(57)【要約】  本発明は、ボスウェル酸、又は新規改良方法を介して得られる選択的に濃縮した３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸（ＡＫＢＡ）又は１１−ケト−β−ボスウェル酸（ＫＢＡ）の化合物と、有機アミン、より特定すればグルコサミンとの間の反応により得られる新規な塩又はイオン対錯体に関する。これらの塩又はイオン対錯体は、関節の消炎及び鎮痛治療、ならびに癌予防又は癌治療薬の栄養補助食品及び食品補助において有用である。これらの塩又はイオン対錯体は、炎症性疾患又は癌を治療するための、身体外部又は臓器対象の化粧用又は医薬用の組成物においても使用し得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式Ｉ、
【化１】
2008538205.tif 000006
［式中Ｒ１及びＲ２は、Ｈであるか、又は一緒になってケト基を形成し、
Ｒ３は、Ｈ又はアシル基であり、
Ｘは、ＮＨＲ４Ｒ５Ｒ６（式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、Ｈ、あるいは置換若しくは非置換の低級若しくは高級アルキル基、又はアリール基、又は環状アルキル基）で表される、複素環塩基又は有機塩基である］
を有する、ボスウェル酸の天然混合物又は濃縮ケトボスウェル酸又は濃縮アセチルケトボスウェル酸と、有機アミンとの新規な塩又はイオン対錯体であって、
前記有機塩基が、グルコサミン（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）、ニコチンアミド（３−ピリジンカルボキサミド）、ピリドキシン（５−ヒドロキシ−６−メチル−３，４−ピリジンジメタノール）、カフェイン（３，７−ジヒドロ−１，３，７−トリメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、クレアチン（Ｎ−（アミノイミノメチル）−Ｎ−メチルグリシン）、アラントイン（２，５−ジオキソ−４−イミダゾリジニル）尿素）、テオブロミン（３，７−ジヒドロ−３，７−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、テオフィリン（３，７−ジヒドロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、メサラミン（５−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸）、エンフェナム酸（２−［（２−フェニルエチル）アミノ］安息香酸）、エトフェナメート（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−アミノ］安息香酸２−（２−ヒドロキシエトキシエチルエステル）、フルフェナム酸（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］安息香酸）、メクロフェナム酸（２−［（２，６−ジクロロ−３−メチルフェニル）アミノ］安息香酸）、メフェナム酸（２−［（２，３−ジメチルフェニル）−アミノ］安息香酸）、ニフルム酸（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−アミノ］−３−ピリジンカルボン酸）、タルニフルメート（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−３−ピリジンカルボン酸１，３−ジヒドロ−３−オキソ−１−イソベンゾフラニルエステル）、テロフェナメート（２−［（２，６−ジクロロ−３−メチルフェニル）−アミノ］安息香酸エトキシメチルエステル）、トルフェナム酸（２−［（３−クロロ−２−メチルフェニル）−アミノ］安息香酸）、Ｓ−アデノシルメチオニン（（３Ｓ）−５’−［（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）メチルスルホニオ］−５’−デオキシアデノシン分子内塩）、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン（１−［２−（３−メチルブトキシ）−２−フェニルエチル］ピロリジン）、ベンジダミン（Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［［１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］オキシ］−１−プロパンアミン）、ジフェンピラミド（Ｎ−２−ピリジニル−［１，１’−ビフェニル］−４−アセトアミド）、ジタゾール（２，２’−［（４，５−ジフェニル−２−オキサゾリル）イミノ］−ビスエタノール）、エモルファゾン（４−エトキシ−２−メチル−５−（４−モルホリニル）−３（２Ｈ）−ピリダジノン）、フェプラジノール（（±）−α−［［（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチルエチル）−アミノ］メチル］ベンゼンメタノール）、パラニリン（４−（９Ｈ−フルオレン−９−イリデンメチル）ベンゼンカルボキシミドアミド）、ペリソキサール（α−（５−フェニル−３−イソオキサゾリル）−１−ピペリジンエタノール）である、
新規な塩又はイオン対錯体。
【請求項２】
天然ボスウェル酸のグルコサミン塩、又はグルコサミン及びボスウェル酸のイオン対錯体であって、Ｒ１及びＲ２がＨであるか、又は一緒にＯを形成し、Ｒ３がＨ又はＣＯＣＨ３であり、Ｘがグルコサミンである、請求項１に記載の塩又はイオン対錯体。
【請求項３】
