(57)【要約】本発明は、検出可能な発光性シグナルを放出し得る明細書で定義したような一般式（Ｉ）の新規１，２−ジオキセタン誘導体と、物理的、化学的又は生物学的、特に酵素現象を検出及び／又は定量するための方法への使用、及び該方法を実施するためのキットに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
Ｓ−Ｂ−Ａ
［式中、
Ｓは、物理的、化学的、生物学的な現象によって活性化されうる不安定な構造を表わし；
Ｂは、不安定な構造Sの活性化が分子Ａ−を放出するための適当な形態で分子内転位を誘導する化学的構造を備える反応性分岐鎖であり；
Ａは、一般式（ＩＩａ）：
【化１】
2008545682.tif 000016
表わされる発色団で、この場合
◇はＢとの共有結合を表わし、
ａ）Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシルラジカル、アミノラジカル、チオラジカル、ハロゲン原子、若しくはアルキルラジカル、アルコキシラジカル、ヘテロアルキルラジカル、シクロアルキルラジカル、ヘテロシクロアルキルラジカル、エーテルラジカル、アルケニルラジカル、アルキニルラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルチオラジカル、ハロアルキルラジカルから選択したＣ１−Ｃ２０、特にＣ２−Ｃ１２、また特にＣ３−Ｃ６炭化水素系鎖、又はアリールラジカル、ヘテロアリールラジカル、アラルキルラジカルから選択し、必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ３０、特にＣ６−Ｃ１０芳香族環であり；
ｂ）Ｒ２及びＲ３を一緒にしてオキソユニットを形成でき；
ｃ）Ｒ１及びＲ２を結合してジオキセタン環と融合したＣ４−Ｃ８の環を形成することができ、必要に応じてＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子で遮断し、また場合によってａ）でＲ１、Ｒ２及びＲ３として既に定義したような一以上のラジカルで置換し；
ｄ）Ｒ２とＲ３又はＲ１とＡｒとを結合してこれらを支えるジオキセタン実体の炭素を有するＣ４−Ｃ２０、特にＣ６−Ｃ１０スピロ環を形成でき、かかる環が場合によっては単環式又は多環式、飽和又は不飽和、芳香族、融合又は非融合であり、必要に応じてＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子を添合し、ａ）でＲ１、Ｒ２及びＲ３として既に定義したような一以上の置換基で随意に置換され；
前記Ａｒは、Ｃ６−Ｃ３０、特にＣ６−Ｃ１０アリーレンラジカルであり、必要に応じてヒドロキシルラジカル、ハロゲン原子、オキソユニット、アミノラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、チオラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、アルキルチオラジカル、カルボキシラジカル、ホルミルラジカル、アルキルエステルラジカル、アルキルケトンラジカル、ハロアルキルラジカル、アリールラジカル、アリールエステルラジカル、アリールケトンラジカル、アリールアミノラジカル、ジアリールアミノラジカルから選択した一以上の置換基で任意に置換され；
ＸはＯ、ＮＨ又はＳを表わす］で表わされる化合物並びにその誘導体。
【請求項２】
前記Ｒ１が蛍光性ラジカルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ＢがＣ１−Ｃ８、特にＣ２−Ｃ６、また特にＣ３−Ｃ４アルキルラジカルによって表わされ、場合によってはＣ６−Ｃ１４、特にＣ６−Ｃ１０アリーレンラジカル及び／又はＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子で遮断され、また必要に応じてヒドロキシルラジカル、オキソユニット、アミノラジカル、ハロゲン原子、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、カルボキシラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、アリールラジカル及びアリールオキシラジカルから選択される一以上の置換基で置換されることを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｂが一般式（ＩＩＩ）：
【化２】
2008545682.tif 000017
で表わされ、ここで
□及び◇がそれぞれ不安定な構造Ｓ及び発色団Ａとの共有結合を表わし；
ｊが０から２、有利には１に等しい整数であり；
Ｒ４がＣ１−Ｃ２０、特にＣ２−Ｃ１２、また特にＣ３−Ｃ６の炭化水素系鎖であり、必要に応じて□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルに対するオルト、メタ、又はパラ位で一以上のヘテロ原子及び／又は−ＣＯ及び／又は−Ｎ（アルキル）−ユニット（類）によって遮断され、特に−（ＣＨ２）ｋ−◇、−（ＣＨ２）ｋ−Ｃ（Ｏ）−◇、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｃ（Ｏ）−◇ラジカル（式中、ｋは１又は２に等しく、１であることが有利である）から選択され；
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子か、或いはアルキルラジカル、アルコキシラジカル、アルキルアミノ又はジアルキルアミノラジカル、アルキルチオラジカルから選択した飽和又は不飽和、直鎖、分岐鎖又は環式のＣ１−Ｃ２０、特にＣ２−Ｃ１２、また特にＣ３−Ｃ６の炭化水素系鎖、又はアリールラジカル、アリールオキシラジカル、アリールアミノラジカル及びアリールチオラジカルから選択したＣ６−Ｃ３０、特にＣ６−Ｃ１０の芳香族環であることを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ａｒが一般式（ＩＶａ）：
【化３】
2008545682.tif 000018
で表わされるアリーレンラジカルであり、ここで
△がＸとの共有結合を表わし、＊がジオキセタン環との共有結合を表わし；
Ｒ１０が水素原子、電気活性ラジカル又は蛍光ラジカルを表わし；
Ｒ１１が水素原子又はフェニレンラジカルと融合したＣ６−Ｃ１０のアリールラジカルであることを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６】
前記Ｒ１が飽和又は不飽和、直鎖、分岐鎖又は環式のＣ１−Ｃ６アルキル又はＣ１−Ｃ６アルコキシラジカルであり、場合によってＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上の原子を含み、置換されていることを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記Ｒ１及び／又はＲ１０が蛍光ラジカルである場合、これらはフェニル基及びその誘導体、ナフタレン及びその誘導体、アントラセン及びその誘導体、ピレン及びその誘導体、ビフェニル及びその誘導体、アクリジン及びその誘導体、クマリン及びその誘導体、キサンテン及びその誘導体、フタロシアニン及びその誘導体、スチルベン及びその誘導体、フラン及びその誘導体、オキサゾール及びその誘導体、オキサジアゾール及びその誘導体、ニトロベンゾキサジアゾール及びその誘導体、ベンゾチアゾール及びその誘導体、フルオロセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ＢＯＤＩＰＹ及びその誘導体、エオシン及びその誘導体、エリスロマイシン及びその誘導体、レゾルフィン及びその誘導体、キノリン及びその誘導体、カルバゾール及びその誘導体、蛍光シアニン及びその誘導体、カルボシアニン及びその誘導体、ピリジニウム塩及びその誘導体、ランタニド及びその誘導体の蛍光錯体、蛍光タンパク質及び量子ドットから選択されることを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項８】
前記Ｒ４が□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルのオルト位に位置する−（ＣＨ２）ｋ−◇ラジカルで表わされ、ｊ＝ｋ＝ｌでありＲ５＝Ｒ６＝−Ｏ−ＣＨ３であることを特徴とする請求項４から７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記Ｒ１０が、ハロゲン原子、シアノラジカル、ニトロラジカル、一置換又は二置換アミドラジカル、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、トリアルキルアンモニウムラジカル、アルキルアミドラジカル、アルキルカルバモイルラジカル、エステルラジカル、アルキルスルホナミドラジカル、トリフルオロメチルラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルアミドスルホニルラジカル、アルキルスルホニルラジカル、アルキルチオエーテルラジカル、ハロアルキルラジカルから選択した電気活性ラジカル、アリールオキシラジカル、アリールアミドラジカル、アリールカルバモイルアリールスルホナミドラジカル、アリールラジカル、ヘテロアリールラジカル、トリアリール若しくはアルキルアリールシリルラジカル、トリアリールシロキシラジカル、アリールアミドスルホニルラジカル、アリールスルホニルラジカル及びアリールチオエーテルラジカルから選択したＣ６−Ｃ１０ラジカルであることを特徴とする請求項５から８の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記ＸがＯを表わすことを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
一般式（Ｖａ）：
【化４】
2008545682.tif 000019
［式中、Ｓ、Ｘ、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が前記請求項の何れか一項に規定されている］に相当することを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
一般式（Ｖｂ）：
【化５】
2008545682.tif 000020
で表わされ、式中のＳ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０、及びＲ１１が前記請求項の何れか一項に規定されていることを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１０＝Ｒ１１＝Ｈ、Ｒ１＝Ｒ５＝Ｒ６＝−Ｏ−ＣＨ３であり、Ｒ２及びＲ３が結合して、これらを支えるジオキセタン環の炭素を有し、必要に応じて置換されているスピロアダマンチルラジカルを形成することを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｓが生物学的実体によって活性化されうる構造である場合、該Ｓが一般式（ＶＩ）：
Ｐ−Ｌ−□
を有し、ここで
□がＢとの共有結合を表わし；
前記Ｐが前記実体により認識されうる基質を表わし；
前記Ｌが酸素、硫黄、カルボキシル基又は−ＣＯ−Ｑ官能基（式中、ＱはＯ、Ｓ若しくはＮＨである）を表わすことを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
前記Ｓが酵素の働きにより不安定化する構造を表わすことを特徴とする前記請求項に記載の化合物。
【請求項１６】
前記Ｓがプロテアーゼの働きによって不安定化する構造を表わす場合、Ｌが−ＣＯ−Ｑ［式中ＱはＮＨである］であり、またＰが前記プロテアーゼによって認識される基質を表わすことを特徴とする前記請求項に記載の化合物。
【請求項１７】
一般式（ＶＩＩ）：
Ｄ−Ｓ−Ｂ−Ａ
の誘導体であり、ここで
Ｄが標的構造を表わし；
Ｓ、Ｂ及びＡが前記請求項で定義されていることを特徴とする前記請求項の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
前記標的構造Ｄが、レクチン、抗体又は後者のフラグメント；細胞受容体のリガンド；膜の脂質又はリン脂質と相互作用できるリガンド；細胞表面に存在する糖と相互作用できるリガンドから選択できることを特徴とする前記請求項に記載の化合物。
【請求項１９】
請求項１から１８の何れか一項に記載の化合物の少なくとも一つを少なくとも有効量含む薬学的組成物。
【請求項２０】
物理的、化学的又は生物学的現象を検出及び／又は定量するための請求項１から１８の何れか一項に記載の少なくとも一つの化合物の使用であって、Ｓが前記現象によって活性化されうる不安定な構造を表わすことを特徴とする化合物の使用。
【請求項２１】
生物学的な実体を検出及び／又は定量する方法であって、
請求項１から１８の何れか一項に記載の少なくとも一つの化合物で、Ｓが検出及び／又は定量すべき前記生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造を表わす化合物の少なくとも有効量を、前記実体を含むと思われる媒体と接触させる工程、及び
発生した蛍光を測定する工程
を少なくとも備えることを特徴とする生物学的な実体の検出及び／又は定量方法。
【請求項２２】
前記化合物が請求項１１から１８で定義されているようなものであることを特徴とする前記請求項に記載の方法。
