(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）2008523072.tif 000078（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｇ、およびＱは、本明細書において規定されている）を有する化合物を目的とする。本発明の化合物は、タンパク質キナーゼの阻害剤として有用である。本発明はまた、上記式による化合物を含んでいる組成物も目的とする。本発明はまた、タンパク質キナーゼの開（ｏｐｅｎ）コンホメーションを安定化する化合物、開コンホメーションにある結晶化されたタンパク質キナーゼ、およびこれらの使用も目的とする。本明細書に記載されている化合物および組成物は、炎症性状態または炎症性疾患を処置および予防するのに有用である。
2008523072.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2008523072.tif 000075
の化合物、または薬学的に受容可能なその塩であって、式中、
Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１またはＲ６−Ｌ２であり；
Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、およびＣ１−６ジアルキルアミノからなる群から独立して選択されるか、あるいはまた、Ｒ２およびＲ３は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、５〜８員環を形成し；
Ｒ４は、
【化２】
2008523072.tif 000076
であって、式中、Ｘ１およびＸ２は、独立して（ＣＲ７Ｒ８）ｎであり、ここで、ｎは、各々の存在において独立して１、２、または３であり、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＨＮ−ＳＯ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ５は、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−６ジアルキルアミノカルボニル、フェニル、およびメトキシフェニルからなる群から独立して選択された１またはそれ以上の基で場合により置換された、１個、２個、３個、または４個のヘテロ原子を含有する５員または６員のアリールまたはヘテロアリール環であり；
Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ２−、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＸ２−、または−ＣＸＨ−であり、ここで、Ｘはハロゲンであり；
Ｒ６は、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルであり；そして
Ｌ２は、（ＣＲ９Ｒ１０）ｍであり、ここで、Ｒ９およびＲ１０の各々の存在は、ＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択され、ｍは、１、２、または３であり；
Ｑは、各々が、Ｒ１１およびＲ１２の１またはそれ以上で場合により置換された５員ヘテロアリール環のジラジカルであり、；
Ｇは、場合により置換されたＣ１−３アルキレンのリンカー、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、または単結合であり；
Ｒ７およびＲ８は、各々の存在において独立して、水素、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルコキシカルボニル、ヒドロキシメチル、アミノメチル、Ｃ１−４アルキルアミノメチル、およびＣ１−４アルキルアミノカルボニルメチルであり；
Ｒ１１は、独立して、各々が場合により１個〜３個のフェニル基で置換されたＣ３−１０アルキルまたはＣ３−１０ハロアルキル；場合により１またはそれ以上のＣ１−３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで置換されたＣ３−７シクロアルキル；場合により置換されたＣ３−１０シクロヘテロアルキル；場合により一部または全部がハロゲン化されていてもよく、かつ場合により１個〜３個のＣ１−５アルキル基またはフェニル基で置換されたＣ３−１０分岐アルケニル；場合により１個〜３個のＣ１−３アルキル基で置換されたＣ５−７シクロアルケニル；シアノ；またはＣ１−４アルコキシカルボニルであり；そして
Ｒ１２は、Ｃ１−５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５ジアルキルアミノ、または場合により置換されたフェニルである、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１であり、Ｒ５はピリジル基であり、Ｌ１は、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｓ−からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１であり、Ｒ５はピリジル基であり、Ｌ１は−Ｏ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｑは、Ｃ１−５アルキル基で置換されたチエニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｑは、Ｃ１−５アルキル基で置換されたピラゾリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４は、
【化３】
2008523072.tif 000077
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１−オキソチオモルホリン−４−イル、および１，１−ジオキソチオモルホリン−４−イルからなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２は、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、オキソピペラジニル、オキソジアゼパニル、およびジオキソチアジアゼパニルからなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ１およびＸ２は、独立してメチレン、エチレン、またはプロピレンである、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｇは−Ｃ（Ｏ）−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２およびＲ３は、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、およびアミノからなる群から独立して選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１は、場合により置換されたピリジルオキシであり；Ｑは、場合により置換されたチエニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１は、場合により置換されたピリジルオキシであり；Ｑは、場合により置換されたピラゾリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−［１，２，５］チアジアゼパン−５−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−オキソ−ピペラジン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；および
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−［１，４］ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレアからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルメトキシ）フェニル）ウレア；
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１−オキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルメチル）フェニル）ウレア；および
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；または薬学的に受容可能なこれらの塩
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
タンパク質キナーゼ；および請求項１に記載の化合物を含む組成物。
【請求項１８】
炎症性状態または炎症性疾患の処置または予防の方法であって、請求項１に記載の化合物を、前記炎症性状態または炎症性疾患の処置または予防に十分な量で、このような処置または予防を必要としている被験者へ投与することを含む方法。
【請求項１９】
タンパク質キナーゼ媒介状態またはタンパク質キナーゼ媒介疾患の処置または予防の方法であって、請求項１に記載の化合物を、前記タンパク質キナーゼ媒介状態またはタンパク質キナーゼ媒介疾患の処置または予防に十分な量で、このような処置または予防を必要としている被験者に投与することを含む方法。
【請求項２０】
前記状態または疾患が癌である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
開コンホメーションにおけるタンパク質キナーゼの結晶形態の調製方法であって、請求項１に記載の化合物の存在下で前記タンパク質キナーゼを結晶化する工程を含む方法。
【請求項２２】
前記タンパク質キナーゼの前記結晶形態は、前記タンパク質キナーゼの三次元原子構造を決定するための使用に適している、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００４年１２月７日に出願された米国仮出願番号第６０／６３３，７２６号の優先権（ｂｅｎｅｆｉｔ）を主張する。これは、参照してその全体が本発明に組み込まれる。
【０００２】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、タンパク質キナーゼのコンホメーションモジュレータとして有用な、式Ｉの化合物に関する。これらの化合物はまた、タンパク質キナーゼの阻害にも有用である。本発明はまた、前記化合物を含んでいる組成物、およびタンパク質キナーゼ媒介状態を処置するか、またはタンパク質キナーゼを阻害するための、式Ｉの化合物の様々な使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
タンパク質キナーゼは、細胞プロセスの機能において死活にかかわる役割を果たす。特定の分子経路の活性化および不活性化は多くの場合、１またはそれ以上のタンパク質のリン酸化または脱リン酸化によって制御されている。
【０００４】
例えばマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ、例えばｐ３８キナーゼは、様々なストレス刺激に応答して活性化される。これは、炎症促進サイトカイン、内毒素、紫外線、および浸透圧衝撃を包含するが、これらに限定されるわけではない。ｐ３８の４つのイソ型が記載されてきた。αおよびβ形態が、炎症細胞中に発現され、ＴＮＦ−α生産のキーメディエーターであると考えられている。細胞中のｐ３８αおよびβの阻害は、結果としてＴＮＦ−αの発現レベルの減少を生じ、このような阻害剤は、炎症性疾患の動物モデルにおいて有効である。
【０００５】
ｐ３８の数多くの小分子阻害剤は、当業界において公知である。これらの化合物は、ｐ３８キナーゼの表面上の離散位置を結合することによって、これらの効果を及ぼすと考えられている。例えばあるいくつかのｐ３８阻害剤は、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１の生産を遮断し、ほかの阻害剤は、これらの二次的生物効果の多くを直接妨害しうる。
【０００６】
タンパク質は、いくつかの異なるコンホメーションにおいて存在しうる。これらのコンホメーションは、様々な方法において互いに異なることがある。例えば、これらのコンホメーションは、様々な三次元構成において存在する、異なる特異的アミノ酸を有しうる。より全体的な観点において、タンパク質は、その全体的な第三構造の異なる構成において存在しうる。例えばあるいくつかのタンパク質は、「開」コンホメーションおよび「閉」コンホメーションの両方において存在しうる。
【０００７】
タンパク質キナーゼの開コンホメーションを安定化しうる化合物は、キナーゼの作用を研究するためのツールとして貴重であろう。このような化合物はまた、多くの理由から、例えば薬品発見のためのツールとしても有用であろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明の第一の態様は、式Ｉの化合物に関する。
【０００９】
本発明の第二の態様は、式Ｉの化合物および適切なキャリヤまたは賦形剤を含んでいる組成物に関する。
【００１０】
本発明の第三の態様は、タンパク質キナーゼの活性の阻害または調節方法であって、タンパク質キナーゼと式Ｉの化合物とを接触させる工程を含む方法に関する。
【００１１】
本発明の第四の態様は、タンパク質キナーゼのコンホメーションの同定方法であって、式Ｉの化合物と錯体化されたタンパク質キナーゼの結晶を形成する工程を含む方法に関する。
【００１２】
本発明の第五の態様は、タンパク質キナーゼへ結合するか、またはこれを阻害しうる化合物の同定方法に関する。
【００１３】
本発明の第六の態様は、開コンホメーションを有するタンパク質キナーゼの結晶構造に関する。
【００１４】
本発明の第七の態様は、式Ｉの化合物と錯体化された結晶化タンパク質キナーゼに関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明は、タンパク質キナーゼへ結合し、タンパク質中にコンホメーション変化を誘発し、したがってタンパク質上のアロステリック部位が暴露されて安定化される化合物を提供する。このアロステリック部位は、第二化合物が結合してタンパク質の機能に影響を与えうるタンパク質キナーゼの区域である。このアロステリック部位の表示は、例えばタンパク質キナーゼを阻害しうる化合物を同定または設計するために有用である。
【００１６】
本発明の化合物はまた、あるいくつかの実施形態において、タンパク質キナーゼの阻害剤としても有用である。いくつかの実施形態における本発明の化合物は、次のキナーゼの１またはそれ以上の阻害剤として有用である：ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃ。別の実施形態において、この化合物は、次のキナーゼの１またはそれ以上の阻害剤である：ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃ。別の実施形態において、本発明による化合物は、次のキナーゼの１またはそれ以上の阻害剤である：ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、およびＴｒｋＢ。
【００１７】
さらにほかの実施形態において、本発明の化合物は、タンパク質キナーゼ媒介炎症およびほかの障害の処置において有用である。これは、骨吸収、受容者に対する移植片の反応、アテローム性動脈硬化症、関節炎、変形性関節症、関節リウマチ、痛風、乾癬、局所炎症性疾患状態、成人呼吸窮迫症候群、喘息、慢性肺炎症性疾患、慢性閉塞性肺疾患、心臓再灌流損傷、腎性再灌流損傷、血栓、糸球体腎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、内毒素性ショック、骨粗鬆症、アルツハイマー病、鬱血性心不全、アレルギー、癌、および悪液質を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００１８】
本発明の第一の態様は、式Ｉ：
【００１９】
【化４】
2008523072.tif 000003
の化合物、または薬学的に受容可能なその塩（式中、
Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１またはＲ６−Ｌ２であり；
Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、およびＣ１−６ジアルキルアミノからなる群から独立して選択されるか、あるいはまた、Ｒ２およびＲ３は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、５〜８員環を形成し；
Ｒ４は、
【００２０】
【化５】
2008523072.tif 000004
（式中、Ｘ１およびＸ２は、独立して（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ここで、ｎは、各々の存在において独立して１、２、または３である）であり、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＨＮ−ＳＯ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（Ｏ）−である）であり；
Ｒ５は、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−６ジアルキルアミノカルボニル、フェニル、およびメトキシフェニルからなる群から独立して選択された１またはそれ以上の基で場合により置換された、１個、２個、３個、または４個のヘテロ原子を含有する５員または６員のアリールまたはヘテロアリール環であり；
Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ２−、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＸ２−、または−ＣＸＨ−（ここで、Ｘはハロゲンである）であり；
Ｒ６は、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルであり；そして
Ｌ２は、（ＣＲ９Ｒ１０）ｍ（ここで、Ｒ９およびＲ１０の各々の存在は、ＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択され、ｍは、１、２、または３である）であり；
Ｑは、各々が場合により、Ｒ１１およびＲ１２の１またはそれ以上で置換された５員ヘテロアリール環のジラジカル（ｄｉｒａｄｉｃａｌ）であり、；
Ｇは、場合により置換されたＣ１−３アルキレンのリンカー、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、または単結合であり；
Ｒ７およびＲ８は、各々の存在において独立して、水素、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルコキシカルボニル、ヒドロキシメチル、アミノメチル、Ｃ１−４アルキルアミノメチル、およびＣ１−４アルキルアミノカルボニルメチルであり；
Ｒ１１は、独立して、各々が場合により１個〜３個のフェニル基で置換されたＣ３−１０アルキルまたはＣ３−１０ハロアルキル；場合により１またはそれ以上のＣ１−３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで置換されたＣ３−７シクロアルキル；場合により置換されたＣ３−１０シクロヘテロアルキル；場合により一部または全部がハロゲン化されていてもよく、かつ場合により１個〜３個のＣ１−５アルキル基またはフェニル基で置換されたＣ３−１０分岐アルケニル；場合により１個〜３個のＣ１−３アルキル基で置換されたＣ５−７シクロアルケニル；シアノ；またはＣ１−４アルコキシカルボニルであり；そして
Ｒ１２は、Ｃ１−５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５ジアルキルアミノ、または場合により置換されたフェニルである）。
【００２１】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を目的とする（式中、
Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１またはＲ６−Ｌ２であり；
Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、およびＣ１−６ジアルキルアミノからなる群から独立して選択されるか、あるいはまたＲ２およびＲ３は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、５〜８員環を形成し；
Ｒ４は、
【００２２】
【化６】
2008523072.tif 000005
（式中、Ｘ１およびＸ２は、独立して（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ここで、ｎは、各々の存在において独立して１、２、または３である）であり、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＨＮ−ＳＯ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（Ｏ）−である）であり；
Ｒ５は、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、およびＣ１−６ジアルキルアミノカルボニルからなる群から独立して選択された１またはそれ以上の基で場合により置換された１、２、または３窒素原子を含有する５員または６員のアリールまたはヘテロアリール環であり；
Ｌ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ２−、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＸ２−、または−ＣＸＨ−（ここで、Ｘはハロゲンである）であり；
Ｒ６は、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルであり；そして
Ｌ２は、（ＣＲ９Ｒ１０）ｍ（ここで、Ｒ９およびＲ１０の各々の存在は、ＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択され、ｍは、１、２、または３である）であり；
Ｑは、場合により、Ｒ１１およびＲ１２の１またはそれ以上で置換された５員ヘテロアリールのジラジカルであり；
Ｇは、場合により置換されたＣ１−３アルキレンのリンカー、Ｃ＝Ｏ、または単結合であり；
Ｒ７およびＲ８は、各々の存在において独立して水素、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルコキシカルボニル、ヒドロキシメチル、アミノメチル、Ｃ１−４アルキルアミノメチル、およびＣ１−４アルキルアミノカルボニルメチルであり；
