(57)【要約】  本発明は、マリーゴールド花弁由来のｔｒａｎｓ−ルテイン、ｔｒａｎｓ−ゼアキサンチン、ｃｉｓ−ルテイン、β−カロテン及びクリプトキサンチンといったカロテノイドを高濃度に含有するカロテノイドを、いかなる有機有害溶剤の痕跡も残さない制御条件下で単離及び精製するための、現実的で効率的な方法を説明する。この方法は、マリーゴールド花弁のエンシレージ、脱水、溶剤抽出、無水アルコールによるカロテノイドエステルのアルカリ加水分解、水と無水アルコールの混合物による結晶化／精製、これに続く濾過、及び結晶が水分を著しく含まなくなり残留有害溶剤を完全に含まなくなるまでの乾燥を含む。これらの結晶は、栄養補助食品及びサプリメント食品に適している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マリーゴールド花弁由来のルテインに富むカロテノイドの生成方法であって、（ａ）マリーゴールド花弁を制御された嫌気性条件下でエンシレージして、花弁に存在するカロテノイドを固定し濃縮するステップと、（ｂ）環境にやさしい乾燥工程を介して脱水し乾燥ミールを得るステップと、（ｃ）前記ミールをペレット化するステップと、（ｄ）食品用へキサンを用いて前記ペレット化ミールを溶剤抽出し、カロテノイドエステルに富むマリーゴールドオレオレジンを得るステップと、（ｅ）無水アルコール中で前記オレオレジンを均質化した後、アルカリでカロテノイドエステルを加水分解するステップと、（ｆ）水アルコール混合物によりカロテノイド結晶を沈殿させるステップと、（ｇ）十分な量の熱水で洗浄し、水溶性石鹸、クロロフィリン及び微量残留へキサン等の他の有機不純物を除去するステップと、（ｈ）フィルタープレス、遠心分離機及びノッチフィルターを用いてカロテノイド結晶を濾過するステップと、（ｉ）著しく水分が少なく、残留有害溶剤を完全に含まない、純度レベルの高い純カロテノイド結晶を得るために乾燥するステップとを含む方法。
【請求項２】
前記マリーゴールドが、熱帯条件に適した栽培習慣により非ＧＭＯ種子から栽培されたタゲテスエレクタ（Ｔａｇｅｔｅｓ  ｅｒｅｃｔａ）種に由来する、請求項１（ａ）に記載の方法。
【請求項３】
前記エンシレージが、脱酸素剤及び封止剤を用いて、嫌気性条件下で忠実に行われ、望ましくない酸化生成物の形成による色素喪失を最小限化する、請求項１（ａ）に記載の方法。
【請求項４】
環境にやさしい乾燥工程を介した前記脱水が、いかなる有害なスタック放出も完全に伴わないガス化装置により発生された発生炉ガスを用いる加熱メカニズムを備えた流動床乾燥機により行われる、請求項１（ｂ）に記載の方法。
【請求項５】
前記ペレット化が、より良い溶剤抽出を助けるのに適切な圧縮機を用いて行われる、請求項１（ｃ）に記載の方法。
【請求項６】
前記溶剤抽出が、最大のカロテノイド抽出性を得るための向流抽出手順により、最少量の残留溶剤を含有するマリーゴールドオレオレジンを得るために食品用へキサンを用いて行われる、請求項１（ｄ）に記載の方法。
【請求項７】
温度が６０℃を超えず、変性酸化物を最少化する、請求項１（ｄ）に記載の方法。
【請求項８】
オレオレジンの前記均質化が、４５℃を超えない温度で１０分間にわたり無水アルコールを用いて行われる、請求項１（ｅ）に記載の方法。
【請求項９】
カロテノイドエステルの加水分解が、エタノール性水酸化カリウムを用いて行われる、請求項１（ｅ）に記載の方法。
【請求項１０】
前記加水分解温度が、７０℃〜８０℃の間であり、鹸化時間が３０分を超えない、請求項１（ｅ）に記載の方法。
【請求項１１】
カロテノイド結晶の前記沈殿が、５０：５０の比率の無水アルコールと水の混合物を用いて行われる、請求項１（ｆ）に記載の方法。
【請求項１２】
前記洗浄が、微量アルカリ及び望ましくない有害な微量不純物を完全に除去し、産物のｐＨを確実に中性にするため、約１５倍の容量で、５０℃〜７０℃の熱水を用いて行われる、請求項１（ｇ）に記載の方法。
【請求項１３】
精製カロテノイド結晶の前記濾過が、フィルタープレス、遠心分離機又はノッチフィルターを用いて行われる、請求項１（ｈ）に記載の方法。
【請求項１４】
前記乾燥が、周囲圧力で約５０℃〜５５℃又は減圧下で約４０℃〜４５℃にて行われる、請求項１（ｉ）に記載の方法。
【請求項１５】
