(57)【要約】  本発明は、１種のアミノ酸とタンパク質加水分解物とを含む組成物を記載している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種のアミノ酸とタンパク質加水分解物とを含む組成物。
【請求項２】
前記１種のアミノ酸がロイシンである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
炭水化物をさらに含む請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
糖尿病前症または耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満、あるいは確定した２型糖尿病を患う個体における２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）の処置または予防に適した請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
加水分解されていないタンパク質が存在する請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
対象に対し、体重１ｋｇ当たり０．００５ｇから体重１ｋｇ当たり約１ｇまでの１日の投与量を投与するのに十分な量のロイシンを含む請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
対象に対し、体重１ｋｇ当たり０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約３ｇまでの１日の投与量を投与するのに十分な量のタンパク質加水分解物を含む請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
対象に対し、体重１ｋｇ当たり０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約３ｇまでの１日の投与量を投与するのに十分な量の加水分解されていないタンパク質を含む請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
対象に対し、体重１ｋｇ当たり０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約７ｇまでの１日の投与量を投与するのに十分な量の炭水化物を含む請求項３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物を含む投与ユニット。
【請求項１１】
前記投与ユニットの形態が固形である請求項１０に記載の投与ユニット。
【請求項１２】
０．０１ｇ〜約５ｇのロイシンを含む投与ユニット。
【請求項１３】
前記投与ユニットが約０．１ｇ〜約５０ｇのタンパク質加水分解物を含む請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の投与ユニット。
【請求項１４】
前記投与ユニットが約０．１ｇ〜約５０ｇの加水分解されていないタンパク質を含む請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の投与ユニット。
【請求項１５】
前記投与ユニットが約０．３ｇ〜約１５０ｇの炭水化物を含む請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の投与ユニット。
【請求項１６】
食品または飲料、あるいは食品または飲料のためのサプリメント組成物である請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
ロイシンとタンパク質加水分解物との組合せの使用であって、前記ロイシンが、投与しようとする対象の体重１ｋｇ当たり０．００１ｇから体重１ｋｇ当たり約１ｇまでの１日の投与量を与えるのに十分な量で用いられ、前記タンパク質加水分解物が、投与しようとする対象の体重１ｋｇ当たり０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約３ｇの１日の投与量を与えるのに十分な量で用いられる、使用。
【請求項１８】
前記組合せが、食品または飲料、あるいは食品または飲料のためのサプリメント組成物中に存在する請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記組合せが、１型または２型糖尿病の処置、あるいは糖尿病前症または耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満を患う個体における２型糖尿病の予防を目的とするものである請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記組合せが、１型または２型糖尿病の処置、あるいは糖尿病前症または耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満を患う個体における２型糖尿病の予防のための医薬組成物を調製するために用いられる請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
１型および２型糖尿病の処置、ならびに糖尿病前症または耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満を患う個体における２型糖尿病の予防のための方法であって、かかる処置を必要とする対象に対して、ロイシンおよびタンパク質加水分解物を投与することを含む方法。
【請求項２２】
血漿インスリンを増加させるためのロイシンおよびタンパク質加水分解物の使用。
【請求項２３】
２型糖尿病または糖尿病前症における、血漿インスリンを増加させるためのロイシンおよびタンパク質加水分解物の使用。
【請求項２４】
２型糖尿病または糖尿病前症における、食後の血中グルコース濃度を低下させるためのロイシンおよびタンパク質加水分解物の使用。
【請求項２５】
２型糖尿病または糖尿病前症における、食後の血中インスリン分泌を高めるためのロイシンおよびタンパク質加水分解物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、新規な栄養補助組成物に関する。
【０００２】
糖尿病は、これまで治療法がなかった一般に広まっている慢性疾患である。糖尿病の発生率と有病率は急激に増加しており、糖尿病は、先進国および発展途上国で最も一般的な代謝性疾患の１つである。糖尿病は、多くの病原体を原因とする複雑な疾患であり、インスリン分泌および／またはインスリン耐性の障害に関連する、炭水化物、タンパク質および脂肪の代謝障害を特徴とする。これにより、空腹時および食後の血中グルコース濃度が高まり、処置せずにおくと合併症を招く。この疾患の主な分類は２つあり、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ、Ｔ１ＤＭ）とインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ、Ｔ２ＤＭ）である。Ｔ１ＤＭは１型糖尿病であり、Ｔ２ＤＭは２型糖尿病である。
【０００３】
Ｔ１ＤＭおよびＴ２ＤＭ糖尿病は、高血糖、高コレステロール血および高脂血に関連している。Ｔ１ＤＭおよびＴ２ＤＭのそれぞれにおける、絶対的インスリン欠乏およびインスリン不感受性は、肝臓、筋肉および脂肪組織によるグルコース利用の減少と、血糖値の上昇とを招く。コントロール不良の高血糖は、腎症、神経障害、網膜症、高血圧症、卒中および心臓病を含む、微小血管疾患および大血管疾患のリスク上昇に起因する死亡率の増加および早死にに結び付く。厳しい血糖コントロールがＴ１ＤＭおよびＴ２ＤＭの両方のこれらの合併症の予防の主な要因であることが最近実証された。したがって、薬剤または治療レジメンによる最適な血糖コントロールが、糖尿病の処置のための重要な手法である。
【０００４】
