(57)【要約】  本発明は、ウンカリア属植物、特にアセンヤク、又はその抽出物を含む、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）及び／又は５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）に介される生理学的及び病理学的異常症状を予防または治療するための組成物、及び上記ウンカリア属植物抽出物とコガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物の配合組成物に関するものである。本発明の組成物は、優れたＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害効果を示し、従って、骨関節炎又は関節リウマチを含む、様々なＣＯＸ回路及び／又は５−ＬＯ回路に介される疾患及び異常症状の予防又は治療に用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウンカリア属植物又はその抽出物を含むシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）及び／又は５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）に介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物。  
【請求項２】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が炎症疾患である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
上記ウンカリア属植物が、アセンヤク（ガンビール）（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）、Ｕ．ａｔｔｅｎｕａｔａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｂｏｒｎｅｅｎｓｉｓ  Ｈａｖｉｌ．、Ｕ．ｃａｌｌｏｐｈｙｌｌａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｅｌｌｉｐｔｉｃａ  Ｒ．Ｂｒ．、キャッツ・クロウ（ウンガリア・ギアネンシス）（Ｕ．ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ（Ａｕｂｌ．）Ｇｍｅｌ．）、Ｕ．ｈｏｍｏｍａｌｌａ  Ｍｉｑ．、Ｕ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ｇｌａｂｒａｔａ（Ｂｌ．）Ｒｉｄｓｄ．、Ｕ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  Ｗａｌｌ．、カギカズラ（Ｕ．ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ  Ｍｉｑ．）、チョトウコウ（釣藤鈎）（Ｕ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｏｌｉｖ．）Ｈａｖｉｌ．）、キャッツ・クロウ（ウンガリア・トメントーサ）（Ｕ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ．）、Ｕ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ  Ｈｓｉａ  Ｋ．Ｃ．、Ｕ．ｈｉｒｓｕｔａ  Ｈａｖｉｌ．及びＵ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔａ  ｆ．ｓｅｔｉｌｏｂａ（Ｂｅｎｔｈ．）Ｒｉｄｓｄ．よりなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
上記ウンカリア属植物がアセンヤク（ガンビール）（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
更に、コガネバナ（スクテラリア・バイカレンシス）抽出物及び／又はチャノキ（カメリア・シネンシス）抽出物を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
上記抽出物が、水、アセトン又はＣ１−４アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
アセンヤク、コガネバナ、チャノキの重量比が、０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０である、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
コガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を含む、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物。
【請求項１０】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患である請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
上記抽出物が、水、アセトン又はＣ１−４アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
コガネバナ、チャノキの重量比が、０．１〜１０：０．１〜１０である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
上記炎症疾患が骨関節炎又は関節リウマチである、請求項３又は１１に記載の組成物。
【請求項１５】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための、ウンカリア属植物又はその抽出物の使用。
【請求項１６】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患である、請求項１６に記載の用途。
【請求項１８】
上記ウンカリア属植物が、アセンヤク、Ｕ．ａｔｔｅｎｕａｔａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｂｏｒｎｅｅｎｓｉｓ  Ｈａｖｉｌ．、Ｕ．ｃａｌｌｏｐｈｙｌｌａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｅｌｌｉｐｔｉｃａ  Ｒ．Ｂｒ．、キャッツ・クロウ（ウンガリア  ギアネンシス）（Ｕ．ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ（Ａｕｂｌ．）Ｇｍｅｌ．）、Ｕ．ｈｏｍｏｍａｌｌａ  Ｍｉｑ．、Ｕ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ｇｌａｂｒａｔａ（Ｂｌ．）Ｒｉｄｓｄ．、Ｕ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  Ｗａｌｌ．、カギカズラ（Ｕ．ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ  Ｍｉｑ．）、チョトウコウ（釣藤鈎）（Ｕ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｏｌｉｖ．）Ｈａｖｉｌ．）、キャッツ・クロウ（ウンガリア  トメントーサ）（Ｕ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ．）、Ｕ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ  ＨｓｉａＫ．Ｃ．、Ｕ．ｈｉｒｓｕｔａ  Ｈａｖｉｌ．及びＵ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔａｆ．ｓｅｔｉｌｏｂａ（Ｂｅｎｔｈ．）Ｒｉｄｓｄ．よりなる群から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
