(57)【要約】  オキシトシン受容体活性に関連する障害を処置する方法は、オキシトシン受容体アンタゴニスト、例えば特定の部分または変種を含む抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子薬剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびＤＮＡザイムを用いる。オキシトシン受容体活性に関連する障害は、炎症性障害、例えば肺障害、例えば喘息、肺気腫、およびＣＯＰＤを含む。
2008523086.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞、組織、器官もしくは動物に、該細胞、組織、器官もしくは動物内でオキシトシン受容体活性を阻害するために有効な量のオキシトシン受容体アンタゴニストを投薬することを含んでなる、細胞、組織、器官もしくは動物内のオキシトシン受容体活性関連障害を処置する方法。
【請求項２】
オキシトシン受容体アンタゴニストがオキシトシン受容体モノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項１の方法。
【請求項３】
抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、もしくはＦ（ａｂ’）２フラグメントまたはその誘導体である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
動物が哺乳動物である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
モノクローナル抗体が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、皮膜内、軟骨内、腔内、腹内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、開口内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内、および経皮から選択される少なくとも１種の様式により投薬される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
モノクローナル抗体が静脈内に投薬される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
モノクローナル抗体が、該哺乳動物の体重ｋｇあたりに、約０．０５ｍｇ〜約１２．０ｍｇの量で投薬される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
哺乳動物がヒト患者である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
モノクローナル抗体が該抗体のボーラス投与で、次いで輸液により投薬される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
オキシトシン受容体活性関連障害が炎症性障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
オキシトシン受容体活性関連障害が肺関連障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
オキシトシン受容体活性関連障害が、喘息、肺気腫、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
オキシトシン受容体アンタゴニストが、小分子、ポリヌクレオチド、およびポリペプチドからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
オキシトシン受容体アンタゴニストが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびＤＮＡザイム分子からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
細胞、組織、器官もしくは動物に、該細胞、組織、器官もしくは動物内でオキシトシン受容体活性を検出するために有効な量のオキシトシン受容体アンタゴニストを投薬することを含んでなる、細胞、組織、器官もしくは動物内のオキシトシン受容体活性関連障害を診断する方法。
【請求項１６】
本明細書内に記載のいずれかの発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オキシトシン受容体アンタゴニスト、および肺障害および症状、および病状、ならびに関連する疾患および病状を処置するためにオキシトシン受容体アンタゴニストを使用する方法に関する。本発明は、さらに具体的には、オキシトシン受容体アンタゴニスト、例えば干渉ＲＮＡ、ＤＮＡザイム、およびその少なくとも１種のタンパク質もしくはフラグメントに特異性である指定する部分または変種を含み、オキシトシン受容体を標的とする抗体を、オキシトシン受容体活性を阻害するために有効な量で使用する、かかる疾患を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息は、遺伝的および環境的要素を含む複合性、慢性疾患である（１）。それは可逆性気道閉塞、気道過敏性、気道炎症およびリモデリングを特徴とする（２）。喘息は、１５百万人のアメリカ人が罹患しそしてそれに関連する罹病率および致死率は工業化各国で上昇していると推定される（３、４）。アレルギー性喘息の気道内の炎症は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞のＴヘルパー（Ｔｈ）２サブセットおよび好酸球の粘膜浸透に関連する（５、６）。それらの細胞間の相互作用は、喘息の発生病理に関与する種々の前炎症性媒介体の産生に導く（７、８）。喘息の他の形態は、身体運動、ウイルス、アスピリンおよび職業により誘発されるものである。喘息のそれらの形態の原因となる機構はＴｈ２リンパ球およびサイトカインを含むらしいが、異なる原因から起きることもあるらしい（９〜１２）。多種のサイトカインおよびケモカインが喘息の発生病理に関与する（１３、１４）。特定すると、Ｔｈ２誘導サイトカイン（インターロイキン−４、５、９、および１３）は、喘息を含むアレルギー性疾患に重要な役割を有する。喘息の発生病理に関与する新規の遺伝子を同定する努力において、研究者らは喘息の動物モデル内で差別的に発現される遺伝子の輪郭を描くためにＤＮＡマイクロアレイ技術を使用している（１５、１６）。
【０００３】
マイクロアレイ技術は、数千個の遺伝子の発現の同時分析を可能としそして高処理量フォーマットを可能とする自動化もできるので、強力な道具である。多因性障害、例えば喘息において、マイクロアレイの結果は、新規治療薬を設計する際に非常に有用なことが証明できる遺伝子発現プロフィールを提供できる。さらに、それは、新規遺伝子の同定および未知機能の遺伝子の解釈に非常に有用なことが証明される（１７）。
【０００４】
視床下部ニューロペプチドであるオキシトシン（ＯＴ）は、分娩の間の子宮収縮および授乳の間の母乳分泌を誘導するとして従来知られている。それはオキシトシン受容体を介してそれらの機能を媒介する。陣痛開始の直前に、オキシトシン受容体量の劇的増加により子宮筋肉はオキシトシンに甚だしく過敏となる。
【０００５】
最近、オキシトシンの作用のこの概念は、オキシトシン受容体遺伝子（ＯＸＴＲ）の発現の新規部位、例えば下垂体、腎臓、卵巣、精巣、胸腺、心臓、血管内皮、破骨細胞、筋芽細胞、膵島、脂肪細胞、種々の形式のガン細胞（１８）、および平滑筋および男性の射精に関与するらしいヒト精巣上体の上皮区画発見により拡大した（１９）。
【０００６】
オキシトシン受容体遺伝子（遺伝子記号ＯＸＴＲ、ジンーンバンク・アクセッション（ＧｅｎｅＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）ＮＭ＿０００９１６、配列番号１）は、ヒト染色体３ｐ２５に存在する。それは４個のエキソンおよび３個のイントロンを有する。エキソン１および２は、５’−非コード領域に相当し、次いでタンパク質のアミノ酸をコードするエキソン３および４が続く（２０）。オキシトシン受容体（ジンーンバンク・アクセ
ッションＮＰ＿０００９０７、配列番号２）は、Ｇタンパク質共役型受容体ファミリーに属する。その活性はＧタンパク質により媒介され、それはホスファチジルイノシトール−カルシウム第二メッセンジャーシステムを活性化する。
【０００７】
遺伝子発現は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス分子およびＤＮＡザイムの使用によるものを含む種々の異なる様式で調節される。ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡは双方共にＲＮＡｉ経路を介して作用しそして遺伝子の発現を抑制するために使用されて成功した。ＲＮＡｉは、最初蠕虫で発見されそしてｄｓＲＮＡに関連する遺伝子サイレンシングの現象は、ＦｉｒｅおよびＭｅｌｌｏにより最初に植物中で報告されそしてＲＮＡウイルスの感染と戦うための植物細胞の一つの手段と考えられている。この経路において、長いｄｓＲＮＡウイルス産物が、ＤＩＣＥＲ様酵素により長さ２１〜２５ｂｐのより小さいフラグメントに処理され次いで二本鎖分子が巻き戻されそしてＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）内に負荷される。同様の経路は、遺伝子特異性ではなくそして細胞内のタンパク質合成の全体的停止に導く、いわゆるインターフェロン反応の誘導を避けるために、ｄｓＲＮＡ分子は長さ３０ｂｐより短くなければならないという顕著な差異と一緒に哺乳動物細胞内で同定された。
【０００８】
合成ｓｉＲＮＡは、１種の遺伝子を特異的に標的とするように設計できそしてそれらはイン・ビトロでもイン・ビボでも細胞に容易に送達できる。ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ分子のＤＮＡ等価物でありそして細胞のゲノム内に組み込まれそして各有糸分裂の間に複製されるという利点を有する。
【０００９】
ＤＮＡザイムは、遺伝子発現を調節するために使用されてきた。ＤＮＡザイムは、一本鎖ＲＮＡを切断する触媒ＤＮＡ分子である。それらは標的ＲＮＡ配列に高度に選択性でありそしてそれ自体としてメッセンジャーＲＮＡのターゲティングを介して特定の遺伝子を下方制御するために使用できる。
【００１０】
従って、肺障害、例えば喘息、および関連疾患および病状に対するＯＸＴＲに関連する診断および処置の新規の方法を同定しそして特性を明らかにする要求がある。
【発明の開示】
【００１１】
発明の要旨
本発明は、オキシトシンのアゴニストおよび／またはアンタゴニスト、オキシトシン受容体、および／またはそれらの活性の一つまたは双方（本明細書中で以後「オキシトシン受容体アンタゴニスト」と称する）、および肺臓関連障害を処置するために、オキシトシンもしくはオキシトシン受容体を標的とする、抗体を含むオキシトシン受容体アンタゴニスト、および少なくとも１種のオキシトシン受容体タンパク質もしくはそのフラグメントに対して特異性であるその特定の部分もしくは変種を使用する方法に関する。
【００１２】
一つの態様では、オキシトシン受容体アンタゴニストは、オキシトシンもしくはオキシトシン受容体を特異的に結合する抗体である。かかる抗体の特別な利点は、それらがオキシトシンまたはオキシトシン受容体の作用を防止する様式でそれを結合できることである。従って、本発明の方法は、ヒトまたはヒト以外の患者内の種々の肺臓関連障害に関連する疾患状態の治療的および予防的処置に理想的にそれらを適合させる望ましい中和性を有する抗体を使用する。従って、本発明は、肺臓関連疾患または病状を阻害する中和性オキシトシン受容体抗体の量を患者に投薬することを含んでなる、かかる治療を必要とする患者内の肺臓関連疾患または病状を処置する方法を目的とする。
【００１３】
別の局面では、本発明は、細胞内の活性または発現が調節されるように、オキシトシンもしくはオキシトシン受容体の活性もしくは発現を調節（抑制または促進）する薬剤（例
えばアンタゴニストまたはアゴニスト）を用いて細胞に接触することを含んでなるオキシトシンまたはその受容体ポリペプチドの活性を調節する方法を提供する。好ましい態様では、薬剤はオキシトシンまたはオキシトシン受容体に特異的に結合する抗体である。他の態様では、調節剤（ｍｏｄｕｒａｔｏｒ）はペプチド、ペプチド擬似体、またはその他の小分子である。
【００１４】
本発明は、オキシトシンまたはオキシトシン受容体の量または活性を調節して障害が軽減できる、肺臓または関連障害を有する対象者を処置する方法も提供する。本発明は、オキシトシンもしくはオキシトシン受容体の活性の調節剤またはオキシトシンもしくはオキシトシン受容体の発現の調節剤である薬剤を対象者に投薬することによる、オキシトシンもしくはオキシトシン受容体またはそれらをコードするポリヌクレオチドの一つもしくは双方の異常な活性を特徴とする障害を有する対象者を処置する方法も提供する。
【００１５】
一つの態様では、調節剤は、ポリペプチドまたは小分子化合物である。他の態様では、調節剤はポリヌクレオチドである。特定の態様では、オキシトシン受容体アンタゴニストは、細胞によるオキシトシン受容体の産生を防止できるｓｉＲＮＡ分子、ｓｈＲＮＡ分子、またはＤＮＡザイムである。
【００１６】
本発明は本明細書中に記載されるいずれの発明もさらに提供する。
【００１７】
発明の詳細な説明
【００１８】
定義
下記の定義は、本明細書中の本発明を記述するために使用される種々の用語の意味および範囲を説明および定義するために記述される。
【００１９】
ポリペプチドの「活性」、生物学的活性、および機能的活性は、標準技術に従ってイン・ビボ、イン・シトゥ、またはイン・ビトロで決定される、その他のタンパク質または分子との特異的な相互反応に反応して、オキシトシンもしくはオキシトシン受容体により発揮される活性を指す。かかる活性は、直接活性、例えば第二のタンパク質に対する酵素活性と関連するもの、または間接活性、例えばタンパク質と第二のタンパク質との相互作用または細胞内シグナリングもしくは凝固カスケードのような一連の相互作用により媒介される細胞プロセスでもあり得る。
【００２０】
「抗体」は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域またはそれらのいずれかの部分、フラグメントもしくは変種を含んでなり、それらに限定はされないいずれかのポリペプチドもしくはペプチド含有分子を含む。「抗体」の用語は、抗体、それらの消化フラグメント、特定の部分および変種を包含するとさらに考えられ、それは抗体擬似体を含むかまたは抗体もしくはその特定のフラグメントまたはその部分の構造および／もしくは機能を擬似する抗体の部分を含んでなり、一本鎖抗体およびそれらのフラグメントを含む。例えば、抗体フラグメントは、それらに限定はされないが、Ｆａｂ（例えばパパイン消化による）。Ｆａｂ’（例えばペプシン消化および部分還元による）およびＦ（ａｂ’）２（例えばペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えばプラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えばペプシンまたはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えばペプシン消化、部分還元および再凝集による）、ＦｖもしくはｓｃＦｖ（例えば分子生物学技術による）フラグメントを含み、それらは本発明に包含される（例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．編集、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ
ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９７−２００１）参照）。
【００２１】
「キメラ」または「融合」分子は、１個もしくはそれ以上のオキシトシン受容体アンタゴニスト（またはそれらの部分）を別の核酸配列と組合せて創成された核酸またはポリペプチドである。かかる複合配列は、適切なベクター内に導入しそして発現させてキメラまたは融合ポリペプチドを生成させてもよい。
【００２２】
本発明の核酸配列「の補体」または「に相補性」とは、最初のポリヌクレオチドと比較して相補性の塩基配列および逆方向を有するポリヌクレオチド分子を指す。
【００２３】
「フラグメント」は、オキシトシン受容体アンタゴニストのいずれかのアミノ酸配列の全部ではないが一部分と完全に同一のアミノ酸配列を有する変種ポリペプチド、またはいずれかのオキシトシン受容体アンタゴニストポリヌクレオチドのいずれかの核酸配列の全部ではないが一部分と完全に同一の核酸配列を有する変種ポリヌクレオチドを指す。フラグメントは、例えば末端切断ポリペプチド、またはそれらの変種、例えば異種アミノ−および／またはカルボキシ−末端アミノ酸配列を含む残基の連続連鎖を含むことができる。宿主細胞によりまたはその中で産生されたオキシトシン受容体アンタゴニストの分解形態も含まれる。その他の例示的なフラグメントは、構造的または機能的属性を特徴とし、例えばアルファ−らせんもしくはアルファ−らせん形成領域、ベータ−シートもしくはベータ−シート形成領域、ターンもしくはターン形成領域、コイルもしくはコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファ−両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可動部、表面形成領域、基体結合領域、細胞外領域、および高い抗原指数（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｉｎｄｅｘ）領域を含んでなるフラグメントである。
【００２４】
当該技術分野で公知の「同一性」とは、２種もしくはそれ以上のポリペプチド配列または２種もしくはそれ以上のポリヌクレオチド配列の間で、配列比較により決定される関係である。当該技術分野では、「同一性」は、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド配列の間で、かかる配列の鎖の間の一致により決定される配列関連性の程度も意味する。「同一性」および「類似性」は、公知の方法、例えば、それらに限定はされないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編集，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編集，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編集，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；およびＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編集，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，Ｓｉａｍ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）中に記載のものにより容易に算出できる。さらに、同一性百分率の値は、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  Ｓｕｉｔｅ  ８．０（Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）のＡｌｉｇｎＸ成分に対するデフォールト決定を用いて生成されるアミノ酸およびヌクレオチド整列から得ることができる。
【００２５】
同一性を決定する好ましい方法は、試験する配列間の最大一致を与えるように設計される。同一性および類似性を決定する方法は、公開されて利用できる計算機プログラム中でコード化されている。２種の配列の間の同一性および類似性を決定するための好ましい計
