(57)【要約】  免疫活性剤の配合方法及びその送達用装置。この方法は、バルク免疫活性剤を提供するステップと、バルク免疫活性剤を接線流入濾過に供して免疫活性剤溶液を提供するステップと、少なくとも１つの賦形剤を免疫活性剤溶液に加えるステップと、免疫活性剤溶液を噴霧乾燥して免疫活性剤生成物を形成するステップとを含み；装置には、複数の微小突起を含む微小突起メンバーであって、それ上に噴霧乾燥した免疫活性剤を含む生体適合性被覆膜が配置された微小突起メンバーが含まれる。好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチン、より好ましくはスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む。
2008507590.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バルク免疫活性剤を提供するステップと、
前記バルク免疫活性剤を接線流入濾過に供して免疫活性剤溶液を提供するステップと、
少なくとも１つの賦形剤を前記免疫活性剤溶液に加えるステップと、
前記免疫活性剤溶液を噴霧乾燥して免疫活性剤生成物を形成するステップと
を含む、免疫活性剤の配合方法。
【請求項２】
前記免疫活性剤溶液を噴霧乾燥するステップを約６０℃〜約２５０℃の範囲の入口温度で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫活性剤溶液を噴霧乾燥するステップを約１００℃〜約２００℃の範囲の入口温度で実施する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫活性剤溶液を噴霧乾燥するステップを約０．５ｍＬ／分〜３０ｍＬ／分の範囲の供給速度で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記免疫活性剤溶液を噴霧乾燥するステップを約２ｍＬ／分〜１０ｍＬ／分の範囲の供給速度で実施する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記免疫活性剤が少なくとも１２カ月の室温安定性を保つ、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記免疫活性剤が少なくとも約７０％の力価を保持する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫活性剤が少なくとも約８０％の力価を保持する、請求項９に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫活性剤がインフルエンザワクチンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫活性剤がスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫活性剤が赤血球凝集素を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫活性剤がウイルス、細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、及び核酸系ワクチンからなる群から選択された抗原を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫活性剤がタンパク質、複合多糖、オリゴ糖、及びリポタンパク質からなる群から選択された抗原を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫活性剤が、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（組換えＰＴワクチン−無細胞性）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）（精製、組換え）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）（精製、組換え）、サイトメガロウイルス（糖タンパク質サブユニット）、Ａ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（糖タンパク質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質Ａ群多糖、毒素サブユニット担体に連結したＭタンパク質／ペプチド、Ｍタンパク質、多価型特異的エピトープ、システインプロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組換えＰｒｅ−ｂＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組換えコアタンパク質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組換え発現させた表面タンパク質及びエピトープ）、ヒトパピローマウイルス（カプシドタンパク質、ＴＡ−ＧＮ組換えタンパク質Ｌ２及びＥ７［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１由来のＭＥＤＩ−５０１組換えＶＬＰ  Ｌ１、４価の組換えＢＬＰ  Ｌ１［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、及びＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６由来］）、在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）（精製細菌表面タンパク質）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（破傷風トキソイドを有する複合糖質）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（合成ペプチド）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、Ｂ髄膜炎菌ＯＭＰと複合した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７と複合した複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０と複合した複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）（表面リポタンパク質）、水痘帯状疱疹（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）ウイルス（サブユニット、糖タンパク質）、並びにコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）（複合リポ多糖）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
免疫活性剤が、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、及びジフテリアワクチンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
免疫応答賦活アジュバントを前記免疫活性剤溶液に加えるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫応答賦活アジュバントが、リン酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウム、藻類グルカン：β−グルカン、コレラ毒素Ｂサブユニット、ＣＲＬ１００５：平均値ｘ＝８及びｙ＝２０５を有するＡＢＡブロックポリマー、γインスリン：直鎖状（枝分かれしていない）β−Ｄ（２−＞１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース、ゲルブ（Ｇｅｒｂｕ）アジュバント：Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロライド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）、イミキモド（１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）：Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート、ＭＴＰ−ＰＥリポソーム：Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）、ムラメチド（Ｍｕｒａｍｅｔｉｄｅ）：Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３、プルラン：β−グルカン、ＱＳ−２１、Ｓ−２８４６３：４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、サルボ（ｓａｌｖｏ）ペプチド：ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１βのペプチド１６３〜１７１）、及びスレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標））：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、インターロイキン−１８、インターロイキン−２、インターロイキン−１２、インターロイキン−１５、ＤＮＡオリゴヌクレオチド、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド、免疫調節性リンホカインをコードしている核酸配列、γインターフェロン、並びにＮＦκＢ調節シグナル伝達タンパク質からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記賦形剤が炭水化物、単糖、二糖、シクロデキストリン、多糖類、デンプン、セルロース、塩、リン酸ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、クエン酸、酒石酸、グリシン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プルロニック、及び界面活性剤からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫活性剤溶液が、非還元糖、多糖類、還元糖、及びシクロデキストリンからなる群から選択された安定化剤をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
