(57)【要約】  小胞体（ＥＲ）ストレスは、肥満に結びつくことが見出されており、それ故、ＥＲストレスを低減する又は予防する薬剤は、末梢インスリン抵抗性、高血糖症及び２型糖尿病を含む、肥満に関連する疾患を治療するために使用することができる。ＥＲストレスを低減し、血糖値を低下させることを示す２つの化合物は、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）及びトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）を含む。ＥＲストレスを低減するのに有用なその他の化合物は、トリメチルアミンＮ−オキシド及びグリセロールのような化学シャペロンである。本発明は、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びＴＭＡＯのようなＥＲストレス低減剤を使用して、肥満、高血糖症、２型糖尿病又はインスリン抵抗性に罹患している対象を治療する方法を提供する。ＥＲストレスを受けている細胞においてＥＲストレスマーカーのレベルを低下させる薬剤を同定することにより、ＥＲストレス低減剤をスクリーニングする方法も提供される。これらの薬剤は、肥満関連の疾患を治療するための方法及び医薬組成物において使用できる。【選択図】図４
2008513465.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＲストレスを低減することが知られている薬剤を動物に投与することを含んでなる、肥満、インスリン抵抗性、高血糖症及び２型糖尿病から成る群より選択される疾患を治療する又は予防する方法。
【請求項２】
抗糖尿病薬、抗肥満薬、抗異常脂質血症薬、抗アテローム性動脈硬化症薬及び抗高血圧薬から成る群より選択される薬剤を投与することを更に包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗糖尿病薬が、ビグアニド、メトホルミン、スルホニル尿素、インスリン、インスリンの類似体、ＰＰＡＲｇアゴニスト、メグリチニド及びＤＰＰ−ＩＶ阻害剤から成る群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗肥満薬が、膵リパーゼ阻害剤、セロトニン再取込み阻害剤、ノルエピネフリン再取込み阻害剤、ノルアドレナリン作動性食欲抑制薬、末梢作用薬、中枢作用薬及び熱産生剤から成る群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記抗異常脂質血症薬又は抗アテローム性動脈硬化症薬が、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ナイアシン、抗血小板薬、ＡＣＥ阻害剤、アスピリン、アスピリンの類似体及びＭＣＰ−１阻害剤から成る群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗高血圧薬が、利尿薬、β遮断薬、Ｃａ＋２チャネル遮断薬、ＡＣＥ阻害剤及びＡＴ−ＩＩ阻害剤から成る群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記疾患がインスリン抵抗性である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記疾患が２型糖尿病である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記疾患が肥満である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記動物が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
投与の工程が、薬剤を経口で投与することを包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
投与の工程が、薬剤を非経口で投与することを包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
投与の工程が、薬剤を静脈内に投与することを包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記薬剤が、化学シャペロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記化学シャペロンが、グリセロール、Ｄ２Ｏ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリシンベタイン（ベタイン）、グリセロールホスホコリン（ＧＰＣ）、メチルアミン及びトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）から成る群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記薬剤が、グリセロールである、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記薬剤が、グリセロールの誘導体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記薬剤が、トリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記薬剤が、トリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）の誘導体又は塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記薬剤が、式：
【化００１】
2008513465.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して水素、ハロゲン又は低級Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
で表される化合物であるか、又は医薬的に許容され得るその塩若しくはその混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して低級Ｃ１−Ｃ６アルキルである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記薬剤が、フェニル酪酸（ＰＢＡ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬剤が、ＰＢＡの誘導体、塩又は異性体である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記薬剤が、式：
【化００２】
2008513465.tif 000011
（式中、
ｎは、１又は２であり；
Ｒ０は、アリール、ヘテロアリール又はフェノキシであり、前記アリール及びフェノキシは、置換されていないか、又はそれぞれ独立して、１個又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ又は低級アルキルで置換されており；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級アルキル又はハロゲンであり；及び
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルコキシ又はハロゲンである）
で表される化合物であるか、又は医薬的に許容され得るその誘導体若しくは塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ０が、フェニル、ナフチル又はフェノキシであり、前記フェニル、ナフチル及びフェノキシが、置換されていないか、又はそれぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ又は低級アルキルの１個又はそれ以上の部分で置換されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ０が、フェニル、ナフチル又はフェノキシであり、前記フェニル、ナフチル及びフェノキシが、置換されていないか、又はそれぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ又は１〜４個の炭素原子の低級アルキルの１〜４個の部分で置換されており；
Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシ、１〜２個の炭素原子の低級アルコキシ、１〜４個の炭素原子の低級直鎖又は分枝鎖アルキル又はハロゲンであり；及び
Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して、Ｈ、１〜２個の炭素原子の低級アルコキシ、１〜４個の炭素原子の低級直鎖又は分枝鎖アルキル又はハロゲンである、
請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ｎが１である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
ｎが２である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
Ｒ０が、フェニルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ０が、置換フェニルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
Ｒ０のフェニル上の置換基が、１〜４個のハロゲン部分である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ３及びＲ４が、どちらも−Ｈである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
前記薬剤が、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記薬剤が、ＴＵＤＣＡの誘導体、塩又は異性体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記薬剤が、式：
【化００３】
2008513465.tif 000012
（式中、Ｒは、−Ｈ又はＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１は、−ＣＨ２−ＳＯ３Ｒ３であり、及びＲ２は、−Ｈであるか；又はＲ１は、−ＣＯＯＨであり、及びＲ２は、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＣＨ３又は−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＯＨであり；及び
Ｒ３は、−Ｈ又は塩基性アミノ酸残基である）
で表される化合物であるか、又は医薬的に許容され得るその塩若しくは誘導体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
Ｒ１が、−ＣＨ２−ＳＯ３Ｒ３であり、及びＲ２が、−Ｈである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒが、−Ｈである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記薬剤を、１００ｍｇ／ｋｇ／日〜５ｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記薬剤を、５００ｍｇ／ｋｇ／日〜３ｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
前記薬剤を、５００ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
ＥＲストレスを低減することが知られている薬剤をヒトに投与することを包含する、肥満を治療する又は予防する方法。
【請求項４３】
ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びそれらの誘導体から成る群より選択される薬剤を、動物に投与することを包含する、血糖値を低下させる方法。
【請求項４４】
ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びそれらの誘導体から成る群より選択される薬剤を、動物に投与することを包含する、インスリン感受性を上昇させる方法。
【請求項４５】
スクリーニングする薬剤を、提供する工程；
前記薬剤を、細胞と接触させる工程；及び
ＥＲストレスマーカーが低下するかどうかを測定する工程；
を含んでなる、肥満、インスリン抵抗性又は糖尿病を治療する又は予防するための薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項４６】
スクリーニングする薬剤を、提供する工程；
前記薬剤を、細胞と接触させる工程；及び
ＥＲストレスマーカーが低下するかどうかを測定する工程；
を含んでなる、インスリン作用又はインスリン受容体シグナル伝達を調節する薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項４７】
ＥＲストレスマーカーが、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態、ｅＩＦ２αのリン酸化、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベル、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのタンパク質レベル及びＪＮＫ活性から成る群より選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞が、ヒト細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記細胞が、脂肪細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞が、肝細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞が、ＥＲストレスを経験している、請求項４６に記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞が、ＥＲストレスを誘導するツニカマイシン又はタプシガルギンで治療されたことがある、請求項４６に記載の方法。
【請求項５４】
スクリーニングする薬剤を、提供する工程；
前記薬剤を、細胞と接触させる工程；及び
ＥＲストレスマーカーが低下するかどうかを測定する工程；
を含んでなる、ＥＲストレスを低減する薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項５５】
スクリーニングする薬剤を、提供する工程；
前記薬剤を、細胞と接触させる工程；
その後、薬剤と接触させた前記細胞をＥＲストレス誘導物質と接触させる工程；及び
ＥＲストレスマーカーが低下するかどうかを測定する工程；
を含んでなる、ＥＲストレスを予防する薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項５６】
前記ＥＲストレス誘導物質が、ツニカマイシン及びタプシガルギンから成る群より選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
請求項４５に記載の方法により同定される化合物。
【請求項５８】
請求項５７に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項５９】
（１）ＥＲストレスを低減することが知られている薬剤、及び（２）抗糖尿病薬、抗肥満薬、抗異常脂質血症薬、抗アテローム性動脈硬化症薬及び抗高血圧薬から成る群より選択される薬剤、を含有する医薬組成物。
【請求項６０】
ＥＲストレスを低減することが知られている前記薬剤が、化学シャペロンである、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
ＥＲストレスを低減することが知られている前記薬剤が、グリセロール、Ｄ２Ｏ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリシンベタイン（ベタイン）、グリセロールホスホコリン（ＧＰＣ）、メチルアミン及びトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）から成る群より選択される、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
ＥＲストレスを低減することが知られている前記薬剤が、ＴＵＤＣＡ又はその誘導体である、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
ＥＲストレスを低減することが知られている前記薬剤が、ＰＢＡ又はその誘導体である、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
ＰＢＡ及びメトホルミンを含有する、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びそれらの誘導体から成る群より選択される薬剤を、動物に投与する工程を含んでなる、ＥＲストレスを低減する又はＥＲストレスに関連する疾患を治療する若しくは予防する方法。
【請求項６６】
少なくとも１つのＥＲストレスマーカーの発現レベルを測定し、前記ストレスマーカーのレベルの上昇が、対象がインスリン抵抗性、高血糖症又は２型糖尿病のリスクがあることを指示すること
を含んでなる、インスリン抵抗性、高血糖症又は２型糖尿病を診断する方法。
【請求項６７】
前記ＥＲストレスマーカーが、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態、ｅＩＦ２αのリン酸化、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベル、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのタンパク質レベル及びＪＮＫ活性から成る群より選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記測定する工程が、少なくとも２つのＥＲストレスマーカーのレベルを測定することを包含する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びそれらの誘導体から成る群より選択される薬剤を、動物に投与することを含んでなる、ＰＥＲＫ、ＩＲＥ−１α、ＪＮＫ、ＩＲＳ−１、ＩＲＳ−２、Ａｋｔ又はインスリン受容体活性を調節する方法。
【請求項７０】
ＰＥＲＫ活性を低下させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
ＩＲＥ−１α活性を低下させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
ＪＮＫキナーゼ活性を低下させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
ＩＲＳ−１活性を増加させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
ＩＲＳ−２活性を増加させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７５】
Ａｋｔ活性を増加させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
インスリン受容体活性を増加させる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７７】
ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びそれらの誘導体から成る群より選択される薬剤を、動物に投与することを含んでなる、インスリン作用又はインスリン受容体シグナル伝達を増加させる方法。
【請求項７８】
インスリン、血糖降下薬、コレステロール低下薬、食欲抑制剤、アスピリン、ビタミン、ミネラル及び抗高血圧薬から成る群より選択される薬剤を、投与することを更に包含する、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ＥＲストレスを低減することが知られている薬剤を、動物に投与することを含んでなる、インスリン受容体シグナル伝達を調節する方法。
【請求項８０】
前記薬剤が、グリセロール、Ｄ２Ｏ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリシンベタイン（ベタイン）、グリセロールホスホコリン（ＧＰＣ）、メチルアミン及びトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）から成る群より選択される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記薬剤が、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ及びそれらの誘導体から成る群より選択される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
インスリン、血糖降下薬、コレステロール低下薬、食欲抑制剤、アスピリン、ビタミン、ミネラル及び抗高血圧薬から成る群より選択される薬剤を、投与することを更に包含する、請求項７９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下に、２００４年９月１５日出願の米国特許仮出願第ＵＳＳＮ６０／６１０，０９３号に対する優先権を主張し、参照することにより本明細書に組み込まれる。本出願はまた、「代謝障害の治療のためのＸＢＰ−１活性の調節」と題する、２００４年９月１５日出願の米国特許仮出願第Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／６１０，２８６号；「代謝障害の治療のためのＸＢＰ−１活性の調節」と題する、２００５年９月１５日出願の米国特許出願第Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ  ＸＸ／ＸＸＸ，ＸＸＸ号；及び「ＸＢＰ−１活性を調節するための方法及び組成物」と題する、２００３年９月２日出願の米国特許出願第Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１０／６５５，６２０号に関連し、それらの各々が参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（政府支援）
本明細書で述べる研究は、国立衛生研究所からの助成金交付Ｎｏ．３２４１２により、一部支援されて実施され、米国政府は本発明に一定の権利を有している。
【背景技術】
【０００３】
世界の大部分の地域における肥満の発生率の劇的な上昇は、インスリン抵抗性、２型糖尿病及び心臓血管疾患の発症率上昇に寄与してきた。これらの肥満関連疾患はヒトの健康に対する深刻な脅威となってきている。
【０００４】
肥満は細胞ストレスシグナル伝達経路の活性化に関与することが見出されている（Uysal et al. Nature 389:610, 1997; Hirosumi et al. Nature 420:333, 2003; Yuan et al. Science 293:1673, 2001；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。細胞ストレス応答におけるプレーヤーの１つが、分泌及び膜タンパク質の合成とプロセシングにおいて機能する膜ネットワーク、小胞体（ＥＲ）である。ＥＲは、真核細胞の大部分の分泌及び内在性膜タンパク質のプロセシング及び転位に関与する。ＥＲの内腔は、これらのタンパク質の翻訳後修飾及びフォールディングのために特殊な環境を提供する。正しくフォールディングされたタンパク質はＥＲから出て行くことが可能になり、分泌経路へと進むが、一方フォールディングされなかったか又はミスフォールディングのタンパク質は、ＥＲ関連タンパク質分解機構によって処分される。細胞が処理するタンパク質の負荷は、細胞型及び細胞の生理的状態に依存して大きく異なる。細胞は、それらのＥＲがタンパク質を処理する能力及び合成されるタンパク質の負荷を調節することによって適応することができる。ＥＲ負荷とフォールディング能力の間の不均衡は、ＥＲストレスと称される（Harding et al. Diabetes 51(Supp. 3):S455, 2002；参照することにより本明細書に組み込まれる）。ＥＲストレスは、低酸素症、低血糖症、ＥＲ機能を乱す天然毒素に曝すこと、及び対象タンパク質のフォールディング能力に影響する様々な突然変異により、誘発されることが示されている（Lee, Trends Biochem. Sci. 26:504-510, 2001; Lee, Curr. Opin. Cell Biol. 4:267-273, 1992；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【０００５】