上記ウンカリア属植物がアセンヤクである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための、コガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を含む組成物の使用。
【請求項２１】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ回路に介在される生理学的及び病理学的異常症状が炎症疾患である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
上記抽出物が、水、アセトン又はＣ１−４アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２４】
コガネバナ、チャノキの重量比が、０．１〜１０：０．１〜１０である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２５】
前記炎症疾患が骨関節炎又は関節リウマチである、請求項１７又は２２に記載の使用。
【請求項２６】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための、ｉ）ウンカリア属植物又はその抽出物、及びｉｉ）コガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物を含む組成物の使用。
【請求項２７】
上記ウンカリア属植物がアセンヤクである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
アセンヤク、コガネバナ、チャノキの重量比は、０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２９】
ウンカリア属植物又はその抽出物を含む組成物の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含んでなる、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療する方法。
【請求項３０】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
上記ウンカリア属植物が、アセンヤク（ガンビール）（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）、Ｕ．ａｔｔｅｎｕａｔａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｂｏｒｎｅｅｎｓｉｓ  Ｈａｖｉｌ．、Ｕ．ｃａｌｌｏｐｈｙｌｌａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｅｌｌｉｐｔｉｃａ  Ｒ．Ｂｒ．、キャッツ・クロウ（ウンガリア  ギアネンシス）（Ｕ．ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ（Ａｕｂｌ．）Ｇｍｅｌ．）、Ｕ．ｈｏｍｏｍａｌｌａ  Ｍｉｑ．、Ｕ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ｇｌａｂｒａｔａ（Ｂｌ．）Ｒｉｄｓｄ．、Ｕ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  Ｗａｌｌ．、カギカズラ（Ｕ．ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ  Ｍｉｑ．）、チョトウコウ（釣藤鈎）（Ｕ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｏｌｉｖ．）Ｈａｖｉｌ．）、キャッツ・クロウ（ウンガリア  トメントーサ）（Ｕ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ．）、Ｕ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ  ＨｓｉａＫ．Ｃ．、Ｕ．ｈｉｒｓｕｔａ  Ｈａｖｉｌ．及びＵ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔａｆ．ｓｅｔｉｌｏｂａ（Ｂｅｎｔｈ．）Ｒｉｄｓｄ．よりなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
上記ウンカリア属植物が、アセンヤクである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
更に、上記組成物がコガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物を含む、請求項２９〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
上記抽出物が、水、アセトン又はＣ１−４アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
アセンヤク、コガネバナ、チャノキの重量比が、０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
コガネバナ及びチャノキ抽出物を含む組成物の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含んでなる、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療する方法。
【請求項３８】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状が炎症疾患である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
上記抽出物が、水、アセトン又はＣ１-４アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
コガネバナ、チャノキの重量比が、０．１〜１０：０．１〜１０である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
上記炎症疾患が骨関節炎又は関節リウマチである、請求項３１又は３９に記載の方法。
【請求項４３】
コガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物を０．１〜１０：０．１〜１０の重量比で含有する、ウンカリア属植物又はその抽出物を混合して、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療剤を製造する方法。
【請求項４４】
アセンヤク、コガネバナ及びチャノキを０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０の重量比で混合する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
コガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を０．１〜１０：０．１〜１０の重量比で混合して、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療剤を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウンカリア（Ｕｎｃａｒｉａ）属植物又はその抽出物、特にウンカリア属植物単独及び更にはコガネバナ（スクテラリア・バイカレンシス）抽出物及び／又はチャノキ（カメリア・シネンシス）抽出物を含む、シクロオキシゲナーゼ（以下、‘ＣＯＸ’）及び／又は５−リポキシゲナーゼ（以下、‘５−ＬＯ’）に介在される、生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
社会経済発展に伴う生活水準の向上と生活様式の変化及び平均寿命の増加が、人口の老齢化に伴う疾患態様にも多くの変化をもたらしており、慢性疾患による死亡の割合が伝染病によるものより高くなっている。慢性疾患が医療費の増加、医療水準上昇への要求、慢性疾患減少のための研究等の局面に於いて社会経済の大きな関心事になっている。最も代表的な慢性疾患としては、関節炎、認知機能の低下、皮膚炎、胃炎、高血圧、糖尿病、歯周炎などが挙げられる。
【０００３】
