(57)【要約】  哺乳類被験体における高脂血症、コレステロール値亢進及び／又は心臓循環器疾患を予防及び治療するための方法と、ベルベリン化合物かベルベリン関連又は誘導化合物かを含む組成物とを提供する。本発明の前記方法及び組成物は、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、高血圧、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、間欠性跛行、脂質代謝異常食後高脂血症又は黄色腫の予防及び治療に効果を奏する。ベルベリン化合物かベルベリン関連又は誘導化合物かを第２の抗高脂血症薬、又は異なる治療薬と併用した、高脂血症及び／又は心臓循環器疾患に対するより効果的な治療ツール、及び／又は哺乳類被験体における高脂血症に随伴する高脂血症及び１つまたは２つ以上の原因又は関連症状又は状態を予防又は低減するのに効果的な二重活性療法及び製剤を用いた、他の組成物及び方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類被験体の高脂血症を予防又は治療する方法であって、
式Ｉ
【化１】
2008513382.tif 000016
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかの抗高脂血症有効量を哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類被験体の高脂血症を予防又は治療する方法。
【請求項２】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され；Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む、直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む、直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験体における高脂血症又は他の心臓血管疾患又は関連症状又はその状態を治療又は予防するために、前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を用いる併用製剤又は協動的治療法に有効な二次的抗高脂血症薬又は他の補助的治療薬を投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験体への前記ベルベリンの投与と同時か、投与前か、あるいは、投与後かに、協動的投与プロトコルにおいて前記被験体に二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬が投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬は、コレステロール取込み阻害剤；ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤又はスタチン系薬剤を含むコレステロール生合成阻害剤と、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤と、スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤及びスクアレン・シンセターゼ阻害剤と、メリナミドを含むアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤と、プロブコールと、ニコチン酸及びその塩と、ナイアシンアミドと、β−シトステロール及びエゼチミブを含むコレステロール吸収阻害剤と、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム及び架橋デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体を含む胆汁酸捕捉剤陰イオン交換樹脂と、ＬＤＬ受容体誘導物質と、クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート及びゲムフィブロジルを含むフィブラート類と、ビタミンＢ６及び薬剤として許容されるその塩と、シアノコバラミン及びヒドロキソコバラミンを含むビタミンＢ１２；ビタミンＢ３と、ビタミンＣ、ビタミンＥ、及びベータカロテンを含む抗酸化ビタミン類と、β遮断薬；アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１）拮抗薬と、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、レニン阻害剤と、フィブリノゲン受容体拮抗薬を含む血小板凝集阻害剤と、エストロゲンを含むホルモン類と、インシュリンと、イオン交換樹脂と、オメガ３オイル類と、ベンフルオレックスと、イコサペント酸エチルと、アムロジピンとからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はスタチン系薬剤又はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記スタチン系薬剤又はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン、又はアトルバスタチンである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はコレステロール取込み阻害剤又はコレステロール生合成阻害剤である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記アシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤は、メリナミド又はプロブコールである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はコレステロール吸収阻害剤である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
前記コレステロール吸収阻害剤はβ−シトステロール又はエゼチミブである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬は陰イオン交換樹脂である、請求項３に記載の方法。
【請求項１４】
前記陰イオン交換樹脂は、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム又はジアルキルアミノアルキル誘導体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はフィブラート系薬剤である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
前記フィブラート系薬剤は、クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート又はゲムフィブロジルである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体に運動、食事制限、又は手術からなる群より選択される追加的な治療処置を受けるよう助言するか又は受けさせることを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はハーブ由来製品又はエキスである、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
前記ハーブ由来製品又はエキスは、クルクミン、ググリピッド、ニンニク、ビタミンＥ、大豆、可溶性繊維、魚油、緑茶、カルニチン、クロム  コエンザムＱ１０、ビタミンＣ、ベータカロテン、ブドウ種子エキス、パンテチン、紅麹米、及びロイヤルゼリーからなる群より得られるか又は選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
哺乳類被験体において高脂血症に起因する心臓血管疾患の１つまたは２つ以上の症状又は状態を予防又は治療する方法であって、
式Ｉ
2008513382.tif 000017
の抗高脂血症有効量のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類被験体において高脂血症に起因する心臓血管疾患の１つまたは２つ以上の症状又は状態を予防又は治療する方法。
【請求項２１】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシ基ル、又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記心臓血管疾患の１つまたは２つ以上の症状又は状態は、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、卒中、脳動脈硬化症、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、高血圧、間欠性跛行、脂質代謝異常、食後高脂血症又は黄色腫を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗高脂血症有効量は１日当たり約１０ないし約１５００ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗高脂血症有効量は１日当たり約２０ないし約１０００ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗高脂血症有効量は、１日当たり約２５ないし約７５０ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗高脂血症有効量は、１日当たり約５０〜約５００ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗高脂血症有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を１日に１回、２回、３回又は４回投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体の総コレステロールを約２００ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体の総コレステロールを約１７５ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記ベルベリンの投与は前記被験体のＬＤＬ濃度を約１３０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のＬＤＬ濃度を約２０ｍｇ／ｄＬないし約５０ｍｇ／ｄＬだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のトリグリセリドを約１５０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のトリグリセリドを約２０ｍｇ／ｄＬないし約５０ｍｇ／ｄＬだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は、前記被験体のｈｓ−ＣＲＰを約２．０ｍｇ／Ｌに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は、前記被験体のｈｓ−ＣＲＰを約０．５ｍｇ／Ｌないし約２．０ｍｇ／Ｌだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
心臓血管疾患を低減又は予防するために哺乳類被験体の高脂血症を管理する方法であって、
式Ｉ
【化２】
2008513382.tif 000018
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグの抗高脂血症有効量を哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３はそれぞれ独立に、集合的に、又は任意の組合せの形で、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、心臓血管疾患を低減又は予防するために哺乳類被験体の高脂血症を管理する方法。
【請求項３７】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記方法は、前記被験体におけるアテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、高血圧、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、間欠性跛行、脂質代謝異常、食後高脂血症、及び黄色腫から選択される１つまたは２つ以上の症状、疾患又は状態を低減又は予防する効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記高脂血症は前記被験体における一次又は二次的高脂血症に随伴する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記高脂血症は、前記被験体における家族性高カイロミクロン血症、家族性コレステロール血症、家族性複合型高脂血症、家族性ＩＩＩ型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、家族性アポリポタンパクＢ−１００欠損症、糖尿病、甲状腺機能低下症、尿毒症、ネフローゼ症候群、先端巨大症、閉塞性肝疾患又はタンパク異常血症に随伴する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記高脂血症は、前記被験体による過去又は現在の経口避妊薬、グルココルチコイド又は降圧薬の使用に随伴する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
前記高脂血症は前記被験体の好ましくない食習慣に随伴する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体の総コレステロールを約２００ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体の総コレステロールを約１７５ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のＬＤＬ濃度を約１３０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のＬＤＬ濃度を約２０ｍｇ／ｄＬないし約５０ｍｇ／ｄＬだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のトリグリセリドを約１５０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のトリグリセリドを約２０ｍｇ／ｄＬないし約５０ｍｇ／ｄＬだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４９】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のｈｓ−ＣＲＰを約２．０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項５０】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のｈｓ−ＣＲＰを約０．５ｍｇ／Ｌないし約２．０ｍｇ／Ｌだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項３６に記載の方法。
【請求項５１】
哺乳類被験体において心臓血管疾患の１つまたは２つ以上の症状を治療する方法であって、
有効量の式Ｉ
【化３】
2008513382.tif 000019
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類被験体において心臓血管疾患の１つまたは２つ以上の症状を治療する方法。
【請求項５２】
前記Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、又はメトキシから選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択され、Ｒ９はメチル基、エチル、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つまたは２つ以上の症状は、息切れ、胸痛、下肢痛、疲労、錯乱、視力変化、血尿、鼻血、不整脈、平衡感覚喪失又は協調、脱力感及び／又はめまいを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
哺乳類被験体において高脂血症を予防又は緩和する組成物であって、
抗高脂血症有効量の式Ｉ
【化４】
2008513382.tif 000020
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを含み、
式Ｉは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、組成物。
【請求項５５】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選択される、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド、又はベルベリン・ベタインである、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
哺乳類被験体において高脂血症を治療又は予防する組成物であって、
抗高脂血症有効量の式Ｉ
【化５】
2008513382.tif 000021
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグと、心臓血管疾患の治療に有効な二次的抗高脂血症薬又は他の補助的治療薬とを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類被験体において高脂血症を治療又は予防する組成物。
【請求項５８】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬は、コレステロール取込み阻害剤と、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤又はスタチン系薬剤を含むコレステロール生合成阻害剤と、ＨＭＧ−ＣｏＡ  シンターゼ阻害剤と、スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤及びスクアレン・シンセターゼ阻害剤と、メリナミドを含むアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤と、プロブコール；ニコチン酸及びその塩と、ナイアシンアミドと、β−シトステロール及びエゼチミブを含むコレステロール吸収阻害剤と、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム及び架橋デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体を含む胆汁酸捕捉剤陰イオン交換樹脂と、ＬＤＬ受容体誘導物質と、クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート及びゲムフィブロジルを含むフィブラート類と、ビタミンＢ６及び薬剤として許容されるその塩と、シアノコバラミン及びヒドロキソコバラミンを含むビタミンＢ１２と、ビタミンＢ３と、ビタミンＣ、ビタミンＥ、及びベータカロテンを含む抗酸化ビタミン類と、β遮断薬と、アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１）拮抗薬と、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、レニン阻害剤；フィブリノゲン受容体拮抗薬を含む血小板凝集阻害剤と、エストロゲンを含むホルモン類と、インシュリンと、イオン交換樹脂と、オメガ３オイル類と、ベンフルオレックスと、イコサペント酸エチルと、アムロジピンとからなる群より選択される、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６０】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はスタチン系薬剤又はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
前記スタチン系薬剤又はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン又はアトルバスタチンである、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はコレステロール取込み阻害剤又はコレステロール生合成阻害剤である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６３】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６４】
前記アシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤はメリナミド又はプロブコールである、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はコレステロール吸収阻害剤である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６６】
前記コレステロール吸収阻害剤はβ−シトステロール又はエゼチミブである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬は陰イオン交換樹脂である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６８】
前記陰イオン交換樹脂は、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム又はジアルキルアミノアルキル誘導体である、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はフィブラート系薬剤である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項７０】
前記フィブラート系薬剤は、クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート又はゲムフィブロジルである、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記二次的抗高脂血症薬又は補助的治療薬はハーブ由来製品又はエキスである、請求項５７に記載の組成物。
【請求項７２】
前記ハーブ由来製品又はエキスはクルクミン、ググリピッド、ニンニク、ビタミンＥ、大豆、可溶性繊維、魚油、緑茶、カルニチン、クロム、コエンザムＱ１０、ビタミンＣ、ベータカロテン、ブドウ種子エキス、パンテチン、紅麹米及びロイヤルゼリーからなる群より得られるか又は選択される、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記ベルベリンは前記被験体の総コレステロールを約２００ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の組成物。
【請求項７４】
前記ベルベリンは前記被験体の総コレステロールを約１７５ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の組成物。
【請求項７５】
前記ベルベリンの投与は前記被験体のＬＤＬ濃度を約１３０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の方法。
【請求項７６】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は、前記被験体のＬＤＬ濃度を約２０ｍｇ／ｄＬないし約５０ｍｇ／ｄＬだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の方法。
【請求項７７】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のトリグリセリドを約１５０ｍｇ／ｄＬに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５３に記載の組成物。
【請求項７８】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は、前記被験体のトリグリセリドを約２０ｍｇ／ｄＬないし約５０ｍｇ／ｄＬだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の組成物。
【請求項７９】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の投与は前記被験体のｈｓ−ＣＲＰを約２．０ｍｇ／Ｌに低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の組成物。
【請求項８０】
前記有効量の式Ｉのベルベリンの投与は前記被験体のｈｓ−ＣＲＰを約０．５ｍｇ／Ｌないし約２．０ｍｇ／Ｌだけ低下させる抗高脂血症効果を奏する、請求項５７に記載の組成物。
【請求項８１】
哺乳類被験体におけるＬＤＬＲ発現を調節する方法であって、
有効量の式Ｉ
【化６】
2008513382.tif 000022
