(57)【要約】  本発明の実施態様は、グリシル−プロリル−グルタメート（ＧＰＥ）の新規類縁体及びＧＰＥのそのような類縁体を含む組成物を包含する。これらのうち、いくつかの類縁体は、変性プロリン残基を有する。本発明の他の実施態様は、損傷又は疾患に応答する変性及び／又は死から神経細胞を保護するためのＧＰＥの類縁体の使用を包含する。本発明の化合物及び組成物で治療可能な疾患としては、低酸素症／虚血、毒損傷、及びパーキンソン病を含む慢性神経変性障害が挙げられる。
2008545697.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物。
【化１】
2008545697.tif 000025
（式中、Ｘ1及びＸ2の間の結合は、飽和又は不飽和のいずれかであり；
Ｘ1は、ＣＨ2、Ｓ、Ｃ（ＯＨ）Ｈからなる群より選ばれ、Ｘ1及びＸ2の間の結合が不飽和である場合、ＣＨであり；
Ｘ2は、ＣＨ2、ＣＨ2ＣＨ2からなる群より選ばれ、Ｘ1及びＸ2の間の結合が不飽和である場合、ＣＨであり；
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ2は、ＣＨ3又はＣＯＯＨであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルからなる群より選ばれるか、又はＮＲ3Ｒ3はひとまとめにして、ピロリジノ又はピペリジノであり；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ5は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ； 及び
ｎは、０〜２の整数である。）
【請求項２】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ2−ＣＨ3であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−２−エチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ−２ＥｔｈｙｌＰＥ”））。
【請求項３】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−２−プロピルプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ−２ＰｒｏｐｙｌＰＥ”））。
【請求項４】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ2−ＣＨ＝ＣＨ2であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−２−アリルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート（“Ｇ−２ＡｌｌｙｌＰＥ”））。
【請求項５】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ベンジルであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−２−ベンジルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート（“Ｇ−２ｂｅｎｚｙｌＰＥ”））。
【請求項６】
Ｘ1が、Ｓであり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−４−チアプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート）。
【請求項７】
Ｘ1が、Ｓであり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、ＣＨ3であり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ−ｔｈｉａｄｉＭｅＰＥ”））。
【請求項８】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、ＣＨ3であり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）。
【請求項９】
Ｘ1が、Ｃ（ＯＨ）Ｈであり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（“ＧＨｙｐＥ”））。
【請求項１０】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが１である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−ホモプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“ＧＨｏｍｏＰＥ”））。
【請求項１１】
Ｘ1及びＸ2の間の結合が不飽和であり；Ｘ1が、ＣＨであり；Ｘ2が、ＣＨであり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−３，４−デヒドロプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート、即ち、“Ｇ−３，４−ｄｅｈｙｄｒｏＰＥ・ＴＦＡ”）。
【請求項１２】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、ＣＨ3であり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（アミノイソブトリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（“ＡｉｂＰＥ”））。
【請求項１３】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＨ3であり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン（“ＧＰＮｏｒｖａｌｉｎｅ”））。
【請求項１４】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ（Ｄ，Ｌ）ＰｉｐＥ”））。
【請求項１５】
Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ3であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；ＮＲ3Ｒ3がひとまとめにして、ピロリジノであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１に記載の化合物（ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸（“ＰｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏＧ−２ＭｅＰＥ”））。
【請求項１６】
以下の式の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物。
【化２】
2008545697.tif 000026
（式中、Ｒは、Ｈ又はＯＨである。）
【請求項１７】
ＲがＨである請求項１６に記載の化合物（（２Ｓ，５’Ｒ）−［１’−（２”−アミノ−アセチル）−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］ノン−７’−イル］−１，５−ペンタン二酸（“ＧＰ−５，５−ｓｐｉｒｏｌａｃｔａｍＥ”））。
【請求項１８】
ＲがＯＨである請求項１６に記載の化合物（（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｒ）−及び（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｓ）−［１’−（２”−アミノ−アセチル）−８’−ヒドロキシ−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］ノン−７’−イル］−１，５−ペンタン二酸（“ＧＰ−５，５−ｈｙｄｒｏｘｙｓｐｉｒｏｌａｃｔａｍＥ”））。
【請求項１９】
以下の式の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物。
【化３】
2008545697.tif 000027
（式中、Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ2は、ＣＨ3又はＣＯＯＨであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルからなる群より選ばれるか、又はＮＲ3Ｒ3はひとまとめにして、ピロリジノ又はピペリジノであり；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
ｎは、０〜２の整数である。）
【請求項２０】
Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；及びｎが０である請求項１９に記載の化合物（グリシル−Ｌ−２−ピログルタミル−Ｌ−グルタミン酸塩酸塩（“ＧｐｙｒｏＥ．ＨＣｌ”））。
【請求項２１】
以下の式の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物。
【化４】
2008545697.tif 000028
（式中、Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれる。）
【請求項２２】
Ｒ1がＣＨ3である請求項２１に記載の化合物（グリシル−Ｌ−２−メチルプロリン（“Ｇ−２ＭｅＰ”））。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物及び医薬的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物、医薬的に許容可能な賦形剤、及びバインダーを含む医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物、医薬的に許容可能な賦形剤、及びカプセルを含む医薬組成物。
【請求項２６】
損傷又は疾患の結果としての死又は変性から神経系細胞を保護するように動物を治療する方法であって、有効量の、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物１又は２以上及び医薬的に許容可能な賦形剤を患者に投与することを含む方法。
【請求項２７】
動物がヒトである請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
損傷又は疾患が、アポトーシス神経細胞死により特徴付けられる請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
損傷又は疾患が、壊死性神経細胞死により特徴付けられる請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
損傷又は疾患が、神経細胞変性により特徴付けられる請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
疾患が、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、脊髄性筋萎縮症、クロイツフェルト・ヤコブ病、エイズによる認知症、進行性核上麻痺、ミエリノパシアセントラリスディフュッサ（バニッシング白質疾患）、慢性神経変性疾患、ダウン症、白質脳症及びシルダー病からなる群より選ばれる請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
損傷又は疾患が、神経芽細胞腫、頭部外傷、外傷性脳損傷、脳卒中、虚血性傷害、低酸素障害、再かん流傷害、てんかん、心臓病動脈バイパスグラフト手術、毒損傷、放射線損傷及び呼吸停止からなる群より選ばれる１又は２以上の状態の結果である請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
損傷又は疾患が、炎症状態の結果である請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
損傷又は疾患が、慢性又は急性脳脊髄炎、脳炎、視神経炎、横断性脊髄炎、髄膜炎、汎脳炎、デビック病、進行性多病巣性白質脳障害、橋中央ミエリン溶解及び視神経脊髄炎からなる群より選ばれる１又は２以上の状態の結果である請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
疾患が、統合失調症又はうつ病の結果である請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
少なくとも１つの他の抗アポトーシス剤、抗壊死剤又は神経保護剤を投与する請求項２６に記載の方法。
【請求項３７】
他のアポトーシス剤又は神経保護剤が、ＧＰＥ、ＧＰＥのジケトピペラジン類縁体、ＧＰＥの大環状類縁体、ＧＰＥの二環式類縁体、神経再生ペプチド、インスリン様成長因子−Ｉ（ＩＧＦ−１）、インスリン様成長因子−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）、形質転換成長因子−β１、アクチビン、成長ホルモン、神経成長因子、成長ホルモン結合タンパク、ＩＧＦ−結合タンパク、ＩＧＦＢＰ−３、塩基性線維芽細胞成長因子、酸性線維芽細胞成長因子、ｈｓｔ／Ｋｆｇｋ遺伝子産物、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−６、ケラチノサイト成長因子、アンドロゲン誘導性増殖因子、ｉｎｔ−２、線維芽細胞増殖因子相同因子−１（ＦＨＦ−１）、ＦＨＦ−２、ＦＨＦ−３及びＦＨＦ−４、カラチノサイト成長因子２、グリア活性化因子、ＦＧＦ−１０及びＦＧＦ−１６、毛様体神経栄養因子、脳由来成長因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、骨形成タンパク２（ＢＭＰ−２）、グリア細胞株由来神経栄養因子、活性依存性神経栄養因子、サイトカイン白血病抑制因子、オンコスタチンＭ、インターロイキン、α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、コンセンサスインターフェロン、ＴＮＦ−α、クロメチアゾール；キヌレン酸、セマックス、タクロリムス、Ｌ−トレオ−１−フェニル−２−デカノイルアミノ−３−モルホリノ−１−プロパノール、アドレノコルチコトロピン−（４−９）類縁体ＯＲＧ２７６６、ジゾルシピン（ＭＫ−８０１）、セレギリン、グルタミン酸拮抗薬、ＡＭＰＡ拮抗薬、及び抗炎症剤からなる群より選ばれる請求項２６に記載の方法。
【請求項３８】
前記グルタミン酸拮抗薬が、ＮＰＳ１５０６、ＧＶ１５０５２６０、ＭＫ−８０１及びＧＶ１５０５２６からなる群より選ばれる請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＡＭＰＡ拮抗薬が、２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイルベンゾ（ｆ）キノキサリン（ＮＢＱＸ）、ＬＹ３０３０７０及びＬＹ３００１６４からなる群より選ばれる請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗炎症剤が、抗−ＭＡｄＣＡＭ−１抗体及びインテグリンα４β１受容体及びインテグリンα４β７受容体に対する抗体からなる群より選ばれる請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
抗−ＭＡｄＣＡＭ−１抗体がＭＥＣＡ−３６７である請求項４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリシル−プロリル−グルタメート（ＧＰＥ）の新規類縁体及びそれらの使用方法に関する。また、本発明は、神経変性及び／又は死により特徴付けられる疾患及び状態の治療における、これらの化合物及びそれらの医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリペプチド  グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタメート（Gly-Pro-Glu又はＧＰＥ）は、天然に発生するペプチドであり、それは、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）からタンパク質分解的に開裂される。ＩＧＦ−１は、脳のダメージを受けた領域において内生的に生成される有力な神経栄養因子である。ＩＧＦ−１のいくらかの神経保護作用が、ＧＰＥにより介在されることが要求されているが、作用の正確なメカニズムは不明なままである。ＧＰＥは、ＧＰＥがＩＧＦ−１受容体に結合しないときＩＧＦ−に対して異なるモードの作用を有する。むしろ、ＧＰＥは、低親和性でＮ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）受容体に結合することが示されており及びまた、他のメカニズムを介して生物学的応答を引き出す。ＧＰＥは、ＮＭＤＡ受容体との相互作用によりドーパミンの放出を促進するが、ＧＰＥ刺激アセチルコリン放出は、知られていない、非−ＮＭＤＡ経路を介する。
ＧＰＥは、低酸素虚血性脳損傷、ＮＭＤＡチャレンジ、化学毒を含む脳損傷又は疾患に次ぐニューロン救出剤として及びパーキンソン病及びアルツハイマー病の動物モデルにおいて作用し得ることが証明されている。ＧＰＥの類縁体は、とりわけ、中枢神経系（ＣＮＳ）損傷及び神経変性障害用新規薬剤の開発において興味深いものである。
発明者らは、構造活性関係を研究するため及び特性、例えば、代謝的安定性及び経口バイオアベイラビリティを改良する試みにおいてグリシン及び／又はグルタメート残基で改質された、いくつかのＧＰＥ類縁体を予め開示している。これらのうちのいくつかは、米国特許第7,041,314号明細書；ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US02/16361（２００２年５月２４日出願）；米国特許出願No: 11/314,424（２００５年１２月２０日出願）；米国特許出願No: 11/315,784（２００５年１２月２１日出願）；米国特許出願No: 11/398,032（２００６年４月４日出願）及び米国仮特許出願No: 60/782,148（２００６年３月１４日出願）において記載される。前記特許及び特許出願の各々は、参考文献として本件明細書に完全に組み込まれるものとする。また、ある類縁体は、Trotter et al. Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 501; Lai et al. Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 533; Brimble et al. Bioorg. Med. Chem. 2005, 13, 519)に記載される。
しかしながら、神経変性及び神経系細胞死を含む疾患を含む神経系の疾患の治療用の、他のＧＰＥ類縁体及び組成物、並びに他のタイプの疾患を治療するための薬剤の継続的な必要性がある。
【０００３】
概要
いくつかの態様においては、本発明は、新規ＧＰＥ類縁体を提供する。
本発明のいくつかの実施態様においては、プロリン残基が変性される。
本発明のいくつかの実施態様では、以下の構造式及び置換基を有する分子を提供する：
【０００４】
【化１】
2008545697.tif 000003
式１
【０００５】
本発明のいくつかの実施態様は、式１の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中：
Ｘ1及びＸ2の間の結合は、飽和又は不飽和であり；
Ｘ1は、ＣＨ2、Ｓ、Ｃ（ＯＨ）Ｈからなる群より選ばれ及びＸ1及びＸ2の間の結合が不飽和である場合、ＣＨであり；
Ｘ2は、ＣＨ2、ＣＨ2ＣＨ2からなる群より選ばれ及びＸ1及びＸ2の間の結合が不飽和である場合、ＣＨであり；
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ2は、ＣＨ3又はＣＯＯＨであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルからなる群より選ばれ又はＮＲ3Ｒ3はひとまとめにして、ピロリジノ又はピペリジノであり；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ5は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
ｎは、０〜２の整数である。
【０００６】
【化２】
2008545697.tif 000004
式２
【０００７】
他の実施態様は、式２の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中、Ｒは、Ｈ又はＯＨである。
【０００８】
【化３】
2008545697.tif 000005
式３
【０００９】
付加的な実施態様は、式３の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中：
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ2は、ＣＨ3又はＣＯＯＨであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルからなる群より選ばれ又はＮＲ3Ｒ3はひとまとめにして、ピロリジノ又はピペリジノであり；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
ｎは、０〜２の整数である。
【００１０】
【化４】
2008545697.tif 000006
式４
【００１１】
更なる実施態様は、式４の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中、Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれる。
本発明の他の態様では、式１〜４において記載された化合物の医薬的に許容可能な塩が提供される。
本発明の化合物は、表される構造式の立体異性体、光学異性体及び配座異性体などを含むことが理解されるべきである。また、本発明の化合物は、異なる立体異性体のラセミ混合物として存在し得ることが理解されるべきである。全てのそのような立体異性体は、本発明の一部として考えられる。
更に別の態様においては、本発明は、医薬的に許容可能な賦形剤及び治療的に有効量の少なくとも１つの本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。これらの化合物は、抗アポトーシス剤及び抗壊死剤としての及び神経退化及び損傷を含む他の条件のための使用が見い出された。
更なる態様においては、本発明は、安定化合物の投与により治療可能な疾患又は損傷を有する動物を治療する方法であって、場合により治療される疾患用の少なくとも１つの他の従来の治療剤と併せて、本発明の少なくとも１つの化合物を該動物に投与することを含む方法を提供する。
更なる態様においては、治療されるべき動物は、ヒトである。
更なる態様においては、本発明は、本発明の式１〜４の化合物を製造する方法を提供する。
更に他の態様においては、本発明は、本発明の式１〜４の化合物を含む医薬製剤を合成、配合及び製造する方法を提供する。
【００１２】
図面の簡単な説明
本発明は、それらの特定の実施態様に関連して記載する。本発明の他の特性、特徴及び実施態様は、図を参照して十分理解され得る。
図１は、皮質細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（１００ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体４９（グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
図２は、１００μＭ  Ｈ2Ｏ2により誘導される皮質細胞培養における興奮毒性酸化的ストレス後のニューロンの生存における類縁体５０（グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
図３は、線条体細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（３０ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６０（グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
図４は、線条体細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（３０ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６４（アミノイソブトリル(aminoisobutryl)−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
図５は、皮質細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（１００ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６５（グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン）の効果を示すグラフである。
図６は、線条体細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（オカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６６（グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
図７は、小脳細胞培養における興奮毒性／酸化的ストレス（０．５ｍＭ  ３−ＮＰグルタメートにより誘導される）後のニューロンの生存における類縁体６７（ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【００１３】
発明の詳細な説明
定義
“アルケニル”は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、不飽和の分枝鎖、直鎖又は環状炭化水素基を意味する。基は、二重結合についてシス又はトランス配座のいずれかにあってもよい。典型的なアルキル基としては、アリル、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、シクロペンテニルなどが挙げられる。いくつかの実施態様においては、アルケニル基は、（Ｃ2-6）アルケニルであり及び他の実施態様においては、アリルが、特に有用であるかもしれない。
“アルキル”は、飽和分枝、直鎖又は環状炭化水素基を意味する。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ｔ−ブチル、シクロプロピルメチル、ヘキシルなどが挙げられる。いくつかの実施態様においては、アルキル基は、（Ｃ1-6）アルキルである。
“アルキニル”は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、不飽和分枝、直鎖又は環状炭化水素基を意味する。典型的なアルキニル基としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、イソブチニルなどが挙げられる。いくつかの実施態様においては、アルキニル基は、（Ｃ2-6）アルキニルである。
“アリール”は、共役π電子系を有する不飽和環状炭化水素基を意味する。典型的なアリール基としては、フェニル、ナフチルなどが挙げられる。いくつかの実施態様においては、アリール基は、（Ｃ5-20）アリールである。
“アリールアルキル”は、その中において、末端炭素に結合する水素原子の１つがアリール基で置換された直鎖アルキル、アルケニル又はアルキニル基を意味する。典型的なアリールアルキル基としては、ベンジル、ナフチルメチル、ベンジリデンなどが挙げられる。
用語“グリシル−プロリル−グルタメート”又は“Gly-Pro-Glu”は、指名されたアミノ酸を含有するトリペプチドを意味する。上記指名された化合物は、また、“グリシル−プロリル−グルタミン酸”とも称される、ペプチドのＣ末端酸形態を含む。
“成長因子”は、細胞が成長又は増殖するように刺激する細胞外ポリペプチド伝達分子(signalling molecule)を意味する。
“ヘテロアルキル”は、その中において、１以上の炭素原子が他の原子、例えば、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓなどで置換されたアルキル基を意味する。典型的なヘテロアルキル基としては、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、テラヒドロフラン(terahydrofuran)、（Ｃ1-10）置換アミン、（Ｃ2-6）チオエーテルなどが挙げられる。
“ヘテロアリール”は、その中において、１以上の炭素原子が他の原子、例えば、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓなどで置換されたアリール基を意味する。典型的なヘテロアリール基としては、カルバゾール、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、イソキノリン、プリン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピロール、チアゾール、チオフェン、トリアゾールなどが挙げられる。
【００１４】
“損傷”としては、神経系における細胞の変性又は死を生じる動物の急性又は慢性ダメージが挙げられる。そのような細胞としては、神経細胞及び非神経細胞が挙げられる。損傷としては、脳卒中、非出血性脳卒中、外傷性脳損傷、胎児仮死、例えば、その後のアブラプション(following abruption)、コードオクルージョン(cord occlusion)と関連する又は子宮内発育遅延と関連する周生期仮死、適切な蘇生又は呼吸の疾患と関連する周生期仮死、ニアミスドローニング(near miss drowning)、ニアミス乳幼児突然死、一酸化炭素吸入、アンモニア又は他のガス中毒、心停止、昏睡状態(coma)、髄膜炎、低血糖及びてんかん重積症に関連する深刻な中枢神経系外傷、冠動脈バイパス形成手術、低血圧症(hypotensive episode)及び低血圧クライシス(hypotensive crisis)と関連する脳の仮死の発現、及び脳の外傷が挙げられる。上記例は、説明のためのものであって、本発明の化合物及び方法により治療され得る損傷を完全に列記することを意図するものではない。
“薬学的に許容可能な賦形剤”は、一般に安全で、非毒性で及び望ましい医薬組成物を製造するのに有用な賦形剤を意味し、及び家畜への使用及びヒトへの医薬的使用を受け入れられる賦形剤を含む。そのような賦形剤は、固形、液体、半固形であってもよく、又はエアロゾル組成物のケースにおいてはガスであってもよい。
“医薬的に許容可能な塩”は、医薬的に許容可能であり及び所望の薬理学的特性を有する塩を意味する。そのような塩としては、化合物に存在する酸性プロトンが無機又は有機塩基と反応可能であるように形成され得る塩が挙げられる。適切な無機塩としては、アルカリ金属、例えばナトリウム及びカリウム、マグネシウム、カルシウム及びアルミニウムと形成されるものが挙げられる。適切な有機塩としては、有機塩基、例えばアミン塩基、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどと形成されるものが挙げられる。そのような塩としては、また、無機酸（例えば、塩酸及び臭化水素酸）及び有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、マレイン酸、及びアルカン−及びアレーン−スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸及びベンゼンスルホン酸）と形成される酸付加塩が挙げられる。２つの酸性基が存在する場合、医薬的に許容可能な塩は、モノ−酸モノ−塩又はジ−塩であってもよく；同様に、３以上の酸性基が存在する場合、そのような気のいくつか又は全ては塩化されていてもよい。
【００１５】
“保護基”は、有機合成においてそれと従来的に関連する意味、即ち、化学反応が他の未保護反応部位において選択的に起こり得るような多官能性化合物における１以上の反応部位を選択的にブロックする基（その木は、選択的反応が完了後容易に取り除かれ得る）を意味する。
“置換”は、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール又はアリールアルキル基における１以上の水素原子が、独立して、他の置換基で置き換えられることを意味する。置換基の例としては、−Ｒ’、−ＯＲ’、−ＳＲ’、−ＮＲ’Ｒ’、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’ Ｒ’、−Ｃ（ＮＲ’）ＮＲ’ Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（ＮＲ’）−ＯＲ’、−Ｎ Ｒ’−Ｃ（ＮＲ’）−ＳＲ’、ＮＲ’−Ｃ（ＮＲ’）−ＮＲ’ Ｒ’、トリハロメチル及びハロゲンが挙げられ、ここで、各Ｒ’は、独立して、−Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルである。
“治療的に効果的な量”は、疾患を治療するための動物に投与した場合に、その疾患のための治療に作用するのに十分な量；即ち、逆の徴候又は結果を低減し、望ましい徴候又は結果を促進し及び／又は基礎疾患を治療し、及び／又は治療に効く量を意味する。
疾患の“治療”としては、疾患にかかりやすいが依然として疾患の徴候を経験しておらず又は示さない動物において生じる疾患を予防すること（予防的治療）、疾患を抑制すること（その発達を遅延又は阻むこと）、疾患の徴候又は副作用からの救済(relief)を提供すること（待機的治療を含む）、及び疾患に良いこと（疾患の退行をもたらすこと）が挙げられる。
潜在的(implicit)水素原子（例えば、ピロール環などにおける水素）は、明瞭さのために式から省略されるが、存在すると理解されるべきである。
本発明の化合物
本発明の１つの態様は、以下の構造式及び置換基を有する分子を含む：
【００１６】
【化５】
2008545697.tif 000007
式１
【００１７】
本発明のいくつかの実施態様は、式１の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、その中において：
Ｘ1は、ＣＨ2、Ｓ、Ｃ（ＯＨ）Ｈからなる群より選ばれ及びＸ1及びＸ2の間の結合が不飽和である場合、ＣＨであり；
Ｘ2は、ＣＨ2、ＣＨ2ＣＨ2からなる群より選ばれ及びＸ1及びＸ2の間の結合が不飽和である場合、ＣＨであり；
Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ2は、ＣＨ3又はＣＯＯＨであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルからなる群より選ばれ又はＮＲ3Ｒ3はひとまとめにして、ピロリジノ又はピペリジノであり；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ5は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；及び
ｎは、０〜２の整数である。
【００１８】
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ2−ＣＨ3であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体２：グリシル−Ｌ−２−エチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ−２ＥｔｈｙｌＰＥ”））。
本発明の更に別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体３：グリシル−Ｌ−２−プロピルプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ−２ＰｒｏｐｙｌＰＥ”））。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ2−ＣＨ＝ＣＨ2であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体４：グリシル−Ｌ−２−アリルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート（“Ｇ−２ＡｌｌｙｌＰＥ”））。
本発明の別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ベンジルであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体５：グリシル−Ｌ−２−ベンジルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート（“Ｇ−２ｂｅｎｚｙｌＰＥ”））。
本発明の更に別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、Ｓであり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体４８：グリシル−Ｌ−４−チアプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート）。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、Ｓであり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、ＣＨ3であり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体４９：グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ−ｔｈｉａｄｉＭｅＰＥ”））。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、ＣＨ3であり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体５０：グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）。
本発明の別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、Ｃ（ＯＨ）Ｈであり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体６０：グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（“ＧＨｙｐＥ”））。
【００１９】
本発明の更に別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが１である（類縁体６２：グリシル−Ｌ−ホモプロリル−Ｌ−グルタミン酸（“ＧＨｏｍｏＰＥ”））。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1及びＸ2の間の結合が不飽和であり；Ｘ1が、ＣＨであり；Ｘ2が、ＣＨであり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体６３：グリシル−Ｌ−３，４−デヒドロプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート（“Ｇ−３，４−ｄｅｈｙｄｒｏＰＥ・ＴＦＡ”））。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、ＣＨ3であり；及びｎが０である（類縁体６４：アミノイソブトリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（“ＡｉｂＰＥ”））。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＨ3であり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体６５：グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン（“ＧＰＮｏｒｖａｌｉｎｅ”））。
本発明の別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2ＣＨ2であり；Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体６６：グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸（“Ｇ（Ｄ，Ｌ）ＰｉｐＥ”））。
本発明の更に別の実施態様においては、化合物は、式１の化合物であり、式中、Ｘ1が、ＣＨ2であり；Ｘ2が、ＣＨ2であり；Ｒ1が、ＣＨ3であり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；ＮＲ3Ｒ3がひとまとめにして、ピロリジノであり；Ｒ4が、Ｈであり；Ｒ5が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体６７：ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸（“ＰｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏＧ−２ＭｅＰＥ”））。
【００２０】
【化６】
2008545697.tif 000008
式２
【００２１】
いくつかの実施態様においては、本発明は、式２の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中、ＲはＨ又はＯＨである。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式２の化合物であり、式中、ＲがＨである（類縁体３５：（２Ｓ，５’Ｒ）−［１’−（２”−アミノ−アセチル）−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］ノン−７’−イル］−１，５−ペンタン二酸(pentanedioic acid)（“ＧＰ−５，５−ｓｐｉｒｏｌａｃｔａｍＥ”））。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式２の化合物であり、式中、ＲがＨである（類縁体３６：（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｒ）−及び（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｓ）−［１’−（２”−アミノ−アセチル）−８’−ヒドロキシ−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］ノン−７’−イル］−１，５−ペンタン二酸（“ＧＰ−５，５−ｈｙｄｒｏｘｙｓｐｉｒｏｌａｃｔａｍＥ”））。
【００２２】
【化７】
2008545697.tif 000009
式３
【００２３】
いくつかの実施態様においては、本発明は、式３の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中、Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
Ｒ2は、ＣＨ3又はＣＯＯＨであり；
Ｒ3は、Ｈ、アルキルからなる群より選ばれ又はＮＲ3Ｒ3はひとまとめにして、ピロリジノ又はピペリジノであり；
Ｒ4は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれ；
ｎは、０〜２の整数である。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式３の化合物であり、式中、Ｒ1が、Ｈであり；Ｒ2が、ＣＯＯＨであり；Ｒ3が、Ｈであり；Ｒ4が、Ｈであり；及びｎが０である（類縁体６１：グリシル−Ｌ−２−ピログルタミル−Ｌ−グルタミン酸塩酸塩（“ＧｐｙｒｏＥ．ＨＣｌ”））。
【００２４】
【化８】
2008545697.tif 000010
式４
【００２５】
いくつかの実施態様においては、本発明は、式４の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含み、式中、Ｒ1は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アリール又は置換アリールアルキルからなる群より選ばれる。
本発明の更なる実施態様においては、化合物は、式４の化合物であり、式中、Ｒ1がＣＨ3である（類縁体６８：グリシル−Ｌ−２−メチルプロリン（“Ｇ−２ＭｅＰ”））。
いくつかの実施態様においては、本発明は、Ｒ1がメチルである式４の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩又は水和物を含む。
本発明の他の態様は、式１〜４に記載される化合物の医薬的に許容可能な塩を提供する。
更に別の態様においては、本発明は、医薬的に許容可能な賦形剤及び治療的に効果的な量の少なくとも１つの本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。これらの組成物は、抗アポトーシス剤及び抗壊死剤としての及び神経退化又は損傷を含むほかの状態のための用途が見い出された。
更なる態様においては、本発明は、式１〜４の適切な化合物を投与することにより治療可能な疾患又は損傷を有する動物を治療する方法であって、該動物に対して、本発明の化合物少なくとも１つを、場合により、少なくとも１つの他の従来の、治療されるべき疾患用治療剤と共に投与することを含む方法が提供される。
更なる態様においては、治療されるべき動物がヒトである。
更なる態様においては、本発明は、本発明の式１〜４の化合物を含む医薬製剤を合成、配合及び製造する方法を提供する。
当該技術分野における当業者は、上記構造式が、キラル中心を含み、その数は、異なる置換基に依存することを理解するであろう。キラリティは、いくつかの中心について単に示される。キラリティは、各中心でＲ又はＳのいずれかであってもよい。式(formulae drawing)は、可能性のある互変異性体、立体配座異性体又は鏡像異性体のほんの１つを表し、本発明は、本件明細書に記載されるような生物学的又は薬理学的活性を示す互変異性体、立体配座異性体又は鏡像異性体を包含すると理解されるべきである。
【００２６】
薬理学及び有用性
本発明のいくつかの態様は、損傷又は疾患に応答する動物における細胞ダメージ、変性及び／又は死の治療又は予防における、本発明の化合物の使用を含む。いくつかの実施態様は、本発明の化合物を含む組成物を、神経退化、及びいくつかのケースにおいては、アポトーシス及び壊死性細胞死を包含する状態に罹患した動物にデリバリーすることを含む。いくつかの実施態様においては、組成物は、脳細胞に影響を与え又は与えがちなＣＮＳの損傷又は疾患を治療するのに望ましい。神経再生を促進し、細胞変性又は死を低減し又は神経防護作用を有する１以上の他の薬剤をも含む組成物が提供される。