関節炎はヒトの日常活動を抑制する最も重大な原因であり、特に老人と女性に於ける発生頻度が高い。このような関節炎は大きく骨関節炎（変形性関節炎）と関節リュウマチ炎とに分けられる。
骨関節炎（変形性関節炎）は、体関節の退化がその原因であり、（尻、膝、首、腰、手、足の指関節などの）骨間の接合部の関節軟骨の磨耗又は損傷による痛みと炎症を伴う疾患をいう。一般的に、関節軟骨は破壊され、再生されるが、再生されるより破壊される軟骨の方が多くなれば、衝撃を吸収する関節軟骨の量が減少又は摩耗する。
さらに関節間の骨が互いに接触するようになり、激しい苦痛を伴う。このような関節軟骨の損傷が初期の骨関節炎であり、治療を受けない場合は、激しい苦痛をもたらす。
関節リュウマチ炎は、多くの関節に生じる多発性の炎症性自己免疫疾患である。関節炎の患者の場合、関節の滑膜組織が過形成されると同時に、マクロファージ細胞、樹状細胞及び活性化されたＴリンパ球とＢリンパ球が滑膜組織中へ移動し、多形核細胞は滑液内と軟骨の表面に蓄積され、炎症を誘発する。このような滑膜組織の炎症は、未だ解明されていないが、自己抗原に対するＴリンパ球の反応により誘発されるものと推定されている。この反応に於いて、大部分の組織中に浸潤されたＴリンパ球は細胞表面には活性化指標を示さず、サイトカインもまたほとんど発現しない。しかし、関節リュウマチ炎症状を持つ滑膜組織と滑液にはマクロファージ細胞由来のサイトカインが多量観察される。代表的なサイトカインには、滑膜繊維芽細胞の成長を促進すると知られるインターロイキン−１（ＩＬ−１）及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を含む。このような実験結果から、Ｔリンパ球が滑膜組織の炎症の誘発に非常に重要な役割を担っており、以後の炎症症状は活性化された滑膜細胞由来のサイトカインによって保持されるという説を立証している［Carson D.A. et al., J. Clin. Invest., 87, pp379-383, 1991: Tighe H. et al., J. Exp. Med., 177, pp10-118, 1993: Burmester G. R. et al., Arthritis Rheum, 40, pp5-18, 1997: Panayi G. S., Curr. Opin. Rheumatol., 9, pp236-240, 1997］。
【０００４】
鎮痛剤や消炎剤が、関節炎を含む痛みを軽減するために一般的に用いられており、代表的な薬剤は、ＣＯＸ阻害効果を有する非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）である［UK-1, R Braham, B Dawson, C Goodman, The effect of glucosamine  supplementation on people experiencing regular knee pain, Br. J. Sports. Med. 2003; 37: 45-49］。アスピリンのような非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）はベストセラーとなっている処方薬であり、抗炎症、解熱及び鎮痛効果があるため変形性関節炎、関節リウマチ、頭痛治療に用いられる。これらのＮＳＡＩＤｓを関節炎に用いる場合、症状の若干の改善は見られるものの、関節部位の軟骨損失や疾患の進行を止めることはない。これらは、胃腸障害のような深刻な副作用を有し、そのためＮＳＡＩＤｓを使用した患者の約半分が１年以内に服用を中止している。従って、新しい治療薬が必要とされている。ＣＯＸ−２を選択的に阻害する一つの薬剤、又はＣＯＸ−２及び５−ＬＯを同時に阻害する一つの治療剤が開発された。
【０００５】
炎症性反応は細胞膜からアラキドン酸の遊離及び代謝作用が多様な回路に於いて炎症初期代謝産物を生成する際に引き起こされる。炎症に対する２種の重要な回路であるＣＯＸ−２及び５−ＬＯは、アラキドン酸（AA)カスケードに於いて重要な役割をする酵素であり、これらの回路は、各々炎症性反応の開始と進行に重要な役割を果たすロイコトリエンとプロスタグランジンを生成する回路と並行して生じる。ＣＯＸは細胞膜のリン脂質がアラキドン酸に変換された後、アラキドン酸をプロスタグランジン（以下ＰＧｓ）に変換する過程に於ける触媒として作用する一つの酵素である。このように生成されたＰＧｓは、それらの種類による平滑筋収縮を刺激し、動物による血圧又は血液凝集を減少又は増加させる。加えて、それらは膜に於けるイオン輸送を促進し、炎症を刺激し、脂肪組織に於ける脂肪分解を阻止する役割を果たす。従って、これらの炎症性メディエイター生成を引き起こす酵素が、関節リウマチ炎、骨関節炎、皮膚炎、認知機能関連疾患及び癌又は変性疾患の発病の要因となる炎症の治療を照準とする多くの新薬の対象とされてきた。
【０００６】
２種のＣＯＸ、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２が既知である。ＣＯＸ−１は大部分の組織に於いて持続的に発現され、“ハウスキーピング（house keeping）の役割をする。即ち、胃粘膜に存在し、腎機能の保持のため血管を拡張するＰＧ（Prostaglandin）の生成及び血小板トロンボキサンの生成に関与する。
【０００７】
ＣＯＸ−２は大部分の正常組織に於いては発現せずに、疾患や生理的条件下であらかじめ発現した成長因子によって誘発される。特に炎症初期を引き起こすサイトカインによって広範囲に誘発されると知られている。
【０００８】
現在まで炎症治療に使用されているＮＳＡＩＤｓは、正常組織から持続的に発現されるＣＯＸ−１さえも阻害し、胃粘膜の腐食、潰瘍などの副作用を引き起こす。最近、これを改善した新しい薬剤としてＣＯＸ−２選択的阻害剤が開発された。セレコキシブ（CeleCOXib）は、抗炎症剤及び抗癌剤として現在臨床的に使用されている代表的なＣＯＸ−２選択的阻害剤の一つである。骨関節炎及び関節リウマチ炎の治療、及び家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）を有する患者の結腸に存在するポリーブ数の低減に効果的である。
【０００９】
炎症反応に於けるアラキドン酸の化学伝達物質への代謝過程に関与する別の酵素は、リポキシゲナーゼである。リポキシゲナーゼは５−、１２−及び１５−リポキシゲナーゼの３種が存在し、その内５−リポキシゲナーゼは、アラキドン酸から５−ＨＰＥＴＥを経由してロイコトリエンＡ４、Ｂ４、Ｃ４、Ｄ４、Ｅ４（ＬＴＡ４、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４)などを合成する過程に関与する。サムエルソンらは、これらのロイコトリエン中でＬＴＢ４は、炎症反応第２期に働く白血球の一つであり、主に多形核好中性白血球（ＰＭＮＬ）で生合成され、白血球凝集、浸潤、走化性及びライソゾーム酵素の遊離などの機能を示すとして知られていると、開示している。また、多くの学者が、５−LOの活性に関与する因子に関する研究と、その活性を阻害する薬剤の開発を行ってきたが、有意な結果は得られておらず、ＥＴＹＡ及びＢＷ７５５Ｃのみが薬剤として開発されている。［Kyung-rak MIN et al., Activation of 5-lipoxygenase and leukotriene Ｂ４ biosynthesis inhibiting  material,Pharmacology, Vol.33(6),319-323(1989)］
【００１０】
ＣＯＸ阻害剤の反応メカニズムは従来の大部分のＮＳＡＩＤｓのそれと一致するため、炎症が重大に作用している一時的異常症状及び慢性疾患に於ける炎症に起因する痛み及び浮腫のような多くの症状の治療に、ＣＯＸ阻害剤が使用される。一時的異常症状とは、軽い擦り傷、日焼け、感染症皮膚炎、頭痛、生理通などを意味する。慢性疾患とは、認知機能低下、関節リウマチ、骨関節炎などを意味する。
【００１１】
