(57)【要約】  本発明は、心臓毒性医薬、特にアントラサイクリンをはじめとする化学療法薬の結果として、心血管合併症、特に心疾患または急性冠症候群に罹患するリスクを診断するための、心臓ホルモン、特にナトリウム利尿ペプチドの使用に関する。特に、本発明は、心臓毒性医薬を投与されようとしている患者についての、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断する方法に関し、該方法は、以下のステップ：（ａ）体液または組織サンプルを取得するステップ、および（ｂ）好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、心臓ホルモンのレベルを測定するステップを含む。本発明に関連して好ましい心臓ホルモンは、ＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＢＮＰ、およびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰである。【選択図】図１
2008502888.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための方法であって、以下のステップ：
ａ）  好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、心臓ホルモンのレベルを測定するステップ、
ｂ）  測定したレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、該患者のリスクを診断するステップ
を含む、上記方法。
【請求項２】
ステップａ）を、心臓毒性医薬を投与する前に行う、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓ホルモンがナトリウム利尿ペプチドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記心臓ホルモンが、ＡＮＰ型ペプチドもしくはその変異体および／またはＢＮＰ型ペプチドもしくはその変異体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記心臓ホルモンがＢＮＰ型ペプチドまたはその変異体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＢＮＰ型ペプチドがＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはその変異体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
男性患者での６０ｐｇ／ｍｌより高くかつ１０００ｐｇ／ｍｌより低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
女性患者での１２０ｐｇ／ｍｌより高くかつ１０００ｐｇ／ｍｌより低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
１０００〜５０００ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの非常な増大に関連する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
５０００ｐｇ／ｍｌより高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの非常な増大に関連する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記心臓毒性医薬が、抗新生物薬、三環系抗うつ剤、多発性硬化症薬、局所麻酔薬、インターフェロンα、コカイン、アンドロゲン、同化剤、およびＨＩＶ抗ウイルス薬からなる群より選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記心臓毒性医薬が、抗新生物薬、特にアントラサイクリンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記心血管合併症が、冠動脈心疾患、急性冠症候群、心筋梗塞、左室機能不全、またはうっ血性心不全である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
診断ステップが、リスクのモニタリングまたは確認と関連付けられる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記心臓ホルモンのレベルを、特異的結合リガンド、アレイ、微小流体デバイス、化学発光分析器、またはロボット化デバイスを用いて測定する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記特異的結合リガンドが、抗体またはアプタマーである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記特異的結合リガンドが標識されている、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための、患者の心臓ホルモン、特にナトリウム利尿ペプチドのレベルを、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで測定することが可能な診断手段の使用。
【請求項１９】
心臓毒性医薬を用いた患者の治療を決定する方法であって、以下のステップ：
（ａ）  好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、心臓ホルモンのレベルを測定するステップ、
（ｂ）  測定された該心臓ホルモンレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、計画された治療の結果として患者が心血管合併症に罹患するリスクを診断するステップ、
（ｃ）  任意により心臓病専門医による患者の診察を開始するステップ、
（ｄ）  該方法が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの存在を示唆する場合、該治療を避けることを推奨するステップ
を含む、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの診断に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代医学の目標は、個人的もしくは個別的な治療法を提供することである。それらは、患者一人一人のニーズまたはリスクを考慮に入れた治療法である。特に重大なリスクは、心血管合併症、特に、見落とされる心血管合併症の存在である。
【０００３】
心血管合併症、特に心疾患は、西半球における罹患および死亡の主原因である。心血管合併症は、心臓毒性作用を示す特定の医薬、例えばアントラサイクリン治療薬が原因で生じる可能性があることが知られている。多くの場合、心臓毒性医薬に伴うリスクは用量制限的である。
【０００４】
分子マーカーまたは生化学的マーカーとしてのナトリウム利尿ペプチドの使用は、それ自体公知である。ＷＯ ０２／０８９６５７には、心筋梗塞を診断するために脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）を測定することが推奨されている。ＷＯ ０２／０８３９１３には、うっ血性心不全、心筋梗塞、ＳＴ上昇型心筋梗塞、または非ＳＴ上昇型急性冠症候群の患者において、差し迫る罹患または死亡を予測するためにＢＮＰを使用することが推奨されている。
【０００５】
Ｓｕｚｕｋｉらは、アントラサイクリンがＢＮＰの血漿濃度に影響を与える可能性があるかを調べた（Suzuki, T.ら(1998). Elevated B-type natriuretic peptide levels after anthracycline administration. American Heart Journal, vol. 136(2), p. 362-363.）。この研究から、アントラサイクリンを投与した後の心臓の状態を評価するためにＢＮＰレベルを使用しうることが示唆される。彼らの解釈によれば、ＢＮＰレベルは、心臓毒性薬剤に対する心臓の耐性を反映する可能性が最も高い。
【０００６】
Ｏｋｕｍｕｒａらは、ダウノルビシン含有療法で急性白血病を治療した患者において心臓毒性の予測因子としてＢＮＰを使用しうるかを調べた（Okumura, H.ら(2000). Brain natriuretic peptide is a predictor of anthracycline-induced cardiotoxicity. Acta Haematologica, vol. 104, p. 158-163）。著者らは、彼らの予備的結果からＢＮＰがアントラサイクリン起因性心臓毒性に対する早期の高感度な指標として役立ちうることが示唆されると結論付けている。
【０００７】
しかしながら、心臓毒性に関連する診断マーカーとしてのＢＮＰの値は、依然として議論を必要とする。最近の総説では、薬剤関連心臓毒性をモニターするためにＢＮＰを使用しうるか疑問視されている（Mohideen, M.R. (2002), Brain natriuretic peptide is more than a marker. Ceylon Medical Journal, vol. 47(3), p. 81-82）。上記の総説の後で発表された他の最近の総説では、アントラサイクリンが原因で生じる心臓毒性の診断にＢＮＰを用いる左室機能不全の早期診断に関して「期待のもてるデータは存在しない」という結論に達している（Tsekoura, D.K.ら(2003). Brain natriuretic peptide. Hellenic Journal of Cardiology, vol. 44, p. 266-270）。
【０００８】
アントラサイクリンにより媒介される心臓毒性の診断に対するＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの役割は、研究の対象になっていない。
【０００９】
更に、先行技術は、心臓毒性、即ち、治療が既に開始された後で薬剤が原因で生じる心臓毒性をモニターするためのＢＮＰの潜在的使用に関するものにすぎない。
【００１０】
しかしながら、心臓毒性医薬を投与する前でもリスク患者を特定できれば好ましいであろう。心血管合併症は長期間にわたり無症候のままである可能性があることを認識することが重要である。従って、心血管合併症の存在の信頼性の高い診断は、一般に考えられているよりも困難であり誤りを生じやすい（Svendstrup Nielsen, L.ら(2004). N-terminal pro-brain natriuretic peptide for discriminating between cardiac and non-cardiac dyspnoea. The European Jounal of Heart Failure）。
【００１１】
現在のところ、心疾患または高血圧症の既往歴を有する患者だけが、心臓毒性医薬を用いる治療の際に、より綿密なモニタリングを受けるにすぎない。特に、一般医や非心臓病専門医は、これまで見落とされてきた心血管障害を明らかにする簡潔な手段を有していない。
【特許文献１】ＷＯ ０２／０８９６５７
【特許文献２】ＷＯ ０２／０８３９１３
【非特許文献１】Suzuki, T.ら(1998) American Heart Journal, vol. 136(2), p. 362-363.
