(57)【要約】  本出願は、患者における脳腫瘍を処置するための方法に関し、この方法は、モノクロナール抗体を全身投与する工程を包含する。本発明は、ｍＡｂの全身投与により、患者における脳腫瘍を処置するための方法を提供する。上記脳腫瘍は、神経膠腫（例えば、神経膠星状細胞腫（例えば、神経膠芽細胞腫））であり得る。投与は、例えば、静脈内経路、筋肉内経路、あるいは皮下経路により得る。好ましい実施形態において、上記ｍＡｂ（例えばヒト化Ｌ２Ｇ７  ｍＡｂ）は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に対する中和ｍＡｂである。別の好ましい実施形態において、ｍＡｂ（例えば、中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂ）の全身投与が、脳腫瘍の退縮を誘導するために使用される。
2008545753.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者において脳腫瘍を処置するための方法であって、
脳腫瘍を有する患者にモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を全身投与し、それにより該脳腫瘍を処置する工程；
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）がキメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、またはヒトモノクローナル抗体である、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂである、方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）がヒト化Ｌ２Ｇ７  ｍＡｂである、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が静脈内投与される、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記脳腫瘍が神経膠腫である、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記脳腫瘍が神経膠芽細胞腫である、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、前記患者がヒトである、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法であって、前記患者が放射線療法でもまた処置される、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が１種以上の他の活性な抗癌薬とともに投与される、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が増殖因子に結合し、該増殖因子は、脈管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ＮＴ−３、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−α（ＴＧＦ−α）、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ヘレグリン、エピレグリン、エンフィレグリン、ニューレグリン（ＮＲＧ）−１α（ＮＲＧ−１α）、ＮＲＧ−１β、ＮＲＧ−２α、ＮＲＧ−２β、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−１（ＩＧＦ−１）、ＩＧＦ−２、酸性線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）（ＦＧＦ−１）、塩基性ＦＧＦ（ＦＧＦ−２）、およびＦＧＦ−ｎ（ｎは３〜２３の任意の数である）からなる群より選択される、方法。
【請求項１２】
患者において脳腫瘍の退縮を引き起こすための方法であって、
脳腫瘍を有する患者にモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を全身投与し、それにより該脳腫瘍の退縮を引き起こす工程；
を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）がキメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、またはヒトモノクローナル抗体である、方法。
【請求項１４】
請求項１２に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂである、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）がヒト化Ｌ２Ｇ７  ｍＡｂである、方法。
【請求項１６】
請求項１２に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が静脈内投与される、方法。
【請求項１７】
請求項１２に記載の方法であって、前記脳腫瘍が神経膠星状細胞腫である、方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法であって、前記脳腫瘍が神経膠芽細胞腫である、方法。
【請求項１９】
請求項１２に記載の方法であって、前記退縮が全体的退縮である、方法。
【請求項２０】
請求項１２に記載の方法であって、前記患者を放射線療法で処置する工程をさらに包含する、方法。
【請求項２１】
請求項１２に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が１種以上の他の活性な抗癌薬とともに投与される、方法。
【請求項２２】
請求項１２に記載の方法であって、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が増殖因子に結合し、該増殖因子は、脈管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ＮＴ−３、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−α（ＴＧＦ−α）、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ヘレグリン、エピレグリン、エンフィレグリン、ニューレグリン（ＮＲＧ）−１α（ＮＲＧ−１α）、ＮＲＧ−１β、ＮＲＧ−２α、ＮＲＧ−２β、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−１（ＩＧＦ−１）、ＩＧＦ−２、酸性線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）（ＦＧＦ−１）、塩基性ＦＧＦ（ＦＧＦ−２）、およびＦＧＦ−ｎ（ｎは３〜２３の任意の数である）からなる群より選択される、方法。
【請求項２３】
全身投与による脳腫瘍処置用の医薬の製造における、中和抗ＨＧＦ抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願は、本出願であり、２００５年６月２日に出願された第６０／６８７１１８号および２００５年１２月１５日に出願された第６０／７５１０９２号の利益を主張する。両方の出願は、あらゆる目的のためにその全体が本明細書中において援用される。
【０００２】
（政府権益の陳述）
この出願において記述された仕事は、国立衛生研究所から補助金１Ｒ４３ＣＡ１０１２８３−０１Ａ１およびＲＯ１  ＮＳ３２１４８により一部研究資金を受けた。米国政府は、本発明において一定の権利を有し得る。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、抗体を用いた脳腫瘍の処置に一般的に関し、より詳細には、例えば肝細胞増殖因子に結合してこれを中和するモノクロナール抗体を用いた脳腫瘍の処置に関する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、間葉細胞により産生される多機能へテロ二量体ポリペプチドである。ＨＧＦは、新脈管形成、形態発生および細胞移動、ならびに種々の細胞型の成長そして分散を刺激することが示されている（Ｂｕｓｓｏｌｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１９：６２９，１９９２；Ｚａｒｎｅｇａｒ  および  Ｍｉｃｈａｌｏｐｏｕｌｏｓ，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２９：１１７７，１９９５；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｂａ．Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐ．２１２：１９８，１９９７；Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ  および  Ｇｈｅｒａｒｄｉ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４０４，１９９８；Ｘｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８：１１１１，２００１）。ＨＧＦの多面発現活性は、癌原遺伝子ｃＭｅｔにコードされている膜貫通型チロシンキナーゼであるそのレセプターを介して媒介される。種々の細胞機能を調節することに加えて、ＨＧＦおよびレセプターｃ−Ｍｅｔは、腫瘍のイニシエーション、浸潤、および転移に関与することが示されている（Ｊｅｆｆｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７４：５０５，１９９６；Ｃｏｍｏｇｌｉｏ  および  Ｔｒｕｓｏｌｉｎｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０９：８５７，２００２）。ＨＧＦおよびｃＭｅｔは、様々なヒト固形腫瘍（肺、結腸、直腸、胃、腎臓、卵巣、皮膚、多発性骨髄腫、および甲状腺組織に由来する腫瘍を含む）において共発現し、しばしば過剰発現する（Ｐｒａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４９：３２３，１９９１；Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２：５９３，１９８８；Ｗｅｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８：２２９，１９９３；Ｄｅｒｋｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９９：１４０５，２００２）。ＨＧＦは、これら腫瘍に対するオートクライン増殖因子（Ｒｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：４７３１，１９９４；Ｋｏｏｃｈｅｋｐｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：５３９１，１９９７）およびパラクリン増殖因子（Ｗｅｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８：２２９，１９９３）および抗アポトーシス調節因子（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：４７２５７，２００１）として働く。したがって、ＨＧＦ−ｃＭｅｔ経路をブロックする拮抗分子（例えば抗体）は、幅広い抗癌治療の可能性を有する。