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグと、心臓血管疾患の治療に有効な二次的抗高脂血症薬又は他の補助的治療薬とを含む組成物を哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類被験体におけるＬＤＬＲ発現を調節する方法。
【請求項８２】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記哺乳類被験体は、哺乳類細胞又は培養細胞か、哺乳類組織又は組織移植片か、哺乳類臓器又は臓器移植片か、哺乳類個体かから選択される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
ＬＤＬＲ増加有効量のベルベリンか、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを含む、哺乳類被験体におけるＬＤＬＲ発現を増加させる組成物。
【請求項８５】
哺乳類細胞、組織、臓器又は個体におけるＬＤＬＲ発現を増加させる組成物であって、
ＬＤＬＲ有効量の式Ｉ
【化７】
2008513382.tif 000023
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、(シクロアルキル)アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類細胞、組織、臓器又は個体におけるＬＤＬＲ発現を増加させる組成物。
【請求項８６】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシから選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド及びベルベリン・ベタインからなる群より選択される、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８８】
哺乳類細胞、組織、臓器又は個体におけるＬＤＬＲ安定性を増大させる方法であって、
有効量の式Ｉ
【化８】
2008513382.tif 000024
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、(シクロアルキル)アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環の各基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類細胞、組織、臓器又は個体におけるＬＤＬＲ安定性を増大させる方法。
【請求項８９】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド、及びベルベリン・ベタインからなる群より選択される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
哺乳類細胞、組織、臓器又は個体におけるＬＤＬＲ安定性を増大させる組成物であって、
ＬＤＬＲ安定化量の式Ｉ
【化９】
2008513382.tif 000025
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類細胞、組織、臓器又は個体におけるＬＤＬＲ安定性を増大させる組成物。
【請求項９２】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され；、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９３】
前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリン  Ｎ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド、及びベルベリン・ベタインからなる群より選択される、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９４】
哺乳類細胞、組織、臓器又は個体から選択される哺乳類被験体におけるＥＲＫ活性化を調節する方法であって、
ＥＲＫ活性化調節有効量の式Ｉ
【化１０】
2008513382.tif 000026
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを前記被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、(シクロアルキル)アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類被験体におけるＥＲＫ活性化を調節する方法。
【請求項９５】
前記Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され；Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記式Ｉのベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物かは、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド、及びベルベリン・ベタインからなる群より選択される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
哺乳類細胞、組織、臓器又は個体から選択される哺乳類被験体におけるコレステロールを低減する方法であって、
コレステロール低減有効量の式Ｉ
【化１１】
2008513382.tif 000027
のベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物か、薬剤として許容されるその塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、水和物、結晶多形又はプロドラッグかを哺乳類被験体に投与することを含み、
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アミノ基、トリフルオロメチル基、シクロアルキル基、(シクロアルキル)アルキル基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アリール基、アロイル基、アラルキル基、ニトリル基、ジアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシアルキル基、アミノアルキル基、アルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、ハロアルキル基、カルボキシアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシ基、アルカノイルアミノ基、カルバモイル基、カルバミル基、カルボニルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基及び複素環基からそれぞれ独立にか、集合的にかあるいはいずれかの組合せかで選択される、哺乳類細胞、組織、臓器又は個体から選択される哺乳類被験体におけるコレステロールを低減する方法。
【請求項９８】
Ｒ１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ２はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ３はＨ、メチル基、エチル基、メテン基から選択され、Ｒ４はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基又はメトキシ基から選択され、Ｒ８はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択され、Ｒ９はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１０はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１１はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１２はメチル基、エチル基、ヒドロキシル基、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、Ｒ１３はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基、ｎ−ペンチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、３−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３−メチルペンチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチル基及び１−メチル−２−エチルプロピル基から選択される置換基を含む直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記式Ｉのベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物かは、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン、１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド及びベルベリン・ベタインからなる群より選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
第２のコレステロール低減薬を前記被験体に投与することを更に含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
前記第２のコレステロール低減薬は前記ベルベリンとの複合製剤として前記被験体に投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記第２のコレステロール低減薬は、前記被験体への前記ベルベリンの投与と同時か、投与前か、投与後かに、協動的投与プロトコルにおいて前記被験体に投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記第２のコレステロール低減薬は、血漿ＨＤＬ上昇薬、コレステロール生合成阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ  シンターゼ阻害剤、スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤、スクアレン・シンセターゼ阻害剤、アシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ阻害剤、ナイアシンアミド、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸捕捉剤、陰イオン交換樹脂、ホルモン類、インシュリン、フィブラート系薬剤、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ３、抗酸化ビタミン類、β遮断薬、アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１）拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、レニン阻害剤、血小板凝集阻害剤、イオン交換樹脂、オメガ３オイル類、ベンフルオレックス又はコレステロール取込み阻害剤から選択される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０４】
前記コレステロール低減有効量は１日当たり約２０ｍｇないし約１５００ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物かベルベリン関連又は誘導化合物かを含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
前記コレステロール低減有効量は１日当たり約２５ｍｇないし約７５０ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０６】
前記コレステロール有効量は１日当たり約５０ｍｇないし約５００ｍｇの範囲の前記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０７】
前記コレステロール低減有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物かを１日に１回、２回、３回、又は４回投与する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０８】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物かの投与は前記被験体の総コレステロールを約２００ｍｇ／ｄＬに低下させる効果を奏する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０９】
前記有効量の前記式Ｉのベルベリン化合物か、ベルベリン関連又は誘導化合物かの投与は前記被験体の総コレステロールを約１７５ｍｇ／ｄＬに低下させる効果を奏する、請求項１００に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類被験体における高脂血症を治療する方法及び組成物に関する。より具体的には、本発明は高脂血症をはじめ、高脂血症に随伴する状態や合併症を治療及び／又は予防する方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連出願
本出願は、２００４年１１月２３日付けの特許文献１及び２００４年９月１７日付けの特許文献２に基づくあらゆる優先権を主張し、各出願は引用により本明細書に取り込まれる。
【特許文献１】中国特許出願第２００４１００９５０６６．Ｘ号明細書
【特許文献２】中国特許出願第２００４１００７８１５０．０号明細書
【０００３】
心臓血管疾患は、過去２０年間にわたりその発症率が３３％減少したものの、目下、米国内における死因のトップである。感染、自己免疫応答、高コレステロール血症及び高脂血症等、幾つかの原因が心臓血管疾患に随伴している。心臓血管疾患の約９０％はアテローム性動脈硬化症と診断されており、低密度リポタンパク（ＬＤＬ）の高血中濃度に起因している。
【０００４】
哺乳類には少なくとも５種類の区別可能なリポタンパクがあり、その各々は大きさ、組成、密度及び機能が異なっている。小腸細胞内では、食物由来の脂質が「キロミクロン」と呼ばれる、トリグリセリド含量が多くコレステロール含量が少ない、大型のリポタンパク複合体に貯蔵される。肝臓では、トリグリセリド及びコレステロール・エステルが貯蔵され、そして超低密度リポタンパク（ＶＬＤＬ）と呼ばれるトリグリセリド・リッチなリポタンパクとして血漿中に放出される。これらは主に肝臓中で作られるか、又は脂肪組織から放出されるトリグリセリドを輸送する。酵素作用により、ＶＬＤＬは還元されて肝臓に取り込まれるか、又は中密度リポタンパクに（ＩＤＬ）に変換される。ＩＤＬは肝臓に取り込まれるか、又は更に低密度リポタンパク（ＬＤＬ）に変化する。ＬＤＬは肝臓に取り込まれて分解されるか、又は肝外組織に取り込まれる。高密度リポタンパク（ＨＤＬ）は、コレステロール逆輸送と呼ばれるプロセスにより、周囲組織からのコレステロール除去を助ける。リポタンパクの形態の中には、ＬＤＬのように「悪玉」コレステロール、即ち、心臓病又は動脈硬化に起因する他の疾病のリスクを増大させると考えられている物がある。ＨＤＬのような他の形態は「善玉」コレステレロール、即ち健康維持に不可欠である。
【０００５】
ＬＤＬの代謝は肝臓低密度タンパク受容体（ＬＤＬＲ）によって調節されている。ＬＤＬＲの発現が増加すると、受容体を介したエンドサイトーシスによる血漿ＬＤＬのクリアランスが改善され、血漿ＬＤＬ濃度が低下し、動脈粥腫の発症率が低下する。ＬＤＬＲ発現は一般に細胞内貯蔵コレステロールの負のフィードバック機構により、転写レベルで調節される。この調節は、ＬＤＬＲプロモーターのステロール調節エレメント（ＳＲＥ−１）とＳＲＥ結合タンパク（ＳＲＥＢＰ）との相互作用により制御される。不活性状態では、ＳＲＥＢＰはＳＲＥＢＰ開裂活性タンパク（ＳＣＡＰ）と会合している。ＳＣＡＰはコレステロール−感知ドメインを含み、ＳＣＡＰ−ＳＲＥＢＰ輸送活性の活性化に伴うステロールの欠乏に応答する。コレステロール欠乏状態では、ＳＣＡＰはＳＲＥＢＰをゴルジ体に輸送し、そこでＳＲＥＢＰのＮ−末端転写活性ドメインが特異的な開裂により前駆体タンパクから放出される。活性型ＳＲＥＢＰは核に移動し、その同族のＳＲＥ−１部位に結合し、ＬＤＬＲ遺伝子の転写を活性化する。豊富なコレステロールの存在下では、ＳＣＡＰ−ＳＲＥＢＰ複合体はステロールによる活性抑制を受けて小胞体内で不活性型を維持し、ＬＤＬＲ遺伝子の転写は最小限の恒常的活性レベルに維持される。
【０００６】
ＬＤＬ調節機構が欠損又は不全であると、血流中の血清脂質の異常な上昇で特徴付けられる高脂血症に至る場合がある。高脂血症はアテローム性動脈硬化症及び他の心臓血管疾患及び末梢血管病の原因であることが知られている。一次性高脂血症は一般に遺伝子欠陥によって起こり、二次性高脂血症は一般に疾病、医薬品、及び／又は食事的要因等の二次的要因によって起こる。高脂血症はまた、一次的要因及び二次的要因の組合せによって起こる場合もある。
【０００７】
一次性高脂血症は、家族性高カイロミクロン血症、家族性高コレステロール血症、家族性複合型高脂血症、家族性ＩＩＩ型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、及び家族性アポリポタンパクＢ−１００欠損症を含む。家族性高カイロミクロン血症は遺伝子の障害に起因し、脂肪分子を分解する酵素であるＬＰリパーゼの欠損を起こす。ＬＰリパーゼの欠損は、血中に大量の脂肪又はリポタンパクを蓄積させる場合がある。家族性高コレステロール血症は、ＬＤＬ受容体遺伝子の１つまたは２つ以上の変異に起因し、ＬＤＬ受容体の機能不全、更にはＬＤＬ受容体の完全欠損に至る。これらの遺伝子欠陥は、ＬＤＬクリアランスの低下又は非効率化を伴い、血漿中のＬＤＬ及び総コレステロール量の増大を招く。家族性複合型高脂血症は、多発性リポタンパク型高脂血症としても知られており、コレステロール及びトリグリセリド濃度の周期的な増加及びＨＤＬ濃度の減少を招く場合がある。家族性アポリポタンパクＢ−１００欠損症は、グルタミンがアルギニンに置き換わるという、単一のヌクレオチド変異による常染色体優性の遺伝子異常である。この変異は、ＬＤＬ粒子のＬＤＬ受容体への親和性を減じ、ＬＤＬ及び総コレステロールの血漿中濃度を増大させる。家族性ＩＩＩ型高脂血症は、ＩＩＩ型高リポタンパク血症とも呼ばれ、血清トリグリセリド及びコレステロール値の中度ないし重度の上昇を招き、アポリポタンパクＥの機能異常を伴う。家族性高トリグリセリド血症では、血漿中ＶＬＤＬ値が上昇する。これは、軽度ないし中度にトリグリセリド値を上昇させる場合があり（通常、コレステロール値は上昇しない）、しばしば低血漿ＨＤＬ値を伴う場合がある。
【０００８】
二次性高脂血症は、非管理の糖尿病（インシュリン依存性糖尿病及び非インシュリン依存性糖尿病）（非特許文献１及び２）、甲状腺機能低下症、尿毒症、ネフローゼ症候群、先端巨大症、閉塞性肝疾患、及びタンパク異常血症（多発性骨髄腫、エリテマトーデス）（非特許文献３）等の疾病が引き金になる場合がある。また、経口避妊薬、グルココルチコイド及び降圧薬を含む多くの医薬品も、二次的高脂血症を招く場合がある。カロリー摂取の増加といった食事的要因、最近の体重増、飽和脂肪及びコレステロールの多い食品の摂取、及びアルコール摂取も、二次性高脂血症の発現に更に寄与する。
【非特許文献１】Ｂｉａｎｃｈｉ，Ｒ．ら，Ｄｉａｂ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂｌ．，７：４３−５１（１９９４）
【非特許文献２】Ｗｅｌｂｏｒｎ，Ｔ．Ａ．，Ａｕｓｔ．ＮＺ  Ｊ．Ｍｅｄ．２４：６１−６４（１９９４）
【非特許文献３】Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｅｄ．Ｂｒａｕｎｗａｌｄ，Ｅ．ら、１１ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  １０１６−１０２４（１９８８）
【０００９】
理由の如何によらず、リポタンパク値の上昇は、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、高血圧、間欠性跛行、脂質代謝異常、食後高脂血症及び黄色腫を含む、数多くの疾病状態と関連している。
【００１０】
コレステロール値を含めたリポタンパク値の低下は、高脂血症に伴う疾病のリスク及び／又は重篤度を軽減する。高脂血症の治療には、主として抗異脂肪血症薬に着目した様々な異なる戦略が長年にわたって試みられており、この医薬品の２００４年度の世界市場は２６０億ドルと見積もられている（非特許文献４）。高脂血症及びコレステロール値亢進（ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）の治療に最も普通に処方される医薬品は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ）阻害剤を用いるもので、「スタチン系薬剤」とも呼ばれている。スタチン系薬剤は、コレステロールの産生を遅らせるか、又は血流からのＬＤＬに対する肝臓のクリアランス能力を高めることにより、コレステロール値を下げる。最新のスタチン系薬剤はアトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ（登録商標））であり、これがトリグリセリドの低減並びに総ＬＤＬコレステロールの低減用に認可されている唯一のスタチン系薬剤である。他のスタチン系薬剤としては、主としてＬＤＬコレステロールを低減させるセリバスタチン（Ｂａｙｃｈｏｌ（登録商標））、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標））、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（登録商標））及びシンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ（登録商標））が入手可能である。しかし、スタチン系薬剤の使用に伴う肝不全及び潜在的な致死的横紋筋融解症の発症率に関する検討から、低用量のスタチン系薬剤と他の投薬とを組み合わせた補助的療法が開発されている。この戦略もある程度は有効であるが、この分野では高脂血症の投薬治療の改良に対する重要なニーズが依然として存在する。
【非特許文献４】Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  Ａｎｔｉｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃｓ：  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｔｏｒ’ｓ  Ｄｏｍｉｎａｎｃｅ，Ｄａｔａｍｏｎｉｔｏｒ，Ｍａｙ，２００５
【００１１】
コレステロール低減のための別の治療方法として、胆汁酸捕捉剤(例えば、コレスチラミン、クロフィブラート)、及び／又はニコチン酸(ナイアシン)といった、上昇したトリグリセリド値を下げることによって機能するものがある。しかし、胆汁酸捕捉剤は便秘、腹痛、腹部膨満、嘔吐、下痢、体重減少及び鼓腸等の胃腸障害を招く可能性があり、又、他の医薬品の吸収を減ずる可能性がある。ニコチン酸は肝臓障害、目眩、かすみ目を起こす可能性があり、多くの患者に許容されない。
【００１２】
従来の治療薬の使用に加え、伝統的医薬品（漢方薬や和薬）が心臓血管疾患の治療に長年用いられている。これらには、トロンボキサンＡ２を遮断することにより体内のコレステロールを減少させる、ターメリック根とも呼ばれるクルクミンの使用が含まれる。トロンボキサンはＡ２はまた、天然の血小板凝集阻害剤であるプロスタサイクリンを増大させる機能を有し、更に血餅形成を阻害するように作用する（非特許文献５）。クルクミンは血清中の総コレステロール及びＬＤＬコレステロール値を低下させ、有益なＨＤＬコレステロール値を上昇させるために用いられてきた。コレステロールを低下させる目的で提案されてきた他のハーブ及び植物性治療薬には、インド産のググルの木（Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ  Ｍｕｋｕｌ）の樹脂から作られるググリピッド、ニンニク、ビタミンＥ、大豆、可溶性繊維、カルニチン、クロムコエンザムＱ１０、繊維、ブドウ種子エキス、パンテチン、紅麹米、ロイヤルゼリー、魚油、及び緑茶が含まれる。しかし、これら天然物由来の植物性製品及び鉱物製品の殆どが共通した投与上の問題点を抱え、多くは少なくとも一部の患者に対して許容し難い有害な副作用をもたらす。
【非特許文献５】Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら，Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ，１９８６，３６（４）：７１５−１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
平均して、先進７カ国の人口の４２％が高脂血症を患っている（非特許文献６）。これらの統計及び高脂血症治療に関する最先端の状況をみる限り、高脂血症及びその他の疾病及び高い脂質値に伴う状態を患う患者らにおいて安全かつ有効に血漿脂質値を下げるための新しい化合物、製剤及び方法の同定に関して、未だ満たされていない緊急のニーズがこの分野には存在する。
