(57)【要約】  本発明は、五ホウ酸ナトリウム五水和物（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）の改良された合成法に関する。該方法は四ホウ酸二ナトリウム十水和物（ＤＴＢＤ、ホウ砂）とオルトホウ酸（ＯＢＡ、ホウ酸）とを反応させることにある。工程は、５日未満で実施され、菌株を必要としない。本発明は、この方法により得られた生成物にも言及し、この生成物により、細菌及びウイルスが原因の疾病において免疫系を強化することを意図とする。これを含む医薬組成物及びこれらの疾病の治療におけるその使用にも言及する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、
ａ）適切な容器内の精製水に、５９〜６１℃の温度で攪拌しながら、反応物を交互に徐々に添加することにより、反応物を精製水にゆっくりと溶解させるステップと、
ｂ）溶液を攪拌するステップと、
ｃ）溶液が透明になるまで反応させておくステップと、
ｄ）溶液を濾過するステップと、
ｅ）結晶を成長させるステップと、
ｆ）形成された結晶を濾液から分離するステップと、
ｇ）最終生成物を冷蔵するステップと、
ｈ）結晶を乾燥させるステップと、
ｉ）生成物を包装するステップと
からなる、合成法。
【請求項２】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、反応物はオルトホウ酸及び四ホウ酸ナトリウム十水和物であり、これらの重量は、純度１００％として計算される、請求項１に記載の合成法。
【請求項３】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、最終生成物１ｋｇを得るために、オルトホウ酸６８０．０ｇ及び四ホウ酸ナトリウム十水和物約７００．０ｇが、いずれも１００％の純度で必要であり、これらの反応物を約５９〜６１℃で精製水約１６００ｍＬ中に溶解させる、請求項２に記載の合成法。
【請求項４】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、反応物は、２００ＲＰＭで攪拌しながら、少しずつ、交互に水に添加する、請求項３に記載の合成法。
【請求項５】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、温度は６１℃を越してはならない、請求項１に記載の合成法。
【請求項６】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、反応物が完全に溶解すると直ちに、溶液を熱源からはずし、濾過して、残存する固体はいずれも除去する、請求項１に記載の合成法。
【請求項７】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、２００ＲＰＭで攪拌しながら、溶液温度を２１℃にし、結晶を成長させ、結晶は、どの方法でも成長させることができるが、冷却法が好ましい、請求項１に記載の合成法。
【請求項８】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、１５０ＲＰＭでゆっくり攪拌しながら、溶液温度を１０〜１２℃まで降下させる、請求項７に記載の合成法。
【請求項９】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、溶液と結晶を有する容器を６℃で１８〜２０時間保持する、請求項７に記載の合成法。
【請求項１０】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、結晶を取り出し、乾燥させる、請求項１に記載の合成法。
【請求項１１】
五ホウ酸ナトリウム五水和物を得るための改良された合成法であって、包装ステップは、ねじ蓋付きプラスチック容器の中で実施される、請求項１に記載の合成法。
【請求項１２】
請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の改良された合成法により得られる生成物。
【請求項１３】
五ホウ酸ナトリウム五水和物（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）である、請求項１２に記載の生成物。
【請求項１４】
五ホウ酸ナトリウム五水和物は、唯一の活性成分であり、これを薬学的に許容されるキャリア又は希釈剤のうち少なくとも１つと共に有する、医薬組成物。
【請求項１５】
薬剤形態は、錠剤、カプセル、ロゼンジ、点滴剤用溶液、シロップ、膣座剤、座薬、ゲル、ローション、及びその経口、鼻、眼、耳、局所、腔内、膣、直腸、皮膚、毛細管、筋肉内、静脈内、皮内、皮下投与又は身体に投与及び吸収されるために好適なその他の手段のためのアンプルバイアルであってよい、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
好ましい薬剤形態はカプセルである、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
活性化合物としての少なくとも1つ以上の五ホウ酸ナトリウム五水和物及び活性化合物を、少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリア又は希釈剤と共に有する、医薬組成物。
【請求項１８】
細菌が原因の疾病を治療するための医療品の製造への、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の方法により得られる五ホウ酸ナトリウム五水和物の使用。
【請求項１９】
ウイルスが原因の疾病を治療するための医療品の製造への、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の方法により得られる五ホウ酸ナトリウム五水和物の使用。
【請求項２０】
疾病を引き起こす細菌は、例えば、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、淋菌、髄膜炎菌、緑膿菌、志賀赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、腸チフス菌、大腸菌、プロテウス・ブルガリス、インフルエンザ菌、豚流産菌、ブドウ球菌、クレブシエラ菌、ライ菌、ヒト型結核菌である、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の方法により得られる五ホウ酸ナトリウム五水和物の、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
ウイルスにより引き起こされる疾病は、例えば、慢性ウイルス感染症、例えばＨＩＶ、及び急性ウイルス感染過程、例えば麻疹、水痘、帯状ヘルペス、Ｂ型肝炎、ウイルス性髄膜脳炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、喉頭気管炎、咽頭炎、気管支炎、細気管支炎、肺炎、感冒、ウイルス性病因からの胃腸病、単純ヘルペス及び帯状ヘルペス、流行性耳下腺炎、天然痘、リンパ肉芽腫、サイトメガロウイルス、デング熱、一般的脳炎、狂犬病、ポリオ、及びエボラである、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の方法により得られる五ホウ酸ナトリウム五水和物の、請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はホウ素及びナトリウムの環状化合物を合成する改良された工程、これを含有する化合物及び化合物の新規使用を開示し、これは、哺乳類における免疫調節効果に関係する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−１）が、ＡＩＤＳを引き起こす作用因子であることは、一般に容認されている。最初のＡＩＤＳの症例が、疾病管理センター（ＣＤＣ）で１９８１年に報告されて以来、１００００を上回る症例が米国で報告されてきた。これらの患者のうち５０％を超える患者が既に死亡している。推定に基づき、１００万から２００万人までのアメリカ人が、今日ＨＩＶに感染し、現在は無症候ではあるものの、その２０〜３０％は、５年以内に発症し、２００８年までには、症状のある患者がほぼ１３０００００人存在し、そのうちの約１００００人が子供であろう。この疾病のウイルスの性質によりＨＩＶ−１阻害剤の研究が推進された。ウイルス複製サイクルへの阻害効果により、これらの阻害剤は、疾病の進行を妨げ、患者の回復をできるかぎり促進することが期待できる。ＨＩＶは免疫系の弱体化を引き起こすので、この取り組みのほかに、幾つかの免疫調節薬が研究された。抗ウイルス免疫応答を増進できる薬剤がウイルスの撲滅を支援するであろうと、考察することができる。
