(57)【要約】【解決手段】  本発明の側面は、血管新生の調整に有用な化合物および方法と、ポリカチオン化合物を投与することにより、血管新生に関連する疾患を治療する、または防ぐ方法に関する。本発明は、動物および人間を含む哺乳類の、血管新生介在疾患を抑制する組成物とその使用法に関する。さらに、本発明は、異なる血管新生介在疾患治療におけるポリカチオンとその他の抗血管新生剤の併用に関する。さらに、このようなポリカチオン化合物は、腫瘍増殖と転移を防ぎ治療するラジオ治療剤と同様に様々な抗炎症剤および細胞毒性剤と併用可能である。【選択図】      図２
2008502703.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上効果的な量のポリカチオン性化合物を含む、血管新生を阻止するための化合物。
【請求項２】
前記ポリカチオン性化合物がアリールアミドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記アリールアミドが
【化１】
2008502703.tif 000089
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記アリールアミドが、
【化２】
2008502703.tif 000090
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
前記アリールアミドが、
【化３】
2008502703.tif 000091
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
前記ポリカチオン性化合物がヒドラジドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記ヒドラジドが、
【化４】
2008502703.tif 000092
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記ヒドラジドが、
【化５】
2008502703.tif 000093
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
前記ポリカチオン性化合物がカリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
前記カリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）が、
【化６】
2008502703.tif 000094
である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記カリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）が、
【化７】
2008502703.tif 000095
である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
前記ポリカチオン性化合物がサリチルアミドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記サリチルアミドが、
【化８】
2008502703.tif 000096
である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記サリチルアミドが、
【化９】
2008502703.tif 000097
である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
前記サリチルアミドが、
【化１０】
2008502703.tif 000098
である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１６】
それを必要とする動物において血管新生を阻止する方法であって、治療上効果的な量のポリカチオン性化合物を前記動物に投与することを含む方法。
【請求項１７】
前記ポリカチオン性化合物がアリールアミドである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリカチオン性化合物がヒドラジドである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ポリカチオン性化合物がカリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリカチオン性化合物がサリチルアミドである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
それを必要とする動物において血管新生に関連する疾患や障害を治療する、あるいは予防する方法であって、治療上効果的な量のポリカチオン性化合物を前記動物に投与することを含む方法。
【請求項２２】
前記ポリカチオン性化合物は、アリールアミド、ヒドラジド、カリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）、サリチルアミド、およびその組合せからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患や障害が過剰な血管新生に関連する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記疾患や障害が、肺癌、乳癌、前立腺癌、大腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、神経芽腫、盲目、黄斑変性、糖尿病性網膜症、角膜移植、近視性変性、ＡＩＤＳに関連する合併症、関節炎、リウマチ関節炎、乾癬、強皮症、炎症性大腸炎、脳梗塞、心疾患、潰瘍および不妊症からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年６月１５日に出願された米国暫定シリアル番号６０／５７９，２８２の名称「ポリカチオン化合物による血管新生の調節」の優先権を請求するものであり、参照することによりここにその全内容が援用される。
【背景技術】
【０００２】
血管新生は、現在ある血管から新しい血管を発達させることである。生理学的に、血管新生は、成熟した有機体が適切に確実に発達するようにし、卵が着床するよう子宮を整え、傷を癒し、骨折を治し、妊娠を確率し維持する役目を果たす。血管新生は、癌、炎症、および、眼疾患などの数多くの病状と関連した病的状態とも関連する。
【０００３】
血管新生もしくは「新血管形成」は、血管新生および抗血管新生因子の平衡により調整される多段階過程である。この過程の段階の後半は、内皮細胞（ＥＣ）をこの管構造の中で増殖させ組織化することを含む。線維芽細胞の増殖因子２（ＦＧＦ２）や血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの増殖因子は、内皮増殖や分化を促す鍵となる働きをすると考えられている。内皮細胞は、血管新生過程の中枢となる成分でありその細胞表面にある受容体と内部細胞信号メカニズムを通して多くのサイトカインに反応する。  血管新生の調整は、血管増殖因子、細胞外マトリクス接着分子と代謝因子の局所放出を含む複雑な過程である。血管内の機能力も必要である。また新しい血管増殖に関わる内因増殖要因で主要なものとしては、線維芽細胞増殖因子類（ＦＧＦ）と血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が挙げられる。マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ；ＥＲＫ１／２）の情報伝達カスケードは、ＶＥＧＦ遺伝子発現および血管内皮細胞の増殖抑制の両方に関わる。
【０００４】
ある状態のもと、一定の時間、もしくは特定の細胞で毛細血管の延長と増殖を抑えることができると、多くの疾患および不調は、防ぐ、あるいは症状を和らげることができる。ここに開示される本発明によって治療可能な血管新生に依存する疾患は、血管増殖を誘発する、もしくは要求する前記状態あるいは前記疾患である。一方、血管新生の促進が好ましい状態は、脈管化が制限されることなく確立されるもしくは延長される脳梗塞、心臓病、潰瘍、強皮症や不妊症などである。
【０００５】
血管新生の抑制は、例えば腫瘍増殖などの無秩序な血管の増殖を制限するのに有益な治療である。血管新生の抑制は、Ｆｏｌｋｍａｎらによる癌生態学３：８９−９６（１９９２）で提案されているように、血管新生の刺激対する内皮細胞の反応を抑制することにより働き、その提案の中で、アンジオスタティックステロイド（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｒｏｉｄ）、フマギリン（ｆｕｍａｇｉｌｉｎ）、などから取り出された真菌性の製品、血小板因子４、トロンボスポンジン、アルファーインターフェロン、ビタミンＤ類似物質、Ｄ―ぺニシラミンなどが内皮細胞の反応抑制因子として挙げられている。また他に提案された血管形成抑制因子については、Ｂｌｏｏｄら、Ｂｉｏｃｈ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ１０３２：８９−１１８（１９９０）、Ｍｏｓｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４８：１４０８−１４１０（１９９０）、米国特許Ｎｏｓ．５，０９２，８８５、５，１１２，９４６、５，１９２，７４４、および５，２０２，３５２を参照。