【０００５】
ＨＧＦは、プラスミノゲンおよび他の血液凝固の酵素と配列類似性および構造類似性を有する１０２ｋＤａのタンパク質である（Ｎａｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：４４０，１９８９；Ｗｅｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８：２２９，１９９３（それぞれを、本明細書中で参考文献として援用する））。ヒトＨＧＦは、７２８アミノ酸前駆体（プレプロＨＧＦ）として合成され、このプレプロＨＧＦは、細胞内切断をうけて不活性な単一鎖形態（プロＨＧＦ）になる（Ｎａｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：４４０，１９８９；Ｒｏｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２７：１７８３，１９９４）。細胞外分泌の際に、プロＨＧＦは、αサブユニットおよびβサブユニットから構成される生物学的に活性なジスルフィド結合ヘテロ二量体分子を産するように切断される（Ｎａｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４２：４４０，１９８９；Ｎａｌｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：４８２５，１９９２）。上記αサブユニットは、Ｎ末端ヘアピンドメインおよび４つのクリングルドメインからなる４４０残基（グリコシレーションを含めて６９ｋＤａ）を含む。上記βサブユニットは、２３４残基（３４ｋＤａ）を含み、タンパク質分解活性を欠くセリンプロテアーゼ様ドメインを有する。ＨＧＦの切断には、レセプターの活性化が必要であるが、レセプターの結合は必要ではない（Ｈａｒｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１１５７４，１９９２；Ｌｏｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１７１４５，１９９２）。ＨＧＦは、４箇所の推定Ｎ−グリコシレーション部位（αサブユニット内に１箇所、βサブユニット内に３箇所）を有する。ＨＧＦは、２箇所の独特な細胞特異的結合部位（ｃＭｅｔレセプターに対する高親和性結合部位（Ｋｄ＝２×１０−１０Ｍ）および硫酸ヘパリンプロテオグリカン（ＨＳＰＧ）に対する低親和性結合部位（Ｋｄ＝１０−９Ｍ））を有する。これら結合部位は、細胞表面および細胞外マトリックスに存在する。（Ｎａｌｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６：５０１，１９９１；Ｂａｒｄｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３７：１０９，１９９４；Ｓａｋａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：９４５７，１９９７）。ＮＫ２（αサブユニットのＮ末端および最初の２箇所のクリングルドメインを含むタンパク質）は、ｃＭｅｔへの結合および運動性のためのシグナル伝達の活性化には十分である。しかし、マイトジェン応答には全長タンパク質が必要である（Ｗｅｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８：２２９，１９９３）。ＨＳＰＧは、ＨＧＦのＮ末端と相互作用することによりＨＧＦと結合する（Ａｏｙａｍａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３６：１０２８６，１９９７；Ｓａｋａｔａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９４５７，１９９７）。ＨＳＰＧ−ＨＧＦ相互作用の想定される役割としては、ＨＧＦのバイオアベイラビリティ、生物学的活性およびオリゴマー化の増進が挙げられる（Ｂａｒｄｅｌｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３７：１０９，１９９４；Ｚｉｏｎｃｈｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６８７１，１９９５）。
【０００６】
ｃＭｅｔは、、チロシンキナーゼレセプターファミリーのクラスＩＶ型タンパク質のメンバーである。全長ｃＭｅｔ遺伝子はクローン化され、ｃＭｅｔ癌原遺伝子として同定された（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１１：２９，１９８４；Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：６３７９，１９８７）。上記ｃＭｅｔレセプターは、単一鎖の部分的にグリコシレーションされた前駆体であるｐ１７０（ＭＥＴ）として最初に合成される（図１）（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：６３７９，１９８７；Ｇｉｏｒｄａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３９：１５５，１９８９；Ｇｉｏｒｄａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４：１３８３，１９８９；Ｂａｒｄｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３７：１０９，１９９４）。さらなるグリコシレーションの際に、このタンパク質は、５０ｋＤａのαサブユニット（残基１〜３０７）および１４５ｋＤａのβサブユニットからなる、ヘテロ二量体の１９０ｋＤａ成熟タンパク質（１３８５アミノ酸残基）へとタンパク質分解的に切断される。上記βサブユニットの細胞質チロシンキナーゼドメインは、シグナル伝達に関与する。
【０００７】
多くの異なるアプローチが、ＨＧＦあるいはｃＭｅｔの効果的な拮抗分子（切断されたＨＧＦタンパク質（例えば、ＮＫ１（クリングルドメイン１を有するＮ末端ドメイン；Ｌｏｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１７１４５，１９９３）、ＮＫ２（クリングルドメイン１およびクリングルドメイン２を有するＮ末端ドメイン；Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１３８２，１９９１）およびＮＫ４（４つのクリングルドメインを有するＮ末端ドメイン；Ｋｕｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：６７３７，２０００））、ならびに抗ｃＭｅｔ  ｍＡｂ（Ｄｏｄｇｅ、修士論文、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９８））を得るために調査されてきた。
【０００８】
ごく最近、非特許文献１（これは、本明細書中で参考として援用される）は、ＨＧＦに対する３種のｍＡｂの併用投与により、マウスにおける皮下神経膠腫異種移植物の増殖を阻害することを報告した。特許文献１（これは、あらゆる目的のためにその全体が本明細書中において援用される）は、単一の抗ＨＧＦ  ｍＡｂを用いた処置が、マウスにおける皮下神経膠腫異種移植物の増殖を阻害し得ることを報告した。しかし、これら刊行物は、抗ＨＧＦｍＡｂあるいは他のｍＡｂの全身投与が、血液脳関門が障害となる脳内（Ｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．３：４３０，２００４）で、腫瘍の増殖を阻害可能か否かに関する問題を扱わなかった。実際、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍に対する全身抗体治療に関して以前に観察された、効果がないことは、ＣＮＳ転移に対してすら血管浸透性を制限されたことに帰せられた（Ｂｅｎｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ９７：２９７２，２００３）。
【特許文献１】国際公開第２００５／０１７１０７  Ａ２号パンフレット
【非特許文献１】Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，２００１，９８：７４４３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
このように、ｍＡｂの全身投与により脳腫瘍を処置するための方法についての必要性が存在する。本発明は、この必要性および他の必要性を満足させる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の簡単な要約）
一つの実施形態において、本発明は、ｍＡｂの全身投与により、患者における脳腫瘍を処置するための方法を提供する。上記脳腫瘍は、神経膠腫（例えば、神経膠星状細胞腫（例えば、神経膠芽細胞腫））であり得る。投与は、例えば、静脈内経路、筋肉内経路、あるいは皮下経路により得る。好ましい実施形態において、上記ｍＡｂ（例えばヒト化Ｌ２Ｇ７  ｍＡｂ）は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に対する中和ｍＡｂである。別の好ましい実施形態において、ｍＡｂ（例えば、中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂ）の全身投与が、脳腫瘍の退縮を誘導するために使用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