【０００３】
誘発されたＨＩＶ−１疾患に対する抗ウイルス療法の有効性は、スラミン（有効なレトロウイルス阻害剤）が、逆転写酵素と共同して、インビボ及びインビトロでＨＩＶ−１複製を抑制することを示す際に明白であった。それにもかかわらず、薬物の毒性のために治療を終了せねばならなかったので、６週間の治療期間後に臨床的又は免疫学的改善は見られなかった。より長期の（３７週間）治療は、臨床的又は免疫学的改善を生じなかった。
【０００４】
以下の研究化合物は、ＡＺＴ（３’−アジド−２’，３’−ジデオキシチミジン）であり、これは、スラミンで観察される場合より著しく低い濃度で、著しく高い阻害レベルでＨＩＶ−１を阻害した。ＡＩＤＳ及びＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）の両方の患者への６週間にわたるＡＺＴ治療は、臨床的及び免疫学的改善を生じ、２４週間の治療期間中の日和見疾患（ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）の頻度の減少及び死亡率の減少も生じた。レトロビル（Ｒｅｔｒｏｖｉｒ）又はジドブジン（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）としても知られているＡＺＴは、ＦＤＡにより認可された、この疾病治療の唯一の薬物である。２４週間までの間に治療を受けたＡＩＤＳ又はＡＲＣ患者の一部にとり、ＡＺＴは効果があるという事実にもかかわらず、薬物の薬効は、６ヶ月の期間の間に下降する。
【０００５】
実際の臨床アッセイで有効のように思われる新規薬物は、ＤＤＣ（２’，３’−ジデオキシシチジン）、ＤＤＩ（２’，３’−ジデオキシイノシン）及びＤＤＡ（２’，３’−ジデオキシアデノシン）を含む。これら３つのうちで、ＤＤＩは、毒性を全く示さないか又は低い毒性を示し、著しい臨床的又は免疫学的改善を引き起こした。
【０００６】
免疫系が破壊されると直ちに、抗ウイルス療法と免疫応答調節剤、例えばインターフェロン（ＨｕＩＦＮ−α、−β又は−γ）又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、との併用が保証され得る。通常、免疫調節薬は、抗ウイルス剤と一緒に投与される。例えば、ＧＭ−ＣＳＦは、ＨＩＶ−１での単球産生を高めるが、ＡＺＴと併用すると、完全なＡＺＴ抗ウイルス活性を高めることが示された。
【０００７】
今日まで、他のウイルス性又は細菌性疾患の治療に関して、五ホウ酸ナトリウム五水和物（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）の使用は開示されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
１．技術水準に記載されるより迅速な製造方法により免疫調節薬を提供すること。
２．免疫系を強化する物質を合成する迅速な方法を提供すること。
３．ＡＩＤＳを含むウイルスが関与する特定の疾病で、免疫系を強化し、高めるために免疫調節薬を使用することを提案すること。
４．ウイルスが関与する幾つかの疾病の治療への本発明の免疫調節薬の使用すること。
５．幾つかの細菌性疾患で、免疫系を強化し、高めるために免疫調節薬を使用することを提案すること。
６．細菌が関与する幾つかの疾病の治療への本発明の免疫調節薬の使用すること。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６３３１、国際公開番号ＷＯ  ９１／０６３０４（Ｄｒｅｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）でのＰＣＴ出願で公開された発明の改良である。前記出願は、環状五ホウ酸塩の合成、該化合物及びその医学的適用に関する。五ホウ酸塩から誘導された幾つかの化学化合物に言及し、その適用は、ＡＩＤＳの治療のみを対象とした。
【００１０】
前記出願は、８段階からなる非常に大規模な工程を請求し、かつ後にヒト免疫不全症候群の治療に使用される五ホウ酸塩誘導体を得るのに約４０日間の作業日を要した。
【００１１】
本発明は、細菌及びウイルスが原因の疾病の治療の間、免疫系を強化することを目的とする単一生成物を得るのに５日も要しない方法にある。本発明は、前記出願の前記発明の改良として考えられる、この生成物を得る方法及び新規用途に関する。
【００１２】
下記合成法は、五ホウ酸ナトリウム五水和物（今からはＰＳＰと呼ぶ）を得るのに使用される。この方法では、前記化合物を５日未満で得ることができるが、他方、親出願ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６３３１の合成法によると、少なくとも４０日を要する。
【００１３】
この合成法で使用される原料は、四ホウ酸二ナトリウム十水和物（ホウ砂又はＤＴＢＤ）、オルトホウ酸（ＯＢＡ、ホウ酸）及び精製水であり、前の２つは両方ともＵ．Ｓ．Ｂｏｒａｘにより提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
四ホウ酸二ナトリウム十水和物アッセイ
参考文献：Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ＸＸＩＩ／ＮＦ  ＸＶＩＩ
目的：本明細書中に記載のＰＳＰを得るための方法における原料としての四ホウ酸二ナトリウム十水和物（ＤＴＢＤ）の純度の測定。
原理：水溶液中のＤＴＢＤに、標準塩酸を用いて、メチルレッドの終点までの滴定を行う。
装置：
５０ｍｌビュレット
撹拌棒付き磁気アジテーター
２５０ｍＬビーカー
ｍｇ精度の分析秤
化学薬品：
水酸化ナトリウム標準に対して標定された０．５Ｎ塩酸（ＨＣｌ）
メチルレッド指示薬の０．１％メタノール溶液
【００１５】
手順：
１．ＤＴＢＤサンプル約３．０ｇをできるだけｍｇの単位まで精確に計量。重量を記録。このサンプルを撹拌棒の付いた２５０ｍＬビーカー中の精製水５０ｍＬに添加し、飽和溶液を得るために１０〜１５分間、マグネティックスターラー上で撹拌する。メチルレッド指示薬溶液５滴を添加。標定済みＨＣｌ  ０．５Ｎで滴定。溶液のｐＨを終点（ｐＨ４．８）より上に保持しながら、できるだけ迅速に滴下させることにより、滴定溶液の最初の３０ｍＬを添加。どの残留ナトリウムＤＴＢＤ結晶も溶解させる。滴定剤を終点までゆっくりと滴下させる。要したＨＣｌ  ０．５Ｎの全容積を記録。
２．ＤＴＢＤサンプル３．０ｇを更に２つ用いて、ステップ１を繰り返す。全ての結果を記録。
【００１６】
原料としての四ホウ酸二ナトリウム十水和物Ｎａ2Ｂ4Ｏ7・１０Ｈ2Ｏ（ＤＴＢＤ）についてのアッセイの検証
装置：
２５ｍＬ  Ｋｉｍａｘ（登録商標）Ｓｃｈｅｌｌｂａｃｈ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｂｕｒｅｔｔｅ，Ｋｉｍｂｌｅ  １７１７０Ｆ
Ｍｅｔｔｌｅｒの分析秤、モデルＨ５４
Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒのスターラー／ホットプレート、モデル４６５８
化学薬品：以下の化学薬品を使用した（商標及び規格を示す）。
四ホウ酸二ナトリウム十水和物、ＥＭ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）Ｎｏ．６３０９−１、バッチ９１１８
水酸化ナトリウム０．５Ｎ、ＶＷＲにより１Ｎ溶液から調製、Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓｓ  Ｉｎｃ．（ＢＴＲ）によるバッチ９００７２６０１
塩酸０．５Ｎ、ＲＩＣＡＡの２Ｎ溶液から調製、ＢＴＲのバッチＮｏ．９００６０６０１
フタル酸水素カリウム（ＫＨＰ）、Ｂａｋｅｒ分析グレード、標準アシジメトリーＮｏ．２９５８−０１、バッチＤ１８０８４
メチルレッド、ナトリウム塩、Ｂａｋｅｒ分析グレード、Ｎｏ．Ｒ０８６−０２、バッチＤ１４７０８
水は、１８メガオーム−ｃｍを上回る比抵抗を用いて、Ｃｏｎｔｉｎｅｎｔａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｕｌａｂ  ｕｎｉｔから得た。
【００１７】
手順：水酸化ナトリウムを、フタル酸水素カリウムアリコート３．０００ｇを使用して、３回（ｔｒｉｐｔｉｃａｔｅ）標定し、１１５度で１時間オーブン乾燥させ、使用するまでデシケーター中に保管した。
塩酸は、標定済みＮａＯＨ  ０．５Ｎの１０ｍＬアリコートを使用して、３回標定した。
滴定は、他に記載がない場合は、測定ごとにサンプル（Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標））３．０００ｇを使用して、３回遂行した。