そのような他の薬剤は、例えば、成長因子及び関連誘導体、例えば、インスリン様成長因子−Ｉ（ＩＧＦ−１）、インスリン様成長因子−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）、トリペプチドＧＰＥ、形質転換成長因子−β１、アクチビン、成長ホルモン、神経成長因子、成長ホルモン結合タンパク、及び／又はＩＧＦ−結合タンパクからなる群より選ばれ得る。
本発明の他の態様としては、軸索のファシキュレーション(fasiculation)を促進する組成物及び方法が挙げられる。神経束の形成を促進することにより、本発明の化合物は、神経突起（軸索及び／又は樹状突起）が、切断され、例えば、シャープなフォース損傷(sharp force injury)、壊死又は疾患の局部、又は神経突起に対する他の局部的な損傷となる状態を治療するのに有用であり得る。
更に他の実施態様においては、ＣＮＳ損傷及び疾患を含む損傷及び疾患に応答する細胞ダメージ及び死を治療又は予防する組成物及び方法は、本発明の化合物の治療低量を、単独で又は他の薬剤との組み合わせで、発作の後に投与することを含む。これらの実施態様は、予期せぬ損傷、例えば、心不全、外傷、例えば、自動車事故による頭の損傷、頭の傷などの状態において特に望ましいものであり得る。
更なる実施態様においては、本発明の化合物は、単独で、又はプランされた頭の損傷の悪影響を防止するための他の薬剤との組み合わせで使用することができる。そのような状態としては、ＣＡＢＧ又は他のプランされた手術、例えば、脳手術、血管手術又は他の診療（神経系の低減された還流をもたらし得る）が挙げられる。手術前及び／又は手術と同時に及び／又は手術後に動物、例えばヒトを治療することにより、神経学的な悪影響が改善され得る。
上記に示したように、本発明は、広範に、本発明の化合物が細胞、特に神経細胞をダメージ、神経突起の損失、及び／又はアポトーシス又は壊死性細胞死から保護し得るとの発明者の知見に基づくものである。
本件明細書において、本発明の化合物が、神経退化疾患の細胞培養モデルにおいて神経保護を示し及び従って、効果的な添加物又は神経退化のための従来の治療の代替物であり得ることが証明される。
保護作用のメカニズムは知られていないが、１つの可能性のあるメカニズムは、細胞を、アポトーシス及び壊死性細胞死から保護することを含む。しかしながら、作用のメカニズムにかかわらず、本発明の化合物は、低酸素症、虚血及び神経毒誘導神経ダメージを含む種々の神経学的疾患のための効果的な治療として使用することができる。更に、本発明の化合物は、神経突起伸長及び神経のファシキュレーションを促進する特定の神経学的欠点なしに使用することができる。従って、細胞死が必ずしも神経学的疾患（例えば、例えば脊髄損傷によりもたらされる軸索ダメージ）と関連しない状況において、本発明の化合物の投与は、軸索再生を促進する効果的方法であり得る。
【００２７】
治療的適用
本発明の組成物及び方法は、神経損傷又は疾患に罹患した動物、例えば、ヒトの患者の治療における用途が見い出された。より一般的には、本発明の組成物及び方法は、神経ダメージ又は潜在的アポトーシス及び／又は壊死性細胞死（損傷及び疾患による）に罹患した哺乳類、例えば、ヒトの患者の治療における用途が見い出された。
ＧＰＥ及び他のＧＰＥ類縁体Ｇ−２メチルＰＥ、Ｇ−２ＡｌｌｙｌＰＥ、ＧＰＥのジケトピペラジン誘導体、ＧＰＥの大環状類縁体及びＬ−Ａｌａ−ＰＥの研究において、一般的な観察がなされた。インビトロ系を用いて評価されるような神経防護性である化合物、例えば、本件明細書に記載され及び発明者の他の特許及び特許出願に記載されるものについて、神経防護性の存在は、適用される損傷のタイプから独立している。従って、低酸素症／虚血及び毒性損傷の神経変性作用は、先に開示されたＧＰＥ及びＧＰＥ類縁体により緩和又は防止され得る。また、上記に予め開示されたＧＰＥ類縁体のパラレルな神経防護作用は、また、インピボ系においてみられる。従って、インビトロで神経防護性を示す化合物は、また、脳卒中、低酸素症／虚血外傷性脳損傷及びパーキンソン病及びアルツハイマー病の動物モデルと関連する神経変性を抑制し得る。更に、予め開示されたＧＰＥ類縁体を用いるインビボ研究においては、機能的欠点及び組織学的に観察される神経変性は、また、ＧＰＥ及び予め開示されたＧＰＥ類縁体によるパラレルな方式において少なくとも部分的に緩和される。そのような機能的欠点は、歩行、運動神経及び記憶の障害を含む。これらの研究及び相互関係のいくらかは、米国特許第7,041,314号、ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US02/16361（２００２年５月２４日出願）、米国特許出願No: 11/314,424（２００５年１２月２０日出願）、米国特許出願No: 11/315,784（２００５年１２月２１日出願）、米国特許出願No: 11/398,032（２００６年４月４日出願）及び米国仮特許出願No: 60/782,148（２００６年３月１４日出願）において記載されている。前述の特許及び特許出願の各々は、参考文献として十分に本件明細書に組み込まれるものとする。従って、本件明細書に記載されるようなインビトロ研究は、インビボ用途についてのＧＰＥ類縁体の効果を評価するのに有用で効果的なツールであり得、及びそのようなインビトロ系を用いて得られる結果は、神経変性と関連する障害に罹患したヒトにおいて及びインビボで観察される作用の高度な予測性を有する。
神経変性、アポトーシス及び／又は壊死により特徴付けられる特定の状態及び疾患としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定される訳ではない：アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、末梢神経障害、クロイツフェルト・ヤコブ病、エイズによる認知症、進行性核上麻痺、ミエリノパシアセントラリスディフューサ(myelinopathia centralis diffusa)（バニッシング(vanishing) 白質疾患）、慢性神経変性疾患、ハンチントン病、脳卒中、虚血性損傷、低酸素障害、再かん流障害、頭部損傷、浸潤型脳損傷、ＣＮＳ外傷、てんかん、脳虚血、緑内障、網膜疾患、視神経症、視神経炎、ダウン症、脳脊髄炎、髄膜炎、汎脳炎、神経芽細胞腫、統合失調症及びうつ病。上記状態の各々は、ＧＰＥ及びＧＰＥ類縁体がそれらのために治療的価値を有し得るグルタメート毒性と関連する神経毒性により症状を呈する病態生理学の所見及び症状を示す。
また、本発明の化合物は、外傷、毒物暴露、呼吸停止又は低酸素虚血の形態における損傷後の神経束形成の誘導において適用することができる。また、本発明の化合物は、癌、ウイルス感染、自己免疫疾患、神経系の疾患及び損傷及び心臓血管の疾患に応答する神経変性、壊死又はダメージのほかの形態又はアポトーシスの治療又は予防において適用することができる。
【００２８】
治療は、損傷の前に、例えば、待機手術前に行うことができる。関連する選択的手段の例は、神経手術（その中において、脳葉のレトラクション(retraction)が脳水腫を導き得る）、又は心臓手術、例えば、弁置換術（その中において、イネビタブルスモールエンボリ(inevitable small emboli)が、７５％のケースにおいて脳機能の検出可能な機能障害をもたらすとされる）を含む。
また、最初の損傷後、損傷又は疾患に関連する神経変性の“早期”又は迅速な相及び神経変性の“遅い”又は遅延相の総合が存在することが知られている。いくつかのケースにおいては、遅い相の神経変性は、最初の損傷後０〜約１００時間本発明のＧＰＥ又はＧＰＥ類縁体を神経保護量で投与することにより効果的に治療することができる。最初の損傷後数時間後、早期相神経変性後の時間の間でさえ、本発明のＧＰＥ類縁体の投与は、遅い相の神経変性を緩和し得る。従って、早期相神経変性を防止する必要があり得るより後に、最初の損傷後に本発明のＧＰＥ類縁体を投与することにより遅い相の神経変性を防止又は抑制し得る。
【００２９】
測定効果
本発明の化合物の神経保護活性は、Klemptらの方法（Klemptら、1992, Molecular Brain Research: 13 93-101）、形態学の顕微鏡的試験、チオニン／フクシンなどで染色される生存及び死神経の細胞カウントを含む当該技術分野における当業者に知られる方法により細胞カウントを用いてインビボで測定され得る。本発明の化合物の効果は、また、神経突起伸長についてのアッセイ、質量分析、当該技術分野において知られる免疫学的又はクロマトグラフの方法を用いてインビトロで測定され得る。これらの方法は、種々の試験系において良好に特徴付けられ及び正当性が立証され及び従って、ヒト細胞及びヒトを含む動物計において神経保護作用が予測される。
ＣＮＳダメージは、例えば、永続的な神経障害認知機能及び／又は発作性疾患の傾向の程度により臨床的に測定され得る。本件明細書に、インビボでの効果を測定するのに適切な組織学的技術を開示する。インビボ評価に適切ないくつかの方法は、米国特許第7,041,314号、ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US02/16361（２００２年５月２４日出願）、米国特許出願No: 11/314,424（２００５年１２月２０日出願）、米国特許出願No: 11/315,784（２００５年１２月２１日出願）、米国特許出願No: 11/398,032（２００６年４月４日出願）及び米国仮特許出願No: 60/782,148（２００６年３月１４日出願）において記載されている。前述の特許及び特許出願の各々は、参考文献として十分に本件明細書に組み込まれるものとする。
化合物の治療可能比は、（２）望ましい治療効果をひき起こす平均投与量を越える（１）副作用を引き起こす投与量の比であると理解される。従って、比較的低い投与量での治療的効果及び高い投与量での不本意な副作用を有する化合物について、治療可能比は＞１である。治療可能比は、例えば、適切なインビボ動物種、例えば、ラット又はマウスにおいて抗アポトーシス及び抗壊死活性を生じる量で割られる、有意な質量損失（又は他の観察され得る副作用）を生じる量を比較することにより測定され得る。適切なモデルは、低酸素虚血損傷（Sirimanneら, 1994 Journal of Neuroscience Methods: 55: 7-14）及び実験的免疫脳脊髄炎（Mendelら, 1995 Eur. J. Immunol.: 1951-1959）を含む。
【００３０】
医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、薬剤又は医薬製剤の部分として投与することができる。これは、本発明の化合物を、医薬的に適切なキャリヤ、アジュバント又は賦形剤と組み合せることを包含する。キャリヤ、アジュバント又は賦形剤の選択は、当然、通常は、使用される投与ルートに依存するであろう。
一般には、本発明の化合物は、治療的有効量で、当該技術分野において知られる通常のモードにより、単独で又は治療される疾患用のほかの従来の治療剤との組み合わせで投与されるであろう。治療的有効量は、疾患又は損傷、その重症度、年齢及び治療される動物の関連的健康、化合物の効力及び他の要因に依存して幅広く変動し得る。抗アポトーシス及び抗壊死剤として本発明の化合物の治療的有効量は、動物の質量ｋｇあたり０．００１〜１００ミリグラムで変動し得、低投与量、例えば、０．００１〜０．１ｍｇ／ｋｇは、脳脊髄液を通した、例えば、脳室内投与により投与するのに適切であり、及び高い投与量、例えば、１〜１ｍｇ／ｋｇは、経口、全身（例えば、経皮的）、又は非経口（例えば、静脈内）投与に適切である。当該技術分野における当業者は、過度な実験なしに、その技術及び本件明細書の開示内容を参照して、所定の疾患及び損傷のための本発明の化合物の治療的有効量を決定することができるであろう。
本発明の化合物は、当該技術分野において知られる抹消ルートを介して末梢的に投与することができる。これらは、非経口ルート、例えば、末梢循環への注入、皮下、眼窩(intraorbital)、眼科的、髄腔内、嚢内、局所、注入（例えば、遅延放出デバイス又はミニポンプ、例えば、浸透圧ポンプ又は皮膚用パッチ剤を用いて）、インプラント、エアロゾル、吸入、乱切(scarification)、腹腔内、嚢内、筋肉内、鼻腔内、経口、口腔、皮下、肺、直腸又は膣ルートを含み得る。組成物は、ヒト又は他の哺乳類へ治療的有効量（例えば、患者の病理学的状態を取り除く又は軽減する量）で非経口投与して、上記神経学的疾患のための治療を提供するように配合することができる。
望ましくは、可能なら、抗アポトーシス剤及び抗壊死剤として投与する場合、本発明の化合物は、経口的に投与されるであろう。組成物における本発明の化合物の量は、組成物のタイプ、単位投与量のサイズ、賦形剤の種類、及び当該技術分野における当業者によく知られる他の因子に依存して幅広く変動し得る。一般に、最終組成物は、本発明の化合物を０．０００１〜１０質量％（％ｗ）、好ましくは、０．００１〜１％ｗ含んでいてもよく、残りは賦形剤である。
他の従来の投与ルートは、皮下注入（例えば、生理学的に適合性のキャリヤ、例えば、０．９％塩化ナトリウムに溶解）又はＣＮＳへの直接投与を含む。動物のＣＮＳの精密な地図及び定位デバイスを用いて、化合物は、神経ダメージの部位へ直接注入される。そのような投与ルートは、特に、その位置のかん流が低減血管かん流又はその領域への低減脳脊髄液（ＣＳＦ）の流れのいずれかにより歩み寄り(compromise)される状況において望ましいものであり得る。例としては、側脳室注入により又は患者の脳の側脳室への、静脈内的に、外科的挿入シャント(surgically inserted shunt)、所望の位置への直接注入又は他のルートを介する投与が挙げられる。
【００３１】
ＣＮＳ内における化合物の有効量は、プロドラッグ形態の化合物の投与により上昇し得、それは、本発明の化合物及びキャリヤを含み、ここで、キャリヤは、本発明の化合物に、患者内の分裂又は消化を受けやすい結合により結合している。投与後に分裂され又は消化されるであろう適切な結合が使用され得る。
しかしながら、他の形態の投与を排除することを意図するものではない。
本発明の更なる実施態様においては、動物において神経変性を抑制すること及び／又は神経機能を回復することは、治療量の本発明の化合物を以下のものから選ばれるほかの神経保護剤と組み合せて投与することを含み得る：米国特許第7,041,314号、ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US02/16361（２００２年５月２４日出願）、米国特許出願No: 11/314,424（２００５年１２月２０日出願）、米国特許出願No: 11/315,784（２００５年１２月２１日出願）、米国特許出願No: 11/398,032（２００６年４月４日出願）及び米国仮特許出願No: 60/782,148（２００６年３月１４日出願）において記載されているＧＰＥ、ＧＰＥの類縁体、米国特許出願No: 10/976,699（２００４年１０月２９日出願）、ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US02/026782（２００２年８月２２日出願）又はPCT/US2004/036203に開示されている神経再生ペプチド、ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US2004/008108（２００４年３月１６日出願）に記載されているＧＰＥの大環状類縁体、ＰＣＴ国際特許出願No: PCT/US2004/028308（２００４年８月３１日出願）に記載されているＧＰＥの二環式類縁体、成長因子及び関連誘導体（インスリン様成長因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様成長因子−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）、形質転換成長因子−β１、アクチビン、成長ホルモン、神経成長因子、成長ホルモン結合タンパク、ＩＧＦ−結合タンパク（特にはＩＧＦＢＰ−３）、塩基性線維芽細胞成長因子、酸性線維芽細胞成長因子、ｈｓｔ／Ｋｆｇｋ遺伝子生産物、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−６、ケラチノサイト成長因子、アンドロゲン誘導成長因子。ＦＧＦファミリーの付加的なメンバーとしては、例えば、ｉｎｔ−２、線維芽細胞成長因子相同因子（ＦＨＦ−１）、ＦＨＦ−２、ＦＨＦ−３及びＦＨＦ−４、ケラチノサイト成長因子２、グリア活性化因子、ＦＧＦ−１０及びＦＧＦ−１６、毛様体神経栄養因子、脳由来成長因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、骨形態形成タンパク２（ＢＭＰ−２）、グリア細胞株由来神経栄養因子、活性依存性神経栄養因子、サイトカイン白血病抑制因子、オンコスタチンＭ、インターロイキン）、α−、β−、γ−又はコンセンサスインターフェロン、及びＴＮＦ−αが挙げられる。神経保護治療剤の他の形態としては、例えば、クロメチアゾール、キヌレン酸、セマックス(Semax)、タクロリムス、Ｌ−トレオ−１−フェニル−２−デカノイルアミノ−３−モルホリノ−１−プロパノール、アンドレノコルチコトロピン−（４−９）類縁体［ＯＲＧ２７６６］及びジゾルシピン(dizolcipine)（ＭＫ−８０１）、セレギリン；グルタメートアンタゴニスト、例えば、ＮＰＳ１５０６、ＧＶ１５０５２６０、ＭＫ−８０１、ＧＶ１５０５２６；ＡＭＰＡアンタゴニスト、例えば、２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイルベンゾ（ｆ）キノキサリン（ＮＢＱＸ）、ＬＹ３０３０７０及びＬＹ３００１６４；アドレシンＭＡｄＣＡＭ−１及び／又はそのインテグリンα４レセプター（α４β１及びα４β７）に対する抗炎症剤、例えば、抗−ＭＡｄＣＡＭ−１ｍａｂ  ＭＥＣＡ−３６７（ＡＴＣＣ受け入れ番号ｎｏ．ＨＢ−９４７８）が挙げられる。
【００３２】
化合物は、持続放出系により投与することができる。持続放出組成物の適切な例は、造形品の形態における半透過性ポリマーマトリクス、例えば、フィルム、又はマクロカプセルを含む。持続放出マトリクスは、ポリアクチド（米国特許第3,773,919号；EP 58,481）、Ｌ−グルタミン酸及びγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Sidmanら, 1983, Biopolymers: 22: 547-56）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Langerら, 1981, J. Biomed. Mater. Res.: 15: 267）、エチレンビニルアセテート（Langerら, 1981, J. Biomed. Mater. Res.: 15: 267）、又はポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（EP 133,988）を含む。持続放出組成物は、また、リポソーム的にトラップされた(liposomally entrapped)化合物を含む。化合物を含有するリポソームは、それ自体知られる方法により製造される：DE 3,218,121、EP 52,322、EP 36,676、EP 88,046、EP 143,949、EP 142,641、日本特許出願83-118008、米国特許第4,485,045号及び第4,544,545号、及びEP 102,324。通常、リポソームは、小さな（約２００〜８００Å）の単層タイプであり、その中においては、脂質含量は、約３０モル％コレステロールより高く、選択された割合は、最も有効な治療のために調節される。
非経口投与について、ある実施態様においては、化合物は、一般には、各々、所望の程度の純度で、単位投与量注入可能な形態（溶液、サスペンション、又はエマルジョン）において、医薬的に、又は非経口的に許容可能なキャリヤ、即ち、受容者にとって使用される投与量及び濃度で非毒性であり及び配合物の他の成分と適合性であるものと共に配合される。
一般には、配合物は、化合物を均一に及び密接に液体キャリヤ又は微細固形キャリヤ又はその両方と接触させることにより製造される。次いで、必要なら、生成物は、所望の配合物に造形される。好ましくは、キャリヤは、非経口キャリヤであり、より好ましくは、受容者の血液と等張の溶液である。そのようなキャリヤビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンガー溶液、緩衝液、及びデキストロース溶液を含む。非水性ビヒクル、例えば、固定油及びオレイン酸エチルはまた、本件明細書において有用である。
キャリヤは、適切には、少量の添加剤、例えば、等張性及び化学安定性を強化する物質を含む。そのような材料は、使用される投与量及び濃度で受容者に非毒性であり、及び緩衝液、ホスフェート、シトレート、スクシネート、酢酸、及び他の有機酸又はそれらの塩；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、例えば、ポリアルギニン又はトリペプチド；タンパク、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；グリシン；アミノ酸、例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、ヒスチジン、又はアルギニン；単糖類、二糖類、セルロース又はその誘導体を含む他の炭水化物、グルコース、マンノース、トレハロース、又はデキストリン；キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトール又はソルビトール；対イオン、例えば、ナトリウム；非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート、ポロキサマー、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；及び／又は中性塩、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ2、ＣａＣｌ2などを含む。
化合物は、典型的には、そのようなビヒクルにおいて、約４．５〜８のｐＨで配合される。前述の賦形剤、キャリヤ又は安定化剤のいくらかの使用により、化合物の塩形態が生じるであろうことが理解されるであろう。最終製剤は、安定液体又は凍結乾燥固体であってもよい。
【００３３】
医薬組成物における化合物の配合物は、また、アジュバントを含んでいてもよい。タブレット、カプセルなどに導入され得る典型的なアジュバントは、バインダー、例えば、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチン；賦形剤、例えば、微結晶セルロース；崩壊剤、例えば、コーンスターチ又はアルギン酸；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；甘味剤、例えば、スクロース又はラクトース；香味料、例えば、ペパーミント、ウィンター・グリーン、又はサクランボである。投与形態がカプセルである場合、上記材料に加えて、それは、また、液体キャリヤ、例えば、脂肪油を含んでいてもよい。他の種々のタイプの材料は、投与単位の物理的形態のコーティングとして又は改良剤として使用することができる。シロップ又はエリキシル剤は、活性化合物、甘味料、例えば、スクロース、防腐剤、例えば、プロピルパラベン、着色料、及び香味料、例えば、サクランボを含んでいてもよい。注入のための無菌組成物は、従来の医薬プラクティスに従って配合することができる。例えば、ビヒクル、例えば、水又は天然発生植物油、例えば、セサミン油、ピーナッツ油又は綿実油又は合成脂肪ビヒクル、例えば、オレイン酸エチルなどにおける活性化合物の溶解物又はサスペンションが望ましいものであり得る。緩衝液、防腐剤、酸化防止剤などを、許容される医薬プラクティスに従って導入することができる。
注入、脳室内投与、及び他の侵略的ルートの投与について、使用される化合物は、無菌でなければならない。無菌は、当該技術分野において知られる方法、例えば、無菌ろ過膜（例えば、０．２ミクロン膜）を通すろ過により達成することができる。治療組成物は、一般には、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射ニードルにより貫通され得るストッパーを有する静脈注射用の溶液バッグ又はバイアルに置かれる。
医薬配合物は、一般には、一個の又は複数の投与容器、例えば、シールされたアンプル又はバイアルにおいて、水性溶液として又は再構成用の凍結乾燥配合物として保存されるであろう。凍結乾燥配合物の例として、１０ｍＬバイアルが、化合物の無菌ろ過１％（ｗ／ｖ）水溶液５ｍＬで充填され、残りの混合物が凍結乾燥される。注入溶液は、静菌性注射用蒸留水を用いて凍結乾燥化合物を再構成することにより製造される。製剤の他の投与形態及びタイプが使用することができることは容易に理解され、及び全ては、本発明の一部とされる。
【００３４】
本発明の化合物の製造
これらの化合物を製造するために使用される出発材料及び試薬は、商業的に、例えば、Aldrich Chemical Company（Milwaukee, Wis）、Bachem（Torrance, Calif.）、Sigma（St. Louis, Mo.）、Strem（Newburyport, Ma.）から入手可能であるか又は当該技術分野における当業者によく知られる方法、以下の文献に記載された手順により製造されるかのいずれかである：Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, vols 1-17, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991； Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, vols. 1-5 and supplements, Elsevier Science Publishers, 1989； Organic Reactions, vols. 1-40, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991； March J； Advanced Organic Chemistry, 4th ed. John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1992； and Larock： Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, 1989。大抵の場合、アミノ酸及びそれらのエステル又はアミド、及び保護されたアミノ酸が幅広く商業的に入手可能であり；改質アミノ酸及びそれらのアミド又はエステルの製剤は、化学及び生化学文献において広範囲にわたって記載され及び従って、当該技術分野における当業者によく知られる。
本発明の出発材料、中間体及び化合物は、ろ過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含む従来の技術を用いて単離及び精製することができる。それらは、物理定数及びスペクトルデータを含む従来の方法を用いて特徴付けることができる。
【００３５】
実施例
実施例１：ＧＰＥの新規類縁体の合成：
類縁体２（グリシル−Ｌ−２−エチルプロピル−Ｌ−グルタミン酸）、類縁体３（グリシル−Ｌ−２−プロピルプロピル−Ｌ−グルタミン酸）、類縁体４（グリシル−Ｌ−２−アリルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロ酢酸）、類縁体５（グリシル−Ｌ−２−ベンジルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロ酢酸）、類縁体３５（（２Ｓ，５’Ｒ）−[１’−（２”−アミノ−アセチル）−６’−オキソ−１，’７’−ジアザスピロ[４．４]非−７’−イル]−１，５−ペンタン二酸）、類縁体３６（（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｒ）−及び（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｓ）−[１’−（２”−アミノ−アセチル）−８’−ヒドロキシ−６’−オキソ−１，’７’−ジアザスピロ[４．４]非−７’−イル]−１，５−ペンタン二酸）、類縁体４８（グリシル−Ｌ−４−チアプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロ酢酸）、類縁体４９（グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）及び類縁体５０（グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）の合成を本件明細書に記載する。
ＧＰＥにおけるプロリンの残りの重要性を詳しく調べるために、Ｐｒｏ又はＰｒｏ−Ｇｌｕ結合のいずれかで修飾された類縁体を合成した。特には、配座固定された類縁体を、受容体結合配座内に洞察を獲得するために製造した。用いられる一般的合成方法は、次いで、グリシン誘導体及びグルタミン酸ジ−エステル（スキーム１）に結合された個々の修飾プロリンの残りの製造を含んだ。
【００３６】
【化９】
2008545697.tif 000011
スキーム１．ＧＰ*Ｅ類縁体の一般的逆合成
【００３７】
（Ｓ）−２−メチルプロリン（２−ＭｅＰｒｏ）の存在は、回転を安定させることが知られ(Bisang,C et al.J.Am.Chem.Soc.1995,117,7904;Welsh et al.A.FEBS Lett.1992,297,216)及びまた、タンパク質分解への耐性をもたらすＰｒｏ−Ｇｌｕアミド結合を認識するペプチターゼを予防し得る(Thaisrivongs et al.Med.Chem.1987,30,536)。従って、グリシル−Ｌ−２−メチルプロピル−Ｌ−グルタミン酸（Ｇ−２ＭｅＰＥ）１の合成を行った。更に、この位での修飾の影響を研究するために、４つの他の２−アルキルプロリン類縁体２−５をまた、合成した（スキーム２）。
２−アルキルプロリン誘導体を、自己再生キラリティーのセーバッハ方法のワング及びジャーマナス(Germanas)修飾を用いて合成した(Seebach et al.J.Am.Chem.Soc.1983,105,5390;Beck et al J.Org Synth.1992,72,62)。クロラール（トリクロロアセトアルデヒド）でのＬ−プロリン６の凝縮は、５つの２―アルキルプロリン修飾トリペプチド１−５の合成のために用いられたオキサゾリジノン７を与えた(Amedjkouth et al.Tetrahedron:Asymmetry 2002,13,2229)。エノラート形成をもたらすためのＬＤＡでの７の処理、次いで、ヨードメタン、ヨードエタン、臭化アリル又は臭化ベンジルそれぞれでのアルキル化は、アルキル化オキサゾリジノン８−１１を提供した。メタノール中の塩化チオニル（８、９のための）又は塩化アセチル（１０、１１のための）でのエステル化は、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシン１６（１２−１４のための）又はＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシン１７（１４及び１５のための）と結合されたメチルエステル塩酸塩１２−１５を与えて、ジペプチド１８−２２を与えた。
【００３８】
アミド結合形成のための最適な条件を、１２及び１６の間の結合を用いて詳しく調べた；ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ）が、優れていることを見出し（ＤＣＣでの６６％と比較して９２％収量）及びすべての続く結合反応のために使用した。カルボン酸２３、２４、２５に対するメチルエステル１８、１９、２０（ジオキサン中のＮａＯＨ）の加水分解、次いで、ジベンジルグルタメート２８と結合すること（ＢｏＰＣｌ）は、ベンジル保護トリペプチド３０、３１、３２を提供した。最終的には、ベンジル基の広範囲の脱保護は、トリペプチド１及び２を与えた一方、２５におけるアリル基の同時水素化分解は、トリペプチド３を与えた。
２−アリルプロリン及び２−ベンジルプロリン単位それぞれを組み込むトリペプチド４及び５の合成のために、Ｂｏｃ及びｔ−ブチル保護基を使用した。これらのケースにおいて、酸２６及び２７をジ−ｔ−ブチルグルタメート２９と結合させることは、ＴＦＡでの脱保護後、トリペプチド４及び５をトリフルオロ酢酸塩として提供するトリペプチド３３及び３４を与えた。
【００３９】
【化１０】
2008545697.tif 000012
スキーム２．試薬、状況及び収率：(i) クロラール, CHCl3, 還流, 6h (77%); (ii) LDA, THF, -78℃, MeI, EtI, CH3CH2=CH2Br又はPhCH2Br, -78 -> -30℃, 4h, 8, 63%, 9, 46%, 10, 60%, 11, 2.5h, 32%; (iii) SOCl2, CH3OH, 還流, 3h, 12, 100%, 13, 71%, AcCl, CH3OH, 還流, 24h, 14, 63%, 15, 48%; (iv) 18, 19, 20について: Et3N, BoPCl, 16, CH2Cl2, rt, 18, 20.5h, 92%, 19, 19.5h, 46%, 20, 20h, 30%; 21, 22について: Et3N, BoPCl, 17, CH2Cl2, rt, 19.5h, 21, 45%, 22, 18.5h, 22%; (v) ジオキサン, 1 M aq. NaOH, rt, 15-20h, 23, 90%, 24, 95%, 25, 92%, 26, 83%, 27, 95%; (vi) 30, 31, 32について: Et3N, BoPCl, 28, CH2Cl2, rt, 17h, 30, 89%, 31, 17.5h, 70%, 32, 19.5h, 76%; 33, 34について: Et3N, BoPCl, 29, CH2Cl2, rt, 17.5h, 33, 77%, 34, 17h, 68%;  (vii) H2, 10% Pd/C, CH3OH/H2O (90:10), rt, 23h, 1, 86%, 2, 20h, 99%, 3, 19h, 100%; (viii) CF3CO2H, CH2Cl2, rt, 6.5h, 4, 96%, 5, 3.5h, 100%。
【００４０】
トランス配座を排他的に選択するほとんどのペプチド結合と対照的に、Ｘａａ−Ｐｒｏ間のアミド結合は、シス及びトランス異性体の混合物として存在し得る(Dugave et al.Chem.Rev.2003,103,2475)。この結合についての配座の性質は、ペプチドの生物活性に影響し得及びいくつかのプロテアーゼが、トランスペプチド結合を認識するのみであるという証拠である(Vanhoof et al.FASEB J.1995,9,736;Lin et al.Biochemistry 1983,22,4480)。特定のペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼの存在は、この証拠を裏付けるように思われるであろう(Fanghanel Angew.Chem Int.Ed.2003,42,490)。ＧＰＥは、ＮＭＲ分析により証明されるように、Ｄ2Ｏ溶液中の異性体の２０：８０のシス−トランス混合物として存在する。アルキル基が、プロリンの２−位で置換される場合、トランス配座が好ましい。化合物１〜４は、すべてのトランス配座を選択し及びトランス母集団はまた、シス配座を選択する単に１０％で化合物５において増加した。２−メチルプロリン化合物におけるトランス異性体の普及は、シス配座を不安定にする大きいメチル基に帰属した(Delaney et al.J.Am.Chem.Soc.1982,104,6635)。
【００４１】
ペプチドを配座的に制限する別の方法は、スピロラクタム環系を含有するペプチド模倣薬を合成することである。スピロラクタム環系が、化合物を主に１つの配座内に固定し得ることを示唆し及び異なる環系は、ｂ−及びｇ−回転双方を模倣することを示した(Hinds et al J.Med.Chem.1991,43,1777;Fernandez et al.J.Org.Chem.2002,67,7587;Kang J.Phys.Chem.2002,106,2074)。スピロ環ｇ−ラクタムブリッジは、ＧＰＥにおけるグルタメートの残りの窒素及びプロリンの残りの２−位の間で形成され得、従って、ＧＰＥ類縁体におけるそのような立体配座制限の効果を詳しく調べるための機会を与える。
ＧＰ−[５．５]スピロラクタムＥ  ３５及び対応ＧＰ−[５．５]ヒドロキシスピロラクタムＥ  ３６の合成は、スキーム３において要約される。
【００４２】
【化１１】
2008545697.tif 000013
スキーム３．試薬, 状況及び収率: (i) O3, MeOH/CH2Cl2 (1:1), 15分次いでPPh3, 24h, 次いでシリカゲル, 63%; (ii) CF3CO2H/Et3SiH/CH2Cl2 (1:1:1), rt, 45分, 96%; (iii) 10% Pd/C, CH3OH/H2O (88:12), 18h, 35, 78%, 36, 99%。
【００４３】
アルケン３２のオゾン分解、次いで、トリフェニルホスフィンでの処理は、アルデヒド３７の仲介を介して開始して、アルコール３８をジアステレオ異性体の１：１の混合物として与えた。３８の直接の水素化は、ヒドロキシスピロラクタム３６を与えた一方、水素化分解工程前の３９に対するヒドロキシ基（トリフルオロ酢酸−トリエチルシラン−ジクロロメタン）の最初の減少は、スピロラクタム３５を提供した。双方のスピロラクタムは、プロリン環についてトランス配座を排他的に選択した。
プロリンのピロリジン環は、２つの確かな配座を選択するのが可能である。これらのダウン−及びアップ−パッカード(up-puckered)配座は、プロリンのＣg及びカルボニル基が、Ｃd、Ｎ及びＣaにより定義された平面の、同一及び反対側それぞれにある場合発生するとして定義される。プロリン環における硫黄原子の存在は、プロリン環配座を変えるいくつかのケースにおいて、結合の角度及び結合の長さに影響を与え得る。カン(Kang)は、４−チアプロリン４０[（Ｒ）−チオゾリジン−４−カルボン酸（Ｔｈｚ）]を有するＡｃＰｒｏＮＨＭｅにおけるプロリンの残りの再置換えが、よりパッカード配座（カン２００２）をもたらすということを見出した。プロリン環における更なる配座の変化は、プロリン又はＴｈｚの５位でメチル基の添加により促進され得る。類縁体の次のセットは、Ｐｒｏのｇ−ＣＨ2が、Ｃdで硫黄で及び／又はジメチル置換基で置換されたそのような疑似−プロリン部分を組み込んだ。
【００４４】
疑似−プロリン：４−チアプロリン４０[（Ｒ）−チオゾリジン−４−カルボン酸（Ｔｈｚ）]及び２，２−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸４１を、簡単に、システイン４２とホルムアルデヒド(Pellegrini et al.Chem.Bull.1999,47,950)又は２，２−ジメトキシプロパン(Lewis et al.J.Med.Chem.Pharm.1978,21,1071;Kemp et al.J.Org.Chem.1989,54,3640)それぞれ（スキーム４）との反応により利用された。
【００４５】
【化１２】
2008545697.tif 000014
スキーム４．試薬, 状況及び収率: (i) 37% aq. HCHO, H2O, rt, 22h, 次いでピリジン, 56 %; (ii) ジメトキシプロパン, アセトン, 還流, 2h, 58%。
【００４６】
Ｂｏｃ−保護メチルＤ，Ｌ−５，５−ジメチルプロリナート４３を、ニトリル４４から製造した（スキーム５）。ニトリル４４を、文献において記載されるように製造し(Ono et al.J.Org.Chem.,1985,50 3692)、しかしながら、ニトリル部分の続く加水分解及び中間体Ｎ−オキシドの水素化（記載されるような）(Magaard et al.Tetrahedron Lett.1993,34,381)を、４５及び４６の混合物を産出する酸触媒メチル移動で同時に起こした。（６：４の比、1Ｈ  ＮＭＲ）。加水分解反応の広範囲の修飾は、Ｎ−メチル化号物４５の形成を克服できなかった。この不要な反応が、それぞれの研究グループにより記載されている(An et al.J.Am.Chem Soc.1999,121,11588)５，５−ジメチルプロリンの合成の間、記録されていないのは興味深い。
メチルエステル及びｔ−ブチルオキシカルバメート（Ｂｏｃ）それぞれのような酸及びアミン官能性双方の保護は、保護５，５−ジメチルプロリン４３（４工程にわたり２２％収量）及びＮ−メチル副生成物４７（４工程にわたり４２％）の簡易分離及び特徴付けを可能にした。所望な保護５，５−ジメチルプロリン４３は、エピマーの混合物（５５：４５）として、排他的には、シス配座異性体として存在した。
【００４７】
【化１３】
2008545697.tif 000015
スキーム５．試薬, 状況及び収率: (i) 32% 水性HCl, 50℃ 5h; (ii) H2 (44 psi), 10% Pd/C, MeOH/H2O (1:1), 20h; (iii) SOCl2, MeOH, 0℃〜rt, 一晩次いでBoc2O, N-メチルモルホリン, CH2Cl2, 還流, 48h [43 (22%) 47 (42%)] ４工程以上。
【００４８】
トリペプチド４８−５０を、同様の方法において、２−アルキルプロリン類縁体に合成した（スキーム６）。Ｂｏｃ−グリシン１７に対する４−チア−プロリンビルディングブロック４０の結合を、混合無水活性化手順を用いて行った一方、ヒンダード５，５−ジメチル−４−チア−プロリン４１は、５３を提供するための反応酸流体５１の使用を必要とした。５，５−ジメチルプロリン４３のケースにおいて、Ｂｏｃ基を、ＢｏＰＣｌがＢｏｃ−グリシン１７と結合する前に、トリフルオロ酢酸で除去して、５４を提供した。メチルエステルの加水分解は、次いで、第二ペプチド結合のための製造において酸５５を提供した。
混合無水プロトコール又はＢｏＰＣｌのいずれかを使用する、疑似ジペプチド５２、５３及び５５の、ジベンジルグルタメート２８又はジ−ｔ−ブチルグルタメート２９のいずれかとの結合は、所望なペプチド５６、５７及び５８を与えた。合成において用いられる保護基に依存する最終脱保護工程の性質は、従って、水素化によるベンジルオキシカルボニル及びベンジル基の除去のために、トリペプチド４９を提供した。５６におけるＢｏｃ及びｔ−ブチルエステル基を、トリフルオロ酢酸を用いて除去して、トリペプチド４８をトリフルオロ酢酸塩として得た一方、５８の脱保護のために、トリフルオロ酢酸での処理、次いで、水素化は、トリペプチド５０を提供した。
【００４９】
プロリンのピロリジン環におけるＣ−４での硫黄原子の存在は、それだけで、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ結合についてペプチドの配座を有意に変えるために現れなかった。ＧＰＥ類縁体４８において、シス：トランスの比は、天然ペプチと変わらない、２０：８０であると確立した。Ｃ−５での２つのメチル基の存在は、シス配座異性体を好都合に劇的に変化させたシス：トランスの比を有する配座上で劇的な影響を有した。５，５−ジメチル化ペプチド５０におけるシス配座異性体の母集団は、ＧＰＥで見られた２０％と比較して７２％に増加した。更なる大きな効果を、プロリン環におけるＣ−５で２つのメチル基と組み合わせてＣ−４で硫黄原子の存在が、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ結合についてシス：トランス異性体の比を決定することにおける重要な役割をすることを示す８５：１５のシス：トランスの比を示す類縁体４９で観察した。関連５，５−ジメチルプロリンにおけるシス配座異性体の高母集団は、化合物がトランス配座を選択する場合、メチル基に起因する立体障害の効果であると考えた。
【００５０】
【化１４】
2008545697.tif 000016
スキーム６．試薬, 状況及び収率: (i) 17, i-BuOCOCl, Et3N, THF, 0℃〜rt, 次いで40, Et3N, H2O, rt, 2h, 52, 81%; (ii) 51, 41, i-Pr2EtN, DMF, rt, 18h 次いでMeOH, Me3SiCl, rt, 15h, 53, 65%; (iii) 43, CF3CO2H, CH2Cl2, rt, 2h 次いで17, BoPCl, i-Pr2EtN, CH2Cl2, rt, 15h, 54, 52%; (iv) ジオキサン, 1 M aq. NaOH, rt, 21h, 55, 94%; (v) 56について: EtOCOCl, Et3N, CH2Cl2, 0℃, 35分次いで29, Et3N, CH2Cl2, 0℃〜rt, 15h, 56, 54%; 57, 58について: BoPCl, i-Pr2EtN, CH2Cl2, 28, rt, 7h, 57, 68%, 58, 24h, 67%; (vi) CF3CO2H, Et3SiH, CH2Cl2, rt, 4h, 48, 61%; (vii) H2(42 psi), 10% Pd/C, CH3OH/H2O (80:20), 24h, 49, 48%; (viii) CF3CO2H, CH2Cl2, rt, 75分次いでH2, 10% Pd/C, CH3OH/H2O (80:20), 15h, 50, 93%。
【００５１】
１．１一般的な詳細