（発明の詳細な説明）
本発明は、脳腫瘍を処置するための方法を提供し、この処置は、ＨＧＦに対する中和ｍＡｂまたは他のサイトカイン（例えば、増殖因子）に対する抗体もしくは細胞表面タンパク質（例えば、サイトカインレセプター）に対する抗体の全身投与による。機構の理解は本発明の実施のために必要ではないが、本発明の成功は、脳腫瘍における血液脳関門欠損に起因する血液から脳腫瘍中への抗体の通過に、少なくとも一部起因すると考えられる。
【００１２】
（１．抗体）
抗体とは、複雑な内部構造を有する非常に大きく複雑な分子（分子量約１５０，０００または約１３２０アミノ酸）である。天然の抗体分子は、同一の２対のポリペプチド鎖を含み、各々の対は、１つの軽鎖および１つの重鎖を有する。各軽鎖および各重鎖はまた、２つの領域（標的抗原の結合に関与する可変（「Ｖ」）領域；および免疫系の他の成分と相互作用する定常（「Ｃ」）領域）からなる。上記軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、三次元空間において一緒に折り畳まれて、抗原（例えば、細胞表面上にあるレセプター）に結合する可変領域を形成する。各軽鎖可変領域または各重鎖可変領域中には、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる３つの短いセグメント（平均１０アミノ酸長）が存在する。抗体可変ドメイン中のこれらの６つのＣＤＲ（軽鎖由来の３つのドメインおよび重鎖由来の３つのドメイン）は、三次元空間において一緒に折り畳まれて、標的抗原を追跡する（ｌｏｃｋ  ｏｎｔｏ）実際の抗原結合部位を形成する。これらのＣＤＲの位置および長さは、正確に定義されている。Ｋａｂａｔ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３，１９８７。可変領域のうちのこれらのＣＤＲ中に含まれない部分は、フレームワークと呼ばれ、これらのＣＤＲのための環境を形成する。
【００１３】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）とは、一分子状抗体種である。従って、このｍＡｂは、動物（例えば、齧歯類、ウサギ、またはヤギ）に抗原を注射してその動物から血清を抽出することによって産生されるポリクローナル抗体を包含しない。ヒト化抗体とは、遺伝子操作（モノクローナル）抗体であり、その抗体においては、マウス抗体（「ドナー抗体」；これは、ラット抗体、ハムスター抗体、または他の同様の種の抗体であり得る）由来のＣＤＲがヒト抗体（「アクセプター抗体」）上に移植されている。ヒト化抗体はまた、マウス抗体に由来する完全ではないＣＤＲを用いて作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２）。従って、ヒト化抗体は、ドナー抗体由来のＣＤＲと、ヒト抗体由来の可変領域フレームワークおよび定常領域とを有する、抗体である。さらに、高い結合親和性を保持するために、２つのさらなる構造エレメントのうちの少なくとも１つが、使用され得る。米国特許第５，５３０，１０１号および米国特許第５，５８５，０８９号（これらのうちの各々が、本明細書において参考として援用される）を参照のこと。これらの米国特許は、ヒト化抗体の構築に関する詳細な指示を提供する。
【００１４】
第一の構造エレメントにおいて、ヒト化抗体の重鎖可変領域のフレームワークが、ドナー抗体の重鎖可変領域のフレームワークと最大の配列同一性（６５％〜９５％）を有するように選択される。この選択は、公知の多くのヒト抗体のうちからアクセプター抗体を適切に選択することによる。第二の構造エレメントにおいて、ヒト化抗体を構築する際に、上記ヒトアクセプター抗体のフレームワークにおける（ＣＤＲの外側にある）選択されたアミノ酸が、特定の規則に従って、ドナー抗体に由来する対応するアミノ酸で置換される。具体的には、上記フレームワークにおける置換されるべきアミノ酸は、上記ＣＤＲと相互作用する能力に基づいて選択される。例えば、置換されるアミノ酸は、ドナー抗体配列中のＣＤＲと隣接し得るか、または三次元空間において測定した場合にそのヒト化抗体中のＣＤＲから４Å〜６Å以内に存在し得る。
【００１５】
キメラ抗体は、マウス（または他の齧歯類）抗体の可変領域がヒト抗体の定常領域と組み合わされた、抗体である。遺伝子操作によるこれらの領域の構築は、周知である。そのような抗体は、マウス抗体の結合特異性を保持し、一方では約３分の２はヒト抗体である。マウス抗体中、キメラ抗体中、およびヒト化抗体中に存在する非ヒト配列の比率は、キメラ抗体の免疫原性がマウス抗体とヒト化抗体との中間であることを示唆する。マウス抗体に対して減少した免疫原性を有し得る他の型の遺伝子操作抗体としては、ファージディスプレイ方法（Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９１／１７２７１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／００１０４７；Ｗｉｎｔｅｒ，ＷＯ９２／２０７９１；およびＷｉｎｔｅｒ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２３：９２，１９９８（これらのうちの各々は、本明細書において参考として援用される））を使用して作製されたヒト抗体、またはトランスジェニック動物（Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９３／１２２２７；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，ＷＯ９１／１０７４１（これらのうちの各々は、本明細書において参考として援用される））を使用して作製されたヒト抗体が挙げられる。
【００１６】
本明細書において使用される場合、用語「ヒト様」抗体とは、一方の鎖または両方の鎖のアミノ酸配列のうちのかなりの部分（例えば、約５０％以上）がヒト免疫グロブリンに由来する、ｍＡｂを指す。従って、ヒト様抗体とは、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体を包含するが、これらには限定されない。本明細書において使用される場合、「減少した免疫原性」の抗体とは、ヒト患者に投与された場合にマウス抗体よりも顕著に低い免疫原性を有すると予期される抗体である。そのような抗体とは、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体、ならびにマウス抗体中にあるＢ細胞エピトープもしくはＴ細胞エピトープに寄与し得る特定アミノ酸（例えば、露出した残基）を置換することにより作製された抗体（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）を包含する。本明細書において使用される場合、「遺伝子操作」抗体とは、その遺伝子が組換えＤＮＡ技術の助けを借りて非天然環境において構築されたかまたは配置されている（例えば、マウス中にあるヒト遺伝子、またはバクテリオファージ上にあるヒト遺伝子）、抗体であり、従って、「遺伝子操作」抗体とは、例えば、従来のハイブリドーマ技術を用いて作製されたマウスｍＡｂ抗体を包含しない。
【００１７】
ｍＡｂのエピトープとは、そのｍＡｂの抗原のうちの、そのｍＡｂが結合する領域である。２つの抗体は、各々がその抗原に対するもう一方の抗体の結合を競合的に阻害（ブロック）する場合には、同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１倍過剰、５倍過剰、１０倍過剰、２０倍過剰、または１００倍過剰である一方の抗体は、競合結合アッセイ（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０（これは、本明細書において参考として援用される）を参照のこと）において測定した場合に、もう一方の抗体の結合を、少なくとも５０％、好ましくは７５％、９０％、または９９％さえも阻害する。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少もしくは排除するその抗原における実質的にすべてのアミノ酸変異がもう一方の結合を減少もしくは排除する場合に、同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少もしくは排除するその抗原におけるいくつかのアミノ酸変異がもう一方の結合を減少もしくは排除する場合に、重複するエピトープを有する。
【００１８】
（２．中和抗ＨＧＦ抗体）
ＨＧＦに結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（すなわち、抗ＨＧＦ  ｍＡｂ）は、（すなわち、そのｍＡｂが単一因子として使用された場合に）その結合がＨＧＦの１つ以上の生物学的活性を部分的または完全に阻害する場合に、「ＨＧＦを中和する」または「中和」抗体であると言われる。中和抗体が阻害し得るＨＧＦの生物学的特性のうちには、ＨＧＦがそのｃＭｅｔレセプターに結合する能力；ＨＧＦが特定の細胞株（例えば、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞）の分散を引き起こす能力；ＨＧＦが特定の細胞（肝細胞、４ＭＢｒ−５サル上皮細胞、および種々のヒト腫瘍細胞が挙げられる）の増殖を刺激する（すなわち、マイトジェンである）能力；または（例えば、ヒト脈管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）増殖もしくは管形成の刺激により測定した場合、またはニワトリ胚絨毛尿膜（ＣＡＭ）に適用した場合の血管の誘導により測定した場合に）ＨＧＦが新脈管形成を刺激する能力がある。本発明において使用される抗体は、好ましくは、ヒトＨＧＦ（すなわち、アクセッション番号Ｄ９０３３４を有するＧｅｎＢａｎｋ配列によりコードされるタンパク質）に結合する。同様に、何らかのサイトカインまたはサイトカインレセプターに対する中和（すなわち、アンタゴニスト）抗体は、そのサイトカインがそのレセプターに結合するのを阻害し得、かつ／またはそのサイトカインによるその細胞へのシグナルの伝達を阻害し得る。そのサイトカインが増殖因子である場合、そのような抗体は、そのサイトカインにより誘導される細胞の増殖を阻害し得る。
