(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）2008513364.tif 000055  ただし、Ｒ３は、Ｈ、メチル、及びヒドロキシアルキルからなる群より選択され、さらに、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、置換基としてｎ個のＲ１及びｍ個のＲ２を有する置換されたまたは非置換のフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジジニル、キノリニル、イソ−キノリニル、クマリニル、インドリル、チアゾリル及びチオフェニル基からなる群より選択され、Ｒ１およびＲ２は、同じであってもあるいは互いに異なるものであってもよく、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、−ＣＯ２Ｒ４、−ＣＯＮＨＲ４、−ＣＲ４Ｏ、−ＳＯ２Ｒ４、−ＮＲ４−ＣＯ−Ｒ４、アルコキシ、アルキルチオ、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ２、ヒドロキシアルキルアミン、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール、ヘテロアリールおよびスルホンアミドからなる群より選択され、この際、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１からＣ６の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−シクロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール及びヘテロアリールからなる群より選択され、さらに、ｎおよびｍは、それぞれ、Ｚ１およびＺ２中の置換基Ｒ１及びＲ２の数であり、０〜５であり、この際、ｎおよびｍが２以上の整数である場合には、Ｒ１および／またはＲ２は、縮合芳香族環系または炭素環系または複素環系を形成してもよい、を有する化合物、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグに関する。
2008513364.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式Ｉ
【化１】
2008513364.tif 000051
ただし、Ｒ３は、Ｈ、メチル、及びヒドロキシアルキルからなる群より選択され、
さらに、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、置換基としてｎ個のＲ１及びｍ個のＲ２を有する置換されたまたは非置換のフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジジニル、キノリニル、イソ−キノリニル、クマリニル、インドリル、チアゾリル及びチオフェニル基からなる群より選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもあるいは互いに異なるものであってもよく、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、−ＣＯ２Ｒ４、−ＣＯＮＨＲ４、−ＣＲ４Ｏ、−ＳＯ２Ｒ４、−ＮＲ４−ＣＯ−Ｒ４、アルコキシ、アルキルチオ、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ２、ヒドロキシアルキルアミン、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール、ヘテロアリールおよびスルホンアミドからなる群より選択され、
この際、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１からＣ６の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−シクロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール及びヘテロアリールからなる群より選択され、
さらに、ｎおよびｍは、それぞれ、Ｚ１およびＺ２中の置換基Ｒ１及びＲ２の数であり、０〜５であり、
この際、ｎおよびｍが２以上の整数である場合には、Ｒ１および／またはＲ２は、縮合芳香族環系または炭素環系または複素環系を形成してもよい、
のヒドラゾン誘導体、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグであって、
この際、下記化合物は、
【化２】
2008513364.tif 000052
式Ｉに含まれない、ヒドラゾン誘導体、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｚ１は、少なくとも２個のハロゲン原子及び１個のヒドロキシル基で置換される置換されたフェニル基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｚ１は、少なくとも１個の置換されたもしくは非置換のアリール環もしくはヘテロアリール環または１もしくは２個のｔｅｒｔ−ブチル基を有する置換されたフェニル基であることを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｚ２は、好ましくはエーテル結合を介してフェニル基に結合するベンジル基で置換されるフェニル基であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚ２は、置換されたもしくは非置換のシクロアルキル基または２置換されたアミノ基を有するピリミジル環であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
エーテル結合を介してフェニル基に結合するベンジル基は、置換されたまたは非置換のベンジルオキシ基であることを特徴とする、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
ヒドロキシル基は、ヒドラゾンモチーフの結合位置に対してｏ−位にあることを特徴とする、請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
化合物は、下記式：
【化３】
2008513364.tif 000053
の一を有することを特徴とする、請求項１〜３及び７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
下記式：
【化４】
2008513364.tif 000054
の化合物。
【請求項１０】
Ｚ２は、置換されたもしくは非置換のフェニル、ピリジニルおよびピリミジニル基からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１、２、３及び７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
