(57)【要約】  本発明は、局所的に許容される担体と組合わせたリン酸化ポリフェノールを含有する局所組成物を提供する。本発明の組成物は、皮膚、髪、爪などの角質組織へのポリフェノールの遅延送達のための手段を提供するが、角質組織の酵素によりポリフェノールを脱リン酸化し、それをその天然の活性な形態へ戻す。この組成物は、皮膚の状態の調節に特に有用である。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
化粧的または医薬的に許容される担体と組合わせた少なくとも１種のリン酸化ポリフェノールを含む角質組織へ適用するための局所組成物。
【請求項２】
ポリフェノールが、式：
【数１】
2008513378.tif 000010
［式中、各々互いに独立したＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、水素、水酸化物、カルボキシル、Ｚ、ＯＺ、またはＣＯＯＺであるが、ただし、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５の少なくとも１つは、水酸基またはカルボキシル基であり、Ｚは、１−１０個の炭素原子から成るアルキル鎖またはＣＨＣＨＣＯＯＹであって、Ｙ＝水素または１−４個の炭素原子のアルキル鎖であることを条件とする。］の化合物である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
化合物が、カテコール、ピロガロール、グアイアコール、レゾルシノール、および１，４−ヒドロキノン；１つのＲ基がビニル酸もしくはそのエステルである、ピロガロール、および局所的に許容されるヒドロキシ酸、およびそのエステル、ヒドロキシ桂皮酸および局所的に許容されるそのエステル；それらの混合物、かかる化合物を含有する植物抽出物、およびそれらの混合物より成る群から選択される請求項２の組成物。
【請求項４】
化合物が、没食子酸、メチル没食子酸、エチル没食子酸、プロピル没食子酸、オクチル没食子酸、ｐ−クマル酸、コーヒー酸、フェルラ酸、サリチル酸、シナピン酸、クロロゲン酸、クルクミン、およびそれの類似体より成る群から選択され、カルボン酸基が、Ｃ１−Ｃ１０アルコール、およびそれらの混合物でエステル化されている請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
少なくとも１種のポリフェノールがリン酸化縮合タンニンである請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
縮合タンニンが、局所的に許容されるリン酸化フラボノイド、スチルベン、またはフロログルシノールである請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
縮合タンニンが、リン酸化フラボノイド、またはその混合物である請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
フラボノイドが、フラバノン、カルコン、フラボン、イソフラボン、フラボノール、フラバノール、クマリン、クロモン、ジクマロール、クロマノン、およびクロマノールのリン酸化形態より成る群から選択される請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
化合物が、リン酸化スチルベンである請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
化合物が、リン酸化レスベラトロルまたはリン酸化レスベラトロル誘導体である請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ポリフェノールが、リン酸化された植物抽出物の形態で提供される請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
ポリフェノールが、ユーカリ、アカシア、ケブラコ、マツ、イチョウ、ハギ、トケイソウ、オオアザミ、シトラス、マンサク、イブキジャコウソウ、カミツレ、ノコギリソウ、トクサ、ソフォラ、ソバ、ニワトコ、カバノキ、ブドウ、サンザシ、ラタニア、ミソハギ、アカシア、イトスギ、スノキ、スグリ、ヤグルマギク、バラ、ハイビスカス、ツバキ、マルバ、ポドフィルム、マツブサ、ガイアカム、テオブロマ、クマコケモモ、ダイズ、キナラ、ロスマリヌス、オルトシフォン、ソリダゴ、ピューニカ、リソスペルマム、クルクマ、トチノキ、シナガワハギ、アミ、ヒエラキウム、アンゼリカ、アスペルラ、チャイニーズ没食子、ブドウの種、ブドウの皮、緑茶、紅茶、白茶、ザクロ、ココア、赤ワイン、柿、柑橘類、大豆、およびそれらの混合物のリン酸化された抽出物より成る群から選択される植物抽出物の形態で提供される請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
リン酸化フェノールが、リン酸化された加水分解性タンニンである請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
ポリフェノールが、カテコール、ＤＬ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、ＤＬ−ＤＯＰＡ、カテコールアミン、３−ヒドロキシチラミン、ドーパミン、フロログルシノール、フェノール酸、コーヒー酸、ジヒドロコーヒー酸、フェルラ酸、プロトカテク酸、クロロゲン酸、イソクロロゲン酸、ゲンチシン酸、ホモゲンチシン酸、没食子酸、ヘキサヒドロキシジフェン酸、エラグ酸、ロスマリン酸、リソスペルミック酸、クルクミン；ポリヒドロキシル化クマリン、ポリヒドロキシル化リグナン、ネオリグナン；シリマリン、アピゲノール、ルテオロール、ケルセチン、ケルセタギン、ケルセタゲチン、クリシン、ミリセチン、ラムネチン、ゲニステイン、モリン、ゴシペチン、ケンペロール、ルチン、ナリンギン、ナリゲニン、ヘスペリチン、ヘスペリジン、ジオスミン、ジオスモシド、アメントフラボン、フィセチン、ビテキシン、イソリクイリチゲニン、ヘスペリジン・メチルカルコン、タキシフォリオール、シリビン、シリクリスチン、シリジアニン、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、没食子酸カテキン、没食子酸ガロカテキン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、エピガロカテキン、グルコガリン；プロアントシアニジン、没食子酸プロピル、没食子酸イソアミルオクチル、没食子酸ドデシル、ペンタ−Ｏ−ガロイルグルコース、タンニン酸、ガロタンニン、エラギタンニン、シキミ酸、サリチル酸、レスベラトロル（３，４’，５’−トリヒドロキシスチルベン）；これら化合物の１つもしくはそれ以上を含有する植物抽出物；およびそれらの混合物のリン酸化形態より成る群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
リン酸化レスベラトロルまたはリン酸化レスベラントロル誘導体を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
収斂剤、酸化防止剤、フリーラジカル捕捉剤、にきび抑制剤、抗菌剤、抗真菌剤、キレート剤、老化防止剤、皺取り剤、鎮痛剤、皮膚美白剤、スキンコンディショニング剤、抗刺激剤、抗炎症剤、抗脂肪沈着剤、保湿剤、皮膚軟化剤、有機日焼け止め剤、無機日焼け止め剤、化学的角質除去剤、物理的角質除去剤、セルフタンニング剤、生理活性ペプチド、およびそれらの混合物より成る群から選択される少なくとも１つの皮膚に有益な薬剤を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
局所的に許容される担体と組合わされて少なくとも１種のリン酸化ポリフェノールを含む組成物を皮膚に適用することを含む皮膚の状態を調節する方法。
【請求項１８】
治療される皮膚の状態が、湿疹、脂漏症、乾癬、乾燥症、腫瘍性成長、皮膚炎、毛嚢炎、酒さ、およびにきびより成る群から選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
治療される皮膚の状態が、１種もしくはそれ以上の皮膚の老化の徴候である請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ポリフェノールが、リン酸化フラボノイド、スチルベン、およびそれらの混合物より成る群から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
フラボノイドが、フラバノン、カルコン、フラボン、イソフラボン、フラボノール、フラバノール、クマリン、クロモン、ジクマロール、クロマノン、およびクロマノールのリン酸化形態より成る群から選択される請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ポリフェノールが、リン酸化レスベラトロルまたはリン酸化レスベラトロル誘導体である請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１種のリン酸化ポリフェノールおよび局所的に許容される担体を含む組成物を細胞に適用することを含む角質組織の細胞に対する活性酸素種の効果を調節する方法。
【請求項２４】
ポリフェノールをリン酸化された形態で皮膚に適用することを含むポリフェノールの皮膚への遅延送達の方法。