【非特許文献２】Okumura, H.ら(2000) Acta Haematologica, vol. 104, p. 158-163
【非特許文献３】Mohideen, M.R. (2002) Ceylon Medical Journal, vol. 47(3), p. 81-82
【非特許文献４】Tsekoura, D.K.ら(2003) Hellenic Journal of Cardiology, vol. 44, p. 266-270
【非特許文献５】Svendstrup Nielsen, L.ら(2004) The European Jounal of Heart Failure, 6(1):63-70.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、心臓毒性医薬を投与される前にリスク患者を特定する方法または手段が必要とされている。特に、好適な診断手段を提供することが必要とされている。特に、心血管合併症の病歴を有していないリスク患者の特定を可能にする診断手段が必要とされている。特に、診断手段は、簡潔で、迅速で、信頼性が高く、しかも一般医や非心臓病専門医による利用に適したものでなければならない。従って、本発明の目的は、そのような手段および方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の目的は、患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための方法により達成される。この方法は、以下のステップ：
ａ）  好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、患者の心臓ホルモン、特にナトリウム利尿ペプチドのレベルを測定するステップ、
ｂ）  測定したレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、該患者のリスクを診断するステップ
を含む。
【００１４】
本方法はまた、患者の体液または組織サンプルを取得するステップを含みうる。
【００１５】
本発明の目的はまた、患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための、患者の心臓ホルモン、特にナトリウム利尿ペプチドのレベルを、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで測定するための診断手段の使用により達成される。好ましくは、該レベルは、患者の体液または組織サンプル中で決定される。
【００１６】
本発明は、心臓毒性医薬を投与されているかまたは投与されようとしている患者をスクリーニングして該患者が該心臓毒性医薬の結果として心血管合併症を発症するリスクを調べる簡単かつ安価な方法および手段を提供する。本発明はまた、心血管合併症の明確な症状を有するかまたは有していない患者における心血管合併症の存在または重症度を表す心臓ホルモンのレベルを提供する。
【００１７】
本発明はまた、薬物の用量を患者のリスクに適合させることを可能にする。アントラサイクリンなどの多くの心臓毒性薬物では、できる限り高い用量から始めることが好ましい。しかしながら、治療を開始した後では、薬剤の用量を適合させることが困難であったり、さらには不可能であったりする可能性がある。従って、心血管合併症のリスクを最小限に抑えるために、多くの場合、最適な治療効果を示すには少なすぎる心臓毒性薬物の用量が選択される。本発明によれば治療を開始する前にリスクの診断または評価が行えるようになるので、心血管合併症を回避しつつ、それぞれの患者で治療効果が最大になるように、心臓毒性医薬の用量の最適化、特に増大を行うことが可能である。
【００１８】
従って、本発明によれば、心臓毒性医薬を適用するべきか、その用量、および／または好適な併用治療もしくはモニタリングを手配するべきかに関して注意深くかつ情報に基づいた決断をすることが可能になる。
【００１９】
本発明は、心臓病専門医による詳細な心臓病学的診察を頻繁に利用できない一般医、専門医、および専門の病棟、部門、または診療所に特に有利である。本発明は、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクに直面している患者についての患者の単純でかつ信頼性の高いスクリーニングを行う手段および方法をそのような非心臓病専門医に提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明は、特定の生化学的マーカーまたは分子マーカーを利用する。「生化学的マーカー」および「分子マーカー」という用語は、当業者に公知である。特に、生化学的マーカーまたは分子マーカーは、特定の病状、疾患、もしくは合併症の存在下または不在下で示差的に発現される（即ち、アップレギュレートまたはダウンレギュレートされる）遺伝子発現産物である。通常、分子マーカーとは、核酸（例えばｍＲＮＡ）として定義され、生化学的マーカーとは、タンパク質またはペプチドである。好適な生化学的マーカーまたは分子マーカーのレベルは、病状、疾患、もしくは合併症の存在または不在を示しうるので、診断を可能にする。
【００２１】
本発明は、特に、生化学的マーカーとして心臓ホルモン、より特定的にはナトリウム利尿ペプチドを利用する。本発明に関連して、任意の心臓ホルモンまたはナトリウム利尿ペプチドの組合せを生化学的マーカーとして利用することも考えられる。
【００２２】
本発明に係る心臓ホルモンは、ナトリウム利尿ペプチドおよびウロテンシンを包含する。特に、本発明に係る心臓ホルモンは、ナトリウム利尿ペプチドである。
【００２３】
本発明に係るナトリウム利尿ペプチドは、ＡＮＰ型およびＢＮＰ型のペプチドならびにそれらの変異体を包含する（例えば、Bonow, R.O. (1996). New insights into the cardiac natriuretic peptides. Circulation 93: 1946-1950を参照されたい）。
【００２４】
ＡＮＰ型ペプチドは、ｐｒｅ−ｐｒｏＡＮＰ、ｐｒｏＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、およびＡＮＰを包含する。
【００２５】
ＢＮＰ型ペプチドは、ｐｒｅ−ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、およびＢＮＰを包含する。
【００２６】
プレプロペプチド（ｐｒｅ−ｐｒｏＢＮＰの場合は１３４個のアミノ酸）は、短いシグナルペプチドを含み、このシグナルペプチドが酵素的に切断除去されてプロペプチド（ｐｒｏＢＮＰの場合は１０８個のアミノ酸）が放出される。プロペプチドはさらに、Ｎ末端プロペプチド（ＮＴプロペプチド、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの場合は７６個のアミノ酸）と活性ホルモン（ＢＮＰの場合は３２個のアミノ酸およびＡＮＰの場合は２８個のアミノ酸）とに切断される。
【００２７】
本発明に係る好ましいナトリウム利尿ペプチドは、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰ、ＡＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、ＢＮＰ、およびそれらの変異体である。ＡＮＰおよびＢＮＰは、活性ホルモンであり、それらのそれぞれの対応する不活性体であるＮＴ−ｐｒｏＡＮＰおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰよりも短い半減期を有する。したがって、対象となる時間経過に応じて、活性型または不活性型のいずれかを測定することが有利であろう。本発明に係る最も好ましいナトリウム利尿ペプチドは、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰおよびその変異体である。
【００２８】
これに関連して、「変異体」という用語は、該ペプチドに実質的に類似したペプチドを表す。「実質的に類似した」という用語は、当業者の熟知するところである。特に、変異体は、ヒト集団において最も優勢なペプチドアイソフォームのアミノ酸配列と比較してアミノ酸交換を示すアイソフォームまたは対立遺伝子でありうる。好ましくは、そのような実質的に類似したペプチドは、ペプチドの最も優勢なアイソフォームに対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列類似性を有する。同様に実質的に類似しているのは、診断手段によりまたは対応する全長ペプチドに対するリガンドにより依然として認識される分解産物、例えばタンパク質分解産物である。「変異体」という用語はまた、スプライス変異体をも表すものとする。
【００２９】
「変異体」という用語はまた、グリコシル化ペプチドのような翻訳後修飾ペプチドをも表す。「変異体」はまた、例えば、標識、特に放射性標識または蛍光標識をペプチドに共有結合もしくは非共有結合させることにより、サンプル採取後に修飾されたペプチドである。
【００３０】
特定の変異体の例およびそれらの測定方法は公知である（例えば、Ala-Kopsala, M., Magga, J., Peuhkurinen, K. et al. (2004): Molecular heterogeneity has a major impact on the measurement of circulating N-terminal fragments of A-type and B-type natriuretic peptides. Clinical Chemistry, vol. 50(9), 1576-1588を参照されたい）。
【００３１】
本発明の他の実施形態は、様々なマーカーを組み合わせて同時または非同時に測定することを含む。一例は、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰをＢＮＰと組み合わせて測定することである。他の例は、ナトリウム利尿ホルモン、特にＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを、トロポニン−Ｔ、ＣＫ−ＭＢ、またはミオグロビンのような心臓壊死のマーカーと組み合わせて測定することである。
【００３２】
本発明に係る診断は、関連する疾患、合併症、またはリスクの決定、モニタリング、確認、細分類、および予測を行うことを包含する。決定とは、疾患、合併症、またはリスクに気付くことを表す。モニタリングとは、既に診断の下された疾患または合併症を追跡すること、例えば、疾患の進行を分析するかまたは疾患もしくは合併症の進行に及ぼす特定の治療の影響を分析することを表す。確認とは、他の指標またはマーカーを用いて既に行われた診断を強化または実証することを表す。細分類とは、診断の下された疾患の様々なサブクラスに基づいて診断をさらに規定すること、例えば、疾患を軽症型および重症型に規定することを表す。予測とは、他の症状またはマーカーが顕在化した状態になるかまたは顕著に変化した状態になる前に疾患または合併症の予後を判定することを表す。
【００３３】
心血管疾患に罹患している個体は、安定狭心症（ＳＡＰ）に罹患している個体および急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する個体でありうる。ＡＣＳ患者は、不安定狭心症（ＵＡＰ）を示す可能性があるか、またはこれらの個体は、既に心筋梗塞（ＭＩ）に罹患している。ＭＩは、ＳＴ上昇型ＭＩまたは非ＳＴ上昇型ＭＩでありうる。ＭＩが起こると、続いて、左室機能不全（ＬＶＤ）が起こる可能性がある。最後に、ＬＶＤ患者は、約１５％の死亡率を有するうっ血性心不全（ＣＨＦ）に罹患する。
