(57)【要約】  本発明は、診断用造影剤又は治療薬として用いられる新規ペプチド系化合物であって、インテグリン受容体に結合するターゲティングベクターを含むペプチド系化合物に関する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化１】
2008510679.tif 000017
式中、
Ｇはグリシンを表し、
Ｄはアスパラギン酸を表し、
Ｒａは−（ＣＨ２）ｎ−又は（ＣＨ２）ｎ−Ｃ６Ｈ４−を表し（式中、ｎは１〜１０の正の整数である。）、
ｈは１又は２の正の整数であり、
Ｘ１は酸又はアミン基のような官能性側鎖を有するアミノ酸残基を表し、
Ｘ２及びＸ６は一緒にジスルフィド結合を形成するアミノ酸残基を独立に表し、
Ｘ３はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体を表し、
Ｘ４はチオール含有アミノ酸残基を表し、
Ｘ５は疎水性アミノ酸又はその誘導体であり、
Ｘ７はバイオモディファイヤー部分であるか、或いは存在せず、
Ｚ１又はＺ２の少なくとも一方が存在していて抗悪性腫瘍薬又は造影性部分を表し、
Ｗ１はスペーサーであるか、或いは存在しない。
【請求項２】
前記造影性部分が、キレート剤Ａ１でキレートされた金属Ｍである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
いずれのアミノ酸残基の立体配置も独立にＤ又はＬである、請求項１又は請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒａが−（ＣＨ２）−を表す、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ１がアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、ホモリシン又は他のジアミノアルキル酸もしくはその誘導体を表す、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ２、Ｘ４及びＸ６が独立にシステイン又はホモシステイン残基を表す、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ３がアルギニンを表す、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ５がチロシン、フェニルアラニン、３−ヨード−チロシン又はナフチルアラニンを表す、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ７が１〜１０単位の単分散ＰＥＧ構成単位を含む、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ７が次の式（ＩＩ）を１〜１０単位含む、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の化合物。
【化２】
2008510679.tif 000018
【請求項１１】
Ｘ７が１〜１０個のアミノ酸残基を表す、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１２】
Ｘ７が、１個以上のグリシン、リシン、アスパラギン酸又はセリン残基、好ましくはグリシンを含む、請求項１乃至請求項８及び請求項１１のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１３】
Ａ１が次の式（ＩＩＩ）のキレート剤である、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の化合物。
【化３】
2008510679.tif 000019
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は各々独立にＲ基であって、各Ｒ基は独立にＨ又はＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリール、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０アルキルアミン、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【請求項１４】
Ａ１が次の式（ＩＶ）のキレート剤である、請求項１乃至請求項１３のいずれか１項記載の化合物。
【化４】
2008510679.tif 000020
【請求項１５】
Ｍが金属放射性核種、常磁性金属イオン、重金属イオン又はクラスターイオンを含む、請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１６】
Ｍが９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、４７Ｓｃ、６７Ｇａ、５１Ｃｒ、１７７ｍＳｎ、６７Ｃｕ、１６７Ｔｍ、９７Ｒｕ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、１９９Ａｕ、２０３Ｐｂ又は１４１Ｃｅを含む、請求項１乃至請求項１５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１７】
Ｍが９９ｍＴｃである、請求項１乃至請求項１６のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１８】
Ｚ１又はＺ２が存在していて１８Ｆを表す、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１９】
Ｚ１又はＺ２が存在していて蛍光色素を表す、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２０】
Ｚ１又はＺ２が存在していて抗悪性腫瘍薬である、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２１】
Ｚ１又はＺ２が存在していてシクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メトトレキセート、シタラビン、フルオロウラシル、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、テニポシド、シスプラチン、アムサクリン又はドセタキセルを表す、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
Ｗ１がグルタル酸又はコハク酸である、請求項１乃至請求項２１のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２３】
インビボイメージングの画像コントラスト強調又は疾患治療に有効な量の一般式（Ｉ）の化合物又はその塩を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる医薬組成物。
【請求項２４】
造影剤をヒト又は動物の身体に投与してヒト又は動物の身体の少なくとも一部分の画像を生成させる診断法に用いられる造影剤の製造における、請求項１乃至請求項１９及び請求項２２のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項２５】
