(57)【要約】  本発明はトランスジェニック動物、並びに遺伝子機能の特徴付けに関する組成物及び方法に関する。特に、本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子に破壊を有するトランスジェニックマウスを提供する。かかるインビボ研究及び特徴付けは、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常のような遺伝子破壊に関連する疾患又は機能不全の予防、改善又は修復に有用な治療薬及び／又は治療法の貴重な同定及び発見をもたらしうる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較することを含み、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定される方法。
【請求項２】
非ヒトトランスジェニック動物が、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
性別が一致した同腹仔と比較して非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型が次のもの：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
眼の異常が網膜異常である、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
眼の異常が白内障である、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１８】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項３に記載の方法。
【請求項２０】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
【請求項２１】
非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較して生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁（海綿骨）の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎��；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離細胞。
【請求項２３】
マウス細胞である、請求項２２に記載の単離細胞。
【請求項２４】
マウス細胞が胚性幹細胞である、請求項２３に記載の単離細胞。
【請求項２５】
非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した同腹仔と比較して次の表現型：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を示す、請求項２２に記載の単離細胞。
【請求項２６】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊に関連した同定された表現型を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項２７】
遺伝子破壊に関連した表現型が神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
眼の異常が網膜異常である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
眼の異常が白内障である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４０】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４３】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４４】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項４５】
非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較して、生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達��常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項２６に記載の方法。
【請求項４６】
請求項２６に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項４７】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項４６に記載の薬剤。
【請求項４８】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項４７に記載の薬剤。
【請求項４９】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項４７に記載の薬剤。
【請求項５０】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す生理学的性質が遺伝子破壊に関連する生理学的性質として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）遺伝子破壊に関連した生理学的性質が調節されるかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項５１】
非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較して、生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達��常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
請求項５０に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項５３】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項５２に記載の薬剤。
【請求項５４】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項５３に記載の薬剤。
【請求項５５】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項５３に記載の薬剤。
【請求項５６】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物が示す行動を観察し；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す観察された行動が遺伝子破壊に関連する行動として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）薬剤が遺伝子破壊に関連した行動を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項５７】
行動がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
行動がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
行動がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
行動がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
行動がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
行動が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
請求項５６に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項６４】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項６３に記載の薬剤。
【請求項６５】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項６４に記載の薬剤。
【請求項６６】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項６４に記載の薬剤。
【請求項６７】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項６８】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
眼の異常が網膜異常である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
眼の異常が白内障である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８０】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項８２】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８３】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８４】
上記骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
【請求項８５】
非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較した生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達異��；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項６７に記載の方法。
【請求項８６】
請求項６７に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項８７】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項８６に記載の薬剤。
【請求項８８】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項８７に記載の薬剤。
【請求項８９】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項８７に記載の薬剤。
【請求項９０】
請求項６７に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項９１】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させ；
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞によるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項９２】
請求項９１に記載の方法によって同定された薬剤。
【請求項９３】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９２に記載の薬剤。
【請求項９４】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９３に記載の薬剤。
【請求項９５】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９３に記載の薬剤。
【請求項９６】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状に影響を及ぼすことが可能な治療剤を評価する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊から生じる症状として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連した同定症状に対する試験薬剤の効果を評価する、ことを含む方法。
【請求項９７】
症状が、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
請求項９６に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項９９】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９８に記載の治療剤。
【請求項１００】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９９に記載の治療剤。
【請求項１０１】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９９に記載の治療剤。
【請求項１０２】
請求項９８に記載の治療剤を含有する医薬組成物。
【請求項１０３】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、疾患を既に有しているか、又は疾患を有している傾向があるか又は疾患が予防される治療を必要とする患者に、治療的有効量の請求項９４に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療又は予防又は寛解することを含む方法。
【請求項１０４】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０８】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０９】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１０】
眼の異常が網膜異常である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１１】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１２】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１４】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１５】
眼の異常が白内障である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１６】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１８】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１９】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２０】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１２１】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供し、該培養物の各細胞はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含み；
（ｂ）上記細胞培養物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が上記細胞培養物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
【請求項１２２】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２５】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２６】
神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２７】
神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２８】
眼の異常が網膜異常である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２９】
眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３０】
網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３２】
網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３３】
眼の異常が白内障である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３４】
白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３６】
循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３７】
免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３８】
骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１３９】
請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項１４０】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項１３９に記載の治療剤。
【請求項１４１】
アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
【請求項１４２】
アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
【請求項１４３】
請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
【請求項１４４】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する方法であって、表現型を既に有しているか、又は表現型を有している傾向があるか又は表現型が予防される患者に、有効量の請求項４６に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって表現型を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４５】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する方法であって、生理学的性質を既に有しているか、又は生理学的性質を有している傾向があるか又は生理学的性質が予防される患者に、有効量の請求項５２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって生理学的性質を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４６】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する方法であって、行動を既に有しているか、又は行動を有している傾向があるか又は行動が予防される患者に、有効量の請求項６３に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって行動を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４７】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する方法であって、上記ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する宿主に、有効量の請求項９２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４８】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状を調節する方法であって、症状を有しているか、又は症状を有している傾向があるか又は症状が予防される患者に、治療的有効量の請求項９８に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって症状を効果的に調節することを含む方法。
【請求項１４９】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物、つまりＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む上記培養物の各細胞に、治療的有効量の請求項９４に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療し又は予防し又は寛解する方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、トランスジェニック及びノックアウト動物を含む組成物と疾病又は障害の診断及び治療のためにそのような組成物を使用する方法に関する。
【０００２】
発明の背景
細胞外タンパク質は、特に、多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を担っている。多くの個々の細胞の運命、例えば増殖、移動、分化又は他の細胞との相互作用は、典型的には、他の細胞及び／又は直近の環境から受け取る情報に支配される。この情報は、しばしば分泌ポリペプチド(例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞障害性因子、分化因子、神経ペプチド、及びホルモン)により伝達され、これが、今度は多様な細胞レセプター又は膜結合タンパク質により受け取られ解釈される。これらの分泌ポリペプチド又はシグナル伝達分子は、通常は細胞分泌経路を通過し、細胞外環境におけるその作用部位に到達する。
分泌タンパク質は、製薬、診断、バイオセンサー及びバイオリアクターを含む、様々な産業上の用途を有している。血栓溶解剤、インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、コロニー刺激因子、及び種々の他のサイトカインのような、現在入手可能な大抵のタンパク質薬物は分泌タンパク質である。膜タンパク質であるそのレセプターもまた治療又は診断用薬剤としての可能性を有している。新規な天然の分泌タンパク質を同定する努力が産業界と学術界の双方によってなされている。多くの努力が新規な分泌タンパク質のコード配列を同定するために哺乳動物組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに注がれている。スクリーニング方法及び技術の例は文献に記載されている[例えば、Klein等, Proc. Natl. Acad. Sci. 93;7108-7113(1996);米国特許第５５３６６３７号を参照されたい]。
【０００３】
膜結合タンパク質とレセプターは、とりわけ、多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を担っている。多くの個々の細胞の運命、例えば増殖、移動、分化又は他の細胞との相互作用は、典型的には他の細胞及び／又は直近の環境から受け取る情報に支配される。この情報は、しばしば分泌ポリペプチド(例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞障害性因子、分化因子、神経ペプチド、及びホルモン)により伝達され、これが次に多様な細胞レセプター又は膜結合タンパク質により受け取られ解釈される。このような膜結合タンパク質と細胞レセプターは、限定されるものではないが、サイトカインレセプター、レセプターキナーゼ、レセプターホスファターゼ、細胞-細胞間相互作用に関与するレセプター、及びセレクチン及びインテグリンのような細胞接着分子を含む。例えば、細胞の増殖及び分化を調節するシグナルの伝達は、様々な細胞タンパク質のリン酸化により部分的に調節される。そのプロセスを触媒する酵素であるプロテインチロシンキナーゼはまた成長因子レセプターとしても作用しうる。具体例には、線維芽細胞成長因子レセプター及び神経成長因子レセプターが含まれる。
膜結合タンパク質とレセプター分子は、製薬及び診断薬を含む、様々な産業的用途を有している。例えば、レセプターイムノアドヘシンはレセプター-リガンド間相互作用を阻止する治療薬として使用することができる。膜結合タンパク質はまた、関連するレセプター／リガンド間相互作用の可能性のあるペプチド又は小分子インヒビターをスクリーニングするために使用することもできる。
新規な天然のレセプター又は膜結合タンパク質を同定するための努力が産業界と学術界の双方によってなされている。多くの努力が、新規なレセプター又は膜結合タンパク質のコード配列を同定するために、哺乳動物組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに注がれている。
【０００４】
生物学的及び疾病プロセスにおける分泌及び膜結合タンパク質の重要性が分かると、インビボ研究及び特徴付けは疾病又は機能不全の予防、改善又は修復に有用な治療薬及び／又は治療方法の貴重な特定と発見をもたらしうる。この点、遺伝子操作マウスは、免疫、癌、神経生物学、心臓血管生物学、肥満及び多くの他の疾病を含むヒトの疾病に関連した生物学的プロセスの機能的な詳細分析のための非常に有益なツールであることが証明されている。遺伝子ノックアウトは高度に特異的なアンタゴニストの活性をインビボで予測することにより薬物作用の生物学的機序をモデル化するものであると見ることができる。ノックアウトマウスは薬物活性をモデル化することが示されている；特定の薬学的標的タンパク質が欠損したマウスの表現型は対応するアンタゴニスト薬によって引き起こされるヒトの臨床表現型に類似しうる。遺伝子ノックアウトによって、標的の作用機序、標的の支配的な生理学的役割、及び哺乳類での標的の阻害から生じるかも知れない作用機序に基づく副作用の発見が可能になる。この種の例には、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）［Esther, C.R.等, Lab. Invest., 74:953-965 (1996)]及びシクロオキシゲナーゼ-１（ＣＯＸ１）遺伝子［Langenbach, R.等, Cell, 83:483-492 (1995)］が欠損したマウスが含まれる。逆に、マウスの遺伝子のノックアウトは、対応する標的へのアゴニスト薬の投与後にヒトにおいて観察されるものと反対の表現型効果を生じうる。例には、変異の結果が不十分な赤血球細胞の生成であるエリスロポエチンノックアウト［Wu, C.S.等, Cell, 83:59-67 (1996)］、及び変異マウスが過敏及び過敏反応性を示すGABA(A)-R-β3ノックアウト［DeLorey, T.M., J. Neurosci., 18:8505-8514 (1998)］が含まれる。これらの表現型の双方ともヒトにおけるエリスロポエチン及びベンゾジアゼピン投与の効果と逆である。マウス遺伝学を用いて確認された標的に特筆すべき例はＡＣＣ２遺伝子である。ヒトＡＣＣ２遺伝子は数年前に同定されているが、薬物開発のための標的としてＡＣＣ２に興味が注がれるようになったのはノックアウトマウスを用いたＡＣＣ２機能の分析後、極く最近になって刺激されたに過ぎない。ＡＣＣ２変異マウスはその野生型の同腹子よりも食欲が多いが、より多く脂肪を燃焼させその脂肪細胞に脂肪を蓄える量が少なく、この酵素は肥満症の治療における化学的拮抗作用に対する可能な標的になっている［Abu-Elheiga, L.等, Science, 291:2613-2616 (2001)]。
【０００５】
本出願において、変異遺伝子破壊は、中枢神経系（ＣＮＳ）／神経障害又は疾患、例えば不安神経症；眼の異常及び関連疾患；アテローム性動脈硬化症を含む循環器、内皮又は血管新生疾患；血清中トリグリセリド及びコレステロール量の増加を伴う糖尿病及び異常脂質血症を含む異常代謝性疾患；免疫学的及び炎症性疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患、例えば関節炎、骨粗鬆症及び大理石骨病；又は発達異常、例えば胚性致死を含む様々な疾病症状又は機能不全に関連した表現型観察を生じさせた。
【０００６】
(発明の概要)
Ａ．実施態様
本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。
一態様では、単離された核酸分子は、(ａ)ここに開示された完全長アミノ酸配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、ここに開示されたシグナルペプチドを伴うか又は伴わない膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン又はここに開示された完全長アミノ酸配列の任意の他の特に決められた断片を有するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は(ｂ)(ａ)のＤＮＡ分子の相補鎖に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【０００７】
他の態様では、単離された核酸分子は、（ａ）ここで開示される完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドｃＤＮＡのコード化配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠くＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのコード化配列、ここに開示されたシグナルペプチドを伴うか又は伴わない膜貫通ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの細胞外ドメインのコード化配列、又はここに開示される完全長ポリペプチドアミノ酸配列の任意の他の具体的に定まった断片のコード化配列を含むＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０００８】
更なる態様では、本発明は、（ａ）ここで開示されるＡＴＣＣに寄託されたヒトタンパク質ｃＤＮＡの何れかによってコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子に関する。
本発明の他の態様は、膜貫通ドメイン欠損又は膜貫通ドメイン不活性化のいずれかであるか、又はそのようなコード化ヌクレオチド配列と相補的であるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供し、そのようなポリペプチドの膜貫通ドメインはここで開示されている。従って、ここに記載のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの可溶性細胞外ドメインが考慮される。
【０００９】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドコード化配列の断片、又はその相補鎖を提供し、それらは、例えば、場合によっては抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体に対する結合部位を含むポリペプチドをコードするＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのコード化断片の、ハイブリッド形成プローブとして、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブとしての用途が見いだされる。このような核酸断片は、通常は少なくとも約１０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１５ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１１０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約５００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約７００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約８００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１０００ヌクレオチド長であり、ここで「約」という語の内容は参照する長さのプラス又はマイナス１０％のヌクレオチド配列長を指すことを意味する。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列の新規な断片は、多くの良く知られた配列アラインメントプログラムの任意のものを用いてＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列と他の公知のヌクレオチド配列とを整列させ、いずれのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列断片が新規であるかを決定することにより、常套的に同定することができる。このようなＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドコード化ヌクレオチド配列は全てここで考慮される。また、これらのヌクレオチド分子断片、好ましくは抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体に対する結合部位を含むＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド断片によってコードされるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド断片も考慮される。
【００１０】
本発明は、上記で特定された単離された核酸配列の任意のものにコードされる単離されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを提供する。
ある態様では、本発明は、ここに開示する完全長アミノ酸配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、ここに開示するシグナルペプチド有又は無の膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長アミノ酸配列の特に同定された他の断片を持つＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに関する。
【００１１】
更なる態様では、本発明は、ここに開示するＡＴＣＣに寄託されたヒトタンパク質ｃＤＮＡの任意のものにコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに関する。
【００１２】
一態様では、本発明は、少なくとも約１０アミノ酸長、あるいは少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長、又はそれ以上であるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリペプチドに関する。場合によっては、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリペプチドは、天然のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列と比較して１を越えない保存的アミノ酸置換を有するか、あるいは天然のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列と比較して２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０を越えない保存的アミノ酸置換を有する。
【００１３】
特定の態様では、本発明は、Ｎ-末端シグナル配列及び／又は開始メチオニンを持たず、上記したようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる単離されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを提供する。それらを製造する方法もここに記載され、それらの方法は、適当なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞をＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、培養培地からＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを回収することを含む。
他の態様では、本発明は、膜貫通ドメインの欠失した又は膜貫通ドメインが不活性化された、単離されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを提供する。それらを製造する方法もここに記載され、それらの方法は、適当なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞をＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、培養培地からＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを回収することを含む。
【００１４】
本発明は、ここで定義されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト及びアンタゴニストを提供する。特に、アゴニスト又はアンタゴニストは、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体又は小分子である。
本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法を提供し、それは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを候補分子と接触させ、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドによって媒介される生物学的活性を監視することを含む。好ましくは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドである。
【００１５】
本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、又はここに記載するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体を、担体と組み合わせて含有する物質の組成物を提供する。場合によっては、担体は製薬的に許容される担体である。
本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、又は上記したようなそのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体の、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体に起因する症状の治療に有用な医薬の調製のための使用を提供する。
【００１６】
本発明は、ここに記載するポリペプチドの任意のものをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。そのようなベクターの任意のものを含む宿主細胞も提供される。例として、宿主細胞はＣＨＯ細胞、大腸菌、又は酵母菌であってよい。ここに記載する所望のポリペプチドの製造方法がさらに提供され、それは、宿主細胞を所望のポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、細胞培養物から所望のポリペプチドを回収することを含む。
本発明は、異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合した、ここに記載する所望のポリペプチドを含んでなるキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例は、エピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合したここに記載の所望のポリペプチドを含む。
本発明は、上記又は下記のポリペプチドの任意のものに特異的に結合する抗体を提供する。場合によっては、抗体はモノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体断片又は一本鎖抗体である。
本発明は、ゲノム及びｃＤＮＡヌクレオチド配列の単離、関連遺伝子の発現の測定又は検出、アンチセンスプローブとして有用なオリゴヌクレオチドプローブを提供し、それらのプローブは上記又は下記のヌクレオチド配列の任意のものから誘導されうる。好適なプローブの長さは上記の通りである。
【００１７】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較することを含み、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定される。一態様では、非ヒトトランスジェニック動物は哺乳動物である。他の態様では、哺乳動物は齧歯類である。更に他の態様では、哺乳動物はラット又はマウスである。一態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である。他の態様では、性別が一致した同腹仔と比較して非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型は次のもの：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つである。
【００１８】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００１９】
他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン(Senior-Loken)症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００２０】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００２１】
他の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦ-α応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成���び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す。
【００２２】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムに含む非ヒトトランスジェニック動物由来の単離した細胞を提供する。一態様では、単離細胞はマウス細胞である。更に他の態様では、マウス細胞は胚性幹細胞である。更に他の態様では、単離細胞は、性別が一致した野生型の同腹仔と比較して次の表現型：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つを示す非ヒトトランスジェニック動物に由来する。本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムに含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊に関連した同定された表現型を調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００２３】
一態様では、遺伝子破壊に関連した表現型は、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を含む。
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００２４】
他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン(Senior-Loken)症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００２５】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００２６】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００２７】
他の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成��び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す。
【００２８】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した表現型を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、アゴニスト薬剤は抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９ポリペプチドである。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムに含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す生理学的性質が遺伝子破壊に関連する生理学的性質として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）遺伝子破壊に関連した生理学的性質が調節されるかどうかを決定する、ことを含む。
【００２９】
一態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質のうち少なくとも一つを示す：
別の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成��び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す。
【００３０】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
【００３１】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムに含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物が示す行動を観察し；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す観察された行動が遺伝子破壊に関連する行動として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）薬剤が遺伝子破壊に関連した行動を調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００３２】
一態様では、観察された行動はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、観察された行動はオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、観察された行動はホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、観察された行動はインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、観察された行動はインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、観察された行動は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００３３】
本発明はまた遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
【００３４】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムに含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物において遺伝子破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００３５】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００３６】
他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００３７】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；及び外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００３８】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である。
【００３９】
更に他の態様では、非ヒトトランスジェニック動物は、性別が一致した野生型同腹仔と比較して次の生理学的性質：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦ-α応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過���成及び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す。
【００４０】
本発明はまた遺伝子破壊に関連する神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解し又は調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体２である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
本発明はまた神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の治療のための治療剤を提供する。
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させ；
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞によるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節するかどうかを決定する、ことを含む。
【００４１】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
【００４２】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状に影響を及ぼすことが可能な治療剤を評価する方法を提供し、該方法は、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムに含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊から生じる症状として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連した同定症状に対する試験薬剤の効果を評価する、ことを含む。
一態様では、症状は、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常である。
【００４３】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した症状に影響を及ぼしうる治療剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
【００４４】
本発明はまた遺伝子破壊に関連した症状に影響を及ぼしうる治療剤を含有する医薬組成物を提供する。
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法を提供し、該方法は、疾患を既に有しているか、又は疾患を有していると思われるか又は疾患が予防される治療を必要とする患者に、治療的有効量の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患又は疾病を効果的に治療又は予防又は寛解することを含む。
【００４５】
更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００４６】
他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン(Senior-Loken)症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００４７】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００４８】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００４９】
他の態様では、治療剤はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
【００５０】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法を提供し、該方法は、
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供し、該培養物の各細胞はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含み；
（ｂ）上記細胞培養物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が上記細胞培養物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む。更に他の態様では、神経障害はオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である。更に他の態様では、神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである。
【００５１】
更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である。更に他の態様では、神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である。更に他の態様では、神経障害は鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏及び感覚器障害を含む。このような神経障害には、限定されるものではないが、以下の「不安障害」と定義される範疇のものが含まれる：軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的な恐怖症、社会的な不安、自閉症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
【００５２】
他の態様では、眼の異常は網膜異常である。更に他の態様では、眼の異常は視覚障害又は失明である。更に他の態様では、網膜異常は網膜色素変性症と一致しているか、網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている。
また他の態様では、網膜異常は網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン(Senior-Loken)症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している。
【００５３】
更に他の態様では、眼の異常は白内障である。また更に他の態様では、白内障は、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群である。
また他の態様では、発生異常は胚性致死又は低減した生存率を含む。
更にまた他の態様では、循環器、内皮又は血管新生疾患は、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である。
【００５４】
更に他の態様では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患と一致している。
更に他の態様では、骨代謝異常又は疾患は関節炎、骨粗鬆症、骨減少症又は大理石骨病である。
【００５５】
本発明はまた前記培養物中における遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を提供する。一態様では、薬剤はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型のアゴニスト又はアンタゴニストである。更に他の態様では、薬剤は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである。また更なる態様では、アゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。更に他の態様では、アンタゴニスト薬剤は、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である。
【００５６】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する方法を提供し、該方法は、表現型を既に有しているか、又は表現型を有している傾向があるか又は表現型が予防される患者に、有効量の上記表現型を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって表現型を効果的に調節することを含む。
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する方法を提供し、該方法は、生理学的性質を既に有しているか、又は生理学的性質を有している傾向があるか又は生理学的性質が予防される患者に、有効量の上記生理学的性質を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって生理学的性質を効果的に調節することを含む。
【００５７】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する方法を提供し、該方法は、行動を既に有しているか、又は行動を有している傾向があるか又は行動が予防される患者に、有効量の上記行動を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって行動を効果的に調節することを含む。
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する方法を提供し、該方法は、上記ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する宿主細胞に、有効量の上記発現を調節すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む。
【００５８】
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状を調節する方法を提供し、症状を有しているか、又は症状を有している傾向があるか又は症状が予防される患者に、治療的有効量の上記症状を調節すると同定された治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって症状を効果的に調節することを含む。
本発明はまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法を提供し、該方法は、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物、つまりＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む上記培養物の各細胞に、治療的有効量の上記疾患を予防又は寛解すると同定された薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療し又は予防し又は寛解する。
【００５９】
Ｂ．更なる実施態様
また更なる実施態様では、本発明は本出願の潜在的な特許請求の範囲である次のものを対象とする：
１．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較することを含み、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定される方法。
２．  非ヒトトランスジェニック動物が、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に対してヘテロ接合性である、請求項１に記載の方法。
３．  性別が一致した同腹仔と比較して非ヒトトランスジェニック動物によって示される表現型が次のもの：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常の少なくとも一つである、請求項１に記載の方法。
４．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
５．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項３に記載の方法。
６．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項３に記載の方法。
７．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項３に記載の方法。
８．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項３に記載の方法。
９．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項３に記載の方法。
１０．  眼の異常が網膜異常である、請求項３に記載の方法。
１１．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項３に記載の方法。
１２．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１０に記載の方法。
１３．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１０に記載の方法。
１４．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１０に記載の方法。
１５．  眼の異常が白内障である、請求項３に記載の方法。
１６．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１５に記載の方法。
１７．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項３に記載の方法。
１８．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項３に記載の方法。
１９．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項３に記載の方法。
２０．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項３に記載の方法。
２１．  非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較して生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項１に記載の方法。
２２．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離細胞。
２３．  マウス細胞である、請求項２２に記載の単離細胞。
２４．  マウス細胞が胚性幹細胞である、請求項２３に記載の単離細胞。
２５．  非ヒトトランスジェニック動物が、性別が一致した同腹仔と比較して次の表現型：神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を示す、請求項２２に記載の単離細胞。
２６．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊から生じる表現型として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊に関連した同定された表現型を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
２７．  遺伝子破壊に関連した表現型が神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を含む、請求項２６に記載の方法。
２８．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
２９．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項２７に記載の方法。
３０．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項２７に記載の方法。
３１．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
３２．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項２７に記載の方法。
３３．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項２７に記載の方法。
３４．  眼の異常が網膜異常である、請求項２７に記載の方法。
３５．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項２７に記載の方法。
３６．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項３４に記載の方法。
３７．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項３４に記載の方法。
３８．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項３４に記載の方法。
３９．  眼の異常が白内障である、請求項２７に記載の方法。
４０．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項３９に記載の方法。
４１．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項２７に記載の方法。
４２．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項２７に記載の方法。
４３．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項２７に記載の方法。
４４．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項２７に記載の方法。
４５．  非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較して、生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項２６に記載の方法。
４６．  請求項２６に記載の方法によって同定された薬剤。
４７．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項４６に記載の薬剤。
４８．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項４７に記載の薬剤。
４９．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項４７に記載の薬剤。
５０．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す生理学的性質が遺伝子破壊に関連する生理学的性質として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）遺伝子破壊に関連した生理学的性質が調節されるかどうかを決定する、ことを含む方法。
５１．  非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較して、生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項５０に記載の方法。
５２．  請求項５０に記載の方法によって同定された薬剤。
５３．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項５２に記載の薬剤。
５４．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項５３に記載の薬剤。
５５．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項５３に記載の薬剤。
５６．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物が示す行動を観察し；
（ｃ）（ｂ）の観察された行動を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物が示す観察された行動と異なる非ヒトトランスジェニック動物が示す観察された行動が遺伝子破壊に関連する行動として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）薬剤が遺伝子破壊に関連した行動を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
５７．  行動がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
５８．  行動がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項５６に記載の方法。
５９．  行動がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項５６に記載の方法。
６０．  行動がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
６１．  行動がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項５６に記載の方法。
６２．  行動が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項５６に記載の方法。
６３．  請求項５６に記載の方法によって同定された薬剤。
６４．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項６３に記載の薬剤。
６５．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項６４に記載の薬剤。
６６．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項６４に記載の薬剤。
６７．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）上記非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が非ヒトトランスジェニック動物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
６８．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
６９．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項６７に記載の方法。
７０．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項６７に記載の方法。
７１．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
７２．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項６７に記載の方法。
７３．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項６７に記載の方法。
７４．  眼の異常が網膜異常である、請求項６７に記載の方法。
７５．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項６７に記載の方法。
７６．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項７４に記載の方法。
７７．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項７４に記載の方法。
７８．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項７４に記載の方法。
７９．  眼の異常が白内障である、請求項６７に記載の方法。
８０．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項７９に記載の方法。
８１．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項６７に記載の方法。
８２．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項６７に記載の方法。
８３．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項６７に記載の方法。
８４．  上記骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項６７に記載の方法。
８５．  非ヒトトランスジェニック動物が、性が一致した野生型同腹子と比較した生理学的特性：オープンフィールド試験の間の不安様応答の増加；オープンフィールド活性試験の間の不安様応答の減少；移動数の減少を含むホームケージ活性試験の間の異常概日リズム；オープンフィールド試験の間の探索活動の増加；ストレス誘発性高体温の増加；逆スクリーン試験の間の運動協調性の亢進；逆スクリーン試験の間の運動協調性の障害；網膜動脈のねじれの増加；網膜血管の減弱を特徴とする網膜の変性；眼科的異常；平均収縮期血圧の上昇；平均空腹時血清血糖値の上昇；平均血清血糖値の低下；平均血清コレステロールレベルの上昇；平均血清トリグリセリドレベルの上昇；平均血清コレステロールレベルの低下；平均血清トリグリセリドレベルの低下；糖耐性の亢進；糖耐性の障害；平均血清インスリンレベルの上昇；平均血清インスリンレベルの減少；尿酸値の上昇；血清リン酸塩レベルの低下；アルカリホスファターゼレベルの上昇及びアラニンアミノ基転移酵素レベルの上昇；肝臓疾患；脾臓及びリンパ節の両方におけるＣＤ２５＋の平均割合の増加；ナチュラルキラー細胞の平均割合の減少；脾臓及びリンパ節におけるＣＤ２１ＨｉＣＤ２３Ｍｅｄ細胞の平均割合の減少；ＣＤ４細胞の平均割合の増加及びＢ細胞の平均割合の減少；ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加；好酸球の平均割合の増加；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ１応答の減少；卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＴＮＦ−α応答の増加；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦα応答の減少；ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ６応答の増加；平均血小板数の増加；平均総白血球（ＷＢＣ）数の減少；絶対リンパ球数の減少；絶対単球数の減少；皮膚線維芽細胞増殖の減少；皮膚線維芽細胞増殖の増大；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増大；平均体重の増大；平均体調の増加；器官重量の増加；総組織量（ＴＴＭ）の増加；除脂肪体重（ＬＢＭ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の増加；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の増加；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の増加；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の増加；総体脂肪及び総体脂肪量の平均割合の増加；平均体重の減少；平均体長の減少；総組織量（ＴＴＭ）の減少；除脂肪体重（ＬＢＭ）の減少；大腿骨及び椎骨の骨密度（ＢＭＤ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の骨塩量（ＢＭＣ）の減少；全身、大腿骨及び椎骨の容量測定骨密度（ｖＢＭＤ）の減少；平均大腿骨中央部皮層厚及び断面積の減少；平均椎骨梁の容量、数及び結合性密度の減少；腹部及び皮下体脂肪沈着の重度の枯渇；器官重量の減少；成長遅延；水頭症；皮脂腺過形成及び成長遅延；嗅覚神経上皮細胞のアポトーシス；リンパ過形成及び組織炎症；発達異常；男性不妊症；生存率低下を伴う成長遅延；並びに胚性死亡率、の少なくとも一つを示す、請求項６７に記載の方法。
８６．  請求項６７に記載の方法によって同定された薬剤。
８７．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項８６に記載の薬剤。
８８．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項８７に記載の薬剤。
８９．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項８７に記載の薬剤。
９０．  請求項６７に記載の方法によって同定された治療剤。
９１．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する宿主細胞に試験薬剤を接触させ；
（ｂ）試験薬剤が宿主細胞によるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
９２．  請求項９１に記載の方法によって同定された薬剤。
９３．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９２に記載の薬剤。
９４．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９３に記載の薬剤。
９５．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９３に記載の薬剤。
９６．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状に影響を及ぼすことが可能な治療剤を評価する方法であって、
（ａ）ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含む非ヒトトランスジェニック動物を提供し；
（ｂ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質を測定し；
（ｃ）（ｂ）の測定された生理学的性質を性別が一致した野生型動物のものと比較し、ここで、野生型動物の生理学的性質と異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的性質が非ヒトトランスジェニック動物の遺伝子破壊から生じる症状として同定され；
（ｄ）（ａ）の非ヒトトランスジェニック動物に試験薬剤を投与し；
（ｅ）非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連した同定症状に対する試験薬剤の効果を評価する、ことを含む方法。
９７．  症状が、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常である、請求項９６に記載の方法。
９８．  請求項９６に記載の方法によって同定された治療剤。
９９．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項９８に記載の治療剤。
１００．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９９に記載の治療剤。
１０１．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項９９に記載の治療剤。
１０２．  請求項９８に記載の治療剤を含有する医薬組成物。
１０３．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、疾患を既に有しているか、又は疾患を有している傾向があるか又は疾患が予防される治療を必要とする患者に、治療的有効量の請求項９４に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療又は予防又は寛解することを含む方法。
１０４．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
１０５．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１０３に記載の方法。
１０６．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１０３に記載の方法。
１０７．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
１０８．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１０３に記載の方法。
１０９．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１０３に記載の方法。
１１０．  眼の異常が網膜異常である、請求項１０３に記載の方法。
１１１．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１０３に記載の方法。
１１２．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１１０に記載の方法。
１１３．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１１０に記載の方法。
１１４．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１１０に記載の方法。
１１５．  眼の異常が白内障である、請求項１０３に記載の方法。
１１６．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１１５に記載の方法。
１１７．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１０３に記載の方法。
１１８．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１０３に記載の方法。
１１９．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１０３に記載の方法。
１２０．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１０３に記載の方法。
１２１．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節する薬剤を同定する方法であって、
（ａ）非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物を提供し、該培養物の各細胞はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊をゲノムが含み；
（ｂ）上記細胞培養物に試験薬剤を投与し；
（ｃ）上記試験薬剤が上記細胞培養物において神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患；脂質代謝疾患；又は発生異常を寛解又は調節するかどうかを決定する、ことを含む方法。
１２２．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の増加した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
１２３．  神経障害がオープンフィールド活動試験中の減少した不安様応答である、請求項１２１に記載の方法。
１２４．  神経障害がホームケージ活動試験中の異常なサーカディアンリズムである、請求項１２１に記載の方法。
１２５．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の亢進した運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
１２６．  神経障害がインバーテッドスクリーン試験中の損なわれた運動協調性である、請求項１２１に記載の方法。
１２７．  神経障害が鬱病、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知機能障害、痛覚過敏又は感覚器障害である、請求項１２１に記載の方法。
１２８．  眼の異常が網膜異常である、請求項１２１に記載の方法。
１２９．  眼の異常が視覚障害又は失明である、請求項１２１に記載の方法。
１３０．  網膜異常が網膜色素変性症と一致している、請求項１２８に記載の方法。
１３１．  網膜異常が網膜変性又は網膜形成不全によって特徴づけられている、請求項１２８に記載の方法。
１３２．  網膜異常が網膜形成不全、未熟児網膜症を含む種々の網膜症、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植拒絶、網膜／脈絡膜新生血管、隅角血管新生（ルベオーシス）、眼血管新生疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織の移植、網膜動脈障害又は閉塞症；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスに一致している、請求項１２８に記載の方法。
１３３．  眼の異常が白内障である、請求項１２１に記載の方法。
１３４．  白内障が、全身性疾病、例えばヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群と一致している、請求項１３３に記載の方法。
１３５．  発生異常が胚性致死又は低減した生存率を含む、請求項１２１に記載の方法。
１３６．  循環器、内皮又は血管新生疾患が、動脈性疾患、例えば真性糖尿病；鬱血乳頭；視神経萎縮；アテローム性動脈硬化症；アンギナ；心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えば鬱血性心不全；高血圧症；炎症性血管炎；レイノー病及びレイノー現象；動脈瘤及び動脈再狭窄；静脈性及びリンパ系疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；末梢血管疾患；癌、例えば血管性腫瘍、例えば血管腫（毛細血管及び海綿状）、グロムス腫瘍、末梢血管拡張、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ性血管肉腫；腫瘍血管新生；外傷、例えば創傷、火傷、及び他の損傷組織、移植片固定、瘢痕；虚血性再灌流障害；関節リウマチ；脳血管性疾患；腎疾患、例えば急性腎不全、又は骨粗鬆症である、請求項１２１に記載の方法。
１３７．  免疫疾患が、全身性エリテマトーデス；関節リウマチ；若年性関節リウマチ；脊椎関節症；全身性強皮症（強皮症）；特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性血管炎；サルコイドーシス；自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病、免疫媒介性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー；肝胆道疾患、例えば感染性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎；炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）；グルテン過敏性腸症、及びウィップル病；水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫又は免疫媒介性皮膚疾患；アレルギー性疾患、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹；肺の免疫疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎；又は移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患である、請求項１２１に記載の方法。
１３８．  骨代謝異常又は疾患が関節炎、骨粗鬆症又は大理石骨病である、請求項１２１に記載の方法。
１３９．  請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
１４０．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストである請求項１３９に記載の治療剤。
１４１．  アゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
１４２．  アンタゴニストが抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体である請求項１４０に記載の治療剤。
１４３．  請求項１２１に記載の方法によって同定された治療剤。
１４４．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を調節する方法であって、表現型を既に有しているか、又は表現型を有している傾向があるか又は表現型が予防される患者に、有効量の請求項４６に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって表現型を効果的に調節することを含む方法。
１４５．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した生理学的性質を調節する方法であって、生理学的性質を既に有しているか、又は生理学的性質を有している傾向があるか又は生理学的性質が予防される患者に、有効量の請求項５２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって生理学的性質を効果的に調節することを含む方法。
１４６．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した行動を調節する方法であって、行動を既に有しているか、又は行動を有している傾向があるか又は行動が予防される患者に、有効量の請求項６３に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって行動を効果的に調節することを含む方法。
１４７．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現を調節する方法であって、上記ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する宿主に、有効量の請求項９２に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記ポリペプチドの発現を効果的に調節することを含む方法。
１４８．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した症状を調節する方法であって、症状を有しているか、又は症状を有している傾向があるか又は症状が予防される患者に、治療的有効量の請求項９８に記載の治療剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって症状を効果的に調節することを含む方法。
１４９．  ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊に関連した神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；免疫疾患；腫瘍学的疾患；骨代謝異常又は疾患又は胚性致死を治療又は予防又は寛解する方法であって、非ヒトトランスジェニック動物細胞培養物、つまりＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む上記培養物の各細胞に、治療的有効量の請求項９４に記載の薬剤、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストを投与し、それによって上記疾患を効果的に治療し又は予防し又は寛解する方法。
【００６０】
（好ましい実施態様の詳細な説明）
Ｉ．定義
ここで使用される「ＰＲＯポリペプチド」及び「ＰＲＯ」という用語は、直後に数値表示がある場合には種々のポリペプチドを指し、完全な表示（つまり、ＰＲＯ／数字）は、ここに記載する特定のポリペプチド配列を意味する。「数字」という用語がここでは実際の数的表示として提供されている「ＰＲＯ／数字ポリペプチド」及び「ＰＲＯ／数字」という用語には、天然配列ポリペプチド、ポリペプチド変異体及び天然配列ポリペプチドとポリペプチド変異体の断片（ここでさらに定義される）を包含する。ここに記載されているＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、ヒト組織型又は他の供給源といった種々の供給源から単離してもよく、あるいは組換え又は合成法によって調製してもよい。「ＰＲＯポリペプチド」という用語は、ここに記載の各個々のＰＲＯ／数字ポリペプチドを指す。「ＰＲＯポリペプチド」を指すこの明細書の全ての開示は、各ポリペプチドを個々に指すと同時に集合的に指す。例えば、調製、精製、誘導、抗体の形成、ＰＲＯ結合オリゴペプチドの形成、ＰＲＯ結合有機分子の形成、投与、含有する組成物、疾患の治療等の記載は、本発明の各ポリペプチドに関している。「ＰＲＯポリペプチド」という用語は、また、ここに記載のＰＲＯ／数字ポリペプチドの変異体を含む。
【００６１】
「天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド」には、天然由来の対応するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。このような天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換え又は合成手段により生成することもできる。「天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド」という用語には、特に、特定のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態(例えば、細胞外ドメイン配列)、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びそのポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明は、添付図に示される完全長アミノ酸配列を含む成熟又は完全長天然配列ポリペプチドであるここに開示される天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを提供する。開始及び停止コドンは、図において太字及び下線で示した。しかし、添付図に開示したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、図面においてアミノ酸位置１としてここに表示されたメチオニン残基で始まるように示されているが、図面におけるアミノ酸位置１の上流又は下流に位置する他のメチオニン残基をＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの開始アミノ酸残基として用いることも考えられるし、可能でもある。
【００６２】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの形態を意味する。通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを１％未満、好ましくはそのようなドメインを０．５％未満しか持たない。本発明のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインの何れかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。場合によっては、従って、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの細胞外ドメインは、実施例又は明細書で同定されるように膜貫通ドメイン／細胞外ドメインの境界の何れかの側から約５を越えないアミノ酸を含んでもよく、シグナルペプチドを伴う又は伴わない、それらのポリペプチド及びそれらをコードする核酸は、本発明で考慮される。
【００６３】
ここに開示する種々のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの「シグナルペプチド」のおおよその位置は、本明細書及び／又は添付図に示されうる。しかし、シグナルペプチドのＣ末端境界は変化しうるが、ここで最初に定義したようにシグナルペプチドＣ末端境界の何れかの側で約５アミノ酸未満である可能性が最も高く、シグナルペプチドのＣ末端境界は、そのような型のアミノ酸配列成分を同定するのに日常的に使用される基準に従って同定しうることに留意される（例えば、Nielsen等, Prot. Eng.10: 1-6 (1997)及びvon Heinje等, Nucl. Acids. Res. 14: 4683-4690 (1986)）。更に、幾つかの場合には、分泌ポリペプチドからのシグナル配列の切断は完全に均一ではなく、一つ以上の分泌種をもたらすことも認められる。シグナルペプチドがここに同定されるシグナルペプチドのＣ末端境界の何れかの側の約５アミノ酸未満内で切断されるこれらの成熟ポリペプチド、及びそれらをコードするポリヌクレオチドは、本発明で考慮される。
【００６４】