乾燥後に得られる前記純カロテノイド結晶が、１％未満の水分レベルを有し、痕跡量の残留へキサンをも含まない、請求項１（ｉ）に記載の方法。
【請求項１６】
乾燥後に得られた前記純カロテノイド結晶が、分光測定による９０％以上の総カロテノイドを含有し、高圧液体クロマトグラフィーによる、ｔｒａｎｓ−ルテインが９０％以上、ｔｒａｎｓ−ゼアキサンチンが５％以上、ｃｉｓ−ルテイン、β−カロテン及びクリプトキサンチン等の他のカロテノイドがそれぞれ１％未満である、請求項１（ｉ）に記載の方法。
【請求項１７】
得られた前記純カロテノイドが、マリーゴールドオレオレジン中の総カロテノイドに対して５５質量％〜８０質量％である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
得られた前記純カロテノイド結晶が、粉末、ビーズレット、顆粒、油分散体及び水分散体の形態で、大量に調合され安定化される、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、マリーゴールド由来の純カロテノイド結晶に関し、特にその単離及び精製方法に関する。
【発明の背景】
【０００２】
マリーゴールド由来の純カロテノイド結晶は、ルテイン、ゼアキサンチン及びクリプトキサンチン等の大部分のキサントフィル、及び低レベルのβ−カロテンを含み、加齢性黄斑変性症のリスクを減少させ（参照：Ｍｏｅｌｌｅｒ  ＳＭ、Ｊａｃｑｕｅｓ  ＰＦ、Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  ＪＢ、「Ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｄｉｅｔａｒｙ  Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｌｓ  ｉｎ  ｃａｔａｒａｃｔ  ａｎｄ  ａｇｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、２０００年；１９：５２２Ｓ〜５２７Ｓ）、ＬＤＬコレステロールを制御し（参照：Ｃｈｏｐｒａ  Ｍ．、Ｔｈｕｒｎｈａｍ  ＤＩ、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｌｕｔｅｉｎ  ｏｎ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＬＤＬ）  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９４年；５３：１９９３、＃１８Ａ）、冠状動脈性心疾患を予防し（参照：Ｈｏｗａｒｄ  ＡＮ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＮＲ、Ｐａｌｍｅｒ  ＣＲ，Ｃａｍｂｏｕ  ＪＰ，Ｅｖａｎｓ  ＡＥ、Ｆｏｏｔｅ  ＪＷら、「Ｄｏ  ｈｙｄｒｏｘｙ−ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ？  Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｂｅｌｆａｓｔ  ａｎｄ  Ｔｏｕｌｏｕｓｅ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｔａｍｉｎ  ａｎｄ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６年；６６：１１３〜１１８頁）、フリーラジカルを捕捉し、免疫力を高める（参照：Ｃｈｅｗ  ＢＰ、Ｗｏｎｇ  ＭＷ、Ｗｏｎｇ  ＴＳ、「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｌｕｔｅｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｍａｒｉｇｏｌｄ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｏｎ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ」、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６年；１６：３６８９〜３６９４頁）ことが科学的に証明されている。
【０００３】