アセチルケトボスウェル酸のグルコサミン塩、又はグルコサミン及びアセチルケトボスウェル酸のイオン対錯体であって、Ｒ１及びＲ２が一緒にＯを形成し、Ｒ３がＣＯＣＨ３であり、Ｘがグルコサミンであり、塩又はイオン対錯体の調製前のアセチルケトボスウェル酸成分の純度が２〜１００％の範囲である、請求項１に記載の塩又はイオン対錯体。
【請求項４】
ケトボスウェル酸のグルコサミン塩、又はグルコサミン及びケトボスウェル酸のイオン対錯体であって、Ｒ１及びＲ２が一緒にＯを形成し、Ｒ３がＨであり、Ｘがグルコサミンであり、塩又はイオン対錯体の調製前のケトボスウェル酸成分の純度が２〜１００％の範囲である、請求項１に記載の塩又は対錯体。
【請求項５】
前記塩又はイオン対錯体が、様々な濃度の、チルカル酸の塩又はイオン対組成物を場合により含む、請求項１に記載のボスウェル酸の塩又はイオン対錯体。
【請求項６】
前記チルカル酸が、３−オキソ−チルカル酸、３−ヒドロキシ−チルカル酸、及び３−アセトキシ−チルカル酸であり、塩の組成物全体の０〜２０％を構成する、請求項１に記載のボスウェル酸塩又はイオン対錯体。
【請求項７】
グルコサミン遊離塩基をボスウェル酸の水性メタノール溶液にゆっくり添加するステップを含む、一般式Ｉのボスウェル酸及びグルコサミンを含有する塩又はイオン対錯体の調製方法。
【請求項８】
減圧下で溶媒を除去することにより、前記塩又はイオン対錯体の組成物を反応混合物から回収する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
グルコサミン遊離塩基のその場生成、及びボスウェル酸との反応の各ステップを含む、一般式Ｉのボスウェル酸及びグルコサミンを含有する塩又はイオン対錯体の調製方法。
【請求項１０】
遊離塩基の前記その場生成が、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムなどのような塩基の添加により達成され、アルコール又は水性アルコールの存在下で行われる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記塩又はイオン対錯体が、減圧下で溶媒を蒸発させることにより得られる、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ボスウェル酸：５〜６０％程度、及びグルコサミン：５〜７０％程度である、請求項１に記載のボスウェル酸及びグルコサミンの天然混合物を含む塩又はイオン対錯体の組成物。
【請求項１３】
ボスウェル酸５〜６０％、グルコサミン５〜７０％、カリウム２〜５％、及び塩化物２〜５％を含む、請求項１に記載のボスウェル酸及びグルコサミンの塩の組成物。
【請求項１４】
ＡＫＢＡ５〜９５％、グルコサミン５〜９５％、カリウム２〜２５％、及び塩化物２〜２５％を含む、請求項１に記載のアセチルケトボスウェル酸及びグルコサミンの塩の組成物。
【請求項１５】
ボスウェリア種のゴム樹脂から得た、ボスウェル酸の混合物を含む抽出物から、請求項３及び１４に記載の塩を製造するための２５〜１００％３−Ｏアセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸を製造する方法であって、前記抽出物由来のボスウェル酸含有分画のアセチル化ステップ、続いて、断続的後処理をしない、同じ反応容器内での前記アセチル化生成物の酸化ステップ、次いで酸処理及び／又はクロマトグラフ分離によって、２５〜１００％の範囲に３−Ｏアセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸を濃縮した分画を得るステップを含む方法。
【請求項１６】
およそ、ＫＢＡ５〜９５％、グルコサミン５〜９５％、カリウム２〜２５％、及び塩化物２〜２５％を含む、請求項１に記載の１１−ケト−β−ボスウェル酸及びグルコサミンの塩の組成物。
【請求項１７】
ボスウェリア種のゴム樹脂から、請求項４及び１６に記載の塩又はイオン対錯体の組成物を生成するための２５〜１００％１１−ケト−β−ボスウェル酸を製造する方法であって、前記抽出物由来のボスウェル酸含有分画のアセチル化ステップ、続いて、断続的後処理をしない、同じ反応容器内での前記アセチル化生成物の酸化ステップ、次いで過アセチル化酸化生成物の塩基処理及び／又はクロマトグラフ分離によって、２５〜１００％の範囲に１１−ケト−β−ボスウェル酸を濃縮した分画を得るステップを含む方法。
【請求項１８】
前記アセチル化ステップが、無水酢酸／ピリジン、又はアセチルクロライド／ピリジン、又は無水酢酸単独で前記抽出物を処理することにより行われる、請求項１５及び１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記酸化が、酢酸無水酢酸／三酸化クロム、又は酢酸／三酸化クロムでアセチル化反応混合物を処理することにより行われる、請求項１５及び１７に記載の方法。
【請求項２０】
アセチル化及び酸化後の反応生成物が、氷水に注ぎ、次いで固形物のろ過、水での洗浄、及び乾燥により得られる、請求項１５、１７、１８、及び１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記生成物を、高温において、４Ｎ  ＨＣｌで処理し、得られる混合物をろ過し、４Ｎ  ＨＣｌ及び水で洗浄し、乾燥して２５〜４０％ＡＫＢＡを得る、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
酸処理後の前記生成物を、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、ヘキサン、メタノールなどの有機溶剤を単独で、又は組み合わせて使用する、シリカカラムクロマトグラフィーにかけてＡＫＢＡ濃縮分画を得、適当な溶媒中で結晶化を繰り返した後、４０〜１００％ＡＫＢＡを回収する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記生成物を、適当な溶媒中で塩基（８Ｎ  ＫＯＨ）処理し、次いで母液をろ過及び酸性化し、固形物をろ過し、乾燥して２５〜４０％ＫＢＡを得る、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