「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド変異体」とはＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、好ましくは、ここに開示するような完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、ここで開示するようなシグナルペプチドを欠くＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、ここに開示するようなシグナルペプチドを有する又は有しないＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの細胞外ドメイン又はここに開示する完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列の任意の他の断片（例えば、完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの完全なコード配列の一部のみを示す核酸によってコードされるもの）と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するここで定義するような活性なＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを意味する。このようなＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド変異体には、例えば、完全長天然アミノ酸配列のＮ末端又はＣ末端において一又は複数のアミノ酸残基が付加、もしくは欠失されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドが含まれる。通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド変異体は、ここに開示する完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠くＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列の任意の具体的に定義した他の断片に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のアミノ酸配列同一性を有している。通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長、あるいは少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００アミノ酸長、又はそれ以上である。場合によっては、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、
ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリペプチドは、天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列に比較して一つ以下の保存的アミノ酸置換、あるいは天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列に比較して２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０以下の同類アミノ酸置換を有するにすぎない。
【００６５】
ここで同定したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列に関する「パーセント(％)アミノ酸配列同一性」とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、特定のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ-２プログラム用の完全なソースコードが下記の表１に提供されている配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって得られる。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権庁, ワシントンD.C., 20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２プログラムはジェネンテック社、サウス サン フランシスコ, カリフォルニアから公的に入手可能であり、下記の表１に提供されたソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００６６】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ-２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性(あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる)は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ-２のＡ及びＢのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なると認識されるであろう。％アミノ酸配列同一性の計算の例として、表２及び３は、「比較タンパク質」と称されるアミノ酸配列の「ＰＲＯ」と称されるアミノ酸配列に対する％アミノ酸配列同一性の計算方法を示し、ここで「ＰＲＯ」は対象の仮想ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」は対象の「ＰＲＯ」ポリペプチドと比較され、これに対するポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」は、それぞれ異なる仮定アミノ酸残基を表す。特に断らない限りは、ここで使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ-２コンピュータプログラムを用いて直ぐ上の段落に記載されるようにして得られる。
【００６７】
「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリヌクレオチド」又は「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体核酸配列」とは、ここで定義されるように、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、好ましくは活性ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードし、ここに開示する完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠いた完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列の他の任意の断片をコードする核酸配列（完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの完全なコード化配列の一部分のみを表す核酸によってコードされた）と、少なくとも約８０％の核酸配列同一性を有する核酸分子を意味する。通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリヌクレオチドは、ここに開示する完全長天然配列ＰＲＯポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠く完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド配列の任意の他の断片をコードする核酸配列と、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の核酸配列同一性を有している。変異体は、天然ヌクレオチド配列を含まない。
【００６８】
通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリヌクレオチドは、少なくとも約５ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、又は１０００ヌクレオチド長であり、この文脈の「約」という用語は、表示ヌクレオチド配列長にその表示長の１０％を加えるか又は減じたものを意味する。
【００６９】
ここで同定されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード化核酸配列に対する「パーセント(％)核酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、対象のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９核酸配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の知る範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。ここでの目的のためには、％核酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ-２プログラム用の完全なソースコードが下記の表１に提供されている配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって得られる。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権庁,ワシントン D.C.，20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２プログラムはジェネンテック社、サウスサンフランシスコ, カリフォルニアから公的に入手可能であり、下記の表１に提供されたソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００７０】
核酸配列比較にＡＬＩＧＮ-２が用いられる状況では、与えられた核酸配列Ｃの、与えられた核酸配列Ｄとの、又はそれに対する％核酸配列同一性（あるいは、与えられた核酸配列Ｄと、又はそれに対して或る程度の％核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Ｃと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｗ／Ｚの１００倍
ここで、Ｗは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ-２のＣ及びＤのアラインメントによって同一であると一致したスコアのヌクレオチドの数であり、ＺはＤの全ヌクレオチドである。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと異なる場合、ＣのＤに対する％核酸配列同一性は、ＤのＣに対する％核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。％核酸配列同一性の計算の例として、「ＰＲＯ-ＤＮＡ」が対象となる仮説的ＰＲＯコード化核酸配列を表し、「比較ＤＮＡ」が対象となる「ＰＲＯ-ＤＮＡ」核酸分子が比較されている核酸配列を表し、そして「Ｎ」、「Ｌ」及び「Ｖ」の各々が異なった仮想ヌクレオチドを表していて、表４及び５が「比較ＤＮＡ」と称される核酸配列の「ＰＲＯ-ＤＮＡ」と称される核酸配列に対する％核酸配列同一性の計算方法を示す。特に断らない限りは、ここでの全ての％核酸配列同一性値は、直ぐ上のパラグラフに示したようにＡＬＩＧＮ-２コンピュータプログラムを用いて得られる。
【００７１】
本発明は、また、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする核酸分子であり、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、ここに記載の完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とハイブリダイゼーションすることができるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリペプチドを提供する。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリペプチドは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ポリヌクレオチドによってコードされているものであり得る。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする核酸に関して使用される場合の「完全長コード領域」という用語は、（添付図において開始及び停止コドンの間でしばしば示される）本発明の完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を意味する。ＡＴＣＣ寄託核酸に関して使用される場合の「完全長コード領域」という用語は、（添付図において開始及び停止コドンの間でしばしば示される）ＡＴＣＣに寄託されたベクター中に挿入されているｃＤＮＡのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドコード部分を意味する。
【００７２】
ここに開示される種々のＰＲＯポリペプチドを記載するために使用される「単離」とは、自然環境の成分から同定され及び分離及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の汚染成分とは、そのポリペプチドの診断又は治療への使用を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、ポリペプチドは、(１)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分なほど、あるいは、(２)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でＳＤＳ-ＰＡＧＥにより均一になるまで精製される。単離されたポリペプチドには、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツのポリペプチドが含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも一つの精製工程により調製される。
【００７３】
「単離された」ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする核酸又は他のポリペプチドコード化核酸は、同定され、ポリペプチドをコードする核酸の天然源に通常付随している少なくとも一つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然に見出される形態あるいは設定以外のものである。故に、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然の細胞中に存在する特異的なポリペプチドをコードする核酸分子とは区別される。しかし、ポリペプチドをコードする単離された核酸分子には、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なった染色体位置にあるポリペプチドを通常は発現する細胞に含まれるポリペプチドをコードする核酸分子が含まれる。
「コントロール配列」という用語は、特定の宿主生物において作用可能に結合したコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば原核生物に好適なコントロール配列は、プロモーター、場合によってはオペレータ配列と、リボソーム結合部位を含む。真核生物の細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。
【００７４】
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに「作用可能に結合し」ている。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているなら、そのポリペプチドのＤＮＡに作用可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に結合している。一般的に、「作用可能に結合している」とは、結合したＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。結合は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。
【００７５】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングに必要な温度が高くなり、プローブが短くなるとそれに必要な温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補鎖がその融点より低い環境に存在する場合に、変性ＤＮＡの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション配列の間で所望される相同性の程度が高くなればなるほど、用いることができる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をよりストリンジェントにすることになり、低い温度はストリンジェントを低下させることになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーの更なる詳細及び説明については、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology（Wiley Interscience Publishers, 1995）を参照のこと。
【００７６】
ここで定義される「ストリンジェント条件」又は「高度のストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄に低イオン強度及び高温度を用いる、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウム；（２）ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる、例えば、４２℃で、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウムバッファー、及び７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウム；又は（３）４２℃で、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハード液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％の硫酸デキストラン溶液中で終夜ハイブリダイゼーション、４２℃で、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中にて１０分間の洗浄、ついで５５℃で、ＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる１０分間高ストリンジェンシー洗浄を用いるものによって同定される。
「中程度のストリンジェント条件」は、Sambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Press, 1989)に記載されているように同定され、上記のストリンジェントより低い洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）の使用を含む。中程度のストリンジェント条件は、２０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハード液、１０％硫酸デキストラン、及び２０ｍｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中にて３７℃での終夜インキュベーション、次いで１×ＳＳＣ中にて約３７−５０℃でのフィルターの洗浄といった条件である。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識する。
【００７７】
「エピトープタグ」なる用語は、ここで用いられるときは、「タグポリペプチド」と融合したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを含んでなるキメラポリペプチドを意味する。タグポリペプチドは、その抗体が産生され得るエピトープを提供するのに十分な残基を有し、その長さは融合するポリペプチドの活性を阻害しないよう充分に短い。また、タグポリペプチドは、好ましくは抗体が他のエピトープと実質的に交差反応をしないようにかなり独特である。適切なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６のアミノ酸残基、通常は約８〜５０のアミノ酸残基(好ましくは、約１０〜２０の残基)を有する。
ここでの目的に対する「活性な」又は「活性」とは、天然又は天然に生じるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９の生物学的及び／又は免疫学的活性を保持するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの形態を意味し、ここで、「生物学的」活性とは、天然又は天然に生じるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９が保持する抗原性エピトープに対する抗体の生成を誘発する能力以外の、天然又は天然に生じるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９によって引き起こされる生物機能（阻害又は刺激）を意味し、「免疫学的」活性とは、天然又は天然に生じるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９が保持する抗原性エピトープに対する抗体の生成を誘発する能力を意味する。
【００７８】
「アンタゴニスト」なる用語は［特段の定義がない場合は］最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの生物学的活性を部分的又は完全にブロック、阻害、又は中和する任意の分子が含まれる。同様に、「アゴニスト」という用語は［特段の定義がない場合は］最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子が含まれる。適切なアゴニスト又はアンタゴニスト分子には、特にアゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、断片、又は天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小有機分子等が含まれる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと候補アゴニスト又はアンタゴニスト分子を接触させ、そして通常はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに関連している一又は複数の生物学的活性の検出可能な変化を測定することが含まれ得る。
【００７９】
「治療する」又は「治療」又は「緩和」とは、治療上の処置及び予防的療法又は防護的療法の双方を称し、その目的は、標的である病的症状又は疾患を防ぐか又は衰え（小さく）させることである。治療を必要とするものには、疾患に罹りやすいものと同時に疾患に既に罹っているもの、又は疾患が予防されるべきものを含む。
「慢性」投与とは、初期の治療効果（活性）を長期間にわたって維持するようにするために、急性態様とは異なり連続的な態様での薬剤の投与を意味する。「間欠」投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ本質的に周期的になされる処理である。
治療のための「哺乳動物」とは、哺乳動物に分類される任意の動物を意味し、ヒト、家畜用及び農場用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
一又は複数の更なる治療薬と「組み合わせた」投与とは、同時（同時期）及び任意の順序での連続した投与を含む。
【００８０】
ここで用いられる「担体」は、製薬的に許容されうる担体、賦形剤、又は安定化剤を含み、用いられる服用量及び濃度でそれらに曝露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。生理学的に許容されうる担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容されうる担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；疎水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭを含む。
【００８１】
「固相」とは、本発明の抗体、ＰＲＯ結合オリゴペプチド又はＰＲＯ結合有機分子が接着できる非水性マトリクスを意味する。ここに包含される固相の例は、部分的又は全体的にガラス（例えば、調整孔ガラス）、ポリサッカリド（例えばアガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンで形成されたものを含む。或る実施態様では、前後関係に応じて、固相はアッセイ用プレートのウェル；その他では精製用カラム（例えばアフィニティクロマトグラフィーカラム）を含むことができる。また、この用語は、米国特許第４２７５１４９号に記載されたような別々の粒子の不連続な固相も含む。
「リポソーム」は、哺乳動物への薬物（例えばＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、又はそれらに対する抗体）の輸送に有用な、脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤を含む種々のタイプの小胞体である。リポソームの成分は、通常は細胞膜の脂質配向に類似した２層構造に配列される。
【００８２】
ここで定義されている「小分子」とは、約５００ダルトン未満の分子量である。
ここに開示するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの「有効量」とは、特に述べた目的を実施するために十分な量のことである。「有効量」は、述べられた目的に関連して、経験的及び常套的な形で決定することができる。
【００８３】
「治療的有効量」という用語は、患者又は哺乳動物の疾患又は疾病を「治療」するのに効果的な抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子又は他の薬剤の量を指す。癌の場合、治療的に有効量の薬は癌細胞の数を減じ；腫瘍の大きさを減じ；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害（すなわち、ある程度まで減速、好ましくは停止）し；腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度まで減速及び好ましくは停止）し；腫瘍成長をある程度まで阻害し；及び／又は癌に関連する一又は複数の症状をある程度まで緩和する。「治療する」のここでの定義を参照せよ。薬が存在する癌細胞の成長を妨げ及び／又は死滅させる程度まで、それは、細胞分裂停止及び／又は細胞障害性であり得る。
【００８４】
「循環器、内皮及び血管新生疾患」、「循環器、内皮及び血管形成機能不全」、「循環器、内皮又は血管新生疾患」及び「循環器、内皮又は血管形成機能不全」という言葉は互換可能に使用され、部分的には血管に影響する全身性の疾患、例えば糖尿病、並びに血管、例えば動脈、毛細管、静脈、及び／又はリンパ管それ自体の病気を意味する。これには、血管形成及び／又は心血管新生を刺激する徴候、及び血管形成及び／又は心血管新生を阻害する徴候が含まれている。このような疾患には、例えば動脈の病気、例えばアテローム性動脈硬化、高血圧、炎症性脈管炎、レーノー病及びレーノー現象、動脈瘤、及び動脈再狭窄；静脈及びリンパ管の疾患、例えば血栓静脈炎、リンパ管炎、及びリンパ浮腫；及び他の血管疾患、例えば末梢血管病、癌、例えば血管腫瘍、例えば血管腫(毛細管及び海綿状)、グロムス腫瘍、毛細管拡張症、細菌性血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管外皮細胞腫、カポジ肉腫、リンパ管腫、及びリンパ管肉腫、腫瘍血管形成、外傷、例えば傷、火傷、及び他の組織損傷、移植固定、瘢痕化、虚血再灌流障害、関節リュウマチ、脳血管の病気、腎臓病、例えば急性腎不全、及び骨粗鬆症が含まれる。また、アンギナ、心筋梗塞、例えば急性心筋梗塞、心肥大、及び心不全、例えばＣＨＦも含まれる。
【００８５】
ここで使用される場合の「肥大」とは、腫瘍形成に関与しない正常な成長とは無関係に組織又は構造体の大きさが増加することとして定義される。器官又は組織の肥大は個々の細胞の大きさの増加(真性肥大)、又は組織を形成する細胞数の増加(過形成)、又はその両方のいずれかによる。ある種の器官、例えば心臓は誕生後、短い期間で分割能力を失う。従って、「心肥大」は心臓の大きさが増加するものとして定義され、成人においては、細胞分割を伴わない、収縮性タンパク質の含有量とミオサイトの細胞サイズの増加により特徴付けられる。肥大を刺激する原因となるストレスの特徴(例えば、プレロードの増加、アフターロードの増加、心筋梗塞の場合と同様のミオサイトの損失、収縮性の一次低下)が、反応の性質の決定において重要な役割を担っていることは明らかである。心肥大の初期段階は、通常、ミオフィブリルとミトコンドリアのサイズの増加、並びにミトコンドリアと核の拡大により形態学的に特徴付けられる。この段階において、筋細胞は正常なものよりもより大きくなり、細胞の構成はほとんど維持される。心肥大の段階がさらに進行すると、特定のオルガネラ、例えばミトコンドリアの数及びサイズが優先的に増加し、新規の収縮エレメントは不規則な方法で、細胞の局在領域に添加される。長年にわたって肥大を被っている細胞は、隣接するミオフィブリルを置換して正常なＺ膜レジストレーションの破壊を引き起こす高度分葉膜を有し、かなり拡大した核を含む、細胞組織化においてより明確な分裂を示す。「心肥大」という用語は、根底にある心疾患に関係なく、心筋の種々の度合いの構造的ダメージにより特徴付けられる病状の進行における全ての段階を含むように使用される。従って、その用語は、心肥大の発達における生理学的病状、例えば血圧の上昇、大動脈狭窄、又は心筋梗塞も含まれる。
【００８６】
「心不全」は、心臓が代謝中の組織の要求が必要とする速さで血液を送らない心機能の異常を指す。心不全は虚血性、先天的、リュウマチ性又は特発的形態を含む、種々の因子が原因となり得る。
「鬱血性心不全」(ＣＨＦ)は、末梢組織まで酸素化された血液を送達させるために、十分な心拍出量(経時的に心臓により押し出される血液量)を供給することのできない心臓の進行性の病状である。ＣＨＦが進行すると、構造的及び血行力学的ダメージが生じる。これらのダメージは様々な徴候を有するが、一つの特徴的な症状は心室肥大である。ＣＨＦは多くの様々な心疾患の共通した終末的な結果である。
「心筋梗塞」は、しばしば多重冠動脈血栓症を伴う、冠動脈のアテローム性動脈硬化の結果であると一般的にされている。それは、心室壁の全厚みにわたって心筋壊死がある壁内梗塞、及び心室壁を通って心外膜に至る全ての経路に伸長することなく、壊死が内皮下層、心筋壁内、又はその両方にある副心内膜(非壁内)梗塞の２つのタイプに分けることができる。心筋梗塞は血行力学的影響の変化と心臓のダメージを受けた、及び健康な領域における構造の変化の両方に原因があることが知られている。よって、例えば心筋梗塞により心臓の最大流出量及び心臓鼓動容量が低減する。また、心筋梗塞に関連して、間隙に生じるＤＮＡ合成が刺激され、影響を受けていない心臓領域におけるコラーゲンの形成が増加する。
長期間にわたる高血圧において、心臓のストレス及び圧力が増加する結果、例えば全末梢耐性が増加して、心肥大は長期間「高血圧」を付随するようになる。慢性的に圧力が加わった結果肥大した心室の特徴は、障害性の心拡張能である。Fouad等,  J. Am. Coll. Cardiol., 4：1500-1506(1984)；Smith等,  J. Am. Coll. Cardiol., 5：869-874(1985)。長期間にわたる左心室の弛緩には、心収縮機能が正常又は非正常にかかわらず、早期に本態性高血圧が検出された。Hartford等,Hypertension, 6: 329-338(1984)。しかし、血圧レベルと心肥大との間に密接な平行関係はない。ヒトにおいて、抗高血圧治療に応じて左心室機能の改善は繰り返されるが、利尿薬(ヒドロクロロチアジド)、β-ブロッカー(プロプラノロール)、又はカルシウムチャンネルブロッカー(ジルチアゼム)で治療している患者は、心拡張機能が改善されることなく左心室肥大への逆戻りがみられる。Inouye等, Am. J. Cardiol., 53：1583-7(1984)。
【００８７】
心肥大に関連した他の複合的心疾患は「肥大性心筋症」である。この病状は形態学的、機能的及び臨床的特性が非常に多様であること(Maron等, N. Engl. J. Med., 316：780-789(1987)；Spirito等,  N. Engl. J. Med., 320：749-755(1989)；Louie及びEdwards, Prog. Cardiovasc. Dis., 36：275-308(1994)；Wigle等, Circulation, 92：1680-1692(1995))、全年齢の患者を悩ます事実により強調される異種性により特徴付けられる。Spirito等, N. Engl. J. Med., 336：775-785(1997)。また、肥大心筋症の原因となる要因は多様であり、ほとんど理解されていない。一般的に、サルコメアタンパク質をコードする遺伝子における変異が肥大性心筋症に関与している。近年のデータでは、β-ミオシン重鎖変異が、家族性肥大性心筋症の原因の約３０から４０パーセントであると計測されていることを示唆している。Watkins等, N. Engl. J. Med., 326：1108-1114(1992)；Schwartz等, Circulation, 91：532-540(1995)；Marian及びRoberts,  Circulation, 92：1336-1347(1995)；Thierfelder等, Cell, 77：701-712(1994)；Watkins等, Nat. Gen., 11：434-437(1995)。β-ミオシン重鎖の他にも、他の位置の遺伝子変異に、心臓トロポニンＴ、アルファトポミオシン、心臓ミオシン結合プロテインＣ、必須ミオシン軽鎖、及び調節性ミオシン軽鎖が含まれる。Malik及びWatkins, Curr. Opin. Cardiol., 12：295-302(1997)を参照されたい。
【００８８】
上弁「大動脈狭窄」は、上行大動脈が狭くなることにより特徴付けられる遺伝性血管疾患であるが、肺動脈を含む他の動脈もさらに影響をうけるおそれがある。未治療の大動脈狭窄では、心内圧力が増加し、結果として心肥大が生じ、実際には心不全及び死に至る。この疾患の病因は十分には理解されていないが、中間平滑筋の過形成可能性及び肥大はこの疾患の顕著な特徴である。エラスチン遺伝子の分子変異体が大動脈狭窄の発現の病因に関与していることが、１９９７年７月２２日公開の米国特許第５６５０２８２号に報告されている。
「心臓弁逆流」は心臓弁の疾患の結果による心臓病の結果として生じる。リュウマチ熱のような種々の病気は、弁オリフィスの収縮又は引っ張りを引き起こすものであるが、他の病気は、心内膜炎、心内膜又は心房オリフィスの内側の膜の炎症、及び心臓の手術になる。欠損、例えば弁狭窄又は弁の欠損近接により、心臓腔における血液の蓄積、又は弁を通過しての血液の逆流が生じる。弁狭窄又は不全を長期間治癒しないと、心肥大や心筋に関連したダメージを被る結果となり、最終的には弁の交換が必要となる。
【００８９】
「免疫関連疾患」という用語は、哺乳動物の免疫系の成分が哺乳動物の罹患を生じさせる、媒介する又は他に寄与する疾患を意味する。また、免疫反応の刺激又は介入が疾患の進行に寛解的効果を有する疾患も包含する。この用語には、免疫媒介炎症性疾患、非免疫媒介炎症性疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、腫瘍形成などが含まれる。
「Ｔ細胞媒介」疾患という用語は、Ｔ細胞が哺乳動物の罹患を直接的又は間接的に媒介する又は他に寄与する疾患を意味する。Ｔ細胞媒介疾患は、細胞媒介効果ｍリンホカイン媒介効果など、及び、例えばＢ細胞がＴ細胞により分泌されたリンホカインによって刺激される場合はＢ細胞に関連する効果にも関連する。
免疫関連及び炎症性疾患であって、それらの幾つかはＴ細胞媒介性である疾患の例は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、脊髄関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症性ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）、甲状腺炎（グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、真性糖尿病、免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、多発性硬化症、特発性脱髄性多発性ニューロパシー又はギヤン‐バレー症候群及び慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー等の中枢及び末梢神経系の脱髄性疾患、感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及び他の非肝向性ウイルス）、自己免疫性慢性活性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎等の肝臓胆管疾患、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン感受性腸炎、及びホウィップル病、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触皮膚炎を含む自己免疫性又は免疫媒介皮膚疾患、乾癬、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及びじんま疹等のアレルギー性疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎等の肺の免疫性疾患、又は移植拒絶及び対宿主性移植片病を含む移植関連疾患を含む。感染性疾患はＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染）、肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ、細菌感染、真菌感染、原生動物感染及び寄生虫感染を含む。
【００９０】
ここで言う「自己免疫疾患」とは、個体自身の組織から生じて個体自身の組織に対して起こる疾患又は障害、あるいはその同時分離いたものないしは徴候又は結果として生じる症状である。自己免疫疾患又は障害の例には、限定するものではないが、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節症、乾癬の関節炎及び強直性脊椎炎）、乾癬、アトピー性皮膚炎を含む皮膚炎；慢性特発性蕁麻疹、例えば慢性自己免疫蕁麻疹、多発性筋炎／皮膚筋炎、中毒性表皮の表皮壊死症、全身強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病、潰瘍性大腸炎）と関連している応答、及び膿皮症壊疽の同時分離を伴うＩＢＤ、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、及び／又は上強膜炎）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む呼吸窮迫症候群、髄膜炎、ＩｇＥ媒介性疾患、例えばアナフィラキシー及びアレルギー性鼻炎、ラスマッセン脳炎のような脳炎、ブドウ膜炎、大腸炎、例えば顕微鏡的大腸炎及び膠原性大腸炎、膜性ＧＮなどの糸球体腎炎（ＧＮ）、特発性膜性ＧＮ、Ｉ型及びＩＩ型及び急速進行性ＧＮを含む膜性増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）、アレルギー症状、湿疹、喘息、Ｔ細胞の浸潤が関与している症状及び慢性炎症反応、アテローム性動脈硬化症、自己免疫心筋炎、白血球癒着不全、皮膚ＳＬＥのような全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス（腎炎、脳炎、小児科、非腎臓、ジスコイド、脱毛症を含む）、若年型糖尿病、脊髄視覚ＭＳなどの多発性硬化症（ＭＳ）、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカイン及びＴリンパ球によって媒介される急性及び遅発性過敏症と関連している免疫応答、結核、サルコイドーシス、ヴェゲナー肉芽腫症を含む肉芽腫症、無顆粒球症、脈管炎（大動脈管炎（リウマチ性多発筋痛症及び巨細胞（高安）動脈炎を含む）、中脈管炎（川崎病及び結節性多発性動脈炎を含む）、ＣＮＳ脈管炎、及び脈管炎関連ＡＮＣＡ、例えばチャーグ・ストラウス脈管炎又は症候群（ＣＳＳ））、無形成性貧血、クームス陽性貧血症、ダイアモンド・ブラックファン(Blackfan)貧血症、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫溶血性貧血、悪性貧血、純粋な赤血球形成不全（赤芽球癆）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球血管外遊出が関与している疾患、ＣＮＳ炎症性障害、多器官損傷症候群、重症筋無力症、抗原抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチュア症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、固形臓器移植拒絶反応（高い試験板反応性の抗体価、組織のＩｇＡ沈澱物及び腎移植、肝移植、腸移植、心臓移植に起因している拒絶などのための前処置を含む）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、類天疱瘡水疱、天疱瘡（尋常性、落葉状及び天疱瘡粘液膜類天疱瘡を含む）、自己免疫多腺性内分泌障害、ライター症候群、スティッフマン症候群、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経炎又はＩｇＭ媒介性神経病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓症血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫血小板減少を含む血小板減少（例えば心筋梗塞��者に発現）、自己免疫精巣炎及び卵巣炎を含む精巣及び卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性甲状腺炎を含む自己免疫内分泌性疾患、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性の甲状腺炎、特発性の甲状腺機能低下症、アジソン病、甲状腺機能亢進症、自己免疫多腺性症候群（又は多腺性内分泌障害症候群）、小児ＩＤＤＭを含むインシュリン依存性真正糖尿病（ＩＤＤＭ）とも称されるＩ型糖尿病、及びシーハン症候群；自己免疫肝炎、リンパ系間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）対ＮＳＩＰ、ギランバレ症候群、ベルジェ病（ＩｇＡネフロパシ）、原発性胆管萎縮症、脂肪便症（グルテン腸疾患）、同時分離疱疹状皮膚炎を有する抵抗性スプルー、クリオグロブリン血症、アミル栄養側索硬化症（ＡＬＳ；筋萎縮性側索硬化症）、冠状動脈疾患、自己免疫内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫聴力障害、眼球クローヌス筋硬直症候群（ＯＭＳ）、抵抗性多発性軟骨炎のような多発性軟骨炎、肺胞蛋白症、アミロイドーシス、巨細胞肝炎、強膜炎、不明な／未知の重大なモノクローナル免疫グロブリン増多症（ＭＧＵＳ）、末梢神経障害、腫瘍随伴症候群、チャネル病、例えば癲癇、片頭痛、不整性、筋疾患、難聴、失明、周期性麻痺及びＣＮＳのチャネル病；自閉症、炎症性筋疾患及び巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）が含まれる。
【００９１】
「不安関連障害」なる語句は、限定されるものでないが以下のものを含む不安、気分及び物質濫用の障害を指す：欝状態、全般性不安障害、注意力欠如障害、睡眠障害、過活動性障害、強迫性障害、精神分裂症、認識力障害、痛覚過敏及び感覚障害。このような障害は、軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定されない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会的恐怖症、社会的不安、自閉症、特定恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、単極型障害を含む双極性障害Ｉ又はＩＩ（別段特定されない双極性障害、気分循環性障害、鬱病性障害、大鬱病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害、認知機能の亢進、限定するものではないがアルツハイマー病、脳梗塞又は脳への外傷に伴う認知機能の喪失、限定するものではないが癲癇、学習障害／学習不能症、脳性麻痺を含む疾患又は損傷から生じる発作。加えて、不安障害は、限定しないが以下のタイプを含む人格障害に応用してもよい：偏執性、社交嫌い、回避性行動、境界線人格障害、依存症、麻薬性、自己愛性、強迫神経症、統合失調症及び統合失調症型性格。
「脂質代謝性障害」という用語は、コレステロール及びトリグリセライドの異常な臨床化学レベルを指すものであり、これら脂質の高いレベルはアテローム性動脈硬化の徴候である。加えて、異常な血清中脂質レベルは、高血圧、脳卒中、冠状動脈疾患、糖尿病及び／又は肥満を含む様々な循環器疾患の徴候でありうる。
【００９２】
「眼の異常」という用語は、それらがアテローム性動脈硬化又は様々な眼科異常に関連しうるような目の潜在的障害を指す。このような障害は、これに限定されるものではないが以下のものを含む：網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞又は閉塞；網膜脈管系の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、先天性脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスを含まれる。白内障はまた眼の異常と考えられ、次のような全身性疾患と関連している：ヒトダウン症候群、ハレルマン-ストレフ症候群、ロー症候群、ガラクトース血症、マルファン症候群、トリソミー１３−１５症、アルポート症候群、筋緊張性ジストロフィー、ファブリー病、副甲状腺機能低下症又はコンラディ症候群。他の眼の発達異常は、無虹彩、前部分及び異発生症候群を含む。白内障はまた眼内感染又は炎症（ブドウ膜炎）の結果として起こる場合がある。
【００９３】
抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子の「成長阻害量」は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞の成長をインビトロ又はインビボで阻害できる量である。腫瘍性細胞成長の阻害の目的のための抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子の「成長阻害量」は、経験的及び常套的な形で決定することができる。
【００９４】
抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子の「細胞障害性量」は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞をインビトロ又はインビボで破壊できる量である。腫瘍性細胞成長の阻害の目的のための抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子の「細胞障害性量」は、経験的及び常套的な形で決定することができる。
【００９５】
「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、例えば、単一の抗ＰＲＯ２２７、抗ＰＲＯ２３３、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ１３２８、抗ＰＲＯ４３４２、抗ＰＲＯ７４２３、抗ＰＲＯ１００９６、抗ＰＲＯ２１３８４、抗ＰＲＯ３５３又は抗ＰＲＯ１８８５モノクローナル抗体(アゴニスト、アンタゴニスト、及び中和抗体を含む)、多エピトープ(polyepitopic)特異性を持つ抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体組成物、ポリクローナル抗体、一本鎖抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、及び所望する生物学的又は免疫学的活性を示す限りは抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体の断片（下記を参照）を包含する。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、ここでの抗体と相互に置き換え可能に用いられる。
【００９６】
「単離された抗体」とは、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分とは、抗体の診断又は治療への使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、抗体は、(１)ローリー(Lowry)法によって定量して９５重量％以上の、最も好ましくは９９重量％以上の抗体まで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列の残基を得るのに充分な程度まで、あるいは(３)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた還元又は非還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離された抗体には、組換え体細胞内のインサイツの抗体が含まれるが、これは抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないからである。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも一つの精製工程により調製される。
【００９７】
基本的な４-鎖抗体ユニットは２つの同一の軽(Ｌ)鎖と２つの同一の重(Ｈ)鎖から構成されるヘテロ四量体の糖タンパクである(ＩｇＭ抗体は、基本的なヘテロ四量体ユニットとそれに付随するＪ鎖と称される付加的なポリペプチドの５つからなり、よって１０の抗原結合部位を有するが、分泌されたＩｇＡ抗体は重合して、基本的４-鎖ユニットとそれ付随するＪ鎖のうち２-５つを含む多価集合を形成可能である)。ＩｇＧの場合、４-鎖ユニットは一般的に約１５００００ダルトンである。それぞれのＬ鎖は１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に結合するが、２つのＨ鎖はＨ鎖のアイソタイプに応じて一又は複数のジスルフィド結合により互いに結合している。それぞれのＨ及びＬ鎖はまた規則的な間隔を持った鎖内ジスルフィド結合を持つ。それぞれのＨ鎖は、α及びγ鎖の各々に対しては３つの定常ドメイン(ＣＨ)が、μ及びεアイソタイプに対しては４つのＣＨドメインが続く可変ドメイン(ＶＨ)をＮ末端に有する。それぞれのＬ鎖は、その他端に定常ドメイン(ＣＬ)が続く可変ドメイン(ＶＬ)をＮ末端に有する。ＶＬはＶＨと整列し、ＣＬは重鎖の第一定常ドメイン(ＣＨ１)と整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。ＶＬとＶＨは共同して対になって、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性は、例えばBasic and Clinical Immunology, ８版, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow(編), Appleton ＆ Lange, Norwalk, CT, 1994, ７１頁及び６章を参照のこと。
【００９８】
任意の脊椎動物種からのＬ鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に区別される型の一つを割り当てることができる。また、その重鎖の定常ドメイン(ＣＨ)のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンには異なったクラス又はアイソタイプを割り当てることができる。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭという免疫グロブリンの５つの主要なクラスがあり、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる重鎖を有する。さらにγ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能等の比較的小さな差異に基づいてサブクラスに分割され、例えば、ヒトにおいては次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２が発現する。
「可変」という用語は、可変ドメインのある部分が抗体の間で配列が広範囲に異なることを意味する。Ｖドメインは抗原結合性を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定める。しかし、可変性は可変ドメインの１１０-アミノ酸スパンを通して均等には分布されていない。代わりに、Ｖ領域は、それぞれ９−１２アミノ酸長である「高頻度可変領域」と称される極度の可変性を有するより短い領域によって分離された１５−３０アミノ酸のフレームワーク領域(ＦＲ)と呼ばれる比較的不変の伸展からなる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメイン各々は、大きなβ-シート配置をとり、３つの高頻度可変領域により接続された４つのＦＲ領域を含み、それはループ状の接続を形成し、β-シート構造の一部を形成することもある。各鎖の高頻度可変領域はＦＲにより他の鎖からの高頻度可変領域とともに極近傍に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ED. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接は関係ないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞障害(ＡＤＣＣ)における抗体の寄与を示す。
【００９９】
ここで使用される場合、「高頻度可変領域」なる用語は、抗原結合性の原因となる抗体のアミノ酸残基を意味する。高頻度可変領域は「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基(すなわち、ＶＬにおいては、およそ残基２４−３４(Ｌ１)、５０−５６(Ｌ２)及び８９−９７(Ｌ３)、及びＶＨにおいては、およそ１−３５(Ｈ１)、５０−６５(Ｈ２)及び９５−１０２(Ｈ３)；Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest,５版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991))及び／又は「高度可変ループ」からの残基(例えば、ＶＬにおいては、およそ残基２６−３２(Ｌ１)、５０−５２(Ｌ２)及び９１−９６(Ｌ３)、及びＶＨにおいては、およそ２６−３２(Ｈ１)、５３−５５(Ｈ２)及び９６−１０１(Ｈ３);Chothia及びLesk J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987))を含んでなる。
【０１００】
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する、すなわち、集団に含まれる個々の抗体が、少量で存在しうる自然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、一つの抗原部位に対している。さらに、異なる決定基(エピトープ)に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と比べて、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体によって汚染されずに合成される点で有利である。「モノクローナル」との修飾詞は、抗体を何か特定の方法で生成しなければならないことを意味するものではない。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体は、最初にKohler等, Nature 256, 495 (1975)により記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、あるいは組換えＤＮＡ法によって、細菌、真核細胞動物又は植物細胞から作ることができる(例えば、米国特許第４８１６５６７号参照)。また「モノクローナル抗体」は、例えばClackson等, Nature 352:624-628(1991)、及びMarks等, J. Mol. Biol. 222:581-597(1991)に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【０１０１】
ここで、モノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、あるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同性があり、鎖の残りの部分が他の種由来の抗体、あるいは他の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同である「キメラ」抗体、並びにそれが所望の生物的活性を有する限りこのような抗体の断片を特に含む(米国特許第４８１６５６７号;及びMorrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855(1984))。ここで対象のキメラ抗体には、非ヒト霊長類(例えば旧世界ザル、類人猿等)から由来する可変ドメイン抗原-結合配列及びヒト定常領域配列を含む「プリマタイズ(primatized)」抗体を含む。
「無傷」の抗体は、抗原-結合部位、並びにＣＬ及び少なくとも重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは天然配列定常ドメイン(例えば、ヒト天然配列定常ドメイン)又はそれらのアミノ酸配列変異体であってよい。好ましくは、無傷の抗体は一又は複数のエフェクター機能を有する。
【０１０２】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは無傷の抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ')２、及びＦｖ断片；ダイアボディ(diabodies)；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Zapata等, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]）；単鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して命名された残留「Ｆｃ」断片を産生する。Ｆａｂ断片は全長Ｌ鎖とＨ鎖の可変領域ドメイン(ＶＨ)、及び一つの重鎖の第一定常ドメイン(ＣＨ１)からなる。各Ｆａｂ断片は抗原結合性に関して一価である、すなわち単一の抗原-結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、単一の大きなＦ(ａｂ')２断片が生じ、これは２価の抗原結合部位を持つ２つのジスルフィド結合されたＦａｂ断片にほぼ対応し、抗原を交差結合させることができるものである。Ｆａｂ'断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に幾つかの残基が付加されていることによりＦａｂ断片と相違する。Ｆａｂ'-ＳＨは、ここでは定常ドメインのシステイン残基(類)が遊離のチオール基を持つＦａｂ'を表す。Ｆ(ａｂ')２抗体断片は、通常はＦａｂ'断片の対として生成され、それらの間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学的結合も知られている。
【０１０３】
Ｆｃ断片はジスルフィドにより一緒に保持されている双方のＨ鎖のカルボキシ末端部位を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列により決定され、その領域は、所定の型の細胞に見出されるＦｃレセプター(ＦｃＲ)によって認識される部位である。
「Ｆｖ」は、完全な抗原-認識及び-結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、密接に非共有結合した１本の重鎖と１本の軽鎖の可変領域の二量体からなる。これら２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する６つの高頻度可変ループ(Ｈ及びＬ鎖から、それぞれ３つのループ)が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含んでなるＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりは低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を持つ。
【０１０４】
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略称される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖内に結合したＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それはｓＦＶが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。ｓＦｖの概説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg及びMoore編, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)；Borrebaeck 1995, 以下を参照のこと。
「ダイアボディ(diabodies)」という用語は、鎖間ではなく鎖内でＶドメインを対形成させ、結果として二価の断片、すなわち２つの抗原-結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨとＶＬドメインとの間に、短いリンカー(約５-１０残基)を持つｓＦｖ断片（前の段落を参照）を構築することにより調製される小型の抗体断片を意味する。二重特異性ダイアボディは２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロダイマーであり、そこでは２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開９３／１１１６１号；及びHollinger等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)により十分に記載されている。
【０１０５】
非ヒト(例えば齧歯類)抗体の「ヒト化」型とは、非ヒト抗体から得られた最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような所望の抗体特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)の高頻度可変領域の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(ＦＲ)残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性をさらに洗練するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、全て又はほとんど全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに一致し、全て又はほとんど全てのＦＲがヒト免疫グロブリン配列である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、状況に応じて免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細は、Jones等, Nature 321, 522-525(1986)；Riechmann等, Nature 332, 323-329(1988)；及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2, 593-596(1992)を参照のこと。
【０１０６】
「種依存性抗体」、例えば哺乳動物抗-ヒトＩｇＥ抗体は、二番目の哺乳動物種からの抗原の相同体に対して有している結合親和性よりも、一番目の哺乳動物種からの抗原に対してより強力な結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原（すなわち、約１ｘ１０−７Ｍ以下、好ましくは約１ｘ１０−８以下、最も好ましくは約１ｘ１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値を有する）と「特異的に結合」するが、そのヒト抗原に対する結合親和性よりも、少なくとも約５０倍、又は少なくとも約５００倍、又は少なくとも約１０００倍弱い、二番目の非ヒト哺乳動物種からの抗原の相同体に対する結合親和性を有する。種依存性抗体は、上にて定義した種々の型の抗体のいずれでもあることが可能だが、好ましくはヒト化又はヒト抗体である。
【０１０７】
「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチド」はここで記載されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに好ましくは特異的に結合するオリゴペプチドである。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチドは、既知のオリゴペプチド合成方法論を用いて化学的に合成することができ、あるいは組み換え技術を用いて調製及び精製することができる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチドは通常、少なくとも約５のアミノ酸長であり、或いは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００のアミノ酸長以上であり、このようなオリゴペプチドはここに記載される様なＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対して好ましくは特異的に結合する能力がある。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合オリゴペプチドは、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定することができる。この点において、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるオリゴペプチドのオリゴペプチドライブラリーを検索する技術は当分野でよく知られていることを注記する（例えば、米国特許第５５５６７６２号、同第５７５０３７３号、同第４７０８８７１号、同第４８３３０９２号、同第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６８９号、同第５６６３１４３号；ＰＣＴ公開第ＷＯ８４／０３５０６号、及びＷＯ８４／０３５６４号；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984)；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985)；Geysen等, in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)；Geysen等, J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)；Schoofs等, J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla,S.E.等(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378；Lowman,H.B.等 (1991) Biochemistry, 30:10832；Clackson,T.等 (1991) Nature, 352:624；Marks,J.D.等 (1991) J. Mol. Biol., 222:581；Kang,A.S.等 (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363、及びSmith, G.P. (1991) Current Opin. Biotechnol., 2:668参照）。
【０１０８】
「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子」とは、ここに記載されるようなＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに、好ましくは特異的に、結合する、ここに定義されるようなオリゴペプチド又は抗体以外の有機分子である。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子は既知の方法（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３号及びＷＯ００／３９５８５号参照）を用いて同定され、化学的に合成されうる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合有機分子は通常、約２０００ダルトン未満の大きさであり、あるいは約１５００、７５０、５００、２５０又は２００ダルトン未満の大きさであり、ここに記載されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに、好ましくは特異的に結合する能力のあるこのような有機分子は、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定されうる。この点において、ポリペプチド標的に結合する能力のある分子の有機分子ライブラリーを検索する技術は当該分野でよく知られていることを注記する（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３号及びＷＯ００／３９５８５号参照）。
【０１０９】
対象の抗原、例えば腫瘍関連ポリペプチド抗原標的と「結合する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、その抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子がその抗原を発現している細胞又は組織を標的とする診断及び／又は治療剤として有用であり、他のタンパク質と有意には交差反応しないように十分な親和性でその抗原と結合するものである。そのような実施態様では、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の「非標的」タンパク質との結合の程度は、蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）分析又は放射免疫沈降（ＲＩＡ）によって定量して、その特定の標的タンパク質との抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合の約１０％よりも低い。標的分子への抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合に関して、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープと「特異的に結合」又は「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」という用語は、非特異的な相互作用とは測定して異なる結合を意味する。特異的な結合は、例えば、一般に結合活性を持たない類似した構造の分子であるコントロール分子の結合性と比較して、分子の結合性を定量することによって測定することができる。例えば、特異的な結合性は、標的、例えば過剰の非標識標的に類似したコントロール分子とも競合にとって定量することができる。この場合、プローブに対する標識標的の結合が過剰の非標識標的によって競合的に阻害されるならば、特異的結合が表示される。ここで使用される特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープと「特異的に結合」又は「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」という用語は、例えば標的に対して少なくとも約１０−４Ｍ、あるいは少なくとも約１０−５Ｍ、あるいは少なくとも約１０−６Ｍ、あるいは少なくとも約１０−７Ｍ、あるいは少なくとも約１０−８Ｍ、あるいは少なくとも約１０−９Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１０Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１１Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１２Ｍ、あるいはそれ以上のＫｄを持つ分子によって示されうる。一実施態様では、「特異的に結合する」という用語は、如何なる他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープへ実質的に結合することなく分子が特定のポリペプチド又は特定のポリペプチドのエピトープに結合する結合を意味する。
【０１１０】
「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現する腫瘍細胞の成長を阻害する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子、又は「成長阻害」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、適切なＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現又は過剰発現する癌細胞の測定可能な程の成長阻害を引き起こすものである。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、癌細胞の表面上に発現される膜貫通ポリペプチドであることができ、癌細胞によって産生され分泌されるポリペプチドであり得る。好ましい成長阻害抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、一般的には、試験された抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子で処理されていない腫瘍細胞であるコントロールである、適切なコントロールと比較して、２０％より多く、好ましくは約２０％から約５０％、そしてさらに好ましくは５０％よりも多く（例えば、約５０％から約１００％）でＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９発現腫瘍細胞の成長を阻害する。成長阻害は、細胞培養で約０．１から３０μｇ／ｍｌ又は約０．５ｎＭから２００ｎＭの抗体濃度で測定することができ、抗体への腫瘍細胞の曝露の後、成長阻害を１−１０日で確かめる。インビボでの腫瘍細胞の成長阻害は、種々の方法で決定することができる。約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体の投与が、最初の抗体の投与から約５日から３ヶ月内、好ましくは約５から３０日内に腫瘍の大きさ又は腫瘍細胞増殖に減少を引き起こす場合、抗体はインビボで成長阻害性である。
【０１１１】
「アポトーシスを誘発する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、及び／又は膜小胞の形成(アポトーシス体と呼ばれる)等により決定されるようなプログラム細胞死を誘発するものである。細胞は、通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを過剰発現しているものである。好ましくは、細胞は腫瘍細胞、例えば前立腺、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、肺、腎臓、結腸、膀胱細胞である。アポトーシスに伴う細胞のイベントを評価するために種々の方法が利用できる。例えば、ホスファチジルセリン(ＰＳ)転位置をアネキシン結合により測定することができ；ＤＮＡ断片化はＤＮＡラダーリングにより評価することができ；ＤＮＡ断片化に伴う細胞核／クロマチン凝結は低二倍体細胞の何らかの増加により評価することができる。好ましくは、アネキシン結合アッセイにおいて、アポトーシスを誘発する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、未処理細胞の約２〜５０倍、好ましくは約５〜５０倍、最も好ましくは約１０〜５０倍のアネキシン結合を誘発するという結果を生じるものである。
抗体の「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に帰する生物学的活性を意味し、抗体のアイソタイプにより変わる。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞障害；Ｆｃレセプター結合性；抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)；貪食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化が含まれる。
【０１１２】
「抗体依存性細胞媒介性細胞障害」又は「ＡＤＣＣ」とは、ある種の細胞障害細胞(例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃレセプター(ＦｃＲｓ)と結合した分泌Ｉｇにより、これらの細胞障害エフェクター細胞が抗原-担持標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒により標的細胞を死滅させることを可能にする細胞障害性の形態を意味する。抗体は細胞障害細胞を「備えて」おり、これはこのような死滅には絶対に必要なものである。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) の４６４頁の表３に要約されている。対象の分子のＡＤＣＣ活性をアッセイするために、米国特許第５５００３６２号又は同第５８２１３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施することができる。このようなアッセイにおいて有用なエフェクター細胞には、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）が含まれる。代わりとして、もしくは付加的に、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Clynes等, (USA) 95:652-656 (1998)において開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価することが可能である。
【０１１３】
「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するものである。好適なＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマレセプター）と結合するもので、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体、選択的にスプライシングされた形態のものも含まれる。ＦｃγＲＩＩレセプターには、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性型レセプター」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型レセプター」）が含まれ、主としてその細胞質ドメインは異なるが、類似のアミノ酸配列を有するものである。活性型レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター活性化モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based activation motif ;ＩＴＡＭ）を含んでいる。阻害型レセプターＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター阻害性モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif ;ＩＴＩＭ）を含んでいる（Daeron, Annu. Rev. immunol. 15:203-234 (1997)を参照）。ＦｃＲsに関しては、 Ravetch and Kinet, Annu.Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel等, Immunomethods 4:25-34 (1994); 及びde Haas等, J.Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995) に概説されている。将来的に同定されるものも含む他のＦｃＲsはここでの「ＦｃＲ」という言葉によって包含される。また、該用語には、母性ＩｇＧｓが胎児に受け継がれる要因となっている新生児性レセプターＦｃＲｎ（Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976) Kim等, J. Immunol.24:249 (1994))も含まれる。
【０１１４】
「ヒトエフェクター細胞」とは、一又は複数のＦｃＲｓを発現し、エフェクター機能を実行する白血球のことである。その細胞が少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行することが望ましい。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例として、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞障害性Ｔ細胞及び好中球が含まれるが、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好適である。エフェクター細胞は天然源、例えば血液から単離してもよい。
「補体依存性細胞障害」もしくは「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解することを意味する。典型的な補体経路の活性化は補体系(Ｃｌｑ)の第１補体が、同族抗原と結合した(適切なサブクラスの)抗体に結合することにより開始される。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを、例えばGazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されているように実施することができる。
【０１１５】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述する。癌の例には、これらに限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれる。このような癌のより特定の例には、扁平細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平癌腫(squamous carcinoma)を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃(gastric)又は腹部(stomach)癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓(kidney)又は腎(renal)癌、肝臓癌、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、肝臓癌及び様々なタイプの頭部及び頸部の癌、並びにＢ細胞リンパ腫（低級／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ；中級／濾胞性ＮＨＬ；中級びまん性ＮＨＬ；高級免疫芽細胞性ＮＨＬ；高級リンパ芽球性ＮＨＬ；高級小非分割細胞ＮＨＬ；バルキー疾患ＮＨＬ；外套細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；及びワルデンストロームのマクログロブリン病を含む）；慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)；急性リンパ芽球白血病(ＡＬＬ)；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）を含む。好ましくは、癌はＩＧＦレセプターを発現する腫瘍、より好ましくは乳癌、肺ガン、結腸直腸癌、又は前立腺癌、更に最も好ましくは乳癌又は前立腺癌である。
【０１１６】
「化学療法剤」は癌の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド(CYTOXAN(登録商標))のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン(acetogenins）(特にブラタシン(bullatacin)及びブラタシノン(bullatacinone)）；カンプトセシン(合成類似体トポテカン（topotecan）を含む）；ブリオスタチン；カリスタチン(callystatin）；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン(adozelesin)、カルゼレシン(carzelesin)及びバイゼレシン(bizelesin）合成類似体を含む）；クリプトフィシン(cryptophycin）(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン(dolastatin）；デュオカルマイシン(duocarmycin ）（合成類似体、KW-2189及びCBI-TMIを含む）； エレトロビン(eleutherobin）；パンクラチスタチン(pancratistatin）；サルコディクチン(sarcodictyin）；スポンジスタチン(spongistatin）；クロランブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；ニトロスレアス(nitrosureas)、例えばカルムスチン(carmustine)、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン(lomustine)、ニムスチン、ラニムスチン；エネジイン(enediyne) 抗生物質等の抗生物質（例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンガンマ１I及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Agnew  Chem Intl. Ed. Engl., 33：183-186(1994)を参照）；ダイネミシンＡ(dynemicinＡ）を含むダイネミシン(dynemicin）；エスペラマイシン(esperamicin）；並びにネオカルチノスタチン発光団及び関連色素蛋白エネジイン(enediyne) 抗生物質発光団）、アクラシノマイシン(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン(bleomycins)、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン(carminomycin）、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorubicin）、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ADRIAMYCIN(登録商標)ドキソルビシン (モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin）、イダルビシン、マセロマイシン(marcellomycin）、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン(mitomycins）、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリ���、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；メトトレキセート及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ）のような抗代謝産物；デノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)のような葉酸類似体；フルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)のようなピリミジン類似体；カルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)のようなアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤；フロリン酸(frolinic acid)のような葉酸リプレニッシャー(replenisher)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium acetate)；エポチロン(epothilone)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン(ansamitocin)のようなメイタンシノイド(maytansinoid)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン(losoxantrone)；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＫＳ(登録商標)多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特にＴ-２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリデンＡ(roridin A)及びアングイデン(anguidine)）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばTAXOL(登録商標)パクリタキセル（Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ）、パクリタキセルのABRAXANETMクレモホール非含有アルブミン操作ナノ粒子製剤(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)、及びTAXOTERE(登録商標)ドキセタキセル（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；GEMZAR(登録商標)ゲンシタビン(gemcitabine)；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６）；イフォスファミド；ミトキサントン；ビンクリスチン；NAVELBINE(登録商標)ビノレルビン；ノバントロン(novantrone)；テニポシド；エダトレキセート(edatrexate)；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ(xeloda)；イバンドロ��ート(ibandronate)；ＣＰＴ-１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸のようなレチノイド類；カペシタビン(capecitabine)；及び上述したものの製薬的に許容可能な塩、酸又は誘導体が含まれる。
【０１１７】
また、この定義に含まれるものには、腫瘍でホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）であり、例えば、タモキシフェン（NOLVADEX(登録商標)タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン(raloxifene)、ドロロキシフェン、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びFARESTONトレミフェン；副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４(５)-イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASE(登録商標)酢酸メゲストロール、AROMASIN(登録商標)エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、RIVISOR(登録商標)ボロゾール、FEMARA(登録商標)レトロゾール、及びARIMIDEX(登録商標)アナストロゾール；及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン(troxacitabine)（１,３-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に付着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-α、Ｒａｌｆ及びＨ-Ｒａｓ；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ANZIOZYME(登録商標)リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばALLOVECTIN(登録商標)ワクチン、LEUVECTIN(登録商標)ワクチン、及びVAXID(登録商標)ワクチン；PROLEUKIN(登録商標)ｒＩＬ-２；LURTOTECAN(登録商標)トポイソメラーゼＩ阻害剤；ABARELIX(登録商標)rGnRH；及び上記のものの製薬的に許容される塩、酸又は誘導体である。
「細胞増殖性疾患」及び「増殖性疾患」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖を伴う疾患を意味する。本発明の一態様では、細胞増殖性疾患は癌である。
ここで用いられる「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、全ての腫瘍形成細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。
【０１１８】
「細胞死を誘導する」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、生細胞を生育不能にするものである。細胞は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを発現するもの、好ましくは、同じ組織型の正常細胞と比較してＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを過剰発現する細胞である。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、癌細胞の表面上で発現される膜貫通ポリペプチドであることができ、癌細胞により生成され分泌されるポリペプチドであり得る。好ましくは、その細胞は癌細胞、例えば、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓又は膀胱細胞である。インビトロ細胞死は、抗体依存性細胞媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性障害（ＣＤＣ）によって誘導される細胞死を識別するために、補体及び免疫エフェクター細胞の無い状態で確かめてもよい。従って、細胞死に関するアッセイは、熱不活性化血清（すなわち、補体の無い）を用いて、免疫エフェクター細胞が無い状態でおこなってもよい。抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子が細胞死を誘導するか否かを確かめるために、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー（Moore等 Cytotechnology 17: 1-11(1995)）又は７ＡＡＤの取り込みによって評価した膜整合性の損失を、未処理細胞と関連して評価することができる。好ましい細胞死を誘導する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、ＢＴ４７４細胞でのＰＩ取り込みアッセイで、ＰＩ取り込みを誘導するものである。
【０１１９】
ここで用いられているように、「イムノアドヘシン」という用語は、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能を持つ異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性を付与した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは抗体の抗原認識及び結合部位以外の所望の結合特異性を持つアミノ酸配列（即ち「異種」）と免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物である。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む近接アミノ酸配列を含む。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ-１、ＩｇＧ-２、ＩｇＧ-３、又はＩｇＧ-４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ-１及びＩｇＡ-２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。
