(57)【要約】高脂血症、肥満症、高インスリン血症および糖尿病を含む代謝障害の治療のためのＩＬ−２２の使用。ＩＬ−２２はまた、糖尿病に対してインスリンと組合せて使用してもよい。
2008526740.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
代謝障害に関連する病状を治療する方法であって、前記方法が、治療有効量のＩＬ−２２またはその機能的な誘導体を、それらを必要としている被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記病状が、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血糖症および高インスリン血症からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
治療有効量のインスリンまたはその機能的な誘導体を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＩＬ−２２が、治療的に適切な発現系によって提供および発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記発現系が、有効量のＩＬ−２２のインビボにおける合成を達成するように選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩＬ−２２が、ヒトＩＬ−２２またはマウスＩＬ−２２である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
被験体の体重を減少させる方法であって、前記方法は、前記被験体に有効量のＩＬ−２２を投与する工程を含む、方法。
【請求項８】
代謝障害の治療のための薬剤の製造のためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用。
【請求項９】
代謝障害の治療のための薬剤の製造のためのＩＬ−２２の使用。
【請求項１０】
前記代謝障害が、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血糖症および高インスリン血症からなる群から選択される状態を含む、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
体重の減少のための薬剤の製造のためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用。
【請求項１２】
体重の減少のための薬剤の製造のためのＩＬ−２２の使用。
【請求項１３】
血液グルコース障害の治療のためのＩＬ−２２とインスリンとの組合せの使用。
」
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
肥満症、糖尿病、高脂血症、高血糖症および高インスリン血症を含む代謝障害は、世界中の多くの人々を苦しめる複雑な症候群である。遺伝要因および環境要因ならびに生活習慣が、代謝障害に寄与してきたと考えられている。これらの代謝障害は、冠状心臓病の発症に大きく寄与する。肥満症および糖尿病などの代謝障害に対する有効な治療法は存在しない。組換えインスリンは、Ｉ型糖尿病を効果的に制御するために広く使用されている。しかし、ＩＩ型糖尿病については、組換えインスリンによる治療は、患者がインスリン抵抗性を発症しているので有効ではなかった。インスリン増感剤は、ＩＩ型糖尿病のために開発されている。高脂血症については、現在の治療は、主にコレステロール合成を阻害することによって患者のコレステロールレベルを減少させることまたは脂質吸収を阻害することに焦点があてられている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
発明の分野
本発明は、一般に治療薬および治療の方法に関する。特に、本発明は、肥満症、糖尿病、高脂血症および高インスリン血症などの代謝障害の治療薬および治療の方法に関する。
【０００３】
発明の概要
従って、肥満症、糖尿病およびそれに関連する健康状態などの栄養的な障害に関連する病状に対する代替の治療薬および治療の方法を提供することが本発明の目的である。
【０００４】
本発明は、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）が、過体重の哺乳動物に関連することが多い数多くの状態を調節するという本発明者らによる発見に基づく。従って、１つの態様において、本発明は、高脂血症を有する患者に薬学的に有効量のＩＬ−２２またはその機能的な誘導体を投与する工程を含む、高脂血症を治療するための方法を提供する。別の態様において、本発明は、高脂血症を治療するための薬剤を調製するためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用に関する。
【０００５】
本発明はまた、高血糖症を有する哺乳動物に薬学的に有効量のＩＬ−２２またはその機能的な誘導体を投与する工程を含む、哺乳動物における血清グルコースレベルを減少させるための方法を提供する。別の態様において、本発明は、高血糖症を治療するための薬剤を調製するためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用に関する。
【０００６】
本発明はまた、哺乳動物の血清トリグリセリドレベルを減少させるときのＩＬ−２２の使用および哺乳動物の血清トリグリセリドレベルを減少させるための薬剤を調製するときのＩＬ−２２の使用を提供する。別の態様において、本発明は、血清トリグリセリドレベルを調節するための薬剤を調製するためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用に関する。
【０００７】
別の態様において、本発明は、肥満患者に薬学的に有効量のＩＬ−２２を投与する工程を含む、肥満症を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明は、肥満症を治療するための薬剤を調製するためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用に関する。
【０００８】
本発明はまた、正常な体重よりも重い哺乳動物に薬学的に有効量のＩＬ−２２を投与する工程を含む、哺乳動物の体重を減量するための方法を提供する。本発明はまた、哺乳動
物の体重を減量するときのＩＬ−２２の使用および哺乳動物の体重を減量するための薬剤を調製するときのＩＬ−２２の使用を提供する。別の態様において、本発明は、体重を減量するための薬剤を調製するためのＩＬ−２２の使用に関する。
【０００９】
また別の態様において、本発明は、糖尿病を有する患者に有効量のＩＬ−２２を投与する工程を含む、糖尿病を治療するための方法を提供する。本発明はまた、哺乳動物に有効量のＩＬ−２２を投与する工程を含む、哺乳動物の耐糖能を改善するための方法を提供する。本発明はまた、哺乳動物の耐糖能を改善するときのＩＬ−２２の使用および哺乳動物のグルコース利用を改善するための薬物を調製するときのＩＬ−２２の使用を提供する。別の態様において、本発明は、血液グルコースレベルを調節するための薬剤を調製するためのＩＬ−２２またはその機能的な誘導体の使用に関する。
【００１０】
さらなる態様において、本発明は、上記の状態を治療するためのＩＬ−２２およびインスリンまたはそれらの各誘導体の組合せの使用に関する。
【００１１】
本発明におけるＩＬ−２２としては、ヒトＩＬ−２２、組換えヒトＩＬ−２２、マウスＩＬ−２２および／または組換えマウスＩＬ−２２が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
本明細書中で使用されるとき、用語「基本的に〜からなる」とは、本明細書中に記載される１つ以上の生物学的活性を維持する間の、カルボキシル末端および／またはアミノ末端における付加的なアミノ酸とともにＩＬ−２２のアミノ酸配列を含むポリペプチドのことをいう。
【００１３】
当業者は、以下に説明するようなアッセイを使用してペプチドまたはポリペプチドの活性を測定することによって前述の定義のもとでポリペプチドが、基本的にＩＬ−２２からなるか否かを容易に判断することができる。
【００１４】
好ましい実施形態において、用語「基本的に〜からなる」とは、ＩＬ−２２配列に加えて８個以下のアミノ酸を有するポリペプチドのことをいう。より好ましい実施形態において、この用語は、ＩＬ−２２に加えて６個以下のアミノ酸を意味する。なおもさらに好ましい実施形態において、同用語は、ＩＬ−２２に加えて４個以下のアミノ酸のことをいう。別の好ましい実施形態において、同用語は、ＩＬ−２２に加えて２または１個のアミノ酸のことをいう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
好ましい実施形態の詳細な説明