【請求項２５】
ポリフェノールを水溶性にするのに十分な程度に不溶性ポリフェノールをリン酸化することを含む水不溶性ポリフェノールを水溶性にするための方法。
【請求項２６】
ポリフェノールが、レスベラトロルまたはレスベラトロル誘導体である請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚へ適用するための組成物に関する。具体的には、本発明は、安定化ポリフェノール化合物を含有する局所組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノールとして周知の化合物のグループは多種多様の生理活性を示し、皮膚の治療用の局所製剤に広く使用されている。多くのポリフェノールの、１つの特に広く利用されている機能は、酸化防止剤としてである。この役割において、これらの化合物は２つの役割を果たしうる。すなわち、それらは、送達されるところで組成物を酸化的分解反応から保護するほか、それらが適用される皮膚のフリーラジカルの破壊からの保護を提供する。しかし、皮肉にも、これらの保護分子そのものが、外部源からの損傷の影響を受けやすい。これら多用途の化合物は、熱または光への曝露による劣化の影響をきわめて受けやすく、しばしばそれらが含まれる組成物の変色がもたらされるほか、皮膚への適用時にそれらの効果を減少させる。この弱点により、それらの有用性の真の範囲は未だ完全に実現されていない。保護されていないポリフェノールを含有する組成物は、それらの完全な生物学的潜在力を実現させる可能性が低く、それらの活性を保存するために必要な保護パッケージングまたは特殊な処理の対策は、大規模に商業化するのに費用がかかり過ぎる。
【特許文献１】米国特許第６，１８０，６６２号明細書
【特許文献２】米国特許第４，６９８，３６０号明細書
【特許文献３】米国特許第６，４３７，００４号明細書
【特許文献４】米国特許第６，６９６，４９５号明細書
【特許文献５】欧州特許第１０５８８６４号明細書
【特許文献６】米国特許第６，１４７，１２１号明細書
【特許文献７】欧州特許第９５３３４５号明細書
【特許文献８】米国特許第６，１３２，７４０号明細書
【特許文献９】国際公開第０１／３０３３６号パンフレット
【特許文献１０】欧州特許第１０１３２６０号明細書
【特許文献１１】国際公開第９９／０４７４７号パンフレット
【非特許文献１】イー．ハスラム（Ｅ．Ｈａｓｌａｍ）編、植物性タンニンの化学（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  ｔａｎｎｉｎｓ）、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ロンドン、１９６６年
【非特許文献２】ピーターソン（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ）ら、ジェー  エーエム  ダイエット  アソシ（Ｊ  Ａｍ  Ｄｉｅｔ  Ａｓｓｏｃ）、９８：６８２−５頁、１９９８年
【非特許文献３】化粧品およびトイレタリー産業の化学および技術（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）、ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）とシュミット（Ｓｃｈｍｉｔｔ）編、ブラッキー・アカデミック・アンド・プロフェッショナル（Ｂｌａｃｋｉｅ  Ａｃａｄｅｍｉｃａｎｄ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）、第２版、１９９６年
【非特許文献４】ハリーの化粧品学（Ｈａｒｒｙ’ｓ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃｏｌｏｇｙ）、第８版、エム．レイガー（Ｍ．Ｒｅｉｇｅｒ）編、２０００年
【非特許文献４】レミントン（Ｒｅｍｉｇｎｔｏｎ）：薬学の科学と実際（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２０版、エー．ジェナロ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ）編、２００３年
【非特許文献５】国際的化粧品成分辞書および手引き（Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第１０版、２００４年
【非特許文献６】ペティット（Ｐｅｔｔｉｔ）ら、ジェー．メッド．ケム．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、２００２年、４５、２５３４−２５４２頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、改善された安定性と保持された生理活性とを備えたポリフェノール含有組成物が必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、少なくとも１種のリン酸化ポリフェノールおよび局所的に許容される担体を含む局所組成物を提供し、これらの組成物は、非修飾ポリフェノールで可能である以上の生理活性の安定性および組成完全性（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）を提供する。本発明の組成物は、他の用途の中では、皮膚でのフリーラジカルの除去、皮膚での老化の症状の治療および削減のための方法において特に有用である。本発明は、少なくとも１種のリン酸化ポリフェノールおよび局所的に許容される担体を含有する組成物の皮膚への適用を含む皮膚上へのポリフェノールの遅延放出の方法をも提供する。本発明は、ポリフェノールを水溶性にするのに十分な程度の不溶性ポリフェノールのリン酸化を含む不溶性ポリフェノールを水溶性にするための方法をも提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明の組成物では、有効成分としてポリフェノールのリン酸エステルが使用される。この有効成分は、分子上の１つもしくはそれ以上の水酸基のリン酸化によって安定化されているポリフェノール分子である。分子のリン酸化は結果として劣化に対する脆弱性の低下をもたらすが、修飾された化合物は、リン酸基の除去と同時に非修飾ポリフェノール分子本来の生理活性を保持する。一つの実施形態では、本発明の組成物は、式ＲＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＲＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはＲＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２によって表されるポリフェノールのリン酸化エステルおよび／またはこれらのうち１つの金属塩を含むが、Ｒは、１つもしくはそれ以上のリン酸化エステル基を含有するように修飾されうる有機ポリフェノール分子を表す。
【０００６】
この組成物において使用されるポリフェノールは、哺乳類の皮膚への局所適用に化粧的または医薬的に許容されるいずれのものでよい。「化粧的または医薬的に許容される」とは、哺乳類の皮膚、髪または爪、好ましくは、ヒトの皮膚、髪または爪で安全かつ有効量で使用されうる化合物を意味する。生理活性ポリフェノールは広く周知であり、自然源、例えば、さまざまな植物抽出物などに容易に見出される。本発明の組成物において有用なポリフェノールは、天然ポリフェノール、ポリフェノールの合成誘導体、および少なくとも１種のポリフェノール成分を含有する植物抽出物を包含すると理解される。
【０００７】
本発明の一つの実施形態において、リン酸化されるポリフェノールは、少なくとも１つの水素基を含む１つの芳香環を有する単純化合物である。かかる化合物は一般式：
【数２】
2008513378.tif 000002
［式中、各々互いに独立したＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、水素、水酸化物、カルボキシル、Ｚ、ＯＺ、またはＣＯＯＺ、ただし、好ましくは、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５の少なくとも１つが水酸基またはカルボキシル基であり、Ｚが、１−１０個の炭素原子から成るアルキル鎖またはＣＨＣＨＣＯＯＹであって、Ｙ＝水素または１−４個の炭素原子のアルキル鎖であることを条件とする。］を有する。好ましくは、Ｒ置換基の１つ以上が水酸基である。このグループの典型的な化合物としては、２つの水酸基を有するカテコール、ピロガロール、グアイアコール、およびレゾルシノール；３つの水酸基を有するピロガロールおよびヒドロキシ酸およびそのエステル、例えば、没食子酸、メチル没食子酸、エチル没食子酸、プロピル没食子酸、およびオクチル没食子酸；１つの水酸基およびカルボキシル基を有するサリチル酸；およびヒドロキシ桂皮酸およびエステルであって、１つのＲ基が、ビニル酸またはエステル、例えば、ｐ−クマル酸、コーヒー酸、フェルラ酸、シナピン酸、クロロゲン酸、クルクミン、およびカルボキシル酸基が単純なＣ１−Ｃ１０アルコールでエステル化された類似体である。
【０００８】
