(57)【要約】【課題】本発明は、ビタミンＣ及び／又はその誘導体を含む脱毛治療剤組成物に関する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、ビタミンＣ又はその誘導体を含むことを特徴とする脱毛治療用組成物。
【請求項２】
前記誘導体が、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ−２−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ）、Ｌ−アスコルビン酸パルミテート（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、又はＬ−アスコルビン酸ステアレート（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｓｔｅａｒａｔｅ）であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ビタミンＣ又はその誘導体が、毛包の成長を促進することを特徴とする請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ビタミンＣ又はその誘導体が、毛乳頭細胞の成長を促進することを特徴とする請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
前記ビタミンＣ又はその誘導体が、毛乳頭細胞においてＩＧＦ−１（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）の生産を促進することを特徴とする請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
前記ビタミンＣ又はその誘導体が、毛乳頭細胞及び毛包においてバーシカン（ｖｅｒｓｉｃａｎ）の発現を増加させることを特徴とする請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項７】
前記ビタミンＣ又はその誘導体が、毛乳頭細胞においてアルカリ性ホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）の発現を増加させることを特徴とする請求項１又は２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、ビタミンＣ及びその誘導体を含む脱毛治療剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景技術
一般的に、哺乳類の毛包は非常に組織化しており、多層構造でかつ動的な組織である。毛包は、間葉組織由来の毛乳頭（ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ）及び毛根鞘細胞（ｄｅｒｍａｌ  ｓｈｅａｔｈ  ｃｅｌｌ）のみならず、上皮組織由来の内毛根鞘及び外毛根鞘、マトリックス、並びに毛幹の上皮細胞を有する。上皮組織と間葉組織との相互作用は、毛包の発生に限らず、出生後の毛髪の成長にも不可欠である。
【０００３】
出生後の毛包は、成長期（ａｎａｇｅｎ）、退行期（ｃａｔａｇｅｎ）、及び休止期（ｔｅｌｏｇｅｎ）の周期を有する。成長期において、毛乳頭は、上皮のマトリックス細胞によってカプセル化し、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）など、毛乳頭から分泌される成長因子が上皮細胞を増殖させ、かつ毛幹を生産するように分化させることがわかっている（Ｉｔａｍｉ  Ｓ，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２１２：９８８−９４，１９９５；Ｗｅｒｎｅｒ  Ｓ，ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２６６：８１９−２２，１９９４）。
【０００４】
一方、退行期には、上皮細胞は、腫瘍成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）のような、毛乳頭から分泌された成長抑制因子によってプログラム化したアポトーシスに陥る（Ｓｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１１：９４８−５４，１９９８；Ｈｉｂｉｎｏ  ａｎｄ  Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ．３５：９−１８，２００４）。したがって、毛乳頭細胞から分泌される因子が毛髪の成長を調節することがわかっている。また、毛乳頭の大きさは、毛包の大きさにも比例する（Ｓｔｅｎｎ  ａｎｄ  Ｐａｕｓ，Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．８１：４４９−４９４，２００１）。したがって、毛乳頭細胞の成長を調節したり、これら細胞の遺伝子発現の調節が可能な天然抽出物又は化学物質は、毛髪の成長の調節にも重要な役割を担うものとみられる。
ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸）は、コラーゲンの生合成の補因子活性を有し、培地における補充成分として使用される。しかし、このようなビタミンＣは、水溶液、特に、通常の培養条件下で急速に酸化分解されるため、その用途は限られてしまう。ビタミンＣ誘導体のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩（「Ａｓｃ２−Ｐ」とする。）は、ビタミンＣよりも安定した製剤であり、様々な培地における補充成分として使用されてきた。ビタミンＣと同様、Ａｓｃ２−Ｐも、ヒト真皮線維芽細胞及び骨芽細胞の成長を促進する（Ｈａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７３：２６１−２６７，１９８８）。ビタミンＣ又はＡｓｃ２−Ｐが毛髪の成長及び毛乳頭細胞の成長に及ぼす影響については全く知られていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の開示
そこで、本発明は、上記の必要性に鑑みてなされたものであって、その目的は、毛乳頭細胞及び／又は毛包の成長を促進する脱毛治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の目的を達成するための本発明は、有効成分として、ビタミンＣ又はその誘導体を含む脱毛治療用組成物を提供する。
本発明において、前記誘導体は、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ−２−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ）、Ｌ−アスコルビン酸パルミテート（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、Ｌ−アスコルビン酸ステアレート（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｓｔｅａｒａｔｅ）からなる群から選択されることが好ましく、下記式１のＬ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩が最も好ましい。
【０００７】
【化１】
