(57)【要約】  本発明は、ピクセルクロックを含むデジタル信号を表示するディスプレー部分、ピクセルクロックの周波数を調製する周波数調製部分、及びデジタル信号のピクセルクロックを一定の周波数範囲に調製するための周波数調製部分を調製するコントローラーを包含してなる、ディスプレー装置に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆種子を水に浸漬すること、この大豆種子を冷凍すること、そして冷凍した大豆種子を解凍することを含んでなる、大豆種子のガンマ−アミノ酪酸の含有量を増大させる方法。
【請求項２】
前記浸漬する工程を、０〜４０℃に保持した水中で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記冷凍する工程を、−４０〜０℃の温度で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記解凍する工程を、１０〜４０℃の温度で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかに記載の方法により製造される、ガンマ−アミノ酪酸の含有量を増大させた大豆種子。
【請求項６】
請求項５に記載の大豆種子から製造される加工食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大豆種子のガンマ−アミノ酪酸の含有量を増大させる方法及びこの方法を用いて製造されるガンマ−アミノ酪酸が豊富な大豆種子に関する。
【背景技術】
【０００２】
ガンマ−アミノ酪酸（gamma-aminobutyric acid：ＧＡＢＡ）は、植物に普遍的に存在する非タンパク質のアミノ酸である。ＧＡＢＡはグルタミン酸からグルタミン酸デカルボキシラーゼ（glutamate decarboxylase：ＧＡＤ）酵素によって生合成される。グルタミン酸は多くのアミノ酸と同様に、α−ケトグルタル酸（α-ketoglutarate）に分解され、次いでこのものは、植物のＴＣＡサイクルを介して、スクシニル−ＣｏＡ（succinyl-CoA）及びコハク酸エステル（succinate）に変換される。植物が物理的又は化学的ストレスを受けると、ＧＡＤがこのストレスに応答して、グルタミン酸からＧＡＢＡの合成を促進し、これにより植物内のＧＡＢＡ含有量が増加することが知られている。
【０００３】
ＧＡＢＡは、動物における中枢神経系の抑制性神経伝達物質（inhibitory Neurotransmitter）として重要な役割を果たしている。ＧＡＢＡは、多くの生理的メカニズムの調節に関与していることが知られており、動物の脳の血流を活発にし、酸素供給量を増加させて脳細胞の代謝機能を増進させる。また、ＧＡＢＡ、ＧＡＢＡ受容体又はＧＡＤの異常が起って、脳内のそれらの含有量が減少すると、アルコール性脳疾患を誘発する可能性が高いと報告されている。更に、ＧＡＢＡは、プロラクチン及び成長ホルモンの分泌にも関与して、興奮抑制効果、抗痙攣作用、精神集中及び記憶力の強化、血圧降下作用、インシュリン効果の増大、憂鬱症解消などを含む、インビボでの様々な作用を示すものと知られていることから、薬学的に高い関心が持たれている。
【０００４】
しかしながら、植物内におけるＧＡＢＡの正確な役割については明確に知られていない。最近の研究で、ＧＡＢＡ関連遺伝子が植物にも発見され（Zik et al., Plant Mol Biol. 1998 Aug; 37(6):967-75 and Turano et al., Plant Physiol. 1998 Aug;117(4):1411-21）、ＧＡＢＡが植物病原菌に対する防御メカニズムに重要な役割を果たしていること(Zimmerli et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2000 Nov 7;97(23):12920-5)、そして、植物内のＧＡＢＡ含有量の増加が植物の収穫高を増大させることが、示されている。そして、ＧＡＢＡ含有量の高い植物の適切な加工品が、ヒト及び動物にいろいろな有益な薬理効果を提供できることを示唆している。
【０００５】
植物は、ストレスを受けるとそのＧＡＢＡ含有量を増加させることが見出された。様々な物理的ストレス（水分、温度、放射線、光、嫌気的条件など）更に化学的ストレスが、植物にＧＡＢＡの蓄積をもたらし、植物におけるＧＡＢＡの合成は上記ストレスへの暴露に加え、種々の環境的要因（機械的な刺激、温度、酸素欠乏、水分ストレスなど）によって誘導されると報告されており、植物が環境的ストレスに対抗するための手段の一つとしてＧＡＢＡ生成のメカニズムを有していると考えられている。例えば、植物内のＧＡＢＡ含有量は、強酸性、機械的応力、低温、低酸素負荷、加熱、乾燥状態、高塩濃度、ウィルス感染などを包含する、環境条件の変化で増加する（Crawford et al., Plant Physiol. 