【００１９】
本発明において使用される中和ｍＡｂは、代表的には、例えば０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、または５０μｇ／ｍｌなどの濃度において、実施例に記載される方法または当該分野において公知である方法によってアッセイした場合に、サイトカイン（例えば、ＨＧＦ）の生物学的機能（例えば、増殖の刺激または新脈管形成の刺激）を少なくとも約５０％、好ましくは７５％、より好ましくは９０％もしくは９５％、または９９％さえも、最も好ましくは約１００％（事実上完全に）阻害する。代表的には、阻害の程度は、使用されるサイトカインの量が上記生物学的活性を完全に刺激するために全く充分であるかまたは０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、もしくは１０μｇ／ｍｌである場合に、測定される。好ましくは、サイトカインに対する抗体のモル比が０．５倍、１倍、２倍、３倍、５倍、もしくは１０倍である場合に、少なくとも５０％の阻害、７５％の阻害、９０％の阻害、もしくは９５％の阻害、または事実上完全な阻害が達成される。好ましくは、上記ｍＡｂは、単一因子として使用された場合に中和ｍＡｂである（すなわち、上記生物学的を阻害する）が、ある方法においては、２つのｍＡｂが一緒に使用されて阻害を提供する。最も好ましくは、上記ｍＡｂは、上記に列挙された生物学的活性のうちの１つだけではなくいくつかを中和する。本明細書の目的のためには、単一因子として使用された場合にＨＧＦのすべての生物学的活性を中和する抗ＨＧＦ  ｍＡｂは、「完全中和抗体」と呼ばれる。そのようなｍＡｂが最も好ましい。本発明において使用されるｍＡｂは、好ましくはＨＧＦに特異的である。すなわち、それらのｍＡｂは、ＨＧＦに関連するタンパク質（例えば、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）および脈管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ））には結合しないかまたはかなり少ない程度にしか結合しない。上記ｍＡｂは、代表的には、少なくとも１０７／Ｍ、好ましくは１０８／Ｍ以上、最も好ましくは１０９／Ｍ以上、または１０１０／Ｍ以上さえもの結合親和性（Ｋａ）を有する。
【００２０】
本発明において使用されるｍＡｂは、その天然の四量体形態（２つの軽鎖および２つの重鎖）にある抗体を包含し、そのｍＡｂは、公知のアイソタイプＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、ならびにそれらのサブタイプ（すなわち、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、およびマウスＩｇＧ１、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、およびマウスＩｇＧ３）のうちのいずれかであり得る。上記ｍＡｂはまた、抗体のフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ’）２）；二重特異性ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｎｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１０５，１９８７）、一本鎖抗体（Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９，１９８８；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３，１９８８）；および改変型定常領域を有する抗体（例えば、米国特許第５，６２４，８１１号）を包含する。上記ｍＡｂは、動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、もしくはニワトリ）起源であってもよいし、または遺伝子操作されていてもよい。齧歯類ｍＡｂは、当該分野において周知である標準的方法により作製され、それらの方法は、適切なアジュバント中にあるＨＧＦを用いて腹腔内への免疫、静脈内への免疫、または足蹠への免疫を複数回行い、その後、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞を抽出して適切な不死化細胞株と融合し、その後、ＨＧＦに結合する抗体を産生するハイブリドーマを選択する（例えば、実施例を参照のこと）ことを包含する。キメラｍＡｂおよびヒト化ｍＡｂ（上記の当該分野で公知である方法により作製される）が、本発明の好ましい実施形態において使用される。例えばファージディスプレイ法またはトランスジェニックマウス法により作製された、ヒト抗体もまた、好ましい（例えば、Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＭｃＣａｒｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｗｉｎｔｅｒ，Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ（上記）を参照のこと）。より一般的には、本明細書において定義されるような、ヒト様抗体、減少した免疫原性の抗体、および遺伝子操作抗体が、すべて好ましい。
【００２１】
中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７（ブダペスト条約に従ってＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５１６２にて寄託された）が、本発明において使用するためのｍＡｂの好ましい例である。上記の寄託物は、サンプルについての最新の分譲請求が寄託機関により受理された後の少なくとも５年間か、寄託日から少なくとも３０年間か、または関連する特許の実施期間の間のうちのいずれかの最も長い期間にわたって、その寄託機関において維持され、変異した場合、死滅した場合、もしくは破壊された場合には置換される。これらの細胞株の公衆による入手可能性に関するすべての制限は、本願からの特許が発行されると取り消し不可能な様式で除去される。Ｌ２Ｇ７と同じエピトープまたは重複するエピトープを有する中和ｍＡｂは、他の例を提供する。Ｌ２Ｇ７の改変体（例えば、キメラ形態のＬ２Ｇ７またはヒト化形態のＬ２Ｇ７）が、特に好ましい。本明細書において記載されるインビトロアッセイまたはインビボアッセイにおいてＨＧＦに結合してＨＧＦを中和することに関してＬ２Ｇ７と競合するｍＡｂもまた、好ましい。Ｌ２Ｇ７の他の改変体（例えば、可変領域アミノ酸配列（少なくともＣＤＲ）において（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（前掲引用書））により整列した場合に）Ｌ２Ｇ７と９０％、９５％、または９９％同一でありかつＬ２Ｇ７の機能的特性を維持するｍＡｂ、あるいは少数の機能的に重要ではないアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、欠失、もしくは挿入によってＬ２Ｇ７と異なるｍＡｂ）もまた、本発明において使用され得る。他の好ましいｍＡｂとしては、本明細書において定義されるような、ヒト様ｍＡｂ、減少した還元性のｍＡｂ、および遺伝子操作ｍＡｂが挙げられる。
【００２２】
例示された免疫グロブリンからの任意のアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。アミノ酸置換を保存的または非保存的であると分類するために、アミノ酸は、以下のようにグループ化され得る：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）；ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖の方向に影響を与える残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じ種類のアミノ酸の間での置換を伴う。非保存的置換は、これらの種類のうちの１つのメンバーを別の種類のメンバーと交換することを構成する。
【００２３】
本発明において使用するために好ましいさらに他のｍＡｂとしては、ＵＳ  ２００５／００１９３２７  Ａ１またはＷＯ  ２００５／０１７１０７  Ａ２において記載されるすべての抗ＨＧＦ  ｍＡｂが（名前もしくは配列が明示されようと、明示されたｍＡｂに関連する記載により暗示されようとに関わらない）挙げられる（引用された出願は両方とも、その抗体についての開示に関してすべての目的のために参考として本明細書中に援用される）。特に好ましいｍＡｂは、上記の引用された出願において１．２４．１、１．２９．１、１．６０．１、１．６１．３、１．７４．３、１．７５．１、２．４．４、２．１２．１、２．４０．１、および３．１０．１と呼ばれるハイブリドーマにより産生され、それぞれＷＯ２００５／０１７１０７  Ａ２の配列番号２４〜４３により提供される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列により規定される、ｍＡｂ；これらの列挙されたｍＡｂのうちのいずれかと同じ個々のＣＤＲを保有するｍＡｂ；これらの列挙されたｍＡｂの個々の可変領域と少なくとも９０％、９５％、もしくは９９％同一であるかまたは重要でないアミノ酸の置換、欠失、もしくは挿入によってのみ上記可変領域と異なる、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有するｍＡｂ；これらの列挙されたｍＡｂのうちのいずれかと同じＨＧＦエピトープに結合するｍＡｂ；ならびに上記の引用された出願において請求項１〜９４により包含されるすべてのｍＡｂ；である。配列同一性は、Ｋａｂａｔ番号付けの慣例を使用して整列された免疫グロブリン可変領域配列の間で決定される。
【００２４】
