば、ＩＲ関連神経変性障害；ＩＲ関連非糖尿病性自己免疫疾患などを治療する方法であって、治療上または予防上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を当該患者に投与し、そのような状態／症状を治療することを具備する方法を提供する。
【０１４２】
もう一つの側面において、本発明は、それを必要とする患者における体重増加を防止する方法であって、治療上または予防上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を当該患者に投与し、ＩＲ関連の体重増加を防止することを具備する方法を提供する。
【０１４３】
関連する側面において、本発明は、治療上または予防上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を患者に対して投与し、（当該患者の体重を安定および／または減少することにより）肥満またはそれに関連する状態を治療することを具備する肥満を治療する方法を提供する。
【０１４４】
もう一つの側面において、本発明は、高インスリン血症、低血糖症、低カリウム血症、および／または低リン酸血症に関連する疾患またはそれらにより引き起こされる疾患を患う患者を治療する方法であって、治療上または予防上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を当該患者に投与し（または別な方法により送達し、その場合は隅から隅までとなるように送達し）、そのような状態／症状を治療することを具備する方法を提供する。
【０１４５】
もう一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物（例えば、組み合わせ組成物など）の前述の状態の何れかの治療において使用される医薬の製造における使用を提供する。
【０１４６】
一つの一般的な側面において、本発明は、個体においてグルコースレベルを調節する方法であって、生理学的に有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を投与し、それにより当該患者における血中グルコースレベルを検出可能な程度に調節することを具備する方法を提供する。もう一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物（例えば、組み合わせ組成物など）の血中グルコースレベルの当該減少において使用される医薬の製造における使用を提供する。
【０１４７】
もう一つの一般的な側面において、本発明は、ＩＲ活性を媒介する方法であって、生理学的に有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を投与し、それによりＩＲを提供する細胞において、応答性ＩＲが、ＩＲ媒介活性または反応を誘導、促進、および／または増強するのに十分な量および条件下で結合することを具備する方法を提供する。例えば、ＩＲＢＰｓはホストに対して送達され、サイト１またはサイト２に対して結合し、それによりインスリンまたはインスリン類似分子を他のサイトに方向付け、それによりインスリンまたはインスリン類似体治療を修飾する。
【０１４８】
更なる面において、本発明は、患者、例えば、患者の内皮細胞などにおける酸化窒素産生を調節する；ＲＡＳ、ＲＡＦ、ＭＥＫおよび／またはマイトジェン活性化タンパク質（MAP）キナーゼ経路調節する；血管組織成長および／または平滑筋、単球、マクロファージおよび／または内皮細胞成長および／または遊走を調節する;プラスミノーゲンアクチベーターインヒビタータイプ１(PAI-1)の産生を刺激する；エンドセリン産生を調節する；ＩＲ関連前アテローム硬化性経路生物学的イベント(proatherosclerotic pathway biological events)を調節する；ＩＲ関連炎症を調節する；動脈障害の危険を治療および／または減少する；アテローム性動脈硬化を治療および／または予防する；および／またはＩＲ関連炎症分子、例えば、患者の血管壁のＬＤＬコレステロールを減少する；ことを、治療上または予防上有効な量の本発明のＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を当該患者に対して送達またはさもなくば投与し、そのような生理反応を誘導、促進および／または増強することによって行う方法を提供する。
【０１４９】
１．送達および投与方法
一般的に、ＩＲＢＰｓは、何れかの適切な方法、例えば、標的ホスト細胞における当該ＩＲＢＰの産生をコードする核酸からの発現により（例えば、ＩＲＢＰをコードする核酸から、誘導プロモーターの調節下で、適切な遺伝子導入ベクター、例えば、標的化および複製を欠く遺伝子導入ベクターなどに含まれての発現などにより）送達できる。典型的には、ＩＲＢＰｓはレシピエントホストに対してＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物を直接投与することにより送達される。従って、ＩＲＢＰｓおよびＩＲＢＰ組成物は、医薬組成物であって、タンパク質およびペプチドを送達するための当該技術分野で公知の標準的な担体を含む医薬組成物として投与されてもよく、および／または遺伝子治療により送達されてもよい。一般的に、且つ適切である場合、用語、投与および送達は、ここでは、もう一方に対する補助を提供すると解釈されるべきであるが（例えば、一般的にはＩＲＢＰをコードする核酸は裸のＩＲＢＰｓを標的ホスト組織に送達するために使用でき、同様に或いは、ＩＲＢＰタンパク質を投与するために使用できると認められるべきであるが）、しかしながら、またそれぞれのそのような方法は、何れかの特定の分子に関して独特であること、および幾つかの分子（例えば、分解抵抗性有機部分を含む複合ＩＲＢＰｓなど）は唯一、送達／投与の一定の形態に対して受け入れられることが認められるべきである。タンパク質、核酸および関連する組成物（例えば、ベクターおよびホスト細胞など）を投与するための方法は周知であり、適宜、簡単にのみここでは記載する。
【０１５０】
ＩＲＢＰ組成物、関連する組成物、および組み合わせ組成物は、何れかの適切な経路、例えば、経口、粘膜の、バッカルの、鼻腔内の、吸入の、静脈注射の、皮下の、筋肉内の、非経口の、または局所的な経路などを経て投与されてよい。そのようなタンパク質はミニポンプまたは他の適切な装置を介して連続的に投与されてもよい。
【０１５１】
ＩＲＢＰまたは他のＩＲＢＰは一般的に、当該疾患状態がある限り、当該タンパク質が当該状態の悪化を止めるまたは改善させるという条件で、投与されるであろう。当該ＩＲＢＰは一般的に、薬学的に許容される組成物の一部分として、例えば、ここの他の場所において詳細に記載する通りに、投与されるであろう。
