(57)【要約】  逆相分取用クロマトグラフィー法を利用する、ナルトレキソンを含有する純粋でない調製物の精製方法が提供される。ある例示的実施態様では、固定相を、典型的には有機リガンドが結合したシリカ粒子を、クロマトグラフィーカラムに負荷する。約１０ないし約１０００の負荷比で、純粋でない調製物を酸性化し、カラムに通す。典型的にはアセトニトリルを含む水性溶液でカラムを溶出し、精製されたナルトレキソンを特定の分画中に得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
高純度のナルトレキソンを純粋でないナルトレキソン調製物から回収する方法であって、
純粋でないナルトレキソン調製物を逆相液体クロマトグラフィーに付すこと（ここで、固定相のナルトレキソンに対する負荷比は最高でも約１０００である）；および、
高純度のナルトレキソンを回収すること（ここで、高純度のナルトレキソンは少なくとも約９５％の純度で回収される）、
を含む、方法。
【請求項２】
負荷比が約１０ないし約１０００の範囲にある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
負荷比が約２０ないし約４０の範囲にある、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
固定相が、アルキルシラン、アリールシラン、ハロアルキルシラン、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルアミン、アルキルシアノ化合物、アルキルジオール、アルキルエーテル、アリールエーテル、ハロアルキルエーテル、アルキルカルボン酸、アリールカルボン酸、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、ポリスチレンジビニルベンゼン、アミノポリカプロラクタム、グリシドキシエチルメトキシシランおよびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
固定相が、ブチル−、オクチル−、オクタデシル−、トリコサン−、シアノ−およびフェニル−部分、並びにこれらの混合物からなる群から選択されるリガンドを含有する結合相のシリカである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
リガンドがオクタデシル−シランである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
クロマトグラフィーカラムを、少なくとも１種の有機溶媒を含有する水性酸性溶液を含む移動相で溶出する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
溶液を酸性化するために用いる酸が、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、硫酸、ギ酸、シュウ酸、乳酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、亜リン酸、硝酸およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
水性移動相のｐＨが、約１ないし約７である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
水性移動相のｐＨが約３.５ないし約５.５である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
有機溶媒が少なくとも１種のアルコールを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１種のアルコールが、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔ−ブタノールおよびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
溶媒がアセトニトリルを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
アセトニトリルが約５ないし約１００体積パーセントである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
精製されたナルトレキソンの回収の間、アセトニトリルが１０体積パーセントまでである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
