(57)【要約】  本発明は、小窩および裂溝のような歯の咬合面における齲蝕、再石灰化、脱灰、および／または侵食を評価するための方法に関する。具体的には、本発明は、以下を含む、咬合面における齲蝕を評価する口腔内の方法に関する：ａ．少なくとも１つの閉端トラフを有する歯科用検査試料を準備すること；ｂ．咬合面に凹みを有する仮歯冠（temporary crown）または人工歯を準備すること；ｃ．前記凹み内にこの歯科用検査試料を配置し、この際、前記歯科用検査試料のトラフ開口が外側を向いていること；ｄ．被験者の口腔内に前記仮歯冠または人工歯を取り付けること；ｅ．被験者の口腔を試験条件に曝すこと；ｆ．歯科用検査試料における齲蝕効力の程度を測定すること。本明細書に記載される方法は、固体の咀嚼可能な単位剤形のような口腔組成物に関する抗齲蝕効力を判定するために特に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．少なくとも１つの閉端トラフを有する歯科用検査試料を準備すること；
ｂ．前記歯科用検査試料の少なくとも１つの閉端トラフ中において、脱灰を誘発すること；
ｃ．咬合面に凹みを有する仮歯冠（temporary crown）または人工歯を準備すること；
ｄ．前記歯科用検査試料を前記凹み内に配置し、この際、この歯科用検査試料のトラフ開口が外側を向いていること；
ｅ．前記仮歯冠または人工歯を被験者の口腔内に取り付けること；
ｆ．前記被験者の口腔を試験条件に曝すこと；
ｇ．前記歯科用検査試料における齲蝕効力の程度を測定すること；
を含む、咬合面における齲蝕を評価する口腔内の方法。
【請求項２】
前記歯科用検査試料が約１〜約４個のトラフを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記歯科用検査試料が２個のトラフを有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記トラフの幅が約２００ミクロン〜約８００ミクロン、長さが約４００ミクロン〜約１０００ミクロン、および深さが約２００ミクロン〜約８００ミクロンである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記トラフの幅が約３００ミクロン〜約５００ミクロン、長さが約７００ミクロン〜約９００ミクロン、深さが約３００ミクロン〜約５００ミクロンである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記歯科用検査試料は、１以上のトラフを有しており、およびそれら全てのトラフの大きさおよび形状がほぼ同様である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記歯科用検査試料がエナメル質または象牙質から構成される、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記歯科用検査試料がヒトまたはウシの歯に由来する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記歯科用検査試料がヒトの歯に由来する、請求項２の方法。
【請求項１０】
前記脱灰が、生物学的な手段または化学的な手段によって前記歯科用検査試料の少なくとも１つのトラフ中で誘発される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記歯科用検査試料が、少なくとも１つの脱灰されたトラフおよび少なくとも１つの健全な（石灰化された）トラフを有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記歯科用検査試料が、脱灰されたトラフ（１または複数）のみまたは健全な（石灰化された）トラフ（１または複数）のみを有する、請求項１０の方法。
【請求項１３】
被験者の口腔内に挿入された後、口腔へと露出される前記歯科用検査試料の表面は、健全である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記条件は、１以上の口腔ケア組成物で処置することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ａ．少なくとも１つの閉端トラフを有する歯科用検査試料を準備すること；
ｂ．前記咬合面に凹みを有する仮歯冠（temporary crown）または人工歯を準備すること；
ｃ．前記歯科用検査試料を前記凹み内に配置し、この際、この歯科用検査試料のトラフ開口が外側を向いていること；
ｄ．前記仮歯冠または人工歯を被験者の口腔内に取り付けること；
ｅ．前記被験者の口腔を試験条件に曝すこと；
ｆ．前記歯科用検査試料における齲蝕効力の程度を測定すること；
を含む、咬合面における齲蝕を評価する口腔内の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、小窩および裂溝のような歯の咬合面における齲蝕、再石灰化、脱灰、および侵食を評価するための方法に関する。本明細書に記載される方法は、固体の咀嚼可能な単位剤形のような口腔ケア組成物に関して抗齲蝕効力を判定するために特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
練り歯磨きなどの口腔ケア製品は、消費者の口腔ケアの健康法レジメンの一部として消費者に日常的に用いられている。これらの口腔ケア製品は、齲蝕、脱灰、侵食、並びに歯垢の処置および予防を含む、種々の口腔状態を処置する。およびこれらの製品としては、例えば、消費者によって使用されるフッ化物含有歯磨剤、典型的に歯科医院において定期的であるが頻繁にではなく、間隔を置くなどして適用される高濃度フッ化物溶液またはジェル等が挙げられる。これらの処置の有効性にもかかわらず、歯の齲蝕および脱灰の発生は依然として問題となっている。齲蝕率は、種々の地域にわたって過去４０年間で低下してきたが、世界規模での齲蝕は、依然として歯の損失の主原因である優勢な疾患のままである。
