(57)【要約】本発明は、ＣＣＮ２の過剰発現に関連する疾患におけるＣＣＮ３の役割を開示し、その疾患としては、腎疾患、線維症、および癌が挙げられるが、これらに限定されない。完全長ＣＣＮ３タンパク質もしくはそのフラグメント、またはＣＣＮ３のアイソフォーム（もしくは組み合わせ）は、これらの疾患に関与する。単離されかつ精製されたＣＣＮ３タンパク質もしくはそのフラグメント、またはＣＣＮ３のアイソフォーム（もしくは組み合わせ）は、ＣＣＮ２タンパク質の発現および／または活性を調節することによって、これらの疾患の処置または予防に、潜在的に使用され得る。組織または体液におけるＣＣＮ３のレベルはまた、疾患の進行を予測するか、診断するか、そして／または追跡するため、および治療的介入の有効性を決定するために使用され得る。
2008526890.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体のＣＣＮ３遺伝子発現またはＣＣＮ３活性レベルを調節することによって、該被験体においてＣＣＮ２活性を調節するための方法。
【請求項２】
前記ＣＣＮ２活性の調節は、ＣＣＮ２の遺伝子発現のダウンレギュレーションによって阻害され、そして前記ＣＣＮ３遺伝子発現または前記ＣＣＮ３活性レベルが、増強される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験体中の高いＣＣＮ２レベルから生じる疾患を処置するための方法であって、ＣＣＮ３の有効量を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項４】
前記疾患は、慢性腎疾患である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記疾患は、線維症または硬化症である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記疾患は、癌である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＣＮ３活性レベルは、ＣＣＮ３の有効量を前記被験体に投与することによって増加され、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記被験体は、ヒト被験体である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
被験体において線維症または硬化症を処置するための方法であって、該被験体においてＣＣＮ３遺伝子の発現を増加させる工程または該被験体においてＣＣＮ３活性のレベルを増加させる工程を包含する、方法。
【請求項１０】
前記線維症または硬化症は、腎臓、心臓、肝臓、肺、血管系、頚、眼、歯肉、脳、および腹膜からなる群より選択される器官に関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記血管系は、強皮症の動脈および冠状動脈からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記線維症または硬化症は、前記被験体の病理学的状態に関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記病理学的状態は、腎臓病、腹膜透析、黄斑変性、歯周疾患、脳卒中および関連する虚血ならびに再灌流障害、外科的介入手順および医学的介入手順、または望ましくない外科手術後の組織の癒着もしくは器官の癒着の結果である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記外科的介入手順および医学的介入手順は、バルーン血管形成術、ステントの挿入、カテーテル、グラフト、および器官移植片からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記グラフトは、動脈瘻または静脈瘻である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記線維症または硬化症は、増加した細胞の増殖に関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞の増殖は、糸球体の増殖性疾患または癌をもたらす、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験体は、ヒトである、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＣＮ３の有効量を被験体に投与することによって、該被験体中の慢性腎疾患における腎線維症を処置するための方法であって、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、方法。
【請求項２０】
前記被験体は、透析溶液による腹膜透析を受け、そして前記ＣＣＮ３は、該ＣＣＮ３を該透析溶液に添加することによって、該被験体に投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
線維症または硬化症を処置するためのキットであって、該キットは、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるＣＣＮ３を備える、キット。
【請求項２２】
被験体において腎障害または線維症障害を診断するための方法であって、（ａ）該被験体から組織サンプルまたは体液サンプルを得る工程、（ｂ）該サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルを検出する工程、および（ｃ）該サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルと、既知の腎障害または線維症障害を有さない被験体のＣＣＮ３活性の標準レベルとを比較する工程を包含し、ＣＣＮ３活性の増加したレベルが、該腎障害または線維症障害の存在を示す、方法。
【請求項２３】
前記サンプルは、尿、血液、または腹膜洗浄液である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＣＮ３の特有の形態の非存在または存在は、前記腎障害もしくは線維症障害の存在または非存在を示す、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＣＮ３活性のレベルは、イムノアッセイによって検出される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物被験体において腎障害または線維症障害を診断するのに使用するための診断キットであって、該キットが、ＣＣＮ３に特異的な抗体を備える、キット。
【請求項２７】
前記抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体から選択される、請求項２６に記載の診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の参照）
本願は、米国仮特許出願第６０／６４２，７２８号（２００５年１月１０日出願）、および米国仮特許出願第６０／６４６，９１６号（２００５年１月２５日出願）（これらは、本明細書中に参考として援用され、そして本明細書の一部を構成する）に基づく優先権を主張する。
【０００２】
（連邦支援の研究または開発）
該当無し。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、ＣＣＮ２の過剰発現に関連する疾患におけるＣＣＮ３の役割を開示し、その疾患としては、としては、腎疾患、線維症、および癌が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質もしくはそのフラグメント、または完全長ＣＣＮ３のアイソフォーム、あるいはそれらの組み合わせであり得る。単離されかつ精製されたＣＣＮ３は、ＣＣＮ２タンパク質の発現および／または活性を調節することによって、これらの疾患の処置に、実現可能に使用され得る。組織または体液におけるＣＣＮ３のレベルはまた、疾患の進行を予測するか、診断するか、そして／または追跡するため、および治療的介入の有効性を決定するために使用され得る。
【０００４】
（ＣＣＮファミリーの遺伝子およびタンパク質）
ＣＣＮファミリーの遺伝子は、現在、基本的な生物学的プロセス（例えば、細胞の増殖、接着、移動、分化、創傷治癒、新脈管形成、ならびに数種の病理（線維症および腫瘍形成が挙げられる））に関与するタンパク質をコードする６種の異なるメンバーからなる。ＣＣＮ遺伝子ファミリーのメンバーによってコードされるタンパク質は、非常にシステインが豊富（質量の１０％）な３０〜４０ｋＤａのタンパク質である（非特許文献１）。より最近、ＣＣＮタンパク質のいくつかの形態（ＣＣＮ３を含めて）は、３５〜５５ｋＤａの範囲であることが、報告されている。それらは、システインリッチ６１（ＣＹＲ−６１）タンパク質、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）タンパク質、腎芽細胞腫過剰発現（ｎｅｐｈｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）（ＮＯＶ）タンパク質、Ｗｎｔ誘導性分泌タンパク質−１（ＷＩＳＰ−１）、Ｗｎｔ誘導性分泌タンパク質−２（ＷＩＳＰ−２）、およびＷｎｔ誘導性分泌タンパク質−３（ＷＩＳＰ−３）として表される。より最近、このファミリーの遺伝子およびタンパク質に対する新規命名法が、提案されている（表１を参照のこと）。
【０００５】
（表１：ＣＣＮファミリーの遺伝子およびタンパク質に対する提案された名称、ならびに現在および以前に使用される名称）
【０００６】
【表１】
2008526890.tif 000003
図１は、ＣＣＮタンパク質のモジュラー構造を示す、それらは、インスリン様増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、Ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（ＶＷＣ）、トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ１）、および成長調節因子のファミリーを含むシステインノット（ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｋｎｏｔ）（ＣＴ）と同一性を共有する４つのモジュールを含む非常に保存された複数モジュラー組織であるが、そのＣＣＮタンパク質は、独特の生物学的特性を有し、そして異なって調節される。それらの関与は、複数の器官系において示されている。多数の研究の焦点となっている１つの器官は、腎臓である。タンパク質の作用の基礎となっている機構は、未だによく理解されていない。特有の特異的な高親和性シグナル変換レセプターを同定する試みは、実っていない（非特許文献２）。
【０００７】
（ＣＣＮ２遺伝子およびそのコードされるタンパク質）
ＣＣＮファミリーの６種のメンバーの全てのうち、ＣＣＮ２は、骨格の成長および胎盤の新脈管形成において重要な特定の細胞の機能の調節におけるその役割、ならびに線維症を含む特定の疾患（腎線維症および糖尿病関連性線維症）、およびおそらく腫瘍形成におけるその役割において重要な作用因子（ｐｌａｙｅｒ）として出現した。
【０００８】
腎臓系による研究は、多くの慢性腎疾患（ＣＫＤ）のモデルにおいて線維症／硬化症における重要な病原因子としてのＣＣＮ２の役割の証拠を提供した。初期の報告は、皮膚の線維症および強皮症における、トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）との相互作用の役割の可能性を示唆した（非特許文献３）。
【０００９】
