(57)【要約】【解決手段】移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造のキモトリプシンによる加水分解によって得られ得る、少なくとも１つの物質を含む、舌下、口腔内または腸内投与のための医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造のキモトリプシンによる加水分解によって得られ得る、少なくとも１つの物質を含む、舌下、口腔内または腸内投与のための医薬組成物。
【請求項２】
該少なくとも１つの物質の量が、0.001〜1000μg、好ましくは1〜100μgの範囲内であるであることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
該少なくとも１つの物質が、タンパク質の加水分解によって得られ得ることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
該少なくとも１つの物質がペプチドであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
該ペプチドの分子量が30kDA未満、好ましくは10kDa未満であることを特徴とする、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ヌクレオシド三リン酸、ヌクレオシド二リン酸、ヌクレオシド一リン酸、核酸、ペプチド核酸、ヌクレオシドまたはその類似体、免疫抑制性サイトカイン、免疫プロテアソームの発現を引き起こす化合物、1,25-ジヒドロキシビタミンD3またはその類似体、リポ多糖類、菌体内毒素、熱ショック蛋白質、NADPHまたはNADPチオレドキシン還元酵素のいずれかを有するチオレドキシン、ジチオトレイトール、サルブタノール等のアドレナリン受容体作動薬、ブトキサミン等のアドレナリン受容体拮抗薬、接着分子ICAM-1の発現を調節する化合物、 N-アセチル-L‐システイン、y-L-グルタミル-L-システイニル-グリシン(還元型L-グルタチオン)、α-2-マクログロブリン、Foxp3遺伝子発現誘導剤、フラボノイド、イソフラボノイド、プテロカルパノイド、レスベラトロール等のスチルベン、タキキニン受容器拮抗薬、キマーゼ阻害薬、植物レクチン等の腸管粘膜上皮に粒子を付着させるための粘膜接着剤、亜鉛、亜鉛塩、多糖、ビタミン及びバクテリア溶解物の群から選択される、少なくとも１つの物質をさらに含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
該抗原構造が、インスリン、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、II型コラーゲン、グリアジン、GAD65、プロテオリピド・タンパク質、S抗原、アセチルコリン受容体、ハプテン化結腸タンパク質、光受容体間のレチノイド結合蛋白質、ミエリン塩基性蛋白質、ミエリン乏突起神経膠細胞糖タンパク質、末梢神経P2、細胞質TSH受容体、内因子、水晶体タンパク質、血小板、ヒストン等の核タンパク質、熱ショック蛋白質、MHC I、MHC II、MHCペプチド複合体、ミルク・アレルゲン、毒アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、草アレルゲン、木アレルゲン、低木アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、菌類アレルゲン、果実アレルゲン、液果アレルゲン、堅果アレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルゲン、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニ・アレルゲン、動物アレルゲン、動物鱗屑アレルゲン、バラゴムノキ（ヘベアブラジリエンシス）のアレルゲン、凝固因子及び血液群抗原より選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患の治療または予防のための、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
経口耐性の誘導、及び／または、免疫抑制性サイトカイン、より好ましくはTGF-β及び／またはIL-4及び／またはIL-10を産生し得る細胞の誘導ための、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１０】
・移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造をキモトリプシンで加水分解して、少なくとも１つの物質を得る工程
・該少なくとも１つの物質を、腸内、舌下または腸内投与用に製剤化する工程
を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１１】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造をキモトリプシンで加水分解して得られ得る少なくとも１つの物質を含む、組成物。
