(57)【要約】  本発明は、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの多形体類、カテプシンSにより介在される疾病の治療へのそれらの使用方法、そのような多形体を含んで成る医薬組成物、それらの調製方法に向けられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約6.19、 19.47及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームA）を有する、下記式（I）：
【化１】
2008513473.tif 000009
で表される化合物。
【請求項２】
約6.19、8.52、9.15、14.42、17.67、18.79、19.47、19.74、21.67、23.16、 23.89、 25.3 1、及び27.06°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターン；及び
約704、731、777、791、808、822、837、856、892、921、935、987、1008、1028、1053、 1080、1115、1128、1161、1180、1230、1261、1288、1361、 1418、1465、1513、1548、1607、 1663、及び3349cm-1でピークを有するFT−IRスペクトルを示す多形体形（フォームA）を有する、下記式（I）：
【化２】
2008513473.tif 000010
で表される化合物。
【請求項３】
約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームB）を有する、下記式（I）：
【化３】
2008513473.tif 000011
で表される化合物。
【請求項４】
約5.65、6.68、 10.12、18.63、19.40、20.66、21.47、21.93、22.47、23.78、25.52、25.76、及び 26.79°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターン；及び
約704、731、791、808、823、837、856、893、936、1028、1053、1080、1115、1128、1 161、1180、1230、1287、1361、1418、1465、1514、1548、1607、1663、及び3349cm-1でピークを有するFT−IRスペクトルを示す多形体形（フォームB）を有する、下記式（I）：
【化４】
2008513473.tif 000012
で表される化合物。
【請求項５】
約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームC）を有する、下記式（I）：
【化５】
2008513473.tif 000013
で表される化合物。
【請求項６】
約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームD）を有する、下記式（I）：
【化６】
2008513473.tif 000014
で表される化合物。
【請求項７】
約6.19、19.47及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームA）を有する、下記式（I）：
【化７】
2008513473.tif 000015
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項８】
約6.19、8.52、9.15、14.42、17.67、18.79、19.47、19.74、21.67、23.16、 23.89、 25.3 1、及び27.06°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターン；及び
約704、731、777、791、808、822、837、856、892、921、935、987、1008、1028、1053、 1080、1115、1128、1161、1180、1230、1261、1288、1361、 1418、1465、1513、1548、1607、 1663、及び3349cm-1でピークを有するFT−IRスペクトルを示す多形体形（フォームA）を有する、下記式（I）：
【化８】
2008513473.tif 000016
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項９】
約6.19、19.47及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームA）を有する、下記式（I）：
【化９】
2008513473.tif 000017
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項１０】
フォームAが、95％以上の量で存在する請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
フォームAが、98％以上の量で存在する請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１２】
約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームB）を有する、下記式（I）：
【化１０】
2008513473.tif 000018
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項１３】
約5.65、6.68、 10.12、18.63、19.40、20.66、21.47、21.93、22.47、23.78、25.52、25.76、及び 26.79°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターン；及び
約704、731、791、808、823、837、856、893、936、1028、1053、1080、1115、1128、1 161、1180、1230、1287、1361、1418、1465、1514、1548、1607、1663、and 3349cm-1でピークを有するFT−IRスペクトルを示す多形体形（フォームB）を有する、下記式（I）：
【化１１】
2008513473.tif 000019
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項１４】
約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームB）を有する、下記式（I）：
【化１２】
2008513473.tif 000020
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項１５】
フォームBが、95％以上の量で存在する請求項14記載の医薬組成物。
【請求項１６】
フォームBが、98％以上の量で存在する請求項14記載の医薬組成物。
【請求項１７】
約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームC）を有する、下記式（I）：
【化１３】
2008513473.tif 000021
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項１８】
約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームC）を有する、下記式（I）：
【化１４】
2008513473.tif 000022
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項１９】
フォームCが、95％以上の量で存在する請求項18記載の医薬組成物。
【請求項２０】
フォームCが、98％以上の量で存在する請求項18記載の医薬組成物。
【請求項２１】
約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームD）を有する、下記式（I）：
【化１５】
2008513473.tif 000023
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項２２】
約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームD）を有する、下記式（I）：
【化１６】
2008513473.tif 000024
で表される化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物。
【請求項２３】
フォームDが、95％以上の量で存在する請求項22記載の医薬組成物。
【請求項２４】
フォームDが、98％以上の量で存在する請求項22記載の医薬組成物。
【請求項２５】
動物におけるカテプシンSにより介在される疾病の処理方法であって、請求項７〜24のいずれか１項記載の医薬組成物を、前記動物に投与することを含んで成る方法。
【請求項２６】
化合物N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの多形体の調製方法であって、
（ａ）結晶化工程の間、前記化合物の２つの不斉中心に実質的に影響を及ぼさないで、前記化合物に対して十分な化学親和性を有する、溶媒又は溶媒混合物からの前記化合物の溶媒結晶化、及び実質的に純粋な形での多形体の単離；又は
（ｂ）結晶化工程の間、化合物の結合性又は化合物の２つの不斉中心に実質的に影響を及ぼさないで、機械的応力への暴露、化合物粒度の低減、電場又は熱処理による前記化合物の結晶化、及び実質的に純粋な形での多形体の単離；又は  
（ｃ）液化又は粒度低減の間、化合物の結合性又は化合物の２つの不斉中心に実質的に影響を及ぼさないで、前記化合物の液化、続く液化された化合物の急速な冷却、又は室温以下の温度での前記化合物の粒度低減への暴露、及び実質的に非晶形での多形体の単離を含んで成る方法。
【請求項２７】
前記工程が、段階（ａ）及び（ｂ）の組合せを含んで成る請求項26記載の方法。
【請求項２８】
前記工程が、段階（ａ）を含んで成る請求項26記載の方法。
【請求項２９】
前記単離された多形体が、前記化合物のフォームAである請求項26又は28記載の方法。
【請求項３０】
段階（ａ）における溶媒が、２−プロパノールである請求項29記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物の第１多形体が第２多形体に転換される請求項26記載の方法。
【請求項３２】
前記第１及び第２多形体が、異なった熱力学的安定性を有する請求項31記載の方法。
【請求項３３】
前記第１多形体が第２多形体よりも低い熱力学的安定性を有する請求項31記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）約6.19、 19.47及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームA）；
（ｂ）約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームB）；
（ｃ）約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームC）；及び
（ｄ）約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームD）