ある特定の病的状態は、ＥＲホメオスタシスを妨害し、それによりＥＲ内腔におけるフォールディングされなかった及びミスフォールディングされたタンパク質の蓄積を導くことが示されている（Hampton Curr. Biol. 10:R518, 2000; Mori Cell 101:451, 2000; Harding et al. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 18:575, 2002；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。ＥＲストレスに対抗するために、細胞は、フォールディング異常タンパク質応答（ＵＰＲ）と呼ばれる、ＥＲ内腔を細胞質及び核に連結するシグナル伝達システムを活性化する（Hampton Curr. Biol. 10:R518, 2000; Mori Cell 101:451, 2000; Harding et al. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 18:575, 2002；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる、）。ＥＲストレスを誘発する状態には、グルコース及び栄養素欠乏、ウイルス感染、分泌タンパク質の合成量増加、並びに突然変異体又はミスフォールディングタンパク質の発現がある（Ma et al. Cell 107:827, 2001; Kaufman et al. Nat. Rev. MoI. Cell Biol. 3:411, 2002；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＥＲストレスの誘発を示している状態の多くはまた、肥満、並びに２型糖尿病、高血糖症及びインスリン抵抗性などに関連する疾患において起こることが見出されている。例えば、肥満は、多くの分泌器官系の細胞の合成機構に対して要求を増加させると、同時に細胞内エネルギーの流れ及び栄養素のアベイラビリティーの異常を引き起こす。本発明は、肥満に関連するこれらの疾患の多くが、特に末梢組織において、ＥＲストレスを引き起こし、そしてＥＲストレスは、肥満の２つの続発症であるインスリン抵抗性及び２型糖尿病の誘発に関与するという認識に由来する。従って、ＥＲストレスを低減する薬剤は、肥満、末梢インスリン抵抗性、高血糖症及び２型糖尿病を治療する上で有用である。これらの疾患の治療において有用な薬剤は、ＥＲストレスを低減する又は予防することが知られている低分子、タンパク質、核酸及びその他の何れかの化合物を包含する。これらの薬剤は、突然変異体又はミスフォールディングタンパク質の産生を低下させること、ＥＲシャペロンの発現を増加させること、タンパク質の安定性を上昇させること、ＥＲのプロセシング能力を促進することのような、ＥＲストレスを低減する又は予防するように働く。特に有用な薬剤は、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、トリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）、グリセロール、Ｄ２Ｏ、ジメチルスルホキシド、グリシンベタイン、メチルアミン及びグリセロールホスホコリンのような化学シャペロンを包含する。特に、ＰＢＡ及びＴＵＤＣＡはいずれも、動物を上記化合物で処置した後にウエスタンブロット法により測定した場合、ＰＥＲＫのリン酸化低下、ＪＮＫの活性化低下及びＩＲＥ−１αのリン酸化低下によって測定されるように、動物においてＥＲストレスを調節することが示された。加えて、ＰＢＡ及びＴＵＤＣＡの両方が、インスリン受容体、インスリン基質１−ＩＲＳ−１及びＩＲＳ−１のチロシンリン酸化上昇、及びＡｋｔのセリンリン酸化上昇によって測定されるように、動物においてインスリン受容体シグナル伝達を調節する。ＴＭＡＯは、インスリン抵抗性及び２型糖尿病を有する動物に投与した場合、グルコース及びインスリンレベルを低下させて、インビボで抗糖尿病薬として働くことが示されている。前記薬剤又はその薬剤の医薬組成物は、ＥＲストレスを低下させるのに有効な用量で、対象（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、哺乳動物、動物）に投与され、それにより肥満、インスリン抵抗性及び２型糖尿病の徴候、症状及びそれらから導かれる結果を低減する。本発明はまた、ＥＲストレスを低減する薬剤を投与することによって、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病及び高血糖症を治療する及び／又は予防する方法を提供する。薬剤は、薬剤送達分野において公知の何れかの方法で投与できるが、好ましくは、薬剤は経口又は非経口で送達される。これらの薬剤の用量範囲は、送達される薬剤及びその他の因子に依存するが、一般的には１０ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｇ／ｋｇ／日である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ある特定の態様では、ＥＲストレスを低減するために使用される薬剤は、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）である。
【０００８】
【化００４】
2008513465.tif 000003
【０００９】
ＰＢＡは、ＥＲストレスを調節し、インスリンシグナル伝達を調節することが示されている。フェニル酪酸（ＰＢＡ）又はその誘導体若しくは塩は、ＥＲストレスを低減するために対象に投与され、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性の治療において、及び血糖値を低下させる上で特に有用である。ＰＢＡは、血糖値を低下させ、インスリン感受性を上昇させるのに有効である（図４及び５）。ＰＢＡ又はその医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜２ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは５００ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。
【００１０】
別な態様では、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、つまり胆汁酸が、ＥＲストレスを低減するために使用される薬剤である。
【００１１】
【化００５】
2008513465.tif 000004
【００１２】
ＴＵＤＣＡは、ＥＲストレス及びインスリンシグナル伝達を調節することが示されている。本発明は、ＥＲストレスを低減するためのタウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）又はその塩又は誘導体の対象への投与を提供する。ＴＵＤＣＡは、肥満、２型糖尿病及びインスリン抵抗性の治療においてこの薬剤を有用なものにする、血糖値を低下させ、インスリン感受性を上昇させることが認められた（図６）。ＴＵＤＣＡ又はその医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜２ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜７５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。
【００１３】
別な態様では、ＴＭＡＯが、ＥＲストレスを低減するために使用される薬剤である。
【００１４】
【化００６】
2008513465.tif 000005
【００１５】
ＴＭＡＯは、インビボで抗糖尿病薬として働くことが示されている（図７参照）。本発明は、ＥＲストレスを低減するためのＴＭＡＯ又はその塩若しくは誘導体の対象への投与を提供する。ＴＵＤＣＡは、肥満、２型糖尿病及びインスリン抵抗性の治療においてこの薬剤を有用なものにする、血糖値を低下させ、インスリン感受性を上昇させることが認められた（図７）。ＴＭＡＯ又はその医薬組成物は、１００ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０１ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ／日〜０．１ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇ／日から０．５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。
【００１６】
ＥＲストレスを低減する薬剤及び医薬的に許容され得る賦形剤を含有する医薬組成物も提供される。前記医薬組成物は、経口、非経口又は経皮送達用に製剤し得る。ＥＲストレス低減剤はまた、インスリン、抗糖尿病薬、血糖降下薬、コレステロール低下薬、食欲抑制剤、アスピリン、ビタミン、ミネラル及び抗高血圧薬のようなその他の薬剤と組み合わせることができる。例えば、ＰＢＡは、メトホルミンと組み合わせる又はメトホルミンと共に投与することができる。薬剤は、同じ医薬組成物中で組み合わせるか又は別々のままで（すなわち２つの別々の製剤で）、キット中で一緒に提供できる。キットはまた、医師及び／又は患者のための指示書、注射器、針、箱、ビン、バイアル等を含むことができる。
【００１７】
別な態様では、本発明は、ＥＲストレスを低減する薬剤をスクリーニングする方法を提供する。同定される薬剤は、肥満、２型糖尿病、高血糖症及びインスリン抵抗性の治療において有用である。スクリーニングする薬剤を、ＥＲストレスを経験している細胞と接触させる。細胞によって経験されるＥＲストレスは、遺伝子変化又はＥＲストレスを生じさせることで公知の化合物（例えばツニカマイシン、タプシガルギン）による処置により引き起こされる。本発明のスクリーニングにおいて特に有用な細胞は、肝細胞及び脂肪細胞である。次に、ＥＲストレスを低減する薬剤を同定するためにＥＲストレスマーカーのレベルを測定する。ＥＲストレスのマーカーの例は、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫ（Ｔｈｒ９８０）及びｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）のリン酸化状態、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡ及びタンパク質レベル、及びＪＮＫ活性を包含する。ＥＲストレスを有する細胞と接触させた場合に、未処置の対照細胞と比較してＥＲストレスのマーカーの低下を生じさせる薬剤であれば、ＥＲストレスを低減する薬剤として同定される。ＥＲストレスマーカーのレベルの低下は、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高血糖症、嚢胞性線維症及びアルツハイマー病のような、ＥＲストレスに関連する疾患を治療する上で有用な薬剤であることを示す。本発明の方法を用いて同定される薬剤は、本発明の一部である。これらの薬剤は、医薬組成物における使用のために更にテストすることができる。
【００１８】
別な態様では、本発明は、ＥＲストレスマーカーの発現のレベルを測定することによる、インスリン抵抗性、高血糖症又は２型糖尿病を診断する方法を提供する。本発明の診断方法において分析できるマーカーは、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態、ｅＩＦ２αのリン酸化、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベル、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのタンパク質レベル及びＪＮＫ活性を包含する。ＥＲストレスを示すことが公知のその他の何れかの細胞マーカーが使用できる。これらのマーカーのレベルは、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、免疫測定法又は酵素アッセイを含む、当分野で公知の何れかの方法によって測定できる。ＥＲストレスマーカーのレベルの上昇は、対象が、インスリン抵抗性、高血糖症又は２型糖尿病に関するリスクがあることを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（定義）
「動物」：本明細書中で使用する動物という用語は、ヒト並びに、例えば哺乳動物、鳥、爬虫動物、両生動物及び魚を含む、非ヒト動物を指す。好ましくは、非ヒト動物は哺乳動物（例えば、げっ歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長動物又はブタ）である。ある特定の態様では、動物はヒトである。
【００２０】
「化学シャペロン」：「化学シャペロン」は、変性（例えば、化学変性、熱変性）に対してタンパク質の高次構造を安定化し、それによってタンパク質の構造と機能を保持することが知られている化合物である（Welch et al. Cell Stress Chaperones 1:109-115, 1996；参照することにより本明細書に組み込まれる）。ある特定の態様では、「化学シャペロン」は、低分子又は低分子量化合物である。好ましくは、「化学シャペロン」は、タンパク質ではない。「化学シャペロン」の例には、グリセロール、重水素水（Ｄ２Ｏ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、トリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）、グリシンベタイン（ベタイン）、グリセロールホスホコリン（ＧＰＣ）（Burg et al. Am. J. Physiol.(Renal Physiol. 43):F762-F765, 1998；参照することにより本明細書に組み込まれる）、４−フェニル酪酸塩又は４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）、メチルアミン、及びタウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）が含まれる。化学シャペロンは、細胞におけるタンパク質のフォールディングに影響を及ぼすために使用できる。化学シャペロンは、ある特定の場合、嚢胞性線維症（Fischer et al. Am. J. Physiol. Lung Cell MoI. Physiol. 281:L52-L57, 2001；参照することにより本明細書に組み込まれる）、プリオン関連疾患、腎原性尿崩症及び癌などの疾患において見られるフォールディング／輸送異常を是正することが示された（Bai et al. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods 40(l):39-45, July 1998；参照することにより本明細書に組み込まれる）。化学シャペロンはまた、ＥＲストレスの低減においても使用でき、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性及び高血糖症の治療において有用である。
【００２１】
「有効量」：一般に、ＥＲストレス低減剤又はその医薬組成物のような活性薬剤の「有効量」は、所望の生物学的応答を引き出すために必要な量を示す。当業者には認識されるように、ＥＲストレスを低減する又は予防する薬剤の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達する薬剤、治療する疾患、治療する対象等の因子に依存して変化しうる。例えば、高血糖症又は２型糖尿病を治療するために使用される薬剤の有効量は、血糖値が少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％又は５０％の減少となる量である。その他の態様では、ＥＲストレス調節剤の有効量は、少なくとも１つのＥＲストレスマーカー（例えばスプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態、ｅＩＦ２αのリン酸化、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベル、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのタンパク質レベル及びＪＮＫ活性）のレベルを低下させる。ある特定の態様では、少なくとも２、３、４又はそれ以上のＥＲストレスマーカーのレベルが低下する。ＥＲストレスマーカーは、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％減少し得る。
【００２２】
「ペプチド」又は「タンパク質」：本発明によれば、「ペプチド」又は「タンパク質」は、ペプチド結合によって互いに連結された少なくとも３個のアミノ酸列を含む。「タンパク質」及び「ペプチド」という用語は、どちらを用いてもよい。本発明のペプチドは、好ましくは天然アミノ酸だけを含むが、当分野において公知である非天然アミノ酸（すなわち天然では生じないが、ポリペプチド鎖に組み込まれ得る化合物）及び／又はアミノ酸類似体を代わりに用いることができる。また、本発明のペプチド内の１つ又はそれ以上のアミノ酸は、炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、複合、官能基化又はその他の修飾のためのリンカー等のような、化学物質の付加によって修飾することができる。好ましい態様では、ペプチドの修飾は、より安定なペプチド（例えばインビボでのより長い半減期）を導く。これらの修飾には、ペプチドの環化、Ｄ−アミノ酸の組込み等が含まれる。何れの修飾も、ペプチドの所望の生物活性を実質的に妨げるものであってはならない。
【００２３】
「ポリヌクレオチド」又は「オリゴヌクレオチド」は、ヌクレオチドの重合体を示す。前記重合体は、天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン及びデオキシシチジン）、ヌクレオシド類似体（例えば、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、ジヒドロウリジン、メチルプソイドウリジン、１−メチルアデノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン及び２−チオシチジン）、化学修飾塩基、生物学的修飾塩基（例えばメチル化塩基）、インターカレートされた塩基、修飾糖（例えば２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、２’−Ｏ−メチルシチジン、アラビノース及びヘキソース）、又は修飾リン酸基（例えばホスホロチオエート及び５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合）を含むことができる。
【００２４】
「低分子」：本明細書で使用する「低分子」という用語は、比較的低い分子量を有し、タンパク質、ポリペプチド又は核酸ではない、天然に生じるか又は人工的に作製された（例えば化学合成によって）有機化合物を示す。一般的には、低分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する。また低分子は、一般的には多数の炭素−炭素結合を有する。公知の天然に生じる低分子は、ペニシリン、エリスロマイシン、タキソール、シクロスポリン及びラパマイシンを含むが、これらに限定されるものではない。公知の合成低分子は、アンピシリン、メチシリン、スルファメトキサゾール及びスルホンアミドを含むが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
（発明を実施するための最良の形態）
小胞体（ＥＲ）ストレスは、α１−アンチトリプシン欠損症、尿素回路障害、１型糖尿病及び嚢胞性線維症を含む様々な疾患の病因において重要であることが認められている。本発明は、ＥＲストレスが、肥満、末梢インスリン抵抗性、高血糖症及び２型糖尿病のような疾患の病因に関与するという認識に由来する（Ozcan et al, "Endoplasmic Reticulum Stress Link Obesity, Insulin Action, and Type 2 Diabetes" Science 306:457-461, 2004；参照することにより本明細書に組み込まれる）。この発見に基づき、ＥＲストレスを低減する又は予防する薬剤は、肥満、インスリン抵抗性、高血糖症及び２型糖尿病の治療において有用であることが示された。
【００２６】
ＥＲストレスを低減する又は調節することが知られている薬剤は、これらの代謝性疾患を治療する上で有用である。これらの薬剤は何らかの方法でＥＲストレスを低減する又は予防するように作用することができる。ある特定の態様では、前記薬剤は、タンパク質を処理するＥＲの能力を上昇させることができる（例えば、ＥＲシャペロンの発現を増加させる、翻訳後機構のレベルを上昇させる）。その他の態様では、薬剤は、ＥＲによって処理されるタンパク質の量を減少させることができる（例えば、細胞内で産生されるタンパク質の総レベルを減少させる、ＥＲによって処理されるタンパク質のレベルを低下させる、突然変異型タンパク質のレベルを減少させる、ミスフォールディングのタンパク質のレベルを減少させる）。更なる他の薬剤は、ミスフォールディング／突然変異型タンパク質のＥＲからの放出を生じさせる。薬剤が、全ての細胞において作用するか、又はその作用は特定の細胞型（例えば分泌細胞、上皮細胞、肝細胞、脂肪細胞、内分泌細胞等）に限定されるかである。ある特定の態様では、薬剤は、脂肪細胞におけるＥＲストレスを低減する上で特に有用である。その他の態様では、薬剤は、肝細胞におけるＥＲストレスを低減するのに特に有用である。薬剤は、ＥＲストレスを低減する又は予防するために転写、翻訳、翻訳後又はタンパク質レベルに作用することができる。
【００２７】
肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高血糖症及びその他の関連する疾患を治療する又は予防するための対象への、ＥＲストレス調節剤の有効量の投与又はＥＲストレス調節剤を含む併用療法は、治療される疾患を治癒する、治療される疾患の少なくとも１つの徴候又は症状を緩和若しくは軽減する、疾患の短期的な結果を軽減する、疾患の長期的な結果を軽減する、又はその他の何らかの一時的な有益作用を対象に提供することができる。ある特定の態様では、本発明の治療は、インスリン感受性を上昇させる。その他の態様では、本発明の治療は、血糖値を低下させる。その他の態様では、本発明の治療は、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、末梢神経障害等を含む糖尿病の長期的結果を予防する。ある特定の態様では、本発明の治療は、細胞（例えば、脂肪細胞、肝細胞）におけるＥＲストレスマーカー（例えば、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態、ｅＩＦ２αのリン酸化、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベル、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのタンパク質レベル及びＪＮＫ活性）のレベルを低下させる。ある特定の態様では、本発明の治療はインスリン作用を増加させる。その他の態様では、本発明の治療はインスリン受容体シグナル伝達（例えば、インスリン受容体、ＩＲＳ−１、ＩＲＳ−２、ａｋｔのリン酸化）を上昇させる。ある特定の態様では、本発明の治療は食欲を抑制する。その他の態様では、本発明の治療は体重増加を予防する又は体重減少を促進する。ある特定の態様では、本発明の治療は２型糖尿病の発症を予防する。ある特定の態様では、本発明の治療は肥満の進行を予防する。ある特定の態様では、本発明の治療は高血糖症の発症を予防する。