Ｔ２ＤＭの治療法は初めに、食習慣および生活習慣の変化を伴い、これらの手段が十分な血糖コントロールを維持できない場合、患者は経口血糖降下薬および／または体外からのインスリンによって処置される。Ｔ２ＤＭの処置のためのこの経口薬剤としては、インスリン分泌を高めるもの（スルホニル尿素剤）、インスリンの肝臓への作用を改善するもの（ビグアニド剤）、インスリン感作剤（チアゾリジンジオン）およびグルコースの取込みを阻害する働きをする試剤（α−グルコシダーゼ阻害剤）が挙げられる。しかし、現在入手可能な試剤は一般に、高血糖、膵臓細胞機能の進行性低下から生じる高血糖の進行性悪化のため、長期間にわたって十分な血糖コントロールを維持できない。目標血糖値を維持できる患者の割合は、追加の／代替の薬剤の投与を必要とする時間が経つにつれ著しく低下する。さらに、薬剤には望ましくない副作用がある場合があり、高い一次的および二次的な事故発生率（ｆａｉｌｕｒｅ  ｒａｔｅ）に結び付く。最後に、血糖降下薬の使用は、血糖値をコントロールするのに有効であり得るが、糖尿病の全ての合併症を予防することはできない。このため、全てのタイプの糖尿病のための現在の処置方法は、正常血糖および糖尿病性合併症の予防という理想を実現することはできない。
【０００５】
したがって、Ｔ１ＤＭおよびＴ２ＤＭの処置における最適な治療法は、インスリンおよび経口血糖降下薬の投与に基本的に基づくものであるが、糖尿病の処置および予防のための副作用が最小限の安全で有効な栄養補助サプリメントに対する必要性がある。多くの患者は、高用量の薬剤に付随する副作用を最小限に抑えるとともに付加的な臨床的有益性をもたらし得る代替の治療法に関心がある。糖尿病の患者は、補助療法として用いることが可能な、抗糖尿病作用が緩やかで主な副作用がない「自然療法」として認識されている処置に特に関心がある。Ｔ２ＤＭは、進行性の慢性疾患であり、通常、インスリンの生成に関与する膵臓細胞（ランゲルハンス島のβ細胞）にかなりの損傷が発生するまで認識されない。したがって、β細胞の損傷を防止し、ゆえに、リスクのある人、特にＴ２ＤＭを発症するリスクの高い高齢者におけるＴ２ＤＭの顕性化の進行を防止するのに用い得る食餌サプリメントの開発がますます関心を集めている。グルコースおよび脂質がβ細胞に損傷作用を及ぼすため、膵臓のβ細胞の保護は、血糖値および／または血中脂質値を低下させることによって行われ得る。血糖値の低下は、様々な機構によって、例えば、インスリン感受性を高めることによって、および／または肝臓におけるグルコースの産生を低減することによって達成され得る。また、血中脂質値の低下は、様々な機構によって、例えば脂質酸化および／または脂質貯蔵を高めることによって達成され得る。膵臓のβ細胞を保護するための別の可能な戦略は、酸化的ストレスを低減することであろう。酸化的ストレスはまたβ細胞の損傷を引き起こし、その結果インスリン分泌の減少およびＴ２ＤＭの顕性化の進行が伴われる。
【０００６】
したがって、Ｔ２ＤＭは、多くの器官部位における合併した障害（すなわち、筋肉および脂肪組織におけるインスリン作用に対する耐性、膵臓のインスリン分泌の障害、肝臓におけるグルコースの産生の非抑制性）に起因する合併疾患である。それらの障害は、脂質異常および内皮機能不全に関連していることが多い。Ｔ２ＤＭに多くの病態生理学的障害がある場合、併用療法が、その管理の代わりとなる手法である。
【０００７】
本発明は、タンパク質加水分解物とロイシンとを含む新規な栄養補助組成物に関する。ロイシンを含む栄養補助組成物は、糖尿病あるいはＸ症候群および肥満などの耐糖能異常に関連する他の病態の処置または予防のための有効成分として、加水分解されていないタンパク質および炭水化物も含み得る。別の態様では、本発明は、前記処置または予防のための栄養補助サプリメントとして、例えば、正常な代謝機能の維持に不可欠であるが体内で合成されないビタミンおよびミネラルを含むマルチビタミン調製物への添加物としてのかかる組成物の使用に関する。さらに別の態様では、本発明は、１型および２型糖尿病の両方の処置、ならびに糖尿病前症または耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満を患う個体におけるＴ２ＤＭの予防のための方法に関し、該方法は、かかる処置を必要とする対象に対して、ロイシンおよびタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質および／または炭水化物を投与することを含む。
【０００８】
本発明の組成物は、特に、Ｔ１ＤＭおよびＴ２ＤＭの両方の処置、ならびに糖尿病前症または耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満を患う個体におけるＴ２ＤＭの予防を特に目的とするものである。
【０００９】
本発明は、１種のアミノ酸とタンパク質加水分解物とを含む組成物に関する。好ましくは、１種のアミノ酸はロイシンである。１種のアミノ酸または１種のアミノ酸はロイシンであるとは、本明細書では、本発明による使用を目的とした組成物または成分中に存在するアミノ酸のうち、存在するアミノ酸の少なくとも７０重量％が１種のアミノ酸（ロイシンなど）であり、存在するアミノ酸の好ましくは少なくとも８０重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％が１種のアミノ酸であり、３０重量％未満、好ましくは２０重量％未満、より好ましくは１０重量％未満の他のアミノ酸が存在することと理解される。１種のアミノ酸、好ましくはロイシンとタンパク質加水分解物との組合せは、好ましくは２型糖尿病または糖尿病前症のために血液中の血漿インスリンを増加させるのに用いられるのが有利である。
【００１０】
意外なことに、この加水分解物と組み合わされた１種のアミノ酸を、好ましくは食後のグルコース濃度を低下させるかまたは食後の血中インスリン分泌を高めるために、２型糖尿病または糖尿病前症のために使用できることが分かった。意外なことに、ロイシンと加水分解物との組合せを使用することにより、例えばロイシンおよびフェニルアラニンなどの２種のアミノ酸と加水分解物との組合せと等しいかまたはそれより良好な結果さえ得られることが分かった。
【００１１】
有効成分、すなわちロイシンとタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質および／または炭水化物との組合せを含む組成物は、相乗的にインスリン分泌を促進し、脂肪組織、骨格筋および肝臓などのインスリン感受性標的組織に対する糖処理を向上させ、それによって糖尿病の処置において相乗効果をもたらす。
【００１２】
本明細書において使用する際の栄養補助という用語は、栄養上の分野および医薬分野の用途の両方における有用性を示している。したがって、新規な栄養補助組成物は、食品および飲料に対するサプリメントとして、ならびに、カプセルまたは錠剤などの固形剤あるいは溶液または懸濁液などの液剤であり得る、腸内または非経口の適用のための医薬製剤として使用され得る。上記から明らかであろうように、栄養補助組成物という用語はまた、ロイシンとタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質および／または炭水化物を含有する食品および飲料、ならびに上記有効成分を含有するサプリメント組成物を含む。
【００１３】
タンパク質加水分解物は、タンパク源を１つのプロテアーゼまたはプロテアーゼの組合せを用いてインキュベートすることによって調製され得る。かかるプロテアーゼは、エンドプロテアーゼ、アミノペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、またはジ−およびトリ−アミノペプチダーゼを含むがこれらに限定されない任意のタイプのプロテアーゼであってもよい。
【００１４】
タンパク源は、基本的に任意のタンパク源であり得る。好ましい源は、カゼインまたはホエータンパクである。本発明によるホエータンパクを含む組成物は、乳汁、クリームおよび乳清などのホエータンパクを含む任意の組成物であり得る。ホエータンパク調製物は、ホエータンパク濃縮物（ＷＰＣ）およびホエータンパク単離物（ＷＰＩ）などのいくつかの形態で市販されている。また、加水分解に適したタンパク質基質としては、全乳、脱脂乳、酸カゼイン、レンネットカゼイン、酸ホエー製品、または乳清製品が挙げられる。また、小麦グルテン、粉砕大麦、および例えば、ダイズ、コメ、またはトウモロコシから得られるタンパク分屑のような植物基質が、適した基質である。