ルテイン（β−ε−カロテン−３−３’−ジオール）及びゼアキサンチン（β−β−カロテン−３−３’−ジオール）は、反応性の高いヒドロキシル基を伴うカロテノイドファミリーのキサントフィル類に属し、ヒト及び動物が合成することができない。
【０００４】
カロテノイドは、主に植物、藻、及び光合成細菌で見られる天然の脂溶性色素の一種であり、ここでカロテノイドは、光合成過程で重大な役割を果たしている。カロテノイドはまた、幾つかの非光合成細菌、酵母、及びカビにおいても発生し、ここでカロテノイドは、光及び酸素による損傷に対する保護機能を果たしている可能性がある。動物は、カロテノイドを合成することができないように思われるが、多くの動物は、食餌からカロテノイドを取り込んでいる。動物において、カロテノイドは、明るい色をもたらし、抗酸化物質として作用し、ビタミンＡ活性の供給源となりうる（Ｏｎｇ及びＴｅｅ、１９９２年；Ｂｒｉｔｔｏｎら、１９９５年）。
【０００５】
カロテノイドは、植物の葉、果実、及び花の赤色、オレンジ色、及び黄色い色調の多くに関与しているほか、幾つかの鳥類、昆虫類、魚類、及び甲殻類の色に関与している。カロテノイドの発色を示す幾つかの身近な例は、ニンジン及び柑橘系果実のオレンジ色、胡椒及びトマトの赤色、並びにフラミンゴ及び鮭のピンク色である（Ｐｆａｎｄｅｒ、１９９２年）。約６００種類のカロテノイドが、自然界に存在することが知られており（Ｏｎｇ及びＴｅｅ、１９９２年）、新たなカロテノイドも同定され続けている（Ｍｅｒｃａｄａｎｔｅ、１９９９年）。
【０００６】
カロテノイドは、その化学構造により定義される。大多数のカロテノイドは、分子骨格と考えられうる４０炭素のポリエン鎖に由来する。この鎖は、環状末端基（環）により終結されることができ、酸素含有官能基により補完されることができる。炭化水素カロテノイドが、カロテンとして知られるのに対し、これら炭化水素の酸化誘導体は、キサントフィルとして知られる。ニンジンの主要カロテノイドであるベータカロテンが、よく知られたカロテンである一方、マリーゴールド花弁の主要な黄色色素であるルテインは、一般的なキサントフィルである。
【０００７】
カロテノイドの骨格は、最終的には、この色素が有する可能性のある潜在的生物学的機能を決定する。カロテノイドのポリエン骨格において単結合及び二重結合が交互する特有のパターンは、他の分子からの余分なエネルギーをカロテノイドが吸収できるようにするものである一方、カロテノイドの特異的末端基の性質は、カロテノイド極性に影響を与えている可能性がある。
【０００８】
前者は、生体カロテノイドの抗酸化特性を説明することができるのに対し、後者は、個々のカロテノイドと生体膜との相互作用の仕方の違いを説明することができる（Ｂｒｉｔｔｏｎ、１９９５年）。
【０００９】
米国特許第５，３８２，７１４号は、フリー体ルテインを含有する、ケミンインダストリー社製（アイオワ州、デモイン）の鹸化マリーゴールドオレオレジンは、純粋ルテインの単離に好ましい出発原料であることを報告している。鹸化ステップには、高率のプロピレングリコールを伴い、鹸化時間は、最短で３時間である。産物をより長時間加熱すると、処理時間も増大する。
【００１０】
米国特許第５，６４８，５６４号は、水性アルカリ及びプロピレングリコールを使用している。ここでカロテノイドエステルは、水性アルカリ及びプロピレングリコールと溶解することも、自由に混和することもないため、脂肪酸エステルを鹸化するのに高温で極めて長時間を要する。これは、産物をより長時間、熱及び空気下に曝露する結果となり、変性酸化物の形成を促す可能性があり、この処理時間は、業務用バッチには長すぎる。
【００１１】
米国特許第６，７４３，９５３号は、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン及びメタノール等の複数の溶剤を伴い、これらと同様の残留物を残す可能性のある、最終精製ステップを説明している。この工程もまた、３時間に及ぶ鹸化を伴う。産物をより長時間７０℃で加熱すると、鹸化塊に変性酸化物が生じる結果となる可能性がある。
【００１２】
米国特許第６，３８０，４４２号は、カロテノイドの加水分解は、イソプロピルアルコールを用いて、鹸化時間９０分で行われると述べている。
【００１３】