【００１８】
計算：
【数１】
2008511532.tif 000002
滴定されたＤＴＢＤ重量＝ＤＴＢＤｅｑｓ．×ＤＴＢＤｅｑ．重量
Ｅｑｓ．＝当量（複数）
Ｅｑ．＝当量
ＤＴＢＤ当量（複数）＝（ｍＬ  ＨＣｌ）（Ｎ  ＨＣｌ）／１０００
【数２】
2008511532.tif 000003
ＨＣｌ  ０．５Ｎの各ｍＬは、９５．３４ｍｇのＮａ2Ｂ4Ｏ7・１０Ｈ2Ｏに相当するので、等式は、以下のように表すことができる。
【数３】
2008511532.tif 000004
無水ＤＴＢＤ、例えばＳｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）については、
【数４】
2008511532.tif 000005
である。ＤＴＢＤ純度は、９９．０〜１０５．０％であるにちがいない。
結果：以下のデータが、実験室で得られた現実の結果であり、例として記載される。
【００１９】
Ａ．酸−塩基標定
１．ＮａＯＨ  ０．５Ｎ、バッチ９００７２６０１；３ｇのＫＨＰ  ０．５Ｎによる滴定５回（５×）
２．ＨＣｌ  ０．５Ｎ、バッチ９００６０６０１；ＮａＯＨ  ０．５Ｎ、バッチＮｏ．９００７２６０１、による滴定；ＮａＯＨの規定度、０．５０１、０．５００、０．５０２；平均０．５０１Ｎ
Ｂ．精度は、無水ＤＴＢＤ  ＥＭ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）で確認された。
【００２０】
例６：ＤＴＢＤサンプル４つを、３．０００ｇに最大限正確に計量した。各サンプルの純度は、前記の方法により、前記の等式を用いて計算した。
【表１】
2008511532.tif 000006
記：最後の２つの測定は、サンプルが不十分なため、３．００ｇ未満であった。
【００２１】
同様にして、３つのサンプルの各純度を、本発明でＰＳＰを得る方法に原料として使用する前に、種々のＤＴＢＤバッチから計算した。結果は表１にまとめた。
【表２】
2008511532.tif 000007
【００２２】
オルトホウ酸アッセイ
参考文献：Ｕ．Ｓ．ＰＨＡＲＭＡＣＯＰＯＥＩＡ  ＸＸＩＩ／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ＸＶＩＩ，ｐ．１９０６
目的：ＰＳＰの製造に使用する予定のオルトホウ酸の純度の測定。
原理：サンプルを、グリセロールの存在下で、標準水酸化ナトリウムで滴定する。グリセロールは、オルトホウ酸と錯体を形成して、これをより可溶性にし、終点を上昇させ、精度を改善する。
装置：
２５０ｍＬビーカー
マグネティックスターラー及び撹拌子
５０ｍｌビュレット
パスツールピペット
分析秤（ｍｇ精度）
化学薬品：
標準１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨ  １Ｎ）
グリセロール
０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（０．１ＮのＮａＯＨ）
指示薬としての１％フェノールフタレインアルコール溶液
【００２３】
手順：
１．２５０ｍＬフラスコ中で、グリセロール５０ｍＬ及び脱イオン水５０ｍＬを、撹拌子を使用して、マグネティックスターラー上で注意深く混合する。指示薬としてフェノールフタレイン溶液を５滴添加する。０．１ＮのＮａＯＨ数滴を添加して、ｐＨを「フェノールフタレイン終点」に調整し、滴定に要した液滴数を記録する。グリセロールを中和させる際に最も重要な因子は、精度よりも粘稠度である。０．１ＮのＮａＯＨほんの数滴（１〜３）を要した。この値は、所定のグリセロール値について一定である。
２．サンプルから、ｍｇの精度で約２．０ｇのオルトホウ酸を計量する。重量を記録。このサンプルを５０％グリセロール水サンプルに添加し、１Ｎの標準ＮａＯＨで滴定を開始する。オルトホウ酸の溶解を促進するため、３０ｍＬのＮａＯＨを添加する。全てのオルトホウ酸が完全に溶解するまで撹拌する。１５分未満である。フェノールフタレイン終点に到達するまで滴定を続ける。要した１Ｎの標準ＮａＯＨの容積を、０．０１ｍＬまで精確に記録する。１００％純粋のオルトホウ酸２．０００ｇの滴定のために、３２．３５ｍＬの１Ｎの標準ＮａＯＨを要する。
３．オルトホウ酸の錯体形成を行うために、更に５０ｍＬのグリセロールを添加する。ステップ３で記録された、グリセロールを中和させるのに必要な液滴数の０．１ＮのＮａＯＨを添加する。１Ｎの標準ＮａＯＨを用いる滴定を続ける。要した滴定溶液の最終容積を０．０１ｍｌまでの精度で記録する。
４．ステップ３から５までをオルトホウ酸の２．０ｇサンプルを更に２つ使用して繰り返す。得られた結果全てを記録する。
オルトホウ酸は、９９．５〜１００．５％の純度であるにちがいない。
【００２４】
原料としてのオルトホウ酸のアッセイについての検証
装置：
５０−ｍＬ  ビュレット  クラスＢ  Ｋｉｍａｘ
Ｍｅｔｔｌｅｒの分析秤、モデルＨ５４
Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒのスターラー／ホットプレート、モデル４６５８
化学薬品：以下の化学薬品を使用した（商標及び規格を示す）。
オルトホウ酸、ＥＭ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）Ｎｏ．７６５−１、バッチＮｏ．９２４９、
１．０Ｎ水酸化ナトリウム、ＲＩＣＣＡ社製、Ｎｏ．７４５０、バッチＮｏ．Ｂ０７１、ＢＴＲにより調製されたバッチ０１３８２
フタル酸水素カリウム、Ｂａｋｅｒ、分析グレード、標準アシジメトリーＮｏ．２９５８−０１、バッチＮｏ．Ｄ１８０８４
フェノールフタレイン、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｎｏ．ＰＸ  ０５２５−１、バッチＮｏ．９１４２、エタノール中１％溶液
グリセロール、Ｂａｋｅｒ分析グレードＮｏ．Ｍ７７８−０９、バッチＣ３３６１０
水は、１８メガオーム−ｃｍを上回る比抵抗を用いて、Ｃｏｎｔｉｎｅｎｔａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｕｌａｂ  ｕｎｉｔから得た。
【００２５】
手順：水酸化ナトリウムは、フタル酸水素カリウム６．０００ｇ量に対し、３回、標定し、１１５度で１時間オーブン乾燥させ、使用するまでデシケーター中に保管した。滴定は、測定により、サンプル２．０００ｇを使用して３回実行した。
【００２６】
計算：
【数５】
2008511532.tif 000008
滴定されたオルトホウ酸の重量＝オルトホウ酸の当量（複数）×オルトホウ酸の当量の重量
オルトホウ酸の当量（複数）＝（ｍＬ  ＮａＯＨ）（Ｎ  ＮａＯＨ）／１０００
Ｅｑｓ．＝当量（複数）
Ｅｑ．＝当量
純度計算のために、等式中に置き換える
【数６】
2008511532.tif 000009
１ＮのＮａＯＨの各ｍＬは、オルトホウ酸（Ｈ3ＢＯ3）の６１．８３ｍｇに相当するので、等式は、以下のように記述することができる。
【数７】
2008511532.tif 000010
オルトホウ酸純度は、９９．５〜９９．８％であるにちがいない。
結果：以下のデータが、実験室で得られた現実の結果であり、例として提出される。
【００２７】
Ａ．水酸化ナトリウム標定
１ＮのＮａＯＨ、バッチ０１３８２、を使用して、６ｇ量のフタル酸水素カリウム６つを滴定した（３×）：１．００７Ｎ
Ｂ．オルトホウ酸バッチ９２４９の精度は、ＥＭ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）で実証された。
【００２８】
例１：３つのオルトホウ酸サンプルを、２．０００ｇなるべく正確に計量した。各サンプルの純度を前記の方法により、前記の等式を用いて計算した。
【表３】
2008511532.tif 000011
【００２９】
同様にして、３つのサンプルの各純度を、本発明でＰＳＰを得る方法に原料として使用する前に、異なるオルトホウ酸バッチから計算した。結果は表２に示す。
【表４】
2008511532.tif 000012
【００３０】
実験室で生成物１ｋｇを得る場合の、五ホウ酸ナトリウム五水和物（ＰＳＰ）（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）の合成法
装置
ハンドル付き３０００ｍＬビーカー
１０８×３８ｍｍテフロン（登録商標）製浮遊型撹拌子、Ｎａｌｇｅｎｅ（商標）
秤、Ｏｈａｕｓ  ＧＴ４０００
秤量皿（２）
２００ｍＬガラス製メスシリンダー
ホットプレートスターラー、Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＰＣ５２０（２）
プラスチック容器、１／３−カップ容量（２）