薬剤としての請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
β−セクレターゼにより仲介される症状または疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造を目的とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
アミロイド前駆体タンパク質ＡＰＰのβ−アミロイドペプチドの形成を阻害する薬剤組成物の製造を目的とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
アルツハイマー病、神経変性、記憶及び注意欠陥、細胞増殖の機能障害、またはβ−アミロイドペプチドの阻害に関連するもしくは当該阻害に応答する他の疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造を目的とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
アルツハイマー病、ダウン症、脳アミロイド血管症、オランダ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性大脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）およびβ−アミロイド沈着の特徴がある他の変性認知症からなる群より選択される症状または疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造を目的とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬上許容できる塩を含む薬剤組成物。
【請求項１７】
少なくとも一の製薬上許容できる担体、希釈剤または賦形剤をさらに含む、請求項１６に記載の薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なヒドラゾン誘導体およびこのようなヒドラゾン誘導体のβ−セクレターゼインヒビターとしての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、ヒトの認知症の非常に一般的な形態であり、特に記憶及び原語を制御する脳の部分に影響を与える。
【０００３】
ＡＤの発症は、「アミロイドプラーク」や「神経原線維のもつれ」とも称される、脳のタンパク質クラスターと関連がある。これらのタンパク質クラスターは、β−アミロイド前駆体タンパク質（β−ＡＰＰ）を含む。β−ＡＰＰは、β−アミロイド変換酵素( beta-Amyloid Converting Enzyme)（ＢＡＣＥ、β−セクレターゼの名称でも知られている）で分解され、アミロイドプラークのこれらのクラスターの主成分であるβ−アミロイドペプチドを生産する。ＢＡＣＥの活性はＡＤの発病経路の初期段階であることが分かっている。
【０００４】
したがって、ＢＡＣＥの阻害剤として機能し、ゆえにＡＤの処置に治療を目的として有用である新規な化合物を提供することが本発明の目的である。
【発明の開示】
【０００５】
この目的は、一般式Ｉ
【０００６】
【化１】
2008513364.tif 000003
【０００７】
ただし、Ｒ３は、Ｈ、メチル、及びヒドロキシアルキルからなる群より選択され、
さらに、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、置換基としてｎ個のＲ１及びｍ個のＲ２を有する置換されたまたは非置換のフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジジニル、キノリニル、イソ−キノリニル、クマリニル、インドリル、チアゾリル及びチオフェニル基からなる群より選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じであってもあるいは互いに異なるものであってもよく、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、−ＣＯ２Ｒ４、−ＣＯＮＨＲ４、−ＣＲ４Ｏ、−ＳＯ２Ｒ４、−ＮＲ４−ＣＯ−Ｒ４、アルコキシ、アルキルチオ、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ２、ヒドロキシアルキルアミン、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール、ヘテロアリールおよびスルホンアミドからなる群より選択され、
この際、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１からＣ６の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−シクロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール及びヘテロアリールからなる群より選択され、
さらに、ｎおよびｍは、それぞれ、Ｚ１およびＺ２中の置換基Ｒ１及びＲ２の数であり、０〜５であり、
この際、ｎおよびｍが２以上の整数である場合には、Ｒ１および／またはＲ２は、縮合芳香族環系または炭素環系または複素環系を形成してもよい、
を有するβ−セクレターゼインヒビターとして作用するヒドラゾン誘導体、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグであって、
ただし、下記化合物は、
【０００８】
【化２】
2008513364.tif 000004
【０００９】
式Ｉに含まれない、
ヒドラゾン誘導体、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグを提供することによって解決される。
【００１０】
上記目的はさらに、一般式Ｉを有するβ−セクレターゼインヒビターとして作用するヒドラゾン誘導体、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグを提供することによって解決される。
【００１１】
【化３】
2008513364.tif 000005
【００１２】
ただし、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、置換基（Ｒ１）ｎ及び（Ｒ２）ｍを有する置換されたまたは非置換の環状及び非環式のアルキル、フェニル、ナフチル、ピリジニル、ピロリニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジジニル、キノリニル、イソキノリニル、クマリニル、インドリル、トリアジニル（１，２，４及び１，３，５−トリアジニルを含む）、イミダゾリル、チアゾリル、チオフェニル及びオキサゾリル基からなる群より選択され、
Ｚ１及びＺ２中の置換基、（Ｒ１）ｎ及び（Ｒ２）ｍ、の数は、０〜５であり、さらに