しかし、好ましい実施形態において、リン酸化されるべき局所的に有用なポリフェノールは、総称的にタンニンとして周知の化合物の群から選択される複雑な分子（ｃｏｍｐｌｅｘ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）である。タンニンは，２つの主な群、縮合タンニンおよび加水分解性タンニンを含む。本発明のリン酸化タンニンは、一般的に、一般式ＡｒＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２生成物、ＡｒＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはＡｒＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２生成物および／またはこれらのうちの１つの金属塩によって表され、Ａｒは縮合または加水分解性タンニンを表す。加水分解性と縮合タンニンおよびそれの例は、イー．ハスラム（Ｅ．Ｈａｓｌａｍ）編による標準著作物「植物性タンニンの化学（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  ｔａｎｎｉｎｓ）」、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ロンドン、１９６６年に十分に記載されており、その内容は参照により本明細書に援用される。
縮合タンニンは、少なくとも２つの芳香環を有する大きな構造の一部であるフェノール誘導体から成り、完全に加水分解されず、少なくとも１つのフェノール環が少なくとも１つの炭素−炭素結合（単一または二重）もしくは分子の別の部分とのエーテル結合によって結合している。縮合タンニンは、一般式
【数３】
2008513378.tif 000003
〔式中：
−ＡおよびＢは、単一または二重結合によって連結される炭素原子であり、
−Ｄは、水素、水酸化物、または没食子酸もしくはエラグ酸でエステル化された水酸化物であり、
−Ｅは、水素、水酸化物、Ｏ−グルコース、またた式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）に対応する別の縮合タンニンであり、
−Ｒは、水素、水酸化物、Ｏ−グルコース、１−３個の炭素原子を含有するＯ−アルキル基、もしくはＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２より成る群から選択されるリン酸基であってＲの少なくとも１つがリン酸基であるかかるリン酸基の金属である。〕によって表される、またはこれに対応する縮合タンニンである。
【０００９】
典型的な生成物のカテゴリーは、フラボノイド、スチルベン、およびフロログルシノールであり、その各々の群は、局所的に有用なポリフェノールを含有する。
【００１０】
一つの好ましい実施形態において、縮合タンニンはフラボノイドである。フラボノイドは、一般式（Ｉ）または（ＩＩ）
【数４】
2008513378.tif 000004
［式中：
−ＡおよびＢは単一または二重結合によって連結される炭素原子であり、
−Ｄは、水素、水酸化物、または没食子酸もしくはエラグ酸でエステル化された水酸化物であり、
−Ｅは、水素、水酸化物、Ｏ−グルコース、または式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）に対応する別のリン酸フラボノイドであり、
−Ｒは、水素、水酸化物、Ｏ−グルコース、１−３個の炭素原子を含有するＯ−アルキル基、もしくはＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２より成る群から選択されるリン酸基であってＲの少なくとも１つがリン酸基であるかかるリン酸基の金属である。］の構造を有する化合物と定義されうる。
【００１１】
フラバノール、フラボノール、フラボン、フラバノン、イソフラバン、イソフラボンはすべて上記のフラボノイドのカテゴリーに属する。これらの語は当業者に周知であり（例えば、ピーターソン（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ）ら（１９９８年）、ジェー  エーエム  ダイエット  アソシ（Ｊ  Ａｍ  Ｄｉｅｔ  Ａｓｓｏｃ）、９８：６８２−５頁参照）、局所用途における広範囲な有用性を有する。かかるフラボノイドは、植物油など天然生成物において生じうるが、例えば、上記の一般構造のダイマーまたはオリゴマーよりもはるかに複雑な構造、またはさらに複雑なその誘導体である。
【００１２】
リン酸化縮合タンニンのカテゴリーにおける特定の好ましい化合物は、式（ＩＩＩ）
【数５】
2008513378.tif 000005
［式中：
−Ｒ１は、水素、水酸化物、Ｏ−グルコース、１−３個の炭素原子を含有するＯ−アルキル基、もしくはＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２より成る群から選択されるリン酸基であってＲ１の少なくとも１つがリン酸基であるかかるリン酸基の金属であり、
−Ｄは、水酸化物、Ｏ−グルコース、またはＲ１について定義された０−３個のリン酸基を有するガロイル残基であり、
−Ｒ２、は水素または式（ＩＩＩ）の別の成分である。］による化合物である。
【００１３】
この式による典型的な生成物カテゴリーは、フラバノールおよびフラバン−３，４−ジオールである。
【００１４】
リン酸化のために有用なポリフェノールのより包括的なリストが以下に示されている。手短には、フラバノールの典型的な例はカテキン、エピカテキン、カテキンまたはエピカテキンのダイマー、モノマーがＣ−Ｃ結合によって連結されているカテキンまたはエピカテキンのオリゴマーおよびポリマーである。オリゴマーは、プロアントシアニジンとして周知であり、ポリマーは、縮合タンニンとして周知である。このカテゴリーに属する化合物の別のグループは、シアニジン、アントシアニジン、およびプロシアニジンである。フラボノールの典型的な例は、ケルセチン、ケンペロール、またはミリセチンである。
【００１５】
局所有用性を有する化合物を含有する縮合タンニンの別のグループは、フェノールヒドロキシル官能基を有するスチルベン誘導体である。それの典型的な例は、レスベラトロルの異性体である。縮合タンニンのさらに別のグループは、ピロガロールのダイマー、オリゴマー、およびピロガロール部分がエーテル結合または２個の芳香炭素原子間でＣ−Ｃ結合によって連結されているポリマーから成るフロログルシノールである。縮合タンニンとして定義されるこれら化合物のすべては、さらに、エラグ酸または没食子酸などの酸でエステル化されうる。エラグ酸自体も縮合タンニンとみなされうる。
【００１６】
１種もしくはそれ以上の種類の縮合タンニンを含有する天然抽出物の例としては、ユーカリ属、アカシア属、シノプシス（Ｓｃｈｉｎｏｐｓｉｓ）属（ケブラコ（Ｑｕｅｂｒａｃｈｏ））、カスタネア（Ｃａｓｔａｎｅａ）属、コナラ属、リゾフォラ（Ｒｉｚｏｐｈｏｒａ）属、ピセア（Ｐｉｃｅａ）属、マツ属、もしくはラリックス（Ｌａｒｉｘ）属などの樹木からのタンニン抽出物、または他の植物源由来のタンニン抽出物、例えば、ブドウの種の抽出物、緑茶の抽出物、紅茶の抽出物、白茶、ココアの抽出物、ワインポリフェノール、果物または野菜、例えば、カキまたはカキタンニン（Ｋａｋｉ  ｔａｎｎｉｎ）、ブドウ、ザクロ（ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ）、ベリー類、柑橘類、または大豆からのタンニン、またはローズマリーなどのハーブやスパイスからのタンニンなどが挙げられる。縮合タンニンは、フェノール化合物間のカップリング反応によって合成的に調製されてもよい。これらの化合物は、一般名シンタン（Ｓｙｎｔａｎ）で周知である。
【００１７】
本発明の局所組成物は、完全または部分的にリン酸化されうる１種もしくはそれ以上の縮合タンニンを含有しうる。
【００１８】
加水分解性タンニンは、天然生成物で生じる複雑な分子（ｃｏｍｐｌｅｘ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）であり、中心核とエステル結合している、または分子の芳香ヒドロキシル官能基とエステル結合しているヒドロキシ安息香酸またはヒドロキシ桂皮酸を有する中心核から成る。この最後の種類の結合は、デプシド（ｄｅｐｓｉｄｉｃ）結合としてよく知られている。１つもしくは２つのデプシド（ｄｅｐｓｉｄｉｃ）結合を含有する生成物の例は、２没食子酸および３没食子酸である。これらヒドロキシ安息香酸の例は、没食子酸およびエラグ酸である。ヒドロキシ桂皮酸の例は、コーヒー酸、フェルラ酸、またはシナピン酸である。
【００１９】
加水分解性、天然タンニンは、すべて、かかる酸、またはこれら酸が一般にグルコース、グリセロール、キナン酸、シキミ酸、糖質、または糖とエステル結合しているものの混合物を含有する。
【００２０】
最も豊富な中心核は、例えば、チャイニーズ没食子およびアレッポ・ナッツからのタンニンにおけるグルコース、および、例えば、タラ・タンニンにおけるキナ酸である。これらの中心核とエステル結合している最も豊富な有機酸は、没食子酸および／またはエラグ酸である。エラグ酸を含む加水分解性タンニンは、エラギタンニンとして周知である。
【００２１】