Ｒ１１は、独立して、各々が場合により１個〜３個のフェニル基で置換されたＣ３−１０アルキルまたはＣ３−１０ハロアルキル；場合により１またはそれ以上のＣ１−３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで置換されたＣ３−７シクロアルキル；場合により置換されたＣ３−１０シクロヘテロアルキル；場合により一部または全部がハロゲン化されていてもよく、かつ場合により１個〜３個のＣ１−５アルキル基またはフェニル基で置換されたＣ３−１０分岐アルケニル；場合により１個〜３個のＣ１−３アルキル基で置換されたＣ５−７シクロアルケニル；シアノ；またはＣ１−４アルコキシカルボニルであり；そして
Ｒ１２は、Ｃ１−５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５ジアルキルアミノ、または場合により置換フェニルである）。
【００２３】
一実施形態において、本発明は、式Ｉ（式中、Ｒ１はＲ５−Ｌ１である）の化合物を目的とする。別の実施形態において、Ｒ１はＲ６−Ｌ２である。
【００２４】
一実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ２−である。別の実施形態において、Ｌ１は、−Ｏ−である。ほかの実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨＸ−、および−ＣＸ２−からなる群から選択される。
【００２５】
一実施形態において、Ｌ２は、メチレン、エチレン、またはプロピレンである。別の実施形態において、Ｌ２は、その置換基とともに、Ｃ３−６分岐アルキレンリンカーである。
【００２６】
一実施形態において、Ｒ１は、各々が場合により置換された４−ピリジルオキシまたは３−ピリジルオキシである。
【００２７】
一実施形態において、Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ、およびＣ１−６ジアルキルアミノからなる群から独立して選択される。適切なＲ２およびＲ３基は、水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、クロロエトキシ、ジクロロエトキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ブチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ、およびジイソプロピルアミノを包含するが、これらに限定されるわけではない。別の実施形態において、Ｒ２およびＲ３は、どちらも水素である。
【００２８】
別の実施形態において、Ｒ２およびＲ３はともに、１つの環を形成し、この場合、前記環は、フェニル環と融合され、これによって二環式環系を形成する。適切な環は、炭環式、ヘテロ環式、アリール環、非芳香族環、ヘテロアリール環などを包含する。ほかの実施形態において、Ｒ２およびＲ３は、３〜６員環を形成する。例えば一実施形態において、Ｒ２、Ｒ３、およびフェニル環はともに、ナフチル環を形成する。Ｒ２およびＲ３によって形成されたほかの適切な環系は、テトラヒドロナフチル、キノリニル、イソキノリニルなどを包含する。
【００２９】
別の実施形態において、Ｑは、各々が場合によりＲ１１およびＲ１２の１またはそれ以上で置換されたピロール、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、フラン、またはチオフェンジラジカルであってもよい。例えば上記実施形態の各々において、Ｑは、各々が場合によりＲ１１およびＲ１２の１またはそれ以上で置換されたチエニル、ピラゾリル、およびチアゾリルからなる群から選択される。あるいくつかの実施形態において、５員ヘテロ環は、Ｃ１−５アルキル基、好ましくは第三ブチル基で置換される。ほかの置換基は、メチル、エチル、およびイソプロピルを包含するが、これらに限定されるわけではない。別の実施形態において、Ｑは、場合により置換されたチエニルであり、例えば５位において、Ｃ１−５アルキル基で置換されている。
【００３０】
ほかの実施形態において、Ｑは、ウレアが２位へ結合され、Ｇが３位へ結合されたチエニル基である。あるいはまたＱは、ウレアが３位へ結合され、Ｇが２位へ結合されたチエニル基である。
【００３１】
別の実施形態において、Ｑは、Ｃ１−５アルキル基で置換されたピラゾリルである。
【００３２】
一実施形態において、Ｇは、場合により置換されたメチレン、エチレンのリンカー、またはプロピレンリンカーである。別の実施形態において、Ｇは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。代替実施形態において、Ｇは、単結合である。別の実施形態において、Ｇは、−（Ｏ）−である。
【００３３】
一実施形態において、Ｒ４は、
【００３４】
【化７】
2008523072.tif 000006
である。別の実施形態において、Ｒ４は、
【００３５】
【化８】
2008523072.tif 000007
である。ほかの適切な実施形態において、Ｘ１およびＸ２は、どちらも非置換Ｃ１−３アルキレン基である。ほかの実施形態において、Ｘ１およびＸ２は、どちらも非置換エチレンである。あるいくつかの実施形態において、Ｚは、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、および−ＮＨＳ（Ｏ）−からなる群から選択される。
【００３６】
Ｒ４の適切な値は、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、オキソピペラジニル、オキソジアゼパニル、およびジオキソチアジアゼパニルを包含する。ほかの適切な基は、１−オキソチオモルホリニル、１，１−ジオキソチオモルホリニル、４−モルホリニル、３−オキソピペラジニル、５−オキソ−１，４−ジアゼパニル、および１，１−ジオキソ［１，２，５］チアジアゼパニルを包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００３７】
ほかの適切なＲ４基は、次のものを包含する：
【００３８】
【化９】
2008523072.tif 000008
ほかの適切なＲ４基は、次のものを包含する：
【００３９】
【化１０】
2008523072.tif 000009
ほかの適切なＲ４基は、次のものを包含する：
【００４０】
【化１１】
2008523072.tif 000010
別の実施形態において、Ｒ５は、場合により上に記載されているように置換された１個、２個、３個、または４個のヘテロ原子を含有する、５または６員ヘテロアリール環である。例えばＲ５は、１または２窒素原子を含有する５または６員環であってもよく、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、またはＣ１−６ジアルキルアミノカルボニルによって置換されてもよい。あるいはまた、Ｒ５は、場合により置換されたフェニル環である。
【００４１】
一実施形態において、Ｒ５は、１、２、または３窒素原子を含有する６員環である。この６員環は場合により、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、およびアルコキシアルキルからなる群から選択された１またはそれ以上の置換基で置換されていてもよい。ほかの特定の実施形態において、Ｒ５は、ピリジル基、例えば２−ピリジル、３−ピリジル、または４−ピリジルである。
【００４２】
別の実施形態において、Ｒ５は、１、２、または３ヘテロ原子、例えば窒素、硫黄、および酸素、およびこれらの組み合わせを含有する９員二環式ヘテロアリール環である。このヘテロアリール環は場合により、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、およびＣ１−６ジアルキルアミノカルボニルからなる群から選択された１またはそれ以上の置換基で置換されてもよい。
【００４３】
ほかの適切なＲ５基は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イル、３，５−ジクロロピリジン−４−イル、フェニル、および３，４−ジフルオロフェニルを包含する。
【００４４】
別の実施形態において、Ｒ６は、モルホリニルまたはチオモルホリニルである。あるいはまた、Ｒ６は、テトラヒドロピラニルまたはテトラヒドロフラニルである。ほかの実施形態において、Ｒ６は、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルである。Ｒ６基の各々は、場合により置換されてもよい。あるいくつかの実施形態において、Ｒ６基は場合により、メチル、エチル、およびプロピルからなる群から独立して選択された１、２、または３置換基で置換されている。
【００４５】
別の実施形態において、Ｌ１は、Ｏ、Ｓ、または−ＣＨ２−である。別の実施形態において、Ｌ１は、−ＳＣＨ２−または−ＣＨ２Ｓ−である。別の実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ（ＯＨ）−または−Ｃ（Ｏ）−である。さらなる実施形態において、Ｌ１は、−ＣＸ２−または−ＣＸＨ−（ここでＸはハロゲンである）である。別の実施形態において、Ｌ１は、単結合である。
【００４６】
別の実施形態において、Ｌ２は、（ＣＲ９Ｒ１０）ｍ（ここで、Ｒ５およびＲ６の各々の存在は水素であり、ｍは、１、２、または３である）である。別の実施形態において、Ｌ２は、Ｃ１−４アルキル基で置換されたメチレン、エチレン、またはプロピレンである。別の実施形態において、Ｌ２は、メチレンリンカーである。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、式Ｉ（式中、Ｚは、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、またはＳ（Ｏ）２であり、Ｘ１およびＸ２は、どちらも非置換エチレンである）の化合物を目的とする。
【００４８】
別の実施形態において、ＱはＧおよびＲ４とともに、次のものから選択された基を形成する：
【００４９】
【化１２】
2008523072.tif 000011
別の実施形態において、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、およびＣ１−４アルコキシカルボニルからなる群から独立して選択される。ほかの実施形態において、Ｒ７およびＲ８の適切な値は、水素、メチル、エチル、イソプロピル、クロロ、フルオロ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ヒドロキシ、プロピルアミノ、メチルアミノカルボニル、メトキシカルボニル、およびエトキシカルボニルを包含する。
【００５０】
別の実施形態において、Ｒ９およびＲ１０は、水素、メチル、エチル、およびプロピルからなる群から独立して選択される。別の実施形態において、Ｒ９およびＲ１０は、水素、メチル、およびエチルなる群から独立して選択される。
【００５１】
別の実施形態において、Ｒ１１は、Ｃ３−１０アルキルおよびＣ３−１０ハロアルキルからなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒ１１は、場合により１またはそれ以上のＣ１−３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで置換されたＣ３−７シクロアルキルである。別の実施形態において、Ｒ１１は、場合により置換されたＣ３−１０シクロヘテロアルキルである。さらに別の実施形態において、Ｒ１１は、各々が場合により１個〜３個のＣ１−５アルキル基で置換されたＣ３−１０分岐アルケニルおよびＣ３−１０分岐ハロアルケニルからなる群から選択される。さらに別の実施形態において、Ｒ１１は、場合により１個〜３個のＣ１−５アルキル基で置換されたＣ５−７シクロアルケニル；シアノ；およびＣ１−４アルコキシカルボニルからなる群から選択される。Ｒ１１の適切な値は、プロピル、ブチル、ヘキシル、クロロブチル、シクロプロピル、シクロヘキシル、シクロヘキサノニルなどを包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００５２】
別の実施形態において、Ｒ１２は、Ｃ１−５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ、およびＣ１−５ジアルキルアミノからなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒ１２は、フェニルおよび置換フェニルからなる群から選択される。Ｒ１２の適切な値は、メチル、エチル、ブチル、フルオロ、ブロモ、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ブチルアミノ、ジイソプロピルアミノ、およびフェニルを包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００５３】
本発明の範囲内に入る化合物の第一下位分類は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、場合により置換されたピリジルオキシであり；Ｑは場合により置換されたチエニルである）の化合物を包含する。
【００５４】
化合物のこの第一下位分類の範囲内の一実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１−５アルキル、Ｃ１−５アルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５ジアルキルアミノ、シアノ、ハロゲン、カルボキシ、アミノカルボニル、およびＣ１−５アルコキシカルボニルからなる群から選択された１または２置換基を有する４−ピリジルオキシである。この第一下位分類の別の実施形態において、Ｒ１は、非置換４−ピリジルオキシである。
【００５５】
この第一下位分類の範囲内の別の実施形態において、Ｑは、非置換チエニルである。あるいくつかの実施形態において、このチエニル基は、２位または３位においてウレアのＮへ結合されている。ほかの実施形態において、このチエニル基は、５位においてＣ１−５アルキル基、例えば第三ブチル基で置換されている。
【００５６】
この第一下位分類の範囲内の別の実施形態において、Ｒ４は、各々が場合により置換されたモルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１−オキソチオモルホリン−４−イル、および１，１−ジオキソチオモルホリン−４−イルからなる群から選択される。
【００５７】
この第一下位分類の範囲内の別の実施形態において、Ｇは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）、およびＣＨ２Ｃ（Ｏ）からなる群から選択される。
【００５８】
本発明の範囲内に入る化合物の第二下位分類は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、場合により置換されたピリジルオキシであり；Ｒ４は、各々が場合により置換されたモルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１−オキソチオモルホリン−４−イル、および１，１−ジオキソチオモルホリン−４−イルからなる群から選択された基である）の化合物を包含する。
【００５９】
本発明の範囲内に入る化合物の第三下位分類は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、場合により置換されたピリジルオキシであり；Ｇは、ＣＨ２およびＣ（Ｏ）からなる群から選択される）の化合物を包含する。この第三下位分類の範囲内において、別の実施形態は、Ｒ２およびＲ３が水素であるような化合物を包含する。
【００６０】
別の実施形態において、本発明は、次の式の１つを有する、式Ｉによる化合物を目的とする：
【００６１】
【化１３】
2008523072.tif 000012
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｇ、およびＲ４は、上に規定されているとおりである）。
【００６２】
本発明のほかの実施形態は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する）の化合物を包含する。
【００６３】
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル基を形成し：
Ｒ１は、ピリジン−４−イルメチル基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１−オキシド−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル基を形成し；
Ｒ１は、ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル基を形成し；
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ基であり、ＧおよびＲ４はともに、１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル基を形成し；そして
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシであり、基ＧおよびＲ４はともに、チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し；式中、先行の下位基のいずれかは、場合により置換されていてもよい。
【００６４】
別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載されたアッセイにしたがって決定された場合、２μＭの濃度で、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のタンパク質キナーゼに対する阻害効果を有する、式Ｉの化合物を目的とする。本発明はまた、上に記載された化合物の下位分類のいずれか１つの化合物であって、本明細書に記載されたアッセイにしたがって決定された場合、２μＭの濃度で、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のタンパク質キナーゼに対する阻害効果を有する化合物を目的とする。一実施形態において、本発明はまた、上に記載された化合物の下位分類のいずれか１つの化合物であって、２μＭの濃度で、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のタンパク質キナーゼに対する阻害効果を有し、前記キナーゼが、セリン−トレオニンキナーゼである化合物も目的とする。代替実施形態において、本発明はまた、上に記載された化合物の下位分類のいずれか１つの化合物であって、２μＭの濃度で、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のタンパク質キナーゼに対する阻害効果を有し、前記キナーゼが、チロシンキナーゼである化合物も目的とする。もう一実施形態において、本発明はまた、上に記載された化合物の下位分類のいずれか１つの化合物であって、２μＭの濃度で、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のタンパク質キナーゼに対する阻害効果を有し、前記キナーゼが、マイトジェン活性化されたタンパク質キナーゼである化合物も目的とする。
【００６５】
非限定例として、本発明の一実施形態は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、４−ピリジルオキシであり；Ｑは場合により置換されたチエニルである）の化合物であって、２μＭの濃度で、少なくとも８０％だけタンパク質キナーゼを阻害し、前記タンパク質キナーゼが、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択される化合物を目的とする。別の実施形態において、このタンパク質キナーゼは、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択される。
【００６６】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、場合によりＣ１−４アルキル、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４ハロアルキル、およびＣ１−４アルコキシのうちの１個〜３個で置換されたピリジルオキシである）の化合物であって、２μＭの濃度で少なくとも７５％だけタンパク質キナーゼを阻害し、前記タンパク質キナーゼが、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、およびＴｒｋＢからなる群から選択される化合物を目的とする。
【００６７】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、場合によりＣ１−４アルキル、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４ハロアルキル、およびＣ１−４アルコキシのうちの１個〜３個で置換されたピリジルオキシである）の化合物であって、２μＭの濃度で少なくとも７５％だけタンパク質キナーゼを阻害する化合物を目的とする。
【００６８】
本明細書において開示された方法および組成物において有用な適切な化合物の例は、次のものを包含する：
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−［１，２，５］チアジアゼパン−５−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−オキソ−ピペラジン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−［１，４］ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルメトキシ）フェニル）ウレア；
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１−オキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルメチル）フェニル）ウレア；  
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア；および
薬学的に受容可能なその塩。
【００６９】