腎臓における硬化症または線維症の形成は、傷害の重症形態または慢性形態に対する一般的な応答である。少なくとも慢性腎疾患（ＣＫＤ）において、３つの優勢な原因因子が存在するようである：代謝的、遺伝的、および血行力学的。これらの因子の全ては、特に、糖尿病性腎症（ＤＮ）において、相互作用して進行を促進し得る。ここで、ＣＣＮ２は、これらの３つのエレメントの効果の中心的な下流のメディエーターであるらしい。例えば、糸球体内の高血圧から生じる病理学的なせん断応力または伸縮力は、ＣＣＮ２を含むサイトカインの産生を刺激するようである。この同じ力は、タンパク尿および血管作用性ホルモン（例えば、アンギオテンシン（ＡＧ）ＩＩおよびエンドセリン）の増加した産生の両方を生じ、次にまた、ＣＣＮ２を上昇させ、そして機械的応力をさらに増強する、増加した血管の透過性を担うようである。グルコースの変化した代謝によって生じる前進性グリコシル化終末産物（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ）（ＡＧＥ）の異常な蓄積はまた、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の架橋および蓄積を直接増加させ、かつＣＣＮ２を増加させるように作用し得る。個体の遺伝的背景は、血行力学および代謝のエレメントに影響し得、次に記載されるように、生じた経路に影響し得る。さらに、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）活性および血管作用性ホルモンの産生に対する遺伝の影響が存在するようである。全ての場合において、ＣＣＮ２活性の慢性的なアップレギュレーションは、変化したＥＣＭのターンオーバーおよび漸増性のＥＣＭの蓄積を生じ、線維症または硬化症をもたらすようである。これらの知見は、ＣＣＮ２は腎線維症の進行における中心的な下流のエレメントであり、そしてそのようなものとして、診断目的および治療目的の両方のための適当でありかつ新規の標的を提供するという仮定を支持する。
【００１０】
ＣＣＮ２は、エストロゲン誘導性であり、そしてステロイド依存性の乳房または子宮の腫瘍において過剰発現される（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。ＣＣＮ２および他のＣＣＮファミリーメンバーは、エストロゲン調節型細胞増殖およびプロゲステロン調節型細胞増殖の重要な下流のメディエーターである。ＣＣＮ２および他のＣＣＮタンパク質もまた、乳癌細胞において他の増殖調節経路に影響を与え得る。尿ＣＣＮ２は、エストロゲンおよびプロゲステロンによって調節され、そして支質のＥＣＭの維持またはリモデリングに重要であるようである（非特許文献１１；非特許文献１２）。卵巣において、ＣＣＮ２は、ゴナドトロピンまたはトランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）によって調節され、そして包膜細胞の漸増および有糸分裂、ならびに黄体の維持に関連する（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７）。
【００１１】
ＲｉｓｅｒおよびＤｅＮｉｃｈｉｌｏによる特許文献１は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の産生におけるＣＣＮ２の役割、ならびにサンプル中のＣＣＮ２のレベルを測定することによる、ＥＣＭ成分の蓄積によって特徴付けられる病理の存在および進行を診断するための方法を開示する。上記方法は、腎線維症および関連する腎障害（特に、糖尿病、高血糖症、および高血圧に関連する合併症）の診断に関する。
【００１２】
（ＣＣＮ３遺伝子およびそのコード化タンパク質）
ＣＣＮ３は、ＣＣＮファミリーの別のメンバーである。ＣＣＮ３が種々の形態で存在することが、報告されている。レトロウイルスコンピテントなオビアン（ｏｖｉａｎ）組換え体を構築する研究において、ＣＣＮ３タンパク質は、約５０ｋＤａの分子量を有する完全長タンパク質、またはその完全長タンパク質のフラグメントであるより小さい切断されたタンパク質のいずれかとして発現され得る（非特許文献１）。ＣＣＮ３タンパク質の他の形態もまた、報告されている。例えば、ＣＣＮ３関連タンパク質は、ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞の核膜において検出されており、そして別のＣＣＮ３関連タンパク質は、ヒトプラスミノーゲン活性化因子インヒビター２型（ＰＡＩ−２）のプロモーターを結合する（非特許文献１）。ＣＣＮ３のＣ末端の１９アミノ酸のペプチドに対するＫ１９Ｍ−ＡＦ抗体は、ネイティブなＣＣＮ３タンパク質の少なくとも２つの立体構造を示した（非特許文献１８）。原形質膜および細胞膜に結合されたＣＣＮ３は、露出したＣ末端を有する一方で、分泌されたＣＣＮ３は、他のタンパク質またはそれ自体との相互作用に起因し得る（二量体化）隔離されたＣ末端を有する。
【００１３】
ヒトを含む種々の種に由来する完全長ＣＣＮ３タンパク質のアミノ酸配列は、完全に特徴付けられており、そしてそのアミノ酸配列は、Ｌｉらによって開示される（非特許文献１９）。
【００１４】
これら局面および他の局面ならびに本発明の特質は、添付の図面および明細書を参照することによって考察される。
【特許文献１】米国特許出願公開第２００４／０２２４３６０号明細書
【非特許文献１】Ｐｅｒｂａｌ  Ｂ．、「ＮＯＶ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ＣＣＮ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｇｅｎｅｓ：ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｓｓｕｅｓ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２００１年、第５４巻、ｐ．５７−７９
【非特許文献２】Ｂｒｉｇｓｔｏｃｋ  Ｄ．Ｒ．、「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ」、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００３年、第３２７巻、ｐ．１２５−１３０
【非特許文献３】Ｂｒａｄｈａｍ  ＤＭら、「Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ａ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ｍｉｔｏｇｅｎ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ＳＣＲ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ＣＥＦ−１０」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９１年、第１１４巻、ｐ．１２８５−１２９４
【非特許文献４】Ｔｓａｉら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＹＲ６１，ａｎ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｆａｃｔｏｒ，ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｂｉｏｐｓｉｅｓ」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００年、第６０巻、ｐ．５６０２−５６０７
【非特許文献５】Ｔｓａｉら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｒ６１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ」、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０００年、第２１巻、ｐ．９６４−９７４
【非特許文献６】Ｓａｍｐａｔｈら、「Ｃｙｒ６１，ａ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＣＮ  ｆａｍｉｌｙ，ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ＭＣＦ−７  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ：ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  １７  ｂｅｔａ−ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｎｄ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００１年、第１４２巻、ｐ．２５４０−２５４８
【非特許文献７】Ｓａｍｐａｔｈら、「Ａｂｅｒｒａｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｒ  ６１、ａ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＣＮ  ｆａｍｉｌｙ（ｉ．ｅ．ＣＣＮ１），ａｎｄ  ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  １７  ｂｅｔａ−ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｎｄ  ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｕｔｅｒｉｎｅ  ｌｅｉｏｍｙｏｍａｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、２００１年、第８６巻、ｐ．１７０７−１７１５
【非特許文献８】Ｓａｍｐａｔｈら、「Ｔｈｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  Ｃｙｒ６１  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ  Ｒ５０２０  ａｎｄ  ｉｓ  ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｆｏｒ  ｍａｍｍａｒｙ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｒｍａ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ、２００２年、第１８巻、ｐ．１４７−１５０
【非特許文献９】Ｘｉｅら、「Ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，Ｃｙｒ６１  ｉｓ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ、ａｎｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｍｏｒｅ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００１年、第２７６巻、ｐ．１４１８７−１４１９４
【非特許文献１０】Ｘｉｅら、「Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ，ＷＩＳＰ−Ｉ，ａｎｄ  ＣＹＲ６１  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈｍｏｒｅ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｆｅａｔｕｒｅｓ」、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００２年、第６１巻、ｐ．８９１７−８９２３