ヒト又は動物における癌又は関連疾患の治療又は予防的治療用の医薬の製造における、請求項１乃至請求項１５及び請求項１９乃至請求項２２のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項２６】
造影剤をヒト又は動物の身体に投与して造影剤が分布した身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含むヒト又は動物の身体の画像を生成させる方法であって、上記造影剤が請求項１乃至請求項１９及び請求項２２のいずれか１項記載の化合物を含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項１記載の化合物を含む造影剤組成物を予め投与しておいたヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、当該方法が身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法。
【請求項２８】
癌に関連した病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、請求項１乃至請求項１９及び請求項２２のいずれか１項記載の化合物又は組成物を身体に投与し、細胞受容体による上記化合物又は組成物の取り込みを検出し、任意ではあるが好ましくは、投与と検出を、例えば上記化合物又は組成物による治療の前後途中のいずれかに繰り返すことを含んでなる方法。
【請求項２９】
ヒト又は動物の身体の癌又は関連疾患の治療方法であって、請求項１乃至請求項１５及び請求項１９乃至請求項２２のいずれか１項記載の化合物又は組成物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項３０】
癌の治療又は治療効果のモニタリングのための画像診断における造影剤として用いられる、請求項１乃至請求項２２のいずれか１項記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ペプチド系化合物並びに治療効果のある処置及び画像診断法におけるそれらの使用に関する。さらに具体的には、本発明は、血管新生に関連する受容体、特にインテグリン受容体（例えばαｖβ３インテグリン受容体など）に結合するターゲティングベクターとしての上記ペプチド系化合物の使用に関する。そこで、かかる造影剤は、例えば悪性疾患、心疾患、子宮内膜症、炎症関連疾患、関節リウマチ及びカポジ肉腫の診断に使用し得る。さらに、かかる薬剤は、これらの疾患の治療にも使用し得る。
【背景技術】
【０００２】
新しい血管は脈管形成と血管新生という２つの異なる機序で形成される。血管新生は既存の血管からの枝分れによる新しい血管の形成である。このプロセスに対する主な刺激として、組織内の細胞への栄養及び酸素の不十分な供給（低酸素）がある。細胞は血管新生因子の分泌によって応答することがある。血管新生因子は多数存在するが、しばしば言及されるその一例は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）である。これらの因子は、基底膜のタンパク質を分解するタンパク分解酵素の分泌だけでなく、かかる潜在的に有害な酵素の作用を制限する阻害剤の分泌も惹起する。血管新生因子のもう一つの顕著な作用は内皮細胞を遊走させ分裂させることである。血管の反管腔側に連続層をなす基底膜に付着した内皮細胞は有糸分裂を起こさない。付着の喪失と血管新生因子受容体からのシグナルとの複合作用によって、内皮細胞の移動、増殖及び再配列が起こり、最終的には新血管周囲に基底膜が合成される。
【０００３】
血管新生は創傷治癒及び炎症過程を始めとする組織の増殖及びリモデリングに重要である。腫瘍は、ミリメートル大に達すると、その増殖速度を保つため血管新生を惹起しなければならない。血管新生は内皮細胞とそれらの周囲の環境に特徴的な変化を伴う。これらの細胞の表面は遊走に備えてリモデリングされ、基底膜が分解されて、タンパク分解の誘発と制御に関与する各種タンパク質に加えて、隠れた構造が露出される。腫瘍の場合、形成される血管ネットワークは通常はまとまりがなく、鋭いねじれや動静脈シャントの形成を伴う。血管新生の阻害も抗腫瘍療法の有望な方策であると考えられる。
【０００４】
血管新生に伴う形質転換も診断に極めて有望であり、明らかな例は悪性疾患であるが、この方策は、炎症及びアテローム性動脈硬化症を始めとする様々な炎症関連疾患にも極めて有望であり、初期アテローム性動脈硬化病変のマクロファージは血管新生因子の潜在的発生源である。これらの因子は心筋梗塞の血管再生にも関与しており、狭窄が短時間で解放された場合にみられる。
【０００５】
新脈管形成又は血管新生、つまり新血管の発生又は増殖に関連した望ましくない病態を以下に示す。これに関しては国際公開第９８／４７５４１号も参照できる。
【０００６】
血管新生に関連した疾患及び適応症は例えば様々な形態の癌及び転移、例えば乳癌、皮膚癌、直腸結腸癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌又は卵巣癌である。
【０００７】
その他の疾患及び適応症は、炎症（例えば慢性）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ及び歯肉炎である。
【０００８】
血管新生に関連したさらに別の疾患及び適応症は、動静脈奇形、星細胞腫、絨毛癌、グリア芽細胞種、神経膠腫、血管腫（小児性、毛細血管性）、肝細胞腫、過形成性子宮内膜症、虚血性心筋症、子宮内膜症、カポジ肉腫、黄斑変性症、黒色腫、神経芽細胞腫、閉塞性末梢動脈疾患、骨関節炎、乾癬、網膜症（糖尿病性、増殖性）、強皮症、精上皮腫及び潰瘍性大腸炎である。
【０００９】
血管新生には、内皮細胞及び周囲組織に特有の受容体が関与する。これらのマーカーとしては、ＶＥＧＦのような増殖因子受容体及びインテグリンファミリーの受容体がある。免疫組織化学的研究によって、様々なインテグリン（最も重要なのはおそらくαｖクラス）が血管の頂端面で発現され［Ｃｏｎｆｏｒｔｉ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｂｌｏｏｄ  ８０：  ３７−４４６］、循環リガンドによるターゲティングに利用できる［Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ，  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５：  ５４２−５４６］ことが示されている。α５β１も、フィブロネクチンマトリックスの構築を促進し、フィブロネクチンへの細胞付着を起こす重要なインテグリンである。α５β１は細胞遊走［Ｂａｕｅｒ，  Ｊ．Ｓ．，（１９９２）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １１６：４７７−４８７］並びに腫瘍の浸潤及び転移［Ｇｅｈｌｓｅｎ，  Ｋ．Ｒ．，（１９８８）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０６：９２５−９３０］にも重要な役割を果たす。
【００１０】
インテグリンαｖβ３は血管新生との関連が知られている受容体の一つである。αｖβ３インテグリン受容体／リガンド相互作用の拮抗剤がアポトーシスを惹起して血管増殖を阻害するので、血管新生プロセスの臨界期における刺激を受けた内皮細胞の生存はこの受容体に依存していると考えられている。