Ｒ１、Ｒ２は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、−ＣＯ２Ｒ４、−ＣＯＮＨＲ４、−ＣＲ４Ｏ、−ＳＯ２Ｒ４、−ＮＲ４−ＣＯ−Ｒ４、アルコキシ、アルキルチオ、−ＯＨ、−ＳＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ＣＮ、ＮＯ２、ヒドロキシアルキルアミン、アミノアルキル、アルキルアミン、アリールまたはヘテロアリール、スルホンおよびスルホンアミドからなる群より選択され、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、同一であってもまたは相互に異なるものであってもよく、
さらに、ｎ及びｍが２以上の整数である場合には、Ｒ１および／またはＲ２は、縮合芳香族または炭素環もしくは複素環系を形成してもよい、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１からＣ６の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、ヘテロアリール；ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１からＣ６の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−シクロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミン、アリールまたはヘテロアリールからなる群より選択され；
この際、下記化合物は、
【００１３】
【化４】
2008513364.tif 000006
【００１４】
式Ｉに含まれない。
【００１５】
上記目的はさらに、一般式Ｉを有するβ−セクレターゼインヒビターとして作用するヒドラゾン誘導体、またはこの塩、または生理学的に機能を有する誘導体、またはプロドラッグを提供することによって解決される。
【００１６】
【化５】
2008513364.tif 000007
【００１７】
ただし、Ｒ３は、Ｈ、メチルおよびヒドロキシアルキルからなる群より選択され、
さらに、Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、置換基としてｎ個のＲ１及びｍ個のＲ２を有する置換されたまたは非置換のフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジジニル、キノリニル、イソキノリニル、クマリニル、インドリル、チアゾリル及びチオフェニル基からなる群より選択され、
この際、Ｒ１およびＲ２は、同一であってもまたは相互に異なるものであってもよいが、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、−ＣＯ２Ｒ４、−ＣＯＮＨＲ４、−ＣＲ４Ｏ、−ＳＯ２Ｒ４、−ＮＲ４−ＣＯ−Ｒ４、アルコキシ、アルキルチオ、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−アルキル−アリール、−Ｓ−アリール、−Ｓ−シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＣＮ、−ＮＯ２、ヒドロキシアルキルアミン、アミノアルキル、アルキルアミン、アリール、ヘテロアリールおよびスルホンアミドからなる群より選択され、
この際、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１からＣ６の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−シクロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミン、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、
この際、ｎおよびｍは、それぞれ、Ｚ１およびＺ２中の置換基Ｒ１およびＲ２の数であり、０〜５の範囲であり、
ｎ及びｍが２以上の整数である場合には、Ｒ１および／またはＲ２は、縮合芳香族または炭素環もしくは複素環系を形成してもよい、
ただし、下記化合物は、
【００１８】
【化６】
2008513364.tif 000008
【００１９】
式Ｉに含まれない。
【００２０】
一般式Ｉは、対応する異性体、即ち、このＥおよびＺ型を含むと解される。
【００２１】
このような塩の例としては、例えば、アルカリ金属塩、特にナトリウム及びカリウム塩、またはアンモニウム塩があるが、これらに限定されない。
【００２２】
本発明に係る化合物は、ＲまたはＳ配置の一以上の不斉炭素を含んでもよい、ゆえに、化合物は、ラセミ体またはラセミ混合物、純粋なエナンチオマー、ジアステレオマー混合物などとして存在してもよいと解される。
【００２３】
好ましい実施形態においては、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１からＣ４の分岐鎖のまたは分岐しないアルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、ヘテロシクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−アリール、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−シクロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミン、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択される。
【００２４】
他の好ましい実施形態においては、Ｚ１は、置換フェニル基であり、この際、さらにより好ましい実施形態においては、当該置換フェニルは、例示番号３、１８、１９、２０、２１、２３〜２６、２８〜３１、３３、３５、３９、４０、４６、４７、５５、５７〜６０、６３、６６〜６８、７５〜７７、８６〜８８、９１〜９６、９８、１００〜１０４、１０８、１１１、１１３、１１４、１１８および１１９のような、少なくとも１個のハロゲン原子または少なくとも１個のヒドロキシル基で置換される。
【００２５】
本発明のさらに好ましい実施形態においては、Ｚ１は、少なくとも２個のハロゲン原子及び１個のヒドロキシル基で置換される置換フェニルであり、本発明の他の好ましい実施形態においては、ヒドロキシル基は、ヒドラゾンモチーフの結合位置に対してｏ−位にある。
【００２６】
さらに、本発明の好ましい実施形態においては、Ｚ１は、少なくとも１個の置換されたもしくは非置換のアリール環もしくはヘテロアリール環または１もしくは２個のｔｅｒｔ−ブチル基を有する置換されたフェニル基である。
【００２７】
他の好ましい実施形態においては、フェニル基（Ｚ１）は、フェニル基（Ｚ１）に直接またはエーテル結合を介して連結した他のフェニルまたはヘテロアリール基で置換される。さらに好ましい実施形態においては、フェニル基は、縮合環系の一部である。
【００２８】