米国特許第６，５０４，０６７号は、マリーゴールドオレオレジンは、水性アルカリを用いてこれを鹸化反応にかける前に、炭酸ナトリウムで前処理され、希釈リン酸でさらに中和され、９０℃で８時間鹸化されると述べている。続いて、反応塊は、酢酸でｐＨを５．０に再調整され、残留物を過剰水で洗浄してｐＨを中性にされる。この工程の短所は、産物がより長時間熱にさらされ、不純物の除去にあまりに多くの酸化及び中和ステップが伴う点である。
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、カロテノイド、主に、マリーゴールド花弁（好ましい供給源である）由来のルテインを単離するための現実的で効率的な方法である。本方法は、マリーゴールド花弁を制御された嫌気性条件下でエンシレージして、花弁に存在するカロテノイドを固定し濃縮すること、ねじプレス等の２〜３のステップを伴う脱水、破砕、及び環境にやさしい発生炉ガスを乾燥機の熱媒体に用いて、いかなる有害なスタック放出も伴わずに乾燥ミールを得る流動床乾燥を含む。乾燥ミールは、次いで、カロテノイドエステル抽出性の向上を促すのに便利な大きさ、密度、硬さにペレット化される。ペレットは、食品用ヘキサンを用いて溶剤抽出され、オレオレジンを大きく変性させずに、できる限り溶剤が揮散される。
【００１５】
オレオレジンは、次いで、アルカリ添加前に無水アルコールで均質化され、エステルは、７０℃〜８０℃の温度でわずか３０分の最長時間で鹸化される。加水分解されたカロテノイドは、次いで、水及びアルコールの混合物により沈殿され、望ましくない微量不純物を全て除去するため熱水で洗浄される。洗浄された結晶は、次いで、遠心分離機により濾過され、次いで、真空下又は大気圧下で乾燥され、水分及び揮発性有機不純物（もしあれば）を除去する。
【００１６】
本発明の利点は、カロテノイドエステルが、わずか３０分以内に９９％を超える鹸化まで鹸化される点であり、産物が、変性酸化物を形成する結果となる可能性のある長時間の加熱にさらされない点である。鹸化塊は、望ましくない非反応性不純物のほとんどを単一ステップで除去するのを助ける若干温かい環境下で、アルコールと水の混合物の助けを借りて直ちに沈殿される。均質化、鹸化、沈殿、洗浄及び濾過の全工程は、３時間以内に完了される。
【００１７】
本発明は、本発明の時間と温度の組み合わせ、手順の単純性及び少量の溶剤の使用の点で有利である。これらの要因は全て、収量及び産物の安定性に寄与し、商業的規模での生産原価を低減する。
【発明の詳細な説明】
【００１８】
本発明は、マリーゴールド花弁由来のカロテノイドであって、大部分がルテインを含む前記カロテノイドを単離及び精製するための現実的で効率的な方法である。品種タゲテスエレクタ（Ｔａｇｅｔｅｓ  ｅｒｅｃｔａ）は、採種を含め、専用の実践パッケージ下で栽培され、収穫され、収穫から数時間以内に脱水ユニットへ運ばれる。実践パッケージには、非ＧＭＯ種子発育、及び熱帯条件に適した栽培が含まれる。花弁は、次いで、物理的洗浄後直ちにサイロでのサイレージにかけられ、酸化防止剤及びサイレージ添加剤を、密閉された嫌気性条件下、適切な濃度で噴霧される。
【００１９】
サイレージ化は、サイレージのｐＨ及び温度を介してモニターされ、２〜３週間かけて確実に完全発酵される。
【００２０】
サイレージされた花弁は、次いで、サイロから収集され、一連のステップにおいて脱水工程にかけられる。サイレージされた花弁は、２段階の工業用ねじプレスにかけられ、滲出水用に圧縮され、含水量が８８％から７５％になる。圧縮された花弁は、次いで、流動床乾燥機で乾燥される前に破砕される。破砕された花弁は、熱風により流動床乾燥機で乾燥される。熱風は、完全にスタック放出を伴わない環境にやさしいガス化装置を用いて生じた発生炉ガス炎で空気を過熱して発生される。トンネル型工業用流動床乾燥機は、最高温度（８５℃〜９０℃）である注入口から、温度４５℃〜５０℃の排出口に至るまで、温度の異なるトンネルを伴う乾燥室からなる。
【００２１】
注入口から排出口に至るＦＢＤ（流動床乾燥機）内通過時間は、最大３０分に過ぎず、産物の含水量は、７５％から約１０％に低減される。この乾燥工程の利点は、産物が、長時間高熱にさらされず、長時間の熱及び空気曝露により形成されうる変性酸化物の形成を最小限化する点にある。
【００２２】
乾燥されたマリーゴールドミールは、工業用ハンマーミルにより粉砕され、４００ミクロン未満の粒子に縮小される。