塩基処理後の前記生成物を、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、ヘキサン及びメタノールなどの有機溶剤を単独で、又は組み合わせて使用する、シリカカラムクロマトグラフィーにかけてＫＢＡ濃縮分画を得、適当な溶媒中で結晶化を繰り返した後、４０〜１００％ＫＢＡを回収する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
結晶化の溶媒が、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、ヘキサン及びメタノールの単独又は組合せである、請求項２２及び２４に記載の方法。
【請求項２６】
２５〜１００％の範囲で濃縮した前記ＫＢＡを、ピリジン／無水酢酸、又は無水酢酸だけを使用してアセチル化し、２５〜１００％の範囲に濃縮したＡＫＢＡを得る、請求項１５及び１７に記載の方法。
【請求項２７】
ボスウェル酸又はケトボスウェル酸又はアセチルケトボスウェル酸及び有機アミンが、本明細書に記載するように実質的に含まれている、塩又はイオン対錯体。
【請求項２８】
抗炎症剤として、鎮痛剤として、癌化学予防のために、及び抗癌剤として強力な５−リポキシゲナーゼ活性を示す、請求項１に記載の式Ｉに表される、ボスウェル酸又はケトボスウェル酸又はアセチルケトボスウェル酸と、グルコサミン又は他の有機アミンとの新規な塩又はイオン対錯体の使用。
【請求項２９】
化粧品及び炎症性疾患を治療する医薬組成物における、請求項１に記載の式Ｉで表されるボスウェル酸又はケトボスウェル酸又はアセチルケトボスウェル酸と、有機アミンとの新規塩の使用。
【請求項３０】
請求項１に記載の式Ｉの塩又はイオン対組成物を、それを必要とする人に投与することを含む、炎症性疾患の治療法。
【請求項３１】
医薬として許容可能な担体中に、請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項３２】
前記担体が水性又は非水性の担体である、請求項３１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、置換／非置換ボスウェル酸と、特にグルコサミンであるが、それだけに限らない、特定の有機塩基との新規な塩又はイオン対錯体に関する。本発明はまた、ボスウェル酸の混合物を含む抽出物から、以下それぞれ（ＡＫＢＡ）及び（ＫＢＡ）と称する、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸及び１１−ケト−β−ボスウェル酸を、選択的に濃縮する改良方法も含む。
【０００２】
背景技術
炎症は、刺激、外傷、又は感染により引き起こされ、発赤及び発熱、腫脹、機能喪失、及び痛みを特色とする、肝要な保護的生体過程である。前記誘発条件に加え、炎症は年齢関連性因子により起こる場合もある。一般人口の平均寿命は、感染症の効率的な抑制、及び栄養食品入手の向上により、過去数十年間で劇的に伸びている。寿命におけるこの明確な伸びのために、変化する環境条件と相まって、関節炎、糖尿病、癌、循環器疾患など、年齢関連性の慢性疾患発生率が上昇した。慢性的な炎症状態及び癌は、世界中の多くの国で、全文化の人々にとって、新たな健康問題となってきた。関節炎は、現代で最も衰弱性の強い疾患の１種である。これら２疾患の患者及びその家族の生活の質が、深刻な影響を受けている。非ステロイド性抗炎症薬は、最も一般的に使用されるリウマチ性疾患の治療薬である。現在、数十年に及ぶ、多様な文化による使用を経て、その確立した安全性及び有効性により、天然の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）への需要が著しく急増してきた。
【０００３】
炎症及び発癌の過程は、アラキドン酸の増加した代謝活性により引き起こされることが知られている。この過程中、アラキドン酸は、２つの主な経路、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）及びリポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）の経路へ分岐する。ＣＯＸ経路は、プロスタグランジン及びトロンボキサンの生成を引き起こし、ＬＯＸ経路は、ロイコトリエン（ＬＴＳ）及びヒドロキシルエイコサテテトラエン酸（ＨＥＴＥ）となる。これらの種類の炎症分子は、深刻な生物学的影響を及ぼし、ヒトの癌の発現及び進行を促進する。
【０００４】
ロイコトリエン及び５（Ｓ）−ＨＥＴＥは、炎症、アレルギー、及び閉塞過程の重要な媒介物質である。ロイコトリエンは、微小血管の透過性を増大する、強力な走化性物質である。５−リポキシゲナーゼの抑制により、ＴＮＦ−α（炎症において中心的な役割を果たすサイトカイン）の発現が間接的に減少される。したがって、５−リポキシゲナーゼは、喘息、関節炎、潰瘍性大腸炎などの腸疾患、及びショック、虚血などの循環障害を含む、種々の炎症及び過敏症性ヒト疾患に対処する潜在能力がある抑制剤を同定するための標的酵素である。
【０００５】