全反応を、他に記載のない限り、フレーム乾燥又はオーブン乾燥ガラス製品において、乾燥窒素雰囲気下で行った。全試薬を、供給されるように使用した。テトラヒドロフランを、ナトリウム／ベンゾフェノン上で乾燥し及び使用前に蒸留した。フラッシュクロマトグラフィを、示された溶剤を有するＭｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０（２３０−４００メッシュ）を用いて行った。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を、プレコーティングされたシリカプレート（Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254）で行い及び化合物を、ＵＶ蛍光及びエタノール硫酸中のアニスアルデヒド又はアルカリ過マンガン酸カリウム溶液においてさっと浸されたプレートを加熱することにより視覚化した。セ氏温度（℃）における融点を、Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ（登録商標）融点器具で測定し及び修正されていない。赤外線スペクトルを、塩化ナトリウムプレート間の薄い膜のような、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  １６００シリーズフーリエ変換赤外線スペクトロメータで記録した。吸収最大を、波数（ｃｍ-1）において、以下の省略形で述べる：ｓ＝強、ｍ＝媒体、ｗ＝弱及びｂｒ＝広範核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＲＸ４００（1Ｈ、４００ＭＨｚ；13Ｃ、１００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ３００（1Ｈ、３００ＭＨｚ；13Ｃ、７５ＭＨｚ）又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ２００（1Ｈ、２００ＭＨｚ；13Ｃ、５０ＭＨｚ）スペクトロメータで、２９８Ｋで記録した。1Ｈ  ＮＭＲデータのために、化学シフトは、テトラメチルシラン（δ０．００）、ＤＯＨ（δ４．７５）、ＣＨＤ2ＯＤ（δ３．３０）又はＣＨＤ2Ｓ（Ｏ）ＣＤ3（δ２．５０）に関連して百万（ｐｐｍ）あたりの部において記載され及び位（δH）、相対積分、多数（ｓ＝一重項）、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｐ＝ペンテト、ｑ＝五重項、ｓ＝六重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｍ＝マルチプレット、及びここでｂｒ＝広範）、結合定数（Ｊ／Ｈｚ）及び配置として連続して記録される。13Ｃ  ＮＭＲデータのために、化学シフト（ｐｐｍ）は、ＣＤＣｌ3（δ７７．０）、ＣＤ3ＯＤ（δ４９．１）及び（ＣＤ3）2Ｓ（Ｏ）（δ３９．４）に内部で又は３−（トリメチルシリル）−１−プロパンスルホン酸ナトトリウム塩（ＤＳＳ）に外部で言及され及び位（δｃ）、交配の程度及び配置として連続して記録される。星印*は、最小の配座異性体に割り当てられた共鳴を示す。高分解質量スペクトルを、７０ｅＶの公称加速電圧で処理するＶＧ７０−ＳＥスペクトロメータを用いて記録した。化学イオン化（ＣＩ）質量スペクトルを、アンモニアで、試薬ガスとして得た。施光度を、２０℃で、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ３４１偏光計で、１０ｃｍの路程細胞を用いて測定し及び１０-1ｄｅｇｃｍ2ｇ-1の単位において与える。サンプルを、特定の濃度（ｇ／１００ｃｍ3において測定）で示された溶剤において製造した。
【００５２】
１．１．１（２Ｒ，５Ｓ）−２−トリクロロメチル−１−アザ−３−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−４−オン７．
Ｌ−プロリン（１０．０ｇ、８６．８ｍｍｏｌ）及びクロラール抱水（２１．６ｇ、１３０ｍｍｏｌ）のサスペンションを、還流下でクロロホルム（１００ｃｍ3）において６時間、逆Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップで加熱した。溶液を、水（２×３０ｃｍ3）で洗浄し及び水洗浄を、クロロホルム（５０ｃｍ3）で抽出した。組み合わせ有機層を、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び溶剤を真空で除去して、明るい茶色の固体（１９．８ｇ）を提供した。祖製品を、エタノール（８０ｃｍ3）から４０℃で再結晶化して、オキサゾリジノン７（１６．１ｇ、７７％）を白色固体として形成した：mp 107-109 oC (lit. Amedjkouh et al.テトラヒドロフラン：非対称 2002, 13, 2229) エタノール, 107.6 ℃);  [α]D +34.2 (C6H6中のc 2), (lit. Wang Synlett 1999,1,33) [α]D +33 (C6H6中のc 2.0):TMH(200 MHz; CDCl3) 1.67-2.29 (4H, m, Proβ-H2 及び Proγ-H2), 3.08-3.20 (1H, m, Proβ-HAHB), 3.37-3.49 (1H, m, Proβ-HAHB), 4.09-4.15 (1H, m, Proα-H) 及び 5.17 (1H, s, NCH); TMC (50 MHz; CDCl3) 25.3 (CH2, Proγ-C), 29.9 (CH2, Proβ-C), 57.9 (CH2, Proδ-C), 62.4 (CH, Proα-C), 100.6 [quat., C(Cl3) ], 103.6 (CH, NCH) 及び 175.5 (quat., CO); m/z (EI+) 244 (MH+ 244)。
【００５３】
１．１．２．（２Ｒ，５Ｓ）−５−メチル−２−トリクロロメチル−１−アザ−３−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−４−オン８．
ｎ−ブチルリチウム（１．３１Ｍ、４．６８ｃｍ3、６．１４ｍｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（１０ｃｍ3）中のジイソプロピルアミン（０．８６ｃｍ3、６．１４ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、−７８℃で窒素の雰囲気下で滴下で添加した。その溶液を、５分間攪拌し、０℃に温め及び１５分間攪拌した。溶液を、乾燥テトラヒドロフラン（２０ｃｍ3）中のオキサゾリジノン７（１．００ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で２０分にわたり滴下で添加し（濃く変化された反応混合物）、更に、３０分間攪拌し、次いで、ヨードメタン（０．７６ｃｍ3、１２．３ｍｍｏｌ）を５分にわたり滴下で添加した。溶液を、−５０℃に２時間にわたり温めた。水（１５ｃｍ3）を添加し、溶液を室温に温め及びクロロホルム（３×４０ｃｍ3）で抽出した。組み合わせられた有機抽出物を、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び乾燥するまで真空で蒸発して、暗褐色の半固体を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（１５％酢酸エチル−ヘキサン）による残りの精製は、オキサゾリジノン８（０．６７ｇ、６３％）を淡黄色の固体として提供した： mp 55-57 ℃ (lit.Wang 57-60 ℃): δH (300 MHz; CDCl3) 1.53 (3H, s, CH3), 1.72-2.02 (3H, m, Proβ-H 及び Proγ-H2), 2.18-2.26 (1H, m, Proβ-H), 3.15-3.22 (1H, m, Proδ-H), 3.35-3.44 (1H, m, Proδ-H) and 4.99 (1H, s, NCH)。
【００５４】
１．１．３．（２Ｒ，５Ｓ）−５−エチル−２−トリクロロメチル−１−アザ−３−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−４−オン９．
反応を、オキサゾリジノン８の製造のために記載されたものと同様の手順に従って、ｎ−ブチルリチウム（１．３１Ｍ、２８．３ｃｍ3、３７．１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルアミン（５．２ｃｍ3、３７．１ｍｍｏｌ）、オキサゾリジノン７（６．０ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）及びヨードエタン（５．９ｃｍ3、７３．８ｍｍｏｌ）を用いて行って、オキサゾリジノン９（３．０５ｇ、４６％）を薄茶色の固体に立てて凝固された明るい赤色の油として提供した： mp 76-77 ℃: [α]D +18.5 (CHCl3 中のc 0.25): δ H(300 MHz; CDCl3) 1.04 (3 H, t, J 7.5, CH3), 1.60-1.80 (1H, m, CHAHBCH3), 1.72-1.99 (4H, m, CHAHBCH3, Proβ-HAHB 及び Proγ-H2), 2.20-2.30 (1H, m, Proβ-HAHB), 3.22-3.29 (2H, m, Proδ-H2) 及び 5.00 (1 H, s, NCH); δ c(75 MHz; CDCl3) 8.4 (CH3, CH3), 25.5 (CH2, CH2CH3), 30.9 (CH2, Proγ-C), 35.6 (CH2, Proβ-C), 58.6 (CH2, Proδ-C), 72.5 (quat., Proα-C), 100.9 [quat., C(Cl3) ], 102.5 (CH, NCH) 及び 176.9 (quat., CO); m/z (EI+) 272.0014 (MH+. C9H1335ClN3O2は、272.0012を必要とする)。
【００５５】
１．１．４．（２Ｒ，５Ｓ）−５−アリル−２−トリクロロメチル−１−アザ−３−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−４−オン１０．
(Wang et al.Synlett 1999,1,33)反応を、オキサゾリジノン８の製造のために記載されらものと同様の手順に従って、ｎ−ブチルリチウム（１．３１Ｍ、９．９３ｃｍ3、１３．０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルアミン（１．８２ｃｍ3、１３．０ｍｍｏｌ）、オキサゾリジノン７（２．１０ｇ、８．７ｍｍｏｌ）及び臭化アリル（２．２５ｃｍ3、２６．０ｍｍｏｌ）を用いて行って、オキサゾリジノン１０（１．４８ｇ、６０％）を、ＮＭＲデータが文献と一致した明るいオレンジ色の油として提供した。
【００５６】
１．１．５．（２Ｒ，５Ｓ）−５−ベンジル−２−トリクロロメチル−１−アザ−３−オキサビシクロ[３．３．０]オクタン−４−オン１１．
(Wang et al.Synlett 1999,1,33) 反応を、オキサゾリジノン８の製造のために記載されらものと同様の手順に従って、ｎ−ブチルリチウム（１．３１Ｍ、５．５３ｃｍ3、７．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルアミン（１．０１ｃｍ3、７．２４ｍｍｏｌ）、オキサゾリジノン７（１．１８ｇ、４．８ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（１．７２ｃｍ3、１４．５ｍｍｏｌ）を用いて行って、オキサゾリジノン１１（０．５２ｇ、３２％）を、無色の結晶性固体として提供した: mp 75-77 ℃ (lit. Wang 72-77): δH (400 MHz; CDCl3) 1.32-1.55 (2H, m, Proγ-H2), 1.93-2.13 (2H, m, Proβ-H2), 2.58-2.65 (1H, m, Proδ-H2), 2.92 (1H, d, J 13.6, PhCHAHB), 2.98-3.03 (1H, m, Proδ-H2), 3.32 (1H, d, J 13.6, PhCHAHB), 4.99 (1H, s, NCH) 及び 7.21-7.35 (5H, m, PhH); δC (100 MHz; CDCl3) 24.8 (CH2, Proγ-C), 34.6 (CH2, Proβ-C), 41.6 (CH2, Proδ-C), 58.4 (CH2, PhCH2), 72.3 (quat., Proα-C), 100.6 (quat., CCl3), 102.8 (CH, NCH), 127.0 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 130.9 (CH, Ph), 135.5 (quat., Ph) 及び 176.6 (quat., C=O); m/z (EI+) 333.0081 [(M+H)+. C14H1435Cl3NO2は、333.0090を必要とする], 335.0069 [(M+H)+. C14H1435Cl237ClNO2は、335.0061を必要とする], 337.0014 [(M+H)+. C14H1435Cl 37Cl2NO2は、337.0031を必要とする] 及び 339.0009 [(M+H)+. C14H14 37Cl3NO2は、339.0002を必要とする]。
【００５７】
１．１．６．メチルＬ−メチルプロリナートヒドロクロリド１２．
塩化チオニル（４．３０ｍＬ，５８．９ｍｍｏｌ）を、８の攪拌された溶液（７．５７ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）に０℃で窒素雰囲気下で慎重に滴下で添加した。冷却層を除去し及び室温で２０分間攪拌された溶液を、次いで、加熱して、３時間還流した。揮発性を真空で除去し、残りをトルエン（２０ｍＬ）において懸濁し及び５０℃で濃縮して、塩化チオニルの痕跡を除去した。乾燥エタノールでの粉砕は、茶色の固体を産出した。黄／オレンジ色のエーテルを、デカントし及び固体を乾燥エーテルで振動し、デカントし及び手順を、エーテルが無色になるまで繰り返した。真空で５０℃でのエーテルの痕跡の除去は、１２（約５．０ｇ、１００％）を、更なる精製なしで使用された、自由流動の、吸湿性の茶色の固体として提供した：mp 107-109 ℃ (lit. (Lewis et al. J.Cem.Soc.Perkin Trans.1 1998, 3777) 106-108 ℃)。
【００５８】
１．１．７．メチルＬ−２−エチルプロリナートヒドロクロリド１３．
乾燥メタノール（３５ｃｍ3）中のオキサゾリジノン９（２．８６ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）の氷のように冷却された溶液を、塩化チオニル（２．３ｃｍ3、３１．５ｍｍｏｌ）の溶液で滴下で処理した。溶液を還流下で３時間加熱し、冷却し及び溶剤を減圧下で除去した。得られた茶色の油を、フラッシュカラムクロマトグラフィ（１０％メタノール／ジクロロメタン）により精製して、ヒドロクロリド１３（１．４５ｇ、７１％）を明るい茶色の半固体として提供した：[α]D 61.1(CHCl3中のc 0.3): δH ( 300 MHz; CDCl3) 1.07 (3H, t, J 7.3, CH3), 1.95-2.33 (5H, m, CH2CH3, Proγ-H2 and Proβ-HAHB), 2.43-2.47 (1 H, Proβ-HAHB), 3.63 (3 H, s, OCH3) 及び 6.98-7.35 (2 H, br s, NH2); δc(75 MHz; CDCl3) 9.9 (CH3, CH3), 22.8 (CH2, CH2CH3), 28.9 (CH2, Proγ-C), 35.1 (CH2, Proβ-C), 45.7 (CH2, Proδ-C), 53.8 (CH3, OCH3), 73.9 (quat., Proα-C) 及び 171.0 (quat., CO). m/z (EI+) 158.1181 (MH+. C8H16NO2は、158.1181を必要とする)。
【００５９】
１．１．８．メチルＬ−２−アリルプロリナートヒドロクロリド’１４．
(Wang et al.Synlett 1999,1,33,Hoffmann et al.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.2001,40,3361)。乾燥メタノール（１５ｃｍ3）中のオキサゾリジノン１０（０．６４ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）の氷のように冷却れれた溶液を、メタノール（５ｃｍ3）中の塩化アセチル（０．３６ｃｍ3、５．０ｍｍｏｌ）の溶液で滴下で処理した。溶液を還流下で２４時間加熱し、冷却し及び溶剤を減圧下で除去した。得られた茶色の油を、トルエン（４０ｃｍ3）において溶解し及び乾燥するまで濃縮して、残りの塩化チオニル及びメタノールを除去し、次いで、フラッシュカラムクロマトグラフィ（５−１０％ＣＨ3ＯＨ−ＣＨ2Ｃｌ2；勾配溶出）により精製して、ヒドロクロリド１４（０．２９ｇ、６３％）をＮＭＲデータが文献において記録されたものと一致した固体として提供した。 δH (300 MHz, CDCl3) 1.72-2.25 (3H, m, Proβ-HAHB 及び Proγ-H2), 2.32-2.52 (1H, m, Proβ-HAHB), 2.72-3.10 (2H, m, Proδ-H2), 3.31-3.78 (2H, m, CH2CH=CH2), 3.84 (3H, s, CO2CH3), 5.20-5.33 (2H, m, CH=CH2), 5.75-5.98 (1H, m, CH=CH2) 及び 8.06 (1H, br s, N-H); m/z (CI+) 170.1183 [(M+H)+. C9H16NO2は、170.1181を必要とする]。
【００６０】
１．１．９．メチルＬ−２−ベンジルプロリナートヒドロクロリド１５．
(Yasuo et al.Chem.Pharm.Bull.1979,27,1931)乾燥メタノール（１０ｃｍ3）中のオキサゾリジノン１１の氷のように冷却された溶液（１．０３ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を、メタノール（１０ｃｍ3）中の塩化アセチルの溶液（０．７１ｍ3、１０．０ｍｍｏｌ）で滴下で処理した。溶液を還流下で２４時間加熱し、冷却し及び溶剤を減圧下で除去した。得られた茶色の固体をトルエン（８０ｍ3）において溶解し、乾燥するまで濃縮して、残りの塩化チオニル及びメタノールを除去し、次いで、フラシュカラムクロマトグラフィ（５％ＣＨ3ＯＨ−ＣＨ2Ｃｌ2）により精製して、ヒドロクロリド１５（０．３８ｇ、４８％）をベージュ色の固体として提供した: δH (400 MHz; D2O) 1.92-2.01 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.11-2.23 (2H, m, Proβ-HAHB 及び Proγ-HAHB), 2.52-2.60 (1H, m, Proβ-HAHB), 3.19 (1H, d, J 14.3, PhCHAHB), 3.24-3.31 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.37-3.43 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.53 (1H, d, J 14.3, PhCHAHB), 3.83 (3H, s, CO2CH3) 及び 7.26-7.47 (5H, m, PhH); δC (100 MHz; D2O) 24.4 (CH2, Proγ-C), 36.8 (CH2, Proβ-C), 43.8 (CH2, PhCH2), 47.6 (CH2, Proδ-C), 56.0 (CH3, OCH3), 75.9 (quat., Proα-C), 130.4 (CH, Ph), 131.5 (CH, Ph), 131.7 (CH, Ph), 137.1 (quat., Ph)  及び175.8 (quat., C=O); m/z (CI+) 220.1340 [(M+H)+. C13H18NO2は、220.1338を必要とする]。
【００６１】
１．１．１０．メチルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−メチルプロリナート１８．
乾燥トリエチルアミン（０．２７ｃｍ3、１．９６ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（３５ｃｍ3）中のヒドロクロリド１２（０．１１ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルオキシカルオニルグリシン１６（０．１７ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．１９６ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を、添加し及び得られた無色の溶液を、２０．５時間攪拌した。溶液を、１０％水性塩酸（３０ｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（３０ｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び乾燥するまで真空で蒸発した。フラッシュカラムクロマログラフィ（５０−８０％酢酸エチル−ヘキサン；勾配溶出）による得られた残りの精製は、エステル１８（０．１８ｇ、９２％）を無色の油として産出した: [α]D -33.0 (MeOH中のc 1.0); ν最大 (フィルム)/cm-1 3406, 2952, 1732, 1651, 1521, 1434, 1373, 1329, 1310, 1284, 1257, 1220, 1195, 1172, 1135, 1107, 1082, 1052, 1029, 986, 965, 907, 876, 829, 775, 738 及び 699; δH (300 MHz, CDCl3) 1.49 (3H, s, CH3), 1.77-2.11 (4H, m, Proβ-H2 及び Proγ-H2), 3.43-3.48 (2H, m, Proδ-H2), 3.61 (3H, s, OCH3), 3.85-3.89 (2H, m, Glyα-H2), 5.04 (2H, s, PhCH2), 5.76 (1H, br s, N-H) 及び 7.21-7.28 (5H, s, ArH); δC (75 MHz, CDCl3), 21.1 (CH3, Proα-CH3), 23.5 (CH2, Proγ-C), 38.0 (CH2, Proβ-C), 43.3 (CH2, Glyα-C), 46.6 (CH2, Proδ-C), 52.1 (CH3, OCH3), 66.0 (quat., Proα-C), 66.3 (CH2, PhCH2), 127.5 (CH, Ph), 127.6 (CH, Ph), 128.1 (CH, Ph), 136.2 (quat., Ph), 155.9 (quat., NCO2), 166.0 (quat., Gly-CON) 及び 173.6 (quat., CO2CH3); m/z (EI+) 334.1535 (M+. C17H22N2O5は、334.1529を必要とする)。
【００６２】
１．１．１１．メチルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−メチルプロリナート１９．
乾燥トリエチルアミン（２．８８ｍ3、２０．７ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１００ｃｍ3）中のヒドロクロリド１３（１．１４ｇ、５．９ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルオキシカルオニルグリシン１６（２．４７ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で０℃で滴下で添加し、及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（３．００ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を２時間攪拌し、室温に温め及び更に１７．５時間攪拌した。ジクロロメタン（５０ｃｍ3）を、添加し及び引き続き０．５Ｍ水性塩酸（２×５０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（２×５０ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発して、明るいオレンジ色のゴムを得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（４０％酢酸エチル／へキサン）による得られた残りの精製は、エステル１９（０．９５ｇ、４６％）を透明の油として産出した： [α]D 9.2 (CHCl3中のc 0.13); δH(300 MHz; CDCl3) 0.81 (3 H, t, J 7.5, CH3), 1.85-2.09 (5 H, m, CH2CH3, Proγ-H2 及び Proβ-HAHB), 2.38 ( 1 H, 六重項, J 7.5, Proβ-HAHB), 3.43-3.47 (1 H, m, Proδ-HAHB), 3.61-3.67 (1 H, m, Proδ-HAHB), 3.70 (3 H, s, OCH3), 4.10-4.13 (2 H, m, Glyα-H2) 5.11 (2 H, s, OCH2Ph), 5.71 (1 H, br s, Gly-NH) 及び 7.27-7.35 (5 H, m, Ph); δc (75 MHz; CDCl3) 8.3 (CH3, CH3), 24.1 (CH2, CH2CH3), 26.5 (CH2, Proγ-C), 35.3 (CH2, Proβ-C), 44.1 (CH2, Glyα-C), 48.2 (CH2, Proδ-C), 52.9 (CH3, OCH3), 67.0 (CH2, OCH2Ph), 70.2 (quat., Proα-C), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.7 (CH, Ph), 136.8 (quat., Ph), 156.5 (quat., NCO), 166.8 (quat., Gly-CON) 及び 174.5 (quat., CO2CH3); m/z (EI+) 348.1688 (MH+. C18H24N2O5は、348.1685を必要とする)。
【００６３】
１．１．１２．メチルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−アリルプロリナート２０．
乾燥トリエチルアミン（１．０７ｍ3、７．７０ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（８０ｃｍ3）中のヒドロクロリド１４（０．５０ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルオキシカルオニル−グリシン１６（０．６５ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し、及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．７７２ｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を２０時間攪拌し、次いで、１０％水性塩酸（８０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（８０ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び乾燥するまで真空で蒸発した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（６０％酢酸エチル／へキサン、すべての２００ｃｍ3のためのＥｔ3Ｎの７滴）による得られた残りの精製は、エステル２０（０．２６ｇ、３０％）を黄色の油として産出した：[α]D +46.0 (CH2Cl2中のc 0.50); ν最大 (フィルム)/cm-1 3405, 3066, 3032, 2953, 2877, 1723, 1655, 1586, 1507, 1434, 1373, 1333, 1309, 1248, 1169, 1121, 1083, 1047, 1027, 1002, 919, 866, 827, 776, 737 及び 699; δH (300 MHz; CDCl3) 1.92-2.17 (4H, m, Proβ-H2 及び Proγ-H2), 2.60-2.67 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.09-3.16 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.35-3.42 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.56-3.63 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.70 (3H, s, OCH3), 3.96 (2H, d, J 4.4, Glyα-H2), 5.07-5.12 (4H, m, PhCH2 及び CH=CH2), 5.58-5.70 (1H, m, CH=CH2) 及び 7.27-7.35 (5H, s, PhH); δC (75 MHz; CDCl3) 23.6 (CH2, Proγ-C), 34.9 (CH2, Proβ-C), 37.6 (CH2, CH2CH=CH2), 43.6 (CH2, Glyα-C), 47.5 (CH2, Proδ-C), 52.5 (CH3, OCH3), 66.7 (CH2, PhCH2), 68.8 (quat., Proα-C), 119.4 (CH2, CH=CH2), 127.9 (CH, Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 132.8 (CH, CH=CH2), 136.4 (quat., Ph), 156.1 (quat., NCO2), 166.4 (quat., Gly-CON) 及び 173.7 (quat., CO2CH3); m/z (EI+) 360.1682 (M+. C19H24N2O5は、360.1685を必要とする)。
【００６４】
１．１．１３．メチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−アリルプロリナート２１．
乾燥トリエチルアミン（０．２８ｍ3、２．０２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（３５ｃｍ3）中のヒドロクロリド１４（０．１３ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）及びＮ−ｔ−ブチルオキシカルオニルグリシン１７（０．１４ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し、及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．２０ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を１９．５時間攪拌し、次いで、１０％水性塩酸（３５ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（３５ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び乾燥するまで真空で蒸発した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（４０％酢酸エチル／へキサン）による得られた残りの精製は、エステル２１（０．０９ｇ、４５％）を明るい黄色の油として産出した：[α]D +33.8 (CH2Cl2中のc 0.83); ν最大 (フィルム)/cm-1 3419, 3075, 2977, 2930, 2874, 1739, 1715, 1656, 1499, 1434, 1392, 1366, 1332, 1268, 1248, 1212, 1168, 1122, 1051, 1026, 1003, 943, 919, 867, 830, 779, 739, 699 及び 679; δH (300 MHz; CDCl3) 1.42 [9H, s, C(CH3)3], 1.93-2.08 (4H, m, Proβ-H2 及び Proγ-H2), 2.59-2.67 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.09-3.16 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.35-3.44 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.56-3.62 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.70 (3H, s, OCH3), 3.89 (2H, d, J 4.2, Glyα-H2), 5.06-5.11 (2H, m, CH=CH2), 5.42 (1H, br s, Gly-NH) 及び 5.58-5.72 (1H, m, CH=CH2); δC (75 MHz; CDCl3) 23.7 (CH2, Proγ-C), 28.3 [CH3, C(CH3)3], 35.0 (CH2, Proβ-C), 37.6 (CH2, CH2CH=CH2), 43.3 (CH2, Glyα-C), 47.5 (CH2, Proδ-C), 52.5 (CH3, OCH3), 68.8 (quat., Proα-C), 79.5 [quat., C(CH3)3], 119.4 (CH2, CH=CH2), 132.9 (CH, CH=CH2), 155.7 (quat., NCO2), 166.9 (quat., Gly-CON) 及び 173.8 (quat., CO2CH3); m/z (EI+) 326.1845 (M+. C16H26N2O5は、326.1842を必要とする)。
【００６５】
１．１．１４．メチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−ベンジルプロリナート２２．
乾燥トリエチルアミン（０．５９ｍ3、４，２２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（７０ｃｍ3）中のヒドロクロリド１５（０．３４ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）及びＮ−ｔ−ブチルオキシカルオニルグリシン１７（０．３０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し、及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．４２ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を１８．５時間攪拌し、次いで、１０％水性塩酸（７０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（７０ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び乾燥するまで真空で蒸発した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（５０％酢酸エチル／へキサン）による得られた残りの精製は、エステル２２（０．１１ｇ、２２％）を淡黄色の油として産出した: [α]D +105.3 (CH2Cl2中のc 0.99); ν最大 (フィルム)/cm-1 3419, 3061, 3028, 2977, 2873, 1799, 1739, 1715, 1655, 1582, 1497, 1454, 1432, 1392, 1366, 1330, 1250, 1167, 1121, 1093, 1049, 1026, 948, 915, 865, 819, 765, 736, 706 及び 653; δH (300 MHz; CDCl3) 1.08-1.12 (1H, m, Proγ-HAHB), 1.47 [9H, s, C(CH3)3], 1.67-1.72 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.01-2.17 (2H, m, Proβ-H2), 2.86-2.92 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.08 (1H, d, J 13.8, PhCHAHB), 3.36-3.42 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.75 (3H, s, OCH3), 3.83 (1H, m, PhCHAHB), 3.90 (2 H, d, J 3.6, Glyα-CH2), 5.54 (1H, br s, N-H) 及び 7.06-7.30 (5H, m, PhH); δC (100 MHz; CDCl3) 23.4 (CH2, Proγ-C), 28.4 [CH3, C(CH3)3], 34.7 (CH2, Proβ-C), 37.8 (CH2, PhCH2), 43.6 (CH2, Glyα-C), 47.4 (CH2, Proδ-C), 52.6 (CH3, OCH3), 69.6 (quat., Proα-C), 79.6 [quat., C(CH3)3], 126.8 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 130.5 (CH, Ph), 136.7 (quat., Ph), 155.8 (quat., NCO2), 167.2 (quat., Gly-CON) 及び 174.0 (quat., CO2CH3); m/z (EI+) 376.2001 (M+. C20H28N2O5は、376.1998を必要とする)。
【００６６】
１．１．１５．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−メチルプロリン２３．
１，４−ジオキサン（３３ｃｍ3）中のメチルエステル１８（０．５６ｇ、約１．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水性水酸化ナトリウム（１０ｃｍ3、１０ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、１９時間室温で攪拌した。ジクロロメタン（１００ｃｍ3）を、次いで、添加し及び有機層を飽和水性炭酸水素ナトリウム（２×１００ｃｍ3）で抽出した。組み合わせられた水性層を、注意深く、希釈塩酸で酸性にし、ジクロロメタン（２×１００ｃｍ3）で抽出し、及び組み合わせられた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し、及び乾燥するまで真空で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（５０％酢酸エチル−ヘキサン〜３０％メタノール−ジクロロメタン；勾配溶出）による次の残り（０．４７ｇ）の精製は、酸２３（０．６８ｇ、９０％）を白色の発泡体として与えた: [α]D -62.3 (CH2Cl2中のc 0.20); ν最大 (フィルム)/cm-1 3583, 3324 br, 2980, 2942, 1722, 1649, 1529, 1454, 1432, 1373, 1337, 1251, 1219, 1179, 1053, 1027, 965, 912, 735 及び 698; δH (300 MHz; CDCl3) 1.59 (3H, s, Proα-CH3), 1.89 (1H, 6 lines, J 18.8, 6.2 及び 6.2, Proβ-HAHB), 2.01 (2H, dtt, J 18.7, 6.2 及び 6.2, Proγ-H2), 2.25-2.40 (1H, m, Proβ-HAHB), 3.54 (2H, t, J 6.6, Proδ-H2), 3.89 (1H, dd, J 17.1 及び 3.9, Glyα-HAHB), 4.04 (1H, dd, J 17.2 及び 5.3, Glyα-HAHB), 5.11 (2H, s, OCH2Ph), 5.84 (1H, br t, J 4.2, N-H), 7.22-7.43 (5H, m, Ph) 及び 7.89 (1H, br s, -COOH); δC (75 MHz; CDCl3) 21.3 (CH3, Proα-CH3), 23.8 (CH2, Proγ-C), 38.2 (CH2, Proβ-C), 43.6 (CH2, Glyα-C), 47.2 (CH2, Proδ-C), 66.7 (quat, Proα-C), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 127.9 (CH, Ph), 127.9 (CH, Ph), 128.4, (CH, Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.4 (quat., NCO2), 167.5 (quat., Gly-CON) 及び 176.7 (quat., CO); m/z (EI+) 320.1368 (M+. C16H20N2O5は、320.1372を必要とする)。
【００６７】
１．１．１６．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−エチルプロリン２４．
ジオキサン（１５ｃｍ3）中のメチルエステル１９（０．３９ｇ、約１．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ  ＮａＯＨ（７．５ｃｍ3、７．５０ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、２０時間室温で攪拌した。溶液を１Ｍ  ＨＣｌで酸性にし及び真空で蒸発した。得られた水性層を、ジクロロメタン（２×３０ｃｍ3）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し、及び真空で蒸発して、透明のゴムを形成し、それを、立てて酸２４（０．３５ｇ、９５％）に無色の固体として凝固し、それを、更なる精製なしで使用した： [α]D 9.9 (MeOH中のc 0.11); δ H(300 MHz; CDCl3) 0.83 (3H, t, J 7.4, CH3), 1.93-2.22 (5H, m, CH2CH3, Proγ-H2 及び Pro-βHAHB), 2.35-2.40 (1H, m, Pro-βHAHB), 3.43-3.46 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.57-3.62 (1H, m, Proδ-HAHB), 4.01 (2H, dd, J 4.3 及び 17.3, Glyα-H2), 5.11 (2H, s, OCH2Ph), 5.82 (1H, br s, Gly-NH), 7.26-7.36 (5H, m, Ph) 及び 7.70 (1H, br s, CO2H); δC (75 MHz; CDCl3) 8.5 (CH3, CH3), 23.9 (CH2, CH2CH3), 26.7 (CH2, Proγ-C), 34.8 (CH2, Proβ-C), 44.1 (CH2, Glyα-C), 48.7 (CH2, Proδ-C), 67.3 (CH2, OCH2Ph), 71.9 (quat., Proα-C), 127.3 (CH, Ph), 127.9 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.9 (CH, Ph), 136.7 (quat., Ph), 156.7 (quat., NCO2), 168.9 (quat., Gly-CON) 及び 175.8 (quat., CO2H); m/z (EI+) 334.1523 (M+, C17H22N2O5は、334.1529を必要とする)。
【００６８】
１．１．１７．Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−アリルプロリン２５．
ジオキサン（７ｃｍ3）中のエステル２０（０．１２ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水性ＮａＯＨ（２．０６ｃｍ3、２．０６ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、２０時間室温で攪拌した。ジクロロメタン（２５ｃｍ3）を、次いで、添加し及び有機層を飽和水性二炭酸ナトリウム（３×２５ｃｍ3）で抽出した。希釈塩酸での組み合わされた水性層の注意深い酸性化、ジクロロメタン（３×２５ｃｍ3）での抽出、組み合わせられた有機層の乾燥（ＭｇＳＯ4）、ろ過及び乾燥するまでの濃縮は、酸２５（０．１１ｇ、９２％）を黄色の油として与えた：[α]D -3.16 (CH2Cl2中のc 0.95); ν最大 (フィルム)/cm-1 3408, 2957, 2923, 2850, 2622, 1715, 1650, 1531, 1453, 1375, 1333, 1259, 1214, 1173, 1121, 1083, 1056, 1028, 1002, 916, 823, 737 及び 698; δH (300 MHz; CDCl3) 1.93-2.07 (3H, m, Proβ-HAHB 及び Proγ-H2), 2.22-2.26 (1H, m, Proβ-HAHB), 2.62-2.69 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.04-3.11 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.31-3.62 (2H, m, Proδ-H2), 3.91-4.05 (2H, m, Glyα-H2), 5.08-5.13 (3H, m, PhCH2 及び CH=CHAHB), 5.55-5.72 (1H, m, CH=CHAHB), 5.89 (1H, m, CH=CH2), 7.29-7.45 (5H, m, PhH) 及び 8.12 (1H, br s, N-H); δC (75 MHz; CDCl3) 23.5 (CH2, Proγ-C), 34.6 (CH2, Proβ-C), 37.5 (CH2, CH2CH=CH2), 43.7 (CH2, Glyα-C), 48.1 (CH2, Proδ-C), 66.9 (CH2, PhCH2), 69.9 (quat., Proα-C), 119.8 (CH2, CH=CH2),  127.97 (CH, Ph), 128.04 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 132.3 (CH, CH=CH2), 136.4 (quat., Ph), 156.4 (quat., NCO2), 168.2 (quat., Gly-CON) 及び 176.1 (quat., CO2H); m/z (EI+) 346.1526 (M+. C18H22N2O5は、346.1529を必要とする)。
【００６９】
１．１．１８．Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−アリルプロリン２６．