【００１１】
インテグリンはヘテロ二量体分子であり、αサブユニットとβサブユニットは細胞膜脂質二重層を貫通している。αサブユニットはその細胞外鎖に４つのＣａ２＋結合ドメインを有し、βサブユニットはシステインリッチな細胞外ドメインを多数有している。
【００１２】
細胞接着に関与するリガンド（例えばフィブロネクチン）の多くはアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）のトリペプチド配列を含んでいる。ＲＧＤ配列は、この配列を提示するリガンドと細胞表面の受容体との間の一次認識部位として作用すると思われる。リガンドと受容体の二次的相互作用は上記相互作用の特異性を高めると一般に考えられている。こうした二次的相互作用は、リガンドと受容体のＲＧＤ配列に直接隣接した部分又はＲＧＤ配列から離れた部位で起こり得る。
【００１３】
ＲＧＤペプチドはある範囲のインテグリン受容体に結合することが知られており、臨床に重要な用途をもつ数多くの細胞事象を調節できる可能性がある（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ８７：１−５（１９９１）。おそらく最も広く研究されたＲＧＤペプチドとその模倣体の作用は抗血栓剤としての使用に関するものであり、これらは血小板インテグリンＧｐＩＩｂＩＩＩａをターゲットとする。
【００１４】
αｖβ３又はαｖβ５拮抗剤の投与による組織内での血管新生の阻害は例えば国際公開第９７／０６７９１号及び同第９５／２５５４３号に記載されており、抗体又はＲＧＤ含有ペプチドが用いられている。欧州特許出願公開第５７８０８３号には、一群の単環式ＲＧＤ含有ペプチドが記載されており、国際公開第９０／１４１０３号の特許請求の範囲には、ＲＧＤ抗体が記載されている。Ｈａｕｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  （１９９９）；４０：１０６１−１０７１には、腫瘍をターゲットとする新種の単環式ＲＧＤ含有ペプチド系トレーサーが記載されている。ただし、全身オートラジオグラフィー画像法を用いた生体分布の研究では、１２５Ｉ標識ペプチドは血中クリアランスが非常に速く、肝胆道排泄経路が主であるので、高いバックグラウンドを生じる。
【００１５】
複数の架橋を含む環状ＲＧＤペプチドも、国際公開第９８／５４３４７号及び同第９５／１４７１４号に記載されている。インビボバイオパニングで得られたペプチド（国際公開第９７／１０５０７号）が様々なターゲティング用途に使用されている。ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（ＲＧＤ−４Ｃ）配列が、細胞へのドキソルビシン（国際公開第９８／１０７９５号）、核酸及びアデノウイルス（国際公開第９９／４０２１４号、同第９９／３９７３４号、同第９８／５４３４７号、同第９８／５４３４６号、米国特許第５８４６７８２号参照）のような薬剤のターゲティングに使用されている。しかし、複数のシステイン残基を含むペプチドには、複数のジスルフィド異性体を生じかねないという短所がある。ＲＧＤ−４Ｃのような４個のシステイン残基を有するペプチドは、３種類の異なるジスルフィド折り畳み構造を形成する可能性がある。ＲＧＤファルマコフォアは３つの異なる高次構造になるので、インテグリン受容体に対するこれらの異性体の親和性は種々異なる。
【００１６】
ＲＧＤ含有ペプチド系化合物のその他の例は、国際公開第０１／７７１４５号、同第０２／２６７７６号及び同第０３／００６４９１号にみられ、それらの開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【特許文献１】国際公開第９８／４７５４１号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９７／０６７９１号パンフレット
【特許文献３】国際公開第９５／２５５４３号パンフレット
【特許文献４】欧州特許出願公開第５７８０８３号明細書
【特許文献５】国際公開第９０／１４１０３号パンフレット
【特許文献６】国際公開第９８／５４３４７号パンフレット
【特許文献７】国際公開第９５／１４７１４号パンフレット
【特許文献８】国際公開第９７／１０５０７号パンフレット
【特許文献９】国際公開第９８／１０７９５号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第９９／４０２１４号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第９９／３９７３４号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第９８／５４３４６号パンフレット
【特許文献１１】米国特許第５８４６７８２号明細書
【特許文献１２】国際公開第０１／７７１４５号パンフレット
【特許文献１３】国際公開第０２／２６７７６号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第０３／００６４９１号パンフレット
【非特許文献１】Ｃｏｎｆｏｒｔｉ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｂｌｏｏｄ  ８０：  ３７−４４６
【非特許文献２】Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ，  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５：  ５４２−５４６
【非特許文献３】Ｂａｕｅｒ，  Ｊ．Ｓ．，（１９９２）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １１６：４７７−４８７
【非特許文献４】Ｇｅｈｌｓｅｎ，  Ｋ．Ｒ．，（１９８８）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０６：９２５−９３０
【非特許文献５】Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ８７：１−５（１９９１）
【非特許文献６】Ｈａｕｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  （１９９９）；４０：１０６１−１０７１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
生体内での血管新生に関連するインテグリン受容体の効率的ターゲティング及びイメージングには、選択的で親和性が高く化学的に頑強で安定なＲＧＤ型ベクターが必要とされる。さらに、バックグラウンドの問題を軽減するための造影剤の設計に際しては、排泄経路が重要な要因である。これらの厳しい条件は、本明細書に記載した二環式構造によって満足される。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、血管新生に関連する疾患の治療及び画像診断に有用な新規ペプチド系化合物を提供する。血管新生に関連した疾患及び適応症は例えば様々な形態の癌及び転移、例えば乳癌、皮膚癌、直腸結腸癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌又は卵巣癌である。