以下は、本発明の様々な態様を説明する実施例である。本明細書中に引用されるすべての参考文献は、それらの全体が本明細書中に援用される。
【００１６】
本明細書中で使用されるとき、用語「代謝障害」は、任意の種類の食餌摂取ならびに多様な環境要因および遺伝要因によって引き起こされ得るか、または悪化させられ得る人体の体内の不均衡が挙げられるがこれらに限定されない広範な意味として使用される。これらとしては、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血糖症および高インスリン血症などの病状が挙げられる。
【実施例】
【００１７】
実施例１
ヒトおよびマウスのＩＬ−２２遺伝子クローニング
ヒトＩＬ−２２遺伝子クローニングは、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒらによる最初のクローニン
グに関する論文，ＰＮＡＳ  ２０００，９７：１０１４４に記載されているのと同様の手順を使用し、この論文の全体が本明細書中に援用される。簡潔には、ヒト末梢血単核球を、抗ヒトＣＤ３ｍＡｂ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を使用または使用せずに２４時間培養した。全ＲＮＡを超遠心分離によって抽出し、ｃＤＮＡを、Ｍｏｌｏｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に記載されている方法に従ってプライマーであるｄＴを用いて合成した。配列番号１に示すような配列を有するヒトＩＬ−２２を、特異的プライマー対（５’−ＧＣＡＧＡＡＴＣＴＴＣＡＧＡＡＣＡＧＧＴＴＣ−３’（配列番号５）および５’−ＧＧＣＡＴＣＴＡＡＴＴＧＴＴＡＴＴＴＣＴＡＧ−３’（配列番号６））を用いたＰＣＲによって増幅した。増幅されたＤＮＡを、ｐＥＴ２１（＋）ベクターにクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉのＢＬ２１株において発現する。
【００１８】
マウスＩＬ−２２遺伝子クローニング：Ｃ５７ＢＬ／６の雌マウスにＬＰＳを注射した。その脾臓を２０時間後に入手した。全ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡをヒトＩＬ−２２クローニングにおいて説明した方法と同じ方法によってｄＴプライマーを介して合成した。マウスＩＬ−２２を、特異的プライマー対（５’−ＣＴＣＴＣＡＣＴＴＡＴＣＡＡＣＴＧＴＴＧＡＣ−３’（配列番号７）および５’−ＧＡＴＧＡＴＧＧＡＣＧＴＴＡＧＣＴＴＣＴＣＡＣ−３’（配列番号８））を用いたＰＣＲ増幅によって増幅した。増幅されたｃＤＮＡを、ｐＥＴ２１（＋）ベクターにクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉのＢＬ２１株において発現する。
【００１９】
ｈＩＬ−２２（ヒトＩＬ−２２）およびｍＩＬ−２２（マウスＩＬ−２２）の両方は、ＤＮＡ配列によって正確に確認される。マウスＩＬ−２２の配列を、配列番号２に示す。
【００２０】
実施例２
組換えヒトＩＬ−２２（ＲＨＩＬ−２２）および組換えマウスＩＬ−２２（ＲＭＩＬ−２２）タンパク質発現
組換えタンパク質の発現は、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒらによる最初のクローニングに関する論文，ＰＮＡＳ  ｖｏｌ：９７：ｐｌ０１４４，２０００に記載されているのと同じ方法を使用し、この論文の全体が、本明細書中に援用される。簡潔には、Ｅ．ｃｏｌｉのＢＬ２１（＋）株（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、発現宿主として使用した。宿主細胞を、アンピシリン（１００ｍｇ／ｍｌ）、クロラムフェニコール（３４ｍｇ／ｍｌ）およびグルコース２％を含むＬｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ培地中で培養した。タンパク質の発現を、１ｍＭイソプロピル−ｂ−Ｄ−チオガラクトシドを用いて誘導した。細胞ペレットを、ホモジナイザーを用いて破砕し、ＩＬ−２２封入体を、遠心分離によって得た。封入体を、ＴｒｉｓｚＨＣｌ  ５０ｍＭ、ＮａＣｌ  １００ｍＭ、ＥＤＴＡ  １ｍＭ、ＤＴＴ  １ｍＭおよびデオキシコール酸ナトリウム０．５％（ｗｔ／ｖｏｌ），ｐＨ８で洗浄した。
【００２１】
封入体を、８Ｍ尿素，５０ｍＭ，ＥＤＴＡ  １０ｍＭおよびＤＴＴ  ０．１ｍＭ、ｐＨ６．５において４℃で一晩可溶化した。その溶液を、１００，０００×ｇで１時間遠心分離し、その上清を使用するまで−８０℃で保存した。ＩＬ−２２の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクマシーブルー染色解析に基づいて９０％超であると推定された。ＩＬ−２２タンパク質を、以下のフォールディング混合物中において可溶化された封入体の直接的な希釈によってリフォールディングした：
ＩＬ−２２  １００ｍｇ／ｍｌ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  １００ｍＭ、ＥＤＴＡ  ２ｍＭ、Ｌ−アルギニン  ０．５Ｍ、還元グルタチオン１ｍＭおよび酸化グルタチオン０．１ｍＭ、ｐＨ８。この溶液を、４℃で２４時間インキュベートした。次いでフォールディング混合物を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）ゲル濾過カラムを使用して精製した。このタンパク質を、ＴｒｉｓｚＨＣｌ  ２０ｍ
ＭおよびＮａＣｌ  ５０ｍＭ、ｐＨ７を用いて溶出し、−８０℃において保存した。
【００２２】
実施例３
ＲＭＩＬ−２２は正常マウスにおいて総血清トリグリセリドレベルを減少させた
正常マウス、Ｃ５７ＢＬ６、８〜１２週齢、雌、体重：２０〜２５ｇ（ｎ＝１０）を使用した。対照群に担体溶液（０．１％ＢＳＡ，ウシ血清アルブミン，ＰＢＳ，リン酸緩衝食塩水，ｐＨ７．０）を注射した。試験群にｒｍＩＬ−２２を注射した。その用量は、０、３、３０、１００、３００μｇ／ｋｇ／ｄで、１日１回を７日間連続して皮下注射した。血液サンプルを、様々な時点で回収し、その血清を、総トリグリセリドレベルの測定のために解析した。
【００２３】
結果：ＩＬ−２２は、正常マウスにおいて総血清トリグリセリドレベルを著しく減少させることができる。その効果は、用量依存的であった。図１は、１００μｇ／ｋｇのｒｍＩＬ−２２で正常マウスを７日間処置した後の正常マウスにおける血清トリグリセリドレベルに対するＩＬ−２２の効果を示す。対照マウスには担体を注射した。結果は、ｒｍＩＬ−２２処置群が、血清トリグリセリドレベルを著しく減少したことを示す。
【００２４】
実施例４
ＲＭＩＬ−２２は後天性肥満マウス（正常老齢マウス）において総血清トリグリセリドレベルおよび腹膜後の脂肪重量を減少させた
１８〜２４月齢のＣ５７ＢＬ６マウス、雌（ｎ＝１０）、体重３０〜４０ｇを使用した。対照群に担体（０．１％ＢＳＡ，ウシ血清アルブミン，ＰＢＳ，リン酸緩衝食塩水，ｐＨ７．０）を注射した。試験群に、３００μｇ／ｋｇ／ｄで皮下に１日に１回、９日間連続してｒｍＩＬ−２２を注射した。血液を様々な時点で回収し、その血清を、総トリグリセリドレベルを測定するために解析した。腹膜後の脂肪重量の測定のために、マウスを２１日間処置した。動物を処置の最後に屠殺した。結果は、ｒｍＩＬ−２２が、後天性肥満マウスにおいて総血清トリグリセリドレベルを著しく減少させることができることを示す。図２は、正常老齢マウスにおける血清トリグリセリドレベルに対するＩＬ−２２の効果を示す。マウスを、１０日間、担体（点線）またはｒｍＩＬ−２２（１００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ、実線）のいずれかで処置した。マウスは、１６月齢、Ｃ５７ＢＬ６マウス、雌（体重：３８＋／−３ｇｍ，ｎ＝１０）であった。点線は、対照群を示し、実線は、試験群を示す。結果は、平均＋／−標準偏差である。
【００２５】
図３は、各処置群の１匹の代表的なマウスの脂肪組織の組織学的切片を示す。同一の倍率下で、ｒｍＩＬ−２２処置群（図３Ｂ）における脂肪細胞の大きさは、対照処置群（図３Ａ）よりもかなり小さかった。さらに、試験群の脂肪組織の平均重量（１１０＋／−１０ｍｇ）は、対照群（１７５＋／−１５ｍｇ）の重量よりも著しく少なかった（ｐ＜０．０１）。
【００２６】
実施例５
遺伝性肥満（ＯＢ／ＯＢ）マウスにおいて血清グルコース、トリグリセリド、インスリンレベルおよび体重を減少させるＩＬ−２２
ｏｂ／ｏｂマウス、８〜１２週齢、雌、体重３５〜５０ｇを使用した。対照群に担体（０．１％ＢＳＡ，ウシ血清アルブミン，ＰＢＳ，リン酸緩衝食塩水，ｐＨ７．０）を注射した。試験群には、３００μｇ／ｋｇ／ｄのｒｍＩＬ−２２を皮下に１日に１回、１４日間連続して注射した。体重（ＢＷ）を記録した。グルコース、トリグリセリドおよびインスリンに対する血清レベルを測定した。