【００２８】
前記薬剤は、何れのタイプの化合物でもよく、低分子、有機金属錯体、無機化合物、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質又は核酸であってよい。ある特定の態様では、薬剤は低分子である。特に有用な薬剤は、化学シャペロンとして知られ、それはタンパク質を変性に対して安定化させ、それによりタンパク質の構造と機能を保持することが知られている。化学シャペロンは、グリセロール、Ｄ２Ｏ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、グリシンベタイン（ベタイン）、グリセロールホスホコリン（ＧＰＣ）、メチルアミン及びトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）を含む。ある特定の態様では、１つ又はそれ以上の化学シャペロンの組合せで使用することができる。これらの化学シャペロンは、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ／日〜５ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは５００ｍｇ／ｋｇ／日〜３ｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。ある特定の態様では、薬剤は分割用量（例えば、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回）で投与される。その他の態様では、薬剤は１日１回用量で投与される。
【００２９】
薬剤は、１つ又はそれ以上のその他の薬剤、特に糖尿病、肥満又はインスリン抵抗性の治療において伝統的に使用される薬剤と併用できる。ＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）との併用において有用な薬剤のリストでは、付属物Ａとして含む。前記リストは、一般名、商品名及び製造者を含む。ＥＲストレス低減剤との併用において有用な薬剤の例としては、抗糖尿病薬（例えば、インスリン、血糖降下薬（例えば、スルホニル尿素、トルブタミド、メトホルミン、クロルプロパミド、アセトヘキサミド、トラザミド、グリブリドのような経口血糖降下薬））、抗肥満薬、抗異常脂質血症薬又は抗アテローム性動脈硬化症薬（例えばコレステロール低下薬（例えば、ロバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン等のようなＨＭｇ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、アスピリン））、高肥満薬（例えば、食欲抑制剤）、ビタミン、ミネラル、及び抗高血圧薬を含むが、これらに限定されるものではない。
【００３０】
ある特定の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、抗糖尿病薬と組み合わせて使用される。例示的な抗糖尿病薬は、ビグアナイト（例えばメトホルミン）、スルホニル尿素（例えば、グリメピリド、グリブリド、グリベンクラミド、グリピジド、グリクラジド）、インスリン及びその類似体（例えば、インスリンリスプロ、インスリングラルギン、エクスベラ、ＡＥＲｘインスリン糖尿病管理システム、ＡＩＲ吸入型インスリン、オーラリン、インスリンデテミル、インスリングルリシン）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γアゴニスト（例えば、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、イサグリタゾン、リボグリタゾン、Ｔ−１３１、ＭＢＸ−１０２、Ｒ−４８３、ＣＬＸ−０９２１）、デュアルＰＰＡＲアゴニスト及びＰＰＡＲパンアゴニスト（例えば、ＢＭＳ−３９８５８５、テサグリタザル、ムラグリタザル、ネーブグリタザル、ＴＡＫ−５５９、ネトグリタゾン、ＧＷ−６７７５９４、ＡＶＥ−０８４７、ＬＹ−９２９、ＯＮＯ−５１２９）、併用療法（例えばメトホルミン／グリブリド、メトホルミン／ロシグリタゾン、メトホルミン、グリピジド）、メグリチニド（例えば、レパグリニド、ナテグリニド）、α−グリコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボーズ、ミグリトール、ボグリボース）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）類似体及びアゴニスト（例えば、エキセナチド、エキセナチドＬＡＲ、リラグルチド、ＣＪＣ−１１３１、ＡＶＥ−００１０、ＢＩＭ−５１０７７、ＮＮ−２５０１、ＳＵＮ−Ｅ７００１）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（例えば、ＬＡＦ−２３７、ＭＫ−４３１（メルク社）、ＰＳＮ−９３０１（Probiodrug Prosidion）、８１５５４１（グラクソ・スミス・クライン社−田辺製薬(株)）、８２３０９３（グラクソ・スミス・クライン社）、８２５９６４（グラクソ・スミス・クライン社）、ＢＭＳ−４７７１１８）、膵リパーゼ阻害剤（例えば,オーリスタット）、ナトリウムグルコース共輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤（例えば、Ｔ−１０９５（田辺製薬(株)−Ｊ＆Ｊ社）、ＡＶＥ−２２６８、８６９６８２（グラクソ・スミス・クライン社−キッセイ薬品工業(株)）、及びアミリン類似体（例えば、プラムリンチド）を含む。
【００３１】
その他の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、抗肥満薬と組み合わせて使用される。例示的な抗肥満薬は、膵リパーゼ阻害剤（例えば、オーリスタット）、セロトニン及びノルエピネフリン再取込み阻害剤（例えば、シブトラミン）、ノルアドレナリン作動性食欲抑制剤（例えば、フェンテルミン、マジンドール）、末梢作用薬（例えばＡＴＬ−９６２（Alizyme）、ＨＭＲ−１４２６（アベンティス社）、ＧＩ−１８１７７１（グラクソ・スミス・クライン社））、中枢作用薬（例えば,組換えヒト毛様体神経栄養因子、リモナバン（ＳＲ−１４１７１６）（Sanofi-Synthelabo）、ＢＶＴ−９３３（グラクソ・スミス・クライン社／Biovitrum）、ブプロピオンＳＲ（グラクソ・スミス・クライン社）、Ｐ−５７（Phytopharm））、熱発生剤（例えばＴＡＫ−６７７（ＡＪ−９６７７）（大日本製薬(株)／武田薬品(株)））、カンナビノイドＣＢｌアンタゴニスト（例えば,アコンプリア、ＳＬＶ３１９）、コレシストキニン（ＣＣＫ）アゴニスト（例えば,ＧＩ１８１７７１（ＧＳＫ））、  脂質代謝調節剤（例えば、ＡＯＤ９６０４（Monash University/Metabolic Pharmaceuticals）、グルカゴン様ペプチド−１アゴニスト（例えばＡＣ１３７（Amylin））、レプチンアゴニスト（例えば、第二世代レプチン（Amgen）、β−３アドレナリン作動性アゴニスト（例えば、ＳＲ５８６１１（Sanofi-アベンティス社）、ＣＰ３３１６８４（ファイザー社）、ＬＹ３７７６０４（Eli Lilly）、ｎ５９８４（日清キョーリン製薬(株)））、ペプチドホルモン（例えば、ペプチドＹＹ［３−３６］（Nastech））、ＣＮＳ調節剤（例えば、Ｓ２３６７（塩野義製薬(株)））、神経栄養因子（例えば、ペグアクソキン）、及び５ＨＴ２Ｃセロトニン受容体アゴニスト（例えば、ＡＰＤ３５６）を含む。その他の抗肥満薬は、塩酸メタンフェタミン、１４２６（Sanofi-アベンティス社）、１９５４（Sanofi-アベンティス社）、ｃ−２６２４（メルク社）、ｃ−５０９３（メルク社）、及びＴ７１（Tularik）を含む。
【００３２】
更なるその他の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、抗異常脂質血症薬又は抗アテローム性動脈硬化症薬と組み合わせて使用される。例示的な抗異常脂質血症薬又は抗アテローム性動脈硬化症薬は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（例えば、アトルバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン）、フィブレート（例えば、シプロフィブレート、ベザフィブレート、クロフィブレート、フェノフィブレート、ゲムフィブロジル）、胆汁酸抑制剤（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）、ナイアシン（即効性及び徐放性）、抗血小板薬（例えば、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジン）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えば、ラミプリル、エナラプリル）、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト（例えば、ロサルタンカリウム）、アシル−ＣｏＡコレステロールアセチルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤（例えば、アバシミブ、エフルシミブ、ＣＳ−５０５（（三共(株)及び京都薬品工業(株)）、ＳＭＰ−７９７（住友製薬(株)））、コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ、パマクエシド）、ニコチン酸誘導体（例えば、ニコチン酸）、コレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤（例えば、ＣＰ−５２９４１４（ファイザー社）、ＪＴＴ−７０５（日本たばこ産業(株)）、ＣＥＴｉ−１、トルセトラピブ）、ミクロゾームトリグリセリド転移タンパク質（ＭＴＴＰ）阻害剤（例えば,インプリタピド、Ｒ−１０３７５７、ＣＰ−３４６０８６（ファイザー社））、他のコレステロール調節剤（例えば、ＮＯ−１８８６（大塚製薬(株)／TAP Pharmaceutical）、ＣＩ−１０２７（ファイザー社）、ＷＡＹ−１３５４３３（Wyeth-Ayerst））、胆汁酸調節剤（例えば、ＧＴｌ０２−２７９（GelTex／三共(株)）、ＨＢＳ−１０７（久光製薬(株)／万有製薬(株)）、ＢＴＧ−５１１（British Technology Group）、ＢＡＲＩ−１４５３（アベンティス社）、Ｓ−８９２１（塩野義製薬(株)）、ＳＤ−５６１３（ファイザー社）、ＡＺＤ−７８０６（アストラ・ゼネカ社））、ペルオキシゾーム増殖活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト（例えば、テサグリタザル（ＡＺ−２４２）（アストラ・ゼネカ社）、ネトグリタゾン（ＭＣＣ−５５５）（三菱ウェルファーマ社／Johnson & Johnson）、ＧＷ−４０９５４４（Ligand Pharmaceuticals/グラクソ・スミス・クライン社）、ＧＷ−５０１５１６（Ligand Pharmaceuticals/グラクソ・スミス・クライン社）、ＬＹ−９２９（Ligand Pharmaceuticals and Eli Lilly）、ＬＹ−４６５６０８（Ligand Pharmaceuticals and Eli Lilly）、ＬＹ−５１８６７４（Ligand Pharmaceuticals and Eli Lilly）、ＭＫ−７６７（メルク社及び杏林製薬(株)））、遺伝子治療（例えば、ＡｄＧＶＶＥＧＦ１２１．１０（Gen Vec）、ＡｐｏＡｌ（UCB Pharma／Groupe Fournier）、ＥＧ−００４（Trinam）（Ark Therapeutics）、ＡＴＰ−結合輸送体−Ａｌ（ＡＢＣＡｌ）（CV Therapeutics/Incyte, アベンティス社, Xenon））、複合血管保護薬（例えば、ＡＧＩ−１０６７（Atherogenics））、ＢＯ−６５３（中外製薬(株)）、糖タンパク質Ｉｌｂ／ＩＩＩａ阻害剤（例えばロキシフィバン（Bristol-Myers Squibb）、ガントフィバン（山之内製薬(株）、クロマフィバン（Millennium Pharmaceuticals）、アスピリン及びその類似体（例えばアサカード、徐放性アスピリン、パミコグレル）、併用療法（例えば、ナイアシン／ロバスタチン、アムロジピン／アトルバスタチン、シンバスタチン／エゼチミブ）、ＩＢＡＴ阻害剤（例えば、Ｓ−８９２１（塩野義製薬(株））、スクワレンシンターゼ阻害剤（例えば、ＢＭＳ−１８８４９４Ｉ（Bristol-Myers Squibb）、ＣＰ−２１０１７２（ファイザー社）、ＣＰ−２９５６９７（ファイザー社）、ＣＰ−２９４８３８（ファイザー社）、ＴＡＫ−４７５（武田薬品工業(株)））、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−Ｉ阻害剤（例えば、ＲＳ−５０４３９３（Roche Bioscience）、その他のＭＣＰ−Ｉ阻害剤（グラクソ・スミス・クライン社、帝人(株)及びBristol-Myers Squibb））、肝Ｘ受容体アゴニスト（例えば、ＧＷ−３９６５（グラクソ・スミス・クライン社）、ＴＵ−０９０１３１７（Tularik））、および他の新しいアプローチ（例えばＭＢＸ−１０２（Metabolex）、ＮＯ−１８８６（大塚製薬(株)）、ゲムカベン（ファイザー社））を含む。
【００３３】
更なるその他の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、抗高血圧薬と組み合わせて使用される。例示的な抗高血圧薬は、利尿薬（例えば、クロルタリドン、メトラゾン、インダパミド、ブメタニド、エタクリン酸、フロセミド、トルセミド、塩酸アミロリド、スピロノラクトン、トリアムテレン）、α−遮断薬（例えば、メシル酸ドキサゾシン、塩酸プラゾシン、塩酸テラゾシン）、β−遮断薬（例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、フマル酸ビソプロロール、塩酸カルテオロール、酒石酸メトプロロール、コハク酸メトプロロール、ナドロール、硫酸ペンブトロール、ピンドロール、塩酸プロパノロール、マレイン酸チモロール、カルベジロール）、Ｃａ＋２チャネル遮断薬（例えば、ベシル酸アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、塩酸ジルチアゼム、塩酸ベラパミル、アゼルニジピン、プラニジピン、段階的ジルチアゼム製剤、（ｓ）−アムロジピン、クレビジピン）、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えば、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、フォシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、塩酸キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル）、アンジオテンシンＩＩ（ＡＴ−ＩＩ）アンタゴニスト（例えば、ロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、カンデルサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン、オルメサルタン、ＹＭ−３５８（山之内製薬(株)））、バソペプチダーゼ阻害剤（例えば、オマパトリラト、ゲモパトリラト、ファシドトリル、サムパトリラト、ＡＶＥ７６８８（アベンティス社）、Ｍｌ００２４０（アベンティス社）、Ｚ１３７５２Ａ（Zambon／ＧＳＫ）、７９６４０６（Zambon／ＧＳＫ））、デュアル中性エンドペプチダーゼ及びエンドセリン変換酵素（ＮＥＰ／ＥＣＥ）阻害剤（例えば、ＳＬＶ３０６（Solvay）、ＮＥＰ阻害剤（例えば、エカドトリル）、アルドステロンアンタゴニスト（例えば、エプレレノン）、レニン阻害剤（例えば、アリスキレン（Novartis）、ＳＰＰ５００（Roche/Speedel）、ＳＰＰ６００（Speedel）、ＳＰＰ８００（Locus/Speedel））、アンギオテンシンワクチン（例えば、ＰＭＤ−３１１７（Protherics））、ＡＣＥ／ＮＥＰ阻害剤（例えば、ＡＶＥ−７６８８（アベンティス社）、ＧＷ−６６０５１１（Zambon SpA））、Ｎａ＋／Ｋ＋ＡＴＰアーゼ調節剤（例えば、ＰＳＴ−２２３８（Prassis-Sigma-Tau）、エンドセリンアンタゴニスト（例えば、ＰＤ−１５６７０７（ファイザー社））、血管拡張薬（例えば、ＮＣＸ−４０１６（NicOx）、  ＬＰ−８０５（Pola/Wyeth））、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、ＢＤＮＰ（Mayo Foundation））、アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢｓ）（例えば、プラトサルタン）、ＡＣＥ架橋切断剤（例えば、塩化アラゲブリウム）、エンドセリン受容体アゴニスト（例えば、テゾセンタン（Genentech）、アムブリセンタン（Myogen）、ＢＭＳ１９３８８４（ＢＭＳ）、シタクスセンタン（Encysive Pharmaceuticals）、ＳＰＰ３０１（Roche/Speedel）、ダルセンタン（Myogen/Abbott）、Ｊ１０４１３２（万有製薬(株)／メルク社）、ＴＢＣ３７１１（Encysive Pharmaceuticals）、ＳＢ２３４５５１（ＧＳＫ／塩野義製薬(株））、併用療法（例えば、塩酸ベナゼプリル／ヒドロクロロチアジド、カプトプリル／ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル／ヒドロクロロチアジド、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、ロサルタン／ヒドロクロロチアジド、アテノロール／クロルタリドン、フマル酸ビソプロロール／ヒドロクロロチアジド、酒石酸メトプロロール／ヒドロクロロチアジド、アムロジピンベシラート／塩酸ベナゼプリル、フェロジピン／マレイン酸エナラプリル、塩酸ベラパミル／トランドラプリル、レルカニジピン及びエナラプリル、オルメサルタン／ヒドロクロロチアジド、エプロサルタン／ヒドロクロロチアジド、アムロジピンベシラート／アトルバスタチン、ニトレンジピン／エナラプリル）、及びＭＣ４２３２（Unversity of Manitoba／Medicure）を含む。
【００３４】
ある特定の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、ビタミン、ミネラル又は他の栄養補助食品と組み合わせて使用される。
【００３５】
ある特定の態様では、ＥＲストレス調節剤（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、最適以下の用量（例えば、二次薬剤の不在下で投与したとき検出可能な治療的恩恵を示さない量）で投与される。そのような場合、別の薬剤と組み合わせたそのような最適以下の用量のＥＲストレス調節剤の投与は、相乗作用を生じさせる。ＥＲストレス調節剤及びその他の薬剤は、一緒に作用して、治療的利点を生じさせる。その他の態様では、その他の薬剤（すなわち、ＥＲストレス調節剤ではない）は、最適以下の用量で投与される。ＥＲストレス調節剤と組み合わせると、その併用は治療効果を示す。更なるその他の態様では、ＥＲストレス調節剤とその他の薬剤の両方が最適以下の用量で投与され、併用したとき治療効果を生じる。その他の薬剤の用量は、当分野で標準的に使用される用量以下であり得る。
【００３６】
抗糖尿病薬、抗肥満薬、抗異常脂質血症薬又は抗アテローム性動脈硬化症薬、抗肥満薬、ビタミン、ミネラル及び抗高血圧薬（上記で列挙した）についての用量、投与経路、製剤等は、当該技術分野において公知である。治療医師又は医療専門家は、そのような情報に関して「Physician′s Desk Reference (59th Ed., 2005)」又は「Mosby′s Drug Consult and Interactions (2005)」などの参考文献を参照できる。治療医師が、特定患者についての用量投与計画を決定するために自らの専門的判断を行使することは了解される。
【００３７】
本発明は、ＥＲストレス様式又はその他の治療様式単独の投与よりも良好な治療プロフィールを提供する、２型糖尿病、インスリン抵抗性、肥満及びその他の関連する疾患を治療するシステム及び方法を提供する。ある特定の態様では、治療効果がより大きいと考えられる。ある特定の態様では、併用は相乗作用を有する。その他の態様では、併用は追加の効果を有する。併用治療の投与計画の投与は、ある特定の望ましくない又は有害な副作用を低減又は更には回避できる。ある特定の態様では、併用における薬剤は、より低い用量で投与でき、より少ない頻度で投与でき、又はより少ない頻度とより低い用量で投与できる。それ故、上記の利点を有する併用療法は、患者のコンプライアンスを高め、治療を改善し、及び／又は望ましくない又は有害な副作用を低減できる。
【００３８】
ある特定の態様では、化学シャペロン（例えば、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はそれらの誘導体）は、血糖降下薬と組み合わせて使用される。例えばインスリン、グルカゴン、ビグアニド血糖降下薬（例えば、メトホルミン、フェンホルミン又はブホルミン）、チアゾリジンジオン血糖降下薬（例えば、シグリタゾン、ピオグリタゾン）、スルホニル尿素血糖降下薬（例えば、トルブタミド、クロルプロパミド、アセトヘキサミド、トラザミド、グリブリド、グリピジド又はグリクラジド）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）、又はジアゾキシドは、グリセロール、Ｄ２Ｏ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、グリシンベタイン（ベタイン）、グリセロールホスホコリン（ＧＰＣ）、メチルアミン又はトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）と組み合わせてもよい。ある特定の例示的併用療法は、インスリンとＰＢＡ、インスリンとＴＵＤＣＡ、インスリンとベタイン、インスリンとＧＰＣ、インスリンとＴＭＡＯ、メトホルミンとＰＢＡ、メトホルミンとＴＵＤＣＡ、メトホルミンとベタイン、メトホルミンとＧＰＣ、メトホルミンとＴＭＡＯ、チアゾリジンジオン血糖降下薬とＰＢＡ、チアゾリジンジオン血糖降下薬とＴＵＤＣＡ、チアゾリジンジオン血糖降下薬とベタイン、チアゾリジンジオン血糖降下薬とＧＰＣ、及びチアゾリジンジオン血糖降下薬とＴＭＡＯを含む。ある特定の態様では、肥満、インスリン抵抗性、高血糖症又は２型糖尿病を治療する又は予防するために使用される組合せは、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）とメトホルミンである。併用療法に関してそれらが化学シャペロンの組合せであるか、ＥＲストレス調節剤の組合せであるか、又は化学シャペロン／ＥＲストレス調節剤と血糖降下薬のようなその他の薬剤の組合せであるかに関わらず、薬剤は同時に又は連続的に送達されてよい。ある特定の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤は、その他の薬剤の前に投与される。その他の態様では、化学シャペロン又はＥＲストレス調節剤は、その他の薬剤の後に投与される。
【００３９】
ある特定の態様では、ＥＲストレスを低減することが示された低分子薬剤は、４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）及びトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）を含む。ＰＢＡは、α１−アンチトリプシン欠損症、尿素回路障害及び嚢胞性線維症を治療するために同時に使用される。ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ又はＴＭＡＯの、誘導体、塩（例えば、ナトリウム、マグネシウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム等）、プロドラッグ、エステル、異性体及び立体異性体も、肥満、高血糖症、２型糖尿病及びインスリン抵抗性を治療するために使用できる。特定の理論に縛られるのは望むところではないが、これらの化合物は、ＥＲが、ＥＲによって処理されるミスフォールディング及び／又は突然変異型タンパク質をよりうまく操作できるように作用すると思われる。