複数の角質層穿孔微小突起を有する微小突起メンバーであって、その上に噴霧乾燥した免疫活性剤を含む生体適合性被覆膜が配置された微小突起メンバーを含む、免疫活性剤を経皮送達する装置。
【請求項２１】
前記免疫活性剤がインフルエンザワクチンを含む、請求項２０に記載の装置。
【請求項２２】
前記免疫活性剤がスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む、請求項１３に記載の装置。
【請求項２３】
複数の角質層穿孔微小突起を有する微小突起メンバー、及び噴霧乾燥した免疫活性剤を含む薬剤配合物を受け入れるように適応させたリザバーを含む、免疫活性剤を経皮送達する装置。
【請求項２４】
前記免疫活性剤がインフルエンザワクチンを含む、請求項２３に記載の装置。
【請求項２５】
前記免疫活性剤がスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む、請求項２３に記載の装置。
【請求項２６】
複数の微小突起を有する微小突起メンバーを提供するステップと、
バルク免疫活性剤を提供するステップと、
前記バルク免疫活性剤を接線流入濾過に供して第１の免疫活性剤溶液を提供するステップと、
少なくとも１つの賦形剤を前記第１の免疫活性剤溶液に加えるステップと、
前記第１の免疫活性剤溶液を噴霧乾燥してワクチン生成物を形成するステップと、
前記ワクチン生成物を第１の溶液で再構成して第２の免疫活性剤溶液を形成するステップと、
前記第２の免疫活性剤溶液を前記微小突起メンバーに適用するステップと、
前記被覆微小突起メンバーを対象の皮膚に適用するステップと
を含む、免疫活性剤の送達方法。
【請求項２７】
前記第２の免疫活性剤溶液を含む生体適合性被覆膜を形成するステップをさらに含み、前記第２の免疫活性剤溶液を前記微小突起メンバーに適用するステップが前記微小突起メンバーに前記生体適合性被覆膜を被覆することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記微小突起メンバーがリザバーをさらに含み、前記第２の免疫活性剤溶液を含む薬剤配合物を形成するステップをさらに含み、前記第２の免疫活性剤溶液を前記微小突起メンバーに適用するステップが、前記リザバーに前記薬剤配合物を装填するステップを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記免疫活性剤がインフルエンザワクチンを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫活性剤がスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記被覆微小突起メンバーを対象の皮膚に適用するステップにより約４５μｇの前記免疫活性剤を送達する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記被覆微小突起メンバーを対象の皮膚に適用するステップにより前記免疫活性剤の少なくとも約５０％をＡＰＣが豊富な表皮層に送達する、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年５月１９日出願の米国仮出願第６０／５７２，８６１号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、一般に、免疫活性剤の組成物並びにそのような組成物を形成及び送達する方法に関する。より詳細には、発明は、噴霧乾燥した免疫活性剤、特にインフルエンザワクチンを経皮送達する方法及び配合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
ワクチンなどの活性剤は、最も習慣的には経口又は注射によって投与される。残念ながら、多くの活性剤は、経口投与した場合に吸収されないか、若しくは血流に入る前に負の影響を受け、したがって所望の活性を持たないので、完全に無効であるか、又は有効性が徹底的に低下する。他方で、薬剤を血流中に直接注射することは、投与中に薬剤が改変されないことを保証するが、場合によっては乏しい患者コンプライアンスをもたらす、困難、不便、有痛性且つ不快な手順である。
【０００４】
したがって、経皮送達は、そうでなければ皮下注射又は静脈点滴によって送達しなければならない活性剤、特にワクチンを投与するための、実行可能な代替方法である。本明細書中で使用する単語「経皮」とは、メスを用いた切断若しくは皮下注射針を用いた皮膚の穿孔など、皮膚の実質的な切断若しくは穿通なしに、皮膚を介して活性剤（例えば、薬物などの治療剤若しくはワクチンなどの免疫活性剤）を局所組織又は全身循環系に送達することの総称である。経皮薬剤送達には、受動拡散による送達並びに電気（例えばイオン泳動）及び超音波（例えば音波泳動）などの外部エネルギー源に基づいた送達が含まれる。
【０００５】
より一般的な受動的経皮薬剤送達系には、通常、高濃度の活性剤を含む薬物リザバー（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ、薬物貯め）が含まれる。リザバーは皮膚と接触するように適応しており、これにより、薬剤が患者の皮膚を通って体組織又は血流中へと拡散することが可能となる。
【０００６】
当分野で周知のように、経皮薬物フラックスは、皮膚の状態、薬物分子の大きさ及び物理的／化学的特性、並びに皮膚にわたる濃度勾配に依存する。多くの薬物に対する皮膚の透過率は低いので、経皮送達はその応用が制限されていた。この低い透過率は主に、脂質二重層に囲まれた、ケラチン線維（すなわちケラチノサイト）で満たされた平坦な死滅細胞からなる皮膚の最外層である、角質層に起因している。脂質二重層のこの高度な秩序構造により、角質層に比較的不透過性の特徴が与えられる。
【０００７】
受動的経皮拡散フラックスを増加させるための１つの一般的な方法は、皮膚の最外層（又は複数の皮膚の最外層）を機械的に穿通して皮膚内に微小な経路を作製することを含む。皮膚に経路を作製するための技術及び器具が数多く開発されている。例示的なものは、米国特許第３，９６４，４８２号に開示されている薬物送達器具である。
【０００８】
経皮薬剤送達を増強するために小さな皮膚穿孔要素を用いる他のシステム及び装置は、すべてその全体で本明細書中に参考として組み込まれている米国特許第５，８７９，３２６号、第３，８１４，０９７号、第５，２５０，０２３号、第３，９６４，４８２号、再発行特許第２５，６３７号、並びにＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９６／３７１５５号、ＷＯ９６／３７２５６号、ＷＯ９６／１７６４８号、ＷＯ９７／０３７１８号、ＷＯ９８／１１９３７号、ＷＯ９８／００１９３号、ＷＯ９７／４８４４０号、ＷＯ９７／４８４４１号、ＷＯ９７／４８４４２号、ＷＯ９８／００１９３号、ＷＯ９９／６４５８０号、ＷＯ９８／２８０３７号、ＷＯ９８／２９２９８号、及びＷＯ９８／２９３６５号に開示されている。
【０００９】
開示されているシステム及び装置では、様々な形状及び大きさの穿孔要素を用いて皮膚の最外層（すなわち角質層）を穿孔する。これらの参考文献に開示されている穿孔要素は、一般に、パッド又はシートなどの薄い平坦なメンバーから垂直に伸びる。これらの器具の一部の穿孔要素は非常に小さく、その一部は微小突起の長さが約２５〜４００ミクロンしかなく、微小突起の厚さが約５〜５０ミクロンしかない。これらの小さな穿孔／切断要素は、角質層を通る経皮薬剤送達を増強するために、それに対応した小さな微小スリット／微小切込みを角質層に入れる。
【００１０】
開示されたシステムは、通常、薬剤を保持するためのリザバー、及び器具自体の中空の歯（ｔｉｎｅｓ）などによって薬剤をリザバーから角質層を通って移動させる送達系をさらに含む。このような器具の一例は国際公開公報ＷＯ９３／１７７５４号に開示されており、これは液体薬剤のリザバーを有する。しかし、小さな管状要素を通して皮膚内に液体薬剤を押し通すためには、リザバーを加圧しなければならない。
【００１１】
全体が本明細書中に参考として組み込まれている米国特許出願第１０／０４５，８４２号に開示されているように、物理的なリザバーに含ませる代わりに、送達する活性剤を微小突起上に被覆することも可能である。これにより、別個の物理的なリザバーの必要性、及びリザバー用に薬剤配合物又は薬剤組成物を特に開発する必要性が排除される。
【００１２】
当分野で周知のように、薬剤配合物及び薬剤配合物を微小突起上に被覆する方法は、被覆微小突起を介した経皮送達の重要な要素である。実際、不安定なワクチン又は十分な貯蔵寿命を持たないワクチンを薬剤配合物中で用いた場合、ワクチンは所望の（又は所要の）有効性を有さない可能性があり、多くの場合は有さない。
【００１３】
また、当分野で周知のように、ワクチンなどの生体物質は、貯蔵又は配送用に安定化させるためにしばしば乾燥させられる。しかし、乾燥はしばしば有効性及び／又は活性の低下を引き起こす。凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）又は凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）はこのような損傷を顕著に軽減することが判明しており、冷蔵貯蔵の必要性を取り除くことができる。
【００１４】
凍結乾燥とは、昇華及び脱着によって生成物から水を除去する工程である。加水分解性の分解を受ける製薬化合物は、凍結乾燥により安定性及び貯蔵寿命を改善する手段が提供される。
【００１５】
転記的な凍結乾燥システムには、温度制御された棚を備えた乾燥チャンバ、生成物から除去された水を捕捉するためのコンデンサー、棚及びコンデンサーに冷媒を供給するための冷却システム、チャンバ内の圧力を低下させるための真空システム、並びに乾燥工程を促進するためのコンデンサーが含まれる。ワクチン、タンパク質、ペプチド、及び抗生物質などの多数の活性剤の凍結乾燥が成功している。
【００１６】
有害な副作用なしに多くの微生物及びタンパク質を凍結乾燥に供することができる。したがって、凍結乾燥は、ワクチン、製薬剤、血液画分、及び診断法を乾燥させるために好まれる手段である。例えば、米国特許第３，９９１，１７９号は、インフルエンザワクチンを凍結乾燥及び再構成してもよく、ワクチンは免疫学的活性を維持することを開示している。
