(57)【要約】  ペプチドの選択的抱合のための方法であって、ペプチドのＣ末端への官能基の酵素的取り込みに続いて、ペプチドに抱合されるべき部分を含む第二の化合物との反応を含んでなり、該第二の化合物は、前記取り込まれた官能基と選択的に反応する官能基を含んでなる方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抱合型ペプチドを調製する方法であって：
ｉ）ペプチドと、該ペプチドを構成する何れのアミノ酸残基にも接近不能な１以上の官能基を有する前記第一の化合物とを、前記ペプチドのＣ末端への第一の化合物の取り込みを触媒することができる酵素の存在下において１以上の段階で反応させて、アシル転移されたペプチドを形成させる工程と、
ｉｉ）前記アシル転移されたペプチドと一以上の官能基を含む第二の化合物とを、１以上の段階において反応させる工程であって、前記官能基は、前記ペプチドを構成するアミノ酸残基における接近可能な官能基と反応せず、また前記第二の化合物における官能基は、前記アシル転移されたペプチドと前記第二の化合物との間に１以上の共有結合が形成されるように、前記第一の化合物中の前記官能基と反応することができる工程と、
を含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって：
ペプチドＰを、カルボキシペプチダーゼの存在下に、１以上の段階で、次式
【化１】
2008502301.tif 000208
によって表されるαアミノ酸アミドである第一の化合物と反応させて、次式のアシル転移されたペプチドを形成し、
【化２】
2008502301.tif 000209
前記アシル転移されたペプチドを、１以上の段階において、次式
式  Ｙ−Ｅ−Ｚ
の第二の化合物と更に反応させて、次式
【化３】
2008502301.tif 000210
の抱合型ペプチドを形成する方法：
但し、
Ｒは、リンカー又は結合を表し；
Ｐ’は、ペプチドＰからＣ末端アミノ酸を除去することによって形成されたペプチドを表し；
Ｘは、ペプチドＰ’を構成するアミノ酸残基中に接近できない１以上の官能基を含む基を表し；
Ｙは、ペプチドＰ’を構成するアミノ酸残基に接近不能な官能基と反応しない１以上の官能基を含む基を表し、該官能基はＸ中に存在する前記官能基と反応し；
Ｅは、リンカー又は結合を表し；
Ａは、Ｘ及びＹ中に含まれる官能基間の反応によって形成される部分を表し；
Ｚは、ペプチドに抱合されるべき部分を含み、該部分がＰのクリアランスに比較して、式［ａ］の化合物のクリアランスを減少させる。
【請求項３】
Ａが、オキシム、ヒドラゾン、フェニルヒドラゾン、セミカルバゾン又はトリアゾール部分を表す、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｘ中に存在する官能基が、ケト、アルデヒド、−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６Ｈ４−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−ＮＨ２、アルキン、ニトリルオキシド及びアジドの中から選択される、請求項２から３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
Ｙ中に存在する官能基が、ケト、アルデヒド、−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６Ｈ４−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−ＮＨ２、アルキン、ニトリルオキシド及びアジドの中から選択される、請求項２から４の何れかに記載の方法。
【請求項６】
Ｘが、ケト及びアルデヒド誘導体から選択され、Ｙが、−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６Ｈ４−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−ＮＨ２から選択される、請求項２から５の何れかに記載の方法。
【請求項７】
Ｘがアルキンを表し、Ｙがアジド又はニトリルオキシドを表す、請求項２から５の何れかに記載の方法。
【請求項８】
Ｘがアジド又はニトリルオキシドを表し、Ｙがアジドを表す、請求項２から５の何れかに記載の方法。
【請求項９】
Ｒ及びＥが、独立に、１以上の単素環芳香族化合物ビラジカル又は複素環化合物ビラジカルが挿入され得る、直鎖、分岐及び／又は環状Ｃ１−１０アルカン、Ｃ２−１０アルケン、Ｃ２−１０アルキン、Ｃ１−１０ヘテロアルカン、Ｃ２−１０ヘテロアルケン、Ｃ２−１０ヘテロアルキンのビラジカルを表す、請求項２から８の何れかに記載の方法。
【請求項１０】
前記α−アミノ酸アミドが、２−アミノ−３−オキソ−ブチラミド、２−アミノ−６−（４−オキソ−ペンタノイルアミノ）−ヘキサン酸アミド，２−アミノ−３−（２−オキソ−２−フェニル−エチルスルファニル）−プロピオンアミド、２−アミノ−５−オキソ−ヘキサン酸アミド、２−アミノ−３−オキソ−プロピオンアミド、２−アミノ−６−（４−アセチルベンゾイルアミノ）ヘキサン酸アミド、２−アミノ−３−オキソプロピオン酸アミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソプロポキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソブトオキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（４−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−フェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、４−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−（４−クロロフェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、３−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、２−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチルベンズアミド、（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−（プロプ−２−イニルオキシ）フェニル）プロピオンアミド、（Ｓ）−２−アミノペント−４−イノイック酸アミド及びＳ−フェニルアシルシステインアミドの中から選択される化合物を表す、請求項２から９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｚが、１以上のポリエチレングリコール又はメトキシポリエチレングリコール基及びそれらのアミノ誘導体；１以上の単素環芳香族化合物ビラジカル又は複素環化合物ビラジカルが挿入され得る、直鎖、分岐及び／又は環状Ｃ１−２２アルカン、Ｃ２−２２アルケニル、Ｃ２−２２アルキニル、Ｃ１−２２ヘテロアルキル、Ｃ２−２２ヘテロアルケニル、Ｃ２−２２ヘテロアルキニル（前記Ｃ１−２２又はＣ２−２２基は、必要に応じて、ヒドロキシル、ハロゲン、カルボキシル及びアリールから選択される１以上の置換基で置換されることができ、前記アリールは、ヒドロキシル、ハロゲン及びカルボキシルから選択される１以上の置換によって、必要に応じてさらに置換されることができる。）；ステロイド基；脂質基；多糖基；デキストラン基；ポリアミド基；ポリアミノ酸基；ＰＶＰ基；ＰＶＡ基；ポリ（１−３−ジオキサラン）基；ポリ（１，３，６−トリオキサン）基；エチレン／無水マレイン酸ポリマー基；Ｃｉｂａｃｒｏｎ色素染料基；及びＣｉｂａｃｒｏｎ  Ｂｌｕｅ  ３ＧＡ基を含む、請求項２から１０の何れかに記載の方法。
【請求項１２】
Ｚが、約１０、２０、３０又は４０ｋＤａの分子量を有する１以上のポリエチレングリコール又はメトキシポリエチレングリコール基を含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｚが、必要に応じてカルボキシ基で置換された１以上のＣ１０−２０アルキルを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
Ｚがウンデカン酸基を表す、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
Ｚが、１以上のＣ１５アルキル、Ｃ１７アルキル、Ｃｉｂａｃｒｏｎ  Ｂｌｕｅ  ３ＧＡ又は式
【化４】
2008502301.tif 000211
の基を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
Ｚが、アルブミンに結合する１以上の部分を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記酵素がカルボキシペプチダーゼＹである、請求項１から１６の何れかに記載の方法。
【請求項１８】
Ｐが、インシュリン化合物、ＧＬＰ−１化合物、ＧＬＰ−２化合物、成長ホルモン化合物、サイトカイン、ＴＦＦ、メラノコルチン受容体修飾物質及び第ＶＩＩ因子化合物から選択されるペプチドを表す、請求項２から１７の何れかに記載の方法。
【請求項１９】
前記抱合型ペプチドを薬学的組成物中に調合する工程をさらに含む、請求項２から１８の何れかに記載の方法。
【請求項２０】
次式に記載の抱合型ペプチド：
【化５】
2008502301.tif 000212
式中、
Ｐ’、Ｒ、Ａ、Ｅ及びＺは、請求項２〜１８に定義した通りであり、
【化６】
2008502301.tif 000213
は、ペプチド結合を介して、Ｐ’のＣ末端に付着されている。
【請求項２１】
下記から選択される、請求項２０に記載のペプチド：
Ｌｙｓε（４−（（２−（１−（ｍＰＥＧカルボニル）ピペリジン−イル）エトキシ）イミノ）ペンタノイル）１９２）ｈＧＨ（１−１９２）アミド、ｍＰＥＧは２０ｋＤａの分子量を有する；
（Ｌｙｓε（４−（（３−（パルミトイルアミノ）プロポキシ）イミノ）ペンタノイル）１９２）ｈＧＨ（１−１９２）アミド；
（Ｌｙｓε（４−（（３−（（２Ｓ）−２，６−ｍＰＥＧカルボニルアミノ）ヘキサノイルアミノ）プロポキシ）イミノ）ペンタノイル）３４）ＧＬＰ−２（１−３４）アミド、ｍＰＥＧは２０ｋＤａの分子量を有する；
（Ｌｙｓε（４−（１−（２−（３−（ｍＰＥＧ）プロパノイルアミノ）ヒドラジノ）エチル）ベンゾイル）１９２）ｈＧＨ（１−９２）アミド、ｍＰＥＧは１０ｋＤａの分子量を有する；
（Ｓ）−３−（４−（（３−（３−クロロフェニル）イソキサゾール−５−イル）メトキシ）フェニル）−２−（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）プロピオンアミド；
（Ｓ）−３−（４−（（３−（３−クロロフェニル）イソキサゾール−５−イル）メトキシ）フェニル）−２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）プロピオンアミド；
３−（３−（３−（（４−（（Ｓ）−２−カルバモイル−３−（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）エチル）フェノキシル）メチル）イソキサゾール−３−イル）ベンジルカルバモイル）プロピオン酸；
１１−（４−（４−（（２Ｓ）−２−カルバモイル−２−（（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）エチル）フェノキシメチル）−１，２，３−トリアゾリル）ウンデカン酸；
１１−（５−（４−（（２Ｓ）−２−カルバモイル−２−（（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）エチル）フェノキシメチル）−１，２，３−トリアゾリル）ウンデカン酸１１−（４−（４−（（Ｓ）−２−カルバモイル−２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ））フェノキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ウンデカン酸；
１１−（５−（４−（（Ｓ）−２−カルバモイル−２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ））フェノキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ウンデカン酸；
２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニル）−３−（４−（（１−（（Ｎ−（ｍＰｅｇ２０ｋＤａイル）カルバモイル）デカニル）−１Ｈ−１，２，３−テトラゾル−４−イル）メトキシ）フェニル）プロピオンアミド；及び
２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニル）−３−（４−（（１−（（Ｎ−（ｍＰｅｇ２０ｋＤａイル）カルバモイル）デカニル）−１Ｈ−１，２，３−テトラゾル−５−イル）メトキシ）フェニル）プロピオンアミド。
【請求項２２】
治療に使用するための、請求項２０又は２１に記載の化合物。
【請求項２３】
請求項２０又は２１に記載の１以上のペプチドを含む薬学的組成物。
【請求項２４】
次式Ｉに記載の化合物：
【化７】
2008502301.tif 000214
式中、
Ａ及びＥは、独立にＣ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る）；
Ｂ及びＤは、−Ｃ（Ｏ）−又は−ＮＨ−を表し（但し、Ｂが−Ｃ（Ｏ）−を表す場合には、Ｄは−ＮＨ−を表さなければならず、Ｂが−ＮＨ−を表す場合には、Ｄは−Ｃ（Ｏ）−を表さなければならない）；
Ｆは、水素、又はＣ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン若しくはアリーレンを表す（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る）。
【請求項２５】
下記から選択される請求項２４に記載の化合物：
（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−フェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、
４−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、
（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−（４−クロロフェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、
３−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド及び
２−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド。
【請求項２６】
次式ＩＩに記載の化合物：
【化８】
2008502301.tif 000215
式中、
Ｊ及びＬは、独立に、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る）；
Ｍは、水素又はＣ１−６アルキルを表す。
【請求項２７】
下記から選択される請求項２６に記載の化合物：
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソプロポキシ）フェニル］プロピオンアミド、
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソブトオキシ）フェニル］プロピオンアミド、
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド、及び
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（４−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド。
【請求項２８】
次式ＩＩＩに記載の化合物：
【化９】
2008502301.tif 000216
式中、
Ｑは、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る）；
Ｔは、水素又はＣ１−６アルキルを表す。
【請求項２９】
次式ＩＶに記載の化合物：
【化１０】
2008502301.tif 000217
式中、
Ｊ’’及びＬ’’は、独立に、Ｃ１−６アルキレン又はアリーレンを表す（全て、ハロゲンアミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る。
【請求項３０】
（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−プロパルギルオキシ）フェニル）プロピオニルアミドからなるリストから選択される、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
請求項２〜１８の何れか１項に記載の方法によって取得できる抱合型ペプチド。
【請求項３２】
第一のペプチドを抱合する方法であって、前記ペプチドがアルキン基を含み、前記方法が、前記第一のペプチドを第二の化合物と反応させることを含み、前記第二の化合物が抱合型ペプチドを形成するためのニトリオキシドを含み、前記第一のペプチドが、イソキサゾリン部分を介して前記第二の化合物に結合される方法。
【請求項３３】
第一のペプチドを抱合する方法であって、前記ペプチドがニトリルオキシド基を含み、前記方法が、前記第一のペプチドを第二の化合物と反応させることを含み、前記第二の化合物が抱合型ペプチドを形成するためのアルキンを含み、前記第一のペプチドが、イソキサゾリン部分を介して前記第二の化合物に結合される方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドの翻訳後抱合のための新規方法に関する。前記抱合型ペプチドは改変された特性を有し、このため、治療用途において有用である可能性があり、又は前記ペプチドの分析又は単離及び精製を容易にし得る。
【発明の背景】
【０００２】
ペプチドに基を抱合することによって、ペプチドの特性及び特徴を修飾することが周知であり、これにより、ペプチドの特性を適切に変化する。このような抱合には、一般的には、抱合基中の別の官能基と反応するためにペプチド中にある種の官能基が必要である。典型的には、Ｎ末端アミノ基又はリジン中のε−アミノ基などのアミノ基が、適切なアシル化試薬と併用される。抱合反応を調節できること、すなわち、抱合する化合物が付着される場所を調節し、抱合する基が付着される数を調節できることが、望まれる場合が多く、又は必要な場合さえある。これは、しばしば、特異性と称される。
【０００３】
ペプチドを高度な特異性で抱合できる方法を提供することが本発明の目的である。一般的な表現では、本方法は、適切な官能基を含む化合物をペプチドのＣ末端中に取り込むことができる酵素を活用し、前記官能基は、続いて、抱合すべき点として使用される。
【０００４】
ペプチドのＣ末端を修飾するためのカルボキシペプチダーゼの使用が、以前に記載されている。ＷＯ９２／０５２７１号は、Ｃ末端のカルボキシ基をアミド化するためのカルボキシペプチダーゼと求核性化合物の使用を開示しており、ＷＯ９８／３８２８５は、この目的に特に適したカルボキシペプチダーゼＹのバリアントを開示している。
【０００５】
ＰＥＧ又はＰＥＧをベースとした鎖のグラフトは、文献に多数記載されている。例として、米国特許第５，７３９，２０８号は、ペプチド中に存在するチオールと反応するスルホン基をＰＥＧと使用することを開示している。
【０００６】
ＥＰ  ６０５  ９６３は、タンパク質上のアルデヒド基とオキシム結合を形成する水性ポリマーのグラフトを開示している。天然アミノ酸にはアルデヒドを含むものは存在しないので、抱合プロセスの第一段階として、ヒドロキシル基を酸化しなければならない。
【０００７】
ＥＰ  ２４３  ９３９は、タンパク質又はポリペプチドのＣ末端中にポリペプチド、レポーター基又は細胞毒性因子を取り込むためのカルボキシペプチダーゼの使用を開示している。
【発明の要約】
【０００８】
本発明者らは、驚くべきことに、ペプチド中で接近不能な１以上の官能基を含む第一の化合物をペプチドＣ末端中に取り込ませて、アシル転移された化合物を形成するために、酵素、例えば、カルボキシペプチダーゼを使用できることを発見し、このアシル転移された化合物は、続いて、前記第一の化合物の官能基と反応するが、ペプチド中で接近可能な他の官能基とは反応しない１以上の官能基を別と化合物と反応させ得ることを発見した。このような方法は、Ｃ末端での取り込みのみを触媒するように酵素が選択され、２つの官能基が互いに反応するだけで、ペプチド中で接近可能な他の官能基とは反応しないように、２つの官能基が選択されるという点で、高度の特異性を提供する。このように、抱合基は、一つの位置にのみ付着され、官能基を選択することによって、抱合される基の数を調節することが可能である。
【０００９】
従って、一実施形態において、本発明は、
ｉ）第一の化合物の、ペプチドのＣ末端中への取り込みを触媒することができる酵素の存在下で、前記ペプチドを構成する何れのアミノ酸にも接近不能な１以上の官能基を有する前記第一の化合物と前記ペプチドを、１以上の段階において反応させて、アシル転移されたペプチドを形成させる工程と、
ｉｉ）前記ペプチドを構成するアミノ酸残基に接近可能な官能基と反応しない官能基であって、前記アシル転移されたペプチドと第二の化合物との間に共有結合が形成されるように、前記第一の化合物中の前記官能基と反応することができる１以上の官能基を含む第二の化合物を前記アシル転移されたペプチドと、１以上の段階において反応させる工程と、を含む、ペプチドを抱合する方法を提供する。
【００１０】
本発明の方法によって抱合型ペプチドを提供することも、本発明の別の目的である。
【００１１】
本発明の方法に対してさらに適するように修飾されたペプチドを提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１２】
本発明の方法での使用に適した試薬及び酵素を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１３】
さらなる実施形態において、本発明は、本発明の方法によって抱合型ペプチドの治療における使用を提供する。
【００１４】
本発明の方法によって抱合型ペプチドを含む組成物、例えば薬学的組成物を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１５】
本発明の方法に従って調製された、抱合型ペプチドを投与することを含む、疾病を治療するための治療方法を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１６】
医薬の製造における、本発明の方法に従って調製された、抱合型ペプチドの使用を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１７】
本発明の方法に従って、前記ペプチドを抱合することによって、ペプチドの特性を改善する方法を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１８】
定義
本明細書において、「アシル転移」という用語は、脱離基が求核試薬と交換される反応を表すものとし、ここで、求核試薬とは、炭素の核を攻撃する傾向がある、電子が豊富な試薬であるものと理解される。ペプチド転移は、アシル転移の一例である。
【００１９】
本明細書において、「接近不能」という用語は、それが到達され得ないという意味において、何かが存在しない、又は事実上存在しないことを表すものとする。抱合されるべきペプチド中で、官能基が接近不能であるという場合、前記官能基がペプチドに存在していないか、又は、存在している場合には、何らかの形で、反応への参加が妨げられていることを表すものとする。例として、前記官能基は、その反応への参加が遮断されるように、ペプチドの構造中に深く埋没され得る。官能基が接近可能であるか否かは、反応条件に依存すると認められる。変性剤の存在下又は高温で、前記ペプチドは折り畳みを解除して、本来、接近不能な官能基を露出する場合があることを想定し得る。「接近不能」とは、「ある対象反応に対して選択された反応条件で接近不能である」ことを意味するものと理解しなければならない。
【００２０】
本発明において、「オキシム結合」という用語は、式−Ｃ＝Ｎ−Ｏ−の部分を表すものとする。
【００２１】
本発明において、「ヒドラゾン結合」という用語は、式−Ｃ＝Ｎ−Ｎ−の部分を表すものとする。
【００２２】
本明細書において、「フェニルヒドラゾン結合」という用語は、式
【化１１】
2008502301.tif 000002
【００２３】
の部分を表すものとする。
【００２４】
本明細書において、「セミカルバゾン結合」という用語は、式−Ｃ＝Ｎ−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ−の部分を表すものとする。
【００２５】
「アルカン」という用語は、飽和、直鎖、分岐及び／又は環状の炭化水素を表すものとする。炭素原子の数に関して別段の数値が記載されていなければ、本用語は、１から２０まで（１及び２０を含む。）、１から１０まで（１及び１０を含む。）、例えば、１から５まで（１及び５を含む。）など、１から３０まで（１及び３０を含む。）の炭素原子を有する炭化水素を表すものとする。アルキルおよびアルキレンという用語は、それぞれ、対応する基及びビラジカルを表す。
【００２６】
「アルケン」という用語は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖、分岐及び／又は環状炭化水素を表すものとする。炭素原子の数に関して別段の数値が記載されていなければ、２から２０まで（２及び２０を含む。）、２から１０まで（２及び１０を含む。）、例えば、２から５まで（２及び５を含む。）など、２から３０まで（２及び３０を含む。）の炭素原子を有する炭化水素を表すものとする。アルケニルおよびアルケニレンという用語は、それぞれ、対応する基及びビラジカルを表す。
【００２７】
「アルキン」という用語は、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖、分岐及び／又は環状炭素原子を表すものとし、１以上の炭素−炭素二重結合を必要に応じて含むことができる。炭素原子の数に関して別段の数値が記載されていなければ、本用語は、２から２０まで（２及び２０を含む。）、２から１０まで（２及び１０を含む。）、例えば、２から５まで（２及び５を含む。）など、２から３０まで（２及び３０を含む。）の炭素原子を有する炭化水素を表すものとする。アルキニルおよびアルキニレンという用語は、それぞれ、対応する基及びビラジカルを表す。
【００２８】
「単素環芳香族化合物」という用語は、ベンゼン及びナフタレンなど芳香族炭化水素を表すものとする。
【００２９】
「複素環化合物」という用語は、５、６又は７個の環原子を含み、そのうち、１、２、３又は４つが、Ｎ、Ｏ及び／又はＳから選択される複素原子である環状化合物を表すものとする。例には、チオフェン、フラン、ピラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、並びに、ピペリジン、ピラゾリジン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペラジン及びモルホリンなど、部分的に又は完全に水素添加されたそれらの均等物などの複素環芳香族化合物が含まれる。
【００３０】
「ヘテロアルカン」、「ヘテロアルケン」及び「ヘテロアルキン」という用語は、１以上の複素原子又基が前記部分の構造中挿入されている、上記定義のアルカン、アルケン及びアルキンを表すものとする。ヘテロ基及び原子の例には、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−−Ｃ（Ｓ）−及び−Ｎ（Ｒ＊）−が含まれる（Ｒ＊は、水素又はＣ１−Ｃ６アルキルを表す。）。ヘテロアルカンの例には、
【化１２】
2008502301.tif 000003
【００３１】
が含まれる。
【００３２】
「基（ｒａｄｉｃａｌ）」又は「ビラジカル」という用語は、それぞれ、そこから１又は２個の水素原子が除去された化合物を表すものとする。具体的に述べるとき、基は、より大きな原子群（例えば、ヒドロキシル）を化合物から正式に除去することによって形成される部分も表し得る。
【００３３】
「ハロゲン」という用語は、周期表の第ＶＩＩ主族のメンバー、すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを表すものとする。
【００３４】
「ＰＥＧ」という用語は、５００から１５０，０００Ｄａの分子量のポリエチレングリコールを表すものとし、例えば、末端のＯＨ基がメトキシ基によって置換された、その類縁体を含む（ｍＰＥＧと称される。）。
【００３５】
本明細書において、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、同じものを表すものとする。「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって連結された二以上のアミノ酸残基を有する化合物を表すものとする。アミノ酸は、天然又は非天然のものであり得る。本用語は、他のペプチド、糖、脂質又は他の有機化合物、並びに１以上のアミノ酸残基が化学的に修飾された化合物及び人工の基を含むペプチドで置換された前記化合物を含むものとする。
【００３６】
本明細書において、「アリール」という用語は、環の少なくとも一つが芳香族である炭素環式芳香族環基又は縮合芳香族環系基を表すものとする。典型的なアリール基には、フェニル、ビフェニリル、ナフチルなどが含まれる。
【００３７】
本明細書において、単独で、又は組み合わせて使用される「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも一つの環が芳香族であり、窒素、酸素又は硫黄複素原子から選択される１以上の複素原子を環原子として含有し、Ｎ−オキシド及び一酸化硫黄及び二酸化硫黄が許容される複素芳香族置換である、例えば５から７員の原子を有する芳香族環基を表し、又は、例えば７から１８員の原子を有する縮合芳香族環系基を表す。例には、フラニル、チエニル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリミジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、及びインダゾリルなどが含まれる。
【００３８】
名詞としての「抱合体」という用語は、修飾されたペプチド、すなわち、ペプチドの特性を修飾するためにペプチドに結合された部分を有するペプチドを表すものとする。動詞としての用語は、ペプチドの特性を修飾するために、ある部分をペプチドに結合する工程を表すものとする。
【００３９】
本明細書において、「プロドラッグ」という用語は、生物加水分解性アミド及び生物加水分解性エステルを表し、ａ）このようなプロドラッグ中の生物加水分解性の官能基が本発明の化合物中に包含されている化合物、及びｂ）ある官能基において生物学的に酸化又は還元され、本発明の薬物物質を生成し得る化合物も包含する。これらの官能基の例には、１，４−ジヒドロピリジン、Ｎ−アルキルカルボニルー１、４−ジヒドロピリジン、１，４−シクロヘキサジエン、ｔｅｒｔ−ブチルなどが含まれる。
【００４０】
本明細書において使用される「生物加水分解性エステル」という用語は、ａ）親物質の生物学的活性を妨害しないが、作用の持続、作用の開始などの有利な特性をその物質にインビボで供与するか、又はｂ）生物学的に不活性であるが、被験者によってインビボで、生物学的に活性な成分へと容易に変換される、薬物物質のエステル（本ケースでは、本発明の化合物）である。利点は、例えば、溶解度の増加、又は生物加水分解性エステルが経口的に腸から吸収され、血漿中で本発明に記載の化合物へと変換されることである。このような多くの例が本分野では公知であり、例えば、低級アルキルエステル（例えば、Ｃ１−Ｃ４）、低級アシルオキシアルキルエステル、低級アルコキシアシルオキシアルキルエステル、アルコキシアシルオキシエステル、アルキルアシルアミノアルキルエステル及びコリンエステルが含まれる。
【００４１】
本明細書において使用される「生物加水分解性アミド」という用語は、ａ）親物質の生物学的活性を妨害しないが、作用の持続、作用の開始などの有利な特性をその物質にインビボで供与するか、又はｂ）生物学的に不活性であるが、被験者によってインビボで、生物学的に活性な成分へと容易に変換される、薬物物質のアミド（本ケースでは、本発明の化合物）である。利点は、例えば、溶解度の増加、又は生物加水分解性アミドが経口的に腸から吸収され、血漿中で本発明に記載の化合物へと変換されることである。このような多く例が本分野では公知であり、例えば、低級アルキルアミド、α−アミノ酸アミド、アルコキシアシルアミド及びアルキルアミノアルキルカルボニルアミドが含まれる。
【００４２】
本明細書において、「薬学的に許容される塩」という用語は、患者に対して有害でない塩を表すものとする。このような塩には、薬学的に許容される酸付加塩、薬学的に許容される金属塩、アンモニウム及びアルキル化されたアンモニウム塩が含まれる。酸付加塩には、無機酸及び有機酸の塩が含まれる。適切な無機酸の代表的な例には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸などが含まれる。適切な有機酸の代表的な例には、蟻酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモ酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが含まれる。薬学的に許容される無機又は有機酸付加塩のさらなる例には、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７７，６６，  ２（参照により、本明細書に組み込まれる。）に列記されている薬学的に許容される塩が含まれる。金属塩の例には、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム塩などが含まれる。アンモニウム及びアルキル化されたアンモニウム塩の例には、アンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ヒドロキシエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ブチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム塩が含まれる。
【００４３】
本明細書において使用される、化合物の「治療的有効量」とは、ある疾病及びその合併症の臨床兆候を治癒、緩和又は部分的に停止するのに十分な量を意味する。これを達成するのに十分な量は、「治療的有効量」と定義される。それぞれの目的に対する有効量は、疾病又は障害の重篤度並びに治療を処置を受ける者の体重及び全身的症状に依存するであろう。適切な投薬量の決定は、値のマトリックスを構築し、このマトリックス中の様々な点を検査することによって、慣用的な実験を用いて達成することができることは自明であり、全て、訓練を受けた医師又は獣医師の通常の技術の範囲に属する。
【００４４】
本明細書において使用される「治療」及び「治療する」という用語は、疾病又は疾患などの症状を撲滅するための、患者の管理及び看護を意味する。本用語には、症候又は合併症を軽減するため、疾病、疾患又は症状の進行を遅延させるため、症候及び合併症を軽減又は緩和するため、及び／又は疾病、疾患又は症状を治癒又は除去するため、並びに症状を予防するための活性化合物の投与など、その患者が罹患している症状に対する治療の全部が含まれるものとし、ここで、予防とは、疾病、症状又は疾患を撲滅するための、患者の管理及び看護と理解され、予防には、症候又は合併症の発症を抑えるために活性化合物を投与することが含まれる。治療されるべき患者は、好ましくは哺乳動物、特にヒトであるが、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ及びブタなどの動物も含まれ得る。
【発明の説明】
【００４５】
原理上、化合物のペプチド中への取り込みを触媒できる任意の酵素が、本発明の方法において有用である。一例を挙げると、有用な酵素には、分類群Ｅ．Ｃ．３．４．１６、３．４．１７及び３．４．１８に属するペプチドヒドロラーゼの群を構成するカルボキシペプチダーゼが含まれる。前記酵素によって触媒されるインビボ反応は、Ｃ末端アミノ酸残基の加水分解である。様々なカルボキシペプチダーゼが知られており、それらは、切除できる末端アミノ酸残基が異なる。触媒サイクルの間に、酵素−基質複合体が形成され、これは、通常のインビボ条件下では、水分子による求核攻撃を受け、最終的に、ペプチド結合の加水分解をもたらす。しかしながら、本発明の方法では、求核試薬として水を凌駕することができる求核試薬が添加される。さらに、溶媒又は水性溶媒中で反応を実行することによって、水の活性を弱めることができる。本発明の方法において、前記求核攻撃は、最終的にアシル転移化合物を形成する酵素−基質複合体を攻撃する。求核試薬であることを筆頭に、前記試薬は、抱合されるべきペプチド中で接近不能な１以上の官能基も含まなければならない。
【００４６】
本発明の方法に適用できる他の酵素には、トリプシンが含まれる。
【００４７】
ペプチド及び求核試薬の反応は、Ｃ末端アミノ酸残基が求核化合物で交換され、抱合されるべきペプチド中で接近不能な１以上の官能基を含むアシル転移ペプチドを与える。この反応（又はこの一連の反応）の総合的な結果は、ペプチド中の唯一つの部位にのみ存在する１以上の官能基がペプチド中に取り込まれることである。このアシル転移ペプチドを、引き続き、ペプチドに抱合させるべき部分と１以上の官能基とを含む化合物（アシル転移反応でペプチドに添加される官能基のみと反応する。）と反応（又は一連の反応）させると、抱合すべきペプチドの選択的な抱合が実施される。
【００４８】
ペプチド中に既に存在する官能基（例えば、Ｎ末端アミノ基又はリジンのアミノ基）を活用する他の抱合法と比較すると、本発明の方法は、選択性が改善されるという利点を与える。ペプチド中で接近不能な１以上の官能基を取り込むことによって、抱合が特定の部位のみで起こることが保証される。
【００４９】
先述したように、本発明の方法では、ペプチド中への化合物の取り込みを触媒できる任意の酵素を使用することができ、特にカルボキシペプチダーゼが有用である。特に有用なカルボキシペプチダーゼの例は、リソゾーム性Ｐｒｏ−Ｘカルボキシペプチダーゼ（プロリンカルボキシペプチダーゼ、アンギオテンシナーゼＣ、リソゾーム性カルボキシペプチダーゼＣ及びプロリルカルボキシペプチダーゼとしても知られる）、セリン型Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａカルボキシペプチダーゼ（Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ、ＤＤ−ペプチダーゼ及びＤＤ−トランスペプチダーゼとしても知られる。）、カルボキシペプチダーゼＣ（セリン型カルボキシペプチダーゼＩ、カテプシンＡ、カルボキシペプチダーゼＹ及びリソゾーム性保護タンパク質としても知られる。）及びカルボキシペプチダーゼＤ（カルボキシペプチダーゼＫＥＸ１及びカルボキシペプチダーゼＳ１としても知られる。）などのセリン型カルボキシペプチダーゼ；カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ（プロタミナーゼとしても知られる。）、リジン（アルギニン）カルボキシペプチダーゼ（カルボキシペプチダーゼＮとしても知られる。）及びＧｌｙ−Ｘカルボキシペプチダーゼ（カルボキシペプチダーゼＳとしても知られる。）；並びにシステイン型カルボキシペプチダーゼ（リソゾーム性カルボキシペプチダーゼＢ、カテプシンＢ２、カテプシンＩｖ及び酸カルボキシペプチダーゼとしても知られる。）などのメタロカルボキシペプチダーゼである。酵素の触媒特性を修飾するために、カルボキシペプチダーゼの配列中に、アミノ酸残基を変化し、付加し、又は欠失させ得ることも周知である。このような修飾されたカルボキシペプチダーゼは、例えば、ＷＯ９８／３８２８５号（参照によって本明細書に組み込まれる。）に開示されている。有用な酵素として、カルボキシペプチダーゼＹが特に挙げられる。
【００５０】
本発明の方法に従って、ペプチド中に取り込まれ得る多くの求核化合物が公知であり、α−アミノ酸は、このようなタイプの求核化合物の一つである。しかしながら、本発明においては、形成されたアシル転移化合物自体が、適用される酵素に対する基質でないように、求核化合物を選択することが好ましい。換言すれば、酵素のさらなる一切の反応を効果的に遮断する求核化合物を適用することが好ましい。カルボキシアミド化されたペプチドは、カルボキシペプチダーゼに対する基質ではないので、このような化合物の一例は、α−アミノ酸のアミドである。
【００５１】
化合物がある酵素に対する基質であるか否かは、原理的には、その反応が起こる条件（例えば、時間枠）に依存するものと認められる。通常の条件下では基質とみなされないが、十分な時間が与えられれば、実際に、多くの化合物が酵素に対する基質である。アシル転移化合物自体が酵素の基質であるべきないと上述されている場合、本発明の方法における以下の反応が妨害されない程度に、アシル転移化合物自体が酵素に対する基質でないことを意味するものとする。アシル転移化合物が、実際に、酵素に対する基質であれば、アシル転移反応後に、酵素を除去し、又は、例えば、酵素阻害剤によって不活化することができる。
【００５２】
一実施形態において、本発明は、ペプチドを抱合する方法であって、ペプチドＰが、カルボキシペプチダーゼの存在下で、式
【化１３】
2008502301.tif 000004
【００５３】
によって表されるα−アミノ酸アミドである第一の化合物と、１以上の工程でさらに反応されて、式
【化１４】
2008502301.tif 000005
【００５４】
のアシル転移ペプチドを形成し、該アシル転移ペプチドが、式
Ｙ−Ｅ−Ｚ
の第二の化合物と、１以上の工程でさらに反応されて、式
【化１５】
2008502301.tif 000006
【００５５】
（式中、
（Ｒは、リンカー又は結合を表し；
Ｐ’は、ペプチドＰからＣ末端アミノ酸が除去されたときに得られるペプチドを表し；
Ｘは、ペプチドＰ’を構成するアミノ酸残基中で接近不能な１以上の官能基を含む基を表し；
Ｙは、Ｘ中に存在する官能基と反応し、ペプチド中で接近可能な官能基とは反応しない１以上の官能基を含む基を表し；
Ｅは、リンカー又は結合を表し；
Ａは、Ｘ及びＹ中に含まれる官能基間の反応によって形成される部分を表し；
Ｚは、ペプチドに抱合されるべき部分であり、該部分がＰのクリアランスに比較して、式［ａ］の化合物のクリアランスを減少させる。）
の、抱合型ペプチドを形成する、方法に関する。
【００５６】
さらなる実施形態において、本発明は、得られた抱合ペプチドを薬学的組成物中に調合する工程をさらに含む、上に開示されたペプチドを抱合する方法に関する。
【００５７】
抱合後、前記抱合型ペプチドを単離し、本分野で周知の技術によって精製することができる。抱合型ペプチドは、適切な場合には、薬学的に許容される塩又はプロドラッグへ変換することもできる。
【００５８】
官能基ＸとＹ間の反応中で形成された部分Ａは、最終の抱合ペプチドについてどのような特性が所望されるかに応じて、原理上、任意の種類のものであり得る。一部の状況では、以降の何れかの段階で、例えば、何らかの酵素作用によって、又は光分解によって切断することができる不安定な結合を有することが望ましい場合があり得る。別の状況では、安定な抱合ペプチドが得られるように、安定な結合を有することが望ましい場合があり得る。アミン誘導体とカルボニル基との反応によって形成される部分の種類として、オキシム、ヒドラゾン、フェニルヒドラゾン及びセミカルバゾン部分などが、具体的に挙げられる。
【００５９】