【請求項１２】
舌下製剤である請求項１または２の医薬組成物。
【請求項１３】
口腔内製剤である請求項１または２の医薬組成物。
【請求項１４】
腸内製剤である請求項１または２の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物、及び医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体の好ましからざる抗原認識による、またはT-細胞が介在する、多くの重症疾患がある。これらの疾患にはアレルギー反応及び自己免疫性疾患が含まれ、抗原／抗体反応は移植後の移植片拒絶の原因でもある。
【０００３】
免疫反応またはその疾病の徴候を抑制する多くの薬物がある一方、満足な原因療法は利用できる状態にない。 多くの実験および研究にもかかわらず、なお新しい医薬組成物は必要である。
【０００４】
国際特許WO88/10120号には、特定の自己免疫性疾患に特異的な、自己抗原、自己抗原のフラグメント、または、それら自己抗原と構造的に関連するアナログを、経口または腸内投与することによって、動物におけるT細胞が介在する自己免疫性疾患を治療する方法が開示されている。
【０００５】
米国特許第6,312,711号には、ストレス蛋白質GroEL、GrpE、DnaK及びDnaJの群から選択されるストレス蛋白質と、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫反応に関連する抗原構造の立体構造エピトープまたは連続するエピトープの少なくとも１つとを含む、医薬及び／または食品組成物が開示されている。
【０００６】
プケー(Pecquet)らは、ワクチン(Vaccine)18(2000)1196〜1202において、封入されたβ-ラクトグロブリンによって、マウスの経口耐性を誘導したことを開示している。 この文献で述べられている様に、同様の研究に関して、別のグループより意見の分かれる結果が得られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、アレルギーまたは自己免疫反応に関連する疾患または移植片拒絶に対する患者の免疫反応を緩和するために開発された、新規な医薬組成物を提供することである。
【０００８】
さらなる目的は、信頼性かつ再現性のある組成物を提供することであった。
【０００９】
別の目的は、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患の治療または予防方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の１つの態様において、本発明は、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造のキモトリプシンによる加水分解によって得られ得る、少なくとも１つの物質を含む、舌下、口腔内または腸内投与のための医薬組成物を提供する。
【００１１】
本発明の別の態様は、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患の治療または予防のため、または、経口耐性の誘導(elicting)及び／または免疫抑制性サイトカイン、より好ましくはTGF-β及び／またはIL-4及び／またはIL-10を産生し得る細胞の誘導ための、本発明の組成物の使用である。
【００１２】
本発明の組成物は、哺乳類、特にヒトにおける、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患の治療または予防に特に有用である。
【００１３】
さらなる態様において、本発明は、
・移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造を、キモトリプシンまたはキモトリプシン様活性を有するタンパク質で加水分解して、少なくとも１つの物質を得る工程
・前記の少なくとも１つの物質を、腸内、舌下または口腔内投与用に製剤化する工程
を含む、本発明の医薬組成物の製造方法を提供する。
【００１４】
本発明は、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造のキモトリプシンによる加水分解によって得られ得る、少なくとも１つの物質を含む、舌下、口腔内または腸内投与のための医薬組成物を提供する。
【００１５】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患は、特にアレルゲンとの接触による、即時型または遅延型の過敏反応であり（この反応は即時かつ特異的であるか(アナフィラキシー、蕁麻疹等)、または長期に遅延し得る）、または、即時型または遅延型の自己免疫性疾患及び免疫系の障害は、移植片に対するホスト型またはホストに対する移植片型の移植片拒絶と関係がある。
【００１６】
