(57)【要約】  本発明は、一般的には、異なる因子から生じる様々な創傷を治癒するためのＰＡ１３１ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）創傷、骨関節炎または関節リウマチを治療、治癒、または予防する；あるいは（２）患者の再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進する方法であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列に少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む治療上有効な量のポリペプチドを患者に投与することを含む方法。
【請求項２】
（１）創傷、骨関節炎または関節リウマチを治療、治癒、または予防する；あるいは（２）患者の再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進する方法であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列を含む治療上有効な量のポリペプチドを患者に投与することを含む方法。
【請求項３】
創傷が、皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、外科手術後または外傷後の傷痕、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、ならびに上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患、から成る群から選択される請求項１または２の方法。
【請求項４】
（１）創傷、骨関節炎または関節リウマチを治療、治癒、または予防するための；あるいは（２）患者の再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進するための医薬組成物であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列に少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む治療上有効な量のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項５】
（１）創傷、骨関節炎または関節リウマチを治療、治癒、または予防するための；あるいは（２）患者の再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進するための医薬組成物であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列を含む治療上有効な量のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項６】
創傷が、皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、外科手術後または外傷後の傷痕、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、および上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患、から成る群から選択される請求項４または５の医薬組成物。
【請求項７】
配列番号２、４、６、８、１２、１５、１７、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１２、１５、１７、または２１のアミノ酸配列に少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項８】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、または２１のアミノ酸を含む、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列番号２、４、６、８、１２、１５、１７、または２１のポリペプチドである、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号１、３、５、７、１１、１４、１６、または２０に包含される配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる、単離されたポリペプチド。
【請求項１１】
配列番号２、４、６、８、１２、１５、１７、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列に少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１２】
配列番号２、４、６、８、１２、１５、１７、または２１のポリペプチド各々をコードする配列番号１、３、５、７、１１、１４、１６、または２０に包含されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１３】
配列番号１、３、５、７、１１、１４、１６、または２０の全長各々にわたって配列番号１、３、５、７、１１、１４、１６、または２０のポリヌクレオチドに少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１４】
配列番号１、３、５、７、１１、１４、１６、または２０のポリヌクレオチドを含む、請求項１３に記載のポリヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的には、異なる因子から生じる様々な創傷を治癒するＰＡ１３１ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬物発見プロセスにおいて、現在、「機能ゲノミクス」、すなわちハイスループットのゲノムまたは遺伝子に基づいた生物学を包含する根本的な革命が進行している。このアプローチは、治療の標的として遺伝子および遺伝子産物を同定する方法として、「ポジショナルクローニング」に基づくより初期のアプローチに急速に取って代わってきている。表現型、すなわち生物学的な機能または遺伝子疾患が同定され、次に表現型から遺伝子マップの位置に基づいた対応遺伝子に辿り着くであろう。
【０００３】
機能ゲノミクスは、現在利用可能な多くの分子生物学的データベースから可能性のある目的の遺伝子配列を同定するハイスループットのＤＮＡ配列決定技術およびバイオインフォマティックスの様々なツールに大きく依存する。薬物発見の標的としてさらなる遺伝子とそれらの関連ポリペプチド／タンパク質を同定し、特徴付けることが継続して必要である。
【０００４】
血液、リンパ球およびその他の体液へ自然に分泌されるか、または細胞膜へ分泌されるタンパク質およびポリペプチドは、医薬品の研究開発にとって第一の興味となる。この興味の理由は、作用部位（体液または細胞膜）へのタンパク質治療物質の標的化が比較的容易なことである。細胞外空間へのタンパク質分泌の自然経路は、真核生物の小胞体および原核生物の内膜である（Ｐａｌａｄｅ，１９７５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８９，３４７；Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，Ｈａｒｒｉｓｏｎ，およびＭａｔｈｅｗｓ，１９７２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌ．２３９，１１７；Ｂｌｏｂｅｌ，およびＤｏｂｂｅｒｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６７，８３５）。その一方で、タンパク質を細胞の外側から細胞質に運ぶ自然経路は知られていない（細胞内への蛇毒の侵入メカニズムであるピノサイトーシスを除く）。それゆえ、細胞内へのタンパク質治療物質の標的化は極度の困難性を有する。
【０００５】
分泌性および膜結合性タンパク質は、全ペプチドホルモンおよびそれらの受容体（インスリン、成長ホルモン、ケモカイン、サイトカイン、神経ペプチド、インテグリン、カリクレイン、ラミン、メラニン、ナトリウム利尿ホルモン、ニューロプシン、ニューロトロピン、下垂体ホルモン、プレイオトロピン（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｎｓ）、プロスタグランジン、セクレトグラニン（ｓｅｃｒｅｔｏｇｒａｎｉｎｓ）、セレクチン、スロンボグロブリン（ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ）、チモシンを包含するが、それらだけに限らない）、乳がんおよび大腸がんの遺伝子産物、レプチン、肥満遺伝子タンパク質およびその受容体、血清アルブミン、スーパーオキシドジスムターゼ、スプライソゾームタンパク質、Ｇタンパク質共役受容体とも呼ばれる７ＴＭ（膜貫通）タンパク質、免疫グロブリン、セリンタンパク質分解酵素の数種類のファミリー（血液凝固系、消化酵素のタンパク質を含むが、それらだけに限らない）、デオキシリボヌクレアーゼＩ、等を含むが、それらだけに限らない。ＦＤＡまたは国外の機関で認可された分泌性または膜結合性タンパク質に基づいた治療物質には、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、カルシトニン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、バソプレッシン、インターロイキン、インターフェロン、免疫グロブリン、ラクトフェリン（多様な生成物が数社から販売されている）、組織型プラスミノーゲン活性化因子（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社ではアルテプラーゼ）、ヒューロリンダーゼ（ｈｙａｕｌｏｒｉｎｄａｓｅ）（Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ社ではワイダーゼ（Ｗｙｄａｓｅ））、ドルナーゼアルファ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社ではパルモザイム）、キモジアクチン（Ｃｈｙｍｏｄｉａｃｔｉｎ）（Ｋｎｏｌｌ社ではキモパパイン）、アルグルセラーゼ（Ｇｅｎｚｙｍｅ社ではセレダーゼ）、ストレプトキナーゼ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社ではカビキナーゼ）（Ａｓｔｒａ社ではストレプターゼ）等が含まれるが、それらだけに限らない。このことは分泌性および膜結合性タンパク質が治療の標的として確立、立証されてきた歴史を有することを示す。
【０００６】
２００２年３月２１日に公開された我々の同時係属出願ＷＯ０２／２２８０８は、分泌性タンパク質をコードするｓｂｇ１０２２００ＭＣＴｂと呼ばれる遺伝子を開示する。それはモノカルボン酸共輸送体（ＭＣＴ１）のメンバーとして特徴付けられた。出願人は、ｓｂｇ１０２２００ＭＣＴｂおよびそのホモログが、皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、または上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患を含むが、それらに限らない障害から引き起こされた創傷の患者を治療、治癒、または予防する利益的な有効性を有することを発見した。また、ｓｂｇ１０２２００ＭＣＴｂとそのホモログは、骨関節炎および関節リウマチを治療、治癒または予防し、再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進する利益的な有効性を有する。