1994 Mar; 104(3): 865-871; Ramputh et al., Plant Physiol. 1996 Aug; 111(4): 1349-1352; Wallace et al., Plant Physiol. 1984 75: 170-175; Aurisano et al., Phytochemistry 1995, 38: 1147-1150; Mayer et al., Plant Physiolo. 1990, 94:796-810; Thompson et al., Plant Physiol., 1996, 41: 1578-1582; Biolarin et al., J. Plant Physiol., 1995, 47:463-468; Cooper et al., Ann. Bot., 1974, 38:625-638）。
【０００６】
これらストレスの間にはお互い関連性はないが、植物のストレス感知後の、ＧＡＢＡの蓄積とストレスの軽減との間には密接な相関関係があることを、これらの調査研究の結果が強力に示唆している。すなわち、ＧＡＢＡがシグナル分子としての役割を持つシグナル伝達経路が存在している。更に、植物が害虫に攻撃されると、ＧＡＢＡが合成されて、植物が虫に対する耐性を示すようになる。
【０００７】
ＧＡＢＡの生理活性が、ますます知られることになり、医薬品としての用途だけでなく、最近では機能性食品にＧＡＢＡを用いることに関心が高まっている。従って、関連する疾患の予防及び治療に役に立つＧＡＢＡ含有量の高い食品の開発が強く要請されている。関係する遺伝子の植物への導入によりＧＡＢＡ合成を制御することに関連して、煙草の植物体にグルタミン酸デカルボキシラーゼ又はカルモジュリン（calmodulin）遺伝子を導入することがＧＡＢＡの含有量を増加させる、と報告されている。ところが、遺伝子組み換えの農産物及び食品そのものが激しい議論を引き起こしているため、現在、この遺伝子組み換えを実現化することは難しい。
【０００８】
大豆は、醤油、味噌、豆腐、大豆油などの原料であって、多くの食品に用いられている。現在市販されている大豆はＧＡＢＡの含有量が低いため、大豆から作られた食品はそれを摂取するヒトに十分な量のＧＡＢＡを提供できない。米国特許出願公開第２００３−１６１９１０号では、クモノスカビ（Rhizopus）属のテンペカビ（Tempe  molds）で大豆を発酵させて製造した、ＧＡＢＡが豊富な発酵大豆食品が開示されている。日本特許出願公開第１１−１５１０７２号によれば、大豆種子を弱酸性の４０℃の水に攪拌しながら４時間浸漬して、１１６ｍｇ／１００ｇの量のＧＡＢＡを得ることができると報告されている。また、韓国特許出願第２００２−３６２９５号では、大豆に物理的ストレス（低温：１５℃、嫌気的条件）及び化学的ストレス（食塩水処理）を同時に加えてＧＡＢＡの含有量を増加させる方法が開示されている。
【０００９】
しかしながら、依然として、大豆の天然のＧＡＢＡ量を増大させて多量のＧＡＢＡを経済的に入手する方法に対するニーズが存在している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者は、大豆のＧＡＢＡ量を増大させることについて研究を行った結果、浸漬処理に関連した冷凍及び解凍処理が、大豆種子のＧＡＢＡ量を画期的に増加させるという事実を見出して、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明の目的は、大豆種子のＧＡＢＡ量を高める方法を提供することにある。
本発明の他の目的は、ＧＡＢＡ量が豊富な大豆種子を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、大豆種子のガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）量を高めることに関する。
本発明の一つの態様として、大豆種子を浸漬すること、浸漬処理された大豆種子を冷凍すること、そして冷凍した大豆種子を解凍することを含んでなる、大豆種子のＧＡＢＡ量を高める方法を提供する。
【００１２】
本発明に使用される「大豆種子」という用語は、大豆の種子（seed）を意味し、特定の品種や形状などに限定されるものではない。例えば、韓国、北米、南米、中国、日本などの生産地域、及びその組成、例えばクンカンデリプ（Keumkang daerib）、クンカンソリプ（Kumgkang sorib）、ゼンジュゼレ（Jeonju jae-re）、ジャンタンベクド（Jang-dan-bag-doo）品種などのタンパク質の含有量が高いもの、及びスコット（Scott）、マンジュテ（Manjutae）、オイアル豆（Oial bean）、黄色中粒（Yellow bean）品種などの脂質含有量の高いもの、に関わらず全ての大豆を本発明で使用することができる。また、全種子、脱皮した種子、及び脱胚軸した種子も使用することができる。大豆は、醤油、味噌、豆乳、豆腐などを含む、多様で容易に得られる加工食品であるばかりでなく、価格も高くないので、ＧＡＢＡの供給源として好ましい。