【０００６】
好ましくない血管新生を抑制する過程には、治療上の処置と、もしくは不適切な、あるいは好ましくない血管新生に対する予防がある。反対に、血管新生の過程を促進する際は、血管新生から恩恵を受ける前記疾患の状態に治療上の処置を提供する。ここに開示される本発明の側面は、非血管新生特性に用いられるポリカチオン化合物のような両親媒性化合物を提供する。血管新生抑制能力は血管新生疾患および、状態を調整する効果的な治療法を提供する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の側面は血管新生の調整において有用なポリカチオン化合物を含む化合物とポリカチオン化合物に関する。
【０００８】
ポリカチオン
本発明の他の側面は、必要な場合に、動物もしくは人間の血管新生を調整する方法に関し、治療上効果的なポリカチオン化合物の量を前記動物に投与することから成る。
【０００９】
本発明のさらに他の側面はまた、必要な場合に、動物もしくは人間の疾患を治療する、あるいは防ぐ方法に関し、治療上効果的なポリカチオン化合物の量を前記動物に投与することから成る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
現合成物と方法について述べる前に、本発明は、特定の分子、合成物、発明、方法もしくは記述プロトコルは、様々で、制限を受けないということが理解される必要がある。また、記述のために使用されている専門用語は、特定の転用あるいは実施例の説明のためにのみ使用され、付記請求のみによって制限される本発明の範囲を制限することを意図しないことも理解される必要がある。
【００１１】
明細書および添付の請求項に使用されるように、単数形は、本文で特別な説明がない限り複数形の意味を含む。従って、例えば、「細胞」という意味は、複数形でなくても、１つ以上の細胞を意味し、当該技術などの意味として知られているものと同等である。特別に定義されない限り、本文で使用されている技術用語や科学用語は、当該技術の通常技術の一つとして一般的に理解されている意味で使用されている。本文で述べられているものと類似のあるいは同等のどの方法や物質も、本発明の実践や実施例のテストで使用が可能であるが、優先される方法、工夫および物質がここで述べられる。文中述べられている広報全ては、参考文献で示されている。本発明は、これまでの発明の長所によりこのような開示を先行する権利を所有しないことを承認するものとしては解釈されない。
【００１２】
本文で使用されている、「およそ」は、使用されている数値の１０％の上下を意味する。従って、およそ５０％とは、４５％から５５％を示す。
【００１３】
前記「血管新生」または前記「新血管形成」と言う単語は現存血管（脈管構造など）から新たに血管、毛細血管、導管などの血液の供給のための血管を生成することを意味する。血管新生は、多くの種類の組織細胞が関係し、例えば、血流や回りの組織間で置換を規則化するのに関与している全ての血管の細胞単層膜を形成する内皮細胞などもそのうちの一つである。新しい血管は（血管新生）、内皮細胞の増生によって現存小血管の壁作り出すことができる。また、血管新生は、腫瘍細胞の生存および増殖（成長）に必要な血液を腫瘍に運ぶ役割もしている。
【００１４】
「患者」および「被験者」とう単語は、人間を含めた全ての動物を指している。患者と被験者の例として、人間、牛、犬、猫、ヤギ、羊、豚などが挙げられる。
【００１５】
薬剤配合を言及する「治療上効果的な量」とは、病気や治療が必要な状態の原因となっている症状を軽減したり、防ぐ、あるいは身体上の特定の機能において機能障害を引き起こす疾患や障害がある際に身体機能を正常化する、あるいは疾患の臨床的測定パラメーターの１つ、あるいはそれ以上を改善するために十分な量を言う。本出願に関して、治療上効果的なポリカチオン化合物の量は、血管新生を減少させるあるいは阻止するために充分な量を意味する。
【００１６】
本発明の側面は、治療上効果的な量のポリカチオン化合物を動物に投与することにより必要な際、動物の血管新生を調整する方法に関する。本発明の側面はまた、治療上効果的な量のポリカチオン化合物を動物に投与することにより必要な際、疾患を治療する、または防ぐ方法に関する。
【００１７】
一般的に、前記ポリカチオン化合物は、好ましくは、剛体あるいは半剛体の骨格を示し、その構造は、ねじりを伴い、骨格の一面上で正電荷を持つ側基を表示する。正電気を帯びた側基は、骨格の長さに伴い最適に分配され、一つ以上のヘテロ原子を任意に含む炭素スペーサーにより骨格から最適に分離される。骨格に沿ったねじり自由は分子内水素結合、立体的拘束、または環化により安定する。アリールアミド、ヒドラジド、カリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）、サリチルアミドなどの望ましい様々なポリカチオン化合物の配合が述べられる一方、正電気を安定させるのに用いられる他の置き換え可能な側基は、Ａ−Ｇなどがある。
【００１８】
【化１１】
2008502703.tif 000003
【００１９】
他に用いられるアミンには、ピペリジン、４位のアミノピリジン、モルホリン、アミノチアゾールなどがある。アミノ基の塩基性は、選択的に、連鎖において１つか２つのフッ素を一つのメチレン基の一つに結合させることによって調整される。骨格の剛性を強化する（ねじり自由を抑制する）ために用いられる他の中央リング置換基には（Ｈ−Ｋ）などがある。
【００２０】
【化１２】
2008502703.tif 000004
【００２１】
本発明の実施例の一つとして、前記ポリカチオン化合物は、アリールアミドのオリゴマー化合物の化学式である。
【００２２】
【化１３】
2008502703.tif 000005
【００２３】
Ｘが０もしくはＳである場合、Ｒ１は、直鎖または分岐鎖Ｃ１−Ｃ９のアルキルであり、
その中で、Ｒ１は一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２と任意に置換される、あるいは、
【００２４】
【化１４】
2008502703.tif 000006
【００２５】
Ｙは結合、もしくは
【００２６】
【化１５】
2008502703.tif 000007
【００２７】
Ｚは結合、もしくは
【００２８】
【化１６】
2008502703.tif 000008
【００２９】
Ｒ２が水素、あるいは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、その中でＲ２は一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２あるいは、
【００３０】
【化１７】
2008502703.tif 000009
【００３１】
と任意に置換され、
もしくはＲ２は、−Ｘ−Ｒ１であり、Ｒ３は、
【００３２】
【化１８】
2008502703.tif 000010
【００３３】
またはメチレンであり、
前記メチレンは、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルと任意に置換され、その中で前記の直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルは一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２または
【００３４】
【化１９】
2008502703.tif 000011
【００３５】
と任意に置換され、
ｎは２−１０であり、ｍは１または２である。本発明の他の実施例の一つとして、アリールアミドのオリゴマー化合物は、次の化学式の化合物である。
【００３６】
【化２０】
2008502703.tif 000012
【００３７】
その中で、Ｒ１は
【００３８】
【化２１】
2008502703.tif 000013
【００３９】
より好ましい実施例として、化合物は、次の式のアリールアミドである。
【００４０】
【化２２】
2008502703.tif 000014
【００４１】
Ｘは０またはＳである。
Ｙは０またはＳである。
Ｒ１はまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ａである、Ａは、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＡは、任意に一つ以上のＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００４２】