【請求項２３】
フルオレセイン、ウシアルブミン、ヒトアルブミン、ポリ（ビニルベンジルトリメチル）アンモニウムクロライド（ＴＭＱ）、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）アンモニウムクロライド（ＴＢＱ）、ポリ（ビニルベンジルジメチル）アンモニウムクロライド（ＢＤＭＱ）、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）ホスホニウムクロライド、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）スルホニウムクロライド、ポリ（ベンジルジメチルビニルベンジル）アンモニウムクロライド、フルオレセインのナトリウム塩、ポリ（ベンジルトリブチル）アンモニウム、及びフルオレセインのナトリウム塩のような重合性４級オニウム塩から選択される光増幅剤を加える工程を備え、インビトロで実施することを特徴とする請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
検出及び／又は定量すべき前記生物学的実体が酵素であり、一般式（Ｉ）の化合物におけるＳが前記酵素によって活性化されうる基質を表わすことを特徴とする請求項２１から２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１から１８の何れか一項記載の化合物の少なくとも一つを備え、Ｓが検出及び／又は定量すべき生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造を表わすことを特徴とする生物学的実体の検出及び／又は定量用キット。
【請求項２６】
生体内での診断方法の実施を対象とした薬学的組成物を製造するための請求項１から１８の何れか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は検出可能な発光シグナルを放出しうる新規化合物、物理的現象、化学的現象又は生物学的現象、特に酵素現象を検出及び／又は定量する方法への使用、更に前記方法を実施可能にするキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
生化学、又は細胞生物学において使用される多くの検出方法は、光シグナルの発生、例えば蛍光に依存している。
【０００３】
従って、生体外で種々の酵素の活性を検出するために多くの色素産生の、蛍光の又は発光性の試験が記載されている。これら試験の多くが、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）用ドナー／アクセプター対又はドナー／クエンチャー対の使用、或いは蛍光プローブ前の実体の使用に依存している。
【０００４】
不運にも、かかるインビトロでの分析に満足な検出方法が、一般に、生体内分析には有効でないことが分かっている。
【０００５】
従って、生体内適用のためには、近赤外で励起させることが必要である。すなわち、励起が重ならないドナー／アクセプター対又はドナー／クエンチャー対の選択が極めて限定される（フノビクス（Ｆｕｎｏｖｉｃｓ）ら、アナリシス  オブ  バイオアナリティカルケミストリー、第３７７巻、２００３年、ｐ．９５６−９６３）。
【０００６】
近赤外において蛍光ドナーを励起する必要がないことから、生物発光又は化学発光化合物類を使用する、即ちその発光が化学反応又は生物反応の終了時点で生ずることが提案されている（ラクスマン（Ｌａｘｍａｎ）ら、アメリカ科学アカデミー紀要、第９９巻、２００２年、ｐ．１６５５１−１６５５５）。
【０００７】
化学発光化合物、これらの調製及びこれらの使用は以前から既知であった。これらのいわゆる“高エネルギー”分子は、観察される化学発光現象に関与しうる励起した電子状態にあるカルボニル基を生じるに十分なエネルギーを含んでいる。
【０００８】
化学発光化合物の代表例として、ジオキセタン由来の化合物、特に１，２−ジオキセタン誘導体を挙げることができる。これら化合物は熱的に不安定で、光シグナルを放出しながら幅広い温度範囲で分解されうる。一般に、これら化合物は下記の一般式：
【化１】
2008545682.tif 000002
［式中、各Ｒ置換基は任意に一以上のヘテロ原子を含む炭化水素系ラジカルに相当し、２つの隣接したＲ基又はＡｒ−Ｘ−Ｗに隣接した１つのＲ基と前記２つの他のＲ基の１つ又はＡｒとは結合していてもよく、ＸはＯ、Ｓ又はＮＨを表わし、Ｗは適切に荷電した置換可能な基を表わす］を有する。
【０００９】
多くの１，２−ジオキセタン誘導体が合成され、この中で、３位に結合したスピロアダマンチルラジカルを含む化合物は、化学発光基質として既に使用されている。これらの誘導体が、特に国際公開第９６／２４８４９号パンフレット、国際公開第９０／０７５１１号パンフレット及び米国特許第５，３３０，９００号の文献中に特に記載されている。これら１，２−ジオキセタン誘導体は酵素認識部位を備えることができ、発光シグナルを発生させるためにかかる部位を認識する酵素によって活性化させることができる。
【００１０】
つい最近では、他のジオキセタン誘導体も開発され、日本国特許公開第２００２−０２０３８号、欧州特許第１３４２７２４号、及び米国特許公開第２００４／００７７０１８号に記載されており、この場合種々のラジカルを用いてジオキセタン環を安定化する。
【００１１】
これら化合物の化学発光反応の原理は、フェノラート官能基とフェノール芳香族環のパラ位に位置する緊張したジオキセタン環との間の電子交換（ＣＩＥＥＬ、化学的に誘発した電子交換発光）に依存している（マツモト、ジャーナルオブフォトケミカルアンドフォトバイオロジカルケミストリー、総説、第５巻、２００４年、ｐ．２７−５３）。フェノラートを含む不安定な化合物の生成は、Ｒラジカルによって安定化された緊張１，２−ジオキセタン単位の破裂をもたらし、次にＣＩＥＥＬ現象によりフェノラートと電荷交換を行い、その結果として発光性シグナルを放出することによって基底状態に戻る活性化エステルが現れる。
【００１２】
フェノールそれ自体、またそのカルボン酸とのエステルは、アルカリ水溶液中でフェノールの酸素アニオン（オキシアニオン）を発生させるために使用される最も一般的な前駆体である。しかしながら、このタイプの他の誘導体も１，２−ジオキセタンから誘導され、この場合同じ酸素原子がチオール基、アミン基又は炭素と置換される（マツモト、ジャーナルオブフォトケミカルアンドフォトバイオロジカルケミストリー：光化学、総説、第５巻、２００４年、ｐ．２７−５３；サベラ（Ｓａｂｅｌｌｅ）ら、アメリカ化学会紀要、第１２４（１７）巻、２００２年、ｐ．４８７４−４８８０；マツモトら、テトラへドロンレター、第４５巻、２００４年、ｐ．３７７９−８２；国際公開第９６／２４８４９号、国際公開第００／４４７１９号）。しかしながら、後者の誘導体は実質的により低い量子収量を有し、実際には使用できない。
【００１３】
本発明は、直接又は分子内蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）によって、生物組織の膜の厚さを通して検出可能な発光シグナルを生成できる１，２−ジオキセタン由来の新規化合物類の提供を目的とする。
【００１４】
本発明の別の目的は、化学的、物理的又は生物学的現象、特に酵素活性によって活性化されうる１，２−ジオキセタン由来の化合物類を提供することにある。従って、本発明は、かかる活性化による情報、例えば酵素活性という脈絡における加水分解型の情報がフェノラートやチオフェナートの出現並びにこれらが与えられたもともとのものと異なる通動態の分光学的性質の誘導体への授与を表示する利点を有する。
【００１５】
本発明の別の目的は、１，２−ジオキセタンから誘導され、生体内で投与でき、医学画像検査法で使用可能な化合物類を提供することにある。
【００１６】
すなわち、発明者らは、予期に反して、光シグナルの放出に害を与えることなく、既に定義したような１，２−ジオキセタン型骨格と、物理的、化学的又は生物学的現象、特に酵素活性によって活性化されうる反応性分岐鎖とを組み合わせできることを確かめた。
【００１７】
本発明に係わる前記反応性分岐鎖は、分子内転位によって、光シグナルの活性化に必要な電子の移動を確実にする。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
従って、第一の主題の一つによれば、本発明は、下記一般式（Ｉ）：
Ｓ−Ｂ−Ａ
［式中、
Ｓは物理的、化学的又は生物学的現象によって活性化されうる不安定な構造を示し、
Ｂは不安定な構造Sの活性化が分子Ａ−を放出するための適当な形態で分子内転位を誘導する化学的構造を備える反応性分岐鎖であり、
Ａは一般式（ＩＩａ）：
【化２】
2008545682.tif 000003
（式中、
◇はＢとの共有結合を表わし、
ａ）Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、以下に定義するようなラジカル、例えば水素原子、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、アリールラジカル、ヒドロキシルラジカル、オキソユニット、アミノラジカル、シリルラジカル、ハロゲン原子であり；
ｂ）Ｒ２及びＲ３がオキソユニットを形成でき、
ｃ）Ｒ１及びＲ２が結合して、以下に定義するようなジオキセタン環と融合した環を形成でき；
ｄ）Ｒ２とＲ３又はＲ１とＡｒが結合して、以下に定義するようなこれらを支えるジオキセタン実体の炭素を有するスピロ環を形成でき；
Ａｒは、特には以下に定義したようなアリーレンラジカルを表わし；並びに
ＸはＯ、ＮＨ又はＳを表わす）で表わされる発光団である］で表わされる化合物、並びに塩類、エステル類、又は一般式（Ｉ）の化合物を目的とした少なくとも一つのユニットで官能化することによって得た誘導体に関する。
【００１９】
別の主題によれば、本発明は、一般式（Ｖａ）：
【化３】
2008545682.tif 000004
［式中、
Ｓは不安定な構造を表わし、Ｘ、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は以下に定義したのと同様である］で表わされる化合物に関する。
【００２０】
他の主題によれば、本発明は、本発明の化合物を、特定の細胞又は組織に有利な、例えば標的とする少なくとも一つの構造ユニットでの官能化に由来する化合物に関する。
【００２１】
更にもう一つの主題によれば、本発明は、物理的、化学的、生物学的現象の検出及び／又は定量を目的とした本発明に係わる化合物の少なくとも一つの使用に関し、ここでＳは前記現象によって活性化されうる不安定な構造を示す。
【００２２】
更にもう一つの主題によれば、本発明は、本発明に係わる化合物、特には一般式（Ｖａ）で表わされる化合物の、生体内での診断法実行向けの薬学的組成物調製のための使用に関する。
【００２３】
更にもう一つの主題によれば、本発明は、生物学的実体、特には酵素を検出及び／又は定量するための、一般式（Ｉ）、特には一般式（Ｖａ）［式中、Ｓは前記生物学的実体を検出及び／又は定量することによって活性化されうる不安定な構造である］で表わされる化合物を含むキットに関する。
【００２４】
更にもう一つの主題によれば、本発明は、生物学的実体、特には酵素を検出及び／又は定量する方法に関するもので、
一般式（Ｉ）、特には一般式（Ｖａ）［式中、Ｓは検出及び／又は定量すべき前記生物学的実体、特には酵素によって活性化されうる不安定な構造である］で表わされる少なくとも一つの化合物の少なくとも有効量を、前記生物学的実体が含まれると仮定される媒体と接触させる工程と、
生じた発光性シグナルを測定する工程とを少なくとも備えることを特徴とする。
【００２５】
更にもう一つの主題によれば、本発明は、一般式（Ｉ）、特には一般式（Ｖａ）［式中、Ｓは検出及び/又は定量すべき生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造である］で表わされる化合物により生物学的実体、特には酵素の検出及び／又は定量を行うことを備える生体内での診断方法、特には医療画像用の診断方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（定義）
本発明の趣意において、”アルキルラジカル”という表現は、以下の定義のような、ラジカルによって置換されうる１から２０個の炭素原子、好ましくは２から１２個の炭素原子、また更に好ましくは３から６個の炭素原子、最も好ましくは４個の炭素原子を有する、飽和又は不飽和の、直鎖、分岐鎖又は環式の、融合した又は融合していない炭化水素系ラジカルを意味する。
【００２７】
この定義に含まれるラジカルの一例としては、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルメチル、ｎ−プロピル、ペンチル、ｎ−ヘキシル、２−エチルブチル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル又はイコサニルラジカル類が挙げられる。
【００２８】
本発明の趣意において、”環式アルキルラジカル”という表現は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル又はシクロヘプチル環のような４から１０個の炭素原子を有するアルキレン環を意味する。
【００２９】