【００１９】
その他の疾患及び適応症は、炎症（例えば慢性）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ及び歯肉炎である。
【００２０】
血管新生に関連したさらに別の疾患及び適応症は、動静脈奇形、星細胞腫、絨毛癌、グリア芽細胞種、神経膠腫、血管腫（小児性、毛細血管性）、肝細胞腫、過形成性子宮内膜症、虚血性心筋症、子宮内膜症、カポジ肉腫、黄斑変性症、黒色腫、神経芽細胞腫、閉塞性末梢動脈疾患、骨関節炎、乾癬、網膜症（糖尿病性、増殖性）、強皮症、精上皮腫及び潰瘍性大腸炎である。
【００２１】
さらに、本発明は、上述したような癌その他の血管新生が関与する疾患の診断に有用なペプチド系化合物であって、ターゲティング部分に造影性部分を組み込んでなるペプチド系化合物を提供する。造影性部分は、被検体に投与したときに被検体の少なくともペプチド系化合物が分布した部分の画像を、例えば放射線イメージング、ＳＰＥＣＴ、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴断層撮影（ＭＲＩ）、Ｘ線、光学イメージング（ＯＩ）、超音波（ＵＳ）、電気インピーダンス又は磁気的画像モダリティで生成することができる造影性基であればよい。
【００２２】
本発明はさらに、血管新生に関連した疾患の治療法及びイメージング法、かかる疾患に対する治療経過のモニタリング法も提供する。本発明はさらに、新規医薬組成物及び診断用造影剤の調製用前駆体を提供する。造影剤のキット、特に放射性造影剤の調製用キットも提供される。
【００２３】
本発明のペプチド系化合物は、ペプチドベクターと任意要素たるリンカーＷ１とＺ１又はＺ２部分のいずれかとを含み、以下の式（１）で表され、その薬学的に許容される塩も包含される。
【００２４】
【化１】
2008510679.tif 000002
式中、
Ｇはグリシンを表し、
Ｄはアスパラギン酸を表し、
Ｒａは−（ＣＨ２）ｎ−又は（ＣＨ２）ｎ−Ｃ６Ｈ４−を表し（式中、ｎは１〜１０の正の整数である。）、
ｈは１又は２の正の整数であり、
Ｘ１は酸又はアミン基のような官能性側鎖を有するアミノ酸残基であり
Ｘ２及びＸ６は一緒にジスルフィド結合を形成するアミノ酸残基を独立に表し、
Ｘ３はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体を表し、
Ｘ４はチオール含有アミノ酸残基を表し、
Ｘ５は疎水性アミノ酸又はその誘導体であり、
Ｘ７はバイオモディファイヤー部分であるか、或いは存在せず、
Ｚ１又はＺ２の少なくとも一方が存在していて抗悪性腫瘍薬又は造影性部分を表し、
Ｗ１はスペーサーであるか、或いは存在しない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
一態様では、本発明は、特許請求の範囲に規定する式（Ｉ）の新規ペプチド系化合物を提供する。この化合物のペプチドベクターは、インテグリン受容体に対する親和性、例えばインテグリンαｖβ３に対する親和性を有するターゲティング部分をなす。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物は２つの架橋を含んでいて、１つの架橋がジスルフィド結合を形成し、第二の架橋はチオエーテル（スルフィド）結合を含んでおり、これらの架橋によってペプチド部分は「交差」立体配置に折り畳まれる。
【００２７】
そこで、本発明の化合物は１分子部分当たり最大１つのジスルフィド架橋を有する。本発明で規定する化合物は、生体内だけでなく、標識化（例えばテクネチウムでの標識化）の際に用いられる条件下で驚異的な安定性を有する。
【００２８】
これらの新規化合物は、治療効果のある処置及びイメージング用に使用し得る。
【００２９】
本発明の新規ペプチド系化合物は、次の式（１）で規定され、その薬学的に許容される塩も包含される。
【００３０】
【化２】
2008510679.tif 000003
式中、
Ｇはグリシンであり、
Ｄはアスパラギン酸であり、
Ｒａは−（ＣＨ２）ｎ−又は（ＣＨ２）ｎ−Ｃ６Ｈ４−（式中、ｎは１〜１０の正の整数である。）であるが、好ましくはＲａは−（ＣＨ２）であり、
ｈは１又は２の正の整数であり、
Ｘ１は酸又はアミン基のような官能性側鎖を有するアミノ酸残基、好ましくはアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、ホモリシン、ジアミノプロピオン酸その他のジアミノアルキル酸であり、
Ｘ２及びＸ６は一緒にジスルフィド結合を形成するアミノ酸残基を独立に表すが、該アミノ酸残基は好ましくは独立にシステイン残基又はホモシステイン残基であり、
Ｘ３はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体、好ましくはアルギニンであり、
Ｘ４はチオール含有アミノ酸残基、好ましくはシステイン残基又はホモシステイン残基であり、
Ｘ５は疎水性アミノ酸又はその誘導体、好ましくはチロシン残基、フェニルアラニン残基、３−ヨード−チロシン残基又はナフチルアラニン残基、さらに好ましくはフェニルアラニン残基又は３−ヨード−チロシン残基であり、
Ｘ７は存在しないか、或いは均質バイオモディファイヤー部分、好ましくは単分散ＰＥＧ構成単位を１〜１０単位含むものであり、バイオモディファイヤーは薬剤の薬物動態及び血中クリアランス速度を変化させる機能を有する。また、Ｘ７は１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくはグリシン、リシン、アスパラギン酸又はセリンを表すものでもよい。本発明の好ましい実施形態では、Ｘ７は式（ＩＩ）の単分散ＰＥＧ様構造１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の重合で得られるバイオモディファイヤー単位を表す。
【００３１】
【化３】
2008510679.tif 000004
式中、ｍは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位はアミド又は酸部分である。
【００３２】
バイオモディファイヤーＸ７が化合物の薬物動態及び血中クリアランス速度を変化させることが判明した。バイオモディファイヤー基は化合物の組織（筋肉、肝臓など）への取り込みを低減し、バックグラウンド干渉が低減するので診断画像が向上する。バイオモディファイヤーの追加の利点として、分泌は主に腎臓を経る。
【００３３】
Ｗ１は存在しないか、或いはスペーサー部分、好ましくはグルタル酸及び／又はコハク酸及び／又はポリエチレングリコール系単位及び／又は上記の式（ＩＩ）の単位から誘導されるものである。
【００３４】
その他の代表的なスペーサー（Ｗ１）要素としては、構造多糖類、貯蔵多糖類、ポリアミノ酸及びそのメチルエステル及びエチルエステル、ポリペプチド、オリゴ糖及びオリゴヌクレオチドが挙げられ、酵素切断部位を含んでいても含んでいなくてもよい。
【００３５】
スペーサー部分Ｗ１の役割は、ペプチド成分の活性部位から比較的嵩高い造影性部分を離隔することである。スペーサー部分Ｗ１は、ペプチドの活性部位から嵩高い抗悪性腫瘍薬を離隔するのにも応用できる。
【００３６】
Ｚ１及びＺ２の少なくとも一方が存在していて、抗悪性腫瘍薬又は造影性部分を表す。以下、Ｚ１及びＺ２の少なくともいずれかをＺで表す。