同様に、プロスタグランジンは、慢性的な炎症部位で高濃度に生成される細胞間のメッセンジャーで、血管拡張を起こし、血管透過性を増大させ、痛み受容体を感作できる。炎症促進プロスタグランジン（ＰＧＥ２）は、誘導性アイソフォーム、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）により生成される。胃腸及び腎臓系機能において重要なプロスタグランジンは、恒常的に発現するアイソフォーム、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）により生成される。ＣＯＸ−１は、保護的ハウスキーピングアイソフォームであり、胃の分泌物に存在する酸及びペプシン間に障壁を形成する粘膜の粘膜細胞生成を調節する。したがって、非選択的ＣＯＸ抑制剤は、深刻な副作用を引き起こす。そのため、世界中の科学者が、５−リポキシゲナーゼ及びシクロオキシゲナーゼ−２の酵素を阻害する非ステロイド系消炎剤を同定することに、多大な努力を注いでいる。ＣＯＸ−２及び５−ＬＯＸは共に、いかなる種類の炎症状態においても一般的に発現するので、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯＸの両酵素を阻害することができる、いわゆる二重作用性消炎剤を得ることに、現在努力が集中している。残念なことに、炎症性疾患の症状を実際に軽減できる新規な二重作用性天然ＮＳＡＩＤを発見する可能性は、非常に薄い。したがって、本研究者らは、ＣＯＸ−２阻害作用を有する薬物と５−ＬＯＸ阻害作用を有する薬物との組合せを使用するということが、次善の選択肢であると想到した。
【０００６】
関節リウマチは、関節の潤滑機構及び緩衝作用に影響する、慢性の炎症状態である。この自己免疫疾患の結果、骨表面が破壊されて、硬直、腫脹、疲労、きりきりする痛み（ｃｒｉｐｐｌｉｎｇ  ｐａｉｎ）に至る。骨関節炎は、関節炎の一般的な形であり、主に軟骨グリコアミノグリカン（ｇｌｙｃｏａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｎ）の進行性変性の結果である。その損傷は、軟骨を含む関節構造を回復及び修復する能力が減少することにより、しばしば悪化する。軟骨の平滑な表面は、硬く、粗くなり、摩擦を起こす。この結果、関節は変形し、痛み、硬直する。諸研究により、４千万人を超えるアメリカ人が骨関節炎を有し、うち８０％の人々が５０歳を超えていることが指摘されている。そのため、骨関節炎治療の主な焦点には、軟骨細胞の再生及び正常な関節機能に必要な生体物質の生成を刺激するだけでなく、痛み、炎症を減少する薬剤が含まれるべきである。
【０００７】
したがって、本発明の目的は、栄養補助食品として、有害な副作用を伴わずに抗関節炎特性を示す、塩又はイオン対錯体を提供することである。
【０００８】
［ボスウェル酸］
インドの乳香として知られているボスウェリア種のゴム樹脂は、インドの伝統アユルベーダ医療で抗炎症剤として使用されてきた。古代アユルベーダ教本には、その治療用法が記されている。インドのＣＳＩＲ研究所で行われた臨床治験により、有害な副作用がなく、患者の８８％に可から優の結果が示された（Ｓｉｎｇｈ，Ｇ．Ｂ．、Ｓｔａｔｕｓ  ｒｅｐｏｒｔ、ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  ｆｒｏｍ  ｐｌａｎｔ  ｓｏｕｒｃｅｓ、１９８２）。膝骨関節炎を有する患者の、無作為で二重盲検の偽薬比較臨床試験により、統計的に有意な痛みの改善、腫脹の減少、膝屈曲の増加などが示された（Ｋｉｍｍａｔｋａｒ、Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００３、１０、３〜７）。ボスウェリア・セラータ（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）抽出物により見られる治療効果は、潰瘍性大腸炎を有する患者におけるスルファサラジン及びメサラジンにより示される治療効果に匹敵した（Ｇｕｐｔａ、Ｉ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．、１９９８、３、５１１〜１４、及びＧｅｒｈａｒｄｔ，Ｈ．ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２００１、３９、１１〜１７）。消炎作用源は、ボスウェル酸（Ｓａｆａｙｈｉ、Ｈ．ら、Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ、１９９７、６３、４８７〜４９３、及びＪ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９２、２６１、１１４３〜４６、共に米国から出版された雑誌）、ボスウェリア樹脂から単離された一群のトリテルペン酸（Ｐａｒｄｈｙ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．、１９７８、１６Ｂ、１７６〜１７８）にあるとされた。これらの化合物は、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）を抑制することにより、抗炎症活性を発揮する。ボスウェル酸は、その抗増殖作用でも、近年注目を集めた。ボスウェル酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでいくつかの白血病細胞系を阻害し、メラノーマ成長を抑制し、アポトーシスを誘発した（Ｈｏｓｔａｎｓｋａ，Ｋ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００２、２２（５）、２８５３〜６２）。アセチルボスウェル酸は、ヒトのトポイソメラーゼＩ及びＩＩαの二重阻害剤という独特な部類であることがわかった（Ｓｙｒｏｖｅｔｓ、Ｔ．ら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２０００、５８（１）、７１〜８１）。