【００３４】
心血管疾患は、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）による機能的分類体系に分類されている。クラスＩの患者は、心血管疾患の明確な症状を有していない。身体活動は制限されず、通常の身体活動では、過度の疲労も動悸も呼吸困難（息切れ）も生じない。クラスＩＩの患者は、身体活動のわずかな制限を受ける。患者は、安静時は快適であるが、通常の身体活動で、疲労、動悸、または呼吸困難を生じる。クラスＩＩＩの患者は、身体活動の顕著な制限を受ける。患者は、安静時は快適であるが、通常よりも少ない活動で、疲労、動悸、または呼吸困難を生じる。クラスＩＶの患者は、いかなる身体活動を行うときにも不快感を伴う。患者は、安静時に心不全の症状を示す。いかなる身体活動を始めても、不快感が増大する。従って、臨床症状を示さない個体と症状（例えば呼吸困難）を有する個体とに患者を分けることが可能である。
【００３５】
心血管疾患の他の特徴は、「駆出率」としても知られる「左室駆出率」（ＬＶＥＦ）でありうる。健康な心臓を有する人々は、通常、５０％超として一般に記述される無損傷ＬＶＥＦを有する。症候性の収縮期心疾患を有するほとんどの人々は、一般的には４０％以下のＬＶＥＦを有する。
【００３６】
本発明は、心臓毒性医薬の結果として発症する「心血管合併症」に関する。
【００３７】
本発明に係る「心血管合併症」は、任意の心血管疾患または心血管事象を表す。心血管疾患または心血管事象が二次的合併症、例えば、肺うっ血またはうっ血肺（例えば、左室不全が原因で起こりうる）を引き起こす限り、二次的合併症もまた、「心血管合併症」という用語に包含されると解釈される。
【００３８】
特定的には、「心血管合併症」とは、冠動脈心疾患、ＳＡＰ、ＡＣＳ、ＵＡＰ、ＭＩ、ＳＴ上昇型ＭＩ、非ＳＴ上昇型ＭＩ、ＬＶＤ、またはＣＨＦを表す。
【００３９】
より特定的には、「心血管合併症」とは、ＡＣＳ、ＵＡＰ、ＭＩ、ＳＴ上昇型ＭＩ、非ＳＴ上昇型ＭＩ、ＬＶＤ、またはＣＨＦを表す。
【００４０】
本発明に係る心血管合併症は、症状、特定的にはＮＹＨＡクラスＩＩ〜ＩＶの症状、より特定的にはＮＹＨＡクラスＩＩＩ〜ＩＶの症状を引き起こしうる。
【００４１】
心血管合併症は、４０％以下のＬＶＥＦに関連付けられる場合がある。
【００４２】
心血管合併症は、「代償性」または「非代償性」のいずれかでありうる。代償性とは、生体による通常の酸素要求を依然として満たしうることを意味し、一方、非代償性とは、生体による通常の酸素要求がもはや満たされないことを意味する。
【００４３】
本発明に係る「心血管合併症に罹患すること」は、既存の心血管合併症の悪化をも包含する。
【００４４】
本発明に係る「患者」という用語は、健常な個体、外見上健常な個体、または特に疾患に罹患している個体を表す。特定的には、患者は、ＡＩＤＳ、癌（例えば、カポジ肉腫、乳癌、前立腺癌、もしくは白血病）、または神経障害（例えば、多発性硬化症もしくはうつ病）に罹患しているか、あるいはそれらの治療を受けている。更により特定的には、患者は、心血管合併症の既往歴を有しておらず、かつ／または心血管合併症の症状をまったくもしくはほとんど有しておらず（ＮＹＨＡクラスＩもしくはＩＩ）、かつ／または心血管合併症の治療を受けていない。
【００４５】
好ましくは、患者は、心臓毒性医薬を投与されているかまたは投与されようとしている患者である。
【００４６】
心臓毒性医薬は、当業者に公知である。心臓毒性医薬とは、心血管合併症を引き起こしうる任意の種類の薬物治療剤を表す。特定的には、心臓毒性医薬は、心臓の細胞損傷（例えば、アポトーシスの誘導によるもの）、組織損傷を引き起こしうるか、または心臓の伝導系に影響を及ぼしうる。
【００４７】
本発明に係る心臓毒性医薬の例としては、抗新生物薬（化学療法薬）、三環系抗うつ剤、多発性硬化症薬、局所麻酔薬、インターフェロンα、コカイン、アンドロゲンや同化剤のような性ホルモン、およびＨＩＶ抗ウイルス薬が挙げられる。
【００４８】
本発明に係る抗新生物薬の例としては、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、イダルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、およびエピルビシン）、アントラキノン誘導体（例えば、ミトキサントロン）、アクリジン誘導体（例えば、アムサクリン）、三酸化ヒ素、ならびに、癌療法用の抗体（特定的には、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に対する抗体、例えば、トラスツズマブ（ハーセプチン））が挙げられる。
【００４９】
抗新生物性であるミトキサントロンはまた、多発性硬化症の治療にも使用される。
【００５０】
本発明に係る三環系抗うつ剤の例としては、アミトリプチリン、アモキサピン、クロミプラミン、デシプラミン、ドキセピン、イミプラミン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、およびトリミプラミンが挙げられる。
【００５１】
本発明に係る局所麻酔薬の例としては、コカインおよびその誘導体、例えば、ベンゾカイン、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、エチドカイン、プリロカイン、メピバカイン、ブピバカイン、ロピバカイン、Ｓ−ロピバカイン、アルチカイン、およびフォモカインが挙げられる。
【００５２】
以上に規定された薬物の修飾体もまた、本発明に係る心臓毒性医薬であると解釈される。そのような修飾体の例としては、ペグ化体またはリポソーム製剤、例えば、いわゆる「ステルスリポソーム」が挙げられる。特定例は、リポソーム化ドキソルビシン（例えば、Ｄ−９９）、ペグ化リポソーム化ドキソルビシン（例えば、Ｃａｅｌｙｘ、Ｄｏｘｉｌ）、およびリポソーム化ダウノルビシン（例えば、Ｄａｕｎｏｘｏｍｅ）である。
【００５３】
アンドロゲンの例は、テストステロン、５α−ジヒドロテストステロン、メチルテストステロン、プロピオン酸テストステロン、ウンデカン酸テストステロン、エナント酸テストステロン、フルオキシメステロン、およびメステロロンである。
【００５４】
同化剤としては、アンドロゲン作用を減少させると同時にタンパク質生成に及ぼす刺激作用を増大させるように改変されたアンドロゲンが挙げられる。同化剤の例は、デカン酸ナンドロロン、酢酸クロステボール、および酢酸メテノロン、アロマターゼ阻害剤、ならびにβ交感神経刺激剤（例えば、クレンブテロール）である。
【００５５】
ＨＩＶ抗ウイルス薬の例は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤（例えば、アンプレナビル、インジナビル、ネルフィナビル、リトナビル、サキナビル）、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ、例えば、ジドブジン（ＡＺＴ）、アバカビル、ジダノシン、ラミブジン、スタブジン、ザルシタビン）、および非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ、例えば、デラビルジン、エファビレンツ、ネビラピン）である。
【００５６】
ＨＩＶ抗ウイルス薬はまた、ＨＡＡＲＴ（高活性抗レトロウイルス治療）療法にも含まれる。古典的ＨＡＡＲＴ療法は、２種のＮＲＴＩと１種のＨＩＶプロテアーゼ阻害剤との同時治療を含む。
【００５７】
ＨＩＶ治療で使用される心臓毒性薬物の詳細なリストは、Barbaro, G., (2002). Cardiovascular Manifestations of HIV Infection. Circulation, vol. 106, pp.1420-1425の１４２４頁の表２に与えられている。
【００５８】
同様に心臓毒性医薬とみなされるのは、記載の薬剤と他の薬剤との組合せであり、例えば、化学療法薬を、三環系抗うつ剤、局所麻酔薬、インターフェロンα、またはアンドロゲンと組み合わせることが可能である。他の例として、多発性硬化症薬を三環系抗うつ剤またはインターフェロンと組み合わせることが可能である。
【００５９】
当業者に公知のように、特定の組合せまたは修飾体は、より少ない心臓毒性作用を示すので、本発明により心血管合併症のリスクの増大または大きな増大が示唆される場合、治療の選択肢を提供する。例えば、先に挙げたペグ化薬物またはリポソーム製剤は、心臓毒性を減少させる目的で開発されてきた。
【００６０】
コカインおよびアンドロゲンは、乱用薬物としても知られる。例えば、多くのＨＩＶ患者は、薬物乱用者でもあるので、ＨＩＶ抗ウイルス薬を用いて治療を開始すると、心血管合併症を引き起こす可能性がある。同様に、アスリートは、運動能力を増大させるためにコカインおよび／またはアンドロゲンを頻繁に使用する。この場合も、追加の心臓毒性医薬により、心血管合併症を引き起こす可能性がある。従って、本発明はまた、そのような患者が追加の心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの診断に関する。
【００６１】
どのような状況のときに心血管合併症が心臓毒性医薬の「結果として」発症したとみなしうるかについては、当業者に公知である。特に、心血管合併症は、心臓毒性医薬による治療開始後１ヶ月間以内、特定的には１週間以内、より特定的には１日以内に発症したならば心臓毒性医薬の結果として発症したとみなされる。
【００６２】
本発明に係る診断は、好ましくは、診断手段を用いて行われる。診断手段とは、対象物質、特定的には対象ペプチドまたは対象ポリペプチド、より特定的には心臓ホルモンのレベル、量、または濃度の測定を可能にする任意の手段のことである。
【００６３】
それぞれのペプチドのレベルを決定するのに使用しうる方法および診断手段は、当業者に公知である。これらの方法としては、ＥＬＩＳＡに基づくマイクロプレート法、完全自動化もしくはロボット化免疫アッセイ（例えば、ＥｌｅｃｓｙｓＴＭ分析器を用いて実施可能）、ＣＢＡ（酵素的コバルト結合アッセイ、例えば、Ｒｏｃｈｅ−ＨｉｔａｃｈｉＴＭ分析器を用いて実施可能）、およびラテックス凝集アッセイ（例えば、Ｒｏｃｈｅ−ＨｉｔａｃｈｉＴＭ分析器を用いて実施可能）が挙げられる。
【００６４】
さらに、当業者は、ペプチドまたはポリペプチドのレベルを測定する様々な方法に精通している。「レベル」という用語は、患者または患者から採取されたサンプルにおけるペプチドもしくはポリペプチドの量または濃度を表す。
【００６５】
本発明に係る「測定」という用語は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、または他の対象物質の量もしくは濃度を、好ましくは半定量的または定量的に、決定することを表す。測定は、直接的または間接的に実施可能である。間接的測定としては、細胞応答、結合リガンド、標識、または酵素反応生成物の測定が挙げられる。
【００６６】
本発明に関連して、量とは、濃度をも表す。自明なことではあるが、既知サイズのサンプル中の対象物質の全量から物質の濃度を計算することが可能であり、その逆方向の計算も可能である。
【００６７】
測定は、当技術分野で公知の任意の方法により実施可能である。好ましい方法について、以下で説明する。
【００６８】