「標識」という語は、ここで用いられる場合、「標識化」抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子を作製するために、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子に直接的又は間接的に結合させる検出可能な化合物又は組成物を意味する。標識はそれ自身によって検出可能でもよく（例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識）、あるいは、酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変換を触媒してもよい。
【０１２０】
「複製防止剤」とは、アポトーシス、血管静止、サイトーシス、殺腫瘍、有糸分裂阻害、細胞周期進行のブロック、細胞成長停止、腫瘍への結合、細胞メディエーターとしての作用などのメカニズムを問わず、細胞の複製、機能、及び／又は成長が阻害又は防止されるか、あるいは細胞が破壊される薬剤である。このような薬剤には、化学療法剤、細胞障害剤、サイトカイン、成長阻害剤、又は抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン等の抗エストロゲン化合物、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎ）等の抗プロゲステロン（ＥＰ６１６８１２参照）、あるいはフルタミド等の抗アンドロゲン、並びにａｒｏｍｉｄａｓｅ阻害薬、マラはアンドロゲンなどのホルモン剤が含まれる。
ここで用いられる「細胞障害性剤」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞破壊を生ずる物質を指す。この用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体）、化学治療薬、例えばメトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド類（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤、酵素及びその断片、例えば核溶解性酵素、抗生物質、及び毒素、例えばその断片及び／又は変異体を含む小分子毒素又は細菌、糸状菌、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素、そして下記に開示する種々の抗腫瘍又は抗癌剤を含むように意図されている。他の細胞障害性薬が下記に記載されている。殺腫瘍性剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。
【０１２１】
ここでアンタゴニストと組み合わせて特定の腫瘍型に使用するのに好ましい細胞障害剤は以下の通りである。
１．前立腺癌：アンドロゲン、ドセタキセル、パクリタキセル、エストラムスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ＥｒｂＢ２の細胞外領域内の一領域（例えば、ＥｒｂＢ２の残基２２から残基５８４の領域における一つ以上の任意の残基）と結合する２Ｃ４（WO 01/00245;ハイブリドーマATCC HB 12697）のようなＥｒｂＢ２領域に対する抗体、ＡＶＡＳＴＩＮＴＭ抗血管性内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ  ＯＳＩ−７７４（エルロチニブ）（ジェネンテック及びＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、又はその他上皮性成長因子レセプターチロシンキナーゼ阻害薬（ＥＧＦＲ ＴＫＩ類）。
２．胃癌：５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、XELODATMカペシタビン、メトトレキセート、エトポシド、シスプラチン／カルボプラチン、パクリタキセル(pacliitaxel)、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、及びＣＰＴ−１１（カンプトシン(camptothcin)１１；イリノテカン、米国商品名：CAMPTOSAR（登録商標））。
３．膵臓癌：ゲムシタビン、５ＦＵ、XELODATMカペシタビン、ＣＰＴ−１１、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、TARCEVATMエルロチニブ及びその他のＥＧＦＲ ＴＫＩ類。
４．結直腸癌：５ＦＵ（XELODATMカペシタビン、ＣＰＴ−１１、オキサリプラチン、AVASTINTM抗ＶＥＧＦ、TARCEVATMエルロチニブ及びその他のＥＧＦＲ ＴＫＩ類、並びに、ＥＧＦＲに結合してＥＧＦのレセプター活性化の開始能及び腫瘍へのシグナル伝達能を遮断する、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（ＩＭＣ-Ｃ２２５として以前に知られていたもの）ヒト：ネズミ−キメラ化モノクローナル抗体。
５．腎癌：ＩＬ−２、インターフェロンα、AVASTINTM抗ＶＥＧＦ、MEGACETM（メゲストロールアセテート）プロゲスチン、ビンブラスチン、TARCEVATMエルロチニブ及びその他のＥＧＦＲ ＴＫＩ類。
【０１２２】
ここで用いられる際の「成長阻害剤」は、細胞、特にＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９発現癌細胞の成長をインビトロ又はインビボの何れかで阻害する化合物又は組成物を意味する。よって、成長阻害剤は、Ｓ期でＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９発現細胞の割合を有意に減少させるものである。成長阻害剤の例は、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）阻害する薬剤、例えばＧ１停止又はＭ期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なＭ期ブロッカーは、ビンカス（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン類、及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンを含む。またＧ１停止させるこれらの薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、及びアラ-Ｃである。更なる情報は、The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn及びIsrael, 編, Chapter 1, 表題「Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs」, Murakami等, (WB Saunders: Philadelphia, 1995)、特に１３頁に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（TAXOTERE（登録商標）、ローン・プーラン ローラー）は、パクリタキセル（TAXOL（登録商標）、ブリストル-マイヤー スクウィブ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。
「ドキソルビシン」はアントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンの完全な化学名は、(８Ｓ-シス)-１０-[(３-アミノ-２，３，６-トリデオキシ-α-Ｌ-リキソ-ヘキサピラノシル)オキシ]-７，８，９，１０-テトラヒドロ-６，８，１１-トリヒドロキシ-８-(ヒドロキシアセチル)-１-メトキシ-５，１２-ナフタセンジオンである。
【０１２３】
「サイトカイン」なる用語は、一つの細胞集団から放出され、他の細胞に細胞間メディエータとして作用するタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ-メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インシュリン；プロインシュリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体化ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；線維芽成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子-α及び-β；ミューラー阻害因子；マウス生殖腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ-β等の神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ-α及びＴＧＦ-β等のトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦｓ）；インシュリン様成長因子-Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘発因子；インターフェロン-α、-β、及び-γ等のインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）、例えばマクロファージ-ＣＳＦ（Ｍ-ＣＳＦ）；顆粒球-マクロファージ-ＣＳＦ（ＧＭ-ＣＳＦ）；及び顆粒球-ＣＳＦ（Ｇ-ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬｓ）、例えばＩＬ-１、ＩＬ-１ａ、ＩＬ-２、ＩＬ-３、ＩＬ-４、ＩＬ-５、ＩＬ-６、ＩＬ-７、ＩＬ-８、ＩＬ-９、ＩＬ-１１、ＩＬ-１２；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ-α及びＴＮＦ-β；及びＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。ここで用いられる際、用語サイトカインには、天然供給源から、又は組換え細胞培養からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。
「パッケージ挿入物」という用語は、効能、用途、服用量、投与、配合禁忌及び／又はその治療薬の用途に関する警告についての情報を含む、治療薬の商業的包装を慣習的に含めた指示書を指す。
【０１２４】
「遺伝子」という用語は（ａ）ここに開示されたＤＮＡ配列の少なくとも一つを含む遺伝子；（ｂ）ここに開示されたＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列をコードする任意のＤＮＡ配列及び／又は；（ｃ）ここに開示されたコード化配列の相補鎖にハイブリダイズする任意のＤＮＡ配列を意味する。好ましくは、その用語にはコード化並びに非コード領域が含まれ、好ましくは正常な遺伝子発現に必要な全ての配列を含む。
「ジーンターゲティング」は、ゲノムＤＮＡの断片が哺乳動物細胞中に導入され、その断片が内因性相同配列と共に位置し、それと共に組換えが生じるときに生じる一種の相同組換えを意味する。相同組換えによるジーンターゲティングは特定のゲノム配列を特定の設計の外因性ＤＮＡと置き換えるために組換えＤＮＡ法を用いる。
「相同組換え」という用語は相同ヌクレオチド配列の部位での二つのＤＮＡ分子又は染色分体間のＤＮＡ断片の交換を意味する。
「標的遺伝子」（あるいは「標的遺伝子配列」又は「標的ＤＮＡ配列」と称す）という用語は、相同組換えによって改変されるべき任意の核酸分子、ポリヌクレオチド、又は遺伝子を意味する。標的配列には、インタクトな遺伝子、エキソン又はイントロン、調節遺伝子又は遺伝子間の任意の領域が含まれる。標的遺伝子は個体のゲノムＤＮＡ中に特定の遺伝子又は遺伝子座の一部を含みうる。
【０１２５】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子の「破壊」は、ゲノムＤＮＡの断片が内因性相同配列と共に位置し、それと共に組換えが生じるときに生じ、ここで、破壊は天然の遺伝子又はその一部の欠失、又は天然の遺伝子における変異であり、あるいは破壊は天然の遺伝子の機能的不活化である。あるいは、配列破壊は、ジーントラップベクター（つまり、無作為に挿入された導入遺伝子を含み発現する非ヒトトランスジェニック動物；例えば２００２年８月２０日に発行された米国特許第６４３６７０７号を参照）を用いる非特異的挿入不活化によって生じさせることができる。これらの配列破壊又は修飾には、挿入、ミスセンス、フレームシフト、欠失、又は置換、又はＤＮＡ配列の置換(replacement)、又はそれらの任意の組み合わせが含まれうる。挿入には、動物、植物、真菌、昆虫、原核生物、又はウイルス由来でありうる遺伝子全体の挿入が含まれる。破壊は、例えば正常な遺伝子産物を、その生産を部分的に又は完全に阻害することによって、あるいは正常な遺伝子産物の活性を亢進することによって改変することができる。好ましくは、破壊はヌル破壊であり、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子の有意な発現がない。
「天然の発現」という用語は、野生型マウスに存在する発現レベルでのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子によってコードされる完全長ポリペプチドの発現を意味する。よって、内因性ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子の「天然の発現がない」破壊は、哺乳動物の単細胞、選択された細胞、又は細胞の全ての内因性ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子によってコードされるポリペプチドの少なくとも一部の発現の部分的な又は完全な低下を意味する。
【０１２６】
「ノックアウト」という用語は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子の破壊を意味し、ここで破壊は、天然の遺伝子の機能的不活化；天然の遺伝子又はその一部の欠失；又は天然の遺伝子の変異を生じる。
「ノックイン」という用語は、特定のヒトＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード化遺伝子又はその変異体の任意のものをコードするヒトｃＤＮＡとのマウスのオルソログ（又は他のマウス遺伝子）の置換を意味する（つまり、破壊が天然のヒト遺伝子との天然のマウス遺伝子の置換を生じる）。
「コンストラクト」又は「ターゲティングコンストラクト」という用語は標的組織、細胞株又は動物中に移入されるべき人為的に組み立てられたＤＮＡセグメントを意味する。典型的には、ターゲティングコンストラクトは特定の興味ある遺伝子又は核酸配列、マーカー遺伝子及び適切な制御配列を含む。ここで提供される場合、ターゲティングコンストラクトはＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ターゲティングコンストラクトを含む。「ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ターゲティングコンストラクト」は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子の少なくとも一部に相同なＤＮＡ配列を含み、宿主細胞中でＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子に破壊を生じさせることができる。
【０１２７】
「トランスジェニック細胞」という用語は、破壊され、改変され、又はジーンターゲティング法によって完全に又は部分的に置換されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子をそのゲノム内に含む細胞を意味する。
「トランスジェニック動物」という用語は、ここに記載された方法又は当該分野でよく知られている他の方法によって、破壊され又はその他の改変がなされ又は変異が施された特定の遺伝子をそのゲノム内に含む動物を意味する。好ましくは、非ヒトトランスジェニック動物は哺乳動物である。より好ましくは、哺乳動物はラット又はマウスのような齧歯類である。また、「トランスジェニック動物」はヘテロ接合体動物（つまり、一つの欠損対立遺伝子と一つの野生型対立遺伝子）又はホモ接合体動物（つまり、二つの欠損対立遺伝子）でありうる。胎仔は動物の定義に入ると考えられる。動物の提供は、交尾によるか又は他の手段によるものであろうと、また胎仔が出産に至ろうと至るまいと、子宮内の胎仔又は胎児の提供を含む。
【０１２８】
ここで使用される場合、「選択マーカー」という用語は、遺伝子を持つ細胞だけをある条件下で生存させ及び／又は成長させることを可能にする産物をコードする遺伝子を意味する。例えば、導入されたネオマイシン耐性(Neor)遺伝子を発現する植物及び動物細胞は化合物Ｇ４１８に耐性がある。Neor遺伝子マーカーを持たない細胞はＧ４１８によって殺される。他のポジティブな選択マーカーは当業者に知られており、あるいはその範囲内にある。
ここで使用される「調節する」又は「調節」という用語はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子機能、発現、活性、あるいはＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子に関連した表現型の減少、阻害、低減、改善、増加又は亢進を意味する。
【０１２９】
ここで使用される「寛解する」又は「寛解(改善)」という用語は、異常又は徴候を含む、症状、疾患、障害、又は表現型の減少、低減又は除去を意味する。
「異常」という用語は、病理的症状及び行動観察を含む、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９が関与している任意の疾患、障害、症状、又は表現型を意味する。
【０１３０】
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【０１３１】
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【０１３２】
ＩＩ．本発明の組成物及び方法
Ａ．完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド
本発明は、本出願でＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと命名されるポリペプチドをコードする新規に同定され単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に下記の実施例でさらに詳細に説明するように、種々のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするｃＤＮＡが同定され単離された。別々の発現ラウンドで生成されたタンパク質には異なるＰＲＯ番号が与えられるが、ＵＮＱ番号は全ての与えられたＤＮＡ及びコード化タンパク質に独特であり、変わることはないことを記しておく。しかしながら、単純化のために、本明細書において、ここに開示した完全長天然核酸分子にコードされるタンパク質並びに上記のＰＲＯの定義に含まれるさらなる天然相同体及び変異体は、それらの起源又は調製形式に関わらず、「ＰＲＯ／番号」で呼称する。
下記の実施例に開示するように、種々のｃＤＮＡクローンをＡＴＣＣに寄託している。これらのクローンの正確なヌクレオチド配列は、この分野で日常的な方法を用いて寄託されたクローンを配列決定することにより容易に決定することができる。予測されるアミノ酸配列は、ヌクレオチド配列から常套的技量を用いて決定できる。ここに記載したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド及びコード化核酸について、本出願人は、現時点で入手可能な配列情報と最も良く一致するリーディングフレームであると考えられるものを同定した。
【０１３３】
Ｂ．ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド変異体
ここに記載した完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに加えて、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体も調製できると考えられる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ ＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、及び／又は所望のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを合成することにより調製できる。当業者であれば��グリコシル化部位の数又は位置の変化あるいは膜固着特性の変化などのアミノ酸変化がＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９の翻訳後プロセスを変えうることを理解するであろう。
【０１３４】
天然完全長配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９又はここに記載したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの種々のドメインにおける変異は、例えば、米国特許第５３６４９３４号に記載されている保存的及び非保存的変異についての任意の技術及び指針を用いてなすことができる。変異は、天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９と比較してＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアミノ酸配列が変化することになるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする一又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってよい。場合によっては、変異は少なくとも一つのアミノ酸のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの一又は複数のドメインの任意の他のアミノ酸による置換である。どのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失されるかの指針は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの配列を、相同性な既知のタンパク質分子のものと比較し、相同性の高い領域になされるアミノ酸配列変化の数を最小にすることによって見出される。アミノ酸置換は、一のアミノ酸の類似した構造及び／又は化学特性を持つ他のアミノ酸での置換、例えばロイシンのセリンでの置換、即ち保存的アミノ酸置換の結果とすることができる。挿入及び欠失は、場合によっては約１から５のアミノ酸の範囲内とすることができる。許容される変異は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に作成し、得られた変異体について全長又は成熟天然配列が示す活性を試験することにより決定される。
【０１３５】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド断片がここに提供される。このような断片は、例えば、全長天然タンパク質と比較した際に、Ｎ末端又はＣ末端で切断されてもよく、又は内部残基を欠いていてもよい。或る種の断片は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの所望の生物学的活性に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９断片は、多くの一般的な技術の任意のものによって調製されうる。所望のペプチド断片は化学合成されてもよい。代替方法は、酵素的消化、例えば特定のアミノ酸残基によって定められる部位のタンパク質を切断することが知られた酵素でタンパク質を処理することにより、あるいは適当な制限酵素でＤＮＡを消化して所望の断片を単離することによるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９断片の生成を含む。さらに他の好適な技術は、ポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)により、所望のポリペプチド断片をコードするＤＮＡ断片を単離し増幅することを含む。ＤＮＡ断片の所望の末端を定めるオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲの５’及び３’プライマーで用いられる。好ましくは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド断片は、ここに開示した天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと少なくとも一つの生物学的及び／又は免疫学的活性を共有する。
対象とする保存的置換を、好ましい置換との表題で表６に示す。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表６に例示的置換と表示し、又は以下にアミノ酸分類に関してさらに記載されるような、より実質的な変化が導入され、生成物がスクリーニングされる。
【０１３６】
2008510488.tif 000023
【０１３７】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの機能又は免疫学的同一性の実質的修飾は、(ａ)置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、(ｂ)標的部位の分子の電荷又は疎水性、又は(ｃ)側鎖の嵩を維持しながら、それらの効果において実質的に異なる置換基を選択することにより達成される。天然に生じる残基は共通の側鎖特性に基づいてグループ分けすることができる：
アミノ酸はその側鎖の性質における類似性に従ってグループ分けすることができる（ A. L. Lehninger, Biochemistry, ２版, pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)）：
（１）非極性：Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)
（２）非荷電極性：Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (c), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)
（３）酸性：Asp (D), Glu (E)
（４）塩基性：Lys (K), Arg(R), His(H)
あるいは、天然に生じる残基を共通の側鎖の性質に基づいて分けることができる：
(１)疎水性：ノルロイシン, met, ala, val, leu, ile;
(２)中性の親水性：cys, ser, thr, asn, gln;
(３)酸性：asp, glu;
(４)塩基性：his, lys, arg;
(５)鎖配向に影響する残基：gly, pro;
(６)芳香族：trp, tyr, phe。
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。また、そのように置換された残基は、保存的置換部位、好ましくは残された(非保存)部位に導入されうる。
【０１３８】
変異は、オリゴヌクレオチド媒介(部位特異的)突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びＰＣＲ突然変異誘発等の当該分野において公知の技術を使用して作成することができる。部位特異的突然変異誘発［Carter等, Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986); Zoller等, Nucl. Acids Res., 10: 6487 (1987)］、カセット突然変異誘発［Wells等, Gene, 34: 315 (1985)］、制限酵素選択突然変異誘発［Wells等, Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317: 415 (1986)］又は他の周知の技術が、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９変異体ＤＮＡを製造するために、クローン化されたＤＮＡに実施できる。
また、隣接配列に沿って一又は複数のアミノ酸を同定するのにスキャンニングアミノ酸分析を用いることができる。好ましいスキャンニングアミノ酸は比較的小さく、中性のアミノ酸である。そのようなアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、及びシステインを含む。アラニンは、ベータ炭素を越える側鎖を排除し変異体の主鎖構造を変化させにくいので、この群の中で典型的に好ましいスキャンニングアミノ酸である［Cuningham及びWells, Science, 244: 1081-1085 (1989)］。また、アラニンは最もありふれたアミノ酸であるため典型的には好ましい。さらに、それは埋もれた及び露出した位置の両方に見られることが多い［Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman &amp; Co., N.Y.); Chothia, J. Mol. Biol., 150: 1 (1976)］。アラニン置換が十分な量の変異体を生じない場合は、アイソテリック(isoteric)アミノ酸を用いることができる。
【０１３９】
Ｃ．ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの修飾
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの共有結合的修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の一型は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの標的とするアミノ酸残基を、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの選択された側鎖又はＮ又はＣ末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることを含む。二官能性試薬での誘導体化が、例えばＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを水不溶性支持体マトリクスあるいは抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体の精製方法又はその逆で用いるための表面に架橋させるのに有用である。通常用いられる架橋剤は、例えば、１，１-ビス(ジアゾアセチル)-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸、３，３’-ジチオビス(スクシンイミジルプロピオネート)等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス-Ｎ-マレイミド-１，８-オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル-３-[(ｐ-アジドフェニル)-ジチオ］プロピオイミダート等の試薬を含む。
【０１４０】
他の修飾は、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα-アミノ基のメチル化[T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp.79-86 (1983)]、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化を含む。
本発明の範囲内に含まれるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。「天然グリコシル化パターンの変更」とは、この目的で意図されるのは、天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに見られる一又は複数の炭水化物部分の欠失(存在するグリコシル化部位の除去又は化学的及び／又は酵素的手段によるグリコシル化の削除のいずれかによる)、及び／又は天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに存在しない一又は複数のグリコシル化部位の付加を意味する。さらに、この文節は、存在する種々の炭水化物部分の性質及び特性の変化を含む、天然タンパク質のグリコシル化における定性的変化を含む。
【０１４１】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加はアミノ酸配列の変更を伴ってもよい。この変更は、例えば、一又は複数のセリン又はトレオニン残基の天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９(Ｏ-結合グリコシル化部位)への付加、又は置換によってなされてもよい。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９アミノ酸配列は、場合によっては、ＤＮＡレベルでの変化、特に、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡを予め選択された塩基において変異させ、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを生成させることを通して変更されてもよい。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド上に炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的結合による。このような方法は、この技術分野において、例えば、1987年9月11日に公開されたWO 87/05330、及びAplin及びWriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)に記載されている。
【０１４２】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグルコシル化の標的として提示されたアミノ酸残基をコードするコドンの変異的置換によってなすことができる。化学的脱グリコシル化技術は、この分野で知られており、例えば、Hakimuddin等, Arch. Biochem. Biophys., 259:52 (1987)により、及びEdge等, Anal. Biochem., 118: 131 (1981)により記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakura等, Meth. Enzymol. 138:350 (1987)に記載されているように、種々のエンド及びエキソグリコシダーゼを用いることにより達成される。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリぺプチドの、種々の非タンパク質様ポリマー、例えばポリエチレングリコール(PEG)、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの一つへの、米国特許第４６４０８３５号；第４４９６６８９号；第４３０１１４４号；第４６７０４１７号；第４７９１１９２号又は第４１７９３３７号に記載された方法での結合を含む。
また、本発明のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、他の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを含むキメラ分子を形成する方法で修飾してもよい。
【０１４３】
このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドとＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般的にはＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に位置する。このようなＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのエピトープタグ形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグの提供は、抗-タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の型の親和性マトリクスを用いたアフィニティ精製によってＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを容易に精製できるようにする。種々のタグポリペプチド及びそれら各々の抗体はこの分野で良く知られている。例としては、ポリ-ヒスチジン(poly-his)又はポリ-ヒスチジン-グリシン(poly-his-gly)タグ；flu HAタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５［Field等, Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)］；c-mycタグ及びそれに��する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体［Evan等, Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985)］；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ(gD)タグ及びその抗体［Paborsky等, Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)］を含む。他のタグポリペプチドは、フラッグペプチド［Hopp等, BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)］；ＫＴ３エピトープペプチド［Martin等, Science, 255:192-194 (1992)］；α-チューブリンエピトープペプチド［Skinner等, J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)］；及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ［Lutz-Freyermuth等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397 (1990)］を含む。
キメラ分子はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定領域との融合体を含んでもよい。キメラ分子の二価形態(「イムノアドヘシン」とも呼ばれる)については、そのような融合体はＩｇＧ分子のＦｃ領域であり得る。Ｉｇ融合体は、好ましくはＩｇ分子内の少なくとも一つの可変領域に換えてＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの可溶化(膜貫通ドメイン欠失又は不活性化)形態を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５４２８１３０号を参照のこと。
【０１４４】
Ｄ．ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの調製
以下の説明は、主として、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９核酸を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を培養することによりＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを生産する方法に関する。もちろん、当該分野においてよく知られている他の方法を用いてＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを調製することができると考えられる。例えば、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９配列、又はその一部は、固相技術を用いた直接ペプチド合成によって生産してもよい［例えば、Stewart等, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969)；Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)参照］。手動技術又は自動によるインビトロタンパク質合成を行ってもよい。自動合成は、例えば、アプライド・バイオシステムズ・ペプチド合成機(Foster City, CA)を用いて、製造者の指示により実施してもよい。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７���ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの種々の部分は、別々に化学的に合成され、化学的又は酵素的方法を用いて結合させて完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを生産してもよい。
【０１４５】
１．ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡの単離
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ｍＲＮＡを保有していてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されたｃＤＮＡライブラリーから得ることができる。従って、ヒトＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ＤＮＡは、実施例に記載されるように、ヒトの組織から調製されたｃＤＮＡライブラリーから簡便に得ることができる。またＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９-コード化遺伝子は、ゲノムライブラリーから又は公知の合成方法(例えば、自動化核酸合成)により得ることもできる。
ライブラリーは、関心ある遺伝子あるいはその遺伝子によりコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブ(ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対する抗体又は少なくとも約２０−８０塩基のオリゴヌクレオチド等)によってスクリーニングできる。選択されたプローブによるｃＤＮＡ又はゲノムライブラリーのスクリーニングは、例えばSambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)に記載されている標準的な手順を使用して実施することができる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９をコードする遺伝子を単離する他の方法はＰＣＲ法を使用するものである［Sambrook等,上掲；Dieffenbach等, PCR Primer：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)］。
【０１４６】
下記の実施例には、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング技術を記載している。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は、充分な長さで、疑陽性が最小化されるよう充分に明瞭でなければならない。オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされるライブラリー内のＤＮＡとのハイブリッド形成時に検出可能であるように標識されていることが好ましい。標識化の方法は当該分野において良く知られており、３２Ｐ標識されたＡＴＰのような放射線標識、ビオチン化あるいは酵素標識の使用が含まれる。中程度の厳密性及び高度の厳密性を含むハイブリッド形成条件は、上掲のSambrook等に与えられている。
このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、Genbank等の公共データベース又は個人の配列データベースに寄託され公衆に利用可能とされている周知の配列と比較及びアラインメントすることができる。分子の決定された領域内又は全長に渡っての(アミノ酸又はヌクレオチドレベルのいずれかでの)配列同一性は、この分野で知られた、そしてここに記載した方法を用いて決定することができる。
タンパク質コード配列を有する核酸は、初めてここで開示された推定アミノ酸配列を使用し、また必要ならば、ｃＤＮＡに逆転写されなかったｍＲＮＡの生成中間体及び先駆物質を検出する上掲のSambrook等に記述されているような従来のプライマー伸展法を使用し、選択されたｃＤＮＡ又はゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより得られる。
【０１４７】
２．宿主細胞の選択及び形質転換
宿主細胞を、ここに記載したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド生産のための発現又はクローニングベクターで形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、ｐＨ等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M.Butler編 (IRL Press, 1991)及びSambrook等, 上掲に見出すことができる。
原核生物細胞形質移入及び真核生物細胞形質転換の方法、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＰＯ４、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。用いられる宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を用いて形質転換はなされる。前掲のSambrook等に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションが、一般的に原核生物に対して用いられる。アグロバクテリウム・トゥメファシエンスによる感染が、Shaw等, Gene, 23:315 (1983)及び１９８９年６月２９日公開のＷＯ  ８９／０５８５９に記載されているように、或る種の植物細胞の形質転換に用いられる。このような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvan der Eb, Virology, 52:456-457 (1978)のリン酸カルシウム沈降法を使用することができる。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第４３９９２１６号に記載されている。酵母菌中への形質転換は、典型的には、Van Solingen等, J. Bact., 130:946 (1977)及びHsiao等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:3829 (1979)の方法に従って実施される。しかしながら、ＤＮＡを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無傷の細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた用いることもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、Keown等, Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990)及び Mansour等, Nature, 336:348-352 (1988)を参照のこと。
【０１４８】
ここに記載のベクターにＤＮＡをクローニングあるいは発現するために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば大腸菌のような腸内細菌科を含む。種々の大腸菌株が公衆に利用可能であり、例えば、大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４(ATCC31,446)；大腸菌Ｘ１７７６(ATCC31,537)；大腸菌株Ｗ３１１０(ATCC27,325)及びＫ５７７２(ATCC53,635)である。他の好ましい原核動物宿主細胞は、大腸菌、例えば、E. coli、エンテロバクター、エルビニア(Erwinia)、クレブシエラ(Klebsiella)、プロテウス(Proteus)、サルモネラ、例えば、ネズミチフス菌、セラチア、例えば、セラチアマルセサンス(Serratia marcescans) 、及び赤痢菌、並びに桿菌、例えばバシリスブチリス(B. subtilis)及びバシリリチェニフォルミス(B. licheniformis)(例えば、1989年4月12日発行のDD 266,710に記載されたバシリリチェニフォルミス４１Ｐ)、シュードモナス、例えば緑膿筋及びストレプトマイセスなどの腸内細菌科を含む。これらの例は限定ではなく例示である。株Ｗ３１１０は、組換えＤＮＡ生産発行のための共通の宿主株であるので一つの特に好ましい宿主又は親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株Ｗ３１１０は、細胞に外来のタンパク質をコードする遺伝子における遺伝子変異をするように修飾してもよく、そのような宿主の例としては、完全な遺伝子型ｔｏｎＡを有する大腸菌Ｗ３１１０株１Ａ２；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３を有する大腸菌Ｗ３１１０株９Ｅ４；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｒｔ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  (ａｒｇＦ-ｌａｃ)１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ ｋａｎrを有する大腸菌Ｗ３１１０株２７Ｃ７(ATCC 55,244)；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  (ａｌｇＦ-ｌａｃ)１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ  ｒｂｓ７ｉｌｖＧｋａｎｒを有する大腸菌Ｗ３１１０株３７Ｄ６；非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠失変異を持つ３７Ｄ６株である大腸菌Ｗ３１１０株４０Ｂ４；及び1990年8月7日発行の米国特許第4,946,783号に開示された変異周辺質プロテアーゼを有する大腸菌株を含む。あるいは、クローニングのインビトロ法、例えばＰＣＲ又は他の核酸ポリメラーゼ反応が好ましい。
【０１４９】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシアは、通常用いられる下等真核生物宿主微生物である。他に、シゾサッカロミセスプロンブ(Schizosaccharomyces prombe)(Beach及びNurse, Nature, 290: 140 [1981]; 1985年5月2日公開のEP 139,383)；クルベロミセスホスツ(Kluveromyces hosts)(米国特許第4,943,529号; Fleer等, Bio/Technology, 9: 968-975 (1991))、例えばケー・ラクチス(K. lactis)(MW98-8C, CBS683, CBS4574; Louvencourt等, J. Bacteriol. 154(2): 737-742 [1983])、ケー・フラギリス(K. fragilis)(ATCC 12,424)、ケー・ブルガリクス(K. bulgaricus)(ATCC 16,045)、ケー・ウィケラミイ(K. wickeramii)(ATCC 24,178)、ケー・ワルチイ(K. waltii)(ATCC 56,500)、ケー・ドロソフィラルム(K. drosophilarum)(ATCC 36,906; Van den Berg等, Bio/Technology, 8: 135 (1990))、ケー・テモトレランス(K. themotolerans)及びケー・マルキシアナス(K. marxianus)；ヤロウィア(yarrowia)(EP 402,226)；ピッチャパストリス(Pichia pastoris)(EP 183,070; Sheekrishna等, J. Basic Microbiol, 28: 265-278 [1988])；カンジダ；トリコデルマレーシア(reesia)(EP 244,234)；アカパンカビ(Case等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76: 5259-5263 [1979])；シュワニオマイセス(schwanniomyces)、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス(occidentalis)(1990年10月31日公開のEP 394,538)；及び糸状真菌、例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム(Tolypocladium)(1991年1月10日公開のWO 91/00357)；及びコウジ菌、例えば偽巣性コウジ菌(Ballance等, Biochem. Biophys. Res. Commun., 112: 284-289 [1983]; Tilburn等, Gene, 26: 205-221 [1983]; Yelton等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984])及びクロカビ(Kelly及びHynes, EMBO J., 4: 475-479 [1985])が含まれる。ここで好ましいメチロトロピック(methylotropic)酵母は、これらに限られないが、ハンセヌラ(Hansenula)、カンジダ、クロエケラ(Kloeckera)、ピチア(Pichia)、サッカロミセス、トルロプシス(Torulopsis)、及びロドトルラ(Rhodotorula)からなる属から選択されるメタノールで成長可能な酵母を含む。この酵母の分類の例示である特定の種のリストは、C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982)に記載されている。
【０１５０】
グリコシル化ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、ショウジョウバエＳ２及びスポドスペラＳｆ９等の昆虫細胞並びに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)及びＣＯＳ細胞を含む。多くの特異的な例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株 (COS-7, ATCC CRL 1651);ヒト胚腎臓株(293又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された293細胞、Graham等, J. Gen Virol., 36:59 (1977));チャイニーズハムスター卵巣細胞／-ＤＨＦＲ(CHO, Urlaub及びChasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980));マウスのセルトリ細胞(TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); ヒト肺細胞 (W138, ATCC CCL 75); ヒト肝細胞 (Hep G2, HB 8065); 及びマウス乳房腫瘍 (MMT 060562, ATTC CCL51)を含む。適切な宿主細胞の選択は、この分野の技術常識内にある。
【０１５１】
３．複製可能なベクターの選択及び使用
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする核酸(例えば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ)は、クローニング(ＤＮＡの増幅)又は発現のために複製可能なベクター内に挿入される。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、種々の手法によってベクターに挿入される。一般に、ＤＮＡはこの分野で周知の技術を用いて適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、一又は複数のシグナル配列、複製開始点、一又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の一又は複数を含む適当なベクターの作成には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。
【０１５２】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは直接的に組換え手法によって生産されるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質あるいはポリペプチドのＮ-末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドである異種性ポリペプチドとの融合ペプチドとしても生産される。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるか、ベクターに挿入されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９-コード化ＤＮＡの一部である。シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐあるいは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であってよい。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー(酵母菌属(Saccharomyces)及びクルイベロマイシス(Kluyveromyces)α因子リーダーを含み、後者は米国特許第5,010,182号に記載されている)、又は酸ホスフォターゼリーダー、白体(C.albicans)グルコアミラーゼリーダー(1990年4月4日公開のEP362179)、又は1990年11月15日に公開されたWO 90/13646に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列は、同一あるいは関連ある種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用してもよい。
【０１５３】
発現及びクローニングベクターは共に一又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は多くの細菌、酵母及びウイルスに対してよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、２μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点(ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ)は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。
発現及びクローニングベクターは、典型的には、選択性マーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、(a)アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートあるいはテトラサイクリンのような抗生物質あるいは他の毒素に耐性を与え、(b)栄養要求性欠陥を補い、又は(c)例えばバシリに対する遺伝子コードＤ-アラニンラセマーゼのような、複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
哺乳動物細胞に適切な選択マーカーの例は、ＤＨＦＲあるいはチミジンキナーゼのように、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９-コード化核酸を取り込むことのできる細胞成分を同定することのできるものである。野生型ＤＨＦＲを用いた場合の好適な宿主細胞は、Urlaub 等により, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)に記載されているようにして調製され増殖されたＤＨＦＲ活性に欠陥のあるＣＨＯ株化細胞である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Stinchcomb等, Nature, 282：39(1979)；Kingman等, Gene, 7：141(1979)；Tschemper等, Gene, 10：157(1980)］。ｔｒｐ１遺伝子は、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６あるいはＰＥＰ４-１のようなトリプトファン内で成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する［Jones, Genetics, 85:12 (1977)］。
【０１５４】
発現及びクローニングベクターは、通常、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９-コード化核酸配列に作用可能に結合し、ｍＲＮＡ合成を制御するプロモーターを含む。種々の可能な宿主細胞により認識されるプロモーターが知られている。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターはβ-ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系［Cahng等, Nature, 275:615 (1978)；Goeddel等, Nature, 281:544 (1979)］、アルカリホスファターゼ、トリプトファン(trp)プロモーター系［Goeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36,776］、及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター［deBoer 等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)］を含む。細菌系で使用するプロモータもまたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡと作用可能に結合したシャイン・ダルガーノ(S.D.)配列を有する。
酵母宿主と共に用いて好適なプロモーター配列の例としては、３-ホスホグリセラートキナーゼ［Hitzeman 等, J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)］又は他の糖分解酵素［Hess 等, J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968)；Holland, Biochemistry, 17：4900(1978)］、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース-６-リン酸イソメラーゼ、３-ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオセリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。
【０１５５】
他の酵母プロモーターとしては、成長条件によって転写が制御される付加的効果を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母菌での発現に好適に用いられるベクターとプロモータはＥＰ７３６５７に更に記載されている。
哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９転写は、例えば、ポリオーマウィルス、伝染性上皮腫ウィルス(1989年7月5日公開のUK 2,211,504)、アデノウィルス(例えばアデノウィルス２)、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス及びサルウィルス４０(SV40)のようなウィルスのゲノムから得られるプロモーター、異種性哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り制御される。
より高等の真核生物による所望のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。エンハンサーは、通常は約１０から３００塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するＤＮＡのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている(グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン及びインスリン)。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー(１００-２７０塩基対)、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード配列の５’又は３’位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから５’位に位置している。
【０１５６】
また真核生物宿主細胞(酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞)に用いられる発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの通常は５’、時には３’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
組換え脊椎動物細胞培養でのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの合成に適応化するのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、Gething等, Nature, 293:620-625 (1981); Mantei等, Nature, 281:40-46 (1979); EP 117,060; 及びEP 117,058に記載されている。
【０１５７】
４．遺伝子増幅／発現の検出
遺伝子増幅及び／又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを用い、例えば一般的なサザンブロット法、ｍＲＮＡの転写を定量化するノーザンブロット法［Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77:5201-5205 (1980)］、ドットブロット法(ＤＮＡ分析)、又はインサイツハイブリッド形成法によって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖及びＤＮＡ-ＲＮＡハイブリッド二本鎖又はＤＮＡ-タンパク二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。ついで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合していて、その結果、二本鎖の表面での形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。
あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び／又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対して、又はここで提供されるＤＮＡ配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ＤＮＡに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製され得る。
【０１５８】
５．ポリペプチドの精製
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液(例えばトリトン-Ｘ１００)又は酵素的切断を用いて膜から引き離すことができる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの種々の化学的又は物理的手段によって破壊することができる。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを、組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい。適切な精製手順の例である次の手順により精製される：すなわち、イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥによるクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ-ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えばセファデックスＧ-７５を用いるゲル濾過；ＩｇＧのような汚染物を除くプロテインＡセファロースカラム；及びＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。様々なタンパク質精製方法を用いることができ、そのような方法は、例えばDeutcher, Methodes in Enzymology, 182 (1990)；Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)に記載されている。選ばれる精製過程は、例えば、用いられる生産方法及び特に生産される特定のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの性質に依存する。
【０１５９】
Ｅ．ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの用途
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（又はそれらの相補鎖）は、ハイブリダイゼーションプローブとしての使用を含む分子生物学の分野において、染色体及び遺伝子マッピングにおいて、及びアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生成において種々の用途を有している。また、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９核酸も、ここに記載される組換え技術によるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの調製に有用である。
【０１６０】
完全長天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子又はその一部は、完全長ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９cＤＮＡの単離又は天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９配列に対して所望の配列同一性を持つ更に他のcＤＮＡ（例えば、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの自然発生変異体又は他の種からのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするもの）の単離のためのcＤＮＡライブラリー用のハイブリダイゼーションプローブとして使用できる。場合によっては、プローブの長さは約２０〜約５０塩基である。ハイブリダイゼーションプローブは、少なくとも部分的には、完全長天然ヌクレオチド配列の新規な領域から誘導してもよく、それらの領域は、過度の実験をすることなく、又は天然配列ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９のプロモーター、エンハンサー成分及びイントロンを含むゲノム配列から決定され得る。例えば、スクリーニング法は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子のコード化領域を既知のＤＮＡ配列を用いて単離して約４０塩基の選択されたプローブを合成することを含む。ハイブリダイゼーションプローブは、３２Ｐ又は３５Ｓ等の放射性ヌクレオチド、又はアビジン／ビオチン結合系を介してプローブに結合したアルカリホスファターゼ等の酵素標識を含む種々の標識で標識されうる。本発明のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子に相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、そのライブラリーの何れのメンバーがプローブにハイブリッド形成するかを決定するのに使用できる。ハイブリダイゼーション技術は、以下の実施例において更に詳細に記載する。
【０１６１】
本出願で開示する任意のＥＳＴ配列は、同様に、ここに記載した方法でプローブとして用いることができる。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９核酸の他の有用な断片は、標的ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ｍＲＮＡ（センス）又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ＤＮＡ（アンチセンス）配列に結合できる一本鎖核酸配列（ＲＮＡ又はＤＮＡのいずれか）を含むアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを含む。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、本発明によると、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ＤＮＡのコード化領域の断片を含む。このような断片は、一般的には少なくとも約１４ヌクレオチド、好ましくは約１４から３０ヌクレオチドを含む。与えられたタンパク質をコードするcＤＮＡ配列に基づく、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを制御する能力は、例えば、Stein及びCohen（Cancer Res. 48: 2659: 1988）及び van der Krolら,（BioTechniques 6: 958, 1988）に記載されている。
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への結合は二重鎖の形成をもたらし、それは、二重鎖の分解の促進、転写又は翻訳の中途での停止を含む幾つかの方法の一つ、又は他の方法により、標的配列の転写又は翻訳を阻止する。よって、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９の発現を阻止するのに用いられる。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖−ホスホジエステル骨格（又は他の糖結合、ＷＯ９１／０６６２９に記載のもの等）を有するオリゴヌクレオチドをさらに含み、そのような糖結合は内因性ヌクレアーゼ耐性である。そのような耐性糖結合を持つオリゴヌクレオチドは、インビボで安定であるが（即ち、酵素分解に耐えうるが）、標的ヌクレオチド配列に結合できる配列特異性は保持している。
【０１６２】
センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの他の例は、ＷＯ９０／１００４８に記載されているもののような、有機部分、及びオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への親和性を向上させる他の部分、例えばポリ-(Ｌ-リジン)に共有結合したオリゴヌクレオチドを含む。さらにまた、エリプチシン等のインターカレート剤、アルキル化剤又は金属錯体をセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させ、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的ヌクレオチド配列への結合特異性を改変してもよい。
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、ＣａＰＯ４-媒介ＤＮＡ形質移入、エレクトロポレーションを含む任意の遺伝子転換方法により、又はエプスタイン-バーウイルスなどの遺伝子転換ベクターを用いることにより、標的核酸配列を含む細胞に導入される。好ましい方法では、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、適切なレトロウイルスベクターに挿入される。標的核酸配列を含む細胞は、インビボ又はエキソビボで組換えレトロウイルスベクターに接触させる。好適なレトロウイルスベクターは、これらに限られないが、マウスレトロウイルスＭ−ＭｕＬＶから誘導されるもの、Ｎ２（Ｍ−ＭｕＬＶから誘導されたレトロウイルス）、又はＤＣＴ５Ａ、ＤＣＴ５Ｂ及びＤＣＴ５Ｃと命名されたダブルコピーベクター（ＷＯ９０／１３６４１参照）を含む。
また、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９１／０４７５３に記載されているように、リガンド結合分子との結合体の形成により標的ヌクレオチド配列を含む細胞に導入してもよい。適切なリガンド結合分子は、これらに限られないが、細胞表面レセプター、増殖因子、他のサイトカイン、又は細胞表面レセプターに結合する他のリガンドを含む。好ましくは、リガンド結合分子の結合体形成は、リガンド結合分子がその対応する分子又はレセプターに結合する、あるいはセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその複合体の細胞への侵入を阻止する能力を実質的に阻害しない。
【０１６３】
あるいは、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９０／１０４４８に記載されたように、オリゴヌクレオチド−脂質複合体の形成により標的核酸配列を含む細胞に導入してもよい。センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド−脂質複合体は、好ましくは内因性リパーゼにより細胞内で分解される。
アンチセンス又はセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子は一般に少なくとも約５塩基長、約１０塩基長、約１５塩基長、約２０塩基長、約２５塩基長、約３０塩基長、約３５塩基長、約４０塩基長、約４５塩基長、約５０塩基長、約５５塩基長、約６０塩基長、約６５塩基長、約７０塩基長、約７５塩基長、約８０塩基長、約８５塩基長、約９０塩基長、約９５塩基長、約１００塩基長又はそれ以上である。
また、プローブは、ＰＣＲ技術に用いて、密接に関連したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード化配列の同定のための配列のプールを作成することができる。
また、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子のマッピングのため、及び遺伝子障害を持つ個体の遺伝子分析のためのハイブリダイゼーションプローブの構築にも用いることができる。ここに提供されるヌクレオチド配列は、インサイツハイブリダイゼーション、既知の染色体マーカーに対する結合分析、及びライブラリーでのハイブリダイゼーションスクリーニング等の周知の技術を用いて、染色体及び染色体の特定領域にマッピングすることができる。
【０１６４】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９のコード化配列が他のタンパク質に結合するタンパク質をコードする場合（例えば、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９がレセプターである場合）、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、結合相互作用に関与している他のタンパク質又は分子を同定するためのアッセイに用いることができる。このような方法により、レセプター／リガンド結合性相互作用の阻害剤を同定することができる。このような結合性相互作用に関与するタンパク質も、ペプチド又は小分子阻害剤又は結合性相互作用のアゴニストのスクリーニングに用いることができる。また、レセプターＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９は関連するリガンドの単離にも使用できる。スクリーニングアッセイは、天然ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのレセプターの生物活性を模倣するリード化合物の発見のために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、化学的ライブラリーのハイスループットスクリーニングにも使用可能なアッセイを含み、小分子候補薬剤の同定に特に適したものとする。考慮される小分子は、合成有機又は無機化合物を含む。アッセイは、この分野で良く知られ特徴付けられているタンパク質−タンパク質結合アッセイ、生物学的スクリーニングアッセイ、免疫検定及び細胞ベースのアッセイを含む種々の型式で実施される。
【０１６５】
また、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド又はその修飾型をコードする核酸は、トランスジェニック動物又は「ノックアウト」動物のいずれかを産生することに使用でき、また、これらは治療的に有用な試薬の開発やスクリーニングに有用である。トランスジェニック動物(例えばマウス又はラット)とは、出生前、例えば胚段階で、その動物又はその動物の祖先に導入された導入遺伝子を含む細胞を有する動物である。導入遺伝子とは、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノムに組み込まれたＤＮＡである。本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするcＤＮＡを提供し、これは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするＤＮＡを発現する細胞を含むトランスジェニック動物を作製するために使用するゲノム配列及び確立された技術に基づいて、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローン化するために使用することができる。動物に標的遺伝子の導入遺伝子を導入してトランスジェニック動物の創始系統を産生するために当該分野で知られている任意の方法を使用することができる。そのような技術には、限定されるものではないが、前核マイクロインジェクション(米国特許第４８７３１９１号、第４７３６８６６号及び第４８７０００９号)；胚系列へのレトロウイルス媒介遺伝子転移(Van der Putten等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6148-6152(1985))；胚性幹細胞でのジーンターゲティング(Thompson等, Cell 56, 313-321 (1989))；ジーントラップベクターを使用する非特異的挿入不活性化（米国特許第６４３６７０７号）；胚のエレクトロポレーション(Lo, Mol. Cel. Biol. 3, 1803-1814 (1983))；及び精子媒介遺伝子移入(Lavitrano等, Cell 57: 717-73 (1989))を含む。典型的には、特定の細胞を組織特異的エンハンサーでのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９導入遺伝子の導入の標的にする。胚段階で動物の生殖系列に導入されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード化導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９をコードするＤＮＡの増大した発現の影響を調べるために使用できる。このような動物は、例えばその過剰発現を伴う病理学的状態に対して保護をもたらすと思われる試薬のテスター動物として使用できる。本発明のこの態様においては、動物を試薬で治療し、導入遺伝子を有する未治療の動物に比べ病理学的状態の発症率が低ければ、病理学的状態に対する治療上の処置の可能性が示される。
【０１６６】
あるいは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの非ヒト相同体は、動物の胚幹細胞に導入されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする変更ゲノムＤＮＡと、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、欠損した又は変更されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９コード化遺伝子を有するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９「ノックアウト」動物を作成するために使用できる。好ましくはノックアウト動物は哺乳動物である。より好ましくは、哺乳動物は齧歯類、例えばラット又はマウスである。例えばＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするcＤＮＡは、確立された技術に従い、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡのクローニングに使用できる。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡの一部は、組込みをモニターするために使用可能な選択マーカーをコード遺伝子のような他の遺伝子によって欠失させたり、置換させることが可能である。典型的には、ベクターは無変化のフランキングＤＮＡ(5'と3'末端の両方)を数キロベース含む［例えば、相同的組換えベクターについてはThomas及びCapecchi, Cell, 51:503(1987)を参照］。ベクターは胚幹細胞に(例えばエレクトロポレーションによって)導入し、導入されたＤＮＡが内在性ＤＮＡと相同的に組換えられた細胞が選択される［例えば、Liら, Cell, 69:915(1992)参照］。選択された細胞は次に動物(例えばマウス又はラット)の胚盤胞内に注入されて集合キメラを形成する［例えば、Bradley, Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987), pp. 113-152参照のこと］。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、期間をおいて「ノックアウト」動物を作り出す。胚細胞に相同的に組換えられたＤＮＡを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたＤＮＡを含む動物を���殖させることができる。ノックアウト動物は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの欠乏によるある種の病理的状態及びその病理的状態の進行に対する防御能力によって特徴付けられる。  
【０１６７】
また、ノックアウトマウスは、薬剤標的の遺伝子機能及び薬学的有用性の発見において、並びに与えられた標的に関連する潜在的な標的への(on-target)副作用の決定において、得る情報が非常に多い場合がある。遺伝子機能と生理学は、双方とも哺乳動物であり類似の遺伝指数を含み、それが種間で高度に保存されているので、マウスとヒトの間で非常によく保存されている。例えば、マウス染色体１６の遺伝子の９８％がヒトオルソログを有することが最近よく文書化されている（Mural等, Science 296:1661-71 (2002)）。
胚性幹(ＥＳ)細胞におけるジーンターゲティングにより、ヒト疾患に関連した多くの遺伝子にヌル変異のマウスを作成することが可能になったが、必ずしも全ての遺伝子疾患がヌル変異に起因するものではない。マウス座を破壊し、変異を持つヒトの対応物を導入する遺伝子置換（ノックイン）の方法を確立することによってヒトの疾患の貴重なマウスモデルを設計することができる。続いて、ヒトタンパク質をターゲットとしたインビボ薬剤研究を行うことができる(Kitamoto等, Biochemical and Biophysical Res. Commun., 222:742-47 (1996))。
また、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする核酸は遺伝子治療にも使用できる。遺伝子治療用途においては、例えば欠陥遺伝子を置換するため、治療的有効量の遺伝子産物のインビボ合成を達成するために遺伝子が導入される。「遺伝子治療」とは、１回の処理により継続的効果が達成される従来の遺伝子治療と、治療的に有効なＤＮＡ又はmＲＮＡの１回又は繰り返し投与を含む遺伝子治療薬の投与の両方を含む。アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡは、ある種の遺伝子のインビボ発現を阻止する治療薬として用いることができる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドを、細胞膜による制限された取り込みに起因する低い細胞内濃度にもかかわらず、それが阻害剤として作用する細胞中に移入できることは既に示されている（Zamecnikら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4143-4146 [1986]）。オリゴヌクレオチドは、それらの負に荷電したリン酸ジエステル基を非荷電基で置換することによって取り込みを促進するように修飾してもよい。
【０１６８】
生存可能な細胞に核酸を導入するための種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が培養細胞にインビトロで、あるいは意図する宿主の細胞においてインビボで移入されるかに応じて変わる。核酸を哺乳動物細胞にインビトロで移入するのに適した方法は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などを含む。現在好ましいインビボ遺伝子移入技術は、ウイルス（典型的にはレトロウイルス）ベクターでの形質移入及びウイルス被覆タンパク質-リポソーム媒介形質移入である（Dzau等, Trends in Biotechnology 11, 205-210[1993]）。幾つかの状況では、核酸供給源を、細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンド等の標的細胞を標的化する薬剤とともに提供するのが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスを伴う細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型向性のキャプシドタンパク質又はその断片、サイクルにおいて内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を向上させるタンパク質が、標的化及び／又は取り込みの促進のために用いられる。レセプター媒介エンドサイトーシスは、例えば、Wu等, J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); 及びWagner等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990)によって記述されている。遺伝子作成及び遺伝子治療のプロトコールの概説については、Anderson等, Science 256, 808-813 (1992)を参照のこと。
【０１６９】
ここに記載したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをタンパク質電気泳動目的の分子量マーカーとして用いてもよい。
ここに記載したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド又はその断片をコードする核酸分子は、染色体の同定に有用である。この点において、実際の配列データに基づく染色体マーキング試薬は殆ど利用可能ではないため、新規な染色体マーカーの同定が必要である。本発明の各ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９核酸分子は染色体マーカーとして使用できる。
また、本発明のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド及び核酸分子は組織タイピングに使用でき、本発明のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、好ましくは同じ組織型の正常組織と比較した疾患組織において、一方の組織において他方に比較して異なる発現をする。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９核酸分子には、ＰＣＲ、ノーザン分析、サザン分析及びウェスタン分析のプローブ生成のための用途が見出されるであろう。
【０１７０】
ここに記載したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは治療薬として用いてもよい。本発明のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、薬学的に有用な組成物を調製するのに知られた方法に従って製剤され、これにより、このＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９産物は薬学的に許容される担体媒体と混合される。治療用製剤は、凍結乾燥された製剤又は水性溶液の形態で、任意的な製薬上許容可能な担体、賦形剤又は安定剤と、所望の精製度を有する活性成分とを混合することにより(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed., (1980))、調製され保管される。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いる投与量及び濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量(残基数１０個未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリン等の単糖類、二糖類又は他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又はＴＷＥＥＮ(登録商標)、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ(登録商標)又はＰＥＧ等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１７１】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなくてはならない。これは、凍結乾燥及び再構成の前又は後に、滅菌フィルター膜を通す濾過により容易に達成される。
ここでの治療用組成物は一般に、無菌のアクセスポートを具備する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能なストッパーを持つ静脈内バッグ又はバイアル内に配される。
投与経路は周知の方法、例えば、静脈内、腹膜内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内又は病巣内経路での局所投与などの注射又は注入、又は徐放系による。
本発明の医薬組成物の用量及び望ましい薬物濃度は、意図する特定の用途に応じて変化する。適切な用量又は投与経路の決定は、通常の内科医の技量の範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効量の決定についての信頼できる指針を提供する。有効量の種間スケーリングは、Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi等編, Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-96のMordenti, J. 及びChappell, W. 「The use of interspecies scaling in toxicokinetics」に記載された原理に従って実施できる。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド又はそのアゴニスト又はアンタゴニストのインビボ投与が用いられる場合、正常な投与量は、投与経路に応じて、哺乳動物の体重当たり１日に約１０ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日である。特定の用量及び輸送方法の指針は文献に与えられている；例えば、米国特許第４６５７７６０号、第５２０６３４４号、又は第５２２５２１２号参照。異なる製剤が異なる治療用化合物及び異なる疾患に有効であること、例えば一つの器官又は組織を標的とする投与には、他の器官又は組織とは異なる方式で輸送することが必要であることが予想される。