から成る群から選択された多形体を有する、下記式（I）：
【化１７】
2008513473.tif 000025
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野：
本発明は、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの多形体類、カテプシンSにより介在される疾病の処理へのそれらの使用方法、そのような多形体を含んで成る医薬組成物、それらの調製方法に向けられる。
【背景技術】
【０００２】
技術状態：
多形体は、結晶格子における分子の順序の結果として異なった物性を有する同じ分子の結晶である。多形体により示される物性の差異は、薬剤の医薬性質、例えば配合及び製造において重要である、貯蔵安定性、圧縮性及び密度、及び薬物の生物利用能に影響を及ぼすことができる溶解性/溶解速度に影響を及ぼすことができる。いくつかの場合、溶解性/溶解差異の結果として、多形現象過渡期は、能力の及び/又は毒性の欠失をもたらすことができる。
【０００３】
従って、食品及び薬物管理局は、固体投与形における活性成分の多形現象含有率に対する厳格な管理を必要としている。一般的に、市販されている薬物が異なった安定性を有する多形体形で存在する場合、その管理機関は品質保証についてそのような薬物のすべてのモニターリングを必要としている。従って、その最も熱力学的に安定した多形体での純粋な薬物を生成し、そして市販することが、医学的及び商業的理由のために好ましい。しかしながら、低い熱力学的安定性の多形体はまた、より安定性の多形体に転換され得る中間体としても有用であり得る。本発明は、この及び関連する必要性を実現する。
【発明の開示】
【０００４】
発明の要約：
下記構造：
【化１】
2008513473.tif 000002
【０００５】
を有し、そしてこの後、式（I）の化合物として言及されるN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドは、フォームA, B及びCとして言及される３種の異なった結晶多形体形及びフォームDとして言及される非晶形で存在することができ、ここでフォームAが最も熱力学的に安定している。
【０００６】
従って、１つの観点においては、本発明は、約6.19, 19.47, 及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回析パターンを示し、そしてフォームAとして言及される多形体形を有する式（I）の化合物に向けられる。
第２の観点においては、本発明は、約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回析パターンを示し、そしてフォームBとして言及される多形体形を有する式（I）の化合物に向けられる。
【０００７】
第３の観点においては、本発明は、約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回析パターンを示し、そしてフォームCとして言及される多形体形を有する式（I）の化合物に向けられる。
第４の観点においては、本発明は、約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回析パターンを示し、そしてフォームDとして言及される多形体形を有する式（I）の化合物に向けられる。
【０００８】
第５の観点においては、本発明は、約6.19、19.47及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回析パターンを示す多形体形を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物に向けられる。好ましくは、医薬組成物は、約6.19、8.52、9.15、14.42、17.67、18.79、19.47、19.74、21.67、23.16、 23.89、 25.3 1、及び27.06°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターン；及び約704、731、777、791、808、822、837、856、892、921、935、987、1008、1028、1053、 1080、1115、1128、1161、1180、1230、1261、1288、1361、 1418、1465、1513、1548、1607、 1663、及び3349cm-1でピークを有するFT−IRスペクトルを示す多形体形（フォームA）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る。
【０００９】
好ましくは、医薬組成物は、約6.19、19.47及び21.67°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームA）を有する下記式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る。フォームAは、80％以上の純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、90％以上純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、95％以上の純度で存在する。
【００１０】
第６の観点においては、約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームB）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物に向けられる。好ましくは、医薬組成物は、約5.65、6.68、 10.12、18.63、19.40、20.66、21.47、21.93、22.47、23.78、25.52、25.76、及び 26.79°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターン；及び約704、731、791、808、823、837、856、893、936、1028、1053、1080、1115、1128、1 161、1180、1230、1287、1361、1418、1465、1514、1548、1607、1663、及び3349cm-1でピークを有するFT−IRスペクトルを示す多形体形（フォームB）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る。
【００１１】
好ましくは、医薬組成物は、約5.65°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームB）を有する下記式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る。フォームBは、80％以上の純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、90％以上純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、95％以上の純度で存在する。
【００１２】
第７の観点においては、本発明は、約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームC）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物に向けられる。より好ましくは、医薬組成物は、約6.24、7.50、17.68、18.76、19.80、21.86、23.93及び25.28°（2-θ）でピークを有するX−線粉末回折を示す多形体形を有する式（I）の化合物を含んで成る。
【００１３】
好ましくは、医薬組成物は、約6.24 及び7.50°（2-θ）で特徴的ピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームC）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る。より好ましくは、フォームCは、80％以上の純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、90％以上純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、95％以上の純度で存在する。
【００１４】
第８の観点に置いては、本発明は、約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回折パターンを示す多形体形（フォームD）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る医薬組成物に向けられる。好ましくは、医薬組成物は、約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有するX−線粉末回折パターンを示す実質的に純粋な多形体形（フォームD）を有する式（I）の化合物、及び医薬的に許容できる賦形剤を含んで成る。さらにより好ましくは、フォームCは、80％以上の純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、90％以上純度で存在する。さらにより好ましくは、フォームAは、95％以上の純度で存在する。
【００１５】
第９の観点においては、本発明は、動物におけるカテプシンSにより介在される疾病の処理方法に向けられ、ここで上記医薬組成物が、前記動物に投与することを含んで成る。好ましくは、動物はヒトであり、そして疾病は、若年型糖尿病、乾癬、多発性硬化症、尋常性天疱瘡、グレーブス病、重症筋無力症、全身性狼蒼先端紅痛症、慢性関節リウマチ、橋本病、アレルギー性疾患、例えば喘息（但し、それだけには限定されない）、同種の免疫応答、例えば器官移植又は組織移植及び子宮内膜症（但し、それだけには限定されない）、慢性閉塞性肺疾患(例えば、肺気腫)、細気管支炎、喘息及び管支炎における過度の気道線維分解、慢性的な疼痛、癌腫、肺炎、及び心臓血管疾患例えば、プラーク裂創及びアテローム、全身性アミロイドーシス、アルツハイマーの疾病、及び医療原性障害である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
発明の特定の記載：
定義：
特にことわらない限り、本明細書及び特許請求の範囲に使用される次の用語は、本出願のために定義され、そして次の意味を有する：
“医薬的に許容できるキャリヤー又は賦形剤”とは、一般的に安全であり、非毒性であり、そして生物学的にも又は他においても所望される医薬組成物の調製において有用である。キャリヤー又は賦形剤を意味し、そして獣医使用及びヒト医薬使用のために許容できるキャリヤー又は賦形剤を包含する。“医薬的に許容できるキャリヤー又は賦形剤”とは、本発明書及び特許請求の範囲において使用される場合、１つ及び１よりも多くのそのような賦形剤を包含する。
【００１７】
疾病を“治療する”又は疾病の“治療”とは、
（１）疾病を予防すること、すなわち疾病に暴露されているか又はその素因を有するが、しかし疾病を経験していないか又は疾病の症状をまだ示していない哺乳類における疾病の臨床学的症状の進形を引起さないこと；
（２）疾病を阻害すること、すなわち疾病又はその臨床学的症状の進行を阻止するか又は低めること；又は
（３）疾病を軽減すること、すなわち疾病又はその臨床学的症状の緩解を引起すことを包含する。