【００２７】
結果は、ｒｍＩＬ−２２が、ｏｂ／ｏｂマウスにおいて血清グルコース、インスリンレベルを著しく減少させることができたことを示した。図４は、ｒｍＩＬ−２２で処置され
たｏｂ／ｏｂマウスの体重を示す。図４の点線は、対照群を示し、実線は、試験群を示す。担体で処置されたマウスでは、体重は、１４日間の処置中に５％超増加した。ｒｍＩＬ−２２で処置されたマウスでは、体重は、１４日間の処置中に７％超減少した。このデータは、ｒｍＩＬ−２２が、遺伝性肥満マウスにおいて体重の減少を引き起こすことができることを示す。図５は、ｏｂ／ｏｂマウスにおける血清トリグリセリドレベルに対するＩＬ−２２の効果を示す。破線は、担体で処置されたマウスを示し、実線は、２週間にわたってｒｍＩＬ−２２（３００μｇ／ｋｇ／日）で処置されたマウス（ｎ＝１０）を示す。このデータは、ＩＬ−２２が、遺伝性肥満マウスにおいて総血清トリグリセリドレベルの減少を引き起こすことができることを示す。
【００２８】
実施例６
マウスの耐糖能およびインスリン感受性を改善するＲＭＩＬ−２２
グルコース耐性試験およびインスリン感受性試験を、８〜１２週齢のＣ５７ＢＬ６マウス、雌、体重：２０〜２５ｇを使用して、ｒｍＩＬ−２２処置あり、およびｒｍＩＬ−２２処置なしで実施した。対照群に担体（０．１％ＢＳＡ，ウシ血清アルブミン，ＰＢＳ，リン酸緩衝食塩水，ｐＨ７．０）を注射した。ｒｍＩＬ−２２処置群にｒｍＩＬ−２２を３００μｇ／ｋｇ／ｄ、１日に１回、皮下に１４日間連続して注射した。処置の最後にマウスを一晩絶食させた。グルコースを、各動物に２ｍｇ／ｇ（体重）で腹腔内注射により投与した。血液グルコース濃度を、グルコース注射の３０、６０および１２０分後に測定した。図６は、ＩＬ−２２が、耐糖能試験におけるマウスのグルコース利用を促進したことを示す。点線は、担体で処置されたマウスの血液グルコースレベルを示す。実線は、２週間にわたってｒｍＩＬ−２２（３００μｇ／ｋｇ／日）で処置されたマウス（ｎ＝１０）のグルコースレベルを示す。グルコースレベルは、６０分および１２０分において２群間で有意に異なっている（ｐ＜０．０１）。
【００２９】
図７は、ｒｍＩＬ−２２が、マウスのインスリン感受性を増大させることができることを示す。点線は、対照群を示し、実線は、２週間にわたるｒｍＩＬ−２２（３００μｇ／ｋｇ／日）処置群を示す。両方の群の動物に同じ用量のインスリンを注射し、インスリン処置後に血液グルコースレベルを測定した。ｒｍＩＬ−２２処置群における変化率を示したグルコースレベルは、６０分および１２０分における対照処置群よりも有意に低い（ｐ＜０．０１）。
【００３０】
本発明の様々な態様が、上に記載にした実施例を使用して説明されるが、本発明が本明細書中に提供される所与の指図を実施し得る他の多くの方法が存在することが明らかである。例えば、本発明においてＩＬ−２２を発現またはクローニングするために使用することができる宿主としては、原核細胞、酵母細胞または真核細胞が挙げられる。適切な原核細胞としては、Ｅ．ｃｏｌｉなどのＧ＋／Ｇ−細菌が挙げられるが、これらに限定されない。これらは、利用可能なＥ．ｃｏｌｉ株：Ｋ１２  ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ  ３１，４４６）、Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ  ３１，５３７）、Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ  ２７，３２５）およびＫ５  ７７２（ＡＴＣＣ  ５３，６３５）、ＪＭ１０９、ＤＨ５、Ｂ株、Ｂ８３４、ＢＬ２１、ＢＬＲなどである。他の適切な原核細胞としては、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍなどのＳａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｂ．ｓｕｂｉｌｉｓ、Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが挙げられる。多くの利用可能なＥ．ｃｏｌｉ株のうち、Ｅ．ｃｏｌｉＷ３１１０は、組換えＤＮＡ産物のためにまず初めに選択される。
【００３１】
原核細胞に加えて、糸状菌類または酵母細胞のような真核細胞もまた、本発明におけるＩＬ−２２の発現またはクローニングに適切である。これらは、適切な株：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ（Ｂｅａｃｈ  
ａｎｄ  Ｎｕｒｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ，２９０：１４０−１４２（１９８１）；ＥＰ１３９，３８３）、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ宿主（米国特許第４，９４３，５２９号；Ｆｌｅｅら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９６８−９７５（１９９１）（例えば、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ（ＭＷ９８−８Ｃ，ＣＢＳ６８３，ＣＢＳ４５７４；Ｌｏｕｖｅｎｃｏｕｒｔら，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５４（２）：７３７−７４２（１９８３））、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ  １２，４２４）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ  ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ  ３６，９０６；Ｖａｎ  ｄｅｎ
Ｂｅｒｇら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：１３５−１３９（１９９０））、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ；ｙａｒｒｏｗｉａ（ＥＰ２４４，２３４））、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ（Ｃａｓｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：５２５９−５２６３（１９７９））、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ（ＥＰ３９４，５３８）のようなｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ（ＷＯ９１／００３５７）のような糸状菌類、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ（Ｂａｌａｎｃｅら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．，１１２：２８４−２８９（１９８３）；Ｔｉｌｂｕｒｎら，Ｇｅｎｅ，２６：２０５−２２１（１９８３）；Ｙｅｌｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：１４７０−１４７４（１９８４））、Ａ．ｎｉｇｅｒ（Ｋｅｌｌｙ  ａｎｄ  Ｈｙｎｅｓ，ＥＭＢＯ  Ｊ．，４：４７５−４７９（１９８５））のようなＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓである。メタノール上で生育することができる酵母（例えば、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ，Ｃａｎｄｉｄａ，ｋｌｏｅｃｋｅｒａ，Ｐｉｃｈｉａ，Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ，Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ，Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）を含むメタノール資化性（ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｉｃ）酵母もまた適切である（Ｃ．Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｓ，２６９（１９８２））。
【００３２】
