(57)【要約】  本発明は、リン脂質エステル類似体を用いて、被験体にある肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、扁平上皮細胞癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、グリオーマ、乳癌および膵臓癌からなる群から選択された、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の治療方法、検出方法および場所の特定方法を提供する。【選択図】図１０
2008545614.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有する被験体または癌を有すると疑われる被験体において、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、扁平上皮細胞癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、頸部癌、グリオーマ、乳癌および膵臓癌からなる群から選ばれる、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌を検出し、場所を特定する方法であって、該方法は、以下の工程：
該被験体にリン脂質エーテル類似体を投与する工程；および
被験体において再発した癌、放射線に非感受性の癌または転移した癌を有すると疑われる臓器が、周囲の領域（単数または複数）よりも高いレベルの該類似体を滞留するかどうかを決定する工程であって、より高い滞留領域が、該再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の検出および位置を示す、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記リン脂質類似体が、以下：
【化１】
2008545614.tif 000023
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群から選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキル置換基であり、あるいは、
【化２】
2008545614.tif 000024
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選ばれ、そしてＺは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選ばれ、Ｒはアルキルまたはアリールアルキル置換基である、
より選択される、方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、Ｘが、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔからなる放射性ハロゲン同位体の群より選ばれる、方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法であって、前記リン脂質エーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであって、ここで、ヨウ素が、放射性同位体の形態である、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記検出がＰＥＴ、ＣＴ、ＭＲＩ走査方法およびこれらの組み合わせにより行われる、方法。
【請求項６】
被験体における、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の治療のための方法であって、該方法が、以下の工程：
前記被験体に、リン脂質エーテル類似体を含む化合物の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記再発した癌、放射線及び化学物質に非感受性の癌または転移した癌が、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、扁平上皮細胞癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、頸部癌、グリオーマ、乳癌、膵臓癌および癌肉腫より選択される群において生じる、方法。
【請求項８】
請求項６に記載の方法であって、ここで、前記リン脂質類似体が、以下：
【化３】
2008545614.tif 000025
Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選ばれ；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基であり、
あるいは
【化４】
2008545614.tif 000026
Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選択され、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、
より選択される、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、Ｘが、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔおよびこれらの組み合わせからなる放射性ハロゲン同位体の群より選択される、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記リン脂質エーテル類似体の有効量が、少なくとも２つの同位体の組み合わせであって、一方は、軌道範囲が約０．１Å〜１ｍｍであり、もう一方は、軌道範囲が約１ｍｍ〜１ｍである、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記リン脂質エーテル類似体の有効量が、少なくとも２つの同位体、１２５Ｉおよび１３１Ｉの組み合わせである、方法。
【請求項１２】
請求項６に記載の方法であって、前記リン脂質エーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであって、ここで、ヨウ素が放射性同位体の形態である、方法。
【請求項１３】
請求項６に記載の方法であって、前記リン脂質エーテル類似体の有効量が分割される、方法。
【請求項１４】
請求項６に記載の方法であって、前記リン脂質エーテル類似体の有効量が、約０．５μＣｉ〜約３Ｃｉであり、線形かつ用量依存的な様式で治療可能である、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記用量が、前記癌の体積に対して調節可能である、方法。
【請求項１６】
請求項１４に記載の方法であって、ここで、前記放射線および化学物質に非感受性の腫瘍に対する用量が、放射線および化学物質に感受性の腫瘍に対する用量よりも多く、３Ｃｉ未満であり、前記癌の体積に対して調節可能である、方法。
【請求項１７】
再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌、転移した癌を治療するための医薬組成物の製造のためのリン脂質エーテル類似体の使用。
【請求項１８】
請求項１７に記載の使用であって、前記リン脂質類似体が、以下：
【化５】
2008545614.tif 000027
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選ばれ；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基であり、
あるいは
【化６】
2008545614.tif 000028
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選択され、そしてＺは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である
より選択される、使用。
【請求項１９】
Ｘが、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔおよびこれらの組み合わせからなる放射性ハロゲン同位体の群より選択される、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
請求項１７に記載の使用であって、前記リン脂質エーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであって、ここで、ヨウ素が放射性同位体の形態である、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
【０００２】
本願は、米国仮出願第６０／５９３，１９０号（２００４年１２月２０日出願）及び米国出願１１／−−−−（２００５年１２月２０日出願）より優先権を要求し、これらの出願は全て、あらゆる目的のために参照することにより本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
【０００４】
本発明は、一般的に、リン脂質エーテル類似体およびその使用に関し、詳細には、種々のタイプの癌（例えば、非小細胞肺癌、前立腺癌及びこれらが転移したもの）の、転移の診断、治療、薬物速度論、線量測定、及び毒性研究のための、リン脂質エーテル類似体及びこの類似体の組み合わせの使用に関する。
【０００５】
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）
【０００６】
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、今日、米国において、癌による死亡の主因である。適切に選ばれた患者は、外科的切除により、回復（ｃｕｒｅ）への最良の機会を与えられる。したがって、局所的、部位的および遠隔的な転移拡大を正確に術前評価することは、最適なマネージメントにとって重要である。
【０００７】
感度が改善されたため（特にＣＴ造影と比べた場合）、ＦＤＧ  ＰＥＴ走査による造影は、最近ではＮＳＣＬＣの造影の「金標準（ｇｏｌｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ）」になっている。しかしながら、縦隔リンパ節合併症（ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）を識別するための感度は約９０％しかなく、特異度の欠如（特に炎症性疾患又は肉芽腫性疾患の患者における特異度の欠如）が特に問題である。その上、脳腫瘍または脳への転移を診断するための使用は、正常な脳組織の高代謝バックグラウンドにより制限される。
【０００８】
ＮＳＣＬＣに罹患した全患者の半数近くに生じる節転移が、おそらく最も頻繁に見られる回復への障害であるので、縦隔リンパ節部の状態（ｓｔａｔｕｓ）の評価は必要不可欠である。正確な病期分類（ｓｔａｇｉｎｇ）によってもまた、患者は不必要で治効なき外科手術を受けることがなくなる。従って、現在利用可能な如何なる技術よりも感度が良く、特異的で、かつ正確な造影技術が依然として必要である。
【０００９】
現在の慣用的な治療法適用様式（ｍｏｄａｌｉｔｙ）には限度がある。コンピューター断層撮影（ＣＴ）および核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による解剖学的造影は、全身のスクリーニングに関しては非現実的であるが、局所領域の広がりを評価するために最も広く使用されている非侵襲的な造影方法である。しかしながら、ＣＴでは、異常な節を診断するために１センチメートルを超えるサイズの基準に依存している。
【００１０】
１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）を用いたポジトロン放出断層撮影（ｐｏｓｉｔｒｏｎ−ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ（ＰＥＴ））走査は、腫瘍の造影技術として多大な関心を生み出してきた。最近の研究では、ＮＳＣＬＣの病期診断への標準的なアプローチ（ＣＴ、超音波、骨の走査など）ならびに縦隔リンパ節および遠隔部位における転移を検出するＰＥＴ走査の能力が予め比較された。縦隔合併症は病理組織学的に確かめられ、遠隔転移は他の造影試験により確かめられた。縦隔転移を検出するＰＥＴの感度および特異度はそれぞれ９１％および８６％である；遠隔転移を検出するＰＥＴの感度および特異度は、それぞれ８２％および９３％である。これを、縦隔合併症のＣＴ走査の感度および特異度、それぞれ７５％および６６％と比較する。３９の研究および１０００人を超える患者が関与したメタ分析でもまた、縦隔病期診断（感度および特異度は、ＦＤＧ−ＰＥＴではそれぞれ８５％および９０％であり、ＣＴ走査では６１％および７９％である）ではＦＤＧ−ＰＥＴがＣＴよりも正確であるということが見出された。しかしながら、ＣＴが肥大した縦隔リンパ節を示した場合（７８％）には、ＦＤＧ−ＰＥＴはより小さな特異度になった。
【００１１】
ＦＤＧ−ＰＥＴが患者における無駄な開胸術を減少させることが、示されている。しかしながら、偽陽性および偽陰性の割合のために、確認のための縦隔鏡検査がしばしば推奨される。例えば、過去に遡って行われた、ＮＳＣＬＣに罹患した２００人を超える患者が関与した研究により、ＦＤＧ−ＰＥＴでの感度、特異度、陽性および陰性の予測値ならびに精度がそれぞれ６４％、７７％、４５％、８８％および７５％であることが見出された。
【００１２】
ＦＤＧ−ＰＥＴはまた、胸腔外の疾患、特に肺癌の中期の患者を診断する役割を果たす。３００人を超える患者が関与した、アメリカ内科医師会の行った研究により、思いもよらない転移性の疾患（ｕｎｓｕｓｐｅｃｔｅｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）または第二の原発性悪性腫瘍（ｓｅｄｏｎ  ｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）が、２８７人の患者のうち１８人（６．３％）で識別されたことが見出された。全てではないが、いくつかの研究では、進行した疾患を正確に識別することにより、ＰＥＴは５人に１人の患者に不要な開胸術を回避させるであろうことが示唆されている。
【００１３】
ＣＴ走査のような従来の解剖学的造影技術は、治療後の生存を予測することも苦手である。シスプラチンベースの化学／放射線治療を同時に受けている、又は放射線治療のみの治療を受けている、７３人のＮＳＣＬＣ患者が関与した最近の研究において、従来のＣＴ造影による反応は生存率に相関がなかった。しかしながら、ＦＤＧ−ＰＥＴ走査による反応は、生存率と強く相関していた（ｐ＜０．００１）。追跡ＰＥＴ走査の日からの生存率は、ＰＥＴで完全に反応した２４人の患者に関しては、１年および２年でそれぞれ８４％および８４％であったが、完全反応しなかった３２人の患者に関してはそれぞれ４３％および３１％しかなかった（ｐ＝０．０１０）。これらの結果は、近年他の著者によって報告された同様の発見を裏付け、腫瘍の生物学的悪性度とＰＥＴ走査での取り込みとの相関を示し、ＰＥＴ造影が治療完了からずっと後の将来の生存率を高率で予測できることを示した。
【００１４】
ＦＤＧ−ＰＥＴ造影が、ＮＳＣＬＣに罹患した患者での脳転移性疾患を識別するのに不十分な（ｐｏｏｒ）方法であることは、一般的に認められている。正常な状況下では、脳の灰白質はグルコースをよく使用し、それゆえ、ＦＤＧの取り込みは正常では高い。大脳転移性疾患は、しばしば非常に代謝性であり、しばしばＦＤＧ取り込みの増加を実証する一方で、高頻度で脳の灰白質より少なく、したがって、大脳転移は明白ではないかもしれない。ＮＳＣＬＣに罹患した患者において、脳転移性疾患を識別する感度および特異度は、ＦＤＧ−ＰＥＴでは６０％および９９％であり、従来の造影では１００％および１００％である。したがって、ＦＤＧ−ＰＥＴ造影は、脳への転移性疾患に関して、ＮＳＣＬＣを罹患した患者を評価する最良の方法であるとは考えられていない。
【００１５】
ＦＤＧの他の欠点は、腫瘍に特異的ではなく、悪性と非悪性との両方の代謝亢進状態の組織に蓄積するということである。肺のＦＤＧ−ＰＥＴでの偽陽性の結果（放射線異常が癌に起因しない場合の陽性の結果）の圧倒的多数は、炎症性および感染性要因に起因する。ＦＤＧは非特異的なトレーサーであり、感染領域または炎症領域に蓄積する。肺において、これらの領域は、局所的な肺実質結節またはより異なる領域（亜区域性、区域性もしくは葉性）あるいは肺門および縦隔節であり得る。日本の近年の研究において、直径が１〜３ｃｍである１１６の肺結節のうち、７３の悪性の結節のうち１５がＦＤＧ−ＰＥＴで偽陰性であり、４３の良性の結節のうち１５がＦＤＧ−ＰＥＴで偽陽性であった。スリガラス状の不透明な（ｇｒｏｕｎｄ  ｇｌａｓｓ  ｏｐａｃｉｔｙ）結節を生じる限局性肺炎（ｆｏｃａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓ）では、偽陽性の割合は８０％もの高さであった。別の研究では、肺外に癌を有する１０人の患者に、肺で偽陽性のＦＤＧ−ＰＥＴの取り込みがあった；６人は１つの病巣または複数の病巣での強度の取り込みがあり、４人はより区域性または葉性のパターンでの取り込みがあった。１０人全ての患者において、取り込みは硬化または無気肺によるものであり、後で行われた最終診断は肺の炎症または感染であった。活性のある細菌性の肺炎に加えて、偽陽性のＦＤＧ−ＰＥＴの結果は、肺における多数の他の感染状態および炎症状態で生じ得る。アメリカ中西部では、多くの無症状の人がヒストプラスマへの感染経験（ｐｒｅｖｉｏｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）に起因する肺結節および肥大した節を有する；これらの結節の多くは休止しているが、くすぶった状態または活発な状態での感染を示すものもある。肺サルコイドーシスは、おそらく肺におけるより一般的な活性のある状態の炎症性肉芽腫過程の１つである。興味深いことに、肺サルコイドーシスに対して経口コルチコステロイド剤で治療された患者において、連続的にＦＤＧ−ＰＥＴ走査が行われる時、ＦＤＧ取り込みは減少し、次いで、消失した。
【００１６】
ＦＤＧ−ＰＥＴはまた、低代謝率の悪性腫瘍（例えば、気管支細胞の癌またはカルチノイド）では、高頻度で陰性である。
【００１７】
それゆえ、ＮＳＣＬＣに罹患した患者における初期の転移性疾患を正確に識別することのできる放射性医薬品は、病期診断と治療への反応との両方に関して、患者のケアに重大な影響を有するであろう。この領域では、ＰＥＴ造影はＣＴに比べて診断効率が改善されてはいるが、非特異的な代謝活性に基づかず、かつ脳を含む全身を非侵襲的に選別する腫瘍特異的機能に基づく正確な造影技術が依然として必要とされている。
【００１８】
前立腺癌
【００１９】
２００４年だけでおよそ２３０，１１０人の新規の前立腺癌の症例が米国で診断されるであろう。放射線による前立腺切除で前立腺癌に制限された臨床的な臓器の最も確実な局所治療（ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ  ｌｏｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）における技術的改良にも関わらず、多くの男性が主要な治療のみで治療され、追跡調査（ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ）で、４０％もの患者が長期で生化学的再発を経験するであろう。この再発は、代表的には、０．４ｎｇ／ｍｌ以上の手術後ＰＳＡレベルとして定義される。その理由は、この閾値を超えるＰＳＡレベルの患者には、一般的には、６〜４９ヵ月以内に再発した臨床的証拠が表面化するためである。もっとも、０．２以上のＰＳＡレベルがさらに最近提案されたのだが。結果は限定されるが、臨床的および病理的診断基準は、現在、全身的疾患の再発の可能性の決定に利用されている。全身的な再発の可能性が増加する要因としては、術前の高いＰＳＡレベル、並びに、グリーソンスコア＞７、精嚢合併症（ｓｅｍｉｎａｌ  ｖｅｓｉｃｌｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）及びリンパ節合併症（ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）を含む、外科的標本の病理的特徴が挙げられる。対照的に、関節外の拡張、明確な外科的限界およびグリーソンスコア＜７は、局所的再発と一般的に関連づけられる要因である。さらに、前立腺切除に伴うＰＳＡ上昇速度は、疾患が局所的に再発したかまたは全身的に再発したかを決定するために利用されている。例えば、Ｐａｒｔｉｎらは、０．７５ｎｇ／ｍｌ／年未満のＰＳＡ上昇が局所的再発とより頻繁に関連していることを報告した。その上、Ｐａｔｅｌらは、ＰＳＡが２倍になる時間が１２ヵ月を超えることは局所的再発に相関することを報告した。これらの臨床的および病理的診断基準に関わらず、発明者らは、依然として、局所的治療に適した患者を的確に選ぶことはできず、その結果、多くの男性がホルモンの不必要なアブレーションを受け得る。
【００２０】
前立腺癌に限定された臨床的臓器を有する患者またはあると見なされた臓器に限定された疾患の限定的治療にともなう生化学的再発を有する患者を治療する際の最大の難題の１つは、依然、転移性疾患に対して局所的疾患を正確に区別することである。この診断能力は、効率的な局所的治療の治療法適用様式（外科的手術、外部光線照射、近接照射療法および寒冷療法が挙げられる）の利益を受け得る患者を識別するために重要である。発明者らは、現在、病期診断の正確な方法を有していないので、不顕性の転移性疾患に罹患した患者は、不必要にも、治療の危険要因に結びつく局所的治療を受け得る。その上、局所的再発によってＰＳＡが上昇し、全身的再発を確実に除外できない患者は、ホルモンのアブレーションを不必要にも経験し得る。これは、一般的に治効的であるとは考えられておらず、ホルモンとは独立した前立腺癌の進行と同様に、骨粗鬆症の進展、性欲減退、体重増加、更年期の症状および全体的な不快感に関与する。
【００２１】
コンピューター断層撮影（ＣＴ）および核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）などの従来の造影研究は柔組織転移を判断するのに有用であるが、前立腺癌の大多数は骨組織にのみ転移する。したがって、疾患を判断する際のＣＴおよびＭＲＩ走査の有用性は次善のものであり、局所的に再発した前立腺癌または転移した前立腺癌のどちらに対しても、より感度の良い造影の治療法適用様式が必要である。インジウム−１１１  ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ（ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ，Ｃｙｔｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を用いた放射免疫シンチグラフィーは、前立腺を切除した、ＰＳＡの上昇がある患者であって、かつ、他の造影研究では不顕性の転移性疾患の臨床的疑いが高く転移性疾患の明確な証拠がない患者に利用されてきた。この走査は、放射標識したマウスのモノクローナル抗体に基づく。この抗体は、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗体）に関して特異的であり、正常前立腺上皮細胞と悪性前立腺上皮細胞との両方に特異的に発現される膜貫通タンパク質である。ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ放射免疫シンチグラフィーは、ＰＳＡが上昇した患者において前立腺床（ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｂｅｄ）で局所的に再発した疾患であると診断の裏づけとして示される一方、この走査の臨床的結果は、感度の範囲が４４％と９２％との間であり、特異度が３６％と８６％との間で幾分可変的である。その上、その後の生検が局所的再発に関する標準的な基準として利用された時、偽陰性のＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ研究は、１０％〜２０％の症例を報告している。さらに、ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔの偽陽性の取り込みは、神経線維腫症、リンパ腫、腎癌、骨盤腎、筋脂肪腫および髄膜腫、ならびに脊椎動物の骨髄において報告されている。このデータによると、前立腺癌の不顕性の転移の危険要因のある患者にＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ走査を使用することは、依然議論の余地がある。
【００２２】
転移性前立腺癌に罹患している患者において、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）造影が、骨転移の代謝活性を測定するために近年使用されている。この技術は、活性のある骨転移と、転移性疾患の成功した治療にともなう骨の治癒の結果として生じる骨芽細胞活性とを区別するのに効率良いことが証明されている。この事柄は、骨走査またはＣＴのいずれかよりもＰＥＴによってより良く診断され得る。その上、従来の骨走査では多くの場合で重大な変化が見られなかったのに対して、ＰＥＴ走査の所見の変化は、転移性前立腺癌に罹患した患者の全身治療の開始に続く最初の４週間で見ることができる。したがって、造影に使用するＰＥＴ技術は、これらの患者での治療に対する反応をモニタリングするのに有用であり得る。１８Ｆ−ＦＤＧを用いたＰＥＴ走査は、造影技術として重要な利益を生み出した。最近では、ＦＤＧ−ＰＥＴは、前立腺癌に罹患した患者において、活動的な骨転移と静止した骨転移とを区別し得ることが示された。ＦＤＧ取り込みの強度は、これらの病巣の代謝活性および生物学的活性を反映すると考えられており、対照的に、テクネチウム−ジホスホン酸化合物を用いる従来の骨走査は、非特異的骨芽細胞活性が、治療にともなう偽陽性の徴候として検出され得る。さらに、骨髄中に最初に播種した初期の転移では、骨芽細胞の反応が生じるまで徴候が必ずしも生じないので、偽陰性の解釈が得られ得る。したがって、持続的に陽性の骨走査は、残存している成育可能な転移の存在を必ずしも示唆しておらず、かつ陰性の骨走査結果は、患者の転移性腫瘍の負荷（ｂｕｒｄｅｎ）を正確には反映し得ない。ＦＤＧ−ＰＥＴは、それゆえ、骨転移のある患者のマネジメントを指導する際に利益があることが証明され得、過去に遡る研究においてＦＤＧ−ＰＥＴおよびらせんＣＴは、転移性疾患を検出する際に１１１Ｉｎ−モノクローナル抗体造影よりも効率的であることが独立して示されている。
【００２３】
ＦＤＧ−ＰＥＴ走査は、前立腺癌に罹患した患者においては有望な造影技術であるが、ほとんどの前立腺癌はゆっくり増殖し、したがって、ＦＤＧを蓄積しない。それゆえ、その薬剤ではよく造影されない。その上、ＦＤＧは尿中に排泄され、膀胱中のＦＤＧの蓄積により、前立腺癌の局所的再発を検出する可能性が最小となる。実際、Ｍｏｒｒｉｓらは、転移部位がトレーサーの排泄の解剖学的経路によって不明瞭にされる場合、ＦＤＧ−ＰＥＴのみによる柔組織転移の検出が困難であることを報告している。さらに最近では、ＰＥＴ−ＣＴは、疑わしいが不顕性の転移を有する患者において転移病巣を識別する際に、ＰＥＴ単独の場合よりも効率的であることが知られている。多様な腫瘍タイプに罹患した患者への期待される研究において、多くの放射性物質の解釈にともなう特異度および正確さは、ＰＥＴ−ＣＴで顕著に高くなった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
したがって、より感度が良く特異的な造影試験、分子造影剤（例えばリン脂質エーテル化合物（ＰＬＥ））を開発する必要がある。膀胱に最小限しか蓄積せず、前立腺癌を罹患した患者における初期の転移性疾患を正確に識別でき、病期診断と治療への反応との両方に関して患者のケアに重大な影響を与える腫瘍選択的放射線医薬品を有することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明の要旨
【００２６】
本発明は、癌を有する被験体または癌を有すると疑われる被験体において、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌（これらの癌は、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌（Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｃａｎｃｅｒ）、扁平上皮細胞癌、腸癌（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、頸部癌（Ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、グリオーマ、乳癌および膵臓癌からなる群から選択される）を検出し、場所を特定するための方法を提供する。該方法は、以下の工程：（ａ）リン脂質エーテル類似体を被験体に投与する工程；および（ｂ）被験体において再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌を有すると疑われる臓器が、周囲の領域（単数または複数）よりも高いレベルの類似体を滞留するかどうかを決定する。ここで、より高い滞留領域は、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の検出および位置を示唆する。