好ましい実施形態においては、Ｚ１は、置換されたフェニル基であり、ここで、さらにより好ましい実施形態においては、置換されたフェニル基は、少なくとも１個のハロゲン原子または少なくとも１個のヒドロキシ基で置換される。
【００２９】
さらに、本発明の他の好ましい実施形態においては、Ｚ１は、同一であってもまたは相互に異なるものであってもよい２または３個の置換基を有し、優先的には、１個の置換基がヒドラゾンモチーフの結合位置に対してｏ−位にある。
【００３０】
他の好ましい実施形態においては、Ｚ２は、置換されたまたは非置換のフェニル、ピリジニル及びピリミジニル基からなる群より選択される。
【００３１】
さらなる好ましい実施形態においては、Ｚ２は、例示番号４〜６、１８〜２１及び６５のような、エーテル結合を介してフェニル基に結合するベンジル基で置換されることが好ましいフェニル基である。
【００３２】
さらに、本発明の好ましい実施形態においては、エーテル結合を介してフェニル基に連結するベンジル基は、置換されたまたは非置換のベンジルオキシ基である。
【００３３】
さらなる好ましい実施形態においては、Ｚ２は、例示番号３、３１、７４、７６〜８４、８６〜１０２、１０５〜１１０及び１１２のような、置換されたもしくは非置換のシクロアルキル基または２置換されたアミノ基を有するピリミジル環である。
【００３４】
さらなる好ましい実施形態においては、Ｚ２は、例示番号１１４〜１１８のような、トリフルオロメチル基を有するピリジル環である。
【００３５】
さらに、他の好ましい実施形態においては、Ｚ２は、非置換のフェニル基である。
【００３６】
他の好ましい実施形態においては、Ｚ２は、少なくとも１個のハロゲン置換基を有するフェニル基である。
【００３７】
本発明のさらなる好ましい実施形態においては、Ｚ２は、同一であってもまたは相互に異なるものであってもよい、少なくとも２個のハロゲン置換基を有するフェニル基である。
【００３８】
本発明の他の好ましい実施形態においては、Ｚ２は、メチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、カルボキシルまたはエーテル基からなる群より選択される少なくとも１個の置換基を有するフェニル基であり、さらにより好ましい実施形態においては、置換されたまたは非置換のベンジルオキシ基である。
【００３９】
他の好ましい実施形態においては、Ｚ２中の１個の置換基は、ヒドラゾンモチーフの結合位置に対してｏ−位にある。
【００４０】
さらに、さらなる好ましい実施形態においては、当該化合物は下記式の一を有する。
【００４１】
【化７】
2008513364.tif 000009
【００４２】
本発明は、さらに下記式の化合物に関する。
【００４３】
【化８】
2008513364.tif 000010
【００４４】
他の好ましい化合物は、表１に挙げられるものである。
【００４５】
他の好ましい化合物は、表２に挙げられるものである。
【００４６】
本発明はさらに、薬剤としての本発明に係る化合物の使用に関するものである。
【００４７】
本発明はさらに、β−セクレターゼにより仲介される症状または疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造を目的とする本発明に係る化合物の使用に関するものである。本発明に係る化合物は、薬剤として、特にβ−セクレターゼインヒビターとして有用である。β−セクレターゼは、非常に効果的に阻害され、また、本発明に係る化合物は、１２０μＭ未満、より好ましくは１００μＭ未満、さらにより好ましくは５０μＭ未満、および最も好ましくは２０μＭ未満のＩＣ５０値を有する。最も強力な本発明に係る化合物は、例えば、化合物番号６０、６１、７４〜８１のような、１０μＭ未満、より好ましくは８μＭ未満、および最も好ましくは６μＭ未満のＩＣ５０値を有する。
【００４８】
本発明はさらに、アミロイド前駆体タンパク質ＡＰＰのβ−アミロイドペプチドの形成を阻害する薬剤組成物の製造を目的とする本発明に係る化合物の使用に関するものである。本発明に係る化合物は、アミロイド前駆体タンパク質ＡＰＰのβ−アミロイドペプチドの形成の阻害によく適する。したがって、本発明に係る化合物は、アルツハイマー病、ダウン症、脳アミロイド血管症、オランダ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性大脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）および他の変性認知症のようなβ−アミロイドペプチドの形成による症状または疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造に適する。
【００４９】
本発明はさらに、アルツハイマー病、神経変性、記憶及び注意欠陥、細胞増殖の機能障害、またはβ−アミロイドペプチドの阻害に関連するもしくは当該阻害に応答する他の疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造を目的とする本発明に係る化合物の使用に関するものである。
【００５０】
本発明はさらに、アルツハイマー病、ダウン症、脳アミロイド血管症、オランダ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性大脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）およびβ−アミロイド沈着の特徴を有する他の変性認知症からなる群より選択される症状または疾患の治療または予防用の薬剤組成物の製造を目的とする本発明に係る化合物の使用に関するものである。
【００５１】
本発明はさらに、本発明に係る化合物またはその製薬上許容できる塩を含む薬剤組成物に関するものである。好ましい一実施形態においては、本薬剤組成物は、製薬上許容できる担体、希釈剤、および／または賦形剤を含む。
【００５２】
本発明に係る化合物は、単独であるいはその製薬上許容できる塩の形態で投与されてもよい。本発明に係る化合物またはその製薬上活性のある塩を含む薬剤組成物は、少なくとも一のその製薬上許容できる担体、希釈剤または賦形剤をさらに含んでもよい。特定の実施形態においてはまた、さらに活性のある化合物が本組成物内に含まれると解される。
【００５３】
本発明に係る化合物は、例えば、錠剤、ゲル、カプセル、パッチ、軟膏、クリームの形態で、局所、経口、経皮、非経口、舌下、鼻腔内、くも膜下、直腸、吸入または静脈内投与用に配合されてもよい。非経口デリバリーは、デポー、シリンジ、アンプルまたはバイアルによって運搬されてもよい。
【００５４】