【０００３】
したがって、改善された齲蝕予防または処置製品および処置レジメンが依然として必要とされている。次には、新規なまたは改善された齲蝕、脱灰、侵食処置製品の安全性および有効性を試験するための生体外、および生体内双方での方法論が必要である。
【０００４】
さらに、齲蝕の８０〜９０％までが咬合面で生じると推定される。咬合部の齲蝕に関する文献に多数の参考資料があるが、咬合部の齲蝕を再現し、およびこれらの種類の齲蝕に対する抗齲蝕製品の潜在的利益を評価するモデルの開発に関して成されたものはほとんどなかった。咬合部の齲蝕のモデルへの関心の欠如には多くの理由がある。これらの理由としては、フッ化物歯磨剤が咬合面における齲蝕に対しては特に効果的ではないという通説が挙げられる。さらに、検査試料が通常の研磨および咀嚼力に曝されるのを可能にする口腔間のモデルを開発することは、困難である。実際大部分の齲蝕モデルシステムは、検査試料の表面脱灰に頼っており、その結果健全なエナメル質と比較して弱くなった表面をもたらす。さらに、咬合部の齲蝕に対する有効性における相対的な差は、標準的な口腔内モデルシステムを用いて実証することができると考えられているが、このモデルシステムにおいては、検査試料が器具または歯冠のいずれか上の隣接歯間部位へ配置されることによって研磨および咀嚼の動作から保護されている。齲蝕の評価のための他の口腔内モデルは、口蓋器具の使用に頼っている。これらのモデルにおいては、潜在的な研磨を回避するために被験者はいつも決まって器具上を直接ブラッシングしないように要求され、および装置は咀嚼力を受けない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
口腔状態の処置のための上記の既知の先行技術の方法論および技術にもかかわらず、この先行技術は、小窩および裂溝のような歯の咬合面における抗齲蝕効力を評価するための方法の利益を十分に認識し、またはそれらの方法に関連する問題を解決してはこなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下を含む、咬合面における齲蝕を評価する口腔内の方法に関する：
ａ．少なくとも１つの閉端トラフを有する歯科用検査試料を準備すること；
ｂ．咬合面に凹みを有する仮歯冠（temporary crown）または人工歯を準備すること；
ｃ．前記凹み内に前記検査試料を配置し、この際、この検査試料のトラフ開口が外側を向いていること；
ｄ．被験者の口腔内に前記仮歯冠または人工歯を取り付けること；
ｅ．被験者の口腔を試験条件に曝すことであって、一実施形態ではこの試験条件は１以上の口腔ケア組成物による処置を含む；
ｆ．歯科用検査試料における齲蝕効力の程度を測定すること。
【０００７】
本発明は、更に、以下を含む、咬合面における齲蝕を評価する口腔内の方法に関する：
ａ．少なくとも１つの閉端トラフを有する歯科用検査試料を準備すること；
ｂ．前記歯科用検査試料の少なくとも１つの閉端トラフ中において脱灰を誘発すること；
ｃ．咬合面に凹みを有する仮歯冠（temporary crown）または人工歯を準備すること；
ｄ．前記歯科用検査試料を前記凹み内に配置し、この際、この歯科用検査試料のトラフ開口が外側を向いていること；
ｅ．前記仮歯冠または人工歯を被験者の口腔内に取り付けること；
ｆ．前記被験者の口腔を試験条件に曝すことであって、一実施形態では、この試験条件は１以上の口腔ケア組成物による処置を含む；
ｇ．前記歯科用検査試料の齲蝕効力の程度を測定すること。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
定義
本明細書で使用する時、「含む」は、最終結果に影響を与えないその他の工程や成分を付け加えることができるということを意味する。この用語は、「から成る」および「から本質的に成る」という用語を包含する。
【０００９】
「口腔ケア組成物」または「口腔組成物」とは、本明細書で使用するとき、治療剤の全身投与の目的で故意に飲み込まれず、一部のまたは実質的に全ての歯の表面および／または口腔粘膜組織に口腔活性の目的で接触するのに十分な時間、口腔内に保持される製品を意味する。さらにこれらの用語は、故意に飲み込まれてもよいが、治療剤の全身投与の目的で飲み込まれるのではない製品を意味し得る。口腔ケア組成物には、練り歯磨き、歯磨剤、局所口腔用ジェル、口内洗浄剤、義歯製品、マウススプレー、薬用キャンディ、口腔用錠剤、咀嚼可能歯磨錠剤、またはチューインガム、ペットケア製品等が挙げられる当該技術分野で既知のあらゆる製品が包含される。歯磨剤組成物は、ペースト、ゲル、もしくはいずれかの形状、またはこれらのいずれの組み合わせであってもよい。一実施形態では、本発明は、プロクター・アンド・ギャンブル（Procter & Gamble）同時係属特許出願番号１０／７０６，１０３および１０／７０６，１０４（いずれも２００３年１１月１２日出願）に開示されているもののような咀嚼可能な口腔ケア組成物の評価に特に適している。
【００１０】
「齲蝕効力」または「齲蝕」は、本発明で使用するとき、齲蝕、歯の侵食、再石灰化、および／若しくは脱灰、並びに／または、齲蝕、歯の侵食、再石灰化、および／若しくは脱灰における、プラセボを包含する口腔ケア組成物による処置の効果を意味する。これらの口腔状態は、ＰＣＴ国際公開特許ＷＯ０２／０２０９６Ａ２（Ｐ＆Ｇ、２００２年１月１０日公開）に更に記載されている。歯の侵食は、プロクター・アンド・ギャンブル（Procter & Gamble）同時係属特許出願番号１０／３１９，１０８（２００２年１２月１３日出願）、米国特許公開番号２００３／０１６５４４２（US Pub. No. 2003/0165442）（２００３年９月４日公開）に更に記載されている。本明細書における本方法は、抗齲蝕効力に関する咀嚼可能歯磨剤口腔ケア組成物の評価に特に適している。
