(57)【要約】  治療に適切な患者のシェーグレン症候群の治療方法であって、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストの有効量を患者に投与して、視覚的類似尺度において乾燥、疲労および関節痛のうちの２つ以上の基準に対して有意な改善を示す方法と、そのための製造品が提供される。また、治療に適切な被検体のシェーグレン症候群を治療することを伴う方法及び製造品は、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体の有効量を被検体に投与することを伴い、特定の投与計画期間内に抗体への初回曝露と続く曝露を提供するものと、そのための製造品を提供する。
2008507555.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者のシェーグレン症候群の治療方法であって、有効量のＣＤ２０抗体と抗マラリア剤とを患者に投与して、視覚的類似尺度において乾燥、疲労および関節痛のうちの２つ以上の基準に対して少なくともおよそ３０％の改善を示す方法。
【請求項２】
乾燥、疲労および関節痛の３つに基準に対する改善がある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
有効量によりＣＤ２０抗体なしで抗マラリア剤を投与する対照治療よりも改善がみられる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗マラリア剤がヒドロキシクロロキンまたはクロロキンである、請求項１ないし３の何れか一に記載の方法。
【請求項５】
前記抗マラリア剤がヒドロキシクロロキンである、請求項１ないし４の何れか一に記載の方法。
【請求項６】
前記ＣＤ２０抗体が第一医薬であり、前記抗マラリア剤が第二医薬である場合に、第三の医薬が有効量で投与される、請求項１ないし４の何れか一に記載の方法。
【請求項７】
前記第三の医薬が、化学療法剤、免疫抑制剤、疾患変更性抗リウマチ剤(ＤＭＡＲＤ)、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)、サイトカインアンタゴニスト、分泌アゴニスト又はホルモンである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記第三の医薬がステロイド、口渇又は乾燥した眼のための分泌アゴニスト、非ステロイド性抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)又は免疫抑制剤である、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
前記第三の医薬がステロイドである、請求項６ないし８の何れか一に記載の方法。
【請求項１０】
前記ステロイドが副腎皮質ステロイドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ステロイドがプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン又はデキサメサゾンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＤ２０抗体がステロイド治療を受けた患者に投与されない場合にステロイドが用いられるよりも少ない量で投与される、請求項９ないし１１の何れか一に記載の方法。
【請求項１３】
第三の医薬が口渇又は乾燥した眼のための分泌アゴニストである、請求項６ないし８の何れか一に記載の方法。
【請求項１４】
分泌アゴニストは、塩酸ピロカルピン、セビメリン、ブロムヘキシン、ジクアフォゾル、システアミン点眼、潤滑油点眼、シクロスポリン眼用エマルジョン又はこれらの製薬的塩類である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記第三の医薬が非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤ)である、請求項６ないし８の何れか一に記載の方法。
【請求項１６】
ＮＳＡＩＤが、アスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、インドメタシン又はトルメチンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
第三の医薬が免疫抑制剤である、請求項６ないし８の何れか一に記載の方法。
【請求項１８】
免疫抑制剤がシクロフォスファミド、クロランブシル、アザチオプリン又はメトトレキセートである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者が以前にＣＤ２０抗体で治療されたことがある、請求項１ないし１８の何れか一に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が前記症候群を再発したものである、請求項１ないし１９の何れか一に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体が完全な抗体である、請求項１ないし２０の何れか一に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体が他の分子とコンジュゲートされたものである、請求項１ないし２０の何れか一に記載の方法。
【請求項２３】
他の分子が細胞障害性剤である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が静脈内に投与される、請求項１ないし２３の何れか一に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体が皮下に投与される、請求項１ないし２３の何れか一に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体がリツキシマブである、請求項１ないし２５の何れか一に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体が配列番号２及び８の可変ドメイン配列を含有するヒト化２Ｈ７である、請求項１ないし２５の何れか一に記載の方法。
【請求項２８】
患者は、抗核抗体(ＡＮＡ)、抗リウマチ因子(ＲＦ)抗体、シェーグレン関連抗原Ａ又はＢ(ＳＳ-Ａ又はＳＳ-Ｂ)に対する抗体、セントロメアプロテインＢ(ＣＥＮＰＢ)又はセントロメアプロテインＣ(ＣＥＮＰＣ)に対する抗体、ＩＣＡ６９に対する自己抗体、又はこのような抗体のうちの２以上の組合せのレベルが亢進している、請求項１ないし２７の何れか一に記載の方法。
【請求項２９】
ＳＳ-Ａ及びＳＳ-Ｂに対する抗体が、抗Ｒｏ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ｂ抗体、又は抗Ｒｏ／ＳＳ-Ｂ抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
シェーグレン症候群が二次的なシェーグレン症候群である、請求項１ないし２９の何れか一に記載の方法。
【請求項３１】
ａ．ＣＤ２０抗体を具備する容器；
ｂ．抗マラリア剤を具備する容器；及び
ｃ．視覚的類似尺度において乾燥、疲労および関節痛のうちの２つ以上の基準に対して少なくともおよそ３０％の改善が得られるために有効な抗体と抗マラリア剤の患者への投与量を示す、患者のシェーグレン症候群を治療するための指示書を有するパッケージ挿入物
を具備する製造品。
【請求項３２】
前記ＣＤ２０抗体が第一の医薬であり、抗マラリア剤が第二の医薬である場合に第三の医薬を具備する容器をさらに含んでなり、第三の医薬で患者を治療するための指示書をパッケージ挿入物に含んでなる、請求項３１に記載の製造品。
【請求項３３】
第三の医薬が化学療法剤、免疫抑制剤、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、又はホルモンである、請求項３２に記載の製造品。
【請求項３４】
第三の医薬がステロイドである、請求項３２又は３３に記載の製造品。
【請求項３５】
患者のシェーグレン症候群の治療方法であって、有効量のＣＤ２０抗体が患者に投与され、初回抗体曝露の後に第二抗体曝露が供給されることを含み、該第二の曝露が初回曝露からおよそ１６から５４週までに供給されない治療方法。
【請求項３６】
前記第二の曝露が初回曝露からおよそ２０から３０週までに供給されない、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記第二の曝露が初回曝露からおよそ４６から５４週までに供給されない、請求項３５又は３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記初期および第二の抗体曝露がそれぞれおよそ０．５から４グラムの量で供給される、請求項３５ないし３７の何れか一に記載の方法。
【請求項３９】
前記初期および第二の抗体曝露がそれぞれおよそ１．５から３．５グラムの量で供給される、請求項３５ないし３８の何れか一に記載の方法。
【請求項４０】
前記初期および第二の抗体曝露がそれぞれおよそ１．５から２．５グラムの量で供給される、請求項３５ないし３９の何れか一に記載の方法。
【請求項４１】
さらに、有効量のＣＤ２０抗体が被検体に投与され、第三抗体曝露が供給されることを含み、該第三の曝露が初回曝露からおよそ４６から６０週までに供給されない、請求項３５ないし４０の何れか一に記載の方法。
【請求項４２】
前記第三の抗体曝露がおよそ０．５から４グラムの量で供給される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記第三の抗体曝露がおよそ１．５から３．５グラムの量で供給される、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記第三の抗体曝露がおよそ１．５から２．５グラムの量で供給される、請求項４１ないし４３の何れか一に記載の方法。
【請求項４５】
前記第三の曝露が初回曝露からおよそ４６から５５週までに供給されない、請求項４１ないし４４の何れか一に記載の方法。
【請求項４６】
更なる抗体曝露が初回曝露から少なくともおよそ７０から７５週までに供給されない、請求項４１ないし４５の何れか一に記載の方法。
【請求項４７】
更なる抗体曝露が初回曝露からおよそ７４から８０週までに供給されない、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
一又は複数の抗体曝露が単回抗体用量として被検体に供給される、請求項３５ないし４７の何れか一に記載の方法。
【請求項４９】
それぞれの抗体曝露が単回抗体用量として被検体に供給される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
一又は複数の抗体曝露が複数回抗体用量として被検体に供給される、請求項３５ないし４９の何れか一に記載の方法。
【請求項５１】
それぞれの抗体曝露が複数回抗体用量として供給される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記複数回用量がおよそ２から４回である、請求項５０又は５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記複数回用量がおよそ２から３回である、請求項５０ないし５２の何れか一に記載の方法。
【請求項５４】
前記複数回用量が第一および第二の用量からなる、請求項５２又は５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記複数回用量が第一、第二および第三の用量からなる、請求項５２又は５３に記載の方法。
【請求項５６】
後に続く用量が、前回の用量が投与されてからおよそ１から２０日に投与される、請求項５０ないし５５の何れか一に記載の方法。
【請求項５７】
後に続く用量が、前回の用量が投与されてからおよそ６から１６日に投与される、請求項５０ないし５６の何れか一に記載の方法。
【請求項５８】
後に続く用量が、前回の用量が投与されてからおよそ１４から１６日に投与される、請求項５０ないし５７の何れか一に記載の方法。
【請求項５９】
前記複数回用量がおよそ１日から４週間の全期間の間に投与される、請求項５０ないし５８の何れか一に記載の方法。
【請求項６０】
前記複数回用量がおよそ１日から２５日の全期間の間に投与される、請求項５０ないし５９の何れか一に記載の方法。
【請求項６１】
前記複数回用量がおよそ週ごとに投与される、つまり、第二用量が第一用量からおよそ１週間に投与され、任意の第三又は後に続く用量が前回の用量からおよそ１週間に投与されるものである、請求項５０ないし６０の何れか一に記載の方法。
【請求項６２】
それぞれの複数回抗体用量がおよそ０．５から１．５グラムである、請求項５０ないし６１の何れか一に記載の方法。
【請求項６３】
それぞれの複数回抗体用量がおよそ０．７５から１．３グラムである、請求項５０ないし６２の何れか一に記載の方法。
【請求項６４】
４から２０の抗体曝露が被検体に投与される、請求項３５ないし６３の何れか一に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＣＤ２０抗体が第一医薬である場合に、第二医薬が有効量の抗体曝露で投与される、請求項３５ないし６４の何れか一に記載の方法。
【請求項６６】
前記第二の医薬が前記第一の曝露とともに投与される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記第二の医薬が前記第一及び第二の曝露とともに投与される、請求項６５又は６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記第二の医薬がすべての曝露とともに投与される、請求項６５ないし６７の何れか一に記載の方法。
【請求項６９】
前記第二の医薬が、化学療法剤、免疫抑制剤、疾患を修飾している抗リウマチ剤(ＤＭＡＲＤ)、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤ)、サイトカインアンタゴニスト、口渇又は乾燥した眼のための分泌アゴニスト、又はホルモンである、請求項６５ないし６８の何れか一に記載の方法。
【請求項７０】
前記第二の医薬が抗マラリア剤である、請求項６５ないし６９の何れか一に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗マラリア剤がヒドロキシクロロキン又はクロロキンである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗マラリア剤がヒドロキシクロロキンである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記第二の医薬が他の医薬をさらに含有する、請求項７０ないし７２の何れか一に記載の方法。
【請求項７４】
前記第二の医薬がステロイド、口渇又は乾燥した眼のための分泌アゴニスト、非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤ)又は免疫抑制剤である、請求項６５ないし７３の何れか一に記載の方法。
【請求項７５】
前記第二の医薬がステロイドを含有する、請求項６５ないし７４の何れか一に記載の方法。
【請求項７６】
前記ステロイドが副腎皮質ステロイドである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ステロイドがプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン又はデキサメサゾンである、請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＣＤ２０抗体がステロイド治療を受けた患者に投与されない場合にステロイドが用いられるよりも少ない量で投与される、請求項７５ないし７７の何れか一に記載の方法。
【請求項７９】
第二の医薬が口渇又は乾燥した眼のための分泌アゴニストである、請求項６５ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８０】
分泌アゴニストは、塩酸ピロカルピン、セビメリン、ブロムヘキシン、シクロスポリン眼用エマルジョン、潤滑油点眼、システアミン点眼、ジクアフォゾル、又はこれらの製薬的塩類である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記第二の医薬が非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤ)を含有する、請求項６５ないし８０の何れか一に記載の方法。
【請求項８２】
ＮＳＡＩＤが、アスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、インドメタシン又はトルメチンである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
第二の医薬が免疫抑制剤を含有する、請求項６５ないし８２の何れか一に記載の方法。
【請求項８４】
免疫抑制剤がシクロフォスファミド、クロランブシル、アザチオプリン又はメトトレキセートである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記第二の医薬が初回曝露とともに投与される、請求項６５ないし８４の何れか一に記載の方法。
【請求項８６】
前記第二の医薬が第二の曝露とともに投与されないか、又は初回曝露で用いたよりも少ない量で投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
およそ２〜３グラムの前記ＣＤ２０抗体が初回曝露として投与される、請求項３５ないし８６の何れか一に記載の方法。
【請求項８８】
およそ１グラムの前記ＣＤ２０抗体が初回曝露としておよそ３週間の間、隔週投与される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記第二の曝露が初回曝露からおよそ６か月目であり、およそ２グラムの量で投与される、請求項８７又は８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記第二の曝露が初回曝露からおよそ６か月目であり、およそ１グラムの抗体として投与されてからおよそ２週間後にさらにおよそ１グラムの抗体が投与される、請求項８７ないし８９の何れか一に記載の方法。
【請求項９１】
およそ１グラムの前記ＣＤ２０抗体が投与されておよそ２週間後に、初回曝露としてさらにおよそ１グラムの抗体が投与される、請求項８７に記載の方法。
【請求項９２】
前記の第二の曝露が初回曝露からおよそ６か月目であり、およそ２グラムの量で投与される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記第二の曝露が初回曝露からおよそ６か月目であり、およそ１グラムの抗体として投与されてからおよそ２週間後にさらにおよそ１グラムの抗体が投与される、請求項９１又は９２に記載の方法。
【請求項９４】
抗マラリア剤が初回曝露の前又は初回曝露とともに被検体に投与される、請求項８７ないし９３の何れか一に記載の方法。
【請求項９５】
さらに、被検体にステロイドを投与することを含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ステロイドが前記第二の曝露とともに投与されないか、又は第二の曝露とともに投与されるが初回曝露で用いられるよりも少ない量で投与される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ステロイドが第三又は後に続く曝露とともに投与されない、請求項９５又は９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記被検体が以前にＣＤ２０抗体で治療されたことがない、請求項３５ないし９７の何れか一に記載の方法。
【請求項９９】
前記抗体が完全な抗体である、請求項３５ないし９８の何れか一に記載の方法。
【請求項１００】
前記抗体が他の分子とコンジュゲートされたものである、請求項３５ないし９９の何れか一に記載の方法。
【請求項１０１】
他の分子が細胞障害性剤である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記抗体が静脈内に投与される、請求項３５ないし１０１の何れか一に記載の方法。
【請求項１０３】
前記抗体がそれぞれの抗体曝露のために静脈内に投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記抗体が皮下に投与される、請求項３５ないし１０１の何れか一に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗体がそれぞれの抗体曝露のために皮下に投与される、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ＣＤ２０抗体以外の他の医薬がシェーグレン症候群の治療のために被検体に投与されない、請求項３５ないし１０５の何れか一に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗体がリツキシマブである、請求項３５ないし１０６の何れか一に記載の方法。
【請求項１０８】
前記抗体が配列番号２及び８の可変ドメイン配列を含有するヒト化２Ｈ７である、請求項３５ないし１０６の何れか一に記載の方法。
【請求項１０９】
前記抗体が配列番号２３及び２４の可変ドメイン配列を含有するヒト化２Ｈ７である、請求項３５ないし１０６の何れか一に記載の方法。
【請求項１１０】
患者は、抗核抗体(ＡＮＡ)、抗リウマチ因子(ＲＦ)抗体、シェーグレン関連抗原Ａ又はＢ(ＳＳ-Ａ又はＳＳ-Ｂ)に対する抗体、セントロメアプロテインＢ(ＣＥＮＰ Ｂ)又はセントロメアプロテインＣ(ＣＥＮＰ Ｃ)に対する抗体、ＩＣＡ６９に対する自己抗体、又はこのような抗体のうちの２以上の組合せのレベルが亢進している、請求項３５ないし１０９の何れか一に記載の方法。
【請求項１１１】
ＳＳ-Ａ及びＳＳ-Ｂに対する抗体が、抗Ｒｏ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ｂ抗体、又は抗Ｒｏ／ＳＳ-Ｂ抗体である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
シェーグレン症候群が二次的なシェーグレン症候群である、請求項３５ないし１１１の何れか一に記載の方法。
【請求項１１３】
ａ．ＣＤ２０抗体を具備する容器；および
ｂ．被検体のシェーグレン症候群を治療するための指示書を有するパッケージ挿入物を具備してなる製造品であって、該指示書が、初回抗体曝露の後に第二抗体曝露を供給するために有効な抗体の被検体への投与量を示すものであり、該第二曝露は初回曝露からおよそ１６から５４週後までに供給されないものである、製造品。
【請求項１１４】
初回抗体曝露と第二抗体曝露のそれぞれが０．５から４グラムの量で供給される、請求項１１３に記載の製造品。
【請求項１１５】
それぞれの抗体曝露がおよそ１から４回の用量で被検体に供給される、請求項１１３又は１１４に記載の製造品。
【請求項１１６】
それぞれの抗体曝露が抗体の単回用量として又は２ないし３回の複数回用量として被検体に供給される、請求項１１３ないし１１５の何れか一に記載の製造品。
【請求項１１７】
前記ＣＤ２０抗体が第一医薬である場合に、第二の医薬を具備する容器をさらに含み、さらに第二の医薬で被検体を治療するための指示書をパッケージ挿入物に有する、請求項１１３ないし１１６の何れか一に記載の製造品。
【請求項１１８】
前記第二の医薬が化学療法剤、免疫抑制剤、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、又はホルモンである、請求項１１７に記載の製造品。
【請求項１１９】
前記第二の医薬が抗マラリア剤である、請求項１１７又は１１８に記載の製造品。
【請求項１２０】
さらに第三の医薬を具備する容器を含み、さらに第三の医薬で被検体を治療するための指示書をパッケージ挿入物に有する、請求項１１７ないし１１９の何れか一に記載の製造品。
【請求項１２１】
前記第三の医薬がステロイドである、請求項１２０に記載の製造品。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
(関連出願)
本出願は、米国特許法規則１．５３(ｂ)(１)に基づき出願した非仮出願であり、米国特許法１１９条(ｅ)に基づき２００４年７月２２日出願の米国特許仮出願番号６０／５９０３０２の優先権を主張するものであり、その全体の開示が出典明記によりそのままここに組み込まれる。
【０００２】
(発明の分野)
本発明は、被検体のシェーグレン症候群の治療方法、並びにその使用のための指示書を有するキットに関する。
【０００３】
(発明の背景)
シェーグレン症候群
自己免疫性疾患、例えばシェーグレン症候群及び狼瘡は、依然としてとりわけ重大な臨床的疾患である。その名の通り、自己免疫性疾患は、身体自身の免疫系による破壊をもたらす。病理学的メカニズムが自己免疫性疾患の個々の種類で異なるが、ある一般的なメカニズムに、特定の抗体(本明細書において、自己反応性抗体又は自己抗体と称される)の結合が関与する。
シェーグレン症候群は、白血球が水分生産性腺を攻撃する慢性疾患である。特徴的症状は乾燥した眼(ドライアイ)および口渇であり、これは涙腺および唾液腺のリンパ球浸透物によって、生じる。涙および唾液の損失により、眼の特徴的変化(水溶性の涙の欠損又は乾性角結膜炎と称する)及び、歯の変質、口腔感染症の増加、嚥下困難および疼痛を伴う口腔を有する口の特徴的変化をが生じうる。また、患者は、関節(関節炎)、筋肉(筋炎)、神経(神経障害)、甲状腺(甲状腺炎)、腎臓(腎炎)、肺、又は体の他の領域、又はリンパ節腫脹の炎症を有しうる。また、患者は疲労及び不眠を感じうる。これは最も一般的な自己免疫性疾患のうちの１つであり、４，０００，０００人ものアメリカ人(主に中年の女性)を悩ませている。
【０００４】
シェーグレン症候群のアメリカ-ヨーロッパの分類基準は、Vitali 等, Ann Rheum Dis 61: 554-558 (2002)に記載される。一般に、治療は対症的であり、病原性データに基づいた治療が必要である。原発性シェーグレン症候群の主な訴えは、シッカ症状(口乾燥および眼乾燥)、疲労、関節痛／関節炎および全身併発(不均一)である。例としてHay 等, Brit J Rheum, 37 (10): 1069-1076 (1998)参照。乾燥は主要な訴えであり、自覚症状と客観的な検査との関連性は弱い(Hay 等, Ann Rheum Dis, 57 (1): 20-24 (1998))。症状の評価についてのゴールドスタンダートは存在しない。客観的な計測(USF, Shirmer)では、腺性障害の重症度を評価するものであり、不快／機能不全の程度を評価するものではない。一次エンドポイントは、４つのシェーグレン病ドメインのうちの２つの改善を含みうる：眼性乾燥、口腔乾燥、疲労および検査。乾燥した眼の患者の評価(視覚的類似尺度(ＶＡＳ))、Shirmer I試験(麻酔あり／麻酔なし)、例えば各眼について５分間、０−２５ｍｍの加湿、およびvan Bijsterveldに従ってスコア化する眼色素試験で２０％以上の改善がある場合を眼改善であるとしてもよい。二次エンドポイントは、lissamine緑染色の後に各眼について０−９であるか、または口渇の患者評価である非刺激唾液流量(分析天秤(１ｇ＝１ｍｌ)で加量した試料を用いて、つばを吐く技術により１５分間採取(Navazesh, Ann N Y Acad Sci, 694: 72-77(1993))で２０％以上の改善がある場合を口腔改善であるとしてもよく、疲労の患者評価(どの程度疲労を感じているか？どのくらい重症な疲労を感じているか？「全くなし」(０ｍｍ)−「とても重症」(１００ｍｍ))、ＭＦＩ (Smets 等, Psychosom Res 39:315 (1995))、ＭＡＦ、及び、シェーグレンに基づく-心理測定的な質問表(Bowman 等, Rheumatology 43 (6): 758-764 (2004))に２０％以上の改善がある場合を疲労改善としてもよい、検査改善はＥＳＲ(ｍｍ／ｈ)、血清ＩｇＧ(ｍｇ／ｄｌ)に２０％以上の改善があるものでもよい。他のエンドポイントは、疲労(シェーグレンに基づく心理測定的な質問表)、乾燥した眼、van Bijsterveldに従ってスコア化する眼色素試験(lissamine緑染色の後に各々の眼について０−９)、人工涙の使用(眼用溶液を使用する１日当たりの回数)、関節痛、一般的な事項(患者の広域評価(ＶＡＳ  ０−１００ｍｍ)、疼痛(ＶＡＳ  ０−１００ｍｍ))、耳下腺／唾液腺拡大、検査(ＲＦ、ＡＮＡ、Ｃ'4、クリオグロブリン血症)およびリバプールシッカ指標(Field 等, J Oral Pathol Med, 32 (3): 154-162 (2003))(経口症状ドメイン、経口症状対照ドメイン、感覚ドメイン、眼ドメインおよび性機能ドメイン)である。
【０００５】
活動中の原発性シェーグレン症候群のインフリキシマブの使用は、Steinfeld 等, Arthritis Rheum, 44: 2371-2375 (2001)によって、調べられた。活動中の原発性シェーグレン症候群患者の３回のインフリキシマブ注入の負荷投与量投薬計画のオープンラベル研究では、重大な副作用を感じることなく疾患活動性のすべての測定値に迅速で有意な改善がある。
活動中の原発性シェーグレン症候群患者のインフリキシマブの１年の追跡調査において、(Steinfeld 等, Arthritis Rheum, 46:3301-3303 (2002))、疾患徴候の有意な改善は１年間持続した。再治療後に観察される有効性の欠損も、重大な副作用もなく、注入応答の現象増加、３か月の臨床試験のプロトコールの延長、第０週、第２週及び第６週目のインフリキシマブ(３ｍｇ／ｋｇ)の３回注入の誘導投薬計画、１年にわたる１２週間毎の投薬の維持、及び再注入の間が２０週である。Steinfeld 等, Arthritis Rheum, 46:2249-2251 (2002)では、インフリキシマブがシェーグレン症候群患者において、本来のＡＱＰ-５分布を復元することが報告されている。
【０００６】
Martin 等, Clin Exp Rheumatol, 21:412 (2003)は、関節リウマチの二次シェーグレン症候群におけるインフリキシマブの使用を開示している。Mariette 等, Arthritis Rheum, 50:1270-1276 (2004)は、原発性シェーグレン症候群を治療する際のインフリキシマブを用いた多施設治験について報告している。一次エンドポイントは、３つのＶＡＳ(乾燥、無力症および疼痛)のうちの２つに少なくとも３０％の減少がみられることであった。また、ＴＲＩＰＳＳの予備的結果を報告しているMariette 等, Ann. Rheum. Dis., 62( 1): 66-66(２００３年７月)が原発性シェーグレン症候群のインフリキシマブの有効性が欠如していることを試験している。さらに、Mariette 等, Arthr. and Rheum., 48 Number 9, S260-S260(２００３年９月)は、ランダム化された、二重盲検、プラセボ対照ＴＲＩＰＳＳ研究から生じる、原発性シェーグレン症候群のインフリキシマブの有効性の欠如を報告していた。
他の試験では、Zandelt 等, J Rheumatol 31:96-101 (2004)は、原発性シェーグレン症候群において、エタナーセプトを用いて調査し、疲労４／１５(ＭＦＩ＋ＶＡＳ)の減少および４つのエンドポイントのうちの３つにおいて、ＥＳＲの著しい減少がみられた。唾液機能または涙の機能＋ＭＳＧに対しては効果がなかった。
【０００７】
他の試験では、Pillemer 等, Arthritis Rheum 50:2240-2245 (2004)はシェーグレン症候群を試験する際にエターナルセプトを用いて調査した。結果は、ＥＳＲ(ｐ＝０．００４)と緩やかに減少し、唾液機能または涙の機能上のには効果がなかった。Azuma 等, Arthritis Rheum, 46:1585-1594 (2002)は、セファランチン(cepharantine)によるＴＮＦα誘発性ＭＭＰ9の抑制を開示した。Steinfeld 等, Lab Invest 81:143-148 (2001)は、異常なアクアポリン-５分布を示した。Towne 等, J Biol Chem, 276:18657-18664 (2001)は、ＴＮＦαがマウス肺上皮細胞でのＡＱＰ５発現を阻害すること、ＴＮＦαに応答して減少したＡＱＰ５ ｍＲＮＡとタンパク質発現はＴＮＦＲ１レセプターを介したシグナル伝達によって、生じ、ＴＮＦαに応答して減少したＡＱＰ５ ｍＲＮＡとタンパク質発現はＮＦ-κＢの核転座を伴うことを示した。Koski 等, Clin Exp Rheumatol, 19:131-137 (2001)は、どのＴＮＦＲが唾液腺に存在するかについて探索した。
シェーグレンを引き起こす自己免疫性現象を開始する初めの引き金が知られていないが、状況証拠としてウイルスが伴うことが示唆される。１つの考えられる候補はエプスタインバーウイルス(ＥＢＶ)であり、それによって、腫大した唾液腺、関節の痛みおよび疲労に特徴がある症状である感染性単核症が生じる。実質的に、すべての成人は２０歳までにＥＢＶに感染している。最初の感染の後、このウイルスは通常唾液腺にとどまるが、問題は生じない。このウイルス(または、密接に関連したウイルス)が遺伝的に感じやすい個体において、自己免疫性応答を誘発しうると推測される。
【０００８】
推定の感染因子は、唾液腺に損傷を与えて、唾液腺に「免疫」リンパ球を引きつける。これらのリンパ球は、リウマチ因子(ＲＦ)、抗核抗体およびシェーグレン関連抗原Ａ及びＢ(またはＳＳ-ＡおよびＳＳ-Ｂ)と称するタンパク質に値する抗体などの特異的な自己抗体を放出する。Ｒｏ／ＳＳ-ＡおよびＬａ／ＳＳ-Ｂ抗原に対する自己抗体はシェーグレン症候群患者の涙液に存在することもあり、血清又は涙液中での存在は乾性角結膜炎の重症度と関係している。Toker 等 Br J Ophthalmol. 88(3): 384-387 (2004)。加えて、セントロメアプロテインＢ(ＣＥＮＰ  Ｂ)およびセントロメアプロテインＣ(ＣＥＮＰ  Ｃ)に対する抗体は、シェーグレン症候群で生じる自己抗体である。試験されたシェーグレン症候群患者の１５％を表すサブセットにおいて、この後者の抗セントロメア抗体はもっぱらＣＥＮＰ  Ｃを認識し、Ｒｏ５２およびＬａへの抗体と均一に関連しているPillemer 等 J Rheumatol. 31 (6): 1121-1125 (2004)。加えて、シェーグレン症候群患者は、自己抗体ＩＣＡ６９を有する(米国公開公報２００４／０１２３３３５)。
これらの抗体は血流に入ることができ、シェーグレン症候群の診断を確認するために行われる血液検査で測定される。付加的なＴ細胞が腺に入り、損傷が永続する。正常な状況下では、「サプレッサー細胞」と称される細胞種類は炎症過程を止める。腺の継続的な破壊は、Ｔヘルパー細胞の過剰機能とＴサプレッサー細胞の欠陥機能の異常なバランスを意味する。これらの細胞の破壊よりむしろ機能低下症は、現在シェーグレン症候群の分泌欠損の主要なメカニズムと考えられる。Venables, Best Practice & Research. Clin. Rheumatol. 18(3): 313-329 (2004)。
【０００９】