算機プログラム方法は、それらに限定はされないが、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（１）：３８７（１９８４）），ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）を含む。ＢＬＡＳＴ  Ｘプログラムは、ＮＣＢＩおよびその他の入手先から公開されて利用できる（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＮＣＢＩＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８４９：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）。周知のＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性決定に使用できる。
【００２６】
ポリペプチド配列比較のために好ましいパラメーターは下記を含む。
（１）アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｍａｔｒｉｘ：Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）からのＢＬＯＳＳＵＭ６２
Ｇａｐ  Ｐｅｎｅｌｔｙ：１２
Ｇａｐ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｅｎａｌｔｙ：４
それらのパラメーターが有用なプログラムはＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ．から”ｇａｐ”プログラムとして公開されて利用できる。上記のパラメーターは、ペプチド配列比較のためのデフォールトパラメーターである（同時にｅｎｄ  ｇａｐに対してｎｏ  ｐｅｎａｌｔｙ）。
【００２７】
ポリヌクレオチド比較のために好ましいパラメーターは下記を含む。
（１）アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）
ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｍａｔｒｉｘ：ｍａｔｃｈｅｓ＝＋１０、ｍｉｓｍａｔｃｈ＝０Ｇａｐ  Ｐｅｎａｌｔｙ：５０
Ｇａｐ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｅｎａｌｔｙ：３
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓから”ｇａｐ”  ｐｒｏｇｒａｍとして入手できる。それらは核酸配列比較のためのデフォールトパラメーターである。
【００２８】
例として、あるポリヌクレオチド配列は、ある配列に対して同一であってもよく、すなわち１００％同一であるか、またはヌクレオチド改変（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）の一定の整数までを含んでもよい。かかる改変は、少なくとも１個のヌクレオチド欠失、転移およびトランスバージョンを含む置換、または挿入から成る群から選択され、そしてここで改変は、参照ヌクレオチド配列の５’もしくは３’末端位置または参照配列内のヌクレオチドの間に個別的にでもまたは参照配列内の１個もしくはそれ以上の隣接基内のいずれかに散在してそれら末端位置の間のどこかに起きてもよい。ヌクレオチド改変の数は、配列内のヌクレオチド全数にそれぞれの同一百分率の百分率数値（１００で割る）を乗じそして配列内のヌクレオチドの全数から該積を差し引いてい決定され、すなわち、
ｎ．ｓｕｂ．ｎ．Ｉｔｏｒｓｉｍ．ｘ．ｓｕｂ．ｎ−（ｘ．ｓｕｂ．ｎ．ｙ）
であり、ここで、ｎ．ｓｕｂ．ｎ．はヌクレオチド改変の数、ｘ．ｓｕｂ．ｎは配列内のヌクレオチドの全数、そしてｙは、例えば７０％に対して０．７０、８０％に対して０．８０、８５％に対して０．８５、９０％に対して０．９０、９５％に対して０．９５などであり、そしてここで、ｘ．ｓｕｂ．ｎとｙとのすべての非整数の積は、ｘ．ｓｕｂ．ｎから差し引く前に最も近い整数に丸める。
【００２９】
配列をコードするポリヌクレオチド配列の改変は、このコード配列内にナンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト変異を含むこともありそしてそれによりかかる改変に従っ
てポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを改変する。同様に、ポリペプチド配列は、参照配列に対して同一であってもよく、すなわち１００％同一であるか、または同一百分率が１００％未満となるような、参照配列と比較してアミノ酸改変の一定の整数までを含んでもよい。かかる改変は、少なくとも１個のアミノ酸欠失、同類的または非同類的置換を含む置換、または挿入からなる群から選択され、そしてここで、改変は参照ポリペプチド配列のアミノ−またはカルボキシ−末端位置、またはそれらの末端位置の間で参照配列内のアミノ酸の間に個別的にでもまたは参照配列内の１個もしくはそれ以上の隣接基内のいずれかに散在してそれら末端位置の間のどこかに起きてもよい。与えられた同一性％に対するアミノ酸改変の数は、配列内のアミノ酸の全数にそれぞれの同一百分率の百分率数値（１００で割る）を乗じそして配列内のアミノ酸の全数から該積を差し引いてい決定され、すなわち、
ｎ．ｓｕｂ．ａ．Ｉｔｏｒｓｉｍ．ｘ．ｓｕｂ．ａ−（ｘ．ｓｕｂ．ａ．ｙ）
であり、ここで、ｎ．ｓｕｂ．ａ．はアミノ酸置換の数、ｘ．ｓｕｂ．ａは配列内のアミノ酸の全数、そしてｙは、例えば７０％に対して０．７０、８０％に対して０．８０、８５％に対して０．８５などであり、そしてここで、ｘ．ｓｕｂ．ａとｙとのすべての非整数積は、ｘ．ｓｕｂ．ａから差し引く前に最も近い整数に丸める。
【００３０】
「核酸」は、ヌクレオチドが、糖に結合した塩基を含んでなり、その糖が他方では少なくとも二価の分子、例えばリン酸を仲介として互いに連結しているヌクレオチドのポリマーである。天然に存在する核酸の中では、糖は２’−デオキシリボース（ＤＮＡ）またはリボース（ＲＮＡ）である。天然に存在しないポリ−もしくはオリゴヌクレオチドは、修飾された塩基、糖類、または連結分子を含むが、しかし一般的にはそれらが手本として設計された天然に存在する核酸の相補的性質に擬似すると理解されている。天然に存在しないオリゴヌクレオチドの例は、ホスホロチオレートバックボーンを有するアンチセンス分子複合物である。「オリゴヌクレオチド」は、一般的に、３０個未満のヌクレオチドを有する核酸分子を指す。
【００３１】
「ポリペプチド」は、ペプチド結合により結合されたアミノ酸残基のポリマーでありそしてペプチドは一般的に１２個またはそれ未満の残基のアミノ酸ポリマーを指す。ペプチド結合は、核酸鋳型により指定されて天然に、または当該技術分野では周知の方法により合成的に産生されることができる。
【００３２】
「タンパク質」は、１個もしくはそれ以上のポリペプチド鎖を含んでなる巨大分子である。タンパク質は、さらにペプチド結合の形成に関与していないアミノ酸の側鎖基に結合する置換基を含んでなってもよい。典型的には、真核細胞発現により形成されたタンパク質は、炭水化物も含む。タンパク質は、本明細書中において、それらのアミノ酸配列またはバックボーンによって定義されそして置換基は、既知であるか否かにかかわらず指定されてもよい。
【００３３】
「受容体」の用語は、特異的リガンドもしくは結合相手との相互作用の結果として、例えば細胞内で生物学的活性に影響する能力を有する分子を指す。細胞膜結合受容体は、細胞外リガンド結合ドメイン、１個もしくはそれ以上の膜通過（ｓｐａｎｎｉｎｇ）もしくは膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達に典型的には関与する細胞内エフェクタードメインを特徴とする。細胞膜受容体に結合するリガンドは、細胞膜を通って伝達される細胞外ドメインにおける変化、１個もしくはそれ以上の細胞内タンパク質との直接もしくは間接相互作用を起こし、そして細胞の性質、例えば酵素活性、細胞形状、または遺伝子発現プロフィールを改変する。受容体は、細胞表面から開放されてもよくそして細胞質ゾル性、核性、または細胞から全く開放されてもよい。細胞に随伴しない受容体は可溶性受容体と呼ばれる。
【００３４】
本明細書中に引用されるすべての出版物および特許は、それに関して特定して指定されると否とにかかわらず、それらが本発明の時点における当該技術分野の状態を示しそして／または本発明の説明および資格付与を提供するとして、引用することにより本明細書に全て編入される。出版物とは、すべての記録された電子的もしくは印刷された型式を含むいずれの科学的もしくは特許出版物、またはいずれかのメディアの型で利用できるいずれかのその他の情報を指す。下記の引用文献は、引用することによりすべて本明細書に編入される：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第二版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，編集，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９７−２００１）。
【００３５】
オキシトシン受容体の生物学的機能
オキシトシン受容体の新規の発現および新規の機能、および気道平滑筋細胞内のその生物学的機能が同定された。この観察は、初代ヒト気道平滑筋細胞（ＨＡＳＭＣ）のマイクロアレイ遺伝子発現プロファイリングのデータ解析を起源とする。非喘息対象者からのＨＡＳＭＣと比較すると、喘息対象者からのＨＡＳＭＣはオキシトシン受容体の高い発現を常に示した。この観察は、メッセンジャーＲＮＡレベルでの独立した方法、すなわち実時間ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により確認された；ＨＡＳＭＣ発現は、ＩＬ−１３および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）により上方制御された。オキシトシン受容体タンパク質は、免疫ブロッティングによりＨＡＳＭＣから細胞溶解物中で検出された。
【００３６】
さらに、オキシトシン受容体の発現特性は、機能研究により確認された。オキシトシン受容体遺伝子をコードする配列は、本明細書中に記載されている。記載された配列は、全長ｃＤＮＡの核酸配列、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、プローブ（例えばＰＣＲのためのもの）、アンチセンス、リボザイム、および配列およびそれらによりコードされるポリペプチドを含むベクターを含む。これは、オキシトシン受容体が炎症性障害、例えば喘息、肺気腫、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）およびその他の肺臓関連障害の発生病理に役割を有し、そして炎症性要因を有するその他の肺臓障害にも役割を有するであろうことを示す。
【００３７】
かかる組成物は、１個もしくはそれ以上のタンパク質イソ型、その免疫原性部分、またはかかる部分をコードするポリヌクレオチドを含んでなってもよい。あるいは、治療組成物は、オキシトシン受容体タンパク質を発現する細胞、または遺伝子によりコードされるポリペプチドを発現する細胞に特異性であるＴ細胞、またはアゴニストのその他の型を含んでなってもよい。そしてアンタゴニスト剤、例えば中和性モノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはオキシトシン受容体ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質のいずれかの部分に該当した小分子化合物を含んでなってもよい。それらの組成物は、例えば、一連の免疫媒介炎症性疾患の予防および処置のために使用されてもよい。試料中のオキシトシン受容体タンパク質、またはかかるタンパク質をコードするｍＲＮＡの検出に基づく診断および予知方法が開示される。
【００３８】
オキシトシンおよびオキシトシン受容体タンパク質、ポリペプチド、およびそれらをコードする核酸分子は、一定の保存された構造および機能的特徴を有する分子のファミリー
を含んでなる。それら分子それぞれは、オキシトシンおよびオキシトシン受容体の定義内に含まれる。本明細書中に使用される場合に、「ファミリー」の用語は、共通もしくは類似したドメイン構造を有しそして本明細書中に記載する十分なアミノ酸もしくはヌクレオチド同一性を有する２種もしくはそれ以上のタンパク質または核酸分子を意味すると意図する。ファミリーメンバーは同一または異なる種のいずれに由来してもよい。例えば、ファミリーは、２種もしくはそれ以上のヒト起源タンパク質を含んでなることができ、または１種もしくはそれ以上のヒト起源タンパク質および１種もしくはそれ以上の非−ヒト起源を含んでなることができる。
【００３９】
オキシトシン受容体タンパク質内に存在してもよいドメインは、シグナル配列である。本明細書中に使用される場合に、「シグナル配列」は、膜結合タンパク質のアミノ末端に存在しそして少なくとも約４５％の疎水性アミノ酸残基、例えばアラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、チロシン、トリプトファン、またはバリンを含む、長さが少なくとも約１０アミノ酸残基のペプチドを含む。好ましい態様では、シグナル配列は、少なくとも約１０〜３５アミノ酸残基、好ましくは約１０〜２０アミノ酸残基を含み、そして少なくとも約３５〜６０％、さらに好ましくは４０〜５０％、そしてさらに好ましくは少なくとも約４５％の疎水性残基を有する。シグナル配列は、かかる配列を含むタンパク質を脂質二重層に導くために役立つ。従って、一つの態様では、オキシトシン受容体タンパク質は、シグナル配列を含んでもよい。シグナル配列は、成熟タンパク質のプロセシングの間に切断される。
【００４０】
オキシトシン受容体タンパク質は細胞外ドメインを含む。本明細書中に使用される場合に、「細胞外ドメイン」は、タンパク質をコードする核酸が細胞内で発現された場合に、細胞の脂質二重層の非細胞質側に位置するタンパク質の一部分を指す。ヒトオキシトシン受容体タンパク質細胞外ドメインは、配列番号２のアミノ酸残基１〜３８に位置する。
【００４１】
さらに、オキシトシン受容体は、膜貫通ドメインを含む。本明細書中に使用される場合に、「膜貫通ドメイン」は、長さが少なくとも約１５アミノ酸残基でありそして少なくとも約６５〜７０％の疎水性アミノ酸残基、例えばアラニン、ロイシン、フェニルアラニン、タンパク質、チロシン、トリプトファン、またはバリンを含むアミノ酸配列を指す（Ｅｒｉｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．ｏｆ  Ｓｉｘｔｈ  Ｉｎｔ．Ｃｏｎｆ．ｏｎ  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１７５〜１８２ページ）。好ましい態様では、膜貫通ドメインは、約１５〜３０アミノ酸残基、好ましくは約２０〜２５アミノ酸残基を含み、そして少なくとも約６０〜８０％、さらに好ましくは６５〜７５％、そしてさらに好ましくは少なくとも約７０％の疎水性残基を有する。従って、オキシトシン受容体タンパク質は、配列番号２のプレタンパク質の残基３９〜残基３３２にわたる特性的７回膜貫通ドメインを有する。
【００４２】
オキシトシン受容体タンパク質は細胞質ドメインを有し、具体的にはカルボキシル末端細胞質ドメインを有するタンパク質を含む。本明細書中に使用される場合に、「細胞質ドメイン」は、タンパク質をコードする核酸が細胞内で発現された場合に、細胞の脂質二重層の細胞質側に位置するタンパク質の一部分を指す。ヒトオキシトシン受容体細胞質ドメインは、配列番号２のアミノ酸残基３３３からタンパク質のＣ末端、すなわち残基３８９までに位置する。オキシトシン受容体タンパク質は、典型的には、種々の可能性がある翻訳後修飾部位を含んでなる（しばしば細胞外ドメイン内）。
【００４３】
オキシトシン受容体アンタゴニスト
本明細書中に使用される場合に、「オキシトシン受容体アンタゴニスト」の用語は、オキシトシン受容体の生物学的活性を阻害もしくは中和する物質を指す。かかるアンタゴニストは種々の様式でこの効果を達成する。一つの分類のオキシトシン受容体アンタゴニス
トは、十分な親和性および特異性をもってオキシトシン受容体タンパク質に結合して、オキシトシン受容体の生物学的効果を中和する。分子のこの分類中に含まれるのは、抗体および抗体フラグメントである（例えば、Ｆ（ａｂ）またはＦ（ａｂ’）２分子）。別の分類のオキシトシン受容体アンタゴニストは、オキシトシン受容体タンパク質のフラグメント、変異体もしくは小さい有機分子、すなわちペプチド擬似体を含んでなり、それらはオキシトシン受容体またはオキシトシン受容体結合相手に結合し、それによりオキシトシン受容体の生物学的活性を阻害する。オキシトシン受容体アンタゴニストは、それがオキシトシン受容体の生物学的活性を阻害する物質である限り、それらの分類のいずれであってもよい。オキシトシン受容体アンタゴニストは、オキシトシン受容体抗体、オキシトシン抗体、修飾オキシトシン受容体、およびオキシトシン受容体の部分ペプチドを含む。別の分類のオキシトシン受容体アンタゴニストは、当該技術分野では公知のオキシトシン受容体遺伝子配列を標的とするｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス分子およびＤＮＡザイムを含み、それは本明細書中に開示される。
【００４４】
従って、本明細書中に使用される場合に、「オキシトシン受容体抗体」、「抗オキシトシン受容体抗体」。「抗オキシトシン受容体抗体部分」、または「抗オキシトシン受容体抗体フラグメント」および／または「抗オキシトシン受容体抗体変種」などは、本発明中に使用される抗体内に組み込むことができる、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分、例えば、それらに限定はされないが、重鎖もしくは軽鎖またはそれらのリガンド結合部分の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、もしくはそれらのいずれの部分、またはオキシトシン受容体タンパク質またはペプチドから誘導されたオキシトシン受容体結合タンパク質の少なくとも一部分を含んでなる分子を含むいずれかのタンパク質またはポリペプチドを含む。かかる抗体は、場合により特定のリガンドにさらに影響し、例えばそれらに限定はされないが、かかる抗体はイン・ビトロ、イン・シトゥおよび／またはイン・ビボでオキシトシン受容体活性を調節、減少、増加、拮抗、作動、軽減、緩和、遮断、阻害、終止および／または干渉する。限定ではない例として、本発明の適切な抗オキシトシン受容体抗体、特定の部分または変種は、少なくとも１個のオキシトシン受容体タンパク質もしくはペプチド、またはそれらの特定の部分、変種もしくはドメインに結合できる。適切な抗オキシトシン受容体抗体、特定の部分、もしくは変種は、種々の経路、例えばそれらに限定はされないが、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、オキシトシン受容体放出、オキシトシン受容体シグナル伝達、オキシトシン受容体結合、オキシトシン受容体産生および／または合成においてオキシトシン受容体脈管形成機能に影響する。
【００４５】
抗体は、少なくとも１個のＣＤＲ、少なくとも１個の可変領域、少なくとも１個の定常領域、少なくとも１個の重鎖（例えば、ｇ１、ｇ２、ｇ３、ｇ４、ｍ、ａ１、ａ２、ｄ、ｅ）、少なくとも１個の軽鎖（例えばｋおよびｌ）、またはそれらのいずれかの部分もしくはフラグメントの１個もしくはそれ以上を含むことができ、そしてさらに鎖間および鎖内ジスルフィド結合、ヒンジ領域、ヒンジ領域により分離されてもよいグリコシル化部位、ならびに重鎖および軽鎖を含んでなることができる。軽鎖は典型的には約２５Ｋｄ、そして重鎖は典型的には約５０Ｋｄ〜７７Ｋｄの範囲の分子量を有する。軽鎖は、２種の異なる形態またはイソ型、カッパ（ｋ）およびラムダ（ｌ）で存在でき、それらはいずれの重鎖タイプとも組み合わすことができる。すべての軽鎖は少なくとも１個の可変領域および少なくとも１個の定常領域を有する。ＩｇＧ抗体は典型的抗体構造と考えられ、そして軽鎖中に２個の鎖内ジスルフィド結合（１個は可変領域内そして１個は定常領域内）、重鎖内に４個を有し、そしてかかる結合は、鎖内に約１１０個のアミノ酸の「ドメイン」を含んでなる約６０〜７０個のアミノ酸のペプチドループを包含する。ＩｇＧ抗体は４個の分類、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に特徴づけることができる。それぞれの免疫グロブリン分類は、異なる組合せの機能を有する。下記の表は、免疫グロブリン分類およびサブ分類それぞれの物理化学的性質を要約したものである。