【００１５】
タンパク質加水分解物は、該タンパク質基質を、１種のタンパク質分解酵素、または複数のタンパク質分解酵素の組合せと接触させることによって調製され得る。２種以上のプロテアーゼが用いられる場合に、これらのプロテアーゼは、タンパク質基質に同時に添加可能である。あるいは、プロテアーゼは、所定の順序でタンパク質に添加可能である。任意選択的に、次のプロテアーゼの添加の前に、加水分解プロセスの比較的早い段階で用いられた１種または複数のプロテアーゼの不活性化が行われる。かかる不活性化は、様々な方法で行われてもよく、最適な方法は、不活性化される必要のあるプロテアーゼに依存している。不活性化処理としては、熱処理およびｐＨの変更が挙げられるがこれらに限定されない。あるいは、市販の加水分解物を用いることができる。
【００１６】
タンパク質基質の加水分解度（ＤＨ）は重要なパラメータである。タンパク質加水分解物のために実現することが可能なＤＨは、具体的なプロテアーゼの選択、加水分解を進行させる時間、反応条件（ｐＨ、温度、塩濃度など）、およびプロテアーゼによって加水分解させる前のタンパク質基質の前処理を含むがこれらに限定されない多数のパラメータに依存している。本発明による方法に適した加水分解物のＤＨは、５〜５０、好ましくは１０〜４０、より好ましくは１５〜３５の範囲であり得る。加水分解物は遊離アミノ酸を含有していてもよい。ＤＨを決定するための方法は当業者には公知であり、例えば、チャーチ（Ｃｈｕｒｃｈ）らによって記載されたＯＰＡ法がある（Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ（１９８５年）１４６、３４３頁）。
【００１７】
加水分解物は、噴霧乾燥、限外ろ過、凍結乾燥、真空乾燥を含むがこれらに限定されない様々な方法でさらに処理することが可能である。乾燥した後、乾燥材料は、特定の粒度範囲の画分を得るために粉砕および／または篩過されてもよい。乾燥を促進するためか、または塊になる傾向または濡れ性などの乾燥された加水分解物の最終的な特性に影響を与えるために、化合物が加水分解物に添加されてもよい。
【００１８】
本発明によれば、ロイシンおよびタンパク質加水分解物、あるいはロイシンおよび加水分解されていないタンパク質、あるいはロイシン、タンパク質加水分解物および炭水化物、あるいはロイシン、加水分解されていないタンパク質および炭水化物を含む組成物が、相乗的に膵臓のインスリン分泌を促進し、インスリン感受性標的組織に対する糖処理を向上させることが意外にも分かった。組成物の効果は、ロイシン、あるいはタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質、あるいは炭水化物が単独でもたらす効果を合わせることによって推定される予期された効果よりはるかに大きい。このように、ロイシン、およびタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質、および／または炭水化物を含む組成物は、相乗的に膵臓のインスリン分泌を促進し、インスリン感受性標的組織に対する糖処理を向上させる。したがって、ロイシン、およびタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質、および／または炭水化物を含む組成物は、Ｔ１ＤＭおよびＴ２ＤＭの両方の予防または処置、ならびに、糖尿病前症、耐糖能異常（ＩＧＴ）または肥満を患う個体におけるＴ２ＤＭの予防のために使用可能である。
【００１９】
それぞれ異なる作用機序を有する、ロイシン、およびタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質、および／または炭水化物の組合せの使用は、糖尿病患者の目標血糖値を達成しそれを維持するのに有効である。
【００２０】
上記で特定した有効成分の組合せは、その異なる作用のために、多器官への相乗的効果を利用するものと考えられた。この組合せは、個々の有効成分の別個の作用機序により、血糖コントロールを向上させるだけでなく、ある状況では薬剤用量を低減し、副作用をも最小限に抑える。それらの作用機序および作用部位が別個であることから、上記の食餌サプリメントの特定の組合せはまた、相乗効果を利用して、単一の試剤が達成可能であるよりも高いグルコース低下度を実現する。このように、Ｔ１ＤＭおよびＴ２ＤＭの治療処置の最適な治療法は基本的に、インスリンおよび経口血糖降下薬の投与に基づいているが、適切な栄養療法もまた、糖尿病の処置の成功のために主として重要なものである。
【００２１】
ある食事において十分な量の必須栄養素不足分を得るために、マルチビタミンおよびミネラルサプリメントが、本発明の栄養補助組成物に添加されてもよい。マルチビタミンおよびミネラルサプリメントはまた、疾病の予防、ならびに、糖尿病で時として見られる生活習慣および不適切な日常的食習慣に起因する栄養の不足や欠乏の防止のために有用であり得る。また、酸化ストレスがインスリン耐性の形成に関係があるとされてきた。活性酸素種が、インスリン受容体のシグナル伝達カスケードを阻害することによって、インスリンに促進されるグルコースの取込みを妨げ得る。α−トコフェロール（ビタミンＥ）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）などの抗酸化剤を用いた酸化ストレスのコントロールは、糖尿病の処置に有用であり得る。したがって、栄養の十分なバランスのとれた状態を維持するために、上述した作用物質にマルチビタミンサプリメントの摂取が加えられてもよい。
【００２２】
１種のアミノ酸（好ましくはロイシン）およびタンパク質加水分解物の別の重要な用途は、グリコーゲンレベルを高める必要のある人のグリコーゲンレベルを高める、またはインスリン分泌を高める必要のある人のインスリン分泌を高めるための用途である。後者の用途は、例えば、運動選手または運動を行うその他の人に向けたものであり得る。タンパク質加水分解物およびアミノ酸（好ましくはロイシン）は、エネルギー補給物または代謝栄養素に使用するための添加剤として好適に用いられる。エネルギー補給物または代謝栄養素は、スポーツドリンク、栄養飲料または他の清涼飲料などの飲料、あるいは運動選手またはグリコーゲンレベルまたはインスリン産生を高める必要のある別の人に適した任意の他の栄養調製物の形態をとることが可能である。エネルギー補給物または代謝栄養素は、好ましくは経口摂取できる形態である。グリコーゲンレベルまたはインスリン分泌を高めることは、例えば、グリコーゲン蓄積の再形成を早め、損傷した筋肉タンパク質の再形成を早めることにつながる。
【００２３】
スポーツドリンクは、運動選手の水分補給を助けるとともに、電解質、糖および他の栄養素を回復させるための飲料である。スポーツドリンクは通常、等張性である。つまり、スポーツドリンクは人体で見られるのと同じ割合の栄養素を含有している（出典：ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｓｐｏｒｔｓ＿ｄｒｉｎｋ）。
【００２４】
栄養飲料は、使用者に活力を与えることを目的とした、（合法の）興奮剤、ビタミン（特にビタミンＢ群）およびミネラルを含有する飲料である。一般的な成分としては、カフェイン、ガラナ（ガラナの木から抽出したカフェイン）、タウリン、様々な形態の朝鮮人参、マルトデキストリン、イノシトール、カルニチン、クレアチン、グルクロノラクトンおよびイチョウが挙げられる。高いレベルの糖またはグルコースを含有するものがあってもよい。多くのかかる飲料は、着香および／または着色される（出典：ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｅｎｅｒｇｙ＿ｄｒｉｎｋ）。
【００２５】
清涼飲料は、アルコールを含有する酒類に対して、アルコールを含有しない飲料である。一般に、この用語は冷たい飲料のみに用いられる。ホットチョコレート、茶およびコーヒーは清涼飲料とみなされていない。この用語は元々炭酸飲料だけを指すものであり、今でもこの用法で普通に用いられている（出典：ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｓｏｆｔ＿ｄｒｉｎｋ）。