【非特許文献６】Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  Ａｎｔｉｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃｓ：  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｔｏｒ’ｓ  Ｄｏｍｉｎａｎｃｅ，Ｄａｔａｍｏｎｉｔｏｒ，Ｍａｙ，２００５
【課題を解決するための手段】
【００１４】
そこで本発明は、哺乳類被験体における高脂血症を治療及び管理するための新規かつ改良された組成物及び方法を提供することを目的とする。
【００１５】
本発明はまた、哺乳類被験体におけるコレステロール代謝障害を治療及び管理するための新規かつ改良された組成物及び方法を提供することを、もう一つの目的とする。
【００１６】
本発明はまた、高脂血症又はコレステロール値亢進が引き金となるか又はこれらにより悪化する疾病、例えば、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、間欠性跛行、脂質代謝異常、食後高脂血症、高血圧及び黄色腫等を含み、かつこれらに限定されない心臓血管疾患を治療及び予防するための組成物及び方法を提供することを、更にもう一つの目的とする。
【００１７】
本発明は、哺乳類被験体における高脂血症又はコレステロール値亢進を治療及び／又は予防するために、下記式Ｉで表されるベルベリン及び関連化合物及び誘導体を用いた新規かつ劇的に有効な方法並びに組成物を提供することにより、これらの目的を達成し、かつ更なる目的と優位性とを満足するものである。
【００１８】
【化１】
2008513382.tif 000002
式Ｉ
【００１９】
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３はそれぞれ独立に、集合的に、又は本開示にしたがって活性（例えば、抗異脂肪血症、ＬＤＬ修飾、又はＬＤＬＲ修飾）化合物を産し得る任意の組合せの形で、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アリール、アロイル、アラルキル、ニトリル、ジアルキルアミノ、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシ、アルカノイルアミノ、カルバモイル、カルバミル、カルボニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、又は複素環基の場合がある。Ｒ基が複数有る場合は、前記Ｒ基は上述の基から選択されるいずれかの基の場合があり、同じでも異なっていてもよい。ある例示的な実施形態においては、哺乳類被験体における高脂血症の治療及び／又は予防のための有用な候補化合物を提供するために、上記式Ｉで表される下記の例示的な構造変形例が選択され、例えば本明細書で、Ｒ１はメチル、エチル、ヒドロキシル、又はメトキシから選択され；Ｒ２はＨ、メチル、エチル、メテンから選択され；Ｒ３はＨ、メチル、エチル、メテンから選択され；Ｒ４はメチル、エチル、ヒドロキシル、又はメトキシから選択され；Ｒ８は直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３−メチルペンチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチル及び１−メチル−２−エチルプロピルから選択される置換基）から選択され；Ｒ９はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１０はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１１はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１２はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１３は直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３−メチルペンチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチル及び１−メチル−２−エチルプロピルから選択される置換基）から選択される。前記組成物及び方法に用いる更に他の候補化合物は、下記の更なる開示にしたがって容易に生成及び選択することができる。
【００２０】
本発明の製剤及び方法に用いられる有用なベルベリン及び関連化合物及び誘導体は、ベルベリンの塩及び関連又は誘導化合物、例えば、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン塩酸塩、塩化ベルベリン、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド、及びベルベリン・ベタインを含むが、これらに限定されない。本発明に用いられるベルベリン及び関連化合物及び誘導体の他の有用な形態は、前記化合物の薬剤として許容される他の活性塩、並びに活性異性体、エナンチオマー、結晶多形、溶媒和物、水和物、及び／又は前記化合物のプロドラッグを含む。
【００２１】
例示的な実施態様では、前記組成物及び本発明の方法は、高脂血症又は他の疾病の症状又は心臓血管疾患のような高脂血症に随伴する状態を治療及び／又は予防するために、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を用いる。
【００２２】
本発明の方法にしたがって式Ｉのベルベリン及びベルベリン関連及び誘導体化合物による治療を受けられる哺乳類被験体は、高脂血症を患う被験体及びコレステロール値亢進を患う被験体を含み、ＬＤＬ値亢進(ｅｌｅｖａｔｅｄ  ＬＤＬ  ｌｅｖｅｌ)、コレステロール値亢進及び／又はトリグリセリド値亢進（ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｌｅｖｅｌ）を発症するか、又はその発現リスクを負う被験体を含むが、これらに限定されない。
【００２３】
これら及び他の被験体は、前記被験体における高脂血症又は１つまたは２つ以上の病状又は高脂血症に随伴する状態を予防又は軽減する（又は代替的に、抗異脂肪血症、ＬＤＬ修飾、又はＬＤＬＲ修飾応答を誘発する）に十分な高脂血症有効量（又は代替的に、高抗異脂肪血症、ＬＤＬ修飾、又はＬＤＬＲ修飾有効量）の式Ｉのベルベリン又はベルベリン関連化合物又は誘導体を、予防的に及び／又は治療的に前記被験者に投与することによって、有効に治療される。治療上有用な本発明の方法及び製剤は、効果的には、上述した様々な形態をとる式Ｉのベルベリン及びベルベリン関連及び誘導体化合物であり、前記化合物のあらゆる活性な薬剤として許容される塩、並びに異性体、エナンチオマー、結晶多形、溶媒和物、水和物、プロドラッグ、及び／又はそれらの組合せを含む。したがってベルベリンは、以下の実施例で述べる例示的な実施態様の如くに使用される。
【００２４】
本発明の追加的な実施態様では、前記被験体は、前記被験体におけるコレステロール値亢進又は随伴する１つまたは２つ以上の病状又は状態を予防又は軽減するに十分なコレステロール制御有効量の式Ｉのベルベリン化合物又は関連又は誘導化合物を、予防的に及び／又は治療的に前記被験者に投与することによって、有効に治療される。これら治療上有効な方法及び製剤は、同様にあらゆる薬剤として許容される塩、異性体、エナンチオマー、結晶多形、溶媒和物、水和物、プロドラッグ、及び／又はそれらの組合せを含む場合がある。
【００２５】
本発明の追加的な局面では、被験体における抗高脂血症又はコレステロール低減有効応答（又は代替的に、抗異脂肪血症、ＬＤＬ修飾、又はＬＤＬＲ修飾応答）を起こさせるために、あるベルベリン化合物(又は式Ｉの別のベルベリン関連又は誘導化合物)の有効量を、該ベルベリン又はベルベリン関連又は誘導化合物と併用製剤として処方され、あるいは、協働的に投与される1種類または2種類以上の二次的又は補助的な活性のある薬剤と組合せて用いる、併用型の製剤及び治療方法が提供される。この意味における例示的な併用製剤（combinatorial formulation）及び協動的（coordinately）治療法では、式Ｉの前記ベルベリン又はベルベリン関連又は誘導化合物を、１つまたは２つ以上の追加的な脂質低減薬又は他の指示された二次的又は補助的治療薬と組み合わせて用いる。例えば、これらの実施態様においてベルベリンと組み合わせて用いられる前記二次的又は補助的治療薬は、単独又は例えばベルベリンとの組合せによりコレステロール低減活性を含む直接的又は間接的な脂質低減活性を有するか、又は例えばベルベリンとの組合せにより他の有用な治療効果を発揮する場合がある。これらの併用製剤及び協動的治療法における有用な補助的治療薬は、例えば、抗高脂血症薬；抗異脂肪血症薬；血漿ＨＤＬ上昇薬；コレステロール取込み阻害剤を含むがこれに限定されない抗高コレステロール血症薬；コレステロール生合成阻害剤、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン系薬剤とも呼ばれる。ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン、及びアトルバスタチン等）；ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤；スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤又はスクアレン・シンセターゼ阻害剤(スクアレン・シンターゼ阻害剤とも呼ばれる)；メリナミドを含むがこれに限定されないアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；プロブコール；ニコチン酸及びその塩；ナイアシンアミド；β−シトステロール又はエゼチミブを含むがこれらに限定されないコレステロール吸収阻害剤；コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム又は架橋デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体を含むがこれらに限定されない胆汁酸捕捉剤陰イオン交換樹脂；ＬＤＬ受容体誘導物質；クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート及びゲムフィブロジルを含むがこれらに限定されないフィブラート；ビタミンＢ６（ピリドキシンとも呼ばれる）及び、塩酸塩のような薬剤として許容されるその塩；ビタミンＢ１２（シアノコバラミンとも呼ばれる）；ビタミンＢ３（上述のとおり、ニコチン酸及びナイアシンアミドとも呼ばれる）；ビタミンＣ及びＥ及びベータカロテンを含むがこれらに限定されない抗酸化ビタミン類；β遮断薬；アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１）拮抗薬；アンジオテンシン変換酵素阻害剤、レニン阻害剤；フィブリノゲン受容体拮抗薬、即ち、糖タンパクＩＩｂ／ＩＩＩａ  フィブリノゲン受容体拮抗薬を含むがこれに限定されない血小板凝集阻害剤；エストロゲンを含むがこれに限定されないホルモン類；インシュリン；イオン交換樹脂；オメガ３オイル類；ベンフルオレックス；イコサペント酸エ��ル;及びアムロジピンを含む。補助的療法は、運動の増進、手術、及び食事の切替え(例えば、低コレステロールへの切替え)を含む場合がある。高脂血症治療のための併用製剤及び協動的治療においては、ある種のハーブ治療薬も有効に用いられる場合があり、例えばクルクミン、ググリピッド、ニンニク、ビタミンＥ、大豆、可溶性繊維、魚油、緑茶、カルニチン、クロム、コエンザムＱ１０、抗酸化ビタミン類、ブドウ種子エキス、パンテチン、紅麹米、及びロイヤルゼリーが挙げられる。
【００２６】
本発明の前記の目的及びその他の諸目的、特徴、局面及び利益は、下記の詳細な記載より明かとなろう。
【００２７】
図面の簡単な説明
図１はＬＤＬ受容体遺伝子のプロモーター領域の図である。前記プロモーター領域については３つの直結した反復配列と２つのＴＡＴＡ様配列がプロモーター領域で同定されている。ステロールのシス作用性エレメントは反復配列２にあり、サイトカインの調節エレメントＯＭ（ＳＩＲＥ）は前記ＴＡＴＡ様配列と重複している。
【００２８】
図２は、ベルベリンによる制御も含めてＬＤＬ受容体遺伝子発現の細胞内調節を示す模式図である。
【００２９】
図３（Ａ）及び図３（Ｂ）は、ベルベリン（Ａ）又はベルベリン硫酸塩（Ｂ）により処理を行ってから２４時間後のヒト肝ＢＥＬ−７４０２細胞のＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ値の定量的ＲＴ−ＰＣＲ産物の電気泳動図である。
【００３０】
図４は、ベルベリン１５μｇ／ｍｌ投与２４時間後のＢＥＬ−７４０２細胞表面に発現するＬＤＬＲのタンパク濃度のフローサイトメトリーによる測定結果のグラフである。
【００３１】
図５は、ベルベリン治療後のハムスターにおける血清コレステロール（Ａ）及びＬＤＬ（Ｂ）の減少、及び時間の関数（Ｃ）としてのＬＤＬの減少を示すグラフである。
【００３２】
図６は、定量リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（Ａ）及びウェスタン・ブロット法（Ｂ）により測定した、ベルベリンの最終投与４時間後に絶命させたハムスターの全ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ及びタンパク抽出物の濃度を示すグラフ及び電気泳動図である。
【００３３】
図７は、ＨｅｐＧ２細胞のＳＲＥＢＰ２にモノクロナール抗体を作用させた場合のＳＲＥＢＰ２の前駆体（Ｐ）及び成熟体（Ｍ）の濃度を示すウェスタン・ブロット解析結果の図である。
【００３４】
図８は、ロバスタチン（Ｌｏｖ）単独又はベルベリン（ＢＢＲ）との組合せのいずれかにより２４時間処理したＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ発現を示すノーザン・ブロット（Ａ）の図と、同じ細胞のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（Ｂ）産物の電気泳動図である。
【００３５】
図９はＧＷ７０７及びオンコスタチンＭの存在下におけるＬＤＬＲプロモータ活性を示すグラフである。
【００３６】
図１０は、異なるアクチノマイシンＤ存在下においてベルベリン処理を行ったＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ濃度を示すノーザン・ブロット図（Ａ）と、残余ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡのパーセンテージとして表した規格化ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ信号のプロット（Ｂ）である。
【００３７】
図１１は、ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ３’ＵＴＲ及びキメラＬｕｃ−ＬＤＬＲ３’ＵＴＲコンストラクトの模式図である。
【００３８】
図１２は、対照用細胞（Ａ）、及びベルベリン又は対照用としてのジメチルスルホキシドで処理した細胞（Ｂ）のノーザン・ブロット解析図である。
【００３９】
図１３は、ＡＲＥ及びＵＣＡＵモチーフが欠失したコンストラクトの模式図（Ａ）と、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析により決定した、ベルベリン処理に対するｗｔ  ｐＬｕｃ／ＵＴＲ−２及び欠失コンストラクトの応答を示すグラフ（Ｂ）である。
【００４０】
図１４は、ベルベリン処理を行わない、又は５μｇ／ｍｌの投与量にて表記の様々なレベルでベルベリン処理を行ったＢｅｌ−７４０２細胞（Ａ）又はＨｅｐＧ２細胞（Ｂ）から回収した細胞タンパクのウェスタン・ブロットと、表記の濃度で１時間処理したＨｅｐＧ２細胞（Ｃ）のウェスタン・ブロットとの図である。
【００４１】
本発明は、個体及び試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、生体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）、及び生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の哺乳類細胞、組織及び臓器を含む哺乳類被験体における、高脂血症及びコレステロール値亢進を予防及び／又は治療するための新規な方法及び組成物を提供する。様々な実施態様において、前記方法及び組成物は、高脂血症及びコレステロール値亢進に起因する心臓血管疾患を含めた疾病を予防又は治療する上で有効である。本明細書で用いられる「心臓血管疾患」には、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、心筋梗塞、高血圧、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、間欠性跛行、脂質代謝異常食後高脂血症及び黄色腫を含むある範囲の症状、状態、及び／又は疾病、並びに前述の疾病及び状態に起因するか又はこれらに随伴する、従来標的とされていたあらゆる病状を含める意図がある。
【００４２】
コレステロール低減製剤及び方法を含む、本明細書で提供される脂質低減製剤及び方法は、上記式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を用い、本明細書に記載される薬剤として許容されるあらゆる活性化合物、並びに種々の予測可能かつ容易に提供される化合物、誘導体、塩、溶媒和物、異性体、エナンチオマー、結晶多形、及びこれらの化合物のプロドラッグ、及びこれらの組合せを、新規な脂質低減薬として含む。本発明で用いられる例示的な化合物は、例証的な実施態様として、ベルベリン硫酸塩、塩化ベルベリン、ベルベリン塩酸塩、塩化パルマチン、オキシベルベリン、ジヒドロベルベリン、８−シアノジヒドロベルベリン、テトラヒドロベルベリンＮ−オキシド、テトラヒドロベルベリン、ヨウ化Ｎ−メチルテトラヒドロベルベリン、６−プロトベルベリン、９−エトキシカルボニルベルベリン、９−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルベルベリン及び１２−ブロモベルベリン、ベルベリンアジド、及びベルベリン・ベタインを含む。
【００４３】
前記製剤及び方法において、本明細書で開示されるベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、高血圧、間欠性跛行、脂質代謝異常食後高脂血症及び黄色腫のような、但しこれらに限定されない、心臓血管疾患を含む、高脂血症及び／又はコレステロール値亢進及び高脂血症及びコレステロール値亢進に随伴する状態を患う哺乳類被験体において、高脂血症及びコレステロール値亢進を治療するために効果的に用いられる。
【００４４】
本発明の製剤及び方法を用いた治療には、ヒト個体を含めた広範な哺乳類被験体が供せられる。これらの被験体は、高脂血症又はコレステロール値亢進又は高脂血症によって悪化するか又は誘発される、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、心筋梗塞、脳梗塞、バルーン血管形成術後の再狭窄、間欠性跛行、高血圧、脂質代謝異常食後高脂血症及び黄色腫を含む心臓血管疾患のような疾病を呈するヒトその他の哺乳類被験体を含む。
【００４５】
本発明の方法及び組成物において、本明細書に開示される１つまたは２つ以上のベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、高脂血症及び／又は関連障害の治療に有効な抗高脂血症又はコレステロール低減薬として効果的に処方されるか又は投与される。例示的な実施態様では、塩化ベルベリンは単独或いは１つまたは２つ以上の補助的治療薬との組合せにて、医薬製剤及び治療法における抗高脂血症有効薬として、例示される目的に照らして実証される。本開示はまた、天然又は合成化合物の形態をとり、複合体、誘導体、塩、溶媒和物、異性体、エナンチオマー、結晶多形、及び本明細書に開示される化合物のプロドラッグ、及びこれらの組合せを含み、本発明の方法及び組成物において脂質低減治療薬として有効な、薬剤として許容される更に別のベルベリン化合物及びベルベリン関連及び誘導体化合物を提供する。
【００４６】
高脂血症とは、血流中の血清脂質の異常な増加である。一般に、遺伝子欠陥によって起こる一次性高脂血症か、又は様々な病態、薬剤及び／又は食事的要因によって起こる二次的高脂血症に分類される。高脂血症はまた、高脂血症の一次的及び二次的要因の組合せに起因する場合もある。本発明の組成物及び方法は、原因のいかんに依らず、あらゆるタイプの高脂血症の治療に有効である。
【００４７】
高脂血症及びコレステロール値亢進の原因の一つは、一つ又は複数のＬＤＬ調節機構又は経路の障害である。血漿中のＬＤＬ濃度は、血流中からＬＤＬ粒子を捕捉し細胞内へ取り込むＬＤＬ受容体によって一部調節されており、多すぎる時には前記血流からそれらを排除し、より多くのＬＤＬが必要な時には放出する。前記ＬＤＬ受容体遺伝子の転写調節は、ステロール調節エレメント結合タンパク経路（ＳＲＥＢＰ）を通じて制御される。胆汁酸捕捉剤、コレステロール生合成阻害剤、及びコレステロール吸収阻害剤はいずれも前記ＳＲＥＢＰ経路及びそれに続くアップレギュレートＬＤＬ受容体発現に影響を及ぼす。前記スタチン系薬剤は、  ３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ  レダクターゼ（ＨＭＧ−ＣｏＡ  レダクターゼ）を競争的に阻害し、また肝臓中におけるコレステロールの生合成を遮断する。ホルモン、サイトカイン、成長因子及び二次情報伝達物質もまた、下記表１に概要を示すように、ＬＤＬ受容体遺伝子の転写を調節する。前記ＬＤＬ受容体遺伝子の転写後の調節もまた、医薬品介入のターゲットである。本発明では、ベルベリンがＬＤＬ受容体発現を肝細胞中の転写後及びステロール非依存的機構によってアップレギュレートできることが実証されている（図２）。
【００４８】
表１  様々な薬剤によるLDL受容体遺伝子発現のアップレギュレーション
【００４９】
【表１】
2008513382.tif 000003
＊ｃ／ＥＢＰ：ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク；Ｅｇｒ１：初期成長応答遺伝子１；ＥＲＫ：細胞外シグナル制御キナーゼ；ＩＬ：インターロイキン；ＬＤＬ：低密度リポタンパク；ＯＭ：オンコスタチンＭ；ＰＫＣ：プロテインキナーゼＣ；ＰＭＡ：ホルボール−１２−ミリステート−１３−酢酸；ＳＩＲＥ：ステロール非依存性調節エレメント；ＳＲＥ：ステロール調節エレメント；ＳＲＥＢＰ：ステロール調節エレメント結合タンパク；ＴＮＦ：腫瘍壊死因子；ＵＴＲ：非翻訳領域。
【００５０】
当業者は、以下に述べる様々な併用製剤及び協動的投与方法において、表１に挙げたＬＤＬ受容体発現調節活性を有する前述の各薬剤を本明細書で述べるベルベリン化合物及びベルベリン関連及び誘導体化合物と組み合わせると有用であることを察知するであろう。
【００５１】
ヒトＬＤＬ受容体構造遺伝子は第１９染色体の短腕に位置する。その長さは約４５キロベース（ｋｂ）であり、約１８エクソンからなり、各々異なる単一のタンパク・ドメインと１７個のイントロンをコードしている。（Ｌｉｎｄｇｒｅｎ  ら、ＰＮＡＳ，８２：８５６７−８５７１（１９８５））。そのプロモータは５’−フランキング領域に位置し、その中の塩基対（ｂｐ）−５８と−２３４との間にシス作用性ＤＮＡエレメントの大部分がみられ、そのイニシエーター・メチオニン・コドンのＡは＋１である。前記プロモータ領域の長さは１７７ｂｐであり、各々１６ｂｐの不完全な反復配列３個と、２個のＴＡＴＡ様配列と、数個の転写開始部位とを含み、これらは全て遺伝子発現及び調節に不可欠である（図１）（Ｓｕｅｄｈｏｆｆら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２８：８１５−８２２（１９８７））。反復配列２は、ＬＤＬレギュレーターを制御する１０ｐｂ長のＤＮＡステロール  調節エレメント（ＳＲＥ）を含む（図１、Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：２３０６−２３１０（１９９０））。ヒトＬＤＬ受容体ｍＲＮＡは長さ５．３ｋｂであり、時として２．５  ｋｂ長の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む（Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｃｅｌｌ，３９：２７−３８（１９８４））。前記３’ＵＴＲの５’基部にはＡＵリッチなエレメント（ＡＲＥｓ）が３個存在し、３’末端領域にはＡｌｕ様の反復配列のコピーが３個存在する。これらの構造は、ＨｅｐＧ２細胞中での半減期が約４５分間と構成的に短いＬＤＬ受容体ｍＲＮＡの安定性に重要な役割を果たし、又、前記受容体遺伝子発現の転写後調節様のシス作用性エレメントとして働く（Ｙａｍａｍｏｔｏら，Ｃｅｌｌ，３９：２７−３８（１９８４）及びＷｉｌｓｏｎら，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．，３９：１０２５−１０３２（１９９８））。
【００５２】