”多環式アルキルラジカル”という表現は、Ｃ１−Ｃ１０アルキルラジカル、特にはＣ２−Ｃ６アルキルラジカル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシラジカル、特にはＣ２−Ｃ６アルコキシラジカル、Ｃ１−Ｃ１０アルキルアミノラジカル、特にはＣ２−Ｃ６アルキルアミノラジカル、Ｃ１−Ｃ１０アルキルチオラジカル、特にはＣ２−Ｃ６アルキルチオラジカル、ハロゲン原子、Ｃ１−Ｃ１０ハロアルキルラジカル、特にはＣ２−Ｃ６ハロアルキルラジカルから独立して選択された１から１０個のラジカルによって任意に置換された、４から２０個の炭素原子、特には６から１２個の炭素原子を有する多環式アルキレンを意味する。
【００３０】
本発明の実施に適した多環式ラジカルの例としては、アダマンチルラジカル又はビシクロ［２．２．１］ヘプチルラジカルが挙げられる。
【００３１】
本発明の趣意において、”アルコキシラジカル”という表現は、アルキル基が上述したような飽和又は不飽和、直鎖、分岐鎖又は環式、融合した又は融合していない炭化水素系ラジカルである−ＯＲラジカルを意味する。
【００３２】
一例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、イソペントキシ、ｓｅｃ−ペントキシ、ｔ−ペントキシ、ヘキシルオキシ、メトキシエトキシ、メトキシプロポキシ、エトキシエトキシ、エトキシプロポキシ基などが挙げられる。
【００３３】
本発明の趣意において、”アシルラジカル”という表現は、Ｃ＝Ｏ官能基を含み、１から２０個の炭素原子、特には２から１２個の炭素原子、また好ましくは３から６個の炭素原子、更に好ましくは４個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の、直鎖、分岐鎖又は環式の、融合した又は融合していない炭化水素系ラジカルを意味し、例えばホルミルラジカル、アセチルラジカル、スクシニルラジカル、ベンゾイルラジカル、１−ナフトイル又は２−ナフトイルラジカルがある。
【００３４】
前述のラジカルの炭化水素系鎖を、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される一以上のヘテロ原子によって遮断して、例えばアルキルエーテルラジカル、アルキルエステルラジカル又はヘテロ環のようなヘテロアルキルラジカルを形成してもよい。
【００３５】
本発明の趣意において、”ヘテロ環式ラジカル”という表現は特に限定されず、例えばフラニルラジカル、チオフェニルラジカル、ピロリルラジカル、オキサゾリルラジカル、イソオキサゾリルラジカル、チアゾリルラジカル、イソチアゾリルラジカル、イミダゾリルラジカル、ピラゾリルラジカル、フラザニルラジカル、ピラニルラジアカル、ピリジニルラジカル、ピリダジニルラジカル、ピリミジニルラジカル、又はピラジニルラジカルを意味する。
【００３６】
本発明の趣意において、”アリールラジカル”という表現は、１から５個の芳香環を含み、任意に融合し、６から３０個の炭素原子、任意に６から１０個の炭素原子を有し、任意にＯ、Ｎ及びＳから選択される一以上のヘテロ原子を含む芳香族環系を意味する。
【００３７】
本発明の実施に適したアリールラジカルの一例としては、フェニルラジカル、ナフチルラジカル、アントリルラジカル、及びＯ、Ｎ及びＳから選択される一以上のヘテロ原子を含む全ての芳香族環、例えばピリジン、チオフェン、ピロール、フラン、キノリンが挙げられる。本発明の趣意において、”アリーレンラジカル”という表現は、既に定義したように、二価のアリールラジカルを意味する。
【００３８】
上記ラジカルの置換に使用できる置換基の例としては、ヒドキシルラジカル、オキソユニット、チオラジカル、アミノラジカル、ハロゲン原子、アルキルラジカル、カルボキシラジカル、アシルラジカル、アミドラジカル、アルコキシラジカル、アルキルアミノ又はジアルキルアミノラジカル、アルキルチオラジカル、例えばパーフルオロラジカルのようなハロアルキルラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル又はトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ又はトリアルキルシロキシラジカル、既に定義したようなアリールラジカルが挙げられる。
【００３９】
本発明の趣意において、”ハロゲン原子”という表現は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを意味する。本発明で有利に用いるハロゲン原子はフッ素及び塩素である。
【００４０】
本発明の趣意において、”ハロアルキルラジカル”という表現は、既に定義したようなアルキルラジカルを上述したような一以上のハロゲン原子で置換したもの、特に限定されないが例えばパーフルオロメチルラジカルを意味する。
【００４１】
（１，２−ジオキセタン誘導体）
本発明による化合物は、一般式（Ｉ）：
Ｓ−Ｂ−Ａ
を有し、またその塩類、エステル類又は特にはターゲティング目的用の構造的元素で官能化した誘導体を含む。
【００４２】
（反応性分岐鎖Ｂ）
本発明の化合物に関する一般式（Ｉ）において、Ｂは単なる化学結合とは異なり、化学的、物理的又は生物学的現象による不安定な構造Ｓの活性化が分子Ａ−を放出するに適した形態でＢの分子内転位を誘導するような化学構造を有する炭化水素系反応性分岐鎖を表わす。
【００４３】
Ｂは、Ｃ１−Ｃ８、特にＣ２−Ｃ６、また特にはＣ３−Ｃ４アルキルラジカルによって表わされるのが有利で、これらはＣ６−Ｃ１４、特にＣ６−Ｃ１０アリーレンラジカル及び／又はＯ、Ｎ又はＳから選択された一以上のヘテロ原子によって随意遮断され、また、前述した一以上の置換基、特にヒドロキシルラジカル、オキソユニット、アミノラジカル、ハロゲン原子、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、カルボキシラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、アリールラジカル及びアリールオキシラジカルから選択されるものによって随意に置換される。前記アルキルラジカルは二個の炭素原子を含むことが有利である。
【００４４】
また、アリーレンラジカルを、既に定義したような一以上の置換基によって置換することができる。
【００４５】
一実施態様の変化によれば、前記アリーレンラジカルはフェニレン又はナフタレンラジカルから選択される。フェニレンラジカルにおいて、前記ラジカルの二つの結合の位置は、オルト、メタ、パラ位とすることができる。これらはオルト位であることが有利である。
【００４６】
一実施態様によれば、反応性分岐鎖Ｂは：
ベンジリデンラジカル；
□−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｃ（Ｏ）−◇ラジカル［式中の□及び◇はそれぞれ不安定な構造Ｓ及び発色団Ａとの共有結合を表わす］；
一般式（ＩＩＩ）：
【化４】
2008545682.tif 000005
［式中、
□及び◇はそれぞれ不安定な構造Ｓ及び発色団Ａとの共有結合を表わし、
ｊは０から２の整数であり、１と等しいことが有利であり；
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２０、特にＣ２−Ｃ１２、また特にはＣ３−Ｃ６炭化水素系鎖であり、必要に応じて□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルのオルト、メタ、又はパラ位に位置した一以上のヘテロ原子及び／又は−ＣＯ及び／又は−Ｎ（アルキル）−ユニット（類）で遮断され、特に−（ＣＨ２）ｋ−◇、−（ＣＨ２）ｋ−Ｃ（Ｏ）−◇、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｃ（Ｏ）−◇ラジカル（式中、ｋは１又は２に等しく、１であることが有利である）から選択され、
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、特に既に定義したような、水素原子或いはアルキルラジカル、アルコキシラジカル、アルキルアミノラジカル、若しくはジアルキルアミノラジカル、アルキルチオラジカルから選択した飽和又は不飽和、直鎖、分岐鎖又は環式Ｃ１−Ｃ２０、特にＣ２−Ｃ１２、また特にはＣ３−Ｃ６炭化水素系鎖、或いはアリールラジカル、アリールオキシラジカル、アリールアミノラジカル及びアリールチオラジカルから選択したＣ６−Ｃ３０、特にＣ６−Ｃ１０芳香族環である］で表わされる誘導体
から選択することができる。
【００４７】
特定の一実施態様によれば、前記ラジカルＲ５及びＲ６は、それぞれ独立して
水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキルラジカル、Ｃ２−Ｃ６アルケニルラジカル、分岐又は未分岐のＣ３−Ｃ６アルキニルラジカル、前述したような一以上の置換基、特にハロゲン原子、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、例えばベンジルオキシラジカル又はベンジルラジカルのようなアリールラジカルから選択されたもので置換或いは未置換のＣ３−Ｃ６シクロアルキルラジカル；
Ｏ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子を含み、随意に前述したような一以上の置換基、特にハロゲン原子、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、及び例えばベンジルオキシラジカル、ベンジルラジカル、フェニルラジカル、又はナフチルラジカルのようなアリールラジカルから選択されたもので置換されるＣ３−Ｃ8、特にＣ４−Ｃ７の環式、脂肪族、芳香族又は複素環式芳香族炭化水素系鎖、
から選択される。
【００４８】
特定の一実施態様によれば、Ｒ４が−（ＣＨ２）ｋ−Ｃ（Ｏ）−◇及び−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｃ（Ｏ）−◇から選択される場合、Ｒ４はパラ位に□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルを有し、ｊ＝ｋ＝１、Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈである。
【００４９】
特定の他の実施態様によれば、Ｒ４は、□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルのオルト位に位置する−（ＣＨ２）ｋ−◇で表わすことができ、ｊ＝ｋ＝１、Ｒ５＝Ｒ６＝−Ｏ−ＣＨ３である。
【００５０】
反応性の分岐鎖Ｂは、米国特許第６，２７１，３４５号明細書で定義されるようなものとするのが有利で、これをここに参照して取り込む。
【００５１】
他の特定の一実施態様によれば、Ｂの分子内転位はラクタム又はラクトンの形成を導く。
【００５２】
（発色団Ａ）
本発明の１，２−ジオキセタン由来の化合物の一般式（Ｉ）において、発色団Ａは一般式（ＩＩａ）：
【化５】
2008545682.tif 000006
で表され、ここで
◇はＢとの共有結合を表わし；
ａ）Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシルラジカル、アミノラジカル、チオラジカル、ハロゲン原子、必要に応じて置換されているアルコキシラジカル、アルキルラジカル、ヘテロアルキルラジカル、シクロアルキルラジカル、ヘテロシクロアルキルラジカル、エーテルラジカル、アルケニルラジカル、アルキニルラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル又はトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ又はトリアルキルシロキシラジカル、アルキルチオラジカル、ハロアルキルラジカル、アリールラジカル及びヘテロアリールラジカルから選択されるＣ６−Ｃ３０、特にＣ６−Ｃ１０芳香環から選択されたＣ１−Ｃ２０、特にＣ２−Ｃ１２、また特にはＣ３−Ｃ６炭化水素系鎖を表わし、
ｂ）Ｒ２及びＲ３が共同してオキソユニットを形成でき；
ｃ）Ｒ１及びＲ２が結合して、ジオキセタン環で融合したＣ４−Ｃ８環を形成でき、必要に応じてＯ、Ｎ及びＳから選択される一以上のヘテロ原子によって遮断され、場合によってはａ）でＲ１、Ｒ２及びＲ３として既に定義したような一以上のラジカルで置換され、
ｄ）Ｒ２とＲ３又はＲ１とＡｒを結合して、これらを支えるジオキセタン実体の炭素を有するＣ４−Ｃ２０、特にＣ６−Ｃ１０のスピロ環を形成でき、かかる環が場合によっては単環式又は多環式、飽和又は不飽和、芳香族、融合又は非融合であり、必要に応じてＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子を添合し、ａ）でＲ１、Ｒ２及びＲ３として既に定義したような一以上の置換基で随意に置換され；
Ａｒは、Ｃ６−Ｃ３０、特にＣ６−Ｃ１０アリーレンラジカルであり、特にヒドロキシルラジカル、ハロゲン原子、オキソユニット、アミノラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、チオラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、アルキルチオラジカル、カルボキシラジカル、ホルミルラジカル、アルキルエステルラジカル、アルキルケトンラジカル、ハロアルキルラジカル、アリールラジカル、アリールエステルラジカル、アリールケトンラジカル、アリールアミノラジカル、ジアリールアミノラジカルから選択した一以上の置換基で随意に置換され；