温度計（−２０〜１５０℃）
組み合わせ電極を備えるＣｏｒｎｉｎｇ  ｐＨ計  ２２０
２４ｃｍブフナー漏斗
ゲージ付き真空ボンベ
４Ｌ  Ｋｉｔａｓａｔｏ
Ｗｈａｔｍａｎろ紙Ｎｏ．４１、２４ｃｍ
Ｗｈａｔｍａｎろ紙Ｎｏ．１、２４ｃｍ
５Ｌプラスチック容器、Ｒｕｂｂｅｒｍａｉｄ
プラスチック撹拌棒
プラスチックスパーテル
水浴、プラスチック容器
１０００ｍＬ広口瓶、Ｎａｌｇｅｎｅ  ＰＭＰ、ねじ蓋（２）付き
１２５ｍＬ細口瓶、Ｎａｌｇｅｎｅ、ねじ蓋付き
ガラス繊維製盆、ＭＦＧ
化学薬品：
四ホウ酸二ナトリウム十水和物（ＤＴＢＤ、ホウ砂）、Ｕ．Ｓ．Ｂｏｒａｘ，ＮＦ
オルトホウ酸（ＯＢＡ、ホウ酸）、Ｕ．Ｓ．Ｂｏｒａｘ，ＮＦ
精製水
【００３１】
手順：
Ｉ．容器の準備
Ａ．３００ｍＬパイレックス（登録商標）ビーカーにラベルをつける。
Ｂ．１０８×３８ｍｍ撹拌棒を内部に挿入する。
ＩＩ．計量手順
Ａ．計算量の四ホウ酸二ナトリウム十水和物（ＤＴＢＤ）を風袋測定済みの秤量容器中で計量した（純度１００％のほぼ７００．０ｇに相当）。
Ｂ．オルトホウ酸を風袋測定済みの秤量容器中で、純度１００％オルトホウ酸のほぼ６８０．０ｇに相当するように、計量した。
ＩＩＩ．溶液の調製
Ａ．精製水ほぼ１６００ｍＬを反応ビーカー中に添加する。
Ｂ．Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒ  モデル４６５８のホットプレートスターラーを加熱レベル５に設定し、水を加熱し、時々温度計で温度をチェックする。
Ｃ．温度が５７〜５９℃に達したならば、加熱レベルを４に下げる。２００ＲＰＭでゆっくり撹拌しながら、計量されたＤＴＢＤとＯＢＡを交互に添加する。即ち、最初にＤＴＢＤ分、次いでＯＢＡ分を、それぞれ約５０ｇ添加し、もう一度ＤＴＢＤ分を、というように、全ての化学薬品が完全に添加されるまで続け、次の部分の添加前に、先に添加された部分が完全に溶解しているようにし、その間、撹拌子の動きを停止させない。全ての化学薬品をほぼ１２分で添加する。
Ｄ．化学薬品が完全に溶解するまで混合する。温度は、６１℃を超えないようにする。温度が約５５℃に達した時に、加熱レベルをレベル３に下げるならば、最良の制御である。熱溶液のｐＨを測定し、記録する。ｐＨは、６．４２であるにちがいない。ホットプレートからはずし、ｐＨを再度測定すると、６．３７であるにちがいない。容器中で冷却されるままにする。ｐＨは、約６．２０である。
ＶＩ．調製の完了
Ａ．冷却の間、またｐＨが約６．２０の時に、熱溶液を、５〜１０ｃｍＨｇ真空下に、２４ｃｍブフナー漏斗でＷｈａｔｍａｎろ紙Ｎｏ．４１を通して濾過する。撹拌子を外し、精製水で洗浄する。
Ｂ．５Ｌプラスチック容器に、濾液を撹拌子と一緒に移す。結晶形成を促進するために、１５０ＲＰＭで撹拌しながら、溶液が３３〜３４℃に冷却されるままにする。これは、任意の公知の方法で行われるが、冷却法が好ましい。容器を約２１℃の水浴内に移し、１５０ＲＰＭで撹拌し続ける。温度が２５〜２７℃の時に、氷を水浴に添加して、温度を１０〜１２℃に下げ、ゆっくりと撹拌を続ける。この時点で、溶液を冷蔵する。
Ｃ．溶液を、約６℃で１８〜２０時間冷蔵する。
Ｄ．結晶を、陰圧２０〜３０ｃｍＨｇ（真空）下に、２４ｃｍのＷｈａｔｍａｎろ紙Ｎｏ．１に収集し、収集された塊を真空下に６０〜７０分間乾燥させる。
Ｅ．紙繊維を損なって、生成物に混ざらないように注意し、結晶をガラス繊維製盆上に広げ、オーブン中に、約３５℃の温度で４８〜７２時間放置する。塊を定期的に撹拌し、乾燥させる。
Ｆ．収集した濾液の容積を測定し、記録する。定性分析のために、プラスチック瓶に１００ｍＬ採る。
Ｇ．乾燥結晶を収集し、計量する。理論的には、１０８４ｇ得られる。生成物をラベルを貼ったねじ蓋付きのポリプロピレン瓶に保管する。
【００３２】
【表５】
2008511532.tif 000013
【００３３】
合成工程は、工業的規模では、所望最終生成物１００ｋｇ当たり、以下のようになろう。
Ｉ．計量手順
ａ．生成物１０８．４ｋｇ（理論）のために、好適な容器中で、計算量を計量する（純度１００％の四ホウ酸二ナトリウム十水和物（ＤＴＢＤ）７０．０ｋｇにほぼ相当）。
ｂ．オルトホウ酸を別の容器中で、約６８．０ｋｇ計量する。
ＩＩ．溶液の調製
ａ．精製水ほぼ１６０．０Ｌを反応容器中に添加する。
ｂ．２００ＲＰＭで撹拌しながら、水を加熱し、温度計で温度を定期的にチェックする。
ｃ．温度が５７〜６１℃に達したならば、温度が６１℃以下に保持されるように加熱を減じる。２００ＲＰＭで撹拌しながら、連続的な撹拌下に、全てが完全に溶解するまで、計量されたＤＴＢＤとＯＢＡをゆっくりと添加する。
ｄ．温度は、６１℃を超えないようにする。熱溶液のｐＨを測定し、記録する。ｐＨは、６．４２でなくてはならない。
ＩＩＩ．調製の完了
ａ．熱溶液を、真空下に、濾過し、固体を除去する。
ｂ．濾液を容器に移し、１５０ＲＰＭで撹拌しながら、約１０〜１２℃まで溶液を冷却する。
ｃ．溶液を、約６℃で１８〜２０時間冷蔵する。
ｄ．結晶を、２０〜３０ｃｍＨｇの真空を使用して、収集し、収集された塊を３５℃のオーブンで４８〜７２時間、静かに乾燥させる。塊を定期的に撹拌して乾燥させる。
ｅ．集めた濾液の容積を測定し、記録する。定性分析のために、１００ｍＬ採る。
ｆ．乾燥結晶を収集し、計量する。理論的には、１０８．４ｋｇが得られる。生成物をラベルを貼ったねじ蓋付きのポリプロピレン容器に保管する。
【００３４】
この工程は、既に包装された乾燥結晶の形での最終生成物を得るのに５日以上はかからず、ほぼ４０日かかる、ＷＯ  ９１／０６３０４（Ｄｒｅｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）として公開された国際番号ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６３３１でのＰＣＴ出願とは異なる。また一方、業界は、Ｔｅｎｄｅｒ  Ｎｏ９３−０１１３−Ａ、Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｙｅｒ、Ｍｏｂｉｌ  Ｍｉｎｏｒ  ２０００等の市販の装備を有し、それにより、生成物は、１日以内に乾燥結晶の形態で得ることができる。
【００３５】
ＰＳＰは、以下の特徴を示す：
簡略化した式：ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ
ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏの理論的組成は：
Ｎａ2Ｏ（１０．５％）、Ｂ2Ｏ3（５９．０％）、Ｈ2Ｏ（３０．５％）
であり、酸化ナトリウム、三酸化ホウ素及び水の組み合わせとして表される化合物及びその成分について公開された分子量から計算される。
【００３６】
図１は、ＣＩＮＶＥＳＴＡＶ（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｔｕｄｉｅｓ）、メキシコ、で実施された、重水中の11Ｂの核磁気共鳴による分析の結果である。これから、ＰＳＰが、ホウ酸ナトリウム及びホウ酸により主に形成された混合物であることが示される。
【００３７】
構造：
【化１】
2008511532.tif 000014
分子量：２９５．１７
融点：融解しない。１００℃以上で、脱水し、昇華により減成産物を放出し、その後、より高温で分解する。
【００３８】
同定パラメータ
外観：白色微細結晶粉末
アッセイ：９５％を超え、少なくとも１０５％の含有（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）。この隔たりは、水和度の多少の違いによる。
熱重量分析による湿度含分は、２８．５〜３２．５％である。
ｐＨ：７．６〜８．２（４％溶液）
溶剤含有率：１％未満
【００３９】
五ホウ酸ナトリウム五水和物（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）アッセイ
目的：ＰＳＰの純度の決定。
原理：ホウ酸ナトリウム組成物は、酸化ナトリウム、三酸化ホウ素及び水当量により表すことができる。ＰＳＰの経験式（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）は、Ｎａ2Ｏ、５Ｂ2Ｏ3、１０Ｈ2Ｏとして表すことができる。Ｎａ2Ｏ含分は、標準ＨＣｌ滴定により確認される。Ｂ2Ｏ3含分は、標準ＮａＯＨ滴定により確認される。ＰＳＰの純度は、Ｂ2Ｏ3含分から計算され、ホウ素に依存する。
装置：
４００ｍＬビーカー
９ｃｍウオッチクリスタル（３．５インチ）
マグネティックスターラー／ホットプレート
撹拌子
５０ｍＬビュレット
２５ｍＬビュレット
化学薬品：
塩酸０．５Ｎ（ＨＣｌ）
水酸化ナトリウム０．５Ｎ（ＮａＯＨ）