本発明はまた、式Ｉによる化合物の塩も包含する。塩という用語は、式Ｉによる化合物の酸および／または塩基付加塩のことを言う。酸付加塩は、式Ｉによる化合物へ適切な酸を付加することによって形成することができる。塩基付加塩は、式Ｉによる化合物へ適切な塩基を付加することによって形成することができる。前記酸または塩基は、式Ｉによる前記化合物を、実質的に劣化も分解も破壊もしない。適切な塩の例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、蓚酸塩、および琥珀酸塩を包含する。ほかの適切な塩は、ナトリウム、カリウム、炭酸塩、およびトロメタミン塩を包含する。
【００７０】
同様に、本発明は、立体異性体ならびに光学異性体、例えば鏡像異性体の混合物、ならびに個々の鏡像異性体およびジアステレオマーを包含すると考えられ、このことは、この系列の選択された化合物における構造対称性の結果として生じると理解すべきである。
【００７１】
式Ｉの化合物はまた、溶媒和（水和を包含する）されていてもよい。水和は、これらの化合物、またはこれらの化合物を含んでいる組成物の製造の間に発生しうるか、または水和は、これらの化合物の吸湿性によって経時的に発生しうる。
【００７２】
式Ｉの範囲内のあるいくつかの化合物は、「プロドラッグ」と呼ばれる誘導体であってもよい。「プロドラッグ」という表現は、公知の直接作用性薬品の誘導体を示す。これの誘導体は、この薬品と比較した場合、向上した送達特徴、および治療値を有し、酵素的または化学的プロセスによって活性薬品に転換される。プロドラッグは本発明の化合物の誘導体であり、これらは、代謝的に劈開可能な（ｃｌｅａｖａｂｌｅ）基を有し、ソルボリシスによって、または生理条件下に、生体内で薬学的に活性な本発明の化合物になる。例えばこの発明の化合物のエステル誘導体は、生体内で活性なことが多いが、試験管内では活性でない。この発明の化合物のほかの誘導体は、これらの酸および酸誘導体形態の両方において活性を有するが、この酸誘導体形態は多くの場合、溶解性、組織適合性、または哺乳類有機体における遅延放出という利点を提供する（Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｈ．，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐｐ．７−９、２１−２４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５参照）。プロドラッグは、当業者に周知の酸誘導体、例えば親酸と適切なアルコールとの反応によって調製されたエステル、または親酸化合物とアミンとの反応によって調製されたアミドを包含する。この発明の化合物上で懸垂する酸性基に由来する単純脂肪族または芳香族エステルは、好ましいプロドラッグである。いくつかの場合、二重エステル型プロドラッグ、例えば（アシルオキシ）アルキルエステルまたは（（アルコキシカルボニル）オキシ）アルキルエステルを調製することが望ましい。
【００７３】
あらゆる変数が、あらゆる成分または式Ｉにおいて１回以上存在する時、各存在におけるその定義は、ほかに指摘されていなければ、１回おきの存在においてその定義から独立している。同様に、置換基および／または変数の組み合わせは、このような組み合わせの結果として、安定化合物を生じさえすれば受容可能である。
【００７４】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルキル」という用語は、鎖長がほかに制限されていなければ、１０炭素までの直鎖および分岐鎖の両方、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ペンチル、１−メチルブチル、イソブチル、ペンチル、ｔ−アミル（ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ３）２Ｃ−）、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、またはデシルのことを言う。
【００７５】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルケニル」という用語は、鎖長がほかに制限されていなければ、２〜１０炭素原子の直鎖または分岐鎖のことを言い、これは、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、ペンテニル、１−ヘキセニル、および２−ヘキセニルを包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００７６】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルキニル」という用語は、鎖長がほかに制限されていなければ、２〜１０炭素原子の直鎖および分岐鎖のことを言い、この場合、この鎖中の炭素原子の２つの間に少なくとも１つの三重結合があり、これは、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−メチル−２−ブチニル、１−メチル−３−ブチニル、２−メチル−３−ペンチニル、ヘキシニル、およびヘプチニルを包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００７７】
本発明において置換基としてアルケニルまたはアルキニル部分がある例では、不飽和連結、すなわちビニレニルまたはセチレニル連結は好ましくは、窒素、酸素、または硫黄部分に直接付着されていない。
【００７８】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「シクロアルキル」という用語は、３〜１４、好ましくは３〜１０炭素原子を含有するシクロアルキル基のことを言う。典型例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびビシクロ［２．２．２］オクチルである。
【００７９】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「シクロアルケニル」という用語は、３〜１４、好ましくは３〜１０炭素原子、および１個〜３個の炭素−炭素二重結合を含有するシクロアルケニル基のことを言う。典型例は、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、およびシクロヘクスジエニルを包含する。
【００８０】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルキレン」という用語は、ほかの指摘がなければ、１〜１５炭素原子、好ましくは１〜１０炭素原子、より好ましくは１〜６炭素原子を有する、非分岐飽和炭化水素鎖のジラジカルのことを言う。この用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ブチレンなどの基によって例示される。
【００８１】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルケニレン」という用語は、ほかの指摘がなければ、２〜１５炭素原子、好ましくは１〜１０炭素原子、より好ましくは２〜６炭素原子を有し、かつビニル不飽和の少なくとも１、好ましくは１〜６部位を有する、非分岐不飽和炭化水素鎖のジラジカルのことを言う。この用語は、エテニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、プロペニレン（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−）などの基によって例示される。
【００８２】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルコキシ」という用語は、酸素原子へ連結された上記アルキル基のいずれかのことを言う。典型例は、メトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、第二−ブチルオキシ、およびｔ−ブチルオキシである。
【００８３】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルケニルオキシ」という用語は、酸素原子へ連結された上記アルケニル基のいずれかのことを言う。典型例は、エテニルオキシ、プロペニルオキシ、ブテニルオキシ、ペンテニルオキシ、およびヘキセニルオキシを包含する。
【００８４】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アリール」という用語は、環部分に６〜１４炭素、好ましくは環部分に６〜１０炭素を含有する単環式または二環式芳香族基のことを言う。典型例は、フェニル、ナフチル、アントラセニル、またはフルオレニルを包含する。
【００８５】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として使用されているような「アラルキル」または「アリールアルキル」という用語は、アリール置換基を有する、上に規定されているようなＣ１−６アルキル基、例えばベンジル、フェニルエチル、または２−ナフチルメチルのことを言う。
【００８６】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ヘテロアリール」という用語は、５〜１４環原子を有し；６、１０、または１４π電子が環状アレーにおいて共有され；かつ炭素原子および１個、２個、３個、または４個の酸素、窒素、または硫黄原子を含有する基のことを言う。ヘテロアリール基の例は、チエニル、ベンゾ［ｂ］チエニル、ナフト［２，３−ｂ］チエニル、チアントレニル、フリル、ピラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾキサゾリル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キナゾリニル、シノリニル、プテリジニル、４αＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、イソチアゾリル、フェノチアジニル、イソキサゾリル、フラザニル、フェノキサジニル、およびテトラゾリル基である。さらなるヘテロアリールは、Ａ．Ｒ．ＫａｔｒｉｔｚｋｙおよびＣ．Ｗ．Ｒｅｅｓ，ｅｄｓ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌ．１−８，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８４）に記載されている。
【００８７】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「アルキレンジオキシ」という用語は、１アルキレン基および２酸素原子を含有する環のことを言い、特にＣ１−４アルキレンジオキシである。アルキレンジオキシ基は場合により、ハロゲン（特にフッ素）で置換されていてもよい。典型例は、メチレンジオキシ（−ＯＣＨ２Ｏ−）またはジフルオロメチレンジオキシ（−ＯＣＦ２Ｏ−）を包含する。
【００８８】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素のことを言う。
【００８９】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「モノアルキルアミン」または「モノアルキルアミノ」という用語は、基ＮＨ２（ここで、１つの水素は、上に規定されているようにアルキル基によって置換されている）のことを言う。
【００９０】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ジアルキルアミン」または「ジアルキルアミノ」という用語は、基ＮＨ２（ここで、両方の水素は、上に規定されているようにアルキル基によって置換されている）のことを言う。
【００９１】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ヒドロキシアルキル」という用語は、これらの１またはそれ以上の水素が、１またはそれ以上のヒドロキシル部分によって置換されている上記アルキル基のいずれかのことを言う。
【００９２】
本明細書において用いられているような「アシルアミノ」という用語は、式−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ（ここで、ＲａおよびＲｂは独立して水素であるか、または上に規定されているようなアルキル基である）の部分のことを言う。
【００９３】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ハロアルキル」という用語は、これらの１またはそれ以上の水素が、１またはそれ以上のハロ部分によって置換されている上記アルキル基のいずれかのことを言う。典型例は、フルオロメチル、トリフルオロメチル、トリクロロエチル、およびトリフルオロエチルを包含する。
【００９４】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ハロアルケニル」という用語は、これらの１またはそれ以上の水素が、１またはそれ以上のハロ部分によって置換されている上記アルケニル基のいずれかのことを言う。典型例は、フルオロエテニル、ジフルオロエテニル、およびトリクロロエテニルを包含する。
【００９５】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「ハロアルキニル」という用語は、これらの１またはそれ以上の水素が、１またはそれ以上のハロ部分によって置換されている上記アルキニル基のいずれかのことを言う。典型例は、フルオロエチニル、トリフルオロエチニル、およびトリクロロエチニルを包含する。
【００９６】
本明細書において、単独でまたは別の基の一部として用いられているような「カルボキシアルキル」という用語は、これらの１またはそれ以上の水素が、１またはそれ以上のカルボン酸部分によって置換されている上記アルキル基のいずれかのことを言う。
【００９７】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書において、酸素原子（「Ｏ」）、硫黄原子（「Ｓ」）、または窒素原子（「Ｎ」）を意味するために用いられている。ヘテロ原子が窒素である時、これは、ＮＲａＲｂ部分（ここで、ＲａおよびＲｂは互いから独立して、水素またはアルキル基であるか、またはこれらが結合している窒素とともに、飽和または不飽和の５員環、６員環、または７員環を形成する）を形成しうると認められるであろう。
【００９８】
「オキシ」という用語は、酸素（Ｏ）原子を意味する。
【００９９】
「チオ」という用語は、硫黄（Ｓ）原子を意味する。
【０１００】
一般に、かつほかに規定されていなければ、本明細書において用いられている「場合により置換された」という語句は、アミノ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、シアノ、チオール、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルケニル、Ｃ３−６シクロヘテラルキル、Ｃ３−６シクロヘテロアルケニル、Ｃ６−１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６アルケニルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキレンジオキシ、Ｃ１−６アルコキシ（Ｃ１−６）アルキル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ２−６）アルケニル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルコキシ、Ｃ１−６アミノアルキル、Ｃ１−６アミノアルコキシ、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ２−６ヒドロキシアルコキシ、モノ（Ｃ１−４）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４）アルキルアミノ、Ｃ２−６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ２−６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシ（Ｃ２−６）アルコキシ、モノ（Ｃ１−４）アルキルアミノ（Ｃ２−６）アルコキシ、ジ（Ｃ１−４）アルキルアミノ（Ｃ２−６）アルコキシＣ２−１０モノ（カルボキシアルキル）アミノ、ビス（Ｃ２−１０カルボキシアルキル）アミノ、アミノカルボニル、Ｃ６−１４アリール（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ２−６アルキニルスルホニル、Ｃ６−１０アリールスルホニル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホンアミド、Ｃ６−１０アリールスルホンアミド、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルキルスルホンアミド、アミジノ、グアニジノ、Ｃ１−６アルキルイミノアミノ、ホルミルイミノアミノ、Ｃ２−６カルボキシアルコキシ、Ｃ２−６カルボキシアルキル、およびカルボキシ（Ｃ１−６）アルキルアミノからなる群から独立して選択された１またはそれ以上の置換基で場合により置換されている１または複数の基のことを言う。
【０１０１】
「場合により置換された」という語句が、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基に関連して用いられる時、本明細における「場合により置換された」という語句は、アミノ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、シアノ、チオール、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルケニル、Ｃ３−６シクロヘテラルキル、Ｃ３−６シクロヘテロアルケニル、Ｃ６−１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６アルケニルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキレンジオキシ、Ｃ１−６アルコキシ（Ｃ１−６）アルキル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ２−６）アルケニル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルコキシ、Ｃ１−６アミノアルキル、Ｃ１−６アミノアルコキシ、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ２−６ヒドロキシアルコキシ、モノ（Ｃ１−４）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４）アルキルアミノ、Ｃ２−６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ２−６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、カルボキシ、（Ｃ１−６）アルコキシ（Ｃ２−６）アルコキシ、モノ（Ｃ１−４）アルキルアミノ（Ｃ２−６）アルコキシ、ジ（Ｃ１−４）アルキルアミノ（Ｃ２−６）アルコキシＣ２−１０モノ（カルボキシアルキル）アミノ、ビス（Ｃ２−１０カルボキシアルキル）アミノ、Ｃ６−１４アリール（Ｃ１−６）アルコキシカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ２−６アルキニルスルホニル、Ｃ６−１０アリールスルホニル、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホンアミド、Ｃ６−１０アリールスルホンアミド、Ｃ６−１０アリール（Ｃ１−６）アルキルスルホンアミド、アミジノ、グアニジノ、Ｃ１−６アルキルイミノアミノ、ホルミルイミノアミノ、Ｃ２−６カルボキシアルコキシ、Ｃ２−６カルボキシアルキル、およびカルボキシ（Ｃ１−６）アルキルアミノからなる群から独立して選択された１またはそれ以上の置換基で場合により選択されている１またはそれ以上の前記基のことを言う。
【０１０２】
詳細な定義は、上で用いられたすべての用語について示されていないが、各用語は、当業者によって理解される。
【０１０３】
（組成物）
本発明による組成物は、上に規定されているような式Ｉの化合物、および１またはそれ以上の薬学的に受容可能な賦形剤を含んでいる製薬組成物を含んでいる。本発明の好ましい組成物は、上に列挙された１またはそれ以上の実施形態から選択された１つの化合物、および１またはそれ以上の薬学的に受容可能な賦形剤を含んでいる製薬組成物である。式Ｉの１またはそれ以上の化合物を含んでいる製薬組成物は、先行技術において周知であるように、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，ＵＳＡのような公知の編集物を参照して配合することができる。
【０１０４】
本発明の一実施形態において、この組成物は、上に列挙された個々の実施形態の１またはそれ以上から選択された化合物を含んでいる。別の実施形態において、この組成物は、上に挙げられた特定の化合物または下位群のいずれかからなる群から選択された化合物；および薬学的に受容可能なこれの塩を含んでいる。
【０１０５】
一実施形態において、本発明の組成物は、約０．００１ｍｇ〜約１，０００ｍｇの式Ｉの化合物を含んでいる。別の実施形態において、本発明の組成物は、約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの式Ｉの化合物を含んでいる。別の実施形態において、本発明の組成物は、約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇの式Ｉの化合物を含んでいる。別の実施形態において、この組成物は、式Ｉの化合物の量を、炎症性状態、炎症性疾患、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、または結腸癌、非小細胞肺癌、および前立腺癌を包含する癌を処置または予防するのに十分な量において含んでいる。各組成物における化合物の量は、この製薬組成物の特定の目的に応じて様々であってもよい。一般的にではあるが、常にというわけではなく、疾患または状態を予防するために用いられる組成物は、疾患または状態を処置するために用いられる組成物よりも少量の化合物を有する。
【０１０６】
本発明の製薬組成物は、本発明の化合物の有利な効果を経験しうるあらゆる動物へ投与することができる。このような動物のうち第一のものはヒトである。ただし本発明はそのように限定されるものではない。ほかの適切な動物は、イヌ科動物、ネコ科動物、イヌ、ネコ、家畜、ウマ、蓄牛、ヒツジなどを包含する。
【０１０７】