ＣＯＸ阻害剤は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）のみならず、皮膚硬化症のような皮膚異常にも使用される。［Goebel et al., Chem. Res. Tox., 12: 488-500, 1999., Patrono et al., J. Clin. Invest., 76: 1011-1018, 1985.］加えて、ＣＯＸ阻害剤は、乾癬のようなリウマチ性ではない炎症性の皮膚異常の緩和のためにも使用されるが、ここではプロスタグランジンの過剰生産による炎症を減少させることによって、直接的な効果を示すものである［Fogh et al., Acta Derm Venerologica, 73: 191-193, 1993.］。
【００１２】
ＣＯＸ阻害剤は、抗炎症性薬剤としての用途に加え、癌の治療という潜在的役割を有する。ＣＯＸの過剰発現は多くのヒト悪性腫瘍で観察されており、ＣＯＸ阻害剤が皮膚癌、乳癌及び膀胱癌を患う動物の治療に効果的であることを示す。この反応メカニズムは完全には解明されていないが、ＣＯＸの過剰発現が細胞死を阻害し、発癌性細胞タイプの侵入を増大させていること示している。［Dempke et al., J. Can. Res. Clin. Oncol., 127: 411-417, 2001., Moore and Simmons, Current Med. Chem., 7: 1131-44, 2000.］
【００１３】
加えて、最近の科学的進歩により、ＣＯＸの発現、一般的な炎症とアルツハイマー病の病原との相互関係が立証された［Ho et al., Arch. Neurol., 58: 487-92, 2001.］。動物モデルに於いて、ＣＯＸ酵素を過剰発現する形質転換されたマウスが、損傷されやすいニューロンをさらにたくさん持つ。ＮＩＡ（National Institute on Aging）は、ＮＳＡＩＤがアルツハイマー病の進行を遅らせることができるか否かを立証するための臨床試験に着手しており、炎症反応に於いて、発現するＣＯＸの阻害が、認知機能改善を助長すると、多数報告されている［Cernak I., Exp Brain Res., 147(2): 193-9, 2002., Casolini P., J Neurosci Res., 68(3): 337-43, 2002., Andreasson KI., J Neurosci., 21(20): 8198-209, 2001］。加えて、ＣＯＸ阻害剤が精神異常に於いて効果的であると立証されている[Muller N., Expert Opin Investig Drugs, 13(8): 1033-44、2004.］。
【００１４】
また、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯの両方を抑制する阻害剤はマウスモデルの老化した心臓に於いて動脈血管収縮を阻害するという報告もある［Gok et al., Pharmacology, 60: 4146, 2000］
【００１５】
アセンヤク（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）はアカネ科に属する植物である。東インドに広く自生しており、マレーシア、中国、インド、スマトラ、ブルネイでは栽培されている。白い花が葉の脇下に咲く。花が落ちると、花柄がフックのように曲がり、別の植物を巻く。アセンヤクの種をまいて１年後、葉柄の端部を切断し、抽出すると、いわゆる、水抽出物が、４−８ヶ月毎に得られる。この水抽出物は樹齢６年の木から最も多く得られる。樹齢約15年ほどに成長すると、根の分離のために土壌を掘り起こさなければならない。この水抽出物はｄ−及びｄｌ−カテキン（カテコール）、タンニン酸、クエルセチン、及びアルカロイドガンビリン（alkaloid gambirin）を含有する。
【００１６】
アセンヤク抽出物は薬用に用いられ、また、主として茶色の染料や革なめしにも用いられる。特に、東南アジアの一部の民族はアセンヤクを水と混ぜ、ビンロウジ（檳榔子）に塗って食べる。アストリンゼンとしての水抽出物は仁丹のように噛む薬剤を作るのに広く使われる。東医治療の記録によれば、水性抽出物は、アストリンゼンや血液凝固剤であり、創傷、口中のタダレ、血便、血尿、吐血、崩漏帯下、その他の皮膚疾患に使用された［韓国食品薬品安全庁］。また、東医宝鑑には、アセンヤクを回生保命丹、楊梅瘡、天疱瘡、頑瘡と軽粉毒のように腱と骨の腫れからの痛みを治療するのに使用されたと記録されている。
【００１７】
黄岑（オウゴン）はシソ科に属する多年生草本のコガネバナの根を意味する。この植物は多年生であり、２年後の７月〜９月に開花する。茎は真っ直ぐに、且つ太く成長するが、肥沃土では斜めに成長する、又は横にさえなる。茎の高さは４０〜６０ｃｍ以内であり、葉は対称的であり、葉柄はなく、避雷針の形態である。花は総状花であり、枝の先端に集まって開花し、花は唇形花冠で、開口している。根は植え付け後、３〜４年目の秋又は春に収集し、周皮を除去し、陽乾して薬用として使用してきた。又根の色は黄色である。一般に、この薬草の木部と柔組織は嵩張り、ほとんど髄は空洞状態であるため、俗に髄の朽ちた草と呼ばれている。しかし、日本では、髄が詰まった新鮮な根は子ゴンと呼ばれ、髄が空洞のものは宿ゴン、粉砕されたものは片ゴンなどと呼ばれている。韓国では、それらはまた枯ゴン、元ゴン、経ゴン、空腸などと呼ばれている。
【００１８】
中国の薬効植物のコガネバナは、バイカレイン（baicalein）、バイカリン（baicalin）、オウゴニン（wogonin）及びバイカレノサイド（baicalenoside）を含むフリー−Ｂ−リングフラボノイドを多量含有している。伝統的に、コガネバナは、解熱、発熱除去、保湿、保温、熱中症、多渇症、癰、猩紅熱、赤痢、吐血及び鼻血を含む異常症状の治療に使用されてきた。さらに、流産を予防するためにも使われた。黄岑（オウゴン）は、現在、小児細菌性下痢、高血圧、気管支喘息及び上部呼吸器系感染症を含む異常症状の治療に臨床的に使用されている。気管支喘息の治療のための黄岑（オウゴン）の根の薬効が、フリー−Ｂ−リングフラボノイドの存在及び好酸球浸潤に関連するエオタキシン(eotaxin）の阻害と関係があることを示す報告がある［Nakajima et al. (2001) Planta Med. 67(2): 132-135］。
【００１９】
チャノキは種々の有用成分を含む健康食品として最近注目を集めている。その成分中で、カテキン化合物は比較的高い抗酸化効果を有し、数多くの研究が進められている。チャノキ中のカテキン化合物は、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン（ＥＣ）、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、エピカテキンガレート（ＥＣＧ）などを含む。優れた抗酸化効果に加え、カテキン化合物は抗癌効果、免疫機能強化、皮膚癌予防、抗血栓効果、心臓病予防、コレステロール予防などの効果を有する。従って、チャノキ中のカテキン化合物に関する研究が飲料及び製薬分野に於いて継続的に行われている。このような研究は、中国に於いて最も積極的に行われており、チャノキに関する数多くの製品が現在商品化されている。Simingshan natural biological product社、China tianbao biochemical plant社などが、チャノキ抽出物製品の販売及び研究を行っている先行企業である。日本に於いては、カテキン化合物に関する研究の結果として、大同薬品工業株式会社の‘β−カテキン’と、三井農林株式会社の’カテキン化合物粉末'が商業化され、より高い収率及び経済的工程開発のための継続的研究及び投資が行われている。
【００２０】
チャノキのさらに別の有効成分であるポリフェノールフラボンは、ＣＯＸ−２、ＮＦκＢ（Nuclear Factor kappa B）、ｂｃｌ−Ｘ（Ｌ）遺伝子に対する一定量のｍＲＮＡによって癌化された大腸癌の成長を抑制する。フリー−Ｂ−リングフラボンとフリー−Ｂ−リングフラボノールは、下記に示す基本構造式に見られるように、芳香族化合物の中でＢ−リング構造に置換基を有しない特異種のフラボノイド化合物である［韓国公開特許公開１０−２００４−００２５８８４］。
【００２１】
【化１】
2008511617.tif 000002
【００２２】