【０１５２】
ＩＲＢＰはまた、予防的に、疾患、障害、または状態であって、そのような治療が有効であるものを予防するために投与または別の方法により送達されてよい。例えば、ＩＲＢＰは、重篤な糖尿病状態（例えば、糖尿病関連失明、切断手術または他の状態の始まりなどの顕著な危険）からの軽減で患者に投与または別の方法により送達される。
【０１５３】
一般的に、ＩＲＢＰまたは他のＩＲＢＰ（または関連する組成物、例えば、ＩＲＢＰをコードする核酸を含むベクターなど）は何れかの適切な経路により投与されてよいが、典型的には、非経口的に、通常の薬学的に許容される担体、補助剤など(安定剤、崩壊剤、抗酸化剤など)を含む投与量単位製剤で投与される。ここで使用される場合、用語「非経口的」は、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、胸骨内、腱内(intratendinous)、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、注入技術および腹腔内送達を含む。従って、一つの側面において、ＩＲＢＰ組成物は静脈内または皮下で、本発明の治療方法の実行において投与される。注射の経路はまた、筋肉への注射(筋肉内  IM)；皮膚の下への注射（皮下(s.c.)）；静脈への注射（静脈内(IV)）；腹腔への注射(腹腔内(IP))；および他の皮膚への／皮膚を通じた送達（通常は多様な注射による皮内送達、これは微粒子銃注射を含んでよい）を含む。
【０１５４】
一つの側面において、本発明は、ホストにおけるＩＲ活性を調節する方法であって、医混合物中に薬学的に(即ち、生理学的に)許容される担体、賦形剤、または希釈剤、および一以上のＩＲアゴニストＩＲＢＰｓを活性剤成分(これは更に第二の活性薬剤と他の箇所に記載された通りに組み合わされてもよい)として含む組成物の投与を具備する方法を提供する。
【０１５５】
本発明の医薬組成物は、経口または非経口経路により全身的に投与されてもよい。非限定的な非経口経路の投与は、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、経皮的に、吸入、鼻腔内、動脈内、くも膜下腔内、経腸、舌下または直腸内を含む。典型的なアミノ酸配列は不安定な性質であるため、非経口投与が都合がよい。有利な投与方法は、例えば、鼻用または気管支吸収用のエアロゾル；静脈内、筋肉内、胸骨内または皮下注射；および経口投与のための化合物などを含む。
【０１５６】
静脈内投与は、例えば、単位投与量の注射により行うことができる。当該用語「単位投与量」は、本発明の医薬組成物に対する言及において使用される場合、ヒトのための１単位用量として適切な物理的に分離された単位をいい、各単位は、必要とされる希釈剤；即ち、濃縮されたまたは純粋な物質を希釈し、当該物質を使用のために正しい（希釈された）濃度にするために使用される液体；に関して所望の治療効果を生じるために計算され予め決められた量の活性物質を含む。注射剤投与のために、当該組成物は、滅菌溶液または懸濁液中にあり、または薬学的および生理学的に許容される水性または油性の溶媒で乳化されてもよく、これらは保存剤、安定剤および当該溶液または懸濁液に当該レシピエントの生体流体（即ち、血液）との等張性を与えるための物質を含んでよい。
【０１５７】
使用のために適切な賦形剤は、水、リン酸バッファー生理食塩水、水性塩化ナトリウム溶液、デキストロース、グリセロール、希エタノールなど、およびその混合物である。例示的な安定剤はポリエチレングリコール、タンパク質、糖類、アミノ酸、無機酸および有機酸、これらはそれら自身でまたは混合物として使用されてもよい。使用される投与の総量および量並びに経路は、個々を基準に決定され、当業者に公知の同様な種類の出願または記載において使用される当該各量に一致する。
【０１５８】
医薬組成物は典型的には投与量剤形に適する方法で、治療上有効な量で投与される。投与されるべき量は、治療されるべき対象、当該対象の免疫系の当該活性成分を利用する能力、および所望のＩＲの程度および種類に依存する。投与されるべき必要な活性成分の正確な量は、医師の判断に依存し、各々の個体特有であってよい。しかしながら、適切な投与量は、一日当たり個体の体重１ｋｇ当たり約１０〜２００ｎｍｏｌの活性ペプチドの範囲であってよく、投与経路に依存してよい。最初の投与およびブースター注射のために適切なレジメはまた可変的であるが、しかしながら、一時間以上の間隔での最初の投与とそれに続く繰り返し投与により、続く注射または他の投与により、代表されてよい。或いは、血中でピコモーラー濃度（例えば、大凡１ｐＭ〜１０ｎＭ）を維持するのに十分な継続的な静脈内注入が考えられる。例示的な製剤は、ＩＲアゴニストＩＲＢＰをソディウムブスルファイトＵＳＰ(3.2mg/mL);エデト酸二ナトリウムＵＳＰ(0.1mg/mL)；および注射用水q.s.a.d(1mL)の混合物中で含む。
【０１５９】
もう一つの詳細な側面において、ＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物は、注射用ポンプにより液体中またはそのような装置に使用するために適切な製剤中で送達される。ＩＲＢＰはまた、ペン、例えば、現在インスリン製品を送達するために使用されているようなペンにより投与される。経皮性パッチ（例えば、マトリックスパッチ中の薬物など）の使用も、ＩＲＢＰｓの送達のために使用できる（例えば、受動性送達により、またはイオン注入送達などを介して）。
【０１６０】
医薬製剤の製造における更なる手引きを、例えば以下の文献に見ることができる；Gilman et al.(eds),1990,Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th ed., Pergamon Press; および Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., 1990, Mack Publishing Co., Easton, PA; Avis et al.(eds), 1993, Pharmaceutical Dosage Forms: Publishing Co., Easton, PA; Avis et al.(eds), 1993, Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Dekker, New York; Lieberman et al.(eds), 1990, Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Dekker, New York.
