(57)【要約】本発明は、分解性結合を有する複合体と該複合体の調製に有益なポリマー試薬を提供する。複合体ならびに複合体を生成するために使用されるポリマー試薬は、イオン性水素原子を含む芳香族部分、スペーサー部分、および水溶性ポリマーの各々のうちの少なくとも１つを含む。ポリマー試薬および複合体を生成する方法、ならびに複合体および組成を投与するための方法も提供される。本発明の１つ以上の実施形態において、ポリマー試薬を調製するための上記方法に準じて調製されるポリマー試薬が提供される【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2008544046.tif 000131
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
【化１Ａ】
2008544046.tif 000132
は、イオン性水素原子、Ｈaを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である、
化Ｉのポリマー試薬。
【請求項２】
【化２】
2008544046.tif 000133
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である、
化ＩＩの請求項１に記載のポリマー試薬。
【請求項３】
【化３】
2008544046.tif 000134
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である、
化ＩＩＩの請求項１に記載のポリマー試薬。
【請求項４】
【化４】
2008544046.tif 000135
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｘ３は、第三のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である、
化ＩＶの請求項１に記載のポリマー試薬。
【請求項５】
【化５】
2008544046.tif 000136
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である、
化Ｖの請求項１に記載のポリマー試薬。
【請求項６】
【化６】
2008544046.tif 000137
ここで、
ポリは、水溶性ポリマー、
Ｘは、
【化７】
2008544046.tif 000138
部分を含まないスペーサー部分、
【化７Ａ】
2008544046.tif 000139
は、イオン性水素原子Ｈαを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
Ｒｅは、存在する場合、電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である、
化ＶＩのポリマー試薬。
【請求項７】
【化８】
2008544046.tif 000140
は、
【化８Ａ】
2008544046.tif 000141
である、請求項６に記載のポリマー試薬。
【請求項８】
ポリ１およびポリ２の各々は、ポリ（エチレングリコール）である、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項９】
ポリは、ポリ（エチレングリコール）である、請求項６に記載のポリマー試薬。
【請求項１０】
各ポリ（エチレングリコール）は、約１２０ダルトンから約６，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１１】
前記ポリ（エチレングリコール）は、約１２０ダルトンから約６，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項６に記載のポリマー試薬。
【請求項１２】
各ポリ（エチレングリコール）は、約６，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１３】
前記ポリ（エチレングリコール）は、約６，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項６に記載のポリマー試薬。
【請求項１４】
前記第一のスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る前記基から選択され、前記第二のスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-，、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-，、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る基から選択される、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１５】
Ｒ１はＨで、Ｒ２はＨである、請求項１、２、３、４、５、および６のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１６】
活性剤のアミノ基と反応可能な前記官能基は、Ｎ-スクシンイミジル、１-ベンゾトリアゾリル、イミダゾール、イミダゾール、ハロゲン化物、およびフェノラートの炭素塩から成る前記基から選択される、請求項１、２、３、４、５、および６のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１７】
アミノ基と反応可能な前記官能基は、Ｎ-スクシンイミジルの炭素塩である、請求項１、２、３、４、５、および６のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１８】
（ａ）は０で、（ｂ）はゼロである、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項１９】
（ａ）はゼロである、請求項６に記載のポリマー試薬。
【請求項２０】
（ａ）は１で、（ｂ）はゼロであり、ならびに前記第一の電子代替基は、ハロ、低級アルキル、アリール、置換アリール、置換アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、および-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲから成る前記基から選択され、Ａｒはアリールであり、ＲはＨまたは有機ラジカルである、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載のポリマー試薬。
【請求項２１】
（ａ）は１で、前記電子代替基は、ハロ、低級アルキル、アリール、置換アリール、置換アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、および-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲから成る前記基から選択され、Ａｒはアリールであり、ＲはＨまたは有機ラジカルである、請求項６に記載のポリマー試薬。
【請求項２２】
【化９】
2008544046.tif 000142
から成る前記基から選択され、各構造について、各（ｎ）は４から１５００である、請求項５に記載のポリマー試薬。
【請求項２３】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項５に記載のポリマー試薬。
【化１０】
2008544046.tif 000143
【請求項２４】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項５に記載のポリマー試薬。
【化１１】
2008544046.tif 000144
【請求項２５】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項５に記載のポリマー試薬。
【化１２】
2008544046.tif 000145
【請求項２６】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項５に記載のポリマー試薬。
【化１３】
2008544046.tif 000146
【請求項２７】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項５に記載のポリマー試薬。
【化１４】
2008544046.tif 000147
【請求項２８】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項５に記載のポリマー試薬。
【化１５】
2008544046.tif 000148
【請求項２９】
各（ｎ）は４から１５００である、以下化学式の請求項６に記載のポリマー試薬。
【化１６】
2008544046.tif 000149
【請求項３０】
【化１７】
2008544046.tif 000150
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
【化１８】
2008544046.tif 000151
は、イオン性水素原子、Ｈαを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である、
化Ｉ-Ｃの複合体。
【請求項３１】
【化１９】
2008544046.tif 000152
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である、
化ＩＩ-Ｃの請求項３０に記載の複合体。
【請求項３２】
【化２０】
2008544046.tif 000153
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である、
化ＩＩＩ-Ｃの請求項３０に記載の複合体。
【請求項３３】
【化２１】
2008544046.tif 000154
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｘ３は、第三のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である、
化ＩＶ-Ｃの請求項３０に記載の複合体。
【請求項３４】
【化２２】
2008544046.tif 000155
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である、
化Ｖ-Ｃの請求項３０に記載の複合体。
【請求項３５】
【化２３】
2008544046.tif 000156
ここで、
ポリは、水溶性ポリマー、
Ｘは、
【化２４】
2008544046.tif 000157
部分を含まないスペーサー部分、
【化２５】
2008544046.tif 000158
は、イオン性水素原子Ｈαを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
Ｒｅは、存在する場合、電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である、
化ＶＩ-Ｃの複合体。
【請求項３６】
【化２６】
2008544046.tif 000159
は
【化２７】
2008544046.tif 000160
である、請求項３５に記載のポリマー試薬。
【請求項３７】
ポリ１およびポリ２の各々は、ポリ（エチレングリコール）である、請求項３０、３１、３２、３３、および３４のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項３８】
ポリは、ポリ（エチレングリコール）である、請求項３５に記載の複合体。
【請求項３９】
各ポリ（エチレングリコール）は、約１２０ダルトンから約６，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項３０、３１、３２、３３、および３４のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４０】
前記ポリ（エチレングリコール）は、約１２０ダルトンから約６，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項３５に記載の複合体。
【請求項４１】
各ポリ（エチレングリコール）は、約６，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項３０、３１、３２、３３、および３４のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４２】
前記ポリ（エチレングリコール）は、約６，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する、請求項３５に記載の複合体。
【請求項４３】
前記第一のスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-，、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る前記基から選択され、前記第二のスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る前記基から選択される、請求項３０、３１、３２、３３、および３４のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４４】
Ｒ１はＨで、Ｒ２はＨである、請求項１、２、３、４、５、および６のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４５】
Ｙ１はＯで、Ｙ２はＯである、請求項３０、３１、３２、３３、３４、および３５のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４６】
前記生理活性剤はポリペプチドである、請求項３０、３１、３２、３３、３４、および３５のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４７】
（ａ）は０で、（ｂ）はゼロである、請求項３０、３１、３２、３３、および３４のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項４８】
（ａ）はゼロである、請求項３５に記載の複合体。
【請求項４９】
（ａ）は１で、（ｂ）はゼロであり、ならびに前記第一の電子代替基は、ハロ、低級アルキル、アリール、置換アリール、置換アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、および-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲから成る前記基から選択され、Ａｒはアリールであり、ＲはＨまたは有機ラジカルである請求項３０、３１、３２、３３、および３４のいずれか１つに記載の複合体。
【請求項５０】
（ａ）は１で、前記電子代替基は、ハロ、低級アルキル、アリール、置換アリール、置換アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、および-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲから成る前記基から選択され、Ａｒはアリールであり、ＲはＨまたは有機ラジカルである、請求項３５に記載の複合体。
【請求項５１】
【化２８】
2008544046.tif 000161
から成る前記基から選択され、各構造について、各（ｎ）は、４から１５００であり、Ｄは、生理活性剤の残留物である、請求項１に記載の複合体。
【請求項５２】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３０に記載の複合体。
【化２９】
2008544046.tif 000162
【請求項５３】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３０に記載の複合体。
【化３０】
2008544046.tif 000163
【請求項５４】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３０に記載の複合体。
【化３１】
2008544046.tif 000164
【請求項５５】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３０に記載の複合体。
【化３２】
2008544046.tif 000165
【請求項５６】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３０に記載の複合体。
【化３３】
2008544046.tif 000166
【請求項５７】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３０に記載の複合体。
【化３４】
2008544046.tif 000167
【請求項５８】
各（ｎ）は４から１５００であり、Ｄは生理活性剤の残留物である、以下化学式の請求項３５に記載の複合体。
【化３５】
2008544046.tif 000168
【請求項５９】
ポリマー試薬を調製するための方法であって、
（ａ）第一の付着部位、第二の付着部位、および第三の付着部位を有する芳香族部分を提供するステップと、
（ｂ）官能基試薬を前記第一の付着部位と反応させて、活性剤のアミノ基と反応可能な官能基を有する前記第一の付着部位をもたらし、加水分解性カルバミン酸塩をもたらすステップと、
（ｃ）反応基を有する複数の水溶性ポリマーを、前記第二の付着部位および第三の付着部位と反応させて、（ｉ）スペーサー部分を介して水溶性ポリマーを有する前記第二の付着部位、および（ｉｉ）スペーサー部分を介して第二の水溶性ポリマーを有する前記第三の付着部位をもたらすステップと、
を含む方法。
【請求項６０】
ステップ（ｂ）は、ステップ（ｃ）の前に実行される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
ステップ（ｃ）は、ステップ（ｂ）の前に実行される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
複合体を調製するための方法であって、請求項１、２、３
、４、５、または６のいずれか１つに準じて、ポリマー試薬をアミン含有生理活性剤と複合条件下で反応させるステップを含む、方法。
【請求項６３】
請求項６２の方法によって調製される複合体。
【請求項６４】
請求項６３の複合体と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む製薬組成。
【請求項６５】
凍結乾燥剤形である請求項６４の製薬組成。
【請求項６６】
液体の希釈剤をさらに含む、請求項６４に記載の製薬組成。
【請求項６７】
前記液体の希釈剤は、注射用静菌水、デキストロース５％の水、リン酸緩衝生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水、およびその組み合わせから成る前記基から選択される、請求項６６に記載の製薬組成。
【請求項６８】
単位剤形である、請求項６４に記載の製薬組成。
【請求項６９】
ガラス製の薬瓶に収容される、請求項６８に記載の製薬組成。
【請求項７０】
請求項３０、３１、３２、３３、３４、および３５のいずれか１つに準じて複合体の治療的有効量を患者に投与するステップを含む、複合体を送達する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、通常、ポリマーと別の部分との間の分解性結合を有する複合体の提供に有益なポリマー試薬に関する。さらに、本発明は、特に、ポリマー試薬の複合体、ポリマー試薬を合成するための方法、およびポリマー試薬を活性剤およびその他の部分に複合するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
科学者および臨床医は、患者への投与に適した剤形に活性剤を開発する試みにおいて多くの課題に直面している。ポリペプチドである活性剤は、例えば、経口投与よりも注射によって投与されることが多い。このように、ポリペプチドは、胃のタンパク質分解環境に暴露されることなく体循環に導入される。しかし、ポリペプチドの注入は、いくつかの欠点を有する。
【０００３】
例えば、ポリペプチドの多くは半減期が比較的短いため、繰り返し注射する必要があり、多くの場合、不便かつ痛みを伴う。さらに、ポリペプチドによっては、 一つ以上の免疫反応を誘発し、その結果、患者の免疫系が 免疫原性ポリペプチドを破壊あるいは、中和することがある。当然、ポリペプチドが破壊または中和されると、ポリペプチドは、その目的の薬理作用を発揮することができない。したがって、ポリペプチドのような活性剤の投与は、これらの薬剤が注射によって投与される場合であっても、問題となることが多い。