そこには、アセンヤクを含むウンカリア属植物が抗炎症性薬剤として使用できるという報告はない。特に、アセンヤクとコガネバナ及び／又はチャノキの化合物が抗炎症性薬剤として、特に、骨関節炎又は関節リウマチを含む、ＣＯＸ回路及び／又は５−ＬＯ回路に介在される疾患及び異常症状の予防又は治療のために使用できるということは知られていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明者らは、欧米先進国での開発戦略と区別可能な、新しいＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害剤を開発すべく、天然物の研究を継続してきた。その結果、アセンヤクを含むウンカリア属植物がＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害効果を有することを見出した。また、上記抽出物と相乗效果を示す別の生薬を見出すために、インビボでの実験（ＣＯＸ−１及び２、５−ＬＯ）とインビボでの実験（浮腫、コラゲナーゼ誘発関節炎（CIA）モデル）を用いた数多くの実験及び関節保護効果の確認のためＧＡＧ分析を実施した。その結果、コガネバナ及び／又はチャノキ抽出物を配合した混合物が、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害活性に於いて、更に顕著に改善された相乗効果を示すことを見出し、コルビー式［COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967］を用いてその相乗効果の測定を行い、本発明の完成に至った。
【００２４】
従って、本発明の目的は、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害効果を示す新しい植物抽出物を含む、即ち、ウンカリア属植物、又は更にコガネバナ及び／又はチャノキ抽出物を含むＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療のための組成物を提供することである。
【００２５】
本発明の他の目的は、コガネバナ及びチャノキ抽出物を含む、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される、生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物を提供することである。
【００２６】
本発明の他の目的は、上記組成物のＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療のための使用を提供することである。
【００２７】
本発明の他の目的は、治療有効量の上記組成物を哺乳動物に投与してＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療する方法を提供することである。
【００２８】
本発明の他の目的は、ウンカリア属植物にコガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物を混合する、又はコガネバナ抽出物にチャノキ抽出物を混合することによって、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療剤を製造する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
上記目的を達成するために、本発明はウンカリア属植物又はその抽出物を含むＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物を提供する。
【００３０】
また、本発明は上記ウンカリア属植物に更にコガネバナ及び／又はチャノキ抽出物を含むＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物を提供する。
【００３１】
さらに、本発明はコガネバナ及びチャノキ抽出物を含むＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物を提供する。
【００３２】
さらにまた、本発明はＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するためのウンカリア属植物又はその抽出物；コガネバナ及びチャノキ抽出物を含む組成物；及びウンカリア属植物又はその抽出物及びコガネバナ及び／又はチャノキ抽出物を含む組成物の使用を提供する。
【００３３】
また、本発明はウンカリア属植物又はその抽出物を含む組成物；及びコガネバナ及びチャノキ抽出物を含む組成物の治療有効量を哺乳動物に投与することを含むＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療する方法を提供する。
【００３４】
また、本発明はウンカリア属植物又はその抽出物に対して、コガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物を０．１〜１０：０．１〜１０の重量比で混合する、又はコガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を０．１〜１０：０.１〜１０の重量比で混合することにより、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療の薬剤を製造する方法を提供する。
【００３５】
上記ウンカリア属植物は、好ましくは、アセンヤク、Ｕ．ａｔｔｅｎｕａｔａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｂｏｒｎｅｅｎｓｉｓ  Ｈａｖｉｌ．、Ｕ．ｃａｌｌｏｐｈｙｌｌａ  Ｋｏｒｔｈ．、Ｕ．ｅｌｌｉｐｔｉｃａ  Ｒ．Ｂｒ．、キャッツ・クロウ（ウンガリア  ギアネンシス）（Ｕ．ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ（Ａｕｂｌ．）Ｇｍｅｌ．）、Ｕ．ｈｏｍｏｍａｌｌａ  Ｍｉｑ．、Ｕ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ｇｌａｂｒａｔａ（Ｂｌ．）Ｒｉｄｓｄ．、Ｕ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  Ｗａｌｌ．、カギカズラ（Ｕ．ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ  Ｍｉｑ．）、チョトウコウ（釣藤鈎）（Ｕ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｏｌｉｖ．）Ｈａｖｉｌ．）、キャッツ・クロウ（ウンガリア  トメントーサ）（Ｕ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ．）、Ｕ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ  ＨｓｉａＫ．Ｃ．、Ｕ．ｈｉｒｓｕｔａ  Ｈａｖｉｌ．及びＵ．ｌａｎｏｓａ  ｖａｒ．ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔａｆ．ｓｅｔｉｌｏｂａ（Ｂｅｎｔｈ．）Ｒｉｄｓｄ．よりなる群から一つ又はそれ以上選択され、特に好ましくはアセンヤクを使用する。
【００３６】
本発明の組成物に於いて、ウンカリア属植物及びコガネバナ及びチャノキは商業的に購入可能な従来の薬草類を使用することができ、これらの薬草の全草、枝、外皮、葉、芽、根、内皮などを使用することができ、好ましくは粉末状、又は抽出物を使用する。
本発明のウンカリア属植物、コガネバナ及びチャノキ抽出物は水、有機溶媒、又はこれらの混合溶媒と共に抽出して使用できる。上記有機溶媒としては、従来の全ての溶媒が使用でき、好ましくは水、Ｃ１−４アルコールなどの極性溶媒、又はｎ−ヘキサン、ジクロロメタンなどの非極性溶媒、又はこれらの混合溶媒が用いられる。
【００３７】
本発明の非極性溶媒抽出物は、ｎ−ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム又はエチルアセテート、好ましくはｎ−ヘキサン、ジクロロメタン、エチルアセテートからなる群より選択される非極性溶媒で抽出した抽出物を含む。さらに、本発明の極性溶媒抽出物はアセトン、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのＣ１−４アルコール、又はイソプロピルアルコールから選択される極性溶媒から抽出した抽出物を含む。