【００２６】
本発明の好ましい態様では、本発明の栄養補助組成物は、ロイシンおよびタンパク質加水分解物を含有する。ロイシンは好適には、本発明による組成物中に、１日の投与量が、投与しようとする対象の体重１ｋｇ当たり約０．００１ｇから体重１ｋｇ当たり約１ｇまでとなるような量で存在する。食品または飲料は好適には、１回分当たり約０．０５ｇから１回分当たり約５０ｇまでのロイシンを含有する。栄養補助組成物が医薬調製物である場合、かかる製剤は、投与ユニット（例えば、カプセルまたは錠剤）当たり約０．００１ｇ〜約１ｇの量のロイシン、あるいは１日の投与量当たり約０．０３５ｇから１日の投与量当たり約７０ｇの液剤を含有し得る。タンパク質加水分解物は好適には、本発明による組成物中に、１日の投与量が、投与しようとする対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約３ｇまでとなるような量で存在する。食品または飲料は好適には、１回分当たり約０．１ｇから１回分当たり約１００ｇまでのタンパク質加水分解物を含有する。栄養補助組成物が医薬調製物である場合、かかる製剤は、投与ユニット（例えば、カプセルまたは錠剤）当たり約０．０１ｇ〜約５ｇの量のタンパク質加水分解物、あるいは１日の投与量当たり約０．７ｇから１日の投与量当たり約２１０ｇまでの液剤を含有し得る。
【００２７】
本発明の別の好ましい態様では、該組成物は、上記で規定したロイシンおよび加水分解されていないタンパク質を含有する。加水分解されていないタンパク質は好適には、本発明による組成物中に、１日の投与量が、投与しようとする対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約３ｇまでとなるような量で存在する。食品または飲料は好適には、１回分当たり約０．１ｇから１回分当たり約１００ｇまでの加水分解されていないタンパク質を含有する。栄養補助組成物が医薬調製物である場合、かかる製剤は、投与ユニット（例えば、カプセルまたは錠剤）当たり約０．０１ｇ〜約５ｇの量の加水分解されていないタンパク質、あるいは１日の投与量当たり約０．７ｇから１日の投与量当たり約２１０ｇまでの液剤を含有し得る。
【００２８】
本発明のさらに別の好ましい態様では、該組成物は、ロイシン、およびタンパク質加水分解物または上記で規定した加水分解されていないタンパク質、および炭水化物を含有する。炭水化物は好適には、本発明による組成物中に、１日の投与量が、投与しようとする対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約７ｇまでとなるような量で存在する。食品または飲料は好適には、１回分当たり約０．５ｇから１回分当たり約２００ｇまでの炭水化物を含有する。栄養補助組成物が医薬調製物である場合、かかる製剤は、投与ユニット（例えば、カプセルまたは錠剤）当たり約０．０５ｇ〜約１０ｇの量の炭水化物、あるいは１日の投与量当たり約０．７ｇから１日の投与量当たり約４９０ｇまでの液剤を含有し得る。
【００２９】
本発明の好ましい栄養補助組成物は、ロイシン、およびタンパク質加水分解物または加水分解されていないタンパク質、および／または炭水化物、特に以下の組合せ：
ロイシンおよびタンパク質加水分解物；
ロイシンおよびタンパク質加水分解物および炭水化物；
ロイシンおよび加水分解されていないタンパク質；
ロイシンおよび加水分解されていないタンパク質および炭水化物；を含み、
最も好ましいのは、ロイシンおよびタンパク質加水分解物の組合せである。
【００３０】
投与量範囲（７０ｋｇの人に対して）
ロイシン：１日当たり０．００５〜７０ｇ
タンパク質加水分解物：１日当たり０．０７〜２１０ｇ
加水分解されていないタンパク質：１日当たり０．０７〜２１０ｇ
炭水化物：１日当たり０．１〜４９０ｇ
【００３１】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するものである。
【００３２】
医薬組成物は、以下に規定される成分を用いた従来の配合手順によって調製され得る。
【００３３】
実施例１
軟ゼラチンカプセル
軟ゼラチンカプセルは、以下に規定される成分を用いた従来の手順によって調製される。
有効成分：ロイシン０．１ｇ、タンパク質加水分解物０．３ｇ
他の成分：グリセロール、水、ゼラチン、植物油
【００３４】
実施例２
硬ゼラチンカプセル
硬ゼラチンカプセルは、以下に規定される成分を用いた従来の手順によって調製される。
有効成分：ロイシン０．３ｇ、タンパク質加水分解物０．７ｇ
他の成分：
充填剤：ラクトースまたはセルロースまたはセルロース誘導体適量
潤滑剤：必要に応じてステアリン酸マグネシウム（０．５％）
【００３５】
実施例３
錠剤
錠剤は、以下に規定される成分を用いた従来の手順によって調製される。
有効成分：ロイシン０．４ｇ、加水分解されていないタンパク質０．４ｇ
他の成分：微結晶性セルロース、二酸化ケイ素（ｓｉｌｉｃｏｎｅ  ｄｉｏｘｉｄｅ）（ＳｉＯ２）、ステアリン酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム．
【００３６】
Ｂ．食品は、以下に規定される成分を用いた従来の手順によって調製され得る。
【００３７】
実施例４
果汁３０％の清涼飲料
通常の１回分の量：２４０ｍＬ
有効成分：
ロイシンおよびタンパク質加水分解物、および炭水化物源としてマルトデキストリンがこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．５〜５ｇ
タンパク質加水分解物：１回分当たり１．５〜１５ｇ
マルトデキストリン：１回分当たり３〜３０ｇ
【００３８】
Ｉ．清涼飲料化合物は、以下の成分から調製される。
濃縮果汁および水溶性の香料
【００３９】
１．１  濃縮オレンジ
［ｇ］
ブリックス６０．３°、酸味５．１５％：６５７．９９
濃縮レモン
ブリックス４３．５°、酸味３２．７％：９５．９６
オレンジ香料（水溶性）              ：１３．４３
アンズ香料（水溶性）                ：６．７１
水                                  ：２６．４６
【００４０】
１．２  着色料
β−カロテン１０％  ＣＷＳ          ：０．８９
水                                  ：６７．６５
【００４１】
１．３  酸および抗酸化剤
アスコルビン酸                      ：４．１１
クエン酸無水物                      ：０．６９
水                                  ：４３．１８
【００４２】
１．４  安定化剤
ペクチン                            ：０．２０
安息香酸ナトリウム                  ：２．７４
水                                  ：６５．６０
【００４３】
１．５  油溶性香料
オレンジ香料（油溶性）              ：０．３４
希釈されたオレンジ油                ：０．３４
【００４４】
１．６  有効成分
有効成分（これは、上記の有効成分、すなわち、上記の濃度のロイシンおよびタンパク質加水分解物、およびマルトデキストリンを意味する）
【００４５】
濃縮果汁および水溶性の香料を、空気を導入せずに混合する。着色料を脱イオン水に溶解させる。アスコルビン酸およびクエン酸を水に溶解させる。安息香酸ナトリウムを水に溶解させる。ペクチンを攪拌しながら添加し、沸騰させながら溶解させる。溶液を冷ます。オレンジ油および油溶性香料を予混合する。１．６の上記の有効成分を乾式混合し、その後、好ましくは濃縮果汁混合物（１．１）中へと攪拌する。
【００４６】
清涼飲料化合物を調製するために、タラックス（Ｔｕｒｒａｘ）および次いで高圧ホモジナイザー（ｐ１＝２００バール、ｐ２＝５０バール）を用いて均質化の前に全てのパート３．１．１〜３．１．６を一緒に混合する。
【００４７】
ＩＩ．瓶詰めシロップは以下の成分から調製される。
［ｇ］
清涼飲料化合物                      ：７４．５０