前記ステロール調節エレメント結合タンパク（ＳＲＥＢＰ）は、基本的ならせん−ループ−らせん−ロイシン・ジッパー（ｂＨＬＨ−Ｚｉｐ）ファミリーに属する転写因子である（Ｙｏｋｏｙａｍａら，Ｃｅｌｌ，７５：１８７−１９７（１９９３））。これらは、前記ＬＤＬ受容体遺伝子の前記プロモータ内のみならず、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ遺伝子及びアセチルコエンザムＡシンターゼ遺伝子のような、コレステロール又は脂肪酸生合成に関与する酵素をコードする他の遺伝子のプロモータ中にも存在するステロール調節エレメント（ＳＲＥ）に結合する（Ｒａｗｓｏｎら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，４：６３１−６４０（２００３））。前記ＬＤＬ受容体遺伝子の主なアクチベーターはＳＲＥＢＰ−２である（Ｈｏｒｔｏｎら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０９：１１２５−１１３１（２００２）。
【００５３】
コレステロール又はその誘導体が細胞内に豊富に存在する場合は、ＳＲＥＢＰ経路が抑制され、前記ＬＤＬ受容体遺伝子又は脂質の生合成に必要な他の遺伝子の転写は行われない。豊富なコレステロールは、ＳＲＥＢ開裂活性化タンパク（ＳＣＡＰ）のステロール感知ドメイン（ＳＳＤ）に直接結合し、ＳＣＡＰをインシュリン誘導遺伝子（Ｉｎｓｉｇ）１及び２と呼ばれる一対の小胞体膜タンパクに結合させるような立体配座を惹起させ、続いてＳＲＥＢＰ／ＳＣＡＰ／Ｉｎｓｉｇ三元複合体を形成する（図２）（Ｙａｎｇら，Ｃｅｌｌ，１１０：４８９−５００（２００２））。これは小胞体膜中のＳＲＥＢＰ／ＳＣＡＰをトラップするので、前記ＳＲＥＢＰはゴルジ体に到達して開裂を起こすことができず、したがってＬＤＬＲの発現値が低下する。この結果、コレステロールの取込みと合成が阻害され、細胞はコレステロール・ホメオスタシスに到達する（Ｙａｎｇら，Ｃｅｌｌ，１１０：４４８９−５００（２００２））．
【００５４】
ステロールが存在しない場合は、ＳＣＡＰはＩｎｓｉｇタンパクと相互作用を起こさない。その代わり、前記ＳＲＥＢＰ／ＳＣＡＰ複合体が自由に小胞体を離脱してゴルジ体に入る（Ｅｓｐｅｎｓｈａｄｅら，ＰＮＡＳ，９９：１１６９４−１１６９９（２００２）。ゴルジ体に到着すると、ゴルジ膜中に存在する２種類のプロテアーゼの触媒作用による２連続のタンパク分解開裂によりＳＲＥＢＰ前駆体の転写活性ドメインが放出され、ＳＣＡＰは小胞体に戻る（図２）（Ｂｒｏｗｎら，ＰＮＡＳ，９６：１１０４１−１１０４８（１９９９）及びＮｏｈｔｕｒｆｆｔら，ＰＮＡＳ，９６：１１２３５−１１２４０（１９９９）。前記ＳＲＥＢＰ前駆体の開裂により、ｂＨＬＨ−Ｚｉｐドメインを含む核ＳＲＥＢＰ（ｎＳＲＥＢＰ）と呼ばれるフラグメント、又はＳＲＥＢＰの成熟体が放出される。前記ｎＳＲＥＢＰは核に入り、転写ＬＤＬＲを活性化する（Ｂｒｏｗｎら，ＰＮＡＳ，９６：１１０４１−１１０４８（１９９９）。この結果、前記細胞はコレステロール含有リポタンパクをより多く取り込み、コレステロール産生を増強し、コレステロール・ホメオスタシスは新たな値に到達する。前記ｎＳＲＥＢＰは不安定で、ポリユビキチン化され、プロテアソームにより推定半減期３時間の速さで分解される（Ｈｉｒａｎｏら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：３６４３１−３６４３７（２００１））。
【００５５】
ＬＤＬ受容体の発現は、アテローム予防効果のあるエストロゲン及びトリヨードチロニンを含むホルモン類；インシュリン、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αを含む幾つかのサイトカイニン類、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６及びオンコスタチンＭ（ＯＭ）のような因子により調節され、これらはいずれも肝細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子の転写を活性化する（Ｓｔｏｐｅｃｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：１７４８９−１７４９４（１９９３））（表１）。ＴＮＦ−α及びＩＬ−１は、細胞がステロールを含まない培地で培養された時のみ前記ＬＤＬ受容体遺伝子の転写を調節することができ、その誘導はステロール又はＬＤＬが添加されると抑制される（Ｓｔｏｐｅｃｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：１７４８９−１７４９４（１９９３））。ＯＭ又はＩＬ−６は前記ＬＤＬ受容体遺伝子の発現を、インシュリン及び幾つかの成長因子のそれと同様、ステロールに依存せずにアップレギュレートする（Ｇｉｅｒｅｎｓら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，２０：１７７７−１７８３（２０００））。ＯＭはまた、転写因子である初期成長応答遺伝子１（Ｅｇｒ１）及びＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパクβ（ｃ／ＥＢＰβ）を補充して、前記ＬＤＬ受容体遺伝子のプロモーター領域のＴＡＴＡ様配列と重複するステロール非依存型調節エレメント（ＳＩＲＥ）と呼ばれるＤＮＡモチーフに結合させることにより、前記ＬＤＬ受容体遺伝子の転写を活発化させることが知られているが（図１）、一方ＩＬ−６はその転写活性効果因子を仲介するのにＳＲＥ及び反復配列３のＳｐ１結合部位を必要とする（Ｇｉｅｒｅｎｓら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，２０：１７７７−１７８３（２０００））。
【００５６】
血小板由来の成長因子（ＰＤＧＦ）、ＥＧＦ及び繊維芽細胞成長因子を含む成長因子もまた、ＬＤＬ受容体遺伝子の発現をアップレギュレートする（Ｂａｓｈｅｅｒｕｄｄｉｎら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，１５：１２４８−１２５４（１９９５））。前記ＬＤＬ受容体遺伝子プロモーターに対する成長因子の刺激効果は、ＳＲＥ並びにシス作用性エレメントとしてのＳｐ１結合部位を必要とし、ちょうどインシュリンのようにこのシグナル伝達経路を強力に活性化する成長因子として、前記ＥＲＫを介したホスホリル化及びＳＲＥＢＰの活性化に関連している（Ｋｏｔｚｋａら，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．，４１：９９−１０８（２０００））。第２のメッセンジャー類似体であるホルボール・エステル類も又、前記ＬＤＬ受容体遺伝子の発現を調節する。
【００５７】
上述の細胞外刺激は、ＥＲＫシグナル伝達カスケードの活性化を必要とすることが判っている。前記ＥＲＫ経路を遮断すると、ＬＤＬ受容体遺伝子の発現を制御するそれらの能力が停止される（Ｋｕｍａｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：５２１４−４２２１（１９９８）。ＥＲＫはマイトジェン活性型プロテイン・キナーゼ（ＭＡＰＫ）のサブファミリーに属し、連続ホスホリル化によるその活性化は、細胞表面のそれらの受容体への細胞外刺激物質の結合に対して二次的なものである。これらの受容体は、（成長因子受容体及びインシュリン受容体のように）固有のチロシン・キナーゼ活性を有するか、又は（サイトカインの受容体のように）他のタンパク−チロシン・キナーゼと結合している（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，９：１８０−１８６（１９９７）。ＥＲＫは、活性化されると様々な細胞質又は核のタンパク因子をホスホリル化及び活性化し、細胞の成長及び分化を制御する応答を含む多発的な生物学的応答を仲介する。しかし、前記ＥＲＫ経路が前記ＬＤＬ受容体遺伝子のプロモーターにどのようにリンクし、異なる機構でその転写を増進させているのかについては、未だ解明されていない。本発明では、実施例ＸＩで後述するように、ベルベリンが速やかにＥＲＫを活性化し、及びＥＲＫ活性化の速度論がＬＤＬＲ発現のベルベリンによるアップレギュレーションに先立つことも確認された。
【００５８】
下記の実施例で示すように、ベルベリン及びその類似体は、前記ＬＤＬ受容体の転写後制御を図２に示したように行う。ベルベリンは植物の９つの科に広く分布する四級塩型アルカロイドの一つで、式ＩＩに示す化合物構造を有する。
【００５９】
【化２】
2008513382.tif 000004
式ＩＩ
【００６０】
ベルベリンはＨｙｄｒａｓｔｉｓ  ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ（ゴールデンシール）、Ｃｏｐｔｉｓ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（黄連又はゴールデンスレッド）、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ  ａｑｕｉｆｏｌｉｕｍ（ヒイラギメギ）、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（セイヨウメギ）、Ｂｅｒｂｅｒｉｓ  ａｒｉｓｔａｔａ（ターメリックの木）、Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｉｓａｔｉｓ、Ｍａｈｏｎｉａ  ｓｗａｓｅｙｉ、Ｙｅｒｂａ  ｍａｎｓａ（アネモプシス・カリフォルニカ）及びＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅに見出される。これら及び他のベルベリン含有ハーブ原料から得られる製品は、あらゆるその調製品及びエキスも含め、ベルベリン(又はベルベリン類似体、関連化合物及び／又は誘導体)を含む本発明に用いて有用な組成物と考えられる。本発明に用いて有用なベルベリン化合物及びベルベリン関連及び誘導体化合物は、典型的に式Ｉで表される構造を有し、機能的に透過な類似体、錯体、複合体、及びこれらの化合物の誘導体も、当業者にとっては本発明の少なくともある局面の範囲に含まれると考えられる。
【００６１】
【化３】
2008513382.tif 000005
式Ｉ
【００６２】
本発明で用いられる有用な式Ｉのベルベリン化合物及びベルベリン関連及び誘導体化合物はまた、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３が（それぞれ独立に、及び前述のように活性化合物を産し得るあらゆる組合せにおいて）ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アリール、アロイル、アラルキル、ニトリル、ジアルキルアミノ、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシ、アルカノイルアミノ、カルバモイル、カルバミル、カルボニルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、又は複素環の各基から選択されるような構造を典型的に有する。
【００６３】
より詳しい実施態様において、上記式Ｉの例示的な構造変形例は、哺乳類被験体における高脂血症を治療及び／又は予防する有用な候補化合物を提供する如くに選択され、ここでＲ１はメチル、エチル、ヒドロキシル、又はメトキシから選択され；Ｒ２はＨ、メチル、エチル、メテンから選択され；Ｒ３はＨ、メチル、エチル、メテンから選択され；Ｒ４はメチル、エチル、ヒドロキシル、又はメトキシから選択され；Ｒ８は直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３−メチルペンチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチル及び１−メチル−２−エチルプロピルから選択される置換基）から選択され；Ｒ９はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１０はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１１はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；Ｒ１２はメチル、エチル、ヒドロキシル、Ｃｌ、Ｂｒから選択され；及びＲ１３は直鎖状又は分枝状の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３−メチルペンチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチル及び１−メチル−２−エチルプロピルから選択される置換基）から選択される。本発明の組成物及び方法に用いられる更に他の候補化合物が提供され、ここで式Ｉ中に示される各基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及び／又はＲ１２は任意的に（独立に、集合的に、又は前述のように活性化合物を産し得るあらゆる組合せにおいて）、以下に述べかつ定義するように置換される場合がある。
【００６４】
本明細書で用いられる用語「ハロゲン」は、臭素、塩素、フッ素、又はヨウ素を指す。ある実施態様において、前記ハロゲンはフッ素である。別の実施態様において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及び／又はＲ１３は独立に塩素又は臭素の場合がある。
【００６５】
本明細書で用いられる用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ又は−Ｏ−を指す。
【００６６】
本明細書で用いられる用語「アルケン」は、炭素−炭素二重結合を含む不飽和炭化水素を指す。かかるアルケン基の例は、エチレン、プロペン等を含む。他の実施態様において、Ｒ２  及び／又はＲ３  独立にメテンの場合がある。
【００６７】
本明細書で用いられる用語「アルキル」は、１−２０個、好ましくは１−７個、最も好ましくは１−６個の炭素原子を含む直鎖状又は分枝状の脂肪族基を指す。この定義は、アルコキシ、アルカノイル及びアラルキルの各基のアルキル部分にも当てはまる。一実施態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８及び／又はＲ１３は独立にメチル又はエチル基の場合がある。他の実施態様において、Ｒ８及び／又はＲ１３は独立にｎ−プロピル、１−メチルエチル、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、ｍ−ヘキシル、１−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３−メチルペンチル、１−２−ジメチルブチル、１，３−ジメチル又は１−メチル−２−エチルプロピルの場合がある。
【００６８】
用語「アルコキシ」は、置換及び無置換アルキル、アルケニル、及び酸素原子に共有結合したアルキニル基を含む。一実施態様において、前記アルコキシ基は１ないし６個の炭素原子を含む。アルコキシ基の実施態様は、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、プロポキシ、ブトキシ、及びペントキシの各基を含むが、これらに限定されない。更なる実施態様において、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、及び／又はＲ１２は独立にメトキシ又はエトキシ基の場合がある。他の実施態様において、Ｒ１はメトキシ基である。置換アルコキシ基の実施態様は、ハロゲン化アルコキシ基を含む。更なる実施態様において、前記アルコキシ基は、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、及びアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル及びウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、サルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホナミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、複素環、アルキルアリール、又は芳香族又はヘテロ芳香族部分のような基で置換される場合がある。例示的なハロゲン置換アルコキシ基は、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロメトキシ、ジクロロメトキシ、及びトリクロロメトキシを含むが、これらに限定されない。一実施態様において、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及び／又はＲ１２は独立にヒドロキシル基の場合がある。
【００６９】
本明細書で単独又は複合的に用いられる用語「ニトロ」は、−ＮＯ２基を指す。
【００７０】
本明細書で用いられる用語「アミノ」は、基−ＮＲＲ’を指し、ここでＲ及びＲ’は独立に水素、アルキル、アリール、アルコキシ、又はヘテロアリールの場合がある。本明細書で用いられる「アミノアルキル」は、「アミノ」と比べてより詳細な選択を表し、基−ＮＲＲ’を指し、ここでＲ及びＲ’は独立に水素又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルの場合がある。
【００７１】
本明細書で用いられる用語「トリフルオロメチル」は、−ＣＦ３を指す。
【００７２】
本明細書で用いられる用語「トリフルオロメトキシ」は、−ＯＣＦ３を指す。
【００７３】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、炭素原子数３から７までの飽和環状炭化水素の環系を指し、任意的に置換される場合がある。例示的な実施態様は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルを含むが、これらに限定されない。ある実施態様では、前記シクロアルキル基はシクロプロピルである。別の実施態様では、前記（シクロアルキル）アルキル基は環状部分が炭素原子数３から７までであり、アルキル部分が炭素原子数１ないし４である。ある実施態様では、前記（シクロアルキル）アルキル基はシクロプロピルメチル基である。前記アルキル基は、ハロゲン、ヒドロキシ及びアミノからなる群より選択される１個から３個までの置換基で任意的に置換される。
【００７４】
本明細書で用いられる用語「アルカノイル」及び「アルカノイルオキシ」は、それぞれ−Ｃ（Ｏ）−アルキル基及び−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキル基を指し、それぞれ任意的に２−５個の炭素原子を含む。アルカノイル及びアルカノイルオキシ基の具体的な実施態様は、それぞれアセチル及びアセトキシである。
【００７５】
本明細書で用いられる用語「アリール」は、環状部分が炭素原子数６から１２までの単環系又は二環系の芳香族炭化水素基を指し、例えば、フェニル、ナフチル、ビフェニル及びジフェニル基であり、これらの各々は例えば、アルキル；上述のごとく定義した置換アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルバミル、カルバモイル及びアリールオキシのような置換基の１ないし４個で置換される場合がある。本発明にかかるアリール基の具体的な実施態様は、フェニル、置換フェニル、ナフチル、ビフェニル、及びジフェニルを含む。
【００７６】
本明細書で単独又は複合的に用いられる用語「アロイル」は、任意的に置換された安息香酸又はナフトイン酸のような、芳香族カルボン酸に由来するアリール・ラジカルである。
【００７７】
本明細書で用いられる用語「ニトリル」又は「シアノ」は、−ＣＮ基を指す。
【００７８】
用語「ジアルキルアミノ」は、２個の同じ又は異なるアルキル基が結合してなるアミノ基を指す。
【００７９】
用語「アルケニル」は、炭素原子数２ないし１０で、１ないし３個の二重結合を有する直鎖状又は分枝状のアルケニル基を指す。好ましい実施態様は、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−メチルエテニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−メチル−２−プロペニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、４−ペンテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、１−へプテニル、２−へプテニル、１−オクテニル、２−オクテニル、１，３−オクタジエニル、２−ノネニル、１，３−ノナジエニル、２−デセニル等を含む。
【００８０】
本明細書で用いられる用語「アルキニル」は、炭素原子数２ないし１０で、１ないし３個の二重結合を有する直鎖状又は分枝状のアルキニル基を指す。例示的なアルキニルは、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、４−ペンチニル、１−オクチニル、６−メチル１−ヘプチニル、及び２−デシニルを含むが、これらに限定されない。
【００８１】
単独又は複合的に用いられる用語「ヒドロキシアルキル」は、先に定義されたアルキル基を指し、ここでは１個又は数個の水素原子、好ましくは１個の水素原子がヒドロキシル基に置換されている。ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル及び2−ヒドロキシエチルが例示される。
【００８２】
本明細書で用いられる用語「アミノアルキル」は−ＮＲＲ’を指し、ここでＲ及びＲ‘は独立に水素又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルの可能性がある。
【００８３】
用語「アルキルアミノアルキル」は、アルキル基を介して連結されたアルキルアミノ基（即ち、一般構造として−アルキル−ＮＨ−アルキル又は−アルキル−Ｎ（アルキル）（アルキル）を有する基）を指す。かかる基は、モノ−及びジ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）アミノＣ１−Ｃ８アルキルを含み、ここで各アルキルは同じ又は異なる場合がある。
【００８４】
用語「ジアルキルアミノアルキル」は、アルキル基に結合したアルキルアミノ基を指す。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル等が例示されるが、これらに限定されない。用語「ジアルキルアミノアルキル」は、架橋アルキル部分が任意的に置換されている基も含む。
【００８５】
用語「ハロアルキル」は、１個又は複数のハロ基で置換されたアルキル基を指し、例えばクロロメチル、２−ブロモエチル、３−ヨードプロピル、トリフルオロメチル、パーフルオロプロピル、８−クロロノニル等である。
【００８６】
本明細書で用いられる用語「カルボキシアルキル」は−Ｒ’−ＣＯＯＨを指し、ここでＲ’はアルキレン;カルボアルコキシアルキルは−Ｒ’−ＣＯＯＲを指し、ここでＲ’及びＲはそれぞれアルキレン及びアルキルである。ある実施態様では、アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルペンチル、ｎ−ヘキシル等のような、炭素原子数１−６の飽和直鎖状又は分枝状ヒドロカルビル・ラジカルを指す。アルキレンは、基が二価であること以外はアルキルと同じである。
【００８７】
用語「アルコキシアルキル」は、アルコキシ基で置換されたアルキレン基を指す。例えば、メトキシエチル［ＣＨ３ＯＣＨ２ＣＨ２−］及びエトキシメチル［ＣＨ３ＣＨ２ＯＣＨ２−］は、共にＣ３アルコキシアルキル基である。
【００８８】
本明細書で用いられる用語「カルボキシ」は、式−ＣＯＯＨで表される基を示す。
【００８９】
前記            「アルカノイルアミノ」は、−Ｃ（Ｏ）−を含むアルキル、アルケニル又はアルキニル基の後に−Ｎ（Ｈ）−が続く基であり、例えば  アセチルアミノ、プロパノイルアミノ及びブタノイルアミノ等である。
【００９０】
用語「カルボニルアミノ」は、基−ＮＲ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｒ’を指し、ここでＲ及びＲ’は独立に水素又は（Ｃ１−Ｃ４）アルキルから選択される場合がある。
【００９１】
本明細書で用いられる用語「カルバモイル」は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２を指す。
【００９２】
本明細書で用いられる用語「カルバミル」は、窒素原子がカルボニルに直接結合した官能基、即ち、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＲ’の中のような基を指し、ここでＲ及びＲ’は水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、シクロアルキル、アリール、複素環、又はヘテロアリールの場合がある。
【００９３】
用語「アルキルスルホニルアミノ」は、基−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒａを指し、ここでＲａは先に定義したとおりのアルキルである。
【００９４】
用語「複素環」は、任意的に置換された、不飽和の、部分飽和の、又は完全飽和の芳香族又は非芳香族環状基であり、少なくとも１個の炭素原子を含む環に少なくとも１個のヘテロ原子を含む４ないし７員単環系、又は７ないし１１員二環系である。前記複素環上の置換基は、前記アリール基に関して先に提示された置換基から選択される場合がある。ヘテロ原子を含む前記複素環基の各環は、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される１、２又は３個のヘテロ原子を持つ場合がある。１つの複素環に複数のヘテロ原子がある場合、それらは同じでも異なっていてもよい。