ボスウェル酸の免疫調節活性は、米国から出版された、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｈｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、１０、１０７〜１１２で、Ｓｈａｒｍａらにより報告された。ボスウェル酸の構造条件に対する詳細な研究により、全６種の酸のうち、以下ＡＫＢＡと称する３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸が、５−ＬＯＸに対し最も顕著な阻害活性を示すことが指摘された（Ｓａｉｌｅｒ，Ｅ．Ｒ．ら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９９６、１１７、６１５〜６１８）。ＡＫＢＡは独特な機序により作用し、カルシウム依存的及び可逆的に５−ＬＯＸに結合し、非酸化還元型で非競合的な阻害剤として作用する（Ｓａｉｌｅｒ，Ｅ．Ｒ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９９８、２５６、３６４〜３６８）。ＡＫＢＡ、あるいはそれを含む植物の抽出物又は組成物は、すじを柔軟にし、及び／又は皮膚を弛緩する薬剤として、局所適用に��効であると報告された（Ａｌａｉｎ，Ｍ．ら、米国特許出願第２００４０１６６１７８号、２００４年８月２６日付）。したがってＡＫＢＡは、慢性的炎症性疾患の治療の可能性に対して、徹底的な調査の対象となった。
【０００９】
［グルコサミン］
グルコサミンは、関節構造で多量に見出される天然物質である。関節構造におけるグルコサミンの主な機能は、関節組織の修復及び保持に必要な軟骨成分を生成することである。グルコサミンは、関節をまとめ合わせ、軟骨基質の増加を促進する、線維性物質のタンパク質であるコラーゲンなどの、関節構造成分の形成を刺激する。コラーゲンは、関節軟骨と呼ばれる緩衝クッションの主な成分である。それは滑液の生成に必要な栄養素でもある。人によっては、グルコサミンを生成する能力が年齢とともに失われる恐れがあり、その結果、骨関節炎患者においては、損耗中に破壊された軟骨の成長が阻害される（Ｔｏｗｈｅａｄ，Ｔ．Ｅ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２００３、４９、６０１〜６０４）。グルコサミン硫酸塩の形で栄養補助食品として経口で摂取すると、グルコサミンは、関節破壊に対し保護効果を発揮することが明らかになっており、更に関節組織による選択的使用によって、健全な関節機能を促進し、骨関節炎における潜在的な治療効果を示す（Ｐｅｒｒｙ，Ｇ．Ｈ．ら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、１９７２、３１、４４０〜４４８）。
【００１０】
グルコサミン硫酸塩を用いるいくつかの二重盲検によれば、骨関節炎の症状緩和において、非ステロイド系消炎剤と匹敵するか、又はそれ以上でさえある治療効果が示された（Ｖａｚ，Ａ．Ｌ．、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｏｐｉｎ．、１９８２、８、１４５〜１４９；Ｄ’Ａｍｂｒｏｓｉａ，Ｅ．Ｄ．ら、Ｐｈａｒｍａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａ、１９８２、２、５０４〜５０８、及びＴａｐａｄｉｎｈａｓ，Ｍ．Ｊ．ら、Ｐｈａｒｍａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａ、１９８２、３、１５７〜１６８）。ＮＳＡＩＤは症状を軽減するに過ぎないが、一方グルコサミンは、骨関節炎疾患の根本的原因に対処する。グルコサミンは、骨関節炎により引き起こされた損傷を修復するグルコサミノグリカンなど多くの構成成分に、基礎単位を提供することにより、身体がそれ自体の疾患に立ち向かう自然能力を支える。本研究では、グルコサミン塩酸塩を使用する。
【００１１】
発明の開示
ボスウェリア・セラータのゴム樹脂の有機溶剤抽出物は、全６種のボスウェル酸及び２種のチルカル酸（ｔｉｒｕｃａｌｌｉｃ  ａｃｉｄｓ）を含む。これらの酸を図１に示し、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ６、Ｔ１、Ｔ２、及びＴ３で表す。諸研究により、ＡＫＢＡは、全てのボスウェル酸の中でも最も強力な抗炎症剤と指摘されてきた。図１でＢ２として表されるＡＫＢＡの濃度は、抽出物中１〜１０％の範囲にしかならないが、ほとんどの場合２〜３％の範囲である。ボスウェル酸一般、特にＡＫＢＡの潜在的有用性は、可能性のある全ての面から、これらの化合物の更なる開発を始める大きな刺激となり得る。
【００１２】
【化１】
2008538205.tif 000002
【００１３】
【化２】
2008538205.tif 000003
【００１４】
本発明は、新しく改良された方法を利用して、天然ボスウェリアの抽出物から、活性化合物のＫＢＡ及びＡＫＢＡを、３０％〜１００％といった治療に有用な範囲にまで選択的に濃縮後、該濃縮化合物を、抗関節炎の栄養補助食品として使用するために、向上した溶解性及び改善した治療有効性を有する、塩又はイオン対錯体に転換することを目的とする。塩又はイオン対の組合せは、ボスウェル酸の酸機能、及びアミノ有機化合物、特にグルコサミンからのアミン機能を利用することにより実現できる。
【００１５】