【００２７】
より好ましい実施態様において、リン脂質類似体は、以下：
【００２８】
【化１】
2008545614.tif 000003
【００２９】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選ばれ；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群から選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、あるいは
【００３０】
【化２】
2008545614.tif 000004
【００３１】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選択され、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、
より選択される。さらに、特定の実施態様において、Ｘは、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉおよび２１１Ａｔからなるハロゲン放射性同位体の群より選択される。より好ましくは、リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ヨウ素は放射性同位体の形態である。この方法において、好ましくは、検出がＰＥＴ、ＣＴ、ＭＲＩ走査方法およびその組み合わせにより行われる。
【００３２】
本発明の別の実施態様は、被験体において再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の治療方法を提供する。この方法は、リン脂質エーテル類似体を含む有効量の化合物を被験体に投与する工程を包含する。好ましい実施態様においては、再発した癌、放射線及び化学物質に非感受性の癌または転移した癌は、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、扁平上皮細胞癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、頸部癌、グリオーマ、乳癌、膵臓癌および癌肉腫から選択される群において生じる。また好ましくは、リン脂質類似体は、以下：
【００３３】
【化３】
2008545614.tif 000005
【００３４】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群から選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、あるいは
【００３５】
【化４】
2008545614.tif 000006
【００３６】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選択され、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、より選択される。この方法において、好ましくは、Ｘは、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔおよびこれらの組み合わせから成るハロゲン放射性同位体の群より選択される。より好ましくは、リン脂質エーテル類似体の有効量が、少なくとも２つの同位体の組み合わせであり、一方は軌道範囲（ｐａｔｈ  ｒａｎｇｅ）が約０．１Å〜１ｍｍであり、もう一方は軌道範囲が１ｍｍ〜１ｍである。
【００３７】
最も好ましくは、リン脂質エーテル類似体の有効量が、少なくとも２つの同位体である１２５Ｉおよび１３１Ｉの組み合わせである。同様に、好ましくは、リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ヨウ素は放射性同位体の形態である。
【００３８】
特定の実施態様において、リン脂質エーテル類似体の有効量は分割される。さらに他の実施態様において、リン脂質エーテル類似体の有効量は約０．５μＣｉから約３Ｃｉで線形かつ用量依存的な様式で処理可能である。他の実施態様は、用量は癌の体積に対して調節可能であることを提供する。更に他の実施態様は、放射線に非感受性の腫瘍に対する投薬量は、放射線に感受性のある腫瘍に対する投薬量よりも多く、かつ３Ｃｉ未満であり、癌の体積に対して調節可能であることを提供する。
【００３９】
本発明の他の実施態様は、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌、転移した癌を治療する医薬組成物の製造のためのリン脂質エーテル類似体の使用を提供する。この実施態様において、リン脂質類似体は以下：
【００４０】
【化５】
2008545614.tif 000007
【００４１】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、あるいは、
【００４２】
【化６】
2008545614.tif 000008
【００４３】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選択され、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、より選択される。この実施態様においてもまた、好ましくは、Ｘは、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔおよびこれらの組み合わせからなる放射性ハロゲン同位体の群より選ばれる。また好ましくは、このリン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ヨウ素は放射性同位体の形態である。
【００４４】
本発明のさらなる目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明、図面および添付の特許請求の範囲からすれば明白である。
【００４５】
発明の詳細な説明
【００４６】
本発明の詳細な説明：本発明の方法の説明の前に、本発明は、本明細書中に記載された特定の方法論、プロトコール、細胞株および試薬に限定されず、これらは変更し得ることが理解される。本明細書中で使用された専門用語は、特定の実施態様を記載する目的でのみ使用され、本発明の範囲を限定することを意図しておらず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることもまた理解されるべきである。
【００４７】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用された場合、単数の形である「１の（ａ）」、「１の（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、本明細書中で他に特に明記されていない限り、複数を包含することに留意されるべきである。したがって、例えば、「１の細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」に対する言及は、当業者およびその他の者に公知の、複数のこのような細胞およびその均等物等を包含する。同様に、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上の」および「少なくとも１つの」は、本明細書中で互換可能に使用され得る。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」の用語が互換可能に使用され得ることにもまた、同様に留意されるべきである。
【００４８】
他に定義がなければ、本明細書中で使用された全ての技術用語および自然科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を持つ。本明細書中で記載されたものと類似または同等のいかなる方法および物質も、本発明の実施または試験に使用され得、より好ましい方法および物質がここで記載される。本発明と関連して使用され得る化学物質、細胞株、ベクター、動物、器具、統計分析および方法論（これらは、上記刊行物において報告されている）を記載かつ開示する目的で、本明細書中で言及した全ての刊行物が、典拠として本明細書中に援用される。本明細書中に記載がないものは、先行発明による記載を予期して本発明が述べないという了解として解釈されるべきである。
【００４９】
本明細書中で定義されたように、用語「核異性体（ｉｓｏｍｅｒ）」は、光学的核異性体およびその類似体、構造核異性体およびその類似体、立体配座核異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｉｓｏｍｅｒ）およびその類似体などを包含するが、これらに限定されない。１つの実施態様において、この発明は、式３Ａの抗腫瘍化合物の異なる光学異性体の使用を包含する。本発明において有用な抗腫瘍化合物が少なくとも１つのキラル中心を含み得ることを当業者は理解する。したがって、本発明の方法で使用される化合物は、光学活性形態またはラセミ体の形態で存在し、かつ単離され得る。多形を示す化合物もまた存在し得る。
【００５０】
本発明はいかなるラセミ体形態、光学活性形態、多形形態または立体異性（ｓｔｅｒｅｒｏｉｓｏｍｅｒｉｃ）形態またはこれらの混合物の使用も包含し得ることが理解されるべきである。これらの形態は、本明細書および特許請求の範囲において記載された、腫瘍関連の状況（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）の治療に有用であるという特徴を有する。１つの実施態様において、前記抗腫瘍化合物は、純粋な（Ｒ）−異性体を含み得る。別の実施態様において、該抗腫瘍化合物は、純粋な（Ｓ）−異性体を含み得る。別の実施態様において、該化合物は、（Ｒ）および（Ｓ）の異性体の混合物を含み得る。別の実施態様において、該化合物は（Ｒ）−異性体と（Ｓ）−異性体との両方を含むラセミ体混合物を含み得る。光学活性の形態を調製の仕方（例えば、再結晶技術でラセミ体を溶解することによる、光学活性出発物質から合成することによる、キラル合成による、キラル固定相を用いてクロマトグラフィーで単離することによる）は、当業者にとって周知である。
【００５１】
本発明は、有機酸および無機酸（例えば、クエン酸および塩酸）でアミノ置換された化合物の医薬上許容され得る塩の使用を包含する。本発明はまた、本明細書中で記載された化合物のアミノ置換基のＮ−酸化物を包含する。医薬上許容され得る塩もまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム）で処理されたフェノール性化合物から調製され得る。同様に、フェノール性化合物のエステルは、脂肪族カルボン酸および芳香族カルボン酸（例えば、酢酸エステルおよび安息香酸エステル）で作製され得る。本明細書中で使用された場合、用語「医薬上許容され得る塩」とは、塩基性化合物と同じ医薬上の効果を実質的に達成し、塩基性化合物から処方される化合物をいう。
【００５２】
この発明は、前記抗腫瘍化合物の誘導体を利用する方法をさらに包含する。用語「誘導体」としては、エーテル誘導体、酸誘導体、アミド誘導体、エステル誘導体などが挙げられるが、これらに限定されない。その上、この発明は、該抗腫瘍化合物の水和物を利用する方法をさらに包含する。用語「水和物」は、１／２水和物、１水和物、２水和物、３水和物などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
この発明は、前記抗腫瘍化合物の代謝産物を利用する方法をさらに包含する。用語「代謝産物」は、代謝作用または代謝過程により別の物質から産生されたいかなる物質をも意味する。
【００５４】
本明細書中で定義されたように、「接触させる（ｃｏｎｔａｃｔ）」は、本発明で使用された抗腫瘍化合物が、試験管、フラスコ、組織培養液（ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ）、チップ、アレイ、プレート、マイクロプレート、毛細管などの中で、受容体を含む試料に投入され（ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ）、そして該抗腫瘍化合物を受容体に結合させるのに十分な温度で、十分な時間、インキュベートすることを意味する。該抗腫瘍化合物または他の特異な結合化合物と試料とを接触させる方法は、当業者に公知であり、行われるアッセイプロトコールのタイプによって選択され得る。インキュベーションの方法もまた、標準的であり、当業者に公知である。
【００５５】
別の実施態様において、用語「接触させること（ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ）」は、本発明において使用された抗腫瘍化合物が、治療を受ける患者の中へと投入され、該化合物が、ｉｎ  ｖｉｖｏで接触させることができることを意味する。
【００５６】
本明細書中で使用された場合、用語「治療すること」は、予防、並びに障害の弛張性の治療（ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｒｅｍｉｔｔｅｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を包含する。本明細書中で使用された場合、用語「減少すること（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）」、「抑制すること（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ）」および「阻害すること（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」は、減らすこと（ｌｅｓｓｅｎｉｎｇ）または低下させること（ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ）の、一般的に理解される意味を有する。本明細書中で使用されたように、用語「進行する（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）」は、範囲または重症度が増加し、進行し、増殖し、さらに悪化することを意味する。本明細書中で使用された場合、用語「再発」は、寛解後に疾患に再度罹患することを意味する。
【００５７】
本明細書中で使用された場合、用語「投与すること」とは、患者、組織、臓器、または細胞に、抗腫瘍リン脂質エーテル化合物を接触させることをいう。本明細書中で使用された場合、投与はｉｎ  ｖｉｔｒｏで（すなわち試験管中で）またはｉｎ  ｖｉｖｏで（すなわち、生命有機体（例えばヒト）の細胞または組織中で）行われ得る。特定の実施態様において、本発明は、本発明における有用な化合物を、患者または被験体に投与する工程を包含する。「患者」または「被験体」は、本明細書中で同等に用いられ、以下のいずれかである哺乳動物、好ましくはヒトをいう：（１）リン脂質エーテル化合物を使用した抗腫瘍物質の投与によって障害が寛解可能若しくは治療可能である、又は（２）リン脂質エーテル化合物を使用した抗腫瘍化合物の投与によって予防可能な障害にかかりやすい。
【００５８】
本明細書中で使用された場合、「医薬組成物」は、治療上有効な量の抗腫瘍化合物（この化合物は、放射能、並びに、適切な希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤およびアジュバント、つまり「医薬的に許容可能な担体」と総称されるものを有する）を意味する。本明細書中で使用された場合、用語「有効量」および「治療上有効な量」とは、過度の副作用（例えば、毒性、炎症またはアレルギー反応など）なしに望ましい治療上の反応を生ずるのに十分な活性のある治療剤の量をいう。特定の「有効量」は、明らかに、治療された特定の状況、患者の身体的状況、治療された動物のタイプ、治療期間、（もしあれば）同時治療の性質、ならびに使用された特定の製剤および化合物またはその誘導体の構造などの要因で変化するであろう。この場合、量は、以下の1つ以上がもたらされれば、治療効果があると見なされる：（a）疾患（例えば、膵臓癌、乳癌）の予防；ならびに（ｂ）かかる疾患の逆転（ｒｅｖｅｒｓａｌ）または安定化。最適な有効量は、慣用的な実験を用いて当業者によって容易に決定され得る。
【００５９】
医薬組成物は、液体製剤であるか、もしくは凍結乾燥された製剤であるか、または他の方法で乾燥された製剤であり、種々の緩衝液の希釈剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨおよびイオン強度、添加剤（例えば、表面への吸収を阻害するアルブミンもしくはゼラチンなど）、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート)２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ亜硫酸水素ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、充填物質（ｂｕｌｋｉｎｇ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）もしくは等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリマーの共有結合（例えば、タンパク質へのポリエチレングリコールなど）、金属イオンとの錯体形成、または重合性化合物（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸（ｐｏｌｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒドロゲル等）の微粒子状の製剤中または製剤上への、あるいはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層ベシクルもしくは多層ベシクル、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト上への当該物質の組み込みを含む。このような組成物は、物理的状態、可溶度、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏでの放出速度、およびｉｎ  ｖｉｖｏでのクリアランス速度に影響するであろう。放出が制御されるか又は維持される組成物は、脂溶性の持続性薬剤（例えば、脂肪酸、蝋、油状物）中で製剤に含まれる。
【００６０】
同様に、本発明により包含されるものは、ポリマー（例えば、ポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）またはポロキサミン（ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅｓ））に被覆された微粒子組成物を投与する方法である。この組成物の他の実施態様は、局所的投与、非経口投与、肺投与、鼻腔内投与および経口投与を含む多様な投与ルートでの保護皮膜、プロテアーゼ阻害剤または透過促進剤を形成する微粒子を組み入れる。ある実施態様において、医薬組成物は非経口投与、癌近傍投与、粘膜投与、経皮投与（ｔａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、筋肉内投与、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、腹膜内投与、脳室内投与、頭蓋内投与および腫瘍内投与である。
【００６１】
さらに、本明細書中で使用されたように、「医薬的に許容可能な担体」は、当業者に周知であり、これらとしては、０．０１〜０．１Ｍおよび好ましくは０．０５Ｍのリン酸バッファーまたは０．９％の生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。その上、かかる医薬的に許容可能な担体は、水性溶液であっても、非水性溶液であっても、懸濁液であっても、乳剤であってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、野菜油（例えば、オリーブ油）、および注入可能な有機エステル（オレイン酸エチルなど）である。水性担体としては、水、アルコール性／水性溶液、乳剤または懸濁液（食塩水および緩衝化媒体を含む）が挙げられる。
【００６２】
非経口のビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンガーブドウ糖溶液、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸加リンガーおよび不揮発性油を含む。静脈内ビヒクルは、流動体および栄養補給、電解質補給（例えば、リンガーブドウ糖溶液に基づくもの）を含む。防腐剤および他の添加剤（例えば、抗生物質、抗酸化剤、コレーティング剤（ｃｏｌｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、不活性ガスなど）も、存在し得る。
【００６３】
本発明の投与可能な、制御されるかまたは維持された放出組成物は、脂溶性のデポ剤（例えば脂肪酸、蝋、油状物）中の製剤を含む。同様に、本発明により包含されるものは、ポリマー（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）に被覆された微粒子組成物ならびに組織特異的受容体、リガンド若しくは抗原に対して指向された抗体に結合された化合物、又は組織特異的受容体のリガンドに結合された化合物を投与する方法である。
【００６４】
本発明にしたがって投与される組成物の他の実施態様は、多様な投与ルート（非経口投与、肺投与、鼻腔内投与および経口投与が挙げられる）のために、微粒子形状、保護皮膜、プロテアーゼ阻害剤または透過促進剤を含んでいる。
【００６５】
水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンまたはポリプロリン）の共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）により修飾された化合物は、対応する非修飾化合物よりも静脈内注射後の血中で実質的に長い半減期を示すことは公知である（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１；Ｎｅｗｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２；およびＫａｔｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）。かかる修飾は、水溶液中での化合物の溶解度を増加させ得、凝集を排除し得、当該化合物の物理的および化学的安定性を増長させ得、かつ当該化合物の免疫原性および反応性を大きく減少させ得る。結果として、ｉｎ  ｖｉｖｏでの所望の生物学的活性は、このようなポリマー化合物の外転の、修飾されていない化合物より低頻度の投与または修飾されていない化合物より少ない用量の投与により、達成され得る。
【００６６】
本発明のさらに別の方法において、医薬組成物は、コントロールドリリースシステムで送達され得る。例えば、薬剤は、静脈内注入、埋め込み型浸透圧ポンプ、経皮貼付、リポソームまたは他の投与様式を用いて投与され得る。１つの実施態様において、ポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ，前出；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施態様において、ポリマー物質が使用され得る。さらに別の実施態様において、コントロールドリリースシステムは、治療標的（例えば、肝臓）近傍に配置され得、したがって、全身投与量のごく一部だけが投与される（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前出，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）参照）。他のコントロールドリリースシステムは、Ｌａｎｇｅｒによるレビューで考察されている（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）)。
【００６７】
医薬製剤は、抗腫瘍化合物のみを含有し得るか、またはさらに医薬的に許容可能な担体を含有し得、かつ、固体または液体の形状（例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、植込錠（ｐｅｌｌｅｔ）、水剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤または坐剤（直腸用坐剤および尿道用坐剤が挙げられる））であり得る。医薬的に許容可能な担体としては、ゴム、デンプン、糖類、セルロース系物質およびこれらの混合物が挙げられる。抗腫瘍化合物を含有する医薬製剤は、例えば、植込錠の皮下への埋め込みによって患者に投与され得る。さらなる実施態様において、植込錠は、長期間にわたって抗腫瘍化合物のコントロールドリリースを提供する。この製剤はまた、液体または固体製剤の静脈内注射、動脈注射または筋肉内注射によってあるいは局所適用によって投与され得る。投与はまた、直腸用坐剤または尿道用坐剤の使用によって達成され得る。
【００６８】
本発明によって投与可能な医薬製剤は、公知の溶解工程、混合工程、造粒工程または錠剤形成（ｔａｂｌｅｔ−ｆｏｒｍｉｎｇ）工程によって調製され得る。経口投与で抗腫瘍化合物またはその生理的に許容される誘導体（例えば、塩、エステル、Ｎ−オキシドなど）は、この目的で、従来からある添加剤（例えば、ビヒクル、安定化剤または不活性希釈剤）と混合され、投与に適した形態（例えば、錠剤、コーティングされた錠剤、硬ゼラチンカプセル剤もしくは軟ゼラチンカプセル剤、水溶液、アルコール溶液または油性溶液）に従来からある方法によって変換される。適切な不活性ビヒクルの例は、結合剤（例えばアカシア、トウモロコシデンプン、ゼラチン）と組み合わせた、崩壊剤（例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸）と組み合わせた、あるいは滑沢剤（例えば、ステアリン酸またはステアリン酸マグネシウム）と組み合わせた、従来からある錠剤ベース（例えば、ラクトース、スクロースまたはトウモロコシデンプン）である。
【００６９】
適切な油性ビヒクルまたは溶媒の例は、植物油または動物油（例えば、ヒマワリ油若しくは魚肝油（ｆｉｓｈ−ｌｉｖｅｒ  ｏｉｌ））である。製剤は、乾燥顆粒として及び湿潤顆粒としての両方として、達成され得る。この目的に対して従来からある適切な物質（例えば可溶化剤または他の補助物質（ａｕｘｉｌｉａｒｉｅｓ））が所望の場合には、非経口投与（皮下注射、静脈内注射、動脈注射または筋肉内注射）で抗腫瘍化合物または生理的に許容される誘導体（例えば、塩、エステル、Ｎ−オキシドなど）は、水剤、懸濁剤または乳化剤（ｅｘｐｕｌｓｉｏｎ）へと変換される。実施例は、界面活性剤および他の医薬的に許容可能なアジュバントの添加あり、または添加なしの、滅菌液（例えば、水および油）である。例示的な油は、石油、動物油、植物油または合成起源の油の滅菌液である（例えば、ピーナッツ油、大豆油または鉱油）。一般的には、水、生理食塩水、デキストロース水溶液およびその類似の糖類の溶液ならびにグリコール（例えば、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール）が、好ましい液体担体であり、特に注射可能な水剤にとっては好ましい液体担体である。
【００７０】
活性成分を含有する医薬組成物の調製は、当該分野において周知である。かかる組成物は、鼻咽頭へ送達されるエアロゾルとして調製され得るか、又は注射可能物質（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｓ）として調製され得、いずれも水剤または懸濁剤として調製され得る；しかしながら、注射の前に溶液中または懸濁液中に入れるのに適切な固体の形態もまた、調製され得る。製剤はまた、乳化され得る。活性な治療成分は、しばしば、医薬的に許容可能でこの活性成分と適合性の賦形剤と混合される。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等又はこれらの組み合わせである。
【００７１】
さらに、前記組成物は、この活性成分の効果を増強する湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含有し得る。
【００７２】
活性成分は、中和された医薬的に許容可能な塩の形態の組成物に処方され得る。医薬的に許容可能な塩としては、酸付加塩（これは、無機酸（例えば、塩酸もしくはリン酸）または有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）で形成される）が挙げられる。遊離カルボキシル基から形成された塩もまた、無機塩基（例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムもしくは水酸化第二鉄）および有機塩基（イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなど）に由来し得る。
【００７３】
例えばクリーム剤、ゲル剤、滴剤等を用いて体表面に局所投与するために、前記抗腫瘍化合物または生理的に許容される誘導体（例えば塩、エステル、Ｎ−オキシドなど）が調製され、医薬担体を有するまたは有しない生理学的に許容可能な希釈液中で水剤、懸濁剤または乳化剤として適用される。
【００７４】
本発明による別の方法において、前記活性化合物は、小胞、特にリポソームの形態で送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）参照；Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ｉｂｉｄ．，ｐｐ．３１７−３２７；一般に同頁を参照）。