【０１７２】
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの投与を必要とする任意の疾患又は疾病の治療に適した放出特性を持つ製剤でＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの持続放出が望まれる場合、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのマイクロカプセル化が考えられる。持続放出のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（rhGH）、インターフェロン-（rhIFN-）、インターロイキン-２、及びMN rgp120で成功裏に実施されている。Johnson等, Nat. Med., 2: 795-799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27: 1221-1223 (1993); Horaら, Bio/Technology, 8: 755-758 (1990); Cleland, 「Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems」Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell 及び Newman編, (Plenum Press: New York, 1995), p.439-462; ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２、ＷＯ９６／０７３９９；及び米国特許第５６５４０１０号。
これらのタンパク質の持続放出製剤は、ポリ-乳酸-グリコール酸（PLGA）コポリマーを用い、その生体適合性及び広範囲の生分解特性に基づいて開発された。ＰＬＧＡの分解生成物である乳酸及びグリコール酸は、ヒト身体内で即座にクリアされる。さらに、このポリマーの分解性は、分子量及び組成に依存して数ヶ月から数年まで調節できる。Lewis, 「Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer」: M. Chasin及び R. Langer (編), Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), pp. 1-41。
【０１７３】
本発明は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを模倣するもの（アゴニスト）又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの効果を阻害するもの（アンタゴニスト）を同定するための化合物のスクリーニング方法も包含する。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを模倣するアゴニストは、そのゲノムがＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物での知見に基づいて陰性の表現型が観察される場合に特に治療上価値が高いであろう。ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの効果を妨げるアンタゴニストは、陽性の表現型が非ヒトトランスジェニックノックアウト動物での観察時に観察される場合に特に治療上価値が高いであろう。アンタゴニスト候補薬のスクリーニングアッセイは、ここに同定した遺伝子にコードされるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと結合又は複合体形成する化合物、又は他にコード化ポリペプチドの他の細胞性タンパク質との相互作用を阻害する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、それを特に小分子候補薬の同定に適したものにする、化学的ライブラリーの高スループットスクリーニングに適用可能なアッセイを含む。
該アッセイは、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、及び細胞ベースのアッセイで、この分野で知られたものを含む種々の方式で実施される。
アンタゴニストについての全てのアッセイは、それらが候補薬をここで同定された核酸にコードされるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと、これら２つの成分が相互作用するのに十分な条件下及び時間で接触させることを必要とすることにおいて共通する。
【０１７４】
結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成された複合体は単離されるか、又は反応混合物中で検出されうる。ここで同定される遺伝子にコードされるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド又は候補薬が、共有又は非共有結合により固相、例えばミクロタイタープレートに固定化される。非共有結合は、一般的に固体表面をＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの溶液で被覆し乾燥させることにより達成される。あるいは、固定化されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えばモノクローナル抗体を、それを固体表面に固着させるために用いることができる。アッセイは、固定化成分、例えば固着成分を含む被覆表面に、検出可能な標識で標識されていてもよい非固定化成分を添加することにより実施される。反応が完了したとき、未反応成分を例えば洗浄により除去し、固体表面に固着した複合体を検出する。最初の非固定化成分が検出可能な標識を有している場合、表面に固定化された標識の検出は複合体形成が起こったことを示す。最初の非固定化成分が標識を持たない場合は、複合体形成は、例えば、固定化された複合体に特異的に結合する標識抗体によって検出できる。
【０１７５】
候補化合物が相互作用するがここに同定した遺伝子にコードされる特定のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチに結合しない場合、そのポリペプチドとの相互作用は、タンパク質−タンパク質相互作用を検出するために良く知られている方法によってアッセイすることができる。そのようなアッセイは、架橋、同時免疫沈降、及び勾配又はクロマトグラフィカラムを通す同時精製などの伝統的な手法を含む。さらに、タンパク質−タンパク質相互作用は、Chevray及びNathans,Proc.Natl. Acad. Sci. USA 89, 5789-5793 (1991)に開示されているように、Fields及び共同研究者［Fiels及びSong, Nature(London) 340, 245-246 (1989); Chien等, Proc.Natl. Acad. Sci. USA 88, 9578-9582 (1991)］に記載された酵母ベースの遺伝子系を用いることによってモニターすることができる。酵母ＧＡＬ４などの多くの転写活性化剤は、２つの物理的に別個のモジュラードメインからなり、一方はＤＮＡ結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。前出の文献に記載された酵母発現系（一般に「２-ハイブリッド系」と呼ばれる）は、この特性の長所を利用し、並びに２つのハイブリッドタンパク質を用い、一方では標的タンパク質がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合し、他方では候補となる活性化タンパク質が活性化ドメインに融合している。ＧＡＬ１-ｌａｃＺリポーター遺伝子のＧＡＬ４活性化プロモーターの制御下での発現は、タンパク質-タンパク質相互作用を介したＧＡＬ４活性の再構成に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、β-ガラクトシダーゼに対する色素生産性物質で検出される。２-ハイブリッド技術を用いた２つの特定なタンパク質間のタンパク質-タンパク質相互作用を同定するための完全なキット（MATCHMAKERTM）は、Clontechから商業的に入手可能である。また、この系は、特定のタンパク質相互作用に含まれるタンパク質ドメインのマッピング、並びにこれら相互作用にとって重要なアミノ酸残基の特定へ拡大適用することができる。
【０１７６】
ここで同定されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする遺伝子と細胞内又は細胞外成分との相互作用を阻害する化合物は、次のようにして試験できる：通常、反応混合物は、遺伝子産物と細胞外又は細胞内成分を、これら２つの生成物の相互作用及び結合が可能な条件下及び時間に渡って含むように調製される。候補化合物が結合を阻害する能力を試験するために、反応は試験化合物の不存在及び存在下で実施される。さらに、プラシーボを第３の反応混合物に添加してポジティブコトロールを提供してもよい。混合物中に存在する試験化合物と細胞内又は細胞外成分との結合（複合体形成）は上記のようにモニターされる。試験化合物を含有する反応混合物ではなく、コントロール反応における複合体の形成は、試験化合物が試験化合物とその反応パートナーとの相互作用を阻害することを示す。
【０１７７】
アンタゴニストをアッセイするためには、特定の活性についてスクリーニングされる化合物とともにＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを細胞へ添加してもよく、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド存在下における対象活性を阻害する化合物の能力は、化合物がＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアンタゴニストであることを示す。あるいは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと膜結合ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドレセプター又は組換えレセプターを有する潜在的アンタゴニストを競合的阻害アッセイに適した条件下で結合させることによって、アンタゴニストを検出してもよい。放射性などでＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを標識することが可能であり、潜在的アンタゴニストの有効性を判断するためにレセプターに結合したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの数を利用することができる。レセプターをコードする遺伝子は、当業者に知られた多くの方法、例えばリガンドパンニング及びＦＡＣＳソートによって同定できる。Coligan等, Current Protocols in Immun., 1(2): 第５章(1991)。好ましくは、発現クローニングが用いられ、ポリアデニル化ＲＮＡがＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに反応性の細胞から調製され、このＲＮＡから生成されたｃＤＮＡライブラリーがプールに分配され、ＣＯＳ細胞又はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプ���ド反応性でない他の細胞の形質移入に使用される。スライドガラスで成長させた形質移入細胞を、標識したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドで暴露する。このＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドは、ヨウ素化又は部位特異的タンパク質キナーゼの認識部位の封入を含む種々の手段で標識できる。固定及びインキュベーションの後、スライドにオートラジオグラフィ分析を施す。ポジティブプールを同定し、相互作用サブプール化及び再スクリーニング工程を用いてサブプールを調製して再形質移入し、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生成する。
【０１７８】
レセプター同定の代替的方法として、標識されたＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをレセプター分子を発現する細胞膜又は抽出調製物に光親和性結合させることができる。架橋材料をＰＡＧＥで溶解させ、Ｘ線フィルムへ暴露する。レセプターを含む標識複合体を励起し、ペプチド断片へ分解し、タンパク質マイクロ配列決定を施すことができる。マイクロ配列決定から得たアミノ酸配列は、推定レセプターをコードする遺伝子を同定するｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングする縮重オリゴヌクレオチドプローブの一組の設計に用いられる。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を評価する際の他のアプローチ法は、既知のノックアウト表現型を模倣するために野生型マウスにＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９アンタゴニストを投与することであろう。よって、先ず、対象のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子をノックアウトし、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子をノックアウトし又は破壊した結果として生じる表現型を観察する。引き続いて、野生型マウスにＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアンタゴニストを投与することによってＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を評価する。効果的なアンタゴニストはノックアウト動物において最初に観察された表現型を模倣することが予想される。
【０１７９】
同様にＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対するアンタゴニストの効果を、既知の陰性のノックアウト表現型を改善するために非ヒトトランスジェニックマウスに対するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９アゴニストを投与することによって、評価することができるであろう。よって、先ず、対象のＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子をノックアウトし、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子をノックアウトし又は破壊した結果として生じる表現型を観察する。引き続いて、非ヒトトランスジェニックマウスにＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドのアゴニストを投与することによってＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対するアゴニストの効果を評価する。効果的なアゴニストはノックアウト動物において最初に観察された陰性表現型効果を改善することが予想される。
【０１８０】
アンタゴニストの他の検定では、レセプターを発現する哺乳動物細胞又は膜調製物を、候補化合物の存在下で標識ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドと共にインキュベートする。ついで、この相互作用を促進又は阻止する化合物の能力を測定する。
潜在的なアンタゴニストのより特別な例は、免疫グロブリンとＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドとの融合体に結合するオリゴヌクレオチドで、特に、限られないが、ポリペプチド-及びモノクローナル抗体及び抗体断片、一本鎖抗体、抗-イディオタイプ抗体、及びこれらの抗体又は断片のキメラ又はヒト化形態、並びにヒト抗体及び抗体断片を含む抗体を含んでいる。あるいは、潜在的アンタゴニストは、密接に関連したタンパク質、例えば、レセプターを認識するが効果を与えず、従ってＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの作用を競合的に阻害するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの変異型であってもよい。
【０１８１】
他の潜在的なＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドアンタゴニストは、アンチセンス技術を使用して調製されるアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ作成物であり、ここで例えばアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子が標的とされているｍＲＮＡにハイブリダイズしタンパク質の翻訳を妨害することによってｍＲＮＡの翻訳を直接阻止するように作用する。アンチセンス技術はトリプルヘリックス形成又はアンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡを通して遺伝子発現を制御するために使用することができ、その双方の方法はＤＮＡ又はＲＮＡに対するポリヌクレオチドの結合に基づいている。例えば、ここでの成熟ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の５'コード部分を用いて、約１０から４０の塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは転写に関与する遺伝子の領域に相補的であるように設計され（トリプルヘリックス−Lee等, Nucl. Acids Res., 6:3073(1979)；Cooney等, Science, 241: 456(1988)；Dervan等, Science, 251:1360 (1991)）、よってＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの転写と産生を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲＮＡにハイブリダイズし、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を阻止する（アンチセンス- Okano, Neurochem., 56:560 (1991)；Okigodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression(CRC Oress: Boca Raton, FL, 1988）。上に記載したオリゴヌクレオチドはまた細胞に移送され得、アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡがインビボで発現されて、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの産生を阻害する。アンチセンスＤＮＡが用いられる場合、翻訳開始部位、例えば標的遺伝子ヌクレオチド配列の約−１０位置と＋１０位置の間から取り出されたオリゴデオキシリボヌクレオチドが好適である。
【０１８２】
潜在的アンタゴニストは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの活性部位、レセプター結合部位、又は成長因子又は他の関連結合部位に結合し、それによりＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの正常な生物学的活性を阻止する小分子を含む。小分子の例は、これらに限られないが、小型ペプチド又はペプチド様分子、好ましくは可溶性ペプチド、及び合成非ペプチド有機又は無機化合物を含む。
リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒できる酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは、相補的標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイゼーション、ついでヌクレオチド鎖切断的切断により作用する。潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は、既知の技術で同定できる。更なる詳細は、例えば、Rossi, Current Biology 4: 469-471 (1994)及びＰＣＴ公報、番号ＷＯ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開）を参照。
【０１８３】
転写の阻害に用いられるトリプルヘリックス形成における核酸分子は一本鎖であるべきでありデオキシヌクレオチドからなる。これらのオリゴヌクレオチドの基本組成は、フーグスチン塩基対則を介するトリプルヘリックス形成を促進するように設計され、それは一般に二重鎖の一方の鎖上のプリン又はピリミジンのサイズ変更可能な伸展を必要とする。更なる詳細は、例えば、上掲のＰＣＴ公報のＷＯ９７／３３５５１を参照。
これらの小分子は、上記で検討したスクリーニングアッセイの何れか一つ又は複数のものにより及び／又は当業者に良く知られた他の任意のスクリーニング技術により同定することができる。
また、ここで開示されている分子の診断的及び治療的利用は、下記に開示及び記載のポジティブ機能アッセイヒットに基づいている。
【０１８４】
Ｆ．抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体
本発明は、ここで治療及び／又は診断薬としての用途が見出され得る抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体を提供する。例示的な抗体には、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性及びヘテロコンジュゲート抗体が含まれる。
【０１８５】
１．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原とアジュバントを複数回皮下(sc)又は腹腔内(ip)注射することにより、動物に産生される。それは、免疫化されるべき種において免疫原性であるタンパク質へ、関連する抗原（特に、合成ペプチドが用いられる場合）を結合させるために有用である。例えば、この抗原を、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビターへ、二重官能性又は誘導体形成剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル(システイン残基を介する抱合)、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド(リジン残基を介する抱合)、グルタルアルデヒド、及び無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又はＲ及びＲ１が異なるアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを用いて結合させることができる。
動物を、例えばタンパク質又はコンジュゲート１００μｇ又は５μｇ（それぞれウサギ又はマウスの場合）を完全フロイントアジュバント３容量と併せ、この溶液を複数部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体に対して免疫する。１ヶ月後、該動物を、完全フロイントアジュバントに入れた初回量の１／５ないし１／１０のペプチド又はコンジュゲートを用いて複数部位に皮下注射することにより、追加免疫する。７ないし１４日後に動物を採血し、抗体価について血清を検定する。動物は、力価がプラトーに達するまで追加免疫する。コンジュゲートはまた、タンパク融合として組換え細胞培養中で調製することができる。また、ミョウバンのような凝集化剤が、免疫反応の増強のために好適に使用される。
【０１８６】
２．モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、Kohler等, Nature, 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法、又は組換えＤＮＡ法(米国特許第４８１６５６７号)によって作成することができる。
ハイブリドーマ法においては、マウス又はその他の適当な宿主動物、例えばハムスターを上記のように免疫し、免疫化に用いられたタンパク質と特異的に結合する抗体を産生する、又は産生することのできるリンパ球を導き出す。別法として、リンパ球をインビトロで免疫することもできる。免疫化の後、リンパ球を単離し、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成させる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞（融合のパートナーとも呼ばれる）の増殖または生存を阻害する一又は複数の物質を好ましくは含む適当な培地に蒔き、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ)を欠失するならば、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ−欠失細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含有するであろう(ＨＡＴ培地)。
【０１８７】
好ましい融合のパートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの発現を支援し、融合しない親細胞に対して選択する選択培地に対して感受性である細胞である。これらの中でも、好ましい骨髄腫株化細胞は、マウス骨髄腫ライン、例えば、ソーク・インスティテュート・セル・ディストリビューション・センター、サンディエゴ、カリフォルニア、ＵＳＡより入手し得るＭＯＰＣ-２１及びＭＰＣ-１１マウス腫瘍、及び、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、マナッサス、バージニア、ＵＳＡより入手し得るＳＰ-２又はＸ６３-Ａｇ８-６５３細胞から誘導されるものである。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫株化細胞もまたヒトモノクローナル抗体の産生のために開示されている（Kozbor, J.Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,51-63頁、(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)）。
ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合検定、例えばラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)又は酵素結合免疫吸着検定(ＥＬＩＳＡ)によって測定する。
【０１８８】
例えば、モノクローナル抗体の結合親和性は、Munson等, Anal. Biochem., 107:220(1980)のスキャッチャード分析によって測定することができる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が確定された後、そのクローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。この目的に対して好適な培地は、例えば、Ｄ-ＭＥＭ又はＲＰＭＩ-１６４０培地を包含する。また、このハイブリドーマ細胞は、動物の腹水症腫瘍として、例えばマウスへの細胞の腹腔内注射によって、インビボで増殖させることができる。
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えばアフィニティークロマトグラフィー（例えばプロテインＡ又はプロテインＧ-セファロースを用いる）又はイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析等のような常套的な抗体精製法によって、培地、腹水、又は血清から上手く分離される。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、常法を用いて(例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより)即座に分離されて、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび分離されたならば、ＤＮＡを発現ベクター中に入れ、ついでこれを、この状況以外では抗体タンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中に形質移入し、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を獲得することができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌での組み換え発現に関する概説論文には、Skerra等, Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262(1993)及びPluckthun, Immunol. Revs. 130: 151-188(1992)が含まれる。
【０１８９】
モノクローナル抗体又は抗体断片は、McCafferty等, Nature, 348:552-554 (1990)に記載された技術を使用して産生される抗体ファージライブラリーから分離することができる。Clackson等, Nature, 352:624-628 (1991)及び Marks等, J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991)は、ファージライブラリーを使用したマウス及びヒト抗体の分離を記述している。続く刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性(ｎＭ範囲)のヒト抗体の生成(Marks等, Bio/Technology, 10:779-783[1992])、並びに非常に大きなファージライブラリーを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換え(Waterhouse等, Nuc.Acids.Res., 21:2265-2266[1993])を記述している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の分離に対する伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ法に対する実行可能な別法である。
抗体をコードするＤＮＡは、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメイン（ＣＨ及びＣＬ）の配列を、相同的マウス配列に代えて置換することによって(米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison等, Proc.Nat.Acad.Sci.,USA,81:6851(1984))、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチド（異種ポリペプチド）のコード配列の全部又は一部を共有結合させることによって修飾してキメラ又は融合抗体ポリペプチドを生成することができる。非免疫グロブリンポリペプチド配列は、抗体の定常ドメインと置き代わることができるか、又は抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインが置換されて、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位と異なる抗原に対する特異性を有するもう一つの抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作り出す。
【０１９０】
３．ヒト及びヒト化抗体
本発明の抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体は、さらにヒト化抗体又はヒト抗体を含む。非ヒト(例えばマウス)抗体のヒト化形とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片(例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列)であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域(ＣＤＲ)の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)を含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般的に、ヒト化抗体は、全て又はほとんど全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのものに一致し、全て又はほとんど全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature, 332:323-329 (1988); 及びPresta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992)］。
【０１９１】
非ヒト抗体をヒト化する方法はこの分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は基本的にウィンター(Winter)及び共同研究者［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536 (1988)］の方法に従って、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。よって、このような「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体(米国特許第４８１６５６７号)である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのＣＤＲ残基及び場合によっては幾つかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。
抗体がヒトの治療用途を意図している場合、抗原性及びＨＡＭＡ反応(ヒト抗-マウス抗体)を低減するには、ヒト化抗体を生成する際に使用するヒトの軽重両方のヒト可変ドメインの選択が非常に重要である。いわゆる「ベストフィット法」では、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次に齧歯動物のものと最も近いヒトＶドメイン配列を同定し、その中のヒトフレームワーク（ＦＲ）をヒト化抗体のために受け入れる(Sims等, J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothia等, J. Mol. Biol., 196:901(1987))。他の方法では、軽又は重鎖の特定のサブグループのヒト抗体全てのコンセンサス配列から誘導される特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用できる(Carter等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta等, J. Immunol., 151:2623(1993))。
【０１９２】
更に、抗体を、抗原に対する高結合親和性や他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化することが重要である。この目標を達成するべく、好ましい方法では、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析工程を経てヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推測三次元立体配座構造を図解し、表示するコンピュータプログラムは購入可能である。これら表示を見ることで、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グログリンの抗原との結合能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、例えば標的抗原に対する親和性が高まるといった、望ましい抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般的に、高頻度可変領域残基は、直接かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。
ヒト化抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体の種々の形態が考えられる。例えばヒト化抗体は、免疫結合体を生成するために、状況に応じて一又は複数の細胞障害剤(類)と結合していてもよい抗体断片、例えばＦａｂであってもよい。また、ヒト化抗体は無傷抗体、例えば無傷ＩｇＧ１抗体であってもよい。
【０１９３】
ヒト化の別法として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、現在では、免疫化することで、内因性免疫グロブリンの産生がなく、ヒト抗体の全レパートリーを産生することのできるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作ることが可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域(ＪＨ)遺伝子のホモ接合体欠失によって、結果として内因性抗体産生の完全な阻害が起こることが説明されてきた。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子配列の、このような生殖細胞系突然変異体マウスへの転移によって、結果として抗原投与時にヒト抗体の産生がおこる。Jakobovits等, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等, Nature 362:255-258 (1993); Bruggeman等, Year in Immuno., 7:33 (1993)；米国特許第５５４５８０６号、同５５６９８２５号、同５５９１６６９号（全てジェンファーム(GenPharm)）；同５５４５８０７号；及び国際公開第９７／１７８５２号を参照されたい。
別法として、ファージディスプレイ技術(McCafferty等, Nature 348：552-553[1990])を使用して、非免疫化ドナーの免疫グロブリン可変(Ｖ)ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産出させることができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、フレーム単位で、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３又はｆｄの大きい又は小さいコートタンパク質遺伝子のどちらかでクローンし、ファージ粒子の表面で機能的抗体断片として表示させる。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択に基づいても、結果としてこれらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択が成される。よって、このファージはＢ細胞のいくつかの特性を模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる；例えばJohnson, Kevin S. 及びChiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)を参照せよ。Ｖ-遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイのために使用できる。Clackson等, Nature, 352：624-628(1991)は、免疫化したマウス脾臓由来のＶ遺伝子の小さいランダムなコンビナトリアルライブラリーから、多様で多くの抗-オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒトドナーのＶ遺伝子のレパートリーが構成可能であり、多様で多くの抗原(自己抗原を含む)に対する抗体は、Marks等, J. Mol. Biol. 222：581-597(1991)、又はGriffith等, EMBO J. 12：725-734(1993)に記載の技術にそのまま従うことで単離することができる。また、米国特許第５５６５３３２号及び同５５７３９０５号を参照のこと。
上述したように、ヒト抗体はインビトロで活性化したＢ細胞により産生することができる(米国特許第５５６７６１０号及び同５２２９２７５号)。
【０１９４】
４．抗体断片
ある状況下では、抗体全体よりも、抗体断片を用いることに利点がある。より小さな大きさの断片によって迅速なクリアランスが可能となり、固形腫瘍への接近の改良につながり得る。
抗体断片を産生するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク分解性消化によって誘導された(例えば、Morimoto等, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及びBrennan等, Science, 229:81(1985)を参照されたい)。しかし、これらの断片は、現在は組換え宿主細胞により直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体断片は、すべて大腸菌で発現させ分泌させることができ、従って、大量のこれら断片の産生が容易となった。抗体断片は、上で論じた抗体ファージライブラリーから単離することができる。別法として、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合させてＦ(ａｂ')２断片を形成することができる(Carter等, Bio/Technology 10:163-167(1992))。他のアプローチ法では、Ｆ(ａｂ')２断片を組換え宿主細胞培養から直接分離することができる。インビボ半減期が増した、サルベージレセプター結合性エピトープ残基を含むＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２が、米国特許第５８６９０４６号に記載されている。抗体断片を生成するのための他の方法は、当業者には明らかであろう。他の実施態様では、選択する抗体は単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦｖ)である。国際公開９３／１６１８５号；米国特許第５５７１８９４号；及び米国特許第５５８７４５８号を参照のこと。Ｆｖ及びｓＦｖは、定常領域を欠く無傷の連結部位を有する唯一の種である；従って、インビボで使用している間の減少した非特異的結合に適している。ｓＦｖ融合タンパク質は、ｓＦｖのアミノ又はカルボキシ末端のどちらかで、エフェクタータンパク質の融合体が生成されるように構成されてもよい。上掲のAntibody Engineering, Borrebaeck編を参照のこと。また、抗体断片は、例えば米国特許第５６４１８７０号に記載されているような「直鎖状抗体」であってもよい。そのような直鎖状抗体断片は単一特異性又は二重特異性であってもよい。
【０１９５】
５．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９タンパク質の２つの異なるエピトープに結合しうる。他のこのような抗体では他のタンパク質に対する結合部位とＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合部位とが結合しうる。あるいは、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体アームは、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９発現細胞に細胞防御メカニズムを集中させ局在させるように、ＦｃγＲＩ(ＣＤ６４)、ＦｃγＲＩＩ(ＣＤ３２)及びＦｃγＲＩＩＩ(ＣＤ１６)等のＩｇＧ(ＦｃγＲ)に対するＦｃレセプター、又はＴ細胞レセプター分子(例えばＣＤ３)等の白血球上のトリガー分子に結合するアームと結合しうる。また、二重特異性抗体はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９を発現する細胞に細胞障害剤を局在化するためにも使用されうる。これらの抗体はＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９結合アーム及び細胞障害剤(例えば、サポリン(saporin)、抗インターフェロン-α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテン)と結合するアームを有する。二重特異性抗体は完全長抗体又は抗体断片(例えばＦ(ａｂ')２二重特異性抗体)として調製することができる。
【０１９６】
国際公開第９６／１６６７３号には、二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／抗-ＦｃγＲＩＩＩ抗体が記載されており、米国特許第５８３７２３４号には、二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／抗-ＦｃγＲＩ抗体が開示されている。二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体は国際公開第９８／０２４６３号に示されている。米国特許第５８２１３３７号は、二重特異性抗-ＥｒｂＢ２／抗-ＣＤ３抗体を教示するものである。
二重特異性抗体を作成する方法は当該分野において既知である。完全長二重特異性抗体の伝統的な産生は二つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の同時発現に基づき、ここで二つの鎖は異なる特異性を持っている(Millstein等, Nature, 305:537-539(1983))。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が無作為に取り揃えられているため、これらのハイブリドーマ(四部雑種)は１０個の異なる抗体分子の可能性ある混合物を産生し、そのうちただ一つが正しい二重特異性構造を有する。通常、アフィニティークロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は、かなり煩わしく、生成物収率は低い。同様の方法が国際公開第９３／０８８２９号及びTraunecker等、EMBO J. 10:3655-3659(1991)に開示されている。
異なったアプローチ法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン(抗原-抗体結合部位)を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含むＩｇ重鎖定常ドメインである。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているＤＮＡを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時トランスフェクトする。これにより、組立に使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が所望の二重特異性抗体の最適な収率をもたらす態様において、三つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率が所望の鎖の結合にあまり影響がないときは、２または３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０１９７】
この発明は、第一の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第二の結合特異性を提供する)とからなる二重特異性抗体を提供する。二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖がないと容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体を産生する更なる詳細については、例えばSuresh等, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。
米国特許第５７３１１６８号に記載された他の手法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーのパーセントを最大にすることができる。好適な界面はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖(例えばチロシン又はトリプトファン)と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの(例えばアラニン又はスレオニン)と置き換えることにより第２の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモダイマーのような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。
【０１９８】
二重特異性抗体は、架橋した又は「ヘテロコンジュゲート」抗体もまた含む。例えば、ヘテロコンジュゲートの抗体の一方はアビジンに結合され、他方はビオチンに結合され得る。そのような抗体は、例えば、不要の細胞に対する免疫系細胞をターゲティングするため(米国特許第４６７６９８０号）、及びＨＩＶ感染の治療のために提案された（国際公開第９１／００３６０号、同９２／２００３７３号、及び欧州特許第０３０８９号)。ヘテロコンジュゲート抗体は、あらゆる簡便な架橋法を用いて作製することができる。好適な架橋剤は当該分野において良く知られており、幾つかの架橋技術と共に米国特許第４６７６９８０号に開示されている。
抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennan等, Science, 229:81 (1985) は無傷の抗体をタンパク分解性に切断してＦ(ａｂ')２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤、亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたＦａｂ'断片はついでチオニトロベンゾアート(ＴＮＢ)誘導体に変換される。Ｆａｂ'-ＴＮＢ誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ'-チオールに再変換し、他のＦａｂ'-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。
【０１９９】
最近の進歩により、大腸菌からのＦａｂ'-ＳＨ断片の直接の回収が容易になり、これは化学的に結合して二重特異性抗体を形成することができる。Shalaby等,J.Exp.Med., 175:217-225 (1992)は完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ(ａｂ')２分子の製造を記述している。各Ｆａｂ'断片は大腸菌から別個に分泌され、インビトロで定方向化学共役を受けて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、正常なヒトＴ細胞、及びＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞に結合可能で、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞障害性リンパ球の細胞溶解活性の誘因となる。組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な技術もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生成されている。Kostelny等, J.Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のＦａｂ'部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生成に対して使用することができる。Hollinger等, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)により記述された「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには十分に短いリンカーによりＶＬにＶＨを結合してなる。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成させられ、よって２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーの使用により二重特異性抗体断片を製造する他の方策もまた報告されている。Gruber等, J.Immunol. 152:5368 (1994)を参照されたい。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt等 J.Immunol. 147:60(1991)。
【０２００】
６．ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため［米国特許第４６７６９８０号］及びＨＩＶ感染の治療のために［国際公開第９１／００３６０；国際公開第９２／２００３７３；欧州特許第０３０８９号］提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を作成することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル-４-メルカプトブチルイミダート、及び例えば米国特許第４６７６９８０号に開示されたものが含まれる。
【０２０１】
７．多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、二価抗体よりも早くインターナリゼーション(及び／又は異化)されうる。本発明の抗体は、３又はそれ以上の結合部位を有する多価抗体(ＩｇＭクラス以外のもの)であり得(例えば四価抗体)、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により容易に生成することができる。多価抗体は二量化ドメインと３又はそれ以上の抗原結合部位を有する。好ましい二量化ドメインはＦｃ領域又はヒンジ領域を有する(又はそれらからなる)。このシナリオにおいて、抗体はＦｃ領域と、Ｆｃ領域のアミノ末端に３又はそれ以上の抗原結合部位を有しているであろう。ここで、好ましい多価抗体は３ないし８、好ましくは４の抗原結合部位を有する(又はそれらからなる)。多価抗体は少なくとも１つのポリペプチド鎖(好ましくは２つのポリペプチド鎖)を有し、ポリペプチド鎖(類)は２又はそれ以上の可変ドメインを有する。例えば、ポリペプチド鎖(類)はＶＤ１-(Ｘ１)ｎ-ＶＤ２-(Ｘ２)ｎ-Ｆｃを有し、ここでＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖の一つであり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸又はポリペプチドを表し、ｎは０又は１である。例えば、ポリペプチド鎖(類)は：ＶＨ-ＣＨ１-柔軟なリンカー-ＶＨ-ＣＨ１-Ｆｃ領域鎖；又はＶＨ-ＣＨ１-ＶＨ-ＣＨ１-Ｆｃ領域鎖を有し得る。ここで多価抗体は、好ましくは少なくとも２つ(好ましくは４つ)の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに有する。ここで多価抗体は、例えば約２〜約８の軽鎖可変ドメインポリペプチドを有する。ここで考察される軽鎖可変ドメインポリペプチドは軽鎖可変ドメインを有し、場合によってはＣＬドメインを更に有する。
【０２０２】
８．エフェクター機能の加工
本発明の抗体をエフェクター機能について改変し、例えば抗体の抗原-依存細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存細胞障害性（ＣＤＣ）を向上させることは望ましい。これは、抗体のＦｃ領域で一又は複数のアミノ酸置換を誘導することによりなされうる。あるいは又はさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成するようにしてもよい。そのようにして生成された同種二量体抗体は、向上したインターナリゼーション能力及び／又は増加した補体媒介細胞殺傷及び抗体−依存細胞性細胞障害性（ＡＤＣＣ）を有する可能性がある。Caron等, J. Exp. Med. 176: 1191-1195 (1992)及びShopes,  B. J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992)参照。また、向上した抗腫瘍活性を持つ同種二量体抗体は、Wolff等, Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)に記載されている異種二官能性架橋を用いて調製することができる。あるいは、抗体は、２つのＦｃ領域を有するように加工して、それにより補体溶解及びＡＤＣＣ能力を向上させることもできる。Stevenson等, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)参照。抗体の血清半減期を増大させるために、例えば米国特許第５７３９２７７号に記載のように、抗体(特に抗体断片)へサルベージレセプター結合エピトープを導入してもよい。ここで使用される場合の「サルベージレセプター結合エピトープ」なる用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させる原因であるＩｇＧ分子(例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４)のＦｃ領域のエピトープを意味する。
【０２０３】
９．免疫複合体
また、本発明は、化学治療薬、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はその断片）などの細胞障害性剤、あるいは放射性同位体（即ち、放射性コンジュゲート）と抱合している抗体を含む免疫複合体に関する。
このような免疫複合体の生成に有用な化学治療薬を上に記載した。用いることのできる酵素活性毒素及びその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン、アレウリテス・フォーディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質（PAPI、PAPII、及びPAP-S）、モモルディカ・チャランチア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サパオナリア・オフィシナリス(sapaonaria officinalis)インヒビター、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。放射性コンジュゲート抗体の生成には、様々な放射性ヌクレオチドが利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅが含まれる。抗体及び細胞障害性薬の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオール)プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬ等）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス-アジド化合物（ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン等）、ビス-ジアゾニウム誘導体（ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)-エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トリエン２，６-ジイソシアネート等）、及びビス-活性フッ素化合物（１，５-ジフルオロ-２，４-ジニトロベンゼン等）を用いて作成できる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等, Science 238: 1098 (1987)に記載されているように調製することができる。カーボン-１４-標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ-ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。国際公開９４／１１０２６参照。
抗体のコンジュゲートと一又は複数の小分子毒素、例えばカリケアマイシン、メイタンシノイド、トリコセン(trichothene)及びＣＣ１０６５、及び毒性活性を有するこれらの毒素の誘導体が、ここで考察される。
【０２０４】
メイタンシン及びメイタンシノイド
本発明の抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体(完全長又は断片)は一又は複数のメイタンシノイド分子と結合している。
メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害するように作用する分裂阻害剤である。メイタンシンは、最初、東アフリカシラブMaytenus serrataから単離されたものである(米国特許第３８９６１１１号)。その後、ある種の微生物がメイタンシノイド類、例えばメイタンシノール及びＣ-３メイタンシノールエステルを生成することが発見された(米国特許第４１５１０４２号)。合成メイタンシノール及びその誘導体及び類似体は、例えば米国特許第４１３７２３０号；同４２４８８７０号；同４２５６７４６号；同４２６０６０８号；同４２６５８１４号；同４２９４７５７号；同４３０７０１６号；同４３０８２６８号；同４３０８２６９号；同４３０９４２８号；同４３１３９４６号；同４３１５９２９号；同４３１７８２１号；同４３２２３４８号；同４３３１５９８号；同４３６１６５０号；同４３６４８６６号；同４４２４２１９号；同４４５０２５４号；同４３６２６６３号；及び同４３７１５３３号に開示されており、その開示は出典を明示してここに援用する。
【０２０５】
メイタンシノイド-抗体コンジュゲート
治療指標を改善する試みにおいて、メイタンシン及びメイタンシノイドは、腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体と結合している。メイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲート及びそれらの治療用途は、例えば米国特許第５，２０８，０２０号、同５，４１６，０６４号、欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号に開示されており、その開示は出典を明示してここに取り込まれる。Liu等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93：8618-8623(1996)には、ヒト結腸直腸癌に対するモノクローナル抗体Ｃ２４２に結合するＤＭ１と命名されたメイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲートが記載されている。前記コンジュゲートは培養された結腸癌細胞に対して高い細胞障害性を有することが見出されており、インビボ腫瘍成長アッセイにおいて抗腫瘍活性を示す。Chari等, Cancer Research, 52：127-131(1992)には、メイタンシノイドが、ジスルフィド結合を介して、ヒト結腸癌株化細胞の抗原に結合するマウス抗体Ａ７、又はＨＥＲ-２／ｎｅｕオンコジーンに結合する他のマウスモノクローナル抗体ＴＡ.１に結合している免疫コンジュゲートが記載されている。ＴＡ.１-メイタンシノイドコンジュゲートの細胞障害性はヒト乳癌株化細胞ＳＫ-ＢＲ-３におけるインビトロで試験され、細胞当たり３ｘ１０５ＨＥＲ-２表面抗原が発現した。薬剤コンジュゲートにより、遊離のメイタンシノイド剤に類似した細胞障害度が達成され、該細胞障害度は、抗体分子当たりのメイタンシノイド分子の数を増加させることにより増加する。Ａ７-メイタンシノイドコンジュゲートはマウスにおいては低い全身性細胞障害性を示した。
【０２０６】
抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体-メイタンシノイドコンジュゲート(免疫コンジュゲート)
抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体-メイタンシノイドコンジュゲートは、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体又はメイタンシノイド分子のいずれの生物学的活性もほとんど低減することなく、メイタンシノイド分子に抗ＰＲＯ抗体を化学的に結合させることにより調製される。１分子の毒素／抗体は、裸抗体の使用において細胞障害性を高めることが予期されているが、抗体分子当たり、平均３−４のメイタンシノイド分子が結合したものは、抗体の機能又は溶解性に悪影響を与えることなく、標的細胞に対する細胞障害性を向上させるといった効力を示す。メイタンシノイドは当該技術分野でよく知られており、公知の技術で合成することも、天然源から単離することもできる。適切なメイタンシノイドは、例えば米国特許第５２０８０２０号、及び他の特許、及び上述した特許ではない刊行物に開示されている。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、及び種々のメイタンシノールエステル等の、メイタンシノール分子の芳香環又は他の位置が修飾されたメイタンシノール類似体である。
例えば、米国特許第５２０８０２０号又は欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号、及びChari等, Cancer Research, 52：127-131(1992)に開示されているもの等を含む、抗体-メイタンシノイドコンジュゲートを作製するために、当該技術で公知の多くの結合基がある。結合基には、上述した特許に開示されているようなジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光不安定性基、ペプチターゼ不安定性基、又はエステラーゼ不安定性基が含まれるが、ジスルフィド及びチオエーテル基が好ましい。
【０２０７】
抗体とメイタンシノイドとのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)、スクシンイミジル-４-(Ｎ-マレイミドメチル)シクロヘキサン-１-カルボキシラート、イミノチオラン(ＩＴ)、イミドエステル類の二官能性誘導体(例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ)、活性エステル類(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド類(例えば、グルタルアルデヒド)、ビスアジド化合物(例えば、ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トルエン-２,６-ジイソシアネート)、及び二活性フッ素化合物(例えば、１,５-ジフルオロ-２,４-ジニトロベンゼン)を使用して作製することができる。特に好ましいカップリング剤には、ジスルフィド結合により提供されるＮ-スクシンイミジル-４-(２-ピリジルチオ)ペンタノアート(ＳＰＰ)及びＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)(Carlsson等, Biochem. J. 173：723-737[1978])が含まれる。
リンカーは結合の種類に応じて、種々の位置でメイタンシノイド分子に結合し得る。例えば、従来からのカップリング技術を使用してヒドロキシル基と反応させることによりエステル結合を形成することができる。反応はヒドロキシル基を有するＣ-３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ-１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ-１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ-２０位で生じる。好ましい実施態様において、結合はメイタンシノール又はメイタンシノールの類似体のＣ-３位で形成される。
【０２０８】
カリケアマイシン
対象の他の免疫コンジュゲートには、一又は複数のカリケアマイシン分子と結合した抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体が含まれる。抗生物質のカリケアマイシンファミリーはサブ-ピコモルの濃度で二重鎖ＤＮＡ破壊を生じることができる。カリケアマイシンファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第５７１２３７４号、同５７１４５８６号、同５７３９１１６号、同５７６７２８５号、同５７７０７０１号、同５７７０７１０号、同５７７３００１号、同５８７７２９６号(全て、American Cyanamid Company)を参照のこと。使用可能なカリケアマイシンの構造類似体には、限定するものではないが、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ-アセチル-γ１Ｉ、ＰＳＡＧ及びθＩ１(Hinman等, Cancer Research, 53：3336-3342(1993)、Lode等 Cancer Research, 58：2925-2928(1998)及び上述したAmerican Cyanamidの米国特許)が含まれる。抗体が結合可能な他の抗腫瘍剤は、葉酸代謝拮抗薬であるＱＦＡである。カリケアマイシン及びＱＦＡは双方共、細胞内に作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。よって抗体媒介性インターナリゼーションによるこれらの薬剤の細胞への取込により、細胞障害効果が大きく向上する。
【０２０９】
他の細胞障害剤
本発明の抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体と結合可能な他の抗腫瘍剤には、ＢＣＮＵ、ストレプトゾイシン、ビンクリスチン及び５-フルオロウラシル、米国特許第５０５３３９４号、同５７７０７１０号に記載されており、集合的にＬＬ-Ｅ３３２８８複合体として公知の薬剤のファミリー、並びにエスペラマイシン(esperamicine)(米国特許第５８７７２９６号)が含まれる。
使用可能な酵素活性毒及びその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖(シュードモナス・アエルギノーサ(Pseudomonas aeruginosa))、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン(sarcin)、アレウライツ・フォルディイ(Aleurites fordii)プロテイン、ジアンシン(dianthin)プロテイン、フィトラッカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)プロテイン(ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ-Ｓ)、モモルディカ・キャランティア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン、サパオナリア(sapaonaria)オフィシナリスインヒビター、ゲロニン(gelonin)、マイトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコセセンス(tricothecenes)が含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日公開の国際公開第９３／２１２３２号を参照のこと。
本発明は、抗体と核酸分解活性を有する化合物(例えばリボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮアーゼ)との間に形成される免疫コンジュゲートをさらに考察する。
【０２１０】
腫瘍を選択的に破壊するため、抗体は高い放射性を有する原子を含有してよい。放射性コンジュゲートした抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体を生成するために、種々の放射性同位体が利用される。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が含まれる。コンジュゲートが診断用に使用される場合、それはシンチグラフィー研究用の放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴(ＮＭＲ)映像(磁気共鳴映像、mriとしても公知)用のスピン標識、例えばヨウ素-１２３、ヨウ素-１３１、インジウム-１１１、フッ素-１９、炭素-１３、窒素-１５、酸素-１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含有し得る。
放射-又は他の標識が、公知の方法でコンジュゲートに導入される。例えば、ペプチドは生物合成されるか、又は水素の代わりにフッ素-１９を含む適切なアミノ酸前駆体を使用する化学的なアミノ酸合成により合成される。標識、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１は、ペプチドのシステイン残基を介して結合可能である。イットリウム-９０はリジン残基を介して結合可能である。IODOGEN法(Fraker等(1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80：49-57)は、ヨウ素-１２３の導入に使用することができる。他の方法の詳細は、「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」(Chatal, CRC Press 1989)に記載されている。
【０２１１】
抗体と細胞障害剤のコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)、スクシンイミジル-４-(Ｎ-マレイミドメチル)シクロヘキサン-１-カルボキシラート、イミノチオラン(ＩＴ)、イミドエステル類の二官能性誘導体(例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ)、活性エステル類(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド類(例えば、グルタルアルデヒド)、ビスアジド化合物(例えば、ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トリエン-２,６-ジイソシアネート)、及び二活性フッ素化合物(例えば、１,５-ジフルオロ-２,４-ジニトロベンゼン)を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等, Science 238:1098(1987)に記載されているようにして調製することができる。炭素-１４標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレン-トリアミン五酢酸(ＭＸ-ＤＴＰＡ)が抗体に放射性ヌクレオチドをコンジュゲートするためのキレート剤の例である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは細胞中の細胞障害剤の放出を容易にするための「切断可能リンカー」であってよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカーが使用され得る(Chari等, Cancer Research, 52：127-131(1992)；米国特許第５２０８０２０号)。
【０２１２】
別法として、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体及び細胞障害剤を含有する融合タンパク質は、例えば組換え技術又はペプチド合成により作製される。ＤＮＡの長さは、コンジュゲートの所望する特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域により離間しているか、又は互いに隣接しているコンジュゲートの２つの部分をコードする領域をそれぞれ含有する。
本発明は、腫瘍の事前ターゲティングに利用するために、「レセプター」(例えばストレプトアビジン)に抗体をコンジュゲートしうることを提供し、ここで抗体-レセプターコンジュゲートを患者に投与し、続いて清澄剤を使用し、循環から未結合コンジュゲートを除去し、細胞障害剤(例えば放射性ヌクレオチド)にコンジュゲートする「リガンド」(例えばアビジン)を投与する。
【０２１３】
１０．免疫リポソーム
ここで開示されている抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体は、免疫リポソームとして処方することもできる。「リポソーム」は、哺乳動物への薬物輸送に有用な、脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤を含む種々のタイプの小胞体である。リポソームの成分は、通常は生物膜の脂質配向に類似した２層構造に配列される。抗体を含有するリポソームは、例えばEpstein等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688(1985)；Hwang等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030(1980)；及び米国特許第４４８５０４５号及び同４５４４５４５号；及び１９９７年１０月２３日に公開の国際公開９７／３８７３１に記載されているように、当該分野において既知の方法により調製される。循環時間が増したリポソームは米国特許第５０１３５５６号に開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ-誘導体化ホスファチジルエタノールアミン(ＰＥＧ-ＰＥ)を含有する脂質組成物を用いた逆相蒸発法により作製することができる。リポソームは孔径が定められたフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のＦａｂ'断片は、ジスルフィド交換反応を介して、Martin等, J. Biol. Chem. 257:286-288(1982)に記載されているようにしてリポソームにコンジュゲートすることができる。場合によっては、化学療法剤はリポソーム内に包含される。Gabizon等, J. National Cancer Inst. 81(19)1484(1989)を参照されたい。
【０２１４】
１１．抗体の製薬組成物
ここで同定されるＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに特異的に結合する抗体、並びに上記に開示したスクリーニングアッセイで同定された他の分子は、種々の疾患の治療のために、製薬組成物の形態で投与することができる。
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドが細胞内であり、全抗体が阻害剤として用いられる場合、内在化抗体が好ましい。しかし、リポフェクション又はリポソームも抗体、又は抗体断片を細胞に導入するのに使用できる。抗体断片が用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持したペプチド分子が設計できる。このようなペプチドは、化学的に合成でき、又は組換えＤＮＡ技術によって生成できる。例えば、Marasco等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 7889-7893 (1993)参照。ここでの製剤は、治療すべき特定の徴候に必要な場合に１以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものも含んでよい。あるいは、又はそれに加えて、組成物は、細胞毒性薬、サイトカイン又は成長阻害剤を含んでもよい。これらの分子は、適切には、意図する目的に有効な量の組み合わせで存在する。
【０２１５】
また、活性成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン-マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は上掲のRemington's Pharmaceutical Scienceに開示されている。
インビボ投与に使用される製剤は無菌でなけらばならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。除放性マトリクスの例は、ポリエステルヒドロゲル（例えば、ポリ(２-ヒドロキシエチル-メタクリレート)又はポリ(ビニルアルコール））、ポリアクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ-グルタミン酸及びγ-エチル-Ｌ-グルタメート、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT(商品名)（乳酸-グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能な小球）などの分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、ポリ-Ｄ-(-)-３-ヒドロキシブチル酸を含む。エチレン-酢酸ビニル及び乳酸-グリコール酸などのポリマーは分子を１００日に渡って放出することができるが、ある種のヒドロゲルはより短時間でタンパク質を放出してしまう。カプセル化された抗体が身体内に長時間残ると、それらは３７℃の水分に露出されることにより変性又は凝集し、その結果、生物学的活性の低下及び起こりうる免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法は、含まれる機構に依存する安定化について工夫することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換を通した分子間Ｓ−Ｓ結合形成であると発見された場合、安定化はスルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加剤の付加、及び特異的ポリマーマトリクス組成物の開発によって達成されうる。
【０２１６】
Ｇ．抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体の用途
本発明の抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体は、神経障害；循環器、内皮又は血管新生疾患；眼の異常；免疫疾患；腫瘍学的疾患；胚性発生障害又は致死、又は代謝異常に対して様々な治療上及び／又は診断上の有用性を有している。例えば、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体は、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９の診断アッセイ、例えばその特定細胞、組織、又は血清での発現（ある場合には次差的発現）の検出に用いられる。競合的結合アッセイ、直接又は間接サンドウィッチアッセイ及び不均一又は均一相で行われる免疫沈降アッセイ［Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987) pp. 147-158］等のこの分野で知られた種々の診断アッセイ技術が使用される。診断アッセイで用いられる抗体は、検出可能な部位で標識されうる。検出可能な部位は、直接又は間接に、検出可能なシグナルを発生しなければならない。例えば、検出可能な部位は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ等の放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン等の蛍光又は化学発光化合物、あるいはアルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ又はセイヨウワサビペルオキシダーゼ等の酵素であってよい。抗体に検出可能な部位を抱合させるためにこの分野で知られた任意の方法が用いられ、それにはHunter等 Nature, 144:945 (1962)；David等, Biochemistry, 13: 1014 (1974)；Pain等, J. Immunol. Meth., 40:219 (1981) ;及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30:407 (1982)に記載された方法が含まれる。
【０２１７】
また、抗ＰＲＯ１９６、抗ＰＲＯ２１７、抗ＰＲＯ２３１、抗ＰＲＯ２３６、抗ＰＲＯ２４５、抗ＰＲＯ２４６、抗ＰＲＯ２５８、抗ＰＲＯ２８７、抗ＰＲＯ３２８、抗ＰＲＯ３４４、抗ＰＲＯ３５７、抗ＰＲＯ５２６、抗ＰＲＯ７２４、抗ＰＲＯ７３１、抗ＰＲＯ７３２、抗ＰＲＯ１００３、抗ＰＲＯ１１０４、抗ＰＲＯ１１５１、抗ＰＲＯ１２４４、抗ＰＲＯ１２９８、抗ＰＲＯ１３１３、抗ＰＲＯ１５７０、抗ＰＲＯ１８８６、抗ＰＲＯ１８９１、抗ＰＲＯ４４０９、抗ＰＲＯ５７２５、抗ＰＲＯ５９９４、抗ＰＲＯ６０９７、抗ＰＲＯ７４２５、抗ＰＲＯ１０１０２、抗ＰＲＯ１０２８２、抗ＰＲＯ６１７０９又は抗ＰＲＯ７７９抗体は組換え細胞培養又は天然供給源からのＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９のアフィニティー精製にも有用である。この方法においては、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドに対する抗体を、当該分野でよく知られている方法を使用して、セファデックス樹脂や濾紙のような適当な支持体に固定化する。次に、固定化された抗体を、精製するＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを含む試料と接触させた後、固定化された抗体に結合したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチド以外の試料中の物質を実質的に全て除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドを抗体から脱離させる他の適当な溶媒で支持体を洗浄する。
以下の実施例は例示するためにのみ提供されるものであって、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。
本明細書で引用した全ての特許及び参考文献の全てを、出典明示によりここに援用する。
【実施例】
【０２１８】
実施例において言及する市販の試薬は、特に断らない限り製造者の指示に従って使用した。以下の実施例、並びに本明細書において、ＡＴＣＣ受託番号によって特定されるこれらの細胞の供給源は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ヴァージニア州マナッサス）である。
【０２１９】
実施例１
新規なポリペプチド及びそれをコードするｃＤＮＡを同定するための細胞外ドメイン相同性スクリーニング
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的データベース（例えば、デイホフ、GenBank）及び企業のデータベース（例えば、LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列とＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。
この細胞外ドメイン相同性スクリーニングを用いて、phrapを用いて他の同定されたＥＳＴ配列に対してコンセンサスＤＮＡ配列をアセンブルした。更に、得られたコンセンサスＤＮＡ配列を、しばしば（常にではない）BLAST又はBLAST-2及びphrapの繰り返しサイクルを用いて伸長し、コンセンサス配列を上で議論したＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長させた。
上記のように得られたコンセンサス配列に基づいて、ついでオリゴヌクレオチドを合成し、ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、及びＰＲＯポリペプチドの完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして用いるために使用した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般的に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を与えるために設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに更なるオリゴヌクレオチドを合成した。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
ｃＤＮＡクローンの単離に用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CAからのもの等の市販試薬を用いて標準的な方法によって作成した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、平滑末端でＳａｌＩヘミキナーゼアダプターに結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分類し、そして適切なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５ＢはＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253: 1278-1280 (1991)参照）の、独特のＸｈｏＩ及びＮｏｔＩ部位に、所定の方向でクローニングした。
【０２２０】
実施例２：アミラーゼスクリーニングによるｃＤＮＡクローンの単離
１．オリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーの調製
ｍＲＮＡを対象とするヒト組織からInvitrogen, San Diego, CAからの試薬及びプロトコールを用いて単離した（Fast Track 2）。このＲＮＡを、Life Technologies, Gaithersburg, MD (Super Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いるベクターｐＲＫ５ＤにおけるオリゴｄＴプライムしたｃＤＮＡの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡは１０００ｂｐを越えるサイズに分類し、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩ結合ｃＤＮＡをＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＲＫ５Ｄを、ｓｐ６転写開始部位、それに続くＳｆｉＩ制限酵素部位、さらにＸｈｉＩ／ＮｏｔＩｃＤＮＡクローニング部位を持つベクターにクローニングした。
２．ランダムプライムｃＤＮＡライブラリーの調製
一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を好ましく表すために二次ｃＤＮＡライブラリーを作成した。Ｓｐ６ＲＮＡを（上記の）一次ライブラリーから生成し、このＲＮＡを、ベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０におけるLife Technologies (上で参照したSuper Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いてランダムプライムしたｃＤＮＡライブラリーの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡを５００−１０００ｂｐにサイズ分類し、平滑末端でＮｏｔＩアダプターに結合させ、ＳｆｉＩ部位で切断し、そしてＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０は、ｃＤＮＡクローニング部位の前に酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモータ、及びクローニング部位の後にマウスアミラーゼ配列（分泌シグナルを持たない成熟配列）についでアルコールデヒドロゲナーゼ転写終結区を有するクローニングベクターである。よって、アミラーゼ配列にインフレームで融合されたこのベクターにクローニングされたｃＤＮＡは、適当に形質移入された酵母コロニーからのアミラーゼの分泌を導くであろう。
【０２２１】
３．形質転換及び検出
上記パラグラフ２に記載されたライブラリーからのＤＮＡを氷上で冷却し、それにエレクトロコンピテントＤＨ１０Ｂ細菌（Life Technoligies、２０ｍｌ）を添加した。細菌及びベクターの混合物を、ついで製造者に推奨されているようにして電気穿孔した。ついで、ＳＯＣ培地（Life Technologies、１ｍｌ）を添加し、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。形質転換体を、ついで、アンピシリンを含む２０標準１５０ｍｍＬＢプレートに蒔き、１６時間インキュベートした（３７℃）。ポジティブコロニーをプレートから廃棄し、細菌ペレットから標準的な方法、例えばＣｓＣｌ-勾配法を用いてＤＮＡを単離した。精製ＤＮＡに、ついで以下の酵母プロトコールを施した。
酵母方法は３つの範疇に分けられる：（１）酵母のプラスミド／ｃＤＮＡ結合ベクターでの形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出及び単離；及び（３）酵母コロニーから直接的な挿入物のＰＣＲ増幅及び配列決定及び更なる分析のためのＤＮＡの精製。
用いた酵母菌株はＨＤ５６-５Ａ（ATCC-90785）であった。この株は以下の遺伝子型：ＭＡＴアルファ、ｕｒａ３-５２、ｌｅｕ２-３、ｌｅｕ２-１１２、ｈｉｓ３-１１、ｈｉｓ３-１５、ＭＡＬ＋、ＳＵＣ＋、ＧＡＬ＋を有する。好ましくは、不完全な翻訳後経路を持つ酵母変異体を用いることができる。このような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２に転位不全対立遺伝子を持つが、切断されたｓｅｃ７１が最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常な操作を妨害するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチド及び／又はリガンドを含む）、この翻訳後経路に関与する他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐ、ＳＳＡ１ｐ-４ｐ）又はこれらのタンパク質の複合体形成も、アミラーゼ発現酵母と組み合わせて好ましく用いられる。
【０２２２】
形質転換は、Gietz等, Nucl. Acid. Res., 20: 1425 (1992)に概略が記されたプロトコールに基づいて実施された。ついで、形質転換細胞を寒天からＹＥＰＤ複合培地ブロス（１００ｍｌ）に播種し、３０℃で終夜成長させた。ＹＥＰＤブロスは、Kaiser等, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, p. 207 (1994)に記載されているようにして調製した。ついで、終夜培地を、新鮮なＹＥＰＤブロス（５００ｍｌ）中でおよそ２ｘ１０６細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．１）に希釈し、１ｘ１０７細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．４−０．５）まで再成長させた。
ついで細胞を収穫し、５０００ｒｐｍで５分間のSorval GS3 ローターのＧＳ３ローターボトルに移し、上清を捨て、ついで無菌水に再懸濁することにより、形質転換のために調製し、５０ｍｌのファルコン管内で、Beckman GS-6KR遠心機において３５００ｒｐｍで再度遠心分離した。上清を捨て、細胞をＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．５、１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３）で続けて洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）中に再懸濁させた。
形質転換は、マイクロチューブ内で、調製した細胞（１００μｌ）を新鮮な変性一本鎖サケ精子ＤＮＡ（Lofstrand Labs, Gaitherburg, MD）及び形質転換ＤＮＡ（１μｇ  ｖｏｌ．＜１０μｌ）と混合することにより生じさせた。混合物はボルテックスにより簡単に混合し、ついで４０％ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ、４０％のポリエチレングリコール-４０００、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３、ｐＨ７．５）を添加した。この混合物を緩く撹拌し、３０℃で撹拌しながら３０分間インキュベートした。ついで細胞に４２℃で１５分間熱衝撃を与え、反応容器をマイクロチューブ内で１２０００ｒｐｍで５−１０秒間遠心分離し、デカントしＴＥ（５００μｌ、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．５）へ再懸濁させた後、遠心分離した。ついで、細胞をＴＥ（１ｍｌ）中に希釈し、アリコート（２００μｌ）を、１５０ｍｍ成長プレート（ＶＷＲ）に予め調製した選択培地に拡げた。