天然ボスウェリア抽出物からのＡＫＢＡの濃縮は、国際特許出願（２００３年９月１２日付、ＰＣＴ国際公開第０３／０７４０６３号パンフレット）、及び米国特許（２００３年１０月２３日付公開、出願番号第２００３０１９９５８１号、及び２００４年４月１５日付公開、出願第２００４００７３０６０号）にも、すでに記載されていた。これらの特許に記載の方法では、多段階的処置が用いられ、手間のかかる後処理及びクロマトグラフィー精製が必要とされる。本発明は、アセチル化及びアリル酸化の各ステップが単一ポットで行われる改良方法である。この方法では、特許及び学術論文で報告されている各方法により必要とされているような、アセチル化後の労力集約的な後処理、及び酸化ステップへ移行する前の時間のかかる生成物乾燥に必要性が取り除かれる。またこの方法では、アセチル化ステップからの未反応のピリジン及び無水酢酸を効率的に利用して、ＣｒＯ３／ピリジン及びＣｒＯ３／無水酢酸などの高活性酸化系を形成する。本発明は、過アセチル化及び酸化ステップの全反応時間を効率的に削減する。新規な方法では、クロマトグラフィーを全く必要とせず、酸／塩基の処理により、ＫＢＡ／ＡＫＢＡ濃縮（３０〜４０％）生成物中にクロム不純物が存在する可能性が除去される。
【００１６】
３０〜４０％１１−ケト−β−ボスウェル酸（ＫＢＡ）に濃縮した分画は、粗製混合物を塩基で処理し、次いで母液のろ過及び酸性化後、ろ過及び乾燥により白色固体の分離をすることによって実現できる。次いでそれを再アセチル化し、３０〜４０％ＡＫＢＡ濃縮分画を得る。ＫＢＡ及びＡＫＢＡの濃縮率を高くした（４０〜１００％）分画は、加水分解混合物及び再アセチル化混合物に、それぞれクロマトグラフィー法を適用することにより得られる。
【００１７】
ＡＫＢＡを５〜１００％の範囲で含む、ボスウェル酸のイオン性塩又はイオン対錯体は、適切に高めたボスウェル化合物及び適切なアミン化合物を使用し、実施例に挙げる代表的な手順を採用することにより得られる。
【００１８】
本発明は、下記一般式を有する、ボスウェル酸及びケトボスウェル酸及びアセチルケトボスウェル酸のグルコサミンとの新規な塩又はイオン対錯体に関する。
【００１９】
【化３】
2008538205.tif 000004
式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈであるか、又は一緒になってケト基を形成し、
Ｒ３は、Ｈ又はアシル基であり、
Ｘは、ＮＨＲ４Ｒ５Ｒ６（式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、Ｈ、あるいは置換若しくは非置換の低級若しくは高級アルキル基、又はアリール基、又は環状アルキル基）で表される複素環塩基又は有機塩基である。
【００２０】
上式において、有機塩基は、グルコサミン（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）、ニコチンアミド（３−ピリジンカルボキサミド）、ピリドキシン（５−ヒドロキシ−６−メチル−３，４−ピリジンジメタノール）、カフェイン（３，７−ジヒドロ−１，３，７−トリメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、クレアチン（Ｎ−（アミノイミノメチル）−Ｎ−メチルグリシン）、アラントイン（２，５−ジオキソ−４−イミダゾリジニル）尿素）、テオブロミン（３，７−ジヒドロ−３，７−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、テオフィリン（３，７−ジヒドロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、メサラミン（５−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸）、エンフェナム酸（２−［（２−フェニルエチル）アミノ］安息香酸）、エトフェナメート（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−アミノ］安息香酸２−（２−ヒドロキシエトキシエチルエステル）、フルフェナム酸（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］安息香酸）、メクロフェナム酸（２−［（２，６−ジクロロ−３−メチルフェニル）−アミノ］安息香酸）、メフェナム酸（２−［（２，３−ジメチルフェニル）−アミノ］安息香酸）、ニフルム酸（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−アミノ］−３−ピリジンカルボン酸）、タルニフルメート（２−［［３−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−３−ピリジンカルボン酸１，３−ジヒドロ−３−オキソ−１−イソベンゾフラニルエステル）、テロフェナメート（２−［（２，６−ジクロロ−３−メチルフェニル）−アミノ］安息香酸エトキシメチルエステル）、トルフェナム酸（２−［（３−クロロ−２−メチルフェニル）−アミノ］安息香酸）、Ｓ−アデノシルメチオニン（（３Ｓ）−５’−［（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）メチルスルホニオ］−５’−デオキシアデノシン分子内塩）、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン（１−［２−（３−メチルブトキシ）−２−フェニルエチル］ピロリジン）、ベンジダミン（Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［［１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］オキシ］−１−プロパンアミン）、ジフェンピラミド（Ｎ−２−ピリジニル−［１，１’−ビフェニル］−４−アセトアミド）、ジタゾール（２，２’−［（４，５−ジフェニル−２−オキサゾリル）イミノ］−ビスエタノール）、エモルファゾン（４−エトキシ−２−メチル−５−（４−モルホリニル）−３（２Ｈ）−ピリダジノン）、フェプラジノール（（±）−α−［［（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチルエチル）−アミノ］メチル］ベンゼンメタノール）、パラニリン（４−（９Ｈ−フルオレン−９−イリデンメチル）ベンゼンカルボキシミドアミド）、ペリソキサール（α−（５−フェニル−３−イソオキサゾリル）−１−ピペリジンエタノール）である。