好ましい実施形態では、対象ペプチドまたは対象ポリペプチド、特に心臓ホルモンのレベルを測定するための方法は、以下のステップ：（ａ）該ペプチドまたはポリペプチドに対して細胞応答を起こしうる細胞を適切な時間にわたり該ペプチドまたはポリペプチドに接触させるステップ、（ｂ）細胞応答を測定するステップ、を含む。
【００６９】
他の好ましい実施形態では、対象ペプチドまたは対象ポリペプチド、特に心臓ホルモンのレベルを測定するための方法は、以下のステップ：（ａ）該ペプチドまたはポリペプチドを適切な時間にわたり好適な基質に接触させるステップ、（ｂ）生成物の量を測定するステップ、を含む。
【００７０】
他の好ましい実施形態では、対象ペプチドまたは対象ポリペプチド、特に心臓ホルモンのレベルを測定するための方法は、以下のステップ：（ａ）該ペプチドまたはポリペプチドを特異的結合リガンドに接触させるステップ、（ｂ）（任意により）非結合リガンドを除去するステップ、（ｃ）結合リガンドの量を測定するステップ、を含む。
【００７１】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドは、サンプル中、特に体液または組織サンプル中に含まれ、サンプル中のペプチドまたはポリペプチドの量が測定される。
【００７２】
ペプチドおよびポリペプチド（タンパク質）は、組織、細胞、および体液サンプルで、即ち、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、測定可能である。好ましくは、対象ペプチドまたは対象ポリペプチドは、体液サンプルで測定される。
【００７３】
本発明に係る組織サンプルは、死亡したかもしくは生きている人体または動物体から取得される任意の種類の組織を意味する。組織サンプルは、当業者に公知の任意の方法により、例えば、生検または掻爬により、取得可能である。
【００７４】
本発明に係る体液としては、血液、血清、血漿、リンパ液、脳脊髄液、唾液、および尿が挙げられる。特に、体液としては、血液、血清、血漿、および尿が挙げられる。体液のサンプルは、当技術分野で公知の任意の方法により取得可能である。
【００７５】
細胞サンプルの取得方法としては、単一細胞または少数の細胞群の直接的調製、組織の分散（例えば、トリプシンを用いる）、および濾過や遠心分離などによる体液からの細胞分離が挙げられる。本発明に係る細胞はまた、血小板および他の無核細胞、例えば赤血球を包含する。
【００７６】
必要であれば、サンプルを更に処理することも可能である。特に、濾過法、遠心分離法、またはクロロホルム／フェノール抽出のような抽出法をはじめとする当技術分野で公知の方法により、核酸、ペプチド、またはポリペプチドをサンプルから精製することが可能である。
【００７７】
細胞応答を測定するために、サンプルまたは処理サンプルを細胞培養物に添加して、細胞内または細胞外の応答を測定する。細胞応答としては、レポーター遺伝子の発現、またはペプチド、ポリペプチド、もしくは小分子などの物質の分泌が挙げられる。
【００７８】
他の好ましい測定方法としては、対象ペプチドまたは対象ポリペプチドに特異的に結合するリガンドの量を測定することが挙げられる。本発明に係る結合は、共有結合と非共有結合の両方を包含する。
【００７９】
本発明に係るリガンドは、対象ペプチドまたは対象ポリペプチドに結合する任意のペプチド、ポリペプチド、核酸、または他の物質でありうる。周知のごとく、ペプチドまたはポリペプチドは、人体もしくは動物体から取得または精製する場合、グリコシル化などにより修飾されている可能性がある。本発明に係る好適なリガンドは、そのような部位を介してペプチドまたはポリペプチドに結合するものでもよい。
【００８０】
好ましくは、リガンドは、測定対象のペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合するものでなければならない。本発明に係る「特異的結合」は、リガンドが試験サンプル中に存在する他のペプチド、ポリペプチド、または物質に実質的に結合する（それらと「交差反応する」）ものであってはならないことを意味する。好ましくは、特異的に結合されるタンパク質またはアイソフォームは、任意の他の相応なペプチドまたはポリペプチドの少なくとも３倍、より好ましくは少なくとも１０倍、さらにより好ましくは少なくとも５０倍高いアフィニティーで結合されなければならない。
【００８１】
特に、検査されるペプチドまたはポリペプチドが、例えば、ウェスタンブロットにおけるサイズにより、またはサンプル中の比較的高い存在量により、依然として識別可能でありかつ明確に測定可能であるならば、非特異的結合は、許容される場合がある。
【００８２】
リガンドの結合は、当技術分野で公知の任意の方法により測定可能である。好ましくは、方法は、半定量的または定量的である。好適な方法について、以下で説明する。
【００８３】
第１に、例えば、ＮＭＲまたは表面プラズモン共鳴により、リガンドの結合を直接測定しうる。
【００８４】
第２に、リガンドが対象ペプチドまたは対象ポリペプチドの酵素活性の基質としても機能するのであれば、酵素反応生成物を測定することが可能である（例えば、切断された基質の量をウェスタンブロットなどで測定することにより、プロテアーゼの量を測定することが可能である）。
【００８５】
酵素反応生成物の測定では、好ましくは、基質の量は飽和状態である。また、反応前に、検出可能な標識で基質を標識することも可能である。好ましくは、サンプルを適切な時間にわたり基質に接触させる。適切な時間とは、検出可能な、好ましくは測定可能な量の生成物を生成するのに必要な時間を意味する。生成物の量を測定する代わりに、所与の（例えば検出可能な）量の生成物が出現するのに必要な時間を測定することも可能である。
【００８６】
第３に、リガンドを共有結合または非共有結合で標識に結合させることにより、リガンドの検出および測定を可能にすることができる。
【００８７】
標識化は、直接的または間接的な方法により実施可能である。直接的な標識化は、標識をリガンドに（共有結合または非共有結合で）直接結合させることを含む。間接的な標識化は、一次リガンドに二次リガンドを（共有結合または非共有結合で）結合させることを含む。二次リガンドは、一次リガンドに特異的に結合するものでなければならない。該二次リガンドは、好適な標識に結合可能であり、かつ／または二次リガンドに結合する三次リガンドの標的（受容体）でありうる。シグナルを増大させるために、二次、三次、またはより高次のリガンドの使用がしばしば行われる。好適な二次およびより高次のリガンドとしては、抗体、二次抗体、および周知のストレプトアビジン−ビオチン系（Vector Laboratories, Inc.）が挙げられる。
【００８８】
当技術分野で公知のように、リガンドまたは基質を１種以上のタグで「タグ付け」することも可能である。その場合、そのようなタグは、より高次のリガンドの標的でありうる。好適なタグとしては、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｈｉｓタグ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ｍｙｃタグ、Ａ型インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、マルトース結合タンパク質などが挙げられる。ペプチドまたはポリペプチドの場合、タグは、好ましくはＮ末端および／またはＣ末端に存在する。
【００８９】
好適な標識は、適切な検出法により検出可能な任意の標識である。典型的な標識としては、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル、ルミノール、ルテニウム、酵素活性標識、放射性標識、磁気標識（「例えば、磁気ビーズ」、常磁性標識および超常磁性標識を包含する）、および蛍光標識が挙げられる。
【００９０】
酵素活性標識としては、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびそれらの誘導体が挙げられる。検出に好適な基質としては、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、ＮＢＴ−ＢＣＩＰ（４−ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−ホスフェート（Roche Diagnosticsから調製済みのストック溶液として入手可能））、ＣＤＰ−ＳｔａｒＴＭ（Amersham Biosciences）、ＥＣＦＴＭ（Amersham Biosciences）が挙げられる。好適な酵素−基質の組合せを用いれば、当技術分野で公知の方法（例えば、感光性フィルムまたは好適なカメラシステムを用いる方法）により測定しうる着色反応生成物（蛍光または化学発光）を生成させることが可能である。酵素反応の測定に関しては、先に記載した基準が同じように適用される。
【００９１】
典型的な蛍光標識としては、蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰおよびその誘導体）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、フルオレセイン、およびＡｌｅｘａ色素（例えば、Ａｌｅｘａ ５６８）が挙げられる。さらなる蛍光標識は、例えば、Molcular Probes（Oregon）から入手可能である。さらに、蛍光標識として量子ドットの使用も考えられる。
【００９２】
典型的な放射性標識としては、３５Ｓ、１２５Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐなどが挙げられる。放射性標識は、任意の公知の適切な方法、例えば、感光性フィルムまたは蛍燐光体イメージャーにより、検出可能である。
【００９３】
本発明に係る好適な測定法としては、このほかに、沈降（特に免疫沈降）、電気化学発光（電解発生化学発光）、ＲＩＡ（放射免疫アッセイ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、サンドイッチ酵素免疫試験、電気化学発光サンドイッチ免疫アッセイ（ＥＣＬＩＡ）、解離増強ランタニド蛍光免疫アッセイ（ＤＥＬＦＩＡ）、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）、比濁法、比朧法、ラテックス増強比濁法またはラテックス増強比朧法、固相免疫試験、および質量分析、例えば、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ、またはキャピラリー電気泳動−質量分析（ＣＥ−ＭＳ）が挙げられる。当技術分野で公知のさらなる方法（例えば、ゲル電気泳動、２Ｄゲル電気泳動、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、ウェスタンブロッティング）を、単独でまたは標識化もしくは先に記載の他の検出法と組み合わせて、使用することが可能である。
【００９４】
好ましいリガンドとしては、抗体、核酸、ペプチドまたはポリペプチド、およびアプタマー（例えば、核酸アプタマーまたはペプチドアプタマー）が挙げられる。そのようなリガンドに対する方法は、当技術分野で周知である。例えば、好適な抗体またはアプタマーの特定法および産生法もまた、供給業者により提供される。当業者は、より高い親和性または特異性を有するそのようなリガンドの誘導体の開発方法に精通している。例えば、ランダム突然変異を核酸、ペプチド、またはポリペプチドに導入することが可能である。次に、当技術分野で公知のスクリーニング手順、例えば、ファージディスプレイにより、これらの誘導体を結合に関して試験することが可能である。