自己免疫性疾患または障害は、自身の成分に対する個体の免疫の状態であり、移植片拒絶の現象は、患者との接触でもたらされる異質の成分に対する個体の免疫の状態である。代表的な自己免疫性疾患は、通称、全身性エリテマトーデス、シェーグレン病、リウマチ性多発関節炎、サルコイドーシス及び骨減少症等の病理と同様の、脊椎関節炎、硬皮症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、甲状腺機能亢進症、アジソン疾病、自己免疫溶血性貧血、クローン病、ゴッドパスチャー(Goddpasture's)症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、特発性出血性紫斑病、インスリン依存性糖尿病、筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、溶連菌感染後糸球体腎炎(glomerulonephrtitis)、乾癬及び自然発症不妊症(spontaneous sterility)である。
【００１７】
「抗原構造」という用語は、ペプチド、脂質、多糖及び／または核酸より成るアレルゲン等の高分子に及ぶ。代表的な抗原構造は、通称、インスリン、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、II型コラーゲン、グリアジン、GAD65、プロテオリピド・タンパク質、S抗原、アセチルコリン受容体、ハプテン化結腸タンパク質、光受容体間のレチノイド結合蛋白質、ミエリン塩基性蛋白質、ミエリン乏突起神経膠細胞糖タンパク質、末梢神経P2、細胞質TSH受容体、内因子、水晶体タンパク質、血小板、ヒストン等の核タンパク質、熱ショック蛋白質、MHC I、MHC II、MHCペプチド複合体、ミルクアレルゲン、毒アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、草アレルゲン、木アレルゲン、低木アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、菌類アレルゲン、果実アレルゲン、液果アレルゲン、堅果アレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルゲン、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニ・アレルゲン、動物アレルゲン、動物鱗屑アレルゲン、バラゴムノキ（ヘベアブラジリエンシス）のアレルゲン、凝固因子及び血液群抗原である。
【００１８】
本発明によれば、組成物は、抗原構造の加水分解によって得られ得る少なくとも１つの物質を含み、即ち、本発明によれば、完全な抗原構造ではなく、抗原構造のフラグメントが用いられる。
【００１９】
驚くべきことに、キモトリプシンによる加水分解によって、ペプシンまたは他のトリプシンによる加水分解と比較して、改良された医薬組成物が提供される。しかしながら、この観察にとらわれず、国際生化学連合及び国際分子生物学連合の命名法委員会によるリスト、MEROPSデータベースhttp://www.merops.co.uk、及び核酸(Nucleid Acids) Res. 2004:32 データベース刊行物:D160-4.のリスト、及びバレット(Barret)AJの、ローリングス(Rawlings)NDワスナー(Woessner)JF版、1998蛋白分解酵素ハンドブック(Handbook of Proteolytic Enzymes)、アカデミックプレスロンドン(Academic Press Londong)のリストから選ばれた他のプロテアーゼを用いて加水分解を実施することもができる。
【００２０】
このような物質は、加水分解によって製造することができるが、合成法によって製造することもできる。
【００２１】
加水分解の場合、抗原構造は、加水分解に先立ち、例えば熱、機械的高圧等の物理的方法、または、例えば還元剤(NADP-チオレドキシン還元酵素を経由するNADPHまたはジチオトレイトールによって活性化されるチオレドキシン等)、酸化剤、アルキル化剤、尿素、塩化グアニジウム等の化学的方法によって、修飾することができる。また、抗原構造は、加水分解に先立ち、限定されないが、リパーゼ、プロテオインキマーゼ、プロテインホスファターゼ、及びN-グリコシラーゼ等の酵素で処理することもできる。
【００２２】
本発明による重要なことは、医薬組成物が、舌下、腸内または口腔内投与用に製造されることである。
【００２３】
「舌下投与」及び「口腔内投与」は、口腔粘膜において前記の少なくとも１つの物質が吸収される医薬製剤中に、その物質を混合させる方法である。舌下投与では、患者は、物質が口の中の粘膜上皮を経て口内に拡散する間、（舌下）医薬組成物または調剤を舌の下に保持する。口腔内投与では、患者は、（バッカル）医薬組成物または調剤を、舌下の代わりに、頬と歯肉（歯茎）との間に保持する。口腔内投与では、バッカル剤をより速く吸収または放出するために噛んでもよく、従って、本発明は、好ましい態様において、ガム基材の製剤またはチューインガム製剤を提供する。
【００２４】
「腸内投与」は、物質が、腸に入る前では、有効成分が吸収及び／または分解から保護される医薬製剤中にある方法である。好ましくは、吸収は、回腸、十二指腸または空腸で行われる。１つの好ましい態様において、前記の医薬製剤は座薬であってもよい。