ジオキサン（２．４ｃｍ3）中のエステル２１（０．０３９ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水性ＮａＯＨ（０．７２ｃｍ3、０．７２ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、１６時間室温で攪拌した。ジクロロメタン（１０ｃｍ3）を、次いで、添加し及び有機層を飽和水性二炭酸ナトリウム（３×２５ｃｍ3）で抽出した。希釈塩酸での組み合わされた水性層の注意深い酸性化、ジクロロメタン（３×１０ｃｍ3）での抽出、組み合わせられた有機層の乾燥（ＭｇＳＯ4）、ろ過及び乾燥するまでの濃縮は、酸２６（０．０３１ｇ、８３％）を黄色の油として与えた：[α]D -15.8 (CH2Cl2中のc 0.89); ν最大 (フィルム)/cm-1 3414, 3076, 2978, 2931, 2620, 1713, 1654, 1510, 1454, 1434, 1392, 1367, 1268, 1250, 1213, 1169, 1121, 1056, 1028, 920, 869, 779, 736 及び 701; δH (300 MHz; CDCl3) 1.43 [9H, s, C(CH3)3], 1.95-2.15 (3H, m, Proβ-HAHB 及び Proγ-CH2), 2.21-2.35 (1H, m, Proβ-HAHB), 2.63-2.70 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.04-3.11 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.35-3.47 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.53-3.62 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.92 (2H, m, Glyα-H2), 5.08-5.13 (2H, m, CH=CH2), 5.52 (1H, br s, Gly-NH), 5.56-5.71 (1H, m, CH=CH2) 及び 8.31 (1 H, br s, OH); δC (75 MHz; CDCl3) 23.5 (CH2, Proγ-C), 28.3 [CH3, C(CH3)3], 34.6 (CH2, Proβ-C), 37.5 (CH2, CH2CH=CH2), 43.4 (CH2, Glyα-C), 48.1 (CH2, Proδ-C), 69.8 (quat., Proα-C), 79.8 [quat., C(CH3)3], 119.8 (CH2, CH=CH2), 132.3 (CH, CH=CH2), 155.8 (quat., NCO2), 168.5 (quat., Gly-CON) 及び 175.9 (quat., CO2H); m/z (EI+) 312.1692 (M+. C15H24N2O5は、312.1685を必要とする)。
【００７０】
１．１．１９．Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−ベンジルプロリン２７．
ジオキサン（５．２ｃｍ3）中のエステル２２（０．０９８ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、１水性ＮａＯＨ（１．５６ｃｍ3、１．５６ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、１５時間室温で攪拌した。ジクロロメタン（２０ｃｍ3）を、次いで、添加し及び有機層を、飽和水性二炭酸ナトリウム（３×２０ｃｍ3）で抽出した。希釈塩酸と組み合わされた水性層の注意深い酸性化、ジクロロメタン（３×２０ｃｍ3）で抽出、組み合わされた有機層（ＭｇＳＯ4）の乾燥、ろ過及び乾燥するまでの濃縮は、酸２７（０．０９ｇ、９５％）を無色のガラスのような固体として与えた：ｍｐ７４−７７℃；[α]D +69.8 (CH2Cl2中のc 0.99); ν最大 (CH2Cl2)/cm-1 3415, 3060, 3028, 2978, 2879, 2621, 1711, 1655, 1497, 1454, 1392, 1367, 1252, 1167, 1120, 1092, 1081, 1049, 1029, 988, 942, 915, 887, 872, 814, 764, 736, 705 and 653; δH (400 MHz; CDCl3) 1.14-1.21 (1H, m, Proγ-HAHB), 1.50 [9H, s, C(CH3)3], 1.72-1.78 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.11-2.29 (2H, m,  Proβ-H2), 2.94-3.00 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.13 (1H, d, J 13.9, PhCHAHB), 3.42-3.48 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.83 (1H, d, J 13.9, PhCHAHB), 4.13 (2H, m, Glyα-H2), 5.69 (1H, br s, Gly-NH), 7.10-7.33 (5H, m, PhH) 及び 8.37 (1 H, br s, OH); δC (100 MHz; CDCl3) 23.3 (CH2, Proγ-C), 28.3 [CH3, C(CH3)3], 34.5 (CH2, Proβ-C), 37.8 (CH2, PhCH2), 43.7 (CH2, Glyα-C), 47.8 (CH2, Proδ-C), 70.3 (quat., Proα-C), 79.8 [quat., C(CH3)3], 126.9 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 130.5 (CH, Ph), 136.3 (quat., Ph), 156.0 (quat., NCO2), 168.6 (quat., Gly-CON) 及び 176.9  (quat., CO2H); m/z (EI+) 362.1834 (M+. C19H26N2O5は、362.1842を必要とする)。
【００７１】
１．１．２０．ジベンジルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−メチルプロリル−Ｌ−グルタメート３０．
トリエチルアミン（０．５０ｃｍ3、３．５９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（６０ｃｍ3）中のジペプチド２３（０．３６ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及びＬ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート２８（０．７３ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素下で室温で滴下で添加し及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．３７ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を添加し及び無色の溶液を１７時間攪拌した。ジクロロメタン溶液を、１０％水性塩酸（５０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（５０ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過及び乾燥するまで真空で蒸発した。繰り返しのフラッシュカラムクロマトグラフィ（３０−７０％酢酸エチル−ヘキサン；溶出勾配）による得られた残りの精製は、保護トリペプチド３０（０．６３ｇ、８９％）を無色の油として産出した。トリペプチド３０が、ＮＭＲによりトランス配座異性体を排他的に選択することを示す: Rf 0.55 (EtOAc); [α]D -41.9 (CH2Cl2中のc 0.29); ν最大 (フィルム)/cm-1 3583, 3353 br, 2950, 1734, 1660, 1521, 1499, 1454, 1429, 1257, 1214, 1188, 1166, 1051, 911, 737 and 697; δH (400 MHz; CDCl3; Me4Si) 1.64 (3H, s, Proα-CH3), 1.72 (1H, dt, J 12.8, 7.6 及び 7.6, Proβ-HAHB), 1.92 (2H, 5 線, J 6.7, Proγ-H2), 2.04 (1H, 6 lines, J 7.3 Gluβ-HAHB), 2.17-2.27 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.35-2.51 (3H, m, Proβ-HAHB 及び Gluγ-H2), 3.37-3.57 (2H, m, Proδ-H2), 3.90 (1H, dd, J 17.0 及び 3.6, Glyα-HAHB), 4.00 (1H, dd, J 17.1 及び 5.1, Glyα-HAHB), 4.56 (1H, td, J 7.7 及び 4.9, Gluα-H), 5.05-5.20 (6H, m, 3 x OCH2Ph), 5.66-5.72 (1H, br m, Gly-NH), 7.26-7.37 (15H, m, 3 x Ph) 及び 7.44 (1H, d, J 7.2, Glu-NH); δC (100 MHz; CDCl3) 21.9 (CH3, Proα-CH3), 23.4 (CH2, Proγ-C), 26.6 (CH2, Gluβ-C), 30.1 (CH2, Gluγ-C), 38.3 (CH2, Proβ-C), 43.9 (CH2, Glyα-C), 47.6 (CH2, Proδ-C), 52.2 (CH, Gluα-C), 66.4 (CH2, OCH2Ph), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 67.1 (CH2, OCH2Ph), 68.2 (quat, Proα-C), 127.9 (CH, Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.1, (CH, Ph), 128.2, (CH, Ph), 128.2, (CH, Ph), 128.3, (CH, Ph), 128.4, (CH, Ph), 128.5, (CH, Ph), 128.5, (CH, Ph), 135.2 (quat., Ph), 135.7 (quat., Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.1 (quat., NCO2), 167.3 (quat., Gly-CO), 171.4 (quat., CO), 172.9 (quat., CO) and 173.4 (quat., CO); m/z (FAB+) 630.2809 (MH+. C35H40N3O8は、630.2815を必要とする)。
【００７２】
１．１．２１．ジベンジルＮ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−エチルプロリル−Ｌ−グルタメート３１．
乾燥トリエチルアミン（０．４４ｃｍ3、３．１６ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（５０ｃｍ3）中の酸２４（０．３０ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）及びＬ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート２８（０．５７ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で０℃で滴下で添加し及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．２９ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し及び溶液を２時間攪拌し、室温に温め及び更に、１７．５時間攪拌した。溶液を、０．５Ｍ水性塩酸（１０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（１０ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過及び真空で蒸発して、明るいオレンジ色のゴムを形成した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（３０％酢酸エチル−ヘキサン）による得られた残りの精製は、保護トリペプチド３１（０．４１ｇ、７０％）を透明の油として産出した： [α]D 52.7 (MeOH中のc 0.16); δH(300 MHz; CDCl3) 0.78 (3 H, t, J 7.4, CH3), 1.25-2.24 (7 H, m, CH2CH3, Gluβ-H2, Proγ-H2  及び Proβ-HAHB), 2.34-2.40 (2H, m, Gluγ-H2), 2.50-2.60 (1 H, m, Proβ-HAHB), 3.34 (1 H, q, J 9.4, Proδ-HAHB), 3.49-3.53 (1 H, m, Proδ-HAHB), 3.96 (2 H, ddd, J 4.9 及び 17.3, Glyα-H2), 4.51-4.54 (1 H, td, J 5.4 及び 7.8, Gluα-H), 5.06-5.19 (6 H, m, 3 x OCH2Ph), 5.70 (1H, br s, Gly-NH), 7.26-7.36 (15 H, 3 x Ph) 及び 8.09 (1H, d, J 7.3, Glu-NH); δC(75 MHz; CDCl3) 8.8 (CH3, CH3), 23.6 (CH2, CH2CH3), 27.2 (CH2, Proγ-C), 27.7 (CH2, Gluβ-C), 30.6 (CH2, Gluγ-C), 34.3 (CH2, Proβ-C), 44.5 (CH2, Glyα-C), 49.0 (CH2, Proδ-C), 52.6 (CH, Gluα-C), 66.9 (CH2, OCH2Ph), 67.3 (CH2, OCH2Ph), 67.5 (CH2, OCH2Ph), 73.9 (quat., Proα-C), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 128.6 (CH, Ph), 128.7 (CH, Ph), 128.8 (CH, Ph), 128.9 (CH, Ph), 135.7 (quat., Ph), 136.1 (quat., Ph), 136.8 (quat., Ph), 156.6 (quat., NCO2), 168.7 (quat., Gly-CON), 171.8 (quat., Pro-CON), 172.9 (quat., Gluα-CO) 及び 173.6 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 644.2981 (MH+.C36H42N3O8は、644.2972を必要とする)。
【００７３】
１．１．２２．ジベンジルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−アリルプロリル−Ｌ−グルタメート３２．
乾燥トリエチルアミン（０．０７ｃｍ3、０．４９ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（８．２ｃｍ3）中の酸２５（０．０５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＬ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート２８（０．１０ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．０５ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加し及び溶液を１９．５時間攪拌した。溶液を、１０％水性塩酸（７ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（７ｃｍ3）で引き続き洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過及び乾燥するまで真空で蒸発した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（５０−８０％酢酸エチル−ヘキサン；勾配溶出）による得られた残りの精製は、保護トリペプチド３２（０．０８ｇ、７６％）を無色の油として産出した：[α]D -27.8 (CH2Cl2中のc 0.79); ν最大 (フィルム)/cm-1 3943, 3583, 3413, 3055, 3032, 2982, 2956, 2880, 2685, 2411, 2305, 1955, 1732, 1668, 1586, 1499, 1454, 1423, 1388, 1329, 1265, 1214, 1169, 1170, 1081, 1058, 1028, 994, 924, 897, 824, 737 及び 701; δH (400 MHz; CDCl3) 1.85 (3H, m, Proβ-HAHB 及び Proγ-H2), 1.99-2.08 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.17-2.25 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.32-2.49 (3H, m, Proβ-HAHB 及び Gluγ-H2), 2.71-2.76 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.05-3.10 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.33 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.51 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.96 (2H, d, J 3.9, Glyα-H2), 4.55 (1H, dd, J 7.6 及び 5.1, Gluα-H), 5.07-5.19 (8H, m, 3 x PhCH2 及び CH=CH2), 5.53-5.63 (1H, m, CH=CH2), 5.71 (1H, br s, Gly-NH), 7.32-7.36 (15H, m, 3 x Ph) 及び 7.90 (1H, d, J 7.2, Glu-NH); δC (100 MHz; CDCl3) 23.1 (CH2, Proγ-C), 26.7 (CH2, Gluβ-C), 30.2 (CH2, Gluγ-C), 34.2 (CH2, Proβ-C), 37.9 (CH2, CH2CH=CH2), 44.1 (CH2, Glyα-C), 48.5 (CH2, Proδ-C), 52.2 (CH, Gluα-C), 66.4 (CH2, PhCH2), 66.9 (CH2, PhCH2), 67.2 (CH2, PhCH2), 71.9 (quat., Proα-C), 119.9 (CH2, CH=CH2), 127.9 (CH, Ph), 128.05 (CH, Ph), 128.1 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.45 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 132.1 (CH, CH=CH2), 135.3 (quat., Ph), 135.7 (quat., Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.2 (quat., NCO2), 168.1 (quat., Gly-CO), 171.3 (quat., Gluα-CO), 172.7 (quat., Gluγ-CO) 及び 173.0 (quat., Pro-CON); m/z (FAB+) 656.2970 (MH+. C37H42N3O8は、656.2992を必要とする)。
【００７４】
１．１．２３．ジ−ｔ−ブチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−アリルプロリル−Ｌ−グルタミン酸塩３３．
乾燥トリエチルアミン（０．０４４ｃｍ3、０．３２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（５．３０ｃｍ3）中の酸２６（０．０３１ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）及びＬ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸塩２９（０．０３８ｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）の溶液（窒素の雰囲気下で、室温で）、及び１０分間攪拌された反応混合物に滴下で添加した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．０３２ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び１７．５時間攪拌された溶液を、添加した。溶液を、引き続いて、１０％水性塩酸（５ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（５ｃｍ3）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発乾固した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（５０％エチルアセテート−ヘキサン）により得られた残りの精製は、淡黄油として、保護トリペプチド３３（０．５３ｇ、７７％）を生産した : [α]D -29.9 (CH2Cl2中のc 0.90 in); νmax (フィルム)/cm-1 3583, 3417, 3076, 2978, 2931, 1728, 1664, 1522, 1453, 1426, 1392, 1367, 1329, 1251, 1158, 1056, 1028, 949, 919, 846及び735; δH (300 MHz; CDCl3) 1.26 [9H, s, C(CH3)3], 1.42 [9H, s, C(CH3)3], 1.43 [9H, s, C(CH3)3], 1.85-1.94 (4H, m, Proβ-HAHB, Ｇｌｕβ-HAHB及びProγ-H2), 2.02-2.12 (1H, m, Ｇｌｕβ-HAHB), 2.16-2.33 (2H, m, Ｇｌｕγ-H2), 2.48-2.53 (1H, m, Proβ-HAHB), 2.69-2.77 (1H, m, 0.5 CHAHBCH=CH2), 3.08-3.15 (1H, m, CHAHBCH=CH2), 3.29-3.38 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.53-3.56 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.91 (2H, d, Ｊ 4.0, Glyα-H2), 4.33 (1H, dd, J 7.5及び5.2, Ｇｌｕα-H), 5.08-5.14 (2H, m, CH=CH2), 5.47 (1H, br s, GlyNH), 5.52-5.66 (1H, m, CH=CH2)及び7.77 (1H, d, J 7.4, ＧｌｕNH); δC (75 MHz; CDCl3) 23.1 (CH2, Proγ-C), 27.4 (CH2, Ｇｌｕβ-C), 27.9 [CH3, C(CH3)3], 28.0 [CH3, C(CH3)3], 28.3 [CH3, C(CH3)3], 31.5 (CH2, Ｇｌｕγ-C), 34.2 (CH2, Proβ-C), 38.0 (CH2, CH2CH=CH2), 43.7 (CH2, Glyα-C), 48.4 (CH2, Proδ-C), 52.7 (CH, Ｇｌｕα-C),  71.8 (quat., Proα-C), 79.5 [quat., C(CH3)3], 80.6 [quat., C(CH3)3], 81.9 [quat., C(CH3)3], 119.8 (CH2, CH=CH2), 132.3 (CH, CH=CH2), 155.7 (quat., NCO2), 168.4 (quat., GlyCO), 170.8 (quat., Ｇｌｕα-CO), 172.3 (quat., Ｇｌｕγ-CO)及び172.8 (quat., ProCON);m/z(EI+) 553.3359 (M+. C28H47N3O8は、553.3363を必要とする)。
【００７５】
１．１．２４．ジ−ｔ−ブチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−２−ベンジルプロリル−Ｌ−グルタミン酸塩３４．
乾燥トリエチルアミン（０．１１ｃｍ3、０．７７ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１３ｃｍ3）中の酸２７（０．０９ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸塩２９（０．０９ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液（窒素の雰囲気下で、室温で）、及び１０分間攪拌された反応混合物に、滴下で添加した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．０８ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及び１７時間攪拌された溶液を、添加し、次いで、引き続いて、１０％水性塩酸（１２ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（１２ｃｍ3）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発乾固した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（４０％エチルアセテート−ヘキサン）により得られた残りの精製は、無色油として、保護トリペプチド３４（ ０．１０ｇ、６８％）を生産した: [α]D +15.7 (CH2Cl2中のc 1.15); νmax (フィルム)/cm-1 3418, 3357, 3060, 3028, 2978, 2933, 2875, 1727, 1663, 1582, 1519, 1497, 1454, 1426, 1392, 1367, 1330, 1251, 1158, 1093, 1051, 1029, 949, 914, 846, 736, 705及び651; δH (400 MHz; CDCl3) 1.28-1.39 (1H, m, Proγ-HAHB), 1.43 [27H, s, C(CH3)3], 1.47 [27H, s, C(CH3)3], 1.48 [27H, s, C(CH3)3], 1.69-1.74 (1H, m, Proγ-HAHB), 1.89-1.99 (2H, m, Proβ-H2), 2.08-2.17 (1H, m, Ｇｌｕβ-HAHB), 2.23-2.41 (3H, m, Ｇｌｕβ-HAHB及びＧｌｕγ-H2), 2.89-2.95 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.13 (1H, d, J 13.4, PhCHAHB), 3.40-3.46 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.85 (1H, d, J 13.4, PhCHAHB),  3.92 (2H, d, J 3.8, Glyα-H2), 4.33 (1H, td, J 7.5及び5.2, Gluα-H), 5.58 (1H, br s, GlyNH), 7.07-7.28 (5H, m, PhH)及び7.71 (1H, d, J 7.2, GluNH); δC (100 MHz; CDCl3) 23.0 (CH2, Proγ-C), 27.4 (CH2, Gluβ-C), 28.0 [CH3, C(CH3)3], 28.1 [CH3, C(CH3)3], 28.3 [CH3, C(CH3)3], 31.5 (CH2, Gluγ-C), 34.2 (CH2, Proβ-C), 38.0 (CH2, PhCH2), 44.1 (CH2, Glyα-C), 48.2 (CH2, Proδ-C), 52.9 (CH, Gluα-C),  72.4 (quat., Proα-C), 79.6 [quat., C(CH3)3], 80.7 [quat., C(CH3)3], 82.1 [quat., C(CH3)3], 126.8 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 130.4 (CH, Ph), 136.3 (quat., Ph), 155.8 (quat., NCO2), 168.6 (quat., GlyCO), 171.0 (quat., Gluα-CO), 172.5 (quat., Gluγ-CO)及び173.1 (quat., ProCON);m/z(FAB+) 604.3592 (MH+. C32H50N3O8は、604.3598を必要とする)。
【００７６】
１．１．２５．グリシル−Ｌ−２−メチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸１．
９０：１０のメタノール対水（２２ｃｍ3）中の保護トリペプチド３０（０．６３ｇ、１．００ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウム（０．３２ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の混合物を、水素の雰囲気下で、室温で攪拌し、光から保護した（２３時間）。反応混合物を、セリット（登録商標）パッド及び７５：２５のメタノール−水（２００ｃｍ3）で洗浄されたパッドを通してろ過した。ろ液を、減圧下で乾燥するまで濃縮し及び残りを、無水ジエチルエーテルで粉砕して、吸湿性の無色の固体としてトリペプチド１（０．２７ｇ、８６％）を提供した。トリペプチド１を、ＮＭＲ分析によりトランス配座を採択するために示した: mp 144 °; [α]D -52.4 (H2O中のc 0.19); δH (400 MHz; D2O) 1.62 (3H, s, Proα-CH3), 1.97-2.25 (6H, m, Proβ-H2, Proγ-H2及びGluβ-H2), 2.45 (2H, t, J 7.3, Gluγ-H2), 3.62-3.70 (2H, m, Proδ-H2), 3.96 (1H, d, J 16.5, Glyα-HAHB), 4.02 (1H, d, J 16.4, Glyα-HAHB)及び4.28 (1H, dd, J 8.4及び4.7, Gluα-H); δC (100 MHz; D2O) 19.9 (CH3, Proα-CH3), 23.0 (CH2, Proγ-C), 26.9 (CH2, Gluβ-C), 30.9 (CH2, Gluγ-C), 38.8 (CH2, Proβ-C), 40.7 (CH2, Glyα-C), 47.5 (CH2, Proδ-C), 54.4 (CH, Gluα-C), 67.8 (quat, Proα-C), 164.6 (quat., GlyCO), 175.3 (quat., ProCON), 177.2 (quat., Gluα-CO), 及び178.5 (quat., Gluγ-CO); m/z(FAB+) 316.1508 (MH+. C13H22N3O6は、316.1509を必要とする)。
【００７７】
１．１．２６．グリシル−Ｌ−２−エチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸２．
９０：１０のメタノール−水（５０ｃｍ3）中の保護トリペプチド３１（０．５１ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウム（０．０９ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の混合物を、水素の雰囲気下で、室温で、２０時間攪拌した。溶液を、セリット（登録商標）パッド、メタノール（２×３０ｃｍ3）で洗浄されたパッドを通してろ過し及びろ液を、蒸発乾固して、透明のゴムを得た。ゴムを、真空の下、３０分間置き及び次いで、無水ジエチルエーテルで、吸湿性の無色の固体としてのトリペプチド２（０．２６ｇ、９９％）に粉砕した。トリペプチド２を、排他的に、1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲ分析によりトランス配座異性体であることを示した：ｍｐ ８２−８５ ℃; [α]D 43.8 (MeOH中のc 0.1); δH (400 MHz; D2O) 0.86 (3 H, t, J 7.4, CH3), 1.94-2.40 (8 H, m, CH2CH3, Gluβ-H2, Proβ-H2 及びProγH2), 2.52-2.56 (2H, m, Gluγ-H2), 3.55-3.61 (1 H, td, J 6.9及び9.7, Proδ-HAHB), 3.75-3.80 (1 H, m, Proδ-HAHB), 4.08 (2H, q, J 16.6, Glyα-H2)及び4.44 (1 H, q, J 4.9, Gluα-H); δC (100 MHz; CDCl3) 6.9 (CH3, CH3), 22.8 (CH2, CH2CH3), 25.3 (CH2, Proγ-C), 25.5 (CH2, Gluβ-C), 30.11(CH2, Gluγ-C), 35.0 (CH2, Proβ-C), 40.7 (CH2, Glyα-C), 48.6 (CH2, Proδ-C), 52.6 (CH, Gluα-C), 71.7 (quat., Proα-C), 164.9 (quat., GlyCON), 175.2 (quat., ProCON) 176.0 (quat., Gluα-CO)及び177.3 (quat., Gluγ-CO); m/z(FAB+) 330.1667 (MH+. C14H24N3O6は、330.1665を必要とする)。
【００７８】
１．１．２７  グリシル−Ｌ−２−プロピルプロリル−Ｌ−グルタミン酸３．
９０：１０のメタノール−水（９．８ｃｍ3）中の保護トリペプチド３２（６４ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウム（２０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、水素の雰囲気下で、室温で攪拌し、光から保護した（１９時間）。反応混合物を、セリット（登録商標）パッド及び７５：２５のメタノール−水（５０ｃｍ3）で洗浄されたパッドを通してろ過した。ろ液を、減圧下で、乾燥するまで濃縮して、トリペプチド３（３３ｍｇ、１００％）を、無色の固体として得た。トリペプチド３を、排他的に、ＮＭＲ分析により配座異性体であることを示した：mp 278-280 ℃ (dec.); [α]D -16.7 (H2O 中のc 0.18); δH (300 MHz; D2O) 0.98 (3H, t, CH2CH3), 1.09 (1H, m, CHAHBCH3),  1.44 (1H, m, CHAHBCH3), 1.82-2.31 (8H, m, Proβ-H2, Proγ-H2, Gluβ-H2及びCH2CH2CH3), 2.40  (1H, m, Gluγ-H2), 3.55-3.63 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.80 (1H, m, Proδ-HAHB), 4.03 (1H, d, J 16.6, Glyα-HAHB), 4.15 (1H, d, J 16.6, Glyα-HAHB)及び4.27 (1H, dd, J 8.2及び4.8, Gluα-H); δC (100 MHz; D2O) 16.0 (CH3, CH2CH3), 19.0 (CH2, CH2CH3), 25.4 (CH2, Proγ-C), 30.9 (CH2, Gluβ-C), 36.3 (CH2, Gluγ-C), 37.4 (CH2, CH2CH2CH3), 38.3 (CH2, Proβ-C), 43.3 (CH2, Glyα-C), 51.2 (CH2, Proδ-C), 58.1  (CH, Gluα-C), 74.1 (quat., Proα-C), 167.7 (quat., NCO), 177.8 (quat., ProCON), 180.9  (quat., Gluα-CO)及び184.7 (quat., Gluγ-CO); m/z(FAB+) 344.1827 (MH+. C15H26N3O6は、344.1822を必要とする)。
【００７９】
１．１．２８．グリシル−２−アリルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート４．
室温でのジクロロメタン（４．５ｃｍ3）中の保護トリペプチド３３（４１ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．７５ｃｍ3、９．７４ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び反応混合物を、６．５時間攪拌した。溶液を、減圧下で蒸発して、淡黄色の固体としてトリペプチド４（３２ｍｇ、９６％）を形成した。トリペプチド４を、排他的に、ＮＭＲ分析によりトランス配座異性体として存在することを示した：[α]D -7.64 (H2O中のc 0.39); δH (400 MHz; D2O) 1.90-2.02 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.03-2.14 (2H, m, Proγ-HAHB及びGluβ-HAHB), 2.19-2.32 (3H, m, Proβ-H2及びGluβ-HAHB), 2.54 (2H, ddd, J 8.1, 7.3, 2.0, Gluγ-H2), 2.74 (1H, dd, J 13.7及び7.3, CHAHBCH=CH2), 3.12 (1H, dd, J 13.7及び7.3, 0.5 CHAHBCH=CH2), 3.48-3.55 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.72-3.77 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.98 (1H, d, J 16.7, Glyα-HAHB), 4.10 (1H, d, J 16.7, Glyα-HAHB), 4.46 (1H, dd, J 4.9及び9.5, Gluα-H) 5.20-5.26 (2H, m, CH=CH2)及び5.73-5.82 (1H, m, CH=CH2); δC (100 MHz; D2O) 25.4 (CH2, Proγ-C), 28.1 (CH2, Gluβ-C), 32.7 (CH2, Gluγ-C), 38.1 (CH2, Proβ-C), 39.1 (CH2, CH2CH=CH2), 43.3 (CH2, Glyα-C), 51.0 (CH2, Proδ-C), 55.1 (CH, Gluα-C), 73.2 (quat., Proα-C), 120.3 (quat., CF3), 122.6 (CH2, CH=CH2), 134.4 (CH, CH=CH2), 165.4 (quat., CF3CO2), 167.5 (quat., GlyCO), 177.5 (quat., ProCON), 178.0 (quat., Glyα-CO)及び179.8 (quat., Gluγ-CO); m/z(EI+) 342.1653 (M+-CF3CO2. C15H24N3O6は、342.1665を必要とする)。
【００８０】
１．１．２９．グリシル−Ｌ−２−ベンジルプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート５．
室温でのジクロロメタン（４ｃｍ3）中の保護トリペプチド３４（９８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．７５ｃｍ3）を滴下で添加し及び反応混合物を、３．５時間攪拌した。溶液を、減圧下で蒸発して、吸湿性の無色の固体としてトリペプチド５（８２ｍｇ、１００％）を得た。トリペプチド５を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の９０：１０のトランス：シス混合物であることを示した（比を、δ４．５１及び４．３３で二重の二重項及びマルチプレットの関連強度から測定し、個々に、大きい及び小さい配座異性体のグルα−Ｈプロトンに与えた: mp 73-82 °C; [α]D +41.0 (MeOH中のc 1.61); δH (300 MHz; D2O) 1.27-1.39 (1H, m, Proγ-HAHB), 1.68-1.83 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.07-2.42 (4H, m, Proβ-H2 及びGluβ-H2), 2.57 (2H, t, J 7.1, Gluγ-H2), 2.82-2.92 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.24 (1H, d, J 13.3, PhCHAHB), 3.50-3.59 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.70 (1H, d, J 13.3, PhCHAHB), 3.91 (1H, d, J 16.7, Glyα-HAHB), 4.09 (1H, d, J 16.7, Glyα-HAHB), 4.33* (0.1H, m, Gluα-H),  4.51 (0.9H, dd, Ｊ 4.8及び9.6, Gluα-H)及び7.21-7.44 (5H, m, PhH); δC (100 MHz; D2O) 25.0 (CH2, Proγ-C), 27.9 (CH2, Gluβ-C), 32.5 (CH2, Gluγ-C), 37.7 (CH2, Proβ-C), 39.2 (CH2, PhCH2), 43.5 (CH2, Glyα-C), 50.6 (CH2, Proδ-C), 54.9 (CH, Gluα-C), 56.0* (CH, Gluα-C), 73.8 (quat., Proα-C), 117.0 (quat., CF3), 129.6 (CH, Ph), 131.1 (CH, Ph), 132.9 (CH, Ph), 138.3 (quat., Ph), 165.4 (quat., CF3CO2), 167.7 (quat., GlyCO), 177.2 (quat., ProCON), 178.0 (quat., Gluα-CO)及び179.7 (quat., Gluγ-CO); m/z(FAB+) 392.1817 (M+-CF3CO2. C19H26N3O6は、392.1822を必要とする)。
【００８１】
１．１．３０．ジベンジル（２Ｓ,５'Ｒ,８'Ｒ）− 及び（２Ｓ,５'Ｒ,８'Ｓ）−［１'−（２''−ベンジルオキシカルボニルアミノ−アセチル）−８'−ヒドロキシ−６'−オキソ−１',７’−ジアザスピロ［４．４］非−７’−イル］−１，５−ペンタンジオエート(pentanedioate)３８．
アルケン３２（９６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン−メタノール（６ｃｍ3、１：１）中で溶解し及びその溶液を、−７８℃に冷却した。オゾンのゆっくりとした流れを、溶液を１５分間、次いで、Ｏ2を通して泡立てて、過度のオゾンを除去した。トリフェニルホスフィン（５７．５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、添加し及び得られた混合物を、激しく、２４時間攪拌し、次いで、少量のシリカを、反応混合物（アルデヒド３７を含有する）に添加し及び溶剤を、減圧下で除去した。得られた残りを、フラッシュカラムクロマトグラフィ（１００％酢酸エチル）により精製して、ヒドロキシスピロラクタム３８（６１ｍｇ、６３％）を淡黄油として提供した。ヒドロキシスピロラクタム３８を、1Ｈ  ＮＭＲ分析によりジアステレオマーの７：３の混合物であることを示した。比を、δ  ４．７６及び４．７９でマルチプレット及びδ  ５．００で二重の二十項の関連強度から測定し、大きい及び小さい異性体の２−Ｈプロトンに与え、及び異性体は、分離できないものである：[α]D -44.4 (MeOH中のc 0.90); νmax (フィルム)/cm-1 3410, 3064, 3034, 2953, 2881, 2083, 1718, 1649, 1498, 1454, 1332, 1267, 1215, 1170, 1121, 1082, 1048, 1028, 1003, 984, 909, 776, 736及び698; δH (400 MHz; CDCl3) 1.74-1.77* (0.3H, m, 9'-HAHB), 1.93-2.04 (1.3H, m, 9'-HAHB及び3'-HA*HB), 2.11-2.39 [4.4H, m, 4'-HAHB, 3'-HAHB, 3-HAHB及び3-HABH (大きい)], 2.42-2.66 (3.3H, m, 3-HAHB*, 4-H2及び4'-HAHB), 2.76 (0.7H, dd, J 12.9及び6.1, 9'-HAHB), 3.46-3.58 (2H, m, 2'-H2), 3.80-3.85* (0.3H, obsc., 2''-HAHB), 3.87 (0.7H, dd, J 17.5及び3.3, 2''-HAHB), 4.02 (0.7H, dd, J 17.5及び5.1, 2''-HAHB), 3.99-4.05* (0.3H, obsc., 2''-HAHB), 4.69 (1H, s, OH), 4.76-4.79* (0.3H, m, 2-H), 5.00 (0.7H, dd, J 10.8及び4.8, 2-H), 5.09-5.21 (6H, m, 3 x OCH2Ph), 5.25* (0.3H, dd, J 12.3及び7.1, 8'-H), 5.42 (0.7H, dd, J 6.0及び2.4, 8'-H), 5.48* (0.3H, m, NH), 5.58-5.59 (0.7H, m, NH)及び7.27-7.39 (15H, m, 3 x Ph); δC (100 MHz; CDCl3) 24.1* (CH2, 3-C), 24.2 (CH2, 3-C), 24.5 (CH2, 3'-C), 25.3* (CH2, 3'-C), 30.2 (CH2, 4'-C), 30.7* (CH2, 4'-C), 37.9 (CH2, 4-C), 39.4 (CH2, 9-C), 39.7* (CH2, 9-C), 43.0* (CH2, 2''-C), 43.7 (CH2, 2''-C), 47.0 (CH2, 2-C), 47.7* (CH2, 2-C), 54.3 (CH, 2'-C), 54.7* (CH, 2'-C), 65.6* (quat., 5-C), 66.2* (CH2, OCH2Ph), 66.4 (CH2, OCH2Ph), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 67.0* (CH2, OCH2Ph), 67.2* (CH2, OC2Ph), 67.3 (CH2, OCH2Ph), 68.1 (quat., 5-C), 77.7 (CH, 8-C), 80.6* (CH, 8-C), 128.05 (CH, Ph), 128.09 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 128.6 (CH, Ph), 128.7 (CH, Ph), 134.5 (quat., Ph), 135.3* (quat., Ph), 135.8 (quat., Ph), 136.0* (quat., Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.1 (quat., NCO2), 166.0 (quat., 1''-C), 167.1* (quat., 1''-C), 170.1* (quat., 1'-C), 172.5 (quat., 1'-C), 172.7* (quat., 5'-C), 173.6 (quat., 5'-C), 173.8* (quat., 6-C)及び175.1 (quat., 6-C); m/z(FAB+) 658.2749 (MH+. C36H40N3O9は、658.2765を必要とする)。