グルコースおよび没食子酸に基づく加水分解性タンニンは、通常、没食子酸およびそのオリゴマー、モノガロイルグルコース、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−、オクタ−、ノナ−、デカ−、ウンデカ−、およびドデカガロイルグルコース、および少ないエラギタンニンである。高置換基も生じるが、稀である。それらは、上述の化合物の、植物源に大きく依存する割合での混合物である。
【００２２】
加水分解性タンニンは、通常、チャイニーズ没食子、ベンガル・キノ（Ｂｅｎｇａｌ  Ｋｉｎｏ）、アレッポ・ナッツ、スマック・タンニン、トルコ・タンニン、タラ・タンニン、カエデ・タンニンなど植物材料の抽出物によって得られる。加水分解性タンニンは、すべての植物に存在し、したがって、他の植物源からも抽出されうる。局所的に許容される加水分解性タンニン抽出物は、広く市販されている。あるいは、加水分解性タンニンは、ヒドロキシ安息香酸のダイマーおよびオリゴマー、例えば、ダイマーエステル２没食子酸、エラグ酸、３没食子酸、およびより高いオリゴマーで構成されてもよい。加水分解性タンニンは、没食子酸またはエラグ酸がエステル結合する中心核として使用される縮合タンニンからも成りうる。異なる特性を有するタンニンの組合せが生成物の性能を改善するために使用されうる。天然に存在する他の誘導体としては、メタノールまたはエタノールなど単純アルコールを有する没食子酸および／またはエラグ酸のエステルおよびエーテルが挙げられる。これらは、上記と同じようにして、より複雑な構造物とも結合しうる。リン酸化された縮合または加水分解性タンニンは、それに結合した２つもしくは３つのフェノール化合物とともに１つの中心リン酸基から成るダイマーまたはトリマーリン酸でもありうる。それらは、互いに結合した２つもしくは３つのリン酸を含有するジリン酸またはトリリン酸でもありうる。
【００２３】
明細書および特許請求の範囲において使用されている「リン酸化ポリフェノール」または「リン酸化タンニン」という語、または個々の化合物への言及は、上記のリン酸化されたベース化合物だけではなく、それのリン酸化された誘導体および類似体、それらの混合物、およびリン酸化された植物抽出物またはそれらの混合物を含むと理解されるであろう。
【００２４】
本発明において有用なリン酸化ポリフェノールは、無機塩基を使用して水媒体中でポリフェノールと塩化ホスホリルを反応させることによって調製されうる。好ましい実施形態において、この水媒体は水である。無機塩基は、金属水酸化物、炭酸塩、リン酸および／またはアンモニアでありうる。最も好ましくは、水酸化ナトリウムである。塩基はリン酸化剤、すなわち試薬の添加前および／または添加中に添加されうる。
【００２５】
塩基は、ヒドロキシル官能基の酸性度に応じて、反応混合物のｐＨを５〜１３の値に上昇させるために使用される。好ましくは、反応混合物のｐＨは、７〜１２に維持される。
【００２６】
塩化ホスホリルは、好ましくは、一般式：
ＲｎＰＯＸ３−ｎ（ＩＶ）またはＲＶＰＸＷ（Ｖ）
［式中、ｎ＝０、１、または２であり、ｖ＋ｗ＝３または５であり、Ｘは、塩化物、臭化物、またはヨウ化物であり、Ｒは、１−８個の炭素原子のアルキル鎖、またはＯ−フェニル、またはＯ−ベンジルを有するアルコキシドである。］によって表される。本発明による実施形態において、塩化ホスホリルはオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）である。
【００２７】
リン酸化剤として使用される塩化ホスホリルは、好ましくは、フェノール性抗酸化剤の構造、およびより具体的には、分子に存在する水酸基の量に応じて、フェノールヒドロキシ化合物１モルあたり０．５等量〜２５等量以上の割合で適用される。リン酸化の程度は、例えば、高圧クロマトグラフィーを使用して制御されうる。
【００２８】
リン酸化ステップ後、反応混合物は酸性化されうる。好ましくは、約２〜約７のｐＨは、鉱酸の添加によって得られる。
【００２９】
好ましくは、出発材料を構成するフェノール化合物は、縮合および／または加水分解性タンニンなどのより複雑なポリフェノール化合物である。水溶液中で得られる生成物はかかるものとして使用され、蒸留または当業者に周知の他の手段によって濃縮され、および／または乾燥されうる。本発明によるリン酸化生成物は、かかるものとして、または程度の差はあるが精製された形態で存在しうる。
【００３０】
上記の広範のグループの中で、一部の特定の種類のポリフェノールが、皮膚、髪、および／または爪への生理活性および利点が認められていることから、リン酸化の出発材料として特に好ましい。一般的に言えば、ピロガロールまたは没食子酸などの単環芳香族化合物よりも、より複雑な多環芳香族ポリフェノールが好ましい。特に、フラボノイド化合物が、局所適用のために広く使用され、広範囲の既知の利点を与える。一つの実施形態において、本組成物において使用するための好ましい種類のフラボノイドとしては、単独または併用して、リン酸化フラバノン、カルコン、フラボン、イソフラボン、フラボノール、フラバノール、クマリン、クロモン、ジクマロール、クロマノン、またはクロマノールが挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、本発明の組成物においてきわめて有用である他の化合物は、レスベラトロル、その異性体および誘導体など、広範囲の活性をも有するリン酸化ヒドロキシスチルベンである。
【００３１】
限定されないが、本組成物において使用されうる特定の化合物または化合物のグループは、以下のもののリン酸化形態である：ＤＬ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンまたはＤＬ−ＤＯＰＡなどのカテコールおよびそれらの誘導体；３−ヒドロキシチラミンまたはドーパミンなどのカテコールアミン；フロログルシノール；コーヒー酸、ジヒドロコーヒー酸、フェルラ酸、プロトカテク酸、クロロゲン酸、イソクロロゲン酸、ゲンチシン酸、ホモゲンチシン酸、没食子酸、ヘキサヒドロキシジフェン酸、エラグ酸、ロスマリン酸、またはリソスペルミック（ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｉｃ）酸、およびそれらのエステルまたはそれらのヘテロサイドなどのそれらの誘導体；クルクミン；サリチル酸、ポリヒドロキシル化クマリン、ポリヒドロキシル化リグナン、またはネオリグナン；シリマリン、アピゲノール（ａｐｉｇｅｎｏｌ）、ルテオロール、ケルセチン、ケルセタギン（ｑｕｅｒｃｅｔａｇｉｎ）、ケルセタゲチン、クリシン、ミリセチン、ラムネチン、ゲニステイン、モリン、ゴシペチン、ケンペロール、ルチン、ナリンギン、ナリゲニン、ヘスペリチン、ヘスペリジン、ジオスミン、ジオスモシド（ｄｉｏｓｍｏｓｉｄｅ）、アメントフラボン、フィセチン、ビテキシン、イソリクイリチゲニン、ヘスペリジン・メチルカルコン、タキシフォリオール（ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ）、シリビン、シリクリスチン、シリジアニン、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、没食子酸カテキン、没食子酸ガロカテキン、没食子酸エピカテキン、没食子酸エピガロカテキン、およびエピガロカテキン；グルコガリン；プロアントシアニジン；没食子酸プロピル、没食子酸イソアミルオクチル、没食子酸ドデシル；ペンタ−Ｏ−ガロイルグルコース；タンニン酸；ガロタンニン、エラギタンニン、シキミ酸、およびレスベラトロル（３，４’，５’−トリヒドロキシスチルベン）、および前記化合物の誘導体または類似体。これらのリン酸化形態の各々は、単独で、あるいは別のリン酸化ポリフェノールまたは非リン酸化ポリフェノールと併用して使用されうると認められるであろう。
【００３２】
有用な化合物または化合物のグループが、ほぼ純粋な形態、すなわち、８０％以上の純度で使用され、またはそれらが植物抽出物の一部として提供されることも認められるであろう。ほぼすべての植物が、何らかの形態のポリフェノールを含有するが、ポリフェノールの特に豊富な供給源であると認められている特定の植物または植物抽出物がある。組成物において有用な抽出物を生じうる植物の例としては、以下の属の植物が挙げられる：イチョウ、ハギ、トケイソウ、オオアザミ、シトラス（Ｃｉｔｒｕｓ）、マンサク、イブキジャコウソウ、カミツレ、ノコギリソウ、トクサ、ソフォラ（Ｓｏｐｈｏｒａ）、ソバ、ユーカリ、ニワトコ、カバノキ、ブドウ、マツ、サンザシ、コナラ、ラタニア（Ｒａｔａｎｈｉａ）、ミソハギ、アカシア、イトスギ、スノキ、スグリ、ヤグルマギク、バラ、ハイビスカス、ツバキ、マルバ（Ｍａｌｖａ）、ポドフィルム（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ）、マツブサ、ガイアカム（Ｇａｉａｃｕｍ）、テオブロマ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ）、クマコケモモ、ダイズ、キナラ（Ｃｙｎａｒａ）、ロスマリヌス（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ）、オルトシフォン（Ｏｒｔｈｏｓｉｏｈｏｎ）、ソリダゴ（Ｓｏｌｉｄａｇｏ）、リソスペルマム（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ）、クルクマ（Ｃｒｕｃｕｍａ）、トチノキ、シナガワハギ、アミ（Ａｍｍｉ）、ヒエラキウム（Ｈｉｅｒａｃｉｕｍ）、アンゼリカ（Ａｎｇｅｌｉｃａ）、およびアスペルラ（Ａｓｐｅｒｕｌａ）。具体的には、ポリフェノールの特に豊富な供給源として、赤ワイン、グレープジュース、ブドウの皮、ブドウの種、ブルーベリー、柿、ユーカリ、ココア、緑茶、紅茶、白茶、ザクロ（ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ）、およびチャイニーズ没食子が挙げられることは公知である。したがって、本明細書および特許請求の範囲においてリン酸化ポリフェノールに言及する場合、この語句は、リン酸化された単離化合物だけでなく、ポリフェノールを含有する植物材料の抽出物が、リン酸化処理を受けて、そこに含まれるポリフェノールをリン酸化したものをもカバーすることを意味する。