【００４６】
【表１】
2008523086.tif 000003
【００４７】
下記の表は、ヒト抗体分類およびサブ分類に対する抗体エフェクター機能の非限定的例を要約したものである。
【００４８】
【表２】
2008523086.tif 000004
【００４９】
従って、抗体またはそのフラグメントの形式は、特定の治療もしくは診断用途、例えば、それらに限定はされないが、血清半減期、血管内分布、補体結合などに望ましい所望の特性および機能に基づいて、本発明による使用のために選択できる。
【００５０】
単離されたオキシトシン受容体もしくはオキシトシンポリペプチド、またはそれらのフラグメントは、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体調製の標準技術を用いて抗体を生成する免疫原として使用できる。全長ポリペプチドまたはタンパク質が使用できるか、あるいは、本発明は免疫原として使用するための抗原性ペプチドフラグメントを提供する。オキシトシン受容体またはオキシトシンタンパク質の抗原性ペプチドは少なくとも８（好ましくは１０、１５、２０もしくは３０またはそれ以上）個のアミノ酸残基を含んでなり、そしてペプチドに対して生成した抗体がタンパク質と特異性免疫複合体を形成するようなタンパク質のエピトープを包含する。
【００５１】
免疫原は、典型的には、適合する（すなわち免疫適合性）対象者、例えばラビット、ヤギ、マウス、またはその他の哺乳動物または脊椎動物を免疫化して抗体を調製するために使用される。適切な免疫原製剤は、例えば、組換え的に発現されるかまたは化学的に合成されたポリペプチドを含むことができる。その製剤は、アジュバント、例えばフロイントの完全もしくは不完全アジュバント、または同様の免疫刺激性薬剤をさらに含むことができる。
【００５２】
抗体産生細胞は、末梢血液または、好ましくは、関連する免疫原を用いて免疫化されたヒトまたはその他の適切な動物の脾臓またはリンパ節から得ることができる。いずれかそ
の他の適切な宿主細胞も、本発明の抗体、それらの特定のフラグメントもしくは変種をコードする異種もしくは内在性核酸を発現するために使用できる。融合細胞（ハイブリドーマ）または組換え細胞は、選択的培養条件またはその他の適合する方法を用いて単離でき、そして限界希釈もしくは細胞選別、またはその他の公知の方法によりクローニングされる。所望の特異性を有する抗体を産生する細胞は適合するアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）により選別できる。
【００５３】
一つの方法では、ハイブリドーマは、適合する不死細胞系統（例えば骨髄種細胞系統、例えば、それらに限定はされないが、Ｓｐ２／０、Ｓｐ２／０−ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、＞２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２  ＳＡ３、Ｓｐ２  ＭＡＩ、Ｓｐ２  ＳＳ１、Ｓｐ２  ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ  １４４、ＡＣＴ  ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ−１、ＪＵＲＫＡＴ，ＷＥＨＩ，Ｋ−５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ  １４４、ＮＡＭＡＬＷＡ、ＮＥＵＲＯ  ２Ａなど）、またはヘテロ骨髄種、それらの融合産物、またはそれらから誘導されたいずれかの細胞もしくは誘導細胞、または当該技術分野では公知のいずれかその他の適合する細胞系統（例えばｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍなど参照）を、抗体産生細胞、例えば、それらに限定はされないが、単離もしくはクローンされた脾臓、末梢血液、リンパ、扁桃、またはその他の免疫細胞もしくはＢ細胞を含む細胞、または、重鎖もしくは軽鎖の定常または可変もしくはフレームワークもしくはＣＤＲ配列を発現するいずれかのその他の細胞と、内在性もしくは異種核酸のいずれかとして、組換えまたは内在性、ウイルス、細菌、藻類、原核性、両生類、昆虫、爬虫類、魚類、哺乳動物、ネズミ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、シープ、霊長類、真核性、ゲノム性ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖、三本鎖、ハイブリダイズ、などおよびそれらのいずれかの組合せとの融合により産生される。例えばＡｕｓｕｂｅｌ、上記文献およびＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、上記文献、第２章（引用することにより全体を本明細書に編入する）参照。
【００５４】
要求される特異性の抗体を産生または単離するその他の適当な方法が使用でき、それには、ペプチドもしくはポリペプチドライブラリー（例えば、それらに限定はされないが、バクテリオファージ、リボソーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、などのディスプレイライブラリー；例えばＣａｍｂｒｉｄｇｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ，ＤＥ；Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ，ＵＫ；ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ；Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．，Ｅｎｚｏｎ，Ａｆｆｙｍａｘ／Ｂｉｏｓｉｔｅ；Ｘｏｍａ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ；Ｉｘｓｙｓから入手できる組換え抗体が含まれる。例えば、欧州特許公開番号（ＥＰ）第３６８，６８４号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／００２２４０号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９２／００８８３号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９３／００６０５号；米国特許（ＵＳ）第５，９６２，２５５号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９４／０１４２２号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９４／０２６６２号；国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９７／０１８３５号；（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；国際特許出願公開（ＷＯ）９０／１４４４３号；国際特許出願公開（ＷＯ）９０／１４４２４号；国際特許出願公開（ＷＯ）９０／１４４４３０；国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２３４号；国際特許出願公開（ＷＯ）９２／１３６１９号；国際特許出願公開（ＷＯ）９６／０７７５４号；（Ｓｃｒｉｐｐｓ）；欧州特許（ＥＰ）第６１４  ９８９号（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）；国際特許出願公開（ＷＯ）９５／１６０２７号（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ）；国際特許出願公開（ＷＯ）８８／０６６３０号；国際特許出願公開（ＷＯ）９０／３８０９号（Ｄｙａｘ）；米国特許（ＵＳ）第４，７０４，６９２号（Ｅｎｚｏｎ）；国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２９８９号（Ａｆｆ
ｙｍａｘ）；国際特許出願公開（ＷＯ）８９／０６２８３号；欧州特許（ＥＰ）第３７１
９９８号；欧州特許（ＥＰ）第５５０  ４００号；（Ｘｏｍａ）；欧州特許（ＥＰ）第２２９  ０４６号；国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４９号（Ｉｘｓｙｓ）；または無作為的に生成されるペプチドまたはポリペプチド−米国特許（ＵＳ）第５７２３３２３号、第５７６３１９２号、第５８１４４７６号、第５８１７４８３号、第５８２４５１４号、および第５９７６８６２号、国際特許出願公開（ＷＯ）８６／０５８０３号；欧州特許（ＥＰ）第５９０  ６８９号（Ｉｘｓｙｓ、現在はＡｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＭＥ）、いずれもすべて引用することにより本明細書に編入される）または当該技術分野では公知であるかおよび／または本明細書中に記載のヒト抗体のある範囲を生成できるトランスジェニック動物の免疫化に依存するもの（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１−９０７（１９９７）；Ｓａｎｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５−１１８（１９９６）：Ｅｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４−１６１（１９９８）、それぞれならびに関連する特許および特許出願はすべて引用することにより本明細書に編入される）参照。かかる技術は、それらに限定はされないが、リボソームディスプレイ（Ｈａｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４９３７−４９４２（Ｍａｙ，１９９７）；Ｈａｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１４１３０−１４１３５（Ｎｏｖ，１９９８））；単一細胞抗体産生技術（例えば、選択されたリンパ球抗体法（”ＳＬＡＭ”）（米国特許（ＵＳ）第５，６２７，０５２号、Ｗｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７−８９２（１９８７）；Ｂａｂｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７８４３−７８４８（１９９６））；ゲル小滴およびフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：３３３−３３７（１９９０）；１細胞システム、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ；Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１８２：１５５−１６３（１９９５）；Ｋｅｎｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１３：７８７−７９０（１９９５））；Ｂ細胞選択（Ｓｔｅｅｎｂａｃｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ  １９：１２５−１３４（１９９４）；Ｊｏｎａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，第５巻，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｏｒｒｅｎｂａｅｃｋ，編集，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ（１９８８））を含む。
【００５５】
非ヒトまたはヒト抗体を操作またはヒト化する方法も使用できそして当該技術分野では周知である。一般的に、ヒト化または操作した抗体は、非ヒト、例えば、それらに限定はされないが、マウス、ラット、ラビット、非ヒト霊長類またはその他の哺乳動物起源からの１個もしくはそれ以上のアミノ酸残基を有する。それらのヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と呼ばれ、それらは典型的には、既知のヒト配列の「インポート」された可変、定常またはその他のドメインから採取される。既知ヒトＩｇ配列は、例えばｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ／ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ／ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ＡＬＩＧＮＭＥＮＴＳ．ｐｈｐ；ｗｗｗ．ｋａｂａｔｄａｔａｂａｓｅ．ｃｏｍ／ｔｏｐ．ｈｔｍｌ；ｆｔｐ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ／ｋａｂａｔ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／〜ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ；
ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／〜ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／〜ｙａｓｕｈｉｔｏ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ；ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｕｋ．ｏｒｇ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／〜ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓ１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ／ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ；ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／〜ｕｂｃｇ０７ｓ；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ，ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ；Ｋａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）（いずれもすべて引用することにより本明細書に編入される）から公開されている。
【００５６】
このようなインポートされた配列は、免疫原性を低下するかまたは結合、親和性、オンレイト（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフレイト（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、結合活性、特異性、半減期もしくはいずれかのその他の適合する特性を低下、促進もしくは変更するために使用でき、それは当該技術分野では公知である。一般的に、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の部分または全体は、可変および定常領域の非ヒト配列がヒトまたはその他のアミノ酸で置換されるのに対して維持される。抗体は、抗原およびその他の好ましい生物学的性質に対する高い親和性を維持しながら任意にヒト化もできる。この目標に達するために、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを用いて親配列および種々の概念的ヒト化生成物の分析のプロセスにより任意に調製できる。三次元免疫グロブリンモデルは普通に入手できそして当該技術分野の熟練者には周知である。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元立体配置構造を例示しそしてディスプレイする計算機プログラムが利用できる。それらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能性における残基の考えられる役割の解析、すなわちその抗原を結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の解析を可能とさせる。この方法で、ＦＲ残基が選択できそして一致およびインポート配列から複合されて、所望の抗体特性、例えば標的抗原への増加した親和性が達成される。一般的に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響において直接的そして最も本質的に関与する。本発明の抗体のヒト化または操作は、いずれかの公知の方法、例えば、それらに限定はされないが、Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９；１５３４（１９８８）），Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９８８）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６；９０１（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３），米国特許（ＵＳ）第５７２３３２３号；第５９７６８６２号；第５８２４５１４号；第５８１７４８３号；第５８１４４７６号；第５７６３１９２号；第５７２３３２３号；第５７６６８８６号；第５７１４３５２号；第６２０
４０２３号；第６１８０３７０号；第５６９３７６２号；第５５３０１０１号；第５５８５０８９号；第５２２５５３９号；および第４８１６５６７号；国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０号；国際特許出願ＵＳ９６／１８９７８号；国際特許出願ＵＳ９１／０９６３０号；国際特許出願ＵＳ９１／０５９３９号；国際特許出願ＵＳ９４／０１２３４号；国際特許出願ＧＢ８９／０１３３４号；国際特許出願ＧＢ９１／０１１３４号；国際特許出願ＧＢ９２／０１７５５号；国際特許出願公開（ＷＯ）９０／１４４４３号；国際特許出願公開（ＷＯ）９０／１４４２４号；および国際特許出願公開（ＷＯ）９０／１４４３０号；欧州特許（ＥＰ）第２２９２４６号（それらの中に引用された参照文献を含めて、それぞれすべてを引用することにより本明細書に編入される）中に開示されたものを用いて実施できる。
【００５７】
オキシトシン受容体抗体は、ある範囲のヒト抗体を産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、非ヒト霊長類動物、など）の免疫化により任意に生成されることもでき、それは本明細書中に記載されるかそして／または当該技術分野では公知のものである。ヒトオキシトシン受容体抗体を産生する細胞は、かかる動物から単離されそして適合する方法、例えば本明細書中に記載の方法を用いて不死化できる。
【００５８】
ヒト抗原に結合するある範囲のヒト抗体を産生できるトランスジェニックマウスは、公知の方法により作製できる（例えば、それらに限定はされないが、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ
ａｌ．に発行された米国特許（ＵＳ）第５，７７０，４２８号、第５，５６９，８２５号、第５，５４５，８０６号、第５，６２５，１２６号、第５，６２５，８２５号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号および第５，７８９，６５０号；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９８／５０４３３号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９８／２４８９３号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９８／２４８８４号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ
ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９７／１３８５２号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９４／２５５８５号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９６／３４０９６号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許（ＥＰ）第０４６３  １５１  Ｂ１号、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許（ＥＰ）第０７１０  ７１９  Ａ１号、Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．米国特許（ＵＳ）第５，５４５，８０７号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．国際特許出願公開（ＷＯ）９０／０４０３６号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許（ＥＰ）第０４３８  ４７４  Ｂ１号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許（ＥＰ）第０８１４  ２５９  Ａ２号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．英国特許（ＧＢ）第２  ２７２
４４０  Ａ号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９−５９１（１９９４）、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０（２３）：６２８７−６２９５（１９９２）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（８）３７２０−３７２４（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３（１）：６５−９３（１９９５）およびＦｉｓｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４（７）：８４５−８５１（１９９６）、これらはそれぞれすべてを引用することにより本明細書に編入される）。一般的に、それらのマウスは、機能的に再構成されるか、または機能的再構成を受けることができる少なくとも１個のヒト免疫グロブリン座からのＤＮＡを含んでなる少なくとも１個の導入遺伝子を含んでなる。かかるマウス内の内在性免疫グロブリン座は、内在遺伝子によりコードされる抗体を産生するために、動物の能力を排除するために破壊または欠損できる。
【００５９】
本発明の抗体は、それらの乳内に抗体を産生するトランスジェニック動物または哺乳動物、例えばヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどに核酸をコードする少なくとも１種の抗オキシトシン受容体抗体を投与することにより、乳内で調製もできる。かかる動物は、公知の方法を用いて供給できる。例えば、それらに限定はされないが、米国特許（ＵＳ）第５，８２７，６９０号；第５，８４９，９９２号；第４，８７３，３１６号；第５，８４９，９９２号；第５，９９４，６１６号；第５，５６５，３６２号；第５，３０４，４８９号、など（それぞれすべてを引用することにより本明細書に編入される）参照。本発明の抗体は、さらに、核酸をコードする少なくとも１種のオキシトシン受容体抗体をコードする核酸を用いて調製でき、植物部分中もしくはそれから培養した細胞内にかかる抗体、特定部分もしくは変種を産生するトランスジェニック植物および培養した植物細胞（例えば、それらに限定はされないが、タバコおよびトウモロコシ）を供給する。
【００６０】
本発明の抗体は、広範囲の親和性（ＫＤ）でヒトオキシトシン受容体を結合できる。一つの好ましい態様では、本発明の少なくとも１種のヒトｍＡｂは、高い親和性でヒトオキシトシン受容体を任意に結合できる。例えば、ヒトｍＡｂは、約１０−７Ｍに等しいかまたはそれ未満、例えば、それらに限定はされないが、０．１〜９．９（またはその範囲内のいずれかの範囲もしくは値）Ｘ１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３またはその範囲内のいずれかの範囲もしくは値のＫＤでヒトオキシトシン受容体を結合できる。
【００６１】
抗原に対する抗体の親和性または結合活性は、いずれかの適合する方法を用いて実験的に決定できる。（例えばＢｅｒｚｏｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，”Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，編集，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）；および本明細書中に記載の方法を参照のこと）。特定の抗体−抗原相互作用の測定された親和性は、異なる条件下（例えば、塩濃度、ｐＨ）で測定された場合には異なる可能性がある。従って、親和性およびその他の抗原−結合パラメーター（例えば、ＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくは、抗体および抗原の標準化された溶液、および標準化された緩衝液、例えば本明細書中に記載の緩衝液を用いておこなわれる。
【００６２】
オキシトシン受容体アンタゴニスト（例えばモノクローナル抗体）は、標準技術、例えばアフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降法によりオキシトシン受容体ポリペプチドを単離するために使用できる。さらに、このような抗体は、ポリペプチドの発現の頻度およびパターンを評価するためにタンパク質（例えば細胞溶解物または細胞上清内）を検出するために使用できる。抗体は、例えば与えられた処置方式の効果を決定するために、臨床試験手順の一部として組織内のタンパク質レベルを測定するために診断的にも使用できる。検出は、抗体を検出可能な物質にカップリングして促進できる。検出可能な物質の例は、種々の酵素、接合団、蛍光物質、発光物質、生物的発光物質、および放射性物質を含む。適合する酵素の例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼを含む；適合する接合団複合体の例は、ストレプタビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含む；適合する蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセイン・イソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン・フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンを含む；発光物質の例は、ルミノールを含む；生物的発光物質の例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンを含み、そして適合する放射性物質の例は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈを含む。
【００６３】
「抗体」の用語は、さらに抗体、それらの消化フラグメント、特定の部分および変種を
包含すると意図され、抗体擬似体を含むかまたは抗体もしくはその特定のフラグメントもしくは部分の構造および／もしくは機能を擬似する抗体の部分を含んでなり、一本鎖抗体およびそれらのフラグメントを含む。機能性フラグメントは、哺乳動物オキシトシン受容体に結合する抗原結合フラグメントを含む。例えば、Ｆａｂ（例えばパパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えばペプシン消化および部分還元による）およびＦ（ａｂ’）２（例えばペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えばプラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えばペプシンまたはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えばペプシン消化、部分還元および再凝集による）、ＦｖまたはｓｃＦｖ（例えば分子生物学技術による）フラグメントを含むが、それらに限定はされない、オキシトシン受容体またはその部分に結合できる抗体フラグメントが、本発明に包含される（例えばＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、上記文献参照）。
【００６４】
かかるフラグメントは、酵素切断、合成または組換え技術により産生でき、それは当該技術分野では公知であるかおよび／または本明細書中に記載されている。抗体は１個もしくはそれ以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入されている抗体遺伝子を用いて短縮された種々の形態として産生もできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする複合遺伝子は、重鎖のＣＨ１ドメインおよび／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計できる。抗体の種々の部分は、慣用の技術により化学的に一緒に接合できるか、または遺伝子工学技術を用いて隣接領域として調製できる。
【００６５】
抗オキシトシン受容体抗体は、霊長類動物、げっ歯類動物、もしくはヒト抗体またはキメラもしくはヒト化抗体であってもよい。本明細書中に使用される場合に、「ヒト抗体」の用語は、タンパク質の本質的に各部分（例えばＣＤＲ、フレームワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））がヒト内で本質的に非免疫原性であり、ここで小さい配列変化もしくは変動があるのみであるか、および／またはヒト公知の抗体成分に操作され、それから誘導されるかもしくはそれを含む抗体を指す。同様に、抗体を指定された霊長類動物（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、げっ歯類動物（マウス、ラット、ラビット、モルモット、ハムスター、など）、およびその他の哺乳動物は、かかる種、亞属、属、亜科、科、に特異性の抗体を指定する。さらに本発明のキメラ抗体は上記のいずれの組合せの含むことができる。かかる変化または変動は、場合によりそして好ましくは、非変性抗体と比較してヒトまたは他の種内の免疫原性を維持または低下する。従って、ヒト抗体はキメラまたはヒト化抗体から区別される。ヒト抗体が、機能的に組みかえられたヒト免疫グロブリン（例えば重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現できる非ヒト動物または原核もしくは真核細胞により産生できることが指摘される。さらに、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合に、それは本来のヒト抗体内には見いだせないリンカーペプチドを含んでなることができる。例えば、Ｆｖは、リンカーペプチド、例えば２〜約８個のグリシンまたはその他のアミノ酸残基を含んでなることができ、それは重鎖の可変領域および軽鎖の可変領域を連結する。かかるリンカーペプチドはヒト起源と考えられる。
【００６６】
少なくとも２種の異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナルであって、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である、二重特異性、異種特異性、異種接合（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、または類似の抗体も使用できる。この場合に、一つの結合特異性は、少なくとも１種のオキシトシン受容体タンパク質に対してのものであり、他のものはいずれかその他の抗原、例えばオキシトシンに対するものである。二重特異性抗体を作成する方法は、当該技術分野では公知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え産生は、２種の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、ここで２種の重鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組合せのために、それらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的混合
物を産生し、その中でただ１個が正しい二重特異性構造を有する。通常はアフィニティクロマトグラフィーにより行われる正しい分子の精製は、かなり煩雑であり、そして製品収率は低い。同様の手順は、例えば国際特許出願公開（ＷＯ）９３／０８８２９号、米国特許（ＵＳ）第６２１０６６８号、第６１９３６６７号、第６１３２９９２号、第６１０６８３３号、第６０６０２８５号、第６０３７４５３号、第６０１０９０２号、第５９８９５３０号、第５９５９０８４号、第５９５９０８３号、第５９３２４４８号、第５８３３９８５号、第５８２１３３３号、第５８０７７０６号、第５６４３７５９号、第５６０１８１９号、第５５８２９９６号、第５４９６５４９号、第４６７６９８０号、国際特許出願公開（ＷＯ）９１／００３６０号、国際特許出願公開（ＷＯ）９２／００３７３号、欧州特許（ＥＰ）第０３０８９号、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）（それぞれすべてを引用することにより本明細書に編入される）中に開示されている。
【００６７】
本発明の方法および組成物に有用な抗オキシトシン受容体抗体は、場合により、オキシトシン受容体への高い親和性結合および場合によりそして好ましくは低い毒性を有することを特徴とする。具体的には、個別成分、例えば可変領域、定常領域およびフレームワークが個別および／または集合的に、場合によりそして好ましくは低い免疫原性を有する、本発明の抗体、特定のフラグメントもしくは変種は、本発明に有用である。本発明に使用できる抗体は、場合により、症状の測定可能な軽減および低いかおよび／または受容できる毒性をもって長期間にわたって患者を処置するそれらの能力を特徴とする。低いかまたは受容できる免疫原性および／または高い親和性、ならびにその他の適合する性質は、達成される治療結果に貢献できる。「低い免疫原性」は、処置される患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満内に著しいＨＡＨＡ、ＨＡＣＡもしくはＨＡＭＡ反応の上昇および／または処置された患者内の低い力価の上昇（二重抗原酵素免疫アッセイを用いて測定された約３００未満、好ましくは約１００未満）として本明細書中で定義される（Ｅｌｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）、すべて引用することにより本明細書に編入される）。
【００６８】
適合する抗体は、オキシトシン受容体活性化を遮断するモノクローナル抗体と、ヒトオキシトシン受容体への結合に関して競合するものを含む。
【００６９】
ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびＤＮＡザイムの形態のオキシトシン受容体アンタゴニスト
オキシトシン受容体の誘導物質を標的とする治療は、より良い成功の機会をもたらすであろう。遺伝子発現は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス分子およびＤＮＡザイムの使用によるものを含み、種々の様式で調節されることができる。合成ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびＤＮＡザイムは、１個もしくはそれ以上の遺伝子を特異的に標的とするように設計できそしてそれらはイン・ビトロまたはイン・ビボで細胞に容易に送達できる。
【００７０】
本発明は、アンチセンス核酸分子、すなわち、オキシトシン受容体ポリペプチドをコードするセンス核酸に相補性、例えば二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補性もしくはｍＲＮＡ配列に相補性である分子を包含する。従って、アンチセンス核酸は、センス核酸に水素結合できる。アンチセンス核酸は、全コード鎖に対して、またはその一部分のみに対して、例えばタンパク質コード領域（またはオープンリーディングフレーム）のすべてもしくは部分に対して相補性であることができる。アンチセンス核酸分子は、オキシトシン受容体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域のすべてもしくは一部分に対してアンチセンスであることができる。非コード領域（「５’および３’非翻訳領域」）は、コード領域に隣接する５’および３’配列でありそしてアミノ酸に翻訳されない。
【００７１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個またはそれ以上のヌクレオチドの長さであることができる。本発明のアンチセンス核酸は、当該技術分野では公知の方法を用いて化学合成および酵素連結反応を用いて構築できる。例えば、アンチセンス核酸（例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチドまたは分子の生物学的安定性を増加するかもしくはアンチセンスとセンス核酸との間に形成されるデュプレックスの物理的安定性を増加するように設計された種々に変性されたヌクレオチドを用いて化学的に合成でき、例えばホスホロチオアート誘導体、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、およびアクリジン置換ヌクレオチドが使用できる。アンチセンス核酸を生成するために使用できる変性ヌクレオチドの例は、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、イオノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイオノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、ベータ−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン、ならびに下記の表に示したものを含む。あるいは、アンチセンス核酸は、中に核酸がアンチセンス方向にサブクローンされている発現ベクターを用いて生物学的に産生できる（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、関係する標的核酸にアンチセンス方向となり、以下のサブセクションにさらに記述される）。
【００７２】