シェーグレン症候群の病理発生について今以上の知識とそれに関与するメカニズムの今以上の理解によって、新規な治療的方策が発見できるかもしれない。例えば、ホルモン類の異常なレベルおよび相対比はシェーグレン症候群の病理発生に役割を果たしうる(Taiym 等 Oral Surg, Oral Med, Oral Pathol, Oral Radiol, & Endodontics. 97(5): 579-583 (2004))、またシェーグレン症候群女性はアンドロゲンが不十分である(Sullivan 等 J Rheumatol. 30 (11): 2413-2419 (2003))。また、シェーグレン症候群の局所及び全身管理に新規な考えを与えるために、アポトーシス( Manganelli及びFietta, Seminars in Arthritis & Rheumatism 33(1): 49-65 (2003))、並びにレトロウィルスおよびサイトカインの役割やアクアポリンの発見について、シェーグレン症候群において、調べられている。Steinfeld及びSimonart, Dermatology 207(1): 6-9 (2003)。シェーグレン症候群患者でのみ増加するアクアポリン５(ＡＱＰ５)の量は、涙腺の腺房細胞がリンパ球浸潤によって、損傷を受けるときに、ＡＱＰ５タンパク質が涙液中に漏れることを示唆する。Ohashi 等 Am J Ophthalmol. 136(2): 291-299 (2003)。γインターフェロンにより誘導されるモノカイン、ＨＬＡ-ＤＲ、ケラチン６ｂ、-６ｃ、及び、-１６の上方制御は、シェーグレン症候群において、インターフェロンγは結膜上皮での変更された遺伝子発現に重要な役割を果たしているかもしれないことを示唆する。Kawasaki 等, Exp Eye Res.77(1): 17-26 (2003)。また、唾液から派生した生物学的な媒介物は、炎症の間に観察される上皮細胞増殖活性の増加に関与しうる。Ccedilelenligil-Nazliel 等, J Periodontol. 74(2): 247-254 (2003)。
更なる背景的文献として、例えばAnaya 等, "Sjogren's syndrome in childhood" J Rheumatol. 22(6): 1152-1158 (1995)およびAndonopoulos 等, "Sjogren's syndrome in patients with newly diagnosed untreated non-Hodgkin's lymphoma" Rev Rhum Engl Ed. 64(5): 287-92 (1997)を参照のこと。
【００１０】
潜在的および実際の治療に関しては、例えば、セビメリンはドライアイに有用であり(Ono 等 Am J Ophthalmol. 138(1): 6-17 (2004))、並びにＰ２Ｙ２レセプターのアゴニストとして機能して、涙分泌に含まれるムチン、脂質及び体液の３つすべての作用機能を標的とする天然涙成分の放出を刺激するジヌクレオチドの製剤であるジクアフォゾルテトラナトリウム(diquafosol tetrasodium)(Inspire Pharmaceuticals)、及びＲＥＳＴＡＳＩＳ(登録商標)(シクロスポリン眼用エマルジョン)、及び、ピロカルピンは唾液の促進に有用でありうる(Fox Caries Res. 38(3): 241-246 (2004))。シクロスポリン、副腎皮質ステロイド、メトトレキセート又はαインターフェロンをベースにした様々な免疫変調治療は異なる結果を有して提案された。Rogers 等, Drugs (New Zealand) 64(2): 123-132 (2004)。プレスリリースでは、２００１年１月５日のAmarillo Biosciences, Inc.は、インターフェロンαを用いた第三相シェーグレン症候群臨床試験の完成を発表した。その結果は有望であった。免疫抑制剤は、シェーグレン症候群のいくつかの合併症において、有用でありうる。残念なことに、腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)アンタゴニストであるインフリキシマブ(ＲＥＭＩＣＡＤＥ(登録商標))を用いたオープン試験の有望な結果は、１００人以上の患者による大きなランダム化対照実験により確認されたものではない。Xavier 等 Arthritis & Rheum.50(4): 1270-1276 (2004)。さらに、サリドマイドの顕著な副作用は原発性シェーグレン症候群を治療するための研究でみられた。Pillemer 等, Arthritis & Rheum. 51(3): 505-506 (2004)。加えて、原発性シェーグレン症候群患者の乾燥症状、全身性及び組織学的徴候に対するもう一つのＴＮＦアンタゴニストであるエタネルセプト(ＥＮＢＲＥＬ(登録商標))を用いたＴＮＦα抗炎症治療の効果を評価するパイロット試験では、１２週または延長した治療がシェーグレン症候群の乾燥症状及び徴候を減退させるようではないことが示された。しかしながら、エタネルセプト治療は、重要疲労を有するシェーグレン症候群患者の小さいサブグループに有益でありうる。Zandbelt 等, J. Rheumatol., 96-101 (2004)。シクロスポリンＡは、中程度から重度の乾性眼病を治療するために効果的であることが明らかとなった。Sall 等, Ophthalmology 107(4): 631-639 (2000)、Stevenson 等, Ophthalmology 107(5): 967-974 (2000)。局所シクロスポリンおよび他の免疫調節性薬剤の開発は、シェーグレン症候群の乾性角結膜炎の治療への期待を示す。Kassan及びMoutsopoulos, Archives of Internal Medicine 164(12): 1275-1284 (2004)。シェーグレン症候群のために損傷した唾液腺を修復するために患者の頭頸部癌治療についての臨床的遺伝子導入研究が報告されている。２００３年１０月２１日付のU.S. Newswire。また、シェーグレン症候群を含む様々な自己免疫性疾患の治療のための、自己応答性Ｂ細胞のＩｇレセプターに特異的に認識される脱免疫化された自己応答性抗原ないしはその断片を含む少なくとも２つのドメインを含んでなるポリペプチドの使用に関する、２００３年８月２１日公開の国際公開公報２００３／６８８２２も参照のこと。
【００１１】
ＣＤ２０およびそれを用いた治療
リンパ球は、造血過程の間に骨髄において生産される多種ある白血球のうちの１つである。リンパ球の２つの主な分類は、Ｂリンパ球(Ｂ細胞)とＴリンパ球(Ｔ細胞)である。ここで特に対象とするリンパ球はＢ細胞である。
Ｂ細胞は骨髄内で成熟して、その細胞表面上に抗原結合抗体を発現する骨髄を放出する。天然のＢ細胞がその膜結合性抗体に特異的な抗原と初めて遭遇すると、細胞は速やかに分離し、その子孫はメモリーＢ細胞と「プラズマ細胞(形質細胞、plasma cell)」と呼ばれるエフェクター細胞に分化する。メモリーＢ細胞は長い寿命を持ち、本来の親細胞と同じ特異性を有する膜結合性抗体を発現し続ける。プラズマ細胞は、膜結合性抗体を発現する代わりに、分泌型抗体を産生する。分泌された抗体は、体液性免疫の主要なエフェクター分子である。
【００１２】
ＣＤ２０抗原(ヒトＢリンパ球制限分化抗原、Ｂｐ３５とも呼ばれる)はプレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に位置するおよそ３５ｋＤの分子量の疎水性膜貫通型タンパク質である(Valentineら, J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989)；及びEinfeldら, EMBO J. 7(3):711-717(1988))。該抗原はまたＢ細胞非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)の９０％以上に発現されるが(Anderson等, Blood 63(6):1424-1433 (1984))、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常なプラズマ細胞又は他の正常な組織上には見出されない(Tedder等, J. Immunol. 135(2):973-979 (1985))。ＣＤ２０は分化及び細胞周期の開始の活性化過程における初期段階を調節し(上掲のTedderら)、おそらくはカルシウムイオンチャネルとして機能する(Tedder等, J. Cell. Biochem. 14D:195 (1990))。
【００１３】
Ｂ細胞リンパ腫ではＣＤ２０が発現されるため、この抗原はこのようなリンパ腫の「標的とする(ターゲティング)」ための候補となりうる。基本的に標的とするとは以下のことを言う：Ｂ細胞のＣＤ２０表面上抗原特異的な抗体を患者に投与する。これらの抗ＣＤ２０抗体は、正常及び悪性の何れのＢ細胞(表面上)のＣＤ２０抗原にも特異的に結合する；ＣＤ２０表面上抗原に結合する抗体は、腫瘍性Ｂ細胞を破壊及び減少に至らしめることができる。さらに、腫瘍を破壊する可能性を有する化学薬品または放射性標識は抗ＣＤ２０抗体に結合させて、作用剤が腫瘍性Ｂ細胞特異的に「運ばれる」ようにすることができる。方法にかかわりなく、主たる目的は、腫瘍を破壊することである；特定の方法は、使用する特定の抗ＣＤ２０抗体により測定することができ、ゆえに、ＣＤ２０抗原を標的とする有用な方法はかなり異なる。
【００１４】
リツキシマブ(rituximab)(リツキサン(RITUXAN)(登録商標))抗体は、一般的にＣＤ２０抗原に対する遺伝子的操作を施したキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは１９９８年４月７日に発行の米国特許第５７３６１３７号(Anderson等)において「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれている抗体である。リツキシマブは、再発性または低抵抗性の(refractory low-grade)または濾胞性の(follicular)、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫患者の治療のためのものである。インビトロの作用機序の研究は、リツキサン(登録商標)がヒト補体に結合し補体依存性細胞障害性(ＣＤＣ)を通してリンパＢ細胞系を溶解することを実証している(Reff等, Blood 83(2):435-445 (1994))。加えて、その抗体は抗体依存細胞性細胞障害性(ＡＤＣＣ)のアッセイにおいて有意な活性を有している。更に近年、リツキシマブは、他の抗ＣＤ１９抗体や抗ＣＤ２０抗体にはない、トリチウム化したチミジン取り込みアッセイにおける抗増殖性効果を持つこと及び直接的にアポトーシスを誘導することが示唆されている(Maloney等 Blood 88(10):637a (1996))。また、リツキシマブ及び化学療法及び毒素間の相乗効果は、実験的に観察された。特に、リツキシマブは、ドキソルビシン、CDDP、VP-16、ジフテリア毒素及びリシンの細胞障害性効果に対するヒトＢ細胞リンパ腫細胞系の薬物抵抗性の感度を高める(Demidem等 Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12(3):177-186 (1997))。インビボ前臨床研究では、リツキサン(登録商標)が、おそらく補足及び細胞媒介過程において、カニクイザルの末梢血、リンパ節及び骨髄からのＢ細胞を減少させることを示した (Reff 等 Blood 83(2):435-445 (1994))。
【００１５】
リツキシマブは、４回の用量につき３７５ｍｇ／ｍ２週ごとの用量で、再発したか抵抗性の低グレードないしは濾胞性ＣＤ２０＋Ｂ細胞ＮＨＬである患者の治療のために、１９９７年１１月に米国で承認された。２００１年４月に、食品・医薬品局(ＦＤＡ)は、軽度のＮＨＬの治療のための付加的な権利を承認した：再治療(週４回の用量)および付加的な用量投薬計画(週８回の用量)。単一療法としてないしは免疫抑制剤又は化学療法剤と併用してリツキシマブに曝露される患者は３００，０００人以上いる。また、患者は、維持療法として最高２年間リツキシマブで治療されている(Hainsworth 等 J Clin Oncol 21:1746-51 (2003)；Hainsworth 等 J Clin Oncol 20:4261-7 (2002))。
また、リツキシマブは様々な非悪性腫瘍性自己免疫疾患において研究されており、そこでＢ細胞と自己抗体は疾患病理学上の役割があるようである。Edwards 等, Biochem Soc. Trans. 30:824-828 (2002)。リツキシマブは、例えば、関節リウマチ(RA) (Leandro 等, Ann. Rheum. Dis. 61:883-888 (2002)；Edwards 等, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S46 (2002)；Stahl 等, Ann. Rheum. Dis., 62 (Suppl. 1): OP004 (2003)；Emery 等, Arthritis Rheum. 48(9): S439 (2003))、ループス(Eisenberg, Arthritis. Res. Ther. 5:157-159 (2003)；Leandro 等 Arthritis Rheum. 46: 2673-2677 (2002)；Gorman 等, Lupus, 13: 312-316 (2004))、免疫性血小板減少性紫斑病(D’Arena 等, Leuk. Lymphoma 44:561-562 (2003)；Stasi 等, Blood, 98: 952-957 (2001)；Saleh 等, Semin. Oncol., 27 (Supp 12):99-103 (2000)；Zaia 等, Haematolgica, 87: 189-195 (2002)；Ratanatharathorn 等, Ann. Int. Med., 133: 275-279 (2000))、 赤芽球ろう (Auner 等, Br. J. Haematol., 116: 725-728 (2002))；自己免疫性貧血(Zaja 等, Haematologica 87:189-195 (2002) (Haematologica 87:336 (2002)に誤植あり)、寒冷凝集素症 (Layios 等, Leukemia, 15: 187-8 (2001)；Berentsen 等, Blood, 103: 2925-2928 (2004)；Berentsen 等, Br. J. Haematol., 115: 79-83 (2001)；Bauduer, Br. J. Haematol., 112: 1083-1090 (2001)；Damiani 等, Br. J. Haematol., 114: 229-234 (2001))、重症インスリン耐性のタイプＢ症候群(Coll 等, N. Engl. J. Med., 350: 310-311 (2004)、混合クリオグロブリン血症(DeVita 等, Arthritis Rheum. 46 Suppl. 9:S206/S469 (2002))、重症筋無力症(Zaja 等, Neurology, 55: 1062-63 (2000)；Wylam 等, J. Pediatr., 143: 674-677 (2003))、ウェゲナー肉芽腫症(Specks 等, Arthritis & Rheumatism 44: 2836-2840 (2001))、難治性尋常性天疱瘡(Dupuy 等, Arch Dermatol., 140:91-96 (2004))、皮膚筋炎(Levine, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9):S1299 (2002))、シェーグレン症候群(Somer 等, Arthritis & Rheumatism, 49: 394-398 (2003))、急性タイプＩＩ混合クリオグロブリン血症(Zaja 等, Blood, 101: 3827-3834 (2003))、尋常性天疱瘡(Dupay 等, Arch. Dermatol., 140: 91-95 (2004))、自己免疫性ニューロパチー(Pestronk 等, J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 74:485-489 (2003))、腫瘍随伴性眼球クローヌス-筋クローヌス症候群(Pranzatelli 等 Neurology 60(Suppl. 1) PO5.128:A395 (2003))、及び再発性多発性硬化症(RRMS)の徴候及び症状を潜在的に軽減することが報告されている。Cross 等 (abstract) 「Preliminary Results from a Phase II Trial of Rituximab in MS」 Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis, 20-21 (2003)。
【００１６】
第ＩＩ相研究(ＷＡ１６２９１)を関節リウマチ(ＲＡ)患者で行い、リツキシマブの安全性及び有効性に関する４８週フォローアップデータを得ている。Emery 等 Arthritis Rheum 48(9): S439 (2003)；Szczepanski 等 Arthritis Rheum 48(9): S121 (2003)。合計１６１人の患者は、４つの治療アームについて均等にランダム化した：メトトレキセート、リツキシマブ単独、リツキシマブとメトトレキセート、及びリツキシマブとシクロホスファミド(ＣＴＸ)。リツキシマブの治療投薬計画は、第１日目と第１５日目に１ｇを静脈内に投与された。ほとんどのＲＡ患者はリツキシマブを注入すると、十分な耐性となり、初めの注入の間でさえ少なくとも一の有害症状を経験するものは３６％に上る(これに対してプラシーボ投与患者は３０％)。概して、大多数の有害症状は、重症度が軽度から中程度のものであると考えられ、すべての治療群全体で等しかった。４８週間の４アーム全体の中に合計１９の重度の有害症状があった。それはリツキシマブ／ＣＴＸ群においてわずかに頻度が多かった。感染の発病は、すべての群全体で等しかった。このＲＡ患者集団の深刻な感染の平均率は年間１００患者につき４．６６であった。それは地域に密着した疫学研究で報告されたＲＡ患者の入院を必要とする感染率より低い(年間１００患者につき９．５７)。Doran 等, Arthritis Rheum. 46:2287-2293 (2002)。
少数の自己免疫神経障害(Pestronk等, 上掲)、眼球クローヌス-筋クローヌス症候群(Pranzatelli 等, 上掲)及びＲＲＭＳ (Cross 等, 上掲))を含む神経病患者におけるリツキシマブの報告された安全特性は、腫瘍学又はＲＡにおいて報告されたものと同じであった。ＲＲＭＳ患者においてインターフェロンβ(ＩＦＮ-β)又は酢酸グラチラマー(glatiramer acetate)と組み合わせたリツキシマブの現行の研究者主導試験(investigator-sponsored trial, IST)(Cross 等, 上掲)では、１０人の治療された患者のうちの１人はリツキシマブの第一注入の後に中程度の熱と悪寒を経験し、一晩観察のために病院に入院したが、その他の９人の患者は有害症状を報告することなく４の注入投薬計画を終えた。
【００１７】
ＣＤ２０抗体及びＣＤ２０結合分子に関する特許及び特許文献には、米国特許第 5,776,456号、同第5,736,137号、同第5,843,439号、同第6,399,061号及び同第6,682,734号、並びに米国公開特許2002/0197255、米国公開特許2003/0021781、米国公開特許2003/0082172、米国公開特許2003/0095963、米国公開特許2003/0147885 (Anderson 等)；米国特許第 6,455,043号及び国際公報2000/09160 (Grillo-Lopez, A.)；国際公報2000/27428 (Grillo-Lopez及びWhite)；国際公報2000/27433 (Grillo-Lopez及びLeonard)；国際公報2000/44788 (Braslawsky 等)；国際公報2001/10462 (Rastetter, W.)；国際公報01/10461 (Rastetter及びWhite)；国際公報2001/10460 (White及びGrillo-Lopez)；米国公開特許2001/0018041、米国公開特許2003/0180292、国際公報2001/34194 (Hanna及びHariharan)；米国公開特許2002/0006404及び国際公報2002/04021 (Hanna及びHariharan)；米国公開特許2002/0012665及び国際公報2001/74388 及び第6,896,885号B5 (Hanna, N.)；米国公開特許2002/0058029 (Hanna, N.)；米国公開特許2003/0103971 (Hariharan及びHanna)；米国公開特許2005/0123540 (Hanna 等)；米国公開特許2002/0009444及び国際公報2001/80884 (Grillo-Lopez, A.)；国際公報2001/97858；米国公開特許2005/0112060、及び米国特許第6,846,476号 (White, C.)；米国公開特許2002/0128488及び国際公報2002/34790 (Reff, M.)；国際公報2002/060955 (Braslawsky 等)；国際公報2002/096948 (Braslawsky 等)；国際公報2002/079255 (Reff及びDavies)；米国特許第 6,171,586号及び国際公報1998/56418 (Lam 等)；国際公報1998/58964 (Raju, S.)；国際公報1999/22764 (Raju, S.)；国際公報1999/51642、米国特許第 6,194,551号、米国特許第 6,242,195号、米国特許第 6,528,624号及び米国特許第 6,538,124 号(Idusogie 等)；国際公報2000/42072 (Presta, L.)；国際公報2000/67796 (Curd 等)；国際公報2001/03734 (Grillo-Lopez 等)；米国公開特許2002/0004587及び国際公報2001/77342 (Miller及びPresta)；米国公開特許2002/0197256 (Grewal, I.)；米国公開特許2003/0157108 (Presta, L.)；米国特許第 6,565,827号、同第6,090,365号、同第6,287,537号、同第6,015,542号、同第5,843,398号、及び同第5,595,721号、(Kaminski 等)；米国特許第 5,500,362号、同第5,677,180号、同第5,721,108号、同第6,120,767号、同第6,652,852号、同第6,893,625号 (Robinson 等)；米国特許第6,410,391号 (Raubitschek 等)；米国特許第 6,224,866号及び国際公報00/20864 (Barbera-Guillem, E.)；国際公報2001/13945 (Barbera-Guillem, E.)；国際公報2000/67795 (Goldenberg)；米国公開特許2003/0133930及び国際公報2000/74718 (Goldenberg及びHansen)；米国公開特許2003/0219433及び国際公報2003/68821 (Hansen 等)；国際公報2004/058298 (Goldenberg及びHansen)；国際公報2000/76542 (Golay 等)；国際公報2001/72333 (Wolin及びRosenblatt)；米国特許第 6,368,596 号(Ghetie 等)；米国特許第 6,306,393号及び米国公開特許2002/0041847 (Goldenberg, D.)；米国公開特許2003/0026801 (Weiner及びHartmann)；国際公報2002/102312 (Engleman, E.)；米国公開特許2003/0068664 (Albitar 等)；国際公報2003/002607 (Leung, S.)；国際公報2003/049694、米国公開特許2002/0009427、及び米国公開特許2003/0185796 (Wolin 等)；国際公報2003/061694 (Sing及びSiegall)；米国公開特許2003/0219818 (Bohen 等)；米国公開特許2003/0219433及び国際公報2003/068821 (Hansen 等)；米国公開特許2003/0219818 (Bohen 等)；米国公開特許2002/0136719 (Shenoy 等)；国際公報2004/032828 (Wahl 等)；及び国際公報2002/56910 (Hayden-Ledbetter)が含まれる。また、米国特許第 5,849,898号及び欧州特許第330,191号 (Seed 等)；欧州特許第332,865号A2 (Meyer及びWeiss)；米国特許第 4,861,579号 (Meyer 等)； 米国公開特許2001/0056066 (Bugelski 等)；国際公報1995/03770 (Bhat 等)；米国公開特許2003/0219433 A1 (Hansen 等)；国際公報2004/035607 (Teeling 等)；国際公開公報2004/056312 (Lowman 等)；米国公開特許2004/0093621 (Shitara 等)；国際公報2004/103404 (Watkins 等)；国際公報2005/000901(Tedder 等)；米国公開特許2005/0025764 (Watkins 等)；国際公報2005/016969 および2005/0069545 A1 (Carr 等)；国際公報2005/014618 (Chang 等)；米国公開特許2005/0079174 (Barbera-GuillemおよびNelson)；および米国公開特許2005/0106108 (LeungおよびHansen)；国際公開公報2005/044859および米国公開特許2005/0123546 (Umana 等)；および米国特許第6,897,044号(Braslawski 等)が含まれる。
【００１８】
リツキシマブを用いた治療に関する文献には、Perotta及びAbuel, 「Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to rituximab」 Abstract # 3360 Blood 10(1)(part 1-2): p. 88B (1998)；Perotta 等, 「Rituxan in the treatment of chronic idiopathic thrombocytopaenic purpura (ITP)」, Blood, 94: 49 (abstract) (1999)；Matthews, R., 「Medical Heretics」 New Scientist (7 April, 2001)；Leandro 等, 「Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion」 Ann Rheum Dis, 上掲；Leandro 等, 「Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response」  Arthritis and Rheumatism 44(9): S370 (2001)；Leandro 等, 「An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus」, Arthritis and Rheumatism, 46:2673-2677 (2002)、この中では2週間の期間に各患者はリツキシマブ500mgの2回投与、シクロフォスファミド750mgの2回投与、及び高用量経口副腎皮質ステロイドを受け、この治療患者のうち2人はそれぞれ7か月目と8か月目に再発し、異なるプロトコールで再治療されている；「Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy」 Weide 等, Lupus, 12: 779-782 (2003)、この中ではある患者はリツキシマブ(375mg/m2×4回、1週間間隔で繰り返す)で治療を受け、更に5〜6か月ごとにリツキシマブを適用し、次いで維持療法として3か月ごとに375mg/m2のリツキシマブ投与をした、他方、難治性ＳＬＥ患者はリツキシマブで成功裏に治療され、維持療法を3か月ごとに受けている、両患者はリツキシマブ療法によく応答している；Edwards及びCambridge, 「Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes」 Rheumatology 40:205-211 (2001)；Cambridge 等, 「B lymphocyte depletion in patients with rheumatoid arthritis: serial studies of immunological parameters」 Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S1350 (2002)；Edwards 等, 「B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders」 Biochem Soc. Trans., 上掲；Edwards 等, 「Efficacy and safety of rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis and Rheumatism 46(9): S197 (2002)；Edwards 等, 「Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patients with rheumatoid arthritis」 N Engl. J. Med. 350:2572-82 (2004)；Pavelka 等, Ann. Rheum. Dis. 63: (S1):289-90 (2004)；Emery 等, Arthritis Rheum. 50 (S9):S659 (2004)；Levine及びPestronk, 「IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using rituximab」 Neurology 52: 1701-1704 (1999)；DeVita 等, 「Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis」 Arthritis & Rheum 46:2029-2033 (2002)；Hidashida 等 「Treatment of DMARD-refractory rheumatoid arthritis with rituximab.」  the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002に公開；Tuscano, J. 「Successful treatment of infliximab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab」 the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002に公開；「Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity; insights from the clinic」 Martin and Chan, Immunity 20:517-527 (2004)；Silverman及びWeisman, 「Rituximab Therapy and Autoimmune Disorders, Prospects for Anti-B Cell Therapy」, Arthritis and Rheumatism, 48: 1484-1492 (2003)；Kazkaz及びIsenberg, 「Anti B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases」, Current opinion in pharmacology, 4: 398-402 (2004)；Virgolini and Vanda, 「Rituximab in autoimmune diseases」, Biomedicine & pharmacotherapy, 58: 299-309(2004)； Klemmer 等, 「Treatment of antibody mediated autoimmune disorders with a AntiCD20 monoclonal antibody Rituximab」, Arthritis And Rheumatism , 48: (9) 9,S (SEP), page: S624-S624 (2003)；Kneitz 等, 「Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases」, Immunobiology, 206: 519-527 (2002)；Arzoo 等, 「Treatment of refractory antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab)」Annals of the Rheumatic Diseases,  61 (10), p922-4 (2002) Comment in Ann Rheum Dis. 61: 863-866 (2002)；「Future Strategies in Immunotherapy」 Lake及びDionne, Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (2003 by John Wiley & Sons, Inc.)Article Online Posting Date: January 15, 2003 (Chapter 2 「 Antibody-Directed Immunotherapy」)；Liang and Tedder, Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine, Section: CD20 as an Immunotherapy Target, 文献オンライン登記日: 2002年1月15日 表題「CD20」；「Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens」と題するAppendix 4A  Stockinger 等, 編集: Coligan 等, in Current Protocols in Immunology (2003 John Wiley & Sons, Inc) オンライン登記日: 2003年3月；印刷物出版日: 2003年2月；Penichet及びMorrison, 「CD Antibodies/molecules: Definition; Antibody Engineering」 Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine Section: Chimeric, Humanized and Human Antibodies; オンライン登記 2002年1月15日；Specks 等 「Response of Wegener’s granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy」 Arthritis & Rheumatism 44:2836-2840 (2001)；online abstract submission and invitation Koegh 等, 「Rituximab for Remission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis: Report of a Prospective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients」, American College of Rheumatology, Session Number: 28-100, Session Title: Vasculitis, Session Type: ACR Concurrent Session, Primary Category: 28 Vasculitis, Session 10/18/2004 (<www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp>)；Eriksson, 「Short-term outcome and safety in 5 patients with ANCA-positive vasculitis treated with rituximab」, Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003)；Jayne 等, 「B-cell depletion with rituximab for refractory vasculitis」 Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003)；Jayne, poster 88 (11th International Vasculitis and ANCA workshop), 2003 American Society of Nephrology；Stone及びSpecks, 「Rituximab Therapy for the Induction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vasculitis」, the 2002-2003 Immune Tolerance Networkのthe Clinical Trial Research Summary, <www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html>が含まれる。また、Leandro 等, 「B cell repopulation occurs mainly from naive B cells in patient with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus」 Arthritis Rheum., 48 (Suppl  9): S1160 (2003)も参照。