【発明の開示】
【０００７】
（発明の要約）
一の態様では、本発明は、（１）皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、または上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患を含むが、それらに限らない障害から引き起こされた創傷の患者を治療、治癒または予防するか；あるいは（２）骨関節炎および関節リウマチを治療、治癒または予防する；あるいは（３）再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進する；方法であって、有効な量のＰＡ１３１ポリペプチドまたはポリヌクレオチドをそれを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。
【０００８】
さらなる態様では、本発明はまた、（１）皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、または上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患を含むが、それらに限らない障害から引き起こされた創傷の患者を治療、治癒または予防するための；あるいは（２）骨関節炎および関節リウマチを治療、治癒または予防するための；あるいは（３）再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進するための医薬組成物（製剤）であって、有効な量のＰＡ１３１ポリペプチドまたはポリヌクレオチドおよび医薬上許容されるキャリアを含む医薬組成物を提供する。
【０００９】
また、さらなる態様では、本発明は、（１）皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、または上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患を含むが、それらに限らない障害から引き起こされた創傷の患者を治療、治癒または予防するための；あるいは（２）骨関節炎および関節リウマチを治療、治癒または予防するための；あるいは（３）再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進するための医薬品の調製におけるＰＡ１３１ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの使用に関する。
【００１０】
（図面の簡単な説明）
図１。Ａｄ．ＭＰＡ１３１Ａ−長（配列番号５）は局所および全身投与によって創傷閉塞を増進した。
【００１１】
図２。ＨＰＡ１３１．１または別名ＨＰＡ１３１．Ｔ１−８（配列番号７）をコードするアデノウイルスの局所投与。
【００１２】
図３。ＭＰＡ１３１Ａ長−Ｆｃ（配列番号１２）はｏｂ／ｏｂの創傷修復における創傷治癒を促進した。ＭＰＡ１３１Ａ長−Ｆｃは毎日の腹腔内投与を介して局所的に投与された。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
以下の定義は、本出願で高頻度に使用される特定の用語と略語の理解を容易にするために提供される。
【００１４】
「単離された」は、本来の状態から「ヒトの手によって」変化されたことを意味する。「単離された」組成物または物質が自然に生じる場合、それは本来の環境から変化または除去されたか、あるいはその両方である。例えば、本来生きている動物内に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離された」状態ではないが、本来の状態である共存物質から分離された同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離された」状態であり、この場合にこの用語が用いられる。
【００１５】
「ポリヌクレオチド」は、一般的にポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを意味し、未修飾のＲＮＡまたはＤＮＡ、あるいは修飾されたＲＮＡまたはＤＮＡであってよい。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖のＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖またはより典型的には二本鎖あるいは一本鎖および二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含む混合分子を含むが、それらだけに限らない。加えて、「ポリヌクレオチド」はまた、ＲＮＡまたはＤＮＡ、あるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。用語「ポリヌクレオチド」はまた、１つ以上の修飾された塩基を包含するＤＮＡまたはＲＮＡ、ならびに安定性または他の理由で修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを含む。「修飾された」塩基は、例えば、イノシンのごときトリチル化された塩基および異常な塩基を含む。多様な修飾がＤＮＡおよびＲＮＡに施されてよい；それゆえ、「ポリヌクレオチド」は、典型的には自然に見出されるごとき化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態のポリヌクレオチド、ならびにウイルスおよび細胞に特有な化学的形態のＤＮＡおよびＲＮＡを包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、しばしばオリゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドを含む。
【００１６】
「ポリペプチド」は、ペプチド結合または修飾ペプチド結合、すなわちペプチドイソスターによって相互に結合された２つ以上のアミノ酸を含むいずれかのペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」は、一般的に、ペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと称される短い鎖、および一般的にタンパク質を意味するより長い鎖、の両方を意味する。ポリペプチドは２０個の遺伝子コードアミノ酸以外のアミノ酸を含んでよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセッシングのごとき本来の過程、あるいは当該技術分野で周知の化学的修飾の技術のどちらかによって修飾されるアミノ酸配列を含んでよい。かかる修飾については、基本書およびより詳細な研究書、ならびに多くの研究文献に詳細に記載されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのいずれかで生じてよい。同一型の修飾が一定のポリペプチド中において同程度または数部位で異なる程度存在すると理解されるだろう。また、一定のポリペプチドは多種類型の修飾を含んでよい。ポリペプチドは遍在化の結果として分岐されてよく、環状であってもよく、分岐があってもなくてもよい。環状、分岐および分岐環状のポリペプチドは翻訳後の本来の過程から生じてよく、または合成法によって施されてよい。修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビン共有結合、ヘム部分共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、イノシトールリン脂質の共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリスチン酸付加、酸化、タンパク質プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化のごときタンパク質へのトランスファーＲＮＡ介在アミノ酸付加、および遍在化が含まれる（例として、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，第２版，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；  Ｗｏｌｄ，Ｆ．，Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，ｐｇｓ．１−１２  ｉｎ  ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ  ＣＯＶＡＬＥＮＴ  ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８３；Ｓｅｉｆｔｅｒら“Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｆａｃｔｏｒｓ”，Ｍｙｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９９０）１８２：６２６−６４６、ならびにＲａｔｔａｎら，”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ”，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（１９９２）６６３：４８−６２を参照）。
【００１７】
「変異型」は、対照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、必要な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。ポリヌクレオチドの典型的な変異型は、別の対照ポリヌクレオチドおよびヌクレオチド配列において相違する。変異型のヌクレオチド配列の変化は、対照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させてもよく、そうでなくともよい。ヌクレオチドの変化は、下記で考察されるように、対照配列でコードされるポリペプチドのアミノ酸置換、付加、欠失、融合および部分欠失を生じてよい。ポリペプチドの典型的な変異型は、別の対照ポリペプチドおよびアミノ酸配列において相違する。一般的に、相違は対照ポリペプチドおよびその変異型の配列が全体として極めて類似し、多くの領域で一致することに限られる。変異型および対照ポリペプチドは、１つ以上の置換、付加、欠失のいずれかの組み合わせでアミノ酸配列において相違してよい。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされた残基であってよく、そうでなくともよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異型は、対立遺伝子多型のごときに自然に生じてよく、あるいは自然に生じることが知られていない変異型であってよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非自然発生変異型は、変異誘発技術または直接合成によって作成されてよい。