【００３８】
上記抽出は、熱湯抽出、超音波処理など従来の方法で行うことができ、この抽出物の凍結乾燥物は本発明の組成物に用いることができる。
【００３９】
また、上記抽出物は従来の分留法又はクロマトグラフィーにより、さらに精製でき、このような分留物又は精製物もまた本発明の範囲内に属するものである。
【００４０】
本発明の組成物は、優れたＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害効果を示し、天然生薬を使用することによって、なんら副作用なしに、特に骨関節炎又は関節リウマチを含む様々なＣＯＸ回路及び／又は５−ＬＯ回路に介在される疾患及び異常症状の予防又は治療に用いることができる。
【００４１】
本明細書に於いて、ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ回路に介在される生理学的及び病理学的異常症状とは、例えば、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、歯周炎、黒色腫及び癌腫からなる群より選択される疾患及び異常症状を含む。
【００４２】
本発明の組成物に於いて、ウンカリア属植物、特にアセンヤクは単独で使用することができるが、ウンカリア属植物又はその抽出物を更にコガネバナ抽出物、チャノキ抽出物、又はコガネバナ及びチャノキ抽出物と混合した複合組成物を使用することが、相乗効果を示すために好ましい。
【００４３】
特に、下記実験例に示されるように、コガネバナ抽出物単独ではＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害効果は示していなかった。しかし、驚くべきことに、ウンカリア属植物、特にアセンヤク抽出物をコガネバナ及び／又はチャノキ抽出物と組み合わせて投与した場合、そしてコガネバナ及びチャノキ抽出物の混合物を投与した場合、相乗効果が観察された。
【００４４】
本発明の組成物に於いて、混合物の投与時の抽出物単独投与時と比較しての相乗効果は、コルビー式［COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967］を用いて測定及び確認した。
【００４５】
上記に示すように、ウンカリア属植物、特にアセンヤクは、コガネバナ及び／又はチャノキ抽出物を組み合わせて使用する場合、アセンヤク、コガネバナ、チャノキは０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０、好ましくは１〜１０：１〜１０：１〜１０、さらに好ましくは、１〜７：１〜７：１〜７の重量比で混合することができる。またコガネバナ及びチャノキを配合する場合、０．１〜１０：０．１〜１０、好ましくは１〜１０：１〜１０、より好ましくは、１〜７：１〜７の重量比で混合することができる。
【００４６】
本発明の組成物は、薬学分野の公知の方法により製剤化でき、例えば、薬剤学的に許容可能な担体、賦形剤などと混合して、ドリンク剤のような液剤、シロップ剤、カプセル剤、粒剤、錠剤、粉末剤、丸薬、軟膏及び乳剤、ジェルなどの皮膚用外用剤等の通常の医薬製剤に製剤化でき、さらに経口又は非経口で投与できる。本発明の組成物は迅速な効果を得るため、カプセル剤、錠剤及びドリンク剤として食前及び／又は食後に経口投与することが好ましい。
【００４７】
本発明の組成物を含むカプセル剤、錠剤、粉末剤、粒剤、液剤、丸薬などは好ましくは医薬品又はヘルスケア製品として用いられる。本明細書で用いられる“ヘルスケア製品”とは、人体に対して有用な作用を及ぼす原料や成分を使用して錠剤、カプセル剤、粉末剤、粒剤、液剤、丸薬などの形状に製造加工した食品を意味するものである。
【００４８】
本発明の組成物は、体内に於ける有効成分の吸収度、排泄速度、患者の年齢、体重、性別及び状態、治療する疾患の重症程度などによって適宜投与される。しかし、一般に、液剤として、成人に1日１〜３回、それぞれ０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ投与することが好ましい。その他の製剤に於いても、上記液剤の投与量を考慮した適正量を経口投与することができる。
【００４９】
以下、本発明を下記の実施例によってより具体的に説明するが、それにより本発明の範囲を何ら制限するものではない。
【実施例】
【００５０】
１．アセンヤク、コガネバナ及びチャノキ抽出物の調製
実施例１:アセンヤク熱湯抽出物の調製
アセンヤクの若葉（５０ｇ）を蒸気で蒸した。そして、精製水を加えて抽出して葉汁を絞り、回収した汁液をゆっくり冷却し再結晶して、アセンヤク抽出粉末  ７．８７ｇ（収率：１５．７４％）を得た。
【００５１】
実施例２：アセンヤクエタノール抽出物の調製
アセンヤクの若葉(５０g）をエタノールを加えて抽出し、葉汁を絞り、回収された汁液をゆっくり冷却させ再結晶させて、アセンヤク抽出粉末  ７．６５ｇ（収率：１５．３％）を得た。
【００５２】
実施例３：コガネバナ抽出物の調製
コガネバナ（５０ｇ）を１Ｌ丸底フラスコに入れ、精製水（３５０ｍｌ）を加え、８０℃で２時間、還流抽出した。抽出物を冷却、濾過及び濃縮して、コガネバナ抽出粉末  １６．５ｇ（収率：３２．９５％）を得た。
【００５３】
実施例４：チャノキ抽出物の調製
チャノキ（５０ｇ）を１Ｌ丸底フラスコに入れ、水溶性エタノール（５００ｍｌ）を加えて、８５℃で、３時間、還流して抽出した。抽出物を冷却、濾過及び濃縮して、チャノキ抽出粉末  １３．５ｇ（収率：２７％）を得た。
【００５４】
実施例９：他のウンカリア属植物の抽出
釣藤鈎５０gを１Ｌ丸底フラスコに入れ、精製水（５００ｍｌ）を加えて、５時間、還流して抽出した。抽出物を冷却、濾過及び濃縮して、釣藤鈎抽出粉末７ｇ（収率：１４％）を得た。
【００５５】
２）混合物の調製
実施例５：アセンヤク及びコガネバナ混合物の調製
アセンヤクとコガネバナの混合物は下記のように調製した。
【００５６】
【表１】
2008511617.tif 000003
【００５７】
実施例６：アセンヤク及びチャノキ混合物の調製
アセンヤクとチャノキの混合物は下記のように調製した。
【００５８】
【表２】
2008511617.tif 000004
【００５９】
実施例７：アセンヤク、コガネバナ及びチャノキ混合物の調製
アセンヤク、コガネバナ及びチャノキ混合物を下記のように調製した。
【００６０】
【表３】
2008511617.tif 000005
【００６１】
実施例８：コガネバナ及びチャノキ混合物の調製
コガネバナ及びチャノキ混合物を下記のように調製した。
【００６２】
【表４】
2008511617.tif 000006
【００６３】
実験例
１）ＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害活性試験
（１）ＣＯＸ阻害活性試験
１、試験材料：
−材料：ＣＯＸ分析キット（Ｃａｙｍａｎ、 Ｃａｔ＃７６０１１１）、インドメタシン（Ｃａｙｍａｎ、 Ｃａｔ＃７０２７０）、ＡＡ−８６１（Ｂｉｏｍｏｌ、 Ｃａｔ＃ＥＩ−２１６）、Ｈ２Ｏ２（Ａｌｄｒｉｃｈ、 Ｃａｔ＃２１６７６３）
−試料：実施例１〜実施例８
−濃度：１０、５０、５００、１０００μｇ／ｍＬ
【００６４】
２、試験方法：バックグラウンドウェルに分析バッファー（１６０μｌ）及びヘム（１０μｌ）を入れた。１００％初期活性ウェルに、分析バッファー（１５０μｌ）、ヘム（１０μｌ）及び酵素（ＣＯＸ−1又はＣＯＸ−２、１０μｌ）を入れた。阻害ウェルに、分析バッファー（１５０μｌ）、ヘム（１０μｌ）及び酵素（ＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２、１０μｌ）を入れた。阻害ウェルにＤＭＳＯに溶かした試料（１０μｌ）を入れた。１００％初期活性ウェルとバックグラウンドウェルに、上記試料の代わりに、試料を溶かした溶媒（ＤＭＳＯ１０μｌ）を入れた。ゆっくり振った後、２５℃、５分間、反応させた。全ウェルに２０μｌの発色基質を入れた。さらに、全ウェルに２０μｌのアラキドン酸を入れた（Ｆｉｎａｌ Ｃｏｎｃ．１００μＭ）。ゆっくり振った後、２５℃、５分間、反応させた。反応を終了させ、５９０ｎｍ（５９０〜６１１ｎｍ）で吸光度を測定し、対照群に対する試験群の相対的活性を下記計算式により％で算出した。