【非特許文献１１】Ｒａｇｅｈら、「Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＣＣＮ２；ＣＴＧＦ）  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｕｔｅｒｕｓ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２００１年、第５６巻、ｐ．８０−８５
【非特許文献１２】Ｃｈｅｏｎら、「Ａ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｕｔｅｒｕｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００２年、第１６巻、ｐ．２８５３−２８７１
【非特許文献１３】Ｗａｎｄｊｉら、「Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｆｏｒ  ＭＡＣ２５  ａｎｄ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＣＴＧＦ）  ａｒｅ  ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｆｏｌｌｉｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ  ｌｕｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２０００年、第６０巻、ｐ．９６−１０５
【非特許文献１４】Ｓｌｅｅら、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｒａｔ  ｇｒａｎｕｌｏｓｅ  ｃｅｌｌｓ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００１年、第１４２巻、ｐ．１０８２−１０８９
【非特許文献１５】ＨａｒｌｏｗおよびＨｉｌｌａｒ、「Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｏｖａｒｉａｎ  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００２年、第１８７巻、ｐ．２３−２７
【非特許文献１６】Ｈａｒｌｏｗら、「ＦＳＨ  ａｎｄ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｇｒａｎｕｌｏｓｅ  ｃｅｌｌ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００２年、第１４３巻、ｐ．３３１６−３３２５
【非特許文献１７】Ｌｉｕら、「Ｇｏｎｏｄｏｔｒｏｐｈｉｎｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ−２  ｍＲＮＡ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ヒトｇｒａｎｕｌｏｓｅ−ｌｕｔｅａｌ  ｃｅｌｌｓ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ、２００２年、第８巻、ｐ．１３６−１４１
【非特許文献１８】Ｋｙｕｒｋｃｈｉｅｖ  Ｓら、「Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＣＮ３  （ＮＯＶ）  ｐｒｏｔｅｉｎ」、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２００４年、第２巻、ｐ．９−１８
【非特許文献１９】Ｌｉ，Ｃ．Ｌ．ら、「Ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＣＣＮ３（ＮＯＶ）  ｉｎ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２００２年、第５５巻、ｐ．２５０−２６１
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明は、多くの異なる形態における実施形態を許容し得る一方で、図面に示されるものが存在し、そして本発明は、本開示が、本発明の原理の例示として見なされるべきであり、そして本発明を示された特定の実施形態に限定することを意図しないことの理解と共に、その詳細な特定の実施形態で本明細書中に記載される。
【００１６】
本発明は、ＣＣＮ２の過剰発現に関連する疾患におけるＣＣＮ３の役割を開示し、その疾患としては、腎疾患、線維症、および癌が挙げられるが、これらに限定されない。上記ＣＣＮ３は、約５０ｋＤの分子量を有する完全長ＣＣＮ３タンパク質もしくはそのフラグメント、または完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム、または１つ以上の形態のＣＣＮ３を含む複合体、あるいはそれらの組み合わせであり得る。本開示における用語「アイソフォーム」によって、各アイソフォームは、完全長ＣＣＮ３分子に対する１つ以上の抗体に免疫反応性であるが、先に報告されたように、翻訳後修飾物（ｐｏｓｔ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）の分子量、アミノ酸配列、三次元構造に関して、完全長形態と正確に似ていない可能性がある。単離かつ精製されたＣＣＮ３は、ＣＣＮ２タンパク質の発現および／または活性を調節することによって、これらの疾患の処置において実現可能に使用され得る。組織または体液におけるＣＣＮ３のレベルはまた、疾患の進行を予測するか、診断するか、そして／または追跡するため、および治療的介入の有効性を決定するために使用され得る。
【００１７】
本開示において使用される用語「線維症」は、用語「硬化症」と交換可能に使用される。なぜならそれらは、線維組織もしくは線維症様組織の過剰増殖および／または細胞外マトリックス分子（例えば、コラーゲン）の増加した沈着に関与する類似のプロセスであり、そして両方とも、少なくとも原因因子としてＣＣＮ２を有することが示されているからである。本開示における用語「線維症」はまた、線維症および／または硬化症を含み得る。
【００１８】
ここで、ＣＣＮ２は、腎線維症における原因因子であることが示されており、そしてＣＣＮ２は、同様の様式で、他の線維性疾患において作用するようであり、その疾患としては、肝臓、肺、心臓、皮膚、血管系、腹膜などにおいて生じる疾患である（Ｄｅａｎ  Ｒ．Ｇ．，Ｂａｌｄｉｎｇ  Ｌ．，Ｃａｎｄｉｄｏ  Ｒ．，Ｂｕｒｎｓ  Ｗ．Ｃ．，Ｃａｏ  Ｚ．，Ｔｗｉｇｇ  Ｓ．Ｍ．，Ｂｕｒｒｅｌｌ  Ｌ，Ｍ．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉａｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｆｔｅｒ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．５３（１０）：１２４５−５６，２００５；Ｓｈｉ−ｗｅｎ  Ｘ．，Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．，Ｈｏｌｍｅｓ  Ａ．，Ｌｅａｓｋ  Ａ．，Ｂｒａｄｈａｍ  Ｄ．，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ  Ｊ．Ｒ．，Ｆｏｎｓｅｃａ  Ｃ．，ｄｕ  Ｂｏｉｓ  Ｒ．Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎ  Ｇ．Ｒ．，Ｂｌａｃｋ  Ｃ．Ｍ．，Ａｂｒａｈａｍ  Ｄ．Ｊ．Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＴＧＦ  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ＲＤＡ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２５９（ｌ）：２１３−２４，２０００；Ｏｚａｋｉ  Ｓ．，Ｓａｔｏ  Ｙ．，Ｙａｓｏｓｈｉｍａ  Ｍ．，Ｈａｒａｄａ  Ｋ．，Ｎａｋａｎｕｍａ  Ｙ．Ｄｉｆｆｕｓｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ａｎｄ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｆｉｂｒｏｕｓ  ｓｅｐｔａ  ｗｉｔｈ  ｍａｎｙ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｌａｔｅ  ｔｏ  ｕｎｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．２５（４）：８１７−２８，２００５；Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ｎ．，Ｓｕｇｉｍｕｒａ  Ｋ．，Ｋａｗａｓｈｉｍａ  Ｈ．，Ｔｓｕｃｈｉｄａ  Ｋ．，Ｔａｋｅｍｏｔｏ  Ｙ．，Ｎａｇａｎｕｍａ  Ｔ．，Ｔａｔｓｕｍｉ  Ｓ．，Ｎａｋａｔａｎｉ  Ｔ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｏｎ  ＴＧＦ−ｂｅｔａｌ  ａｎｄ  ＣＴＧＦ  ｍＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１５（６）：９０７−ｌｌ，２００５；Ｚａｒｒｉｎｋａｌａｍ  Ｋ．Ｈ．，Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｊ．Ｍ．，Ｇｒａｙ  Ｊ．，Ｏｌｉｖｅｒ  Ｎ．，Ｆａｕｌｌ  Ｒ．Ｊ．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｃａｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｄｉａｌｙｓｉｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．６４（１）：３３１−８，２００３）。増加した量で発現する場合、例えば、トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、高濃度グルコース、機械的応力、前進性グリコシル化終末産物（ＡＧＥ）によってアップレギュレートされたＣＣＮ２は、（とりわけ）細胞外マトリックス（ＥＣＭ）分子（例えば、コラーゲン形態およびトロンボスポンジン（ＴＳＰ））の過剰蓄積を誘導し、これは、瘢痕化および線維症／硬化症を生じる。ＣＣＮ３は、遺伝子のＣＣＮファミリーに属すると認識されるのに十分な、構造における類似性を有する。ＣＣＮ２とは異なり、ＣＣＮ３が、コラーゲン、トロンボスポンジンまたは線維症の調節に関与することは報告されておらず、そして実際に、ＣＣＮファミリーのメンバーのほとんどは、大部分、異なる生物学的活性を有することが報告されている。
【００１９】
（糖尿病を有する患者および腎線維症を有する患者の尿におけるＣＣＮ３の排泄）