【００１８】
当該技術分野で知られる「同一性」は、配列を比較することで決定される、２つ以上のポリペプチド配列または２つ以上のポリヌクレオチド配列間の関連性である。当該技術分野では、「同一性」はまた、ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列間の関連性の程度を意味し、場合によっては、一連のかかる配列間の一致によって決定されてよい。「同一性」および「類似性」は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．とＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．ら編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；ならびにＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．とＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編，Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；ならびにＣａｒｉｌｌｏ，H.，とＬｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８：１０７３（１９８８）に記載される方法を含むが、それらだけに限らない公知の方法によって容易に算出され得る。同一性を決定する好ましい方法は、テストされる配列間で一致が最大であるように設定される。同一性および類似性を決定する方法は、公開された入手可能なコンピュータープログラムにおいて体系化されている。２つの配列間の同一性および類似性を決定するのに好ましいコンピュータープログラムの方法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（１）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））を含むが、それらだけに限らない。ＢＬＡＳＴ  ＸプログラムはＮＣＢＩおよび他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，S．ら，ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））から公開されて入手可能である。周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一性を決定するために使用されてよい。
【００１９】
ポリペプチド配列比較用の好ましいパラメーターは以下のものを含む。
１）アルゴリズム：ＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）
比較マトリックス：ＨｅｎｔｉｋｏｆｆとＨｅｎｔｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）によるＢＬＯＳＳＵＭ６２
ギャップペナルティー：１２
ギャップ長ペナルティー（Ｇａｐ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｅｎａｌｔｙ）：４
【００２０】
これらのパラメーターを用いる有用なプログラムは、ウイスコンシン州、マディソンのＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐによる「ギャップ」プログラムとして公開されて入手可能である。前記パラメーターはペプチド比較用初期設定パラメーターである（終結ギャップ（ｅｎｄ  ｇａｐｓ）のペナルティーなし）。
【００２１】
ポリヌクレオチド比較用の好ましいパラメーターは以下のものを含む：
１）アルゴリズム：ＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）
比較マトリックス：適合＝＋１０、不適合＝０
ギャップペナルティー：５０
ギャップ長ペナルティー：３
利用可能：ウイスコンシン州、マディソンのＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐの「ギャップ」プログラム。核酸比較用の初期設定パラメーターが存在する。
【００２２】
例えば、本発明のポリヌクレオチド配列は、配列番号１の対照配列と同一であってよいか、すなわち１００％同一であってよいか、またはその対照配列と比較して一定整数以内のヌクレオチド変化を含んでよい。かかる変化は、少なくとも１つのヌクレオチド欠失、転移および転換を含む置換、または挿入から成る群から選択され、ここで該変化は対照ヌクレオチド配列の５’または３’末端位置あるいはそれらの末端位置間のいずれかで起こってよく、対照配列中のヌクレオチドにおいて個々に、あるいは対照配列中の１またはそれ以上の隣接した群において散在してよい。ヌクレオチド変化の数は、配列番号１のヌクレオチド合計数を各パーセント同一性のパーセント数で乗じ（１００で割る）、配列番号１のヌクレオチドの該合計数からその計算値を減ずることによるか、または：
ｎｎ≦ｘｎ−（ｘｎ・ｙ）
［式中、
ｎｎはヌクレオチド変化の数であり、ｘｎは配列番号１のヌクレオチドの合計数であり、ｙは、例えば、０．７０を７０％、０．８０を８０％、０．８５を８５％、０．９０を９０％、０．９５を９５％、等であり、ここで、ｘｎとｙの非整数の計算値はｘｎから差し引く前に最近似整数へ端数を切り捨てられる］
によって決定される。配列番号２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の変化は、このコード配列中にナンセンス変異、ミスセンス変異またはフレームシフト変異を作り出し、それにより、かかる変化後のポリヌクレオチドによってコードされたポリペプチドを変化させてよい。
【００２３】
同様に、本発明のポリペプチド配列は、配列番号２の対照配列と同一であってよく、すなわち１００％同一であってよいか、または対照配列と比較して一定整数以内のアミノ酸変化を含んでよいものであり、その結果、％同一性が１００％未満であってもよい。かかる変化は、少なくとも１つのアミノ酸欠失、保存置換および非保存置換を含む置換、または挿入から成る群から選択され、ここで、該変化は、対照ポリペプチド配列のアミノ末端位置またはカルボキシ末端位置あるいはそれら末端位置間のいずれかで起こってよく、対照配列中のアミノ酸において個々に、あるいは対照配列中の１またはそれ以上の隣接した群において散在してよい。一定の％同一性のアミノ酸変化の数は、配列番号２のアミノ酸合計数を各パーセント同一性のパーセント数で乗じ（１００で割る）、配列番号２のアミノ酸該合計数からその計算値を減ずることによるか、または：
ｎａ≦ｘａ−（ｘａ・ｙ）
［式中、
ｎａはアミノ酸変化の数であり、ｘａは配列番号２のアミノ酸合計数であり、ｙは、例えば、０．７０を７０％、０．８０を８０％、０．８５を８５％、等であり、ここで、ｘａとｙの非整数の計算値はｘａから差し引く前に最近似整数へ端数を切り捨てられる］
によって決定される。
【００２４】
「融合タンパク質」は、２つのしばしば無関係な融合遺伝子またはそれらの断片によってコードされたタンパク質を意味する。一の例では、ＥＰ−Ａ−０４６４５３３Ａは、別のヒトタンパク質またはその一部と連結させた免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部位を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合では、融合タンパク質の一部として免疫グロブリンＦｃ領域を用いることは、例えば、改良された薬物動態特性を生じる治療および診断上の使用の際に有利である（例、ＥＰ−Ａ０２３２２６２を参照）。一方で、ある使用においては、融合タンパク質の発現、検出、および精製後にＦｃ部分を欠失できることが望ましいであろう。
【００２５】
ＰＡ１３１ポリペプチド（本発明のポリペプチド）
ＰＡ１３１ポリペプチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７％〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を包含する単離されたポリペプチドを含む。かかるポリペプチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列を包含する単離されたポリペプチドを含む。
【００２６】
本発明のさらなるポリペプチドは、アミノ酸配列が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７％−９９％の同一性を有する単離されたポリペプチドを含む。かかるポリペプチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のポリペプチドを含む。
【００２７】
本発明のさらなるポリペプチドは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１４、１６、１８、または２０に含まれる配列を包含するポリヌクレオチドでコードされる単離されたポリペプチドを含む。
【００２８】
本発明のポリペプチドは、現在、（１）皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、または上皮細胞の損傷かつ瘢痕の形成が生じている他の肺疾患を含むが、それらに限らないことで引き起こされた患者の創傷を治療、治癒または予防する；あるいは（２）骨関節炎および関節リウマチを治療、治癒または予防する；あるいは（３）再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進することに有効であることが見出されている。この特性については、これ以後、「ＰＡ１３１活性」または「ＰＡ１３１ポリペプチド活性」あるいは「ＰＡ１３１の生物学的活性」と称する。また、「ＰＡ１３１活性」または「ＰＡ１３１ポリペプチド活性」あるいは「ＰＡ１３１の生物学的活性」は、該ＰＡ１３１ポリペプチドの抗原活性および免疫活性、特に配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のポリペプチドの抗原活性および免疫活性を含む。好ましいのは、本発明のポリペプチドがＰＡ１３１の少なくとも１種類の生物学的な活性を示す。
【００２９】