−計算式：
阻害率％＝(１００％−阻害率)／（１００％−blank）×１００
【００６５】
３、試験結果：単一抽出物及び混合物のＣＯＸ−１，２に対する５０％阻害活性（単位：μｇ／ｍｌ）
【００６６】
【表５】
2008511617.tif 000007
【００６７】
４、結論：実施例１＝実施例２≫実施例３という試験結果から、単一抽出物中、アセンヤク抽出物が優れたＣＯＸ阻害活性を示した。さらに、上記単一抽出物を適宜比混合した混合組成物は、実施例６＞実施例７＞実施例８＞実施例５の順にＣＯＸ阻害活性を示した。
【００６８】
上記試験から分かるように、アセンヤク粗抽出物（実施例１及び２）は、優れたＣＯＸ阻害活性を示したが、コガネバナ抽出物の５−ＬＯ阻害活性は有意的ではなかった。しかし、驚くべきことに、上記抽出物の混合物が相乗された阻害活性を示した。
【００６９】
（２）５−ＬＯ（ＬＴＢ４生成阻害）
１、試験材料：
ＲＰＭＩ１６４０培地：ｓｉｇｍａ  Ｃｅｔ＃Ｒ８７５８
Ｔ７５フラスコ：Ｃｏｒｎｉｎｇ（４３０６４１）
抗生物質：Ｇｉｂｃｏ（１５２４０−０６２）
ＦＢＳ：ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ（１４−４７１ＱＭ）
マイクロチューブ：ｓａｒｓｔｅｄｔ（７２．６９０）
ＰＢＳ：ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ（１７−５１２Ｆ）
遠心分離機：Ｈａｎｉｌ（ｍｉｃｒｏ−１２）
−試料：実施例１〜実施例８
−濃度：０．０２５、０．０５、１、２０μｇ／ｍｌ（実施例１〜３）０．００５、０．０５、０．５、５μｇ／ｍｌ（実施例４〜７）
【００７０】
２、試験方法：ＨＴ−２９細胞株（韓国細胞株銀行）は、Ｔ７５フラスコ内でＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＢＳ）２０ｍｌ、５％ＣＯ２及び3７℃の条件で培養し、一週間に２−３回継代培養した。ＨＴ−２９セルを６−ウェルプレート中に１．５−２．０×１０５／ウェル／２ｍｌで分注後、５％ＣＯ２及び３７℃の条件で約６０−７０％融合するまで培養した。培地除去後、ＰＢＳ（ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ、１７−５１２Ｆ）で細胞株を２−３回洗浄し、新培地（５％ＦＢＳ、ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ、１４−４７１ＱＭ）２ｍｌを加えた。試料の最終濃度が０、０．００５、０．０５、０．５、５（μｇ／ｍｌ）になるよう処理した。さらに、ＬＰＳを最終濃度  １μｇ／ｍｌになるよう処理した。未処理のＮ−Ｃｏｎｔｒｏｌは、上記試料の代わりに、上記試料を溶かした溶媒（０．１％以下のＤＭＳＯ）で処理した。Ｐ−ＣｏｎｔｒｏｌはＬＰＳ単独処理した。全試料を、５％ＣＯ２  及び３７℃の条件で24時間反応させた。反応終了後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、へらでこすり取り、マイクロチューブに入れ、１０，０００ｒｐｍ以上、５分間、遠心分離して回収した。上清除去後、ペレットだけが残ったチューブに溶解用バッファーを加え、５分間氷で処理し、細胞を破壊させた。１０，０００ｒｐｍ以上、５分間、遠心分離した後、細胞破片は残し、上清のみを新しいチューブに回収した。この試料をＬＴＢ４  ＥＬＩＳＡ分析まで−７０℃で保管した。
【００７１】
細胞溶解物はキットに於いてＥＩＡバッファーで１／２０希釈した。ＬＴＢ４スタンダードを、０、０．０４、０．１、０．２、０．４、１．０、２．０、４．０（ｎｇ／ｍｌ）に準備した。ロイコトリエンＣ４酵素標識抗原はＥＩＡバッファーで１／５０に希釈して準備した。抗体被覆９６ウェルプレートに、スタンダード又は試料５０μｌ及び、希釈した酵素標識抗原５０ｕｌを入れた。ゆっくり振った後、覆いをして室温で１時間反応させた。
【００７２】
反応終了後、３００μｌの洗浄バッファーで３回プレートを洗浄した。プレートに培養基１５０μｌを入れ、ゆっくり振りながら、３０分間反応させた。６５０ｎｍで吸光度を測定し、対照群に対する試験群の相対的活性を下記計算式により％で算出した。各値はブラッドフォードタンパク質定量で規格化した。
−計算式：
阻害率％＝［（ＮＣ−ＰＣ）−（ＮＣ−Ｓ）／（ＮＣ−ＰＣ）］×１００
【００７３】
３、試験結果：単一抽出物及び混合物の５−ＬＯに対する５０％阻害活性（単位：μｇ／ｍｌ）
【００７４】
【表６】
2008511617.tif 000008
【００７５】
４、結論：単一抽出物の５−ＬＯ阻害活性は、実施例１＝実施例２≫実施例３の順である。さらに、前記単一抽出物を適切な比率で混合した混合物の５−ＬＯ阻害活性は、実施例６＞実施例７≧実施例８＞実施例５の順である。上記ＣＯＸ−１、２に関する試験と同様に、本試験に於いても、アセンヤク粗抽出物は優れた５−ＬＯ阻害活性を示したが、コガネバナ抽出物の５−ＬＯ阻害活性は有意的ではなかった。しかし、驚くべきことに、上記抽出物の混合物は相乗された５−ＬＯ阻害活性を示した。
【００７６】
（３）耳浮腫阻害試験(浮腫阻害試験)
１、試験材料：
−試験動物：ＩＣＲマウス（大韓バイオリンク)
−炎症誘導：アラキドン酸（２ｍｇ／２０μｌ）
−試料：実施例１〜実施例８
−陽性対照群：インドメタシン（２５、５０ｍｇ／ｋｇ）
−濃度：５０、７５、１００ｍｇ／ｋｇ
【００７７】
２、試験方法：試験動物（ＩＣＲマウス（大韓バイオリンク））に試験物質を浮腫誘導２４時間及び１時間前に投与した。続いて、試験動物の右耳に、濃度２ｍｇ／２０μｌのアラキドン酸を投与し、左耳に、対照溶媒としてアセトンを投与し、溶媒比較のため、カリパスで耳の厚さを測定した。価値にと倉名対照物質としてＮＳＡＩＤｓの代表的抗炎症及び消炎鎮痛剤であるインドメタシンを、アラキドン酸投与２４時間及び１時間前に、経口投与した。アラキドン酸及びアセトンを投与した試験動物の耳の厚さを１、２、３時間毎に測定した。
【００７８】
３、試験結果：実施例１、２の抗炎症活性を図１に示した。実施例５及び実施例１、３の抗炎症活性を図３に示した。実施例６及び実施例１、４の抗炎症活性を図４に示した。実施例７及び実施例１、３、４の抗炎症活性を図５に示した。実施例８及び実施例１、４の抗炎症活性を図６に示した（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。
【００７９】
上記図１〜６から分かるように、アセンヤク単一抽出物及びこれらの混合物で抗炎症効能を確認することができた。特に、実施例１が実施例３より強い抗炎症効果を示し、これらの混合物である実施例５（１００ｍｇ／ｋｇ）で単一抽出物の混合による相乗效果を示した。また実施例１、３の混合物である実施例５は濃度依存的に抗炎症活性が増加する傾向を示した。
【００８０】
上記のように、実施例１と実施例３若しくは実施例４を組み合わせて、又は実施例３、４をを組み合わせて実施した場合、実施例１のみの場合に比べて組成物（実施例５〜８）の耳浮腫阻害効果が向上した。
【００８１】
（４）ＣＩＡモデルによる抗炎症活性の確認
１、試験材料：
−試験動物：ＤＢＡ／１マウス(（株）オリエンタル)
−陽性対照群：インドメタシン（５０ｍｇ／ｋｇ）
−対照物質：グルコサミン（２５０ｍｇ／ｋｇ）
−試料：実施例５
−濃度：１００、２００ｍｇ／ｋｇ
【００８２】
２、試験方法：８週齢ＤＢＡ／１マウス（（株）オリエンタル）を使用して関節炎を誘発させた。マウスを免疫化するため、ＣＦＡ（Complete Freund's Adjuvant）と懸濁させたコラーゲン１００μｇをマウスの尾に投与した。２１日目から、各群５匹ずつ５群に分け、準備しておいた抽出物を５６日目まで投与した。週１回、マウスの体重と浮腫を引き起こした足の厚さ及びポイント（０：正常、１：弱い赤色、２：足の指に浮腫、３：全体的に激しい浮腫、４:足の指全体と関節に最も激しい浮腫）を測定した。５６日目に、採血、解剖を行い、浮腫を引き起こした足を、固定及び脱石灰化過程の後、Ｈ＆Ｅ（Hematozyline & Eosin）により染色して、顕微鏡を通して関節組織を観察した。
【００８３】
３、試験結果：コラーゲン投与後の、経時に伴うマウスの足の浮腫の変化及び経時に伴う関節炎指数の変化を、各々図７及び図８に示した（＊Ｐ＜０．０５）。また実施例５投与後の、ＣＩＡマウスの関節の軟骨組織を図９に示した。