【０００４】
注射による活性剤投与の問題解決において、いくつか成功が達成されてきた。例えば、活性剤を水溶性ポリマーに複合することによって、免疫原性および抗原性が低下したポリマー活性剤複合体が生成された。さらに、これらのポリマー活性剤複合体は、腎臓を介したクリアランスの減少および／または体循環における酵素分解の減少の結果として、非複合のものと比べて大幅に長い半減期を有することが多い。より長い半減期を有することから、ポリマー活性剤複合体は、頻繁に投薬する必要がなく、よって、痛みを伴う注射の全体的な数が減少し、医療専門家へ通う不便さも減少する。さらに、わずかにだけ可溶性である活性剤は、水溶性ポリマーに複合されると、水溶性の大幅増加を示す。
【０００５】
その立証された安全性だけでなく、局所使用および内部使用に関するＦＤＡによるその認可によって、ポリエチレングリコールは活性剤に複合されている。活性剤が、ポリエチレングリコールつまり「ＰＥＧ」のポリマーに複合される際、複合された活性剤は、従来から「ＰＥＧ化」と呼ばれている。ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）  ＰＥＧ化インターフェロンアルファ-２ａ（ニュージャージー州、ナトリーのＨｏｆｆｍａｎｎ-Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ社）、ＰＥＧ-ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）  ＰＥＧ化インターフェロンアルファ-２ｂ（ニュージャージー州、ケニルワースのＳｃｈｅｒｉｎｇ社）、およびＮＥＵＬＡＳＴＡＴＭ  ＰＥＧ-フィルグラスチム（カリフォルニア州、サウザンドオークスのＡｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．社）などのＰＥＧ化活性剤の商業的成功によって、活性剤の複合剤形の投与は、非複合のものよりも大きな利点を有することが可能であることが示されている。また、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（非特許文献１）およびフルオロウラシル（非特許文献２）などの小分子も、ＰＥＧ化されている。Ｈａｒｒｉｓらは、薬剤のＰＥＧ化の効果を調査をした。非特許文献３。
【０００６】
これらの成功にも関わらず、結果的に市販の薬物をもたらすポリマーの活性剤への複合は、課題も多い。例えば、複合により、ポリマーは、 活性剤の、薬理活性に必要な部位、またはその付近に付着する可能性がある（例えば、結合部位かその付近）。ゆえに、そのような複合体は、例えば、ポリマーにより導入される立体効果により、容認し難いほどの低い活性を有する場合がある。容認し難いほど低い活性を有する複合体を改善する試みは、活性剤がポリマーへの付着に適した部位を全く、あるいは、ほとんど有しない場合に妨げられる。したがって、追加のＰＥＧ化代替物が求められてきた。
【０００７】
この問題およびその他の問題を解決するために提案された方法の一つに、「可逆的ＰＥＧ化」があり、天然活性剤（または、ＰＥＧ化活性剤と比べて作用のより大きい部分）が放出される。例えば、米国出願公開公報番号第２００５／００７９１５５号において、可逆的結合を使用する複合体が記載される。本公報に記載されるように、可逆的結合は、酵素基質部分を使用することで効果をもたらすことができる。しかしながら、酵素活性に依存する方法は、酵素の使用可能性に左右されることが指摘されている。非特許文献４参照のこと。このように、酵素プロセスに依存しない分解のための追加の方法が望ましいと記載されている。
【０００８】
可逆的ＰＥＧ化のためのこのような方法の一つは、分岐ポリマーがマレイミド化学を使用して付着されるフルオレン部分を含むポリマー試薬を記載する。同文献の非特許文献５および特許文献１参照のこと。記載のポリマー試薬を生成するために使用される合成方法は、複雑で多くの工程を必要とする。したがって、そのような複雑な合成スキームを要しない代替えのポリマー試薬が必要である。
【０００９】
別の可逆的複合方法は、特許文献２に記載される。本特許に記載される構造は、水溶性で非ペプチドのポリマーが単一の付着点で芳香族基に付着するものを含む。複合体内に分解性結合を提供するが、複合体で分解性結合を生成可能であるさらなるポリマー試薬を提供する必要がある。
【００１０】
したがって、ポリマーと別の部分との間の分解性結合を有する複合体の提供に有益なさらなるポリマー試薬が依然として必要である。さらに、さまざまな放出速度を有する複合体の提供に有益なさまざまなポリマー試薬を提供する必要性が依然として存在する。ゆえに、本発明は、当技術におけるこれらおよびその他の必要性の解決に努める。
【特許文献１】国際公開第２００４／０８９２８０号パンフレット
【特許文献２】米国特許第６，５１４，４９１号明細書
【非特許文献１】Ｚａｌｉｐｓｋｙによる、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．４（１９９３年）（４）：２９６-２９９
【非特許文献２】Ｏｕｃｈｉらによる、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．  Ｄｉｓｃｏｖ．９（１９９２年）（１）：９３-１０５
【非特許文献３】Ｈａｒｒｉｓらによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２（２００３年）（３）：２１４-２２１
【非特許文献４】Ｐｅｌｅｇ-Ｓｃｈｕｌｍａｎによる、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００４年）４７：４８９７から４９０４
【非特許文献５】Ｐｅｌｅｇ-Ｓｃｈｕｌｍａｎによる、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００４年）４７：４８９７から４９０４
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式のポリマー試薬が提供される。
【００１２】
【化３６】
2008544046.tif 000002
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
【００１３】
【化３７】
2008544046.tif 000003
は、イオン性水素原子、Ｈaを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【００１４】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式のポリマー試薬が提供される
【００１５】
【化３８】
2008544046.tif 000004
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【００１６】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式のポリマー試薬が提供される。
【００１７】
【化３９】
2008544046.tif 000005
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【００１８】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式のポリマー試薬が提供される。
【００１９】
【化４０】
2008544046.tif 000006
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｘ３は、第三のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【００２０】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式のポリマー試薬が提供される。
【００２１】
【化４１】
2008544046.tif 000007
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【００２２】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式のポリマー試薬が提供される。
【００２３】
【化４２】
2008544046.tif 000008
ここで、
ポリは、水溶性ポリマー、
Ｘは、
【００２４】
【化４３】
2008544046.tif 000009
部分を含まないスペーサー部分、
【００２５】
【化４４】
2008544046.tif 000010
は、イオン性水素原子Ｈaを有する芳香族部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
Ｒｅは、存在する場合、電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【００２６】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式の複合体が提供される。
【００２７】
【化４５】
2008544046.tif 000011
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
【００２８】
【化４６】
2008544046.tif 000012
は、イオン性水素原子Ｈaを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、およびＤは、生理活性剤の残留物である。
【００２９】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式の複合体が提供される。
【００３０】
【化４７】
2008544046.tif 000013
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
【００３１】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の化学式の複合体が提供される。
【００３２】
【化４８】
2008544046.tif 000014
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
【００３３】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造を備える複合体が提供される。
【００３４】
【化４９】
2008544046.tif 000015
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｘ３は、第三のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
【００３５】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造を備える複合体が提供される。
【００３６】
【化５０】
2008544046.tif 000016
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｈaは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
【００３７】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造を備える複合体が提供される。
【００３８】
【化５１】
2008544046.tif 000017
ここで、
ポリは、水溶性ポリマー、
Ｘは、
【００３９】
【化５２】
2008544046.tif 000018
部分を含まないスペーサー部分、
【００４０】
【化５３】
2008544046.tif 000019
は、イオン性水素原子Ｈaを有する芳香族部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
Ｒｅは、存在する場合、電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
【００４１】
本発明の１つ以上の実施形態において、ポリマー試薬を調製するための方法が提供され、前記方法は、
（ａ）第一の付着部位、第二の付着部位、任意の第三の付着部位、および任意の追加の付着部位を有する芳香族部分を提供するステップと、
（ｂ）官能基試薬を前記第一の付着部位と反応させて、活性剤のアミノ基と反応可能な官能基を有する前記第一の付着部位をもたらし、カルバメート結合などの放出可能な結合をもたらすステップと、
（ｃ）反応基を有する水溶性ポリマーを前記第二の付着部位と、存在する場合は、前記任意の第三の付着部位と反応させて、（ｉ）スペーサー部分を介して水溶性ポリマーを有する前記第二の付着部位をもたらすステップであって、前記スペーサー部分は、
【００４２】
【化５４】
2008544046.tif 000020
部分を含まないステップと、（ｉｉ）存在する場合に、スペーサー部分を介して第二の水溶性ポリマーを有する前記任意の第三の部位をもたらすステップであって、前記スペーサー部分は、
【００４３】
【化５５】
2008544046.tif 000021
部分を含まないステップと、を含む。
【００４４】
本発明の１つ以上の実施形態において、ポリマー試薬を調製するための上記方法に準じて調製されるポリマー試薬が提供される
本発明の１つ以上の実施形態において、複合体を調製するための方法が提供される。
【００４５】
本発明の１つ以上の実施形態において、本明細書に記載される前記新規のポリマー試薬を使用して調製される複合体が提供される。
【００４６】
本発明の１つ以上の実施形態において、前記複合体を含む製剤が提供される。
本発明の１つ以上の実施形態において、前記複合体を投与するための方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４７】
（発明の詳細な説明）
本発明について詳しく記載する前に、本発明が、特定のポリマー、合成技術、活性剤等に限定されず、変化してもよいことが理解されたい。
【００４８】
本明細書および請求項に使用される際、その内容が明確に述べられている場合を除き、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」が、複数の指示対象を含むことが留意されるべきである。したがって、例えば、「ポリマー」と言及することは、単数のポリマーならびに２つ以上の同一または異なるポリマーが含まれ、「複合体」と言及することは、単一の複合体ならびに２つ以上の同一または異なる複合体が含まれ、「賦形剤」と言及することは、単一の賦形剤ならびに２つ以上の同一または異なる賦形剤等が含まれる。
【００４９】
本発明について記載および請求する際、以下の専門用語が以下に記載される定義に基づき使用される。
【００５０】
本明細書で使用される際、「ＰＥＧ」、「ポリエチレングリコール」、および「ポリ（エチレングリコール）」は、いかなる水溶性ポリ（エチレンオキシド）も含むように意味する。一般的に、本発明に準じて使用されるＰＥＧは、（ｍ）が２から４０００である以下の構造「-Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ-」を備える。また、ＰＥＧは、本明細書で使用される際、「-ＣＨ２ＣＨ２-Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ-ＣＨ２ＣＨ２-」および「-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ-」も含み、末端酸素が置換されたか否かによって決まる。ＰＥＧがスペーサー部分（以下にさらに詳しく記載される）をさらに含む場合、スペーサー部分を含む原子は、水溶性ポリマーセグメントに共有付着する際に、酸素-酸素結合（つまり、「-Ｏ-Ｏ-」または酸化物結合毎）の生成をもたらさない。本明細書および請求項全体において、用語「ＰＥＧ」は、さまざまな末端または「エンドキャッピング」基等を有する構造を含むことが銘記されたい。また、用語「ＰＥＧ」は、大部分、つまり５０％を上回る-ＣＨ２ＣＨ２Ｏ-単量体サブユニットを含有するポリマーも意味する。特定の形態に関して、ＰＥＧは、さまざまな、いかなる分子量をもとり、ならびに「分岐」、「線状」、「フォーク状」、「多機能」等の構造または形状をとることが可能で、以下にさらに詳しく記載される。
【００５１】
「エンドキャップ」または「末端キャップ」という用語は、エンドキャッピング部分を有するポリマーの末端またはエンドポイントを言及する際に、本明細書において同じ意味で使用される。一般的に、必ずしもそうとは限らないが、エンドキャッピング部分は、ヒドロキシまたはＣ１-２０アルコキシ基を含む。したがって、エンドキャッピング部分の例として、アルコキシ（例えば、メトキシ（基）、エトキシ（基）、およびベンジルオキシ）、ならびにアリール、ヘテロアリール、シクロ、ヘテロシクロ等が挙げられる。さらに、前述のものの各々の飽和、不飽和、置換、および非置換型も想定される。さらに、エンドキャッピング基は、シランであることも可能である。また、エンドキャピング基は、検出可能な標識も有利に含むことができる。ポリマーが検出可能な標識を含むエンドキャッピング基を有する際、ポリマーおよび／またはポリマーが結合される該当部分（例えば、活性剤）の量または位置が、適切な検出器を使用して決定可能である。そのような標識には、蛍光試薬、化学発光物質、酵素標識で使用される部分、比色（例えば、染料）、金属イオン、放射性部分等を含めるがそれだけに限定されない。適切な検出器には、光度計、膜、分光器等が含まれる。
【００５２】
ポリマーまたは水溶性ポリマーに関して「非自然発生」とは、自然界においてそのままの形態で発見されないことを意味する。しかしながら、非自然発生ポリマーまたは水溶性ポリマーは、全体のポリマー構造が自然界に見られない限り、自然発生の１つ以上のサブユニットまたは一部のサブユニットを含んでもよい。
【００５３】
「水溶性ポリマー」という用語は、室温で水に可溶性であるいかなるポリマーでもある。一般的に、水溶性ポリマーは、ろ過後の同一溶液によって透過される光の少なくとも約７５％、さらに好ましくは、少なくとも約９５％を透過する。重量ベースで、水溶性ポリマーは、好ましくは、少なくとも約３５％（重量比）が水に可溶性であり、さらに好ましくは、少なくとも約５０％（重量比）が水に可溶性であり、さらに好ましくは、約７０％（重量比）が水に可溶性であり、またさらに好ましくは、約８５％（重量比）が水に可溶性である。しかしながら、水溶性ポリマーは、約９５％（重量比）が水に可溶性であることがまたさらに好ましく、水溶性ポリマーが完全に水に可溶性であることが最も好ましい。
【００５４】
ＰＥＧなどの本発明の水溶性ポリマーの内容における分子量は、数平均分子量または重量平均分子量として表すことが可能である。別途明記されない限り、本明細書における分子量に関する全ての言及は、重量平均分子量を言及する。双方の分子量決定法、数平均、重量平均は、ゲル浸透クロマトグラフィーまたはその他の液体ロマトグラフィー技術を使用して測定可能である。分子量値測定のためのその他の方法も使用可能で、数平均分子量の決定には、末端基分析の使用または束一性（例えば、凝固点降下、沸点上昇、または浸透圧）の測定を、あるいは、重量平均分子量の決定には光散乱技術、超遠心分離法、または粘度測定を使用することができる。本発明のポリマーは、一般的に多分散であり（つまり、ポリマーの数平均分子量および重量平均分子量は等しくない）、好ましくは約１．２未満、さらに好ましくは約１．１５未満、またさらに好ましくは約１．１０未満、よりまたさらに好ましくは約１．０５未満、および最も好ましくは約１．０３未満の低多分散性値を有する。
【００５５】
本明細書で使用される際、「カルボン酸」という用語は、
【００５６】
【化５６】
2008544046.tif 000022
官能基［「-ＣＯＯＨ」または-Ｃ（Ｏ）ＯＨとしても表される］を有する部分、ならびにカルボン酸の誘導体である部分であって、その誘導体は、例えば保護カルボン酸を含む。したがって、別途内容を明記しない限り、カルボン酸の用語は、酸性型だけでなく、対応するエステルおよび保護型も含める。カルボン酸および本明細書に記載のいかなるその他の官能基に適切な保護基に関して、Ｇｒｅｅｎｅらによる「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第三版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９年を参照すること。