線維症（特に、糖尿病疾患における腎線維症）におけるＣＣＮ３についての役割を示すために、腎臓病の異なる病期における糖尿病患者は、尿におけるＣＣＮ３の排泄について検査される。糖尿病患者はまた、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を含む、腎臓の線維症／硬化症および腎臓以外の線維症／硬化症の両方の多くの他の形態についてのモデルとして機能し得る。ＣＫＤを有する患者は、腎臓に存在するＣＣＮ２の増加した量を有し、そしてその患者はまた、ＣＣＮ２を尿中に排泄することが、先に示されている。上記ＣＣＮ２のレベルは、その疾患の進行の増大に相関する量の増加によって、その疾患の進行に関連するようである（ＲｉｓｅｒおよびＤｅＮｉｃｈｉｌｏによる米国特許出願公開第２００４−０２２４３６０号）。本発明者らは、本願において初めて、腎臓病の既知の履歴を有さない健康なヒト被験体（本明細書中で以下、「健康なヒト被験体」または「健康な被験体」と称される）もまた、その尿中にＣＣＮ３を排泄すること示す。このことは、ＣＣＮ３特異的抗体を使用したＥＬＩＳＡによって、この研究において、最初に決定された。健康なヒト被験体中のＣＣＮ３の量は、約２８０（＋／−３７７）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニンであった。これは、平均で、約２．０（＋／−２．０）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニンである健康なヒト被験体中のＣＣＮ２のレベルよりずっと高い。臨床的な腎臓病を有さない糖尿病患者（正常アルブミン尿患者）において、３５０（＋／−５７４）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニンのＣＣＮ３の平均レベルは、健康なコントロール群のＣＣＮ３レベルと同様であった。最も初期の腎臓病にある患者（すなわち、アルブミン尿患者）において、群としてのＣＣＮ３レベルは、３，０４８（＋／−６，５９９）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニンの平均レベルまで増加した。別個に、上記群における１３人のアルブミン尿患者のうちの７人は、健康な者に関して正常であることが見出されたレベルを上回って上昇したＣＣＮ３のレベルを有した。進行した臨床的な腎臓病を有する患者（すなわち、タンパク尿患者）において、上記レベルは、さらに、そして大きく、平均２７，５２６（＋／−６５，３０１）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニン（すなわち、ｍｇに換算すると２７．５ｍｇ／ｍｍｏｌクレアチニン）まで増加した。対照的に、健康な被験体および腎疾患を伴わない糖尿病患者における尿のＣＣＮ２レベルは、比較的低いレベル（２．０（＋／−２．３）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニンおよび２．４（＋／−６．８）μｇ／ｍｍｏｌクレアチニン）を有したか、またはＣＣＮ３より約１００倍低いＣＣＮ２を有した。腎臓病を発症した患者は、後期において、ＣＣＮ３に対する応答であるらしい若干異なる発現の経過に従う。例えば、上記ＣＣＮ２発現は、限定的な数の患者において、初期（すなわち、アルブミン尿の前）に増加したが、その平均は、非腎性の被験体または健康な被験体の平均（１．１＋／−１．６ｎｇ／ｍｍｏｌクレアチニン）と同様のままである。タンパク質尿の群において、上記平均は、１８．７ｎｇ／ｍｍｏｌクレアチニンまで上昇したが、その後、ＣＣＮ３の値が増加するのに伴って、時間と共に下降してベースラインに戻るようである。このことは、ＣＣＮ３が、おそ���くＣＣＮ２（疾患の進行における公知の原因因子）の内因性のインヒビターとして疾患に関与することを示した。これは、ＣＣＮ３がＣＣＮ２に対するネガティブな調節エレメントを提供し得ること、および尿中のレベルが患者の腎不全への進行を予測するか、または病気分類する（ｓｔａｇｅ）ために機能し得ることを示唆した。これらのデータはまた、上記ＣＣＮ３がヒト被験体の尿から単離され、そして精製され得ることを示す。特に、ＣＣＮ３が過剰発現される種々の腎臓病を有する患者は、ＣＣＮ３を大量に得るための優れた供給源を提供する。ＣＣＮ３が、ヒト被験体、ならびにＣＣＮ３タンパク質の単離および精製のための優れた供給源としても機能し得る他の動物種の体液または組織において見出され得ることは、下に記載される研究から明らかである。
【００２０】
尿サンプルの免疫ブロット分析は、尿におけるＣＣＮ３の存在を確認し、そして糖尿病性疾患を有する患者におけるＣＣＮ３の複数の分子形態（アイソフォーム）の存在を同定した。健康な被験体由来の尿サンプルは、約５０ｋＤａの分子量を有する天然に産生される完全長ＣＣＮ３に等しい単一のバンドのみを示した。糖尿病患者由来の尿サンプルは、完全長ＣＣＮ３に加えて、より低い分子量の免疫反応性ＣＣＮ３、およびより高い分子量の免疫反応性ＣＣＮ３の両方の形態（図２、右側のレーン）を示し、このことは、これらの代替的な形態（フラグメント、アイソフォーム、あるいはＣＣＮ３分子の１つ以上の形態を含む組み合わせまたはそのフラグメントもしくはそのアイソフォームを含む）が、上記疾患の進行において重要であり得ることを示唆する。本開示における用語「アイソフォーム」によって、各アイソフォームが上記完全長ＣＣＮ３分子に対する１つ以上の抗体に免疫反応性であるが、翻訳後修飾物の分子量、アミノ酸配列、三次元構造に関して、完全長形態と正確に似ていない可能性がある。
【００２１】
（上首尾の腹膜透析を受ける患者由来の透析流体におけるＣＣＮ３）
腎臓が衰えるような末期の腎臓病（ＥＳＲＤ）を有する患者が生存するために、その患者は、３種の利用可能な型の腎臓代償療法から選択し得る。これは、急性腎不全を含む種々の他の腎臓病を有する患者にもあてはまる。１つの代償療法は、腎移植であるが、それは、多くの患者に対して、受容可能または利用可能ではない。第２の治療の型は、透析のための診察室に、長くかつ身体的に拘束される期間（ｐｈｙｓｉｃａｌｌｙ  ｄｅｍａｎｄｉｎｇ  ｓｅｓｓｉｏｎ）（最も一般的には、１週間に３回）を必要とする、血液透析である。第３の型の治療は、腹膜透析であり、そしてそれは、頻繁に、患者によって自宅で行われ得る。したがって、腹膜透析は、多くの患者にとって最良の選択肢である。上首尾の長期治療としてのこれに対する最も大きな障害の１つは、血液から有毒な代謝副産物を除去するために必要な透析流体を輸送する能力の最終的な喪失を伴う腹膜の線維症を、多くの患者が、時が経つにつれて発症する傾向である。この型の線維症に対して利用可能な処置は、存在せず、そして現在、患者がこの型の透析を使用し得る期間を予測する方法は、存在しない。
【００２２】
本発明者らは、上首尾の透析（すなわち、膜を横切る不適切な限外濾過によって決定されるような腹膜の線維症の明らかな発症を伴わない）を受ける患者由来の腹膜透析流体（透析物サンプルとしても公知である）を、ＣＣＮ３の存在について検査し、そしてＣＣＮ２レベルの比較のために検査した。ＥＬＩＳＡによって試験された５１人の患者において、驚くべきことに、これらの患者のほとんどが、６〜２８ｎｇ／ｍｌの範囲にある透析流体中のＣＣＮ３レベルを有したことが、見出された。対照的に、試験された患者のほとんどは、ＣＣＮ２の検出可能なレベルを有さなかった（すなわち、２ｎｇ／ｍｌ未満）。試験された５１人の患者のうちの２人だけが、高いＣＣＮ２レベル（それぞれ、１８．６ｎｇ／ｍｌおよび１８．５ｎｇ／ｍｌ）を有した。これは、ＣＣＮ３もしくはフラグメント、またはＣＣＮ３の分子アイソフォームが、腹膜の線維症において役割を果たし得るが、ＣＣＮ２とは異なり、ＣＣＮ３もしくはフラグメントまたは分子アイソフォームが、線維症のインヒビターとして作用し得ることを、示唆する。
【００２３】
上首尾の腹膜透析（すなわち、腹膜の線維症の発症を伴わない）からのヒト腹膜透析（ＰＤ）流体（透析物サンプルとしても公知である）の、ＣＣＮ３特異的抗体を使用したウェスタンブロット分析（図３を参照のこと）は、分子量標準と比較した場合に、約５０ｋＤａおよび６５〜７０ｋＤａにおいて、２つの明確なＣＣＮ３バンドを示した。対照的に、尿のＣＣＮ３（この場合では、マウス）は、約５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、および７０ｋＤａにおける３つのバンド、ならびに約１５ｋＤａにおける単一のバンドとして出現した。後者の１５ｋＤａのバンドは、完全長分子の４分の１のフラグメントを表し得る。図４に示されるように、上首尾の腹膜透析を受ける患者由来の透析物サンプルがウェスタンブロット分析によって検査された場合、ほとんどの患者が、５０〜６５ｋＤａの範囲において２つの顕著なバンドを示した。しかし、幾人かの患者が、これらのバンドに対する薄い染色を示したのに対して、いくつかのサンプルは、約２０ｋＤａにおけるバンドを含むＣＣＮ３反応性分子の代わりのサイズの存在を示した。
【００２４】
これらの結果は、初めて、上首尾の腹膜透析を伴う糖尿病患者のＰＤ流体において、ＣＣＮ３の存在だけでなく、特有のアイソフォームの存在も示した。これは、とりわけ、高レベルの腹膜のＣＣＮ３（あるいはＣＣＮ３フラグメントもしくはアイソフォームまたはそれらの組み合わせ）を有する患者が、ＣＣＮ２（およびいくつかの他のＣＣＮファミリーメンバーを含む、考えられる他の線維症誘発因子）を制御する（またはダウンレギュレートする）ことによって、少なくとも部分的に、その位置において線維症に対して保護され得ることを示唆する。最初に高いＣＣＮ３レベルを有する患者は、腹膜の線維症の発症、および継続的な透析処置における限外濾過能力の喪失に対して最も抵抗性の患者であり得、したがって長期ＰＤ療法に最も適した患者であり得る。これはまた、ＣＣＮ３が、糖尿病患者を処置するか、または線維症の発症およびもしくは透析における限外濾過能力の喪失（糖尿病であるか否かにかかわらず）から糖尿病患者（特に、最初に低いレベル有する患者、または腹膜透析後に減少したレベルを有する患者のいずれか）を保護するために使用され得ることの証拠を提供する。本開示において使用される場合、ＣＣＮ３としては、上記完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、この完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３の分子模倣（ｍｉｍｅｔｉｃ）物、もしくはＣＣＮ３の１つ以上の形態を含む複合体、またはＣＣＮ３の１つ以上の形態の任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。「アイソフォーム」によって、完全長ＣＣＮ３に特異的な１つ以上の抗体に対して免疫反応性である分子が、意味される。それらは、高分子を送達するのに適した任意の伝統的な経路（例えば、静脈内、筋肉内、鼻、局所、経皮、吸入、経口など）によって患者に投与され得る。これらの投与経路は、当業者にとって周知である。腹膜透析を受ける患者において腹膜の線維症を予防するか、または元に戻す（ｒｅｖｅｒｓｅ）ためにＣＣＮ３ベースの治療を施すための１つの方法は、腹膜透析を受ける患者によって使用される透析溶液に対するＣＣＮ３の添加である。
【００２５】
（２型糖尿病および腎臓病の動物モデルからのデータ）