【００１７】
同様に、２００４年４月１日出願の同時係属の米国特許出願第１１／０８４，６３１号は、凍結乾燥を含めたインフルエンザワクチンの配合前工程を開示している。また、言及したこの工程は、高濃度のワクチン配合物も中間生成物として提供する。
【００１８】
氷を昇華させたあとに残る多孔性構造により、凍結乾燥した材料は、典型的には容易且つ迅速に再構成される。再水和の際に、安定化した材料は、微小突起上の被覆膜又はリザバー中の薬剤配合物中の含有物のどちらかとして、容易に経皮送達用に配合することができる。
【００１９】
典型的な凍結乾燥サイクルは３つの段階、すなわち（ｉ）凍結、（ｉｉ）一次乾燥及び（ｉｉｉ）二次乾燥からなる。生じる生成物が所望の物理特性及び化学特性を有し、所要の安定性が達成されることを保証するために、乾燥機内の状態を、サイクルを通して変動させる。
【００２０】
しかし、凍結乾燥工程にはいくつかの欠点及び不利点が関連している。例えば、一度に凍結乾燥に供することができる材料の合計量は限られており、全工程は数日間かかる場合がある。したがって、その利点にもかかわらず、凍結乾燥は非常に複雑、高価且つ時間のかかる工程である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
したがって、十分な活性を維持し、損傷を最小限に抑えながらも凍結乾燥より経済的である、安定な免疫活性剤、特にインフルエンザワクチンを配合する方法を提供することが望ましい。
【００２２】
したがって、本発明の目的は、免疫学的又は生物学的に有効であるように十分な活性を保持している安定化した免疫活性剤配合物を提供することである。
【００２３】
本発明の別の目的は、製造の時間及びコストを最小限にする、免疫活性剤の安定化方法を提供することである。
【００２４】
本発明の別の目的は、免疫学的（又は生物学的）に有効な量で容易に経皮投与することができる安定化したインフルエンザワクチンを提供することである。
【００２５】
本発明のさらに別の目的は、安定化した免疫活性剤に特定の粒子特徴を与えることである。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
上記目的並びに以下に言及する目的及び以下で明らかとなる目的によれば、本発明の一実施形態では、免疫活性剤の配合方法は、（ｉ）バルク免疫活性剤を提供するステップと、（ｉｉ）バルク免疫活性剤を接線流入（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ−ｆｌｏｗ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）濾過に供して免疫活性剤溶液を提供するステップと、（ｉｉｉ）少なくとも１つの賦形剤を免疫活性剤溶液に加えるステップと、（ｉｖ）免疫活性剤溶液を噴霧乾燥して免疫活性剤生成物を形成するステップとを含む。
【００２７】
好ましくは、免疫活性剤溶液を約６０℃〜約２５０℃の範囲、より好ましくは約１００℃〜約２００℃の範囲の入口温度で噴霧乾燥する。
【００２８】
また、好ましくは、免疫活性剤溶液を約０．５ｍＬ／分〜３０ｍＬ／分の範囲、より好ましくは約２ｍＬ／分〜１０ｍＬ／分の範囲の供給速度で噴霧乾燥する。
【００２９】
本発明の別の態様では、免疫活性剤は、噴霧乾燥ののち少なくとも１２カ月の室温安定性を保つ。
【００３０】
本発明のさらに別の態様によれば、免疫活性剤は、少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％の力価を保持する。
【００３１】
本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチンを含む。より好ましくは、免疫活性剤はスプリットバリオン（ｓｐｌｉｔ−ｖａｒｉｏｎ）インフルエンザワクチンを含む。さらにより好ましくは、免疫活性剤は赤血球凝集素を含む。
【００３２】
本発明の代替実施形態では、免疫活性剤は、ウイルス及び細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、並びに核酸系ワクチンからなる群から選択された抗原又はワクチンを含む。
【００３３】
適切な免疫活性剤には、それだけには限定されないが、タンパク質、複合多糖、オリゴ糖、及びリポタンパク質の形態の抗原が含まれる。これらサブユニットワクチンには、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（組換えＰＴワクチン−無細胞性）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）（精製、組換え）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）（精製、組換え）、サイトメガロウイルス（糖タンパク質サブユニット）、Ａ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（糖タンパク質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質Ａ群多糖、毒素サブユニット担体に連結したＭタンパク質／ペプチド、Ｍタンパク質、多価型特異的エピトープ、システインプロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組換えＰｒｅ−ｂＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組換えコアタンパク質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組換え発現させた表面タンパク質及びエピトープ）、ヒトパピローマウイルス（カプシドタンパク質、ＴＡ−ＧＮ組換えタンパク質Ｌ２及びＥ７［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１由来のＭＥＤＩ−５０１組換えＶＬＰ  Ｌ１、４価の組換えＢＬＰ  Ｌ１［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、及びＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６由来］）、在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）（精製細菌表面タンパク質）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（破傷風トキソイドを有する複合糖質）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（合成ペプチド）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、Ｂ髄膜炎菌ＯＭＰと複合した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７と複合した複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０と複合した複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）（表面リポタンパク質）、水痘帯状疱疹（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）ウイルス（サブユニット、糖タンパク質）、並びにコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）（複合リポ多糖）が含まれる。
【００３４】
全ウイルス又は全細菌には、それだけには限定されないが、サイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、風疹ウイルス、及び水痘帯状疱疹（ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）などの弱毒化ウイルス又は死滅ウイルス、百日咳菌（ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、破傷風菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、ジフテリア菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、Ａ群連鎖球菌（ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、在郷軍人病菌（ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、ナイセリア髄膜炎（ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、梅毒トレポネーマ（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、及びコレラ菌（ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）などの弱毒化細菌又は死滅細菌、並びにそれらの混合物が含まれる。
【００３５】
抗原を含むいくつかの市販のワクチンも本発明において有用性があり、それだけには限定されないが、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、及びジフテリアワクチンが含まれる。
【００３６】
やはり本発明の方法に従って送達することができる核酸を含むワクチンには、それだけには限定されないが、例えばスーパーコイルプラスミドＤＮＡなどの一本鎖及び二本鎖の核酸；直鎖状プラスミドＤＮＡ；コスミド；細菌人工染色体（ＢＡＣ）；酵母人工染色体（ＹＡＣ）；哺乳動物人工染色体；並びに例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡ分子が含まれる。
【００３７】