【００７５】
医薬での使用では、前記抗腫瘍化合物の塩は、医薬的に許容可能な塩であり得る。しかしながら、他の塩は、本発明の化合物の調製またはこれらの医薬的に許容可能な塩の調製に有用であり得る。当該化合物の適切で医薬的に許容可能な塩としては、酸付加塩が挙げられ、これは、例えば、本発明の化合物の溶液と、医薬的に許容可能な酸（例えば塩酸、硫酸（ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、カルボン酸もしくはリン酸など）の溶液とを混合することによって形成され得る。
【００７６】
一般的に、リン脂質エーテル化合物、特にＮＭ４０４は、いくつかの腫瘍治療の治療法適用様式の治療反応をモニタリングするための、前途有望な新規な腫瘍選択的診断造影剤である。放射性ヨウ素化されたＮＭ４０４は、第二世代のリン脂質エーテル類似体であるが、２７／２７の腫瘍モデルにおいて顕著な腫瘍選択性を示した。腫瘍細胞の細胞膜における代謝性ホスホリパーゼ酵素の欠損による、このアプローチの有力な仮説は、リン脂質エーテル類似体は代謝され排出されることができないため、腫瘍細胞膜で独占的に捕集されてきたというものである。したがって、正常細胞からのリン脂質エーテルのクリアランス速度対生存腫瘍細胞からのリン脂質エーテルのクリアランス速度の差異が、この概念の基礎を形成する。多様な腫瘍モデルにおいて得られた結果は、ＮＭ４０４が捕捉され、選択的に生存腫瘍細胞で滞留され、かつ、リンパ節で見られる病巣を含む解剖学的部位に関わらず、原発病巣と転移病巣との両方に局在することを示唆する。ＦＤＧとは異なり、この薬剤は感染部位に局在しない。ＮＭ４０４のＦＤＧに対する他の利点としては、以下が挙げられる：ＦＤＧは、腫瘍細胞に選択的でなく、感染部位に移行し、肥厚化する（バレット食道）のに対し、ＮＭ４０４は、悪性腫瘍細胞に対して選択的であり、悪性腫瘍細胞に無限に滞留する。さらに、ＦＤＧは、半減期が１１０分であり、生産地点から２００マイル以内に配給が限定され得るが、１２４Ｉは４日の物理的半減期を有するので、世界中どこでも輸送可能である。ＦＤＧがいかなる治療能力も有しないのに対して、ＮＭ４０４は長く滞留し（代謝されない）、したがって、１３１Ｉのような適切な放射性同位体と組み合わさった場合に、ＮＭ４０４は顕著な治療能力を生じる。ＮＭ４０４は多様なヨウ素同位体で標識され得、そのことがＮＭ４０４の多用途性（診断および治療、ならびに実験動物の研究のための道具）を拡げている一方で、ＦＤＧはＰＥＴ走査に関しては１８Ｆに限定されるか、又は、非常に低い感度であるにもかかわらず、核磁気共鳴画像法に関しては潜在的には１９Ｆ（安定）に限定される。ＦＤＧはその腫瘍標的化能力にもかかわらず、腫瘍細胞における急速な代謝のために、ＦＤＧは治療に関して潜在能力は有しない。ＮＭ４０４は、多様な治療の治療法適用様式への局所的な腫瘍の反応を正確に予測するのみならず、治療量以下で原発腫瘍を治療する場合に、離れた転移病巣の検出をも可能にする。
【００７７】
前記ＰＬＥ化合物は、前立腺癌および他の癌における造影剤として、放射標識したＰＬＥ類似体（例えば、ＮＭ４０４）の特異度および感度をより正確に推定するように設計され得る。前臨床のモデルに基づき、ＮＭ４０４などのＰＬＥ類似体は腫瘍における高い取り込みを示す傾向があり、この傾向のために、この薬剤は、病期診断、治療に続く反応に使用する顕著な潜在能力を有し、潜在的には、治療有効性を有するα線放出ハロゲンが、１３１Ｉ、１２５Ｉまたは２１１Ａｔの高用量と組み合わさる場合、治療剤として使用され得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７８】
好ましい実施態様
【００７９】
本発明は、一般的に、多様な癌の検出および治療のための方法および技術を提供する。本発明は、癌を有する被験体か有する疑いのある被験体において、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌、並びに転移した癌（これらは、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、扁平上皮細胞癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、頸部癌、グリオーマ、乳癌および膵臓癌からなる群から選択される）を検出し、位置を決定するための方法を提供する。該方法は、以下の工程を包含する：（ａ）被験体にリン脂質エーテル類似体を投与する工程；及び
（ｂ）被験体において再発した癌、放射線に非感受性の癌、または転移した癌を有する疑いのある臓器が、周囲の領域（単数または複数）よりも高いレベルの類似体を滞留するかどうかを決定する工程。ここで、より高い滞留領域は、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌、または転移した癌の検出ならびに位置を示す。
【００８０】
より好ましい実施態様において、前記リン脂質類似体は、以下：
【００８１】
【化７】
2008545614.tif 000009
【００８２】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選ばれ；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群より選ばれ、ここで、Ｒはアルキルまたはアリールアルキルの置換基である、
あるいは
【００８３】
【化８】
2008545614.tif 000010
【００８４】
ここで、Ｘはハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選ばれ、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、より選択される。さらに、特定の実施態様において、Ｘは、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉおよび２１１Ａｔからなる放射性ハロゲン同位体の群より選ばれる。より好ましくは、前記リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ヨウ素は放射活性同位体の形態である。この方法において、好ましくは、検出はＰＥＴ走査方法、ＣＴ走査方法、ＭＲＩ走査方法およびこれらの組み合わせにより行う。
【００８５】
本明細書中で使用された場合、「アルキル」基とは、直鎖、分枝鎖または環状鎖の、飽和または不飽和の脂肪族炭化水素をいう。このアルキル基は１〜１６個の炭素を有し、置換されていなくてもよいし、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、カルボニル、アミド、アルキルアミド、ジアルキルアミド、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、チオおよびチオアルキルから選ばれる１つ以上の基により置換されていてもよい。「ヒドロキシ」基とは、ＯＨ基をいう。「アルコキシ」基とは、−Ｏ−アルキル基をいい、ここで、アルキルは上で定義した通りである。「チオ」基とは、−ＳＨ基をいう。「チオアルキル」基とは、−ＳＲ基をいい、ここで、Ｒは、上で定義したアルキルである。「アミノ」基とは、−ＮＨ２基をいう。「アルキルアミノ」基とは、−ＮＨＲ基をいい、ここで、Ｒは上で定義したアルキルである。「ジアルキルアミノ」基とは、−ＮＲＲ’基をいい、ここで、ＲおよびＲ’は、全て上で定義した通りである。「アミド」基とは、−ＣＯＮＨ２をいう。「アルキルアミド」基とは、−ＣＯＮＨＲ基をいい、ここで、Ｒは、上で定義したアルキルである。「ジアルキルアミド」基とは、−ＣＯＮＲＲ’基をいい、ここで、ＲおよびＲ’が上で定義したアルキルである。「ニトロ」基とは、ＮＯ２基をいう。「カルボキシ」基とは、ＣＯＯＨ基をいう。
【００８６】
本明細書中で使用された場合、「アリール」は、炭素環式芳香環と複素環式芳香環との両方、単環式と縮合多環式との両方を包含し、該芳香環は、５員環または６員環であり得る。代表的な単環アリール基としては、フェニル、フラニル、ピロリル、チエニル、ピリジニル、ピリミジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリルなどが挙げられるが、これらに限定されない。縮合多環アリール基は、縮合された環系における１つ以上の環として、５員環または６員環の芳香環または芳香族複素環を含む芳香基である。代表的な縮合多環アリール基としては、ナフタレン、アントラセン、インドリジン、インドール、イソインドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール（ｂｅｎｚｔｈｉａｚｏｌｅ）、プリン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、１，８−ナフチリジン、プテリジン、カルバゾール、アクリジン、フェナジン、フェノチアジン、フェノキサジン、およびアズレンなどが挙げられる。さらに、本明細書中で使用された場合、「アリールアルキル」とは、芳香族が、ＰＬＥ化合物において示された部位に結合されているアルキル基と連結している部分（例えば、ベンジル）をいう。
【００８７】
本発明の別の実施態様は、被験体における、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の治療のための方法を提供する。該方法は、被験体にリン脂質エーテル類似体を含む有効量の化合物を投与する工程を包含する。好ましい実施態様において、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌は、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、扁平上皮細胞癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、頸部癌、グリオーマ、乳癌、膵臓癌および癌肉腫から選ばれる群において生じる。また好ましくは、リン脂質類似体は、以下：
【００８８】
【化９】
2008545614.tif 000011
【００８９】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選ばれ；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、。あるいは
【００９０】
【化１０】
2008545614.tif 000012
【００９１】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選ばれ、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、から選ばれる。この方法において、好ましくは、Ｘは、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔおよびこれらの組み合わせからなる放射性ハロゲン同位体の群より選ばれる。より好ましくは、有効量のリン脂質エーテル類似体は、少なくとも２つの同位体の組み合わせであり、図２に記載したのと同様に一方は約０．１Å〜１ｍｍの軌道範囲、かつもう一方は約１ｍｍ〜１ｍの軌道範囲である。
【００９２】
最も好ましくは、有効量のリン脂質エーテル類似体は、少なくとも２つの同位体、１２５Ｉおよび１３１Ｉの組み合わせである。同様に、好ましくは、該リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリンまたは１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここで、ヨウ素は放射性同位体の形態である。
【００９３】
図１１に示したように特定の実施態様では、有効量のリン脂質エーテル類似体が分割される。分割用量を使用する利点は、これにより、前記ＰＬＥ類似体が正常組織から取り除かれ得るということである。実施例のように、ＮＭ４０４の分割用量は、同じ治療効果を生じた（例えば、３×５０マイクロＣｉ対単回用量の１５０マイクロＣｉ）が、その間、低用量の化合物（これは、その後、分割注射と分割注射との間に正常組織から排除される）をさらに提供した。
【００９４】
さらに他の実施態様において、有効量のリン脂質エーテル類似体は、約０．５μＣｉから約５００ｍＣｉであり、図１０に示したように、これは、線形かつ用量依存的な様式で治療可能である。他の実施態様は、投薬量が図１２に示されたように癌の体積に対して調節可能であることを提供する。図１２のグラフは、小腫瘍（＜１ｃｍ）および大腫瘍（＞１ｃｍ）を有する動物に注射した場合、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４（１５０μＣｉ）の同一用量に対する腫瘍の増殖の差異を示す。
【００９５】
その結果は、小腫瘍には、該用量で腫瘍の増殖が圧倒された（ｓｔｕｎ）が、大腫瘍の集団には当該用量はいかなる影響も示さなかったこと、つまり基本的には非照射のコントロールのようにふるまったことを示す。図１２のグラフでさらに実証されたことは、腫瘍への有効用量は腫瘍の体積に合わせて調節されるべきであること、および有効性を示すために達成されるべき腫瘍体積の体積あたりの腫瘍用量があることである。
【００９６】
なお他の実施態様は、ＰＣ３癌モデル（図８）及びＡ５４９癌モデル（図１０、１１および１２）を比較することによって確かめられるように、放射線および化学物質に非感受性の腫瘍に対する用量が放射線に感受性の腫瘍に対する用量よりも多く、５００ｍＣｉ未満であり、癌の体積に合わせて調節可能であることを提供する。ここでＰＣ３モデルは放射線非感受性である。
【００９７】
本発明の別の実施態様は、再発した癌、放射線および化学物質に非感受性の癌または転移した癌の治療用医薬組成物を生産するためのリン脂質エーテル類似体の使用を提供する。この実施態様において、該リン脂質類似体は、以下：
【００９８】
【化１１】
2008545614.tif 000013
【００９９】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体からなる群より選ばれ；ｎは、８と３０との間の整数であり；そしてＹは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３を含む群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、あるいは
【０１００】
【化１２】
2008545614.tif 000014
【０１０１】
ここで、Ｘは、ハロゲンの放射性同位体であり；ｎは、８と３０との間の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲおよびＯＲからなる群より選ばれ、Ｚは、ＮＨ２、ＮＲ２およびＮＲ３からなる群より選ばれ、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールアルキルの置換基である、から選ばれる。同様にこの実施態様において、好ましくは、Ｘは、１８Ｆ、３６Ｃｌ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８２Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔおよびこれらの組み合わせからなる放射性ハロゲン同位体の群より選ばれる。同様に好ましくは、該リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、または１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ヨウ素は放射性同位体の形態である。
【実施例】
【０１０２】
放射性ヨウ化リン脂質エーテル類似体の腫瘍アビディティーに対する合成および構造活性関係の効果
【０１０３】
放射性ヨウ化リン脂質エーテル類似体は、異種移植片中のヒトおよび動物の多様な腫瘍においてならびに自然発生腫瘍を有するげっ歯類モデルにおいて選択的に蓄積する顕著な能力を示す。この腫瘍アビディティーは、腫瘍と対応する正常組織との間の代謝の違いの結果として生じると考えられている。本研究の結果は、腫瘍でのこれらの化合物の腫瘍滞留における１つの要因が、疎水性の性質を決定するアルキル鎖の長さであることを示す。Ｃ１２からＣ７へ鎖長を減少させることにより、腫瘍保有ラットにおいて、該化合物が、投与２４時間以内の、腫瘍での蓄積をほとんどない状態または無い状態にし、かつ当該化合物の急速なクリアランスをもたらした。鎖長を増加させることにより、反対の効果が得られ、Ｃ１５およびＣ１８の類似体は血漿でのクリアランスを遅延させ、かつ腫瘍保有ラットにおける腫瘍の取り込みおよび滞留の増進を示した。プロパンジオール類似体ＮＭ−４１２およびＮＭ−４１３により示される腫瘍の取り込みは、腫瘍保有ラットへの注射２４時間後の肝臓および腹部の放射能が高レベルであることに付随するものであった。プロパンジオール骨格に２−Ｏ−メチル部分を加えることも同様に、有意に腫瘍への取り込みを遅延させた。ヒトＰＣ−３腫瘍保有免疫不全マウスにおいて、ＮＭ−４０４と前駆物質、ＮＭ−３２４とを直接比較することにより、ＮＭ−３２４に比較してＮＭ−４０４の腫瘍取り込みおよび全身での排泄の両方での劇的な増進が明らかになった。数種のげっ歯類腫瘍モデルにおける造影および組織分布研究に基づき、Ｃ１８類似体であるＮＭ−４０４をヒト肺癌患者での追跡評価に選んだ。予備試験の結果は、腫瘍中への該剤の選択的取り込みおよび滞留が正常組織、特に腹部の正常組織からバックグラウンド放射能の急速なクリアランスにともなって生じることが非常に強く期待される。これらの結果は、特にＮＭ−４０４がヨウ素−１２４、新しく市販されているポジトロン放出同位体で放射標識される場合に、他の癌を含むヒト試験への拡張の正当な根拠であることを強く示唆する。この同位体により得られる比較的長い物理的半減期の４日が、ＮＭ−４０４の薬力学的特徴によく適しているように思われる。
【０１０４】
化学合成。ヨウ化リン脂質エーテル類似体の合成過程で、発明者らは、標的化合物の鎖長を変化させられる一般的な合成スキームを開発しようと努めた。合成アプローチは、アルキルトシラートまたはハロゲン化物を有するグリニャール試薬の、銅触媒性クロスカップリング反応に基づいていた１５（スキーム１、２）。アルキル鎖伸長のための構成要素（ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｌｏｃｋ）の選択は、出発物質の商業的入手可能性（ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）により決定した。
【０１０５】
スキーム１：試薬および条件：（ａ）Ｍｅ３ＳｉＢｒ、ＣＨ２Ｃｌ２；（ｂ）ＢｒＭｇ（ＣＨ２）１１ＯＴＨＰ、Ｌｉ２ＣｕＣｌ４（触媒）、ＴＨＦ、−７８℃〜２０℃；（ｃ）ＰＰＴＳ、ＥｔＯＨ、４０℃；（ｄ）ＴｓＣｌ、ＤＭＡＰ、ＣＨ２Ｃｌ２；（ｅ）ＢｒＭｇ（ＣＨ２）３ＯＴＨＰ、Ｌｉ２ＣｕＣｌ４（触媒）、ＴＨＦ、−７８℃〜２０℃；（ｇ）ＢｒＭｇ（ＣＨ２）６ＯＴＨＰ、Ｌｉ２ＣｕＣｌ４（触媒）、ＴＨＦ、−７８℃〜２０℃。
【０１０６】
スキーム１
【０１０７】
【化１３】
2008545614.tif 000015
【０１０８】
合成は、スキーム１に示したように、ｐ−ヨードベンジルアルコール１１からｐ−ヨードベンジルブロミド１２への変換によって開始した。ｐ−ヨードベンジルブロミドを、０．５〜０．７ｍｏｌ％のＬｉ２ＣｕＣｌ４の存在下で、ＴＨＰで保護した１１−ブロモウンデカノール１３に由来するグリニャール試薬でさらにカップリングした。最初のカップリング生成物１６の脱保護後に得られた１２−（ｐ−ヨードフェニル）ドデカノール１７は、前述したようにＣ１２ヨウ化リン脂質の合成に使用した。１２、１３アルコール１７もまた、長鎖を有するω−ヨードフェニルアルカノール合成の開始物質として役立った。例えば、トシラート１８と、ＴＨＰ脱保護へ続くブロミド１４および１５から作製されるグリニャール試薬とのカップリングは、それぞれＣ１５（２０）およびＣ１８（２２）アルコールを提供する。これらのアルコールを、公表されている方法により、対応するアルキルホスホコリン５（ＮＭ−３９７）および６（ＮＭ−４０４）へと変換した。１２、１３本発明者らが以前に報告した一連の反応を用いて、プロパンジオールリン脂質エーテル７（ＮＭ−４１３）および８（ＮＭ−４１２）を、３−ベンジルオキシプロパノール２５から合成し、２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロールリン脂質エーテル９（ＮＭ−４１４）および１０（ＮＭ−４１０）を、１−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロール２６から取得した。ヨウ素−１２５による放射標識を、実験室で通常用いられる同位体変換法により行った。
【０１０９】
スキーム２
【０１１０】
【化１４】
2008545614.tif 000016
【０１１１】
生物学。腫瘍に局在するＰＬＥ類似体のアビディティーを、数種の動物モデルで評価した。前記ＰＣ−３モデルは、前立腺癌患者における初期のヒトでの薬物動態学的試験の候補を選ぶために、ＮＭ−４０４およびＮＭ−４１２の標的（腫瘍）と非標的との割合を直接比較して決定するのに使用したヒト腫瘍細胞株を示す。ＭａｔＬｙＬｕ（Ｄｕｎｎｉｎｇ  Ｒ３３２７ラット）モデル、つまりラット前立腺腫瘍株を、該ラットが線量測定のために制御下に置かれる前、および腫瘍保有動物が腫瘍／バックグラウンドの割合を決定するために制御下に置かれる前に、特異的な９の類似体をスクリーニングするために特異的に使用した。最終的に、Ｗａｌｋｅｒ−２５６癌肉腫モデルを組織分布を定量する目的で使用した。
【０１１２】
スクリーニング工程を迅速化するため、かつ多数の時点の組織分布研究で使用される腫瘍保有動物の数を最小化するために、新規な放射性ヨウ化ホモログを、ラットのＤｕｎｎｉｎｇ  Ｒ３３３７（ＭＡＴ  ＬｙＬｕ株）前立腺癌モデルにおいてガンマカメラシンチグラフィーにより造影した。したがって、オスのコペンハーゲンラットに、大腿部にＭＡＴ  ＬｙＬｕ細胞（１×１０６細胞）の皮下注射をし、その１０〜１４日後に、２％のＴｗｅｅｎ−２０溶液中の放射性ヨウ化ＰＬＥ類似体（３０〜４０μＣｉ）の注射をした。ガンマカメラの画像は、注射２４および４８時間後を含む多数の時点で得た。肝臓での高い取り込み、顕著な腹部での蓄積および滞留、または腫瘍での低い取り込みおよび滞留を示すホモログ（ＮＭ−４１０、ＮＭ−４１３およびＮＭ−４１４）は、続く生体内分布分析に供しなかった。Ｗａｌｋｅｒ−２５６癌肉腫を保有するラットにおける放射能の組織分布を、放射性ヨウ化鎖長ホモログの静脈内投与後に多様な時間間隔で評価した。試験した化合物の最初の群は、３種のアルキルホスホコリンを含んでいた：７つの炭素を有するより短い鎖の類似体３（ＮＭ−３９６）ならびにより長い鎖を有する２つの類似体５（ＮＭ−３９７、Ｃ１５アルキル鎖長）および６（ＮＭ−４０４、Ｃ１８アルキル鎖長）。
【０１１３】
最初の生体内分布実験は、３（ＮＭ−３９６、Ｃ７類似体）を用いて行い、これは、有意なｉｎ  ｖｉｖｏでの脱ヨード化をともなう急速な組織クリアランスを示した。２４時間で、甲状腺における放射能の量は２１３％ＩＤ／ｇであったが、その一方で調査した全臓器において放射能のレベルは＜０．１０％ＩＤ／ｇであった。これらの研究にともない、メチレン基の数を７に減少させることは、腎臓により迅速に排泄される、より一層親水性の分子を与えることは明らかであった。化合物４（ＮＭ−３４６、Ｃ１２類似体）とは対照的に、Ｃ７類似体３は急速にラットから消え、調査したいずれの時点でも腫瘍組織に局在しなかった。
【０１１４】
この観察結果は、腫瘍での取り込みおよび滞留に対する、脂肪族鎖長の増加の影響を評価するという、その後の取り組みを方向付けた。Ｃ１５ホモログ５（ＮＭ−３９７）の組織分布は、同じＷａｌｋｅｒ２５６ラット腫瘍モデルを使用することで評価した。ほとんどの正常組織が投与６時間後に最も高いレベルの放射能を示したのに対し、腫瘍での放射能は、時間とともに増加し、投与４８時間後にピークになった（ＩＤ／ｇの１．６５±０．２３％）。甲状腺という例外を除いて、腫瘍は、２４時間、４８時間および１２０時間の時点で、調査されたいずれの他の組織よりも高い放射能濃度であった。腫瘍と比べて正常組織での放射能のより急速な排出（ｗａｓｈｏｕｔ）は、おそらく正常組織による代謝および排出によるものである。甲状腺における放射能の蓄積は、研究の間ずっと増加した。このことは、低レベルのｉｎ  ｖｉｖｏでの脱ヨード化があることを示唆した。十二指腸での放射能レベルは、投与４８時間後に見られる最大レベルを有する腫瘍レベルと良く類似していた（１．３８±０．２４％ＩＤ／ｇ）。
【０１１５】
このモデルにおいて、限定的な結果が、Ｃ１２類似体４（ＮＭ−３４６）で得られた。しかし、その結果は、Ｃ１５類似体５（ＮＭ−３９７）の組織分布分析結果が、２４時間で腫瘍での取り込みの２倍に増加したことを除いて、Ｃ１２類似体４で見られた結果と類似していることを示唆した。他の臓器および組織での取り込みおよびクリアランスを留めることは、２つの化合物間で同様であった。
【０１１６】
Ｃ１８類似体６（ＮＭ−４０４）へとさらに脂肪族鎖を伸ばした効果は、この化合物の動態的分析結果を示した。投与４８時間後に腫瘍でピークになった放射能のレベル（１．１４±０．０１％ＩＤ／ｇ）で、わずかに低いレベルではあるが、この効果はＣ１５類似体５（ＮＭ−３９７）と同様である。肝臓、腎臓および十二指腸において検出された放射能の量は、Ｃ１５類似体５の研究における同一臓器と比較して、Ｃ１８化合物６の投与後有意に低くなった。さらに、Ｃ１８類似体６は、調査した他の鎖長ホモログよりもずっと長い間、血液の循環中に滞留された。例えば、１２０時間の時点で、Ｃ１５（５）類似体では０．０７±０．００％ＩＤ／ｇのレベルであるのと比較して、６の血液レベルは０．６±０．１％ＩＤ／ｇであった。非常に小さな質量の腺を考慮に入れる場合、甲状腺における全放射能レベルは、５と６との両方で相対的に低かった。
【０１１７】
ＰＬＥ類似体の輸送特性を試験するために、血漿を、ヨウ素−１２５で標識した６の投与７日後のＷａｌｋｅｒ−２５６腫瘍保有ラットから単離した。６（ＮＭ−４０４）を接種されたラットの血漿成分における放射能の分布を調査した。ＰＡＧＥ分析は、Ｃ１８類似体６の投与後の血液の循環中の放射能のほとんど（８８％）がアルブミン画分に関連することを明らかにした。この発見は、リン脂質エーテルプロトタイプであるＥＴ−１８−ＯＣＨ３と血清タンパク質との結合を研究し、エーテル脂質の大多数（７１％）がアルブミンと結合し、約６％がＨＤＬと結合することを見出したＥｉｂｌにより報告された結果と類似している。
【０１１８】
比較造影研究。図１９に示されたガンマカメラシンチグラフィー造影は、ヒトＰＣ−３前立腺腫瘍異種移植片を保有する免疫不全ＳＣＩＤマウスにおける投与１、２および４日後に、第二世代類似体１２５Ｉ−ＮＭ−４０４（６）に対して、より短い鎖である第一世代前駆物質１２５Ｉ−ＮＭ−３２４（２）の腫瘍での取り込みおよび体でのクリアランスを直接比較する。これらの２つのＰＬＥ類似体の量的なシンチグラフィーで比較することにより、腫瘍での取り込みおよび全身クリアランスにおける顕著な差異が実証された。急速な腫瘍での取り込みおよび増長された滞留を示す、より長い鎖の薬剤ＮＭ−４０４は、全身での放射能の急速な排泄をともなう。一方で、腫瘍での取り込みおよび体でのクリアランスは、投与４日後でさえ、ＮＭ−３２４では実質的に遅延される。急速な全身での排泄をともなうＣ１８類似体ＮＭ−４０４の腫瘍での有意な取り込みおよび滞留は、このモデルにおけるＮＭ−４０４の優れた造影特性により明確に定義される。
【０１１９】
幅広い量的組織分布結果を、８日間の評価期間中に全正常組織から放射能の急速な排泄を示すこのモデルで、放射性ヨウ化ＮＭ−４０４の投与１、３、５および８日後に得た。しかしながら、腫瘍での取り込みは、腫瘍１グラム当たり１８％注射用量に達する第５日まで増加を続けた。バックグラウンド組織に対する腫瘍の割合は、腫瘍での増長した滞留のために、正常組織からの順調な排泄と一緒に、実験の間、徐々に増加した。バックグラウンド組織に対する腫瘍の割合は、注射３日後に血液、肝臓、筋肉および前立腺でそれぞれ４、６．８、２３および９を超え、５日間および８日間高まり続けた。さらに、非常に小さな質量の臓器が考慮され、データが臓器基準あたりで投与した用量に基づいた百分率で表される場合、甲状腺のレベルは組織１グラムあたり２６％〜５４％までの注射投与量の範囲であるが、これらのレベルは実際非常に低く、非常に小さな百分率の注射投薬量を示す。
【０１２０】
Ｋｏｔｔｉｎｇらは、３つのアルキルホスホコリン（ＡＰＣ）類似体の生体内分布に対する、アルキル鎖長の効果を調査した。Ｋｏｔｔｉｎｇの研究は、１）化合物が腫瘍に対して細胞障害性があると思われる濃度で経口投与されること、かつ２）Ｃ２２化合物がアルキル鎖中に二重結合を含むという点で、前記実験とは異なった。それゆえ、投与量の大きな違いおよび経口剤の未知のバイオアベイラビリティーのために、該研究を本明細書中で記載された研究と直接比較することはできない。Ｋｏｔｔｉｎｇの研究では、Ｃ１６、Ｃ１８およびＣ２２の類似体を、メチルニトロソ尿素で誘導した乳癌を保有するラットに、５０〜１２０∝ｍｏｌ／ｋｇの一日用量で経口投与した。アルキル鎖長が増加するにつれて、腎臓、肝臓および肺での化合物が観察されるレベルは減少した。放射性ヨウ化ＰＬＥ類似体で得られたトレーサーの結果とは対照的に、Ｋｏｔｔｉｎｇや共著者は、腫瘍レベルは鎖長の増加と共に増加するのに対し、血中ＡＰＣのレベルは鎖長の増加と共に減少することを発見した。１９経口投与は吸収前のＧ１経路におけるエーテル脂質の実質的な量の分解をもたらす、ということが予想される。