本発明の製薬組成物は、これらの意図された目的を達成するあらゆる手段によって投与することができる。例えば投与は、皮下、静脈内、筋肉内、腹膜内、口腔内、または目経路、直腸的、非経口的、組織内、膣内、局所的（粉末、軟膏、滴、または経皮パッチによってなど）、または経口または鼻腔スプレーとしてであってもよい。投与される投薬量は、受容者の年齢、健康、および体重、もしあるとすれば、同時処置の種類、処置頻度、および所望の効果の種類によるであろう。
【０１０８】
薬理学的に活性な化合物に加えて、新しい製薬調製物は、薬学的に用いることができる調製物へのこれらの活性化合物の加工処理を容易にする賦形剤および助剤を含んでいる、薬学的に受容可能な適切なキャリヤを含有してもよい。
【０１０９】
本発明の製薬調製物は、それ自体公知の方法で、例えば従来の混合、顆粒化、糖衣錠製造、溶解、または凍結乾燥方法によって製造される。このようにして、経口使用のための製薬調製物は、活性化合物と固体賦形剤とを組み合わせ、結果として生じた混合物を場合により磨砕し、顆粒混合物を加工処理することによって得ることができ、所望であるかまたは必要ならば、適切な助剤を添加した後、タブレットまたは糖衣錠コアを得ることができる。
【０１１０】
製薬賦形剤は、当業界において周知である。適切な賦形剤は、充填剤、例えば糖類、例えばラクトースもしくはスクロース、マンニトールもしくはソルビトール、セルロース調製物および／またはリン酸カルシウム、例えばリン酸三カルシウムもしくはリン酸水素カルシウム、ならびに例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ポテトデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドンを用いたバインダー、例えばデンプンペーストを包含する。所望であれば、崩壊剤を添加することができる。例えば上記デンプン、およびまたカルボキシメチル−デンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、またはこれの塩、例えばアルギン酸ナトリウムである。助剤は、とりわけ流量調節剤および潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸またはこれらの塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、および／またはポリエチレングリコールである。糖衣錠コアには、所望であれば胃液に抵抗性がある適切なコーティングが備えられている。この目的のために、濃縮糖類溶液を用いることができる。これらは場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。胃液に抵抗性があるコーティングを生成するために、適切なセルロース調製物、例えばアセチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチル−セルロースフタレートの溶液が用いられる。染料または顔料が、例えば識別のため、または活性化合物用量の組み合わせを特徴付けるために、タブレットまたは糖衣錠コーティングへ添加されてもよい。
【０１１１】
経口的に用いることができるほかの製薬調製物は、ゼラチン製の押しばめ（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールもしくはソルビトールからできている、密閉されたソフトカプセルを包含する。押しばめカプセルは、充填剤例えばラクトース、バインダー例えばデンプン、および／または潤滑剤例えばタルクもしくはステアリン酸マグネシウム、および場合により安定剤と混合されてもよい顆粒の形態にある活性化合物を含有しうる。ソフトカプセルにおいて、活性化合物は好ましくは、適切な液体、例えば脂肪油もしくは液体パラフィン中に溶解または縣濁される。これに加えて、安定剤が添加されてもよい。
【０１１２】
非経口投与に適した配合物は、水溶性形態、例えば水溶性塩、アルカリ溶液、およびシクロデキストリン包含錯体中の活性化合物の水溶液を含んでいる。特に好ましいアルカリ塩は、例えばトリス、コリン水酸化物、ビス−トリスプロパン、Ｎ−メチルグルカミン、またはアルギニンを用いて調製されたアンモニウム塩である。
【０１１３】
この発明の化合物はまた、生理的に受容可能な希釈剤、例えば水、生理食塩水、水性デキストロース、およびほかの薬学的に受容可能な糖溶液を包含する滅菌液もしくはこれらの混合物、アルコール、例えばエタノール、イソプロパノール、またはヘキサデシルアルコール、グリコール、例えばプロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール、グリセロールケタール、例えば２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、エーテル、例えばポリ（エチレングリコール）４００、薬学的に受容可能な油、脂肪酸、脂肪酸エステルもしくはグリセリド、または薬学的に受容可能な界面活性剤、例えば石鹸または洗剤をともうか、またはともなわないアセチル化脂肪酸グリセリド、縣濁剤、例えばペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロース、乳化剤、または製薬アジュバント中の注射可能な投薬形態として非経口的に投与されてもよい。すべての場合、この形態は、無菌であるべきであり、容易な注射針通過性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度まで流体であるべきである。これは製造および保存条件下に安定であるべきであり、微生物、例えば細菌および菌類の汚染作用に対して保存されるべきである。
【０１１４】
本発明の配合物中で有用な薬学的に受容可能な油は、石油、動物性、植物性、または合成起源のものを包含し、これは、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、オリーブ油、ひまわり油、ペトロラタム、および鉱油を包含する。用いることができる脂肪酸は、オレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸を包含するが、一方で、本発明において有用な脂肪酸エステルは、エチルオレエートおよびイソプロピルミリステートを包含しうる。適切な石鹸は、脂肪酸アルカリ金属、アンモニウム、およびトリエタノールアミン塩を包含する。受容可能な洗剤は、カチオン性洗剤、例えばジメチルジアルキルアンモニウムハライド、アルキルピリジニウムハライド、およびアルキルアミンアセテート、およびアニオン性洗剤、例えばアルキル、アリール、およびオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテル、およびモノグリセリドスルフェート、およびスルホスクシネートを包含する。有用な非イオン性洗剤は、脂肪アミン酸化物、脂肪酸アルカノールアミド、およびポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマーを包含しうる。両性洗剤は、アルキル−β−アミノプロピオネート、および２−アルキルイミダゾリン第四塩、およびこれらの混合物を包含しうる。
【０１１５】
この発明の非経口組成物は、一実施形態において、溶液状の本明細書に記載された活性化合物約０．５〜約２５重量％を含有する。滅菌注射可能溶液もしくは縣濁液の形態の非経口組成物はまた好ましくは、等張性媒質中の約０．０５％〜約５％縣濁剤も含有するであろう。緩衝剤および防腐剤が添加されてもよい。適切な界面活性剤もまた、添加されてもよい。これらの界面活性剤は、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、例えばソルビタンモノオレエート、および酸化プロピレンとプロピレングリコールとの縮合によって形成された、疎水性塩基での酸化エチレンの高分子量付加物を含んでいてもよい。
【０１１６】
これに加えて、適切な油性注射縣濁液としてのこれらの活性化合物の縣濁液が投与されてもよい。適切な脂溶性溶媒またはビヒクルは、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばエチルオレエートもしくはトリグリセリドもしくはポリエチレングリコール−４００を含んでいる。水性注射縣濁液は、この縣濁液の粘度を増す物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、および／またはデキストランを含有しうる。場合により、この縣濁液はまた、安定剤を含有してもよい。
【０１１７】
経口投与用の液体投薬量は、薬学的に受容可能なエマルジョン、溶液、縣濁液、シロップ、およびエリキシルを包含する。これらの活性化合物に加えて、この液体投薬形態は、当業界において通常用いられている不活性希釈剤、例えば水もしくはほかの溶媒、可溶化剤、および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽（ｇｅｒｍ）油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびこれらの混合物を含有してもよい。
【０１１８】
これらの活性化合物に加えて、縣濁液は、縣濁剤、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、およびこれらの混合物を含有してもよい。
【０１１９】
局所投与は、肺および目の表面を包含する皮膚または粘膜への投与を含む。吸入用組成物を包含する局所投与用組成物は、加圧されていてもよく、非加圧であってもよい乾燥粉末として調製されてもよい。非加圧粉末組成物において、細かく分割された形態の活性成分は、例えば直径１００マイクロメートルまでのサイズを有する、より大きいサイズの薬学的に受容可能な不活性キャリヤと混合して用いられてもよい。適切な不活性キャリヤは、糖例えばラクトースを包含する。望ましくは活性成分のこれらの粒子の少なくとも９５重量％は、０．０１〜１０マイクロメートルの範囲内の有効粒子サイズを有する。
【０１２０】
あるいはまた、この組成物は加圧されてもよく、圧縮ガス、例えば窒素または液化ガス推進薬を含有していてもよい。この液化推進薬媒質、および実際には総組成物は好ましくは、これらの活性成分が実質的な程度までまったくその中に溶解しないようなものである。この加圧組成物はまた、界面活性剤を含有していてもよい。この界面活性剤は、液体または固体非イオン性界面活性剤であってもよく、または固体アニオン性界面活性剤であってもよい。ナトリウム塩の形態にある固体アニオン性界面活性剤を用いるのが好ましい。
【０１２１】
局所投与のさらなる形態は、目に対してである。本発明のこれらの化合物および組成物は、薬学的に受容可能な眼科ビヒクル中に送達される。したがってこれらの化合物は、これらの化合物を、目の角膜および内部区域、例えば前眼房、後眼房、ガラス体、房水、ガラス体液、角膜、虹彩／毛様体、レンズ、脈絡膜／網膜、および強膜へ浸透させうるのに十分な時間、目の表面との接触に維持される。この薬学的に受容可能な眼科ビヒクルは、例えば軟膏、植物油、またはカプセル化材料であってもよい。
【０１２２】
直腸または膣投与用組成物は好ましくは、本発明の化合物と、適切な非刺激性賦形剤もしくはキャリヤ、例えば室温で固体であるが体温で液体であり、したがって直腸または膣腔において融解し、薬品を放出する、カカオバター、ポリエチレングリコール、または座薬ワックスとを混合することによって調製することができる座薬である。
【０１２３】
本発明の組成物はまた、リポソームの形態でも投与することができる。当業界において公知であるように、リポソームは一般に、リン脂質またはほかの液体物質に由来する。リポソームは、水性媒質中に分散される一または多ラメラ水和液晶によって形成される。リポソームを形成しうるあらゆる非毒性の生理的に受容可能な代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形態における本組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、防腐剤、賦形剤などを含有しうる。好ましい脂質は、天然および合成の両方のリン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、当業界において公知である（例えばＰｒｅｓｃｏｔｔ，Ｅｄ．，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１４：３３（１９７６）参照）。
【０１２４】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物およびキャリヤを含んでいる組成物であって、前記キャリヤがアッセイに適した組成物を目的とする。このようなキャリヤは、固体キャリヤおよび液体キャリヤを包含しうる。アッセイに適した組成物は、無菌であってもよいが、必ずしもそうでなくてもよい。アッセイに適したキャリヤの例は、ジメチルスルホキシド、エタノール、ジクロロメタン、メタノールなどを包含する。別の実施形態において、組成物は、式Ｉの化合物およびキャリヤを含み、この場合この化合物は、ｐ３８を阻害するのに適した量にある。
【０１２５】
本発明の別の態様は、式Ｉによる化合物およびタンパク質キナーゼ、例えばｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃの１またはそれ以上を含んでいる組成物を目的とする。
【０１２６】
（これらの化合物および組成物の使用）
本発明の追加の態様は、タンパク質キナーゼにおけるコンホメーション変化の誘発方法であって、このコンホメーション変化が、前記タンパク質キナーゼ上のアロステリック部位を暴露する方法を目的とする。本明細書において開示された発明以前には、このアロステリック部位が暴露および／または安定化されたままであり、同定することができ、さらには例えば本明細書に記載された方法において用いることができるように、小さい分子を有するタンパク質キナーゼにおけるコンホメーション変化を誘発および安定化させることは可能でなかった。タンパク質キナーゼにおけるこのコンホメーション変化は、上に記載された式Ｉによる化合物によって誘発することができる。このコンホメーション変化は、本明細書において「開形態」と呼ばれているタンパク質の形態につながる。別の実施形態において、式Ｉの化合物は、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択された１またはそれ以上のキナーゼの開形態を安定化することができる。別の実施形態において、このキナーゼは、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択される。
【０１２７】
タンパク質キナーゼの開コンホメーションは、式Ｉの化合物によって安定化することができる。あるいくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、タンパク質キナーゼの結晶化を可能にするのに十分なほど、タンパク質キナーゼの開コンホメーションを安定化することができる。ほかの実施形態において、式Ｉの化合物は、公知方法、例えばＮＭＲ方法、またはＸ線回折方法を用いて、タンパク質キナーゼの構造の解明を可能にするのに十分なほどタンパク質キナーゼの開コンホメーションを安定化することができる。
【０１２８】
一実施形態において、コンホメーション変化は、タンパク質キナーゼと、ｐ３８タンパク質キナーゼ中にコンホメーション変化を誘発させうる化合物とを接触させることによって、タンパク質キナーゼ中に誘発される。適切な化合物は、式Ｉによる化合物を含んでいる。誘導因子化合物は、この化合物にタンパク質キナーゼのコンホメーション変化を実施させうるための時間、タンパク質キナーゼとともに適切な媒質中でインキュベーションすることができる。あるいくつかの実施形態において、ｐ３８タンパク質キナーゼおよび化学的誘導因子は、約１、５、１０、２０、３０、６０、または１００分間インキュベーションされる。
【０１２９】
モジュレータは、タンパク質キナーゼ例えばｐ３８と、適切な媒質中で接触しうる。
【０１３０】
一実施形態において、本発明の化合物は、次の媒質中でタンパク質キナーゼのコンホメーション変化を誘発するために用いられる：５０μＬの２４ｍＭ  トリス−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．５であって、１３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２％グリセロール、２％ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＤＴＴ、２．５Ｃｉのγ−［３３Ｐ］ＡＴＰ（１０００Ｃｉ／ミリモル；１Ｃｉ＝３７ＧＢｑ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、１０Ｍ  ＡＴＰ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、および２Ｍ  ＧＳＴ−ＡＴＦ２を含有する媒質。
【０１３１】
あるいくつかの実施形態において、コンホメーション変化を誘発し、安定化する化合物は、次のように記載されている領域においてタンパク質キナーゼへ結合する。
【０１３２】
タンパク質キナーゼ上のアロステリック部位は、一実施形態において、Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（ＤＦＧ）モチーフ（ｍｏｔｉｖｅ）の近くのポケットである。これの大きいコンホメーション変化が、阻害剤の結合のために一般に必要とされる。この領域は、Ｐａｒｇｅｌｌｉｓら、“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ３８  ＭＡＰ  Ｋｉｎａｓｅ  ｂｙ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ”，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９（４）：２６８−２７２（２００２）において、ｐ３８について記載されている。これは、その全体が参照して本明細書に組み込まれる。一実施形態において、アロステリック部位は、その閉コンホメーションにおいてセリン−トレオニン（Ｓｅｒ−Ｔｈｒ）キナーゼにおいてＤＦＧモチーフによって占められている疎水性ポケットである。この疎水性ポケットは、式Ｉの化合物によって占められていてもよく、その結果、開コンホメーションを有するタンパク質キナーゼを生じる。一実施形態において、ＤＦＧモチーフは、閉コンホメーションにおけるその位置と比べて、約１〜約２０Åだけシフトされる。別の実施形態において、ＤＦＧモチーフは、約５〜約１５Å、または約９〜約１０Åシフトされる。一実施形態において、このアロステリック部位は、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択されたタンパク質上の、ＤＦＧモチーフ、または類似モチーフ、または相同モチーフの近くのアロステリック部位である。別の実施形態において、このアロステリック部位は、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択されたタンパク質上の、ＤＦＧモチーフ、または類似モチーフ、または相同モチーフの近くのアロステリック部位である。
【０１３３】
（開形態における結晶化されたキナーゼ）
別の態様において、本発明は、開形態において結晶化されたタンパク質キナーゼを目的とする。開形態における結晶化されたタンパク質キナーゼは、例えば前記タンパク質キナーゼへ結合する化合物を設計または同定するために用いることができる。タンパク質キナーゼの開形態は、あるいくつかの実施形態において、タンパク質の開形態を安定化する化合物と錯体化される。このような化合物の一例は、式Ｉによる化合物である。
【０１３４】
別の実施形態において、本発明は、式Ｉによる化合物とともに開形態において結晶化されたタンパク質キナーゼを目的とする。別の実施形態において、本発明は、式Ｉによる化合物とともに開形態において結晶化されたタンパク質キナーゼであって、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択されたキナーゼタンパク質を目的とする。別の実施形態において、本発明は、式Ｉによる化合物とともに開形態において結晶化されたタンパク質キナーゼであって、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択されたキナーゼタンパク質を目的とする。
【０１３５】
別の実施形態において、式Ｉの化合物とともに開形態において結晶化されたタンパク質キナーゼは、セリン−トレオニンキナーゼである。別の実施形態において、このタンパク質キナーゼは、マイトジェン活性化されたタンパク質キナーゼである。
【０１３６】
別の態様において、本発明は、開形態において結晶化されたｐ３８タンパク質キナーゼを目的とする。開形態における結晶化ｐ３８キナーゼは、例えばｐ３８へ結合する化合物を設計または同定するために用いることができる。このタンパク質の開形態は好ましくは、このタンパク質の開形態を安定化する化合物と錯体化される。このような化合物の一例は、式Ｉによる化合物である。
【０１３７】
本発明による開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼの一例は、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ３８キナーゼのヒト形態、および実施例１〜４のいずれか１つの化合物とともに共結晶化されたこれらの相同突然変異体を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１３８】
開形態における結晶化タンパク質キナーゼの一例は、ヒトｐ３８アルファＭＡＰキナーゼである。
【０１３９】
一実施形態において、本発明は、開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼを提供する。開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼは、本明細書に記載されているような特徴を有する。一実施形態において、開形態における前記結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼの空間群は、好ましくは六角形である。前記空間群の単位細胞寸法は、ａ、ｂ、ｃ、α、β、およびγによって規定され、この場合、ａは、約６７Å〜約６８Åであり、ｂは、約７６Å〜約７７．００Åであり、ｃは、約７６Å〜約７７．００Åであり、好ましくはこれらは、それぞれ６７．５７、７６．６３、および７６．５８であり、αは約９０度であり、βは約９０度であり、γは約９０度である。
【０１４０】