【００４０】
ある特定の態様では、本発明において有用な４−フェニル酪酸の誘導体は、式：
【００４１】
【化００７】
2008513465.tif 000006
【００４２】
（式中、
ｎは、１又は２であり；
Ｒ０は、アリール、ヘテロアリール又はフェノキシであり、前記アリール、ヘテロアリール及びフェノキシは、置換されていないか、又はそれぞれ独立して、１個又はそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ又は低級アルキル（Ｃ１−Ｃ６）基で置換されており；
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級アルキル又はハロゲンであり；及び
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルコキシ又はハロゲンである）
で表される化合物であるか、又は医薬的に許容され得るその塩若しくはその混合物である。
【００４３】
ある特定の態様では、Ｒ０は、置換又は非置換のフェニル環である。ある特定の態様では、Ｒ０は、非置換のフェニル環である。その他の態様では、Ｒ０は、一置換フェニル環である。更なるその他の態様では、Ｒ０は、ニ置換フェニル環である。更なるその他の態様では、Ｒ０は、三置換フェニル環である。ある特定の態様では、Ｒ０は、１、２、３又は４個のハロゲン原子で置換されたフェニル環である。ある特定の態様では、Ｒ０は、置換又は非置換のヘテロアリール環である。ある特定の態様では、Ｒ０は、ナフチル環である。ある特定の態様では、Ｒ０は、５又は６員、好ましくは６員である。ある特定の態様では、Ｒ１及びＲ２は、どちらも水素である。ある特定の態様では、ｎは１である。その他の態様では、ｎは２である。ある特定の態様では、Ｒ３及びＲ４は全て水素である。その他の態様では、少なくとも１個のＲ３又はＲ４は、水素である。ある特定の態様では、化合物は塩形態（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等）で使用される。本発明において有用なその他の誘導体は、参照することにより本明細書に組み込まれている米国特許第５，７１０，１７８号に述べられている。４−フェニル酪酸又はその誘導体は、市販の供給元からの入手、又は全合成又は半合成によって製造できる。
【００４４】
ある特定の態様では、本発明において有用なＴＵＤＣＡの誘導体は、式：
【００４５】
【化００８】
2008513465.tif 000007
【００４６】
（式中、
Ｒは、−Ｈ又はＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１は、−ＣＨ２−ＳＯ３Ｒ３であり、そしてＲ２は、−Ｈであるか；又はＲ１は、−ＣＯＯＨであり、そしてＲ２は、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＣＨ３又は−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＯＨであり；及び
Ｒ３は、−Ｈ又は塩基性アミノ酸残基である）
で表される化合物であるか、又は医薬的に許容されるその塩である。
【００４７】
ある特定の態様では、誘導体の立体化学構造は、以下の構造：
【００４８】
【化００９】
2008513465.tif 000008
【００４９】
に表される。
ある特定の態様では、ＲはＨである。その他の態様では、Ｒは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル又はｔｅｒｔ−ブチルであり、好ましくはメチルである。ある特定の態様では、Ｒ１又はＲ２は水素である。ある特定の態様では、Ｒ１は、−ＣＨ２−ＳＯ３Ｒ３であり、そしてＲ２は、−Ｈである。その他の態様では、Ｒ１は、−ＣＯＯＨであり、そしてＲ２は、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＣＨ３又は−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＯＨである。ある特定の態様では、Ｒ３は水素である。ある特定の態様では、Ｒ３は、リシン、アルギニン、オルニチン又はヒスチジンである。ＴＵＤＣＡ及びウルソデオキシコール酸の誘導体は、市販の供給元から入手するか、全合成から調製するか、又は半合成によって入手することができる。ある特定の態様では、誘導体は、半合成により、例えば、米国特許第５，５５０，４２１号及び同第４，８６５，７６５号（各々が、参照することにより本明細書に組み込まれる）に述べられているように調製される。
【００５０】
ある特定の態様では、本発明において有用なトリメチルアミンＮ−オキシドの誘導体は、式：
【００５１】
【化０１０】
2008513465.tif 000009
【００５２】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン又は低級Ｃ１−Ｃ６アルキルである）
で表される化合物であるか又は医薬的に許容され得るその塩若しくはその混合物である。  ある特定の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同じである。その他の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１個が異なる。更なるその他の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の全てが異なる。ある特定の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素又は低級Ｃ１−Ｃ６アルキルである。更なるその他の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して低級Ｃ１−Ｃ６アルキルである。更なるその他の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、メチル、エチル又はプロピルである。ある特定の態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はエチルである。ＴＭＡＯの誘導体は、市販の供給元から入手、又は全合成又は半合成によって製造することができる。
【００５３】
その他の態様では、薬剤は、核酸、例えば、ｓｉＲＮＡのような阻害性ＲＮＡである。その他の態様では、薬剤は、タンパク質、例えば、抗体又は抗体フラグメントである。更なるその他の態様では、薬剤はペプチドである。
【００５４】
肥満、末梢インスリン抵抗性、高血糖症又は２型糖尿病に罹患している動物を治療する場合は、治療有効量の薬剤を、所望の生物学的結果を達成するために、何れかの経路で対象に投与する。経口、非経口、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣、経皮、腹腔内及びクモ膜下腔内を含む何れかの投与経路を用いることができる。ある特定の態様では、薬剤を非経口で投与する。その他の態様では、薬剤を経口で投与する。
【００５５】
ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ又はＴＭＡＯを使用する場合は、好ましくは薬剤を経口で投与する；しかしながら、上記に列挙した何れの投与経路も使用できる。ある特定の態様では、ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ又はＴＭＡＯを非経口で投与する。ＰＢＡは、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜７５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。ＴＵＤＣＡは、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５ｇ／ｋｇ／日、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜７５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。ＴＭＡＯは、１０ｇ／ｋｇ／日〜０．１ｇ／ｋｇ／日、好ましくは５ｇ／ｋｇ／日〜０．５ｇ／ｋｇ／日、より好ましくは２．５ｇ／ｋｇ／日〜５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で投与される。ある特定の態様では、薬剤は分割用量（例えば１日２回、１日３回、１日４回、１日５回）で投与される。その他の態様では、薬剤は１日１回投与で投与される。
【００５６】
（医薬組成物）
本発明の組成物及び本発明に従った使用のための本発明の医薬組成物は、医薬的に許容される賦形剤又は担体を含んでもよい。本明細書で使用する、「医薬的に許容され得る担体」という用語は、非毒性で不活性の固体、半固体若しくは液体充填剤、希釈剤、被包材料又は製剤助剤の何れかのタイプを意味する。医薬的に許容される担体として使用できる材料の例としては、ラクトース、グルコース及びスクロースのような糖類；トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンのようなデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースのようなセルロース及びその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；滑石；ココアバター及び坐薬ろうのような賦形剤；落花生油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油のような油；プロピレングリコールのようなグリコール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのようなエステル；寒天；トゥイーン（Tween）８０のような界面活性剤；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンガー液；エチルアルコール；人工脳脊髄液（ＣＳＦ）及びリン酸緩衝液、更にラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムのようなその他の非毒性の適合性潤滑剤、更に着色料、放出剤、被覆剤、甘味料、香味料及び香料であり、防腐剤及び抗酸化剤も、製剤者の判断に従って、組成物中に存在させることができる。本発明の医薬組成物は、経口、直腸経路、非経口、脳槽内、膣内、鼻内、腹腔内、局所的（粉末、クリーム、軟膏又は点滴剤として）、経皮的、皮下的、口腔内（bucally）に、又は経口又は鼻噴霧剤として、ヒト及び／又は動物に投与することができる。
【００５７】
注射用製剤、例えば無菌注射用水性又は油性懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して公知の技術に従って製剤できる。無菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口で許容される希釈剤又は溶媒中の無菌注射用溶液、懸濁液又は乳剤であってもよく、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液である。使用できる許容される賦形剤及び溶媒の中には、水、リンガー液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張食塩水が含まれる。加えて、無菌の不揮発性油が、溶媒又は懸濁媒質として慣例的に使用される。この目的のために、合成モノ又はジグリセリドを含む不揮発性油の何れのブランドも使用できる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が注射用製剤において使用される。
【００５８】
注射用製剤は、例えば細菌除去フィルターでのろ過によって、又は使用前に滅菌水又はその他の滅菌注射用媒質に溶解又は分散することができる無菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。
【００５９】
本発明の医薬組成物は、糖尿病、インスリン抵抗性又は肥満を治療するために使用されるその他の薬剤と共にキットで提供されてもよい。キットは、投薬情報、安全性情報、副作用のリスト、薬剤の化学式、作用機序等を含んでいてもよい指示書を、治療医師及び／又は患者のために含んでいてもよい。ある特定の態様では、キットは、医薬組成物を投与するための材料を含んでいてもよい。例えば、キットは、注射用製剤の投与のための注射器、針、アルコール綿棒等を含んでいてもよい。２つ又はそれ以上の薬剤が、キット中で提供されるある特定の態様では、医薬有効成分は別々に又は一緒に製剤されてもよい。例えばキットは、ＥＲストレス調節剤（ＰＢＡ、ＴＵＤＣＡ、ＴＭＡＯ又はその誘導体）を含む第一容器と、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高血糖症、肥満又は関連疾患を治療するときに使用される第二薬剤（例えば上記のような抗糖尿病薬、抗肥満薬、抗異常脂質血症薬又は抗アテローム性動脈硬化症薬、抗肥満薬、ビタミン、ミネラル及び抗高血圧薬）を含む第二容器を含んでいてもよい。ある特定の態様では、医薬有効成分は別々に製剤される。その他の態様では、医薬有効成分は一緒に製剤される。
【００６０】
（ＥＲストレス低減剤のスクリーニング）
本明細書で示したように、ＥＲストレスは、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性及び高血糖症を含む様々な疾患の治療のための標的として同定された。ＥＲストレスのマーカーも同定されている。ＥＲストレスを低減する又は予防する新しい薬剤の必要性に鑑みて、ＥＲストレス調節剤を同定する又はスクリーニングする方法が求められている。
【００６１】
ある特定の態様では、インビボ又はインビトロで、好ましくはインビボでＥＲストレスを低減する又は調節する化合物を同定するために、化合物又は化合物の集合を試験する。これらの化合物は、低分子、タンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド、炭水化物、脂質等を含む化合物の何れのタイプでもよい。ある特定の態様では、本発明の方法を用いて化合物の集合を、スクリーニングする。これらの集合は、製薬会社からの化合物の歴史的ライブラリーであり得る。集合はまた化学物質のコンビナトリアルライブラリーであってもよい。集合は、少なくとも５、１０、５０、１００、５００、１０００、１００００、１０００００又は１００００００の化合物を含んでいてもよい。
【００６２】
化合物を細胞と接触させる。細胞は、小胞体を有する何れのタイプの細胞でもよい。細胞は、動物細胞、植物細胞又は真菌細胞であってもよい。ある特定の態様では、哺乳動物細胞、特にヒト細胞が好ましい。細胞は何れの器官系にも由来してもよい。ある特定の態様では、脂肪組織又は肝組織からの細胞が好ましい。
【００６３】
ＥＲストレスを低減する薬剤をスクリーニングする場合、テスト化合物を、既にＥＲストレスを経験している細胞と接触させる。細胞におけるＥＲストレスは、当該技術分野において公知の何れかの手法によって引き起こすことができる。例えば、ＥＲストレスは、細胞における遺伝子変化（例えば、ＸＢＰ−１突然変異）又はＥＲストレスを引き起こすことが公知の化学物質（例えば、ツニカマイシン、タプシガルギン）での処置によるものであってよい。化合物がＥＲストレスを低減するかどうかを判定するために、テスト化合物の添加前と添加後にＥＲストレスマーカーのレベルを試験する。本発明の方法において試験できるＥＲストレスのマーカーは、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態（例えば、Ｔｈｒ９８０）、ｅＩＦ２αのリン酸化状況（例えば、Ｓｅｒ５１）、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡ及び／又はタンパク質レベル及びＪＮＫ活性を含む。ある特定の態様では、１個のＥＲマーカーを測定する。その他の態様では、２、３、４、５、６又はそれ以上のＥＲストレスマーカーの組合せのレベルを測定する。ＥＲストレスマーカーのレベルを少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％低下させるテスト化合物は、臨床でのＥＲストレス低減剤の評価のために有用とみなされる。当業者に認識されるように、テスト化合物は、様々な濃度及び様々な条件下で（例えば、様々な細胞型、ＥＲストレスの様々な原因（遺伝性対化学的）、様々な製剤）、試験できる。
【００６４】
別な態様では、本発明は、ＥＲストレスを予防する化合物を同定する方法を提供する。ＥＲストレスを予防する化合物をスクリーニングする場合、細胞は、テスト化合物と接触する前にＥＲストレスを経験していない。細胞をテスト化合物と接触させた後、ＥＲストレスを引き起こすことが公知の薬剤を細胞に添加し、その後、前記化合物がＥＲストレスを予防できるかどうかを判定するために少なくとも１つのＥＲマーカーのレベルを測定する。当業者に認識されるように、テスト化合物は様々な濃度及び様々な条件下で試験できる。
【００６５】
本発明の方法によって同定された薬剤は、それらが肥満、２型糖尿病、高血糖症及びインスリン抵抗性を治療するために臨床で製剤し、使用できるように、毒性、薬物動態特性、インビボでの使用等に関して、さらに試験できる。同定された薬剤はまた、ＥＲストレスに関連するその他の疾患の治療においても使用できる。
【００６６】
（ＥＲストレスに関連する疾患の診断）
様々なＥＲストレスマーカーの同定は、ＥＲストレスに関連する疾患の診断及びＥＲストレスに関連する疾患を発症するリスクのある対象のスクリーニングを可能にする。肥満、高血糖症、２型糖尿病及びインスリン抵抗性は、全てＥＲストレスに関連することが示されている。従って、対象においてＥＲストレスマーカーのレベルを測定することは、患者がこれらの疾患の何れか関してリスクがあるかどうかを判定することを可能にする。ＥＲストレスマーカーのレベルの測定は、ＥＲストレスに関連する何らかの疾患（例えば、嚢胞性線維症、アルツハイマー病）を発症するリスクを判定するために使用できる。
【００６７】
同定されているＥＲストレスマーカーは、スプライシングされた形態のＸＢＰ−１、ＰＥＲＫのリン酸化状態、ｅＩＦ２αのリン酸化状態、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベル、ＧＲＰ７８／ＢＩＰのタンパク質レベル及びＪＮＫ活性を含む。これらのＥＲストレスマーカーは、ｍＲＮＡレベル、タンパク質レベル、タンパク質活性又はリン酸化状態を測定するため、当該技術分野で公知の何れかの手法を用いて測定できる。ＥＲストレスマーカーを測定するための例示的な手法は、ウエスタンブロット分析、ノーザンブロット分析、免疫アッセイ、定量的ＰＣＲ分析及び酵素活性アッセイ（これらの手法のより詳細な説明については、「Ausubel et al. Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1999); Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch, and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989」を参照されたい、尚、これらの各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【００６８】
対象がＥＲストレスに関連する疾患についてのリスクがあるかどうかを判定する場合、１、２、３、４、５又は６個のＥＲストレスマーカーのレベルを測定できる。ある特定の態様では、１個だけのＥＲストレスマーカーのレベルを測定する。その他の態様では、少なくとも２個のＥＲストレスマーカーのレベルを測定する。更なるその他の態様では、少なくとも３個のＥＲストレスマーカーのレベルを測定する。
【００６９】
一般的に、ＥＲストレスマーカーのレベルが、正常な対照と比較して高いと測定される場合、テストされた対象は、インスリン抵抗性、肥満、高血糖症又は２型糖尿病のリスクがあるとみなされる。同定された対象は、その後、さらなるテストに供されるか、治療が開始されるか、又は対象はインスリン抵抗性、肥満、高血糖症又は２型糖尿病に関連する症状及び徴候の将来の発症に関して観察される。この次の行動方針は、一般的に対象と相談して対象の医療提供者によって決定される。
【００７０】
ＥＲストレスマーカーのレベルは、対象の身体内の何れの細胞に関しても測定できる。好ましくは、細胞はテストする状態に関係する。例えば、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性又は高血糖症のような疾患に関してテストするときは、肝細胞又は脂肪細胞を使用できる。ある特定の態様では、肝細胞を使用する。その他の態様では、細胞は脂肪細胞である。細胞は、肝細胞の場合は肝生検によって対象から入手できる。脂肪細胞は、対象の生検によって入手できる。
【００７１】
本発明はまた、対象において様々なＥＲストレスマーカーのレベルを測定するためのキット及びシステムを提供する。キットは、プライマー、ハイブリダイゼーションプローブ、ポリヌクレオチド、抗体、抗体フラグメント、ゲル、緩衝液、酵素基質、ＡＴＰ又は他のヌクレオチド、対象からの細胞又は生検を得るためのツール、指示書、ソフトウエア等を含んでいてもよい。診断法を実施するためのこれらの材料は、医師、科学者、病理学者、看護士、検査技師又は医療専門家による使用のために好適に包装することができる。
【００７２】
本発明の前述の態様及びその他の態様は、以下の実施例を考慮すれば更に正当に理解されるであろう、尚、実施例は、本発明のある特定の態様を例示することを意図しており、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定することを意図しているものではない。
（実施例）
【実施例１】
【００７３】
肥満、インスリン作用及び２型糖尿病に関連する小胞体ストレス
（結果）
肥満におけるＥＲストレスの誘導
ＥＲストレスが肥満において上昇するかどうかを調べるために、本発明者らは、肥満マウスの食餌性（高脂肪食誘発性）及び遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）モデルにおけるＥＲストレスの幾つかの分子指標の発現パターンを検討した。膵臓ＥＲキナーゼ又はＰＫＲ様キナーゼ（ＰＥＲＫ）は、ＥＲストレスに応答して翻訳開始因子２のαサブユニット（ｅＩＦ２α）をリン酸化するＥＲ膜貫通プロテインキナーゼである（Shi et al, MoI. Cell Biol. 18, 7499(1998); Harding et al., Nature 397, 271 (Jan 21, 1999)；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。ＰＥＲＫ及びｅＩＦ２αのリン酸化状態は、それ故、ＥＲストレスの存在の鍵となる指標である。本発明者らは、リン特異的抗体を用いてＰＥＲＫ（Ｔｈｒ９８０）及びｅＩＦ２α（Ｓｅｒ５１）のリン酸化状態を測定した。これらの実験は、肥満マウスの肝抽出物におけるＰＥＲＫ及びｅＩＦ２αのリン酸化上昇を、やせ型対照と比較して明らかにした（図１Ａ及び１Ｂ）。ＥＲストレスはまた、ＪＮＫ活性化を導く。以前の所見（J. Hirosumi et al., Nature 420, 333 (2002)；参照することにより本明細書に組み込まれる）と一致して、ｃ−Ｊｕｎリン酸化によって示される総ＪＮＫ活性もまた、肥満マウスでは劇的に高かった（図１Ａ及び１Ｂ）。
【００７４】
７８ｋＤａのグルコース調節／結合Ｉｇタンパク質（ＧＲＰ８９／ＢＩＰ）は、ＥＲストレス時にその発現が上昇するＥＲシャペロンである。ＧＲＰ７８／ＢＩＰのｍＲＮＡレベルは、対応するやせ型対照と比較して肥満マウスの肝組織において高かった（図１Ｃ及び１Ｄ）。ＧＲＰ７８発現はグルコースに対して応答性があるので、本発明者らは、この上方調節が単にグルコースレベルの上昇によるものであるのかどうかをテストした。高レベルのグルコースによる培養ラットＦａｏ肝細胞の処置は、ＧＲＰ７８発現の低下を生じさせた（図９Ａ）。同様に高血糖症のマウスモデルではＧＲＰ７８レベルは上昇しておらず（図９Ｂ）、肥満における調節が血糖だけに関連する可能性は低いことを示した。