ａ．例示的な投与量および投与戦略
上述した通り、本発明の組成物は、「治療上有効な量」または「予防上有効な量」のＩＲＢＰを含んでよい（または、ＩＲＢＰおよび第二の成分を含む組み合わせ組成物においては第一および第二の量；二つのＩＲＢＰｓと第三の薬剤またはＩＲＢＰと二つの第二の薬剤を含む組み合わせ組成物の場合には第一、第二および第三の量；などを含んでよい）。詳細な側面をよりよく説明するために、投与量の原理の詳細な考察をさらにここで提供する。
【０１６１】
本発明の実施において、使用される当該ＩＲＢＰの量または投与量範囲は、同種のＩＲの結合するＩＲＢＰに関連する生理反応を有効に誘導、促進または増強するものである。一つの側面において、当該投与量範囲は、使用するＩＲＢＰが、ＩＲ活性により少なくとも部分的に調節されるものに関連する状態、例えば、糖尿病の状態などに苦しむ、またはそのような状態が進展する実質的な危険にある患者における重要な中程度の効果を誘導、促進または増強するように選択され、それの効果は、その同種ＩＲの活性化、シグナリング、および／または生物学的修飾（例えば、リン酸化など）に関連する。
【０１６２】
更なるもう一つの側面において、活性成分（例えば、ＩＲＢＰ）の１日当たりの投与量は体重１ｋｇ当たり約０．０1〜１００ｍｇが患者に対して提供される。通常、１日約１〜約６回に分けた投与量で与えられる、または持続放出の形態において１日当たり体重１キログラム当たり約１〜約５、または１〜１０ミリグラムが所望の結果を得るために有効であってよい。
【０１６３】
非限定的な例として、ヒトまたは動物におけるＩＲ関連病理の治療は、ＩＲＢＰ(s)の１日当たりの投与量が約０．１−１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６，１７、１８，１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０日のうちの少なくとも１、或いは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０週のうちの少なくとも１で
またはその何れかの組み合わせで、単回投与量または約２４、１２、８、６、４または２時間毎に分けた投与量、または何れかのその組み合わせを使用する投与が提供される。
【０１６４】
一つの側面において、本発明の方法は、二つの異なるＩＲＶＰｓを一ヶ月の期間に亘り、それにより、第一のＩＲＢＰの継続した使用が当該患者に対して有害になるために、第一のＩＲＢＰの第一の送達後約１−３週（例えば、約１０日）に開始する第二のＩＲＢＰを含む治療を開始すること、または当該ホストにおける第一のＩＲＢＰに対する顕著な免疫反応が生じる何れかの時間で、投与または別の方法で送達することを具備する。
【０１６５】
ｂ．経口送達製剤
本発明の特に有利な側面は、治療上および／または予防上有効な量の一以上の消化酵素安定化ＩＲＢＰｓ（一以上の通常の分解抵抗性アミノ酸残基および／または分解抵抗性部分を上述通り含む）を含み、経口投与のために製剤化された薬学的に許容される組成物生物、および組成物のような組成物生物のＩＲ活性の調節における使用（例えば、糖尿病または関連する状態、例えば、ＩＲ媒介代謝障害などを治療する面において）において例示される。比較的小さいサイズの典型的なＩＲＢＰおよびそれ自身おけるおよびそれ自身の簡単な構造（例えば、多くのＩＲＢＰダイマーの場合には約３０アミノ酸残基の単鎖、モノマーの場合は約５-２０残基の単鎖）はそのようなタンパク質の経口送達をヒトインスリン(それは５１残基の二重鎖であり、多くの場合より多くの種類のマルチマー形態で送達される）に比べて助けると考えられる。Ｎおよび／またはＣ末端ブロッキング修飾の追加(特に、例えば、それぞれアセチル化およびアミド化)が、そのような分子の経口で送達される能力を、インスリンに比べて増加すると考えられる。分解抵抗性特殊アミノ酸残基および／または有機部分もまた、または或いは、顕著にそのようなペプチドの経口経路による送達される能力を、現在公知のインスリンおよびインスリン類似体に比べて増大すると考えられる。そのような特徴を有する組み合わせを含むＩＲＢＰｓは特に抗糖尿病薬に適切な経口送達のために遊離であると考えられる（例えば、少なくとも一つの、典型的には少なくとも二つの分解抵抗性残基および／または部分、例えば、Ｄ-アルギニン残基など、および少なくともＮまたはＣ末端ブロッキングを含むＩＲＢＰｓ、典型的には各々アセチル化およびアミド化によりブロッキングが、経口投与のために特に適切であると期待される）。
【０１６６】
一つの側面において、本発明はＩＲＢＰ経口製剤であって、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、よりも多い、非経口注射に比べての経口投与における相対的生物学的利用能を示すことが可能なＩＲＢＰ経口製剤を提供する。ＩＲＢＰｓの本来備わっている経口送達能力は、ＩＲＢＰｓと当該分野において公知の方法の経口送達増強組成物との配合により増強でき、それは経口送達および小型ペプチド（例えば、インスリンのサイズおよびそれよりも５アミノ酸長を超えて小さいペプチドなど）の有効性を増強する上で有効であることが示されている。そのような組成物はもう一つの重要な本発明の面である。
【０１６７】
一般的に、経口製剤は、タンパク分解活性の阻害または調節；当該ペプチドを分解する；当該ペプチドのパラセルラーおよび／またはトランスセルラーの輸送を増強する；粘膜障壁（特に迅速溶解形態およびエアロゾル送達またはスプレー送達経口投与形態）を通過するペプチドの浸透を改善する；および／または循環における当該ペプチドの半減期を増加する（特にペプチドは、治療学的効果のために持続して存在することを求める）；ことを求める。装置がそのような送達を助ける。例えば、ＩＲＢＰ組成物は、頬側粘膜および咽頭中央部領域、ここにおいて当該製剤の吸収が起こる、に対して当該組成物を送達可能にするエアロゾルスプレー装置により送達するように製剤化できる。例えば、インスリンなどの小型ペプチドの送達のために使用されるそのような装置の例は、当該分野で公知である。
【０１６８】
一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰ経口製剤組成物であって、ここで、ＩＲＢＰは担体分子に対して複合しているか、またはカプセルに包まれており、それにより当該ＩＲＢＰは当該安定化複合またはカプセル化物質なしのＩＲＢＰの安定性に比べて安定性が改善される。ＰＥＧ複合体および典型的な安定化および送達増強複合物質の例。ＩＲＢＰｓは、例えば、ＧＩ吸収の増加および／またはタンパク分解性の当該ＩＲＢＰの分解を減少するＰＥＧベースの両親媒性のオリゴマーに対して複合される。もう一つの例示的側面異おいて、カルシウムホスフェート-ＰＥＧ-インスリン-カゼイン(ＣＡＰＩＣ)粒子で包んでＩＲＢＰ組成物は、経口送達形態として使用される（微粒子およびナノ粒子形態を更にこの説明の他の場所に記載する）。