【００９５】
本明細書中で使用される「抗体」という用語は、ポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体の両方、更にはそれらのフラグメント、例えば、抗原またはハプテンに結合可能なＦｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ）２フラグメントを包含する。
【００９６】
他の好ましい実施形態では、好ましくは核酸、ペプチド、ポリペプチドよりなる群から、より好ましくは核酸、抗体、またはアプタマーよりなる群から選択されるリガンドは、アレイ上に存在する。
【００９７】
該アレイは、対象のペプチド、ポリペプチド、または核酸に対して特異性を有する少なくとも１種の追加のリガンドを含む。該追加のリガンドはまた、本発明に関連する特定の対象でないペプチド、ポリペプチド、または核酸に対して特異性を有していてもよい。好ましくは、本発明に関連する少なくとも３種、好ましくは少なくとも５種、より好ましくは少なくとも８種の対象ペプチドまたは対象ポリペプチドに対するリガンドが、アレイ上に含まれる。
【００９８】
本発明では、「アレイ」という用語は、少なくとも２種の化合物が一次元、二次元、もしくは三次元の配置で付着または結合する固相もしくはゲル状の担体を意味する。そのようなアレイ（例えば、「遺伝子チップ」、「タンパク質チップ」、抗体アレイなど）は、当業者に広く知られており、典型的にはガラス製顕微鏡スライド上、特にコーティングガラススライド上、例えば、ポリカチオン、ニトロセルロース、もしくはビオチンでコーティングされたスライド上、カバースリップ上、および膜上、例えば、ニトロセルロースまたはナイロンをベースとする膜上に作製される。
【００９９】
アレイは、結合リガンドまたはそれぞれ少なくとも１種のリガンドを発現する少なくとも２種の細胞を含む。
【０１００】
本発明に係るアレイとして「サスペンジョンアレイ」を使用することも考えられる（Nolan JP, Sklar LA. (2002). Suspension array technology: evolution of the flat-array paradigm. Trends Biotechnol. 20(1):9-12）。そのようなサスペンジョンアレイでは、マイクロビーズやマイクロスフェアなどの担体は、懸濁状態で存在する。アレイは、様々なリガンドを担持する様々なマイクロビーズまたはマイクロスフェア（標識化されていてもよい）で構成される。
【０１０１】
本発明は更に、少なくとも１種のリガンドを他のリガンドに加えて担体材料に結合してなる先に規定されるようなアレイの作製方法に関する。
【０１０２】
固相化学や光活性保護基などをベースとするそのようなアレイの作製方法は、広く知られている（ＵＳ ５，７４４，３０５）。そのようなアレイはまた、物質または物質ライブラリーに接触させることにより、結合やコンフォメーション変化などの相互作用に関して試験することが可能である。従って、先に規定されるようなペプチドまたはポリペプチドを含むアレイは、該ペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合するリガンドを特定するために使用可能である。
【０１０３】
本発明に係る方法は、測定したレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、患者のリスクを診断するステップを含む。
【０１０４】
当業者であれば、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの種々の段階に関連する心臓ホルモンの既知のレベルを決定することが可能である。
【０１０５】
本発明では、「リスク」という用語は、特定の事象、より特定的には心血管合併症が発生する可能性を表す。リスクの段階は、増大しているか、大きく増大しているか、または非常に大きく増大している、とすることができる。リスクの段階はまた、増大していない可能性もある。「リスクの増大なし」とは、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクが見かけ上存在しないことを意味する。
【０１０６】
どのレベルがリスクのどの段階に関連するかに関する指標は、心血管疾患の存在または重症度に関連する公知の心臓ホルモンのレベルから導出することが可能である。例えば、５０歳未満の個体で得られた９７．５百分位数に基づいて、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベル１２５ｐｇ／ｍｌを正常レベルであるとみなした（実施例３参照）。より高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、例えば、ＮＹＨＡ分類に基づく症状レベルおよびＬＶＥＦの悪化レベルと相関する。「血漿レベル」という用語は、血漿中で測定されるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのレベルを表す。
【０１０７】
心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの指定の段階に関連すると一般にみなされるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルを以下に示す。
【０１０８】
以下に示したレベルは、患者のリスクの第１の分類としての役割を果たすにすぎないことは明らかである。例えば、リスクはまた、特定の患者の心臓の余剰ポンプ容量に依存する。
【０１０９】
既知レベルの値はまた、診断の所望の感度または特異性に応じて選択することが可能である。所望の感度が高いほど、診断の特異性は低く、その逆も成り立つ。例えば、リスクを規定するために選択されるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの既知レベルが高いほど、診断の特異性は高いであろう。しかしながら、診断の感度は、より低いであろう。
【０１１０】
そのほかに、当業者であれば、以下に更に示される実施例から、他の適合するレベル、特に、高齢患者や甲状腺機能のマーカー（例えば、ＴＳＨまたはＦＴ４）のレベルが増大または低減した患者のような特定の患者集団において適合するレベル、を決定することが可能である。
【０１１１】
典型的には、５０ｐｇ／ｍｌ未満のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルは、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連しない。特に、男性患者では、約６０〜１００ｐｇ／ｍｌ未満の血漿レベルは、リスクの増大に関連せず、女性患者では、約１２０〜１５０ｐｇ／ｍｌ未満の血漿レベルは、リスクの増大に関連しない。平均値は１２５ｐｇ／ｍｌである。
【０１１２】
典型的には、リスクの増大なしに対する血漿レベルよりも高いが１０００ｐｇ／ｍｌよりも低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルは、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する。
【０１１３】
典型的には、１０００〜５０００ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルは、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの大きな増大に関連する。
【０１１４】
典型的には、５０００ｐｇ／ｍｌよりも高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルは、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの非常に大きな増大に関連する。
【０１１５】
患者のリスクが診断されれば、以下に記載されるような後続治療の結果を有しうる。以下に記載のリスクの段階は、特に、以上に記載のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのレベルに関連するリスクの段階を意味する。
【０１１６】
本発明に係る方法によりリスクの増大なしと示唆された場合、計画通り治療を継続しうる。
【０１１７】
本発明に係る方法によりリスクの増大が示唆された場合、治療を適合化させることができる。好ましくは、治療は、本発明に係る心臓ホルモンのレベルのさらなる測定およびさらなる診断、例えば、心電図検査、心エコー検査、または熟練心臓病専門医に公知の任意の他の好適な方法を伴うであろう。心臓毒性医薬の用量を減少させてもよく、かつ／または心臓毒性のより低いタイプの医薬を治療に供すべく選択してもよい。そのほかに、治療の適合化としては、塩分摂取の制限、定期的な適度の運動、非ステロイド系抗炎症剤の回避、インフルエンザおよび肺炎球菌の予防接種の実施、利尿剤（２種以上の利尿剤の共投与を包含する）、ＡＣＥ阻害剤、βアドレナリンブロッカー、アンギオテンシン受容体ブロッカー、ジギタリスなどの薬物の投与のような手段、および公知で当業者により適切であるとみなされる任意の他の手段が挙げられる。従って、本発明はまた、心臓毒性医薬を投与されているかまたは投与されようとしている患者を治療する方法を提供する。
【０１１８】
本発明に係る方法によりリスクの大きな増大が示唆された場合、リスクの増大に関して記載されるように治療を適合化させることができる。しかしながら、いずれかの心臓毒性医薬が許容されうるか再検討することも可能である。
【０１１９】
本発明に係る方法によりリスクの非常に大きな増大が示唆された場合、リスクの大きな増大に関して記載されるように治療を適合化させることができる。しかしながら、即時入院および／または集中的心臓治療も考えられる。
【０１２０】
他の実施形態では、本発明は、心臓毒性医薬を用いた患者の治療を決定する方法に関する。該方法は、以下のステップ：（ａ）好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、心臓ホルモンのレベルを測定するステップ、（ｂ）測定された該心臓ホルモンレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、計画された治療の結果として患者が心血管合併症に罹患するリスクを診断するステップ、（ｃ）任意により心臓病専門医による患者の診察を開始するステップ、（ｄ）任意により心臓病専門医による患者の診察の結果を考慮して、治療を開始することまたは治療を避けることを推奨するステップを含む。好ましくは、心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの存在が本方法により示唆された場合、心臓病専門医による診察を開始することおよび／または治療を避けることを推奨する。本明細書に記載の本発明のすべての実施形態または好ましい態様に基づいて本方法を適合化させうることは明らかである。
【実施例】
【０１２１】
以下の実施例により本発明について説明する。
【０１２２】
実施例１
ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの測定：