マンニトール
１％アルコール溶液中の指示薬としてのフェノールフタレイン
１％アルコール溶液中の指示薬としてのメチルレッド
０．２５％水溶液中の指示薬としてのメチレンブルー
【００４０】
手順：
１．精製水１００ｍＬ中にＰＳＰ  １．００＋／−１ｍｇを溶解。正確な重量を記録。
２．メチルレッド５滴添加。溶液を酸性にするために、赤くなるまで、０．５ＮのＨＣｌを２５ｍＬビュレットから添加。０．３〜０．４ｍＬ過剰に添加。最終容積を記録。
３．ＣＯ2を除去するために、３分間沸騰させ、冷却して、１５０ｍＬの容積をとる。
４．メチレンブルー１滴を添加し、過剰のＨＣｌを０．５ＮのＮａＯＨで滴定する。容積を記録。
５．Ｎａ2Ｏの中性滴定溶液にマンニトール約１５ｇ、フェノールフタレイン５滴を添加、０．５ＮのＮａＯＨで終点まで滴定。容積を記録（注意参照）。
６．溶液の色が消えていく場合は、少量のマンニトール（２〜３ｇ）を添加し、滴定を続ける。
７．変化が永続するまで、ステップ６を繰り返す。
８．酸と塩基のパーセンテージを評価。
％Ｎａ2Ｏ＝０．５ＮのＨＣｌの正味容積（ｍＬ）×１．５５０
％Ｂ2Ｏ3＝０．５ＮのＮａＯＨの正味容積（ｍＬ）×１．７４１
注意：マンニトールを中和溶液に添加する場合、その色は緑から紫に変化する。この色は、形成された錯体マンニトール−ホウ酸の酸性によるのであって、フェノールフタレイン変化の紫色と混同してはならない。溶液中の水酸化ナトリウムは、紫色を緑色へと変え、溶液がフェノールフタレインでアルカリ性になると再び紫になる。全てのホウ酸がメタホウ酸ナトリウムに変換された時に、終点に到達する。
２Ｈ3ＢＯ3＋２ＮａＯＨ＋４Ｈ2Ｏ＝Ｎａ2Ｂ2Ｏ4・８Ｈ2Ｏ
【００４１】
五ホウ酸ナトリウム五水和物（ＮａＢ5Ｏ8・５Ｈ2Ｏ）アッセイの検証
装置：以下の物質は、実験室で遂行されたアッセイ及び検証に使用し、本明細書中に例として示される。
Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒのスターラー／ホットプレート、モデル４６５８（滴定混合物を撹拌するために２回使用）
Ｃｏｒｎｉｎｇ  スターラー／ホットプレート、モデル６７９５−５２０（テスト溶液を沸騰させるために）
０．５ＮのＨＣｌを分注するための、２５ｍＬ  Ｋｉｍａｘ（登録商標）Ｓｃｈｅｌｌｂａｃｈ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｂｕｒｅｔｔｅ，Ｋｉｍｂｌｅ  １７１７０Ｆ
０．５ＮのＮａＯＨを分注するための、酸化カルシウムで保護された、５０ｍＬ  Ｋｉｍａｘ（登録商標）Ｓｃｈｅｌｌｂａｃｈ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｂｕｒｅｔｔｅ，Ｋｉｍｂｌｅ  １７１７０Ｆ
セミミクロ電極組み合わせを備えたｐＨ計、モデル２２０、Ｎｏ．４７６５４０
Ｍｅｔｔｌｅｒの分析秤、モデルＨ５４
化学薬品：
マンニトール、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、ＵＳＰグレード、Ｎｏ．ＭＸ０２１６
オルトホウ酸、ＥＭ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）、ＮＯ．７５６−１、バッチ９２４９
無水四ホウ酸二ナトリウム、ＥＭ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）、Ｎｏ．６３０９−１、バッチ９１１８
０．５Ｎ水酸化ナトリウム、ＶＷＲ社により溶液で調製、バッチ９００６０６０２及び９００７２６０１ＢＴＲ
０．５Ｎ塩酸、ＲＩＣＡＡ社から溶液で調製、バッチ９００６０６０１ＢＴＲ
フタル酸水素カリウム、Ｂａｋｅｒ分析試薬、標準アシジメトリーＮｏ．２９５８−０１、バッチＤ１８０８４
フェノールフタレイン、ＥＭ  ＳｃｉｅｎｃｅＮｏ．ＰＸ  ０５２５−１、バッチ９１４２
メチレンブルー、Ｂａｋｅｒ分析試薬、Ｎｏ．Ｑ４７５−０３、バッチＤ０３７２８
メチルレッド、ナトリウム塩、Ｂａｋｅｒ分析試薬、Ｎｏ．Ｒ０８６−０２、バッチＤ１４７０８
水は、１８メガオーム−ｃｍを上回る比抵抗を用いて、Ｃｏｎｔｉｎｅｎｔａｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｕｌａｂ  ｕｎｉｔから得た。
【００４２】
手順：
アッセイの精度のために、５連続再現測定を行った。サンプルは、滴定前に５０℃で約２４〜３６時間乾燥させた。
【００４３】
アッセイの精度のために、オルトホウ酸及び四ホウ酸二ナトリウム、Ｓｉｅｎｃｅ  Ｓｕｐｒａｐｕｒ（登録商標）、グレードＥＭ、は、使用するまで、乾燥剤（ｄｅｓｉｃｃａｔｏｒ）を含有するプラスチックバッグ中に保管した。
【００４４】
感受性及び特異性研究のために、乾燥粉末の混合物をアッセイ直前に調製し、追加の処置をせずに滴定を行い、五ホウ酸ナトリウム五水和物のための手順に使用した。
【００４５】
サンプルの重量は、他に指示が無ければ、１．０００＋／−０．０００１ｇであり、全ての計算について、１．０００ｇと考えた。
【００４６】
水酸化ナトリウムの標定は、最初にフタル酸水素カリウム（ＫＨＰ）１ｇ量で試みたが、最良の結果が、測定により、より多量のＫＰＨを用いて得られた（０．５ＮのＮａＯＨで３ｇ、１ＮのＮａＯＨで６ｇ）ことが判明したので、最終容積は、未知物質の測定に使用されるものとほぼ変わらなかった。ＫＰＨは、ほぼ１１５℃で１時間オーブン乾燥させ、使用するまで乾燥して保管した。
【００４７】
計算：
【数８】
2008511532.tif 000015
サンプル中のＢ2Ｏ3重量は、掛算：
（サンプル中のＢ2Ｏ3当量（複数））×（Ｂ2Ｏ3当量の重量）
により得られる。
【数９】
2008511532.tif 000016
【００４８】
酸化ナトリウム含有率
計算は、
【数１０】
2008511532.tif 000017
を除いて、Ｂ2Ｏ3についての計算と同じである。
【数１１】
2008511532.tif 000018
【００４９】
結果：
酸−塩基標定
１．０．５ＮのＮａＯＨ、バッチ９００７２６０１、を、ＫＰＨ３ｇに対して５回滴定した。
２．０．５ＮのＨＣｌ、バッチ９００６０６０１、を、０．５ＮのＮａＯＨ、バッチ９００７２６０１に対して、３回滴定した。以下の結果が得られた。
０．５０１Ｎ；０．５００Ｎ；０．５０２Ｎ；平均＝０．５０１Ｎ
３．０．５ＮのＮａＯＨ、バッチ９００６０９６０２、を、０．５ＮのＨＣｌ、バッチ９００６０６０１に対して６回滴定した。以下の結果が得られた。
０．５０１Ｎ；０．５０１Ｎ；０．５０１Ｎ；０．５０１Ｎ；０．５０１Ｎ；０．５０１Ｎ；平均＝０．５０１Ｎ
ＰＳＰ純度
【数１２】
2008511532.tif 000019
【００５０】
ＰＳＰの使用
最初のアプローチは、ペニシリンに類似の抗生物質を発見することであったが、過敏性反応などの望ましくない作用のため、初期の段階では、薬物製造に異なる菌株を使用した（非常に大規模で、複雑な工程であったが、多数のアッセイと研究の後、現在ではほんの数日までに減っている）。動物でのアッセイの後、ヒトについて用量及び安全な休止期間が決定された。種々の動物種（マウス、ラット、犬、サル等）で毒性検査をして、健康な人間に使用が許され、その後、病気のヒトに対し使用され、主に細菌性の疾患に、例えば、血液、腎臓、肝臓又はその他の人体器官に、どのレベルでも有害な副作用の無い優れた結果を示した。この薬物の使用を抜本的に変えたものは、この記述された報告書中に記載の、ウイルス性病因の髄膜脳炎と診断された２歳の子供への使用であった。このことが、他の種々のウイルス性病因の疾病にこの薬物を使用し、優れた結果を得ることに気づかせた。
【００５１】
ヒューストン、テキサスの微生物学専門家により行われた抗菌作用の評価は、インビトロで行われた。この研究では、ＰＳＰ実験薬物の水溶液を使用して、紙ディスクにしみこませ、凍結乾燥させ、その後、予めテスト微生物を播種した寒天表面に適用した。５つのＰＳＰ希釈液、４０μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ及び４００ｍｇ／ｍＬを、４００ｍｇ／ｍＬＮａＣｌ対照に対してテストした。１４の細菌種をテストし、その全てが、インビトロで、ＰＳＰ４００ｍｇ／ｍＬの効力に対し感受性を有した（表３）。
【００５２】
【表６】
2008511532.tif 000020
菌株とディスク番号を結びつける数字は、阻害輪（ｍｍ）に相当する。
ディスク表題の下の数字は、以下の希釈を表す：
ＰＳＰ：１＝４ｍｇ／ｍＬ、２＝４０ｍｇ／ｍＬ、３＝４００ｍｇ／ｍＬ、４＝４０μｇ／ｍＬ、５＝４００μｇ／ｍＬ
ＮａＣｌ：６＝４００ｍｇ／ｍＬ（対照）
【００５３】
得られた結果は、ＰＳＰを抗生物質として使用できることを示唆する。