開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼはまた、Ｍａｔｔｈｅｗの係数によって特徴付けることができる。本発明による開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼのあるいくつかの実施形態において、Ｍａｔｔｈｅｗの係数は、１ダルトン（Ｄａ）あたり約２．２Å３〜１ダルトンあたり約２．４Å３である。好ましくはＭａｔｔｈｅｗの係数は、１ダルトンあたり約２．３Å３である。ほかの実施形態において、溶媒含量は、約４４％〜約５０％、好ましくは約４６％〜約４８％、好ましくは約４７％である。
【０１４１】
本明細書において用いられているように、「ｐ３８タンパク質キナーゼ」という用語は、天然および組換えにより生産されたｐ３８タンパク質キナーゼ；ｐ３８タンパク質キナーゼの天然、合成、および組換え生物活性ポリペプチド断片；ハイブリッド融合タンパク質およびダイマーを包含する、ｐ３８タンパク質キナーゼもしくはこれの断片の生物活性ポリペプチド変異体；システイン置換類似体を包含する、ｐ３８タンパク質キナーゼまたはこれの断片もしくは変異体の生物活性ポリペプチド類似体を包含する。このｐ３８タンパク質キナーゼは、当業界において公知のあらゆる手段によって発生および／または単離されてもよい。ｐ３８タンパク質キナーゼおよびｐ３８タンパク質キナーゼの生産方法は、すべてが参照して本明細書に完全に組み込まれているものにおいて開示されている。
【０１４２】
相同体は、自然の突然変異またはヒトの操作のどちらかからの、１またはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含みうるタンパク質である。このようにして、例として、結晶質開形態におけるｐ３８タンパク質キナーゼは、自然の突然変異またはヒトの操作のどちらかからの、１またはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含みうる。示されているように、変更は、好ましくは小さい種類のもの、例えばタンパク質の折り畳みまたは活性に有意な影響を与えない保存的アミノ酸置換である（表１参照）。
【０１４３】
【表１】
2008523072.tif 000013
本発明の一実施形態において、開形態において結晶化されたｐ３８タンパク質キナーゼは、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換であるが、２０以上でない保存的アミノ酸置換を含有するアミノ酸配列を有するｐ３８タンパク質キナーゼのアミノ酸配列を含むか、あるいはまたこれからなる。ほかの実施形態において、開形態において結晶化されたｐ３８タンパク質キナーゼは、ヒトｐ３８タンパク質キナーゼのアミノ酸配列を含む。これは少なくとも１つであるが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以上でない保存的アミノ酸置換を含有する。
【０１４４】
ｐ３８タンパク質キナーゼの対照アミノ酸配列と少なくとも例えば９５％「同一」であるアミノ酸配列を有するタンパク質とは、このタンパク質配列が、ｐ３８タンパク質キナーゼの対照アミノ酸の各１００アミノ酸あたり５つまでのアミノ酸改変を含みうること以外、このタンパク質のアミノ酸配列は、対照配列と同一であるものとする。換言すれば、対照アミノ酸配列と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を得るために、対照配列におけるアミノ酸残基の５％までが、欠失されているか、または別のアミノ酸で置換されていてもよく、または対照配列における総アミノ酸残基の５％までのいくつかのアミノ酸が、この対照配列中に挿入されてもよい。対照配列のこれらの改変は、対照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置において、または個別に対照配列における残基中に、または対照配列内の１またはそれ以上の隣接基中に散在した、これらの末端位置間のどこかで発生しうる。
【０１４５】
実際問題として、いずれかの特定ポリペプチドまたはタンパク質が、例えばある一定のｐ３８タンパク質キナーゼのアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは従来、公知のコンピュータプログラム、例えばＢｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ  ５３７１１）を用いて決定することができる。特定配列が本発明による対照配列と例えば９５％同一であるかどうかを決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたはほかのいずれかのアラインメントプログラムを用いる時、これらのパラメーターは当然ながら、同一性のパーセンテージが、対照アミノ酸配列の全長にわたって計算され、かつ対照配列中のアミノ酸残基の総数の５％までの相同性におけるギャップが許容されるように設定される。
【０１４６】
一実施形態において、結晶化タンパク質キナーゼは、式Ｉによる化合物の少なくとも１つの分子と錯体化される。ほかの実施形態において、開形態におけるタンパク質キナーゼは、１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−［１，２，５］チアジアゼパン−５−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−オキソ−ピペラジン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−［１，４］ジアゼパン−１−カルボニル）−チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア；および薬学的に受容可能なその塩からなる群から選択された化合物と錯体化される。ほかの実施形態において、開形態におけるタンパク質キナーゼは、上に挙げられた本発明の特定の化合物または下位群のいずれかから選択された化合物と錯体化される。
【０１４７】
（結晶化開形態キナーゼの調製方法）
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物と共結晶化された、開形態における結晶化タンパク質キナーゼの調製方法を目的とする。本発明は、開形態における結晶化タンパク質キナーゼの調製方法を提供する。好ましくはこの方法は、開形態における結晶化タンパク質キナーゼであって、原子配位を含む前記タンパク質キナーゼの三次元構造の決定を可能にするのに十分なほど高い分解能（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）でＸ線を回折するタンパク質キナーゼを生産する。この三次元構造は、本明細書に記載されているように、本発明のいくつかの方法において有用である。一実施形態において、このタンパク質キナーゼは、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択される。別の実施形態において、このタンパク質キナーゼは、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択される。
【０１４８】
一実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物と共結晶化された、開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼの調製方法を目的とする。本発明は、式Ｉの化合物と共結晶化された、開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼの調製方法を提供する。好ましくはこの方法は、開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼであって、原子配位を含む前記ｐ３８タンパク質キナーゼの三次元構造の決定を可能にするのに十分なほど高い分解能でＸ線を回折するタンパク質キナーゼを生産する。この三次元構造は、本明細書に記載されているように、本発明のいくつかの方法において有用である。具体的には、式Ｉによる化合物と錯体化された組換え非グリコシル化ヒトｐ３８αタンパク質キナーゼの結晶化方法が提供される。
【０１４９】
前記タンパク質キナーゼは、適切な源、例えば真核細胞または組織から得ることができる。一般に、ｐ３８タンパク質キナーゼまたはこれの一部分を含んでいるタンパク質は、可溶形態で十分な純度で単離され、結晶化のために濃縮される。ポリペプチドは場合により、（結晶化を妨げることがある）凝集の欠如についてアッセイされる。この精製されたポリペプチドは好ましくは、次の要因の少なくとも１つの種々の条件下に結晶化される：ｐＨ、緩衝剤、緩衝濃度、塩、ポリマー、ポリマー濃度、ほかの沈殿剤、およびｐ３８タンパク質キナーゼまたはこれの一部分の濃度。例えばＢｌｕｎｄｅｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９７６）；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．（１９８２）参照。この結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼは場合により、キナーゼ活性についてテストされる。異なるサイズおよび形状の結晶はさらに、Ｘ線回折への適合性についてテストされうる。
【０１５０】
あるいくつかの実施形態において、結晶化溶液のｐＨは、約６〜８、好ましくは約６．５〜８である。別の実施形態において、この溶液のｐＨは、約７．５である。
【０１５１】
結晶化溶液は場合により、緩衝剤を含有しうる。緩衝剤は、当業界において周知である。緩衝剤の例は、ホスフェート、カコジレート、アセテート、イミダゾール、トリスＨＣｌ、およびナトリウムＨＥＰＥＳを包含する。
【０１５２】
あるいくつかの実施形態において、緩衝濃度は、約１０ミリモル（ｍＭ）〜約２００ｍＭである。
【０１５３】
この塩は、当業界において周知のイオン塩である。塩の例は、塩化カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、酢酸マグネシウム、酢酸亜鉛、および酢酸カルシウムを包含する。
【０１５４】
結晶化溶液は、ポリマーを含有しうる。本発明において有用なポリマー例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）ほかを包含するが、必ずしもこれらに限定されるわけではない。このポリマーの平均分子量は、約２００〜約１００，０００である。このポリマーの平均分子量に適したほかの値は、約２００〜約１０，０００を包含する。
【０１５５】
このポリマーの濃度は、結晶化に適した溶液中のポリマーの濃度である。あるいくつかの実施形態において、このポリマーの濃度は、約１％〜５０％である。ほかの実施形態において、このポリマーの濃度は、約１％、５％、１０％、２０％、２５％、３０％、または４０％である。
【０１５６】
結晶化に適した溶液は場合により、酒石酸カリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、硫酸リチウム、蟻酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、蟻酸マグネシウム（Ｍｇ（ＨＣＯ２）２）、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム；ＮＨ４ＰＯ４；および２−プロパノールからなる群から選択された１またはそれ以上の追加作用物質を含んでいる。
【０１５７】
あらゆる適切な結晶化方法が、開形態におけるｐ３８タンパク質キナーゼまたはその断片を結晶化するために用いられる。適切な方法は、縣滴、蒸気拡散方法、マイクロバッチ、シッティングドロップ（ｓｉｔｔｉｎｇ  ｄｒｏｐ）、および透析を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１５８】
あるいくつかの実施形態において、これらの結晶は、約１時間〜約２４時間成長させられる。
【０１５９】
本発明によれば、開形態における結晶化ｐ３８タンパク質キナーゼの１つの調製実施形態は、次のようなプロセスを用いる。結晶化のために、タンパク質は、２５ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＤＴＴ、および５％グリセロールに対して透析され、ＹＭ−１０膜を有するＡｍｉｃｏｎ攪拌限外濾過セルを用いて１６ｍｇ／ｍｌに濃縮される。これらのサンプルアリコートは、液体窒素中にフラッシュ凍結され、−８０℃で保存される。式Ｉによる化合物で飽和されたタンパク質は、３：２のタンパク質：溶液容量比で、貯蔵器溶液（１０〜２０％ＰＥＧ４０００、０．１Ｍカコジル酸、ｐＨ６、および５０ｍＭ  ｎ−オクチル−β−Ｄ−グリコシド洗剤）と混合される。この混合物の縣滴またはシッティングドロップが、貯蔵器溶液の上に置かれ、結晶が蒸気拡散によって成長させられた。本発明のほかの実施形態は、これらの成分の比が、＋／−１０％だけ変えられる同様な手順を含む。ほかの実施形態において、タンパク質キナーゼは、ｐ３８αおよびｐ３８βからなる群から選択される。
【０１６０】
本発明にしたがって成長させられた結晶は、少なくとも１０Å分解能、例えば０．１５〜１０．０Å、またはその中のあらゆる範囲の値、例えば１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、または３．５までＸ線を回折し、結晶構造を決定するには、３．５Åまたはそれ以上の分解能が好ましい。しかしながら、より低い分解能を有する回折パターン、例えば２５〜３．５Åも有用である。
【０１６１】
本発明のあるいくつかの実施形態によれば、成長の間、これらの結晶のいくつかは、場合により除去され、洗浄され、生物活性についてアッセイされる。
【０１６２】
ほかの実施形態において、多重同型置換のために用いられる重原子誘導体は、データ収集の間、これらの結晶を水銀試薬とともに浸漬するか、または結晶を気体キセノン（Ｘｅ）雰囲気中に置くことによって得ることができる（Ｓｃｈｉｌｔｚら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．２７：９５０−９６０（１９９４））。適切な水銀試薬は、ナトリウムｐ−クロロメルキュリベンジルスルホネート（ＰＣＭＢＳ）を含んでいる。水銀試薬の濃度は、約０．１ｍＭ〜約０．５ｍＭである。
【０１６３】
本発明の追加の態様は、タンパク質キナーゼ、例えばｐ３８タンパク質キナーゼ、および式Ｉによる化合物を含んでいる組成物である。ほかの実施形態において、この組成物はさらに、開形態におけるキナーゼ、例えばｐ３８タンパク質キナーゼの結晶化に適した媒質も含んでいる。この結晶化に適した媒質は、緩衝剤、ｐＨ調節剤、塩、ポリマー、沈殿剤、およびこれらの混合物を包含しうるが、これらに限定されるわけではない。
【０１６４】
本発明の別の実施形態は、式Ｉによる化合物、タンパク質キナーゼ、および結晶化に適したキャリヤを含んでいる組成物を目的とする。例えば一実施形態において、この組成物は、式Ｉによる化合物、タンパク質キナーゼ、および水を含んでいる。この組成物は場合によりさらに、次のもの：緩衝剤、ｐＨ調節剤、塩、ポリマー、沈殿剤、およびこれらの混合物の１またはそれ以上を含んでいてもよい。
【０１６５】
本発明による適切な組成物は、式Ｉによる化合物；ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ、Ｌｃｋ、Ｌｕｎ、Ｔｉｅ２、およびＴＲＫからなる群から選択されたタンパク質キナーゼ；水；および緩衝剤を含んでいる。別の実施形態において、この組成物は、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択されたタンパク質キナーゼ；式Ｉによる化合物；および適切な結晶化媒質を含んでいる。
【０１６６】
別の適切な組成物は、式Ｉによる化合物；ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ、Ｌｃｋ、Ｌｕｎ、Ｔｉｅ２、およびＴＲＫからなる群から選択されたタンパク質キナーゼ；水；トリス−ＨＣｌ；および緩衝剤を含んでいる。
【０１６７】
別の適切な組成物は、式Ｉによる化合物；ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ、Ｌｃｋ、Ｌｕｎ、Ｔｉｅ２、およびＴＲＫからなる群から選択されたタンパク質キナーゼ；水；グリセロール；および緩衝剤を含んでいる。
【０１６８】
別の適切な組成物は、１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−［１，２，５］チアジアゼパン−５−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア、１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−オキソ−ピペラジン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］−ウレア、１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア、および１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−［１，４］ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレアからなる群から選択された化合物；タンパク質キナーゼ；水；および緩衝剤を含んでいる。別の適切な組成物は、本明細書に記載された特定の実施形態または下位群のいずれかから選択された化合物；タンパク質キナーゼ；水；および緩衝剤を含んでいる。
【０１６９】
（薬品の同定または設計方法）
本発明の別の態様は、タンパク質キナーゼのアロステリック部位へ結合するか、またはその中に嵌め込まれる分子を設計または同定する方法を目的とする。タンパク質キナーゼのアロステリック部位へ結合するか、またはその中に嵌め込まれる分子を設計または同定することによって、前記分子を、あるいくつかのタンパク質キナーゼ媒介疾患および状態についての効果的な処置また予防へと開発することができる。アロステリック部位へ結合するか、またはその中に嵌め込むことによって、分子は、タンパク質キナーゼの正常な機能を阻害する。タンパク質キナーゼの正常な機能を阻害することによって、この分子は、前記状態を予防または処置するのに効果的である。本発明の１つの態様は、分子の設計および同定方法であって、前記分子の設計および同定プロセスの使用を含み、前記分子がタンパク質キナーゼのアロステリック部位へ結合するか、またはその中に嵌め込まれる方法を目的とする。
【０１７０】
このアロステリック部位の静電ポテンシャルマップは、本発明による分子の同定または設計プロセスにおいて有用なアロステリック部位についての情報を明らかにする。例えば、このアロステリック部位のあるいくつかの部分は、より電気陰性であり、一方、ほかの区域は、より電気陽性である。この分子とアロステリック部位との間の引力相互作用を増すために、この分子の電気陰性部分が、アロステリック部位の電気陽性部分と相互作用することができるように、およびこの分子の電機陽性部分が、アロステリック部位の電気陰性部分と相互作用することができるように、化合物を同定または設計することが望まれるであろう。このアロステリック部位の静電ポテンシャルのほかの表示は、当業界において公知の方法を用いて決定することができる。
【０１７１】
このアロステリック部位の親油性ポテンシャルマップは、本発明による分子の同定または設計プロセスにおいて有用なアロステリック部位についての情報を明らかにする。例えばこのアロステリック部位のあるいくつかの部分は、より親油性であり、一方、ほかの区域は、より親水性である。この分子とアロステリック部位との間の引力相互作用を増すために、この分子の親油性部分が、アロステリック部位の親油性部分と相互作用することができるように、およびこの分子の親水性部分が、アロステリック部位の親水性部分と相互作用することができるように、化合物を同定または設計することが望まれるであろう。このアロステリック部位の親油性ポテンシャルのほかの表示は、当業界において公知の方法を用いて決定することができる。
【０１７２】
このアロステリック部位の追加の特徴は、本明細書に記載された方法による分子の同定または設計のための指針を与える。したがってあるいくつかの実施形態において、アロステリック部位と相互作用する、少なくとも１つの芳香族またはヘテロアリール部分、例えばチオフェン部分を含有する分子を同定または設計することが有利である。
【０１７３】
本発明の追加の態様は、アロステリック部位へ結合するか、またはその中に嵌め込まれる分子であって、このアロステリック部位の１またはそれ以上のアミノ酸との１またはそれ以上の相互作用を形成する分子を同定または設計することである。
【０１７４】
別の実施形態において、本発明にしたがって同定または設計された分子は、２０マイクロメートル（μＭ）またはそれ以下の予測された親和性を有する。ほかの実施形態において、この分子は、１μＭまたはそれ以下の予測された親和性を有する。ほかの好ましい実施形態において、この分子は、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、または１ｎＭ未満の予測された親和性を有する。
【０１７５】
別の実施形態において、本発明にしたがって同定または設計された分子は、約−６〜約−１６ｋｃａｌ／モルの計算された結合自由エネルギーを有する。ほかの実施形態において、この分子は、約−１０〜約−１４ｋｃａｌ／モルの計算された結合自由エネルギーを有する。ほかの実施形態において、この分子は、約−８〜約−１２ｋｃａｌ／モルの計算された結合自由エネルギーを有する。このような計算は、通常の技術者の技術を用いて行なわれる。例えば、Ａｑｖｉｓｔら、Ａｃｃｏｕｎｔｓ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３５（６）：３５８−３６５（２００２）およびこれに引用された文献参照。これは、参照して本明細書に組み込まれる。
【０１７６】
別の実施形態において、本発明にしたがって設計または同定された化合物の予想された結合エネルギーは、約−１０ｋｃａｌ／モル〜約−１５ｋｃａｌ／モルである。ほかの適切な範囲は、約−１０ｋｃａｌ／モル〜約−３０ｋｃａｌ／モル、または約−３５ｋｃａｌ／モルを包含する。一実施形態において、１つの分子またはその断片の予測された結合エネルギーは、米国特許第６，７３５，５３０Ｂ１号に記載されている方法にしたがって計算される。これは、その全体が参照して本明細書に組み込まれる。
【０１７７】