ワクチン抗原と一緒にワクチンを構成することができる適切な免疫応答賦活アジュバントには、それだけには限定されないが、リン酸アルミニウムゲル；水酸化アルミニウム；藻類グルカン：β−グルカン；コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５：平均値ｘ＝８及びｙ＝２０５を有するＡＢＡブロックポリマー；γインスリン：直鎖状（枝分かれしていない）β−Ｄ（２−＞１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース；ゲルブ（Ｇｅｒｂｕ）アジュバント：Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロライド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）：Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート；ＭＴＰ−ＰＥリポソーム：Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）；ムラメチド（Ｍｕｒａｍｅｔｉｄｅ）：Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３；プルラン：β−グルカン；ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３：４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；サルボ（ｓａｌｖｏ）ペプチド：ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−βのペプチド１６３〜１７１）；及びスレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標））：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、並びにインターロイキン１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５が含まれる。また、アジュバントには、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドなどのＤＮＡオリゴヌクレオチドも含まれる。さらに、免疫調節性リンホカインをコードしている核酸配列、例えばＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ１０、γインターフェロン、及びＮＦκＢ調節シグナル伝達タンパク質を用いることができる。
【００３８】
適切な賦形剤には、それだけには限定されないが、単糖、二糖、シクロデキストリン、及び多糖類を含めた製薬グレードの炭水化物；デンプン；セルロース；塩（例えば、リン酸ナトリウム又はリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム）；クエン酸；酒石酸；グリシン；低分子量、中分子量又は高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；プルロニック；界面活性剤；並びにそれらの組合せが含まれる。好ましい賦形剤は二糖及び多糖類を含む。
【００３９】
本発明の別の態様によれば、免疫活性剤溶液は、非還元糖、多糖類、還元糖及びシクロデキストリンからなる群から選択された安定化剤をさらに含む。
【００４０】
本発明の方法及び組成物で用いる適切な非還元糖には、例えば、スクロース、トレハロース、スタキオース、又はラフィノースが含まれる。
【００４１】
本発明の方法及び組成物で用いる適切な多糖類には、例えば、デキストラン、可溶性デンプン、デキストリン、及びインスリンが含まれる。
【００４２】
本発明の方法及び組成物で用いる適切な還元糖には、例えば、アピオース、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、ジギトキソース、フコース、クエルシトール、キノボース、ラムノース、アロース、アルトロース、フルクトース、ガラクトース、グルコース、グロース、ハマメロース、イドース、マンノース、タガトースなどの単糖；並びに、例えば、プリメベロース、ビシアノース、ルチノース、シラビオース、セロビオース、ゲンチオビオース、ラクトース、ラクツロース、マルトース、メリビオース、ソホロース、及びツラノースなどの二糖が含まれる。
【００４３】
本発明の方法及び組成物で用いる適切なシクロデキストリンには、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、グルコシル−α−シクロデキストリン、マルトシル−α−シクロデキストリン、グルコシル−β−シクロデキストリン、マルトシル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−α−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、及びスルホブチルエーテル−γ−シクロデキストリンが含まれる。最も好ましい可溶化剤／錯化剤は、β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル７β−シクロデキストリンである。
【００４４】
本発明のさらなる実施形態によれば、免疫活性剤を経皮送達する装置には、角質層を通ってその下にある表皮層、又は表皮層及び真皮層まで穿孔するように適応させた複数の微小突起を含む微小突起メンバーであって、その上に噴霧乾燥した免疫活性剤を含む生体適合性被覆膜が配置された微小突起メンバーを含む。好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチン、より好ましくはスプリットバリオンインフルエンザワクチンが含まれる。
【００４５】
本発明の別の実施形態によれば、免疫活性剤を経皮送達する装置は、複数の微小突起を含む微小突起メンバー及び噴霧乾燥した免疫活性剤を含む薬剤配合物を受け入れるように適応させたリザバーとを含む。好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチン、より好ましくはスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む。
【００４６】
本発明の一実施形態によれば、免疫活性剤の送達方法は、（ｉ）複数の微小突起を有する微小突起メンバーを提供するステップと、（ｉｉ）バルク免疫活性剤を提供するステップと、（ｉｉｉ）バルク免疫活性剤を接線流入濾過に供して第１の免疫活性剤溶液を提供するステップと、（ｉｖ）少なくとも１つの賦形剤（例えばスクロース）を第１の免疫活性剤溶液に加えるステップと、（ｖ）第１の免疫活性剤溶液を噴霧乾燥してワクチン生成物を形成するステップと、（ｖｉ）ワクチン生成物を第１の溶液（例えば水）で再構成して第２の免疫活性剤溶液を形成するステップと、（ｖｉｉ）第２の免疫活性剤溶液を含む生体適合性被覆膜を形成するステップと、（ｖｉｉｉ）微小突起メンバーを生体適合性被覆膜で被覆するステップと、（ｖｉｉｉ）被覆微小突起メンバーを対象の皮膚に適用するステップとを含む。
【００４７】
本発明のさらに別の実施形態によれば、免疫活性剤の送達方法は、（ｉ）複数の微小突起を有する微小突起メンバーと薬剤配合物を受け入れるように適応させたリザバーとを含む経皮送達器具を提供するステップと、（ｉｉ）バルク免疫活性剤を提供するステップと、（ｉｉｉ）バルク免疫活性剤を接線流入濾過に供して第１の免疫活性剤溶液を提供するステップと、（ｉｖ）少なくとも１つの賦形剤（例えばスクロース）を第１の免疫活性剤溶液に加えるステップと、（ｖ）第１の免疫活性剤溶液を噴霧乾燥してワクチン生成物を形成するステップと、（ｖｉ）ワクチン生成物を第１の溶液（例えば水）で再構成して第２の免疫活性剤溶液を形成するステップと、（ｖｉｉ）第２の免疫活性剤溶液を含む薬剤配合物を形成するステップと、（ｖｉｉｉ）リザバーに薬剤配合物を装填するステップと、（ｉｘ）被覆微小突起メンバーを対象の皮膚に適用するステップとを含む。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤は赤血球凝集素を含み、微小突起メンバーを対象の皮膚に施用するステップでは、約４５μｇの赤血球凝集素を送達する。より好ましくは、免疫活性剤の少なくとも約５０％を、ＡＰＣが豊富な表皮層に送達する。
【００４９】
さらなる特徴及び利点は、添付の図面に例示した、以下の本発明の好ましい実施形態のより詳細な説明によって明らかとなり、参照した同様の文字は、一般にすべての図にわたって同じ部分又は要素を指す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
本発明を詳細に説明する前に、具体的に例示した材料、配合物、方法又は構造は当然変化し得るので、本発明はそれらに限定されるべきでないことを理解されたい。したがって、本明細書中に記載したものに類似した又はそれと均等であるいくつかの材料及び方法を、本発明の実施に用いることができるが、好ましい材料及び方法を本明細書中に記載する。
【００５１】
また、本明細書中で使用した用語は、本発明の特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図しないことも理解されたい。
【００５２】
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての専門用語及び科学用語は、本発明が関連する分野の技術者に一般的に理解されるものと同じ意味を持つ。
【００５３】
さらに、本明細書中で引用するすべての出版物、特許及び特許出願は、上記のものでも下記のものでも、その全体を本明細書中に参考として組み込む。
【００５４】
最後に、本明細書中及び添付の特許請求の範囲中で使用する、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、内容から明らかにそうでないと指示されない限りは、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「免疫活性剤」への言及には２つ以上のそのような免疫活性剤が含まれ、「微小突起」への言及には２つ以上のそのような微小突起が含まれる。
【００５５】
定義
本明細書中で使用する用語「経皮」とは、局所治療又は全身治療のための、皮膚内へ且つ／又は皮膚を通った薬剤の送達を意味する。
【００５６】
本明細書中で使用する用語「経皮フラックス」とは、経皮送達の速度を意味する。
【００５７】