２型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルはまた、腎臓病および線維症疾患（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）におけるＣＣＮ３についての役割を確立するために使用される。上記ｄｂ／ｄｂマウスは、速やかに肥満になり、そしてそのマウスは、月齢約１ヶ月以内に高血糖症を発症する。その後３〜４ヶ月間にわたって、そのマウスは、ヒト腎臓病の腎糸球体の線維症の特徴を発症する。しかし、その疾患は、ヒトにおいて見られるものと同様に、重い糸球体硬化症および／または糸球体の間質性疾患（当然に、その後の腎不全）に進行しないままであるが、「静止的（ｓｔａｔｉｃ−ｌｉｋｅ）な疾患状態」であり続けるようである。コントロールのｄｂ／ｍ同腹仔は、変異の表現型を示さず、そして肥満にならず、糖尿病、または腎疾患を発症しないことを除いてｄｂ／ｄｂマウスと同一である。ヒト患者の場合のように、糖尿病のマウスは、ＥＬＩＳＡによって、尿中にＣＣＮ２を含むことが見出された（Ｒｉｓｅｒ，Ｂ．Ｌ．ら、Ｕｒｉｎａｒｙ  ＣＣＮ２（ＣＴＧＦ）  ａｓ  ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ  ｏｆ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ：Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｒｅｐｏｒｔ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．６４：４５１−４５８、２００３）。本開示において、コントロール（非糖尿病マウス）は、約２０４μｇ／ｍｍｏｌ尿クレアチニンの尿中ＣＣＮ３レベルを有することが見出された。尿のクレアチニンが測定され、サンプルを標準化する手段として使用される。なぜならば、糖尿病患者および糖尿病の動物は、より頻繁に排尿し、より希釈された尿を産生するからである。コントロール動物とは対照的に、糖尿病を有する動物は、糖尿病になってから４週間以内に、その尿中ＣＣＮ３レベルが６倍（１ｍｍｏｌのクレアチニンあたり１，２４４μｇのＣＣＮ３）まで増加した。糖尿病になってから２ヶ月で、その値は、１ｍｍｏｌのクレアチニンあたり３３４μｇのＣＣＮ３に戻り、そしてその値は、３ヶ月（１ｍｍｏｌのクレアチニンあたり３１．２μｇのＣＣＮ３）、および検査した最後の期間である６ヶ月（糖尿病の動物において１ｍｍｏｌのクレアチニンあたり２７．５μｇのＣＣＮ３であり、非糖尿病コントロール動物において１ｍｍｏｌのクレアチニンあたり２８．３μｇであった）において低いままであった。要約すると、２型糖尿病のｄｂ／ｄｂモデルにおいて、ＣＣＮ３は、尿において測定したところ、糖尿病になってから１ヶ月以内に大きく増加した。その後、時間が経つにつれて、そのＣＣＮ３レベルは、コントロール（疾患を有さない動物）のレベルまで減少した。このことは、ＣＣＮ３が糖尿病および腎臓病に関与するという見解を支持する。健康な動物におけるＣＣＮ３の既に高いレベル（すなわち、ＣＣＮ２と比較して）は、ＣＣＮ２のレベルを恒常的に低く保つように（ネガティブな調節因子として）作用し得る。その後、ＣＣＮ２は、傷害に対する応答（創傷を治癒する応答）、すなわち代謝的ストレスの事象として、ＣＣＮ３の存在によるダウンレギュレーションを克服して糖尿病の発症後に増加した。この代謝的ストレスは、慢性的であるので、増加したＣＣＮ２に対するシグナルは、存在し続ける。このシグナルのネガティブフィードバック���対する通常の方法は、ＣＣＮ３に対するこのデータからもたらされる。したがって、ＣＣＮ３において観察されたアップレギュレーションは、初期であるが若干長い期間のＣＣＮ２の増加に対する応答であり、それは、ＣＣＮ２発現のネガティブな調節因子であり、その後のＣＣＮ２の発現およびまたは活性を制御するＣＣＮ３による。この修復機構全体は、急性の傷害に対するＣＣＮ２の必要とされる応答を可能にするが、慢性の傷害の場合、その応答の遮断を必要とする。適切に遮断されない場合、その結果として線維症が、発症する。
【００２６】
免疫ブロット法は、存在するＣＣＮ３分子の形態の同一性を決定するために使用された（すなわち、定量的ではなく定性的なアッセイ）。ｄｂ／ｍコントロールマウス由来の尿は、ＣＣＮ３バンドのみを示し、それは、６匹のマウスのうちの１匹に存在した（図５）。しかし、ｄｂ／ｄｂマウスは、複数のＣＣＮ３バンドを示し、それは、疾患を有するマウスのほぼ全てに存在した。この結果は、ＥＬＩＳＡアッセイに関して上に記載されるような知見を支持するが、さらに、疾患を有する動物では、ＣＣＮ３のレベルの増加だけでなく、複数のアイソフォーム、フラグメント、または複数の複合体のレベルの増加も存在することを示す。尿（および／またはＰＤ流体）由来のこれらの特有の形態の単離および特徴付けは、特有であるか、もしくは最大の治療的可能性を有する分子、または分子形態を決定するために使用され得、それらは、細胞、組織、もしくは他の系において抽出されるか、そして／または細胞、組織、または他の系において組換え形態で精製されるか、もしくは産生されるものとして使用される。
【００２７】
ＣＣＮ３  ｍＲＮＡについての逆転写ＰＣＲ（図６）は、ＣＣＮ３のｍＲＮＡレベルが疾患の６ヶ月目（検査された唯一の期間）において腎臓で劇的にアップレギュレートされたことを示した。腎臓のＣＣＮ２  ｍＲＮＡは、早期に大きくアップレギュレートされる（先の研究（Ｒｉｓｅｒ  Ｂ．Ｌ．ら、Ｕｒｉｎａｒｙ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＣＴＧＦ）：ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ（ＤＮ）：Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ、１１：１２１Ａ、２０００）において示されるとおり４〜５ヶ月目にて）。本研究において用いられた６ヶ月間において、ＣＣＮ２は、わずかに上昇しただけであった（図７を参照のこと）。これは、ＣＣＮ３が高い量で発現される場合、ＣＣＮ３がＣＣＮ２の発現および／または活性を減少させるように作用し得るという見解を支持する。これは、これらの動物においてさらに進行しない「静的な（ｓｔａｔｉｃ）」疾患状態を説明し得る。腎臓組織において増加したＣＣＮ３  ｍＲＮＡはまた、腎臓の細胞が尿中に観察されるＣＣＮ３の少なくとも１つの供給源であるという証拠を提供する。さらに、本発明者らはまた、ＣＣＮ３タンパク質がまた、これらの糖尿病マウスのマウス腎臓切片に存在することを、ＣＣＮ３に対する免疫ブロット法を使用して見出した。
【００２８】
（腎臓病および腎線維症のインビトロモデルからのデータ）
腎臓のメサンギウム細胞は、ＣＫＤを含み、糖尿病に関連する多くの腎臓病において重要な役割を果たす。この細胞は、多くのサイトカインおよび増殖因子の産生、ならびにそれらに対する応答の両方を行い、そしてその細胞は、糸球体間質の線維症／硬化症の一般的な病変を媒介するのに重要である。インビボの場合のように、培養された腎臓のメサンギウム細胞は、ＴＧＦ−β（良好に確立された線維症／硬化症誘発サイトカイン）に応答して、ＣＣＮ２を増加し、次にコラーゲン（線維症において重要な細胞外マトリックス分子）を増加する。これは、腎臓（および他の器官においても）線維症を発症するインビトロモデルを提供する。このモデルにおいて、ＣＣＮ２は、これらの細胞によって低レベルで産生されるが、ＴＧＦ−β（２ｎｇ／ｍｌ）に対する曝露後に、顕著に増加する。ＴＧＦ−βは、多くの他の細胞型においても、ＣＣＮ２の周知の刺激因子または周知のポジティブな調節因子である。
【００２９】
本発明者らは、メサンギウム細胞がＣＣＮ３を産生し、そうであるならばＴＧＦ−βに応答し得るか否かを試験した。本発明者らの実験において、培養されたメサンギウム細胞は、比較的高レベル（１００，０００個の細胞あたり約６．７ｎｇ）のＣＣＮ３を分泌することが見出された。その細胞がＴＧＦ−β（２ｎｇ／ｍｌ）に曝された場合、そのＣＣＮ３レベルは、２．２ｎｇまで著しく減少（すなわち、７０％近く減少）したが、同時に、ＣＣＮ２、およびコラーゲンの蓄積が、同様の量で増加した。これは、ＣＣＮ２およびＣＣＮ３の逆（または、ネガティブ）の調節という見解、ならびに線維症／硬化症における逆の役割という見解を支持する。ＣＣＮ３レベルが減少する場合、ＣＣＮ２レベル（活性）は増加し、そしてＥＣＭが蓄積する。ＣＣＮ３レベルの上昇が、その後にＣＣＮ２の産生または活性を減少させるように作用し、そして硬化症／線維症からの回復またはそれらの予防をもたらすか否かを決定するために、２セットの実験を行った。第１に、メサンギウム細胞は、ＣＣＮ３が濃縮された条件培養培地の存在下または非存在下で、ＴＧＦ−βによって処理された。メサンギウム細胞においてＴＧＦ−βによって増強されるＣＣＮ２およびＩ型コラーゲンの蓄積は、線維症の発症および進行に対する十分に認められたインビトロモデルである。この条件培地は、ＮＣＩと称されるヒト腫瘍細胞株由来であった。これらの細胞は、顕著なレベルのＣＣＮ３を分泌することが示されている。この結果は、ＣＣＮ２およびコラーゲンの増強した産生（通常、ＴＧＦ−βによって刺激される）が、ＮＣＩ条件培地の存在下において、両方とも著しく阻害されたことを示した。この条件培地は、ＣＣＮ３に加えて、上記細胞から放出される他のタンパク質を含むので、実験の第２のセットは、ＣＣＮ３特異的効果を検証するために行われた。これを達成するために、本発明者らは、ＣＣＮ３についての遺伝子をクローニングし、そしてその遺伝子をメサンギウム細胞にトランスフェクトし、コントロール細胞は、ｌａｃ  Ｚ遺伝子を受容した。得られた細胞株は、ＣＣＮ３遺伝子を受容する細胞（ＣＣＮ３＋株）では、ＣＣＮ３  ｍＲＮＡの恒常的発現の顕著な上昇を示したが、ｌａｃ−ｚ遺伝子を受容する細胞株（ＣＣＮ３−株）は、変化しないままであった（図８）。仮定されるように、ＣＣＮ３  ｍＲＮＡの発現におけるこの特異的なアップレギュレーションは、Ｉ型コラーゲンｍＲＮＡレベルの同時発生的かつ実質的な減少をもたらすことが示された（図８）。タンパク質分析は、ＣＣＮ３遺伝子発現におけるこのアップレギュレーションが、分泌されるＣＣＮ２の実質的な減少をもたらし（図９）、そしてＩ型コラーゲンのほぼ完全な阻害（９７％）をもたらした（図１０）ことを示した。第２の細胞外マトリックスタンパク質でありかつ線維症誘発因子であるＴＳＰ−１もまた、ＣＣＮ３の増加した発現の結果として、大きく減少した（図１１）。ＣＣＮ２がＴＳＰ−１のアップレギュレーションにおいて役割を果たすこと（Ｗａｎｇ  Ｓ．Ｄｅｎｉｃｈｉｌｏ  Ｍ．Ｂｒｕｂａｋｅｒ  Ｃ．Ｈｉｒｓｃｈｂｅｒｇ  Ｒ．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｕｂｕｌｏｉｎｔ��ｒｓｔｉｔｉａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ｏｆｄｉａｂｅｔｉｃ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．６０（１）：９６−１０５、２００１）、およびこの研究において、ＣＣＮ３によるＣＣＮ２のダウンレギュレーションが、ＴＳＰ−１の形成を減少させるＣＣＮ３についての機構であるらしいことが、報告されたが、本発明のデータは、ＣＣＮ３がＴＳＰ−１の分泌を阻害する直接的な役割を担うこと除外しない。
【００３０】
（生物学的に活性なＣＣＮ３（ｎｏｖ）タンパク質の供給源としての、腹膜透析患者由来の尿および／または腹膜洗浄液（透析流体））
（患者の腹膜透析（ＰＤ）流体および血清中のＣＣＮ３タンパク質）
本発明者らは、ほとんどの腹膜透析患者が、ＰＤ流体中にＣＣＮ３（ＮＯＶ）タンパク質を２０ｎｇ／ｍｌまたはそれより高い範囲のレベルで有することを見出した。対照的に、ほとんどの患者は、ＰＤ中に検出可能なレベルのＣＣＮ２（ＣＴＧＦ）タンパク質を有さなかった。数人の患者のみが、測定可能なＣＣＮ２値を有した。健康な被験体由来の血清は、この測定のために用いられるＣＣＮ３（ＮＯＶ）特異的抗体による間接的なＥＬＩＳＡを使用したところ、約７００ｎｇ／ｍｌのＣＣＮ３を示した。ウェスタンブロッティングによって、（多数のＰＤ患者において）ＰＤ流体がＣＣＮ３タンパク質を含んだこと、ならびにＣＣＮ３の量および分子形態が、患者の間で変化すること（図４）を確認された。これらのデータはまた、ＰＤ流体が、先に考察された尿と同様に、ＣＣＮ３タンパク質、もしくはそのフラグメント、またはＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム、あるいはそれらの任意の組み合わせを単離し、そして精製するための優れた供給源であるという証拠を提供する。ＣＣＮ３タンパク質、活性フラグメント、アイソフォーム、またはそれらの組み合わせがまた、他の体液（例えば、血液）および組織（例えば、腎臓細胞）から単離され、そして精製され得ることが、企図される。