本発明のアンチセンス核酸分子は、それらが、選択されたオキシトシン受容体ポリペプチドをコードする細胞ｍＲＮＡおよび／もしくはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするかもしくは結合して、それにより例えば転写および／もしくは翻訳を阻害して発現を抑制するように、典型的には対象者に投薬されるかまたはイン・シトゥで生成される。ハイブリダイゼーションは、慣用のヌクレオチド相補性によるか、または例えばＤＮＡデュプレックスに結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二本らせんの主要なみぞ内の特異性相互作用を介して安定なデュプレックスを形成できる。本発明のアンチセンス核酸分子の投与の経路の一例は、組織部位における直接注入を含む。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的とするように変性でき次いで全身的に投与できる。例えば、全身投与の場合に、アンチセンス分子は、選択された細胞表面上に発現された受容体もしくは抗原に、例えば細胞表面受容体もしくは抗原に結合するペプチドもしくは抗体にアンチセンス核酸分子を連結することにより、それらが特異的に結合するように変性できる。アンチセンス核酸分子は、本明細書中に記載のベクターを用いて細胞に送達されることもできる。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度に到達するために、強いｐｏｌ  ＩＩもしくはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの制御下にアンチセンス核酸分子が置かれるベクター構築物が好ましい。
【００７３】
本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子であることができる。α−アノマー核酸分子は、相補性ＲＮＡを有する特異性二本鎖ハイブリッドを形成し、その中で、通常のα−単位とは異なり、鎖は互いに平行に走る（Ｇａｕｌｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．
（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ，１５：６６２５−６６４１）。アンチセンス核酸分子は、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，１５：６１３１−６１４８）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０）を含んでなることもできる。
【００７４】
本発明は、リボザイムも包含する。リボザイムは、それらが相補性領域を有する一本鎖核酸、例えばｍＲＮＡを切断できるリボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡ分子である。従って、リボザイム（例えばハンマーヘッド型リボザイム、Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ  ａｎｄ  Ｇｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５８５−５９１に記載）は、ｍＲＮＡを触媒的に切断してそれによりｍＲＮＡによりコードされるタンパク質の翻訳を抑制するために使用できる。オキシトシン受容体ポリペプチドをコードする核酸分子に特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示するｃＤＮＡの核酸配列に基づいて設計できる。例えば、その中で活性部位のヌクレオチド配列が、Ｃｅｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許（ＵＳ）第４，９８７，０７１号；およびＣｅｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許（ＵＳ）第５，１１６，７４２号中で切断されるヌクレオチド配列に相補性である、テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）Ｌ−１９  ＩＶＳ  ＲＮＡの誘導体が構築できる。あるいは、オキシトシン受容体ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、ＲＮＡ分子のプールから特異性リボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択するために使用できる。例えば、Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ  ａｎｄ  Ｇｅｒｌａｃｈ、上記文献；Ｂａｒｔｅｌ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１４１１−１４１８参照。
【００７５】
本発明は、相補性、アンチセンス、二本鎖同族体、ｓｉＲＮＡであるか、または短いヘアピン構造を形成する配列特異性一本鎖ＲＮＡであるｓｈＲＮＡ（総称して干渉ＲＮＡ）であるリボ核酸も包含し、それらは特異性遺伝子発現、この場合にはオキシトシン受容体を下方調節するため、従ってタンパク質発現を阻害しそしてそれらのそれぞれの生物学的機能を解明するために使用できる（Ｆｉｒｅ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：８０６−８１１；Ｐａｄｄｉｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐ  １６：９４８−９５８）。
【００７６】
種々の態様において、本発明の核酸分子は、例えば分子の安定性、ハイブリダイゼーション、または溶解性を改善するために塩基部分、糖部分、またはリン酸バックボーンを修飾されることができる。例えば、下記の表に示しそして上記に記載したヌクレオチド類似体は、天然に存在するヌクレオチドに置換できる。
【００７７】
別の例では、核酸のデオキシリボースリン酸バックボーンは、ペプチド核酸を生成するように変性できる（Ｈｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４（１）：５−２３参照）。本明細書中に使用される場合に、「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」の用語は、核酸擬似体、例えばＤＮＡ擬似体を指し、ここでデオキシリボースリン酸バックボーンは、プソイドペプチドバックボーンにより置換されそして４個の天然核酸塩基のみが維持される。ＰＮＡの天然バックボーンは、低いイオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡへの特異性ハイブリダイゼーションを可能とすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐ  ｅｔ
ａｌ．（１９９６）、上記文献；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１４６７０−６７５に記載のようにして標準固相ペプチド合成プロトコールを用いて行うことができる。
【００７８】
ＰＮＡは、治療および診断用途に使用できる。例えば、ＰＮＡは、例えば転写もしくは翻訳停止または複製阻害を誘導することにより、遺伝子発現の配列特異性調節のためのアンチセンスまたは抗原剤として使用できる。ＰＮＡは、例えばＰＮＡ指令ＰＣＲクランピ
ング（ｃｌａｍｐｉｎｇ）により遺伝子内の単一塩基対変異の分析において、他の酵素、例えばＳ１ヌクレアーゼと組み合わせて使用される場合の人工的制限酵素として（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）上記文献）；またはＤＮＡ配列およびハイブリダイゼーションのためのプローブたはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）上記文献；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１４６７０−６７５）も使用できる。
【００７９】
別の態様では、ＰＮＡに親油性またはその他のヘルパー基を結合し、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成により、またはリポソームもしくは当該技術分野では公知の薬剤送達のその他の技術の使用により、例えば、それらの安定性もしくは細胞取り込みを増強するために変性されることができる。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な性質を組み合わせることができるＰＮＡ−ＤＮＡキメラが生成できる。かかるキメラは、ＤＮＡ認識酵素、例えばＲＮＡＳＥ  ＨおよびＤＮＡポリメラーゼにＤＮＡ部分と相互作用をさせ、一方ＰＮＡ部分は、高い結合親和性および特異性をもたらす。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基スタッキング、核酸塩基の間の結合の数、および方向に関して選択された適当な長さのリンカーを用いて連結できる（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、上記文献）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、上記文献、およびＦｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４（１７）：３３５７−６３に記載のようにして行える。例えば、ＤＮＡ鎖は標準ホスホルアミダイトカップリング化学および変性ヌクレオシド類似体を用いて固体担体上で合成できる。化合物、例えば５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジン  ホスホルアミダイトは、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端とのリンクとして使用できる（Ｍａｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，１７：５９７３−８８）。次いで、ＰＮＡモノマーは段階方式でカップリングされて５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２４（１７）：３３５７−６３）。あるいは、キメラ分子は、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを有するように合成できる（Ｐｅｔｅｒｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：１１１９−１１１２４）。
【００８０】
別の態様では、オリゴヌクレオチドは、他の添付基、例えばペプチド（例えばイン・ビボで宿主細胞受容体をターゲティングするため）、または細胞膜を通過する輸送を促進する薬剤（例えばＬｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：６４８−６５２；国際特許出願公開（ＷＯ）８８／０９８１０号参照）または血脳関門（例えば国際特許出願公開（ＷＯ）８９／１０１３４号参照）を含むことができる。さらに、オリゴヌクレオチドはハイブリダイゼーション開始（ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）切断剤（例えばＫｒｏｌ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８−９７６参照）またはインターカレーション剤（例えばＺｏｎ（１９８８）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５４９参照）を用いて修飾できる。この目的で、オリゴヌクレオチドは他の分子、例えばペプチド、ハイブリダイゼーション開始架橋剤、輸送因子、ハイブリダイゼーション開始切断剤などに接合できる。
【００８１】
タンパク質
本発明は、キメラまたは融合タンパク質も提供する。本明細書中に使用される場合に、「キメラタンパク質」または「融合タンパク質」は、異種ポリペプチド（すなわち同じオキシトシン受容体ポリペプチド以外のポリペプチド）に操作可能に連結されたオキシトシン受容体ポリペプチドのすべてまたは（好ましくは生物学的活性の）部分を含んでなる。融合タンパク質内で、「操作可能に連結」の用語は、オキシトシン受容体ポリペプチドと
異種ポリペプチドとが相互にインフレームで融合していることを指すと意図する。異種ポリペプチドは、オキシトシン受容体ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に融合できる。他の態様では、オキシトシン受容体ポリペプチドまたはそのドメインもしくは活性フラグメントは、異種タンパク質配列またはそのフラグメントに融合してキメラタンパク質を形成でき、ここでポリペプチド、ドメインまたはフラグメントは末端と末端とでは融合しないで、異種タンパク質フレームワーク内に挟み込まれる。
【００８２】
一つの有用な融合タンパク質は、その中でオキシトシン受容体ポリペプチドがＧＳＴ配列のカルボキシル末端に融合しているＧＳＴ誘導タンパク質である。かかる融合タンパク質は、組換えオキシトシン受容体ポリペプチドの精製を促進できる。
【００８３】
別の態様では、融合タンパク質はそのアミノ末端に異種シグナル配列を含む、例えばオキシトシン受容体ポリペプチドの本来のシグナル配列を取去りそして他のタンパク質からのシグナル配列で置き換えることができる。例えば、バキュロウイルスエンベロープタンパク質のｇｐ６７分泌配列は異種シグナル配列として使用できる（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ
ａｌ．，編集，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２）。真核性異種シグナル配列の他の例は、メリチンおよびヒト胎盤アルカリホスファターゼの分泌配列を含む（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ）。さらに別の例では、有用な真核異種シグナル配列はｐｈｏＡ分泌シグナル（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ、上記文献）およびプロテインＡ分泌シグナル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ，Ｊ，）を含む。
【００８４】
さらに別の態様では、融合タンパク質は、オキシトシン受容体ポリペプチドのすべてまたは部分が、免疫グロブリンタンパク質ファミリーの一員から誘導された配列に融合されている免疫グロブリン融合タンパク質である。本発明の免疫グロブリン融合タンパク質は製薬学的組成物中に混和されそしてリガンド（可溶性または膜結合）と細胞の表面上のタンパク質（受容体）の間の相互作用を阻害するために対象者に投薬できて、それによりイン・ビボでシグナル伝達を抑制する。免疫グロブリン融合タンパク質は、オキシトシン受容体ポリペプチドの同族体リガンドの生物学的利用能に影響するように使用できる。リガンド／受容体相互作用の阻害は、多発性および分化性障害を処置するためおよび細胞生存を調節（例えば促進または阻害）するための双方に治療的に有用であり得る。免疫グロブリンキメラタンパク質の好ましい態様は、同時係属出願ＰＣＴ  ＷＯ／０４００２４１７号中で教示される変性フレームワーク領域内に差し込まれた活性ポリペプチドフラグメントを有するＣＨ１ドメイン欠失免疫グロブリンすなわち「ミメティボディー（ｍｉｍｅｔｉｂｏｄｙ）」である。さらに、本発明の免疫グロブリン融合タンパク質は、対象者内のオキシトシン受容体ポリペプチドに対して向けられる抗体を産生する免疫原として使用できて、リガンドを精製し受容体とリガンドとの相互作用を阻害する分子を同定するためのスクリーニングアッセイに使用される。
【００８５】
本発明のキメラおよび融合タンパク質は、標準組換えＤＮＡ技術により産生できる。別の態様では、融合遺伝子は自動化ＤＮＡ合成装置を含む慣用の技術により合成できる。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、２個の連続遺伝子フラグメントの間の相補性オーバーハングを発生させるアンカープライマーを用いて実行でき、それはその後アニールおよび再増幅されてキメラ遺伝子配列を生成する（例えばＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ、上記文献参照）。さらに、すでに融合部分をコードしている多数の発現ベクターが市場で入手できる（例えばＧＳＴポリペプチド）。オキシトシン受容体ポリペプチドをコードする核酸は、融合部分がオキシトシン受容体ポリペプチドにイン−フレームで連結するように発現ベクター内にクローンできる。
【００８６】
オキシトシン受容体ポリペプチドのシグナル配列は、分泌タンパク質または関係する他のタンパク質の分泌および単離を容易にするために使用できる。シグナル配列は、典型的には、１回もしくはそれ以上の切断イベント中で分泌の間に成熟タンパク質から一般的には切断される疎水性アミノ酸のコアを特徴とする。かかるシグナルペプチドは、それらが分泌経路を通過する間に成熟タンパク質からシグナル配列の切断をさせるプロセシング部位を含む。従って、本発明は、シグナル配列を有する上記のポリペプチド、ならびにシグナル配列自体およびシグナル配列が存在しないポリペプチド（即ち切断産物）に関する。一つの態様では、本発明のシグナル配列をコードする核酸配列は、発現ベクター内で関係するタンパク質、例えば通常では分泌されないかまたはさもなければ単離が困難なタンパク質に操作可能に連結できる。シグナル配列は、発現ベクターがその中に形質転換される真核宿主からのようなタンパク質の分泌を指令し、そしてシグナルはその後または同時に切断される。次いで、タンパク質は、当該技術分野で認められている方法により細胞外媒体から容易に精製できる。あるいは、シグナル配列は、例えばＧＳＴドメインを用いる精製を促進する配列を用いて関係するタンパク質に連結できる。
【００８７】
別の態様では、本発明のシグナル配列は、調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、および／またはレプレッサーを同定するために使用できる。シグナル配列はペプチドの最もアミノ末端に近い配列であるので、そのアミノ末端側のシグナル配列に近接する核酸は転写に影響する調節配列であるらしい。従って、シグナル配列のすべてもしくは一部分をコードするヌクレオチド配列は、シグナル配列およびそれらの近接領域を同定しそして単離するためのプローブとして使用でき、そしてそれらの近接領域はその中の制御要素を同定するために研究できる。
【００８８】
本発明はオキシトシン受容体ポリペプチドの変種にも関しそして、天然の変異由来であってもまたは本明細書中に指定するようなヒトの操作であっても、１個もしくはそれ以上のアミノ酸置換、欠失または付加を含むことができる。かかる変異または置換は、その変異がそのリガンドへのヒトオキシトシン受容体の結合を阻害するペプチドの生物学的活性を改変することなくペプチドの性質を改変するために十分なほど著しいことができる変異タンパク質を含むことができる。当然ながら、熟練者が行うであろうアミノ酸置換の数は、上記のものを含み多数の因子に依存する。本発明の一部の態様では、与えられたオキシトシン受容体ポリペプチド、フラグメントもしくは変種へのアミノ酸置換、挿入もしくは欠失の数は、本明細書中に指定されるように、１〜５を越えないか、またはその間の何れかの範囲または値である。
【００８９】
オキシトシン受容体ポリペプチドは、それらのアミノ酸配列に置換または付加された修飾され天然由来ではなくそして異常なアミノ酸も含んでなってもよい。例示的な修飾され天然由来ではなくそして異常なアミノ酸を以下に際する。
【００９０】
修飾（異常）アミノ酸 記号
２−アミノアジピン酸                  Ａａｄ
３−アミノアジピン酸                  Ｂａａｄ
β−アラニン、β−アミノプロピオン酸  ｂＡｌａ
２−アミノ酪酸                        Ａｂｕ
４−アミノ酪酸、ピペリジン酸          ４Ａｂｕ
６−アミノカプロン酸                  Ａｃｐ
２−アミノヘプタン酸                  Ａｈｅ
２−アミノイソ酪酸                    Ａｉｂ
３−アミノイソ酪酸                    ＢＡｉｂ
２−アミノピメリン酸                  Ａｐｍ