純粋でないナルトレキソン調製物を逆相液体クロマトグラフィーに付す前に、純粋でないナルトレキソン調製物を酸性化してナルトレキソン塩を形成させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
純粋でないナルトレキソン調製物を少なくとも１種の無機酸で酸性化する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１種の無機酸が、硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、亜リン酸、硝酸およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
純粋でないナルトレキソン調製物を少なくとも１種の有機酸で酸性化する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
有機酸が、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、ギ酸、シュウ酸、乳酸およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
純粋でないナルトレキソン調製物のｐＨが、約１ないし約７である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
純粋でないナルトレキソン調製物のｐＨが、約２ないし約３である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
２ＢＮおよび３ＢＮを含有する純粋でないナルトレキソン調製物の精製方法であって、
（ａ）クロマトグラフィーカラムをクロマトグラフィー充填物質で充填すること；
（ｂ）充填されたクロマトグラフィーカラムに、水性の酸性化されたナルトレキソン調製物の溶液を、約１０ないし約１０００の負荷比で通すこと；および、
（ｃ）充填されたクロマトグラフィーカラムを、有機溶媒の水性溶液で溶出し、各々０.５０面積％より少ない２ＢＮおよび３ＢＮを有するナルトレキソンを含有する溶出液を産生すること、
の各段階を含む方法。
【請求項２４】
溶出液を５個の分画に分けることをさらに含み、ここで、
（ｉ.）第１分画を廃棄し、
（ｉｉ.）第２分画を第４分画と合わせ、水および有機溶媒を実質的に減らし、次いで、カラムを通して再利用し、そして、
（ｉｉｉ.）０.５０面積％より少ない２ＢＮおよび３ＢＮを含有する第３分画を回収する、
請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、逆相分取用クロマトグラフィーを利用するナルトレキソンの分離および精製方法に関する。より詳しくは、本発明の方法は、高度に純粋なナルトレキソンを工業的な量で経済的に提供する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ナルトレキソンは、化学的には１７−（シクロプロピルメチル）−４,５−エポキシ−３,１４ジヒドロキシ−（５アルファ）−モルフィナン−６−オン、ＣＡＳ ＲＮ １６５９０−４１−３である。一般的な商品名には、Trexan（登録商標）および Revia（登録商標）が含まれる。ナルトレキソンは、アゴニスト特性のないオピオイドアンタゴニストである。それは、オピオイドへの身体依存を顕著に遮断する。ナルトレキソンは、アルコール依存症の処置において、アルコールへの欲求を低減するのにも使用される。
【０００３】
ナルトレキソンの合成方法は、当分野で説明され、周知である。ノルオキシモルホン（noroxymorphone）からナルトレキソン塩酸塩への従来法の全体的なモル収率は、約６５％であると報告された。無水ナルトレキソン塩基への全体的収率は、典型的には約４５％である。Ｎ−（３−ブテニル）ノルオキシモルホン（３ＢＮ）および２,２−ビスナルトレキソン（２ＢＮ）などの典型的な不純物のレベルは、連邦の純度基準に適合するために、０.５０面積％未満に下げる必要がある。従って、特に工業的な量で製造するときに、高純度のナルトレキソンを単離するより効率的かつ直接的な方法への要望がある。
【０００４】
医薬の分離または精製を達成する手段には、炭素の使用などの吸着方法が含まれる。残念ながら、炭素は、色素および他の望まれない物質を除去するのに加えて、目的とする医薬を不可逆的に吸着する。これは、有意な収量の損失をもたらす。
【０００５】