【００２５】
特に好適な製剤は、例えば、ドイツのデグサ(Degussa)から販売されている、商標名ユードラギッド(R)(Eudragit(R))などのポリマーでのコーティングを含む。ユードラギッド(R)ポリマーは、腸の中で放出される固体経口製剤に好適である。好ましい態様において、好適な医薬製剤は、患者における塩酸(胃酸分泌)の中和及び／またはペプシンの阻害及び／または重炭酸塩及び粘液分泌の刺激のため、必要とされるあらゆる結合剤あるいは添加剤を含んでいる。
【００２６】
胃における塩酸の中和及び／またはペプシンの阻害は、例えば、スクラルファート、または、限定されないが、ポリエチレンイミン(polyethylenimine)等のプロトン結合ポリマー、または、アルミニウム塩、ビスマス塩、マグネシウム塩、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、クエン酸カリウム、酒石酸カリウムナトリウム、リン酸三カルシウム及びそれらの混合物から成る群より選択される、あらゆる中和抗酸剤（制酸剤）またはあらゆる酸遮断薬によって達成することができる。
【００２７】
好適な製剤において使用することができる他のいくつかのタイプの酸遮断薬は、胃プロトンポンプ阻害薬(または胃のH+/K+ATPアーゼ阻害剤)、プロスタグランジン・アナログ及びヒスタミンH2受容体拮抗剤と呼ばれる。限定されないが、これらには、ミソプロストール、ラニチジン(ザンタック(ZANTAC)(R)中で使用)、シメチジン(タガメット(TAGAMET)(R)中で使用)、ニザチジン(アキシッド(AXID)(R)中で使用)、ファモチジン(famotindine)(ペプシッド(PEPCID)(R)中で使用)、スフォチジン(sufotidine)、ロキサチジン、ビスフェンチジン(bisfentidine)、チオチジン、ラムチジン(lamtidine)、ニペロチジン(niperotidine)、ミフェンチジン(mifentidine)、ザルチジン(zaltindine)、ロキシチジン(loxtidine)、オメプラゾール(プリソレック(PRISOLEC)(R)中で使用)、及びラベプラゾールが含まれる。
【００２８】
別の好ましい態様において、好適な製剤は、メッシュサイズが約30〜35メッシュ（約600μm〜500μm）または約40メッシュを超えるもの、最も好ましくは約45〜200メッシュの範囲内の、あらゆる形状または形態の不活性粒子に結合するか封入された、前記の少なくとも１つの物質のミクロスフェアを含み、例えば、ノンパレイユ（砂糖粒）、シリカ粉末、塩結晶または糖結晶であってもよい。
【００２９】
理論に拘泥しないが、そのような抗原構造の前者の製剤は、胃液によって部分的に崩壊したと考えられる。これはそれぞれの抗原が加水分解されてフラグメントが産生された可能性がある一方、吸収された加水分解ペプチドの量は、患者の消化活動に高度に依存していたことから、非常に可変的であった。
【００３０】
本発明の医薬組成物によってのみ、組成物は一定の品質で製造することができる。 舌下、口腔内または腸内投与のいずれかによって、吸収される有効成分の量を厳密に制御することができる。
【００３１】
各疾病または疾患の治療または予防に適当な量を特定することは重要である。典型的な好ましい量は、投与単位当たり0.001μg〜1000μgの範囲内であり、投与単位は0.01μg以上であることが好ましい。より好ましい態様において、投与単位は0.1μg以上であり、非常に好ましい態様では、1μg以上である。
【００３２】
有効成分の量が多すぎないことも重要である。前記の少なくとも1つの物質の量が100μg以下、50μg以下であることが好ましく、より好ましくは10μg以下である。
【００３３】
1つの態様において、これらの投与単位は、体重75kgの通常の患者に基づいて計算される。典型的には、毎日1〜10投与単位を適用するべきである。
【００３４】
1つの好ましい態様において、前記の少なくとも1つの物質(本発明の医薬組成物の有効成分)は、タンパク質の加水分解によって得られ得る。非常に好ましい態様において、前記の少なくとも1つの物質はペプチドである。ペプチドの分子量は、好ましくは30kDa未満であり、より好ましくは10kDa未満である。前記の少なくとも1つの物質は加水分解によって得ることができる。
【００３５】
別の態様において、加水分解によって得られ得る少なくとも1つの物質、好ましくはペプチドは、限定されないが、リパーゼ、プロテインキナーゼ、プロテインフォスファターゼ及びN-グリコシラーゼ等のタンパク質、または、限定されないが、ヒドロキシルアミン、臭化シアンの様な化学薬品の少なくとも１つで、さらに処理することができる。
【００３６】
好ましい態様において、前記の少なくとも1つの物質は、アレルギー、自己免疫性疾患または移植片拒絶に罹患した患者の血清中の特定の免疫グロブリンに結合する可能性がある。好ましくは、その免疫グロブリンはIgGである。
【００３７】