【００１１】
「試験条件」とは、本明細書で使用するとき、口腔をｐＨ条件に曝しつつ、口腔を食物または飲料に曝しつつ、および／または唾液流動の効果等を評価するために、プラセボを包含する１以上の口腔ケア組成物によって処置することを意味する。
【００１２】
「安全且つ有効な量」とは、本明細書で使用するとき、健全な医学／歯学的判断の範囲内で、治療すべき状態を著しく（よい方向に）改変するのに、または所望の抗齲蝕の結果をもたらすのに十分多いが、（適当な利益／リスク比において）深刻な副作用を回避できるのに十分に少ない、構成成分の量を意味する。構成成分の安全且つ有効な量は、治療される特定の状態（例えば抗齲蝕活性をもたらすため、脱灰を防止するため、または再石灰化を起こさせるための）、治療される患者の年齢および身体状態、状態の重症度、治療期間、併用療法の性質、使用する特定の形態、並びに構成成分を適用するための特定のビヒクルによって異なる。
【００１３】
「ほぼ同様の」大きさおよび形状とは、本明細書で使用するとき、閉端トラフの大きさおよび形状の変化が約２０％を超えない、別の実施形態では約１０％を超えない、また別の実施形態では約５％を超えないことを意味する。
【００１４】
「被験者」とは本明細書で使用するとき、ヒトおよび／または他の動物（例えば、ペット、動物園の動物または家畜）を意味する。一実施形態では、被験者は、臼歯または小臼歯上に仮のまたは永久的な歯冠を必要としているヒトである。一実施形態では、被験者は歯根管を必要としているヒト被験者である。別の実施形態では、被験者は、臼歯または小臼歯を失ったヒトまたは動物の被験者、例えば部分義歯装着者である。これらの被験者の場合、歯冠の替わりに、１以上の現存する隣接歯に人工歯を装着することによって失われた歯の空間に人工歯を挿入することができる。凹みは人工歯中にドリル穿孔することができ、その中に歯科用検査試料を取り付けることができる。
【００１５】
「人工歯」は、本明細書で使用するとき、合成の小臼歯若しくは臼歯、またはヒト若しくは動物の供給源からの交換用臼歯または小臼歯を意味する。
【００１６】
本明細書の以下で使用される全ての百分率および比率は、特に指示がない限り、組成物全体の重量を基準とする。
【００１７】
本明細書で言及される身体の外側でなされる測定はすべて、特に指定しない限り、２５℃で行われる。
【００１８】
本明細書で言及される成分の百分率、比率および濃度は、特に指示がない限り全て成分の実際の量に基づき、市販製品として成分と組み合わされている可能性がある溶媒、充填剤、またはその他の物質を包含しない。
【００１９】
本明細書に記載された全ての出版物、特許出願、および発行された特許は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。いかなる参照文献の引用も、特許請求する本発明に対する従来技術としての有用性の決定に関する容認ではない。この文書における用語のあらゆる意味または定義が、参考として組み込まれる文献における用語のあらゆる意味または定義と対立する範囲内においては、本文書における用語に与えられた意味または定義が適用される。
【００２０】
歯科用検査試料の準備
本発明を実行する際、歯科用検査試料は歯のサンプル（例えば切歯）から切断され、次いで削られ、そして準備される必要がある。一実施形態では、歯の検査試料は、歯のサンプルから切断され、その後歯科用タイプののこぎり装置（dental type saw device）、例えばライツ・マイクロトーム１６００、ＦＲＧ（Leitz Microtome 1600, FRG）を用いてエナメル質−象牙質結合部の近くまで削られる。歯科用検査試料は、エナメル質、象牙質、およびこれらの混合物から成っていてもよく、一実施形態では、エナメル質のみ、または象牙質のみから成る。歯科用検査試料は、ウシ供給源、ヒト供給源、およびこれらの混合に由来してよく、一実施形態では、ヒト供給源のみに由来する。歯科用検査試料の全体の大きさおよび形状は様々であってよいが、本明細書に記載された凹み内に挿入するために好適でありおよび実用的である大きさ（および形状）でなければならない。凹み（および歯科用検査試料）の大きさは、特にその凹みがヒト被験者の歯冠内に作られる場合には、実用上の制限を有する。一実施形態では、歯科用検査試料の大きさは、長さ約２ｍｍ〜約４ｍｍ、幅約２ｍｍ〜約４ｍｍ、深さ約１ｍｍ〜約５ｍｍである。卵形、円形、または楕円形の場合は、歯科用検査試料の大きさは直径約２〜約５ｍｍ、深さ約１ｍｍ〜約５ｍｍである。一実施形態では、形状は正方形、矩形、卵形、楕円形、円形、またはあらゆる他の好適な形状である。
【００２１】
歯科用検査試料を準備するためには、歯のサンプルは一般に修復、齲蝕病変、白斑等に関して分析され、および健全なエナメル質および象牙質を有する歯のサンプルが選択されてさらなる加工のために洗浄される。その後、歯科用検査試料は歯のサンプルから切断される。歯のサンプルを切断する方法、切断に使用される道具、およびそれに続くその歯のサンプルからの歯科用検査試料の紙やすりによる研磨は、当該技術分野で既知であり、例えば、ラガーウェイジ（Lagerweij）、Ｍ．Ｄ．ダーメン（Damen）、Ｊ．Ｊ．Ｍ．およびテン  ケイト（ten Cate）  Ｊ．Ｍ．、生体外の象牙質の溝の脱灰（Demineralization of Dentine Grooves in vitro.）、カリエスリサーチ（Caries Res.）、３０：２３１〜２３６（１９９６年）を参照のこと。例えば、ライツ・マイクロトーム１６００、ＦＲＧ（Leitz Microtome1600, FRG）は削るのに適している。