【００３１】
これらの分子は、任意の標準的なバイオセパレーション技術、または当業者にとって周知であるバイオセパレーション工程の組み合わせによって先に記載された供給源から単離され、そして精製され得る。周知のバイオセパレーション技術の例としては、透析、分子サイズ排除クロマトグラフィー、免疫単離（ｉｍｍｕｎｏｉｓｏｌａｔｉｏｎ）、アフィニティークロマトグラフィー、ゲル電気泳動（１次元または２次元）、等電点電気泳動法（ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｏｆｏｃｕｓｉｎｇ）、高速液体クロマトグラフィー、ｐＨ勾配クロマトグラフィー、イオン強度勾配クロマトグラフィー、向流クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィーなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
単離され、そして精製されたＣＣＮ３タンパク質もしくはそのフラグメントまたはＣＣＮ３のアイソフォーム（あるいは組み合わせ）は、ＣＣＮ２タンパク質の発現および／または活性を調節することによる、ＣＣＮ２の異常なレベルに関連する疾患の処置に、実現可能に使用され得る。組織または体液におけるＣＣＮ３のレベルはまた、疾患の進行を予測するか、診断するか、そして／または追跡するため、および治療的介入の有効性を決定するために使用され得る。
【００３３】
したがって、本発明は、被験体のＣＣＮ３遺伝子発現またはＣＣＮ３活性レベルを調節することによってその被験体中のＣＣＮ２活性レベルを調節するための方法を開示する。上記被験体は、哺乳動物（例えば、ヒト、げっ歯類動物など）または鳥類の被験体のような任意の種の被験体であり得る。好ましい実施形態において、上記被験体は、ヒトである。「ＣＣＮ３」によって、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、アイソフォーム、ＣＣＮ３の任意の形態を含む複合体、組換えＣＣＮ３タンパク質分子、ＣＣＮ３分子に対する模倣物、またはそれらの組み合わせを含む、ＣＣＮ３タンパク質に関連するあらゆる分子種が意味される。用語「アイソフォーム」は、本願において、ＣＣＮ３に特異的な抗体との免疫反応性を有するタンパク質分子を意味する。上記抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。１つの実施形態において、上記ＣＣＮ３活性は、ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロットなどの標準的なイムノアッセイ技術を使用して、完全長ＣＣＮ３タンパク質分子に対する１つ以上の抗体（およびいくつかの場合においては、ＣＣＮ３に特有の短い配列および／またはエピトープに特異的なモノクローナル抗体）に対する免疫反応性によって測定される。
【００３４】
１つの実施形態において、ＣＣＮ２（ＣＴＧＦ）遺伝子発現の調節は、ダウンレギュレーションによるものであり、そしてそのＣＣＮ２遺伝子発現は、被験体において、ＣＣＮ３（ＮＯＶ）遺伝子発現を増強することによってか、またはＣＣＮ３活性のレベルを増加させることによって、ダウンレギュレートされる。好ましい実施形態において、被験体におけるＣＣＮ３活性のレベルは、ＣＣＮ３の有効量を投与することによって増加し得、そのＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３分子、そのフラグメント、ＣＣＮ３のアイソフォーム、ＣＣＮ３の任意の形態を含む複合体、組換えＣＣＮ３、またはＣＣＮ３タンパク質の分子模倣物であり得る。ＣＣＮ３の有効量の例は、約９００ｎｇ／ｍｌ以上の血清完全長ＣＣＮ３レベルを提供するための量である。ＣＣＮ３の有効量の別の例は、約２８０μｇ／ｍｍｏｌクレアチニン以上の尿ＣＣＮ３レベルを提供するために、ＣＣＮ３の１つ以上の用量を被験体に投与することである。ＣＣＮ３によるＣＣＮ２の調節が、先に考察されたＣＣＮ２の異常なレベルに関連する任意の疾患を処置するために使用され得ることが、企図され、その疾患としては、慢性腎疾患、線維症または硬化症、および癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３５】
本発明の方法の可能な使用の１つは、線維症の処置のための使用である。本開示において使用される用語「線維症」は、線維症および／または硬化症を含む。なぜならそれらは、類似のプロセスであり、そして両方とも、少なくとも１つの原因因子としてＣＣＮ２を有することが示されているからである。本開示において、「線維症」および「硬化症」は、交換可能に使用され得る。上記線維症は、線維症を形成し得る任意の器官（例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、血管系（強皮症の動脈、冠状動脈を含む）、頚、眼、歯肉、脳、および腹膜であるが、これらに限定されない）に関連し得る。上記線維症はまた、病理学的状態（例えば、腎臓病、腹膜透析、黄斑変性、歯周疾患、うっ血性心臓不全、脳卒中ならびに関連する虚血および再灌流障害、外科的介入手順および医学的介入手順（例えば、バルーン血管形成術、ステントの挿入、カテーテル、グラフト（動脈瘻および静脈瘻を含む）、および器官移植片）、ならびに外科手術後の望ましくない組織の癒着もしくは器官の癒着）の１つの結果であり得る。上記線維症はまた、増加した細胞の増殖（例えば、糸球体の増殖性疾患）に関連し得る。他の適応は、特に、増殖または転移がＣＣＮ２発現のアップレギュレーションに関連する場合、異常な細胞の増殖（例えば、癌）に関連する。
【００３６】
本発明はまた、ＣＣＮ３の有効量を被験体に投与することによって、その被験体中の慢性腎疾患における腎線維症を処置するための方法に関連し、このＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ＣＣＮ３の有効量の例は、約９００ｎｇ／ｍｌ以上の血清レベルを提供するために、完全長ＣＣＮ３の１つ以上の用量を被験体に投与することである。完全長ＣＣＮ３の有効量の別の例は、２８０μｇ／ｍｍｏｌクレアチニン以上の尿ＣＣＮ３レベルを提供するのに十分な量である。透析流体による腹膜透析を受ける患者のために、上記ＣＣＮ３は、腹膜透析を受ける患者によって使用される透析溶液にそのＣＣＮ３を添加することによってその被験体に投与され得る。この実施形態において、完全長ＣＣＮ３の有効量の例は、透析溶液１ｍｌあたり１００ｎｇ以上（例えば、５００ｎｇ／ｍｌ以上、または１０００ｎｇ／ｍｌ以上）の完全長ＣＣＮ３タンパク質の濃度である。
【００３７】
本発明は、さらに、線維症または硬化症、あるいはＣＣＮ２の異常なレベルに関連する任意の他の疾患を処置するためのキットに関連する。上記キットは、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるＣＣＮ３を備える。
【００３８】
本発明は、被験体において腎臓病または線維症／硬化症の障害などの疾患を診断するために使用され得る。上記方法は、（ａ）被験体から組織サンプルまたは体液サンプルを得る工程、（ｂ）そのサンプル中のＣＣＮ３活性のレベルを検出する工程、および（ｃ）そのサンプル中のＣＣＮ３活性のレベルと、標準レベルとを比較する工程を包含し、ＣＣＮ３活性の増加したレベルは、上記疾患の存在を示す。１つの実施形態において、ＣＣＮ３の特有のアイソフォームの存在または非存在が、疾患を示すために使用され得る。上記サンプルは、組織または体液（例えば、尿、血液（血漿および血清を含む）、または腹膜洗浄液）であり得る。好ましい実施形態において、上記ＣＣＮ３活性のレベルは、イムノアッセイによって検出される。
【００３９】
本発明は、さらに、哺乳動物被験体において腎障害または線維症障害（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を診断するのに使用するための診断キットに関する。上記キットは、ＣＣＮ３に特異的な抗体を備える。上記抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。
【００４０】
本発明の実施は、特に示されない限り、当業者の技術範囲内である細胞生物学、細胞培養、分子生物学、微生物学、遺伝子操作、および免疫学の従来技術を利用し、そしてそれらを組み込む。本発明は、現在、最も実用的であり、かつ好ましい実施形態であると考えられるものに関連して記載される。本発明は、本開示の実施形態に限定されず、特許請求の範囲の精神および範囲内に含まれる種々の改変および等価な配置を網羅することが意図されることが、認識されるべきである。本発明の改変およびバリエーションは、特許請求の範囲に規定されるような本発明の新規局面から逸脱することなくなされ得る。添付の特許請求の範囲は、広く、かつ本明細書中の本発明の精神および範囲と一致する様式で解釈されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、ＣＣＮタンパク質の複数モジュラー構造を示す。ＣＴ、成長調節因子のファミリーを含むシステインノット（ｋｎｏｔ）；ＩＧＦＢＰ、インスリン様増殖因子結合タンパク質ドメイン；ＴＳＰ１、トロンボスポンジン様ドメイン；およびＶＷＣ、Ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子様ドメイン（ＶＷＣ）。
【図２】図２は、不希釈または１：１０希釈の両方で泳動されるサンプルによる、糖尿病性腎症を有する患者の尿における複数のバンドを示す、ＣＣＮ３反応性タンパク質についてのウェスタン（免疫ブロット）ブロット分析である。高い量のＣＣＮ３を産生する細胞株（ＮＣＩ）由来の条件培地が、ポジティブコントロールとして泳動された（左の２レーン）。ｋＤａにおけるおおよその分子量（レーンＭに示される）は、この図面の左に数値として示される。
【図３】図３は、ＣＣＮ３特異的抗体を使用した、マウス尿およびヒト腹膜透析物（ＰＤ）流体のウェスタン（免疫ブロット）ブロット分析である。ヒトＰＤ流体は、高濃度のＣＣＮ３を含む条件培地（ＧＳＴ−ＮＯＶ、一番左のレーン）と比較して、約５０ｋＤａおよび６５〜７０ｋＤａに２つの明確なＣＣＮ３のバンドを示した。マウス尿のＣＣＮ３は、約５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、および７０ｋＤａにおける３つのバンド、ならびに約１５〜２０ｋＤａにおける、単一の、より強い染色のバンドとして出現した。後者の１５〜２０ｋＤａのバンドは、完全長分子の４分の１のフラグメントを表し得る。
【図４】図４は、上首尾に透析（すなわち、膜を横切る適切な限外濾過によって決定されるような、腹膜の線維症の明らかな発症を伴わない）を受ける患者から回収された透析液のウェスタンブロットまたは免疫ブロット（同時に同一条件下で泳動される４つのゲル）であり、そして免疫反応性のＣＣＮ３分子の存在を示した。ほとんどの患者は、５０〜６５ｋＤａ（元のゲル上の分子量標準との比較によって決定される）の範囲に２つの顕著なバンドを示したが、数人の患者が、少ない染色を示したのに対して、他の患者は、強い染色を示し、そしていくつかのサンプルは、約２０ｋＤａにおけるバンドを含む、代わりのサイズの存在を示した。（＋）で示されたレーンは、ポジティブコントロールとして、ＣＣＮ３について濃縮された培養培地を含み、そして約５０〜５５ｋＤａにおける１つの強力なバンド、および約２０ｋＤａにおける別の強力なバンドからなる２つの強いバンドを示した。２０ｋＤａのバンドは、中央にて切断されたＣＣＮ３のフラグメントを表すと考えられる。３番目に軽いバンドは、６０〜６５ｋＤａにて出現し、大部分の患者の流体において見られる強力なバンドとサイズが等しい。