【００１８】
“治療的有効量”とは、疾病の治療のために哺乳類に投与される場合、疾病に対するそのような処理をもたらすのに十分である、式（I）の化合物の量を意味する。“治療的有効量”は、化合物、治療される哺乳類の疾病及びその重要度及び年齢、体重、等に依存して変化するであろう。
【００１９】
“実質的に純粋な”とは、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド、すなわち式（I）の化合物の多形体形に関して使用される場合、約80％の純度、好ましくは約85〜約95％の純度、さらにより好ましくは約98〜約99.9％の純度であるN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの多形体形を意味する。これは、存在するN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの他の多形体形の量が、約20％以下、好ましくは、約15〜約5％、さらにより好ましくは約２〜約0.1％であることを意味する。
【００２０】
“動物”とは、ヒト、非ヒト哺乳類（例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、牛、ウマ、羊、ヤギ、ブタ、シカ及び同様のもの）、及び非哺乳類（例えば、鳥類及び同様のもの）を包含する。
“十分な化学的親和性”とは、溶媒又は溶媒混合物に関して使用される場合、化合物の結晶化を可能にする量で式（I）の化合物を溶解する能力を有する、溶媒又は溶媒混合物を言及する。この能力は、温度の関数であり得るか、又は化合物の異なった多形体により変化することができる。
【００２１】
“機械的応力”とは、加工段階に関して、本明細書において使用される場合、式（I）の化合物が機械力、又は機械力、例えば剪断の変化（低下又は上昇）にゆだねられることを意味し、そして濾過、毛管作用、超音波、粒度変化、例えば粉砕、微粉砕、超微粉砕、攪拌、乾燥、溶媒の昇華又は除去、及び本明細書においてさらに詳細に記載される他の機械力暴露を包含する。
【００２２】
当業者は、X−線回折パターンが、使用される測定条件に依存する測定誤差を伴って得られることを理解するであろう。特に、X−線回折パターンの強度が、使用される測定条件に依存して変動できることは一般的に知られている。相対的強度もまた、実験条件に依存して変化し、そして従って、強度の正確な程度は考慮されるべきではないことが、さらに理解される。従って、従来のX−線回折パターンについての回折角度の測定誤差は、典型的には、約5％又はそれ以下であり、そしてそのような測定誤差の程度は、前記回折パターンに関連するものとして考慮されるべきである。
【００２３】
結果的に、用語“約”とは、X−線粉末回折パターンに関して、本明細書において使用される場合、本発明の結晶形が、本明細書に開示される添付図面に示されるX−線回折パターンと完全に同一のX−線回折パターンを供給する結晶形に限定されないことを意味する。添付図面に開示されるX−線回折パターンと実質的に同一であるX−線回折パターンを提供するいずれの結晶形も、本発明の範囲内である。化合物の多形体形が、X−線回折パターンが完全には同一でないにもかかわらず、同一であるかどうかを確める能力は、当業者の範囲内である。上記のことは、本明細書に開示されるFT−IRスペクトルを用いて多形体形を決定する場合、真実であり、すなわち、添付図面に開示されるFT−IRスペクトルと実質的に同一であるFT−IRスペクトルを供給するいずれかの結晶形も、本発明の範囲内である。
【００２４】
用語“化合物の結合性に実質的に影響を及ぼさないで”とは、加工段階に関して本明細書において使用される場合、式（I）の化合物の化学的同一性が加工段階の完結の後、有意に変更されず；換言すれば、化学結合が実質的に損なわれないまま存続することを意味する。
用語“化合物の２つの不斉中心に実質的に影響を及ぼさないで”とは、多形体の調製方法の完結の後、２つの不斉中心の光学的形状が、少なくとも約90％、好ましくは約95％又はそれ以上、保持されることを意味する。
“液化”とは、式（I）の化合物に関して使用される場合、化合物の液体形への転換、又は溶融を意味する。
【００２５】
生物学的利用能、加工能力及び生成物の安定性は、種々の多形体に関連する固体状態形の種々の物理的及び化学的性質の存在により影響される。本発明の多形体は同じ元素組成を有するが、それらは異なった生理−化学及び生理−技術的性質、例えば自由エネルギー、エントロピー、熱用量、融点、昇華温度、溶解性、安定性、溶解速度、生物学的利用能、硬度、適合性、流動性、引張り強さ、及び圧縮性を示し、それらのすべては、その医薬使用のための多形体の適合性を決定する因子である。熱力学的に最も安定した多形体が一般的に市販のための好ましい選択であるが、活性成分の他の多形体もまた、薬物品質保証モニターにおいてのみならず、重要な役割を演じることができる。例えば、低い安定性の多形体は、より安定した多形体を調製するための重要な中間体として使用され得る。
【００２６】
化合物（I）の多形体形の特徴化：
式（I）の多形体形は、融点、X−線粉末回折法（XRPD）及びFourier転位赤外分光法（FT-IR）により特徴づけられる。X−線回折（XRPD）分析は、120°の2θ範囲を有するCPS（曲線に位置感受性）検出器を備えたInel XRG-3000回折計を用いて行われた。即時データーが、0.03°2θの分解能で約４°2θで開始するCu-Kα放射線を用いて集められた。管電圧及びアンペア数が、それぞれ40kV及び30mAに設定された。パターンは、2.5〜40°2θで示された。サンプルは、それらを薄壁ガラス細管中に充填することにより、分析のために調製された。個々の細管は、データ獲得の間、細管の回転を可能にするために電動化されるゴニオメーターヘッド上に固定された。サンプルは５又は10分間、分析された。計器検定は、珪素参照標準を用いて行われた。
【００２７】
赤外スペクトルは、Ever−Glo mil/far mil/far IR源、延長された範囲の臭化カリウム（KBr）ビームスプリッター、及び重水素化されたトリグリセリンスルフェート（DTGS）検出器を備えたMagna-IR860（商標）Fourier転位赤外（Ft−IR）分光計（Thermo Nicolet）上で得られた。ゲルマニウム（Ge）結晶を有する、減衰された合計反射（ATR）アクセサリー（ThunderdomeTM, ThermoSpectra-Tech）が、データ獲得のために使用された。サンプルは適切に分析された。個々のスペクトルは、4cm-1のスペクトル分解度で集められた256の同時添加された走査を表す。バックグラウンドデータ組は、きれいなGe結晶により得られた。Log 1/R（R＝参照）スペクトルが、お互いに対するそれらの２つのデータ組の比を取ることにより得られ、そして次に、Kubelka-Munk単位に転換された。波長検量は、ポリスチレンを用いて行われた。バックグラウンドデータ組は、KBrのサンプルに対して得られた。
【００２８】
フォームA：
フォームAは、約175℃で融点を有する、無水非吸湿性結晶材料である。約6.19、8.52、9.15、14.42、17.67、18.79、19.47、19.74、21.67、23.16、 23.89、 25.3 1、及び27.06°（2-θ）でピークを有するフォームAのXRPDが図１に示される。XRPDにおけるフォームAについてのユニークピークが、約6.19、19.47及び21.67°（2-θ）で存在する。フォームAのFT−IRスペクトルは、約704、731、777、791、808、822、837、856、892、921、935、987、1008、1028、1053、 1080、1115、1128、1161、1180、1230、1261、1288、1361、 1418、1465、1513、1548、1607、 1663、及び3349cm-1でのピークを示した。
【００２９】
フォームB：
フォームBは、溶媒化合物であり、そしてたぶん水和物である。約5.65、6.68、 10.12、18.63、19.40、20.66、21.47、21.93、22.47、23.78、25.52、25.76、及び 26.79°（2-θ）でピークを有するフォームBのXRPDが図３に示される。XRPDにおけるフォームBについてのユニークピークが、約5.65°（2-θ）で存在する。フォームBのFT−IRスペクトルは、約704、731、791、808、823、837、856、893、936、1028、1053、1080、1115、1128、1 161、1180、1230、1287、1361、1418、1465、1514、1548、1607、1663、及び3349cm-1でのピークを示した。
【００３０】
フォームC：
フォームC：は無水性である。約6.24、7.50、17.68、18.76、19.80、21.86、23.93及び 25.28°（2-θ）でピークを有するフォームCのXRPDが図５に示される。XRPDにおけるフォームCについてのユニークピークが、約6.24 及び7.50°（2-θ）で存在する。
フォームD：
フォームDは非晶性であり、そして約5 及び 12 、及び 約 14 及び 25°（2-θ）での広いピークを有する、図６に示されるXRPDを有する。
フォームA〜Dの詳細な合成は、下記実施例に提供される。
【００３１】
フォームA, B, C及びDについてXRPDピーク（°2θ）及び相対的強さの列挙が下記表１に列挙される：
【表１】
2008513473.tif 000003
【００３２】
フォームA, B及びCについてのユニークXRPDピーク（±0.20°2θ内の他のピークは個々の結晶形についてのユニーク組を構成しない）が、下記表２に列挙される：
【表２】
2008513473.tif 000004
【００３３】
フォームA, B, C及びDについてのIRピーク列挙（ピーク＞400cm-1）が下記表３に列挙される：
【表３】
2008513473.tif 000005
【００３４】
本発明の多形体の調製方法：
多形体を調製するための種々の方法の記載は、文献'New Trends in the Crystallisation of Active Pharmaceutical Ingredients' 、S. Banga など, October 2004 in Business Briefings PharmaGenerics 2004, p. 70、及び前記文献に報告されている引例に見出され得る。
【００３５】
本発明の異なった多形体は、溶媒結晶化又は非溶媒結晶化により生成され得る。結晶化の異なった方法は、種々の反応条件を提供することにより、異なった結晶形を生成する。溶液（単一の溶媒又は溶媒混合物）からの結晶化、及び非溶媒方法、例えば昇華、熱処理、脱溶媒、加工（粉砕）及び溶融からの結晶化は、通常使用される方法である。毛管結晶化、レーザー誘発された結晶化及び音波結晶化は、結晶化速度を早めるために有核化段階を標的化する。
【００３６】
種々の方法を用いることにより得られる異なった多形体の存在は、当業界において知られている十分且つ早い多形体スクリーンを用いることにより確られ得る。多形体を調製するための最も便利な方法は、溶媒からの結晶化を包含する。
【００３７】
溶媒結晶化：