本発明においてグリコシル化されたＩＬ−２２を発現するために使用される宿主は、好ましくは多細胞生物由来である。無脊椎動物細胞としては、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  Ｓｆ９などの昆虫細胞ならびに植物細胞が挙げられる。適切な哺乳動物の細胞としては、ＣＨＯ、ＣＯＳ細胞、特にＳＶ４０によって形質転換されたＣＶ１株（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）、ヒト胚腎細胞２９３（Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９−７４（１９７７））、ＣＨＯ／−ＤＨＦＲ（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０（１９８０））、マウス精巣栄養膜細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１（１９８０））、ヒト肺細胞（ＷＩ３８，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７５）、ヒト肝臓細胞（ｈｅｐＧ２，ＨＢ８０６５）、マウス乳癌細胞（ＭＭＴ０６０５６２，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）が挙げられる。当該分野の技術者は、適切な宿主細胞を選択する方法を知っているはずである。
【００３３】
トランスフェクションまたはベクターによる転換後、上記の宿主細胞は、通常の栄養培地中で培養することができる。改変された培地は、プロモーターを誘導すること、形質転換体を選択することまたはＩＬ−２２をコードする遺伝子配列を増幅することに適応されている。当該分野の技術者は、培養条件（例えば、培地、温度、ｐＨなど）を知っているはずである。詳細な技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ，ｅｄ．（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）およびＳａｍｂｒｏｏｋら，前出に見ることができる。
【００３４】
真核生物のトランスフェクションおよび原核生物の転換の方法（例えば、ＣａＣ１２法、リン酸カルシウム沈殿法、リポソーム中間法（ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ）またはエレクトロポレーション法）が、当業者に公知である。例えば、ＣａＣｌ２法（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出）またはエレクトロポレーション法は、原核細胞向きで
ある。Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓの感染は、一部の植物細胞向きである（Ｓｈａｗら，Ｇｅｎｅ，２３：３１５−３３０（１９８３）およびＷＯ８９／０５８５９）。リン酸カルシウム沈殿法は、哺乳動物細胞向きである（Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２；４５６−４５７（１９７８））。酵母細胞の転換についての詳細な技術は、Ｖａｎ  Ｓｏｌｉｎｇｅｎら，Ｊ．Ｂａｃｔ，１３０：９４６−９４７（１９７７）；およびＨｓｉａｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），７６：３８２９−３８３３（１９７９）に見ることができる。他の方法（例えば、核酸のマイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無処置の細胞との細菌のプロトプラスト融合など）もまた、適切である。哺乳動物細胞の転換に関連する技術は、Ｋｅｏｗｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５：５２７−５３７（１９９０）；およびＭａｎｓｏｕｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：３４８−３５２（１９８８）に見ることができる。
【００３５】
本発明におけるＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列は、遺伝子をクローニングするためか、またはタンパク質を発現するための複製可能なベクターに挿入することができる。すべてのベクター（例えば、プラスミド、コスミド、ビリオンまたはバクテリオファージ）が、公的に利用可能である。当該分野における通常の技術を適用して、当業者は、適切な制限エンドヌクレアーゼ認識部位にＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列を挿入することができる。複製可能なベクターは、通常、以下の部分：１つ以上のシグナル配列、１つの複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、１つのエンハンサー要素、１つのプロモーターおよび１つの転写終結配列を含むが、これらに限定されない。当該分野において標準的なライゲーション技術を適用して、当業者は、１つ以上の上記の部分を含む適切な複製可能なベクターを構築することができる。
【００３６】
本発明におけるＩＬ−２２を組換えＤＮＡを介して直接発現することができ、ポリペプチドの融合を介して産生することもできる。後者は、成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に位置するシグナル配列であり得る。また、それは、成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に位置する特別な切断部位を有する他のフラグメントであり得る。通常、シグナル配列は、上記の複製可能なベクターの一部または本発明においてＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列の一部である。シグナル配列は、原核生物のシグナル配列（例えば、ＡＬＰ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐなど）であり得る。酵母分泌において、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、病原体リーダー配列またはＡＬＰリーダー配列などであり得る。哺乳動物の発現において、哺乳動物のシグナル配列は、標的タンパク質を分泌させるために直接的に使用することができる。
【００３７】
発現ベクターとクローニングベクターとの両方が、１つ以上の宿主においてベクターを複製させることができるＤＮＡ配列の断片を有する。細菌、酵母およびウイルス宿主に対応する配列は、当該分野の技術者に公知である（Ｍｏｌｏｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）。
【００３８】
発現ベクターとクローニングベクターとの両方が、遺伝子を選択する断片、すなわち「選択マーカー」を有する。遺伝子を選択することによって発現される代表的なタンパク質は、いくつかの抗生物質およびトキシンに対して耐性を有し、栄養要求欠乏を救済することができ、複雑な培地が提供することができないいくつかの重要な栄養素を補給することができる。
【００３９】
ＤＨＦＲまたはチミジンキナーゼなどの哺乳動物の宿主細胞に適した選択遺伝子は、ＩＬ−２２をコードする遺伝子を含む宿主細胞と区別することができ得る。選択遺伝子として広範なＤＨＦＲを含む適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を有しないＣＨＯ株である。培
養方法は、Ｕｒｌａｕｂら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０（１９８０）に見ることができる。酵母細胞に適した選択遺伝子は、酵母プラスミドＹｒｐ７において発現されるｔｒｐｌ遺伝子である（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９−４３（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎら，Ｇｅｎｅ，７：１４１−１５２（１９７９）；Ｔｓｃｈｕｍｐｅｒら，Ｇｅｎｅ，１０：１５７−１６６（１９８０））。Ｔｒｐｌ遺伝子は、ＡＴＣＣ番号４４０４７またはＰＥＰ４−１などのトリプトファン上で生育することができない酵母変異株を選択するために使用することができる（Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：２２−３３（１９７７））。
【００４０】