したがって、本発明の化合物は、公知のアジュバント、担体、または希釈剤と共に、薬剤組成物およびその単位剤形中に仕込まれてもよく、また、このような形態で、固体、液体としてまたは滅菌注射可能な溶液の形態で使用されてもよい。固体担体を使用する際には、製剤を錠剤化し、粉末もしくはペレットの形態で、またはトローチもしくはロゼンジの形態で硬質ゼラチンカプセルに仕込まれてもよい。固体担体は、結合剤、錠剤化滑剤、充填剤、崩壊剤、湿潤化剤などの公知の賦形剤を含んでもよい。錠剤は、公知の技術によってフィルムコートされてもよい。液状担体を使用する際には、製剤は、シロップ、エマルジョン、軟質ゼラチンカプセル、注射用の滅菌ベヒクル、水性もしくは非水性液の懸濁液の形態を有していても、または使用する前に水もしくは他の適当なベヒクルで再構成する乾燥製品であってもよい。液状製剤は、懸濁化剤、乳化剤、湿潤化剤、非水性ベヒクル（食用油を含む）、保存剤、さらには芳香および／または着色剤などの公知の添加剤を含んでもよい。非経口投与用では、ベヒクルは、生理食塩水、グルコース溶液などが使用されてもよいものの、通常、少なくとも大部分において、滅菌水を含むであろう。注射可能な懸濁液を使用してもよく、この場合には、公知の懸濁化剤を使用してもよい。公知の保存剤、緩衝剤などもまた、非経口投薬形態に添加してもよい。しかしながら、投与はまた、例えば、坐剤の形態で経直腸的に行なわれても、または例えば、ペッサリー、タンポン、クリームの形態で経膣的に行なわれても、または例えば、軟膏、クリームもしくはチンキ剤の形態で経皮的に行なわれてもよい。
【００５５】
本明細書に記載されるいずれかの症状に罹っているあるいは罹る可能性のある哺乳動物、特にヒトに対する本発明に係る化合物または薬剤組成物の適当な投与量は、約０．１μｇ／ｋｇ（ＮＢ：例えば、ある種のホルモンなど、より低投与量でデリバリーされる化合部の例も数件ある）〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の量の活性成分である。非経口投与では、投与量は、静脈内投与で０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲でありうる。活性成分は、毎日、１〜４回、等量で投与されることが好ましいであろう。式（Ｉ）の化合物はまた、前駆体（プロドラッグ）の形態であるいはインビボで活性のある化合物を放出するように適当に修飾された形態で使用されてもよい。通常、投与量は、治療宿主での最適な有効投与量が決定されるまで、徐々に増やしていくであろう。最適な投与量は、治療される症状、投与される化合物の選択、投与径路、個人の症状の重篤度に関する治療個人の性、年齢、体重及び特異的な応答に応じて、主治医または他の当業者により決定されるであろう。
【００５６】
薬剤組成物は、適当量の活性成分、即ち、本発明の化合物を含む所望の製剤に適する公知の技術によって調製される。このような薬剤組成物およびその単位投薬形態は、活性のある化合物もしくは成分を追加してまたは追加せずに、公知の割合で公知の成分を含んでもよく、このような単位投薬形態は、使用される所定の毎日の投与量範囲に見合った適当な有効量の活性のある成分を含んでもよい。
【００５７】
本発明の化合物は、ヒドラゾンの合成について当該分野において既知の方法によって調製される。式ＩＩのアルデヒドまたはケトンと式ＩＩＩの化合物との反応により、置換基Ｚ１、Ｚ２及びＲ３が前記したのと同様の定義である、本発明に係る一般的Ｉのヒドラゾン誘導体を得ることが特に好ましい。
【００５８】
【化９】
2008513364.tif 000011
【００５９】
一般式ＩＩＩのヒドラジンは、以下に制限されないが、好ましくは室温で、イオン交換樹脂触媒下で一般式ＩＩのアルデヒドまたはケトンと適当な条件下で反応させて、化合物Ｉを得た。
【００６０】
反応式の化合物Ｉ及びＩＩＩにおいて、Ｚ２は、好ましくは置換されたまたは非置換のフェニル、ピリジニル及びピリミジニル基からなる群より選択される。
【００６１】
化学物質について本明細書中で使用されることばは、以下のように定義される。
アルキル基は、特記しない限り、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくは直鎖もしくは分岐鎖のＣ１−Ｃ６  −原子、直鎖もしくは分岐鎖のＣ１−Ｃ６−アルケニルまたは直鎖もしくは分岐鎖のＣ１−Ｃ６−アルキニル基を意味し、これらは、必要であれば、一以上の置換基Ｒ３で置換されてもよく、この際、Ｒ３及びＲ４は上記したのと同様の定義である。Ｃ１−Ｃ６アルキルは、特にメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたは相当するアルケン及びアルキン類似体を意味する。好ましくは、アルキル基は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ４−アルキル、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ４−アルケニル基を意味し、これらは、必要であれば、一以上の置換基で置換されてもよく、置換基は、上記した残基Ｒ３またはＲ４と同様の定義である。Ｃ１−Ｃ４アルキルは、特にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルまたは相当するアルケン類似体を意味する。
【００６２】
Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルケニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキニル残基は、以下に制限されないが、下記基を含む。
【００６３】
−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ２Ｈ４−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡ＣＨ。
【００６４】
優先的に、Ｃ１−Ｃ４−アルキル及びＣ１−Ｃ４−アルケニル残基は、以下に制限されないが、下記基を含みうる。
【００６５】
−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ３Ｈ７、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ４Ｈ９、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）３。
【００６６】
シクロアルキル基は、３〜８炭素原子、好ましくは４〜７炭素原子を含む非芳香族環系を意味し、この際、環中の一以上の炭素原子は基Ｘで置換されてもよく、ここで、Ｘは、Ｎ、Ｓ、Ｏ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ４及びＣＯからなる群より選択される；Ｃ４−Ｃ７−シクロアルキル残基は、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１、−シクロ−Ｃ７Ｈ１３からなる群より選択されてもよく、シクロアルキル基は、必要であれば、一以上の置換基Ｒ３で置換されてもよく、この際、Ｒ３及びＲ４は上記したのと同様の定義である。優先的に、シクロアルキル基は、３〜６炭素原子を含む非芳香族環系を意味し、この際、環中の一以上の炭素原子は基Ｘで置換されてもよく、ここで、Ｘは、Ｎ、Ｓ、Ｏ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ４及びＣＯからなる群より選択される；Ｃ４−Ｃ７−シクロアルキル残基は、−シクロ−Ｃ３Ｈ５、−シクロ−Ｃ４Ｈ７、−シクロ−Ｃ５Ｈ９、−シクロ−Ｃ６Ｈ１１からなる群より選択され、シクロアルキル基は、必要であれば、一以上の置換基で置換されてもよく、置換基は、前記した残基Ｒ３および／またはＲ４と同様の定義である。