【００５７】
「反応性」または「活性」という用語は、特定の官能基と組み合せて使用される場合、別の分子の求電子剤または求核試剤と容易に反応する反応性官能基を言及する。これは、反応するのに強力な触媒または非常に非実用的な反応条件を必要とする基（つまり、「非反応性」または「不活性」基）とは対照的である。
【００５８】
「保護」または「保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ）基」または「保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）基」という用語は、特定の反応条件下の分子における特定の化学反応性官能基の反応を防止または阻止する部分（つまり保護基）の存在を言及する。保護基は、保護される化学反応性官能基の種類、ならびに使用される反応条件および該当する場合は分子における追加の反応性または保護基の存在によって変化する。当技術分野で既知である保護基は、Ｇｒｅｅｎｅらによる上記文献に見ることができる。
【００５９】
本明細書使用される際、「官能基」という用語またはそのいかなる同義語も、その保護型を含むように意味する。
【００６０】
「スペーサー」または「スペーサー部分」という用語は、水溶性ポリマーセグメントから芳香族含有部分になど、一部分を別の部分に結合するために任意で使用される原子または原子の集まりを言及するために本明細書で使用される。本発明のスペーサー部分は、加水分解に安定であってもよく、あるいは、１つ以上の生理的に加水分解性または酵素的に分解性の結合を含んでもよい。
【００６１】
使用される「有機ラジカル」には、例えば、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールが含まれる。
【００６２】
「アルキル」は、炭化水素鎖を言及し、一般的に、約１から２０原子の範囲の長さである。このような炭化水素鎖は、好ましくは飽和であるが必ずしもそうであるとは限らず、分岐または直鎖であってもよいが、一般的には、直鎖が好ましい。典型的なアルキル基として、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル（基）、１-メチルブチル、１-エチルプロピル、３-メチルペンチル（基）等が挙げられる。本明細書で使用される際、三つ以上の炭素原子が参照および低級アルキルの場合、「アルキル」には、シクロアルキルが含まれる。
【００６３】
「低級アルキル」は、１から６の炭素原子を含むアルキル基を言及し、直鎖または分岐であってもよく、メチル、エチル、ｎ-ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ-ブチルが例として挙げられる。
【００６４】
「シクロアルキル」は、飽和または不飽和の環状炭化水素鎖を言及し、架橋、融合、またはスピロ環状化合物が含まれ、好ましくは３から約１２の炭素原子から成り、さらに好ましくは３から約８の炭素原子から成る。
【００６５】
「非干渉置換基」は、分子に存在する場合、一般的に、分子に含まれるその他の官能基と非反応性である基である。
【００６６】
例えば「置換アルキル」における「置換」の用語は、１つ以上の非妨害置換基と置換される部分（例えば、アルキル基）を言及し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル等のＣ３-Ｃ８シクロアルキル；例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードなどのハロ、シアノ、アルコキシ、低級フェニル（例えば、０-２置換フェニル）；置換フェニル；および同様なものが挙げられるがそれだけに限定されない。「置換アリール」は、１つ以上の非妨害基を置換基として有するアリールである。フェニル環の置換について、置換基はいかなる配向であってもよい（つまり、オルト、メタ、またはパラ）。
【００６７】
「アルコキシ」は、-Ｏ-Ｒ基を言及し、Ｒは、アルキルまたは置換アルキル、好ましくはＣ１-Ｃ２０アルキル（例えば、メトキシ（基）、エトキシ（基）、プロピルオキシ、ベンジルなど）、好ましくはＣ１-Ｃ７アルキルである。
【００６８】
本明細書で使用される際、「アルケニル」は、１から１５原子の長さの分岐または非分岐炭化水素基を言及し、エテンザミド、ｎ-プロペニル、イソプロペニル、ｎ-ブテニル、イソブテニル、オクテニル、デセニル、テトラデセニルなどの少なくとも１つの二重結合を含む。
【００６９】
本明細書で使用される際、「アルキニル」という用語は、分岐または非分岐の２から１５原子の長さの炭化水素基を言及し、エチニル、ｎ-ブチニル、イソペンチニル、オクチニル、デシニルなどの少なくとも１つの三重結合を含む。
【００７０】
「アリール」は、１つ以上の芳香環で、それぞれ、５または６つのコアの炭素原子をふくむものを意味する。アリールは、ナルチルなどの融合またはビフェニルなどの未融合されてもよい多数のアリール環を含む。アリール環は、１つ以上の環状炭化水素、ヘテロアリール、または複素環と融合または未融合されてもよい。本明細書で使用される際、「アリール」には、ヘテロアリールが含まれる。芳香族部分（例えば、Ａｒ１、Ａｒ２など）は、アリールを含む構造を意味する。
【００７１】
「ヘテロアリール」は、１から４つのヘテロ原子を含むアリール基であり、前記へテロ原子は、好ましくはＮ、Ｏ、またはＳ、あるいはその組み合わせである。ヘテロアリール環も、１つ以上の環状炭化水素、複素環、アリール、またはヘテロアリール環と融合されてもよい。
【００７２】
「複素環」または「複素環の」は、不飽和または芳香族性を示すまたは示さない、炭素でない少なくとも１つの環の原子を有する、５から１２原子、好ましくは５から７原子の１つ以上の環を意味する。好ましいヘテロ原子には、硫黄、酸素、および窒素が含まれる。
【００７３】
「置換ヘテロアリール」は、置換基として１つ以上の非妨害基を有するヘテロアリールである。
【００７４】
「置換複素環」は、非妨害置換基から形成される１つ以上の側鎖を有する複素環である。
【００７５】
「求電子剤」は、イオン性であってもよく、求電子中心、つまり電子を求める中心を有し、求核剤と反応可能である、イオンあるいは原子または原子の集まりを言及する。
【００７６】
「求核剤」は、イオン性であってもよく、求核中心、つまり求電子中心、あるいは、求電子剤を有する中心を求める中心を有するイオンあるいは原子または原子の集まりを言及する。
【００７７】
「生理学的に開裂可能な」または「加水分解可能な」結合は、生理条件下で水と反応する（つまり加水分解される）比較的弱い結合である。水に加水分解する結合の傾向は、２つの中心原子を連結する一般型の結合だけでなく、これらの中心原子に付着する置換基によって決まる。適切な加水分解に不安定または弱い結合には、カルボン酸エステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシロキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、およびオリゴヌクレオチドが含まれるがそれだけに限定されない。
【００７８】
「分解性結合」には、生理学的に開裂可能な結合、加水分解可能な結合、および酵素的分解性結合が含まれるがそれだけに限定されない。したがって、分解性結合」は、生理条件下で他の何らかの機構（つまり、酵素触媒、酸触媒、塩基触媒など）によって加水分解または開裂してもよい結合である。例えば、「分解性結合」は、プロトン（例えば、イオン性水素原子、Ｈα）の塩基抽出を駆動力として有する脱離反応を伴うことが可能である。
【００７９】
「酵素的分解性結合」は、１つ以上の酵素の酵素によって分解する結合を意味する。
【００８０】
「加水分解に安定な」結合（ｌｉｎｋａｇｅ）または結合（ｂｏｎｄ）は、水において実質的に安定な、つまり生理条件下で長期間にわたって、明らかな程度に加水分解をすることがない化学結合、典型的には、共有結合を言及する。加水分解に安定な結合の例として、炭素-炭素結合（例えば、脂肪族鎖における）、エステル、アミド、ウレタン（カルバミン酸塩）等が挙げられるがそれだけに限定されない。通常、加水分解に安定な結合は、生理条件下で一日毎に約１から２％未満の加水分解速度を呈するものである。代表的な化学結合の加水分解速度は、標準的な化学のテキストに記載されている。結合によっては、（例えば）隣接および付近の原子ならびに周囲条件に応じて、加水分解に安定または加水分解性であることが可能であることが指摘されたい。当技術分野において通常の技術を有する者は、例えば、該当する結合を含む分子を該当する条件下に置き、加水分解（例えば、単一分子の開裂により生じる２つの分子の存在および量）の証拠を確認するために試験を行なうことによって、一定の結合（ｌｉｎｋａｇｅ）または結合（ｂｏｎｄ）が、与えられた情況において加水分解に安定または加水分解性であるか否かを決定することができる。当技術分野において通常の技術を有する者に既知である、一定の結合（ｌｉｎｋａｇｅ）または結合（ｂｏｎｄ）が加水分解に安定または加水分解性であるか否かを決定するためのその他の方法も使用可能である。
【００８１】
「活性剤」、「生理活性剤」、および「薬理活性剤」という用語は、本明細書において同じ意味で使用され、体内または体外で示される、薬理学的で、多くの場合は有益である何らかの効果を提供するいかなる薬剤、薬物、化合物、組成物、または混合物も含めるように定義される。これには、食物、補助食品、栄養物、栄養補給食品、薬剤、タンパク質、ワクチン、抗毒素、ビタミン、およびその他の有益な薬剤が含まれる。本明細書で使用される際、これらの用語には、患者における局所的または全身的効果をもたらす生理活性または薬理活性物質がさらに含まれる。
【００８２】
「薬学的に許容可能な賦形剤」または「薬学的に許容可能な担体」は、本発明の組成に含めることが可能で、患者に著しく有害な毒性効果をもたらさない賦形剤を言及する。
【００８３】
「薬理学的有効量」、「生理学的有効量」、および「治療的有効量」は、本明細書において同じ意味で使用され、血流または対象組織における活性剤および／または複合体の所望レベルを提供するのに必要とされるポリマー活性剤複合体（製剤において一般的に存在する）の量を意味する。正確な量は、数多くの要因、例えば、特定の活性剤、製剤の成分および物理的特性、対象患者人口、患者検討等に左右され、当技術分野の通常の技術を有する者は、本明細書で提供される情報および該当文献で利用可能な情報に基づき容易に決定できる。
【００８４】
本発明のポリマーに関する「多機能」は、３つ以上の官能基を含むポリマーを意味し、その官能基は、同一または異なってもよい。本発明の多機能性ポリマーは、一般的に、約３〜１００の官能基、または３から５０の官能基または３から２５の官能基または３から１５の官能基または３から１０の官能基、あるいは、３、４、５、６、７、８、９、または１０の官能基をポリマー内に含む。「二官能性」ポリマーは、そ２つの官能基を含むポリマーであり、その官能基は同一（つまり、ホモ二官能性）または異なる（つまり、ヘテロ二官能性）である。
【００８５】
ポリマーの形状または全体構造に関連する「分岐」は、２つ以上のポリマー「アーム」を有するポリマーを言及する。分岐ポリマーは、２ポリマーアーム、３ポリマーアーム、４ポリマーアーム、６ポリマーアーム、８ポリマーアーム、またはそれ以上を有してもよい。高度に分岐したポリマーの特定の一種類は、樹枝状ポリマーまたはデンドリマーであり、本発明の目的のために、分岐ポリマーのものとは異なる構造を有するものと考える。
【００８６】
「デンドリマー」または樹枝状ポリマーは、球状のサイズ単分散ポリマーであり、全ての結合が、通常の分岐パターンおよびそれぞれが分岐点を形成する繰り返し単位で中心の焦点または核から半径方向に現れる。デンドリマーは、コアカプセルなどの特定の樹枝性を呈し、その他の種類のポリマーとは異なる。
【００８７】
本明細書に記載の塩基性または酸性の反応剤は、中性、荷電、およびそのいかなる対応する塩形態も含む。
【００８８】
「患者」という用語は、本明細書で提供されるような複合体を投与することによって防止または治療可能な病状に悩むまたはその病状の傾向のある生物を言及し、ヒトと動物が含まれる。
【００８９】
本明細書で使用される際、「イオン性水素原子」（「Ｈα」）という用語は、多くの場合水酸化物またはアミン塩基である塩基の存在下で除去可能である水素原子を意味する。一般的に、「イオン性水素原子」（「Ｈα」）は、炭素原子に付着する水素原子で、１つ以上の芳香族部分あるいは別の基に付着し、該芳香族部分あるいは別の基は、プロトンとしてのイオン性水素原子が失われることによって形成されるであろうカルボア二オン（または、該カルボアニオンをもたらす遷移状態）を何らかの方法で安定させる。
【００９０】
本明細書で使用される際、「薬物放出速度」は、体系におけるポリマー活性剤複合体の総量の半分が、活性剤およびポリマー残基に開裂する速度（半減期と明記される）を意味する。
【００９１】
「任意の」および「任意で」は、後述の状態が発生してもしなくてもよいことを意味し、その記述がその状況が発生する事例およびその状況が発生しない事例を含むようにする。
【００９２】
本明細書で使用される際、指示語の「ハロ（halo）」（例えば、フルオロ、クロロ、ヨード、ブロモなど）は、通常、ハロゲンが分子に付着する場合に使用され、一方接尾語の「物（-ide）」（例えば、フッ化物、塩化物、ヨウ化物、臭化物など）は、ハロゲンが独立イオン型に存在する場合（例えば、離脱基が分子を離脱する場合など）に使用される。
【００９３】
本説明に関する状況において、１つの構造または化学式に関して提供される変数の定義は、状況が他の状態を示さない限り、異なる構造において繰り返される同一の変数に当てはまることが認識されたい。したがって、例えば、ポリマー試薬に関する「ポリ」、「スペーサー部分」、「Ｒｅ１」などの定義は、本明細書に提供される複合体にも当てはまる。
【００９４】
前述のとおり、本発明は、ポリマーと別の部分との間に分解性結合を有する複合体を提供するのに有益なポリマー試薬を（特に）含む。理論によって縛られることなく、複合体を生成するために使用されるポリマー試薬のいかなる残留物または「タグ」を最小化または全体的に除去するような方法で、複合体が分解されると考えられる。結果として、（本明細書に記載されるポリマー試薬のアミン含有活性剤との反応から生成される複合体の加水分解後に）活性剤の元々の非複合で未変更の形態に再生または回復することが可能である。
【００９５】
本明細書に記載のように、ならびに本明細書に提供される化学式によって証明されるように、本発明のポリマー試薬は、１つ以上の水溶性ポリマー（例えば、本明細書に提供されるさまざまな化学式に記載される「ポリ１」および「ポリ２」）、イオン性水素原子Ｈaを含む芳香族含有部分（例えば、本明細書に提供されるさまざまな化学式に記載される「
【００９６】
【化５７】
2008544046.tif 000023
」）、および活性剤のアミノ基と反応して分解性結合を生成可能な官能基アミノ基［例えば、本明細書に提供されるさまざまな化学式に記載される「（ＦＧ）」］を含む。さらに、記載のポリマー試薬のさまざまな組成は、任意のスペーサー部分（例えば、本明細書に提供されるさまざまな化学式に記載される「Ｘ」、「Ｘ１」、「Ｘ２」、および「Ｘ３」）を介して残りのポリマー試薬に付着可能である。さらに、１、２、３、４、またはそれ以上の電子代替基（例えば、本明細書に提供されるさまざまな化学式に記載される「Ｒｅ」、「Ｒｅ１」、「Ｒｅ２」、「Ｒｅ３」、「Ｒｅ４」など）は、芳香族含有部分（ポリマー試薬と複合体との両方において）に付着可能である。
【００９７】
本発明の模範的ポリマー試薬について記載する前に、水溶性ポリマー、芳香族部分、活性剤のアミノ基と反応してカルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基、電子代替基、およびスペーサー部分の実施形態についてまず記載する。水溶性ポリマー、芳香族部分、電子代替基、およびスペーサー部分の以下の記載は、ポリマー試薬だけでなく、記載のポリマー試薬を使用して形成される対応する複合体にも当てはまる。
【００９８】
一定の水溶性ポリマーに関して、各水溶性ポリマー（例えば、ポリ、ポリ１、およびポリ２）は、ポリマーが水溶性で非ペプチド性である限り、いかなるポリマーも含むことができる。本明細書で使用される水溶性ポリマーは、好ましくは、ポリ（エチレングリコール）であるが、例えば、米国特許番号第５，６２９，３８４号に記載されるような、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）などのその他のポリ（アルキレングリコール）、エチレングリコールおよびプロピレングリコール等の共重合体、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリル酸塩）、ポリ（サッカリド）、ポリ（a-ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリ（Ｎ-アクリロイルモルホリン）などのその他の水溶性ポリマーも可能である。水溶性ポリマーは、ホモポリマー、共重合体、ターポリマー、非ランダムブロックポリマー、および前述のあらゆるもののランダムブロックポリマーであることが可能である。さらに、水溶性ポリマーは、線状であることが可能であるが、以下にさらに詳しく記載されるその他の形態（例えば、分岐、フォーク状等）でも可能である。全体の構造内に存在する状況において、水溶性ポリマーは、１から約３００の末端を有する。
【００９９】
ポリマー試薬は、２つ以上の水溶性ポリマーを含む事例において、全体構造における各水溶性ポリマーが、同一または異なることが可能である。しかしながら、全体構造における全ての水溶性ポリマーは、同一の種類であることが好ましい。例えば、一定の構造内の全ての水溶性ポリマーは、各々がポリ（エチレングリコール）であることが好ましい。
【０１００】
個々のいかなる水溶性ポリマーの重量平均分子量も変化可能であるが、いかなる一定の水溶性ポリマーの重量平均分子量も、一般的には、１００ダルトンから約１５０，０００ダルトンの範囲である。しかしながら、典型的範囲として、約８８０ダルトンから約５，０００ダルトン、５，０００を上回るダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲、約６，０００ダルトンから約９０，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲、１０，０００を上回るダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲、約２０，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲、約５３，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲、約２５，０００ダルトンから約１２０，０００ダルトンの範囲、約２９，０００ダルトンから約１２０，０００ダルトンの範囲、約３５，０００ダルトンから約１２０，０００ダルトンの範囲、約８８０ダルトンから約６０，０００ダルトンの範囲、約４４０ダルトンから約４０，０００ダルトンの範囲、約４４０ダルトンから約３０，０００ダルトンの範囲、および約４０，０００ダルトンから約１２０，０００ダルトンの範囲の重量平均分子が挙げられる。いかなる一定の水溶性ポリマーについても、これらの範囲のうちの１つ以上における分子量を有するＰＥＧが好ましい。
【０１０１】
水溶性ポリマーの典型的重量平均分子として、約１００ダルトン、約２００ダルトン、約３００ダルトン、約４００ダルトン、約４４０ダルトン、約５００ダルトン、約６００ダルトン、約７００ダルトン、約７５０ダルトン、約８００ダルトン、約９００ダルトン、約１，０００ダルトン、約１，５００ダルトン、約２，０００ダルトン、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約１６，０００ダルトン、約１７，０００ダルトン、約１８，０００ダルトン、約１９，０００ダルトン、約２０，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、および約７５，０００ダルトンが挙げられる。前述のものの総重量平均分子量を有する水溶性ポリマーの分岐型水溶性ポリマー（例えば、２つの２０，０００ダルトンポリマーから成る分岐４０，０００ダルトン水溶性ポリマー）も使用可能である。