【００７５】
本発明者らはまた、肥満におけるＥＲストレスの指標に関して、代謝ホメオスタシスのために重要な部位である脂肪及び筋組織をテストした。肝臓と同様に、ＰＥＲＫリン酸化、ＪＮＫ活性及びＧＲＰ７８発現は全て、肥満動物の脂肪組織ではやせ型対照と比較して有意に高かった（図１０Ａ〜１０Ｃ）。しかし、肥満動物の筋組織ではＥＲストレスについての指標は明白ではなかった（データは示していない）。合わせて考慮すると、これらの結果は、肥満が主として肝及び脂肪組織においてＥＲストレスの誘導と関連することを示している。
【００７６】
ＥＲストレスの肝細胞におけるインスリン作用阻害
ＥＲストレスがインスリン作用に妨げるかどうかを検討するため、本発明者らは、ＥＲストレスを誘導するために一般的に使用される薬剤、ツニカマシンとタプシガルギンでＦａｏ肝細胞を前処置した。ツニカマイシンは、ＩＲＳ−１のインスリン刺激チロシンリン酸化を有意に低下させ（図１１Ａ及び１１Ｂ）、またＩＲＳ−１の分子量の上昇を生じさせた（図１１Ａ）。ＩＲＳ−１はインスリン受容体チロシンキナーゼについての基質であり、特にＪＮＫによって媒介されるＩＲＳ−１のセリンリン酸化は、インスリン受容体シグナル伝達を低下させる（Hirosumi et al., Nature 420:333 (2002)；参照することにより本明細書に組み込まれる）。ツニカマイシンによるＦａｏ細胞の前処置は、ＩＲＳ−１のセリンリン酸化を有意に上昇させた（図１１Ａ及び１１Ｂ）。ツニカマイシン前処置はまた、インスリン受容体シグナル伝達経路におけるより末端の事象である、インスリン誘導のＡｋｔリン酸化も抑制した（図１１Ａ及び１１Ｂ）。タプシガルギンによる処置後も同様の結果が得られ（図１２Ａ）、これは細胞カルシウムレベルの変化とは無関係であった（図１２Ｂ）。
【００７７】
本発明者らは次に、ＥＲストレスによるＩＲＳ−１セリンリン酸化及びインスリン刺激のＩＲＳ−１チロシンリン酸化の阻害におけるＪＮＫの役割を検討した（図１１Ｃ及び１１Ｄ）。合成阻害剤であるＳＰ６００１２５によるＪＮＫ活性の阻害は、ＥＲストレスが誘導するＩＲＳ−１のセリンリン酸化を改善させた（図１１Ｃ及び１１Ｄ）。ＪＮＫ結合タンパク質であるＪＩＰに由来する高度特異的阻害性ペプチド（参照により本明細書に組み込まれる、Barr et al., J. Biol. Chem. 277:10987(2002)）によるＦａｏ細胞の前処置も、ツニカマイシンに曝した細胞におけるインスリン受容体シグナル伝達を完全に保持した（図１１Ｅ及び１１Ｆ）。合成ＪＮＫ阻害剤であるＳＰ６００１２５に関しても同様の結果が得られた（データは示していない）。これらの結果は、ＥＲストレスがＩＲＳ−１のＪＮＫ依存性セリンリン酸化を促進し、それが次にインスリン受容体シグナル伝達を阻害することを指示する。
【００７８】
ＩＲＥ−１のインスリン受容体シグナル伝達における重大な役割
ＥＲストレスの存在下での、イノシトール要求性キナーゼ−１α（ＩＲＥ−１α）のリン酸化上昇は、ＴＮＦ−α受容体関連因子２（ＴＲＡＦ２）タンパク質の集積を導き、ＪＮＫを活性化する（Urano et al., Science 287:664(2000)；参照することにより本明細書に組み込まれる）。ＥＲストレス誘導のインスリン抵抗性が無傷ＩＲＥ−１αに依存するかどうかを検討するため、本発明者らは、ＩＲＥ−１α−／−及び野生型（ＷＴ）線維芽細胞をツニカマイシンに曝した時のＪＮＫ活性化、ＩＲＳ−１セリンリン酸化及びインスリン受容体シグナル伝達を測定した。ＷＴ細胞では、ツニカマイシンによるＥＲストレスの誘導はＪＮＫの強力な活性化を生じさせたが、ＩＲＥ−１α−／−細胞ではＪＮＫの活性化を生じさせなかった（図１１Ｇ）。ツニカマイシンはまた、ＷＴのＳｅｒ３０７残基におけるＩＲＳ−１のリン酸化を刺激したが（図１１Ｇ）、ＩＲＥ−１α−／−線維芽細胞ではＩＲＳ−１のリン酸化を刺激しなかった（図１１Ｅ）。重要な点として、ツニカマイシンはＷＴ細胞におけるＩＲＳ−１のインスリン刺激チロシンリン酸化を阻害したが、ＩＲＥ−１α−／−細胞ではそのような作用は検出されなかった（図１１Ｈ）。ＩＲＳ−１のインスリン刺激チロシンリン酸化のレベルは、総ＩＲＳ−１タンパク質レベルはより低かったにもかかわらず、ＩＲＥ−１α−／−細胞において劇的に高かった（図１１Ｈ）。これらの結果は、ＥＲストレスが誘導するインスリン作用の阻害が、ＩＲＥ−１α−ＪＮＫ依存性プロテインキナーゼカスケードによって媒介されることを明らかにする。
【００７９】
ＸＢＰ−１レベルの操作によるインスリン受容体シグナル伝達の変化
転写因子ＸＢＰ−１は、ｂＺＩＰタンパク質である。スプライシングされた又はプロセシングされた形態のＸＢＰ−１（ＸＢＰ−１ｓ）は、分子シャペロンの転写調節において鍵となる因子であり、補償ＵＰＲを促進する（Calfon et al., Nature 415, 92(2002); Shen et al., Cell 107:893(2001); Yoshida et al., Cell 107:881(2001); Lee et al., MoI. Cell Biol. 23:7448(2003)；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）。本発明者らはそれ故、細胞におけるＸＢＰ−１レベルの調節は、ＥＲストレス応答の大きさへのその潜在的影響によってインスリン作用を変化させるはずであると推論した。この可能性をテストするため、本発明者らは、ＸＢＰ−１機能獲得及び機能喪失細胞モデルを確立した。第一に、本発明者らは、外来性ＸＢＰ−１がテトラサイクリン／ドキシサイクリンの不在下でのみ発現される誘導的遺伝子発現系を確立した（図１３Ａ）。平行して、本発明者らはまた、ＸＢＰ−１−／−マウス胚に由来するＭＥＦｓも検討した（Lee et al., MoI. Cell Biol. 23, 7448(2003); A. M. Reimold et al., Genes Dev. 14, 152(2000); Reimold et al., Nature 412, 300(2001)；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）（図１３Ｂ）。外来性ＸＢＰ−１発現を伴わない線維芽細胞での、ツニカマイシン処置（２μｇ／ｍｌ）は、強力なＰＥＲＫリン酸化を生じさせるが、ＰＥＲＫリン酸化の特徴である移動度のシフトに結びついて３０分目から始まり、３〜４時間目でピークに達する（図１３Ｃ）。これらの細胞では、同時にＥＲストレスに応答した迅速で強固なＪＮＫの活性化が存在した（図１３Ｃ）。ＸＢＰ−１発現の誘導時に、ツニカマイシン処置後のＰＥＲＫリン酸化及びＪＮＫ活性化の両方の劇的な低下が存在した（図１３Ｃ）。従って、ＸＢＰ−１の過剰発現は、ＷＴ細胞をＥＲストレスに対して不応性にした。ＸＢＰ−１−／−ＭＥＦにおいて実施した同様の実験は、反対のパターンを明らかにした（図１３Ｄ）。ＸＢＰ−１−／−ＭＥＦは、ＷＴ細
胞において有意のＥＲストレスを刺激することができなかった低用量のツニカマイシン（０．５μｇ／ｍｌ）で処置したときでさえも、強力なＥＲストレス応答を開始させた（図１３Ｄ）。これらの条件下で、ＸＢＰ−１−／−ＭＥＦにおけるＰＥＲＫリン酸化及びＪＮＫ活性化レベルは、ＷＴ対照で見られるものよりも有意に高く（図１３Ｄ）、ＸＢＰ−１−／−細胞がＥＲストレスを受けやすいことを示した。従って、細胞ＸＢＰ−１タンパク質のレベルの変化は、ＥＲストレス応答の変化を生じさせる。
【００８０】
次に本発明者らは、ＩＲＳ−１セリンリン酸化及びインスリン刺激ＩＲＳ−１チロシンリン酸化によって評価したとき、ＥＲストレス応答のこれらの相違がインスリン作用の変化を生じさせるかどうかを検討した。ツニカマイシン誘導のＩＲＳ−１セリンリン酸化は、対照細胞と比較して、ＸＢＰ−１を外来性発現する線維芽細胞において有意に低かった（図１３Ｅ）。インスリン刺激時のＩＲＳ−１チロシンリン酸化の程度は、対照と比較して、ＸＢＰ−１を過剰発現する細胞において有意に高かった（図１３Ｆ）。これに対し、ＩＲＳ−１セリンリン酸化は、低用量のツニカマイシン処置（０．５μｇ／ｍｌ）時でさえも、ＸＢＰ−１＋／＋対照と比較してＸＢＰ−１−／−ＭＥＦにおいて強力に誘導された（図１３Ｇ）。インスリン刺激後、ＩＲＳ−１チロシンリン酸化のレベルは、ツニカマイシン処置ＷＴ対照と比較してツニカマイシン処置ＸＢＰ−１−／−細胞において有意に低かった（図１３Ｈ）。インスリン受容体のインスリン刺激チロシンリン酸化はこれらの細胞において正常であった（図１４）。
【００８１】
ＸＢＰ−１＋／−マウスのグルコースホメオスタシス障害
完全なＸＢＰ−１欠損は、胚を死に至らせる（Reimold et al., Genes Dev. 14:152, 2000；参照することにより本明細書に組み込まれる）。インビボでのＥＲストレス、インスリン感受性及び全身グルコース代謝におけるＸＢＰ−１の役割を検討するため、本発明者らは、１個のＸＢＰ−１対立遺伝子にヌル変異を有するＢａｌｂ／Ｃ−ＸＢＰ−１＋／−マウスを検討した。本発明者らはＢａｌｂ／Ｃ遺伝的背景のマウスを検討したが、この系統は全身グルコース代謝において肥満誘導の変化に対して強い抵抗性を示すからである。細胞系に関する本発明者らの結果に基づき、本発明者らは、ＸＢＰ−１欠損がマウスにインスリン抵抗性及び２型糖尿病の発症に対する素因を与えると仮定した。
【００８２】
本発明者らは、ＸＢＰ−１＋／−マウスとそれらのＷＴ同腹子を３週齢で高脂肪食（ＨＦＤ）下に飼育した。平行して、両方の遺伝子型の対照マウスを普通食で飼育した。両方の遺伝子型の総体重は、普通食とＨＦＤでの１２週齢までは同様であった。この期間後、ＨＦＤのＸＢＰ−１＋／−動物は、小さいが有意の体重増加を示した（図１５Ａ）。レプチン、アジポネクチン及びトリグリセリドの血清レベルは、ＨＦＤの１６週間後に測定した両遺伝子型の間で統計的に有意の差を示さなかった（図１６）。
【００８３】
ＨＦＤでは、ＸＢＰ−１＋／−マウスは、４週目で早くも明らかになった持続的で進行性の高インスリン血症を発症した。実験の期間中、ＸＢＰ−１＋／−マウスではインスリンレベルが上昇し続けた。ＸＢＰ−１＋／＋マウスにおける血中インスリンレベルは、ＸＢＰ−１＋／−同腹子におけるよりも有意に低かった（図１５Ｂ）。図１５Ｃに示すように、Ｃ−ペプチドレベルもまた、ＷＴ対照におけるよりもＸＢＰ−１＋／−動物において有意に高かった。血糖値も、ＨＦＤ下のＸＢＰ−１＋／−マウスにおいて８週目に上昇し始め、２０週目の実験終了時まで高いままであった（図１５Ｄ）。このパターンは絶食（図１５Ｄ）及び食後（データは示していない）状態で同じであった。ＨＦＤ下のマウスにおける高インスリン血症の状況での血糖値上昇は、末梢インスリン抵抗性の発症の強力な指標である。
【００８４】
全身インスリン感受性を調べるため、本発明者らは、ＸＢＰ−１＋／−マウス及びＸＢＰ−１＋／＋対照においてグルコース（ＧＴＴ）及びインスリン（ＩＴＴ）耐性試験を実施した。ＨＦＤでの飼育は、ＸＢＰ−１＋／−マウスにおいて有意のグルコース不耐症を生じさせた。ＨＦＤ飼育７週間後のグルコース負荷試験で、ＸＢＰ−１＋／−マウスはＸＢＰ−１＋／＋マウスよりも有意に高いグルコースレベルを示した（図１５Ｅ）。このグルコース不耐症は、ＨＦＤ飼育１６週間後のＸＢＰ−１＋／−マウスにおいて、ＷＴマウスと比較して存在することが継続している。（図１５Ｆ）。ＩＴＴの間、インスリンに対する血糖低下応答も、ＨＦＤ飼育の８週間目にＸＢＰ−１＋／＋同腹子と比較してＸＢＰ−１＋／−マウスでは有意に低く（図１５Ｇ）、この低い応答性はＨＦＤ飼育の１７週間後も存在することが継続していた（図１５Ｈ）。膵島の形態及び機能の検査では、遺伝子型の間で有意差を示さなかった（図１７）。それ故、ＸＢＰ−１対立遺伝子の喪失は、マウスに食餌誘導性インスリン抵抗性及び糖尿病に対する素因を与える。
【００８５】
ＸＢＰ−１＋／−マウスにおけるＥＲストレス上昇及びインスリンシグナル伝達障害
培養細胞に関する本発明者らの実験は、ＸＢＰ−１欠損細胞におけるＥＲストレスの上昇及びインスリンシグナル伝達能力の低下、並びに高レベルのＸＢＰ−１発現時のこれらの表現型の改善を明らかにした。このメカニズムが、ＸＢＰ−１＋／−マウスで見られるインスリン抵抗性の基礎であるとすれば、これらの動物は、インスリン受容体シグナル伝達障害と結合した高レベルのＥＲストレスを示すはずである。これを調べるため、本発明者らは最初に、肥満ＸＢＰ−１＋／−及びＷＴマウスの肝臓におけるＰＥＲＫリン酸化及びＪＮＫ活性を検査することによってＥＲストレスを評価した。これらの実験は、ＨＦＤ下のＷＴ対照と比較して肥満ＸＢＰ−１＋／−マウスでのＰＥＲＫレベルの上昇及び肝ＰＥＲＫリン酸化の見掛けの上昇を明らかにした（図１８Ａ）。また、ＷＴ対照と比較してＸＢＰ−１＋／−マウスでは、ＪＮＫ活性の有意の上昇があった（図１８Ｂ）。これらの結果と一致して、ＩＲＳ−１のセリン３０７リン酸化も、ＨＦＤ下のＷＴ対照と比較してＸＢＰ−１＋／−マウスでは高かった（図１８Ｃ）。最後に、本発明者らは、これらのマウスにおけるインビボでのインスリン刺激性インスリン受容体シグナル伝達能力を検討した。普通食下の遺伝子型の間では、肝及び脂肪組織におけるインスリン受容体シグナル伝達成分の何れにも検出可能な差は見出せなかった（図１９）。しかし、ＨＦＤでの飼育後、インスリン刺激ＩＲ、ＩＲＳ−１及びＩＲＳ−２チロシン並びにＡｋｔセリンリン酸化を含む、肝臓におけるインスリン受容体シグナル伝達の主要成分は全て、ＷＴ対照と比較してＸＢＰ−１＋／−マウスでは低下していた（図１８Ｄ〜Ｇ）。インスリン受容体シグナル伝達の同様の抑制もまた、ＨＦＤ下のＸＢＰ−１＋／−マウスの脂肪組織において、ＸＢＰ−１＋／＋マウスと比較して存在することが明らかであった（図２０）。ＸＢＰ−１＋／−マウスにおけるＩＲチロシンリン酸化の抑制は、ＥＲストレスが受容体後レベルでインスリン作用を阻害した場合にＸＢＰ−１−／−細胞で得られる所見とは異なる。これは、インスリン受容体にインビボでの慢性高インスリン血症が影響しているのを反映すると考えられる。従って、本発明者らのデータは、インビボでのＥＲストレスとインスリン作用の間の関連を明らかにするが、このメカニズムを通して標的されるインスリン受容体シグナル伝達経路の正確な遺伝子座を決定する上では確実ではない。
【００８６】
（考察）
この検討において、本発明者らは、ＥＲストレスを、インスリン作用の悪化である肥満と２型糖尿病の発症の間の分子レベルでの関連を特定する。
【００８７】
本発明者らの所見は、ＥＲによる肥満誘導性代謝ストレスの分子センシング及び最終的にインスリン抵抗性及び２型糖尿病へと導くインスリン作用の阻害に内在する基本的メカニズムを示す。本発明者らは、ＥＲストレスが、肥満におけるストレス及び炎症応答の発現並びに全身グルコースホメオスタシスの総合的な悪化に内在すると主張する（Shi et al., Sonenberg, Endocr. Rev. 24:91(2003)；参照することにより本明細書に組み込まれる）。本発明者らの所見は、ＥＲストレスを１型糖尿病に結びつける、この領域でのこれまでの研究とは大きく異なり、ＥＲストレスがインスリン抵抗性及び２型糖尿病に内在する不可欠のメカニズムであることを明らかにする。
【００８８】
インスリン作用におけるＥＲストレス応答の重要な役割は、それによってストレスシグナルが代謝調節経路と統合される進化的に保存されたメカニズムであると考えられる。インスリン作用のようなエネルギーの流れの適切な調節及び主要同化経路の抑制は、急性ストレス、病原体の侵入及び免疫応答時には有益であると考えられるので、ＥＲストレスを通してのこのような統合は好都合であろう。しかしながら、肥満のような慢性ＥＲストレスの存在下では、ＥＲストレスと代謝調節の間の密接な結びつきは、インスリン抵抗性、そして最後には２型糖尿病の発症へと導くであろう。最終的に、ＥＲストレスを通してのストレスシグナルと代謝ホメオスタシスの統合が生存に対して潜在的にプラスの影響を及ぼすとすれば、高度な応答性のシステムは淘汰に供される。過剰なカロリー負荷に曝すことがＥＲに対する持続的なストレスを生み出す現代においては、この淘汰は、代謝性疾患の劇的に高い発生率についての潜在的に内在するメカニズムであり得る。治療の見地から、本発明者らの所見は、ＥＲストレス応答の操作が２型糖尿病を予防し、治療するための新しい可能性を提供することを示唆する。
【００８９】
（試験材料及び方法）
生化学試薬：抗ＩＲＳ−１、抗ホスホ−ＩＲＳ−１（Ｓｅｒ３０７）及び抗ＩＲＳ−２抗体は、「Upstate Biotechnology（Charlottesville, VA）」より入手した。ホスホチロシン、ｅＩＦ２α、インスリン受容体βサブユニット及びＸＢＰ−１は、「Santa Cruz Biotechnology（Santa Cruz, CA）」から入手した。抗ホスホ−ＰＥＲＫ、抗Ａｋｔ及び抗ホスホ−Ａｋｔ抗体及びｃ−Ｊｕｎタンパク質は、「Cell Signaling Technology（Beverly, MA）」より入手した。抗ホスホ−ｅＩＦ２α抗体は、「Stressgen（Victoria, British Columbia, Canada）」から購入した。抗インスリン抗体及びＣ−ペプチドＲＩＡキットは、「Linco Research（St. Charles, MO）」から購入した。抗グルカゴン抗体は「Zymed（San Francisco, CA）」より入手した。ＰＥＲＫ抗血清は、Ｄｒ．Ｄａｖｉｄ  Ｒｏｎ（New York University School of Medicine）の好意により提供された。テキサスレッド複合ロバ抗モルモットＩｇＧ及びフルオレセイン複合（ＦＩＴＣ複合）ヤギ抗ウサギＩｇＧは、「Jackson Immuno Research Laboratories（West Grove, PA）」より入手した。タプシガルギン、ツニカマイシン及びＪＮＫ阻害剤は、「Calbiochem（San Diego, CA）」より入手した。インスリン、グルコース及びスリンダックスルフィドは「Sigma（St. Louis, MO）」からであった。Ｔｈｅ  Ｕｌｔｒａ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｒａｔ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ＥＬＩＳＡキットは、「Crystal Chem Inc.（Downers Grove, IL）」からであった。
【００９０】
細胞：ラットＦａｏ肝細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ１６４０（Gibco、Grand Island, NY）で培養した。７０〜８０％の集密度で、実験を開始する前に１２時間、細胞を血清枯渇させた。環境ストレスを予防するため、インキュベータ内の培養皿にツニカマイシン、タプシガルギン及びＪＮＫ阻害剤を含む試薬を静かに添加した。ＪＮＫ阻害剤は、ツニカマイシン／タプシガルギン処置の１時間前に添加した。ＸＢＰ−１−／−マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）（A. H. Lee, N. N. Iwakoshi, L. H. Glimcher, MoI. Cell Biol. 23:7448(2003)；参照することにより本明細書に組み込まれる）、ＩＲＥ−１α−／−ＭＥＦ細胞（Ｄｒ．Ｄａｖｉｄ  Ｒｏｎ（New York University School of Medicine）の好意により提供された）、及びそれらの野生型対照を、１０％ＦＢＳを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Gibco, Grand Island, NY）で培養した。ＭＥＦ細胞における実験に関しては、細胞を６時間だけ血清除去したことを除いて、同様のプロトコールに従った。
【００９１】
ＭＥＦにおけるＸＢＰ−１の過剰発現：ＭＥＦ−ｔｅｔ−ｏｆｆ細胞（BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA）を、１００μｇ／ｍｌのＧ４１８及び１μｇ／ｍｌのドキシサイクリンを添加したＤＭＥＭで培養した。ＭＥＦ−ｔｅｔ−ｏｆｆ細胞は、ＴＲＥ（テトラサイクリン応答エレメント）に結合し、テトラサイクリン又はドキシサイクリンの不在下でのみ転写を活性化する、外来性ｔＴＡ（テトラサイクリン制御性トランス活性化因子）タンパク質を発現する。スプライシングされた形態のＸＢＰ−１のｃＤＮＡをｐＴＲＥ２ｈｙｇ２プラスミド（BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA）に連結した。ＭＥＦ−ｔｅｔ−ｏｆｆ細胞を、ＴＲＥ２ｈｙｇ２−ＸＢＰ−ｌプラスミドでトランスフェクトし、次に４００μｇ／ｍｌのヒグロマイシンＢの存在下で選択した。安定なトランスフェクタントの個々のクローンを単離し、ドキシサイクリン依存性ＸＢＰ−１発現を免疫ブロット法によって確認した。
【００９２】
忌引き
ノーザンブロット分析：トリゾール試薬（Invitrogen, Carlsbad, CA）を用いてマウス肝臓から全ＲＮＡを単離し、１％のアガロースゲルによって分離して、その後ＢｒｉｇｈｔＳｔａｒ  Ｐｌｕｓナイロン膜（Ambion, Austin, TX）に移した。ＧＲＰ７８ｃＤＮＡプローブを、以下のプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲによってマウス肝全ｃＤＮＡから作製した：５’−ＴＧＧＡＧＴＴＣＣＣＣＡＧＡＴＴＧＡＡＧ−３’及び５’−ＣＣＴＧＡＣＣＣＡＣＣＴＴＴＴＴＣＴＣＡ−３’。ＤＮＡプローブを、ランダムプライムドＤＮＡ標識キット（Roche, Indianapolis, IN）を使用して３２Ｐ−ｄＣＴＰで標識した。製造者のプロトコール（Ambion, Austin, TX）に従ってハイブリダイゼーションを実施し、Ｖｅｒｓａ  Ｄｏｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ  ３０００（BioRad, Hercules, CA）によって視覚化した。
【００９３】
細胞からのタンパク質抽出物：各々の処置の最後に、細胞を液体窒素中で即時凍結し、−８０℃に保持した。２５ｍＭ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、２ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１０ｍＭのＮａＦ、１０ｍＭのＮａ４Ｐ２Ｏ７、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＮＰ−４０、５μｇ／ｍｌのロイペプチン、５μｇ／ｍｌのアプロチニン、１０ｎＭのオカダ酸及び１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含む溶解緩衝液でタンパク質抽出物を作製した。免疫沈降及び免疫ブロット法実験は、それぞれ７５０μｇ及び７５μｇのタンパク質で実施した。
【００９４】
動物試験及び肥満モデル：成体（１０〜１２週齢）の雄性ｏｂ／ｏｂマウス及びそれらの野生型（ＷＴ）同腹子を、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ．より購入した。食餌誘発性肥満モデルにおいて使用したマウスは、雄性Ｃ５７ＢＬ／６であった。全てのマウスを、離乳の直後（約３週齢時）に高脂肪食（ＨＦＤ：３５．５％脂肪、２０％タンパク質、３２．７％炭水化物、Ｂｉｏ−Ｓｅｒｖｅ）飼育下に置いた。ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスは、Ｂａｌｂ／Ｃの遺伝的背景にあった。インスリン及びグルコース耐性テストを、以前に記載されているように（Hirosumi et al, Nature 420:333(2002)；参照することにより本明細書に組み込まれる）実施した。インスリン及びＣ−ペプチドＥＬＩＳＡを、マウス標準（Crystal Chem Inc., Downers Grove, IL）を用いて製造者の指示に従って実施した。１６週齢のマウスから単離した膵臓を、ブワン液（Bouin's fluid）及びホルマリンに固定し、パラフィン切片をモルモット抗インスリン及びウサギ抗グルカゴン抗体で二重染色した。テキサスレッド複合ロバ抗モルモットＩｇＧ及びＦＩＴＣ複合ヤギ抗ウサギＩｇＧを、二次抗体として使用した。