【００６７】
アルコキシ基は、Ｏ−アルキル基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である；アルコキシ基は、好ましくは、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ基またはペントキシ基である。
【００６８】
ハロアルキル基は、１〜５個のハロゲン原子で置換されたアルキル基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である；ハロアルキル基は、好ましくは、−Ｃ（Ｒ５）３、−ＣＲ５（Ｒ５）２、−ＣＲ５（Ｒ５）Ｒ５、−Ｃ２（Ｒ５）５、−ＣＨ２−Ｃ（Ｒ５）３、−ＣＨ２−ＣＲ５（Ｒ５）２、−ＣＨ２−ＣＲ５（Ｒ５）Ｒ５、−Ｃ３（Ｒ５）７または−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（Ｒ５）３であり、ここで、Ｒ５は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表わし、好ましくはＦまたはＣｌであり、また、Ｒ５は、同一であってもあるいは異なるものであってもよい。優先的に、ハロアルキル基は、１〜３個のハロゲン原子で置換されたアルキル基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である；ハロアルキル基は、好ましくは−Ｃ（Ｒ５）３、−ＣＨ（Ｒ５）２、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）２、−ＣＨ２−Ｃ（Ｒ５）３、−Ｃ２Ｈ４−ＣＨ（Ｒ５）２または−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（Ｒ５）３であり、ここで、Ｒ５は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表わし、好ましくはＦまたはＣｌであり、また、Ｒ５は、同一であってもあるいは相互に異なるものであってもよい。
【００６９】
ヒドロキシアルキル基は、ＨＯ−アルキル基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である。
【００７０】
ハロアルキルオキシ基は、１〜５個のハロゲン原子で置換されたアルコキシ基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である；ハロアルキルオキシ基は、好ましくは、−ＯＣ（Ｒ５）３、−ＯＣＲ５（Ｒ５）２、−ＯＣＲ５（Ｒ５）Ｒ５、−ＯＣ２（Ｒ５）５、−ＯＣＨ２−Ｃ（Ｒ５）３、−ＯＣＨ２−ＣＲ５（Ｒ５）２、−ＯＣＨ２−ＣＲ５（Ｒ５）Ｒ５、−ＯＣ３（Ｒ５）７または−ＯＣ２Ｈ４−Ｃ（Ｒ５）３であり、ここで、Ｒ５は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表わし、好ましくはＦまたはＣｌであり、また、Ｒ５は、同一であってもあるいは異なるものであってもよい。優先的に、ハロアルコキシ基は、１〜３個のハロゲン原子で置換されたアルコキシ基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である；ハロアルキルオキシ基は、好ましくは、−ＯＣ（Ｒ５）３、−ＯＣＨ２−Ｃ（Ｒ５）３、−ＯＣ２Ｈ４−Ｃ（Ｒ５）３であり、ここで、Ｒ５は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表わし、また、Ｒ５は、同一であってもあるいは相互に異なるものであってもよい。
【００７１】
ヒドロキシアルキルアミノ基は、（ＨＯ−アルキル）２−Ｎ−基またはＨＯ−アルキル−ＮＨ−基を意味し、アルキル基は上記したのと同様の定義である。優先的に、ヒドロキシアルキルアミノ基は、（ＯＨ−アルキル）２−Ｎ−基、ＨＯ−アルキル−ＮＨ−基またはＨＯ−アルキル−ＮＲ４−基を意味し、アルキル基およびＲ４基は上記したのと同様の定義である。
【００７２】
ハロゲン基は、塩素、臭素、フッ素またはヨウ素を意味する。
【００７３】
アリール基は、好ましくは５〜１０個の炭素原子および／またはへテロ原子を有する芳香族基を意味し、必要であれば、一以上の置換基で置換されてもよく、この際、Ｒ１及びＲ２は上記と同様の定義である。優先的に、アリール基は、５〜６個の炭素原子および／またはへテロ原子を有する芳香族基を意味し、必要であれば、一以上の置換基で置換されてもよく、置換基は、前記した残基Ｒ１および／またはＲ２と同様の定義である。
【００７４】
ヘテロアリール基は、Ｏ、Ｎ、Ｓのような少なくとも一のヘテロ原子を含む５−または６−員の複素環基である。この複素環基は、他の環に融合していてもよい。例えば、この基は、オキサゾール−２−イル、オキサゾール−４−イル、オキサゾール−５−イル、チアゾール−２−イル、チアゾール−４−イル、チアゾール−５−イル、イソチアゾール−３−イル、イソチアゾール−４−イル、イソチアゾール−５−イル、１，２，４−オキサジアゾール−３−イル、１，２，４−オキサジアゾール−５−イル、１，２，４−チアジアゾール−３−イル、１，２，４−チアジアゾール−５−イル、１，２，５−オキサジアゾール−３−イル、１，２，５−チアジアゾール−３−イル、１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、２−ピラジニル、１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル、インドリル、インドリニル、ベンゾ−［ｂ］−フラニル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、キナゾリニル、キノキサゾリニル、インドリジン−イル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソオキサゾール−３−イル、イソオキサゾール−４−イル、イソオキサゾール−５−イル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、フタラジニル、１，８−ナフチリジニル、プテリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、インデニル、クマリニル、ナフタリニル、フルオレニル、アンタセニル基から選択されうる。この複素環基は、必要であれば一以上の置換基Ｒ１またはＲ２で置換されてもよく、置換基は上記と同様の定義である。
【００７５】