【００３３】
実施例５に示されているように、こうして調製されるリン酸化化合物が、それらの非修飾対応物と比べて化粧品処方において強化された安定性を示す。
【００３４】
この化合物は、治療される局所表面での活性ポリフェノール分子の遅延放出の達成にも有用である。有利な効果が持続するように、かつ大量の有効成分が一回量で送達されうるように、ある期間にわたって持続する局所組成物の活性を有することがしばしば好ましい。実施例６に示されているように、リン酸化化合物は皮膚に存在するホスファターゼによって脱リン酸化され、脱リン酸化化合物は、したがって、同じ分子の非リン酸化変形で一般的であるように迅速に利用可能ではなく、皮膚へ徐々に放出される。したがって、本発明の組成物は二重の潜在的利点を提供する。すなわち、その中に含まれる活性化合物は容易に劣化せず、したがって、処方の時間と適用の時間との間でより多くの活性を保持しうるとともに、治療表面への活性の遅延放出は、その化合物のより効果的な送達を可能にする。
【００３５】
実施例６に示されているように、ホスファターゼによる脱リン酸化は、生理活性の回復をもたらす。
【００３６】
追加の予想されない利点に、特定のポリフェノールのリン酸化の結果としてそれらの水溶性の増大がある。これは特に、比較的水に不溶性の非リン酸化形態であるレスベラトロルで明らかにされている。比較的極性のあるリン酸基を分子に添加すると、その極性が増大し、したがって、実施例２に示されているように、水および極性溶剤に対するその可溶性が増大する。水溶性の不足は、処方上の厳しい制限になりえ、したがって、リン酸化ポリフェノールは、局所適用のための組成物の処方においてその非リン酸化対応物よりも有用でありうる。
【００３７】
リン酸化化合物は、その非リン酸化対応物とほとんど同じように局所的に許容される担体と組合せて組成物に処方されうる。担体（ｃａｒｒｉｅｒｓ）は、医薬的または化粧的に許容される、すなわち、皮膚、髪、または爪などの外部体表面への適用を目的とする医薬品または化粧品の用途の担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）であり、その担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）は、有効成分を標的に送達し、治療されることを目的とする表面に適用されたときに、平均的なヒトまたは他の受け手の生物に害をもたらすことがない。ここで使用される「医薬品」または「化粧品」は、ヒトおよび動物、好ましくは、哺乳類の医薬品または化粧品であって、有効成分と相性が良いもの、例えば、ゲル、クリーム、ローション、軟膏、ムース、スプレー、固形スティック、粉末、懸濁液、分散液などを包含すると理解される。さまざまな種類の担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）の処方のための技術は、当業者に公知であり、例えば、化粧品およびトイレタリー産業の化学および技術（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）、ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）とシュミット（Ｓｃｈｍｉｔｔ）編、ブラッキー・アカデミック・アンド・プロフェッショナル（Ｂｌａｃｋｉｅ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  ａｎｄ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）、第２版、１９９６年、ハリーの化粧品学（Ｈａｒｒｙ’ｓ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃｏｌｏｇｙ）、第８版、エム．レイガー（Ｍ．Ｒｅｉｇｅｒ）編（２０００年）、およびレミントン（Ｒｅｍｉｇｎｔｏｎ）：薬学の科学と実際（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２０版、エー．ジェナロ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ）編、（２００３年）において見出されうるが、これらの各々の内容は参照により本明細書に援用される。担体（ｃａｒｒｉｅｒ）の化学組成は、有効成分の性質および目的とする最終用途に応じて変わる。しかし、局所送達に有用である典型的な組成物、例えば、水分散体、液状の無水組成物、固体または粉末形態、エマルジョン（水中油またはシリコーン、油またはシリコーン中水、多重エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン）などのいずれもが、成分が好まれる活性と相性が良いという条件で使用されうる。組成物は、例えば、日焼け止め剤、セルフ・タナー、皮膚保湿剤およびコンディショナー、エクスフォリエーター、にきび抑制組成物、老化防止組成物などのスキンケア商品；または口紅、リップグロス、ファンデーション、アイシャドー、ほお紅、またはアイライナーなどのカラー化粧品；髪、まつげ、および／または頭皮への適用のために、例えば、マスカラ、ラッシュプ・ライマー、またはコーティング製品、髪成長遅延組成物、髪成長促進組成物、シャンプー、またはコンディショナー；または爪への適用のために、例えば、ネイル・ラッカー、トップ・コート、ベース・コート、リッジ・フィラー、およびネイル・コンディショナーが皮膚への適用のために処方されうる。これらポリフェノールの非リン酸化形態の多くは、すでに局所用途に処方されているため、目的とする特定のリン酸化ポリフェノールの適切な処方を決定するのは、従��技術の中で十分にできる。担体（ｃａｒｒｉｅｒ）と組合わされるリン酸化ポリフェノールの量は、ポリフェノールの性質および意図される結果によって変わるが、通常、組成物中のポリフェノールの量は、組成物重量の約０．０００１〜約９９％、好ましくは、約０．００１〜約５０％、より好ましくは、約０．０１〜約３０％、最も好ましくは、約０．０５〜約１０％である。単離化合物ではなく、ポリフェノール含有抽出物を使用する場合、組み合わせる量は、抽出物中のポリフェノール濃度によって決まり、ポリフェノールそれ自体の上記ガイドラインから推定されうる。組成物は、組成物の活性を強化または補完しうる他の局所的に有用な成分をも含有しうる。組成物中の添加成分の選択は、組成物の目的とする用途によっても決まる。標準の局所的に有用な成分は、例えば、国際的化粧品成分辞書および手引き（Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第１０版、２００４年に見出されるが、その内容は参照により本明細書に援用される。リン酸化フェノールと組合されうる局所的に許容される成分の有用なカテゴリーの例としては、香料または精油；顔料または染料；凝固防止剤、消泡剤、賦形剤および充填剤、増粘剤、ゲル化剤、構造剤、および乳化安定剤；界面活性剤、および乳化剤；標的上での付着および保持を強化する被膜剤、高圧ガス、防腐剤、およびｐＨ調整剤、および中和剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
リン酸化ポリフェノールへの添加に特に好ましいのは、組成物が適用される角質表面への追加の利点を提供する、以下、「皮膚に有益な薬剤」と称する成分である。かかる皮膚に有益な薬剤の例としては、丁子油、メントール、樟脳、ユーカリ油、オイゲノール、乳酸メチル、ハマメリス水などの収斂剤；アスコルビン酸、その脂肪エステルおよびリン酸、トコフェロールおよびその誘導体、Ｎ−アセチルシステイン、ソルビン酸およびリポ酸などの酸化防止剤またはフリーラジカル捕捉剤；サリチル酸および過酸化ベンゾイルなどのにきび抑制剤；カプリリルグリコール、トリクロサン、フェノキシエタノール、エリスロマイシン、トルナフテート、ナイスタチン、またはクロトリマゾールなどの抗菌剤または抗真菌剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ベンゾカイン、リドカイン、またはプロカインなどの局所鎮痛剤；レチノイドまたはヒドロキシ酸などの老化防止／皺取り剤；カンゾウ、リン酸アスコルビル、ヒドロキノン、またはコウジ酸などの皮膚美白剤、スキンコンディショニング剤（例えば、混合型（ｍｉｓｃｅｌｌａｎｅｏｕｓ）および閉塞型（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ）を含む保湿剤）、コーラ、ビサボロール、アロエ、またはパンテノールなどの抗刺激剤、ヒドロコルチゾン、クロベタゾール、デキサメタゾン、プレドニゾン、アセチルサリチル酸、グリシルリジン酸、またはグリシルリチン酸などの抗炎症剤；カフェイン、および他のキサンチンなどの抗脂肪沈着剤；アルキレンポリオール、またはヒアルロン酸などの保湿剤；油性エステルまたはワセリンなどの皮膚軟化剤；アヴォベンゾン、オキシベンゾン、桂皮酸オクチルメトキシ、二酸化チタン、または酸化亜鉛などの日焼け防止剤（有機または無機）；Ｎ−アセチルグルコサミン、リン酸マンノース、ヒドロキシ酸、ラクトビオン酸、ピーチカーネル（ｐｅａｃｈ  ｋｅｒｎｅｌ）、または海塩などの角質除去剤（化学的または物理的）；ジヒドロキシアセトンなどのセルフタンニング剤；およびパルミトイルペンタペプチド、またはアルジレリンなどの生理活性ペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。これらの補助的な皮膚に有益な薬剤は、意図した目的に使用される場合に活性であるために有効であることが通常周知の量で使用される。