【００８２】
１．１．３１．ジベンジル（２Ｓ，５’Ｒ）−［１’−（２”−ベンジルオキシカルボニルアミノ−アセチル）−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］非−７’−イル］−１，５−ペンタンジオエート３９．
室温でのトリフルオロ酢酸−トリエチルシラン−ジクロロメタン（１．０ｃｍ3、１：１：１）中のヒドロキシスピロラクタム３８（３３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液を、４５分間攪拌し、次いで、真空で、濃縮して、フラッシュカラムクロマトグラフィ（１００％酢酸エチル）により精製された不透明な白色油を得て、スピロラクタム３９（３１ｍｇ、９６％）を、無色の油として提供した：[α]D -18.0 (CH2Cl2中のc 0.67); νmax (フィルム)/cm-1 3583, 3412, 3032, 2952, 1734, 1654, 1497, 1454, 1432, 1289, 1259, 1215, 1171, 1048, 982, 738及び698; δH (300 MHz; CDCl3) 1.76-2.19 (6H, m, 9'-HAHB, 4'-H2, 3'-HAHB及び3-H2), 2.31-2.63 (4H, m, 9'-HAHB, 3'-HAHB及び4-H2), 3.31 (1H, dd, J 16.8及び8.1, 8'-HAHB), 3.40-3.47 (1H, m, 8'-HAHB), 3.51-3.55 (2H, m, 2'-H2), 3.86 (1H, dd, J 17.1及び3.3, 2''-HAHB), 4.05 (1H, dd, J 17.1及び5.4, 2''-HAHB), 4.90 (1H, dd, J 11.3及び4.5, 2-H), 5.07-5.18 (6H, m, 3 x OCH2Ph), 5.63 (1H, br s, N-H)及び7.27-7.34 (15H, m, 3 x Ph); δC (75 MHz; CDCl3) 23.4 (CH2, 3'-C), 24.0 (CH2, 3-C), 29.8 (CH2, 9'-C), 30.4 (CH2, 4-C), 36.2 (CH2, 4'-C), 39.8 (CH2, 8'-C), 43.7 (CH2, 2''-C), 47.1 (CH2, 2'-C), 53.8 (CH, 2-C), 66.3 (CH2, OCH2Ph), 66.9 (CH2, OCH2Ph), 67.2 (CH2, OCH2Ph), 68.2 (quat., 5-C), 128.0 (CH, Ph), 128.05 (CH, Ph), 128.1 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.49 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 128.7 (CH, Ph), 135.2 (quat., Ph), 136.0 (quat., Ph), 136.5 (quat., Ph), 156.2 (quat., NCO2), 166.1 (quat., 1''-C), 170.1 (quat., 1-C), 172.7 (quat., 5-C)及び174.4 (quat., 6'-C); m/z(FAB+) 642.2802 (MH+. C36H40N3O8は、642.2815を必要とする)。
【００８３】
１．１．３１．（２Ｓ，５’Ｒ）−［１’−（２”−アミノ−アセチル）−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］非−７’−イル］−１，５−ペンタン二酸３５．
８８：１２のメタノール−水（６．６ｃｍ3）中の保護スピロラクタム３９（３０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウム（９．６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を、水素の雰囲気下で、室温で攪拌し、光から保護した（１８時間）。反応混合物を、セリット（登録商標）パッドを通して、７５：２５のメタノール−水（３０ｃｍ3）でろ過し、及びろ液を、減圧下で、乾燥するまで濃縮して、逆相Ｃ１８フラッシュカラムクロマトグラフィ（Ｈ2Ｏ）により精製された黄色固体を得て、スピロラクタム３５（１２ｍｇ、７８％）を、無色の固体として提供した：mp 238-239 °C (dec.); [α]D -23.5 [MeOH-H2O (1:1)中のc 1.15]; δH (400 MHz; D2O) 1.97-2.61 (10H, m, 9'-H2, 4'-H2, 3'-H2, 3-H2及び4-H2), 3.44-3.78 (4H, br m, 8'-H2及び2'-H2) 3.81-4.12 (2H, br m, 2''-H2)及び4.41 (1H, m, 2-H); δC (100 MHz; D2O) 25.8 (CH2, 3'-C), 27.8 (CH2, 3-C), 31.4 (CH2, 9'-C), 37.3 (2 x CH2, 4'-C及び4-C), 43.1 (2 x CH2, 8'-C及び2''-C), 50.1 (CH2, 2'-C), 60.2 (CH, 2-C), 72.5 (quat., 5'-C), 173.6 (quat., 1''-C), 178.9 (quat., 6'-C) 179.1 (quat., 1-C)及び184.9 (quat., 5-C); m/z(FAB+) 328.1521 (MH+. C14H21N3O6は、328.1509を必要とする)。
【００８４】
１．１．３２．（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｒ）−及び（２Ｓ，５’Ｒ，８’Ｓ）−［１’−（２”−アミノ−アセチル）−８’−ヒドロキシ−６’−オキソ−１’，７’−ジアザスピロ［４．４］非−７’−イル］−１，５−ペンタン二酸３６．
８８：１２のメタノール−水（５．８ｃｍ3）中の保護ヒドロキシスピロラクタム３８（２７ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウム（８．４ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）の混合物を、水素の雰囲気下で、室温で攪拌し、光から保護した（１８時間）。反応混合物を、セリット（登録商標）パッドを通して、７５：２５のメタノール−水（３０ｃｍ3）でろ過し、及びろ液を、減圧下で、乾燥するまで濃縮して、スピロラクタム３６（１４ｍｇ、９９％）を無色の固体として提供した。スピロラクタム３６を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により２つのジアステレオマーの７：３の混合物であることを示した（比を、δ  ４．４７及び４．５３の二重の二重項の関連強度から測定し、大きい及び小さい異性体の２−Ｈに、個々に与えた：[α]D +0.86 [MeOH-H2O (1:1)中のc 0.35]; δH (400 MHz; D2O) 2.10-2.46 (9H, m, 9'-HAHB, 4'-H2, 3'-H2, 3-H2及び4-H2), 2.65* (0.3H, dd, J 13.8及び7.0, 9'-HAHB), 2.75 (0.7H, dd, J 13.6及び6.2, 9'-HAHB), 3.55-3.61 (1H, m, 2'-HAHB), 3.69-3.73 (1H, m, 2'-HAHB), 3.94-4.09 (2H, d, J 16.5, 2''-H2), 4.47* (0.3H, dd, J 9.9及び5.8, 2-H), 4.53 (0.7H, dd, J 10.4及び5.0, 2-H), 5.49* (0.3H, dd, J 6.8及び5.1, 8'-H)及び5.59 (0.7H, d, J 6.1, 8'-H); δC (100 MHz; D2O) 26.0* (CH2, 3'-C), 26.1 (CH2, 3'-C), 27.4 (CH2, 3-C), 29.6* (CH2, 3-C), 39.3* (CH2, 4-C), 40.1 (CH2, 4-C), 40.7 (2 x CH2, 4'-C及び9'-C), 42.2* (CH2, 9'-C), 43.1 (CH2, 2''-C), 49.8 (CH2, 2'-C), 49.9* (CH2, 2'-C), 60.2* (CH, 2-C), 60.7 (CH, 2-C), 70.1* (quat., 5'-C), 70.9 (quat., 5'-C), 80.6 (CH, 8'-C), 83.2* (CH, 8'-C), 166.9 (quat., 1''-C), 167.1* (quat., 1''-C), 178.2* (quat., 6'-C), 179.7 (2 x quat., 1-C及び6'-C), 180.4 (quat., 1-C), 182.5 (quat., 5-C)及び182.8* (quat., 5-C); m/z(FAB+) 344.1467 (MH+. C14H22N3O7は、344.1458を必要とする)。
【００８５】
１．１．３３．メチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリナート４３．
(Magaard et al. Tetrahedron Lett.1993,34,381)ニトリル４４(Magaard et al.Tetrahedron Lett.1993,34,381;Bonnet et al.J.Chem.Soc.1959,34,381)(2g,14.3mmol)を、３２％塩酸（６ｃｍ3）において溶解し及び５０℃に５時間加熱した。溶剤の蒸発は、メタノール：水（１：１、３０ｃｍ3）において溶解され及び４４ｐ．ｓ．ｉの水素の下、２０時間、活性炭上の１０％パラジウムで水素化された残りを提供した。触媒を、セリット（登録商標）を通すろ過により除去し及び溶剤を、真空で除去して、Ｎ−メチル−５−メチルプロリン*４５の６：４の混合物、及び所望な５，５−ジメチルプロリン４６を得た：δH  (300 MHz; D2O) 1.34-1.40 (8.6H, m, 4 x CH3), 1.67-1.74 (1.3H, m) 1.91 (1.6H, t, J 12.2), 2.07-2.32 (3.5H, m), 2.40-2.54 (2H, m), 2.90* (3.6H, s, N-CH3), 3.45-3.53 (1.3H, m), 4.23* (1.3H, dd, J 9.7及び7.5, Proα-H)及び4.47 (1H, d, J 8.4, Proα-H); δC  (75 MHz; D2O)  14.6* (CH3), 24.5 (CH3), 24.7 (CH3), 25.9* (CH2), 27.2 (CH2), 29.9* (CH2), 37.0 (CH2), 39.1* (CH3, N-CH3), 58.9* (CH, Proδ-C), 67.1 (quat., Proδ-C), 67.6* (CH, Proα-C), 69.2 (CH, Proα-C), 171.5* (quat., Proα-CO)及び172.4 (quat., Proα-CO)。
【００８６】
混合物を、続いて、乾燥メタノール（６０ｃｍ3）において溶解し、０℃に冷却し及び塩化チオニル（４．２ｃｍ3、５７．２ｍｍｏｌ）を、５分間にわたり滴下で添加した。反応物を、室温に温め及び一晩攪拌した。溶剤を除去し、残りを、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及びクロロホルムで抽出された製品において溶解して、乾燥ジクロロメタン（２０ｃｍ3）において溶解された非分離メチルエステル（１．５３ｇ）の混合物を生産した。Ｎ−メチルモルホリン（１．５６ｃｍ3、１４．２ｍｍｏｌ）及びジ−ｔ−ブチルジカルボネート（３．１ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）を添加し及び反応物を、還流で、窒素の下、４８時間加熱した。室温に冷却後、反応混合物を、水、１Ｍ水性塩酸（２×３０ｃｍ3）、塩水で洗浄し及び乾燥した（ＭｇＳＯ4）。水性層を、真空で濃縮して、メチルＮ−メチル−５−メチルプロリネート４７（１．０９３ｇ、４２％、４工程）を、その塩酸塩として得た。これを、飽和炭酸水素ナトリムで中性にし及びクロマトグラフィ（シリカゲル、４：１、ジクロロメタン：酢酸エチル）により精製した: δH  (200 MHz; CDCl3; Me4Si) 1.06 (3H, d, J 6.0, Proδ-CH3), 1.35-1.55 (1H, m), 1.70-2.01 (3H, m), 2.17-2.27 (1H, m), 2.24 (3H, s, N-CH3), 2.90 (1H, t, J 7.8, Proα-H)及び3.65 (3H, s, 2-CO2CH3); δC  (75 MHz; CDCl3)  18.2 (CH3, Proδ-CH3), 26.4 (CH2), 31.3 (CH2), 38.9 (CH3, N-CH3), 51.3 (CH3, Proα-CO2CH3) 61.8 (CH, Proδ-C), 68.4 (CH, Proα-C)及び173.6 (quat., Proα-CO); m/z (CI+) 158.1176 (MH+. C8H16NO2は、158.1181を必要とする);有機層を、真空で濃縮し及びクロマトグラフィ（シリカゲル、ジクロロメタン次いでクロロホルム）により精製して、メチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリナート４３（０．７９５ｇ、２２％、４工程）を、黄色油として得た。この化合物は、エピマーの混合物（５５：４５）として、ほとんど排他的には、シス配座異性体として存在した: δH  (300 MHz; CDCl3) 1.26-1.53 [15H, m, C(CH3)2, C(CH3)3], 1.60-1.90 (4H, m, Proβ-H2及びProγ-H2), 3.66 (3H, CO2CH3), 4.24 (0.55H, dd J  8.9及び3.5, Proα-H) 及び 4.35 (0.45H, dd J  8.5 及び 2.6, Proα-H);  δC  (75 MHz; CDCl3)  25.7 (CH3, Proδ-CH3), 25.9 (CH2, Proγ-C), 26.0 (CH3, Proδ-CH3), 26.5 (CH2, Proγ-C), 26.6 (CH3, Proδ-CH3), 27.2 (CH3, Proδ-CH3), 28.2 [CH3, C(CH3)3], 28.3 [CH3, C(CH3)3], 39.8 (CH2, Proβ-C), 40.7 (CH2, Proβ-C), 51.6 (CH3, Proα-CO2CH3), 51.7 (CH3, Proα-CO2CH3), 60.5 (quat., Proδ-C), 61.16 (CH, Proα-C), 61.2 (CH, Proα-C), 61.3 (quat., Proδ-C), 79.1 [quat., C(CH3)3], 79.6 [quat., C(CH3)3], 152.4 (quat., NCO2), 154.0 (quat., NCO2), 173.4 (quat., Proα-CO) 及び 173.8 (quat., Proα-CO); m/z (EI+) 257.1624 (M+. C13H23NO4は、257.1627を必要とする)。
【００８７】
１．１．３４．Ｎ−ｔ−ブチルオキシグリシル−Ｌ−チアプロリン５２．
クロロギ酸イソ−ブチル（０．１５４ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（６ｃｍ3）中のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシン１７及びトリエチルアミン（０．２１５ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、０℃で添加した。白色沈殿物が観察され、冷却槽を除去し及び混合物を、室温で、１０分間攪拌した。水（２ｃｍ3）中の塩酸４−チアプロリン４０（上のペレグリニ(pellegrini)（０．１５０ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．２１５ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の溶液を、添加し及び得られた溶液を１時間攪拌した。混合物を、２  Ｍ  ＨＣｌで酸性にし及び酢酸エチルで抽出した。組み合わせられた有機抽出物を、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し及び真空で濃縮して、フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル：酢酸２：１：０．３次いで１：１：０．２）により精製された油（０．３９ｇ）を生産して、ジペプチド５２（０．２６４ｇ、８１％）を、吸湿性の白色発泡体として得た。５２を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の６２：３８のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ５．６５及び５．７５でグリＮ−Ｈプロトンの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体に、個々に、与えた： [α]D -93.5 (CH2Cl2中のc 0.25); δH (400 MHz; CDCl3) 1.43* [3.4H, s, C(CH3)3], 1.44 [5.6H, s, C(CH3)3], 3.31 (1.24H, d, J 5.1, 3-HAHB), 3.37* (0.38H, dd, J 11.8 及び 5.2, 3-HAHB), 3.49* (0.38H, dd, J 11.7 及び 1.4, 3-HAHB), 3.90-4.20 (2H, m, Glyα-H2), 4.55-4.62 (1.62H, m 5-H2, *5-HAHB), 4.79* (0.38H, d, J 9.7, 5-HAHB), 4.86* (0.38H, d, J 5.7, 2-H), 5.11 (0.62H, t, J 4.9, 2-H), 5.65 (0.62H, br s, GlyN-H) 及び 5.75* (0.38H, br s, GlyN-H);  δC (100 MHz; CDCl3) 28.2 [CH3, C(CH3)3], 32.3 (CH2, 3-C), 34.4* (CH2, 3-C), 43.1 (CH2, Glyα-C), 43.4* (CH2, Glyα-C), 47.6 (CH2, 5-C), 48.9* (CH2, 5-C), 60.7* (CH, 2-C), 61.6 (CH, 2-C), 80.3* [quat., C(CH3)3], 80.7 [quat., C(CH3)3], 156.1 (quat., NCO2), 156.4* (quat., NCO2), 167.8 (quat., GlyCO), 168.0* (quat., GlyCO), 171.6 (quat., 2-CO) 及び 172.0* (quat., 2-CO); m/z(EI+) 290.0938 (M+. C11H18N2O5Sは、290.0936を必要とする)。
【００８８】
１．１．３５．ジ−ｔ−ブチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−４−チオプロリル−Ｌ−グルタミン酸塩５６．
エチルクロロホマート(ethyl chlorofomate)（０．０４８ｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３ｃｍ3）中の酸５２（０．１２９ｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０５０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で滴下で添加した。その溶液を、３５分間、０℃で攪拌し次いで、ジクロロメタン（３ｃｍ3）中のグルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸塩２９（０．１３２ｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０５０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、添加した。混合物を、一晩攪拌し、引き続き、２Ｍ水性塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し及び溶剤を除去した。フラッシュクロマトグラフィ（ジクロロメタン：酢酸エチル、３：１）による精製は、保護トリペプチド５６（０．１２８ｇ、５４％）を、無色の固体として提供した。５６を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の６６：３４のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ７．２０及び７．４３でチアプロＮ−Ｈプロトンの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体に、個々に、与えた）: mp 99-100 ℃; [α]D -70 (CH2Cl2中のc 0.6);  δH (400 MHz; CDCl3) 1.25-1.45 [27H, m, C(CH3)3], 1.80-1.95 (1H, m, Gluβ-HAHB), 1.97-2.14 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.18-2.35 (2H, m, Gluγ-H2), 3.14 (0.66H, dd, J 11.2 及び 7.0, 3-HAHB), 3.22-3.35* (0.34H, br m, 3-HAHB), 3.38 (1H, dd, J 12.3 及び 3.6, 3-HAHB), 3.85-4.05 (2H, m, Glyα-H2), 4.38 (1H, br t, J 4.8, Gluα-H), 4.49-4.57 (1.66H, 5-HAHB 及び *5-HAHB), 4.69-4.77* (0.72H, *5-HAHB 及び *2-H), 4.98 (0.66H, br s, 2-H), 5.51 (1H, br s, GlyN-H), 7.20 (0.66H, d, J 7.2, thiaProN-H), 7.20* (0.34H, br s, thiaProN-H);  δC (100 MHz; CDCl3) 26.4* (CH2, Gluβ-C), 27.1 (CH2, Gluβ-C), 27.8 [CH3, C(CH3)3], 27.9 [CH3, C(CH3)3], 28.2 [CH3, C(CH3)3], 31.3 (CH2, Gluγ-C), 32.2 (CH2, 3-C), 35.4* (CH2, 3-C), 43.2 (CH2, Glyα-C), 43.5* (CH2, Glyα-C), 48.2 (CH2, 5-C), 49.7* (CH2, 5-C), 52.5 (CH, Gluα-C), 62.3* (CH, 2-C), 62.5 (CH, 2-C), 79.7 [quat., C(CH3)3], 80.6 [quat., C(CH3)3], 80.9* [quat., C(CH3)3], 82.1 [quat., C(CH3)3], 82.2* [quat., C(CH3)3], 155.7 (quat., NCO2), 167.9 (quat., GlyCO), 168.6* (quat., 2-CO), 168.9 (quat., 2-CO), 170.4 (quat., Gluα-CO) 及び 172.4 (quat., Gluγ-CO);  m/z(FAB+) 532.2628 (MH+. C24H42N3O8Sは、532.2693を必要とする)。
【００８９】
１．１．３６．グリシル−Ｌ−４−チアプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロアセテート４８．
トリフルオロ酢酸（１ｃｍ3）を、ジクロロメタン（３ｃｍ3）中の保護トリペプチド５６（０．１２８ｇ、０．２４１）及びトリエチルシラン（０．０８４ｇ、０．７２３ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に添加した。得られた溶液を、４時間、室温で攪拌し及び揮発性を真空で除去した。クロマトグラフィ（逆相Ｃ18、水、１０−２０％アセトニトリル：水）及び凍結乾燥による残りの精製により、４８（０．０６６ｇ、６１％）を吸湿性のオフホワイトの固体として得た。４８を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８０：２０のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ３．８０及び３．５８でグリαプロトンの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体に、個々に、与えた）：吸湿性のサンプルに起因する非ｍｐ；[α]D -88.6 (H2O中のc 0.203); δH  (400 MHz; D2O) 1.73-1.82 (1H, m, Gluβ-HAHB), 1.96-2.06 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.28 (2H, t, J 6.9, Gluγ-H2), 2.96 (0.8H, dd, J 12.4 及び 3.7, 3-HAHB), 3.13* (0.2H, d, 12.2, 3-HAHB), 3.20 (0.8H, dd, J 12.4 及び 7.3, 3-HAHB), 3.27* (0.2H, dd, J 12.4 及び 6.9, 3-HAHB), 3.58 (0.2H, d, J 16.4, Glyα-HAHB), 3.80-3.92 (1.8H, m, Glyα-H2 及び *Glyα-HAHB), 4.25 (0.8H, dd, 9.4 及び 4.8, Gluα-H), 4.30* (0.2H, dd, 10.0 及び 4.8, Gluα-H), 4.35-4.49 (2H, m, 5-H2) 及び 4.67 (1H, dd, J 6.9 及び 3.8, 2-H);  δC (100 MHz; CDCl3) 24.8* (CH2, Gluβ-C), 25.3 (CH2, Gluβ-C), 29.5 (CH2, Gluγ-C), 29.8* (CH2, Gluγ-C), 32.8 (CH2, 3-C), 34.9* (CH2, 3-C), 40.3 (CH2, Glyα-C), 40.5* (CH2, Glyα-C), 48.4 (CH2, 5-C), 49.6* (CH2, 5-C), 51.7 (CH, Gluα-C), 51.9* (CH, Gluα-C), 61.6* (CH, 2-C), 62.6 (CH, 2-C), 115.7(quat., q, J 290.7, CF3CO2H), 161.9 (quat., q, J 36.2, CF3CO2H), 165.0 (quat., GlyCO), 165.6* (quat., GlyCO), 171.0* (quat., 2-CO), 171.5 (quat., 2-CO), 174.0* (quat., Gluα-CO), 174.1* (quat., Gluα-CO)  及び 176.7 (quat., Gluγ-CO) ; m/z(FAB+) 320.0921 [M(遊離塩基)H+. C11H18N3O6Sは、320.0916を必要とする]。
【００９０】
１．１．３７．Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリン５３．
窒素下の乾燥ジメチルホルムアミド（３５ｃｍ3）中の５，５−ジメチル−４−チアプロリン塩酸塩４１の攪拌された溶液(Lewis et al.J.Med.Chem.1978,21,1071;Kemp et al.J.Org.Chem.1989,54,3640) （０．３５４ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）に、ジイソプロピルエチルアミン（０．５９４ｃｍ3、１．９ｍｍｏｌ）及び酸フッ化物５１(Bertho et al.Tetrahedron Lett.1991,32,1303;Carpino et al.J.Org.Chem.1991,56,2611)（０，３４１ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を、１８時間攪拌し、溶剤を、真空で除去し及び残りを、酢酸エチルにおいて再溶解し、１０％クエン酸溶液、塩水で洗浄し及び乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶剤を、除去し及び残りを、フラッシュクロマトグラフィ（４：１：０．５、酢酸エチル：ヘキサン：酢酸、次いで、３：１．０．４）により精製して、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシン１６（１４％、1Ｈ  ＮＭＲ）で汚染されている所望な化合物を得た。この混合物を、メタノールにおいて溶解し、塩化トリメチルシリル（０．０７ｃｍ3）を添加し及びその溶液を、一晩攪拌した。真空での溶剤の除去及び続くフラッシュクロマトグラフィ（３：１、酢酸エチル：ヘキサン［Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンメチルエステルを除去するための］次いで、３：１．０．４の酢酸エチル：ヘキサン：酢酸）により、ジペプチド５３（反応した酸フッ化物の量をベースとする、０．３２０ｇ、６５％）を、白色固体として得た。この化合物は、純粋に、シス配座異性体として存在した：ｍｐ１３０−１３２℃; [α]D  -51.7 (ジクロロメタン中のc 0.116);  δH  (300 MHz; CDCl3)  1.85 (3H, s, ΨPδ-CH3) 1.91 (3H, s, Pδ-CH3), 3.30 (1H, dd, J 12.1 及び 5.6, Pβ-HAHB), 3.40 (1H, d, J 12.1, Pβ-HAHB), 3.87 (1H, dd, J 16.6 及び 3.7, Glyα-HAHB), 4.09 (1H, dd, Ｊ16.6 及び 3.7, Glyα-HAHB), 4.82 (1H, d, J 5.2, Pα-H), 5.13 (2H, s, OCH2Ph), 6.10 (1H, br t, J 3.8, GlyN-H) 及び 7.29-7.39 (5H, m, Ph); δC (75 MHz; CDCl3)  27.0 (CH3, Pδ-CH3) 29.4 (CH3, Pδ-CH3), 31.6 (CH2, Pβ-C), 44.8 (CH2, Glyα-C), 64.3 (CH, Pα-C), 67.3 (CH2, OCH2Ph), 74.2 (quat., Pδ-C), 127.9 (CH, Ph), 128.1 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 135.8 (quat., Ph), 156.8 (quat., NCO2), 166.6 (quat., GlyCO) 及び 172.0 (quat., Pα-CO); m/z(EI+) 352.1088 (M+. C16H20N2O5Sは、352.1093を必要とする)。
ΨＰは、問題になっているプロリン類縁体部に関する。
【００９１】
１．１．３８．ジベンジルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸塩５７．
乾燥ジクロロメタン（４０ｃｍ3）中のジペプチド５３（０．３９８ｇ、１．１１ｍｏｌ）、Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホナート２８（０．６７０ｇ、１．３４ｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．５１ｃｍ3、２．９０ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、一部におけるビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．３７０ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を、７時間、窒素下で攪拌し及び溶剤を除去した。残りを、酢酸エチルにおいて懸濁し、１０％クエン酸溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、食塩で洗浄し、及び乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶剤の除去及び続くクロマトグラフィ（２：１、ヘキサン：酢酸エチル、次いで、１：１）により、保護トリペプチド５７（０．５ｇ、６８％）を、無色油として得た。保護トリペプチド５７を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の９０：１０のシス：トランスの混合物であることを示した（比を、δ５．６９及び５．８０で広範囲の一重項の強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグリＮ−Ｈプロトンに、個々に、与えた）: [α]D  -35.6 (ジクロロメタン中のc 0.399);  δH  (300 MHz; CDCl3)  1.85 (3H, Pδ-CH3) 1.97 (3H, Pδ-CH3), 2.08-2.15 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.29-2.38 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.47 (2H, t, J 5.4, Gluγ-H2), 3.32 (2H, m, Pβ-H2), 3.85 (1H, d, Ｊ 16.6, Glyα-HAHB), 3.91 (1H, dd, Ｊ 17.0 及び 8.0, Glyα-HAHB), 4.72 (2H, br s, Pα-H, Gluα-H), 5.20-5.08 (6H, m, 3 x OCH2Ph), 5.69 (0.9H, br s, GlyNH), 5.80* (0.1H, br s, GlyNH) 及び 7.33-7.39 (15H, m, Ph); δC (75 MHz; CDCl3)  26.3 (CH2, Gluβ-C), 26.45* (CH2, Gluβ-C), 27.21* (CH3, Pδ-CH3), 27.43 (CH3, Pδ-CH3), 28.4 (CH3, Pδ-CH3), 29.91 (CH2, Gluγ-C), 30.09* (CH2, Gluγ-C), 32.3 (CH2, Pβ-C), 44.7 (CH2, Glyα-C), 45.1* (CH2, Glyα-C), 52.1 (CH, Gluα-C), 52.3* (CH, Gluα-C), 65.8 (CH, Pα-H), 66.4 (CH2, OCH2Ph), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 67.4 (CH2, OCH2Ph), 74.5 (quat., Pδ-C), 127.8 (CH, Ph), 127.9 (CH, Ph), 128.1, (CH, Ph), 128.14 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 134.8 (quat., Ph), 135.5 (quat., Ph), 136.2 (quat., Ph), 156.4 (quat., NCO2), 167.1 (quat., GlyCO), 169.6 (quat., P-CON), 170.9 (quat., Gluα-CO) 及び 172.7 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 662.2536 (MH+. C35H40N3O8Sは、662.2536を必要とする)。
【００９２】
１．１．３９．グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸４９．
保護トリペプチド５７（０．４４ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を、メタノール：水（４：１、５０ｃｍ3）において溶解し、ボトル(Parr bottle)に置いた。容器を、窒素で洗い流し、活性炭上の１０％パラジウム（７０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）を、添加し及び混合物を、水素で４０ｐ．ｓ．ｉに加圧し及び３時間振動した。更なる活性炭上の１０％パラジウム（７０ｍｇ）を添加し及び反応を２１時間続けた。反応混合物を、セリット（登録商標）を通してろ過し、メタノール：水（４：１）で洗浄し及び溶剤を除去して、ｔ．ｌ．ｃにより油を生産し及び1Ｈ  ＮＭＲ分析は、所望な製品及び脱ベンジル化の量を変化することを含有する製品を含有した。混合物を、水において溶解し及び水、次いで、１０％メタノール：水で溶出するＣ18カラムを通した。関連留分を組み合わせ、溶剤を除去し及び残りを、乾燥エーテルで粉砕して、トリペプチド４９（０．１１０ｇ、４８％）を、白色固体として生産した。トリペプチド４９を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８５：１５のシス：トランスの混合物であることを示した（比を、δ４．９５及び５．０２で二重項の強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のＰα−Ｈプロトンに、個々に、与えた）：ｍｐ１４５−１５０℃；C;  [α]D  -75 (水中のc 0.064);  δH  (300 MHz; D2O)  1.84 (2.55H, s, Pδ-CH3). 1.90* (0.45H, s, Pδ-CH3) 1.93 (3H, s, Pδ-CH3), 1.96-2.05 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.18-2.27 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.42 (2H, t, J  7.5, Gluγ-H2), 3.36 (1H, d, J  12.7, Pβ-HAHB) 3.59 (1H, dd, J  12.8 及び 6.4, Pβ-HAHB),, 3.70 (1H, d, J  16.2, Glyα-HAHB), 4.01 (1H, d, J  16.3, Glyα-CHAHB), 4.23* (0.15H, dd, J  9.1 及び 4.9, Gluα-H), 4.32 (0.85H, dd, J  9.1 及び 4.9, Gluα-H), 4.95 (0.85H, d, J  6.2, Pα-H) 及び 5.02* (0.15H, d, J  6.0, Pα-H); δC (75 MHz; D2O)  26.1* (CH3, Pδ-CH3), 26.3 (CH3, Pδ-CH3),  26.56 (CH2, Gluβ-C), 27.6 (CH3, Pδ-CH3), 27.9* (CH3, Pδ-CH3), 31.1 (CH2, Gluγ-C), 30.3* (CH2, Gluγ-C), 32.1 (CH2, Pβ-C), 32.3* (CH2, Pβ-C), 41.1* (CH2, Glyα-C), 41.6 (CH2, Glyα-C), 54.4 (CH, Gluα-C), 55.0* (CH, Gluα-C), 65.3* (CH, Pα-H), 65.5 (CH, Pα-H), 74.3* (quat., Pδ-C), 74.6 (quat., Pδ-C), 164.4* (quat., GlyCO), 164.6 (quat., GlyCO), 170.5 (quat., P-CON), 170.8* (quat., P-CON), 176.9 (quat., Gluα-CO) 及び 178.3 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 348.1249 (MH+. C12H22N3O6Sは、348.1229を必要とする)。
【００９３】
１．１．４０．メチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリナート５４．
トリフルオロ酢酸（１ｃｍ3）を、ジクロロメタン（６ｃｍ3）中のカルバメート４３（０．５８４ｇ、２．２７ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に添加した。溶液を、２時間攪拌し、その時間の後、揮発性を真空で除去し及びトリフルオロ酢酸の痕跡を、油ポンプにサンプルを、２時間置くことにより除去した。塩を、次いで、ジクロロメタン（２０ｃｍ3）において溶解し及びジイソプロピルエチルアミン（１．３ｃｍ3、７．４９ｍｍｏｌ）、次いで、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシン１７（０．４７７ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．６９１ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）添加した。追加のジクロロメタン（５ｃｍ3）を添加し及びその溶液を、一晩窒素下で攪拌した。溶剤を、次いで、真空で除去し、残りを、酢酸エチルにおいて溶解し、及び引き続き、２Ｍ水性塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し及び乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶剤の除去は、クロマトグラフィ（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル、２：１、次いで、１：１）により精製された油（０．４４０ｇ）を与えて、ジペプチド５４（０．３６８ｇ、５２％）を、無色の油として得た。ジペプチド５４を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８０：２０のシス：トランスの混合物であることを示した（比を、δ４．２８及び４．４６で化学シフトの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のプロα−Ｈプロトンに、個々に、与えた）：δH  (300 MHz; CDCl3) 1.26 (2.4H, s, Proδ-CH3), 1.28 [9H, s, C(CH3)3], 1.31* (0.6H, s, Proδ-CH3), 1.44* (0.6H, s, Proδ-CH3), 1.46 (2.4H, s, Proδ-CH3), 1.59-2.15 (4H, m, Proβ-H2, Proγ-H2), 3.37 (0.8H, dd, J  16.7 及び 3.3, Glyα-HAHB), 3.57* (0.6H, s, Proα-CO2CH3), 3.61 (2.4H, s, Proα-CO2CH3), 3.74 (0.8H, dd, J  16.7 及び 3.3, Glyα-HAHB), 3.84* (0.2H, dd, J  16.9 及び 3.9, Glyα-HAHB), 3.39-4.01* (0.2H, m, Glyα-HAHB), 4.28 (0.8H, d, J  8.3, Proα-H), 4.46* (0.2H, dd, J  8.0 及び 2.2, Proα-H) 及び 5.40 (1H, br s, 1H, GlyNH); δH  (75 MHz; CDCl3)  24.5 (CH3, Proδ-CH3), 25.0* (CH2, Proβ-C), 26.1 (CH3, Proδ-CH3), 26.9* (CH3, Proδ-CH3), 27.2* (CH3, Proδ-CH3), 27.4 (CH2, Proβ-C), 27.9 [CH3, C(CH3)3], 38.9 (CH2, Proγ-C), 41.7* (CH2, Proγ-C), 42.8* (CH2, Glyα-C), 43.1 (CH2, Glyα-C), 51.7* (CH3, Proα-CO2CH3), 52.3 (CH3, Proα-CO2CH3), 60.1 (CH, Proα-C), 60.9* (quat., Proδ-C), 61.7* (CH, Proα-C), 63.8 (CH, Proα-C), 78.0 [quat., C(CH3)3], 155.3 (quat., NCO2), 155.4* (quat., NCO2), 166.5 (quat., GlyCO), 167.7* (quat., GlyCO), 171.9 (quat., Proα-CO) 及び 172.4* (quat., Proα-CO); m/z (CI+) 315.1927 (MH+. C15H27N2O5は、315.1920を必要とする)。
【００９４】
１．１．４１．Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリン５５．