【０１２１】
腫瘍は、注射２４時間後と４８時間後との両方で、ガンマカメラシンチグラフィーによりＣ１２（４）、Ｃ１５（５）およびＣ１８（６）のアルキルホスホコリンホモログを用いて容易に可視化された。ラットの造影結果は、Ｃ１５（７、ＮＭ−４１３）およびＣ１８（８、ＮＭ−４１２）プロパンジオール類似体で得られる。他方で、示された腫瘍での取り込みは、肝臓及び腹部での高い放射能レベルをともなう。ＭＡＴ  ＬｙＬｕ前立腺モデルでの、造影の結果は、Ｃ１５（９、ＮＭ−４１４）およびＣ１８（１０、ＮＭ−４１０）２−Ｏ−Ｍｅグリセロール類似体で得られ、腫瘍中に薬剤をほとんど取り込まないかまたは全く取り込まない、肝臓および腹部において、高い放射能レベルを示した。肝臓および腸管を含む非標的組織からの放射能のクリアランスおよび量における違いは、ヒトの造影剤として放射性ヨウ化リン脂質エーテル類似体を適用する場合に有意な影響を有する。非標的組織での取り込みは、注射された放射能に対して高いバックグラウンドの活性を創出することにより、または放射感受性組織に過度な被曝をさせることにより放射診断造影の効果を減少させ得る。癌患者における２（ＮＭ−３２４、ＮＭ−３４６のメタヨード核異性体）での予備的臨床試験は、優れた腫瘍での取り込みを与える一方で、肝臓、腎臓および膀胱を含む非標的組織での蓄積に関する放射線量測定によって制限された。
【０１２２】
戦略は、リン脂質エーテル類似体構造のアルキル部分を調査することであり、腫瘍中での局在性および滞留における役割を決定することであった。より長い鎖長の放射性ヨウ化ＰＬＥ類似体を有する、ＭＡＴ−ＬｙＬｕ腫瘍保有ラットにおいて得られた定性的なラットの全身スクリーニング走査により、検出を可能にするのに十分な腫瘍での取り込みが明らかになった。しかしながら、追跡組織分布研究では、鎖長がＣ１２からＣ１５、Ｃ１８へと逐次増加することにより、非標的臓器で検出された放射能の量が急速に減少した。非標的組織の放射能の量のこの十分な減少は、腫瘍中に存在する放射能レベルにおける相対的に小さな減少をともなった。さらに、Ｃ１８類似体６（ＮＭ−４０４）は、Ｃ１２（４）およびＣ１５（５）類似体よりもはるかに長い環形を留める傾向を示した。より長い血漿半減期は、化合物が血管系を通じて継続的に循環するので、腫瘍でのＣ１８化合物６の取り込みのさらなる機会をもたらすと期待され得る。この拡張された（ｅｘｔｅｎｄｅｄ）血漿半減期は、プローブとアルブミンとの強力な結合の結果であり得る。放射標識されたＰＬＥの血漿成分による取り込みおよび輸送は、これら化合物の腫瘍での滞留に関連する重要な要因でもあり得る。確かに、Ｃ７からＣ１８への鎖長の増加は、ＰＬＥ類似体の親油性における増加をもたらす。より大きな親油性は、これら化合物の細胞膜に関する親和性を増加させ得、かつ血漿成分に対する結合を変化させ得る。内因性のリポタンパク質（例えば、ＬＤＬおよびＨＤＬ）による血液循環中での取り込みおよび輸送もまた、腫瘍中での生物学的分布に影響し得る。
【０１２３】
ヒト臨床試験のための調製において、非標識ＮＭ４０４を、ラットおよびウサギで予想された造影用量の１２００倍の用量で、独立した（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）急性毒性評価に供した。該薬剤は十分に許容され、急性毒性はこの用量レベルで見出された。多様なげっ歯類腫瘍モデルでの選択的な腫瘍での取り込みおよび滞留特性、ならびにその後のラットおよびウサギでの優れた安全な特性があるので、ＮＭ−４０４は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者での最初のヒト薬物動態学的評価を行うことを選択した。患者は、１３１Ｉ−ＮＭ−４０４の注射を受けた後（＜１ｍＣｉ）、平面ガンマカメラシンチグラフィーを受けた。予備的なヒトでの結果（ｎ＝３）は、原発性肺腫瘍における腫瘍での取り込みおよび増進した滞留を実証した（図２５）。しかしながら、その前駆物質であるＮＭ−３２４では、肝臓で高い取り込み値が観察されるのに対して、肝臓および腹部の放射線レベルは、ＮＭ−４０４での放射線レベルよりはるかに低かった。このことは、この薬剤を、他の腹部の腫瘍（結腸、前立腺および膵臓に関するものが挙げられる）において、評価できる可能性を示唆する。
【０１２４】
結論
【０１２５】
要するに、この文書中に記載された新規なヨウ化ＰＬＥ類似体の設計の背後にある論理的根拠は、腫瘍での取り込みおよび滞留に対する、リン脂質分子の疎水性の部分での鎖長および他の構造的修飾の効果を評価する取り組みに生かされた。Ｃ１２からＣ７へ鎖長を減少させることで、腫瘍保有ラットにおける投与２４時間後までの、該化合物の腫瘍での蓄積がほとんどなくなるかまたは全くなくなり、かつ急速なクリアランスが生じた。腫瘍保有ラットでは、鎖長の増加により、逆の効果が生じ、Ｃ１５およびＣ１８類似体では、血漿クリアランスに遅延が生じ、腫瘍での取り込み及び滞留が促進された。プロパンジオール類似体７および８により示された腫瘍での取り込みは、腫瘍保有ラットへの注射２４時間後の、肝臓および腹部の、わずかに高い放射能レベルを伴った。９および１０での２−Ｏ−メチル部分の追加により、腫瘍での取り込みは有意に遅延された。ヒトＰＣ−３保有免疫不全マウスにおいて、ＮＭ−４０４とその前駆物質であるＮＭ−３２４との間で直接比較することにより、ＮＭ−４０４の腫瘍での取り込みと全身での排泄との両方において、ＮＭ−３２４と比較して、劇的な促進が明らかになった。ＮＭ−４０４は、数種の動物モデルで試験された他の類似体に対して優れた造影特性を有した。したがって、ヒト肺癌患者におけるこの第二世代ＰＬＥ類似体のさらなる評価を保証した。ヒトでの予備臨床試験結果は、動物モデルで以前から見られたものと同様の所望の腫瘍での取り込みおよび滞留特性を示した。しかしながら、より短い鎖の前駆物質であるＮＭ−３２４とは対照的に、ＮＭ−４０４は、バックグラウンド放射能レベルが有意に低い肝臓、腎臓および腹部を示した。このことは、肺腫瘍の造影への展望を提供するのに加え、ヒトの結腸直腸癌患者、膵臓癌患者および前立腺癌患者でのこの薬剤のさらなる評価が保証されることを示唆する。さらに、膀胱での放射能の欠如は、該薬剤又はその代謝物の腎臓でのクリアランスが、調査された時点にわたって、ほとんどないことを示唆する。これは、今日腫瘍の造影に日常的に使用される１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）、ＰＥＴ薬剤に対する顕著な利点を示す。ＦＤＧは顕著に腎臓で排泄が行われ、したがって、前立腺領域での造影を妨げる。
【０１２６】
ＰＬＥ類似体の腫瘍標的化戦略が時間経過とともに選択的な腫瘍での滞留に影響すると考えられるので、比較的短い半減期の核種（例えば１８Ｆまたは９９ｍＴｃでさえ）は、現在の時点ではＮＭ−４０４を標識するのに実用的ではない。現在の肺癌造影試験における１３１Ｉ−ＮＭ−４０４の予備試験が成功したので、４．２日の半減期を有する比較的新しいポジトロン放出同位体であるヨウ素−１２４によりＮＭ−４０４を放射標識することおよびＰＥＴにより腫瘍検出効率を評価することは、今や必須である。１２４ＩによるＰＥＴ造影は、平面１３１Ｉ−ガンマ造影、ＰＥＴの感度の４０倍を超えることが報告されている。ＰＥＴは、従来のガンマカメラ造影とは異なり、有意な解像力の増強および３次元造影能力、ならびに平面シンチグラフィー造影と比べて優れた定量性質を提供しもする。このＰＥＴ同位体の４日の長い物理的半減期は、腫瘍でのＮＭ−４０４の取り込みおよび滞留動態に良く適し、発明者らはＰＥＴを含むＮＭ−４０４を用いた造影研究を拡大する過程の途中にいる。
【０１２７】
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）
【０１２８】
リン脂質エーテル類似体（ＰＬＥ）分子は、高度の腫瘍選択性をもたらす、特有の生化学的および薬理学的特性を有する。悪性の代謝亢進状態の組織と非悪性の代謝亢進状態の組織との両方で非特異的に蓄積されるＦＤＧとは異なり、放射性ヨウ化ＰＬＥ類似体は、多様なマウスおよびヒトの腫瘍では高レベルで選択的に滞留し、正常組織または炎症組織には蓄積しないことを、本発明者らは示した。リン脂質エーテル族（ＰＬＥ）は、全リン脂質内容物のうち少数成分として一般的に哺乳動物細胞で見られるグリセロホスホコリン分子と連結したエーテルに結合した長鎖アルキルまたはアルケニルアルコールの存在によって特徴付けられる。ＰＬＥ間では、多くのサブタイプがあり、最も広く研究されたサブタイプの１つは、構造的に単純なアルキルホスホコリン（ＡＰＣ）である。Ｉ−１２５−ＮＭ４０４は、このＡＰＣ族の一部である。
【０１２９】
本発明は、ＮＳＣＬＣに罹患した患者を造影する際の、第二世代のＰＬＥ類似体、つまりＮＭ−４０４の使用に関わる予備的ヒトＰＥＴ造影データのための方法論を教示する。前臨床モデルにおいて、本発明者らは、ＮＭ−４０４は（ａ）２７／２７腫瘍モデル（肺腫瘍および脳腫瘍ならびにＰＣ−３前立腺骨転移が挙げられる）で選択的に滞留され、（ｂ）正常組織、前悪性組織または過形成組織で滞留されず、（ｃ）炎症組織で滞留されないということを示した。ＮＳＣＬＣに罹患した患者に１３１Ｉ−ＮＭ４０４を用いる初めてのヒトでの薬物動態学的研究では、本発明者らは１３１Ｉ−ＮＭ４０４が安全であること、および腫瘍を検出するためには光学的シンチグラフィー造影時点は２４〜４８時間であることを見出した。これらの研究はまた、初期の期待された類似体に関する有意に低い肝臓でのレベルおよびバックグラウンドの活性レベルも明らかにし、かつ該薬剤が無傷の血液脳関門を通過しないことを確認した。
【０１３０】
初期のヒトでの薬物動態学的研究にとっては十分であったが、ヨウ素−１３１シンチグラフィーに関する造影特性および平面造影の性質が不十分であることは、ＮＭ４０４がさらにＰＥＴ造影のために開発されることに影響する。本発明者らは、最近、比較的新しく、長い半減期のＰＥＴ同位体である市販されているヨウ素−１２４を用いて、ＮＭ４０４を優れた収率で放射性ヨウ素化した。その半減期は、ＮＭ４０４の薬物動態学的分析結果と理想的に適合しているように考えられる。原始的なマイクロＰＥＴ走査は、異種移植片中の１２４Ｉ−ＮＭ４０４で得られ、これにより、自発的なマウス腫瘍モデルおよびラット腫瘍モデルは普遍的な腫瘍アビディティーおよび増長された滞留を確認した。ＰＥＴ走査に対してこれらの結果を拡張することは、ｉｎ  ｖｉｖｏでこの薬剤の分布特性を正確に特徴づけ、定量するために今や必要である。この提案の主要な目的は、この放射性同位体を用いてＮＳＣＬＣ患者でＰＥＴ／ＣＴ造影するためにＮＭ４０４をさらに開発することである。
【０１３１】
本発明は、（ａ）術前の画像を病理学的知見と比較することによって、切除を経験したＮＳＣＬＣに罹患した患者で１２４Ｉ−ＮＭ４０４  ＰＥＴ／ＣＴを用いて主要なＮＳＣＬＳ腫瘍を造影する効果、（ｂ）切除を経験したＮＳＣＬＣ患者でのＮＭ４０４の特異的な腫瘍での蓄積および代謝運命、ならびに腫瘍での滞留とホスホリパーゼＤ活性の減少との相関；（ｃ）これらの結果をＦＤＧ  ＰＥＴ／ＣＴ走査と比較することによる、ＮＳＣＬＣに罹患した患者で１２４Ｉ−ＮＭ４０４  ＰＥＴ／ＣＴを用いて局所領域の腫瘍および転移腫瘍を造影する感度に関する予備試験データ；および（ｄ）孤立性肺小節のある患者または肺サルコイドーシスもしくは肉芽腫性の感染（例えば菌感染もしくは細菌感染、または細菌性肺炎など）の診断をされた患者を造影することによって、１２４Ｉ−ＮＭ４０４  ＰＥＴ／ＣＴを用いて造影する感度に関する予備試験データ、を研究する。
【０１３２】
その増長された腫瘍での滞留特性により、１２５Ｉで標識されたＮＭ４０４は、Ａ５４９ヒト肺腫瘍異種移植片保有ＳＣＩＤマウスにおいて、重要な腫瘍での後退が最近行われた（下記参照）。診断と医薬的有用性との両方を示しているので、ＮＭ４０４は、真正の、普遍的になる可能性のある、診断薬剤および治療薬剤として開発されている。
【０１３３】
ＮＭ４０４は、現在、数種の肺を含む２７の動物腫瘍モデルで評価されており、該薬剤が１度腫瘍細胞中に入ると代謝の終端（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｅａｄ  ｅｎｄ）に達し、トラップされることは明らかである。この薬剤の増長された腫瘍での滞留は、ＳＣＩＤマウスに移植されたヒトの副腎腫瘍の異種移植片で実証される（図１４）。ＮＭ４０４はまた、自然発生マウス肺腫瘍中で滞留する（図１３）。１２５Ｉで標識されたＮＭ４０４を使用して、本発明者らは６０日を超えてマウスでの乳腺腫瘍および前立腺腫瘍を造影することができた。増長された腫瘍での滞留特性は、該薬剤の放射性治療効果を有意に高め得る。造影および組織分布研究は、幅広い腫瘍モデルにおいて取り込み特性を決定することを目的にしたマウスモデルにおいて行われ、表２に取りまとめられる。
【０１３４】
臨床研究での同位体選択の論理的根拠
【０１３５】
本発明者らは予備的な薬物動態学的研究においてヨウ素−１３１で標識したＮＭ４０４を調査したが、造影のためにはこれは最適ではない。なぜなら、ヨウ素−１３１シンチグラフィーは、限られた解像度および解剖学的詳細がほとんどない画像を作り出すからである。しかし、新規な長い半減期の同位体であるヨウ素−１２４は、対応するＣＴ画像で表示されるトモグラフィーＰＥＴ画像を作り出し、これにより、有意に優れた解剖学的および機能的詳細を提供する。
【０１３６】
ＰＬＥ類似体の腫瘍標的戦略は時間とともに選択的に腫瘍で滞留するように見えるため、比較的短い半減期の核種（例えば１８Ｆまたは９９ｍＴｃでさえ）は、現時点でＮＭ４０４を標識するのは実用的ではない。ヨウ素−１２３を含む他の同位体の使用は、特定の腫瘍におけるＮＭ４０４の使用に適していることを最終的に証明し得るが、現在の焦点は、複合されたＰＥＴ−ＣＴのスキャナーを使用する腫瘍造影の最近の成功により、この剤のＰＥＴ造影能力を開発するであろう。ＣＴにより提供される正確な解剖学的精度と組み合わさった生化学的または機能的腫瘍造影ＰＥＴ剤により提供される越えられない診断の精度は、腫瘍の造影にとって今や金標準である。しかしながら、比較的新規なＰＥＴ同位体であるヨウ素−１２４でＰＬＥ類似体を標識することは非常に利点があり、物理的半減期（４日）は、ＰＬＥの腫瘍での取り込みおよび滞留動態と良く適合する。ヨウ素−１２４でＮＭ４０４を標識することは、４日の物理的半減期に基づくガンマ線放射核種を用いた最近の研究の自然な拡大を象徴する。１２４Ｉを用いたＰＥＴ造影は平面１３１Ｉ−ガンマシンチグラフィーの感度の４０倍を越える感度を提供するということを示した。ＰＥＴは、従来のガンマカメラ造影とは異なり、有意な解像度の向上および３次元能力を示すだけでなく、ＣＴによりもたらされる減衰した補正の利点を組み込むことで複合されたＰＥＴ−ＣＴと組み合わせて使用される場合には素晴らしい造影評価方法を提供する。最近の肺癌造影試験における１３１Ｉ−ＮＭ４０４の予備試験の成功により、平面シンチグラフィーと本質的に関連する制限を克服するために、ヨウ素−１２４を用いて標識したＮＭ４０４の腫瘍検出効果をＰＥＴにより評価することは今や不可欠である。
【０１３７】
ヨウ素−１２４によるＮＭ４０４の成功した放射標識
【０１３８】
本発明者らは、Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｉｓｏｔｏｐｅ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ、ＶＡ）から０．１Ｎ  ＮａＯＨ中でナトリウム−ヨウ素−１２４の高い特異的活性を得た。ＮＭ４０４の放射標識は、同位体変換法の改変によって６０％を超える単離放射化学的収率を達成する。要するに、２ｍｌのガラス製のバイアルは、脱イオン化水５０μｌ中に溶解された硫化アンモニウム１０ｍｇで充填する。ガラスビーズを添加し、テフロン加工された隔膜およびスクリューキャップが加えられ、バイアルを穏やかに旋回させた。０．０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３０μｌ未満中に、ＮＭ４０４ストックの１０μｇの溶液（エタノール１０μｌ中）を添加し、その後、ヨウ化ナトリウム水溶液（Ｉ−１２４，１〜５ｍＣｉ）を添加する。反応バイアル（ｖｉｌｅ）を、穏やかに旋回させる。直列にガラスウールが入っている５ｍｌ使い捨てシリンジは、木炭の小塊を充填された別の５ｍｌのシリンジに針の末端で取り付ける。ガラスウールシリンジは、蒸発した溶媒を捕らえるための濃縮チャンバーとして働き、木炭シリンジは遊離したヨウ化物／ヨウ素をトラップするための濃縮チャンバーとして働く。反応容器を１５０℃で４５分間ヒートブロック装置を用いて加熱する。その後、４つの２０ｍｌ体積の空気を、２５ｍｌの使い捨てシリンジとつなげられた反応バイアル中に注入し、二重のトラップ付属品を通して放出させる。温度を１６０℃まで上昇させ、反応バイアルはその後３０分加熱する。室温にまで冷ました後、エタノール（２００μｌ）を添加し、バイアルを回転させた。エタノール溶液は、未反応のヨウ化物を除去するために、事前に平衡化したＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ４００−ＯＨ樹脂カラムを通過させる。溶離液の体積は窒素気流を介して５０μｌにまで減少し（木炭シリンジトラップを使用）、残りの体積は精製するためにシリカゲルカラム中に注入した（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ヘキサン／イソプロパノール／水（５２：４０：８）を用いて１ｍｌ／分で溶離する３μｍ×３ｃｍの使い捨てカートリッジカラム）。最終的な純度は、ＴＬＣ（クロロホルム−メタノール−水（６５：３５：４、Ｒｆ＝０．１）を用いて溶離したプラスチックに支持されたシリカゲル−６０）によって決定される。ＨＰＬＣ溶媒は、回転蒸発によって除去され、得られた放射性ヨウ化ＮＭ４０４は、２％ポリソルベート−２０水溶液で可溶化し、滅菌したバイアル中の０．２２μｍフィルターを通過させた。放射化学的純度は典型的には９９％を超える。
【０１３９】
１２４Ｉ−ＮＭ４０４を用いたマウスの腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏでのＰＥＴ造影
【０１４０】
脳腫瘍。本発明者らは、Ｃ６グリオーマ（直径３〜５ｍｍ）腫瘍保有ラットおよび擬似手術したラットでのＮＭ４０４の造影特性を評価した。組織分布分析は、注射２４時間後および４８時間後に１２５Ｉ−ＮＭ４０４を用いて行い、別個の群の動物を、１２４Ｉ−ＮＭ４０４の注射後、種々の各時点でマイクロＰＥＴ走査した。正常な脳組織では、生体内分布分析は、最小のＮＭ４０４放射能を示した。しかしながら、２４時間、４８時間では、腫瘍／脳の割合（％注射された用量／ｇ）はそれぞれ１０．６および１２．０であった。（図１５）ＮＭ４０４の腫瘍での取り込みは、組織学によって裏付けられた。ラットのグリオーマモデルで得られたこれらの予備実験結果は、ＮＭ４０４が悪性の原発脳腫瘍および転移脳腫瘍の検出することにかなり期待できることを示唆する。
【０１４１】
肺、前立腺および膵臓腫瘍モデル
【０１４２】
肺、前立腺および膵臓マウスモデルにおける、１２４Ｉ−ＮＭ４０４を用いた予備的マイクロＰＥＴ造影の結果を、図１６〜１８に示す。動物モデルで得られた全てのマイクロＰＥＴ造影での一般的な特徴は、いずれの時点でも膀胱活性が欠損していることである。ヒトの薬物動態学的研究は、該薬剤のたった４％だけが静脈内注射から４日以内に腎臓で除去される（大部分はＧ１経路により排出される）という、この発見を裏付けた。すべての場合において、ＮＭ４０４は、体内での位置に関わらず有意な腫瘍アビディテイーを示した。バックグラウンドに対して腫瘍（特に腹部の腫瘍）は一般的には時間経過とともに顕著に高まるにも関わらず、腫瘍での取り込みは、注射６時間以内は、典型的には一般的な状態（ｓｃｅｎｅ）である。
【０１４３】
これらの観察結果および他の観察結果に刺激され、本発明者らは、ヒトＡ５４９肺腫瘍異種移植片を有するＳＣＩＤマウスで小規模の１２５Ｉ−ＮＭ４０４の試験的治療研究を最近行った。１２５Ｉ−ＮＭ４０４を、６匹のマウスの群に対して単回用量またはその代わりに３回用量（週に１度、３週間）のいずれかで投与し、分けられた一団は比較例として非標識ＮＭ４０４の等用量を受けた。単回用量は５０または５００μＣｉであり、繰り返し用量群は全部で３週間５０μＣｉ用量を受けた。腫瘍の増殖を、最終の注射の後に１０週間モニタリングした。予備実験結果は、高用量の腫瘍増殖では顕著な後退および３回用量群ではおそらく同様の反応を示す。しかし、該研究のこれらの戦闘（ａｒｍ）は依然進行中である。新規な戦闘は、この薬剤の医薬的潜在能力をより正確に評価するために、現在のもの間の用量レベルをカバーするように現在開始されている。５００μＣｉ用量でさえ、マウスはいかなる毒性の兆候も示さなかった。
【０１４４】
臨床試験
【０１４５】
ウィスコンシン大学でのフェーズ１のＮＳＣＬＣ試験において、ＮＭ４０４は造影のためのトレーサーの用量（０．３μｇ／ｋｇ体重）で投与した。７０ｋｇの被験体は、したがって、およそＮＭ４０４を２１μｇ受けたであろう。しかし、変換標識手順での最近の改良は、注射される用量がかなり少ないことをもたらす。標識および特異的活性における最近の改良により、本発明者らはすでに０．２２ｎｍｏｌ／ｋｇＢＷに対応する１４２．９ｎｇ／ｋｇＢＷまたは７０ｋｇの患者あたり０．０１０ｍｇの全用量の範囲で用量に達することが可能であった。さらに、改良は、下記の新規な標識方法論に基づくことが期待される。該改良は、必要な化合物の量を５０分の１未満に減少させることになるであろう。それらの将来の改良を考慮して、本発明者らが、行われた臨床試験で与えられるように意図したＩ−１２５−ＮＭ４０４の臨床用量は、およそ３〜５ｎｇ／ｋｇＢＷまたは７０ｋｇの患者当たり約２５０ｎｇである。
【０１４６】
アルキルホスホコリンとして公知のリン脂質エーテルの一部は、幅広い薬理学的活性を有し、動物モデルおよびヒトにおいてマイクロモル濃度で抗癌剤および抗リーシュマニア（ｌｅｓｈｍａｎｉａｌ）剤として広く研究されている。膜脂質代謝の崩壊が腫瘍細胞膜で見られるが、取り込み様式だけでなく作用の正確な機序（単数または複数）も、明らかに定義されていない。ミルテホシン、ヘキサデシルホスホコリンは、４週間の期間中に３９ｎｍｏｌ／ｋｇの最大許容用量になるラットでのＬＤ５０が６０６ｎｍｏｌ／ｋｇであることが報告されている。ヒトでの臨床試験において、１５０ｍｇ（３×５０ｍｇ）の毎日の経口用量は、最小の副作用（吐き気および嘔吐）でよく許容された（Ｐｌａｎｔｉｎｇ  ＡＳ，Ｓｔｏｔｅｒ  Ｇ，Ｖｅｒｗｅｉｊ  Ｊ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １９９３；２９Ａ：５１８−５１９）。
【０１４７】
ＮＭ４０４で行われた毒性研究
【０１４８】
この節では、ＮＭ４０４を用いて行った４つの正式なＧＬＰ毒性研究を要約する。これらの研究は次のものである：
【０１４９】
【表１】
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【０１５０】
雄のラットおよびウサギにおけるＮＭ４０４の正式な毒性研究は、Ｐａｕｌ  Ｋｏｓｔｙｎｉａｋ博士の監督の下、バッファロー（Ｂｕｆｆａｌｏ）にあるニューヨーク州立大学のＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒで行われた。薬物ビヒクルおよび薬物製品（ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ）は、ミシガン大学のＲａｙｍｏｎｄ  Ｃｏｕｎｓｅｌｌ博士からＫｏｓｔｙｎｉａｋ博士に、添付の研究２７および研究２８の概要に記載した試験のために提供された。４ｍｇ／ｋｇの用量では有意な毒性効果は指摘されなかった（この量は、当時予期された造影用量のおよそ２００倍の量である）ので、本発明者らは、この発明の下で行われた臨床試験に関して予期される治療用量はおよそ２８６０倍であると見積もった。非標識ＮＭ４０４のヒト安全性研究は、予期される造影用量の１０倍および予期される治療用量の約２１倍の量で正常なヒト男性において開始した。その結果は、薬物物質による毒性がないことを再び示した。この毒性研究はＧＬＰ条件下で行った。
【０１５１】
その後に、ウィスコンシン大学の研究者らは、ＮＳＣＬＣのフェーズ１臨床試験で研究される患者群を拡大するために、ＳＵＮＹ−バッファローにあるＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒで非標識ＮＭ４０４の毒性研究を雌のラットおよびウサギ（研究３１および研究３２）を用いて開始した。０．０４ｍｇ／ｋｇの用量（これは、当時の改正された造影用量のおよそ２００倍の用量である）で有意な毒性効果は指摘されなかった。そのため、本発明者らは臨床試験に関して予期される治療用量はおよそ２８６倍であると見積もった。非標識ＮＭ４０４のヒト安全性研究を、最初に予期された造影用量の１０倍および予期された治療用量の約２１倍の量で、正常なヒト女性において開始した。さらに、有意な毒性効果は雌ラットまたはウサギのどちらでも指摘されなかった。この毒性研究は、ＧＬＰ条件下で行った。
【０１５２】
毒性研究は、当時、ヒトの試験において予期される用量の２００倍にまで至るように設計された。その後、変換標識方法論（ＣＭＣ節の方法２を参照）の改良は、反応のために必要な化合物の量において１／５０未満への減少をおそらくもたらすであろう。したがって、毒性用量の再計算は、少なくとも１０，０００×予期される臨床用量の用量では明らかに毒性がないことを示した。正常なボランティアおよびＮＳＣＬＣ患者でのフェーズ１の安全性試験、薬物動態学的試験および線量測定試験の間、正常な男性（Ｕ  Ｍ１）もしくは女性（ＵＷ）のボランティア、または研究に参加したいずれのＮＳＣＬＣ患者（ＵＷ）のいずれにおいても、毒性は観察されなかった。
【０１５３】
コントロールおよび試験製品（Ｔｅｓｔ  Ａｒｔｉｃｌｅ）：
【０１５４】
この試験製品は、不活性成分（ビヒクル）を含有するＣ−ＮＭ４０４（活性成分）の溶液であった。本研究のコントロール溶液は、活性成分のないビヒクルであった。
【０１５５】
前記試験製品を、以下のように処方した：
（１）活性成分：２ｍｇ／ｍＬ  Ｃ−ＮＭ４０４
（２）不活性成分：滅菌水中２％ポリソルベート２０（注射グレード）
【０１５６】
前記コントロールを、以下のように処方した：
（１）不活性成分：滅菌水中２％ポリソルベート２０（注射グレード）
【０１５７】
このコントロール製品および試験製品は、１９９８年１０月２９日に、ミシガン州アン  アーバー（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ）にあるミシガン薬科大学薬理学部の、薬理学および薬化学の教授Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｅ．Ｃｏｕｎｓｅｌｌ博士から受け取った。バッファローの大学のＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ、つまり本研究の試験場所で、「２％ポリソルベート２０／滅菌水中ＮＭ−４０４（２ｍｇ／ｍｌ）、ＭＡＬ−Ｖ１−８２」とラベルされた試験製品の４本のバイアル、および「コントロールビヒクル−滅菌水中２％ポリソルベート２０、ＭＡＬ−Ｖ１−８３」とラベルされたコントロール製品の４本のバイアルが、一覧表に記載され、これを室温で保存した。
【０１５８】
投与：試験製品（Ｃ−ＮＭ−４０４）を、予期される臨床用量の２００倍を超える用量で投与した。コントロールラットおよび試験ラットに、尾の側面の静脈に静脈内注射した。ラットに、２５口径の針および１ｍｌシリンジを用いて、体重に対して２ｍｌ／ｋｇで試験またはコントロール製品を静脈内に注射した。注射は、コントロール群由来のラットと試験群由来のラットを交代ですることにより行った。注射は、３０秒より長く１分までの時間間隔で注意深く行った。コントロールラット＃２７−０１への注射は、午前９：０３に行い、試験ラット＃２７−１６への最後の注射は午前１１：０１になされた。以下のラットは注射の間動いており、複数回の注射を受けた：コントロール＃６（２カ所）、試験＃９（３カ所）、試験＃１５（３カ所）。
【０１５９】
ヒトへの適用において、ＥＴ−１８−ＯＣＨ３、真正のＰＬＥであり、したがってミルテホシンよりもＮＭ４０４とは非類似であるが、（エデルホシン、マウスＬＤ５０（経口）２００ｍｇ／ｋｇ）は静脈内に５％ＨＳＡ中５ｍｇ／ｍｌで１５〜２０ｍｇ／ｋｇ／ｄの用量で投与される。最大の許容用量は５０ｍｇ／ｋｇである。この剤に対して報告された副作用としては、注射４時間後までに肺浮腫により損なわれた肝臓機能および溶血が挙げられる。（Ｂｅｒｄｅｌ  ＷＥ，Ｆｉｎｋ  Ｕ，Ｒａｓｔｅｔｔｅｒ  Ｊ．Ｌｉｐｉｄｓ  １９８７；２２：９６７−９６９）。ＮＭ４０４の全用量が、ミルテホシンの１日の１回分の用量の１／１００００未満であることを考慮すれば、毒性の事象（ｔｏｘｉｃ  ｅｖｅｎｔ）は、予期されない。
【０１６０】
研究手順：ラットを、注射時から午後３：３０まで、急性毒性の兆候に関して、ＬＡＦ職員が観察した。このラットの体重を、１週間（月曜日から金曜日）に５回測定し、キログラム単位で記録した。１９９８年１２月１７日、ラットを、腹腔内に投与したペントバルビタールナトリウム（６５ｍｇ／ｍｌ、Ｌｏｔ＃９７０７８９、有効期限：２０００年２月１日）で麻酔した。その後、血液学的ＣＢＣおよび臨床的な血液の化学性質をもつ血液試料を収集するため、心臓穿刺を２０口径の針および１０ｍｌシリンジを用いて行った。ラットは瀉血して死亡させた。胸腺、心臓、肺、脾臓、腎臓、肝臓、脳および睾丸を収集し、肉眼検査し、体重を測定し、病理学のために切開した。組織試料（胸腺は除く）は、組織学のために、固定液「Ｚ−ｆｉｘ」の広口瓶に入れた。