別の好ましい態様において、前記の少なくとも1つの物質は、アレルギー、自己免疫性疾患または移植片拒絶に罹患した患者の血清中の特定の免疫グロブリンに結合しない。
【００３８】
さらに、好ましい態様において、前記の少なくとも1つの物質は、熱ショック蛋白質(HSP)に結合することができる。
【００３９】
さらなる態様において、組成物は1つ以上の「エンハンサー」を含むことができる。好適なエンハンサーは、ヌクレオシド三リン酸、ヌクレオシド二リン酸、ヌクレオシド一リン酸、核酸、ペプチド核酸、ヌクレオシドまたはそのアナログ、 免疫抑制性サイトカイン、1,25-ジヒドロキシビタミンD3またはそのアナログ、リポ多糖類、菌体内毒素、熱ショック蛋白質、NADPH及びNADP-チオレドキシン還元酵素またはジチオトレイトールのいずれかを有するチオレドキシン、サルブタノール等のアドレナリン受容体作動薬、ブトキサミン等のアドレナリン受容体拮抗薬、接着分子ICAM-1の発現を調節する化合物、N-アセチル-L‐システイン、y-L-グルタミル-L-システイニル-グリシン(還元型L-グルタチオン)、α-2-マクログロブリン、Foxp3遺伝子発現誘導剤、フラボノイド、イソフラボノイド、プテロカルパノイド、レスベラトロール等のスチルベン、タキキニン受容体拮抗薬、キマーゼ阻害薬、植物レクチン等の腸管粘膜上皮に粒子を付着させるための粘膜接着剤、亜鉛及び亜鉛塩である。
【００４０】
他のエンハンサーは、多糖、ビタミン、及びイムノプロテアソームの発現を誘導する化合物である。さらに好ましいエンハンサーは、例えば、欧州特許0 269 928 A2号、英国特許2240922A号または英国特許2054374号に記載されたような、バクテリア溶解物である。
【００４１】
医薬組成物は熱ショック蛋白質を含まないことが好ましい。
【００４２】
本発明の組成物は、移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患の治療または予防に特に有用である。これらの組成物は、経口耐性の誘導、及び／または、免疫抑制性サイトカイン、より好ましくはTGF-β及び／またはIL-4及び／またはIL-10を産生し得る細胞の誘導にさらに好適である。別の態様において、本発明の組成物による前記細胞の誘導はインビトロで実施され、次に細胞は、例えば静脈内導入、外科的移植または注入によって、哺乳類、好ましくはヒトの体内に「戻される」。
【００４３】
さらなる態様において、本発明は、
・移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造を加水分解して、少なくとも１つの物質を得る工程
・前記の少なくとも１つの物質を、腸内、舌下または口腔内投与用に製剤化する工程
を含む、組成物の製造方法を提供する。
【００４４】
上記で説明したように、加水分解は酵素的加水分解であってもよく、キモトリプシンによる加水分解は特に好ましい。本発明は以下の実施例によってより詳細に説明される。
【００４５】
ここに開示された医薬組成物及び方法は、広範な条件において、予防及び治療に使用できることが理解されるであろう。従って、本明細書に示され、記載される本発明の態様は、単に好ましい態様であって、決して限定されない。これらの態様の種々の変更、修正または改変は、本発明の精神及び請求項の範囲から外れることなく、実施または使用することが可能である。
【実施例】
【００４６】
実施例１
以下の試験計画に従って、4群のマウスをβ-ラクトグロブリン(BLG)で感作した。
【００４７】
キモトリプシン消化
1mgのBLGを、1mlの40mMトリス塩酸、10mM CaCl2(pH8.0)に溶解し、20μLのキモトリプシン溶液（タンパク質／プロテアーゼ(w/w)最終比＝100:1）をタンパク質に加える。得られる溶液を37℃で6時間インキュベーションする。次に、溶液をセントリコン(centricon)YM-10装置で遠心分離し、残存するタンパク質とキモトリプシンを除去する。
【００４８】
HPLC分析
低分子量フラクションを、ヴィダック(Vydac)のC18逆相カラム(HP32、201TP52 C18、250/2.1mm、5μm)を使用して、逆相高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)で分画する。 ペプチドの溶離は、OD214nm及びOD280nmの両方でモニターすることができる。
【００４９】
DnaK.ATPの製造
緩衝液１(25mM HEPES、10mM KCl、3mM MgCl2、5mM 2-メルカプトエタノール、pH 7.5)中のATP溶液(4.5mg/mL)25μLを、400μLのDnaK(2mg/mLの緩衝液1)に加える。 溶液を20℃で１時間インキュベーションし、次に、セントリコンYM-10装置で遠心分離して、Dna Kに緩く結合した全ての低分子量物質を除去する。高分子量フラクションを除き、セントリコンYM-10を使用した限外ろ過によって、緩衝液１で充分に洗浄する。
【００５０】
組成物のインビトロでの製造
限外濾過された消化物は、好適な緩衝液1で希釈し、その後、ADPを加え(最終1mM)、混合物を25℃で1時間インキュベーションするか、