【０１０２】
本発明の１つ以上の実施形態において、ポリマー試薬は、それから生成される複合体の所望の放出に適した範囲のサイズの水溶性ポリマーを含む。例えば、比較的長い放出速度を有する複合体は、（ａ）複合体の分解までの長時間の循環、および（ｂ）複合体の分解後の残りの水溶性ポリマーの適度に速い体内クリアランス、に適したサイズのポリマー試薬から調製されることができる。同様に、複合体が比較的速い放出速度を有する場合、ポリマー試薬は、一般的に低い分子量を有する。
【０１０３】
ＰＥＧが、ポリマー試薬において水溶性ポリマーとして使用される場合、一般的に、ＰＥＧは、多くの（ＯＣＨ２ＣＨ２）モノマー［またはＰＥＧの定義に応じて（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）モノマー］を含む。本記載全体で使用される際、繰り返し単位の数は、「（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ．」における下付き文字の「ｎ」によって識別される。したがって、（ｎ）の値は、一般的に、２から約３４００、約４から約１５００、約１００から約２３００、約１００から約２２７０、約１３６から約２０５０、約２２５から約１９３０、約４５０から約１９３０、約１２００から約１９３０、約５６８から約２７２７、約６６０から約２７３０、約７９５から約２７３０、約７９５から約２７３０、約９０９から約２７３０、および約１，２００から約１，９００の範囲のうちの１つ以上に含まれる。分子量が既知であるいかなる一定のポリマーについても、ポリマーの総重量平均分子量を繰り返しモノマーの分子量で割ることによって、繰り返し単位（つまり「ｎ」）を決定することが可能である。
【０１０４】
各水溶性ポリマーは、一般的に、生体適合性かつ非免疫原性である。生体適合性について、生体組織に関連して（例えば、患者への投与）物質を単独または別の物質（例えば、活性剤）と共に使用することによる有益な効果が、臨床医、例えば医師によって評価されるいかなる有害効果も上回る場合に、物質は生体適合性であると考えられる。非免疫原性について、生体組織に関連して単独または別の物質と共に物質を使用することによって免疫反応（例えば、抗体の形成）がもたらされない場合、あるいは免疫反応が生成され、その反応が臨床医の評価により臨床的に重大かつ重要と見なされない場合に、物質の使用物質は非免疫原性であると考えられる。本明細書に記載される水溶性ポリマーならびに活性剤の複合体およびポリマーは、生体適合性かつ非免疫原性であることが特に好ましい。
【０１０５】
有益な１形態において、遊離または非結合のＰＥＧは、ヒドロキシル基と各端で末端された線状ポリマーであり、
ＨＯ-ＣＨ２ＣＨ２Ｏ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ'-ＣＨ２ＣＨ２-ＯＨ
ここで、（ｍ'）は、一般的に、０から約４，０００までであり、好ましくは、約２０から約１，０００までである。
【０１０６】
上記ポリマーである、アルファ-、オメガ-ジヒドロキシルポリ（エチレングリコール）は、ＨＯ-ＰＥＧ-ＯＨとして簡潔に表すことが可能で、-ＰＥＧ-の記号は、以下の構造単位を表すことができることが理解され、
-ＣＨ２ＣＨ２Ｏ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ'-ＣＨ２ＣＨ２-
ここで、（ｍ'）は、上記のように定義される。
【０１０７】
本発明において有益な遊離または非結合の別の種類のＰＥＧは、メトキシ-ＰＥＧ-ＯＨ、または簡潔にｍＰＥＧであり、１つの末端が比較的不活性のメトキシ基であり、他方の末端がヒドロキシル基である。ｍＰＥＧの構造は以下に示される。
ＣＨ３Ｏ-ＣＨ２ＣＨ２Ｏ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ'-ＣＨ２ＣＨ２-
ここで、（ｍ'）は上述のとおりである。
【０１０８】
米国特許番号第５，９３２，４６２号に記載されるようなマルチアームまたは分岐ＰＥＧ分子も、ＰＥＧポリマーとして使用可能である。例えば、ＰＥＧは以下の構造を有することが可能で、
【０１０９】
【化５８】
2008544046.tif 000024
ここで、
ポリａおよびポリｂは、メトキシポリ（エチレングリコール）などのＰＥＧ骨格（同一または異なる）であり、
Ｒ”は、Ｈ、メチル、またはＰＥＧ骨格などの非反応性部分であり、
ＰおよびＱは、非反応性結合である。好適な実施形態において、分岐ＰＥＧポリマーは、メトキシポリ（エチレングリコール）二置換リジンである。
【０１１０】
さらに、ＰＥＧは、フォーク状のＰＥＧを含むことができる。遊離または非結合のフォーク状ＰＥＧの例は、以下の化学式によって表され、
【０１１１】
【化５９】
2008544046.tif 000025
ここで、Ｘはスペーサー部分で、各Ｚは、規定長さの原子の鎖によってＣＨに結合される活性末端基である。官能基を分岐炭素原子に結合する原子の鎖は、連結基としての役割を果たし、例えば、アルキル鎖、エーテル鎖、エステル鎖、アミド鎖、およびその組み合わせを含めてもよい。米国特許番号第６，３６２，２５４号は、本発明において使用可能なさまざまなフォーク状のＰＥＧ構造を開示する。
【０１１２】
ＰＥＧポリマーは、ＰＥＧ鎖の端にではなくＰＥＧに沿って共有結合的に付着されたカルボキシルなどの、反応基を有するペンダントＰＥＧ分子を含めてもよい。ペンダント反応基は、直接またはアルキレン基などのスペーサー部分を介してＰＥＧに付着可能である。
【０１１３】
上述のＰＥＧ形態に加え、ポリマー試薬における各水溶性ポリマーは、ポリマーにおける１つ以上の弱いまたは分解性の結合で調製されることも可能で、上述のポリマーのうちのいかなるものも含めることができる。例えば、ＰＥＧは、加水分解するポリマーにおけるエステル結合で調製されることができる。下に示されるように、この加水分解により、ポリマーは、低分子量の断片に開裂される。
【０１１４】
【化６０】
2008544046.tif 000026
ポリマー骨格内の分解性結合として有益である加水分解で分解性のその他の結合には、炭素塩結合、例えばアミンおよびアルデヒドの反応からもたらされるイミン結合（例えば、Ｏｕｃｈｉらによる（１９９７年）Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ  ３８（１）：５８２-３参照）、例えばアルコールをリン酸基と反応させることによって生成されるリン酸エステル結合、ヒドラジドとアルデヒドの反応によって一般的に生成されるヒドラゾン結合、アルデヒドとアルコールの反応によって一般的に生成されるアセタール結合、例えばギ酸塩とアルコールの反応によって生成されるオルトエステル結合、例えばＰＥＧなどのポリマーの端でアミン基によって、および別のＰＥＧ鎖のカルボキシル基によって生成されるアミド結合、例えばＰＥＧと末端イソシアネート基およびＰＥＧアルコールとの反応から生成されるウレタン結合、例えばＰＥＧなどのポリマーの端でアミン基によって、およびペプチドのカルボキシル基によって生成されるペプチド結合、ならびに例えばポリマーの端でホスホアミダイド基によって、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基によって生成されるオリゴヌクレオチド結合が含まれる。
【０１１５】
ポリ（エチレングリコール）つまりＰＥＧという用語が、ＰＥＧの上記の全ての形態を表す、または含めることが、当技術分野で通常の技術を有するものに理解される。
【０１１６】
当技術分野において通常の技術を有する者は、実質的に水溶性のポリマーに関する前述の説明が、決して包括的ではなく、単に例示的であること、ならびに上記の特性を有する全てのポリマー材料が考慮されるということが認識されるだろう。本明細書で使用される際、「水溶性ポリマー」という用語は、分子を言及するだけでなく、別の部分に付着した水溶性ポリマーの残留物も言及する。
【０１１７】
各水溶性ポリマーは、イオン性水素原子を有する芳香族含有部分に付着される（直接または１つ以上の原子から成るスペーサー部分を介して）。したがって、芳香族含有部分は、１つ以上の水溶性ポリマーの付着点としての役割を果たす。
【０１１８】
理論に縛られることなく、芳香族含有部分が１つ以上の水溶性ポリマーの付着点としての役割を果たすことは有利であると考えられる。特に、各水溶性ポリマーが（直接またはスペーサー部分を介して）芳香族含有部分に付着されることによって、芳香族種によくある毒性作用が、水溶性ポリマーによって提供される立体効果または阻害効果により削減されてもよい。この立体または阻害効果によって、芳香族物質を投与する場合に発生する可能性のある損害を与え得る代謝過程が削減または排除可能である。したがって、ここに記載される２つ以上の水溶性ポリマーを有するポリマー試薬は、毒性がより低いと考えられる複合体を提供することができる。このような利点は、たとえば、単一の分岐水溶性ポリマーが、芳香族含有部分に付着されるようなその他のポリマー試薬（および対応する複合体）と差別化することが考えられる。
【０１１９】
イオン性水素原子を有する大体のいかなる芳香族含有部分も使用可能であるが、芳香族含有部分は、さまざまな成分の一つの付着部位または複数の付着部位を提供しなければならない。さらに、芳香族含有部分は、それ自体完全に芳香族である必要はないことが認識されるべきである。芳香族含有部分は、例えば、任意で相互に直接または一つ以上の原子から成るスペーサー部分を介して結合する１つ以上の別々の芳香族部分を含むことができる。
【０１２０】
つかの事例において、イオン性水素原子を有する芳香族部分が、以下の構造のうちの１つの形態をとる。
【０１２１】
【化６１】
2008544046.tif 000027
ここで、Ａｒ１は第一の芳香族部分、Ａｒ２は第二の芳香族部分、Ｘ３はスペーサー部分、およびＺはＨに対する電子代替基である。このような電子代替基は、以下にさらに詳しく説明される。好適なＺ基には、-ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒｙｌ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒｙｌ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒｙｌ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒｙｌ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒｙｌ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ等が含まれるがそれだけに限定されず、Ｒは、Ｈまたは有機ラジカルである。
【０１２２】
典型的な（本明細書でさらに説明されるように１つ以上の電子代替基でさらに置換可能である）芳香族部分には、以下のもの（この時各場合において、該当するイオン性水素原子は、１つ以上の芳香環に隣接する脂肪酸炭素に付着する水素である、つまり、それはベンジル型またはベンジル様である）が含まれる。
【０１２３】
【化６２】
2008544046.tif 000028
【０１２４】
【化６３】
2008544046.tif 000029
【０１２５】
【化６４】
2008544046.tif 000030
であり、ここで、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５の各々は、ＧのいかなるＧ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５もＮである場合に、隣接する原子がＣ-Ｈまたは置換炭素でなければならないいう条件付きで、独立してＮ、Ｃ-Ｈ、または置換炭素である。好適な芳香族部分には、
【０１２６】
【化６５】
2008544046.tif 000031
【０１２７】
【化６６】
2008544046.tif 000032
【０１２８】
【化６７】
2008544046.tif 000033
が含まれ、ここで、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５の各々は、ＧのいかなるＧ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５もＮである場合に、隣接する原子がＣ-Ｈまたは置換炭素でなければならないという条件付きで、独立してＮ、Ｃ-Ｈ、または置換炭素である。
【０１２９】
１つ以上の実施形態において、イオン性水素原子を有する芳香族含有部分は、１つ以上の電子代替基（「Ｒｅ」、「Ｒｅ１」、「Ｒｅ２」など）を任意で含む。電子代替基は、電子を供与する基（ゆえに「電子供与基」と呼ばれる）または電子を求引する基（ゆえに「電子求引基」と呼ばれる）である。イオン性水素原子を有する芳香族含有部分に付着する場合、電子供与基は、電子をそれ自体から離れて配置し、芳香族含有部分付近または内に配置する能力を有する基である。イオン性水素原子を有する芳香族含有部分に付着する場合、電子求引基は、電子をそれ自体に近く配置し、かつ芳香族含有部分から離れて配置する能力を有する基である。水素は、一定の基の位置がそれ自体から離れているか近づいているかの決定における比較の基準として使用される。
【０１３０】
理論によって縛られないが、イオン性水素原子を有する芳香族含有部分の電子の位置（つまり、「電子密度」）を変更することによって、電子代替基は、イオン性水素原子がイオン化する容易さに影響する。したがって、電子求引基によりイオン性水素原子の酸性度が増加する一方で、電子供与基によりイオン性水素原子の酸性度が減少することが考えられる。イオン性水素原子の酸性度に影響を及ぼす電子供与および求引基には、本明細書に提供される構造のさまざまな構成と結合する働きをする、スペーサー部分（例えば、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３など）内に含まれる基が含まれる。
【０１３１】
典型的な電子求引基として、ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、およびヨード）、ニトロ、カルボキシ、エステル、ホルミル、ケト、アゾ、アミドカルボニル、アミドスルホニル、カルボキシアミド、スルホンオキシ、スルホンアミド、ウレイド、およびアリールが挙げられる。典型的な電子供与基として、ヒドロキシル、低級アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ等）、低級アルキル（例えば、メチル、エチル等）、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノ、アリールオキシ（例えば、フェノキシ等）、アリールアルコキシ（例えば、フェノキシ等）、アミノアリール（例えば、ｐ-ジチルアミノフェニル等）、メルカプト、およびアルキルチオが挙げられる。
【０１３２】
１つ以上の実施形態において、芳香族含有部分は、（１つ以上の水溶性ポリマーの他に）１、２、３、４、またはそれ以上の電子代替基を含んでもよい。  芳香族含有部分が２つの電子代替基を含む典型的事例は、以下の構造で示され、
【０１３３】
【化６８】
2008544046.tif 000034
ここで、
【０１３４】
【化６９】
2008544046.tif 000035
は芳香族含有部分で、Ａｒ１は第一の芳香族部分で、Ａｒ２は第二の芳香族部分で、Ｒｅ１は電子代替基、およびＲｅ２は電子代替基であり、一方、イオン性水素原子（すなわちＨα）、１つ以上の水溶性ポリマー、およびその他のいかなる成分も、存在してもよいが示されていない。Ｒｅ１およびＲｅ２の各々が異なる場合、（ａ）Ｒｅ１およびＲｅ２が異なる電子求引基であること、（ｂ）Ｒｅ１およびＲｅ２が異なる電子供与基であること、あるいは（ｃ）Ｒｅ１およびＲｅ２は、１つが電子求引基で他方が電子供与基であることが可能である。しかしながら、多くの状況において、Ｒｅ１およびＲｅ２の各々は同一である。
【０１３５】
イオン性水素原子を有する芳香族含有部分における電子代替基の位置は、多くの場合、芳香族求電子または求核置換過程によって添加される電子代替基の好適な入口点によって決定されるのが一般的であるが必ずしもそうとは限らない。例えば、フルオレン環について、求電子芳香族置換による電子代替基添加のための一般的な位置は「２」および「７」の位置である。これらの位置が、スペーサー部分（水溶性ポリマーに付着される）によって占められる場合、フルオレン環におけるその他の位置は、（ａ）スペーサー部分（例えば、Ｘ１およびＸ２）の配向能力、ならびに（ｂ）立体的影響などの要因に基づいて置換される。しかしながら、多くの場合、「２」および「７」の位置が利用できない場合、特に、アルファ炭素つまりフルオレンにおける９位（つまり、イオン性水素原子Ｈαを有する炭素）が置換される場合に、フルオレン環の「４」および「５」の位置は、付着部位を表す傾向にある。例示するために、フルオレン環における位置は、以下の構造において識別され、
【０１３６】
【化７０】
2008544046.tif 000036
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、および（ＦＧ）は、化Ｉに関して以下に定義されるとおりである。電子代替基およびその他の基の典型的位置は、フルオレン環に関して言及されたが、電子代替基の配置位置の本説明は、その他の芳香族系にも当てはまる。当技術分野において通常の技術を有する者は、その他の環系における配置位置を決定することができる。
【０１３７】
上に示されたように、電子代替基は、特定の電子代替基の性質に応じたさまざまな方法で、芳香族含有部分のイオン性水素原子の酸性度に影響を及ぼすことができる。例えば、上に示されるフルオレン環における「１」および「８」の位置の電子代替基のイオン性水素原子に対する近接性により、これらの位置にある電子代替基は、結合（誘起）効果によって最大の影響力を有する。しかしながら、ポリ１-Ｘ１-およびポリ２-Ｘ２-が２および７の位置に付着する場合、上述の理由（つまりスペーサー部分の配向能力および立体的影響）から、電子代替基の４または５の位置における添加の可能性が大きい。アミド、カルボキシ、ニトロ、およびアルコキシ基などの共鳴効果によって環と相互作用する電子代替基は、アルファ水素から相当な距離において共鳴効果を提供することができる。結果として、それらが、イオン性水素原子に比較的近く配置されることは、それほど重要でない可能性がある。別の観点から述べれば、最終的に除去されるイオン性水素原子がこれらの位置で電子代替基の立体効果によって抑制される可能性があるので、比較的近いそれらの配置（例えば、「１」および「４」の位置）を置換しないことが有利であってもよい。また、電子代替基およびその他の基の例示的配置が、フルオレン環に関して言及されたが、配置位置の本説明は、その他の環系にも当てはまり、当技術分野において通常の技術を有する者は、その他の環系における対応する配置位置を決定することができる。
【０１３８】
本発明のポリマー試薬で生成される複合体の放出反応をより理解するために、（ならびにその過程における電子代替基の効果を示すするためにも）、理論によって縛られないことを意図して、放出過程の機構の提案が提供される。提案される機構の概略図は、芳香族含有部分としてフルオレン部分を利用して以下に示される。概略図において、本発明の典型的な複合体が示され、カルバメート結合が活性剤（「薬物」）の残留物を残りの分子に結合する。変数である「ポリ１」、「ポリ２」、「Ｘ１」、「Ｘ２」、「Ｒ１」、および「Ｒ２」は、上に定義されるとおりである。
【０１３９】
【化７１】
2008544046.tif 000037
放出過程は、一般的に、転移過程においてプロトンを受け入れる能力を有する塩基性分子、イオン、または種（概略図において「Ｂ：」と示される）の攻撃によって開始される。体内において、これは、いくつかの塩基性原子を有するイオン種またはタンパク質のいくつかの種類のいずれかの１つであってもよい。置換フルベン部分（または、非フルオレン構造が用いられる際に対応する構造）を生成するために脱離が起こることによって、生理条件下で急速に失われるカルボキシ基に最初に付着されてもよい活性剤または「薬物」の種を放出する。
【０１４０】
放出過程は、協奏的または段階的であることが可能である。プロトンの除去ステップの正確な性質に関わらず、カルボアニオンが中間体として生成されるか、カルボアニオン性を有する遷移状態が伴う。したがって、カルボアニオンの生成を抑制する芳香環に付着する電子供与基は、カルボアニオン生成過程を抑制することにより放出速度が遅くなる。反対に、カルボアニオン種の生成を促進し、カルボアニオン遷移状態を安定させるカルボアニオン遷移状態電子求引基は、カルボアニオン生成過程を加速することによって、放出速度が速くなる。