ＸはＯ、ＮＨ又はＳで、ＸがＯであるのが有利である。
【００５３】
不安定な構造Ｓの活性化及び反応性分岐鎖Ｂの分子内転位後に生成した化合物Ａ−は不安定であり、化学発光反応によって光シグナルを放出しながら反応する。
【００５４】
特定の一実施態様によれば、Ｒ１は、蛍光性ラジカル又は、既に定義したような蛍光性ラジカルで置換されたアルキルラジカルとすることができる。
【００５５】
他の実施態様によれば、Ａｒをそれ自体蛍光性のラジカル、若しくは構造全体に蛍光性を与えうるラジカル、又はその蛍光性を修飾できるラジカルによって置換できる。
【００５６】
他の特定の実施態様によれば、Ａｒと、Ｒ１及び／又はＲ２と、Ｒ３とを結合して環式又は多環式又はスピロ融合アルキルラジカルを形成でき、これは：
その環又は側鎖に少なくとも一つの二重結合又は少なくとも一つの三重結合を、また任意にＯ、Ｎ及びＳから選択された一以上のヘテロ原子を含むか；
或いは置換又は未置換の芳香環に結合又は融合するかの何れかが可能である。Ａｒ及びＲ１が互いに結合しない場合、Ａｒは、フェニル、ナフチル又はアントラリルラジカルのようなアリールラジカルとすることができ、ここで特に前述したようなラジカルにより適切に置換され、またR１は前述したものとすることができる。かかる化合物は、米国特許出願第２００４／００７７０１８号明細書により詳しく説明されており、この内容を参照することによって本願に取り込む。
【００５７】
他の実施態様によれば、Ｒ２及びＲ３を一緒に結合してこれらを支えるジオキセタン環の炭素のスピロ位にアダマンチルラジカルを形成し、必要に応じて後述するＲ８及びＲ９ラジカルにより特に置換される。
【００５８】
他の実施態様によれば、Ｒ１及びＲ２を一緒に結合してジオキセタン環で融合した環を形成することができ、Ｏ、Ｎ及びＳから選択した一つ以上のヘテロ原子を随意に含む。Ｒ１及びＲ２がジオキセタンで融合したオキソシクロペンタンを形成するのが有利である。かかる化合物は欧州特許出願第１３４２７２４号に記載されており、またこれをここに参照して取り込む。
【００５９】
他の実施態様によれば、Ｒ１及びＲ２を一緒に結合してジオキセタンで融合した多環式の環系を形成することができる。かかる化合物は日本国特許出願第２００４−２６２８１７号明細書に記載されており、該内容をここに参照することによって取り込む。
【００６０】
特定の実施態様の変化によれば、発色団Ａは一般式（ＩＩｂ）：
【化６】
2008545682.tif 000007
で表され、ここで
◇はＢとの共有結合を表わし、
Ｒ１は既に定義したとおりである。有益なことに、Ｒ１をアルキルラジカル、蛍光性基及び蛍光性基で置換したアルキルラジカルから選択できる。該アルキルラジカルは既に定義したとおりである。有益なことに、Ｒ１はＯ、Ｎ及びＳから選択される一以上のヘテロ原子を任意に含み、任意に置換された、飽和又は不飽和の、直鎖、分岐鎖又は環式のＣ１−Ｃ６アルキル又はＣ１−Ｃ６アルコキシラジカルとすることができる。Ｒ１は既に定義したようなラジカルで置換してもよい。Ｒ１はＣ１−Ｃ３アルキル又はＣ１−Ｃ３アルコキシラジカルであることが有利であり、メチル又はメトキシラジカルであることが好ましい。
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素原子又は電気活性なラジカルであり、
ＸはＯ、ＮＨ又はＳで、ＸがＯであるのが有利である。
Ａｒは既に定義したようにアリーレンラジカル、又は一般式（ＩＶａ）：
【化７】
2008545682.tif 000008
で表され、ここで、
△はＸとの共有結合を表わし、＊はジオキセタン環との共有結合を表わす。△及び＊はオルト、メタ、パラ位に位置できる。△及び＊はメタ位に位置することが有利であり、
Ｒ１０は水素原子、電気活性基又は蛍光性ラジカルを表わす。該電気活性ラジカルはＡｒラジカルの蛍光特性を、例えばアルキルシリル、ジアルキルシリル又はトリアルキルシリルラジカル、ＮＯ２ラジカル、アントリルラジカル、ナフチルラジカルの形態に修飾しうることが有利である（例えば、マツモトら著、テトラヒドロンレター（Tetrahedron Lett）、第４３巻、２００２年、ｐ．８９５５−５８を参照）。
Ｒ１１は水素原子、又はアリールラジカルを表わし、例えばフェニレンラジカル、特にフェニルラジカルで融合してナフタレンラジカルを形成するＣ６−Ｃ１０アリールラジカルである。
【００６１】
本発明の趣意において、“電気活性基”という用語は電子受容基又は電子供与基を意味する。
【００６２】
特定の一態様変化によれば、前記発光団Ａは、基Ｒ８又はＲ９、Ｒ１０の少なくとも一つが水溶液中で本発明の一般式（Ｉ）の化合物の可溶化を促進する電気活性ラジカルである。
【００６３】
水溶液中で一般式（Ｉ）の化合物の可溶化を促進する基の例として、アンモニウム、ホスホニウム、スルホニウム、カルボン酸、スルホン酸、トリフルオロメチルスルホニル、メチルスルホニル、シアノ及びヒドロキシラジカルが挙げられる。
【００６４】
他の実施態様によれば、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、ヒドロキシラジカル、ハロゲン原子、シアノラジカル、アミドラジカル、アルコキシラジカル、ハロアルキルラジカル、フェニルラジカル、アルコキシフェニルラジカルから選択した電気活性ラジカルである。
【００６５】
更に他の実施態様の変化によれば、Ｒ１０は水素原子か、又はハロゲン原子、特には塩素又はフッ素原子、シアノラジカル、ニトロラジカル、一置換又は二置換アミドラジカル、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、トリアルキルアンモニウムラジカル、アルキルアミドラジカル、アルキルカルバモイルラジカル、エステルラジカル、アルキルスルホンアミドラジカル、トリフルオロメチルラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル又はトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ又はトリアルキルシロキシラジカル、アルキルアミドスルホニルラジカル、アルキルスルホニルラジカル、アルキルチオエーテルラジカル、ハロアルキルラジカル、並びにアリールオキシラジカル、アリールアミドラジカル、アリールカルバモイルラジカル、アリールスルホンアミドラジカル、アリールラジカル、ヘテロアリールラジカル、トリアリールシリル又はアルキルアリールシロキシラジカル、トリアリールシロキシラジカル、アリールアミドスルホニルラジカル、アリールスルホニルラジカル及びアルールチオエーテルラジカルから選択したＣ６−Ｃ１０ラジカル、から有利に選択される電気活性ラジカルである。
【００６６】
特定の一実施態様によれば、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０は水素原子であることが有利である。
【００６７】
特定の他の実施態様によれば、Ｒ１又はＲ１０は、本発明による発光化合物の放出波長を分子内ＦＲＥＴによって修飾するために、蛍光性ラジカルとすることができる。
【００６８】
例えば、これらの蛍光性ラジカルは、限定することなく、フェニル基並びにその誘導体、ナフタレン並びに５−ジメチルアミノナフタレン−１−スルホン酸及びヒドロキシナフタレン類のような誘導体、アントラセン並びに９，１０−ジフェニルナフタレン及び９−メチルアントラセンのような誘導体、ピレン並びにＮ−（１−ピレン）ヨードアセトアミド及びヒドロキシピレン類のような誘導体、ビフェニル並びにその誘導体、アクリジン並びにヒドロキシアクリジン類及び９−メチルアクリジンのような誘導体、クマリン並びに７−ジアルキルアミノ−４−メチルクマリン及び４−ブロモメチル−７−メトキシクマリンのような誘導体、キサンテン並びにその誘導体、フタロシアニン並びにその誘導体、スチルベン並びに６，６’−ジブロモスチルベン及びヒドロキシスチルベン類のようなその誘導体、フラン並びにその誘導体、オキサゾール並びにその誘導体、オキサジアゾール並びにその誘導体、ニトロベンゾキサジアゾール並びにヒドロキシニトロベンゾキサジアゾール類のような誘導体、ベンゾチアゾール並びにその誘導体、フルオロセイン並びに５−ヨードアセトアミドフルオロセイン及びフルオロセイン−５−マレイミドのような誘導体、ローダミン並びにテトラメチルローダミン、テトラエチルローダミン及びローダミン類のような誘導体、ＢＯＤＩＰＹ並びにその誘導体、エオシン並びにその誘導体、エリスロシン並びにヒドロキシエリトロシン類及び５−ヨードアセトアミドエリスロシンのような誘導体、レソルフィン並びにヒドロキシレソルフィンのような誘導体、キノリン並びに６−ヒドロキシキノリン及び６−アミノキノリンのような誘導体、カルバゾール並びにＮ−メチルカルバゾールのような誘導体、蛍光性シアニン類並びにヒドロキシシアニンのような誘導体、カルボシアニン並びにフェニルカルボシアニンのような誘導体、ピリジニウム塩並びに４−（４−ジアルキルジアミドスチリル）−Ｎ−メチルピリジニウムヨウ素酸塩のような誘導体、ランタニド並びにその誘導体の蛍光錯体、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及びその変異体のような蛍光性タンパク質並びに量子ドットから選択することができる。
【００６９】
有益なことに、Ｒ１及びＲ１０は、例えばローダミン及びその誘導体、ＢＯＤＩＰＹ及びその誘導体、シアニン類及びその誘導体又は量子ドットのように、蛍光放出波長が４００から９００ナノメートル、特に５００から９００ナノメートル、更に特には６００から９００ナノメートルの範囲にある分子から有利に選択できる。
【００７０】
他の特定の実施態様によれば、本発明による化合物類は一般式（Ｖａ）：
【化８】
2008545682.tif 000009
とすることができ、式中、
Ｓは不安定な構造、並びにＸ、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は既に定義した通りである。
【００７１】
有益なことに、Ｒ２及びＲ３を結合して、これらを支えるジオキセタン環の炭素を有するスピロアダマンチルラジカルを形成し、必要に応じて既に定義したようなラジカル、特にＲ８及びＲ９のようなラジカルによって置換される。
【００７２】
Ｒ１、Ｒ５及びＲ６はメトキシラジカルであることが有利である。
【００７３】
他の特定の実施態様によれば、本発明の化合物類は一般式（Ｖｂ）：
【化９】
2008545682.tif 000010
とすることができ、式中、
Ｓは不安定な構造を表わし、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０及びＲ１１は既に定義した通りである。
【００７４】
Ｒ２及びＲ３を融合して、これらを支えるジオキセタン環の炭素を有するスピロアダマンチルラジカルを形成し、必要に応じて既に定義したようなラジカル、特にＲ８及びＲ９のようなラジカルによって置換される。
【００７５】
Ｒ１、Ｒ５及びＲ６はメトキシラジカルであることが有利である。
【００７６】
Ｒ１０及びＲ１１が水素原子、又はＲ１１が水素原子で、Ｒ１１がフェニレンラジカルとナフタレンラジカルを形成することが有利である。
【００７７】
他の特定の実施態様によれば、本発明による化合物は一般式（Ｖｃ）：
【化１０】
2008545682.tif 000011
とすることができ、式中Ｓは不安定な構造を表わし、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は既に定義した通りである。
【００７８】
他の特定の実施態様によれば、本発明による化合物は、Ｒ８＝Ｒ９＝Ｒ１０＝Ｒ１１＝Ｈ及びＲ１＝Ｒ５＝Ｒ６＝−Ｏ−ＣＨ３である一般式（Ｖｃ）によって表わすことができる。
【００７９】
（不安定な構造Ｓ）
本発明の化合物の一般式（Ｉ）において、Ｓは化学的、物理的、生物学的現象又は実体によって活性化されうる不安定な構造を表わす。
【００８０】
“物理的現象”という表現は、本発明における趣意において、例えば温度変化又は圧力変化を指すと理解される。
【００８１】
“化学的現象”という表現は、本発明における趣意において、プロトンの増加又は減少によるｐＨの変化、塩成分の増加又は減少による塩分の変化、酸化還元ポテンシャルの変化、化学種、例えばＦ−、Ｓ−のようなイオン及びＣａ２＋のようなアルカリ土類金属の出現又は消滅のような周囲の化学的性質を修飾する化学的実体を含む現象を指すと理解される。
【００８２】
Ｓが化学的現象によって活性化されうる不安定な構造を表わす場合、Ｓは例えばアンモニウム、アミド、アミン、エステル、シリラン（ｓｉｌｙｌａｎｅ）、チオール、カルバメート又はカーボネート基であることが有利である。
【００８３】
“生物学的現象”という表現は、本発明における趣意において、例えば、加水分解、アミン基の転移、又は異性化の生成において、例えば酵素活性のような生物学的実体の活性を含む現象を指すと理解される。
【００８４】
従って、本発明の化合物が生物学的現象によって活性化されている間に、該化合物は生物学的実体の作用を受ける。
【００８５】
本発明の化合物を活性化し得る生物学的実体の一例としては、限定されないが、酵素、リボソーム及び抗体酵素を挙げることができる。
【００８６】