ジオキサン（１２ｃｍ3）中のジペプチド５４（０．３６２ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水性水酸化ナトリウム（５．９１ｃｍ3、５．９１ｍｍｏｌ）を添加し及び混合物を、２１時間攪拌した。反応物を、固体のクエン酸で酸性にし及び製品を、酢酸エチルで抽出した。組み合わせられた有機抽出物を、食塩で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）及び溶剤を、真空で除去して、クロマトグラフィ（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル、２：１、１：１、４：６）により精製された油を生産して、酸５５（０．３２４ｇ、９４％）を、迅速に液体化された白色発泡体として得た。酸５５を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８０：２０のシス：トランスの混合物であることを示した（比を、δ５．８１及び５．６６で広範囲の一重項の強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグリＮ−Ｈプロトンに、個々に、与えた）：δH  (300 MHz; CDCl3) 1.40 (2.4H, s, Proδ-CH3), 1.43 [7.2H, s, C(CH3)3], 1.44* [1.8H, s, C(CH3)3], 1.47* (0.6H, s, Proδ-CH3), 1.58* (0.6H, s, Proδ-CH3), 1.61 (2.4H, s, Proδ-CH3), 1.74-2.33 (4H, m, Proβ-H2, Proγ-H2), 3.37 (0.8H, dd, J  16.7 及び 3.3, Glyα-HAHB), 3.65 (0.8H, dd, J  16.8 及び 3.6, Glyα-HAHB), 3.96 (1H, dd, J  16.9 及び 3.9, Glyα-HAHB, Glyα-HAHB* （部分的に不明瞭な）), 4.21* (0.2H, dd, J  17.0 及び 5.9, Gyα-HAHB), 4.42 (0.8H, d, J  7.2, Proα-H), 4.67* (0.2H, d, J  7.9 Proα-H), 5.66* (0.2H, br s, GlyNH), 5.81 (0.8H, br s, GlyNH) 及び 6.2 (1H, br s, OH);  δH  (75 MHz; CDCl3)  24.8 (CH3, Proδ-CH3), 25.1* (CH2, Proβ-C), 26.3 (CH3, Proδ-CH3), 27.1* (CH3, Proδ-CH3), 27.6* (CH3, Proδ-CH3), 28.0 (CH2, Proβ-C), 28.2 [CH3, C(CH3)3], 39.2 (CH2, Proγ-C), 42.0* (CH2, Proγ-C), 43.0* (CH2, Glyα-C), 43.5 (CH2, Glyα-C), 60.5 (CH, Proα-C), 61.8* (quat., Proδ-C), 62.2* (CH, Proα-C), 64.3 (CH, Proα-C), 79.7* [quat., C(CH3)3], 80.2 [quat., C(CH3)3], 156.0* (quat., NCO2), 156.4 (quat., NCO2), 166.8 (quat., GlyCO), 169.5* (quat., GlyCO), 173.9 (quat., Pro)α-CO) 及び 174.5* (quat., Proα-CO); m/z (CI+) 315.1927 (MH+. C15H27N2O5は、315.1920を必要とする)。
【００９５】
１．１．４２．ジベンジルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸塩５８．
乾燥ジクロロメタン（４０ｃｍ3）中の酸５５（０．２９８ｇ、１ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、引き続き、ジイソプロピルエチルアミン（０．４５３ｃｍ3、２．６ｍｍｏｌ）、Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート２８（０．６４８ｇ、１．３ｍｍｏｌ）及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．３３０ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を、室温で窒素下で一晩攪拌し及び溶剤を除去した。残りを、酢酸エチルにおいて溶解し、１０％水性クエン酸溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、食塩で洗浄し及び乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶剤を、蒸発し及び製品を、クロマトグラフィ（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル、１：１）により精製して、保護トリペプチド５８（０．４０８ｇ、６７％）を、黄色油（プロα−Ｃエピマーの１：１の混合物）として得た。トリペプチド５８を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８５：１５のシス：トランスの混合物であることを示した（比を、δ５．３１−５．３８及び５．４８で化学シフトの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグリ−ＮＨプロトンに、個々に、与えた）：δH (300 MHz; CDCl3)  1.41 [9H, s, C(CH3)3], 1.44 (2.55H, s, Proδ-CH3), 1.52* (0.45H, s, Proδ-CH3), 1.54* (0.45H, s, Proδ-CH3), 1.64 (2.55H, s, Proδ-CH3), 1.67 (2.55H, s, Proδ-CH3), 1.70-2.24 (6H, m, Proβ-H2, Proγ-H2, Gluβ-H2), 2.35-2.45 (2H, m, Gluγ-H2), 3.58-3.69 (0.85H, m, Glyα-HAHB), 3.85 (0.85H, m, Glyα-HAHB), 3.88-3.98* (0.15H, m, Glyα-HAHB), 4.12-4.17* (0.15H, m, Glyα-HAHB), 4.20-4.31 (1H, m, Proα-H), 4.59-4.71 (1H, m, Gluα-H), 5.10-5.22 (m, 4H, 2 x OCH2Ph), 5.31-5.38 (0.85H, m, GlyNH) 及び 5.48* (0.15H, m, GlyNH); δC  (75 MHz; CDCl3)  24.38 (CH3, Proδ-CH3), 24.46 (CH3, Proδ-CH3), 25.1* (CH2, Proβ-C), 25.2* (CH2, Proβ-C), 26.2 (CH2, Gluβ-C), 26.3 (CH2, Gluβ-C), 26.6 (CH3, Proδ-CH3), 26.8* (CH2, Proβ-C), 27.0* (CH3, Proδ-CH3), 27.1* (CH3, Proδ-CH3), 27.9* (CH3, Proδ-CH3), 28.2 [CH3, C(CH3)3], 28.5 (CH2, Proβ-C), 28.8 (CH2, Proβ-C), 30.05* (CH2, Gluγ-C), 30.1* (CH2, Gluγ-C), 30.2 (CH2, Gluγ-C), 30.25 (CH2, Gluγ-C), 38.9 (CH2, Proγ-C), 39.1 (CH2, Proγ-C), 42.4** (CH2, Proγ-C), 43.1* (CH2, Glyα-C), 43.3* (CH2, Glyα-C), 43.5 (CH2, Glyα-C), 43.6 (CH2, Glyα-C), 51.7* (CH, Gluα-C), 52.0 (CH, Gluα-C), 52.1 (CH, Gluα-C), 61.5* (quat., Proδ-C), 61.6* (quat., Proδ-C), 61.9 (CH, Proα-C), 62.0 (CH, Proα-C), 63.0* (CH, Proα-C), 63.05* (CH, Proα-C), 64.3 (quat., Proδ-C), 64.3 (quat., Proδ-C), 66.3* (CH2, OCH2Ph), 66.4* (CH2, OCH2Ph), 66.41 (CH2, OCH2Ph), 66.5 (CH2, OCH2Ph), 67.0* (CH2, OCH2Ph), 67.1* (CH2, OCH2Ph), 67.21 (CH2, OCH2Ph), 67.24 (CH2, OCH2Ph), 79.3 [quat., C(CH3)3], 128.1 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.4* (CH, Ph), 128.43 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 135.03 (quat., Ph), 135.07, (quat., Ph), 153.13* (quat., Ph), 135.18* (quat., Ph), 135.6 (quat., Ph), 135.7* (quat., Ph), 155.8* (quat., NCO2), 155.9 (quat., NCO2), 156.0 (quat., NCO2), 167.6 (quat., GlyCO), 167.7 (quat., GlyCO), 168.8* (quat., GlyCO), 169.3* (quat., GlyCO), 171.1 (quat., ProCON), 171.3* (quat., ProCON), 171.4* (quat., ProCON), 171.6 (quat., Gluα-CO), 171.8 (quat., Gluα-CO), 172.4 (quat., Gluγ-CO), 172.5* (quat., Gluγ-CO) 及び 172.6 (quat., Gluγ-CO); mz/ (EI+) 609.3035 (M+. C33H43N3O8は、609.3050を必要とする)。
【００９６】
１．１．４３．グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸５０．
ジクロロメタン（１０ｃｍ3）中の保護トリペプチド５８の溶液（０．２７６ｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、トリフルオロ酢酸（１ｃｍ3）を添加し及び混合物を、７５分間攪拌した。溶剤を真空で除去し、残りを、飽和炭酸水素ナトリウムにおいて溶解し及び製品を、酢酸エチルで抽出した。組み合わせられた有機層を食塩で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）及び溶剤を除去して、メタノール：水（４：１、５０ｃｍ3）において溶解された油（０．２４４ｇ）を生産した。フラスコを窒素で洗い流し、活性炭上の１０％パラジウム（０．０４８ｍｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）を添加し、及び混合物を、次いで、一晩水素の１雰囲気下で攪拌した。セリット（登録商標）を通すろ過、次いで、溶剤の除去は、乾燥ジエチルエーテルで粉砕された油を生産して、トリペプチド５０（０．１３９ｇ、９３％）を、オフホワイトの固体として生産した。トリペプチド５０を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７２：２８のシス：トランスの混合物であることを示した（比を、δ３．５７及び４．１５−４．１６で化学シフトの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグリα−Ｈプロトンに、個々に、与えた）：最終製品の約１０％を、試験的に、塩酸塩**として与えた：ｍｐ１４５−１５０℃; δH  (400 MHz; D2O)  1.43 (2.16H, s, Proδ-CH3), 1.49* (0.84H, s, Proδ-CH3), 1.57* (0.84H, s, Proδ-CH3), 1.58* (0.84H, s, Proδ-CH3), 1.60 (2.16H, s, Proδ-CH3), 1.61 (2.16H, s, Proδ-CH3), 1.90-2.48 (8H, m, Proβ-H2, Proγ-H2, Gluβ-H2, Gluγ-H2), 3.57 (0.72H, dd, J 16.1 及び 2.8, Glyα-HAHB), 3.75-3.82** (0.2H, m, Glyα-HAHB, Gluα-H), 3.94 (0.72H, dd, J 16.1 及び 6.5, Glyα-HAHB), 4.11** (0.1H, d, J 2.5, Glyα-HAHB), 4.15-4.16* (0.56H, m, Glyα-H2), 4.24-4.30 (1H, m, Gluα-H), 4.46-4.51** (0.1H, m, Proα-H), 4.60 (0.72H, t, J 10.1, Proα-H) 及び 4.68* (0.28H, dd, J 13.5 及び 4.3, Proα-H); δC  (400 MHz; D2O)  23.56 (CH3, Proδ-CH3), 23.76 (CH3, Proδ-CH3), 24.1** (CH3, Proδ-CH3), 25.0 (CH2, Gluβ-C), 25.2 (CH3, Proδ-CH3), 25.6 (CH2, Gluβ-C), 25.7** (CH3, Proδ-CH3), 26.0 (CH2, Gluβ-C), 26.1* (CH3, Proδ-CH3), 26.2* (CH3, Proδ-CH3), 26.4 (CH2, Gluβ-C), 26.8* (CH2, Gluβ-C), 28.4, (CH2, Proβ-C), 28.7, (CH2, Proβ-C), 30.8* (CH2, Gluγ-C), 31.0* (CH2, Gluγ-C), 31.2 (CH2, Gluγ-C), 38.7 (CH2, Proγ-C), 38.8 (CH2, Proγ-C), 40.6* (CH2, Glyα-C), 40.7 (CH2, Glyα-C), 40.8 (CH2, Glyα-C), 41.1* (CH2, Proγ-C), 41.2* (CH2, Proγ-C), 46.1** (CH2, Glyα-C), 54.1 (CH, Gluα-＊C), 54.5 (CH, Gluα-C), 59.7* (CH, Proα-C), 61.7 (CH, Proα-C), 61.8 (CH, Proα-C), 62.6** (quat., Proδ-C), 62.7* (quat., Proδ-C), 63.4* (CH, Proα-C), 63.9** (quat., Proδ-C), 65.0 (quat., Proδ-C), 65.1 (quat., Proδ-C), 164.8 (quat., GlyCO), 164.9 (quat., GlyCO), 165.6* (quat., GlyCO), 165.8* (quat., GlyCO), 166.0** (quat., GlyCO), 172.3** (quat., ProCON), 172.8 (quat., ProCON), 173.1 (quat., ProCON), 173.3* (quat., ProCON), 173.6* (quat., ProCON), 176.9 (quat., Gluα-CO), 177.3 (quat., Gluα-CO) 及び 178.1 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 330.1666 (MH+. C14H24N3O6は、330.1666を必要とする)。
【００９７】
要約すれば、ＧＰＥの新規のアルアノグ(alanogue)を合成した。これらの類縁体の５つにおいて、グリプロ*結合についてのトランス配座を、プロリン上のＣ−２での疎水性アルキル基の存在（化合物１−５）により又はプロリンの２−位及びグルタメートの窒素の間のスピロラクタムブリッジ（化合物３５及び３６）のいずれかにより安定した。対照的に、プロリン上のＣ−５でのジメチル化は、シス配座異性体の増加母集団においてもたらされるトランス配座（化合物４９及び５０）を不安定にする。これらのＧＰ*Ｅ模倣剤は、親ペプチドＧＰＥの生物活性上のプロリンの残りの影響についての情報を提供するための価値ある道具である。
実施例２：類縁体６０（グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（ＧｈｙｐＥ））の合成
【００９８】
【化１５】
2008545697.tif 000017
【００９９】
実験
フラッシュクロマトグラフィを、Ｓｃｈａｒｌａｕ６０（４０−６０μｍメッシュ）シリカゲルを用いて行った。分析的な薄層クロマトグラフィを、０．２０ｍｍのプレ−コーティングされたシリカゲルプレート（ＡＬＵＧＲＡＭ（登録商標）ＳＩＬ  Ｇ／ＵＶ254）で行い及び化合物を、ＵＶ蛍光を用いて、又はアルカリ溶液中の過マンガン酸カリウムにおいてさっと浸されたプレートを加熱して視覚化した。
セ氏温度（℃）における融点を、電熱（登録商標）融点器具で決定し及び訂正しない。
施光度を、２０℃で、パーキンエルマー３４１偏光計で、１０ｃｍのパスレングス(path length)細胞を用いて測定し及び１０-1ｄｅｇｃｍ2ｇ-1の単位において得る。サンプルを、特定の濃度（ｇ／１００ｃｍ3において測定される）で示された溶剤において製造した。
【０１００】
ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＲＸ４００（1Ｈ、４００ＭＨｚ；13Ｃ、１００ＭＨｚ）又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ３００（1Ｈ、３００ＭＨｚ；13Ｃ、７５ＭＨｚ）スペクトロメータで周囲温度で記録した。1Ｈ  ＮＭＲデータについて、化学シフトを、ＳｉＭｅ4から百万ダウンフィールドあたりの部において記載し及び連続して、位（δH）、相対積分、多様（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｍ＝マルチプレット、ｂｒ＝広範）、結合定数（Ｊ／Ｈｚ）及び配置として記録する。13Ｃ  ＮＭＲデータについて、化学シフトを、百万あたりの部において、ＣＤＣｌ3に関連して記載し及び連続して、位（δｃ）、ＤＥＰＴ実験により決定されるような交配の程度、及び配置として記録する。13Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、内部で、ＳｉＭｅ4（δ０．００）又はＣＤＣｌ3（δ７．２６）を用いて参照とした。13Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、内部で、ＣＤＣｌ3（δ７７．０）を用いて又は外面的に、ＤＳＳ（３−（トリメチルシリル）−１−プロパンスルホン酸、ナトリウム塩）上で参照とした。ピークの２つのセットが、ＮＭＲスペクトルにおいて、グリシン−プロリンアミド結合の周囲の異なる配剤に起因して生じる場合、小さいシス配座異性体のための化学シフトは、星印（*）である。
【０１０１】
精密質量測定を、ＶＧ−７０ＳＥ質量スペクトロメータ上で記録した。ヘキサン及びジクロロメタンを、使用する前に蒸留した。メタノールを、マグネシウム回転及びヨウ素を用いて乾燥し、及び窒素下で蒸留した。トリエチルアミンを、水素化カルシウム上で乾燥し及び窒素下で蒸留した。Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホナート４を、バケム(Bachem)から獲得した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ）（９７％）を、フルカ(Fluka)から獲得した。トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン１及び活性炭上の１０％パラジウムを、アルドリッチケミカルカンパニーから獲得した。
【０１０２】
２．１Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン３：
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン１（０．２８ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（０．１８ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を、水（３ｃｍ3）において室温で溶解した。Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２（０．４４ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を、５分の一定期間にわたって、滴下で添加した。溶液を、２．５の間攪拌し次いで、濃縮物塩酸（３８％）でｐＨ１に酸性にした。溶液を、冷蔵庫において一晩置いた。酢酸エチル（２×２０ｃｍ3）を添加し及び得られた有機層を、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、明るいピンク色の発泡体を生産し、それは、フラッシュカラムクロマトグラフィ（１０％メタノール／塩化メチレン）により精製されて、酸３（０．３２ｇ、７０％）を、透明な発泡体として生産した。酸３を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７７：２３のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ４．３３−４．３８及び４．５２−４．５４でシグナルの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のプロα−Ｈに、個々に、与えた）: [α]D  75.5 (MeOH中のc 0.08); δH (300 MHz; CD3OD) 1.89-1.94 (0.77H, m, Proβ-HAHB), 2.08-2.14 (1H, m, Proβ-HAHB), 2.14-2.16* (0.23H, m, Proβ-HAHB), 3.17-3.20 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.53-3.57 (1H, m, Proδ-HAHB), 3.73-3.78 (1H, d, J 17.1, Glyα-HAHB), 3.87-3.93 (1H, d, J 17.1, Glyα-HAHB), 4.20-4.30* (0.23H, m, Proγ-H), 4.33-4.38 (1.54H, m, Proγ-H 及び Proα-H), 4.52-4.54* (0.23H, t, J 7.0, Proα-H) 4.94 (2H, s, OCH2Ph ) 及び 7.11-7.23 (5H, m, Ph); δC ( 75 MHz, CD3OD) 39.0 (CH2, Proβ-C), 41.3* (CH2, Proβ-C), 44.2* (CH2, Proδ-C), 44.8 (CH2, Proδ-C), 55.9 (CH2, Glyα-C), 56.2* (CH2, Glyα-C), 59.5*(CH, Proα-C), 60.1 (CH, Proα-C), 68.5 (CH2, OCH2Ph), 68.7* (CH2, OCH2Ph), 69.7* (CH, Proγ-C), 71.7 (CH, Proγ-C), 129.6 (CH, Ph), 129.7 (CH, Ph), 130.2 (CH, Ph), 138.9 (quat., Ph), 159.6 (quat., NCO2), 170.1 (quat., GlyCO), 171.6* (quat., GlyCO), 175.9* (quat., CO2H) 及び 176.3 (quat., CO2H),; m/z (FAB+) 323.1240 (M+.C16H20N2O5は、320.1243を必要とする)。
【０１０３】
２．２ジベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸塩５：
酸３（０．７０ｇ、２．１８ｍｍｏｌ），Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート４（１．１９ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．３７ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．４６ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（６０ｃｍ3）において、窒素下で溶解し及び０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．６０ｃｍ3、４．３０ｍｍｏｌ）を、５分の期間にわたり滴下で添加した。溶液を、１．５時間攪拌し、次いで、室温に温め及び一晩攪拌した。ジクロロメタン（４０ｃｍ3）を添加し及び有機層を、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム（２５ｃｍ3）及び水性２Ｍクエン酸（２５ｃｍ3）で洗浄し、次いで、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、白色の粘着性の固体を形成し、それを、フラッシュカラムクロマトグラフィ（１０％メタノール／酢酸エチル）により精製して、十分な保護トリペプチド５（０．９７ｇ、７１％）を、白色固体として製造した。トリペプチド５を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の９１：９のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ５．８９及び６．５１で広範のシグナルの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグリ−ＮＨに、個々に、与えた）：ｍ．ｐ．１２４−１２６℃；[α]D  57.7 (MeOH中のc 0.07) ; δH (300 MHz; CDCl3; Me4Si ) 2.08-2.18 (4H, m, Gluβ-H2, 及び Proβ-H2), 2.44-2.46 ( 2H, m, Gluγ-H2), 3.43-3.62 (2H, m, Proδ-H2), 3.75-4.03 (2H, m, Glyα-H2), 4.40-4.50 (1H, m, Gluα-H), 4.53-4.56 (2H, m, Proα-H 及び Proγ-H), 5.04 (2H, s, OCH2Ph), 5.05 (2H, s, OCH2Ph), 5.10 (2H, s, OCH2Ph), 5.89 (0.91 H, br s, GlyNH), 6.51* (0.09H, br s, GlyNH), 7.30-7.40 (15H, m, 3 x Ph), 7.51 (0.91H, d, J 7.4, GluNH) 及び 7.64* (0.09H, br s, GluNH); δC (75 MHz, CDCl3 ) 27.3 (CH2, Gluβ-C), 30.4 (CH2, Proβ-C), 30.7* (CH2, Proβ-C), 37.5 (CH2, Gluγ-C), 43.7 (CH2, Glyα-C), 52.2 (CH, Gluα-C), 54.8 (CH2, Proδ-C), 55.8*(CH2, Proδ-C), 59.0* (CH, Proα-C), 59.3 (CH, Proα-C), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 67.3 (CH2, OCH2Ph),, 67.7 (CH2, OCH2Ph), 68.7*(CH, Proγ-C), 70.5 (CH, Proγ-C), 128.3 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph),, 128.6 (CH, Ph), 128.8 (CH, Ph), 128.9 (CH, Ph), 135.6 (quat., Ph),, 135.9 (quat., Ph),, 136.1 (quat., Ph), 157.0 (quat., NCO2),, 168.7 (quat., GlyCO), 169.6* (quat., GlyCO), 171.8 (quat., ProCON) 及び 173.2 (quat., Gluγ-CO 及び Gluα-CO);  m/z (FAB+) 632.2613 (M+.C34H38N3O9は、632.2608を必要とする)。
【０１０４】
２．３グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−グルタミン酸（ＧＨｙｐＥ）６０：
２０％水／メタノール（１００ｃｍ3）中の保護トリペプチド５（０．５０ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウムの混合物を、水素の雰囲気下で室温で２０時間攪拌した。溶液を、セリット（登録商標）パッドと通してろ過し、メタノール（６０ｃｍ3）で洗浄し及びろ液を蒸発環固して、透明なゴムを形成した。このゴムを、メタノール（３０ｃｍ3）において溶解し及びセリット（登録商標）パッドを通して再ろ過した。溶液を、蒸発乾固して、透明なゴムを形成した。ゴムを、真空ラインに１５時間置き及び次いで、無水ジエチルエーテルで粉砕して、ＧＨｙｐＥ（０．２０ｇ、８０％）を、白色固体として形成した。ＧＨｙｐＥを、13Ｃ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８０：２０のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ７０．２及び６８．５でシグナルの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のプロ−Ｃに、個々に、与えた）； [α]D 58.1 (MeOH中のc 0.1 ) ; δH (300 MHz; D2O) 1.96-2.23 (4H, m, Gluβ-H2, 及び Proβ-H2), 2.48-2.56 (2H, m, Gluγ-H2), 3.62 ( 2H, d, J 10.0, Glyα-H2), 3.80 (1H, dd, J 8.8 及び 4.9, Gluα-H), 4.08 (1H, dd, J 10.4 及び 2.6, Proα-H), 4.30-4.35 (2H, m, Proδ-H2) 及び 4.63-4.69 (1 H, m, Proγ-H) ; δC (75 MHz, D2O ) 29.2 (CH2, Gluβ-C), 31.7 (CH2, Proβ-C), 32.3*(CH2, Proβ-C), 37.6 (CH2, Gluγ-C), 40.0* (CH2, Glyα-C), 41.0 (CH2, Glyα-C), 54.8 (CH2, Proδ-C), 55.3 (CH, Gluα-C), 59.1* (CH, Proα-C), 59.7 (CH, Proα-C), 68.5*(CH, Proγ-C), 70.2 (CH, Proγ-C), 166.4 (quat., GlyCO), 167.1* (quat., GlyCO), 173.0* (quat., ProCON), 173.4 (quat., ProCON), 177.9 (quat., Gluα-CO) 及び 179.2 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 318.1329 (MH+. C17H20NO5は、318.1342を必要とする)。
【０１０５】
実施例３：類縁体６１（グリシル−Ｌ−２−ピログルタミル−Ｌ−グルタミン酸ヒドロクロリド（ＧｐｙｒｏＥ／ＨＣｌ）の合成
上の実施例２におけるような一般的な実験の記載。Ｌ−ピログルタミン酸を、アクロスオーオーガニック(Acros Organic)から獲得した。Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネートを、バケムから獲得した。酢酸ｔ−ブチルを、ランカスターケミカル(Lancaster Chemical Co.)から獲得した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（９７％）を、フルカから獲得した。活性炭上の１０％パラジウムを、アルドリッチケミカルカンパニーから獲得した。
【０１０６】
【化１６】
2008545697.tif 000018
【０１０７】
３．１  ｔ−ブチル−Ｌ−ピログルタミン酸塩２：
７０％過塩素酸（０．８５ｃｍ3、９．９０ｍｍｏｌ）を、酢酸ｔ−ブチル（１７．０ｃｍ3、１２６．２０ｍｍｏｌ）中のＬ−ピログルタミン酸１（１．７０ｇ、１３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で５分の期間にわたり滴下で添加した。溶液を、２０時間攪拌し及び次いで、固体炭酸ナトリウムを、ｐＨ７に達するまでゆっくりと滴下で添加した。水性層を、ジエチルエーテル（４０ｃｍ3）及び酢酸エチル（４０ｃｍ3）で抽出した。組み合わされた抽出物を、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、透明の油を生産し、それを、フラシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により精製して、エステル２（１．３３ｇ、５５％）を、白色固体として生産した。：ｍｐ１０１−１０３℃．、ｌｉｔ．1ｍｐ１０２℃；[α]D + 9.7 (MeOH 中のc 0.14), lit. 1 ＋11 (MeOH中のc 3) ; δH (200 MHz; CD3OD) 1.44 [9H, s C(CH3)3], 2.30-2.39 (4H, m, ピロβ-H2 及び ピロγ-H2), 4.10-4.13 (1H, m, ピロα-H) 及び 6.71 (1H, br s, NH) ; δC (50 MHz; CD3OD) 24.8 (CH2, ピロβ-C), 27.9 [CH3, C(CH3)3], 29.4 (CH2, ピロγ-C), 56.1 (CH, ピロα-C), 82.2 [quat., C(CH3)3], 171.2 (quat. ピロ-CO) 及び 178.3 (quat., ピロ-CONH)。
【０１０８】
３．２  ｔ−ブチル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−ピログルタミン酸塩４：
エステル２（０．６１ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２０ｃｍ3）において、窒素下で溶解し及び−７８℃に冷却した。ルチウムヘキサメチルジシラジド（１．０６Ｍ、３．３０ｃｍ3、３．５０ｍｍｏｌ）を、５分の期間にわたり滴下で添加した。溶液を、１５分間攪拌し、次いで、テトラヒドロフラン（３０ｃｍ3）中のＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド4３（ＤＣ８９．５２）（１．２３ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）を、添加し及びその溶液を、４５分間攪拌した。水（５０ｃｍ3）を、添加し及び反応物を、室温に温めた。得られた水性溶液を、酢酸エチル（２×５０ｃｍ3）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、白色の粘着性のある固体を形成し、それを、フラシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により精製して、カルバメート４（１．０４ｇ、８３％）を、白色固体として製造した：ｍｐ１３２−１３５℃、ｌｉｔ2．１３４−１３５℃； [α]D  45.5 (EtOH中のc 0.1), lit.2  61.7 (EtOH 中のc 1.01),; δH (300 MHz; CDCl3; Me4Si ) 1.47 [9 H, s, C(CH3)3], 2.08-2.13 (1H, m, Pyroβ-HAHB), 2.31-2.39 (1H, m, Pyroβ-HAHB), 2.56 (1H, ddd, J 3.1, 9.2 及び 12.3, Pyroγ-HAHB), 2.64-2.73 (1H, m, Pyroγ-HAHB), 4.48 (1H, dd, J 4.8 及び 19.6, Glyα-HAHB), 4.61-4.71 (2H, m, Glyα-HAHB 及び Pyroα-H), 5.08 (2H, s, OCH2Ph), 5.47 (1H, s br, GlyNH) 及び 7.33 (5H, s, Ph) ; δC (75 MHz, CDCl3 ) 22.3 (CH2, Pyroβ-C), 28.2 [CH3, C(CH3)3], 31.8 (CH2, Pyroγ-C), 46.7 (CH2, Glyα-C), 58.7 (CH, Pyroα-C), 67.3 (CH2, OCH2Ph), 83.1 [quat., C(CH3)3], 128.4 ( CH, Ph), 128.6 ( CH, Ph), 129.0 (CH, Ph), 136.8 (quat., Ph), 156.6 (quat., NCO2), 170.1 (quat., GlyCON), 170.5 (quat., PyroCONH) 及び 175.1 (quat., PyroCO); m/z (FAB+) 377.1698 (MH+.C19H25N2O6は、377.1713を必要とする)。
【０１０９】
３．３  ｔ−ブチル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−ピログルタミン酸５：
カルバメート４（０．７４ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１２ｃｍ3）において窒素下で溶解し及び０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（６ｃｍ3）を、５分の期間にわたり滴下で添加し及び溶液を、１．５時間攪拌した。溶液を、減圧下で蒸発して、オレンジ色のゴムを得、それを、トルエンにおいて溶解し及び減圧下で（２×１０ｃｍ3）蒸発して、祖酸５を、オレンジ色のゴムとして得た。材料を、更なる精製なしで使用した。
【０１１０】
３．４  ジベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−ピログルタミル−Ｌ−グルタミン酸塩７：
祖酸５（０．６３ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）、Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート６（１．１８ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．６０ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２０ｃｍ3）において、窒素下で溶解し及び０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．６４ｃｍ3、４．６０ｍｍｏｌ）を、５分に期間にわたり滴下で添加した。溶液を、１．５時間攪拌し、次いで、室温に温め及び一晩攪拌した。ジクロロメタン（４０ｃｍ3）を、添加し及び有機層を、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３０ｃｍ3）及び水性２Ｍクエン酸（３０ｃｍ3）で洗浄し、次いで、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、白色の粘着性の固体を形成した。フラシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）による精製は、白色固体を提供した。この白色固体を、ジエチルエーテル（２×１５ｃｍ3）で洗浄し、ろ過して、十分な保護トリペプチド７（０．９８ｇ、７８％）を、白色固体として製造した。：ｍ．ｐ．１０９−１１１℃；[α]D  55.5 (MeOH中のc 0.25) ; δH (300 MHz; CDCl3; Me4Si ) 1.80-2.24 (7H, m, Gluβ-H2, Gluγ-H2, Pyroβ-H2 及び Pyroγ-HAHB), 2.74-2.80 (1H, m, Pyroγ-HAHB), 4.38 (1H, dd, J 4.2 及び 19.5, Glyα-HAHB), 4.58-4.68 (3H, m, Glyα-HAHB, Proα-H 及び Gluα-H), 5.08-5.19 (6H, m, 3 x OCH2Ph), 5.38 (1H, s br, GlyNH), 6.84 (1H, d, J 7.7, GluNH) 及び 7.30 (15H, s, 3 x Ph); δc (75 MHz, CDCl3 ) 22.2 (CH2, Pyroβ-C), 26.6 (CH2, Gluβ-C), 30.0 (CH2, Gluγ-C), 33.9 (CH2, Pyroγ-C), 46.2 (CH2, Glyα-C), 52.0 (CH, Gluα-C), 58.6 (CH, Pyroα-C), 66.7 (CH2, OCH2Ph), 66.9 (CH2, OCH2Ph), 67.4 (CH2, OCH2Ph), 128.0     (CH, Ph), 128.1 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 128.6 (CH, Ph), 135.0 (quat., Ph), 135.3 (quat., Ph), 135.6 (quat., Ph), 156.3 (quat., NCO2), 170.2 (quat., GlyCO), 170.6 (quat., PyroCO), 171.2 (quat., PyroCO), 172.9 (quat., GluCO) 及び 175.2 (quat., GluCO); m/z (FAB+) 630.2460 (MH+.C34H36N3O9は、630.2452を必要とする)。
【０１１１】
３．５  グリシル−Ｌ−ピログルタミル−Ｌ−グルタミン酸ヒドロクロリド（ＧｐｙｒｏＥ．ＨＣｌ）６１：
２０％水／テトラヒドロフラン（６０ｃｍ3）中の保護トリペプチド７（０．４５ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、濃縮塩酸（３８％、０．１３ｃｍ3）及び活性炭上の１０％パラジウム（０．０８ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の混合物を、水素の雰囲気下で室温で４時間攪拌した。溶液を、セリット（登録商標）パッドを通してろ過し、２０％水／テトラヒドロフラン（２×６０ｃｍ3）で洗浄し及びろ液を、蒸発環固して、ＧｐｙｒｏＥ．ＨＣｌ（０．１９ｇ，７４％）を固体として形成した。ＧｐｙｒｏＥ．ＨＣｌを、1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲ分析5により、排他的に、トランス配座異性体であることを示した：ｍｐ４２−４４℃．; [α]D  57.3 (MeOH中の c 0.09); δH (400 MHz; D2O) 2.07-2.14 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.20-2.25 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.30-2.34 (1H, m, Pyroβ-HAHB), 2.60-2.65 (3H, m, Pyroβ-HAHB 及び Gluγ-H2), 2.74-2.89 (2H, m, Pyroγ-H2), 4.48-4.59 (3H, Glyα-H2 及び Gluα-H) 及び 4.93-4.95 (1H, m, Pyroα-H); δC (75 MHz, D2O ) 22.5 (CH2, Pyroβ-C), 26.4 (CH2, Gluβ-C), 30.5 (CH2, Gluγ-C), 31.8 (CH2, Pyroγ-C), 44.3 (CH2, Glyα-C), 52.7 (CH, Gluα-C), 59.3 (CH, Pyroα-C), 168.5 (quat., GlyCO), 173.6 (quat., PyroCO), 175.2 (quat., PyroCO), 177.6 (quat., GluCO) 及び 178.9 (quat., GluCO); m/z (FAB+) 316.1138 (MH+.C12H18N3O7は、316.1145を必要とする)。
【０１１２】
参照: 1. Besson et al. Chem.Eur.j., 2000, 6, 949. 2. Johnson et al.  J.Med.Chem. 1985, 28, 1596. 3. Li et al. Synth.Comm. 1995, 25, 4045. 4。 スクシンイミド３を、類縁体６６ （Ｇ（Ｄ,Ｌ）ＰｉｐＥ）の合成において与えられた実験手順に従って製造した。 5. Galardyet al. Int.J.Pept.Protein Res1982, 19, 123。
実施例４：類縁体６２（グリシル−Ｌ−ホモプロピル−Ｌ−グルタミン酸（ＧＨｏｍｏＰＥ））の合成
一般的な実験の詳細を、上の実施例２において記載した。Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシン、活性炭上の１０％パラジウム及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ、９７％）を、アルドリッチケムコから獲得した。Ｌ−グルタミン酸ジベンジルｐ−トルエンスルホネートを、バケムから獲得した。
【０１１３】
【化１７】
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スキーム１: 試薬, 状況及び収率: (i) 塩化チオニル, CH3OH, RT, N2, 24 h (97%); (ii) Et3N, BoPCl, CH2Cl2, RT, N2, 19.5 h (78%); (iii) ジオキサン, 1 M NaOH (aq), RT, 16 h (93%); (iv) Et3N, BoPCl, CH2Cl2, RT, N2, 17.5 h (74%); (v) H2, 10 % Pd/C, 10 % H2O/MeOH, RT, 20 h (93%)。
【０１１４】
４．１  メチルＬ−ピロリジン−２−イルアセテートヒドロクロリド1２：