本発明のポリペプチドは、治療効果を存続させるか、あるいは適する受容体または受容体に対する結合性を増加させるかのどちらかによって、循環の半減期を持続し、その治療効果を改善する上記タンパク質に対するいずれかの修飾を含む。例えば、本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク質の形態であってよいか、または融合タンパク質を形成してよい。セクレタリー（ｓｅｃｒｅｔａｒｙ）配列またはリーダー配列、プロ配列、複数ヒスチジン残基のごとき精製を目的とする配列、あるいは組み換え生成時の安定用付加配列、を含む付加アミノ酸配列を包含することはしばしば有効である。本発明のポリペプチドは、（例えば、配列番号１２、１５、または１７であるが、それらだけに限らないものを作成するために）実施例２で例証されるように、抗体のＦｃ部分にコンジュゲートされた上記ポリペプチド（例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１９、または２１であるが、それらだけに限らない）のいくつかから形成されてよい。かかるＦｃ融合タンパク質はまた、（１）皮膚の創傷、外科的創傷、火傷、下腿潰瘍、糖尿病潰瘍、静脈不全潰瘍、褥瘡、腎線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、または上皮細胞の損傷と瘢痕の形成が生じている他の肺疾患を含むが、それらに限らないことから引き起こされた創傷の患者を治療、治癒または予防する；あるいは（２）骨関節炎および関節リウマチを治療、治癒または予防する；あるいは（３）再かん流障害後の心臓血管組織の修復を促進する、活性を有する。Ｆｃ融合タンパク質の構築物は周知である。例として、Ａｒｕｆｆｏ，Ａ．（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓを参照。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｓ．Ｍ．ＣｈａｍｏｗとＡ．Ａｓｈｋｅｎａｚｉら編）における８章、ｐｐ２２１−２４１、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．；Ａｖｉ  ＡｓｈｋｅｎａｚｉとＳｔｅｖｅｎ  Ｍ  Ｃｈａｍｏｗ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７，９：１９５−２００。
【００３０】
Ｆｃ融合タンパク質とは別に、本発明のポリペプチドは、アルブミンまたはアルブミン結合ペプチドと上記ポリペプチドをコンジュゲートすることによって形成されてよいか、あるいはペグ化さえされ得る。アルブミンまたはアルブミン結合ペプチドとのコンジュゲートあるいはペグ化の技術は周知である。例えば、Ｊ．Ｍ．ＨａｒｒｉｓとＲ．Ｂ．Ｃｈｅｓｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ２，ｐｐ２１４−２２１；Ｒ．Ｂ．Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５５（２００３）２１７−２５０；Ｍ．Ｓ．Ｄｅｎｎｉｓら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ２７７，Ｎｏ．３８，２００２，ｐｐ３５０３５−３５０４３；Ｓ．Ｓｙｅｄら，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ８９，Ｎｏ９，１９９７：ｐｐ３２４３−３２５２を参照。
【００３１】
本発明のポリペプチドはまた、（１）Ｊ．Ａ．Ａｎｄｒａｄｅｓら，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ，Ｖｏｌ  １８，ｐｐ２６１−２７５  （２００１）；（２）Ｔ．Ｉｓｈｉｋａｗａら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１２９，６２７−６３３（２００１）；（３）Ｊ．Ａ．Ａｎｄｒａｄｅｓら，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２５０，ｐｐ４８５−４９８（１９９９）；（４）Ｂｏ  Ｈａｎら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０（２００２）７４７−７５５で行われるように標的となるコラーゲンに対するコラーゲン結合ドメインを上記ポリペプチドに融合することによって形成されてよい。
【００３２】
本発明のポリペプチドはまた、保存アミノ酸置換によって対照と異なるポリペプチドになり、それによってある残基が同様の性質を有する別の残基に置換される上記ポリペプチドの変異型を含む。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間；ＳｅｒおよびＴｈｒ間；酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならびに塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒ間である。特に好ましいのは、数個、５−１０個、１−５個、１−３個、１−２個または１個のアミノ酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失、または付加される変異型である。
【００３３】
本発明のポリペプチドはいずれかの適する方法で調製され得る。かかるポリペプチドは、単離された自然発生ポリペプチド、組み換え産生ポリペプチド、合成ポリペプチド、あるいはこれらの方法の組み合わせによって産生されるポリペプチドを含む。かかるポリペプチドを調製する方法は当該技術分野でよく理解されている。
【００３４】
本発明の組み換えポリペプチドは、発現系を含む遺伝学的に改良された宿主細胞による当該技術分野において周知の過程によって調製されてよい。従って、さらなる態様では、本発明は、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現系、かかる発現系とともに遺伝学的に改良された宿主細胞、ならびに組み換え技術による本発明のポリペプチドの産生、に関する。また、無細胞翻訳系が用いられることにより、本発明のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを用いるかかるタンパク質が産生され得る。
【００３５】
適する宿主の代表的な例は、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞のごとき細菌細胞；酵母細胞およびコウジカビ細胞のごとき菌性細胞；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  Ｓｆ９細胞のごとき昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３およびＢｏｗｅｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ細胞のごとき動物細胞；ならびに植物細胞を含む。
【００３６】
非常に多くの発現系が用いられ得る。例えば、染色体、エピソームおよびウイルスに由来する系であり、例えば、細菌プラスミド、バクテリオファージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入エレメント、酵母染色体エレメントに由来するベクターであり、バキュロウイルス、パポバウイルス、ＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルスのごときウイルスに由来するベクター、ならびにプラスミド、バクテリオファージの遺伝学的エレメント、コスミド、およびファージミドのごときそれらの組み合わせに由来するベクター、が使用され得る。該発現系は発現を誘発するとともに調節する制御領域を含んでよい。一般的に、ポリヌクレオチドを維持、増幅または発現させて宿主細胞中でポリペプチドが産生され得るいずれかの系またはベクターが使用されてよい。適するヌクレオチド配列は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）などで説明されるごとき様々な周知の基本的な技術のいずれかによって発現系に挿入されてよい。適する分泌シグナルが望ましいポリペプチド内に組み込まれることにより、小胞体ルーメン内、細胞膜周辺腔または細胞外環境への翻訳タンパク質の分泌が可能となり得る。これらのシグナルはポリペプチドに対して内在性であってもよく、または異種性シグナルであってもよい。
【００３７】
本発明のポリペプチドは、硫安沈殿またはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含む周知の方法によって組み換え細胞培地から回収および精製され得る。最も好ましいのは、アフィニティークロマトグラフィーが精製に用いられることである。ポリペプチドが単離およびまたは精製時に変性される場合、タンパク質リフォールディングの周知技術が用いられて活性構造が再生されてよい。
【００３８】
本発明のポリペプチドは、医薬組成物中に製剤化され、他のポリペプチドが記載されるような同一の方法で投与され得る。例えば、国際特許出願、公開番号ＷＯ９０／０２７６２を参照。一般的に、これらの組成物は治療上有効な量の本発明のポリペプチドおよび許容される医薬キャリアを含む。適するキャリアが当業者に周知であり、例えば、生理食塩水を含む。代替的に、かかる組成物は本発明のポリペプチドが含まれる送達系を含んでよい。必要に応じて、これらの組成物は他の活性成分を含んでよい。
【００３９】
ＰＡ１３１ポリヌクレオチド（本発明のポリヌクレオチド）
一の態様では、本発明はＰ１３１ポリヌクレオチドに関する。かかるポリヌクレオチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１の全長各々にわたって配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のアミノ酸配列に少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を包含する単離されたポリヌクレオチドを含む。このことに関して、少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドが非常に好ましく、少なくとも９８−９９％の同一性を有するポリペプチドがさらに非常に好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドが最も好ましい。かかるポリヌクレオチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１５、１７、１９、または２１のポリペプチド各々をコードする配列番号１、３、５、７、９、１１、１４、１６、１８、または２１に含まれるヌクレオチド配列を包含するポリヌクレオチドを含む。
【００４０】
本発明のさらなるポリヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１４、１６、１８、または２０の全長各々にわたって配列番号１、３、５、７、９、１１、１４、１６、１８、または２０に少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を包含する単離されたポリヌクレオチドを含む。このことに関して、少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチドが非常に好ましく、少なくとも９８−９９％の同一性を有するポリヌクレオチドがより非常に好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドが最も非常に好ましい。かかるポリヌクレオチドは配列番号１、３、５、７、９、１１、１４、１６、１８、または２０のポリヌクレオチドならびに配列番号１、３、５、７、９、１１、１４、１６、１８、または２０のポリヌクレオチドを包含するポリヌクレオチドを含む。