【００９５】
本明細書で述べる数値範囲は、いずれも表示された範囲全体を含む。したがって、あるＲの範囲が０及び４の間である場合、その値は１、２、３、及び４と理解される。
【００９６】
塩化ベルベリンは、本発明の方法及び組成物に用いられるベルベリンの一形態であり、下記式ＩＩＩの構造を有する。
【００９７】
【化４】
2008513382.tif 000006
式ＩＩＩ
【００９８】
ベルベリン及び関連及び誘導体化合物は当業者に公知のいかなる方法によっても生成できる場合があるが、本発明に用いられる例示的な化合物は、例えば以下に述べる経路１、２、３、及び４によっても生成できる場合がある。これらの反応及び合成手順は例示的なものに過ぎず、省略、代替、及び変更された手順、例えば、これらの手順の必須要素、又はその同等物を包含した手順も、本発明の範囲内であると考えられる。
【００９９】
【化５】
2008513382.tif 000007
【０１００】
【化６】
2008513382.tif 000008
【０１０１】
【化７】
2008513382.tif 000009
【０１０２】
【化８】
2008513382.tif 000010
【０１０３】
本発明の薬物学的な製剤を含めた式Ｉの化合物を含む脂質低減組成物は、哺乳類被験体における高脂血症及びコレステロール値亢進の予防及び／又は治療に有効な脂質低減有効量の式Ｉで表されるベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む。典型的には、コレステロール低減有効量を含めた脂質低減有効量の式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、単回投与又は多数回投与の形で、ある特定の治療的介入期間にわたり、前記被験体の１つまたは２つ以上の心臓血管疾患の症状又は状態を測定可能な程度に軽減する上で治療上有効な量の活性化合物を含む。例示的な実施態様では、これらの組成物は高脂血症を軽減するｉｎ  ｖｉｖｏ治療法において有効である。
【０１０４】
本発明の脂質低減組成物は、典型的には脂質低減有効量又は単位投与量の式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含み、これは１つまたは２つ以上の薬剤として許容される担体、賦形剤、ビヒクル、乳化剤、安定化剤、保存料、緩衝液、及び／又は安定性、送達性、吸収性、半減期、有効性、薬物動態的性質、及び／又は薬力学的性質を増強し、有害な副作用を低減し、又は薬剤としての利用に対する利点を提供し得るようなその他の添加剤と共に処方される場合がある。コレステロール低減有効量を含めた脂質低減有効量のベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物（例えば、有効濃度／量のベルベリン、又は選択された薬剤として許容される塩、異性体、エナンチオマー、溶媒和物、結晶多形及び／又はベルベリンのプロドラッグを含む単位投与量）は、当業者であれば臨床上及び患者特有の要因にしたがって容易に決定することができるであろう。ヒトを含めた哺乳類被験体への投与のための、前記活性化合物の好適かつ有効な単位投与量は、１０ないし１５００ｍｇ、２０ないし１０００ｍｇ、２５ないし７５０ｍｇ、５０ないし５００ｍｇ、又は１５０ないし５００ｍｇの範囲とされる場合がある。ある実施態様では、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の前記抗高脂血症又は高脂血症有効投与量はより狭い範囲内、例えば１０ないし２５ｍｇ、３０−５０ｍｇ、７５ないし１００ｍｇ、１００ないし２５０ｍｇ、又は２５０ないし５００ｍｇで選択される場合がある。これら及び他の有効な単位投与量は単回投与、又は毎日、毎週又は毎月といった多数回投与の形で、例えば１日に、１週間に、又は１ヶ月間に１ないし５回、又は２−３回の投与を行うことを含む投与計画に従って投与される場合がある。例示的な一実施態様では、１０ないし２５ｍｇ、３０−５０ｍｇ、７５ないし１００ｍｇ、１００ないし２５０ｍｇ、又は２５０ないし５００ｍｇの投与量が１日１回、２回、３回、４回又は５回投与される。より詳細な実施態様では、５０−７５ｍｇ、１００−２００ｍｇ、２５０−４００ｍｇ、又は４００−６００ｍｇの投与量が１日１回又は２回投与される。別の実施態様では、投与量を体重に基づいて計算し、例えば１日当たり約０．５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまでか、１日当たり１ｍｇ／ｋｇから約７５ｍｇ／ｋｇまでか、１日当たり１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇまでか、１日当たり２ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇまでか、１日当たり２ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまでか、１日当たり３ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまでかの分量で投与される場合がある。
【０１０５】
抗高脂血症有効量の式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む本発明の組成物の分量、タイミング及び送達モードは、体重、年齢、性別、及び個人の体調、高脂血症及び／又は関連症状の急性の度合い、投与が予防目的と治療目的のいずれであるかに応じて、また医薬品の送達性、吸収性、半減期を含む薬物動態、及び有効性に影響を与えることが知られている要因に応じて個人ベースで日常的に調節される。
【０１０６】
即効性の脂質低減製剤の有効な単回投与又は多数回投与法は通常、被験体の高脂血症及び心臓血管疾患を実質的に予防するか又は軽減するに必要十分な、及び／又は被験体の高脂血症に随伴する１つまたは２つ以上の病状を実質的に予防するか又は軽減するに必要十分な最低用量を近似すべく選択される。ある投与及び投与プロトコルは、数日、又は１週又は複数週又は複数年にすらわたる反復投与を含む場合がある。ある効果的な治療法はまた、１日１回又は１日複数回ベースで複数日、複数週、又は複数年にすらにわたる予防的投与を包含する場合がある。
【０１０７】
本発明による抗高脂血症治療の有効性の判定には、様々な分析やモデル系を容易に用いることができる。例えば、総コレステロール値並びにトリグリセリド、ＬＤＬ及びＨＤＬ値を測定するための血液検査は、ルーチン的に行うことができる。総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬを超える個体は、心臓血管疾患の高リスク群との境界線上に居ると考えられる。総コレステロール値が２３９ｍｇ／ｄＬより高い個体は、高リスク群と考えられる。ＬＤＬ値は、１００ｍｇ／ｄＬ未満が最適である。ＬＤＬ値１３０ないし１５９ｍｇ／ｄＬは、高リスク群との境界線上と考えられる。ＬＤＬ値１６０ないし１８９ｍｇ／ｄＬは心臓血管疾患の高リスク群と考えられ、ＬＤＬが１９０ｍｇ／ｄＬを超える個体は心臓血管疾患のリスクが極めて高いと考えられる。トリグリセリド値は、１５０ｍｇ／ｄＬ未満が正常である。この値が１５０−１９９ｍｇ／ｄＬは高リスクとの境界線上と考えられ、この値が２００を超えるとその個体は心臓血管疾患の高リスク群であると考えられる。脂質値は、標準的な血中脂質プロファイル試験で決定することができる。本発明の前記組成物の有効量は、高脂質値を少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％以上、７５−９０％まで、又は９５％以上、下げることができる。有効量はまた、ある個体の脂質プロファイルを各脂質について最適範囲に移行させることができ、即ち、ＬＤＬ値を１９０ｍｇ／ｄｌから１３０ないし１５９ｍｇ／ｄＬの範囲内、更には１００ｍｇ／ｄＬ未満まで下げることができる。有効量はまた、ＬＤＬ又はトリグリセリド値を約１０ないし約７０ｍｇ／ｄＬ、約２０ないし約５０ｍｇ／ｄＬ、約２０ないし約３０ｍｇ／ｄＬ、又は約１０ないし約２０ｍｇ／ｄＬだけ下げることができる。
【０１０８】
個体はまた、ｈｓ−ＣＲＰ（高感度Ｃ反応性タンパク）血液検査で評価される場合がある。ｈｓ−ＣＲＰ検査値が１．０ｍｇ／Ｌ未満の個体は、心臓血管疾患のリスクが低い。ｈｓ−ＣＲＰの検査値が約１．０ないし３．０ｍｇ／Ｌの個体は、心臓血管疾患のリスクが平均レベルである。ｈｓ−ＣＲＰ検査値が３．０ｍｇ／Ｌを超える個体は心臓血管疾患のリスクが高い。本発明の前記組成物の有効量は、ｈｓ−ＣＲＰ検査値を３．０ｍｇ／Ｌ未満に下げることができる。本発明の前記組成物の油香料は、ｈｓ−ＣＲＰ検査値を約０．５ないし約３．０ｍｇ／Ｌ、更には約０．５ないし約２．０ｍｇ／Ｌだけ下げることができる。
【０１０９】
本発明の前記組成物の有効量はまた、息切れ、胸痛、下肢痛、疲労、錯乱視力変化、血尿、鼻血、不整脈、平衡感覚喪失又は協調、脱力感、又はめまいを含む心臓血管疾患の諸症状の低減によって実証される場合がある。
【０１１０】
本明細書に述べた状態の各々について、被験体は、該被験体における高脂血症、コレステロール値亢進及び／又は標的の心臓血管疾患又は状態に随伴する１つまたは２つ以上の病状を、偽薬投与群又は他の適当な対照群と比較して、１０％、２０％、３０％、５０％以上、７５−９０％まで、又は９５％以上、下げることができる。
【０１１１】
本発明の更なる局面において、コンビナトリアル脂質低減製剤及び協動的投与が提供され、ここでは、有効量の式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物、及び１つまたは２つ以上の二次的又は補助的薬剤がコンビナトリアルに処方されるか、又は前記ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物と協動的に投与され、複合多活性薬剤である抗高脂血症組成物又は協動的治療方法が用いられる。この意味における例示的な併用製剤及び協動的治療法では、前記ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を、選択された該併用製剤又は協動的治療法において標的の（又は随伴する）疾病、状態、及び／又は病状の治療又は予防に有用な１つまたは２つ以上の二次的抗高脂血症薬剤)、或いは１つまたは２つ以上の補助的治療薬を組み合わせて用いる。本発明の併用製剤及び協動的治療法の大部分は、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を１つまたは２つ以上の二次的又は補助的治療薬と組み合わせて処方するか又は協動的に投与し、前記被験体の高脂血症及び／又は１つまたは２つ以上の心臓血管疾患の症状又は又は状態の治療にコンビナトリアルに有効であるか又は協動的に有用な複合製剤又は協動的治療法を与えるものである。この意味における例示的な併用製剤及び協動的治療法では、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を、例えば、抗高脂血症薬；抗異脂肪血症薬；血漿ＨＤＬ上昇薬；コレステロール取込み阻害剤を含むがこれに限定されない抗高コレステロール血症薬；コレステロール生合成阻害剤、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（別名スタチン系薬剤、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン、及びアトルバスタチン等）；ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤；スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤又はスクアレン・シンセターゼ阻害剤（別名スクアレン・シンターゼ阻害剤）；メリナミドを含むがこれに限定されないアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；プロブコール；ニコチン酸及びその塩；ナイアシンアミド；β−シトステロール又はエゼチミブを含むがこれに限定されないコレステロール吸収阻害剤；コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム又は架橋デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体を含むがこれに限定されない胆汁酸捕捉剤陰イオン交換樹脂；ＬＤＬ受容体誘導物質；クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート及びゲムフィブロジルを含むがこれに限定されないフィブラート系薬剤；ビタミンＢ６（別名ピリドキシン）、及びＨＣｌ塩のような、薬剤として許容されるその塩；ビタミンＢ１２（別名シアノコバラミン）；ビタミンＢ３（上記のとおり、別名ニコチン酸及びナイアシンアミド）；ビタミンＣ及びＥ及びベータカロテンを含むがこれらに限定されない抗酸化ビタミン類；β遮断薬；アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１）拮抗薬；アンジオテンシン変換酵素阻害剤、レニン阻害剤；フィブリノゲン受容体拮抗薬、即ち、糖タンパクＩＩｂ／ＩＩＩａフィブリノゲン受容体拮抗薬を含むがこれに限定されない血小板凝集阻害剤；エストロゲンを含むが���れに限定されないホルモン類；インシュリン；イオン交換樹脂；オメガ３オイル類；ベンフルオレックス；イコサペント酸エチル;及びアムロジピンから選択される１つまたは２つ以上の二次的又は補助的治療薬と組み合わせて用いる。補助的療法はまた、運動量の増加又は変更、手術、及び食事の切替え(例えば、低コレステロール食及び／又は高繊維食への切り替え)を含む場合がある。上述したように、ハーブ調製品(例えば、固形品、液状エキス等)もまた、脂質値を下げるための併用製剤及び協動的治療プロトコルに効果的に用いられる。この意味における効果的なコンビナトリアル・ハーブ系薬剤は、例えば、クルクミン、抗酸化ビタミン類、ググリピッド（ググルの木Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ  Ｍｕｋｕｌの樹脂から採れる）、ニンニク、ビタミンＥ、大豆、可溶性繊維、魚油、緑茶、カルニチン、クロム、コエンザムＱ１０、ブドウ種子エキス、パンテチン、紅麹米、及びロイヤルゼリーを含む。
【０１１２】
ある実施態様において、本発明はベルベリンと、抗炎症又は脂質低減活性を有する１つまたは２つ以上の補助薬剤とを含むコンビナトリアル脂質低減製剤を提供する。かかる併用製剤において、ベルベリンと脂質低減活性を有する前記補助薬剤とは、単独又は組合せによる脂質低減効果量にて、複合製剤中に存在する。例示的な実施態様では、ベルベリン及び非ベルベリン脂質低減薬剤はそれぞれ脂質低減量（即ち、単独で被験体に検出可能な抗高脂血症応答を生じさせる単回投与量）にて含まれる。或いは、前記併用製剤はベルベリン及び非ベルベリン薬剤の一方又は双方をサブセラピー的な単回投与量にて含む場合があり、本明細書で双方の薬剤を含む前記併用製剤は、脂質低減応答を総力的に引き出すのに有効な双方の薬剤の合計投与量で特徴付けられる。したがって、ベルベリン及び非ベルベリン薬剤の一方又は双方が前記製剤中に存在する場合があり、又はサブセラピー的な投与量にて、但し、被験体に検出可能な脂質低減応答を引き出せる製剤又は方法にて、協動的投与プロトコルにしたがって投与される場合がある。
【０１１３】
本発明の協動的投与方法を実施するにあたり、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、本明細書で想定される１つまたは２つ以上の二次的又は補助的治療薬と共に、協動的治療プロトコルにしたがって同時又は逐次的に投与される場合がある。したがってある実施態様では、ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、非ベルベリン系脂質低減薬又は本明細書で想定される何らかの他の二次的又は補助的治療薬と共に、別々の製剤又は上述の併用製剤（即ち、ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物、及び非ベルベリン治療薬の双方を含む）を用いて、協動的に投与される。この協動的投与は、同時又はいずれかの順番で行われる場合があり、又、一方のみ又は双方（又は全て）の活性治療薬が独立及び／又は総合的にその生物学的活性を発揮する期間がある場合がある。かかる全ての治療法の特徴的な局面は、前記ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物が少なくとも何らかの脂質低減活性を示し、、相補的な脂質低減と関連した好ましい臨床応答、又は二次的又は補助的治療薬によってもたらされる顕著な臨床応答が生ずる。しばしば、前記ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物と二次的又は補助的治療薬との協動的投与は、前記ベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物、又は前記二次的又は補助的治療薬の単独使用によって引き出される治療効果を上回って、より優れた治療又は予防成績を被験体にもたらす。この性質は、間接効果はもちろん、直接効果をも予測させるものである。
【０１１４】
例示的な実施態様では、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、例えばコレステロール取込み阻害剤；コレステロール生合成阻害剤、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン系薬剤ともいう。ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン、及びアトルバスタチン等）；ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤；スクアレン・エポキシダーゼ阻害剤又はスクアレン・シンセターゼ阻害剤（スクアレン・シンターゼ阻害剤としても知られる。）；メリナミドを含むがこれに限定されないアシル−コエンザムＡコレステロール・アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤；プロブコール；ニコチン酸及びその塩；ナイアシンアミド；β−シトステロール又はエゼチミブを含むがこれに限定されないコレステロール吸収阻害剤；コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラムを含むがこれらに限定されない胆汁酸捕捉剤陰イオン交換樹脂、又は架橋デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体；ＬＤＬ受容体誘導物質；クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート及びゲムフィブロジルを含むがこれらに限定されないフィブラート系薬剤；ビタミンＢ６（ピリドキシンとも呼ばれる）及び薬剤として許容される塩酸塩のようなその塩；ビタミンＢ１２（シアノコバラミンとも呼ばれる）；ビタミンＢ３（ニコチン酸及びナイアシンアミドとも呼ばれる。前述のとおり。）；ビタミンＣ及びＥ及びベータカロテンを含むがこれらに限定されない抗酸化ビタミン類；β遮断薬；アンジオテンシンＩＩ受容体（ＡＴ１）拮抗薬；アンジオテンシン変換酵素阻害剤、レニン阻害剤；フィブリノゲン受容体拮抗薬、即ち、糖タンパクＩＩｂ／ＩＩＩａフィブリノゲン受容体拮抗薬を含むがこれに限定されない血小板凝集阻害剤；エストロゲン；インシュリンを含むがこれらに限定されないホルモン類；イオン交換樹脂；オメガ３オイル類；ベンフルオレックス；イコサペント酸エチル；及びアムロジピンから選択される１つまたは２つ以上の第２の脂質低減剤、又は他の指定された治療薬と協動的に（同時又は順次に、複合又はセパレート製剤の形で）投与される。補助的療法は又、運動の増加、手術、及び食事の切替え（例えば、低コレステロール食）を含む場合がある。又、例えばクルクミン、ググリピッド、ニンニク、ビタミンＥ、大豆、可溶性繊維、魚油、緑茶、カルニチン、クロム、コエンザムＱ１０、抗酸化ビタミン類、ブドウ種子エキス、パンテチン、紅麹米、及びロイヤルゼリー等、何らかのハーブ療法が併用製剤及び高脂血症の協動的治療に効果的に用いられる場合もある。
【０１１５】
上述のように、本明細書に企図される本発明の様々な実施態様の全てにおいて、抗高脂血症及び関連する方法及び製剤は、様々な形態をとる式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を用いる場合があり、当該化合物の薬剤として許容される塩、異性体、エナンチオマー、結晶多形、溶媒和物、水和物、及び／又はプロドラッグのいずれか１つまたは２つ以上の組合せを含む。本発明の例示的な実施態様では、ベルベリンは例証的な目的による治療製剤及び方法に用いられる。
【０１１６】
本発明の医薬品組成物は、それらの意図する治療又は予防目的を達成し得るあらゆる手段で投与される場合がある。本発明の前記組成物の好適な投与経路は、経口、頬側、経鼻、エアロゾル、局所、経皮、粘膜、注射、徐放、制御放出、イオン泳動、超音波導入、及び他のあらゆる従来の送達経路、デバイス及び方法を含むが、これらに限定されない。注射による方法は、静脈内、筋肉内、腹腔内、脊椎内、くも膜下内、脳室内、動脈内、皮下及び鼻腔内経路を含むが、これらに限定されない。
【０１１７】
本発明の組成物は更に、採用される特定の投与方式に適合した、薬剤として許容されるキャリヤを含む場合がある。本発明の前記組成物の投与形態は、当該分野において上述のような投与単位の調製に適すると認められている賦形剤を含む。かかる賦形剤は、バインダー、フィラー、潤滑剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、香料、保存料、緩衝液、湿潤剤、崩壊薬、発泡剤及び他の従来の賦形剤及び添加剤を含むが、これらに限定されない。
【０１１８】
所望の場合には、親水性徐放性ポリマーのような徐放性キャリアを用いた制御放出形態で、本発明の組成物を投与することができる。この意味において、例示的な制御放出剤は、約１００ｃｐｓないし約１００，０００ｃｐｓの粘度範囲を持つヒドロキシプロピル・メチル・セルロース、又は、コレステロールのような他の生体適合性マトリクスを含む。
【０１１９】
本発明の組成物はしばしば経口投与の形態で調剤・投与されるが、任意的にキャリヤ又は他の添加剤と組み合わせられる。調剤技術で普通に用いられる好適なキャリアは、微結晶セルロース、乳糖、ショ糖、果糖、ブドウ糖、デキストロース、又は他の糖類、二塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、セルロース誘導体、カオリン、マンニトール、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、ソルビトール、又は他の糖アルコール類、乾燥デンプン、デキストリン、マルトデキストリン又は他の多糖類、イノシトール、又はこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。本発明に用いられる例示的な単位経口投与剤形はタブレットを含み、これは医薬品の単位経口投与剤形を調製するための何らかの従来法で調製される場合がある。タブレットのような経口単位投与剤形形態は、放出調節剤、流動促進剤、圧縮剤（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎａｉｄｅｓ）、崩壊薬、潤滑剤、バインダー、香料、香味増進剤、甘味料及び／又は保存料を含む従来の製剤用添加剤の１つ又は複数を含有する場合があるが、これらに限定されない。好適な潤滑剤は、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、水素添加植物油、安息香酸ナトリウム、ロイシン、カーボワックス、ラウリル硫酸マグネシウム、コロイド状二酸化珪素及びモノステアリン酸グリセリルを含む。好適な流動促進剤は、コロイダルシリカ、乾式二酸化珪素、シリカ、タルク、乾式シリカ、ギプス及びモノステアリン酸グリセリルを含む。コーティングに用いられる場合がある物質は、ヒドロキシプロピルセルロース、酸化チタン、タルク、甘味料及び着色料を含む。
【０１２０】
本発明の更なる組成物を、当該技術分野で公知のいかなる様々な吸入又は経鼻的剤形によっても調製し、投与することができる。エアロゾル化した精製ベルベリン製剤を患者の副鼻腔（ｓｉｎｕｓｃａｖｉｔｙ）又は肺胞内に配置させ得る装置は、定量噴霧式吸入器、噴霧器、乾燥粉末生成器、散布器等を含む。全身効果を期待した薬剤の肺送達に適した方法及び組成物は、当該分野において公知である。他に考えられる送達方法は、吸入による肺深部への送達を含む。キャリヤが液体である、例えば点鼻薬又は点鼻液として好適な剤形は、ベルベリン組成物及び何らかの活性又は不活性添加剤の水溶液又は油性溶液の場合がある。
【０１２１】
本発明の更なる組成物及び方法は又、高脂血症の治療を目的としたベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物の局所投与用に提供される。局所用組成物は、エアロゾル・スプレー、粉末、皮膚パッチ、スティック、顆粒、クリーム、ペースト、ジェル、ローション、シロップ、軟膏、含浸スポンジ、綿棒、又は溶液、又は水溶液、非水溶液中の懸濁液、水中油滴型エマルジョン、又は油中水滴型エマルジョンの形態を含む、皮膚又は粘膜に許容され得るキャリヤに含有される形で、式Ｉベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を１つまたは２つ以上の活性又は不活性添加剤と共に含む場合がある。これらの局所組成物は、少量の水又は他の溶媒又は局所用組成物に取り込まれる液体又は送達デバイスに溶解又は分散させた、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む場合がある。経皮的な投与経路が当業者に公知の皮膚浸透増進剤で増進されることは、容易に察知できる。かかる投与形態に適する製剤は、通常利用される賦形剤、特に、例えば２４時間といった長時間にわたる薬物の吸収を維持するための例えば構造又はマトリクスといった手段を含む。経皮送達は又、超音波導入のような技術により増進される場合がある。