【００１３】
従来は、主に、大豆を単に０℃より高い温度の水に浸漬する、酸性条件下で大豆を処理する、若しくは微生物で大豆を発酵するような単一処理、又は嫌気的及び食塩水条件で、０℃より上の低温（例えば１５℃）処理を含む並行工程によって、大豆のＧＡＢＡ量を高めることが実施されている。
【００１４】
本発明において、一連の処理工程、すなわち浸漬すること、冷凍すること及び解凍することによって、最高１９１４．４μｇ／乾燥重量（ｇ）までＧＡＢＡ量を高めることができる。本発明の処理を実施すると、大豆のＧＡＢＡ含有量が、未処理のもの（７０μｇ／乾燥重量（ｇ））と比較して２７倍に、そして浸漬だけのもの（実施例２）と比較して３倍に増加する。本発明に従って処理した大豆は、前記日本特許出願公開第１１−１５１０７２号に従って処理した大豆と比較して、１．7倍量のＧＡＢＡを含有している。
【００１５】
大豆種子の浸漬には、水道水、蒸留水、鉱水などの様々な水を用いることができる。浸漬は、大豆種子の重量に対して約１０倍量の水を用いて、５時間又はそれ以上、好ましくは６時間〜１４時間行うことができる。浸漬温度は、０℃又はそれ以上の温度、好ましくは０〜４０℃に保持することが適当である。大豆のＧＡＢＡ含有量は、温度と共に増加して、３０〜４０℃でピークとなる。豆腐、豆乳、大豆油などの大豆加工食品の場合には、加工食品の製造コスト及びＧＡＢＡの含有量を考慮すると、浸漬温度は約１０〜２５℃であり、約１０〜１５℃の温度が便利である。
【００１６】
次に、大豆種子から過剰な水を除去した後、０℃より低い温度で冷凍する。冷凍温度は０℃より低い温度であれば有効であり、好ましくは約−４０〜０℃、より好ましくは約−３２℃〜−５℃、最も好ましくは約−３２℃〜−１９℃である。冷凍の工程は、６時間又はそれ以上、好ましくは６〜２４時間、より好ましくは１２〜２４時間、最も好ましくは１８〜２４時間実施される。
【００１７】
最後に、冷凍した大豆種子を、０℃を超えた温度で、好ましくは１０〜４０℃、より好ましくは１５〜３５℃、最も好ましくは２０〜３０℃で解凍する。ＧＡＢＡの含有量は、冷凍温度が低くなるほど増加し、及び／又は解凍時間が長くなるほど増加する。
【００１８】
一つの好ましい態様では、本発明は、大豆種子を０〜４０℃の水に浸漬すること、その大豆種子を−４０〜０℃の温度で冷凍すること、そして冷凍した大豆種子を１０〜４０℃の温度で解凍することを含んでなる、大豆種子のＧＡＢＡ量を高める方法を提供する。
【００１９】
より好ましい態様では、本発明は、大豆種子を１０〜２５℃の水に浸漬すること、その大豆種子を−３２〜−２０℃の温度で冷凍すること、そして冷凍した大豆種子を２０〜３０℃の温度で解凍することを含んでなる、大豆種子のＧＡＢＡ量を高める方法を提供する。
【００２０】
更により好ましい態様では、本発明は、大豆種子を１５℃の水に浸漬すること、その大豆種子を−３２℃の温度で冷凍すること、そして冷凍した大豆種子を２０℃の温度で解凍することを含んでなる、大豆種子のＧＡＢＡ量を高める方法を提供する。
【００２１】
大豆種子のＧＡＢＡ含有量は、通常の方法、例えば凍結乾燥法によって測定することができる。一つの具体的な測定法として、Institute of Public Health and Enviroment, Japan により示唆されるものがある。
【００２２】
本発明によると、本発明が示している前述の処理工程に関連して、嫌気処理、超音波処理、放射線処理、食塩水、キトサン又はグルタミン酸の溶液での処理、微生物での発酵などのような追加の物理的、化学的、生物学的及び／又は機械的処理によって、大豆種子のＧＡＢＡ量を高めることができる。
【００２３】
本発明の別の態様において、大豆種子を水に浸漬すること、その大豆種子を冷凍すること、そして冷凍した大豆種子を解凍することを含んでなる方法によって製造される、ＧＡＢＡが豊富な大豆種子を提供する。
【００２４】
本発明による大豆種子は、乾燥した大豆種子１ｇ当たり１９００μｇ又はそれ以上のＧＡＢＡを含有し、様々な機能性食品に加工することができる。例えば、ＧＡＢＡ強化の大豆種子は、豆乳、大豆油、豆腐、おから（tofu-residue）、きな粉、醤油、味噌、とうがらし味噌、ヨーグルト、アイスクリーム、大豆もやしなどを製造するために使用でき、これらは全て興奮抑制効果、抗痙攣作用、精神集中及び記憶力の強化、血圧降下作用、インシュリン効果の増大、憂鬱症解消などを含む、インビボでの様々な機能を示す健康食品として利用することができる。また、本発明の大豆種子とその他の生理活性を有する物質を混合して新規な健康食品を製造することもできる。
【００２５】
以下の実施例による説明により、本発明をより良く理解できるであろう。しかし、下記実施例は本発明を限定するものではない。
（実施例）
【実施例１】
【００２６】
浸漬温度によるＧＡＢＡ含有量の変化