一実施形態において、Ｘ及びＹの官能基は、ケト及びアルデヒド基などのカルボニル基、並びに、
ヒドラジン誘導体  −ＮＨ−ＮＨ２、
ヒドラジンカルボン酸誘導体  −Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、
セミカルバジド誘導体  −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、
チオセミカルバジド誘導体  −ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、
炭酸ジヒドラジド誘導体  −ＮＨＣ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、
カルバジド誘導体  ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２、
チオカルバジド誘導体  −ＮＨ−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−ＮＨ２、
アリールヒドラジン誘導体  −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ６Ｈ４−ＮＨ−ＮＨ２及び、
ヒドラジド誘導体  −Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ２
オキシルアミン誘導体−Ｏ−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２及び−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−ＮＨ２などのアミン誘導体の中から選択される。
【００６０】
Ｘ中に含まれる官能基がカルボニル基であれば、Ｙ中に含まれる官能基はアミン誘導体であり、逆もまた成り立つことを理解しなければならない。多くのペプチド中に−ＮＨ２基が存在するために、Ｘがケト−又はアルデヒド官能基を含めば、より優れた選択性が得られると考えられる。
【００６１】
Ｘ及びＹの適切な対の別の例は、反応して、トリアゾール部分を形成するアジド誘導体（−Ｎ３）及びアルキンである。
【００６２】
Ｘ及びＹの適切な対の別の例は、反応して、イソオキサゾリジン部分を形成するアルキン及びニトリルオキシドである。
【００６３】
特に、アシル転移されるべき基
【化１６】
2008502301.tif 000007
【００６４】
は、２−アミノ−３−オキソ−ブチラミド、２−アミノ−６−（４−オキソ−ペンタノイルアミノ）−ヘキサン酸アミド、２−アミノ−３−（２−オキソ−２−フェニル−エチルスルファニル）−プロピオンアミド、２−アミノ−５−オキソ−ヘキサン酸アミド、２−アミノ−３−オキソ−プロピオンアミド、２−アミノ−６−（４−アセチルベンゾイルアミノ）ヘキサン酸アミド、２−アミノ−３−オキソプロピオン酸アミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソプロポキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソブトキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（４−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド、（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−フェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、４−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−（４−クロロフェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、３−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、２−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−プロプ−２−イニルオキシ）フェニル）プロピオンアミド、（Ｓ）−２−アミノペント−４−イノイック酸（ｙｎｏｉｃａｃｉｄ）アミド及びＳ−フェニルアシルシステインアミドの中から選択され得る。
【００６５】
アシル転移されるべき化合物及びアシル転移されたペプチドと反応されるべき化合物は何れも、それぞれ、リンカーＲ及びＥを含む。これらのリンカー（互いに独立している。）は、存在していなくてもよく、又はアルカン、アルケン若しくはアルキンジラジカル並びにヘテロアルカン、ヘテロアルケン及びヘテロアルキンジラジカルの中から選択することができ、１以上の、必要に応じて置換された芳香族単素環ビラジカル又は複素環化合物のビラジカル（例えば、フェニレン又はピペリジンビラジカル）は、先述のビラジカル中に挿入され得る。前記リンカーは、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、カルボキシル、アリール、アルキル及びヘテロアリールの中から選択される基による置換も含み得ることを理解すべきである。
【００６６】
Ｅ及びＲは何れも、結合又はリンカーを表し、本明細書において、「リンカー」という用語は、それぞれＹをＺから分離し、ＸをＮＨ２−Ｃ（Ｏ）−Ｃ（ＮＨ２）−から分離するための手段として機能する部分を表すものとする。リンカーＥ及びＲの一機能は、ペプチドと抱合された部分Ｚ間の連結中に十分な柔軟性を提供することであり得る。Ｅ及びＲの典型的な例には、直鎖、分岐及び／又は環状Ｃ１−１０アルカン、Ｃ２−１０アルケン、Ｃ２−１０アルキン、Ｃ１−１０ヘテロアルカン、Ｃ２−１０ヘテロアルケン、Ｃ２−１０ヘテロアルキンのビラジカルが含まれ、１以上の単素環複素化合物ビラジカル又は複素環化合物ビラジカルが挿入され得る。Ｅ及びＲの具体例には、
【化１７】
2008502301.tif 000008
【化１８】
2008502301.tif 000009
【００６７】
が含まれる。
【００６８】
ペプチドを修飾する必要性は、あらゆる理由によって生じ得るものであり、これは、本発明の方法に従ってペプチドに抱合され得る化合物の種類にも反映される。例えば、治療用ペプチドの生物学的利用性を修飾するために、溶解度を増加（又は減少）させるためなど、ペプチドの物理化学的特性を変化させるために、ペプチドを抱合することが望ましいことがある。別の実施形態では、腎臓を通じた放出を抑制又は遅延させるために、例えば、血漿タンパク質（例えば、アルブミンなど）に結合するペプチドするか、又ペプチドのサイズを増加させるペプチドに化合物を抱合させることによって、身体中のクリアランス速度を修飾することが望ましい場合があり得る。別の実施形態では、ペプチドの分析を促進するために標識を抱合することが望ましい場合があり得る。このような標識の例には、放射性同位体、蛍光マーカー及び酵素基質が含まれる。さらに別の実施形態では、ペプチドの単離を促進するために、化合物がペプチドに抱合される。例えば、あるカラム材料に対して特異的な親和性を有する化合物をペプチドに抱合することができる。例えば、ペプチドの１以上の免疫原性エピトープを隠し、遮蔽し、又は覆い隠すために、ペプチドを抱合することによって、ペプチドの免疫原性を修飾することが望ましい場合もあり得る。
【００６９】
特に、本発明の方法は、クリアランスを減少させて、対応する非修飾ペプチドに比べて修飾ペプチドの血漿半減期を増加するために使用することができる。「血漿半減期」という用語は、その通常の意味で、すなわち、排除される前に、ペプチドの生物活性の５０％が血漿中に存在する時間という意味で使用される。別の用語には、血清半減期、循環半減期、循環性半減期、血清クリアランス、血漿クリアランス及びクリアランス半減期が含まれる。
【００７０】
血漿半減期に関して使用される「増加された」という用語は、抱合ペプチドの半減期が、対応する非修飾ペプチドの半減に比して著しく増加されることを表すために使用される。例えば、半減期は、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％又は少なくとも５００％増加され得る。
【００７１】
一実施形態において、本発明は、血漿半減期の増加が達成されたかどうかを測定する工程をさらに含む、上記ペプチドを抱合する方法に関する。
【００７２】
Ｐのクリアランスに比べて、式［ａ］の化合物のクリアランスを減少させるＺの具体例には、ＰＥＧ又はｍＰＥＧ基及びそのアミノ誘導体、直鎖、分岐及び／又は環状Ｃ１−２２アルキル、Ｃ２−２２アルケニル、Ｃ２−２２アルキニル、Ｃ１−２２ヘテロアルキル、Ｃ２−２２ヘテロアルケニル、Ｃ２−２２ヘテロアルキニル（１以上の、単素環芳香族化合物ビラジカル又は複素環化合物ビラジカルが、先述のビラジカル中に挿入されることができ、前記Ｃ１−２２又はＣ２−２２基は、必要に応じて、ヒドロキシル、ハロゲン、カルボキシル、ヘテロアリール及びアリールから選択される１以上の置換基で置換されることができ、前記アリール又はヘテロアリールは、ヒドロキシル、ハロゲン及びカルボキシルから選択される１以上の置換によって、必要に応じてさらに置換されることができる。）；ステロイド基；脂質基；多糖基；多糖基、デキストラン；ポリアミド基、例えばポリアミノ酸基；ＰＶＰ基；ＰＶＡ基；ポリ（１−３−ジオキサラン）；ポリ（１，３，６−トリオキサン）；エチレン／無水マレイン酸ポリマー基；Ｃｉｂａｃｒｏｎ色素染料、Ｃｉｂａｃｒｏｎ  Ｂｌｕｅ  ３ＧＡなど、及び、ＷＯ  ００／１２５８７号（参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されている、指定された長さのポリアミド鎖などの有機部分が含まれる。
【００７３】
具体的には、Ｃ１５及びＣ１７などのＣ１０−２０アルキル、及び式
【化１９】
2008502301.tif 000010
【００７４】
の、ベンゾフェノン誘導体が挙げられる。
【００７５】
本発明のペプチドに抱合されるＰＥＧは、任意の分子量のものであり得る。特に、前記分子量は、５００から６０，０００Ｄａなど、１０００から４０，０００Ｄａなど、５０００から４０，０００Ｄａなど、５００から１００，０００Ｄａであり得る。特に、１００００Ｄａ、２００００Ｄａ、３００００Ｄａ又は４００００Ｄａの分子量を有するＰＥＧを本発明において使用し得る。
【００７６】
一実施形態において、Ｚは、血漿タンパク質（例えば、アルブミンなど）に結合することが知られている１以上の部分を含む。化合物がアルブミンに結合する能力は、「Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ，  ４３，２０００，  １９８６−１９９２」（参照により、本明細書に組み込まれる。）に記載されているように決定することができる。本明細書において、Ｒｕ／Ｄａが０．０５より上、例えば０．１０より上、例えば０．１２より上、又は０．１５より上であれば、化合物はアルブミンに結合するものと定義される。
【００７７】
本発明の別の実施形態において、前記アルブミン結合部分は、４０アミノ酸未満の残基を含むペプチドなど、ペプチドである。アルブミン結合部分である多数の小ペプチドが、「Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７７，  ３８（２００２）３５０３５−３５０４３」（参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されている。
【００７８】
Ｚは、上記標識又は基の二以上を含むように、分岐させることができる。
【００７９】
式Ｙ−Ｅ−Ｚの化合物の具体例には、
【化２０】
2008502301.tif 000011
【００８０】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２１】
2008502301.tif 000012
【００８１】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２２】
2008502301.tif 000013
【００８２】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２３】
2008502301.tif 000014
【００８３】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２４】
2008502301.tif 000015
【００８４】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２５】
2008502301.tif 000016
【００８５】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２６】
2008502301.tif 000017
【００８６】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２７】
2008502301.tif 000018
【００８７】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２８】
2008502301.tif 000019
【００８８】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化２９】
2008502301.tif 000020
【００８９】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３０】
2008502301.tif 000021
【００９０】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３１】
2008502301.tif 000022
【００９１】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３２】
2008502301.tif 000023
【００９２】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３３】
2008502301.tif 000024
【００９３】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３４】
2008502301.tif 000025
【００９４】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３５】
2008502301.tif 000026
【００９５】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３６】
2008502301.tif 000027
【００９６】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３７】
2008502301.tif 000028
【００９７】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３８】
2008502301.tif 000029
【００９８】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化３９】
2008502301.tif 000030
【００９９】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４０】
2008502301.tif 000031
【０１００】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４１】
2008502301.tif 000032
【０１０１】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４２】
2008502301.tif 000033
【０１０２】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４３】
2008502301.tif 000034
【０１０３】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４４】
2008502301.tif 000035
【０１０４】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４５】
2008502301.tif 000036
【０１０５】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４６】
2008502301.tif 000037
【０１０６】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４７】
2008502301.tif 000038
【０１０７】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４８】
2008502301.tif 000039
【０１０８】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化４９】
2008502301.tif 000040
【０１０９】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５０】
2008502301.tif 000041
【０１１０】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５１】
2008502301.tif 000042
【０１１１】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５２】
2008502301.tif 000043
【０１１２】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５３】
2008502301.tif 000044
【０１１３】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５４】
2008502301.tif 000045
【０１１４】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５５】
2008502301.tif 000046
【０１１５】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５６】
2008502301.tif 000047
【０１１６】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５７】
2008502301.tif 000048
【０１１７】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５８】
2008502301.tif 000049
【０１１８】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化５９】
2008502301.tif 000050
【０１１９】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６０】
2008502301.tif 000051
【０１２０】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６１】
2008502301.tif 000052
【０１２１】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６２】
2008502301.tif 000053
【０１２２】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６３】
2008502301.tif 000054
【０１２３】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６４】
2008502301.tif 000055
【０１２４】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６５】
2008502301.tif 000056
【０１２５】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６６】
2008502301.tif 000057
【０１２６】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６７】
2008502301.tif 000058
【０１２７】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６８】
2008502301.tif 000059
【０１２８】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化６９】
2008502301.tif 000060
【０１２９】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７０】
2008502301.tif 000061
【０１３０】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７１】
2008502301.tif 000062
【０１３１】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７２】
2008502301.tif 000063
【０１３２】
（式中、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７３】
2008502301.tif 000064
【化７４】
2008502301.tif 000065
【化７５】
2008502301.tif 000066
【化７６】
2008502301.tif 000067
【０１３３】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７７】
2008502301.tif 000068
【０１３４】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７８】
2008502301.tif 000069
【０１３５】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化７９】
2008502301.tif 000070
【０１３６】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８０】
2008502301.tif 000071
【０１３７】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８１】
2008502301.tif 000072
【０１３８】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８２】
2008502301.tif 000073
【０１３９】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８３】
2008502301.tif 000074
【０１４０】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８４】
2008502301.tif 000075
【０１４１】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８５】
2008502301.tif 000076
【０１４２】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８６】
2008502301.tif 000077
【０１４３】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８７】
2008502301.tif 000078
【０１４４】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８８】
2008502301.tif 000079
【０１４５】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化８９】
2008502301.tif 000080
【０１４６】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９０】
2008502301.tif 000081
【０１４７】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９１】
2008502301.tif 000082
【０１４８】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９２】
2008502301.tif 000083
【０１４９】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９３】
2008502301.tif 000084
【０１５０】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９４】
2008502301.tif 000085
【０１５１】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９５】
2008502301.tif 000086
【０１５２】
（式中、ｍＰＥＧは、３０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９６】
2008502301.tif 000087
【化９７】
2008502301.tif 000088
【０１５３】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９８】
2008502301.tif 000089
【０１５４】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）、
【化９９】
2008502301.tif 000090
【０１５５】
（式中、ｍＰＥＧは、２０ｋＤａの分子量を有する。）
が含まれる。
【０１５６】
上で説明したように、カルボキシペプチダーゼの触媒作用は、Ｃ末端アミノ酸残残基を、例えば、式
【化１００】
2008502301.tif 000091
【０１５７】
の化合物と交換させる。
【０１５８】
このため、抱合すべきペプチドの配列全体を維持することを望むのであれば、ペプチドの配列を一アミノ酸残基伸長させることが必要である。これを行う手段は当業者に周知であり、例えば、組換え技術又はタンパク質合成法によって行われる。ペプチドの配列を伸張することを望む別の理由は、ペプチドを、手元にあるカルボキシペプチダーゼの基質とすることであり得る。上で説明したように、カルボキシペプチダーゼ間の差は、主に、それらが切除できるアミノ酸残基の種類に存する。このように、あるペプチドを、所定のカルボキシペプチダーゼに対する基質とするために、１以上のアミノ酸残基を追加することが必要であり得る。追加されるアミノ酸残基は、天然又は非天然であり得る。
【０１５９】
幾つかのペプチド（例えば、インシュリン及び第ＶＩＩ因子）は、２以上の鎖を含み、これは、それらが２以上のＣ末端を有することを意味すると認められる。一部のケースでは、使用されるカルボキシペプチダーゼを適切に選択することによって、Ｃ末端を区別することが可能であり得る。他のケースでは、例えば、存在する限られた数のＣ末端における抱合を実施するために、Ｃ末端の一つから１以上のアミノ酸残基を付加又は欠失することによって、Ｃ末端間に差を導入することが必要であり得る。さらに別のケースでは、ペプチドの全てのＣ末端に抱合することが有用であり得る。
【０１６０】
本発明の方法によって、例えば、酵素、ペプチドホルモン、増殖因子、抗体、サイトカイン、受容体、リンフォカイン及びワクチンアンチジーン（ｖａｃｃｉｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎｅｓ）など任意のペプチドが抱合されることが可能であり、具体的には、インシュリン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）、成長ホルモン、サイトカイン、トレフォイル因子ペプチド（ＴＦＦ）、ペプチドメラノコルチン受容体修飾物質及び第ＶＩＩ因子化合物などの治療用ペプチドが挙げられる。
【０１６１】
適用できる具体的なインシュリンは、ヒトインシュリンである。本明細書において、「ヒトインシュリン」という用語は、天然に産生されるインシュリン又は組換えによって産生されるインシュリンを表す。組換えヒトインシュリンは、任意の適切な宿主細胞中で産生されることができ、例えば、宿主細胞は、細菌、真菌（酵母を含む。）、昆虫、動物又は植物細胞であり得る。多くのインシュリン化合物が文献に開示されており、それらも、本発明の方法において特に有用である。「インシュリン化合物」（及び関連表現）は、１以上のアミノ酸が欠失され、及び／又は他のアミノ酸（非コードアミノ酸を含む。）によって置換されているヒトインシュリン、及び／又は追加のアミノ酸（すなわち、５２以上のアミノ酸）を含むヒトインシュリン、及び／又は少なくとも一つの有機置換基が１以上のアミノ酸に結合されているヒトインシュリンを意味する。
【０１６２】
本発明によって与えられる方法に特に適用できるインシュリン化合物の開示として、以下の特許文書が挙げられる。  ＷＯ９７／３１０２２号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸のアミノ基及び／又はＬｙｓＢ２９のεアミノ基が親油性置換基を含有するカルボン酸を有する、持続的な活性プロファイルを有するインシュリン化合物を開示する。具体的には、ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１４−ＣＯＯＨ）ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ）ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯＯＨ）ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）２０−ＣＯＯＨ）；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）２２−ＣＯＯＨ）ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１４−ＣＯＯＨ）ＡｓｐＢ２８−ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ）ＡｓｐＢ２８−ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯＯＨ）ＡｓｐＢ２８−ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）２０−ＣＯＯＨ）ＡｓｐＢ２８−ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）２２−ＣＯＯＨ）ＡｓｐＢ２８ヒトインシュリン；ＮεＢ３０−（ＣＯ−（ＣＨ２）１４−ＣＯＯＨ）ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインシュリン；ＮεＢ３０（ＣＯ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ）ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインシュリン；ＮεＢ３０−（ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯＯＨ）ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインシュリン；ＮεＢ３０−（ＣＯ−（ＣＨ２）２０−ＣＯＯＨ）ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインシュリン；ＮεＢ３０−（ＣＯ−（ＣＨ２）２２−ＣＯＯＨ）ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０−ヒトインシュリン；ＮεＢ２８−（ＣＯ−（ＣＨ２）１４−ＣＯＯＨ）ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインシュリン；ＮεＢ２８−（ＣＯ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ）ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインシュリン；ＮεＢ２８−（ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯＯＨ）ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインシュリン；ＮεＢ２８−（ＣＯ−（ＣＨ２）２０−ＣＯＯＨ）ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインシュリン；ＮεＢ２８−（ＣＯ−（ＣＨ２）２２−ＣＯＯＨ）ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９−ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１４−ＣＯＯＨ）ｄｅｓＢ３０ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ）ｄｅｓＢ３０ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯＯＨ）ｄｅｓＢ３０ヒトインシュリン；ＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）２０−ＣＯＯＨ）ｄｅｓＢ３０ヒトインシュリン；及びＮεＢ２９−（ＣＯ−（ＣＨ２）２２ＣＯＯＨ）ｄｅｓＢ３０ヒトインシュリンが挙げられる。  ＷＯ  ９６／２９３４４号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸のアミノ基に、１２から４０個の炭素原子を含む親油性置換基が付着されており、又はＢ鎖のＣ末端アミノ酸のカルボン酸基に、１２から４０個の炭素原子を含む親油性置換基が付着されている、持続された活性プロファイルを有するインシュリン化合物を開示する。
【０１６３】
ＷＯ  ９５／０７９３１号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、ＬｙｓＢ２９のεアミノ基が親油性置換基を有する、持続された活性プロファイルを有するインシュリン化合物を開示する。具体的には、ＮεＢ２９−トリデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｙＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｙＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｙＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｙＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＡｌａＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＡｌａＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＡｌａＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＡｌａＡ２１ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｎＢ３ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＮεＢ２９トリデカノイルＧｌｙＡ２１ヒトインシュリ
ン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｙＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｙＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｙＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９ドデカノイルＧｌｙＡ２１ＧＩｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＡｌａＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＡｌａＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＡｌａＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＡｌａＡ２１ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｎＢ３ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９デカノイルＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９デカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｙＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−ドデカノイルＡｌａＡ２１ＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−トリデカノイルＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−テトラデカノイルＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン、ＮεＢ２９−デカノイルＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリン及びＮεＢ２９−ドデカノイルＧｌｎＢ３ＧｌｕＢ３０ヒトインシュリンが挙げられる���  ＷＯ  ９７／０２０４３号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、インシュリン予防において有用である、ホルモンとして不活性なインシュリン化合物を開示しており、特に、ヒトインシュリンのこのような類縁体は、ｄｅｓＡ１ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ａ１−Ａ２）ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ａ１−Ａ３）ヒトインシュリン；ｄｅｓＡ２１ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ｂ１−Ｂ５）ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ｂ１−Ｂ６）ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ｂ２３−Ｂ３０）ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ｂ２４−Ｂ３０）ヒトインシュリン；ｄｅｓ（Ｂ２５−Ｂ３０）ヒトインシュリン；ＧｌｙＡ２ヒトインシュリン；ＡｌａＡ２ヒトインシュリン；ＮｌｅＡ２ヒトインシュリン；ＴｈｒＡ２ヒトインシュリン；ＰｒｏＡ２ヒトインシュリン；Ｄ−アロＩｌｅＡ２ヒトインシュリン；ＮｖａＡ３ヒトインシュリン；ＮｌｅＡ３ヒトインシュリン；ＬｅｕＡ３ヒトインシュリン；ＶａｌＡ２，ＩｌｅＡ３ヒトインシュリン；ＡｂｕＡ２，ＡｂｕＡ３ヒトインシュリン；ＧｌｙＡ２，ＧｌｙＡ３ヒトインシュリン；Ｄ−ＣｙｓＡ６ヒトインシュリン；Ｄ−ＣｙｓＡ６，Ｄ−ＣｙｓＡ１１ヒトインシュリン；ＳｅｒＡ６，ＳｅｒＡ１１，ｄｅｓ（Ａ８−Ａ１０）ヒトインシュリン；Ｄ−ＣｙｓＡ７ヒトインシュリン；Ｄ−ＣｙｓＡ１１ヒトインシュリン；ＬｅｕＡ１９ヒトインシュリン；ＧｌｙＢ６ヒトインシュリン；ＧｌｕＢ１２ヒトイ
ンシュリン；ＡｓｎＢ１２ヒトインシュリン；ＰｈｅＢ１２ヒトインシュリン；Ｄ−ＡｌａＢ１２ヒトインシュリン；及びＡｓｐＢ２５ヒトインシュリンから選択され、本発明の方法に適用することができる。
【０１６４】
ＷＯ  ９２／１５６１１号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、インシュリン受容体結合プロセスにおいて、速い会合速度定数を有し、Ａ１３位にチロシン及び／又は、Ｂ１７位にフェニルアラニン、トリプトファン又はチロシンを含むことを特徴とする、ヒトインシュリンの類縁体を開示する。特に、このような類縁体は、ＴｙｒＡ１３ヒトインシュリン、ＰｈｅＢ１７ヒトインシュリン、ＴｒｐＢ１７ヒトインシュリン、ＴｙｒＢ１７ヒトインシュリン、ＴｙｒＡ１３，ＰｈｅＢ１７ヒトインシュリン，ＴｙｒＡ１３，ＴｒｐＢ１７ヒトインシュリン，ＴｙｒＡ１３，ＴｙｒＢ１７ヒトインシュリン、ＰｈｅＡ１３，ＰｈｅＢ１７ヒトインシュリン、ＰｈｅＡ１３，ＴｒｐＢ１７ヒトインシュリン、ＰｈｅＡ１３，ＴｙｒＢ１７ヒトインシュリン、ＴｒｐＡ１３，ＰｈｅＢ１７ヒトインシュリン、ＴｒｐＡ１３，ＴｒｐＢ１７ヒトインシュリン及びＴｒｐＡ１３，ＴｙｒＢ１７ヒトインシュリンから選択される。
【０１６５】
ＷＯ  ９２／００３２２号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、特異的な組織へ標的誘導されることができ、インシュリン分子中のＡ１３位及び／又はＢ１７位中に、ロイシンとは異なる天然に存在するアミノ酸残基を有すること、及び／又は、インシュリン分子中のＢ１８位中に、バリンとは異なる天然に存在するアミノ酸残基を有することを特徴とする、ヒトインシュリンの類縁体を開示する。特に、このような類縁体は、ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン，ＡｌａＢ１８ヒトインシュリン，ＡｓｎＡ１３ヒトインシュリン，ＡｓｎＡ１３，ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン、ＡｓｎＡ１３，ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＡｓｎＡ１３，ＧｌｕＢ１７ヒトインシュリン、ＡｓｎＢ１８ヒトインシュリン、ＡｓｐＡ１３ヒトインシュリン、ＡｓｐＡ１３，ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン、ＡｓｐＡ１３，ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＡｓｐＡ１３,ＧｌｕＢ１７ヒトインシュリン、ＡｓｐＢ１８ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１３ヒトインシュリン，ＧｌｎＡ１３，ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１３，ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１８ヒトインシュリン、ＧｌｕＡ１３ヒトインシュリン、ＧｌｕＡ１３，ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｕＡ１３，ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｕＡ１３，ＧｌｕＢ１７ヒトインシュリンＧｌｕＢ１８ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ１３ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ１３，ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ１３，ＡｓｎＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ１３、ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ１３、ＧｌｕＢ１７ヒトインシュリン、ＧｌｙＢ１８ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＧｌｎＡ１７，ＧｌｕＢ１０，ＧｌｎＢ１７−ｄｅｓ（ＴｈｒＢ３０）ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＡｌａＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＡｓｎＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＧｌｎＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＧｌｕＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ１３，ＴｈｒＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＢ１４、ＡｓｐＢ１７ヒトインシュリン、ＳｅｒＢ１８ヒトインシュリン、ＴｈｒＡ１３ヒトインシュリン又はＴｈｒＢ１８ヒトインシュリンから選択される。