【０２２３】
あるいは、複数の少量反応ではなく、形質転換を１回の大規模反応で実施したが、試薬の量はしかるべくスケールアップした。
用いた選択培地は、Kaiser等, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor press, Cold Spring Harbor, NY, p. 208-210 (1994)に記載されているように調製したウラシルを欠く合成完全デキストロース寒天（ＳＣＤ-Ｕｒａ）であった。形質転換体は３０℃で２−３日成長させた。
アミラーゼを分泌するコロニーの検出は、選択成長培地に赤色デンプンを含有せしめることにより実施した。Biely等, Anal. Biochem., 172: 176-179 (1988)に記載された方法に従って、デンプンを赤色染料（反応性 Red-120, Sigma）に結合させた。結合したデンプンをＳＣＤ-Ｕｒａ寒天プレートに最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）で導入し、リン酸カリウムでｐＨ７．０に緩衝した（最終濃度５０−１００ｍＭ）。
ポジティブコロニーを拾って新鮮な選択培地（１５０ｍｍプレート）に画線し、良好に単離され同定可能な単一コロニーを得た。アミラーゼ分泌についてポジティブな良好に単離されたコロニーは、緩衝ＳＣＤ-Ｕｒａ寒天への赤色デンプンの直接導入により検出した。ポジティブコロニーは、デンプンを分解して、ポジティブコロニーの周囲に直接目視できるハローを生じる能力により決定した。
【０２２４】
４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離
ポジティブコロニーが単離された場合、その一部を楊枝で拾い、９６ウェルプレートにおいて無菌水（３０μｌ）に希釈した。この時点で、ポジティブコロニーは凍結して次の分析のために保存するか、即座に増幅するかのいずれかである。細胞のアリコート（５μｌ）を、０．５μｌのKlentaq（Clontech, Palo Alto, CA）;  ４．０μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰ（Perkin Elmer-Cetus）;２．５μｌのKentaqバッファー(Clontech);０．２５μｌの正方向オリゴ１；０．２５μｌの逆方向オリゴ２；１２．５μｌの蒸留水を含有する２５μｌ容量中でのＰＣＲ反応のテンプレートとして使用した。正方向オリゴヌクレオチド１の配列は：
5'-TGTAAAACGACGGCCAGTTAAATAGACCTGCAATTATTAATCT-3'      （配列番号６７）
逆方向オリゴヌクレオチド２の配列は：
5'-CAGGAAACAGCTATGACCACCTGCACACCTGCAAATCCATT-3'      （配列番号６８）
ついで、ＰＣＲは以下の通り実施した：
ａ．                  変性            ９２℃、５分間
ｂ．次の３サイクル    変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５９℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｃ．次の３サイクル    変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５７℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｄ．次の２５サイクル  変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５５℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｅ．                  保持            ４℃
オリゴヌクレオチドの下線を施した領域は、各々ＡＤＨプロモーター領域及びアミラーゼ領域にアニーリングされ、挿入物が存在しない場合はベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０からの３０７ｂｐ領域を増幅した。典型的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列プライマーのアニーリング部位を含んでいた。よって、空のベクターからのＰＣＲ反応の全産物は３４３ｂｐであった。しかしながら、シグナル配列融合ｃＤＮＡは、かなり長いヌクレオチド配列をもたらした。
ＰＣＲに続いて、反応のアリコート（５μｌ）を、上掲のSambrook等に記載されたように１％アガロースゲル中でトリス-ボレート-ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝系を用いたアガローススゲル電気泳動により試験した。４００ｂｐより大きな単一で強いＰＣＲ産物をもたらすクローンを、96 Qiaquick PCR 清浄化カラム（Quagen Inc., Chatsworth, CA）での精製の後にＤＮＡ配列により更に分析した。
【０２２５】
実施例３：シグナルアルゴリズム分析法を用いたｃＤＮＡクローンの単離
種々のポリペプチドコード化核酸配列は、ジェネンテック社（South San Francisco, CA）によって開発された専売のシグナル配列発見アルゴリズムを、公的（例えば、GenBank）及び／又は私的（LIFESEQ(登録商標), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA）データベースからのＥＳＴｓ並びに集団化及び構築されたＥＳＴ断片に適用することにより同定した。シグナル配列アルゴリズムは、検討下の配列又は配列断片の５'-末端の第１及び場合によっては第２のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を取り囲むＤＮＡヌクレオチドの文字に基づく分泌シグナルスコアを計算する。第１のＡＴＧに続くヌクレオチドは、停止コドンを持たない少なくとも３５の不明瞭でないアミノ酸をコードしなければならない。第１のＡＴＧが必要なアミノ酸を有する場合、第２のものは解析しない。何れも要件を満たさない場合、候補配列にスコアをつけない。ＥＳＴ配列が真正のシグナル配列を含むか否かを決定するために、ＡＴＧコドンを取り囲むＤＮＡ及び対応するアミノ酸配列を、分泌シグナルに関連することが知られた７つのセンサー（評価パラメータ）の組を用いてスコアをつける。このアルゴリズムの使用により、多くのポリペプチドコード化核酸配列の同定を行った。
【０２２６】
上の実施例１から３に記載した方法を使用して、ここに開示したＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドをコードする多くの完全長ｃＤＮＡクローンを同定した。ついで、これらのｃＤＮＡは以下の表７に示すようにブタペスト条約に則り、合衆国バージニア州２０１１０−２２０９マナッサス、ユニバーシティ通り１０８０１のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託した。また、ＰＲＯ５９９４ポリペプチドをコードするＤＮＡ９８５９１の配列はジェンバンク寄託番号：ＡＦ０４８７００から同定され；ＰＲＯ６１７０９ポリペプチドをコードするＤＮＡ３４７７６７の配列は、ジェンバンク寄託番号ＡＢ０２９０００から同定された。
【０２２７】
表７
材料                        ATCC寄託番号            寄託した日付 
ＤＮＡ２２７７９−１１３０      ２０９２８０            １９９７年９月１８日
ＤＮＡ３３０９４−１１３１      ２０９２５６            １９９７年９月１６日
ＤＮＡ３４４３４−１１３９      ２０９２５２            １９９７年９月１６日
ＤＮＡ３５５９９−１１６８      ２０９３７３            １９９７年１０月１６日
ＤＮＡ３５６３８−１１４１      ２０９２６５            １９９７年９月１６日
ＤＮＡ３５６３９−１１７２      ２０９３９６            １９９７年１０月１７日
ＤＮＡ３５９１８−１１７４      ２０９４０２            １９９７年１０月１７日
ＤＮＡ３９９６９−１１８５      ２０９４００            １９９７年１０月１７日
ＤＮＡ４０５８７−１２３１      ２０９４３８            １９９７年１１月７日
ＤＮＡ４０５９２−１２４２      ２０９４９２            １９９７年１１月２１日
ＤＮＡ４４８０４−１２４８      ２０９５２７            １９９７年１２月１０日
ＤＮＡ４４１８４−１３１９      ２０９７０４            １９９８年３月２６日
ＤＮＡ４９６３１−１３２８      ２０９８０６            １９９８年４月２８日
ＤＮＡ４８３３１−１３２９      ２０９７１５            １９９８年３月３１日
ＤＮＡ４８３３４−１４３５      ２０９９２４            １９９８年６月２日
ＤＮＡ５８８４６−１４０９      ２０９９５７            １９９８年６月９日
ＤＮＡ５９６１６−１４６５      ２０９９９１            １９９８年６月１６日
ＤＮＡ４４６９４−１５００      ２０３１１４            １９９８年８月１１日
ＤＮＡ６４８８３−１５２６      ２０３２５３            １９９８年９月９日
ＤＮＡ６６５１１−１５６３      ２０３２２８            １９９８年９月１５日
ＤＮＡ６４９６６−１５７５      ２０３５７５            １９９９年１月１２日
ＤＮＡ６８８８５−１６７８      ２０３３１１            １９９８年１０月６日
ＤＮＡ８０７９６−２５２３      ２０３５５５            １９９８年１２月２２日
ＤＮＡ７６７８８−２５２６      ２０３５５１            １９９８年１２月２２日
ＤＮＡ８８００４−２５７５      ２０３８９０            １９９９年３月３０日
ＤＮＡ９２２６５−２６６９      ＰＴＡ−２５６          １９９９年６月２２日
ＤＮＡ１０７７０１−２７１１    ＰＴＡ−４８７          １９９９年８月３日
ＤＮＡ１０８７９２−２７５３    ＰＴＡ−６１７          １９９９年８月３１日
ＤＮＡ１２９５４２−２８０８    ＰＴＡ−１１７８        ２０００年１月１１日
ＤＮＡ１４８３８０−２８２７    ＰＴＡ−１１８１        ２０００年１月１１日
ＤＮＡ５８８０１−１０５２      ５５８２０              １９９６年９月５日
これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約及びその規則(ブダペスト条約)の規定に従って行われた。これは、寄託の日付から３０年間、寄託の生存可能な培養が維持されることを保証するものである。寄託物はブダペスト条約の条項に従い、またジェネンテク社とＡＴＣＣとの間の合意に従い、ＡＴＣＣから入手することができ、これは、どれが最初であろうとも、関連した米国特許の発行時又は任意の米国又は外国特許出願の公開時に、寄託培養物の後代を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第１２２条及びそれに従う特許庁長官規則(特に参照番号８８６ＯＧ６３８の３７ＣＦＲ第１．１４条を含む)に従って権利を有すると米国特許庁長官が決定した者に子孫を入手可能とすることを保証するものである。
本出願の譲受人は、寄託した培養物が、適切な条件下で培養されていた場合に死亡もしくは損失又は破壊されたならば、材料は通知時に同一の他のものと即座に取り替えることに同意する。寄託物質の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。
【０２２８】
実施例４
ヒトＰＲＯ１９６（ＮＬ１）ポリペプチド（ＵＮＱ１７０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ（Altshul等、Methods in Enzymology 266:460-480 (1996)を用いてＧｅｎＢａｎｋデータベースをスクリーニングすることによりＮＬ１が同定された。ＮＬ１配列は、既知の発現遺伝子配列断片（ＥＳＴ）配列Ｔ３５４４８、Ｔ１１４４２、及びＷ７７８２３との相同性を示す。既知のＥＳＴ配列の中で、完全長配列として同定されているか、又はＴＩＥレセプターに結合したリガンドとして記載されているものは無い。
同定された後、Clontech, Inc.（米国カリフォルニア州パロアルト）から購入したカタログ＃６５２８−１のｍRNAより調製されたヒトの胎性肺ライブラリーから、製造者の指示に従ってＮＬ１をクローニングした。
ライブラリーをｐＲＫ５Ｂベクター内に連結した。このベクターは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体であった（Holmes等、Science, 253:1278-1280 (1991)参照）。よってｐＲＫ５ＤはｐＲＫ５の誘導体であり（１９８９年３月１５日公開、ＥＰ３０７２４７）、それらポリリンカー配列内の差異は小さい。ＧｅｎＢａｎｋデータベースに見つかったＥＳＴに基づいて、合成オリゴヌクレオチドプローブとのハイブリダイゼーションによりライブラリーをスクリーニングした：
NL1.5-1 5'-GCTGACGAACCAAGGCAACTACAAACTCCTGGT      配列番号６９
NL1.3-1 5'-TGCGGCCGGACCAGTCCTCCATGGTCACCAGGAGTTTGTAG      配列番号７０
NL1.3-2 5'-GGTGGTGAACTGCTTGCCGTTGTGCCATGTAAA      配列番号７１
ｃＤＮＡ配列全体が配列決定されている。ｃＤＮＡ配列をそのまま配列決定した。
ＮＬ１のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を図１（配列番号１；ＤＮＡ２２７７９−１１３０）及び図２（配列番号２；ＰＲＯ１９６）にそれぞれ示す。
ＮＬ１はＴＩＥ１及びＴＩＥ２リガンドの両方に対し、２３％の配列同一性を示す。
ＮＬ１のクローン(本明細書においてＤＮＡ２２７７９−１１３０と命名する)は、ブダペスト条約に基づき、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）（２０８５２メリーランド州ロックビル、パークローン・ドライブ１２３０１）に１９９７年９月１８日に寄託されており、寄託番号ＡＴＣＣ２０９２８０を付与されている。
ＮＬ１は、染色体９、バンドアームｑ１３−ｑ２１にマッピングされている。
【０２２９】
実施例５：ヒトＰＲＯ２１７ポリペプチド（ＵＮＱ１９１）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ２８７６０と命名した。アセンブリされたＤＮＡ２８７６０コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ２１７の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向及び逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー：
5'-AAAGACGCATCTGCGAGTGTCC-3'    （配列番号７２）
逆方向ＰＣＲ用プライマー：
5'-TGCTGATTTCACACTGCTCTCCC-3'    （配列番号７３）
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つＤＮＡ２８７６０コンセンサス配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ：
5'-CCCACGATGTATGAATGGTGGACTTTGTGTGACTCCTGGTTTCTGCATC-3'  （配列番号７４）
【０２３０】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２１７遺伝子をコードするクローンを単離した。ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肺組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＤＮＡ３３０９４−１１３１の完全長ＤＮＡ配列（図３、配列番号３）及びＰＲＯ２１７の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ３３０９４−１１３１の全コード化配列は、図３（配列番号３）に含まれている。クローンＤＮＡ３３０９４−１１３１は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１４６−１４８に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１２８３−１２８５に見かけの停止コドンを有していた。予測されるポリペプチド前駆体は３７９アミノ酸長であり、分子量は約４１，５２８ダルトンであり、予測されるｐＩは約７．９７である。図４（配列番号４）に示す完全長ＰＲＯ２１７配列の分析により、多種多様の重要なポリペプチドドメインの存在が証明され、それら重要なポリペプチドドメインの位置は概ね上述の通りであった。図４（配列番号４）に示す完全長ＰＲＯ２１７ポリペプチドの分析により、次の存在が明らかとなった。即ち、概ねアミノ酸１〜２８の単一ペプチド；概ねアミノ酸８８〜９２及び２４５〜２４９のＮグリコシル化部位；概ねアミノ酸３７０〜３７８のチロシンキナーゼリン酸化部位；概ねアミノ酸１８４〜１９０、１８５〜１９１、１８９〜１９５、及び３１５〜３２１のＮミリストイル化部位；概ねアミノ酸２８５〜２９３のＡＴＰ／ＧＴＰ結合部位モチーフＡ（Ｐループ）；概ねアミノ酸１９８〜２１０、２３０〜２４２、２６２〜２７４、２９４〜３０６、及び３２６〜３３８のＥＧＦ様ドメインシステインパターンシグネチャーである。クローンＤＮＡ３３０９４−１１３１は、１９９７年９月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２５６を付与された。
図４（配列番号４）に示す完全長配列のＢＬＡＳＴ及びＦａｓｔＡ配列アラインメント分析に基づき、ＰＲＯ２１７は新規ＥＧＦ様相同体と考えられた。
【０２３１】
実施例６：ヒトＰＲＯ２３１ポリペプチド（ＵＮＱ２０５）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のように同定された他のＥＳＴ配列に対して作成し、このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３０９３３と命名した。ＤＮＡ３０９３３コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ２３１の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
ＰＣＲ用プライマー（２つの正方向プライマー及び１つの逆方向プライマー）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-CCAACTACCAAAGCTGCTGGAGCC-3'      （配列番号７５）
正方向ＰＣＲ用プライマー２  5'-GCAGCTCTATTACCACGGGAAGGA-3'  (配列番号７６)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TCCTTCCCGTGGTAATAGAGCTGC-3'  (配列番号７７)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０９３３配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GGCAGAGAACCAGAGGCCGGAGGAGACTGCCTCTTTACAGCCAGG-3'  (配列番号７８)
【０２３２】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２３１遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２１３（ここでＤＮＡ３４４３４−１１３９と命名する）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ２３１の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ３４４３４−１１３９の全ヌクレオチド配列は、図５（配列番号５）に示す。クローンＤＮＡ３４４３４−１１３９は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１７３−１７５に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１４５７−１４５９の停止コドンで終止していた（図５：配列番号５）。予測されるポリペプチド前駆体は４２８アミノ酸長である（図６；配列番号６）。クローンＤＮＡ３４４３４−１１３９は１９９７年９月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２５２が付与されている。
完全長ＰＲＯ２３１のアミノ酸配列の解析により、これが、ヒト及びラットの前立腺性酸性ホスファターゼ前駆体タンパク質に対し、それぞれ３０％及び３１％のアミノ酸配列同一性を有することが示唆された。
【０２３３】
実施例７：ヒトＰＲＯ２３６ポリペプチド（ＵＮＱ２１０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３０９０１と命名した。ＤＮＡ３０９０１コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ２３６の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
ＤＮＡ３０９０１コンセンサス配列に基づいて、一対のＰＣＲ用プライマー（正方向及び逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TGGCTACTCCAAGACCCTGGCATG-3'  (配列番号７９)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TGGACAAATCCCCTTGCTCAGCCC-3'  (配列番号８０)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０９０１配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GGGCTTCACCGAAGCAGTGGACCTTTATTTTGACCACCTGATGTCCAGGG-3'  (配列番号８１)
【０２３４】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２３６遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをＰＲＯ２３６のヒト胎児肺組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２３６の誘導タンパク質配列である、ＰＲＯ２３６（ここでＤＮＡ３５５９９−１１６８と命名する）（配列番号７）の完全長ＤＮＡ配列が得られた。
ＤＮＡ３５５９９−１１６８の全ヌクレオチド配列は、図７（配列番号７）に示す。クローンＤＮＡ３５５９９−１１６８は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置６９−７１に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１９７７−１９７９の停止コドンで終わっていた（図７；配列番号７）。予測されるポリペプチド前駆体は６３６アミノ酸長である（図８；配列番号８）。クローンＤＮＡ３５５９９−１１６８は１９９７年１０月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９３７３が付与されている。
完全長ＰＲＯ２３６ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、このポリペプチドの部位が様々なソースから得られたβガラクトシダーゼタンパク質に有意に相同であることが示され、これによってＰＲＯ２３６が新規のβガラクトシダーゼ相同体であることが示唆される。
【０２３５】
実施例８：ヒトＰＲＯ２４５ポリペプチド（ＵＮＱ２１９）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて同定された他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３０９５４と命名した。
ＤＮＡ３０９５４コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、ＰＲＯ２４５の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向及び逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-ATCGTTGTGAAGTTAGTGCCCC-3'  (配列番号８２)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-ACCTGCGATATCCAACAGAATTG-3'  (配列番号８３)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０９５４配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GGAAGAGGATACAGTCACTCTGGAAGTATTAGTGGCTCCAGCAGTTCC-3'  (配列番号８４)
【０２３６】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２４５遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織から単離した。上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２４５（ここではＤＮＡ３５６３８−１１４１と命名する）完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ２４５の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ３５６３８−１１４１の全ヌクレオチド配列は、図９（配列番号９）に示す。クローンＤＮＡ３５６３８−１１４１は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置８９−９１に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１０２５−１０２７の停止コドンで終わっていた（図９；配列番号９）。予測されるポリペプチド前駆体は３１２アミノ酸長である（図１０；配列番号１０）。クローンＤＮＡ３５６３８−１１４１は１９９７年９月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９２６５が付与されている。
完全長ＰＲＯ２４５のアミノ酸配列の解析により、その一部分がヒトｃ−ｍｙｂタンパク質に対して６０％のアミノ酸配列同一性を有し、よって膜貫通タンパク質レセプターチロシンキナーゼファミリーの新規のメンバーであり得ることが示唆される。
【０２３７】
実施例９：ヒトＰＲＯ２４６ポリペプチド（ＵＮＱ２２０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３０９５５と命名した。ＤＮＡ３０９５５コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ２４６の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向及び逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-AGGGTCTCCAGGAGAAAGACTC-3'  (配列番号８５)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-ATTGTGGGCCTTGCAGACATAGAC-3'  (配列番号８６)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３０９５５配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GGCCACAGCATCAAAACCTTAGAACTCAATGTACTGGTTCCTCCAGCTCC-3'  (配列番号８７)
【０２３８】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２４６遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織から単離した。上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２４６（ここでＤＮＡ３５６３９−１１７２と命名する）（配列番号１１）及びＰＲＯ２４６の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ３５６３９−１１７２の全ヌクレオチド配列は、図１１（配列番号１１）に示す。クローンＤＮＡ３５６３９−１１７２は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１２６−１２８に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１２９６−１２９８の停止コドンで終わっていた（図１１）。予測されるポリペプチド前駆体は３９０アミノ酸長である（図１２；配列番号１２）。クローンＤＮＡ３５６３９−１１７２は１９９７年１０月１７日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号２０９３９６が付与されている。
完全長ＰＲＯ２４６ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、これがヒト細胞表面タンパク質ＨＣＡＲに有意に相同であることが示された。これによってＰＲＯ２４６が新規の細胞表面ウイルスレセプターであり得ることが示唆される。
【０２３９】
実施例１０：ヒトＰＲＯ２５８ポリペプチド（ＵＮＱ２２５）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ２８７４６と命名した。
ＤＮＡ２８７４６コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ２５８の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
ＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-GCTAGGAATTCCACAGAAGCCC-3'  (配列番号８８)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-AACCTGGAATGTCACCGAGCTG-3'  (配列番号８９)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CCTAGCACAGTGACGAGGGACTTGGC-3'  (配列番号９０)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ２８７４０配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-AAGACACAGCCACCCTAAACTGTCAGTCTTCTGGGAGCAAGCCTGCAGCC-3'  （配列番号９１）
5'-GCCCTGGCAGACGAGGGCGAGTACACCTGCTCAATCTTCACTATGCCTGT-3'  （配列番号９２）
【０２４０】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２５８遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肺組織から単離した。上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２５８（ここではＤＮＡ３５９１８−１１７４と命名する）（配列番号１３）及びＰＲＯ２５８の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ３５９１８−１１７４の全ヌクレオチド配列は、図１３（配列番号１３）に示す。クローンＤＮＡ３５９１８−１１７４は、単一のオープンリーディングフレームを含み、配列番号１３のヌクレオチド位置１４７−１４９に見かけの翻訳開始部位を有しており、配列番号１３（図１３）のヌクレオチド位置１３４０の後の停止コドンで終わっていた（図５）。予測されるポリペプチド前駆体は３９８アミノ酸長である（図１４；配列番号１４）。クローンＤＮＡ３５９１８−１１７４は１９９７年１０月１７日にＡＴＣＣに寄託し、ＡＴＣＣ寄託番号２０９４０２が付与されている。
完全長ＰＲＯ２５８ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、これがＣＲＴＡＭ及びポリオウイルスレセプターに有意に相同であり、Ｉｇドメインを有することが示された。これによってＰＲＯ２５８がＩｇスーパーファミリーの新規メンバーであることが示唆される。
【０２４１】
実施例１１：ヒトＰＲＯ２８７ポリペプチド（ＵＮＱ２５０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
ＰＲＯ２８７をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のように同定された他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ２８７２８と命名した。ＤＮＡ２８７２８コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また、ＰＲＯ２８７の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CCGATTCATAGACCTCGAGAGT-3'  (配列番号９３)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-GTCAAGGAGTCCTCCACAATAC-3'  (配列番号９４)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ２８７２８配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GTGTACAATGGCCATGCCAATGGCCAGCGCATTGGCCGCTTCTGT-3'  (配列番号９５)
【０２４２】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ２８７遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児腎臓組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ２８７（ここではＤＮＡ３９９６９−１１８５、配列番号１５と命名する）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ２８７の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ３９９６９−１１８５の全ヌクレオチド配列は、図１５（配列番号１５）に示す。クローンＤＮＡ３９９６９−１１８５は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置３０７−３０９に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１５５２−１５５４の停止コドンで終わっていた（図１５；配列番号１５）。予測されるポリペプチド前駆体は４１５アミノ酸長である（図１６；配列番号１６）。クローンＤＮＡ３９９６９−１１８５は１９９７年１０月１７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９４００が付与されている。
完全長ＰＲＯ２８７のアミノ酸配列の解析により、これがプロコラーゲンＣプロテイナーゼエンハンサータンパク質前駆体又はプロコラーゲンＣプロテイナーゼエンハンサータンパク質様ドメインを有することが示唆される。完全長配列のＢＬＡＳＴ及びＦａｓｔＡ配列アラインメント分析の解析は、ＰＲＯ２８７がプロコラーゲンＣプロテイナーゼエンハンサータンパク質前駆体及びプロコラーゲンＣプロテイナーゼエンハンサータンパク質に対する核酸配列同一性（それぞれ４７及び５４％）を示した。
【０２４３】
実施例１２：ヒトＰＲＯ３２８ポリペプチド（ＵＮＱ２８９）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３５６１５と命名した。ＤＮＡ３５６１５コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ３２８の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
正方向及び逆方向ＰＣＲ用プライマーを合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-TCCTGCAGTTTCCTGATGC-3'  (配列番号９６)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CTCATATTGCACACCAGTAATTCG-3'  (配列番号９７)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３５６１５配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-ATGAGGAGAAACGTTTGATGGTGGAGCTGCACAACCTCTACCGGG-3'  (配列番号９８)
【０２４４】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ３２８遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児腎臓組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ３２８（ここでＤＮＡ４０５８７−１２３１と命名する（配列番号１７）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ３２８の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮ４０５８７−１２３１の全ヌクレオチド配列は、図１７（配列番号１７）に示す。クローンＤＮＡ４０５８７−１２３１は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１５−１７に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１４０４−１４０６の停止コドンで終わっていた（図１７）。予測されるポリペプチド前駆体は４６３アミノ酸長である（図１８；配列番号１８）。クローンＤＮＡ４０５８７−１２３１は１９９７年１１月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９４３８が付与されている。
完全長ＰＲＯ３２８ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、これがヒト神経膠芽細胞腫及びシステインに富む分泌タンパク質に有意に相同であることが示された。これによってＰＲＯ３２８が新規の神経膠芽細胞腫タンパク質又はシステインに富む分泌タンパク質であることが示唆される。
【０２４５】
実施例１３：ヒトＰＲＯ３４４ポリペプチド（ＵＮＱ３０３）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のように他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３４３９８と命名した。ＤＮＡ３４３９８コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ３４４の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
ＤＮＡ３４３９８コンセンサス配列に基づいて、正方向及び逆方向ＰＣＲ用プライマーを次のように合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  （３４３９８．ｆ１）  5'-TACAGGCCCAGTCAGGACCAGGGG-3'  (配列番号９９)
正方向ＰＣＲ用プライマー  （３４３９８．ｆ２）  5'-AGCCAGCCTCGCTCTCGG-3'  (配列番号１００)
正方向ＰＣＲ用プライマー  （３４３９８．ｆ３）  5'-GTCTGCGATCAGGTCTGG-3'  （配列番号１０１）
逆方向ＰＣＲ用プライマー  （３４３９８．ｒ１）  5'-GAAAGAGGCAATGGATTCGC-3'  (配列番号１０２)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  （３４３９８．ｒ２）  5'-GACTTACACTTGCCAGCACAGCAC-3'  (配列番号１０３)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つＤＮＡ３４３９８コンセンサス配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ  （３４３９８．ｐ１）
5'-GGAGCACCACCAACTGGAGGGTCCGGAGTAGCGAGCGCCCCGAAG-3'  (配列番号１０４)
【０２４６】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組の一つを用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ３４４遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児腎臓組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ３４４（ここでＤＮＡ４０５９２−１２４２と命名する）（配列番号１９）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ３４４の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ４０５９２−１２４２の全ヌクレオチド配列は、図１９（配列番号１９）に示す。クローンＤＮＡ４０５９２−１２４２は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２２７−２２９に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置９５６−９５８の停止コドンで終わっていた（図１９）。予測されるポリペプチド前駆体は２４３アミノ酸長である（図２０；配列番号２０）。天然ＰＲＯ３４４アミノ酸配列の重要な領域は、図２０に示すように、シグナルペプチド、成熟タンパク質の開始及び二つの潜在的Ｎミリストイル化部位を含んでいた。クローンＤＮＡ４０５９２−１２４２は１９９７年１１月２１日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９４９２が付与されている。
完全長ＰＲＯ３４４ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、その一部が様々なヒト及びマウス補体タンパク質に有意に相同であることが示された。これによってＰＲＯ３４４が新規の補体タンパク質であることが示唆される。
【０２４７】
実施例１４：ヒトＰＲＯ３５７ポリペプチド（ＵＮＱ３１４）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Incyte Pharmaceuticals（カリフォルニア州パロアルト）による配列発現タグクローン番号「２４５２９７２」を使用してデータベース検索を行った。Swiss-Prot公的タンパク質データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、Ｉｎｃｙｔｅ社のＥＳＴクローン番号「２４５２９７２」の一部と重なる発現遺伝子配列断片(ＥＳＴ)データベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）、及びメーカー独自のＥＳＴ ＤＮＡデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含んでいた。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列とＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。
次いで、ｐｈｒａｐを用いて他のＥＳＴ配列に関連するコンセンサスＤＮＡ配列をアセンブルした。このコンセンサス配列をここではＤＮＡ３７１６２と命名する。この場合、ＢＬＡＳＴ及びｐｈｒａｐの反復サイクルを用いてこのコンセンサスＤＮＡ配列を伸展し、上述のＥＳＴ配列のソースを用いてコンセンサス配列を可能な限り拡大した。
ＤＮＡ３７１６２コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ３５７の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。正方向及び逆方向ＰＣＲ用プライマーは一般に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を得るように設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに更なるオリゴヌクレオチドを合成した。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ついで、ポジティブライブラリーを用いて、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方により対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
ＰＣＲ用プライマーを次のように合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-CCCTCCACTGCCCCACCGACTG-3'  (配列番号１０５)；
逆方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-CGGTTCTGGGGACGTTAGGGCTCG-3'  (配列番号１０６)；及び
逆方向ＰＣＲ用プライマー２  5'-CTGCCCACCGTCCACCTGCCTCAAT-3'  (配列番号１０７)
更に、二つの合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３７１６２配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ１：
5'-AGGACTGCCCACCGTCCACCTGCCTCAATGGGGGCACATGCCACC-3'  (配列番号１０８)；及び
ハイブリダイゼーションプローブ２：
5'-ACGCAAAGCCCTACATCTAAGCCAGAGAGAGACAGGGCAGCTGGG-3'  (配列番号１０９)；
【０２４８】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブとＰＣＲプライマーの一つを用いてＰＲＯ３５７遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織から単離した。ｃＤＮＡクローンを単離するために用いたｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen, San Diego, CA からのもの等の市販試薬を用いて標準的方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に特定のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ３５７の完全長ＤＮＡ配列［ここでＤＮＡ４４８０４−１２４８と命名］（配列番号２１）とＰＲＯ３５７の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ４４８０４−１２４８の全ヌクレオチド配列は、図２１（配列番号２１）に示す。クローンＤＮＡ４４８０４−１２４８は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１３７−１３９に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１９３１−１９３３の停止コドンで終わっていた（図２１）。予測されるポリペプチド前駆体は５９８アミノ酸長である（図２２；配列番号２２）。クローンＤＮＡ４４８０４−１２４８は１９９７年１２月１０日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９５２７が付与されている。
完全長ＰＲＯ３５７ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、その一部にＡＬＳに有意に相同性があることが示された。これによってＰＲＯ３５７がＡＬＳに関する新規のロイシンリッチタンパク質であることが示唆される。
【０２４９】
実施例１５：ヒトＰＲＯ５２６ポリペプチド（ＵＮＱ３３０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサス配列は、実施例１に記載のようにさまざまなＥＳＴ配列に含まれていた。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３９６２６と命名した。ＤＮＡ３９６２６コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ５２６の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-TGGCTGCCCTGCAGTACCTCTACC-3'  (配列番号１１０)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CCCTGCAGGTCATTGGCAGCTAGG-3'  (配列番号１１１)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つＤＮＡ３９６２６コンセンサス配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-AGGCACTGCCTGATGACACCTTCCGCGACCTGGGCAACCTCACAC-3'  (配列番号１１２)
【０２５０】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ５２６遺伝子をコードするクローンを単離した。ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肝臓組織（ＬＩＢ２２８）から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ５２６（ここでＵＮＱ３３０（ＤＮＡ４４１８４−１３１９）と命名する）（配列番号２３）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ５２６の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ３３０（ＤＮＡ４４１８４−１３１９）の全ヌクレオチド配列は、図２３（配列番号２３）に示す。クローンＵＮＱ３３０（ＤＮＡ４４１８４−１３１９）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置５１４−５１６に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１９３３−１９３５の停止コドンで終わっていた（図２３）。予測されるポリペプチド前駆体は４７３アミノ酸長である（図２４；配列番号２４）。図２４に示す完全長ＰＲＯ５２６タンパク質の予測される分子量は約５０，７０８ダルトンであり、ｐＩは約９．２８である。クローンＵＮＱ３３０（ＤＮＡ４４１８４−１３１９）は１９９８年３月２６日にＡＴＣＣ寄託番号２０９７０４の下にＡＴＣＣに寄託されている。このクローンは実際の配列を含むと考えられるが、ここに提示される配列は、現在の配列決定技術に基づく例示的なものである。
完全長ＰＲＯ５２６ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、その一部がＡＬＳ、ＳＬＩＴ、カルボキシペプチダーゼ及び血小板糖タンパク質Ｖを含むロイシンリピートに富むタンパク質に有意に相同であることが示された。これによってＰＲＯ５２６が、タンパク質−タンパク質相互作用に関与する新規のタンパク質であることが示唆される。
配列番号２４を更に解析したところ、シグナルペプチド配列は約アミノ酸１〜２６であった。ロイシンジッパーパターンは概ねアミノ酸１３５−１５６であった。グリコサミノグリカン付着は概ねアミノ酸４３６〜４３９であった。Ｎグリコシレーション部位は、概ねアミノ酸８２〜８５、１７９〜１８２、２３７〜２４０及び４２３〜４２６であった。フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）型Ｃドメインが、約アミノ酸４１１〜４２５に見つかった。当業者であれば、ここに提供された配列に基づき、これらのアミノ酸にいずれのヌクレオチドが対応するかが分かるであろう。
【０２５１】
実施例１６：ヒトＰＲＯ７２４ポリペプチド（ＵＮＱ３８９）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列が、実施例１に記載のように様々なＥＳＴ配列に含まれていた。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ３５６０３と命名した。ＤＮＡ３５６０３コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ７２４の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-GGCTGTCACTGTGGAGACAC-3'  (配列番号１１３)
正方向ＰＣＲ用プライマー２  5'-GCAAGGTCATTACAGCTG-3'  (配列番号１１４)
逆方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-AGAACATAGGAGCAGTCCCACTC-3'  (配列番号１１５)
逆方向ＰＣＲ用プライマー２  5'-TGCCTGCTGCTGCACAATCTCAG-3'  (配列番号１１６)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ３５６０３配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GGCTATTGCTTGCCTTGGGACAGACCCTGTGGCTTAGGCTCTGGC-3'  (配列番号１１７)
【０２５２】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ７２４遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肺組織（ＬＩＢ２６）から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ７２４（ここでＵＮＱ３８９（ＤＮＡ４９６３１−１３２８）と命名する）（配列番号２５）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ７２４の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ３８９（ＤＮＡ４９６３１−１３２８）の全ヌクレオチド配列は、図２５（配列番号２５）に示す。ＵＮＱ３８９クローン（ＤＮＡ４９６３１−１３２８）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置５４６−５４８に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置２６８５−２６８７の停止コドンで終わっていた（図２５）。予測されるポリペプチド前駆体は７１３アミノ酸長である（図２６；配列番号２６）。図２６に示す完全長ＰＲＯ７２４タンパク質の予測される分子量は約７６，１９３ダルトンであり、ｐＩは約５．４２である。図２６（配列番号２６）に示される完全長ＰＲＯ７２４アミノ酸配列の解析により、概ねアミノ酸１〜１６のシグナルペプチド、概ねアミノ酸４４２〜４６２の膜貫通ドメイン、及び概ねアミノ酸１５２〜１７１、３３１〜３５０、３７４〜３９３、並びに４１１〜４３０のＬＤＬレセプタークラスＡドメイン領域の存在が実証された。クローンＵＮＱ３８９（ＤＮＡ４９６３１−１３２８）は１９９８年４月２８日にＡＴＣＣ寄託番号２０９８０６の下にＡＴＣＣに寄託されている。
完全長ＰＲＯ７２４ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、それがヒトＬＤＬレセプタータンパク質に有意に相同であることが示された。これによってＰＲＯ７２４が、新規のＬＤＬレセプター相同体であることが示唆される。具体的には、デイホフデータベース（バージョン３５．４５ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ７２４アミノ酸配列と以下のデイホフ配列、即ちＰ＿Ｒ４８５４７、ＭＭＡＭ２Ｒ＿１、ＬＲＰ２＿ＲＡＴ、Ｐ＿Ｒ６０５１７、Ｐ＿Ｒ４７８６１、Ｐ＿Ｒ０５５３３、Ａ４４５１３＿１、Ａ３０３６３、Ｐ＿Ｒ７４６９２及びＬＭＬＩＰＯＰＨＯ＿１との間には有意な相同性があることが実証された。
【０２５３】
実施例１７：ヒトＰＲＯ７３１ポリペプチド（ＵＮＱ３９５）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
データベースを使用して、発現発現遺伝子配列断片（ＥＳＴ）データベースを検索した。ここで使用したＥＳＴデータベースは、Incyte Pharmaceuticals社（カリフォルニア州パロアルト）所有のＥＳＴ  ＤＮＡデータベースＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）であった。Ｉｎｃｙｔｅクローン２５８１３２６をここで同定し、ＤＮＡ４２８０１と命名した。ＤＮＡ４２８０１配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ７３１の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
一対のＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー１  5'-GTAAGCACATGCCTCCAGAGGTGC-3'  (配列番号１１８)
逆方向ＰＣＲ用プライマー２  5'-GTGACGTGGATGCTTGGGATGTTG-3'  (配列番号１１９)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ４２８０１配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-TGGACACCTTCAGTATTGATGCCAAGACAGGCCAGGTCATTCTGCGTCGA-3'  (配列番号１２０)
【０２５４】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ７３１遺伝子をコードするクローンを単離した。ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト骨髄組織（ＬＩＢ２５５）から単離した。ｃＤＮＡクローンの単離に使用したｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen（カリフォルニア州サンディエゴ）社製品等市販の試薬を用いた標準的方法により構築された。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミキナーゼアダプターに結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分類し、そして適切なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５ＢはＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253: 1278-1280 (1991)参照）の、独特のＸｈｏＩ及びＮｏｔＩ部位に、所定の方向でクローニングした。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ７３１（ここでＵＮＱ３９５（ＤＮＡ４８３３１−１３２９）と命名される）（配列番号２７）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ７３１の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ３９５（ＤＮＡ４８３３１−１３２９）の全ヌクレオチド配列は、図２７（配列番号２７）に示す。クローンＵＮＱ３９５（ＤＮＡ４８３３１−１３２９）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置３２９−３３１に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置３８８１−３８８３の停止コドンで終わっていた（図２７）。予想されるポリペプチド前駆体は１１８４アミノ酸長であった（図２８；配列番号２８）。図２８に示す完全長ＰＲＯ７３１タンパク質の予測される分子量は約１２９，０２２ダルトンであり、ｐＩは約５．２である。クローンＵＮＱ３９５（ＤＮＡ４８３３１−１３２９）は１９９８年３月３１日にＡＴＣＣ寄託番号２０９７１５の下にＡＴＣＣに寄託されている。配列に関し、寄託されたクローンは正確な配列を含むと考えられ、ここに提供される配列は既知の配列決定技術に基づいている。
完全長ＰＲＯ７３１ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、これがプロトカドヘリンファミリーのメンバーに対する有意な同一性及び類似性を有することが示された。これによってＰＲＯ７３１が新規のプロトカドヘリンであり得ることが示唆される。
配列番号２８の更なる解析を行ったところ、推定上のシグナルペプチドは、概ね、配列番号２８のアミノ酸１〜１３に位置していた。膜貫通ドメインは配列番号２８のアミノ酸７１９〜７３９であった。配列番号２８のＮグリコシル化は、４１５〜４１８、５８２〜５８６、６５９〜６６２、６６２〜６６５、及び８５７〜８６０であった。カドヘリン細胞外反復ドメインシグネチャーは、概ね、（配列番号２８の）アミノ酸１２３〜１３３、２３２〜２４２、３４０〜３５０、４４８〜４５８、及び５５３〜５６３に位置していた。対応するヌクレオチドは、ここに提示する配列があれば常套的な方法により決定することができる。
【０２５５】
実施例１８：ヒトＰＲＯ７２３ポリペプチド（ＵＮＱ３９６）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
酵母スクリーニングアッセイを用いて、潜在的な分泌タンパク質をコードするｃＤＮＡクローンを同定した。この酵母スクリーニングアッセイを使用することにより、単一のｃＤＮＡクローン（ここでＤＮＡ４２５８０と命名する）を同定することができる。次いで、ＤＮＡ４２５８０配列を、様々な既知のＥＳＴ配列と比較して相同体を同定した。使用したＥＳＴデータベースには、公的なＥＳＴデータベース（例えばＧｅｎＢａｎｋ）及び自社のＥＳＴ  ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）、Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、カリフォルニア州パロアルト）が含まれる。検索は、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ又はＢＬＡＳＴ２（Altshul等、Methods in Enzymology 266:460-480 (1996)）を用いて、ＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較により行った。ｐｈｒａｐ（Phil Green、ワシントン大学、ワシントン州シアトル）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（場合によっては９０）以上の比較物を集団化してコンセンサスＤＮＡ配列をアセンブルした。
上記の解析を使用し、ｐｈｒａｐを用いて他のＥＳＴ配列に関連するコンセンサスＤＮＡ配列をアセンブルした。このコンセンサス配列をここではｃｏｎｓｅｎ０１と命名する。このコンセンサスアセンブリにはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ社独自のＥＳＴ配列が使用された。ここで、それらをＤＮＡ２０２３９、ＤＮＡ３８０５０及びＤＮＡ４０６８３と命名する。
ｃｏｎｓｅｎ０１配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ７３２の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。正方向及び逆方向のＰＣＲプライマーは通常２０〜３０のヌクレオチドに亘り、約１００〜１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を生じさせることが多い。プローブ配列は通常４０〜５５ｂｐ長である。場合によっては、コンセンサス配列が約１〜１．５ｋｂｐより大きいときに更なるオリゴヌクレオチドを合成した。複数のライブラリーを完全長クローンについてスクリーニングするために、Ausubel等、Current Protocols in Molecular Biologyに従い、ＰＣＲプライマーの対を用いたＰＣＲ増幅によってライブラリのＤＮＡをクリーニングした。次いで、ポジティブライブラリーを使用し、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一つを用いて対象の遺伝子をコードするクローンを単離した。
ＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-ATGTTTGTGTGGAAGTGCCCCG-3'  (配列番号１２１)
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-GTCAACATGCTCCTCTGC-3'  (配列番号１２２)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-AATCCATTGTGCACTGCAGCTCTAGG-3'  (配列番号１２３)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-GAGCATGCCACCACTGGACTGAC-3'  (配列番号１２４)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ４４１４３配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-GCCGATGCTGTCCTAGTGGAAACAACTCCACTGTAACTAGATTGATCTATGCAC-3'  (配列番号１２５)
【０２５６】
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ７３２遺伝子をコードするクローンを単離した。
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児肺組織（ＬＩＢ２６）から単離した。ｃＤＮＡクローンの単離に使用したｃＤＮＡライブラリーは、Invitrogen（カリフォルニア州サンディエゴ）社製品等市販の試薬を用いた標準的方法により構築された。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミキナーゼアダプターに結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズに分類し、そして適切なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５ＢはＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253: 1278-1280 (1991)参照）の、独特のＸｈｏＩ及びＮｏｔＩ部位に、所定の方向でクローニングした。
見かけ上の翻訳開始部位をヌクレオチド位置８８−９０に有し、ヌクレオチド位置１４４７−１４４９に見られる終止コドンで終端する（図２９、配列番号２９）単一のオープンリーディングフレームを含む完全長クローンを同定した。予測されるポリペプチド前駆体は４５３アミノ酸長であり、算定分子量は約５０４１９ダルトンであり、予測されるｐＩは約５．７８である。図３０（配列番号３０）に示される完全長ＰＲＯ７３２配列タンパク質の解析により、アミノ酸約１−約２８に位置するシグナルペプチド、アミノ酸約３７−約５７、約９３−１０９、約１２６-約１４８、約１５１−約１７２、約１９７−２１５、約２３１−２４５、約２６０−２７９、約３１５−約３３３、約３８４−約４０３、及び約４２２−４４７に位置する膜貫通ドメイン、アミノ酸約３３−約３６、約３４−３７、約１７９−１８３、約２９８−３０１、約３３７−３４０、及び４０６−４０９に位置するＮグリコシル化部位、アミノ酸約１１９−約１４９に位置するタンパク質のＭＩＰファミリーに対して相同性を有するアミノ酸ブロック、並びに、アミノ酸約２７９−約２８６に位置するＤＮＡ／ＲＮＡ非特異性エンドヌクレアーゼタンパク質に対して相同性を有するアミノ酸ブロックの存在が実証された。クローンＤＮＡ４８３３４−１４３５は、１９９８年６月２日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０９９２４が付与されている。
完全長ＰＲＯ７３２ポリペプチドのアミノ酸配列の解析により、それがＤｉｆｆ３３タンパク質に有意な配列類似性を有することが示唆された。従って、ＰＲＯ７３２は新規のＤｉｆｆ３３ホモログであり得ることが示唆される。具体的には、デイホフデータベース（バージョン３５．４５、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ７３２アミノ酸配列と以下のデイホフ配列、即ち、HS179M20_2, MUSTETU_1, CER11H6_2, RATDRP_1, S51256, E69226, AE000869_1, JC4120, CYB_PARTE及びP_R50619との相同性が実証された。
【０２５７】
実施例１９：ヒトＰＲＯ１００３ポリペプチド（ＵＮＱ４８７）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記実施例３に記載のシグナル配列アルゴリズムを用いて、ここで４３０５５と命名する単一のIncyte ESTクラスター配列の同定を行った。次いで、この配列を、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び独自のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む様々なＥＳＴデータベースと比較して相同性を同定した。相同性検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて行った。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。このようにして得られたコンセンサス配列をｃｏｎｓｅｎ０１と命名した。
コンセンサス配列とIncyte ESTクローン番号２８４９３８２内に含まれるＥＳＴ配列とに観察される配列相同性を考えて、Incyte ESTクローン番号２８４９３８２を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て、配列決定した。この挿入物が完全長タンパク質をコードすることが分かった。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図３１に示す。
ＤＮＡ５８８４６−１４０９の全ヌクレオチド配列を図３１（配列番号３１）に示す。クローンＤＮＡ５８８４６−１４０９は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置４１−４３に見かけの翻訳開始部位を有し、ヌクレオチド位置２９３−２９５の停止コドンで終止していた（図３１）。予測されるポリペプチド前駆体は８４アミノ酸長である（図３２；配列番号３２）。図３２に示す完全長ＰＲＯ１００３タンパク質は、分子量およそ９４０８ダルトン、ｐＩおよそ９．２８と推測される。図３２（配列番号３２）に示される完全長ＰＲＯ１００３配列の解析により、概ねアミノ酸１−２４に位置するシグナルペプチド、及び概ねアミノ酸５８−６１に位置するｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位の存在が証明された。デイホフデータベース（バージョン３５．４５、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）を用いた完全長ＰＲＯ１００３ポリペプチドの解析により、ＰＲＯ１００３アミノ酸配列と以下のデイホフ配列、即ち、AOPCZA363_3, SRTX_ATREN, A48298, MHVJHMS_1, VGL2_CVMJH, DHDHTC2_2, CORT_RAT, TAL6_HUMAN, P_W14123,及びDVUFI_2との相同性が実証された。
【０２５８】
実施例２０：ヒトＰＲＯ１１０４ポリペプチド（ＵＮＱ５４７）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記実施例３に記載のシグナル配列アルゴリズムを用いて、ESTクラスター配列の同定を行った。次いで、このＥＳＴクラスターを、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び独自のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む様々なＥＳＴデータベースと比較して相同性を同定した。相同性検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて行った。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。このようにして得られたコンセンサス配列をＤＮＡ５６４４６と命名した。
ＤＮＡ５６４４６配列とIncyte ESTクローン番号２８３７４９６内に含まれるＥＳＴ配列とに観察される配列相同性を考えて、Incyte ESTクローン番号２８３７４９６を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て、配列決定した。この挿入物が完全長タンパク質をコードすることが分かった。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図３３に示し、ここでＤＮＡ５９６１６−１４６５と命名する。
ＤＮＡ５９６１６−１４６５の全ヌクレオチド配列を図３３（配列番号３３）に示す。クローンＤＮＡ５９６１６−１４６５は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１０９−１１１に見かけの翻訳開始部位を有し、配列番号３３（図３３）のヌクレオチド位置１１３２−１１３４に停止コドンで終止していた（図３３）。予測されるポリペプチド前駆体は３４１アミノ酸長である（図３４；配列番号３４）。図３４に示す完全長ＰＲＯ１１０４タンパク質は、分子量およそ３６７６９ダルトン、ｐＩおよそ９．０３と推測される。クローンＤＮＡ５９６１６−１４６５は、１９９８年６月１６日に、ＡＴＣＣ寄託番号２０９９９１の下にＡＴＣＣに寄託されている。寄託されたクローンは実際の核酸配列を有し、ここに提示される配列は既知の配列決定技術に基づいている。
図３４の分析により、シグナルペプチドは配列番号３４のアミノ酸約１−２２に位置している。Ｎミリストイル化部位は、配列番号３４のアミノ酸約４１−４６、１１０−１１５、１３３−１３８、１６７−１７２及び１７９−１８４に位置している。
【０２５９】
実施例２１：ヒトＰＲＯ１１５１ポリペプチド（ＵＮＱ５８１）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
コンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにphrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ４０６６５と命名した。ＤＮＡ４０６６５コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲにより同定するために、また２）ＰＲＯ１１５１の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして使用するために合成した。
ＰＣＲ用プライマー（正方向および逆方向）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  5'-CCAGACGCTGCTCTTCGAAAGGGTC-3'  (配列番号１２６)
逆方向ＰＣＲ用プライマー  5'-GGTCCCCGTAGGCCAGGTCCAGC-3'  (配列番号１２７)
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ４０６６５配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
5'-CTACTTCTTCAGCCTCAATGTGCACAGCTGGAATTACAAGGAGACGTACG-3'  (配列番号１２８)
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ１１５１遺伝子をコードするクローンを単離した。ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト胎児腎臓組織から単離した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１１５１（ここでＤＮＡ４４６９４−１５００と命名する（図３５、配列番号３５））の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ１１５１の誘導タンパク質配列が得られた。
ＤＮＡ４４６９４−１５００の全ヌクレオチド配列は、図３５（配列番号３５）に示す。クローンＤＮＡ４４６９４−１５００は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２７２−２７４に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１０４９−１０５１の停止コドンで終止していた（図３５）。予測されるポリペプチド前駆体は２５９アミノ酸長である（図３６；配列番号３６）。図３６に示す完全長ＰＲＯ１１５１タンパク質に予測される分子量はおよそ２８７７０ダルトンであり、ｐＩは約６．１２である。図３６（配列番号３６）に示される完全長ＰＲＯ１１５１の解析により、アミノ酸約１−約２０に位置するシグナルペプチド、アミノ酸約７２−約７５に位置する潜在的Ｎグリコシレーション部位、並びにアミノ酸約１４４−約１７８、約７８−約１１１、及び約８４−１１７に位置するタンパク質を含むＣ１ｑドメインに相同性を有するアミノ酸配列ブロックの存在が実証されている。クローンＵＮＱ５８１（ＤＮＡ４４６９４−１５００）は１９９８年８月１１日に、ＡＴＣＣ寄託番号２０３１１４の下にＡＴＣＣに寄託されている。
図３６（配列番号３６）に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２配列アラインメント解析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の分析により、ＰＲＯ１１５１と、以下のデイホフ配列、即ち、ACR3_HUMAN, HP25_TAMAS, HUMC1QB2_1, P_R99306, CA1F_HUMAN, JX0369, CA24_HUMAN, S32436, P_R28916及びCA54_HUMANとの間に有意な相同性があることが実証された
【０２６０】
実施例２２：ヒトＰＲＯ１２４４ポリペプチド（ＵＮＱ６２８）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記実施例３に記載のシグナル配列アルゴリズムを用いて、ここでクラスター番号７８７４と命名する単一のESTクラスター配列をＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）データベースあから同定した。次いで、このＥＳＴクラスターを、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び独自のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA；Genentech、South San Francisco, CA）を含む様々な発現遺伝子配列断片（ＥＳＴ）データベースと比較して相同性を同定した。海綿体の組織から構築されたライブラリーから１以上のＥＳＴが得られた。相同性検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて行った。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。このようにして得られたコンセンサス配列を「ＤＮＡ５６０１１」と命名した。
ＤＮＡ５６０１１配列と、Incyte EST番号３２０２３４９内に含まれるＥＳＴ配列との間の配列相同性を考えて、ESTクローン番号３２０２３４９を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て、配列決定した。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図３７（配列番号３７）に示し、ここで「ＤＮＡ６４８８３−１５２６」と命名する。
図３７に示される完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置９−１１に見かけの翻訳開始部位を有し、ヌクレオチド位置１０１４−１０１６に見られる停止コドンで終止していた（図３７；配列番号３７）。予測されるポリペプチド前駆体（図３８、配列番号３８）は３３５アミノ酸長である。ＰＲＯ１２４４について計算された分子量は約３８０３７ダルトンであり、推測されるｐＩはおよそ９．８７である。他の特徴として、アミノ酸約１−２９に位置するシグナルペプチド；概ねアミノ酸１８３−２０５、２１７−２３７、２７１−２８７、及び３０１−３２１に位置する膜貫通ドメイン；概ねアミノ酸７１−７４、及び２１５−２１８に位置する潜在的Ｎグリコシル化部位；並びに、アミノ酸約１５０−１５２における細胞接着配列が含まれる
図３８（配列番号３８）に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１２４４アミノ酸配列と以下のデイホフ配列、即ち、AF008554_1, P_485334, G02297, HUMN33S11_1, HUMN33S10_1, YO13_CAEEL, GEN13255, S49758, E70107,及びERP5_MEDSAとの相同性が実証された。
クローンＤＮＡ６４８８３−１５２６は、１９９８年９月９日に、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３２５３が付与されている。
【０２６１】
実施例２３：ヒトＰＲＯ１２９８ポリペプチド（ＵＮＱ６６６）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記実施例３に記載のシグナル配列アルゴリズムを用いて、ESTクラスター配列をＩｎｃｙｔｅデータベースから同定した。次いで、このＥＳＴクラスター配列を、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び独自のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む様々なＥＳＴデータベースと比較して相同性を同定した。１以上のＥＳＴが前立腺患部組織ライブラリーから得られた。相同性検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて行った。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。このようにして得られたコンセンサス配列をＤＮＡ５６３８９と命名した。
ＤＮＡ５６３８９配列と、コンセンサス配列が得られたアセンブリ内におけるIncyte ESTに含まれるＥＳＴ配列との間の配列相同性を考えて、Incyteクローン３３５５７１７を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て、配列決定した。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図３９に示し、ここでＤＮＡ６６５１１−１５６３と命名する。
図３９に示す完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置９４−９６に見かけの翻訳開始部位を有し、ヌクレオチド位置１０６３−１０６５に見られる停止コドンで終止していた（図３９；配列番号３９）。予測されるポリペプチド前駆体は３２３アミノ酸長である（図４０；配列番号４０）。シグナルペプチドは、配列番号４０のアミノ酸約１−１５に位置していた。ＰＲＯ１２９８について計算された分子量はおよそ３７０１７ダルトンであり、予測されるｐＩはおよそ８．８３である。クローンＤＮＡ６６５１１−１５６３は、１９９８年９月１５日に、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３２２８が付与されている
図４０（配列番号４０）に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１２９８アミノ酸配列と以下のデイホフ配列（ここに含まれるデータ）、即ち、ALG2_YEAST, CAPM_STAAU, C69098, C69255, SUS2_MAIZE, A69143, S74778, AB009527_13, AF050103_2及びBBA224769_1との相同性が実証された。
【０２６２】
実施例２４  ヒトＰＲＯ１３１３ポリペプチド（ＵＮＱ６７９）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）、企業のデータベース（例えば、LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）、及びＧｅｎｅｎｔｅｃｈ社の社内ＥＳＴを含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列とＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。既知のタンパク質をコードせず、BLASTスコア７０（場合によっては９０）以上の結果が出た比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington, Seattle, Washington）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列をアセンブルした。
コンセンサスＤＮＡ配列を、phrapを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ６４８７６と命名した。ＤＮＡ６４８７６コンセンサス配列に基づいて、またＤＮＡ５７７１１と命名されたジェネンテック社の社内ＥＳＴの配列との配列相同性に関する検索に基づいて、Ｒ８０６１３と命名されているMerck/Washington大学ＥＳＴ配列が、ＤＮＡ６４８７６及びＤＮＡ５７７１１と有意な相同性を有することが判明した。従って、Merck/Washington大学ＥＳＴクローン番号Ｒ８０６１３を購入し、得られたその挿入物及び配列によって、図４１に示すＤＮＡ６４９６６−１５７５配列を生成した。
上述のようにして得られたＲ８０６１３挿入物のＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１３１３（ここでＤＮＡ６４９６６−１５７５（図４１、配列番号４１）と命名する）（ＵＮＱ６７９）の完全長ＤＮＡ配列及びＰＲＯ１３１３の誘導タンパク質配列が得られた。
ＵＮＱ６７９（ＤＮＡ６４９６６−１５７５）の全ヌクレオチド配列は、図４１（配列番号４１）に示す。クローンＵＮＱ６７９（ＤＮＡ６４９６６−１５７５）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１１５−１１７に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１０３６−１０３８の停止コドンで終わっていた（図４１）。予測されるポリペプチド前駆体は３０７アミノ酸長である（図４２；配列番号４２）。図４２に示される完全長ＰＲＯ１３１３タンパク質に予測される分子量は約３５，０９８ダルトンであり、ｐＩは約８．１１であった。図４２（配列番号４２）に示される完全長ＰＲＯ１３１３の解析により、アミノ酸約１−約１５に位置するシグナルペプチド、アミノ酸約１３４−約１５７、約１６９−約１８９、約２３０−約２４８、及び約２７２−約２８５に位置する膜貫通ドメイン、アミノ酸約３４−約３７、アミノ酸約１３５−約１３８、及び約２０３−約２０６に位置するＮグリコシル化部位、並びに、アミノ酸約５３−約６０に位置するＡＴＰ／ＧＴＰ結合部位モチーフＡの存在が実証された。クローンＵＮＱ６７９（ＤＮＡ６４９６６−１５７５）は１９９９年１月１２日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５７５が付与されている。
図４２（配列番号４２）に示す完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の分析により、ＰＲＯ１３１３アミノ酸配列と以下のデイホフ配列、即ち、CELT27A1_3, CEF09C6_7, U93688_9, H64896, YDCX_ECOLI and RNU06101_1との間に有意な相同性があることが実証された。
【０２６３】
実施例２５  ヒトＰＲＯ１５７０ポリペプチド（ＵＮＱ７７６）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
ＰＲＯ１５７０をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、実施例１に記載のようにｐｈｒａｐを用いて他のＥＳＴ配列に対して作成し、アセンブリを形成した。このコンセンサス配列を、ここで「ＤＮＡ６５４１５」と命名した。ＤＮＡ６５４１５コンセンサス配列に基づいて、またここに提示するほかの発見及び情報に基づいて、Ｉｎｃｙｔｅ  ＥＳＴ３２３２２８５（子宮／大腸癌組織のライブラリー由来）を含むクローンを購入し、完全に配列決定して配列番号４３を得た。
ＰＲＯ１５７０の全ヌクレオチド配列は、図４３（配列番号４３）に含まれている。クローンＤＮＡ６８８８５−１６７８は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置２１０−２１２に見かけの翻訳開始部位を有しており、配列番号４３のヌクレオチド位置１５０６−１５０８に見かけの停止コドンを有していた。予測されるポリペプチド前駆体は４３２アミノ酸長である。図４４（配列番号４４）は多数のモチーフを示す。クローンＤＮＡ６８８８５−１６７８は１９９８年１０月６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３３１１が付与されている。図４４に示される完全長ＰＲＯ１５７０タンパク質に予測される分子量は約４７６４４ダルトンであり、ｐＩは約５．１８である。
図４４（配列番号４４）に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１５７０アミノ酸配列と、以下のデイホフ配列（ここに包含する）、即ちP_W22986, TMS2_HUMAN, HEPS_HUMAN, P_R89435, AB002134_1, KAL_MOUSE, ACRO_HUMAN, GEN12917, AF045649_1,及びP_W34285との配列同一性が明らかになった。
【０２６４】
実施例２６  ヒトＰＲＯ１８８６ポリペプチド（ＵＮＱ８７０）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
好ましくは一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を示すヒトの大動脈内皮ｃＤＮＡライブラリーにおいて、酵母スクリーニングアッセイを用いて、最初のＤＮＡ配列を同定した。この配列を、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２（Altschul等、Methods in Enzymology, 266:460-480 (1996)）を用いて公的なデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｍｅｒｃｋ／Ｗａｓｈ  Ｕ．）、自社のＥＳＴデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、カリフォルニア州パロアルト）のＥＳＴと比較した。コンピュータプログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green, University of Washington、ワシントン州シアトル；http://bozeman.mbt.washington.edu/phrap.docs/phrap.html）を用いて、ＥＳＴをクラスター形成し、コンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここで「ＤＮＡ７８７２２」と命名する。ＤＮＡ７８７２２を形成した配列のアラインメントにおいて他の新規の配列が同定された。ＤＮＡ７８７２２コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを合成してプローブとして使用し、ヒト大動脈上皮細胞ｃＤＮＡライブラリーからＰＲＯ１８８６の完全長コード化配列のクローンを単離した。
図４５に示される完全長ＤＮＡ８０７９６−２５２３クローンは、見かけ上の翻訳開始部位をヌクレオチド位置７３−７５に有し、ヌクレオチド位置１０２２−１０２５に見られる終止コドンで終端する（図４５、配列番号４５）単一のオープンリーディングフレームを含んでいた。予測されるポリペプチド前駆体（図４６、配列番号４６）は３１６アミノ酸長であった。他の特徴を図４６に示す。ＰＲＯ１８８６に計算される分子量は約３６０４５ダルトンであり、予測されるｐＩは約８．１８である。ＤＮＡ８０７９６−２５２３と命名されるクローンＤＮＡ８０７９６−２５２３（ＵＮＱ８７０）は、１９９８年１２月２２日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５５５が付与されている。
図４６に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１８８６アミノ酸配列とデイホフ配列ＣＥＬＴ２６Ａ８＿２及びＳ４３２３０との配列同一性が明らかになった。
【０２６５】
実施例２７  ヒトＰＲＯ１８９１ポリペプチド（ＵＮＱ８７３）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の既知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び企業のＥＳＴデータベース（LIFESEQTM、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列とＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。
ＰＲＯ１８９１をコードするコンセンサスＤＮＡ配列を、phrapを用いて、他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を本明細書では「ＤＮＡ４４８１３」と命名する。
ＤＮＡ４４８１３コンセンサス配列に基づいて、オリゴヌクレオチドを、１）ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、及び２）ＰＲＯ１８９１の完全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして用いるために使用した。正方向及び逆方向ＰＣＲ用プライマーは一般的に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を与えるために設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。幾つかの場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに更なるオリゴヌクレオチドを合成した。完全長クローンについて幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、ライブラリーからのＤＮＡを、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology、上掲のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリーを、ついで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