【化２３】
2008502703.tif 000015
【００４３】
と置換され、
Ｒ２は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００４４】
【化２４】
2008502703.tif 000016
【００４５】
と置換され、
Ｒ３は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ３は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００４６】
【化２５】
2008502703.tif 000017
【００４７】
と置換され、
Ｒ４はＨ、−Ｂまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｂであり、ここでＢは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルである。
【００４８】
他の実施例では、前記ポリカチオン化合物は、次のヒドラジドの化学式である。
【００４９】
【化２６】
2008502703.tif 000018
【００５０】
その中で、ｎが１から１０で、
ＸはＯかＳであり、
ＹはＯかＳであり、
Ｚは結合であり、Ｃ１−Ｃ９の直鎖または分岐鎖のアルキルもしくは１、４−シクロヘキシルであり、
Ｒ１はＮＨ２あるいはＮＨ−Ａであり、その中でＡはＣ１−Ｃ９の直鎖または分岐鎖のアルキルであり、その中でＡは、任意に−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００５１】
【化２７】
2008502703.tif 000019
【００５２】
と置換され、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、ここでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００５３】
【化２８】
2008502703.tif 000020
【００５４】
と置換され、
Ｒ３は直線、あるいは枝分かれしたＣ１−Ｃ９のアルキルであり、ここでＲ３は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００５５】
【化２９】
2008502703.tif 000021
【００５６】
と置換され、
Ｒ４は、Ｈまたは
【００５７】
【化３０】
2008502703.tif 000022
【００５８】
である。
【００５９】
他の本発明の実施例では、ポリカチオン化合物は、次の化学式のカリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）である。
【００６０】
【化３１】
2008502703.tif 000023
【００６１】
ｎが２−８で、より好ましくは、４−８であり、
ＸはＯまたは−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−の結合であり、
ここでＡはＣ１−Ｃ９の直鎖または分岐鎖のアルキルであり；
Ｒ２はＣ１−Ｃ９の直鎖または分岐鎖のアルキルであり、ここでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００６２】
【化３２】
2008502703.tif 000024
【００６３】
と置換される。
【００６４】
他の本発明の実施例では、前記ポリカチオン化合物は次の化学式のサリチルアミドである。
【００６５】
【化３３】
2008502703.tif 000025
【００６６】
ｎは、２から１０である；
【００６７】
【化３４】
2008502703.tif 000026
【００６８】
Ｒ２はＨまたは
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、ここでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００６９】
【化３５】
2008502703.tif 000027
【００７０】
と置換され、
Ｒ３は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、ここでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【００７１】
【化３６】
2008502703.tif 000028
【００７２】
と置換され、
Ｒ４４は、ＯＨ、ＮＨ２あるいは
【００７３】
【化３７】
2008502703.tif 000029
【００７４】
ＡはＯＨまたはＮＨ２である。
【００７５】
さらなる実施例では、前記ポリカチオン化合物は、表１に示される化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、化合物１９、化合物２０、化合物２１、化合物２２、化合物２３、化合物２４、化合物２５、化合物２６、化合物２７、化合物２８、化合物２９、化合物３０、化合物３１、化合物３２、化合物３３、化合物３４、化合物３５、化合物２６、化合物３７、化合物３８、化合物３９、化合物４０、化合物４１、化合物４２、化合物４３、化合物４４、化合物４５、化合物４６、化合物４７、化合物４８、化合物４９、化合物５０、化合物５１、化合物５２、化合物５３、化合物５４と化合物５５から成る基より選択される。
【００７６】
化合物１と化合物２が、アリールアミドと同じ構造のである時、化合物１と化合物２は異なる状態で合成され、異なる純度を示す。重合の際、ＤＣＭ（ジクロロメタン）は、化合物２の溶媒として用いられ、ＮＭＰ（１−メチル−２−ピロリジノン）は、化合物１の溶媒として用いられる。重合はＮＭＰであまり効果的ではないため、化合物１はｎ＝２−１０で、化合物２ではｎ＝１０である。
【００７７】
【表１】
2008502703.tif 000030
【００７８】
【表２】
2008502703.tif 000031
【００７９】
【表３】
2008502703.tif 000032
【００８０】
【表４】
2008502703.tif 000033
【００８１】
【表５】
2008502703.tif 000034
【００８２】
【表６】
2008502703.tif 000035
【００８３】
【表７】
2008502703.tif 000036
【００８４】
【表８】
2008502703.tif 000037
【００８５】
【表９】
2008502703.tif 000038
【００８６】
【表１０】
2008502703.tif 000039
【００８７】
【表１１】
2008502703.tif 000040
【００８８】
さらに前記ポリカチオン化合物は、そこで化合物２６、化合物２８、化合物２９、化合物３４、化合物４８または化合物５０あるいはその混合である。
他に、本発明の方法において有益なポリカチオン化合物は、２００２年３月７日に出願された「抗感染症薬としての顔面両親媒性高分子」と言う表題のＷＯ  ０２／０７／２００７、２００２年３月７日に出願された「抗感染症薬としての顔面両親媒性高分子」と言う表題のＷＯ  ０２／１００２９５、２００４年３月１７日に出願された「顔面両親媒性高分子とそこでのオリゴマーとその使用法」言う表題のＷＯ  ０４／／０８２６３４に示されているものである。
【００８９】
他の実施例として、化合物はポリカチオン化合物の治療上効果的な量から成る血管新生の調整をするために提供される。
【００９０】
本発明の実施例の一つとして、前記ポリカチオン化合物は、次の化学式のアリールアミドオリゴマー化合物である：
【００９１】
【化３８】
2008502703.tif 000041
【００９２】
Ｘは０もしくはＳであり、
Ｒ１は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、
その中で、Ｒ１は一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２あるいは
【００９３】
【化３９】
2008502703.tif 000042
【００９４】
と任意に置換され、
Ｙは結合、あるいは
【００９５】
【化４０】
2008502703.tif 000043
【００９６】
Ｚは結合、あるいは
【００９７】
【化４１】
2008502703.tif 000044
【００９８】
Ｒ２は、水素または、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこで前記Ｒ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２または
【００９９】
【化４２】
2008502703.tif 000045
【０１００】
と置換され、