または、限外濾過された消化物を、ADPで予め処理したDnaKと混合し、その後、ADPを加え(最終1mM)、混合物を好適な緩衝液1中、25℃で1時間インキュベーションする。
【００５１】
両タイプの組成物は、好適な緩衝液１でさらに希釈し、以下の組成物を得る(総投与量):
p8:加水分解BLG 10μg＋HSP 10μg
p9:加水分解BLG 1μg＋HSP 1μg
p10:加水分解BLG 10μg
p11:加水分解BLG 1μg
c:コントロール(緩衝液)
【００５２】
動物実験
0.2MのNa2HCO3中の20mgのBLG及び10のμgコレラ毒素を胃液で(gastric)インキュベーションした後、胃管投与によって、4群のマウスを、J0、J7、J14及びJ21日にBLGで感作した。
【００５３】
処置初日(J26)から２日毎に、組成物を5回の等量の投与量にして（総投与量を5回に分割）投与する。
【００５４】
マウスは個々に処置し、経口投与は微量の投与量の0.012mLを口腔内注入することにって実施する。
【００５５】
36日と56日に、免疫グロブリンを測定した。
【００５６】
HSPを用いないペプチドで処置した動物では、免疫グロブリンの増加が縮小されるのを観察することができる。IgEについては、ペプチド単独を含む組成物は、対照群に類似する。
【００５７】
これらのデータに見られるように、動物の何例かは、本発明の少量の医薬組成物1μg; P11)で処置した場合に、より多量(10μg; P10)の場合と比較して、臨床スコアの低下を示す。また、この研究は、ペプチドの経口投与量が10μg未満であった場合に、有意な経口耐性に達したことも示す。少量の本発明の医薬組成物では、36〜56日に、BLG(IgG1及びIgG2a)に対する特異的な体液性応答反応が抑制されるようであるが、本発明の医薬品組成物とアジュバント(HPS)との組み合わせで、36〜56日にIgG2aレベルが安定し、経口耐性が誘導される。
【００５８】
実施例２
生物学的研究
NOD（非肥満型糖尿病）マウスを自己免疫性疾患の発症後に処置するモデルである。
【００５９】
糖尿病の最初の兆候が発症した後、幼若NODマウスの500の正常なランゲルハンス(Langherhans)島を、糖尿病動物の腎皮膜下に移植する。その後、糖尿と血糖は毎日モニターする。糖尿が検出され、血糖が2日連続間で12mmole/L(2.16g/l)を超える場合、マウスは糖尿病とみなす。高血糖の初日を再発の開始と見なす。
【００６０】
ペプチドの製造  
インシュリンを、トリプシンまたはキモトリプシンのいずれかで消化した(タンパク質/プロテアーゼの最終比率(W/W)＝100:1)。得られた溶液を、セントリコンYM-10装置で遠心分離し、残存するタンパク質及びプロテアーゼを除去する。
【００６１】
マウスの処置
全ての処置は、疾病が発症した初日であって、移植の前日に開始した。マウスは２日に１回、舌下注入によって処置し、総投与量は以下の通りであった。
グループ１：トリプシン消化によるペプチド(1μg)
グループ２：キモトリプシン消化によるペプチド(1μg)
グループ３：緩衝液
【００６２】
臨床結果
非処置のNODマウスにおいて、再発するまでの平均遅延は約１１〜１２日である。14日を超える遅延は処置の効果によるものと考えられ、インスリンのキモトリプシン消化で得られたペプチドで処置したグループにおいて、14日を超える遅延の比率は4/6(66%)であることがわかる。その他の、インスリンのトリプシン消化で得られたペプチド、または緩衝液のいずれかで処置したグループでは、この比率は2/6(33%)である。従って、インスリンのキモトリプシン消化で得られたペプチドの経口投与には治療効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１は、BLBのキモトリプシン開裂で産生されたペプチド(MW<または=10kDa)を示す。
【図２】図２は、Dnakに結合したBLGのキモトリプシン開裂によるペプチド(MW<または=10kDa)を示す。
【図３】図３は、IgG1の変化を示す。
【図４】図４は、IgEについての結果を示す。
【図５】図５は、IgG2aについての結果を示す。
【図６】図６は、IgAについての結果を示す。
【図７】図７は、種々の群についての臨床スコアを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年5月16日(2007.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造のキモトリプシンによる加水分解によって得られ得る、少なくとも１つの物質を含む、舌下、口腔内または腸内投与のための医薬組成物。
【請求項２】
該少なくとも１つの物質の量が、0.001〜1000μgの範囲内であるであることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
該少なくとも１つの物質が、タンパク質の加水分解によって得られ得ることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