【００１９】
さらに、Looney 「B cells as a therapeutic target in autoimmune diseases other than rheumatoid arthritis」 Rheumatology, 44 Suppl 2: ii13-ii17 (2005)；ChambersおよびIsenberg, 「Anti-B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases」 Lupus 14(3): 210-214 (2005)；Edelbauer 等, 「Rituximab in childhood systemic lupus erythematosus refractory to conventional immunosuppression Case report」 Pediatr. Nephrol. 20(6): 811-813 (2005)；D'Cruz and Hughes, 「The treatment of lupus nephritis」 BMJ 330(7488): 377-378 (2005)；Looney, 「B cell-targeted therapy in diseases other than rheumatoid arthritis」 J. Rheumatol. Suppl. 73: 25-28; discussion 29-30 (2005)；Sfikakis 等, 「Remission of proliferative lupus nephritis following B cell depletion therapy is preceded by down-regulation of the T cell costimulatory molecule CD40 ligand: an open-label trial」 Arthritis Rheum. 52(2): 501-513 (2005)；Silverman, 「Anti-CD20 therapy in systemic lupus erythematosus: a step closer to the clinic」  Arthritis Rheum. 52(2): 371-7 (2005), Erratum in: Arthritis Rheum. 52(4): 1342 (2005)；Ahn 等, 「Long-term remission  from life-threatening hypercoagulable state associated with lupus anticoagulant (LA) following rituximab therapy」Am. J. Hematol. 78(2): 127-129 (2005)；Tahir 等, 「Humanized anti-CD20 monoclonal antibody in the treatment of severe resistant systemic lupus erythematosus in a patient with antibodies against rituximab」 Rheumatology, 44(4): 561-562 (2005), Epub 2005 Jan 11；Looney 等, 「Treatment of SLE with anti-CD20 monoclonal antibody」 Curr. Dir. Autoimmun. 8: 193-205 (2005)；Cragg 等, 「The biology of CD20 and its potential as a target for mAb therapy」 Curr. Dir. Autoimmun. 8: 140-174 (2005)；Gottenberg 等, 「Tolerance and short term efficacy of rituximab in 43 patients with systemic autoimmune diseases」 Ann. Rheum. Dis. 64(6): 913-920 (2005) Epub 2004 Nov 18；Tokunaga 等, 「Down-regulation of CD40 and CD80 on B cells in patients with life-threatening systemic lupus erythematosus after successful treatment with rituximab」 Rheumatology 44(2): 176-182 (2005), Epub 2004 Oct 19を参照のこと。血清病様症候群のいくつかの症例は、ある理論に限定するものではないが、サイトカイン放出を引き起こすＢ細胞のアポトーシスおよび／または抗体のキメラ性質に関連しうるシェーグレン症候群のリツキシマブ寄託調査治験において観察されている。さらに、ＢＡＦＦのレベルが高いシェーグレンの患者は抗アポトーシスの傾向となり、ＢＡＦＦレベルの増加は高γグロブリン血症に相関し、Ｂ細胞サイトカインレベルが増加する。また、ＣＤ２０アンタゴニストを用いたシェーグレンの眼合併症などの眼性疾患の治療に関する、2005年3月10日公開の米国公開特許2005/0053602、並びに国際公開公報2003/014294；2005年3月31日公開の米国公開特許2005/0070689；2003年5月22日公開の米国公開特許2003/0095967；2005年5月5日公開の米国公開特許2005/0095243；および2005年1月20日公開の国際公開公報2005/005462も参照のこと。
【００２０】
現在、シェーグレン症候群の根本的な原因を治療するために有用な治療法はなく、はシェーグレン症候群を治療するために承認されてる疾患変更性抗リウマチ剤(ＤＭＡＲＤ)はない。したがって、治療は、症状を改善する、合併症(例えば虫歯、経口カンジダ菌又は角膜損傷)を予防する、および疾患進行を予防するためのものである。リンパ腫(リンパ節の腫瘍)を発症するリスクがわずかにあるので、これらの組織の持続的な腫脹には十分注意すべきである。シェーグレン症候群で苦しむ人々は、彼らの症状を寛解するのを助ける、経済的で安全な治療を必要とする。
【００２１】
(発明の概要)
本発明は、効果的な用量投薬計画の選択を含む、シェーグレン症候群患者へ安全で効果的な治療投薬計画を提供するＣＤ２０抗体の投与を伴う。
したがって、本発明は特許請求の通りである。第一の態様では、本発明は、患者のシェーグレン症候群の治療方法であって、有効量のＣＤ２０抗体と抗マラリア剤とを患者に投与して、視覚的類似尺度(ＶＡＳ)において乾燥、疲労および関節痛のうちの２つ以上の基準に対して少なくともおよそ３０％の改善を示す方法に関する。
更なる態様では、本発明は：
ＣＤ２０抗体を具備する容器；抗マラリア剤を具備する容器；及び、視覚的類似尺度において乾燥、疲労および関節痛のうちの２つ以上の基準に対して少なくともおよそ３０％の改善が得られるために有効なＣＤ２０抗体と抗マラリア剤の患者への投与量を示す、患者のシェーグレン症候群を治療するための指示書を有するパッケージ挿入物
を含んでなる製造品を提供する。
【００２２】
上記の発明の態様の好適な実施態様では、前記ＣＤ２０抗体が第一医薬であり、前記抗マラリア剤が第二医薬である場合に、第三の医薬が有効量で投与される。より好適には、前記第三の医薬が、化学療法剤、免疫抑制剤、疾患変更性抗リウマチ剤(ＤＭＡＲＤ)、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)、サイトカインアンタゴニスト、乾性口腔又は乾性眼のための分泌アゴニスト又はホルモンである。他の態様では、前記患者はＣＤ２０抗体を投与される前に再発している。更なる態様では、前記患者はＣＤ２０抗体を投与される前に再発していない。更なる好適な態様では、症候群は二次的シェーグレン症候群である。
更なる態様では、本発明は、被検体のシェーグレン症候群の治療方法であって、有効量のＣＤ２０抗体が被検体に投与され、初回抗体曝露の後に第二抗体曝露が供給されることを含み、該第二の曝露が初回曝露からおよそ１６から５４週までに供給されない治療方法に関する。
【００２３】
この一番最後の態様の好適な一実施態様では、本発明は、被検体のシェーグレン症候群の治療方法であって、有効量のＣＤ２０抗体が被検体に投与され、およそ０．５から４グラムの初回抗体曝露の後におよそ０．５から４グラムの第二抗体曝露が供給されることを含み、該第二の曝露が初回曝露からおよそ１６から５４週までに供給されず、各々の抗体曝露がおよそ１から４回の抗体用量として、より好ましくは単回抗体用量として又は２ないしは３回の複数回抗体用量として被検体に供給される治療方法に関する。
この一番最後の態様の好適な一実施態様では、前記ＣＤ２０抗体が第一の医薬である場合に、第二の医薬が初回曝露及び／又は後に続く曝露とともに投与される。好適な実施態様では、第二の医薬は、化学療法剤、免疫抑制剤、疾患変更性抗リウマチ剤(ＤＭＡＲＤ)、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)、サイトカインアンタゴニスト、乾性口腔又は乾性眼のための分泌アゴニスト又はホルモンである。より好適な実施態様では、第二の医薬抗マラリア剤単独であるか、抗マラリア剤とステロイドとであるか、ステロイドである。更なる好適な実施態様では、ステロイドは第二の曝露でなく第一の曝露とともに投与されるか、初回曝露で用いたよりも少ない量で投与される。
【００２４】
この一番最後の態様のさらに好適な他の実施態様では、前記被検体は、以前にＣＤ２０抗体で治療されたことがなく、及び／又はＣＤ２０抗体以外の他の医薬はシェーグレン症候群を治療するために被検体に投与されていない。
この一番最後の態様の更なる他の好適な実施態様では、前記被検体は、抗核抗体(ＡＮＡ)、抗リウマチ因子(ＲＦ)抗体、シェーグレン関連抗原Ａ又はＢ(ＳＳ-Ａ又はＳＳ-Ｂ)に対する抗体、セントロメアプロテインＢ(ＣＥＮＰＢ)又はセントロメアプロテインＣ(ＣＥＮＰＣ)に対する抗体、ＩＣＡ６９に対する自己抗体、又はこのような抗体のうちの２以上の組合せのレベルが亢進している。より好適には、ＳＳ-Ａ及びＳＳ-Ｂに対する抗体が、抗Ｒｏ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ｂ抗体、又は抗Ｒｏ／ＳＳ-Ｂ抗体である。
【００２５】
さらに、更なる態様では、本発明は：
(ａ)ＣＤ２０抗体を具備する容器；および
(ｂ)被検体のシェーグレン症候群を治療するための指示書を有するパッケージ挿入物を含んでなる製造品であって、該指示書が、初回抗体曝露の後に第二抗体曝露を供給するために有効な抗体の被検体への投与量を示すものであり、該第二曝露は初回曝露からおよそ１６から５４週までに供給されないものである、製造品を提供する。
好適には、そのようなパッケージ挿入物は、被検体のシェーグレン症候群を治療するための指示書を提供するものであり、該指示書が、およそ０．５から４グラムの初回抗体曝露の後におよそ０．５から４グラムの第二抗体曝露を供給するために有効な抗体の被検体への投与量を示すものであり、該第二曝露は初回曝露からおよそ１６から５４週までに供給されず、各々の抗体曝露がおよそ１から４回の抗体用量として、より好ましくは単回抗体用量として又は２ないしは３回の複数回抗体用量として被検体に供給されるものである。
本明細書中の治療は、標準的な治療の副作用をできるだけ避けるために、被検体に対して通常は標準的治療である免疫抑制剤や化学療法剤などの過剰量の第二又は第三の医薬の同時投与、事前投与又は事後投与の必要性を減少する、最小限化する又は不要にすること、並びに費用を抑え、時間利便性など被検体にとっての利便性を増すが好ましい。
【００２６】
(好ましい実施態様の詳細な説明)
Ｉ．定義
本明細書中の「シェーグレン症候群」とは、免疫細胞が涙や唾液を産生する腺を攻撃する自己免疫性疾患又は疾病である。この疾患の特徴的症状は乾性口腔及び乾性眼である。加えて、シェーグレン症候群は、皮膚、鼻および膣の乾燥を引き起こし、腎臓、血管、肺、肝臓、膵臓および脳を含む身体の他の器官に作用しうる。シェーグレン症候群は原発性疾患(「原発性シェーグレン症候群」)として又は、関節リウマチなどのリウマチ性疾患、全身性狼瘡、多発性筋炎、強皮症および自己免疫性肝炎、非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫、及び甲状腺炎などの内分泌性疾患を含む他の自己免疫性疾患と関連する、及び／又はそれらの自己免疫性疾患の二次的なものである二次疾患(「二次シェーグレン症候群」)として存在しうる。本明細書中の「シェーグレン症候群」なる用語は、原発性及び二次性のシェーグレン症候群を含む、いかなる段階のシェーグレン症候群、及び診断されて明らかとなるいかなる症状のシェーグレン症候群にも用いる。症候群の診断は後述のものを含む。また、全身性症状を伴わない中程度から重度の乾性症状の患者、並びに全身性症状を伴う被検体が含まれる。
【００２７】
「Ｂ細胞」は骨髄内で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞、又はエフェクターＢ細胞(プラズマ細胞)などがある。本明細書中のＢ細胞は正常又は非悪性のＢ細胞でもよい。
ここで「Ｂ細胞表面上マーカー」又は「Ｂ細胞表面上抗原」とは、Ｂ細胞の表面上に発現する抗原であり、それに結合するアンタゴニストの標的となることができる。例示的Ｂ細胞表面上マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５及びＣＤ８６白血球表面上マーカーが含まれる。(詳しくは、The Leukocyte Antigen Facts Book, 2nd Edition. 1997, 編集. Barclay 等 Academic Press, Harcourt Brace & Co., New Yorkを参照)。他のＢ細胞表面上マーカーには、RP105、FcRH2、B細胞CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRH1、IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA、及び239287などがある。特に対象とするＢ細胞表面上マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上に優先的に発現しており、Ｂ細胞前駆細胞及び成熟Ｂ細胞の両方の細胞上に発現していてもよい。本明細書中で好適なＢ細胞表面上マーカーはＣＤ２０およびＣＤ２２である。
【００２８】
「ＣＤ２０」抗原又は「ＣＤ２０」は、末梢血又はリンパ系器官に由来するＢ細胞の９０％以上の表面にみられるおよそ３５ｋＤａの非グルコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は正常Ｂ細胞だけでなく悪性のＢ細胞上にも存在し、幹細胞には発現しない。ＣＤ２０を意味する文献中での他の名称には、「Ｂリンパ球限定抗原(B-lymphocyte-restricted antigen)」及び「Ｂｐ３５」などがある。ＣＤ２０抗原は、例としてClark等 PNAS (USA) 82:1766 (1985)に記載されている。
ＢＬ-ＣＡＭ又はＬｙｂ８としても知られる「ＣＤ２２」抗原又は「ＣＤ２２」は、およそ１３０ｋＤ(還元型)から１４０ｋＤ(非還元型)の分子量を有するタイプ１完全膜糖タンパク質である。それはＢリンパ球の細胞質及び細胞膜に発現される。ＣＤ２２抗原は、Ｂ細胞リンパ球分化の初めにＣＤ１９抗原とおよそ同じ段階で現れる。他のＢ細胞マーカーと異なり、ＣＤ２２膜発現は成熟Ｂ細胞(ＣＤ２２＋)とプラズマ細胞(ＣＤ２２−)の間の後期分化段階に限定される。ＣＤ２２抗原は、例えば、Wilson 等 J. Exp. Med. 173: 137 (1991)及びWilson 等 J. Immunol. 150:5013 (1993)において記述されている。
【００２９】
「アンタゴニスト」とは、Ｂ細胞上のＣＤ２０に結合することによって哺乳動物のＢ細胞を破壊又は枯渇させる、及び／又は一以上のＢ細胞機能を妨げる、例えば、Ｂ細胞に誘導される体液性反応を低減又は阻害する分子である。好ましくは、アンタゴニストは、それによって治療される哺乳動物のＢ細胞を枯渇する（すなわち、循環中のＢ細胞レベルを下げる）ことができる。そのような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害及び／又はＢ細胞死の誘導（例えば、アポトーシスを介する）等の多様なメカニズムを介して達成されるであろう。本発明の範囲に包含されるアンタゴニストには、場合によって細胞障害性剤を抱合する又は細胞障害性剤と融合している、ＣＤ２０に結合する抗体、合成又は天然配列のペプチド、イムノアドヘシン、及び小分子アンタゴニストが含まれる。好適なアンタゴニストは抗体を含む。
【００３０】
本明細書中の「抗体アンタゴニスト」とは、Ｂ細胞上のＢ細胞表面マーカーに結合することによって哺乳動物のＢ細胞を破壊又は枯渇させる、及び／又は一以上のＢ細胞機能を妨げる、例えば、Ｂ細胞に誘導される体液性反応を低減又は阻害する抗体である。好ましくは、抗体アンタゴニストは、それによって治療する哺乳動物のＢ細胞を枯渇する(すなわち、循環中のＢ細胞レベルを下げる)ことができる。そのような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)及び／又は補体依存性細胞障害(ＣＤＣ)、Ｂ細胞増殖の阻害及び／又はＢ細胞死の誘導(例えば、アポトーシスを介する)等の多様な機能を介して達成されるであろう。
ここで「抗体」なる用語は、広い意味で用いられ、特にモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全な抗体から形成した多特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、及び所望の生物学的活性を有する限りにおける抗体断片の範囲にわたる。
【００３１】
「抗体断片」は、完全な抗体の一部、好ましくはその抗原結合領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体；一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多特異性抗体が含まれる。
本明細書中の目的では、「完全な抗体」とは重鎖と軽鎖の可変ドメイン並びにＦｃ領域を含有してなるものである。
「Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体」とは、Ｂ細胞表面マーカーに結合することによって哺乳動物のＢ細胞を破壊又は枯渇させる、及び／又は一以上のＢ細胞機能を妨げる、例えば、Ｂ細胞に誘導される体液性反応を低減又は阻害する分子である。好ましくは、抗体は、それによって治療する哺乳動物のＢ細胞を枯渇する(すなわち、循環中のＢ細胞レベルを下げる)ことができる。そのような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)及び／又は補体依存性細胞障害(ＣＤＣ)、Ｂ細胞増殖の阻害及び／又はＢ細胞死の誘導(例えば、アポトーシスを介する)等の多様な機能を介して達成されるであろう。好ましくは、Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２０であり、Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体はＣＤ２０に結合する抗体、または「ＣＤ２０抗体」である。
【００３２】
ＣＤ２０抗体の例には以下のものが含まれる：現在では「リツキシマブ」(「リツキサン(登録商標)」)と呼称される「Ｃ２Ｂ８」(米国特許第５，７３６，１３７号)；「Ｙ２Ｂ８」又は「Ibritumomab Tiuxetan」ゼバリン(登録商標)と命名されるイットリウム-[90]-標識２Ｂ８マウス抗体、IDEC Pharmaceuticals, Inc.から市販(米国特許第５，７３６，１３７号；１９９３年６月２２日に受託番号ＨＢ１１３８８としてＡＴＣＣに寄託された２Ｂ８)；場合によっては「１３１Ｉ-Ｂ１」またはCorixaから市販の「ヨードＩ131 Tositumomab」抗体(BEXXARＴＭ)を生成するために１３１Ｉで標識した「Tositumomab」とも呼称されるマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」(米国特許第５，５９５，７２１号も参照のこと)；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」(Press等 Blood 69(2):584-591 (1987)及びそれらの変異体、例として「フレームワークパッチ」又はヒト化１Ｆ５(国際公報０３／００２６０７, Leung, S；ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ-９６４５０)；マウス２Ｈ７及びキメラ２Ｈ７抗体(米国特許第５，６７７，１８０号)；ヒト化２Ｈ７；Ｂ細胞の細胞膜のＣＤ２０分子を標的としたｈｕＭａｘ-ＣＤ２０ＴＭ完全ヒト、高親和性抗体(Genmab, Denmark；例としてGlennie及びvan de Winkel, Drug Discovery Today 8: 503-510 (2003)とCragg 等, Blood 101: 1045-1052 (2003)を参照)；国際公報２００４／０３５６０７(Teeling 等)に記載のヒトモノクローナル抗体；ＡＭＥ-１３３ＴＭ抗体(Applied Molecular Evolution)；キメラ又はヒト化Ａ２０抗体(それぞれｃＡ２０、ｈＡ２０)などのＡ２０抗体又はその変異形(米国公開番号２００３／０２１９４３３、免疫医学)；及びInternational Leukocyte Typing Workshopより入手のモノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８-２、９３-１Ｂ３、Ｂ-Ｃ１又はＮＵ-Ｂ２(Valentine等, Leukocyte Typing III (McMichael, 編集, 440頁, Oxford University Press (1987))。本明細書中の好適なＣＤ２０抗体は、キメラＣＤ２０抗体、ヒト化ＣＤ２０抗体またはヒトＣＤ２０抗体、より好ましくはリツキシマブ、ヒト化２Ｈ７、キメラないしはヒト化Ａ２０抗体(Immunomedics)、及びHUMAX-CD20TM  ヒトCD20抗体(Genmab)である。
【００３３】
ここで言う「リツキシマブ」又は「リツキサン(登録商標)」なる用語は、ＣＤ２０抗原に対する一般的に遺伝学的に操作したキメラのマウス／ヒトモノクローナル抗体を指し、米国特許第５，７３６，１３７号では「Ｃ２Ｂ８」と命名されるものであり、ＣＤ２０を結合する能力を保持する該抗体の断片を含みうる。
単に本願明細書中の目的のために、特別に明記しなければ、「ヒト化２Ｈ７」は、ヒト化ＣＤ２０抗体又はその抗原結合断片を意味し、該抗体がインビボで霊長類のＢ細胞を枯渇させる効果を有し、該抗体はそのＨ鎖可変領域(ＶＨ)に抗ヒトＣＤ２０抗体由来の配列番号：１２(図１Ｂ)に記載の少なくとも１のＣＤＲＨ３配列と実質的なヒト重鎖サブグループIII(ＶＨIII)のヒトコンセンサスフレームワーク(ＦＲ)残基を有するものである。好ましい実施態様では、更に、この抗体は配列番号：１０のＨ鎖ＣＤＲＨ１配列及び配列番号：１１のＣＤＲＨ２配列を含んでなるもの、より好ましくは更に、配列番号：４のＬ鎖ＣＤＲＬ１配列、配列番号：５のＬ鎖ＣＤＲＬ２配列、配列番号：６のＬ鎖ＣＤＲＬ３配列及び実質的にヒト軽鎖κサブグループI(ＶκI)のヒトコンセンサスフレームワーク(ＦＲ)残基を含有してなるものであり、この抗体のＶＨ領域はヒトＩｇＧ鎖定常領域に結合されていてもよく、該領域は、例えばＩｇＧ１又はＩｇＧ３であってもよい。好ましい実施態様では、このような抗体は配列番号：８のＶＨ配列(図１Ｂのｖ１６)を含有するもの、場合によってはまた、配列番号：２のＶＬ配列(図１Ａのｖ１６)を含有するものであり、それはＨ鎖内にＤ５６Ａ及びＮ１００Ａのアミノ酸置換とＬ鎖内にＳ９２Ａのアミノ酸置換を含有してもよい(ｖ.９６)。好ましくは、抗体は、図２及び図３のそれぞれに示す配列番号：１３及び配列番号：１４の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を有する完全な抗体である。他の好ましい実施態様は、抗体が、図２及び図４のそれぞれに示す配列番号：１３及び配列番号：１５の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列を有する２Ｈ７.ｖ３１である。本願明細書中の抗体は、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ活性が改良される、少なくとも１のアミノ酸置換をＦｃ領域内に含有するものであり、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａのアミノ酸置換を有するものであり、より好ましくは、配列番号：１５(図４に示す)の重鎖アミノ酸配列を有する２Ｈ７.ｖ３１でもよい。これらの抗体の何れかは更に、ＣＤＣ活性を低減するようにＦｃ領域内に少なくとも１のアミノ酸置換を含有し、例えば少なくとも置換Ｋ３２２Ａを少なくとも含む。米国特許第６，５２８，６２４号Ｂ１(Idusogie 等)を参照のこと。
【００３４】
好適なヒト化２Ｈ７は可変軽鎖配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR (配列番号:2)；
と、可変重鎖配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS (配列番号:8)
を含有する完全な抗体ないしは抗体断片である。
【００３５】
ヒト化２Ｈ７抗体が完全な抗体である場合、軽鎖アミノ酸配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (配列番号:13)；
と、重鎖アミノ酸配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号:14) 
又は、重鎖アミノ酸配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (配列番号:15)
を含有するのが好ましい。
【００３６】
本発明の好適な実施態様では、２Ｈ７バージョン１６に基づく変異形のＶ領域は、以下の表に示すアミノ酸置換の位置以外はｖ１６のアミノ酸配列であるだろう。特に明記しない限りは、２Ｈ７変異形はｖ１６のＬ鎖と同じである。
2008507555.tif 000003
【００３７】
「抗体依存性細胞媒介性細胞障害」または「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃレセプター(ＦｃＲ)を発現する非特異的細胞障害性細胞(例えば、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、好中球、及びマクロファージ)が標的細胞上の結合した抗体を認識し、続いて標的細胞を溶解する細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲIIIのみを発現する一方、単球はＦｃγＲI、ＦｃγＲII及びＦｃγＲIIIを発現する。造血性細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch及びKinet, Annu.Rev.Immunol., 9:457-92(1991)の４６４頁の表３に要約されている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するためには、米国特許第５５００３６２号又は第５８２１３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施されうる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)及びナチュラルキラー(ＮＫ)細胞を含む。あるいは、又は付加的に、対象分子のＡＤＣＣ活性は、例えばClynes等 .PNAS(USA), 95:652-656(1998)に開示されたような動物モデルにおいて、インビボで評価されてもよい。
【００３８】
「ヒトエフェクター細胞」とは、１つ又は複数のＦｃＲｓを発現し、エフェクター機能を実行する白血球のことである。好ましくは、その細胞が少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例として、末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、単球、細胞障害性Ｔ細胞及び好中球が含まれるが、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好適である。
「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを表す。好適なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体(γレセプター)に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲII及びＦｃγＲIIIサブクラスのレセプターを含むものであり、これらのレセプターの対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング型を含む。ＦｃγＲIIレセプターは、ＦｃγＲIIＡ(「活性化レセプター」)及びＦｃγＲIIＢ(「阻害レセプター」)を含み、それらは、主としてその細胞質ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化レセプターＦｃγＲIIＡは、その細胞質ドメインに、免疫レセプターチロシン−ベース活性化モチーフ(ＩＴＡＭ)を有する。阻害レセプターＦｃγＲIIＢは、その細胞質ドメインに、免疫レセプターチロシン−ベース阻害モチーフ(ＩＴＩＭ)を有する(Daeron, Annu. Rev. Immunol., 15:203-234(1997)参照)。ＦｃＲはRavetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；Capelら, Immunomethods 4:25-34 (1994)；及びde Haasら, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)において概説されている。将来同定されるものも含め、他のＦｃＲもここにおける「ＦｃＲ」なる用語によって包含される。この用語は胎児への母性ＩｇＧの移動の原因である新生児レセプター、ＦｃＲｎもまた含む(Guyerら, J. Immumol. 117:587 (1976)及びKimら, J. Immunol. 24:249 (1994))。
【００３９】
「補体依存性細胞障害」もしくは「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解することを意味する。補体活性化経路は補体系(Ｃｌｑ)の第１補体が、同族抗原と結合した分子(例えば、抗体)に結合することにより開始される。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを、例えばGazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されているように実施することができる。
「成長阻害」抗体は、抗体が結合する抗原を発現している細胞の増殖を阻害又は低減するものである。例えば、アンタゴニストはインビトロ及び／又はインビボでのＢ細胞の増殖を阻害又は低減しうる。
「アポトーシスを誘導する」抗体とは、標準的なアポトーシスアッセイにより測定できるようなＢ細胞などのプログラム細胞死、例えば、アネキシンＶの結合、ＤＮＡ断片化、細胞収縮、小胞体の肥大、細胞断片化、及び／又は膜小嚢の形成(アポトーシス体と呼称)を誘導するものである。
【００４０】
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽(Ｌ)鎖及び２つの同一の重(Ｈ)鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は一つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は、異なった免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の中で変化する。また各重鎖と軽鎖は、規則的に離間した鎖間ジスルフィド結合を有している。各重鎖は、多くの定常ドメインが続く可変ドメイン(ＶＨ)を一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン(ＶＬ)を、他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。
【００４１】