本発明の化合物を活性化しうる酵素の一例としては、アミノトランスフェラーゼ類のような転位酵素類；エステラーゼ類（例えばアルカリフォスタファーゼ）、グルコシダーゼ類、プロテアーゼ類（例えばトリプシン、メタロプロテアーゼ類又はカスペース類）のような加水分解酵素；イソメラーゼ類が挙げられる。
【００８７】
Ｓが生物学的実体によって活性化されうる構造である場合、Ｓは一般式（ＶＩ）：
Ｐ−Ｌ−□
［式中、
□はＢとの共有結合を表わし；
Ｐは前記実体によって認識されうる基質；
Ｌは酸素、硫黄、ニトロ基、カルボニル基、又は−ＣＯ−Ｑ−官能基（式中、ＱはＯ、Ｓ、ＮＨである）である］で表わされることが有利である。
【００８８】
一実施態様によれば、Ｓは酵素の作用、特に加水分解酵素の作用によって不安定になる構造を表わすことができる。
【００８９】
Ｓがプロテアーゼ型の加水分解酵素の作用によって不安定になる構造を表わす場合、Ｌは−ＣＯ−Ｑ（式中、ＱはＮＨである）を表わし、Ｐは、例えばペプチド又は偽ペプチド残基のような基質を認識するプロテアーゼを表わす。
【００９０】
本発明を実施するために望ましいと思われるプロテアーゼの例としては、限定されないが、カスパーゼ−３のようなカスパーゼ、アシルアミノアシルペプチダーゼ、アミノペプチダーゼＭ、ペニシリンＧアシラーゼ、サーモリシン、カテプシンＢ、Ｇ、Ｌ、メタロプロテアーゼ類、エラスターゼ、ズブチリシン、プラスミノーゲン活性化因子及びウロキナーゼが挙げられる。
【００９１】
一実施態様によれば、Ｐがペプチド残基である場合、これは少なくとも２個、特には少なくとも４個、特には少なくとも６個、また更に特には少なくとも８個のアミノ酸残基を含む。
【００９２】
これらアミノ酸は天然物又は合成物、及びＬ型又はＤ型配置でもよい。
【００９３】
これらのペプチド類は、化学合成又は分子生物学により、当業者に周知の通常の方法によって得ることができる。
【００９４】
本発明の実施に適したペプチド残基の一例としては、カスパーゼ−３によって最近のアスパラギン酸塩残基から選択的に加水分解されたＤＥＶＥテトラペプチド配列（一字表記で書かれたアミノ酸）が挙げられる。
【００９５】
他の実施態様の変化によれば、Ｓはカルボキシエステラーゼ、ホスファターゼ又はリパーゼのようなエステラーゼ型加水分解酵素の作用によって不安定になる構造を表わしうる。
【００９６】
この場合、Ｌは−ＣＯ−Ｑ（式中、ＱはＯである）を表わし、Ｐはエステラーゼ又はグルコシダーゼ型酵素によって認識される（Ｐ-Ｌアセンブリがカルボン酸、特に脂肪酸残基を形成するようなアルキル鎖型の）炭素系残基、或いはホスファターゼ型酵素によって認識されるリン酸基を表わす。
【００９７】
Ｐがリン酸基である場合、これは一般式（ＶＩＩ）：
【化１１】
2008545682.tif 000012
とすることができ、式中Ｍ＋は、Ｎａ＋、Ｋ＋、アンモニウム、又は４級アンモニウムカチオンＮ（Ｒ）４＋（式中、ＲはそれぞれＣ１−Ｃ２アルキル、ベンジル基のようなアリールアルキルにでき、又はピリミジン環のようにヘテロ環の一部を形成する）等のアルカリ金属のようなカチオンを表わす。
【００９８】
該構造体は、アルカリホスファターゼによって有利に加水分解される。
【００９９】
他の実施態様の変化によれば、Ｓは、グルコシダーゼ型酵素の作用によって不安定になる構造を表わす。
【０１００】
この場合、Ｌは酸素原子とするのが有利で、Ｐはグルコシダーゼによって認識される糖のような基質を表わす。
【０１０１】
本発明の実施に好ましい糖の一例としては、α−Ｄ−又はβ−Ｄ−ガラクトシド、α−Ｄ−又はβ−Ｄ−グルコシド、α−Ｄ−又はβ−Ｄ−マンノシド及びα−Ｄ−又はβ−Ｄ−フルクトフラノシドが挙げられる。
【０１０２】
他の実施態様によれば、Ｓはアミノトランスフェラーゼの作用により不安定になる構造を示しうる。
【０１０３】
この場合、Ｌはカルボニル基を表わし、Ｐは例えば、限定されないが、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼのような酵素によって認識される基質を表わす。
【０１０４】
（標的）
一実施態様によれば、本発明の化合物は、更に不安定な構造Ｓにおいて標的構造Ｄを含みうる。
【０１０５】
それ故、化合物は下記の一般式（ＶＩＩ）：
Ｄ−Ｓ−Ｂ−Ａ
［式中、
Ｄは標的構造を表わし；
Ｓ、Ｂ及びＡは既に定義したとおりである］を有する。
【０１０６】
標的構造Ｄ、又はリガンドは、限定されないが、例えば受容体、酵素、構造たんぱく質、糖タンパク質、糖、脂質又はリン脂質のような特定の細胞成分を発現している細胞を認識するか、或いはこれに優先的に結合しうる成分である。細胞成分は膜成分、好ましくは細胞外の媒体中に位置しているその構造の一部を有する膜成分であるのが有利である。
【０１０７】
一実施態様によれば、前記細胞成分は、細胞又は細胞周囲の組織又は細胞を構成する器官の生理的又は病理学的状態に対して特異的とすることができる。従って、限定されないが、細胞成分は細胞の成長状態、細胞周期の位置、細胞又は組織の炎症反応、アポトーシス、又は組織の変性に対して特異的とすることができる。
【０１０８】
“認識する又は優先的に結合する”という表現は、生体内又は生体外における他の細胞又は他の組織との非特異的な又は重要性の薄い結合を完全に除外することは出来ないけれども、 標的構造Ｄが当該の細胞又は組織に対して特定の親和性を有することを示す。しかしながら、優先的結合は、本発明の化合物を興味ある部位で標的にして、本発明の化合物が興味の薄い組織及び／又は細胞に拡散するのを減少することを可能にする。
【０１０９】
それ故、標的構造Ｄは、限定されないが、例えばタンパク質、糖又は脂質のような細胞の表面上に存在する成分を認識するもののレクチン、抗体又は抗体のフラグメント；例えばニューロペプチドＹのようなペプチド、アドレナリンのようなカテコールアミン、例えばプロプラノロールのようなβ−アドレナリン受容体アンタゴニストのようなアンタゴニスト、増殖因子、アミノ酸又は例えばグルタミン酸塩のような誘導体、例えばインターロイキン、インターフェロン又はＴＮＦのようなサイトカイン、ホルモン、ビタミン、アポリプロプロテイン又はコレステロールのような細胞受容体のリガンド；例えばアネキシンのような膜の脂質又はリン脂質と相互作用し得るリガンド；細胞表面に存在する糖と相互作用し得るリガンドから選択することができる。
【０１１０】
“細胞受容体”という表現は、細胞の外側から内側に情報伝達可能な如何なる細胞成分を意味すると理解される。
【０１１１】
必要に応じてその分野において普通に実施される試験方法を使用することによって、当業者の知識が望ましい標的として適した構造Ｄの性質を決定することになる。
【０１１２】
一実施態様によれば、標的構造Ｄは、例えば特定の又は病変を示す組織に特徴的又は特異的な様式で存在する細胞の表面に結合できるペプチドのようなリガンドとすることができる。
【０１１３】
また、標的構造Ｄは、腫瘍細胞又は腫瘍組織に存在する細胞の表面、或いは、炎症組織に存在する細胞の表面に結合しうる。
【０１１４】
例えば、標的構造Ｄは、ホスファチジルセリンのような負に荷電した脂質を表面上で曝すアポトーシス過程にある細胞の表面に結合できる。
【０１１５】
一実施態様の変化によれば、標的構造Ｄは、ペプチド又はポリペプチド又は偽ペプチドのようなタンパク質又はタンパク質フラグメントとすることができる。
【０１１６】
負に荷電した脂質を曝す膜に結合しうるタンパク質類としては、限定されないが、アネキシンファミリー、Ｃ１又はＣ２ドメインを含む血液凝固因子Ｖ及びＶＩＩＩのようなタンパク質ファミリー、ＰＨドメイン又はＦＹＶＥドメインを備えるタンパク質ファミリー、或いはβ２−グリコプロテイン−Ｉ（βＧＰ−Ｉ）の５ドメインと同一又は相同のドメインを備える他のタンパク質が挙げられる。これらタンパク質類又はその配列から導かれるドメインは、本発明の化合物の標的構造として使用できる。
【０１１７】
他の実施態様によれば、一般式（Ｉ）の一以上の化合物を、特に放出シグナルの強度を増大させるために、標的構造Ｄに固定することができる。
【０１１８】
従って、少なくとも１個、特には少なくとも２個、特には少なくとも３個、特には４個、更に特には５個の化学式Ｓ−Ｂ−Ａを有する化合物を標的成分Ｄに固定することができる。
【０１１９】
(検出方法）
既に述べたように、本発明の他の主題は、既に規定した本発明の少なくとも一つの化合物の化学的、物理的又は生物学的現象を検出及び／又は定量用への使用であり、Ｓは前記現象によって活性化されうる不安定な構造を表わす。
【０１２０】
かかる使用に用いる本発明の化合物は、既に規定したような一般式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）とするのが有利である。
【０１２１】
特に、本発明は、生物学的実体の検出方法及び／又は定量方法を提供することにある。
【０１２２】
本発明の方法は、本発明のとりわけ一般式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）［式中、Ｓは検出及び／又は定量すべき前記生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造を表わす］で表わされる化合物の少なくとも一つの、少なくとも有効量を、前記生物学的実体が含まれると仮定される媒体と接触させ、生成した発光性シグナルを測定する工程を備える。
【０１２３】
本発明の方法は、インビトロ、生体外又は生体内で実施できる。
【０１２４】
化学的、物理的、又は生物学的現象が起こりうる媒体を、前記現象の達成に適した条件下で、本発明の化合物の少なくとも一つ［ここで、Ｓは前記現象によって活性化されうる不安定な構造を表わす］の少なくとも有効量と接触させる場合、前記構造Ｓの活性化は発光性シグナルの放出を導く。
【０１２５】
発光性シグナルの有無を検出することによって前記現象の有無を証明することができ、また前記シグナルの強度を測定することによって前記現象の程度を測定できる。
【０１２６】
特定の一実施態様によれば、検出／定量すべき生物学的現象は、生物学的実体、特には酵素の活性である。
【０１２７】
かかる特定の実施態様においては、前記不安定な構造Ｓは前記酵素によって認識される基質を表わす。前記酵素の反応性に適した条件下での前記基質Ｓ、特には一般式（ＩＩ）の基Ｌに対する酵素の作用は、発光性シグナルの放出を導く。
【０１２８】
それ故、例えば加水分解酵素の脈絡内では、酵素の反応性に適した条件下での酵素による加水分解性基、特には一般式（ＩＩ）のＬによって表わされる基の加水分解が、発光性シグナルの放出を導く。
【０１２９】
前記発光性シグナルの有無を検出することによって前記酵素の有無を証明することが可能であり、また前記シグナルの強度を測定することによって濃度及び／又は速度論的性質も求めることができる。
【０１３０】
有益なことに、本発明の方法を実施するために適した媒体は、体液試料の形態の、合成又は天然の生体媒体にできる。
【０１３１】
インビトロ、又は必要に応じて生体外において、本発明の化合物と共に、本発明の前記化合物の分解による発光性シグナルを増強できる光増幅剤の少なくとも一つを使用するのが有利な場合がある。
【０１３２】
かかる化合物類は既知である。
【０１３３】
これら増幅剤の一例として、フルオレセイン、ウシアルブミン、ヒトアルブミン、ポリ（ビニルベンジルトリメチル）アンモニウムクロライド（ＴＭＱ）、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）アンモニウムクロライド（ＴＢＱ）（サファイア−ＩＩ（登録商標））、ポリ（ビニルベンジルジメチル）アンモニウムクロライド（ＢＤＭＱ）（サファイア−Ｉ（登録商標））、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）ホスホニウムクロライド、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）スルホニウムクロライド、ポリ（ベンジルジメチルビニルベンジル）アンモニウムクロライド、フルオレセインのナトリウム塩（エメラルド（登録商標））、ポリ（ベンジルトリブチル）アンモニウム、及びフルオレセインのナトリウム塩（エメラルドＩＩ（登録商標））のようなポリマー性４級オニウム塩が挙げられる。
【０１３４】
本発明の方法をインビトロで実行する場合、蛍光シグナルの検出は当業者が通常使用するあらゆる機械によって行うことができる。
【０１３５】
例えば、本発明の化合物と接触させたサンプルに、任意に一定時間インキュベートした後、例えばクロマトグラフィー（例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ））によって前記サンプルを構成する成分を分離する工程と、該分離工程による種々のフラクションのスペクトル分析（例えば紫外分光法による）工程を備えるか、又は備えない分析方法を施すことができる。本発明の化合物に特異的な分光シグナルの検出及び測定（例えばクロマトグラフィーのピークの高さ及び表面積）は、例えば酵素の存在、量及び／又は速度活性のような検出すべき現象の存在及び／又は強度／量と関連づけることができる。
【０１３６】
また、本発明の前記方法及び使用は、生体内においても有利に実行出来る。
【０１３７】
本発明の前記化合物は、例えば動物又はヒトのような生体にまず投与し、次に、当分野で通常使用されている方法により生体内で蛍光シグナルの検出を行うことができる。
【０１３８】
本発明に係わる使用を生体内で実施することによって、検出／定量すべき前記現象が起こりうる感受性組織又は器官の画像を有利に映し出すことが出来る。