２，４−ジアミノ酪酸                  Ｄｂｕ
デスモシン                            Ｄｅｓ
２，２’−ジアミノピメリン酸          Ｄｐｍ
２，３−ジアミノプロピオン酸          Ｄｐｒ
Ｎ−エチルグリシン                    ＥｔＧｌｙ
Ｎ−エチルアスパラギン                ＥｔＡｓｎ
ヒドロキシリシン                      Ｈｙｌ
アロ（ａｌｌｏ）−ヒドロキシリシン    ＡＨｙｌ
３−ヒドロキシプロリン                ３Ｈｙｐ
４−ヒドロキシプロリン                ４Ｈｙｐ
イソデスモシン                        Ｉｄｅ
アロ−イソロイシン                    ＡＩｌｅ
Ｎ−メチルグリシン、サルコシン        ＭｅＧｌｙ
Ｎ−メチルイソロイシン                ＭｅＩｌｅ
６−Ｎ−メチルリシン                  ＭｅＬｙｓ
Ｎ−メチルバリン                      ＭｅＶａｌ
ノルバリン                            Ｎｖａ
ノルロイシン                          Ｎｌｅ
オルチニン                            Ｏｒｎ
【００９１】
機能のために必須であるオキシトシン受容体ポリペプチド内のアミノ酸は、当該技術分野で公知の方法、例えば部位指定変異誘発またはアラニン走査変異誘発により同定できる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、上記文献、第８、１５章；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ
Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。後者の方法は、分子内のすべての残基で単一アラニン変異を誘発する。次いで、得られた変異体分子を生物学的活性、例えば、それらに限定はされないが、少なくとも１種のオキシトシン受容体中和活性について試験する。
【００９２】
かかる変種は、改変されたアミノ酸配列を有しそしてアゴニスト（擬似体）またはアンタゴニストのいずれかとして機能できる。変種は、変異誘発、例えば離散点（ｄｉｓｃｒｅｔｅ  ｐｏｉｎｔ）変異または末端切断により生成できる。アゴニストは、該タンパク質の天然存在形態の生物学的活性と本質的に同一のものまたはそのサブセットを持続できる。タンパク質のアンタゴニストは、例えば、関係するタンパク質を含む細胞シグナリングカスケードの下流もしくは上流メンバーに競合的に結合することにより、タンパク質の天然に存在する形態の活性の１種もしくはそれ以上を阻害できる。従って、特異性生物学的効果は、限定された機能の変種を用いる処理により誘発できる。タンパク質の天然存在形態の生物学的活性のサブセットを有する変種を用いる対象者の処置は、タンパク質の天然に存在する形態を用いる処置と比較して対象者内で副作用がより少なくなり得る。
【００９３】
アゴニスト（擬似体）としてまたはアンタゴニストとしてのいずれかで機能するオキシトシン受容体ポリペプチドの変種は、アゴニストまたはアンタゴニスト活性に対する本発明のタンパク質の変異体、例えば末端短縮変異体の組合せライブラリーをスクリーニングして同定できる。一つの態様では、変種の多様な（ｖａｒｉｅｇａｔｅｄ）ライブラリーが、核酸レベルで組合せ変異誘発により生成され、そして多様な遺伝子ライブラリーによりコードされる。変種の多様なライブラリーは、例えば、潜在的なタンパク質配列の縮退した組が個別ポリペプチドとして、あるいはより大きい融合タンパク質の組（例えばファージディスプレイのため）として発現可能なように、合成オリゴヌクレオチドの混合物を遺伝子配列内に酵素的に結合して生成できる。縮退オリゴヌクレオチド配列からオキシトシン受容体ポリペプチドの潜在的変種のライブラリーを生成するために使用できる各種の方法がある。縮退オリゴヌクレオチドの合成のための方法は、当該技術分野では公知である（例えば、Ｎａｒａｎｇ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３９：３；Ｉｔａｋｕ
ｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８：１０５６；Ｉｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１１：４７７参照）。
【００９４】
さらに追加して、オキシトシン受容体ポリペプチドのコード配列のフラグメントのライブラリーは、変種のスクリーニングおよび引き続く選択のためにポリペプチドの多様な集団を生成するために使用できる。例えば、コード配列フラグメントのライブラリーは、ニッキングが分子あたりに約１回起きるような条件下でヌクレアーゼを用いて関係するコード配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを処理し、二本鎖ＤＮＡを変性し、ＤＮＡを復元して異なるニック生成物からのセンス／アンチセンス対を含むことができる二本鎖ＤＮＡを形成し、Ｓ１ヌクレアーゼを用いる処理により再生されたデュプレックスから一本鎖部分を除去し、そして得られたフラグメントライブラリーを発現ベクター内に結合することにより生成できる。この方法により、アミノ末端および関係するタンパク質の種々の大きさの内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが誘導できる。
【００９５】
点変異または末端短縮により作製された組合せライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、および選択された性質を有する遺伝子産物のためのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野では種々の技術が知られている。大きい遺伝子ライブラリーをスクリーニングするために、高処理量分析に適する最も広く用いられる技術は、典型的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター内にクローンし、ベクターの得られたライブラリーを用いて適切な細胞を形質転換し、そして、所望の活性の検出がその産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易とすることを含む条件下で組合せ遺伝子を発現させることを含む。ライブラリー内の機能性変異体の頻度を増加する技術である再帰的集団変異誘発（ＲＥＭ、ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ  ｅｎｓｅｍｂｌｅ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）は、オキシトシン受容体アンタゴニストポリペプチドの変種を同定するためのスクリーニングアッセイと組み合わせて使用できる（Ａｒｋｉｎ  ａｎｄ  Ｙｏｕｒｖａｎ（１９９３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６（３）：３２７−３３１）。
【００９６】
組成物およびそれらの使用
本発明に従って、中和性抗オキシトシン受容体アンタゴニスト、例えば本明細書中記載のモノクローナル抗体は、オキシトシン受容体の活性を阻害するために使用できる。さらに、かかるアンタゴニストは、かかる処置に適するオキシトシン受容体関連炎症性疾患を阻害するために使用でき、それには、それらに限定はされないが、肺臓関連疾患が含まれる。処置されるべき個体はいずれの哺乳動物であってもよくそして好ましくは霊長類、哺乳動物である随伴動物そして最も好ましくはヒト患者であってもよい。投薬されるアンタゴニストの量は、それが使用される目的および投薬の方法に従って変化するであろう。
【００９７】
抗オキシトシン受容体アンタゴニストは、オキシトシン受容体活性が防止または停止されることが望まれる組織内にある効果をもたらす多数の方法により投薬されてもよい。更にオキシトシン受容体活性に対する効果を与えるために抗オキシトシン受容体アンタゴニストが局所的に存在する必要はなく、従ってそれらはオキシトシン受容体を含む身体コンパートメントまたは液体に近接できるいずれかの場所に投薬してもよい。炎症、悪性またはその外に障害が生じた組織の場合に、それらの方法は、アンタゴニストを含む調剤の直接適用を含んでもよい。かかる方法は、液状組成物の静脈内投薬、液状または固体状配合剤の経皮投薬、経口、局所投薬、または間隙（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）または手術間（ｉｎｔｅｒ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ）投薬を含む。投薬は、一次的目的が薬剤送達ビヒクルでなくてもよいデバイスの埋め込みにより行われてもよい。
【００９８】
投薬は、経口または腫瘍もしくは組織内への局所注入であってもよいが、しかし一般的には、モノクローナル抗体が静脈内に投薬される。一般的に、投与範囲は約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１２．０ｍｇ／ｋｇである。これはボーラスとしてでもまたはマイクロプロセッサー制御およびプログラムされたポンプデバイスにより制御されてもよい徐放または連続輸液としてであってもよい。
【００９９】
あるいは、好ましくはモノクローナル抗体のフラグメントをコードするＤＮＡがハイブリドーマ細胞から単離されそして哺乳動物に投薬されてもよい。ＤＮＡは、裸の形態でもまたは患者の細胞内でＤＮＡの発現および抗体の送達をもたらす様式で、組換えベクター、例えばバクシニアウイルス内に挿入され投薬されてもよい。
【０１００】
本発明の方法に使用されるモノクローナル抗体は、製薬学的組成物を調剤するための確立されたいずれかの方法により、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５中に記載のようにして調剤されてもよい。投薬を容易にするために、モノクローナル抗体は、典型的には、製薬学的に許容できる担体と組み合わされる。かかる担体は、水、生理的塩水または油を含む。
【０１０１】
非経口投薬に適する調剤は、抗酸化剤、緩衝剤、殺菌剤および調剤に意図するレシピエントの血液と等張性を与える溶剤を含んでもよい水性および非水性滅菌注入用液剤；および懸濁剤および増粘剤を含んでもよい水性および非水性滅菌懸濁剤を含む。慣用のいずれの媒体も有効成分およびその意図する使用に適合しない場合を除き、いずれの組成物内でのその使用も意図される。
【０１０２】
調剤は、単位投与量または複数回投与量のコンテナー、例えば封入アンプルおよびバイアル内に存在してもよく、そして冷凍乾燥（リポフィライズ）条件で保管してもよく、それは使用の直前に滅菌液状担体、例えば注入のための水を加える必要があるのみである。
【０１０３】
オキシトシン受容体アンタゴニスト核酸分子、ポリペプチドおよび抗体は、投薬に適する製薬学的組成物内に混和できる。かかる組成物は、典型的には、核酸分子、タンパク質、または抗体および製薬学的に許容できる担体を含んでなる。本明細書中に使用される場合に、「製薬学的に許容できる担体」の用語は、製薬学的投薬に適合するいずれかおよびすべての溶剤、分散媒体、被覆、抗細菌および抗菌剤、等張および吸収遅延剤などを含むことを意図する。製薬学的活性物質に対するかかる媒体および薬剤の使用は、当該技術分野では周知である。いずれかの慣用の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除き、組成物内のそれらの使用が意図されている。補足的な活性化合物も本組成物内に混和されてもよい。
【０１０４】
別の局面では、本発明は、ある部分の共有結合により修飾される、本明細書中に記載のオキシトシン受容体アンタゴニストに関する。かかる修飾は、改善された薬物動力学的性質（例えばイン・ビボ血清半減期の上昇）を有するオキシトシン受容体アンタゴニストを産生できる。有機部分は、線状または分枝状親水性ポリマー基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であることができる。特別の態様では、親水性ポリマー基は、約８００〜約２０，０００ドルトンの分子量を有することができ、そしてポリアルカングリコール（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーまたはポリビニルピロリドンであることができ、そして脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基は、約８〜約４０個の炭素原子を含んでなることができる。本明細書中に使用される場合に、「脂肪酸」の用語は、モノカルボン酸およびジカルボン酸を包含する。本発明の抗体を修飾するために適合する脂肪酸および脂肪酸エステルは、飽和されていることができまたは１個もしくはそれ以上の不飽和単位を含むことができる。本発明の抗体を修飾するために適する脂肪酸は、例えば、ｎ−ドデカン酸（Ｃ１２、ラ
ウリン酸）、ｎ−テトラドデカン酸（Ｃ１４、ミリスチン酸）、ｎ−オクタデカン酸（Ｃ１８、ステアリン酸）、ｎ−エイコサン酸（Ｃ２０、アラキジン酸）、ｎ−ドコサン酸（Ｃ２２、ベヘン酸）、ｎ−トリアコンタン酸（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタン酸（Ｃ４０）、シス−デルタ  ９−オクタデカン酸（Ｃ１８、オレイン酸）、全シス−デルタ５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸（Ｃ２０、アラキドン酸）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸、などを含む。適合する脂肪酸エステルは、線状または分枝状低級アルキル基を含んでなるジカルボン酸のモノエステルを含む。低級アルキル基は、１〜約１２個、好ましくは１〜約６個の炭素原子を含んでなることができる。
【０１０５】
修飾されたヒトポリペプチドおよび抗体は、適合する方法を用い、例えば１個もしくはそれ以上の修飾剤との反応により調製できる。本明細書中に使用される場合の「修飾剤」の用語は、活性化基を含んでなる適当な有機基（例えば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性化基」は、適当な条件下で第二の化学基と反応でき、それにより修飾剤と第二の化学基との間に共有結合を形成することができる化学部分または機能基である。例えば、アミン−反応性活性化基は、求電子基、例えばトシル酸、メシル酸、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）、などを含む。チオールと反応できる活性化基は、例えばマレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジル、ジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などを含む。アルデヒド官能基は、アミン−またはヒドラジン−含有分子にカップリングでき、そしてアジド基は３価亜リン酸基と反応できてホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を形成する。分子中に活性化基を導入する適切な方法は、当該技術分野では公知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６））。
【０１０６】
本発明は、オキシトシン受容体ポリペプチド、核酸、または抗体の発現または活性を調節する製薬学的組成物を調製する方法を含む。かかる方法は、製薬学的に許容できる担体をオキシトシン受容体ポリペプチド、核酸または抗体の発現または活性を調節する薬剤と共に調剤することを含んでなる。かかる組成物は、追加の活性薬剤をさらに含むことができる。従って、本発明は、製薬学的に許容できる担体をオキシトシン受容体ポリペプチド、核酸または抗体の発現もしくは活性を調節する薬剤および１種もしくはそれ以上の追加の活性成分と調剤して、製薬学的組成物を調製する方法をさらに含む。
【０１０７】
発現または活性を調節する薬剤は、例えば、小分子であることができる。例えば、かかる小分子は、ペプチド、ペプチド擬似体、アミノ酸、アミノ酸類似体、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド類似体、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、約１０，０００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する有機もしくは無機化合物（すなわち、ヘテロオーガニック（ｈｅｔｅｒｏｏｒｇａｎｉｃ）および有機金属化合物を含む）、約５，０００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する有機もしくは無機化合物、約１，０００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する有機もしくは無機化合物、約５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する有機もしくは無機化合物、およびかかる化合物の塩、エステル、およびその他の製薬学的に許容できる形態を含む。
【０１０８】
小分子薬剤およびタンパク質もしくはポリペプチド剤の適当な投与量は、通常の技術を有する医師、獣医師、又は研究者の知識の範囲内の多数の因子に依存すると理解される。それら薬剤の投与量は、例えば、処置される対象者または試料の実態、大きさおよび状態に依存し、さらに組成物が投薬される経路、および適合する場合には、実施者がオキシトシン受容体ポリペプチド、核酸、および抗体に対して有することを希望する効果にさらに依存する。小分子の例示的な投与量は、対象者もしくは試料重量のｋｇあたりにｍｇもし
くはμｇ程度の量を含む（例えば約１μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約１μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ）。タンパク質またはポリペプチドの例示的な投与量は、対象者または試料のｋｇあたりにｇ、ｍｇまたはμｇ程度の量を含む（例えば約１μｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）。それら薬剤の一つの適切な投与量は、調節されるべき発現または活性に関する該薬剤の効力に依存するとさらに理解される。かかる適切な投与量は、本明細書中に記載のアッセイを用いて決定できる。
【０１０９】
オキシトシン受容体ポリペプチド、核酸、または抗体の発現または活性を調節するために動物（例えばヒト）に１種もしくはそれ以上のそれらの薬剤が投薬される場合には、医師、獣医師、または研究者は、例えば、最初は比較的低い投与量を処方し、引き続いて適切な反応が得られるまで投与量を増加することができる。さらに、いずれかの特定の動物対象者への特定の投薬レベルは、使用される特定の薬剤の活性、年齢、体重、全体的健康、性別、および対象者の食事、投薬の時間、投薬の経路、排泄の速度、いずれかの薬剤との組合せ、および調節される発現または活性の程度を含む種々の因子に依存することが理解される。
【０１１０】
本発明の製薬学的組成物は、投薬の意図する経路と適合するように調剤される。投薬の経路の例は、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入または口中）、経皮（局所）、粘膜経由、および直腸投薬を含む。非経口、皮内、または皮下適用に使用される液剤および懸濁剤は下記の成分を含むことができる：滅菌希釈剤（ｄｉｌｕｅｎ）、例えば注入のための水、塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤；抗菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート化剤、例えばエチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩および張性を調節するための薬剤、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロースを含むことができる。ｐＨは、酸または塩基、例えば塩化水素酸または水酸化ナトリウムを用いて調節できる。非経口製剤は、アンプル、一回使用注射器またはガラスまたはプラスチック製の複数回投与バイアルに封入できる。