【図５】図５は、１個体の非糖尿病動物における弱いＣＣＮ３バンド（レーン２０）、および「静的な」腎臓病を有する大部分の糖尿病動物における強力なＣＣＮ３バンドの存在を実証する、糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ）由来の尿サンプル（レーン１〜１６）、および非糖尿病マウス（ｄｂ／ｍ）由来の尿サンプル（レーン１７〜３２）のウェスタンブロット分析である。Ｍ＝分子量標準。
【図６】図６は、特異的プライマー配列を使用した逆転写ＰＣＲの結果であり、この結果は、月齢約８ヶ月の健康なコントロール非糖尿病マウスの腎臓（主に、腎皮質）における低いＣＣＮ３  ｍＲＮＡレベル（ｄｂ／ｍ、１７〜３２、上の図、下のバンド）を実証する。ＣＣＮ３の発現は、動物が「静的な疾患状態」にあり、そして進行が安定化している場合、糖尿病の７ヵ月後および月齢８ヶ月で著しく増加した（ｄｂ／ｄｂ、１−１６、上のパネル、上のバンド）。対応するβアクチン（ハウスキーピング遺伝子）レベルの量は、両群の動物において同様であった（下のパネル）。
【図７】図７は、ＣＣＮ２特異的プライマー配列を使用した逆転写ＰＣＲの結果であり、この結果は、月齢約８ヶ月の健康なコントロール非糖尿病マウスの腎臓（主に、腎皮質）における対応するＣＣＮ２  ｍＲＮＡレベル（図面の左上４分の１）を実証する。ＣＣＮ２の発現は、動物が、さらなる疾患の進行を伴わない「静的な」状態にある場合、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、糖尿病の７ヵ月後に正常に戻った（右上４分の１）。対応するβアクチンレベルの発現は、図面の下半分のレーンに示される（ハウスキーピング遺伝子）。図面中の各バンドは、個々の動物からの結果を表す。
【図８】図８は、ＣＣＮ３特異的プライマー配列またはＩ型コラーゲン特異的プライマー配列を使用した逆転写ＰＣＲの結果を示し、この結果は、メサンギウム細胞のインビトロでのトランスフェクション後のヒトＣＣＮ３遺伝子の特異的な過剰発現が、Ｉ型コラーゲン遺伝子発現の著しいダウンレギュレーションをもたらしたことを実証する。ラットのメサンギウム細胞は、ＣＣＮ３遺伝子構築物（＋）、またはコントロールＬａｃ−Ｚ遺伝子構築物（−）のいずれかを用いてトランスフェクトされた。
【図９】図９は、トランスフェクトされたメサンギウム細胞におけるＣＣＮ２タンパク質分泌の、ＥＬＩＳＡによる測定を示し、この測定は、そのトランスフェクション、およびその後のＣＣＮ３遺伝子の過剰発現が、その分泌されたＣＣＮ２の著しい減少をもたらすことを実証する。
【図１０】図１０は、トランスフェクトされたメサンギウム細胞におけるＩ型コラーゲンタンパク質の分泌の、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）による測定を示し、そしてこの測定は、メサンギウム細胞におけるＣＣＮ３遺伝子の特異的な過剰発現が、産生および／または蓄積されたコラーゲンの遮断をもたらしたことを実証した。
【図１１】図１１は、メサンギウム細胞におけるトロンボスポンジン１（ＴＳＰ−１）タンパク質分泌の、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）による測定を示し、そしてこの測定は、ＣＣＮ３遺伝子の特異的な過剰発現が、ＴＳＰ−１分泌の実質的な減少をもたらしたことを実証した。
【図１】
2008526890.tif 000004
【図２】
2008526890.tif 000005
【図３】
2008526890.tif 000006
【図４】
2008526890.tif 000007
【図５】
2008526890.tif 000008
【図６】
2008526890.tif 000009
【図７】
2008526890.tif 000010
【図８】
2008526890.tif 000011
【図９】
2008526890.tif 000012
【図１０】
2008526890.tif 000013
【図１１】
2008526890.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成19年9月21日(2007.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体においてＣＣＮ２活性を調節するための組成物であって、該組成物は、該被験体のＣＣＮ３遺伝子発現またはＣＣＮ３活性レベルを調節する、組成物。
【請求項２】
前記ＣＣＮ２活性の調節は、ＣＣＮ２の遺伝子発現のダウンレギュレーションによって阻害され、そして前記ＣＣＮ３遺伝子発現または前記ＣＣＮ３活性レベルが、増強される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
被験体中の高いＣＣＮ２レベルから生じる疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量のＣＣＮ３を含有し、該組成物は、該被験体への投与のために適切である、組成物。
【請求項４】
前記疾患は、慢性腎疾患である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記疾患は、線維症または硬化症である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記疾患は、癌である、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
有効量のＣＣＮ３の投与は、前記ＣＣＮ３活性レベルを増加させ、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記被験体は、ヒト被験体である、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
被験体において線維症または硬化症を処置するための組成物であって、該組成物は、該被験体においてＣＣＮ３遺伝子の発現を増加させるるか、または該被験体においてＣＣＮ３活性のレベルを増加させる、組成物。
【請求項１０】
前記線維症または硬化症は、腎臓、心臓、肝臓、肺、血管系、頚、眼、歯肉、脳、および腹膜からなる群より選択される器官に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記血管系は、強皮症の動脈および冠状動脈からなる群より選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記線維症または硬化症は、前記被験体の病理学的状態に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記病理学的状態は、腎臓病、腹膜透析、黄斑変性、歯周疾患、脳卒中および関連する虚血ならびに再灌流障害、外科的介入手順および医学的介入手順、または望ましくない外科手術後の組織の癒着もしくは器官の癒着の結果である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記外科的介入手順および医学的介入手順は、バルーン血管形成術、ステントの挿入、カテーテル、グラフト、および器官移植片からなる群より選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記グラフトは、動脈瘻または静脈瘻である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記線維症または硬化症は、増加した細胞の増殖に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
前記細胞の増殖は、糸球体の増殖性疾患または癌をもたらす、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記被験体は、ヒトである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１９】
被験体中の慢性腎疾患における腎線維症を処置するための組成物であって、該組成物は、該被験体に投与するために適切な有効量のＣＣＮ３を含有し、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、組成物。
【請求項２０】
前記被験体は、透析溶液による腹膜透析を受け、そして前記ＣＣＮ３は、該ＣＣＮ３を該透析溶液に添加することによって、該被験体に投与されるために適切である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
線維症または硬化症を処置するためのキットであって、該キットは、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるＣＣＮ３を備える、キット。
【請求項２２】
被験体における腎障害または線維症障害の診断を補助するための方法であって、（ａ）組織サンプルまたは体液サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルを検出する工程、および（ｂ）該サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルと、既知の腎障害または線維症障害を有さない被験体のＣＣＮ３活性の標準レベルとを比較する工程を包含し、ＣＣＮ３活性の増加したレベルが、該腎障害または線維症障害の存在を示す、方法。
【請求項２３】
前記サンプルは、尿、血液、または腹膜洗浄液である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＣＮ３の特有の形態の非存在または存在は、前記腎障害もしくは線維症障害の存在または非存在を示す、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＣＮ３活性のレベルは、イムノアッセイによって検出される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物被験体において腎障害または線維症障害を診断するのに使用するための診断キットであって、該キットが、ＣＣＮ３に特異的な抗体を備える、キット。
【請求項２７】
前記抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体から選択される、請求項２６に記載の診断キット。
【手続補正書】
【提出日】平成19年10月16日(2007.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体においてＣＣＮ２活性を調節するための組成物であって、該組成物は、該被験体のＣＣＮ３遺伝子発現またはＣＣＮ３活性レベルを調節する、組成物。
【請求項２】
前記ＣＣＮ２活性の調節は、ＣＣＮ２の遺伝子発現のダウンレギュレーションによって阻害され、そして前記ＣＣＮ３遺伝子発現または前記ＣＣＮ３活性レベルが、増強される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
被験体中の高いＣＣＮ２レベルから生じる疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量のＣＣＮ３を含有し、該組成物は、該被験体への投与のために適切である、組成物。
【請求項４】