該少なくとも１つの物質がペプチドであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
該ペプチドの分子量が30kDA未満であることを特徴とする、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ヌクレオシド三リン酸、ヌクレオシド二リン酸、ヌクレオシド一リン酸、核酸、ペプチド核酸、ヌクレオシドまたはその類似体、免疫抑制性サイトカイン、免疫プロテアソームの発現を引き起こす化合物、1,25-ジヒドロキシビタミンD3またはその類似体、リポ多糖類、菌体内毒素、熱ショック蛋白質、NADPHまたはNADPチオレドキシン還元酵素のいずれかを有するチオレドキシン、ジチオトレイトール、アドレナリン受容体作動薬、アドレナリン受容体拮抗薬、接着分子ICAM-1の発現を調節する化合物、 N-アセチル-L‐システイン、y-L-グルタミル-L-システイニル-グリシン(還元型L-グルタチオン)、α-2-マクログロブリン、Foxp3遺伝子発現誘導剤、フラボノイド、イソフラボノイド、プテロカルパノイド、スチルベン、タキキニン受容器拮抗薬、キマーゼ阻害薬、腸管粘膜上皮に粒子を付着させるための粘膜接着剤、多糖、ビタミン及びバクテリア溶解物の群から選択される、少なくとも１つの物質をさらに含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
該抗原構造が、インスリン、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、II型コラーゲン、グリアジン、GAD65、プロテオリピド・タンパク質、S抗原、アセチルコリン受容体、ハプテン化結腸タンパク質、光受容体間のレチノイド結合蛋白質、ミエリン塩基性蛋白質、ミエリン乏突起神経膠細胞糖タンパク質、末梢神経P2、細胞質TSH受容体、内因子、水晶体タンパク質、血小板、ヒストン等の核タンパク質、熱ショック蛋白質、MHC I、MHC II、MHCペプチド複合体、ミルク・アレルゲン、毒アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、草アレルゲン、木アレルゲン、低木アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、菌類アレルゲン、果実アレルゲン、液果アレルゲン、堅果アレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルゲン、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニ・アレルゲン、動物アレルゲン、動物鱗屑アレルゲン、バラゴムノキ（ヘベアブラジリエンシス）のアレルゲン、凝固因子及び血液群抗原より選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患の治療または予防に使用されるための、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
経口耐性の誘導、及び／または、免疫抑制性サイトカイン、より好ましくはTGF-β及び／またはIL-4及び／またはIL-10を産生し得る細胞の誘導に使用されるための、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
・移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造をキモトリプシンで加水分解して、少なくとも１つの物質を得る工程
・該少なくとも１つの物質を、腸内、舌下または腸内投与用に製剤化する工程
を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１１】
移植片拒絶、アレルギー反応または自己免疫性疾患を引き起こす抗原構造をキモトリプシンで加水分解して得られ得る少なくとも１つの物質を含む、組成物。
【請求項１２】
舌下製剤である請求項１または２の医薬組成物。
【請求項１３】
口腔内製剤である請求項１または２の医薬組成物。
【請求項１４】
腸内製剤である請求項１または２の医薬組成物。
【請求項１５】
該少なくとも１つの物質の量が、1〜100μgの範囲内であるであることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
該ペプチドの分子量が10kDa未満であることを特徴とする、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
アドレナリン受容体作動薬がブタノールであり、アドレナリン受容体拮抗薬がブトキサミンであり、スチルベンがレスベラトロールであり、腸管粘膜上皮に粒子を付着させるための粘膜接着剤が植物レクチン、亜鉛、亜鉛塩であることを特徴とする、請求項６に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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