【０１１１】
注入用途に適する製薬学的組成物は、滅菌水性液剤（水溶性の場合）または滅菌注入用液剤もしくは分散剤の即座調製のための分散液もしくは滅菌粉末を含む。静脈内投薬のためには、適合する担体は生理塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合に、組成物は滅菌でなければならずそして容易な注入性が存在する範囲で流動性でなければならない。それは製造および保管の条件下で安定でなければならずそして微生物、例えば細菌および菌類の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコール、など）を含む溶剤または分散媒体、およびそれらの適合する混合物であることができる。例えばレシチンのような被覆の使用により、分散の場合に所要の粒径の維持によりそして界面活性剤の使用により、適当な流動性が維持できる。多くの場合に、等張剤、例えば糖類、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを組成物内に含むことが好ましい。注入可能な組成物の長期間にわたる吸収は、組成物中に吸収を遅延する薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含ませて得られる。本組成物を安定化するために有用な製薬学的賦形剤および添加剤は、それらに限定はされないが、ポリペプチド、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物（例えば単糖類、二糖類、三糖類、四糖類、およびオリゴ糖類を含む糖類；誘導体化された糖類、例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化糖類など；および多糖類または糖ポリマー）を含み、それらは、単独または重量もしくは体積基準で１〜９９．９９％の組合せを含んでなる、単独または組み合せで存在できる。例示的であるが限定ではないポリ
ペプチド賦形剤は、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどを含む。緩衝能力でも機能できる代表的なアミノ酸は、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパラテームなどを含む。好ましいアミノ酸はグリシンである。
【０１１２】
滅菌した注入用液剤は、必要に応じて上記に列記した成分を単独または組合せを加えた適切な溶剤中に、所要量の活性化合物（例えばポリペプチドまたは抗体）を混和し、次いで濾過滅菌して調製できる。一般的に、分散剤は、塩基性分散媒体を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を混和し、次いで上記に列記したものから所要のその他の成分を混和して調製される。滅菌注入可能液剤の調製のための滅菌粉末の場合に、調製の好ましい方法は、あらかじめ濾過滅菌した溶液からの有効成分といずれかの追加の所望の成分の粉末を生成する真空乾燥および冷凍乾燥である。かかる滅菌液剤の調製の限定ではない例および調製方法は、当該技術分野では周知であり、例えば、それらに限定はされないが、Ｇｅｎｎａｒｏ編集、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）１９９０である。
【０１１３】
経口組成物は、一般に不活性希釈剤または食用担体を含む。それらはゼラチンカプセル内に封入するかまたは錠剤に圧縮できる。経口治療投薬の目的で、活性化合物は賦形剤と混和されそして錠剤、トローチ、またはカプセルの形式で使用できる。経口組成物は、口洗浄剤として使用するために液体担体を用いてでも調製でき、その際液状担体中の化合物が経口使用され、そしてスイッシュ（ｓｗｉｓｈ）されそして吐き出すかまたは飲み込まれる。
【０１１４】
製薬学的に適合する結合剤、および／またはアジュバント材料を組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチなどは、下記の成分、または同様の性質の化合物のいずれかを含むことができる：結合剤、例えばミクロクリスタリンセルロース、トラガカントガムまたはゼラチン；賦形剤、例えばデンプンまたはラクトース、崩壊剤、例えばアルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはトウモロコシデンプン；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはステローツ（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）；滑剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリン；または調味料、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ風味剤。
【０１１５】
吸入により投薬するためには、化合物は、適切な噴射剤、例えば気体、例えば二酸化炭素を含む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからエアロゾル化された粒子の形態で送達される。あるいは、粒子として調剤された組成物は、静電的、振動を含む機械的手段、または超音波手段により分散でき、それらは米国特許（ＵＳ）第４５３０４６４号、第４５３３０８２号、第５８３８３５０号、第６１１３００１号、第６５１４４９６号、第５５１８１７９号、第５１５２４５６号、第５２６１６０１号、および第４６０５１６７号中に教示されている。
【０１１６】
全身的投薬は、粘膜経由または経皮手段によっても可能である。粘膜経由または経皮投薬のために、浸透すべき障害に適する浸透剤が配合中に使用される。かかる浸透剤は、一般的に当該技術分野では公知であり、そして例えば粘膜経由投薬のためには、洗浄剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。粘膜経由投薬は、鼻噴霧剤または座薬の使用を介して達成されてもよい。経皮投薬のために、活性化合物は、当該技術分野では一般的に公知のように軟膏、貼付薬、ゲル剤、またはクリーム剤に調剤される。
【０１１７】
化合物は、座薬（例えば慣用の座薬基剤、例えばココアバターおよびその他のグリセリ
ド）または直腸送達のための貯留浣腸の形態で調製できる。
【０１１８】
一つの態様では、活性化合物は、埋め込みおよびミクロカプセル送達システムを含む制御された放出調剤のように、身体からの急速な排出に対抗して化合物を保護する担体を用いて調製される。生物分解性、生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリアンヒドリド（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸が使用できる。かかる配合剤を調製する方法は、当該技術分野の熟練者には明らかである。リポソーム懸濁液（その中またはその上に組み込まれたモノクローナル抗体を有するリポソームを含む）は、製薬学的に許容できる担体としても使用できる。特に好ましい組成物および方法は、米国特許（ＵＳ）第５，８９１，４６８号および第６，３１６，０２４号中に教示されている。
【０１１９】
投薬の容易さおよび投与量の均等性のために投与単位剤型での経口もしくは非経口組成物に調剤すると特に有利である。本明細書中に使用される場合の投与単位剤型は、処置される対象者に対する単位投与として適する、物理的に分離された単位を指す。それぞれの単位は、所要の製薬学的担体と共同して所望の治療効果を発揮するように算出された活性化合物の所定の量を含む。本発明の投与単位剤型の仕様は、活性化合物の独特の性質および達成されるべき特定の治療効果、および個体の処置のためにかかる活性化合物をコンパウンディングする当該技術分野に固有の限界により示されそしてそれらの直接依存する。
【０１２０】
抗体に対して、好ましい投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）（一般的には約１０ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ）である。抗体が脳内で作用する場合には、約５０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの投与量が通常適切である。一般に、部分的ヒト抗体および完全なヒト抗体は、人体内で他の抗体よりも長い半減期を有する。従って、より低い投与量の使用およびより少ない回数の投薬が可能な場合が多い。脂質化のような変性は、抗体を安定化しそして取り込みおよび組織浸透（例えば脳内）を促進するために使用できる。抗体の脂質化の方法は、Ｃｒｕｉｋｓｈａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（（１９９７）Ｊ．Ａｑｕｉｒｅｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ  １４：１９３）により記載されている。
【０１２１】
オキシトシン受容体アンタゴニスト核酸分子は、ベクター内に挿入されてそして遺伝子治療ベクターとして使用できる。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注入、局所投薬（米国特許（ＵＳ）第５，３２８，０７０号）により、または定位注入（例えばＣｈｅｎ
ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：３０５４−３０５７参照）により対象者に送達できる。遺伝子治療ベクターの製薬学的製剤は、許容できる希釈剤中の遺伝子治療ベクターを含むことができるか、または遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれた徐放マトリックスを含んでなることができる。あるいは、完全な遺伝子送達ベクター、例えばレトロウイルスベクターが組換え細胞から不変で産生できる場合には、製薬学的製剤は遺伝子送達システムを生成する１個もしくはそれ以上の細胞を含むことができる。
【０１２２】
製薬学的組成物は、投薬の指示書と一緒にコンテナー、パック、またはディスペンサー内に収容できる。
【０１２３】
ファルマコゲノミクス
本明細書中に記載のスクリーニングアッセイにより同定されるオキシトシン受容体ポリペプチドの活性または発現に刺激または阻害的効果を有する薬剤、またはモジュレーターは、ポリペプチドの異常な活性と関連する障害を処置（予防的または治療的）するために個体に投薬できる。かかる処置と関連して、個体のファルマコゲノミクス（すなわち個体の遺伝子型と外来化合物または薬剤に対する個体の反応との関係の研究）が考慮されるで
あろう。治療剤の代謝の相違は、薬理学的に活性な薬剤の投与量と血中濃度との間の関係を改変して重大な毒性または治療過誤に導く可能性がある。従って、個体のファルマコゲノミクスは、個体の遺伝子型の考慮に基づく予防もしくは治療処置のための有効な薬剤（例えば医薬）の選択を可能とさせる。かかるファルマコゲノミクスは、適切な投与および治療方式を決定するためにもさらに使用できる。従って、個体中のオキシトシン受容体ポリペプチドの活性、オキシトシン受容体核酸の発現、またはオキシトシン受容体遺伝子の変異含有量は、個体の治療または予防処置のために適切な薬剤をこれらにより選択するために決定できる。
【０１２４】
ファルマコゲノミクスは、罹患した患者内の改変された医薬素質および異常な作用による医薬に対する反応における臨床的に著しい遺伝的変動を取り扱う。例えばＬｉｎｄｅｒ（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３（２）：２５４−２６６参照。一般に、２種のファルマコゲノミクス状態が区別される。身体に薬剤が作用する様式を改変する単一因子として伝達される遺伝的状態は、「改変された薬剤作用」と呼ばれる。身体が薬剤に作用する様式を改変する単一因子として伝達される遺伝的状態は、「改変された薬剤代謝」と呼ばれる。それらのファルマコゲノミクス状態は、稀な欠損としてまたは多型として現れ得る。例えば、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠乏は、主要な臨床的合併症はオキシダント薬剤（抗マラリア、スルホンアミド、鎮静剤、ニトロフラン）の摂取およびソラマメ摂取の後の溶血として普通に遺伝される酵素病である。
【０１２５】
解説的態様では、薬剤代謝酵素の活性は、薬剤作用の強さと継続期間の双方の主要な決定因子である。薬剤代謝酵素（例えばＮ−アセチルトランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝子多型の発見は、薬剤の標準で安全な投与量を受けた後に一部の患者が期待される薬剤効果を得られないかまたは過大な薬剤反応および重大な毒性を示す理由に関する説明をもたらした。それらの多型は、集団内の二つの表現型、広範囲代謝型（ＥＭ）および不良代謝型（ＰＭ）として現れる。ＰＭの罹患率は異なる集団で異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は高度に多型性でありそして数種の変異がＰＭ内に同定され、それはすべて機能性ＣＹＰ２Ｄ６の不在に導く。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の不良代謝者は、標準投与量を受けた場合に非常に頻繁に過大な薬剤反応を経験する。代謝物が活性な治療部分である場合には、ＰＭは治療反応を示さないであろうので、それはコデインのＣＹＰ２Ｄ６で形成される代謝物モルヒネにより媒介されるコデインの鎮痛効果で示される。別の極端は、標準投与量に反応しないいわゆる超迅速代謝者である。最近、超迅速代謝の分子的基礎が、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅によると同定されえた。
【０１２６】
従って、個体内のオキシトシン受容体ポリペプチドの活性、ポリペプチドをコードする核酸の発現、またはポリペプチドをコードする遺伝子の変異含有量を決定すると、それにより個体の治療または予防処置のために、適当な薬剤を選択できる。さらに、ファルマコゲノミクス研究は、個体の薬剤反応性表現型の同定のために薬剤代謝酵素をコードする多型対立遺伝子の遺伝子型決定を適用するために利用できる。この知識は、投与または薬剤選択に適用された場合に、不利な反応または治療過誤を回避でき、従ってポリペプチドの活性または発現のモジュレーター、例えば本明細書中に記載の例示的スクリーニングアッセイの一つにより同定されたモジュレーターを用いて対象者を処置した場合に、治療または予防効率を上昇できる。
【０１２７】
処置の方法
本発明は、障害の危険がある（かまたは疑わしい）対象者、またはオキシトシン受容体ポリペプチドの異常な発現もしくは活性と関連および／もしくはそれにオキシトシン受容体ポリペプチドが関与する障害を有する対象者を処置する予防および治療的方法の双方を提供する。
【０１２８】
本発明は、少なくとも１種のオキシトシン受容体アンタゴニストを用いて、当該技術分野では公知であるかまたは本明細書中に記載のようにして、細胞、組織、器官、動物、または患者内の少なくとも１種のオキシトシン受容体関連疾患もしくは病状を調節または処置する方法を提供する。
【０１２９】
オキシトシン受容体アンタゴニストの組成物は、肺障害関連病状、例えば喘息、肺気腫、ＣＯＰＤ、および新生児慢性肺疾患の処置における治療的使用を見いだすであろう。
【０１３０】
本発明は、少なくとも１種のリウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、全身発症若年性リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊髄炎、胃潰瘍、血清反応陰性関節症、変形性関節症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質症候群、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、特発性肺線維症、全身性脈管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症、類肉芽腫症、精巣炎／精管切除逆手順（ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）、アレルギー性／アトピー性疾患、アレルギー性鼻炎、湿疹、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺臓炎、移植、器官移植拒絶、移植片対宿主病、全身性免疫反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性敗血症、グラム陰性敗血症、カルチャー陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少熱、尿路敗血症、髄膜炎球菌血症、外傷／出血、火傷、電離放射線暴露、急性膵臓炎、成人呼吸窮迫症候群、リウマチ性関節炎、アルコール誘発肝炎、慢性炎症病状、類肉芽腫症、クローン病、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、過敏反応、アレルギー性鼻炎、枯草熱、多年生鼻炎、結膜炎、子宮内膜症、蕁麻疹、全身性過敏症、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、いずれかの器官もしくは組織の移植片拒絶、腎臓移植拒絶、心臓移植拒絶、肝臓移植拒絶、膵臓移植拒絶、肺臓移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、皮膚同種移植拒絶、軟骨移植拒絶、骨片移植拒絶、小腸移植拒絶、胎児胸腺移植拒絶、副甲状腺移植拒絶、いずれかの器官または組織の異種移植拒絶、同種移植拒絶、抗受容体過敏反応、グレーヴズ病、レイノー病、Ｂ型インスリン抵抗性糖尿病、重症筋無力症、抗体媒介細胞毒性、ＩＩＩ型敏感反応、全身性エリテマトーデス、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、器官肥大、内分泌障害、モノクローナルガンマグロブリン異常、および皮膚変化症候群）、抗リン脂質症候群、天疱瘡、強皮症、混合性結合組織病、特発性アディソン病、真性糖尿病、慢性活性肝炎、初期胆汁肝硬変、白斑、脈管炎、ＭＩ後心臓切開症候群、ＩＶ型過敏症、接触性皮膚炎、過敏性肺臓炎、同種移植拒絶、細胞内有機体による肉芽腫、薬剤過敏症、代謝／特発性、ウイルソン病、ヘマトクロム病、アルファ−１−アンチトリプシン欠乏症、糖尿病網膜症、ハシモト甲状腺炎、骨粗鬆症、視床下部−下垂体−アドレナルアキシス評価、初期胆汁肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、カヘキシー、嚢胞性線腫、家族性血球貪食性リンパ組織球症、皮膚科学病状、乾癬、脱毛症、腎炎症候群、腎炎、糸球体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性、子癇前症、ｏｋｔ３治療、抗−ｃｄ３治療、サイトカイン治療、化学療法、放射線療法（例えば無力症、貧血症、カヘキシーなどを含みそれらに限定はされない）、慢性サリチル酸中毒、などを含み、それらに限定はされない細胞、組織、器官、動物、または患者内の少なくとも１種の免疫関連疾患を調節または処置する方法も提供する。例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、第１２〜１７版、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ（１９７２，１９７７，１９８２，１９８７，１９９２，１９９９）、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，編集、第２版、Ａｐｐｌｅ���ｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（１９８８，２０００）参照、それぞれすべて引用することにより編入される。