他の実施形態において、本発明において（すなわち、その全身投与により脳腫瘍を処置するために）使用するためのｍＡｂは、以下の増殖因子のうちの１つ以上に結合する：脈管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、ニューロトロフィン（例えば、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、もしくはＮＴ−３）、トランスフォーミング増殖因子（例えば、ＴＧＦ−αまたはＴＧＦ−β（ＴＧＦ−β１および／もしくはＴＧＦ−β２））；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）；ヘレグリン（ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ）；エピレグリン；エンフィレグリン（ｅｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）；ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ）（ＮＲＧ−１αおよび／もしくはＮＲＧ−１β、ＮＲＧ−２αおよび／もしくはＮＲＧ−２β、ＮＲＧ−３、またはＮＲＧ−４）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２）；あるいは好ましい実施形態においては線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）（特に、酸性ＦＧＦ（ＦＧＦ−１）または最も好ましくは塩基性ＦＧＦ（ＦＧＦ−２）、あるいはＦＧＦ−ｎ（ｎは３〜２３の任意の数である））。一般的には、そのようなｍＡｂは、中和ｍＡｂである。なお他の実施形態において、本発明において使用するためのｍＡｂは、上記の増殖因子のうちのいずれか１つ以上に関する細胞レセプターに結合する。
【００２５】
本発明において使用するためのネイティブｍＡｂは、それらのハイブリドーマから産生され得る。遺伝子操作されたｍＡｂ（例えば、キメラｍＡｂもしくはヒト化ｍＡｂ）は、当該分野において公知である種々の方法により発現され得る。例えば、それらの軽鎖Ｖ領域をコードする遺伝子および重鎖Ｖ領域をコードする遺伝子は、重複するオリゴヌクレオチドから合成され得、利用可能なＣ領域と一緒に、必要な調節領域（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリＡ部位など）を提供する発現ベクター（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから市販されているもの）中に挿入され得る。ＣＭＶプロモーター−エンハンサーの使用が、好ましい。その後、上記発現ベクターは、周知である種々の方法（例えば、リポフェクチンまたはエレクトロポレーション）を使用して種々の哺乳動物細胞株（例えば、ＣＨＯ）または非産生骨髄腫（Ｓｐ２／０およびＮＳ０が挙げられる）中にトランスフェクトされ得、上記抗体を発現する細胞が、適切な抗生物質選択によって選択され得る。例えば、米国特許第５，５３０，１０１号を参照のこと。大量の抗体が、市販のバイオリアクターにおいて上記細胞を増殖させることによって産生され得る。
【００２６】
一旦発現された後は、本発明において使用するためのｍＡｂまたは他の抗体は、当該分野における標準的な手順（例えば、精密濾過、限外濾過、プロテインＡアフィニティクロマトグラフィーもしくはプロテインＧアフィニティクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、および／または有機色素をベースとする他の形態のアフィニティクロマトグラフィーなど）に従って精製され得る。薬学的用途のためには、少なくとも約９０％または約９５％の均一性である実質的に純粋な抗体が好ましく、９８％以上または９９％以上の均一性が最も好ましい。
【００２７】
（３．治療方法）
好ましい実施形態において、本発明は、本明細書において記載されるｍＡｂを含む薬学的処方物を用いる、処置方法を提供する。上記抗体の薬学的処方物は、薬理学的に受容可能なキャリア中にある上記ｍＡｂを、必要に応じて賦形剤もしくは安定剤とともに、凍結乾燥形態もしくは水溶液の形態で、含む。受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、これらとしては、ｐＨが代表的には５．０〜８．０であり最も頻繁には６．０〜７．０である緩衝剤（例えば、リン酸塩、クエン酸塩、もしくは酢酸塩）；等張性にするための塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウムなど）；抗酸化剤、保存剤、低分子量ポリペプチド、タンパク質、疎水性ポリマー（例えば、ポリソルベート８０）、アミノ酸、糖質、キレート剤、糖、および当業者にとって公知である他の標準的成分（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編，１９８０）が挙げられる。上記ｍＡｂは、代表的には、１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度（例えば、１０ｍｇ／ｍｌ）で存在する。上記ｍＡｂはまた、運搬剤（ｃａｒｒｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、リポソーム）中に封入され得る。
【００２８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、ｍＡｂ（例えば、中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂ、またはサイトカインに対する抗体もしくはサイトカインレセプターに対する抗体）の全身投与によって脳腫瘍を有す患者を処置するための方法を提供する。上記患者は、好ましくはヒトであるが、任意の動物でもあり得る。全身投与によって、本発明者らは本明細書において、上記ｍＡｂが循環系に対する全体的アクセスを有し、それゆえ上記ｍＡｂが身体の器官（脳の血管が挙げられる）に対する全体的アクセスを有する、投与経路を意味する。換言すれば、上記ｍＡｂは、血液脳関門の末梢側に投与される。全身投与の例としては、静脈内注入もしくはボーラス注射、または筋肉内投与もしくは皮下投与もしくは腹腔内投与が挙げられる。しかし、全身投与は、上記腫瘍中への直接的注射も、器官（例えば、脳もしくはその周囲の膜、または脳脊髄液）中への直接的注射も包含しない。静脈内注入は、１５分間程度の短い間にわたって、より頻繁には３０分間にわたって、または１時間、２時間、３時間もの間にわたって、または４時間もしくはそれ以上の間にわたって、投与され得る。投与される用量は、処置される状態を治癒するため、処置される状態を少なくとも部分的に軽減するため、または処置される状態のさらなる進展を阻害するために、充分である（「治療上有効な用量」）。治療上有効な用量は、好ましくは、上記腫瘍の退縮を引き起こし、より好ましくは上記腫瘍の除去を引き起こす。治療上有効な投与量は、通常は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、１ｍｇ／ｋｇ体重、２ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、もしくは４ｍｇ／ｋｇ体重）であるが、１０ｍｇ／ｋｇ体重程度の多さであり得、１５ｍｇ／ｋｇ体重もしくは２０ｍｇ／ｋｇ体重さえもの多さであり得る。固定単位用量（例えば、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、５００ｍｇ、もしくは１０００ｍｇ）もまた投与され得、あるいは上記用量は、患者の表面積（例えば、１００ｍｇ／ｍ２）に基づき得る。処置される状態を治癒するため、処置される状態を少なくとも部分的に軽減するため、または処置される状態のさらなる進展を阻害するために、充分な頻度で投与される治療上有効な投与量は、治療上有効なレジメンと呼ばれる。そのようなレジメンは、好ましくは、上記腫瘍の退縮を引き起こし、より好ましくは上記腫瘍の除去を引き起こす。通常は１用量〜８用量（例えば、１用量、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、もしくは８用量）が、癌を処置するために投与されるが、１０用量、２０用量、またはそれ以上の用量が、投与され得る。上記ｍＡｂは、１日１回、週２回、週１回、隔週１回、月１回、または例えば上記ｍＡｂの半減期に依存する他の何らかの間隔（１週間、２週間、４週間、８週間、３ヶ月〜６ヶ月、もしくはそれ以上）で投与され得る。反復的な処置過程もまた可能であり、同様に長期間投与もまた可能である。
【００２９】
本発明の方法（例えば、ｍＡｂ（例えば、抗ＨＧＦ  ｍＡｂ（特に、Ｌ２Ｇ７およびその改変体（ヒト化Ｌ２Ｇ７が挙げられる）））の全身投与）は、すべての脳腫瘍（髄膜腫：神経膠腫（脳室上衣細胞腫、希突起神経膠腫、およびすべての型の神経膠星状細胞腫（低悪性度神経膠星状細胞腫、未分化神経膠星状細胞腫、および多形性神経膠芽細胞腫、または単なる神経膠芽細胞腫）が挙げられる）；髄芽細胞腫、神経節膠腫、神経鞘腫、脊索腫；および主に小児の脳腫瘍（未分化神経外胚葉性腫瘍が挙げられる）が挙げられる）を処置するために使用され得る。原発性腫瘍（すなわち、脳において生じる腫瘍）および続発性脳腫瘍もしくは転移性脳腫瘍の両方が、本発明の方法によって処置され得る。Ｍｅｔおよび／またはＨＧＦを（特に高レベルで）発現する脳腫瘍が、中和抗ＨＧＦ抗体（例えば、Ｌ２Ｇ７またはその改変体）の全身投与によって処置するために特に適切である。
【００３０】