【０１３９】
特定の一実施態様によれば、検出及び／又は定量すべき生物学的実体、特に酵素を発現しうる組織又は器官の画像を映し出すことが出来る。
【０１４０】
従って、特定の一実施態様によれば、本発明による方法を医学的画像検査法において実施できる。
【０１４１】
他の実施態様によれば、本発明の方法は、生物学的実体、特に酵素の、一般式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）［式中、Ｓは検出及び／又は定量すべき前記生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造を表わす］で表わされる化合物によって検出及び／又は定量することを備える生体内での診断方法である。
【０１４２】
本発明による方法は、例として、また非包括的に、ヒト、或いはラット、マウス、テンジクネズミ、非ヒト霊長類、又はブタ等の実験動物又は農業で使用する動物のような動物における医学、実験、臨床又は前臨床診断用に利用できる。
【０１４３】
特定の一実施態様によれば、本発明の方法によって検出及び／又は定量し得る生物学的実体は酵素で、特に限定されないがアミノトランスフェラーゼ、或いはエステラーゼ、プロテアーゼ、又はグルコシダーゼのような加水分解酵素から選択することができる。
【０１４４】
他の実施態様によれば、検出及び／又は定量すべき酵素がプロテアーゼである場合、これは限定されないが、カスパーゼ類、ペニシリナーゼ類、カルボキシペプチダーゼ類、トリプシン、アミノアシルペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ類、カテプシン類、メタロプルテアーゼ類、エラスターゼ、ズブチリシン、サーモリシン、プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ類、イソメラーゼ類から有利に選択することができる。
【０１４５】
生体内での実施の範囲内において、本発明の前記化合物は、経口、非経口、特に点滴、静脈内、心臓内、脳室内、腹腔内、又は腫瘍内投与、或いは肺、鼻、眼、及び任意に直腸、膣内、又は局所的投与に適合するように処方できる。
【０１４６】
従って、本発明の前記化合物は、実行する検出方法及び選択した投与経路に適合した処方で使用することができる。
【０１４７】
例えば、本発明の前記化合物は、錠剤、ゲルカプセル、或いは濃縮又は非濃縮水溶液の形状に調製できる。有益なことに、かかる水溶液を無菌にできる。
【０１４８】
他の実施態様によれば、本発明の前記化合物を固体状態、例えば粉末状にすることができ、また有益なことにその投与直前に無菌水溶液に調製し得る。
【０１４９】
従って、その一態様によれば、本発明は、生体内での診断方法、特に医学画像検査法の実施に適した薬学的組成物を製造するための本発明の化合物の使用、特に一般式が（Ｖａ）又は（Ｖｂ）で表わされる化合物の使用に関する。
【０１５０】
それ故、その一態様によれば、本発明は更に、本発明の少なくとも一つの化合物、特に一般式が（Ｖａ）又は（Ｖｂ）で表わされる化合物の少なくとも有効量を含む薬学的組成物に関する。
【０１５１】
薬学的組成物を調製するための本発明の組成物の使用は、薬学的に適した塩又はエステルのような誘導体の形態で実行することが有利である。従って、本発明は、更に本発明の前記化合物の塩類及びエステル類に関する。本発明の化合物のエステルの一例としては、本発明化合物のコハク酸塩、ヘミコハク酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、又はグリコール酸塩が挙げられる。本発明の化合物の塩の一例としては、本発明化合物の硫酸塩、リン酸塩、ナトリウム塩、又はカルシウム塩が挙げられる。
【０１５２】
本発明の方法又は使用に用いるべき本発明の化合物又は化合物類の適切な有効量への調整は、検出／定量（化学的、物理的、生物学的現象の）すべき現象又は実体、及び本発明の方法を実施する環境（体外、生体外又は生体内）に依存する。
【０１５３】
生体内での有効量は、本発明の方法を適用するか又は本発明の使用が実行される個体の大きさ及び重量、及び目的器官又は組織に依存して調整することができる。
【０１５４】
前記調整は、当業者が通常用いるすべての方法によって行うことができる。
【０１５５】
本発明の趣意において、“有効量”という表現は、望ましい効果、即ち化学的、物理的又は生物学的現象或いはその生物学的実体の検出及び／又は定量を得るに必要且つ十分な量を意味すると理解される。
【０１５６】
他の特定の実施態様によれば、本発明は化学的、物理的又は生物学的現象の発光性シグナルの放出による検出及び／又は定量用のキットに関し、該キットは少なくとも一つの本発明化合物を含み、ここでＳが検出及び／又は定量すべき前記物理的、化学的又は生物学的現象によって活性化されうる不安定な構造を表わす。
【０１５７】
特定の一実施態様によれば、本発明は生物学的実体、特に酵素の検出及び／又は定量用キットに関し、本発明化合物、特に一般式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）で表わされ、ここでＳが検出及び／又は定量すべき前記物理的、化学的又は生物学的現象によって活性化されうる不安定な構造を表わす化合物を備える。
【０１５８】
特定の一実施態様によれば、本発明による前記キットは、既に定義したような光増幅剤を少なくとも一つ含むことができる。
【０１５９】
本発明は、以下の例によって、よりよく理解されるであろう。
【０１６０】
これらの例は本発明の説明として与えられており、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。
【実施例】
【０１６１】
（実験の部）
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による分離
数種のクロマトグラフシステムを分析実験および精製工程に使用した：
システムＡ：流速１．０ｍｌ／分での酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液とアセトニトリル（ＴＥＡＡ  １００ｍｌ、ｐＨ  ７．０）［７５％ＴＥＡＡ（２分）、続いてアセトニトリルによる２５から１００％への直線的グラジエント（３０分）］による逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ハイパーシルゴールド（ＨＹＰＥＲＳＩＬ  ＧＯＬＤ）、５μ、４．６×１５０）。二波長でのＵＶ検出を２５４及び２８５ｎｍで行った。
システムＢ：流速５．０ｍｌ／分での脱塩水及びアセトニトリル［水７５％（５分）、続いてアセトニトリルによる２５から５５％（１５分）並びに５５から９０％（７０分）への直線的グラジエント］混合物における逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ヌクレオシル（ＮＵＣＬＥＯＳＩＬ）、５μ、１０×２５０）。ＵＶ検出を２６０ｎｍで行った。
システムＣ：流速１．０ｍｌ／分での酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液とアセトニトリル（ＴＥＡＡ  １００ｍｌ、ｐＨ  ７．０）［９０％ＴＥＡＡ（２分）、続いてアセトニトリルによる１０から９０％（４０分）への直線的グラジエント］による逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ハイパーシルゴールド、５μ、４．６×１５０）。二波長でのＵＶ検出を２５４及び２８５ｎｍで行った。
【０１６２】
（実施例１：反応性分岐鎖）
４，５−ジメトキシ−２−［（フェニルアセトアミノ）メチル］フェニル酢酸（７）の合成
【化１２】
2008545682.tif 000013
細かく粉砕した水酸化カリウム（２ｇ、３６ｍｍｏｌ）を、フェニルアセトニトリル１３（２ｍｌ、１７ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチルアルコール溶液（２０ｍｌ）に撹拌しながら加えた。反応混合物を４５分間還流し、続いて室温に冷却し、塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）に加えた。生成物をクロロホルム（ＣＨＣｌ３）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮して、白い粉末状のフェニルアセトアミド１２（２．１ｇ、９４％）を得た。融点１５２℃。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．４０−７．１０（ｍ、５Ｈ）、５．８８及び５．３９（ｂｒ  ｓ、ＮＨ２）、３．５０（ｓ、２Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１７３．８、１３４．９、１２９．５、１２９．１、１２７．５、４３．４。
【０１６３】
フェニルアセトアミド１２（２ｇ、１５ｍｍｏｌ）の炭酸カリウム溶液（４％、２ｍｌ、０．６ｍｍｏｌ）と、ホルムアルデヒド水溶液（３７％、２ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）との混合物を１５分間（完全に溶解するまで）還流した。混合物を冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍｌ）で抽出した。有機相を一緒にしてＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮して、粗精製物（１．３５ｇ）を得、これをトルエン（２０ｍｌ）中で再結晶して白い粉末状のＮ−ヒドロキシメチルフェニルアセトアミド１１（１．１ｇ、４４％）を得た。融点７８℃。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．５０−７．２０（ｍ、５Ｈ）、６．４８（ｂｒ  ｓ、ＮＨ）、４．６９（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．６７（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、ＯＨ）、３．６０（ｓ、２Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１７２．９、１３４．４、１２９．５、１２９．０、１２７．５、６４．２、４３．６。
【０１６４】
ホモバニリン酸１０（２ｇ、１１ｍｍｏｌ）と硫酸（５００ｍｌ、９．４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１００ｍｌ）を３時間還流した。冷却後、重炭酸ナトリウム溶液を該反応混合物に加えた。生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を一緒にしてＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮して、無色油状のメチル４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル酢酸９（２ｇ、９４％）を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．００−６．７０（ｍ、３Ｈ）、５．８２（ｂｒ  ｓ、ＯＨ）、３．８７（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．５６（ｓ、２Ｈ。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１７２．６、１４６．６、１４４．８、１２５．７、１２２．１、１１４．５、１１１．８、５５．９、５２．１、４０．８。
【０１６５】
炭酸セシウム（６．６ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）と硫酸ジメチル（２ｍｌ、２１ｍｍｏｌ）をメチル−４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル酢酸９（２ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（８０ｍｌ）に加えた。反応混合物を９０℃で３時間加熱した。冷却後、混合物に水（２０ｍｌ）を加え、生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×５０ｍｌ）。
【０１６６】
有機相を一緒にしてＮａＣｌ水溶液（２０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。溶離液混合物としてシクロヘキサン／酢酸エチル（１／１）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより無色油状のメチル２−（３，４−ジメトキシフェニル）酢酸８（１．７ｇ、８０％）を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ６．８０−６．５０（ｍ、３Ｈ）、３．７１（ｓ、３Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．４０（ｓ、２Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１７２．２、１４８．８、１４８．０、１２６．４、１２１．３、１１２．３、１１１．１、５５．８、５５．７、５１．９、４０．６。