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【０００８】
また、本発明のビタミンＣ又はその誘導体は、毛包の成長を促進し、かつ毛乳頭細胞の成長を促進し、また、毛乳頭細胞においてＩＧＦ−１（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）の生産を促進し、かつ毛乳頭細胞及び毛包においてバーシカン（ｖｅｒｓｉｃａｎ）の発現を増加させ、毛乳頭細胞においてアルカリ性ホスファターゼ（ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）の発現を増加させることを特徴とする。
発明を実施するための最良の形態
以下、非限定的な実施例を参照して本発明をより詳細に説明する。
【実施例】
【０００９】
実施例１：ヒト毛包の組織培養及び成長分析
生検サンプルは、患者の同意を得た後、慶北大学病院で男性ホルモン性脱毛症患者が毛髪移植手術を受けている間に喉頭部の頭皮部分から得た。毛包は、公知の方法（Ｐｈｉｌｐｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．９７：４６３−４７１，１９９０）によって分離及び培養された。頭皮において、成長期（ａｎａｇｅｎ）の毛包は、双眼解剖顕微鏡下で分離した。分離した成長期毛包の上部１／３を切断した後、下部の２／３の毛包をＷｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ培地（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）で３７℃、５％ＣＯ２下において培養した。毛包をＡｓｃ２−Ｐを添加した培地で９日間培養した後、成長した毛包の長さを解剖顕微鏡にて測定した。
実施例２：毛乳頭細胞の培養及び成長分析
毛乳頭は、双眼顕微鏡下で切開した毛球から分離し、組織培養皿に移した。毛乳頭は、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）及び２０％加熱不活性化したウシ胎仔血清（ＦＢＳ，Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＵＳＡ）を補充したＤＭＥＭ培地で３７℃、５％ＣＯ２下において５日間培養した後、継代培養を行った。継代培養の後に、毛乳頭細胞は、１０％ＦＢＳを有するＤＭＥＭで保持した。２度の継代培養した細胞を本発明にて使用した。
【００１０】
毛乳頭細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で、９６ウェルプレート内に５，０００個の細胞／ウェルの密度で一晩培養した。その後、その培地を様々な濃度のＡｓｃ２−Ｐを有するＤＭＥＭに換えて５日間培養した後、ＭＴＴ法にて細胞数を測定した。
実施例３：毛乳頭細胞における各種遺伝子発現の分析
毛乳頭細胞をＡｓｃ２−Ｐを０．２５ｍＭ含有する培地で５日間培養した後、ＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を用いて分離した。ｃＤＮＡは、ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素及びランダム６量体（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を有するｃＤＮＡ合成キットを用いてＲＮＡから合成した。ｃＤＮＡは、遺伝子特異的プライマー対に増幅した（表１）。表１は、ＲＴ−ＰＣＲプライマー及び条件を示したものである。
【００１１】
本発明では、ＩＧＦ−１（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｌ）、ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、ＶＥＧＦ（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、ＫＧＦ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、コラーゲンI、コラーゲンIII、バーシカン（ｖｅｒｓｉｃａｎ）及びアルカリ性ホスファターゼ（ＡＬＰ、ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）の遺伝子発現を分析した。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
実施例４：毛包におけるバーシカンに対する免疫染色
毛包を０．１ｍＭ及び１ｍＭ  Ａｓｃ２−Ｐで処理した培地で５日間培養した後、バーシカン（ｖｅｒｓｉｃａｎ）に対する免疫染色を行った。
実施例５：統計分析
統計的な違いは、ｔ−テストを用いて分析した。０．０５以下の可能性（Ｐ）値を統計的に有意なものとしてみなした。
【００１４】
上記のような実施例から、本発明者等は、次のような結果を得た。
インビトロにおける毛包の成長促進に対するＡｓｃ２−Ｐの効果
本発明者等は、頭皮から分離したヒト成長期毛包に対するＡｓｃ２−Ｐの効果を調べた。０．０５ｍＭ及び０．２５ｍＭ  Ａｓｃ２−Ｐの存在下におけるＷｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ培地にて９日間毛包を培養した際、顕著な毛包の成長が観察された（図１）。
毛乳頭細胞の成長促進に対するＡｓｃ２−Ｐの効果
Ａｓｃ２−Ｐは、０．０５ｍＭ、０．２５ｍＭ、１ｍＭ及び５ｍＭの濃度において毛乳頭細胞の成長を顕著に促進させた（図２）。特に、０．２５ｍＭの濃度では、対照群に比べて２．４倍の高い成長をみせた。
毛乳頭細胞の遺伝子発現に対するＡｓｃ２−Ｐの効果
Ａｓｃ２−Ｐは、０．２５ｍＭの濃度においてＩＧＦ−１、バーシカン、アルカリ性ホスファターゼ（ＡＬＰ）のｍＲＮＡの濃度を増加させた。反面、ＨＧＦ、ＶＥＧＦ、ＫＧＦ、コラーゲンI、コラーゲンIIIは、影響がなかった（図３）。
免疫染色も、Ａｓｃ２−Ｐによって処理された毛包においてバーシカンの発現が増加することを示した（図４）。
【産業上の利用可能性】
【００１５】
産業上の利用可能性
上記の構成からわかるように、本発明のビタミンＣ又はその誘導体のＡｓｃ２−Ｐは、毛乳頭細胞及び／又は毛包の成長を促進し、脱毛治療剤などとして有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、インビトロで培養された毛包の成長に対するＡｓｃ２−Ｐの効果を示す図である。毛包をＡｓｃ２−Ｐの存在下で９日間培養した後、成長した毛包の長さを測定した（＊、Ｐ＜０．０５）。
【図２】図２は、培養された毛乳頭細胞の成長に対するＡｓｃ２−Ｐの効果を示す図である。毛乳頭細胞をＡｓｃ２−Ｐを含有した培地で５日間培養した後、細胞数をＭＴＴ法にて測定した（＊、Ｐ＜０．０５）。
【図３】図３は、毛乳頭細胞において成長因子（Ａ）、コラーゲン（Ｂ）、バーシカン（Ｃ）及びアルカリ性ホスファターゼ（Ｄ）の発現に対するＡｓｃ２−Ｐの効果を示す図である。毛乳頭細胞をＡｓｃ２−Ｐによって５日間処理した後、ｍＲＮＡを測定した。
【図４】図４は、毛包においてバーシカンの発現に対するＡｓｃ２−Ｐの効果を示す図である。毛包をＡｓｃ２−Ｐによって５日間処理した後、免疫染色を行った。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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