【００２１】
本発明者らは、ボスウェル酸のヘテロ原子塩基（「有機塩基」とも称する）との塩又はイオン対錯体を、炎症を減少し、他の健康上の利点を提供する食餌又は医薬の組成物中に含めるために合成する、簡易な方法を開示した。これらの塩又はイオン対錯体は、反応式１に示すように、有機酸（ＲＣＯＯＨ）と有機塩基（ＮＲ４Ｒ５Ｒ６）との簡易な酸塩基反応により合成される。
【００２２】
【化４】
2008538205.tif 000005
【００２３】
本発明による新規の組成物は、以下の方法により調製できる。
（ａ）ボスウェル酸又はケトボスウェル酸又はアセチルケトボスウェル酸を有機塩基と反応させる。
（ｂ）有機遊離塩基をその場（ｉｎ  ｓｉｔｕ）生成し、ボスウェル酸又はケトボスウェル酸又はアセチルケトボスウェル酸と反応させる。
【００２４】
第１の方法では、化学量論的等量の反応剤を混合し、所望の塩又はイオン対錯体を得る。該反応は、有機遊離塩基、特にグルコサミン遊離塩基を、ボスウェル酸の水性メタノール溶液へゆっくり添加することにより開始するのが好ましい。ボスウェル酸（ＨＰＬＣにより４８％）は、ボスウェリア・セラータのゴム樹脂から抽出する公知の方法により得ることができる。グルコサミン遊離塩基は、陰イオン交換樹脂処理により、グルコサミン塩酸塩から遊離することができる。濃縮１１−ケトボスウェル酸又は３−Ｏ−アセチル−１１−ケトボスウェル酸（３０％〜１００％）は、本明細書に記載の改良方法を使用して、ボスウェリア・セラータのゴム樹脂から得た。
【００２５】
この方法により調製された塩又は対錯体は、ボスウェル酸を１０〜７０％、グルコサミンを５〜４０％の間で含んでよい。
【００２６】
本発明の化合物を調製する第２の方法によれば、化学量論的量のボスウェル酸、水酸化カリウム、及び有機塩基塩、特にグルコサミン塩酸塩を、水性メタノール媒体中で反応させる。
【００２７】
本発明の更なる態様は、上記化合物を、医薬として許容可能な担体（例えば、水性又は非水性の担体）中に含む組成物である。
【００２８】
本発明のまた更なる態様は、それを必要とするヒト又は動物の対象に、治療有効量（例えば、治療、進行遅延などに有効な量）の上記化合物を投与することを含む、炎症性疾患を治療する方法である。
【００２９】
天然ボスウェリア抽出物中のＡＫＢＡを濃縮し、塩又はイオン対錯体を作製する改良方法に関する好ましい実施形態を実施例１〜６に提示する。
【００３０】
以下の実施例で本発明の詳細な実施形態を記述するが、当分野の技術者には公知である明らかな等価物及び改変は、添付の特許請求の範囲から除外されることはない。
【００３１】
（実施例１）
１１−ケト−β−ボスウェル酸、及び３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸の単離：
１ａ）ＡＫＢＡ濃縮分画へのボスウェリア抽出物単一ポット転換：
ボスウェリア・セラータ抽出物（８５％、１０ｋｇ）のピリジン溶液（５．４Ｌ）に、水冷式還流冷却器を装備した１００Ｌ全ガラス反応器内で、無水酢酸（４．２Ｌ）を室温で添加し、混合物を攪拌下、６０〜６５℃で加熱した。３時間後、混合物を周囲温度まで冷却し、酢酸（２４Ｌ）及び無水酢酸（２４Ｌ）で希釈した。内容物を冷却し、温度を４０℃未満に維持しながら、三酸化クロム（６．４ｋｇ）でゆっくり処理した。添加後、攪拌を更に２時間続け、次いで混合物を氷水中に注ぎ、内容物を完全に混合した。固形物をろ過し、水で洗浄、真空オーブン中で乾燥し、残渣（１４ｋｇ）を得た。粗製生成物のＨＰＬＣ分析により、ボスウェル酸Ｂ１、Ｂ４、及びＢ６が、Ｂ２（ＡＫＢＡ）へ完全に転換したことが示された。
【００３２】
１ｂ）３０〜４０％３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸の単離：
上記粗反応混合物（５ｋｇ）を、４Ｎ塩酸（４５Ｌ）へ添加し、６０℃で４時間加熱した。混合物を周囲温度まで冷却し、ろ過した。沈殿物を４Ｎ  ＨＣｌ、次いで水で洗浄し、真空オーブン中で乾燥し、３０〜４０％（２．８ｋｇ）に濃縮したＡＫＢＡを得た。
【００３３】
１ｃ）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェル酸の単離：
上記濃縮化合物（５００ｇ）を、５％〜３０％酢酸エチル／ヘキサンの混合物を使用し、シリカカラムクロマトグラフィーにかけた。各分画をＴＬＣによりモニターし、ＡＫＢＡ（３０％〜６０％）を含む分画を組み合わせ、ヘキサンと酢酸エチルとの混合物中で結晶化し、８５％ＡＫＢＡまで濃縮した分画を得た。同じ溶媒系中で結晶化を繰り返し、１００％まで濃縮したＡＫＢＡを回収した。
【００３４】
１ｄ）１１−ケト−β−ボスウェル酸の単離：
別法として、粗混合物をメタノールに溶解し、塩基処理（８Ｎ  ＫＯＨ）した。沈殿物をろ過により分離して捨てた。母液を酸性化し、オフホワイトの析出物をろ過して、水で洗浄し、真空下で乾燥して３０〜４０％ケトボスウェル酸（ＫＢＡ）を得た。得られた１１−ケト−β−ボスウェル酸混合物（２００ｇ）をシリカゲル２５０ｇに吸収し、シリカ５００ｇ上でカラムクロマトグラフィーにかけた。該カラムを、ヘキサン、１０％酢酸エチル／ヘキサン、２０％酢酸エチル／ヘキサン、及び３０％酢酸エチル／ヘキサンの混合物で溶出した。各分画をＴＬＣによりモニターし、１１−ケト−β−ボスウェル酸を含む分画を合わせ、蒸発させた。残渣にエチル／ヘキサン混合物からの結晶化を繰り返して行い、純粋な１１−ケト−β−ボスウェル酸（４５ｇ、純度９５〜１００％）を得た。