【００３７】
診断、特にインビボ診断に有用な造影剤用には、Ｚ部分は１以上の造影性部分を含む。造影性部分をＷ１、Ｘ７又はペプチドに直接結合させることができない場合、例えば、造影性部分が金属粒子又は金属イオン（以下、Ｍという）である場合には、ＺはＡ１Ｍを含んでなる。ここで、Ａ１はＷ１、Ｘ７又はペプチドに結合し得る部分であるとともに、Ｍを保持する。保持とは、化学結合（例えば共有結合又はイオン結合）又は吸着その他の種類の会合など、Ａ１基とＭとのあらゆる形態の結合を意味する。
【００３８】
後述の式（ＩＩＩ）及び式（ＶＩＩＩ）のキレート剤も、特に好ましい。
【００３９】
Ｍが金属である場合、Ａ１はキレート剤を表し、金属は金属イオン、常磁性金属、金属放射性核種、重金属及び重金属酸化物を表す。Ｚ及び／又はＡ１Ｍの性状は、診断に利用される画像モダリティに依存する。Ｚ及び／又はＡ１Ｍはインビボ画像診断で直接又は間接的に検出できるものでなければならず、例えば、検出可能な放射線を（放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起などによって）放出する成分もしくは放出を誘起する成分、局所的電磁場に影響を与える成分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性もしくは強磁性種）、放射線エネルギーを吸収又は散乱する成分（例えば、発色団、粒子（気体又は液体含有ベシクルも包含する。）、重元素及びその化合物など）、並びに検出可能な物質を生成する成分（例えば、気体マイクロバブル発生剤）などである。
【００４０】
インビボイメージングでの検出に適した広範な成分が、例えば国際公開第９８／４７５４１号から知られており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４１】
以下、造影性部分Ｚ及びＭについてさらに詳しく説明する。
【００４２】
第一の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺは、放射線及びＳＰＥＣＴ画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを保持する部分Ａ１を含む。好ましくは、Ｍはα線及びβ線をほとんど或いは全く放出しない半減期１時間以上のγ放射体である。好ましいＭ基は、放射性核種６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、８１ｍＫｒ、９９Ｍｏ、９９ｍＴｃ、２０１Ｔｌ及び１３３Ｘｅである。最も好ましいのは９９ｍＴｃである。
【００４３】
Ｍは、イメージング及び治療の両用途において、以下に挙げる同位体又は同位体対であってもよく、放射性標識法又はキレート剤を変更する必要はない：４７Ｓｃ２１、１４１Ｃｅ５８、１８８Ｒｅ７５、１７７Ｌｕ７１、１９９Ａｕ７９、４７Ｓｃ２１、１３１Ｉ５３、６７Ｃｕ２９、１３１Ｉ５３と１２３Ｉ５３、１８８Ｒｅ７５と９９ｍＴｃ４３、９０Ｙ３９と８７Ｙ３９、４７Ｓｃ２１と４４Ｓｃ２１、９０Ｙ３９と１２３Ｉ５３、１４６Ｓｍ６２と１５３Ｓｍ６２、及び９０Ｙ３９と１１１Ｉｎ４９。
【００４４】
Ｍが金属放射性核種を表す場合、Ａ１は、Ｍとの安定キレートの形成に適したキレート剤を表す。かかるキレート剤は当技術分野で周知であり、かかるキレート剤の典型例は国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉに記載されている。
【００４５】
特に好ましいのは、次の式（ＩＩＩ）のキレート剤である。
【００４６】
【化４】
2008510679.tif 000005
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は各々独立にＨ又はＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリール、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０アルキルアミン、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【００４７】
さらに好ましいのは、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が水素又はメチル基であり、Ｒ４がアルキルアミン基である式（ＩＩＩ）のキレート剤であり、特に次の式（ＩＶ）の化合物である。
【００４８】
【化５】
2008510679.tif 000006
最も好ましくは、Ａ１は式（ＩＶ）のキレートであり、造影性部分Ｍは９９ｍＴｃである。
【００４９】
他の好ましいキレート剤は次の式（Ｖ）のものである。
【００５０】
【化６】
2008510679.tif 000007
式中、Ｙ１〜Ｙ６は独立にＨ、アルキル、アリール又はその組合せであり、Ｙ１〜Ｙ６基は、該キレートを式（Ｉ）のペプチド系化合物のＷ１又はＸ７に結合させることができる１以上の官能基、例えば、好ましくはアルキルアミン、アルキルスルフィド、アルコキシアルキルカルボキシレート、アリールアミン、アリールスルフィド又はα−ハロアセチルを含む。
【００５１】
１２３Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉのような非金属放射性核種は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、Ｗ１基（存在する場合）又はＸ１に共有結合させることができる。
【００５２】
第二の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ＰＥＴ画像モダリティに有用な部分Ｚを含む。この場合、Ｚは陽電子放出性をもつ放射線放出体を表す。好ましいＺ基は、放射性核種１１Ｃ、１８Ｆ、１３Ｎ及び１５Ｏである。１８Ｆが特に好ましい。キレート剤Ａ１でキレートした放射線放出性金属８２Ｒｂ及び６８Ｇａも好ましい。
【００５３】
チオールカップリングの化学、１８Ｆシントン及びチオールカップリング反応を用いて調製される標識ペプチドは、国際公開第０３／０８０５４４号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００５４】
１８Ｆのような非金属放射性核種は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、Ｗ１基（存在する場合）又はＸ１に共有結合させることができ、例えば国際公開第０３／０８０５４４号に記載されている（その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。）。
【００５５】
チオールカップリング反応を用いた標識ペプチドの詳細は、国際公開第２００５／０１２３３５号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００５６】
好ましい実施形態では、Ａ１はＤＯＴＡキレート剤であり、Ｍは６８Ｇａであってマイクロ波化学で容易にキレート剤に導入し得る。
【００５７】