好ましい実施形態において、上記ｍＡｂは、他の抗癌療法と組合わせて（すなわち、その前に、その間に、またはその後に）投与される。例えば、上記ｍＡｂ（例えば、抗ＨＧＦ  ｍＡｂ（例えば、Ｌ２Ｇ７およびその改変体））は、腫瘍学の当業者にとって公知である化学療法剤（例えば、アルキル化薬（例えば、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、カルボプラチン、オキシプラチン、プロカルバジン、およびシクロホスファミド）；代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、メトトレキサート、およびヒドロキシ尿素）；天然産物（植物アルカロイドおよび抗生物質（例えば、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エトポシド、マイトマイシン、ミトザントロン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびＴａｘｏｌ（パクリタキセル）または関連化合物（例えば、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）））が挙げられる）；脳腫瘍に関して具体的に認可された薬剤（テモゾロミドおよびカルムスチン含有Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）オブラートが挙げられる）；ならびに他の薬物（イリノテカンおよびＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ならびにＷＯ２００５／０１７１０７  Ａ２（これは本明細書において参考として援用される）において列挙される認可された抗癌剤および実験的抗癌剤すべてが挙げられる））のうちのいずれか１以上と一緒に投与され得る。上記ｍＡｂは、これらの薬剤のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれ以上と組合わせて、例えば、標準的な化学療法レジメンにおいて、投与され得る。抗ＨＧＦ  ｍＡｂが投与され得る他の物質としては、生物剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）（例えば、モノクローナル抗体（ＨＥＲ２抗原に対するＨｅｒｃｅｐｔｉｎＴＭ、ＶＥＧＦに対するＡｖａｓｔｉｎＴＭ、ＥＧＦレセプターに対する抗体（例えば、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、または抗ＦＧＦ  ｍＡｂが挙げられる）、ならびに低分子抗血管新生薬もしくはＥＧＦレセプターアンタゴニスト薬（例えば、Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）およびＴａｒｃｅｖａ（登録商標）））が挙げられる。さらに、上記ｍＡｂは、任意の形態の放射線療法（外部ビーム照射、強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）が挙げられる）および任意の形態の放射線手術（Ｇａｍｍａ  Ｋｎｉｆｅ、Ｃｙｂｅｒｋｎｉｆｅ、Ｌｉｎａｃ）および組織内照射（例えば、移植型放射性シード、ＧｌｉａＳｉｔｅバルーン）が挙げられる）と一緒に投与され得る。
【００３１】
本発明の好ましい実施形態において、上記ｍＡｂは、他のいかなる物質とも連結も結合体化もされない。他の実施形態において、上記ｍＡｂは、放射性同位体、化学療法薬もしくは化学療法プロドラッグ、または毒素と結合体化され得る。例えば、上記ｍＡｂは、α線を放射する放射性同位体、β線を放射線する放射性同位体、および／もしくはγ線を放射する放射性同位体（例えば、９０Ｙ、ヨウ素同位体（例えば、１３１Ｉ）、またはビスマス同位体（例えば、２１２Ｂｉもしくは２１４Ｂｉ））に；植物タンパク質毒素もしくは細菌タンパク質毒素（例えば、リシンもしくはシュードモナス体外毒素、またはそれらのフラグメント（例えば、ＰＥ４０））に；低分子毒素（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）関連化合物、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）由来化合物、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）関連化合物、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）由来化合物、もしくはマイタンシン関連化合物、マイスタンシン由来化合物）に；あるいは化学療法薬（例えば、ドキソルビシン、または上記に列挙された他の化学療法薬のうちのいずれか）に；連結され得る。そのような物質をｍＡｂに連結するための方法は、当業者にとって周知である。
【００３２】
ｍＡｂ（例えば、中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂ（例えば、Ｌ２Ｇ７もしくはその改変体））の全身投与と、必要に応じてそれに加えられる他の処置（例えば、化学療法もしくは放射線療法）は、特定の脳腫瘍（例えば、神経膠芽細胞腫）を有する患者の無憎悪生存期間（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）中央値もしくは全生存期間中央値を、上記ｍＡｂを投与しないコントロールレジメンと比較して、少なくとも３０％もしくは４０％、好ましくは５０％、６０％〜７０％、もしくは１００％またはそれ以上も、増加し得る。抗ＨＧＦ  ｍＡｂの投与が他の処置（例えば、化学療法もしくは放射線）を伴う場合には、上記他の処置もまた、上記コントロールレジメンに含まれる。抗ＨＧＦ  ｍＡｂが他の処置を伴わずに投与される場合には、上記コントロールレジメンは、プラシーボ処置であるかまたは他の特定の処置がないものである。さらに、もしくはあるいは、ｍＡｂ（例えば中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂ（例えば、Ｌ２Ｇ７もしくはその改変体））の全身投与＋他の処置（例えば、化学療法もしくは放射線療法）は、特定の脳腫瘍を有する患者の完全奏功率（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒａｔｅ）（その腫瘍の完全な退縮（すなわち、寛解））、部分奏功率（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒａｔｅ）（患者における部分奏功とは、その腫瘍のサイズの部分的（例えば、少なくとも３０％もしくは５０％の）収縮を意味する）、または客観的奏功率（ｏｂｋｅｃｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒａｔｅ）（完全奏功率＋部分奏功率）を、上記のｍＡｂの投与を行わないコントロールレジメンと比較して、少なくとも３０％もしくは４０％、好ましくは５０％、６０％〜７０％、もしくは９０％またはそれ以上、増加し得る。処置に応答した腫瘍のサイズ変化は、ＭＲＩ、ＣＴスキャンなどによって測定され得る。
【００３３】
同様に、（例えば下記実施例２において記載されるような）ヒト神経膠腫の頭蓋内移植物を保有する動物（例えば、免疫不全マウス（例えば、ヌードマウスもしくはＳＣＩＤマウス））に全身投与された場合、上記中和抗ＨＧＦ  ｍＡｂもしくは抗ＦＧＦ  ｍＡｂ、または他のｍＡｂは、上記動物の生存期間中央値を、少なくとも約２５日間もしくは少なくとも約３０日間もしくは少なくとも約４０日間、好ましくは５０日間、６０日間、もしくは７０日間、またはそれ以上までも延長させる。そのような延長は、統計学的に有意である。このことは、処置開始が腫瘍細胞移植の少なくとも５日間後もしくは１８日間後またはそれ以上後にまで遅れた場合でさえ、当てはまる。さらに、そのような処置は、平均して、上記腫瘍を少なくとも２５％、好ましくは５０％もしくは７５％さえも収縮させる。上記ｍＡｂで処置した動物における平均腫瘍体積は、コントロールで処置した動物における平均腫瘍体積の５０％未満または２５％未満もしくは１０％未満でさえある。上記腫瘍サイズは、代表的には、腫瘍細胞移植の２１日間後もしくは２９日間後に測定される。
【００３４】
代表的には、臨床試験（例えば、フェーズＩＩ試験、フェーズＩＩ／ＩＩＩ試験、もしくはフェーズＩＩＩ試験）において、ｍＡｂ（例えば、抗ＨＧＦ  ｍＡｂ）の投与と必要に応じて加えられる他の処置とによって処置された患者の無憎悪生存期間中央値および／または奏功率における、上記抗体を含まないコントロールレジメンを受ける患者と比較した上記の増加は、例えばｐ＝０．０５レベルもしくはｐ＝０．０１レベルまたはｐ＝０．００１レベルまでも、統計学的に有意である。上記完全奏功率および部分奏功率は、癌について臨床試験において一般的に使用される客観的基準（例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅおよび／またはＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎによって列挙または認可された基準）によって決定される。
【実施例】
【００３５】
（１．抗ＨＧＦ  ｍＡｂｓの生成およびインビトロでの特性）
十分に中和する抗ＨＧＦ  ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７の開発は、米国特許出願公開番号ＵＳ２００５／００１９３２７Ａ１に記載されている。この米国特許出願公開番号ＵＳ２００５／００１９３２７Ａ１を本明細書中で参考として援用する。要するに、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、足蹠注射により、組換えヒトＨＧＦで十分に免疫し、そしてハイブリドーマを通常の手法によりこれらマウスから作り出した。Ｆｌａｇペプチドを融合させたＨＧＦからなるキメラ融合タンパク質（ＨＧＦ−Ｆｌａｇ）とヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を融合させたＭｅｔ細胞外領域（Ｍｅｔ−Ｆｃ）を通常の組換え技術により生成し、そしてそれらを、ＭｅｔレセプターとＨＧＦの結合を阻害する抗ＨＧＦ  ｍＡｂｓの能力決定のために用いた。図１ａは、３つ別々の抗ＨＧＦ  ｍＡｂの能力を示す。これら３つ別々の抗ＨＧＦ  ｍＡｂのそれぞれは、溶液中でＨＧＦを捕捉するために別のエピトープを認識する。ＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７は、ＨＧＦに対して結合力から判断すると中程度の親和力を有するが、ＥＬＩＳＡ（図１ｂ）においてＭｅｔ−ＦｃとＨＧＦ−Ｆｌａｇの結合を完全にブロックすると確認された唯一のｍＡｂである。ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７は、ＨＧＦに対し特異的である。なぜなら、そのｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７は、ＶＥＧＦ，ＦＧＦ，ＥＧＦのような他の成長因子に結合を示さないからである。
【００３６】