発現ベクターとクローニングベクターとの両方が、通常、ＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列に連結することができるプロモーターを有する。プロモーターは、ｍＲＮＡ合成を指示することができる。すべての種類の宿主に対応するプロモーターは、当該分野の技術者に知られているはずである。原核生物の宿主に適したプロモーターとしては、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系（Ｃｈａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６１５（１９７８）；Ｇｏｅｄｄｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ，２８１；５４４−５４８（１９７９））、ＡＬＰおよびｔｒｐプロモーター系（Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，８：４０５７−４０７４（１９８０）；ＥＰ３６，７７６）、ｔａｃプロモーターのような異種プロモーター（ｄｅＢｏｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１−２５（１９８３））が挙げられる。細菌のプロモーターはまた、ＩＬ−２２をコードする配列に連結することができるシャイン・ダルガノ（Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ）配列の断片を有する。
【００４１】
酵母宿主に適したプロモーターとしては、３−ホスホグリセリンホスホキナーゼ（３−ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｋｉｎａｓｅ）プロモーター（Ｈｉｔｚｅｍａｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５５：１２０７３−１２０８０（１９８０））または他の解糖酵素プロモーター（Ｈｅｓｓら，Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇ．，７：１４９−１６７（１９６８）；Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：４９００−  ４９０７（１９７８））（例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、フルクトースジホスファターゼなど）が挙げられる。
【００４２】
他のいくつかの誘導性酵母プロモーターは、様々な生育条件に従って転写を制御することができる。詳細な説明は、米国特許５，０６３，１５４号および同第６，２２１，６３０号に見ることができる。
【００４３】
プロモーターは、哺乳動物の宿主細胞において複製可能なベクター上のＩＬ−２２をコードする遺伝子の転写を制御することができる。そのプロモーターとしては、所定のウイルスゲノム、外来性哺乳動物プロモーターおよび熱ショックタンパク質プロモーターなど由来のプロモーターが挙げられる。しかしながら、これらのプロモーターは、宿主の発現系に適合しているべきである。
【００４４】
真核生物の発現系におけるＩＬ−２２をコードする配列の転写は、複製可能なベクターへのエンハンサーの挿入を介して促進することができる。エンハンサーは、プロモーターに作用することによってＤＮＡ分子の転写を促進することができる、通常１０〜３００ｂｐのＤＮＡ分子の一種のシス作用性要素である。哺乳動物の遺伝子由来の多くのエンハンサーが公知であり、最も広範に使用されるエンハンサーは、真核生物のウイルス細胞由来のものである。エンハンサーは、複製可能なベクター上のＩＬ−２２をコードする配列の５’または３’末端に挿入することができるが、５’末端が最初に選択される。
【００４５】
真核生物の宿主細胞（酵母、菌類、昆虫、植物、動物、ヒトまたは他の多細胞生物）に
おける発現ベクターはまた、転写を終結するためおよびｍＲＮＡを安定化するためのＤＮＡ配列を含む。この種の配列は、通常、真核細胞における非翻訳領域の５’または３’末端またはウイルスのＤＮＡもしくはｃＤＮＡ由来である。他の方法、ベクターおよび宿主は、Ｇｅｔｈｉｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，２９３：６２０−６２５（１９８１）；Ｍａｎｔｅｉら，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：４０−４６（１９７９）；ＥＰ１１７，０６０；ＥＰ１１７，０５８に見ることができる。
【００４６】
遺伝子マーキングおよび遺伝子治療は、Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６，８０８−８１３（１９９２）によって教示される手順を使用して実施してもよい。遺伝子送達システムは、様々なウイルスに基づくベクターを含んでいてもよい。そのベクターとしては、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターまたはＡＡＶ、リポソーム媒介性遺伝子送達もしくはレセプター媒介性遺伝子送達のディレクタープラスミド送達（ｄｉｒｅｃｔｏｒ  ｐｌａｓｍｉｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）が挙げられる（Ｄｚａｕら，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １１，２０５−２１０，１９９３）。
【００４７】
本発明におけるＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列は、遺伝子治療に使用することができ、その過程で、治療的な効果を有する産物を発現して元の欠損した遺伝子を置換するためにＩＬ−２２遺伝子が細胞に導入される。遺伝子治療は、伝統的な治療法を含み、１回の治療であって、遺伝子治療薬物を投与することによって長期間の効果がある。後者は、効果的なＤＮＡまたはｍＲＮＡを１回または数回投与することを含む。
【００４８】
本発明におけるＩＬ−２２は、薬物として使用することができる。当該分野における技術者は、通常の方法に従って、有効量のＩＬ−２２および薬用の担体を含む数種の効果的な処方物を調製することができる。
【００４９】
凍結乾燥物または液体として調製されるとき、本発明における薬用の組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．，Ｅｄ．（１９８０）（その開示の全体が、本明細書中において参考として援用される）に記載されているような保存の利便性に対して生理学的に許容可能であるいくつかの他の担体、賦形剤、安定剤などが添加されるべきである。担体、賦形剤および安定剤の用量および濃度は、ヒト、マウスおよび他の哺乳動物に対して安全であるべきである。
【００５０】
１つの態様において、処方物は、有効量のＩＬ−２２および生理学的に許容可能な担体、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せを含む。
【００５１】
用語「薬学的組成物」または「薬学的処方物」とは、希釈剤または担体などの他の化学成分を含むＩＬ−２２の混合物のことをいう。薬学的組成物は、生物へのＩＬ−２２の投与を促進する。処方物を投与する多様な技術としては、経口、注射、エアロゾル、非経口および局所的投与を挙げてもよいが、これらに限定されない。
【００５２】
用語「担体」とは、細胞または組織へのＩＬ−２２の取り込みを促進する化合物と定義される。例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、一般に利用される担体である。
【００５３】
用語「希釈剤」とは、ＩＬ−２２を溶解し、ならびにＩＬ−２２の生物学的に活性な形態を安定化し得る、水で希釈された化合物と定義される。緩衝液に溶解された塩は、当該分野において希釈剤として利用される。ヒト血液の塩の条件を模倣しているので、通常使用される緩衝液の１つは、リン酸緩衝食塩水である。緩衝塩は、低濃度の溶液のｐＨを制御することができるので、緩衝化された希釈剤は、薬学的に活性な物質の生物学的活性を改変することがほとんどない。
【００５４】
用語「生理学的に許容可能な」とは、ＩＬ−２２の生物学的活性および特性を抑制しない担体または希釈剤と定義される。
【００５５】
本明細書中に記載される薬学的組成物は、それ自体でか、または併用療法においては、他の活性成分または適切な担体もしくは賦形剤と混合された薬学的組成物としてヒト患者に投与することができる。処方物および本出願において説明される処方物の投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０（その開示の全体が、本明細書中に参考として援用される）に見出すことができる。
【００５６】
投与の適切な経路としては、例えば、経口投与、直腸投与、経粘膜的投与または腸管投与；筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、髄内注射ならびにクモ膜下腔注射、脳室内へ直接注射、腹腔内注射、鼻腔内注射または眼内注射を含む非経口送達が挙げられ得る。