【００９５】
インスリン注入及び組織タンパク質抽出：インスリンを、以前に記載されているように（Uysal et al., Nature 389:610(1997); Hirosumi et al., Nature 420:333(2002)；各々が参照することにより本明細書に組み込まれる）、門脈を通して注入した。インスリン注入の３分後、肝臓を切除し、液体窒素中で凍結して、処理まで−８０℃で保存した。タンパク質抽出のために、肝組織（約０．３ｇ）を、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１００ｍＭのＮａＦ、５０ｍＭのＮａ４Ｐ２Ｏ７、１０ｍＭのＥＧＴＡ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＮＰ−４０、５μｇ／ｍｌのロイペプチン、５μｇ／ｍｌのアプロチニン、１０ｎＭのオカダ酸及び２ｍＭのＰＭＳＦを含む溶解緩衝液１０ｍｌ中に入れた。氷上で均質化した後、組織溶解産物を４℃にて４，０００ｒｐｍで１５分間、次に４℃にて５５，０００ｒｐｍで１時間遠心分離した。全組織タンパク質１ｍｇを免疫沈降反応及びその後の免疫ブロット法のために使用し、一方全組織タンパク質１００〜１５０μｇを直接免疫ブロット法のために使用した（Hirosumi et al, Nature 420:333 (2002)；参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【００９６】
その他の態様：以上の記載は、本発明のある特定の非限定的な好ましい態様の説明である。当業者であれば、特許請求の範囲で定義されるような本発明の精神又は範囲から逸脱することなく、本記述に様々な変更及び修正を実施できることを認識するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】図１は、肥満に見られる小胞体ストレス上昇を示す。マウス肥満の食餌性（高脂肪食誘発性）及び遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）モデルを、年齢及び性別が対応するやせ型対照と比較して、肝組織におけるＥＲストレスのマーカーを検討するために使用した。スプライシングされた形態のＸＢＰ−１（ＸＢＰ−１ｓ）、ｅＩＦ２αのリン酸化（ｓｅｒ５１、ｐ−ｅＩＦ２α）、ＰＥＲＫのリン酸化（ｐ−ＰＥＲＫ）、ＧＲＰ７８のｍＲＮＡ発現レベル及びＪＮＫ活性を含むＥＲストレスマーカーを、標準又は高脂肪食のどちらかで１６週間飼育した雄性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）の肝臓試料において検査した。タンパク質１００μｇを各々の免疫ブロット法のために使用した（図１ａ）。１２〜１４週齢の雄性ｏｂ／ｏｂ及び野生型マウスの肝臓における同じＥＲストレスマーカーを検査した（図１ｂ）。肝臓におけるＧＲＰ７８ｍＲＮＡの発現レベルを、図１ａ及び１ｂで述べた群と同様のやせ型及び肥満型動物においてノーザンブロット分析によって検査した。
【図２】図２は、ＥＲストレスの誘導が、どのようにしてＪＮＫを介したＩＲＳ−１のリン酸化を通して肝細胞におけるインスリン作用を損なうかを示す。タプシガルギン（ｔｈａｐ、４時間で３００ｎＭ）又はツニカマイシン（ｔｕｎ、２時間で１０μｇ／ｍｌ）のいずれかで、Ｆａｏ細胞においてＥＲストレスを誘導し、その後細胞をインスリン（ｉｎｓ）で刺激した。タプシガルギン又はツニカマイシン処置細胞における、インスリンで刺激したＩＲＳ−１チロシンリン酸化及び総タンパク質レベルを、ホスホチロシン（ｐＹ）に対する抗体によるＩＲＳ−１の免疫沈降反応（ＩＰ）とそれに続く免疫ブロット法（ＩＢ）の実施後に検査した（ａ）。タプシガルギン又はツニカマイシン処置細胞における、インスリンで刺激したインスリン受容体（ＩＲ）のチロシンリン酸化及び総タンパク質レベル（ｂ）。タプシガルギンによる２時間の刺激後のＦａｏ細胞におけるＩＲＳ−１のｓｅｒ３０７残基のリン酸化（ｃ）。タプシガルギン処置後のＪＮＫ−１阻害剤ＳＰ６００１２５（ＪＮＫｉ）によるｓｅｒ３０７リン酸化の阻害（ｄ）。ペプチド阻害剤（ＪＮＫｉ）でＪＮＫ活性をブロックすることによる、ツニカマイシンが誘導するＩＲＳ−１のインスリン刺激チロシンリン酸化（ｐＹ）の阻害の改善。これらの実験では、免疫沈降反応及び免疫ブロット法の両方を抗ホスホチロシン抗体で実施した（ｅ）。
【図３】図３は、ＩＲＥ−１が、どのようにしてＥＲストレスを介したＪＮＫ活性化、ＩＲＳ−１のｓｅｒ３０７リン酸化及びインスリン受容体シグナル伝達の阻害において決定的役割を果たすかを示す。インビボキナーゼアッセイ及び組換えｃ−ｊｕｎを基質として用いて、ＩＲＥ−１α＋／＋及びＩＲＥ−１α−／−線維芽細胞におけるツニカマイシンにより処置した後の指示されている時点でのＪＮＫ活性を検査した。ＪＮＫ活性及び総ＪＮＫレベル（ａ）。ＩＲＳ−１ホスホセリン３０７特異的抗体によるＩＲＳ−１の免疫沈降反応（ＩＰ）及び免疫ブロット法（ＩＢ）に続くツニカマイシンでの処置後の、ＩＲＥ−１α＋／＋及びＩＲＥ−１α−／−線維芽細胞におけるｓｅｒ３０７残基でのＩＲＳ−１のリン酸化（ｂ）。ツニカマイシンによるＩＲＥ−１α＋／＋及びＩＲＥ−１α−／−線維芽細胞処置後のインスリン（ｉｎｓ）刺激ＩＲＳ−１チロシンリン酸化及び総ＩＲＳ−１レベル。ブロットの下のグラフは、各々の処置時点での総ＩＲＳ−１レベルに対するＩＲＳ−１チロシンリン酸化の補正密度を示す（ｃ）。
【図４】図４は、非経口経路による４−フェニル酪酸（４−ＰＢＡ）の投与が、どのようにしてインビボでのインスリン感受性を上昇させ、糖尿病マウスの血糖値を低下させるかを示す。インスリン感受性及び高血糖症への４−フェニル酪酸（４−ＰＢＡ）の作用を分析するためにマウス肥満の遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）モデルを使用した。１０〜１２週齢の雄性レプチン欠損マウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓより入手し、４日間ＰＢＳの３回の注射（１日３回）によって順化させ、７日間にわたって４−ＰＢＡ（３回分割投与で１ｇ／ｋｇ／日）又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（１００μｌの３回投与）のいずれかの腹腔内注射で処置した。試験の３日目と７日目の食後血糖値（ｍｇ／ｄｌ）（ａ）。１回目の注射後７日目にインスリン耐性試験（ＩＴＴ）を実施した（ｂ）。
【図５】図５は、経口経路による４−フェニル酪酸（４−ＰＢＡ）の投与が、どのようにしてインビボでのインスリン感受性を上昇させ、糖尿病マウスの血糖値を低下させるかを示す。インスリン感受性及び高血糖症への４−フェニル酪酸（４−ＰＢＡ）の作用を分析するためにマウス肥満の遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）モデルを使用した。８〜１０週齢の雄性レプチン欠損マウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓより入手し、４日間ＰＢＳの注射（１日２回）によって順化させ、２０日間にわたって４−ＰＢＡ（２回分割投与で５００ｍｇ／ｋｇ／日）又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（２００μｌの２回投与）のいずれかで処置した。処置期間中の体重（ａ）。０日目と２０日目での６時間絶食後の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）（ｂ）。０日目と２０日目のインスリンレベル（ｎｇ／ｍｌ）（ｃ）。処置の１５日目にインスリン耐性試験を実施した（ｄ）。
【図６】図６は、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）によるｏｂ／ｏｂマウスの処置が、インスリン感受性を上昇させ、糖尿病を改善することを示す。９〜１０週齢のｏｂ／ｏｂ及びそれらの年齢及び性別が対応するやせ型対照を、グルコース代謝及び糖尿病へのＴＵＤＣＡの作用を分析するために使用した。４日間のＰＢＳ注射（１日１回、２００μｌの腹腔内注射）による順化後、マウスにＴＵＤＣＡ（ＰＢＳ２００μｌ中、５００ｍｇ／ｋｇで１日１回）（やせ型についてはｎ＝６、そしてｏｂ／ｏｂについてはｎ＝７）及びＰＢＳ（２００μｌ）（やせ型についてはｎ＝６、そしてｏｂ／ｏｂについてはｎ＝７）を腹腔内注射した。１回目の注射後４、７及び１０日目の血糖値（ａ）。１回目の注射後１０日目のＩＴＴ値（ｂ）。
【図７】図７は、トリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）の抗糖尿病作用を示す。肥満及びインスリン抵抗性のｏｂ／ｏｂ遺伝性モデルを使用して実験を実施した（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｌｅｐ−ｏｂマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Bar Harbor, ME）より購入した）。７週齢で、ＰＢＳの投与による５日間の順化後に処置を開始した。この期間後、ＴＭＡＯ（Sigma, T0514）をＰＢＳに溶解し、１ｇ／ｋｇ／日の用量で２４時間ごとに腹腔内（ＩＰ）注射によって投与した。指示されている日数目に、自動血糖測定システムを用いて午前８時に食後血糖値を測定した。インスリン測定のために、６時間の絶食後に血液試料を採取し、特異的ＥＬＩＳＡ（Crystal Chem, 90060）を用いて血清インスリンレベルを定量した。各々の処置グループは、実験グループ当り少なくとも６匹の動物を含んでいた。
【図８】図８は、糖尿病の治療における４−フェニル酪酸ナトリウムとメトホルミンの有効な併用を示す。肥満及びインスリン抵抗性のｏｂ／ｏｂ遺伝性モデル（Ｃ５７Ｂ６．Ｖ−Ｌｅｐｏｂ／ＯｌａＨｓｄマウスをＨａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ（Madison, WI）より購入した）を使用して実験を実施した。７週齢で、ＰＢＳの投与による５日間の順化後に処置を開始した。この期間後、ＰＢＳ、４−フェニル酪酸ナトリウム（２００ｍｇ／ｋｇ／日）、メトホルミン（２００ｍｇ／ｋｇ／日）及び４−フェニル酪酸ナトリウム＋メトホルミン（各々２００ｍｇ／ｋｇ／日）を、強制経口投与によって毎日４つの別々の実験グループのマウス（各々のグループに少なくとも６匹のマウス）に投与した。これらの用量で、４−フェニル酪酸ナトリウムとメトホルミンの併用だけが血糖値低下レジメンとして有効であることが明らかになり、単一薬剤は血糖値に何ら効果がなかった。血糖値は午前８時に食後状態で測定した。
【図９】図９は、インビトロでのグルコースによるＧＲＰ７８発現の調節及びインビボでの高血糖症を示す。（Ａ）Ｆａｏ細胞を様々な用量のグルコース（０、５、１０、２５及び７５ｍＭ）で２４時間処置した。ＧＲＰ７８のｍＲＮＡレベルを、これらの細胞から単離した全ＲＮＡを用いたノーザンブロット法によって検査した。臭化エチジウム染色をＲＮＡの負荷及び完全性についての対照として示す。（Ｂ）ストレプトゾトシン（ＳＴＺ、２００ｍｇ／ｋｇ）を雄性マウスに腹腔内注射した。注射の３日後、ＳＴＺ誘導の高血糖症を確認するために血糖値を測定した。注射の１０日後の肝臓を採集し、肝臓の全ＲＮＡを用いたノーザンブロット分析によってＧＲＰ７８発現を検討した。
【図１０】図１０は、肥満マウスの脂肪組織におけるＥＲストレス指標を示す。マウス肥満の食餌性（高脂肪食誘発性）及び遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）モデルを、年齢及び性別が対応するやせ型対照と比較して脂肪組織におけるＥＲストレスのマーカーを検討するために使用した。（Ａ）標準食（ＲＤ）又は高脂肪食（ＨＦＤ）のどちらかで１６週間飼育した雄性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）の脂肪試料においてＰＥＲＫリン酸化（ｐ−ＰＥＲＫ）及びＪＮＫ活性を検査した。（Ｂ）１２〜１４週齢の雄性ｏｂ／ｏｂ及びＷＴやせ型マウスの脂肪組織におけるＰＥＲＫリン酸化及びＪＮＫ活性。（Ｃ）ＧＲＰ７８のｍＲＮＡレベルを、ＷＴやせ型及びｏｂ／ｏｂ動物の脂肪組織におけるノーザンブロット分析によって検査した。臭化エチジウム染色をＲＮＡの負荷及び完全性についての対照として示す。
【図１１−１】図１１は、ＥＲストレスの誘導が、ＪＮＫを介したＩＲＳ−１のリン酸化を通してインスリン作用を損なうことを示す。（Ａ）５μｇ／ｍｌのツニカマイシン（Ｔｕｎ）での３時間の処置によってＦａｏ肝細胞においてＥＲストレスを誘導した。その後細胞をインスリン（Ｉｎｓ）で刺激した。ＩＲＳ−１チロシン及びセリン（Ｓｅｒ３０７）リン酸化、Ａｋｔリン酸化（Ｓｅｒ４７３）、インスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化及びそれらの総タンパク質レベルを、免疫沈降反応（ＩＰ）とそれに続く免疫ブロット法（ＩＢ）又は直接免疫ブロット法のいずれかを用いて検査した。（Ｂ）各々の分子についてタンパク質レベルに基準化した、（Ａ）で述べた実験条件下でのＩＲＳ−１（チロシン及びＳｅｒ３０７）、Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）及びＩＲ（チロシン）リン酸化の定量。（Ｃ）ＪＮＫ−１阻害剤、ＳＰ６００１２５（ＪＮＫｉ、２５μＭ）による、ＥＲストレスが誘導する（４時間で３００ｎＭのタプシガルギン）ＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７リン酸化の阻害。（Ｄ）（Ｃ）で述べた実験条件下でのＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７リン酸化の定量。（Ｅ）ＪＮＫ阻害剤による、ＥＲストレスが誘導するＩＲＳ−１のインスリン刺激チロシンリン酸化（ｐＹ）の阻害の改善。（Ｆ）（Ｅ）で述べたインスリン誘導のＩＲＳ−１チロシンリン酸化レベルの定量。
【図１１−２】図１１は、ＥＲストレスの誘導が、ＪＮＫを介したＩＲＳ−１のリン酸化を通してインスリン作用を損なうことを示す。（Ｇ）ＩＲＥ−１α＋／＋及びＩＲＥ−１α−／−線維芽細胞におけるツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、１時間で１０μｇ／ｍｌ）した後の指示されている表示時点でのＪＮＫ活性、ＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７リン酸化及び総ＩＲＳ−１レベル。（Ｈ）ＩＲＥ−１α＋／＋及びＩＲＥ−１α−／−線維芽細胞におけるツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、１時間で１０μｇ／ｍｌ）した後のインスリン刺激ＩＲＳ−１チロシンリン酸化及び総ＩＲＳ−１レベル。ＩＲＥ−１α＋／＋及びＩＲＥ−１α−／−細胞におけるインスリン誘導のＩＲＳ−１チロシンリン酸化レベルの定量をパネルの下部に示す。全てのグラフは、少なくとも２つの独立した実験からの平均値±ＳＥＭを示し、対照からの統計的有意性をｐ＜０．００５を有する「＊」で表示する。
【図１２】図１２は、タプシガルギン誘導のＥＲストレスによるインスリン受容体シグナル伝達の阻害及びＩＲＳ−１セリンリン酸化におけるＣａレベルの役割を示す。（Ａ）３００ｎＭのタプシガルギン（Ｔｈａｐ）での１時間の処置によってＦａｏ細胞においてＥＲストレスを誘導し、その後細胞をインスリン（Ｉｎｓ）で刺激した。ＩＲＳ−１チロシンリン酸化（ｐＹ）及びセリンリン酸化（ｐＳｅｒ３０７）、インスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化及び総タンパク質レベルを、免疫沈降反応（ＩＰ）とそれに続く免疫ブロット法（ＩＢ）又は直接免疫ブロット法のいずれかを用いて検査した。（Ｂ）Ｆａｏ細胞を、スリンダックスルフィド（ＳＳ：０、７．５、３０及び６０μＭ）で４５分間処置し、さらに１時間、３００ｎＭのタプシガルギン（Ｔｈａｐ）に曝すか又は曝さなかった。ＩＲＳ−１セリンリン酸化及び総ＩＲＳ−１タンパク質レベルを上記したように検査した。
【図１３−１】図１３は、ＸＢＰ−１レベルの操作によるＥＲストレス応答の変化が、インスリン受容体シグナル伝達の変化を導くことを明らかにする。ＸＢＰ−１過剰発現細胞、ＸＢＰ−１−／−細胞及びそれらの対照におけるＥＲストレス応答。（Ａ）マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）におけるドキシサイクリンの除去後のＸＢＰ−１発現の誘導。（Ｂ）野生型（９．４ｋｂ）及び標的（６．５ｋｂ）の対立遺伝子についてのＸＢＰ−１−／−ＭＥＦ細胞及びそれらのＷＴ対照のサザンブロット分析。（Ｃ）ツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、２μｇ／ｍｌ）後のＸＢＰ−１ｓ過剰発現細胞及びそれらの対照細胞（それぞれ、−Ｄｏｘ及び＋Ｄｏｘ）におけるＰＥＲＫリン酸化（ｐ−ＰＥＲＫ）及びＪＮＫ活性。（Ｄ）ＸＢＰ−１−／−ＭＥＦ細胞及びそれらのＷＴ対照における低用量ツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、０．５μｇ／ｍｌ）した後のＰＥＲＫリン酸化（ｐ−ＰＥＲＫ）及びＪＮＫ活性。
【図１３−２】図１３は、ＸＢＰ−１レベルの操作によるＥＲストレス応答の変化が、インスリン受容体シグナル伝達の変化を導くことを明らかにする。ＸＢＰ−１過剰発現細胞、ＸＢＰ−１−／−細胞及びそれらの対照におけるＥＲストレス応答。（Ｅ）ＸＢＰ−１過剰発現細胞及び対照細胞（それぞれ、−Ｄｏｘ及び＋Ｄｏｘ）におけるツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、２μｇ／ｍｌ）した後のＩＲＳ−１  Ｓｅｒ３０７リン酸化は、ＩＲＳ−１ホスホセリン３０７特異的抗体によるＩＲＳ−１の免疫沈降反応（ＩＰ）とそれに続く免疫ブロット法（ＩＢ）を用いて検出した。ブロットの隣のグラフは、パネルＥで述べた条件下でのＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７リン酸化の定量を示す。（Ｆ）ツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、２μｇ／ｍｌ）を伴う又は伴わない場合の、ＸＢＰ−１ｓ過剰発現細胞及び対照細胞におけるＩＲＳ−１のインスリン刺激のチロシンリン酸化。ＩＲＳ−１チロシンリン酸化対総ＩＲＳ−１レベルの比を独立した実験から要約し、グラフに示した。（Ｇ）ＸＢＰ−１−／−細胞及びＷＴ対照におけるツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、０．５μｇ／ｍｌ）した後のＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７リン酸化をパネルＣで述べたように検出した。ブロットの隣のグラフは、図１２Ｇで述べた条件下でのＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７リン酸化の定量を示す。（Ｈ）ツニカマイシン処置（Ｔｕｎ、０．５μｇ／ｍｌ）を伴う又は伴わない場合の、ＸＢＰ−１−／−及びＷＴ対照におけるＩＲＳ−１のインスリン刺激のチロシンリン酸化。ＩＲＳ−１チロシンリン酸化対総ＩＲＳ−１レベルの比を独立した実験から要約し、グラフに示した。全てのグラフは、少なくとも２つの独立した実験からの平均値±ＳＥＭを示し、対照からの統計的有意性をｐ＜０．００５を有する「＊」で表示する。
【図１４】図１４は、ＸＢＰ−１過剰発現細胞とＸＢＰ−１欠損細胞におけるインスリン誘導のインスリン受容体自己リン酸化を示す。（Ａ）ＸＢＰ−１過剰発現細胞及びそれらの対照ＭＥＦ細胞（それぞれ、−Ｄｏｘ及び＋Ｄｏｘ）を、２μｇ／ｍｌのツニカマイシン（Ｔｕｎ）で様々な期間（０、０．５、１、２、３及び４時間）処置した。インスリン誘導のインスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化（ｐＹ）及び総ＩＲレベルを、ＩＲ抗体での免疫沈降反応（ＩＰ）とそれに続くＩＲ又はホスホチロシン（ｐＹ）に対する抗体での免疫ブロット法（ＩＢ）を用いて前記細胞において検査した。（Ｂ）ＸＢＰ−１−／−ＭＥＦ細胞及びそれらのＷＴ対照を、０．５μｇ／ｍｌのツニカマイシンで様々な期間（０、０．５、１、２、３及び４時間）処置した。インスリン誘導のインスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化（ｐＹ）及び総ＩＲレベルをパネルＡにおけるように検査した。
【図１５】図１５は、高脂肪食を与えたＸＢＰ−１−／−マウスにおけるグルコースホメオスタシスを示す。ＸＢＰ−１＋／−（◇）及びＸＢＰ−１＋／＋（■）マウスを、離乳の直後から高脂肪食（ＨＦＤ）で飼育した。総体重（Ａ）、絶食時血中インスリン（Ｂ）、Ｃ−ペプチド（Ｃ）及びグルコース（Ｄ）レベルを、ＨＦＤの期間中、ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスにおいて測定した。ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスにおいてＨＦＤでの７（Ｅ）及び１６（Ｆ）週間後にグルコース耐性試験を実施した。ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスにおいてＨＦＤでの８（Ｅ）及び１７（Ｈ）週間後にインスリン耐性試験を実施した。ＸＢＰ−１＋／−マウスに対して、ｎ＝１１；ＸＢＰ−１＋／＋マウスに対して、ｎ＝８。データを平均値±ＳＥＭとして示す。ｐ≦０．０５での両側スチューデントｔ検定における統計的有意性を、「＊」によって示し、ｐ≦０．００５での統計的有意性を「＊＊」によって、及びｐ≦０．０００５での統計的有意性を「＊＊＊」によって示す。ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋グループを、ＡＮＯＶＡによっても比較する（パネルＡ〜Ｈ）。
【図１６】図１６は、ＸＢＰ−１＋／−マウスにおけるＥＲストレス及びインスリン受容体シグナル伝達を示す。高脂肪食での１６週間飼育後のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの肝臓においてＰＥＲＫリン酸化（ｐ−ＰＥＲＫ）（Ａ）、ＪＮＫ活性（ｐ−ｃ−Ｊｕｎ）（Ｂ）、及びＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７（ＩＲＳ−１ｐＳｅｒ３０７）（Ｃ）を検査した。門脈を通してのインスリン（１Ｕ／ｋｇ）の注入後、高脂肪食で１６週間飼育後のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの肝臓において、インスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化（ｐＹ）（Ｄ）、ＩＲＳ−１チロシンリン酸化（Ｅ）、ＩＲＳ−２チロシンリン酸化（Ｆ）、及びＡｋｔのＳｅｒ４７３リン酸化（Ｇ）を検査した。
【図１７】図１７は、ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスにおける膵島の特性決定である。普通食（Ａ〜Ｄ）又はＨＦＤ（Ｅ〜Ｈ）のいずれかのＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ＋／＋マウスから得た膵切片における膵島の形態、大きさ、及びインスリンとグルカゴンについての免疫組織化学染色である。高脂肪食でのＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスにおけるグルコース刺激インスリン分泌。グルコース刺激インスリン分泌を、１６週間高脂肪食で飼育したＸＢＰ−１＋／−及びＷＴマウスにおいて検査した（Ｉ）。各々の遺伝子型のマウスにグルコースを腹腔内投与し、指示されている時点でインスリン測定のために血液試料を採集した。これらの実験において、ＸＢＰ−１＋／−膵島に検出可能な異常は存在せず、標準条件下で遺伝子型間の差は明らかではなかった。ＨＦＤ下で、ＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの両方が膵島過形成を示した。ＨＦＤに対するこの予想された応答は遺伝子型間では同様であり、過形成成分（膵島サイズ＞１５０μＭ）は、ＨＦＤ下のＸＢＰ−１＋／−における全ての膵島の４０％及びＷＴマウスにおける全ての膵島の４３％を構成した。ＨＦＤ下のＸＢＰ−１＋／−及びＷＴマウスにおけるグルコース刺激インスリン分泌を検討する実験で、ＸＢＰ−１＋／−マウスはより一層強力なインスリン分泌応答でグルコースに応答するが、これはそれらの表現型に内在する単離した膵島欠陥の可能性を有効に排除する。従って、これらのデータは、ＸＢＰ−１＋／−マウスの表現型が欠陥膵島によって説明できないこと、及びＨＦＤでの１６週間後でさえも、膵島は表現型の間で識別不能のように見えることを示す。