【０１４１】
有利には、１つ以上の電子代替基を芳香族含有部分に含むことによって、活性剤の所望の放出速度をより厳密に提供することができる。１つ以上の電子求引基を芳香族含有部分に含むことによって放出は増加し、１つ以上の電子供与基の存在により、放出速度が減少することが考えられる。したがって、１つ以上の電子代替基の存在は、放出反応に伴う帯電中間体または遷移状態の相対的安定性または不安定性を提供可能であると考えられる。したがって、そのような１つ以上の電子求引基を芳香族含有部分に含むことによって、本発明のポリマー試薬に複合された元々の活性剤の所望の放出速度をよりカスタマイズすることが可能である。
【０１４２】
そのような電子代替基は、提案される電子代替基を有するポリマー試薬を調製し、このポリマー試薬を使用して複合体を調製し、その複合体を経時的に薬物放出速度について試験し、ならびにその薬物放出速度を対照ポリマー試薬で調製される複合体と比較することによって、複合体の薬物放出速度にどの効果をもたらすかを決定することが可能である。
【０１４３】
体内の複合体の相対放出速度を決定するために、複合体は、調製および研究可能である。以下の実施例５を参照のこと。グリシン複合体の調製が以下のスキーム（この場合、ｍ-ＰＥＧＯおよびＯＰＥＧ-ｍはそれぞれ、各ｎが４から１５００である-Ｏ-ＣＨ２ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ-ＯＣＨ３として定義される）に例示される。
【０１４４】
【化７２】
2008544046.tif 000038
本複合体の放出速度は、中性に近いｐＨで緩衝媒体における反応を観測することによって、疑似体内状態で研究された。フルベン含有部分の出現を経時的に追うことによって、放出をもたらす反応の半減期を計算してもよい。この放出速度は、電子代替基の数および／または種類によって異なるその他のグリシン複合体の放出速度と質的に比較可能である。そうすることによって、いかなる一定の種の放出速度も決定することができる。
【０１４５】
本明細書に記載のポリマー試薬の官能基は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。官能基が活性剤のアミノ基と反応してカルバメート結合などの分解性結合を生成可能である限り、本発明は特定の官能基に限定されない。活性剤のアミノ基と反応可能である典型的な官能基として、Ｎ-スクシンイミジル、１-ベンゾトリアゾリル、イミダゾール、炭素塩ハロゲン化物（例えば、炭素塩塩化物および炭素塩臭化物）、フェノラート（例えば、ｐ-ニトロフェノラート）などの活性炭素塩から成る基から選択される官能基が挙げられる。また、特別な場合として、活性剤がイソシアネートまたはイソチオシアネート基に変換される活性アミン基と共に利用可能な場合、ポリマー試薬の官能基は、これらの成分の反応が分解性カルバメート結合を提供するため、ヒドロキシルであることが可能である。
【０１４６】
スペーサー部分（例えば、「Ｘ」、「Ｘ１」、「Ｘ２」、「Ｘ３」など）は、いかなる原子あるいは分子のある部分を別の部分に結合する一連の原子である。しかしながら、本開示目的により、一連の原子がポリマーに直接隣接する場合は、一連の原子はスペーサー部分ではなく、一連の原子は提案されるスペーサー部分が単にポリマー鎖の延長を表すように別のモノマー部分である。例えば、部分的な構造「ポリ-Ｘ-」、およびポリが、（ｍ）が２から４０００でＸがスペーサー部分と定義される「ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ-」として定義される場合、スペーサー部分は、定義が単にポリマー鎖の延長を表すことになるため、「-ＣＨ２ＣＨ２Ｏ-」として定義されない。しかしながら、その場合、許容可能なスペーサー部分は「-ＣＨ２ＣＨ２-」として定義されうる。
【０１４７】
模範的スペーサー部分として、-Ｃ（Ｏ）-、-Ｓ（Ｏ２）-、-Ｓ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｓ（Ｏ２）-、-Ｓ（Ｏ２）-ＮＨ-、-ＣＨ＝ＣＨ-、-Ｏ-ＣＨ＝ＣＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｏ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｓ）-、-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｓ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｓ-、-Ｓ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｓ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｓ-、-Ｓ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｓ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｓ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｓ-、-Ｓ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｓ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｓ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｓ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｓ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ＝ＣＨ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-Ｏ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-Ｏ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-Ｏ-ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-、-Ｏ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＮＨ-ＣＨ２-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＮＨ-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-［ＣＨ２］ｈ-（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-Ｏ-［ＣＨ２］ｈ-（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ-、二価シクロアルキル基、-Ｏ-、-Ｓ-、アミノ酸、-Ｎ（Ｒ６）-、および前述のいずれかのうちの２つ以上の組み合わせが含まれるがそれだけに限らず、Ｒ６は、Ｈ、またはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールから成る基から選択される有機ラジカルであり、（ｈ）は０から６であり、（ｊ）は０から２０である。その他の特定のスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２）１-６-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２）１-６-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、および-Ｏ-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２）１-６-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-の構造を有し、ここで、メチレンに続く下付き文字の値は、その構造に含まれるメチレンの数を示し、例えば、（ＣＨ２）１-６は、その構造が１、２、３、４、５、または６つのメチレンを含むことが可能であることを意味する。さらに、上記スペーサー部分のいずれもが、１から２０のエチレンオキシドモノマー単位［つまり、--（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-２０］を含むエチレンオキシドオリゴマー鎖をさらに含んでもよい。つまり、エチレンオキシドオリゴマー鎖は、スペーサー部分の前または後、および、任意で２つ以上の原子から成るスペーサー部分のいかなる２つの原子もの間で発生することが可能である。また、オリゴマー鎖は、オリゴマーがポリマーセグメントに隣接し、単にポリマーセグメントの延長を表す場合は、スペーサー部分の一部として考えられない。最後に、スペーサー部分によっては、原子または電子代替基としても機能する原子の基を含み、その場合、１つ以上の追加の「離散」（つまり、スペーサー部分の一部ではない）電子代替基を含むことは所望されず、または必要とされなくてもよいことが留意されたい。
【０１４８】
ＸおよびＸ１のための好適なスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る基から選択されるものを含む。Ｘ２のための好適なスペーサー部分は、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｎ���-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）１-３-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１-３-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る基から選択されるものを含む。
【０１４９】
全体構造における各スペーサー部分は、存在する場合、全体構造におけるその他のいかなるスペーサー部分と同一または異なることが可能である。Ｘ１およびＸ２に関して、Ｘ１およびＸ２にが同一であることが好ましい場合がある。
【０１５０】
Ｘ、Ｘ１および／またはＸ２に相当する好適なスペーサー部分には、アミドカルボキシ、カルボキシアミド、スルホンアミド、エステル、およびウレイドが含まれる。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、スペーサー部分（特に、化ＶＩおよびＶＩ-ＣのＸ）は、硫黄原子が欠如すること（例えば、「-Ｓ-」の欠如）、リン原子が欠如すること、４を上回る原子の鎖であること、ならびに-ＣＯ-ＣＨ２-ＮＨ-ＣＯ-、-ＣＯ-ＣＨ（ＣＨ３）-ＮＨ-ＣＯ-、および-ＣＯ-ＣＨ２-ＮＨ-ＣＯ-ＮＨを含まないことのうちの１つ以上を満たすことが好ましい。いくつかの実施形態において、スペーサー部分（特に、化ＶＩおよびＶＩ-ＣのＸ）は、原子または原子の基に硫黄およびリン原子が欠如していること、および-ＮＨ-ＣＯ-Ｏ-、-ＮＨ-ＣＯ-ＣＨ２-ＮＨ２-ＣＯ-ＮＨ-、-ＮＨ-ＣＯ-、-ＮＨ-ＣＨ２-、-ＮＨ-ＣＯ-ＮＨ-、-ＮＨ-ＣＳ-ＮＨ-、-ＣＯ-Ｏ-、-ＣＯ-ＮＨ-、および-ＣＨ２-ＮＨ-でないことを条件とした、原子または原子の基であることが好ましい。いくつかの実施形態において、スペーサー部分（特に、化ＶＩおよびＶＩ-ＣのＸ）は、-Ｒ５-Ｒ６ではなく、ここで、Ｒ５は--ＮＨ-、-Ｓ-、-ＣＯ-、-ＣＯＯ-、-ＣＨ２-、-ＳＯ２-、-ＳＯ３-、-ＰＯ２-、および-ＰＯ３-から成る基から選択され、Ｒ６は、-ＣＯ-、-ＣＯＯ-、-ＣＨ２-、-ＣＨ（ＣＨ３）-、-ＣＯ-ＮＨ-、-ＣＳ-ＮＨ、-ＣＯ-ＣＨ２-ＮＨ-ＣＯ-、-ＣＯ-ＣＨ（ＣＨ３）-ＮＨ-ＣＯ-、-ＣＯ-ＣＨ２-ＮＨ-ＣＯ-ＮＨ-、-ＣＯ-Ｒ８-（ここで、Ｒ８は、直線状または分岐アルキレン）、マレイミド含有ラジカル、およびトリアジニル含有ラジカルから成る基から選択される結合あるいはラジカルである。
【０１５２】
いくつかの事例において、スペーサー部分および／またはいかなる電子代替基も、芳香族含有部分と直接結合するアミド官能基を含んでもよい（すなわち、その場合、アミドの窒素は、芳香族含有部分と直接共有結合する）。しかしながら、いくつかの実施形態において、スペーサー部分および／またはいかなる電子代替基の両方ともが、芳香族含有部分と直接結合するアミド官能基（つまり、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-または-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-）を含まないことが好ましい。
【０１５３】
典型的な本発明のポリマー試薬について、ここで、さらに詳しく説明する。立体化学は、いかなる化学式または構造（ポリマー試薬、複合体のためのもの、あるいはいかなるその他の化学式または構造であっても）にも特に示されないが、提供される化学式および構造は、双方の光学異性体とともに、同等量（つまり、ラセミ混合物）および同等でない量の各光学異性体の混合物を含む組成を考慮していることが銘記されたい。したがって、例えば、単一の電子代替基（Ｒｅ１）が存在する化ＩＩｃのポリマー試薬は、双方の光学異性体とその混合物を含む。
【０１５４】
典型的な本発明のポリマー試薬は、以下の構造を有し、
【０１５５】
【化７３】
2008544046.tif 000039
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
【０１５６】
【化７４】
2008544046.tif 000040
は、イオン性水素原子Ｈaを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である。
【０１５７】
化Ｉに相当するポリマー試薬に、離散電子代替基が存在しない場合［つまり、化Ｉに関して（ａ）および（ｂ）が両方ともが０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１５８】
【化７５】
2008544046.tif 000041
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、
【０１５９】
【化７６】
2008544046.tif 000042
、および（ＦＧ）の各々は、化Ｉに関して上に定義されたとおりである。
【０１６０】
化Ｉに相当するポリマー試薬が、単一の離散電子代替基を有する場合［つまり、化Ｉにおいて（ａ）が１で、（ｂ）が０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１６１】
【化７７】
2008544046.tif 000043
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、
【０１６２】
【化７８】
2008544046.tif 000044
、（ＦＧ）およびＲｅ１の各々は、前述の化Ｉに定義されたとおりである。
【０１６３】
化Ｉに相当するポリマー試薬が、２つの離散電子代替基を有する場合［つまり、化Ｉにおいて（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１６４】
【化７９】
2008544046.tif 000045
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、
【０１６５】
【化８０】
2008544046.tif 000046
、（ＦＧ）、Ｒｅ１、Ｒｅ２の各々は、前述の化Ｉに定義されたとおりである。
【０１６６】
いくつかの場合において、ポリマー試薬は、イオン性水素原子を有する炭素原子を介してのみ相互に結合するだけの個別の芳香族部分を含むことができる。このようなポリマー試薬は、以下の化学式を有し、
【０１６７】
【化８１】
2008544046.tif 000047
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【０１６８】
化ＩＩに相当するポリマー試薬に、離散電子代替基が存在しない場合［つまり、化ＩＩにおいて（ａ）および（ｂ）が両方ともが０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１６９】
【化８２】
2008544046.tif 000048
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ１、Ｘ２、Ａｒ１、Ａｒ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＩに定義されたとおりである。
【０１７０】
化ＩＩに相当するポリマー試薬が、単一の離散電子代替基を有する場合［つまり、化ＩＩにおいて（ａ）が１で、（ｂ）が０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１７１】
【化８３】
2008544046.tif 000049
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＩに定義されたとおりである。
【０１７２】
化ＩＩに相当するポリマー試薬が、２つの離散電子代替基を有する場合［つまり、化ＩＩにおいて（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１７３】
【化８４】
2008544046.tif 000050
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、（ＦＧ）、Ｒｅ１、およびＲｅ２の各々は、前述の化ＩＩに定義されたとおりである。
【０１７４】
さらにその他の場合において、ポリマー試薬は、イオン性水素原子を有する炭素原子を介して、ならびに別の直接結合の両方で相互に結合するの個別の芳香族部分を含むことができる。このようなポリマー試薬は、以下の化学式を有し、
【０１７５】
【化８５】
2008544046.tif 000051
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【０１７６】
化ＩＩＩに相当するポリマー試薬に、離散電子代替基が存在しない場合［つまり、化ＩＩＩにおいて（ａ）および（ｂ）が両方ともが０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１７７】
【化８６】
2008544046.tif 000052
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＩＩにに定義されたとおりである。
【０１７８】
化ＩＩＩに相当するポリマー試薬が、単一の離散電子代替基を有する場合［つまり、化ＩＩＩにおいて（ａ）が１で、（ｂ）が０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１７９】
【化８７】
2008544046.tif 000053
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｒｅ１、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＩＩに定義されたとおりである。
【０１８０】
化ＩＩＩに相当するポリマー試薬が、２つの離散電子代替基を有する場合［つまり、化ＩＩＩにおいて（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１８１】
【化８８】
2008544046.tif 000054
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｒｅ１、Ｒｅ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＩＩに定義されたとおりである。
【０１８２】
さらにその他の場合において、ポリマー試薬は、イオン性水素原子を有する炭素原子ならびに１つ以上の原子のスペーサー部分の両方を介して、相互に結合するの個別の芳香族部分を含むことができる。このようなポリマー試薬は、以下の化学式を有し、
【０１８３】
【化８９】
2008544046.tif 000055