【０１６９】
一つの側面において、ＩＲＢＰは、受動的なトランスセルラー輸送を容易にする送達剤または担体に対して複合化する。望ましくは、そのような担体または薬剤は、循環中の（例えば、低いｐＨ状態への暴露をあるレベルに到達することにおいて）当該ＩＲＢＰとは関係ないように工作される。
【０１７０】
もう一つの側面において、ＩＲＢＰは、一以上の経口送達促進賦形剤、例えば、コール酸ナトリウムおよび／またはトリプシンインヒビターなどを含む腸溶性のコートをされたマイクロカプセルまたは錠剤に製剤化される。
【０１７１】
更なる側面において、ＩＲＢＰ経口製剤は、当該ペプチドの溶解性を増加し、腸粘膜との相互作用を減少し、および／またはパラセルラー輸送を増強する界面活性剤成分の有効量を含んで提供される。
【０１７２】
更なるもう一つの側面において、ＩＲＢＰは、経口送達を促進する一以上の（典型的には幾つかの）低分子量(LMW)ポリマー複合体に複合し、例えば、関連／同様の裸のＩＲＢＰｓに関する酵素分解に対して抵抗性を付与する、および／または（例えば、胃腸管経路に沿って、および血流へ吸収するための障壁を構成する細胞および組織の水および脂肪質部分を通過しての拡散を改善して）よりよい胃腸管輸送を可能にする。
【０１７３】
経口送達増大小型ペプチド複合体の構造のための組成物、方法および関連した原理は、米国特許5,359,030; 5,438,040; 5,681,811; および6,309,633に提供される。
【０１７４】
もう一つの側面において、本発明は、アミノ酸を基礎とするカプセル系を含む経口送達ＩＲＢＰ製剤であって、当該ＩＲＢＰの腸の裏打ち輸送を促進し、酵素分解を阻害する製剤を提供する。
【０１７５】
更なるもう一つの側面において、本発明は、ＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物の脂質またはリポソームカプセル包入を含む経口送達ＩＲＢＰ製剤を提供し、これは、上皮性関門を介した伝達を促進し、および／または当該ＩＲＢＰを酵素分解から守る。望ましくは、そのような脂質製剤は、医薬組成物の口腔粘膜による顕著な吸収を促進し、それにより「初回通過」効果を避ける。
【０１７６】
もう一つの面において、本発明は、ＩＲＢＰ経口送達製剤であって、ＩＲＢＰがマイクロカプセルに含まれる製剤を提供し、それは直接投与されても、または直接経口投与または経口送達装置による投与のためのカプセル、パケットなどに入れられて投与されてもよい（ここにおいて一般的に記載される他の経口送達形態は、そのような方法によって良好にホストに対して送達される）。詳細な側面において、本発明は、アルギネートミクロスフェアで構成されるＩＲＢＰ経口送達剤形を提供する。望ましくは、当該アルギネートは天然に存在するアルギネートであり、ＵＳ ＦＤＡにより安全であると一般的にみなされる通りに分類され、任意にまた、上部消化管の粘膜でのタンパク分解効果を誘導または促進する。もう一つの側面において、コートされた結晶製剤が提供される。
【０１７７】
突出したスフェロナイゼーション(spheronization)は、高濃度の活性物質を高薬物濃度ペレットに含ませることを可能にし、ＩＲＢＰ製剤に対して適用することが可能である。
【０１７８】
もう一つの側面において、ＩＲＢＰ組成物は、ＩＲＢＰ組成物は、液体経口投与のための壜または他の容器中（例えば、単位用量の容器など）のコートされた粒子のドライシロップ懸濁液として提供される。
【０１７９】
一般的には、ここにおいて記載される製剤は、持続放出剤形、味をマスクした、または腸溶コートの組成物である。
【０１８０】
もう一つの側面において、本発明は、経口投与用の比較的硬いゼラチンカプセル中の半固体マトリックス系を提供する。典型的には、そのようなカプセルは更に、送達促進剤、例えば、脂質ペプチド送達系を含む。コートされた微粒子を含む軟ペレット錠もまた、本発明により提供される。水不活性および／または脂肪不活性なマトリックス錠は、もう一つの潜在的に適切な経口送達形態である。典型的には、そのような錠剤はコートされた微粒子のＩＲＢＰ組成物と、任意のペプチダーゼインヒビターおよび／または浸透増強剤、または他の適切な賦形剤を含む。適せな浸透増強剤は界面活性剤、脂肪酸、胆汁塩、クエン酸塩、およびキレーター（例えば、ＥＤＴＡなど）を含むが、他の適切な浸透増強剤もまたこれらの組成物において、またはここで記載された他の経口送達形態に含まれる。例えば、シクロデキストリンを使用して、ＩＲＢＰ微粒子、複合体または他の薬剤形態の浸透増強してもよい。
【０１８１】
更なる面において、本発明は、生物接着性ポリマーまたは他の生物接着性物質を含むＩＲＢＰ組成物を提供し、それは典型的にＧＩ管との関連を促進にする。そのようなポリマーの例は、ポリカーボフィルおよびキトサンを含む。
【０１８２】
既に言及したように、担体系、例えば、ナノ粒子、ミクロスフェア、リポソームなど（例えば、小型単層ベシクル(SUVs);アルブミンコーティングナノ粒子;メチルメタクリレートコーティングなの粒子；およびアルブミンコーティングミクロスフェア(例えば、アルブミン／酸化鉄磁気および目標を定めることが可能なミクロスフェアまたは他の目標を定めることが可能な微粒子／ナノ粒子製剤)など）もまた、または或いは使用し、IRBP組成物の患者に対する経口投与を促進する。そのような製剤はＧＩ管の種々の領域からの吸収を増強する、および／またはＩＲＢＰ組成物の分解を防止するように工作されてもよい。
【０１８３】
乳剤およびミクロエマルジョンもＩＲＢＰｓの経口送達剤形として使用される。例えば、オレイン酸、ガドレイン酸、エルカ酸、リノレン酸、リシノール酸、アラキドン酸、そのような酸のグリセリルエステル、オレイルアルコール、ｄ−アルファ−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート、それらの何れかの組み合わせ、または同様な分子；断続的な水性親水性相；および少なくとも一つの界面活性剤(例えば、ポロキサマー124、ポリグリコライズされたグリセリド、ソルビタンラウリレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、または同様な界面活性剤がそのような乳剤および関連するプレエマルジョン濃縮物を含む)を含む疎水性相を含む油中水乳液を分散疎水性相（当該疎水性相は典型的に約５−１０wt%の乳剤）のために、ＩＲＢＰを含む組成物、これはアルコール、塩溶液などを含んでよい）を油中水乳剤として、ＩＲＢＰ組成物の経口送達を促進することにおいて使用してもよい。乳剤は、腸溶コーティング物質でコーティングされてよく、これは、本発明の経口送達製剤のための適切な他のコーティング物質に関して言及したとおり酸性水性環境において溶解してもよい。