乾燥メタノール（３ｃｍ3）中の、窒素の雰囲気下のヒドロクロリド１のヒドロクロリドの氷で冷却された溶液の氷で冷却された溶液（０．２５ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を、塩化チオニル（０．１３ｃｍ3、１．７８ｍｍｏｌ）の溶液で滴下で処理した。溶液を、一晩攪拌し及び溶剤を、減圧下で除去した。得られた薄緑色のゴムを、フラッシュカラムクロマトグラフィ（１０％メタノール／ジクロロメタン）により精製して、ヒドロクロリド２（０．２６ｇ、９７％）を、淡黄色として提供し、それを、立てて白色の半固体に凝固した: [α]D +44.3 (MeOH中のc 0.05): δH (300 MHz; CDCl3) 1.73-1.79 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.00-2.11 (2H, m, Proγ-HAHB及び Proβ-HAHB), 2.26-2.31 (1H, m, Proβ-HAHB), 2.86 (1 H, dd, J 6.9, 17.2, CHAHBCO2), 3.22 (1 H, dd, J 6.9, 17.2, CHAHBCO2), 3.29 (2 H, t, J 6.8, Proδ-H2), 3.44 (3 H, s, OCH3), 3.92 (1 H, m, Proα-H) 及び 8.15 (2 H, br s , NCH); δC (75 MHz; CDCl3) 23.8 (CH2, Proγ-C), 30.8 (CH2, Proβ-C), 36.4 (CH2, CH2CO2), 45.3 (CH2, Proδ-C), 52.6 (CH3, CH3O), 56.3 (CH, Proα-C) 及び 171.0 (quat., CO); m/z (FAB+)  323.1737 [M2.H35Cl.H+](C7H1335ClNO2)2. H35Cl.Hは、323.1738を必要とする]。
【０１１５】
４．２  メチル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−ピロリジン−２−イルアセテート４：
乾燥トリエチルアミン（０．７０ｃｍ3、５．００ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（８ｃｍ3）中のヒドロクロリド２（０．２６ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシン３（０．３２ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で、０℃で滴下で添加し、及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（０．３９ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を２時間攪拌し、室温に温め及び更に２０時間攪拌した。ジクロロメタン（４０ｃｍ3）を添加し及び溶液を、引き続き、０．５Ｍ水性塩酸（２×１０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（２×１０ｃｍ3）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発して、明るいオレンジ色のゴムを得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により得られた残りの精製は、エステル４（０．３８ｇ、７８％）を無色の油として生産した。エステル４を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８５：１５のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ４．２１−４．３０及び４．３７−４．４７でシグナルの強度から測定し、小さい及び大きい配座異性体のプロα−Ｈに、個々に、与えた：[α]D 36.0 (MeOH中の c 0.13); δ H(300 MHz; CDCl3) 1.81-2.07 (4 H, m, Proγ-H2 及び Proβ-H2), 2.36 (0.85 H, dd, J 9.2 及び 15.5, CHAHBCO2), 2.47* (0.15 H, d, J 10.1, CHAHBCO2), 2.60* (0.15 H, d, J 10.1, CHAHBCO2), 2.92 (0.85 H, dd, J 9.2 及び 15.5, CHAHBCO2), 3.43-3.44 (2 H, m, Proδ-H2), 3.66 (2.55 H, s, OCH3), 3.70* (0.45 H, s, OCH3), 3.92 (1.7 H, d, J 4.1, Glyα-H2), 3.95* (0.3 H, m, Glyα-H2), 4.21-4.30* (0.15 H, m, Proα-H), 4.37-4.47 (0.85 H, m, Proα-H), 5.11 (2 H, s, OCH2Ph), 5.76 (1 H, br s, GlyNH) 及び 7.27-7.36 (5 H, m, Ph); δc(75 MHz; CDCl3) 21.4* (CH2, Proγ-C), 23.9 (CH2, Proγ-C), 30.0 (CH2, Proβ-C), 31.5*(CH2, Proβ-C), 37.5 (CH2, CH2CO2), 43.4* (CH2, Proδ-C), 43.8 (CH2, Proδ-C), 46.0 (CH2, Glyα-C), 51.9 (CH3, OCH3), 52.2* (CH3, OCH3), 53.9* (CH, Proα-C), 54.7 (CH, Proα-C) 67.1 (CH2, OCH2Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.7 (CH, Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.2 (quat., NCO), 166.6 (quat., GlyCON) 及び 171.6 (quat., CO2CH3); m/z (EI+) 334.1532 (M+. C17H22N2O5は、334.1529を必要とする)。
【０１１６】
４．３  Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−ピロリジン−２−イル酢酸５：
ジオキサン（１０ｃｍ3）中の（メチルエステル４（０．３６ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水性ＮａＯＨ（５ｃｍ3、５．００ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、２０時間室温で攪拌した。溶液を、１Ｍ  ＨＣｌで酸性にし及び真空で蒸発した。得られた水性層を、ジクロロメタン（２×２５ｃｍ3）で抽出し、乾燥し（ＮａＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発して、透明なゴムを形成し、それを、立てて、酸５（０．３２ｇ、９３％）に、透明なゴムとして凝固し、それを、更なる精製なしで使用した。酸５を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７６：２４のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ５．９７及び６．１０で広範のシグナルの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグリ−ＮＨに、個々に、与えた: [α]D 33.3 (MeOH中のc 0.03); δH(300 MHz; CDCl3) 1.81-2.04 (4 H, m, Proγ-H2 及び Proβ-H2), 2.38 (0.76 H, dd, J 8.9, 15.7, CHAHBCO2), 2.45* (0.24 H, d, J 10.6, CHAHBCO2), 2.58* (0.24 H, d, J 10.6, CHAHBCO2), 2.92 (0.76 H, dd, J 3.8 及び 15.7, CHAHBCO2), 3.36-3.47 (2 H, m, Proδ-H2), 3.92 (1.52 H, m, Glyα-H2), 3.95* (0.48 H, m, Glyα-H2), 4.21-4.30* (0.76 H, m, Proα-H), 4.37-4.69 (0.24 H, m, Proα-H), 5.11 (2 H, s, OCH2Ph), 5.97 (0.76 H, br s, GlyNH), 6.10* (0.24 H, br s, GlyNH), 7.27-7.35 (5 H, m, Ph) 及び 7.72 (1 H, br s, CO2H); δc(75 MHz; CDCl3) 21.4* (CH2, Proγ-C), 24.0 (CH2, Proγ-C), 30.4 (CH2, Proβ-C), 31.7*(CH2, Proβ-C), 37.9 (CH2, CH2CO2), 39.1* (CH2, CH2CO2), 43.5* (CH2, Proδ-C), 43.9 (CH2, Proδ-C), 46.4 (CH2, Glyα-C), 53.8* (CH, Proα-C), 54.1 (CH, Proα-C) 67.3 (CH2, OCH2Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.8 (CH, Ph), 136.6 (quat., Ph), 156.8 (quat., NCO), 167.8 (quat., GlyCON), 175.0* (quat., CO2H) 及び 175.3 (quat., CO2H); m/z (EI+) 320.1369 (M+. C16H20N2O5は、320.1372を必要とする)。
【０１１７】
４．４  ジベンジルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−ピロリジン−２−イル−アセチル−Ｌ−グルタミン酸塩７：
乾燥トリエチルアミン（０．３８ｃｍ3、２．７３ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（５０ｃｍ3）中の酸６（０．２９ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）及びＬ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート６（０．５０ｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で０℃で添加し、及び反応混合物を、１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ、９７％）（０．２５ｇ、１．００ｍｍｏｌ）を添加し及び溶液を２時間攪拌し、室温に温め及び更に、２０時間攪拌した。溶液を、引き続き、０．５Ｍ水性塩酸（１０ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（１０ｃｍ3）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発して、明るいオレンジ色のゴムを形成した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により得られた残りの精製は、十分な保護トリペプチド７（０．４２ｇ、７４％）を、透明な油として生産した: [α]D 26.6 (MeOH 中のc 0.13); δ H(300 MHz; CDCl3) 1.95-2.47 (9 H, m, Proγ-H2, Proβ-H2 , Gluβ-H2 , Gluγ-H2  及び CHAHBCO2), 2.75 (1 H, dd, J 3.5 及び 13.9, CHAHBCO2), 3.35-3.42 (2 H, m, Proδ-H2), 3.94 (2 H, d, J 4.1, Glyα-H2), 4.33-4.34 (1 H, m, Gluα-H), 4.63-4.67 (1 H, m, Proα-H), 5.11-5.26 (6 H, s, 3 x OCH2Ph), 5.80 (1 H, br s, GlyNH), 7.00 (1 H, d, J 7.8, GluNH) 及び 7.31-7.35 (15 H, m, 3 x Ph); δ c(75 MHz; CDCl3) 23.8 (CH2, Proγ-C), 27.1 (CH2, Gluβ-C), 30.0 (CH2, Gluγ-C), 30.3 (CH2, Proβ-C), 40.2 (CH2, CH2CO2), 43.5 (CH2, Proδ-C), 45.9 (CH2, Glyα-C), 51.6 (CH, Gluα-C), 55.5 (CH, Proα-C), 66.4 (CH2, OCH2Ph), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 67.2 (CH2, OCH2Ph), 127.9 (CH, Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 135.2 (quat., Ph), 135.7 (quat., Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.2 (quat., NCO2), 166.9 (quat., GlyCON), 170.7 (quat., ProCON), 171.5 (quat., Gluα-CO) 及び 172.4 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 630.2809 (MH+.C35H40N3O8は、630.2815を必要とする)。
【０１１８】
４．５  グリシル−Ｌ−ホモプロイル−Ｌ−グルタミン酸（ＧＨｏｍｏＰＥ）６２：
１０％水／メタノール（４０ｃｍ3）中の保護トリペプチド７（０．３９ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０質量％パラジウム（０．００７ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を、窒素の雰囲気下で室温で２時間攪拌した。溶液を、セリット（登録商標）パッドを通してろ過し、メタノール（２×３０ｃｍ3）で洗浄し及びろ液を、蒸発乾固して、透明のゴムを得た。ゴムを、３０分間真空下に置き及び次いで、無水ジエチルエーテルで粉砕して、ＧＨｏｍｏＰＥ（０．１９ｇ、９３％）を、白色固体として形成した。ＧＨｏｍｏＰＥを、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８０：２０のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ４．０８及び４．１１でシグナルの強度から測定し、大きい及び小さい配座異性体のグルα−Ｈに、個々に、与えた：ｍｐ４８−５０℃; [α]D 36.6 (H2O中の c 0.06); δH (400 MHz; D2O) 1.84-2.22 (6 H, m, Gluβ-H2, Proβ-H2 及び ProγH2), 2.41-2.62 (3.2 H, m, Gluγ-H2, CHAHBCO2 及び 2 x *CH2CO2), 2.77 (0.8 H, dd, J 5.4 及び 13.9, CHAHBCO2), 3.45-3.55 (1 H, m, Proδ-HAHB), 3.51-3.60 (1 H, m, Proδ-HAHB), 4.08 (1.6 H, q, J 16.9, Glyα-H2), 4.11*(0.4 H, q, J 16.9, Glyα-H2), 4.34 (1 H, dd, J 8.4 及び 13.7, Gluα-H) 及び 4.45-4.47 (1 H, m, Proα-H); δ c(100 MHz; CDCl3) 21.1* (CH2, Proγ-C), 23.4 (CH2, Proγ-C), 26.0* (CH2, Gluβ-C), 26.7 (CH2, Gluβ-C), 29.5 (CH2, Gluγ-C), 31.0 (CH2, Proβ-C), 31.1* (CH2, Proβ-C), 39.1 (CH2, Glyα-C), 39.9* (CH2, Glyα-C), 40.6* (CH2, CH2CO2), 40.9 (CH2, CH2CO2), 46.2* (CH2, Proδ-C), 46.4 (CH2, Proδ-C), 53.8 (CH, Gluα-C), 54.2* (CH, Gluα-C), 55.4* (CH, Proα-C), 55.9 (CH, Proα-C), 165.4 (quat., GlyCON), 165.5* (quat., GlyCON), 173.0* (quat., ProCON), 173.6 (quat., ProCON), 177.2 (quat., Gluα-CO) 及び 178.1 (quat., Gluγ-CO); m/z (FAB+) 316.1503 (MH+. C13H22N3O6は、316.1509を必要とする)。
【０１１９】
参照: 1. Wanner et al. Ger.Offen., 2000, 36pp, DE 98-19840611 19980905 (Chem Abstr., 132:194656 AN 2000:157915)。
実施例５：類縁体６３（グリシル−Ｌ−３，４−デヒドロプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロ酢酸（Ｇ−３，４−ｄｅｈｙｄｒｏＰＥ／ＴＦＡ））の合成
一般的実験の詳細は、上の実施例２において記載されるようなものであった。Ｌ−３，４−デヒドロプロリン１は、フルカから獲得した。Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸塩４を、バケムから獲得した。
【０１２０】
【化１８】
2008545697.tif 000020
【０１２１】
５．１  ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−３．４−デヒドロプロリン２：
３，４−デヒドロプロリン１（０．０１１ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（０．００８２ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を、水（１ｃｍ3）において溶解した。ジオキサン（１ｃｍ3）中のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシンＮ−ヒドロキシスクシンイミド２（０．０２４ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の溶液を、滴下で添加し及び一晩攪拌した。反応混合物を、水で希釈し、固体のクエン酸で酸性にし及びジクロロメタン（３×）で抽出した。組み合わされた有機層を、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び溶剤を除去して、更なる精製なしで使用された祖酸３（０．０２４２ｇ、約１００％）を提供した。酸３を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７５：２５のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、個々に、大きい及び小さい配座異性体のδ５．２１及び５．１３でプロαプロトンの強度から測定した: δH (300 MHz; CDCl3; Me4Si) 1.411 [2.25H, s, C(CH3)3], 1.42 [6.75H, s, C(CH3)3], 3.83-4.08 (2H, m, Glyα-H2), 4.25-4.45 (2H, m, Proδ-H2), 5.13* (0.25H, br d, J 2.8, Proα-H), 5.21 (0.75H, br d, J 3.1, Proα-H), 5.55-5.80 (2H, br m, O-H 及び N-H) 及び 5.86-6.02 (2H, m, Proβ-H 及び Proγ-H)。
【０１２２】
５．２  ジ−ｔ−ブチルＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシル−Ｌ−３，４−デヒドロプロリル−Ｌ−グルタミン酸塩５：
トリエチルアミン（０．０４１ｃｍ3、０．２９１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３ｃｍ3）中の酸３（０．０２４２ｇ、約０．０９７ｍｍｏｌ）、Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステルヒドロクロリド４（０．０２９ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及びベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢｏＰ）（０．０４３ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液を、一晩２Ｍ水性塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び溶剤を除去して、クロマトグラフィ（ＳｉＯ2、ヘキサン：酢酸エチル、１：１、次いで、１：２）により精製された油（０．０６２２ｇ）を提供して、保護トリペプチド５（０．０３１０ｇ、５９％）を、無色の油として得た。５を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７９：２１のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、個々に、大きい及び小さい配座異性体のδ５．０７及び５．１７−５．１８でプロαプロトンの強度から測定した： δH (300 MHz; CDCl3; Me4Si) 1.45-1.48 [27H, m, 3 x C(CH3)3], 1.90-1.98 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.06-2.14 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.24-2.35 (2H, m, Gluγ-H2), 3.82* (0.21H, br d, J 17.2, Glyα-HAHB), 3.95 (1H, dd, J 17.1 及び 2.0, Glyα-H 及び *Glyα-HAHB), 4.04 (0.79H, dd, J 17.2 及び 4.4, Glyα-H), 4.30 (0.79H, dd, J 14.0 及び 2.0, Proδ-HAHB), 4.38-4.43 (2H, m, Proδ-H 及び Gluα-H), 4.54* (0.21H, br d, J 15.2, Proδ-HAHB), 5.07* (0.21H, br s, Proα-H), 5.17-5.18 (0.79H, m, Proα-H), 5.14* (0.21H, br s, N-H), 5.52 (0.79H, br s, N-H), 5.88-6.03 (2H, m, Proβ-H 及び Proγ-H) 及び 7.11 (1H, d, J 7.6, N-H)。
【０１２３】
５．３  グリシル−Ｌ−３，４−デヒドロプロリル−Ｌ−グルタミン酸トリフルオロ酢酸（Ｇ−３，４−デヒドロＰＥ）６３：
ジクロロメタン（３ｃｍ3）中の保護トリペプチド５（０．０３０１ｇ、０．０５７５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．５ｃｍ3）を添加し及び溶液を、３時間室温で攪拌した。揮発性を、真空で除去し及び残りを、クロマトグラフィ（Ｃ18、水）により精製し及びＧ−３，４−デヒドロＰＥ（０．０２２４ｇ、９４％）を、吸湿性の淡黄色の固体として得た。Ｇ−デヒドロＰＥを、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８４：１６のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、個々に、大きい及び小さい配座異性体のδ４．０７及び３．７８でグリαプロトンの強度から測定した：吸湿性のサンプルに起因する非ｍｐ； [α]D -139.5 (MeOH中のc 0.2); δH  (300 MHz; D2O) 2.02-2.14 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.25-2.61 (1H, m, Gluβ-HAHB), 2.53-2.61 (2H, m, Gluγ-H2), 3.78* (0.16H, d, J 16.2 Glyα-H), 4.03* (0.16H, d, J 16.5 Glyα-H), 4.07 (1.68H, s, Glyα-H2), 4.38-4.45 (1H, m, Gluα-H), 4.53 (1H , dd, J 9.3 及び 5.1, Proδ-H2), 5.28-5.32 (1H, m, Proα-H), 5.95 (1H, dd, J 6.2 及び 2.2, Proβ-H 又は Proγ-H) 及び 6.16-6.19 (1H, m, Proβ-H 又は Proγ-H); δC  (75 MHz; D2O) 25.2* (CH2, Gluβ-C), 25.7 (CH2, Gluβ-C), 29.8 (CH2, Gluγ-C), 30.2* (CH2, Gluγ-C), 40.0* (CH2, Glyα-C), 40.2* (CH2, Glyα-C), 52.1* (CH, Gluα-C), 52.3 (CH, Gluα-C), 53.3 (CH2, Proδ-C), 54.5* (CH2, Proδ-C), 67.0* (CH, Proα-C), 67.7 (CH, Proα-C), 124.3 (CH), 128.4* (CH), 128.5 (CH), 165.4 (quat., GlyCO), 171.7 (quat., ProCO), 174.6 (quat., Proα-CO) 及び 177.0 (quat., Proγ-CO) (CF3CO2Hは、決定されない); m/z (FAB+) 300.1196 [MH(遊離塩基)+. C12H18N3O6は、300.1196を必要とする]。
【０１２４】
実施例６：類縁体６４（アミノイソブトリル(Aminoisobutryl)−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（ＡｉｂＰＥ）
一般的実験の詳細は、上の実施例２において記載されるようなものであった。
【０１２５】
【化１９】
2008545697.tif 000021
【０１２６】
６．１  Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノイソ酢酸1,2１：
アミノイソ酪酸（２．００ｇ、１９．４０ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（６．１６ｇ、５８．１２ｍｍｏｌ）を、水（７０ｃｍ3）において溶解し及びその溶液を、０℃に冷却した。クロロギ酸ベンジル（３．０５ｃｍ3、２１．４ｍｍｏｌ）を、１５分の期間にわたり滴下で添加した。溶液を、０℃で１．５時間攪拌し及び室温に温めた。攪拌を２０時間続け及び水性層を、ジエチルエーテル（１００ｃｍ3）で抽出し、塩酸（３２％）でｐＨ１に酸性にし及び酢酸エチル（２×７５ｃｍ3）で抽出した。有機層を、組み合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、透明の油を得、それを、立てて祖カルバメート１（４．５９ｇ、１００％）に、粘着性の固体として凝固し、それを、更なる精製なしで使用した: δ H ( 200 MHz; CDCl3; Me4Si ) 1.57 (6H, s, 2 × CH3), 5.10 (2H, s, OCH2Ph) , 5.55 (1H, br s , NH),  7.26-7.33 (5H, m, Ph) 及び 10.53 (1H, br s , CO2H) ; δc (50 MHz; CDCl3) 25.0 (CH3, 2 × CH3), 56.3 [quat., C(CH3)2], 66.9 (CH2, OCH2Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 136.1 (quat., Ph), 155.2 (quat., NCO2) 及び 179.6 (quat., CO2H) ; m/z  (EI+) 237 (M+. 12%)。
【０１２７】
６．２  ジベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノイソブチリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸塩３：
アミン3２（ＤＣ６４．１０）（１．００ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）、酸１（０．５６ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．３６ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１０ｃｍ3）において室温で溶解した。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．４５ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を３日間攪拌した。溶剤を、減圧下で乾燥するまで除去し及び残りを、酢酸エチル（１００ｃｍ3）において溶解し、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２５ｃｍ3）、塩水（２５ｃｍ3）、水（２５ｃｍ3）で洗浄し及び次いで、乾燥した（ＭｇＳＯ4）。溶剤を、減圧下で除去して、オレンジ色のゴムを得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（２０％ヘキサン／酢酸エチル）によるゴムの精製は、十分な保護トリペプチド３（０．４０ｇ、２６％）を、透明のゴムとして製造した: [α]D  36.5 (MeOH中のc 0.05) : δ H( 200 MHz; CDCl3; Me4Si ) 1.41 (3H, s, CH3), 1.51 (3H, s, CH3), 1.68-2.29 (6H, m, Proβ-H2, Proγ-H2 及び Gluβ-H2), 2.44 (2H, t, J  7.5, Gluβ-H2), 3.20-3.25 (1H, m, Proδ-H), 3.55-3.60 (1H, m, Proδ-H), 4.44-4.51 (1H, m, Gluα-H) 4,54-4.61 (1H, m, Proα-H), 4.97 (2H, s, OCH2Ph), 5.06 (2H, s, OCH2Ph), 5.15 (2H, s, OCH2Ph) 5.48 (1H, br  s , NHCO2), 7.28-7.33 (15H, m, Ph) 及び 7.58-7.62 (1H, m, NHCO) ; δc ( 50 MHz; CDCl3) 24.8 [CH3, (CH3)2C], 25.6 (CH2, Proγ-C), 26.1 [CH3, C(CH3)2], 28.0 (CH2, Gluβ-C 及び Proβ-C), 30.1 (CH2, Gluγ-C), 48.0 (CH2, Proδ-C), 51.8 (CH, Gluα-C), 57.0 (quat, C(CH3)2), 62.2 (CH, Proα-C), 66.1 (CH2, OCH2Ph), 66.9 (CH2, OCH2Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 136.0 (quat., Ph), 155.1 (quat., NCO2), 171.0 (quat., GluCO), 172.0 (quat., GluCO) 及び 172.7 (quat., ProCON) ; m/z (EI+) 644.2969 (M+. C36H42N3O8は、644.2972を必要とする)。
【０１２８】
６．３  アミノイソブチリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸（ＡｉｂＰＥ）６４：
メタノール（４０ｃｍ3）中の保護トリペプチド３（０．４４ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０質量％パラジウム（０．０７ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を、窒素及び次いで水素の雰囲気下で、室温で２０時間攪拌した。溶液を、セリット（登録商標）パッドを通してろ過し及びメタノール（２×２０ｃｍ3）で洗浄した。ろ液を、減圧下で蒸発して、透明のゴムを形成した。ゴムを、メタノール（２０ｃｍ3）において溶解し及びセリット（登録商標）パッドを通して再ろ過した。溶液を、乾燥するまで減圧下で蒸発して、明るいオレンジ色のゴムを形成した。ゴムを、真空ラインに１５分間置き及び次いで、無水ジエチルエーテルで粉砕して、ＡｉｂＰＥ（０．１４ｇ、６３％）を、淡黄色の固体として形成した。ＡｉｂＰＥを、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の６５：３５のトランス：シスの混合物であることを示した：ｍｐ１９０−１９２℃: [α]D 35.5 (MeOH中のc 0.06): δH  ( 200 MHz; D2O) 1.47* ( 1.05H, s, CH3), 1.49* ( 1.05H, s, CH3), 1.73 ( 1.95H, s, CH3), 1.76 ( 1.95H, s, CH3), 1.96-2.34 (6H, m, Proβ-H2, Proγ-H2 及び Gluβ-H2), 2.54-2.60 ( 1.3H, m, Gluβ-H2) 2.60-2.64* ( 0.7H, m, Gluβ-H2), 3.55-3.59 (1H, m, Proδ-H), 3.70-3.80 (1H, m, Proδ-H), 4.46-4.58 (1H, m, Gluα-H), 4.55-4.57 (1H, m, Proα-H) ; δc ( 50 MHz; D2O ) 21.3* [CH3, (CH3)C], 21.5 [CH3, (CH3)C], 22.5* (CH3, (CH3)C), 23.8 (CH3, (CH3)C), 24.8 (CH2, Proγ-C), 25.0 (CH2, Gluβ-C), 25.5* (CH2, Proγ-C), 27.9 (CH2, Proβ-C), 29.3* (CH2, Proβ-C), 29.6 (CH2, Gluγ-C), 45.5* (CH2, Proδ-C), 48.5 (CH2, Proδ-C), 51.9 (CH, Gluα-C), 52.7* (CH, Gluα-C), 57.0* [quat., C(CH3)2], 57.9 [quat., C(CH3)2], 58.5*(CH, Proα-C), 62.1 (CH, Proα-C), 171.0 (quat., Aib-CO), 174.0 (quat., ProCON), 174.8 (quat., Gluα-CO2) 及び 176.8 (quat, Gluγ-CO2) ; m/z (FAB+) 330.1664 (MH+. C14H24N3O6は、330.1665を必要とする)
【０１２９】
参照:  1. Wipf  et al. Helv.Chim.Acta, 1988, 71, 140; 2. Kent et al. J.Sol.Chem., 1985, 14, 101; 3. Gillesse et al. Helv.Chim.Acta, 1970, 53, 63。
実施例７：類縁体６５（グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン（ＧＰＮｏｒｖａｌｉｎｅ））の合成
一般的実験の詳細は、上の実施例２において記載されるようなものであった。Ｌ−ノルバリン１を、シグマから獲得した。
グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン（ＧＰＮｏｒｖａｌ）
【０１３０】
【化２０】
2008545697.tif 000022
【０１３１】
７．１  Ｌ−ノルバリンベンジルエステルｐ−トルエンスルホナート２：
ベンジルアルコール（５ｃｍ3）中のＬ−ノルバリン１（１．０ｇ、８．５３ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（１．７０ｇ、８．９６ｍｍｏｌ）のサスペンションを、還流下で、ベンゼン（２５ｃｍ3）において、水の除去を伴い（ディーン−スタークトラップ）、１７時間加熱した（５分後得られた溶液）。溶液を、室温に冷却し及び乾燥エーテルを添加した。０℃に冷却で、白色固体が沈殿し及びろ過により収集し、乾燥エーテルで洗浄し及び乾燥して、ｐ−トルエンスルホナート２（３．０７ｇ、９５％）を、白色固体として得た：ｍｐ１４２−１４４℃; [α]D  -1.45 (ジクロロメタン中のc 1); δH  (200 MHz; CDCl3; Me4Si) 0.7 (3H, t, J  7.1, 5-H3), 1.09-1.37, (2H, m, 4-H2), 1.74, (2H, app. quartet, J  7.9, 3-H2), 2.30 (3H, s, Ar-CH3), 3.99 (1H, t, J  6.2, 2-H2), 4.98 (1H, d, J  12.3, OCHAHBPh), 5.11 (1H, d, J  12.3, OCHAHBPh), 7.07 (2H, d, J  8.0, 3'-H); 7.22-7.30 (5H, m, Ph-H) 及び 7.74 (2H, d, J  8.0, 2'-H);  δC (50 MHz; CDCl3) 13.4 (CH3, 5-C), 17.9 (CH2, 4-C), 21.2 (CH3, Ar-CH3) 32.3 (CH2, 3-C), 53.1 (CH, 2-C), 67.6 (CH2, OCH2Ph), 126.0 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.7 (CH, Ph), 134.8 (quat., Ph), 140.2 (quat., Ph), 141.4 (quat., Ph) 及び 169.4, (quat., 1-C); m/z (FAB) 587.2777[M2.pTsOH.H+ : (C12H17NO2)2.C7H8O3S.Hは、587.2791を必要とする]。
【０１３２】
７．２  Ｎ−ベンジルオキシルカルボニル−グリシル−Ｌ−ノルバリンベンジルエステル４：
窒素下で乾燥ジクロロメタン（２０ｃｍ3）中のベンジルＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｌ−プロリン３（０．４ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．３１ｃｍ3、１．７６ｍｍｏｌ）を添加した。サスペンションを、５分間攪拌し（溶液を得た）、０℃に冷却し及びクロロギ酸エチル（０．１６６ｃｍ3、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。４５分後、乾燥ジクロロメタン（２０ｃｍ3）中のジイソプロピルエチルアミン（０．３１ｃｍ3、１．７６ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホナート２（０．６４４ｇ、１．７０ｍｍｏｌ）の溶液を、５分にわたり滴下で添加した。冷却槽を、除去し及び得られた溶液を、一晩攪拌した。溶剤を、真空で除去し及び残りを、クロマトグラフィ（シリカゲル、５０−１００％酢酸エチル−ヘキサン）にかけて、十分な保護トリペプチド４（０．５０２ｇ、７８％）を、無色の油として得た。トリペプチド４を、13Ｃ  ＮＭＲ分析により配座異性体の８４：１６のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、個々に、大きい及び小さい配座異性体のδ３４．０及び３３．６でΨＥβ−Ｃ及びδ１８．５及び１８．８でＥγ−Ｃ炭素の強度から測定した）: [α]D -70.3 (ジクロロメタン中のc 0.8); δH  (300 MHz; CDCl3; Me4Si)  0.87 (3H, d, J 6.0, Eγ-CH3), 1.26-1.33 (2H, m, Eγ-H2), 1.58-1.68 (1H, m, Eβ-HAHB), 1.70-2.26 (5H, m, Eβ-HAHB, Proβ-H2, 及び Proγ-H2), 3.38 (0.84H, d, J  7.6, Proδ-HAHB), 3.51-3.56 (0.84H, m, Proδ-HAHB), 3.60-3.65* (0.32 H, m, Proδ-H2), 3.76* (0.16H, d, J  16.5, Glyα-HAHB), 3.91 (1.84H, m, Glyα-H2), 4.37* (0.16H, br s, Proα-H), 4.49-4.62 (2H, m, Proα-H, Eα-H), 5.09-5.21 (4H, m, 2 x OCH2Ph), 5.85 (1H, br s, GlyNH), 7.2 (1H, d, J 5.5, Eα-NH) 及び 7.34 (10H, s, 2 x Ph);  δC (75 MHz; CDCl3)  13.4 (CH3, Eγ-CH3), 13.5* (CH3, Eγ-CH3), 18.5 (CH2, Eγ-C), 18.8* (CH2, Eγ-C), 22.2* (CH2, Proγ-C), 24.7 (CH2, Proγ-C), 27.7, (CH2, Proβ-C) 31.9* (CH2, Proβ-C) 33.6* (CH2, Eβ-C), 34.0 (CH2, Eβ-C), 43.3 (CH2, Glyα-C), 46.2 (CH, Proδ-C), 47.0* (CH, Proδ-C), 52.1* (CH, Eα-C), 52.3 (CH, Eα-C), 59.9 (CH, Proα-C), 66.8 (CH2, OCH2Ph), 67.1* (CH2, OCH2Ph), 127.9 (CH, Ph), 127.99 (CH, Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.1* (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 135.4 (quat., Ph), 136.3 (quat., Ph), 156.2 (quat., NCO2), 156.4* (quat., NCO2), 167.9 (quat., GlyCO), 168.2* (quat., Gly-CO), 170.7 (quat., ProCON), 171.1* (quat., ProCON) 及び 172.1 (quat., Eα-CO); m/z (FAB+) 495.2381 (MH+. C27H33N3O6は、495.2370を必要とする)。
ΨEは、問題になっているプロリン類縁体部に関する。
*は、小さい配座異性体に配置される共鳴を示す。
【０１３３】
７．３  グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン（ＧＰＮｏｒｖａｌ）６５：
トリペプチド４（０．３０８ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を、メタノール（３０ｃｍ3）において溶解した。反応フラスコを、窒素で洗い流し及び活性炭上の１０質量％パラジウム（６６ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を添加し混合物を、水素の１雰囲気で水素化した。３０分後、白色固体が、沈殿した。水（１５ｃｍ3）を添加して、固体を溶解し及び反応物を、１８時間攪拌した。反応物を、セリット（登録商標）を通してろ過し、メタノール／水で洗浄し及び溶剤を除去して、パラジウムで組み合わされた油を生産した。ろ過を再び繰り返し及び溶剤を除去して、メタノールにおいて懸濁された白色固体を生産し及び冷蔵庫に一晩置いた。固体をろ過し、氷のように冷たいメタノールで洗浄し及び乾燥して、ＧＰＮｏｒｖａｌ（０．１４２ｇ、８４％）を、白色のフレークとして生産した。ＧＰＮｏｒｖａｌを、13Ｃ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７８：２２のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、個々に、大きい及び小さい配座異性体のδ２９．４及び３１．６でプロβ−Ｃ炭素及びδ２４．１及び２１．９でプロγ−Ｃ炭素の強度から測定した）: [α]D  -79 (水中のc 0.1); δH  (300 MHz; D2O)  0.85 (3H, d, J  7.4, Eγ-CH3), 1.29 (2H, 六重項, J  7.0, Eγ-H2), 1.53-1.75 (2H, m, Eβ-H2) 1.88-2.05 (3H, m, Proβ-HAHB, Proγ-H2) 2.09-2.27 (1H, m, Proβ-HAHB), 3.51-3.82 (4H, m, Proδ-H2, Glyα-H2), 4.09 (0.78H, dd, J  7.8 5.0, Eα-H), 4.14* (0.22H, dd, J  9 5.0, Eα-H) 及び 4.41 (1H, m, Proα-H);  δC (75 MHz; D2O)  12.8* (CH3, Eγ-CH3), 12.9 (CH3, Eγ-CH3), 18.5 (CH2, Eγ-C), 18.7* (CH2, Eγ-C), 21.9* (CH2, Proγ-C), 24.1 (CH2, Proγ-C), 29.4, (CH2, Proβ-C), 31.6* (CH2, Proβ-C), 33.3* (CH2, Eβ-C), 33.8 (CH2, Eβ-C), 40.6 (CH2, Glyα-C), 46.8 (CH, Proδ-C), 47.5* (CH, Proδ-C), 55.1 (CH, Eα-C), 60.0* (CH, Proα-C), 60.4 (CH, Proα-C), 166.6 (quat., GlyCO), 173.1 (quat., ProCON), 178.9* (quat., Eα-CO) 及び 179.0 (quat., Eα-CO);  m/z (FAB+) 272.1641 (MH+. C12H22N3O4は、272.1610を必要とする)。
【０１３４】
実施例８：類縁体６６（グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル(pipecolinyl)−Ｌ−グルタミン酸（Ｇ（Ｄ，Ｌ）ＰｉｐＥ））の合成