【００２２】
歯科用検査試料が切断され（またはドリル穿孔され）て準備されたなら、その歯科用検査試料の上部表面内に少なくとも１つの閉端トラフを切り込まなければならない。切断の方法、切断のために使用される道具、およびそれに続いて歯科用検査試料のトラフの大きさを調節するために紙やすりで研磨することは、当該技術分野で既知である。一実施形態では、オハイオ州シンシナティ（Cincinnati, Ohio）、ステラ・システムズ（Stellar Systems）によって製造されたビデオを装備したマイクロドリルのようなマイクロドリルを用いてトラフが切断される。トラフを作製するために、マイクロドリルを用いて反復される直線状の錐揉みを行い、所望の長さおよび高さの閉端トラフが作製されることになる。ドリル錐の幅がその閉端トラフの幅を決定する。一実施形態では、ドリル錐の幅は、約３００ミクロン〜約５００ミクロンである。
【００２３】
用語「閉端トラフ」とは、本明細書で使用するとき、そのトラフがその歯科用検査試料の上部表面全体に渡って延在していないこと、およびトラフの長さがその歯科用検査試料の外縁部まで延長していないことを意味している。本方法で閉端トラフを使用することにより、歯科用検査試料に追加の安定性が提供され、歯科用検査試料の破断が最小限に抑えられ、天然の歯の表面には存在せず、開いた端部のトラフで存在する貫流効果（flow-through effects）の可能性が最小限に抑えられる。閉端トラフはまた、歯の表面の天然のモルホロジーを、できる限り厳密に複製している。
【００２４】
一実施形態では、歯科用検査試料は約１〜約４個の閉端トラフを有しており、別の実施形態では、検査試料は約１〜約２個の閉端トラフを有している。トラフの大きさおよび形状もまた様々であってよいが、トラフは本明細書に記載されている凹み内に挿入するのに好適でありおよび実用的である大きさ（および形状）でなければならない。歯科用検査試料は、幾つかの実用的な大きさの制限を有しているので、本明細書に記載されているトラフ（１または複数）についてもまた同様である。一実施形態では、閉端トラフの形状は正方形、矩形、卵形、楕円形、円形、またはあらゆる他の好適な形状である。別の実施形態では、閉端トラフは矩形または正方形である。
【００２５】
一実施形態では、閉端トラフの大きさは、幅および／または長さおよび／または直径が約１５０ミクロン〜約１，０００ミクロンであり、別の実施形態では、幅および／または長さおよび／または直径が約２５０ミクロン〜約８００ミクロン、および深さが約２００ミクロン〜約８００ミクロンであり、他の実施形態では、深さが約３００ミクロン〜約５００ミクロンである。
【００２６】
一実施形態では、閉端トラフは、幅が約２００ミクロン〜約８００ミクロン、別の実施形態では、幅が約３００ミクロン〜約５００ミクロン、長さが約４００ミクロン〜約１０００ミクロンであり、別の実施形態では、長さが約７００ミクロン〜約９００ミクロン、深さが約２００ミクロン〜約８００ミクロンであり、別の実施形態では、深さが約３００ミクロン〜約５００ミクロンの矩形の形状を有している。
【００２７】
一実施形態では、歯科用検査試料は１つよりも多いトラフを有しており、それら全てのトラフは同じ大きさおよび形状である。別の実施形態では、歯科用検査試料は異なる大きさおよび形状を有するトラフ（１または複数）を含む。
【００２８】
１つよりも多いトラフを有する歯科用検査試料では、それらのトラフは互いに対して平行、垂直等あらゆる配向で配列されてよい。一実施形態では、歯科用検査試料における全てのトラフは互いに平行である。別の実施形態では、歯科用検査試料は、同様の寸法を有する、別の実施形態ではほぼ同様の寸法を有する、２つの平行な矩形の閉端トラフを有している。次いで閉端トラフは、脱灰を誘発する前に高圧空気および水を用いるなどしておよそ３０秒〜１分間洗浄されてもよい。
【００２９】
歯科用検査試料のトラフ内での脱灰の誘発
１以上のトラフ内で脱灰を誘発することが望ましい場合、本明細書の下記に記載するように、歯科用検査試料の上部面または歯科用検査試料の全体面のどちらかに保護コーティングを適用する。保護コーティングは、脱灰剤（類）によって誘発される脱灰または齲蝕形成に対する障壁を提供し、および特に対象とされたトラフ（１または複数）に対する脱灰に的をしぼる。
【００３０】
１以上のトラフで脱灰を誘発することが望ましい場合、この脱灰は化学的手段、生物学的手段、またはこれらの混合（本明細書では「脱灰剤」と称される）によって誘発される。例えば、エナメル質または象牙質において人工的に誘発された脱灰病変を生ずるための化学的手段は、ホワイト（White）ら、カリエスリサーチ（Caries Res）２１、２２８〜２４２、１９８７年に開示されており、乳酸溶液、例えば一般に３７℃で一般に１〜７日間の十分な時間の間適用されるｐＨ４〜５における０．１Ｍ乳酸溶液が挙げられる。さらにエナメル質または象牙質において人工的に誘発された脱灰病変を生ずるための生物学的手段としては、Ｓ．ミュータンス（S. mutans）のような細菌組成物の接種が挙げられる。他の生物学的手段は、フォンタナ（Fontana）ら（et a.）、二次的カリエス形成の研究のための生体外微生物モデル（An in vitro Microbial Model for Studying Secondary Caries Formation）、カリエスリサーチ（Caries Res.）３０：１１２〜１１８、１９９６年に開示されている。