【０２６６】
ＰＣＲ用プライマー（正方向プライマー及び逆方向プライマー）を合成した：
正方向ＰＣＲ用プライマー  GCTGCTTTGCTCACAACTGCTCGC  （４４８１３．ｆ１；配列番号１２９）、
CATGACACCTTCCTGCTG  （４４８１３．ｆ２；配列番号１３０）
及び
CAGCCATGGGTGACTGTGACCTCC  （４４８１３．ｆ３；配列番号１３１）
逆方向ＰＣＲ用プライマー  CTCCTGGGAGTCGGTAGCAACACC  （４４８１３．ｒ１；配列番号１３２）、
GGGAGGTCACAGTCACCC  （４４８１３．ｒ２；配列番号１３３）
及び
GGCTGGGCTTTCCACCCTGGCAC  （４４８１３．ｒ３；配列番号１３４）
更に、合成オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブは、以下のヌクレオチド配列を持つコンセンサスＤＮＡ４４８１３配列から構築した。
ハイブリダイゼーションプローブ
CAGCCATGGGTGACTGTGACCTCCCTGAGTTTTGCACGGG  （４４８１３．ｐ１；配列番号１３５）
完全長クローンのソースとして幾つかのライブラリーをスクリーニングするために、上記のごとく同定したＰＣＲプライマー組を用いたＰＣＲ増幅によりライブラリーからのＤＮＡをスクリーニングした。その後、ポジティブなライブラリーを用い、オリゴヌクレオチドプローブ及び１のＰＣＲプライマーを用いてＰＲＯ１８９１遺伝子をコードするクローンを単離した。
【０２６７】
ｃＤＮＡライブラリーの構築のためのＲＮＡをヒト骨髄から単離した。ｃＤＮＡクローンの単離に使用したｃＤＮＡライブラリーを、Invitrogen（カリフォルニア州サンディエゴ）製等の市販の試薬を用いた標準的な方法によって構築した。ｃＤＮＡは、ＮｏｔＩ部位を含むオリゴｄＴでプライムし、ＳａｌＩヘミリン酸化アダプターへ平滑末端で結合させ、ＮｏｔＩで切断し、ゲル電気泳動でおよそのサイズ分割をし、決められた方向で適当なクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ；ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を持たないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等, Science, 253:1278-1280 (1991)）に特定のＸｈｏｌ及びＮｏｔＩ部位においてクローン化した。
上記のようにして単離されたクローンのＤＮＡ配列決定により、ＰＲＯ１８９１の完全長ＤＮＡ配列［ここでＤＮＡ７６７８８−２５２６と命名］（図４７；配列番号４７）とＰＲＯ１８９１の誘導タンパク質配列が得られた。
ＰＲＯ１８９１の全コード化配列は、図４７（配列番号４７）に示す。クローンＤＮ７６７８８−２５２６は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１１４−１１６に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置２５５３−２５５５に見かけの停止コドンを有していた。予測されるポリペプチド前駆体は８１３アミノ酸長である。図４８（配列番号４８）に示される完全長ＰＲＯ１８９１タンパク質に予測される分子量は約８７７３９ダルトンであり、ｐＩは約６．９４であった。その他の特徴としては、アミノ酸約１−２７にシグナルペプチドを、アミノ酸約７０２−７２０に膜貫通ドメインを、アミノ酸約１０９−１１２、１４５−１４８、２３１−２３４、２７６−２７９、及び４４８−４５１に潜在的Ｎグリコシレーション部位を、アミノ酸約２３６−２４３にチロシンキナーゼリン酸化部位を、アミノ酸約２９−３４、２８５−１９０、１９５−２００、３０８−３１３、３１８−３２３、３２６−３３１、３３８−３４３、３７０−３７５、４００−４０５、４０２−４０７、４５４−４５９、５０４−５０９、５１０−５１５、５１７−５２２、５８０−５８５、６０１−６０６、６６１−６６６、６８７−６９２、７１７−７２２及び７１９−７２４に潜在的Ｎミリストイル化部位を、アミノ酸約２００−２０３にアミド化部位を、並びに、アミノ酸約３４２−３５１に中性亜鉛メタロペプチダーセ、亜鉛結合領域シグネチャーを含むことが挙げられる。
図４８に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１８９１アミノ酸配列とデイホフ配列：ＸＬＵ６６００３＿１、Ｐ＿Ｗ２５７１６、ＡＦ０２３４７７＿１、Ｐ＿Ｗ０１８２５、Ｐ＿Ｒ９９８０１、Ｐ＿Ｗ２５７２２、Ｐ＿Ｗ４４１２０、Ｐ＿Ｒ６７７５９、ＡＦ０２９８９９＿１、及びＰ＿Ｗ１４７７２との配列同一性が明らかになった。
クローンＤＮＡ７６７８８（ＵＮＱ８７３）は１９９８年１２月２２日に、ＤＮＡ７６７８８−２５２６としてＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５５１が付与されている。
【０２６８】
実施例２８：ヒトＰＲＯ４４０９ポリペプチド（ＵＮＱ１９３４）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
ＤＮＡ８８００４−２５７５は、ジェネンテック社（South San Francisco, CA）によって開発された専売のシグナル配列発見アルゴリズムを、公的（例えば、GenBank）及び／又は私的（LIFESEQ(登録商標), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA）データベースからのＥＳＴｓ並びにクラスター化してアセンブルしたＥＳＴ断片に適用することにより同定した。シグナル配列アルゴリズムは、検討下の配列又は配列断片の５'-末端の第１及び場合によっては第２のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を取り囲むＤＮＡヌクレオチドの文字に基づく分泌シグナルスコアを計算する。第１のＡＴＧに続くヌクレオチドは、停止コドンを持たない少なくとも３５の不明瞭でないアミノ酸をコードしなければならない。第１のＡＴＧが必要なアミノ酸を有する場合、第２のものは解析しない。何れも要件を満たさない場合、候補配列にスコアをつけない。ＥＳＴ配列が真正のシグナル配列を含むか否かを決定するために、ＡＴＧコドンを取り囲むＤＮＡ及び対応するアミノ酸配列を、分泌シグナルに関連することが知られた７つのセンサー（評価パラメータ）の組を用いてスコアをつける。
上記に記載のシグナル配列アルゴリズムを用いて、Incyte ESTクラスター配列番号40671と称するIncyteデータベースからのＥＳＴクラスター配列の同定を行った。次いで、このＥＳＴクラスター配列を、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び独自のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む様々な発現遺伝子配列断片（ＥＳＴ）データベースと比較して相同性を同定した。相同性検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて行った。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。これにより得られたコンセンサス配列をここではＤＮＡ７９３０５と命名した。ＤＮＡ７９３０５を考慮して、ヒト脳ライブラリーｃＤＮＡライブラリーを以下の２つのプライマーを用いてスクリーニングし、ＤＮＡ８８００４−２５７５を同定した。
5'GAGCTGAAGTCAGCCTTTGAG3'  （配列番号１３６、正方向）、及び
5'CTCTGCAGAAGTCTCGTTCC3'  （配列番号１３７、逆方向）
図４９に示す完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置３３７−３３９に見かけの翻訳開始部位を有しており、ヌクレオチド位置１１７１−１１７３に停止コドンを有していた（図４９；配列番号４９）。予測されるポリペプチド前駆体（図５０；配列番号５０）は２７８アミノ酸長である。ＰＲＯ４４０９は算定される分子量およそ３０７４８ダルトンであり、予測されるｐＩはおよそ５．４７である。
図５０（配列番号５０）に示される完全長配列のＷＵ−ＢＬＡＳＴ２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ４４０９アミノ酸配列とデイホフ配列：ＨＧＳ＿ＲＦ３００、ＨＳＵ８０７４４＿１、ＣＥＣ１１Ｈ１＿７、ＣＥＶＫ０４Ｇ１１＿２、ＨＧＳ＿ＲＦ１７７、ＣＥＦ０９Ｅ８＿２、ＡＦ０３４８０２＿１、Ｐ＿Ｒ５１２２７、Ｉ４６０１４ 及びＣＹＬ２＿ＢＯＶＩＮ（配列ｎａｄに関連するテキストをここに含む）との配列同一性が明らかになった。
クローンＤＮＡ８８００４−２５７５（ＵＮＱ１９３４）は、ＤＮＡ８８００４−２５７５と命名され、１９９９年３月３０日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８９０が付与されている。
【０２６９】
実施例２９：ヒトＰＲＯ５７２５ポリペプチド（ＵＮＱ２４４６）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
発現された配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）、Incyte Pharmaceuticals／カリフォルニア州パロアルト）を検索し、Neuritinに対して相同性を示すＥＳＴを同定した。次いでＥＳＴクローン番号３７０５６８４をＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）（Incyte Pharmaceuticals／カリフォルニア州パロアルト）から購入し、そのクローンのｃＤＮＡ挿入物を得てその全体の配列を決定した。
このクローンのヌクレオチド配列全体を、ここでＤＮＡ９２２６５−２６６９と命名し、図５１（配列番号５１）に示す。ＤＮＡ９２２６５−２６６９クローンは、単一のオープンリーディングフレームを有し、その見かけ上の翻訳開始部位はヌクレオチド位置２７−２９に位置しており、停止シグナルはヌクレオチド位置５２２−５２４に位置していた（図５１、配列番号５１）。予測されるポリペプチド前駆体は１６５アミノ酸長であり、計算される分子量は約１７７８６ダルトンであり、予測されるｐＩは約８．４３であった。図５２（配列番号５２）に示す完全長ＰＲＯ５７２５配列の解析により、図５２に示すような多様な重要ポリペプチドドメインの存在が明らかになり、これら重要ポリペプチドドメインの位置は上記の通りである。クローンＤＮＡ９２２６５−２６６９は、１９９９年６月２２日ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−２５６を付与されている。
図５２（配列番号５２）に示される完全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アラインメント分析を用いたデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ５７２５アミノ酸配列と、デイホフ配列ＲＮＵ８８９５８＿１；Ｐ＿Ｗ３７８５９；Ｐ＿Ｗ３７８５８；ＪＣ６３０５；ＨＧＳ＿ＲＥ７７８；ＨＧＳ＿ＲＥ７７７；Ｐ＿Ｗ２７６５２；Ｐ＿Ｗ４４０８８；ＨＧＳ＿ＲＥ７７６；及びＨＧＳ.＿ＲＥ４２５との配列同一性が明らかになった。
【０２７０】
実施例３０：ヒトＰＲＯ６０９７ポリペプチド（ＵＮＱ２５４５）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
１．オリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリーの調製
ヒトＳＫ−Ｌｕ−１腺癌細胞系組織からInvitrogen, San Diego, CAの試薬及びプロトコールを用いてｍＲＮＡを単離した（Fast Track 2）。このＲＮＡを、Life Technologies, Gaithersburg, MD (Super Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いるベクターｐＲＫ５ＤにおけるオリゴｄＴプライムしたｃＤＮＡの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡは１０００ｂｐを越えるサイズに分類し、ＳａｌＩ／ＮｏｔＩ結合ｃＤＮＡをＸｈｏＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＲＫ５Ｄを、ｓｐ６転写開始部位、それに続くＳｆｉＩ制限酵素部位、さらにＸｈｉＩ／ＮｏｔＩｃＤＮＡクローニング部位を持つベクターにクローニングした。
２．ランダムプライムｃＤＮＡライブラリーの調製
一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を好ましく表すために二次ｃＤＮＡライブラリーを作成した。Ｓｐ６ＲＮＡを（上記の）一次ライブラリーから生成し、このＲＮＡを、ベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０におけるLife Technologies (上で参照したSuper Script Plasmid System)からの試薬及びプロトコールを用いてランダムプライムしたｃＤＮＡライブラリーの生成に使用した。この方法において、二本鎖ｃＤＮＡを５００−１０００ｂｐにサイズ分類し、平滑末端でＮｏｔＩアダプターに結合させ、ＳｆｉＩ部位で切断し、そしてＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ切断ベクターにクローニングした。ｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０は、ｃＤＮＡクローニング部位の前に酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモータ、及びクローニング部位の後にマウスアミラーゼ配列（分泌シグナルを持たない成熟配列）についでアルコールデヒドロゲナーゼ転写終結区を有するクローニングベクターである。よって、アミラーゼ配列にインフレームで融合されたこのベクターにクローニングされたｃＤＮＡは、適当に形質移入された酵母コロニーからのアミラーゼの分泌を導くであろう。
【０２７１】
３．形質転換及び検出
上記パラグラフ２に記載されたライブラリーからのＤＮＡを氷上で冷却し、それにエレクトロコンピテントＤＨ１０Ｂ細菌（Life Technoligies、２０ｍｌ）を添加した。細菌及びベクターの混合物を、ついで製造者に推奨されているようにして電気穿孔した。ついで、ＳＯＣ培地（Life Technologies、１ｍｌ）を添加し、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。形質転換体を、ついで、アンピシリンを含む２０標準１５０ｍｍＬＢプレートに蒔き、１６時間インキュベートした（３７℃）。ポジティブコロニーをプレートから廃棄し、細菌ペレットから標準的な方法、例えばＣｓＣｌ-勾配法を用いてＤＮＡを単離した。精製ＤＮＡに、ついで以下の酵母プロトコールを施した。
酵母方法は３つの範疇に分けられる：（１）酵母のプラスミド／ｃＤＮＡ結合ベクターでの形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出及び単離；及び（３）酵母コロニーから直接的な挿入物のＰＣＲ増幅及び配列決定及び更なる分析のためのＤＮＡの精製。
用いた酵母菌株はＨＤ５６-５Ａ（ATCC-90785）であった。この株は以下の遺伝子型：ＭＡＴアルファ、ｕｒａ３-５２、ｌｅｕ２-３、ｌｅｕ２-１１２、ｈｉｓ３-１１、ｈｉｓ３-１５、ＭＡＬ＋、ＳＵＣ＋、ＧＡＬ＋を有する。好ましくは、不完全な翻訳後経路を持つ酵母変異体を用いることができる。このような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２に転位不全対立遺伝子を持つが、切断されたｓｅｃ７１が最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常な操作を妨害するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチド及び／又はリガンドを含む）、この翻訳後経路に関与する他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐ、ＳＳＡ１ｐ-４ｐ）又はこれらのタンパク質の複合体形成も、アミラーゼ発現酵母と組み合わせて好ましく用いられる。
形質転換は、Gietz等, Nucl. Acid. Res., 20: 1425 (1992)に概略が記されたプロトコールに基づいて実施された。ついで、形質転換細胞を寒天からＹＥＰＤ複合培地ブロス（１００ｍｌ）に播種し、３０℃で終夜成長させた。ＹＥＰＤブロスは、Kaiser等, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, p. 207 (1994)に記載されているようにして調製した。ついで、終夜培地を、新鮮なＹＥＰＤブロス（５００ｍｌ）中でおよそ２ｘ１０６細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．１）に希釈し、１ｘ１０７細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．４−０．５）まで再成長させた。
ついで細胞を収穫し、５０００ｒｐｍで５分間のSorval GS3 ローターのＧＳ３ローターボトルに移し、上清を捨て、ついで無菌水に再懸濁することにより、形質転換のために調製し、５０ｍｌのファルコン管内で、Beckman GS-6KR遠心機において３５００ｒｐｍで再度遠心分離した。上清を捨て、細胞をＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．５、１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３）で続けて洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）中に再懸濁させた。
形質転換は、マイクロチューブ内で、調製した細胞（１００μｌ）を新鮮な変性一本鎖サケ精子ＤＮＡ（Lofstrand Labs, Gaitherburg, MD）及び形質転換ＤＮＡ（１μｇ  ｖｏｌ．＜１０μｌ）と混合することにより生じさせた。混合物はボルテックスにより簡単に混合し、ついで４０％ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ、４０％のポリエチレングリコール-４０００、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３、ｐＨ７．５）を添加した。この混合物を緩く撹拌し、３０℃で撹拌しながら３０分間インキュベートした。ついで細胞に４２℃で１５分間熱衝撃を与え、反応容器をマイクロチューブ内で１２０００ｒｐｍで５−１０秒間遠心分離し、デカントしＴＥ（５００μｌ、１０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．５）へ再懸濁させた後、遠心分離した。ついで、細胞をＴＥ（１ｍｌ）中に希釈し、アリコート（２００μｌ）を、１５０ｍｍ成長プレート（ＶＷＲ）に予め調製した選択培地に拡げた。
あるいは、複数の少量反応ではなく、形質転換を１回の大規模反応で実施したが、試薬の量はしかるべくスケールアップした。
用いた選択培地は、Kaiser等, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor press, Cold Spring Harbor, NY, p. 208-210 (1994)に記載されているように調製したウラシルを欠く合成完全デキストロース寒天（ＳＣＤ-Ｕｒａ）であった。形質転換体は３０℃で２−３日成長させた。
アミラーゼを分泌するコロニーの検出は、選択成長培地に赤色デンプンを含有せしめることにより実施した。Biely等, Anal. Biochem., 172: 176-179 (1988)に記載された方法に従って、デンプンを赤色染料（反応性 Red-120, Sigma）に結合させた。結合したデンプンをＳＣＤ-Ｕｒａ寒天プレートに最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）で導入し、リン酸カリウムでｐＨ７．０に緩衝した（最終濃度５０−１００ｍＭ）。
ポジティブコロニーを拾って新鮮な選択培地（１５０ｍｍプレート）に画線し、良好に単離され同定可能な単一コロニーを得た。アミラーゼ分泌についてポジティブな良好に単離されたコロニーは、緩衝ＳＣＤ-Ｕｒａ寒天への赤色デンプンの直接導入により検出した。ポジティブコロニーは、デンプンを分解して、ポジティブコロニーの周囲に直接目視できるハローを生じる能力により決定した。
【０２７２】
４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離
ポジティブコロニーが単離された場合、その一部を楊枝で拾い、９６ウェルプレートにおいて無菌水（３０μｌ）に希釈した。この時点で、ポジティブコロニーは凍結して次の分析のために保存するか、即座に増幅するかのいずれかである。細胞のアリコート（５μｌ）を、０．５μｌのKlentaq（Clontech, Palo Alto, CA）;  ４．０μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰ（Perkin Elmer-Cetus）;２．５μｌのKentaqバッファー(Clontech);０．２５μｌの正方向オリゴ１；０．２５μｌの逆方向オリゴ２；１２．５μｌの蒸留水を含有する２５μｌ容量中でのＰＣＲ反応のテンプレートとして使用した。正方向オリゴヌクレオチド１の配列は：
5'-TGTAAAACGACGGCCAGTTAAATAGACCTGCAATTATTAATCT-3'      （配列番号６７）
逆方向オリゴヌクレオチド２の配列は：
5'-CAGGAAACAGCTATGACCACCTGCACACCTGCAAATCCATT-3'      （配列番号６８）
ついで、ＰＣＲは以下の通り実施した：
ａ．                  変性            ９２℃、５分間
ｂ．次の３サイクル    変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５９℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｃ．次の３サイクル    変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５７℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｄ．次の２５サイクル  変性            ９２℃、３０秒間
アニール        ５５℃、３０秒間
伸長            ７２℃、６０秒間
ｅ．                  保持            ４℃
上記オリゴヌクレオチドの下線を施した領域は、各々ＡＤＨプロモーター領域及びアミラーゼ領域にアニーリングされ、挿入物が存在しない場合はベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０からの３０７ｂｐ領域を増幅した。典型的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列プライマーのアニーリング部位を含んでいた。よって、空のベクターからのＰＣＲ反応の全産物は３４３ｂｐであった。しかしながら、シグナル配列融合ｃＤＮＡは、かなり長いヌクレオチド配列をもたらした。
ＰＣＲに続いて、反応のアリコート（５μｌ）を、上掲のSambrook等に記載されたように１％アガロースゲル中でトリス-ボレート-ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝系を用いたアガローススゲル電気泳動により試験した。４００ｂｐより大きな単一で強いＰＣＲ産物をもたらすクローンを、96 Qiaquick PCR 清浄化カラム（Quagen Inc., Chatsworth, CA）での精製の後にＤＮＡ配列により更に分析した。
【０２７３】
５．完全長クローンの同定
ｃＤＮＡ配列を上記の検索にて単離し、ここでＤＮＡ８４７１２と命名した。次いでＤＮＡ８４７１２分子の配列からプローブを生成し、これを使用して、上記１に記載のようにして準備したヒトＳＫ−Ｌｕ−１選手細胞系ライブラリー（２４７）を検索した。クローニングベクターは、ｐＲＫ５Ｂ（ｐＲＫ５Ｂは、ＳｆｉＩ部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmes等、Science, 253:1278-1280 (1991)参照）であり、切断されたｃＤＮＡの大きさは２８００ｂｐ未満であった。オリゴヌクレオチドプローブを、１）ＰＣＲによって対象の配列を含むｃＤＮＡライブラリーを同定するため、及び２）ＰＲＯ６０９７の完全長コード化配列のクローンを単離するためのプローブとして用いるため、に合成した。正方向及び逆方向のＰＣＲプライマーは、通常２０−３０オリゴヌクレオチドに亘り、約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を生じることが多い。プローブ配列は通常４０−５５ｂｐ長である。完全長クローンについいて複数のライブラリーをスクリーニングするために、ＰＣＲプライマーの対を使用し、Ausubel等、Current Protocols in Molecular Biology、上掲に従って、ライブラリーから得たＤＮＡをＰＣＲ増幅によってスクリーニングした。次いでポジティブライブラリーを使用し、プローブオリゴヌクレオチドとプライマー対とを用いて、対象の遺伝子をコードするクローンを単離した。
使用したオリゴヌクレオチドプローブは以下である。
正方向のＰＣＲプライマー  5'-CTGACCGGTCCGCTCATGG-3'  （配列番号１３８）
逆方向のＰＣＲプライマー  5'-CAGCATGCTTTCCGCGAAGTC-3'  （配列番号１３９）
ハイブリダイゼーションプローブ  5'-GGCAGGAAGGCCAGGGGTGCTGAGTTCTTCACCTCCTTTTAGACTG-3'  （配列番号１４０）
同定された完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置１５８−１６０に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置１７２７−１７２９に停止シグナルを有していた（図５５；配列番号５５）。予測されるポリペプチド前駆体は５２３アミノ酸長であり、およそ５８８８７ダルトンの算定分子量とおよそ９．５７の推定ｐＩを有していることが明らかとなった。図５６（配列番号５６）に示す完全長ＰＲＯ６０９７配列の解析により、図５６に示すような様々な重要ポリペプチドドメインの存在が明らかとなり、それら重要ポリペプチドドメインの位置は、概ね上記の通りであった。クローンＤＮＡ１０７７０１−２７１１、１９９９年８月３日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−４８７が付与されている。
図５６（配列番号５６）に示した完全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アラインメント解析を使用するデイホフデータベース（バージョン３５．４５ SwissProt３５）の解析により、ＰＲＯ６０９７アミノ酸配列と次のデイホフ配列との間の配列同一性が明らかになった：ＹＭＢ８＿YEAST；Ｓ４９７５９；ＡＴＦ１０Ｎ７＿５；ＳＰＢＣ４０５＿３；Ｓ６９７１８；Ｈ６９７９８；Ｄ７１２２６；Ｕ９５３７０＿５；Ａ６９７８０；Ｂ６９４６１。
【０２７４】
実施例３１：ヒトＰＲＯ７４２５ポリペプチド（ＵＮＱ２９６６）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
Swiss-Prot公的データベースから得られた約９５０の既知の分泌タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（もしあれば、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、（１）公的ＥＳＴデータベース（例えばMerck/Washington大学）、（２）企業のＥＳＴデータベース（LIFESEQ（登録商標）、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）、及び（３）Genentech社の企業ESTデータベースを含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列とＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。
コンセンサスＤＮＡ配列を、上述のようにして、ｐｈｒａｐを用いて他のＥＳＴ配列と比較してアセンブルした。このコンセンサス配列を、ここでＤＮＡ８６６２０と命名した。場合によっては、ＤＮＡ８６６２０コンセンサスは、ＢＬＡＳＴの反復サイクル及びｐｈｒａｐを使用して、上述のＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長された中間コンセンサスＤＮＡ配列に由来する。
ＤＮＡ８６６２０コンセンサス配列に基づいて、及びＤＮＡ８６６２０配列と、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）（Incyte Pharmaceuticals／カリフォルニア州パロアルト）データベースから得られたクローン番号４７９７１３７に含まれるＥＳＴ配列とに見られる配列相同性を考慮して、クローン番号４７９７１３７を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て、配列決定した。ここで、ｃＤＮＡ挿入物が完全長タンパク質をコードすることが判明した。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図５７に示し、ここでＤＮＡ１０８７９２−２７５３と命名する。
上記に同定された完全長クローンは、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置３−５に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置７０８−７１０に停止シグナルを有していた（図５７、配列番号５７）。予測されるポリペプチド前駆体は２３５アミノ酸長であり、算定分子量は約２５９８９ダルトンであり、推定ｐＩは約８．３２である。図５８（配列番号５８）に示される完全長ＰＲＯ７４２５配列の解析により、図５８に示すような様々な重要ポリペプチドドメインの存在が明らかとなり、これら重要ポリペプチドドメインの位置は、概ね上記の通りである。クローンＤＮＡ１０８７９２−２７５３は１９９９年８月３１日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−６１７が付与されている。
図５８（配列番号５８）に示した完全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アラインメント解析を使用するデイホフデータベース（バージョン３５．４５ SwissProt３５）の解析により、ＰＲＯ７４２５アミノ酸配列と次のデイホフ配列との間の配列同一性が明らかになった：Ｐ＿Ｙ１１８３１；Ｐ＿Ｙ１１６１９；ＭＹＰ０＿ＨＵＭＡＮ；ＭＹＰ０＿ＭＯＵＳＥ；ＨＳＰＭＰＯ２＿１；ＡＦ０８７０２０＿１；ＧＥＮ１３７５１；ＡＦ００７７８３＿１；Ｐ＿Ｗ１４１４６；ＸＬＵ４３３３０＿１。
【０２７５】
実施例３２：ヒトＰＲＯ１０１０２ポリペプチド（ＵＮＱ３１０３）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
ＤＮＡ１２９５４２−２８０８は、ジェネンテック社（South San Francisco, CA）によって開発された専売のシグナル配列発見アルゴリズムを、公的（例えば、GenBank）及び／又は私的（LIFESEQ(登録商標), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA）データベースからのＥＳＴｓ並びに集団化して構築されたＥＳＴ断片に適用することにより同定した。シグナル配列アルゴリズムは、検討下の配列又は配列断片の５'-末端の第１及び場合によっては第２のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を取り囲むＤＮＡヌクレオチドの文字に基づく分泌シグナルスコアを計算する。第１のＡＴＧに続くヌクレオチドは、停止コドンを持たない少なくとも３５の不明瞭でないアミノ酸をコードしなければならない。第１のＡＴＧが必要なアミノ酸を有する場合、第２のものは解析しない。何れも要件を満たさない場合、候補配列にスコアをつけない。ＥＳＴ配列が真正のシグナル配列を含むか否かを決定するために、ＡＴＧコドンを取り囲むＤＮＡ及び対応するアミノ酸配列を、分泌シグナルに関連することが知られた７つのセンサー（評価パラメータ）の組を用いてスコアをつける。
上記に記載のシグナル配列アルゴリズムを用いて、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）（Incyte Pharmaceuticals, Inc.／カリフォルニア州パロアルト）データベースから、ここで１６６９５０Ｈ１と命名するＥＳＴクラスター配列の同定を行うことができた。次いで、このＥＳＴクラスター配列を、公的ＥＳＴデータベース（例えば、GenBank）及び独自のＥＳＴＤＮＡデータベース（LIFESEQ(登録商標)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を含む様々な発現遺伝子配列断片（ＥＳＴ）データベースと比較して相同性を同定した。相同性検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altshul等, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて行った。プログラム「ｐｈｒａｐ」（Phil Green、ワシントン州シアトル、ワシントン大学）を用いて、既知のタンパク質をコードしない、BLASTスコア７０（９０の場合もある）以上の比較物をクラスター化してコンセンサスＤＮＡ配列にアセンブルした。これにより得られたコンセンサス配列をここではＤＮＡ１１２５６０と命名した。
ＤＮＡ１１２５６０配列と、ＬＩＦＥＳＥＱ（登録商標）（Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）データベースから得られたクローン番号１６６９５０に含まれるＥＳＴ配列とに見られる配列相同性を考慮して、クローン番号１６６９５０を購入し、ｃＤＮＡ挿入物を得て配列決定した。ここで、このｃＤＮＡ挿入物が完全長タンパク質をコードすることが判明した。このｃＤＮＡ挿入物の配列を図５９に示し、ここでＤＮＡ１２９５４２−２８０８と命名する。
クローン番号１２９５４２−２８０８は、単一のオープンリーディングフレームを含み、ヌクレオチド位置５８−６０に見かけの翻訳開始部位を有し、ヌクレオチド位置１７８６−１７８８に位置する停止コドンで終止していた（図５９、配列番号５９）。予測されるポリペプチド前駆体は５７６アミノ酸長であった（図６０、配列番号６０）。図６０に示される完全長ＰＲＯ１０１０２タンパク質に予測される分子量は約６２１２８ダルトンであり、推定ｐＩは約７．４１である。図６０（配列番号６０）に示される完全長ＰＲＯ１０１０２配列の解析により、図６０に示すような様々な重要ポリペプチドドメインの存在が明らかとなり、これら重要ポリペプチドドメインの位置は、概ね上記の通りである。クローンＤＮＡ１２９５４２−２８０８は２０００年２月２３日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１４０５が付与されている。
図６０（配列番号６０）に示した完全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アラインメント解析を使用するデイホフデータベース（バージョン３５．４５ SwissProt３５）の解析により、ＰＲＯ１０１０２アミノ酸配列と次のデイホフ配列との間の配列同一性が明らかになった：ｒＴＮＦＳＦ３Ｌ＿１、Ｐ＿Ｙ００７７１、ＡＣ００７７８５＿２、ＡＦ０７６４８３＿１、Ｐ＿Ｗ２３７２２、Ｐ＿Ｗ３７８３７、Ｐ＿Ｙ００７７０及びＡＢ０１６６０５＿１。ＰＲＯ１０１０２ポリペプチドは、それと相同な配列よりはるかに長い。例えば、それはｒＴＮＦＳＦ３Ｌ＿１及びＰ＿Ｙ００７７１に相同でないＮ末端に３７８のアミノ酸残基を有している。
【０２７６】
実施例３３：ヒトＰＲＯ１０２８２ポリペプチド（ＵＮＱ３１２６）をコードするＤＮＡクローンの単離
酵母スクリーニングアッセイを用いて、一次ｃＤＮＡクローンをの５’末端を優先的に提示するヒトｃＤＮＡライブラリーにおいて、天然ヒトＰＲＯ１０２８２ポリペプチドをコードするｃＤＮＡクローン（ＤＮＡ１４８３８０−２８２７）を単離した。
クローンＤＮＡ１４８３８０−２８２７−１は、単一のオープンリーディングフレームを含み、見かけ上の翻訳開始部位をヌクレオチド位置４９−５１に有し、ヌクレオチド位置２０５０−２０５２の停止コドンで終止していた（図６１、配列番号６１）。予測されるポリペプチド前駆体は６６７アミノ酸長であった（図６２、配列番号６２）。図６２に示される完全長ＰＲＯ１０２８２タンパク質に予測される分子量は約７３５０２ダルトンであり、ｐＩは約９．２６であった。図６２（配列番号６２）に示される完全長ＰＲＯ１０２８２配列の解析により、図６２に示されるような多様な重要ポリペプチドドメインの存在が明らかとなり、それら重要ポリペプチドドメインの位置は、概ね上記の通りであった。クローンＤＮＡ１４８３８０−２８２７は、２０００年１月１１日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１８１が付与されている。
図６２（配列番号６２）に示される完全長配列のＡＬＩＧＮ−２配列アラインメント分析を使用たデイホフデータベース（バージョン３５．４５  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ３５）の解析により、ＰＲＯ１０２８２アミノ酸配列と、以下のデイホフ配列、即ち、ＡＦ０６２４７６、Ｐ＿Ｗ８８５５９及びＨＧＳ＿ＲＥ２５９との相同性が実証された。
【０２７７】
実施例３４：ヒトＰＲＯ７７９ポリペプチド（ＵＮＱ４５５）をコードするｃＤＮＡクローンの単離
ヒト胎生期心臓及びヒト胎生期肺ｌｇｔ１０バクテリオファージｃＤＮＡライブラリー（共にClontechから購入）を、ＥＳＴ(GenBank座位W71984)に基づいて、合成オリゴヌクレオチドプローブを用いたハイブリダイゼーションによりスクリーニングしたところ、ヒトＴＮＦＲ１及びＣＤ９５の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に対する或る程度の相同性が示された。Ｗ７１９８４は、５２３ｂｐ  ＥＳＴであり、１のリーディングフレームに、ヒトＴＮＦＲ１のＩＣＤ内の４３アミノ酸長配列に対する２７の同一性を有する。スクリーニングに使用されるオリゴヌクレオチドプローブは、それぞれ２７及び２５ｂｐ長であり、以下の配列を有している。
5'-GGCGCTCTGGTGGCCCTTGCAGAAGCC-3'  （配列番号１４１）
5'-TTCGGCCGAGAAGTTGAGAAATGTC-3'  （配列番号１４２）
２つのプローブを１：１で混合したハイブリダイゼーションを、２０％のホルムアミド、５ＸＳＳＣ、１０％のデキストラン硫酸、０．１％のＮａＰｉＰＯ４、０．０５ｍｇのサケ精子ＤＮＡ、及び０．１％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含むバッファー中において室温で一晩行い、その後連続的に室温で６ＸＳＳＣでの洗浄１回、３７℃で１ＸＳＳＣ／０．１％ＳＤＳでの洗浄２回、３７℃で０．５ＸＳＳＣ／０．１％ＳＤＳでの洗浄２回、及び３７℃で０．２ＸＳＳＣ／０．１％ＳＤＳでの洗浄２回を行った。胎生期心臓（ＦＨ２０Ａ．５７）及び胎生期肺（ＦＬ８Ａ．５３）ライブラリー各々から得られたポジティブクローンは、それぞれの上記ハイブリダイゼーションプローブをプライマーとして使用したＰＣＲにより、特異的であることが確認された。各ポジティブクローンを含む単一のファージプラーク希釈を制限することにより単離し、Ｗｉｚａｒｄλ調製ＤＮＡ精製キット（Promega）を用いて精製した。
ＥｃｏＲＩを用いた消化によりｃＤＮＡ挿入物をλベクターアームから切除し、ゲル精製し、ＥｃｏＲＩによって事前に消化させたｐＲＫ５にサブクローニングした。次いでこのクローン全体の配列を決定した。
クローン（ＦＨ２０Ａ．５７）ＤＮＡ５８８０１−１０５２（後述するように、ＡＴＣＣ５５８２０として寄託されたＡｐｏ３クローンＦＨ２０．５７とも呼ばれる）は、単一のオープンリーディングフレームを含み、見かけ上の翻訳開始部位をヌクレオチド位置１０３−１０５に有し、ヌクレオチドいち  １３５４−１３５６に見られる停止コドンで終止していた（図６５、配列番号６５）。予測されるポリペプチド前駆体は４１７アミノ酸長であった（図６６、配列番号６６）。図６６に示される完全長ＰＲＯ７７９タンパク質に予測される分子量は約４５０００ダルトンであり、ｐＩは約６．４０であった。図６６（配列番号６６）に示される完全長ＰＲＯ７７９配列の解析により、多様な重要ポリペプチドドメインの存在が明らかとなり、これら重要ポリペプチドドメインの位置は概ね上記の通りであった。図６６に示す完全長ＰＲＯ７７９配列の解析により、アミノ酸約１−２４に位置するシグナルペプチド、アミノ酸約１９９−２１９に位置する膜貫通ドメイン、アミノ酸約６７−７１及び約１０６−１１０に位置するＮグリコシル化部位、アミノ酸約１５７−１６１に位置するｃＡＭＰ−及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位、アミノ酸約３７０−３７７に位置するチロシンキナーゼリン酸化部位、アミノ酸約４４−５０、約５０−５６、約６６−７２、約１１６−１２２、約２１７−２２３、約３５５−３６１、約３９１−３９７、及び約４０１−４０７に位置するＮミリストイル化部位、並びに、アミノ酸約１７７−１８８に位置する原核膜リポタンパク脂質付着部位の存在が明らかとなった。クローンＤＮＡ５８８０１−１０５２は、１９９６年９月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号５５８２０が付与されている。
ＥＣＤはヒトＴＮＦＲ１（４反復）、ＣＤ９５（３反復）及び他の既知のＴＮＦＲファミリーのメンバーの対応する領域に類似する４つのシステインに富む反復を含む。ＩＣＤは、ＴＮＦＲ１及びＣＤ９５のＩＣＤと、ヒトＦＡＤＤ／ＭＯＲＴ１、ＴＲＡＤＤ、ＲＩＰ及びショウジョウバエＲｅａｐｅｒなどの細胞質のデスシグナル伝達タンパク質に見られるデスドメインに類似するデスドメイン配列を含む。全体に、且つ個々の領域において、ＰＲＯ７７９（ＡＰＯ３）はＣＤ９５よりＴＮＦＲ１に密接に関連しており、それぞれのアミノ酸同一性は、全体で２９．３％及び２２．８％であり、ＥＣＤにおいては２８．２％及び２４．７％であり、ＩＣＤにおいては３１．６％及び１８．３％であり、デスドメインにおいては４７．５％及び２０％であった。
【０２７８】
実施例３５：ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子破壊を有するマウスの産生及び分析
ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９ポリペプチドの役割を調査するために、相同組換えによりＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子における破壊を産出させた。特に、ＰＲＯ１９６、ＰＲＯ２１７、ＰＲＯ２３１、ＰＲＯ２３６、ＰＲＯ２４５、ＰＲＯ２４６、ＰＲＯ２５８、ＰＲＯ２８７、ＰＲＯ３２８、ＰＲＯ３４４、ＰＲＯ３５７、ＰＲＯ５２６、ＰＲＯ７２４、ＰＲＯ７３１、ＰＲＯ７３２、ＰＲＯ１００３、ＰＲＯ１１０４、ＰＲＯ１１５１、ＰＲＯ１２４４、ＰＲＯ１２９８、ＰＲＯ１３１３、ＰＲＯ１５７０、ＰＲＯ１８８６、ＰＲＯ１８９１、ＰＲＯ４４０９、ＰＲＯ５７２５、ＰＲＯ５９９４、ＰＲＯ６０９７、ＰＲＯ７４２５、ＰＲＯ１０１０２、ＰＲＯ１０２８２、ＰＲＯ６１７０９又はＰＲＯ７７９遺伝子に破壊を含むトランスジェニックマウス(すなわちノックアウトマウス)を、ジーンターゲティング又はジーントラッピングによりつくりだした。変異をサザンブロット分析法により確認し、３'及び５'末端の双方に対する正しいターゲティングを確認した。また遺伝子特異的ジェノタイピングをゲノムＰＣＲにより実施し、挿入部位に隣接するエキソンにアニールするプライマーを使用したＲＴ-ＰＣＲにより裏付けられるように、内在性の未変性転写物の損失を確認した。ターゲティングベクターを１２９系統ＥＳ細胞に電気穿孔し、標的クローンを同定した。標的クローンを宿主胚盤胞に微量注入し、キメラを生成させた。キメラをＣ５７動物と交配し、Ｆ１ヘテロ接合体をつくった。ヘテロ接合体を交雑させ、表現型分析に使用したＦ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体のコホートを産生した。希にＦ１ヘテロ接合体が十分に産生されない場合、Ｆ１hetsを野生型Ｃ５７マウスに交配させて、十分なヘテロ接合体を作製し、表現型の分析のコホートのために交配させた。誕生後１２−１６週で、全ての表現型分析を実施した。
【０２７９】
３５．１  ＤＮＡ２２７７９−１１３０（ＵＮＱ１７０）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ１９６ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ２２７７９−１１３０(ＵＮＱ１７０)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１１９２３又は寄託番号：ＮＭ＿０１１９２３  ＮＩＤ：ｇｉ  ６７５３１１９参照番号ＮＭ＿０１１９２３.１  ムスムスクルスアンジオポエチン様２（Ａｎｇｐｔｌ２）；タンパク質参照番号：Ｑ９Ｒ０４５又は寄託番号：Ｑ９Ｒ０４５  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．アンジオポエチン関連タンパク質２前駆体（アンジオポエチン様２）．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１２０９８又は寄託番号：ＮＭ＿０１２０９８  ＮＩＤ：ｇｉ  ６９１２２３５参照番号ＮＭ＿０１２０９８.１  ホモサピエンスアンジオポエチン様２（ＡＮＧＰＴＬ２）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９ＵＫＵ９又は寄託番号：Ｑ９ＵＫＵ９  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．アンジオポエチン関連タンパク質２前駆体（アンジオポエチン様２）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
対象のマウス遺伝子は、アンジオポエチン様２（Ａｎｇｐｔｌ２）、ヒトＡＮＧＰＴＬ２のオルソログである。別名は、アンジオポエチン関連タンパク質２（Ａｒｐ２）、ＨＡＲＰ、及びＭＧＣ８８８９等である。Ａｎｇｐｔｌ２は分泌された糖タンパク質ホルモンであり、血管内皮細胞、血管平滑筋、心臓、小腸、脾臓、胃、大腸、卵巣、副腎、骨格筋及び前立腺に発現する。Ａｎｇｐｔｌ２の構造はホルモンのアンジオポエチンに類似しているが、Ａｎｇｐｔｌ２はアンジオポエチンレセプターＴｉｅ１及びＴｉｅ２には結合しない。Ａｎｇｐｔｌ２は内皮細胞に出芽を誘発し、これは血管形成におけるアンジオポエチンの役割と一致する（Kim等、J Biol Chem. 274(37):26523-8 (1999)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      23        32      23      78
予想値      19.5      39      19.5    78
カイ二乗 = 2.51  有意性=0.28467  (hom/n) = 029  平均産仔数 = 8
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０１１９２３．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞の、骨格筋、骨、及び脂肪を除くすべてにおいて検出された。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
表現型分析を、以下に記載するようにして、この世代からのマウスについて実施した。
【０２８０】
３５．１．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ２２７７９−１１３０(ＵＮＱ１７０)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトアンジオポエチン様２（ＡＮＧＰＴＬ２）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−６の応答が減少した。また、（−／−）マウスは、全組織量、総体脂肪、の減少、体重及び体長の減少、ならびに平均椎骨梁測定値の減少を特徴とする有意な成長遅延を示した。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０２８１】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０２８２】
以下の試験を行った。
急性期応答：
試験の説明：細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）は内毒素であり、それ自体が急性期応答及び全身性炎症の強力な誘導因子である。レベル１ＬＰＳマウスに対し、２６ゲージの針を用いて２００μＬの無菌生理食塩水中致死量以下のＬＰＳを腹腔内に注射した。投与量は、試験したマウスの平均体重に基づき、注射後３時間で体重１ｇ当たり１μｇとした。次いで１００μｌの血液試料を採取し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ器具でＴＮＦａ、ＭＣＰ−１、及びＩＬ−６の存在について分析した。
結果：
（−／−）マウスは、その同復仔及び背景的平均と比較して、ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＭＣＰ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α応答の減少を示した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ６／４／１０
要約すると、ＬＰＳ内毒素抗原の投与によって、ＰＲＯ１９６ポリペプチドをコードする遺伝子を欠くノックアウトマウスが、その野生型同復仔と比較して、免疫学的異常を示すことが証明された。特に、変異マウスは、LPS内毒素抗原を投与したとき、免疫学的応答（MCP-1、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生）を誘発する能力の低下を示した。これは、炎症誘発性応答が欠乏していることを示す。ＩＬ−６は、その後のＢ細胞活性化段階に寄与する。加えて、ＩＬ−６は、急性期応答及び全身性炎症の誘発に重要な役割を果たす。これは、ＰＲＯ１９６ポリペプチドが又はそのアゴニストが、免疫系を刺激することを示し、この効果が個体に有益である場合、例えば白血病及び他の種類の癌、並びにＡＩＤＳ患者等の免疫不全患者に使用できると思われる。従って、ＰＲＯ１９６ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、免疫応答の抑制に機能し、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合の有害な免疫応答を抑制するための有益な候補である。
【０２８３】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均体重及び平均体長の減少を示した（特に最初の八（８）週で少なくとも二（２）つの標準偏差（ＳＤ）が正常を下回った）。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：２３／３２／２３
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織容積及び全体脂肪の減少が示された。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均椎骨の骨梁の体積、厚み、及び結合密度の減少が示された。
分析値  wt／het／hom：４／４／１０]。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、密度の減少と場合によっては骨折に繋がる脆弱性を伴う骨量減少を特徴とする骨粗鬆症に似た有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。よって、ＰＲＯ１９６ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨恒常性の維持に機能すると考えられる。加えて、ＰＲＯ１９６又はそのコード化遺伝子は、骨治癒に有用であるか、骨関節症又は骨粗鬆症の治療に有用であると考えられる。一方、ＰＲＯ１９６のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、関節炎、骨関節症及び骨粗鬆症等の異常骨代謝に関連する炎症性疾患を含む異常又は病的な骨障害を招くと考えられる。
ＤＥＸＡによって分析した（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔と比較した場合に全組織量及び全体脂肪の顕著な減少と、体重及び体長の減少を特徴とする有意な成長遅延を示した。これらの結果は、骨成長に影響し得る視床下部−下垂体軸に関連する問題に起因すると思われる。これを骨測定値の減少が見られたことと組み合わせると、カヘキシー等の組織消耗状態が示唆される。よって、ＰＲＯ１９６ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨障害の治療に有用であると考えられ、また成長疾患の治療、或いはカヘキシー又は他の組織消耗性疾患の予防に有用であると思われる。
【０２８４】
３５．２  ＤＮＡ３３０９４−１１３１（ＵＮＱ１９１）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２１７ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３３０９４−１１３１(ＵＮＱ１９１)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１１９１５又は寄託番号：ＮＭ＿０１１９１５  ＮＩＤ：６７５５９９８ムスムスクルスムスムスクルスＷｎｔ抑制因子１（Ｗｉｆ１）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＷＵＡ１又は寄託番号：Ｑ９ＷＵＡ１  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．ＷＮＴ抑制因子１前駆体（ＷＩＦ−１）．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿００７１９１又は寄託番号：ＮＭ＿００７１９１  ＮＩＤ：１８３７９３５４ホモサピエンスホモサピエンスＷＮＴ抑制因子１（ＷＩＦ１）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９Ｙ５Ｗ５又は寄託番号：Ｑ９Ｙ５Ｗ５  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．Ｗｎｔ抑制因子１前駆体（アンジオポエチン様２）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｗｉｆ１（Ｗｎｔ抑制因子１）、ヒトＷＩＦ１のオルソログである。別名は、ＷＩＦ−１及びＷｎｔ抑制因子１等である。ＷＩＦ１は胚発生段階で発現する分泌されたタンパク質であり、Ｗｎｔタンパク質に結合し、それらの同族レセプターの活性化を乱す。Ｗｎｔタンパク質は、発達段階に関与する細胞外シグナル伝達分子である（Hseih等、Nature, 398(6726):431-6 (1999)）。ＷＩＦ１は前立腺、胸部、肺、及び膀胱の癌において下方制御されるが、大腸腺癌細胞系では上方制御される。このことにより、ＷＩＦ１発現の変化がそれら組織における腫瘍形成に関連していることが示唆される（Wissmann等、J Pathol, 201(2):204-12 (2003); Cebrat等、Cancer Lett, 206(1):107-13 (2004)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      24        35      20      79
予想値      19.75    39.5    19.75  79
カイ二乗 = 1.43  有意性=0.48910  (hom/n) = 0.25  平均産仔数 =8
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０１１９１５．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料のうち、脳、脊髄、眼及び心臓において検出された。
サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０２８５】
３５．２．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３３０９４−１１３１(ＵＮＱ１９１)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトＷｎｔ抑制因子１（ＷＩＦ１）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、骨測定値の減少を伴う成長遅延が起こった。また、突然変異（−／−）マウスは、卵白アルブミン抗原投与に対するＩｇＧ２ａ応答の増大を示した。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０２８６】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０２８７】
以下の試験を行った。
卵白アルブミン抗原投与：
手順：本アッセイは、７の野生型及び８のホモ接合体に対して行った。ニワトリの卵白アルブミン（ＯＶＡ）はＴ細胞依存性の抗原であり、マウスにおける抗原特異性の免疫応答の研究に広く用いられるモデルタンパク質である。ＯＶＡは非毒性且つ不活性であり、従って免疫応答が誘発されない場合も動物に害を与えない。ＯＶＡに対するマウスの免疫応答の特徴は既に大部分が明らかになっており、Ｔ細胞の応答を誘発する免疫優性ペプチドが同定されている。抗ＯＶＡ抗体は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＺＡ）を用いて免疫化の８〜１０日後に検出可能であり、抗体の異なるアイソタイプの決定により、遺伝子改変マウスに応答の不足を招く複雑なプロセスについて新しい情報が得られる。
上記のように、このプロトコルでは、抗原特異性の免疫応答を上昇させるマウスの能力を評価する。動物に対し、フロイント完全アジュバンド内で乳化させた５０ｍｇのニワトリ卵白アルブミンを腹腔内注入し、１４日後に抗卵白アルブミン抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２サブクラス）の血清力価を測定した。血清試料に含まれるＯＶＡ特異性抗体の量は、９６ウェル試料プレートをスキャンする器具によって生成された吸光度（ＯＤ）の値に比例していた。希釈の度合いを少しずつ変えた血清試料の各組についてデータを収集した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ８／４／９
本抗原投与の結果：
（−／−）マウスは、その同復仔及び背景的平均と比較して、卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の増加を示した。つまり、これらのノックアウトマウスは、ＯＶＡ特異性抗体の、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原に対する応答又はポジティブな免疫学的表現型（炎症誘発性応答）を誘発する能力の増大を示した。よって、ＰＲＯ２１７ポリペプチドをコードする遺伝子は、Ｔｈ、Ｂ又はプラズマ細胞の欠損によって引き起こされる炎症誘発性応答を抑制すると思われる。
要約すると、卵白アルブミン抗原の研究によって、ＰＲＯ２１７ポリペプチドをコードする遺伝子を欠くノックアウトマウスが、その野生型同復仔と比較して、免疫学的異常を示すことが証明された。特に、変異マウスは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原を投与したとき、免疫学的応答を誘発する能力の増大を示した。従って、ＰＲＯ２１７ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、免疫系（例えばＴ細胞の増殖）の刺激に有用であり、この作用は、白血病及び他の種類の癌、並びにＡＩＤＳ患者等の免疫不全患者に効果的である場合に使用できると思われる。従って、ＰＲＯ２１７ポリペプチド又はそのアゴニストは、免疫応答の抑制に有用であり、よって、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合の有害な免疫応答を抑制するための有益な候補である。
【０２８８】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均体重及び平均体長の減少を示した（一（１）の標準偏差（ＳＤ）が体重で背景的平均を下回り、二（２）の標準偏差（ＳＤ）が体長で背景的平均を下回った）。
心拍数：オスとメス両方のノックアウト（−／−）マウスにおいて、背景的コントロールに対し、心拍数が標準偏差（ＳＤ）で１〜２低下した。
受胎能：分析に使用した一つのオスの（−／−）マウス（Ｍ−１５１）は不妊症であった。
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
結果：
（−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織容積及び除脂肪体重の減少、平均骨塩量及び骨塩量の減少が示された。分析値  wt／het／hom：４／４／８。
まとめ：
ＤＥＸＡによって分析した（−／−）マウスは、(＋／＋)同腹仔と比較して、全組織量及び除脂肪体重の顕著な減少と、骨測定値の減少を示し、これによってこれら変異種における成長遅延が示唆された。この結果に加えて、体重及び体長の減少が観察されたことから、カヘキシー又はその他成長に関連する障害などの組織消耗状態が示唆される。つまり、ＰＲＯ２１７ポリペプチド又はそのアゴニストは、カヘキシー又はその他の組織消耗性疾患の治療又は予防に有用であると考えられる。
【０２８９】
３５．３  ＤＮＡ３４４３４−１１３９（ＵＮＱ２０５）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２３１ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３４４３４−１１３９(ＵＮＱ２０５)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１９８００又は寄託番号：ＮＭ＿０１９８００  ＮＩＤ：９７９００５８ムスムスクルスムスムスクルス  リゾホスファチジン酸ホスファターゼ６、（Ａｃｐ６）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＪＭＧ５又は寄託番号：Ｑ９ＪＭＧ５  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．MPACPL1．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１６３６１又は寄託番号：ＮＭ＿０１６３６１  ＮＩＤ：２１３５９９１０ホモサピエンスホモサピエンスリゾホスファチジン酸ホスファターゼのＬＰＡＰ（ＬＯＣ５１２０５）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９ＮＰＨ０又は寄託番号：Ｑ９ＮＰＨ０  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．HPACPL1(ＣＤＮＡ  ＦＬＪ２０６５０ＦＩＳ、クローンＫＡＴ０１９６２)（リゾホスファチジン酸ホスファターゼのＬＰＡＰ）（リゾホスファチジン酸ホスファターゼの前駆体）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
標的のマウス遺伝子は、Ａｃｐ６（リゾホスファチジン酸ホスファターゼ６）であり、これはヒトＡＣＰ６のオルソログである。別名は、ＡＣＰＬ１；ｍＰＡＣＰＬ１；５７３０５５９Ａ０９Ｒｉｋ；酸性ホスファターゼ様１；ＬＰＡＰ；ＰＡＣＰＬ１；及び、マウスリゾホスファチジン酸ホスファターゼ６、のオルソログ等である。ＡＣＰ６は、リゾホスファチジン酸のモノアシルグリセロールとリン酸への加水分解を媒介する細胞質及びミトコンドリア酵素である。ＡＣＰ６の発現は、様々な組織に検出されるが、特に腎臓、心臓、小腸、筋肉及び肝臓に多く発現する。この酵素はまた、脳ホモジネートの細胞質画分と、カハール間質細胞に検出されており、胃腸平滑筋における運動神経伝達のペースメーカー及びメディエーターとして機能する。ＡＣＰ６は脂質代謝に関与していると思われる（Hiroyama及びTakenawa, Biochem J, 336 (Pt2):483-9(1998);Hiroyama及びTakenawa, J Biol Chem, 274(41):29172-80(1999); Takayama等、Gut 50(6):790-6(2002)）。
wt        het      hom    合計
観察値      19        39      23      81
予想値      20.25    40.5    20.25  81
カイ二乗 = 0.51  有意性=0.77640  (hom/n) = 0.28  平均産仔数 = 8
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン１と２の間のイントロンにレトロウイルスが挿入された。（寄託番号：ＮＭ＿０１９８００．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料のうち、骨格筋、骨、及び脂肪を除くすべてに検出された。
ＲＴ−ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ−４６）に転写が無かったことが判明した。インバースＰＣＲにより標的遺伝子の破壊を確認した。
【０２９０】
３５．３．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３４４３４−１１３９(ＵＮＱ２０５)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトリゾホスファチジン酸ホスファターゼ６（ＡＣＰ６）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、野生型の(＋／＋)同腹仔と比較して、（−／−）マウスに平均血小板数の増加が観察された。また、（−／−）変異マウスは、総体脂肪（％及びグラム）、並びに全組織量が減少していると思われ、組織消耗性疾患を示していた。ＲＴ−ＰＣＲにより、転写は無かった。
【０２９１】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０２９２】
以下の試験を行った。
血液学的分析
試験の説明：アボット社のＣｅｌｌ−Ｄｙｎ  ３５００Ｒ（自動血液分析器）による血液試験を行った。その特徴の一部には、５つの部分からなる白血球の示差が含まれる。患者のレポートは全部で２２を超えるパラメータを網羅することができる。
結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均血小板数の増加を示した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／５／８
このように、ＤＮＡ３４４３４−１１３９遺伝子を欠く変異マウスは、凝固障害に関連する表現型を持つようになる。これに関し、ＰＲＯ２３１ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、血友病等の異常血液凝固に関する障害の治療に有用と思われる。
【０２９３】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、全体脂肪（％及びグラム）及び全組織量の減少が示された。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、組織消耗性疾患を示唆する体脂肪及び質量の有意な減少を伴う異常な身体測定値を示すことが判明した。ＤＥＸＡによって分析した（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔と比較した場合に、全組織量及び除脂肪体重の顕著な減少を示した。これらの結果は、これらの変異種における成長遅延を示唆するものである。よって、ＰＲＯ２３１ポリペプチド又はそのアゴニストは、成長疾患の治療、カヘキシーの予防、又は他の組織消耗性疾患の予防に有用であると思われる。
【０２９４】
３５．４  ＤＮＡ３５５９９−１１６８（ＵＮＱ２１０）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２３６ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３５５９９−１１６８(ＵＮＱ２１０)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿１５３８０３又は寄託番号：ＮＭ＿１５３８０３  ＮＩＤ：ｇｉ  ２４４１８９２４参照番号ＮＭ＿１５３８０３.１  ムスムスクルス仮説タンパク質ＭＧＣ４７４１９（ＭＧＣ４７４１９）；タンパク質参照番号：Ｑ８ＣＦＴ１又は寄託番号：Ｑ８ＣＦＴ１  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ４９２１５０９Ｆ２４遺伝子に類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１３８３４２又は寄託番号：ＮＭ＿１３８３４２  ＮＩＤ：ｇｉ  ２４３０８３９１参照番号ＮＭ＿１３８３４２.１  ホモサピエンス仮説タンパク質ＢＣ００８３２６（ＬＯＣ８９９４４）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ８ＩＷ９２又は寄託番号：Ｑ８ＩＷ９２  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．仮説タンパク質ＢＣ００８３２６に対応する。
対象のマウス遺伝子は、「ｃＤＮＡ配列ＢＣ０３８４７９」（ＢＣ０３８４７９）、ヒト「仮説タンパク質ＢＣ００８３２６」のオルソログである。別名は、仮説タンパク質ＭＧＣ４７４１９等である。
ＢＣ０３８４７９は、グルコシル加水分解酵素ファミリー３５ドメインを含む推定上のリソソーム酵素である。このドメインを有するタンパク質には、β−ガラクトシダーゼと、ガングリオシド、糖タンパク質、及びグリコサミノグリカンからの末端ガラクトースの切断を媒介するリソソーム酵素とが含まれる（Ｐｆａｍ寄託番号ＰＦ０１３０１）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      22        25      26      73
予想値      18.25    36.5    18.25  73
カイ二乗 = 7.68  有意性=0.02144  (hom/n) = 0.36  平均産仔数 = 7
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿１５３８０３．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに胚性幹(ＥＳ)細胞において検出された。サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０２９５】
３５．４．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３５５９９−１１６８(ＵＮＱ２１０)
（ａ）全体的な表現型の要約：
仮説ヒトタンパク質（ＢＣ００８３２６）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、平均白血球数（ＷＢＣ）リンパ球数が低下し、ナチュラルキラー細胞の平均割合が低下した。また、（−／−）マウスは、耐糖能障害を示した。加えて、骨粗鬆症を示唆する（−／−）変異マウスは異常骨測定値を示した。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０２９６】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０２９７】
以下の試験を行った。
（１）蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析
手順：
ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターを含む抹消血の免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を行い、ナチュラルキラー細胞の白血球マーカー及びｐａｎＮＫとしてのＴリンパ球、Ｂリンパ球のＣＤ１９、ＣＤ４５を評価した。ＦＡＣＳ分析は２の野生型マウス及び６のホモ接合マウスに対して行い、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から得られた細胞を含めた。
これらの試験では、分析する細胞を胸腺、抹消血、脾臓、骨髄及びリンパ節から単離した。フローサイトメトリーを設計し、単核細胞集団中のＣＤ４及びＣＤ８ポジティブＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球の相対的な割合を決定した。Becton-DickinsonのFACSCalibur ３−レーザーＦＡＣＳマシンを使用して免疫状態を評価した。表現型分析及びスクリーニングのために、このマシンは、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比に加えて、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ８＋／ＣＤ４−、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球の数を記録する。６つの系列特異性抗体の組を用いて各マウスの溶解させた抹消血の単一試料を染色することにより、単核細胞のプロファイルを得た：ＣＤ４５  ＰｅｒＣＰ、抗ＴＣＲｂ  ＡＰＣ、ＣＤ４  ＰＥ、ＣＤ８  ＦＩＴＣ、ｐａｎ−ＮＫ  ＰＥ、及びＣＤ１９  ＦＩＴＣ。ＦＩＴＣ及びＰＥで標識した２つの抗体は、互いに排他的な細胞型を染色した。この試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを用いて、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアにより分析した。
（２）血液学的分析
試験の説明：アボット社のＣｅｌｌ−Ｄｙｎ  ３５００Ｒ（自動血液分析器）による血液試験を行った。その特徴の一部には、５つの部分からなる白血球の示差が含まれる。患者のレポートは全部で２２を超えるパラメータを網羅することができる。
結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均総白血球数及びリンパ球の絶対数の減少を示した。
ＦＡＣＳ分析により、その(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、（−／−）マウスがナチュラルキラー細胞の平均割合の減少を示すことが判明した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／５／８
要約すると、血液学的分析及びＦＡＣＳの結果により、ホモ変異体マウスは、特に白血球の総数とリンパ球の絶対数が減少するという点で、免疫系に障害を有することが示された。更に、ナチュラルキラー細胞の平均割合の低下も、ＰＲＯ２３６ポリペプチドをコードするＤＮＡ３５５９９−１１６８遺伝子のノックアウトに関連するネガティブな表現型を示すものである。ナチュラルキラー細胞は、ウイルス免疫及び腫瘍に対する防御に関係しているので、ウイルス性感染症に対する防御の第一線である。ナチュラルキラー細胞又はＮＫ細胞は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害性のエフェクターとして機能し、前もって免疫化又は活性化することなく特定のリンパ性腫瘍細胞系をインビボで殺傷する能力により同定されている。しかしながら、宿主防御におけるその既知の機能は、複数の細胞内病原体、特にヘルペスウイルスによる感染の早期に働く。従って、ＰＲＯ２３６ポリペプチド及びそのアゴニストは、健常な免疫系に重要であり、免疫系を、特にウイルス性感染に対して刺激するのに有用であると思われる。
【０２９８】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学：骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
マイクロＣＴ：（−／−）マウスは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、５番目の腰椎における骨測定値の減少（椎骨の骨梁の量及び厚みの平均値の減少）を示した。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、骨量の減少、骨密度の減少及び場合によっては骨折に繋がる脆弱性を特徴とする、骨粗鬆症に類似の有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。従って、Ｐ｝ＲＯ２３６ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨恒常性維持に関与していると考えられる。加えて、ＰＲＯ２３６又はそのコード化遺伝子は、骨治癒に有用であると思われるか、或いは関節炎又は骨粗鬆症の治療に有用だと思われる。一方、ＰＲＯ２３６に対するアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、骨代謝異常に関連する炎症性疾患、例えば関節炎、骨粗鬆症、及び骨減少症を含む異常な又は病理学的骨障害を引き起こすと思われる。
【０２９９】
（ｄ）表現型分析：代謝−血液化学／耐糖性
代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、血糖測定を含む。ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、マウスの血液化学試験を行った。代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、インスリン感受性及び糖代謝の変化を測定する耐糖試験を含む。異常耐糖試験の結果は、以下の障害又は状態を示すことができるが、示唆されるのはそれらに限定されない：１型及び２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患及び／又は肥満。
手順：このアッセイでは、２の野生型マウス及び４のホモ接合体からなるコホートを用いた。耐糖試験は哺乳動物における糖恒常性の欠失を定義するための標準法である。対応試験はＬｉｆｅｓｃａｎ社のグルコメーターを用いて実行した。動物に対し、２ｇ／ｋｇでＤ−グルコースの２０％溶液を腹腔内に注入し、注入後０、３０、６０及び９０分後に血糖値を測定した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
結果：
耐糖試験の間、（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、耐糖性の不全を示した。
以上の結果から、（−／−）マウスが、性別が一致するその(＋／＋)同腹仔と比較した場合に、３つの測定時点の全てにおいて、正常な空腹時血糖の存在下で耐糖性の低下を示すことが判明した。つまり、ノックアウトマウスは、糖恒常性の不全の表現パターンを示した。この観察結果から、ＰＲＯ２３６ポリペプチド（又はそのアゴニスト）又はそのコード化遺伝子は、糖恒常性及び／又は様々な循環器疾患の治療（糖尿病の治療を含む）に有用であると思われる。
【０３００】
３５．５  ＤＮＡ３５６３８−１１４１（ＵＮＱ２１９）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２４５ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３５６３８−１１４１(ＵＮＱ２１９)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２３８４４又はムスムスクルスＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ１１１０００２Ｎ２３遺伝子（１１１０００２Ｎ２３Ｒｉｋ）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＪＩ５９又は血管内皮接合部関連分子（接合部接着分子−３）（２４１００３０Ｇ２１ＲＩＫタンパク質）ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２１２１９又は寄託番号：ＮＭ＿０２１２１９  ＮＩＤ：ｇｉ  ２１７０４２８４参照番号ＮＭ＿０２１２１９．２  ホモサピエンス接合部接着分子２（ＪＡＭ２）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｐ５７０８７又は寄託番号：Ｐ５７０８７  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．接合部接着分子２前駆体（血管内皮接合部関連分子）（ＶＥ−ＪＡＭ）ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
破壊されたマウス遺伝子は、Ｊａｍ２（接合部接着分子２）、ヒトＪＡＭ２のオルソログである。別名は、ＶＥＪＡＭ、ＶＥ−ＪＡＭ、ＪＡＭ−２、Ｊｃａｍ２、Ｃ２１又はｆ４３、染色体２１オープンリーディングフレーム４３、血管内皮接合部関連分子、及び接合部細胞接着分子２等である。
ＪＡＭ２はＩｇスーパーファミリーのメンバーであり、膜係留細胞外タンパク質である。ＪＡＭ２は特に、リンパ性内皮細胞の接合部、リンパ節及びパイエル板内部の高内皮細静脈に局在化している（Johnson-Leger等、Blood, 100(7):2479-86(2002)）。ＪＡＭ２は、α４−β１インテグリンとＪＡＭ３との相互作用を介してＴ細胞、ＮＫ細胞及び樹状細胞に結合する（Liang等、J Immunol, 168(4):1618-26 (2002)）。ＪＡＭ２が、密着接合の形成、経内皮及びリンパ球移動、及び内皮組織の細胞極性の確立において中心的役割を果たしていることは明らかである（Ebnet等、J Cell Sci, 116(Pt 19):3879-91 (2003), Aurrand-Lions等、Cells Tissues Organs, 172(3):152-60(2002)）。
遺伝学情報：
wt        het      hom    合計
観察値      18        32      22      72
予想値      18        36      18      72
カイ二乗 = 1.33  有意性=0.51342  (hom/n) = 0.31  平均産仔数 = 7
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン３と４の間にレトロウイルスを挿入した（寄託番号：ＮＭ＿０２３８４４．）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞の、脂肪を除くすべてにおいて検出された。
ＲＴ−ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｆ−５８）には転写が無いことが判明した。
【０３０１】
３５．５．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３５６３８−１１４１(ＵＮＱ２１９)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒト接合部接着分子２（ＪＡＭ２）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、不安関連応答が増加した。加えて、変異（−／−）マウスは、その(＋／＋)野生型同腹仔と比較して、卵白アルブミン応答の減少を示した。また、（−／−）マウスは、網膜動脈のねじれの増大に関連する眼科的異常を示した。ＲＴ−ＰＣＲで転写は見られなかった。
【０３０２】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０３０３】
以下の試験を行った。
卵白アルブミン抗原投与：
手順：本アッセイは、７の野生型及び８のホモ接合体に対して行った。ニワトリの卵白アルブミン（ＯＶＡ）はＴ細胞依存性の抗原であり、マウスにおける抗原特異性の免疫応答の研究に広く用いられるモデルタンパク質である。ＯＶＡは非毒性且つ不活性であり、従って免疫応答が誘発されない場合も動物に害を与えない。ＯＶＡに対するマウスの免疫応答の特徴は既に大部分が明らかになっており、Ｔ細胞の応答を誘発する免疫優性ペプチドが同定されている。抗ＯＶＡ抗体は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＺＡ）を用いて免疫化の８〜１０日後に検出可能であり、抗体の異なるアイソタイプの決定により、遺伝子改変マウスに応答の不足を招く複雑なプロセスについて新しい情報が得られる。
上記のように、このプロトコルでは、抗原特異性の免疫応答を上昇させるマウスの能力を評価する。動物に対し、フロイント完全アジュバンド内で乳化させた５０ｍｇのニワトリ卵白アルブミンを腹腔内注入し、１４日後に抗卵白アルブミン抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２サブクラス）の血清力価を測定した。血清試料に含まれるＯＶＡ特異性抗体の量は、９６ウェル試料プレートをスキャンする器具によって生成された吸光度（ＯＤ）の値に比例していた。希釈の度合いを少しずつ変えた血清試料の各組についてデータを収集した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ８／４／９
本抗原投与の結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同復仔及び背景的平均と比較して、卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少を示した。つまり、これらのノックアウトマウスは、ＯＶＡ特異性抗体の、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原に対する応答を誘発する能力の減少を示した。
要約すると、卵白アルブミン抗原の研究によって、ＰＲＯ２４５ポリペプチドをコードする遺伝子を欠くノックアウトマウスが、その野生型同復仔と比較して、免疫学的異常を示すことが証明された。特に、変異マウスは、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原を投与したとき、免疫学的応答を誘発する能力の低下を示した。従って、ＰＲＯ２４５ポリペプチド又はそのアゴニストは、免疫系（例えばＴ細胞の増殖）の刺激に有用であり、この作用は、白血病及び他の種類の癌、並びにＡＩＤＳ患者等の免疫不全患者に効果的である場合に使用できると思われる。従って、ＰＲＯ２４５ポリペプチドのヒンヒビター（アンタゴニスト）は、免疫応答の抑制に有用であり、よって、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合の有害な免疫応答を抑制するための有益な候補である。
【０３０４】
（ｃ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、分析は、ここでは、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏及びは感覚器障害を含む神経障害及び精神障害の治療のためのインビボで有効とされた標的を同定することに集中させた。神経障害には「不安障害」と定義される範疇が含まれ、これには、限定されるものではないが、軽度〜中程度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会恐怖症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害が含まれる。加えて、不安障害は、限定しないが、以下の種類を含む人格障害に適用することもできる：偏執性、反社会性、回避性行動、境界線人格障害、依存症、演技性、自己愛性、強迫性、分裂性、及び統合失調型性格。
手順：
行動スクリーニングを４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスからなるコホートに対して実施した。全ての行動試験は、生存性の低下により試験の時期を早めなければならない場合を除き、１２週齢と１６週齢の間で行った。これらの試験は不安、活動レベル及び探索を測定するためのオープンフィールド試験を含んでいた。
オープンフィールド試験：
既知の薬物の幾つかの標的はオープンフィールド試験で表現型を示した。これらにはセラトニントランスポーター、ドーパミントランスポーター（Giros等,  Nature. 1996 Feb 15;379(6566):606-12)、及びＧＡＢＡレセプター(Homanics等, Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Apr 15;94(8):4143-8）のノックアウトを含む。自動化されたオープンフィールドアッセイをカスタマイズして感情状態に関する変化及び学習に関する探索パターンに関する変化を扱った。先ず、フィールド（４０Ｘ４０ｃｍ）をマウスに対して比較的大きくなるように選択し、よって探索に関連する自発運動の変化を取り上げた。また、床には、探索に特に関連した活動である、鼻を突っ込むことを可能にする４つの穴がある。幾つかのファクターがこの試験に関連した感情状態を高めるためにまた設計された。オープンフィールド試験はマウスが試験される最初の実験的手順であり、なされる測定は被験体のチャンバーとの最初の経験であった。また、オープンフィールドは明るく照らした。これらのファクターの全てが新しくオープンな空間に関連した自然の不安を高める。ついで、探索活動のパターンと度合い、特に中心からの全移動距離比は、不安又は鬱に対する罹りやすさに関する変化を識別することができる。３つの異なったレベルでの赤外線ビームを用いた大きな活動領域（４０ｃｍｘ４０ｃｍ、AccuScan InstrumentsのVersaMax動物活動性モニターシステム）を用いて、立ち上がり、穴への鼻の突っ込み、及び自発運動を記録した。動物を中心に置き、その活動を２０分間測定した。この試験のデータを４分間隔で５回分析した。移動した全距離（ｃｍ）、垂直移動数（立ち上がり）、穴突っ込み数、及び中心からの全移動距離比を記録した。
マウスが新しい環境に対して正常な馴化応答を示す傾向を、５回の時間間隔にわたるその水平自発運動の全変化を決定することにより評価した。経時的な活動性の変化のこの算定傾きは、絶対値よりも正規化された全移動距離を使用して決定した。傾きは５回の時間間隔のそれぞれにおける正規化された活動を通しての回帰直線から決定した。正常な習慣作用は負の傾き値によって表される。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ５／４／８
結果：
（−／−）マウスは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔と比較した場合、オープンフィールド試験の間に、中心領域においてメジアン合計時間の減少を示した。これは、変異型における不安様応答の増加を示している。上述のように、オープンフィールド試験の間に、顕著な差異が観察された。（−／−）マウスは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔と比較した場合、中心領域においてメジアン合計時間の減少を示した。この種の行動は、不安様応答の増加と一致している。よって、ノックアウトマウスは、軽度から中度の不安、全身の医学的状態による不安及び／または二極性障害；活動亢進；感覚障害；強迫性障害、精神分裂症又は偏執性性格に関連する不安関連疾患と一致する表現型を示した。よって、ＰＲＯ２４５ポリペプチド又はそのアゴニストは、そのような神経学的障害の治療又は不安疾患に伴う徴候の改善に有用であろう。
【０３０５】
（ｄ）心血管表現型分析
心血管生物学の領域では、表現型試験を実施して、循環器、内皮又は血管新生疾患を治療するための潜在的標的を同定した。このような表現型試験は、網膜動静脈率（Ａ／Ｖ率）を決定することにより様々な眼の異常にフラグを立てるための眼底撮影法及び血管造影法である。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧による血管疾患に関連したもののような全身性の疾患又は障害(及び高血圧に起因する任意の病気、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病、又は眼科的疾患に対応する他の眼病の徴候を表している。このような眼の異常には、限定されるものではないが、次のものが含まれうる：網膜の異常は、網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞症又は閉塞；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、全脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスである。
手順：本アッセイでは、４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスからなるコホートを試験した。Hawes及び共著者により修正されたKowa Genesis小動物用眼底カメラを使用し、意識のある動物について眼底撮影を行った(Hawes等, 1999 Molecular Vision 1999; 5:22)。フルオレセインの腹膜内注射により、各検査の蛍光アルゴリズム及び直射光眼底画像の獲得が可能になった。直接的な眼科的変化に加えて、この試験では、糖尿病及びアテローム性動脈硬化症又は他の網膜異常等の全身性疾患に伴う網膜変化を検出することができる。正常光の下での眼底写真が提供された。血管造影写真により、眼の動脈及び静脈の検査が可能になった。更に、眼の、静脈と動脈との比(Ａ／Ｖ)が決定された。
上述したプロトコルを使用し、産生したＦ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体の変異子孫について眼科的分析を実施した。具体的には、Ａ／Ｖ比を測定し、Kowa COMIT＋ソフトウェアを用い、眼底画像に従って算出した。この試験は、散大した瞳孔を通してカラー写真が撮影されるものであり：画像が多くの病気の検出及び分類分けに役立つ。静脈に対する動脈の比(Ａ／Ｖ)は、静脈の直径に対する動脈の直径(血管の分岐前に測定)の比である。多くの病気、すなわち糖尿病、循環器疾患、乳頭浮腫、視神経萎縮又は他の眼の異常、例えば網膜変性症(網膜色素変性症としても知られている)、又は網膜形成不全、視覚障害又は失明がこの比に影響を及ぼしているであろう。よって、野生型(＋／＋)同腹仔と比較し、ホモ接合体（−／−）及びヘテロ接合体(＋／−)の変異子孫において、静脈に対する動脈の比が増加していた表現型観察結果は、このような病態を示している。
結果：
顕微鏡による病理観察により、分析した（−／−）マウスで網膜動脈のねじれが増大したことが示された。（−／−）変異マウスに角膜炎及び潰瘍が見つかった。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ０／１／４
要約すると、この研究において（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔と比較して、網膜血管の弱力化及び場合によっては網膜変性症を引き起こす眼科的異常を示した。つまり、ＰＲＯ２４５ポリペプチドをコードするＤＮＡ３５６３８−１１４１と同定された遺伝子をノックアウトすることにより、ホモ接合体の変異子孫が、網膜動脈の異常に関連した表現型を示す。このような検出された網膜変化は、高血圧による血管疾患に関連する循環器系の全身性の病気又は疾患(及び高血圧を引き起こすあらゆる疾患、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病又は網膜変性症等の眼科的疾患に対応する他の眼病に最も一般的に関連している。よって、ＰＲＯ２４５をコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似した病理的網膜変化を生じさせる一方、アゴニストは高血圧、アテローム性動脈硬化症、又は網膜変性症と、この症状に関連した疾患を含む他の眼科的疾患(上述したもの)の治療における治療剤として有用であろう。