【００３５】
１ｅ）実施例１ａで述べた方法の更なる変形形態では、無水酢酸の添加を省いた。代わりに、過アセチル化混合物を酢酸２０Ｌで希釈し、酢酸１００Ｌ中ＣｒＯ３（６．４ｋｇ）で処理した。２４時間後、反応混合物を過剰の水で急冷し、実施例１ａに記述したように処理した。
【００３６】
（実施例２）
ボスウェル酸のグルコサミン塩：  
ボスウェル酸（２ｇ、４８％ボスウェル酸）の９５％水性メタノール溶液（５０ｍＬ）に、グルコサミン遊離塩基溶液（８．６ｍＬ、０．４ｇ）を添加し、室温で１時間攪拌した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、乾燥してボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体を、ｐＨ６．３、９０％水性メタノールに可溶な灰色の粉末（２．３ｇ）として得た。
【００３７】
こうして得られたボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体の分析特性は、Ｂ１：４．７５％、Ｂ２：２．１０％、Ｂ３：５．４４％、Ｂ４：１４．９１％、Ｂ５：２．１８％、Ｂ６：８．６６％、合計：３８．０４％、グルコサミン（遊離塩基として）：８．５２％である。
【００３８】
（実施例３）
ボスウェル酸（ＫＣｌ）のグルコサミン塩：
ボスウェル酸（５ｇ、４８％ボスウェル酸）のメタノール溶液（１２５ｍＬ）に、グルコサミン塩酸塩（２ｇ）水溶液（８ｍＬ）を添加し、室温で１５分間攪拌した。次いで水酸化カリウム（０．５２ｇ、２０％水溶液２．６ｍＬ）を、１０分かけてゆっくり入れ、該溶液を室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、乾燥してボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体を、ｐＨ６．８、９０％水性メタノールに可溶な灰色の粉末（７．５ｇ）として得た。
【００３９】
こうして得られたボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体の分析特性は、Ｂ１：４．０４％、Ｂ２：１．８６％、Ｂ３：４．６５％、Ｂ４：１２．７３％、Ｂ５：１．７６％、Ｂ６：７．３４％、合計：３２．３８％、グルコサミン（遊離塩基として）：１２．４４％である。
【００４０】
（実施例４）
ボスウェル酸（ＫＣｌ）のグルコサミン塩：
ボスウェル酸（５ｇ、４８％ボスウェル酸）のメタノール溶液（１２５ｍＬ）に、グルコサミン塩酸塩（４ｇ）の水溶液（１１ｍＬ）を添加し、室温で１５分間攪拌した。次いで水酸化カリウム（０．５２ｇ、２０％水溶液２．６ｍＬ）を、１０分かけてゆっくり入れ、該溶液を室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、乾燥してボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体を、ｐＨ６．６、９０％水性メタノールに可溶な灰色の粉末（９．６ｇ）として得た。
【００４１】
こうして得られたボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体の分析特性は、Ｂ１：３．１４％、Ｂ２：１．３７％、Ｂ３：３．３６％、Ｂ４：９．７５％、Ｂ５：０．９３％、Ｂ６：４．７６％、合計：２３．３１％、グルコサミン（遊離塩基として）：２７．１６％である。
【００４２】
（実施例５）
アセチルケトボスウェル酸（ＫＣｌ）のグルコサミン塩：
アセチルケトボスウェル酸（５ｇ、３０％ＡＫＢＡ）のメタノール溶液（１００ｍＬ）に、グルコサミン塩酸塩（０．６３ｇ）の水溶液（３ｍＬ）を添加し、室温で１５分間攪拌した。次いで水酸化カリウム（０．１６４ｇ、２０％水溶液０．８２ｍＬ）を、１０分かけてゆっくり入れ、該溶液を室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、乾燥してアセチルケトボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体を、ｐＨ６．７、９０％水性メタノールに可溶な灰色の粉末（４．８ｇ）として得た。
【００４３】
こうして得られたアセチルケトボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体の分析特性は、ＡＫＢＡ：２７．６８％、グルコサミン（遊離塩基として）：５．４２％である。
【００４４】
（実施例６）
アセチルケトボスウェル酸（ＫＣｌ）のグルコサミン塩：
アセチルケトボスウェル酸（５ｇ、３０％ＡＫＢＡ）のメタノール溶液（１００ｍＬ）に、グルコサミン塩酸塩（５ｇ）の水溶液（１５ｍＬ）を添加し、室温で１５分間攪拌した。次いで水酸化カリウム（０．２ｇ、２０％水溶液１．０ｍＬ）を、１０分かけてゆっくり入れ、該溶液を室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、乾燥してアセチルケトボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン錯体を、ｐＨ５．６、９０％水性メタノールに可溶な灰色の粉末（９．３ｇ）として得た。
【００４５】
こうして得られたアセチルケトボスウェル酸のグルコサミン塩又はイオン対錯体の分析特性は、ＡＫＢＡ：１５．３０％、グルコサミン（遊離塩基として）：３９．４４％である。
【国際調査報告】
2008538205.tif 000007