【００３１】
健全なトラフ（１または複数）および脱灰したトラフ（１または複数）の両方を有する歯科用検査試料を準備することが望ましい場合、歯科用検査試料の健全な部分は脱灰剤に曝される間、保護されねばならない。一実施形態では、最初に、歯科用検査試料中に１以上のトラフを切り込む。その後、当該トラフ（１または複数）を除く歯科用検査試料の全体面に保護コーティングを適用する。これは、歯科用検査試料表面の残部を脱灰剤または化学物質に曝すことを回避し、当該トラフのみを露出された状態にする。その後、歯科用検査試料を脱灰剤の溶液、例えば乳酸の溶液中に沈める。その後、歯科用検査試料を脱灰剤から取り出して水ですすぐ。保護コーティングは残されても除去されてもよい。一実施形態では、保護コーティングはその後除去される。１以上の追加のトラフをその後その歯科用検査試料中にドリル穿孔するかまたは切り込むことができる。これらの追加のトラフ（１または複数）は脱灰剤には曝されず、これらのトラフ（１または複数）は健全なエナメル質または象牙質のみを含んでいる。
【００３２】
保護コーティングは、歯科用検査試料の表面に粘着し、脱灰剤による除去に抵抗しおよび脱灰剤と反応せず、並びに所望のトラフ（１または複数）の脱灰が達成された後に容易に除去される、いずれかの材料である。一実施形態では、保護コーティングは耐酸性のマニキュア液である。別の実施形態では、保護コーティングは３Ｍからの多目的スコッチボンド（Scotchbond multipurpose）のような軽量硬化結合剤である。
【００３３】
一実施形態では、後で加えられたすべてのトラフ（複数）は第１のトラフ（１または複数）と平行である。脱灰後、歯科用検査試料は凹みへ挿入される前に滅菌される。
【００３４】
本発明の一実施形態では、歯科用検査試料中の全てのトラフ（１または複数）は健全な（脱灰されていない）エナメル質または象牙質のみを含有する。本発明の別の実施形態では、歯科用検査試料の全てのトラフ（複数）は脱灰されたエナメル質または象牙質のみを含有する。本発明のさらに別の実施形態では、歯科用検査試料は少なくとも１つの健全な（脱灰されていない）トラフと少なくとも１つの脱灰されたトラフとを含有する。一実施形態では、歯科用検査試料は１つの健全な（脱灰されていない）トラフと１つの脱灰されたトラフとを含有する。
【００３５】
一実施形態では、歯科用検査試料は健全な上部面、少なくとも１つの健全なトラフ、および少なくとも１つの脱灰されたトラフを含有する。これは、咀嚼（mastication(chewing)）力に耐え、歯ブラシでのブラッシングの研磨作用に耐え、および口腔内での研磨剤含有練り歯磨きの使用からの研磨作用に耐え得る歯科用検査試料を提供する。したがって、歯ブラシでブラッシングすることを必要とする口腔ケア組成物の有効性を評価してもよい。このタイプの歯科用検査試料はまた、齲蝕過程の脱灰および再石灰化の観点の両方における口腔ケア組成物の同時評価を可能にする。
【００３６】
凹みの準備；凹みへの歯科用検査試料の配置；口腔内の仮歯冠（temporary crown）または人工歯の取り付け
本方法を実行する際、被験者の仮歯冠（temporary crown）または人工歯の咬合面に凹みを準備することが必要である。凹みは歯科医師に利用可能なあらゆる実用的手段によって作ることができる。凹みの全体的な大きさおよび形状は様々であってよいが、本明細書に記載されているように仮歯冠（temporary crown）または人工歯内に挿入するのに好適でありおよび実用的である大きさ（および形状）でなければならない。凹みの大きさは、特にヒト被験者の仮歯冠（temporary crown）中に凹みが作られる場合、実用上の制限を有する。一実施形態では、凹みの大きさは、長さおよび／または直径が約１ｍｍ〜約５ｍｍ、幅および／または直径が約１ｍｍ〜約５ｍｍ、深さが約２ｍｍ〜約６ｍｍである。別の実施形態では、凹みの大きさは、長さおよび／または直径が約２ｍｍ〜約４ｍｍ、幅および／または直径が約３ｍｍ〜約４ｍｍ、深さが約３ｍｍ〜約４ｍｍである。一実施形態では、凹みの形状は正方形、矩形、卵形、楕円形、円形、または歯科用検査試料を受け入れるためのあらゆる他の好適な形状であってよい。一実施形態では、凹みは、仮のまたは永久的な歯冠を成形するための当業者に既知のいずれかの成形法によって仮歯冠（temporary crown）中に成形され、例えば、シリンバーグ（Shillingburg）、固定式歯科補綴学の基礎（Fundamentals of fixed Prosthodontics）、第３版、１９９７年１月、およびダニッツ、Ｍ．（Dunitz, M.）、歯冠およびブリッジの設計および製造（Planning and Making Crowns and Bridges）、第３版、１９９８年１月を参照のこと。
【００３７】
別の実施形態では、凹みは人工歯中にドリル穿孔されるか切り込まれる。切断の方法、切断に使用される道具、およびその後の人工歯の凹みの大きさを調節するための紙やすりによる研磨は当該技術分野で既知である。一実施形態では、凹みは適切な大きさのドリル錐を有するドリルまたはマイクロドリルを用いて切断される。凹みを作るために、ドリルを用いて反復される直線状の錐揉みを行って、所望の長さ、幅、および高さの凹みを作ってもよい。ドリル錐の幅の選択により人工歯における凹みの幅を決定してよい。
【００３８】