別の実施形態において、本発明にしたがって同定または設計された分子は、２０マイクロメートル（μＭ）またはそれ以下の親和性を有する。ほかの実施形態において、この分子は、１μＭまたはそれ以下の親和性を有する。ほかの好ましい実施形態において、この分子は、１００ｎＭ、１０ｎＭ、または１ｎＭ未満の親和性を有する。このような測定は、当業者の技術の範囲内にある。適切なアッセイは、本明細書に記載されている。一実施形態において、この分子は、本明細書に記載されたアッセイのいずれか１つにおいて決定されたように上に列挙された親和性値のいずれか１つを有する。
【０１７８】
（これらの化合物および組成物のさらなる使用）
本発明のさらなる態様は、式Ｉの化合物の使用方法を目的とする。
【０１７９】
式Ｉによる化合物は、タンパク質キナーゼ媒介状態の処置または予防に有用である。一実施形態において、本発明は、タンパク質キナーゼ媒介状態を処置、予防、または改善する方法であって、式Ｉによる化合物の有効量を、このような処置を必要としている被験者に投与することを含む方法を目的とする。本発明の一実施形態において、この方法は、上に列挙された個々の実施形態の１またはそれ以上から選択された化合物を用いる。別の実施形態において、このタンパク質キナーゼ媒介状態は、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択されたキナーゼの１またはそれ以上によって媒介された状態である。別の実施形態において、このタンパク質キナーゼは、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂ１１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−アルファ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ベータ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、ＬｙｎＡ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−アルファ、およびＳｒｃからなる群から選択される。別の実施形態において、このタンパク質キナーゼ媒介状態は、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、およびＴｒｋＢからなる群から選択されたキナーゼの１またはそれ以上によって媒介された状態である。
【０１８０】
ほかの実施形態において、式Ｉによる化合物は、キナーゼ媒介状態の処置または予防のために有用である。一実施形態において、本発明は、キナーゼ媒介状態を処置、予防、または改善する方法であって、式Ｉによる化合物の有効量を、このような処置を必要としている被験者に投与することを含む方法を目的とする。本発明の一実施形態において、この方法は、上に列挙された個々の実施形態の１またはそれ以上から選択された化合物を用いる。
【０１８１】
一実施形態において、この状態または疾患は、ｐ３８αによって媒介される。
【０１８２】
本発明の別の実施形態は、炎症性状態の処置または予防を目的とする。一実施形態において、本発明は、炎症性状態または疾患を処置、予防、または改善する方法であって、式Ｉによる化合物の有効量を、このような処置を必要としている被験者に投与することを含む方法を目的とする。本発明の一実施形態において、この方法は、上に列挙された個々の実施形態の１またはそれ以上から選択された化合物を用いる。
【０１８３】
本明細書において開示された方法の被験者は好ましくは、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ニワトリ、七面鳥、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、およびモルモットを包含するがこれらに限定されるわけではない動物であり、より好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。
【０１８４】
本発明において用いられている「キナーゼ媒介状態」という用語は、タンパク質キナーゼがある役割を果たすことが知られているあらゆる疾患またはほかの有害な状態を意味する。これは、インターロイキンまたはＴＮＦ、特にＴＮＦ−α過剰生産によって引起こされることが知られている状態を包含するが、必ずしもこれらに限定されるわけではない。このような状態は、非限定的に、炎症性疾患、自己免疫病、慢性閉塞性肺疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、癌（例えば結腸癌、非小細胞肺癌、および前立腺癌）、感染病、神経変性病、アレルギー、脳卒中における再灌流／虚血、心臓発作、脈管形成障害、器官低酸素症、血管肥厚化、心臓肥大、トロンビン誘発血小板凝集、およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連した状態を包含する。
【０１８５】
処置または予防することができる炎症性疾患は、急性膵炎、慢性膵炎、喘息、アレルギー、および成人呼吸窮迫症候群を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１８６】
本発明の化合物は、増殖因子依存性脈管形成にともなって生じる疾患、例えば癌、黄斑変性、および関節炎を予防または処置するために用いることができる。このような増殖因子脈管形成は、アンジオポエチン１、脈管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、および血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）によって媒介されうる。
【０１８７】
処置または予防されうる自己免疫病は、糸球体腎炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、慢性甲状腺炎、バセドウ病、自己免疫胃炎、糖尿病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬、または受容者に対する移植片の疾患を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１８８】
処置または予防されうる破壊性骨障害は、骨粗鬆症、変形性関節症、および多発性骨髄腫関連骨障害を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１８９】
処置または予防されうる増殖性疾患は、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性黒色腫、カポジ肉腫、および多発性骨髄腫を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１９０】
処置または予防されうる脈管形成障害は、充実性腫瘍、眼の新血管新生（ｎｅｏｖａｓｃｕｌｉｚａｔｉｏｎ）、小児血管腫（ｈａｅｍａｎｇｉｏｍａｓ）を包含する。
【０１９１】
処置または予防されうる感染病は、敗血症、敗血性ショック、および細菌性赤痢を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１９２】
処置または予防されうるウイルス病は、急性肝炎感染（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎）、およびＣＭＶ網膜炎を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１９３】
この発明の化合物によって処置または予防されうる神経変性病は、アルツハイマー病、パーキンソン病、および外傷によって引起こされる脳虚血または神経変性病を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【０１９４】
本発明の化合物および組成物は、アレルギーの処置および／または予防に用いることができる。一実施形態において、この化合物または組成物は、アレルギー反応の炎症性症状を処置または予防するために用いられる。別の実施形態において、この化合物または組成物は、アレルゲンによって引起こされた呼吸器炎症性応答を処置または予防するために用いられる。
【０１９５】
別の実施形態において、本発明の化合物または組成物は、癌、例えば結腸癌、非小細胞肺癌、および前立腺癌を処置するために用いられる。一実施形態において、この化合物または組成物は、慢性炎症と関連した癌を処置するために用いられる。これは、結腸直腸癌、結腸癌、食道癌、中皮腫、卵巣癌、および胃癌を包含するが、これらに限定されるわけではない。別の実施形態において、この化合物または組成物は、腫瘍形成を遮断することによって癌を処置するために用いられる。別の実施形態において、この化合物または組成物は、転移を阻害することによって癌を処置するために用いられる。別の実施形態において、この化合物または組成物は、アポトーシスを誘発することによって癌を処置するために用いられる。
【０１９６】
「ｐ３８媒介状態」はまた、脳卒中における虚血／再灌流、心臓発作、心筋虚血、器官低酸素症、血管肥厚化、心臓肥大、およびトロンビン誘発血小板凝集も包含する。
【０１９７】
式Ｉの化合物はさらに、健康な被験者が炎症性状態またはｐ３８媒介状態を発症するのを阻害または予防するために、被験者に投与されてもよい。炎症性状態またはｐ３８媒介状態を有していないが、それを発症するかもしれない被験者が、この状態を予防または阻害するために、式Ｉによる化合物が投与されてもよい。換言すれば、式Ｉの化合物は、炎症性またはｐ３８媒介状態または疾患の発症を予防または阻害する予防薬として用いられてもよい。この方法によれば、式Ｉによる化合物は、炎症性またはｐ３８媒介状態または疾患の有意な発現を防止するのに有効な用量で投与される。被検者の体の中またはそれの上の式Ｉの化合物の存在は、炎症性またはｐ３８媒介状態または疾患の発症を予防または阻害する。
【０１９８】
本発明の化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量範囲内の有効量で投与されてもよい。本発明の化合物は、単一の一日用量で投与されてもよく、または総一日投薬量が、例えば一日２、３、または４回の分割用量で投与されてもよい。炎症性状態およびｐ３８媒介状態の処置における当業者なら、ここに示されたテスト結果からの有効一日量を決定することができるであろう。正確な投薬量および投薬頻度は、当業者に周知であるように、用いられる式Ｉの特定化合物、処置されている特定の状態、処置されている状態の重症度、および特定の患者の年齢、体重、および一般的な健康状態、ならびに個人が受けているかもしれないほかの薬物療法に応じる。これらの投薬量は、患者の必要条件、処置されている状態の重症度、および用いられている化合物に応じて様々に変えられてもよい。一般に処置は、この化合物の最適用量よりも少ない、より小さい投薬量で開始される。その後、投薬量は、これらの条件下に最適な効果に到達するまで、小さいインクリメントで増加される。便宜上、総一日投薬量は、所望であれば一日の間に、ポーションに分けて投与されてもよい。
【０１９９】
治療的有効量は、疾患の処置のために哺乳動物に投与される時、この疾患のためにこのような処置を実施するのに十分な化合物の量を意味すると理解される。治療的有効量は、化合物、疾患、およびその重症度、および処置される哺乳動物の年齢、体重などに応じて様々であろう。
【０２００】
さらには、これらの投薬量は、特定の用途にしたがって様々に変えることができる。例えば、十分に発症した炎症性状態を有する被験者を処置する時、被験者が炎症性状態を発症するのを予防するために用いられる量と比べて、より多量の式Ｉの化合物が用いられてもよい。
【０２０１】
すべての投与の事例において、式Ｉの化合物は、前記化合物、および本明細書に記載されているような薬学的に受容可能な賦形剤を含んでいる製薬組成物として投与することができると理解される。あるいはまた、式Ｉの化合物は、適切であれば純粋物質として投与されてもよい。
【０２０２】
本発明の追加の態様において、式Ｉの化合物は、単独で、または１またはそれ以上の追加の抗炎症剤と組み合わせて用いられてもよい。本発明の化合物が、１またはそれ以上の追加の抗炎症剤とともに用いられる時、本発明の化合物は、式Ｉの化合物および１またはそれ以上の追加の抗炎症剤を含んでいる製薬組成物が動物に投与されるように、ほかの１または複数の抗炎症剤とともに配合されてもよい。あるいはまた式Ｉの化合物は、１またはそれ以上の追加の抗炎症剤を含んでいる組成物とは別個の製薬組成物として投与することもできる。
【０２０３】
本発明の化合物はまた、薬品発見アッセイにおいても有用である。式Ｉの化合物は、抗炎症剤として、またはタンパク質キナーゼ、例えばＰ３８キナーゼの阻害剤としてのほかの化合物の有効性および／または効能を決定するために、アッセイにおいて用いられてもよい。これらのアッセイは、生体内および試験管内アッセイを包含する。本発明の化合物は、対照として用いることができるか、または新しい有用な抗炎症化合物、またはキナーゼ、例えばＰ３８キナーゼの新しい有用な阻害剤を発見するためのリード化合物として用いることができる。さらには式Ｉの化合物は、タンパク質キナーゼ、例えばＰ３８タンパク質との結晶化錯体を形成するために用いられてもよい。
【０２０４】
これらの化合物はまた、試験管内または生体内でのタンパク質キナーゼの阻害においても用いることができる。タンパク質キナーゼを阻害するために用いられる式Ｉの化合物の量は、生体内で用いられる時、試験管内と比べて必ずしも同じでなくてもよい。例えば特定化合物の薬物動力学および薬力学などの要因は、生体内でタンパク質キナーゼを阻害する時に、より多量かまたはより少量の式Ｉの化合物が用いられることを必要とすることがある。したがって本発明の追加の態様は、タンパク質キナーゼの阻害方法であって、タンパク質キナーゼと式Ｉによる化合物とを接触させる工程を含む方法である。本発明のこの態様の一実施形態において、この方法は、細胞と式Ｉの化合物とを接触させる工程であって、前記細胞がタンパク質キナーゼを有する工程を含む。本発明の別の実施形態において、この方法は、式Ｉの化合物を被験者へ、タンパク質キナーゼを阻害するのに十分な量で投与する工程であって、前記被験者がタンパク質キナーゼを有するか、または発現する工程を含む。一実施形態において、本発明の化合物は、次の媒質：５０μＬの２４ｍＭ  トリス−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．５であって、１３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２％グリセロール、２％ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＤＴＴ、２．５Ｃｉのγ−［３３Ｐ］ＡＴＰ（１，０００Ｃｉ／ミリモル；１Ｃｉ＝３７ＧＢｑ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、１０Ｍ  ＡＴＰ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、および２Ｍ  ＧＳＴ−ＡＴＦ２を含有する媒質中でタンパク質キナーゼを阻害するために用いられる。
【０２０５】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの化合物は、タンパク質キナーゼ、例えばＰ３８を阻害または調節するため、炎症性状態または疾病の処置または予防のため、またはタンパク質キナーゼ媒介状態の処置または予防のために用いられることになる製薬組成物を調製するために用いることができる。
【０２０６】
別の実施形態において、本明細書に記載されている方法のいずれか１つは、上に挙げられた本発明の特定の化合物または下位群のいずれかから選択された化合物、および薬学的に受容可能なその塩を用いる。
【０２０７】
式Ｉによる化合物の生物活性は、当業界において公知の方法を用いて前記化合物をテストすることによって決定することができる。例えば、１またはそれ以上の公知アッセイによって、化合物が炎症性状態を予防、処置、または阻害する能力を評価することができる。
【０２０８】
一実施形態において、１またはそれ以上の公知アッセイを用いて、化合物がｐ３８キナーゼの活性を阻害または調節する能力を評価することができる。１つの公知アッセイは、テスト化合物によるＥＧＦ受容体ペプチドのｐ３８触媒されたリン酸化の阻害についてテストすることである。ＥＧＦ受容体ペプチドは、公開された米国特許出願公報第２００３／０１４９０３７号（Ｓａｌｉｔｕｒｏら）に記載されており、ｐ３８−触媒されたキナーゼ反応におけるホスホリル受容体である。このテスト化合物の阻害活性は、テスト化合物の存在下、およびテスト化合物の非存在下で、ＥＧＦ受容体ペプチドのリン酸化の限度を比較することによって決定することができる。
【０２０９】
化合物のｐ３８阻害活性のテストのための第二アッセイは、ＡＴＰアーゼ活性の阻害についてのテストである。このアッセイは、化合物が活性化ｐ３８のＡＴＰアーゼ活性を阻害する能力を決定する。ｐ３８  ＡＴＰアーゼ活性の産物、すなわちＡＤＰは、ＨＰＬＣ分析によって定量化される。
【０２１０】
第三アッセイは、化合物がｐ３８キナーゼ活性を阻害する能力をテストするもう１つのアッセイである。このアッセイは、下の実施例セクションに詳細に記載されているように、γ−［３３Ｐ］ＡＴＰからの３３ＰのＧＳＴ−ＡＴＦ−２基質、アミノ酸１９−９６（Ｕｐｓｔａｔｅ，ＮＹ，ＵＳＡ）中への組み込みを測定する。この組み込みは、ｐ３８によって触媒される。阻害化合物の存在下において、γ−［３３Ｐ］ＡＴＰからの３３ＰのＧＳＴ−ＡＴＦ−２基質へのｐ３８触媒された組み込みは、より低い。
【０２１１】
化合物がｐ３８を阻害する能力をテストするために用いることができる別のアッセイは、ＭＫＫ６によるｐ３８の活性化動力学を測定するアッセイである。上流キナーゼＭＫＫ６によるｐ３８の活性化は、例えばＥＬＩＳＡを用いて特徴決定される。テスト化合物は、ｐ３８キナーゼで予めインキュベーションされる。
【０２１２】
化合物がリポ多糖体（ＬＰＳ）によって引起こされたＴＮＦα分泌を阻害する能力をテストするアッセイもまた、用いることができる。このようなアッセイは、当業者に公知であり、一例は下に詳細に記載されている。
【０２１３】
さらに、タンパク質のｐ３８ＭＡＰキナーゼ族は、少なくとも４つの異なるイソ型：α、β、γ、およびδを含むと理解される。ｐ３８ＭＡＰキナーゼのほかの名称は、サイトカイン抑制抗炎症薬品結合タンパク質（ＣＳＢＰ）、ＣＳＢＰキナーゼ、およびストレス活性化タンパク質キナーゼ（ＳＡＰＫ）を包含するが、これらに限定されるわけではない。ｐ３８ＭＡＰキナーゼの配列は、次の米国特許：第５，７８３，６６４号；第５，７７７，０９７号；第５，９５５，３６６号；第６，０３３，８７３号；第５，８６９，０４３号；第６，４４４，４５５Ｂ１号；第５，９４８，８８５号；および第６，３７６，２１４Ｂ１号に開示されている。
【０２１４】
式Ｉによる化合物のキナーゼ活性を決定するために用いられる追加のアッセイは、実施例セクションにおいて下に列挙されている。
【０２１５】
（化合物の調製方法）
本発明における使用のための化合物は、次の説明において概要が示されている方法にしたがって合成することができる。本発明における使用のための化合物は、当業界において公知の手順を用いて合成することができる。次の一般図式は、本発明の化合物を調製するために用いられる合成方法を例証する。
【０２１６】
本発明の化合物は、下に記載された方法の少なくとも１つを用いて調製することができる。式Ｉ（式中、ＧはＣ（Ｏ）またはＣＨ２である）の化合物は、次の図式に示されている一般的方法Ｉにしたがって調製することができる：
【０２１７】
【化１４】
2008523072.tif 000014
（式中、ＧはＣＨ２またはＣ（Ｏ）であり；Ｑ、Ｘ１、Ｘ２、およびＺは、上に規定されているとおりであり；Ｒ１３は、式Ｉに示されているように、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３とともにフェニル基である）。工程ａは、エステルを加水分解するために塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムを用いる。その結果として生じた酸はついで、工程ｂにおいて、ホスゲンと反応させられて環状無水物を形成し、これはついで、適切なアミン、Ｒ１３−ＮＨ２と反応させられて、カルボン酸（ここでＧはＣ（Ｏ）である）を形成する。このカルボン酸はついで、
【０２１８】
【化１５】
2008523072.tif 000015
と反応させられて、式Ｉ（式中、ＧはＣ（Ｏ）である）による化合物を形成する。所望であれば、この化合物は場合によりさらに、Ｃ（Ｏ）をＣＨ２へ還元するために、還元剤、例えばＢＨ３−ＴＨＦと、工程（ｅ）において反応させることができる。あるいくつかの実施形態において、カップリング剤が、工程ｄにおいて用いられてもよい。適切なカップリング剤は、ＥＤＣＩ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、および酸、例えばＨＣｌを含んでいる。
【０２１９】
例えば式Ｉ（式中、ＧはＣ（Ｏ）またはＣＨ２である）による化合物は、次の図式にしたがって調製することができる：
【０２２０】
【化１６】
2008523072.tif 000016
（式中、Ｒ１３、Ｘ１、Ｘ２、およびＺは、上に規定されている）。工程ａは、塩基、例えば水酸化カリウムを用いる。工程ｂは、ＣＯＣｌ２を用いる。工程ｃは、適切なアミン、Ｒ１３−ＮＨ２を用いる。工程ｄは、式
【０２２１】
【化１７】
2008523072.tif 000017
のアミンを用いる。工程ｅは、ＢＨ３−ＴＨＦを用いる。適切な触媒またはカップリング剤、例えば酸、ＥＤＣＩ、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを、工程ｄにおけるアミンの形成を実施するために用いることができる。
【０２２２】
別の例として、式Ｉ（式中、ＧはＣ（Ｏ）またはＣＨ２である）による化合物は、次の図式にしたがって同様に調製することができる：
【０２２３】
【化１８】
2008523072.tif 000018
（式中、Ｒ１３、Ｘ１、Ｘ２、およびＺは、上に規定されているとおりである）。
【０２２４】
別の方法、すなわち方法ＩＩにおいて、式Ｉ（式中、ＧはＣ（Ｏ）であり、Ｒ２は、
【０２２５】
【化１９】
2008523072.tif 000019
である）による化合物は、次の図式に示されているように調製することができる：
【０２２６】
【化２０】
2008523072.tif 000020
（式中、Ｑ、Ｒ１３、Ｘ１、およびＸ２は、式Ｉについて規定されているとおりである）。方法ＩＩにおいて、工程ａは、この化合物と塩基、例えばＮａＯＨまたはＫ２ＣＯ３とを反応させて酸を形成し、これはついで、適切なアミン
【０２２７】
【化２１】
2008523072.tif 000021