【００２３】
粉末のマリーゴールドミールは、工業用ペレタイザー、及び結合剤として蒸気又は熱水を用いることにより、所望のかさ密度である６ｍｍ〜１０ｍｍサイズのペレットにペレット化される。
【００２４】
マリーゴールド花弁ペレットは、有効成分、すなわちキサントフィル及びカロテノイドの最大抽出性を、他のレジノイド及び脂質とともに得るために、向流抽出下において、一連の抽出機で食品用ヘキサンを溶剤に用いて溶剤抽出される。得られた希薄ミセラは、次いで、流下膜式蒸発器及び薄膜式蒸発器において濃縮され、溶剤濃度を約９０％〜９５％から約５％に下げる。濃縮されたミセラは、次いで、真空蒸留され、溶剤レベルを５％から１％に下げる。この溶剤レベルが１％である粗マリーゴールドオレオレジンは、窒素気流及び蒸気下で溶剤を揮散させることによりさらに濃縮され、最終マリーゴールドオレオレジン中の溶剤レベルは１０００ｐｐｍ未満に低減する。濃縮操作を通して、産物が６０℃を超える温度に曝されることはなく、エポキシド等の変性酸化物の形成は最小限に抑えられる。
【００２５】
得られたマリーゴールドオレオレジンは、反応器中で４５℃以下の温度にて最大１０分間攪拌することにより均質化される。
【００２６】
均質化されたマリーゴールドオレオレジンは、次いで、同じ反応器において、マリーゴールドオレオレジン量の１．２〜２．０の量の、１３％〜１５％アルコール性水酸化カリウムを、７０℃〜８０℃の温度範囲にて３０分を超えない時間添加することにより、加水分解される。使用されるアルコールは、含水量５％未満の無水エチルアルコールである。鹸化度は、薄層クロマトグラフィー又は高圧液体クロマトグラフィーのいずれかにより確認され、最終加熱は、９９％を超える鹸化完了を確認した後、同じ温度で１０分間行われる。
【００２７】
得られた鹸化塊に、別の容器で６５℃〜７５℃の温度に調製された熱水が添加され、比率１：１の水及び無水アルコールの混合物中におけるカロテノイドの結晶化を助けるため、同じ温度で１０分間十分に均質化される。５０：５０の水対エチルアルコール比は、カロテノイドのより良い結晶化を促進し、さらに、石鹸、脂質、脂肪及び他の有機物等の望ましくない不純物も分解する。
【００２８】
得られた希釈塊は、次いで、窒素又は空気のいずれかによる陽圧を用い、フィルタープレスに前記塊を汲み上げて、フィルタープレスを介して濾過される。フィルタープレスプレート内の収集塊は、ｐＨが約７．０の中性に低下されるまで、十分量の熱水により、６０℃〜７０℃の温度で熱水洗浄される。
【００２９】
フィルタープレスから収集された湿塊は、トレー上に薄く積まれ、産物中の水分レベルが１％未満となり、いずれの有害有機揮発性不純物も、ガスクロマトグラフィーで定量される検出限界を下回るまでの時間（通常は３〜４時間）、大気圧下、温度５０℃〜５５℃の箱型乾燥機、又は減圧下、温度４０℃〜４５℃の真空箱型乾燥機で乾燥される。
【００３０】
結果として生じた産物は、分光光度計で定量された場合、カロテノイドを最低９０％含有し、順相高圧液体クロマトグラフィーで定量された場合、総ｔｒａｎｓ−ルテインを最低９０％、総ｔｒａｎｓ−ゼアキサンチンを最低５〜８％、ｃｉｓ−ルテイン、β−カロテン及びクリプトキサンチンを各１％未満含有する。
【００３１】
最終産物中の有効成分、すなわち、カロテノイド及びキサントフィルの化学的回収は、所望の最終産物純度、及び本明細書の方法を若干変更して上記処理パラメータに基づき用いられる、化学的回収の様々な条件により、５５％〜８０％となる。
【００３２】
得られたカロテノイド結晶の最終産物は、粉末、ビーズレット、顆粒、油分散体及び水分散体の形態で、大量に調合され安定化され、栄養補助食品及び食品の用途に合わせた最終用途により、適切な医薬品用賦形剤及び乳化剤を添加することで、濃度が１％〜４０％濃度に異なる。
【００３３】
本発明は、説明された実施形態を参照して記載されるが、本発明は、本発明の主な範囲を改変又は逸脱することなく、様々な変更又はこれに等しいことを行う者の技能に限定されるものではない。したがって、本発明は、記載された実施形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲にある全ての他の実施形態を包含するものである。
【００３４】