【００３９】
本発明の組成物は数々の用途を有する。すでに上記されているように、グループとしてのポリフェノールは、無数の生理活性を有し、かつ多くの種類のポリフェノールは、一種類以上の活性を有すると報告されている。例えば、さまざまなタンニン、特にフラボノイドは、アトピー皮膚炎、湿疹、乾癬、毛嚢炎、酒さ、およびにきびなどの機能減退性または過反応性皮膚状態の治療における活性を有し（米国特許第６，１８０，６６２号明細書）；フリーラジカル捕捉剤および酸化防止剤として老化の徴候の予防において有用であり（米国特許第４，６９８，３６０号明細書および同第６，４３７，００４号明細書）、かつ酸化窒素およびアポトーシス調節因子、抗癌剤、および酸化的ＤＮＡ損傷の抑制剤として（米国特許第６，６９６，４９５号明細書）報告されている。同様に、スチルベン、および特にレスベラトロルは、皮膚タンパク質の糖化の抑制において（欧州特許第１０５８８６４号明細書）；コラーゲンの合成または線維芽細胞の増殖の促進において（米国特許第６，１４７，１２１号明細書）；微生物増殖の阻害において（欧州特許第９５３３４５号明細書）；皮膚美白化において（米国特許第６，１３２，７４０号明細書）；皮膚癌、日焼け、湿疹、皮膚炎、または乾癬の予防および／または治療において（国際公開第０１／３０３３６号パンフレット）；ヘアカラーにおいて（欧州特許第１０１３２６０号明細書）；および植物エストロゲンとして（国際公開第９９／０４７４７号パンフレット）活性を有すると言われている。前記特許文書のすべての開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。したがって、多数のポリフェノールが、角質組織、特に皮膚の状態の調節において顕著な有用性を有することは明らかである。したがって、本発明は、有効量のリン酸化ポリフェノールを含有する組成物を組織に適用することを含む皮膚、髪、または爪などの角質組織の状態を調節するための方法を提供する。有効量のリン酸化ポリフェノールは、意図した治療効果を達成することができる量のポリフェノールである。これは、典型的には、非リン酸化ポリフェノールに使用される量の範囲となるであろうが、いずれにしても、既知の化合物の範囲から容易に推定される。
【００４０】
本発明の特定の用途において、目的とする活性は、皮膚の状態を調節する能力である。上記の引例、およびその他の多くは、リン酸化ポリフェノールが皮膚に対して有しうる多様な効果を示す。本明細書で使用される皮膚の状態を「調節する」という語は、皮膚の状態、具体的には、病状を表す状態、および、深刻ではないが、不快感を引き起こし、または美しくないもしくは魅力的でない外見を呈しうる状態の治療および予防を意味すると理解される。治療され、改善され、低減され、または予防されうる皮膚の状態の例としては、湿疹、脂漏症、乾癬、乾燥症、腫瘍性成長、皮膚炎、毛嚢炎、酒さ、およびにきびが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
好ましい実施形態において、調節される皮膚の状態は、まとめて皮膚の老化の徴候と言われる１種もしくはそれ以上の状態である。皮膚の外観は、通常、時間と関連した多くの内部要因により年齢とともに変化する。しかし、皮膚は、日光、汚れ、またはタバコの煙など環境的要因への過剰な曝露によって年齢の割りに早く老化する場合もある。次の用語、老化に起因する皮膚の状態の調節は、経時的老化および光もしくは環境誘発性老化の徴候を包含することを意味する。老化過程の徴候は多く、かつ外的（すなわち、直ちに可視的）または内的（すなわち、裸眼では直ちに可視的ではない）でありうる。当業者は、老化の徴候の多数の例を容易に認めるであろう。かかる例としては、限定されないが、とりわけ、小皺や皺、深いしわ、圧痕や瘤、毛穴の径の増大、角化、皮膚の脱落または粗さ、肌の色合いの不均一または染み、皮膚の黄化、濃い眼の下の影またはくま、皮膚の弾性の喪失、たるみ（目尻や顎の腫れを含む）、弾性線維症、皮膚の弾力性または張りの喪失、色素沈着過度、しみやそばかす、異常な分化、過剰な角質化、コラーゲン分解、クモ状静脈、または毛細血管拡張症が挙げられる。
【００４２】
皮膚の状態の調節において確認される活性の一部は、フリーラジカル捕捉剤または酸化防止剤としてのそれらの公知の活性でありうる。現代人が日常的に曝露されているさまざまな食事要素、農薬、日光、タバコの煙、大気汚染、麻酔剤、および芳香族炭化水素など多くの環境要因、およびさまざまな内因性好気的反応は、スーパーオキシドアニオンラジカル、過酸化水素、およびヒドロキシルイオンのほか、一重項酸素（厳密に言えば、フリーラジカルではないが、ここでは、便宜上、かかるものとして含まれる）などの高活性酸素種を生成しうる。これら高活性酸素種は、細胞成分への深刻な損傷をもたらしうる多くの反応に関与している；例えば、酸化的ラジカルは、ＤＮＡの塩基および糖分子を攻撃し、分子構造を変化させ、それによって生体機能を妨げる。それらはまた、細胞膜中の不飽和脂肪酸と相互作用し、脂質過酸化反応を引き起こしうるが、これは、結果として、膜のタンパク質：脂質相互作用の変化だけではなく、多くの望ましくない効果、例えば、ＤＮＡ合成、アデニルシクラーゼ、およびグルコース−６−リン酸の阻害、毛細管透過性の増大および血小板凝集の阻害の効果を及ぼし、分解生成物の生成をもたらしうる。抑制されないフリーラジカル反応が、多くの疾患状態、例えば、肺気腫、炎症、癌、アテローム性動脈硬化症、および白内障において、重要ではないにしても何らかの関わりがあることの相当な証拠が存在する。フリーラジカル反応はまた、上記の通り、自然な老化過程に対する主な一因となる効果を有すると広く考えられている。フリーラジカル捕捉剤および酸化防止剤としての多くのポリフェノールの活性が公知であることから、リン酸化ポリフェノールは、それらの生物学的同等物として、同じ有用性を有することが予想される。したがって、本発明はまた、フリーラジカルによる損傷の危険がある細胞へ、フリーラジカル捕捉有効量の少なくとも１つのリン酸化ポリフェノールを適用することを含む、フリーラジカルによる損傷を低減または予防する方法を提供する。この方法は、有力な要因が活性酸素種の有害な効果である病的状態の治療または予防を包含すると理解される。
【００４３】
同じような文脈で、リン酸化ポリフェノールは、食品、化粧品、医薬品などにおける防腐効果のある酸化防止剤としても便利に使用されうる。特に、脂質内容物が多い特定の種類の処方の性質として、それらの内容物に対する酸素種の作用による損傷を受け易いというのがある。１種もしくはそれ以上のリン酸化ポリフェノールは、酸素による損傷に対してそれらの成分を保存し、かつ酸敗を阻止するためにかかる製剤に添加されうる。同様に、それらの抗菌活性により、それらは微生物活動による汚染の予防または低減における付加的な保存効果を提供しうる。
【００４４】
本発明の局所組成物の適用の方法は、リン酸化ポリフェノールの性質および組成物の目的とする最終用途によって変わる。一般に、さまざまな皮膚の状態の調節のために、または酸素のフリーラジカルと関連した状態の予防または治療のために、組成物は、損傷を与えるおそれのある因子（例えば、日光）への曝露より前に、または曝露の結果として生じうる損傷の改善のために曝露後に適用されうる。適用は、有害な刺激への曝露が継続する限り継続し、緩和すれば中止されうる。より永続的な状態、例えば、日光への毎日の曝露または環境的損傷を治療、改善、または予防するために、または経時的老化と関連した徴候の治療または予防のために使用される場合には、組成物は、好ましくは、慢性的に適用して状態の発生または再発を阻止する。このために、一例として、組成物の局所適用は、治療される角質表面の約０．１ｍｇ／ｃｍ２〜２ｍｇ／ｃｍ２の量で、約週１回〜毎日約４または５回、好ましくは、週約３回〜毎日約３回、最も好ましくは、１日約１回または２回実行されることが提案される。ここで、「慢性的」適用とは、局所適用の期間が、使用者の生涯にわたり、好ましくは、少なくとも１か月間、より好ましくは、約３か月〜約２０年間、より好ましくは、約６か月〜約１０年間、さらに好ましくは、約１年〜約５年間であることを意味し、それによって、問題の状態の治療、改善、低減、または予防がもたらされる。
【００４５】
リン酸化ポリフェノールの他の用途は本明細書を読めば容易に認められる。本発明は、さらに、以下の実施例によって説明されているが、これに限定されない。
【実施例１】
【００４６】
ブドウの種のタンニンのリン酸化