凹み形成の後、歯科用検査試料を凹み内に配置し、この際、歯科用検査試料の上部面をトラフ開口が外側を向くように位置決めする。一実施形態では、歯科用検査試料の上部は仮歯冠（temporary crown）の上外側面の上部と同一平面上に位置決めされる。歯科用検査試料を凹み中で安定化するためおよび歯科用検査試料の体積と凹み容積の間のあらゆる余分な容積または空間差を満たすために、あらゆる好適な不活性材料、例えばワックス材またはノゲノール（Nogenol）（登録商標）テンポラリーセメント（Temporary Cement）（Ｇ．Ｃ．アメリカ（G.C. America）により製造）などの歯科用テンポラリーセメントを使用してよい。一実施形態では、不活性材料はフッ化物イオンを含まない。
【００３９】
最終的に、仮歯冠（temporary crown）（凹みおよび歯科用検査試料を含む）は、被験者の歯冠を必要としている臼歯または小臼歯上に取り付けられる。仮歯冠（temporary crown）を取り付けるための方法は当該技術分野、例えば、シリンバーグ（Shillingburg）、固定式歯科補綴学の基礎（Fundamentals of fixed Prosthodontics）、第３版、１９９７年１月、およびダニッツ、Ｍ．（Dunitz, M.）、歯冠およびブリッジの設計および製造（Planning and Making Crowns and Bridges）、第３版、１９９８年１月において周知である。
【００４０】
人工歯が使用される場合、歯科用検査試料は人工歯の凹み内に配置され、この際、歯科用検査試料の上部面はトラフ開口が外側を向くように位置決めされる。一実施形態では、歯科用検査試料の上部は人口歯の上外側面と同一平面上に位置決めされる。歯科用検査試料を凹み内で安定化させ、および歯科用検査試料の体積と凹みの容積の間の余分な体積または空間差を満たすために、あらゆる好適な不活性材料、例えばワックス材または歯科用テンポラリーセメントを使用してよい。その後、人工歯（凹みおよび歯科用検査試料を含む）は装着手段（例えば部分義歯）を用いて失われた歯の空間中の歯肉に沿って取り付けられる。この場合、被験者は、臼歯または小臼歯を失っている人、例えば部分義歯装着者であってよい。これらの被験者の場合、歯冠の替わりに、当該技術分野で既知の手段によって、細いワイヤを用いて１以上の現存する天然歯にまたは義歯に人口歯を装着することができる。人工歯が使用される場合、この人工歯は口腔内の失われた歯の開口部中に歯肉線に沿って取り付けられてよく、例えば、シリンバーグ（Shillingburg）、固定式歯科補綴学の基礎（Fundamentals of fixed Prosthodontics）、第３版、１９９７年１月、および（ダニッツ、Ｍ．）、歯冠およびブリッジの設計および製造（Planning and Making Crowns and Bridges）、第３版、１９９８年１月を参照のこと。
【００４１】
口腔ケア組成物への曝露および効力の評価
本方法を実行する際、被験者の口腔を１以上の口腔ケア組成物に曝し、その後歯科用検査試料における齲蝕効力、脱灰、再石灰化、侵食に対する効果を測定することが必要である。一実施形態では、口腔ケア組成物は安全且つ有効な量の抗齲蝕剤を含む。別の実施形態では、組成物は非フッ化物口腔ケア組成物である。
【００４２】
一実施形態では、抗齲蝕剤は、キシリトール、フッ化物イオン源およびこれらの混合物から成る群から選択される。口腔ケア組成物の使用中に、フッ化物イオン源が遊離のフッ化物イオンを提供する。一実施形態では、フッ化物イオン源は、フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、フッ化インジウム、フッ化アミンのような有機フッ化物およびモノフルオロリン酸ナトリウムから成る群から選択される。別の実施形態では、フッ化物イオンはフッ化ナトリウムである。米国特許第２，９４６，７２５号（ノリス（Norris）ら、１９６０年７月２６日発行）および米国特許第３，６７８，１５４号（ウィダー（Widder）ら、１９７２年７月１８日発行）は、このようなフッ化物塩類、並びにフッ化物イオン源として使用できるその他のものを開示している。
【００４３】
一実施形態では、口腔ケア組成物中のフッ化物イオン源の濃度は、約５ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、別の実施形態では約１０ｐｐｍ〜約３０００ｐｐｍ、別の実施形態では、約５０ｐｐｍ〜約２，８００ｐｐｍ、別の実施形態では、約１００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、別の実施形態では約３００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、およびさらに別の実施形態では、約８５０ｐｐｍ〜約１，１００ｐｐｍである。
【００４４】
被験者の口腔を１以上の口腔ケア組成物へ曝すことは、口腔ケア組成物のための、いずれの評価されるべき処置レジメンもまたは既知の処置レジメンを含んでいてもよい。例えば、安全且つ有効な量の口腔ケア組成物が、幾つかの従来の方法で、歯の表面に局所適用されてもよい。例えば、歯の表面は、溶液（例えば、口内洗浄剤、マウススプレー）ですすいでもよく、または歯磨剤（例えば、練り歯磨き、歯磨きジェル、若しくは歯磨き粉）においては、歯をブラッシングすることによって生成された液体および／または泡に歯を浸す。他の非限定例としては、非研磨性ジェルまたはペーストを直接歯に適用することが挙げられる。
【００４５】
他の処置レジメンとしては、少なくとも約１０秒間、別の実施形態では約２０秒〜約１０分間、更に別の実施形態では約３０秒〜約６０秒間、安全且つ有効な量の口腔ケア組成物を歯に適用すること（例えば、口内洗浄剤ですすぐこと、非研磨性ジェルを装置を用いてまたは用いずに直接適用すること、咀嚼可能な歯磨錠剤を咀嚼すること、薬用キャンディを咀嚼すること、固体剤形を咀嚼すること、歯磨剤または歯磨ジェルを歯ブラシを用いて適用すること、等による）が挙げられる。処置レジメンは、こうした接触に続いて組成物の大部分を喀出することを伴うことが多い。こうした接触の頻度は、およそ週１回〜およそ１日４回、別の実施形態ではおよそ週３回〜およそ１日３回、更に別の実施形態ではおよそ１日１回〜およそ１日２回であってよい。こうした処置の期間は典型的には、約１日〜数年間、別の実施形態では約５日〜約６ヶ月間、別の実施形態では約１４日〜約６０日間の範囲である。