ナルトレキソンの場合など、いくつかの例では、所望の純度を達成するために、複数回の沈殿操作が必要とされる。これは、上清の流れを再利用しない場合、全体的な収率を大幅に下げる。これらの付加的沈殿操作は、その方法においてより大量のナルトレキソンの使用も要し、より長いサイクル時間を伴う。さらに、加熱および冷却に要するときもある時間を加えると、沈殿過程は冗長になり得る。さらに、いくつかの沈殿操作は、最終的に製造される生成物の粒子サイズのために、濾過時間の延長を要する。
【０００６】
従来のナルトレキソン精製方法の他の欠点には、ナルトレキソンを回収するための複数回の手動の連続的な取扱い操作が含まれる。これらの操作は、操作者がより多くナルトレキソンに曝露されることを導き、工学的制御および個人の保護装備に頼ることとなる。この操作は、単調かつ退屈であり得る。
【０００７】
ナルトレキソンを精製するための他のアプローチは、イオン交換による吸着の使用である。これは、コデインおよびモルヒネなどのアルカロイドで達成されたが、低い供給濃度を要するという制限がある。これは、沈殿を引き起こし得る高いｐＨのフラッシュを使用する必要があるためである。いかなる沈殿も、イオン交換樹脂カラム全体を損なう可能性がある。この方法の別の不利益は、かなりの塩を必要とするために、付加的な透析または逆浸透の段階がイオンの除去に必要であることである。
【０００８】
吸着を達成するまた他の方法は、極性相互作用または順相吸着によるものである。この方法は成功し得るが、大量の有機溶媒の使用を要する。さらに、ナルトレキソンはこの方法で精製され得るが、より多くの蒸発が必要とされよう。
【０００９】
ナルトレキソンへの分析用クロマトグラフィーのいかなる使用も、工業的規模の方法のために分取用クロマトグラフィーを使用することから遠ざけるように当業者を導くであろう。分取用クロマトグラフィーと異なり、分析用クロマトグラフィーは、一般的に各ピークの完全な分離を要する。成分のピークの溶出は、しばしば紫外（ＵＶ）光の吸光を介して測定される。分析用クロマトグラフィーでは、ピークの分離は、極少量の供給試料をカラムに負荷し（load）、小さい粒子サイズ直径（固定相では、しばしば５マイクロメートルより小さい）を使用することにより達成される。小さい粒子サイズは、分取用クロマトグラフィーで見られるものよりも大幅に高い圧力を生じさせる。これらの高圧は、非常に大きく、強く、高価なクロマトグラフィー装置の使用を要求し、それは、この分析方法の商業的適用可能性を否定するであろう。極少量の供給試料が実施の都度負荷されることを考えに入れると、その装置は非常に大きくなるであろう。分取用クロマトグラフィーでは、目的は所望の供給成分を必要な純度で回収することである。不純物が規格限界内にある限り、所望の成分は不純物と共に回収されてもよい。固定相の粒子サイズは、分離を達成するために十分に小さいが、しばしば１０ミクロンより大きい。このことは、生じる圧力の低下を制限する。また、分取用クロマトグラフィーでは、所望の生成物の品質を確保できる限り、最大の供給量を負荷する。このことは、生成物が最高の濃度でカラムから出ることを可能にし、かくして下流の装置、特に蒸発または濃縮ユニットのサイズを最小にする。
【００１０】
クロマトグラフィー法を利用する有機物質の分離または精製は、当分野で周知である。しかしながら、クロマトグラフィー法を利用して分離される物質は、本発明の目的、即ち、工業的規模でのナルトレキソンの分離および精製とはかけ離れている。ナルトレキソンへの分析用クロマトグラフィーの適用には多数の参照文献があるが、過去に知られた条件下で工業的方法を用い得るという示唆はない。
【００１１】
本発明は、上記の１つまたはそれ以上の欠陥を克服することを対象とする。これらの欠陥には、生成物収量の減損、遠心機またはフィルターの取り付けおよび取り外しなどの冗長な手動の間断のない取扱い操作、操作者による保護装備への依存、必要な純度の要件を達成するための多数の処理段階および複数回の沈殿操作が含まれるがこれらに限定されない。
【発明の開示】
【００１２】
発明の要旨
本発明のある態様では、純度の高いナルトレキソンを純粋でないナルトレキソン調製物から回収する方法が提供される。その方法は、純粋でないナルトレキソン調製物を、逆相液体クロマトグラフィーに付すことを含み、そこでは、固定相のナルトレキソンに対する負荷比（loading ratio）は最高でも約１０００であり、回収される純度の高いナルトレキソンは、少なくとも約９５％の純度である。
【００１３】
本発明の他の態様では、純度の高いナルトレキソンを純粋でない調製物から回収する方法が提供される。この方法は、純粋でない調製物を、逆相高速分取液体クロマトグラフィーに付し、純度の高いナルトレキソンを回収することを含む。