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物を説明するものであるが、これらに限定されるものではない。その他、条件変数の適切な修正及び応用や、ありふれた天然産物の単離及び精製技術等の当業者にとって明らかなことは、本発明の趣旨及び範囲内である。
【００３５】
実施例１：
キサントフィル９２．１９ｇｍ／Ｋｇ又は９．２２％を有するマリーゴールドオレオレジン２５Ｋｇを、１００リットル容量の攪拌器付き反応器に入れる。オレオレジンを、熱媒体として反応器のジャケット中の蒸気又は熱水のいずれかを用いて、温度４０℃にて１０分間攪拌することにより、均質化する。エタノール性ＫＯＨは、純度９５％のＫＯＨ５Ｋｇを３５リットルのエチルアルコール（１：１．４容量）に入れ、これを溶解して調製する。調製したエタノール性ＫＯＨを、均質化塊の入った反応容器にゆっくり添加する。鹸化反応は、７５℃の温度で３０分間行う。９９％を超える鹸化度をＨＰＬＣで確認後、温度７０℃に維持した脱塩熱水４０リットルを、反応塊に添加し、１０分間攪拌し続ける。カロテノイド結晶を伴う希釈塊を、次いでフィルタープレスに汲み上げ、結晶を回収する。望ましくない不純物を洗浄し、流出物のｐＨを約７．０の中性に下げるため、追加の熱水約２５０リットルを、フィルタープレスを介して汲み上げる。中和を確実に行った後、窒素陽圧を、圧力１．２５Ｋｇでフィルタープレスに適用し、フィルター内に閉じ込められた結晶を圧搾する。湿結晶を、次いでフィルタープレス板からトレーに集め、薄層とし、箱型乾燥機で常圧下、３時間、温度約５５℃で乾燥する。
【００３６】
最終産物の物理的回収率は、６．７６％である。得られたカロテノイド結晶は、９１．２８％のカロテノイドを含有していた（分光光度計により定量）。このうち、９１．９９％は全ｔｒａｎｓ−ルテインであり、６．９０％は全ｔｒａｎｓ−ゼアキサンチン、０．２７％はｃｉｓ−ルテイン、０．２３％はベータカロテン及び０．５％はクリプトキサンチンである（ＨＰＬＣにより定量）。最終産物の化学的回収率は、６６．９％である。
【００３７】
最終産物の含水量は０．５７％であり、最終産物のガスクロマトグラフィー分析を行なった結果、残留へキサンは少しも検出されなかった。
【００３８】
実施例２：
キサントフィル１０２．１８ｇｍ／Ｋｇ又は１０．２２％を有するマリーゴールドオレオレジン２５．５Ｋｇを、１００リットル容量の攪拌器付き反応器に入れる。
【００３９】
熱媒体として反応器のジャケット中の蒸気又は熱水のいずれかを用いて、オレオレジンを温度４５℃にて１０分間攪拌することにより、均質化する。エタノール性ＫＯＨは、純度９５％のＫＯＨ５．１Ｋｇを４０リットルのエチルアルコール（１：１．５６容量）に入れ、これを溶解して調製する。
【００４０】
調製したエタノール性ＫＯＨを、均質化塊の入った反応容器にゆっくり添加する。鹸化反応は、７３℃の温度で３０分間行う。９９％を超える鹸化度をＨＰＬＣで確認後、温度６５℃に維持した脱塩熱水４５リットルを、反応塊に添加し、１０分間攪拌し続ける。カロテノイド結晶を伴う希釈塊を、次いでフィルタープレスに汲み上げ、結晶を回収する。望ましくない不純物を洗浄し、流出物のｐＨを約７．０の中性に下げるため、追加の熱水約２７５リットルを、フィルタープレスを介して汲み上げる。中和を確実に行った後、窒素陽圧を、圧力１．２Ｋｇでフィルタープレスに適用し、フィルター内に閉じ込められた結晶を圧搾する。湿結晶を、次いでフィルタープレス板からトレーに集め、薄層とし、箱型乾燥機で６００ｍｍＨｇの真空下、２時間、約４５℃の温度で乾燥する。
【００４１】
最終産物の物理的回収率は、７．６７％である。得られたカロテノイド結晶は、９３．７６％のカロテノイドを含有していた（分光光度計により定量）。このうち、９２．８６％は総ｔｒａｎｓ−ルテインであり、６．１４％は全ｔｒａｎｓ−ゼアキサンチン、０．１２％はｃｉｓ−ルテイン、０．２２％はベータカロテン及び０．５２％はクリプトキサンチンである（ＨＰＬＣにより定量）。最終産物の化学的回収率は、７０．５３％である。
【００４２】
最終産物の含水量は０．６３％であり、最終産物のガスクロマトグラフィー分析を行なった結果、残留へキサンは少しも検出されなかった。
【国際調査報告】
2008538697.tif 000002
2008538697.tif 000003
2008538697.tif 000004