【００４６】
一実施形態では、次の２つの処置レジメンが評価される：１．１１００ｐｐｍのフッ化物イオン（例えば、フッ化ナトリウム）を含む練り歯磨き、および２．使用中に約０．２ｍｇ〜約３ｍｇのフッ化物イオンを送達する咀嚼可能な歯磨剤。各被験者は１つの仮歯冠（temporary crown）を臼歯上に取り付けられている。仮歯冠（temporary crown）は直径３ｍｍおよび深さ２ｍｍの円筒形状の凹みを有している。各被験者は、２つの矩形トラフ（深さおよび幅５００ミクロンおよび長さ８００ミクロンの大きさ）を有する円筒形のエナメル質の歯科用検査試料（直径２．５ｍｍおよび深さ１．５ｍｍ）を凹み内に取り付けられている。１つのトラフは脱灰されており、および１つのトラフは健全なエナメル質のみを含有する。被験者は、約１ヶ月の間毎日２〜３回、口腔ケア組成物を使用する。約１ヶ月後、仮歯冠（temporary crown）を口腔から取り外し、および歯科用検査試料を凹みから取り外す。健全なトラフ中または歯科用検査試料の上部面上における病変または脱灰の存在、並びに病変の齲蝕、侵食、脱灰、および／または再石灰化の程度（病変の平均深さを包含）を、偏光顕微鏡法によって測定する。例えば、アレンズ（Arends）ら、カリエスリサーチ（Caries Res.）、人工的Ｕ字状溝におけるヒトのエナメル質の生体外脱灰（In vitro Demineralization of Human Enamel in Artificial U-Shaped Grooves）、２０：２１７〜２２２（１９８６年）；ラガーウェイジ（Lagerweij）ら、カリエスリサーチ、生体外における象牙質の溝の脱灰（Demineralization of Dentine Grooves in vitro）、３０：２３１〜２３６（１９９６年）；ラガーウェイジら、カリエスリサーチ、歯垢で満たされた象牙質の溝中の病変の発達におけるフッ化物化練り歯磨きの効果（Effect of Fluoridated Toothpaste on Lesion Development in Plaque-Filled Dentine Grooves）：口腔内研究（An Intra Oral Study）、３１：１４１〜１４７（１９９７年）を参照のこと。
【００４７】
齲蝕、侵食、脱灰、および／または再石灰化を測定するために有用な偏光顕微鏡法以外の方法は当該技術分野で教示されており、横断マイクロラジオグラフィー、断面微小硬さ（cross-sectional microhardness）、光学蛍光、並びにその他のものが挙げられる。
【００４８】
別の実施形態では、処置レジメンに曝した後に、歯科用検査試料は、仮歯冠（temporary crown）または器具から取り外され、エナメル質または象牙質の鉱物含量の変化を測定するために使用されるいずれかの関連の技術によって分析される。一実施形態では、各検査試料から薄い断面（複数）（厚さ８０〜１２０μｍ）をその断面がトラフの配向に対して垂直となるように取り除く。断面（複数）の除去は、シルバーストーン−テイラー硬組織マイクロトーム（Silverstone-Taylor Hard Tissue Microtome）（デラックス１０００シリーズ（Series 1000 Deluxe））を用いて達成されてよく、これはラジオグラフィー分析の前に磨く必要のない部片を作製することができる。他の技術では、各歯科用検査試料からより厚みのある断面を除去することができ、それはその後ラジオグラフィー分析のために所望の厚さ（８０〜１２０μｍ）まで研磨される。断面を準備したなら、病変の大きさ、深さ、および程度の定量的評価を可能にする、定量的横断マイクロラジオグラフィー（ＴＭＲ）を用いて分析を実行してよい。偏光顕微鏡法もまた、これらの種類のサンプルに関する病変の変化の優れた評価を提供できる。各歯科用検査試料に関する病変の大きさ、深さ、程度等は、試験試料と同じ前処理条件に曝された未処置の対照用歯科用検査試料と比較して評価されてもよい。
【００４９】
本発明は、以下の実施形態の説明を、添付図面と共に参照することによってよりよく理解され、これらの図面において同様の参照番号は同一の要素を示す。本発明を制限しようとするものではないが、本発明の実施形態は下記に更に詳細に記載される。本発明の範囲から逸脱することなく、これらの実施形態の多くの変形が可能である。
【００５０】
図１では、円筒形状の歯科用検査試料４がヒトの切歯サンプル１から切断されている。歯科用検査試料４は、象牙質層３、並びにエナメル質層２から構成されている。歯科用検査試料４は、切歯サンプル１を完全に貫通して切断される。
【００５１】
図２では、円筒形状の歯科用検査試料５が矩形の閉端トラフ６を含み、この閉端トラフ６は、それとほぼ同様の大きさおよび形状を有する第２の閉端トラフ７に対して平行である。歯科用検査試料５は上側部８、連続円形側部９、並びに底側部１０を有する。矩形閉端トラフ６および７の開口は円筒形状の歯科用検査試料５の上側部８から外側に向いている。
【００５２】
図３では、円筒形状の歯科用検査試料１１が矩形閉端トラフ１２を含んでいる。この円筒形状の歯科用検査試料１１は上側部１３、連続円形側部１４、並びに底側部１５を有している。矩形閉端トラフ１２の開口はこの円筒形状の歯科用検査試料１１の上側部１３から外側に向いている。
【００５３】