【００４１】
本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明のポリペプチドをコードするいずれか他のポリヌクレオチドを含む。
【００４２】
本発明はまた、上記の全ポリヌクレオチドに相補的であるポリヌクレオチドを提供する。
【００４３】
本発明のポリペプチドは適する体内経路のいずれかによって投与されてよく、例えば、１日から約３週までの期間中に１日１回から３回の頻度ないし１週間に１度または２週間に１度の頻度で必要に応じて繰り返されてよい。処置の用量および期間は、ヒトの循環系における本発明分子の相対的な持続時間に関連し、患者の処置状態および総体的な健康に依存して当業者によって調整され得る。
【００４４】
本明細書で使用されるように、用語「医薬上」は本発明の獣医学的な適用を含む。用語「治療上有効な量」は、選択された状態を軽減するのに有効な治療薬剤の量を意味する。
【００４５】
特定の具体例では、本発明のポリペプチドまたはその機能的な誘導体をコードするポリヌクレオチド配列を包含するポリヌクレオチド（核酸配列または単に核酸）が投与されることにより、遺伝子治療を介して創傷が処置される。「遺伝子治療」は、発現された核酸または発現可能な核酸の患者への投与によって行われる治療を意味する。本発明のこの具体例では、該核酸は治療の有効性を介するコードタンパク質を産生する。
【００４６】
当該技術分野で利用可能な遺伝子治療のいずれかの方法が本発明によって使用され得る。典型的な方法が以下に記載される。
【００４７】
遺伝子治療の方法の一般的な総説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５（１９９３）；ＷｕとＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎとＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照。使用され得る組み換えＤＮＡ技術の分野で一般的に知られる方法が、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙとＳｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；ならびにＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。
【００４８】
好ましい態様では、ポリペプチドをコードする核酸配列は、適する宿主中でポリペプチドを発現する一部の発現ベクターを形成する。特に、かかる核酸配列は、誘導性または構成性であり、必要に応じて組織特異性であるプロモーターであって、ポリペプチドのコード領域に操作可能に連結されたプロモーターを有する。別の特定の具体例において、該核酸分子は、ポリペプチドのコード配列および他の望ましい配列がゲノム中の望ましい部位で相同的組み換えを促進する領域によって挟まれて使用され、それゆえにポリペプチドコード核酸の染色体内発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒとＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
【００４９】
患者への核酸の送達は、患者が核酸または核酸運搬ベクターに直接曝露される直接的な場合か、あるいは最初にｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞に核酸を形質転換させてから患者に移植する間接的な場合のどちらかである。これら２つのアプローチは各々、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏの遺伝子治療として知られる。
【００５０】
特定の具体例では、核酸配列がｉｎ  ｖｉｖｏで直接投与され、発現されることによりコード産物が産生される。これは、当該技術分野で知られる多くの方法のいずれか、例えば、適する核酸発現ベクターの一部として核酸配列を構築し、それを細胞内に局在するように投与することにより、例えば、欠損または弱毒レトロウイルスまたは他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照）を用いた感染により、あるいは裸のＤＮＡの直接注射により、あるいは微粒子照射（例、遺伝子銃；バイオリスティック、デュポン）の使用、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクション剤による被膜、リポソーム、微小粒子もしくはマイクロカプセル内のカプセル化により、あるいは核に移入することが知られているペプチドを連結してそれを投与することにより、（特に受容体を発現する細胞型を標的として用いられ得る）受容体介在エンドサイトーシス感受性リガンドを連結してそれを投与すること（ＷｕとＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７））、等により達成され得る。別の具体例において、核酸−リガンド複合体は、該リガンドがエンドソームを分解する融合ウイルスペプチドを含み、それによって該核酸がリソソーム分解を回避できるように形成され得る。さらに別の具体例では、核酸は、特定の受容体を標的とすることによってｉｎ  ｖｉｖｏで細胞の特異的な取り込みおよび発現の標的とされ得る（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１８０；ＷＯ９２／２２６３５；ＷＯ９２／２０３１６；ＷＯ９３／１４１８８；ＷＯ９３／２０２２１を参照）。代替的には、核酸は、細胞内に導入され、発現のために相同組み換えで宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る（ＫｏｌｌｅｒとＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
【００５１】
特定の具体例では、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列を含むウイルスベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが使用され得る（Ｍｉｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）を参照）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムの適正なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの挿入に必要な構成要素を含む。遺伝子治療に使用される本発明のポリペプチドをコードする核酸配列は、患者への遺伝子送達を容易にする１つ以上のベクターにクローン化される。レトロウイルスベクターについてのより詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ６：２９１−３０２（１９９４）で見出され得、そこでは、幹細胞を化学治療に対してより耐性にするために造血幹細胞にｍｄｒ１遺伝子を送達するレトロウイルスベクターの使用が記載されている。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を記載する他の参考文献は、Ｃｌｏｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５１（１９９４）；Ｋｉｅｍら，Ｂｌｏｏｄ８３：１４６７−１４７３（１９９４）；ＳａｌｍｏｎｓとＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ４：１２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎとＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．３：１１０−１１４（１９９３）である。
【００５２】
アデノウイルスは遺伝子治療で使用され得る他のウイルスベクターである。アデノウイルスは、呼吸上皮に遺伝子を送達するのに特に魅力的なビヒクルである。アデノウイルスは本来、呼吸上皮に感染し、軽度の病気を引き起こす。アデノウイルスに基づく送達系のその他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは非分裂細胞に感染可能という利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙとＷｉｌｓｏｎによるＣｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ３：４９９−５０３（１９９３）はアデノウイルスに基づく遺伝子治療の総説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：３−１０（１９９４）は、アカゲサルの消化上皮に遺伝子を送達するアデノウイルスベクターの使用を示す。遺伝子治療におけるアデノウイルス使用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：４３１−４３４（１９９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ６８：１４３−１５５（１９９２）；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５−２３４（１９９３）；ＰＣＴ公開ＷＯ９４／１２６４９；ならびにＷａｎｇら，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２：７７５−７８３（１９９５）で見出され得る。好ましい具体例では、アデノウイルスベクターが使用される。アデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）もまた、遺伝子治療における使用が提唱されている（Ｗａｌｓｈら，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９−３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。
【００５３】
遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム介在トランスフェクション、またはウイルス感染のごとき方法によって組識培養中の細胞に遺伝子を送達することに関する。一般的に、該送達方法は細胞への選別マーカーの送達を含む。次に細胞が選別下に置かれることにより、送達された遺伝子が取り込まれて発現している細胞が単離される。その後にこれらの細胞が患者に送達される。
【００５４】