インビトロでのテストの後、マウス、ラット、サル、及び犬にインビボテストを実施した。この結果を使用して、ヒトに使用するための投薬量を設定した。
【００５４】
動物におけるインビボ毒性試験
マウスにおける急性及び亜急性毒性アッセイ
単回投与量の毒性を決定し、最大耐量（ＭＴＤ）を発見するために、１０００ｍｇ  ＰＳＰ／ｋｇの１日の用量を、マウスに静脈内投与した。全ての動物が、１４日まで、正常であり、剖検では、重要な損傷は観察されなかった。平均のマウスは、体重減少を示さなかったが、１匹の動物が、７日から１４日の間に、３．６ｇの体重減少を示した。しかし０日から７日の間には体重が増加しており、かつ剖検で重要な組織変質の臨床的兆候が見られないため、この動物の体重減少は厳密ではないと考えられた。これらの発見から、テスト状態でのＰＳＰは、マウスでは低い毒性を有することが判明した。１０００ｍｇ  ＰＳＰ／ｋｇ用量で、マウスが健康を維持しているので、この用量は、マウスにとり最大耐量（ＭＴＤ）と考えられた。２０日間続けて、カテーテルを介して経口で又は腹腔内注入によりＭＴＤを投与した。ＰＳＰを、１．２又は３ｍｇ／ｍＬの用量で、２０日間続けて、飲料水に投与した。この種のアッセイでの毒性サインは、２０日の実験期間、ＰＳＰを摂取した動物の体重減少である。各グループにつき平均体重を計算した。飲料水にＰＳＰ３ｍｇ／ｍＬの用量を入れて処理されたグループのみが、リバルビン対照より高い体重の増加を示した。
【００５５】
水１ｍＬにつき３ｍｇのＰＳＰの用量では、処理グループは、リバルビン対照グループと比較して、４１．１％の体重増加を示した。全ての処理グループが、７１％を上回る体重の増加を示した。
【００５６】
ラットにおける急性毒性アッセイ
単回投与毒物学アッセイをラットで実施した。用量間隔は、１００ｍｇＰＳＰ／ｋｇ〜４０００ｍｇＰＳＰ／ｋｇであり、カテーテルにより経口投与した。４０００ｍｇ／ｋｇ用量で、雄のラットが１１％の体重減少を示した。雌のグループには、体重減少の徴候は観察されなかった。連続して毎日投薬するために、４０００ｍｇ／ｋｇの用量を選択した。４０００ｍｇ／ｋｇの２日続けての投与後、テスト動物はいずれも生存しなかった。用量を１０００ｍｇ／ｋｇまで減じ、他のラット（各性それぞれ３匹）のグループに３日間投与した。この３日間、異常な徴候は観察されなかった。用量を２０００ｍｇ／ｋｇまで上げた。２０００ｍｇ／ｋｇでの連続処置４日の後に全てのラットが死亡した。これらの結果は、ラットにおけるＰＳＰのＭＴＤは、約１０００ｍｇ／ｋｇであることを示唆する。これは、マウスのＭＴＤ用量と一致する。
【００５７】
サルにおける急性及び亜急性毒性アッセイ
急性及び亜急性毒性アッセイをサルで実施した。対照動物とテスト動物に５００ｍｇＰＳＰ／ｋｇ及び２５０ｍｇＰＳＰ／ｋｇの用量を投与した。両方の投薬で、動物は、各用量服用後に嘔吐及び／又は無食欲を特徴とする毒性応答を示した。サルに関するＭＴＤは、１００ｍｇ／ｋｇと決定した。連続１４日間、投与を続けた。投薬計画が終了するとすぐに、全ての動物に剖検を実施した。重要な損傷は、識別されなかった。
【００５８】
結論
急性及び亜急性毒物アッセイの結果は、以下のＭＴＤを示唆する：
マウスでは１０００ｍｇＰＳＰ／ｋｇ体重
ラットでは略１０００ｍｇＰＳＰ／ｋｇ体重
サルでは１００ｍｇＰＳＰ／ｋｇ体重
これらの結果を基に、ヒトには１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量を使用するのが、道理上、安全であると考えられる。
【００５９】
ホウ酸は急性毒とは考えられない。大量のホウ酸の血液中への摂取又は吸収後に、２４〜７２時間で症状が現れることがある。ホウ酸塩は、尿中に除去され、最初の２４時間の間に、その７０％が除かれる。
【００６０】
食物に入れたＰＳＰでラット及び犬を飼育するアッセイを行った２年後に、体内にホウ素蓄積の徴候は観察されなかった。食事の０．３１％でのＰＳＰ摂取では、副作用はない。
【００６１】
薬学的研究
インビボでのＲａｕｓｃｈｅｒ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｖｉｒｕｓ（Ｒａｕｓｃｈｅｒ  ＭｕＬＶ：Ｒａｕｓｃｈｅｒマウス白血病ウイルス）系
Ｒａｕｓｃｈｅｒ  ＭｕＬＶウイルスに感染させた動物について、感染７日後の脾腫を観察した。時間とともに脾臓重量が増加する理由とその大きさは、投与されたウイルスの用量に左右され、ウイルス複製に直接又は間接に干渉する薬剤により緩和することができる。
【００６２】
マウスにＲａｕｓｃｈｅｒ  ＭｕＬＶを接種し、１．２又は３ｍｇ／ｍＬ用量を含む飲料水によるＰＳＰ投与、カテーテルを介して用量２５０、５００又は１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＳＰ投与又は静脈内への用量２５０、５００又は１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＳＰ投与で治療した。一般に、感染は、治療を受けていない動物では脾腫をもたらした。結果から、治療を受けなかった感染動物に比較して、飲料水中の３ｍｇ／ｍＬのＰＳＰ用量は、脾臓のサイズを７２％減じ、リバビリンは、脾臓のサイズを７４％減じたことが示された。
【００６３】
インビトロでの薬物学的特性
「新鮮（ｆｒｅｓｈ）」Ｔ細胞及びＨ９細胞へのＰＳＰ作用を評価するために、毒性研究を実施した。ＰＳＰ希釈液を２個の細胞培養に添加した。３３３μｇ／ｍＬと１０００μｇ／ｍＬのＰＳＰが細胞に毒性であったことを、結果が示した。細胞発達が影響され、明らかな細胞変性効果が増加した。
【００６４】
ＰＳＰ薬理活性を決定するために使用されるインビトロ方法は、抗菌活性を示すが、抗ウイルス又は殺ウイルス活性は示さない。ＰＳＰは、脾腫サイズを減じることにより、Ｒａｕｓｃｈｅｒ  ＭｕＬＶに感染したマウスを保護することが示された。インビトロで抗ウイルス活性又は殺ウイルス活性がないということを考慮すると、ＰＳＰの作用の考えられ得るメカニズムは、免疫調節である。
【００６５】
ヒトでのインビボアッセイ
前記研究から、体重１ｋｇ当たり１０〜２０ｍｇの用量を確認でき、この投与量間隔を、様々な細菌及びウイルス疾患、例えば、喉頭気管気管支炎、帯状ヘルペス、Ｂ型肝炎、水痘、敗血症等で試験した。
【００６６】
喉頭気管気管支炎：
７ヶ月の男児、体重７ｋｇ、栄養状態良好、喉頭気管気管支炎の症状あり。全身状態は悪く、眠らず、泣き叫ぶ、チアノーゼ（＋）、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ−Ａｎｄｅｒｓｅｎスコア７（鼻孔細動（ｎａｓａｌ  ｆｌａｐｐｉｎｇ）、肋間筋引っ張り、うめき声、剣状突起部の陥没、胸腹の収縮運動のずれ）、多病巣性及び食欲不振（ｈｙｐｏｒｅｘｉｃ）。
【００６７】
ＰＳＰ５０ｍｇを経口で１２時間ごとに投与した。これは１５ｍｇ／ｋｇ／日に相当する。最初の数時間の内に回復し始め、入院の必要は無かった。４８時間後、症状が消えた。子供は、更に１週間治療を受けた。
【００６８】
帯状ヘルペス
男性患者（５４歳）は、胸部右側に疼痛を１週間患っていた。肋骨の帯域は、神経路に沿って、非常な疼痛のある膨れを示した。患者は、予めステロイド及び鎮痛剤の治療を受けていたが、改善はみられなかった。ＰＳＰ５００ｍｇを経口で１２時間ごとに投与して治療を開始し、７２時間毎に鎮痛剤とＢ錯体（ＩＭ）を併用した。治療を開始して２４時間後に、著しい改善が見られ、治療を開始して１週間後、患者は無症候となった。患者に、1日あたり５００ｍｇでの治療を更に３週間続けた。
【００６９】
Ｂ型肝炎
７歳女児に、全身状態の軽度の変化として、軽度の黄疸、衰弱、脱力、食欲不振（ｈｙｐｏｒｅｘｉａ）、微熱、胆汁欠乏（ａｃｏｈｏｌｉａ）、胆汁尿、右側下肋部に軽度の痛み、目立たない肝腫大、の症状が始まった。実験室でのテストは、ビリルビンレベルの増加、ＡＬＴ、ＡＳＴ及びアルカリ性ホスファターゼの増加を伴う肝機能テストの変化を示した。
【００７０】
ＰＳＰ１００ｍｇを経口で２４時間ごとに１月投与した。治療開始後最初の数日で、すべての症状の緩慢な減少が見られ、１０日以内に症状が消え、１ヶ月後の実験室検査では、正常のレベルが示された。
【００７１】
水痘
３歳の女児が、殆ど全身を覆う、丘疹、小水疱及び膿胞を伴う特徴的な発疹を示し、また、全身状態の軽度の変化、軽度の衰弱及び脱力、微熱並びに食欲不振を示した。
【００７２】
発病３日後に、１００ｍｇ  ＰＳＰ／２４時間で、治療を開始した。病的症状は消失した。７２時間後、患者は、多少の皮膚の病巣以外は、ほぼ無症候となった。この皮膚の病巣は２日後に消失した。
【００７３】
敗血症