【００１４】
本発明のまた他の態様では、３ＢＮおよび２ＢＮを含有する純粋でないナルトレキソン調製物を精製する方法が提供される。本方法は、クロマトグラフィーのカラムをクロマトグラフィー充填物質で充填し；水性の酸性化されたナルトレキソン調製物の溶液を、負荷比約１０ないし約１０００でカラムに通し；そして、水性溶液でカラムを溶出し、各々０.５０面積パーセントより少ない３ＢＮおよび２ＢＮ不純物を有するナルトレキソンを含有する溶出液を産生する、各段階を含む。
【００１５】
図面の簡単な説明
図１は、粗製ナルトレキソン供給物１００ｇを利用する、本発明の方法の非限定的例示的実施態様のフローチャートである。この図では、ナルトレキソン生成物は塩酸塩である。
【００１６】
図２は、本発明による逆相分取ＨＰＬＣ操作の非限定的例示的実施態様の結果を示すグラフであり、ここでは、生成物のＵＶ分析が、カラムから出た各溶出液分画の内容物の指標を提供する。この図はまた、時間；４つの分画各々の分画カットラインおよびこの方法で用いた移動相のアセトニトリル含有量も示す。
【００１７】
発明の詳細な説明
本発明の方法は、図１に図解されている。この開示のために、以下の用語を定義する：
面積％：分析用クロマトグラフィーから算出される純度の単位。それは、所望の成分の面積を検出される総面積で除したものである。
負荷比：固定相の質量を、精製の実施において負荷されるアルカロイドの質量で除したもの。
移動相：供給物が負荷された後に、カラムに送られる液体。この液体は、成分を溶出する。
二次産物：２回目のクロマトグラフィーカラムの通過を必要とする分画中で回収されるアルカロイド物質。これらの分画は、濃縮され、次いで別個に精製される。
固定相：供給物の成分をカラムに吸着させる媒体。
収率：精製分画中で回収される所望の成分の質量を、カラムに供給された成分の質量で除したもの。
パーセント：断りの無い限り、本明細書および特許請求の範囲で述べる全てのパーセントの量は、重量パーセントである。
【００１８】
ナルトレキソンの製造は、従来法と同様に開始する。合成後、ナルトレキソンを塩酸で水層に抽出する。次いで、水層を十分な水酸化アンモニウムで処理し、ナルトレキソンアルカロイドを沈殿させる。遠心分離により固体を単離し、乾燥させる。
【００１９】
この時点で、溶液をアルカロイド沈殿に付して第２の単離塩基を形成させずに、固体を水および少なくとも１種の酸、例えば塩酸で溶解し、クロマトグラフィー供給液を形成させる。次いで、クロマトグラフィーカラムを通してナルトレキソンを精製する。精製分画を蒸発させ、結晶化用液濃度を達成する。濃縮物を冷却して精製されたナルトレキソン塩酸塩を形成させるか、または、水酸化アンモニウムで処理してナルトレキソン塩基を形成させる。ナルトレキソン塩基の場合、次いで、固体をメタノール中で結晶化させ、無水塩基生成物を形成させる。
【００２０】
いずれかの結晶化生成物からの母液を、クロマトグラフィーからの純粋でない分画と合わせる。次いで、二次産物複合物中のナルトレキソンを、蒸発を介して濃縮する。次いで、クロマトグラフィーカラムを通して濃縮物を精製し、いかなる粗製ナルトレキソン塩基とも分離する。この精製では、不純物が蓄積できないように、純粋でない分画を再利用しない。次いで、二次産物から精製したナルトレキソンを、蒸発工程の一次産物からの精製物質と合わせる。
【００２１】
この提唱される方法は、少なくとも約９０％、好ましくは約９５％の精製回収率を有し、精製されたナルトレキソン塩を製造する全体的回収率は約８５％である。無水ナルトレキソン塩基を製造するには、提唱される方法は、少なくとも約８０％、好ましくは約８８％の精製収率、および、約８０％の全体的回収率を有する。クロマトグラフィー的精製の使用は、３ＢＮおよび２ＢＮのレベルを０.５０面積パーセントより低く減少させる。
【００２２】
代替的実施態様では、純粋でないナルトレキソン調製物を逆相液体クロマトグラフィーに付す前に、純粋でないナルトレキソン調製物を無機または有機酸で酸性化し、ナルトレキソン塩を形成させる。適する無機酸には、硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、亜リン酸、硝酸およびこれらの混合物が含まれる。適する有機酸には、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、ギ酸、シュウ酸、乳酸およびこれらの混合物が含まれる。得られる純粋でないナルトレキソン調製物のｐＨは、典型的には約１ないし約７であり、約２ないし約３のｐＨが好ましい。ナルトレキソン塩調製物の精製方法は、ナルトレキソン調製物と同様に進行する。