【０１６６】
ＷＯ  ９０／０１０３８号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、高い生物学的活性を有し、ＰｈｅＢ２５が、Ｈｉｓ又はＴｙｒによって置換されていること、Ａ４、Ａ８、Ａ１７、Ａ２１、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１２、Ｂ１３、Ｂ２１、Ｂ２６、Ｂ２７、Ｂ２８及びＢ３０位の一又は複数に置換を有すること、並びにＢ３０位のアミノ酸残基が必要に応じて存在しないことを特徴とするヒトインシュリンの類縁体を開示する。特に、このような類縁体は、ＴｙｒＢ２５ヒトインシュリン、ＴｙｒＢ２５、ＡｓｐＢ２８ヒトインシュリン、ＨｉｓＢ２５ヒトインシュリン、ＨｉｓＢ２５，ＡｓｐＢ２８ヒトインシュリン、ＴｙｒＢ２５ヒトインシュリン−Ｂ３０−アミド及びＨｉｓＢ２５ヒトインシュリン−Ｂ３０−アミドから選択される。
【０１６７】
ＷＯ  ８６／０５４９６号（Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ｇｅｎｔｏｆｔｅ）は、持続された作用を有し、封鎖されたＢ３０カルボキシル基を有すること、並びにＡ４、Ａ１７、Ａ２１、Ｂ１３及びＢ２１位のアミノ酸残基中に１から４個の封鎖されたカルボキシル基を有することを特徴とするヒトインシュリンの類縁体を開示する。特に、このような類縁体は、インシュリン−Ｂ３０−オクチルエステル、インシュリン−Ｂ３０−ドデシルアミド、インシュリン−Ｂ３０−ヘキサデシルアミド、インシュリン−（Ｂ２１，Ｂ３０）−ジメチルエステル、インシュリン−（Ｂ１７，Ｂ３０）−ジメチルエステル、インシュリン−（Ａ４，Ｂ３０）ジアミド，インシュリン−Ａ１７アミド−Ｂ３０−オクチルエステル、インシュリン−（Ａ４，Ｂ１３）−ジアミド−Ｂ３０−ヘキシルアミド、インシュリン−（Ａ４，Ａ１７，Ｂ２１，Ｂ３０）−テトラアミド、インシュリン−（Ａ１７，Ｂ３０）−ジアミド、Ａ４−Ａｌａ−インシュリン−Ｂ３０−アミド及びＢ３０−Ｌｅｕ−インシュリン−（Ａ４，Ｂ３０）−ジアミドの中から選択される。
【０１６８】
ＷＯ  ８６／０５４９７号（Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ｇｅｎｔｏｆｔｅ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ａ４、Ａ１７、Ｂ１３及びＢ２１位の４つのアミノ酸残基の一以上が未変化の側鎖を含むインシュリン化合物を開示する。具体的には、ヒトインシュリンＡ１７−Ｇｌｎ、ヒトインシュリンＡ４−Ｇｌｎ、ブタインシュリンＢ２１−Ｇｌｎ、ヒトインシュリンＢ１３−Ｇｌｎ、ヒトインシュリン（Ａ１７，Ｂ２１）−Ｇｌｎ、ヒトインシュリンＡ４−Ａｌａ、ヒトインシュリンＢ２１−Ｔｈｒ、ヒトインシュリンＢ１３−Ｖａｌ、ヒトインシュリン−Ｔｈｒ−Ａ１７−Ｇｌｎ、ヒトインシュリンＢ２１−メチルエステル及びヒトインシュリンＡ１７−メチルエステルが挙げられる。
【０１６９】
ＷＯ  ９２／００３２１号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ｂ鎖のＮ末端に正の電荷が導入されている、持続された活性を有するインシュリン化合物を開示する。具体的には、ＡｒｇＢ５,ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ５，ＰｒｏＢ６，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ５，ＧＩｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ５，ＰｒｏＢ６，ＧｌｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２，ＰｒｏＢ３，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２，ＧｌｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２，ＰｒｏＢ３，ＧｌｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２，ＡｒｇＢ３，ＳｅｒＡ２１、ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２，ＡｒｇＢ３，ＳｅｒＡ２１ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ４，ＰｒｏＢ５，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ４，ＡｒｇＢ５、ＰｒｏＢ６、ＧｌｙＡ２１,ＴｈｒＢ３０ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３，ＧｌｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ４，ＧｌｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ４，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン及びＡｒｇＢ１，ＰｒｏＢ２，ＧｌｙＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリンが挙げられる。
【０１７０】
ＷＯ  ９０／０７５２２（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ｂ２８位に、正に帯電したアミノ酸残基（すなわち、Ｌｙｓ又はＡｒｇ）が存在する、溶液中で低い会合能を示すインシュリン化合物を開示する。具体的には、ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］−ヒトインシュリン、ｄｅｓ［ＴｙｒＢ２６］−ヒトインシュリン、ｄｅｓ［ＴｈｒＢ２７］−ヒトインシュリン、ｄｅｓ［ＰｒｏＢ２８］−ヒトインシュリン、ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］−ブタインシュリン、ｄｅｓ［ＰｒｏＢ２８］−ブタインシュリン、ｄｅｓ［ＰｒｏＢ２８］−ウサギインシュリン、ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］，ｄｅｓ［ＴｈｒＢ３０］−ヒトインシュリン、ｄｅｓ［ＴｙｒＢ２６］，ｄｅｓ［ＴｈｒＢ３０］−ヒトインシュリン、［ＳｅｒＡ２１］−ｄｅｓ［ＰｒｏＢ２８］−ヒトインシュリン、［ＧｌｙＡ２１］−ｄｅｓ［ＰｒｏＢ２８］−ヒトインシュリン、［ＧｌｙＡ２１］−ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］−ヒトインシュリン、［ＡｓｐＡ２１］−ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］−ヒトインシュリン、［ＨｉｓＢ２５］−ｄｅｓ［ＴｙｒＢ２６］，ｄｅｓ［ＴｈｒＢ３０］−ヒトインシュリン、［ＡｓｎＢ２５］−ｄｅｓ［ＴｙｒＢ２６］，ｄｅｓ［ＴｈｒＢ３０］−ヒトインシュリン、［ＡｓｐＡ２１］−ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］，ｄｅｓ［ＴｈｒＢ３０］−ヒトインシュリン、［ＡｓｐＢ２８］−ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５］−ヒトインシュリン、［ＡｓｐＢ３］−ｄｅｓ［ＰｈｅＢ２５−ヒトインシュリン、［ＬｙｓＢ２８］−ヒトインシュリン、［ＬｙｓＢ２８，ＴｈｒＢ２９］−ヒトインシュリン及び［ＡｒｇＢ２８］−ｄｅｓ［ＬｙｓＢ２９］−ヒトインシュリンが挙げられる。
【０１７１】
ＷＯ  ９０／１１２９０号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、延長された活性を有するインシュリン化合物を開示する。具体的には、［ＡｒｇＡ０］−ヒトインシュリン−（Ｂ３０−アミド）、［ＡｒｇＡ０，ＧｌｎＢ１３］−ヒトインシュリン−（Ｂ３０−アミド）、［ＡｒｇＡ０，ＧｌｎＡ４，ＡｓｐＡ２１］−ヒトインシュリン−（Ｂ３０−アミド）、［ＡｒｇＡ０，ＳｅｒＡ２１］−ヒトインシュリン−（Ｂ３０−アミド）及び［ＡｒｇＡ０，ＡｒｇＢ２７］−ｄｅｓ［ＴｈｒＢ３０］−ヒトインシュリンが挙げられる。
【０１７２】
ＷＯ  ９０／１０６４５号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、グリコシル化されたインシュリンを開示する。具体的には、Ｐｈｅ（Ｂ１）グルコースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）マンノースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１）マンノースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）マンノースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）ガラクトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１）ガラクトースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）ガラクトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）マルトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）ラクトースヒトインシュリン，Ｇｌｙ（Ａ１）グルコースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１）マルトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１）ラクトースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）グルコースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）マルトースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）ラクトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｐｈｅ（Ｂ１）ジグルコースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジグルコースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジグルコースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）イソマルトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１）イソマルトースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）イソマルトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）マルトトリオースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１）マルトトリオースヒトインシュリン、Ｌｙｓ（Ｂ２９）マルトトリオースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｐｈｅ（Ｂ１）ジマルトースヒトインシュリン，Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジマルトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジマルトースヒトインシュリン，Ｇｌｙ（Ａ１），Ｐｈｅ（Ｂ１）ジラクトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジラクトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジラクトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｐｈｅ（Ｂ１）ジマルトトリオースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジマルトトリオースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジマルトトリオースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｇｌｙ（Ａ１）ジマンノースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）、Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジマンノースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジマンノースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｇｌｙ（Ａ１）ジガラクトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジガラクトースヒトインシュリン、
Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジガラクトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｇｌｙ（Ａ１）ジイソマルトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジイソマルトースヒトインシュリン、Ｇｌｙ（Ａ１），Ｌｙｓ（Ｂ２９）ジイソマルトースヒトインシュリン、Ｐｈｅ（Ｂ１）グルコース［ＡｓｐＢ１０］ヒトインシュリン及びＧｌｙ（Ａ１），Ｐｈｅ（Ｂ１）グルコース［ＡｓｐＢ１］ヒトインシュリン
が挙げられる。
【０１７３】
ＷＯ８８／０６５９９９号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ａｎｓ２１Ａが他のアミノ酸残基で置換された、安定化されたインシュリン化合物を開示する。具体的には、ＧｌｙＡ２１ヒトインシュリン、ＡｌａＡ２１ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ２１ヒトインシュリン、ＴｈｒＡ２１ヒトインシュリン及びｈＳｅｒＡ２１ヒトインシュリンが挙げられる。
【０１７４】
ＥＰ２５４５１６号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、塩基性アミノ酸残基が中性アミノ酸残基によって置換されている、延長された作用を有するインシュリン化合物を開示する。具体的には、ＧｌｙＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン，ＳｅｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＴｈｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｌａＢ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＨｉｓＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｓｐＢ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＮ２ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＴｈｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｌａＢ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＨｉｓＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｓｐＢ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＳｅｒＡ２１，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＳｅｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＴｈｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｌｎＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＨｉｓＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｓｐＡ２１，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＧｌｙＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＳｅｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＴｈｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｌａＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＨｉｓＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｓｐＡ２１，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２、ＡｓｎＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＴｈｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＡｌａＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＨｉｓＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＡｓｐＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＡｓｎＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＳｅｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＴｈｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＡｌａＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリンＨｉｓＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＡｓｐＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｎＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＳｅｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒ���インシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＴｈｒＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｌａＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＨｉｓＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｐＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＧｌｙＡ２１，ＡｒｇＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｎＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＳｅｒＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＴｈｒＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｎＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＨｉｓＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｐＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＧｌｙＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリンＡｒｇＡ２７，ＡｓｎＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ２７，ＳｅｒＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ２７，ＴｈｒＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ２７，ＡｌａＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ２７，ＨｉｓＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ２７，ＡｓｐＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＡｒｇＡ２７，ＧｌｙＡ２１，ＧｌｎＢ１３ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｎＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＳｅｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＴｈｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｌａＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＨｉｓＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＡｓｐＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＧｌｙＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｓｎＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＳｅｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＴｈｒＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｌａＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＨｉｓＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｓｐＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリン及びＧｌｎＢ１３，ＧｌｙＡ２１，ＬｙｓＢ２７ヒトインシュリンが挙げられる。
【０１７５】
ＥＰ２１４８２６（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、迅速に効果を発現するインシュリン化合物を開示する。
【０１７６】
ＥＰ１９４８６４号（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、塩基性アミノ酸残基が中性アミノ酸残基によって置換されている、持続的な作用を有するインシュリン化合物を開示する。具体的には、ＧｌｎＡ１７，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＧｌｎＢ１３，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン，ＧｌｎＡ１７，ＬｙｓＢ２７−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＡ１７，ＧｌｎＡ１７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＬｙｓＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＧｌｎＢ１３，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２７，ＡｒｇＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２７，ＬｙｓＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ２７，ＡｒｇＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ２７，ＬｙｓＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ２７，ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン，ＬｙｓＢ２９−ＮＨ２、ｄｅｓ−（Ｂ３０）ヒトインシュリン、ＴｈｒＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ３０(Ｌａｕ)−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ３０，ＡｒｇＢ３１−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＬｙｓＢ３０，ＬｙｓＢ３１−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３０−ＮＨ２ヒトインシュリン、ＡｒｇＢ３０，ＡｒｇＢ３１−ＮＨ２ヒトインシュリン及びＡｒｇＢ３０，ＬｙｓＢ３１−ＮＨ２ヒトインシュリンが挙げられる。
【０１７７】
米国特許第３，５２８，９６０号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、インシュリン分子の１、２又は３個の一級アミノ基がカルボキシアロイル基を有する、Ｎ−カルボキシアロイルインシュリン化合物を開示する。
【０１７８】
英国特許１．４９２．９９７号（Ｎａｔ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．Ｃｏｒｐ．）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、ＮεＢ２９にカルバミル置換を有し、改善された血糖降下効果のプロファイルを有するインシュリン化合物を開示する。
【０１７９】
日本国出願公開１−２５４６９９号（Ｋｏｄａｍａ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、アルカノイル基がＰｈｅＢ１のアミノ基又はＬｙｓＢ２９のεアミノ基又はこれらの両方に結合されているインシュリン化合物を開示する。
【０１８０】
日本国出願公開５７−０６７５４８（Ｓｈｉｏｎｏｇｉ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ｂ３０位が、ヌクレオチドのトリップレットによって必ずしもコードされることができない、少なくとも５つの炭素原子を有するアミノ酸を有する、インシュリン化合物を開示する。
【０１８１】
ＷＯ０３／０５３３３９（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）は、Ｎ末端中のＡ鎖が２アミノ酸残基伸長されており（Ａ−１及びＡ０）、Ｎ末端のＢ鎖が２アミノ酸残基伸長されており（Ｂ−１及びＢ０）、Ｂ２８、Ｂ２９及びＢ３９位のアミノ酸残基が置換されることができ、Ｂ２８又はＢ２９位のＬｙｓのεアミノ基が、正に帯電したアミノ酸のαカルボキシル基に共有結合されて、Ｌｙｓ−Ｎεアミノ酸誘導体を形成する、インシュリン化合物を開示する。具体的には、Ａ−１及びＢ−１が何れも存在せず、Ａ０がＡｒｇを表し、Ｂ０がＡｒｇを表し、又は存在しない類縁体が挙げられる。
【０１８２】
ｉ．Ｂ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ又はＡｌａであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏである類縁体；及び
ｉｉ．ｄｅｓ（Ｂ２８−Ｂ３０）、ｄｅｓ（Ｂ２７）又はｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリンからなる群から選択されるインシュリン化合物、具体的には、Ｂ２８位がＡｓｐ又はＬｙｓであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるインシュリン化合物も、本発明の方法に適用することができる。
【０１８３】
ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリンも、本発明の方法に適用することができる。
【０１８４】
適用可能な他のインシュリン化合物は、Ｂ２９−Ｎε−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、Ｂ２９−Ｎε−パルミトイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、Ｂ２９−Ｎε−ミリストイルヒトインシュリン、Ｂ２９−Ｎε−パルミトイルヒトインシュリン、Ｂ２８−Ｎε−ミリストイルＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインシュリン、Ｂ２８−Ｎε−パルミトイルＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインシュリン、Ｂ３０−Ｎε−ミリストイル−ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０ヒトインシュリン、Ｂ３０−Ｎε−パルミトイル−ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０ヒトインシュリン、Ｂ２９−Ｎε−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン，Ｂ２９−Ｎε−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、Ｂ２９−Ｎε−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリン、Ｂ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）ヒトインシュリン及びＢ２９−Ｎε−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインシュリンからなる群から選択される。
【０１８５】
本発明の方法に適用できるＧＬＰ−１の例には、ヒトＧＬＰ−１及びＧＬＰ−１化合物が含まれる。ヒトＧＬＰ−１は、特に、遠位回腸、膵臓及び脳内のＬ細胞中で合成されるプレプログルカゴンに由来する３７アミノ酸残基のペプチドである。ＧＬＰ−１は、グルコース代謝並びに胃腸分泌及び代謝において制御機能を有する重要な腸のホルモンである。ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、ＧＬＰ−１（７−３７）及びＧＬＰ−２を与えるプレプログルカゴンのプロセッシングは、主として、Ｌ細胞中で起こる。断片ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド及びＧＬＰ−１（７−３７）は、何れもグルコース依存性のインシュリン分泌促進物質である。過去２０年の間に、アメリカドクトカゲ（Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ  ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ及びＨｅｌｏｄｅｒｍａ  ｈｏｒｒｉｄｕｍ）の毒から、数多くのＧＬＰ−１の構造類縁体が単離された。エキセンディン−４は、Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ  ｈｏｒｒｉｄｕｍの毒から単離された３９アミノ酸残基のペプチドであり、このペプチドは、ＧＬＰ−１と５２％の相同性を有する。エキセンディン−４は、インシュリンの放出を刺激し、イヌに注射されたときに血中グルコースレベルを低下させることが示されている強力なＧＬＰ−１受容体アゴニストである。ＧＬＰ−１（１−３７）及びエキセンディン−４（１−３９）並びにそれらのある種の断片、類縁体及び誘導体の群（本明細書において、ＧＬＰ−１化合物と表記する。）は、強力なインシュリン分泌促進物質であり、それらは全て、本発明の方法に適用することができる。ＧＬＰ−１（１−３７）のインシュリン分泌促進断片は、その配列全体がＧＬＰ−１（１−３７）の配列中に見出すことができ、少なくとも一つの末端アミノ酸が欠失されている、インシュリン分泌促進ペプチドである。ＧＬＰ−１（１−３７）のインシュリン分泌促進断片の例は、ＧＬＰ−１（１−３７）の１から６位のアミノ酸残基が欠失されているＧＬＰ−１（７−３７）、並びにＧＬＰ−１（１−３７）の１から６位及び３７位のアミノ酸残基が欠失されているＧＬＰ−１（７−３６）である。エキセンディン−４（１−３９）のインシュリン分泌促進断片の例は、エキセンディン−４（１−３８）及びエキセンディン−４（１−３１）である。ある化合物のインシュリン分泌促進特性は、本分野において周知のインビボ又はインビトロアッセイによって決定することができる。例えば、この化合物を動物に投与し、インシュリン濃度を経時的にモニタリングすることができる。ＧＬＰ−１（１−３７）及びエキセンディン−４（１−３９）のインシュリン分泌促進類縁体は、１以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基と交換されており、及び／又は１以上のアミノ酸残基がそこから欠失されており、及び／又は１以上のアミノ酸残基がそこから付加されている、それぞれの分子を表す（但し、前記類縁体は、インシュリン分泌促進性であるか、インシュリン分泌促進化合物のプロドラッグである。）。ＧＬＰ−１（１−３７）のインシュリン分泌促進類縁体の例は、例えば、８位のアラニンがメチオニンによって置換されており、１から６位のアミノ酸残基が欠失されているＭｅｔ８−ＧＬＰ−１（７−３７）、及び３４位のバリンがアルギニンによって置換されており、１から６位のアミノ酸残基が欠失されているＡｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）である。エキセンディン−４（１−３９）のインシュリン分泌類縁体の例は、２及び３位のアミノ酸残基が、それぞれ、セリン及びアスパラギン酸で置換されている、Ｓｅｒ２Ａｓｐ３−エキセンディン−４（１−３９）である（この類縁体は、本分野において、エキセンディン−３としても知られている。）。ＧＬＰ−１（１−３７）、エキセンディン−４（１−３９）及びそれらの類縁体のインシュリン分泌促進誘導体は、これらのペプチドの誘導体、すなわち親ペプチド分子中に存在しない少なくとも一つの置換基を有すると当業者が考えるものである（但し、前記類縁体は、インシュリン分泌促進性であるか、又はインシュリン分泌促進化合物のプロドラッグである。）。置換基の例は、アミド、炭水化物、アルキル基及び親油性置換基である。ＧＬＰ−１（１−３７）、エキセンディン−４（１−３９）及びそれらの類縁体のインシュリン分泌促進誘導体の例は、ＧＬＰ−１（７−３６）−アミド、Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（Ｎε−（γ−Ｇｌｕ（Ｎα−ヘキサデカノイル）））−ＧＬＰ−１（７−３７）及びＴｙｒ３１−エキセンディン−４（１−３１）−アミドである。ＧＬＰ−１（１−３７）、エキセンディン−４（１−３９）、そのインシュリン分泌促進断片、そのインシュリン分泌促進類縁体及びそのインシュリン分泌促進誘導体のさらなる例は、ＷＯ  ９８／０８８７１号、ＷＯ  ９９／４３７０６号、米国  ５４２４２８６号  及びＷＯ  ００／０９６６６号（全て参照により、本明細書に開示される。）に記載されている。
【０１８６】
ＧＬＰ−２及びＧＬＰ−２化合物は、本発明によって提供される方法によって修飾することもできる。本明細書において、好ましくは１μＭ未満、例えば１００ｎＭの親和定数（ＫＤ）又は効力（ＥＣ５０）で、ＧＬＰ−２化合物はＧＬＰ−２受容体に結合する。「ＧＬＰ−２化合物」という用語は、１以上のアミノ酸残基が欠失され、及び／又は別の天然又は非天然アミノ酸残基によって置換されたヒトＧＬＰ−２、及び／又は追加のアミノ酸残基を含むヒトＧＬＰ−２、及び／又は少なくとも一つの有機置換基が１以上のアミノ酸残基に結合されているヒトＧＬＰ−２を表すものとする。特に、３３の連続するアミノ酸の任意の配列において、アミノ酸配列が、ヒトＧＬＰ−２のアミノ酸配列の６０％超を示す、ペプチドが考えられる。最大４つのアミノ酸がヒトＧＬＰ−２のアミノ酸配列から欠失している場合に、３７の連続するアミノ酸の任意の配列において、アミノ酸配列が、ヒトＧＬＰ−２のアミノ酸配列の６０％超を示す、ペプチドも考えられる。最大２つのアミノ酸がヒトＧＬＰ−２のアミノ酸配列に付加されている場合に、３１の連続するアミノ酸の任意の配列において、アミノ酸配列が、ＧＬＰ−２のアミノ酸配列の６０％超を示す、ペプチドも考えられる。「ＧＬＰ化合物」という用語には、個体によって存在し、発生する場合がある自然の対立遺伝子の変動も含まれる。また、グリコシル化又は他の翻訳後修飾の程度及び位置は、選択された宿主細胞及び宿主細胞環境の性質に応じて、変動し得る。
【０１８７】
本発明に従って使用することができる候補ＧＬＰ−２化合物には、ＷＯ９６／３２４１４号、ＷＯ  ９７／３９０３１号、ＷＯ  ９８／０３５４７号、ＷＯ  ９６／２９３４２号、ＷＯ  ９７／３１９４３号、ＷＯ  ９８／０８８７２号（全て参照により、本明細書に組み込まれる。）に記載されているＧＬＰ−２化合物が含まれる。特に、以下のＧＬＰ−２化合物は、本発明の方法に適用することができる。Ａ２Ｇ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ５Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ７Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ８Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｅ９Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｍ１０Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１１Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｔ１２Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｉ１３Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１４Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ１５Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１６Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１７Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ａ１８Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ２１Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ２４Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｑ２８Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ５Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ７Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ８Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｅ９Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｍ１０Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１１Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｔ１２Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｉ１３Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１４Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ１５Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１６Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１７Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ａ１８Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ２１Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ２４Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｑ２８Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｓ５Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｓ７Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｄ８Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｅ９Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｍ１０Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｎ１１Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｔ１２Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｉ１３Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｌ１４Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｄ１５Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｎ１６Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ａ１８Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｄ２１Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｎ２４Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；及びＤ３Ｅ／Ｑ２８Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ��２（１−３３）。