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｘ３は、第三のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合などの分解性結合を生成可能な官能基である。
【０１８４】
化ＩＶに相当するポリマー試薬に、離散電子代替基が存在しない場合［つまり、化ＩＶにおいて（ａ）および（ｂ）が両方ともが０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１８５】
【化９０】
2008544046.tif 000056
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＶに定義されたとおりである。
【０１８６】
化ＩＶに相当するポリマー試薬が、単一の離散電子代替基を有する場合［つまり、化ＩＶにおいて（ａ）が１で、（ｂ）が０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１８７】
【化９１】
2008544046.tif 000057
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｒｅ１、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＶに定義されたとおりである。
【０１８８】
化ＩＶに相当するポリマー試薬が、２つの離散電子代替基を有する場合［つまり、化ＩＶにおいて（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１８９】
【化９２】
2008544046.tif 000058
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、Ｒｅ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＩＶに定義されたとおりである。
【０１９０】
一つの好適なポリマー試薬は、以下の構造を有し、
【０１９１】
【化９３】
2008544046.tif 000059
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である。
【０１９２】
化Ｖに相当するポリマー試薬に、離散電子代替基が存在しない場合［つまり、化Ｖにおいて（ａ）および（ｂ）が両方ともが０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１９３】
【化９４】
2008544046.tif 000060
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖに定義されたとおりである。
【０１９４】
化Ｖに相当するポリマー試薬が、単一の離散電子代替基を有する場合［つまり、化Ｖにおいて（ａ）が１で、（ｂ）が０である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１９５】
【化９５】
2008544046.tif 000061
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖに定義されたとおりである。
【０１９６】
化Ｖに相当するポリマー試薬が、２つの離散電子代替基を有する場合［つまり、化Ｖにおいて（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、以下の化学式のポリマー試薬となり、
【０１９７】
【化９６】
2008544046.tif 000062
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、Ｒｅ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖに定義されたとおりである。
【０１９８】
さらに別の好適なポリマー試薬は、以下の構造を有し、
【０１９９】
【化９７】
2008544046.tif 000063
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、（ａ）、（ｂ）、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖにに定義されたとおりであるが、但し、（ａ）が０の場合にＲｅ２がＨであり、（ｂ）が０の場合にＲｅ２がＨである。
【０２００】
さらに別の好適なポリマー試薬は、以下の構造を有し、
【０２０１】
【化９８】
2008544046.tif 000064
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖに定義されたとおりであるが、但し、（ａ）が０の場合にＲｅ２がＨであり、（ｂ）が０の場合にＲｅ２がＨである。
【０２０２】
さらに別の好適なポリマー試薬は、以下の構造を有し、
【０２０３】
【化９９】
2008544046.tif 000065
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖに定義されたとおりであるが、（ａ）が０の場合にＲｅ２がＨであり、（ｂ）が０の場合にＲｅ２がＨであることを条件とする。
【０２０４】
さらに別の好適なポリマー試薬は、以下の構造を有し、
【０２０５】
【化１００】
2008544046.tif 000066
ここで、ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、（ａ）、（ｂ）、および（ＦＧ）の各々は、前述の化Ｖに定義されたとおりであるが、但し、（ａ）が０の場合にＲｅ２がＨであり、（ｂ）が０の場合にＲｅ２がＨである。
【０２０６】
一般的に、化Ｉ、Ｉａ、Ｉｃ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｃ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｃ、ＩＶｂ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ、Ｖｆ、およびＶｇのポリマー試薬の各々におけるポリ１およびポリ２の各々は、同一である。しかしながら、ポリ１およびポリ２の各々が異なるポリマー試薬を有することは可能である。さらに、ポリ１およびポリ２のうちの各々は、一般的に（必ずしもそうとは限らないが）、ポリ（エチレングリコール）などのポリ（アルキレン酸化物）である。さらに、一定のポリ（エチレングリコール）に関して、各ポリ（エチレングリコール）は、ヒドロキシル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケンオキシ、置換アルケンオキシ、アルキンオキシ、置換アルキンオキシ、アリールオキシ、および置換アリールオキシから成る基から選択されるエンドキャッピング部分と末端でキャップされることができる。しかしながら、好適な末端キャッピング基にはメトキシが含まれる。化Ｉ、Ｉａ、Ｉｃ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｃ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｃ、ＩＶｂ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ、Ｖｆ、およびＶｇにおけるポリ１およびポリ２としての役割を果たす各ポリ（エチレングリコール）の典型的な重量平均分子量には、約１２０ダルトンから約６，０００ダルトンの範囲、約６，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲、および約２０，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲のうちの１つ以上が含まれる。化Ｉ、Ｉａ、Ｉｃ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｃ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｃ、ＩＶｂ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ、Ｖｆ、およびＶｇにおけるポリ１およびポリ２としての役割を果たす一定のポリ（エチレングリコール）の典型的な構造には、線状および分岐状が含まれる。化Ｉ、Ｉａ、Ｉｃ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｃ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｃ、ＩＶｂ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ、Ｖｆ、およびＶｇの各々の典型的な第一および第二のスペーサー部分には、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る基から独立して選択されるＸ１およびＸ２スペーサー部分が含まれる。また、化Ｉ、Ｉａ、Ｉｃ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｃ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｃ、ＩＶｂ、Ｖ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ、Ｖｆ、およびＶｇに関して、Ｒ１およびＲ２の各々がＨであるが、低級アルキル（例えば、メチルおよびエチル）も考慮さ��ることが好ましい。さらに、化Ｉ、Ｉｃ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩｃ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩｃ、ＩＩＩｂ、ＩＶ、ＩＶｃ、ＩＶｂ、Ｖ、Ｖｂ、Ｖｃ、Ｖｄ、Ｖｅ、Ｖｆ、およびＶｇのいずれにおいても存在するいかなる電子代替基に関しても、各電子代替基は、ハロ、低級アルキル、アリール、置換アリール、置換アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ等であることが好ましく、ここで、Ａｒはアリールであり、ＲはＨまたは有機ラジカルである。
【０２０７】
別の典型的なポリマー試薬は、以下の化学式を有し、
【０２０８】
【化１０１】
2008544046.tif 000067
ここで、
ポリは、水溶性ポリマー、
Ｘは、
【０２０９】
【化１０２】
2008544046.tif 000068
部分を含まないスペーサー部分、
【０２１０】
【化１０３】
2008544046.tif 000069
は、イオン性水素原子Ｈαを有するする芳香族部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒｅは、電子代替基、
（ａ）は、０または１、および
（ＦＧ）は、活性剤のアミノ基と反応して、分解性結合を生成可能な官能基である。
【０２１１】
別の典型的なポリマー試薬は、以下の化学式を有し、
【０２１２】
【化１０４】
2008544046.tif 000070
ここで、ポリ、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、（ａ）、および（ＦＧ）の各々は、前述の化ＶＩに定義されたとおりである。
【０２１３】
化ＶＩおよびＶＩａに相当するポリマー試薬は、一般的に（必ずしもそうとは限らないが）、ポリが、ポリ（エチレングリコール）などのポリ（アルキレン酸化物）であるようにする。さらに、ポリ（エチレングリコール）は、ヒドロキシル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケンオキシ、置換アルケンオキシ、アルキンオキシ、置換アルキンオキシ、アリールオキシ、および置換アリールオキシから成る基から選択されるエンドキャッピング部分と、末端でキャップされることができる。しかしながら、好適な末端キャッピング基にはメトキシが含まれる。化ＶＩおよびＶＩａでポリとしての役割を果たすポリ（エチレングリコール）の典型的な重量平均分子量には、約１２０ダルトンから約６，０００ダルトンの範囲、約６，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲、および約２０，０００ダルトンから約８５，０００ダルトンの範囲のうちの１つ以上が含まれる。化ＶＩおよびＶＩａにおいてポリとしての役割を果たすポリ（エチレングリコール）の典型的な構造には、線状および分岐状が含まれる。化ＶＩおよびＶＩａの典型的な第二のスペーサー部分には、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-、-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-、-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-、-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-ＣＨ２-ＣＨ２-Ｏ-、および-Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２-ＮＨ-Ｃ（Ｏ）-から成る基から選択されるスペーサー部分が含まれる。化ＶＩおよびＶＩａに関して、Ｒ１およびＲ２の各々はＨであることが好ましいが、低級アルキル（例えば、メチルおよびエチル）も考慮される。化ＶＩａに関して、Ｒｅは、ハロ、低級アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２Ｃ６Ｆ５、-ＣＮ、-ＮＯ２、-Ｓ（Ｏ）Ｒ、-Ｓ（Ｏ）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ｒ、-Ｓ（Ｏ２）Ａｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＯＡｒ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ、-Ｓ（Ｏ２）ＮＨＡｒ、-Ｃ（Ｏ）Ｒ、-Ｃ（Ｏ）Ａｒ、-Ｃ（Ｏ）ＯＲ、-Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ等であることが好ましく、ここで、Ａｒはアリールであり、ＲはＨまたは有機ラジカルである。
【０２１４】
いくつかの実施形態において、ＶＩの芳香族部分（および化ＶＩ-Ｃで表される相当する複合体）は、
【０２１５】
【化１０５】
2008544046.tif 000071
のうちの１つではないことが好ましい。
【０２１６】
本発明のポリマー試薬の実施例として、以下が挙げられ、
【０２１７】
【化１０６】
2008544046.tif 000072
【０２１８】
【化１０７】
2008544046.tif 000073
ここで、各（ｎ）は、４から１５００である。
【０２１９】
本発明のポリマー試薬は、あらゆる方法で調製可能である。したがって、本明細書に提供されるポリマーは、調製に使用される特定の技術または方法に限定されない。しかしながら、ここに記載されるポリマー試薬を調製する典型的な方法について、以下に詳細に説明する。
【０２２０】
ポリマー試薬を調製するための１方法において、その方法は、（ａ）第一の付着部位、第二の付着部位、および任意の第三の付着部位を有する芳香族部分を提供するステップ、（ｂ）官能基試薬を第一の付着部位と反応させて、活性剤のアミノ基と反応可能な官能基を有する第一の付着部位をもたらし、カルバミン酸塩のような分解性結合をもたらすステップ、および（ｃ）反応基を有する水溶性ポリマーを、第二の付着部位、および存在する場合は任意の第三の付着部位と反応させて、（ｉ）スペーサー部分を介して水溶性ポリマーを有する第二の付着部位をもたらすステップであって、そのスペーサー部分は、
【０２２１】
【化１０８】
2008544046.tif 000074
部分を含まないステップと、（ｉｉ）存在する場合に、スペーサー部分を介して第二の水溶性ポリマーを有する任意の第三の付着部位をもたらすステップであって、そのスペーサー部分は、
【０２２２】
【化１０９】
2008544046.tif 000075
部分を含まないステップと、を含む。いくつかの事例において、（ｂ）は、ステップ（ｃ）の前に実行され、一方その他の事例において、（ｃ）は、ステップ（ｂ）の前に実行される。
【０２２３】
したがって、ポリマー試薬を調製するための本方法において、必要なステップは、第一の付着部位、第二の付着部位、および任意の第三の付着部位を有する芳香族部分を提供する（ａ）である。合成調製の状況において、材料を「提供すること」は、材料の取得を意味することが理解される（例えば、それを合成または市販のものを取得することによって）。典型的な芳香族含有部分は、例示目的として、以下に示されるような９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンである。
【０２２４】
【化１１０】
2008544046.tif 000076
本芳香族含有部分である、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンは、３つの付着部位を有する芳香族含有部分の例であり、９位にヒドロキシル基および２位および７位の各々におけいてアミノ基を有する。芳香族含有部分は、塩基または塩形態で提供可能である。９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンに関し、二塩酸塩の形態を使用することが可能である。
【０２２５】
芳香族含有部分を提供した後、本方法における別のステップには、反応基を有する水溶性ポリマーを芳香族含有部分の付着部位と反応させるステップが広範囲に含められる。ここで、水溶性ポリマーを芳香族含有部分の１つ以上の付着部位に付着するための当技術分野で既知であるいかなる方法も使用可能であり、その方法は、特定の方法に限定されない。例えば、アミン反応性ＰＥＧ（例えば、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドとＣＨ３Ｏ-ＣＨ２ＣＨ２-（ＯＣＨ２ＣＨ２）-ＯＣＨ２ＣＨ２-ＯＣＨ２ＣＯＯＨを、縮合剤としてのジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）とを、任意で塩基の存在下で反応させることによって生成されるＮ-スクシンイミジルエステル-末端ｍＰＥＧなど）は、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンなどのアミンを持った芳香族含有部分と反応可能である。
【０２２６】
いくつかの事例において、反応基を有する水溶性ポリマーの芳香族含有部分との反応により、そこに付着される水溶性ポリマーを有する全ての可能な付着部位がもたらされる。このような状況において、少なくとも１つの水溶性ポリマーを除去し、付着部位が、官能基試薬との反応に利用可能であるようにする必要がある。したがって、例えば、前段落で説明されたＮ-スクシンイミジルエステル-末端ｍＰＥＧの９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンとの反応により、（ａ）２つのアミン部位の各々に１つずつの２つの水溶性ポリマーを有する種、および（ｂ）３つの水溶性ポリマーを、２つのアミン部位の各々と、ヒドロキシル部位に有する種を含む混合物がもたらされる。ここで、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、高分子量種を除去および収集することが可能である。さらに、混合物を高ｐＨに処理し［例えば、水酸化リチウム（ＬｉＯＨ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、水酸化カリウム（ＫＯＨ）に混合物を処理する］、その後、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を行なうことが可能である。いずれにせよ、結果として、２つの水溶性ポリマーをアミン部位の各々に１つずつ有する９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンを主に含む組成になる。したがって、第三のヒドロキシル部位は、官能基試薬との反応に利用可能である。
【０２２７】