【０１３１】
本発明は、少なくとも一種の：白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病、骨髄異形形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポシ肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、鼻咽頭癌、悪性組織球症、異所新生物症候群／悪性の高カルシウム血症、充実性腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移性疾患、癌関連骨再吸収、癌関連骨痛、などを含み、それらに限定はされない、細胞、組織、器官、動物または患者内の少なくとも１種の悪性疾患を調節または処置する方法も提供する。
【０１３２】
オキシトシン受容体ポリペプチドの異常な発現または活性を特徴とする障害は、本開示の別の箇所にさらに記載される。
【０１３３】
１．予防方法
一つの局面では、本発明は、ポリペプチドの発現および少なくとも１種の活性を調節する薬剤を対象者に投薬することにより、オキシトシン受容体ポリペプチドの異常な発現または活性と関連する疾患または病状を、対象者内で少なくとも本質的に防止するための方法を提供する。オキシトシン受容体ポリペプチドの異常な発現または活性により起きるかまたはそれが一因となる疾患の危険にある対象者は、例えば、本明細書中に記載のような診断または予知アッセイのいずれかまたはそれらの組合せにより同定できる。予防薬剤の投薬は、疾患または障害が予防されあるいはその進行を遅らせる様に、異常型の症状特性の発現の前に始めることができる。異常型の形式に応じて、例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト薬剤が対象者の処置のために使用できる。適切な薬剤は、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイに基づいて決定できる。
【０１３４】
２．治療方法。
本発明の別の局面は、治療目的のためにオキシトシン受容体ポリペプチドの発現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節方法は、ポリペプチドの１種もしくはそれ以上の活性を調節する薬剤と細胞との接触を含む。活性を調節する薬剤は、本明細書中に記載の薬剤、例えば核酸もしくはタンパク質、天然に存在するポリペプチドの同属リガンド、ペプチド、ペプチド擬似体、またはその他の小分子であることができる。一つの態様では、該薬剤はポリペプチドの１種もしくはそれ以上の生物学的活性を刺激する。別の態様では、薬剤はオキシトシン受容体ポリペプチドの１種もしくはそれ以上の生物学的活性を阻害する。かかる阻害性薬剤の例は、アンチセンス核酸分子および抗体およびその他の本明細書中に記載の方法を含む。それらの調節方法は、イン・ビトロ（例えば薬剤と一緒に細胞を培養する）または、その代わりに、イン・ビボ（例えば対象者に薬剤を投薬する）で実施できる。このように、本発明は、オキシトシン受容体ポリペプチドの異常な発現または活性を特徴とする疾患もしくは障害を患う個体を処置する方法を提供する。一つの態様では、方法は、発現または活性を調節（例えば上方制御または下方制御）する薬剤（例えば本明細書中に記載のスクリーニングアッセイにより同定された薬剤）、または薬剤の組合せを投薬することを含む。活性の阻害は、活性もしくは発現が異常に高いかもしくは上方制御される状況および／または低下した活性が有利な効果を有するらしい状況で望ましい。
【０１３５】
本発明を一般的な見地から記載したが、本発明の態様は、特許請求範囲を限定するとは解釈されてはならない以下の実施例でさらに開示される。
【実施例１】
【０１３６】
マイクロアレイ実験の記述
全ＲＮＡをヒト気道平滑筋細胞（ＨＡＳＭＣ）の処理された初代カルチャーから採取した。休止状況の対照ＨＡＳＭＣを４週間（十分なＲＮＡが単離できるように細胞数を増加させるために６回継代）、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中で培養し、１％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中で２４時間、そして０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中でさらに２４時間休止した。ＨＡＳＭＣは、アトピー性血清（抗原またはアレルゲンに過敏性の個体からのもの）または非アトピー性
血清に２４時間まで暴露した。本明細書中で使用される場合に、「アトピー」および「アトピー性」の用語は、それに対して全員が暴露されるがしかしそれに対して大部分は継続的なＩｇＥ抗体反応を発生しない環境内に普通に存在するアレルゲンに感作されてＩｇＥとなる遺伝的体質として定義される。マイクロアレイ分析が、非刺激のまま放置または１５分間、３０分間、２時間、４時間、８時間もしくはは２４時間アトピー性もしくはは非アトピー性血清を用いて刺激された喘息および非喘息ＨＡＳＭＣからのＲＮＡについて行われた。
【０１３７】
チップ・タイプ：内部で開発したｃＤＮＡマイクロアレイＴａｒｇｅｔＡ＿１およびＴａｒｇｅｔＡ＿２が使用された。
【０１３８】
データ分析
実験条件の２８の可能な組合せがあった。それらの条件は、以下のカテゴリーである：（１）疾患病状：喘息または非喘息；（２）処置：アトピー性または非アトピー性血清；および（３）時点：０、１５分、３０分、２時間、４時間、８時間、もしくは２４時間。
【０１３９】
反復試料をそれらの実験条件に従って分類した。正規化した強さの平均をそれぞれの条件を代表するとして使用した。
【０１４０】
分析Ｉ
等分散の推定を用いないで、それぞれの相当する時点（カテゴリー（３））で下記の比較（上記のカテゴリー（１）および（２）より）に関してＷｅｌｃｈの近似ｔ検定を用いるパラメトリック解析を行った。
【０１４１】
Ａ：喘息性非アトピー性血清  対  非喘息性非アトピー性血清
Ｂ：喘息性アトピー性血清  対  喘息性非アトピー性血清
Ｃ：喘息性アトピー性血清  対  非喘息性アトピー性血清
Ｄ：非喘息性アトピー性血清  対  非喘息性非アトピー性血清
【０１４２】
上記の４カテゴリーそれぞれにおいて、時間経過の複数の時点で同じ方向に有意の（Ｐ値＜０．０５）差異ＲＮＡ発現を示す共通の遺伝子を同定した。
【０１４３】
それぞれの比較で差異ＲＮＡ発現の倍数変化を算出した。
【０１４４】
ＡとＣとを比較して複数の時点で同定された遺伝子を喘息状態に関連する遺伝子であると推定する。ＢとＤとを比較して複数の時点で同定された遺伝子は、アトピーに関連する遺伝子である。
【０１４５】
分析ＩＩ
本分析は、いかなる時点でピークが現れたかとは無関係に、喘息状態の一つの上方制御を示す遺伝子を同定するためであった。同様の差異発現は非喘息条件のいずれにおいても観察されなかった。下記の４条件が本分析で考慮された。
【０１４６】
Ｅ．Ａ＿アトピー（喘息性／アトピー性）
Ｆ．Ａ＿非アトピー（喘息性／非アトピー性）
Ｇ．Ｎ＿アトピー（非喘息性／アトピー性）、および
Ｈ．Ｎ＿非アトピー（非喘息性／非アトピー性）
【０１４７】
同定するために使用した手順は以下であった。
【０１４８】
喘息条件内で、対の比較は、Ａ＿ｃｎｔｌに対する各時点とその他の時点で行った。同定された遺伝子は、他の種のいずれの時点よりも高いＲＮＡ発現、および基線、Ａ＿ｃｎｔｌと比較して２倍以上のＲＮＡ発現変化を示す。
【０１４９】
同じ条件のそれぞれの時点で同様の同定を行った。次いで少なくとも一つの時点でＲＮＡ発現ピークを示す遺伝子を含む遺伝子表を条件について組み合わせた。
【０１５０】
それらの２段階をその他の３条件に対して反復した。他の３条件で同様の様式と同定されたものを除いて、喘息状態と同定された遺伝子は、この喘息条件内で特異的に上方制御された。
【０１５１】
分析ＩＩＩ
科学文献から喘息関連として知られている４０種以上の遺伝子のＲＮＡ発現パターンを実験中にプロットした。それらの大部分は、公開されたデータに一致するＲＮＡ発現プロフィールを示す。
【０１５２】
分析ＩＶ
分析Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩで同定された遺伝子の発現プロフィールは、同様のＲＮＡ発現プロフィールと関連する遺伝子を捜索するための参照プロフィールとして使用された。それぞれの遺伝子（ＲＮＡ）発現プロフィールは、同様と考えられる０．９５〜０．９９の定義された極小相関を有するはずである。極小相関（極大１．０）が高いほど、遺伝子（ＲＮＡ）発現プロフィールが近くなるであろう。
【０１５３】
同定された遺伝子のアノテーションは、ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＬｏｃｕｓＬｉｎｋ、Ｕｎｉｇｅｎｅ、およびＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙから得られる。
【０１５４】
オキシトシン受容体遺伝子に対するマイクロアレイ結果
図１に示すように、マイクロアレイデータの上記の分析から、オキシトシン受容体は、アトピー性血清処理した非喘息細胞と比較して、アトピー性血清処理した喘息細胞内で高いＲＮＡ発現（１．５倍上昇）を示す。同様に、図２に示すように、非アトピー血清処理した非喘息細胞と比較して、非アトピー性血清処理した喘息細胞内で高いＲＮＡ発現（１．４倍上昇）があった。
【０１５５】
気管平滑筋細胞の実時間ＰＣＲ分析
独立した手段によりマイクロアレイ知見を確認するために、実時間ＰＣＲ技術を利用した。「正常」ドナーからの初代ヒト気管平滑筋細胞は、ＩＬ−１３を用いて、またはＩＬ−１３Ｒ１３０Ｑ（高い血清ＩｇＥレベルと関連）を用いて、細胞を２４時間静置したのち、５０ｎｇ／ｍｌで０．６時間または１８時間にわたって培養した。全ＲＮＡを単離し、逆転写しそしてＡＳＩ  ＰＲＩＳＭ（Ｒ）７９００ＨＴ配列検出システム上で、Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ遺伝子発現アッセイ（ＩＤ番号Ｈｓ０００１６８７３＿ｍｌ）を用いるオキシトシン受容体に対する実時間ＲＮＡ分析に使用した。６時間では、１８Ｓ  ｍＲＮＡに正規化しそして非処理対照（すなわち０時間の時点）に対してＯＸＴＲ  ｍＲＮＡのレベルは、細胞がＷＴ  ＩＬ−１３で刺激された場合に１．９５（標準偏差０．４１）であり、Ｒ１３０Ｑで刺激された場合に１．７９（標準偏差０．４２）であった。１８時間では、１８Ｓ  ｍＲＮＡに正規化しそして非処理対照（すなわち０時間の時点）に対してＯＸＴＲ  ｍＲＮＡのレベルは、細胞がＷＴ  ＩＬ−１３で刺激された場合に２．０２（標準偏差０．４２）であり、Ｒ１３０Ｑで刺激された場合に３．５８（標準偏差０．７４）であった。
【０１５６】
この結果は、オキシトシン受容体が初代気管平滑筋細胞内に発現されそして発現は、Ｉ
Ｌ１３により２倍まで、そしてＩＬ−１３Ｒ１３０Ｑにより６時間で２倍までそして１８時間では約３．５倍まで高く誘導されたことを示す。
【０１５７】
二人の「正常」なドナーからの初代ヒト気管平滑筋細胞は、細胞を２４時間静置した後、１０ｎｇ／ｍｌで０．６時間または１８時間、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）と共に培養した。全ＲＮＡを単離し、逆転写しそしてオキシトシン受容体に関する実時間ＲＮＡ分析に使用した。ＴＮＦαは、１８Ｓで正規化されそして非処理対照（すなわち０時間の時点）と比較して、オキシトシン受容体の発現を６時間で４．８８（標準偏差１．１３）、そして１８時間点では７．０６（標準偏差１．４２）を誘導した。
【０１５８】
それらのデータは、ヒト気管平滑筋細胞上でのオキシトシン受容体の新規ＲＮＡ発現を確認しそして該発現は炎症性サイトカインにより制御され、それは肺臓炎症性疾患の発生病理におけるオキシトシン受容体の考えられる役割を支持する。
【０１５９】
ヒト組織のアレイの実時間ＰＣＲ分析
種々の組織にわたってオキシトシン受容体のＲＮＡ発現を評価するために、実時間ＰＣＲは、種々の正常組織内のオキシトシン受容体を検出するためのＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ＠７９００ＨＴ配列検出システム上Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ遺伝子発現アッセイ（ＩＤ番号Ｈｓ００１６８５７３＿ｍ１）を使用して利用された。種々の組織中のオキシトシン受容体レベル（”１８ＳａｄｊＱｔｙ”と呼ぶ）を表１に示す。
【０１６０】
最高の発現は、胸組織中に検出され、次いで男性の大静脈、ペニスおよび子宮の組織であった。ＲＮＡ発現レベルは、正常の肺臓を含み大部分の正常の組織ではかなり低かった。これは、肺臓内のＯＸＴＲの発現が、例えば、疾患または炎症状態では上方制御されるらしいことを示唆する。表１において、組織タイプの略号は以下である：ＲＰ＝生殖器；ＣＶ＝心血管；ＧＩ＝胃腸；Ｓ＝軟組織／器官；ＧＵ＝泌尿器；およびＲ＝呼吸器。
【０１６１】
【表３】
2008523086.tif 000005
【０１６２】
【表４】
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【０１６３】
【表５】
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【０１６４】
【表６】
2008523086.tif 000008
【０１６５】
タンパク質発現
ヒト気道平滑筋細胞内のオキシトシン受容体のタンパク質レベルを検出するために、初代ヒト気道平滑筋細胞からの全細胞溶解物を電気泳動しそして抗オキシトシン受容体抗体を用いて免疫ブロットした。図３は、ヒト気道平滑筋細胞（ＨＡＳＭＣ）および陽性対照（ＭＤＡＭＢ２３１）内のオキシトシン受容体の発現を示す。
【０１６６】
オキシトシン受容体は、陽性細胞内に検出されたものと同様の分子量をもって細胞溶解物内に明瞭に検出された。それらの結果は、オキシトシン受容体タンパク質がヒト気道平滑筋細胞により発現されることの最初の実証である。
【０１６７】
機能性データ
ヒト気道平滑筋細胞の表面上に発現されたオキシトシン受容体が機能性であるかどうかを決定するために、カルシウムの流入の量を測定した。ＨＡＳＮＣは血清飢餓状態であり、次いで非刺激または２４時間にわたってＩＬ１３（５０ｎｇ／ｍｌ）を用いて刺激された。細胞内に移動したカルシウムの量が、オキシトシンの添加（１００ｎＭまたは５００ｎＭ）の後に測定された。図４は、オキシトシンがヒト気道平滑筋細胞内へのＣａ流入を誘導し、そしてオキシトシンの低濃度では、ＩＬ−１３はオキシトシンにより誘導されるＨＳＡＭＣ中へのカルシウム流入をさらに促進することを示す。
【０１６８】
イン・ビボデータ
急性喘息のイン・ビボモデルにおるオキシトシン受容体のＲＮＡ発現を試験した。１日目および８日目に腹膜内にオボアルブミンを用いてマウスを免疫化し次いで２２、２３および２４日目に鼻内にチャレンジした。２５日目に、マウスを安楽死させた。ＲＮＡ単離のために気管を抽出しそしてオキシトシン受容体に関する実時間ＰＣＲ分析を行った。
【０１６９】
オキシトシン受容体ｍＲＮＡは、免疫化してオボアルブミンでチャレンジしたマウスからの気管中では、ＰＢＳ対照と比較して１．５倍高いことが観察された。
【０１７０】
利点／利用
要約すると、ヒト気道平滑筋細胞内のＩＬ１３を用いるオキシトシン受容体遺伝子／タンパク質調節に新規の関連が発見された。オキシトシン受容体は、分娩の間の子宮収縮、授乳の間の母乳分泌および男性の射精に関与することが以前から知られていた。本明細書中で、本発見が、気道平滑筋内のオキシトシン−オキシトシン受容体結合、その反応性、および肺臓疾患へのその関与を意味することが発見された。炎症のある肺臓内の炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１３およびＴＮＦαが、気道のオキシトシン誘導平滑筋収縮への異常に強い反応に導き（増加したＯＸＴＲ発現による）、気管支収縮、従って空気流量の低下に導くとの仮説が立てられる。
【０１７１】
オキシトシン受容体ｍＲＮＡのレベルは、前炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１３およびＴＮＦαにより上方制御され、喘息性肺臓内で、気道平滑筋細胞がオキシトシンへの高い感受性を有しそしてサイトカイン放出の間にさらに収縮する傾向があり、従って喘息発作の総合的症状に寄与するであろうことを示す。従って、オキシトシン受容体は、過敏化個体の診断のバイオマーカーでありならびに種々の免疫媒介炎症性障害、例えば喘息の処置に有用な治療法の開発のための標的である。
【０１７２】
標的として、オキシトシン受容体は、モノクローナル抗体または小分子化合物を含み、それらに限定はされないそれに対するアンタゴニストの標的になりやすい。オキシトシン受容体に選択的な抗体は、診断、予知、または治療の目的のために製造できる。或いは、オキシトシン受容体アンタゴニストは、現在の抗サイトカイン治療と組み合わせて上記の種々の疾患状態における種々の前炎症性サイトカインの発現をより良く調節するために使用できる。かかる介入は、例えば肺臓関連障害もしくは疾患、例えば喘息、ＣＯＰＤおよび肺気腫の予防もしくは処置に使用してもよい。鼻内経路を介する肺臓への標的送達は、望ましくない副作用を回避する追加の利点をもたらす。
【実施例２】
【０１７３】
ｓｉＲＮＡおよびＤＮＡザイムアンタゴニスト
喘息またはその他の呼吸器系病状の進行におけるオキシトシン受容体の役割は、ＲＮＡｉ経路による遺伝子発現の調節によるかまたは特異性ＤＮＡザイムの使用により解明できる。同様に、オキシトシン受容体は、強いプロモーターを含むベクターの使用により過剰発現できる。オキシトシン受容体発現およびオキシトシン受容体過剰発現を抑制された安定な細胞系統が生成できる。次いで、それらの細胞系統は、イン・ビトロ機能性研究に使用できて、炎症性障害、例えば本明細書中に記載の肺臓障害を標的にするオキシトシン受容体の迅速な確認を可能とする。この目的で、オキシトシン受容体に特異性のｓｉＲＮＡをスクリーニングし、次いで有効なｓｉＲＮＡをヘアピンとしてベクター内にクローンして安定な細胞系統を生成させる。さらに、オキシトシン受容体特異性ＤＮＡザイムを設計および試験する。過剰発現クローンも生成される。
【０１７４】
上記には一定の特定の態様を参照して説明および記載したが、それにもかかわらず本発明は記載の詳細に限定はされない。より正確には、本発明は、本明細書中に記載のオキシトシン受容体アンタゴニストポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、装置およびキットおよびそれらの使用、およびオキシトシン受容体のレベルを制御する方法を目的とし、そして種々の変更が、請求範囲の等価の範囲および領域内で本発明の精神から逸脱することなく詳細になされるであろう。
【０１７５】
【表７】
2008523086.tif 000009
【０１７６】
【表８】
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【図面の簡単な説明】
【０１７７】
【図１】アトピー性血清を用いる処理に反応する非喘息細胞と比較した喘息細胞内のオキシトシン受容体のＲＮＡ発現レベルを示す。
【図２】非アトピー性血清を用いる処理に反応する非喘息細胞と比較した喘息細胞内のオキシトシン受容体のＲＮＡ発現レベルを示す。
【図３】ヒト気道平滑筋細胞（ＨＡＳＭＣ）内のオキシトシン受容体の発現を示す。
【図４】非刺激またはＩＬ−１３（５０ｎｇ／ｍｌ）を用いて２４時間刺激されてオキシトシンに反応するヒト気道平滑筋細胞内に放出されたカルシウムの量を示す。
【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2008523086.tif 000019
2008523086.tif 000020
2008523086.tif 000021