【図１８】図１８は、ＸＢＰ−１＋／−マウスにおけるＥＲストレス及びインスリン受容体シグナル伝達を示す。高脂肪食で１６週間飼育後のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの肝臓においてＰＥＲＫリン酸化（ｐ−ＰＥＲＫ）（Ａ）、ＪＮＫ活性（ｐ−ｃ−Ｊｕｎ）（Ｂ）、及びＩＲＳ−１のＳｅｒ３０７（ＩＲＳ−１ｐＳｅｒ３０７）（Ｃ）を検査した。門脈を通してのインスリン（１Ｕ／ｋｇ）の注入後、高脂肪食で１６週間飼育後のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの肝臓において、インスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化（ｐＹ）（Ｄ）、ＩＲＳ−１チロシンリン酸化（Ｅ）、ＩＲＳ−２チロシンリン酸化（Ｆ）、及びＡｋｔのＳｅｒ４７３リン酸化（Ｇ）を検査した。
【図１９】図１９は、普通食のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの肝臓及び脂肪組織における無傷インスリン受容体シグナル伝達を示す。門脈を通してのインスリン（１Ｕ／ｋｇ）の注入後、普通食のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ＋／＋マウスの肝臓（Ａ）及び脂肪組織（Ｂ）において、インスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化（ｐＹ）、ＩＲＳ−１チロシンリン酸化、ＩＲＳ−２チロシンリン酸化、及びＡｋｔのＳｅｒ４７３リン酸化を検査した。
【図２０】図２０は、高脂肪食のＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ−１＋／＋マウスの脂肪組織におけるインスリン受容体シグナル伝達低下を示す。（Ａ）門脈を通してのインスリン（１Ｕ／ｋｇ）の注入後、１６週間高脂肪食を与えたＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ＋／＋マウスの脂肪組織において、インスリン受容体（ＩＲ）チロシンリン酸化（ｐＹ）、ＩＲＳ−１チロシンリン酸化、ＩＲＳ−２チロシンリン酸化、ＡｋｔのＳｅｒ４７３リン酸化、及びそれらの総タンパク質レベルを検査した。（Ｂ）１６週間高脂肪食を与えたＸＢＰ−１＋／−及びＸＢＰ＋／＋マウスの脂肪組織においてＪＮＫキナーゼアッセイを実施した。
【図２１】図２１は、肥満マウスの肝組織におけるＪＮＫ活性上昇と、それに続くＰＢＡによる処置後のＪＮＫ活性の正常化を示す。
【００９８】
別記Ａ
ＥＲストレス調節剤との併用剤
抗糖尿病薬
ベルオキシリソーム増殖因子活性化受容体ーγアゴニスト
ロシグリタゾン（グラクソ・スミス・クライン社のアバンディア）
ピオグリタゾン(武田薬品工業(株)/イーライ・リリー社のアクトス）
イサグリタゾン(三菱化学エンジニアリング(株))
リボクリタゾン(三共(株)のCS-011)
Ｔ−１３１(アムゲン社)
ＭＢＸ−１０２(メタボレックス社)
Ｒ−４８３(ロシュ・中外製薬(株))
ＣＬＸ−０９２１(カリックス社)
ビグアナイト剤
メトフォルミン（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社のグルコファージのジュネリック医薬品 / ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社のグルコファージＸＲ）
スルホニル尿素
グリメピリド（アベンティス社のアマリル）
グリブリド/グリベンクラミド（アベンティス社のDiabeta / ファーマシア社のMicronaseのジュネリック医薬品 / ファーマシア社のGlynase)
グリピジド（ファイザー社のグルコトロールのジュネリック医薬品 / ファイザー社のグルコトロールＸＬ）
グリクラジド（セルヴィエ社のディアミクロン / Molteni&C.F.LLI Alitti社のDiabrezide / Irex-シンセラボ社社のGlycemirex / 大日本製薬(株)のグリミクロンのジュネリック医薬品）
併用剤
メトフォルミン/グリブリド（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社のグルコバンス  / Hoechst社のSuguan M)
メトフォルミン/ロシグリタゾン（グラクソ・スミス・クライン社のアバダメット）
メトフォルミン/グリピジド（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社のメタグリップ）
メグリチニド
レパグリニド（ノボ・ノルディスク社のプランジン/ノボノーム）
ナテグリニド（ノバルティス社のスターリックス/スターシス）
αーグルコシダーゼ阻害剤
アカルボーズ（バイエル社のPrecose/グルコバイのジュネリック医薬品）
ミグリトール（ファーマシア社のグリセット） 
ボグリボーズ（武田薬品工業（株）の ベイスン）
インスリンとインスリン・アナログ
インスリン・リスプロ（イーライ・リリー社のヒューマログ）
インスリン・グラルジン(アベンティス社のランタス）
エクスベラ（ネクター社/ファイザー社/アベンティス社)
AERｘインスリン糖尿病管理システム（アラディム社/ノボ・ノルディスク社）
AIR吸入型インスリン（イーライ・リリー社/Alkermes社)
オーラリン（ジェネレックス社）
インスリン・デテミル(NN-304)（ノボ・ノルディスク社）
インスリン・グルリシン（アベンティス社)
デュアルPPARアゴニストとPPARパン・アゴニスト 
ＢＭＳ−２９８５８３（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社/メルク社）
テサグリタザル（アストラ・ゼネカ社のガリダ）
ムラグリタザル(BMS-メルク）
ネーブグリタザル（リリー−リガンド社のLY-818）
ＴＡＫ−５５９（武田薬品工業（株））
ネトグリタゾン（三菱ウェルファーマ社）
ＧＷ−６７７５９４（ＧＳＫ社）
ＡＶＥ−０８４７（アベンティス社)
ＬＹ−９２９（リリー−リガンド社）
ＯＮＯ−５１２９（ＯＮＯ社）
グルカゴン様ペプチドー1(GLP-1)アナログとアゴニスト
エクセナチド(AC-2993)（イーライ・リリー社/アミリン・ファーマシュティカル社)
エクセナチドLAR(AC-2993 LAR)（アミリン・ファーマシュティカル社/Alkermes社/イーライ・リリー社)  
リラグルチド(insulinotropin/NN-2211)（Scios社/ノボ・ノルディスク社）
ＣＪＣ−１１３１(Conju Chem社）
ＡＶＥ−００１０（アベンティス社−ジーランド社）
ＢＩＭ−５１０７７(ロッシュ社−帝人（株）−イプサン社）    
ＮＮ−２５０１(ノボ・ノルディスク社）
ＳＵＮ−Ｅ７００１（第一サントリーファーマ(株)−三共(株)）
ジペプチジルペプチターゼＩＶ(DPP-IV)阻害剤
ＬＡＦ−２３７（ノバルティス社）
ＭＫ−４３１(メルク社）
ＰＳＮ−９３０１(Probiodrug prosidion社）
８１５５４１（グラクソ・スミス・クライン社−田辺製薬（株））
８２３０９３（グラクソ・スミス・クライン社）
８２５９６４（グラクソ・スミス・クライン社）
ＢＭＳ−４７７１１８(BMS社)
膵リパーゼ阻害剤 
オーリスタット （ロッシュ・ホールディング社）
Na+-ブドウ糖共輸送体(SGLT)阻害剤
Ｔ−１０９５（田辺製薬(株)−J&J社)
ＡＶＥ−２２６８（アベンティス社）
８６９６８２ （グラクソ・スミス・クライン社− キッセイ薬品工業(株)）
アミリン・アナログ
プラムリンチド（アミリン社のシミリン）
ＰＤＲ引用その他の薬剤
適用症−高血糖症
アクトス錠（武田薬品工業（株））
塩酸ピオグリタゾン  
アマリール錠（サノフィーアべンティス社）
グリメピリド
アピドラ注射（サノフィーアべンティス社）
インスリングルリジン
アバンダメット錠（グラクソ・スミス・クライン社）
塩酸メトフォルミン、マレイン酸ロシグリタゾン                  
アバンディア錠（グラクソ・スミス・クライン社）
マレイン酸ロシグリタゾン
ディアベータ錠（サノフィーアべンティス社）
グリブリド
フォルタメット徐放錠（アンドルクス社）
塩酸メトフォルミン
グルコトールXL除放錠（ファイザー社）
グリピジド
メタグリップ錠（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社）
グリピジド、塩酸メトフォルミン
プランディン錠（0.5,1，及び2mg)(ノボ・ノルディスク社）
レパグリニド
プレコース錠（バイエル社）
アカルボーズ
スタリックス錠（ノバルティス社）
ナテグリニド
ＰＤＲ引用その他の薬剤
適用症−インスリン依存型糖尿病
ヒューマログ−ペン（リリー社）
インスリン、リスプロ、ヒト
ヒューマログミックス75/25−ペン（リリー社）
インスリン、リスプロプロタミン、ヒト、インスリン、リスプロ、ヒト
ヒューマリン50/50、100ユニット（リリー社）
インスリン、ヒトレギュラ及びヒトNPH混合型
ヒューマリン70/30ペン（リリー社）
インスリン、ヒトレギュラ及びヒトNPH混合型
ヒューマリンＬ、100ユニット（リリー社）
インスリン、ヒト、亜鉛懸濁
ヒューマリンＮ、100ユニット（リリー社）
インスリン、ヒトNPH
ヒューマリンＲ（Ｕ-500）（リリー社）
インスリン、ヒトレギュラ
ヒューマリンＲ、100ユニット（リリー社）
インスリン、ヒトレギュラ
ヒューマリンＵ、100ユニット（リリー社）
インスリン、ヒト、亜鉛懸濁
ヒューマリンＮペン（リリー社）
インスリン、ヒトNPH
インノボ(ノボ・ノルディスク社）
デバイス
ランタス注入器（サノフィーアべンティス社）
インスリングラルギン
ノボリン70／30ヒトインスリン10ｍｌ  バイアル (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトレギュラ及びヒトNPH混合型
ノボリン70／30ペンフィル3ｍｌ  カートリッジ (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトレギュラ及びヒトNPH混合型
ノボリンＮ  ヒトインスリン10ｍｌ  バイアル (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトNPH
ノボリンＮ  ペンフィル3ｍｌ  カートリッジ (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトNPH混合型
ノボリンＲ  ヒトインスリン10ｍｌ  バイアル (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトレギュラー
ノボリンＲ  ペンフィル1.5ｍｌ  カートリッジ (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトレギュラー
ノボリンＲ  ペンフィル3ｍｌ  カートリッジ (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトレギュラー
ノボログ注射 (ノボ・ノルディスク社）
インスリンアスパルト、ヒトレギュラー
ノボログ混合型  70/30 (ノボ・ノルディスク社）
インスリンアスパルトプロタミン、ヒト、インスリンアスパルト、ヒト
ＰＤＲ引用その他の薬剤
適用症−インスリン非依存型糖尿病
アクトス錠（武田薬品工業（株））
塩酸ピオグリタゾン  
アマリール錠（サノフィーアべンティス社）
グリメピリド
アバンダメット錠（グラクソ・スミス・クライン社）
塩酸メトフォルミン、マレイン酸ロシグリタゾン                  
アバンディア錠（グラクソ・スミス・クライン社）
マレイン酸ロシグリタゾン
ディアベータ錠（サノフィ−アべンティス社）
グリブリド
グルコトールXL除放錠（ファイザー社）
グリピジド
ランタス注入器（サノフィーアべンティス社）
インスリングラルギン
メタグリップ錠（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社）
グリピジド、塩酸メトフォルミン
プランディン錠（0.5,1，及び2mg)(ノボ・ノルディスク社）
レパグリニド
プレコース錠（バイエル社）
アカルボーズ
スタリックス錠（ノバルティス社）
ナテグリニド
ＰＤＲ引用その他の薬剤
適用症−１型糖尿病
ランタス注入器（サノフィ−アべンティス社）
インスリングラルギン
ノボリン70／30  イノレット (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトレギュラ及びヒトNPH混合型
ノボリンＮ  イノレット (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトNPH
ノボリンＲ  イノレット (ノボ・ノルディスク社）
インスリン、ヒトNPH
ＰＤＲ引用その他の薬剤
適用症−２型糖尿病
フォルタメット徐放錠（アンドルクス社）
塩酸メトフォルミン
ランタス注入器（サノフィーアべンティス社）
インスリングラルギン
プランディン錠（0.5,1，及び2mg)(ノボ・ノルディスク社）
レパグリニド
抗肥満薬
膵リパーゼ阻害剤 
オーリスタット （ロッシュ社のゼニカル、日本ロッシュ社のゼニカル）
セロトニン及びノルエピネフリン再取り込み阻害剤
シブトラミン（アボット社／クノール・ファーマシュティカルズ社のメリディア、アストラ・ゼネカ社のリダクティル、エーザイ(株)のリダクティル）
代謝性疾患薬
フェンテルミン（グラクソ・スミス・クライン社のファスティン、メデバ社のイオナミン）
マジンドール（ワイス−エアスト社のマザノール、ノバルティス社のサノレックス）  末梢作用剤
ＡＴＬ−９６２（Alizyme社）
ＨＭＲ−１４２６（アベンティス社）
ＧＩ−１８１７７１（グラクソ・スミス・クライン社）
中枢作用剤 
組み換えヒト毛様体神経栄養因子（アクソカイン）（リジェネロン社）
リモナバン（ＳＲ−１４１７１６）（サノフィ−サンテラボ社）
ＢＶＴ−９３３（グラクソ・スミス・クライン社／バイオビトラム社）
ブプロピオンＳＲ（グラクソ・スミス・クライン社）
Ｐ−５７（フィトファーム社）
熱発生剤
ＴＡＫ−６７７（AJ-9677）（大日本製薬(株)／武田薬品工業（株））
カンナビノイドＣＢ１アンタゴニスト
アコンプリア（サノフィ−アベンティス社）
ＳＬＶ３１９（ソルベイ社）
毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）アゴニスト
アクソカイン（リジェネロン社）
その他の抗肥満薬
１４２６（サノフィ−アベンティス社）
１９５４（サノフィ−アベンティス社）
ｃ−２６２４（メルク社）
ｃ−５０９３（メルク社）
Ｔ７１（テュラリック社）
コレシストキニン（ＣＣＫ）アゴニスト 
ＧＩ１８１７７１（ＧＳＫ）
脂質代謝調節剤
ＡＯＤ９６０４（モナッシュ大学／メタボリック・ファーマシュティカル社）
リパーゼ阻害剤
ＡＴＬ９６２（Alizyme社、武田薬品工業（株））
グルカゴン様ペプチド １アゴニスト
ＡＣ１３７（アミリン社）
レプチンアゴニスト
第二世代レプチン（アムジェン社）
ベータ−3アドレナリンアゴニスト
ＳＲ５８６１１（サノフィ−アベンティス社）
ＣＰ３３１６８４（ファイザー社）
ＬＹ３７７６０４（イーライ・リリー社）
ｎ５９８４（日清キョーリン製薬（株））
ペプチド・ホルモン
ペプチドＹＹ（３−３６）（Nastech社）
ＣＮＳ調節剤
ｓ２３６７（塩野義製薬（株））
神経栄養因子
ペグアクソキン（リジェネロン社）
５ＨＴ２Ｃセロトニン受容体アゴニスト
ＡＰＤ３５６（ アリーナ・ファーマシュティカル社）
ペプチドＹＹ（３−３６）
ＡＣ１６２３５２（アミリン社）
ＰＤＲ引用その他の薬剤
適用症−肥満
Ａｄｉｐｅｘ−Ｐカプセル（Gate社）
塩酸フェンテルミン
Ａｄｉｐｅｘ−Ｐ錠（Gate社）
塩酸フェンテルミン
Ｄｅｓｏｘｙｎ錠ＵＳＰ（Ovation社） 
塩酸メタンフェタミン
イオナミン  カプセル（セルテック社）
フェンテルミン樹脂
メリディア  カプセル（アボット社）
塩酸シブトラミン一水和物
ゼニカル  カプセル（ロッシュ・ラボラトリー社）
オーリスタット
ＰＤＲ引用その他の薬剤
処方カテゴリー−食欲抑制剤
Ａｄｉｐｅｘ−Ｐカプセル（Gate社）
塩酸フェンテルミン
Ａｄｉｐｅｘ−Ｐ錠（Gate社）
塩酸フェンテルミン
Ｄｅｓｏｘｙｎ錠ＵＳＰ（Ovation社） 
塩酸メタンフェタミン
イオナミン  カプセル（セルテック社）
フェンテルミン樹脂
メリディア  カプセル（アボット社）
塩酸シブトラミン一水和物
抗アテローム性動脈硬化剤 
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（スタチン）
アトルバスタチン（ワーナー・ランバート社／ファイザー社のリピトール）
プラバスタチン（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のプラバコール、三共（株）のメバロチン）
シンバスタチン（メルク社のゾコール）
ロバスタチン（メルク社のメバコール）
フルバスタチン（ノバルティス社のレスコール）
セリバスタチン（バイエル社のリポバイ、グラクソ・スミス・クライン社のバイコール）
ロスバスタチン（アストラ・ゼネカ社のクレストール ）
ピタバスタチン（イタバスタチン／risivastatin）（日産化学工業（株）／興和（株）／三共（株）／ノバルティス社）
フィブレート系
ベザフィブレート（ベーリンガー・マンハイム社／ロッシュ社のベザリップ、キッセイ薬品(株)のベザトール）
クロフィブレート（ワイス−エアスト社のAtromid-Sのジュネリック医薬品)
フェノフィブレート（フルニエ社のリピディル、アボット社のトリコール、武田薬品(株)のリパンチルのジュネリック医薬品）
ゲムフィブロジル（ファイザー社のロピッドのジュネリック医薬品)
胆汁酸抑制剤
コレスチラミン（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のクエストランとクエストラン・ライトのジュネリック医薬品）
コレスチポール（ファーマシア社のコレスチド）
ナイアシン 
ナイアシン−即効性（アベンティス社のNicobid、Upsher-Smith社のNiacor、アベンティス社のNicolar、(株)三和化学研究所のペリシットのジュネリック医薬品）
ナイアシン−徐放性（コス・ファーマシューティカルズ(株)のナイアスパン、Upsher-Smith社のスローナイアシン）
抗血小板剤
アスピリン(バイエル社のアスピリンのジュネリック医薬品)
クロピドグレル（サノフィー−サンテラボ社／ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のプラビックス）
チクロピジン（サノフィー−サンテラボ社チクリド、第一製薬(株)のパナルジンのジュネリック医薬品)
アンジオテンシ変換酵素阻害剤
ラミプリル（アベンティス社のアルテース）
エナラプリル（メルク社のバソテック）
アンジオテンシンII受容体アンタゴニスト
ロサルタンカリウム（メルク社のコザール）
アシルCoAコレステロールアセチルトランスフェラーゼ（ACAT）阻害剤
アバシミブ（ファイザー社）
エフルシミブ（Bio Merieux Pierre Fabre社／イーライ・リリー社）
ＣＳ−５０５（三共(株)と京都薬品工業（株））
ＳＭＰ−７９７（住友製薬(株)）
コレステロール吸収阻害剤
エゼチミブ（シェリング−プラウ社／メルク社）
パマクエシド(ファイザー社)
コレステロールエステル転送タンパク質（CETP）阻害剤
ＣＰ−５２９４１４(ファイザー社)
ＪＴＴ−７０５（日本たばこ産業(株)）
ＣＥＴｉ−１（Avant Immunotherapeutics社)
ミクロゾームトリグリセリド転移タンパク質(MTTP)阻害剤 
インプリタピド(バイエル社)
Ｒ−１０３７５７（Janssen社)
他のコレステロール調節剤
ＮＯ−１８８６（大塚製薬(株)／ＴＡＰファーマシュティカル社）
ＣＩ−１０２７（ファイザー社）
ＷＡＹ−１３５４３３（ワイス−エアスト社）
胆汁酸調節剤
ＧＴ１０２−２７９（ジェル・テックス社／三共(株)）
ＨＢＳ−１０７（久光製薬／万有製薬(株)）
ペルオキシゾーム増殖活性化受容体(PPAR)アゴニスト
テサグリタザル(AZ-242)（アストラ・ゼネカ社)
ネトグリタゾン(MCC-555)（三菱ウェルファーマ社／Johnson&Johnson社)
ＧＷ−４０９５４４(リガンド・ファーマシュティカルズ社／グラクソ・スミス・クライン社)  
ＧＷ−５０１５１６(リガンド・ファーマシュティカルズ社／グラクソ・スミス・クライン社)  
遺伝子治療
ＡｄＧＶＶＥＧＦ１２１．１０（ジェン・ベック社）
ＡｐｏＡ１（ＵＣＢファーマシュティカル社／グループ・フルニエ）  
ＥＧ−００４(Trinam)（アーク・セラピューティクス社)
ＡＴＰ−結合輸送膜−Ａ１(ABCA1)（ＣＶセラピューティクス社／Incyte社、アベンティス社、Xenon社)
複合血管保護薬
ＡＧＩ−１０６７（アテロジェニクス社)
他の抗アテローム性動脈硬化剤
ＢＯ−６５３（中外製薬(株)）
糖タンパク質Ｉｌｂ／ＩＩＩａ阻害剤
ロキシフィバン（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
ガントフィバン（山之内製薬(株)）
クロマフィバン（ミレニアム・ファーマシューティカルズ社）
アスピリンとアスピリン様化合物
アサカード（徐放性アスピリン）(ファーマシア社)
パミコグレル（カネボウ（株）／Angelini Ricerche社／ＣＥＰＡ）
併用療法
アドビコール(ナイアシン／ロバスタチン)（コス・ファーマシューティカルズ社）
アムロジピン／アトルバスタチン（ファイザー社）
シンバスタチン／エゼチミベ（メルク社/シェリング・プラウ社）
ＩＢＡＴ阻害剤
Ｓ−８９２１（塩野義製薬(株)）
スクワレンシンターゼ阻害剤
ＢＭＳ−１８８４９４  Ｉ（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
ＣＰ−２１０１７２（ファイザー社）
ＣＰ−２９５６９７（ファイザー社）
ＣＰ−２９４８３８（ファイザー社）
単球走化性タンパク質(MCP)−Ｉ阻害剤
ＲＳ−５０４３９３（ロシュ・バイオサイエンス社）
他のＭＣＰ−Ｉ阻害剤（グラクソ・スミス・クライン社、帝人(株)とブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
ＰＤＲ引用のその他の薬剤
適応症−高コレステロール血症
アドビコール錠（コス社)
ロバスタチン、ナイアシン
アルトプレブ徐放性錠(アンドルクス・ラブ社)
ロバスタチン
カデュエット錠(ファイザー社)
ベシル酸アムロジピン、アトルバスタチンカルシウム
クレストール錠（アストラ・ゼネカ社)    
ロスバスタチンカルシウム
レスコール  カプセル(ノバルティス社)
フルバスタチンナトリウム
レスコール  カプセル(Reliant社)
フルバスタチンナトリウム
レスコールXL錠(ノバルティス社)
フルバスタチンナトリウム
レスコールXL錠(Reliant社)
フルバスタチンナトリウム
リピトール錠（パーク・デービス社）  
アトルバスタチンカルシウム
Lofibra錠（Gate社) 
フェノフィブレート
メバコール錠（メルク社）
ロバスタチン
ナイアスパン徐放錠(コス社)
ナイアシン
プラバコール錠（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
プラバスタチンナトリウム
トリコール錠（アボット社)
フェノフィブレート