【０１８８】
本発明の一実施形態において、ＧＬＰ−２化合物は、ＧＬＰ−２（１−３３）、３４Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３４）、Ａ２Ｇ−ＧＬＰ−２（１−３３）、Ａ２Ｇ／３４Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３４）、Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ５Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ７Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ８Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｅ９Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｍ１０Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１１Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｔ１２Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｉ１３Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１４Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ１５Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１６Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１７Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ａ１８Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ２１Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ２４Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｑ２８Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ５Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｓ７Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ８Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｅ９Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｍ１０Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１１Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｔ１２Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｉ１３Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１４Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ１５Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ１６Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ１７Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ａ１８Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ２１Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｎ２４Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｑ２８Ｋ／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｋ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｓ５Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｓ７Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｄ８Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｅ９Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｍ１０Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｎ１１Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｔ１２Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｉ１３Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｌ１４Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｄ１５Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｎ１６Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ａ１８Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｄ２１Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｎ２４Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｄ３Ｅ／Ｑ２８Ｋ／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）から選択される。
【０１８９】
親油性置換基が、８から２５個の炭素原子、例えば、１２から２０個の炭素原子など、４から４０個の炭素原子を含むＧＬＰ−２誘導体のような、ＧＬＰ−２誘導体に親油性置換基が一つだけ付着したＧＬＰ−２誘導体も、本発明の方法に適用することができる。
【０１９０】
親油性置換基は、親油性置換基のカルボキシル基がアミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成するように、アミノ酸残基に付着させることができる。
【０１９１】
例として、親油性置換基はＬｙｓ残基に付着される。
【０１９２】
親油性置換基は、親油性置換基のアミノ基がアミノ酸残基のカルボキシル基とアミド結合を形成するように、アミノ酸残基に付着させることができる。
【０１９３】
親油性置換基は、スペーサーを用いてＧＬＰ−２ペプチドに付着させることもでき、前記スペーサーは、β−アラニン、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、γ−グルタミン酸、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｐを含有するジペプチド、Ｇｌｕを含有するジペプチド又はＬｙｓを含有するジペプチドから選択することができる。本発明の一実施形態において、スペーサーは、β−アラニンである。親ＧＬＰ−２ペプチドのカルボキシル基は、スペーサーのアミノ基とアミド結合を形成することができ、アミノ酸又はジペプチドスペーサーのカルボキシル基は、親油性置換基のアミノ基とアミド結合を形成する。
【０１９４】
親ＧＬＰ−２ペプチドのアミノ基は、スペーサーのカルボキシル基とアミド結合を形成することができ、スペーサーのアミノ基は、親油性置換基のカルボキシル基とアミド結合を形成する。
【０１９５】
本発明の一実施形態において、親油性置換基は、直鎖又は分岐アルキル基である。本発明の一実施形態において、親油性置換基は、直鎖又は分岐脂肪酸のアシル基である。
【０１９６】
本発明の一実施形態において、親油性置換基は、直鎖又は分岐アルカンα，ω−ジカルボン酸のアシル基である。
【０１９７】
本発明の一実施形態において、ＧＬＰ−２誘導体は一つの親油性置換基を有する。本発明の一実施形態において、ＧＬＰ−２誘導体は二つの親油性置換基を有する。本発明の一実施形態において、ＧＬＰ−２誘導体は三つの親油性置換基を有する。本発明の一実施形態において、ＧＬＰ−２誘導体は四つの親油性置換基を有する。以下のリストは、本発明の方法に具体的に適用できるＧＬＰ−２誘導体を含む。
【０１９８】
Ｓ５Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｓ７Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ８Ｋ（３−ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｅ９Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｍ１０Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｎ１１Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｔ１２Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｉ１３Ｋ（３−ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１４Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ１５Ｋ（３−ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｎ１６Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（オクタノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ノナノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（デカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ウンデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ドデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（トリデカノイルアミノ）プロピオニル−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（テトラデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ペンタデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ヘプタデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（オクタデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ノナデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（エイコサノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（オクタノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ノナノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（デカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ウンデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ドデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（トリデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ペンタデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（オクタデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ノナデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌｌ７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（エイコサノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（オクタノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ノナノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（デカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ウンデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ドデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（トリデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−ペンタデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−ヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−オクタデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−ノナデカノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（エイコサノイルアミノ）ブタノイル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ａ１８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ２１Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｎ２４Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｑ２８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｓ５Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｓ７Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｅ９Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｍ１０Ｋ（３−ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｎ１１Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｔ１２Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｉ１３Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１４Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ１５Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｎ１６Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（オクタノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−ノナノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−デカノイルアミノ）プロピオニル／ＫＬ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ウンデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−ドデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３００−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（トリデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（テトラデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ペンタデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ヘプタデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（オクタデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（ノナデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（３−（エイコサノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（オクタノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ノナノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（デカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ウンデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ドデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（トリデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ペンタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（オクタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ノナデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（エイコサノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（オクタノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ノナノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（デカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ウンデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ドデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（トリデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ペンタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（オクタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（ノナデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｌ１７Ｋ（４−（エイコサノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ａ１８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ２１Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｎ２４Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｑ２８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｓ５Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｓ７Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｄ８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｅ９Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｍ１０Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｎ１１Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｔ１２Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｉ１３Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１４Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｄ１５Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｎ１６Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（オクタノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ノナノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（デカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ウンデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ドデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（トリデカノイルアミノ）プロピオニル／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（テトラデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ペンタデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ヘプタデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（オクタデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（ノナデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（３−（エイコサノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（オクタノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ノナノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７１Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（デカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ウンデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ドデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（トリデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ペンタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（オクタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（ノナデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（エイコサノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（オクタノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ノナノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（デカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ウンデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ドデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（トリデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ペンタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（オクタデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌ１７Ｋ（４−（ノナデカノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｌｌ７Ｋ（４−（エイコサノイルアミノ）ブタノイル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ａｌ８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｄ２１Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；
Ｄ３Ｅ／Ｎ２４Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル）／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）；及び
Ｄ３Ｅ／Ｑ２８Ｋ（３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピオニル））／Ｋ３０Ｒ／Ｄ３３Ｅ−ＧＬＰ−２（１−３３）
本発明の方法に適用できる第ＶＩＩ因子化合物には、野生型第ＶＩＩ因子（すなわち、米国特許第４，７８４，９５０号に開示されているアミノ酸配列を有するポリペプチド）並びに野生型第ＶＩＩ因子と比較して実質的に同じ、又は改善された生物学的活性を示す第ＶＩＩ因子のバリアント、第ＶＩＩ因子関連ポリペプチド並びに第ＶＩＩ因子誘導体及び第ＶＩＩ因子抱合体が包含される。「第ＶＩＩ因子化合物」という用語は、非切断（チモーゲン）型の第ＶＩＩ因子ポリペプチド、及びタンパク質分解によって加工されて、それらの生物活性形態を与える第ＶＩＩ因子ポリペプチド（第ＶＩＩａ因子と表記される場合がある。）を包含するものとする。典型的には、第ＶＩＩ因子は、残基１５２及び１５３の間で切断されて、第ＶＩＩａ因子を与える。第ＶＩＩ因子のこのようなバリアントは、安定性、リン脂質の結合、変化された比活性など、ヒト第ＶＩＩ因子に比べて異なる特性を示し得る。
【０１９９】
本明細書において使用される「第ＶＩＩ因子関連ポリペプチド」には、第ＶＩＩａ生物活性が、野生型第ＶＩＩａの活性に比べて実質的に修飾又は減少されたポリペプチド（バリアントを含む。）が包含される。これらのポリペプチドには、ポリペプチドの生物活性を修飾又は崩壊する特異的なアミノ酸配列の変化がその中に導入された第ＶＩＩ因子又は第ＶＩＩａ因子が含まれるが、これらに限定されない。本明細書において使用される「第ＶＩＩ因子誘導体」という用語は、野生型ＶＩＩ因子、野生型第ＶＩＩ因子に比べて実質的に同一又は改善された生物活性を示す第ＶＩＩ因子のバリアント、並びに、親ペプチドの１以上のアミノ酸が、例えば、アルキル化、ＰＥＧ化、アシル化、エステル形成又はアミド形成などによって、化学的に修飾された第ＶＩＩ因子関連ポリペプチドを表すものとする。これには、ＰＥＧ化されたヒト第ＶＩＩａ因子、システイン−ＰＥＧ化されたヒト第ＶＩＩａ因子及びそれらのバリアントが含まれるが、これらに限定されない。
【０２００】
「ＰＥＧ化されたヒト第ＶＩＩａ因子」という用語は、ヒト第ＶＩＩａポリペプチドに抱合されたＰＥＧ分子を有するヒト第ＶＩＩａ因子を意味する。ＰＥＧ分子は、第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの任意のアミノ酸残基又は炭水化物部分を含む、第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの任意の部分に付着させ得ることを理解すべきである。「システイン−ＰＥＧ化されたヒト第ＶＩＩａ因子」という用語は、ヒト第ＶＩＩａ因子中に導入されたシステインのスルフヒドリル基に抱合されたＰＥＧ分子を有する第ＶＩＩａ因子を意味する。
【０２０１】
血液凝固における第ＶＩＩａ因子の生物活性は、（ｉ）その組織因子（ＴＦ）結合能及び（ｉｉ）活性化された第ＩＸ因子又は第Ｘ因子（それぞれ、第ＩＸａ因子又は第Ｘａ因子）を産生するために、第ＩＸ又は第Ｘ因子のタンパク質分解による切断を触媒する能力に由来する。本発明において、第ＶＩＩａ因子の生物活性は、例えば米国特許第５，９９７，８６４号に記載されているように、第ＶＩＩ因子欠損血漿及びトロンボプラスチンを用いて、調製物が血液凝固を促進する能力を測定することによって定量することができる。このアッセイでは、生物学的活性は、対照試料に比べた凝固時間の減少として表され、１ユニット／ｍＬの第ＶＩＩ因子活性を含有するプールされたヒト血清標準との比較により、「第ＶＩＩ因子ユニット」に変換される。あるいは、第ＶＩＩａ因子の生物活性は、（ｉ）第ＶＩＩａ因子が、脂質膜中に包埋されたＴＦと第Ｘ因子を含む系で、第Ｘａ因子を産生する能力（Ｐｅｒｓｓｏｎ  ｅｔａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：１９９１９−１９９２４，１９９７）；（ｉｉ）水系で第Ｘ因子の加水分解を測定すること、（ｉｉｉ）表面プラズモン共鳴を基礎とした装置を用いて、ＴＦへのその物理的結合を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｓ．  ４１３：３５９−３６３，１９９７）、及び（ｉｖ）合成基質の加水分解を測定することによって、定量することができる。
【０２０２】
野生型第ＶＩＩａ因子に比べて実質的に同一又は改善された生物学的活性を有する第ＶＩＩ因子バリアントには、上記凝固アッセイ、タンパク質分解アッセイ又はＴＦ結合アッセイの一以上で検査されたときに、同じ細胞種中で産生される第ＶＩＩａ因子の比活性の少なくとも約２５％、好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約７５％、最も好ましくは少なくとも約９０％を示すものが包含される。野生型第ＶＩＩａ因子に比べて実質的に減少された生物学的活性を有する第ＶＩＩ因子バリアントは、上記凝固アッセイ、タンパク質分解アッセイ又はＴＦ結合アッセイの一以上で検査されたときに、同じ細胞種中で産生される野生型第ＶＩＩａ因子の比活性の約２５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、最も好ましくは約１％を示すものである。野生型第ＶＩＩ因子に比べて実質的に修飾された生物学的活性を有する第ＶＩＩ因子バリアントには、ＴＦ非依存性の第Ｘ因子タンパク質分解活性を示す第ＶＩＩ因子バリアント、及びＴＦを結合するが、第Ｘ因子を切断しない第ＶＩＩ因子バリアントが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０３】
野生型第ＶＩＩ因子と実質的に同じ又は優れた生物活性を示すか、野生型第ＶＩＩ因子に比べて実質的に修飾又は減少された生物活性を示すかを問わず、第ＶＩＩ因子のバリアントには、１以上のアミノ酸の挿入、欠失又は置換によって野生型第ＶＩＩ因子の配列と異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０４】
本明細書において、「バリアント」という用語は、親タンパク質の１以上のアミノ酸が、別のアミノ酸によって置換され、及び／又は親タンパク質の１以上のアミノ酸が欠失され、及び／又はタンパク質中に１以上のアミノ酸が挿入され、１以上のアミノ酸が親タンパク質に付加された野生型第ＶＩＩ因子の配列を有する第ＶＩＩ因子を表すものとする。このような付加は、親タンパク質のＮ末端若しくはＣ末端又はその両方に行うことができる。この定義に属する「バリアント」は、その活性化された形態で、なおＦＶＩＩ活性を有する。一実施形態において、バリアントは、野生型第ＶＩＩ因子の配列と７０％同一である。一実施形態において、バリアントは、野生型第ＶＩＩ因子の配列と８０％同一である。別の実施形態において、バリアントは、野生型第ＶＩＩ因子の配列と９０％同一である。さらなる実施形態において、バリアントは、野生型第ＶＩＩ因子の配列と９５％同一である。
【０２０５】
野生型第ＶＩＩ因子と実質的に同一の生物学的活性を有する第ＶＩＩ因子バリアントの非限定的な例には、Ｓ５２Ａ−ＦＶＩＩａ、Ｓ６０Ａ−ＦＶＩＩａ（Ｌｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ３５２：１８２−１９２，１９９８）；米国特許第５，５８０，５６０号に開示されている、タンパク質分解に対する安定性が増大したＦＶｌｌａバリアント；残基２９０と２９１又は残基３１５と３１６の間でタンパク質分解によって切断される第ＶＩＩａ因子（Ｍｏｌｌｅｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ４８：５０１−５０５，１９９５）；第ＶＩＩａ因子の酸化型（Ｋｏｒｎｆｅｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ３６３：４３−５４，１９９９）；ＰＣＴ／ＤＫ０２／００１８９に開示されているＦＶＩＩバリアント；ＷＯ０２／３８１６２（Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）に開示されている、タンパク質分解に対する安定性が増大したＦＶＩＩバリアント；ＷＯ  ９９／２０７６７（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）及びＷＯ  ００／６６７５３（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）に開示されている、修飾されたＧｌａドメインを有し、増強された膜結合を示すＦＶＩＩバリアント；並びにＷＯ  ０１／５８９３５号（Ｍａｘｙｇｅｎ  ＡｐＳ）、ＷＯ  ０３／９３４６５号（Ｍａｘｙｇｅｎ  ＡｐＳ）及びＷＯ  ０４／０２９０９１  （Ｍａｘｙｇｅｎ  ＡｐＳ）に開示されている、ＦＶＩＩバリアントが含まれる。
【０２０６】
具体的に挙げられる、野生型ＦＶＩＩａに比べて増加した生物学的活性を有するＦＶＩＩバリアントには、ＷＯ  ０１／８３７２５、ＷＯ  ０２／２２７７６、ＷＯ  ０２／０７７２１８、ＰＣＴ／ＤＫ０２／００６３５、ＷＯ  ２００４／０２９０９０、ＷＯ  ２００３／０３７９３２；ＷＯ  ０２／３８１６２（Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）に開示されているＦＶＩＩバリアント及びＪＰ２００１０６１４７９（Ｃｈｅｍｏ−Ｓｅｒｏ−Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒｅｓ  Ｉｎｓｔ．）に開示されている、増強された活性を有するＦＶＩＩａが含まれる（全て、参照により、本明細書中に組み込まれる。）。
【０２０７】
野生型第ＶＩＩ因子に比べて実質的に減少又は修飾された生物学的活性を有する第ＶＩＩ因子バリアントの例には、Ｒ１５２Ｅ−ＦＶＩＩａ（Ｗｉｌｄｇｏｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２９：３４１３−３４２０，１９９０）、Ｓ３４４Ａ−ＦＶＩＩａ（Ｋａｚａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：６６−７２，１９９５），ＦＦＲ−ＦＶｌｌａ（Ｈｏｌｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｖａｓｃ．  Ｅｎｄｏｖａｓｃ．  Ｓｕｒｇ．  １５：５１５−５２０，１９９８）、及びＧｌａドメインを欠如する第ＶＩＩａ因子（Ｎｉｃｏｌａｉｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｓ．  ３１７：２４５−２４９，１９９３）が含まれる（全て、参照により、本明細書中に組み込まれる。）。
【０２０８】
第ＶＩＩ因子のバリアント、第ＶＩＩ因子又は第ＶＩＩ因子関連ポリペプチドの例には、野生型第ＶＩＩ因子、Ｌ３０５Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｍ３０６Ｄ／Ｄ３０９Ｓ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５１−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｐ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｌ３０５Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ１５７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｋ−ＦＶＩＩ、及びＳ３３６Ｇ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｋ３１６Ｈ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｋ３１６Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶｌｌ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ／Ｖ１５８Ｄ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１
５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩＦ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｓ５２Ａ−第ＶＩＩ因子、Ｓ６０Ａ−第ＶＩＩ因子；Ｒ１５２Ｅ−第ＶＩＩ因子、Ｓ３４４Ａ−第ＶＩＩ因子、Ｇｌａドメインを欠如する第ＶＩＩａ因子；及びＰ１１１Ｑ／Ｋ３３Ｅ−ＦＶＩＩ、Ｔ１０６Ｎ−ＦＶＩＩ、Ｋ１４３Ｎ／Ｎ１４５Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｖ２５３Ｎ−ＦＶＩＩ、Ｒ２９０Ｎ／Ａ２９２Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｇ２９１Ｎ−ＦＶＩＩ、Ｒ３１５Ｎ／Ｖ３１７Ｔ−ＦＶＩＩ、Ｋ１４３Ｎ／Ｎ１４５Ｔ／Ｒ３１５Ｎ／Ｖ３１７Ｔ−ＦＶＩＩ；及び２３３Ｔｈｒから２４０Ａｓｎのアミノ酸配列中に置換、付加又は欠失を有するＦＶＩＩ、３０４Ａｒｇから３２９Ｃｙｓのアミノ酸配列中に置換、付加又は欠失を有するＦＶＩＩが含まれる。
【０２０９】
本発明の方法に適用可能な成長ホルモンには、その配列及び特徴が、例えば、「Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｄｒｕｇｓ，  Ｇｕｅｒｉｇｕｉａｎ，  Ｕ．Ｓ．Ｐ．  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌ，  １９８２」に記載されているヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及び成長ホルモン化合物が含まれる。「成長ホルモン化合物」という用語は、１以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基（天然又は非天然）によって欠失及び／又は置換されているヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、及び／又は付加アミノ酸残基（天然又は非天然）を含むｈＧＨ、及び／又は少なくとも一つの有機置換基が１以上の有機置換基に結合されているｈＧＨを表すものとする。具体的には、１９１固有アミノ酸配列（ソマトロピン）及び１９２アミノ酸Ｎ末端メチオニン種（ソマトレム）が挙げられる。