【０１２２】
更に、別のベルベリン組成物は、本発明で企図される他の多くの組成物と同様、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤及び／又は製剤を哺乳類被験体の血液と等張にするための溶質を任意的に含む場合がある水系及び非水系の滅菌注射液と；懸濁化剤及び／又は濃化剤を含む場合がある水系及び非水系の滅菌懸濁液とを含む非経口投与用、例えば静脈注射、筋肉注射用、皮下注射用、又は腹腔内注射用の組成物として設計される。前記製剤は、単位投与又は多数回投与の容器に収められる場合がある。本発明の別の組成物及び製剤は、非経口投与後の放出時間を延長するためのポリマーを含む場合がある。前記非経口製剤は、かかる投与に適した溶液、分散物又はエマルジョンの場合がある。前記製剤は又、非経口投与後の放出時間を延長するためにポリマー製剤とされる場合がある。薬剤として許容される製剤及び成分は典型的に、滅菌されているか又は容易に滅菌可能であり、生物学的に不活性であり、容易に投与可能である。かかるポリマー材料は、調剤分野の当業者にはよく知られている。非経口製剤は典型的に緩衝化剤、防腐剤、及び水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロール等のような、薬学的・生理学的に許容される注射液を含む。即席の注射液、エマルジョン及び懸濁液が、前述したような滅菌粉末、顆粒及びタブレットから調製される場合がある。好ましい単位投与製剤は、活性成分の１日単回投与量又は上述のような単位１日サブ投与量、又はその適当な分画物を含む。
【０１２３】
より詳細な実施態様では、本発明の組成物は、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物をデリバリー用に、例えばコアセルベーション法又は界面重合法により、例えばヒドロキシメチル・セルロース又はゼラチン・マイクロカプセル及びポリ(メチルメタシレート)(methacylate)マイクロカプセル等のマイクロカプセル、ミクロ粒子又はミクロスフィアに封入したもの；コロイド状の薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミン・ミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）の形をとるもの;又はマクロエマルジョンの形をとるものを含む場合がある。
【０１２４】
上述したように、ある実施態様において、本発明の方法及び組成物は、薬剤として許容される塩類、例えば、上述のベルベリン化合物及び／又はベルベリン関連又は誘導化合物の酸付加物又は塩基性塩を用いる場合がある。薬剤として許容される付加塩の具体例は、無機及び有機酸付加塩を含む。好適な酸付加塩は、無毒な塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、及びリン酸水素塩を形成する酸から形成される。他の薬剤として許容される塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩等のような金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のようなアルカリ土類金属塩;トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等のような有機アミン塩；酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、酢酸塩、ジクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、及び蟻酸塩のような有機酸塩類；メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩類;及びアルギン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、及びグルコン酸塩のようなアミノ酸塩類を含むが、これらに限定されない。好適な塩基性塩は、無毒な塩、例えばアルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛及びジエタノールアミンの各塩を形成する塩基から形成される。
【０１２５】
本発明の方法及び組成物において用いられるベルベリン化合物及びベルベリン関連及び誘導体化合物の有用な塩形態の範囲を説明するために、ベルベリンの塩形態の例示的な集合を作成し、それらの溶解度を調べた（表２）。このようにして提供された新規なベルベリン塩類は、本発明の更に他の局面を具現化し、有用なベルベリン及び関連化合物の広範な集合をここに例示する。
【０１２６】
表２  代表的なベルベリン塩
【０１２７】
【表２】
2008513382.tif 000011
【０１２８】
他の詳細な実施態様において、本発明の前記方法及び組成物は、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物のプロドラッグを用いる。プロドラッグはｉｎ  ｖｉｖｏに活性な親薬物を放出する、共有結合した何らかのキャリアと考えられている。本発明において有用なプロドラッグの例は、ヒドロキシアルキル又はアミノアルキルを置換基として有するエステル又はアミドを含み、これらは上述のかかる化合物を無水コハク酸のような無水物と反応させることにより調製される場合がある。
【０１２９】
また本明細書に開示される本発明は、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を含む方法及び組成物であって、前記化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ代謝生成物（当該前駆体化合物の投与後にｉｎ  ｖｉｖｏに生成するか、又は代謝生成物そのものの形で直接投与するか、のいずれか）を用いる方法及び化合物をも包含するものと理解される。かかる生成物は、投与された前記化合物の、主に酵素的プロセスによる酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル等により生ずる場合がある。したがって本発明は、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を、その代謝生成物を生じさせるに十分な長さの期間、哺乳類被験体と接触させることを含むプロセスにより生成する化合物を用いる方法及び組成物を含む。かかる生成物は、典型的には本発明の化合物の放射能ラベル体を調製し、これをラット、マウス、モルモット、サル又はヒトのような動物に検出可能投与量にて非経口投与し、十分な時間にわたって代謝を進行させ、その転換生成物を尿、血液又は他の生物学的サンプルから及び単離することによって同定される。
【０１３０】
本明細書に開示される本発明は又、哺乳類被験体における高脂血症及び／又は心臓血管疾患又は状態のリスク値、有無、重篤度又は治療成績を診断するか、或いは管理する診断組成物をも包含するものと理解され、ラベル（例えば、同位体ラベル、蛍光ラベル、或いは従来法でラベル化合物を検出できるようにラベル）された式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物を、高脂血症及び／又は心臓血管疾患のリスクを持つか、或いはその１つまたは２つ以上の症状を呈する哺乳類被験体（例えば、細胞、組織、臓器、又は個体）に接触させ、その後、多岐にわたる公知の分析及びラベル化／検出方法のいずれかを用い、前記ラベル化合物の有無、場所、代謝、及び／又は結合部位を検出する（例えば、ＬＤＬ受容体の生理作用／代謝に関与する未ラベルの結合相手への結合を検出する）。例示的な実施態様では、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物は、１個又は複数個の原子が異なる原子量又は質量番号を有する１種類の原子に置き換わることにより、同位体ラベルされている。開示された前記化合物中に導入し得る同位体の例は、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌのような、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体を含む。続いて、前記同位体ラベルされた化合物は個体又は他の被験体に投与され、その後、上述のようにして検出され、従来法により有用な診断及び／又は治療管理データを与える。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１３１】
以下に述べる実験では、スタチン系薬剤のような現行の高脂血症治療薬によって利用される機構とは別の機構により血清コレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬを効果的に低減できるコレステロール低減薬としての、ベルベリン化合物及びベルベリン関連及び誘導体化合物の新規で強力な利用を実証する。例示的な実験では、ヒト肝ガン細胞由来の細胞株ＨｅｐＧ２の細胞に対し、漢方薬から単離された７００種類の化合物で２４時間の処理を行った。次に、前記細胞からＲＮＡを単離し、半定量ＲＴ−ＰＣＲ分析によりＬＤＬＲ  ｍＲＮＡの分析値を求めた。テストした化合物中、ベルベリンがＬＤＬＲ発現の増加に最も顕著な効果を示した。０．５％リポタンパク−欠乏胎児ウシ血清又はステロールとベルベリンとを添加した血清を含む培地で培養されたＨｅｐＧ２細胞の処理により、ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡの発現が時間に依存して増大した。以下の各実施例で、これら及び追加的な知見を更に拡張し解明する。
【実施例１】
【０１３２】
高脂血症チャイニーズ・ハムスターのコレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬタンパクの各値に及ぼすベルベリンの効果
治療の２週間前に、国立ワクチン血清研究所（National Institute of Vaccine and Serum Research）（中国、北京）から購入したメスのチャイニーズ・ハムスターの食餌を高脂肪・高コレステロール食（１０％ラード、１０％卵黄粉末及び１％コレステロール）に切り替えた。２週間後、１４匹のハムスターの各群に、腹腔内注射による１０ｍｇ／ｋｇ／日ベルベリン、腹腔内注射による２０ｍｇ／ｋｇ／日ベルベリン、経口投与による５０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日ベルベリン、又は生理食塩水のいずれかを１０日間投与した。治療開始前、治療期間中、及び治療後の４時間絶食後に、血清コレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬの各値を測定した。前記処置の４時間後、前記動物を絶命させ、分析用に肝臓を摘出した。
【０１３３】
表３に示すように、ベルベリンは全ての処置群個体においてコレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬタンパクの各値を低減させた。１０日間の処置を経て、５０／ｍｇ／ｋｇ／日のベルベリン投与ではＬＤＬが２６％低下し、１００ｍｇ／ｋｇ／日の投与ではＬＤＬが４２％低下した。血清ＬＤＬの減少は５日目までに観察され、双方の投与量共に７日目までには顕著化した（図５）。
【０１３４】
表３:高脂血症チャイニーズ・ハムスターにおけるベルベリンの脂質低減効果
【０１３５】
【表３】
2008513382.tif 000012
*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001（対照群との比較）
【０１３６】
治療終了時、各群の３個体を絶命させ、肝臓ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ及びタンパク発現量を定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ及びウェスタン・ブロット解析法で調べた。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲでは、ランダム・プライマーとＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩを用いた逆転写を１μｇの全ＲＮＡの存在下、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７９００−ＨＴ配列検出システム及びユニバーサルＭａｓｔｅｒＭｉｘ（アプライド・バイオシステムズ社（Applied Biosystems），カリフォルニア州フォスター・シティ）を用い、４２°Ｃで３０分間行った。ＬＤＬＲ及びＧＡＰＤ  ｍＲＮＡの各発現値は、開発済みのヒトＬＤＬＲ及びＧＡＰＤのＴａｑＭａｎ分析試薬（アプライド・バイオシステムズ社）を用いて決定した。図６から判るように、ベルベリン治療を行ったハムスターの全個体において、ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ及びタンパク値が投与量に依存して上昇した。ベルベリン１００ｍｇ／ｋｇ／日を用いて治療したハムスターの肝臓では、ｍＲＮＡが３．５倍、タンパクが２．６倍上昇した。
【実施例２】
【０１３７】
高脂血症のヒトに対するベルベリンの効果
ヒト高脂血症患者（男性５２名、女性３９名）をランダムに２つのグループに分け、０．５ｇのベルベリン塩酸塩（ｎ＝６３）又はプラシーボ（ｎ＝２８）のいずれかを１日２回、３ヶ月間投与した。３ヶ月後、コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ及びＬＤＬの空腹時血清中濃度を、標準的な血中脂質試験法により測定した。肝機能及び腎機能も測定した。ベルベリン治療を受けた個体は、プラシーボ治療を受けた個体に比べてコレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬタンパク値が統計上有意に低く、ベルベリン塩酸塩により血清中のコレステロール値が１８％（Ｐ＜０．００１）、トリグリセリド値が２８％（Ｐ＜０．００１）、ＬＤＬ値が２０％（Ｐ＜０．００１）低下した。一部の治験参加者は結果に影響を与える可能性のある他の医薬品を服用していたため、ベルベリン治療前又は治療中に医薬品も特別食も処置されていない被験者のデータのみを用いて、前記結果を解析し直した。表４から解るように、ベルベリン塩酸塩のみを摂取した個体では、更に顕著に血清コレステロール値が２９％（Ｐ＜  ０．０００１）、トリグリセリドが３５％（Ｐ＜０．０００１）、ＬＤＬが２５％（Ｐ＜０．０００１）も減少した。ベルベリンは全ての被験者に良く許容され副作用は観察されなかったが、治療中、１名の被験者に軽度の便秘が現れたので、投与量を１日２回、０．２５ｇに減じたところ軽快した。ＢＢＲは、腎機能（治療群及びプラシーボ群の被験者らのクレアチン、血中尿素窒素、及び総ビリルビンの測定から決定）を変化させることはなかったが、肝機能を実質的に改善し、アラニン・アミノトランスアミナーゼ、アスパルテート・アミノトランスアミナーゼ、及びガンマ−グルタミル・トランスペプチダーゼをそれぞれ約４８％、３６％、及び４１％低減させた。プラシーボ群は、これらのパラメータに有意な変化を示さなかった。
【０１３８】
表４:高脂血症患者におけるベルベリンの脂質低減効果
【０１３９】
【表４】
2008513382.tif 000013
aコレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬ−ｃ、及びＬＤＬ−ｃのベースラインの統計的解析により、治療前のベルベリン群とプラシーボ群との間に有意な差は認められなかった（ｐ＞０．０５）。***治療前群のベースラインとの比較では、Ｐ＜０．０００１（対応のあるｔ検定）。
【実施例３】
【０１４０】
ＬＤＬＲ発現に対するベルベリンの効果
Ｂｅｌ−７４０２細胞を０、０．５、１、２．５、５μｇ／ｍｌのベルベリン又は２．５、７．５及び１５μｇ／ｍｌのベルベリン硫酸塩で処理した。続いて、前記細胞を遠心、洗浄し、ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡを抽出した。走査型定量ＲＴ−ＰＣＲにより、ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ値を測定した（図３（Ａ）及び図３（Ｂ））。図３（Ａ）及び図３（Ｂ）から解るように、ベルベリン処理及びベルベリン硫酸塩処理は投与量に依存してＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ発現を増大させ、５μｇ／ｍｌのベルベリンでＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ発現は２．３倍に増大した。また、ベルベリンはＢＥＬ−７４０２細胞表面のＬＤＬＲタンパク発現を増大させた。
【０１４１】
ＥＤＴＡを含む細胞剥離用緩衝液で５μｇ／ｍｌのベルベリンで処理したＢｅｌ−７４０２細胞を剥離し、洗浄し、ＦＡＣＳ溶液（０．５％ＢＳＡ及び０．０２％ナトリウムアジドを含むＰＢＳ）中に細胞濃度１×１０６個／ｍｌにて再懸濁させた。続いて、細胞をＬＤＬＲのモノクロナール抗体（サンタ・クルーズ・バイオテクノロジー社(Santa Cruz Biotechnology, Inc.)、カリフォルニア州サンタ・クルーズ）と共に最終希釈濃度１：５０にてインキュベートし、室温に１時間放置した。続いて、前記細胞をアイソタイプが適合した(isotope matched)対照用の非特異的マウスＩｇＧと反応させ、非特異的染色を行った。続いて、前記細胞を洗浄し、マウスＩｇＧに対するＦＩＴＣ複合化ヤギ抗体（サンタ・クルーズ・バイオテクノロジー社、カリフォルニア州サンタ・クルーズ、１：１００希釈)で染色し、蛍光強度をＦＡＣＳ（FACSort、ベクトン・ディッキンソン社、ニュージャージー州フランクリン・レイクス）により解析した。図４からわかるように、ベルベリンは細胞表面のＬＤＬＲタンパク発現を４倍に増加させた。
【０１４２】
以上の研究結果は、ベルベリンの血清脂質低減効果がＬＤＬＲ発現の増加を介して現れていることを実証している。
【実施例４】
【０１４３】
ラットの血清脂質値を低下させるためのベルベリンとシンバスタチンとの併用
ラットを高コレステロール（ＨＦＨＣ）食で１０日間飼育した後、７グループに分けた。続いて、ラットにベルベリン、又はシンバスタチン、又はベルベリンとシンバスタチンとの組合せを２５日間経口投与した。２５日間経過後、血清コレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬ−ｃ値を測定した。表５からわかるように、ベルベリンによる治療はラットのコレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬ−ｃの各値を低下させ、又、トリグリセリド及びＬＤＬ−ｃの各値の低減に関してはシンバスタチンよりも効果的であった。シンバスタチンとベルベリンとの組合せは、いずれかを単独で用いるよりもコレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬ−ｃの各値をより一層低下させた。
【０１４４】
表５:ラットにおけるベルベリンとシンバスタチンの併用治療
【０１４５】
【表５】
2008513382.tif 000014
【０１４６】
２５日後、血中総コレステロール、トリグリセリド及びＬＤＬ−ｃの各値を調べた。表中の結果は、平均±標準偏差である。
【実施例５】
【０１４７】
ベルベリンを用いたＬＤＬＲ  ｍＲＮＡｍの安定性向上
ＨｅｐＧ２細胞をベルベリン塩酸塩又は陽性対照としてのＧＷ７０７のいずれかと共に８時間培養した。未処理の細胞から可溶化した全細胞可溶化物、又はベルベリン又はＧＷ７０７のいずれかで処理した細胞を回収し、ウェスタン・ブロット法で解析した。図７に示すように、ＧＷ７０はＳＲＥＢ−２の成熟型の量を実質的に増加させたのに対し、ベルベリンは効果を示さなかった。これらのデータは、スタチン系薬剤が用いた機構とは異なる機構で、ベルベリンが効果的にＬＤＬＲ発現を増大させ、これにより更に、この新規な薬物とその関連及び誘導化合物が、他の公知の抗高脂血症薬にみられる副作用を最小限に抑えた、有用な抗高脂血症製剤及び方法を提供できることを示している。
【実施例６】
【０１４８】
スタチン系薬剤存在下のベルベリンの機能
ＨｅｐＧ２細胞をＬＰＤＳ培地中で培養し、続いて未処理とするか、ベルベリンの存在下又は非存在下で２４時間、０．５及び１μＭの各濃度のロバスタチンで処理を行うか、又はベルベリン単独で処理を行うか、のいずれかとした。図８からわかるように、ベルベリン及びロバスタチンはＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ発現に対して相加的な刺激効果を示し、このデータは本明細書に述べた前記新規な併用製剤及び協動的治療法の汎用性を示している。
【実施例７】
【０１４９】
ＬＤＬＲプロモーター活性の分析
ＳＲＥ−１モチーフとＬＤＬＲ遺伝子のサイトカイン・オンコスタチンＭ誘発性の転写を仲介するステロール非依存型の調節エレメントとを含むレポーター・コンストラクト、ｐＬＤＬＲ２３４ＬｕｃをＨｅｐＧ２細胞にトランスフェクションした。トランスフェクション後、細胞を０．５％リポタンパク欠乏胎児ウシ血清（ＬＰＤＳ）中、又はＬＰＤＳとコレステロールの培地で培養し、その後ベルベリン、ＧＷ７０７又はオンコスタチンＭを用いて８時間の処理を行った。図９からわかるように、双方の培養条件下で、ＬＤＬＲプロモーター活性はＧＷ７０７及びオンコスタチンＭによって大幅に増強された。ベルベリンは効果を示さず、この化合物が抗高脂血症薬活性を有する他の公知の医薬品とは異なるＬＤＬＲ調節機構を介して作用することが示された。
【実施例８】
【０１５０】
ベルベリンによるによるＬＤＬＲ  ｍＲＮＡの安定化
ＨｅｐＧ２細胞を培養し、そのまま放置するか、又は１５時間のベルベリン処理を行った。１５時間後に、０、２０、４０、６０、９０、１２０、又は１５０分の時点で細胞にアクチノマイシンＤ（５μｇ／ｍｌ）を添加した。全ｍＲＮＡを単離し、ノーザン・ブロット法でＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ量を分析した。図１０からわかるように、ベルベリンはＬＤＬＲ転写のターンオーバー速度を約３倍に延長した。これに対し、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのｍＲＮＡ安定性は、ベルベリンで変化しなかった。
【実施例９】
【０１５１】
ＨｅｐＧ２細胞のトランスフェクション
サイトメガロウィルス・プロモーター由来のＬｕｃプラスミド（ｐＬｕｃ）のＬｕｃコード化配列の３’末端側であってＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの前に、ＬＤＬＲ  ３’ＵＴＲの３連続フラグメントを挿入した。Ｌｕｃ  ｃＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．１／Ｚｅｏ（＋）のＨｉｎｄＩＩＩ及びＸｂａサイトに挿入することにより、野生型Ｌｕｃレポータープラスミドを構築した。ＬＤＬＲ  ３／ＵＴＲの追加は、ＸｂａＩテイルを持つプライマー及びテンプレートであるｐＬＤＬＲ３を用い、ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡの２．５ｋｂ  ３’ＵＴＲの異なる部位をＰＣＲ増幅することにより行った。前記野生型のｐＬｕｃ及びキメラ・プラスミドｐＬｕｃ−ＵＴＲ−２、ＵＴＲ−３及びＵＴＲ−４をＨｅｐＧ２細胞にトランスフェクションした（図１１）。培養皿に接種した細胞に、前記キメラ・プラスミドをトランジェントにトランスフェクションした。トランスフェクションから２４時間後に、細胞にトリプシン処理を行い、各プラスミド・トランスフェクションにつき２枚の皿に均等に接種した。一晩インキュベートした後、一方の皿には溶媒コントロールとしてジメチルスルホキシド処理を行い、他方の皿には８時間のベルベリン処理を行った。Ｌｕｃ−ＬＤＬＲ融合転写産物の存在を検出するために、５’プライマーＬｕｃ−２ｕｐ（５’−ＧＣＴＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＲＡＡＧＧＣ−３’）（配列番号１）及び３’プライマーＬｕｃ−２ｌｏ（５’−ＧＣＡＧＡＣＣＡＧＴＡＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧ−３’）（配列番号２）を用い、ｐＧＬ３−ベーシックをテンプレートとして用いてＰＣＲ反応を行い、Ｌｕｃコード化領域の５５０塩基対フラグメントを増幅した。前記ＰＣＲフラグメントを３２Ｐでラベルしてノーザン・ブロット解析に供し、Ｌｕｃ  ｍＲＮＡとＬｕｃ−ＬＤＬＲ  ３’ＵＴＲのキメラ融合の発現を測定した。図１２からわかるように、ＵＴＲ−２及びＵＴＲ−３配列の導入によりＬｕｃ  ｍＲＮＡの発現値が約３〜４倍減少し、これらのグループ内に不安定化要因が存在することが示されたが、Ｌｕｃ  ｍＲＮＡ値はＵＴＲ−４との融合によって僅かに減少しただけであった。ベルベリンは、ＬｕｃＵＴＲ−３及びＬｕｃ−ＵＴＲ−４又は野生型の発現に影響を与えることなく、Ｌｕｃ−ＵＴＲ−２  ｍＲＮＡのレベルを２．５倍増加させた。このことは、ベルベリンが非相同的なＬｕｃ−ＬＤＬＲ転写産物のｍＲＮＡ安定性に影響を及ぼしていること、及び、この安定化はＬＤＬＲ  ３’ＵＴＲ（ｎｔ  ２６７７−３５８２）の５’基部に存在する調節配列を介して行われていることを示す。