本明細書中で使用する用語「同時送達すること」とは、薬剤を送達する前、薬剤の経皮フラックスの前及びその間、薬剤の経皮フラックスの間、薬剤の経皮フラックスの間及びその後、及び／又は薬剤の経皮フラックスの後に、補足の薬剤（又は複数の補足の薬剤）を経皮投与することを意味する。さらに、２つ以上の免疫活性剤を本発明の生体適合性被覆膜中に配合してもよく、これにより異なる免疫活性剤の同時送達がもたらされる。
【００５８】
本明細書中で使用する用語「生物活性剤」とは、活性剤若しくは薬物を含み、治療上有効な量で投与した場合に薬理学的に有効である物質又は混合物の組成物をいう。このような活性剤の例には、それだけには限定されないが、小分子量の化合物、ポリペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸及び多糖類が含まれる。
【００５９】
本明細書中で使用する用語「免疫活性剤」とは、任意且つすべての源由来の抗原及び／若しくは「ワクチン」を含み、免疫学的に有効な量で投与した場合に有益な免疫反応を始動させることができる物質又は混合物の組成物をいう。免疫活性剤の具体例はインフルエンザワクチンである。
【００６０】
免疫活性剤のさらなる例には、それだけには限定されないが、ウイルス及び細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、並びに核酸系ワクチンが含まれる。
【００６１】
適切な免疫活性剤には、それだけには限定されないが、タンパク質、複合多糖、オリゴ糖、及びリポタンパク質の形態の抗原が含まれる。これらサブユニットワクチンには、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（組換えＰＴワクチン−無細胞性）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）（精製、組換え）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）（精製、組換え）、サイトメガロウイルス（糖タンパク質サブユニット）、Ａ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（糖タンパク質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質Ａ群多糖、毒素サブユニット担体に連結したＭタンパク質／ペプチド、Ｍタンパク質、多価型特異的エピトープ、システインプロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組換えＰｒｅ  Ｓ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組換えコアタンパク質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組換え発現させた表面タンパク質及びエピトープ）、ヒトパピローマウイルス（カプシドタンパク質、ＴＡ−ＧＮ組換えタンパク質Ｌ２及びＥ７［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１由来のＭＥＤＩ−５０１組換えＶＬＰ  Ｌ１、４価の組換えＢＬＰ  Ｌ１［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、及びＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６由来］）、在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）（精製細菌表面タンパク質）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（破傷風トキソイドを有する複合糖質）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（合成ペプチド）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、Ｂ髄膜炎菌ＯＭＰと複合した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７と複合した複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０と複合した複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）（表面リポタンパク質）、水痘帯状疱疹（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）ウイルス（サブユニット、糖タンパク質）、並びにコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）（複合リポ多糖）が含まれる。
【００６２】
全ウイルス又は全細菌には、それだけには限定されないが、サイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、風疹ウイルス、及び水痘帯状疱疹（ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）などの弱毒化ウイルス又は死滅ウイルス、百日咳菌（ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、破傷風菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、ジフテリア菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、Ａ群連鎖球菌（ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、在郷軍人病菌（ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、ナイセリア髄膜炎（ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、梅毒トレポネーマ（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、及びコレラ菌（ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）などの弱毒化細菌又は死滅細菌、並びにそれらの混合物が含まれる。
【００６３】
抗原を含むいくつかの市販のワクチンも本発明において有用性があり、それだけには限定されないが、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、及びジフテリアワクチンが含まれる。
【００６４】
やはり本発明の方法に従って送達することができる核酸を含むワクチンには、それだけには限定されないが、例えばスーパーコイルプラスミドＤＮＡなどの一本鎖及び二本鎖の核酸；直鎖状プラスミドＤＮＡ；コスミド；細菌人工染色体（ＢＡＣ）；酵母人工染色体（ＹＡＣ）；哺乳動物人工染色体；及び例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡ分子が含まれる。核酸の大きさは、数千キロ塩基までにすることができる。また、核酸は、タンパク質剤とカップリングさせるか、又は例えばホスホロチオエート部分などの１つ若しくは複数の化学修飾を含むこともできる。
【００６５】
ワクチン抗原と一緒にワクチンを構成することができるに適切な免疫応答賦活アジュバントには、それだけには限定されないが、リン酸アルミニウムゲル；水酸化アルミニウム；藻類グルカン：β−グルカン；コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５：平均値ｘ＝８及びｙ＝２０５を有するＡＢＡブロックポリマー；γインスリン：直鎖状（枝分かれしていない）β−Ｄ（２−＞１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース；ゲルブアジュバント：Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロライド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）：Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート；ＭＴＰ−ＰＥリポソーム：Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）；ムラメチド：Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３；プルラン：β−グルカン；ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３：４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；サルボペプチド：ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１βのペプチド１６３〜１７１）；及びスレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標））：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、並びにインターロイキン１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５が含まれる。また、アジュバントには、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドなどのＤＮＡオリゴヌクレオチドも含まれる。さらに、免疫調節性リンホカインをコードしている核酸配列、例えばＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ１０、γインターフェロン、及びＮＦκＢ調節シグナル伝達タンパク質を用いることができる。
【００６６】
本明細書中で使用する用語「賦形剤」とは、それだけには限定されないが、単糖、二糖、シクロデキストリン、及び多糖類（例えば、デキストロース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン）を含めた製薬グレードの炭水化物；デンプン；セルロース；塩（例えば、リン酸ナトリウム又はリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム）；クエン酸；酒石酸；グリシン；低分子量、中分子量又は高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；プルロニック；界面活性剤；並びにそれらの組合せをいう。