【０１６１】
１６匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは、インディアナ州のインディアナポリスにあるＨａｒｌａｎ−Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙから受け取った。全てのラットは同日に生まれた雄であり、健康のようであった。これらのラットを、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆａｃｉｌｉｔｙで飼育し、任意に飼料および水を与えた。それぞれのラットに、２７（研究番号）で始まり、「０１」から「１６」の「固有の」番号が続く２つの部分の番号（示数性）を与えた。それぞれのラットの右耳に、「０１」から「１６」の固有の番号に基づいて穴を開けた。コントロールラットに、＃２７−０１から＃２７−０８まで番号を付け、試験ラットに、＃２７−０９から＃２７−１６まで番号を付けた。そのケージ内でどのラットが飼育されているかを示すように、固有の番号をそれぞれのケージにもまた付けた。コントロールラットのケージが４つあり、試験ラットのケージが４つあった。ラットの体重を測定した。コントロール群の平均体重は０．２３４キログラムであり、試験群は０．２３８キログラムであった。２群の８匹のラットは、ランダムな割り当てにより構築した。ラットの体重を、第１４日の研究の最後まで、毎日測定した。試験製品（ｔｅｓｔ  ｐｒｏｄｕｃｔ）、投与用量および投与様式、バッチ番号：Ｃ−ＮＭ−４０４（ＭＡＬ−Ｖ１−８２）２ｍｇ／ｍｌ、３０〜６０秒の治療期間にわたって尾静脈注射を介して投与する：単回用量の比較治療、投与用量および投与様式、バッチ番号：滅菌水中２％ポリソルベート２０、体重に対して２ｍｌ／ｋｇ、３０〜６０秒より長く尾静脈注射を介して投与する。
【０１６２】
安全性：第１４日に、両群の血液試料を、血液学的および臨床化学的に分析する。さらに、以下の臓器が、病理学的報告および組織学的脱落（ｓｌｉｄｅ）に関して、除外される：脳、肺、肝臓、心臓、腎臓、脾臓および睾丸。各ラットに関して、臓器の重量及び臓器／体重の比の編集チャートが編集され得る。
【０１６３】
統計学的方法：
【０１６４】
体重および生化学的パラメーターの群間での相違は、ｔ−検定を用いて比較する。
【０１６５】
安全性の結果：
【０１６６】
いずれのラットでも、この期間の間またはこの１４日の研究の間ずっと、異常な行動は指摘されなかった。尾静脈注射部位は、ラットの体重を測定する時に毎日チェックし、組織の副作用はいずれのラットでも指摘されなかった。コントロール群および試験群におけるラットの平均体重は、体重が両群において有意ではなく周期的に一日一日減少したことを除いては、有意差はなかった。
【０１６７】
バッファローのＳＵＮＹで、病理学者が、屠殺後１週間で組織の肉眼検査を行った。肉眼で見られる病巣は、試験群でもまたはコントロール群でも指摘されなかった。次いで、組織の切開面を、光学顕微鏡による検査で分析した。調べられた臓器には、試験物質の投与に起因し得る組織病理学における変化はなかった。試験物質を接種したラット＃２７−１２は、心筋障害（初期段階の梗塞）の小さな病巣領域を有する。非常に小さいと解釈されるように同様に進行したと分かった他の区画においては、この変化は見られない。該物質を接種された他の動物では病巣は見られないので、病理学者はいくつかの説明できない変化によるものであると感じた。肺は組織病理的変化を示していないので、肺に起因する感染によるのではない。
【０１６８】
任意の明白な数値（これは、参照範囲より大きかったか又は小さかった）に関して、臨床的血液化学および血液学の結果を調査した。これらの数値は、ｐ値が０．０５のｔ検定を使用して群を比較することになった。ｔ検定を、以下のものにおいて行った：リン、ナトリウム、カリウム、ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、グロブリン、Ａ／Ｇ比、グルコース、ＷＢＣ、ＲＢＣおよびヘモグロビン。有意な差異は見られなかった。
【０１６９】
結論：該試験製品が原因の急性毒性効果は見られなかった。試験群とコントロール群との間で有意な差異はなかった。
【０１７０】
雄および雌の、ウサギおよび雌のラットで同様の試験を行った。試験製品が原因の副作用は指摘されなかった。
【０１７１】
前臨床薬理学：
【０１７２】
安全で有効な癌治療の開発に取り組んだ本発明者らは、小分子の担体分子を設計する。該分子は、癌組織で選択的に滞留する能力を持つが、癌ではない組織では滞留しないか最小限に滞留する能力を持つ。放射線治療へのこのアプローチの拡大により、腫瘍塊内に治療レベルの放射線を預ける（ｄｅｐｏｓｉｔ）一方で、正常組織に放射線に誘導された損傷を最小限にする放射性医薬品の選択的送達が開発される。この技術は、リン脂質エーテル（ＰＬＥ’ｓ）および特にそのサブグループのアルキルホスホコリン類似体（例えばＮＭ４０４であり、高度の腫瘍選択性を示す）の固有の生化学的特性および薬理学的特性に基づく。リン脂質は、細胞膜の不可欠の成分であり、構造的完全性を与え、多様な細胞シグナル伝達過程と密接に関連する。ホスファチジルコリンは、レシチンとして周知であり、かかるものの例である。リン脂質エーテルは、他方、膜にも存在するリン脂質の少数のサブクラスを代表する。名称が示唆するように、これらの脂質はＣ１部位でのエステル結合よりむしろエーテル結合を含む。血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、より周知のリン脂質エーテルの１つを代表する。
【０１７３】
数種の動物およびヒトの腫瘍が、正常組織よりも、腫瘍の細胞膜中に、ずっと高濃度の、自然に生じたエーテル脂質の集積を含むという、彼の初期の知見に基づいて(Ｓｎｙｄｅｒ，Ｆ．ａｎｄ  Ｗｏｏｄ  Ｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９６８；２８：９７２−９７８，Ｓｎｙｄｅｒ  Ｆ．ａｎｄ  Ｗｏｏｄ  Ｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９６９；２９：２５１−２５８)、Ｓｎｙｄｅｒは、腫瘍におけるエーテル脂質の蓄積が、結果としてこれらの脂質を代謝する腫瘍細胞の能力を、より低下させることを提唱した。最も一般的な仮説は、細胞膜ではおそらくホスホリパーゼ酵素により代謝されて除去される能力がないため、リン脂質エーテルは腫瘍膜でトラップされるというものである。この仮説は、放射性ヨウ化リン脂質エーテルの投与後の腫瘍から得た脂質抽出物が無傷の剤のみであることを明らかにし、他方では尿および便の分析により、代謝産物のみであることが明らかにされることを示す実験によって支持される（Ｐｌｏｔｚｋｅ，ＫＰ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ，１９９３；３７：２６４−２７２）。したがって、腫瘍がＰＬＥを滞留する理由は、正常細胞と腫瘍細胞のＰＬＥのクリアランス速度の差異によるものである。
【０１７４】
広範囲の構造活性関係研究は、潜在的な腫瘍選択的造影剤として２０を超えるリン脂質エーテル類似体の合成、放射標識および評価をもたらした。ヨウ化ＡＰＣ類似体を、同位体変換法を使用して全てのヨウ素放射性同位体を用いて容易に標識した。これらのＰＬＥ類似体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの脱ヨード化に対して安定な分子にするために、芳香族放射性ヨウ素を組み込んで特異的に設計する。全ての事前の前臨床造影および組織分布研究で（％注射用量／ｇと％注射用量／臓器基準との両方で）甲状腺活性が低レベルであることは、放射性ヨウ化ＰＬＥ類似体のｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を保証する。
【０１７５】
リン脂質エーテル（ＰＬＥ）化合物のライブラリーでは、ＮＭ３２４［１２−（３−ヨードフェニル）−ドデシルホスホコリン］が、動物腫瘍局在性研究において初めは最も有望性を示した。多様な腫瘍（乳房の腫瘍、前立腺の腫瘍、扁平上皮細胞癌、卵巣の腫瘍、結腸直腸の腫瘍および黒色腫が挙げられる）を、ＮＭ３２４を用いたシンチグラフィーによってうまく可視化した。プロトタイプの剤であるＮＭ３２４を用いた最初のヒト薬物動態学的研究中に、肝臓組織での許容できない蓄積を観察し、優れた腫瘍局在性特性およびバックグラウンドクリアランス特性を有するＰＬＥ化合物を同定するために更なる実験を行った。この研究に基づいて、ＮＭ４０４［１８−（４−ヨードフェニル）−オクタデシルホスホコリン］は、腫瘍で局在する能力を増強すること、肝臓からの代謝によるクリアランスを増加させること、および血漿でのより長い半減期により浮かび上がった。重要な観察は、リンパ節転移で局在するＮＭ４０４の能力を実証し、関与していないリンパ節での滞留のない転移前立腺腫瘍モデルでのシンチグラフィーにより明らかに描写された。
【０１７６】
主要な化合物であるＮＭ４０４は、現在まで、研究されている限りでは２５を超える動物腫瘍モデルならびにすべての腫瘍モデルおよび腫瘍タイプで評価されており、ＮＭ４０４は腫瘍選択的滞留を示す。１２５Ｉ−ＮＭ４０４の増長された腫瘍滞留は、マウスで注射後２０〜６０日の期間が実証されている。かかる非常に広範囲で延長された腫瘍滞留特性は、該剤（特に、例えばヨウ素−１２５のように放射能の減衰が遅い同位体）の放射治療効果を有意に増強し得る。
【０１７７】
数種の腫瘍モデルでの、プロトタイプ薬剤である１２５Ｉ−ＮＭ３２４に対する広範囲の生体内分布のデータにより、より後期の注射後期間に（ａｔ  ｌａｔｅｒ  ｐｏｓｔ−ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｔｉｍｅｓ）腫瘍対血液の割合が８：１を越えることが明らかになった。ラットの乳癌モデルにおけるこのような一つの例では、腫瘍対正常組織の比は、９６時間で最高に達し、腫瘍対血液の比は８．６であり、腫瘍対筋肉の比は２０：１であった。さらに、腫瘍中のＰＬＥ関連放射能の生体内分布の不均一性は、マイクロオートラジオグラフィー研究により実証された。この研究は、ＰＬＥ放射能が、中心の壊死領域よりもむしろ外側領域に位置する生存腫瘍細胞においてだけ存在することを示した。ＮＭ３２４およびＮＭ４０４に対する比較生体内分布のデータは、ＳＣＩＤマウス前立腺腫瘍モデルおよびＡ５４９肺癌腫瘍モデルにおいて得られた。これらの研究により、腫瘍対正常組織の大きな比および腫瘍中のＮＭ４０４の注射用量の２５％を超える腫瘍での取り込みが明らかになった。したがって、これは、ヒトにおけるＮＭ４０４の生体内分布を研究するという要望を支持する。
【０１７８】
作用機序
【０１７９】
代謝研究
【０１８０】
正式な代謝研究は、ＮＭ３２４、つまりＮＭ４０４の前駆物質を含む数種のＰＬＥ類似体で実施した。これらの研究において、各薬剤を、ＰＬＥ代謝に関する酵素の基質として作用する能力を決定するために試験した。３つの主要な酵素経路は、ＰＬＥの代謝に関係する。Ｏ−アルキルグリセロールモノオキシゲナーゼ（ＡＧＭＯ）は、長鎖脂肪アルコールか、または後の対応する脂肪酸のいずれかを形成するためにＣ１でアルキルエーテル結合を開裂させる原因である。ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）およびホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）は、他方で、それぞれグリセロールまたはホスファチジン酸生成物を生じる。ミクロソームＡＧＭＯ酵素調製物を用いて、広範囲で代謝される［３Ｈ］−溶解（ｌｙｓｏ）−ＰＡＦ(血小板活性化因子)と比較する場合、ＮＭ３２４はこの酵素の基質ではなかった。同様の様式で、ＮＭ３２４を、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓから単離されたＰＬＣに対する基質として分析し、有意に加水分解が行われる１−パルミトイル−２−［３Ｈ］−パルミトイル−Ｌ−３−ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）に比べて加水分解は行われなかった。
【０１８１】
最終的に、数種のＰＬＥ類似体をホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）アッセイに供した。酵素反応がエタノールの存在下で行われる場合にはホスファチジン酸に加えて、該キャベツの形態がホスファチジルエタノールタイプの生成物であるという点で、該ＰＬＤ（これは、キャベツから単離されたものであった）は、哺乳動物ＰＬＤと類似している。これらのアッセイ条件に供された数種のＰＬＥ類似体は、ホスファチジルエタノール付加体を生じ、ＰＬＤと相互作用可能であることを示した。本発明者らは、ＮＭ４０４はヒトホスホリパーゼＤに対する代謝基質であり、癌細胞膜におけるホスホリパーゼＤの相対的欠如がＮＭ４０４の腫瘍選択的滞留に関する機序の基礎をなすと考えている。しかしながら、文献（参考文献？？？）から公知なことであるが、癌がなぜ膜内でＰＬＤ欠損であるのかは依然として不明である。
【０１８２】
数種のＮＭ４０４の前駆物質を、Ｗａｌｋｅｒ腫瘍細胞、ラット筋肉（Ｈ９ｃ２）およびラットの肝細胞を含む多様な細胞株において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの代謝研究にも供した。これらの研究において、代謝の程度を、多様な時期にインキュベーションした後に形成された放射標識生成物に基づいて決定し、その結果を細胞数または細胞タンパク質の量に標準化した。インキュベーション培地および細胞懸濁液の結果生じた脂質抽出物により、Ｗａｌｋｅｒ腫瘍細胞ではＰＬＥ代謝物をほとんど産生しないことが実証され、一方で、４８時間の研究期間中に筋細胞と肝細胞との両方では代謝物の有意な産生が見られることが実証された。これらの結果は、全ての類似体に関して完了した、ｉｎ  ｖｉｖｏでの生体内分布研究によく相関する。いくつかの研究は完了したが、腫瘍細胞中での放射標識ＰＬＥ類似体の取り込みおよび滞留における代謝トラップの役割は、十分には定義されておらず、最近でも依然として試験の活発な領域である。本発明者らは、ＮＭ４０４は全細胞の細胞膜に入ることができるが、急速な代謝を通して非癌細胞から排出され、一方で、癌細胞では適切な代謝酵素の欠損によりトラップされると考えている。
【０１８３】
ＰＬＤアッセイ
【０１８４】
動物腫瘍モデルでのＮＭ４０４の腫瘍滞留の明瞭な普遍性およびヒト肺癌試験で最初の確証的な結果により、本発明者らは、この剤の作用機序を調査し始めた。ＰＬＥ類似体の膜代謝は多様なホスホリパーゼにより制御されるが、本発明者らは、ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）活性への最初の取り組みに焦点を当てた。この取り組みは、ＮＭ４０４の細胞での取り込みおよび滞留が、正常細胞に対する腫瘍細胞膜中のＰＬＤ量に逆に相関するという仮説に基づくものである。
【０１８５】
これらの知見のために、ＰＬＤタンパク質活性およびＲＴ−ＰＣＲアッセイによるＰＬＤのｍＲＮＡ定量の予備的な評価を数種のマウス腫瘍細胞株で行い、正常な肝（ｌｉｖｅｒ）と比較した。かかるマウス腫瘍細胞株としては、マウス腫瘍細胞株ｈｅｐａ−１（肝癌）、ＣＴ２６（結腸直腸の腺癌）およびＴＳ／Ａ（乳腺癌）が挙げられる。これらの実験により、ＰＬＤタンパク質活性とｍＲＮＡレベルとの両方が、正常肝組織よりも腫瘍において有意に低いことを明らかになった（ｐ＜０．０５、Ｔ検定）（表１）。
【０１８６】
【表２】
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【０１８７】
結論として、ＮＭ４０４の選択的滞留の機序は、ＰＬＤの膜レベルでの減少のためであり得、それゆえに、細胞からのＮＭ４０４の代謝およびクリアランスを妨害し得る。初期の酵素基質アッセイをキャベツ由来のＰＬＤで行うという思いつきは、ＮＭ４０４が実際にこの酵素に対して優れた基質であることを示した。このことはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞培養における取り込みおよび滞留研究での発見を支持する。該研究は、ＰＬＥ類似体が正常細胞（ＰＬＤの正常レベルを含む）により捕捉され、その後代謝されることを示した。悪性腫瘍細胞が、ＰＬＤの正常な補体を有するならば、該薬剤は同様に腫瘍細胞から代謝され排出される。反対に、悪性細胞からの該剤の代謝およびクリアランスの欠如は、これらの腫瘍性細胞が周囲の正常宿主細胞と比較してＰＬＤを欠損するという仮説を支持するということが推定され得る。
【０１８８】
他の研究
【０１８９】
ＰＬＥ類似体を用いた機序研究：ＮＭ３２４およびＮＭ４０４はミルテホシン（ヘキサデシルホスホコリン）つまりヨーロッパで最も広範囲に研究されている抗腫瘍エーテル脂質と構造が類似している。ミルテホシンおよび数種の他の抗腫瘍リン脂質エーテル類似体の抗腫瘍特性は、広範囲の腫瘍細胞株で実証された。腫瘍細胞株としては、前立腺腫瘍、膀胱腫瘍および奇形腫瘍、マウス白血病およびヒト白血病、ならびに肺癌、結腸癌、卵巣癌、脳の癌および乳癌が挙げられる（Ｌｏｈｍｅｙｅｒ  Ｍ，Ｂｉｔｔｍａｎ  Ｒ．Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  １９９４；１９：１０２１−１０３７)。多くの抗癌薬物とは対照的に、これらのリン脂質エーテル類似体は、ＤＮＡに直接結合せず、かつ変異原性がない。正確な抗増殖性作用機序は決定されていないが、リン脂質エーテル類似体は数種の腫瘍細胞部位に明らかに作用する。これらの化合物は、多様な細胞効果に関与し、この細胞効果としては、輸送、サイトカイン形成の促進、アポトーシス誘導および種々の主要な脂質代謝と細胞シグナル伝達酵素（これらのほとんどは、細胞膜中に位置する）との干渉が挙げられる。ＰＬＥの細胞内への取り込み様式に関して不明な事柄も残っているが、ほとんどの証拠は、これらのエーテル脂質が蓄積される細胞膜中に直接吸収されるという考えを現在支持している。広く認められた考えは、これらの剤が膜リン脂質代謝を混乱させることによって作用するというものである；しかしながら、これらの剤の細胞分布研究は、均一化中の自然発生的な細胞区画での再分配および非細胞分別手順（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）により制限される。本発明者らにより引用された造影および生体内分布研究で用いられたトレーサー造影用量（数μｇ）とは対照的に、抗腫瘍効果は、１日当たり１５０ｍｇを一般的に超える用量でのみ見られた（Ｐｌａｎｔｉｎｇ  ＡＳ，Ｓｔｏｔｅｒ  Ｇ，Ｖｅｒｗｅｉｊ  Ｊ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９３；２９Ａ：５１８−９；Ｖｅｒｗｅｉｊ  Ｊ，Ｐｌａｎｔｉｎｇ  Ａ，  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂｕｒｇ  Ｍ，Ｓｔｏｔｅｒ  Ｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１９９２；１１８：６０６−８；Ｍｕｓｃｈｉｏｌ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｐｉｄｓ  １９８７；２２：９３０−９３４）。
【０１９０】
作用機序
【０１９１】
一般的な作用機序は、リン脂質エーテル（例えば、ＮＭ４０４）が、代謝され排出される能力がないために、悪性腫瘍細胞膜にトラップされるようになることである。放射性ヨウ化リン脂質エーテルの投与後の腫瘍の摘出は、無傷の薬剤の存在のみを示したが、尿および便の分析は、代謝産物のみであることを示した。したがって、この概念の基礎をなすのは、正常細胞対腫瘍細胞のリン脂質エーテルの異なるクリアランス速度である。２７を超える異種移植片および自然発生腫瘍モデルにより得られた予備的な結果は、ＮＭ４０４が腫瘍で選択的および増長された滞留をすることを普遍的に示した。
【０１９２】
治療のための同位体選択
【０１９３】
本発明者らは、ヨウ素−１２５が、背骨を標的にしてＮＭ４０４と一緒に組み合わせて使用するのに最も適切な放射性同位体であると考えている。その理由は：
【０１９４】
ヨウ素−１２５の同位体の長い半減期は、長期の安定した腫瘍滞留をするＮＭ４０４と完全に適合し、このＮＭ４０４は、長期間の間、治療できる放射線用量を送達するからである。
【０１９５】
ヨウ素−１２５の効果は、低エネルギーガンマ線／Ｘ線照射とオージェ電子との両方によって生じる。これらは全て、治療距離が非常に限定されている。ＮＭ４０４が腫瘍中に取り込まれるので、ヨウ素−１２５を効率的に腫瘍用量を送達し得るが、周囲の健康な組織には危害を与えない。
【０１９６】
ヨウ素−１２５は、放射線減衰の副産物の１つとしてオージェ電子を有する（図２）。オージェ電子は顕著な生物学的効果を生じるが、治療距離が非常に短い。ＮＭ４０４が癌細胞の全細胞膜（核膜を含む）中に直接取り込まれるので、ＤＮＡへの治療距離は非常に低い。オージェ電子は、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４の治療効果に対して、主要な寄与者に効率的になることができる。
【０１９７】
ヨウ素−１２５同位体は、本出願において製剤として使用される。なぜなら、癌の放射線治療のために好ましい特徴を示すからであり、その特性は以下に列挙した：
【０１９８】
ガンマ線照射
（１）放射線同位体の半減期：５９．４３日
（２）ガンマ線のエネルギー：３５．５ｋｅＶ
（３）Ｘ線のエネルギー：２７．５−３１．７ｋｅＶ
（４）放射線の半減距離：０．０２ｍｍ鉛；組織中で２ｃｍ
【０１９９】
オージェ電子
（１）放射線のエネルギー：１ｋｅＶ
（２）オージェ電子の数：ガンマ線の減衰に対して２１以下
（３）放射線の半減距離：１〜１０ｎｍ
【０２００】
ヨウ素−１２５は、診断用造影のための、ｉｎ  ｖｉｖｏで生体内分布研究および線量測定外挿のために非常に有用であるが、全身平面造影またはｉｎ  ｖｉｖｏでのシンチグラフィーによるＮＭ４０４の組織濃度の定量のいずれにもあまり適していないことは注目すべきことである。しかしながら、ヨウ素−１２４はｉｎ  ｖｉｖｏでの組織濃度の定量決定のために優れた特性を提供する。したがって、１２４−Ｉ−ＮＭ４０４は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物動態学的研究および生体内分布研究に有用であることが見出されるであろう。しかし、１２４−Ｉ−ＮＭ４０４は、放射性治療効果は有さず、ヨウ素−１３１は、治療効果を生じるベータ線とガンマ線との両方を放射する。Ｉ−１３１−ＮＭ４０４は、放射線治療に潜在的に使用され得るが、本発明者らは、Ｉ−１２５がより最適な同位体であると考えている。なぜなら、その低いエネルギー放射線は、Ｉ−１３１よりも短い放射半減距離を有し、それゆえ、健康な組織に対しては損傷が少ないであろうと仮定されるからである。したがって、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４は、健康な組織に対して副次的な損傷を生じさせる可能性を減少させるために、行った全ての臨床放射線治療研究に使用した。
【０２０１】
物理的半減期が６０日であり、かつ低エネルギーの３５ｋｅＶの光子を放出するために、ヨウ素−１２５は、マウスおよびラットでの造影実験に適している。ヨウ素−１２５はまた、永久的な前立腺近接照射療法の移植片（「近接照射療法の種」）に対して使用される場合に治療効果を提供する。１２５Ｉの主要な利点は、全ての光子が低エネルギーであり、腫瘍周囲の正常組織が非常に限定的に被曝することが保証されることである。ヨウ素−１２５を含む近接照射療法の種とＩ−１２５−ＮＭ４０４との主要な違いは、オージェ電子の効果である。近接照射療法の種は、ヨウ素−１２５の周りに金属のカプセルを有するので、低エネルギーのガンマ線およびＸ線のみが治療価値を有し、オージェ電子は金属カプセルにより排除される。それとは異なり、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４は、癌細胞膜中（その核膜中も含む）に取り込まれ、オージェ電子は治療効果に主に寄与することができる。
【０２０２】
ヨウ素−１３１は甲状腺癌の治療に優れた効果を持って使用されるが、ヨウ素−１３１の顕著な難点は、高いエネルギーのガンマ線の放出があることである。その放出により、実際には、近接した周囲の組織が、ヨウ素−１２５で生じるよりも大量の放射線に曝され得る。
【０２０３】
線量測定
【０２０４】
大人の女性患者でのＩ−１２５−ＮＭ４０４の線量測定評価は、Ｉ−１３１−ＮＭ４０４投与後の雌の腫瘍非保有ラットを用いたＳＰＥＣＴ造影データに基づいて計算した。その結果を以下に列挙する：
【０２０５】
１２５Ｉ−ＮＭ４０４ラット組織分布データのＭＩＲＤの外挿は、１３１Ｉ−ＮＭ４０４の２ｍＣｉの副腎壁および膀胱壁へ、５Ｒａｄに限定された用量を初めに提供した。したがって、本発明者らは、ヒト肺癌患者で予備試験の薬物動態学的研究を１ｍＣｉで行った。１２４Ｉ−ＮＭ４０４の線量測定の同様の外挿計算は、副腎壁および膀胱壁に対して予測された線量測定に基づいて再び同様の２ｍＣｉ用量レベルを提供した。予備試験でのヒトのデータ（５人の患者）は、しかしながら、１１日以内にバックグラウンドレベルに戻った肝臓を除いて、いずれの腹部の臓器（膀胱および副腎を含む）中へも非常に少ない剤の取り込みおよび滞留を示す。これらの結果はまだ完全ではないが、実際に許容され得る１２４Ｉ−ＮＭ４０４用量は、おそらく４ｍＣｉを超える。
【０２０６】
【表３】
2008545614.tif 000019
【０２０７】
これらの線量測定評価の結果として、以下の点が考慮されなければならない：
【０２０８】
これらの結果は、身体からのＮＭ４０４の排泄がないという最悪の場合のシナリオに基づいた。線量測定データを、Ｉ−１３１−ＮＭ４０４を用いてラットでのＳＰＥＣＴ造影で計算し、次いで、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４に変換した。副腎の腺は、放射線暴露に対して用量限定的または臨界的な臓器であると考えられる。ＳＰＥＣＴ造影実験において、ラットの甲状腺は遮断されなかった。したがって、甲状腺の計算結果は、注意して評価するべきである。
【０２０９】
薬理学の概要
【０２１０】
ＮＭ４０４の合成および生物学的特性の包括的な概要は、米国特許出願第６０／５９３，１９０号（２００４年１２月２０日出願）、米国出願第１０／９０６，６８７号（２００５年３月２日出願）および米国仮出願第６０／５２１，１６６号（２００４年３月２日出願）において述べており、これら全ては、全ての目的のために典拠として本明細書中に援用される。
【０２１１】
本発明者らのアプローチは、小分子担体分子を設計することであり、該小分子担体分子は、高度の組織選択性または腫瘍選択性を示す分子固有の生化学的特性または薬理学的特性を利用して、診断用プローブまたは治療用プローブを所望の標的組織へ選択的に送達することができる。
【０２１２】
多様な動物およびヒトの腫瘍は、正常組織よりもずっと高濃度の、天然に生じるエーテル脂質を細胞膜中に含むことが最初に観察された。リン脂質エーテル類似体は、これらの脂質を代謝する能力が低いために腫瘍細胞に蓄積し得る、と仮定された。本発明者らは、潜在的な腫瘍選択的造影剤として、放射性ヨウ化リン脂質エーテル（ＰＬＥ）類似体を追求した。ＰＬＥ類似体の中には、種々多様な、移植されたラット腫瘍モデル、移植されたマウス腫瘍モデルおよび移植されたヒト腫瘍モデルにおいて、選択的に局在するという、顕著な普遍的能力を示したものもあった。
【０２１３】
有力な仮説は、リン脂質エーテルは、代謝されて取り除かれることができないので、リン脂質エーテルは腫瘍の膜でトラップされるというものである。実際、放射性ヨウ化リン脂質エーテルの投与後の腫瘍の分析は、無傷の薬剤の存在のみを示したが、一方で、正常組織（肝臓および筋肉）、尿および便の分析により、代謝産物のみが明らかになった。したがって、この標的概念の基礎をなすことがらは、正常細胞対腫瘍細胞からのリン脂質エーテル類似体の異なるクリアランス速度の差異である。
【０２１４】
最初に産生されたＰＬＥ類似体の全臨床研究：
【０２１５】
リン脂質エーテルは、実験室で開発された放射性標識方法を使用して、ヨウ化放射性同位体で容易に標識し得る。ヨードフェニルリン脂質エーテル類似体は、各分子に付着（ａｆｆｉｘ）された放射性ヨウ素が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの容易な脱ヨード化に対して安定であるように、特に設計する。ホスホコリン部分にいかなる化学的修飾をしても、ヨードフェニルアルキル部分の鎖長を８メチレンより短くしても、腫瘍での取り込みが減少したりなくなったりすることが見出された。本発明者らは、現在、２０の放射標識ＰＬＥ化合物を合成し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで試験している。これらのうち２つ、すなわちＮＭ２９４およびＮＭ３２４［１２−（３−ヨードフェニル）−ドデシル−ホスホコリン］は、動物腫瘍局在研究において最大の有望性を最初に示した。これらのプロトタイプの化合物は、ヨウ素−１２５で標識され、後述の動物腫瘍モデルにおいて、時間とともに、腫瘍中に選択的に局在した；１）Ｗａｌｋｅｒ  ２５６癌肉腫保有Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット；２）乳腺腫瘍保有Ｌｅｗｉｓラット；３）Ｄｕｎｎｉｎｇ  Ｒ３３２７前立腺腫瘍保有コペンハーゲンラット；４）Ｖｘ２腫瘍保有ウサギ；および５）ヒト乳癌（ＨＴ３９）、小細胞肺腫瘍（ＮＣＩ−６９）、結腸直腸腫瘍（ＬＳＩ  ７４Ｔ）、卵巣腫瘍（ＨＴＢ７７ＩＰ３）、および黒色腫腫瘍を保有する胸腺欠損マウス。これらの薬剤の最適な腫瘍局在は、腫瘍に比べて正常組織からの放射能のより急速なクリアランスに起因し、１日から数日かかる。