と反応させられて、アミドを形成する工程を含む。このアミドはついで、２，２，２−トリフルオロエチルクロロホルメートと反応させられてカルバメートを形成する。このカルバメートはついで、アミンＲ１３−ＮＨ２と反応させられて、式Ｉの化合物を形成する。
【０２２８】
例えば式Ｉによる化合物は、次のように、方法ＩＩにしたがって調製することができる：
【０２２９】
【化２２】
2008523072.tif 000022
この場合、工程ａは、アミノエステルとＫＯＨとを反応させ、ついでその結果生じたアミノ酸は、ＥＤＣＩおよびＨＯＢＴと反応させられ；ついでアミノアミドと
【０２３０】
【化２３】
2008523072.tif 000023
とを反応させ；ついでＲ１３−ＮＨ２とカルバメートとを反応させることによってウレアを形成する。
【０２３１】
対応出発アミンは、商業的に入手しうるか、または文献に報告されている方法によって調製することができる。当然ながら、当業界において周知のほかの方法および手順が、式Ｉのあるいくつかの化合物を調製するために用いられてもよい。
【０２３２】
当然ながら、当業界において公知のほかの方法および手順が、式Ｉのあるいくつかの化合物を調製するために用いられてもよい。
【０２３３】
次の実施例は、本発明の方法、化合物、および組成物を例証するが、限定的ではない。ほかの適切な修正例、および当業者には明白な、通常遭遇する多様な条件およびパラメーターの適応例は、本発明の精神および範囲内にある。
【０２３４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、標準的手順にしたがって記録された。有意ピークは、プロトン数、多重性（ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｂｒ  ｓ、広幅一重線）、および１または複数の結合定数（ヘルツ）の順に表にされている。
【実施例】
【０２３５】
次の説明は、式Ｉによるあるいくつかの化合物、およびこれらの化合物を調製するためのあるいくつかの中間体を調製するために用いられた手順を示す。
【０２３６】
（実施例１）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−［１，２，５］チアジアゼパン−５−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２３７】
【化２４】
2008523072.tif 000024
（実施例２）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−オキソ−ピペラジン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２３８】
【化２５】
2008523072.tif 000025
（実施例３）
１−［５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル］−３−［４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル］ウレア
【０２３９】
【化２６】
2008523072.tif 000026
（実施例４）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−［１，４］ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２４０】
【化２７】
2008523072.tif 000027
（実施例５）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２４１】
【化２８】
2008523072.tif 000028
ジオキサン（３０ｍＬ）中の６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（３，７ｇ、１５ミリモル）の溶液へ、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（３．４ｇ、１４ミリモル）を添加し、この反応混合物を９０℃で４時間加熱した。これらの揮発性物質を減圧下に蒸発させると、粗生成物を生じ、これは、さらなる精製を行なわずに次の工程で用いられた。
【０２４２】
ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（４−ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレイド）チオフェン−３−カルボン酸（約１４ミリモル）の溶液へ、チオモルホリン−１，１−ジオキシド（２．２７ｇ、１６．８ミリモル、１．２当量）、ＨＯＢｔ（２．０８ｇ、１５．４ミリモル、１．１当量）、ＥＤＣＩ（３．２２ｇ、１６．８ミリモル、１．２当量）を添加し、この混合物を、室温で１６時間攪拌した。これらの揮発性物質を、減圧下に蒸発させると粗生成物を生じ、これを、飽和炭酸水素ナトリウム（３×４０ｍＬ）および酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機相を乾燥し、エタノール（４０ｍＬ）で希釈した。回転蒸発器を用いてこの溶液を濃縮した時、固体の沈殿が発生した。この固体を、エタノール（７０ｍＬ）で消化し、濾過し、エタノールで洗浄すると生成物を生じ、これを、真空下７０℃で２４時間乾燥した（収率＝７．２ｇ、８２％）。
【０２４３】
【化２９】
2008523072.tif 000029
（実施例６）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２４４】
【化３０】
2008523072.tif 000030
ＢＡＬアルデヒド樹脂（０．５ｇ、１ミリモル／ｇ、０．５ミリモル）を、２０ｍＬシリンジ反応器に入れた。ＤＭＦ（３ｍＬ）中の５％ＡｃＯＨ中４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（２４３ｍｇ、１．０ミリモル）の溶液を、シリンジに装入し、このシリンジを、２時間振とうした。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の５％ＡｃＯＨ中ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２１２ｍｇ、１．０ミリモル）の溶液を、シリンジへ添加した。室温で２時間振とうした後、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の５％ＡｃＯＨ中ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２１２ｍｇ、１．０ミリモル）の追加溶液を、シリンジへ添加し、この反応物を一晩振とうした。この樹脂を、ＤＭＦ中の５％ＡｃＯＨ（２×１０ｍＬ）、ＤＭＦ（２×１０ｍＬ）、ＤＣＭ（２×１０ｍＬ）、ＤＣＭ中１０％ジイソプロピルエチルアミン（２×１０ｍＬ）、ＤＣＭ（４×１０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥した。
【０２４５】
第二アミン樹脂（０．２５ミリモル）を、ジオキサン（４ｍＬ）中の６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１１３ｍｇ、０．５０ミリモル）の溶液で処理し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。この樹脂を、ＴＨＦ（２×４ｍＬ）、ＤＣＭ（４×４ｍＬ）で洗浄し、真空下に乾燥した。
【０２４６】
樹脂（０．１ミリモル）上の酸中間体を、ＥＤＣＩ（９６ｍｇ、０．５ミリモル）、ＨＯＢｔ（６８ｍｇ、０．５ミリモル）、およびＤＣＭ（２ｍＬ）中の第二アミン（７５．１ｍｇ、０．５ミリモル）で室温で３時間処理し、ＤＣＭ（２×４ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×４ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×４ｍＬ）で洗浄し、真空下に乾燥した。
【０２４７】
上で調製された樹脂（０．１ミリモル）を、３分間５ｍＬシリンジ中で５０％ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）で処理し、劈開（ｃｌｅａｖａｇｅ）溶液を濾過した。この樹脂をＤＣＭ（１ｍＬ）で洗浄し、組み合わされた溶液を、穏やかな（ｍｉｌｄ）加熱下、窒素吹き付けによって蒸発させると生成物が生じ、これを、酢酸エチル／水性ＮａＨＣＯ３で抽出した。有機相を乾燥し、蒸発させると、所望の生成物を白色固体として生じた（収率＝４４．５ｍｇ）。
【０２４８】
【化３１】
2008523072.tif 000031
（実施例７）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２４９】
【化３２】
2008523072.tif 000032
この実施例の化合物は、実施例６において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、１，１−ジオキソ−１，２，５−チアジアゼパンの代わりに、１，４−ジアゼパン−５−オンを用いた。
【０２５０】
【化３３】
2008523072.tif 000033
（実施例８）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２５１】
【化３４】
2008523072.tif 000034
この実施例の化合物は、実施例６において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、１，１−ジオキソ−１，２，５−チアジアゼパンの代わりに、ピペラジン−２−オンを用いた。
【０２５２】
【化３５】
2008523072.tif 000035
（実施例９）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２５３】
【化３６】
2008523072.tif 000036
４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（３．４ｇ、１４ミリモル）を、ジオキサン（３０ｍＬ）中の６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［３，２−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（分子量＝２２５．２６、３．７ｇ、１５ミリモル）の溶液で処理し、反応混合物を、９０℃で８時間加熱した。
【０２５４】
これらの揮発性物質を、減圧下に蒸発させると粗生成物を生じた。ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレイド）チオフェン−２−カルボン酸（１．４ミリモル）の溶液へ、チオモルホリン−１，１−ジオキシド（２．２７ｇ、１６．８ミリモル、１．２当量）、ＨＯＢｔ（２．０８ｇ、１５．４ミリモル、１．１当量）、ＥＤＣＩ（３．２２ｇ、１６．８ミリモル、１．２当量）を添加し、この混合物を室温で１６時間攪拌した。これらの揮発性物質を、減圧下に蒸発させると粗生成物を生じ、これを、飽和炭酸水素ナトリウム（３×５０ｍＬ）および酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機相を乾燥し、濃縮すると粗生成物を生じ、これを、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中に溶解した。固体沈殿物を濾過し、メタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥すると、所望生成物を生じた（６．０ｇ、７３％）。
【０２５５】
【化３７】
2008523072.tif 000037
（実施例１０）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２５６】
【化３８】
2008523072.tif 000038
１ｍＬのＴＨＦ中の尿酸（６０．６ｍｇ、０．１４７ミリモル、１当量）、ＥＤＣＩ（３４．２ｍｇ、０．１７８ミリモル、１．２当量）、およびＨＯＢｔ（２１．２ｍｇ、０．１５７ミリモル、１．１当量）が入っているガラス瓶へ、チオモルホリン（０．０１５ｍＬ、０．１５８ミリモル、１．１当量）を添加した。このガラス瓶に蓋をし、反応混合物を、室温で攪拌した。２１時間後、反応溶液を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（×１）、水（×１）、およびブライン（×１）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下に除去した。９３：７のジクロロメタン：メタノールを用いた分取ＴＬＣによる精製が、オフホワイト固体として６０．８ｍｇ（８３％）の所望の生成物を生じた。
【０２５７】
【化３９】
2008523072.tif 000039
（実施例１１）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２５８】
【化４０】
2008523072.tif 000040
反応を上（方法１）のように実施すると、淡黄色固体として８６％の所望の生成物を生じた。
【０２５９】
【化４１】
2008523072.tif 000041
（実施例１２）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２６０】
【化４２】
2008523072.tif 000042
この実施例の化合物は、実施例８において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンの代わりに、６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［３，２−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンを用いた。
【０２６１】
【化４３】
2008523072.tif 000043
（実施例１３）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２６２】
【化４４】
2008523072.tif 000044
この実施例の化合物は、実施例７において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、１，１−ジオキソ−１，２，５−チアジアゼパンの代わりに、１，４−ジアゼパン−５−オンを用いた。
【０２６３】
【化４５】
2008523072.tif 000045
（実施例１４）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２６４】
【化４６】
2008523072.tif 000046
この実施例の化合物は、実施例６において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンの代わりに、６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［３，２−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンを用いた。
【０２６５】
【化４７】
2008523072.tif 000047
（実施例１５）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルメトキシ）フェニル）ウレア
【０２６６】
【化４８】
2008523072.tif 000048
第二アミン樹脂（０．２５ミリモル）を、ジオキサン（４ｍＬ）中の６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（１１３ｍｇ、０．５０ミリモル）の溶液で処理し、この反応混合物を９０℃で３時間加熱した。この樹脂を、ＴＨＦ（２×４ｍＬ）、ＤＣＭ（４×４ｍＬ）で洗浄し、真空下に乾燥した。樹脂（０．１ミリモル）上の酸中間体を、ＥＤＣＩ（９６ｍｇ、０．５ミリモル）、ＨＯＢｔ（６８ｍｇ、０．５ミリモル）、およびＤＣＭ（２ｍＬ）中のチオモルホリン１，１−ジオキシド（６８ｍｇ、０．５ミリモル）で、室温で３時間処理し、ＤＣＭ（２×３ｍＬ）、ＴＨＦ（２×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄し、真空下に乾燥した。
【０２６７】
上で調製された樹脂結合中間体へ、ＴＨＦ（３ｍＬ）中の４−ピリジンメタノール（５４．５ｍｇ、０．４ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（７９ｍｇ、０．３ミリモル）を添加した。このシリンジをドライアイス中で数分間冷却した後、ＴＨＦ（１ｍＬ）中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、７１ｍｇ、０．３５モリモル）の溶液を、シリンジへ添加し、このシリンジを室温で１６時間振とうした。この樹脂を、ＴＨＦ（４×４ｍＬ）、ＭｅＯＨ（４×４ｍＬ）、ＤＣＭ（４×４ｍＬ）で洗浄し、高真空下に乾燥した。
【０２６８】
上で調製された樹脂（０．１ミリモル）を、３分間５ｍＬシリンジ中で５０％ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）で処理し、劈開溶液を濾過した。この樹脂をＤＣＭ（１ｍＬ）で洗浄し、組み合わされた溶液を、穏やかな加熱下、窒素吹き付けによって蒸発させると生成物が生じ、これを、酢酸エチル／水性ＮａＨＣＯ３で抽出した。有機相を乾燥し、蒸発させると粗生成物を生じた（所望の化合物は、主要成分プラス約２０％フェノール副生成物であり、これは、次の工程によって除去した）。
【０２６９】
この粗生成物を、ＭｅＯＨ中のＰＳ−ＴＢＳ樹脂（１００ｍｇ）とともに２時間攪拌した。反応物を濾過し、濾過物を濃縮すると所望の生成物が生じた（収率＝９．０ｍｇ）。
【０２７０】
【化４９】
2008523072.tif 000049
（実施例１６）
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２７１】
【化５０】
2008523072.tif 000050
第二アミン樹脂（０．１ミリモル）を、ジオキサン（２ｍＬ）中の２−ｔｅｒｔ−ブチル−４Ｈ−チアゾロ［５，４−ｄ］［１，３］オキサジン−５，７−ジオン（４５ｍｇ、０．２０ミリモル）の溶液で処理し、この反応混合物を９０℃で３時間加熱した。この樹脂を、ＴＨＦ（２×３ｍＬ）、ＤＣＭ（４×３ｍＬ）で洗浄し、真空下に乾燥した。
【０２７２】
樹脂（０．０５ミリモル）上の酸中間体を、ＥＤＣＩ（４８ｍｇ、０．２５ミリモル）、ＨＯＢｔ（１２．３４ｍｇ、０．２５ミリモル）、およびジクロロメタン（２ｍＬ）中のチオモルホリン１，１−ジオキシド（３４ｍｇ、０．２５ミリモル）で、３時間室温で処理し、ジクロロメタン（２×３ｍＬ）、ＴＨＦ（２×３ｍＬ）、ジクロロメタン（３×３ｍＬ）で洗浄し、真空下に乾燥した。
【０２７３】
上で調製された樹脂（０．０５ミリモル）を、５０％ＴＦＡ：ジクロロメタン（２ｍＬ）で３分間５ｍＬシリンジ中で処理し、劈開溶液を濾過した。この樹脂をジクロロメタン（１ｍＬ）で洗浄し、組み合わされた溶液を、穏やかな加熱下、窒素吹き付けによって蒸発させると生成物が生じ、これを、酢酸エチル：水性ＮａＨＣＯ３で抽出した。有機相を乾燥し、蒸発させると粗生成物を生じ、これを、分取ＳＦＣによって精製すると、所望の生成物を固体として生じた。
【０２７４】
【化５１】
2008523072.tif 000051
（実施例１７）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１−オキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２７５】
【化５２】
2008523072.tif 000052
反応は、オキソチオモルホリンを用いて上（方法１）のように実施すると（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９６２、２７、２８２−２８４）、８３％の所望の生成物をオフホワイト固体として生じた。
【０２７６】
【化５３】
2008523072.tif 000053
（実施例１８）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２７７】
【化５４】
2008523072.tif 000054
この実施例の化合物は、実施例９において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドの代わりに、４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニルアミンを用いた。
【０２７８】
【化５５】
2008523072.tif 000055
（実施例１９）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−オキソピペラジン−４−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２７９】
【化５６】
2008523072.tif 000056
この実施例の化合物は、実施例１２において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドの代わりに、４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニルアミンを用いた。
【０２８０】
【化５７】
2008523072.tif 000057
（実施例２０）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２８１】
【化５８】
2008523072.tif 000058
この実施例の化合物は、実施例６において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドの代わりに、４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニルアミンを用いた。
【０２８２】
【化５９】
2008523072.tif 000059
（実施例２１）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２８３】
【化６０】
2008523072.tif 000060
この実施例の化合物は、実施例７において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドの代わりに、ニルアミン（ｎｙｌａｍｉｎｅ）を用いた。
【０２８４】
【化６１】
2008523072.tif 000061
（実施例２２）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２８５】
【化６２】