あるいはＲ２は、−Ｘ−Ｒ１であり、
Ｒ３は、
【０１０１】
【化４３】
2008502703.tif 000046
【０１０２】
あるいはメチレンであり、
その中で前記メチレンは、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルと任意に置換され、その中で前記直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルは一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２または
【０１０３】
【化４４】
2008502703.tif 000047
【０１０４】
と置換され、
ｎは２−１０である；
またｍは１あるいは２である。
【０１０５】
より好ましい実施例では、化合物は、下記のアリールアミドの化学式である。
【０１０６】
【化４５】
2008502703.tif 000048
【０１０７】
Ｘが０またはＳである。
Ｙが０またはＳである。
Ｒ１は、Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ａ、直鎖または分岐鎖のＡＣ１−Ｃ９のアルキルであり、その中でＡは一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２あるいは
【０１０８】
【化４６】
2008502703.tif 000049
【０１０９】
と任意に置換され、
Ｒ２は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこで、Ｒ２は、一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２あるいは
【０１１０】
【化４７】
2008502703.tif 000050
【０１１１】
と任意に置換され、
Ｒ３は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこで、Ｒ３は、一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２あるいは
【０１１２】
【化４８】
2008502703.tif 000051
【０１１３】
と任意に置換され、
Ｒ４は、Ｈ、−Ｂまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｂであり、ここでＢは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルである。
【０１１４】
その他の実施例として、前記ポリカチオン化合物は、次の化学式のヒドラジドである。
【０１１５】
【化４９】
2008502703.tif 000052
【０１１６】
ｎ＝１から１０であり；
ＸはＯまたはＳであり、
ＹはＯまたはＳであり、
Ｚは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルまたは１，４−シクロヘキシル基の結合で、
Ｒ１はＮＨ２あるいはＮＨ−Ａであり、その中でＡはＣ１からＣ９の直鎖または分岐鎖のアルキルであり、その中でＡは、任意に−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１１７】
【化５０】
2008502703.tif 000053
【０１１８】
と置換され、
Ｒ２は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１１９】
【化５１】
2008502703.tif 000054
【０１２０】
と置換され、
Ｒ３は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、ここでＲ３は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１２１】
【化５２】
2008502703.tif 000055
【０１２２】
と置換され、
Ｒ４はＨまたは
【０１２３】
【化５３】
2008502703.tif 000056
【０１２４】
である。
【０１２５】
他の本発明の実施例では、前記ポリカチオン化合物は次の化学式のカリクスレン（ｃａｌｉｘｒｅｎｅ）である。
【０１２６】
【化５４】
2008502703.tif 000057
【０１２７】
ｎは、２から８、より好ましくは４から８であり、
ＸはＯまたは−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−の結合であり、
Ｒ１は、−Ａまたは−Ｏ−Ａであり、そこでＡは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、ここでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１２８】
【化５５】
2008502703.tif 000058
【０１２９】
と置換される。
【０１３０】
他の本発明の実施例では、前記ポリカチオン化合物は次の化学式のサリチルアミドである。
【０１３１】
【化５６】
2008502703.tif 000059
【０１３２】
ｎは、２から１０であり、
Ｒ１はＨまたは
【０１３３】
【化５７】
2008502703.tif 000060
【０１３４】
であり、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１３５】
【化５８】
2008502703.tif 000061
【０１３６】
と置換され、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１３７】
【化５９】
2008502703.tif 000062
【０１３８】
と置換され、
Ｒ４はＯＨ、ＮＨ２または、
【０１３９】
【化６０】
2008502703.tif 000063
【０１４０】
であり、そこでＡはＯＨまたはＮＨ２である。
【０１４１】
より好ましい実施例では、本化合物は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、化合物７、化合物８、化合物９、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１５、化合物１６、化合物１７、化合物１８、化合物１９、化合物２０、化合物２１、化合物２２、化合物２３、化合物２４、化合物２５、化合物２６、化合物２７、化合物２８、化合物２９、化合物３０、化合物３１、化合物３２、化合物３３、化合物３４、化合物３５、化合物２６、化合物３７、化合物３８、化合物３９、化合物４０、化合物４１、化合物４２、化合物４３、化合物４４、化合物４５、化合物４６、化合物４７、化合物４８、化合物４９、化合物５０、化合物５１、化合物５２、化合物５３、化合物５４と化合物５５、あるいはその混合から成る。
【０１４２】
より好ましい実施例では、本化合物は、化合物２６、化合物２８、化合物２９、化合物３４、化合物４８、または化合物５０、あるいはその混合から成る。
【０１４３】
サリチルアミドのポリカチオン化合物は下記のように合成される：
【０１４４】
【化６１】
2008502703.tif 000064
【０１４５】
他の実施例では、前記化合物は、ポリカチオン化合物の治療上効果的な量による血管新生の調整のために提供される。
【０１４６】
ある実施例では、前記化合物は、血管新生を促すポリカチオン化合物の治療上効果的な量を含む。より好ましい実施例では、本化合物は、血管新生を阻止するポリカチオン化合物の治療上効果的な量を含む。
【０１４７】
好ましい実施例では、前記化合物は、次の化学式のアリールアミドである。
【０１４８】
【化６２】
2008502703.tif 000065
【０１４９】
ＸはＯまたはＳであり、
ＹはＯまたはＳであり、
Ｒ１は、Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ａ、直鎖または分岐鎖のＡＣ１−Ｃ９のアルキルであり、その中でＡは一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２あるいは
【０１５０】
【化６３】
2008502703.tif 000066
【０１５１】
と任意に置換され、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１５２】
【化６４】
2008502703.tif 000067
【０１５３】
と置換され、
Ｒ３は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ３は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１５４】
【化６５】
2008502703.tif 000068
【０１５５】
と置換され、