【００６７】
本明細書中で使用する用語「生物学的に有効な量」又は「生物学的に有効な速度」とは、所望の免疫学的なしばしば有益な結果を刺激又は開始するために必要な、免疫活性剤の量又は速度をいう。本発明の被覆膜中に用いた免疫活性剤の量は、所望の免疫学的結果を達成するために必要な免疫活性剤の量を送達するのに必要な量である。実際には、これは、送達する具体的な免疫活性剤、送達部位、並びに免疫活性剤を皮膚組織内に送達する溶解及び放出の速度論に応じて変動する。
【００６８】
当業者には理解されるように、送達する免疫活性剤の用量は、微小突起アレイ（若しくはパッチ）の大きさ、密度などを変えることによっても変更又は操作することができる。
【００６９】
本明細書中で使用する用語「被覆配合物」とは、微小突起及び／若しくはそのアレイを被覆するために用いる、自由に流動する組成物又は混合物を意味し、そしてそれが含まれることを意図する。
【００７０】
本明細書中で使用する用語「生体適合性被覆膜」及び「固体被覆膜」とは、実質的に固体状態の「被覆配合物」を意味し、そしてそれが含まれることを意図する。
【００７１】
本明細書中で使用する用語「微小突起」とは、生きた動物、詳細には哺乳動物、より詳細にはヒトの皮膚の角質層を通ってその下にある表皮層、若しくは表皮層及び真皮層まで穿孔又は切断するように適応させた穿孔要素をいう。
【００７２】
本明細書中で使用する用語「微小突起メンバー」とは、一般に、角質層を穿孔するためのアレイ状に配置された複数の微小突起を含む、微小突起アレイを意味する。微小突起メンバーは、薄いシートから複数の微小突起をエッチング又は打印し、シートの平面から微小突起を折り出す（ｆｏｌｄ  ｏｕｔ）又は曲げ出して（ｂｅｎｄ  ｏｕｔ）立体配置を形成することによって、形成することができる。微小突起メンバーは、その全体が参考として本明細書中に組み込まれている米国特許第６，０５０，９８８号に開示されているように、各条片の縁に沿って微小突起を有する１つ又は複数の条片を形成することによってなど、他の知られている方法で形成することもできる。
【００７３】
本発明で用いることができる微小突起メンバーには、それだけには限定されないが、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている米国特許第６，０８３，１９６号、６，０５０，９８８号、及び第６，０９１，９７５号、並びに米国特許公開第２００２／００１６５６２号に開示されているメンバーが含まれる。
【００７４】
上述したように、本発明は、免疫活性剤を経皮送達するための装置、方法及び配合物を含む。本発明の一実施形態では、この装置には、角質層を通ってその下にある表皮層、又は表皮層及び真皮層まで穿孔するように適応させた複数の微小突起（若しくはそのアレイ）を有する微小突起メンバー（或いはシステム）であって、それ上に少なくとも１つの噴霧乾燥した免疫活性剤を含む生体適合性被覆膜が配置された微小突起メンバーが含まれる。
【００７５】
本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤は、インフルエンザワクチン、より好ましくは噴霧乾燥したスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む。本発明によれば、皮膚の角質層を穿孔したのち、生体適合性被覆膜は体液（細胞内液及び間質液などの細胞外液）によって溶解され、全身治療のためにインフルエンザワクチンが皮膚内に放出される（すなわちボーラス送達）。
【００７６】
本発明によれば、被覆膜の溶解及び放出の速度論は、免疫活性剤の性質、被覆工程、被覆膜の厚さ及び被覆膜の組成（例えば被覆配合物添加剤の存在）を含めた多数の因子に依存する。放出の速度論のプロフィール次第では、長時間、被覆微小突起を皮膚と穿孔関係に維持する必要があり得る。これは、接着剤を用いて微小突起メンバーを皮膚に固定することによって、又はその全体が本明細書中に参考として組み込まれている国際公開公報ＷＯ９７／４８４４０号などに記載の固定された微小突起を用いて、実行することができる。
【００７７】
当分野で周知のように、インフルエンザウイルス粒子は多数のタンパク質構成要素からなり、赤血球凝集素（ＨＡ）がヒトにおける保護抗ＨＡ抗体の誘導を司る一次表面抗原である。インフルエンザ粒子の図解を図１に示す。
【００７８】
免疫学的には、インフルエンザＡウイルスは２つの表面抗原、すなわちＨＡ及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）に基づいて亜型に分類される。ＨＡは、インフルエンザウイルスの、赤血球を凝集する能力、及びシアル酸へのその付着を介してウイルスが細胞に結合する能力を司っているタンパク質である。ＨＡは現在、このウイルスに関連する主要な毒性因子として認識されている。これらの抗原、特に赤血球凝集素に対する免疫により、感染症の可能性が低下し、感染症が引き起こされた場合に疾患の重篤度が軽減される。
【００７９】
循環株の抗原性特徴により、各年のワクチンに含めるウイルス株を選択する基礎が提供される。毎年、インフルエンザワクチンは次の冬に世界中で循環する可能性の高いインフルエンザウイルスを表す３つのウイルス株（通常は２つのＡ型及び１つのＢ型）を含む。インフルエンザＡとＢとは、その核タンパク質及び基質タンパク質の差異によって識別することができる。Ａ型が最も一般的な株であり、ヒトにおける主な世界的流行の原因である。三価ワクチン中の各株のＨＡ含有量は、典型的には、単一のヒト用量で１５μｇ、すなわち４５μｇの全ＨＡに設定される。
【００８０】
スプリットバリオン又はスプリット抗原ワクチンが、本発明の実施における使用に好ましい。ウイルスの不完全部分を用いるので、感染症の危険性は本質的に排除される。
【００８１】
スプリットバリオンワクチンを産生する一手段は、ニワトリ胚中でインフルエンザウイルスを増殖させ、その後、ウイルスを含む液体を収穫してホルムアルデヒドで失活させる手段である。連続流遠心分離を用いた直線のスクロース密度勾配の溶液でインフルエンザウイルスを濃縮及び精製する。その後、ポリエチレングリコールｐ−イソオクチルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａａｓ，Ｃｏ．）を用いてウイルスを化学的に破壊して、スプリットバリオンを産生した。その後、化学的手段によってスプリットバリオンをさらに精製し、リン酸ナトリウム緩衝の等張塩化ナトリウム溶液に懸濁させた。
【００８２】
下に詳述する独特な配合工程により、インフルエンザワクチンの完全なヒト用量、すなわち４５μｇの赤血球凝集素を、被覆微小突起アレイを介して、皮膚の最も免疫適合性のある構成要素であるＡＰＣが豊富な表皮層に経皮送達することができ、インフルエンザワクチンの少なくとも５０％が言及した表皮層に送達される。最も重要なことに、抗原は皮膚中で免疫原性を保ち、強力な抗体及び血清保護免疫応答を誘発する。さらに、乾燥被覆ワクチン配合物は、少なくとも１２カ月の室温安定性を維持することができる。
【００８３】
ここで、図２を参照すると、本発明の配合工程の一実施形態の流れ図が示されている。図２に例示したように、配合工程には、接線流入濾過（ＴＦＦ）ステップ、噴霧乾燥ステップ及び再構成ステップが含まれる。
【００８４】
ワクチンを受け取ったあと、最初のステップはワクチンを接線流入濾過に供することである。当分野で周知のように、接線流入濾過は、典型的に低分子量の物質を除去するために用いる。
【００８５】
ＴＦＦの後、好ましくはワクチンをスクロース又はトレハロースなどの溶解保護賦形剤とともに配合し、噴霧乾燥する。
【００８６】
当分野で周知のように、噴霧乾燥とは、材料の液体溶液を熱い乾燥媒体中に噴霧することによる、物質の乾燥粒子状粉末への変形である。噴霧乾燥により、溶液又は分散液から直接粉末の球状生成物を形成することができる。
【００８７】
噴霧乾燥の主な利点は、迅速な乾燥及び噴霧乾燥工程中の材料の温度上昇が最小限であることである。さらに、この方法は、液剤、乳剤及び懸濁液などの液体から粉末形態、顆粒形態又は凝集塊形態のいずれかの乾燥固体を連続的に生成するのに適している。また、噴霧乾燥により、粒子径及び粒子径分布、残留含水量、粒子密度、粒子形態学、並びに他の特徴に関して正確な品質基準を有する最終生成物が提供される。
【００８８】
典型的な噴霧乾燥機装置には、供給ポンプ、噴霧器、空気加熱器、空気供給器及び乾燥チャンバが含まれる。この装置には、排気を清浄し、粉末を回収するシステムがさらに含まれる。
【００８９】
一般に、噴霧乾燥工程は、液体の供給ストックを液滴の噴霧へと微粒化すること、及び乾燥チャンバ中で液滴を熱気と接触させることを含む。噴霧は、ロータリー（ホイール）又はノズル噴霧器のどちらかによって生成する。液滴から水分を蒸発させること及び乾燥粒子の形成は、制御された温度及び空気流条件下で行う。ほとんどの運用において、粉末は乾燥チャンバから連続的に排出される。
【００９０】
本発明によれば、溶解した材料（例えば免疫活性剤溶液）の細かい霧を大きな円錐形のチャンバに導入し、ここで霧を、乾燥させる材料又は薬剤に応じて約１００℃以上に加熱した空気と接触させる。本発明の免疫活性剤には、噴霧乾燥は、好ましくは約６０℃〜２５０℃の範囲の入口温度、より好ましくは約１００℃〜２００℃の範囲で実施する。適切な供給速度は、約０．５ｍＬ／分〜３０ｍＬ／分の範囲、より好ましくは約２ｍＬ／分〜１０ｍＬ／分の範囲である。
【００９１】
典型的には、乾燥用空気及び粒子は、同じ方向で乾燥チャンバ内を移動する。乾燥機から排出された際の生成物の温度は一般に排気の温度よりも低く、したがって、熱感受性の生成物を乾燥させるために理想的な方法が提供される。
【００９２】
ロータリー噴霧器を操作する場合は、空気分散器が高度な空気回転を生じ、これにより乾燥チャンバにわたって均一な温度がもたらされる。或いは、ノズル噴霧器で非回転性の空気流を用いることができる。
【００９３】
本発明によれば、乾燥させる薬剤及び所望の結果向けに工程をあつらえるために、様々な空気流の形態を用いることができる。例えば、乾燥用空気及び粒子が逆方向で乾燥チャンバ内を移動する逆流条件では、一般に、乾燥中にある程度の熱処理がもたらされる。乾燥機から排出される粉末の温度も排気温度より高い。