第三の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ＭＲ画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを保持する部分Ａ１を含む。この場合、Ｍは米国特許第４６４７４４７号に記載されているような常磁性金属を表す。Ｇｄ３＋、Ｄｙ３＋、Ｆｅ３＋及びＭｎ２＋が特に好ましく、Ｚはキレート剤、特に米国特許第４６４７４４７号及び国際公開第８６／０２８４１号などに記載されているような非環式又は環式ポリアミノカルボキシレートのようなキレート剤（例えばＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＤＯＴＡ及びＤＯ３Ａ）を表す。また、Ｍは、超常磁性種、フェリ磁性種又は強磁性種のような金属酸化物であってもよく、これらは例えばＺが金属酸化物のコーティングとして機能するようにＺに吸着される。ＭＲ造影剤として用いられる金属酸化物は、例えば米国特許第６２３０７７７号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００５８】
第四の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｘ線画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを保持する部分Ａ１を含む。この場合、ＭはＷ、Ａｕ及びＢｉのような重金属であり、好ましくは酸化物の形態である。Ｚは、Ｘ線造影剤として周知のヨウ素化アリール誘導体、例えばＩｏｐａｍｉｒｏｎ（商標）及びＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）であってもよい。これらの造影剤は、そのアミド又はアミン官能基を介して式（Ｉ）のペプチドに結合させることができる。
【００５９】
他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はガス充填マイクロベシクルの形態のＺを含む。かかる超音波造影剤は受容体のイメージングに利用することができ、例えば国際公開第９８／１８５００号のような従来技術に記載の通り、官能化してペプチドに結合させればよい。
【００６０】
本発明の第六の実施形態では、式（Ｉ）の部分Ｚは、光学イメージング法で直接又は間接的に検出し得る基であってもよい。検出性基は、光散乱体（例えば着色又は無着色粒子）でも、光吸収体でも、光放射体でもよい。さらに好ましくは、Ｚは発色団又は蛍光化合物のような色素である。Ｚ基は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。最も好ましくはＺは蛍光性を有する。
【００６１】
好ましい有機色素部分としては、広く非局在化した電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素鎖体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）鎖体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）鎖体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）鎖体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾物も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の鎖体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のような特定の状況で用いられる。
【００６２】
光学イメージング法に適した基の詳細は、国際公開第２００５／００３１６６号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００６３】
本発明の一態様では、式（Ｉ）のＺは抗悪性腫瘍薬である。この態様では、本化合物は癌に関連した血管新生部位をターゲティングし、抗悪性腫瘍薬を疾患領域に運搬する。抗悪性腫瘍薬の例として、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メトトレキセート、シタラビン、フルオロウラシル、ビンブラスチン、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、テニポシド、シスプラチン、アムサクリン、ドセタキセルが挙げられるが、その他幅広い種類の抗悪性腫瘍薬も使用し得る。
【００６４】
本明細書に記載するペプチド系化合物のペプチドベクターは好ましくは遊離アミノ及びカルボキシ末端をもたない。これによって、これらの化合物は酵素分解に対する耐性が格段に向上し、多くの公知の遊離ペプチドに比べてインビボ安定性が増す。
【００６５】
本明細書で用いる「アミノ酸」という用語は、広義には、タンパク新生Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、化学修飾アミノ酸、Ｎ−メチル、Ｃα−メチル及びアミノ酸側鎖模倣体並びにナフチルアラニンのような非天然アミノ酸をいう。天然アミノ酸又はかかる天然アミノ酸の模倣体が好ましい。
【００６６】
式（Ｉ）の化合物の好ましい実施形態として、次の化合物が挙げられる。
【００６７】
【化７】
2008510679.tif 000008
式中、Ｚは上記で定義した通りである。
【００６８】
本発明では、式（Ｉ）に規定するいずれのアミノ酸残基も好ましくは天然アミノ酸を表し、立体配置は独立にＤ又はＬのいずれでもよい。
【００６９】
ほとんどの場合、ペプチドのアミノ酸はすべてＬ型であるのが好ましい。ただし、本発明のある実施形態では、ペプチドの１、２又は３個以上のアミノ酸は好ましくはＤ型である。かかるＤ型アミノ酸の導入は化合物の血清中安定性に多大な影響をもつことがある。
【００７０】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物又はその塩の有効量（例えばインビボイメージングでの画像コントラストの強調に有効な量）を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる医薬組成物も提供する。
【００７１】
本発明は、さらに、一般式（Ｉ）の化合物又はその酸付加塩の有効量を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる疾患治療用の医薬組成物も提供する。
【００７２】
本発明の好ましい一実施形態は、画像診断用の一般式（Ｉ）の放射線標識剤に関する。
【００７３】
本発明の化合物は、当業者の技術常識に属する方法で、生理学的に許容される担体又は賦形剤を用いて投与用に製剤化し得る。例えば、薬学的に許容される賦形剤を適宜添加した化合物を、水性媒体に懸濁又は溶解し、次いで得られた溶液又は懸濁液を滅菌すればよい。
【００７４】
式（Ｉ）の化合物は、疾患の治療に治療効果をもつとともにインビボイメージングで検出可能なものにすることもできる。例えば、ペプチドベクターによって化合物は受容体をターゲットとするし、また造影性部分Ｚは例えばキレート剤Ａ１を介して化合物に結合した放射性核種Ｍの放射線治療効果などによって、治療効果を有し得る。
【００７５】
そこで、治療用組成物（医薬）の製造、並びにヒト又は動物の身体の治療又は予防的治療、好ましくは癌の治療における、式（Ｉ）の化合物の使用は本発明の別の態様をなすと考えられる。
【００７６】