溶媒極性、非溶媒の添加、超飽和の程度、冷却プロフィールを伴っての温度、添加剤、種子、pH及び攪拌速度のような溶媒再結晶化に影響を及ぼす要因の細心の考慮が、活性成分の完全な多形現象特徴の解明を助ける。適切な溶媒は、本発明の化合物について十分な化学的親和性を有し、そして結晶化工程の間、分子の２つの不斉中心に実質的に影響を及ぼさない溶媒である。
【００３８】
それらは、１〜６個の炭素原子を有する低級アルカノール、例えばエタノール又は２−プロパノール、等、３〜６個の炭素原子を有するケトン、例えばアセトン、メチルエチルケトン、等、１〜４個の炭素原子を有するハロゲン化された炭化水素、例えば塩化メチレン、１，１−ジクロロエタン、等、水性溶媒、例えば水と低級アルキルニトリル、例えばアセトニトリル、プロピオニトリル及び同様のものとの混合物、及び６〜８個の炭素原子を有する芳香族溶媒、例えばベンゼン、トルエン、又はキシレン、等、並びにそれらの溶媒の適切な混合物を包含する。一般的に、溶媒と式（I）の化合物との混合物が、40〜100℃、好ましくは50〜90℃の高温に加熱されるであろう。選択される高温に達し、そして化合物がほぼ飽和濃度で通常、溶液に存在した後、溶液はゆっくり冷却されるであろう。
【００３９】
しばしば、0.5〜10℃/時、好ましくは１〜８℃/時、最も好ましくは１〜５℃/時の冷却速度を伴って冷却を調節することが有用である。一定の溶媒に関しては、例えばアセトンと共に溶媒のゆっくりした蒸発を可能にすることが好ましい。その場合、式（I）の化合物の飽和溶液により結晶化段階を開始する必要はない。しばしば、予備加熱された濾過装置を通しての温溶液の濾過が、不純物の除去のために有用である。単離された化合物は、乾燥され、そしてその多形体形が、本明細書に記載される方法の１つにより決定される。溶媒結晶化は、より安定した多形体、特に最も安定した多形体（例えば、フォームA）の調製のために好ましい。
【００４０】
準安定性フォームB及びCに関しては、一定の選択される溶媒、例えばハロゲン化された低級アルカノール、好ましくは２〜６個の炭素原子を有する過ハロゲン化されたアルカノール、最も好ましくはトリフルオロエタノールが使用され得る。フォームCを得るためのより好ましい方法は、非溶媒結晶化、例えば昇華、熱処理、脱溶媒、加工（粉砕）、音波処理、例えば電気音波処理又はレーザー誘発された結晶化が適切である。
【００４１】
より新規の結晶化方法、例えばレーザー誘発された結晶化、毛管結晶化及び音波結晶化は、有核化段階を目標とする。普通でない反応条件又は機械応力（例えば、エネルギー源として超音波及びレーザー）の使用によるそれらの技法は、スクリーニング工程において、及び式（I）の化合物の異なった多形体、特に熱力学的に低い安定性の多形体の調製のために、しばしば有用である。それらの技法は、理解でき、そして早められた結晶化速度を伴う。毛管環境を通しての準安定形の確認は、助になることが分っている。音波−結晶化及びレーザー誘発された結晶化の調整可能な利点は、良好であることが予測される。さらに、音波結晶化は、粒度を低めるために効果的に使用され得る。
【００４２】
毛管結晶化：
この技法は、結晶化容器として毛管を使用し、そして準安定性領域の幅を操作することにより活性成分の準安定形を捕獲する。従来の方法においては、高い溶解性を有する準安定形は溶解する傾向があり、そして安定形はそれを犠牲にして結晶化する。低められた対流及び低い乱流を伴って小体積の溶液を有する毛管環境が、低い安定形の単離のために理想的である。毛管システム技法は、遅い蒸発速度を可能にし、それにより、準安定性領域を延長し、そして準安定相に対して超飽和される溶液のために十分な高い濃度を生成する。蒸発条件の注意した選択はしばしば、準安定形を得るために重要である。
【００４３】
レーザー誘発された結晶化：
レーザーは、振動する電場により特徴づけられる電磁放射線の形である。それらは、連続及びパルス形の両者におけるスペクトルの可視、赤外及び紫外線領域において異なった波長で光を生成する。レーザー誘発された結晶化は、赤外線近くの領域において強いパルスを生成する、ソリッドステートレーザー、特にQ−スイッチされたネオジムイットリウムアルミニウムガーネット（Nd：YAG）レーザーを使用する。それは、数十のワット〜1,800Wの連続した出力により特徴づけられる。結晶化のためのapt手段は、数ナノ秒間、作用する、パルスされた源を使用することである。レーザーパルスは、前もって存在するクラスターに対して優先的に作用し、それにより、前有核化クラスター及び胚の核中への構成を助ける。
【００４４】
レーザー誘発された結晶化の基本原理は、振動する電場による分子における双極子運動の誘発を包含する。次に、同じ電場が、誘発された双極子と相互作用し、分子にトルクを適用し、そしてそれらを、電場に対して平行な最も極性化できる軸に沿って整列する。レーザー誘発された結晶化のために適用できる一般的な方法論は、パイレックス（登録商標）ガラス製のスクリューキップされた試験菅において特定の温度での飽和された溶液の調製により開始する。次に、溶液が、室温にゆっくり冷却され、そして同じ温度で数日間、維持される。熟成がクラスターサイズ及びクラスター数の増強を可能にし、従って有核化の可能性を改良する。次に、溶液が、高エネルギーレーザーパルス（Nd：YAGレーザー発振器増幅器システム）により照射され、数秒以内に肉眼で見える結晶の出現を示す。
【００４５】
音波結晶化：
音波結晶化は、結晶化を誘発するために2〜100kHzの周波数範囲により特徴づけられる超音波力を使用する。それは、有核化速度を早めるのみならず、また活性成分を付随する、機械的サイズ低下に変わる良好なものであることがわかっている。それは、サイズ低下された形での活性成分を必要とする、吸入目的のために配合される活性成分の結晶化において好ましい。音波は、液体内で圧縮及び希薄の交互サイクルに作用し、希薄段階の間、バブルを創造する。それらのバブルは、決定的サイズに達するまで、圧縮及び希薄の反復サイクルを生存し、そして次に、破壊し、キャビティーが形成される。
【００４６】
この工程は、キャビティー形成として知られている。キャビティー形成の現像は、エネルギーを供給し、温度の上昇を刺激する。飽和溶液におけるキャビティー形成の結果としての温度のこの適度な上昇が、有核化を数倍、促進することができる。実験的には、10W以上の力を有する音波が、飽和溶液においてプローブを通して連続した態様で適用され、抗溶媒と共に混合される。有核化速度の増強は、固体を沈殿するのにかかる時間により、可視的に検出される。高過ぎるエネルギーの音波は、活性成分の分解を導く結合を破壊しないので、そのようなことを防ぐために注意が払われるべきである。
【００４７】
粉砕方法：
粉砕はしばしば、室温又は室温以下の温度で、時々、約-200℃以下の温度、すなわちほぼ液体窒素の沸点温度で、10〜60分間、より好ましくは、15〜45分間、混合−微粉砕装置により行われるであろう。粉砕段階が完結にした後、サンプルは、室温に暖められるであろう。
【００４８】
非晶性多形体は、式（I）の化合物の液化により、例えば前記化合物を、その融点以上の温度に加熱し、続いて急速に冷却することにより調製され得る。溶融物の急速な冷却は、結晶化を妨げる。他方では、非晶性多形体は、有意には室温以下の温度で、例えば約-200℃での粒度低下により調製され得る。
【００４９】
利用性及び試験：
式（I）の化合物の多形体は、カテプシンSの選択的インヒビターであり、そして従って、システインプロテアーゼ活性が疾病の病理学及び/又は症候学的に寄与する疾病の処理のために有用である。例えば、本発明の多形体は、自己免疫疾患、例えば若年型糖尿病、乾癬、多発性硬化症、尋常性天疱瘡、グレーブス病、重症筋無力症、全身性狼蒼先端紅痛症、慢性関節リウマチ、橋本病、アレルギー性疾患、例えば喘息（但し、それだけには限定されない）、同種の免疫応答、例えば器官移植又は組織移植及び子宮内膜症（但し、それだけには限定されない）の処理において有用である。
【００５０】
カテプシンSはまた、過度の弾力線維分解、例えば慢性閉塞性肺疾患(例えば、肺気腫)、細気管支炎、喘息及び管支炎における過度の気道線維分解、慢性的な疼痛、癌腫、肺炎、及び心臓血管疾患例えば、プラーク裂創及びアテロームを包含する疾病に包含される。カテプシンSは、原線維形成に包含され、そして従って、カテプシンSのインヒビターは、全身性アミロイドーシスの処理に使用される。
式（I）の化合物の多形体のカテプシンS阻害活性は、当業者に知られている方法により決定され得る。プロテアーゼ活性、及び試験化合物によるその阻害を測定するための適切なインビトロアッセイは知られている。カテプシン阻害活性を測定するためのアッセイの詳細は、生物学的例１及び２に示される。
【００５１】
投与及び医薬組成物：
一般的に、式（I）の化合物の多形体は、当業界において知られている通常の及び許容できる態様のいずれかを通して、単独で、又は１又は複数の治療剤と組合して、治療的有効量で投与されるであろう。治療的有効量は、疾病の重症度、患者の年齢及び相対的健康性、使用される化合物の能力、及び他の要因に依存して広く変化することができる。例えば、式（I）の化合物の治療的有効量は、約10μg〜約100mg/kg体重（μg/kg）/日、典型的には、約100μg/kg/日〜約10mg/kg/日の範囲である。従って、80kgのヒト患者のための治療的有効量は、約1mg/日〜約８g/日、典型的には約1mg/日〜約800mg/日の範囲であり得る。一般的に、個人的知識及び本出願の開示に基づいて行動する当業者は、所定の疾病の処理のための式（I）の化合物の治療的有効量を確めることができる。
【００５２】
式（I）の化合物の多形体は、次の経路の１つにより、医薬組成物として投与され得る：
経口、全身性（例えば、経皮、鼻腔内又は坐薬）又は非経口（例えば、筋肉内、静脈内又は皮下）。組成物は、錠剤、ピル、カプセル、半固体、粉末、持効性製剤、溶液、懸濁液、エリキシル、エアロゾル、又はいずれか他の適切な組成物の形を取ることができる、そして一般的に、式（I）の化合物、及び少なくとも１つの医薬的に許容できる賦形剤から構成される。許容できる賦形剤は、非毒性であり、投与を助け、そして活性成分の治療能力に悪影響を及ぼさない。そのような賦形剤は、いずれかの固体、溶液、半固体、又はエアロゾル組成物の場合、一般的に当業者に入手できる気体賦形剤であり得る。
【００５３】
固体医薬賦形剤は、澱粉、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、一ステアリン酸グルセロール、塩化ナトリウム、乾燥された脱脂粉乳及び同様のものを包含する。液体及び半固体賦形剤は、水、エタノール、グルセロール、プロピレングリコール及び種々の油、例えば石油、動物、植物又は合成起源のそれら（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油及び同様のもの）から選択され得る。特に注射用溶液のための好ましい液体キャリヤーは、水、塩溶液、水性デキストロース及びグルコールを包含する。
【００５４】
組成物における式（I）の化合物の多形体の量は、配合物の処理の型、単離用量のサイズ、賦形剤の種類、及び医薬科学の当業者において知られている他の要因に依存し、広く変化することができる。一般的に、所定の疾病の処理のための式（I）の化合物の多形体の組成物は、0.01％w〜90％w、5％w〜50％wの活性成分を含んで成り、そして残りは賦形剤である。好ましくは、医薬組成物は、連続処理のために単一の単位用量形で、又は症状の軽減が特に必要とされる場合、任意での単一の単位用量形で投与される。式（I）の化合物の多形体を含む代表的な医薬製剤が、下記例１に記載されている。