【００５７】
あるいは、当業者は、全身性様式よりもむしろ局所様式で、例えば、時効性または徐放性の処方物中においてであることが多い、腎臓領域または心臓領域における直接的な注射を介してＩＬ−２２処方物を投与してもよい。さらに、当業者は、標的化された薬物送達システムにおいて、例えば、組織特異的抗体で被覆されたリポソームでＩＬ−２２を投与してもよい。そのリポソームは、器官に対して標的化されていて、その器官によって選択的に取り込まれる。
【００５８】
本発明の薬学的組成物は、それ自体が公知である様式、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、粉末化、乳化、カプセル化、封入または錠剤化のプロセスを用いて製造されてもよい。
【００５９】
従って、本発明に記載の用途のための薬学的組成物は、薬学的に使用することができる調製物へのＩＬ−２２の加工を促進する賦形剤および補助剤を含む１つ以上の生理学的に許容可能な担体を使用して従来の様式において処方されてもよい。適切な処方物は、選択される投与の経路に依存する。任意の周知の技術、担体および賦形剤を、適切であるように、当該分野；例えば、上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおいて理解されるように使用してもよい。
【００６０】
注射のために、本発明のＩＬ−２２は、水溶液、好ましくは、ハンクス液、リンガー溶液または生理食塩緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液中に処方されてもよい。経粘膜的投与のために、浸透させるべき障壁に適切な浸透剤が、処方物中に使用される。このような浸透剤は、一般に当該分野で公知である。
【００６１】
経口投与のために、ＩＬ−２２は、当該分野で周知である薬学的に許容可能な担体と組合せることによって容易に処方することができる。このような担体は、治療される患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとしてＩＬ−２２を処方することができる。経口用途のための薬学的処方物は、１つ以上の固体賦形剤とＩＬ−２２とを混合することによって得ることができる。必要に応じて、生じた混合物を粉砕し、適切な補助剤を添加した後に顆粒の混合物を加工してもよい。所望であれば、錠剤または糖衣錠コアを得る。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの賦形剤；例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）
などのセルロース調製物である。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）などの崩壊剤を添加してもよい。
【００６２】
糖衣錠コアは、適切なコーティング剤により提供される。このために、濃縮された糖溶液を使用してもよく、必要に応じてアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液ならびに適切な有機溶媒または溶媒の混合物を含んでもよい。同定するためか、またはＩＬ−２２の用量の様々な組合せを特徴付けるために染料または色素を錠剤または糖衣錠のコーティング剤に添加してもよい。
【００６３】
経口的に使用することができる薬学的調製物としては、ゼラチンから製造された押し込み型のカプセルならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤から製造された軟質の密封されたカプセルが挙げられる。押し込み型のカプセルは、ラクトースなどの賦形剤、デンプンなどの結合剤および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤ならびに必要に応じて安定剤と混合したＩＬ−２２を含むことができる。軟質のカプセルにおいて、ＩＬ−２２を、適切な液体（例えば、脂肪油、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁してもよい。さらに、安定剤が添加されてもよい。経口投与のためのすべての処方物は、このような投与に適切な用量であるべきである。
【００６４】
頬側投与のために、組成物は、従来の様式で処方された錠剤または舐剤の形態であってもよい。
【００６５】
吸入による投与のために、本発明に記載の用途のためのＩＬ−２２は、加圧された容器または噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で、適切な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体）の使用を伴って便利に送達される。加圧されたエアロゾルの場合、その用量単位は、測定された量を送達するためのバルブを提供することによって測定してもよい。吸入器または注入器における使用のための例えばゼラチンのカプセルおよび薬包は、ＩＬ−２２とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末の基剤との粉末混合物を含むように処方されてもよい。
【００６６】
ＩＬ−２２は、注射、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与のために処方されてもよい。注射のための処方物は、添加された保存剤とともに、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回用量の容器で提供されてもよい。組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態であってもよく、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）を含んでもよい。
【００６７】
非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性の形態のＩＬ−２２の水溶液を含む。さらに、いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２の懸濁液は、適切な油性の注射懸濁液として調製されてもよい。適切な親油性の溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステルまたはリポソームが挙げられる。水性の注射懸濁液は、懸濁液（例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストラン）の粘性を増加させる物質を含んでもよい。必要に応じて、その懸濁液はまた、適切な安定剤または調製物を高度に濃縮された溶液にすることができるＩＬ−２２の溶解度を増加させる薬剤を含んでもよい。
【００６８】
あるいは、ＩＬ−２２は、適切なビヒクル、例えば、使用前に滅菌されたパイロジェン
を含まない水を含む組成についての粉末形態であってもよい。
【００６９】
ＩＬ−２２はまた、例えば、従来の坐剤の基剤（例えば、カカオバターまたは他のグリセリド）を含む坐剤または停留浣腸などの直腸組成物に処方されてもよい。
【００７０】
前に記載した処方物に加えて、ＩＬ−２２はまた、持続性調製物として処方されてもよい。このような長時間作用する処方物は、埋め込み（例えば、皮下または筋肉内）によってか、または筋肉内注射によって投与されてもよい。従って、例えば、ＩＬ−２２は、適切な多量体の材料または疎水性の材料（例えば、許容可能な油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂あるいは難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として処方されてもよい。
【００７１】
所望であれば、処方物は、ベンジルアルコール、非極性の界面活性剤、水混和性の有機ポリマーおよび水相を含む共溶媒系を含んでもよい。通常使用される共溶媒系は、ＶＰＤ共溶媒系であり、無水エタノール中の体積に作られた３％ｗ／ｖベンジルアルコール、８％ｗ／ｖ非極性の界面活性剤Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０ＴＭおよび６５％ｗ／ｖポリエチレングリコール３００の溶液である。当然のことながら、共溶媒系の比率は、その溶解性および毒性特性を無効にすることなく相当変化してもよい。さらに、共溶媒の構成要素の独自性は、変化してもよい：例えば、他の低毒性で非極性の界面活性剤がＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ８０ＴＭの代わりに使用されてもよく；ポリエチレングリコールの画分の量が変動してもよく；他の生体適合性のポリマーがポリエチレングリコール、例えば、ポリビニルピロリドンを置換してもよく；他の糖類または多糖類がデキストロースに対して置換してもよい。