ブドウの種のタンニン（タンフォス（ＴＡＮＦＯＳ）１６７−１３４）１００．０ｇを水３００ｍＬ中に室温、窒素雰囲気下に溶解した。ＮａＯＨ２９％で溶液のｐＨを９にし、オキシ塩化リン２６．６ｍＬを１．５時間にわたって溶液に添加した。添加中、さらにＮａＯＨ２９％を添加し、ｐＨを９に維持した。添加後、反応混合物を一夜攪拌し、ＨＰＬＣによって分析した。次いで、生成物をＨＣｌ  ２５％で酸性化させ、３．１のｐＨにし、噴霧乾燥によって単離してピンク色の粉末を得た。
【実施例２】
【００４７】
レスベラトロルのリン酸化
レスベラトロル（３，４，５−トリヒドロキシスチルベン）として知られている化合物の構造は以下の通りである。
【数６】
2008513378.tif 000006
【００４８】
リン酸化は、例えば、ペティット（Ｐｅｔｔｉｔ）ら、ジェー．メッド．ケム．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、２００２年、４５、２５３４−２５４２頁によって開示されている方法によって達成されうる。レスベラトロル（２５ｍｍｏｌｓ、５．７ｇ）およびジメチルアミノピリジン（７．５ｍｍｏｌｓ、０．９３ｇ）のアセトニトリル溶液１００ｍＬを窒素下に−１０℃まで冷却する。１０分後、ＣＣｌ４（３７５ｍｍｏｌ、３６．２ｍＬ）およびＤＩＥＡ（１５９ｍｍｏｌｓ；２７．７ｍＬ）および混合物を攪拌しながら３０分間維持する。亜リン酸ジベンジル（１１３ｍｍｏｌ、２５.０ｍＬ）を添加し、混合物をさらに１２時間、室温下に攪拌する。反応の経過をＴＬＣ（シリカ（Ｓｉｌｉｃａ）Ｆ２５４、溶出液  酢酸エチル／ｎ−ヘキサン  ８０／２０  ｖ／ｖ）によって監視する。１リットルの０．５Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４を添加し、次いで混合物を酢酸エチルで抽出する。結果として生じる生成物、トリ（リン酸ジベンジル）レスベラトロルをシリカゲル上のろ過によって精製し、最初に酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（８０／２０  ｖ／ｖ）の混合物で洗浄して残りの未反応レスベラトロルを除去し、次いでメタノールで洗浄して黄色の油を得る。
【００４９】
０℃の無水ＤＣＭ２００ｍＬ中トリ（リン酸ジベンジル）レスベラトロル（１２．５ｍｍｏｌ）にブロモメチルシラン（７９ｍｍｏｌｓ、１０．４ｍＬ）を添加する。２時間後、Ｈ２Ｏ  ３００ｍＬを添加し、反応混合物を１時間攪拌する。水相を再び酢酸エチルで洗浄し、次いで凍結乾燥させてオレンジ色の油を得る。
【００５０】
エタノール４００ｍＬ中に溶解した上記の得られた生成物にＣＨ３ＯＮａ（３７ｍｍｏｌ；２．０３ｇ）を添加し、反応物を１２時間、室温下に攪拌する。エタノールをロータベーパーで蒸発させ、残留物をＨ２Ｏ中に溶解する。水相を酢酸エチルで洗浄し、凍結乾燥する。それによって得られる白色固体の質量スペクトルはトリリン酸レスベラトロル（ＰＭ＝４６８．１）の存在を示し、総収率はレスベラトロルに対して９０％以上である。
【実施例３】
【００５１】
トリリン酸レスベラトロルの可溶性
レスベラトロルの水溶性を室温下、１ｍＭリン酸カリウム緩衝液中ｐＨ７で試験する。レスベラトロル（Ｍ．Ｗ．２２８．２４）１０ｍｇを緩衝液１０ｍＬ中に懸濁する。１ｇ／ｌまた４．３８ｍＭの濃度に対応するこの懸濁液を暗所で２５℃下、回転攪拌機中で２４時間、攪拌する。試料を５分間１４，０００ｒｐｍで遠心分離し、６．２６のＯＤをレスベラトロルのεｍＭが２８．１の値を有する波長３０５ｎｍで測定する。レスベラトロルの完全な可溶性を仮定すると、得られるべきＯＤは１２３．１（４．３８×２８．１）である。測定された６．２６のＯＤにより、溶解したレスベラトロルの比率は５．１％（６．２６×１００／１２３．１）すなわち５．１ｍｇ／ｌである。
【００５２】
対照的に、トリリン酸レスベラトロルの可溶性および安定性は、同じ条件下、すなわち、４〜９の範囲のさまざまなｐＨで、水中、室温下に試験する。トリリン酸レスベラトロルの可溶性は＞３０％ｗ／ｖであることが確認され、非修飾レスベラトロルに比べて可溶性の増大を示す。また、トリリン酸レスベラトロルは、固体および水溶液の両形態で１年間以上安定である。
【実施例４】
【００５３】
インビトロでのトリリン酸レスベラトロルの脱リン酸化
分子を脱リン酸化して活性の脱リン酸化状態に戻すことが可能かどうか判定するために、ここでレスベラトロルＰｉで示されるリン酸化レスベラトロルを評価する。
【００５４】
Ａ．レスベラトロルおよびレスベラトロルＰｉのＨＰＬＣ分析
レスベラトロルのＨＰＬＣ分析の実験条件は以下の通りである。
方法：ＨＰＬＣ−ＵＶ
カラム：オルテク（Ａｌｌｔｅｃｈ）、オルチマ（Ａｌｌｔｉｍａ）Ｃ１８  ５μ（２５０＊４．６ｍｍ）
カラム温度：３０℃
移動相：Ａ：０．０８５％  ｏ−リン酸溶液
：Ｂ：アセトニトリル
注入カラム：１０μｌ
流量：１ｍｌ／分
λ検出：３１０ｎｍ
保持時間：レスベラトロル８．２分
：レスベラトロルＰｉ４０．７分
勾配：
【００５５】
【表１】
2008513378.tif 000007
【００５６】
非リン酸化レスベラトロルのクロマトグラムは図１の上枠に示されている。これはリン酸化の出発材料である出発材料のＨＰＬＣプロフィールである。非リン酸化レスベラトロルは約４０．７分で移動し、ほぼ純粋で面積比が９８％であった。高リン酸化レスベラトロルは図１の下枠に示されている。８．２分時点での主ピークは、リン酸基が３つのヒドロキシル基すべてと置き換わっている完全にリン酸化されたレスベラトロルである。この置換は極性の大幅な増大をもたらすが、これは保持時間の劇的な減少に反映されている。２つの「不純物」が検出されうる；すなわち、ジリン酸化レスベラトロル（約１４．６分および１６．７分のｔｍ）およびモノリン酸化レスベラトロル（約２３．３分および２６．７分のｔｍ）の２つの異性体である。きわめて少量の非リン酸化レスベラトロルしか検出されない。
【００５７】
Ｂ．レスベラトロルＰｉの酵素的脱リン酸化
リン酸化レスベラトロルを、０．１４７Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４／０．１８ｍＭ  ＭｇＣｌ２  ｐＨ５．５中の小麦麦芽（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、Ｐ３６２７ロット０８１Ｋ７０７１）からの酸性ホスファターゼの存在下にインキュベートした。レスベラトロルＰｉおよび酸性ホスファターゼの濃度は、それぞれ、１．６ｍｇ／ｍｌおよび０．０５６Ｕ／ｍｌであった。一定分量を異なる時間間隔で取り、ＨＰＬＣによって分析した（条件は上記参照）。
【００５８】
結果は図２に示されている。酸性ホスファターゼによるレスベラトロルＰｉの処理は、結果としてレスベラトロルの時間依存形成をもたらしたが、トリリン酸化レスベラトロル（完全にリン酸化）は徐々に減少した。ピークの特定は、保持挙動およびＵＶスペクトルによって確認された。ジリン酸レスベラトロルの量は当初、上昇し、酸性ホスファターゼにともに約８５分のインキュベーションしたときに最大に達し、その後、徐々に減少する。酵素とともにインキュベーションを開始した時、レスベラトロルの大部分は完全にリン酸化されていて、したがってトリ−からジリン酸化レスベラトロルの変換が優勢である。これはジリン酸化レスベラトロルの純増加をもたらす。長いインキュベーション時間ではトリリン酸レスベラトロルは少なく、したがってジリン酸レスベラトロルへの変換が少なく、ジ−からモノリン酸化レスベラトロルへの変換が優勢となり、これは長いインキュベーション時間（＞８５分）でジリン酸レスベラトロルの全体的な減少をもたらす。モノリン酸レスベラトロルのインキュベーション時間依存濃度プロフィールは、ジリン酸のものと同様である。これは上記の形成／除去機序と一致するが、モノリン酸レスベラトロルの最大濃度には現在、長いインキュベーション時間（〜３００分）で達する。
【００５９】
Ｃ．結論
処方におけるレスベラトロルの安定性を増大させるために、レスベラトロルの反応性ヒドロキシル基はリン酸基によって置換された（〜レスベラトロルＰｉ）。リン酸化レスベラトロルのＨＰＬＣ分析は、きわめて少量の非リン酸化レスベラトロルしか検出されないため、リン酸化の程度が高いことを示す。この実験は、小麦麦芽からの酸性ホスファターゼが、水酸基によってレスベラトロルＰｉのリン酸基を置換することができ、かかるものとしてリン酸化レスベラトロルを最初のヒドロキシル含有レスベラトロルに変換することを示す。
【実施例５】
【００６０】
等モルレベルのトリリン酸レスベラトロルまたは非修飾レスベラトロルを含有する化粧品処方の視覚（色）安定性。
レスベラトロルを含有しない対照、一方は０．１％非修飾レスベラトロルを含有し、他方は０．２％リン酸化レスベラトロル（レスベラトロルＰｉ）を含有する以外は対照と同じ他の２つの処方という３つの基準処方を調製する。
【００６１】
【表２】
2008513378.tif 000008
【００６２】
対照のベースの色は白色であり、レスベラトロルの添加により、明るいベージュ色になる。各処方を４週間にわたって週１回観察し、３種類の異なる環境条件、すなわち、５０℃、４℃、および室温下（ＲＴ）で色の変化の存在（色安定性の変化を示す）を判定する。得られた結果は以下の通りである：
１週目の安定性
担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照  ５０−白／４−白／ＲＴ−白