【実施例】
【００５５】
すべての溶媒及び試薬は、Aldrichから購入され、そして注意されている場合を除いて、受け取るようにして使用された。すべての反応及び生成物は、逆相HPLCを用いて、化学的純度について分析された。反応生成物及び試薬中の湿分は、EM−ScienceモデルV−200AQUASTAR容積Karl Fischer滴定計を用いて決定された。燃焼分析は、Rovertson Microlit Laboratories, Inc., Madison, NJにより行われた。
【００５６】
参照A：２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エタノールの合成：
【化２】
2008513473.tif 000006
【００５７】
温度計、機械攪拌機、攪拌−軸及びテフロ製攪拌−羽根を供えた、2Lの３ツ首丸底フラスコに、２，２，２，4’−テトラフルオロアセトフェノン（80.0g、0,416モル）及び無水ジクロロメタン（320ml）を添加した。このフラスコを窒素によりフラッシュし、次にドライアイス/アセトン浴により-78℃に冷却した。その得られる溶液に、１−（S）−メチル−CBSオキサザボーロリジン（41ml、トルエン中、1.03M溶液、0.042モル）を添加した。アテコールボラン（トルエン中、2M溶液として249g；BASFから購入された）を、内部温度を-75℃以下に維持する速度で滴下した。
【００５８】
添加の完結の後、反応混合物を、-75℃で約15時間、攪拌し、そして次に、内部温度を-75℃以下に保持しながら、１，４−ジオキサン中、4NのHCl（31ml；0.124モル）のゆっくりした添加により急冷した。氷浴を除き、そして反応混合物を３時間にわたって室温に暖めた。反応混合物を、約200mlの最終体積に濃縮し、白色懸濁液を得た。ヘキサン（800ml）を添加し、そしてその懸濁液を濾過した。濾液を水により洗浄した。有機相を乾燥し（硫酸ナトリウム）、そして30〜35℃の水浴温度及び5mバールの圧力で、真空下で濃縮し、２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エタノール（67g）を、赤みがかった油状物として得た。キラルHPLCによる生成物の分析は、90％の鏡像異性体過剰に対応するR−及びS−異性体の95：5混合物であることを示した。
【００５９】
参照B：１−アミノシクロプロパンカルボニトリル塩酸塩の合成：
【化３】
2008513473.tif 000007
【００６０】
段階１：
ジクロロメタン（1000ml）中、ベンゾフェノンイミン（25g、0.138モル、Aldrich）及びアミノアセトニトリル塩酸塩（25g、0.270モル、Lancaster)の混合物を、2Lの三角フラスコにおいて窒素下で室温で５日間、攪拌した。その反応混合物を濾過し、沈殿した塩化アンモニウムを除去し、そして濾液を真空下で蒸発乾燥した。得られる残渣をエーテル（400ml）に溶解し、水（200ml）及びブラインにより洗浄した。硫酸マグネシウム上での乾燥の後、溶媒を蒸発し、（ベンズヒドリデンアミノ）アセトニトリル（47.89g）を得た。
【００６１】
段階２：
2Lのフラスコにおける水（91ml）中、水酸化ナトリウム（91g、2.275モル）の溶液を、窒素下で氷上で冷却し、そして次に、トルエン（100ml）中、ベンジルトリエチルアンモニウム塩化物（2.0g、0.0088モル、Aldrich）及び（ベンズヒドリデンアミノ）アセトニトリル（47.89g）により処理した。次に、１，２−ジブロモエタン（23ml、122.4mモル、Aldrich）を、＋10℃近くの内部温度を維持するために、機械的攪拌及び冷却を伴って、反応混合物に25分間にわたって滴下した。次に、反応混合物を、室温で24時間、激しく攪拌し、そして次に、氷水中に注ぎ、そしてその混合物をトルエンにより抽出した。
【００６２】
組合された抽出物を、ブラインにより洗浄し、そして次に、硫酸マグネシウム及びNoriteにより処理した。濾過の後、トルエンを回転蒸発機により除去し、油状物（67g）を得た。残渣を煮沸へキサン（400ml）に溶解し、Noriteにより処理し、そして暖かなまま濾過し、そして冷却した。黒みがかった油状物を分離し、そしてそれをピペットにより除去した（約2ml）。引掻きにより、残る溶液において結晶化を誘発し、これを氷上で２時間、冷却した。淡黄色の結晶を濾過により集め、そして冷ヘキサンにより洗浄し、１−（ベンズヒドリデンアミノ）シクロプロパンカルボニトリル（30.56g）を得た。
【００６３】
段階３：
水（100ml）及びエーテル（100ml）中、濃HCl（12ml）における１−（ベンズヒドリデンアミノ）シクロプロパンカルボニトリル（30.56g、0.124モル）の混合物を、室温で15時間、攪拌した。エーテル層を捨て、そして水性層をエーテルにより洗浄した。次に、水性層を凍結乾燥し、標記化合物を、黄褐色粉末（13.51g）として得た。この化合物はまた、市販されている。
【００６４】
例１：N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの合成：
【化４】
2008513473.tif 000008
【００６５】
段階１：
12Lのフラスコを、ジクロロメタン（3.7L）により充填し、そして２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エタノール（367g；1.89モル、90％ee）を添加した。その反応混合物を、-50℃の内部温度に冷却し、そしてN, N−ジメソプロピルエチルアミン（DIPEA；855g、1153ml、6.62モル、250モル％）を、-50℃でその溶液を維持しながら、添加した。添加の完結の後、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（560g、334ml、1.98モル、105モル％）を、-50±5℃で溶液を維持しながら、0.75時間にわたって、添加用漏斗を通して添加し、そしてその溶液を、その温度で４〜６時間、攪拌し、この時までに、トリフレートの形成を、19F−NMR分析により完全であることを決定した。
【００６６】
固体S−トリチル−L−システイン（686g、1.89モル、100モル％）を、添加し、溶液の内部温度を-40℃に高めた。反応混合物を10℃に一晩、暖め、均質溶液を得た。反応混合物を、10℃でさらに10時間、攪拌し、この時までに、追加の反応は、HPLC分析により決定される場合、発生しなかった。トルエン（5L）を添加し、続いて、ジクロロメタンを真空下で除去した。沈殿されたDIPEAのトリフルオロメタンスルホン酸塩を濾過により除去した。濾液を、2Nの水性HCl（4L）、続いて飽和水性NaCl（4L）により洗浄した。
【００６７】
得られるトルエン溶液を濃縮し、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸を、５：１混合物として、及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルエステル及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸２，２，２、−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）−エチルエステルを、副生成物として得た。粗材料を、いずれのさらなる精製も行わないで、次の段階に使用した。
【００６８】
段階２：
上記段階１からの２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸の粗混合物（430g；797mモル）を、ジクロロメタン（310ml）及びTFA（238ml；352g；3.09モル；388モル％）に溶解し、そしてその溶液を氷水浴において冷却した。トリエチルシラン（247ml；180g；1.55モル；194モル％）を滴下した。添加の完結の後、氷浴を除き、そして反応混合物を室温に暖めた。さらなる１時間の攪拌の後、HPLC−MS分析は、反応が完結したことを示した。ジクロロメタンを真空下で除去した。
【００６９】
濃縮された材料を、トルエン（300ml）により希釈し、そしてその混合物を真空下で濃縮し、揮発残留物（トリエチルシラン及びTFA）を除去した。共沸蒸留工程を、粗生成物へのもう１つの部分のトルエンの添加により反復した。得られる黒みがかった残渣を、ヘキサン（800ml）により希釈し、そしてその混合物を、3Nの水酸化ナトリウム溶液（500ml）及び次に、2Nの水酸化ナトリウム溶液により抽出した。組合された塩基性（pH＞13）水性抽出物を、ヘキサンにより洗浄し、そして次に、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン・HCl（22.1g；77.1mモル；9.7モル％）及びシクロプロピルメチル臭化物（104.6g；775mモル）により処理した。
【００７０】
反応混合物を、3NのNaOH水溶液の添加により混合物を塩基性（pH＞13）に維持しながら、攪拌した。２時間後、HPLC分析は、反応の完結を示した。反応混合物を、濃水性HClによりpH２〜３に酸性化し、そしてジエチルエーテルにより２度、抽出した。組合された有機抽出物を飽和水性NaClにより洗浄し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、そして真空下で濃縮し、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオン酸及び３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオン酸（193g、68.9％）を、黒みがかった油状物として得た。
【００７１】
段階３：
３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオン酸及び３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオン酸の混合物（193g；54.9mlモル）を、N−メチルピロリジノン（NMP；1L）に溶解し、そして１−アミノ−１−シクロプロピルカルボニトリル（65.2g；550mモル）、HATU（209.1g；550.0mモル）及びDIPEA（239.6ml；177.8g；1.37モル；250モル％）を、氷浴による冷却下で、前記溶液に添加した。添加の完結の後、氷浴を除き、そして反応混合物を室温に暖めた。２時間後、LC−MS分析は、反応の完結を示した。
【００７２】
OXONE（商標）（507.8g；826mモル；150モル％）を、温（60〜70℃）水（1.25L）に溶解し、そして得られる溶液を、50℃以下に内部温度を維持するための速度で、反応混合物に添加した。１時間後、反応は完結し、そして水（2L）を添加した。得られるスラリーを１時間、攪拌し、濾過し、そして得られる固形物を水（1L）及び次に、２−プロパノール（IPA）（500ml）により洗浄した。固形物を空気乾燥し、145gの粉末を得、これを酢酸エチル（1.5L）に溶解し、そして得られる溶液を水により洗浄した。有機相を乾燥し（硫酸マグネシウム）、そして真空下で濃縮し、粗生成物（127g）を得、これを温（85〜90℃）IPA（2.5L）に溶解した。その溶液を、結晶化のために温水浴（70℃）に配置し、水浴の温度を１時間当たり15℃低めた。結晶化は50℃で観察された。室温に冷却した後、結晶を濾過し、そしてIPAにより洗浄し、次に真空オーブン下で24時間、乾燥し、XRPD分析によれば、フォームAを有する標記化合物（87g）を得た。