【０２１０】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、ＷＯ９２／０９６９０（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、アミノ酸１７２、１７４、１７６及び１７８が群として、以下のアミノ酸の群（Ｒ，Ｓ，Ｆ，Ｒ）；（Ｒ，Ａ，Ｙ，Ｒ）、（Ｋ，Ｔ，Ｙ，Ｋ）；（Ｒ，Ｓ，Ｙ，Ｒ）；（Ｋ，Ａ，Ｙ，Ｒ）；（Ｒ，Ｆ，Ｆ，Ｒ）；（Ｋ，Ｑ，Ｙ，Ｒ）；（Ｒ，Ｔ，Ｙ，Ｈ）；（Ｑ，Ｒ，Ｙ，Ｒ）；（Ｋ，Ｋ，Ｙ，Ｋ）；（Ｒ，Ｓ，Ｆ，Ｓ）又は（Ｋ，Ｓ，Ｎ，Ｒ）の一つによって置換されているものが含まれる。
【０２１１】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、米国特許６，００４，９３１号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換Ｇ１２０Ｒ、Ｇ１２０Ｋ、Ｇ１２０Ｙ、Ｇ１２０Ｆ及びＧ１２０Ｅを有するｈＧＨが含まれる。
【０２１２】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、米国特許６，１４３，５２３号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換群Ｒ１６７Ｎ、Ｄ１７１Ｓ、Ｅ１７４Ｓ、Ｆ１７６Ｙ及びＩ１７９Ｔ；Ｒ１７６Ｅ、Ｄ１７１Ｓ、Ｅ１７４Ｓ及びＦ１７６Ｙ；Ｆ１０Ａ、Ｍ１４Ｗ、Ｈ１８Ｄ及びＨ２１Ｎ；Ｆ１０Ａ、Ｍ１４Ｗ、Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｄ１７１Ｓ、Ｅ１７４Ｓ、Ｆ１７６Ｙ、Ｉ１７９Ｔ；Ｆ１０Ａ、Ｍ１４Ｗ、Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｄ１７１Ａ、Ｅ１７４Ｓ、Ｆ１７６Ｙ、Ｉ１７９Ｔ；Ｆ１０Ｈ、Ｍ１４Ｇ、Ｈ１８Ｎ及びＨ２１Ｎ；Ｆ１０Ａ、Ｍ１４Ｗ、Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｄ１７１Ａ、Ｔ１７５Ｔ及びＩ１７９Ｔ；並びにＦ１０Ｉ、Ｍ１４Ｑ、Ｈ１８Ｅ、Ｒ１６７Ｎ、Ｄ１７１Ｓ及びＩ１７９Ｔを有するｈＧＨが含まれる。
【０２１３】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、米国特許第６，１３６，５３６号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換群Ｈ１８Ａ、Ｑ２２Ａ、Ｆ２５Ａ、Ｄ２６Ａ、Ｑ２９Ａ、Ｅ６５Ａ、Ｋ１６８Ａ、Ｅ１７４Ａ及びＧ１２０Ｋを有するｈＧＨが含まれる。
【０２１４】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、米国特許第６，０５７，２９２号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換群Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、Ｉ１７９Ｔを有し、Ｇ１２０がＲ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｆ又はＥでさらに置換されているｈＧＨが含まれる。
【０２１５】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、米国特許第５，８４９，５３５号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換群Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｎ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ、Ｉ１７９Ｔを有するｈＧＨが含まれる。
【０２１６】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、ＷＯ９７／１１１７８（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換群Ｈ１８Ｄ、Ｈ２１Ｄ、Ｒ１６７Ｎ、Ｋ１６８Ａ、Ｄ１７１Ｓ、Ｋ１７２Ｒ、Ｅ１７４Ｓ及びＩ１７９Ｔ、並びにＨ１８Ａ、Ｑ２２Ａ、Ｆ２５Ａ、Ｄ２６Ａ、Ｑ２９Ａ、Ｅ６５Ａ、Ｋ１６８Ａ及びＥ１７４Ａを有するｈＧＨが含まれる。
【０２１７】
本発明に適用可能な成長ホルモン化合物の他の例には、ＷＯ９０／０４７８８号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているように、以下の置換群Ｋ１６８Ａ及びＥ１７４Ａ；Ｒ１７８Ｎ及びＩ１７９Ｍ；Ｋ１７２Ａ及びＦ１７６Ａ；並びにＨ５４Ｆ、Ｓ５６Ｅ、Ｌ５８Ｉ、Ｅ６２Ｓ、Ｄ６３Ｎ及びＱ６６Ｅを有するｈＧＨが含まれる。
【０２１８】
本発明の方法を用いて修飾することができるサイトカインの例には、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポエチン、ＩＮＦ−α，ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、インターロイキン１β（ＩＬ−１−β）、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２４、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＧＭ−ＣＳＦ、及びマクロファージ炎症性タンパク質−１（ＭＩＰ−１）、γインターフェロン誘導性タンパク質及びＩＦＮγによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ）などのケモカインが含まれる。
【０２１９】
本発明の方法に適用可能なＩＬ−１９の具体例には、ＷＯ  ９８／０８８７０号（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているものが含まれる。具体的には、ＷＯ  ９８／０８８７０号で配列番号２として開示されているペプチドが挙げられる。
【０２２０】
適用可能なＩＬ−２０の具体例には、ＷＯ９９／２７１０３号（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているものが含まれる。本明細書において、ＩＬ−２０とは、ＩＬ−２０そのもの及びその断片並びにＩＬ−２０と少なくとも９０％同一であるポリペプチド及びそれらの断片を表すものとする。
【０２２１】
本発明の方法に適用できる具体的なタンパク質には、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34及び配列番号３５として、ＷＯ  ９９／２７１０３号に開示されているものが含まれる。
【０２２２】
本発明の方法に適用可能なＩＬ−２１の例には、ＷＯ００／５３７６１号（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）（参照により、本明細書中に組み込まれる。）に開示されているものが含まれる。具体的には、ＷＯ  ００／５３７６１号で配列番号２として開示されているペプチドが挙げられる。
【０２２３】
ＴＴＦは、本発明の方法に適用できる。ＴＴＦペプチドは、主として、消化管に付随して見出されるペプチドのファミリーである。具体的には、ヒト、マウス及びラット由来のものが知られている乳癌関連ｐＳ２ペプチド（ＴＦＦ−１）、ヒト、ブタ、ラット及びマウス由来のものが知られている鎮痙性ポリペプチド（ＴＴＦ−２）並びにヒト、ラット及びマウス由来のものが知られている腸トレフォイル因子（ＴＦＦ−３）が挙げられる。
【０２２４】
本発明の方法に適用できるＴＴＦファミリー由来の他のペプチドには、ＷＯ  ０２／４６２２６（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されているものが含まれる。具体的には、ＷＯ  ０２／４６２２６号の配列番号１に開示されているアミノ酸を有し、Ｃｙｓ６−Ｃｙｓ１０４、Ｃｙｓ８−Ｃｙｓ３５、Ｃｙｓ１９−Ｃｙｓ３４、Ｃｙｓ２９−Ｃｙｓ４６、Ｃｙｓ５８−Ｃｙｓ８４、Ｃｙｓ６８−Ｃｙｓ８３及びＣｙｓ７８−Ｃｙｓ９５間にジスルフィド結合を含み、部分Ｘが糖残基から独立に選択され、オリゴ糖がＡｓｎ１５に共有結合されているＴＦＦ２ペプチドが挙げられる。
【０２２５】
ＴＴＦファミリーの他のペプチドには、ＷＯ９６／０６８６１（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）（参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されているようなＴＦＦ−１とＴＦＦ−３の二量体が含まれる。
【０２２６】
幾つかのメラノコルチン受容体が知られており、本発明の方法に適用できる具体的なペプチドとしては、食欲抑制効果を有することが知られているペプチド性メラノコルチン−４受容体アゴニストが挙げられる。具体的には、以下の特許文献に開示されているペプチド又はタンパク質が挙げられる。ＵＳ６，０５４，５５６号（Ｈｒｕｂｙ）、ＷＯ  ００／０５２６３（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｈａｒｖｅｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＷＯ００／３５９５２（Ｍｅｌａｃｕｒｅ）、ＷＯ  ００／３５９５２（Ｍｅｌａｃｕｒｅ）、ＷＯ  ００／５８３６１（Ｐｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ）、ＷＯ０１／５２８８０（Ｍｅｒｃｋ）、ＷＯ  ０２／２６７７４（Ｐｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ）、ＷＯ  ０３／０６６２０（Ｐａｌａｔｉｎ）、ＷＯ  ９８／２７１１３（Ｒｕｄｏｌｆ  Ｍａｇｎｕｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）及びＷＯ  ９９／２１５７１（Ｔｒｅｇａ）（全て、参照により、本明細書に組み込まれる。）。
【０２２７】
本発明の方法に適用できる他のペプチド又はタンパク質のクラスには、酵素が含まれる。様々な産業的目的のために、多くの酵素が使用されており、具体的には、加水分解酵素（プロテアーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、エステラーゼ）、酸化還元酵素（ラッカーゼ、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、リポキシゲナーゼ）、転移酵素及び異性化酵素が挙げられる。
【０２２８】
本発明の方法に適用可能な他のペプチド又はタンパク質には、ＡＣＴＨ、コルチコトロピン放出因子、アンギオテンシン、カルシトニン、インシュリン及びその断片及び類縁体、グルカゴン、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、エンテロガストリン、ガストリン、テトラガストリン、ペンタガストリン、ウロガストリン、上皮成長因子、セクレチン、神経成長因子、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、成長ホルモン放出ホルモン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、トロンボポエチン、エリスロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、オキシトシン、オピオイド及びその類縁体、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ及びリボヌクレアーゼが含まれる。
【０２２９】
本発明の方法に従って修飾されるべきペプチドは、天然の採取源（例えば、植物、動物、又は酵母、細菌、真菌若しくはウイルスなどの微生物）から単離することができ、又は本発明の方法に従って修飾されるべきペプチドは、合成することができる。天然の採取源から得られるペプチドには、トランスジェニック源、例えば、ペプチドを発現するように、又はペプチドの発現を増加させるように遺伝的に修飾を施されたトランスジェニック源（ここで、前記ペプチドは、天然に存在するという意味で、「天然」であり得、またはヒトの介入によらなければ存在しないという意味で「非天然」であり得る。）から得られるペプチドも含まれる。天然の採取源から単離されたペプチドは、本発明の抱合の前に、合成による修飾に供することもできる。
【０２３０】
一実施形態において、本発明は、本発明の方法に従って取得できる抱合型ペプチドに関する。本発明の方法によって得られた抱合ペプチドが治療ペプチドである場合には、本発明は、治療におけるこのような化合物の使用、及びこのような化合物を含む薬学的組成物も提供する。
【０２３１】
一実施形態において、本発明は、式
【化１０１】
2008502301.tif 000092
【０２３２】
（式中、Ｐ’、Ｒ、Ａ、Ｅ及びＺは、上記定義のとおりであり、基
【化１０２】
2008502301.tif 000093
【０２３３】
は、ペプチド結合を介して、Ｐ’のＣ末端に結合されている。）の抱合ペプチドを提供する。
【０２３４】
このような化合物の具体例には、
Ｌｙｓε（４−（（２−（１−（ｍＰＥＧカルボニル）ピペリジン−４イル）エトキシ）イミノ）ペンタノイル）１９２）ｈＧＨ（１−１９２）アミド、ｍＰＥＧは２０ｋＤａの分子量を有する；
（Ｌｙｓε（４−（（３−（パルミトイルアミノ）プロポキシ）イミノ）ペンタノール）１９２）ｈＧＨ（１−１９２）アミド；
（Ｌｙｓε（４−（（３−（（２Ｓ）−２，６−ｍＰＥＧカルボニルアミノ）ヘキサノイルアミノ）プロポキシ）イミノ）ペンタノイル）３４）ＧＬＰ−２（１−３４）アミド、ｍＰＥＧは２０ｋＤａの分子量を有する；
（Ｌｙｓε（４−（１−（２−（３−（ｍＰＥＧ）プロパンイルアミノ）ヒドラジノ）エチル）ベンゾイル）１９２）ｈＧＨ（１−９２）アミド、ｍＰＥＧは１０ｋＤａの分子量を有する；
（Ｓ）−３−（４−（（３−（３−クロロフェニル）イソキサゾール−５−イル）メトキシ）フェニル）−２−（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）プロピオンアミド；
（Ｓ）−３−（４−（（３−（３−クロロフェニル）イソキサゾール−５−イル）メトキシ）フェニル）−２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）プロピオンアミド；
３−（３−（３−（（４−（（Ｓ）−２−カルバモイル−３−（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）エチル）フェノキシル）メチル）イソキサゾール−３−イル）ベンジルカルバモイル）プロピオン酸；
１１−（４−（４−（（２Ｓ）−２−カルバモイル−２−（（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）エチル）フェノキシメチル）−１，２，３−トリアゾリル）ウンデカン酸；
１１−（５−（４−（（２Ｓ）−２−カルバモイル−２−（（［Ｇｌｕ３，Ｌｅｕ１０］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ）エチル）フェノキシメチル）−１，２，３−トリアゾリル）ウンデカン酸１１−（４−（４−（（Ｓ）−２−カルバモイル−２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ））フェノキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ウンデカン酸；
１１−（５−（４−（（Ｓ）−２−カルバモイル−２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニルアミノ））フェノキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ウンデカン酸；
２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニル）−３−（４−（（１−（（Ｎ−（ｍＰｅｇ２０ｋＤａイル）カルバモイル）デカニル）−１Ｈ−１，２，３−テトラゾル−４−イル）メトキシ）フェニル）プロピオンアミド；及び
２−（［Ｇｌｕ３］ＧＬＰ−２イルロイシニル）−３−（４−（（１−（（Ｎ−（ｍＰｅｇ２０ｋＤａイル）カルバモイル）デカニル）−１Ｈ−１，２，３−テトラゾル−５−イル）メトキシ）フェニル）プロピオンアミドが含まれる。
【０２３５】
インシュリンは糖尿病を治療又は予防するために使用され、このため、一実施形態において、本発明は、治療的有効量の、本発明のインシュリン又はインシュリン化合物抱合体を、これを必要とする対象に投与することを含む、１型又は２型糖尿病を治療する方法を提供する。
【０２３６】
別の実施形態において、本発明は、１型又は２型糖尿病の治療において使用される医薬の製造における、本発明のインシュリン又はインシュリン化合物抱合体の使用を提供する。
【０２３７】
ＧＬＰ−１は、高血糖、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満、高血圧、シンドロームＸ、異脂肪血症、β細胞のアポトーシス、β細胞の欠乏、炎症性腸症候群、消化不良、認知障害、例えば、認知増強、神経保護、アテローム性硬化症、冠状動脈性心臓病及びその他の心血管疾患の治療において使用され得る。このため、一実施形態において、本発明は、治療有効量の、本発明のＧＬＰ−１又はＧＬＰ−１化合物抱合体を、これを必要としている患者に投与することを含む、前記疾病を治療する方法を提供する。
【０２３８】
別の実施形態において、本発明は、上記疾病の治療において使用される医薬の製造における、本発明のＧＬＰ−１又はＧＬＰ−１化合物抱合体の使用を提供する。
【０２３９】
ＧＬＰ−２は、腸内での栄養素の吸収不良を引き起こす腸疾患の治療において使用することができ、特に、ＧＬＰ−２は、小腸症候群、炎症性腸症候群、クローン病、コラーゲン性大腸炎、放射線大腸炎を含む大腸炎、放射線照射後萎縮、非熱帯性（グルテン不耐性）及び熱帯性スプルー、血管閉塞又は外傷後の損傷組織、旅行者下痢症、脱水、菌血症、敗血症、拒食症、化学療法後の損傷組織、早産児、強皮症、萎縮性胃炎、鼓室洞摘出術後の萎縮性胃炎及びヘリコバクター・ピロリ性胃炎を含む胃炎、潰瘍、腸炎、盲管、リンパ管の閉塞、血管疾患及び移植片対宿主、外科的処置後の治癒、放射線照射後の萎縮、化学療法並びに骨粗鬆症の治療に使用することができる。従って、治療有効量の、本発明のＧＬＰ−２又はＧＬＰ−２化合物抱合体を、これを必要とする対象に投与することを含む、上記疾病を治療する方法を提供することは本発明の目的である。
【０２４０】
別の実施形態において、本発明は、上記疾病の治療において使用される医薬の製造における、本発明のＧＬＰ−２又はＧＬＰ−２化合物抱合体の使用を提供する。
【０２４１】
成長ホルモンは、成長ホルモンの血漿レベルの増加が有益である疾病の治療に関わる。一実施形態において、本発明は、有効量の、本発明の成長ホルモン化合物抱合体を、治療が必要な患者に投与することを含む、成長ホルモン欠損症；ターナー症候群；プラダーウィリ症候群（ＰＷＳ）；ヌーナン症候群；ダウン症候群；慢性腎臓病、若年性関節リウマチ；嚢胞性繊維症、ＨＡＡＲＴ治療を受けている児童のＨＩＶ感染者（ＨＩＶ／ＨＡＬＳ児童）；短い妊娠期間で生まれた小柄な児童（ＳＧＡ、  ｂｏｒｎ  ｓｈｏｒｔ  ｆｏｒ  ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ  ａｇｅ）；ＳＧＡでない、出生時の体重が極めて低く（ＶＬＢＷ）生まれた児童の小人症；骨格形成異常；軟骨低形成症；軟骨形成不全；突発性小人症（ＩＳＳ）；成人のＧＨＤ；脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手骨（ｍａｔａｃａｒｐｅａ）、中足骨（ｍａｔａｔａｒｓｅａ）及び足趾などの長骨中の骨折又は長骨の骨折；頭蓋骨、手の付け根及び足の付け根などの海綿様骨中又は海綿様骨の骨折など；例えば、手、膝又は肩の手術の腱又は靭帯手術後の患者；仮骨延長術（ｄｉｓｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ）を有する又は行っている患者；人工股関節置換術又は円盤置換術、半月板修復、脊椎固定術又は膝、臀部、肩、肘、手首若しくは顎などの人工器官固定後の患者；釘、ねじ及びプレートなど骨接合術素材が固定された患者；骨折の癒着不能又は変形治癒を有する患者；例えば脛骨又は第一の親指からの骨切断術（ｏｓｔｅａｔｏｍｉａ）後の患者；移植片移植後の患者；外傷又は関節炎によって引き起こされる膝の関節軟骨の変性；ターナー症候群患者の骨粗鬆症；男性の骨粗鬆症；慢性透析を受けている成人患者（ＡＰＣＤ、ａｄｕｌｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｄｉａｌｙｓｉｓ）；ＡＰＣＤにおける栄養不良関連性心血管疾患；ＡＰＣＤにおける悪液質の回復；ＡＰＣＤにおける癌；ＡＰＣＤにおける慢性閉塞性（ａｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ）肺疾患；ＡＰＣＤにおけるＨＩＶ;ＡＰＣＤを有する高齢者；ＡＰＣＤにおける慢性肝臓病；ＡＰＣＤにおける疲労症候群；クローン病；肝機能障害；ＨＩＶ感染を有する雄；短腸症候群；中心性肥満；ＨＩＶ関連脂肪異栄養症候群（ＨＡＬＳ）；雄の不妊；主要な待機手術、アルコール／薬物解毒又は神経外傷後の患者；老化；虚弱な高齢者；骨関節炎；外傷的に損傷を受けた軟骨；勃起不全；繊維筋痛；記憶障害；うつ病；外傷性脳損傷；くも膜下出血；出生時極低体重；代謝症候群；グルココルチコイド筋障害；又は児童におけるグルココルチコイド治療に起因する小人症を治療する方法を提供する。
【０２４２】
一側面において、本発明は、有効量の、本発明の成長ホルモン化合物抱合体を、これを必要とする患者に投与することを含む、筋肉組織、神経組織若しくは創傷の治癒の加速、損傷を受けた組織への血流の加速若しくは改善、又は損傷を受けた組織中の感染率の減少のための方法を提供する。
【０２４３】
一側面において、本発明は、上記疾病の治療用医薬の製造における、本発明の成長ホルモン化合物抱合体の使用を提供する。
【０２４４】
サイトカインは、免疫系が関与する多数の疾病の発症に関わる。特に、ＩＬ−２０は、乾癬及びその治療に関与することがあり、Ｉ−２１は癌に関与しており、本疾病に対する治療を構成し得ると考えられていることが記述されている。一実施形態において、本発明は、本発明のＩＬ−２０抱合体の投与を含む、乾癬の治療方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、乾癬の治療において使用される医薬の製造における、本発明のＩＬ−２０抱合体の使用に関する。
【０２４５】
別の実施形態において、本発明は、本発明のＩＬ−２１抱合体を、これを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法に関する。
【０２４６】
別の実施形態において、本発明は、癌の治療において使用される医薬の製造における、本発明のＩＬ−２１抱合体の使用に関する。
【０２４７】
ＴＴＦペプチドは、唾液の分泌を減少させるために、対象中の粘膜層（ｍｕｓｃｕｓ  ｌａｙｅｒ）の粘度を増加させる（例えば、唾液分泌の増加が、放射線治療、抗コリン薬を用いた治療又はシェーグレン症候群）によって引き起こされる場合）ために、アレルギー性鼻炎、外傷に対して副次的なストレス誘導性胃潰瘍、ショック、大手術、腎臓又は肝臓疾患、ＮＳＡＩＤ、例えばアスピリン、ステロイド又はアルコールによる治療のために使用することができる。ＴＴＦペプチドは、クローン病、潰瘍性大腸炎、角結膜炎、慢性膀胱感染症、腸膀胱炎、乳頭腫及膀胱癌を治療するために使用することもできる。このように、一実施形態において、本発明は、治療的有効量の、本発明のＴＴＦ抱合体を、これを必要としている対象患者に投与することを含む、上記疾病又は状態を治療する方法に関する。
【０２４８】
別の実施形態において、本発明は、上記疾病又は状態の治療用医薬の製造における本発明のＴＴＦ抱合体の使用に関する。
【０２４９】
メラノコルチン受容体修飾因子、特にメラノコルチン４受容体アゴニストは、肥満及び関連疾患の治療及び予防が想定されている。一実施形態において、本発明は、インシュリンを必要としない２型糖尿病に対する耐糖能障害（ＩＧＴ）の進行を予防若しくは遅延し、インシュリンを必要としない２型糖尿病の、インシュリンを必要とする糖尿病への進行を予防若しくは遅延し、肥満を治療し、食欲を制御する方法を提供する。メラノコルチン４受容体アゴニストは、アテローム性硬化症、高血圧、糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害（ＩＧＴ）、異脂肪血症、冠状動脈性心疾患、胆嚢疾患、胆石、骨関節炎、癌、性的不全及び早死のリスクから選択される疾病の治療にも関わる。一実施形態において、本発明は、治療的有効量の、本発明のメラノコルチン４受容体アゴニスト抱合体を、これを必要としている対象患者に投与することを含む、上記疾病又は状態を治療する方法を提供する。
【０２５０】
さらに別の実施形態において、本発明は、上記疾病又は状態の治療用医薬の製造における、本発明のメラノコルチン４受容体アゴニスト抱合体の使用に関する。
【０２５１】
第ＶＩＩ因子化合物は、凝固に関連する疾病の治療に関連し、特に、生物学的に活性な第ＶＩＩ因子化合物は、血友病、第ＶＩＩＩ及びＩＸに対する阻害剤による血友病、血小板減少症の患者、グランツマン血小板無力症血小板放出欠損及び血小板貯蔵欠損、フォン・ビレブランド病の患者などの血小板症の患者、肝臓病の患者及び外傷又は手術に付随する出血の問題の治療に関連する。生物的に不活性な第ＶＩＩ因子化合物は、敗血症の患者、深部静脈血栓症、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）又は血栓性脳卒中のリスクがある患者、肺塞栓、急性冠不全症候群、冠動脈心臓病患者、心事故の予防及び血管形成術を受けている患者のための再狭窄、末梢血管疾患及び急性呼吸窮迫症候群など、凝固亢進状態にある患者に治療に関連する。このように、一実施形態において、本発明は、治療的有効量の、本発明の第ＶＩＩ因子化合物抱合体を、これを必要としている対象に投与することを含む、上記疾病又は状態を治療する方法を提供する。
【０２５２】
別の実施形態において、本発明は、上記疾病又は状態の治療において使用される医薬の製造における、本発明の第ＶＩＩ因子化合物抱合体の使用を提供する。
【０２５３】
多くの疾病は、治療において、２以上の医薬を使用して治療され、併用して投与されるか、又は順次投与される。従って、前記疾病を治療するために通常使用される１以上の他の治療的活性化合物と共に、上記疾病の一つを治療するための治療法における、本発明のペプチド抱合体を使用することも、本発明の範囲に属する。同様に、前記疾病用医薬の製造において、上記疾病の一つの治療において通常使用される他の治療的活性化合物と共に、本発明のペプチド抱合体を使用することも本発明の範囲に属する。
【０２５４】
別の実施形態において、本発明は、診断における、本発明の抱合型ペプチドの使用を提供する。
【０２５５】
α−アミノ酸アミドは、先述のように、本発明の方法における求核試薬として、特に適している。このため、一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）
【化１０３】
2008502301.tif 000094
【０２５６】
（式中、
Ａ及びＥは、独立にＣ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る。）；
Ｂ及びＤは、−Ｃ（Ｏ）−又は−ＮＨ−を表し（但し、Ｂが−Ｃ（Ｏ）−を表す場合には、Ｄは−ＮＨ−を表さなければならず、Ｂが−ＮＨ−を表す場合には、Ｄは−Ｃ（Ｏ）−を表さなければならない）。）；
Ｇは、水素、又はＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル若しくはアリールを表す（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る。）。））
の化合物を提供する。
【０２５７】
一実施形態において、Ａ及びＥは、独立に、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン若しくはヘキシレンなどのＣ１−６アルキレン又はフェニレンなどのアリーレンを表す。
【０２５８】
一実施形態において、Ｇは、水素又はメチル、エチル、プロピル若しくはブチルを表す。
【０２５９】
式Ｉの化合物の具体例には、
（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−フェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、
４−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド、
（２Ｓ）−２−アミノ−６−（４−オキソ−４−（４−クロロフェニルブチリルアミノ）ヘキサン酸アミド、
３−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド及び
２−アセチル−Ｎ−（（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルバモイルペンチル）ベンズアミド
が含まれる。
【０２６０】
別の実施形態において、本発明は、式ＩＩ
【化１０４】
2008502301.tif 000095
【０２６１】
（Ｊ及びＬは、独立に、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る。）；
Ｍは、水素又はＣ１−６アルキルを表す。）
に記載の化合物を提供する。
【０２６２】
一実施形態において、Ｊ及びＬは、独立に、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン若しくはヘキシレンなどのＣ１−６アルキレン又はフェニレンなどのアリーレンを表す。
【０２６３】
一実施形態において、Ｍは、水素又はメチル、エチル、プロピル若しくはブチルを表す。
【０２６４】
一実施形態において、式ＩＩの化合物は、
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソプロポキシ）フェニル］プロピオンアミド、
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソブトキシ）フェニル］プロピオンアミド、
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（２−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミド及び
（２Ｓ）−アミノ−３−［４−（４−オキソペントキシ）フェニル］プロピオンアミドの中から選択される。
【０２６５】
さらに別の実施形態において、本発明は、式ＩＩＩ
【化１０５】
2008502301.tif 000096
【０２６６】
（Ｑは、Ｃ１−６アルキレン、Ｃ２−６アルケニレン、Ｃ２−６アルキニレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲン、アミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る。）；
Ｔは、水素又はＣ１−６アルキルを表す。）
に記載の化合物を提供する。
【０２６７】
一実施形態において、Ｑは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン若しくはヘキシレンなどのＣ１−６アルキレン又はフェニレンなどのアリーレンを表す。
【０２６８】
一実施形態において、Ｔは、水素又はメチル、エチル、プロピル若しくはブチルを表す。
【０２６９】
さらに別の実施形態において、本発明は、式ＩＶ
【化１０６】
2008502301.tif 000097
【０２７０】
（式中、「Ｊ及びＬ」は、Ｃ１−６アルキレン又はアリーレンを表し（全て、ハロゲンアミノ、シアノ及びニトロから選択される１以上の置換基で必要に応じて置換され得る。）
に記載の化合物を提供する。
【０２７１】
一実施形態において、Ｊ及びＬは、独立に、メチレン又はエチレンを表す。
【０２７２】
一実施形態において、式ＩＶの化合物は、（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−プロパルギルオキシ）フェニル）プロピオニルアミドの中から選択される。
【０２７３】
薬学的組成物
本発明の別の目的は、１０−１２ｍｇ／ｍＬから２００ｍｇ／ｍＬ、例えば１０−１０ｍｇ／ｍＬから５ｍｇ／ｍＬなどの濃度で存在する式［ａ］の化合物を含み、２．０から１０．０のｐＨを有する薬学的組成物を提供することである。前記組成物は、緩衝系、防腐剤、等張化剤、キレート剤、安定化剤及び界面活性剤をさらに含み得る。本発明の一実施形態では、前記薬学的組成物は、水性組成物、すなわち、水を含む組成物である。このような組成物は、典型的には、溶液又は懸濁液である。本発明のさらなる実施形態において、前記薬学的組成物は水溶液である。「水性組成物」という用語は、少なくとも５０％  ｗ／ｗの水を含む組成物として定義される。同様に、「水溶液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液として定義される。
【０２７４】
別の実施形態において、前記薬学的組成物は、凍結乾燥された組成物であり、医師又は患者は、使用前に、溶媒及び／又は希釈剤をこれに添加する。
【０２７５】
別の実施形態において、前記薬学的組成物は、予め溶解することなく、そのまま使用するための乾燥された組成物（例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥されている）である。
【０２７６】
さらなる側面において、本発明は式［ａ］の化合物の水溶液と緩衝剤とを含み、前記式［ａ］の化合物は０．１−１００ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で存在し、組成物が約２．０から約１０．０のｐＨを有する、薬学的組成物に関する。
【０２７７】
本発明の別の実施形態では、組成物のｐＨは、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９及び１０．０からなるリストから選択される。
【０２７８】
本発明のさらなる実施形態において、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はこれらの混合物からなる群から選択される。これらの具体的な緩衝剤の各々一つが、本発明の別の実施形態を構成する。
【０２７９】
本発明のさらなる実施形態において、前記組成物は、薬学的に許容される防腐剤をさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、前記防腐剤は、フェノール、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ブチル、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール及びチオメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素（ｉｍｉｄｕｒｅａ）、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンズエトニウム、クロロフェネシン（３ｐ−クロルフェノキシプロパン−１，２−ジオール）又はこれらの混合物からなる群から選択される。本発明のさらなる実施形態において、前記防腐剤は、０．１ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記防腐剤は、０．１ｍｇ／ｍＬから５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記防腐剤は、５ｍｇ／ｍＬから１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記防腐剤は、１０ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの具体的な防腐剤の各々一つが、本発明の別の実施形態を構成する。薬学的組成物中での防腐剤の使用は、当業者に周知である。便宜のため、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２０００」を参照されたい。
【０２８０】
本発明のさらなる実施形態において、前記組成物は等張化剤をさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、前記等張化剤は、塩（例えば、塩化ナトリウム）、糖若しくは糖アルコール、アミノ酸（例えば、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン）、アルジトール（例えば、グリセロール）（グリセリン）、１，２−プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３−プロパンジオール、１，３−ブタンジオール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）又はこれらの混合物からなる群から選択される。例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン及びカルボキシメチルセルロース−Ｎａを含む、単糖、二糖若しくは多糖などの任意の糖、又は水溶性グルカンを使用し得る。一実施形態において、糖添加物はスクロースである。糖アルコールは、少なくとも一つの−ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素として定義され、例えば、マニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール及びアラビトールが含まれる。一実施形態において、糖アルコール添加物はマニトールである。上記糖又は糖アルコールは、個別に又は組み合わせて使用し得る。糖又は糖アルコールが液体調製物中に溶解でき、本発明の方法を用いて得られる安定化効果に悪影響を及ぼさない限り、使用される量に一定の制限はない。一実施形態において、糖又は糖アルコール濃度は、約１ｍｇ／ｍＬから約１５０ｍｇ／ｍＬの間にある。本発明のさらなる実施形態において、前記等張化剤は、１ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記等張化剤は、１ｍｇ／ｍＬから７ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記等張化剤は、８ｍｇ／ｍＬから２４ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記等張化剤は、２５ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの具体的な等張化剤の各々一つが、本発明の別の実施形態を構成する。薬学的組成物中での等張化剤の使用は、当業者に周知である。便宜のため、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２０００」を参照されたい。
【０２８１】
本発明のさらなる実施形態において、前記組成物はキレート剤をさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、前記キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸及びアスパラギン酸並びにこれらの混合物の塩から選択される。本発明のさらなる実施形態において、前記キレート剤は、０．１ｍｇ／ｍＬから５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記キレート剤は、０．１ｍｇ／ｍＬから２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明のさらなる実施形態において、前記キレート剤は、２ｍｇ／ｍＬから５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの具体的なキレート剤の各々一つが、本発明の別の実施形態を構成する。薬学的組成物中でのキレート剤の使用は、当業者に周知である。便宜のため、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２０００」を参照されたい。
【０２８２】
本発明のさらなる実施形態において、前記組成物は安定化剤をさらに含む。薬学的組成物中での安定化剤の使用は、当業者に周知である。便宜のため、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２０００」を参照されたい。
【０２８３】
より具体的には、本発明の組成物は、液体薬学的組成物中での保存時に、凝集物の形成の可能性があるポリペプチドをその治療的活性成分が含む、安定化された液体薬学的組成物である。「凝集物の形成」とは、なお溶解することができるオリゴマー又は溶液から沈殿する可視的な巨大凝集物の形成をもたらすタンパク質分子間の物理的相互作用を意味する。「保存時」とは、一旦調製された、液体薬学的組成物又は組成物が、直ちに対象に投与されないことを意味する。むしろ、調製後、液体形態で、凍結された状態で、若しくは後に液体形態に戻すために乾燥された形態で、又は対象への投与に適したその他の形態で、保存のために梱包される。「乾燥された形態」とは、液体薬学的組成物又は製剤が、フリーズドライ（すなわち、凍結乾燥；例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｐｏｌｌｉ（１９８４）Ｊ．  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ３８：４８−５９を参照）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ（１９９１）ｉｎ  Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（５ｔｈ  ｅｄ；Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｚ、Ｕ．Ｋ．）、ｐｐ．４９１−６７６；Ｂｒｏａｄｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．  Ｉｎｄ．  Ｐｈａｒｍ．  １８：１１６９−１２０６；およびＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １１：１２−２０を参照）、又は風乾（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｃｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２５：４５９−４７０；及びＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．  ４：４７−５３）の何れかによって乾燥されていることを意味する。液体薬学的組成物の保存時における、タンパク質による凝集物の形成は、そのタンパク質の生物学的活性に悪影響を与え、薬学的組成物の治療的効果の喪失をもたらすことがある。さらに、凝集物の形成は、タンパク質を含有する薬学的組成物が、注入系を用いて投与されるときには、管、膜又はポンプの閉塞などその他の問題を引き起こすことがある。