大豆種子（米国産）５００ｇに水５０００ｍＬを加えた後、それぞれ１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃及び４０℃に保持した恒温槽（ＪＥＩＯ ＴＥＣＨ、ＢＩ−５００ＭＰ Ｌｏｗ ＴＥＭＰ．）中で６〜１４時間浸漬させながら、２時間間隔で大豆をそれぞれの温度条件で１００ｇずつサンプリングした。サンプリングした大豆種子を凍結乾燥機（Ｖｉｒｔｉｓ ｃｏｍｐａｎｙ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ１２５２５）で凍結乾燥させた後、Institute of Public Health and Enviroment, Japan の方法によって前処理した。すなわち、１ｇの試料をホモジナイズして、７５％エタノール３０ｍＬで２０分間の８０℃還流を３回実施した。エタノール抽出液を濾過して得られた濾液２０ｍＬを５ｍＬに濃縮し、０．４５μｍのフィルターで濾過してｏ−フタルアルデヒドと反応させた。得られた誘導体を、以下の条件（Institute of Public Health and Enviroment, Japan の分析法）でＨＰＬＣカラムを用いて検出して、水に浸漬させない大豆種子を対照とする標準曲線を用いて、ＧＡＢＡの含有量を測定した。
【００２７】
分析条件
１）機器：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ１１００、蛍光検出器
２）カラム：ＺＯＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ（150mm Ｘ 4.5mm、Agilent）
３）カラム温度：３５℃
４）溶媒：４０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ３（Ａ）、ＡＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｄ．Ｗ．＝４５：４５：１０（Ｂ）
５）流速：２．０ｍＬ／ｍｉｎ
６）注入量：２０μＬ
【００２８】
７）ポンププログラム（勾配）
時間（ｍｉｎ）        Ａ（％）               Ｂ（％） 
0                  100                    0
1.9                100                    0
18.1                 43                   57
18.6                  0                  100
22.3                  0                  100
23.2                100                    0
26                  100                    0
【００２９】
８）検出器：蛍光検出器（ピーク幅 > 0.5 min）
時間（ｍｉｎ）    励起(Excitation)      放出(Emission)    ＰＭＴゲイン
0               340                   450              10    
15               266                   305               9    
【００３０】
【表１】
2008507268.tif 000002
【００３１】
表１から明らかなように、対照（７０μｇ／乾燥重量（ｇ））に比べて、水に浸漬させた大豆種子のＧＡＢＡ含有量が増加し、３０〜４０℃の温度で浸漬するときにピークとなる。また、浸漬時間を延ばしても、ＧＡＢＡの含有量がそれに比例して増加しないので、短時間の浸漬が効率的である。
【実施例２】
【００３２】
冷凍及び解凍温度によるＧＡＢＡ含有量の変化
実施例１で１５℃にて８時間浸漬した大豆種子の１００ｇを、水気を除去した後、−４℃、−２０℃又は−３２℃の冷凍庫（ILSHIN DEEP FREEZER、GUDERO）で、１２時間又は２４時間保持した。その後、この大豆種子を２０℃又は３０℃のチャンバーへ移し、１２時間又は２４時間保持した後、ＧＡＢＡの含有量を測定した。その結果（冷凍及び解凍温度によるＧＡＢＡ含有量の変化）を以下の表２に示す。
【００３３】
【表２】
2008507268.tif 000003
【００３４】
表２から分かるように、浸漬すること、冷凍すること及び解凍することの一連の処理により、大豆種子のＧＡＢＡ量が、未処理のものに比べて２７．３倍に、浸漬処理のみのものに比べて３倍に増加した。また、表２のデータは、冷凍温度が低いほど、そして解凍時間が長いほど、ＧＡＢＡの含有量が増加していることを示す。
（産業上の利用可能性）
【００３５】
上で述べたように、本発明によって大豆種子のＧＡＢＡ量を高めることができ、そしてその大豆種子を健康向けに加工することができる。
【国際調査報告】
2008507268.tif 000004
2008507268.tif 000005