【００７３】
他の調製：
段階１：
２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルエステル及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸２，２，２、−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）−エチルエステルを含む、上記例１、段階１からの粗生成物（193gの生成物）1.25Lに、イソプロパノール（300ml）、続いて水酸化リチウムの10％水溶液（300ml）を添加し、pH14にした。
【００７４】
反応混合物を、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルエステル及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸２，２，２、−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）−エチルエステルが、HPLC−UV分析により決定される場合、その対応する酸に転換されるまで、一晩、攪拌した。次に、その溶液を、濃HClによりpH3に酸性化し、次にシリカゲルのパッド（5’’×6’’）上に負荷し、そして酢酸エチルにより溶出した。
【００７５】
濾液を真空下で濃縮し、油状物を得、これをジクロロメタン（1.5L）に溶解した。その溶液を攪拌し、次にヘプタン（800ml）を添加した。ジクロロメタンのほとんどを、60℃での蒸留により除去し、そして追加のヘプタン（800ml）により置換した。攪拌を続け、そして反応混合物を室温に一晩、冷却した。得られる沈殿された固形物を濾過し、そしてヘプタンにより洗浄し、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸（207g）を、12：1のジアステレオマー混合物として得た。
【００７６】
段階２：
ジクロロメタン（400ml）中、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸（207g；384mモル）の溶液を、10℃に冷却し、そして内部温度を30℃以下に維持しながら、トリフルオロ酢酸（118ml）を添加し、続いて、トリエチルシラン（122ml）を滴下した。反応の完結後（２時間）、反応混合物を真空下で濃縮し、そして次に残渣をトリエンから同時蒸発した。残渣をジクロロメタン（500ml）に溶解し、そしてこの溶液を、10％水性NaOHにより抽出した。水性抽出物を、ジクロロメタン（100ml）により洗浄し、次に水性相をトリス−（２−カルボキシエチル−ホスフィン）（11.0g；38.4mモル）、続いてシクロプロピルメチル臭化物（52.0g；385mモル）により処理した。
【００７７】
得られる溶液を一晩、攪拌し、次にジクロロメタン（400ml）を添加し、そして反応混合物を10℃に冷却した。反応混合物を、濃HCl（35ml）によりpH３〜４に酸性化した。層を分離し、そして有機相を水（100ml）により洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）、そして真空下で濃縮し、油状物を得た。油状物を酢酸エチル（500ml）に溶解し、そして酢酸エチル（1.5L）により溶離する、シリカゲルの4’’×3’’パッドを通して濾過した。濾液を真空下で濃縮し、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]プロピオン酸（100g）を、油状物として得た。
【００７８】
段階３：
N−メチルピロリジン（NMP；260ml）中、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオン酸（50.0g；142mモル）の溶液に、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボニトリル塩酸塩７（17.5g；148mモル；104モル％）、続いてHATU（56.0g；147mモル）及びN, N−ジイソプロピルエチルアミン（62.0ml；46.0g；356mモル；250mモル％）を添加した。内部温度は24℃以下であった。反応を室温で攪拌し、そして反応の進行をHPLC及びLC−MSによりモニターした。３時間後、HPLC分析は、過剰の出発材料を示した。追加のDIPEA（30ml；22.3g；172mモル）を添加し、pH３〜10に上げた。適切な転換は、追加の１時間の反応時間の後、観察されなかった。追加の10％（5.6g；14.7mモル）のHATUを添加し、そして反応は、LC−MS分析により決定される場合、１時間後に完結した。
【００７９】
反応混合物を、NMP（100ml）により希釈し、そしてその混合物を、70℃での加熱により調製され、次に添加のために45℃に冷却された、水（360ml）中、OXONE（商標）(157g; 255mモル；180モル％)の溶液により処理した。OXONE（商標）の水溶液の添加により、攪拌するのが困難である懸濁液を得た。スラリーを、この温度で一晩、攪拌し、LC−MSは、反応の完結を示した。反応混合物を、水（500ml）により希釈し、そして得られる懸濁液をさらに30分間、攪拌した。固形物を濾過し、そして水（500ml）及び次にイソプロパノール（250ml）により洗浄した。フィルターケークを酢酸エチル（1.5L）に溶解し、そしてその溶液を水（1.5L）、水（500ml）及び飽和水性NaCl（500ml）により洗浄した。
【００８０】
有機相を真空下で濃縮し、50gのオフホワイト色の固形物を得た。その固形物を、80℃での油浴において、イソプロパノール（500ml）及び水（50ml）の混合物に溶解し、次にその溶液を、攪拌下で一晩、冷却した。濃白色結晶固形物を生成し、これをイソプロパノール（200ml）により希釈し、濾過のための移動を助けた。固形物を濾過し、イソプロパノール（200ml）により洗浄し、空気乾燥し、次に真空下で乾燥し、標記化合物（42.0g）を結晶性固形物として得た。
【００８１】
N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−（２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−フルオロフェニルエチルアミノ）−プロピオンアミドの他の調製：
段階１：
シクロプロピルメチル臭化物（45g）を、2NのNaOH（333mlの水中、26.6g）中、L−システイン（40.32g）の氷水浴冷却された溶液に、激しい攪拌下で添加した。反応混合物を、氷水浴において３時間、攪拌、そして次に、6NのHClによりpH6に中和した。沈殿した生成物を、真空下により集め、そしてヘキサンにより洗浄し、そしてさらに、凍結乾燥により乾燥し、２−（R）−アミノ−３−シクロプロピルメタンスルファニルプロピオン酸（58g）を、白色固形物として得た。
【００８２】
段階２：
水素化リチウムアルミニウム（200ml、テトラヒドロフラン中、1.5M溶液）を、氷浴において冷却し、そして固体２−（R）−アミノ−３−シクロプロピルメタンスルファニルプロピオン酸（20g）を、ガス発生を調節するために粉末漏斗を通してフラスコ中にタッピングすることにより添加した。添加の完結の後、浴を除き、そして反応混合物を還流下で一晩、加熱した。反応混合物を、氷浴において冷却し、そしてジエチルエステル（110ml）を添加し、続いて5mlの水、5mlの15％水性NaOH及び次に、15ml以上の水を滴下した。氷浴における攪拌を２時間、続け、そして次に反応混合物を真空濾過した。フィルターケークを、ジエチルエーテル部分により洗浄した。濾液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして濃縮し、２（R）−アミノ−３−シクロプロピルメタンスルファニルプロパン−１−オール（15.03g）を、無色の油状物として得た。
【００８３】
段階３：
トルエン（100ml）中、２（R）−アミノ−３−シクロプロピルメタンスルファニルプロパン−１−オール（15.03g）及びトリフルオロアセトアルデヒドメチルヘミアアセタール（12.2g）の溶液を、水を抜き取りながら、Dean Starkにより還流下で24時間、加熱した。反応混合物を濃縮し、４−シクロプロピルメタンスルファニルメチル−２−トリフルオロメチルオキサゾリジン（17.61g）を、淡黄色の油状物として得た。
【００８４】
段階４：
パートA：無水テトラヒドロフラン（145ml）中、４−シクロプロピルメタンスルファニルメチル−２−トリフルオロメチルオキサゾリジン（17.6g）の溶液を、氷水浴において冷却し、そしてクロロトリメチルシラン（11ml）及びリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（テトラヒドロフラン中、1.0M溶液87.5ml）により処理した。反応混合物を、氷浴での冷却下で30分間、攪拌し、そして次に室温で１時間、攪拌した。
【００８５】
パートB：無水テトラヒドロフラン（440ml）中、４−フルオロブロモベンゼン（24ml）の溶液を、-78℃に冷却し、そして次にｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中、1.6M溶液137ml）により処理した。20分後、パートAからの溶液を、この混合物にカニューレにより-78℃で10分間にわたって移した。-78℃で２時間、攪拌し、続いて1NのHCl（300ml）を添加し、そして次に、反応混合物を室温に暖めた。粗生成物を、酢酸エチルにより抽出した。組合された有機層を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、そして８：１〜５：１のヘキサン：酢酸エチルのグラジエントを用いてクロマトグラフィー処理し、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1S−（４−フルオロ−フェニル）エチルアミノ]プロパン−１−オール（13.0g）、及び３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1S−（４−フルオロ−フェニル）エチルアミノ]プロパン−１−オール及び３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1R−（４−フルオロ−フェニル）エチルアミノ]プロパン−１−オールの混合物（5,23g）を含んで成る、混合された画分、及び３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1R−（４−フルオロ−フェニル）エチルアミノ]プロパン−１−オール（1.5g）を得た。
【００８６】
段階５：