「可変」という用語は、可変ドメインのある部位が、抗体の中で配列が広範囲に異なっており、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合性及び特異性に使用されているという事実を意味する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメインにわたって一様には分布していない。軽鎖及び重鎖の可変ドメインの両方の高頻度可変領域と呼ばれる３つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保持された部分はフレームワーク領域(ＦＲ)と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、βシート構造を結合し、ある場合にはその一部を形成するループ結合を形成する、３つの高頻度可変領域により連結されたβシート配置を主にとる４つのＦＲをそれぞれ含んでいる。各鎖の高頻度可変領域は、ＦＲによって近接して結合され、他の鎖の高頻度可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している(Kabatら, Sequence of Proteins ofImmunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, BEthesda, MD. (1991))。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関連しているものではないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞性細胞障害(ＡＤＣＣ)への抗体の関与を示す。
【００４２】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片を生成し、その各々は単一の抗原結合部位を持ち、残りは容易に結晶化する能力を反映して「Ｆｃ」断片と命名される。ペプシン処理はＦ(ａｂ')２断片を生じ、それは２つの抗原結合部位を持ち、抗原を交差結合することができる。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この領域は、堅固な非共有結合をなした一つの重鎖及び一つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この配置において、各可変ドメインの３つの高頻度可変領域は相互に作用してＶＨ-ＶＬ二量体表面に抗原結合部位を形成する。集合的に、６つの高頻度可変領域が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン(又は抗原に対して特異的な３つの高頻度可変領域のみを含むＦｖの半分)でさえ、全結合部位よりも親和性が低くなるが、抗原を認識して結合する能力を有している。
【００４３】
またＦａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第一定常領域(ＣＨ１)を有する。Ｆａｂ'断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１領域のカルボキシ末端に数個の残基が付加している点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ'-ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも一つの遊離チオール基を担持しているＦａｂ'に対するここでの命名である。Ｆ(ａｂ')２抗体断片は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ'断片の対として生産された。また、抗体断片の他の化学結合も知られている。
任意の脊椎動物種からの抗体(イムノグロブリン)の「軽鎖」には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ(κ)及びラムダ(λ)と呼ばれる２つの明確に区別される型の一つが割り当てられる。
抗体の重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、抗体は異なるクラスが割り当てられる。完全な抗体には５つの主なクラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、更にそれらは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２等のサブクラス(イソ型)に分かれる。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。イムノグロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配位はよく知られている。
【００４４】
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、ＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓｃＦｖが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。ｓｃＦｖの概説については、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg及びMoore編, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)のPluckthunを参照のこと。
「ダイアボディ」なる用語は、二つの抗原結合部位を持つ小さい抗体断片を指し、その断片は同一のポリペプチド鎖(ＶＨ−ＶＬ)内で軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に重鎖可変ドメイン(ＶＨ)が結合してなる。非常に短いために同一鎖上で二つのドメインの対形成が可能であるリンカーを使用して、ドメインを他の鎖の相補ドメインと強制的に対形成させ、二つの抗原結合部位を創製する。ダイアボディーは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びHollingerら, Proc.Natl.Acad.Sci. USA 90:6444-6448 (1993)に更に詳細に記載されている。
【００４５】
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、一般的に少量存在しうる変異形などのモノクローナル抗体の産生中に生じうる突然変異形を除いて同一のもの及び／又は同じエピトープに結合するものである。異なる決定基(エピトープ)に対する異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は他のイムノグロブリンの混入がないという利点がある。「モノクローナル」との修飾語句は、実質的に均一な抗体の集団から得たものとしての抗体の性質を表すものであり、抗体が何か特定の方法による生成を必要として構築したものであることを意味するものではない。例えば、本発明において使用されるモノクローナル抗体は、最初にKohler等, Nature, 256:495 (1975)に記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、あるいは組換えＤＮＡ法によって作ることができる(例えば米国特許第４８１６５６７号を参照のこと)。また「モノクローナル抗体」は、例えば、Clackson等, Nature, 352：624-628 (1991)およびMarks等, J. Mol. biol. 222: 581-597 (1991)に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから作成することもできる。
【００４６】
ここで言うモノクローナル抗体は、特に「キメラ」抗体(免疫グロブリン)を含み、それは特定の種由来または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体が持つ配列に一致するまたは類似する重鎖および／または軽鎖の一部を含むものであり、残りの鎖は、所望の生物学的活性を表す限り、抗体断片のように他の種由来または他の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体が持つ配列に一致するまたは類似するものである(米国特許第4,816,567号；およびMorrisonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984))。ここで対象とするキメラ抗体には、非ヒト霊長類(例えば、ヒヒ、アカゲザル又はカニクイザルなどの旧世界サル)由来の可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体を含む(米国特許第５，６９３，７８０号)。
【００４７】
非ヒト(例えばマウス)の抗体の「ヒト化」型は、非ヒトイムノグロブリン(免疫グロブリン)に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト霊長類のような非ヒト種(ドナー抗体)からの高頻度可変領域の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。例として、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(ＦＲ)残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、もしくはドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性を更に洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいは実質的に全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ヒト免疫グロブリン配列の高頻度可変ループが上記のＦＲ置換を除くＦＲのすべて又は実質的にすべてである少なくとも一又は一般的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。また、ヒト化抗体は、場合によっては免疫グロブリン定常領域の一部、一般的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含む。更なる詳細については、Jones等, Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature 332:323-329 (1988);及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。
【００４８】
ここで使用されるところの「高頻度可変領域」なる用語は、抗原結合に寄与する抗体のアミノ酸残基を意味する。高頻度可変領域は一般には「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基(例えば、軽鎖可変ドメインの残基２４−３４(Ｌ１)、５０−５６(Ｌ２)及び８９−９７(Ｌ３)、及び重鎖可変ドメインの３１−３５(Ｈ１)、５０−６５(Ｈ２)及び９５−１０２(Ｈ３)；Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest,５版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991))及び／又は「高頻度可変ループ」からの残基(例えば、軽鎖可変ドメインの残基２６−３２(Ｌ１)、５０−５２(Ｌ２)及び９１−９６(Ｌ３)及び重鎖可変ドメインの残基２６−３２(Ｈ１)、５３−５５(Ｈ２)及び９６−１０１(Ｈ３)；Chothia及びLesk J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987))を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基はここで定義するように高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
「完全な抗体」とは、異種性分子、例えば細胞障害性分子又は放射性標識などとコンジュゲートしていない抗体である(本明細書中で定義される)。
【００４９】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断又は治療への使用を妨害しうる物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様においては、抗体は、(１)ローリー(Lowry)法により定量して、抗体が９５重量％より多くなるまで、最も好ましくは９９重量％より多くなるまで、(２)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、Ｎ末端あるいは内部アミノ酸配列の少なくとも１５の残基を得るのに充分な程度まで、あるいは、(３)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性が得られるように充分な程度まで精製される。抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、単離された抗体には、組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により調製される。
【００５０】
本明細書中の「被検体」とは、シェーグレン症候群の一又は複数の徴候、症状又は他の指標を経験しているか経験したことがあるもの、例えば新規に診断されるか、既に診断されているかにかかわらずシェーグレン症候群と診断され、現在再発又は再燃しているもの、または、シェーグレン症候群を進行させるリスクにあるもので、シェーグレン症候群の治療に適する患者を含む、ヒト被検体である。被検体は既にＣＤ２０抗体で治療されているか、そのような治療を受けていなくてもよい。シェーグレン症候群治療に適する被検体は、場合によっては、血中に浸潤するＣＤ２０細胞レベルの亢進についてスクリーニングされたもの、又は質的及び好ましくは量的に自己抗体の産生が評価される自己抗体を検出するためのアッセイを用いてスクリーニングされるものとして同定されてもよい。シェーグレン症候群と関係しているこのような自己抗体の例は、抗核抗体(ＡＮＡ)、抗リウマチ因子(ＲＦ)抗体、シェーグレン症候群抗原Ａ又はＢ(又はＳＳ-Ａ又はＳＳ-Ｂ)と称されるタンパク質に対する抗体、例えば抗Ｒｏ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ-Ｂ抗体および抗Ｒｏ／ＳＳ-Ｂ抗体、セントロメアプロテインＢ(ＣＥＮＰＢ)又はセントロメアプロテインＣ(ＣＥＮＰＣ)に対する抗体、ＩＣＡ６９に対する自己抗体、又はこのような抗体のうちの２以上の組合せが含まれる。
【００５１】
本明細書中の「患者」とは、例えば新規に診断されるか、既に診断されているかにかかわらず、現在再発又は再燃している、シェーグレン症候群の一又は複数の徴候、症状又は他の指標を経験しているか経験したことがある、シェーグレン症候群の治療に適するヒト被検体である。被検体は既にＣＤ２０抗体で治療されているか、そのような治療を受けていなくてもよい。シェーグレン症候群治療に適する被検体は、場合によっては、血中に浸潤するＣＤ２０細胞レベルの亢進についてスクリーニングされたもの、又は質的及び好ましくは量的に自己抗体の産生が評価される上記の自己抗体を検出するためのアッセイを用いてスクリーニングされるものとして同定されてもよい。
いくつかの診断検査は、シェーグレン症候群があると疑われる人々に共通して用いる。このような試験には眼と口の臨床試験が含まれる。乾性眼の試験のために眼科医によって行われる２つのよく用いられる試験がある：１．シルマー試験(Schirmer's test)、眼に一片の濾紙(シルマー紙と称する)を置く前に刺激されるために眼のしびれを伴う。この濾紙は５分間にぬれた量を計量する。５ｍｍ未満の濡れは乾性眼の強い指標である。この試験は１００％確実なものではなく、診断に問題がある場合には再度行う必要がある。２．ローズベンガル色素試験(Rose-Bengal dye test)、角膜の傷害性／炎症の領域を染色する。
【００５２】
口渇は、唾液産生の減少があるかどうかを測定するために唾液腺流量率を測定することによって確認することができる。ある患者では、耳下腺又は顎下腺へのリンパ球の浸潤によって、疼痛および腫脹が生じる。経口乾燥と関係する唾液腺破壊の範囲を測定するために、確固たる診断となるように、(ある場合には)唾液腺の数と存在する炎症浸潤物の種類を示すために下唇の内側表面から生検を採取してもよい。陽性結果により、シェーグレン症候群の診断と一致した特徴的な炎症性特徴が示される。おそらく、口および眼の乾燥は、唾液腺の破壊と分泌を調節する神経シグナル伝達の中断の両方から生じるようである。シェーグレン症候群の初期では、患者は、「基礎」分泌の減少によって食事と夜間の間に最もひどい乾燥を感じるが、まだ困難なく乾燥食(ドライフード)を食べることができる。「乾燥」徴候が進行するにつれて、摂食と燕下により多くの体液が必要となる。また、唾液流量の減少は、カンジダなどの口腔酵母感染及び歯周疾患の素因にもなる。香辛料のきいた食べ物およびアルコールに対する激しい感受性は一般的な訴状である；同様に、オイゲノールなどの精油を含有する歯科用製品及びうがい薬は耐えられないものである。
シェーグレン症候群が典型的に眼および口に作用するにもかかわらず、身体の他の部分も影響されうる。関節および筋肉痛が生じることもある。場合によっては、関節リウマチ(ＲＡ)、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)又はＳＬＥ様疾患によるものである。後者は、例えば、血液検査および関節のＸ線によって診断される。しかしながら、場合によっては、筋肉および関節痛はシェーグレン症候群によるものである。
【００５３】
疲労はもう一つの一般的な症状である。甲状腺機能低下症(シェーグレン症候群患者の最大２０％に発症しうる)、貧血症(血液細胞の産生の減少並びに関節痛のためのアスピリン、イブプロフェン又はナプロキセンなどの医薬の摂取による血液損失のため)、および劣悪な就眠パターン(特に日中に大量の液体を経口摂取したことによって夜間に頻回にトイレに行くため)を除外することが重要である。記憶および集中の低下が生じることが多く、免疫系による催炎物質の放出のためでありうる。また、睡眠パターンの崩壊によって生じうる。皮膚発疹、肺炎症、腫脹リンパ節および他の症状も、生じる。
加えて、アクアポリン５(ＡＱＰ５)などのアクアポリンの定量がこの徴候の診断法で有用でありうる。
本明細書中の被検体の「治療(処置)」は、治療的処置と予防的または防止的な方法の両方を意味する。治療に必要なものには、既にシェーグレン症候群であるもの、並びに予防すべきシェーグレン症候群があるものが含まれる。ゆえに、被検体はシェーグレン症候群を有すると診断されていても、シェーグレン症候群の素因があるないしはシェーグレン症候群にかかりやすくてもよい。被検体の処置には患者の治療が含まれる。
本明細書中の患者の「治療」は治療的処置を意味する。治療が必要な患者はシェーグレン症候群と診断された者である。
【００５４】
シェーグレン症候群の「症状」は、任意の病的な現象又は構造、機能ないしは感覚の正常からの離脱であり、被検体又は患者によって体感され、疾患を示す。
「有効量」なる表現は、シェーグレン症候群を治療するために効果的である抗体又はアンタゴニストの量を意味する。
「抗体曝露」とは、およそ１日からおよそ５週間の期間にわたって投与される一又は複数回用量の本明細書中の抗体への接触または曝露を意味する。用量は、この曝露期間にわたって一回または決まった時間ないしは変則的な時間、例えば週１回服用を４週間、またはおよそ１３〜１７日の期間あけて２回服用で、投与されてもよい。初めおよびその後の抗体曝露は、本明細書中で詳述されるようにそれぞれ時間を隔てたものである。
「初回の曝露から」または任意の先の曝露から特定の時間まで投与されない又は供給されない曝露とは、一以上の用量が曝露で投与される場合、第二またはそれ以降の曝露の時間が投与された先の曝露の任意の服用時間から測定されることを意味する。例えば、初回曝露で２回用量が投与される場合、第二の曝露は、先の曝露の期間内に投与される第一または第二の服用の時から計算して少なくともおよそ１６〜５４週までには投与されない。同様に、３回用量が投与される場合、第二の曝露は、先の曝露の期間内の第一、第二ないしは第三の服用の時から計算してもよい。好ましくは、「初回の曝露から」とは第一の服用の時から計算する。
【００５５】
ここで補助治療として用いる「免疫抑制剤」なる用語は、本明細書中で治療される哺乳動物の免疫系を抑制する又は遮断するように働く物質を表す。これは、サイトカイン産生を抑制する、自己抗原の発現を下方制御または抑制する、あるいはＭＨＣ抗原を遮断する物質を含む。そのような薬剤の例として、2-アミノ-6-アリル-5-代替ピリミジン(米国特許第４，６６５，０７７号参照)；非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤｓ)；ガンシクロビル、タクロリムス、糖質コルチコイド、例としてコルチゾール又はアルドステロン、抗炎症剤、例としてシクロオキシゲナーゼインヒビター、５-リポキシゲナーゼインヒビター又はロイコトリエンレセプターアンタゴニスト；プリンアンタゴニスト、例えばアザチオプリン又はミコフェノール酸モフェチル(ＭＭＦ)；アルキル化剤、例えばシクロホスファミド；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド (米国特許第４，１２０，６４９号に記載のように、ＭＨＣ抗原を遮断する)；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣフラグメントに対する抗イデオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；副腎皮質ステロイド又は糖質副腎皮質ステロイド又は糖質コルチコイド類似体などのステロイド、例としてプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン；ジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビター、例としてメトトレキサート(経口又は皮下)；クロロキン及びヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカイン又はサイトカインレセプター抗体、例として抗インターフェロン-γ、-β、又は-α抗体、抗腫瘍壊死因子α抗体(インフリキシマブ又はアダリムマブ)、抗ＴＮＦαイムノアドヘシン(エタネルセプト)、抗腫瘍壊死因子β抗体、抗インターロイキン２(ＩＬ-２)抗体及び抗ＩＬ-２レセプター抗体、抗インターロイキン６(ＩＬ-６)レセプター抗体及びアンタゴニスト；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む抗ＬＦＡ-１抗体；抗-Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ-Ｔ抗体、好ましくは、抗-ＣＤ３又は抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ-３結合ドメインを含む可溶性ペプチド(１９９０年７月２６日公開の国際公報９０／０８１８７)；ストレプトキナーゼ；トランスフォーミング成長因子-β(ＴＧＦ-β)；ストレプトドルナーゼ(streptodornase)；宿主由来のＲＮＡ又はＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ-６１４４３；クロランブシル；デオキシスペルグアニン(deoxyspergualin)；ラパマイシン；Ｔ細胞レセプター (Cohen等, 米国特許第５，１１４，７２１号)；Ｔ細胞レセプターフラグメント(Offner 等, Science 251:430-432 (1991)；国際公報９０／１１２９４；Ianeway, Nature, 341: 482 (1989)；及び国際公報９１／０１１３３)；ＢＡＦＦ抗体及びＢＲ３抗体などのＢＡＦＦアンタゴニスト；抗ＣＤ４０レセプター又は抗ＣＤ４０リガンド(ＣＤ１５４)；及びＴ１０Ｂ９などのＴ細胞レセプター抗体 (欧州特許第３４０，１０９号)を含む。本明細書中の好適な免疫抑制剤には、シクロフォスファミド、クロランブシル、アザチオプリン又はメトトレキセートが含まれるものもある。
ここで使用する「細胞障害性剤」なる用語は、細胞の機能阻害又は阻止、及び／又は細胞破壊をもたらす物質を表す。この用語は、放射性同位体(例として、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体)、化学療法剤、及び細菌、真菌、植物、又は動物起源の酵素活性毒素又は小分子毒素などの毒素、またはそれらの断片を含むことを意図する。
【００５６】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びCYTOXAN(登録商標)シクロホスファミドのようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ-９-テトラヒドロカナビノール（ドロナビノール、MARINOL（登録商標）；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（HYCAMTIN（登録商標）、ＣＰＴ-１１（イリノテカン、CAMPTOSAR（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン(scopolectin)及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ-１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ-２１８９及びＣＢ１-ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロランブシル、クロロナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス(nitrosureas)；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質(例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばAgnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)参照）；ダイネマイシン(dynemicin)Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団)、アクラシノマイシン類(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorbicin)、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン(ADRIAMYCIN(登録商標)、モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣＩリポソーム注射剤(DOXIL(登録商標))及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン(gemcitabine) (GEMZAR(登録商標))、テガフル(tegafur) (UFTORAL(登録商標))、カペシタビン(capecitabine) (XELODA(登録商標))、エポチロン(epothilone)、及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ)；葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)；プリンアナログ、例えばフルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー(replenisher)、例えばフロリン酸(frolinic acid)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシノイド(maytansinoid)類、例えばメイタンシン(maytansine)及びアンサミトシン(ansamitocine)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類(特にＴ-２毒素、ベラクリン(verracurin)Ａ、ロリジン(roridine)Ａ及びアングイジン(anguidine))；ウレタン；ビンデシン（ELDISINE（登録商標）、FILDESIN（登録商標））；ダカーバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ａｒａ-Ｃ」）；チオテパ；タキソイド類、例えばパクリタキセル(TAXOL(登録商標))、パクリタキセルのクレモフォー無添加アルブミン操作ナノ粒子製剤(ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ)、及びドキセタキセル(TAXOTERE(登録商標))；クロランブシル；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナアナログ、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン（VELBAN（登録商標））；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６)；イホスファミド；マイトキサントロン；ビンクリスチン（ONCOVIN（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン(leucovovin)；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ(登録商標)）；ノバントロン(novantrone)；エダトレキセート；ダ���ノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート(ibandronate)；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸のようなレチノイド；上述したもののいずれかの薬学的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体：並びに上記のうち２以上の組み合わせ、例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロン併用療法の略称であるＣＨＯＰ、及び5-FU及びロイコボビン(leucovovin)とオキサリプラチン（ELOXATINTM）を組み合わせた治療法の略称であるFOLFOXが含まれる。
【００５７】
またこの定義に含まれるものには、癌の成長を助けるホルモンの作用を調節、低減、遮断又は阻害するように働き、多くの場合全身処置の形態で使用される抗ホルモン剤がある。それらはそれ自体がホルモンであってもよい。それらは例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）を含み、例えば、タモキシフェン（NOLVADEX(登録商標)タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン(raloxifene)(EVISTA(登録商標))、ドロロキシフェン、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びトレミフェン(ＦＡＲＥＳＴＯＮ(登録商標))；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプター下方調節剤（ERD）；エストロゲンレセプターアンタゴニスト、例えばフルベストラント(fulvestrant) (FASLODEX(登録商標))；卵巣を抑止又は停止させる機能がある作用剤、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）アゴニスト、例えば酢酸リュープロリド(LUPRON(登録商標)及びELIGARD(登録商標))、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプテレリン(tripterelin)；抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド；並びに副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４(５)-イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール(ＭＥＧＡＳＥ(登録商標))、エキセメスタン(ＡＲＯＭＡＳＩＮ(登録商標))、フォルメスタニー(formestanie)、ファドロゾール、ボロゾール(ＲＩＶＩＳＯＲ(登録商標))、レトロゾール(ＦＥＭＡＲＡ(登録商標))、及びアナストロゾール(ＡＲＩＭＩＤＥＸ(登録商標))である。加えて、このような化学療法剤の定義には、クロドロネート（例えばBONEFOS(登録商標)又はOSTAC(登録商標)）、エチドロン酸(DIDROCAL(登録商標))、NE-58095、ゾレドロン酸／ゾレドロネート(ZOMETA(登録商標))、アレンドロネート(FOSAMAX(登録商標))、パミドロン酸(AREDIA(登録商標))、チルドロン酸(SKELID(登録商標))、又はリセドロン酸(ACTONEL(登録商標))、並びにトロキサシタビン(troxacitabine)（１,３-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に接着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-α、Ｒａｆ、及びＨ-Ｒａｓ、及び上皮成長因子レセプター（EGF-R）；THERATOPE（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ(登録商標)ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ(登録商標)ワクチン、及びＶＡＸＩＤ(登録商標)ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤(例えばＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ(登録商標))；ｒｍＲＨ(例えばＡＢＡＲＥＬＩＸ(登録商標))；ラパチニブ（lapatinib ditosylate）（GW572016としても知られるErbB-2及びEGFR二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）；セレコシブ(celecoxib)などのＣＯＸ-２阻害剤(CELEBREX(登録商標)；４-(５-(４-メチルフェニル)-３-(トリフルオロメチル)-１Ｈ-ピラゾル-１-イル)ベンゼンスルホンアミド；及び上記のもののいずれかの製薬的に許容される塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【００５８】
「サイトカイン」なる用語は、一つの細胞集団から放出されるタンパク質であって、他の細胞に対して細胞間メディエータとして作用するものの包括的な用語である。このようなサイトカインの例としては、リンフォカイン、モノカイン；PROLEUKIN(登録商標)ｒＩＬ-２を含むＩＬ-１、ＩＬ-１α、ＩＬ-２、ＩＬ-３、 ＩＬ-４、ＩＬ-５、ＩＬ-６、ＩＬ-７、 ＩＬ-８、ＩＬ-９、ＩＬ-１１、ＩＬ-１２、ＩＬ-１５等のインターロイキン(ＩＬ)；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ-α又はＴＮＦ-β、及びＬＩＦ及びキットリガンド(ＫＬ)を含む他のポリペプチド因子が含まれる。ここで使用される場合、サイトカインなる用語は天然源由来あるいは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物、例えば合成して産生された小分子構成要素及び製薬的に受容可能な誘導体及びその塩類を含む。