【０２８４】
本発明の薬学的組成物は、さらに、組成物の保存時における、ポリペプチドによる凝集物の形成を減少するのに十分な量のアミノ酸塩基を含み得る。「アミノ酸塩基」とは、与えられた全てのアミノ酸がその遊離塩基形態又はその塩形態で存在する、アミノ酸又はアミノ酸の組み合わせを意味する。アミノ酸の組み合わせが使用される場合、アミノ酸の全てがそれらの遊離塩基形態で存在し、全てがそれらの塩形態で存在し、又は一部がそれらの遊離塩基形態で存在するが、残りがそれらの塩形態で存在し得る。一実施形態において、本発明の組成物を調製する際に使用されるアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸及びグルタミン酸などの帯電した側鎖を有するアミノ酸である。あるアミノ酸又は有機塩基が、その遊離塩基形態又はその塩形態で存在する限り、あるアミノ酸（メチオニン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン及びそれらの混合物）の任意の立体異性体（すなわち、Ｌ若しくはＤ異性体又はそれらの混合物）又はこれらの立体異性体の組み合わせ又はグリシン又はイミダゾールなど（これに限定されない。）の有機塩基が、本発明の薬学的組成物中に存在し得る。一実施形態では、アミノ酸のＬ−立体異性体が使用される。一実施形態では、Ｄ−立体異性体が使用される。本発明の組成物は、これらのアミノ酸の類縁体と共に調合することもできる。「アミノ酸類縁体」とは、本発明の液体薬学的組成物の保存時における、ポリペプチドによる凝集物の形成を減少させる所望の効果をもたらす、天然に存在するアミノ酸の誘導体を意味する。例えば、適切なアルギニン類縁体には、アミノグアニジン、オルニチン及びＮ−モノエチル  Ｌ−アルギニンが含まれ、適切なメチオニン類縁体には、エチオニン及びブチオニンが含まれ、適切なシステイン類縁体には、Ｓ−メチル−Ｌ−システインが含まれる。他のアミノ酸と同様に、アミノ酸類縁体は、それらの遊離塩基形態又はそれらの塩形態で、組成物中に取り込まれる。本発明のさらなる実施形態において、アミノ酸又はアミノ酸類縁体は、タンパク質の凝集を抑制又は遅延させるのに十分な濃度で使用される。
【０２８５】
本発明のさらなる実施形態では、治療剤として作用するタンパク質が、このような酸化を受けやすい少なくとも一つのメチオニン残基を含むタンパク質である場合、メチオニン残基のメチオニンスルホキシドへの酸化を阻害するために、メチオニン（又は他の硫酸アミノ酸若しくはアミノ酸類縁体）を添加することができる。「阻害する」とは、メチオニンが酸化された種の経時的な蓄積が最小限であることを意味する。メチオニン酸化を阻害することによって、タンパク質がその適切な分子形態に保持される度合いが高くなる。メチオニンの任意の立体異性体（Ｌ又はＤ異性体）又はそれらの任意の組み合わせを使用することができる。添加すべき量は、メチオニンスルホキシドの量が規制当局によって許容されるように、メチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量とすべきである。典型的には、このことは、組成物が約１０％から約３０％以下のメチオニンスルホキシドを含有することを意味する。これは、一般的に、メチオニン残基に対する添加されたメチオニンの比が約１：１から約１０００：１までの範囲（１０：１から約１００：１など）であるように、メチオニンを添加することによって得ることが可能である。
【０２８６】
本発明のさらなる実施形態において、前記組成物は、高分子量ポリマー又は低分子化合物の群から選択される安定化剤をさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、前記安定化剤は、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ  ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシ−／ヒドロキシセルロース又はそれらの誘導体（例えば、ＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬ、ＨＰＣ−Ｌ及びＨＰＭＣ）、シクロデキストリン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２−メチルチオエタノールなどの含硫物質、並びに様々な塩（例えば、塩化ナトリウム）から選択される。これらの具体的な安定化剤の各々一つが、本発明の別の実施形態を構成する。
【０２８７】
前記薬学的組成物は、その中に存在する治療的に活性なタンパク質の安定性をさらに増強する追加の安定化剤も含み得る。本発明に対して特に興味深い安定化剤には、メチオニン酸化に対してタンパク質を保護するメチオニン及びＥＤＴＡ、並びに、凍結融解又は力学的剪断に付随する凝集に対してタンパク質を保護する非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２８８】
本発明のさらなる実施形態において、前記組成物は界面活性剤をさらに含む。本発明のさらなる実施形態において、前記界面活性剤は、洗浄剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）、エトキシル化されたヒマシ油、ポリグリコール化されたグリセリド、アセチル化されたモノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロックポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（Ｒ）  Ｆ６８、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １８８及び４０７、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００などのポロキサマー）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アルキル化及びアルコキシル化された誘導体（ｔｗｅｅｎｓ、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−４０、Ｔｗｅｅｎ−８０及びＢｒｉｊ−３５）などのポリオキシエチレン及びポリエチレン誘導体、モノグリセリド又はそのエトキシル化誘導体、ジグリセリド又はそのポリオキシエチレン誘導体、アルコール、グリセロール、レシチン及びリン脂質（例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ジホスファチジルグリセロール及びスフィンゴミエリン）、リン脂質（例えば、ジパルミトイルホスファチジン酸）及びリゾリン脂質（例えば、エタノールアミン、コリン、セリン又はスレオニンのパルミトイルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン及び１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸エステル）の誘導体並びにリゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、アルコキシ（アルキルエーテル）誘導体（例えば、リゾホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体）、並びに極性頭部基（すなわち、コリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール及び正に帯電したＤＯＰＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ）の修飾物、リゾホスファチジルセリン及びリゾホスファチジルスレオニン、及びグリセロリン脂質（例えば、セファリン）、グリセロ糖脂質（例えば、ガラクトピラノシド）、スフィンゴ糖脂質（例えば、セラミド、ガングリオシド）、ドデシルホスホコリン、ニワトリ卵リゾレシチン、フシジン酸誘導体（例えば、タウロジヒドロフシジン酸ナトリウムなど）、長鎖脂肪酸及びその塩Ｃ６−Ｃ１２（例えば、オレイン酸及びカプリル酸）、アクリルカルニチン及び誘導体、リジン、アルギニン若しくはヒスチジンのＮε−アシル化誘導体、又はリジン若しくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン若しくはヒスチジンと中性若しくは酸性アミノ酸の任意の組み合わせを含むジペプチドのＮα−アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの帯電アミノ酸の任意の組み合わせを含むトリペプチドのＮα−アシル化誘導体、ＤＳＳ（ドキュセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７−１１−７］）、ドキュセートカルシウム、ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドキュセートカリウム、ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム）、カプリル酸ナトリウム、コール酸又はその誘導体、胆汁酸及びその塩及びグリシン又はタウリン抱合体、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウム、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホン酸、陰イオン性（アルキル−アリール−スルホネート）一価界面活性剤、双性イオン界面活性剤（例えば、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−コールアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート、陽イオン性界面活性剤）（四級アンモニム塩基）（例えば、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、セチルピリジニウムクロリド）、非イオン性界面活性剤（例えば、ドデシル  β−Ｄ−グルコピラノシド）、ポロキサミン（例えば、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ’ｓ）（酸化プロピレン及び酸化エチレンをエチレンジアミンに順次添加することによって得られる四官能基のブロック共重合体）から選択され、又は界面活性剤はイミダゾリン誘導体の群若しくはそれらの混合物から選択され得る。これらの具体的な界面活性剤の各々一つが、本発明の別の実施形態を構成する。
【０２８９】
薬学的組成物中での界面活性剤の使用は、当業者に周知である。便宜のため、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２０００」を参照されたい。
【０２９０】
本発明の薬学的組成物中に、他の成分が存在し得ることも可能である。このような追加成分には、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、等張化剤、キレート剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）及び双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン及びヒスチジンなどのアミノ酸）が含まれ得る。このような追加成分は、もちろん、本発明の薬学的組成物の全体的な安定性に対して悪影響を与えるべきでない。
【０２９１】
本発明の、式［ａ］の化合物を含有する薬学的組成物は、幾つかの部位、例えば、局所部位（例えば、皮膚及び粘膜部位）、吸収を迂回する部位（例えば、動脈、静脈、心臓内投与）、及び吸収を伴う部位（例えば、皮膚、皮下、筋肉内又は腹部内投与）で、このような治療を必要としている患者に、投与され得る。  
本発明の薬学的組成物の投与は、例えば、舌、舌下、頬、口腔内、経口、胃及び腸内、鼻、肺、例えば、細気管支及び肺胞又はこれらの組み合わせ、上皮、皮膚、経皮、膣、直腸、目（例えば、結膜を介して）、尿管（ｕｒｅｔａｌ）、並びに非経口など幾つかの投与経路を通じて、このような治療を必要とする患者に与え得る。  本発明の組成物は、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、ミクロエマルジョン、多重エマルジョン（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、発泡、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ペースト、膏薬、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、錠剤、被覆錠、リンス、カプセル（例えば、硬ゼラチンカプセル及び軟ゼラチンカプセル）、坐薬、直腸カプセル、ドロップ、ゲル、スプレー、粉末、エアロゾル、吸入薬、点眼薬、眼軟膏、眼用リンス、膣ペッサリー、膣リング、膣軟膏、注射溶液、インシチュ変換溶液（例えば、インシチュでのゲル化、インシチュでの硬化、インシチュでの沈殿、インシチュでの結晶化、注入溶液及びインプラント）のような幾つかの剤形で投与することができる。
【０２９２】
さらに、本発明の組成物は、式［ａ］の化合物の安定性をさらに増強するため、生物学的利用度を増加するため、溶解度を増加するため、有害な効果を減少するため、当業者に周知の時間療法を達成するため、患者の服用遵守を強化するため、又はこれらの任意の組み合わせのために、例えば、共有、疎水性及び静電的相互作用を通じて、薬物担体、薬物送達系、高度薬物送達系の中に配合し、又は付着させることができる。担体、薬物送達系及び高度薬物送達系の例には、ポリマー、例えば、セルロース及び誘導体、多糖、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体、ポリ（ビニルアルコール）、アクリル酸及びメタクリル酸ポリマー、ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそれらのブロック共重合体、ポリエチレングリコ−ル、担体タンパク質、例えば、アルブミン、ゲル、例えば、サーモゲル系、例えば、当業者に周知のブロック共重合体系、ミセル、リポソーム、細粒、ナノ粒子、液晶及びその分散系、Ｌ２相及びその分散系、当業者に周知の脂質−水系中での相挙動、ポリマー性ミセル、多重エマルジョン、自己乳化、自己マイクロエマルジョン化、シクロデキストリン及びそれらの誘導体、並びにデンドリマーが含まれるが、これらに限定されない。
【０２９３】
本発明の組成物は、例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器及び噴霧器（全て、当業者に周知の装置である。）を用いて、式［ａ］の化合物の経肺投与のための、固体、半固体、粉末及び溶液の組成物において有用である。
【０２９４】
本発明の組成物は、制御された、持続性の、長期の、遅延された、及び徐放薬物送達系の組成物において、特に有用である。より具体的には、組成物は、当業者に周知の、非経口制御放出及び持続性放出系（両系とも、投与の回数が大幅に減少する。）の組成物において有用であるが、これらに限定されない。さらに好ましいのは、皮下から投与される制御放出及び持続性放出系である。本発明の範囲を限定するものではないが、有用な制御放出系及び組成物の例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマー性ミセル、細粒、ナノ粒子である。
【０２９５】
本発明の組成物に対して有用な制御放出系を作製する方法には、結晶化、濃縮、共結晶化（ｃｏ−ｃｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、沈殿、共沈殿、乳化、分散、高圧ホモジネーション、カプセル化、噴霧乾燥、ミクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、細粒を作製するための溶媒蒸発、射出及び超臨界流体プロセスが含まれるが、これらに限定されない。一般的な参考文献として、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｗｉｓｅ，Ｄ．Ｌ．，ｅｄ．  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００）」及び「Ｄｒｕｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｖｏｌ．  ９９：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（ＭａｃＮａｌｌｙ，Ｅ．Ｊ．，ｅｄ．  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００）」を参照されたい。
【０２９６】
非経口投与は、注射器、必要に応じてペン様注射器を使用して、皮下、筋肉内、腹腔内又は静脈内注射によって行い得る。あるいは、非経口投与は、注入ポンプによって行うことが可能である。さらなる選択肢は、鼻又は肺用スプレーの形態で、式［ａ］の化合物を投与するための溶液又は懸濁液であり得る組成物である。さらなる選択肢として、本発明の式［ａ］の化合物を含有する薬学的組成物は、例えば、無針注射による、若しくはパッチ、必要に応じてイオン注入パッチからの経皮投与、又は経粘膜投与（例えば、頬）に適合することも可能である。
【０２９７】
刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書に引用されている全ての参考文献は、各参考文献が、参照により、個別且つ具体的に援用されることが記され、その全体が本明細書中に記載されている場合と同程度に（法によって許容される最大限まで）、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
【０２９８】
本明細書において、全ての見出し及び小見出しは、便宜のために使用されているものに過ぎず、如何なる意味においても、本発明を限定するものと解釈すべきではない。
【０２９９】
本明細書に記載されているあらゆる全ての例又は例示的言語（例えば、「など」）の使用は、本発明をより明確にするためのものにすぎず、別段の記載がなければ、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の言語は、本発明の実施に不可欠なものとして特許請求の範囲に記載されていない要素を示すものと解釈すべきでない。
【０３００】
本明細書中への特許文献の引用及び援用は便宜のために行われているに過ぎず、このような特許文献の正当性、特許可能性及び／又は法的強制力についての見解を反映するものではない。
【０３０１】
本発明には、適用法令によって許容されるとおり、本明細書に添付された特許請求の範囲に記載された主題のあらゆる修飾及び均等物が含まれる。
【実施例】
【０３０２】
化学基に対して、以下の略号を使用する。
【化１０７】
2008502301.tif 000098
【０３０３】
以下の他の略号を使用した。
【０３０４】
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＣＨＣＡ：４−ヒドロキシ−α−シアノ桂皮酸
【化１０８】
2008502301.tif 000099
【０３０５】
ＣＰＹ：カルボキシペプチダーゼＹ
ＨＰＬＣ法：
方法：０２−Ｂ４−４
ＲＰ分析は、Ｗａｔｅｒｓ２４８７デュアルバンド検出器を取り付けたＡｌｌｉａｎｃｅ  Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５システムを使用して行った。２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでのＵＶ検出は、Ｓｙｍｍｅｔｒｙ３００  Ｃ１８、５μｍ、３．９ｍｍ×１５０ｍｍカラム、４２℃を用いて収集した。化合物は、１．０分／分の流速で、１５分にわたって、０．０５％トリフルオロ酢酸で緩衝化された水中の５−９５％アセトニトリルの線形グラジエントで溶出する。
【０３０６】
方法０３−Ｂ１−１：
ＲＰ分析は、Ｗａｔｅｒｓ９９６ダイオードアレイ検出器を取り付けたＷａｔｅｒｓ２６９０システムを用いて行った。ＵＶ検出は、４２℃、１ｍｌ／分で溶出される２１８ＴＰ５４  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ  ５μ  Ｃ−１８シリカカラム（ＴｈｅＳｅｐｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｈｅｓｐｅｒｉａ）上にて、２１４、２５４、２７６及び３０１ｎｍで収集した。０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中の、０．１％トリフルオロ酢酸で緩衝化された５％アセトニトリルでカラムを平衡化した。注入後、５０分にわたり、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中の、０．１％トリフルオロ酢酸で緩衝化された０％から９０％アセトニトリルのグラジエントによって試料を溶出した。
【０３０７】
ペプチドに対する質量スペクトルは、５００−１８００Ｄａの範囲ではＡｇｉｌｅｎｔ  １１００Ｓｅｒｉｅｓ上で、又は５００−２０００Ｄａの範囲ではＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＰＥ  ＡＰＩ  １００上で取得した。典型的には、ｍ／ｚに対して認められたシグナルは、一連のｚ＝１、２、３、４、５又は６の何れかに対応する。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＤスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｘ  ａｕｔｏｆｌｅｘ上で取得した。
【０３０８】
アシル転移化合物、例えば、式
【化１０９】
2008502301.tif 000100
【０３０９】
の化合物
及び抱合部分Ｙ−Ｅ−Ｚは、市販のものを取得し、又は以下の一般的な方法で、以下のガイドラインに従って合成することができる。  
一般的な方法（Ａ）：
一般式
【化１１０】
2008502301.tif 000101
【０３１０】
（Ｒ’及びＲ’’は、独立に、Ｃ１−１５アルキレン、Ｃ２−１５アルケニレン、Ｃ２−１５アルキニレン、Ｃ１−１５ヘテロアルキレン、Ｃ２−１５ヘテロアルケニレン、Ｃ２−１５ヘテロアルキニレンを表し、１以上の単素環芳香族化合物ビラジカル又は複素環化合物ビラジカルを挿入することができる。）
の化合物は、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基ＰＧによってα−アミノ基が保護された適切なアミノ酸メチルエステル
【化１１１】
2008502301.tif 000102
【０３１１】
から、例えば、適切な酸
【化１１２】
2008502301.tif 000103
【０３１２】
（Ｘは、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基によって保護されてもよく、又は保護されなくてもよい。）と、例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシベンゾトリアジン−４−オン又は７−アザベンゾトリアゾールなどのカップリング試薬とを、例えば、例えばジイソプロピルカルボジイミド又は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩などのカルボジイミドと組み合わせて、例えばトリエチルアミン又はエチルジイソプロピルアミンなどの適切な塩基の存在下又は不存在下で使用して、
【化１１３】
2008502301.tif 000104
【０３１３】
タイプのエステルを形成させる、アシル化法によって調製することができる。
【０３１４】
このエステルは、例えば、水又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒又は溶媒の混合物中で、例えばアンモニアと反応させることによって、対応するアミドへ変換させることができる。
【化１１４】
2008502301.tif 000105
【０３１５】
全ての保護基の除去は、文献（例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  ，  １９９１  ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている方法によって、１以上の段階で行うことができる。
【化１１５】
2008502301.tif 000106
【０３１６】
一般的方法Ａに定義されているように、
【化１１６】
2008502301.tif 000107
【０３１７】
アミノ酸メチルエステルは、一般的に市販されているものを購入するか、又は周知の方法によって合成することができる。
【０３１８】
一般的方法（Ｂ）：
一般式
【化１１７】
2008502301.tif 000108
【０３１９】
の化合物（Ｒ’及びＲ’’は上記に定義されている。）は、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基によってα−アミノ基が保護された適切なアミノ酸メチルエステル
【化１１８−１】
2008502301.tif 000109
から
適切なアルコール
【化１１８−２】
2008502301.tif 000110
（Ｘは、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基によって保護されてもよく、又は保護されなくてもよい。）を、文献に記載されているような、アルキル化を行える条件、例えば、例えばトリフェニルホスフィン及びアゾカルボン酸エチルなどのＭｉｔｓｕｎｏｂｕ条件下で使用し、芳香族ヒドロキシル基をアルキル化して、
【化１１９】
2008502301.tif 000111
【０３２０】
タイプのエステルを形成させることによって、調製することができる。
【０３２１】
このエステルは、例えば、水又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒又は溶媒の混合物中で、例えばアンモニアと反応させることによって、対応するアミドへ変換させることができる。
【化１２０】
2008502301.tif 000112
【０３２２】
全ての保護基の除去は、文献（例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  ，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている方法によって、１以上の段階で行うことができる。
【化１２１】
2008502301.tif 000113
【０３２３】
一般的方法Ｂに定義されているように、
【化１２２】
2008502301.tif 000114
【０３２４】
一般的方法（Ｃ）：
一般式
【化１２３】
2008502301.tif 000115
【０３２５】
の化合物（Ｒ’及びＲ’’は上記に定義されている。）は、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基ＰＧによってα−アミノ基が保護された適切なアミノ酸メチルエステル
【化１２４】
2008502301.tif 000116
【０３２６】
から
適切なアルキル化試薬
【化１２５】
2008502301.tif 000117
【０３２７】
（ＬＧ’の陰イオンは、ハロゲン化物又はスルホン酸塩などの適切な脱離基であり、Ｘは、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基によって保護されてもよく、又は保護されなくてもよい。）を使用して、芳香族ヒドロキシル基をアルキル化することによって調製することができる。この反応は、例えば、炭酸カリウム、ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデク−５−エン又はｔｅｒｔ−ブチルテトラメチルウアニジンなどの塩基を、適切な温度、典型的には、−７８℃と２００℃の間で与える塩基性条件下で起り得る。
【化１２６】
2008502301.tif 000118
【０３２８】
このエステルは、例えば、水又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒又は溶媒の混合物中で、例えばアンモニアと反応させることによって、対応するアミドへ変換させることができる。
【化１２７】
2008502301.tif 000119
【０３２９】
全ての保護基の除去は、文献（例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている方法によって、１以上の段階で行うことができる。
【化１２８】
2008502301.tif 000120
【０３３０】
一般的方法Ｃに定義されているように、
【化１２９】
2008502301.tif 000121
【０３３１】
一般的な方法（Ｄ）：
一般式
【化１３０】
2008502301.tif 000122
【０３３２】
の化合物（Ｒ’及びＲ’’は上記に定義されている。）は、文献（例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基ＰＧによってα−アミノ基が保護された適切な酸
【化１３１】
2008502301.tif 000123
【０３３３】
から、
例えばトリエチルアミン又はエチルジイソプロピルアミンなどの適切な塩の存在下又は不存在下で、当業者に公知のアシル化条件（例えば、例えばジイソプロピルカルボジイミド又は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩などの例えばカルボジイミドと組み合わせて、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシベンゾトリアジン−４−オン又は７−アザベンゾトリアゾールなどのカップリング試薬）を用いて、適切な第一級又は第二級アミン（Ｘは、適切な保護基によって保護されてもよく、又は保護されなくてもよい。）と反応させて、アミド
【化１３２】
2008502301.tif 000124
【０３３４】
を形成することによって調製することができる。
【０３３５】
全ての保護基の除去は、文献（例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている方法によって、１以上の段階で行うことができる。
【化１３３−１】
2008502301.tif 000125
一般的方法Ｄに定義されているように、
【化１３３−２】
2008502301.tif 000126
一般的方法（Ｅ）：システインからのケト基含有アミノ酸アミドの合成
適宜にＮ保護されたシステイン誘導体（例えば、エステル、Ｎ−（２，４−ジメトキシベンジル）アミド又はＮ−ビス（シクロプロピル）メチルアミド）又は適宜にＮ保護されたシステインアミドを、カルボニル基含有アルキル化剤（Ｒ５０ＣＯ（ＣＨ２）ｎＬＧ’’、ＬＧ’’＝ハロゲン、スルホン酸塩（Ｏ−ＳＯ２−Ｒ５１）、ジアルキルスルホニウム、フェニルヨードニウム又はヒドロキシから選択される求核置換のための脱離基、Ｒ５１は、Ｃ１−６アルキル、部分的に又は完全にフッ素化されたＣ１−６アルキル、又はアルキル、ハロゲン、ニトロ、シアノ若しくはアセトアミドで必要に応じて置換されたアリールであり、Ｒ５０は、水素、アルキル、アリール又はヘテロアリール（該アリール又はヘテロアリールは、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アシル、アルキル又はニトロで、必要に応じて一回又は複数回置換されている。）を表し、Ｓアルキル化されたシステイン誘導体を与えるための適切な反応条件下で処理される。酸誘導体をアミドへ変換し、α−アミノ基を脱保護することによって、この誘導体をアミノ酸アミドへと変換する。適切なＮ保護基は、例えば、トリチル、フタロイル又はｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル基である。
【化１３４】
2008502301.tif 000127
【０３３６】
（式中、ｎは、１から１０までの整数を表す。）
一般的合成（Ｆ）：アスパラギン酸又はグルタミン酸からのケト基含有アミノ酸アミドの合成
アスパラギン酸又はグルタミン酸は、以下に示されている環状エステルを生成するために、Ｎ−アルコキシカルボニル誘導体をホルムアルデヒドと処理することによって選択的に保護することができる。
【化１３５】
2008502301.tif 000128
【０３３７】
これらの誘導体（Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル、２−クロロベンジル、アリル、２−（トリメチルシリル）エチル、２，２，２−トリクロロエチル又はベンズヒドリルを表す。）は、カルボン酸（ＬｖＧは、ハロゲン、アリールオキシ又はヘテロアリールオキシを表す。）を活性化し、必要に応じて適切な触媒の存在下で、炭素求核試薬Ｒ８０−Ｍ１（Ｒ８０は、アルキル、アリールまたはヘテロアリール（該アリール又はヘテロアリールは、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アシル、アルキル又はニトロで、必要に応じて一回又は複数回置換されている。）を表し、Ｍ１は、アルカリ金属、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｔｉ、Ｚｒ、Ｍｎ、Ｃｕ、Ｃｅ又はＣａを表す。）との反応とによって、保護されたケトン含有アミノ酸誘導体へと変換することができる。生成物をアンモニアと反応し、脱保護すると、所望のアミノ酸アミドが得られる。
【化１３６】
2008502301.tif 000129
【０３３８】
同様に、Ｎ−アルコキシカルボニルピログルタミン酸エステル（Ｒ７０は、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル、２−クロロベンジル、アリル、２−（トリメチルシリル）エチル、２，２，２−トリクロロエチル又はベンズヒドリルを表し、Ｒ８０は、低級アルキルを表す。）を求核炭素試薬と反応させると、保護されたケト基含有アミノ酸誘導体を得ることができる。生成物をアンモニアと反応し、脱保護すると、所望のアミノ酸アミドが得られる。
【化１３７】
2008502301.tif 000130
【０３３９】
同様に、以下に示されているような適切にＮ保護されたグルタミン酸ジエステル（Ｒ９０は、低級アルキルを表す。）は、炭素が選択的にアシル化されて、加水分解及び脱カルボキシル化の後、ケト基含有アミノ酸の保護された誘導体を与えることができ、これは、標準的な手順を用いて、アミノ酸アミドへと変換することができる。
【化１３８】
2008502301.tif 000131
【０３４０】
一般的方法（Ｇ）
一般式
【化１３９】
2008502301.tif 000132
【０３４１】
の化合物
（Ｒ’’’は、Ｃ１−１５アルキレン、Ｃ２−１５アルケニレン、Ｃ２−１５アルキニレン、Ｃ１−１５ヘテロアルキレン、Ｃ２−１５ヘテロアルケニレン、Ｃ２−１５ヘテロアルキニレンを表し、１以上の単素環芳香族化合物ビラジカル又は複素環化合物ビラジカルを挿入することができる。）は、適切な保護された第一級又は第二級アミン
【化１４０】
2008502301.tif 000133
【０３４２】
（ＰＧは、文献、例えば、「Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されているような適切な保護基であり得、ＬＧ’’’の陰イオンは、例えばハロゲン化物又はスルホン酸塩などの脱離基である。）
から調製することができる。
【０３４３】
このアミンは、適切な保護されたヒドロキシルアミン
【化１４１】
2008502301.tif 000134
【０３４４】
（ＰＧ’は保護基であり、ヒドロキシルアミンからＰＧ’が除去されることなく、ＰＧがアミンから除去され得るように選択される。）と反応される。これに対する例は、文献、例えば、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に見出すことができる。
【０３４５】
例えば−７８℃ないし２００℃などの適切な温度で、例えば水素化ナトリウムなどの塩基性条件下で、この二成分を反応させる。
【化１４２】
2008502301.tif 000135
【０３４６】
アミンの保護基は、文献に記載されている方法を用いて、選択的に除去することができる。
【化１４３】
2008502301.tif 000136
【０３４７】
例えばトリエチルアミン又はエチルジイソプロピルアミンなどの適切な塩基の存在下又は不存在下で、例えばジイソプロピルカルボジイミド又は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩などの例えばカルボジイミドと組み合わせて、適切な酸及び例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシベンゾトリアジン−４−オン又は７−アザベンゾトリアゾールなどのカップリング試薬によって、アミンをアシル化して、アミドを得ることができる。
【化１４４】
2008502301.tif 000137
【０３４８】
最後に、ヒドロキシルアミンの保護基は、文献（例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９９１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている方法によって、除去することができる。
【化１４５】
2008502301.tif 000138
【０３４９】
一般的方法（Ｈ）
一般式
【化１４６】
2008502301.tif 000139
【０３５０】
の化合物は、ヒドラジン水和物の添加によって、エタノールなど適切な溶媒中の適切なエステル（ＲＩＶはＣ１−１０アルキルである。）から調製することができる。
【化１４７】
2008502301.tif 000140
【０３５１】
一般的方法（Ｊ）アシル転移反応
例えば５から５０℃又は室温などの適切な温度で、低濃度のＥＤＴＡを含有する水の中に、対象ペプチド（最終濃度１から１０ｍＭ）及び対象求核試薬（最終濃度１０ｍＭから２Ｍ）の溶液を溶解又は懸濁する。
【０３５２】
反応物質の溶解度を向上させるために、有機溶媒を加えてもよい。例えばｐＨ１ないしｐＨ１４、例えばｐＨ３．５ないしｐＨ９、ｐＨ６ないしｐＨ８．５など適切なｐＨ値になるように、例えばリン酸緩衝液又はＨＥＰＥＳなどの適切な緩衝液で、混合物を緩衝化することができ、又は塩基若しくは酸の添加により、ｐＨを維持することができる。適切な酵素、例えば、カルボキシペプチダーゼＹを、ペプチドと求核試薬の前記混合物に添加する。温度若しくはｐＨ値を変化させることにより、有機溶媒を添加することにより、又は透析若しくはゲルろ過により、適切な時間の後、例えば５分ないし１０日後に、反応を停止し得る。
【化１４８】
2008502301.tif 000141
【０３５３】
選択すべきｐＨは、例えば、抱合されるべきペプチドの溶解度及び使用される酵素の活性によって決定される。ペプチドの溶解度は、大部分、ペプチドのｐＫａによって決定される。通常、あるペプチドの溶解度は、ｐＨがペプチドのｐＫａに等しいときに、最小となる。上記を考慮に入れながら、反応を実行するｐＨを選択することは、当業者の能力の範疇に属する。
【０３５４】
一般的方法（Ｋ）オキシム形成
オキシム部分は、アシル転移された対象ペプチド（ＲＶは、置換された若しくは置換されていない芳香環、置換された若しくは置換されていない複素芳香環、水素又はＣ１−１０アルキルであり得る。）を水中に溶解することによって形成され得る。溶解度を増加するために、有機溶媒を加えてもよい。溶液を、例えばｐＨ０ないしｐＨ１４、ｐＨ３ないしｐＨ６、又はｐＨ５などの適切なｐＨ値に緩衝化し、例えば０から６０℃などの適切な温度に維持する。対象のヒドロキシルアミンを添加し、以下の反応スキームに従って、オキシム部分を形成する。
【化１４９】
2008502301.tif 000142
【０３５５】
選択すべきｐＨは、例えばペプチドの溶解度によって決定される。ペプチドの溶解度は、大部分、ペプチドのｐＫａによって決定される。通常、あるペプチドの溶解度は、ｐＨがペプチドのｐＫａに等しいときに、最小となる。上記を考慮に入れながら、反応を実行するｐＨを選択することは、当業者の能力の範疇に属する。
【０３５６】
一般的方法（Ｌ）ヒドラゾンの形成
ヒドラゾンの形成（Ｉ）
ヒドラゾン部分は、アシル転移された対象ペプチド（ＲＶＩは、置換された若しくは置換されていない芳香環、置換された若しくは置換されていない複素芳香環、水素又はＣ１−１０アルキルであり得る。）を水中に溶解することによって形成され得る。溶液を、例えばｐＨ２ないしｐＨ１４、又はｐＨ０ないしｐＨ４などの適切なｐＨ値に緩衝化し、例えば０から６０℃などの適切な温度に維持する。それによりヒドラゾンが形成される対象ヒドラジドを添加する。
【化１５０】
2008502301.tif 000143
【０３５７】
ヒドラゾンの形成（ＩＩ）
ヒドラゾンは、アシル転移された対象ペプチド（ＲＶＩＩは、置換された若しくは置換されていない芳香環、置換された若しくは置換されていない複素芳香環、水素又はＣ１−１０アルキルであり得る。）を水中に溶解することによって形成され得る。溶液を、例えばｐＨ２ないしｐＨ１４、又はｐＨ０ないしｐＨ４などの適切なｐＨ値に緩衝化し、例えば０から６０℃などの適切な温度に維持する。それによりヒドラゾンが形成される対象ヒドラジンを添加する。
【化１５１】
2008502301.tif 000144
【０３５８】
一般的方法（Ｍ）イソオキサゾールの形成
イソオキサゾールは、ニトリルオキシド及びアルキン間の反応によって形成され得る。ニトリルオキシドは、過剰の適切なオキシムに、例えば漂白剤などの適切な酸化試薬を添加することによって形成される。新たに形成された過剰のニトリルオキシドのオキシドの溶液を、対象ペプチドに添加し得る。
【化１５２】
2008502301.tif 000145
【０３５９】
一般的方法（Ｎ）トリアゾールの形成
トリアゾールは、水又は水と有機溶媒（例えば、アセトニトリルなど）の混合物などの適切な溶媒中、Ｃｕ（Ｉ）イオンの存在下での、Ｚ基に結合されたアジドと対象ペプチドに結合されたアルキンとの反応によって形成され得る。トリアゾールは、２つの可能な位置異性体を形成し得る。
【化１５３】
2008502301.tif 000146
【０３６０】
一般的方法（Ｏ）トリアゾールの形成
トリアゾールは、水又は水と有機溶媒（例えば、アセトニトリルなど）の混合物などの適切な溶媒中、Ｃｕ（Ｉ）イオンの存在下での、Ｚ基に結合されたアルキンと対象ペプチドに結合されたアジドとの反応によって形成され得る。トリアゾールは、２つの可能な位置異性体を形成し得る。
【化１５４】
2008502301.tif 000147
【０３６１】
一般的方法（Ｐ）アミドの形成
アミドは、例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ２００３，  ４４，４５１５−４５１８に記載されているように、ペプチドに共有結合されたアジドを、トリフェニルホスフィン部分を含有するエステルと反応させることによって、位置選択的に形成させることができる。
【化１５５】
2008502301.tif 000148
【０３６２】
一般的方法（Ｑ）アミドの形成
アミドは、例えば、「Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，６７，  ４９９３−４９９６」に記載されているように、ペプチドに共有結合されたアジドを、ジフェニルホスフィン部分を含有するチオエステルと反応させることによって、位置選択的に形成させることができる。
【化１５６】
2008502301.tif 000149
【０３６３】
一般的方法（Ｒ）アリールアルキンの形成