ＭｅｔへのＨＧＦ結合をブロックするｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７の能力は、その能力がＨＧＦの誘導するすべての細胞応答を阻害することを示唆した。しかし、この仮説は、検証する必要がある。何故ならば、ＨＧＦのαサブユニットおよびβサブユニットは異なった活性を媒介するからである（Ｌｏｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：２５０３，１９９２；Ｈａｒｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１１５７４，１９９２）。ＨＧＦのαサブユニットを通して媒介されるＨＧＦのひとつの重要な生物活性は、細胞分散を誘導する能力であり、ＨＧＦのαサブユニットの別名である「分散因子」はその生物活性から由来している。  図２ａは、Ｌ２Ｇ７が、ＭＤＣＫ上皮細胞のＨＧＦの誘導による分散を完全に阻害することができることを示しており、そのＭＤＣＫ上皮細胞のＨＧＦの誘導による分散は、ＨＧＦ分散活性を定量するための広く用いられる生物活性検定法である。ＨＧＦのβサブユニットを通して媒介されるＨＧＦのひとつの鍵となる生物活性は、ある細胞種の有糸分裂誘発である。図２ｂは、ＨＧＦとｍＡｂのモル比が１：１であるＬ２Ｇ７は、Ｍｖ１Ｌｕミンク肺上皮細胞におけるＨＧＦで誘導した３Ｈ−チミジンの取り込みを完全に阻害することを示す。したがって、ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７は、αーＨＧＦサブユニットおよびβーＨＧＦサブユニットのどちらにも起因するＨＧＦの誘導による生物活性をブロックする。
【００３７】
新脈管形成が固形腫瘍の増殖のために必要である。ＨＧＦは、強力な脈管形成因子である（Ｇｒａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１９３７，１９９３）。そして、ＨＧＦの腫瘍段階は、神経膠腫を含むヒト悪性疾患の脈管密度と相関する（Ｓｃｈｍｉｄｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８４：１０，１９９９）。ＨＧＦはまた、ＶＥＧＦなど他の脈管形成因子の産生を刺激し得、ＶＥＧＦに誘導された新脈管形成をも増強し得る（Ｘｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１１１１，２００１）。新脈管形成に必要とされる２つの最初の段階は、内皮細胞の増殖および細管形成である。ゆえに、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）のＨＧＦの誘導による増殖、および３次元コラーゲンゲル中での脈管様細管のＨＧＦの誘導による形成に対するＬ２Ｇ７の効果を測定した。ＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ、７２時間）によるＨＵＶＥＣの増殖の刺激は、ｍＡｂとＨＧＦのモル比が１．５：１であるＬ２Ｇ７により完全に阻害された（図２ｃ）。３次元コラーゲンゲル中に懸濁させたＨＵＶＥＣは、ＨＧＦ（２００ｎｇ／ｍｌ、４８時間）で刺激後、相互連結した分枝細管の網様構造を発達させたが、Ｌ２Ｇ７を添加したＨＧＦで処理した細胞は、このような細管形成はほとんどあるいは全く示さなかった（図２ｄ）。このことから、Ｌ２Ｇ７は、ＨＧＦの誘導する新脈管形成の増殖局面および形態形成の局面をブロックする。
【００３８】
ＨＧＦは、癌治療で一般的に使用されているＤＮＡ損傷剤を含む多くの治療薬により誘導されるアポトーシス死から腫瘍細胞を守る（Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：４２７７，２０００；Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２４：１７４９，２００５）。ヒト悪性神経膠腫細胞の多くは、デスレセプターＦＡＳを発現する。そのことにより、インビトロで抗ＦＡＳ抗体により誘導されるアポトーシスに対し、ヒト神経膠腫細胞は感受性になる（Ｗｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：９５４，１９９４）。従って、アポトーシス性抗ＦＡＳ  ｍＡｂ  ＣＨ−１１で処理されたＵ８７神経膠腫細胞のＨＧＦ誘導性細胞防御に対するＬ２Ｇ７の効果を測定した。ＣＨ−１１処理（２４時間）後、Ｕ８７細胞の生存は、未処理のコントロールにおける細胞生存の約４５％にまで減少した。これは、無関係なアイソタイプコントロール抗体存在下、ＨＧＦとともにＵ８７細胞を前培養することにより完全に逆となったが、Ｌ２Ｇ７の存在下、ＨＧＦによってはそうならなかった効果であった（図２ｅ）。
【００３９】
（２．神経膠腫異種移植腫瘍モデルにおける抗ＨＧＦｍＡｂの効果）
ＨＧＦの多様な腫瘍促進活性をブロックするＬ２Ｇ７の能力は、このｍＡｂが少なくともＨＧＦ＋／Ｍｅｔ＋ヒト腫瘍に対する抗腫瘍活性を有することを示唆した。神経膠腫の多くは、ＭｅｔおよびＨＧＦを発現するようである（Ｒｏｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ６７：２４８，１９９６）。神経膠腫細胞株Ｕ８７及びＵ１１８に関して、Ｍｅｔの発現が、フローサイトメトリー分析により確認した。そして、ＨＧＦ特異的ＥＬＩＳＡを使用して７日間のコンフルエント培養からの上清中に約２０〜３５ｎｇ／ｍｌのＨＧＦが検出された。前もって確立されたＵ１１８およびＵ８７皮下の異種移植のヌードマウスモデルにおけるＬ２Ｇ７の抗腫瘍効果が、決定された。Ｌ２Ｇ７は、腫瘍の大きさが約５０ｍｍ３に達した後、一週間に２回腹腔に投与した（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：８４１，１９９３（本明細書中で参考文献として援用される））。１回の注射あたり１００μｇ（約５ｍｇ／ｋｇ）で、Ｌ２Ｇ７は、完全にＵ１１８腫瘍の増殖を阻害した（図３ａ）。Ｕ８７異種移植物モデルにおいて、１回の注射あたり、５０μｇまたは１００μｇのいずれかのＬ２Ｇ７が、腫瘍の増殖を阻害するだけでなく、実際に腫瘍の退縮を引き起こした（図３ｂ）。コントロールのｍＡｂ（１回の注射あたり１００μｇ）は、ＰＢＳコントロールと比較してほんの少しだけ腫瘍の増殖を阻害した。Ｌ２Ｇ７は、Ｕ２５１神経膠腫異種移植物の増殖に対して効果はなかった。Ｍｅｔを発現するが、ＨＧＦは分泌しない。これらインビボでの結果は、単一の物質としてＬ２Ｇ７が、特異的にＨＧＦ活性をブロックすることにより、腫瘍の増殖を防ぐことを示す。
【００４０】
次に、Ｌ２Ｇ７の効力を、前もって確立された頭蓋内Ｕ８７神経膠腫異種移植物を有するマウスで試験した。マウスに、右尾状核あるいは右被殻への定位注射により、Ｕ８７ヒト悪性神経膠腫細胞（１００，０００μｇ、細胞／動物）を移植した。移植後５日目から５２日までに投与されたＬ２Ｇ７（１００μｇ／注射、腹腔内、週二回）は、動物生存期間を有意に延長した（図３ｃ）。コントロールマウスにおいて、生存期間中央値は、３９日であった。そしてすべてのマウスは、４１日までに進行性腫瘍により死んだ。対照的に、Ｌ２Ｇ７で処置されたすべてのマウスは、７０日まで生存し、そして９０日（ｍＡｂ処置の中止後７週間）で８０％が生存した（図３ｃ）。Ｌ２Ｇ７の３回投与後、２１日目で屠殺したマウスでは、コントロール腫瘍が、Ｌ２Ｇ７で処置した腫瘍の１０倍よりも大きかった（６．６＋２．７ｍｍ３  対  ０．５４＋０．１７ｍｍ３）（図３ｄ）。
【００４１】
さらなる厳しい条件下でのｍＡｂ効力を試験するために、同種の実験において、Ｌ２Ｇ７処置の開始を１８日目まで遅らせた。１サブセットのマウス（１グループあたりｎ＝５）を、処置過程において初期に屠殺した。そして、腫瘍体積を、コンピューター支援型イメージ解析を用いて、Ｈ＆Ｅ染色した脳の部分の腫瘍断面積を測ることにより定量した。Ｌ２Ｇ７は、かなりの腫瘍の退縮を誘導した（図３ｅ，ｆ）。具体的には、１８日目での処置前腫瘍体積が、２６．７＋２．５ｍｍ３であった（範囲１９．５〜５４ｍｍ３、中央値２７．９ｍｍ３）。Ｌ２Ｇ７の３回投与後、２９日目に、腫瘍は、ほんの１１．７＋５．０ｍｍ３（範囲０〜２６．２ｍｍ３、中央値７．５ｍｍ３）だった。それで、それら腫瘍は、実際平均して５０％以上退縮したか、あるいは大きさが収縮した。アイソタイプが一致するコンロトールｍＡｂで処置したマウスからの２９日目での腫瘍体積は、１３４．３＋２２．０ｍｍ３であった（範囲７１．２〜１９６．８ｍｍ３、中央値１２８ｍｍ３）。それゆえ、コントロールｍＡｂで処置した腫瘍はほぼ５倍増殖し、平均体積はＬ２Ｇ７で処置した腫瘍と比較して１２倍大きかった。屠殺しなかったマウス（１グループあたりｎ＝１０）において、コントロールマウスにおける生存期間中央値は、３２日であり、そして全てが４２日目までに死んだ。一方、Ｌ２Ｇ７で処置されたマウスは４６日目まで全く死なず、そしてＬ２Ｇ７は、生存期間中央値を６１日目に延ばした。このように、Ｌ２Ｇ７は、非常に高い全身腫瘍組織量を有するマウスにおいて、腫瘍退縮を誘導した。
【００４２】
頭蓋内腫瘍の組織切片のさらに詳細な解析を、Ｌ２Ｇ７の抗腫瘍効果についてあり得る機構を調査するために行った（図４）。Ｌ２Ｇ７の３回投与の後、腫瘍細胞の増殖（Ｋｉ−６７指数）および新脈管形成（脈管密度、すなわち、腫瘍面積のパーセントとしての抗ラミニン染色腫瘍脈管の面積）は、それぞれ５１％および６２％減少した。一方、活性化されたカスパーゼ−３陽性細胞の総数により定量された腫瘍細胞のアポトーシスの指数は、６倍増加した。Ｌ２Ｇ７の治療を開始した後に、速やかに起こった明らかな腫瘍退縮は、アゴニスト抗デスレセプター４（ＴＲＡＩＬ１）ｍＡｂ（Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：４８９１，２００１）で処理されたヒト結腸腫瘍Ｃｏｌｏ２０５異種移植物において観察されたものと類似する細胞死の応答を示す。
【００４３】
ここで報告された結果は、トキシンにも放射性核種にも連結していないｍＡｂからの顕著な脳腫瘍応答の例である。比較として、皮下の異種移植物モデルにおいて、抗ＶＥＧＦマウスｍＡｂ  Ａ４．６．１、（これは、後に薬Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）を作製するためにヒト化した）が、ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７によるＵ８７神経膠腫およびＵ１１８神経膠腫の本質的に完全な増殖阻害とは対照的に、Ｇ５５ヒト神経膠腫の増殖を約５０〜６０％ほどしか阻害しなかった（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：８４１，１９９３）。正常位頭蓋内腫瘍モデルにおいて、Ｇ５５神経膠腫細胞移植と同時に投与された全身抗ＶＥＦＧ  ｍＡｂは、動物生存期間をわずかに２〜３週間延ばすにとどまった（Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ２：３０６，２０００）。同じく、ＥＧＦレセプターの改変体へのｍＡｂの全身投与は、その改変体ＥＧＦレセプターでトランスフェクションした神経膠腫細胞の頭蓋内異種移植物を有するマウスの生存期間中央値を、総体的にささやかにしか延ばさなかった（１３日から２１日まで、あるいは１３日から１９日まで、しかしひとつのケースは１９日から５８日まで：Ｍｉｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４３４９，２００１）。しかし、これらささやかな効果は、ｍＡｂ投与を異種移植物の移植と同時、あるいは移植後速やかに開始した場合に、達成された。そしてこのことから考えると、これらのささやかな効果は、少なくとも部分的には異種移植物の脈管新生（既に脳腫瘍を有する患者において標的とされ得ない事象）の開始を遅らせることにより引き起こされた可能性があった。対照的に、抗ＨＧＦｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７の全身投与は、生存期間を延ばした。そして、その全身投与は、腫瘍が十分に安定化された移植後５日目あるいはさらに１８日目で投与された場合でさえ、腫瘍の退縮を引き起こした。それゆえ、この全身投与の結果は、ヒト患者における状況に対応する。