最終ステップは、芳香族含有部の反応部位を官能基試薬と反応させることである。好適な方法として、２つの水溶性ポリマーを２つのアミン部位の各々に１つずつ有するヒドロキシル含有９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンを、トリホスゲンと反応させ、その後、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドで処理することが挙げられる。このようにして、活性剤のアミノ基と反応して、カルバメート結合（この場合、「活性炭素塩」）などの分解性結合を生成可能な官能基が、ヒドロキシル含有反応部位に生成される。
【０２２８】
本方法のステップは適切な溶媒において行なわれる。当技術分野において通常の技術を有する者は、任意の特定の溶媒が、任意の一定の反応に適切であるかを決定することができる。しかしながら、一般的に、溶媒は、無極性溶媒または極性非プロトン性溶媒であることが好ましい。無極性溶媒の限定されない例として、ベンゼン、キシレン、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ｔ-ブチルアルコール、およびトルエンが挙げられる。特に、好適な無極性溶媒には、トルエン、キシレン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、およびｔ-ブチルアルコールが挙げられる。典型的な極性非プロトン性溶媒には、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＨＭＰＡヘキサメチルリン酸アミド）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、ＮＭＰ（Ｎ-メチル‐２‐ピロリドン）が含まれるがそれだけに限定されない。
【０２２９】
代替方法として、容易に入手可能な出発原料であるフルオレンジアミンを用いて開始する。本方法の構造図を以下に示す（複合体の提供に十分な合成ステップを示す）。
【０２３０】
【化１１１】
2008544046.tif 000077
本方法において、カルボキシルメチル-末端ＰＥＧ（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから市販の「ＰＥＧ-ＣＭ」）は、フルオレンジアミンと反応し、活性剤（「Ｄｒｕｇ-ＮＨ２」）と複合体を形成するためにその後使用可能な中間体を提供することができる。フルオレンジアミンは、芳香核に付着する２つのアミド基を有し、その結果イオン性水素原子（Ｈα）の酸性度（ｐＫａ値）に対し軽度の効果を有する（本基が置換する水素と比較して）。したがって、薬剤開放率は、中程度から緩効性となる。
【０２３１】
同様に、市販のｍＰＥＧプロピオン酸エステル「ｍＰＥＧ-ＳＰＡ」等のアミン試薬に基づく別の方法において、合成は僅かに異なるが、薬剤放出速度の最終結果は最小である。本方法の構造図を以下に示す（複合体の提供に十分な合成ステップを示す）。
【０２３２】
【化１１２】
2008544046.tif 000078
ｍＰＥＧ-ＣＭおよびｍＰＥＧ-ＳＰＡとの反応の結果得られる芳香環置換が類似しているため、薬剤放出速度の差異は最小である。
【０２３３】
無水コハク酸またはグルタル酸無水物等の試薬と反応させることでアミン基を増大させ、合成方法を大幅に変更し、末端カルボン酸を得ることができる。本方法の構造図を以下に示す（複合体の提供に十分な合成ステップを示す）。
【０２３４】
【化１１３】
2008544046.tif 000079
本方法において、結果は、ＰＥＧカルボン酸または活性エステルではなく、ＰＥＧ化試薬としてＰＥＧアミンを使用することを可能にする。したがって、さらに他の試薬の合成方法を達成することが可能であるが、薬剤放出速度の最終結果は、芳香環置換は、アミド基のままであるため、大幅に変化しない。
【０２３５】
前述の３試薬の芳香環のうち１つ以上が、合成のある段階において、さらに置換することによって増大される場合、薬剤放出速度に大幅な変化が生じ得る。例えば、スルホン酸基またはニトロ基との環置換を生じさせる場合がある。いずれの基も電子求引度が高く、イオン性水素原子（Ｈα）の酸性度（ｐＫａ値）に大幅な影響を及ぼす。
【０２３６】
最終試薬薬剤複合体における薬剤放出速度に影響を及ぼす能力を示すための別の実施例を、以下に図示する。
【０２３７】
【化１１４】
2008544046.tif 000080
ここで、開始フルオレン誘導体は、カルボン酸基を含む。容易に入手可能な本原料は、遠隔芳香環にアミノ基の導入を可能にする反応条件下におかれる。その後、前述の実施例に類似の化学反応を使用して、１芳香環上にアミド基および他の環上にカルボキサミド基を有する試薬を提供することができる。環置換基の本組み合わせは、２つのアミド基を有する前述の実施例と比較して、最終的には電子求引性であり、その結果、イオン性水素原子（Ｈα）の酸性度（ｐＫａ値）に及ぼす効果として、薬剤放出速度が増加する。
【０２３８】
異なるアミド結合種を使用することによって、薬剤放出速度をさらに大幅に増強させることが可能となる。以下に図示する一連の反応を使用して、スルホンアミドを調製することができる（複合体の提供に十分な合成ステップを示す）。
【０２３９】
【化１１５】
2008544046.tif 000081
各環に付着されたスルホニル基（電気陰性度が高い基）は、イオン性水素原子（Ｈα）の酸性度（ｐＫａ値）に影響する。その結果、本複合体の薬剤放出速度は、相対的に早くなる。
【０２４０】
他の実施例において、中程度の放出率を有する薬物複合体を図示する（複合体の提供に十分な合成ステップを示す）。
【０２４１】
【化１１６】
2008544046.tif 000082
本例において、市販のイソシアネート原料を使用して、ウレイド基およびスルホンアミド基を芳香族核に付着する。前述のアミド基等と同様にウレイド基は、軽度の効果があるが、スルホンアミド基は強度の効果を有する。最終結果として、本試薬から調製された複合体は、ビススルホンアミドおよび前述の他の複合体の中間の放出率を有する。
【０２４２】
ある合成経路が他の経路に勝って有する利点の１つとして、イオン交換クロマトグラフィーを任意で使用し、中間段階で試薬を精製することが挙げられる。途中不純物が生成される可能性があるため、このことは合成法における非常に利点となる可能性がある。
【０２４３】
グルタル酸無水物修飾ジアミノフルオレンの調製の中間段階で、電子求引性スルホン酸基を化学反応によって挿入する例を以下に示す。前述の合成から、「ｍ-ＰＥＧ」および「ＰＥＧ-ｍ」は、メトキシポリ（エチレングリコール）を示す。
【０２４４】
【化１１７】
2008544046.tif 000083
本例において、ヒドロキシル基を阻止し、硫酸エステルの形成を防ぎ、その後クロロスルホン酸を使用して求電子性芳香族スルホン化過程を実行することができる。モノおよびジスルホン化生成物の混合物が生じる場合がある。本混合物は、形成される場合、容易に精製され、非常に純粋状態のいずれかの形態で提供され得る。また、合成には最適なクロマトグラフィーステップが実施されるように含まれていないため、これによって、前ステップから実施してもよかった中性不純物を除去する機会が提供される。
【０２４５】
アルファ水素の酸性度を高めるとともに、ポリマー鎖添加用部位として、スルホニル基を使用した実施例を下図に示す。本例において、芳香族部分は、市販のアルコール中に単一のピリジン環を含み、ポリマー試薬作製の開始点としての機能を果たす。芳香族環中の窒素の存在によって、フェニル環よりも電子求引性が増し、その結果アルファ水素の酸性度が高められる。しかしながら、アルファ水素の酸性度をさらに高めることができ、それにより、相対的にさらに離脱可能にすることができる。スルホニル基の付着により、水素の酸性度が増す。スルホニル基添加に必要なステップを、下図に示す［ここで、ジＢＴＣは、ジ（１-ベンゾトリアゾリル）炭酸塩、ＢＴＣは、ベンゾトリアゾリルラジカルである］。
【０２４６】
【化１１８】
2008544046.tif 000084
前述の方法は、電子代替基の添加を示す（単一の環状芳香族部分および単一の水溶性ポリマーを含むポリマー試薬上）。いくつかの実施形態において２つの水溶性ポリマーが好ましい一方、他の実施形態においては、単一の水溶性ポリマーの混入が好ましい（ポリマー試薬の総サイズが、相対的に小さいことが望まれる場合等）。
【０２４７】
他の電子代替基を、同様の方法で添加してもよい。例えば、硫酸存在下で硝酸を結合させる芳香族ニトロ化によって、芳香族系に付着されるニトロ基（-ＮＯ２）を生じさせる。また、芳香族系を金属触媒（鉄等）存在下でのハロゲン結合等のハロゲン化方法によって、芳香族系に付着されるハロ基を生じさせる。金属イオンが存在するハロゲン化方法に関しては、（本明細書に記載の理由のため）まずハロ基を芳香族系に添加し、その後金属イオンを除去した後、１つ以上の水溶性ポリマーを芳香族系に付着させることが好ましい。さらに、フリーデル・クラフツ反応等のアルキル化およびアシル化方法を使用して、金属触媒（アルミニウム等）存在下ハロゲン化アルキル（塩化イソブチル（基）等）またはハロゲン化アシル（塩化プロピオニル等）を芳香族系に添加し、電子変換アルキルまたはアシル基（それぞれ）を芳香族系に加えることができる。同様に、金属触媒は、典型的に該反応を実行する必要があるため、まずアルキル基を芳香族系に添加し、その後金属イオンを除去した後、１つ以上の水溶性ポリマーを芳香族系に付着させることが好ましい。
【０２４８】
ポリマー試薬の調製および取り扱い（相当する複合体の調製および取り扱いも同様）中は、金属イオンの導入を防ぐことが好ましい。例えば、金属イオンはＰＥＧで配位されることは周知であるため、金属イオンの回避が好ましい。また、金属イオンは、ＰＥＧ連鎖酸化に触媒作用を及ぼすことが知られている。特に、ＰＥＧが電子の豊富な芳香族系に付着すると、ＰＥＧ鎖に配位された金属イオンの存在によって、芳香核からＰＥＧ金属イオン錯体への電子移動経路が提供され、ＰＥＧ鎖切断が促進される場合がある。したがって、本発明には、金属イオンが完全に不在の方法および組成を含む。
【０２４９】
本方法および本明細書に記載の他のポリマー試薬調製方法を使用することができる。
【０２５０】
いったん調製すれば、ポリマー試薬は単離可能である。既知の方法を使用してポリマー試薬を単離可能であるが、サイズ排除クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーの使用が特に好ましい。代わりとして、あるいはさらに加えて、生成後のポリマー試薬を精製するステップを含めてもよい。ここでも、既知の標準的精製方法を使用して、ポリマー試薬を精製可能である。
【０２５１】
本発明のポリマー試薬は、湿気および酸素に対し敏感であるため、理想的には、アルゴン下または窒素下等の不活性雰囲気下および低温度下に保存される。これによって、例えば、大気中の酸素と関連して生じる分解過程の可能性を、完全に削減または回避される。いくつかの事例において、酸化分解を回避するため、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）等の抗酸化物質を、保存前にポリマー試薬に添加することができる。また、保存条件に関連して生じる湿気を最小限にし、活性エステルの加水分解等の水と関連して生じる反応を害する可能性を軽減することが好ましい。さらに、光に関連する特定の分解過程を防止するため、暗条件下で保存することが好ましい。したがって、好適な保存条件には、以下の１つ以上を含む。乾燥アルゴンまたは他の乾燥不活性ガス下での保存、約−１５℃以下での保存、光の不在下での保存、好適な量（例えば、５０から５００ｐｐｍ）のＢＨＴ等の抗酸化剤との保存。
【０２５２】
前述のポリマー試薬は、生理活性剤との複合に有益である。例えば、活性剤上のアミノ基（１級アミン等）は、活性剤のアミノ基と反応可能な官能基と反応し、カルバメート結合等の分解性結合を形成する。したがって、本発明は、本明細書に記載のいずれかのポリマー試薬で形成された複合体を含む。
【０２５３】
典型的な複合体は、以下の化学式の複合体を含む。
【０２５４】
【化１１９】
2008544046.tif 000085
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
【０２５５】
【化１２０】
2008544046.tif 000086
は、イオン性水素原子Ｈａを有する芳香族含有部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
本化Ｉ-Ｃに相当する複合体は、化Ｉに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２５６】
化Ｉ-Ｃに相当する複合体に、離散電子代替基が存在しない場合［化Ｉ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２５７】
【化１２１】
2008544046.tif 000087
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、
【０２５８】
【化１２２】
2008544046.tif 000088
、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｉ-Ｃに定義されたとおりである。本化Ｉａ-Ｃに相当する複合体は、化Ｉａに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２５９】
化Ｉ-Ｃに相当する複合体が、単一の離散電子代替基を有する場合［化Ｉ-Ｃにおいて、（ａ）が１、（ｂ）が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２６０】
【化１２３】
2008544046.tif 000089
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、
【０２６１】
【化１２４】
2008544046.tif 000090
、Ｙ１、Ｙ２、ＤおよびＲｅ１は、前述の化Ｉ-Ｃに定義されたとおりである。本化Ｉｃ-Ｃに相当する複合体は、化Ｉｃに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２６２】
化Ｉ-Ｃに相当する複合体が、２つの離散電子代替基を有する場合［化Ｉ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２６３】
【化１２５】
2008544046.tif 000091
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、
【０２６４】
【化１２６】
2008544046.tif 000092
、Ｙ１、Ｙ２、Ｄ、Ｒｅ１およびＲｅ２は、前述の化Ｉ-Ｃに定義されたとおりである。本化Ｉｂ-Ｃに相当する複合体は、化Ｉｂに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２６５】
いくつかの事例において、複合体は、イオン性水素原子を有する炭素原子を介して相互にのみ結合する個別の芳香族部分を含むことができる。該複合体は、以下の化学式となり、
【０２６６】
【化１２７】
2008544046.tif 000093
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。本化ＩＩ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２６７】
化ＩＩ-Ｃに相当する複合体に離散電子代替基が存在しない場合［化ＩＩ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２６８】
【化１２８】
2008544046.tif 000094
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＩ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＩａ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩａに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２６９】
化ＩＩに相当する複合体が、単一の離散電子代替基を有する場合［化ＩＩにおいて、（ａ）が１、（ｂ）が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２７０】
【化１２９】
2008544046.tif 000095
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＩ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＩｃ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩｃに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２７１】
化ＩＩ-Ｃに相当する複合体が、２つの離散電子代替基有する場合［化ＩＩ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２７２】
【化１３０】
2008544046.tif 000096
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｙ１、Ｙ２、Ｄ、Ｒｅ１、およびＲｅ２は、前述の化ＩＩ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＩｂ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩｂに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２７３】
さらに他の事例において、イオン性水素原子を有する炭素原子および他の直接結合の両方を介して相互に結合する個別の芳香族部分を含むことができる。該複合体は、以下の化学式となる。
【０２７４】
【化１３１】
2008544046.tif 000097
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。
本化ＩＩＩ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩＩに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２７５】
化ＩＩＩ-Ｃに相当する複合体に離散電子代替基が存在しない場合［化ＩＩＩ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２７６】
【化１３２】
2008544046.tif 000098
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＩＩ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＩＩａ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩＩａに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２７７】
化ＩＩＩ-Ｃに相当する複合体が、単一の離散電子代替基を有する場合［化ＩＩＩ-Ｃにおいて、（ａ）が１、（ｂ）が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２７８】
【化１３３】
2008544046.tif 000099
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｒｅ１、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＩＩ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＩＩｃ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩＩｃに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２７９】
化ＩＩＩ-Ｃに相当する複合体が、２つの離散電子代替基を有する場合［化ＩＩＩ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２８０】
【化１３４】
2008544046.tif 000100