【００７２】
あるいは、所望であれば、他の送達システムを使用してもよい。リポソームおよびエマルジョンは、利用されてもよい送達ビヒクルまたは担体の周知の例である。ジメチルスルホキシドなどの所定の有機溶媒は、通常、高い毒性という犠牲を払ってでも使用されてもよい。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２は、治療薬を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスなどの徐放システムを使用して送達されてもよい。様々な徐放性材料が確立されており、当業者に周知である。徐放カプセルは、それらの化学的性質に依存して、ＩＬ−２２を数週間から１００日までに亘って放出し得る。治療的な試薬の化学的性質および生物学的安定性に依存して、タンパク質安定性に対する追加のストラテジが使用されてもよい。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２は、薬学的に適合する対イオンを含む塩として提供されてもよい。薬学的に適合する塩は、多くの酸とともに形成されてもよい。それらの酸としては、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などが挙げられるが、これらに限定されない。塩は、遊離酸の形態または遊離塩基の形態に対応するよりも、水性溶媒または他のプロトン性溶媒に、より溶解性である傾向にある。
【００７４】
本発明における用途に適した薬学的組成物は、ＩＬ−２２が、その意図される目的を達成するのに有効な量を含む組成物を含む。より詳細には、治療有効量は、疾患の症状を予防、軽減もしくは回復するか、または治療される被験体の生存時間を延長するのに有効なＩＬ−２２の量を意味する。治療有効量の決定は、当業者の能力の十分な範囲内である。
【００７５】
本発明のＩＬ−２２組成物についての的確な処方、投与の経路および用量は、患者の状態を考慮して個別の医師によって選択することができる（例えば、Ｆｉｎｇｌら１９７５，ｉｎ  “Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”，Ｃｈ．１  ｐ．１を参照のこと）。用量は、患者が必要とするとような１日以上に亘って投与される単回または一連の２回以上であってもよい。いくつかの実施
形態において、適切なヒト用量は、動物における毒性研究および効能研究によって認定されるように、ＥＤ５０値もしくはＩＤ５０値またはインビトロ研究もしくはインビボ研究から得られた他の適切な値から推測することができる。
【００７６】
用量および間隔は、調節効果または最小有効濃度（ＭＥＣ）を維持するのに十分なＩＬ−２２の血漿レベルを提供するように個別に調整されてもよい。所望であれば、ＭＥＣは、インビトロのデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するのに必要な用量は、個体の特性および投与の経路に依存し得る。しかしながら、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを、血漿濃度を測定するために使用することができる。
【００７７】
投薬の間隔はまた、ＭＥＣ値を使用して決定することができる。いくつかの実施形態において、処方物は、その時間の１０〜９０％、好ましくは、３０〜９０％および最も好ましくは、５０〜９０％の間はＭＥＣを超える血漿レベルを維持するレジメンを使用して投与される。
【００７８】
局所投与または選択的取り込みの場合、ＩＬ−２２の有効な局所濃度は、血漿濃度に関係しなくてもよい。
【００７９】
投与される組成物の量は、当然のことながら、治療される被験体、被験体の体重、苦痛の重症度、投与の様式および処方する医師の判断に依存し得る。
【００８０】
組成物は、所望であれば、活性成分を含む１つ以上の単位剤形を含み得る容器またはディスペンサーデバイスで提供されてもよい。容器は、例えば、金属箔またはブリスター包装などのプラスチック箔を含み得る。容器またはディスペンサーデバイスは、投与のための指示書が付属されていてもよい。容器またはディスペンサーはまた、医薬品の製造、使用または販売を管理している行政機関によって指示された形態でその容器に付属される注意書きを伴っていてもよく、その注意書きは、ヒトまたは家畜への投与についての薬物の形態に関する機関による承認を反映している。このような注意書きは、例えば、処方薬に対する米国食品医薬品局によって承認された標識または承認された製品の挿入物であってもよい。適合する薬学的担体中に処方された本発明に記載の組成物はまた、調製され、適切な容器に置かれ、示された状態の治療のために表示されてもよい。
【００８１】
いくつかの実施形態において、組成物は、緩衝液、酸化防止剤、低分子ポリペプチド、タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）、ＰＶＰなどの親水性ポリマー、グルタミン酸アミノ酢酸塩などのアミノ酸、単糖、二糖類およびグルコース、マンノースまたはデキストリンのような他の炭水化物、ＥＤＴＡのようなキレート剤、マンニトール、ソルビトールのような糖アルコール、Ｎａ＋のような対イオンおよび／または非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはＰＥＧなど）を含んでもよい。
【００８２】
好ましくは、本発明におけるＩＬ−２２を含む調製物は、注射の前に滅菌されている。この手順は、凍結乾燥および再構成の前または後に、滅菌濾過膜を使用して実施することができる。
【００８３】
薬用の組成物は、通常、滅菌された接続口を備える容器に満たされている。本発明における薬用の組成物は、通常の方法によって注射することができる。その方法としては、静脈内、腹腔内、頭部内、筋肉内、眼内、動脈内、局所または徐放システムを介してが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
用量および濃度は、実際の状況に従って調節することができる。当該分野の技術者は、
実際の状況に従って適切な用量および注射の方法を選択する方法を知っているはずである。本発明における動物試験は、人体における有効量について信用できる使用法を提供する。異なる種間の調節原理は、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ”Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉら；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−９６に見ることができる。
【００８５】
ＩＬ−２２が、哺乳動物に注射されるとき、通常の用量は、１日当たり１ｎｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、最適には１０μｇ／ｋｇ／ｄ〜１００μｇ／ｋｇ／ｄである。用量は、異なる注射方法に従って調節されるべきである。その使用法は、米国特許第４，６５７，７６０号；同第５，２０６，３４４号；または同第５，２２５，２１２号に見ることができる。予想通りに、様々なＩＬ−２２調製物は、様々な疾患に作用する。作用する標的（器官または組織）を変更するとき、それに応じて注射方法が、調整されるべきである。
【００８６】
ＩＬ−２２を含むマイクロカプセルは、徐放システムとして使用することができる。組換えタンパク質のマイクロカプセル徐放システムの技術は、ｒｈＧＨ、ｒｈＩＦＮ、ＩＬ−２およびＭＮｒｇｐ１２０においてうまく採用された（Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：７９５−７９９（１９９６）；Ｙａｓｕｄａ，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ  ２７：１２２１−１２２３（１９９３）；ＷＯ９７／０３６９２，ＷＯ９６／４００７２，ＷＯ９６／０７３９９；米国特許第５，６５４，０１０号）。
【００８７】
本発明におけるＩＬ−２２の徐放システムは、生物学的に適合し、容易に分解するＰＬＧＡを用いて調製することができる。ＰＬＧＡの分解産物である乳酸およびヒドロキシ酢酸は、人体において迅速に排出され得る。さらに、分解する能力は、その異なる分子および組成物によって数ヶ月から数年まで異なり得る（Ｌｅｗｉｓ，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒｍ  ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｅｒ”，ｉｎ：  Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌａｎｇｅｒ（Ｅｄｓ．），Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｙｔｅｍｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ：  Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，１９９０），ｐｐ．１−４１））。