本発明の一態様では、式（Ｉ）のペプチド系化合物は画像診断における造影剤として使用される。
【００７７】
別の態様では、本発明は、造影剤をヒト又は動物の身体に投与して身体の少なくとも一部分の画像を生成させる診断法に用いられる造影剤の製造における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００７８】
さらに別の態様では、本発明は、造影剤をヒト又は動物の身体（例えば血管系）に投与し、造影剤が分布した身体の少なくとも一部分の画像をシンチグラフィー、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴモダリティ、ＭＲＩ、Ｘ線、超音波又は光学イメージングを用いて生成させることを含むヒト又は動物の身体の画像を生成させる方法であって、上記造影剤として式（Ｉ）の化合物を用いることを特徴とする方法を提供する。
【００７９】
さらに別の態様では、本発明は、式（Ｉ）で定義される化合物を含む造影剤組成物を予め投与しておいたヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法を提供する。
【００８０】
さらに別の態様では、本発明は、癌に関連した病態（好ましくは血管新生）に対処するための薬剤（例えば細胞毒性剤）によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、式（Ｉ）の化合物を身体に投与し、細胞受容体（好ましくは内皮細胞受容体、特にαｖβ３受容体）による上記薬剤の取り込みを検出し、任意ではあるが好ましくは、投与と検出を、例えば上記薬剤による治療の前後途中のいずれかに繰り返すことを含む方法を提供する。
【００８１】
本発明の化合物は、あらゆる公知の化学合成法で合成できるが、特に有用な方法は自動ペプチド合成装置を用いたＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９（１９６４））。典型的には、所望の配列を固相ペプチド合成で構築する。本発明の実施例で用いた合成法の標準的手順は、Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ  ＆  Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，  “Ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  １９８９，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄに記載されている。
【００８２】
例えば、酸不安定リンカー基を有する樹脂を用いて、これに、所望のアミノ保護Ｃ末端アミノ酸残基をエステル化したものを結合させる。次いでアミノ保護基を外し、適当な縮合剤を用いて配列の第二のアミノ酸をカップリングさせる。一時的なアミノ保護基と官能性側鎖のための永続的な保護基をもつアミノ酸を使用する。次にアミノ脱保護とカップリングのサイクルを目的配列が構築されられるまで交互に繰り返す。
【００８３】
別法として、ペプチドは、全体的な又は最小限の保護戦略を用いて、当技術分野で公知の溶液ペプチド合成法によって、カルボキシル末端から段階的に及び／又はセグメント縮合もしくはライゲーション法を用いて合成することもできる。溶液−固相セグメント縮合法の組合せを利用することもできる。
【００８４】
一般に、反応性側鎖基（例えばアミノ、ヒドロキシル、グアニジノ及びカルボキシル基）は、上述の通り合成の全期間にわたって保護される。アミノ酸に対する保護基については幅広い選択肢が知られている（例えばＧｒｅｅｎｅ，  Ｔ．Ｗ．  ＆  Ｗｕｔｓ，  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  （１９９１）  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照）。使用し得るアミノ保護基としては、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及びｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）が挙げられる。使用し得る側鎖保護基としては、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリチル（Ｔｒｔ）、Ｂｏｃ及び２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）が挙げられる。かかる保護基としてその他多種多様なものが当技術分野で公知である。
【００８５】
最後に、永続的な側鎖保護基を外し、ペプチドを樹脂から切断するが、これらは、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のような適当な酸性試薬での処理によって同時に行われるのが一般的である。
【００８６】
複数の架橋を含むペプチド系ベクターは、ベクターの最終的な折り畳み構造が曖昧とならないように、様々なシステイン保護基を用いて合成される。チオエーテル及びジスルフィド架橋を含むペプチドの形成について記載された国際公開第０３／００６４９１号に記載の合成法を使用し得る。チオエーテル環化は例えば以下の通り実施できる。Ｃｙｓ（ｔ−Ｂｕ）保護ペプチドを水／アセトニトリルに溶解する（１ｍｇ／ｍｌ）。希アンモニア溶液で混合物のｐＨを８に調節し、混合物を一晩攪拌する。ジスルフィド架橋は、次のようにＤＭＳＯ／ＴＨＦ酸化によって形成させることができる。ペプチドを５％ＤＭＳＯ／ＴＨＦに溶解し（１ｍｇ／ｍｌ）、混合物を３０分間攪拌する。
【００８７】
Ｗ１及び／又はＸ７とペプチドとのカップリング：
Ｗ１及び／又はＸ７は公知の化学合成法を用いてペプチドに結合させることができる。特に有用なものは、ペプチドＮ末端の脱離基をＷ１及び／又はＸ７の求核基で置換する求核置換反応である。かかる脱離基は、カルボニル基にα位で結合した臭素とすることができ、求核基は窒素とすることができる。
【００８８】
Ｚとペプチド、Ｗ１及び／又はＸ７とのカップリング：
Ｚは、Ｗ１及び／又はＸ７とペプチドとの結合法と同様の方法を用いてペプチドに直接に結合させることができる。ＺがＷ１又はＸ７を介してペプチドに連結する場合、ＺとＷ１又はＸ７の結合にはあらゆる化学合成法を使用できる。特に有用なものはアミド結合の形成である。
【００８９】
ペプチドベクター及びペプチド系化合物は、インビトロスクリーニングでの試験前に、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製し、質量分析及び分析用ＨＰＬＣで特性決定してもよい。
【００９０】
以下の非限定的な実施例によって本発明をさらに例示する。
【実施例】
【００９１】
実施例１
［Ｃｙｓ２−８］シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２とｃａｒｂａ−Ｐｎ２１６キレートとのコンジュゲート
１ａ）ＣｌＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２の合成
【００９２】
【化８】
2008510679.tif 000009