2008523072.tif 000062
４−（３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ）ベンゼンアミン。６０ｍＬのＤＭＦ中の４−アミノフェノール（２．１８５ｇ、２０．０ミリモル、１当量）が入っているガラス瓶へ、ｔ−ＢｕＯＫ（２．４６８ｇ、２２．０ミリモル、１．１当量）、ついで３，４，５−トリクロロピリジン（３．６５３ｇ、２０．０ミリモル、１当量）を添加した。このフラスコに凝縮器を取り付け、混合物を窒素下８０℃で攪拌した。反応混合物を冷却した後、酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈し、水（３×１５０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下に除去した。粗材料をシリカゲル上に吸収し、２，５００ｍＬの１：１ヘキサン：酢酸エチルを用いたフラッシュカラム（７．５×１２ｃｍシリカ）によって精製すると、４．６３４８ｇ（９１％）の生成物を淡黄色結晶質固体として生じた。
【０２８６】
５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（４−（３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレイド）チオフェン−３−カルボン酸
【０２８７】
【化６３】
2008523072.tif 000063
ＴＨＦ中の６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオンおよび４−（３，５−ジクロロピリジン−４−イルオキシ）ベンゼンアミンが入っているガラス瓶に蓋をし、８０℃で攪拌した。約６時間後、反応物を冷却し、十分な溶媒を真空下に除去すると、油残渣が残った。ジクロロメタンを添加すると（約１０ｍＬ）、生成物が沈殿し、混合物を少なくとも１時間そのままにしておいた。混合物を濾過し（濾紙；真空吸引）、これらの固体をジクロロメタンで洗浄した。フィルター上の固体、およびフラスコ中に残留する固体は、アセトン中に溶解することによって収集した。溶媒を真空下に除去すると、８９％の生成物が白色の細かい結晶質固体として生じた。
【０２８８】
反応を上（方法１）のように実施すると、９１％の所望の生成物が、淡黄色油として生じた。
【０２８９】
【化６４】
2008523072.tif 000064
（実施例２３）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（モルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２９０】
【化６５】
2008523072.tif 000065
この実施例の化合物は、実施例１１において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（ピリジン−４−イルオキシ）アニリンの代わりに、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドを用いた。
【０２９１】
【化６６】
2008523072.tif 000066
（実施例２４）
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（４−（ピリジン−４−イルメチル）フェニル）ウレア
【０２９２】
【化６７】
2008523072.tif 000067
この実施例の化合物は、実施例５において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドの代わりに、４−（ピリジン−４−イルメチル）アニリンを用いた。
【０２９３】
【化６８】
2008523072.tif 000068
（実施例２５）
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル）−３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレア
【０２９４】
【化６９】
2008523072.tif 000069
この実施例の化合物は、実施例１８において用いられた手順と類似の手順を用いて調製した。ただし、４−（ピリジン−４−イルオキシ）アニリンの代わりに、４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミドを用いた。
【０２９５】
【化７０】
2008523072.tif 000070
（実施例２６）
これらの化合物の生物活性
ヒト非活性化ｐ３８キナーゼ（分子量＝４３ｋＤａ）を、本明細書に記載されたプロトコルにしたがって精製した。薬品は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍから購入した。蛍光特徴決定は、Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ（Ｖａｒｉａｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗａｌｎｕｔ  Ｃｒｅｅｋ，ＣＡ）を用いて実施した。研究グレードＣＭ５センサーチップおよびカップリング試薬（Ｎ−エチル−Ｎ’−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＥＤＣ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、および１ＭエタノールアミンＨＣｌ、ｐＨ８．５）は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ（Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から購入した。バイオセンサー分析は、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００ＳＰＲ器具を用いて実施した。動力学分析は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ分光計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）で実施した。
【０２９６】
ｐ３８キナーゼアッセイ：ｐ３８のタンパク質キナーゼ活性は、γ−［３３Ｐ］ＡＴＰからの３３ＰのＧＳＴ−ＡＴＦ−２基質、アミノ酸１９−９６（Ｕｐｓｔａｔｅ，ＮＹ，ＵＳＡ）中への組み込みを測定することによって決定した。これらの反応は、５０μＬの２４ｍＭ  トリス−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．５であって、１３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２％グリセロール、２％ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＤＴＴ、２．５Ｃｉのγ−［３３Ｐ］ＡＴＰ（１，０００Ｃｉ／ミリモル；１Ｃｉ＝３７ＧＢｑ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、１０Ｍ  ＡＴＰ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、および２Ｍ  ＧＳＴ−ＡＴＦ２を含有するものの最終容積中で実施された。化合物を、１０ｎＭ  ｐ３８とともに３０℃で２０分間前インキュベーションした。これらの反応は、ＧＳＴ−ＡＴＦ２およびＡＴＰの添加によって開始し、３０℃で７０分間インキュベーションし、その後１０μＬの６００ｍＭリン酸の添加によって停止させた。リン酸化基質を、ホスホセルロース９６−ウエルプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭＡＰＨＮＯＢ  １０）で捕獲し、１００ｍＭリン酸で洗浄し、ＢｅｃｋｍｅｎＣｏｕｌｔｅｒ  ＬＳ６５００液体シンチレーションカウンターで計数した。
【０２９７】
Ａｂ１キナーゼ活性：２５μＬの最終反応容積において、Ａｂｌｅ（ｍ）（５−１０ｍＵ）を、ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０μＭ  ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０２９８】
ＣＨＫ２キナーゼ活性：２５ｍｌの最終反応容積において、ＣＨＫ２（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２００ｍＭ  ＫＫＫＶＡＳＲＳＧＬＹＲＳＰＳＭＰＥＮＬＮＲＰＲ、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０２９９】
ｃ−ＲＡＦキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ｃ−ＲＡＦ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、２５ｍＭ  トリスｐＨ７．５、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．６６ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３００】
ｃＳＲＣキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ｃＳＲＣ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２５０μＭ  ＫＶＥＫＩＧＥＧＴＹＧＶＶＹＫ（Ｃｄｃ２ペプチド）、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０１】
ＥｐｈＢ４キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＥｐｈＢ４（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕｅ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、フィルターマットＡ上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０２】
Ｆｌｔ３キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、Ｆｌｔ３（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０μＭ  ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５ｍＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０ｍＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０３】
ＧＳＫ３βキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＧＳＫ３β（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８μＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０ｍＭ  ＹＲＲＡＡＶＰＰＳＰＳＬＳＲＨＳＳＰＨＱＳ（ｐ）ＥＤＥＥＥ（リンＧＳ２ペプチド）、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、５０ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０４】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＩＧＦ−１Ｒ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、５０ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、０．１％β−メルカプトエタノール、２５０μＭ  ＫＫＫＳＰＥＧＹＶＮＩＥＦＧ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０５】
ＪＮＫ２α２キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＪＮＫ２α２（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、５０ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％β−メルカプトエタノール、３μＭ  ＡＴＦ２、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０６】
ＪＮＫ３キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＪＮＫ３（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、５０ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％β−メルカプトエタノール、２５０μＭ  ペプチド、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０７】
Ｌｃｋキナーゼ活性：２５ｍｌの最終反応容積において、Ｌｃｋ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、５０ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５０μＭ  ＫＶＥＫＩＧＥＧＴＹＧＶＶＹＫ（Ｃｄｃ２ペプチド）、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０８】
Ｌｙｎキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、Ｌｙｎ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、５０ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、０．１％β−メルカプトエタノール、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕｅ、Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、フィルターマットＡ上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３０９】
ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、５０ｍＭ  Ｎａ−β−グリセロホスフェート  ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、３０ｍＭ  ＫＫＬＮＲＴＬＳＶＡ、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１０】
Ｍｅｔキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、Ｍｅｔ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２５０μＭ  ＫＫＫＳＰＥＧＹＶＮＩＥＦＧ、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１１】
ＰＤＧＦＲβキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＰＤＧＦＲβ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、フィルターマットＡ上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１２】
ＰＫＡキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＰＫＡ（ｂ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、３０μＭ  ＬＲＲＡＳＬＧ（ケンプチド）、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、５０ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１３】
ＰＫＣαキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＰＫＣα（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．０３％トリトンＸ−１００、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌホスファチジルセリン、１０μｇ／ｍｌジアシルグリセロール、０．１ｍｇ／ｍｌヒストンＨ１、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１４】
ＳＡＰＫ２ａキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＳＡＰＫ２ａ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、２５ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１５】
ＳＡＰＫ２ｂキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＳＡＰＫ２ｂ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、２５ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１６】
ＳＡＰＫ３キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＳＡＰＫ３（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、２５ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１７】
ＳＡＰＫ４キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＳＡＰＫ４（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、２５ｍＭ  トリス  ｐＨ７．５、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。１０μＬの反応物を、Ｐ３０フィルターマット上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１８】
Ｔｉｅ２キナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、Ｔｉｅ２（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、フィルターマットＡ上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３１９】
ＴｒｋＢキナーゼ活性：２５μｌの最終反応容積において、ＴｒｋＢ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ  ＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐモル、必要に応じた濃度）でインキュベーションする。反応は、ＭｇＡＴＰミックスの添加によって開始する。室温で４０分間のインキュベーション後、反応を、５μＬの３％リン酸溶液の添加によって停止させる。ついで１０μＬの反応物を、フィルターマットＡ上へ点在させ、乾燥およびシンチレーション計数に先立って、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で１回洗浄する。
【０３２０】
化合物３についてのタンパク質キナーゼ阻害結果を、次の表に示す。
【０３２１】
【表２】
2008523072.tif 000071
実施例１、２、および４の化合物ついてのキナーゼ阻害活性を、次の表に示す。
【０３２２】
【表３】
2008523072.tif 000072
実施例１および２の化合物はまた、２つの細胞系、ＭＣＦ−７およびＵ２６６に対して細胞成長阻害活性についてもテストされた。１０％ＦＢＳが補足され、ＲＰＭＩ１６４０培地中に縣濁されたＪｕｒｋａｔ細胞を、１ウエルあたり２００ｍＬの容積中１ミリリットルあたり１０，０００細胞の密度で、９６ウエルプレートにピペットで入れた。細胞を、５％ＣＯ２中に３７℃で一晩平衡させておいた。ついで細胞を、テスト化合物の存在下、０．０３μＭ〜１０μＭの範囲の濃度で（１／２  ｌｏｇ希釈において）、２４時間インキュベーションした。インキュベーション時間の後、細胞を、ＷＳＴ−１（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ）またはＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（ＢｉｏＳｏｕｒｓｅ）のどちらかを用いて、生存能力について評価した。処理された細胞からの値を、対照細胞からの値と比較し、値を対照パーセントとして表示した。実施例１および２の化合物および１０μＭ未満のＩＣ５０値。
【０３２３】
実施例３の化合物についてのタンパク質キナーゼ阻害結果を、次の表に示す。
【０３２４】
【表４】
2008523072.tif 000073
【０３２５】
【表５】
2008523072.tif 000074
さらには、いくつかのこれらの化合物を、Ｆｌｔ３、ＫＤＲ、Ｔｉｅ２、およびｐ３８を阻害する活性についてテストした。これらの化合物は、受容可能な生物活性、例えばＦｌｔ３については１μＭ未満、ＫＤＲについては＞１０〜０．１μＭ未満、Ｔｉｅ２については＞１０〜１μＭ未満、およびｐ３８については１μＭ未満のＩＣ５０を示す。
【０３２６】
今やこの発明を完全に説明したので、同じことを、条件、配合、およびほかのパラメーターの幅広い同等の範囲内で、本発明の範囲またはこれのあらゆる実施形態に影響を与えることなく実施することができることは、当業者によって理解されるであろう。本明細書に引用されたすべての特許および出版物は、参照してその全体が完全に本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】
2008523072.tif 000079
2008523072.tif 000080