【実施例１０】
【０１５２】
ベルベリンを介したＬＤＬＲ  ｍＲＮＡの安定化におけるＡＲＥ及びＵＣＡＵモチーフの役割の決定
ＡＲＥ欠失コンストラクトを作成するため、ｐＬｕｃ／ＵＴＲ−２をテンプレートとして用いる部位特異的変異誘発により、ＡＲＥ３欠失用にｎｔ３，３８４のＡｐａ作用部位を生成し、ＡＲＥ２欠失用にｎｔ３，３３４のＡｐａ１作用部位を生成した。変異プラスミドをＡｐａ１で切断してＡＲＥ含有領域を除去し、残ったベクターをＵＴＲ−２の５’基部と再ライゲートした。ＵＣＡＵモチーフ欠失を生じさせるために、ＵＴＲ−２をテンプレートとして用い、ｎｔ３，０６２〜３，３２４を内部欠失させるための２ヶ所のＳａｃＩＩ切断部位を生成した。全てのコンストラクトの配列を決定し、正しいクローンを更に増殖させ、プラスミドＤＮＡを単離した。これらのコンストラクトと前記ベルベリン応答性野生型コンストラクトとをＨｅｐＧ２細胞にトランスフェクションした。前記キメラＬｕｃ転写産物に対するベルベリンの効果を、定量リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析でＬｕｃ  ｍＲＮＡを測定することにより決定した。前記ＡＲＥ３領域が欠失するとベルベリン刺激が部分的に失われ、ＡＲＥ３及びＡＲＥ２の双方が欠失すると前記コンストラクトはベルベリンに応答しなくなった。Ｌｕｃ転写産物に対するベルベリンの安定化効果は、ＵＣＡＵモチーフの欠失によっても消失した（図１３）。
【実施例１１】
【０１５３】
ベルベリンによるＭＥＫ１−ＥＲＫ経路の活性化
ＨｅｐＧ２又はＢｅｌ−７４０２細胞にそれぞれにそれぞれ０．２５、０．５、０．７５、１、２、８、及び２４時間のベルベリン処理を施し、活性型（ホスホリル化）ＥＲＫのみを認識する抗体を用いたウェスタン・ブロッティング解析により活性型ＥＲＫのレベルを検査した。両方の肝ガン細胞株において、ベルベリンはＥＲＫを速やかに活性化し、ＥＲＫ活性化の前記カイネティクスはベルベリンによるＬＤＬＲ発現のアップレギュレーションに先立って生じた（図１４Ａ及びＢ）。ベルベリンによるこの活性化は投与量に依存する（図１４Ｃ）。これらのデータは、ベルベリンを介したＬＤＬＲ転写産物の安定化においてＥＲＫ経路の活性化が必須イベントであることを示している。
【実施例１２】
【０１５４】
ベルベリンの薬物動態
健康なヒト志願者に３００ｍｇのベルベリンを経口投与した。投与から０．５、１、２、３、４、５、７、１２及び２４時間後に血液サンプルを採取し、ＨＰＬＣによりベルベリン濃度を評価した。血中濃度曲線を３Ｐ８７薬物動態ソフトウェア・プログラム（中国薬理学会(Chinese Pharmacological Association, China)）を用いて解析した。１分画モデルを用いたメジアン薬物動態パラメータの算出値は以下のとおり。ピーク時間Ｔｐｅａｋｉｎｇ＝２．３７時間、ピーク濃度Ｃｍａｘ＝３９４．７ηｇ／ｍｌ、消失半減期Ｔ１／２＝２．９１時間、曲線下面積ＡＵＣ＝２７９９．０μｇ／Ｌ  ｈ、クリアランス速度ＣＬ＝１３０．５Ｌ／ｈ。平均薬物滞留時間は３２．６３時間であった。
【０１５５】
これと平行した動物モデル実験において、４頭のイヌ（ビーグル種）被験体に４５ｍｇ／ｋｇのベルベリンを経口投与した。投与２及び３時間後に、前記薬物の血清濃度をＨＰＬＣにより決定した。前記濃度が検出限界である１０ηｇ／ｍｌを下回ったことを示唆する明白なスペクトル・ピークは検出されなかった。２８０ｍｇ／ｋｇのベルベリンを投与したある１頭においては、投与２時間後の濃度が３１．４ηｇ／ｍｌ、３時間後の濃度が２２．６ηｇ／ｍｌであった。前記ベルベリンを系外へクリアした後、同じイヌに７００ｍｇ／ｋｇのベルベリンを投与し、投与２、３、５、７、９及び２４時間後に血液サンプルを採取したところ、濃度はそれぞれ２１．５１、４４．８９、４９．５４、３６．３５、２７．８３、及び１６．０１ηｇ／ｍｌであった。
【０１５６】
ビーグル犬４頭に１００ｍｇ／ｋｇのベルベリンを静脈注射した。２分画モデルを用いた薬物動態パラメータの算出値は以下のとおり。消失半減期Ｔ１／２Ｂ＝１２．５９±８．８３時間、曲線下面積ＡＵＣ＝１９７９．３１±１１４０．３１μｇ／ｈ．Ｌ、血液クリアランス速度ＣＬ＝６０．７０±２４．３８Ｌ／ｈ。
【０１５７】
更に、これと平行した動物モデル実験において、３Ｈ−ベルベリンを５匹のウサギに静脈注射し（２５ＭＢｑ／ｋｇ）、また４匹のウサギに静脈内点滴投与した（４６．２５Ｍｂｑ／ｋｇ）。さまざまな時点で血液０．１ｍｌを採取し、放射能を測定した。両群の薬物動態パラメータの算出値は以下のとおり。Ｔ１／２αは各々１．４１±０．１６時間、１．０３±０．１１時間、Ｔ１／２βは各々３５．３±１．３時間、３５．８±２．０時間、Ｖｄは各々２０±３Ｌ／ｋｇ及び２２．１±１．７Ｌ／ｋｇ。
【０１５８】
６匹のウサギに５０ｍｇ／ｋｇのベルベリンを胃注入により投与した。投与後の様々な時点で血清サンプルを採取し、ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて薬物濃度を測定した。前記薬剤の血中濃度−時間データを、３Ｐ８７薬物動態ソフトウェア・プログラム（中国薬理学会(Chinese Pharmacological Association、China)）を用いて解析した。自動フィッティングにより、ウサギ・ベルベリン薬物動態モデルが１分画オープン・モデルに一致していることがわかった。主な薬物動態パラメータは以下のとおり。ピーク時間Ｔｐｅａｋ＝０．６３±０．２５時間、ピーク濃度Ｃｍａｘ＝９２．７２±５０．８９ηｇ／ｍｌ、消失半減期Ｔ１／２β＝３．１１±０．５８時間、曲線下面積ＡＵＣ＝４９１．７±２９５．５μｇｈ／Ｌ。これらの結果は、ベルベリンが速やかに吸収され、有効濃度に達することを示している。
【０１５９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ透析により、ウサギ血中タンパク結合速度を３８±３％（ＸＤ±Ｓ、ｎ＝６）と測定した。
【０１６０】
更に別のモデル検討において、マウスの尾静脈に３Ｈ−ベルベリン（１３５ＬＢｑ／１０ｇ）を注射した。組織の放射能を投与５分後から２時間後までにわたり測定したところ、ベルベリン濃度分布は高い方から低い方へ、肺＞肝臓＞腎臓＞脾臓＞心臓＞腸＞胃＞脳の順となった。
【０１６１】
動物モデル実験の最終シリーズでは、ラットに３Ｈ−ベルベリンを経口投与した。投与４８時間後に、排泄物についてベルベリンの有無を調べた。経口投与量の２．７％が尿中に観測され、経口投与量の８６％が便中に観測された。
【０１６２】
ラットにベルベリン（９．２５ＭＢｑ／ｋｇ）を静脈内投与した。６日分のラットの尿と便分泌物を集め、ベルベリンの有無を調べた。前記ベルベリンの静脈内投与量の７３％が、代謝型及び未代謝型の両方の形で蓄積尿中に観測された。静脈内投与量の１０．９％は便中に観測された。
【０１６３】
ラット３匹にベルベリン（９．２５ＭＢｑ／ｋｇ）を静脈内投与した。２４時間後に胆嚢分泌物を集め、ベルベリンの有無を評価した。前記胆嚢分泌物中には、１０．１±０．９％（ｘ±ＳＤ、ｎ＝３）のベルベリンが認められた。
【実施例１３】
【０１６４】
ベルベリンの毒性分析
ラット及びマウスに、経口、皮下注射、腹腔内注射及び静脈注射を含む様々な手法でベルベリンを投与した。
【０１６５】
ラットでは、ＬＤ５０＞１５０００ｍｇ／ｋｇの経口投与で毒性が現れた。皮下注射による毒性はＬＤ５０７９７０〜１０６９０ｍｇ／ｋｇであった。腹腔内注射による毒性はＬＤ５０＝１３８．１〜１４６．２ｍｇ／ｋｇであり、ベルベリンを静脈注射した場合はＬＤ５０４６．２〜６３．３ｍｇ／ｋｇであった。
【０１６６】
マウスでは、経口投与で現れる毒性のＬＤ５０は２９５８６〜４５００ｍｇ／ｋｇより上であった。皮下注射による毒性のＤ５０はＬ１３．９〜２０ｍｇ／ｋｇであった。腹腔内注射による毒性のＬＤ５０は３０〜３２．２ｍｇ／ｋｇであり、静脈注射でのＬＤ５０は７．６〜１０．２ｍｇ／ｋｇであった。
【０１６７】
長期毒性を調べるため、ラットに３００ｍｇ／ｋｇのベルベリンを１８２日間にわたり経口投与した。血液検査、血液生化学的検査、尿分析又は組織病理学検査で異常は認められなかった。
【０１６８】
催奇性を評価するため、妊娠中のマウスに妊娠７日目から７日間、１日投与量３０〜４８０ｍｇ／ｋｇの範囲でベルベリンを経口投与した。ラットには、妊娠９日目から７日間、ベルベリンを投与した。明白な先天異常は認められなかった。
【実施例１４】
【０１６９】
ベルベリンとロバスタチンを用いたコンビナトリアル治療の例
上述の知見にもとづき、式Ｉのベルベリン化合物又はベルベリン関連又は誘導化合物をある例示的な二次的抗高脂血症薬と組み合わせて用いるコンビナトリアル薬物治療を、ラットをモデル被験体とし、ベルベリンと、例示的なスタチン系薬剤としてロバスタチンとを用いて実証した。本実験の手順は前述の実施例における手順と同様であり、結果を以下の表６に示す。
【０１７０】
表６  協動的治療法におけるベルベリンとロバスタチンのコンビナトリアル抗高脂血症薬の有効性
コレステロールとLDL濃度の単位はｍモル／Ｌ
【０１７１】
【表６】
2008513382.tif 000015
第０日目は未処置のラットを表す。
第１５日目は１５日間の処置を行ったラットを表す。
【０１７２】
上記のデータは、協動的治療プロトコルにおいて二次的抗高脂血症薬と併用した例示的なベルベリン化合物のコンビナトリアルな有効性を示し、前述の知見と一致している。
【０１７３】
以上、明快な理解を目的として本発明を実施例にもとづき詳細に説明したが、ある種の変更や改良が、限定ではなく例示によって示される添付の請求の範囲に含まれることは、当業者にとって自明である。この意味において、上述の開示では様々な出版物その他の参照文献を引用して、説明を省いている。これらの参照文献の各々は、あらゆる目的のために引用により本明細書にその全文が取り込まれる。但し、本明細書で論ずる様々な文献は、本願の出願日以前の開示内容に限って取り込まれ、本発明者らは先発明であるとしてかかる開示より以前であると主張する権利を保留する。
【０１７４】
文献リスト
（下記の文献に含まれる開示内容及び記述の全ては、あらゆる目的において引用により本明細書に包括的に取り込まれる。）
Adams CM, Goldstein JL, Brown MS.  Cholesterol-induced conformational change in SCAP enhanced by Insig proteins and mimicked by cationic amphiphiles. Proc Natl Acad Sci USA 100:10647-10652 (2003).
Ansell, B.J., Watson, K.E. & Fogelman, A.M.  An evidence-based assessment of the NCEP adult treatment panel II guidelines. National cholesterol education program.  JAMA 282, 2051-2057 (1999).
Austin MA, Hutter CM, Zimmern RL, Humphries SE.  Genetic causes of monogenic heterozygous familial hypercholesterolemia: a HuGE prevalence review. Am J Epidemiol 160:407-420 (2004).
Auwerx JH, Chait A, Wolfbauer G, Deeb SS.  Involvement of second messengers in regulation of the low-density lipoprotein receptor gene. Mol Cell Biol 9:2298-2302 (1989).
Bakker O, Hudig F, Meijssen S, Wiersinga WM. Effects of triiodothyronine and amiodarone on the promoter of the human LDL receptor gene. Biochem Biophys Res Commun 249:517-521 (1998).
Basheeruddin K, Li X, Rechtoris C, Mazzone T.  Platelet-derived growth factor enhances Sp1 binding to the LDL receptor gene. Arterioscler Thromb Vasc Biol 15:1248-1254 (1995).
Bays H, Stein EA.  Pharmacotherapy for dyslipidaemia  current therapies and future agents. Expert Opin Pharmacother 4:1901-1938 (2003).
Bensch, W.R., Gadski, R.A., Bean, J.S., et al., Effects of LY295427, a low-density lipoprotein (LDL) receptor up-regulator, on LDL receptor gene transcription and cholesterol metabolism in normal and hypercholesterolemic hamsters.  J.Pharmacology & Experimental Therapeutics 289, 85-92 (1999).
Briggs MR, Yokoyama C, Wang X, Brown MS, Goldstein JL. Nuclear protein that binds sterol regulatory element of low density lipoprotein receptor promoter. Ｉ. Identification of the protein and delineation of its target nucleotide sequence. J Biol Chem 268:14490-14496 (1993).
Brown AJ, Sun L, Feramisco JD, Brown MS, Goldstein JL.  Cholesterol addition to ER membranes alters conformation of SCAP, the SREBP escort protein that regulates cholesterol metabolism. Mol Cell 10:237-245 (2002).
Brown MS, Goldstein JL.  Receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis. Science 232:34-47 (1986).
Brown MS, Goldstein JL.  A proteolytic pathway that controls the cholesterol content of membranes, cells, and blood. Proc Natl Acad Sci USA 96:11041-11048 (1999).
Bruening JC, Lingohr P, Gillette J, Hanstein B, Avci H, Krone W, Mueller-Wieland D, Kotzka J. Estrogen receptor-α and Sp1 interact in the induction of the low density lipoprotein-receptor. J Steroid Biochem Mol Biol 86:113-121 (2003).
Catapano.  The low density lipoprotein receptor: structure, function and pharmacological modulation. Pharmac Ther 43:187-219 (1989).
Chang R, Yang E, Chamblis D, Kumar A, Wise J, Mehta KD.  In vivo role of the Sp1 site neighboring sterol-responsive element-1 in controlling low-density lipoprotein receptor gene expression. Biochem Biophys Res Commun 218:733-739 (1996).
Cho, E. Berberini Hydrochloride, In: Pharmacopoeia of the People's Republic of China.  Pharmacopoeia of the People's Republic of China 2, 437-439 (1990).
Corsini A, Bellosta S, Baetta R, Fumagalli R, Paoletti R, Bernini F.  New insights into the pharmacodynamic and pharmacokinetic properties of statins. Pharmacol Ther 84:413-428 (1999).
Davis CG, Van Driel IR, Russell DW, Brown MS, Goldstein JL.  The LDL-receptor: identification of aminoacids in cytoplasmic domain required for rapid endocytosis. J Biol Chem 262:4075-4079 (1987).
Defesche JC.  Low-density lipoprotein receptorits structure, function, and mutations. Semin Vasc Med 4:5-11 (2004).
Dixon, D.A., Kaplan, C.D., McIntyre, T.M., Zimmerman, G.A., Prescott, S.M. Post-transcriptional control of cyclooxygenase-2 gene expression.  J.Biol.Chem. 275, 11750-11757 (2000).
Duncan EA, Brown MS, Goldstein JL, Sakai J.  Cleavage site for sterol-regulated protease located to a Leu-Ser bond in the lumenal loop of sterol regulatory element-binding protein-2. J Biol Chem 272:12778-12785 (1997).
Duncan EA, Dave UP, Sakai J, Goldstein JL, Brown MS.  Second-site cleavage in sterol regulatory element-binding protein occurs at transmembrane junction as determined by cysteine panning. J Biol Chem 273:17801-17809 (1998)..
Duntas LH.  Thyroid disease and lipids. Thyroid 12:287-293 (2002).
Duvillard L, Florentin E, Lizard G, Petit JM, Galland F, Monier S, Gambert P, Verges B. Cell surface expression of LDL receptor is decreased in type 2 diabetic patients and is normalized by insulin therapy. Diabetes Care 26:1540-1544 (2003).
Espenshade PJ, Li WP, Yabe D.  Sterols block binding of COPＩＩ proteins to SCAP, thereby controlling SCAP sorting in ER. Proc Natl Acad Sci USA 99:11694-11699 (2002).
Expert panel on detection evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults. Executive summary of the third report of the national cholesterol education program (NCEP).  JAMA 285, 2486-2497 (2001).
Gierens H, Nauck M, Roth M, Schinker R, Schuermann C, Scharnagl H, Neuhaus G, Wieland H, Maerz W.  Interleukin-6 stimulates LDL receptor gene expression via activation of sterol-responsive and Sp1 binding elements. Arterioscler Thromb Vasc Biol 20:1777-1783 (2000).
Goldstein, J.L. & Brown, M.S. Regulation of the mevalonate pathway.  Nature 343, 425-430 (1990).
Goldstein, J.L., Rawson, R.B. & Brown, M.S. Mutant mammalian cells as tools to delineate the sterol regulatory element-binding protein pathway for feedback regulation of lipid synthesis.  Archives of Biochemistry and Biophysics 397, 139-148 (2002).
Goto D, Okimoto T, Ono M, Shimotsu H, Abe K, Tsujita Y, Kuwano M (1997) Upregulation of low density lipoprotein receptor by gemfibrozil, a hypolipidemic agent, in human hepatoma cells through stabilization of mRNA transcripts. Arterioscler Thromb Vasc Biol 17:2707-2712.
Graham A, Russell LJ.  Stimulation of low-density lipoprotein uptake in HepG2 cells by epidermal growth factor via a tyrosine kinase-dependent, but protein kianse C-independent mechanism. Biochem J 298:579-584 (1994).
Grand-Perret, T., Bouillot, A., Perrot, A., Commans, S., Walker, M. & Issandou, M. SCAP ligands are potent new lipid-lowering drugs.  Nature Medicine 7, 1332-1338 (2001).
Grundy, S.M. Statin trials and goals of cholesterol-lowering therapy.  Circulation 97, 1436-1439 (1998).
Hardardottir I, Grunfeld C, Feingold KR.  Effects of endotoxin and cytokines on lipid metabolism. Curr Opin Lipidol 5:207-215 (1994).
Hirano Y, Yoshida M, Shimizu M, Sato R. Direct demonstration of rapid degradation of nuclear sterol regulatory element-binding proteins by the ubiquitin-proteasome pathway. J Biol Chem 276:36431-36437 (2001).
Hobbs HH, Russell DW, Brown MS, Goldstein JL. The LDL receptor locus in familial hypercholesterolemia: mutation analysis of a membrane protein. Annu Rev Genet 24:133-170 (1990).