０．１％レスベラトロル  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ／４−明るい（ｌｔ）ベージュ／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
０．２％レスベラトロルＰｉ  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ／４−明るい（ｌｔ）ベージュ／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
２週目の安定性
担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照  ５０−白／４−白／ＲＴ−白
０．１％レスベラトロル  ５０−明る（ｌｔいベージュ／４−明るい（ｌｔベージュ／ＲＴ−明るい（ｌｔベージュ
０．２％レスベラトロルＰｉ  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ／４−明るい（ｌｔ）ベージュ／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
３週目の安定性
担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照  ５０−白／４−白／ＲＴ−白
０．１％レスベラトロル  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ（ｖｓｌ濃く、ｓｌ表面酸化）／４−明るい（ｌｔ）ベージュ／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
０．２％レスベラトロルＰｉ  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ／４−明るい（ｌｔ）ベージュ（他の時点よりもｖｖｓｌ明るい（ｌｔ））／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
４週目の安定性
担体（ｖｅｈｉｃｌｅ）対照  ５０−白／４−白／ＲＴ−白
０．１％レスベラトロル  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ（ＲＴよりもｓｌ濃く、表面酸化）／４−明るい（ｌｔ）ベージュ（ＲＴよりもｓｌ明るい（ｌｔ）ベージュ）／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
０．２％レスベラトロルＰｉ  ５０−明るい（ｌｔ）ベージュ／４−明るい（ｌｔ）ベージュ（他の位置よりもｖｖｓｌ明るい（ｌｔ））／ＲＴ−明るい（ｌｔ）ベージュ
ｓｌ＝わずか、ｖｓｌ＝きわめてわずか、ｖｖｓｌ＝きわめてきわめてわずか
【００６３】
これらの結果は、４週間の最後で、リン酸化レスベラトロルが非修飾レスベラトロルよりも少ない着色を示し、リン酸化材料の色安定性の増強が確認されることを示す。
【実施例６】
【００６４】
角質層細胞によるトリリン酸レスベラトロルの脱リン酸化
Ａ．レスベラトロルおよびレスベラトロルＰｉのＨＰＬＣ分析
レスベラトロルのＨＰＬＣ分析の実験条件は実施例４の上記の通りである。
勾配：
【００６５】
【表３】
2008513378.tif 000009
【００６６】
オムニケム（Ｏｍｎｉｃｈｅｍ）によって調製された非リン酸化レスベラトロルおよび高リン酸化レスベラトロルのクロマトグラムが図１に示されている。ピークの分析が実施例４に上記されているのを参照。
【００６７】
Ｂ．レスベラトロルＰｉの酵素的脱リン酸化
１人のパネリストの前内腕でのＤ−スクアム（ｓｑｕａｍｅ）テープの剥離物（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇｓ）を集めた。層１３および１４をプールし、試験管に入れ、１００ｍＭフタル酸および０．２５％トリトン−Ｘ１００、ｐＨ５．６、７００μｌで９０分間、室温下に静かに攪拌しながら抽出した。抽出画分を別のバイアルへ移し、レスベラトロルＰｉストック溶液と混合した。インキュベーション中のレスベラトロルＰｉの濃度は、０．２２ｍｇ／ｍｌすなわち０．４７ｍＭであった。さまざまなインキュベーション時点で、２５μｌの一定分量のインキュベーション混合物を１０ｍＭｏ−リン酸２５μｌおよびＭｅＯＨ５０μｌ中で希釈し、ＨＰＬＣシステムへ注入した。
【００６８】
結果は図３に示されている。ＳＣ  Ｄ−スクアム（ｓｑｕａｍｅ）テープの剥離物（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇｓ）の抽出画分とのレスベラトロルＰｉのインキュベーションは、結果としてレスベラトロルの時間依存形成（ｒ＝０．９９、Ｎ＝１５、ｐ＜１＊１０−６）をもたらしたが、トリリン酸化レスベラトロル（完全にリン酸化された）は徐々に減少した（ｒ＝−０．６９、Ｎ＝１５、ｐ＝０．００５）。
【００６９】
モノリン酸化レスベラトロルの時間依存形態も確認される（ｒ＝０．９８、Ｎ＝１５、ｐ＜１＊１０−６）。レスベラトロルのジリン酸化形態の全体的な量は、時間の関数として大幅に変化しなかったが（ｒ＝−０．２７、Ｎ＝１５、ｐ＝０．３３）、これはジリン酸化レスベラトロルの（完全にリン酸化されたレスベラトロルからの）形成が、ジ−のモノリン酸化レスベラトロルへの変換と同じく迅速であることを示す。
【００７０】
Ｃ．結論
本実験では、リン酸化レスベラトロルが皮膚に存在する酵素により脱リン酸化されることをを示すことが試みられた。例えば、皮膚におけるインサイチュー（ｉｎ  ｓｉｔｕ）酸性ホスファターゼによるリン酸化レスベラトロルの酵素的脱リン酸化は、最初のレスベラトロルを構成し、同時に、生理活性が上昇する。図３に示されている結果は、皮膚上に存在し、Ｄ−スクアム（ｓｑｕａｍｅ）テープの剥離物（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇｓ）によってサンプリングされた酸性ホスファターゼが、水酸基によってレスベラトロルＰｉ上のリン酸基を置換することが可能であることを示す。これは、結果として、レスベラトロルの時間依存形成および対応するレスベラトロルＰｉの減少をもたらし、それによって、リン酸化ポリフェノールが皮膚に適用される場合に角質層酵素の作用による活性レスベラトロル分子、またはリン酸化ポリフェノールの遅延放出の構想を裏づける。
【実施例７】
【００７１】
トリリン酸レスベラトロルの脱リン酸化後のインビトロ抗酸化活性
リン酸化レスベラトロル（レスベラトロルＰｉ）（０．２５６ｍＭ）を小麦麦芽からのさまざまな濃度の酸性ホスファターゼで６時間、３７℃下で、０．０５％トリトン−Ｘ１００を含む２０ｍＭクエン酸緩衝液、ｐＨ５中でインキュベートする。酸性ホスファターゼの濃度は０．０６３〜６３ｍＵ／ｍｌである。リン酸化レスベラトロルの変換は、酸性ホスファターゼの濃度に依存するため、高い酸性ホスファターゼ濃度で、脱リン酸化レスベラトロルの量が増大することが期待される。
【００７２】
水溶液系における酸化防止剤の効果を判定する試験を、フリーラジカル開始剤として２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）．２ＨＣｌ（２ｍＭでＡＡＰＨ）を使用して準備する。３０℃、ｐＨ７．４の５０ｍＭリン酸緩衝液の水溶液系中でリノール酸（０．１６ｍＭ）の酸化により生成される共役ジエンヒドロペルオキシドの生成を、２３４ｎｍで監視する。抗酸化効果を、フリーラジカルを消去してリノール酸の酸化を遅らせる、または停止させる能力によって測定する。
【００７３】
結果は図４に示されている。この図のｘ軸は、固定濃度のレスベラトロルＰｉとともにインキュベートされている酸性ホスファターゼの量に対応する。したがって、酸性ホスファターゼの濃度の上昇は、脱リン酸化レスベラトロルの量の増大に対応する。これは、結果として、抗酸化活性の用量依存増大をもたらす。
【００７４】
要約すれば、これらのデータは、リン酸化レスベラトロルの酵素的脱リン酸化が、結果として、リノール酸のＡＡＰＨ誘導酸化に対するインビトロ抗酸化活性として測定される活性の回復をもたらす。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】レスベラトロルのＨＰＬＣ分析を示す図である：上枠にリン酸化されていない出発材料および下枠に高リン酸化レスベラトロル。
【図２】小麦麦芽からの酸性ホスファターゼともにインキュベーションしたときのリン酸化レスベラトロルからのレスベラトロルの時間依存形成を示す図である。
【図３】ヒトのＳＣ  Ｄ−スクアム（ｓｑｕａｍｅ）テープの剥離物（ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）の抽出画分とともにインキュベーションしたときのリン酸化レスベラトロルからのレスベラトロルの時間依存形成を示す図である。
【図４】小麦麦芽からの酸性ホスファターゼの濃度を上昇させながらインキュベーションしたときのリン酸化レスベラトロルのインビトロでの抗酸化活性の回復を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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