図４では、箱形状の歯科用検査試料２０が矩形の閉端トラフ２１を含み、この閉端トラフ２１はそれと大きさおよび形状がほぼ同様である第２の閉端トラフ２２に対して平行である。箱形状の歯科用検査試料２０は上側部２３、側部２４、並びに底側部２５を有している。矩形閉端トラフ２１および２２の開口は、箱形状の歯科用検査試料２０の上側部２３から外側に向いている。
【００５４】
図５は、図３の円筒形状の歯科用検査試料１１の上平面図であり、矩形閉端トラフ１２および上側部１３を含んでいる。
【００５５】
図６は、図２の円筒形状の歯科用検査試料５の上平面図であり、２つの矩形閉端トラフ６および７、並びに上側部８を含んでいる。
【００５６】
図７は、図４の箱形状の歯科用検査試料２０の上平面図であり、２つの矩形閉端トラフ２１および２２、並びに上側部２３を含んでいる。
【００５７】
図８は、図２の円筒形状の歯科用検査試料５の断面図である。この円筒形状の歯科用検査試料５は、２つの矩形閉端トラフ６および７、上側部８、連続円形側部９、並びに底側部１０を含んでいる。矩形閉端トラフ６および７の開口は、この円筒形状の歯科用検査試料５の上側部８から外側に向いている。
【００５８】
図９の人工臼歯または臼歯用歯冠５０は凹み５４を含んでいる。図２の円筒形状の歯科用検査試料５が凹み５４内に取り付けられている。パラフィンワックスの層５５が、円筒形状の歯科用検査試料５と凹み５４との間の空間を満たしている。この円筒形状の歯科用検査試料は２つの矩形閉端トラフ６および７を有している。
【００５９】
図１０の人工臼歯または臼歯用歯冠５０は凹み５４を含んでいる。図２の円筒形状の歯科用検査試料５が凹み５４中に取り付けられている。パラフィンワックスの層５５が円筒形状の歯科用検査試料５と凹み５４との間の空間を満たしている。この円筒形状の歯科用検査試料は、２つの矩形閉端トラフ６および７を有している。
【００６０】
図１１では、人工臼歯または臼歯用歯冠６８は、凹み７０およびその凹み７０中に取り付けられた方形形状の歯科用検査試料７３を有している。方形形状の歯科用検査試料７３は２つの矩形閉端トラフ６６および６７を有しており、これらのトラフ６６および６７は、ほぼ同様の大きさおよび形状を有しており、互いに平行である。矩形閉端トラフ６６および６７の開口は矩形形状の歯科用検査試料７３の上側部７２から外側を向いている。人工臼歯または歯冠６８は、２つの天然臼歯６５および６９の間に、歯肉線７１に沿って取り付けられている。
【００６１】
図１２は、ヒト被験者の下側の歯のフルセットの模型の平面図を示している写真である。１つの臼歯は金の仮歯冠（temporary crown）を有している。歯冠はその歯冠の咬合面に凹みを含み、およびその凹み中には、２つの平行な閉端トラフを有する歯科用検査試料が取り付けられている。歯冠は除去可能な歯科用セメントを用いて歯の表面の下部に取り付けられている。
【００６２】
図１３は、部分義歯器具を示している写真であり、歯科用検査試料が人工臼歯の咬合面の凹み中に取り付けられている。
【００６３】
「発明を実施するための最良の形態」で引用した全ての文献は、その関連部分において本明細書に参考として組み込まれ、いかなる文献の引用も、それが本発明に対する先行技術であることを認めるものと解釈すべきではない。この文書における用語のあらゆる意味または定義が、参考として組み込まれる文献における用語のあらゆる意味または定義と対立する範囲内においては、本文書における用語に与えられた意味または定義が適用される。
【００６４】
本発明の特定の実施形態が説明および記載されてきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく他の様々な変更および修正を行えることが当業者には明白であろう。したがって、本発明の範囲内にあるそのようなすべての変更および修正を、添付の特許請求の範囲で扱うものとする。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】エナメル質および象牙質を含む歯科用検査試料が、切歯サンプルから切断されている歯のサンプルの斜視図。
【図２】２つの閉端トラフを有する円筒形状の歯科用検査試料の拡大部分側面図。
【図３】１つの閉端トラフを有する円筒形状の歯科用検査試料の拡大部分側面図。
【図４】２つの閉端トラフを有する正方形の歯科用検査試料の拡大部分側面図。
【図５】図３の歯科用検査試料の拡大上平面図。
【図６】図２の歯科用検査試料の拡大上平面図。
【図７】図４の歯科用検査試料の拡大上平面図。
【図８】図２の歯科用検査試料の拡大断面図。
【図９】図２の歯科用検査試料が凹み内に取り付けられている、凹みを含む人工臼歯または臼歯用歯冠の拡大断面図。
【図１０】図２の歯科用検査試料が凹み内に取り付けられており、凹みは臼歯または臼歯用歯冠の咬合側の咬頭部にある、図９の凹みを含む人工臼歯または臼歯用歯冠の拡大平面図。
【図１１】臼歯または歯冠が２つの天然臼歯の間に歯肉線に沿って取り付けられている、凹みおよび図４の歯科用検査試料を有する人工臼歯または臼歯用歯冠の部分側面図。
【図１２】１つの臼歯は仮歯冠（temporary crown）を有しており、この歯冠はその咬合面に凹みを含み、およびその凹み内に２つの閉端トラフを有する歯科用検査試料が取り付けられていて、歯冠は歯の表面の下部に取り付けられている、ヒト被験者の下側の歯のフルセットの模型の平面図を示している写真。
【図１３】歯科用検査試料が人工臼歯の咬合面の凹み中に取り付けられている、部分義歯器具を示している写真。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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