前記疾患は、腎疾患である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記疾患は、線維症または硬化症である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記疾患は、癌である、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
有効量のＣＣＮ３の投与は、前記ＣＣＮ３活性レベルを増加させ、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記被験体は、ヒト被験体である、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
被験体において線維症または硬化症を処置するための組成物であって、該組成物は、該被験体においてＣＣＮ３遺伝子の発現を増加させるか、または該被験体においてＣＣＮ３活性のレベルを増加させる、組成物。
【請求項１０】
前記線維症または硬化症は、腎臓、心臓、肝臓、肺、血管系、頚、眼、歯肉、脳、皮膚および腹膜からなる群より選択される器官に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記血管系は、強皮症の動脈および冠状動脈からなる群より選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記線維症または硬化症は、前記被験体の病理学的状態に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記病理学的状態は、腎臓病、腹膜透析、黄斑変性、歯周疾患、脳卒中および関連する虚血ならびに再灌流障害、外科的介入手順および医学的介入手順、または望ましくない外科手術後の組織の癒着もしくは器官の癒着の結果である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記外科的介入手順および医学的介入手順は、バルーン血管形成術、ステントの挿入、カテーテル、グラフト、および器官移植片からなる群より選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記グラフトは、動脈瘻または静脈瘻である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記線維症または硬化症は、増加した細胞の増殖に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
前記細胞の増殖は、糸球体の増殖性疾患または癌をもたらす、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記被験体は、ヒトである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１９】
被験体中の腎疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、該被験体に投与するために適切な有効量のＣＣＮ３を含有し、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、組成物。
【請求項２０】
前記被験体は、透析溶液による腹膜透析を受け、そして前記ＣＣＮ３は、該ＣＣＮ３を該透析溶液に添加することによって、該被験体に投与されるために適切である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
線維症または硬化症を処置するためのキットであって、該キットは、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるＣＣＮ３を備える、キット。
【請求項２２】
被験体における腎疾患、線維症、または癌の診断を補助するための方法であって、（ａ）組織サンプルまたは体液サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルを検出する工程、および（ｂ）該サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルと、既知の腎疾患も、線維症も、癌も有さない被験体のＣＣＮ３活性の標準レベルとを比較する工程を包含し、ＣＣＮ３活性の増加したレベルが、該腎疾患、線維症、または癌の存在を示す、方法。
【請求項２３】
前記サンプルは、尿、血液、または腹膜洗浄液である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＣＮ３の特有の形態の非存在または存在は、前記腎障害もしくは線維症障害の存在または非存在を示す、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＣＮ３活性のレベルは、イムノアッセイによって検出される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物被験体において腎障害または線維症障害を診断するのに使用するための診断キットであって、該キットが、ＣＣＮ３に特異的な抗体を備える、キット。
【請求項２７】
前記抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体から選択される、請求項２６に記載の診断キット。
【手続補正書】
【提出日】平成19年10月24日(2007.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体においてＣＣＮ２活性を調節するための組成物であって、該組成物は、該被験体のＣＣＮ３遺伝子発現またはＣＣＮ３活性レベルを調節する、組成物。
【請求項２】
前記ＣＣＮ２活性の調節は、ＣＣＮ２の遺伝子発現のダウンレギュレーションによって阻害され、そして前記ＣＣＮ３遺伝子発現または前記ＣＣＮ３活性レベルが、増強される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
被験体中の高いＣＣＮ２レベルから生じる疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量のＣＣＮ３を含有し、該組成物は、該被験体への投与のために適切である、組成物。
【請求項４】
前記疾患は、腎疾患である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記疾患は、線維症または硬化症である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記疾患は、癌である、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
有効量のＣＣＮ３の投与は、前記ＣＣＮ３活性レベルを増加させ、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記被験体は、ヒト被験体である、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
被験体において線維症または硬化症を処置するための組成物であって、該組成物は、該被験体においてＣＣＮ３遺伝子の発現を増加させるか、または該被験体においてＣＣＮ３活性のレベルを増加させる、組成物。
【請求項１０】
前記線維症または硬化症は、腎臓、心臓、肝臓、肺、血管系、頚、眼、歯肉、脳、皮膚および腹膜からなる群より選択される器官に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記血管系は、強皮症の動脈および冠状動脈からなる群より選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記線維症または硬化症は、前記被験体の病理学的状態に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記病理学的状態は、腎臓病、腹膜透析、黄斑変性、歯周疾患、脳卒中および関連する虚血ならびに再灌流障害、外科的介入手順および医学的介入手順、または望ましくない外科手術後の組織の癒着もしくは器官の癒着の結果である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記外科的介入手順および医学的介入手順は、バルーン血管形成術、ステントの挿入、カテーテル、グラフト、器官移植片、美容外科および美容処置からなる群より選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記グラフトは、動脈瘻または静脈瘻である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記線維症または硬化症は、増加した細胞の増殖に関連する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
前記細胞の増殖は、糸球体の増殖性疾患または癌をもたらす、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記被験体は、ヒトである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１９】
被験体中の腎疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、該被験体に投与するために適切な有効量のＣＣＮ３を含有し、該ＣＣＮ３は、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、組成物。
【請求項２０】
前記被験体は、透析溶液による腹膜透析を受け、そして前記ＣＣＮ３は、該ＣＣＮ３を該透析溶液に添加することによって、該被験体に投与されるために適切である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
線維症または硬化症を処置するためのキットであって、該キットは、完全長ＣＣＮ３タンパク質、そのフラグメント、完全長ＣＣＮ３タンパク質のアイソフォーム；ＣＣＮ３の分子模倣物、組換えＣＣＮ３タンパク質、ＣＣＮ３を含む複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるＣＣＮ３を備える、キット。
【請求項２２】
被験体における腎疾患、線維症、または癌の診断を補助するための方法であって、（ａ）組織サンプルまたは体液サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルを検出する工程、および（ｂ）該サンプル中のＣＣＮ３活性のレベルと、既知の腎疾患も、線維症も、癌も有さない被験体のＣＣＮ３活性の標準レベルとを比較する工程を包含し、ＣＣＮ３活性の増加したレベルが、該腎疾患、線維症、または癌の存在を示す、方法。
【請求項２３】
前記サンプルは、尿、血液、または腹膜洗浄液である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＣＮ３の特有の形態の非存在または存在は、前記腎障害もしくは線維症障害の存在または非存在を示す、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＣＮ３活性のレベルは、イムノアッセイによって検出される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物被験体において腎障害または線維症障害を診断するのに使用するための診断キットであって、該キットが、ＣＣＮ３に特異的な抗体を備える、キット。
【請求項２７】
前記抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体から選択される、請求項２６に記載の診断キット。
【国際調査報告】
2008526890.tif 000015