無水アセトニトリル中、0.41Mの過ヨウ素酸及び無水アセトニトリル中、0.02Mの三酸化クロムの溶液を、室温で攪拌下で、３時間前に調製した。過ヨウ素酸溶液（477ml）を、氷/アセトン浴において急冷し、そしてまず、三酸化クロム溶液（95ml）、次にアセトニトリル（8.5ml）中、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1S−（４−フルオロ−フェニル）エチルアミノ]プロパン−１−オール（13g）の溶液により処理した。反応をTLC（ヘキサン：酢酸エチル（１：１）中、１％酢酸）によりモニターし、そして三酸化クロムの一部を添加した（1.5時間の反応時間で95ml、4.5時間の反応時間で40ml）。１時間以上の反応時間の後、反応は、HPLC分析によれば、完結した。イソプロパノール（200ml）を添加し、そして反応混合物を室温に暖め、そして次に、濃縮した。
【００８７】
得られる固形物を、酢酸エチルと飽和水性KH2PO4との間に分けた。水性層を酢酸エチルにより抽出し、そして組合された有機層をブラインにより洗浄し、そして無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶媒を除去し、そしてtert−ブチルメチルエーテル（60ml）、続いてジシクロへキシルアミン（4ml）を添加した。反応混合物をフリーザーに一晩、貯蔵した。いくらかの塩結晶化が発生した。ヘキサンを5mlずつ、合計60ml添加し、そして反応混合物をフリーザーに一晩、貯蔵した。上清液をデカントした。上清液は、ジシクロヘキシルアミン塩のいくつかの収穫物（合計4.89g）を生成した。この塩を、2Nの水性HClと酢酸エチルとの間に分け、そして酢酸エチル層を濃縮し、３−シクロプロピルメタンスルホニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1S−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]プロピオン酸（3.29g）を得た。
【００８８】
段階６：
３−シクロプロピルメタンスルホニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−1S−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]プロピオン酸（3.29g）、１−アミノシクロプロパンカルボニトリル塩酸塩（1.33g）、HATU（4.6g）及びジメチルホルムアミド（20ml）の混合物を、ジイソプロピルエチルアミン（3.4ml）により処理し、そしてその反応混合物を室温で一晩、攪拌した。反応混合物を、酢酸エチルと水との間に分けた。酢酸エチル層を、1NのHCl、水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及びブラインにより洗浄し、そして次に、硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして濃縮した。
【００８９】
粗生成物を、ヘキサン：酢酸エチル（１：１）を用いてクロマトグラフィー処理し、そしてさらに、温酢酸エチルからの再結晶化により精製し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−２（R）−（２，２，２−トリフルオロ−１（S）−４−フルオロフェニルエチルアミノ）−プロピオンアミド（2.44g）を、無水の結晶性固形物として得た。XRPD分析は、それがフォームA及びCの90：10混合物であることを示した。
【００９０】
N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−（２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−フルオロフェニルエチルアミノ）−プロピオンアミドの他の調製：
段階１：
鉱油中、水素化ナトリウムの60％懸濁液（10.53g、0.253モル）を、乾燥された500mlのフラスコに添加し、そして乾燥されたヘキサン（50ml）により２度、洗浄した。無水エーテル（200ml）の添加の後、エチルエーテル（100ml）中、２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エタノール（39.3g、0.203モル、90％ee）の溶液を0℃に冷却し、そしてエチルエーテル（50ml）中、トリフルオロメタンスルホニル塩化物（44.24g、0.263モル）の溶液を添加した。
【００９１】
その反応混合物を、室温に暖め、そして１時間、攪拌した。溶媒の除去の後、残渣をヘキサン（500ml）により希釈し、そして飽和炭酸水素ナトリウム溶液及びブラインにより洗浄した。硫酸マグネシウム上での乾燥の後、溶媒をroto-vap上で除去し、トリフルオロメタンスルホン酸２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルエステル（62.83g）を無色の油状物として得、これを、さらに精製しないで、次の段階に使用した。
【００９２】
段階２：
ジクロロメタン（800ml）中、S−トリチル−L−システイン（70g、0.193モル）の攪拌された懸濁液中に、DIPEA（74.55g、0.578モル）及び２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルエステル（62.8g）を25℃で添加した。20時間後、溶媒を除去し、そして残渣をエチルエーテル（800ml）により希釈し、そして1NのHClにより洗浄した。硫酸マグネシウム上での乾燥の後、溶媒をrot-vap上で除去し、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸（110g）を得た。1H NMRは、生成物がジアステレオマーの混合物（９：１）であることを示す。
【００９３】
段階３：
ジクロロメタン（150ml）及びTFA（89.6g）中、２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸及び２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（R）−（４−フルオロフェニル）エチルアミノ]−３−トリチルスルファニルプロピオン酸の（９：１）混合物（109g）を充填する2Lのフラスコ中に、トリエチルシラン（45.6g）を添加し、そして氷浴冷却した。添加の完結の後、氷浴を除き、そして反応混合物を室温に暖めた。１時間後、HPLC−MSは、反応の完結を示した。溶媒の除去の後、残渣を、1NのNaOH（500ml）により希釈し、そしてヘキサンにより抽出した。
【００９４】
水性相に、ジオキサン（250ml）、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン−HCl（5.5g）及びシクロプロピルメチル臭化物（26g）を添加した。12時間後、HPLCは、反応の完結を示した。ジオキサンを除去し、そして反応混合物を濃塩酸によりpH２〜３に酸性化し、そしてエチルエーテルにより抽出した。組合されたエチルエーテル層をブラインにより洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして濃縮し、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）−エチルアミノ]−プロピオン酸（38.86g）を、黒みかかった油状物として得た。
【００９５】
段階４：
DMF（100ml）中、３−シクロプロピルメタンスルファニル−２（R）−[２，２，２−トリフルオロ−１（S）−（４−フルオロフェニル）−エチルアミノ]−プロピオン酸（38.8g）の溶液中に、１−アミノシクロプロパン−カルボニトリル塩酸塩（15.1g）、HATU（48,3g）及びDIPEA（55.4ml）を、氷浴冷却下で添加した。添加の完結の後、氷浴を除き、そして反応混合物を室温に暖めた。２時間後、HPLCは反応の完結を示した。反応混合物を、1Lのエチルエーテルにより希釈し、そして飽和炭酸水素ナトリウム溶液及びブラインにより洗浄し、硫酸マグネシウム上での乾燥の後、溶媒を除去し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルファニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（41.4g）を、褐色の油状物として得た。
【００９６】
段階５：
N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルファニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドをメタノール（400ml）に溶解し、そして温水（400ml）中、OXONE（商標）（88.9g）の溶液を添加した。１時間後、メタノールをroto-vap上で除去し、そして残渣を酢酸エチルにより抽出した。有機抽出物を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして濃縮し、粗生成物（46.73g）を白色固形物として得、LC−MSは、生成物が7.8％のスルホキシドを含んでいることを示した。その粗生成物をメタノール（500ml）に再溶解し、そして水（300ml）中、OXONE（商標）（18g）の溶液を添加した。1時間後、反応混合物を上記のようにして操作し、粗生成物（100g）を得、これを、酢酸エチル及びヘキサンから結晶化し、標記化合物（27.5g）を得た。
【００９７】
上記方法を、２度、反復し、標記化合物の28g及び33gのバッチを調製した。バッチを組合し、そして80〜90℃でイソプロパノールから結晶化し、結晶性生成物（76g）を、純粋なフォームA（XRPD分析によれば）として、及び4.5gの追加の標記化合物を、フォームA（約10％のフォームBを含む）として得た。
【００９８】
N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドの多形体形の調製方法：
フォームA：
（i）２−プロパノール（30ml）中、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドをメタノール（1.0023g）（いくらかのフォームB又はCを含むフォームA）の懸濁液を、80℃に加熱し、透明な溶液を生成した。
【００９９】
その溶液を、0.2μmのフィルターを通して、前もって暖められたフラスコ中に濾過した。水（3.0ml）を添加し、そして溶液は透明のまま存続した。フラスコを、5℃/時の速度で、80℃に調節された冷却の水浴中に配置した。約23時間後、白色結晶を濾過により集めた。固形物を真空下で２時間、乾燥し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、純粋なフォームAとして得た。
【０１００】
（ii）エタノール（1.5ml）を、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（29.3mg）（いくらかのフォームB又はCを含むフォームA）に添加した。その溶液をホットプレート上で加熱還流した。透明な溶液を得た。溶液を、前もって暖められた注射器及び0.2μmのナイロン注射器フォームを通して濾過した。濾液を、前もって暖められたバイアルに集められた。バイアルをホットプレートに置き、そして加熱を切り、ゆっくり冷却した。固形物を真空濾過により集め、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを純粋なフォームAとして得た。
【０１０１】