【０３０６】
３５．６  ＤＮＡ３５６３９−１１７２（ＵＮＱ２２０）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２４６ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３５６３９−１１７２(ＵＮＱ２２０)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２７１０２又は寄託番号：ＮＭ＿０２７１０２  ＮＩＤ：２２０９４９９４ムスムスクルスムスムスクルス内皮細胞選択性接着分子；タンパク質参照番号：Ｑ９２５Ｆ２又は寄託番号：Ｑ９２５Ｆ２  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．内皮細胞選択性接着分子．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１３８９６１又は寄託番号：ＮＭ＿１３８９６１  ＮＩＤ：内皮細胞選択性接着分子に類似の２０４５２４６３  ホモサピエンスホモサピエンス；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９６ＡＰ７又は寄託番号：Ｑ９６ＡＰ７  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．仮想タンパク質ＰＬＡＣＥ１０００４５６に対応する。
破壊されたマウス遺伝子は、Ｅｓａｍ１（内皮細胞特異性接着分子）、ヒトＥＳＡＭのオルソログである。別名は、Ｗ１１７ｍ、２３１０００８Ｄ０５Ｒｉｋ、及びＨＵＥＬ（Ｃ４ｏｒｆ１）相互作用たんぱく質等である。
ＥＳＡＭは、内皮細胞上の密着結合に発現される免疫グロブリンレセプターファミリーの接着分子である。ＥＳＡＭは、内部での内皮細胞接着に参画していると考えられる（Hirata等、J Biol Chem. 276(19):16223-31(2001); Nasdala等、J Biol Chem, 277(18):16294-303 (2002)）。Ishida及び共同研究者によるJ biol Chem. 278(36):34598-604 (2003)により、ＥＳＡＭホモ接合ヌルマウスは同じ野生型マウスより顕著に小さいことが示された。Ishida及び共同研究者は、マトリゲルプラグアッセイにより、野生型マウスよりＥＳＡＭホモ接合ヌルマウスにおける血管新生が顕著に遅いことも示した。彼等は、ＥＳＡＭが腫瘍成長などの病理的な血管新生プロセスに参画していると結論付けている。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      18        26      15      59
予想値      14.75    29.5    14.75  59
カイ二乗 = 1.14  有意性=0.56677  (hom/n) = 0.25  平均産仔数 = 7
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン２と３の間のイントロンにレトロウイルスを挿入した（Ｉ寄託番号ＮＭ＿０２７１０２．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞の、脂肪を除くすべてにおいて検出された。
ＲＴ−ＰＣＲ分析の結果、分析した（−／−）マウス（Ｍ−１５６）に転写はなかった。インバースＰＣＲにより、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０３０７】
３５．６．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３５６３９−１１７２(ＵＮＱ２２０)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒト内皮細胞特異性接着分子（ＥＳＡＭ）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、平均血清グルコースの値が上昇し、耐糖性が減少又は欠損した。また、（−／−）マウスでは心拍数が減少した（１の標準偏差が背景的平均を下回った）。ＲＴ−ＰＣＲで転写は見られなかった。
【０３０８】
（ｂ）表現型分析：代謝−血液化学／耐糖性
代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、血糖測定を含む。ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、マウスの血液化学試験を行った。代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、インスリン感受性及び糖代謝の変化を測定する耐糖試験を含む。異常耐糖試験の結果は、以下の障害又は状態を示すことができるが、示唆されるのはそれらに限定されない：１型及び２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患及び／又は肥満。
手順：このアッセイでは、２の野生型マウス及び４のホモ接合体からなるコホートを用いた。耐糖試験は哺乳動物における糖恒常性の欠失を定義するための標準法である。対応試験はＬｉｆｅｓｃａｎ社のグルコメーターを用いて実行した。動物に対し、２ｇ／ｋｇでＤ−グルコースの２０％溶液を腹腔内に注入し、注入後０、３０、６０及び９０分後に血糖値を測定した。
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均血清グルコースレベルの増加を示した[二（２）の標準偏差（ＳＤ）が背景的平均を上回った]。加えて、（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、耐糖性の不全を示した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
以上の結果から、（−／−）マウスが、性別が一致するその(＋／＋)同腹仔と比較した場合に、３つの測定時点の全てにおいて、正常な空腹時血糖の存在下で、耐糖性の低下を示すことが判明した。つまり、ノックアウトマウスは、糖恒常性の不全の表現パターンを示した。この観察結果から、ＰＲＯ２４６ポリペプチド（又はそのアゴニスト）又はそのコード化遺伝子は、糖恒常性及び／又は様々な循環器疾患の治療（糖尿病の治療を含む）に有用であると思われる。
【０３０９】
３５．７  ＤＮＡ３５９１８−１１７４（ＵＮＱ２２５）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２５８ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３５９１８−１１７４(ＵＮＱ２２５)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０５３１９９又はムスムスクルス免疫グロブリンスーパーファミリー、メンバー４Ｂ（Ｉｇｓｆ４ｂ）；タンパク質参照番号：Ｑ９９Ｎ２８又は寄託番号：Ｑ９９Ｎ２８  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．ネクチン様タンパク質１．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２１１８９又はホモサピエンス免疫グロブリンスーパーファミリー、メンバー４Ｂ（ＩＧＳＦ４Ｂ）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９ＵＪＰ１又は寄託番号：Ｑ９ＵＪＰ１  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．ＢＫ１３４Ｐ２２．１（マウスイムノスーパーファミリータンパク質ＢＬ２に類似の新規タンパク質）（ネクチン様タンパク質１）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｉｇｓｆ４ｂ（免疫グロブリンスーパーファミリー、メンバー４Ｂ）、ヒトＩＧＳＦ４Ｂのオルソログである。別名は、ＢＩｇＲ、Ｎｅｃｌ１、Ｔｓｌｌ１  ＦＬＪ１０６９８、ネクチン様１、ＴＳＬＣ１様１、ネクチン様タンパク質、及び脳免疫グロブリンレセプター前駆体等である。
ＩＧＳＦ４Ｂは、細胞接着分子として機能すると思われる神経原性細胞に主に発現する１型原形質膜タンパク質である。このタンパク質は、シグナルペプチド、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｐｆａｍ寄託番号ＰＦ０００４７）、膜貫通領域、及び短い細胞質Ｃ末端を含む。ＩＧＳＦ４Ｂの構造はＴＳＬＣ１（ヒト非小細胞肺癌腫の腫瘍抑制因子）に類似しており、ＩＧＳＦ４Ｂの発現は、多くのグリオーマ細胞系において欠損しているか、顕著に減少している。これは、ＩＧＳＦ４Ｂが腫瘍抑制因子としても機能することを示唆している（Fukuhara等、Oncogene, 20(38):5401-7 (2001); Shingai等、J Biol Chem. 278(37):35421-7 (2003); Fukami等、Gene, 323:11-8 (2003)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      17        30      22      69
予想値      17.25    34.5    17.25  69
カイ二乗 = 1.90  有意性=0.38702  (hom/n) = 0.32  平均産仔数 = 7
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０５３１９９．２）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞の、脳及び眼を除くすべてにおいて検出された。
サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０３１０】
３５．７．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３５９１８−１１７４(ＵＮＱ２２５)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒト免疫グロブリンスーパーファミリー、メンバー４Ｂ（ＩＧＳＦ４Ｂ）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、多数の免疫学的異常が発生した。また、（−／−）マウスの運動協調性が亢進した。しかしながら、概日リズム試験は、（−／−）マウスの異所運動の減少を示した。加えて、変異（−／−）マウスは、平均血清コレステロール値及び平均血清グルコース値の増加を示した。マイクロＣＴ観察では、５番目の腰椎の骨測定値の減少が示された。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０３１１】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０３１２】
以下の試験を行った。
血液学的分析
試験の説明：アボット社のＣｅｌｌ−Ｄｙｎ  ３５００Ｒ（自動血液分析器）による血液試験を行った。その特徴の一部には、５つの部分からなる白血球の示差が含まれる。患者のレポートは全部で２２を超えるパラメータを網羅することができる。
結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、総白血球数、リンパ球の絶対数、及び単球の絶対数の減少を示した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／４／８
蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析
手順：
ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターを含む抹消血の免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を行い、ナチュラルキラー細胞の白血球マーカー及びｐａｎＮＫとしてのＴリンパ球、Ｂリンパ球のＣＤ１９、ＣＤ４５を評価した。ＦＡＣＳ分析は２の野生型マウス及び６のホモ接合マウスに対して行い、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から得られた細胞を含めた。
これらの試験では、分析する細胞を胸腺、抹消血、脾臓、骨髄及びリンパ節から単離した。フローサイトメトリーを設計し、単核細胞集団中のＣＤ４及びＣＤ８ポジティブＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球の相対的な割合を決定した。Ｂｅｃｔｏｎ−ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのFACSCalibur  ３−レーサ゛ーＦＡＣＳマシンを用いて免疫状態を評価した。表現型分析及びスクリーニングのために、このマシンは、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比に加えて、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ８＋／ＣＤ４−、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球の数を記録する。６つの系列特異性抗体の組を用いて各マウスの溶解させた抹消血の単一試料を染色することにより、単核細胞のプロファイルを得た：ＣＤ４５  ＰｅｒＣＰ、抗ＴＣＲｂ  ＡＰＣ、ＣＤ４  ＰＥ、ＣＤ８  ＦＩＴＣ、ｐａｎ−ＮＫ  ＰＥ、及びＣＤ１９  ＦＩＴＣ。ＦＩＴＣ及びＰＥで標識した２つの抗体は、互いに排他的な細胞型を染色した。この試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを用いて、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアにより分析した。
結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、ＣＤ４細胞の平均割合の増加と、Ｂ細胞の平均割合の減少を示した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／４／８
卵白アルブミン抗原投与：
手順：本アッセイは、７の野生型及び８のホモ接合体に対して行った。ニワトリの卵白アルブミン（ＯＶＡ）はＴ細胞依存性の抗原であり、マウスにおける抗原特異性の免疫応答の研究に広く用いられるモデルタンパク質である。ＯＶＡは非毒性且つ不活性であり、従って免疫応答が誘発されない場合も動物に害を与えない。ＯＶＡに対するマウスの免疫応答の特徴は既に大部分が明らかになっており、Ｔ細胞の応答を誘発する免疫優性ペプチドが同定されている。抗ＯＶＡ抗体は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＺＡ）を用いて免疫化の８〜１０日後に検出可能であり、抗体の異なるアイソタイプの決定により、遺伝子改変マウスに応答の不足を招く複雑なプロセスについて新しい情報が得られる。
上記のように、このプロトコルでは、抗原特異性の免疫応答を増加させるマウスの能力を評価する。動物に対し、フロイント完全アジュバンド内で乳化させた５０ｍｇのニワトリ卵白アルブミンを腹腔内注入し、１４日後に抗卵白アルブミン抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２サブクラス）の血清力価を測定した。血清試料に含まれるＯＶＡ特異性抗体の量は、９６ウェル試料プレートをスキャンする器具によって生成された吸光度（ＯＤ）の値に比例していた。希釈の度合いを少しずつ変えた血清試料の各組についてデータを収集した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／４／８
本抗原投与の結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同復仔と比較して、卵白アルブミン抗原投与に対する平均血清ＩｇＧ２ａ応答の減少（実質的にはゼロ）を示した。つまり、これらのノックアウトマウスは、ＯＶＡ特異性抗体の、Ｔ細胞依存性ＯＶＡ抗原に対する応答を誘発する能力の低下を、おそらくはＴｈ細胞の欠損により示した。よって、ＰＲＯ２５８ポリペプチド又はそのアゴニストは、免疫系を刺激すると思われ、この作用が、白血病、他の種類の癌、並びにＡＩＤＳ患者等の免疫不全患者のような個体に効果的である場合に使用できるであろう。従って、ＰＲＯ２５８ポリペプチドの抑制因子又はアンタゴニストは、免疫応答の抑制に参画していると思われ、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合の有害な免疫応答を抑制するための有益な候補であると考えられる。
免疫学的観察の全体的要約
要約すると、卵白アルブミン抗原投与の研究、血液学及びＦＡＣＳの結果は、ホモ接合変異マウスが免疫系に障害を有し、特に、総白血球数及びリンパ球及び単球の絶対数が減少しており、並びにＯＶＡ特異性抗体応答を誘発する能力が無い。これらの研究は全て、ＰＲＯ２５８ポリペプチドをコードするＤＮＡ３５９１８−１１７４遺伝子のノックアウトに伴うネガティブな表現型を示すものである。よって、ＰＲＯ２５８ポリペプチド及びそのアンタゴニストは、健常な免疫系に重要であり、免疫系の防護機能の刺激又は誘発に有用であると思われる。
【０３１３】
（ｃ）表現型分析：ＣＮＳ／神経学
神経学の分野において、分析は、ここでは、鬱病、全般性不安障害、注意欠陥多動性障害、強迫性障害、統合失調症、認知障害、痛覚過敏及びは感覚器障害を含む神経障害及び精神障害の治療のためのインビボで有効とされた標的を同定することに集中させた。神経障害には「不安障害」と定義される範疇が含まれ、これには、限定されるものではないが、軽度〜中程度の不安、全身の医学的状態による不安障害、別段特定しない不安障害、全般性不安障害、パニック発作、広場恐怖症を示すパニック障害、広場恐怖症のないパニック障害、心的外傷後ストレス症候群、社会恐怖症、特定の恐怖症、物質誘発性不安障害、急性アルコール禁断、強迫性障害、広場恐怖症、双極性障害Ｉ又はＩＩ、別段特定しない双極性障害、循環気質者疾患、うつ病性障害、大うつ病性障害、気分障害、物質誘発性気分障害が含まれる。加えて、不安障害は、限定しないが、以下の種類を含む人格障害に適用することもできる：偏執性、反社会性、回避性行動、境界線人格障害、依存症、演技性、自己愛性、強迫性、分裂性、及び統合失調型性格。
手順：
行動スクリーニングを４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスからなるコホートに対して実施した。全ての行動試験は、生存性の低下により試験の時期を早めなければならない限り、１２週齢と１６週齢の間で行った。これらの試験は不安、活動レベル及び探索を測定するためのオープンフィールド試験を含んでいた。
概日性試験の説明：
雌性マウスを、４８．２ｃｍ×２６．５ｃｍのホームケージに試験初日の午後４時に個別に収容し、必要に応じて食物及び水を与えた。動物は、午前７時に照明を付け午後７時に照明を切るという１２時間の明期／暗期の周期下に置かれた。システムソフトウェアにより、歩行運動に自動的に分裂する光線遮断を用いて、動物の運動によって生じた光線中断の数を記録する。活動は、３日間に亘る試験において、１時間間隔で６０回記録した。生じたデータは、３日間に亘る試験期間の、各時間に記録されたメジアン活動レベル（概日リズム）、及び各明期／暗期のメジアン総活動（自発運動活性）によって表した。
結果：
性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、（−／−）マウスは、ホームケージ活動試験の１時間の習慣期間の間に歩行運動数の減少を示した。この結果、同腹仔コントロールと比較して、暗期に著しい減少があったことから、概日リズムの抑制が示された。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ６／４／１２
インバーテッドスクリーン試験
行動スクリーニングを４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスからなるコホートに対して実施した。全ての行動試験は、生存性の低下により試験の時期を早めなければならない限り、１２週齢と１６週齢の間で行った。これらの試験は不安、活動レベル及び探索を測定するためのオープンフィールド試験を含んでいた。
インバーテッドスクリーン試験データ
反転させたスクリーンを使用して、運動強度／協調の測定を行った。未熟なマウスを、金属製のロッド上に水平に搭載した正方形（７．５ｃｍｘ７．５ｃｍ）のワイヤースクリーンの上に個別に収容した。次いでロッドを１８０度回転させ、マウスをスクリーンの下にした。１分間の試験セッションの間に、以下のように、落下、登らない、及び登るという行動応答が記録された：
遺伝子型            落下（％）          登る（％）
＋／＋（ｎ＝４）      ０／４（０）      ０／４（０）
＋／−（ｎ＝４）      ０／４（０）      ４／４（１００）＊
−／−（ｎ＝８）      １／８（１３）    ７／８（８８）＊
＊コード化は顕著な差異を示した。
（−／−）マウス又は（＋／−）マウスと(＋／＋)マウスの間に、落下反応について５０％ポイントの差異があるとき、運動強度の欠損は明らかであった。０／８又は１／８の登らない（−／−）又は（＋／−）マウスは、運動協調性の欠損を示した。７／８又は８／８の登った（−／−）又は（＋／−）マウスは、運動協調性の亢進を示した。
結果：
インバーテッドスクリーン試験は、基本的な感覚性及び運動性観察内容を測定するために設計されたものである。インバーテッドスクリーン試験において、７／８の（−／−）マウスと、０／４の(＋／＋)マウスがスクリーンを登ったことから、（−／−）マウスに運動協調性の亢進が観察された。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ６／４／１２
【０３１４】
（ｄ）表現型分析：心臓病学
心血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症、例えば高コレステロール(高コレステロール血症)及び血清トリグリセリドの上昇(高トリグリセリド血症)、糖尿病、及び／又は肥満の治療のための標的をここで同定した。表現型試験には、血清コレステロール及びトリグリセリドの測定が含まれる。
血中脂質
手順：
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。高コレステロールレベル及びトリグリセリド血中レベルの上昇は、循環器疾患及び／又は糖尿病の進行において認識される危険因子である。血中脂質を測定することで、血中脂質レベルを調節する生物学的スイッチの発見が容易になる。血中脂質レベルを上昇させる因子の抑制は、循環器疾患の危険の削減に有用であり得る。この血液化学試験では、COBAS Integra400(mfr：Roche)を使用してコレステロール測定値を記録した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
結果：
（１）性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、（−／−）マウスは平均血清コレステロールレベルの増加を示した。平均血清コレステロールレベルは正常範囲を有意に超えていた。（２）（−／−）マウスはまた、平均血清グルコースレベルの有意な上昇を示した。耐糖性試験の間、（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均空腹時血清グルコースレベルの上昇を示した。
要約すると、これらのノックアウト変異マウスは、脂質代謝に関してネガティブな表現型を示した。つまり、ＰＲＯ２５８遺伝子を欠く変異マウスは、循環器疾患の治療のモデルとして機能できる。ＰＲＯ２５８ポリペプチド、そのアゴニスト又はＰＲＯ２５８のコード化遺伝子は、血中脂質の調整、特に正常コレステロール代謝の維持に有用であると思われる。よって、このような薬剤は、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、及び／又は肥満等の、脂質代謝異常に関連する循環器病の治療に有用である。
同時に、ノックアウトマウスは、空腹時血清グルコースレベルの上昇を伴うグルコース恒常性の欠損という表現パターンを示した。これは、糖尿病又は前糖尿病性状態を示すものである。これらの結果に基づき、ＰＲＯ２５８（又はそのアゴニスト）又はそのコード化遺伝子は、グルコース代謝不全及び／又は糖尿病の治療に有用である。
【０３１５】
（ｅ）骨代謝及び身体診断学：骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
マイクロＣＴ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、５番目の腰椎における骨測定値の減少（平均腰椎骨の容積、数、厚み及び結合密度の減少）が示された。大腿骨の総面積に減少が見られた。加えて、変異（−／−）マウスは、二（２）の標準偏差が平均を下回る心拍数の減少を示した。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、密度の減少と場合によっては骨折に繋がる脆弱性を伴う骨量減少を特徴とする骨粗鬆症に似た有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。よって、ＰＲＯ２５８ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨恒常性の維持に機能すると考えられる。加えて、ＰＲＯ２５８又はそのコード化遺伝子は、骨治癒に有用であるか、骨関節症又は骨粗鬆症の治療に有用であると考えられる。一方、ＰＲＯ２５８のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、関節炎、骨関節症及び骨粗鬆症等の異常骨代謝に関連する炎症性疾患を含む異常又は病的な骨障害を招くと考えられる。
【０３１６】
３５．８  ＤＮＡ３９９６９−１１８５（ＵＮＱ２５０）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ２８７ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ３９９６９−１１８５(ＵＮＱ２５０)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２９６２０又は寄託番号：ＮＭ＿０２９６２０  ＮＩＤ：ｇｉ  ２２０９５０１０参照番号ＮＭ＿０２９６２０.１  ムスムスクルスプロコラーゲンＣエンドペプチダーゼエンハンサー２（Ｐｃｏｌｃｅ２）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿０８３８９６又は寄託番号ＮＰ＿０８３８９６  ＮＩＤ：ｇｉ  ２２０９５０１１参照番号ＮＰ＿０８３８９６．１（ＮＭ＿０２９６２０）プロコラーゲンＣエンドペプチダーゼエンハンサー２（ムスムスクルス）；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１３３６３又は寄託番号：ＮＭ＿０１３３６３  ＮＩＤ：ｇｉ  １６９０４３８６参照番号ＮＭ＿０１３３６３．２  ホモサピエンスプロコラーゲンＣエンドペプチダーゼエンハンサー２（ＰＣＯＬＣＥ２）；ヒトタンパク質配列は、参照番号：ＮＰ＿０３７４９５又は寄託番号：ＮＰ＿０３７４９５  ＮＩＤ：ｇｉ  ７０１９４８３参照番号ＮＰ＿０３７４９５．１（ＮＭ＿０１３３６３）プロコラーゲンＣエンドペプチダーゼエンハンサー２（ホモサピエンス）に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｐｃｏｌｃｅ２（プロコラーゲンＣエンドペプチダーゼエンハンサー２）、ヒトＰＣＯＬＣＥ２のオルソログである。別名は、ＰＣＰＥ２等である。
ＰＣＯＬＣＥ２は、分泌された糖タンパク質であり、１型プロコラーゲンのＣ末端に結合し、骨形態形成タンパク質１等のＣプロテイナーゼによるプロコラーゲンの切断を増強する。繊維柱帯網、肺、心臓、脳、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、及び胎盤は、ＰＣＯＬＣＥ２  ｍＲＮＡを発現する；しかしながら、ＰＣＯＬＣＥ２タンパク質は主に繊維柱帯網に検出される。ＰＣＯＬＣＥ２は、発達段階の間、様々な組織における軟骨形成に関与していると思われる（Steiglitz等、J Biol Chem, 277(51):49820-30 (2002); Xu等、Genomics, 66(3):264-73 (2000)）。
遺伝子情報
wt        het      hom    合計
観察値      25        39      18      82
予想値      20.5      41      20.5    82
カイ二乗 = 1.39  有意性=0.49901  (hom/n) = 0.22  平均産仔数 = 8
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン１と２の間のイントロンにレトロウイルスを挿入した（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０２９６２０．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料の、脳、脊髄、眼、胸腺、脾臓、及び肺において検出された。
ＲＴ-ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ−２０１）に転写が見られなかったことが判明した。
【０３１７】
３５．８．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ３９９６９−１１８５(ＵＮＱ２５０)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトプロコラーゲンCエンドペプチダーゼエンハンサー２（ＰＣＯＬＣＥ２）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスは、成長遅延及び骨測定値の減少を示した。変異（−／−）マウスには、尿酸値の上昇と血清リン酸塩レベルの減少も観察された。ＲＴ−ＰＣＲの結果、転写はなかった。
【０３１８】
（ｂ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均体重及び平均体長の減少を示した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：３７／５４／２８
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織容積及び除脂肪体重の減少が示された。これらの変異マウスはまた、平均骨塩量と骨密度の減少を示した。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均椎骨の骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度の減少、並びに平均大腿骨断面積の減少が示された。
分析値  wt／het／hom：４／４／８。
加えて、（−／−）マウスの体脂肪が有意に減少した。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、密度の減少と場合によっては骨折に繋がる脆弱性を伴う骨量減少を特徴とする骨粗鬆症に似た有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。よって、ＰＲＯ２８７ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨恒常性の維持に機能すると考えられる。加えて、ＰＲＯ２８７又はそのコード化遺伝子は、骨治癒に有用であるか、骨関節症又は骨粗鬆症の治療に有用であると考えられる。一方、ＰＲＯ２８７のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、関節炎、骨関節症及び骨粗鬆症等の異常骨代謝に関連する炎症性疾患を含む異常又は病的な骨障害を招くと考えられる。
ＤＥＸＡによって分析した（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔と比較した場合に全組織量及び全体脂肪の顕著な減少と、体重及び体長の減少を特徴とする有意な成長遅延を示した。これらの結果は、骨成長に影響し得る視床下部−下垂体軸に関連する問題に起因すると思われる。これを骨測定値の減少が見られたことと組み合わせると、カヘキシー等の組織消耗状態が示唆される。よって、ＰＲＯ２８７ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨障害の治療に有用であると考えられ、また成長疾患の治療、或いはカヘキシー又は他の組織消耗性疾患の予防に有用であると思われる。
【０３１９】
（ｃ）血液化学−尿酸及び血清リン酸塩のレベル
ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、臨床的設定でマウスの血液化学試験を行った。
結果：
変異（−／−）マウスは、そのコントロール野生型同腹仔と比較して、尿酸値の増加と血清リン酸塩レベルの減少を示した。
【０３２０】
３５．９  ＤＮＡ４０５８７−１２３１（ＵＮＱ２８９）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ３２８ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４０５８７−１２３１(ＵＮＱ２８９)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２３７３４又は寄託番号：ＮＭ＿０２３７３４  ＮＩＤ：１２９６３８０２  ムスムスクルスＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  １２００００９Ｈ１１遺伝子（１２００００９Ｈ１１Ｒｉｋ）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＥＴ６６又は寄託番号：Ｑ９ＥＴ６６  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．システインリッチプロテアーゼインヒビター．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿１５３３７０又はホモサピエンスプロテアーゼインヒビター１６（ＰＩ１６）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ８ＮＢＫ０又は寄託番号：Ｑ８ＮＢＫ０  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．仮想タンパク質ＰＬＡＣＥ１０１０４８２．に対応する。
対象のマウス遺伝子は、仮想分泌タンパク質をコードし、ヒトＰＩ１６（プロテアーゼインヒビター１６）のオルソログである。
ＰＩ１６は、シグナルペプチド、ＳＣＰ様細胞外タンパク質（ＳＣＰ）ドメイン、及び複数の内部反復を含む。ＳＣＰドメインは、多数の異なる種の細胞体タンパク質に見られる。例えば、昆虫の毒液アレルゲン、哺乳動物の精巣特異性タンパク質、及び植物の病変形成に関連するタンパク質（Ｐｆａｍ寄託番号ＰＦ００１８８）が挙げられる。ＰＩ１６は、プロテアーゼインヒビター１５（ＰＩ１５）の相同体であり、更にＳＣＰドメイン及び分泌されたセリンプロテアーゼ（トリプシン）インヒビターとしての機能を含む（Yamakawa等、Biochim Biophys Acta, 1395(2):202-8 (1998)）。ＰＩ１６の機能は実験によって実証されていない。
遺伝子情報：
wt        het      hom    合計
観察値      16        45      22      83
予想値      20.75    41.5    20.75    83
カイ二乗 = 1.46  有意性=0.48243  (hom/n) = 0.27  平均産仔数 = 8
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン２と３の間のイントロンにレトロウイルスを挿入した（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０２３７３４．２）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞において検出された。
ＲＴ−ＰＣＲ分析の結果、分析した（−／−）マウス（Ｍ−９７）に転写が無かったことが判明した。
【０３２１】
３５．９．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４０５８７−１２３１(ＵＮＱ２８９)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトプロテアアーゼインヒビター１６（ＰＩ１６）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、免疫学的表現型が生じた。また、（−／−）マウスの耐糖試験の間に、耐糖性の亢進が観察された。５番目の腰椎の変化も認められた（同腹仔コントロールと比較して測定値が減少した）。ＲＴ−ＰＣＲの結果転写は、無かった。
【０３２２】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０３２３】
以下の試験を行った。
血液学的分析
試験の説明：アボット社のＣｅｌｌ−Ｄｙｎ  ３５００Ｒ（自動血液分析器）による血液試験を行った。その特徴の一部には、５つの部分からなる白血球の示差が含まれる。患者のレポートは全部で２２を超えるパラメータを網羅することができる。
結果：
（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均赤血球分布幅の増大を示した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ９／４／１４
蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析／組織特異性ＦＡＣＳ
手順：
ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターを含む抹消血の免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を行い、ナチュラルキラー細胞の白血球マーカー及びｐａｎＮＫとしてのＴリンパ球、Ｂリンパ球のＣＤ１９、ＣＤ４５を評価した。ＦＡＣＳ分析は２の野生型マウス及び６のホモ接合マウスに対して行い、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から得られた細胞を含めた。
これらの試験では、分析する細胞を胸腺、抹消血、脾臓、骨髄及びリンパ節から単離した。フローサイトメトリーを設計し、単核細胞集団中のＣＤ４及びＣＤ８ポジティブＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球の相対的な割合を決定した。Becton-DickingsonのFACSCalibur  ３−レーザーＦＡＣＳマシンを使用して免疫状態を評価した。表現型分析及びスクリーニングのために、このマシンは、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比に加えて、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ８＋／ＣＤ４−、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球の数を記録する。６つの系列特異性抗体の組を用いて各マウスの溶解させた抹消血の単一試料を染色することにより、単核細胞のプロファイルを得た：ＣＤ４５  ＰｅｒＣＰ、抗ＴＣＲｂ  ＡＰＣ、ＣＤ４  ＰＥ、ＣＤ８  ＦＩＴＣ、ｐａｎ−ＮＫ  ＰＥ、及びＣＤ１９  ＦＩＴＣ。ＦＩＴＣ及びＰＥで標識した２つの抗体は、互いに排他的な細胞型を染色した。この試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを用いて、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアにより分析した。
結果：
組織特異性ＦＡＣＳ：（−／−）マウスは、脾臓及びリンパ節において、ＣＤ２１Ｈｉ  ＣＤ２３Ｍｅｄ  細胞の平均割合の減少を示した。（−／−）マウスの脾臓及びリンパ節では、ＣＤ２５＋細胞の平均割合の増加も観察された。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ９／４／１４
要約すると、ＤＮＡ４０５８７−１２３１（ＰＲＯ３２８ポリペプチドをコードする遺伝子）のノックアウトにより、メモリー細胞のプールを含み、高速免疫応答に参画するＢ細胞−周辺帯Ｂ細胞のサブセットが減少した。従って、ＰＲＯ３２８ポリペプチドのアンタゴニスト又はインヒビターは、同じ表現型を示すことが予想される。ＰＲＯ３２８ポリペプチドは、高速免疫応答への参画に役立つ周辺帯Ｂ細胞の発達又は生成に有用であると思われる。
【０３２４】
（ｃ）表現型分析：代謝−血液化学／耐糖性
代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、血糖測定を含む。ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、マウスの血液化学試験を行った。代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、インスリン感受性及び糖代謝の変化を測定する耐糖試験を含む。異常耐糖試験の結果は、以下の障害又は状態を示すことができるが、示唆されるのはそれらに限定されない：１型及び２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患及び／又は肥満。
手順：このアッセイでは、２の野生型マウス及び４のホモ接合体からなるコホートを用いた。耐糖試験は哺乳動物における糖恒常性の欠失を定義するための標準法である。対応試験はＬｉｆｅｓｃａｎ社のグルコメーターを用いて実行した。動物に対し、２ｇ／ｋｇでＤ−グルコースの２０％溶液を腹腔内に注入し、注入後０、３０、６０及び９０分後に血糖値を測定した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、耐糖性の亢進を示した。つまり、ノックアウトマウスは、糖恒常性の不全とは反対の表現パターンを示し、よって、ＰＲＯ３２８のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、糖恒常性の不全及び異常な糖代謝に関連する疾患の治療に有用であると思われる。
【０３２５】
（ｄ）骨代謝及び身体診断学：骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織容積及び全体脂肪の減少が示された。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均椎骨の骨梁の体積、厚み、及び結合密度の減少が示された。
分析値  wt／het／hom：４／４／１０]。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、密度の減少と場合によっては骨折に繋がる脆弱性を伴う骨量減少を特徴とする骨粗鬆症に似た有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。よって、ＰＲＯ３２８ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨恒常性の維持に機能すると考えられる。加えて、ＰＲＯ３２８又はそのコード化遺伝子は、骨治癒に有用であるか、骨関節症又は骨粗鬆症の治療に有用であると考えられる。一方、ＰＲＯ３２８のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、関節炎、骨関節症及び骨粗鬆症等の異常骨代謝に関連する炎症性疾患を含む異常又は病的な骨障害を招くと考えられる。
ＤＥＸＡによって分析した（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔と比較した場合に全組織量及び全体脂肪の顕著な減少と、体重及び体長の減少を特徴とする有意な成長遅延を示した。これらの結果は、骨成長に影響し得る視床下部−下垂体軸に関連する問題に起因すると思われる。これを骨測定値の減少が見られたことと組み合わせると、カヘキシー等の組織消耗状態が示唆される。よって、ＰＲＯ３２８ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨障害の治療に有用であると考えられ、また成長疾患の治療、或いはカヘキシー又は他の組織消耗性疾患の予防に有用であると思われる。
【０３２６】
３５．１０  ＤＮＡ４０５９２−１２４２（ＵＮＱ３０３）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ３４４ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４０５９２−１２４２(ＵＮＱ３０３)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＢＣ０２３０６８又はムスムスクルスＣ１ｑ及び腫瘍壊死因子関連タンパク質５；タンパク質参照番号：Ｑ８Ｒ００２又は寄託番号：Ｑ８Ｒ００２  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．ＤＫＦＺＰ５８６Ｂ０６２１タンパク質（仮想タンパク質）と類似；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１５６４５又はホモサピエンスＣ１ｑ及び腫瘍壊死因子関連タンパク質５（Ｃ１ＱＴＮＦ５）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９ＢＸＪ０又は寄託番号：Ｑ９ＢＸＪ０  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．補体Ｃ１ｑ腫瘍壊死因子関連タンパク質５前駆体に対応する。
破壊されたマウス遺伝子は、Ｃ１ｑｔｎｆ５（Ｃ１ｑ及び腫瘍壊死因子関連タンパク質５）であり、これはヒトＣ１ＱＴＮＦ５のオルソログである。別名は、ＣＴＲＰ５及び補体−ｃ１ｑ腫瘍壊死因子関連タンパク質５等である。
Ｃ１ＱＴＮＦ５は仮想分泌タンパク質であり、シグナルペプチド、コラーゲン三重らせん体リピート（Ｐｆａｍ寄託番号ＰＦ０１３９１）、及び補体組成Ｃ１ｑドメイン（ＳＭＡＲＴ寄託番号ＳＭ００１１０）を含む。Ｃ１ｑドメインは、多くのコラーゲンと、血清補体系を活性化するＣ１酵素複合体に見られる球状構造である。このドメインの折り畳みは、腫瘍壊死因子の折り畳みと類似している。Ｃ１ＱＴＮＦ５の分子機能及び生物学的役割は不明である。
遺伝子情報： 
wt        het      hom    合計
観察値      19        31      16      66
予想値      16.5      33      16.5    66
カイ二乗 = 0.52  有意性=0.77292  (hom/n) = 0.24  平均産仔数 = 7
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン１と２の間にレトロウイルスを挿入した（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿１４５６１３．２）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料の、脳、脊髄、眼、肺、腎臓、骨格筋、及び心臓において検出された。大きなバンドはスプライシングされていない遺伝子特異性の転写であった。
ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ−１３１）に転写が無かったことが判明した。
【０３２７】
３５．１０．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４０５９２−１２４２(ＵＮＱ３０３)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトＣ１ｑ及び腫瘍壊死因子関連タンパク質５（Ｃ１ＱＴＮＦ５）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスに網膜変性症が生じた。また、（−／−）マウスは、５番目の腰椎における測定値の減少を伴う異常骨測定値を示した。ノックアウトマウスはまた、総体脂肪の有意な減少と、尿酸値の上昇を示した。ＲＴ−ＰＣＲの結果転写は無かった。
【０３２８】
（ｂ）心血管表現型分析
心血管生物学の領域では、表現型試験を実施して、循環器、内皮又は血管新生疾患を治療するための潜在的標的を同定した。このような表現型試験は、網膜動静脈率（Ａ／Ｖ率）を決定することにより様々な眼の異常にフラグを立てるための眼底撮影法及び血管造影法である。異常なＡ／Ｖ比は、高血圧による血管疾患に関連したもののような全身性の疾患又は障害(及び高血圧に起因する任意の病気、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病、又は眼科的疾患に対応する他の眼病の徴候を表している。このような眼の異常には、限定されるものではないが、次のものが含まれうる：網膜の異常は、網膜形成不全、種々の網膜症、再狭窄、網膜動脈閉塞症又は閉塞；網膜脈管構造の続発性萎縮を生じる網膜変性症、網膜色素変性症、黄斑萎縮、シュタルガルト病、先天性静止性夜盲症、全脈絡膜欠如、脳回転状萎縮、レーバー先天性黒内障、網膜分離症、ワーグナー症候群、アッシャー症候群、ツェルヴェーガー症候群、サルディーノ・マインザー症候群、シニア・ローケン症候群、バルデー・ビードル症候群、アルポート症候群、アルストレム症候群、コケーン症候群、先天性脊椎異形成、フリン・エアード症候群、フリードライヒ失調症、ハルグレン症候群、マーシャル症候群、アルバース・シェーンベルグ病、レフサム病、キーンズ・セイアー症候群、ワールデンブルグ症候群、アラジール症候群、筋強直性ジストロフィー、オリーブ橋小脳萎縮症、ピエール・マリー症候群、スティックラー症候群、カロチン血症（carotinemeia）、シスチン蓄積症、ウォルフラム症候群、バッセン・コルンツヴァイク症候群、無βリポタンパク血症、色素失調症、バッテン病、ムコ多糖症、ホモシスチン尿症、又はマンノシドーシスである。
手順：本アッセイでは、４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体変異マウスからなるコホートを試験した。Hawes及び共著者により修正されたKowa Genesis小動物用眼底カメラを使用し、意識のある動物について眼底撮影を行った(Hawes等, 1999 Molecular Vision 1999; 5:22)。フルオレセインの腹膜内注射により、各検査の蛍光アルゴリズム及び直射光眼底画像の獲得が可能になった。直接的な眼科的変化に加えて、この試験では、糖尿病及びアテローム性動脈硬化症又は他の網膜異常等の全身性疾患に伴う網膜変化を検出することができる。正常光の下での眼底写真が提供された。血管造影写真により、眼の動脈及び静脈の検査が可能になった。更に、眼の、静脈と動脈との比(Ａ／Ｖ)が決定された。
上述したプロトコルを使用し、産生したＦ２野生型、ヘテロ接合体及びホモ接合体の変異子孫について眼科的分析を実施した。具体的には、Ａ／Ｖ比を測定し、Kowa COMIT＋ソフトウェアを用い、眼底画像に従って算出した。この試験は、散大した瞳孔を通してカラー写真が撮影されるものであり：画像が多くの病気の検出及び分類分けに役立つ。静脈に対する動脈の比(Ａ／Ｖ)は、静脈の直径に対する動脈の直径(血管の分岐前に測定)の比である。多くの病気、すなわち糖尿病、循環器疾患、乳頭浮腫、視神経萎縮又は他の眼の異常、例えば網膜変性症(網膜色素変性症としても知られている)、又は網膜形成不全、視覚障害又は失明がこの比に影響を及ぼしているであろう。よって、野生型(＋／＋)同腹仔と比較し、ホモ接合体（−／−）及びヘテロ接合体(＋／−)の変異子孫において、静脈に対する動脈の比が増加していた表現型観察結果は、このような病態を示している。
結果：
眼底：分析した７匹の非白色種（−／−）マウスのうち、６匹（Ｆ１３４、Ｆ１５５、Ｆ１５８、Ｍ１６４、Ｍ１７１、及びＦ１８３）が網膜全体を覆う複数の白点を示し、網膜動脈の弱化を伴っていた。これは、ヒトの斑点網膜疾患に類似の網膜変性が変異種に生じていることを示す。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
顕微鏡による病理観察により、分析した４匹の（−／−）マウス（Ｍ−１７３、Ｍ−１８８、Ｆ−１９７、及びＦ−１９９）で網膜変性の徴候が示された。網膜の外顆粒層においてアポトーシス細胞の増加が示された箇所に組織学的変性が見られた。このプロジェクトでは、遺伝子発現分析は実行できなかった。
要約すると、この研究において、眼底撮影法により、（−／−）マウスが、その(＋／＋)同腹仔と比較して、重度の網膜変性症、つまり顕著な網膜血管の弱力化を示すことが判明した。血管造影図は、変異（−／−）マウスが、毛細血管瘤を伴う網膜血管の弱力化を示すことを実証した。同様に、顕微鏡による観察により、変異（−／−）マウスにおける両側性の網膜変性症が示された。つまり、ＰＲＯ３４４ポリペプチドをコードするＤＮＡ４０５９２−１２４２と同定された遺伝子をノックアウトすることにより、ホモ接合体変異子孫が、網膜変性症に関連した表現型を示す。検出されたこのような網膜変化は、高血圧による血管疾患に関連する循環器系の全身性の病気又は疾患(及び高血圧を引き起こすあらゆる疾患、例えばアテローム性動脈硬化症)、糖尿病又は網膜変性症等の眼科的疾患に対応する他の眼病に最も一般的に関連している。よって、ＰＲＯ３４４をコードする遺伝子のアンタゴニストは、類似した病理的網膜変化を生じさせる一方、アゴニストは高血圧、アテローム性動脈硬化症、又は網膜変性症とこの症状に関連した疾患を含む他の眼科的疾患(上述したもの)の治療において治療剤として有用であろう。
【０３２９】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学：骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、同腹仔コントロールと比較した場合、総体脂肪量の有意な減少が示された。加えて、（−／−）変異マウスの尿酸値が上昇した（血液化学分析において観察された）。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均椎骨の骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度の減少と、平均大腿骨断面積の減少が示された。分析値  wt／het／hom：４／４／８。
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、密度の減少と場合によっては骨折に繋がる脆弱性を伴う骨量減少を特徴とする骨粗鬆症に似た有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。よって、ＰＲＯ３４４又はそのアゴニストは、骨恒常性の維持に機能すると考えられる。加えて、ＰＲＯ３４４又はそのコード化遺伝子は、骨治癒に有用であるか、関節炎又は骨粗鬆症の治療に有用であると考えられる。一方、ＰＲＯ３４４のアンタゴニストは、骨関節症、骨粗鬆症及び骨減少症を含む異常骨代謝に関連する炎症性疾患を含む異常又は病的な骨障害を招くと考えられる。加えて、（−／−）マウスにおける総体脂肪量の減少は、組織消耗性疾患を示唆していた。
【０３３０】
３５．１１  ＤＮＡ４４８０４−１２４８（ＵＮＱ３１４）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ３５７ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４４８０４−１２４８(ＵＮＱ３１２)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿１３９３０７又はムスムスクルススリット様２（ショウジョウバエ）（Ｓｌｉｔｌ２）；タンパク質参照番号：ＮＰ＿６４７４６８又はスリット様２［ムスムスクルス］；ヒト遺伝子配列参照番号：ＢＣ０１３７６７又は寄託番号：ＢＣ０１３７６７  ＮＩＤ：１５４８９３３８ホモサピエンスホモサピエンス、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２６１０５２８Ｇ０５遺伝子に類似、クローン画像：３８７５８３７；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９６ＣＸ１又は寄託番号：Ｑ９６ＣＸ１  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．ＲＩＫＥＮ  ＣＤＮＡ２６１０５２８Ｇ０５遺伝子（断片）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
破壊されたマウス遺伝子は、Ｓｌｉｔｌ２（スリット様２[ショウジョウバエ]）、ヒト仮想タンパク質ＬＯＣ１１４９９０のオルソログである。別名は、仮想タンパク質ＢＣ０１３７６７及び２６１０５２８Ｇ０５Ｒｉｋ等である。
スリット型タンパク質（例えばＳＬＩＴ１）は、発達プロセスにおいて、特に神経系及び内分泌系の形成に重要な役割を果たす細胞外タンパク質である。スリット型タンパク質は細胞移動を補助すると考えられている（Piper及びLittle, Bioessays, 25(1):32-8 (2003)）。このように、相同性により、ＬＯＣ１１４９９０は分泌されるか又は殆ど細胞外にあり、発達段階を補助すると思われる。
遺伝子情報：
wt        het      hom    合計
観察値      15        33      13      61
予想値      15.25    30.5    15.25  61
カイ二乗 = 0.54  有意性=0.76300  (hom/n) = 0.21  平均産仔数 = 4
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン２内の破壊された遺伝子にレトロウイルスを挿入した（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿１３９３０７）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞の、腎臓、骨格筋、及び心臓において検出された。
ＲＴ−ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｆ−５９）に転写が無いことが判明した。インバースＰＣＲにより標的遺伝子の破壊を確認した。
【０３３１】
３５．１１．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４４８０４−１２４８(ＵＮＱ３１４)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒト仮想タンパク質（ＢＣ０１３７６７）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、全身、大腿骨、椎骨の平均骨塩量、容積測定による骨密度、及び骨密度が増加した。一部の（−／−）マウスは、(＋／＋)同腹仔より小さく、（生後１９日だけ）早く死んだ。（＋／−）マウスも小さく、早く死んだ。オスの（−／−）マウスは不妊症を示した。ノックアウトマウスでは、血清トリグリセリド、ケトン体、及びグルコースレベルが増加し、血圧が上昇した。（−／−）マウスはまた、骨測定値の増加と総体脂肪の増加を示した。ＲＴ−ＰＣＲの結果転写は無かった。
【０３３２】
（ｂ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
一部の（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔より小さく、生後１９日だけ早く死亡した。残りの（−／−）マウスは健常に思われた。多数の（＋／−）マウスも小さく、器官質量が小さく、早く死亡した。分析できた２匹のオス（−／−）マウスが、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して平均収縮期血圧の上昇を示した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：１４／２７／１０
受胎能：  分析したオス（−／−）マウス（Ｍ−１０６）は不妊症だった。
病理学：  分析した単一の（−／−）マウス（Ｍ−１０６）の顕微鏡観察により、一方の中耳からの血清化膿滲出液が示された。加えて、変性の一方の側に沿う精巣に嚢胞が見られた。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ０／２／１
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ：（−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均骨塩量、容量測定による骨密度、並びに、全身、大腿骨及び椎骨における骨密度の増加が示された。変異マウスはまた、総体脂肪量の増加とそれに対応する血中トリグリセリドの増加を示し、脂質代謝異常が示唆された。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／８／８
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する野生型同腹仔と比較した場合、第５腰椎の測定値が増加した。
まとめ：
複数の変異（−／−）マウスはその(＋／＋)同腹仔よりずっと小さく、成長遅延の徴候を示していた。加えて、ヘテロ接合（＋／−）マウスは、成長の抑制及び生存度の低下を示し、体が小さく、その(＋／＋)同腹仔程長く生存しなかった。更に、（−／−）マウスは、その(＋／＋)同腹仔と比較して、平均骨塩量、容積測定による骨密度及び全身と大腿骨の骨密度の増加を示した。以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、成長不全及び生存度の低下だけでなく、大理石骨病のような骨の疾病に関連する骨の異常を示すことが判明した。大理石骨病は、骨の異常な肥厚及び硬化、並びに骨の異常な脆弱性を特徴とする状態である。よって、ＰＲＯ３５７ポリペプチド又はそのアゴニストは、正常な成長及び正常な骨代謝に重要であり、大理石骨病又は他の関連骨疾患の治療に有用であると考えられる。加えて、オス（−／−）マウスは、不妊症及び精巣変性の徴候を示した。よって、ＰＲＯ３５７ポリペプチド又はそのアゴニストは、そのような骨障害の予防及び／又は治療に有用であると思われ、また、正常な成長と発達を維持するのに重要な役割を果たすと考えられる。
【０３３３】
（ｃ）表現型分析：心臓病学
心血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症、例えば高コレステロール(高コレステロール血症)及び血清トリグリセリドの上昇(高トリグリセリド血症)、糖尿病、及び／又は肥満の治療のための標的をここで同定した。表現型試験には、血清コレステロール及びトリグリセリドの測定が含まれる。
血中脂質
手順：
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。高コレステロールレベル及びトリグリセリド血中レベルの上昇は、循環器疾患及び／又は糖尿病の進行における認識された危険因子である。血中脂質を測定することで、血中脂質レベルを調節する生物学的スイッチの発見が容易になる。血中脂質レベルを上昇させる因子の抑制は、循環器疾患の危険の削減に有用であり得る。この血液化学試験では、COBAS Integra400(mfr：Roche)を使用してコレステロール測定値を記録した。
結果：
性別が一致する(＋／＋)同腹仔及びオス(＋／＋)マウスの背景的平均と比較した場合、（−／−）マウスは、平均血清トリグリセリド、ケトン体及びグルコースレベルの増加を示した。加えて、（−／−）マウスは血圧の上昇を示した。
性別が一致する(＋／＋)同腹仔及びオス(＋／＋)マウスの背景的平均と比較した場合、（−／−）マウスはトリグリセリドレベルの顕著な増加を示した。加えて、平均血清グルコースレベルの上昇から、糖尿病が示唆された。血液化学による平均収縮期血圧の上昇は、高血圧症又は他の循環器疾患を示していた。よって、ＰＲＯ３５７遺伝子を欠く変異マウスは、糖尿病を含む循環器疾患のモデルとして機能できる。ＰＲＯ３５７ポリペプチド又はそのコード化遺伝子は、トリグリセリド及び／又は血糖等の正常な血中脂質レベルの制御に有用であると考えられる。よって、ＰＲＯ３５７ポリペプチド又はそのアゴニストは、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、糖尿病及び／又は肥満等の、循環器病の治療に有用であると思われる。
【０３３４】
３５．１２  ＤＮＡ４４１８４−１３１９（ＵＮＱ３３０）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ５２６ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４４１８４−１３１９(ＵＮＱ３３０)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２２９８２又は寄託番号：ＮＭ＿０２２９８２  ＮＩＤ：ｇｉ  １２６６７７９３参照番号ＮＭ＿０２２９８２．１  ムスムスクルスｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４レセプター（Ｒｔｎ４ｒ）；タンパク質参照番号：Ｑ９９ＰＩ８又はＲｅｔｉｃｕｌｏｎ４レセプター前駆体（Ｎｏｇｏレセプター）（ＮｇＲ）（Ｎｏｇｏ−６６レセプター）；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２３００４又はホモサピエンスｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４レセプター（ＲＴＮ４Ｒ）；ヒトタンパク質配列は、参照番号：Ｑ９ＢＺＲ６又はＲｅｔｉｃｕｌｏｎ４レセプター前駆体（Ｎｏｇｏレセプター）（ＮｇＲ）（Ｎｏｇｏ−６６レセプター（ＵＮＱ３３０／ＰＲＯ５２６）に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｒｔｎ４ｒ（ｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４レセプター）、ヒトＲＴＮ４Ｒのオルソログである。別名は、ＮｇＲ、ＮＯＧＯＲ、ｎｏｇｏレセプター、及びＮｏｇｏ−６６レセプター等である。
ＲＴＮ４Ｒは、ｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４のレセプターとして機能するグリコシルホスファチジルイノシトール繋留細胞外タンパク質（ＲＴＮ４；ＮＯＧＯとしても知られる）、オリゴデンドロサイトミエリン糖タンパク質（ＯＭＧ）、及びミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）であり、軸策成長の抑制を媒介する（Fournier等、Nature, 409-(6818):341-6 (2001); Wang, Koprivica等、Nature, 417(6892):941-4 (2002); Liu等、Science, 297(5584):1190-3 (2002)）。これらのリガンドと結合すると、ＲＴＮ４Ｒは、膜貫通タンパク質及びニューロトロフィン成長因子ファミリーのレセプターであるＲＴＮ４Ｒ、及び神経系に特異的な膜貫通タンパク質であるＬＩＮＧＯ−１と結合する。この結合により、細胞の内部にシグナルが伝達される（Wang, Kim等、Nature, 420(6911):74-8 (2002); Wong等、Nat Neurosci, 5(12):1302-8 (2002); Mi等、Nat Neurosci, 7(3):221-8 (2004)。ＲＴＮ４Ｒは軸策の誘導及び神経系の発達に関与している。更に、ＲＴＮ４Ｒ及びそのシグナル伝達組成は、中枢神経系の損傷後に起こる軸策再生を可能にするインヒビターの標的である（Fisher等、J Neurosci, 24(7):1646-51 (2004); Song等、J Neurosci, 24(2):542-6(2004); Lee等、Nat Rev Drug Discov, 2(11):872-8 (2003)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      20        36      22      78
予想値      19.5      39      19.5    78
カイ二乗 = 0.56  有意性=0.75424  (hom/n) = 0.28  平均産仔数 = 8
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０２２９８２．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料の全てと胚性幹(ＥＳ)細胞とにおいて検出された。
サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０３３５】
３５．１２．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４４１８４−１３１９(ＵＮＱ３３０)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４レセプター（ＲＴＮ４Ｒ）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、耐糖性が亢進し、平均血清コレスウテロール、トリグリセリド及びグルコースのレベルが低下した。オス（−／−）マウスは除脂肪体重の増加、骨密度の上昇、及び全身、大腿骨、椎骨における骨塩量の増加、並びに平均体重の増加を示した。変異マウスはまた、ＬＰＳ抗原投与に対するＴＮＦ−α及びＩＬ−６応答の顕著な増加を示した。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０３３６】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０３３７】
以下の試験を行った。
急性期応答：
試験の説明：細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）は内毒素であり、それ自体が急性期応答及び全身性炎症の強力な誘導因子である。レベル１ＬＰＳマウスに対し、２６ゲージの針を用いて２００μＬの無菌生理食塩水中致死量以下のＬＰＳを腹腔内に注射した。投与量は、試験したマウスの平均体重に基づき、注射後３時間で体重１ｇ当たり１μｇとした。次いで１００μｌの血液試料を採取し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ器具でＴＮＦａ、ＭＣＰ−１、及びＩＬ−６の存在について分析した。
結果：
（−／−）マウスは、その同復仔及び背景的平均と比較して、ＬＰＳ抗原投与に対する平均血清ＩＬ−６及びＴＮＦ−α応答の顕著な増加を示した。
要約すると、ＬＰＳ内毒素抗原の投与によって、ＰＲＯ５２６ポリペプチドをコードする遺伝子を欠くノックアウトマウスが、その野生型同復仔と比較して、免疫学的異常を示すことが証明された。特に、変異マウスは、LPS内毒素抗原を投与したとき、免疫学的応答（ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生）を誘発する能力の低下を示した。これは、強い炎症誘発性応答を示す。ＩＬ−６及びＴＮＦ−αは、その後のＢ細胞活性化段階に寄与する。加えて、ＩＬ−６は、急性期応答及び全身性炎症の誘発に重要な役割を果たす。これは、ＰＲＯ５２６ポリペプチドのインヒビター又はそのアンタゴニスト、又はそのコード化遺伝子が、免疫系を刺激することを示し、この効果が個体に有益である場合、例えば白血病及び他の種類の癌、並びにＡＩＤＳ患者等の免疫不全患者に使用できると思われる。従って、ＰＲＯ５２６ポリペプチド又はそのアゴニストは、免疫応答の抑制に機能し、例えば移植片拒絶又は移植片対宿主病の場合の有害な免疫応答を抑制するための有益な候補である。
【０３３８】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
（−／−）マウスは、その野生型同腹仔コントロールと比較して、有意な体重増加を示した。
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ：オス（−／−）は、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均除脂肪体重の増加と、全身、大腿骨、及び椎骨における平均骨塩量及び骨密度の増加を示した。
マイクロＣＴ： （−／−）マウスでは、その野生型同腹仔及び背景的平均と比較した場合、骨陵骨の結合密度増加が示された。
まとめ：
要約すると、オス（−／−）マウスは、性別が一致するその(＋／＋)同腹仔と比較した場合、平均除脂肪体重、骨塩量、並びに、全身及び大腿骨の骨密度の増加を示した。以上の結果から、ノックアウト変異表現型は、大理石骨病のような骨異常に関連していると思われる。大理石骨病は、骨の異常な肥厚及び硬化を特徴とする状態である。よって、ＰＲＯ５２６ポリペプチド又はそのアンタゴニストは、大理石骨病又はその他の骨の疾病の治療に効果があると思われる。一方、ＰＲＯ５２６ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、骨治癒に有用であると思われる。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
【０３３９】
（ｄ）表現型分析：心臓病学
心血管生物学の領域において、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、異脂肪血症、例えば高コレステロール(高コレステロール血症)及び血清トリグリセリドの上昇(高トリグリセリド血症)、糖尿病、及び／又は肥満の治療のための標的をここで同定した。表現型試験には、血清コレステロール及びトリグリセリドの測定が含まれる。
血中脂質
手順：
４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートをこのアッセイで試験した。高コレステロールレベル及びトリグリセリド血中レベルの上昇は、循環器疾患及び／又は糖尿病の進行における認識された危険因子である。血中脂質を測定することで、血中脂質レベルを調節する生物学的スイッチの発見が容易になる。血中脂質レベルを上昇させる因子の抑制は、循環器疾患の危険の削減に有用であり得る。この血液化学試験では、COBAS Integra400(mfr：Roche)を使用してコレステロール測定値を記録した。
結果：
性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、（−／−）マウスは平均血清コレステロール、トリグリセリド及びグルコースレベルの減少を示した。要約すると、これらのノックアウト変異マウスは、脂質及び／又は糖代謝に関してポジティブな表現型を示した。つまり、ＰＲＯ５２６遺伝子を欠く変異マウスは、循環器疾患の治療のモデルとして機能できる。ＰＲＯ５２６のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、血中脂質の調整、特に正常コレステロール代謝の維持に有用であると思われる。よって、ＰＲＯ５２６ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、脳卒中、種々の冠動脈疾患、肥満、及び／又は糖尿病等の、脂質代謝異常に関連する循環器病の治療に有用である。
【０３４０】
表現型分析：代謝−血液化学／耐糖性
代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、血糖測定を含む。ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、マウスの血液化学試験を行った。代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、インスリン感受性及び糖代謝の変化を測定する耐糖試験を含む。異常耐糖試験の結果は、以下の障害又は状態を示すことができるが、示唆されるのはそれらに限定されない：１型及び２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患及び／又は肥満。
手順：このアッセイでは、２の野生型マウス及び４のホモ接合体からなるコホートを用いた。耐糖試験は哺乳動物における糖恒常性の欠失を定義するための標準法である。対応試験はＬｉｆｅｓｃａｎ社のグルコメーターを用いて実行した。動物に対し、２ｇ／ｋｇでＤ−グルコースの２０％溶液を腹腔内に注入し、注入後０、３０、６０及び９０分後に血糖値を測定した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、耐糖性の亢進を示した。このように、ノックアウトマウスは、グルコース恒常性不全と反対の表現型パターンを示し、よってＰＲＯ５２６のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、グルコース恒常性不全及び異常グルコース代謝に関連する疾患の治療に有用であると思われる。
【０３４１】
３５．１３  ＤＮＡ４９６３１−１３２８（ＵＮＱ３８９）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ７２４ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４９６３１−１３２８(ＵＮＱ３８９)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０２２９９３又は寄託番号：ＮＭ＿０２２９９３  ＮＩＤ：１２６６７８０５ムスムスクルスムスムスクルス低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１０（Ｌｒｐ１０）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＥＰＥ８又は寄託番号：Ｑ９ＥＰＥ８  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質９．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１４０４５又は寄託番号：ＮＭ＿０１４０４５  ＮＩＤ：１３０２７５８７ホモサピエンスホモサピエンスＤＫＦＺＰ５６４Ｃ１９４０タンパク質（ＤＫＦＺＰ５６４Ｃ１９４０）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ８６Ｔ０２．寄託番号：Ｑ８６Ｔ０２  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．ホモサピエンス（ヒト）のＨｅＬａ細胞のヒト完全長ｃＤＮＡクローンＣＳ０ＤＫ００２ＹＯ０６に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｌｒｐ１０（低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１０）、ヒトＬＲＰ１０のオルソログである。別名は、Ｌｒｐ９、ＭＧＣ８６７５、及びＤＫＦＺＰ５６４Ｃ１９４０等である。
ＬＲＰ１０は、主に肝臓に発現すると予想される１型原形質膜タンパク質であり、インビトロでのアポリポタンパク質Ｅ濃縮β−ＶＬＤＬの取り込みを媒介する。従って、インビボでの低密度リポタンパク質のレセプターとして機能すると思われる。肝臓に加えて、ＬＲＰ１０は腎臓及び脳にも見られ、特に血管壁におけるレベルが高い。ＬＲＰ１０はアポＥ含有リポタンパク質の取り込みに参画している可能性がある（Sugiyama等、Biochemistry, 39(51):15817-25 (2000)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      17        29      17      63
予想値      15.75    31.5    15.75  63
カイ二乗 = 0.40  有意性=0.82003  (hom/n) = 0.27  平均産仔数 = 6
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０２２９９３．２）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料の全て並びに、胚性幹(ＥＳ)細胞において検出された。
サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０３４２】
３５．１３．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４９６３１−１３２８(ＵＮＱ３８９)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒト低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質１０（ＬＲＰ１０）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、皮膚繊維芽細胞増殖率が急激に低下した。また、（−／−）マウスは、骨測定値の増加を示した。変異マウスには耐糖性の不全も見られた。また、変異（−／−）マウスは、好酸球及び単球のレベルの低下とＣＤ８＋細胞のレベルの上昇とを特徴とする免疫学的異常を示した。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０３４３】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０３４４】
以下の試験を行った。
（１）蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析
手順：
ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターを含む抹消血の免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を行い、ナチュラルキラー細胞の白血球マーカー及びｐａｎＮＫとしてのＴリンパ球、Ｂリンパ球のＣＤ１９、ＣＤ４５を評価した。ＦＡＣＳ分析は２の野生型マウス及び６のホモ接合マウスに対して行い、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から得られた細胞を含めた。
これらの試験では、分析する細胞を胸腺、抹消血、脾臓、骨髄及びリンパ節から単離した。フローサイトメトリーを設計し、単核細胞集団中のＣＤ４及びＣＤ８ポジティブＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球の相対的な割合を決定した。表現型分析及びスクリーニングのために、このマシンは、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比に加えて、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ８＋／ＣＤ４−、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球の数を記録する。６つの系列特異性抗体の組を用いて各マウスの溶解させた抹消血の単一試料を染色することにより、単核細胞のプロファイルを得た：ＣＤ４５  ＰｅｒＣＰ、抗ＴＣＲｂ  ＡＰＣ、ＣＤ４  ＰＥ、ＣＤ８  ＦＩＴＣ、ｐａｎ−ＮＫ  ＰＥ、及びＣＤ１９  ＦＩＴＣ。ＦＩＴＣ及びＰＥで標識した２つの抗体は、互いに排他的な細胞型を染色した。この試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを用いて、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアにより分析した。
（２）血液学的分析
試験の説明：アボット社のＣｅｌｌ−Ｄｙｎ  ３５００Ｒ（自動血液分析器）による血液試験を行った。その特徴の一部には、５つの部分からなる白血球の示差が含まれる。患者のレポートは全部で２２を超えるパラメータを網羅することができる。
結果：
（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較して、好中球及び単球の減少を示した。
ＦＡＣＳ分析により、（−／−）マウスがその(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、ＣＤ８＋細胞の平均割合の増加を示すことも判明した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／５／８
要約すると、血液学的分析とＦＡＣＳの結果、ホモ接合変異マウスが、その同腹仔コントロールと比較して、好酸球及び単球数の減少を示すことが示され、マクロファージの前駆体のレベルが低いことが示された。しかしながら、（−／−）マウスはＣＤ８＋細胞の割合の増加も示した。ＣＤ８＋分子は抗原認識においてＴ細胞レセプターと協働するコレセプターであり、特にＭＨＣクラス１分子の不変部位にのみ特異的に結合する。抗原認識の間、ＣＤ８＋分子はＴ細胞レセプターの組成によりＴ細胞表面に結合して細胞障害性のＣＤ８＋Ｔ細胞を形成する。よって、ＰＲＯ７２４ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、ＭＨＣクラス１経路に関与するＴ細胞媒介性レスポンスにおいて重要であり、サイトゾル病原体に対する宿主防御に細胞障害性Ｔ細胞が必要な場合に有効である。対照的に、ＰＲＯ７２４ポリペプチド又はそのアゴニストは、ネガティブな表現型を模倣することが予想され、その結果、ＣＤ８＋細胞の平均割合の不足と、それによるＭＨＣクラス１の欠乏が起こる。細胞表面ＭＨＣクラス１分子がほぼ完全に無くなったとき、そのような疾病モデルが生じる。このような状態にある患者において、ＭＨＣクラス１分子をコードするｍＲＮＡのレベルは正常であり、ＭＨＣクラス１タンパク質の産生レベルは正常である。しかしながら、これらの個体は免疫不全であり、これは特にＣＤ８＋Ｔ細胞の不足に起因している。これは、ほぼ全ての病原体に対する応答が致命的に抑制された状態の重度の免疫不全疾患を引き起こす。
【０３４５】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ：（−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均骨密度の増加が示された。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均椎骨の骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度の増加が示された。
分析値  wt／het／hom：４／４／９
まとめ：
要約すると、（−／−）マウスはその性別が一致する(＋／＋)同腹仔と比較した場合、平均骨塩量、全身及び大腿骨の骨密度の増加を示した。以上の結果から、ノックアウト変異表現型が、大理石骨病のような骨の異常に関連していることが示された。大理石骨病は、骨の異常な肥厚及び硬化と骨の異常な脆弱性を特徴とする状態である。このように、ＰＲＯ７２４ポリペプチド又はそのアゴニストは、大理石骨病又はその他の骨の疾病の治療に効果があると思われる。一方、ＰＲＯ７２４ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、骨の治癒に有用であると思われる。
【０３４６】
（ｄ）腫瘍学表現型分析
腫瘍学の分野において、標的を、ここでは固形腫瘍、リンパ腫及び白血病の治療に対して同定した。
成体皮膚細胞の増殖
手順：週齢１６週の動物から皮膚細胞を分離した（野生型２匹及びホモ接合４匹）。これらを第一の繊維芽細胞培養液中で育て、厳密に制御したプロトコルにより繊維芽細胞の増殖率を測定した。このアッセイの過増殖性及び低増殖性表現型の検出能は、ｐ５３及びＫｕ８０を示した。増殖はBrdu Incorporatonを用いて測定した。
具体的には、この研究には皮膚線維芽細胞増殖アッセイを用いた。標準培養液中の細胞の増加を、相対的増殖能の指標として用いた。野生型及び変異マウスから採取した皮膚の組織診から、一次繊維芽細胞を確立した。５０，０００個の細胞を含む２又は３の培養液を蒔き、６日間成長させた。培養期間の終了時に、電子粒子計数器を用いて培養液中の細胞の数を決定した。
結果：（−／−）マウスは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均皮膚繊維芽細胞の増殖率の急激な低下を示した。このように、ホモ接合変異マウスは、低増殖性表現型を示した。これらの観察結果に示されるように、ＰＲＯ７２４ポリペプチドのアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、腫瘍細胞の成長等の異常な細胞増殖を減少させるのに有用であると思われる。
【０３４７】
（ｅ）表現型分析：代謝−血液化学／耐糖性
代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、血糖測定を含む。ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、マウスの血液化学試験を行った。代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、インスリン感受性及び糖代謝の変化を測定する耐糖試験を含む。異常耐糖試験の結果は、以下の障害又は状態を示すことができるが、示唆されるのはそれらに限定されない：１型及び２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患及び／又は肥満。
手順：このアッセイでは、２の野生型マウス及び４のホモ接合体からなるコホートを用いた。耐糖試験は哺乳動物における糖恒常性の欠失を定義するための標準法である。対応試験はＬｉｆｅｓｃａｎ社のグルコメーターを用いて実行した。動物に対し、２ｇ／ｋｇでＤ−グルコースの２０％溶液を腹腔内に注入し、注入後０、３０、６０及び９０分後に血糖値を測定した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、平均血清グルコースレベルの低下を示した。加えて、（−／−）マウスは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較して、耐糖性の不全を示した。
分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／４／８
以上の結果から、（−／−）マウスが、性別が一致するその(＋／＋)同腹仔と比較した場合に、４つの測定時点の全てにおいて、正常な空腹時血糖の存在下で、耐糖性の低下を示すことが判明した。つまり、ノックアウトマウスは、糖恒常性の不全の表現パターンを示し、従って、ＰＲＯ７２４ポリペプチド（又はそのアゴニスト）又はそのコード化遺伝子は、糖恒常性及び／又は糖尿病を含む様々な循環器疾患の治療に有用であると思われる。
【０３４８】
３５．１４  ＤＮＡ４８３３１−１３２９（ＵＮＱ３９５）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ７３１ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４８３３１−１３２９(ＵＮＱ３９５)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１７３７８又は寄託番号：ＮＭ＿０１７３７８  ＮＩＤ：８３９３９１５ムスムスクルスムスムスクルスｐｕｒｏｔｏｋａｄｏｈｅｒｉｎ１２（Ｐｃｄｈ１２）；タンパク質参照番号：Ｏ５５１３４又は寄託番号：Ｏ５５１３４  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．血管カドヘリン２．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０１６５８０又は寄託番号：ＮＭ＿０１６５８０  ＮＩＤ：１４５８９９２５  ホモサピエンスホモサピエンスプロトカドヘリン１２（ＰＣＤＨ１２）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９ＮＰＧ４又は寄託番号：Ｑ９ＮＰＧ４  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．プロトカドヘリン１２前駆体（血管カドヘリン２）（血管内皮カドヘリン２）（ＶＥ−カドヘリン−２）（ＶＥ−ｃａｄ−２）．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｐｃｄｈ１２（ｐｕｒｏｔｏｋａｄｏｈｅｒｉｎ１２）、ヒトＰＣＤＨ１２のオルソログである。別名は、Ｐｃｄｈ１４、ＶＥ−ｃａｄ−２、ＶＥ−カドヘリン−２、ＶＥＣＡＤ２、プロトカドヘリン１４、及び血管内皮カドヘリン２等である。
ＰＣＤＨ１２は、血管内皮に発現される１型膜タンパク質であり、カドヘリンファミリー細胞接着分子として機能すると思われる。このタンパク質は、６のカドヘリン反復、膜貫通領域、及び細胞質Ｃ末端を含む細胞外ドメインからなる。血管内皮カドヘリン１とは異なり、ＰＣＤＨ１２はカテニンと相互作用せず、細胞遊走又は成長に作用もしない。ＰＣＤＨ１２は、細胞内接合部における凝集クラスター及びホモタイプなカルシウム依存性接着を促進する（Telo等、J Biol Chem, 273(28):17565-72 (1998); Wu及びManiatis, Proc Natl Acad Sci USA, 97(7):3124-9 (2000)）。
標的突然変異又はジーントラップ突然変異を株１２９ＳｖＥｖＢｒｄ-由来胚性幹(ＥＳ)細胞において生じさせた。キメラマウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊアルビノマウスに交雑してＦ１ヘテロ接合体動物を産生した。これらの子孫を交雑させてＦ２野生型、ヘテロ接合体、及びホモ接合体突然変異子孫を産生した。極くたまに、例えばＦ１マウスがキメラからほとんど得られなかった場合に、Ｆ１ヘテロ接合マウスを１２９ＳｖＥｖＢｒｄ／Ｃ５７ハイブリッドマウスと交雑させ、交雑受精のための付加的なヘテロ接合動物を生じさせてＦ２マウスを産生せしめた。このように産生されたマウスに対し、レベル１の表現型分析を行った。
wt        het      hom    合計
観察値      20        40      19      79
予想値      19.75    39.5    19.75  79
カイ二乗 = 0.04  有意性=0.98119  (hom/n) = 0.24  平均産仔数 = 8
突然変異型：相同組換え（標準）
コード化エキソン１を標的とした（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０１７３７８．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料の、胃、小腸、及び大腸を除くすべてにおいて検出された。
サザンハイブリダイゼーション分析により、標的遺伝子の破壊を確認した。
【０３４９】
３５．１４．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４８３３１−１３２９(ＵＮＱ３９５)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒトプロトカドヘリン１２（ＰＣＤＨ１２）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスが大きくなり、体重、全組織量、及び除脂肪体重の増加、並びに骨に関連する測定値の増加が示された。また、（−／−）マウスは、器官重量、総体脂肪、及び総体脂肪量の増加を示した。加えて、（−／−）マウスは、ナチュラルキラー細胞及び血中好酸球の割合の低下を示した。サザンブロット法によって遺伝子破壊を確認した。
【０３５０】
（ｂ）免疫学表現型分析
免疫関連疾患及び炎症性疾患は、通常の生理学において、侵襲又は傷害への応答、侵襲又は傷害の修復の開始、及び外来の生体物に対する先天的及び後天的防護力の組み込みに重要な生理学的経路が、非常に複雑に且つ複数が相互に結合した徴候又は結果である。疾病又は病態は、これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に関して直接的に、異常な制御又は過剰な刺激の結果として、自己に対する応答として、或いはこれらの組み合わせとして、追加的な侵襲又は傷害を引き起こすときに生じる。
これら疾病の起源には、複数の経路、及び多くの場合複数の異なる生理学的系／経路が関わっていることが多く、これら経路のうち複数の経路に介入することで、寛解性又は治療的効果を挙げることができる。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗、又は有益なプロセス／経路の刺激によって行うことができる。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な成分である。Ｔ細胞は、主要組織適合抗原（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面上に、ＭＨＣ分子と共に表出されうる。Ｔ細胞系は、宿主である哺乳動物の健康に対して脅威となる変性細胞を除去する。Ｔ細胞にはヘルパーＴ細胞及び細胞障害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体を認識すると、大規模に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、様々なサイトカイン、つまりリンホカインを分泌し、これはＢ細胞、細胞障害性Ｔ細胞及び免疫応答に参画する他の様々な細胞の活性において中心的な役割を果たす。
多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害又は感染の部位を浸潤する。移動性細胞は好中球、好酸球、単球又はリンパ球であり、患部組織の組織学的試験により決定することができる。Current Protocols in Immunology, ed John E. Coligan, 1994 John Wiley & Sons, Inc.