【０１６７】
前もって冷却した酢酸（２０ｍｌ）及び硫酸（７３０μｌ、１４ｍｍｏｌ）溶液をＮ−ヒドロキシメチルフェニルアセトアミド１１とメチル  ２−（３，４−ジメチルフェニル）酢酸８（１．５ｇ、７．２ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。生成した懸濁液を０℃で２時間、室温で１２時間撹拌した。０℃において反応混合物を５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で中和した。生成物を酢酸エチルで抽出した（２×３０ｍｌ）。有機相を一緒にしてＭｇＳＯ４上で乾燥し、濃縮して結晶化した無色油状のメチル４，５−ジメトキシ−２−［（フェニルアセトアミノ）メチル］フェニル酢酸６（２ｇ、７８％）を得た。融点１１８℃。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．４０−７．１５（ｍ、５Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、６．５９（ｓ、１Ｈ）、６．２４（ｂｒ  ｓ、ＮＨ）、４．２８（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）、３．７１（ｓ、３Ｈ）、３．５７（ｓ、３Ｈ）、３．５１（ｓ、２Ｈ）、３．４７（ｓ、２Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１７２．８、１７０．８、１４８．４（２Ｃ）、１３５．０、１２９．７（２Ｃ）、１２９．２、１２７．５（２Ｃ）、１２４．９、１１３．８、１１３．２、５６．３（２Ｃ）、５２．７、４４．２、４１．７、３８．３。ＩＲ（ＣＨＣｌ３）３０１７、１７３２、１６６０、１５２０、１４６６、１２７５。Ｃ２０Ｈ２３ＮＯ５の計算された分析：Ｃ＝６７．２１、Ｈ＝６．４９、Ｎ＝３．９２。測定された分析：Ｃ＝６６．８８、Ｈ＝６．５６、Ｎ＝３．９７。
【０１６８】
水酸化リチウムの水溶液（０．５Ｍ、５６ｍｌ、２８ｍｍｏｌ）をメチル４，５−ジメトキシ−２−［（フェニルアセトアミノ）メチル］フェニル酢酸６（２ｇ、５．６ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（５０ｍｌ）に加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、続いてＨＣｌ水溶液（２Ｎ）で中和したところ、生成物の沈殿が観察された。濾過することにより、白い粉末状の４，５−ジメトキシ−２−［（フェニルアセトアミノ）メチル］−フェニル酢酸７（１．５ｇ、７８％）を得た。融点１８６℃。１ＨＮＭＲ（（ＣＤ３）２ＳＯ、３００ＭＨｚ）δ８．４０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、  ７．３０−７．２０（ｍ、６Ｈ）、６．８０（ｓ、１Ｈ）、６．７３（ｓ、１Ｈ）、４．１８（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、３．５５（ｓ、２Ｈ）、３．４４（ｓ、２Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（（ＣＤ３）２ＳＯ、７５ＭＨｚ）δ１７２．８、１７０．０、１４７．４、１４７．３、１３６．６、１２９．９、１２９．０（２Ｃ）、１２８．３（２Ｃ）、１２６．４、１２５．２、１１４．６、１１１．９、５５．６、５５．４、４２．５、３９．６、３７．５。Ｃ１９Ｈ２１ＮＯ５の計算された分析：Ｃ＝６６．４６、Ｈ＝６．１６、Ｎ＝４．０８。測定された分析：Ｃ＝６６．５２、Ｈ＝５．９２、Ｎ＝４．０６。
【０１６９】
（実施例２：ジオキセタン前駆体）
２−［１−（３−ヒドロキシフェニル）−１−メトキシメチレン］トリシクロ［３．３．１．１３，７］−デカン（３ａ）の合成
【化１３】
2008545682.tif 000014
ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（２．７ｇ、１８ｍｍｏｌ）を、メチル３−ヒドロキシベンゾエート４ａ（２．３ｇ、１５ｍｍｏｌ）とイミダゾール（２．６ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）との無水ＤＭＦ溶液（５ｍｌ）に加えた。反応混合物をアルゴン雰囲気下、室温で１４時間撹拌した。混合物を水（２０ｍｌ）で希釈し、生成物をｎ−ペンタン（２×２０ｍｌ）で抽出した。有機相を一緒にしてＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。溶離液混合物としてシクロヘキサン／酢酸エチル（ｖ／ｖ：９５／５）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、メチル  ３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリロキシ）安息香酸エステル４ｂ（３．７ｇ、９３％）を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．４２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｔ、Ｊ＝２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０７（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６８（ｓ、３Ｈ）、０．７８（ｓ、９Ｈ）、０．１（ｓ、６Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１６６．９、１５５．８、１３１．６、１２９．４、１２４．９、１２２．７、１２１．１、５５．２、２５．７、１８．２、−４．４。
【０１７０】
ＬｉＡｌＨ４（８００ｍｇ）を０℃でＴｉＣｌ３（ＴＨＦ）３（１６．５ｇ、４４．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（１５ｍｌ）にゆっくり加えた。０℃で１０分後、トリエチルアミン（３．５ｍｌ）を加え、混合物を１時間還流した。予備調製した２−アダマンタノン５（８２２ｍｇ、５．４７ｍｍｏｌ）とメチルベンゾエートエステル４ｂ（１．２ｇ、４４４．５０ｍｍｏｌ）との無水ＴＨＦ溶液（１０ｍｌ）を前記混合物に滴下した。反応混合物を３時間還流した。０℃で注意深く水を混合物に加え、次にジエチルエーテルで希釈した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、その後ＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。溶離液混合物としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（ｖ／ｖ：９９／１）を用いたシリカゲルカラムにより、無色油状の２−［１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリロキシ）フェニル］−１−メトキシ−メチレン］トリシクロ［３．３．１．１］デカン３ｂ（７９６ｍｇ、６６％）を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．０９（ｔ、１Ｈ）、６．８１（ｄ、１Ｈ）、６．７０（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｓ、３Ｈ）、３．１４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、２．５４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１．８７−１．６７（ｍ、１２Ｈ）、０．９１（ｓ、９Ｈ）、０．１４（ｓ、６Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１５５．５、１４３．６、１３６．９、１３１．２、１２９．０、１２２．６、１２１．２、１１９．５、５７．６、３９．３、３９．２、３８．９、３７．４、３２．９、３０．５、２５．８、１８．３、−４．７０。
【０１７１】
ｎ−Ｂｕ４ＮＦのＴＨＦ溶液（２．１ｍｌ、２．１ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を、２−［１−（３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリロキシ）フェニル］−１−メトキシメチレン］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン３ｂ（７４０ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（１２ｍｌ）に加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。混合物をジエチルエーテル（３０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮したところ、粗生成物として黄色油状の２−［１−（３−ヒドロキシ）フェニル］−１−メトキシメチレン］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン３ａを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．１９−６．６７（ｍ、４Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、３．３０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、３．１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、２．５０（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、１．８７−１．６７（ｍ、１０Ｈ）。
【０１７２】
（実施例３：ジオキセタン）
本発明による化学発光誘導体（１）の合成
【化１４】
2008545682.tif 000015
２−［１−（３−ヒドロキシ）フェニル］−１−メトキシメチレン］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン３ａ（５２０ｍｇ）と、トリエチルアミン（８００μｌ）と、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）（９５０ｍｇ）とを４，５−ジメトキシ−２−［（フェニルアセトアミノ）メチル］フェニル酢酸７（６５６ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（１０ｍｌ）に加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。溶離液としてシクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ（ｖ／ｖ：４０／６０）を使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより、白い粉末状の［４，５−ジメトキシ−２−（フェニルアセチルアミノメチル）フェニル］−酢酸２（６０６ｍｇ、５３％）の３−（アダマンタン−２−イリデン−メトキシメチル）フェニルエノールエステルのエーテルを得た。融点９５℃。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ７．２１−７．１５（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、  ７．１５−７．００（ｍ、６Ｈ）、６．９１（ｔ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８４（ｄｄｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２．３Ｈｚ、０．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｓ、１Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）、４．４４（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）、３．８５（ｓ、２Ｈ）、３．８１（ｓ、３Ｈ）、３．５３（ｓ、２Ｈ）、３．３０（ｓ、３Ｈ）、３．２５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、２．６６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１．９０−１．５５（ｍ、１２Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、７５ＭＨｚ）δ１５０．６、１４８．６、１４８．５、１４２．６、１３７．３、１３４．９、１３２．９、１２９．４、１２９．１、１２８．９、１２７．３、１２７．１、１２４．１、１２２．１、１２０．４、１１３．５、１１２．９、５８．０、５６．１、５６．０、４３．９、４１．４、３９．３、３９．１、３８．３、３７．２、３２．２、３０．３、２８．３．Ｍ．Ｓ．（マルディ−トフ（Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ）、ポジティブモード）ｍ／ｚ６３４．２７［Ｍ＋Ｋ］＋、６１８．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋。Ｃ３７Ｈ４１ＮＯ６の計算された解析：Ｃ＝７４．６０、Ｈ＝６．９４、Ｎ＝２．３５。測定された解析：Ｃ＝７４．２５、Ｈ＝７．０９、Ｎ＝２．４１。