Hodgin JB, Maeda N.  Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology 143:4495-4501 (2002).
Horton JD, Goldstein JL, Brown MS.  SREBPs: activators of the complete program of cholesterol and fatty acid synthesis in the liver. J Clin Invest 109:1125-1131 (2002).
Horton, J.D., Cuthbert, J.A. & Spady, D.K. Dietary fatty-acids regulate hepatic low-density lipoprotein (LDL) transport by altering LDL receptor protein and messenger-RNA levels.  J.Clinc.Invest. 92, 743-749 (1993).
Hsu HY, Nicholson AC, Hajjar DP. Basic fibroblast growth factor-induced low density lipoprotein receptor transcription and surface expression. Signal transduction pathways mediated by the bFGF receptor tyrosine kinase. J Biol Chem 269:9213-9220 (1994).
Hua X, Nohturfft A, Goldstein JL, Brown MS.  Sterol resistance in CHO cells traced to point mutations in SREBP cleavage activating protein (SCAP). Cell 87:415-426 (1996).
Hua X, Sakai J, Ho YK, Goldstein JL, Brown MS.  Hairpin orientation of sterol regulatory element-binding protein-2 in cell membranes as determined by protease protection. J Biol Chem 270:29422-29427 (1995).
Huang W, Mishra V, Batra S, Dillon I, Mehta KD. Phorbol ester promotes histone H3-Ser10 phosphorylation at the LDL receptor promoter in a protein kinase C-dependent manner. J Lipid Res 45:1519-1527 (2004).
Inukai T, Takanashi K, Takebayashi K, Tayama K, Aso Y, Takiguchi Y, Takemura Y.  Estrogen markedly increases LDL-receptor activity in hypercholesterolemic patients. J Med 31:247-261 (2000).
Kapoor GS, Atkins BA, Mehta KD.  Activation of Raf-1/MEK-1/2/p42/44MAPK cascade alone is sufficient to uncouple LDL receptor expression from cell growth. Mol Cell Biochem 236:13-22 (2002).
Kapoor GS, Golden C, Atkins B, Mehta KD. pp90RSK- and protein kinase C-dependent pathway regulates p42/44MAPK-induced LDL receptor transcription in HepG2 cells. J Lipid Res 44:584-593 (2003).
Knouff C, Malloy S, Wilder J, Altenburg MK, Maeda N. Doubling expression of the low density lipoprotein receptor by truncation of the 3'-untranslated region sequence ameliorates type ＩＩＩ hyperlipoproteinemia in mice expressing the human ApoE2 isoform. J Biol Chem 276:3856-3862 (2001).
Kong W, Abidi P, Kraemer FB, Jiang JD, Liu J. In vivo activities of cytokine oncostatin M in regulation of plasma lipid levels. J Lipid Res 46:1163-1171 (2005).
Kong W, Wei J, Abidi P, Lin M, Inaba S, Li C, Wang Y, Wang Z, Si S, Pan H, Wang S, Wu J, Wang Y, Li Z, Liu J, Jiang JD.  Berberine is a novel cholesterol-lowering drug working through a unique mechanism distinct from statins. Nat Med 10:1344-1351 (2004).
Kotzka J, Lehr S, Roth G, Avci H, Knebel B, Mueller-Wieland D.  Insulin-activated Erk-mitogen-activated protein kinases phosphorylate sterol regulatory element-binding protein-2 at serine residues 432 and 455 in vivo. J Biol Chem 279:22404-22411 (2004).
Kotzka J, Mueller-Wieland D, Koponen A, Njamen D, Kremer L, Roth G, Munck M, Knebel B, Krone W.  ADD1/SREBP-1c mediates insulin-induced gene expression linked to the MAP kinase pathway.  Biochem Biophys Res Commun 249:375-379 (1998).
Kotzka J, Mueller-Wieland D, Roth G, Kremer L, Munck M, Schuermann S, Knebel B, Krone W.  Sterol regulatory element binding proteins (SREBP)-1a and SREBP-2 are linked to the MAP-kinase cascade. J Lipid Res 41:99-108 (2000).
Kumar A, Middleton A, Chambers TC, Mehta KD.  Differential roles of extracellular signal-regulated kinase-1/2 and p38MAPK in interleukin-1β- and tumor necrosis factor-α-induced low density lipoprotein receptor expression in HepG2 cells. J Biol Chem 273:15742-15748 (1998).
LaRosa, J.C. & He, J.V.S. Effect of statins on risk of coronary disease: a meta-analysis of randomized controlled trials.  JAMA 282, 2340-2346 (1999).
Lau,C.W., Yao, X.Q., Chen, Z.Y., Ko, W.H., Huang, Y. Cardiovascular actions of berberine.  Cardiovasc Drug Rev. 19, 234-244 (2001).
Li C, Briggs MR, Ahlborn TE, Kraemer FB, Liu J.  Requirement of Sp1 and estrogen receptor α interaction in 17β-estradiol-mediated transcriptional activation of the low density lipoprotein receptor gene expression. Endocrinology 142:1546-1553 (2001).
Li C, Kraemer FB, Ahlborn TE, Liu J.  Induction of low density lipoprotein receptor (LDLR) transcription by oncostatin M is mediated by the extracellular signal-regulated kinase signaling pathway and the repeat 3 element of the LDLR promoter.  J Biol Chem 274:6747-6753 (1999).
Lindgren V, Luskey KL, Russell DW, Francke U.  Human genes involved in cholesterol metabolism: chromosomal mapping of the loci for the low-density lipoprotein receptor and 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase with cDNA probe. Proc Natl Acad Sci USA 82:8567-8571 (1985).
Liu J, Ahlborn TE, Briggs MR, Kraemer FB.  Identification of a novel sterol-independent regulatory element in the human low density lipoprotein receptor promoter. J Biol Chem 275:5214-5221 (2000).
Liu J, Streiff R, Zhang YL, Vestal RE, Spence MJ, Briggs MR.  Novel mechanism of transcriptional activation of hepatic LDL receptor by oncostatin M. J Lipid Res 38:2035-2048 (1997).
Liu, J., Zhang, F., Li, C., Lin, M. and Briggs, M.R. Synergistic activation of human LDL receptor expression by SCAP ligand and cytokine oncostatin M.  Arterioscler.Throm.Vasc.Biol 23:90-96, (2003).
Liu. Berberine.  Altern Med Rev. 5, 175-177 (2000).
Luo, L.J. Experience of berberine in the treatment of diarrhea.  Chin.J.Med. 41, 452-455 (1955).
Mazzone T, Basheeruddin K, Ping L, Frazer S, Getz GS.  Mechanism of the growth-related activation of the low density lipoprotein receptor pathway. J Biol Chem 264:1787-1792 (1989).
Mehta KD.  Role of mitogen-activated protein kinases and protein kinase C in regulating low-density lipoprotein receptor expression. Gene Expr 10:153-164 (2002).
MRC/BHF. Heart protection study of cholesterol lowering with simvastatin in 20536 high-risk individuals: a randomised placebo-controlled trial.  Lancet 360, 7-22 (2002).
Nakahara M, Fujii H, Maloney PR, Shimizu M, Sato R.  Bile acids enhance low density lipoprotein receptor gene expression via a MAPK cascade-mediated stabilization of mRNA. J Biol Chem 277:37229-37234 (2002).
Ness GC.  Thyroid hormone. Basis for its hypocholesterolemic effect. J Fla Med Assoc 78:383-385 (1991).
Ness GC, Lopez D.  Transcriptional regulation of rat hepatic low-density lipoprotein receptor and cholesterol 7-α-hydroxylase by thyroid hormone. Arch Biochem Biophys 323:404-408 (1995).
Nohturfft A, Brown MS, Goldstein JL.  Topology of SREBP cleavage activating protein, a polytopic membrane protein with a sterol sensing domain. J Biol Chem 273:17243-17250 (1998).
Nohturfft A, DeBose-Boyd RA, Scheek S, Goldstein JL, Brown MS.  Sterols regulate cycling of SREBP cleavage-activating protein (SCAP) between endoplasmic reticulum and Golgi. Proc Natl Acad Sci USA 96:11235-11240 (1999).
Norturfft, A., DeBose-Boyd, R.A., Scheek, S., Goldstein, J.L. & Brown, M.S. Sterols regulate cycling of SREBP cleavage-activating protein (SCAP) between endoplasmic reticulum and Golgi.  Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96, 11235-11240 (1999).
Parini P, Angelin B, Rudling M.  Importance of estrogen receptors in hepatic LDL receptor regulation. Arterioscler Thromb Vasc Biol 17:1800-1805 (1997).
Radhakrishnan A, Sun LP, Kwon HJ, Brown MS, Goldstein JL.  Direct binding of cholesterol to the purified membrane region of SCAP: mechanism for a sterol-sensing domain. Mol Cell 15:259-268 (2004).
Rawson RB.  The SREBP pathway  insights from Insigs and insects. Nat Rev Mol Cell Biol 4:631-640 (2003).
Robinson MJ, Cobb MH.  Mitogen-activated protein kinase pathways. Curr Opin Cell Biol 9:180-186 (1997).
Roth G, Kotzka J, Kremer L, Lehr S, Lohaus C, Meyer HE, Krone W, Mueller-Wieland D.  MAP kinases Erk1/2 phosphorylate sterol regulatory element-binding protein (SREBP)-1a at serine 117 in vitro. J Biol Chem 275:33302-33307 (2000).
Sakai, J. & Rawson, R.B.  The sterol regulatory element-protein pathway: control of lipid homeostasis through regulated intracellular transport.  Curr.Opin Lipidol 12, 261-266 (2001).
Singh RP, Dhawan P, Golden C, Kapoor GS, Mehta KD.  One-way cross-talk between p38MAPK and p42/44MAPK. Inhibition of p38MAPK induces low density lipoprotein receptor expression through activation of p42/44 MAPK cascade. J Biol Chem 274:19593-19600 (1999).
Smith JR, Osborne TF, Goldstein JL, Brown MS.  Identification of nucleotides responsible for enhancer activity of sterol regulatory element in low density lipoprotein receptor gene. J Biol Chem 265:2306-2310 (1990).
Soutar AK.  Intracellular transport of the low-density lipoprotein receptor. Biochem Soc Trans 24:547-552 (1996).
Soutar AK, Knight BL.  Structure and regulation of the LDL-receptor and its gene. Br Med Bull 46:891-916 (1990).
Spady DK.  Hepatic clearance of plasma low-density lipoproteins.  Semin Liver Dis 12:373-385 (1992).
Stopeck AT, Nicholson AC, Mancini FP, Hajjar DP.  Cytokine regulation of low density lipoprotein receptor gene transcription in HepG2 cells. J Biol Chem 268:17489-17494 (1993).
Streicher R, Kotzka J, Mueller-Wieland D, Siemeister G, Munck M, Avci H, Krone W.  SREBP-1 mediates activation of the low density lipoprotein receptor promoter by insulin and insulin-like growth factor-Ｉ. J Biol Chem 271:7128-7133 (1996).
Suedhoff TC, Goldstein JL, Brown MS, Russell DW.  The LDL-receptor gene. A mosaic of exons shared with different proteins. Science 228:815-822 (1985).
Suedhoff TC, Van Der Westhuyzen DR, Goldstein JL, Brown MS, Russell DW.  Three direct repeats and a TATA-like sequence are required for regulated expression of the human low density lipoprotein receptor gene. J Biol Chem 262:10773-10779 (1987).
Sugiura, R., Kita, A., Shimizu, Y., Shuntoh, H., Sio, S.O. & Kuno, T. Feedback regulation of MAPK signaling by an RNA-binding protein.  Nature 424, 961-965 (2003).
Tolleshaug H, Goldstein JL, Schneider WJ, Brown MS.  Posttranslational processing of the LDL receptor and its genetic disruption in familial hypercholesterolemia. Cell 30:715-724 (1982).
Ugawa, T., Kakuta, H., Moritani, H. and Inagaki, O. Effect of YM-53601, a novel squalene synthase inhibitor, on the clearance rate of plasma LDL and VLDL in hamsters.  British J.of Pharmacology 137, 561-567 (2002).  
Liu, J., Hadjokas, N., Mosley, B., Vestal, R.E.  Oncostatin M-specific receptor expression and function in regulating cell proliferation of normal and malignant mammary epithelial cells.  Cytokine 10, 295-302 (1998).
Wade DP, Knight BL, Soutar AK.  Regulation of low-density-lipoprotein-receptor mRNA by insulin in human hepatoma HepG2 cells. Eur J Biochem 181:727-731.
Wang X, Briggs MR, Hua X, Yokoyama C, Goldstein JL, Brown MS (1993) Nuclear protein that binds sterol regulatory element of low density lipoprotein receptor promoter. ＩＩ. Purification and characterization. J Biol Chem 268:14497-14504.
Wang X, Sato R, Brown MS, Hua X, Goldstein JL (1994) SREBP-1, a membrane-bound transcription factor released by sterol-regulated proteolysis. Cell 77:53-62 (1989).
Wilson GM, Roberts EA, Deeley RG.  Modulation of LDL receptor mRNA stability by phorbol esters in human liver cell culture models. J Lipid Res 38:437-446 (1997).
Wilson GM, Vasa MZ, Deeley RG.  Stabilization and cytoskeletal-association of LDL receptor mRNA are mediated by distinct domains in its 3' untranslated region. J Lipid Res 39:1025-1032 (1998).
Windler EET, Kovanen PT, Chao Y, Brown MS, Havel RJ, Goldstein JL.  The estradiol-stimulated lipoprotein receptor of rat liver. J Biol Chem 255:10464-10471 (1980).
Yabe D, Brown MS, Goldstein JL. Insig-2, a second endoplasmic reticulum protein that binds SCAP and blocks export of sterol regulatory element-binding proteins. Proc Natl Acad Sci USA 99:12753-12758 (2002).
Yamamoto T, Davis CG, Brown MS, Schneider WJ, Casey ML, Goldstein JL, Russell DW.  The human LDL receptor: a cysteine-rich protein with multiple Alu sequences in its mRNA. Cell 39:27-38 (1984).
Yang T, Espenshade PJ, Wright ME, Yabe D, Gong Y, Aebersold R, Goldstein JL, Brown MS. Crucial step in cholesterol homeostasis: sterols promote binding of SCAP to Insig-1, a membrane protein that facilitates retention of SREBPs in ER. Cell 110:489-500 (2002).
Yang, T., Goldstein, J.L. & Brown, M.S. Overexpression of membrane domain of SCAP prevents sterols from inhibiting SCAP.SREBP exit from endoplasmic reticulum.  J.Biol.Chem. 275, 29881-29886 (2000).
Yeung, A. & Tsao, P. Statin therapy: beyond cholesterol lowering and antiinflammatory effects.  Circulation 105, 2937-2938 (2002).
Yokoyama C, Wang X, Briggs MR, Admon A, Wu J, Hua X, Goldstein JL, Brown MS.  SREBP-1, a basic-helix-loop-helix-leucine zipper protein that controls transcription of the low density lipoprotein receptor gene. Cell 75:187-197 (1993).
Zhang F, Lin M, Abidi P, Thiel G, Liu J.  Specific interaction of Egr1 and c/EBPβ leads to the transcriptional activation of the human low density lipoprotein receptor gene. J Biol Chem 278:44246-44254 (2003).
Zhang, F., Ahlborn, T.E., Li, C., Kraemer, F.B. & Liu, J. Identification of Egr1 as the oncostatin M-induced transcription activator that binds to the sterol-independent regulatory element of the human LDL receptor promoter.  J.Lipid Res. 43, 1477-1485 (2002).
Zhao, S.P. Etiology and diagnosis of hyperlipidemia.  Clinical Serum and Lipid 1, 72-94 (1997).
Zubiaga AM, Belasco JG, Greenberg ME.  The nonamer UUAUUUAUU is the key AU-rich sequence motif that mediates mRNA degradation. Mol Cell Biol 15:2219-2230 (1995).
【図面の簡単な説明】
【０１７５】
【図１】ＬＤＬ受容体遺伝子のプロモーター領域の図である。
【図２】ベルベリンによる制御も含めてＬＤＬ受容体遺伝子発現の細胞内調節を示す模式図である。
【図３】ベルベリン（Ａ）又はベルベリン硫酸塩（Ｂ）により処理を行ってから２４時間後のヒト肝ＢＥＬ−７４０２細胞のＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ値の定量的ＲＴ−ＰＣＲ産物の電気泳動図である。
【図４】ベルベリン１５μｇ／ｍｌ投与２４時間後のＢＥＬ−７４０２細胞表面に発現するＬＤＬＲのタンパク濃度のフローサイトメトリーによる測定結果のグラフである。
【図５】ベルベリン治療後のハムスターにおける血清コレステロール（Ａ）及びＬＤＬ（Ｂ）の減少、及び時間の関数（Ｃ）としてのＬＤＬの減少を示すグラフである。
【図６】定量リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（Ａ）及びウェスタン・ブロット法（Ｂ）により測定した、ベルベリンの最終投与４時間後に絶命させたハムスターの全ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ及びタンパク抽出物の濃度を示すグラフ及び電気泳動図である。
【図７】ＨｅｐＧ２細胞のＳＲＥＢＰ２にモノクロナール抗体を作用させた場合のＳＲＥＢＰ２の前駆体（Ｐ）及び成熟体（Ｍ）の濃度を示すウェスタン・ブロット解析結果の図である。
【図８】ロバスタチン（Ｌｏｖ）単独又はベルベリン（ＢＢＲ）との組合せのいずれかにより２４時間処理したＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ発現を示すノーザン・ブロット（Ａ）の図と、同じ細胞のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（Ｂ）産物の電気泳動図である。
【図９】ＧＷ７０７及びオンコスタチンＭの存在下におけるＬＤＬＲプロモータ活性を示すグラフである。
【図１０】異なるアクチノマイシンＤ存在下においてベルベリン処理を行ったＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ濃度を示すノーザン・ブロット図（Ａ）と、残余ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡのパーセンテージとして表した規格化ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ信号のプロット（Ｂ）である。
【図１１】ＬＤＬＲ  ｍＲＮＡ３’ＵＴＲ及びキメラＬｕｃ−ＬＤＬＲ３’ＵＴＲコンストラクトの模式図である。
【図１２】対照用細胞（Ａ）、及びベルベリン又は対照用としてのジメチルスルホキシドで処理した細胞（Ｂ）のノーザン・ブロット解析図である。
【図１３】ＡＲＥ及びＵＣＡＵモチーフが欠失したコンストラクトの模式図（Ａ）と、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析により決定した、ベルベリン処理に対するｗｔ  ｐＬｕｃ／ＵＴＲ−２及び欠失コンストラクトの応答を示すグラフ（Ｂ）である。
【図１４】ベルベリン処理を行わない、又は５μｇ／ｍｌの投与量にて表記の様々なレベルでベルベリン処理を行ったＢｅｌ−７４０２細胞（Ａ）又はＨｅｐＧ２細胞（Ｂ）から回収した細胞タンパクのウェスタン・ブロットと、表記の濃度で１時間処理したＨｅｐＧ２細胞（Ｃ）のウェスタン・ブロットとの図である。
【図１】
2008513382.tif 000028
【図２】
2008513382.tif 000029
【図３】
2008513382.tif 000030
【図４】
2008513382.tif 000031
【図５】
2008513382.tif 000032
【図６】
2008513382.tif 000033
【図７】
2008513382.tif 000034
【図８】
2008513382.tif 000035
【図９】
2008513382.tif 000036
【図１０】
2008513382.tif 000037
【図１１】
2008513382.tif 000038
【図１２】
2008513382.tif 000039
【図１３】
2008513382.tif 000040
【図１４】
2008513382.tif 000041
【国際調査報告】
2008513382.tif 000042
2008513382.tif 000043
2008513382.tif 000044