（iii）アセトニトリル：水の２：１（体積）溶液を調製し、そしてN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（いくらかのフォームB又はCを有するフォームA）を添加した。バイアルにキャップをし、そして60℃のホットプレート上に置き、透明な溶液を得た。追加の量のN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、上記溶液に添加した。
【０１０２】
次に、その溶液を、0.2μmのナイロンフィルターを通して、暖かな受容バイアル中に濾過し、そしてキャップをした。ホットプレートを停止し、そしてその溶液を、室温にゆっくり冷却した。沈殿物を濾過し、そして空気乾燥し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、純粋なフォームAとして得た。
【０１０３】
（iv）N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（いくらかのフォームB又はCを有するフォームA）を、アセトンに溶解し、透明な淡黄色の溶液を得た。その溶液を、0.2μmのナイロンフィルターを通して、２−ドラムバイアル中に濾過し、そして箔により被覆した。１つの穴を箔に開け、ゆっくりした蒸発を可能にした。溶媒を完全に蒸発し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、純粋なフォームAとして得た。
【０１０４】
（v）N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、塩化メチレンに添加し、そして45℃のホットプレート上に置いた。固形物は、透明な淡黄色の溶液で存在した。その溶液を、0.2μmのナイロンフィルターを通して、暖かな受容バイアル中に濾過した。バイアルをキャップし、そしてホットプレートを止めた。サンプルを室温にゆっくり冷却した。固形物を、真空濾過により集め、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、純粋なフォームAとして得た。
【０１０５】
（vi）N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（24.4mg）（いくらかのフォームB又はCを有するフォームA）を、トルエン（500μl）に添加した。その溶液を、ホットプレート上で約100℃に加熱した。透明な溶液が得られた。その溶液を、前もって暖められた注射器及び0.2μmのナイロン注射器フィルターを通して濾過した。濾液を、前もって暖められたバイアルに集めた。バイアルをホットプレート上に置き、そして加熱を停止し、ゆっくり冷却した。固形物を真空濾過により集め、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、純粋なフォームAとして得た。
【０１０６】
フォームB：
N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（20.6mg）（主にフォームA）を、トリフルオロエタノール（1.5ml）に添加し、そしてその混合物を約80℃に加熱した。透明な溶液を得、これを、次に濾過した。濾過された溶液を、ホットプレート上で80℃から55℃に、1℃/時の速度で冷却した。固形物は、この点で存在せず、そしてサンプルを冷蔵庫に置いた。サンプルを冷蔵庫から取り出した後、固形物をすぐに濾過により集め、そして空気乾燥し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、フォームA及びBの混合物として得た。XPRD分析は、生成物におけるフォームBの量が約90％であったことを示した。
【０１０７】
フォームC：
少量のN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミド（フォームA）を、単一のステンレス鋼ボールを有するステンレス鋼容器中に配置した。材料を、Retschミキサーミル上で30s-1の振盪数で20.0分間、粉砕し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、純粋なフォームCとして得た。
【０１０８】
フォームD：
（i）少量のN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドフォームA材料を、Inel毛管中に充填した。次に、その毛管を、融点装置に配置し、そして170〜171℃に約10℃/分で加熱した。次に、加熱を200℃まで続けた。次に、毛管を融点装置から除き、そしてすぐに、液体窒素浴に配置し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、フォームDとして得た。XPRD分析は、生成物におけるフォームDの量が約90％純度であることを示した。
【０１０９】
（ii）少量のN−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドフォームA材料を、ステンレス鋼棒を備えたステンレス鋼シリンダーに配置し、そしてキャップをした。サンプルを、液体窒素により充填されるSPEX/Certiprepモデル6750フリーザーミルにおいて粉砕した。個々の粉砕間に冷却を伴って、２分間の粉砕サイクルのプログラムを設定した。そのサイクルを、合計20分の粉砕時間、10度、反復した。次に、サンプルを、デシケーターに配置し、そして周囲温度に30分間、平衡化し、N−（１−シアノシクロプロピル）−３−シクロプロピルメタンスルホニル−2(R)−[２，２，２−トリフルオロ−1(S)−４−（フルオロフェニル）エチルアミノ]−プロピオンアミドを、フォームDとして得た。XPRD分析は、生成物におけるフォームDとして得た。XPRD分析は、生成物におけるフォームDの量が約90％であったことを示した。
【０１１０】
式（I）の化合物の多形現象純度を、約３％の検出誤差を有するXRPD分析を用いて決定した。他のより敏感な分光測定方法、例えばRaman分光法及び固体状態NMRが本発明の化合物の多形現象純度を、より正確に決定するために使用されることは理解されるべきである。
【０１１１】
生物学的例：
例１：カテプシンSアッセイ：
種々の濃度での試験化合物の溶液を、10μlのジメチルスルホキシド（DMSO）において調製し、そして次に、アッセイ緩衝液（MES、50mM（pH6.5）；EDTA、2.5mM；及びNaCl, 100mM；β−メルカプトエタノール、2.5mM；及びBSA、0.00％を含んで成る；40μl）に希釈した。ヒトカテプシンS（25μlのアッセイ緩衝液中、0.05pモル）を、前記希釈溶液に添加した。アッセイ溶液を、シェーカープレート上で５〜10秒間、混合し、被覆し、そして室温で30分間インキュベートした。Z−Val−Val−Arg−AMC（10％DMSOを含むアッセイ緩衝液25μl中、4nモル）を、アッセイ溶液に添加し、そして加水分解を、５分間、分光測定した（λ460nmで）、見掛け損害定数（Ki）を、標準の数学的モデルを用いて、酵素進行曲線から計算した。
【０１１２】
例２：インビトロIip10蓄積アッセイ：
通常の抗原提供の間、Iip10はタンパク質加水分解的に分解され、ペプチドフラグメントの負荷、及び抗原提供細胞の表面上への続くMHC−II提供を可能にされる。その切断工程はカテプシンSにより仲介される。従って、Iip10アッセイは、延長抗原提供による、カテプシンSを阻止する化合物の能力のインビトロ測定である。Iip10の低濃度での蓄積を引起す化合物は、抗原の提供を阻止することが予測される。
方法：
【０１１３】
Raji細胞（４×106）を、10％（v/v）のFBS, 10mMのHEPES、2mMのL−グルタミン及び1mMのピルビン酸ナトリウムを含むRPMI培地において、0.02％DMSO又は異なった濃度のカテプシンSインヒビターと共に、５％CO2の湿潤された雰囲気下で37℃で４時間、培養した。培養期間の後、細胞を冷PBSにより洗浄し、そして次に、細胞を、NP-40溶解緩衝液（5mMのEDTA、1％NP-40、150mMのNaCl及び50mMのトリス、pH7.6）及びプロテアーゼインヒビターに溶解した。タンパク質決定を行い、そして溶解物サンプルを、還元SDSサンプル緩衝液において煮沸した。
【０１１４】
タンパク質を、12％NuPAGE（商標）Bis-Trisゲル上での電気泳動により分離した。次に、タンパク質を、ニトロセルロース膜に移し、そしてブロッキング緩衝液（PBS−Tween中、５％脱脂粉乳）とのインキュベーションの後、ブロットを、ヒトCD74不変鎖合成ペプチドに対する一次抗体（1.5〜2μg/mlのマウス抗−CD74モノクローナル抗体、PIN.1, Stressgen Biotechnologies）と共にインキュベートした。次に、ブロットを、二次抗体、すなわちホースラディシュペルオキシダーゼ接合ロバ抗−マウスIgGと共に１：10,000希釈度でインキュベートした。免疫反応性タンパク質を、Pierce Super Signal（商標）West Pico化学発光基質を用いて、化学発光反応により検出した。
【０１１５】
配合例：
例１：式（I）の化合物を含む代表的医薬配合物：
経口配合：
懸濁配合：
フォームA                    １〜100mg
キサンタンガム                2.5mg
Tween80                       5mg
スクロース                    100mg
ソルビン酸                    1mg
メチルパラベン                1.8mg
プロピルパラベン              0.2mg
水                            1ml
錠剤配合：
式（I）の化合物               1％
微晶性セルロース              73％
ステアリン酸                  25％
コロイド状シリカ              1％
【０１１６】
前述の発明は、例示により、及び明確且つ理解のために、いくらか詳細に記載されて来た。変更及び修飾が本発明の範囲内で実施されることは当業者に明らかであろう。従って、上記の記載は例示的であって、制限的でないことが理解されるべきである。従って、本発明の範囲は、上記の記載に関して決定されるべきではなく、しかし代わりに、特許請求の範囲に関して決定されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】図１は、式（I）の化合物フォームAのX−線粉末回折（XRPD）である。
【図２】図２は、式（I）の化合物フォームAのFourier赤外線分光法（FT-IR）である。
【図３】図３は、式（I）の化合物フォームBのX−線粉末回折（XRPD）である。
【図４】図４は、式（I）の化合物フォームBのFourier赤外線分光法（FT-IR）である。
【図５】図５は、式（I）の化合物フォームCのX−線粉末回折（XRPD）である。
【図６】図６は、式（I）の化合物フォームDのX−線粉末回折（XRPD）である。
【図１】
2008513473.tif 000026
【図２】
2008513473.tif 000027
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
2008513473.tif 000032
2008513473.tif 000033
2008513473.tif 000034