水                                  ：５０．００
糖シロップ、ブリックス６０°        ：１５０．００
【００４８】
瓶詰めシロップの成分を一緒に混合する。瓶詰めシロップを水で希釈して、１Ｌのそのまま飲める（ｒｅａｄｙ  ｔｏ  ｄｒｉｎｋ）飲料にする。
【００４９】
変形例：
安息香酸ナトリウムを用いる代わりに、飲料を殺菌してもよい。また、飲料を炭酸にしてもよい。
【００５０】
実施例５
五穀パン
通常の１回分の量：５０ｇ
有効成分：
ロイシンおよび加水分解されていないタンパク質および炭水化物（五穀粉の形態）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．５〜５ｇ
加水分解されていないタンパク質：１回分当たり１．５〜１５ｇ
【００５１】
他の成分                            ：［％］
五穀粉（炭水化物源）                ：５６．８
水                                  ：３９．８
酵母                                ：２．３
塩                                  ：１．１
【００５２】
酵母を１部の水に溶解させる。全ての成分を一緒に混合して生地を形成する。混練時間の最後に塩を添加する。発酵させた後、生地をこね直し、分割して１塊のパンを形成する。焼く前に、パンの塊の表面に刷毛で水を塗り、粉を振り掛ける。
【００５３】
手順：
混練：
菊練り（Ｓｐｉｒａｌ  ｋｎｅａｄｉｎｇ）システム：第１ギアで４分間、第２ギアで５分間
生地の発酵：６０分間
生地の温度：２２〜２４℃
発酵時間：３０分間
焼成：
オーブン：ダッチオーブン
焼成温度：２５０／２２０℃
焼成時間：５０〜６０分間
【００５４】
実施例６
クッキー（ミラノタイプ）（Ｔｙｐｅ  Ｍｉｌａｎｏ）
通常の１回分の量：３０ｇ
有効成分：
ロイシンおよびタンパク質加水分解物および炭水化物（小麦粉、タイプ５５０の形態）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．３〜３ｇ
タンパク質加水分解物：１回分当たり０．９〜９ｇ
【００５５】
他の成分                            ：［ｇ］
小麦粉、タイプ５５０（炭水化物源）  ：４１．０
糖                                  ：２０．５
脂肪／バター                        ：２０．５
全卵（液）                          ：１８．０
レモン香料                          ：適量
ベーキング剤                        ：適量
【００５６】
全ての成分を混合しながらゆっくりと添加し、甘いショートペストリーを形成する。
【００５７】
その後、ペストリーを少なくとも２時間保冷（４℃）にしてから、ペストリーを厚さ約５ｍｍに引き伸ばす。クッキー片を型抜きし、焼成する前に表面に刷毛で卵黄を塗る。
【００５８】
焼成：
オーブン：ファンオーブン
焼成温度：１８０℃
焼成時間：１５分間
【００５９】
実施例７
トースト
通常の１回分の量：１００ｇ
有効成分：
ロイシンおよび加水分解されていないタンパク質および炭水化物（小麦粉、タイプ５５０の形態）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．６〜６ｇ
タンパク質加水分解物：１回分当たり１．８〜１８ｇ
【００６０】
他の成分                          ：［％］
小麦粉、タイプ５５０（炭水化物源）：５５．４
水                                ：３３．２
酵母                              ：２．８
塩                                ：１．１
脂肪／バター                      ：５．５
モルト                            ：０．６
乳化ベーキング剤                  ：１．４
【００６１】
酵母を１部の水に溶解させる。全ての成分を一緒に混合して生地を形成する。混練時間の最後に塩を添加する。その後、生地をこね直し、分割して焼き型に入れて発酵させる。焼成した後、塊を型から直接外す。
【００６２】
手順：
混練：
菊練りシステム：第１ギアで５〜６分間；第２ギアで３〜４分間
生地の発酵：なし
生地の温度：２２〜２４℃
発酵時間：４０分間
焼成：
オーブン：ダッチオーブン
焼成温度：２２０℃
焼成時間：３５〜４０分間
【００６３】
実施例８
ヨーグルト−固形タイプ；脂肪分３．５％
通常の１回分の量：２２５ｇ
有効成分：
ロイシンおよびタンパク質加水分解物および炭水化物（糖の形態）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．５〜５ｇ
タンパク質加水分解物：１回分当たり１．５〜１５ｇ
【００６４】
他の成分：［％］
全乳（脂肪分３．８％）：９０．５
脱脂粉乳：２．０
糖（炭水化物源）：５．０
培養液：２．５
【００６５】
粉乳、安定化剤、糖および有効成分を添加する前に、乳汁を３５℃に加熱する。この混合物を６５℃に加熱して全ての成分を溶解させる。その後、混合物を６５℃において高圧ホモジナイザー（ｐ１＝１５０バール、ｐ２＝５０バール）で均質化する。このエマルジョンを次いで８０℃で２０分間殺菌する。４５℃に冷却した後、天然ヨーグルト／培養液を添加して混合する。その後、この混合物をカップに満たし、ｐＨが４．３に達するまで４５℃で３〜４時間発酵させ、次いで４℃で貯蔵する。
【００６６】
実施例９
ヨーグルト−シロップタイプ；脂肪分３．５％
通常の１回分の量：２２５ｇ
ロイシンおよびタンパク質加水分解物および炭水化物（糖の形態）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．１〜１ｇ
タンパク質加水分解物：１回分当たり０．３〜３ｇ
【００６７】
他の成分                            ：［％］
全乳（脂肪分３．８％）              ：９０．２
脱脂粉乳                            ：２．０
安定化剤                            ：０．３
糖（炭水化物源）                    ：５．０
培養液                              ：２．５
【００６８】
粉乳、安定化剤、糖および有効成分を添加する前に、乳汁を３５℃に加熱する。この混合物を６５℃に加熱して全ての成分を溶解させた後、６５℃において高圧ホモジナイザー（ｐ１＝１５０バール、ｐ２＝５０バール）で均質化する。このエマルジョンを次いで８０℃で２０分間殺菌する。４５℃に冷却した後、天然ヨーグルト／培養液を添加して混合してから、ｐＨが４．３に達するまで４５℃で３〜４時間発酵させる。冷却して激しく攪拌した後、ヨーグルトをカップに満たし、４℃で貯蔵する。
【００６９】
実施例１０
アイスクリーム；脂肪分８％
通常の１回分の量：８５ｇ
有効成分：
ロイシンおよびタンパク質加水分解物および炭水化物（糖およびグルコースシロップの形態）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：１回分当たり０．１〜１ｇ
タンパク質加水分解物：１回分当たり０．３〜３ｇ
【００７０】
他の成分                              ：［ｇ］
乳汁（脂肪分３．７％）                ：６００．００
クリーム（脂肪分３５％）              ：１６６．００
脱脂粉乳                              ：４９．１０
糖（炭水化物源）                      ：１０９．００
グルコースシロップ８０％（炭水化物源）：７０．００
アイスクリーム安定化剤                ：５．００