「ホルモン」なる用語は通常管を有する腺性器官によって分泌されるポリペプチドホルモンを表す。そのようなホルモンには、例えば、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ-メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラクシン；エストラジオール；ホルモン補充療法；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、エピチオスタノール、メピチオスタン又はテストラクトン；プロリラクシン；卵胞刺激ホルモン(ＦＳＨ)、副甲状腺刺激ホルモン(ＴＳＨ)、及び黄体形成ホルモン(ＬＨ)のような糖タンパク質ホルモン；プロラクチン、胎盤ラクトゲン、マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド性腺刺激ホルモン放出ホルモン；インヒビン；アクチビン；ミュラー阻害物質；及びトロンボポエチンなどがある。本明細中で用いるように、ホルモンなる用語は、天然源由来または組み換え細胞培養由来のタンパク質および天然配列ホルモンの生物学的活性な相当物、例えば合成して産生した小分子成分および製薬的に許容可能な誘導体およびその塩類が含まれる。
【００５９】
「成長因子」なる用語は成長を促進するタンパク質を表し、例えば、肝成長因子；線維芽細胞成長因子；血管内皮成長因子；神経成長因子、例えばＮＧＦ-β；血小板由来増殖因子；トランスフォーミング成長因子(ＴＧＦ)、例えばＴＧＦ-α及びＴＧＦ-β；インスリン様増殖因子-I及び-II；エリトロポエチン(ＥＰＯ)；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン-α、-β、及び-γ；及び、コロニー刺激因子(ＣＳＦ)、例えばマクロファージ-ＣＳＦ(Ｍ-ＣＳＦ)、顆粒球-マクロファージ-ＣＳＦ(ＧＭ-ＣＳＦ)及び顆粒球-ＣＳＦ(Ｇ-ＣＳＦ)などがある。本明細書中で用いられる、成長因子なる用語には、天然源由来あるいは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列成長因子の生物学的に活性な等価物、例えば合成して産生された小分子構成要素及び製薬的に受容可能な誘導体及びその塩類を含む。
「インテグリン」なる用語は、細胞の細胞外基質への結合と応答の両方をさせるレセプタータンパク質であり、創傷治癒、細胞分化、腫瘍細胞のホーミング及びアポトーシスなどの様々な細胞性機能に関与するものを表す。これらは細胞-細胞外基質及び細胞間相互作用に関与する細胞接着レセプターの大きなファミリーの一部である。機能的なインテグリンは、α及びβと称する２つの膜貫通性グリコプロテインサブユニットから成り、非共有的に結合している。βサブユニットのように、αサブユニットはすべて互いにいくらかの相同性がある。レセプターは常に１のα鎖及び１のβ鎖を含有する。例えば、α６β１、α３β１、α７β１、ＬＦＡ-１などがある。本明細書中で用いられる、インテグリンなる用語には、天然源由来あるいは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列インテグリンの生物学的に活性な等価物、例えば合成して産生された小分子構成要素及び製薬的に受容可能な誘導体及びその塩類を含む。
【００６０】
本明細書中では、「腫瘍壊死因子α(ＴＮＦα)」とは、Pennica 等, Nature, 312:721 (1984)又はAggarwal 等, JBC, 260:2345 (1985)に記載のアミノ酸配列を含有するヒトＴＮＦα分子を意味する。
本明細書中の「ＴＮＦαインヒビター」は、一般的にはＴＮＦαへの結合とその活性を中和することを介してＴＮＦαの生物学的活性をある程度阻害する薬剤である。本明細書中で考慮されるＴＮＦインヒビターの具体例は、エタネルセプト(ENBREL(登録商標))、インフリキシマブ(REMICADE(登録商標))及びアダリムマブ(HUMIRATM)である。
「疾患変更性抗リウマチ剤」又は「ＤＭＡＲＤ」の例には、ヒドロキシクロロキノン、スルファサラジン、メトトレキセート、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ(加えて、経口及び皮下メトトレキセート(methrotrexate))、アザチオプリン、Ｄ-ペニシラミン、ゴールド塩類(経口)、ゴールド塩類(筋肉内)、ミノサイクリン、シクロスポリンＡ及び局所性シクロスポリンを含むシクロスポリン、ブドウ球菌プロテインＡ免疫吸着、これらの塩類および誘導体を含むものなどがある。
【００６１】
「非ステロイド系抗炎症薬」又は「ＮＳＡＩＤ」の例として、アスピリン、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、これらの塩類および誘導体がある。アスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、インドメタシン又はトルメチンが好ましい。
本明細書中の「インテグリンアンタゴニスト又は抗体」の例として、ＬＦＡ-１抗体、例としてGenentechから市販のエファリズマブ(ＲＡＰＴＩＶＡ(登録商標))、または、α４インテグリン抗体、例としてBiogenから入手可能なナタリズマブ(ＡＮＴＥＧＲＥＮ(登録商標))、または、ジアザサイクリックフェニルアラニン誘導体(国際公報２００３／８９４１０)、フェニルアラニン誘導体(国際公報２００３／７０７０９、国際公報２００２／２８８３０、国際公報２００２／１６３２９および国際公報２００３／５３９２６)、フェニルプロピオン酸誘導体(国際公報２００３／１０１３５)、エナミン誘導体(国際公報２００１／７９１７３)、プロパン酸誘導体(国際公報２０００／３７４４４)、アルカノン酸誘導体(国際公報２０００／３２５７５)、置換型フェニール誘導体(米国特許第６,６７７,３３９号および同第６，３４８，４６３号)、芳香族アミン誘導体(米国特許第６,３６９,２２９号)、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド(米国公開公報２００２／００４２３６８)、αｖβ３インテグリンに対する抗体(欧州特許第６３３９４５号)、アザ架橋された二環式アミノ酸誘導体(国際公報２００２／０２５５６)などが含まれる。
【００６２】
「口渇又は乾性眼の分泌アゴニスト」は、例えば、ピロカルピンおよび塩酸ピロカルピン、セビメリン(ＥＶＯＸＡＣ(登録商標))、ブロムヘキシン、ＲＥＳＴＡＳＩＳ(登録商標)(シクロスポリン眼用エマルジョン)、ジクアフォゾル(diquafosol)、プリン作動性レセプターアゴニスト、ムスカリン様アゴニスト、副交感神経作動薬、システアミン点眼(Kaiser-Kupfer 等, Arch Ophthalmol., 108(5): 689-693 (1990))、ＲＥＦＲＥＳＨ  ＥＮＤＵＲＡ(登録商標)潤滑油点眼およびそれらの製薬的塩類および誘導体などの、口渇又は乾性眼を治療するための医薬である。
「副腎皮質ステロイド」は、天然に生じる副腎皮質ステロイドの効果を模倣するかあるいは増大するステロイドの一般的な化学構造を有するいくつかの合成又は天然に生じる物質の何か一つを指す。合成副腎皮質ステロイドの例として、プレドニゾン、プレドニゾロン(メチルプレドニゾロンを含む)、デキサメサゾン又はデキサメサゾントリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、およびベタメサゾンが含まれる。本明細書中の好適な副腎皮質ステロイドは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン又はデキサメサゾンである。
「抗マラリア剤」は、マラリアを治療する(マラリアの予防を含む)薬剤であって、関節痛、疲労および皮膚発疹などのシェーグレン症候群の全身性合併症を治療するために有用である。このような薬剤には、例えば、ヒドロクロロキン、クロロキン、ＬＡＲＩＵＭＴＭ、メフロキン、メフロキン塩酸塩、ＭＥＰＨＡＱＵＩＮＥＴＭ、プリマキン−ＡＴＡＢＲＩＮＥＴＭ、メパクリン、キナクリン、塩酸キナクリンおよびキニーネが含まれる。好ましくは、ヒドロクロロキン又はクロロキン、最も好ましくはヒドロキシクロロキン(例えば商標名ＰＬＡＱＵＥＮＩＬ(登録商標))である。
【００６３】
ここで用いられる「ＢＡＦＦ」、「ＢＡＦＦポリペプチド」、「ＴＡＬＬ-１」または「ＴＡＬＬ-１ポリペプチド」及び「ＢＬｙＳ」なる用語は、「天然配列ＢＡＦＦポリペプチド」および「ＢＡＦＦ変異体」を包含する。「ＢＡＦＦ」は以下のアミノ酸配列の何れか一を有するポリペプチド：
ヒトＢＡＦＦ配列（配列番号１６）
1     MDDSTEREQSRLTSCLKKREEMKLKECVSILPRKESPSVRSSKDGKLLAATLLLALLSCC
61   LTVVSFYQVAALQGDLASLRAELQGHHAEKLPAGAGAPKAGLEEAPAVTAGLKIFEPPAP
121 GEGNSSQNSRNKRAVQGPEETVTQDCLQLIADSETPTIQKGSYTFVPWLLSFKRGSALEE
181 KENKILVKETGYFFIYGQVLYTDKTYAMGHLIQRKKVHVFGDELSLVTLFRCIQNMPETL
241 PNNSCYSAGIAKLEEGDELQLAIPRENAQISLDGDVTFFGALKLL
マウスＢＡＦＦ配列（配列番号１７）
1    MDESAKTLPPPCLCFCSEKGEDMKVGYDPITPQKEEGAWFGICRDGRLLAATLLLALLSS
61  SFTAMSLYQLAALQADLMNLRMELQSYRGSATPAAAGAPELTAGVKLLTPAAPRPHNSSR
121 GHRNRRAFQGPEETEQDVDLSAPPAPCLPGCRHSQHDDNGMNLRNIIQDCLQLIADSDTP
181 TIRKGTYTFVPWLLSFKRGNALEEKENKIVVRQTGYFFIYSQVLYTDPIFAMGHVIQRKK
241 VHVFGDELSLVTLFRCIQNMPKTLPNNSCYSAGIARLEEGDEIQLAIPRENAQISRNGDD
301 TFFGALKLL
およびそれらのホモログ及び断片及び変異形を意味し、天然のＢＡＦＦの生物学的活性を有する。ＢＡＦＦの生物学的活性は、Ｂ細胞生存を促進する、Ｂ細胞成熟を促進する、およびＢＲ３に結合することからなる群から選択されうる。ＢＡＦＦの変異体は、天然配列のＢＡＦＦポリペプチドと好ましくは少なくとも８０％ないし１００％までの連続的整数、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有する。
【００６４】
「天然配列」ＢＡＦＦポリペプチドは、天然由来の対応するＢＡＦＦポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。例えば、ＢＡＦＦはフューリン型のプロテアーゼにより細胞表面から切断された後の可溶型で存在する。そのような天然配列のＢＡＦＦポリペプチドは天然から単離するか、組み換えおよび／または合成方法により生成することができる。
「天然配列ＢＡＦＦポリペプチド」又は「天然のＢＡＦＦ」なる用語は、ポリペプチドの天然に生じる切断型ないし分泌型（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に生じる変異型（例えば、選択的スプライシング型）および天然に生じる対立変異型を具体的に包含する。「ＢＡＦＦ」なる用語は、Shu 等., J. Leukocyte Biol., 65:680 (1999)；GenBank寄託番号 AF136293；1998年5月7日公開のW098/18921；1998年10月7日公開のEP 869,180；1998年6月25日公開のW098/27114；1999年3月18日公開のW099/12964；1999年7月8日公開のW099/33980；Moore 等., Science, 285:260-263 (1999)；Schneider 等., J. Exp. Med., 189:1747-1756 (1999)；Mukhopadhyay 等., J. Biol. Chem., 274:15978-15981 (1999)に記載のポリペプチドを含む。
【００６５】
ここで用いられる「ＢＡＦＦアンタゴニスト」なる用語は、広義の意味で用いられ、（１）天然配列ＢＡＦＦポリペプチドないし天然配列ＢＲ３ポリペプチドに結合してＢＡＦＦポリペプチドと相互作用するＢＲ３を部分的又は完全にブロックする、および（２）天然配列ＢＡＦＦ活性を部分的又は完全にブロック、阻害ないし中和（無効化）する任意の分子を含む。好適な一実施態様では、ブロックすべきＢＡＦＦレセプターはＢＲ３レセプターである。とりわけ、天然配列ＢＡＦＦポリペプチドシグナル伝達はＢ細胞生存およびＢ細胞成熟を促進する。ＢＡＦＦ活性の阻害、ブロックまたは中和によりＢ細胞数が減少する。本発明によるＢＡＦＦアンタゴニストはインビトロ及び／又はインビボのＢＡＦＦポリペプチドの一以上の生物学的活性を部分的または完全にブロック、阻害ないし中和するであろう。一実施態様では、生物学的活性なＢＡＦＦはインビトロ及び／又はインビボで以下の事象の何れか一またはそれらのいくつかを増強する：Ｂ細胞の生存促進、ＩｇＧ及び／又はＩｇＭレベルの増加、形質細胞数の増加、および脾臓Ｂ細胞でのＮＦ-κｂ２／１００のｐ５２ＮＦ-κｂへの進行(例えば、Batten, M 等., (2000) J. Exp. Med. 192:1453-1465；Moore, 等., (1999) Science 285:260-263；Kayagaki, 等., (2002) 10:515-524)。
【００６６】
上記のように、ＢＡＦＦアンタゴニストは直接的または間接的な方法で、インビトロまたはインビボのＢＡＦＦシグナル伝達を部分的ないし完全にブロック、阻害又は中和する機能を持つ。例えば、ＢＡＦＦアンタゴニストは直接ＢＡＦＦに結合する。例えば、抗体がＢＡＦＦのＢＲ３への結合を立体的に妨げるようにヒトＢＡＦＦの残基１６２−２７５および／または、１６２、１６３、２０６、２１１、２３１、２３３、２６４および２６５からなる群から選択した残基の近傍残基を含んでなる、ヒトＢＡＦＦの領域内に結合するＢＡＦＦ抗体を包含する。この残基番号は配列番号１６を指す。他の実施例では、直接結合するものは、ＢＡＦＦレセプターの細胞外ドメインなどのＢＡＦＦに結合するＢＡＦＦレセプター、又は天然のＢＡＦＦに結合する断片及び変異体の何れか一部を含んでなるポリペプチドである。他の実施例では、ＢＡＦＦアンタゴニストには、式Ｉ：Ｘ１−Ｃ−Ｘ３-Ｄ-Ｘ５-Ｌ-Ｘ７-Ｘ８-Ｘ９-Ｘ１０-Ｘ１１-Ｘ１２-Ｃ-Ｘ１４-Ｘ１５-Ｘ１６-Ｘ１７ (式Ｉ) (配列番号18)の配列を含んでなるポリペプチドの配列を有するポリペプチドが含まれ、この式ＩのＸ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１４、Ｘ１５及びＸ１７はシステインを除く任意のアミノ酸であり；Ｘ１６はＬ、Ｆ、Ｉ及びＶからなる群から選択されたアミノ酸であり；該ポリペプチドは式ＩのＣ末端システインＣに対するＣ末端及びＮ末端システインＣに対する７アミノ酸残基Ｎ末端内にシステインを含有しない。
一実施態様では、式Ｉの配列を含有するポリペプチドはジスルフィド結合によって結合された２つのＣｓ；ＬとＸ７との間のターンの中心にタイプＩβターン構造の高次構造を形成するＸ５ＬＸ７Ｘ８を有し、Ｘ８の二面角φについて陽性値を有する。一実施態様では、Ｘ１０はW、F、V、L、I、Y、M及び無極性アミノ酸からなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ１０はＷである。他の実施態様では、Ｘ３はM、V、L、I、Y、F、W及び無極性アミノ酸からなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ５はV、L、P、S、I、A及びRからなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ７はV、T、I及びLからなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ８はR、K、G、N、H及びＤアミノ酸からなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ９はH、K、A、R及びQからなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ１１はＩ又はＶである。他の実施態様では、Ｘ１２はP、A、D、E及びSからなる群から選択される。他の実施態様では、Ｘ１６はＬである。具体的な一実施態様では、式Ｉの配列は、ECFDLLVRAWVPCSVLK (配列番号19)、ECFDLLVRHWVPCGLLR (配列番号20)、ECFDLLVRRWVPCEMLG (配列番号21)、ECFDLLVRSWVPCHMLR (配列番号22)、ECFDLLVRHWVACGLLR (配列番号23)、及びQCFDRLNAWVPCSVLK (配列番号24)からなる群から選択される配列である。好適な実施態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストは配列番号１９、２０、２１、２２及び２３からなる群から選択される何れか一のアミノ酸配列を含有する。
【００６７】
さらに他の例では、ＢＡＦＦアンタゴニストには式Ｉ：Ｘ１-Ｃ-Ｘ３-Ｄ-Ｘ５-Ｌ-Ｖ-Ｘ８-Ｘ９-Ｗ-Ｖ-Ｐ-Ｃ-Ｘ１４-Ｘ１５-Ｌ-Ｘ１７ (式ＩＩ) (配列番号２５)の配列を含んでなるポリペプチドの配列を有するポリペプチドが含まれ、この式ＩのＸ１、Ｘ３、Ｘ５、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１４、Ｘ１５及びＸ１７はシステインを除く任意のアミノ酸であり、該ポリペプチドは式ＩＩのＣ末端システインＣに対するＣ末端及びＮ末端システインＣに対する７アミノ酸残基Ｎ末端内にシステインを含有しない。
一実施態様では、式ＩＩの配列を含有するポリペプチドはジスルフィド結合によって結合された２つのＣｓ；ＬとＸ７との間のターンの中心にタイプＩβターン構造を形成するＸ５ＬＸ７Ｘ８を有し、Ｘ８の二面角φについて陽性値を有する。式ＩＩの他の実施態様では、Ｘ３はM、Ａ、V、L、I、Y、F、W及び無極性アミノ酸からなる群から選択される。式ＩＩの他の実施態様では、Ｘ５はV、L、P、S、I、A及びRからなる群から選択される。式ＩＩの他の実施態様では、Ｘ８はR、K、G、N、H及びＤアミノ酸からなる群から選択される。式ＩＩの他の実施態様では、Ｘ９はH、K、A、R及びQからなる群から選択される。
【００６８】
更なる実施態様では、ＢＡＦＦレセプターに由来するその細胞外ドメイン又はＢＡＦＦ結合断片ないしはＢＡＦＦ結合変異体は、ＴＡＣＩ、ＢＲ３又はＢＣＭＡである。あるいは、ＢＡＦＦアンタゴニストは天然配列ＢＲ３の細胞外ドメインをＢＡＦＦ結合領域で結合して、ＢＡＦＦのインビトロ、インサイツまたはインビボのＢＲ３への結合を部分的あるいは完全にブロック、阻害ないし中和することができる。例えば、そのような間接的なアンタゴニストは、以下に示す(配列番号２６)ヒトＢＲ３のＢＡＦＦへの結合を立体的に妨げるようにヒトＢＲ３の残基２３−３８またはそれら残基の近傍領域を含む、ＢＲ３の領域内に結合する抗ＢＲ３抗体である。
ある実施態様では、本発明のＢＡＦＦアンタゴニストには、天然のＢＡＦＦに結合するＢＡＦＦレセプターの細胞外ドメイン又はそれらの断片及び変異体を含有するＢＡＦＦ抗体及びイムノアドヘシンが含まれる。更なる実施態様では、ＢＡＦＦレセプターに由来するその細胞外ドメイン又はＢＡＦＦ結合断片ないしはＢＡＦＦ結合変異体は、ＴＡＣＩ、ＢＲ３又はＢＣＭＡである。更なる他の実施態様では、イムノアドヘシンは、上記の式Ｉ又は式ＩＩのアミノ酸配列を含有し、配列番号１９、２０、２１、２２、２３及び２４からなる群から選択される何れか一のアミノ酸配列を含有する。
一実施態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストはＢＡＦＦポリペプチド又はＢＲ３ポリペプチドに１００ｎＭ以下の結合親和性で結合する。他の実施態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストはＢＡＦＦポリペプチド又はＢＲ３ポリペプチドに１０ｎＭ以下の結合親和性で結合する。さらに他の実施態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストはＢＡＦＦポリペプチド又はＢＲ３ポリペプチドに１ｎＭ以下の結合親和性で結合する。
【００６９】
ここで用いられる「ＢＲ３」、「ＢＲ３ポリペプチド」または「ＢＲ３レセプター」なる用語は、「天然配列ＢＲ３ポリペプチド」および「ＢＲ３変異体」を包含する（ここでさらに定義する）。「ＢＲ３」は以下のアミノ酸配列およびその相同体：
ヒトＢＲ３配列（配列番号２６）
1   MRRGPRSLRGRDAPAPTPCVPAECFDLLVRHCVACGLLRTPRPKPAGASSPAPRTALQPQ
61 ESVGAGAGEAALPLPGLLFGAPALLGLALVLALVLVGLVSWRRRQRRLRGASSAEAPDGD
121 KDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAG
181 PEQQ
およびＢＡＦＦに結合するそれらの変異体または断片を含んでなるポリペプチドを意味する。本発明のＢＲ３ポリペプチドは、ヒト組織型または他の供給源などの様々な供給源から単離する、または組み換えおよび／または合成法によって調製することができる。ＢＲ３なる用語は、WO2002/24909およびWO2003/14294に記載のＢＲ３ポリペプチドを含む。
【００７０】
「天然配列」ＢＲ３ポリペプチド又は「天然のＢＲ３」は、天然由来の対応するＢＲ３ポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。そのような天然配列のＢＲ３ポリペプチドは天然から単離するか、組み換えおよび／または合成方法により生成することができる。「天然配列ＢＲ３ポリペプチド」なる用語は、ポリペプチドの天然に生じる切断型ないし分泌型（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に生じる変異型（例えば、選択的スプライシング型）および天然に生じる対立変異型を具体的に包含する。本発明のＢＲ３ポリペプチドには、ヒトＢＲ３(配列番号２６)のアミノ酸残基１−１８４の近接した配列からなるかまたはそれらを含有するＢＲ３ポリペプチドが含まれる。
ＢＲ３「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを実質的に含まないＢＲ３ポリペプチド型を意味する。ＢＲ３のＥＣＤ型には、ＢＲ３のアミノ酸１−７７、２−６２、２−７１、１−６１、７−７１、２３−３８および２−６３からなる群から選択される何れか一のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを包含する。本発明は、ヒトＢＲ３の上記の何れか一のＥＣＤ型を含有するポリペプチド、及び天然のＢＡＦＦに結合するそれらの変異体及び断片を包含する。
ミニ-ＢＲ３はＢＲ３のＢＡＦＦ結合ドメインの２６残基のコア領域、すなわちアミノ酸配列：TPCVPAECFD LLVRHCVACG LLRTPR  (配列番号２７)である。
【００７１】
「ＢＲ３変異体（変異型）」は、天然配列完全長ＢＲ３またはＢＲ３ ＥＣＤのアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するＢＲ３ポリペプチドを意味し、天然配列ＢＡＦＦポリペプチドを結合する。場合によっては、ＢＲ３変異体は単一システイン豊富なドメインを含む。そのようなＢＲ３変異体ポリペプチドには、例えば完全長アミノ酸配列のうちの一以上のアミノ酸残基がＮ末端および／またはＣ末端で、並びに一以上の内部ドメイン内で付加または欠損しているＢＲ３ポリペプチドが含まれる。天然配列ＢＡＦＦポリペプチドを結合するＢＲ３ ＥＣＤの断片もまた包含される。場合によっては、ＢＲ３変異型ポリペプチドは、ヒトＢＲ３ポリペプチドまたはその特定の断片(例えばＥＣＤ)と、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、さらにより好ましくは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有している。ＢＲ３変異型ポリペプチドは天然のＢＲ３ポリペプチド配列を包含しない。他の実施態様では、ＢＲ３変異型ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長、少なくとも約２０アミノ酸長、少なくとも約３０アミノ酸長、少なくとも約４０アミノ酸長、少なくとも約５０アミノ酸長、少なくとも約６０アミノ酸長、少なくとも約７０アミノ酸長である。
【００７２】
好適な一実施態様では、本明細書中のＢＡＦＦアンタゴニストはＢＡＦＦに結合するＢＲ３、ＴＡＣＩ又はＢＣＭＡの一部、又はＢＡＦＦに結合するその変異体の一部を含有するイムノアドヘシンである。他の実施態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストはＢＡＦＦ抗体である。「ＢＡＦＦ抗体」はＢＡＦＦに結合する抗体であり、「ＢＡＦＦ」の定義に開示したヒトＢＡＦＦ配列(配列番号１６)の残基１６２−２７５を含有するヒトＢＡＦＦの領域内のＢＡＦＦに結合することが好ましい。他の実施態様では、ＢＡＦＦアンタゴニストはＢＲ３抗体である。「ＢＲ３抗体」はＢＲ３に結合する抗体であり、「ＢＲ３」の定義に開示したヒトＢＲ３配列(配列番号２６)の残基２３−３８を含有するヒトＢＲ３の領域内のＢＲ３に結合するものであることが好ましい。一般に、本明細書中で意味するヒトＢＡＦＦ及びヒトＢＲ３のアミノ酸位置は「ＢＡＦＦ」及び「ＢＲ３」の定義に開示したそれぞれ配列番号１６及び２６のヒトＢＡＦＦ及びヒトＢＲ３の配列番号付けに従ったものである。
ＢＡＦＦ結合ポリペプチド又はＢＡＦＦ抗体の他の例は、例えば国際公開公報2002/092620、国際公開公報2003/014294、Gordon 等, Biochemistry 42(20):5977-5983 (2003)、Kelley 等 J Biol Chem.279(16):16727-16735 (2004)、国際公開公報1998/18921、国際公開公報2001/12812、国際公開公報2000/68378及び国際公開公報2000/40716にみられる。
【００７３】
「パッケージ挿入物」は、効能、用途、服用量、投与、配合禁忌、パッケージされている製品と併用される他の治療薬、及び／又はその治療薬などの用途に関する警告についての情報を含む、治療薬の商業的包装を慣習的に含めた指示書を指す。
「医薬」とはシェーグレン症候群またはその症状または副作用を治療するために活性な薬剤である。
「視覚的類似尺度」又は「ＶＡＳ」は、連続した値全体が変動すると考えられていて、容易に直接測定することができない特徴又は姿勢の測定値である。例えば、患者が感じる疼痛の量は、疼痛がない状態から最大の疼痛量まで連続する範囲である。患者の観点から、患者の疼痛が分散して起こらないので、この範囲は、疼痛なし、軽度、中程度及び重度の分類として連続しているようである。これはＶＡＳが考案された基本的な連続の考えを捕らえるためのものである。このような評価は明らかにとても主観的であるので、個体内の変化に注目するときに、これらのスケールは最も価値があり、一つの時点で一群の個体間の比較をする場合には有用性が低い。したがって、本願明細書のＶＡＳ上の基準を上回る改善は、治療の前にこのようなスケールで測定した個体自身の基準を上回る個体患者の改善を意味する。一実施態様では、操作として、ＶＡＳは長さ１００ｍｍの水平線であり、それぞれの終わりに語句を付記する。患者は自分が認識する現在の状態を表す線上の位置にマークを付ける。ＶＡＳスコアは、線の左端から患者がマークする点までをミリメートル単位で測定することによって決定されることが多い。垂直線及び付加的な記載をした線を含め、ＶＡＳスケールが示される方法には他の多くのものがある。Wewers & Lowe, Research in Nursing and Health 13: 227-236 (1990)は、ＶＡＳに関する有益な考察を提供している。また、Gould 等, Journal of Clinical Nursing, 10: 697-706 (2001)も参照。このようなスケール上の乾燥のマーカーは、シェーグレン症候群の症状として起こりうるので、眼又は口又はその組合せの乾燥である。このようなスケール上の疲労のマーカーは、シェーグレン症候群の症状としての力およびエネルギーの欠落、倦怠感、疲れおよび他の疲労型に特徴がある疲労であり、スケール上の関節痛のマーカーは、シェーグレン症候群の症状として生じうる、例えば膝、指関節、手首、足関節などの関節痛、こわばりないしは炎症により生じうる一以上の関節に影響する関節痛ないしは関節の痛みである。
【００７４】
ＩＩ．治療
一態様では、本発明は、治療に適する患者のシェーグレン症候群の治療方法であって、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニスト、好ましくは抗体(より好ましくはＣＤ２０抗体)と抗マラリア剤の有効量を患者に投与して、ＶＡＳの３つの測定値(乾燥、疲労及び関節痛)の２つ以上において患者の基準より少なくともおよそ３０％(好ましくは少なくともおよそ３５−５０％)を提供することを含む治療方法を提供する。より好ましくは、前記患者は、乾燥及び少なくとも一の関節痛ないしは疲労の基準からの改善を表す。好ましくは、抗マラリア剤はヒドロキシクロロキンであり、ステロイドなどの他の医薬は投与されない。
好適な実施態様では、基準を上回る改善が乾燥、疲労及び関節痛の３つすべてにみられる。また、有効量により、ＣＤ２０抗体を用いずに抗マラリア剤を患者に投与する対照治療よりも改善がされる。
好適な抗マラリア剤はヒドロクロロキンまたはクロロキン、最も好ましくはヒドロキシクロロキンである。
【００７５】
他の実施態様では、本発明は、治療に好適な被検体のシェーグレン症候群の治療方法であって、有効量のＢ細胞表面マーカーに結合する抗体(好ましくはＣＤ２０抗体)を被検体に投与して、(好ましくはおよそ０．５から４グラム、より好ましくはおよそ１．５から３．５グラム、さらにより好ましくはおよそ１．５から２．５グラム)の初回抗体曝露の後、(好ましくはおよそ０．５から４グラム、より好ましくはおよそ１．５から３．５グラム、さらにより好ましくはおよそ１．５から２．５グラム)の第二抗体曝露を供給することを含み、該第二の曝露が初回曝露からおよそ１６から５４週(好ましくはおよそ２０から３０週、より好ましくはおよそ４６から５４週)までに供給されるものでない方法を提供する。この発明では、第二の抗体曝露は、被検体が初回抗体曝露の後の次にＣＤ２０抗体で治療される時であり、初回と第二の曝露との間にＣＤ２０抗体処置や曝露がないものである。処置には、例えば本明細書中の実施例に示すような、一以上の一次及び／又は二次の有効エンドポイントを満たすことが含まれる。
本方法は、有効量のＣＤ２０抗体を被検体に投与して(好ましくはおよそ０．５から４グラム、より好ましくはおよそ１．５からから３．５グラム、さらにより好ましくはおよそ１．５から２．５グラム)の第三抗体曝露を供給することを含むのが好ましく、該第三の曝露が初回曝露からおよそ４６から６０週(好ましくはおよそ４６から５５週、より好ましくはおよそ４６から５２週)までに供給されない。好ましくは、更なる抗体曝露は初回曝露から少なくともおよそ７０から７５週までにない、さらにより好ましくは更なる抗体曝露は初回曝露からおよそ７４から８０週までにない。
【００７６】
本明細書中の任意の一又は複数の抗体曝露は、単回抗体用量としてないしは複数回抗体用量、例えばおよそ１ないし４回の複数回抗体用量として被検体に供給されてもよい(例えば、第一および第二、又は第一、第二及び第三の用量、又は第一、第二、第三および第四の服用などから構成される)。それぞれの抗体曝露のために行われる特定回数の用量(１、２または３またはそれ以上のいずれであっても)は、例えば治療されるシェーグレン症候群の種類、用いる抗体の種類、以下に挙げるような第二の医薬としてどのタイプを用いるか、並びに投与方法と頻度に依存する。複数回投与が行われる場合、後に続く用量(例えば第二用量または第三用量)は、前回の服用から好ましくはおよそ１〜２０日、より好ましくはおよそ６〜１６日、最も好ましくはおよそ１４〜１６日に投与される。複数回用量は、全期間で、およそ１日〜４週、より好ましくはおよそ１日〜２０日(例えば６〜１８日の期間以内)に投与される。ある態様では、複数回用量は、およそ週ごとに、第二用量が初期用量からおよそ１週間に投与され、任意の第三用量又は続く用量が第二用量からおよそ１週間に投与される。それぞれの複数回抗体用量は好ましくはおよそ０．５から１．５グラム、より好ましくはおよそ０．７５から１．３グラムである。
【００７７】
一実施態様では、被検体は少なくともおよそ３回、例えばおよそ３から６０回、より好ましくはおよそ３から４０回、最も好ましくはおよそ３から２０回、抗体曝露を受ける。好ましくは、その曝露はそれぞれおよそ２４週間の間隔で投与される。一実施態様では、それぞれの抗体曝露は単回抗体用量として供給される。変更した実施態様では、それぞれの抗体曝露は、複数回抗体用量として供給される。しかしながら、すべての抗体曝露が単回用量あるいは複数回用量として供給される必要はない。
好適な一実施態様では、およそ２から３グラムのＣＤ２０抗体は初回曝露として投与される。およそ３グラムが投与される場合、およそ１グラムのＣＤ２０抗体が初回曝露としておよそ３週間の間隔週で投与される。およそ２グラムのＣＤ２０抗体が初回曝露として投与される場合、およそ１グラムのＣＤ２０抗体が投与された後、およそ２週間にさらにおよそ１グラムの抗体が初回曝露として投与される。好適な態様では、第二曝露は初回曝露から少なくともおよそ６か月であり、およそ２グラムの量で投与される。選択的に好適な態様では、第二曝露は初回曝露からおよそ６か月であり、およそ１グラムの抗体として投与されたおよそ２週間の後に、さらにおよそ１グラムの抗体が投与される。好適には、抗マラリア剤はＣＤ２０抗体とともに被検体に投与される。さらに又は選択的に、副腎皮質ステロイドなどのステロイドは初回抗体曝露によって投与されるのが好ましい。好適な態様では、ステロイドは第二曝露によって投与されないか、あるいは第二曝露によって投与されるが初回曝露で用いた量よりも少ない量で投与される。また、ステロイドは第三又はその後の曝露によって投与されないのが好ましい。
【００７８】
本明細書中に記載の本発明の方法では、ＣＤ２０又はＢ細胞表面マーカー抗体は、完全な抗体であってもよく、または放射性化合物などの細胞障害性剤などの他の分子とコンジュゲートしていてもよい。本明細書中で好適なＣＤ２０抗体は、キメラＣＤ２０抗体、ヒト化ＣＤ２０抗体又はヒトＣＤ２０抗体、より好ましくはリツキシマブ、ヒト化２Ｈ７(例えば、配列番号：２および８に記載の可変ドメイン配列を含有してなる)、キメラないしはヒト化Ａ２０抗体(Immunomedics)、及びＨＵＭＡＸ-ＣＤ２０ＴＭヒトＣＤ２０抗体(Genmab)である。リツキシマブ又はヒト化２Ｈ７がさらにより好ましい。
また、シェーグレン症候群はどのステージにあってもよく、好適な一実施態様では、シェーグレン症候群は二次的シェーグレン症候群である。他の好適な実施態様では、シェーグレン症候群は原発性シェーグレン症候群である。
【００７９】