Ｅｌｅｃｓｙｓ ２０１０を用いて電気化学発光免疫アッセイ（Ｅｌｅｃｓｙｓ ｐｒｏＢＮＰサンドイッチ免疫アッセイ；Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）により、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを測定した。電気化学発光サンドイッチ免疫アッセイの原則に従ってアッセイを行う。第１のステップでは、ビオチン標識化ＩｇＧ（１−２１）捕捉抗体、ルテニウム標識化Ｆ（ａｂ’）２（３９−５０）シグナル抗体、および２０マイクロリットルのサンプルを３７℃で９分間インキュベートする。その後、ストレプトアビジンコーティング磁気マイクロ粒子を添加し、混合物を更に９分間インキュベートする。第２のインキュベーションの後、反応混合物をシステムの測定セルに移して、ビーズを電極の表面に磁気的に捕捉する。測定セルを緩衝液で洗浄することにより、未結合標識を除去する。
【０１２３】
最後のステップでは、トリプロピルアミン含有緩衝液の存在下で電極に電圧を印加し、得られた電気化学発光シグナルを光電子増倍管により記録する。すべての試薬およびサンプルをＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）装置により完全に自動で操作する。二点検量により装置固有に作成された検量線と試薬バーコードにより提供されたマスターカーブとを利用して、結果を定量化する。製造業者の使用説明書に従って試験を行った。
【０１２４】
実施例２
分析：
５０００Ｕのアプロチニン（Trasylol, Beyer, Germany）を入れたＥＤＴＡ管および必要に応じてリチウムヘパリン管（臨床化学用）にホルモン分析用の血液のサンプルを採取した。直ちに、血液および尿のサンプルを３４００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心した。上清を分析まで−８０℃で貯蔵した。
【０１２５】
ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰの測定：
同一のウサギ抗ラットｐｒｏＡＮＰポリクロナール血清、標準としてPeninsula Lab (Bachem Ltd, St. Helene, UK)製のヒトｐｒｏＡＮＰ（１−３０）、および放射性標識化に供すべくＨＰＬＣにより精製したヨウ素化ｐｒｏＡＮＰ １−３０を用いて、Sundsfjord, J.A., Thibault, G.ら(1988)（Identification and plasma concentrations of the N-terminal fragment of proatrial natriuretic factor in man. J Clin Endocrinol Metab 66:605-10.）に変更を加えた磁気固相技術を用いる競合結合放射免疫アッセイにより、ＮＴ−ｐｒｏＡＮＰを測定した。高感度かつ良好な精度を達成するために、固相および二次抗体として、ヒツジ抗ウサギＩｇＧを有するＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ２８０（Dynal Biotech, Oslo, Norway）を使用した。４２５、１１６３、および２４９０ｐｍｏｌ・ｌ−１における変動係数は、それぞれ、７．５、３．７、および３．４％であった。検出限界は、３０ｐｍｏｌ／ｌであった。
【０１２６】
ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの測定：
Ｅｌｅｃｓｙｓ ２０１０を用いて電気化学発光免疫アッセイ（Ｅｌｅｃｓｙｓ ｐｒｏＢＮＰサンドイッチ免疫アッセイ；Roche Diagnostics, Basel, Switzerland）によりＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを測定した（Mueller, T., Gegenhuber, A. (2003). Comparison of the Biomedica NT-proBNP enzyme immuno assay and the Roche NT-proBNP chemiluminescence immuno assay: implications for the prediction of symptomatic and asymptomatic structural heart disease. Clin. Chem. 49:976-9）。実施例１も参照されたい。平均アッセイ内変動は、４．３％であった（範囲：７．６〜２７３２ｐｍｏｌ・ｌ−１の濃度を有する血漿サンプルで２．７〜５．９％、アッセイ間変動３．２％）。下方検出限界は、０．６ｐｍｏｌ・ｌ−１であった。
【０１２７】
実施例３
供血者のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルに関する試験：
University of Mainz, Germanyの輸血部門から合計１９８１名の供血者を集めた。供血者の大多数は反復供与者であった。また、反復供与者は、１年間隔で健康診断を受ける。この健診に基づいて、試験に組み込まれた供血者はすべて、臨床的に健常であるとみなされた。献血時、ヘモグロビンレベルおよびクレアチニンレベルを調べた。献血前にすべての測定を行った。試験は、ヘルシンキ宣言に準拠して行われ、地域の倫理委員会により承認された。
【０１２８】
図１に示されるように、各ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は、年齢および性別に対してプロットされている。図１から明らかなように、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベル（メジアン）は、男性よりも女性のほうが高かった。高齢の個体（年齢５０歳超）では、外れ値がより高頻度で観測されたが、若齢の個体（年齢５０歳未満）では、各測定値はクラスター化していた。９７．５百分位数に基づいて、年齢および性別に関連する参照値を計算したところ、それぞれ年齢５０歳未満において、男性では８４．２ｐｇ／ｍｌおよび女性では１４６．２ｐｇ／ｍｌであることがわかった（表１）。
【表１】
2008502888.tif 000003
【０１２９】
表２からわかるように、上記の範囲から外れたすべての個体から約１２ヶ月間隔で第２のサンプルを採取したところ、サンプルの大多数がそれぞれの参照範囲から外れたままであったことから、これらの高値は定常的に観察される知見であることが示唆された。範囲を外れた初期値を有する第２のサンプルに示される個体の小さなサブセットは、所定の参照範囲内にあるとみなされる値を有していた。
【０１３０】
ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値がヘモグロビンレベルに依存しないかを評価するために、男性および女性でヘモグロビン濃度を測定したところ、男性よりも女性のほうが平均で１．５ｇ／ｍｌ低いことがわかった（図２）。ヘモグロビンレベルは、年齢に依存しなかった。
【表２】
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【０１３１】
同一のヘモグロビンレベルでかつ年齢の一致する群で男性と女性との間でＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値を比較した場合、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルに関して依然として男性と女性との間で差が存在したことから、ヘモグロビンレベルは男性と女性との間で見いだされたＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの異なる濃度を説明するものではないことが示唆された。また、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、実際上、ヘモグロビン依存性であり、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、ヘモグロビン濃度の減少に伴って増大することが明らかになった（図２）。
【０１３２】
あるサブセットの個体でクレアチニンレベルをＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルと比較した。試験した群では、クレアチニンレベルは、試験したすべての個体で正常な範囲内にあった。クレアチニンレベルは年齢と共に増大することはなかったが、これとは対照的にＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは年齢と共に増大したことから、腎機能は年齢の増加に伴うＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの増大を引き起こす可能性はないことが示唆された（表３）。
【表３】
2008502888.tif 000005
【０１３３】
外見上健常な集団で正常および参照のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値を決定すべく試験を開始した。示されるように、各ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、ごく少数の外れ値を有して年齢５０歳までクラスター化された。この知見は、心臓疾患、特に心血管疾患がこの年齢群では稀であるという仮定と一致しているので、９７．５百分位数に基づいて、５０歳未満の個体で得られた値を正常値とみなした。これらの値はまた、男性と女性との間で異なることがわかった。より少ないヘモグロビンを有する個体がより高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有していたことから、実際上、ヘモグロビンレベルがＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのレベルに影響を及ぼすことも実証することができた。同一のヘモグロビンレベルで見た場合、依然として男性と女性との間で差が存在した。従って、ヘモグロビンレベルは、両性別間で見られたＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルの差を説明するものではなかった。
【０１３４】
この試験から、多くの個体が、５０歳未満の個体の９７．５百分位数を超えるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有することが実証された。これらの外れ値を有する患者の数は、年齢と共に増大した。ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルの測定は、実施例１に記載されるようにＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）免疫アッセイにより行った。
【０１３５】
実施例４
心臓障害が疑われる患者におけるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルに関する試験：
１８名の心臓病専門医の診察を受けている合計４７３名の患者を試験のために集めた。患者は、病歴聴取、健康診断、および左室駆出率が記録される心エコー図検査を受けた。そのほかに、１０ｍｌの血液を採取し、遠心分離し、そして分析時まで−２０℃で貯蔵した。この試験に組み込まれた患者の主な個体群統計学的変数を表４に示す。試験は、地域の倫理委員会により承認され、ヘルシンキ宣言に準拠して行われた。