【０１７３】
わずかに青色が現れるまで、新たに蒸留したトリフェニルホスファイト（３７μｌ、０．１４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２の冷却溶液（−７８℃）にオゾンをパージした。次に、反応媒体を青色が消えるまでアルゴンでパージした。−７８℃で無水ＣＨ２Ｃｌ２１ｍｌに溶解した、前もって合成したエノール２のエーテル（２１ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を−３０℃で１．５時間撹拌し、室温まで加熱するため２時間放置した。制御ＨＰＬＣ（システムＡ）後、反応混合物を蒸発乾固した。得られた油状の残渣をセミプレパラティブＨＰＬＣ（システムＢ）で精製した。生成物を含む画分（保持時間ＴＲ＝４８−５０分）を一部蒸発させ、その後凍結乾燥して、白い粉末状のジオキセタン１（約１ｍｇ、収率５％）を得た。ＨＰＬＣ（システムＣ）、ＴＲ２３．８分。（ＨＰＬＣ分析中に記録された）ＵＶのλｍａｘは２３５ｎｍ及び２８１ｎｍ。ＭＳ（ＥＳＩ、ポジティブモード）ｍ／ｚ  ６５０．０（Ｍ＋Ｎａ）＋（計算されたＣ３７Ｈ４１ＮＯ８の分子量：６２７．７４）。
【手続補正書】
【提出日】平成20年2月27日(2008.2.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
Ｓ−Ｂ−Ａ
［式中、
Ｓは、物理的、化学的、生物学的な現象によって活性化されうる不安定な構造を表わし；
Ｂは、不安定な構造Sの活性化が分子Ａ−を放出するための適当な形態で分子内転位を誘導する化学的構造を備える反応性分岐鎖であり；
Ａは、一般式（ＩＩａ）：
【化１】
2008545682.tif 000021
表わされる発色団で、この場合
◇はＢとの共有結合を表わし、
ａ）Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシルラジカル、アミノラジカル、チオラジカル、ハロゲン原子、若しくはアルキルラジカル、アルコキシラジカル、ヘテロアルキルラジカル、シクロアルキルラジカル、ヘテロシクロアルキルラジカル、エーテルラジカル、アルケニルラジカル、アルキニルラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルチオラジカル、ハロアルキルラジカルから選択したＣ１−Ｃ２０炭化水素系鎖、又はアリールラジカル、ヘテロアリールラジカル、アラルキルラジカルから選択し、必要に応じて置換されたＣ６−Ｃ３０芳香族環であり；
ｂ）Ｒ２及びＲ３を一緒にしてオキソユニットを形成でき；
ｃ）Ｒ１及びＲ２を結合してジオキセタン環と融合したＣ４−Ｃ８の環を形成することができ、必要に応じてＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子で遮断し、また場合によってａ）でＲ１、Ｒ２及びＲ３として既に定義したような一以上のラジカルで置換し；
ｄ）Ｒ２とＲ３又はＲ１とＡｒとを結合してこれらを支えるジオキセタン実体の炭素を有するＣ４−Ｃ２０スピロ環を形成でき、かかる環が場合によっては単環式又は多環式、飽和又は不飽和、芳香族、融合又は非融合であり、必要に応じてＯ、Ｎ及びＳから選択した一以上のヘテロ原子を添合し、ａ）でＲ１、Ｒ２及びＲ３として既に定義したような一以上の置換基で随意に置換され；
前記Ａｒは、Ｃ６−Ｃ３０アリーレンラジカルであり、必要に応じてヒドロキシルラジカル、ハロゲン原子、オキソユニット、アミノラジカル、アルキルアミノラジカル、ジアルキルアミノラジカル、チオラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、アルキルチオラジカル、カルボキシラジカル、ホルミルラジカル、アルキルエステルラジカル、アルキルケトンラジカル、ハロアルキルラジカル、アリールラジカル、アリールエステルラジカル、アリールケトンラジカル、アリールアミノラジカル、ジアリールアミノラジカルから選択した一以上の置換基で任意に置換され；
ＸはＯ、ＮＨ又はＳを表わす］で表わされる化合物並びにその誘導体。
【請求項２】
前記Ｂが一般式（ＩＩＩ）：
【化２】
2008545682.tif 000022
で表わされ、ここで
□及び◇がそれぞれ不安定な構造Ｓ及び発色団Ａとの共有結合を表わし；
ｊが０から２であり；
Ｒ４がＣ１−Ｃ２０の炭化水素系鎖であり、必要に応じて□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルに対するオルト、メタ、又はパラ位で一以上のヘテロ原子及び／又は−ＣＯ及び／又は−Ｎ（アルキル）−ユニット（類）によって遮断され、特に−（ＣＨ２）ｋ−◇、−（ＣＨ２）ｋ−Ｃ（Ｏ）−◇、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｃ（Ｏ）−◇ラジカル（式中、ｋは１又は２に等しい）から選択され；
Ｒ５及びＲ６は、それぞれ独立して、水素原子か、或いはアルキルラジカル、アルコキシラジカル、アルキルアミノ又はジアルキルアミノラジカル、アルキルチオラジカルから選択した飽和又は不飽和、直鎖、分岐鎖又は環式のＣ１−Ｃ２０の炭化水素系鎖、又はアリールラジカル、アリールオキシラジカル、アリールアミノラジカル及びアリールチオラジカルから選択したＣ６−Ｃ３０の芳香族環であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項３】
前記Ａｒが一般式（ＩＶａ）：
【化３】
2008545682.tif 000023
で表わされるアリーレンラジカルであり、ここで
△がＸとの共有結合を表わし、＊がジオキセタン環との共有結合を表わし；
Ｒ１０が水素原子、電気活性ラジカル又は蛍光ラジカルを表わし；
Ｒ１１が水素原子又はフェニレンラジカルと融合したＣ６−Ｃ１０のアリールラジカルであることを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ１及び／又はＲ１０が蛍光ラジカルである場合、これらはフェニル基及びその誘導体、ナフタレン及びその誘導体、アントラセン及びその誘導体、ピレン及びその誘導体、ビフェニル及びその誘導体、アクリジン及びその誘導体、クマリン及びその誘導体、キサンテン及びその誘導体、フタロシアニン及びその誘導体、スチルベン及びその誘導体、フラン及びその誘導体、オキサゾール及びその誘導体、オキサジアゾール及びその誘導体、ニトロベンゾキサジアゾール及びその誘導体、ベンゾチアゾール及びその誘導体、フルオロセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ＢＯＤＩＰＹ及びその誘導体、エオシン及びその誘導体、エリスロマイシン及びその誘導体、レゾルフィン及びその誘導体、キノリン及びその誘導体、カルバゾール及びその誘導体、蛍光シアニン及びその誘導体、カルボシアニン及びその誘導体、ピリジニウム塩及びその誘導体、ランタニド及びその誘導体の蛍光錯体、蛍光タンパク質及び量子ドットから選択されることを特徴とする請求項１から３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｒ４が□−（ＣＨ２）ｊ−ラジカルのオルト位に位置する−（ＣＨ２）ｋ−◇ラジカルで表わされ、ｊ＝ｋ＝ｌでありＲ５＝Ｒ６＝−Ｏ−ＣＨ３であることを特徴とする請求項２から４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６】
前記Ｒ１０が、ハロゲン原子、シアノラジカル、ニトロラジカル、一置換又は二置換アミドラジカル、アルキルラジカル、アルコキシラジカル、トリアルキルアンモニウムラジカル、アルキルアミドラジカル、アルキルカルバモイルラジカル、エステルラジカル、アルキルスルホナミドラジカル、トリフルオロメチルラジカル、アルキルシリル、ジアルキルシリル若しくはトリアルキルシリルラジカル、アルキルシロキシ、ジアルキルシロキシ若しくはトリアルキルシロキシラジカル、アルキルアミドスルホニルラジカル、アルキルスルホニルラジカル、アルキルチオエーテルラジカル、ハロアルキルラジカルから選択した電気活性ラジカル、アリールオキシラジカル、アリールアミドラジカル、アリールカルバモイルアリールスルホナミドラジカル、アリールラジカル、ヘテロアリールラジカル、トリアリール若しくはアルキルアリールシリルラジカル、トリアリールシロキシラジカル、アリールアミドスルホニルラジカル、アリールスルホニルラジカル及びアリールチオエーテルラジカルから選択したＣ６−Ｃ１０ラジカルであることを特徴とする請求項３から５の何れか一項に記載の化合物。
【請求項７】
一般式（Ｖａ）：
【化４】
2008545682.tif 000024
［式中、Ｓ、Ｘ、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６が前記請求項の何れか一項に規定されている］に相当することを特徴とする請求項１から６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項８】
一般式（Ｖｂ）：
【化５】
2008545682.tif 000025
で表わされ、式中のＳ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０、及びＲ１１が前記請求項の何れか一項に規定されていることを特徴とする請求項１から７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｓが生物学的実体によって活性化されうる構造である場合、該Ｓが一般式（ＶＩ）：
Ｐ−Ｌ−□
を有し、ここで
□がＢとの共有結合を表わし；
前記Ｐが前記実体により認識されうる基質を表わし；
前記Ｌが酸素、硫黄、カルボキシル基又は−ＣＯ−Ｑ官能基（式中、ＱはＯ、Ｓ若しくはＮＨである）を表わすことを特徴とする請求項１から８の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
一般式（ＶＩＩ）：
Ｄ−Ｓ−Ｂ−Ａ
の誘導体であり、ここで
Ｄが標的構造を表わし；
Ｓ、Ｂ及びＡが前記請求項で定義されていることを特徴とする請求項１から９の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記標的構造Ｄが、レクチン、抗体又は後者のフラグメント；細胞受容体のリガンド；膜の脂質又はリン脂質と相互作用できるリガンド；細胞表面に存在する糖と相互作用できるリガンドから選択できることを特徴とする請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１から１１の何れか一項に記載の化合物の少なくとも一つを少なくとも有効量含む薬学的組成物。
【請求項１３】
生物学的な実体を検出及び／又は定量する方法であって、
請求項１から１１の何れか一項に記載の少なくとも一つの化合物で、Ｓが検出及び／又は定量すべき前記生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造を表わす化合物の少なくとも有効量を、前記実体を含むと思われる媒体と接触させる工程、及び
発生した蛍光を測定する工程
を少なくとも備えることを特徴とする生物学的な実体の検出及び／又は定量方法。
【請求項１４】
フルオレセイン、ウシアルブミン、ヒトアルブミン、ポリ（ビニルベンジルトリメチル）アンモニウムクロライド（ＴＭＱ）、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）アンモニウムクロライド（ＴＢＱ）、ポリ（ビニルベンジルジメチル）アンモニウムクロライド（ＢＤＭＱ）、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）ホスホニウムクロライド、ポリ（ビニルベンジルトリブチル）スルホニウムクロライド、ポリ（ベンジルジメチルビニルベンジル）アンモニウムクロライド、フルオレセインのナトリウム塩、ポリ（ベンジルトリブチル）アンモニウム、及びフルオレセインのナトリウム塩のような重合性４級オニウム塩から選択される光増幅剤を加える工程を備え、インビトロで実施することを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
請求項１から１１の何れか一項記載の化合物の少なくとも一つを備え、Ｓが検出及び／又は定量すべき生物学的実体によって活性化されうる不安定な構造を表わすことを特徴とする生物学的実体の検出及び／又は定量用キット。
【請求項１６】
生体内での診断方法の実施を対象とした薬学的組成物を製造するための請求項１から１１の何れか一項に記載の化合物の使用。
【国際調査報告】
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2008545682.tif 000028
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