【００９４】
別の種類の空気流は、粒子が空気流に沿って及び対抗して乾燥チャンバ内を移動する、混合流である。この方法は、粗い粉末の要件によりノズル噴霧器を使用することが必要とされ、入ってくる空気流に上向きに噴霧する熱安定性の生成物に適しており、又は統合された流体ベッドに向かって下向きに液滴を噴霧し、空気の入口及び出口が乾燥チャンバの上部に位置する熱感受性の生成物に適している。
【００９５】
本発明によれば、言及した配合工程は、高度に安定した、濃縮された固体状態の赤血球凝集素（ＨＡ）配合物を中間生成物としてもたらす。この中間生成物も非常に強力且つ免疫性である。
【００９６】
どの具体的な理論にも限定されずに、化学的破壊因子、脂質、脂質−タンパク質複合体及び他のタンパク質を含めた赤血球凝集素でない構成要素の存在は、噴霧乾燥したワクチンの安定性を増強する。
【００９７】
当業者には理解されるように、本発明の言及した配合工程は、様々なワクチン源材料及び様々なその形態を配合するように改変並びに適応させることができる。例えば、より高い濃度で受け取られた原材料を用いるために工程を適応させることができる。この場合、ダイアフィルトレーションステップは不要であり、高濃度の原材料を直接噴霧乾燥及び再構成して被覆配合物を生成する。
【００９８】
また、それだけには限定されないが、細胞由来のインフルエンザワクチンなどの高純度の原材料で用いるために配合工程を改変することもできる。この場合、材料は、ＴＦＦ及び再構成ステップが不必要となるほどの十分な純度であり得る。
【００９９】
本発明によれば、多数の免疫活性剤又はワクチンを本発明の配合工程に供して、高度に安定したワクチン配合物を提供することができる。本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチン、より好ましくはスプリットバリオンインフルエンザワクチンを含む。
【０１００】
免疫活性剤は、ウイルス及び細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、並びに核酸系ワクチンをさらに含むことができる。適切な抗原には、それだけには限定されないが、タンパク質、複合多糖、オリゴ糖、及びリポタンパク質の形態の抗原が含まれる。これらサブユニットワクチンには、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（組換えＰＴワクチン−無細胞性）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）（精製、組換え）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）（精製、組換え）、サイトメガロウイルス（糖タンパク質サブユニット）、Ａ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（糖タンパク質サブユニット、破傷風トキソイドを有する複合糖質Ａ群多糖、毒素サブユニット担体に連結したＭタンパク質／ペプチド、Ｍタンパク質、多価型特異的エピトープ、システインプロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組換えＰｒｅ  Ｓ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組換えコアタンパク質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組換え発現させた表面タンパク質及びエピトープ）、ヒトパピローマウイルス（カプシドタンパク質、ＴＡ−ＧＮ組換えタンパク質Ｌ２及びＥ７［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１由来のＭＥＤＩ−５０１組換えＶＬＰ  Ｌ１、４価の組換えＢＬＰ  Ｌ１［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、及びＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６由来］）、在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）（精製細菌表面タンパク質）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）（破傷風トキソイドを有する複合糖質）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（合成ペプチド）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、Ｂ髄膜炎菌ＯＭＰと複合した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７と複合した複合糖質［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０と複合した複合糖質［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）（表面リポタンパク質）、水痘帯状疱疹（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）ウイルス（サブユニット、糖タンパク質）、並びにコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）（複合リポ多糖）が含まれる。
【０１０１】
全ウイルス又は全細菌には、それだけには限定されないが、サイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、風疹ウイルス、及び水痘帯状疱疹（ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｚｏｓｔｅｒ）などの弱毒化ウイルス又は死滅ウイルス、百日咳菌（ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、破傷風菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、ジフテリア菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、Ａ群連鎖球菌（ｇｒｏｕｐ  Ａ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、在郷軍人病菌（ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、ナイセリア髄膜炎（ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）、緑膿菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、梅毒トレポネーマ（ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、及びコレラ菌（ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）などの弱毒化細菌又は死滅細菌、並びにそれらの混合物が含まれる。
【０１０２】
抗原を含むさらなる市販のワクチンには、それだけには限定されないが、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、風疹ワクチン、百日咳ワクチン、破傷風ワクチン、腸チフスワクチン、ライノウイルスワクチン、ヘモフィルスインフルエンザＢ、ポリオワクチン、肺炎球菌ワクチン、髄膜炎菌性のワクチン、ＲＳＵワクチン、ヘルペスワクチン、ＨＩＶワクチン、水痘ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン（Ａ、Ｂ及びＤ型を含む）並びにジフテリアワクチンが含まれる。
【０１０３】
核酸を含むワクチンには、それだけには限定されないが、例えばスーパーコイルプラスミドＤＮＡなどの一本鎖及び二本鎖の核酸；直鎖状プラスミドＤＮＡ；コスミド；細菌人工染色体（ＢＡＣ）；酵母人工染色体（ＹＡＣ）；哺乳動物人工染色体；並びに例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡ分子が含まれる。核酸の大きさは、数千キロ塩基までにすることができる。さらに、本発明の特定の実施形態では、核酸は、タンパク質剤とカップリングさせるか、又は例えばホスホロチオエート部分などの１つ若しくは複数の化学修飾を含むことができる。
【０１０４】
ワクチン抗原と一緒にワクチンを構成することができるに適切な免疫応答賦活アジュバントには、それだけには限定されないが、リン酸アルミニウムゲル；水酸化アルミニウム；藻類グルカン：β−グルカン；コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５：平均値ｘ＝８及びｙ＝２０５を有するＡＢＡブロックポリマー；γインスリン：直鎖状（枝分かれしていない）β−Ｄ（２−＞１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース；ゲルブアジュバント：Ｎ−アセチルグルコサミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロライド（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩錯体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）：Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート；ＭＴＰ−ＰＥリポソーム：Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）；ムラメチド：Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３；プルラン：β−グルカン；ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３：４−アミノ−ａ，ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；サルボペプチド：ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１βのペプチド１６３〜１７１）；及びスレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標））：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、並びにインターロイキン１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５が含まれる。また、アジュバントには、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドなどのＤＮＡオリゴヌクレオチドも含まれる。さらに、免疫調節性リンホカインをコードしている核酸配列、例えばＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ１０、γインターフェロン、及びＮＦκＢ調節シグナル伝達タンパク質を用いることができる。