【０２１６】
以下の段落で述べられた特定のＰＬＥ化合物を、図１に示す。
【０２１７】
ＮＭ３２４の臨床的評価：最初に産生された化合物であるＮＭ３２４およびＮＭ２９４は同様の動物腫瘍局在特性を示したが、ＮＭ３２４は化学的に容易に合成され、したがって、最初の臨床研究の主要な化合物として選択された。数人のヒト肺癌患者において得られた画像では腫瘍を検出したが、画像は、肝臓の高い放射能によって複雑化した（ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ）（図３）。
【０２１８】
ＰＬＥ類似体の２番目の産生：肝臓での取り込みを減少させ、血漿相を増長させる目的で、本発明者らは、９つのＮＭ３２４の構造的類似体を試験し、腫瘍対バックグラウンド組織の比の改善を示す薬剤を同定し、肝臓での取り込みを減少させた。新規のＰＬＥ類似体を、Ｄｕｎｎｉｎｇ  Ｒ３３２７前立腺腫瘍保有コペンハーゲンラットでの最初の造影分析のために合成し、１２５Ｉで放射標識した。この最初のスクリーニングに基づいて、ＮＭ４０４は、前駆物質のＮＭ３２４よりもはるかに低い肝臓での活性を示すのみならず、腫瘍での増長された滞留を維持する（図４。ＮＭ４０４は、それゆえ、多様な動物腫瘍モデルにおいて更なる造影および生体内分布分析を行うために選択した。
【０２１９】
したがって、ＮＭ４０４は、表２に示すように、現在、２０を超える異種移植片および自然発生的な動物腫瘍モデルにおいて評価されている。全ての腫瘍モデルにおいて、この薬剤は、場所に関係なく、腫瘍での有意な取り込みおよび滞留を示した。腫瘍での滞留を腫瘍細胞膜での代謝ホスホリパーゼ酵素の欠如により説明することは可能だが、腫瘍細胞での取り込みの正確な機序は未知である。さらに、本発明者らは、この薬剤が良性の腸腺腫（ポリープ）に局在しないことを知っており、そこで、腫瘍形成の中期、つまり過形成段階に局在する剤の傾向を更に評価することが望ましい。本発明者らは、ウィスコンシンで開発された固有のマウス腫瘍モデルにおいて、ＮＭ４０４の選択性を現在のところ評価しており、新生物発生前の過形成と悪性腺癌との両方が自然に乳腺で形成される。予備的な結果により、新生物発生前の病巣でこの薬剤が取り込まれず、かつ保持されないということを示すこのモデルがもたらされた。したがって、この薬剤は悪性の腫瘍細胞によってだけ保持されと考えられる。この最初の観察の正当性が立証された場合、ゲノム分析およびプロテオーム解析を介して、本発明者らは、悪性腫瘍と悪性でない前駆細胞との間の主要な遺伝的差異を識別し得る。このことにより、全タイプの癌に普遍的であり得る完全に新規な分子治療標的を識別する。
【０２２０】
下表は、ＮＭ４０４による蓄積に関して評価された種々様々な癌のタイプおよび腫瘍系を集約する。
【０２２１】
【表４】
2008545614.tif 000020
【０２２２】
組織分布および動態
【０２２３】
一貫して、ＮＭ４０４は、長く延長された期間、腫瘍組織中に保持されることが見出された。腫瘍での濃度は、ＮＭ４０４投与後何週間もほぼ安定しており、このことは、時間とともに癌組織からゆっくり排除されることを示す。対照的に、ＮＭ４０４は、正常組織から数日以内に排出されて、非常に低いレベルに達する。
【０２２４】
さらに、ＮＭ４０４は、血中で長い半減期を有するように設計した。このことにより、腫瘍組織へのＮＭ４０４の増長された暴露および腫瘍組織中への注射された用量の、最大で１０％〜２５％の取り込みが保証される。本発明者らは、放射線治療化合物にとって、注射された用量の大部分が目的の組織に蓄積することが非常に重要であると考えている。血中での半減期が長い結果として、ＮＭ４０４は時間とともに腫瘍組織中に継続的に蓄積する。このパターンの例は図５で提供する。これは、数日または数週間続く腫瘍組織中へのＮＭ４０４の蓄積までに、治療効果の開始の遅延につながり得る。
【０２２５】
血液血漿動態
【０２２６】
第一世代のプロトタイプ化合物のＮＭ３２４は、ラットにおいて２．４３時間の血漿での排出の半減期を有することが見出された。それに比べて、主要化合物のＮＭ４０４は、ラットでおよそ２０９時間の排出の半減期を有する（分布相の半減期は４．８６時間である）。
【０２２７】
Ｉ−１２５−ＮＭ４０４の放射線治療研究
【０２２８】
１２５Ｉ標識したＮＭ４０４の「造影」用量（１５〜２０μＣｉ／２０ｇマウス）を用いたマウスの腫瘍での取り込みおよび滞留研究の間、いくつかの明瞭な治療反応が観察された（結果は公表せず）。ＡｐｃＭｉｎｌ＋マウス乳癌モデルにおいて、ＮＭ４０４の１回の静脈内注射後、腫瘍の増殖は止まったままである。これらの動物の中には、注射後８日ほどで、乳癌より大きな部分の全ての毛を失ったものもいた。さらに、これらのマウスはまた、腸の腫瘍にもなり、通常は、深刻な貧血をもたらすような腸の出血に苦しみ、このことにより、マウスの足が白くなる。Ｍｏｓｅｒ博士は、これらのマウスの足が、ＮＭ４０４の１回の注射後５日ほどでピンク色に戻ったことに注目した。これらの動物の最終的な解剖により、この齢では、あったとしても、見られることが通常は非常に少ない、２０前後の予想された腸腫瘍が、残っていただけだったことに注目した。「白からピンクの足へ」の現象は、分離されているがより悪性のマウス腸腺癌モデルにおいてもまた観察された。ここで、解剖は、ＮＭ４０４の投与の１２日後であり、全部ではないにしろ、予想された腸腫瘍のほとんどがなくなったことが再度明らかになった。両方の腸のモデルにおいて２１日後には、ＮＭ４０４を投与された動物は、非処理の同腹子仲間よりも容易に長生きした。腫瘍の退行の他の説得力のある例は、図６に例示されている。２匹の同腹子仲間に、各々がＳＣＣ１およびＳＣＣ６の異種移植片を左脇腹および右脇腹にそれぞれ接種した。１匹のマウスに、１２５Ｉ−ＮＭ４０４の注射を１回行った（２０μＣｉ）。ＮＭ４０４を投与しなかったマウスは、２１日後に死亡したが、処理されたマウスにおける腫瘍は顕著に退行し、この動物は注射の８０日後でも非常に健康であった。符合したこれらの知見は、６匹より多くのマウスをそれぞれ用いた、２つの別々の齢が合致した群において再確認された。１２５Ｉ−ＮＭ４０４でのこれらの観察は、この点で不確かではあるが、これらの観察は、特にヨウ素−１３１で標識される場合には、放射線治療の適用についての潜在性を強く示唆していると考えられる。数種の動物腫瘍モデルにおける継続的な定量的な腫瘍での取り込みおよび滞留の研究は、その本当の放射線治療の潜在能力を評価するために、この剤の総合的な線量測定分析を始めるための十分なデータも提供する。
【０２２９】
６０日の物理的半減期および低エネルギーの３５ＫｅＶ光子放出により、ヨウ素−１２５はマウスおよびラットは造影実験に適している。ヨウ素−１２５はまた、治療特性をも有する。１つの造影実験において（図６）、２匹のヌードマウスに、反対側の脇腹に皮下の扁平上皮細胞株のＳＣＣ１およびＳＣＣ６の腫瘍細胞移植片をそれぞれ接種した。ＳＣＣ１およびＳＣＣ６細胞は、一方に対してもう一方のものが放射線感受性であるために使用した。平均腫瘍サイズが直径０．５ｃｍに達した１４日後、一方のマウスにＩ−１２５−ＮＭ４０４を２０μＣｉ投与し、他方のマウスに等用量の非標識ＮＭ４０４を投与した。非標識のコールドの化合物を投与されたマウスは、両方の腫瘍が動物使用プロトコールに定義された末期サイズ（ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｓｉｚｅ）の限界に達したために、注射２０日後に安楽死させた。ＮＭ４０４の造影用量の１回の注射の後、数週間にわたって、１２５Ｉ−ＮＭ４０４マウスにおける両腫瘍は劇的かつ予想以上に後退した（図６）。このマウスは決して末期腫瘍サイズ（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｔｕｍｏｒ  ｓｉｚｅ）に達することはなく、実際には、マウスは、組織学的切片を回収するために９０日後に安楽死させた。
【０２３０】
進行している腫瘍治療研究の予備的報告
【０２３１】
前臨床的研究−予備的結果：
【０２３２】
Ａ５４９  ＳＣＩＤマウスモデルでのＩ−１２５標識ＳＦ４０４Ａの１回の注射の効果
【０２３３】
目的および論理的根拠：異種移植片腫瘍モデルでのＩ−１２５標識ＳＦ４０４Ａの１回注射を用いた放射線治療のための有効量を決定すること
【０２３４】
腫瘍モデル：
【０２３５】
Ａ５４９（ヒト非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ、ＡＴＣＣより）を、１０％胎児ウシ血清添加Ｈａｍ’ｓＦ−１２Ｋ培地中で保持した。腫瘍細胞懸濁液（リン酸緩衝食塩水中１×１０６細胞）を、雌ＳＣＩＤマウス（６〜８週、Ｃ．Ｂ−１７／ｌｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｃｄｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ）の右脇腹中に皮下注射する。動物は、食料および水を自由に利用することができ、腫瘍の増殖および動物の体重をモニタリングした。直径４〜５ｍｍに達すると、マウスを治療研究のために６の群に分割する。
【０２３６】
用量：
【０２３７】
０日目のＳＦ４０４Ａの１回の注射
【０２３８】
群：
（１）５つの研究群：４つの処理区＋１つのコントロール区
（２）各群あたりＮ＝６
（３）４つの正確な用量レベル：各マウス５０μＣｉ、１５０μＣｉ、２５０μＣｉおよび５００μＣｉ
（４）ＮＭ４０４の等用量を投与されたコントロール群：
（５）コントロール：各マウス０μＣｉ（「コールドの」ＮＭ４０４）
【０２３９】
効果査定：
（１）週に１度測定された腫瘍サイズ（カリパス）
（２）生存率
（３）全体的な様子（活動状態、集中力（ａｌｅｒｔｎｅｓｓ）、運動性）
（４）注射後１０週間までか、またはコントロール群の動物が全く生存しなくなるかのうち、いずれか最初に到来するもの
（５）腫瘍または残存腫瘍部位の病理組織の査定
【０２４０】
各動物に関して、第０日、第３０日および第６０日での腫瘍写真。
【０２４１】
本研究の目的は、異種移植片腫瘍モデルにおいて、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４（製剤ＳＦ４０４Ａ）の１回の注射を用いた放射線治療のための有効量を決定することであった。
【０２４２】
本研究に使用した腫瘍モデルは、Ａ５４９、つまりＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から得たヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であった。腫瘍細胞を、１０％胎児ウシ血清添加ＨａｍＦ１２Ｋ培地で保持する。腫瘍細胞懸濁液（リン酸緩衝生理食塩水中１×１０６細胞）を雌ＳＣＩＤマウス（６〜８週、ＣＢ−１７／ｌｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｃｄｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ）の右脇腹に皮下注射する。動物は、食料および水を自由に利用できる。腫瘍直径が５〜１０ｍｍに達すると、マウスは研究名簿に記載される。
【０２４３】
ＳＦ４０４Ａの１回の静脈内注射を、０日目に行った。コントロール群として、コールドの化合物（Ｃ−ＮＭ４０４）を注射した。処理群には、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４を注射した。
【０２４４】
本研究は、５群を包含していた；４つの処理群（ｎ＝６／群）および１つのコントロール群（ｎ＝９）。処理群のヨウ素用量は、マウスあたり５０μＣｉ、１５０μＣｉ、２５０μＣｉおよび５００μＣｉであった。コントロール群には、等用量のＣ−ＮＭ４０４（０μＣｉ）を投与した。
【０２４５】
処理効果の査定、その後の査定を行った：
（１）週に１度測定した腫瘍サイズ（カリパス）
（２）生存率
（３）全体的な様子（活動状態、集中力、運動性）
（４）腫瘍保有マウスのデジタル写真。
【０２４６】
査定は、注射１０週後か、またはコントロール群の動物が全く生存しなくなるかのうち、いずれかが最初に到来するまで行った。腫瘍または残存腫瘍部位の組織病理的査定を、本研究の最後に行った。
（１）５０μＣｉ群：６匹の動物を登録した；
（２）１５０μＣｉ群：５匹の動物を登録した；
（３）２５０μＣｉ群：６匹の動物を登録した；
（４）５００μＣｉ群：６匹の動物を登録した。
【０２４７】
この予備的報告の一部として、本発明者らは分析で以下の動物を付け加える。
（１）コントロール：ｎ＝７
（２）５０μＣｉ群：ｎ＝４
（３）１５０μＣｉ群：ｎ＝５
（４）２５０μＣｉ群：ｎ＝６
（５）５００μＣｉ群：ｎ＝５
【０２４８】
各群の基準腫瘍体積（ｍｍ３）は：
【０２４９】
【表５】
2008545614.tif 000021
【０２５０】
であった。
【０２５１】
コントロール群および１５０μＣｉ群の腫瘍体積は、実質上他の群よりも大きく、前もって計画したものよりも大きかったので、腫瘍サイズの小さい両群の再登録を始めた。５００μＣｉ群の腫瘍体積に関する限りは、本発明者らは、研究はこの群に対してバイアスがかかり得ると考えている。壊死および非効率的な血液供給により、より大きな腫瘍はＩ−１２５−ＮＭ４０４処理に対して十分には反応し得ない。
【０２５２】
以下の各群の平均腫瘍体積は、１０週間の査定期間にわたって記録した：
【０２５３】
【表６】
2008545614.tif 000022
【０２５４】
これは、図１０にも示す。
【０２５５】
要するに、コントロール動物は、１０週間の査定期間にわたって、腫瘍の急激な増殖を示す。このことは、化合物それ自体のＣ−ＮＭ４０４が、腫瘍の増殖に実質的な効果を有しないことを裏付ける。５０μＣｉ用量群は、コントロール動物とのいかなる差異も示さず、したがって、これはこの動物モデルにおける有効量でないと考えられる。１５０μＣｉ用量群は同様に治療効果を示さなかったが、（前で指摘したように）この用量群は、０日目で異常な大きさの腫瘍で開始した。しかしながら、この用量群は、より小さな腫瘍を有する１５０μＣｉのこの用量群とは異なる結果を示し得る。
【０２５６】
予備実験のデータは、２５０と５００μＣｉとの両方が実質的かつ増長された治療効果を示すことを示す。腫瘍体積は安定していて、同一の腫瘍は「崩壊した」と考えられる（腫瘍表面が陥没した。図７に示す）。さらに、腫瘍上の毛が抜け落ち、これらの腫瘍中に放射能が実質的に蓄積していることを示した。
【０２５７】
他の現在進行中の前臨床腫瘍治療研究
【０２５８】
Ａ５４９  ＳＣＩＤマウスモデルにおける、Ｉ−１２５標識ＳＦ４０４Ａの、分割用量の効果対単回注射の効果
【０２５９】
この前臨床研究は、以前の研究で与えられた１回の単回１５０μＣｉ用量の代わりに、３週間５０μＣｉ用量を注射することにより１５０μＣｉ用量を分割することについて査定する。
【０２６０】
目的および論理的根拠：異種移植片腫瘍モデルで、Ｉ−１２５標識ＳＦ４０４Ａの分割用量に対する等全量（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ｔｏｔａｌ  ｄｏｓｅ）の単回注射の放射治療効果を決定すること。この研究は、ＣＴＬＲ−Ｐｒｅ−０５−００１に付加するものであり、これは比較のために使用された１５０μＣｉの単回用量を含む。
【０２６１】
腫瘍モデル
【０２６２】
Ａ５４９（ヒト非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ、ＡＴＣＣより）は、１０％胎児ウシ血清添加Ｈａｍ  Ｆ１２Ｋ培地で保持する。腫瘍細胞懸濁液（リン酸緩衝生理食塩水中に１×１０６細胞）を、雌ＳＣＩＤマウス（６〜８週、Ｃ．Ｂ−１７／ｌｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｃｄｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ）の右側側腹部に皮下注射する。動物は、食料および水を自由に利用でき、腫瘍の増殖および動物の体重がモニタリングされる。直径が４〜５ｍｍに達すると、治療研究のためにマウスを６の群に分割する。
【０２６３】
用量：
【０２６４】
０日目の、Ｉ−１２５−ＳＦ４０４Ａの単回注射対Ｉ−１２５−Ｓ４０４Ａの分割用量の注射
【０２６５】
群：
【０２６６】
２つの研究群：１つは分割用量、１つは単回注射
（１）各群あたりＮ＝６
（２）分割注射により、マウス１匹当たり１５０μＣｉ（３×５０μＣｉ）、０日目から１週間間隔
（３）単回注射により、マウス１匹当たり１５０μＣｉ
【０２６７】
効果の査定：
（１）週に１度測定した腫瘍サイズ（カリパス）
（２）生存率：注射１０週後まで、またはいずれの群においても動物が生存していなくなるまでのうち、いずれか最初に到来するもの
（３）全体的な様子（活動状態、集中力、運動性）
（４）腫瘍または残存腫瘍部位の組織病理学的査定
（５）各動物についての、０日目、３０日目および６０日目の腫瘍の写真。
【０２６８】
ＰＣ−３（前立腺癌）ＳＣＩＤマウスモデルでのＩ−１２５標識ＳＦ４０４Ａの単回注射の効果
【０２６９】
目的および論理的根拠：前立腺癌異種移植変腫瘍モデルで、Ｉ−１２５標識ＳＦ４０４Ａの単回注射を用いた放射線治療のための有効量を決定すること。
【０２７０】
腫瘍モデル：
【０２７１】
ＰＣ−３（ヒト前立腺癌、ＡＴＣＣより）を、１０％胎児ウシ血清添加Ｈａｍ  Ｆ１２Ｋ培地で保持する。腫瘍細胞懸濁液（リン酸緩衝生理食塩水中に１×１０６細胞）を、雄ＳＣＩＤマウス（６〜８週、Ｃ．Ｂ−１７／ｌｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｃｄｓｃｉｄ、Ｈａｒｌａｎ）の右側側腹部に皮下注射する。動物は、食料および水を自由に利用可能であり、腫瘍の増殖と動物の体重をモニタリングする。直径が４〜５ｍｍに達すると、マウスを治療研究のために６の群に分割する。
【０２７２】
用量：
【０２７３】
０日目でＳＦ４０４Ａの１回の注射
【０２７４】
群：
（１）５つの研究群：４つの処理群＋１つのコントロール群
（２）各群あたりＮ＝６
（３）４つの急性線量レベル：各マウスあたり５０μＣｉ、１５０μＣｉ、２５０μＣｉおよび５００μＣｉ
（４）等量のＮＭ４０４を投薬されたコントロール群；各マウスあたり０μＣｉ（「コールド」ＮＭ４０４）
【０２７５】
効果査定：
【０２７６】
週に１度測定した腫瘍サイズ（カリパス）
【０２７７】
生存率：注射１０週後まで、またはいずれの群の動物も生存しなくなるまでのうち、いずれか最初に到来するまで
（１）全体的な様子（活動状態、集中力、運動性）
（２）腫瘍または残存腫瘍部位の組織病理学的査定
（３）各動物について、０日目、３０日目および６０日目での腫瘍の写真。
【０２７８】
この前臨床研究は、単回注射での研究である以前の研究を繰り返すが、異なる腫瘍モデルを用いる。
【０２７９】
リン脂質エーテル類似体であるＮＭ４０４を使用した、前立腺およびＮＳＣＬＣの造影に対する臨床的評価
【０２８０】
正常な男性被験体および健康で正常な女性の被験体における安全性の査定を行い、Ｃ−ＮＭ−４０４の３μｇ／ｋｇの用量レベルは、男性の被験体へ投与しても安全であることが見出された。この用量は、転移前立腺癌を有する患者で造影のために使用されることが予想される１３１Ｉ−ＮＭ４０４の０．３μｇ／ｋｇの用量の１０倍である。Ｃ−ＮＭ４０４の３μｇ／ｋｇの用量レベルは、女性の被験体へ投与しても安全である。この用量は、転移肺癌を有する患者で造影のために使用されることが予想される１３１Ｉ−ＮＭ４０４の０．３μｇ／ｋｇ用量の１０倍である。
【０２８１】
ＮＳＣＬＣを有する患者におけるＮＭ４０４の造影特性
【０２８２】
転移非小細胞肺癌被検体：
【０２８３】
書面によるインフォームドコンセントが得られる。０．３μｇ／ｋｇ用量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４を、１０分間にわたって注入する。１３１Ｉ−ＮＭ４０４を含有する水溶液を、ウィスコンシン大学のＪａｍｅｙ  Ｗｅｉｃｈｅｒｔ博士の実験室における滅菌技術を用いて調製する。核薬学（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）によって調合される調製物は、無菌で、かつ発熱物質がないことが証明される。被検体は、注入の間および後に、副作用反応に関してモニタリングされる。生命徴候（ｖｉｔａｌ  ｓｉｇｎ）を、注入後すぐ、および注射４時間後まで６０分間隔でチェックする。この期間ずっと、生命徴候が、副作用情報（ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔ）に関して観察される。被験体は、注入の２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１２０時間後、１４４時間後および３０日後に戻る。ＮＭ４０４のＰＥＴ走査を、注射の４時間後、８時間後、２４時間後、４８時間後および９６時間後に行う。これらの時点において、生命徴候をモニタリングする。被験体に起こるいかなる副作用をも記録する。甲状腺の遊離放射性ヨウ素に対する暴露を減少させるために、全ての被験体に、１３１Ｉ−ＮＭ４０４注入の１日前から始め、７日間続けて、ＳＳＫＩ経口溶液を投与する。血清薬物動態の結果が、注入前、注射の５分後、１０分後、３０分後、６０分後、１２０分後、２４０分後、３６０分後に、及び注射の２４時間後、４８時間後、７２時間後及び９６時間後に得られる。逐次的な２４時間（注射の０時間後〜２４時間後、２４時間後〜４８時間後、４８時間後〜７２時間後および７２時間後〜９６時間後）の尿の回収物を得る。
【０２８４】
血漿薬物動態学により、ＮＭ４０４に関して、平均１１３．１時間（ＳＥＭ＝７．９時間）の排泄半減期が裏付けられた。
【０２８５】
注射用量の平均３．４％（０．９％〜９．８％の範囲）が、ＮＭ４０４の静脈内投与から９６時間で腎臓を経由して排泄された。０．３μｇ／ｋｇの用量レベルの１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、進行した非小細胞肺癌を有する被験体への投与しても安全であった。ＮＭ４０４の排泄血漿半減期は、１１３．１時間であることが見出され、尿中への排泄は、注射後９６時間以内でおよそ３．４％であることが見出された。
【０２８６】
前立腺癌
本発明は、前立腺癌を有する患者を造影する際の、第二世代のＰＬＥ類似体であるＮＭ４０４の使用に関する予備的なデータを提供する。この薬剤は、ウィスコンシン大学で現在調査されており、高レベルで選択的に腫瘍中で保持され、そして前臨床モデルにおいて、高い感度および特異性を有する。該薬剤は、予期されたヒトでの造影用量の１０００倍を超える用量でも、ラットおよびウサギの両方での急性中毒試験に合格した。そして、安全性を実証するために、ミシガン大学およびウィスコンシン大学で、１０人の正常なボランティアに対して、予期された造影用量の１０倍の用量で非標識薬剤を投与した。本発明者らは、ＮＭ４０４を用いた造影が、ＦＤＧを用いた造影と同様の感度であることが最終的に実証され、ＮＭ４０４を用いた造影が、さらに特異的でもあり、治療に利用され得、かつ、比較的長い半減期のために、位置に関わらず実質的に全てのＰＥＴ設備において利用可能であると仮定する。
【０２８７】
１３１Ｉ−ＮＭ４０４の生体内分布、動態、最適な造影時間および線量測定は、ＵＷＣＣＣで肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者における試験的な研究において現在評価されている。この薬剤はまた、転移前立腺腫瘍モデルにおいて前臨床的に評価され、このモデルにおいて、リンパ節転移はＮＭ４０４の静脈内投与後のシンチグラフィーによって明らかに描き出されたが、トレーサーは、関与しないリンパ節に適切に滞留しなかった。ＰＳＡなどの従来の腫瘍マーカーが多様な良性の疾患状態（前立腺炎および良性の前立腺肥大が挙げられる）でも上昇し得るように、悪性細胞に対するＮＭ４０４の選択性は、前立腺癌に特に関係する。その上、腫瘍細胞による選択的取り込みおよび増長した滞留は、腫瘍選択的診断および治療剤としてのＮＭ４０４の役割を支持する。
【０２８８】
予備的結果は、前立腺癌における病期診断および／または治療への反応のためのＮＭ４０４の予測力をより正確に評価するように設計した連続的な研究の予備的データを提供する。さらに、ＮＭ４０４が腫瘍での高い取り込みを有するので、この薬剤はまた、高用量の、１３１Ｉ、１２５Ｉ、別のハロゲンアスタチンと組み合わさったとき、治療剤として開発される潜在性をも有する。ヨウ素−１２５は、組織での短いオージェ電子軌道長のおかげで、特に前立腺癌患者において望ましく、直腸などの近隣の正常組織における放射線効果を理論的に最小化する。治療の意味では、ヨウ素−１２５の６０日の半減期は、ＮＭ４０４の増長された腫瘍滞留特性と非常によく合致する。
【０２８９】
腫瘍細胞の標的化
【０２９０】
感度が良く、より有用な造影試験の開発への１つのアプローチは、所望の標的組織へ放射性医薬品プローブを選択的に送達する能力を有する担体分子を設計することである。該アプローチは、高度の腫瘍選択性を示すリン脂質エーテル類似体（例えば、ＮＭ４０４）の固有の生化学的および薬理学的特性を利用する。リン脂質は、細胞膜の必須の成分であり、細胞膜においてリン脂質は、構造的完全性を与え、多くの細胞シグナル伝達過程と非常に関連している。ホスファチジルコリンは、レシチンとして周知であり、このような例の一つである。リン脂質エーテルは、他方で、膜中に同様に存在するリン脂質の微量のサブクラスを代表する。名称が示唆するように、これらの脂質は、Ｃ−１位にてエステル結合よりもむしろエーテル結合を含む。血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、周知のリン脂質エーテルの１つを代表する。上記のように、ＰＬＥが腫瘍で滞留するのは、正常細胞対腫瘍で異なるＰＬＥクリアランス速度に起因する。
【０２９１】
プロトタイプ剤であるＮＭ３２４を用いたヒト薬物動態学的研究を始める一方で、優れた腫瘍局在性およびバックグラウンドクリアランス特性を有するＰＬＥ化合物を同定するための、進行中の実験を行った。この研究に基づいて、ＮＭ４０４［１２−（４−ヨードフェニル）−オクタデシルホスホコリン］を、腫瘍中に局在する能力の増強、肝臓からの代謝によるクリアランスの増加、および長い血漿半減期のために選択した。転移に局在化するＮＭ４０４の能力を実証する主要な実験において、ＮＭ４０４の静脈内投与後の転移前立腺腫瘍モデルで、リンパ節転移はシンチグラフィーによって明確に描き出されたが、トレーサーは、関与しないリンパ節には滞留しなかった。
【０２９２】
ＰＣ−３前立腺腫瘍保有ＳＣＩＤマウスでの、比較例のシンチグラフィーの造影結果（ＮＭ３２４およびＮＭ４０４に関するもの）によれば、腫瘍対正常組織の比が大きいこと、ならびに、バックグラウンドの腹部及び肝臓においてＮＭ４０４の放射線が有意に減少したことが明らかになった（図１９）。この薬剤は、現在２７匹の動物腫瘍モデルで評価されており、一度薬剤が腫瘍細胞に入ると、代謝の終端（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｅａｄ  ｅｎｄ）に達してトラップされることが明らかである。この薬剤の増長された腫瘍滞留は、ＳＣＩＤマウスに埋め込まれたヒト副腎腫瘍異種移植片において実証されている（図２０）。１２５Ｉ標識ＮＭ４０４を使用して、本発明者らは、６０日より長くマウスで乳癌および前立腺腫瘍を造影できた。増長された腫瘍滞留特性は、該薬剤の放射性治療効果を有意に増強する。
【０２９３】
げっ歯類モデルで行われた最近の造影および生体内分布研究は、多様な異種移植片および自然発生的（内因性またはトランスジェニック）腫瘍タイプにおける取り込み特性を決定することが目的であり、上記に要約されている。これらの薬剤は、今までに研究された解剖学的位置（リンパ節を含む）に関わらず、全ての悪性の腫瘍における選択的局在性および増長された滞留を示した。
【０２９４】
前立腺腫瘍保有マウスにおける、ＮＭ４０４を用いた予備的シンチグラフィー造影結果：マウスの前立腺腫瘍にＮＭ４０４が局在することを示す予備試験実験では、ＴＲＡＭＰマウスを、１２５Ｉ−ＮＭ４０４（１５μＣｉ）の尾静脈注射の１日後〜８日後からバイオスキャンＡＲ−２０００放射ＴＬＣスキャナー（マウス造影のために実験室で修正した）で走査した。低エネルギーのヨウ素−１２５に関連する組織の衰弱を回避するため、麻酔したマウスのｉｎ  ｖｉｖｏでの造影後に、前立腺腫瘍を即座に除去し、同一のスキャナー（高い解像度の１ｍｍコリメータおよび２−Ｄ収集および分析ソフトウェアを備える）を用いてｅｘ  ｖｉｖｏで造影した（図２１）。前立腺腫瘍保有動物の数は少なかったが（ｎ＝４）、予備的造影および腫瘍対バックグラウンドのデータは、このモデルにおいて見られた良性の過形成ではなく、前立腺腫瘍でのＮＭ４０４の取り込みを示した。骨転移をシミュレートする試みでは、別の実験を行った。該実験では、最近の報告に従って、ヒトＰＣ−３腫瘍細胞を免疫不全ヌードマウス（ｎ＝６）の脛骨に埋め込んだ。腫瘍細胞の接種後に、骨腫瘍の進行をモニタリングするために、マウスを高解像度のマイクロＣＴで連続的に走査した（図２２）。一度、骨の劣化を検出するとすぐに、ヨウ素−１２５標識ＮＭ４０４を尾静脈を介して静脈内投与した。マウスを、ＮＭ４０４投与の４日後に、マイクロＣＴにより放射能に関して走査した。放射能走査を、マイクロＣＴ走査（図２３）と融合させ、ＮＭ４０４の放射能および腫瘍の位置を確認した。