Ｒ４は、Ｈ、−Ｂあるいは−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｂであり、そこではＢは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルである。
【０１５６】
ある実施例では、前記ポリカチオン化合物は、次の化学式のヒドラジドである。
【０１５７】
【化６６】
2008502703.tif 000069
【０１５８】
ｎ＝１から１０であり；
ＸはＯまたはＳであり、
ＹはＯまたはＳであり、
Ｚは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルまたは１、４−シクロヘキシル基の結合で、
Ｒ１はＮＨ２あるいはＮＨ−Ａであり、その中でＡはＣ１からＣ９の直鎖または分岐鎖のアルキルであり、その中でＡは、任意に−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１５９】
【化６７】
2008502703.tif 000070
【０１６０】
と置換され、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１６１】
【化６８】
2008502703.tif 000071
【０１６２】
と置換され、
Ｒ３は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこで、Ｒ３は、一つあるいはそれ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２あるいは
【０１６３】
【化６９】
2008502703.tif 000072
【０１６４】
と任意に置換され、
Ｒ４はＨまたは
【０１６５】
【化７０】
2008502703.tif 000073
【０１６６】
である。
【０１６７】
本発明の他の実施例では、前記ポリカチオン化合物は、次の化学式のカリクスレン（ｃａｌｉｘａｒｅｎｅ）である。
【０１６８】
【化７１】
2008502703.tif 000074
【０１６９】
ｎは、２から８、より好ましくは４から８であり、
Ｘは、Ｏまたは−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−の結合であり、
Ｒ２は、−Ａまたは−Ｏ−Ａであり、そこでＡは直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、
Ｒ２は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１７０】
【化７２】
2008502703.tif 000075
【０１７１】
と置換される。
【０１７２】
本発明の他の実施例では、前記ポリカチオン化合物は、次の化学式のサリチルアミドである。
【０１７３】
【化７３】
2008502703.tif 000076
【０１７４】
ｎは２から１０であり、
Ｒ１は、Ｈまたは
【０１７５】
【化７４】
2008502703.tif 000077
【０１７６】
であり、
Ｒ２は、直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１７７】
【化７５】
2008502703.tif 000078
【０１７８】
と置換され、
Ｒ３は直鎖または分岐鎖のＣ１−Ｃ９のアルキルであり、そこでＲ２は、任意に一つ以上の−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２または
【０１７９】
【化７６】
2008502703.tif 000079
【０１８０】
と置換され、
Ｒ４はＯＨ、ＮＨ２あるいは
【０１８１】
【化７７】
2008502703.tif 000080
【０１８２】
であり、そこでＡはＯＨまたはＮＨ２である。
【０１８３】
本発明の一つの側面は、本発明の前記化合物は、血管新生と関連する疾患や障害に有用である。より好ましい実施例では、本化合物は治療上効果的な量の化合物２６、化合物２８、化合物２９、化合物３４、化合物４８、または化合物５０あるいはその混合物から成る。
【０１８４】
本発明の他の実施例では、前記ポリカチオン化合物は、血管新生が十分でない時に起こる疾患または障害を防ぐまたは治療するために使用される。具体的には脳梗塞、心臓病、潰瘍、強皮症や不妊症などの疾患がある。
【０１８５】
本発明のある実施例では、前記ポリカチオン化合物は、血管新生が過剰である時に起こる疾患または障害を防ぐまたは治療するために使用される。具体的には癌、関節リウマチ、ＡＩＤＳ合併症、乾癬、失明などの疾患がある。
【０１８６】
通常、癌は異常で抑制が効かない細胞部分での悪性増殖もしくは腫瘍全てのことを言い、リンパ系もしくは、血流を通って違った身体部分に広がっていく。癌には、充実性腫瘍と血液感染性腫瘍のものがある。充実性腫瘍には、カポジ肉腫、血管腫、充実性腫瘍、乳癌、肺癌、卵巣癌、睾丸癌、大腸癌、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、神経芽細胞腫、および骨肉腫などがある。血管新生はまた、骨髄で白血球細胞が無制限に増殖する様々な急性または慢性的腫瘍性疾患全てを指す白血病などの血液感染性腫瘍に関連しており、このような疾患は、通常は貧血、血液凝固能およびリンパ節、肝臓そして脾臓の増大に伴って起こる。血管新生は、白血病のような腫瘍を生み出す骨髄で異常な働きをすると考えられている。
【０１８７】
また、本発明の他の実施例では、疾患または障害には、肺癌、乳癌、前立腺癌、大腸癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、膠芽腫細胞、神経芽細胞腫、盲目、黄斑変性、糖尿病性網膜症、角膜移植、近視性変性、ＡＩＤＳに関連する合併症、関節炎、リウマチ関節炎、乾癬、強皮症、炎症性大腸炎、脳梗塞、心疾患、潰瘍および不妊症がある。例えば、これらに限定されるのではないが、癌、炎症性関節炎（リウマチ関節炎など）、糖尿病性網膜症やその他の眼に関する他の新生血管疾患、（例えば、角膜血管新生、緑内障、水晶体後線維増殖症および黄斑変性など）、動静脈奇形、過剰出血の状態（月経過剰）、Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｅｒ症候群、心筋血管新生、プラーク新生血管、血管拡張症、血友病関節、血管線維腫および傷口肉芽発生がある。ここに提供される抗血管新生化合物は内皮細胞が異常に刺激されるあるいは過剰に増殖する疾患の治療にもまた有用である。この疾患には、これらに限定されるのではないが、腸管癒着症、クローン病、アテローム性動脈硬化、強皮症および肥厚性瘢痕（例えばケロイド）などがある。
【０１８８】
ポリカチオン化合物での予防、または治療に適した血管新生−介在疾患は、これらに限定されるものではないが、腫瘍および癌に関連した障害（例えば、網膜腫瘍増大、良性腫瘍（血管腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫など）、固形腫瘍、血液由来腫瘍（白血病、血管線維腫、カポジ肉腫など）、腫瘍転移、腫瘍の成長を促す新血管形成を必要とするその他の癌など）、眼球新生血管障害（糖尿病性網膜症、黄斑変性、未熟児網膜症、新生血管緑内障、角膜移植拒絶、およびその他の眼球血管新生媒介障害など）、炎症性障害（免疫性および非免疫性炎症、リウマチ関節炎、慢性関節リウマチ、炎症性大腸炎、乾癬、およびその他の慢性炎症性障害など）、子宮内膜症、およびその他の血管の不当または、不適切な浸潤に関連する障害（水晶体後線維増殖症、ルベオーシスおよびアテローム硬化性プラーグと骨粗しょう症における毛細血管の増殖など）、Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｅｒ症候群、心筋血管新生、プラーク新生血管、血管拡張症、血友病関節、傷口肉芽発生などがある。血管新生により病理状態が継続または進行する他の疾患は、当業者にはよく知られており、同じように血管新生媒介としてここで使用されている単語の意味の範囲に含まれることを目的としている。
【０１８９】