一実施態様では、被検体は、シェーグレン症候群を治療するために免疫抑制剤などの薬剤によって以前に治療されたことがない、および／またはＢ細胞表面マーカーに対する抗体で以前に治療されたことがない(例えばＣＤ２０抗体で以前に治療されことがない)。更なる他の実施態様では、患者は症候を再発している。他の実施態様では、患者は症候を再発していない。他の実施態様では、被検体は、症候群を治療するために薬剤によって以前に治療されたことがない、および／またはそのような抗体で以前に治療されたことがない。他の実施態様では、ＣＤ２０抗体は症候群を治療するために被検体に投与される唯一の医薬である。他の実施態様では、ＣＤ２０抗体は、症候群を治療するために用いた医薬の一つである。更なる実施態様では、被検体は関節リウマチを有さない。より更なる実施態様では、被検体は多発性硬化症を有さない。より更なる実施態様では、被検体は狼瘡又はＡＮＣＡ関連血管炎を有さない。更なる他の実施態様では、被検体はシェーグレン症候群以外の自己免疫性疾患を有さない。この一番最後の言及では、本明細書中の「自己免疫性疾患」は、個体自身の組織ないしは器官ないしは同時分離したものから生じるかないしはそれらに対する疾患又は疾病、またはそれらの症状、または結果として生じる状態である。一実施態様では、正常体組織および抗原に反応する抗体のＢ細胞による産生によって増悪するまたはそれらの産生によって生じる症状を意味する。他の実施態様では、自己免疫性疾患は、自己抗原(例えば核抗原)のエピトープに特異的な自己抗体の分泌を伴うものである。
【００８０】
本明細書中の何れかの方法では、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニスト又は抗体、例えば細胞障害性剤、化学療法剤、免疫抑制剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニストないしは抗体、成長因子、ホルモン、インテグリン、インテグリンアンタゴニストないしは抗体(例えばＣＤ２０抗体)とともに、有効量の他の医薬が投与されてもよい。本明細書中の抗マラリア剤が用いられる初めの方法では、そのような医薬は第三の医薬と称され、ＣＤ２０抗体などのアンタゴニスト(又はアンタゴニスト、例えば抗体の組合せ)が第一の医薬であり、抗マラリア剤が第二の医薬である。抗体が複数回の曝露で投与される本明細書中の第二の方法では、そのような医薬は第二の医薬と称され、抗体が第一の医薬である。
【００８１】
そのような付加的な医薬の例として、化学療法剤、インターフェロンクラス薬剤、例としてインターフェロンα(例えばAmarillo Biosciences, Inc.から入手)、ＩＦＮβ-1ａ(ＲＥＢＩＦ(登録商標)およびＡＶＯＮＥＸ(登録商標))又はＩＦＮβ-1ｂ(ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ(登録商標))、オリゴペプチド、例として酢酸グラチラマー(ＣＯＰＡＸＯＮＥ(登録商標))、細胞障害性剤(例として、ミトキサントロン(ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ(登録商標))、メトトレキセート、シクロホスファミド、クロランブシルおよびアザチオプリン)、ピロキシカム(ＦＥＬＤＥＮＥ(登録商標))、非ステロイド性、抗炎症性薬効保持鎮痛剤および解熱性性質、静脈性免疫グロブリン(γグロブリン)、リンパ球枯渇治療(例としてミトキサントロン、シクロホスファミド、ＣＡＭＰＡＴＨＴＭ抗体、抗ＣＤ４、クラドリビン、自己応答性Ｂ細胞のＩｇレセプターによって特異的に認識される、脱免疫化、自己反応性抗原又はその断片を含有する少なくとも２つのドメインを有するポリペプチド(国際公開公報２００３／６８８２２)、全身照射、骨髄移植)、インテグリンアンタゴニスト又は抗体(例えば、Genentechから市販されているエファリズマブ／ＲＡＰＴＩＶＡ(登録商標)などのＬＦＡ-１抗体、又はBiogenから入手可能なナタリズマブ／ＡＮＴＥＧＲＥＮ(登録商標)などのα４インテグリン抗体、又は他の上記したもの)、シェーグレン症候群の二次症状又は関連する症状(例えば乾燥、腫脹、失調症、疼痛、疲労)を治療するための薬剤、ステロイド、例として副腎皮質ステロイド(例えば、メチルプレドニゾロン、低用量プレドニゾンなどのプレドニゾン、デキサメサゾン、又は、例えば全身性副腎皮質ステロイド治療を含む関節注射を介した糖質コルチコイド)、非リンパ球枯渇性免疫抑制療法(例えばＭＭＦ又はシクロスポリン)、「スタチン」クラスのコレステロール低下薬(セリバスタチン(ＢＡＹＣＯＬＴＭ)、フルバスタチン(ＬＥＳＣＯＬＴＭ)、アトルバスタチン(ＬＩＰＩＴＯＲＴＭ)、ロバスタチン(ＭＥＶＡＣＯＲＴＭ)、プラバスタチン(ＰＲＡＶＡＣＨＯＬＴＭ)およびシンバスタチン(ＺＯＣＯＲＴＭ)を含む)、エストラジオール、テストステロン(場合によって高用量；Stuve 等 Neurology 8:290-301 (2002))、アンドロゲン、ホルモン補充療法、ＴＮＦインヒビター、これらは、疲労又は症候群の他の症状を治療する際に少なくとも有用であるものである、ＤＭＡＲＤ、例えば上記のものを含む抗マラリア剤、ＮＳＡＩＤ、血漿分離交換法、レボチロキシン、シクロスポリンＡ、ソマタスタチン類似体、サイトカイン、抗サイトカインアンタゴニスト又は抗体、代謝拮抗物質、免疫抑制剤、リハビリ手術、放射性ヨード、甲状腺除去、ＢＡＦＦアンタゴニスト、例えばＢＡＦＦ又はＢＲ３抗体ないしはイムノアドヘシン抗ＣＤ４０レセプター又は抗ＣＤ４０リガンド(ＣＤ１５４)、抗ＩＬ-６レセプターアンタゴニスト／抗体、他のＢ細胞表面アンタゴニスト又は抗体、例えばリツキシマブを有するヒト化２Ｈ７又は他のヒト化ないしはヒトＣＤ２０抗体などがある。このような付加的な医薬には、遺伝子治療、例えば遺伝子導入がシェーグレン症候群によって傷害された唾液腺を修復するために患者の頭頸部癌治療のためのヒト遺伝子導入研究などの他方式の治療も含まれる。
【００８２】
このような医薬のより具体的な例として、例えば渇きの症状を和らげるための点眼のような水分補充療法化学療法剤、細胞障害性剤、抗インテグリン、γグロブリン、抗ＣＤ４、クラドリビン、副腎皮質ステロイド、ＭＭＦ、シクロスポリン、スタチンクラスのコレステロール低下薬、エストラジオール、テストステロン、アンドロゲン、ホルモン補充薬剤、ＴＮＦインヒビター、ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ(例えば筋骨格症状を治療するためのもの)、レボチロキシン、シクロスポリンＡ、ソマタスタチン類似体、サイトカインアンタゴニスト又はサイトカインレセプターアンタゴニスト、代謝拮抗物質、抗マラリア剤、ＢＡＦＦ抗体又はＢＲ３抗体などのＢＡＦＦアンタゴニスト、特にＢＡＦＦ抗体、免疫抑制剤および他のＢ細胞表面マーカ抗体、例えばリツキシマブおよびヒト化２Ｈ７の組合せ又は他のヒト化ＣＤ２０抗体などがある。
【００８３】
より好適な医薬は、化学療法剤、免疫抑制剤、ＢＡＦＦアンタゴニスト、例としてＢＡＦＦ又はＢＲ３抗体、ＤＭＡＲＤ、水分補充療法、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、ＮＳＡＩＤ、サイトカインアンタゴニスト、分泌アゴニスト又はホルモン、又はその組合せ、より好ましくはステロイド、口渇又は乾燥した眼のための分泌アゴニスト、ＮＳＡＩＤ、又は免疫抑制剤、又はこれらの組合せである。抗マラリア剤のようなＤＭＡＲＤは、例えば関節痛、皮膚発疹および体毛損失の軽減に有用でありうる。副腎皮質ステロイドなどのステロイド、例えばプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン又はデキサメサゾンを含むステロイドは、例えば、より重度な合併症、例えば血管炎又は神経系併発を有する被検体や、臓器を脅かす疾患(例えばＮＳＡＩＤＳや抗マラリア剤が失敗した場合)を有する被検体に必要である場合もある。分泌アゴニスト、例としてＳＡＬＡＧＥＮ(登録商標)塩酸ピロカルピン、ＥＶＯＸＡＣ(登録商標)  セビメリン、又はブロムヘキシン又はその薬剤的な塩類は、口渇の治療をするための第二医薬として有用であり、例えばジクアファゾル、ＲＥＦＲＥＳＨ  ＥＮＤＵＲＡ(登録商標)潤滑油点眼、セビメリン、システアミン点眼およびシクロスポリン眼用エマルジョンは眼の乾燥を治療するために有用である。加えて、ＮＳＡＩＤは、例えば、関節痛、腫脹、筋肉の痛み、熱の軽減のために有用で、アスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、インドメタシンおよびトルメチンなどがある。免疫抑制剤は、例えば、重大な器官併発を有する非常に活発な疾患に必要であり、シクロホスファミド(ＣＹＴＯＸＡＮ(登録商標))、クロランブシル、アザチオプリン(ＩＭＵＲＡＮ(登録商標))およびメトトレキセートなどの薬剤が含まれる。ＢＡＦＦアンタゴニストは、有効性のためのＣＤ２０抗体との併用に有用でありうる。
【００８４】
ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ、およびより重度の合併症には、副腎皮質ステロイド、化学療法剤、免疫抑制剤、細胞毒性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト又はホルモン、より好適にはＮＳＡＩＤ、副腎皮質ステロイド又は免疫抑制剤が好ましい。第二の医薬としては抗マラリア剤単独ないしは他の第二医薬との併用も好ましい。
具体的に好適な一実施態様では、第二ないしは第三の医薬はステロイド、例えば副腎皮質ステロイドであるか、これらを含むものであり、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン又はデキサメサゾンが好ましい。このようなステロイドは、ＣＤ２０抗体がステロイドで治療された患者に投与されない場合に用いられる量よりも少ない量で投与されることが好ましい。
具体的に好適な他の態様では、第二ないしは第三の医薬は口渇の分泌アゴニストであり、塩酸ピロカルピン、セビメリン又はブロムヘキシン又はその薬剤的な塩類、ないしは眼の乾燥に好適である(例えば、ジクアファゾル、システアミン点眼、ＲＥＦＲＥＳＨ  ＥＮＤＵＲＡ(登録商標)潤滑油点眼、セビメリンおよびシクロスポリン眼用エマルジョン)。
選択的に具体的に好適な実施態様では、第二又は第三の医薬は、ＮＳＡＩＤ、より好ましくはアスピリン、ナプロキセン、イブプロフェン、インドメタシン又はトルメチンである。
なお更なる具体的に好適な態様では、第二又は第三の医薬は、免疫抑制剤、より好ましくはシクロホスファミド、クロランブシル、アザチオプリン又はメトトレキセートである。
【００８５】
これらすべての第二又は第三の医薬は、ＣＤ２０抗体とともに互いにないしはそれら自体で組み合わせて用いてもよく、したがって、本明細書で用いる「第二医薬」又は「第三医薬」なる表現は、それぞれ第一医薬又は第二医薬以外の唯一の医薬であることを意味するものではない。したがって、第二又は第三の医薬は一つの医薬である必要はないが、一つ以上の薬剤からなるか、一つ以上の薬剤を含有する。
本明細書中に記載の第二及び第三の医薬は一般に、同じ用量およびここに示した投与経路またはここで用いられる用量の約１〜９９％量で用いられる。第二又は第三の医薬が多少なりとも用いられる場合、起こりうる副作用を除去するか減少するために、特に抗体の初期用量以降の続く投与にＣＤ２０抗体がない場合よりも少ない量で用いられるのが好ましい。
第二医薬が抗体曝露によって有効量投与される場合、例えば１回の曝露によって、又は１回以上の曝露によって、任意の回数の曝露によって投与されてもよい。一実施態様では、第二医薬は初期曝露によって投与される。他の実施態様では、第二医薬は初期及び第二の曝露によって投与される。より更なる実施態様では、第二医薬はすべての曝露によって投与される。初期曝露の後、プレドニゾン及びシクロフォスファミドなどの副作用を有する薬剤に被検体が曝されることを減少するために、ステロイドなどの薬剤の量を減少するか、用いないのが好ましい。
第二及び／又は第三の医薬の併用投与には、別々の製剤又は単一の製剤を用いた共投与(同時投与)、及び好ましくは両(すべての)活性剤(医薬)が生物学的な活性を同時に示す期間に何れかの順番での連続投与が含まれる。
【００８６】
抗体又はアンタゴニストは任意の好適な方法、例えば非経口的、局所的、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、及び／又は、病巣内投与などによって投与される。非経口的注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下の投与などがある。また、くも膜下腔内投与も考慮される(例えば米国公開公報２００２／０００９４４４, Grillo-Lopez, Aを参照、ＣＤ２０抗体のくも膜下腔デリバリーに関するもの)。加えて、抗体又はアンタゴニストは、例えば低減した抗体又はアンタゴニスト用量のパルス注入によって好適に投与されうる。好ましくは静脈内または皮下的に、より好ましくは静脈内注入によって投与される。
複数回の曝露が供給される場合、それぞれの曝露は同じまたは異なる投与方法を用いて供給されてもよい。一実施態様では、それぞれの曝露は静脈内投与による。他の実施態様では、それぞれの曝露は皮下投与による。更なる他の実施態様では、曝露は静脈内投与および皮下投与の両方による。
一実施態様では、ＣＤ２０抗体は静脈内パルスやボーラスでなくゆっくりとした静脈内注入で投与する。例えば、プレドニゾロン又はメチルプレドニゾロンなどのステロイド(例えば、およそ８０〜１２０ｍｇ静脈内投与、より好ましくはおよそ１００ｍｇ静脈内投与)を任意のＣＤ２０抗体の注入のおよそ３０分前に投与する。例えば、ＣＤ２０抗体は専用ラインを介して注入される。
【００８７】
ＣＤ２０抗体への複数回の曝露の初期用量では、または唯の一用量を伴う曝露の場合の単回用量には、およそ５０ｍｇ／時間の速度で注入が開始されることが好ましい。例えば５０ｍｇ／時間の速度から最高およそ４００ｍｇ／時間までおよそ３０分ずつ上げていってもよい。しかしながら、被検体が注入関連の反応を感じている場合には、注入速度を、現行速度の半分、例えば１００ｍｇ／時間から５０ｍｇ／時間までに、低減するのが好ましい。このような用量のＣＤ２０抗体の注入(例えばおよそ１０００ｍｇの総用量)は、およそ２５５分(４時間１５分)で完了するのが好ましい。場合によっては、被検体は、注入の開始前およそ３０分から６０分に、アセトアミノフェン／パラセタモール(例えばおよそ１ｇ)およびジフェンヒドラミンＨＣｌ(例えばおよそ５０ｍｇ又は同種の薬剤の当量用量)の予防治療を経口で受けることが好ましい。
ＣＤ２０抗体を複数回注入(用量)して総曝露を成す場合、この注入実施態様の第二またはそれ以降のＣＤ２０抗体注入は、初期注入より速い速度で、例えばおよそ１００ｍｇ／時間で開始されるのが好ましい。この速度は、例えばおよそ１００ｍｇ／時間の速度から最高およそ４００ｍｇ／時間までおよそ３０分ずつ上げていってもよい。被検体が注入関連の反応を感じている場合には、注入速度を、現行速度の半分、例えば１００ｍｇ／時間から５０ｍｇ／時間までに、低減するのが好ましい。このような第二またはその後の用量のＣＤ２０抗体の注入(例えばおよそ１０００ｍｇの総用量)は、およそ１９５分(３時間１５分)で完了するのが好ましい。
このような抗体の産生、修飾および製剤化方法については以下の通りである。
【００８８】
ＩＩＩ．抗体の製造
本発明の方法及び製造品は、Ｂ細胞表面上のマーカーに結合する抗体、特にＣＤ２０に結合する抗体を使用又は取り込む。したがって、該抗体の製造方法をここに記載する。
抗体の製造又はスクリーニングのために用いるＣＤ２０抗原は、例として所望のエピトープを含むＣＤ２０ないしは一部の可溶性形態であってもよい。あるいは又は更に、ＣＤ２０をその細胞表面上に発現する細胞を抗体の製造又はスクリーニングに用いることができる。抗体の製造に有用なＣＤ２０の他の形態は当業者に明らかである。
以下は、本発明に従って用いた抗体の製造の例示的技術として記載する。
【００８９】
(i)  ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原とアジュバントを複数回皮下(ｓｃ)又は腹腔内(ｉｐ)注射することにより動物に産生される。免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビターに関連抗原を、二官能性又は誘導体形成剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル(システイン残基による抱合)、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド(リジン残基による)、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又はＲとＲ１が異なったアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲにより抱合させることが有用である。
動物を、例えばタンパク質又はコンジュゲート１００μｇ又は５μｇ(それぞれウサギ又はマウスの場合)を完全フロイントアジュバント３容量と併せ、この溶液を複数部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体に対して免疫化する。１ヶ月後、該動物を、完全フロイントアジュバントに入れた初回量の１／５ないし１／１０のペプチド又はコンジュゲートを用いて複数部位に皮下注射することにより、追加免疫する。７ないし１４日後に動物を採血し、抗体価について血清を検定する。動物は、力価がプラトーに達するまで追加免疫する。好ましくは、動物は、同じ抗原のコンジュゲートであるが、異なったタンパク質にコンジュゲートさせた、及び／又は異なった架橋剤によってコンジュゲートさせたコンジュゲートで追加免疫する。コンジュゲートはまたタンパク融合として組換え細胞培養中で調製することもできる。また、ミョウバンのような凝集化剤が、免疫反応の増強のために好適に使用される。
【００９０】
(ii)  モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を意味する、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、一般にわずかながら存在する突然変異体などのモノクローナル抗体の産生中に生じうる突然変異体を除いて同一及び／又は同じエピトープに結合するものである。よって、「モノクローナル」との修飾詞は、別個又はポリクローナルの抗体の混合物ではなく、抗体の特性を示すものである。
例えば、モノクローナル抗体は、Kohlerら, Nature, 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製でき、又は組換えＤＮＡ法(米国特許第4,816,567号)によって作製することができる。
ハイブリドーマ法においては、マウス又はその他の適当な宿主動物、例えばハムスターを上記したようにして免疫し、免疫化に用いられるタンパク質と特異的に結合する抗体を生産するか又は生産することのできるリンパ球を導き出す。別法として、リンパ球をインビトロで免疫することもできる。次に、リンパ球を、ポリエチレングリコールのような適当な融剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,59-103頁(Academic Press, 1986))。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する一又は複数の物質を好ましくは含む適当な培地に蒔き、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニジンホスホリボシルトランスフェラーゼ(ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ)を欠失するならば、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠失細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含有するであろう(ＨＡＴ培地)。
【００９１】
好ましい骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの生産を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に対して感受性である細胞である。これらの中でも、好ましい骨髄腫株化細胞は、マウス骨髄腫系、例えば、ソーク・インスティテュート・セル・ディストリビューション・センター、San Diego, California USAから入手し得るＭＯＰＣ-２１及びＭＰＣ-１１マウス腫瘍、及びアメリカ培養細胞系統保存機関、Rockville, Maryland USAから入手し得るＳＰ-２又はＸ６３-Ａｇ８-６５３細胞から誘導されたものである。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫株化細胞もまたヒトモノクローナル抗体の産生のために開示されている(Kozbor, J.Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeurら, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,51-63頁(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987))。
ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合検定、例えばラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)又は酵素結合免疫吸着検定(ＥＬＩＳＡ)によって測定する。
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunsonほか, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャッチャード分析法によって測定することができる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が確定された後、該クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。この目的に対して好適な培地には、例えば、Ｄ-ＭＥＭ又はＲＰＭＩ-１６４０培地が包含される。加えて、該ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで増殖させることができる。
【００９２】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ-セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィーのような常套的な免疫グロブリン精製法により、培地、腹水、又は血清から好適に分離される。
モノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、常法を用いて(例えば、マウスの重鎖及び軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより)即座に単離され配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたならば、ＤＮＡを発現ベクター中に入れ、ついでこれを、そうしないと免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中にトランスフェクトし、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体の合成を達成することができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌中での組換え発現に関する概説論文には、Skerraら, Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262(1993)及びPlueckthum, Immunol. Revs., 130:151-188(1992)がある。
【００９３】
更なる実施態様では、抗体又は抗体断片は、McCaffertyら, Nature, 348:552-554 (1990)に記載された技術を使用して産生される抗体ファージライブラリから単離することができる。Clacksonら, Nature, 352:624-628 (1991)及び Marksら, J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991)は、ファージライブラリを使用したマウス及びヒト抗体の単離を記述している。続く刊行物は、鎖混合による高親和性(ｎＭ範囲)のヒト抗体の生産(Marksら, Bio/Technology, 10:779-783(1992))、並びに非常に大きなファージライブラリを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換え(Waterhouseら, Nuc.Acids.Res., 21:2265-2266(1993))を記述している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の分離に対する伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ法に対する実行可能な別法である。
ＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード化配列を、相同的マウス配列に代えて置換することにより(米国特許第４，８１６，５６７号；Morrisonら, Proc.Nat.Acad.Sci.,USA,81:6851(1984))、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部又は一部を共有結合させることで修飾できる。
典型的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインに置換され、又は抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換されて、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位と異なる抗原に対する特異性を有するもう一つの抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作り出す。
【００９４】
(iii)  ヒト化抗体
非ヒト抗体をヒト化する方法は従来からよく知られている。好ましくは、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入されている。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と呼ばれる。ヒト化は、本質的にはヒト抗体の該当する高頻度可変領域配列を置換することによりウィンターと共同研究者の方法(Jonesほか, Nature, 321:522-525 (1986)、Riechmannほか, Nature, 332:323-327 (1988)、Verhoeyenほか, Science, 239:1534-1536(1988))を使用して実施することができる。よって、このような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の該当する配列で置換されたキメラ抗体(米国特許第4,816,567号)である。実際には、ヒト化抗体は、典型的にはいくつかの高頻度可変領域残基及び場合によってはいくらかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。
抗原性を低減するには、ヒト化抗体を生成する際に使用するヒトの軽重両方の可変ドメインの選択が非常に重要である。「ベストフィット法」では、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列を既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングする。次に齧歯動物のものと最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワーク領域(ＦＲ)として受け入れる(Simsほか, J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothiaら, J. Mol. Biol., 196:901(1987))。他の方法では、軽又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体全てのコンセンサス配列から誘導される特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用できる(Carterほか, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Prestaほか, J. Immunol., 151:2623(1993))。
【００９５】
更に、抗体を、抗原に対する高親和性や他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化することが重要である。この目標を達成するべく、好ましい方法では、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析工程を経てヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推測三次元立体配座構造を図解し、表示するコンピュータプログラムは購入可能である。これら表示を見ることで、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グログリンの抗原との結合能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、例えば標的抗原に対する親和性が高まるといった、望ましい抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般的に、高頻度可変領域残基は、直接的かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。
【００９６】
(iv)  ヒト抗体
ヒト化のための別法により、ヒト抗体を生産することができる。例えば、内因性の免疫グロブリン産生がなくともヒト抗体の全レパートリーを免疫化することで産生することのできるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作ることが今は可能である。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域(ＪＨ)遺伝子の同型接合除去が内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような生殖系列突然変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子列の転移は、抗原投与時にヒト抗体の産生をもたらす。Jakobovitsら, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90:2551 (1993)；Jakobovitsら, Nature 362:255-258 (1993)；Bruggermanら, Year in Immuno., 7:33 (1993)；米国特許第5,591,669号、同5,589,369号及び同5,545,807号を参照されたい。
【００９７】
あるいは、ファージディスプレイ技術(McCaffertyら, Nature 348：552-553(1990))を、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変(Ｖ)ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産出させるために使用することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３の大きい又は小さいコートタンパク質遺伝子のいずれかにおいてイン-フレームをクローンする。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖のＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択により、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択がなされる。よって、ファージはＢ細胞の特性のいくつかを模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる；例えばJohnson, Kevin S. 及びChiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)を参照のこと。Ｖ-遺伝子セグメントのいくつかの供給源がファージディスプレイのために使用可能である。Clacksonら, Nature, 352：624-628(1991)は、免疫化されたマウス脾臓から得られたＶ遺伝子の小ランダム組合せライブラリーからの抗オキサゾロン抗体の異なった配列を単離した。非免疫化ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構成可能で、抗原(自己抗原を含む)とは異なる配列の抗体を、Marksら, J. Mol. Biol. 222：581-597(1991)、又はGriffithら, EMBO J. 12：725-734(1993)に記載の技術に本質的に従って単離することができる。また、米国特許第5,565,332号及び同5,573,905号を参照のこと。
またヒト抗体は、活性化Ｂ細胞によりインビトロで生産してもよい(例えば米国特許第5,567,610号及び同5,229,275号を参照)。
【００９８】
(v)  抗体断片
抗体断片を生産するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、完全な抗体のタンパク分解性消化を介して誘導されていた(例えば、Morimotoら, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及びBrennanら, Science, 229:81(1985)を参照されたい)。しかし、これらの断片は現在は組換え宿主細胞により直接生産することができる。例えば、抗体断片は上述において検討した抗体ファージライブラリーから分離することができる。別法として、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合してＦ(ａｂ')２断片を形成することができる(Carterら, Bio/Technology 10:163-167(1992))。他のアプローチ法では、Ｆ(ａｂ')２断片を組換え宿主細胞培養から直接分離することができる。抗体断片の生産のための他の方法は当業者には明らかであろう。他の実施態様では、選択抗体は単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦＶ)である。国際公開93/16185；米国特許第5,571,894号；及び米国特許第5,587,458号を参照のこと。また、抗体断片は、例えば米国特許第5,641,870号に記載されているような「直鎖状抗体」であってもよい。このような直線状の断片は単特異的又は二重特異的であってもよい。
【００９９】