アリールアルキンは、例えば「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２００４，１５，２３１−２３４」に記載されているように、ペプチドに共有結合されたアルキンとハロアルキル化合物とを、水溶性であるパラジウム触媒の存在下で反応させることによって形成させることができる。ハロアリール化合物は、対応するアリールトリフルオロスルホン酸塩と交換することができる。
【化１５７】
2008502301.tif 000150
【０３６４】
一般的方法（Ｓ）アリールアルキンの形成
アリールアルキンは、例えば「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２００４，１５，２３１−２３４」に記載されているように、ペプチドに共有結合されたハロアリール部分とアルキンとを、水溶性であるパラジウム触媒の存在下で反応させることによって形成させることができる。ハロアリール部分に代えて、ペプチドに付着されたトリフルオロスルホニルオキシアリール部分を使用することもできる。
【化１５８】
2008502301.tif 000151
【０３６５】
一般的方法（Ｔ）
一般式
【化１５９】
2008502301.tif 000152
【０３６６】
（式中、Ｒ’及びＲ’’は、上記定義のとおりである。）の化合物は、α−アミノ基が酸に不安定な保護基ＰＧ１（例えば、ＢＯＣ又はトリチルなど）で保護され、ω−アミノ基が塩基に不安定な保護基ＰＧ２（例えば、Ｆｍｏｃなど）で保護された適切なアミノ酸から調製することができる。酸は、試薬（例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール又は３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン）などの試薬の存在下又は不存在下及び塩基（例えば、トリエチルアミン又はエチルジイソプロピルアミンなど）の存在下又は不存在下でのカルボジイミド（例えば、ジイソプロピルカルボジイミド）を例えば使用するなど、当業者に公知の標準的なカップリング条件を用いて、Ｒｉｎｋ−アミド樹脂に付着させ得る。ω−アミンＰＧ２の保護基は、例えば、「T. W. Greene, P. G.M. Wuts, Protective groups in organic synthesis,2nd ed., 1991 JohnWiley & Sons, Inc. New York」などの文献中で、特定の保護基に関して記載されている塩基性条件下で除去され得る。
【化１６０】
2008502301.tif 000153
【０３６７】
酸は、試薬（例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール又は３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン）などの試薬の存在下又は不存在下及び塩基（例えば、トリエチルアミン又はエチルジイソプロピルアミンなど）の存在下又は不存在下で、カルボジイミド（例えば、ジイソプロピルカルボジイミド）を例えば使用するなど、標準的なカップリング条件を用いて、ωアミノ部分に付着させることができる。中間体は、例えば、トリフルオロ酢酸又はジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の２０から７０％溶液など酸性条件下で固相支持体から切断され、所望のアミンアミドを与え得る。
【化１６１】
2008502301.tif 000154
一般的方法（Ｕ）
一般式
【化１６２】
2008502301.tif 000155
【０３６８】
（式中、Ｒ’及びＲ’’は、上記定義のとおりである。）の化合物は、酸に不安定な保護基ＰＧ１（例えば、ＢＯＣ又はトリチルなど）で保護された適切なアミノ酸から調製することができ、これは、試薬（例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール又は３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン）などの試薬の存在下又は不存在下で、カルボジイミド（例えば、ジイソプロピルカルボジイミド）などのカップリング試薬の存在下で、過剰のアンモニアと反応される。
【化１６３】
2008502301.tif 000156
【０３６９】
フェノール性水酸基は、例えば炭酸カリウム又はテトラメチルグアニジンなどの適切な塩基の存在下で、適切なハロゲン化物又はスルホン酸塩でアルキル化することができる（Ｒａは、任意の適切な置換されたアルキル又はアリール基である。）。保護基ＰＧ１は、例えば、「T. W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective groups in organic synthesis, 2nd ed., 1991 John Wiley & Sons, Inc. New York」中で、選択された特定の保護基に関して文献に記載されているように、酸性条件下でαアミノ酸から除去して、所望のアミノアミドを与えることができる。
【化１６４】
2008502301.tif 000157
【０３７０】
一般的方法（Ｖ）ＰＥＧ−試薬
一般式
【化１６５】
2008502301.tif 000158
【０３７１】
（式中、
【化１６６】
2008502301.tif 000159
【０３７２】
は、上記定義どおりのＥである。）
の試薬は、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒中の適切な試薬又は試薬の組み合わせ（例えば、２−スクシンイミド−１，１，３，３−テトレメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸（ＴＳＴＵ）など）と反応させることによって活性化され得る適切な酸から調製することができる。活性化された酸（例えば、取得された前記酸の２，５−ジオキソピロジン−１−イルエステル）は、例えば、必要に応じてエチルジイソプロピルアミン又はトリエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で、第一級アミンで官能化された市販のＰＥＧ試薬と反応させることができる。
【化１６７】
2008502301.tif 000160
【０３７３】
例１  (2S)-2-アミノ-6-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ヘキサン酸アミド
【化１６８】
2008502301.tif 000161
ステップＡ：(2S)-2-tert-(ブトキシカルボニルアミノ)-6-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ヘキサン酸メチルエステル
【化１６９】
2008502301.tif 000162
1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(3.23g, 16.8mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(20mL)及びジクロロメタン(20mL)の混合物中のベンゾイルプロピオン酸(3.00g, 16.8mmol)及び3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシベンゾトリアジン-4-オン(2.75g, 16.8mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を20分室温で撹拌した。BOC-Lys-OMeの塩酸塩(5.00g, 16.8mmol)及びエチルジイソプロピルアミン(8.65mL, 50.5mmol)を連続して添加した。この反応混合物を16h撹拌した。酢酸エチル(300mL)で希釈し、炭酸水素ナトリウムの半濃縮溶液で洗浄した(2×300mL)。この有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘプタン 2：1を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(90g)により精製し、2.41gの(2S)-2-tert-(ブトキシカルボニルアミノ)-6-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ヘキサン酸メチルエステルを得た。
【０３７４】
1H-NMR(CDCl3)：δ1.30-1.90(m, 6H); 1.44(s, 9H); 2.61(t, 2H); 3.20(q, 2H); 3.37(t, 2H); 4.25(m, 1H); 5.20(br, 1H); 5.90(br, 1H); 7.46(m, 2H); 7.50(m, 1H); 8.00(d, 2H)。
【０３７５】
ステップＢ：[(1S)-1-カルバモイル-5-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ペンチル]カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１７０】
2008502301.tif 000163
水(25mL)中のアンモニアの25％溶液を、(2S)-2-tert-(ブトキシカルボニルアミノ)-6-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ヘキサン酸メチルエステル(0.70g, 1.67mmol)に添加した。この反応混合物を２日間室温で撹拌した。溶媒を真空下で除去して0.56gの[(1S)-1-カルバモイル-5-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ペンチル]カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０３７６】
1H-NMR(CDCl3)：δ0.90(m, 6H); 2.75(t, 2H); 3.20-3.50(m, 4H); 4.15(m, 1H); 7.35-7.60(m, 3H); 8.00(d, 2H)。
【０３７７】
ステップＣ：トリフルオロ酢酸(25mL)を、ジクロロ-メタン(25mL)中の[(1S)-1-カルバモイル-5-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ペンチル]カルバミン酸tert-ブチルエステル(0.56g, 1.38mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を1h室温で撹拌した。溶媒を除去した。粗生成物を、緩衝液として0.1％のトリフルオロ酢酸を含んだ水中のアセトニトリル20〜45％勾配を用いるRP-18カラム上のHPLCにより精製し、純度が約85％の92mgの標題化合物を得、これをさらなる実験に用いた。
【０３７８】
1H-NMR(CDCl3)：δ1.40(m, 4H); 1.70(m, 2H); 2.46(t, 2H); 3.00(q, 2H); 3.23(t, 2H); 3.70(m, 1H); 7.53(m, 3H); 7.65(t, 1H); 7.83(br, 1H); 7.90(t, 1H); 8.00(d, 2H); 8.05(br, 3H)。 MS：m/z＝306 [M+1]+。
【０３７９】
4-アセチル-N-((5S)-5-アミノ-5-カルバモイルペンチル)ベンズアミド
【化１７１】
2008502301.tif 000164
ステップＡ：1.65gの標題化合物を、(2S)-2-アミノ-6-(4-オキソ-4-フェニルブチリルアミノ)ヘキサン酸アミドについての記載のとおりに、ベンゾイルプロピオン酸の代わりに4-アセチル安息香酸を用いて調製した。
【０３８０】
1H-NMR(CDCl3)：δ1.40(m, 2H); 1.60(m, 2H); 1.80(m, 2H); 2.62(s, 3H); 3.30(q, 2H); 3.75(q, 1H); 7.55(br, 1H); 7.85(br, 1H); 7.97(d, 2H); 8.05(d, 2H); 8.10(br, 3H); 8.65(t, 1H)。
【０３８１】
S-フェナシルシステインアミド塩酸塩
【化１７２】
2008502301.tif 000165
ステップＡ：S-フェナシル-N-Boc-システインメチルエステル
MeCN(20mL)中のN-Boc システインメチルエステル(2.05mL, 9.93mmol)の溶液に、0℃でDIPEA(3.55mL, 20.1mmol)、NaI(0.48g, 3.20mmol)、及び、ついでMeCN(4mL)中の臭化フェナシル(2.41g, 12.1mmol)の溶液を添加した。この混合物を室温で19h撹拌した。水(100mL)及び1N HCl水溶液(30mL)を添加し、生成物を抽出した(3×AcOEt)。合体した抽出物を塩水で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、減圧下で濃縮し、4.37gの油状物を得た。−20℃で一晩AcOEt(約10mL)及びヘプタン(約40mL)から結晶化させて3.49g(99％)の標題のメチルエステルを茶色の固体で得た。
【０３８２】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.37(s, 9H), 2.74(dd, J＝9Hz, 13Hz, 1H), 2.89(dd, J＝5.5Hz, 13Hz, 1H), 3.62(s, 3H), 4.03(d, J＝15Hz, 1H), 4.14(d, J＝15Hz, 1H), 4.22(m, 1H), 7.33(br d, J＝8Hz, 1H), 7.52(m, 2H), 7.64(m, 1H), 7.99(m, 2H)。
【０３８３】
ステップＢ：S-フェナシル-N-Boc システインアミド
【化１７３】
2008502301.tif 000166
MeCN(30mL)中のS-フェナシル-N-Boc-システインメチルエステル(1.77g, 5.01mmol)の溶液に、アンモニア水溶液(50mL, 25％; 12.5g NH3)を添加した。室温で71h撹拌した後、さらなる出発物質はTLCにより検出できなかった。この混合物を減圧下で濃縮し、残渣をトルエン及びエタノール中に懸濁させ、再び濃縮した。PhMe＋EtOHを用いてストリッピングした。低温のメタノールからの結晶化により、0.86g(50％)の標題のアミドを得た。
【０３８４】
1H NMR(DMSO-d6)：δ1.37(s, 9H), 2.66(dd, J＝9Hz, 13Hz, 1H), 2.83(dd, J＝5.5Hz, 13Hz, 1H), 4.07(d, J＝15Hz, 1H), 4.10(m, 1H), 4.12(d, J＝15Hz, 1H), 6.88(br d, J＝8Hz, 7.12(br s, 1H), 7.35(br s, 1H), 7.52(t, J＝8Hz, 2H), 7.64(m, 1H), 7.96(m, 2H)。
【０３８５】
ステップＣ：S-フェナシルシステインアミド塩酸塩
【化１７４】
2008502301.tif 000167
S-フェナシル-N-Boc システインアミド(0.70g, 2.07mmol)をDCM(10mL)及びTFA(20mL)と混合した。30分後、混合物を濃縮し、残渣をトルエン及びMeCN と混合し、再び濃縮した。残渣を1N HCl(1.5mL)、エタノール、MeCN、及びトルエンと混合し、再び濃縮した。この残渣を、沸騰しているEtOH(約5mL)中に懸濁させた。濾過及び乾燥により0.18g(32％)の標題の塩酸塩を薄茶色の固体で得た。LCMS：唯一の生成物(HPLC, 210nm), MH+＝221(生成物−水)。
【０３８６】
1H NMR(DMSO-d6)：δ2.93(dd, J＝7Hz, 13Hz, 1H), 3.06(dd, J＝6Hz, 13Hz, 1H), 3.97(m, 1H), 4.33(br s, 2H), 7.58(m, 2H), 7.68(m, 1H), 8.02(m, 2H), 8.32(br s, 3H)。
【０３８７】
例４  4-アセチル-N-((5S)-5-アミノ-5-カルバモイルペンチル)ベンズアミド
【化１７５】
2008502301.tif 000168
Rink-アミド-樹脂(負荷：0.43mmol/g, 6.66g, 2.86mmol)を、ジクロロメタン(50mL)を用いて膨潤させた。溶媒を除去した。N-メチルピロリジノン中のピペリジンの20％溶液を添加した(50mL)。該反応器を20分振盪させた。液体を除去した。この樹脂をN-メチルピロリジノン(3×50mL)及びジクロロメタン(5×50mL)で洗浄した。N-メチルピロリジノン(50mL)中のBOC-Lys(FMOC)-OH(5.37g, 11.5mmol)の溶液及びN-メチルピロリジノン(20mL)中の1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(1.75g, 11.5mmol)の溶液を連続して添加した。ジイソプロピルカルボジイミド(1.79mL, 11.5mmol)及びエチルジイソプロピルアミン(1.96mL, 11.5mmol)を添加した。該反応器を室温で16h振盪させた。液体を除去した。この樹脂をN-メチルピロリジノン(3×50mL)及びジクロロメタン(3×50mL)で洗浄した。N-メチルピロリジノン(50mL)中の4-アセチル安息香酸(2.82g, 11.5mmol)の溶液、及びN-メチルピロリジノン(20mL)中の1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(1.75g, 11.5mmol)の溶液を連続して添加した。ジイソプロピルカルボジイミド(1.79mL, 11.5mmol)及びエチルジイソプロピルアミン(1.96mL, 11.5mmol)を添加した。該反応器を室温で16h振盪させた。この樹脂をN-メチルピロリジノン(3×50mL)及びジクロロメタン(3×50mL)で洗浄した。ジクロロメタン(50mL)中のトリフルオロ酢酸及び10％トリイソプロピルシランの50％溶液を樹脂に添加した。この反応槽を1h室温で振盪させた。液体を回収した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をトルエン(50mL)中に再び溶解させた。溶媒を真空下で除去した。
【０３８８】
上述の手順の６回分の粗生成物を合体させた。これらを、トリフルオロ酢酸の0.1％緩衝液中の水中のアセトニトリル3-23％勾配を用いるC18-逆相カラム上のHPLC-クロマトグラフィーにより精製し、4-アセチル-N-((5S)-5-アミノ-5-カルバモイルペンチル)ベンズアミドの1.07gのトリフルオロ酢酸の塩を得た。
【０３８９】
例５  1-[4-(2-(アミノオキシ)エチル)ピペリジン-1-イル]ヘキサデカン-1-オン
【化１７６】
2008502301.tif 000169
ステップ１：4-[2-(トルエン-4-スルホニルオキシ)エチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１７７】
2008502301.tif 000170
塩化トシル(4.16g, 21.8mmol)を、ジクロロメタン(100mL)中の商業的に入手可能な4-(2-ヒドロキシエチル)ピペリジン-1-カルボン酸エステル tert-ブチルエステル(例えばAldrich 54,724-7, 5.0g, 21.8mmol)及びトリエチルアミン(4.25mL, 30.5mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を室温で16h撹拌した。酢酸エチル(300mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液(200mL)で洗浄した。この水相を酢酸エチル(150mL)で抽出した。合体した有機層を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液(250mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、最初に酢酸エチル／ヘプタン1：2、次いで1：1 を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(80g)により精製して、6.04gの4-[2-(トルエン-4-スルホニルオキシ)エチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０３９０】
1H-NMR(CDCl3)：δ1.05(m, 2H); 1.45(s, 9H); 1.55(m, 5H); 2.50(s, 3H); 2.65(t, 2H); 4.05(m, 4H); 7.35(d, 2H); 7.80(d, 2H)。
【０３９１】
ステップ２：4-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロイソインドール-2-イルオキシ)エチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１７８】
2008502301.tif 000171
鉱物油(0.69g, 17.2mmol)中の水素化ナトリウムの60％懸濁物を、０℃において、N,N-ジメチルホルムアミド(20mL)中のN-ヒドロキシフタルイミド(2.80g, 17.2mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を45分０℃で撹拌した。N,N-ジメチルホルムアミド(15mL)中の4-[2-(トルエン-4-スルホニルオキシ)エチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(5.99g, 15.6mmol)の溶液、及びヨウ化テトラブチルアンモニウム(0.17g, 0.47mmol)を連続して添加した。この反応混合物を60℃にまで２日間加熱し、室温にまで冷却した。水(5mL)を慎重に添加した。この反応混合物を酢酸エチル(250mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液(200mL)で洗浄した。この水相を酢酸エチル(200mL)で抽出した。合体した有機層を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液(150mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘプタン 1：1 を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(80g)により精製して4.36gの4-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロイソインドール-2-イルオキシ)エチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０３９２】
1H-NMR(CDCl3)：δ1.15(m, 2H); 1.50(s, 9H); 1.75(m, 5H); 2.75(m, 2H); 4.10(m, 2H); 4.30(t, 2H); 7.80(m, 4H)。
【０３９３】
ステップ３：2-(2-(ピペリジン-4-イル)エトキシ)イソインドール-1,3-ジオン
【化１７９】
2008502301.tif 000172
トリフルオロ酢酸(20mL)を、ジクロロメタン(20mL)中の4-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロイソインドール-2-イルオキシ)エチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(4.26g, 11.4mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を室温で50分撹拌した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をジクロロメタン(50mL)中に溶解させ、溶媒を真空下で除去した。この後者の手順を２回繰り返し、6.46gの2-(2-(ピペリジン-4-イル)エトキシ)イソインドール-1,3-ジオンの粗製のトリフルオロ酢酸の塩を得た。
【０３９４】
MS：m/z＝275 [M+1+]。1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.30(m, 2H); 1.65(m, 2H); 1.90(m, 3H); 2.90(q, 2H); 3.30(d, 2H); 4.20(t, 2H); 7.90(s, 4H); 8.30(br, 1H); 8.65(br, 1H)。
【０３９５】
ステップ４：2-[2-(1-(ヘキサデカノイル)ピペリジン-4-イル)エトキシ]イソインドール-1,3-ジオン
【化１８０】
2008502301.tif 000173
０℃で、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(1.04g, 5.44mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(20mL)及びジクロロメタン(20mL)中のパルミン酸(1.40g, 5.44mmol)及び3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアゾール(0.89g, 5.44mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を０℃で20分撹拌した。N,N-ジメチルホルムアミド(5mL)中の2-(2-(ピペリジン-4-イル)エトキシ)イソインドール-1,3-ジオン(2.11g, 5.44mmol)のトリフルオロ酢酸塩の溶液、及びエチルジイソプロピルアミン(6.19mL, 38.1mmol)を連続して添加した。この反応混合物を、室温にまで昇温させながら16h撹拌した。これを酢酸エチル(150mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液(150mL)で洗浄した。この水相を酢酸エチルで抽出した。合体した有機層を、水(50mL)及び炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(50mL)の混合物で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。この粗生成物を、酢酸エチル／ヘプタン 1：1 を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(40g)により精製して1.52gの2-[2-(1-(ヘキサデカノイル)ピペリジン-4-イル)エトキシ]イソインドール-1,3-ジオンを得た。
【０３９６】
MS：m/z＝513 [M+1+]。1H-NMR(DMSO-d6)：δ0.90(t, 3H); 1.10(m, 2H); 1.25(m, 26H); 1.45(m, 2H); 1.65(m, 1H); 1.80(m, 2H); 2.30(t, 2H); 2.95(t, 1H); 3.85(m, 3H); 4.20(t, 2H); 4.40(d, 1H); 7.90(s, 4H)。
【０３９７】
ステップ５：ヒドラジン水和物(0.14mL, 2.96mmol)を、エタノール(30mL)中の2-[2-(1-(ヘキサデカノイル)ピペリジン-4-イル)エトキシ]イソインドール-1,3-ジオン(1.52g, 2.96mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を還流にまで75分加熱し、室温にまで冷却した。形成された沈殿物を濾過により除去した。濾液の溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノール／25％アンモニア水溶液の混合物(100：10：1)を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(30g)により精製して800mgの1-[4-(2-(アミノオキシ)エチル)ピペリジン-1-イル]ヘキサデカン-1-オンを得た。
【０３９８】
MS：m/z＝383 [M+1+]。1H-NMR(CDCl3)：δ0.80(t, 3H); 1.25(m, 2H); 1.60(m, 26H); 1.70(m, 4H); 1.65(m, 3H); 2.70 8t, 2H); 2.60(t, 1H); 3.05(t, 1H); 3.80(m, 3H); 4.60(d, 1H)。
【０３９９】
例６  (S)-2-アミノペンタ-4-イン酸アミド
【化１８１】
2008502301.tif 000174
ステップ１：((S)-1-カルバモイルbut-3-イニル)カルバミン酸tert-ブチルエステル
０℃で、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(563mg, 2.94mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(20mL)中の、商業的に入手可能な(S)-2-(tert-butyオキシカルボニルアミノペンタ-4-イン酸(例えばAcros, 626mg, 2.94mmol)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(397mg, 2.94mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を０℃で20分撹拌した。アンモニアの25％水溶液(2.38mL)を添加した。この反応混合物を室温にまで昇温させながら16h撹拌した。酢酸エチル(150mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液(150mL)で洗浄した。この水相を酢酸エチルで抽出した(2×100mL)。合体した有機層を塩水(250mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。この残渣を酢酸エチル(100mL)中に溶解させ、塩水(75mL)及び水(75mL)の混合物で洗浄した。この水相を酢酸エチルで抽出した(2×50mL)。合体した有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノール(10：1)を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(50g)により精製して138mgの((S)-1-カルバモイルbut-3-イニル)カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０４００】
1H-NMR(CDCl3)：δ1.40(s, 9H); 2.15(t, 1H); 2.70(m, 1H); 2.90(m, 1H); 4.40(m, 1H); 5.70(d, 1H); 6.50(br, 1H); 6.90(br, 1H)。
【０４０１】
ステップ２
トリフルオロ酢酸(3mL)を、ジクロロメタン(3mL)中の((S)-1-カルバモイルbut-3-イニル)カルバミン酸tert-ブチルエステル(138mg, 0.65mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を1.25h室温で撹拌した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をジクロロメタン(40mL)中に溶解させ、溶媒を真空下で除去した。後者の手順を２回繰り返し、粗製の(S)-2-アミノペンタ-4-イン酸アミドのトリフルオロ酢酸塩の塩を得、これを次の実験に用いた。
【０４０２】
MS：m/z＝113 [M+1+]。1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.70(m, 2H); 3.15(t, 1H); 3.85(m, 1H); 7.65(s, 1H); 7.85(s, 1H); 8.20(br, 3H)。
【０４０３】
例７  (S)-2-(([Leu37]GLP-1-(7-37)イル)アミノ)ペンタ-4-イン酸アミド
【化１８２】
2008502301.tif 000175
250mM HEPES 及び5mM EDTA(0.085mL)の緩衝液中の[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン(0.348mg, 100nmol)、(S)-2-アミノペンタ-4-イン酸アミドのトリフルオロ酢酸塩の塩(2.26mg, 10000nmol)、及びヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン(4mg)（使用に先立ちpH 7.5に調整）、アンモニアの25％水溶液ならびに1N 塩酸からなる溶液（pH7.96。合わせて0.011mL)を準備した。水(0.005mL)中のCPY(1.0U)の溶液を添加した。この反応混合物を室温で静置した。40分後、MALDI-TOFにおいて(S)-2-(([Leu37]GLP-1-(7-37)イル)アミノ)ペンタ-4-イン酸アミドに相当するマスが、さらに[Leu37]GLP-1-(7-37)イルアラニン、[Leu37]GLP-1-(7-37)ペプチド、(S)-2-{(S)-2-(([Leu37]GLP-1-(7-37)イル)アミノ)ペンタ-4-イノイルアミノ}ペンタ-4-イノイルアミドに相当するマスが測定できた。
【０４０４】
MALDI-TOF(CHCA)：m/z＝3508, 3485, 3604, 3413。
【０４０５】
例８  (2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド 
【化１８３】
2008502301.tif 000176
ステップ１：[(S)-1-カルバモイル-2-(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１８４】
2008502301.tif 000177
ジカルボン酸ジ-tert-ブチル(15g, 69mmol)を、ジオキサン(140mL)及び水酸化ナトリウムの1N 水溶液(140mL)中のチロシンアミド(15g, 69mmol)の塩酸塩の塩の溶液に添加した。この反応混合物を16h室温で撹拌した。硫酸水素ナトリウム(200mL)の10％水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した(3×200mL)。合体した有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノール(10：1)の混合物を用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(400g)により精製し、8.17gの[(S)-1-カルバモイル-2-(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０４０６】
MS：m/z＝303(M＋Na)+。
【０４０７】
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.31(s 9H); 2.80(dd, 1H); 2.83(dd, 1H); 4.00(m, 1H); 6.62(d, 2H); 6.70(d, 1H); 6.97(br, 1H); 7.03(d, 2H); 7.31(br, 1H); 9.14(s, 1H)。
【０４０８】
ステップ２：[(S)-1-カルバモイル-2-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)エチル]カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１８５】
2008502301.tif 000178
[(S)-1-カルバモイル-2-(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(1.0g, 3.57mmol)、ヨウ化テトラブチルアンモニウム(65mg, 0.17mmol)、炭酸カリウム(3.94g, 29mmol)、臭化プロパルギル(0.38mL, 4.28mmol)及びN,N-ジメチルホルムアミド(15mL)の混合物を60℃にまで16h加熱した。室温にまで冷却し、水(30mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウム10％水溶液を用いて酸性にした。この混合物を酢酸エチルで抽出した(2×100mL)。合体した有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(200mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノールの混合物(10：1)を溶出剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー(100g)により精製して、998mgの[(S)-1-カルバモイル-2-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)エチル]カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０４０９】
MS：m/z＝341(M＋Na)+。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.31(s, 9H); 2.50(s, 1H); 2.67(dd, 1H); 2.91(dd, 1H); 4.03(m, 1H); 4.74(s, 2H); 6.77(d, 1H); 6.86(d, 2H); 6.99(s, 1 H), 7.17(d, 2H); 7.35(s, 1H)。
【０４１０】
トリフルオロ酢酸(10mL)を、ジクロロメタン(10mL)中の[(S)-1-カルバモイル-2-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)エチル]カルバミン酸tert-ブチルエステル(998mg, 3.13mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を1.5h室温で撹拌した。溶媒を除去した。この残渣をジクロロメタン(30mL)中に溶解させた。溶媒を除去した。この後者の手順を２回繰り返して1.53gの(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドのトリフルオロ酢酸塩の塩を得た。
【０４１１】
HPLC(方法02-B4-4)：Rf＝5.62分。MS：m/z＝219(M＋1)+。
【０４１２】
1H-NMR(CDCl3)δ2.51(s, 1H); 3.02(m, 2H); 3.90(m, 1H); 4.78(s, 2H); 6.95(d, 2H); 7.20(d, 2H); 7.56(s, 1H); 7.87(s, 1H); 8.10(br, 3H)。
【０４１３】
例９  (S)-2-([Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)3-(4-(プロパ-2-イニル)フェニル)プロピオンアミド
【化１８６】
2008502301.tif 000179
ステップ１：[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン 
[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニンを、Applied Biosystems 433A ペプチド合成器上で、商業的に入手可能なFmoc-Ala-Wang 樹脂を用いて出発する標準的なFmoc-方法により調製した。以下のアミノ酸誘導体が用いられた：
【表１】
2008502301.tif 000180
【０４１４】
トリフルオロ酢酸(10mL)、水(0.265mL)及びトリイソプロピルシラン(0.265mL)の混合物を、上記樹脂に添加した。これを1.5h振盪した。液体を回収した。この樹脂をトリフルオロ酢酸(1mL)で洗浄した。この液体を合体させた。この溶液を窒素流のもとで濃縮した。エーテル(40mL)を添加した。沈殿物を遠心分離により分離した。粗生成物を、トリフルオロ酢酸の緩衝液中において水中のアセトニトリル37-65％勾配を溶出剤として用いるHPLC上の逆相C18-カラムで精製した。
【０４１５】
ステップ２：(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド の[Leu37]GLP-1(7-37)アラニンを用いたCPY-反応
250mM HEPES及び5mM EDTAからなる緩衝液中の、[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン(1mM 最終濃度)及び(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドのトリフルオロ酢酸塩の塩(100mM 最終濃度)及びヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン(4mg)の混合物(0.100mL 最終体積)を、水酸化ナトリウムの1N 水溶液を用いてpH 8に調整した。カルボキシペプチダーゼＹの溶液(CPY, 200U/ml, 0.005mL, 1U)を添加し添加、所望の最終体積及び濃度を得た。この混合物を3h室温で静置した。
【０４１６】
MALDI-TOF(飛行質量分光分析のマトリックス支援レーザー脱離イオン化時間)：m/z＝3412([Leu37]GLP-1ペプチド)及び3612((S)-2-([Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)3-(4-(プロパ-2-イニル)フェニル)プロピオンアミド)。MS(電子スプレー)：1205(M)3+。
【０４１７】
例10  (2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド
【化１８７】
2008502301.tif 000181
ステップ１：[Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアラニン
[Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアラニンを、Applied Biosystems 433A ペプチド合成器上で、商業的に入手可能なFmoc-Ala-Wang 樹脂を用いて出発する標準的なFmoc-方法により調製した。以下のアミノ酸誘導体が用いられた：
【表２】
2008502301.tif 000182
【０４１８】
トリフルオロ酢酸(10mL)、水(0.265mL)、及びトリイソプロピルシラン(0.265mL)の混合物を、上記樹脂に添加した。これを1.5h振盪した。液体を回収した。この樹脂をトリフルオロ酢酸(1mL)で洗浄した。液体を合体させた。溶液を窒素流のもとで濃縮した。エーテル(40mL)を添加した。沈殿物を遠心分離により分離した。粗生成物を、0.1％トリフルオロ酢酸の緩衝液中で水中の37-65％の勾配のアセトニトリルをを溶出剤として用いるHPLC上の逆相C18-カラム上で精製した。
【０４１９】
HPLC：8.81分(方法02-B4-4)。MALDI-TOF：m/z＝3946。MS：m/z＝1317. 988, 790。
【０４２０】
ステップ２：(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドの(([Glu3,Leu10]GLP-2イル)ロイシニル)アラニンを用いたCPY-反応