香料                                  ：適量
着色料                                ：適量
【００７１】
糖、脱脂粉乳および安定化剤を、乳汁およびクリームに添加し、混合して４５℃に加熱する。その後、有効成分だけでなく、原液としての着色料およびグルコースシロップを添加する。混合物を加熱し殺菌する（２０分間、８０℃）。次いで、均質化工程を行う。その後、混合物を一定の攪拌下で冷却し、香料を５℃で添加する。混合物を、少なくとも４時間の間５℃で成熟させ、次いでアイスクリーム機に通す（オーバーラン、約１００％）。アイスクリームをカップに満たし、−２０〜−３０℃で貯蔵する。
【００７２】
実施例１１
ワインガム（Ｗｉｎｅ  ｇｕｍ）
有効成分：
ロイシンおよびタンパク質加水分解物および炭水化物（糖結晶の形態）およびグルコースシロップＤＥ  ３８）がこの食品中に組み込まれる。
ロイシン：３０ｇ当たり０．０５〜０．５ｇ
タンパク質加水分解物：３０ｇ当たり０．１５〜１．５ｇ
【００７３】
他の成分                                  ：［ｇ］
ゼラチン  ２００ブルーム                  ：８０．０
水Ｉ                                      ：１２５．０
糖結晶（炭水化物源）                      ：２９０．０
水ＩＩ                                    ：１２０．０
グルコースシロップＤＥ  ３８（炭水化物源）：３９０．０
クエン酸                                  ：１０．０
香料                                      ：２．０
着色料                                    ：適量
収量                                      ：約１０００．０
【００７４】
ゼラチンを水Ｉに分散し、流浴を加熱するかまたはマイクロ波を用いることによって攪拌して溶解させる。糖を水ＩＩと混合し、透明の溶液が得られるまで沸騰させる。熱源から取り外す。溶解された糖溶液がまだ熱い間にグルコースシロップと混合する。ゆっくりとゼラチン溶液を添加する。表面の泡が取り除かれ、６０〜６５℃に達するまで静置する。攪拌下で、香料、クエン酸および着色料溶液ならびに有効成分を添加する。スターチトレー（ｓｔａｒｃｈ  ｔｒａｙ）に型取られた型に入れ、室温で少なくとも４８時間そのままにする。スターチ粉末を除去し、油またはロウでつやを出す。室温で乾燥させ、気密パウチに詰める。
【００７５】
実施例１２
この実施例は、１回投与分の炭水化物と組み合わせた追加のロイシンを用いたおよび用いない、インスリン分泌促進タンパク質加水分解物の同時摂取の後の、食後の血漿インスリンおよびグルコース反応を示している。１０人の長期間診断されている男性の２型糖尿病患者および１０人の健常な対照対象が３つの試験に参加し、これらの試験では、血漿グルコース、インスリンおよびアミノ酸反応を、様々な飲料組成物（炭水化物、ＣＨＯ；炭水化物およびタンパク質加水分解物、ＣＨＯ＋ＰＲＯ；あるいは炭水化物、タンパク質加水分解物および遊離ロイシン、ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ）の摂取後に測定した。ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験では、血漿インスリン反応が、ＣＨＯ試験と比べた際に、２型糖尿病患者においてそれぞれ１４１および２０４％高く、対照においてそれぞれ６６および２２１％高かった（Ｐ＜０．０５）。それに付随する血漿グルコース反応は、ＣＨＯ試験と比べた際に、２型糖尿病患者においてそれぞれ１５および１２％低く、対照においてそれぞれ９２および９７％低かった（Ｐ＜０．０５）。血漿ロイシン濃度がインスリン反応と強い相関性があった（ｒ＝０．４３、Ｐ＜０．００１）。本発明者らは、追加の遊離ロイシンを用いたおよび用いないタンパク質加水分解物の同時摂取が炭水化物摂取の後のインスリン反応を高め、それによって、長期間診断されている２型糖尿病患者における食後のグルコース異常をかなり低減することを結論付けた。
【００７６】
対象および方法
対象
１０人の長期間診断されている男性の２型糖尿病患者および１０人の健常な年齢およびＢＭＩの適合した対照対象を、この研究に参加するために選択した。対象の特徴を表１に示す。除外基準は、腎機能または肝機能の障害、肥満（ＢＭＩ＞３５ｋｇ／ｍ２）、心臓病、高血圧症、糖尿病の合併症、および体外からのインスリン治療を受けていることであった。全ての２型糖尿病患者は経口血漿グルコース低下薬剤（メトホルミンおよび／またはスルホニル尿素）を用いた。血中グルコースを低下させる薬剤はスクリーニング前の２日間は通知されず、スルホニル尿素（メトホルミンではなく）は、各試験の前の２日間は通知されなかった。全ての対象には、事前の書面による同意書を提出する前に、実験手順の性質およびリスクについて知らせた。全ての臨床試験は、地元の医療倫理委員会（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって認可された。
【００７７】
【表１】
2008527020.tif 000002
【００７８】
スクリーニング
研究への選別の前に、全ての対象に経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を行った。対象は、一晩絶食後、自動車または公共交通機関で午前８．００に研究室に到着した。カテーテル（バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）ＢＶ、ユトレヒト（Ｕｔｒｅｃｈｔ）、オランダ）を肘正中静脈に挿入し、安静時の血液サンプルを採取し、その後７５ｇのグルコース（２５０ｍＬの水に溶解させた）を摂取させた。１回分が摂取された後、３０分間ごとにｔ＝１２０分間になるまで血液を採取した。１９９９年の世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）基準（参照：アルベルティ（Ａｌｂｅｒｔｉ），Ｋ．Ｇ．およびジメット（Ｚｉｍｍｅｔ），Ｐ．Ｚ．（１９９８年）「糖尿病およびその合併症の定義、診断および分類、パート１：ＷＨＯ協議の糖尿病の診断および分類に関する仮報告書（Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ、ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｐａｒｔ  １：ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ＷＨＯ  ｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ．）」Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ  １５：５３９〜５５３頁）に準拠して耐糖能異常および／または２型糖尿病を判断するために、血漿グルコース濃度を測定した。さらに、マリ（Ｍａｒｉ）ら、Ｊ．Ｊ．（２００１年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２４：５３９〜５４８頁に記載されるように、血漿グルコースおよびインスリン濃度を用いて、２時間のＯＧＴＴの間の経口グルコースインスリン感受性（ＯＧＩＳ）−指数によりインスリン感受性感受性を評価した。
【００７９】
計画
各対象は、少なくとも７日間隔離されて３つの試験に参加した。これらの試験では、血漿グルコース、インスリンおよびアミノ酸反応を、３種の異なる飲料組成物（ＣＨＯ：炭水化物、ＣＨＯ＋ＰＲＯ：炭水化物およびカゼインタンパク質加水分解物、あるいはＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ：炭水化物、カゼインタンパク質加水分解物およびロイシン）の摂取後に測定した。対象を背臥位にして４時間の間、安静状態を保った。飲料を無作為な順序で二重盲検法で与えた。