(vi)  二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＣＤ２０抗原の２つの異なるエピトープに結合しうる。他のこのような抗体ではＣＤ２０が結合し、更に他方のＢ細胞表面上のマーカーが結合しうる。あるいは、抗ＣＤ２０結合アームは、Ｂ細胞に細胞防御メカニズムを集中させるように、ＦｃγＲＩ(ＣＤ６４)、ＦｃγＲＩＩ(ＣＤ３２)及びＦｃγＲＩＩＩ(ＣＤ１６)等のＩｇＧ(ＦｃγＲ)に対するＦｃレセプター、又はＴ細胞レセプター分子(例えばＣＤ２又はＣＤ３)等の白血球上のトリガー分子に結合するアームと結合しうる。また、二重特異性抗体はＢ細胞に細胞障害剤を局在化するためにも使用されうる。これらの抗体はＣＤ２０結合アーム及び細胞障害剤(例えば、サポリン(saporin)、抗インターフェロン-α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテン)と結合するアームを有する。二重特異性抗体は全長抗体又は抗体断片(例えばＦ(ａｂ')２二重特異性抗体)として調製することができる。
【０１００】
二重特異性抗体を作成する方法は当該分野において既知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は二つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の同時発現に基づき、ここで二つの鎖は異なる特異性を持っている(Millsteinら, Nature, 305:537-539(1983))。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が無作為に取り揃えられているため、これらのハイブリドーマ(四部雑種)は１０個の異なる抗体分子の可能性ある混合物を産生し、そのうちただ一つが正しい二重特異性構造を有する。通常、アフィニティークロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は、かなり煩わしく、生成物収率は低い。同様の方法が国際公報９３／８８２９及びTrauneckerら、EMBO J. 10:3655-3659(1991)に開示されている。
異なったアプローチ法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン(抗原−抗体結合部位)を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているＤＮＡを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。これにより、コンストラクトに使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率をもたらす態様において、三つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率が特に重要性を持たないときは、２または３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０１０１】
このアプローチ法の好適な実施態様では、二重特異性抗体は、第一の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第二の結合特異性を提供する)とからなる。二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖がないと容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、国際公報94/04690に開示されている。二重特異性抗体を産生する更なる詳細については、例えばSureshら, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。
米国特許第5,731,168号に記載された他のアプローチ法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーのパーセントを最大にすることができる。好適な界面は抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖(例えばチロシン又はトリプトファン)と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの(例えばアラニン又はスレオニン)と置き換えることにより第２の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモダイマーのような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。
【０１０２】
二特異性抗体とは架橋抗体や「ヘテロ抱合抗体」を含む。例えば、ヘテロ抱合体の一方の抗体がアビジンと結合し、他方はビオチンと結合していても良い。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせること(米国特許第4,676,980号)及びＨＩＶ感染の治療(国際公報91/00360、国際公報92/200373及び欧州特許第03089号)等の用途が提案されている。ヘテロ抱合抗体は適当な架橋方法によって生成できる。当技術分野においては、適切な架橋剤は周知であり、それらは複数の架橋法と共に米国特許第4,676,980号などに記されている。
抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennanら, Science, 229:81 (1985) は完全な抗体をタンパク分解性に切断してＦ(ａｂ')２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルヒド形成を防止する。産生されたＦａｂ'断片はついでチオニトロベンゾアート(ＴＮＢ)誘導体に転換される。Ｆａｂ'-ＴＮＢ誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ'-チオールに再転換し、他のＦａｂ'-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。
【０１０３】
組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な方法もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生産された。Kostelnyら, J.Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のＦａｂ'部分に結合させられた。抗体ホモダイマーはヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、ついで再酸化させて抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生産に対して使用することができる。Hollingerら, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)により記述された「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするのに十分に短いリンカーにより軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に重鎖可変ドメイン(ＶＨ)を結合してなる。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成させられ、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーを使用する他の二重特異性抗体断片製造方策もまた報告されている。Gruberら, J.Immunol., 152:5368 (1994)を参照されたい。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tuttら J.Immunol. 147:60(1991)。
【０１０４】
ＩＶ．抗体のコンジュゲート(結合)と他の修飾
本明細書中の方法に用いる又は製造品に内包される抗体は場合によって細胞障害性剤と結合させる。例えば国際公報2004/032828に記載のように、(ＣＤ２０)抗体は薬剤とコンジュゲートさせてもよい。
そのような抗体-細胞障害性剤コンジュゲートの生成に有用な化学療法剤は前述している。
また、抗体と一つ以上の小分子毒素のコンジュゲート、例えばカリケアミシン(calicheamicin)、マイタンシン(maytansine)(米国特許第5,208,020号)、トリコテン(trichothene)及びＣＣ１０６５もここにおいて考慮される。本発明の一実施態様では、抗体は、一つ以上のマイタンシン(maytansine)分子(例えば、抗体分子当たり約１から約１０のマイタンシン分子)と共役している。マイタンシンは、例えばＭａｙ-ＳＨ３へ還元されるＭａｙ-ＳＳ-Ｍｅへ変換され、修飾抗体(Chariら，Cancer Research 52:127-131(1992))と反応してマイタンシノイド(maytansinoids)−抗体コンジュゲートを生じる。
【０１０５】
あるいは、抗体は、一つ以上のカリケアマイシン(calicheamicin)分子を包含する。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、サブピコモル濃度で、二重鎖ＤＮＡの割れ目を作ることができる。使用されるであろうカリケアマイシンの構造類似体は、限定されるものではないが、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチルγ１Ｉ、ＰＳＡＧ及びθＩ１(Hinmanら, Cancer Research 53:3336-3342(1993)及びLodeら，Cancer Research 58:2925-2928(1998))を含む。
使用可能な酵素活性毒及びその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖(シュードモナス・アエルギノーサ(Pseudomonas aeruginosa))、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン(sarcin)、アレウライツ・フォルディイ(Aleurites fordii)プロテイン、ジアンシン(dianthin)プロテイン、フィトラッカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)プロテイン(ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ-Ｓ)、モモルディカ・キャランティア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン、サパオナリア(sapaonaria)オフィシナリスインヒビター、ゲロニン(gelonin)、マイトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコセセンス(tricothecenes)が含まれる。例えば、1993年10月28日に公開の国際公開93/21232を参照のこと。
【０１０６】
本発明は、更に、抗体と核酸分解性活性(例えば、リボムクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮＡ分解酵素)を有する化合物との抗体コンジュゲートについて考慮する。
種々の放射性核種が放射性コンジュゲート抗体の生成に利用できる。具体例にはＡｔ211、Ｉ131、Ｉ125、Ｙ90、Ｒｅ186、Ｓｍ153、Ｂｉ212、Ｐ32及びＬｕの放射線各種が含まれる。
抗体と細胞障害剤のコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオール)プロピオナート(ＳＰＤＰ)、スクシインミジル１-４-(Ｎ-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート、イミノチオラン(ＩＴ)、イミドエステル類の二官能性誘導体(例えばジメチルアジピミダートＨＣｌ)、活性エステル類(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド類(例えば、グルタルアルデヒド)、ビス-アジド化合物(例えば、ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)-エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トリエン-２,６-ジイソシアネート)、及び二活性フッ素化合物(例えば、１,５-ジフルオロ-２,４-ジニトロベンゼン)を使用して作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等, Science 238:1098(1987)に記載されているようにして調製することができる。炭素-１４標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレン-トリアミン五酢酸(ＭＸ-ＤＴＰＡ)が抗体に放射性ヌクレオチドをコンジュゲートするためのキレート剤の例である。国際公開94/11026を参照されたい。リンカーは、細胞内で細胞毒性薬剤を放出を容易にする「切断可能なリンカー」でもよい。例えば、酸性の易動性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー(Chari 等 Cancer Research 52: 127-131 (1992))を用いてもよい。
あるいは、抗体及び細胞障害性剤を含んでなる融合タンパク質を、例えば組み換え技術又はペプチド合成で製造してもよい。
【０１０７】
他の実施態様では、腫瘍の事前ターゲティングに利用するために、「レセプター」(例えばストレプトアビジン)に抗体がコンジュゲートされ得、ここで、抗体-レセプターコンジュゲートを患者に投与し、続いて清澄化(clearing)剤を使用し、循環から未結合コンジュゲートを除去し、細胞障害剤(例えば放射性ヌクレオチド)にコンジュゲートする「リガンド」(例えばアビジン)を投与する。
また、本発明の抗体を、プロドラッグ(例えばペプチジル化学療法剤、国際公報81/01145を参照)を活性な抗癌剤に転化させるプロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートさせてもよい。例えば国際公報88/07378及び米国特許第4,975,278号を参照されたい。
そのようなコンジュゲートの酵素成分には、より活性な細胞毒形態に転化するように、プロドラッグに作用し得る任意の酵素が含まれる。
【０１０８】
限定するものではないが、この発明の方法に有用な酵素には、ホスファート含有プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なアルカリ性ホスファターゼ；スルファート含有プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性５-フルオロシトシンを抗癌剤５-フルオロウラシルに転化するのに有用なシトシンデアミナーゼ；プロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン(例えば、カテプシンＢ及びＬ)で、ペプチド含有プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なもの；Ｄ-アミノ酸置換基を含有するプロドラッグの転化に有用なＤ-アラニルカルボキシペプチダーゼ；炭水化物切断酵素、例えばグリコシル化プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なノイラミニダーゼ及びβガラクトシダーゼ；βラクタムで誘導体化された薬剤を遊離の薬剤に転化させるのに有用なβラクタマーゼ；及びペニシリンアミダーゼ、例えばそれぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で、それらのアミン性窒素において誘導体化された薬剤を遊離の薬剤に転化するのに有用なペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼが含まれる。あるいは、「アブザイム」としてもまた公知の酵素活性を有する抗体を、遊離の活性薬剤に本発明のプロドラッグを転化させるために使用することもできる(例えば、Massey, Nature 328:457-458(1987)を参照)。抗体-アブザイムコンジュゲートは、ここで記載されているようにして、腫瘍細胞個体群にアブザイムを送達するために調製することができる。
【０１０９】
この発明の酵素は、当該分野においてよく知られている技術、例えば上で検討したヘテロ二官能性架橋試薬を使用することにより、抗体に共有的に結合させることができる。あるいは、本発明の抗体の少なくとも結合領域を本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な部位に結合せしめてなる融合タンパク質を、当該技術においてよく知られている組換えＤＮＡ技術を使用して作成することができる(例えばNeubergerら, Nature 312:604-608(1984)参照。
抗体の他の修飾がここで検討される。例えば、抗体は、様々な非タンパク質性(nonproteinaceous)のポリマー、例えば、ポリエチレングリコール(ＰＥＧ)、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン類、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマーの1つに結合させてもよい。一以上のＰＥＧ分子と結合しているＦａｂ'等の抗体断片は本発明の実施態様に特に好ましい。
また、ここで開示する抗体はリポソームとして製剤化してもよい。抗体を含むリポソームは、Epstein等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985)；Hwang等, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980)；U.S. Pat. Nos. 4,485,045及び4,544,545；及び１９９７年１０月２３日に公開の国際公報97/38731等に記載されているような当分野において公知の方法によって調製する。循環時間が長いリポソームは、米国特許第5,013,556号に開示されている。
【０１１０】
特に有用なリポソームは、フォスファチジルコリン、コレステロール及びPEG-誘導体ホスファチジルエタノールアミン(PEG-PE)を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成することができる。所望の直径を有するリポソームを回収するために、リポソームを規定のサイズの孔のフィルターに通す。本発明の抗体のＦａｂ’断片を、ジスルフィド相互反応を介してMartin等 J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982)に記載のようにリポソームと抱合させることができる。場合によっては、化学療法剤をリポソーム内に内包させる。Gabizon等 J. National Cancer Inst.81(19)1484 (1989)を参照。
ここで記載のタンパク質又はペプチド抗体のアミノ酸配列の修飾を考察する。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性が改善されることが望ましい。抗体のアミノ酸配列変異体は、適当なヌクレオチド変化を抗体核酸に導入することにより、又はペプチド合成により調製される。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構造物に達するまでなされるが、その最終構造物は所望の特徴を有する。また、アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置の変化など、抗体の翻訳後過程を変更しうる。
【０１１１】
突然変異のための好ましい位置にある抗体の残基又は領域の同定のために有用な方法は、Cunningham及びWells , Science 244: 1081-1085 (1989)に記載されているように「アラニンスキャンニング突然変異誘発」と呼ばれる。ここで、標的残基の残基又は基が同定され(例えば、arg, asp, his, lys,及びglu等の荷電残基)、中性又は負荷電アミノ酸(最も好ましくはアラニン又はポリペプチドアニリン)に置換され、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼす。次いで置換に対する機能的感受性を示すこれらのアミノ酸の位置は、置換部位において又はそれに対して更に又は他の置換を導入することにより精密にされる。即ち、アミノ酸配列変異を導入する部位は予め決定されるが、変異自体の性質は予め決める必要はない。例えば、与えられた部位における性能を分析するために、ａｌａスキャンニング又はランダム突然変異誘発を標的コドン又は領域で実施し、発現された抗体変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【０１１２】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドの長さの範囲のアミノ-及び／又はカルボキシル末端融合物、並びに一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入物を含む。末端挿入物の例は、Ｎ-末端メチオニル残基を持つ抗体又は細胞障害ポリペプチドに融合した抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を向上させる酵素又はポリペプチドの抗体のＮ-又はＣ-末端への融合物を含む。
他の型の変異体はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、抗体分子において少なくとも一つのアミノ酸残基に異なる残基が挿入されている。抗体の置換突然変異について最も関心ある部位は高度可変領域を含むが、ＦＲ交互変化も考慮される。保存的置換は、「好ましい置換」と題して表１に示す。これらの置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表１に「例示的置換」と名前を付けた又はアミノ酸の分類を参照して以下に更に記載するような、より実質的な変化を導入して、生成物をスクリーニングしてよい。
【０１１３】
表１
2008507555.tif 000004
【０１１４】
抗体の生物学的性質における実質的な修飾は、(ａ)置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、(ｂ)標的部位の分子の電荷又は疎水性、又は(ｃ)側鎖の嵩を維持するそれらの効果において実質的に異なる置換を選択することにより達成される。アミノ酸はその側鎖の性質の類似性に応じて分類される( Biochemistry, 第２版., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)中のA. L. Lehninger)：
(１)非極性：Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)
(２)荷電のない極性：Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)
(３)酸性：Asp (D), Glu (E)
(４)塩基性：Lys (K), Arg (R), His(H)
あるいは、天然に生じる残基は共通の側鎖性質に基づいてグループに分類してもよい。
(１)疎水性：ノルロイシン、met、ala、val、leu、ile；
(２)中性の親水性：cys、ser、thr、asn、gln；
(３)酸性：asp、glu；
(４)塩基性：his、lys、arg；
(５)鎖配向に影響する残基：gly、pro；
(６)芳香族：trp、tyr、phe。
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
抗体の適切な配置の維持に関与しない任意のシステイン残基は、一般にセリンで置換し、分子の酸化的安定性を向上させて異常な架橋を防止する。逆に、抗体にシステイン結合を付加して、その安定性を向上させてもよい(特にここでの抗体は抗体断片、例としてＦｖ断片である)。
【０１１５】
特に好ましい型の置換変異体は、親抗体の一又は複数の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的に、さらなる発展のために選択され、得られた変異体は、それらが作製された親抗体と比較して向上した生物学的特性を有している。そのような置換変異体を作製する簡便な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性突然変異である。簡潔に言えば、幾つかの高頻度可変領域部位(例えば６−７部位)を突然変異させて各部位における全ての可能なアミノ置換を生成させる。このように生成された多価抗体は、繊維状ファージ粒子から、各粒子内に充填されたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物としてディスプレイされる。ファージディスプレイ変異体は、ついで、ここに開示されるようなそれらの生物学的活性(例えば、結合親和性)についてスクリーニングされる。修飾のための候補となる高頻度可変領域部位を同定するために、アラニンスキャンニング突然変異誘発を実施し、抗原結合に有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。別法として、又はそれに加えて、抗原-抗体複合体の結晶構造を分析して抗体と抗原の接点を特定するのが有利である場合もある。このような接触残基及び隣接残基は、ここに述べた技術に従う置換の候補である。そのような変異体が生成されると、変異体のパネルにここに記載するようなスクリーニングを施し、一又は複数の関連アッセイにおいて優れた特性を持つ抗体を更なる開発のために選択する。
抗体のアミノ酸変異の他の型は、抗体の元のグリコシル化パターンを変更する。このような変更とは、抗体に見い出される一又は複数の糖鎖部分の欠失、及び／又は抗体に存在しない一又は複数のグリコシル化部位の付加等を含む。
【０１１６】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合の何れかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を意味する。アスパラギン-Ｘ-セリン及びアスパラギン-Ｘ-スレオニン(ここでＸはプロリンを除く任意のアミノ酸)のトリペプチド配列は、アスパラギン側鎖への糖鎖部分の酵素的結合のための認識配列である。従って、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列の何れかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作出される。Ｏ結合グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに、糖類Ｎ-アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの一つが結合することを意味するが、５-ヒドロキシプロリン又は５-ヒドロキシリジンもまた用いられる。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を、それが一又は複数の上述したトリペプチド配列(Ｎ結合グリコシル化部位のもの)を含むように変化させることによって簡便に達成される。該変化は、元の抗体の配列への一又は複数のセリン又はスレオニン残基の付加、又はこれによる置換によってもなされる(Ｏ-結合グリコシル化部位の場合)。
【０１１７】
抗体がＦｃ領域を含有する場合、それに接着する炭水化物を変更してもよい。例えば、抗体のＦｃ領域に接着するフコースを欠損する成熟炭水化物構造の抗体は、米国特許公開出願番号2003/0157108 (Presta, L.)に記載される。米国公開特許2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.)も参照のこと。抗体のＦｃ領域に接着した炭水化物内のＮ-アセチルグルコサミン(ＧｌｃＮＡｃ)を二分する抗体は、国際公報03/011878, Jean-Mairet 等、及び米国特許第6,602,684号, Umana 等に参照されている。抗体のＦｃ領域に接着するオリゴサッカライド内の少なくとも一のガラクトース残基を有する抗体は、国際公報97/30087, Patel 等に報告される。また、抗体のＦｃ領域に接着する変更された炭水化物を有する抗体については、国際公報98/58964 (Raju, S.)及び国際公報99/22764 (Raju, S.)も参照のこと。
【０１１８】
本明細書中の好適なグリコシル化変異形はＦｃ領域を含有し、Ｆｃ領域に接着される炭水化物構造はフコースを欠いている。このような変異形は改善されたＡＤＣＣ機能を有する。場合によって、Ｆｃ領域は、更にＡＤＣＣを改善する一つ以上のアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の位置２９８、３３３および／または３３４の置換(Ｅｕ残基番号付け)を更に含む。「脱フコース化」または「フコース欠失」抗体に関する文献の例には以下のものを含む：米国公開番号2003/0157108；国際公報2000/61739；国際公報2001/29246；米国公開番号2003/0115614；米国公開番号2002/0164328；米国公開番号2004/0093621；米国公開番号2004/0132140；米国公開番号2004/0110704；米国公開番号2004/0110282；米国公開番号2004/0109865；国際公報2003/085119；国際公報2003/084570；国際公報2005/035586；国際公報2005/035778；；国際公報2005/053742；Okazaki 等 J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；およびYamane-Ohnuki 等 Biotech. Bioeng.87: 614 (2004)。脱フコース化抗体を産生する細胞株の例として、タンパク質フコース化欠失Lec13 CHO細胞 (Ripka 等 Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国公開番号2003/0157108, Presta, L；および国際公報2004/056312, Adams 等, 特に実施例１１)、およびノックアウト細胞株、例としてα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、FUT8,-ノックアウトCHO細胞 (Yamane-Ohnuki 等 Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004))などがある。
【０１１９】
抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、この分野で知られた種々の方法によって調製される。これらの方法は、限定するものではないが、天然源からの単離(天然に生じるアミノ酸配列変異体の場合)又は初期に調製された抗体の変異体又は非変異体のオリゴヌクレオチド媒介(又は部位特異的)突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、及びカセット突然変異誘発による調製を含む。
エフェクター機能に関して、例えば抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞毒性(ＡＤＣＣ)及び／又は補体依存性細胞毒性(ＣＤＣ)を向上させるために、本発明の抗体を修飾することが望ましい。このことは、抗体のＦｃ領域に一又は複数のアミノ酸修飾を導入することで達成される。あるいはまたは加えて、Ｆｃ領域にシステイン残基を導入することによってこの領域での鎖間のジスルフィド結合形成が起こりうる。故に、生成されたホモ二量体抗体は内部移行能を向上および／または補体媒介性細胞障害およびＡＤＣＣを増強する。Caron等, J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) およびShopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)を参照。抗腫瘍活性が亢進されたホモ二量体抗体もまた、Wolff ら Cancer Research 53:2560-2565 (1993)に記載されているような異種性二機能性交差結合を用いて調製されうる。または、抗体を二重のＦｃ領域を持つように操作して、それによって補体媒介性溶解およびＡＤＣＣ能を亢進した。StevensonらAnti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)を参照。
【０１２０】
国際公報00/42072 (Presta, L.)は、抗体がそのＦｃ領域内にアミノ酸置換を含有する場合のヒトエフェクター細胞の存在下で改善されたＡＤＣＣ機能を有する抗体を述べる。好ましくは、改善されたＡＤＣＣを有する抗体はＦｃ領域内の位置２９８、３３３及び／又は３３４に置換を有する。好ましくは、変更されたＦｃ領域は、それらの位置のうちの１、２又は３つに置換を含有する又はそれらからなるヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。
変更したＣ１ｑ結合及び／又はＣＤＣを有する抗体については、国際公報99/51642、米国特許第6,194,551号B1、米国特許第6,242,195号B1、米国特許第6,528,624号B1及び米国特許第6,538,124号 (Idusogie 等)に記載される。抗体は、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２６、３２７、３２９、３１３、３３３及び／又は３３４の一以上にアミノ酸置換を含有する。
抗体の血清半減期を延長するために、例として米国特許第5739277号に記載されているように抗体(特に抗体断片)内にサルベージレセプター結合エピトープを組み込む方法がある。ここで用いる、「サルベージレセプター結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期延長に関与するＩｇＧ分子(例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４)のＦｃ領域のエピトープを表す。また、Ｆｃ領域内に置換を有し、血清半減期が延長された抗体は国際公報00/42072(Presta, L.)に記載される。
３つ以上(好ましくは４つ)の機能的抗原結合部位を有する遺伝的に操作した抗体もまた考慮される(米国公開番号2002/0004587 A1, Miller 等)。
【０１２１】
Ｖ．治療的剤形
本発明に関連して使用される抗体の治療的剤形は、所望の純度を有する抗体を選択的に薬剤的許容可能な担体、賦形剤、安定剤と混合して凍結乾燥の剤形または液状溶液の形態の貯蔵に適するものである(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))。許容可能な担体、賦形剤、又は安定化剤は、用いられる用量及び濃度で受容者に非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤(オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンズアルコニウムクロライド；ベンズエトニウムクロライド；フェノール；ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３-ペンタノール；及びｍ-クレゾールなど)；低分子量(約１０残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体(例えば、Ｚｎ-タンパク質錯体)又はTWEENTM、PLURONICSTM、またはポリエチレングリコール(ＰＥＧ)等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１２２】