ある実施例では、ポリカチオン性化合物は他の血管新生阻害物と併用して用いられる。血管新生阻害物は、当該技術として知られており、既知の方法として用意される。血管新生阻害物と対象物の詳細については、Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：４２３０−４２３３（１９９５）、Ｇｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：６６２９−６６２８（１９９０）、Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、ｃｅｌｌ  ７９：３１５−３２８（１９９４）、Ｐａｒａｎｇｉら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：２００２−２００７（１９９６）、Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、ｃｅｌｌ  ５６：３４５−３５５（１９８９）、Ｇｕｐｔａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：７７９９−７８０３（１９９５）、Ｍａｉｏｎｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：７７−７９（１９９０）、Ａｎｇｉｏｌｉｌｌｏら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１５５−１６２（１９９５）、Ｓｔｒｉｅｔｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ．２１０：５１−５７（１９９５）；Ｖｏｅｓｔら、Ｊ．Ｎａｔｌ．ｃａｎｃｅｒＩｎｓｔ．８７：５８１−５８６（１９９５）、Ｃａｏら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：２０６９−２０７７（１９９５）、およびＣｌａｐｐら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３３：１２９２−１２９９（１９９３）、などを参照。これらは参照することによりその全体がここに組み込まれる。血管新生阻害物のその他の詳細については、例えばＢｌｏｏｄら、Ｂｉｏｃｈ．Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．，１０３２：８９−１１８（１９９０）、Ｍｏｓｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４８：１４０８−１４１０（１９９０）、Ｉｎｇｂｅｒら、ＬａｔＩｎｖｅｓｔ．，５９：４４−５１（１９８８）、および米国特許Ｎｏ  ５，０９２，８８５および５，１１２，９４６を参照。、これらは参照することによりその全体がここに組み込まれる。
【０１９０】
他の実施例では、ポリカチオン性化合物は、他の治療法、例えば抗炎症性治療法、標準眼球治療法、標準皮膚治療法、放射線治療、腫瘍手術、および充実性腫瘍に対する従来の化学療法などと併用したり、転移の抑制に使用する。血管新生阻害物の投与は、化学療法の後、もしくは最中に通常行われ、化学療法では、腫瘍組織へ栄養素と血液を供給することで血管新生を回復に導くことにより腫瘍組織が、毒の攻撃に反応する。また、転移を防ぐために充実性腫瘍を取り除く外科手術の後に、血管新生阻害物を投与することが望ましい。細胞毒性または抗癌剤は、アジリジンチオテパ、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、白金錯体、非標準アルキル化剤、葉酸類似物質、プリン類似物質、アデノシン類似物質、ピリミジン類似物質、置換尿素、抗腫瘍抗生物質、微小管剤、およびアスプリナーゼ（ａｓｐｒｉｇｎａｓｅ）などが当該技術として知られている。
【０１９１】
本発明の他の側面は、血管新生媒介過程の阻害において、単独、または他の既存の抗炎症性、抗血管新生、抗癌および眼球の治療法と併用されるポリカチオン性化合物の使用に関する。ポリカチオン性化合物は、炎症性疾患、および眼球疾患において血管新生媒介障害の効果的な治療と予防策の代表的なものである。
【０１９２】
上記に述べた化合物は、投与の際利用できる担体と供にポリカチオン性化合物と誘導体が含まれる処方により投与される。通常当事者に良く知られている、この使用目的に適した活性成分が含まれる処方あるいは薬物送達システム全てを使用することができる。経口、直腸、局所、または非経口（皮下、腹腔内、筋肉内および静脈内を含む）投与に適した薬学上利用可能な担体は、当事者に知られている。担体は、処方上、他の内容物と混合可能であるという点で薬学上利用可能でなければならなく、本出願において有害であってはならない。
【０１９３】
非経口的投与に適した処方は、都合よく活性化合物の無菌性水溶性調合であり、それを受け取る血液に都合よく等張性を持つ。すなわち、そのような処方は都合良く蒸留水、５％のブドウ糖を含む蒸留水または生理食塩水である。また、有用な処方は、濃縮液または処方（１）の化合物を含む固体であり、それを適切な溶媒と供に希釈することで、上記の非経口的投与に適した溶液ができる。
【０１９４】
腸内投与では、化合物は、それぞれに粉上または顆粒上の決められた量の活性化合物を含むカプセル、錠剤またはトローチ剤のような不連続単位、あるいはシロップ、エリキシル剤、乳液、ドラフト（ｄｒａｕｇｈｔ）などの水溶液または非水溶液に浮遊または溶解させ、不活性担体と混合させることができる。適した担体は、でんぷん、砂糖などで、潤滑油、香味料結合剤など、または同じ性質の物質などを含む。
【０１９５】
錠剤は、圧縮または型に押し付けて成形することにより作られ、任意に一つまたはそれ以上の副成分を混合する。圧縮された錠剤は、適した機械で流通型、例えば、粉上または顆粒などの中で活性化合物を圧縮することにより調合され、任意に結合剤、潤滑油、不活性希釈剤、表面活性または分散剤などの副成分を混合する。型に押し付けて成形するタイプの錠剤は、適した担体のうちのいずれかと粉上の活性化合物の混合物を型に押し付けて成形することで作られる。
【０１９６】
シロップまたは浮遊液は、活性化合物をサッカロースなどの濃縮砂糖水に加えることにより作られ、副成分のうちのどれかを混ぜることもある。そのような副成分には、香味料、砂糖の結晶化を遅らせる薬剤、または他のどの内容物の溶解度も向上させる薬剤、例えばグリセロールやソルビトールなどの多価アルコールなどがある。
【０１９７】
直腸投与のための処方は、通常担体と供に座薬基材としてココアバターまたはＷｉｔｅｐｓｏｌ  Ｓ５５（ドイツＤｙｎａｍｉｔｅ  Ｎｏｂｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社の商標）を使用した坐薬である。
【０１９８】
他の選択として、化合物は、リポソーム、またはマイクロスフェア（あるいは微粒子）で投与される。リポソーム、またはマイクロスフェアを患者に投与するために調合する方法は、当事者に良く知られている。参考文献としてここに取り入れられた内容、米国特許．Ｎｏ４，７８９，７３４には、リポソームに生体物質を包み込むための方法が述べられている。基本的に、前記物質は、適量のリン脂質および脂質が加えられた水溶液に溶け、必要に応じて界面活性剤も加えられ、前記物質は、必要な場合は透析または超音波分解されることもある。既知の方法の再検討は、「Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」（医学における薬物担体）の２８７ページから３４１ページにＧ．  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉにより紹介されている（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９７９）。
【０１９９】
ポリマーまたは蛋白質で形成されたマイクロー球体あるいはナノ球体は、当該者に良く知られており、消化管から直接、血流まで到達する通路の確保を可能にする。他の選択として、前記化合物は、取り入れられてから、マイクロー球体・ナノ球体、またはその両方の合成物として、数日から数ヶ月かけてゆっくりと体内で開放され植えつけられる。参考例としては、参考文献としてここに取り入れられた内容、米国特許番号４，９０６，４７４，４，９２５，６７３、番号３，６２５，２１４とＪｅｉｎのＴＩＰＳ１９：１５５−１５７（１９９８）を参照。
【０２００】
本発明の前記ポリカチオン性化合物は、生体外および生体内の抗血管新生効果を示す。さらに、本発明の前記ポリカチオン性化合物はヘパリンに対する拮抗効果を示す。理論に縛られることは望ましくないが、前記ポリカチオン性化合物の前記抗血管新生効果は、少なくともＦＧＦおよびＶＥＧＦ受容体の活性化を促すヘパリンの役割を中和する前記ポリカチオン性化合物の能力の一部である。
【０２０１】
下記の例において、多様な物質を次に示すように得た。