【００２３】
固定相は、アルキルシラン類、アリールシラン類、ハロアルキルシラン類、アルキルエステル類、アリールエステル類、アルキルアミン類、アルキルシアノ化合物、アルキルジオール類、アルキルエーテル類、アリールエーテル類、ハロアルキルエーテル類、アルキルカルボン酸類、アリールカルボン酸類、アルキルスルホン酸類、アリールスルホン酸類、ポリスチレンジビニルベンゼン、アミノポリカプロラクタムおよびグリシドキシエチルメトキシシランおよびこれらの混合物を含むがこれらに限定されない群からの様々な物質の１種であり得る。
【００２４】
例示的実施態様で利用した固定相の媒体は、オクタデシル−（Ｃ１８）リガンドを有するシリカであるが、オクチル−（Ｃ８）、ブチル−（Ｃ４）、トリコサン−（Ｃ２３）リガンドなどの他のリガンド、シアノまたはフェニル基、並びにこれらの混合物も用い得る。これらのリガンドは、ポリマー、酸化ジルコニウムまたはチタンなどの他の粒子に取り付けることができる。固定相は、約１ないし約２００ミクロンであり、約１５ないし約５０ミクロンが好ましく、約２０ミクロンが最も好ましい。この例示的実施態様では、約５０ないし約３００Åの孔を有する球形の粒子を利用し、約９０ないし約１５０Åが好ましく、約１２０Åが最も好ましい。
【００２５】
高速分取液体クロマトグラフィーカラムを一般的に用いる。分取用クロマトグラフィーカラムは、例示的な、非限定的なシステムでは、約０.１ないし約２００ｃｍの直径を含み、少なくとも約５ｃｍが好ましい。分取用クロマトグラフィーカラムの長さは、本方法に決定的ではない。好ましい長さは、約１０センチメートルないし約１００センチメートルの範囲にあり、より好ましい長さは、約２０センチメートルないし約３０センチメートルの範囲にあり、長さ約２５センチメートルが最も好ましい。72 Cherry Hill Drive, Beverly, Massachusetts 01915 に営業所を有する Amicon, Inc. を含む、この性質の分取用クロマトグラフィーカラムを構築できる様々な供給業者がある。Amicon, Inc. は、PROCHROM（登録商標）クロマトグラフィーカラムの製造業者である。他の製造業者には、なかんずく、1801 Maple Avenue, Evanston, Illinois 60201 に営業所を有する TechniKrom, Incorporated が含まれる。本発明は、幅広く様々な高速液体分取用クロマトグラフィーカラムに適用可能であり、この特許出願で詳述する特定の実施態様に限定されない。
【００２６】
ナルトレキソンおよびその不純物は、固定相に吸着され、そして少なくとも１種の薄い酸および少なくとも１種の有機極性溶媒を含有する移動相により脱離または溶出される。適する酸には、酢酸、ギ酸、シュウ酸、乳酸、リンゴ酸、硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、亜リン酸、硝酸およびこれらの混合物が含まれるがこれらに限定されず、塩酸が好ましい。有機極性溶媒は、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔ−ブタノールおよびこれらの混合物並びにアセトニトリルなどの水溶性、非妨害性の溶媒のいくつからでも選択される。水性移動相は、水を酸性化して約１ないし約７のｐＨ、より好ましくは約３.５ないし約５.５のｐＨ範囲を達成することにより調製される。典型的には、移動相中の有機溶媒の量は溶出処理の間に増大する。移動相の最初の数回のカラム通過では少量の有機溶媒を使用し、後の通過では漸増する量を用いてカラムから全排出する。
【００２７】
本発明の決定的な特徴は、負荷比である。本発明の方法で用いる負荷比は、典型的には、移動相を用いる前にカラムに負荷するナルトレキソン１ｇにつき約１０ないし約１０００ｇの媒体の範囲にあると見出された。好ましい例示的実施態様では、負荷比は、約２０ないし約４０の範囲にある。周知の通り、ＨＰＬＣの分析的使用では、負荷比は１０,０００を超え、供給成分は分離したピークで溶出されるであろう。分取用クロマトグラフィーでは、かかる負荷比は、１個のカラムでの実施回数を５００倍以上に増やすか、または、カラムを２０倍以上大きい直径にするであろう。分析用の負荷条件の使用は、いかなる新たなクロマトグラフィー精製技法も、特に工業的な量では、非実用的にするであろう。本発明の分取的適用は、ナルトレキソンが所望の純度で回収される溶出前線（elution front）を有する。
【００２８】