多くの免疫関連疾患が既知であり、広く研究されている。このような疾病には、免疫媒介性炎症性疾患（例えばリウマチ様関節炎、免疫媒介性腎疾患、肝胆道疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、及び喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、腫瘍、及び移植片拒絶等が含まれる。免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定された。
免疫学の分野において、炎症及び炎症性疾患の治療のための標的が同定されている。免疫関連疾患は、一例では、免疫応答を抑制することにより治療することができる。免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を使用することは、免疫媒介性疾患及び炎症性疾患の治療に有益である。免疫応答を抑制する分子を利用して（タンパク質を直接的に又は抗体アゴニストを用いて）、免疫応答を抑制し、よって免疫関連疾患を寛解することができる。
【０３５１】
蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析
手順：
ＣＤ４、ＣＤ８及びＴ細胞レセプターを含む抹消血の免疫細胞組成のＦＡＣＳ分析を行い、ナチュラルキラー細胞の白血球マーカー及びｐａｎＮＫとしてのＴリンパ球、Ｂリンパ球のＣＤ１９、ＣＤ４５を評価した。ＦＡＣＳ分析は２の野生型マウス及び６のホモ接合マウスに対して行い、胸腺、脾臓、骨髄及びリンパ節から得られた細胞を含めた。
これらの試験では、分析する細胞を胸腺、抹消血、脾臓、骨髄及びリンパ節から単離した。フローサイトメトリーを設計し、単核細胞集団中のＣＤ４及びＣＤ８ポジティブＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及び単球の相対的な割合を決定した。表現型分析及びスクリーニングのために、このマシンは、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比に加えて、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ８＋／ＣＤ４−、ＮＫ、Ｂ細胞及び単球の数を記録する。６つの系列特異性抗体の組を用いて各マウスの溶解させた抹消血の単一試料を染色することにより、単核細胞のプロファイルを得た：ＣＤ４５  ＰｅｒＣＰ、抗ＴＣＲｂ  ＡＰＣ、ＣＤ４  ＰＥ、ＣＤ８  ＦＩＴＣ、ｐａｎ−ＮＫ  ＰＥ、及びＣＤ１９  ＦＩＴＣ。ＦＩＴＣ及びＰＥで標識した２つの抗体は、互いに排他的な細胞型を染色した。この試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを用いて、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアにより分析した。
結果：
FACS：（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較した場合、ナチュラルキラー細胞及び血中好酸球の平均割合の減少を示した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ７／４／８
要約すると、ＦＡＣＳの結果、特に、ＰＲＯ７３１ポリペプチドをコードするＤＮＡ４８３３１−１３２９遺伝子のノックアウトに関連するネガティブな表現型を示すナチュラルキラー細胞の平均割合が減少するという観点から、ホモ接合変異マウスが免疫系の不全を有することが示された。ナチュラルキラー細胞は、ウイルス免疫及び腫瘍に対する防御に結びつけられており、よってウイルス性感染に対する防御の第一線となる細胞である。ナチュラルキラー細胞又はＮＫ細胞は、抗体依存性細胞媒介細胞毒性のエフェクターとして作用し、事前の免疫化又は活性化の必要なくインビトロで特定のリンパ系腫瘍細胞系を死滅させる能力により同定されている。しかしながら、宿主防御におけるその既知の機能は、複数の細胞内病原体、特にヘルペスウイルスの感染の初期に働くものである。よって、ＰＲＯ７３１ポリペプチド及びそのアゴニストは、健常な免疫システムに重要であり、特にウイルス感染の際に免疫系を刺激するのに有用であると思われる。
【０３５２】
（ｃ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
（−／−）マウスは、性別が一致する（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較して、平均体重の増加を示した。器官重量も有意に増加した。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ２８／５８／３３
病理学：顕微鏡による観察により、６匹中３匹の（−／−）マウス及び２匹中１匹の（＋／＋）マウスにおいて、嗅覚神経上皮細胞のアポトーシスが判明した。
遺伝子発現：免疫組織化学分析により、一組の組織にＬａｃＺ活性は検出されなかった。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ４／２／１３
【０３５３】
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織容積、除脂肪体重、全身の骨密度、及び容積測定による骨密度の増加が示された。加えて、（−／−）マウスは、平均全体脂肪割合及び総脂肪容積の増加を示した。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する(＋／＋)同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均脊椎の椎骨梁の体積、数、及び結合密度の増加と、大腿骨中軸の皮質の厚み及び断面積の平均値の増加が示された。
分析値  wt／het／hom：４／４／８。
要約すると、（−／−）マウスは、その性別が一致する(＋／＋)同腹仔と比較して、体重増加、体脂肪増加、平均除脂肪体重の増加、骨塩量の増加、及び全身及び大腿骨の骨密度の増加を示した。（−／−）変異マウスに体重、体脂肪、及び平均除脂肪体重の増加が観察されたことは、肥満表現型を示唆している。このようなデータは、ＰＲＯ７３１ポリペプチドをコードするＤＮＡ４８３３１−１３２９遺伝子が、増殖及び成長（細胞／器官の大きさ）をネガティブに制御する役割を果たし、細胞生存に重要であることを示唆している。加えて、異常な骨測定値により、ノックアウト変異表現型が大理石骨病のような骨の異常に関与していることが示された。大理石骨病は、骨の異常な肥厚及び硬化と、骨の異常な脆弱性を特徴とする状態である。よって、ＰＲＯ７３１ポリペプチド又はそのアゴニストは、大理石骨病又はその他の骨の疾患の治療に効果があると思われる。一方、ＰＲＯ７３１ポリペプチドのインヒビター又はアンタゴニストは、骨の治癒に有用であると思われる。
【０３５４】
３５．１５  ＤＮＡ４８３３４−１４３５（ＵＮＱ３９６）遺伝子破壊を有するマウスの作製及び分析
これらのノックアウト実験では、ＰＲＯ７３２ポリペプチドをコードする遺伝子(ＤＮＡ４８３３４−１４３５(ＵＮＱ３９６)と命名)を破壊した。これらの研究のための遺伝子特異的情報は次の通りである：変異したマウス遺伝子は次のものに対応する：ヌクレオチド参照番号：ＮＭ＿０１９７６０又は寄託番号：ＮＭ＿０１９７６０  ＮＩＤ：ｇｉ  ９７９０２６８参照番号ＮＭ＿０１９７６０.１  差次的に発現されたムスムスクルス腫瘍１様（Ｔｄｅｌ１）；タンパク質参照番号：Ｑ９ＱＺＩ８又は寄託番号：Ｑ９ＱＺＩ８  ＮＩＤ：ムスムスクルス（マウス）．差次的発現腫瘍１タンパク質様（膜タンパク質ＴＭＳ−２）．MOUSESPTRNRDB；ヒト遺伝子配列参照番号：ＮＭ＿０２０７５５又は寄託番号：ＮＭ＿０２０７５５  ＮＩＤ：ｇｉ  ２４３０８２１２参照番号ＮＭ＿０２０７５５．１  ホモサピエンスのおそらくは差次的発言１様マウス腫瘍のオルソログ（ＴＤＥ１Ｌ）；ヒトタンパク質配列は、参照番号Ｑ９ＮＲＸ５又は寄託番号：Ｑ９ＮＲＸ５  ＮＩＤ：ホモサピエンス(ヒト)．差次的発現腫瘍１タンパク質様．ＨＵＭＡＮＳＰＴＲＮＲＤＢ．に対応する。
対象のマウス遺伝子は、Ｔｄｅ２(差次的発現腫瘍２)、ヒトＴＤＥ２のオルソログである。別名は、Ｔｍｓ２、ＴＭＳ−２、Ｔｄｅ１ｌ、ＡＩＧＰ２、膜タンパク質ＴＭＳ−２、及び差次的発現腫瘍１様等である。ＴＤＥ２は中枢神経系のニューロン（Grossman等、J Exp Biol 203 Pt 3:447-57 (2000)）、並びに膀胱、腎臓、及び筋肉等の他の複数の組織に発現する仮想の複合的原形質膜タンパク質である（Player等、Int J Cancer, 107(2):238-43 (2003)）。このタンパク質は、「ＴＭＳ膜タンパク質／差次的発現腫瘍タンパク質（ＴＤＥ）」ドメイン内に含まれる複数の膜貫通領域からなる。このドメインは、他の複数のタンパク質に見られ、様々な腫瘍及び細胞系に差次的に発現するファミリーからなる（Pfam寄託番号ＰＦ０３３４８）。例えば、ＴＤＥ２は、非小細胞肺癌において、隣接する正常組織より強く発現する傾向がある。対照的に、肺腫瘍におけるＴＤＥ２の発現は、隣接する非悪性器官支梢上皮よりも弱い傾向がある（Player等、Int J Cancer, 107(2):238-43 (2003)）。このタンパク質の機能は知られていない。
遺伝子情報：
wt        het      hom    合計
観察値      13        32      9      54
予想値      13.5      27    13.5    54
カイ二乗 = 2.44  有意性=0.29457  (hom/n) = 0.17  平均産仔数 =  6
突然変異型：レトロウイルス挿入（ＯＳＴ）
コード化エキソン１と２の間のイントロンにレトロウイルスを挿入した（ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿０１９７６０．１）
標的遺伝子の野生型の発現は、ＲＴ-ＰＣＲで試験された１３の成体組織試料の、骨を除くすべてにおいて検出された。
ＲＴ−ＰＣＲ分析により、分析した（−／−）マウス（Ｍ−１３３）に転写が無いことが判明した。標的遺伝子の破壊をインバースＰＣＲにより確認した。
【０３５５】
３５．１５．１．表現型分析(破壊した遺伝子：ＤＮＡ４８３３４−１４３５(ＵＮＱ３９６)
（ａ）全体的な表現型の要約：
ヒト差次的発現腫瘍２（ＴＤＥ２）のオルソログをコードする遺伝子の突然変異により、（−／−）マウスにおいて、成長遅延及び骨異常（骨測定値の減少）が発生した。また、（−／−）マウスは、平均血清グルコースレベルの上昇と耐糖性の不全を示した。加えて、オープンフィールド試験により、オープンフィールド試験期間中に変異（−／−）マウスの活動性が増大することが判明した。ＲＴ−ＰＣＲの結果、転写は無かった。
【０３５６】
（ｂ）骨代謝及び身体診断学
（１）組織質量及び除脂肪体重の測定−Ｄｅｘａ
Ｄｅｘａ分析−試験の説明
手順：このアッセイでは、４の野生型、４のヘテロ接合体及び８のホモ接合体からなるコホートを試験した。二重エネルギーＸ線吸収法（ＤＥＸＡ）を成功裏に用いて全組織量（ＴＴＭ）の変化を同定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
身体測定（体長及び体重）：週齢約１６週で体長及び体重の測定を行った。
結果：
（−／−）マウスは、性が一致する（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較して、平均体重及び平均体長の減少を示した。差異はオスの方に顕著であった。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ２０／４５／１０
病理学／顕微鏡観察：分析に使用した複数の（−／−）マウスに水頭症が見られた。
遺伝子発現：免疫組織化学分析により、一組の組織にＬａｃＺ活性は検出されなかった。分析したｗｔ／ｈｅｔ／ｈｏｍ：  ２／２／６
（２）骨代謝：放射線学的表現型分析
骨代謝の領域において、標的は、ここでは関節炎、骨粗鬆症、骨減少症及び大理石骨病の治療に対して同定し、並びに骨折治癒を促進する標的が同定される。試験には次のものが含まれる：
・大腿及び椎骨における骨塩量の測定のためのＤＥＸＡ
・骨梁及び皮質骨の双方の骨塩量の非常に高い解像度で非常に高い感度での測定のためのマイクロＣＴ。
Ｄｅｘａ分析−試験法の記述
手順：４匹の野生型、４匹のヘテロ接合体及び８匹のホモ接合体のコホートを、このアッセイにおいて試験した。二重エネルギーＸ線吸収測定法(ＤＥＸＡ)を成功裏に使用し、骨中の変化を同定した。麻酔した動物を検査し、骨塩量(ＢＭＣ)、ＢＭＣ／ＬＢＭ比、容積測定骨密度（ｖＢＭＤ）、全身ＢＭＤ、大腿ＢＭＤ及び椎骨ＢＭＤを測定した。
Avertin(１．２５％の２,２,２-トリブロモエタノール、２０ｍｌ／ｋｇ体重)を腹腔内注射することにより、マウスを麻酔し、体長及び体重を測定し、ついでＤＥＸＡスキャンのためにPIXImusTMデンシトメータ(Lunar Inc.)の台にマウスを腹臥位で置いた。Lunar PIXImusソフトウェアを使用し、骨密度（ＢＭＤ）及び脂肪組成(％脂肪)及び全組織量(ＴＴＭ)を関心領域(ＲＯＩ)[すなわち、全身、椎骨及び両大腿]で測定した。
骨マイクロＣＴ分析
手順：マイクロＣＴをまた使用して非常に高感度のＢＭＤ測定を行った。１つの椎骨と１つの大腿を、４匹の野生型及び８匹のホモ接合体マウスのコホートから取り出した。腰部の５つの椎骨梁(veterbra traebecular)体積、骨梁(traebecular)厚、結合密度、及び中軸大腿の全骨領域及び皮質厚の測定を行った。マイクロＣＴ４０スキャンにより、骨量及び構造の詳細な情報が得られた。複数の骨を試料ホルダーに配し、自動的にスキャンした。機器ソフトウェアを使用し、分析のための関心領域を選択した。骨梁パラメータを１６マイクロメーター解像度で第５腰椎(ＬＶ５)において分析し、皮質骨パラメータを２０マイクロメーターの解像度で大腿中軸において分析した。
結果：
ＤＥＸＡ： （−／−）マウスでは、その性別が一致する（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均全組織容積及び除脂肪体重の減少が示された。これらの変異動物はまた、平均骨塩量及び骨密度に関連する測定値の減少を示した。
マイクロ-ＣＴ分析：（−／−）マウスでは、性別が一致する（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較した場合、平均脊椎の椎骨梁の体積、数、厚み、及び結合密度の減少、並びに平均大腿骨中軸皮質厚の減少が示された。
分析値  wt／het／hom：４／４／８。
まとめ：
以上の結果から、ノックアウト変異マウスが、密度の減少と場合によっては骨折に繋がる脆弱性を伴う骨量減少を特徴とする骨粗鬆症に似た有意な骨量減少を伴う異常な骨代謝を示すことが判明した。よって、ＰＲＯ７３２ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨恒常性の維持に機能すると考えられる。加えて、ＰＲＯ７３２又はそのコード化遺伝子は、骨恒常性の維持、及び骨治癒に有用であるか、関節症又は骨粗鬆症の治療に有用であると考えられる。一方、ＰＲＯ７３２のアンタゴニスト又はそのコード化遺伝子は、関節炎、骨粗鬆症、骨減少症を含む異常骨代謝に関連する炎症性疾患を含む異常又は病的な骨障害を招くと考えられる。
ＤＥＸＡによって分析した（−／−）マウスは、その（＋／＋）同腹仔と比較した場合に全組織量及び除脂肪体重の顕著な減少を示した。これは、これら変異種に成長遅延が生じたことを示唆するものである。これを骨測定値の異常が見られたことと組み合わせると、カヘキシー等の組織消耗状態又はその他の成長関連障害が示唆される。よって、ＰＲＯ７３２ポリペプチド又はそのアゴニストは、骨障害の治療に有用であるだけでなく、カヘキシー及び／又はその他の組織消耗疾患消耗等の成長に関連する障害の予防に有用であると思われる。
【０３５７】
（ｃ）表現型分析：代謝−血液化学／耐糖性
代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、血糖測定を含む。ＣＯＢＡＳ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００(製造者：Ｒｏｃｈｅ)を使用して、マウスの血液化学試験を行った。代謝の分野において、糖尿病の治療を標的とすることができる。血液化学表現型分析は、インスリン感受性及び糖代謝の変化を測定する耐糖試験を含む。異常耐糖試験の結果は、以下の障害又は状態を示すことができるが、示唆されるのはそれらに限定されない：１型及び２型糖尿病、シンドロームＸ、様々な循環器疾患及び／又は肥満。
手順：このアッセイでは、２の野生型マウス及び４のホモ接合体からなるコホートを用いた。耐糖試験は哺乳動物における糖恒常性の欠失を定義するための標準法である。対応試験はＬｉｆｅｓｃａｎ社のグルコメーターを用いて実行した。動物に対し、２ｇ／ｋｇでＤ−グルコースの２０％溶液を腹腔内に注入し、注入後０、３０、６０及び９０分後に血糖値を測定した。
結果：
血液化学：（−／−）マウスは、性別が一致する（＋／＋）同腹仔及び背景的平均と比較して、平均血清グルコースレベルの上昇を示した。耐糖性試験において：４匹の（−／−）マウスを分析したところ、２匹（Ｍ−１５７及びＭ−볯隼볯覼臣膀胦ꖈ臣肸蟨馁苣袼볯込볯覼郥릅믤誏臣貃駦蒚맥螝臣钯볨鞁臣膀ꧧ릅駦股룦낂菣뎂菣릂菣馃菣꺁룤螘苣몤臣龁胣蚈黦鞁臣鞽뷯込뷯薽뷯込뷯辽뷯骼†볯込볯込볯㲘牢ਾ†믤誸臣钠ꧧ讁苣膀볯銈볯銈볯麃苣릂臣膀胦ꖈ臣肸蟨馁苣鶁臣袼볯込볯覼郥릅믤ꢁ꿦莼臣龁ꃥ袐臣膀볯ꒁ臣겸껥芙苧꺁藥ꚁ臣誁臣ꚁ胣ꎭ룥ꪁꧧ릅駦股돧꺁귥ꢜ룤ꞁ胣邀돧Ꞁ臣躽룤銂ꓧ馁臣ꢁ臣ꒈ飦鞁臣芀臣뺁苣膀菣莃苣ꊂ苣袃菣Ꚃ苣꾁胣隳臦뢸胦꺁룤ꢅ臣ꢡ迧醃苣벃菣銂ꓧ鞁胣鎾臣ꚁ胣낼볯꾼볯鎼볯鶃菣骃菣膃菣袼迥꾁臣꺁苣뒂菣릂菣覼迥꾁臣꺁苣벃菣隌臩鶼귥꾁胣隳臦뢸胦趸藥꺁닦芙臣覜铧ꞁ臣讂臣鶀苣貂苣芀㰊䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖袼뷯覼ꇨ뺏黥蚈黦骼볯꺼볯込ꗧ貵귥㲦牢ਾ†ꗧ貵귥꺁裥躇臣誁臣ꚁ胣蚈黦꾁胣鎁臣ꞁ臣膀곩薗胣ꢅ裨Ꞁ룤覮髩뎮胣ꢳ蓦ꂬ駩骤该Ꞁ髩뎮胣랼뿨Ꞁ髩뎮胣놵郥놤ꫨ螗胣趪鿧鲚껥膀韧骦臩辕迥뎁臣龄ꛨꢙ髩뎮苣ꮐ苣麥뗧鲚껥誏臣뺲ꗧ鲚껥꺁닦芙臣龁苣꺁苣뎃菣鲃臣覜諥ꢁ臣貂臣馨髧銂郥骮臣讂臣ꢁ臣蚛룤閁臣龁胣麥뗧鲚껥ꮁ臣貀룤覮髩뎮胣ꢁ껥ꦾ臣貂苣蒯雧貁郥뺁苣膀臣貂臣꾁胣邙껥閁苣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣膀믨ꚺ胣궸꣧ꚺ臣趸껥膀藥ꮺ臣뮌귥蒚諧讅臣袂苣趸껥鲚껥膀裥떮觧骮臣ꪁ臣趸껥鲚껥膀藥겈胦趸껥鲚껥膀菣讃菣꾂駧鲽胣莺ꃥ邁胦螗苣몤臣醃菣莃苣鲚껥膀뫥뒠臦隀韧꺁臣蒁菣讃菣꾂髩뎮胣莿髧隤若貾苣袃菣릂韧馀뻧膀ꓧ骼臦隀韧膀觧骮臣邁胦螗胣ꦉ돨颪駧Ꞁ룤覮髩뎮胣ꖀ胦ꊂ菣뎂菣ꮃꛧ궖胣랼뿨Ꞁ髩뎮胣莺ꃥ邁胦螗胣貏ꗦꞀ髩뎮볯袏臣ꦼ볯膀裥떮觧骮臣ꪁ臣貏ꗦꞀ髩뎮胣ꪾ鋧鞰돨薀雧ꎂ胣蚁臣薗胦鲚껥膀ꓥ蚁臣薗胦鲚껥膀냦蚈髩뎮胣ꦉ돨颪駧Ꞁ냦蚈髩뎮臣ꮐ臣貂苣芀諥袁臣膀룤覮髩뎮臣膀駩骮臣ꪁ臣貁胣ꖻ룤꺁꣧麡苣ꮐ苣몺ꃦ鲚껥ꮁ臩ꢔ臣讂臣ꢁ苣ꞁ臣讂볯辁鿥Ꞁ胣趏ꓧ骼胦膀鯥뾁胦財该膀ꋥ貕럧몺ꃦ鲚껥膀뻤颭韧膀볦肊胦膀蟨놷蓦Ꞁ胣랼뿨Ꞁ胣蚈ꏨꞀ胣誏臣놵郥놤ꫨ讞胦베胣㲂牢ਾ†触蚠볯㲚牢ਾ†ꇨ開苣꾂菣벃菣뎃苣銂볯릌臣躇铧讞胣钼賥꺁菣蚃菣ꖎ郥鎽迥뎁볯릌臣鮃菣ꖎ郥鎽ꓥ낕菣Ꚃ苣讁苣ꪁ苣뎂菣벃菣ꮁ꿥鞁臣龮雦鞁臣芀藥ꚁ臣財该ꚩ꣩꾁胣龔귥Ꞁ臣躽룤ꮁ苣誂ꧨ鎨臣芙鳦銂韦膂臣醁苣낁臣覂臣蒁駩誂胣醼볯놀뷩ꢁ볯隼胩ꊽ臣鎖臣財臣龁胣鎁苣覂臣ꚩ꣩꾁룤覮胣뮴该것菣ꮃ迥뎁軦ꊴ苣겸껥馁苣龁苣꺁苣벃菣뎃菣ꎂ菣ꮃ菣ꚩ꣩銂郥鎂臣蒁臣芀戼㹲 †ꪂ菣鞃菣閃苣벃菣覃ꧨ鎨볯㲚牢ਾ†韦ꖟ臣겖觧꺁맥ꒁ臣꺁꣦蒚臣ꪂ菣鞃菣閃苣벃菣覃ꧨ鎨臣ꢡ迧讞苣몤臣龁胣鎁苣覂臣꾁苣ꦃ菣讃菣袃菣뎃苣鶃菣뾂菣膀菣벃菣龃菣袃菣뎃苣鶃菣뾂菣袼楇潲覭‬丠瑡牵⹥ㄠ㤹‶敆⁢㔱㌻㤷㘨㘵⤶㘺㘰ㄭ⤲胣誏臣Ꞽ볯ꊼ볯것苣鞃苣벃䠨浯湡捩覭‬牐捯丠瑡⁬捁摡匠楣唠匠䄠‮㤱㜹䄠牰ㄠ㬵㐹㠨㨩ㄴ㌴㠭볯꺁菣莃苣ꊂ苣袃苣ꮐ苣芀蟨開賥閁苣龁苣벃菣뎃菣ꎂ菣ꮃ菣ꊂ菣뮂苣銂苣릂苣麃苣몂臣ꚁ蓦薃諧讅臣ꊖ臣讂ꓥ隌迥뎁귥銿臣ꊖ臣讂軦ꊴ菣뾂菣뎃臣ꊖ臣讂ꓥ隌苣놉臣龁胣袅臣膀菣ꎂ菣ꮃ菣袼볯邼볯钼볯莽뷯覼苣麃苣릂臣뺯臣ꚁ꿦莼髧Ꞥ臣辁臣讂苣蚁臣뢁諦鞁胣袂臣ꚁ軦ꊴ臣ꊖ胩馁苣ꪇ駧讁该꺁ꓥ隌苣随苣誸臣龁胣뺁臣膀뫥ꮁ臣膀軦ꊴ臣릉臣ꊖ胩鞁臣뮴该ꞁ臣讂볩銂ꫧꎁ뻨肂臣ꢁ苣꾏菨ꮁ臣讂볯ꒁ臣뒩臣芁苣芀맥ꒁ臣꺁菣ꆂ苣뾂菣貁臣꺁ꧨ鎨臣ꊖ胩鞁臣龄菦뚊藦銂ꯩ膂苣龁苣ꮁ臣龁꣨袨臣貂臣芀苣벃菣뎃菣ꎂ菣ꮃ菣ꚩ꣩꾁菣Ꚃ苣貁ꧨ鎨臣貂苣肜裥꺁껥鎨髧讉ꃩꞁ臣誂胣ꪁ臣貂苣겸껥꾁ꋨ鎨뷤꺁菣ꎃ菣邃菣ꢁ臣肜裥꺁뗧鎨臣芁臣龁胣뺁臣膀苣벃菣뎃菣ꎂ菣ꮃ菣꾁飦讂臣ꞅ苣鞁臣芀臣貂苣꺁菣ꆂ苣뾂菣꺁藥ꚁ臣낖臣辁苣벃菣뎃臣목雩ꮁ雩ꎀ臣龁蟨뚄臣趸껥銂ꯩ膂苣芀臣蒁臣膀軦ꊴ듦開臣醃苣벃菣ꢁ뫥袐臣膀觧ꮁ룤莿臣覂臣ꢅ꟧開럨ꊛ꿦꾁胣趸껥袏臣놬臣뺯臣讂뷧誂苣馁臣ꮁ雩馁苣覤賥銂귨ꖈ臣讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂胣鎼臣꺁闧ꪁ臣龁菣馃菣ꞁ臣꒵ꓥ骷菣벃菣銂铧蒁臣Ꞥ臣ꪁ듦開ꃩ龟볯钼볯莽뷯颽볯邼뷯趽胣䆁捣卵慣⁮湉瑳畲敭瑮꺁敖獲䵡硡该ꦉ듦開胦ꊃ菣뾂菣랂苣蚃菣覼苣ꢔ臣ꚁ胣讫臣誸臣誂胣뒩臣꺁볩꺁ꫧꎁ뻨뾁胣誏臣ꪇ駧讁该銂꣨늌臣龁胣開觧銂룤莿臣꺽臣膀臣꺁듦開苣銼볯蚈雩겸껥鞁臣芀臣꺁ꧨ鎨臣螃菣뾂苣钼裥鎖髩ꞁ볯麛裥邞臣龁胣뮧该鞁臣ꢅ럨ꊛ볯莽뷯覼胣芞鯧뮧该낕볯讫臣誸臣誂볯膀ꧧ膪臣벾臣낕胣誏臣궸뿥讁苣꺁藥뮧该鶷鯩钯苣風賩鞁臣芀戼㹲 麃苣릂臣낖臣蒁鋧莢臣뺯臣ꚁ귦뢸臣뒦賥鲿귧銂ꓧ馁若醐苣膀볯麛臣芙雩鎖髩ꮁ苣龁苣鶁臣뒰맥ꪇ駧讁该꺁藥覤賥銂뇦骮臣讂臣ꢁ臣袂苣閩뻤鞁臣芀뗧芙髧ꪁ듦開胦꺁ꓥ隌臣鎁臣鞮껥뺂臣꾁胣뚵꿥ꒀ苣誂苣ꎭꛨ隌臣貂臣ꢅ꟧開럨ꊛ苣뾽铧鞁臣몱껥鞁臣芀若趁臣閼鯥꺁駦鎖雩钚臣鶁苣麁苣ꮁ臣醁苣ꎭꛨ隌臣貂臣뮴该銂胩鞁臣꺁鯥낸鯧骷臣覂뇦骮臣龁胣ꎭ룥ꪁ뿧ꎅ뷤ꢔ臣ꂲ臣뺂臣ꒀ臣袂臣ꚁꇨ閁苣讂胣蚈黦鞁臣鞽뷯込뷯薽뷯込뷯辽뷯骼†볯込볯込볯㲘牢ਾ†뗧鲞볯㲚牢ਾ†볯銈볯銈볯麃苣릂臣膀臣꺁胦ꖈ臣肸蟨馁苣袼볯込볯覼郥릅믤ꢁ꿦莼臣龁ꃥ袐胣ꪂ菣鞃菣閃苣벃菣覃ꧨ鎨臣鎖臣膀룤莿ꃩ龟臣誁臣ꚁ菣뢂苣뎃郥袨駦鎖臣鮸냥銂ꓧ鞁臣芀臣貂臣膀ꓥ낕黥ꮁ臣醁苣趸껥颧뿥钭臣鞢諥銂ꓧ鞁臣蒁苣芀룤낿臣袂臣ꮁ胣ꪂ菣鞃菣閃苣벃菣覃ꧨ鎨臣鎖臣膀ꇩ鞑臣꺷闧貁ꛨ龯臣貂臣芀볯銈볯銈볯麃苣릂臣膀臣꺁胦ꖈ臣肸蟨馁苣袼볯込볯覼郥릅믤ꢁ꿦莼臣龁ꃥ袐胣궸뿥颠鿥ꮁ臣蒁臣ꆃ苣ꊂ菣袐꣨芙雩꺁룦醰苣몤臣龁胣鎁臣꺨臣財该꾁胣趸껥颧뿥钭臣鞢諥ꢁ룤뒇臣ꚁ臣讂胣袂臣ꚁ胣躃菣꾂苣Ꚃ菣麃苣릂臣膀믨ꚺ臣覂룤ꚺ臣趸껥膀藥ꮺ臣뮌귥蒚諧讅臣袂苣趸껥誏臣込臣龁臣貺ꗦꞀ髩뎮볯뮴该ꊺ胩鮼蓦骦髩뎮볯랼뿨Ꞁ髩뎮胣뺲ꗧ蚈ꏨ螗迥꾁臥랟胦Ꞁꃦꮁ雩ꎀ臣讂룤覮雩ꎀ雧ꎂ臣肸蟨馁苣ꢡ迧讞苣몤臣龁胣袂臣ꚁ胣낼볯꾼볯鎼볯鶃菣骃菣膃菣袏臣鶁臣ꊂ苣讃苣袃臣膀臣꺁苣蚁臣麥뗧ꚭ髧鲚껥꺁닦芙迥꾁룤覮雧ꎂ臣뒼臣뒾胥꺁铦蒖臣覜铧ꞁ臣趂臣芀㰊䥄㹖胣邼볯閼볯醀⼼䥄㹖鎼볯躼볯隼†볯꺼볯閼볯颼볯隼裢醼볯邼볯袼볯꺼볯钼볯鞼볯몁볤邭ꃧ誣苣覜臣讂菣Ꚃ苣꺁뷤붣迥뎁裥邞戼㹲 鎁苣覂臣躃菣꾂苣Ꚃ菣龮꣩ꞁ臣膀볯늼볯醼볯邼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣몁볤邭꒼볯ꆼ볯颼볯钼볯銈볯钼볯馼떼볯놼볯颼볯⦗臣붑郥⦍苣뒠ꏥ鞁臣芀臣貂苣꺁ꃧ뚩臣龁苣꺁臩鶼귥릉闧蒚菦놠臣ꆬ臣骀苣ꞁ臣讂볯覤闧鞁臣麃苣릂臩鶼귥꾁곦꺁苣꺁臣뺯뿥馁苣骼菣꾂菣ꪂ菣覃迥ꞅ闧랏볯꺼볯뾼볯鎼볯閼볯醼迥꾁꿥鞨闧랏볯꺼볯뾼볯鎼볯閼볯醼†볯ꦼ볯骼뷯覽†볯钼볯醼볯閼볯醼迥ꞅ闧랏볯궼볯邼볯銼볯钼볯躼볯ₑꂃ苣ꂃ苣꾂菣릂菣鞃苣뢂菣鞊迨骃菣膃菣袼볯膽뷯邽볯鮼苣뎃菣꾂돨芏藧ꪕ迥骼볯馼볯놼볯醼迥꾁꿥鞨闧랏볯놼볯ꖼ볯銼볯ₑ꺼볯꒼볯ꂃ苣ꂃ苣꾂菣릂볯麃苣릂볯躼菣궃菣鞃苣뢂菣袼菣鞃苣뢂菣鞊迨骃菣膃菣覼볯䶎問䕓偓剔剎䉄볯銃菣몁볤邭藩鞈迥ꞅ闧랏볯꺼볯뾼볯銼볯醼볯閼迥꾁꿥鞨闧랏볯꺼볯뾼볯銼볯醼볯閼†볯ꦼ볯骼뷯覽†볯邼볯隼볯馼볯銼迥ꞅ闧랏볯궼볯邼볯醼볯鞼볯躼볯ₑ鮃菣떂菣ꢂ菣릂菣鞃苣뢂菣鞊迨骃菣膃菣袼볯ꆼ볯낼볯鮼菣袃苣뎃菣꾂돨超裥꾁胣芏藧ꪕ迥낼볯醼볯鞼볯袏臣蒯꣨ꪕ迥骼볯颼볯醼볯銼†볯ꦼ볯骼菣ꊃ苣钃苣뎃苣⢹菣袃躼諦貏菣鞃菣覃菣鞃苣뢂菣趉꟩鎽볯鶂蟨몙迧鞊迨骃菣膃菣覼볯겼볯ꆼ볯銈볯覼볯꺻菦鶂蟨ꮅ飧ꪃ苣것菣떂菣覼볯낼볯뒼볯覼颃菣랂苣뎃볯閼볯ꢼ볯낼볯銼볯覼볯颃菣랂苣뎃볯邼볯ꢼ볯낼볯銼볯覼苣ꮐ苣嶀볯䢎䵕乁偓剔剎䉄臣뺯뿥馁苣芀戼㹲 뒠ꏥ閁苣龁菣Ꚃ苣몁볤邭臣膀菣鞃苣뢂菣鞊迨骃菣膃菣袼볯膽뷯邽볯膀菣袃볯ꆼ볯낼臣ꪂ菣붂菣낂臣芁苣芀裥趐臣膀볯ꖼ볯ꎼ볯膀볯ꖼ볯ꎼ胣ꢼ볯ꖼ볯膀볯ꖼ볯낼볯膀볯ꖼ볯낼裢醼胣誏臣鶂蟨몙迧鞊迨骃菣膃菣覭臣芁苣芀戼㹲 ꢼ볯궼볯꾁胣뮸臣鶂蟨讁苣蚈돦閁苣讂苣뎃菣꾂돨ꞁ臣誂胣蒉ꫨ肯菣ꮃ菣뎃迥뎁蟨뚄藥ꮖ臣ꆃ菣ꎂ苣벃苣벃臣鞁臣龩菨馁苣芀볯钼苣龃菣뢅苣뎃菣꾂돨꾁胣ꎼ鳦꾫臣膀볯閼苣龃菣뢅菣鞃苣뢂菣뎂苣膀菣궃菣鞃菣覃胣誏臣랂苣誃菣骃菣膃菣銂郥肂胣ꎭ臣뮛跨銂賦ꒁꛨ뒰胦议鿥ꢁ胣邈蛧銼볯ꊂ菣躃藩颃菣랂苣뎃苣ꊂ菣鞃菣覃臣ꪦ냦Ꞁ껦몟臣꾁ꧧ鎖髧ꮁ鯩貂臣誁苣膀菣鞃菣覃臣내迨鲆苣뒠ꏥ閁臣讂臣ꢁ臣꾏菨ꞁ臣讂볯䞈湡⁺潔慭⹳‬求潯Ɽㄠ㈰㌨㨩㠷ⴳ‸㈨〰⤳볯芀戼㹲 ꢼ볯궼볯꾁胣蒉臦뢸胦ꮁ雩躸臣ꚁ臣讂胣蒉臣ꂲ跨貁ꋥꞤ臣讂臣膀볯ꆼ볯낼臣몙迧貁ꋥꞤ臣膀臣꺁뗧鲞ꏩ论胦蒉郥躏胣貵菨꒛胦蒉볨膀胣誏臣뺄蟨誏臣鶂蟨麃苣궃菣ꆂ菣뢂臣覂臣蒉臣뮧该貁룦醰臣讂胣ꢼ볯궼볯몁볤邭臣覤闧꾁胣ꖋ맥Ꞁ臩鶼胦颃菣꾂菣麃菣벃苣릂苣閼臣략臣鞁胣蒉臣躁단랍胣鶂ꇧ覤胣莿귧螗胣ꊖ꿧躂迥뎁蛥蚈돦趸藥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麃菣낂菣閃苣벃꣦芄臣놅鳦邵郥閁苣讂胣鞊뷤貁꣦芄臣邵郥閁苣膀꣦芄臣隃菣莃苣閁苣膀ꫨ躰뷤릨蓨꾁ꏨꂀ胨꺁賦몤臣鎾臣ꚁ듦蒵臣貂苣芀戼㹲 鎁臣袂臣ꪁ藥ꮖꛨ貒胦ꮂ菣ꂃ臣膀迥뚺賥ꊽ藦꺁볯늼볯醼볯隼胣낼볯꾼볯醼볯膀볯늼볯銼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯閼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯鎼볯颼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯鎼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯钼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯鎼胣낼볯꾼볯醼볯钼胣낼볯꾼볯醼볯醼胣낼볯꾼볯銼볯钼胣낼볯꾼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯鎼볯鎼胣낼볯꾼볯閼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯隼胣낼볯꾼볯颼볯醼胣낼볯꾼볯钼볯馼胣낼볯꾼볯鞼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯钼胣낼볯꾼볯邼볯鞼胣낼볯꾼볯钼볯閼胣낼볯꾼볯邼볯邼볯膀볯늼볯醼볯銼볯銼胣낼볯꾼볯醼볯邼볯袏臣낼볯꾼볯鞼볯鶃菣骃菣膃菣銂郥覜臣讂듧麃臣覂臣뮔裥銂ꫨ붣臣讂臣ꢁ臣袂苣낼볯꾼볯馼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯閼볯隼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯钼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯钼볯邼볯膀볯늼볯閼볯銼볯膀볯늼볯閼볯馼볯膀볯늼볯隼볯馼볯膀볯늼볯鞼볯銼볯膀볯늼볯醼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯颼볯膀볯늼볯隼볯鞼볯馼迥꾁볯늼볯鞼볯馼菣ꪃ菣鞃菣覃臣뺲ꏨꮁ臣蒁臣ꦈ铧閁苣讂胣鎁臣뾪ꏨꦉ臣膀듦蒵觥꺁럦ꂊ迥꾁臣꺁裥躇臣겅鿧꺁雦閳臣袂苣꺾裥ꂁ뿥蚈鯩銂믤鞁臣鞾苣貂苣ꢅ듧麃迥꾁듧麃裦蚈铧蚈臣꾏뫦隌臣袂苣颪냥閁苣讂胣芁苣蒁臣膀苣낂菣ꮃ藩鞈苣ꮐ苣꾏뫦隌菣ꪃ菣鞃菣覃臣膀듧麃臣邈闩馁苣릟鳥궸臣覜铧ꪁ蟩ꞁ裥貳臣貂苣芀戼㹲 꾏뫦隌볯늼볯醼볯隼胣낼볯꾼볯醼볯膀볯늼볯銼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯閼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯鎼볯颼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯鎼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯钼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯鎼胣낼볯꾼볯醼볯钼胣낼볯꾼볯醼볯醼胣낼볯꾼볯銼볯钼胣낼볯꾼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯鎼볯鎼胣낼볯꾼볯閼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯隼胣낼볯꾼볯颼볯醼胣낼볯꾼볯钼볯馼胣낼볯꾼볯鞼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯钼胣낼볯꾼볯邼볯鞼胣낼볯꾼볯钼볯閼胣낼볯꾼볯邼볯邼볯膀볯늼볯醼볯銼볯銼胣낼볯꾼볯醼볯邼볯袏臣낼볯꾼볯鞼볯鶃菣骃菣膃菣ꮐ鳦뾪ꏨꦉ臣膀藥ꮖꛨ貒胦ꮂ菣ꂃ苣骀臣貂胣ꮂ菣ꂃ臣낼볯꾼볯馼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯閼볯隼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯钼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯钼볯邼볯膀볯늼볯閼볯銼볯膀볯늼볯閼볯馼볯膀볯늼볯隼볯馼볯膀볯늼볯鞼볯銼볯膀볯늼볯醼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯颼볯膀볯늼볯隼볯鞼볯馼迥꾁볯늼볯鞼볯馼菣ꪃ菣鞃菣覃臣붥臣鞁臣뢐鷧銂臣鮁苣ꆝ믤许볯设臣낁胣鞴뗦ꒉ귥ꢜ룤꺁ꯩꒂ苣뎃볥ꚺ菣莃菣ꆂ菣覼臣鞴뗦閁苣讂胣ꒁ臣ꞁ胣ꮂ菣ꂃ臣膀諦鎽볯낼볯꾼볯銼볯膀諦鎽볯낼볯꾼볯鎼볯膀諦鎽볯낼볯꾼볯醼볯膀諦鎽볯낼볯꾼볯鎼볯颼胣鞊뷤込볯늼볯钼볯钼볯膀諦鎽볯낼볯꾼볯钼볯鎼胣膀諦鎽볯낼볯꾼볯邼볯馼볯膀諦鎽볯낼볯꾼볯醼볯颼볯膀諦鎽볯낼볯꾼볯閼볯袏臣鞊뷤込볯늼볯醼볯颼볯鶃菣骃菣膃菣邵郥銂裥ꎧ臣讂鷦뚻룤袼뻤袁臣膀듧銼胣鎼臣蒁臣龁뷤邽볯邃菣閃苣벃胣颫뿦ꚺ臣뾰듧袏臣膃苣랂苣뎃藩ꒂ苣뎃귧꺁苣ꪂ菣궃菣鞃볯ꞁ뫦ꊛ臣貂胣낼볯꾼볯馼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯閼볯隼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯钼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯钼볯邼볯膀볯늼볯閼볯銼볯膀볯늼볯閼볯馼볯膀볯늼볯隼볯馼볯膀볯늼볯鞼볯銼볯膀볯늼볯醼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯颼볯膀볯늼볯隼볯鞼볯馼迥꾁볯늼볯鞼볯馼菣ꪃ菣鞃菣覃臣躏鯩閁苣讂胣ં䐼噉邀볯钼볯颼胣㲑䐯噉ਾ껥붖뻤钼볯骼雨ꦉ苣꾂菣벃菣뎃苣㲰牢ਾ†鳦몙飦꾁胣낼볯꾼볯馼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯閼볯隼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯钼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯醼볯醼볯膀볯늼볯醼볯鞼볯膀볯늼볯醼볯颼볯膀볯늼볯醼볯馼볯膀볯늼볯钼볯邼볯膀볯늼볯閼볯銼볯膀볯늼볯閼볯馼볯膀볯늼볯隼볯馼볯膀볯늼볯鞼볯銼볯膀볯늼볯醼볯醼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯颼볯膀볯늼볯隼볯鞼볯馼迥꾁볯늼볯鞼볯馼菣ꪃ菣鞃菣覃迥꾁臣꺁뗧袐雦螉苣꺨胣꺁雨ꦉ苣꾂菣벃菣뎃苣肊ꇨꮁ臣蒁臣뾽铧馁苣鎁臣ꮁ苣讂賥袐觧꺁苣꾂菣벃菣뎃苣ꮁ臣ꎁ臣릉臣覜铧ꞁ臣讂胣鶁臣袂臣ꪁꧨ鎨臣ꢔ臣覂苣讂볯늼볯醼볯隼胣낼볯꾼볯醼볯膀볯늼볯銼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯閼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯鎼볯颼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯鎼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯钼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯鎼胣낼볯꾼볯醼볯钼胣낼볯꾼볯醼볯醼胣낼볯꾼볯銼볯钼胣낼볯꾼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯鎼볯鎼胣낼볯꾼볯閼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯隼胣낼볯꾼볯颼볯醼胣낼볯꾼볯钼볯馼胣낼볯꾼볯鞼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯钼胣낼볯꾼볯邼볯鞼胣낼볯꾼볯钼볯閼胣낼볯꾼볯邼볯邼볯膀볯늼볯醼볯銼볯銼胣낼볯꾼볯醼볯邼볯袏臣낼볯꾼볯鞼볯鶃菣骃菣膃菣袏臣궖觧꾁胣뚺뛦궸臣ꪇ铧뚊藦ꞁ苣膀鯥鎽铦膌뷤ꮁ鯥骮臣貂臣节胣내菨ꢡ鷩ꮁ详膌臣貂臣蒁臣节胣隈臣꾁듧麃蛥ꮁ뷤꺽臣ꚁ臣ꚁ苣袂臣芀雨ꒉ苣꾂菣벃菣뎃苣꺁룤ꒁ臣릖돦ꞁ臣膀볯늼볯醼볯隼胣낼볯꾼볯醼볯膀볯늼볯銼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯閼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯鎼볯颼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯鎼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯钼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯鎼胣낼볯꾼볯醼볯钼胣낼볯꾼볯醼볯醼胣낼볯꾼볯銼볯钼胣낼볯꾼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯鎼볯鎼胣낼볯꾼볯閼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯隼胣낼볯꾼볯颼볯醼胣낼볯꾼볯钼볯馼胣낼볯꾼볯鞼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯钼胣낼볯꾼볯邼볯鞼胣낼볯꾼볯钼볯閼胣낼볯꾼볯邼볯邼볯膀볯늼볯醼볯銼볯銼胣낼볯꾼볯醼볯邼볯袏臣낼볯꾼볯鞼볯鶃菣骃菣膃菣袏臣궖觧銂駧뺏臣讂뗧鮏臣뢠藩ꞁ껥骮臣袃菣뎃苣閃苣꾂苣ꞃ菣閁苣讂鳧뢠铧ꦉ迥꾁軥뢠铧ꦉ껥뮸듧麃苣ꦈ铧馁苣芀雨ꒉ臣膀臣꺁苣蚁臣袃菣뎃苣閃苣꾂苣ꞃ菣내菨ꮁ꿥鞁臣膀ꯧ袐髧邵郥ꊂ菣뮂苣ꮁ苣ꎁ臣릂苣ꪃ菣讃菣낂臣貂苣芀铧颭迥붃迥꾁鯥骮賥ꊽ藦꺁臣骁苣讁臣袂臣ꚁ胣鎁臣袂臣ꪁ듧麃臣馨뫦蒚臣邵郥ꊂ菣뮂苣ꞁ뷤ꢔ臣趁苣芀뻤袁臣膀볯늼볯醼볯隼胣낼볯꾼볯醼볯膀볯늼볯銼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯閼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯颼볯膀볯늼볯鎼볯颼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯鎼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯钼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯鞼볯銼胣낼볯꾼볯邼볯鎼胣낼볯꾼볯醼볯钼胣낼볯꾼볯醼볯醼胣낼볯꾼볯銼볯钼胣낼볯꾼볯銼볯颼胣낼볯꾼볯鎼볯鎼胣낼볯꾼볯閼볯邼胣낼볯꾼볯颼볯隼胣낼볯꾼볯颼볯醼胣낼볯꾼볯钼볯馼胣낼볯꾼볯鞼볯閼胣낼볯꾼볯馼볯钼胣낼볯꾼볯邼볯鞼胣낼볯꾼볯钼볯閼胣낼볯꾼볯邼볯邼볯膀볯늼볯醼볯銼볯銼胣낼볯꾼볯醼볯邼볯袏臣낼볯꾼볯鞼볯鶃菣骃菣膃菣袏臣궖觧ꢁꧨ鎨臣貂苣ꚩ雨꺁雩ꞁ臣螤郥鎽臣ꊽ裦銂룦骮臣ꚁ苣蒁胣芁苣蒁臣膀ꧨ鎨臣讂ꧨ겖臣袂臣ꚁ铧骁苣낼볯꾼볯馼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯钼볯膀볯늼볯銼볯隼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯銼볯鞼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鎼볯钼胣낼볯꾼볯閼볯膀볯늼볯閼볯隼胣낼볯꾼볯銼볯膀볯늼볯鞼볯醼胣낼볯꾼볯鎼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯邼볯膀볯늼볯醼볯閼볯膀볯늼볯醼볯钼볯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