【表４】
2008502888.tif 000006
【０１３６】
全員または大多数の患者で次の試験を行った：クレアチニンレベル、ＴＳＨ、ＦＴ４、およびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ。製造業者（Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）の使用説明書に従って試験を行った。最近開発された免疫アッセイ（Roche Diagnostics, Mannheim, Germany）を用いてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）２０１０装置によりＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを分析した（実施例１参照）。
【０１３７】
Ｗｉｌｃｏｘｏｎスコア法およびＰｅａｒｓｏｎ χ２検定に基づいて有意性を計算した：ｐ値＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１のとき、有意性が存在する。誤差の確率は、５％を超えてはならない。
【０１３８】
左室駆出率（ＬＶＥＦ）に基づいて、患者を３つの群に分けた。即ち、３０％未満のＬＶＥＦ、３０〜５０％のＬＶＥＦ、および５０％超のＬＶＥＦ。また、グレードＩ〜ＩＶのＮＹＨＡ分類に基づいて、患者を等級付けした。
【０１３９】
表５に示されるように、左室駆出率のレベルに基づいてかつ症状に基づいて、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを記録した。男性では８４ｐｇ／ｍｌおよび女性では１４６ｐｇ／ｍｌのカットオフを使用した場合（これは、正常な心臓機能と異常な心臓機能とを識別する）、大多数の個体は、増大したＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有していた（実施例１参照）。平均ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、ＮＹＨＡ分類により評価される症状レベルと共にかつエコーにより測定される駆出率の悪化レベルと共に、増大した。左室駆出率へのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの依存性を男性および女性についてそれぞれ図３および４にまとめる。図からわかるように、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベル（メジアン）は、駆出率の減少に伴って増大した。
【表５】
2008502888.tif 000007
【０１４０】
表６に示されるように、心臓病専門医センターで試験のために集められた個体のうちのごく少数は、５０歳未満の供血者の試験から作成されたカットオフに基づいて正常なＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有していた（実施例３参照）。正常なＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は、悪化のない左室駆出率を有しかつ症状を有していない個体としてクラスター化され、ごくわずかの外れ値が確認された。
【表６】
2008502888.tif 000008
【０１４１】
合計３２名の個体は、心電図（ＥＣＧ）により示される心房細動を有していたが、大多数の個体は、心房細動の所見を有していなかった。表７からわかるように、心房細動群のメジアン値は、非心房細動群の場合よりも高かった。これらの患者群に対する主な個体群統計学的変数を示す。心房細動を有していない個体は、より高頻度で心筋梗塞および狭心症の病歴を有していた。データから、心房細動はＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルの上昇に対する独立寄与因子であることが示唆される（Ｐ：０．０００２）。
【表７】
2008502888.tif 000009
【０１４２】
合計７８名の個体は、心筋梗塞（ＭＩ）の病歴を有していたが、大多数は、ＭＩの病歴を有していなかった。心筋梗塞の病歴を有する個体は、ＭＩの病歴を有していない個体よりも高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有していた（表８）。
【表８】
2008502888.tif 000010
【０１４３】
ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は、狭心症の病歴を有していない個体よりも狭心症の病歴を有する個体のほうが高かった（表９）。狭心症の病歴を有する患者は、症候性であることはあまりなく、より高頻度で心疾患を有し、より高頻度で心筋梗塞の病歴を有していた（表８）。
【表９】
2008502888.tif 000011
【０１４４】
４７０名の個体でクレアチニンを測定した。１５２名の個体だけが、正常な範囲内のクレアチニンレベルを有し、３１８名は、正常な範囲から外れていた。高クレアチニンレベルを有する個体は、正常なクレアチニンレベルを有する個体よりも高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有していた。高クレアチニンレベルを有する個体は、より高頻度で心筋梗塞の病歴を有することが個体群統計学的変数から示唆される。ＭＩの病歴（ＡＭＩ）を有する患者を評価から除外した場合、腎機能自体の悪化は、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルの増加に寄与する可能性があることがデータから示唆される（表９）。
【表１０】
2008502888.tif 000012
【０１４５】
３０６名の個体のサブグループで、甲状腺機能を測定した。ＴＳＨおよびＦＴ４のレベルに基づいて、患者を正常な甲状腺機能を有する個体と異常な甲状腺機能を有する個体とに分けた。異常な甲状腺機能を有する個体の大多数は、高ＴＳＨレベルを有していたが、ＦＴ４は正常であったことから、代償的甲状腺機能低下が示唆される。メジアンＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、正常な甲状腺機能を有する個体よりも異常な甲状腺機能を有する個体のほうが高かった。このことから、甲状腺機能不全は、甲状腺機能の悪化を介して心臓機能の悪化に関連付けられる可能性が最も高い高ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルに対する寄与因子であることが示唆される（表１１）。
【表１１】
2008502888.tif 000013
【０１４６】
供血者で得られたデータ（実施例３）と比較した場合、心臓病専門医の診察を受けている患者の大多数は高ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを有することが本データから示唆される。ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、症状のレベルと共にかつ左室駆出率の悪化と共に増大した。高ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルが無症候の個体および悪化した駆出率を有する個体で記録されたという事実から、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰは心臓病専門医により用いられる現在の最も基準となる方法よりも早期に心臓合併症を見分けることが示唆される。本試験において、心臓合併症の所見を有する一群の患者では、腎機能は、クレアチニンレベルに基づいて高頻度で悪化していることがわかった。このことは、類似の年齢の集団で顕著に低い正常なクレアチニンレベルが見いだされた供血者の試験（実施例３参照）とは対照的である。腎機能と心臓合併症の両要素を考慮に入れる必要があることが本試験から示唆され、さらに、軽度〜中等度の腎機能不全は、心臓合併症の診断および評価において、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値の解釈に影響を及ぼさないことがデータから示唆される。
【０１４７】
そのほかに、甲状腺機能不全は心機能不全に関連する可能性がありかつ高ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルに寄与する可能性があることがデータから示唆される。
【０１４８】
実施例６
貧血を併発している４６歳の腫瘍患者の治療の選択肢について検討する。アントラサイクリンを用いる治療は、好ましい選択肢であるように思われる。心血管合併症のリスクを診断するために、患者のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値を求める。８００ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は、心血管合併症のリスクの増大を示唆するが、心エコー図は変化しない。アントラサイクリンを用いる治療を開始し、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値を短い間隔でモニタリングする。心エコー図および超音波検査では変化は見られないが、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は３５００ｐｇ／ｍｌの値に増大している。これらの値に基づいて、心血管合併症に罹患するリスクの大きな増大が診断される。医師は、治療を中断すべきか、ヘモグロビン値を増大させるべきか、または心臓療法を開始すべきかについて検討する。
【０１４９】
実施例７
初診時に１２００ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値を有する６２歳のうつ病患者は、三環系抗うつ剤で治療されている。心機能不全が疑われるので、ＥＣＧ、心エコー図、およびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰにより、定期的に患者を追跡する。二週間の間隔で測定した場合、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は、２０５０ｐｇ／ｍｌまで顕著に増大する。それと同時点で、ＥＣＧおよび心エコー図は、変化しないままである。患者は、ループ利尿剤を含む心機能不全のより強い治療を受ける。その後、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ値は減少し、代替抗うつ剤療法が検討される。
【０１５０】
実施例８