【００８０】
プロトコル
対象は、一晩絶食後、自動車または公共交通機関で午前８．００に研究室に出向いた。テフロン（Ｔｅｆｌｏｎ）製カテーテル（バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）ＢＶ、ユトレヒト（Ｕｔｒｅｃｈｔ）、オランダ）を、静脈血採取のために肘正中静脈に挿入し、安静時の血液サンプルを採取した。ｔ＝０分間において、対象に１回分（４ｍＬ／ｋｇ）の実験の飲料を飲ませた。最初の１時間の間、１５分間ごとに血液サンプルを採取し、その後、ｔ＝２４０分間になるまで３０分間置きに血液を採取して、血漿グルコースおよびインスリン濃度を測定した。血漿アミノ酸濃度を１時間置きに測定した。
【００８１】
試験前の食事および運動
実験期間全体にわたって、全ての対象は通常の食事および運動の習慣を維持した。さらに、対象は、各試験の前の少なくとも３日間は重労働および／または激しい運動トレーニングを控え、最初の試験の前の２日間にわたり食物摂取日記を記入し、他の試験の前に食物摂取をできるだけ同じように保った。各試験の前の晩に、対象は標準化された食事（体重１ｋｇ当たり４３．８０ｋＪ；６０エネルギー％（Ｅｎ％）の炭水化物、２８Ｅｎ％の脂肪および１２Ｅｎ％のタンパク質からなる）を摂取した。
【００８２】
飲料
対象は、０．７ｇ／ｋｇの炭水化物（５０％のグルコースおよび５０％のマルトデキストリン、ＣＨＯ）および０．３ｇ／ｋｇのカゼインタンパク質加水分解物（ＣＨＯ＋ＰＲＯ）あるいは０．３ｇ／ｋｇのカゼインタンパク質加水分解物および０．１ｇ／ｋｇのロイシン（ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ）を含有する１回分の量（４ｍＬ／ｋｇ）を摂取した。グルコースおよびマルトデキストリンはアベベ（ＡＶＥＢＥ）（フェーンダム（Ｖｅｅｎｄａｍ）、オランダ）から入手し、微結晶性ロイシンはビュファ（ＢＵＦＡ）（アイトヘースト（Ｕｉｔｇｅｅｓｔ）、オランダ）から入手し、カゼインタンパク質加水分解物はＤＳＭフードスペシャルティーズ（ＤＳＭ  Ｆｏｏｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ）（デルフト（Ｄｅｌｆｔ）、オランダ）によって調製されたものであった。カゼイン加水分解物（インスバイタル（Ｉｎｓｕｖｉｔａｌ）ＴＭ）は、中性プロテアーゼおよびプロリル特異的エンドプロテアーゼを用いたカゼイン酸ナトリウムの酵素による加水分解によって得られた。飲料は、飲料１リットル当たり０．２ｇのサッカリン酸ナトリウム、１．８ｇのクエン酸および５ｇクリームバニラ香料（クエストインターナショナル（Ｑｕｅｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ナールデン（Ｎａａｒｄｅｎ）、オランダ）を添加することによって均一に着香された。
【００８３】
血液サンプル分析
血液をＥＤＴＡ含有チューブに採取し、１，０００ｇおよび４℃で１０分間遠心分離した。血漿のアリコートを液体窒素で急速に凍結させ、分析まで−８０℃で保管した。グルコース濃度（ユニキット（Ｕｎｉ  Ｋｉｔ）ＩＩＩ、ロシェ（Ｒｏｃｈｅ）、バーゼル（Ｂａｓｅｌ））をコバスファラ（ＣＯＢＡＳ  ＦＡＲＡ）半自動分析機（ロシェ（Ｒｏｃｈｅ））を用いて分析した。血漿インスリンを、ラジオイムノアッセイ（ＨＩ−１４Ｋ、リンコリサーチ社（Ｌｉｎｃｏ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．）、セントチャールズ（Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ）、米国）によって測定した。遊離アミノ酸を、内部標準としてノルバリンを用いてニンヒドリン・ポストカラム誘導体化法によって、イオン交換クロマトグラフィー（ＪＥＯＬ、アミノタック（ＡｍｉｎｏＴａｃ）ＪＬＣ−５００／Ｖ）を用いて分析した。分析の前にサンプルを５−スルホサリチル酸で除タンパク処理した。ＨｂＡ１ｃ含量を測定するために、３ｍＬの血液サンプルをＥＤＴＡ含有チューブに採取し、高速液体クロマトグラフィー（バイオラッドディアマット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｄｉａｍａｔ）、ミュンヘン（Ｍｕｎｉｃｈ）、独国）によって分析した。
【００８４】
統計
データを平均値±ＳＥＭとして表す。血漿反応を、ベースライン値の上の曲線下面積として計算した。試験間の時間の経過にわたる血漿代謝産物濃度を比較するために、反復測定２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を適用した。各群内の時間の変化を、反復測定１元配置ＡＮＯＶＡを用いて統計的有意性について調べた。特定の差異を示す有意なＦ比がある場合、シェッフェ（Ｓｃｈｅｆｆｅ）のポストホックテストを適用した。変数が時間に依存しない場合、多元配置ＡＮＯＶＡまたはスチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔ）を適用した。有意性を、０．０５水準の信頼度に設定した。全ての計算を、スタットビュー（ＳｔａｔＶｉｅｗ）５．０（ＳＡＳインスティチュート社（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｉｎｃ．）、ノースカロライナ州カリー（Ｃａｒｙ，ＮＣ）、米国）を用いて行った。
【００８５】
結果
血漿インスリン濃度
ベースライン血漿インスリン濃度は、群および試験の間で同様であり、２型糖尿病および対照群でそれぞれ平均して１１．２±１．５および１３．０±１．１ｍＵ／Ｌであった（図１Ａ、Ｐ＝０．１）。様々な飲料を摂取した後、２型糖尿病患者における血漿インスリン濃度は、ＣＨＯ試験では上昇せず、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験では上昇した（Ｐ＜０．０５）。対照群では、飲料摂取後の最初の１時間の間、血漿インスリン濃度の大きな上昇が観察された（Ｐ＜０．０５）。この上昇は、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験で最も顕著であった。全ての試験では、両方の群の実験の最後の１時間の間に、血漿インスリン濃度はベースライン濃度に戻った。糖尿病群のインスリン反応（ベースライン値の上のＡＵＣ）は、ＣＨＯ試験と比べた際に、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験においてそれぞれ１４１±４０および２０４±３７％高かった（Ｐ＜０．０５、図１Ｂ）。対照群では、インスリン反応は、ＣＨＯ試験と比べた際に、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験においてそれぞれ６６±２０および２２１±８２％高かった（Ｐ＜０．０５）。さらに、対照群では、ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験におけるインスリン反応は、ＣＨＯ＋ＰＲＯ試験と比べて有意に高かった（Ｐ＜０．０５）。同じ試験内の群の間でインスリン反応に違いが観察されなかった。
【００８６】
血漿グルコース濃度
空腹時の血漿グルコース濃度は、正常血糖の対照と比べて２型糖尿病患者においてより高かった（それぞれ８．６±０．６対５．７±０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｐ＜０．０１）。全ての試験で、様々な飲料の摂取後、血漿グルコース濃度は、糖尿病患者においてその対応対照と比べて依然として有意に高かった（Ｐ＜０．０１、図２Ａ）。飲料摂取後の最初の１時間の間、２型糖尿病患者において、血漿グルコース濃度が有意に上昇し、その後、値はほぼベースライン値まで戻った（図２Ａ）。対照群における血漿グルコース濃度は、試験飲料の摂取後の最初の３０分間の間、上昇し、その後、血漿グルコース濃度もまたベースライン値に戻った。対照群において、血漿グルコース濃度は、ＣＨＯ試験と比べた際に、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験においてより急速に低下し、結果として、ｔ＝４５分およびｔ＝６０分においてより低い血漿グルコース濃度となった（Ｐ＜０．０５、図２Ａ）。食後のグルコース反応をベースライン値の上の曲線下面積（図２Ｂ）として表した後、グルコース反応は、ＣＨＯ試験と比べた際に、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験で、２型糖尿病群においてそれぞれ１５±５および１２±３％まで低下され、対照群においてそれぞれ９２±２および９７±３％まで低下された（Ｐ＜０．０５）。全ての試験において、血漿グルコース反応は、対照と比べた際に、糖尿病患者において大幅に高かった（Ｐ＜０．０１、図２Ｂ）。２型糖尿病患者におけるグルコース反応は、付随するインスリン反応と逆相関の関係にあった（ｒ＝−０．４８、Ｐ＜０．０１）。