250mM HEPES及び5mM EDTAからなる緩衝液中の(([Glu3,Leu10]GLP-2イル)ロイシニル)アラニン(1mM 最終濃度)及び(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドのトリフルオロ酢酸塩の塩(6mg, 150mM 最終濃度)及びヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン(61mg)の混合物(1.5mL 最終体積)を、水酸化ナトリウムの1N 水溶液を用いてpH 8に調整した。カルボキシペプチダーゼＹの溶液(CPY, 800U/mL, 0.019mL, 15U)を添加して所望の最終体積及び濃度を得た。この混合物を3.5h室温で静置した。この混合物を水を用いて10mLの体積にまで希釈した。生成物を、C18-カラム及び水中の39-67％勾配のアセトニトリルを用いるHPLC-精製により分離し、0.1％ トリフルオロ酢酸を用いて酸性にし、(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドを得た。214nmで吸収係数1500000を用いて、収量2.5mg が測定された。
【０４２１】
MALDI-TOF：4073。HPLC(系02-b4-4)：9.14分。
【０４２２】
MS(電子スプレー)：m/z＝815, 1120, 1359。
【０４２３】
例11  (S)-3-(4-((3-(3-クロロフェニル)イソキサゾール-5-イル)メトキシ)フェニル)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)プロピオン酸アミド
【化１８８】
2008502301.tif 000183
ステップ１：3-クロロベンズアルデヒドオキシム
【化１８９】
2008502301.tif 000184
水(5mL)中のヒドロキシルアミン塩酸塩(3.68g, 53mmol)の溶液を、エタノール(20mL)中の3-クロロベンズアルデヒド(5.00mL, 44mmol)の溶液に添加した。水(5mL)中の水酸化ナトリウム(2.64g, 66mmol)の溶液を添加した。この反応混合物を室温で48h撹拌した。この反応混合物を水／氷(150mL)中に加えた。形成された沈殿物を濾過により分離し、ジクロロメタン(200mL)中に溶解させた。この溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を除去して3.88gの3-クロロベンズアルデヒドオキシムを得、これをさらに精製せずに用いた。
【０４２４】
ステップ２：次亜塩素酸ナトリウムの10％溶液(0.008mL)を、水(0.5mL)中の3-クロロベンズアルデヒドオキシム(4.2mg, 0.027mmol)の懸濁物に添加した。この溶液を10分室温で静置した。水(0.5mL)中のの溶液(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(1.1mg, 0.00027mmol)及びトリエチルアミン(0.003mL)を添加した。この反応混合物を室温で16h静置した。粗生成物を、TFAの0.1％緩衝液中において水中の43-75％の勾配のアセトニトリルを用いる逆相C18-HPLCで精製した。
【０４２５】
HPLC(方法02-b4-4)：9.56分。MS(EI)：m/z＝1410(M3+), 1054(M4+)及び844(M5+)。
【０４２６】
例12  (S)-2-アミノ-3-[4-(2-オキソプロポキシ)フェニル]プロピオンアミド
【化１９０】
2008502301.tif 000185
ステップ１：[(S)-1-カルバモイル-2-(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１９１】
2008502301.tif 000186
1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(6.82g, 35.5mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)及びジクロロメタン(10mL)の混合物中のBOC-保護されたチロシン(10.0g, 35,5mmol)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(5.44g, 35.5mmol)溶液に添加した。この反応混合物を20分撹拌した。水中のアンモニアの25％水溶液を添加した。この反応混合物を室温で16h撹拌した。酢酸エチル(100mL)で希釈し、水(3×100mL)、続いて炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(100mL)で洗浄した。これを硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して4.24gの[(S)-1-カルバモイル-2-(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０４２７】
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.31(s 9H); 2.80(dd, 1H); 2.83(dd, 1H); 4.00(m, 1H); 6.62(d, 2H); 6.70(d, 1H); 6.97(br, 1H); 7.03(d, 2H); 7.31(br, 1H); 9.14(s, 1H)。
【０４２８】
ステップ２：{(S)-1-カルバモイル-2-[4-(2-オキソプロポキシ)フェニル]エチル}カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１９２】
2008502301.tif 000187
N,N-ジメチルホルムアミド(50mL)中の、[(S)-1-カルバモイル-2-(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(3.00g, 10.7mmol)及び炭酸カリウム(7.40g, 53.5mmol)の混合物に、クロロアセトン(1.02mL, 12.8mmol)及びヨウ化テトラブチルアンモニウム(197mg, 0.54mmol)を連続して添加した。この反応混合物を90℃にまで16h加熱し、室温にまで冷却した。これを、水(100mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウムの10％溶液を用いてpH 2にまで酸性にした。酢酸エチル(300mL)を添加した。相を分離した。有機層を水で洗浄し(3×150mL)、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して2.65gの{(S)-1-カルバモイル-2-[4-(2-オキソプロポキシ)フェニル]エチル}カルバミン酸tert-ブチルエステルを得た。
【０４２９】
MS：m/z＝359(M＋Na+)。1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30(s, 9H); 2.10(s, 3H); 2.70(dd, 1H); 2.90(dd, 1H); 3.95(br, 1H); 4.00(m, 1H); 4.75(s, 2H); 6.80(d, 2H); 7.00(br, 1H); 7.20(d, 2H); 7.35(br, 1H)。
【０４３０】
ステップ３：
トリフルオロ酢酸(50mL)を、ジクロロメタン(50mL)中の{(S)-1-カルバモイル-2-[4-(2-オキソプロポキシ)フェニル]エチル}カルバミン酸tert-ブチルエステル(2.65g, 7.88mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を1h室温で撹拌した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をジクロロメタン(50mL)中に溶解させ、溶媒を真空下で除去した。後者の手順をもう一度繰り返した。粗生成物を、トリフルオロ酢酸(0.1％)の緩衝液中において水中のアセトニトリル勾配13-33％を用いるHPLC上のC-18逆相クロマトグラフィーにより精製して、460mgの(S)-2-アミノ-3-[4-(2-オキソプロポキシ)フェニル]プロピオンアミドを得た。
【０４３１】
MS：m/z＝237(M+)。1H-NMR(DMSO-d6, TFA-塩)δ2.20(s, 3H); 2.80-3.10(m, 2H); 3.90(m, 1H); 4.80(s, 2H); 6.90(d, 2H); 7.20(d, 2H); 7.55(br, 1H); 7.90(br, 1H); 8.10+(br, 3H)。
【０４３２】
例13  (S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(2-オキソプロポキシ)フェニル)プロピオン酸アミド 
【化１９３】
2008502301.tif 000188
水(0.040mL)及び水酸化ナトリウムの1N 水溶液(0.003mL)中の(([Glu3,Leu10]GLP-2イル)ロイシニル)アラニン(0.50mg, 127pmol)の溶液を、250mM HEPES及び5mM EDTAを含んだ緩衝水溶液中の(S)-2-アミノ-3-[4-(2-オキソプロポキシ)フェニル]プロピオンアミド(13.3mg, 0.038mmol)のトリフルオロ酢酸塩の溶液（水酸化ナトリウムを用いてpH 8 に調整したもの）に添加した。この溶液を水酸化ナトリウムの1N 水溶液を用いてpH 8に調整した。この溶液を、250mM HEPES及び5mM EDTAを含み、水酸化ナトリウムを用いてpH 8 に調整された緩衝水溶液を用いて最終体積0.127mLにまで希釈した。水中のCPYの溶液(0.005mL, 1U)を添加した。この反応混合物を室温で16h静置した。MS分析は、所望のマスを有する生成物の形成を示した。
【０４３３】
MALDI-TOF：m/z＝4090.321。MS：m/z＝1365, 1024。HPLC(方法03-b6-1)：30.69分。
【０４３４】
例14  (2S)-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド
【化１９４】
2008502301.tif 000189
ステップ１：(([Glu3]GLP-2イル)ロイシニル)アラニン
(([Glu3]GLP-2イル)ロイシニル)アラニンを、(([Glu3,Leu10]GLP-2イル)ロイシニル)アラニンについての記載と同様に、商業的に入手可能なFmoc-Ala-Wang 樹脂から調製した。以下のアミノ酸誘導体が用いられる：
【表３】
2008502301.tif 000190
【０４３５】
HPLC：8.60分(方法02-B4-4)。MALDI-TOF：m/z＝3964.17。
【０４３６】
ステップ２：(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドの(([Glu3]GLP-2-イル)ロイシニル)アラニンを用いたCPY-反応：
(([Glu3]GLP-2-イル)ロイシニル)アラニンを、当業の熟練者に知られたFMOC-方法を用いるABI-433A ペプチド合成器で、標準的な固相ペプチド合成により調製した。(([Glu3]GLP-2イル)ロイシニル)アラニン(1mM 最終濃度)、及び(2S)-2-アミノ-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(28mg, 150mM 最終濃度)のトリフルオロ酢酸塩、及びヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン(250mM HEPES及び5mM EDTAを含んだ緩衝液中のシクロデキストリン(284mg)の混合物(7mL最終体積)を、水酸化ナトリウムの1N 水溶液を用いてpH 8に調整した。カルボキシペプチダーゼY(CPY, 800U/mL, 0.088mL, 70U)の溶液を添加して所望の最終体積及び濃度を得た。この混合物を100分室温で静置した。この混合物を水で希釈して体積を10mLにした。この生成物をC18-カラム及び水中のアセトニトリル36-75％勾配を用いるHPLC-精製により精製し、0.1％ トリフルオロ酢酸を用いて酸性にして、(2S)-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドを得た。214nmで1500000の吸収係数を用いて、収量9.9mgが測定された。
【０４３７】
MALDI-TOF：4096(M+)。HPLC(系02-b4-4)：8.97分。
【０４３８】
MS(電子スプレー)：m/z＝1366(M3+), 1024(M4+)，及び819(M5+)。
【０４３９】
例15  (S)-3-(4-((3-(3-クロロフェニル)イソキサゾール-5-イル)メトキシ)フェニル)-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ)プロピオン酸アミド
【化１９５】
2008502301.tif 000191
次亜塩素酸ナトリウムの10％溶液(0.062mL)を、水(4.2mL)中の3-クロロベンズアルデヒドオキシム(32mg, 0.205mmol)の懸濁物に添加した。この混合物を10分室温静置し、水(4.7mL)中の(2S)-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(8.4mg, 0.0021mmol)及びトリエチルアミン(0.025mL)の溶液に添加した。この反応混合物を室温で16h静置した。粗生成物を、TFAの0.1％緩衝液中において水中のアセトニトリル勾配40-80％を用いる逆相C18-HPLCを用いて精製した。
【０４４０】
214nmで1500000の吸収係数を用いて、収量0.132mgが測定された。
【０４４１】
MALDI-TOF：4244(M+)及び4228(M−O+)HPLC(方法02-b4-4)：9.41分。
【０４４２】
MS(EI)：m/z＝1417(M3+)及び1062(M4+)。
【０４４３】
例16  3-(3-(3-((4-((S)-2-カルバモイル-3-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェノキシル)メチル)イソキサゾール-3-イル)ベンジルカルバモイル)プロピオン酸 
【化１９６】
2008502301.tif 000192
ステップ１：(3-ヒドロキシメチルベンジル)カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１９７】
2008502301.tif 000193
０℃で、クロロ蟻酸エチル(1.93mL, 20mmol)を、テトラヒドロフラン(30mL)中の3-(tert-ブトキシカルボニルアミノメチル)安息香酸(5.0g, 20mmol)及びトリエチルアミン(3.33mL, 24mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を40分０℃で撹拌し、形成された沈殿物を濾過除去した。この濾液を０℃にまで冷却した。THF(25mL, 50mmol)中の水素化ホウ素リチウムの2.0M 溶液を添加した。この反応混合物を16h撹拌し、室温にまで昇温させながら、ガスが発生しなくなるまで水を慎重に添加した。硫酸水素ナトリウムの10％溶液(10mL)を添加した。炭酸水素ナトリウム飽和溶液(200mL)を添加した。この混合物を酢酸エチルで抽出した(200及び100mL)。合体した有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘプタン 1：1 を溶出剤として用いるシリカ(80g)上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、3.73gの(3-ヒドロキシメチルベンジル)カルバミン酸tertブチルエステルを得た。
【０４４４】
MS：m/z＝260(M+23+)。1H-NMR(CDCl3)：δ1.48(s, 9H); 4.30(br, 2H); 4.70(s, 2H); 4.85(br, 1H); 7.15-7.35(m, 5H)。
【０４４５】
ステップ２：(3-(アミノメチル)フェニル)メタノール
【化１９８】
2008502301.tif 000194
トリフルオロ酢酸(5mL)を、ジクロロメタン(5mL)中の(3-ヒドロキシメチルベンジル)カルバミン酸tertブチルエステル(1.70g, 7.17mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を40分撹拌した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をジクロロメタン(40mL)中に溶解させた。溶媒を真空下で除去した。後者の手順を２度繰り返した。この残渣を水(50mL)及び水酸化ナトリウム(100mL)の1N 水溶液中に溶解させた。tert-ブチルメチルエーテルで洗浄した(3×100mL)。塩化ナトリウムを用いて飽和させ、ジクロロメタンで抽出した(3×75mL)。合体したジクロロメタン相を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して328mgの粗製の(3-(アミノメチル)フェニル)メタノールを得、これを精製せずにさらなるステップで用いた。
【０４４６】
1H-NMR(DMSO-d6)：δ3.30(br, 2H); 3.70(s, 2H); 4.45(s, 2H); 5.15(br, 1H); 7.10-7.30(m, 4H)。
【０４４７】
ステップ３：N-(3-(ヒドロキシメチル)ベンジル)スクシンアミド酸 tert-ブチルエステル
【化１９９】
2008502301.tif 000195
０℃で、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(451mg, 2.35mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(5mL)及びジクロロメタン(5mL)の混合物中のコハク酸モノ-tert-ブチル(410mg, 2.35mmol)及び3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン(384mg, 2.35mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を25分０℃で撹拌した。
【０４４８】
N,N-ジメチルホルムアミド(5mL)及びエチルジイソプロピルアミン(0.40mL, 2.48mmol)中の粗製(3-(アミノメチル)フェニル)メタノール(340mg, 2.48mmol)の溶液を連続して添加した。この反応混合物を、室温にまでゆっくり加温しながら16h撹拌した。酢酸エチル(150mL)で希釈し、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液(100mL)で洗浄した。この水相を酢酸エチル(50mL)で抽出した。合体した有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(150mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、酢酸エチル及びヘプタンの混合物(2：1)を溶出剤として用いるシリカ(60g)上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、372mgのN-(3-(ヒドロキシメチル)ベンジル)スクシンアミド酸 tert-ブチルエステルを得た。
【０４４９】
MS：m/z＝316(M+23+)。1H-NMR(CDCl3)：δ1.45(s, 9H); 2.45(t, 2H); 2.60(t, 2H); 4.45(d, 2H); 4.70(s, 2H); 6.15(br, 1H); 7.15-7.35(m, 5H)。
【０４５０】
ステップ４：N-(3-ホルミルベンジル)スクシンアミド酸 tert-ブチルエステル
【化２００】
2008502301.tif 000196
−78℃で、塩化オキサリル(0.142mL, 1.63mmol)を、ジクロロメタン(5mL)中のジメチル スルホキシド(0.232 ml. 3.26mmol)の溶液に滴下添加した。この反応混合物を10分−78℃で撹拌した。ジクロロメタン(5mL)中のN-(3-(ヒドロキシメチル)ベンジル)スクシンアミド酸 tert-ブチルエステル(372mg, 1.55mmol)の溶液を添加した。この反応混合物を−78℃で10分撹拌した。トリエチルアミン(1.08mL, 7.77mmol)を添加した。この反応混合物を−78℃で5分撹拌し、次いで室温にまで加温した。室温で40分撹拌し、酢酸エチル(100mL)で希釈した。硫酸水素ナトリウムの10％水溶液(100mL)で洗浄した。水相を酢酸エチルで抽出した(2×50mL)。合体した有機層を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(150mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を除去して312mgの粗製のN-(3-ホルミルベンジル)スクシンアミド酸 tert-ブチルエステルを得、これをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０４５１】
MS：m/z＝314(M+23+)。1H-NMR(CDCl3)：δ1.35(s, 9H); 2.45(t, 2H); 2.55(t, 2H); 4.45(d, 2H); 6.20(br, 1H); 7.44(t, 1H); 7.50(d, 1H); 7.75(m, 2H); 9.95(s, 1H)。
【０４５２】
ステップ５：N-[3-((ヒドロキシイミノ)メチル)ベンジル]スクシンアミド酸 tert-ブチルエステル
【化２０１】
2008502301.tif 000197
水酸化ナトリウムの3.2M 水溶液(0.5mL, 1.60mmol)を、エタノール(2.5mL)及び水(0.5mL)中のN-(3-ホルミルベンジル)スクシンアミド酸 tert-ブチルエステル(312mg, 1.07mmol)及びヒドロキシルアミン塩酸塩(89mg, 1.29mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を室温で3日間撹拌した。硫酸水素ナトリウム(20mL)及び水(50mL)を添加した。この混合物を酢酸エチルで抽出した(3×50mL)。合体した有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して249mgの粗製のN-[3-((ヒドロキシイミノ)メチル)ベンジル]スクシンアミド酸 tert-ブチルエステルを得、これをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０４５３】
MS：m/z＝329(M+23+), 307(M+1+)
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.35(s, 9H); 2.40(m, 4H); 4.30(d, 2H); 7.25(d, 1H); 7.35(t, 1H); 7.50(m, 2H); 8.10(s, 1H); 8.40(t, 1H); 11.20(s, 1H)。
【０４５４】
ステップ６：N-[3-(ヒドロキシイミノメチル)ベンジル]スクシンアミド酸
【化２０２】
2008502301.tif 000198
トリフルオロ酢酸(7mL)を、ジクロロメタン(7mL)中の粗製のN-[3-((ヒドロキシイミノ)メチル)ベンジル]スクシンアミド酸 tert-ブチルエステル(249mg, 0.81mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を55分室温で撹拌した。溶媒を真空下で除去した。この残渣をジクロロメタン(50mL)中に再び溶解させた。溶媒を真空下で除去した。後者の手続を２度繰り返して294mgの粗製のN-[3-(ヒドロキシイミノメチル)ベンジル]スクシンアミド酸を得、これをさらに精製せずに次のステップで用いた。
【０４５５】
MS：m/z＝273(M+23+), 251(M+1+)。1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.45(A2B2, 4H); 4.30(d, 2H); 7.20-7.50(m, 4H); 8.10(s, 1H); 8.40(t, 1H); 11.20(br, 1H)。
【０４５６】
ステップ７：
次亜塩素酸ナトリウムの10％水溶液(0.0015mL, 2600pmol)を、水(0.11mL)及びの炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(0.01mL)の混合物中の粗製のN-[3-(ヒドロキシイミノメチル)ベンジル]スクシンアミド酸(1.29mg, 5150pmol)の溶液に添加した。この反応混合物を10分室温で静置した。水(0.11mL)中の(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(0.210mg, 51pmol)及びトリエチルアミン(0.0006mL)の溶液を添加した。この反応混合物を室温で振盪した。１時間後、MALDI-TOFは、(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドの質量に相当する主要なm/z＝4076と共に、3-(3-(3-((4-((S)-2-カルバモイル-3-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェノキシル)メチル)イソキサゾール-3-イル)ベンジルカルバモイル)プロピオン酸の質量に相当する少量のm/z＝4323を示した。2h後、LC-MS 電子スプレーは、(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミドの(M3+),(M4+)及び(M5+)にそれぞれ相当する質量m/z＝1359, 1020,及び816と共に、3-(3-(3-((4-((S)-2-カルバモイル-3-([Glu3,Leu10]GLP-2-イルロイシニルアミノ)エチル)フェノキシル)メチル)イソキサゾール-3-イル)ベンジルカルバモイル)プロピオン酸の(M3+),(M4+)及び(M5+)にそれぞれ相当する質量m/z＝1442, 1082,及び866を示した。8h後、LC-MS 電子スプレーは、(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(M3+)及び(M4+)にそれぞれ相当する主要な質量m/z＝1360及び1020と共に、3-(3-(3-((4-((S)-2-カルバモイル-3-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェノキシル)メチル)イソキサゾール-3-イル)ベンジルカルバモイル)プロピオン酸の(M3+)及び(M4+)にそれぞれ相当する少量の質量m/z＝1442及び1082を示した。
【０４５７】
例17  11-(4-(4-((2S)-2-カルバモイル-2-(([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェオキシメチル)-1,2,3-トリアゾリル)ウンデカン酸及び11-(5-(4-((2S)-2-カルバモイル-2-(([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェオキシメチル)-1,2,3-トリアゾリル)ウンデカン酸
【化２０３】
2008502301.tif 000199
ステップ１：11-アジドウンデカン酸メチル
【化２０４】
2008502301.tif 000200
アジドナトリウム(4.66g, 72mmol)及びヨウ化テトラブチルアンモニウム(66mg, 0.18mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(50mL)中の11-ブロモウンデカン酸メチル(Aldrichで商業的に入手可能, 5.00g, 17.9mmol)の溶液に連続的に添加した。この反応混合物を60℃にまで16h加熱し、室温にまで冷却した。水(200mL)で希釈し、酢酸エチル(200mL)で抽出した。この水相を水で洗浄した(2×200mL)。この有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して4.28gの11-アジドウンデカン酸メチルを得た。MS：m/z＝264(M+23+), 214(M-N2+)
ステップ２：11-アジドウンデカン酸
【化２０５】
2008502301.tif 000201
砕いた水酸化ナトリウム(709mg, 17.7mmol)を、メタノール(75mL)中の11-アジドウンデカン酸メチル(4.03g, 17.7mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を16h 室温で撹拌した。水(50mL)を添加した。この混合物を、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液を添加することによりpH 2にまで酸性にし、酢酸エチルで抽出した(3×50mL)。合体した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去した。この残渣をメタノール(50mL)中に溶解させた。砕いた水酸化ナトリウム(1.42g, 35.4mmol)を添加した。この反応混合物を室温で16h撹拌した。水(50mL)を添加した。この混合物を、硫酸水素ナトリウムの10％水溶液を添加することによりpH 2にまで酸性にし、酢酸エチルで抽出した(3×50mL)。合体した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して3.13gの11-アジドウンデカン酸を得た。
【０４５８】
MS：m/z＝250(M+23+), 200(M-N2+)。1H-NMR(CDCl3)：δ1.30(m, 12H); 1.65(m, 4H); 2.40(t, 2H); 3.20(t, 2H); 9.00-10.80(br, 1H)。
【０４５９】
ステップ３
アセトニトリル(0.055mL)中の11-アジドウンデカン酸(0.116mg, 510nmol)の溶液を、水(0.105mL)中の(2S)-2-([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(0.210mg, 51nmol)及び2,6-ルチジン(0.0012mL, 10200nmol)の溶液に添加した。アセトニトリル(0.050mL)中のヨウ化銅(I)(0.001mg, 5nmol)の溶液を添加した。この反応混合物を室温で維持した。4h後、アセトニトリル中のヨウ化銅(I)(0.098mg, 500nmol)の溶液を添加した。この反応混合物を室温で16h維持した。水(0.200mL)中のアンモニア2.5％溶液を添加した。この反応混合物を室温で室内圧力で4h維持した。このMS及びMALDI-TOFにより測定されたマスは、11-(4-(4-((2S)-2-カルバモイル-2-(([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェオキシメチル)-1,2,3-トリアゾリル)ウンデカン酸及び11-(5-(4-((2S)-2-カルバモイル-2-(([Glu3,Leu10]GLP-2イルロイシニルアミノ)エチル)フェオキシメチル)-1,2,3-トリアゾリル)ウンデカン酸について測定されたマスの予測範囲内(expectations)に該当した。
【０４６０】
HPLC：9.43分(方法02-B4-4)。MS：m/z＝1435, 1077。MALDI-TOF：4303。
【０４６１】
例18  11-(4-(4-((S)-2-カルバモイル-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ))フェノキシメチル)-1H-1,2,3-トリアゾール-1-イル)ウンデカン酸及び11-(5-(4-((S)-2-カルバモイル-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ))フェノキシメチル)-1H-1,2,3-トリアゾール-1-イル)ウンデカン酸
【化２０６】
2008502301.tif 000202
2,6-ルチジンを、水(0.5mL)中の(2S)-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ)-3-(4-(プロパ-2-イニルオキシ)フェニル)プロピオンアミド(1.0mg, 244pmol)の混合物に添加し、透明な溶液を得た。アセトニトリル(0.25mL)中の11-アジドウンデカン酸(0.554mg, 0.0025mmol)の溶液、及びアセトニトリル(0.25mL)中のヨウ化銅(I)(0.467mg, 0.0025mmol)の溶液を連続して添加した。この反応混合物を16h室温で静置した。0.1％トリフルオロ酢酸の緩衝液中において水中のアセトニトリル勾配35-75％を用いるHPLCの逆相C18カラムで分画した。約0.3mgの11-(4-(4-((S)-2-カルバモイル-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ))フェノキシメチル)-1,2,3-トリアゾリル)ウンデカン酸または11-(5-(4-((S)-2-カルバモイル-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニルアミノ))フェノキシメチル)-1H-1,2,3-トリアゾール-1-イル)ウンデカン酸またはこれらの混合物を得た。
【０４６２】
HPLC：9.27分(方法02-B4-4)。
【０４６３】
MS：m/z＝1441.8, 1081.3, 865.2, 721.2, 618.9。MALDI-TOF：m/z＝4317。
【０４６４】
例19  2-([Glu3]GLP-2イルロイシニル)-3-(4-((1-((N-(mPeg20kDayl)カルバモイル)デカニル)-1H-1,2,3-テトラゾール-4-イル)メトキシ)フェニル)プロピオンアミド及び2-([Glu3]GLP-2イルロイシニル)-3-(4-((1-((N-(mPeg20kDayl)カルバモイル)デカニル)-1H-1,2,3-テトラゾール-5-イル)メトキシ)フェニル)プロピオンアミド 
【化２０７】
2008502301.tif 000203
ステップ１：11-アジドウンデカン酸 2,5-ジオキソピロルジン-1-イルエステル
【化２０８】
2008502301.tif 000204
N,N,N',N'-テトラメチル-O-(N-スクシンイミジル)ウラニウムテトラフルオロボレート(1.32g, 4.40mmol)を、N,N-ジメチルホルムアミド(10mL)中の11-アジドウンデカン酸(1.00g, 4.40mmol)及びトリエチルアミン(0.61mL, 4.40mmol)の溶液に添加した。この反応混合物を2h室温で撹拌した。酢酸エチル(50mL)で希釈し、水で洗浄した(3×50mL)。この有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去して1.40gの粗製の11-アジドウンデカン酸 2,5-ジオキソピロルジン-1-イルエステルを得、これをさらに精製せずに次のステップで用いた。MS：m/z＝347 [M+Na+]。1H-NMR(CDCl3)：δ1.35(m, 12H); 1.60(quintett, 2H); 1.75(quintett, 2H); 2.60(t, 2H); 1.85(m, 4H); 3.25(t, 2H)。
【０４６５】
ステップ２：11-アジドウンデカノイルアミノmPEG20kDa
【化２０９】
2008502301.tif 000205
11-アジドウンデカン酸 2,5-ジオキソピロルジン-1-イルエステル(227mg, 0.7mmol)の溶液を、ジクロロメタン(50mL)中の商業的に入手可能なmPEG20000DA-アミン(Nektar 2M2U0P01, 5.00g, 0.25mmol)及びトリエチルアミン(0.174mL, 1.25mmol)の溶液に添加した。反応混合物を室温で16h撹拌した。エーテル(800mL)を添加した。形成された沈殿物を濾過により分離し、エーテルで洗浄した(2×100mL)。真空下で乾燥させて4.58gの11-アジドウンデカノイルアミノmPEG20kDaを得た。
【０４６６】
ステップ３：水(0.10mL)中のアスコルビン酸(1.72mg, 9766nmol)及び2,6-ルチジン(0.0024mL)の溶液を、水(0.1mL)中の硫酸銅(II)五水和物(0.49mg, 1954nmol)の溶液に添加した。この溶液を5分室温で維持した。得られた混合物の一部(0.025mL)を、水(0.075mL)中の(S)-2-([Glu3]GLP-2イルロイシニル)-3-(4-プロパルギルオキシフェニル)プロピオンアミド(0.1mg, 24nmol)、2,6-ルチジン(0.0012mL)及び11-アジドウンデカノイルアミノmPEG20kDa(0.049mg, 240nmol)の溶液に添加した。この反応混合物を室温で維持した。24h後、10％ NuPAGE(Invitrogen)のBis-Tirs ゲル及びSilverXpress（登録商標）銀染色法を用いるSDS-ゲル電気泳動により、2-([Glu3]GLP-2イルロイシニル)-3-(4-((1-((N-(mPeg20kDayl)カルバモイル)デカニル)-1H-1,2,3-テトラゾール-4-イル)メトキシ)フェニル)プロピオンアミド及び2-([Glu3]GLP-2イルロイシニル)-3-(4-((1-((N-(mPeg20kDayl)カルバモイル)デカニル)-1H-1,2,3-テトラゾール-5-イル)メトキシ)フェニル)プロピオンアミドとの予測に従って高分子ペプチドの形成が確認された。
【０４６７】
例20：N-((S)-5-([Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)-5-カルバモイルペンチル)-4-アセチル ベンズアミド：
【化２１０】
2008502301.tif 000206
ステップ１：
[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニンを例９のとおりに調製した。
【０４６８】
ステップ２：[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニンを用いた4-アセチル-N-((5S)-5-アミノ-5-カルバモイルペンチル)ベンズアミドのCPY-触媒によるペプチド転移：
5mM EDTAを含んだHEPES緩衝液 250mM pH8 の溶液中の4-アセチル-N-((5S)-5-アミノ-5-カルバモイルペンチル)ベンズアミド(最終濃度100mM)及びヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン(4％ w/v 最終濃度)の混合物に、5mM EDTAを含んだHEPES緩衝液 250mM pH8 の溶液[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン(1mM 最終濃度)を添加した。ジイソプロピルエチルアミンの添加によりこのpHを8.1に調整した。上記酵素の水溶液(10U/mL 最終濃度)を添加することにより反応を開始した。反応はHPLCによりモニターされる。
【０４６９】
HPLC方法：
カラム：Vydac C18(218TP53)250x4.6
Ａ：(NH4)2SO4  50mM, 0.5％ CH3CN, pH2.5   Ｂ：CH3CN /TFA 0.1％
1.5mL/分。5〜45％B 20分間  214nmで検出。40℃。
【０４７０】
30℃で6h30後、反応混合物の含有物は約22％が残留する出発化合物[Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン(保持時間：18.1分)、70％がペプチド転移生成物(保持時間：18.3分)及び8％が加水分解生成物 [Leu37]GLP-1(7-37)(保持時間：18.4分)であった。
【０４７１】
MALDI-TOF：m/z＝3684(S)-5-[Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)5-カルバモイルペンチル)4-アセチルベンズアミド), 3482([Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン), 3411([Leu37]GLP-1(7-37))及び1162及び1742([Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン)
MS(電子スプレー)：m/z=1844及び1229((S)-5-[Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)5-カルバモイルペンチル)4-アセチル ベンズアミド), 1139及び1702([Leu37]GLP-1(7-37))及び1162及び1742([Leu37]GLP-1(7-37)イルアラニン)。
【０４７２】
例21：N-((S)-5-([Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)-5-カルバモイルペンチル)-4-[1-[2-(1-(ヘキサデカノイル)ピペリジン-4-イル))エトキシイミノ]エチル] ベンズアミド：
【化２１１】
2008502301.tif 000207
酢酸塩緩衝液 50mM pH4中のN-((S)-5-([Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)-5-カルバモイルペンチル)-4-アセチルベンズアミド(最終濃度 0.3mM)の溶液に、アセトニトリル中の1-[4-(2-(アミノオキシ)エチル)ピペリジン-1-イル]ヘキサデカン-1-オン(最終濃度 3mM)の溶液(最終アセトニトリル濃度：18％ v/v)を添加した。この反応を30℃で行い、続いてHPLCを行った。
【０４７３】
HPLC方法：
カラム：Vydac C18(218TP53)250x4.6。Ａ：H2O/TFA 0.1％  Ｂ：CH3CN/TFA 0.1％。
【０４７４】
10％ B を5分、次いで10〜91％ B を27分。1mL/分。40℃。214及び280nmで検出。
【０４７５】
N-((S)-5-([Leu37]GLP-1(7-37)イルアミノ)5-カルバモイルペンチル)-4-アセチルベンズアミドの保持時間：18.4分、生成物の保持時間：26.5及び27.1分。
【０４７６】
4hの反応時間後に90％を超える収率が得られた。
【０４７７】
MS(電子スプレー)：m/z=1351.4 (計算値Ｃ：1350.9)
MALDI-TOF：m/z＝4048(計算値Ｃ：4049.8)。
【０４７８】
刊行物、特許出願および特許を含む本明細書に引用されている全ての参考文献は、各参考文献が個別的かつ具体的に本明細書の一部として援用されることが特記されていて、その全体が本明細書中に記載されているとみなされる場合と同様に、その内容全体が、参照により本明細書の一部として援用される（法によって許容される最大限まで）。
【０４７９】
本明細書において、全ての見出し及び小見出しは、便宜のために使用されているに過ぎず、如何なる意味においても本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
【０４８０】
本明細書に記載されているあらゆる全ての例または例示的言語（例えば、「のような」）の使用は本発明をより良く例示するためのものにすぎず、別段の記載がない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の言語は、特許請求の範囲に記載されていない要素を本発明の実施に不可欠なものとして示すものとして解釈されるべきではない。
【０４８１】
本明細書中への特許文献の引用及び援用は便宜上の理由で行われているに過ぎず、このような特許文献の有効性、特許可能性および／または法的執行可能性性についての見解を反映するものではない。
【０４８２】
本発明には、特許請求の範囲に記載された主題の、適用法により許容される全ての変更および均等物が含まれるものである。
【国際調査報告】
2008502301.tif 000218
2008502301.tif 000219
2008502301.tif 000220
2008502301.tif 000221
2008502301.tif 000222