慢性Ｃ型肝炎（主に遺伝子型１）に罹患している４８名の患者を５００万単位の非ペグ化インターフェロンα２ｂで週３回４８週間にわたり治療した。追加的に、患者にリバビリンを投与した。サンプルを採取し、治療開始前、２４週間後、４８週間後、および９６週間後に、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを測定した。すべての患者の測定されたＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルは、治療中に増大した（メジアン：記載の時点で３７．１、４４．３、５２．４、および４９ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）。しかしながら、治療開始前に既に増大したＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベル（３６８ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）を示した１名の患者は、後で、臨床的に明らかな心不全を発症した。この患者はまた、他の患者よりも治療中にＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのより大きな増大を示した（測定されたレベルは、３６８、６９６、３７６、および４１３ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰであった）。それと比較して、他の４７名のすべての患者で測定されたＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの最高レベルは、記載の時点で約２００、３７０、２８０、４３０ｐｇ／ｍｌであった。９６週間後に他の患者で測定された最高レベル（４３０ｐｇ／ｍｌ）の次のレベルは、約２８０ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰであった。従って、本発明によれば、治療開始前に３６８ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを示す患者で心血管合併症に罹患するリスクがあると診断することが可能である。
【０１５１】
実施例９
乳癌に罹患している９８名の患者をアントラサイクリンで治療する。治療を開始する前、１名の患者は、既に増大したＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルを示す。治療中、この患者のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの測定レベルは、大きく増大する。この患者は心不全を発症する。心不全の臨床症状が明らかになる前に、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルの増大が見られる。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１】年齢１８〜６５歳（１８〜２９歳、３０〜３９歳、４０〜４９歳、５０〜５９歳、６０〜６５歳）の供血者（ｎ＝２９４８）におけるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベル（メジアン）の度数分布。Ｍ、男性；Ｆ、女性。
【図２】供血者のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベルおよびヘモグロビンレベルとの関係。ｍ、男性（菱形）；ｆ、女性（正方形）、ｔ、全体（三角形）。
【図３】ＬＶＥＦに対応させた男性のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベル。
【図４】ＬＶＥＦに対応させた女性のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰレベル。
【図１】
2008502888.tif 000014
【図２】
2008502888.tif 000015
【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年2月14日(2007.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための方法であって、該診断は該心臓毒性医薬を用いた治療が開始される前に行われ、以下のステップ：
ａ）  好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、心臓ホルモンのレベルを測定するステップ、
ｂ）  測定したレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、該患者のリスクを診断するステップ
を含む、上記方法。
【請求項２】
前記心臓ホルモンがナトリウム利尿ペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓ホルモンが、ＡＮＰ型ペプチドもしくはその変異体および／またはＢＮＰ型ペプチドもしくはその変異体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記心臓ホルモンがＢＮＰ型ペプチドまたはその変異体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＢＮＰ型ペプチドがＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはその変異体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
男性患者での６０ｐｇ／ｍｌより高くかつ１０００ｐｇ／ｍｌより低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
女性患者での１２０ｐｇ／ｍｌより高くかつ１０００ｐｇ／ｍｌより低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
１０００〜５０００ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの非常な増大に関連する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
５０００ｐｇ／ｍｌより高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの非常な増大に関連する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記心臓毒性医薬が、抗新生物薬、三環系抗うつ剤、多発性硬化症薬、局所麻酔薬、インターフェロンα、コカイン、アンドロゲン、同化剤、およびＨＩＶ抗ウイルス薬からなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記心臓毒性医薬が、抗新生物薬、特にアントラサイクリンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記心血管合併症が、冠動脈心疾患、急性冠症候群、心筋梗塞、左室機能不全、またはうっ血性心不全である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
診断ステップが、リスクのモニタリングまたは確認と関連付けられる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記心臓ホルモンのレベルを、特異的結合リガンド、アレイ、微小流体デバイス、化学発光分析器、またはロボット化デバイスを用いて測定する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記特異的結合リガンドが、抗体またはアプタマーである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記特異的結合リガンドが標識されている、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための、患者の心臓ホルモン、特にナトリウム利尿ペプチドのレベルを、好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで測定することが可能な診断手段の使用であって、該診断は該心臓毒性医薬を用いた治療が開始される前に行われる、上記使用。
【請求項１８】
心臓毒性医薬を用いた患者の治療を決定する方法であって、以下のステップ：
（ａ）  好ましくはｉｎ ｖｉｔｒｏで、心臓ホルモンのレベルを測定するステップ、
（ｂ）  測定された該心臓ホルモンレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、計画された治療の結果として患者が心血管合併症に罹患するリスクを診断するステップ、
（ｃ）  任意により心臓病専門医による患者の診察を開始するステップ、
（ｄ）  該方法が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクの存在を示唆する場合、該治療を避けることを推奨するステップ
を含む、上記方法。
【手続補正書】
【提出日】平成19年7月11日(2007.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者が心臓毒性医薬の結果として心血管合併症に罹患するリスクを診断するための方法であって、該診断は該心臓毒性医薬を用いた治療が開始される前に行われ、以下のステップ：
ａ）  ｉｎ ｖｉｔｒｏで心臓ホルモンのレベルを測定するステップ、
ｂ）  測定したレベルを、患者でのリスクの種々の段階に関連する既知のレベルと比較することにより、該患者のリスクを診断するステップ
を含む、上記方法。
【請求項２】
前記心臓ホルモンがナトリウム利尿ペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓ホルモンが、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはその変異体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
男性患者での６０ｐｇ／ｍｌより高くかつ１０００ｐｇ／ｍｌより低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
女性患者での１２０ｐｇ／ｍｌより高くかつ１０００ｐｇ／ｍｌより低いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの増大に関連する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
１０００〜５０００ｐｇ／ｍｌのＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの非常な増大に関連する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
５０００ｐｇ／ｍｌより高いＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの血漿レベルが、心血管合併症に罹患するリスクの非常な増大に関連する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記心臓毒性医薬が、抗新生物薬、三環系抗うつ剤、多発性硬化症薬、局所麻酔薬、インターフェロンα、コカイン、アンドロゲン、同化剤、およびＨＩＶ抗ウイルス薬からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記心血管合併症が、冠動脈心疾患、急性冠症候群、心筋梗塞、左室機能不全、またはうっ血性心不全である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
2008502888.tif 000018
2008502888.tif 000019
2008502888.tif 000020