【００８４】
上記図７〜図９からわかるように、実施例５を投与した群は対照群と比較して約２０％の効能があった。軟骨組織の破壊及び免疫細胞の浸潤が、対照群及びグルコサミンを投与した群と比較して顕著に減少していることが観察された。
【００８５】
２）関節保護試験
（１）ＧＡＧ分析
１、試験材料：
−材料：６-ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３５１６）、ダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）、加熱不活性化されたウシ胎仔血清（FBS)、ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、ＩＬ−１  ａｌｐｈａ（Ｒ＆Ｄ２００ＬＡ−００２）及びＢｌｙｓｃａｎグリコサミノグリカン分析キット（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ  Ｂ１０００）
−試料：実施例１〜８
−対照物質：グルコサミン
−濃度：５、５０、５００μｇ／ｍＬ
−試験動物：京畿道烏山市(Ｓａｍｔａｋｏ)より提供のニュージーランド白ウサギ（２．０ｋｇ、９週齢）を利用した。
【００８６】
２、試験方法
−軟骨移植片培養
９週齢ラビットから膝関節軟骨を採取した。次に採取した軟骨をＤＭＥＭ（５％ＦＢＳ、ペニシリン  １００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン  100μｇ／ｍｌ）に入れ、３７℃、24時間、ＣＯ２培養基で安定化させた。試料を処理する前に、全ての軟骨を一定のサイズにスライスして、２４のウェルに入れた。準備した試料とＩＬ−１ａｌｐｈａ（５ｎｇ／ｍｌ）を処理した。処理試料を３７℃、６０時間、５％ＣＯ２培養基で反応させた後、上清を回収し、次の試験まで−２０℃に保管した。
−ＧＡＧ分析：上清のＧＡＧ分泌程度を測定するため、Ｂｌｙｓｃａｎ分析キットを使用した。６５６ｎｍで吸光度を測定し、対照群に対する試験群の相対活性を下記計算式により％で算出した。
−計算式：
計算式＝［（ＰＣ−試料）−（ＰＣ−ＮＣ）］×１００
ＮＣ：陰性対照群、ＰＣ：陽性対照群、Ｓ：試料
【００８７】
３、試験結果：
実施例１〜４及び実施例５〜８の関節保護効果を、各々図１０及び図１１に示した。
【００８８】
４、結論：実施例１〜４及び５〜８は、特に、濃度≦５０μｇ／ｍＬで、関節保護効能を示した。
【００８９】
製剤例１：液剤の調製
実施例６の抽出物                ２０ｇ
砂糖                            １０ｇ
異性化糖                        １０ｇ
レモン香                          適量
精製水を加えた後の総量      １００ｍｌ
上記の成分を通常の液剤の調製方法によって混合し滅菌し、液剤を製造した。
【００９０】
製剤例２：液剤の調製
実施例１の抽出物                ３０ｇ
砂糖                            １０ｇ
異性化糖                        １０ｇ
レモン香                          適量
精製水を加えた後の総量      １００ｍｌ
上記の成分を通常の液剤の調製方法によって混合し滅菌し、液剤を製造した。
【００９１】
製剤例３：カプセル剤の調製
実施例７の抽出物            ５００ｍｇ
ラクトース                    ５０ｍｇ
でんぷん                      ５０ｍｇ
タルク                          ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００９２】
製剤例４：カプセル剤の調製
実施例８の抽出物            ５００ｍｇ
ラクトース                    ５０ｍｇ
でんぷん                      ５０ｍｇ
タルク                          ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００９３】
製剤例５：カプセル剤の調製
実施例５の抽出物            ５００ｍｇ
ラクトース                    ５０ｍｇ
でんぷん                      ５０ｍｇ
タルク                          ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００９４】
製剤例６：カプセル剤の調製
実施例１の抽出物            ７００ｍｇ
ラクトース                    ５０ｍｇ
でんぷん                      ５０ｍｇ
タルク                          ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
【００９５】
製剤例７：軟膏剤の調製
実施例５の抽出物                    ２００ｇ
白色ワセリン                        １００ｇ
ステアリルアルコール                １５０ｇ
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油        ４０ｇ
モノステアリン酸グリセリン            ２０ｇ
プロピレングリコール                １００ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                １ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル              １ｇ
上記の成分を混合して、通常の軟膏剤調製方法によって軟膏剤を製造した。
（産業上利用可能性）
【００９６】
上記から分かるように、本発明のアセンヤク抽出物を含む組成物は優れたＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害活性を示し、更にコガネバナ抽出物及び／又はチャノキ抽出物を含む本発明の組成物は相乗效果を示しており、コガネバナ及びチャノキ抽出物の配合物もまた相乗效果を示した。本発明の組成物は、天然物質から得られるので、副作用の危険性がなく優れたＣＯＸ及び／又は５−ＬＯ阻害活性を示し、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、Ｘ症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫又は癌腫を含む疾患の予防又は治療に使用することができる。また、本発明の組成物は、特に骨関節炎、関節リウマチなどを含む、様々な炎症疾患の予防又は治療のために使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
図１は本発明の実施例１、２の抗炎症活性を示すグラフである。
図２は本発明の実施例５〜８の抗炎症活性を示すグラフである。
図３は本発明の実施例５及び実施例１、３の抗炎症活性を示すグラフである。
図４は本発明の実施例６及び実施例１、４の抗炎症活性を示すグラフである。
図５は本発明の実施例７の抗炎症活性を示すグラフである。
図６は本発明の実施例８及び実施例３、４の抗炎症活性を示すグラフである。  
図７は本発明の実施例５投与後のマウスの足浮腫変化を示す時系列のグラフである。
図８は本発明の実施例５投与後の関節炎指数の変化を示す時系列のグラフである。
図９は本発明の実施例５投与後のＣＩＡマウス関節で軟骨組織図を示す写真である。
図１０は本発明の実施例１〜４の関節保護効果を示すグラフである。
図１１は本発明の実施例５〜８の関節保護効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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