【０１８４】
もう一つの側面において、本発明は、チオレートポリマー薬物担体マトリックスまたはポリマーと関連付けられたＩＲＢＰを含む経口送達製剤を提供する。そのようなポリマーの例は、2−リミノチオレーンである。任意に、酵素阻害剤(例えば、ボーマン-バーク-インヒビターおよび／またはエラスタチナルなど)が当該複合物の当該キトサン組成物に対して複合される。更にまた、または或いは、浸透メディエーターをそのようなキトサンから形成された錠剤形態の当該ＩＲＢＰ組成物に含ませてもよい。当該ポリマーにおけるチオール基の固定は、そのような剤形の当該粘膜付着／密着する特徴を増強してよい。
【０１８５】
カプセル包入コートは、薬学的に活性な成分、親水性界面活性剤、親油性界面活性剤、およびトリグリセライドなど、他の異なる組み合わせを含むことも可能である。持続放出経口送達系および／または経口投与投与量形態のための腸溶コーティングは、また、コンテンプレートされてもよく、例えば、これらは以下の文献に記載される：U.S. Pat. No. 4,704,295 issued Nov. 3, 1987, U.S. Pat. No. 4,556,552 issued Dec. 3, 1985, U.S. Pat. No. 4,309,404 issued Jan. 5, 1982 and U.S. Pat. No. 4,309,406 issued Jan. 5, 1982。更なる例示的物質はここの他の箇所に記載される。
【０１８６】
更なる側面において、ハイドロジェルを含むＩＲＢＰ経口送達形態が提供される。ＩＲＢＰｓは、ポリ（メタクリル酸−ｇ−エチレングリコール）のハイドロゲル中に組み込まれ、経口的に送達される。ＩＲＢＰｓはまた、ハイドロゲルトと複合してもよい。ｐＨ反応性複合体ハイドロゲル、例えば、ペンダントグルコース（P(MAA-co-MEG)）を含むハイドロゲルまたはグラフトＬＭＷ（例えば、約200MN）ＰＥＧ鎖（P(MAA-g-EG)）が、IRBP経口送達剤として使用されてもよい。
【０１８７】
ナノスフェア、ミクロスフェアおよび他のナノ粒子／微粒子はクロスリンクしたネットワークのメタクリル酸から形成されてもよくおよび／またはＰＥＧを伴うアクリル酸グラフトが有利な経口送達製剤であってもよい。そのようなナノスフェアに低いｐＨ（例えば、約３）で、しかしながら放出可能な薬剤は生理学的なｐＨ（例えば、約７）で薬物製品を閉じ込める方法は、当該分野で公知である。裸のおよび複合された小型ペプチド送達および放出方法および原理のための更なる例示的微粒子製剤は、例えば、US Patent 6,191,105に発表されている。
【０１８８】
経口送達剤形はまた、エアロゾル、スプレーおよび乾燥パウダーの群から選択される吸入用組成物として提供されてもよい。そのような本発明の医薬製剤は、例えば、以下の文献に記載されるネブライザーを私用してエアロゾルスプレーの形態で投与されてもよい；U.S. Pat. No. 4,624,251 issued Nov. 25, 1986; U.S. Pat. No. 3,703,173 issued Nov. 21, 1972; U.S. Pat. No. 3,561,444 issued Feb. 9, 1971 and U.S. Pat. No. 4,635,627 issued Jan. 13, 1971。エアロゾル送達の他のシステムは、例えば、Newman, S. P. in Aerosols and the Lung, Clarke, S. W. and Davia, D. eds. pp. 197-224, Butterworths, London, England, 1984に記載されるプレスライズド・メータード・ドーズ・インヘラー(pressurized metered does inhaler (MDI))およびドライパウダーインヘラーを本発明を実施する際に使用してもよい。
【０１８９】
更なる側面において、ＩＲＢＰ組成物は、粘膜付着性腸用パッチとして製剤化されてもよく、それは患者の全身循環にＩＲＢＰ(ｓ)の治療用量を送達するために設計される。そのような腸用パッチは、粘膜近くに関連するＩＲＢＰを局在化させ、タンパク分解からそれを保護するために考えられている。そのようなパッチの腸に対する安全な接着は、インスリン製剤で示されており、そのようなパッチは、ペプチド薬物送達のためにゆうこうであることが示されている。
【０１９０】
ここに記載される当該経口送達剤形は、明確にここに記載される新規ＩＲＢＰｓ、その変異体（ここで記載される通り）、先の特許文書に記載されるＩＲＢＰｓからの誘導体（本発明の側面である一以上の変異体により修飾されるとおり）に対して適用され、そのような非修飾および以前に特徴付けられたＩＲＢＰｓをそのような組成物に含むことが結果として経口投与における有効性を増強する限り、更に前の特許文書に記載される非修飾のＩＲＢＰｓにさえも適用される。本発明の様々な方法におけるそのような組成物の使用は、本発明の更なる面である。
【０１９１】
ｃ．肺送達剤形
ここにおいて既に記載したとおり、本発明はまた、ＩＲＢＰｓまたはＩＲＢＰ組成物（例えば、ＩＲＢＰｓおよび／またはＩＲＢＰｓと第二の薬剤、例えば、第二の抗糖尿病剤、例えば、一以上のインスリンまたはインスリン類似体を含む組成物）の肺送達のための製剤を提供する。ＩＲＢＰｓは直接に肺に投与されてもよく、（送達のこれらの形態のためのそのような分子の上述した有利な特徴のために）標準的な医薬製剤において肺に対して投与されてもよく、しかし更に典型的には、肺送達のために工作された剤形、例えば、吸入のためのエアロゾルとして送達される粒子などが投与される。ＩＲＢＰ組成物は、例えば、ドライパウダー（およびブリスターパックのような送達前の適切な組成物における貯蔵される）インヘラーによる投与のためのドライパウダーとして製造される。そのような系のための乾燥剤形における当該粒子の粒子サイズは、典型的に直径約５μｍ未満であり、そのような粒子は典型的に薬物組成物のために約９０％以上の純度である。そのような組成物は、公知の「ガラス安定化技術」を介して製造される。或いは、ＩＲＢＰ組成物は、水性組成物に製剤化され（また、任意にブリスターパックに貯蔵され）、水性ミストインヘラー（例えば、適切な用量を確実にするように工作されたマイクロプロセッサー制御水性ミストインヘラー）により投与される。そのような装置は、従来のネブライザーよりも少なくとも５倍、例えば、約１０倍の送達の増加を提供する。多くのそのような装置および同様な装置がペプチド薬物の肺送達のために開発されている。製剤もまた、送達における長時間のＩＲ調節活性のために工作され、例えば、粒子薬物の場合、増強剤を使用することにより、および／または長時間活性促進粒子特性(例えば、大量の、例えば、少なくとも約５０％のポリ（乳酸-コ-グリコール酸）；小型空気力学的サイズ（例えば、約１−３μｍ）、低密度（例えば、約0.1gm/ml未満）および大型形状粒子サイズ（例えば、約１０−２０μｍ）の乾燥粒子を含む多孔性の粒子)を使用することによる。