本発明の方法で得られる所望の純度は、当然、不純物の量およびクロマトグラフィー法の操作条件により、ある程度は左右される。不純物が多い場合、上記の好ましい範囲の高いレベルの負荷比が必要とされよう。また、移動相中の有機溶媒の量は、不純物を早まって溶出しないように制御されなければならない。下記の操作実施例に見られる通り、溶出の総量が多い実施ほど、より多い不純物が産生される。
【００２９】
操作に当たり、ナルトレキソン供給溶液を充填カラムに負荷した後、有機溶媒を含有しない移動相を用いて最初の成分を溶出する。いくらかの不純物が、廃棄される最初の分画中に収集される。最初の少量のナルトレキソンおよび不純物を含有する第２分画を収集する。第２の分画は、負荷したナルトレキソンの約５パーセントを含有するであろう。次いで、精製されたナルトレキソンを第３分画で収集する。そこでは、移動相は完全に水性のままである。第３分画は、カラムに負荷したナルトレキソンの約８０パーセントを含有する。この第３分画を蒸発させて水の殆どを除去し、標準的操作に準じる沈殿により、精製ナルトレキソンを溶液から回収する。第４分画は、約５０％ないし約８０％の有機溶媒を含有するフラッシュ中に、残っているナルトレキソン（典型的には約１５パーセント）の殆どを収集する。この例示的実施態様では、好ましい溶媒はアセトニトリルである。次いで、第５分画を得、カラムから残っている不純物を押し流す。第５分画では、用いる移動相は、約８０％ないし約１００％の有機溶媒、典型的にはアセトニトリルを含有する。
【００３０】
次いで、第４分画を、第２分画と合わせ、蒸発に付し有機溶媒を除去する。合わせた分画を、上記の通りに逆相分取用クロマトグラフィーに付すが、不純物を排斥するために、再利用分画を収集しない。次いで、精製された、合わせた二次産物を、第３分画について上記した通りの沈殿操作に送る。
【００３１】
本発明の逆相分取用クロマトグラフィー法は、典型的には、約１０℃ないし約５０℃の温度で操作し、約２０℃ないし約３０℃が好ましい。しかしながら、この方法において温度は決定的ではないことが留意される。有意な結果の変化を伴うことなく、より高いかまたはより低い温度を用い得る。
【００３２】
操作に当たり、カラムから溶出された物質のＵＶ分析を用いるのが典型的である。本発明の方法に従い溶出した物質の典型的なＵＶプロフィールを、図２に示す。図２のＵＶ曲線をもたらす方法は、ｐＨ３.０のナルトレキソン塩酸塩の供給溶液を、２０ミクロンのポリマー粒子を含む０.４６ｘ２５−ｃｍの寸法を有するクロマトグラフィーカラムに用いた。負荷比は３０であり、流速は０.６５ｍｌ／分であった。図中、横軸は溶出時間を分で示し、左の縦軸は３１０ｎｍでのＵＶ吸光を示す。右の縦軸は、供給溶液中のアセトニトリルのパーセントを体積パーセントで示す。収集した様々な分画を、Ｆ１−Ｆ５と称する。
【実施例】
【００３３】
実施例
実施例１
以下の条件を用いて２種類のクロマトグラフィーランを実施した：
目的：３ＢＮおよび２ＢＮが０.５０面積パーセントより少ないナルトレキソンを回収する。
供給組成：９５.８２面積％ナルトレキソン、０.４４面積％３ＢＮおよび０.８１面積％２ＢＮ
供給ｐＨ：塩酸で３.００
供給濃度：ナルトレキソン２８−ｇ／ｌ
固定相：１２０オングストロームの孔を有する２０ミクロンの疎水性ポリマーの球状粒子
カラム：直径０.４６−ｃｍ、長さ２５−ｃｍおよび固定相２.２ｇ
流速：０.６４ｍｌ／分
流動方向：上から下
温度：２６℃
検出：３１５ｎｍ
移動相：希塩酸水溶液、および５０ないし１００体積パーセントの段階的グラジエントで添加するアセトニトリル（ＡＣＮ）
【００３４】
第１および第２試行の結果を下記表Ｉに示す。これは、供給負荷の影響の比較であった。
表Ｉ
【表１】
2008544222.tif 000002
【００３５】
試行１では、ナルトレキソンは９９.８２面積％に精製され、３ＢＮは検出されず、０.１６面積％の２ＢＮが検出された。試行１は、３２ｇ媒体／ｇナルトレキソンの負荷比を使用し、一方、試行２は１４の比で多すぎる供給物を負荷した。試行１は、精製Ｆ３分画中に７８％のナルトレキソンを回収でき、一方試行２は、より多い不純物の溶出のために、より少なく７２％で回収した。より多い不純物の溶出は、より多い供給物をカラムに負荷したナルトレキソンで起こった。残りのナルトレキソン収量は、両試行において、分画Ｆ２およびＦ４で回収された。これらの分画は二次産物と呼ばれ、カラムを通して２回目の精製を行うべきものであった。
【００３６】
実施例２
目的：３ＢＮおよび２ＢＮが０.５０面積パーセントより少ないナルトレキソンを回収する。