全ての試薬は、化学用で、シグマケミカル社（ミズーリ州、セントルイス）からもしくは、ＶＷＲ化学（ニュージャージ州、ブリッジポート）を通じて購入したものである。酢酸コルチゾン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、およびゼラチン溶液（牛皮からのＢ種２％）をシグマケミカル社（ミズーリ州、セントルイス）から購入した。Ｅａｒｌ’ｓ  ｓａｌｔｓのＭ１９９成長培地、基本ＦＧＦ、インスリン・トランスフェリン・セレンＧ補給剤（Ｉ−Ｔ−Ｓｅ）１００Ｘ、ダルベッコのＣａ＋２およびＭｇ＋２の入ったリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）とＣａ＋２およびＭｇ＋２の入らないもの、および０．５  Ｍ  ＥＤＴＡをＧｉｂｃｏ  ＢＲＬ（ニューヨーク州、グランドアイランド）から得た。ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、内皮細胞基礎培地（血清、ＥＢＭ）、内皮基礎培地（ＥＧＭ）（成長因子、ウシ胎仔血清などにより補給される）およびトリプシン０．０２５％とＥＤＴＡ０．０１％の溶液をＣｌｏｎｅｔｉｃｓ社（カリフォルニア州、サンディエゴ）から購入した。ヒト前立腺（ＴＳＵ−Ｐｒ）腫瘍  細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（メリーランド州、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）から得られた。マトリゲル（登録商標）マトリックス、およびヒトコラーゲンＩＩＩは、ベクトン・ディッキンソン株式会社（マサチューセッツ州ベッドフォード）から購入した。ＨＥＭＡ−３固定液と染色溶液をバイオケミカル化学社（ニュージャージー州、Ｓｗｅｄｅｓｂｏｒｏ）から購入した。受精鶏卵をチャ−ルス・リバー社ＳＰＡＦＡＳ  Ａｖｉａｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ&Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（コネチカット州、Ｎｏｒｔｈ  Ｆｒａｎｋｌｉｎ）より購入した。生体内新生血管は、以前、Ａｕｅｒｂａｃｈらにより述べられた方法により検査を行った（Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，４１：３９１−３９４、１９７４年）が、参照することによりよりその全体がここに組み込まれる。
【実施例１】
【０２０２】
次の例は、本発明の模範的ポリカチオン性化合物の抗血管新生効果を示す。受精後１０日経過した胚をＳｐａｆａｓ社（コネチカット州、Ｐｒｅｓｔｏｎ）より購入し、５５％の相対湿度で気温を３７度に保ち培養した。ロウソクの灯りをかりながら暗闇の中、空気嚢を覆う殻に皮下注射器で小さな穴を開けた。二つ目の穴は、ロウソクの灯りで観察しながら、胚膜の無血管蛋白質の上の平らな面の卵の殻に穴を開けた。偽空気嚢は、絨毛尿膜（ＣＡＭ）を殻と分離させる最初の穴にかかる陰圧を応用して二つ目の穴の下に作られた。小さな工芸砥石車を利用して落としたＣＡＭの上の殻を切って、底にあるＣＡＭに直接およそ１．０ｃｍの窓が作られ、（ドレメル、ＲａｃｉｎｅｎｅにあるＥｍｅｒｓｏｎ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ社の部門、ウエスコンシン）、直接底にあるＣＡＭに近づけるようになった。番号１のろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製、英国）のろ過材ディスクを、水とエタノール９５％溶液に３ｍｇ／ｍＬの酢酸コルチゾン（シグマ社製、ミズーリ州、セントルイス）を入れた中に浸し、続いて、無菌状態で乾かした。ＦＧＦ２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製、メリーランド州、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を受精後１０日経過した鶏胚のＣＡＭの血管を増殖するために使用した。１μｇ／ｍＬのＰＢＳを溶かしたＦＧＦ２に吸着した無菌のろ過材ディスクを増殖中のＣＡＭに置いた。２４時間、検査化合物もしくは対象物をＣＡＭに局所的に、直接的加えた。
【０２０３】
ＦＧＦ２が染み込んだろ過材ディスクの直下のＣＡＭ組織を、検査化合物もしくは対象物で４８時間前に前もって処理した胚から切除した。ＰＢＳを用いて組織を、３回洗浄した。その組織を、３５−ｍｍのシャーレー（Ｎａｌｇｅｎ  Ｎｕｎｃ製、ニューヨーク州、ロチェスター）に置き、５０Ｘの倍率のＳＶ６実体立体顕微鏡（Ｋａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ製、ニューヨーク州、Ｔｈｏｍｗｏｏｄ）で検査した。ＣＡＭ組織のフィルター隣接部位のデジタル映像を３−ＣＣＤカラービデオカメラシステム（米国東芝製、ニューヨーク州、ニューヨーク）を使って集め、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓソフトウエア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ製、メリーランド州、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ）で分析した。表４には、それぞれの部位を数えるフィルターディスク部分と同じ円領域内にある血管分岐点の数が入っている。
【０２０４】
ＣＡＭ細胞は、ＦＧＦ２が染み込んだろ過材ディスクの直下のＣＡＭ組織を、検査化合物もしくは対象物で４８時間前に前もって処理した胚から切除した。ＰＢＳを用いて組織を、３回洗浄した。その組織を、３５−ｍｍのシャーレー（Ｎａｌｇｅｎ  Ｎｕｎｃ製、ニューヨーク州、ロチェスター）に置き、５０Ｘの倍率のＳＶ６実体立体顕微鏡（Ｋａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ製、ニューヨーク州、Ｔｈｏｍｗｏｏｄ）で検査した。ＣＡＭ組織のフィルター隣接部位のデジタル映像を３−ＣＣＤカラービデオカメラシステム（米国東芝製、ニューヨーク州、ニューヨーク）を使って集め、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓソフトウエア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ製、メリーランド州、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ）で分析した。血管新生に対するポリカチオン性化合物の前記効果を表２，３および４に示す。図１にも前記効果を示す。
【０２０５】
【表１２】
2008502703.tif 000081
【０２０６】
【表１３】
2008502703.tif 000082
【０２０７】
【表１４】
2008502703.tif 000083
【０２０８】
データは、平均＋ＳＥＭ、ｎ＝８である。
【０２０９】
表２、３および４に示されているように、ＣＡＭモデルにおいて、前記ポリカチオン性化合物は、ＦＧＦ２誘発性血管新生を阻止した。
【実施例２】
【０２１０】
次の例は、本発明のポリカチオン性化合物による内皮細胞管形成の阻害を示す。内皮細胞ごとの違いがＧｒａｎｔらにより開発された方法を用いて検査された。（Ｇｒａｎｔら、生体外細胞Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，２７Ａ：３２７−３３６（１９９１）、マトリゲル（登録商標）マトリックス赤フェノールフリー（ベクトン・ディッキンソン株式会社の市販製品、マサチューセッツ州ベッドフォード）を４℃で一晩かけて解凍した。冷たくしたピペットチップを用い、３．０ｍｇのウエルマトリゲル（登録商標）マトリックスを冷たくした２４マルチウェルプレートに置いた。マトリゲル（登録商標）マトリックスは、３７℃での３０分間の培養中、重合可能であった。
【０２１１】
ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）が、２％のウシ胎仔血清（ＥＧＭ）が混ざった内皮細胞成長培地で５％の二酸化炭素と９５％の湿度、および気温３７℃の中、保管された。真空管検定を０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１：１００に希釈したインスリン・トランスフェリン・セレンＧ補給剤（Ｉ−Ｔ−Ｓｅ、１００Ｘ）を補給した内皮細胞基礎培地（ＥＧＭ）で行った。ＨＵＶＥＣは、トリプシン処理され、遠心分離機で分離し、続いてリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。数を数えた後、細胞密度を３５、０００細胞ｓ／ｍＬに調整した。
【０２１２】
３５，０００細胞ｓ／ｍＬ／ウエルの最終濃縮物を、１００ｎｇ／ｍｌの組み換えヒト線維芽細胞増殖因子塩基で処理し、ポリカチオン性化合物（表１Ｂを参照）をＥＢＭ媒介物に溶かした。処理済の細胞を、細胞結合が可能な５％の二酸化炭素と９５％の湿度、および気温３７℃の中で培養した。
【０２１３】