敗血症の２６歳女性患者。入院４８時間前の帝王切開の手術記録がある。全身状態は非常に悪く、４０℃の発熱、低血圧、頻脈、外科手術傷及び膣から血液の混じった化膿性滲出液が記録された。８時間毎のＰＳＰ（ＩＶ）１５０ｍｇと、２４時間ごとにペニシリン及びゲンタマイシンと共に１．５ｇを静脈内溶液により点滴で、全身経路を介して投与することで、治療を始めた。２４時間後に、感染徴候は消失し始め、７２時間後に無症候となった。患者は、合併症を発症せず、５日目に退院した。
【００７４】
髄膜脳炎
２歳男児、非常に悪い全身状態で入院。熱は無く、神経学的症候：髄膜刺激データ、頸部硬直、ケルニッヒ徴候（＋）、ブルジンスキー徴候（＋）、バビンスキー徴候（＋）、全身性反射亢進、増大された筋肉強直間代性痙攣、昏迷、後に昏睡。診断：ウイルス性髄膜炎、脊髄液分析により診断。１２時間毎の１５０ｍｇ  ＰＳＰ  ＩＶ（２０ｍｇ／ｋｇ／日）による治療を開始した。患者は、意識喪失から回復し始め、全身症状は消え始めた。治療開始５日後に患者は退院した。神経学的病状経過の唯一の後遺症は、ＶＩ頭蓋対（ｃｒａｎｉａｌ  ｐａｉｒ）の不全麻痺であり、これは、患者の退院３ヶ月後、もとの状態に戻った。家での治療は、１２時間毎の１００ｍｇ  ＰＳＰ  ＩＭ  の投与を１週間、その後、更に２週間、２４時間毎に同一の用量を投与した。患者は、如何なる事後の問題も報告せず、普段どおりの生活を行っている。
【００７５】
Ｃ型肝炎
Ｃ型肝炎と診断された、３２歳男性患者。総体的徴候：肝腫、全身状態の中程度の変化、衰弱、脱力、頭痛、筋肉痛、黄疸無し、微熱、食欲不振。２４時間毎のＰＳＰ５００ｍｇ（１５ｍｇ／ｋｇ／日）での治療を開始し、１５ヶ月行った。全病状経過は元に戻り、これは正常な実験室テスト（ＡＬＴ、ＡＳＴ及びアルカリ性ホスファターゼ等）を含む。現在、患者は無症候であり、体重が増加し、なんの症状も示さない。
【００７６】
前記結果により、ウイルス疾患の領域内で、薬物をテストすることが促され、その結果、ＡＩＤＳ患者で薬物をテストし、以下の結果を得た：
臨床アッセイをセットアップし、ＡＩＤＳに対するＰＳＰの治療的有用性を評価した。
ＰＳＰは、水溶性なので、投与すべき酸塩の形状を得る必要が無く、直接に使用して、所要の濃度で薬物を得ることができる。
ＰＳＰは、薬学的許容性賦形剤と共に医薬組成物を様々な薬剤形態に処方するのに有用であり、前記形態は、例えば、錠剤、カプセル、ロゼンジ、点滴剤用溶液、シロップ、膣座剤、座薬、ゲル、ローション、及びその経口、鼻、眼、耳、局所、腔内、膣、直腸、皮膚、毛細管、筋肉内、静脈内、皮内、皮下投与又は身体に投与及び吸収されるために好適なその他の手段のためのアンプルバイアル（ａｍｐｏｕｌｅ  ｖｉａｌｓ）である。
【００７７】
臨床アッセイ
臨床アッセイの目的は、以下であった：
１．疾病経過を緩和するのに必要な薬物用量を同定すること。
２．そのような用量の危険性を立証すること。
３．客観的及び主観的病状を管理すること。
４．ＰＳＰの利点及び効能を立証すること。
これらの研究は、抗体研究、ウイルス抗原制御研究及びリンパ球表現型を含む完全血球カウントを含んだ。
【００７８】
第一の研究では１８人の患者を含んだ。研究の開始時に、全ての被験者は、ＨＩＶ−１抗体に陽性であり、表４のとおりの、Ｗａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄ（ＷＲ）分類ＷＲ２〜ＷＲ６であった。１８人の被験者のうち９人が、ＷＲ２及びＷＲ３（検出可能な免疫学的損傷無し）と格付けされた。２人がＷＲ５と格付けられ、残りの５人の患者はＷＲ６と格付けられた。
【００７９】
５ヶ月の間、患者は経口投与により、薬物を１日２〜３回投与された。合計用量は、１日当たり５００〜２５００ｍｇであり、これは、治療開始時のＣＤ４カウントに依存する。この期間後、治療を中断し、被験者は、追跡調査通院をし、定期的な実験室及び臨床テストが実施された。これらの研究は、継続中である。
【００８０】
治療開始後、ＨＩＶ感染した個々の患者全員にＰＳＰ治療に対する顕著で見込みのある応答パターンが観察された。患者全員が、以下の副作用１つ以上を発現した：体重減少、発汗、うつ病、掌及び足の皮膚の軽微の剥がれ、下痢又は便秘、及び頭痛。同期間、患者の多くに、総リンパ球の減少が観察され、特にＣＤ８及びＣＤ４の減少が見られた。治療の８〜１２週で、症状の中断が観察され、総リンパ球、特にＣＤ８、の著しい増加が報告された（非感染の人間の正常の限界値より大）。活性化Ｔ細胞マーカー、ＨＬＡ−ＤＲ、の同様のパターンが観察された。Ｔ細胞活性化の第二のマーカー（ＩＬ−２）は、分析が実施できる前に、細胞の寿命のため、この研究で立証できなかった。
【００８１】
治療終了の５ヵ月後、患者１８人のうち１４人が良好な健康を示した。治療の最初の２１週以内に３人の患者が死亡し、そのうちの２人は、進行したカポジ肉腫（ＫＳ）が原因であり、３人目は進んだ栄養障害が原因であった。精神症状を有した（治療前、第二ＡＩＤＳ痴呆）４番目の患者は、２〜３ヶ月の間、好ましい応答をしたが、後に精神状態はもとに戻った。治療後５ヶ月の間、ＰＳＰ（５００ｍｇ／日）が継続されたが、最終的に、治療が始まって１年後に患者は死亡した。
【００８２】
【表７】
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【００８３】
有利な応答をしなかった４人の患者は、治療開始時に４０未満（絶対値）のＣＤ４カウントを有した。正常なＣＤ４カウントは、４００以上である。これら４人の患者の治療への最後の応答不全にもかかわらず、彼らは、少なくとも４ヶ月の間、食欲の増進及び最初の月の症状の減少を伴う生活の質の改善を経験した。ＫＳ病変部は、好ましい応答をし、治療の２〜８週の間、乾性のままであった。このような次第であるが、この応答は、一時的であり、ＫＳを有する２人の患者の死の前に、病変部は一層侵襲性になった。
【００８４】
良好な健康を示した１２人の患者に関して、ＰＳＰ治療を中断した５ヵ月後に、応答パターンに２つの特徴が観察された。テストされた患者のうちの７人は、ウイルスの存在に対し陰性であり、ＣＤ４細胞が著しく増加された（統計的に、これらの増加は、症例の１％でランダムに起こった）。これらの患者は、治療開始後、９ヶ月の期間に体重を維持又は増加させた。残りの５人の患者は、ウイルスに対し陽性のままであり、ＣＤ４細胞は減少又は一定のままであるが、見たところ良好な健康状態にあった。更に、ＥＬＩＳＡ市販のテストにより測定された抗−ＨＩＶ抗体活性は、この９ヶ月の間、１６人の生存患者のうち１０人で２〜１２倍上昇した。
【００８５】
ウイルスに対し陽性であった患者全員は、コントロール下に、テストが陰性（ウイルスがもはや検出されない）になるかどうかの測定を続け、ＣＤ４細胞が増加する時を確認する。
【００８６】
臨床アッセイの結論
１日当たり２５００ｍｇ用量下で、ＰＳＰは、疾病の進行を修正するように思える。そうはいっても、一部の患者に強い副作用が見られた。４０未満のＣＤ４細胞で始まった４人の患者は、治療に対し好ましい応答をしなかった。そのうちの１人は、治療の間、無症候であり、治療終了後の５ヶ月の間、外見的には優れた健康状態にあった。患者１８人のうち１４人は、治療の中断後４０週間生存した。治療の間、ＣＤ４細胞の著しい増加を示した７人の患者は、ウイルスに陰性のままであり、治療後の期間の間、ｐ２４抗原に対し陰性のままで、治療後のＣＤ４細胞は、正常の力価にとどまった。好ましい応答をした残りの４人の患者は、治療後にＣＤ４細胞の減少を示し、最近、ＰＳＰによる二回目の治療を始めた。これらの患者は注意深く観察されるであろう。これら４人の患者がｐ２４陽性にとどまったことに言及すべきである。ＰＳＰ治療の前に予めＡＺＴで治療された１人の患者に、治療後の４０週間の追跡調査の間、如何なる変化も見られなかったが、もう１人の患者は、ニューモシスティス・カリニによる肺感染（ＰＣＰ）を発現し、スルファメトキサゾールに部分的に応答した。後にこの患者は同一の感染により死亡した。両患者は、ＰＳＰでの治療を２回うけた。この最初のアッセイに対する重要な結果は、ＡＺＴ治療を止めた患者の即座の悪化とは対照的に、無症候の患者は、治療を一時中断した後の５ヶ月の間、無症候のままであったことである。最初の臨床アッセイは、疾病の経過を緩和させる治療に有効な低い薬物用量を定めるために、更なる調査を必要とする。
【００８７】