【００８７】
血漿アミノ酸濃度
空腹時の血漿アミノ酸濃度を表２に記録する。
【００８８】
【表２】
2008527020.tif 000003
【００８９】
ベースラインにおいて、血漿必須アミノ酸（ＥＡＡ）：ロイシン（１４４．９±３．２対１２２．８±３．０μｍｏｌ／Ｌ）、イソロイシン（７９．１±２．３対６６．０±２．０μｍｏｌ／Ｌ）、リジン（２０４．２±５．４対１８７．８±４．７μｍｏｌ／Ｌ）およびバリン（２５２．４±４．９対２１６．７±５．０μｍｏｌ／Ｌ）、ならびに、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）：アラニン（４３１±１７．０対３７０．３±１９．２μｍｏｌ／Ｌ）、グルタミン（１０９．７±５．９対９４．３±４．３μｍｏｌ／Ｌ）およびプロリン（９４．７±５．８対７７．１±３．１μｍｏｌ／Ｌ）の濃度は、対応対照と比べて２型糖尿病患者においてより高かった（Ｐ＜０．０５）。血漿アルギニン（１１０±０．６対１２８．１±７．０μｍｏｌ／Ｌ）およびアスパラギン酸（３４．８±１．２対３９．０±１．１μｍｏｌ／Ｌ）の濃度は、対照対象と比べて２型糖尿病患者において基礎的な空腹状態においてより低かった（Ｐ＜０．０５）。次の血漿遊離アミノ酸反応の完全な概要を、ベースライン値の上の曲線下面積として計算し、表３に示す。
【００９０】
【表３】
2008527020.tif 000004
【００９１】
一般に、アミノ酸反応は、ＣＨＯ試験で陰性であり、ＣＨＯ＋ＰＲＯ試験で陽性であり、ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験におけるロイシンの同時摂取後には中間値であった。インスリン反応と血漿ロイシン（Ｐ＜０．００１）、シトルリン（Ｐ＜０．００１）、システイン（Ｐ＜０．０４）、リジン（Ｐ＜０．００１）、メチオニン（Ｐ＜０．０４）、オルニチン（Ｐ＜０．０１）およびプロリン（Ｐ＜０．０１）の増加との間には強い正相関が観察された。非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）の反応およびロイシンの補給を除いた必須アミノ酸（ＥＡＡＬＥＵ）の反応を計算すると、２型糖尿病（図３Ａ）および対照群（図３Ｂ）において以下の反応が観察された。２型糖尿病群においては、ＥＡＡ−ＬＥＵ反応は、ＣＨＯ試験で陰性であり、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験で有意に高かった（それぞれ−２７．７±５．８対３１．２±６．１および１１．５±４．６ｍｍｏｌ／Ｌ／４時間、Ｐ＜０．０５）。さらに、ＥＡＡ−ＬＥＵ反応は、ＣＨＯ＋ＰＲＯ試験と比べて、ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵでは有意に低かった（６０±４％、Ｐ＜０．０５）。糖尿病患者において、血漿ＮＥＡＡ反応は、ＣＨＯ試験で陰性であり、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験で有意に高かった（それぞれ−２８．８±１４．７対２３．１±８．８および１０．２±１３．８ｍｍｏｌ／Ｌ／４時間；Ｐ＜０．０５）。同様の知見が対照群で観察された。陰性の血漿ＥＡＡ−ＬＥＵ反応がＣＨＯ試験で観察され、有意に高いＥＡＡ−ＬＥＵ反応がＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験で観察された（それぞれ−３５．０±６．７対３７．９±５．１および１２．７±４．１ｍｍｏｌ／Ｌ／４時間；Ｐ＜０．０５）。ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験においてロイシンを添加することにより、ＣＨＯ＋ＰＲＯ試験と比べて６５±５％低い血漿ＥＡＡ−ＬＥＵ反応がもたらされた（Ｐ＜０．０５）。血漿ＮＥＡＡ反応はＣＨＯ試験で陰性であり、ＣＨＯ＋ＰＲＯおよびＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ試験で有意に高かった（それぞれ−６０．８±１３．６対２７．６±１０．６および１１．２±９．８ｍｍｏｌ／Ｌ／４時間；Ｐ＜０．０５）。群の間でアミノ酸反応に違いが観察されなかった。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】２型糖尿病患者（Ｔ２Ｄ）および健常な対照対象（ＣＯＮ）に、炭水化物（ＣＨＯ；白抜きのバー）、炭水化物およびタンパク質加水分解物（ＣＨＯ＋ＰＲＯ；斜線入りのバー）、ならびに、炭水化物、タンパク質加水分解物および遊離ロイシン（ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ；黒塗りのバー）を摂取させた後４時間の期間にわたる平均値（±ＳＥＭ）血漿インスリン濃度（Ａ）および反応（Ｂ）。＊：ＣＨＯ試験と比べて有意差あり。Ｐ＜０．０５。＃：ＣＨＯ＋ＰＲＯ試験と比べて有意差あり。Ｐ＜０．０５。同じ試験内の群の間でインスリン反応に違いが観察されなかった。１つの群につきｎ＝１０。
【図２】２型糖尿病患者（Ｔ２Ｄ）および健常な対照対象（ＣＯＮ）に、炭水化物（ＣＨＯ；白抜きのバー）、炭水化物およびタンパク質加水分解物（ＣＨＯ＋ＰＲＯ；斜線入りのバー）、ならびに、炭水化物、タンパク質加水分解物および遊離ロイシン（ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ；黒塗りのバー）を摂取させた後４時間の期間にわたる平均値（±ＳＥＭ）血漿グルコース濃度（Ａ）および反応（Ｂ）。＊：ＣＨＯ試験と比べて有意差あり。Ｐ＜０．０５。＃：糖尿病群と有意差あり。Ｐ＜０．０１。１つの群につきｎ＝１０。
【図３】２型糖尿病患者（Ａ）および健常な対照対象（Ｂ）に、炭水化物（ＣＨＯ）、炭水化物およびタンパク質加水分解物（ＣＨＯ＋ＰＲＯ）、ならびに、炭水化物、タンパク質加水分解物および遊離ロイシン（ＣＨＯ＋ＰＲＯ＋ＬＥＵ）を摂取させた後４時間の期間にわたる平均値（±ＳＥＭ）血漿必須アミノ酸（ロイシンなし、ＥＡＡ−ＬＥＵ）および非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）の反応。＊：ＣＨＯ試験と比べて有意差あり。Ｐ＜０．０５；＃：ＣＨＯ＋ＰＲＯ試験と比べて有意差あり。Ｐ＜０．０５。同じ試験内の群の間でアミノ酸反応に違いが観察されなかった。１つの群につきｎ＝１０。
【図１】
2008527020.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年10月3日(2007.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項９】
対象に対し、体重１ｋｇ当たり０．０１ｇから体重１ｋｇ当たり約７ｇまでの１日の投与量を投与するのに十分な量の炭水化物を含む請求項３に記載の組成物。
【国際調査報告】
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2008527020.tif 000009
2008527020.tif 000010
2008527020.tif 000011
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