続いて、前記媒介物を吸引し、細胞を固定して、改良ＨＥＭＡ−３染色液キットを使用し、染色した。マイクロタイターのウェル部分のデジタル映像をＤＫＣ５０００  ３−ＣＣＤカラービデオカメラシステム（米国東芝製、ニューヨーク州、ニューヨーク）を用いて集め、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓソフトウエア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ製、メリーランド州、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ）で分析した。管状形態を持つ染色された細胞の主軸の長さと範囲をマトリゲル（登録商標）マトリックス（ベクトン・ディッキンソン製、マサチューセッツ州ベッドフォード）上で５映像／ウエルから数え、測定した。
【０２１４】
下記の表５に示すように、ポリカチオン性化合物は、生体外でＥＣ管形成の強力な阻害物質である。
【０２１５】
【表１５】
2008502703.tif 000084
【実施例３】
【０２１６】
この例は細胞転移検査に関する。これまでの検査は、８μｍの細孔サイズによる使い捨てのＮｅｕｒｏｐｒｏｂｅ９６ウエル走化性チャンバーを使用して行われてきた。このチャンバーでは、ビトロネクチンまたはオステオポンチンのいずれかの勾配に対する細胞転移を計量することができた。培養細胞を、ＥＤＴＡ／トリプシン（０．０１％／０．０２５％）を使用した標準化法に従って除去した。前記細胞を二回洗浄し、ＥＢＭ（内皮細胞基本培地、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社製）の中で再懸濁した（２ｘ１０６／ｍｌ）。０．０１２５−１００μｇ／ｍｌのビトロネクチンまたはオステオポンチンのいずれか（３３μｌ）を使い捨て走化性チャンバーの底部のウエルに加え、前記のフレーム付きのフィルターを使用して集めた。前記細胞浮遊液（４５μｌ）を、違った濃度の検査薬５μｌを含むポリプロピレン皿に加え、２２度で１０分間培養した。細胞・検査薬浮遊液２５μｌを上部フィルターウエルに加え、それから加湿細胞培養器の中で一晩培養した（３７℃で２２時間）。一晩培養した後、転移しなかった細胞や、過剰な媒体は１２チャンネルピペットと細胞擦過器を使用してゆっくりと除去した。前記フィルターを、ＰＢＳ（ｎｏＣａ＋２  ｏｒ  Ｍｇ＋２）の中で２回洗浄し、１％のホルムアルデヒドで固定した。転移細胞の腹膜を、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（０．２％）に浸透させ、ＰＢＳで２〜３回洗浄した。転移細胞のアクチン・フィラメントを３０分間（２２℃）でローダミンファロイジンを用い、洗浄した（１２．８ＩＵ／ｍｌ）。ローダミンファロイジンは、保管先が４度に保たれ、光を避ける環境の場合、毎週新しく作られ、最長３日間までの使用とした。走化性は、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ  ＩＩ（５３０励振／５９０発光）を使用して蛍光検出により量を決定した。全細胞処理とそれに続く洗浄は、特別に設計された処理・洗い場で行った。この場所は、それぞれ容積容量３０ｍｌの６つの個別の試薬ユニットから成る。個別ユニットは、次に述べる試薬の一つで占められている−ＰＢＳ、ホルムアルデヒド、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはローダミンファロイジン。この技術を使用して、フィルターは、適切な溶液に浸されるため、転移細胞の損失は最小限となる。この技術は、最大量での細胞転移を可能にし、再現可能な結果が求められ、最低限の内外検査信頼性が得られる（Ｂｏｚａｒｔｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ（細胞科学における方法）、１９（３）：１７９−１８７、１９９７：Ｐｅｎｎｏら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ（細胞科学における方法）、１９（３）：１８９−１９５、１９９７）。
【０２１７】
表６に示すように、本発明のポリカチオン性化合物は、ヒト臍帯静脈内皮転移を阻止する。
【０２１８】
【表１６】
2008502703.tif 000085
【実施例４】
【０２１９】
次の例に、本発明におけるポリカチオン性化合物のヘパリン拮抗効果を示す。前記ポリカチオン性化合物の抗ヘパリン活性について理解するために、固定濃度のポリカチオン性化合物または、５０％のヒト赤血球細胞の溶解を起こす濃度のポリカチオン性化合物を用いて、阻害度を測定する検査を行った。
【０２２０】
１０ＩＵの抗トロンビンを１０ｍｌの緩衝液に溶かし、１ＩＵ／ｍｌ抗トロンビン原液を作った。１ＩＵ／ｍｌ（２５０ｘ）の抗トロンビン原液と３３６ｍＭのＮａＣｌ原液が、全容量５０μｌの緩衝液で希釈されたため最終的な抗トロンビン濃度は、０．００４ＩＵ／サンプルウエル、ＮａＣｌでは、１５０ｍＭ／サンプルウエルとなった。実験のための前記化合物の１μｌ、すなわち最終濃度１０μｇ／ｍｌ（０．５の対数拮抗希釈に匹敵する）のものをサンプルウエルに加えた。サンプルをかき混ぜ、２０分間室温で培養することができた。５０μｌの緩衝液にＸａ因子を溶かしたもの５０μｌをサンプルウエルに加え最終濃度０．１４ｋｎａｔ／ウエルとした。（１００μｌの最終サンプルウエル緩衝液とする７．１ｋｎａｔ／ｍｌ原液２μｌ）。前記サンプルに混ぜた後、１０分間室温の中でさらに培養した。４ｍＭ  Ｓ−２７６５の基質原液１０μｌを最終濃度０．４Ｍｍにするためにそれぞれのサンプルウエルに加えた。
サンプルを混ぜ、発色基質Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（Ｓ−２７６５）の加水分解を行い、それに従い、発色団ｐＮＡ（ｐ−ニトロアニリン）を遊離して、４０５ｎｍで観測した。３０秒ごと液の均一性を保つためにサンプルをかき混ぜた。ＴｈｅｒｍｏＬａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎスペクトル分光光度計を用いて吸光スペクトルを測定した。分光の増加と酵素（Ｘａ因子）の活動化は比例した。Ｘａ因子の阻害度％を標準曲線を用いて決定した。結果を表７に示す。図２も阻害度％を棒グラフで表わしている。
【０２２１】
【表１７】
2008502703.tif 000086
【０２２２】
上記図２および表７に説明されているように本発明におけるポリカチオン化合物はＸａ因子を抑制する。
【０２２３】
Ｘａ因子の抑制：ＥＣ５０。ヒトの赤血球の５０％の溶解を引き起こすポリカチオン化合物の濃度を判断するため、一定のヘパリン濃度が使用され、異なる量のヘパリン抑制因子が加えられた。この結果が表８に記述されている。
【０２２４】
【表１８】
2008502703.tif 000087
【０２２５】
上記表７で説明されているように本発明のポリカチオン化合物はＸａ因子の種々抑制度合いを示す。
【実施例５】
【０２２６】
次の例は本発明のポリカチオン化合物の凝固時間に対する効果を示す。本明細書に記載されている抗ヘパリン検査が使用された。検査は１ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌもしくは４ｍｇ／Ｌのヘパリンを含み、化合物２６の増加量が加えられた。表９および図３が化合物２６の凝固時間に対する効果を示す。
【０２２７】
【表１９】
2008502703.tif 000088
【０２２８】
上記図３および表９に説明されているように、本発明におけるポリカチオン化合物である化合物２６は種々のヘパリン濃度において凝固時間を短縮しており、これは前記化合物のヘパリンの活動に対する抑制能力を証明している。
本明細書に好適実施形態が詳細に渡り記載されているが、以下に続く特許請求の範囲により定義された本発明の要旨を逸脱しない範囲で種々修正、追加、代替や同様の行為が可能であることはこの技術に精通したものなら言うまでもない。本発明のその他の実施例は、明細書もしくは本明細書に開示されている本発明の実践で考慮されている事項によりこの技術に精通したものなら言うまでもない。以下の特許請求の範囲に示されている本発明の真の範囲と精神のもとに、本明細書および種々の例は模範をとして考慮されるよう意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０２２９】
本発明の出願は、カラーによる履行ずみの図あるいや写真が少なくとも１枚含んでいる。このカラーの図と写真を伴う本発明の複写は要望があり次第、必要な料金が支払われてから特許および商標事務所により提供される。
【図１】図１に抗血管新生のＣＡＭ模型でのポリカチオン化合物の効果を示す。
【図２】図２は、本発明のポリカチオン化合物のＸａ因子の抑制度を示す。
【図３】図３は、本発明の凝固時間においてのポリカチオン化合物の化合物１１０００２化合物の効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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2008502703.tif 000103