ヴィトリン10/10錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/10錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/20錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/20錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/40錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/40錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/80錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/80錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ウェルコール錠（三共(株)）
塩酸コレセベラム  
ゼティア錠（シェーリング社)
エゼチミベ  
ゼティア錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ
ゾコール錠（メルク社）
シンバスタチン  
抗異常脂質血症
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤
アトルバスタチン（ファイザー社のリピトール／Tahor/Sortis/Torvast/Cardyl）
シンバスタチン（メルク社のゾコール/Sinvacor、ベーリンガー・インゲルハイム社のDenan、万有製薬(株)のリポバス)
プラバスタチン（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のプラバコール、三共（株）のメバロチン／Sanaprav）
フルバスタチン（ノバルティス社のレスコール／ロコール／ローコール、藤沢薬品(株)のクラノック、ソルベイ社のDigaril）
ロバスタチン（メルク社のメバコール／Mevinacor、Bexal社のLovastatina、Cepa社
;シュワルツ・ファーマ社のLiposcler）
ロスバスタチン（アストラ・ゼネカ社のクレストール ）
ピタバスタチン（日産化学工業(株)／興和(株)／三共(株)とノバルティス社）
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤併用治療
シンバスタチン／エゼチミベ（メルク社とシェーリング・プラウ社）
フィブレート系
フェノフィブレート（アボット社のトリコール、フルニエ社のリピディル／リパンチル）
ベザフィブレート（ロッシュ社のBefizal/Cedur/ベザリップ、キッセイ薬品(株)のベザトールのジュネリック医薬品）
ゲムフィブロジル（ファイザー社のロピッド／リピュールのジュネリック医薬品)
クロフィブレート（ワイス社のAtromid-Sのジュネリック医薬品)
シプロフィブレート（サノフィー−サンテラボ社のモダリム）
胆汁酸抑制剤
コレスチラミン（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のクエストラン）
コレスチポール（ファイザー社のコレスチド）
コレセベラム（ジェンザイム／三共(株)のウェルコール）  
コレステロール吸収阻害剤
エゼチミブ（メルク社とシェリング−プラウ社のゼティア）
パマクエシド(ファイザー社)
ニコチン酸誘導体
ニコチン酸（コス社のナイアスパン、山之内製薬(株)のナイクリン） 
アシルCoAコレステロールアセチルトランスフェラーゼ阻害剤
アバシミブ（ファイザー社）
エフルシミブ（イーライ・リリー社）
コレステロールエステル転送タンパク質阻害剤
トルセトラピブ（ファイザー社)
ＪＴＴ−７０５（日本たばこ産業(株)）
ＣＥＴｉ−１（Avant Immunotherapeutics社)
ミクロゾームトリグリセリド転移タンパク質阻害剤 
インプリタピド(バイエル社)
ＣＰ−３４６０８６(ファイザー社)
ペルオキシゾーム増殖剤応答性受容体アゴニスト
ＧＷ−５０１５１６(リガンド・ファーマシュティカルズ社とグラクソ・スミス・クライン社)  
テサグリタザル（アストラ・ゼネカ社)
ＬＹ−９２９(リガンド・ファーマシュティカルズ社とイーライ・リリー社）
ＬＹ−４６５６０８(リガンド・ファーマシュティカルズ社とイーライ・リリー社）
ＬＹ−５１８６７４(リガンド・ファーマシュティカルズ社とイーライ・リリー社）
ＭＫ−７６７(メルク社と杏林製薬(株)）
スクワレンシンターゼ阻害剤
ＴＡＫ−４７５（武田薬品工業(株))
他の新しいアプローチ
ＭＢＸ−１０２(メタボレックス社)    
ＮＯ−１８８６（大塚製薬(株)）
ゲムカベン（ファイザー社）
肝Ｘ受容体アゴニスト
ＧＷ−３９６５（グラクソ・スミス・クライン社）
ＴＵ−０９０１３１７（Tularik社）
胆汁酸調節剤
ＢＴＧ−５１１（ブリティッシュ・テクノロジーグループ）
ＨＢＳ−１０７（久光製薬(株)と万有製薬(株)）
ＢＡＲＩ−１４５３（アベンティス社)
Ｓ−８９２１（塩野義製薬(株)）
ＳＤ−５６１３(ファイザー社)
ＡＺＤ−７８０６（アストラ・ゼネカ社)
ＰＤＲ引用のその他の薬剤
適応症−高コレステロール血症
アドビコール錠（コス社)
ロバスタチン、ナイアシン
アルトプレブ徐放性錠(アンドルクス・ラブ社)
ロバスタチン
カデュエット錠(ファイザー社)
ベシル酸アムロジピン、アトルバスタチンカルシウム
クレストール錠（アストラ・ゼネカ社)    
ロスバスタチンカルシウム
レスコール  カプセル(ノバルティス社)
フルバスタチンナトリウム
レスコール  カプセル(Reliant社)
フルバスタチンナトリウム
レスコールXL錠(ノバルティス社)
フルバスタチンナトリウム
レスコールXL錠(Reliant社)
フルバスタチンナトリウム
リピトール錠（パーク・デービス社）  
アトルバスタチンカルシウム
Lofibra錠（Gate社) 
フェノフィブレート
メバコール錠（メルク社）
ロバスタチン
ナイアスパン徐放錠(コス社)
ナイアシン
プラバコール錠（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
プラバスタチンナトリウム
トリコール錠（アボット社)
フェノフィブレート
ヴィトリン10/10錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/10錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/20錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/20錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/40錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/40錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/80錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ヴィトリン10/80錠（シェーリング社）
エゼチミベ、シンバスタチン、
ウェルコール錠（三共(株)）
塩酸コレセベラム  
ゼティア錠（シェーリング社)
エゼチミベ  
ゼティア錠（メルク社／シェーリング・プラウ社）
エゼチミベ
ゾコール錠（メルク社）
シンバスタチン  
抗高血圧薬
利尿薬
クロルタリドン(アライアンス社のハイグロトンのジュネリック医薬品)
メトラゾン（ジェネリックス）
インダパミド（セルヴィエ社のナトリックス／Tertensif、アベンティス社のLozol、メルク社のインダパミドのジュネリック医薬品）
ブメタニド(レオ社のブリネックス、三共(株)のルネトロン、ロッシュ社のブメックスのジュネリック医薬品）
エタクリン酸（メルク社のエデクリン）
フロセミド（アベンティス社のラシリックス／ラシックス／オイテンシン／Segurilのジュネリック医薬品）
トルセミド（ロッシュ社のデマデックスのジュネリック医薬品）
塩酸アミロリド（メルク社のミダモールのジュネリック医薬品）
スピロノラクトン（ファーマシア社のSpirolang／アルダクトン、ミラン社のスピロノラクトンのジュネリック医薬品）
トリアムテレン（グラクソ・スミス・クライン社のジウテレン、Goldshield社のDytac、イセイ社のトリアムテレン／トリテレン）
α−遮断薬
メシル酸ドキサゾシン(ファイザー社のZoxan／カルデュラ／カルデナリン、ヘキサル社のDoxacorのジュネリック医薬品）
塩酸プラゾシン（ファイザー社のミニプレスのジュネリック医薬品）
塩酸テラゾシン（アボット社のハイトリン／Flotrin／Heitrin／イトリン／Deflox、三菱ウェルファーマ社のバソメットのジュネリック医薬品）
β−遮断薬
アセブトロール(バイエル社のプレント、ワイス社のセクトラール、アベンティス社のアセタノールのジュネリック医薬品）
アテノロール（アストラ・ゼネカ社／住友製薬(株)のテノルミンのジュネリック医薬品）
ベタキソロール（サノフィー・シンセラボ社のケルロンのジュネリック医薬品）
フマル酸ビソプロロール（Merck KGaA社のCardicor、Lipha Sante社のDensiel/Cardentiel、Lederle社のMonacor/Zebetaのジュネリック医薬品）
塩酸カルテオロール（Lipha Sante社／大塚製薬(株)のミケラン、アボット社のカルトロール）
酒石酸メトプロロール(ノバルティス社のロプレゾール／Prelis、アストラ・ゼネカ社のセロケン／ベタロックのジュネリック医薬品）
コハク酸メトプロロール（アストロゼネカ社のトップロール-XL Herz-miteのジュネリック医薬品）
ナドロール(ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社／サノフィー・シンセラボ社のCorgardのジュネリック医薬品)
硫酸ペンブトロール（シュワルツ・ファーマ社のレバトール、Wolff社／アベンティス社のベータプレシン）
ピンドロール（ノバルティス社のビスケンのジュネリック医薬品)
塩酸プロパノロール（アストラ・ゼネカ社のインデラル／ドシトン、ワイス社のインデラルLAのジュネリック医薬品)
マレイン酸チモロール(メルク社のブロカドレンのジュネリック医薬品)
カルベジロール（ロッシュ社のコレグ／Dilatrend/Coropres/Eucardic、グラクソ・スミス・クライン社のコレグ）
Ｃａ＋２チャネル遮断薬
ベシル酸アムロジピン（ファイザー社のアムロール／Istin／ノルバスク）
フェロジピン（アストラ・ゼネカ社のFlodil／Modip／プレンジル／Splendil）
イスラジピン（ノバルティス社のロミール／Prescal）
ニカルジピン（ロッシュ社／山之内製薬（株）のCardeneのジュネリック医薬品)
ニフェジピン（バイエル社のアダラットのジュネリック医薬品)
ニソルジピン（アストラ・ゼネカ社のSular、バイエル社のSyscorMR／バイミカード ）
塩酸ジルチアゼム（サノフィー・シンセラボ社のティルジエム／Angizem60、ファイザー社のDinisorのジュネリック医薬品)
塩酸ベラパミル（クノール社のIsoptin Press/Manidon Retard/セキュロン、ファーマシア社のCalan／Coveraのジュネリック医薬品) 
アゼルニジピン（三共（株）／宇部興産(株)）
プラニジピン（大塚製薬(株)）
段階的ジルチアゼム製剤（Biovail社）
（ｓ）−アムロジピン(セプラコール／Emcure）
クレビジピン（アストラ・ゼネカ社／The Medicines Company）
アンギオテンシン変換酵素阻害剤
塩酸ベナゼプリル(ノバルティス社のチバセン/ロテンシン ）
カプトプリル（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のロプリル／ロピリン／カポテン／Acepress、サノフィー・シンセラボ社のAlopresinのジュネリック医薬品)
マレイン酸エナラプリル（メルク社のバソテック、万有製薬(株)のレニベースのジュネリック医薬品)
フォシノプリルナトリウム（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のFosinorm/Tensogard/Fosinir/Staril/モノプリル）
リシノプリル（メルク社のプリニビル／アストラ・ゼネカ社のゼストリル）
モエキシプリル（シュワルツ社のMoex／Fempress／ユニバスク）
ペリンドプリル（セルビエ社のConversyl） 
塩酸キナプリル（ファイザー社のアキュプリル／Acuitel/Accuprin/Acuprel、サノフィー・シンセラボ社のKorecのジュネリック医薬品)
ラミプリル（アベンティス社のアルタス)
トランドラプリル（アボット社のGopten/Mavik）
アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト
ロサルタン(メルク社のコザール)
バルサルタン（ノバルティス社のTareg／ディオバン、アベンティス社のニシス）
イルベサルタン（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社／サノフィー・シンセラボ社のアプロベル／Karvea）
カンデルサルタン(アストラ・ゼネカ社のアタカンド／Ratacand／アミアス、武田薬品工業(株)のブロプレス）
テルミサルタン（ベーリンガー・インゲルハイム社のミカルディス）
エプロサルタン(ソルベイ社のテベテン）
オルメサルタン(三共(株)／レコルダチ社／メナリニ社／フォレスト社／興和(株)）
ＹＭ−３５８（山之内製薬(株))）  
併用療法
塩酸ベナゼプリル／ヒドロクロロチアジド(ノバルティス社のCibadrex/ロテンシン HCT）
カプトプリル／ヒドロクロロチアジド（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のCapozide／Ecazide)
マレイン酸エナラプリル／ヒドロクロロチアジド（メルク社のVasorectic／Co Renitec/Innozide、アストラ・ゼネカ社のLexxelのジュネリック医薬品)
リシノプリル／ヒドロクロロチアジド（メルク社のPrinzide、アストラ・ゼネカ社のZestorectic)
ロサルタン／ヒドロクロロチアジド(メルク社のハイザール)
アテノロール／クロルタリドン(アストラ・ゼネカ社のTenoreticのジュネリック医薬品)
フマル酸ビソプロロール／ヒドロクロロチアジド(Lederle社のZiacのジュネリック医薬品)
酒石酸メトプロロール／ヒドロクロロチアジド（ノバルティス社のロプレソールHCT、ファーマシア社のSelopresin/Selozide） 
アムロジピンベシラート／塩酸ベナゼプリル（ファイザー社のノルバスク、ノバルティス社のロトレル）
フェロジピン／マレイン酸エナラプリル（アストラ・ゼネカ社のLexxel）
塩酸ベラパミル／トランドラプリル(クノール社／アボット社のTarka、アベンティス社のUdramil）
レルカニジピンとエナラプリル（レコルダチ社／ピエール・ファブレ社）
オルメサルタン／ヒドロクロロチアジド(三共（株）)
エプロサルタン／ヒドロクロロチアジド（ユニメド社）
アムロジピンベシラート／アトルバスタチン（ファイザー社）
ニトレンジピン／エナラプリル（Vita Invest社)
バソペプチダーゼ阻害剤
オマパトリラト（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
ゲモパトリラト（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
ファシドトリル（イーライ・リリー社）
サムパトリラト（ファイザー社／Shire社）
ＡＶＥ  ７６８８（アベンティス社）
Ｍｌ００２４０（アベンティス社）
Ｚ１３７５２Ａ（Zambon社／GSK社）
７９６４０６（Zambon社／GSK社）
デュアル中性エンドペプチダーゼ及びエンドセリン変換酵素（ＮＥＰ／ＥＣＥ）阻害剤    ＳＬＶ３０６（ソルベイ社）
ＮＥＰ阻害剤
エカドトリル（バイオプロジェクト社）
アルドステロンアンタゴニスト
エプレレノン（ファーマシア社）
レニン阻害剤
アリスキレン（ノバルティス社）
ＳＰＰ５００（ロッシュ社／スピーデル社）
ＳＰＰ６００（スピーデル社）
ＳＰＰ８００（Locus社／スピーデル社）
アンギオテンシンワクチン
ＰＭＤ−３１１７（プロテリックス社）
ＡＣＥ／ＮＥＰ阻害剤
ＡＶＥ−７６８８（アベンティス社）
ＧＷ−６６０５１１（Zambon SpA社）
Ｎａ＋／Ｋ＋ＡＴＰアーゼ調節剤
ＰＳＴ−２２３８（Prassis-Sigma-Tau社）
エンドセリンアンタゴニスト
ＰＤ−１５６７０７（ファイザー社）
血管拡張薬
ＮＣＸ−４０１６（NicOx社）
ＬＰ−８０５（ポラ社／ワイス社）
ナトリウム利尿ペプチド
ＢＤＮＰ（Mayo Foundation）
アンギオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢｓ）
プラトサルタン（プラトサルタン社／ボリョン社）
ＡＣＥ架橋切断剤
塩化アラゲブリウム（アルテオン社）
エンドセリン受容体アゴニスト
テゾセンタン（ジェネンテク社）
アムブリセンタン（マイオゲン社）
ＢＭＳ１９３８８４（BMS社）
シタクスセンタン（Encysive Pharmaceuticals社）
ＳＰＰ３０１（ロッシュ社／スピーデル社）
ダルセンタン（マイオゲン社／アボット社）
Ｊ１０４１３２（万有製薬（株）／メルク社）
ＴＢＣ３７１１（Encysive Pharmaceuticals社）
ＳＢ２３４５５１（GSK社／塩野義製薬(株)）
他の抗高血圧薬
ＭＣ４２３２（マニトバ大学／Medicure社）
ＰＤＲ引用のその他の薬剤
適応症−高血圧症
アキュプリル錠（パーク・デービス社）
塩酸キナプリル
アキュレティック錠（パーク・デービス社）
ヒドロクロロチアジド、塩酸キナプリル
アセオン錠(2ｍｇ、4ｍｇ、8ｍｇ)(ソルベイ社)
ペリンドプリルエルブミン
アダラトCC錠(バイエル社)
ニフェジピン 
Aldoclor錠(メルク社）
クロロチアジド、メチルドパ
アルドリル錠（メルク社）
ヒドロクロロチアジド、メチルドパ
アルタス  カプセル(キング社）
ラミプリル
アタカンド錠（アストラゼネカLP社）    
カンデサルタン シレキセチル
アタカンド HCT 16-12.5錠（アストラゼネカLP社）    
カンデサルタン シレキセチル、ヒドロクロロチアジド
アタカンド HCT 32-12.5錠（アストラゼネカLP社）    
カンデサルタン シレキセチル、ヒドロクロロチアジド
Avalide錠（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
ヒドロクロロチアジド、イルベサルタン
アバプロ錠（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社）
イルベサルタン
アバプロ錠（サノフィー・アベンティス社）
イルベサルタン
ベニカール錠（三共(株)）
オルメサルタン メドキソミル
ベニカールHCT錠（三共(株)）
ヒドロクロロチアジド、オルメサルタン メドキソミル
ブロカドレン錠（メルク社）
マレイン酸チモロール
カデュエット錠（ファイザー社）
ベジル酸アムロジピン、アトルバスタチンカルシウム  
カプトプリル錠（ミラン社）
カプトプリル
カルデネI.V.（ESPファーマ社）
塩酸ニカルジピン
カルディゼムLA徐放錠(Biovail社）
塩酸ジルチアゼム
カタプレス錠（ベーリンガー・インゲルハイム社）
塩酸クロニジン
カタプレス−TTS（ベーリンガー・インゲルハイム社）
クロニジン
クロルプレス錠（ミラン・ベルテック社）
クロルタリドン、塩酸クロニジン
コレグ錠（グラクソ・スミス・クライン社）
カルベジドール
コルジド40／5錠（キング社）
ベンドロフルメチアジド、ナドロール
コルジド80／5錠（キング社）
ベンドロフルメチアジド、ナドロール
コベラHS錠（Searle社）
塩酸ベラパミル
コザール錠（メルク社）
ロサルタンカリウム
デマデックス錠と注入器（ロッシュ・ラボラトリー社）  
トルセミド
ディオバンHCT錠（ノバルティス社）
ヒドロクロロチアジド、バルサルタン
ディオバン錠（ノバルティス社）
バルサルタン
ディウリル経口懸濁剤（メルク社）
クロロチアジド
ディウリル錠（メルク社）
クロロチアジド
ダイアジドカプセル（グラクソ・スミス・クライン社）
ヒドロクロロチアジド、トリアムテレン
ダイナシルクCR錠（Reliant社）
イスラジピン
フロセミド錠（ミラン社）
フロセミド
ヒドロDIURIL錠（メルク社）  
ヒドロクロロチアジド
ハイトリンカプセル（アボット社）
塩酸テラゾシン    
ハイザール50−12．5錠（メルク社）
ヒドロクロロチアジド、ロサルタンカリウム
ハイザール100−12．5錠（メルク社）
ヒドロクロロチアジド、ロサルタンカリウム
インダパミド錠（ミラン社）
インダパミド
インデラルLA長時間作用型カプセル（ワイス社）
塩酸プロパノール
インノプランXLカプセル（Reliant社）
塩酸プロパノール
インスプラ錠（ファイザー社）
エプレレノン
インベルシン錠（ターガセプト社）  
塩酸メカミラミン
イソプチンSR錠（アボット社）
塩酸ベラパミル
ロテンシン錠（ノバルティス社）  
塩酸ベナゼプリル
ロテンシンHCT錠（ノバルティス社）  
塩酸ベナゼプリル、ヒドロクロロチアジド
ロトレルカプセル（ノバルティス社）  
ベシル酸アムロジピン、塩酸ベナゼプリル
マビック錠（アボット社）
トランドラプリル
マックスジド錠（ミラン・ベルテック社）
ヒドロクロロチアジド、トリアムテレン
マックスジド−25mg錠（ミラン・ベルテック社）
ヒドロクロロチアジド、トリアムテレン
ミカルディス錠（ベーリンガー・インゲルハイム社）
テルミサルタン
ミカルディスHCT錠（ベーリンガー・インゲルハイム社）
ヒドロクロロチアジド、テルミサルタン
ミダモール錠（メルク社）
塩酸アミロリド
モデュレティク錠（メルク社）
塩酸アミロリド、ヒドロクロロチアジド
ナドロール錠（ミラン社）
ナドロール
ノルバスク錠（ファイザー社）
ベシル酸アムロジピン
プリニビル錠（メルク社）
リシノプリル
プリンジド錠（メルク社）
ヒドロクロロチアジド、リシノプリル
Sular錠（ファースト・ホリゾン社）
ニソルジピン
Tarka錠（アボット社）
トランドラプリル、塩酸ベラパミル
テベテン錠（Biovail社）
エプロサルタンメシラート
テベテンHCT錠（Biovail社）
エプロサルタンメシラート、ヒドロクロロチアジド
ティアザックカプセル（フォレスト社）
塩酸ジルチアゼム
チモリド錠（メルク社）
ヒドロクロロチアジド、マレイン酸チモロール
トプロール−ＸＬ錠（アストラ・ゼネカLP社）
酒石酸メトプロロール
ユニレティク錠（シュワルツ社）
ヒドロクロロチアジド、塩酸モエキシプリル
ユニバスク錠（シュワルツ社）
塩酸モエキシプリル
バセレティック錠（メルク社）
マレイン酸エナラプリル、ヒドロクロロチアジド
バソテックI.V.注射（メルク社）
マレイン酸エナラプリル
ベレランPMカプセル（シュワルツ社）  
塩酸ベラパミル
ザロキソリン錠（セルテック社）
メトラゾン
【図１】
2008513465.tif 000013
【図２】
2008513465.tif 000014
【図３】
2008513465.tif 000015
【図４】
2008513465.tif 000016
【図５】
2008513465.tif 000017
【図６】
2008513465.tif 000018
【図７】
2008513465.tif 000019
【図８】
2008513465.tif 000020
【図９】
2008513465.tif 000021
【図１０】
2008513465.tif 000022
【図１１−１】
2008513465.tif 000023
【図１１−２】
2008513465.tif 000024
【図１２】
2008513465.tif 000025
【図１３−１】
2008513465.tif 000026
【図１３−２】
2008513465.tif 000027
【図１４】
2008513465.tif 000028
【図１５】
2008513465.tif 000029
【図１６】
2008513465.tif 000030
【図１７】
2008513465.tif 000031
【図１８】
2008513465.tif 000032
【図１９】
2008513465.tif 000033
【図２０】
2008513465.tif 000034
【図２１】
2008513465.tif 000035
【国際調査報告】
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