供給組成：９５.８２面積％ナルトレキソン、０.４４面積％３ＢＮおよび０.８１面積％２ＢＮ
供給濃度：水性溶液中、ナルトレキソン２８ｇ／ｌ
固定相：Ｃ１８リガンドを有するシリカ、１２０Åの孔を有する２０μｍの球状粒子
カラム：直径１.０ｃｍ、長さ２５ｃｍ、固定相１０.２ｇ
流速：３ｍｌ／分
流動方向：上から下
温度：２７℃
検出：３１５ｎｍ
移動相：希塩酸水溶液およびＡＣＮ。アセトニトリルは、１０−１００体積パーセントの段階的グラジエントで添加する。
【００３７】
移動相のｐＨの影響を比較するために、もう１対の試行を行った。各ランの結果を下記表ＩＩに示す。
表ＩＩ
【表２】
2008544222.tif 000003
【００３８】
表ＩＩ中、試行３は、両方とも５より高い供給物および移動相のｐＨを使用した。この試行は、十分に全ての不純物を低減させ、９２％のナルトレキソンが精製分画Ｆ３中に回収された。試行４は、両方とも３より低い、より低い供給物および移動相のｐＨを使用した。これは、より迅速なナルトレキソンおよび不純物の溶出を引き起こした。試行４では、ナルトレキソンが不純物を伴って最初にかなり溶出するために、Ｆ２の二次産物分画は回収できなかった。試行４では、全体的なナルトレキソンの純度は９９.５５面積％と高かったが、３ＢＮ不純物をより多く含有した。他の試行は、３.５より高い移動相ｐＨで３ＢＮの低減が改善されることを示した。試行３のより段階的な溶出は、遅く流れる不純物が溶出される前に、より多くのナルトレキソンが回収されることを可能にした。
【００３９】
実施例３
下表ＩＩＩの試行５および６は、分離用媒体の選択を比較する。
目的：３ＢＮおよび２ＢＮが０.５０面積パーセントより少ないナルトレキソンを回収する。
供給組成：９５.８２面積％ナルトレキソン、０.４４面積％３ＢＮおよび０.８１面積％２ＢＮ
供給濃度：水性溶液中、ナルトレキソン２８ｇ／ｌ
供給ｐＨ：塩酸で２.２４
固定相：１２０Åの孔を有する２０μｍの球状粒子
カラム：直径１.０ｃｍ、長さ２５ｃｍ、固定相１０.２ｇ
流速：３ｍｌ／分
流動方向：上から下
温度：２７℃
検出：３１５ｎｍ
移動相：ｐＨ＝２.７４の希塩酸水溶液およびアセトニトリル（ＡＣＮ）。アセトニトリルは、７−１００体積パーセントの段階的グラジエントで添加する。
【００４０】
表ＩＩＩ
【表３】
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【００４１】
試行５は、Ｃ１８シリカを使用し、それは、０.２３面積％の３ＢＮを伴って、９９.７７面積％の純度にナルトレキソンを精製できた。試行６はＣ４シリカを使用し、それは、ナルトレキソンを９９.０７面積％の純度で溶出し、そして、かなりのレベルの３ＢＮおよびノルオキシモルホンを溶出した。両試行は、同じ負荷比および移動相ｐＨで実施した。Ｃ４シリカは、より速いナルトレキソンの到達およびより多いＦ３分画の回収を可能にした。残念なことに、Ｃ４シリカは、不純物を十分に分離することができなかった。Ｃ４シリカは、より多くのナルトレキソンが二次産物分画で回収されて純度を改善する、より良好な分画回収を使用すれば、使用できよう。
【００４２】
逆相分取用クロマトグラフィーを利用するナルトレキソン精製のための新規方法を記載した。特定の化合物および実施例を参照して本発明の方法を説明したが、明示的に述べない限り、かかる参照により本発明の範囲を限定することを意図しない。物質および方法の段階の順序、並びに方法の組合せにおいて、様々な改変を行うことができ、それは、本発明から逸脱せずに様々な方法の段階に合うように適合させる。改変は当業者に明らかであるので、上述の記載は理解の明快化のためにのみ与えられ、そこから不必要な限定を理解すべきでない。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、粗製ナルトレキソン供給物１００ｇを利用する、本発明の方法の非限定的例示的実施態様のフローチャートである。この図では、ナルトレキソン生成物は塩酸塩である。
【図２】図２は、本発明による逆相分取ＨＰＬＣ操作の非限定的例示的実施態様の結果を示すグラフであり、ここでは、生成物のＵＶ分析が、カラムから出た各溶出液分画の内容物の指標を提供する。この図はまた、時間；４つの分画各々の分画カットラインおよびこの方法で用いた移動相のアセトニトリル含有量も示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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