【０２９５】
生体内分布データ
数種の腫瘍モデルにおいて、プロトタイプ剤である１２５Ｉ−ＮＭ４０４の拡張された生体内分布データが、以前に報告されている。８：１を超える腫瘍対血液の比は、注射後の遅延時間で見られた。例えば、ラットの乳癌モデルでは、腫瘍対正常組織の比が、９６時間にて最大に達し、その時、腫瘍対血液の比は、８．６であり、腫瘍対筋肉の比は、２０：１であった。さらに、ＰＬＥ関連放射能の生体内分布は、ミクロオートラジオグラム研究により実証されるように、腫瘍では不均一であり、このことは、該ＰＬＥ放射能が、中心の壊死領域よりはむしろ外側領域に向かって位置する生存腫瘍細胞に独占的に存在することを示す。ＳＣＩＤマウスでのＮＭ３２４およびＮＭ４０４に関する比較例生体内分布データは、前立腺およびＡ５４９肺癌腫瘍モデルで得られた。これらの研究により、ＮＭ４０４に関して、腫瘍対正常組織の比が大きいこと及び腫瘍取り込みが注射用量の２５％を超えることが明らかになり、したがって、この研究はヒトでのＰＬＥ類似体の生体内分布を試験するという望みを支持する。
【０２９６】
同位体選択
ＰＬＥ類似体の腫瘍標的化戦略が、経時的選択的腫瘍滞留を含むと考えられるので、比較的短命の核種（例えば、１８Ｆまたは９９ｍＴｃ）はＮＭ４０４を標識するには現在では実用的でない。１３時間の半減期および最適な造影特性を有するので、３次元ＳＰＥＣＴモードで走査する場合、ヨウ素−１２３がこの薬剤にとって適切であることもまた証明され得る。ヨウ素−１２３を用いた造影は、さらなる調査を必要とする。ＰＬＥ類似体の腫瘍局在は、注射の数時間以内に生じると考えられる（ＮＭ３２４の画像は、以前の研究で肺腫瘍での強度の取り込みを示した肺癌患者で注射６時間後に得られた）。一方で、ヨウ素−１３１を用いてヒトで最近行われているような平面２次元造影は、バックグラウンドでの活性が、近隣の正常組織および血液から取り除かれるのを可能にするための遅延時間が必要である。ＰＥＴおよび３Ｄ  ＳＰＥＣＴを用いて走査する場合、より早期の造影が可能であり得るようである。その場合、近隣の放射能は、これらのの治療法適用様式の３次元の性質を原因とする干渉が少ない。バックグラウンドの放射能が本質的に少ないままの臓器（例えば、脳）では、ヨウ素−１２３のようなガンマ線放射同位体（これは、美しい画像をさらに提供するのに加えて、注射後の同日に画像の取得が可能である）を使用することが可能であり得る。他の同位体の使用がＮＭ４０４での使用に適していることは最終的には証明され得るが、現在の焦点は、ハイブリッドＰＥＴ−ＣＴスキャナーを用いた腫瘍造影の現在の成功に基づいてこの薬剤のＰＥＴ造影能力を発達させることであろう。ＣＴにより提供される正確な解剖学的精度と組み合わされる、生化学的または機能的腫瘍造影ＰＥＴ剤により行われる卓越した診断の精度が、現在、腫瘍造影の金標準である。しかしながら、ヨウ素−１２４、つまり比較的新しいＰＥＴ同位体でＰＬＥ類似体を標識するのは非常に都合が良く、その物理的半減期（４日）は、ＰＬＥの腫瘍での取り込みおよび滞留動態によく合致する。ヨウ素−１２４でＮＭ４０４を標識することは、ガンマ線を放出する核種を用いた以前の研究の自然な拡張を示す。１２４Ｉを用いたＰＥＴ造影が、平面１３１Ｉ−ガンマ線シンチグラフィーの感度の４０倍を超えたことが示されている。ＰＥＴは、従来のガンマ線カメラ造影とは異なり、重要な解像度の増強、造影定量化および３次元の能力をも提供する。現在の肺癌造影試験において、平面シンチグラフィーに本質的に関与した限定を克服するために、１３１Ｉ−ＮＭ４０４の予備的成功に基づいて、ヨウ素−１２４でＮＭ４０４を標識すること、およびＰＥＴによる腫瘍検出効果を評価することが現在必須である。
【０２９７】
腫瘍トレーサー（例えば、６７Ｇａ−クエン酸塩および１８Ｆ−ＦＤＧ）の利用は、新生物と炎症とを区別する特異性の欠如のために、制限される。この特異性の欠如は、癌を有する患者では重要な臨床的問題である。しかしながら、ＰＬＥ類似体の予備的研究は、この制限を克服する将来性（ｐｒｏｍｉｓｅ）を提供する。ラットで行われた以前の実験により、カラギーナンにより誘導された肉芽腫中へのＮＭ３２４の取り込みおよび滞留がないことが明らかなった。クエン酸ガリウムは、しかしながら、この研究でコントロールとして使用されたが、肉芽腫性の病巣中で有意に実際に集積したわけではなかった。したがって、ＰＬＥ類似体が炎症性病巣で明らかには局在しないというこの予備的な発見は、ヒト癌患者におけるこの薬剤の評価の必要性をさらに正当化する。ＦＤＧ−ＰＥＴがハイブリッド造影方法の道を開いたが、腫瘍細胞特異性の欠如は診断効果を常に制限する。ＮＭ４０４などの新規な分子標的剤は、悪性腫瘍細胞の位置およびこれについての選択性に関わらず（非炎症性または増殖性病巣への選択性に関してはこの限りではない）、普遍的な腫瘍での取り込みおよび選択的滞留を示し、癌の検出および特性解析に顕著な改善を示す。
【０２９８】
平面核医学造影技術が、許容可能な２Ｄ画像を歴史的に行っているのに対し、この治療法適用様式はトモグラフィー能力がなく、画像定量化が乏しい。１２５Ｉ−ＮＭ４０４は、げっ歯類腫瘍モデルにおける予備試験シンチグラフィー造影および組織分布研究に適しており、１３１Ｉは、ヒト肺癌患者でのフェーズ１の安全性および薬物動態学的評価に適していた。しかし、両者はいずれも、ｉｎ  ｖｉｖｏのヒト造影での定量化に最適ではない。ヨウ素−１２４を使用したＰＥＴ造影は比較的新しく、４日の半減期を有する市販のポジトロン同位体は、平面造影に関連する多くの問題を緩和する。ＮＭ４０４の独特の腫瘍造影能力をＰＥＴ走査に移行させることは、現在、本発明者らの実験室の主な目的になっている。なぜなら、ヨウ素−１２４が昨年の後半に市販されるようになったからである。マウスモデルで見られる、悪性腫瘍に対するＮＭ４０４の腫瘍特異性が、ヒトにおいて確かめられた場合、本発明者らは、炎症部位局在特性がないにも関わらずＦＤＧよりも腫瘍特異性を有する剤を有する。さらに、該薬剤は１つの施設で製造され得、半減期が４日であるので事実上世界中のいかなる場所へも輸送することができる。
【０２９９】
本発明者らは、最近、民間の製造供給元（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ）から提供されたヨウ素−１２４を用いてＮＭ４０４を首尾よく２回放射標識した。放射化学的収率（＞６０％の平均分離収率、＞９９％の純度）は、ヨウ素−１２５または１３１のヨウ化ナトリウムの市販されている商業的供給源で通常得られるものと、非常によく類似していた。ラットのＣＮＳ−１脳腫瘍モデルにおける１２４Ｉ−ＮＭ４０４のＰＥＴ造影特性を試験した（図２４）。この予備的研究での造影時間は、マイクロＰＥＴスキャナーの利用できる度合いにより注射２４時間後および４日後に制限された。１２４Ｉ−ＮＭ４０４の静脈内注射２４時間後に得られたマイクロＰＥＴ画像は、コントラストを増強したＭＲＩ画像を裏付け、脳腫瘍でのトレーサーの強度の取り込みを示した。該トレーサーは、周囲の生来の脳組織でほとんどまたは全く取り込まれない。この研究は、ＮＭ４０４で得られる最初のＰＥＴ造影を代表し、ＰＥＴ造影のためにＮＭ４０４を効率的に放射標識し、精製し、そして処方する能力を実証する。次いで、これらの化合物は、ヒト癌患者において、ＮＭ４０４ＰＥＴの拡張された利用のために使用され得る。
【０３００】
Ｘ線写真により証明された転移前立腺癌を有する患者でのＰＥＴ−ＣＴによる１２４Ｉ  ＮＭ４０４の腫瘍での取り込みおよび滞留特性を決定する
【０３０１】
目的および論理的根拠
【０３０２】
放射性ヨウ化ＮＭ４０４による既知の転移病巣の選択的検出が可能かどうか、および従来の放射性物質の治療法適用様式と比較できるかどうかの査定は、後の段落で議論する。この研究での包含診断基準は、転移前立腺癌を有する１５人の患者からなり、少なくとも５人の患者は柔組織前立腺癌転移を有し、少なくとも５人の患者は骨転移を有する。これらの転移は、従来の放射性医学研究（ＣＴ走査および骨走査が挙げられる）により特定できる。患者の登録に続いて、放射標識ＮＭ４０４の取り込みをＩ−１２４同位体ＰＥＴ−ＣＴ走査により測定する。これは、患者の他の従来の病期診断研究により検出されたＸ線写真により明らかにされた病巣と相関する。
【０３０３】
方法
【０３０４】
合成、放射標識および製剤化：１２４Ｉ−ヨウ化ナトリウムを有する安定したＮＭ４０４の放射性ヨウ素化は、Ｍａｎｇｎｅｒにより報告された硫酸アンモニウム媒介性同位体変換反応の修飾により日常的に達成し、本発明者らの実験室でＮＭ４０４用に最近最適化した。変換反応方法論は、ＮＭ３２４、つまりＮＭ４０４の前駆物質を用いた最初のヒトでの試験に効果的に使用され、現在、前臨床研究およびヒト肺癌試験に使用されている。一時的には、２ｍｌのガラス製のバイアルを、脱イオン水５０μｌ中に溶解した硫酸アンモニウム１０ｍｇで充填する。１４個の２ｍｍ化学耐性ガラスビーズを添加し、テフロンで裏打ちされた隔膜およびスクリューキャップを取り付け、バイアルを穏やかに旋回させる。（エタノール２０μｌ中）ＮＭ４０４ストック溶液（２０μｇ）を添加し、続いて、０．０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３０μｌ未満中のヨウ化ナトリウム水溶液（１２４、１〜５ｍＣｉ）を添加する。同位体シリンジを、エタノール１回量２０μｌで３回洗浄する。反応バイアル（ｖｉｌｅ）を、穏やかに旋回させる。グラスウールを含有させた５ｍｌの使い捨てシリンジを、別の５ｍｌの木炭の小塊で満たされたシリンジと直列に針の排出口で取り付ける。グラスウールシリンジは、蒸発した溶媒を捕集するための濃縮チャンバーとして働き、木炭シリンジは遊離ヨウ化物／ヨウ素をトラップする。該反応容器を、１５０℃で４５分間ヒートブロック装置において加熱する。容積２０ｍｌの空気（４つ）を、２５ｍｌの使い捨てシリンジにより反応バイアル中へ注入し、２重のトラップ付属品を通して放出されることが可能である。温度は１６０℃まで上昇させ、反応バイアルをさらに３０分間加熱する。室温にまで冷却した後、エタノール（２００μｌ）を添加し、バイアルを旋回させる。未反応のヨウ化物を除去するために、エタノール溶液を、事前に平衡化したアンバーライトＩＲＡ４００−ＯＨ樹脂カラムに通す。溶離液の体積は、窒素気流（木炭シリンジトラップを用いる）を介して５０μｌにまで減少させ、残った体積は、精製のためにＨＰＬＣのシリカゲルカラム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ヘキサン／イソプロパノール／水（５２：４０：８）とともに１ｍｌ／分で溶出した３μｍ×３ｃｍの使い捨てカートリッジカラム）中に注入する。最終純度を、ＴＬＣ（クロロホルム−メタノール−水（６５：３５：４、Ｒｆ＝０．１）で溶出したプラスチックサポート付きの（ｐｌａｓｔｉｃ  ｂａｃｋｅｄ）シリカゲル−６０）により決定する。ＨＰＬＣ溶媒を、ロータリーエバポレーションにより除去し、生じた放射性ヨウ化ＮＭ４０４を、２％医薬品等級のポリソルベート−２０水溶液（化合物０．１μｌ／ｍｇ）で可溶化する。エタノールを、減圧下で除去し、残りは、滅菌水に溶解し、２〜３％以下のポリソルベート−２０を含有する最終溶液を得る。滅菌は、滅菌した０．２μｍのフィルターユニットを通してろ過することにより達成する。Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ試験キットを使用して、発熱物質に関して各溶液を試験する。これは、肺癌患者研究で使用されるＩ−１３１標識ＮＭ４０４の調製、精製および滅菌製剤のために現在使用されているのと同一の手順である。ｄｒｕｇ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ＣａｒｄおよびＰｒｏｄｕｃｔ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｃｈｅｃｋｌｉｓｔは、この提案の補足部分に含まれる。本発明者らは、ヨウ素−１３１または１２５のいずれかを用いてこの放射性ヨウ素化を何百回も行い、１３０ｍＣｉ／μｍｏｌを超える特異的活性を有するＮＭ４０４の、概して６０〜９０％の範囲の放射化学収率（分離された純生産物）を達成した。この方法により、進行中の前臨床試験およびヒト試験のために、十分で純粋で注射可能な１３１Ｉ−ＮＭ４０４を得た。本発明者らは現在までに標識の失敗をしていない。さらに、現在の提案に関して、本発明者らは、最近、＞６０％の分離された放射化学的収率において、Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｉｓｏｔｏｐｅから得たヨウ素−１２４ヨウ化ナトリウム（５ｍＣｉ）でＮＭ４０４を首尾よく放射標識した。許容可能な診断基準は＞９５％の放射性化学的純度を必要としているが、全ての反応混合物を調製用ＨＰＬＣ精製に供しているので、結果は、典型的には、９９％を超えている。
【０３０５】
ヒトへの投与のためのＩ−１２４用量：１３１Ｉ  ＮＭ４０４の毒性分析結果、生体内分布、動態、最適な造影時間および線量測定が、ＵＷＣＣＣにて肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者での進行中の研究において、最近評価されている。放射性ヨウ化された１２４Ｉ  ＮＭ４０４の用量は、この進行中の研究に由来するヨウ素−１３１の線量測定データのＭＩＲＤ外挿法に基づく。１３１Ｉ−ＮＭ４０４の用量は、最近では以下のように計算される：動物生体内分布データは、様々な時点での注射された用量／臓器の百分率を決定するのに使用される。これらの動物データは、ＭＩＲＤ形式の方法（ＭＩＲＤＯＳＥ  ＰＣ  ｖ３．１）でヒトに対して外挿する。この方法は、ラットと標準的なヒトとの間の臓器の量（ｍａｓｓ）と生体構造との差異に対する標準的な変換係数を使用しており、予期されたヒト臓器用量を提供する；これらの予測された用量に基づいて、ヒトに注射することが許容されるｍＣｉ用量は、連邦官報（Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｉｓｔｅｒ）（２１  ＣＦＲ  Ｐａｒｔ  ３６１．１）において規定された、特定のヒト組織についての、ＲＤＲＣ規則により法律的に許容された最大用量を用いて決定される。例えば、全身、血液、造血組織、眼レンズ、生殖腺−３ｒｅｍ／用量；他の組織−５ｒｅｍ／用量である。このアプローチは、ＮＭ３２４とＮＭ４０４との両方を臨床に使用するために前もって使用され、１ｍＣｉの計算された用量をもたらした。ＮＭ４０４で得られた新規な動物のデータは（５ｒａｄの睾丸への用量＝２．１ｍＣｉおよび５ｒａｄの副腎への用量＝２．２ｍＣｉ）、１３１Ｉ−ＮＭ４０４の開始最大用量が１．９ｍＣｉ前後であるか、またはＮＭ３２４の２倍であることを示す。
【０３０６】
研究手順：注入前に、腕に静脈内ラインを構築する。０．３μｇ／ｋｇ体重未満のトレーサー用量の１２４Ｉ−ＮＭ４０４（１ｍＣｉ、実際の用量は進行中の研究の線量測定結果）を、５分間かけて注入する。調製物は、無菌であり、発熱物質がなく、かつ薄層クロマトグラフィーによって５％未満の遊離ヨウ素を含有する（通常の結果は１％未満）。患者を、該注入の間、有害反応に関して臨床的にモニタリングする。
【０３０７】
動物毒性研究（本研究において、１２４Ｉ−ＮＭ４０４の計画最大量の１０００倍超を用いる）および非標識化合物（１０倍超の用量）を用いた予備的臨床安全性研究は副作用なしに行われたので、私たちは造影用量では毒性を予期しない。しかしながら、私たちは不適当なアレルギーまたは他の反応がある可能性を認識している。患者の生命徴候（脈、ＢＰ、体温および呼吸数）を、注入後すぐならびに注入３０分後および６０分後に再チェックする。生命徴候は、その後、２時間、１時間おきにチェックする。
【０３０８】
最初の５人の患者に対する基準ＰＥＴ−ＣＴ造影（全身および選択された局所結合の撮影）は、注射４８時間後および９６時間後に得られる。ＰＥＴ造影は、適切な減衰の補正を用いるＧＥ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＧＥ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＬＳ  ＰＥＴ−ＣＴスキャナーを用いて得られ、ヨウ素−１２４に対して最適化される。４８時間および９６時間の時点は、肺癌における１３１Ｉ−ＮＭ４０４に対する最適な造影時間に関する予備的データに基づく。しかしながら、ヒト前立腺癌における１２４Ｉ−ＮＭ４０４に対する最適腫瘍標的時間は、まだ決定されていない。
【０３０９】
１２４Ｉ−ＮＭ４０４トレーサーの蓄積および洗い流しは、私たちの診療所で使用可能なＧＥ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＬＳ  ＰＥＴ／ＣＴスキャナーまたはＧＥ  Ａｄｖａｎｃｅ  ＰＥＴスキャナーで記録する。患者での局在および減衰の補正のために、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＬＳ  ＰＥＴ／ＣＴスキャナーを用いてＣＴ走査を最初に行う；透過走査（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｓｃａｎ）をＡｄｖａｎｃｅ  ＰＥＴスキャナーで行う。各ＰＥＴ走査は、任意に、不感時間（ｄｅａｄ  ｔｉｍｅ）、減衰および拡散に対して補正される。最初の走査は、１２４Ｉ−ＮＭ４０４注射の４８時間後および９６時間後に迅速に行う。全身走査は、走査時間を増加させて（腫瘍部位を超えて、３０分まで）行う。画像を、減衰補正により相互作用するＯＳＥＭ再構築法を用いて再構築し、Ｇａｕｓｓｉａｎフィルターにより滑らかにする。
【０３１０】
データの評価は、ＰＥＴ造影とともに記録された、目的の領域（ｒｅｇｉｏｎ−ｏｆ−ｉｎｔｅｒｅｓｔ）（ＲＯＩ）分析に基づく。各ＰＥＴ／ＣＴ走査により得られるＣＴは、ＰＥＴデータの正確な部位特定ができるように記録する。ＲＯＩは、図という観点から、多様な器官（代表的には、心臓、肺、筋肉、肝臓、胃、脾臓、腸、腎臓および膀胱）を描くために略図が描かれる。各ＲＯＩおよび各時間枠で、平均放射能濃度を計算し、標準化された取り込み値（ＳＵＶｓ）を計算する。詳細な薬物動態学的分析は、この研究では行われない。しかし、それは進行している肺癌試験では完了しているが、ここでは述べない。なぜなら、肺癌試験で行われるからである。該肺癌試験では、２人の患者にＮＭ４０４を注入した直後にＰＥＴ走査を行い、その後、注入の６時間後、２４時間後および４８時間後にＰＥＴ走査を行う。ＳＵＶ（複数）は、時間−行動曲線としてプロットされる。各ＲＯＩにおける放射能の時間経過は、多様な動力学モデルを用いてあてはめる。このモデルとしては、２コンパートメントモデルにおける２−速度定数、並びに３コンパートメントモデルにおける４−速度定数及び３−速度定数、非線形回帰あてはめに関連するものが挙げられる。非線形の、少なくとも２乗のあてはめは、修正された長波長展開（ｇｒａｄｉｅｎｔ−ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）アルゴリズムを用いてなされる。最良のあてはめは、モデルのパラメーターにおける変数に関するχ２関数を最小化することにより決定される。腫瘍の膜で不可逆的にトラップされたリン脂質の仮定を試験するために、３ｋモデルに関して、ｋ４が０に等しく設定されれば、データに適合する。さらに、Ｐａｔｌａｋプロットは、血漿放射能の動態に対して組織放射能の動態を標準化するために使用される。
【０３１１】
統計学的考察：これは、転移前立腺癌（ｃａｎｔｅｒ）の臨床的証拠を有する患者においてＰＥＴ−ＣＴにより放射性ヨウ素化１２４Ｉ−ＮＭ４０４の腫瘍での取り込みおよび滞留特性を決定する、実現可能性のある研究である。転移前立腺癌を有する１５人の患者は、本研究のＰａｒｔ１のために集められる。造影走査は、一般的な０〜３の階段標準を用いて記録する：０＝認知できる取り込みはない、１＋＝バックグラウンドを超える取り込みはわずかに認知できる、２＋＝バックグラウンドを超える取り込みは明確に区別できる、３＋＝強度の取り込み、周囲の正常構造物よりはるかに多い（２＋および３＋は、病巣同定に関して異常またはポジティブとみなされる；０および１＋は、病巣同定に関して正常またはネガティブとみなされる）。多くとも５０％の病巣の同定にとってポジティブと分類された取り込み割合は、臨床的に不適切であるとみなされる。したがって、私たちは、病巣の同定にポジティブであると分類された取り込み割合がほぼ５０％であるという帰無仮説に対して、割合が５０％超であるという対立仮説を試験する。私たちは、病巣の同定に対してポジティブであると分類された取り込み割合が少なくとも８０％であると予想する。全サンプルのサイズが１５人の患者であると仮定すれば、ポジティブと分類された取り込み割合がほぼ５０％であるという帰無仮説の一試料二項検定試験（ｏｎｅ−ｓａｍｐｌｅ  ｂｉｎｏｍｉａｌ  ｔｅｓｔ）は、１０％の有意レベルでの（片側検定で）８０％の割合を検出するのに、８５％の検出力を有する。９０％の割合が、９５％の検出力で検出される。サンプルサイズが１５人の患者であるので、病巣同定に対してポジティブと分類された腫瘍の割合は、多くとも１３％の標準誤差を有し、この割合に対する９０％の信頼区間は３９％より広くはない。
【０３１２】
両側の骨盤リンパ節切開にともなう徹底的な前立腺切除の候補者である臨床的に器官の狭められた前立腺癌を有する患者における、１２４Ｉ−ＮＭ４０４の特異的な腫瘍蓄積および代謝運命の決定
【０３１３】
目的および論理的根拠
【０３１４】
２つ目の予備分析として、悪性および良性の前立腺および結節組織は、徹底的な前立腺切除および両側のリンパ節切開によって得られ、放射性ヨウ素化ＮＭ４０４の蓄積およびＮＭ４０４の代謝産物を評価される。この組織分析により得られたデータは、最終的な病理学的分析の結果と比較される。器官限定的前立腺癌を有する１０人の患者は、両側の骨盤のリンパ節切開に伴う徹底的な前立腺切除を行うように計画され、登録される。全患者に、ＣＴ走査および骨走査を含む従来の術前病期診断研究を行う。全患者に、また、計画された前立腺切除の前の週にＮＭ４０４のＰＥＴ−ＣＴ走査を行う。切除された前立腺およびリンパ腺の最終的な病理学的分析は、ＮＭ４０４蓄積および代謝産物の組織アッセイと相関し、局所領域の転移疾患を有する患者において、最初の標本およびリンパ節中の腫瘍体積に対する徴候の関係を決定する。ネガティブな術前ＣＴ走査および骨走査にもかかわらず、ＮＭ４０４の蓄積により検出された結節性転移は、治療前のこれら患者の病期診断の改善という観点から、大きな臨床的重要性を有する。
【０３１５】
研究手順：本研究における造影手順は、患者が最初のプロトコールで同定された最適な造影時間（おそらく注射の２４時間後〜４８時間後の間に）に基づいてただ１回だけ造影される点を除いて、最初の研究と同一である。６つの前立腺の生検コア（ｂｉｏｐｓｙ  ｃｏｒｅ）を、外科的除去の直後にＯＲにおける前立腺標本から、６日目ごとの分布（ｓｅｘｔａｎｔ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）（左右の尖、中央の腺（ｍｉｄ−ｇｌａｎｄ）および基底領域）において得る。これらの６つの生検コアを、悪性と良性の前立腺組織の両方の標本の代表的なサンプリングを確実にするために、凍結した切片の病理学によって評価する。前立腺における同一の対応する部位から同時に得られた、６つの生検コアの２つ目のセットを、１２４Ｉ−ＮＭ４０４の取り込みに関して分析する。したがって、それらを、写真撮影し、Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００放射スキャナー（ｒａｄｉｏｓｃａｎｎｅｒ）で高解像度の走査を行い、そしてまた、重量測定し、ウェルカウンタで放射能を定量する。放射能濃度は、比較例に基づいて％用量／ｇ組織サンプルで決定する。関与していない周囲の組織と比較して、腫瘍中の局在を確かにするために、これらの結果を組織学的結果と比較する。コア生検（ｃｏｒｅ  ｂｉｏｐｓｙ）を、患者の研究同定番号および得られた前立腺中の部位でラベルする。
【０３１６】
転移前立腺腫瘍が存在するいずれのリンパ節の最終的な症状も、また、術前のＰＥＴ−ＣＴ走査により検出される１２４Ｉ−ＮＭ４０４の取り込みシグナルと相関する。生命徴候は、１２４Ｉ−ＮＭ４０４の注入の後に得られる。
【０３１７】
統計学的考察：前立腺癌が臨床的に局在した高リスクの１０人の患者は、本研究のＰａｒｔ２のために集められる。Ｐａｒｔ２の帰無仮説は、臨床的に位置づけられた前立腺患者の正常な周囲の組織に対して、腫瘍組織内にＮＭ４０４の蓄積の対数比（ｌｏｇ  ｒａｔｉｏ）がゼロであることである。対立仮説は、ＮＭ４０４の蓄積の対数比が０より大きいというものである。少なくとも５：１の腫瘍対正常組織（Ｔ／Ｎ）比が、臨床的に適切であるとみなされている。ＮＭ４０４に関する過去の実験に基づいて、ＮＭ４０４の蓄積の対数割合の標準偏差は、１．５と２．０との間であると予想される。サンプルサイズが１０であるので、片側１０％有意レベルの片側ｔ検定は、８６％、９０％および９５％の検出力を有し、それぞれ０．８、０．９０および１．００の有効サイズを検出する。例えば、対数比の標準偏差が２．０である場合、腫瘍対正常組織のＮＭ４０４の蓄積における５：１の比は、８６％の検出力で検出される。同様に、対数割合の標準偏差が１．６である場合、ＮＭ４０４の蓄積の、腫瘍対正常組織の５：１の割合は、９５％の検出力で検出される。
【０３１８】
疾患の唯一の証拠としてのＰＳＡの上昇を有する１０人の患者における、前立腺癌（病期Ｄ０）の第一次の治療後に転移性再発をＮＭ４０４が検出できるかどうかを決定する
【０３１９】
目的および論理的根拠
【０３２０】
定義により、病期Ｄ０の前立腺癌を有する患者は、この疾患の最も確実な治療の後にＰＳＡ上昇があり、従来の病期診断（ＣＴ走査および骨走査が挙げられ、疾患の放射線写真の証拠では陰性である）で生化学的再発を示す。ＮＭ４０４のＰＥＴ−ＣＴ走査により検出可能な疾患を有する可能性のより大きな患者は、登録され、その結果０．７５ｎｇ／ｍｌ／年を超えるＰＳＡの上昇を有しなければならない。
【０３２１】
研究手順：本研究における造影手段は、患者を最初のプロトコールにおいて同定された最適な造影時間に基づいてただ１度だけ造影することを除けば、最初の研究と同一である。患者に、１２４Ｉ−ＮＭ４０４の注射（０．３μｇ／ｋｇ体重、１ｍＣｉまたは最初のセットの患者における線量測定計算により確証された限界）を行う。患者に、注入の４８時間後にＰＥＴ−ＣＴ走査も行う。生命徴候は、１２４Ｉ−ＮＭ４０４注入後に得られる。
【０３２２】
統計学的考察：病期Ｄ０の前立腺癌を有する１０人の患者が集められ、少なくとも２年間、転移性再発を追跡する。本研究のこの部分において、集められた全患者は０．７５ｎｇ／ｍｌ／年より大きいＰＳＡ値を有するので、少なくとも６０％が２年以内に転移性再発を経験すると予期する。１０人のうち６人の患者が結局２年以内に転移性再発を経験すると仮定すれば、転移性再発を検出するＮＭ４０４の感度は２０％未満の標準誤差であり、感度の９０％信頼区間は５５％より広くはない。その上、この患者群でＮＭ４０４の感度が多くとも３０％であるという帰無仮説は、感度が３０％より大きいという対立仮説に対して試験される。一試料二項検定試験（ｏｎｅ−ｓａｍｐｌｅ  ｂｉｎｏｍｉａｌ  ｔｅｓｔ）は、片側１０％の有意レベルで、７５％の感度を検出する８３％の検出力を有する。８０％の感度が、９０％の検出力で検出される。
【０３２３】
米国では、２００４年だけで、およそ２３０１１０症例の新規の前立腺癌が診断される。徹底的な前立腺切除により臨床的に臓器が狭められた前立腺癌の、最も確実な局所的治療という技術的改良に関わらず、多くの男性が第一次の治療だけで回復し、長期の追跡では４０％もの患者が生化学的再発を経験する。臨床的に器官が狭められた前立腺癌有する患者、または器官が狭められたことが推定される疾患の最も確実な治療を受けた後の生化学的再発を有する患者を治療する際の最大の難題の一つは、依然として、局所的な疾患と転移した疾患とを正確に区別することである。この診断能力は、有効な局所治療の治療法適用様式（外科手術、外部光線照射、近接照射療法および寒冷治療が挙げられる）が有益であり得る患者を同定するのに重要である。本発明者らには、現在、正確な病期診断の手段がないので、肉眼で発見できない転移疾患を有する患者は、治療に関してリスクのある、局所的な治療を不必要にも受け得る。その上、局所的再発によりＰＳＡが上昇していて、全身的再発を確信を持って排除できない患者は、ホルモンアブレーションを不必要にも受け得る。ホルモンアブレーションは、一般的には、病気に効くとは考えられておらず、骨粗鬆症の進行、性欲減退、体重増加、更年期症候群および全体的な不快感ならびにホルモン非依存性前立腺癌の進行に関連している。
【０３２４】