優先的に、ヘテロアリール基は、Ｏ、Ｎ、Ｓのような少なくとも一のヘテロ原子を含む５−または６−員の複素環基であり、チアゾール−２−イル、チアゾール−４−イル、チアゾール−５−イル、１，２，４−チアジアゾール−３−イル、１，２，４−チアジアゾール−５−イル、１，２，５−チアジアゾール−３−イル、１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、２−フラニル、３−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、２−ピラジニル、１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、キナゾリニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、キノリニル、イソキノリニル、フタラジニル、１，８−ナフチリジニル、クマリニル及びナフタリニル基からなる群より選択される。この複素環基は、必要であれば、一以上の置換基で置換されてもよく、置換基は、上記した残基Ｒ１および／またはＲ２と同様の定義である。
【００７６】
本発明をさらに実施例によって説明するが、実施例は単に詳細に説明するものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００７７】
実施例
実施例１：式Ｉの化合物の調製を目的とする一般的な合成方法
テトラヒドロフラン（４ｍｌ）における式ＩＩＩのヒドラジン化合物（〜１００ｍｇ）、式ＩＩのアルデヒド（１当量）、約１００ｍｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  １５イオン交換樹脂およびモレキュラーシーブを、Ｇ−１２フラスコに入れた。この反応混合物を４時間還流しながら加熱した。ＴＬＣ分析（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１／１）から、すべてのヒドラジンが反応したことが示された。この反応混合物を濾過して、溶液を小容積（約０．５ｍＬ）になるまで濃縮した。得られた残渣をメタノール（約１．５ｍＬ）に懸濁し、超音波処理し、遠心し、さらにデカンテーションした。この方法を２回繰り返した。形成した白−黄色っぽい固体を減圧乾燥した。
【００７８】
この方法は、本発明に係る一般式Ｉのすべての化合物に適用可能である。しかしながら、他の合成径路が排除されるものではなく。当業者の知見に含まれる。
【００７９】
特定の化合物を下記表１に示す。
【００８０】
さらなる特定の化合物を下記表２に示す。
【００８１】
質量は、質量分析によって測定した。表１及び２の化合物は、５０μＭ未満のインビトロ活性を示す。インビトロ活性は、実施例２に記載されるのと同様にして測定した。
【００８２】
【表１−１】
2008513364.tif 000012
【００８３】
【表１−２】
2008513364.tif 000013
【００８４】
【表１−３】
2008513364.tif 000014
【００８５】
【表１−４】
2008513364.tif 000015
【００８６】
【表１−５】
2008513364.tif 000016
【００８７】
【表１−６】
2008513364.tif 000017
【００８８】
【表１−７】
2008513364.tif 000018
【００８９】
【表１−８】
2008513364.tif 000019
【００９０】
【表１−９】
2008513364.tif 000020
【００９１】
【表１−１０】
2008513364.tif 000021
【００９２】
【表１−１１】
2008513364.tif 000022
【００９３】
【表１−１２】
2008513364.tif 000023
【００９４】
【表１−１３】
2008513364.tif 000024
【００９５】
【表１−１４】
2008513364.tif 000025
【００９６】
【表１−１５】
2008513364.tif 000026
【００９７】
【表１−１６】
2008513364.tif 000027
【００９８】
【表１−１７】
2008513364.tif 000028
【００９９】
【表１−１８】
2008513364.tif 000029
【０１００】
【表２−１】
2008513364.tif 000030
【０１０１】
【表２−２】
2008513364.tif 000031
【０１０２】
【表２−３】
2008513364.tif 000032
【０１０３】
【表２−４】
2008513364.tif 000033
【０１０４】
【表２−５】
2008513364.tif 000034
【０１０５】
【表２−６】
2008513364.tif 000035
【０１０６】
【表２−７】
2008513364.tif 000036
【０１０７】
【表２−８】
2008513364.tif 000037
【０１０８】
【表２−９】
2008513364.tif 000038
【０１０９】
【表２−１０】
2008513364.tif 000039
【０１１０】
【表２−１１】
2008513364.tif 000040
【０１１１】
【表２−１２】
2008513364.tif 000041
【０１１２】
【表２−１３】
2008513364.tif 000042
【０１１３】
【表２−１４】
2008513364.tif 000043
【０１１４】
【表２−１５】
2008513364.tif 000044
【０１１５】
【表２−１６】
2008513364.tif 000045
【０１１６】
【表２−１７】
2008513364.tif 000046
【０１１７】
【表２−１８】
2008513364.tif 000047
【０１１８】
【表２−１９】
2008513364.tif 000048
【０１１９】
【表２−２０】
2008513364.tif 000049
【０１２０】
【表２−２１】
2008513364.tif 000050
【０１２１】
実施例２：β−セクレターゼ活性の阻害−ＦＲＥＴアッセイ
β−セクレターゼ切断部位でのＡＰＰ切断を決定するアッセイ法は当該分野において既知である。具体的なアッセイ法が、例えば、米国特許第５，７４４，３４６号及び第５，９４２，４００号に記載される。
【０１２２】
β−セクレターゼの阻害活性を試験するのに有用な一つのアッセイ法としては、ペプチド基質の切断をモニターする蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）技術に基づくものがある。５μｌ／ウェルの基質（０．１Ｍ  Ｎａ−Ａｃ  ｐＨ＝４．５において、０．２ｍＭ；Ｂａｃｈｅｍ  Ｎｏ．  Ｍ−２４７０）を、黒色の９６ウェルのプレートにピペットで入れ、暗所に貯蔵する。５μｌ／ウェルのインヒビター化合物を含むＤＭＳＯ（化合物の最終濃度：１ナノモル〜５００マイクロモル）を、９６ウェルの透明なＶ形状のプレートにピペットで入れ、７０μｌの０．１Ｍ  Ｎａ−Ａｃ  ｐＨ＝４．５及び２０μｌ  ｒｈＢＡＣＥ１（０．１Ｍ  Ｎａ−Ａｃ  ｐＨ＝４．５において、１０μｇ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｎｏ  ９３１−ＡＳ）を加えて、室温で１０分間、インキュベートする。次に、各ウェルの９４ｍｌを黒色プレートの基質に移して、反応を開始する。混合直後に、時間（Ｔ）＝０を、Ｗａｌｌａｃ１４２０プレートリーダーで測定する（励起  ３５５ｎｍ、発光  ４８６ｎｍ）。緩やかに振盪しながら３７℃で６０分間インキュベートした後、反応物を再度測定する。化合物を添加しないコントロールにおける酵素反応シグナルと比較した際、検出シグナル（ＩＣ５０）の５０％減少を示した化合物の濃度を算出することによって、相対的な化合物の阻害能を決定する。