本具体例では、核酸は、生じた組み換え細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ投与前に細胞に導入される。かかる導入は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、微量インジェクション、核酸配列を含むウイルスまたはバクテリオファージベクターの感染、細胞融合、染色体介在遺伝子送達、微量キュベット介在遺伝子送達、スフェロプラスト融合、等を含むが、それらだけに限定しない当該技術分野で周知のいずれかの方法によって実施される。多くの技術が細胞内への外部遺伝子の導入に関する技術分野において知られ（ＬｏｅｆｆｌｅｒとＢｅｈｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ，Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２ｍ（１９８５）を参照。）、受容細胞に必要である発生的および生理的な機能が妨げられない場合に限り、本発明で使用されてよい。該技術は細胞への核酸の安定な送達を提供すべきであり、そのために該核酸は細胞において発現でき、好ましくは、その子孫まで遺伝して発現できるべきである。
【００５５】
生じた組み換え細胞は当該技術分野で公知の様々な方法によって患者に送達され得る。組み換え血球細胞（例えば、造血幹細胞または造血始原細胞）は、好ましくは静脈内に投与される。使用が想定される細胞量は、望まれる効果、患者の状態、等に依存し、当業者によって決定され得る。
【００５６】
遺伝子治療の目的で核酸が導入され得る細胞は、望まれる利用可能ないずれかの細胞型を含み、上皮細胞、内皮細胞、ケラチン生成細胞、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔ−リンパ球細胞、Ｂ−リンパ球細胞、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のごとき血球細胞；様々な幹細胞または始原細胞、特に、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝臓、等から得られるような造血幹細胞または造血始原細胞を含むが、それらだけに限らない。
【００５７】
好ましい具体例では、遺伝子治療に使用される細胞は患者自身の細胞である。
【００５８】
組み換え細胞が遺伝子治療に使用される具体例において、ポリペプチドをコードする核酸配列が細胞に導入され、その結果、該核酸配列が該細胞またはそれらの子孫において発現可能なものとなり、次に該組み換え細胞が治療の有効性のためにｉｎ  ｖｉｖｏで投与される。特定の具体例では、幹細胞または始原細胞が使用される。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏで単離および維持され得る幹細胞および／または始原細胞は本発明の具体例に従って使用され得る（ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０８５９８；ＳｔｅｍｐｌｅとＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌ  ７１：９７３−９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９（１９８０）；およびＰｉｔｔｅｌｋｏｗとＳｃｏｔｔ，Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｐｒｏｃ．６１：７７１（１９８６）を参照）。
【００５９】
特定の具体例では、遺伝子治療の目的で導入される核酸はコード領域に操作可能に連結された誘導性プロモーターを含み、その結果、該核酸の発現は適する転写誘導体の存在または不在を調節することによって制御可能である。
【００６０】
本発明は、有効量の本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（以下「組成物」と称する）、あるいは本発明の医薬組成物を患者に投与することによる治療、抑制および予防の方法を提供する。好ましい態様では、本化合物は十分に精製される（例えば、その有効性を制限するか、または望ましくない副作用を生成する物質から十分に解離される）。患者は、好ましくはウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌ、等のごとき動物を含むがそれらだけに限らず、好ましくは哺乳類であり、最も好ましくはヒトである。
【００６１】
本化合物がポリヌクレオチドまたはポリペプチドを含む場合に用いられ得る投与製剤および投与方法が上記に記載される；さらなる適切な投与製剤および投与経路は、以下の本明細書で記載されたものから選択され得る。
【００６２】
多様な送達系が知られ、本発明の化合物を投与することに使用され得る。例えば、リポソームのカプセル化、微小粒子、マイクロカプセル、本化合物を発現可能な組み換え細胞、受容体介在エンドサイトーシス（ＷｕとＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７））、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸構築物、等である。導入の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路を含むが、それらだけに限らない。化合物または組成物は、利便的な経路、例えば、注入またはボーラス注入、上皮または粘膜皮膚の被膜（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸管粘膜、等）を介した吸収によって投与されてよく、他の生物学的な活性薬剤と一緒に投与されてよい。投与は全身的または局所的であり得る。加えて、脳室内注射および随腔内注射を含む適切な経路によって中枢神経系に本発明の医薬化合物または組成物を導入することが望まれてよい。ここで、脳室内注射は、例えば、オンマヤ槽のごときリザーバーに付属する脳室内カテーテルによって促進されてよい。経肺投与もまた、例えば、吸入器または噴霧器（ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）の使用、およびエアロゾル剤を含む製剤によって用いられ得る。
【００６３】
特定の具体例では、本発明の医薬化合物または組成物を治療が必要な領域に局所的に投与することが望まれてよい。これは、例として、外科手術中の局所的な吸入、局所適用、例えば、外科手術後に覆われた創傷に併せた、例えば、注射、カテーテル、座薬法、または移植法によってであり、該移植はセラミック膜または繊維のごとき膜を含む多孔性、非多孔性またはゲル状物質であるものによって達成されてよいが、それらだけに限定するわけではない。好ましいのは、本発明の抗体を含むタンパク質を投与する際に、タンパク質が吸収されない物質を使用することに注意しなくてはならない。
【００６４】
別の具体例では、化合物または組成物は、小胞、特にリポソーム中で送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）；Ｔｒｅａｔら，ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎとＦｉｄｌｅｒ（ら編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，前記，ｐｐ．３１７−３２７を参照、一般的に前記箇所を参照）。
【００６５】
さらに別の具体例では、化合物または組成物は制御された放出系で送達され得る。一の具体例では、ポンプが使用されてよい（Ｌａｎｇｅｒ、前記；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照）。別の具体例では、ポリマー材質が使用され得る（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒとＷｉｓｅ（ら編），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎとＢａｌｌ（ら編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒとＰｅｐｐａｓ，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３）；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９））。さらに別の具体例では、制御された放出系が治療上の標的、すなわち脳の近傍に配置され、それゆえに全身用量の一部のみが必要となる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前記，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照）。
【００６６】
他の制御された放出系がＬａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））による総説で考察されている。
【００６７】
本発明の化合物がポリペプチドをコードする核酸である特定の具体例において、該核酸は、適する核酸発現ベクターの一部として構築され、細胞内に局在するように投与されることによって、例えば、レトロウイルスの使用（米国特許第４，９８０，２８６号）、あるいは直接注射、あるいは微少粒子照射の使用（例、遺伝子ガン；遺伝子銃、デュポン）、あるいは脂質、細胞表面受容体またはトランスフェクション剤による被膜、あるいは核への移入が知られるホメオボックス様ペプチド（Ｊｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１８６４−１８６８（１９９１））を核酸に連結させて投与すること、等によって、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与されてコードタンパク質の発現が促進され得る。代替的には、核酸が細胞内に導入され、相同組み換えによって発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。
【００６８】
本発明はまた、医薬組成物（製剤）を提供する。かかる組成物は治療上有効な量の化合物、および医薬上許容されるキャリアを含む。特定の具体例では、用語「医薬上許容される」は、動物、特にヒトに対する使用において、連邦政府または州政府の規制当局に認可されていること、あるいは米国薬局方または他の一般的に承認された薬局方に記載されていることを意味する。用語「キャリア」は、治療剤とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを意味する。かかる医薬キャリアは、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、胡麻油およびその類似油のごとき石油、動物、植物または合成由来の油を含む水および油のごとき滅菌液体であり得る。医薬組成物が静脈内に投与される場合に水が好ましいキャリアである。生理食塩水溶液およびブドウ糖水溶液およびグリセロール溶液はまた、液体キャリア、特に注射用溶液として使用され得る。適する医薬賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールおよびその類似物を含む。該組成物はまた、望ましくは少量の湿潤剤または乳白剤、あるいはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、タブレット、錠剤、カプセル、粉末、持続性放出製剤およびその類似物の形態であり得る。該組成物は、トリグリセリドのごとき慣用的な結合剤およびキャリアと一緒に座薬として製剤化され得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン酸ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、等のごとき一般的なキャリアを含み得る。適する医薬キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。かかる組成物は、患者に適当な投与形態を提供するために、適する量のキャリアと一緒に、好ましくは精製された形態で治療上有効な量の化合物を含むであろう。該製剤は投与の様式に合わせるべきである。