例示的抗ＣＤ２０抗体の剤形は国際公報98/56418に記載されており、出典明記により特別に本明細書中に組み込まれる。この公報は、２−８℃で２年間の最小限の貯蔵期間を持つように、リツキシマブ４０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍＭ酢酸塩、１５０ｍＭトレハロース、０．９％ベンジルアルコール、及び０．０２％ポリソルベート２０, ｐＨ５．０を含む液状複数回用量の剤形である。目的の他の抗ＣＤ２０剤形は、リツキシマブ１０ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム９．０ｍｇ／ｍＬ、クエン酸ナトリウム二水和物７．３５ｍｇ／ｍＬ、ポリソルベート８０ ０．７ｍｇ／ｍＬ、および注入用の滅菌水を含むｐＨ  ６．５のものである。
凍結乾燥剤形は米国特許第６２６７９５８(Andya 等)に記載されるように、皮下的投与に適する。そのような凍結乾燥剤形は適当な希釈剤で高いタンパク質濃度に再編成されるかもしれない、また再編成された剤形はここで治療される哺乳動物に皮下注射されうる。
また、抗体又はアンタゴニストの結晶形態も考慮される。例えば米国公開番号2002/0136719A1(Shenoy 等)も参照のこと。
【０１２３】
また、本明細書中の製剤は、必要に応じて、一以上の活性な化合物(上記の第二又は第三の医薬)、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものを含有してもよい。そのような薬剤の種類と有効量は、例えば製剤中に存在する抗体の量、および被検体の臨床的パラメータに依存する。そのような好適な医薬は上記に記載のものである。
また、活性成分は、例としてコアセルべーション技術または界面重合化により調製したマイクロカプセル、例として、個々のコロイド状のドラッグデリバリーシステム(例として、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル)またはマクロエマルジョン中の、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ-(メチルメタサイクリン)マイクロカプセル中に包まれているかもしれない。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
持続性徐放剤が調製される。持続性徐放剤の好適な例は、抗体を含む固形疎水性ポリマーの準透過性基質を含むものであり、基質は、造形品、例としてフィルム、またはマイクロカプセルの形である。持続性徐放基質の例として、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2ヒドロキシエチル-メタクリレート)、またはポリ(ビニルアルコール))、ポリ乳酸(米国特許第3773919号), L-グルタミン酸およびエチルＬグルタミン酸の共重合体、非分解性のエチレンビニール酢酸塩、分解性の乳酸グリコール酸共重合体、例としてLUPRON DEPOTTM(乳酸-グリコール酸共重合体およびロイプロリド酢酸塩で構成された注入可能ミクロスフェア)、およびポリD-(-)-3ヒドロキシブチリン酸を含む。
インビボ投与に用いる剤形は無菌でなければならない。これは滅菌濾過膜を通す濾過によって容易く達成できる。
【０１２４】
ＶＩ．製造品
本発明の他の実施態様では、前述したシェーグレン症候群の治療に有用な物質を含有する製造品が提供される。
一態様では、製造品は、(ａ) Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニスト(例えばＣＤ２０抗体を含む結合する抗体)を具備する容器(好ましくはアンタゴニスト又は抗体と製薬的に受容可能な担体又は希釈剤を具備する容器)；(ｂ) 抗マラリア剤を具備する容器(好ましくは抗マラリア剤と製薬的に受容可能な担体又は希釈剤を具備する容器)；及び(ｃ) 被検体のシェーグレン症候群を治療するための指示を有するパッケージ挿入物、を含んでなる製造品であって、該指示が視覚的類似尺度において乾燥、疲労および関節痛のうちの２つ以上の基準に対して少なくともおよそ３０％の改善が得られるために有効な抗体又はアンタゴニストと抗マラリア剤の患者への投与量を示すものである。
好適な実施態様では、本明細書中の製造品は、前記アンタゴニスト又は抗体が第一医薬であり、前記抗マラリア剤が第二医薬である場合に、さらに第三医薬を具備する容器を含んでなり、該製造品は有効量の第三医薬で患者を治療するための指示書をパッケージ挿入物に具備する。第三医薬は上記の何れかのものでよく、第三医薬の例は化学療法剤、免疫抑制剤、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト又はホルモンである。好適な第三医薬は上記のものであり、ステロイドが最も好適である。
【０１２５】
他の態様では、製造品は、(ａ) Ｂ細胞表面マーカーに結合する抗体(例えばＣＤ２０抗体)を具備する容器(好ましくは抗体と製薬的に受容可能な担体又は希釈剤を具備する容器)；及び(ｂ) 被検体のシェーグレン症候群を治療するための指示を有するパッケージ挿入物、を含んでなる製造品であって、該指示が初回抗体曝露の後に第二抗体曝露を供給するために有効な抗体の被検体への投与量を示し、該第二の曝露が該初期曝露からおよそ１６から５４週までに供給されないものである。
好適にはそのようなパッケージ挿入物は被検体のシェーグレン症候群を治療するための指示書を提供するものであり、該指示書は、およそ０．５から４グラムの初回抗体曝露の後におよそ０．５から４グラムの第二抗体曝露が供給されることを含み、該第二の曝露が初回曝露からおよそ１６から５４週までに供給されず、各々の抗体曝露がおよそ１から４回の抗体用量として、より好ましくは単回抗体用量として又は２ないしは３回の複数回抗体用量として被検体に供給されるものである。
【０１２６】
本発明の態様の好適な実施態様では、本明細書中の製造品は、前記ＣＤ２０抗体が第一医薬である場合に、さらに第二医薬を具備する容器を含んでなり、該製造品はさらに有効量の第二医薬で患者を治療するための指示書をパッケージ挿入物に具備する。第二医薬は上記の何れかのものでよく、第二医薬の例は化学療法剤、免疫抑制剤、細胞障害性剤、インテグリンアンタゴニスト、サイトカインアンタゴニスト又はホルモンであり、抗マラリア剤が最も好ましい。本発明の態様の他の好適な実施態様では、本明細書中の製造品はさらに、第三の医薬と第三医薬で被検体を治療するための指示書を有するパッケージ挿入物を具備する容器を含んでなる。好ましくは、そのような第三医薬は容器のものであり、ステロイドが最も好ましい。
すべての態様において、パッケージ挿入物は容器上にあるないしは容器に付属するものである。適切な容器には、例えばボトル、ガラス瓶、シリンジ等が含まれる。容器はガラス又はプラスチックのような様々な材料で形成されうる。容器はシェーグレン症候群の治療に有効な組成物を収容しており、滅菌した出入口を有している(例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパーを具備する静脈溶液用のバック又はガラス瓶であってよい)。組成物中の少なくとも１つの活性剤はアゴニスト又は抗体である。ラベル又はパッケージ挿入物には、供給されるアンタゴニスト又は抗体と任意の他の薬剤の用量と間隔に関する特定のガイダンスと共に、組成物が治療に好適な患者又は被検体のシェーグレン症候群を治療するために使用されることが示されている。更に、製造品は、製薬的に許容可能な希釈用バッファー、例えば、注入のための静菌性水(ＢＷＦＩ)、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液及び／又はデキストロース溶液を収容する付加的な容器を具備してもよい。さらに、製造品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、市販及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
更に、以下の限定的でない実施例により本発明を詳述する。本明細書中のすべての引例に開示されていることは出典明記によりここに組み込まれる。
【実施例】
【０１２７】
実施例１  中程度から重度のシェーグレン症候群患者におけるリツキシマブの有効性と安全性の研究
この研究では、全身性疾患の一以上の症状を示す中程度から重度の原発性シェーグレン症候群患者の徴候と症状を急性に治療するための、プラセボと比較した場合のリツキシマブ(MABTHERA(登録商標)／RITUXAN(登録商標))の有効性と安全性の優位性を評価する。ＰｖＲを用いてシェーグレン症候群を原発性シェーグレン症候群患者に分けた。二次性シェーグレン症候群に対する原発性シェーグレン症候群の割合はおよそ１：１であった。原発性シェーグレン症候群の割合がおよそ５６％(９５％ＣＩ、４５％−６４％)であることを示すThomas 等 British J Rheumatol 1998;37:1069-76 (1998)による。
リツキシマブ(１０００ｍｇ×２、静注)を静注ヒドロクロロキノン(ＨＱ)とステロイドによって第１および第１５日目の２回、初期用量で静脈内投与した。この例示的投薬計画をリツキシマブの代わりにリツキシマブプラセボを用いたこと以外は同じ投薬計画と比較した。これは治験のアーム間は１：１無作為であり、１アームはおよそ４８人の患者(総患者数９６)とした。このリツキシマブベースの投薬計画は現在の標準的な治療に挑戦的なものであり、ステロイドとその公知の毒性への患者の曝露を抑え、正味の臨床的利点を向上させた。患者は、３か月目に測定する治験の一次有効性エンドポイント後１年までの追跡調査を有する１年の治験期間を通じて、疾患活動性、付加的な免疫抑制剤の使用、ステロイドの使用および安全性の項目についてモニターした。何れが後になろうとも、リツキシマブの最終投与またはＢ細胞の正常範囲への回復後１２か月までは安全性経過観察を行った。
【０１２８】
第一の目標は、ＶＡＳ(乾燥、疲労、関節痛)の改善と予め特定される副作用がない、一次有効性エンドポイントに到達する患者の割合を測定することである。具体的には、一次エンドポイントは、３つのＶＡＳ尺度(乾燥、疲労、関節痛)のうちの２つにおいて基準より少なくともおよそ３０％上回る改善により定義される。
二次エンドポイントは、唾液シンチグラフィ、Rose Bengal、個体のＶＡＳ、ＴＪＣ、ＳＦ-３６、ＥＳＲおよび高グロブリン血症、並びに浸透物、生検、ＭＲＩおよび抗ＳＳＡ／Ｒｏ／抗ＳＳＢ／Ｌａ抗体の存在のような試験方法である。
上記のプロトコールにおける患者へのリツキシマブ(又はリツキシマブの代わりのヒト化２Ｈ７)の投与により、シェーグレン症候群患者の一以上の徴候、症状又は他の指標がコントロールに対して改善しうることが予測され、期待される。
【０１２９】
第II相：
特に、第II相治験では、３か月目の結果を以下のように予測した：
予測される一次エンドポイント：
・ＶＡＳの応答割合(乾燥、疲労、関節痛の３つのうちの２つ)：予測されるプラセボ応答がおよそ３０％である場合、基準に対して少なくともおよそ３０％、好ましくはおよそ４０から５０％未満、より好ましくはおよそ５０から６０％未満。
予測される二次エンドポイント：
・唾液流量：およそ４０から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(予測されるプラセボ応答はおよそ２５％) 
・シルマー試験：およそ４０から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(予測されるプラセボ応答はおよそ２５％) 
・テンダージョイントカウント(ＴＪＣ)：およそ４０％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(予測されるプラセボ応答はおよそ３０％) 
・ＭＯＳ短型-３６(ＳＦ-３６)：およそ４０％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(予測されるプラセボ応答はおよそ３０％)
・赤血球沈降速度(ＥＳＲ)：およそ４０％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(予測されるプラセボ応答はおよそ２０％)
・高グロブリン血症：およそ３２％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(予測されるプラセボ応答はおよそ２０％)
・試験的なエンドポイント：浸透物／生検＝およそ３０％；Ｒｏ／Ｌａ自己抗体
浸潤反応：
・重度 およそ１％未満−５％未満、非致命的
感染／ＳＡＥ
・感染又はＳＡＥｓの有意でないかあるいは対処可能な増加
ＨＡＣＡ
・臨床関連性の低いおよそ３％未満から１２％未満
【０１３０】
第III相
第III相試験では、６ヵ月目の結果を以下のように予測した：
予測される一次エンドポイント
・ＶＡＳの応答割合(乾燥、疲労、関節痛の３つのうちの２つ)又は第II相からの客観的測定値：予測されるプラセボ応答がおよそ３０％である場合、基準に対して少なくともおよそ３０％、好ましくはおよそ４０から６０％未満。
二次エンドポイント：
・唾液流量：およそ４０から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ２５％) 
・シルマー試験：およそ４０から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ２５％)
・第II相の結果に応じて、さらに以下の１−２：
・唾液シンチグラフィ：およそ４０から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ２５％)
・ＴＪＣ：およそ４０から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ３０％) 
・ＳＦ-３６：およそ４０％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ３０％)
・ＥＳＲ：およそ４０％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ２０％)
・高グロブリン血症：およそ３２％から４０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ２０％)
・Ｒｏｓｅ Ｂｅｎｇａｌ：およそ４０％から５０％未満の患者が臨床反応を有するであろう(プラセボ応答はおよそ２５％)
・試験的なエンドポイント：浸透物／生検／ＭＲＩ＝およそ３０％；Ｒｏ／Ｌａ自己抗体、特定の臓器(例えば血管、肺、腎臓)合併の評価
浸潤反応：
・重度 およそ１％未満−５％未満、非致命的
感染／ＳＡＥ
・感染又はＳＡＥｓの有意でないかあるいは対処可能な増加
ＨＡＣＡ
・臨床関連性の低いおよそ３％未満から１２％未満
【０１３１】
実施例２  中程度から重度のシェーグレン症候群患者におけるリツキシマブの有効性と安全性の再治療研究
この研究では、中程度から重度の原発性シェーグレン症候群の成人被検体において、プラセボと比較した場合のリツキシマブ(MABTHERA(登録商標)／RITUXAN(登録商標))の有効性と安全性の優位性を評価する。リツキシマブ(１０００ｍｇ×３、静注)を静注ヒドロクロロキノン(ＨＱ)とプレドニゾンによって第１、第８および第１５日目の３回、初期用量で静脈内投与し、その後６か月目に１ｇ×２回を静注した。この例示的投薬計画をリツキシマブプラセボ＋等量のＨＱ及びプレドニゾンと比較した。このリツキシマブベースの投薬計画は現在の標準的な治療に挑戦的なものであり、正味の臨床的利点が向上すると思われる。患者は、５０週の治験にわたって、疾患活動性、付加的な免疫抑制剤の使用、疾患の再燃、プレドニゾンの使用および安全性の項目についてモニターした。治験の一次有効性エンドポイントは５０週目とし、患者治療又は他の試験実施に関与しない特定の試験提供者によって有効性測定値を評価した。何れが後になろうとも、リツキシマブの最終投与またはＢ細胞の正常範囲への回復後１２か月までは安全性経過観察を行った。
【０１３２】
第一の目標は、一次有効性エンドポイントに到達し、予め特定される副作用がない患者の割合を測定することである。一次エンドポイントは、ＶＡＳの乾燥、疲労及び関節痛のうちの２つ以上において被検体の基準より少なくともおよそ３０％上回る改善が得られることである。この治験の使用のための、所望の好適な第II及び第III相一次及び二次エンドポイントについては実施例１を参照のこと。
治験アームは、まず第０日目に１０００ｍｇのリツキシマブ／プラセボの静注、第８日目に２回目の注入、第１５日目に３回目の注入を受けた。また、これら被検体は、第３及び第１８日目にプレドニゾンとＨＱ(７５０ｍｇ／ｍ２)の静注の２回の初回用量を投与された。すべての被検体は、第２４週及び第２６週の１４日間に分けて、２回目の１０００ｍｇのリツキシマブ／プラセボ静注が投与された。
Ｂ細胞数(ＣＤ１９)は、基準値、リツキシマブ／プラセボ注入治療の終わり、及び治験の全期間にわたって４週間毎に評価した。すべてのＢ細胞の計測は治験提供者帰属の中央研究所で行った。Ｂ細胞枯渇は、５ ＣＤ１９＋Ｂ細胞／μｌ以下、又はスクリーニングの基準値からＣＤ１９＋Ｂ細胞の９５％以上の枯渇とする。５０週の終わりに、プラセボリツキシマブを投与された被検体又は活性なリツキシマブを投与されたがＢ細胞回復を示した被検体を完全な治験参加者とした。リツキシマブを投与されたがＢ細胞の回復を示さなかった被検体は、何れが先かにかかわらず最後のリツキシマブ投与後又はＢ細胞回復まで１２か月間追跡調査した。被検体にプラセボとリツキシマブの何れを投与したかでなく、追跡調査の継続が必要かどうかを知らせる。
【０１３３】
第５０週目に予め予測される副作用がなく、一次エンドポイントの臨床応答を達成した被検体に、第１４及び第１７か月目にシクロフォスファミド又はプラセボ静注ＨＱを投与した。中断した被検体を含め、すべての被検体は、最後のリツキシマブ／プラセボ注入後又はＢ細胞数の回復まで５０週間観察される。
この治験の一次結果はリツキシマブで有効かつ安全に再治療されうる被検体の割合を決定することである。
１０００ｍｇ用量のリツキシマブ又はプラセボ等量を、第０、第８及び第１５日目、及び２４週目及び２６週目に静注した。基準の免疫抑制治療の際に疾患を新規に発症した被検体又は再燃した被検体を登録した。基準の免疫抑制剤には、抗マラリア剤、プレドニゾン、ヒドロキシクロロキン、メトトレキセート、アザチオプリン又はＭＭＦが含まれる。ＭＴＸ、ＡＺＡ又はＭＭＦなどの基準の医薬は過剰な免疫抑制を防止するために治験開始時に中止した。登録前の３か月以内にシクロフォスファミド治療を受けた被検体は除外した。
【０１３４】
上記のプロトコールで被検体にリツキシマブ又はヒト化２Ｈ７を投与することによって、コントロールを比較してシェーグレン症候群の徴候、症状又は他の指標の一以上が改善することが予測され、期待される。また、およそ４８−５４週に、さらに２ｇ用量のＣＤ２０抗体を一度に、あるいは１グラム量でおよそ１４−１６日に分散して投与すると、プレドニゾン及び／又は他の免疫抑制剤の有無にかかわらず、２年目にシェーグレン症候群治療の効果がみられる。したがって、ＣＤ２０抗体は、およそ２週間の期間に初回投与し、およそ４−８か月目に更なる治療をし、その後初回治療からおよそ１年に更なる治療をし(何れか一投与時から測定したもの)、初回治療からおよそ２年目に治療し、成功すると思われるのは、各治療時にはおよそ１グラム×２−４用量を、一度に、週ごとに、又はおよそ隔週で、およそ２から４週にわたって投与した。この再治療プロトコールは、副作用がほとんどないか全くない何年もの間成功裏に使用されうる。
【０１３５】
実施例３  中程度から重度の全身性シェーグレン症候群被検体におけるリツキシマブの有効性と安全性を評価するための再治療研究
この研究では、第II／III相治験に登録される中程度から重度の原発性シェーグレン症候群の被検体において、プラセボと比較した場合のプレドニゾン及びＨＱに添加したリツキシマブ(MABTHERA(登録商標)／RITUXAN(登録商標))の有効性と安全性を評価する。第２週目に被検体を無作為に抽出してリツキシマブとＨＱとプレドニゾン又はプラセボを投与した。患者は、５０週の治験にわたって、疾患活動性、付加的な免疫抑制剤の使用、疾患の再燃、プレドニゾンの使用および安全性の項目についてモニターした。治験の一次有効性エンドポイントは５０週目とし、患者治療又は他の試験実施に関与しない特定の試験提供者によって有効性測定値を評価した。何れが後になろうとも、リツキシマブの最終投与またはＢ細胞の正常範囲への回復後１２か月までは安全性経過観察を行った。
【０１３６】
第一の目標は、５０週にわたって、シェーグレン症候群被検体の徴候、症状又は他の指標を改善する、プラセボと比較した場合のリツキシマブの有効性を調査することである。この治験の使用のための、所望の好適な第II及び第III相一次及び二次エンドポイントについては実施例１を参照のこと。
同意の得られた被検体は、適正を決定するために１４日間継続するスクリーニングに参加させた。被検体は、２８日間、０．４ｍｇ／ｋｇ／日から１．０ｍｇ／ｋｇ／日の経口プレドニゾンで治療した。適正のある被検体を１：１の比に無作為に分け、５０週の治験期間及び観察期間に、リツキシマブ１０００ｍｇ×２回静注(第１及び第１５日目)に加えてプレドニゾンとＨＱを投与した。第０日目に初回リツキシマブ／プラセボ注入をし、第１５日目±１日に２回目の注入を行った。毒性が起こらない限り、免疫抑制剤の変更を許し、メディカルモニターに先んじて免疫抑制剤の減量の必要性を検討した。疾患活動性が増加しないすべての被検体には、リツキシマブ又はプラセボ注入治療は第２４週及び第２６週に行い、２回の隔週用量で行った。リツキシマブ治療の過程は最短で１６週とした。
【０１３７】
患者は隔月で１２か月間評価した。Ｂ細胞数は、基準値、リツキシマブ／プラセボ注入治療の終わり、及び治験／観察の全期間にわたって４週間毎に連続して評価した。すべてのＢ細胞の計測は中央研究所で行い、実施者にＢ細胞数はふせた。Ｂ細胞枯渇は、５ ＣＤ１９＋Ｂ細胞／μｌ以下、又はスクリーニングの基準値からＣＤ１９＋Ｂ細胞の９５％以上の枯渇とする。５０週の終わりに、リツキシマブプラセボを投与された被検体又は活性なリツキシマブを投与されたがＢ細胞回復を示した被検体を完全な治験参加者とした。リツキシマブを投与されたが５０週でＢ細胞の回復を示さなかった被検体は、何れが先かにかかわらず最後のリツキシマブ投与後又はＢ細胞回復まで６か月間追跡調査した。一次有効性結果の測定は、曲線−５０週目のＢＩＬＡＧスコアの基準で示される時間調整領域である。
１０００ｍｇ用量のリツキシマブ又はプラセボ等量を、第０及び第１５日目に静注した。治験実施者は適切なリツキシマブの投与方法について訓練している。被検体は、調査者の判断で、特に初回注入時には観察のために入院させた。厳重な監視下でリツキシマブを投与し、十分な緊急蘇生施設がすぐに利用可能となるようにした。
【０１３８】
上記のプロトコールで被検体にリツキシマブ又はヒト化２Ｈ７を投与することによって、コントロールを比較してシェーグレン症候群の徴候、症状又は他の指標の一以上が改善することが予測され、期待される。また、およそ４８−５４週に、さらに２ｇ用量のＣＤ２０抗体を一度に、あるいは１グラム量でおよそ１４−１６日に分散して投与すると、プレドニゾン及び／又は他の免疫抑制剤の有無にかかわらず、２年目にシェーグレン症候群治療の効果がみられる。したがって、ＣＤ２０抗体は、およそ２週間の期間に初回投与し、およそ４−８か月目に更なる治療をし、その後初回治療からおよそ１年に更なる治療をし(何れか一投与時から測定したもの)、初回治療からおよそ２年目に治療し、成功すると思われるのは、各治療時にはおよそ１グラム×２−４用量を、一度に、週ごとに、又はおよそ隔週で、およそ２から４週にわたって投与した。この再治療プロトコールは、副作用がほとんどないか全くなく何年もの間成功裏に使用されうる。
加えて、ＣＤ２０抗体は軽度の全身性原発性シェーグレン症候群患者などの重度でない症状を有する患者を治療するために有効性があると思われる。この一次エンドポイントはＶＡＳの疲労、慢性痛又は乾燥の一以上の基準を少なくとも３０％上回る改善であり、及び／又は、患者は治療前にヒドロキシクロロキン及び／又はステロイドなどの医薬を併用していない、及び／又は、ＣＤ２０抗体の治療中にそのような医薬を投与する必要がなかった者である。ＶＡＳ因子の一つのみが有効性を示すために改善される必要がある一次エンドポイントを除き、実施例１に記載の所望の好適な一次及び二次第II及び第III相エンドポイントは治験に用いられる。
【０１３９】
実施例４  中程度から重度の全身性シェーグレン症候群被検体におけるリツキシマブの有効性と安全性を評価するための個々の再治療研究
リツキシマブが６か月ごとでなく１年おきに投与される場合を除き、実施例３と同じ用量、同じプロトコールで、同じタイプの患者がリツキシマブで初回治療を受け、次いで初めに治療されてから１年後にリツキシマブで再治療される場合、実施例３の結果は成功を収めていると思われる。上記のようなあまり重度でない症状の患者についても同じか類似の結果が得られるであろう。
【０１４０】
実施例５  本発明で有用なヒト化２Ｈ７変異体
以下のＣＤＲ配列の１、２、３、４、５又は６を含有するヒト化２Ｈ７抗体が本明細書の目的に有用である：
ＸがＭ又はＬであるＣＤＲＬ１配列RASSSVSYXH(配列番号１８)、例として配列番号４(図１Ａ)、
配列番号５(図１Ａ)のＣＤＲＬ２配列、
ＸがＳ又はＡであるＣＤＲＬ３配列QQWXFNPPT(配列番号１９)、例として配列番号６(図１Ａ)、
配列番号１０のＣＤＲＨ１配列(図１Ｂ)、
ＸがＤ又はＡであるＣＤＲＨ２配列AIYPGNGXTSYNQKFKG(配列番号２０)、例として配列番号１１(図１Ｂ)、及び
位置６のＸがＮ、Ａ、Ｙ、Ｗ又はＤであり、位置７のＸがＳ又はＲである、ＣＤＲＨ３配列VVYYSXXYWYFDV(配列番号２１)、例として配列番号１２(図１Ｂ)。
上記のＣＤＲ配列は一般的に、ヒト可変軽鎖及び可変重鎖のフレームワーク配列、例えばヒト軽鎖κサブグループI(ＶＬκI)の実質的なヒトコンセンサスＦＲ残基、及びヒト重鎖サブグループIII(ＶＨIII)の実質的なヒトコンセンサスＦＲ残基内に存在する。また、国際公報２００４／０５６３１２(Lowman 等)も参照のこと。
【０１４１】
可変重鎖領域はヒトＩｇＧ鎖定常領域に結合されてもよく、該領域は例えば天然配列及び非天然配列の定常領域を含むＩｇＧ１又はＩｇＧ３でもよい。
好適な実施態様では、このような抗体は、配列番号８の可変重鎖ドメイン配列(ｖ１６、図１Ｂに示す)を含有し、場合によっては配列番号２の可変軽鎖ドメイン配列(ｖ１６、図１Ａに示す)を含有し、場合によっては、可変重鎖ドメイン内の位置５６、１００及び／又は１００ａに一又は複数のアミノ酸置換、例えばＤ５６Ａ、Ｎ１００Ａ又はＮ１００Ｙ、及び／又はＳ１００ａＲと、可変軽鎖ドメイン内の位置３２及び／又は９２に一又は複数のアミノ酸置換、例えばＭ３２Ｌ及び／又はＳ９２Ａを含有する。好ましくは、抗体は配列番号１３又は１６の軽鎖アミノ酸配列と、配列番号１４、１５、１７または２２の重鎖アミノ酸配列を含有する完全な抗体であり、この配列番号２２は以下に示す。
好適なヒト化２Ｈ７抗体はオクレリズマブ(ocrelizumab)(Genentech)である。
本明細書中の抗体はさらに、ＡＤＣＣ活性を改善するＦｃ領域内の少なくとも一のアミノ酸置換を含有する、例えば重鎖残基のＥｕ番号付けでいうと、位置２９８、３３３及び３３４にアミノ酸置換、好ましくはＳ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ及びＫ３３４Ａを有するものである。また、米国特許第6,737,056号, L. Prestaを参照のこと。
【０１４２】
これら抗体の何れかは、ＦｃＲｎ結合又は血清半減期を改善するようなＦｃ領域内での少なくとも一の置換、例えば重鎖位置４３４での置換、Ｎ４３４Ｗなどを含有してもよい。また、米国特許第6737056号, L. Prestaを参照のこと。
これら抗体の何れかはさらに、ＣＤＣ活性を亢進するＦｃ領域内での少なくとも一のアミノ酸置換、例えば位置３２６での少なくとも一置換、好ましくはＫ３２６Ａ又はＫ３２６Ｗを含有してもよい。また、米国特許第6528624号(Idusogie 等)を参照のこと。
いくつかの好適なヒト化２Ｈ７変異体は、配列番号２の可変軽鎖ドメインと配列番号８の可変重鎖ドメインを含有するものであり、例として、(存在する場合には)Ｆｃ領域内に置換を有するもの又は有さないもの、配列番号８内に変異Ｎ１００Ａ；又はＤ５６Ａ及びＮ１００Ａ；又はＤ５６Ａ、Ｎ１００Ｙ、及びＳ１００ａＲを含有する可変重鎖ドメインと、配列番号２内に変異Ｍ３２Ｌ；又はＳ９２Ａ；又はＭ３２Ｌ及びＳ９２Ａを含有する可変軽鎖ドメインを有するものなどがある。
２Ｈ７.ｖ１６の可変重鎖ドメイン内のＭ３４は抗体安定性の潜在的源として同定され、新たな置換の潜在的候補である。
【０１４３】
本発明のいくつかの多様な好適な実施態様をまとめると、２Ｈ７.ｖ１６をベースとした突然変異体の可変領域は、以下の表２に挙げる位置のアミノ酸置換を除いてｖ１６のアミノ酸配列を含有する。特に明記しない限り、２Ｈ７変異体はｖ１６と同じ軽鎖を有する。
表２  例示的ヒト化２Ｈ７抗体突然変異体
2008507555.tif 000005
【０１４４】
ある好適なヒト化２Ｈ７は、以下の２Ｈ７.ｖ１６可変軽鎖ドメイン配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR (配列番号2)；
及び以下の２Ｈ７.ｖ１６可変重鎖ドメイン配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS (配列番号8)、
を有する。
ヒト化２Ｈ７.ｖ１６抗体が完全な抗体である場合、以下の軽鎖アミノ酸配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (配列番号13)；
及び配列番号１４又は以下の重鎖アミノ酸配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (配列番号15)、
を有してもよい。
【０１４５】
他の好適なヒト化２Ｈ７抗体は、以下の２Ｈ７.ｖ５１１可変軽鎖ドメイン配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKR (配列番号23)
及び、以下の２Ｈ７.ｖ５１１可変重鎖ドメイン配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSS (配列番号24)、
を有する。
ヒト化２Ｈ７.ｖ１６を有するヒト化２Ｈ７.ｖ５１１の成熟軽鎖および重鎖それぞれを整列する図５および図６を参照のこと。
【０１４６】
ヒト化２Ｈ７.ｖ３１抗体が完全抗体である場合、以下の軽鎖アミノ酸配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (配列番号13)
及び、配列番号１５又は以下の重鎖アミノ酸配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (配列番号22)
を有してもよい。
本明細書中で好適な実施態様では、抗体は配列番号２および８に記載の可変ドメイン配列を含有するヒト化２Ｈ７である。本明細書中で好適な他の実施態様では、抗体は配列番号２３および２４に記載の可変ドメイン配列を含有するヒト化２Ｈ７である。
【図面の簡単な説明】
【０１４７】
【図１Ａ】マウス２Ｈ７の軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)(配列番号１)、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異形の軽鎖可変ドメイン(配列番号２)、及びヒトκ軽鎖サブグループＩの軽鎖可変ドメイン(配列番号３)のアミノ酸配列を比較した配列アラインメント。２Ｈ７及びｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶＬのＣＤＲは以下の通りである：ＣＤＲ１(配列番号４)、ＣＤＲ２(配列番号５)、及びＣＤＲ３(配列番号６)。それぞれの鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は示すように大括弧で囲っており、フレームワーク領域、ＦＲ１-ＦＲ４に隣接している。２Ｈ７はマウス２Ｈ７抗体を示す。２配列間にあるアスタリスクは２配列間で異なる箇所を示す。 Kabat 等, Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に従って残基番号を示し、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、及びｅで挿入を示す。
【図１Ｂ】マウス２Ｈ７の重鎖可変ドメイン(ＶＨ)(配列番号７)、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異形の重鎖可変ドメイン(配列番号８)、及び重鎖サブグループＩＩＩのヒトコンセンサス配列の重鎖可変ドメイン(配列番号９)のアミノ酸配列を比較した配列アラインメント。２Ｈ７及びｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶＨのＣＤＲは以下の通りである：ＣＤＲ１(配列番号１０)、ＣＤＲ２(配列番号１１)、及びＣＤＲ３(配列番号１２)。それぞれの鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は示すように大括弧で囲っており、フレームワーク領域、ＦＲ１-ＦＲ４に隣接している。２Ｈ７はマウス２Ｈ７抗体を示す。２配列間にあるアスタリスクは２配列間で異なる箇所を示す。 Kabat 等, Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に従って残基番号を示し、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、及びｅで挿入を示す。
【図２】成熟２Ｈ７.ｖ１６Ｌ鎖のアミノ酸配列(配列番号１３)を示す。
【図３】成熟２Ｈ７.ｖ１６Ｈ鎖のアミノ酸配列(配列番号１４)を示す。
【図４】成熟２Ｈ７.ｖ３１Ｈ鎖のアミノ酸配列(配列番号１５)を示す。２Ｈ７.ｖ３１のＬ鎖は２Ｈ７.ｖ１６と同じである。
【図５】Kabatの可変ドメイン残基番号付け及びＥｕ定常ドメイン残基番号付けを用いて、成熟２Ｈ７.ｖ１６及び２Ｈ７.ｖ５１１の軽鎖(それぞれ配列番号１３及び１６)のアラインメントを示す。
【図６】Kabatの可変ドメイン残基番号付け及びＥｕ定常ドメイン残基番号付けを用いて、成熟２Ｈ７.ｖ１６及び２Ｈ７.ｖ５１１の重鎖(それぞれ配列番号１４及び１７)のアラインメントを示す。
【図１Ａ】
2008507555.tif 000006
【図１Ｂ】
2008507555.tif 000007
【図２】
2008507555.tif 000008
【図３】
2008507555.tif 000009
【図４】
2008507555.tif 000010
【図５】
2008507555.tif 000011
【図６】
2008507555.tif 000012
【国際調査報告】
2008507555.tif 000013
2008507555.tif 000014
2008507555.tif 000015
2008507555.tif 000016
2008507555.tif 000017
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