上記ペプチドの合成は、ＡＢＩ  ４３３Ａ自動ペプチド合成装置で、１ｍｍｏｌアミノ酸及びクロロ酢酸カートリッジを用いて、０．２５ｍｍｏｌスケールのＯ−ビス−（アミノエチル）エチレングリコールトリチル樹脂から開始した。アミノ酸及びクロロ酢酸はカップリング前にＨＢＴＵを用いて予め活性化しておいた。樹脂からのペプチドと側鎖保護基（ｔＢｕ以外）の同時除去は、ＴＩＳ（５％）、Ｈ２０（５％）及びフェノール（２．５％）を含有するＴＦＡ中で２時間行った。
【００９３】
後処理後、粗ペプチドを白色固体として得た（分析用ＨＰＬＣ；勾配：１０分間で５〜５０％Ｂ（Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ；検出：ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間：６．５０分）。エレクトロスプレー質量分析法でさらに生成物の特性決定を行った（Ｍ＋Ｈの予測値１２９３．５、実測値１２９３．５）。
【００９４】
１ｂ）シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２の合成
【００９５】
【化９】
2008510679.tif 000010
ＣｌＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２を水／アセトニトリルに溶解した。アンモニア溶液で混合物のｐＨを８に調節し、４時間攪拌した。
【００９６】
後処理後、粗ペプチドを白色粉末として得た（分析用ＨＰＬＣ；勾配：１０分間で５〜５０％Ｂ（Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ；検出：ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間：５．９０分）。エレクトロスプレー質量分析法でさらに生成物の特性決定を行った（Ｍ＋Ｈの予測値１２５７．５、実測値１２５７．５）。
【００９７】
１ｃ）［Ｃｙｓ２−８］シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２の合成
【００９８】
【化１０】
2008510679.tif 000011
シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２を、アニソール（５００μｌ）とＤＭＳＯ（４ｍｌ）を含むＴＦＡ（２００ｍｌ）に溶解した。混合物を１５分間攪拌してから、ＴＦＡを減圧除去し、ジエチルエーテルを添加してペプチドを沈殿させた。
【００９９】
分取用ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）  ２５０×２１．２０ｍｍカラム）による粗物質の精製は、０〜３０％のＢ（Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）を用いて１０ｍＬ／分の流速で４０分間実施した。凍結乾燥後、１８．７ｍｇの純物質を得た（分析用ＨＰＬＣ；勾配：１０分間で０〜３０％のＢ（Ａ＝Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ；検出：ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間：５．７３分）。エレクトロスプレー質量分析法でさらに生成物の特性決定を行った（Ｍ＋Ｈの予測値１１４３．４、実測値１１４３．５）。
【０１００】
１ｄ）ペプチドとｃａｒｂａ−Ｐｎ２１６キレートの結合
【０１０１】
【化１１】
2008510679.tif 000012
ｃａｒｂａ−Ｐｎ２１６キレート活性エステル、Ｎ−メチルモルホリン及び［Ｃｙｓ２−８］シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）に溶解する。混合物を２４時間攪拌する。水を加え、生成物を分取用ＨＰＬＣで精製する。
【０１０２】
実施例２
［Ｃｙｓ２−８］シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＣＣＸ６−ＮＨ２とｃａｒｂａ−Ｐｎ２１６キレートとのコンジュゲート
２ａ）ＣｌＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＣＣＸ６−ＮＨ２の合成
【０１０３】
【化１２】
2008510679.tif 000013
上記ペプチドの合成は、ＡＢＩ  ４３３Ａ自動ペプチド合成装置で、１ｍｍｏｌアミノ酸及びクロロ酢酸カートリッジを用いて、０．２５ｍｍｏｌスケールのＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＡＭ樹脂から開始する。アミノ酸及びクロロ酢酸はカップリング前にＨＢＴＵを用いて予め活性化しておく。樹脂からのペプチドと側鎖保護基（ｔＢｕ以外）の同時除去は、ＴＩＳ（５％）、Ｈ２０（５％）及びフェノール（２．５％）を含有するＴＦＡ中で２時間実施する。後処理後に、粗ペプチドが白色固体として得られる。
【０１０４】
２ｂ）シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＣＣＸ６−ＮＨ２の合成
【０１０５】
【化１３】
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ＣｌＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＣＣＸ６−ＮＨ２を、水／アセトニトリルに溶解する。アンモニア溶液で混合物のｐＨを８に調節し、４時間攪拌する。凍結乾燥後、粗ペプチドが白色固体として得られる。
【０１０６】
２ｃ）［Ｃｙｓ２−８］シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＣＣＸ６−ＮＨ２の合成
【０１０７】
【化１４】
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ＤＭＳＯ（４ｍＬ）を含むＴＦＡ（２００ｍＬ）に、シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＣＣＸ６−ＮＨ２を溶解する。混合物を３０分間攪拌してから、ＴＦＡを減圧除去し、ジエチルエーテルを添加してペプチドを沈殿させる。
【０１０８】
２ｄ）ペプチドとｃａｒｂａ−Ｐｎ２１６キレートの結合
【０１０９】
【化１５】
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ｃａｒｂａ−Ｐｎ２１６キレート活性エステル、Ｎ−メチルモルホリン及び［Ｃｙｓ２−８］シクロ［ＣＨ２ＣＯＮＨ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ］−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＣＣＸ６−ＮＨ２を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）に溶解する。混合物を２４時間攪拌する。水を加え、生成物を分取用ＨＰＬＣで精製する。
【配列表】
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【国際調査報告】
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