【００６９】
好ましい具体例では、本組成物は、人間への静脈内投与に適合させた医薬組成物として慣用的な方法によって製剤化される。典型的には、静脈内投与用組成物は滅菌等張性緩衝液中の溶液である。必要であれば、本組成物はまた、可溶化剤および注射部位の痛みを和らげるリグノカインのごとき局所麻酔剤を含んでよい。一般的に、構成成分は単位用量の形態で別々に、または一緒に混合され、例えば、活性薬剤の分量を表示するアンプルまたはサシェットのごとき密閉容器中で凍結乾燥粉末または濃縮遊離水として供給される。本組成物が輸液で投与される場合、滅菌された医薬グレードの水または生理食塩水を含む輸液ボトルと一緒に調剤され得る。本組成物が注射で投与される場合、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルは、活性成分が投与前に混合されてよいように提供され得る。
【００７０】
本発明の化合物は中性または塩の形態として製剤化され得る。医薬上許容される塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸のごとき陰イオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、第二鉄ヒドロキシド、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインのごとき陽イオンとともに形成される塩を含む。
【００７１】
本発明ポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連する病気または疾患の治療、抑制および予防に有効であろう本発明の化合物の量は、標準的な臨床技法によって決定され得る。加えて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイが必要に応じて用いられることにより最適な用量範囲が同定されるのに役に立ってよい。製剤化に用いられる適正な用量はまた、投与経路、ならびに病気または疾患の重症度に依存しており、医者の判断および各患者の状態によって決定されるべきである。有効な用量はｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から推定されてよい。
【００７２】
ポリペプチドにおいて、患者に投与される用量は、典型的には患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇである。好ましいのは、患者に投与される用量が患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇの間であり、より好ましいのは、患者の体重の１ｍｇ／ｋｇないし１０ｍｇ／ｋｇである。一般的に、ヒトのポリペプチドは、外部ポリペプチドに対する免疫応答性のために、他の種に由来するポリペプチドよりヒトの体内でより長い半減期を有する。それゆえ、より低用量のヒトポリペプチドおよびより低頻度の投与がしばしば可能である。さらに、本発明のポリペプチド投与の用量および頻度は、例えば、脂質付加反応のごとき修飾によってポリペプチドの取り込みおよび組織透過性（例えば、脳内へ）を上昇させることで減少されてよい。
【００７３】
本発明はまた、１種類以上の本発明の医薬組成物の成分を充填した１つ以上の容器を含む医薬包装または医薬キットを提供する。必要に応じて医薬品または生物学的産物の製造、使用または販売を統制する政府当局に規定された形式の注意書きがかかる容器に添付され得、その注意書きは、ヒト投与用薬剤の製造、使用または販売の当局による認可を反映する。
【００７４】
本発明は、本発明のポリペプチドおよび医薬上許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。従って、該ポリペプチドは医薬品の製造に使用されてよい。本発明の医薬組成物は、非経口投与用の溶液または凍結乾燥粉末として製剤化されてよい。粉末は使用前に適する希釈剤または他の医薬上許容されるキャリアの添加によって再構成されてよい。液体製剤は緩衝化された等張性水溶液であってよい。適する希釈剤の例は、一般的な等張性生理食塩水、標準的な５％ブドウ糖水溶液、あるいは緩衝化された酢酸ナトリウムまたは酢酸アンモニウム溶液である。かかる製剤は、特に非経口投与に適するが、経口投与用にも使用されてよく、あるいは定量吸入器または定量ネブライザーに含まれてよい。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムのごとき賦形剤を添加することが望まれてよい。
【００７５】
代替的には、該ポリペプチドは経口投与用に乳液中またはシロップ中でカプセル化、タブレット化または調製されてよい。医薬上許容される固体または液体キャリアが添加されることにより、本組成物が亢進または安定化されるか、あるいは本組成物の調製が促進されてよい。固体キャリアは、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、石膏、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、滑石、ペクチン、アカシア、寒天あるいはゼラチンを含む。液体キャリアは、シロップ、ピーナッツ油、オリーブオイル、生理食塩水および水を含む。キャリアはまた、単独またはワックスと一緒になったモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンのごとき持続性放出物質を含んでよい。固体キャリアの量は変動するが、好ましいのは、用量単位あたり約２０ｍｇないし約１ｇの間である。医薬調製物は、タブレット形態用には、必要ならば、粉砕、混合、顆粒化、および圧縮；あるいは硬ゼラチンカプセル形態用には、粉砕、混合および注入に関連する薬学の従来技術に従って調製される。液体キャリアが使用される場合、該調製物はシロップ、エリキシル剤、乳剤、あるいは水性または非水性懸濁液の形態である。かかる液体製剤は直接経口で投与されてよく、または軟ゼラチンカプセルに充填されてよい。
【００７６】
本発明のポリペプチドの投与形態は、宿主に該薬剤を送達するいずれかの適する経路であってよい。本発明のポリペプチドおよび医薬組成物は、非経口投与、すなわち皮下内、筋肉内、静脈内または鼻腔内の投与において特に有用である。
【００７７】
本発明のポリペプチドは、医薬上許容されるキャリア中に活性成分として有効な量の本発明のポリペプチドを含む医薬組成物として調製されてよい。本発明の組成物において、ポリペプチドを含む水性懸濁液または水溶液は、好ましくは生理的なｐＨに緩衝化され、注射用に準備された形態であることが好ましい。局所投与用組成物は、一般的に本発明のポリペプチド溶液、あるいは医薬上許容されるキャリア、好ましくは水性キャリア中に溶解されたそれらの混合液を含む。様々な水性キャリア、例えば、０．４％  生理食塩水、０．３％  グリシンおよびその類似物が用いられてよい。これらの溶液は滅菌され、一般的に粒子状物質を含まない。これらの溶液は慣用的で周知な滅菌技術（例、濾過）によって滅菌されてよい。本組成物は、ｐＨ調整剤および緩衝剤のごとき生理的条件に近づけるような医薬上許容される補助剤を含んでよい。かかる医薬製剤における本発明のポリペプチド濃度は、広範囲に、すなわち約０．５重量％未満、一般的に少なくとも約１重量％ないし１５重量％または２０重量％に変動可能であり、選択された特定の投与形態により、液量、粘性、等に基づいて最初に選択されるだろう。
【００７８】
それゆえ、筋肉内注射用の本発明の医薬組成物は、１ｍＬの滅菌緩衝水、ならびに約１ｎｇないし約１００ｍｇの間、例えば、約５０ｎｇないし約３０ｍｇの間、またはより好ましくは約５ｍｇないし約２５ｍｇの間の本発明のポリペプチドを含むように調製され得る。同様に、静脈内注入用の本発明の医薬組成物は、約２５０ｍＬの滅菌リンガー溶液、ならびに約１ｍｇないし約３０ｍｇ、および好ましくは５ｍｇないし約２５ｍｇの本発明のポリペプチドを含むように構成され得るであろう。非経口的に投与可能な組成物を調製する実際の方法は当業者に周知であるか、または明白であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ」第１５版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａでより詳細に記載される。
【００７９】
本発明のポリペプチドは、医薬調製物中において単位用量の形態で存在することが好ましい。適切な治療上有効な用量は当業者によって容易に決定され得る。かかる用量は、必要ならば、反応期間中に医師によって適当であると選択された時間間隔で繰り返されてよい。
【００８０】
本発明はその精神または本質的な特性から逸脱することなく、他の特定な形態において具体化されてよく、従って、本発明の範囲を示すものとしては、上記の明細書または下記の実施例よりむしろ特許請求の範囲を参照とすべきである。
【００８１】
（実施例）
実施例１．アデノウイルスの作成
アデノウイルスＭＰＡ１３１Ａ−長を以下の通りに作成した。ＭＰＡ１３１Ａ−長のＯＲＦ（配列番号５）を適切な制限酵素部位を用いてアデノウイルスシャトルベクターｐＳｈｕｔｔｌｅ（ＣｌｏｎＴｅｃｈ社）にサブクローン化し、ＯＲＦを適正な方向でＣＭＶ  ＩＥプロモーターの下流に配置した。発現カセット（ＣＭＶ  ＩＥ−ＯＲＦ−ＢＧＨ  ポリＡ）を含むＩ−ＣｅｕＩ／ＰＩ−ＳｃｅＩ断片をシャトルベクターから単離し、アデノウイルス骨格ｐＡｄＸのＩ−ＣｅｕＩ／ＰＩ−ＳｃｅＩ部位の細菌Ｌａｃプロモーターで可動されるＧＦＰ発現カセットに交換した。クローン化の工程を利便的な緑／白選別（ｇｒｅｅｎ／ｗｈｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）工程により行い、該白色コロニーが組み換え構築物ｐＡｄＸ．ＭＰＡ１３１Ａ−長を含んだ。精製したアデノウイルスベクターの分子クローンＤＮＡを制限酵素ＰａｃＩで消化させることにより直鎖状にしてＩＴＲｓを曝露させ、アデノウイルスのレスキュー用にＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。記載されるように、アデノウイルスを増殖させ、塩化セシウムバンド法で精製した（Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ，Ｊ．１９９９．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｏ  ａｉｒｗａｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ．Ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｐ．Ｒｏｂｂｉｎｓ（編）．ｐ．１６９−１８４．Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ）。濃縮アデノウイルスを滅菌したＢｉｏ−ｇｅｌカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）を用いて脱塩し、−８０℃の１０％グリセロール含有１ｘＰＢＳ中で保存した。他の本発明のＰＡ１３１ポリヌクレオチドを含むその他のアデノウイルスを同様の方法で作成可能であった。