【０１２３】
実施例３：β−セクレターゼ活性の阻害−細胞アッセイ
β−セクレターゼ活性の阻害の分析を目的とする具体的なアッセイ法としては、米国特許第５，６０４，１０２号に記載されるように、一般的にはスェーデン突然変異(Swedish mutation)と呼ばれ、Ａベータを過剰生産することが示される(Citron et al., 1992, Nature 360:672-674)、自然発生した２突然変異Ｌｙｓ６５１Ｍｅｔ６５２からＡｓｎ６５１Ｍｅｔ６５２（ＡＰＰ７５１に対する番号付け）を含むＡＰＰ７５１でトランスフェクトしたヒト胎児腎臓細胞系ＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ寄託Ｎｏ．  ＣＲＬ−１５７３）を用いるものがある。しかしながら、他の形質転換細胞系、例えば、ＣＨＯまたはＳＨ−ＳＹ５Ｙを、同様にして使用してもよい。
【０１２４】
所望の濃度、通常１００μＭ以下の濃度で、阻害化合物（ＤＭＳＯで希釈；ＤＭＳＯの最終濃度：０．０５％）の存在／不存在下で、細胞をインキュベートする。処理期間（２４時間）終了時に、馴化培地について、例えば、切断断片を分析することによって、β−セクレターゼ活性を分析する。Ａベータは、特異的な検出抗体（Ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ製の、ＨＳ４０  ＡＢｅｔａ  ｋｉｔ）を用いて、イムノアッセイによって分析できる。酵素活性は、ＡＰＰ基質のβ−セクレターゼが仲介する切断の特異的な阻害を示す化合物インヒビターの存在及び不存在下で測定される。化合物を添加しないコントロールにおけるＡベータ４０シグナルと比較した際、検出シグナル（ＩＣ５０）の５０％減少を示した化合物の濃度を算出することによって、相対的な化合物の阻害能を決定する。
【０１２５】
下記化合物は、５０μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０１２６】
Ｎ１、Ｎ８、Ｎ１０、Ｎ１３、Ｎ１５〜Ｎ２１、Ｎ２３〜Ｎ３０、Ｎ４０、Ｎ４３、Ｎ５８〜Ｎ６６、Ｎ６９〜Ｎ７０、Ｎ７６〜Ｎ８１、Ｎ８３〜Ｎ８８、Ｎ９０〜Ｎ９４、Ｎ９６、Ｎ９８〜Ｎ１００、Ｎ１０２、Ｎ１０８〜Ｎ１０９、Ｎ１１４、Ｎ１１９。
【０１２７】
実施例４：脳での化合物の測定
「ｗｔ」マウスと称される、Ｃ５７／ｂｌ６マウスを得た。これらのマウスをフェニルヒドラゾン番号２９で処置した。投薬は、腹腔内または経口のいずれかで投与した。経口投薬は、強制経口投与により投与した。腹腔内処置動物には、８日間まで、１回注射をした、または１日に１回もしくは２回投薬した。加えて、週齢が一致しているｗｔマウスの一群を、担体ベヒクルのみで処置した。
【０１２８】
最終投薬から０．５〜２４時間の間に、動物を剖検した。脳を取り除いて、−８０℃で貯蔵した。脳を２００ｍｇ片に切断し、８００μｌのアセトニトリル：水の溶液（８０：２０；ｖ：ｖ）を添加し、脳サンプルを２分間超音波処理した。サンプルを２分間ボルテックスにかけ、不溶性粒子を遠心によって除去した。サンプル中の化合物を、２５４または３６０ｎｍで高速液体クロマトグラフィーによって検出した。濃度を、内部標準物質を脳サンプルに添加することによって測定した。
【０１２９】
５５ｍｇ／ｋｇの投与量で１回腹腔内投与した後、化合物レベルは、３０分以内で脳中で検出可能になり、投与後少なくとも５時間このレベルを維持し、注射してから２．５時間でピークレベルを示す。３日間連続して同様の投与量で１日に１回マウスを処置すると、最後の注射から２４時間後の脳中で検出される化合物の量は、１回投与した後に測定されるピークレベルの２倍であった。化合物の同様のレベルが、８日間連続して１日２回処置した後に検出できたことから、脳内での化合物の蓄積について飽和効果が示された。
【０１３０】
１回経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）後、化合物は「ｗｔ」マウスの脳中で検出できたことから、化合物が経口で吸収されることが示される。
【０１３１】
実施例５：ＡＤの動物モデルにおけるβ−セクレターゼの阻害
様々な動物モデルが、β−セクレターゼ活性の阻害をスクリーニングするのに使用できる。本発明で使用できる動物モデルの例としては、以下に制限されるものではないが、マウス、モルモット、イヌなどが挙げられる。使用される動物は、野生型、形質転換、またはノックアウトモデルであってもよい。加えて、哺乳動物モデルは、本明細書に記載されるＡＰＰ６９５−ＳＷなどの、ＡＰＰで突然変異を発現するものであってもよい。形質転換非ヒト哺乳動物モデルの例が、Hsiao et al., 1996, Science 274, 99-102およびKawarabayshi et al., 2001, J Neuroscie 21, 372-381に記載される。
【０１３２】
例えば、Hsiao et al., 1996, Science 274, 99-102に記載されるようにして調製される、Ｔｇ２５７６マウスは、推定上の阻害化合物の存在下でＡベータ放出のインビボでの抑制を分析するのに使用できる。
【０１３３】
例えば、Chang et al., 2004, J. Neurochem. 89, 1409-1416に記載されるようにして、所定の投与形質に適する担体中に配合される一定量のＢＡＣＥインヒビターを形質転換動物に投与する。コントロール動物は、処置しない、ベヒクルで処置する、または不活性な化合物で処置する。投与は、急性、即ち、１日１回投与もしくは複数回投与であってもよい、または慢性、即ち、所定の日数の間毎日投薬を繰り返してもよい。時間０で始めて、脳組織、脳脊髄液または血液を所定の動物から得て、例えば、Ａベータ検出に特異的な抗体を用いたイムノアッセイによって、Ａベータなどの、ＡＰＰ切断ペプチドの存在について分析する。試験期間終了時に、動物を剖検し、脳組織、脳脊髄液または血液について、Ａベータおよび／またはβ−アミロイドプラークの存在を分析する。または、処置された形質転換動物（例えば、Ｔｇ２５７６マウス）について、例えば、Hsiao et al., 1996, Science 274, 99-102に記載されるようにしてＡＰＰで誘導される表現型の変化をモニターしてもよい。
【国際調査報告】
2008513364.tif 000056
2008513364.tif 000057
2008513364.tif 000058
2008513364.tif 000059