【００４４】
ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７の顕著な抗腫瘍効果は、その分子標的であるＨＧＦの独特な多機能特性（すなわち、マイトジェン特性、脈管形成特性、そして細胞防御特性）に起因する可能性がある（Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．４：９１５，２００３；Ｔｒｕｓｏｌｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ４：２８９，２００２）。神経膠腫の退縮を誘導するＬ２Ｇ７の能力は、ＭｅｔへのＨＧＦの結合によりブロックされるＦａｓ媒介アポトーシス、（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．９：４１１，２００２）、もしくは、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ、Ａｋｔ、およびＮＦ−κＢ中間体を含むＨＧＦ誘導性細胞防御経路の不活性化（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２４：１７４９，２００５）に起因し得る、細胞死の応答を意味する。ＨＧＦの細胞防御および脈管形成の効果をブロックするＬ２Ｇ７の能力は、全身に送達されたＬ２Ｇ７が、悪性脳腫瘍を処置するために現在使用されている細胞毒性治療（たとえば、γ−放射線および化学療法）の効力を増すことを予測する。
【００４５】
本発明は、目下好ましい実施例に関して記述されているが、種々の改変が、本発明から逸脱することなくなされ得ることが、理解されるべきである。
【００４６】
引用した全ての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれ個別の刊行物、特許および特許出願があらゆる目的のためにその全体を本明細書中で参考として援用されると具体的かつ個別に示されたのと同じ程度まで、あらゆる目的のためにその全体が参考として本明細書中に援用される。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ＥＬＩＳＡにより測定された抗ＨＧＦ  ｍＡｂの結合活性およびブロック活性。Ａ．結合について、ｍＡｂを、ヤギ抗マウスＩｇＧでコートしたＥＬＩＳＡプレート上に捕捉し、ＢＳＡでブロックし、ＨＧＦ−Ｆｌａｇ（１μｇ／ｍｌ）とともにインキュベートし、ついでＨＲＰ−Ｍ２抗Ｆｌａｇ  ｍＡｂ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともにインキュベートした。Ｂ．Ｍｅｔ−Ｆｃ結合に対するＨＧＦ−Ｆｌａｇのブロッキングについて、プレートを、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃでコートし、ＢＳＡでブロックし、Ｍｅｔ−Ｆｃ（２μｇ／ｍｌ）とともにインキュベートし、それからＨＧＦ−Ｆｌａｇ（１μｇ／ｍｌ）（抗ＨＧＦｍＡｂ添加または無添加）とともにインキュベートした。ＨＧＦ−Ｆｌａｇが結合する結合は、ＨＲＰ−Ｍ２抗Ｆｌａｇ  ｍＡｂにより検出した。
【図２】ＨＧＦの分散活性、マイトジェン活性、脈管形成活性、および抗アポトーシス活性に対するｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７のブロック効果。Ａ．ＭＤＣＫ細胞（ＡＴＣＣ）を、Ｌ２Ｇ７（１０μｇ／ｍｌ）を添加したかまたは添加していないＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）で記載された（Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９８：７４４３，２００１）のように二日間刺激した。写真は、上記細胞をクリスタルバイオレットで染色後、１００倍の倍率で撮影した。Ｂ．ＭｖｌＬｕミンク肺上皮細胞（ＡＴＣＣ；５×１０４細胞／ｍｌ）を、ＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）とＬ２Ｇ７  ｍＡｂまたはアイソタイプが一致するコンロトールｍＡｂ（ｍＩｇＧ）との存在下あるいは非存在下の無血清ＤＭＥＭ中で２４時間インキュベートした。細胞増殖のレベルは、６時間の３Ｈ−チミジン添加により測定した。Ｃ．（Ｘｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１１１１，２００１）に記載されたように、ＨＵＶＥＣ（ＣＡＭＢＲＥＸ；１０４細胞／１００μｌ／ウエル）を、ＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）とＬ２Ｇ７  ｍＡｂまたはコンロトールｍＡｂとの存在下あるいは非存在下の０．１％ＦＣＳ／ＥＢＭ−２中で７２時間インキュベートし、ＷＳＴ−１添加により増殖レベルを測定した。Ｄ．（Ｘｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１１１１，２００１）に記載されたように、ＤＭＥＭ／ゲル中のＨＵＶＥＣ（６×１０４細胞／１００μｌ／ウエル）に、Ｌ２Ｇ７（２０μｇ／ｍｌ）を添加したかまたは添加していないＨＧＦ（２００ｎｇ／ｍｌ）存在下あるいは非存在下の０．１％ＦＣＳ／０．１％ＢＳＡ／ＥＭＢ−２（１００μｌ／ウエル）を重層した。４８時間インキュベーションした後、細胞を、固定化し、トルイジンブルーを用いて染色し、４０倍の倍率で写真を撮った。Ｅ．（Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２４：１７４９，２００５）に記載されたように、無血清ＤＭＥＭにおけるＵ８７腫瘍細胞を、ｍＡｂ  Ｌ２Ｇ７（２０μｌ／ｍｌ）あるいはアイソタイプコントロール抗体（ｍＩｇＧ）を添加したかまたは添加していなかったＨＧＦで４８時間処理するかもしくは処理せず、それから抗Ｆａｓ  ｍＡｂ  ＣＨ１１（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４０ｎｇ／ｍｌ）で２４時間処理し、細胞生存期間をＷＳＴ−１添加により測定した。ｂ、ｃ、ｅにおいて、値は、平均＋／−標準偏差を意味する。
【図３】Ｌ２Ｇ７による神経膠腫異種移植物の阻害あるいは退縮。Ｕ１１８神経膠腫細胞（Ａ）あるいはＵ８７神経膠腫細胞（Ｂ）を、ＮＩＨ  ＩＩＩのベージュマウスおよびヌードマウスの皮下に移植し、腫瘍の大きさを記載された（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：８４１，１９９３）ようにモニターした。腫瘍の大きさが約５０ｍｍ３に達した後、マウスのグループ（ｎ＝６あるいは７）を、５０μｇ  Ｌ２Ｇ７、１００μｇ  Ｌ２Ｇ７、１００μｇのアイソタイプが一致するコントロールｍＡｂ（ｍＩｇＧ）またはＰＢＳで一週間に２回腹腔内処置した。矢印は、処置の最初の日を示す。値は、平均腫瘍体積＋／−平均値標準誤差を意味する。Ｃ．Ｕ８７腫瘍細胞（１０５／マウス）を、重篤複合免疫不全（Ｓｃｉｄ）マウスあるいはベージュマウスの尾状核あるいは被殻に頭蓋内移植した（Ａｂｏｕｎａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１６，１０８，２００２）。矢印に示されているようにそれぞれ５日目および５２日目に開始および終了して、マウスのグループ（ｎ＝１０）に、１週間に２回１００μｇ  Ｌ２Ｇ７あるいは１００μｇ  ＰＢＳを腹腔内に投与し、生存期間をモニターした。生存期間調査は、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ  プロットにより分析した。Ｄ．１００μｇ  Ｌ２Ｇ７あるいは１００μｇ  ＰＢＳにより１週間に２回の腹腔内処置を３回投与後、２１日目に屠殺した代表となるマウスから記載された（Ａｂｏｕｎａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１６，１０８，２００２）ように調整した脳切片。これは、Ｕ８７頭蓋内異種移植物の大きさを示す。Ｅ．処置開始前１８日目での個々のマウスにおける頭蓋内Ｕ８７腫瘍の体積およびＬ２Ｇ７で３回処置した後の２９日目での個々のマウスにおける頭蓋内Ｕ８７腫瘍の体積。Ｆ．処置前１８日目での代表的マウスからの脳切片ならびにＬ２Ｇ７  ｍＡｂあるいはコントロールｍＡｂにより処置した後の２９日目における代表的マウスからの脳切片。
【図４】Ｕ８７頭蓋内異種移植物を有するマウスからの脳切片の組織学的分析。マウスは、前もって確立した腫瘍をＬ２Ｇ７あるいはコントロールを週２回の３回投与により処置した後、屠殺した。灌流固定凍結切片をＨ＆Ｅおよび示された抗体で染色し、コンピューター支援型イメージ分析を用いて、指数を定量化した。Ａ．増殖細胞を検出するための抗Ｋｉ６７（ＤＡＫＯ）。Ｂ．血管を検出するための抗ラミニン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。Ｃ．アポトーシス腫瘍細胞応答を検出するための切断型カスパーゼー３に対する抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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