【００８２】
図２に記載される実験では、コントロールとしてアデノウイルスＡｄ．ｍ−ＧＭ−ＣＳＦを用いた。Ａｄ．ＣＭＶ．ｍＧＭ−ＣＳＦは、カリフォルニア州、カールズバッドのＱ．ＢＩＯｇｅｎｅ社から購入した（カタログ番号：ＡＤＶ０４１０）。次にウイルスを使用するために増幅した。
【００８３】
実施例２．ＭＰＡ１３１Ａ−長融合タンパク質（配列番号１２）の作成
ＭＰＡ１３１Ａ−長のＯＲＦ（配列番号５）をＭＰＡ１３１Ａ−長のＣ末端に付加したＴｅｖプロテアーゼ切断部位ＥＮＬＹＦＱのコドンとともにＰＣＲを用いて増幅した。そのＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩ／ＢｓａＩで消化し、ここでそれらの部位はＰＣＲプライマー間で改良された部位であり、ｐＩｇｇ２ｂｆｃｌｉｎｋのＥｃｏＲＩ／ＢｇｌＩＩ部位にサブクローン化した。これをベクターに含まれるマウスＩｇｇ２ｂＦｃのすぐ上流にＭＰＡ１３１Ａ−長／Ｔｅｖ  ＯＲＦを配置し、「ＭＰＡ１３１Ａ長−Ｔｅｖ−ｍＦｃ」融合とした。該構築物をＣＨＯＥ１Ａ細胞にトランスフェクトし、安定な系列を選別し、確立した。該アミノ酸配列において、ａａ５０５−７４３の末端がマウスＩｇｇ２ｂＦｃ（配列番号１３）の一部であることに留意。
【００８４】
実施例３．切除創傷修復モデル
Ｏｂ／ｏｂ系統のごとき糖尿病マウスは創傷治癒の遅延を示す１。Ｏｂ／ｏｂマウスは、レプチンをコードするｏｂ／ｏｂ遺伝子の欠失を有する自然発生系統マウスである。該レプチンはサイトカインクラスＩ受容体ｏｂＲｂに結合し、食欲を抑制する細胞内シグナルカスケードを活性化する。Ｏｂ／ｏｂマウスはレプチンを産生できないから、肥満となり、通常のＣ５７／Ｂ１６マウスの２倍の体重となる。肥満マウスはまた、熱発生の減少、食欲亢進、減退した繁殖力、および成長ホルモンの抑制２を含む他の代謝性欠損を示す。Ｏｂ／ｏｂマウスにおける創傷治癒の顕著な遅延は糖尿病様表現型に帰属している。創傷治癒障害モデルは、創傷修復における特定のサイトカインおよび成長因子の有効性を探索することを可能にする。新規タンパク質ＭＰＡ１３１Ａ−長がｏｂ／ｏｂ創傷修復モデルにおける局所および全身送達の両方によって創傷閉塞を促進することが示された。
【００８５】
局所送達の実験設計
創傷修復におけるＭＰＡ１３１Ａ−長または陽性対照タンパク質すなわちｍ−ＧＭ−ＣＳＦの局所送達の有効性を調べるために、１０週齢ないし１４週齢のｏｂ／ｏｂ雌マウスをケタミン（９０ｍｇ／ｋｇ）／キシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）混合物を用いて麻酔にかけた。マウスの背中の上部を剃り、アルコールとベタジン（Ｂｅｔａｄｉｎｅ）の代替ワイプを用いて滅菌フィールドを作成した。滅菌済み生検パンチを用いて直径６ｍｍの全層円形切除創傷を作成し、マウスあたり２つの創傷を作成した。局所送達では、ＭＰＡ１３１Ａ−長、ＨＰＡ１３１．１、マウスＧＭ−ＣＳＦまたは対照の空ウイルスをコードするアデノウイルス（１ｘ１０１０ウイルス粒子／創傷）を直接創傷部位に適用した。生理食塩水の対照も直接創傷に適用した。次にポロクサマー（１０％ＰＢＳ中のＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１２７）を創傷に塗布し、続いて透明な無菌包帯剤で覆った。創傷閉塞の速度を調べるために、創傷の状況を２日間隔で透明なフィルム上で追跡した。全創傷が治癒した研究終了時に、透明フィルムを必要に応じてスキャンし、表面の領域をＳｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅソフトウエア（米国、メリーランド州、フレデリックのＳｃｉｏｎ社）を用いて調べた。
【００８６】
全身送達の実験設計
ＭＰＡ１３１Ａ−長−Ｆｃ（配列番号１２）の全身送達の有効性を調べるために、１０週齢ないし１４週齢のｏｂ／ｏｂ雌マウスをケタミン（９０ｍｇ／ｋｇ）／キシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）混合物を用いて麻酔にかけた。創傷処置２時間前に、マウスに複数種類の濃度の１３１−長−Ｆｃタンパク質（０．１μｇ／０．５ｍｌないし１００μｇ／０．５ｍｌ）またはビヒクル（カルシウムとマグネシウムを含まないＰＢＳ）の腹腔内注射を施した。マウスの背中の上部を剃り、アルコールとベタジン（Ｂｅｔａｄｉｎｅ）の代替ワイプを用いて滅菌フィールドを作成した。滅菌済み生検パンチを用いて直径６ｍｍの全層円形切除創傷を作成し、マウスあたり２つの創傷を作った。生理食塩水を創傷に直接適用し、次に透明な滅菌包帯剤で覆った。創傷閉塞の速度を調べるために、創傷の状況を２日間隔で透明なフィルム上で追跡した。全創傷が治癒した研究終了時に、透明フィルムを必要に応じてスキャンし、表面の領域をＳｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅソフトウエア（米国メリーランド州、フレデリックのＳｃｉｏｎ社）を用いて調べた。全身性研究の継続期間を通してマウス体重の増減をモニターした。（図１に記載される実験において、Ａｄ．ＭＰＡ１３１Ａ−長を前段で記載されるように局所的に、あるいは創傷処置２時間前の静脈内注射によって全身的に投与した。）
【００８７】
１．）Ｓｔａｌｌｍｅｙｅｒ，Ｂ．ら（２００１）．Ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ  ａｎｄ  ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ  ｌｅｐｔｉｎ  ｆａｉｌｓ  ｔｏ  ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｓｋｉｎ  ｒｅｐａｉｒ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｏｂ／ｏｂ  ｍｉｃｅ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ４４：４７１−４７９．
【００８８】
２．）Ｒｉｎｇ，Ｂ．Ｄ．ら（２０００）．Ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ  ａｎｄ  Ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  Ｌｅｐｔｉｎ  Ｂｏｔｈ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｏｂ／ｏｂ  Ｍｉｃｅ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４１（１）：４４６−４４９．
【００８９】
配列番号１（ＭＰＡ１３１Ａポリヌクレオチド）
【表１】
2008538078.tif 000002
【００９０】
配列番号２（ＭＰＡ１３１Ａポリペプチド）
【表２】
2008538078.tif 000003
【００９１】
配列番号３（ＭＰＡ１３１Ｂポリヌクレオチド）
【表３】
2008538078.tif 000004
【００９２】
配列番号４（ＭＰＡ１３１Ｂポリペプチド）
【表４】
2008538078.tif 000005
【００９３】
配列番号５（ＭＰＡ１３１Ａ−長ポリヌクレオチド）
【表５】
2008538078.tif 000006
【００９４】
配列番号６（ＭＰＡ１３１Ａ−長ポリペプチド）
【表６】
2008538078.tif 000007
【００９５】
配列番号７（ＨＰＡ１３１．１）
【表７】
2008538078.tif 000008
【００９６】
配列番号８（ＨＰＡ１３１．１ポリペプチド）
【表８】
2008538078.tif 000009
【００９７】
配列番号９（ＨＰＡ１３１．２ポリヌクレオチド）
【表９】
2008538078.tif 000010
【００９８】
配列番号１０（ＨＰＡ１３１．２ポリペプチド）
【表１０】
2008538078.tif 000011
【００９９】
配列番号１１（ＭＰＡ１３１Ａ−長Ｆｃ−融合ポリヌクレオチド）
【表１１】
2008538078.tif 000012
【０１００】
配列番号１２（ＭＰＡ１３１Ａ−長Ｆｃ融合ポリペプチド）
【表１２】
2008538078.tif 000013
【０１０１】
配列番号１３
【表１３】
2008538078.tif 000014
【０１０２】
配列番号１４（ＨＰＡ１３１．１−ＩｇＧ１Ｆｃ−融合ポリヌクレオチド）
【表１４】
2008538078.tif 000015
【０１０３】
配列番号１５（ＨＰＡ１３１．１−ＩｇＧ１Ｆｃ−融合ポリペプチド）
【表１５】
2008538078.tif 000016
【０１０４】
配列番号１６（ＨＰＡ１３１．２−ＩｇＧ１Ｆｃ−融合ポリヌクレオチド）
【表１６】
2008538078.tif 000017
【０１０５】
配列番号１７（ＨＰＡ１３１．２−ＩｇＧ１Ｆｃ−融合ポリペプチド）
【表１７】
2008538078.tif 000018
【０１０６】
配列番号１８（ＨＰＡ１３１．２−短ポリヌクレオチド）
【表１８】
2008538078.tif 000019
【０１０７】
配列番号１９（ＨＰＡ１３１．２−短ポリペプチド）
【表１９】
2008538078.tif 000020
【０１０８】
配列番号２０（ＨＰＡ１３１．１−短ポリヌクレオチド）
【表２０】
2008538078.tif 000021
【０１０９】
配列番号２１（ＨＰＡ１３１．１−短ポリペプチド）
【表２１】
2008538078.tif 000022
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】Ａｄ．ＭＰＡ１３１Ａ−長（配列番号５）は局所および全身投与によって創傷閉塞を増進した。
【図２】ＨＰＡ１３１．１または別名ＨＰＡ１３１．Ｔ１−８（配列番号７）をコードするアデノウイルスの局所投与。
【図３】ＭＰＡ１３１Ａ長−Ｆｃ（配列番号１２）はｏｂ／ｏｂの創傷修復における創傷治癒を促進した。ＭＰＡ１３１Ａ長−Ｆｃは毎日の腹腔内投与を介して局所的に投与された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年11月20日(2007.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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