これらのアッセイの観察から、１日の用量２５００ｍｇは、重度の発疹、うつ病、下痢、及び体重の平均３．１ｋｇ減を伴う胃の問題のような副作用を、一部の患者に引き起こすことが示唆される。大抵の患者において、治療の最初の６〜８週の間、総リンパ球の力価、主にＣＤ４とＣＤ８、における減少も観察された。例えば、１人の患者では、治療の最初の８週で、ＣＤ４は、２６９から６６までに減じた。インビボ及びインビトロで得られた結果は、ＰＳＰの作用のメカニズムが免疫調節によることを示唆した。臨床アッセイにおいて、典型的にはＣＤ８刺激及び遅れてＣＤ４刺激が後に続く、ＣＤ４及びＣＤ８の減少を観察した。現実に、この作用のメカニズムは研究中である。これらの臨床の観察は、他の臨床アッセイを実施することを促す。医療記録形式が考案され、Ｅｐｉ−ｉｎｆｏバージョン３を履行した。Ｅｐｉ−ｉｎｆｏは、これらの種類の臨床アッセイのために、Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｔ  Ａｔｌａｎｔａ，Ｇｅｏｒｇｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａにより考案された統計ソフトウェアである。
【００８８】
第二グループに関する研究プロトコールを修正した。修正は、1日当たり２５００ｍｇに対し１日当たり最大１５００ｍｇまでとする薬物用量の減少、治療の前後の一連の皮膚反応テスト、及び追加の臨床実験室テストを含んだ。臨床アッセイは、１９人のＨＩＶ−１陽性患者を含み、そのうちの１７人が、ＷＲ４からＷＲ６までに分類され、残りの２人がＷＲ３と分類された。ＷＲ４からＷＲ６までの患者全員が免疫不全であり、これは、細胞仲介免疫応答の直接の尺度である、皮膚反応テストの抗体シリーズに対する応答が部分的又は皆無であることを意味する。
【００８９】
各患者は、1日当たり用量５００〜１５００ｍｇのＰＳＰを経口で４ヶ月間投与された。治療の７週間後副作用が観察された。これらの研究では、副作用は類似するが、最初の研究において観察されたものより重症ではない。例えば、より少ない容量のために、このグループでは比較的軽度の体重減少が観察された（平均の体重減少は、第一アッセイの３．１ｋｇに対し、０．５ｋｇであった）。第二グループでの臨床的観察は、研究の間、２週間ごとに記録された。治療の前の日まで、及び治療開始後の１２週間の観察記録から、アッセイの開始時に症状のない患者はいなかったことが示された。１４人が、３つ以上の症状を有していた。治療の１２週間後、１３人の患者に、主観的な苦痛の訴えもなく改善が見られ、３つを上回る症状のある患者は見られなかった。例えば、寝汗、体重減少、吐き気、嘔吐、上腹部の疼痛、ＨＳＶ（単純ヘルペスウイルス）などの問題が、治療の最初の数週の間に消えることが観察されたに違いない。
【００９０】
初期ＫＳの患者についての報告に特に関心がある。スクリーニング後の患者及び最初の血液サンプルでＫＳが検出された（ＰＳＰでの治療開始の直前）。この患者に、当初、ＰＳＰとビンクリスチンスルフェートを併用して投与した。治療１２週間後、ＫＳ病変部は、増加せず、即ち病理学により確認されず、５ヶ月間陰性にとどまった。実験室での発見及び／又は医学的観察により、臨床的改善が確認された。副腎過形成及びカンジダ症等の徴候は、１２週以内に解決した。リンパ節疾患の頻度は、研究開始から研究のほぼ最後までの、３回の観察結果で、減少し、同様にカンジダ症の頻度も１２から１まで減少した。
【００９１】
第一の臨床アッセイのグループと対照的に、第二アッセイの間及びその終結まで、初期ＣＤ４及びＣＤ８カウントからの顕著な変化はなかった。他方、ＨＬＡ−ＤＲ及びＩＬ−２マーカーにより検出されたリンパ球Ｔ活性に、統計的に顕著な増加があった。両方の細胞タイプが、治療の開始後３週間で減少した。その日から、両表現型の細胞（ＨＬＡ−ＤＲ及びＩＬ−２）の力価は、増加し、明らかに正常値を超えプラトーに達した。
【００９２】
一連の皮膚反応のテストは、治療開始前及び治療開始後５ヶ月間に、第二研究に関係する患者全員に実施した。患者１９人のうちの９人に、５ヶ月の治療の間、皮膚テストの抗原１つ以上への陽性の応答が発現した。これは、予め直面した感染症１つ以上に対する、細胞仲介免疫応答の回復を示唆する。
【００９３】
第二臨床研究では３人の患者が死亡した。患者は、それぞれ、ＣＤ４力価３０、１０、及び１０で出発した。１人目の患者は、ＰＣＰを発現し、肺感染症へのトリメトプリム及びスルファメトキサゾールの治療に一時的に応答したが、直ぐに原因不明の理由のため死亡した。２人目の患者は、境界決定及び消耗を伴う痴呆及び栄養失調を発現した。３人目の患者は脳トキソプラズマ症を発現した。最初の２人の患者は、治療１２週目で死亡し、３人目は治療終了後２５週で死亡した。
【００９４】
正常対照として、２人のＨＩＶ−抗体陰性成人被験者を第二アッセイに含む。６〜８週間の間、各患者に、１日２回ＰＳＰカプセル２個（１日１０００ｍｇ）をそれぞれ投与した。治療６週間の間、１人目の正常対照は、２週目に胃の不快感を少々有し、体重約３ｋｇを減じた。この体重減少は、患者が個人的な家族の問題によるものとした。２人目の対照は、ＰＳＰを８週間服用したが、副作用は見られなかった。これらの限定的な観察に基づき、ＰＳＰは、正常成人では、毒性を生じない又は最小の毒性があるように思われる。
【００９５】
第二臨床アッセイの結論
第二臨床アッセイでの患者の応答の予備的評価に基づき、ＨＩＶ−１陽性で無症候の各人及び、ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連症候群）又はＡＩＤＳ（ＷＲ４、ＷＲ５及びＷＲ６）の臨床的進行を有する誰にとっても、ＰＳＰは、有効かつ安全であるように思えると結論される。治療１２週間後に、徴候及び症状が消えたようである。１６人の生存患者のうち９人がＰＳＰの治療を４ヶ月継続した。残りの７人の患者に、２ヶ月の間、１日当たり５００ｍｇのカプセル１つを投与した。毎日５００〜１５００ｍｇのＰＳＰを摂取する患者の主観的及び客観的コントロールは、副作用が最小であることを示唆する。
【００９６】
高いＰＳＰ投薬（２５００ｍｇ／日）で治療されるＡＩＤＳ患者の免疫応答及びウイルス学的応答の実際の概念は以下のとおりである：
１．ＰＳＰ治療の開始時に、ＨＬＡ−ＤＲマーカーを担うＴ細胞及びＣＤ８の力価は、正常の力価より増加し、治療終了後には、正常の力価まで下がった。
２．ウイルスの存在を示さない（ウイルスに陰性である）患者は、ＣＤ４細胞の力価増加により、抗−ＨＩＶ抗体活性の増加を経験する。ウイルス複製を阻害するＣＤ*細胞の能力は、予め報告されていた。
【００９７】
第二臨床アッセイで用量を減じた（最大１５００ｍｇ／日）時点で、リンパ球表現型の主な変化が、活性Ｔ細胞集団、ＨＬＡ−ＤＲ又はＩＬ−２、に観察された。疾病が進展するにつれＨＬＡ−ＤＲ細胞数は減少することを、大部分の報告書が示す。これは、ＷＲ４、ＷＲ５及びＷＲ６の患者におけるＰＳＰ治療の応答としてのＴリンパ球活性化が、固有の免疫調節のためのマーカーとして働き得ることを示唆する。これらの細胞集団の性能について、引き続いてのアッセイを実施することが期待される。
【００９８】
ＷＲ３と分類された、第二臨床アッセイの患者２人が、治療の１８週間後、ＣＤ４及びＣＤ８細胞の増加を有したと述べられているのは興味深い。これら２人の患者において、Ｔ細胞活性化の変化は変動しやすかった。ＰＳＰ治療に感応するリンパ球集団は、薬物の用量ではなく疾病の病期に多く依存し得るらしい。
【００９９】
１人の患者では、ＫＳ病変部は、ＰＳＰとビンクリスチンの併用治療への応答として消散するようであり、そのため他の併用療法を研究するのは価値があることを注記するのは重要である。
【０１００】
感染症の治療におけるＰＳＰの利点は、顕著な毒性の副作用が無いこと、他の薬物に反応しなかった感染症に対する効能、及びＨＩＶなどの慢性ウイルス感染症に罹患した患者及びウイルス感染過程の患者への治療能力を含む。ウイルス感染過程は、例えば麻疹、水痘、帯状ヘルペス、Ｂ型肝炎、ウイルス性髄膜脳炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、喉頭気管炎、咽頭炎、気管支炎、細気管支炎、肺炎、感冒、ウイルス性病因からの胃腸病、単純ヘルペス、及び帯状ヘルペス、流行性耳下腺炎、天然痘、リンパ肉芽腫、サイトメガロウイルス、デング熱、一般的脳炎、狂犬病、ポリオ、及びエボラである。
【０１０１】
最初の病期及び最終病期でのＴＤ４とＴＤ８濃度の差が示唆するように、ＰＳＰは、免疫調節効果を有し、即ち免疫系を調節し、生命体が自然回復するのを助け、均衡状態を見つけ、かつ健康状態を再構築する。
【０１０２】
ＰＳＰの低い毒性レベルのため、作用の特異なメカニズムのため、かつ他の細胞抗ウイルス活性とのその可能性ある併用のために、ＰＳＰは、ＡＩＤＳ治療及び他の細菌性及びウイルス性疾患の治療の分野で、特異で高度に優位な立場にたつことができると信ずる。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】重水中の11Ｂの核磁気共鳴スペクトルを示す。
【国際調査報告】
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