【０１９２】
ＩＲＢＰ組成物は、ＩＲＢＰ誘導体、例えば、低分子量ＰＥＧｙｌ化ＩＲＢＰｓを含んでもよく、それはそのような分子の肺送達を増強する。もう一つの側面において、ＩＲＢＰ組成物は、肺に対して、ＰＥＧ粒子、リン酸カルシウム（ＣＡＰ）粒子、またはＰＥＧ−ＣＡＰ粒子（典型的には懸濁液中）の形態で送達され、そのような粒子は、標準的な技術（例えば、制御された沈殿技術など）を使用して製造される。そのような粒子組成物は、例えば、気管内の注入および／またはスプレー注入などにより特異的に肺に対して送達される。そのような粒子はまた、任意に一以上のカゼインと関連付けられる（例えば、ＰＥＧ、ＣＡＰまたはＰＥＧ−ＣＡＰ粒子のためのコーティング剤として−カゼインの溶液に対して当該粒子を加えることにより形成され、当該カゼインを当該粒子の周りに凝集および／または複合することを可能にする）。同様な組成物が、経口送達形態または経鼻送達形態（例えば、経口スプレー製剤）のために利用され、およびそのような分子は他の形態においても使用される。
【０１９３】
小型ペプチド、例えば、インスリンなどの肺および経口送達のための多くの戦略、組成物および装置が、当該技術分野において開発され、記載されており、それらはまた、本発明のＩＲＢＰおよびＩＲＢＰ組成物に適用してよい（例えば、当該ＩＲＢＰをここで記載したインスリン分子に似るように修飾することにより；ＩＲＢＰ組成物をそこで記載されたインスリン製剤と似るように製剤化することにより；そこで記載されるのと同様な方法および／または装置を使用して当該ＩＲＢＰを投与すること）。そのような方法、原理、送達装置および同様な組成物の例は、例えば、以下の文献に記載される；Garcia-Contreras et al., AAPS PharmSci 2003; 5(2) Article 9 (2003); Steiner et al., Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2002 Jan;110(1):17-21; Pfutzner et al., Diabetes Technol Ther. 2002;4(5):589-94; Gonda, I. et al.: Journal of Controlled Release 1998; 53:269-274; Schuster, J. et al.: Pharmaceutical Research 1997;14(3):354-357; Farr, S.J. et al., Interpharm Press Inc., Buffalo Grove, Illinois. 1996, pp. 175-184; Thippawong, J. et al., Diabetes Technology & Therapeutics 2002; 4(4): 499-504; Sangwan, S. et al., Journal of Aerosol Medicine. 2001;14(2):185-195, Mudumba S. et al., Respiratory Drug Delivery VII. Dalby R.N. et al (eds) Serentec Press, Raliegh, NC. 2000. pp. 329-332; Brinda, Curr Opin Investig Drugs. 2002 May;3(5
):758-62; Brunner, G.A. et al., Diabetologia 1991; 44:305-308; US Patent Applications 20040096401; 20040089290; 20030216542; 20030148925; 20030113273; 20020046750; 20010039260; 20030150446; and US Patents 6,635,617; 6,518,239; 6,349,719; 6,335,316; 6,098,615; 6,024,090; 5,672,581; 5,915,378; 5,970,240; and 5,813,358。
【０１９４】
２．組み合わせ方法：共投与および共適用
上記のとおり、本発明は、多くの組み合わせ組成物および組み合わせ方法を提供する（組み合わせ方法は、例えば、低グルコース、低脂肪および／または低グルコースおよび低脂肪食事制限を採用するような患者における食餌療法の変更を含む治療計画に含まれてよい）。
【０１９５】
組み合わせ投与／送達方法において、当該ＩＲＢＰおよび第二の薬剤の各々に送達する当該用量および経路は、所望の治療、予防および／または生理的効果をレシピエントホストにおいて達成する（例えば、患者におけるＩＲ活性調節に関連する血中グルコースを低下することなど）何れかの適切な用量および経路であってよい。そのような方法および組み合わせにおける当該ＩＲＢＰおよび第二の薬剤を組み合わせた効果の点から、そのような方法および組成物における当該ＩＲＢＰの典型的な用量が下げられる。
【０１９６】
一般的に、本発明の組み合わせ投与方法は、何れかの適切な投与スキームを含んでよく、それには共投与（当該成分が混合されていか、別々になっている個別の組成物または単一の組成物として）および種々の活性剤の段階的な投与を含む。
【０１９７】
ここにおける用語「共投与」、「共投与する」などは、他に記載がない限り、同時投与（または併用投与）および連続しているが、関連しない投与の両方をいう。薬剤の共投与は、何れかの適切な方法および何れかの適切な時間において達成されてよい。言い換えると、共投与は、第二の薬剤の投与の前、同時、後の何れかの時間で、ＩＲＢＰを投与することをいい、結果として、第二の薬剤、ＩＲＢＰ、または両方の薬剤を独立して投与した場合よりも治療応答が増強する。
【０１９８】