従来の造影研究（例えば、コンピューター断層撮影（ＣＴ）および磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）など）は、柔組織転移を評価するのに有用であるが、大部分の前立腺癌は骨にのみ転移する。したがって、疾患を評価する際、ＣＴおよびＭＲＩ走査の利用は次善のものであり、そして局所再発又は転移性の前立腺癌のいずれに関しても、より感度の高い造影の治療法適用様式が必要である。インジウム−１１１  ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅを用いた放射免疫シンチグラフィー（ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ，Ｃｙｔｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）は、ＰＳＡ上昇のある前立腺切除後の患者（この患者には、肉眼で発見できない転移性疾患の、臨床的な大きな疑いがあり、他の造影研究では、転移性疾患の明らかな証拠がない）で利用される。しかしながら、前立腺癌からの肉眼で発見できない転移のリスクのある患者にＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ走査を使用することは、依然、従来のままである。感度の高い造影試験の開発に対する１つのアプローチは、所望の標的組織への放射線医薬品プローブの送達を達成する鍵である、より適切な担体分子を開発することである。１つの戦略は、放射性ヨウ化リン脂質エーテル類似体（ＰＬＥ）を潜在的な診断造影剤として研究することである。これらの分子の固有の生化学的または薬理学的特性を利用することは、高度の組織または腫瘍選択性をもたらす。前臨床モデルにおいて、本発明者らは、これらの分子が、選択的に、種々多様なマウスおよびヒトの腫瘍で高レベルで蓄積されることを明らかにした。
【０３２５】
本発明の特定の実施態様は、前立腺癌の患者を造影する際に、第２世代のＰＬＥ類似体であるＮＭ４０４の使用に関する予備的なデータを提供する。ＮＭ４０４は、（ａ）前臨床モデルにおいて種々多様な腫瘍タイプの中に、非常に選択的に滞留すること、（ｂ）ヒトでは安全であること、（ｃ）Ｉ−１２４で放射標識されること、および（ｄ）Ｉ−１３１で標識された適切な線量測定特性を有することを示す。
【０３２６】
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【０３２７】
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【０３２８】
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Ｓｃｏｔｔ  ＤＬ，Ｈａｌｋａｒ  ＲＫ，Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ：Ｆａｌｓｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  １１１  ｉｎｄｉｕｍ  ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ  ｓｃａｎ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｂｅｎｉｇｎ  ｍｙｅｌｏｌｉｐｏｍａ．Ｊ  Ｕｒｏｌ．２００１；１６５：９１０−９１１，．
【０３４３】
Ｋｈａｎ  Ａ，Ｃａｒｉｄｅ  ＶＪ：Ｉｎｄｉｕｍ−１１１  ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ（ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ）ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ．Ｕｒｏｌｏｇｙ  ２０００；５６：ｌ５４．
【０３４４】
Ｖａｌｌｉａｐｐａｎ  Ｓ，Ｊｏｙｃｅ  ＪＭ，Ｍｙｅｒｓ  ＤＴ：Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｆａｌｓｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｏｎ  ａｎ  Ｉｎ−１１１  ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ  ｓｃａｎ  ａｓ  ａ  ｒｅｓｕｌｔ  ｏｆ  ａ  ｐｅｌｖｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ．Ｃｌｉｎ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．１９９９；２４：９８４−９８５．
【０３４５】
Ｍｉｃｈａｅｌｓ  ＥＫ，Ｂｌｅｎｄ  Ｍ，Ｑｕｉｎｔａｎａ  ＪＣ：１１１Ｉｎｄｉｕｍ−ｃａｐｒｏｍａｂ  ｐｅｎｄｅｔｉｄｅ  ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄｌｙ  ｌｏｃａｌｉｚｅｓ  ｔｏ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ  Ｕｒｏｌ．１９９９；１６１：５９７−５９８．
【０３４６】
Ｙｅｕｎｇ  Ｈ，Ｓｃｈｏｄｅｒ  Ｈ，Ｌａｒｓｏｎ  Ｓ：Ｕｔｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ＰＥＴ−ＣＴ  ｆｏｒ  ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｅｑｕｉｖｏｃａｌ  ＰＥＴ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ−Ｉｎｉｔｉａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．２００２；４３：３２Ｐ（ａｂｓｔｒ）．
【０３４７】
Ｎｕｎｅｚ  Ｒ，Ｍａｃａｐｉｎｌａｃ  ＨＡ，Ｙｅｕｎｇ  ＨＷ，Ａｋｈｕｒｓｔ  Ｔ，Ｃａｉ  Ｓ，Ｏｓｍａｎ  Ｉ，Ｇｏｎｅｎ  Ｍ，Ｒｉｅｄｅｌ  Ｅ，Ｓｃｈｅｒ  ＨＩ，Ｌａｒｓｏｎ  ＳＭ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  １８Ｆ−ＦＤＧ  ａｎｄ  １１Ｃ−ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  ＰＥＴ  ｓｃａｎｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｗｌｙ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．２００２；４３（ｌ）：４６−５５．
【０３４８】
Ｍｏｒｒｉｓ  ＭＪ，Ａｋｈｕｒｓｔ  Ｔ，Ｏｓｍａｎ  Ｉ，Ｎｕｎｅｚ  Ｒ，  Ｍａｃａｐｉｎｌａｃ  Ｈ，Ｓｉｅｄｌｅｃｋｉ  Ｋ，Ｖｅｒｂｅｌ  Ｄ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ｌ，Ｌａｒｓｏｎ  ＳＭ，Ｓｃｈｅｒ  ＨＩ．Ｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ  ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｕｒｏｌｏｇｙ  ２００２；５９（６）：９１３−８．
【０３４９】
Ｓｅｌｔｚｅｒ  ＭＡ，Ｂａｒｂａｒｉｃ  Ｚ，Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎ  Ａ，Ｎａｉｔｏｈ  Ｊ，Ｄｏｒｅｙ  Ｆ，Ｐｈｅｌｐｓ  ＭＥ，Ｇａｍｂｈｉｒ  ＳＳ，Ｈｏｈ  ＣＫ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｈｅｌｉｃａｌ  ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｃａｎｓ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｌａｐｓｅ  ａｆｔｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｕｒｏｌ．１９９９；１６２（４）：１３２２−８．
【０３５０】
Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ，Ｌｏｎｇｉｎｏ  Ｍ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  Ａ．，Ｓｋｉｎｎｅｒ  Ｓ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒｓ  ｆｏｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｑｕａｒｔ  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ．１９９７；４１，１４−１６．
【０３５１】
Ｓｎｙｄｅｒ  Ｆ，Ｗｏｏｄ  Ｒ．Ａｌｋｙｌ  ａｎｄ  ａｌｋ−１−ｅｎｙｌ  ｅｔｈｅｒｓ  ｏｆ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄｓ  ｆｒｏｍ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９６９；２９：２５１−２５７．
【０３５２】
Ｓｎｙｄｅｒ  Ｆ，Ｂｌａｎｋ  ＭＬ，Ｍｏｒｒｉｓ  ＨＰ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏ−ａｌｋｙｌ  ａｎｄ  Ｏ−ａｌｋ−ｌ−ｅｎｙｌ  ｍｏｉｅｔｉｅｓ  ｏｆ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄｓ  ｏｆ  Ｍｏｒｒｉｓ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ  ｈｅｐａｔｏｍａｓ  ａｎｄ  ｎｏｒｍａｌ  ｒａｔ  ｌｉｖｅｒ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １９６９；１７６：５０２−５１０．
【０３５３】
Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ  ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９９５；３８：３１５６−３１６２．
【０３５４】
Ｐｌｏｔｚｋｅ  ＫＰ，Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｍｅｙｅｒ  Ｋ，Ｒｕｙａｎ  Ｍ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ  ａｎａｌｏｇｓ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  １９９３；３７：２６４−２７２．
【０３５５】
Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｌｏｎｇｉｎｏ  ＭＡ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷＳ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ａｖｉｄｉｔｙ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ  ａｎａｌｏｇｓ．Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ  ２００６）．
【０３５６】
Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ  Ｖａｎｄｏｒｔ  ＭＥ，Ｇｒｏｚｉａｋ  ＭＰ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  Ｒ．Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｉｓｏｔｏｐｅ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｉｖａｌｉｃ  ａｃｉｄ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｒａｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  １９８６；３８：９０７−９１３．
【０３５７】
Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｂｒｏｗｎ  ＲＳ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｅｔｈｉｅｒ  ＳＰ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｔｗｏ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  １９９６；３７：１５４０−１５４５．
【０３５８】
Ｐｌｏｔｚｋｅ  ＫＰ，Ｈａｒａｄａｈｉｒａ  Ｔ，Ｓｔａｎｃａｔｏ  Ｌ，Ｏｌｋｅｎ  ＮＭ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  Ｓ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  Ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒｓ．Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９２；１９：７６５−７７３．
【０３５９】
Ｂｅｒｌｉｎ  Ｏ，Ｓａｍｉｄ  Ｄ，Ｃｏｎｔｈｉｎｅｎｉ−Ｒａｏ  Ｒ，Ａｋｅｓｏｎ  Ｗ，Ａｍｉｅｌ  Ｄ  Ｗｏｏｄｓ  ＶＬ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｍｅｔａｓｔｉａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｓｔｅｒｓａｒｃｏｍａ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ  ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ｉｎｔｏ  ｂｏｎｅ  ｏｒ  ａｔｈｙｍｉｃ  ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９３；５３：４８９０−９５．
【０３６０】
Ｃｏｒｅｙ  Ｅ，Ｑｕｉｎｎ  ＪＥ，Ｂｌａｄｏｕ  Ｆ，Ｂｒｏｗｎ  ＬＧ，Ｒｏｕｄｉｅｒ  ＭＰ，Ｂｒｏｗｎ  ＪＭ，Ｂｕｈｌｅｒ  ＫＲ，Ｖｅｓｓｅｌｌａ  ＲＬ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｓｓｅｏｕｓ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ：Ｉｎｔｒａ−ｔｉｂｉａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２００２；５２：２０−３３．
【０３６１】
Ｐｌｏｔｚｋｅ  ＫＰ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｏｌｋｅｎ  ＮＭ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  Ｓ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ  ａｎａｌｏｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  １９９３；３４：７８７−７９２．
【０３６２】
Ｐｅｎｔｌｏｗ  ＫＳ，Ｇｒａｈａｍ  ＭＣ，Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ  ＲＭ，Ｄａｇｈｉｇｈｉａｎ  Ｆ，Ｂａｃｈａｒａｃｈ  ＳＬ，Ｂｅｎｄｒｉｅｍ  Ｂ，Ｆｉｎｎ  ＲＤ，Ｊｏｒｄａｎ  Ｋ，Ｋａｌａｉｇｉａｎ  Ｈ，Ｋａｒｐ  ＪＳ，Ｒｏｂｅｓｏｎ  ＷＲ，Ｌａｒｓｏｎ  ＳＭ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｉｏｄｉｎｅ−１２４  ｗｉｔｈ  ＰＥＴ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９９６；３７：１５５７−１５６２．
【０３６３】
Ｂｌａｓｂｅｒｇ  ＲＧ，Ｒｏｅｌｃｋｅ  Ｕ，Ｗｅｉｎｒｅｉｃｈ  Ｒ，Ｂｅａｔｔｉｅ  Ｂ，ｖｏｎ  Ａｍｍｏｎ  Ｋ，Ｙｏｎｅｋａｗａ  Ｙ，Ｌａｎｄｏｌｔ  Ｈ，Ｇｕｅｎｔｈｅｒ  Ｉ，Ｃｒｏｍｐｔｏｎ  ＮＥＡ，Ｖｏｎｔｏｂｅｌ  Ｐ，Ｍｉｓｓｉｍｅｒ  Ｊ，Ｍａｇｕｉｒｅ  ＲＰ，Ｋｏｚｉｏｒｏｗｓｋｉ  Ｊ，Ｋｎｕｓｔ  ＥＪ，Ｆｉｎｎ  ＲＤ，Ｌｅｅｎｄｅｒｓ  ＫＬ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ｂｒａｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ［Ｉ−１２４］ｉｏｄｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０００；６０：６２４−６３５．
【０３６４】
Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ，Ｓｃｈｗｅｎｄｎｅｒ  ＳＷ，  Ｍｅｙｅｒ  ＫＬ，Ｈａｒａｄａｈｉｒａ  Ｔ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ．Ｔｕｍｏｒ  ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  １９９０：３１：３３２−３３６．
【０３６５】
Ｍｏｓｅｒ  ＡＲ，  Ｐｉｔｏｔ  ＨＣ，Ｄｏｖｅ  ＷＦ．Ａ  Ｄｏｍｉｎａｎｔ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｔｈａｔ  Ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ  ｔｏ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９０；２４７：３２２−３２４．
【０３６６】
Ｍｏｓｅｒ，ＡＲ，Ｈｅｇｇｅ，ＬＦ，ａｎｄ  ＲＤ  Ｃａｒｄｉｆｆ．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒｓ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａｓ  ｉｎ  ＡｐｃＭｉｎ／＋  ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００１；６１：３４８０−３４８５．
【０３６７】
Ｍａｎｇｎｅｒ  ＴＪ，Ｗｕ  ＪＬ，Ｗｉｅｌａｎｄ  ＤＭ．Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｙｌ  ｉｏｄｉｄｅｓ．Ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ．Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ．１９８２；４７（８）：１４８４−１４８８．
【０３６８】
本明細書中で引用した全ての参考文献は、特に引用によって、および本明細書を十分に説明する目的でその全部が本発明に組み込まれる。
【０３６９】
本発明は明細書中で実例によって説明された実施態様によって限定されず、添付の請求項の範囲内で示したような形状を全て包含する。
【図面の簡単な説明】
【０３７０】
図面の簡単な説明
【図１】特定のＰＬＥ類似体の構造
【図２】制動放射線、特性Ｘ線、およびオージェ電子の産出を示す古典的なモデル。（左図）電子は、正に帯電した核により弾性的および非弾性的に散乱される。非弾性的に散乱した電子はエネルギーを失い、制動放射線として現れる。弾性的に散乱された電子（後方散乱された電子を含む）は、一般的に、非弾性的に散乱された電子よりも広角に散乱される。（右図）入射電子は、より内側の殻（この場合は、Ｋ殻）から電子を放出することにより試料原子をイオン化する。脱励起により、次々に特性Ｘ線放射（上）またはオージェ電子（下）が産みだされる。二次電子は外側の緩く結合した電子殻から、より低いエネルギーで放出される（過程は示さない）。
【図３】患者０３の前胸部のシンチグラフィーは、１ｍＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ−３２４の静脈内投与後１、２および６日で取得した。取り込みは、時間経過とともに、左舌肺癌（Ｔ）において見られ、腫瘍対バックグランドの割合が増加している。
【図４】ヒトＲＬ−２５１副腎腫瘍（Ｔ）異種移植片を有するＳＣＩＤマウスにおけるＮＭ４０４の時間経過（日）。
【図５】腫瘍での蓄積が増加する１日から１４日の間に血液、脾臓および腎臓において分布が減少することを示した、ＳＣＩＤマウスにおけるＲＬ２５１副腎癌での組織分布Ｉ−１１２５−ＮＭ４０４。
【図６】１２５Ｉ−ＮＭ４０４の注射後の明らかなＳＣＣ１およびＳＣＣ６腫瘍退化。４１日までに、腫瘍は有意に減少した。
【図７】画像は、注射後４週間、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４（２５０μＣｉ）で処理した腫瘍保有動物の１匹を示す。おそらく腫瘍に放射能の強度の蓄積があるため、腫瘍の上の毛は抜け落ちている。さらに、おそらく出血およびネクローシスにより、腫瘍の表面は、「崩落（ｃａｖｅｄ  ｉｎ）」しているように見え、より黒みがかった（ｄａｒｋｅｒ）領域を示す。図は、腫瘍に対するＩ−１２５−ＮＭ４０４の効果を示す。腫瘍のサイズ（外形（ｏｕｔｅｒ  ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ））は収縮し得ないが、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４は中心部の（ｃｅｎｔｒａｌ）ネクローシスを生じさせる。腫瘍外形を測定する測定方法は、Ｉ−１２５−ＮＭ４０４にともなう腫瘍体積の反応を過小評価し得る。
【図８】ＳＣＩＤマウス中に埋め込まれたＰＣ３ヒト前立腺癌モデル。ＰＣ３は放射線非感受性であることが公知である。コントロール（放射能なし、コールドのＮＭ４０４）と処理（Ｉ−１２５−ＮＭ４０４）との間の曲線は、処理の約４〜５週間後に分離するのみであり、それまでは腫瘍の増殖は同一であるように見える。このことは以下のことを示唆している：１）ＮＭ４０４は腫瘍に十分に蓄積されるのに数日から約１週間かかり、かつ２）同位体Ｉ−１２５は低放射線流量（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｆｌｏｗ）を有する（長い半減期を有するため）。全てのＮＭ４０４が正常組織から排除される時点で、両因子は治療効果の発現の遅延に寄与する。
【図９】側腹部にヒト前立腺ＰＣ−３腫瘍（矢印）が埋め込まれたＳＣＩＤマウスにおける、１日目、２日目および４日目の、ＮＭ４０４（下のパネル）とＮＭ３２４（上のパネル）とＮＭ３２４（上のパネル）との比較。肝臓およびバックグラウンドの放射能は、ＮＭ４０４ではるかに改善される。
【図１０】各群の腫瘍体積（コントロールならびに用量が５０μＣｉ、１５０μＣｉ、２５０μＣｉおよび５００μＣｉのものを描いた）は、１０週間の評価期間にわたって記録された。この図において、コントロール動物は、１０週間の評価期間にわたって、腫瘍の急速な増殖を示す。このことで、化合物それ自体であるＣ−ＮＭ４０４が腫瘍の増殖に実質的な影響がないことを確実になる。５０μＣｉ用量群は、コントロール動物とのいかなる違いも示さず、したがって、これらは、この動物モデルにおいて有効でない線量レベルであると考えられる。しかしながら、１５０μＣｉ、２５０μＣｉおよび５００μＣｉの用量群は実質的かつ増長された治療効果を示す。腫瘍の体積は一定であり、かつ同じ腫瘍が「崩落した」ように見える（この腫瘍の表面が陥没した）。さらに、腫瘍の上の毛が抜け落ち、これによりかかる腫瘍での放射能の実質的蓄積が確かめられた。その結果は、腫瘍体積に対するＩ−１２５−ＮＭ４０４の線量線形（ｄｏｓｅ−ｌｉｎｅａｒ）効果を示している。
【図１１】メスＳＣＩＤマウス分割用量（３×５０ｍＣｉ）におけるＡ５４９腫瘍異種移植片（１×１０６細胞、皮下注射）。これらは、各投薬に対して２つの独立したコントロールを有する。ＮＭ４０４の分割用量（例えば、３×５０ｍＣｉ対１５０ｍＣｉの１回線量）は、同じ治療効果を生じた。分割注射と分割注射との時間内に分割用量が正常組織から排出されるので、分割用量がより安全であり得る。
【図１２】Ａ５４９の大きな腫瘍対小さな腫瘍（１５０マイクロキュリー）
【図１３】Ｂｉｏｓｃａｎ造影（Ａ）は、ＡｐｃＭｉｎマウスへの１２５Ｉ−ＮＭ４０４注射の４日後に得た。自然発生肺腫瘍（直径２ｍｍ、矢印）を含んで切除されたマウス肺のデジタル写真（Ｂ）および位置的に一致した融合した造影（Ｃ）は、腫瘍中でのＮＭ４０４の強い取り込みを示す。
【図１４】ＳＣＩＤマウスでの、ヒトＲＬ−２５１副腎癌異種移植片中における１２５Ｉ−ＮＭ４０４の時間経過。増長された腫瘍（１．５×０．５ｃｍ、矢印）での滞留は２０日後でさえ明白である。
【図１５】融合させた３Ｄの表面を画像化したＭＲＩ造影（青）および３ＤマイクロＰＥＴ造影（Ａ）は、ＣＮＳ−１グリオーマ脳腫瘍を有するラットへの１２４Ｉ−ＮＭ４０４（８０μＣｉ）静脈内注射の２４時間後に得た。画像はＡｍｉｒａ（ｖ３．１）を使用して融合させた。下のパネルは、（Ｂ）腫瘍（矢印）を貫通していてコントラストを増強させた冠状のＭＲＩ切片（ＭＲＩ  ｓｌｉｃｅ）並びに（Ｃ）腫瘍の存在と位置を実証する、融合された冠状ＭＲＩおよび１２４Ｉ−ＮＭ４０４マイクロＰＥＴ造影を示す。
【図１６】１２４Ｉ−マイクロＰＥＴにより、１２４Ｉ−ＮＭ４０４（８０μＣｉ）の注射４８時間後のＳＣＩＤマウスにおけるヒトＡ５４９肺腫瘍異種移植片を造影する。対応する画像面は、冠状図において緑の破線で示す。
【図１７】ＰＣ−３（側腹部）腫瘍保有マウスへの１２４Ｉ−ＮＭ４０４静脈内注射の９６時間後の１２４Ｉ−マイクロＰＥＴ造影（冠状、矢状および軸状）。いずれの時点でも膀胱での活性は明らか（ｅｖｉｄｅｎｔ）ではなかった。
【図１８】１２４Ｉ−ＮＭ４０４（８０μＣｉ）注射の１８時間後の自然発生ｃ−ｍｙｃ膵臓腺癌（５ｍｍ）を有するトランスジェニックマウスの１２４Ｉ−マイクロＰＥＴ造影。
【図１９】側腹部に埋め込まれたヒト前立腺ＰＣ−３腫瘍（矢印）を有するＳＣＩＤマウスにおける、１日目、２日目および４日目のＮＭ４０４（下のパネル）およびＮＭ３２４（上のパネル）のシンチグラフィーでの比較。肝臓およびバックグラウンドの放射能は、ＮＭ４０４ではるかに改善される。
【図２０】ＳＣＩＤマウスでのヒトＲＬ−２５１副腎癌異種移植片における１２５Ｉ−ＮＭ４０４の時間経過。増長された腫瘍（１．５×０．５ｃｍ、矢印）での滞留は、２０日後でさえも明白である。
【図２１】切除された前立腺／小胞状の腺（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｇｌａｎｄ）複合体の写真（Ａ）。ＮＭ４０４注射４日後に得られたＢｉｏｓｃａｎ画像（Ｂ）。前立腺腫瘍における放射能の強い取り込みを示す、切除された前立腺／小胞状の腺の位置が一致した、融合された写真／Ｂｉｏｓｃａｎ造影（Ｃ）。
【図２２】２×１０５ヒトＰＣ３前立腺腫瘍細胞の脛骨内注射後の種々の時点での、ヌードマウスの脚の、高濃度の３Ｄ表面を画像化した（Ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ３Ｄ  ｓｕｒｆａｃｅ−ｒｅｎｄｅｒｅｄ）マイクロＣＴ造影（第一のパネルは、注射部位及び方向を示す）。腫瘍は２８日目までに骨を突き抜けてはみ出し始め（矢印）、そしておよび４６日目までには、腫瘍は腓骨のみを無傷で残して、文字通りに脛骨を破壊した。
【図２３】ともに記録された表面を画像化し、冠状切片のマイクロＣＴ造影は、１２５Ｉ標識ＮＭ４０４の注射４日後に、位置が一致したＢｉｏｓｃａｎ放射性核種走査と融合した（色彩）。限局的なＮＭ４０４活性は、脛骨のＰＣ３腫瘍（矢印）と十分に相関がある。
【図２４】ＣＮＳ−１グリオーマ脳腫瘍を有するラットへの１２４Ｉ−ＮＭ４０４（１００μＣｉ）の静脈内注射の２４時間後に得られた、融合した３Ｄ表面を画像化したＭＲＩ造影（青）および３ＤマイクロＰＥＴ造影（Ａ）。画像はＡｍｉｒａ（ｖ３．１）を用いて融合した。右のパネルは、（Ｂ）腫瘍（矢印）を貫通してコントラストを増強させた冠状のＭＲＩ切片、並びに、（Ｃ）腫瘍の存在及び位置を確証する、融合された冠状のＭＲＩおよび１２４Ｉ−ＮＭ４０４マイクロＰＥＴ造影を示す。
【図２５】非小細胞肺癌（直径６ｃｍ、矢印）を有する患者への、１３１Ｉ−ＮＭ−４０４（０．８ｍＣｉ）の静脈内投与の４日後の、後部全身平面核医学造影（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｗｈｏｌｅ  ｂｏｄｙ  ｐｌａｎａｒ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｉｍａｇｅ）（Ａ）。肺腫瘍は、対応する軸状のコンピューター断層撮影（ＣＴ）走査（Ｂ）および冠状のコンピューター断層撮影（ＣＴ）走査（Ｃ）において、容易に検出される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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