【００８８】
本発明におけるＩＬ−２２は、活性化されたＰＥＧを用いて、例えば、これに限定されるわけではないが、半減期を延長する目的で分子量を５，０００〜１００，０００にするなどの改変をすることができる。その生物学的活性を増大するか、またはその半減期を延長する目的で、本発明におけるＩＬ−２２をキメラ分子または融合タンパク質として調製することもできる。詳細な技術については、Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９４，４：２４６５−２４７０；Ｃａｌｉｃｅｔｉら，ＩＬ  Ｆａｒｍａｃｏ，１９９３，４８：９１９−９３２などに見ることができる。
【００８９】
本発明におけるＩＬ−２２は、その生物学的活性を増大するか、または生物学的半減期を延長する目的で、キメラ分子または融合タンパク質として調製することができる。共有結合的に改変されたＩＬ−２２がまた、本発明に含まれる。化学的な共有結合性の改変としては、Ｎ末端もしくはＣ末端の改変または化学分子の他のアミノ酸への付加が挙げられる。その改変としては、アミノ酸配列の改変、ＩＬ−２２自体のグリコシル化の改変も挙げられる。
【００９０】
ナノテクノロジー調製物（ＵＳ６０／５４４，６９３）、噴霧調製物（例えば、ＣＮ００１１４３１８．２，ＰＣＴ／ＣＮ０２／００３４２において教示されるような）、吸入
調製物などのような他の調製技術もまた、本発明に含まれる。引用されたすべての参考文献は、それらの全体が本明細書中に援用される。
【００９１】
上記の実験に使用されたポリペプチドは、配列番号３に示されるような核酸配列を使用する配列番号１に示されるような配列を含む。それでもなお、配列番号１〜４が、本発明のいくつかの実施形態だけであることおよび本発明と同じ原理が、ＩＬ−２２の生物学的機能に影響することなく改変される、他の機能的に等価なペプチドに適用することができることは明らかである。例えば、保存的アミノ酸置換（すなわち、同じ生化学的タイプ（例えば、疎水性、親水性、正または負に帯電した基）内のアミノ酸）による改変。１つ以上の上記の改変を有し、なおも本発明において記載される活性を保持するこれらのペプチドのことを、機能的改変体という。配列番号１〜４の１つに対して少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％または３０％のアミノ酸配列同一性またはヌクレオチド配列同一性を有し、ＩＬ−２２の１つ以上の活性を保持するか、またはＩＬ−２２の１つ以上の活性を保持するポリペプチドをコードする他のペプチドもまた、改変体と考えられる。
【００９２】
アミノ酸配列同一性またはヌクレオチド配列同一性は、当該分野で公知である種々の任意の配列比較のアルゴリズムおよびプログラムを使用して推定してもよい。このようなアルゴリズムおよびプログラムとしては、ＴＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＴＦＡＳＴＡおよびＣＬＵＳＴＡＬＷが挙げられるが、これらに限定されない（Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（８）：２４４４−２４４８；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２（２）：４６７３−４６８０；Ｈｉｇｇｉｎｓら，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３−４０２；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：２６６−２７２）。特に好ましい実施形態において、タンパク質および核酸配列の相同性は、当該分野で周知であるＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（「ＢＬＡＳＴ」）を使用して推定される（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６７−２２６８；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：２６６−２７２；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９７，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２を参照のこと）。ＢＬＡＳＴプログラムは、好ましくはタンパク質または核酸配列データベースから得られる、本明細書中におけるクエリーアミノ酸配列またはクエリー核酸配列と試験配列との間の「スコアの高いセグメント対」といわれる類似のセグメントを同定することによって相同配列を同定する。スコアの高いセグメント対は、好ましくは当該分野で公知である多くのスコア行列を用いて同定される（すなわち、アラインメントされる）。好ましくは、使用されるスコア行列は、ＢＬＯＳＵＭ６２行列である（Ｇｏｎｎｅｔら，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １７：４９−６１）。それほど好ましいわけではないが、ＰＡＭまたはＰＡＭ２５０行列を使用してもよい（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ａｎｄ  Ｄａｙｈｏｆｆ，ｅｄｓ．，１９７８，Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  Ｄｉｓｔａｎｃｅ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ：
Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎを参照のこと）。ＢＬＡＳＴプログラムは、同定されたすべてのスコアの高いセグメント対の統計的有意性を評価し、好ましくは利用者に特異的な相同性パーセントなどの利用者に特異的な有意性の閾値を満たすそれらのセグメントを選択する。好ましくは、スコアの
高いセグメント対の統計的有意性を、Ｋａｒｌｉｎの統計的有意性の式を使用して評価する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６７−２２６８を参照のこと）。
【００９３】
ＢＬＡＳＴプログラムは、初期設定のパラメータまたは利用者によって改変されたパラメータを用いて使用してもよい。
【００９４】
他の改変体は、上で説明し、ＩＬ−２２の機能的な誘導体であると考えられるＩＬ−２２のいくつかの例へ他の材料を抱合することなどの改変を含む。
【００９５】
多くの改変および様々な改変が、本発明の精神から逸脱することなくなされ得ることが当業者によって理解されるだろう。従って、本発明の形態が、単なる説明であって、本発明の範囲を限定することを意図しないことが明確に理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】図１は、正常マウスにおける総血清トリグリセリドレベルに対するＩＬ−２２（組換えマウスＩＬ−２２）の効果を示す。
【図２】図２は、後天性肥満マウスにおける総血清トリグリセリドレベルに対するＩＬ−２２の効果を示す。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、対照群（図３Ａ）と比較した場合の、後天性（正常老齢）肥満マウス（図３Ｂ）における脂肪組織の脂肪細胞に対するＩＬ−２２の効果を示す。
【図４】図４は、遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）肥満マウスの体重に対するＩＬ−２２の効果を示す。
【図５】図５は、遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）肥満マウスの総血清トリグリセリドレベルに対するＩＬ−２２の効果を示す。
【図６】図６は、マウスの耐糖能に対するＩＬ−２２の効果を示す。
【図７】図７は、マウスのインスリン感受性に対するＩＬ−２２の効果を示す。
【図２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図１】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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