治療または予防レジメは、また、ＩＲＢＰおよびＩＲＢＰ組成物（例えば、ここで記載された組み合わせ組成物など）の投与または送達に関連する種々の方法の共適用を含み、これは例えば、低グルコースおよび／または低脂肪性の食餌の適用、運動レジメの適用；抗糖尿病遺伝療法レジメの適用；ステム細胞または他の細胞全体の治療の適用（例えば、例えば、エクスビボでのβ細胞の工作したインスリン生産性β細胞の送達）：器官（例えば、膵）移植；島の移植；統合または連結されたインスリンポンプの提供；などを含んでよい。
【０１９９】
一以上の薬剤を、治療レジメにおけるＩＲＢＰ組成物との組み合わせにおいて使用する場合、各治療が別々に行われた場合に観察される効果に相加的な組み合わされた結果は要求されない。或いは、少なくとも相加的な効果は一般的に望ましくは、何れかのＩＲ媒介効果は増加し（例えば、抗糖尿病効果など）、上記の単一治療の一つからの利点であろう。また、これは確かに可能且つ典型的な利点であるが、当該組み合わせ療法に相乗的な効果を示すような特定の要求はない。
【０２００】
組み合わされた抗糖尿病治療または他のＩＲ関連状態の治療を実施するために、例えば、、一つは、哺乳動物または他の適切な動物に対して本発明のＩＲＢＰ組成物をもう一つの抗糖尿病剤（例えば、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体、ビグアナイド抗糖尿病薬、グルカゴン受容体アンタゴニストなど）との組み合わせにおいて簡単に投与されてよく、またはそれらの組み合わされた抗糖尿病効果（例えば、一以上の糖尿病関連症状および／または生理的状態など）を当該治療動物において得るのに有効な方法において、関連ある治療方法の適用が可能である。当該薬剤群または薬剤および方法は、従って、当該疾患、障害または状態に対する組み合わせ効果を得るために有効な量および有効な時間に亘り提供または適用されるであろう。この目的を達成するために、ＩＲＢＰ組成物および第二の薬剤／方法は、単一の組み合わせ組成物／方法、または(組み合わせ療法の場合において)二つの異なる組成物／異なる投与経路を使用する方法としての何れかで、同時に動物に対して投与または適用されてよい。
【０２０１】
一つの例示的な側面において、ＩＲＢＰまたはＩＲＢＰ組成物は、島発生方法の適用に関連において、例えば、島発生分子、例えば、島発生Ｃ−レクチンタンパク質、例えば、島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）またはＲｅｇ（例えば、Kobayashi et al., J Biol Chem. 2000;275:10723-10726 and Rafaeloff et al., J Clin Invest. 1997;99:2100-2109を参照されたい）などが患者に投与される。
【０２０２】
或いは、本発明のＩＲＢＰ組成物の投与は、他の関連する抗糖尿病または他の抗糖尿病治療に、例えば、分単位から週および月単位の間隔で、先行して、または続いてよい。一つには、当該第二の抗糖尿病または抗ＩＲ状態関連薬剤およびＩＲＢＰが有利な組み合わせ効果を当該状態、障害、症候群などにおいて発揮することを保証するであろう。
【０２０３】
ここにおける他の箇所で触れられたとおり、ＩＲＢＰｓは一以上の有利な特性を含み、それはヒトインスリンとは異なり、それは、例えば、より小型のサイズ、インビボでのより長い半減期、分解に対するより強い抵抗性、より高い生物学的利用能、或いはインスリン受容体親和性よりも強い親和性などを含む。そのような特性の一以上を有するＩＲＢＰｓは、また、有利にインスリン、インスリン類似体、他の擬態性インスリンおよび／または抗糖尿病薬と組み合わせてよく、それにより現在入手可能な治療学的組成物とは異なる活性プロファイルを有する組み合わせ治療または治療学的組成物が提供される。
【０２０４】
詳細な側面において、本発明は、一以上のＳ６３６、Ｓ６４２、Ｓ６６５、Ｓ７２６、Ｓ７２７、Ｓ７３３およびＳ８７３を含む組成物を提供する。もう一つの詳細な側面において、本発明は、ここに記載されるＩＲ活性を調節する方法、または当該疾患／障害を提供し、それは一以上のこれらのＩＲＢＰｓを適切なホスト細胞に対して（インビトロまたはインビボにおいて）送達する。更なる面において、本発明は、ここで記載される一以上の疾患または障害（例えば、１型および／または２型糖尿病など）を治療するための医薬の製造においける一以上のそのようなＩＲＢＰｓの使用を提供する。
【０２０５】
[例]
以下の例は、本発明の詳細な側面を更に説明するために提供されるが、如何なる点においてもその範囲に限定するものと理解されるべきではない。
【０２０６】
例１
本例は、親ＩＲＢＰの酵素分解分析、および続く、変異体／誘導体を第二の、関連しているＩＲＢＰへ導入することにより、当該親ＩＲＢＰに比べて酵素学的な安定性を改善された生物学的に同様のＩＲＢＰを得ることを介して、酵素安定なＩＲＢＰを産生するための戦略を示す。
【０２０７】
先に述べられたＩＲＢＰ  Ｓ５９７は、一連の適切な消化酵素（ペプシン、エラスターゼ、キモトリプシン、トリプシンおよびカルボキシ−ペプチドＡ）での消化に供され、そのような反応からの当該分解産物は、標準質量分析により同定し、それにより各酵素による当該ＩＲＢＰにおける主な切断部位を明らかにした。
【０２０８】
新規ＩＲＢＰはＳ５９７に由来し、Ｓ５９７のＮ末端式６様ＩＲＢＡＡＳ配列のＸａａ７位置に（Alaの代わりに）およびＣ末端式１配列のＸａａ１位置に（Pheの代わりに）特殊なアミノ酸残基アミノイソ酪酸およびジフェニルアラニンを導入したことによる。
【０２０９】
Ｓ５９７における酵素による消化の主要な点を図示し、Ｓ８７３を記述する図を以下の図１として提供する。
【０２１０】
本例は、本発明の新規ＩＲＢＰｓが、以前に特徴付けられた同じ種類および／または数の分解耐性残基および／または部分を欠いたＩＲＢＰｓを超えて、適切なＩＲ親和性を失うことなく、どのように改善された安定性を有するかを示した。
【０２１１】
本例はまた、本発明の更なる側面、ＩＲＢＰ、例えば、先の特許文献において提供されたＩＲＢＰなど、を修飾して、酵素分解抵抗性を増強する方法を提供することを示す。従って、先の特許文献において開示される他のＩＲＢＰｓに対するそのような方法の適用は、本発明の更なる特徴を具体化するものである。
【０２１２】
例２
本例は、本発明の独特のＩＲＢＰｓの特有のＩＲアイソフォームおよび特有の種のＩＲｓに関する優先度を示す。
【０２１３】
多くのＩＲＢＰｓ（Ｓ５１９；Ｓ５５７；Ｓ５９７；Ｓ６３６；Ｓ６６７；Ｓ７３３；Ｓ６７１；Ｓ６６０；Ｓ６９６；Ｓ５７４；Ｓ７００；Ｓ６２６；およびＳ７２６）、その幾つかは先の特許文献に記載されたもであり、これらをヒト、ラットおよびブタインスリン受容体（ＨＩＲ、ＲＩＲおよびＰＩＲ）のＡおよびＢアイソフォームに対して標準法を用いて適用した。当該種々の受容体に対するこれらのＩＲＢＰｓの相対的な親和性を図２に明らかにした。