【０１０５】
本発明の好ましい実施形態では、ワクチン配合物には少なくとも１つの賦形剤が含まれる。適切な賦形剤には、それだけには限定されないが、単糖、二糖、シクロデキストリン、及び多糖類（例えば、デキストロース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン）を含めた製薬グレードの炭水化物；デンプン；セルロース；塩（例えば、リン酸ナトリウム又はリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム）；クエン酸；酒石酸；グリシン；低分子量、中分子量又は高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；プルロニック；界面活性剤；並びにそれらの組合せが含まれる。好ましくは、賦形剤は二糖及び多糖類を含む。
【０１０６】
本発明によれば、好ましい賦形剤は、再構成中におけるワクチンの力価の維持及び抗原の回収を支援する。用いる賦形剤の量は免疫活性剤に依存する。例えば、一実施形態では、薬剤対賦形剤の比は、インフルエンザワクチンで好ましくは約２：１〜１：２０の範囲、より好ましくは約１：４である。
【０１０７】
本発明によれば、本発明の噴霧乾燥した免疫活性剤は被覆膜及びヒドロゲル配合物中で容易に用いることができ、それを経皮送達する方法及び装置は、その全体が明白に本明細書中に組み込まれている２００４年４月１日出願の同時係属の米国特許出願第１１／０８４，６３１号及び２００４年４月１３日出願の米国特許出願第１１／０８４，６３５号に詳述されている。
【０１０８】
言及した同時係属出願に記載のとおり、微小突起又はそのアレイを被覆するために用いることができる一方法は、浸漬被覆を含む。浸漬被覆は、一般に、微小突起を部分的に又は完全に被覆溶液中に浸漬することを含む。部分浸漬技法を用いることによって、被覆を微小突起の先端のみに限定することが可能となる。
【０１０９】
さらなる被覆方法は、同様に被覆を微小突起の先端に限定するローラー被覆機構を用いた、ローラー被覆を含む。ローラー被覆方法は、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている米国出願第１０／０９９，６０４号（公開第２００２／０１３２０５４号）に開示されている。
【０１１０】
当業者には理解されるように、本発明の噴霧乾燥した免疫活性剤を含むワクチン配合物は、様々なイオン泳動システム及び電気輸送システムと併せて用いることもできる。その全体が本明細書中に組み込まれている米国特許第５，１４７，２９６号、第５，０８０，６４６号、第５，１６９，３８２号及び第５，１６９，３８３号にはこれらの電気輸送システムが図示されている。
【実施例】
【０１１１】
以下の研究及び実施例は、本発明の配合物、方法及び工程を例示する。実施例は例示目的のみであり、いかなる様式でも本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１１２】
（実施例１）
当分野で知られているように、接線流入濾過（ＴＦＦ）によりダイアフィルトレーション及び濃縮を同時に行うことが可能である。したがって、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ  ＸＬ、再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、５０ｃｍ２、３０ｋＤ分子量カットオフ）を備えたＴＦＦシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｌａｂｓｃａｌｅ）をワクチン原材料のダイアフィルトレーション及び濃縮に用いた。ワクチン溶液の体積は最初の体積の１／２０〜１／５０まで減少し、ＨＡ濃度が５〜１０ｍｇのＨＡ／ｍＬまで増加した。緩衝液の交換及び濃縮のために緩衝溶液も加えた。
【０１１３】
最初の研究では、上述のようにインフルエンザワクチン、すなわち一価のＡ／Ｐａｎａｍａ株（Ａｖｅｎｔｉｓ  ＰａｓｔｅｕｒのＦｌｕｚｏｎｅ（登録商標））のダイアフィルトレーション及び濃縮を、約１０ｍｇのＨＡ／ｍＬまで行った。追加の賦形剤なしに５ｍＬのこの濃縮Ａ／Ｐａｎａｍａ溶液を直接噴霧乾燥した（配合物Ａ）。別の配合物では、５０ｍｇのスクロースを５ｍＬのＡ／Ｐａｎａｍａ濃縮物に加えた（配合物Ｂ）。Ｙａｍａｔｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ噴霧乾燥機を用いて配合物を噴霧乾燥した。
【０１１４】
１２０℃の入口温度、１２０℃の出口温度及び２ｍＬ／分の液体供給速度で配合物Ａを噴霧乾燥した。これにより、３１％の収率を表す４７．１ｍｇの粉末が生じ、これを試料１とした。試料１の形態学を図３に示す。
【０１１５】
１４０℃の入口温度、１０５℃の出口温度及び２ｍＬ／分の液体供給速度で配合物Ｂを噴霧乾燥した。これにより、２６％の収率を表す５５．４８ｍｇの粉末が生じ、これを試料２とした。試料２の形態学を図４に示す。
【０１１６】
どちらの粉末配合物も水で約１．２ｍｇのＨＡ／ｍＬの濃度まで再構成した。スクロースを含む配合物は少量の沈殿を示し、一方でスクロースを含まない配合物では顕著に多い沈殿があった。ビシンコニン酸（ＢＣＡ）分析及び酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、配合物のタンパク質及び力価についてアッセイを行った。
【０１１７】
試料２は、ＢＣＡによるＨＡ濃度１．３４±０．１１及びＥＬＩＳＡによるＨＡ濃度０．８３±０．０４を示した。試料１は、ＢＣＡによるＨＡ濃度０．５５±０．０３及びＥＬＩＳＡによるＨＡ濃度０．７２±０．０３を示した。理論ＨＡ濃度１．２ｍｇのＨＡ／ｍＬと比較したこれらのアッセイにおけるＨＡの相対回収率を図５に示す。図５に例示したように、スクロースを含む配合物ではタンパク質の損失がなかった。
【０１１８】
ここで、図６を参照すると、配合物及び様々な試薬の分子量のドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分析の結果が示されている。具体的には、レーン１にはＡ／Ｐａｎａｍａ  Ｌ／Ｎ  ＦＡ１０８６２１ワクチンを１８０μｇのＨＡ／ｍＬで３５μＬ載せ、これは６．３μｇのＨＡに対応する。レーン２には噴霧乾燥前のＴＦＦ濃縮スクロースなし配合物（配合物Ａ）を約１ｍｇのＨＡ／ｍＬで１０μＬ載せ、これは１０μｇのＨＡに対応する。レーン３には噴霧乾燥前のＴＦＦ濃縮スクロースあり配合物（配合物Ｂ）を約１ｍｇのＨＡ／ｍＬで１０μＬ載せ、これは１０μｇのＨＡに対応する。レーン４には２０μＬの噴霧乾燥したスクロースなし配合物（配合物Ａ）を８ｍｇの粉末／ｍＬで載せた。レーン５には２０μＬの噴霧乾燥したスクロースあり配合物（配合物Ｂ）を１０ｍｇの粉末／ｍＬで載せた。レーン６及び８には緩衝液のブランクを載せ、レーン７には標準の分子量マーカーを載せた。これらの結果は、スクロースを含む噴霧乾燥した配合物について分子量種に変化がなかったことを示す。
【０１１９】
（実施例２）
さらなる研究では、赤血球凝集素の一価のＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ株を用いて２つの配合物を調製した。配合物Ｃは抗原及びスクロースを１：４の重量比で含んでいた。配合物Ｄは抗原、トレハロース及びマンニトールを１：２：２の重量比で含んでいた。どちらの配合物も噴霧乾燥し（ＳＤ）、凍結乾燥し（ＦＤ）、その後、ＢＣＡタンパク質分析及びＳＲＩＤ（一元放射性免疫拡散）力価分析に供した。
【０１２０】
ＳＤ配合物及びＦＤ配合物のＢＣＡアッセイにより、どちらの安定化方法でも赤血球凝集素抗原の完全な回収がもたらされたことが実証された。図７に示すように、ＳＲＩＤ分析にから、噴霧乾燥により配合物Ｃでは約７０％、配合物Ｄでは約８０％の力価保持が提供されたことが実証された。したがって、結果により、噴霧乾燥は凍結乾燥に関して免疫活性剤を安定化する一方で優れた経済性及び効率を提供する実行可能な手段であることが実証された。
【０１２１】
本発明の精神及び範囲から逸脱せずに、当業者は、様々な用途及び条件に適応させるために本発明に様々な変化及び変更を行うことができる。したがって、このような変化及び変更は添付の特許請求の範囲の均等物の完全な範囲内に適正且つ公正にあり、そのように意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】インフルエンザウイルス粒子の図解である。
【図２】本発明による免疫活性剤の配合工程の一実施形態の流れ図である。
【図３】本発明による安定化したインフルエンザワクチンの形態学を例示するＳＥＭ画像である。
【図４】本発明による安定化したインフルエンザワクチンの形態学を例示するＳＥＭ画像である。
【図５】本発明による様々な安定化したインフルエンザワクチンの力価を例示する棒グラフである。
【図６】本発明による様々な安定化したインフルエンザワクチンの分子量を比較した例示画像である。
【図７】本発明による安定化したインフルエンザワクチンの活性を凍結乾燥したワクチンの活性と比較したグラフである。
【図１】
2008507590.tif 000003
【図２】
2008507590.tif 000004
【図３】
2008507590.tif 000005
【図４】
2008507590.tif 000006
【図５】
2008507590.tif 000007
【図６】
2008507590.tif 000008
【図７】
2008507590.tif 000009