一般的実験の詳細は、上の実施例１において記載されるようなものであった。Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシン１、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２（９７％）（ＮＨＳ）、Ｄ，Ｌ−ピペコリン酸４（９８％）及び活性炭上の１０％パラジウムを、アルドリッチケミカルカンパニーから獲得した。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を、Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ−Ｈａｅｎから獲得した。Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート６を、バケムから獲得した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（９７％）（ＢｏＰＣｌ）を、フルカから獲得した。
【０１３５】
【化２１】
2008545697.tif 000023
【０１３６】
８．１  Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシルスクシンイミド1,2３：
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシン１（７．５０ｇ、３５．９ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド２（４．１３ｇ、３５．９ｍｍｏｌ）を、１，２−ジメトキシエタン（６０ｃｍ3）において溶解し及び０℃（氷／水）に窒素下で冷却した。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジミド(dicyclohexylcarbodimide)（８．１４ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）を添加し及び溶液を、１．５時間攪拌し及び次いで、冷蔵庫に−５℃で２０時間置いた。溶液をろ過し及び減圧下で蒸発して、黄色油を形成した。油を、ジエチルエーテル（３０ｃｍ3）で粉砕して、スクシンイミド３を、白色固体として形成した。この固体を、引き続き、更なる精製なしで使用した。
【０１３７】
８．２  Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリン酸3５：
Ｄ，Ｌ−ピペコリン酸４（０．２０ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルオキシカルボニル−グリシルＮ−ヒドロキシスクシンイミド３（０．４７ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（２ｃｍ3）に室温で窒素下で添加した。トリエチルアミン（０．２２ｃｍ3、１．５８ｍｍｏｌ）を、次いで、５分の期間にわたり滴下で添加した。溶液を、８０℃で４時間加熱し及び次いで、室温に冷却し及び２日間攪拌した。酢酸エチル（４０ｃｍ3）を添加し及び得られた溶液を、１Ｍ塩酸（２×５ｃｍ3）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、透明のゴムを生産し、それを、ジエチルエーテル（５ｃｍ3）で粉砕して、酸５（０．３３ｇ、６７％）を白色固体として製造した。酸５を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により配座異性体の７５：２５のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ３．７６及び３．８１で、二重項の強度から測定し、個々に、小さい及び大きい配座異性体のグリα−ＨAＨBに与えた）: δ H(300 MHz; CD3OD) 1.05-1.76 (5H, m, pipβ-H, pipγ-H2 and pipδ-H2), 2.19 (0.75H, t, J 12.6, pipβ-H), 2.62* (0.25H, t, J 15.4, pipβ-H), 3.14-3.25 (1H, m, pipε-HAHB), 3.65-3.70 (1H, pipε-HAHB), 3.76* (0.25H, d, J 16.7, Glyα-HAHB), 3.81 (0.75H, d, J 16.9, Glyα-HAHB,), 4.06* (0.25H, d, J 16.6, Glyα-HAHB,), 4.08 (0.75H, d, J 17.0, Glyα-HAHB,), 4.22* (0.25H, d, J 13.6, pipε-H), 4.60* (0.25H, br s, pipα-H), 4.83 (2H, s, OCH2Ph), 5.14 (0.75H, br s, pipα-H ) 及び 7.20-7.31 (5H, m, Ph); δc( 75 MHz, CD3OD) 22.5 (CH2, pipγ-C), 26.2* (CH2, pipγ-C), 26.6 (CH2, pipβ-C), 27.3* (CH2, pipβ-C), 28.2 (CH2, pipδ-C), 28.5* (CH2, pipδ-C), 35.3 (CH2, pipε-C), 41.8* (CH2, Glyα-C), 44.2 (CH2, Glyα-C), 54.3 (CH, pipα-C), 57.1*(CH, pipα-C), 68.3 (CH2, OCH2Ph), 129.5 (CH, Ph), 129.6 (CH, Ph), 130.1 (CH, Ph), 138.8 (quat., Ph), 159.5 (quat., NCO2), 171.5 (quat., GlyCO), 174.1* (quat., CO2H) 及び 174.7 (quat., CO2H); m/z  (EI+) 320.1369 (M+.C16H20N2O5は、320.1372を必要とする)。
【０１３８】
８．３  ベンジル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸塩７：
酸５（０．２５ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート６（０．４７ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（９７％）（０．２４ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０ｃｍ3）において窒素下で溶解し及び０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．２５ｃｍ3、１．８０ｍｍｏｌ）を、５分の期間にわたり滴下で添加した。溶液を１．５時間攪拌し次いで、室温に温め及び一晩攪拌した。ジクロロメタン（３０ｃｍ3）を添加し及び有機層を、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｃｍ3）及び水性２Ｍクエン酸（１０ｃｍ3）で洗浄し次いで、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び減圧下で蒸発して、白色のゴム状の固体を形成し、それを、フラッシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により精製して、十分な保護トリペプチド７（０．３７ｇ、７４％）を透明のゴムとして製造した。トリペプチド７を、1Ｈ  ＮＭＲ分析により２つの当モルのジアステレオマーの配座異性体の８７：１３のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ４．０５−４．１１及び４．２０−４．３０で一重項の強度から測定し、個々に、大きい及び小さい配座異性体のグリα−Ｈ2プロトン与えた）: [α]D  9.2 (MeOH中の c 0.07) ; δH (300 MHz; CDCl3; Me4Si ) 1.11-2.22 (8H, m, pipβ-H2, pipγ-H2  pipδ-H2 及び Gluβ-H2), 2.30-2.41 (2H, m, Gluγ-H2), 3.00-3.20 (1 H, m, pipε-H), 3.48 (1 H, t, J 10.6, pipε-H), 4.05-4.11 (1.74 H, m, Glyα-H2), 4.20-4.30* (0.26 H, m, Glyα-H2), 4.55-4.59 (1 H, m, Gluα-H), 5.07-5.23 (7H, m, 3 x OCH2Ph 及び pipα-H), 5.84 (1 H, br s, GlyNH ), 6.97* (0.13 H, d, J 7.2, GluNH), 7.19 (0.87 H, d, J 7.2, GluNH) 及び 7.31-7.32 (15H, m, 3 x Ph); δc(75 MHz, CDCl3 ) 20.1 (CH2, pipγ-C), 20.4 (CH2, pipγ-C), 25.3 (CH2, Gluβ-C), 25.4 (CH2, Gluβ-C), 25.7 (CH2, pipβ-C), 25.9 (CH2, pipβ-C), 26.1 (CH2, pipδ-C), 26.7 (CH2, pipδ-C), 30.8 (CH2, Gluγ-C), 30.9 (CH2, Gluγ-C), 34.2 (CH2, pipε-C), 40.6* (CH2, Glyα-C), 43.0 (CH2, Glyα-C), 43.2 (CH2, Glyα-C), 49.4*(CH, pipα-C), 52.5 (CH, pipα-C), 52.6 (CH, pipα-C), 52.7 (CH, Gluα-C), 53.0 (CH, Gluα-C), 67.0 (CH2, OCH2Ph), 67.1 (CH2, OCH2Ph), 67.2 (CH2, OCH2Ph), 67.6 (CH2, OCH2Ph), 67.7 (CH2, OCH2Ph), 69.4 (CH2, OCH2Ph), 127.9 (CH, Ph), 128.0 (CH, Ph), 128.2 (CH, Ph), 128.4 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 135.1 (quat., Ph), 135.5 (quat., Ph), 136.4 (quat., Ph), 156.2 (quat., NCO2), 168.3 (quat., GlyCO), 168.4 (quat., GlyCO), 170.3 (quat., GluCO), 170.5 (quat., GluCO), 171.1 (quat., GluCO), 171.3 (quat., GluCO), 173.0 (quat., pip-CONH) 及び 173.4 (quat., pip-CONH); m/z (FAB+) 630.2821 (M+.C35H40N3O8は、630.2815を必要とする)。
【０１３９】
８．４  グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸[Ｇ（Ｄ，Ｌ）ＰｉｐＥ]６６：
メタノール（７０ｃｍ3）中の保護トリペプチド７（０．７２ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０％パラジウム（０．１２ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、水素の雰囲気下で室温で２０時間攪拌した。溶液を、セリット(登録商標)パッドを通してろ過し、メタノール（６０ｃｍ3）で洗浄し及びろ液を、蒸発乾固して、透明のゴムを形成した。このゴムを、メタノール（３０ｃｍ3）において溶解し及びセリット(登録商標)パッドを通して再ろ過した。溶液を、蒸発乾固して、透明のゴムを形成した。ゴムを、真空ラインに１５分間置き及び次いで、無水ジエチルエーテルで粉砕して、Ｇ（Ｄ，Ｌ）ＰｉｐＥ（０．３４ｇ、９５％）を白色固体として形成した。Ｇ（Ｄ，Ｌ）ＰｉｐＥを、1Ｈ  ＮＭＲ分析により２つの当モルジアステレオマーの配座異性体の８０：２０のトランス：シスの混合物であることを示した（比を、δ２．９１及び３．３４で三重項の強度から測定し、個々に、小さい及び大きい配座異性体のｐｉｐε−ＨAＨBに与えた）:ｍｐ６７−６９℃．; [α]D +7.9 (MeOH中の c 0.09) ; δH (400 MHz; CD3OD) 1.37-1.65 (4H, Gluβ-H2 及び pipγ-H2), 1.89-2.52 (6H, pipδ-H2, pipβ-H2 及び Gluγ-H2), 2.78* (0.1H, t, J 10.5, pipε-HAHB), 2.91* (0.1H, t, J 10.5, pipε-HAHB), 3.18 (0.4H, t, J 10.5, pipε-HAHB), 3.34 (0.4H, t, J 10.5, pipε-HAHB), 3.52-3.58 (1H, m, pipε-HAHB), 3.81-3.88 (1.6H, m, Glyα-H2), 4.00-4.10* (0.2H, m, Glyα-H2), 4.16 (0.8H, t, J 6.4 , Gluα-H), 4.40-4.50* (0.2H, m, Glyα-H2), 4.46-4.50* (0.2H, m, pipα-H) 及び 5.05-5.09 (0.8H, m, pipα-H); δC (75 MHz, CD3OD ) 21.8 (CH2, pipγ-C), 25.7 (CH2, Gluβ-C), 26.0* (CH2, Gluβ-C), 26.5 (CH2, Gluβ-C), 27.0 (CH2, pipβ-C), 27.4* (CH2, pipβ-C), 27.6 (CH2, pipβ-C), 28.1 (CH2, pipδ-C), 28.3*(CH2, pipδ-C), 28.7 (CH2, pipδ-C), 32.2 (CH2, Gluγ-C), 33.1 (CH2, Gluγ-C), 33.2*(CH2, Gluγ-C), 33.5*(CH2, Gluγ-C), 41.9 (CH2, pipε-C), 44.1 (CH2, Glyα-C), 44.6* (CH2, Glyα-C), 44.8* (CH2, Glyα-C), 45.6 (CH2, Glyα-C), 55.0 (CH, pipα-C), 56.1 (CH, pipα-C), 56.2 (CH, Gluα-C), 57.7* (CH, Gluα-C), 57.9*(CH, Gluα-C), 60.5 (CH, Gluα-C), 168.3 (quat., GlyCO), 169.8 (quat., GlyCO), 172.5 (quat., pip-CON), 174.6 (quat., pip-CON), 177.2 (quat., Gluα-CO), 178.5 (quat., Gluα-CO), 179.3 ( quat., Gluγ-CO) 及び 180.0 (quat., Gluγ-CO) ; m/z (FAB+) 316.1509 (MH+. C13H22N3O6は、316.1509を必要とする)。
【０１４０】
参照: 1. Detsiet al. J.Chem.Soc.Perkin Trans1, 1998, 15, 2443; 2. Scudder et al. Tet.Lett. 1995, 36, 2105; 3. Nishitani et al. J.Org.Chem., 1982, 47, 1706。
実施例９：類縁体６７（ピロリジノグリシル(pyrrolidinoglycyl)−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸（ＰｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏＧ−２ＭｅＰＥ））の合成
一般的実験の詳細は、上の実施例２において記載されるようなものであった。塩酸塩（１）及びピロリジノ酢酸(pyrrolidinoacetic acid)（２）を、個々に、ＤＣ５４（ＣｙｃｌｉｃＧ−２ＥｔＰ）及びＤＣ６８（ＰｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏＧＰＥ）の合成において記載されるように合成した。グルタミン酸ジベンジルエステルｐ−トルエンスルホネート（５）及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ、９７％）を、バケム及びフルカから、個々に獲得した。
【０１４１】
【化２２】
2008545697.tif 000024
【０１４２】
９．１  メチルピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチルプロリナート（３）：
乾燥トリエチルアミン（１．９ｃｍ3、１３．７ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１０ｃｍ3）中の酸２（０．３９ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）及び塩酸塩１（０．４０ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し、及び反応混合物を、１時間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフォン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ、９７％）（０．７０ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を２時間室温で攪拌し、次いで、１００℃に３時間加熱し、室温に冷却し及び３日間攪拌した。溶液を、真空で蒸発乾固して、酢酸エチル（５０ｃｍ3）において溶解された暗褐色の固体を形成し及び次いで、飽和炭酸水素ナトリウム（２０ｃｍ3）で洗浄した。水性層を、酢酸エチル（２×２０ｃｍ3）で再抽出した。組み合わされた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ4）及び減圧下で蒸発した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（５％メタノール−ジクロロメタン）による得られた残りの精製により、アミド３（０．１１ｇ、１９％）をオレンジ色の油として得た：δH (400 MHz, CDCl3) 1.56 (3H, s, Proα-CH3), 1.77-1.80 (4H, m, 2 x Pyrβ-H2), 1.85-1.90 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.00-2.04 (2H, m, Proβ-H2), 2.10-2.13 (1H, m, Proγ-HAHB), 2.58-2.63 (4H, m, 2 x Pyrα-H2), 3.25 (2H, s, Glyα-H2) 及び 3.66-3.73 (5H, m, Proδ-H2 及び OCH3); δC (100 MHz, CDCl3) 21.8 (CH3, Proα-CH3), 24.0 (CH2, 2 x Pyrβ-C), 24.5 (CH2, Proγ-C), 38.6 (CH2, Proβ-C), 47.9 (CH2, Proδ-C), 52.6 (CH3, OCH3), 54.4 (CH2, 2 x Pyrα-C), 59.3 (CH2, Glyα-C), 66.2 (quat., Proα-C), 168.6 (quat., GlyCO) 及び 174.8 (quat., CO2CH3)。
【０１４３】
９．２  ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチルプロリン（４）：
ジオキサン（５ｃｍ3）中のアミド３（０．０８ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ水性ＮａＯＨ（２．５ｃｍ3、２．５ｍｍｏｌ）を滴下で添加し及び混合物を、２日間室温で攪拌した。反応混合物を、１Ｍ塩酸で酸性にし及び及び減圧下で蒸発環固した。得られたサスペンションを、エタノールにおいて再溶解し、ろ過し及び真空で蒸発乾固して、酸４（０．０５ｇ、６６％）を暗褐色のゴムとして提供した: δH (400 MHz, CD3OD) 1.56 (3H, s, Proα-CH3), 1.94-2.22 (8H, m, Proβ-H2, Proγ-H2 及び 2 x Pyrβ-H2), 3.10-3.13 (2H, m, Pyrα-H2), 3.54-3.63 (2H, m, Proδ-H2), 3.67-3.70 (2H, m, Pyrα-H2), 及び 4.27 (2H, s, Glyα-H2); δC (100 MHz, CD3OD) 22.1 (CH3, Proα-CH3), 24.6 (CH2, Pyrβ-C), 24.7 (CH2, Pyrβ-C), 25.3 (CH2, Proβ-C), 40.3 (CH2, Proγ-C), 49.1 (CH2, Proδ-C), 56.6 (CH2, Pyrα-C), 56.8 (CH2, Pyrα-C), 57.9 (CH2, Glyα-C), 68.5 (quat., Proα-C), 164.7 (quat., GlyCO) 及び 177.2 (quat., CO2H)。
【０１４４】
９．３  ジベンジルピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリル−Ｌ−グルタミン酸塩（６）：
乾燥トリエチルアミン（０．０９ｃｍ3、０．６２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（８ｃｍ3）中の酸４（０．０５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＬ−グルタミン酸ジエチルエステルｐ−トルエンスルホナート５（０．１１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素の雰囲気下で室温で滴下で添加し、及び反応混合物を１０分間攪拌した。ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢｏＰＣｌ、９７％）（０．０６ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、添加し及び溶液を３日間攪拌した。溶液を、引き続き、１０％水性塩酸（７ｃｍ3）及び飽和水性炭酸水素ナトリウム（７ｃｍ3）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、ろ過し及び真空で蒸発乾固した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（１０−２０％メタノール−ジクロロメタン；勾配溶離）による得られた残りの精製は、十分な保護トリペプチド４（０．０３８ｇ、４０％）を無色の油として製造した：; δH (400 MHz, CDCl3) 1.62 (3H, s, Proα-CH3),1.83-2.44 (12H, m, Proβ-H2, Proγ-H2, Gluβ-H2, Gluγ-H2 及び2 × Pyrβ-H2), 2.80-2.90 (4H, m, 2 × Pyrα-H2), 3.43-3.72 (4H, m, NCH2CO 及び Proδ-H2), 4.52-4.54 (1H, m, Gluα-H), 5.08 (2H, s, OCH2Ph) , 5.08-5.14 (2H, m, OCH2Ph), 7.27-7.37 (10H, m, 2 × Ph) 及び 7.77 (1H, d, J 7.3, GluNH). δC (100 MHz, CDCl3) 21.4 (CH3, Proα-C), 23.1 (CH2, Pyrβ-C 及び Proγ-C), 26.3 (CH2, Gluβ-C), 29.8 (CH2, Gluγ-C), 38.1 Proγ-C), 47.8 (CH2, Proδ-C), 51.7 (CH, Gluα-C), 53.9 (CH2, Pyrα-C), 57.9 (CH2, NCH2CO), 65.9 (CH2, OCH2Ph), 66.6 (CH2, OCH2Ph), 67.7 (quat., Proα-C), 128.1 (CH, Ph), 128.3 (CH, Ph), 128.5 (CH, Ph), 134.9 (quat., Ph), 135.4 (quat., Ph), 167.5 (quat., Pyr-CONH), 171.3 (quat., GluCO) , 172.3 (quat., GluCO) 及び 173.4 (quat., Pro-CON)。
【０１４５】
９．４  ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸(ＰｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏＧ−２−ＭｅＰＥ)６７：
１０％水−エタノール（８ｃｍ3）中の保護ペプチド６（０．０３８ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び活性炭上の１０質量％パラジウム（０．０７３ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の混合物を、水素の雰囲気下で室温で２０時間攪拌した。溶液を、セリット（登録商標）パッドを通してろ過し及びろ液を、蒸発乾固して、透明のゴムを形成した。ゴムを、１０％水−エタノール（１０ｃｍ3）において溶解し及びセリット（登録商標）パッドを通して再ろ過した。ろ液を蒸発乾固して、透明のゴムを得、それを、真空ラインに１５分間置き及び次いで、無水ジエチルエーテルで粉砕して、ＰｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏＧ−２ＭｅＰＥ（０．０２４ｇ、９８％）を透明のゴムとして形成した。; δH ( 300 MHz; CD3OD) 1.57 (3H, s, ， Proα-CH3), 1.87-2.20 (10H, m, Proβ-H2, Proγ-H2, Gluβ-H2 及び2× Pyrβ-H2), 2.30-2.33 (2H, m, Gluγ-H2), 3.35-3.45 (4H, m, 2 x Pyrα-H2), 3.59-3.62 (4H, m, Proδ-H2 及び NCH2CO) 及び 4.18-4.25 (1H, m, Gluα-H); δC ( 75 MHz; CD3OD) 21.9 (CH3, Proα-C), 24.8 (CH2, Pyrβ-C), 25.8 (CH2, Proγ-C), 29.3 (CH2, Gluβ-C), 32.6 (CH2, Gluγ-C), 40.9 (CH2, Proβ-C), 49.3 (CH2, Proδ-C), 56.0 (CH, Gluα-C), 56.5 (CH2, Pyrα-C), 70.0 (quat., Proα-C), 165.3 (quat, Pyr-CONH), 175.9 (quat, ProCONH) 及び 179.0 (quat, Gluγ-CO2H)。
【０１４６】
実施例１０：ＧＰＥ類縁体のインビトロ活性の研究
ＧＰＥの合成類縁体を、神経細胞死の予防におけるそれらの効果のインビトロ評価に付した。
ａ）線条体細胞培養
方法及び材料
２匹の妊娠したウィスターラット(wistar rat)（妊娠日１８）は、オークランドの大学のAnimal Ethics Committeeからの認可された手順に従って帝王切開を受けた。ウィスターダム(wistar dam)を、ＣＯ2−濃縮雰囲気において麻酔し及び続く脊髄コード転移により犠牲にした。胎児をそれらの胎児嚢から除去し及び頭部を切除した。細いはさみで頭蓋骨内を切開後、胎児の脳を、細いへらで除去した。線条体組織を、顕微鏡の下新皮質組織から分離し及びペニシリン／ストレプトマイシン（１００μ／ｍＬ）で補われた血清を含まないＤＭＥＭ／Ｆ−１２媒体内に置いた。組織は、Ｐ１０００分注器を用いて１５の粉砕の工程を受けて、解離細胞を得、それを、５分間２５０Ｇ（４℃）で遠心分離にかけ及び浮遊物を捨てた。細胞を、１ｍＬのＤＭＥＭ／Ｆ−１２媒体内で再−懸濁し及び氷上に維持した。細胞サスペンション（４００，０００細胞／ｃｍ2）を、９６−ウェルプレート（３７℃で３時間）をプレコーティングされた０．１ｍｇ／ｍＬのポリ−Ｌ−リシンに適用し及び容量を、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２＋５％ＦＢＳで最大１００μＬまで増加した。細胞を、３７℃で１００％湿度において５％ＣＯ2雰囲気において培養した。２４時間後、媒体を、血清を含まない神経基礎／Ｂ２７に変化した。細胞媒体を、３日ごとに変化し及びインビトロで８日まで維持した（ＤＩＶ）。
【０１４７】
細胞障害、薬剤投与及び細胞生存分析
線条体細胞を、２、３、７又は８日後、インビトロで傷つけた。障害パラダイムは、本発明のＧＰＥ類縁体の同時投与での３０ｎＭオカダ酸治療を２４時間含んだ。ＰＢＳにおいて溶解された１μＬのＧＰＥ類縁体（２μＬのＰＢＳを受けたベヒクル）と一緒に１μＬの３μＭオカダ酸原液を、２４時間線条体細胞で培養した。引き続き、２０μＬのＭＴＴ（ＰＢＳ中の５ｍｇ／ｍＬ）を、４時間添加した。反応を、
１００μＬの４％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液の添加により終了した。１６−２４時間の培養時間後、消光値を５９５ｎｍで示す。ベヒクル及びオカダ酸損傷条件の間の差違を、計算した。この値を、理論上の１００％回収値としてセットした。非対ステューデントｔ−検定を、統計分析のために用いた。
【０１４８】
ｂ）小脳細胞培養
方法及び材料
出産日３、４又は８のウィスターラットを、研究のために用いた。ラットを、犠牲にし及び氷において１分置き、頭部を切り落とし及び小脳を除去し及び氷上に置いた。小脳組織を、大きなペトリ皿において１ｍｌの０．６５％グルコース−捕捉ＰＢＳ（１０μｌの６５％ストックＤ（＋）グルコース／１ｍｌのＰＢＳ）中に置き、小断片に切り刻み及び２３標準規格（０．４ｍｍ）注射針を介して１ｍｌのインスリンシリンジで粉砕し、及び次いで、ペトリ皿においてグルコース溶液内に吹きかけた。組織を、ふるいにかけ（１２５μｍの気孔サイズ）及び遠心分離にかけて（６０ｘｇで２分）（２回）、血清を含まないＢＳＡ−捕捉ＳＴＡＲＴ  Ｖ媒体（バイオクロム(Biochrom)、ドイツ）内で媒体を交換した。第二の遠心分離工程を、１ｍｌのＳＴＡＲＴ  Ｖ媒体で行った。微小移植を、５００μｌのＳＴＡＲＴ  Ｖ媒体内で再構成し及び氷上に置いた。
【０１４９】
培養カバースリップの製造及び小脳細胞の培養
ＰＤＬ−コーティング（１００μｇ／ｍｌ）の２時間後、スライドを、ミリポアＨ2Ｏで洗浄し及び空気を乾燥した。各々のスライドを、小さなペトリ皿(直径：３５ｍｍ)内に置き及び４０μｌのＳＴＡＲＴ  Ｖ／細胞サスペンションを添加した。組織を、２時間３４℃でインキュベートした（沈下期）。ＳＴＡＲＴ  Ｖ−媒体（１ｍｌ）を、次いで、ペトリ皿に添加し及び３４℃で空中の５％ＣＯ2の存在下で１００％の湿度で４８時間培養した。
【０１５０】
細胞損傷、薬剤投与及び細胞生存分析
１０μｌの毒素１（ミリポア水中のＬ−グルタメート−１００ｍＭ；最終濃度：０．５ｍＭ）及び１０μｌの毒素２（ミリポア水中の３−ニトロプロピオン酸−５０ｍＭ−ｐＨ７−、最終濃度：０．５ｍＭ）を、同時に、化合物で適用して、試験した（ＰＢＳにおいて製造され及び１−１００ｎＭの間の最終濃度に希釈された１０ｍＭストック溶液）。各々のケースにおいて、薬剤を、研究の間移植に関して放置した。
移植を、研究期間の間、本発明のＧＰＥ類縁体に暴露した後、細胞を次いで、ＰＢＳにおいてすすぎ及び次いで、パラホルムアルデヒドの濃度を増加することにおいて固定化した（５００μｌの０．４％ＰＦＡ、次いで、１．２％ＰＦＡ；次いで、３％ＰＦＡ及び最終的には、４％ＰＦＡを適用した（各々の固化工程：２−３分）。最終的には、微小移植を、ＰＢＳですすいだ。移植における神経を、次いで、形態学（神経突起の存在）のために評価し及び顕微鏡視野を通して生細胞として数えた。最も高い細胞密度を表示する４つの分野を、カバースリップ(cover slip)で数え及びデータを、意味（ＳＥＭ）；ｎ＝各々４の意味±標準エラーとして表した。統計的意義を、非−対スチューデントｔ−検定を用いることにより評価した。
【０１５１】
ｃ）ラット皮質解離細胞培養
材料
胎児Ｅ１８／１９ウィスターラットを、解離皮質細胞培養の生成のために使用した。皮質プレートの後部（視覚皮質の後頭皮質−エリア１７／１８）を、培養の生成のために使用する。細胞を、血清を含まない媒体の一部及びラット皮質誘導培養された星状条件媒体（ＡＣＭ）の一部における３−１０ＤＩＶのために成長させた。
方法
９６−ウェル組織培養プレートを、０．２ｍｇ／ｍｌのポリ−Ｌ−リシン、次いで、２μｇ／ｍｌのラミニンでコーティングした。その後、６０μｌのＡＣＭを、ウェルあたり添加し及びプレートを、３７℃で皮質細胞をプレートするまで貯蔵した。
【０１５２】
星状−条件媒体（ＡＣＭ（）の製造
１／２ウィスターパップ(wistar pup)の全体皮質を、チューブあたり４ｍｌのＤＭＥＭ−１皮質を含有する分離チューブ内に収集した。組織を、５ｍｌの殺菌したピペットで数回粉砕して、それらを小片に砕いた。各々のチューブを、別々に、試薬容器内に注ぎ及び５ｍｌのシリンジ及び１８ゲージ製図注射器で１回粉砕した。混合物を、次いで、１００μｍの細胞ろ過器を通して、５０ｍｌの遠心分離管内にろ過した。ろ過器を、５ｍｌのＤＭＥＭで洗浄した。細胞溶液を、ＤＭＥＮで５０ｍｌの容量に拡張した。溶液を、次いで、５分間３５０ｇでＲＴで遠心分離にかけた。細胞を、４０ｍｌのＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳにおいて再懸濁した。細胞を、次いで(tehn)、７５ｃｍ2細胞フラスコ内で再構成し及び３７℃／１０％ＣＯ2／１００％の湿度で、５ｎＭオカダ酸の存在下でインキュベートした。この毒素は、神経細胞を殺して、培養における星状エンティティを豊かにした。媒体を、１日後新鮮なＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳで置換した。細胞増殖を、監視し及び媒体＋ＦＢＳを、毎週２回、細胞が融合するまで(〜１０−１４日)再置換した。密集度が達するとすぐに、細胞を、２０ｍｌの殺菌ＰＢＳで１回洗浄した。細胞を、３日間３０ｍｌの神経基礎媒体＋Ｂ２７捕捉においてインキュベートして、細胞を、結成を含まない条件下で維持した。細胞浮遊物を、次いで、０．２２μｍの殺菌フィルターを通してろ過し及びアリコートにおいて−８０℃で冷凍した。
【０１５３】
皮質細胞の解剖及びめっき
胎児からの視覚野を、収集し及び解剖した−ＰＢＳ＋０．６５％グルコースにおいて行われた全工程。組織を、ＰＢＳ＋グルコース溶液において、氷上で、すべての解剖が、完了するまで貯蔵した。組織材料を、３５０ｇで５分間ＲＴで遠心分離にかけた。浮遊物を、除去し及び細胞ペレットを、５ｍｌのトリプシン／ＥＤＴＡ溶液（インビトロジェン）において８分間３７℃でインキュベートした。タンパク質分解を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳの一部の添加により停止した。その後、組織を、３５０ｇで５分間ＲＴで遠心分離にかけた。ペレットを、収集し、ＮＢ／Ｂ２７媒体（インビトロジェン）において２回洗浄し（遠心分離）及び１ｍｌのＮＢ／Ｂ２７媒体において再懸濁した。組織を、ペトリ皿内に移送し及びピペットと結合されたガラスパスツールピペットで２回粉砕して、大きい組織片を砕いた。組織を、次いで、１ｍｌのシリンジ及び２２ゲージ注射器を用いて２回粉砕し及び１００μｍの細胞容器を通して、残りの大きな組織の片を除去した。細胞を、１ｍｌのＮＢ／Ｂ２７で洗浄した。生存神経細胞の数を、数え及び細胞生存能力のパーセンテージを決定した。細胞溶液を、最終細胞の計算が、６０μｌあたり５０，０００細胞（８３３，３３３細胞／ｍｌ）である程度に希釈した。皮質細胞を、３７℃／１０％  ＣＯ2／１００％の湿度でインキュベートした。
【０１５４】
障害−神経救助剤(neuronal rescue agent)及び神経防護作用分析
神経損傷を生じさせるのために、ホスファターゼ１／２Ａアンタゴニストオカダ酸を、２４時間添加する。同時に、本発明のＧＰＥの類縁体を投与した。２４時間後、代謝活性を、２−４時間のＭＴＴの添加により、次いで、でＳＤＳ−溶液の添加及び５９５ｎｍでの光度終点測定により測定した。
ステューデント非対ｔ−検定を、条件を含有する損傷神経救助剤での損傷のない制御を比較する場合、統計的意義のための試験のために使用する。
結果
ＧＰＥ類縁体がない場合、オカダ酸治療は、未処理制御細胞(左カラム；オープンバー)と比較して、生存細胞において約３０％の減少（図１；左からの第二カラム）をもたらした。本件明細書で表される他の研究において、オカダ酸は、生存細胞の数を約１０％〜約５０％まで減少させた(図２−６)。
【０１５５】
図１は、また、ＧＰＥ治療（ハットトバー(hatched bar)）が、細胞生存の損失を生じさせたオカダ酸を逆にしたことを示す。同様に、類縁体４９（グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）は、神経防護作用である。類縁体４９は、細胞を、濃度−依存ファッションにおける細胞生存のオカダ酸−誘発損失から保護した。１０ｎＭ〜１０μＭの濃度範囲において、類縁体４９での治療は、オカダ酸により引き起こされた神経細胞生存の損失に反して１００％保護を生じさせた。
図２は、類縁体４９のように、類縁体５０（グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）がまた、神経防護作用であることを示す（図２）。１０ｎＭ〜１００ｎＭの濃度範囲において、類縁体５０での治療は、オカダ酸により引き起こされる神経細胞生存の損失から１００％保護を生じさせた。
図３は、類縁体６０（グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸）での治療がまた、１００ｎＭ及び１００μＭ及び１ｍＭの濃度で観察される統計的に有意な効果を伴い神経防護作用であることを示す。
【０１５６】
図４は、類縁体６４（アミノイソブトリル−Ｌ−プロピル−Ｌ−グルタミン酸）ＡｉｂＰｅが、神経防護作用であることを示す。１００ｕＭ〜１ｍＭの濃度範囲において、類縁体６４は、ＧＰＥより効果的であった。１ｍＭの濃度で、類縁体６４での治療は、オカダ酸により誘導される神経細胞生存の損失からの完全な保護を生じさせた。
図５は、類縁体６５（グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン）が、１０ｎＭ〜１ｍＭの広範囲の濃度にわたり神経防護作用であることを示す。試験されたほとんどすべての濃度で、類縁体６５で治療された細胞は、オカダ酸により誘導された細胞生存の損失に反して１００％保護を示した。
図６は、類縁体６６（グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸）が、１００ｎＭ、１００ｍＭ及び１ｍＭの濃度で観察された統計的に有意な効果を伴う神経防護作用であることを示す。
図７は、類縁体６７（ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸）が、小脳細胞を、オカダ酸により引き起こされた神経突起の損失から保護したことを示す。統計的に有意な効果は、１０ｐＭ−１０ｎＭの濃度で観察された。
【０１５７】
１つは、オカダ酸によりで生じた損傷が、細胞生存によるものより神経突起伸長を測定することにより細かく決定され得る、図１−６及び図７の比較から評価することができる。オカダ酸は、約１０％〜約５０％まで生存を減少させた（図１−６）。対照的に、オカダ酸は、８０％を超えるまでの神経突起を有する細胞の数を減少させた。損傷が、どのように評価されたかにかかわらず、試験された各々のＧＰＥ類縁体は、統計的に有意な神経防護作用の効果を有した。
本発明のＧＰＥの類縁体が、神経細胞を、生存の損失及び／又は神経突起の損失から、よく知られる神経毒、オカダ酸に応えて、保護し得ることを、これらの研究から結論を出す。なぜなら、オカダ酸毒素は、低酸素／虚血、発作、パーキンソン病などを含む、神経損傷の他の原因により作られたものと類似する組織学的変化を作るからであり、神経細胞保護を研究するためのこのシステム(sytem)が、他のタイプの神経変性刺激を用いて観察されるであろう効果を予測するという結論を下す。更に、これらの研究において観察される神経防護作用効果は、従って、ラットのような実験動物におけるインビボ研究を含む、神経防護作用を研究するための他のシステムと大いに関連があるようである。更に、なぜならば、ＧＰＥに関する化合物は、インビボで動物を、さまざまな異なる条件により関連する機能神経学的欠陥及び神経細胞の損失に反して保護することを示したからであり、これらの研究から、本発明のＧＰＥ類縁体が、神経学的欠陥及び神経学的疾患と関連する種々の条件を治療することにおいて有用であり得るという結論を下す。
【０１５８】
本発明が、それらの具体的な実施例に関して記載されることを評価することができる。当業者は、本件明細書で、過度の実験なしで及び成功の合理的な可能性を伴い、開示及び技術をベースとして、バリエーション及び他の実施態様を作ることができるであろう。すべてのこれらの他の実施態様は、本発明の部分であると考えられる。
図１は、また、ＧＰＥ治療（ハットトバー(hatched bar)）が、細胞生存の損失を生じさせたオカダ酸を逆にしたことを示す。同様に、類縁体４９（グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）は、神経防護作用である。類縁体４９は、細胞を、濃度−依存ファッションにおける細胞生存のオカダ酸−誘発損失から保護した。１０ｎＭ〜１０μＭの濃度範囲において、類縁体４９での治療は、オカダ酸により引き起こされた神経細胞生存の損失に反して１００％保護を生じさせた。
図２は、類縁体４９のように、類縁体５０（グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）がまた、神経防護作用であることを示す（図２）。１０ｎＭ〜１００ｎＭの濃度範囲において、類縁体５０での治療は、オカダ酸により引き起こされる神経細胞生存の損失から１００％保護を生じさせた。
図３は、類縁体６０（グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸）での治療がまた、１００ｎＭ及び１００μＭ及び１ｍＭの濃度で観察される統計的に有意な効果を伴い神経防護作用であることを示す。
図４は、類縁体６４（アミノイソブトリル−Ｌ−プロピル−Ｌ−グルタミン酸）ＡｉｂＰｅが、神経防護作用であることを示す。１００ｕＭ〜１ｍＭの濃度範囲において、類縁体６４は、ＧＰＥより効果的であった。１ｍＭの濃度で、類縁体６４での治療は、オカダ酸により誘導される神経細胞生存の損失からの完全な保護を生じさせた。
図５は、類縁体６５（グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン）が、１０ｎＭ〜１ｍＭの広範囲の濃度にわたり神経防護作用であることを示す。試験されたほとんどすべての濃度で、類縁体６５で治療された細胞は、オカダ酸により誘導された細胞生存の損失に反して１００％保護を示した。
図６は、類縁体６６（グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸）が、１００ｎＭ、１００ｍＭ及び１ｍＭの濃度で観察された統計的に有意な効果を伴う神経防護作用であることを示す。
図７は、類縁体６７（ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸）が、小脳細胞を、オカダ酸により引き起こされた神経突起の損失から保護したことを示す。統計的に有意な効果は、１０ｐＭ−１０ｎＭの濃度で観察された。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１】皮質細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（１００ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体４９（グリシル−Ｌ−チア−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【図２】１００μＭ  Ｈ2Ｏ2により誘導される皮質細胞培養における興奮毒性酸化的ストレス後のニューロンの生存における類縁体５０（グリシル−（Ｄ，Ｌ）−５，５−ジメチルプロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【図３】線条体細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（３０ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６０（グリシル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【図４】線条体細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（３０ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６４（アミノイソブトリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【図５】皮質細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（１００ｎＭオカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６５（グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ノルバリン）の効果を示すグラフである。
【図６】線条体細胞培養におけるアポトーシス誘導毒（オカダ酸）の投与後のニューロンの生存における類縁体６６（グリシル−Ｄ，Ｌ−ピペコリニル−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【図７】小脳細胞培養における興奮毒性／酸化的ストレス（０．５ｍＭ  ３−ＮＰグルタメートにより誘導される）後のニューロンの生存における類縁体６７（ピロリジノグリシル−Ｌ−２−メチル−プロリン−Ｌ−グルタミン酸）の効果を示すグラフである。
【図１】
2008545697.tif 000029
【図２】
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【図３】
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【図５】
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【図６】
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【図４】
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【図７】
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【国際調査報告】
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