【０２１４】
図２から分かる通り、例えば、ＨＩＲがＲＩＲおよび／またはＰＩＲと対照的であるように、多くのＩＲＢＰｓが特有種のＩＲに対する選択性を示した。従って、このデータは、本発明の側面、先の特許文献に記載された以前に特徴付けられたＩＲＢＰｓとここで開示された新規のＩＲＢＰｓとの両方に関する側面が；即ち、ＩＲＢＰｓは特有種のＩＲに対するそれらの特異性を選択されること、ＩＲＢＡＡＳｓに対する修飾がそのような分子のＩＲ種特性を調節するということを例証する。従って、例えば、本発明は、そのためにＩＲＢＰ特異性を選択することにより、ＰＩＲおよび／またはＲＩＲとは対照的に特異的にＨＩＲをターゲティングする方法を提供する。
【０２１５】
図２はまた、ＩＲＢＰｓが特定の種におけるＩＲアイソフォーム特異性を示す（即ち、少なくとも幾つかのＩＲＰＢは、ＨＩＲ−１１よりもＨＩＲ＋１１に対してより強い親和性を示し、その逆のものもある）。これは、本発明のもう一つの新規の側面、ＩＲＢＰｓが特定のＩＲアイソフォームを特異的に標的とするために使用でき、従って、例えば、
ＩＲが介在する状態、障害など、特にそのような選択に基づく標的組織を治療するために使用できることを例証するものである。
【０２１６】
若干の他の結果が、ＩＲＢＰｓの種およびアイソフォーム特異性から起こり、少なくともその幾つかは本明細書の他の箇所に記載され、これは本発明の更なる側面を形成する。
【０２１７】
例３
本例は、本発明の新規ＩＲＢＰが適切な動物モデルにおいてヒトインスリンに匹敵するグルコース濃度の調節能力を有することを証明する。
【０２１８】
ＩＲＢＰ  Ｓ６６７およびヒトインスリンをウィスターラットに対して、標準技術、例えば、先の特許文献に記載されるような技術を使用して投与した（S667は1.25nmol/kg；2.5nmol/kg；および5nmol/kg：ヒトインスリン(HI)は1.25nmol/kg）。グルコース測定を投与前の２０分、投与時、投与後２０；４０；６０；８０；１２０；および１８０分に行った。これらの測定を図３で比較した。
【０２１９】
図３から分かるように、Ｓ６６７、即ち、新規ＩＲＢＰは、同様な用量でヒトインスリンと同様なレベルに血中グルコースを低下することが可能であった。図３の結果はまた、少なくとも幾つかの用量の範囲に亘り、当該ＩＲＢＰが用量依存的なＩＲ媒介グルコース濃度調節を示すことを証明する。
【０２２０】
ここで引用された全ての参考文献、出版物、特許出願および特許は引用により組み込まれるが、各参考文献は参考により組み入れられるべきであることが個々に取り分け示されるように、その全体がここに示されたものであるかのようにその同じ範囲に亘って組み込まれる。
【０２２１】
全ての表題および副題は、便宜的にここで使用するだけのものであるので、どのような点においても本発明を限定すると解釈されるものではない。
【０２２２】
その可能な全てのバリエーションにおける上記の要素の何れの組み合わせも、ここにおいて別なふうに記載されない限り、或いは文脈により明らかに否定されない限り、本発明により包含される。
【０２２３】
本発明を説明する文脈において、「或る（不定冠詞：a）」および「一つの（不定冠詞：an）」および「前記（定冠詞：the）」の用語、並びに類似の指示語の使用は、ここで特に別途指示しない限り、または明瞭に文脈と矛盾しない限り、単数および複数の両方をカバーするように解釈されるべきである。
【０２２４】
特に別途言及しない限り、ここでの数値範囲の記載は、該範囲内の別々の各値に個別に言及するための簡略法として働くことのみを意図しており、別々の各値は、それが個別にここに記載されているかのように、本明細書の中に組み込まれる。特に別途言及しない限り、全ての正確な値は、対応する概略値を代表するものである（例えば、特定の因子または測定に関して与えられる全ての正確な例示値は、適切な場合には「約」の語によって修飾された対応の概略測定値をも提供するとみなすことができる）。
【０２２５】
ここに記載した全ての方法は、ここで特に別途指示しない限り、または明瞭に文脈と矛盾しない限り、何れかの適切な順序で実施することができる。
【０２２６】
ここに与えられた例または例示的言語（例えば「のような」）の何れかもしくは全部の使用は、本発明をより良く説明することのみを目的としており、特に別途指示しない限り、本発明の範囲に対する制限を課するものではない。明細書中の如何なる文言も、特許請求の範囲に記載されていない何れかの要素が本発明の実施に不可欠であることを示しているように解釈されるべきではない。
【０２２７】
ここでの特許書類の引用および援用は、便宜上の目的だけでなされており、このような特許書類の有効性、特許性、および／または強制執行可能性の如何なる観点をも反映するものではない。
【０２２８】
一つの要素または複数の要素に関して、「含んでなる」、「有する」、「含んだ」または「含有する」のような用語を使用した、本発明の何れかの側面または実施形態のここでの説明は、特に別途言及しない限り、または文脈と明瞭に矛盾しない限り、当該特定の一つの要素または複数の要素「からなる」、「実質的にからなる」、または「実質的に含んでなる」本発明の同様の側面または実施形態のための裏付けを提供するものである（例えば、特定の要素を含んでなるものとしてここに記載された組成物は、特に別途言及しない限り、または文脈と明確に矛盾しない限り、当該要素からなる組成物をも記載しているものとして理解されるべきである）。
【０２２９】
種々の式が、ここではアミノ酸配列の群を記載する便宜的な簡略法として使用される。このような式によるアミノ酸配列の群の記載は、特に別途言及しない限り、または文脈と明瞭に矛盾しない限り、これら式の範囲内にある各配列のための文字通りの裏付けを提供することが理解されるであろう（このような式に包含される配列の多くの特定の例がここに与えられている。例えば表２参照）。
【０２３０】
本発明は、適用可能な法によって許容される最大範囲において、ここに提供した複数の側面に記載した主題の全ての変形および均等物を含むものである。
【図面の簡単な説明】
【０２３１】
【図１】Ｓ５９７における酵素による消化の主要な点を示し、Ｓ８７３を記述する図。
【図２】種々の受容体に対するＩＲＢＰｓの相対的な親和性を図２に明らかにした。
【図３】グルコース測定を投与前の２０分、投与時、投与後２０；４０；６０；８０；１２０；および１８０分に行った。これらの測定を図３で比較した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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