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｒｅ１、Ｒｅ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＩＩ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＩＩｂ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＩＩｂに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２８１】
さらに他の事例において、複合体は、イオン性水素原子を有する炭素原子および１つ以上の原子のスペーサー部分の両方を介して相互に結合する個別の芳香族部分を含むことができる。該複合体は、以下の化学式となり、
【０２８２】
【化１３５】
2008544046.tif 000101
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｘ３は、第三のスペーサー部分、
Ａｒ１は、第一の芳香族部分、
Ａｒ２は、第二の芳香族部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、生理活性剤の残留物である。本化ＩＶ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＶに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２８３】
化ＩＶ-Ｃに相当する複合体に離散電子代替基が存在しない場合［化ＩＶ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２８４】
【化１３６】
2008544046.tif 000102
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＶ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＶａ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＶａに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２８５】
化ＩＶ-Ｃに相当する複合体が、単一の離散電子代替基を有する場合［化ＩＶ-Ｃにおいて、（ａ）が１、（ｂ）が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２８６】
【化１３７】
2008544046.tif 000103
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１、Ｒ２、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｒｅ１、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＶ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＶｃ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＶｃに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２８７】
化ＩＶ-Ｃに相当する複合体が、２つの離散電子代替基を有する場合［化ＩＶ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２８８】
【化１３８】
2008544046.tif 000104
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、Ｒｅ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＩＶ-Ｃに定義されたとおりである。本化ＩＶｂ-Ｃに相当する複合体は、化ＩＶｂに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２８９】
好適な複合体は、以下の構造から成る。
【０２９０】
【化１３９】
2008544046.tif 000105
ここで、
ポリ１は、第一の水溶性ポリマー、
ポリ２は、第二の水溶性ポリマー、
Ｘ１は、第一のスペーサー部分、
Ｘ２は、第二のスペーサー部分、
Ｈαは、イオン性水素原子、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
（ａ）は、０または１、
（ｂ）は、０または１、
Ｒｅ１は、存在する場合、第一の電子代替基、
Ｒｅ２は、存在する場合、第二の電子代替基、
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、アミン官能基を有する生理活性剤の残留物である。
本化Ｖ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２９１】
化Ｖ-Ｃに相当する複合体に離散電子代替基が存在しない場合［化Ｖ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２９２】
【化１４０】
2008544046.tif 000106
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｖ-Ｃに定義されたとおりである。本化Ｖａ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖａに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２９３】
化Ｖ-Ｃに相当する複合体が、単一の離散電子代替基を有する場合［化Ｖ-Ｃにおいて、（ａ）が１および（ｂ）が０である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２９４】
【化１４１】
2008544046.tif 000107
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｈα、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｅ１、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述のに定義されたとおりである。本化Ｖｃ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖｃに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２９５】
化Ｖ-Ｃに相当する複合体が、２つの離散電子代替基を有する場合［化Ｖ-Ｃにおいて、（ａ）および（ｂ）の両方が１である場合］、複合体は以下の化学式となり、
【０２９６】
【化１４２】
2008544046.tif 000108
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｖ-Ｃに定義されたとおりである。本化Ｖｂ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖｂに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２９７】
さらに別の好適な複合体は、以下の構造から成る。
【０２９８】
【化１４３】
2008544046.tif 000109
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、（ａ）、（ｂ）、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｖ-Ｃに定義されたとおりであるが、但し、（ａ）が０の時、Ｒｅ１はＨ、（ｂ）が０の時、Ｒｅ２はＨである。本化Ｖｄ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖｄに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０２９９】
さらに、他の好適な複合体は、以下の構造から成る。
【０３００】
【化１４４】
2008544046.tif 000110
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｖ-Ｃに定義されたとおりであるが、但し、（ａ）が０の時、Ｒｅ１はＨ、（ｂ）が０の時、Ｒｅ２はＨである。本化Ｖｅ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖｅに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０３０１】
さらに、他の好適な複合体は、以下の構造から成る。
【０３０２】
【化１４５】
2008544046.tif 000111
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｖ-Ｃに定義されたとおりであるが、但し、（ａ）が０の時、Ｒｅ１はＨ、（ｂ）が０の時、Ｒｅ２はＨである。本化Ｖｆ-Ｃに相当する複合体は、化Ｖｆに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０３０３】
さらに、他の好適な複合体は、以下の構造から成り、
【０３０４】
【化１４６】
2008544046.tif 000112
ここで、各ポリ１、ポリ２、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｈα、Ｒｅ１、Ｒｅ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化Ｖ-Ｃで定義された通りであるが、但し、（ａ）が０の時、Ｒｅ１はＨ、（ｂ）が０の時、Ｒｅ２はＨである。本化Ｖｇ-Ｃに相当する複合体は、Ｖｇに相当するポリマー試薬化を使用して調製可能である。
【０３０５】
本発明の他の典型的な複合体は、以下の化学式から成り、
【０３０６】
【化１４７】
2008544046.tif 000113
ここで、
ポリは、水溶性ポリマー、
Ｘは、
【０３０７】
【化１４８】
2008544046.tif 000114
部分を含まないスペーサー部分、
【０３０８】
【化１４９】
2008544046.tif 000115
は、芳香族部分、
Ｒ１は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒ２は、Ｈまたは有機ラジカル、
Ｒｅは、電子代替基、
（ａ）は、０または１、および
Ｙ１は、ＯまたはＳ、
Ｙ２は、ＯまたはＳ、および
Ｄは、アミン官能基を有する生理活性剤の残留物である。
本化ＶＩ-Ｃに相当する複合体は、化ＶＩに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０３０９】
他の典型的な複合体は、以下の構造から成り、
【０３１０】
【化１５０】
2008544046.tif 000116
ここで、各ポリ、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｙ１、Ｙ２およびＤは、前述の化ＶＩにおいて定義されたとおりである。本化ＶＩａ-Ｃに相当する複合体は、化ＶＩａに相当するポリマー試薬を使用して調製可能である。
【０３１１】
本発明の複合体の実施例には、以下を含む。
【０３１２】
【化１５１】
2008544046.tif 000117
【０３１３】
【化１５２】
2008544046.tif 000118
ここで、各（ｎ）は４から１５００である。
【０３１４】
本明細書に記載のポリマー試薬に複合され得る生理活性剤は、生理活性剤を含むアミンである。いくつかの実施形態において、生理活性剤は、小分子（約３，５００ダルトン未満の分子量を有する生理活性剤等）である。他の実施形態においては、生理活性剤は、約３，５００ダルトンより大きい分子量を有するポリペプチド等のマクロ分子である。生理活性ポリペプチドは、好適な生理活性剤種を代表する。議論の目的のため、「ポリペプチド」とは、オリゴペプチドおよびタンパク質の総称であることは理解すべきである。ポリペプチドに関して、ポリマー試薬に結合されるアミンは、ポリペプチド内のＮ-末端またはアミノ酸（リシン等）のアミン含有側鎖に結合可能である。
【０３１５】
さらに、本発明は、ポリマーおよび生理活性剤との共有結合を形成するために好適な条件下で、本発明のポリマー試薬と生理活性剤を接触させるステップを含む複合体の調製方法を提供する。典型的に、ポリマーは、活性剤、あるいは表面に等モル量（反応基との反応に好適な所望の数の基に対し）または過剰モル量が加えられる。例えば、ポリマー試薬を、モル比約１：１（ポリマー試薬：活性剤）、１．５：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、８：１、１０：１で、対象活性剤に加えることができる。さらに複合が実質的に生じなくなるまで複合反応を行うが、一般に経時的に反応の経過を観測することによって決定される。反応の経過は、異なる時点で反応混合物から一定量を採取し、ＳＤＳ-ＰＡＧＥまたはＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ質量分析によって、あるいは他の好適な分析方法によって、反応混合物を分析することによって観測することができる。生成複合体量または残留非複合ポリマー量が停滞状態に達すると、反応が終了したとみなす。典型的には、複合反応は、数分から数時間（５分から２４時間以上）かかる。得られた生成混合物は、必ずしも行う必要はないが、好ましくは、精製し、過剰な試薬、非複合反応物（活性剤等）、不要な多重複合種、遊離または未反応ポリマーを析出する。その後、得られた複合体を、さらにＭＡＬＤＩ、キャピラリー電気泳動、ゲル電気泳動、および／またはクロマトグラフィー等の分析方法を使用して特性化することができる。
【０３１６】
ポリマー活性剤複合体に関して、複合体を精製し、異なる複合種を得る、または単離することができる。低分子量（約２０キロダルトン未満、より好ましくは約１０キロダルトン未満）のポリマーに対し、代替的に、および、より好ましくは、生成混合物を精製し、活性剤毎の水溶性ポリマーセグメント分布を得ることができる。例えば、生成混合物を精製し、活性剤（ポリペプチド等）毎に平均で、１から５程度ののＰＥＧを得ることができる。最終複合反応混合物の精製方法は、様々な要因によって異なるが、例えば使用したポリマーの分子量、特定の活性剤、所望の投与方式、残留活性、各複合体の生体内特性が挙げられる。
【０３１７】
必要に応じて、異なる分子量を有する複合体を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使用して単離することができる。つまり、ゲル濾過クロマトグラフィーを使用して、異なる分子量（その差異は、原則として水溶性ポリマーセグメントの平均分子量に相当する）に基づいて、それぞれ定められたポリマーと活性剤の割合（１-ｍｅｒ、２-ｍｅｒ、３-ｍｅｒ等、ここで「-ｍｅｒ」とは、活性剤に対して１ポリマーであり、「２-ｍｅｒ」とは、活性剤に対して２ポリマーを示す）に分画する。例えば、１００ｋＤａタンパク質が、分子量約２０ｋＤａを有するポリマー試薬に無作為に複合される典型的な反応において、得られる反応混合物は、未修飾タンパク質（分子量１００ｋＤａ）、モノＰＥＧ化タンパク質（分子量１２０ｋＤａ）、ジＰＥＧ化タンパク質（分子量１４０ｋＤａ）等を含む可能性がある。本方法は、ＰＥＧおよび異なる分子量を有する他のポリマー複合体の分離に使用可能ではあるが、一般に、タンパク質内に異なるポリマー付着部位を有する位置異性体の分離には有効ではない。例えば、ゲル濾過クロマトグラフィーは、ＰＥＧ１-ｍｅｒ、２-ｍｅｒ、３-ｍｅｒ等の混合物を互いに分離することは可能であるが、各回収したＰＥＧｍｅｒ組成は、活性剤内で異なる活性アミノ基（リシン残基等）に付着するＰＥＧを含む場合がある。
【０３１８】
この種の分離を行う際に好適なゲル濾過カラムには、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から市販のＳｕｐｅｒｄｅｘＴＭおよびＳｅｐｈａｄｅｘＴＭカラムを含む。特定のカラムの選択は、所望の分画範囲によって異なる。溶離は、一般に、リン酸塩、酢酸等の好適なバッファーを使用して行われる。回収した画分は、種々の異なる方法によって分析してもよい。例えば、（ｉ）タンパク質含有量のための光学密度（ＯＤ）（２８０ｎｍ）、（ｉｉ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）タンパク質分析、（ｉｉｉ）ＰＥＧ含有量のためのヨウ素検査［Ｓｉｍｓらによる（１９８０年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０７：６０-６３］、（ｉｖ）ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ  ＰＡＧＥ）後、ヨウ化バリウムで染色等。
【０３１９】
位置異性体の分離は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ-ＨＰＬＣ）Ｃ１８カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＶｙｄａｃ）を使用した逆相クロマトグラフィー、あるいはＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販のＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭイオン交換カラム等のイオン交換カラムを使用したイオン交換クロマトグラフィーによって行う。いずれの方法も、同分子量（位置異性体）を有するポリマー活性剤異性体の分離に使用し得る。
【０３２０】
複合および任意の追加分離ステップの後、複合混合物を濃縮、無菌濾過し、低温で保存することができる（典型的には、約−２０℃から−８０℃）。あるいは、複合体を残留バッファーと共に、またはなしで、凍結乾燥させ、凍結乾燥粉末として保存してもよい。場合によっては、酢酸ナトリウム等の複合に使用するバッファーを、凍結乾燥に容易に除去可能であって、凍結乾燥粉末に残留バッファーをなくするように、炭酸アンモニウムまたは酢酸アンモニウム等の揮発性バッファーと交換することが好ましい。あるいは、バッファー交換ステップを、製剤バッファーを使用して行い、凍結乾燥複合体を、製剤バッファーへの再構成および最終的に哺乳類への投与に好適な形態にしてもよい。
【０３２１】
本明細書で提供されるポリマーとの結合において使用される生理活性剤は、以下のいずれか１つ以上であってもよい。好適な薬剤として、例えば、催眠剤、鎮静剤、精神賦活剤、精神安定剤、呼吸器系疾患治療剤、抗痙攣剤、筋弛緩剤、抗パーキンソン剤（ドーパミン拮抗剤）、鎮痛剤、抗炎症剤、抗不安剤（不安寛解剤）、食欲抑制剤、抗片頭痛剤、筋収縮剤、抗感染剤（抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、ワクチン）、抗関節炎剤、抗マラリア剤、制吐剤、抗癲癇剤、気管支拡張剤、サイトカイン、成長因子、抗癌剤、抗血栓剤、降圧剤、心臓脈管薬、不整脈治療剤、抗酸化剤、抗ぜんそく薬、避妊薬を含むホルモン剤、交感神経様作用薬、利尿薬、脂質調節剤、抗アンドロゲン剤、抗寄生虫剤、抗凝血剤、腫瘍薬、抗腫瘍薬、血糖降下薬、栄養剤および栄養補助剤、成長補助剤、抗腸炎剤、ワクチン、抗体、診断薬、コントラスト剤から選択することができる。
【０３２２】
より詳細には、活性剤は、小分子（好ましくは不溶性小分子）、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ポリサッカリド、ステロイド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂肪、電解質等の構造分類の１つに該当するが、これらに限定されない。好ましくは、本明細書に記載のポリマーと結合する活性剤は、天然アミノ基を有するか、あるいは，好適な本明細書に記載のポリマーとの複合に好適な活性アミノ基を少なくとも１つ含むように修飾される。
【０３２３】
また、本発明は、医薬品賦形剤と併せて本明細書で提供される複合体から成る製剤を含む。一般に、複合体自体は、固体（沈殿物等）形態をとり、固体または液体でありうる好適な医薬品賦形剤と結合可能である。
【０３２４】
典型的な賦形剤として、糖質、無機塩、抗菌剤、抗酸化剤、界面活性剤、、バッファー、酸、塩基、およびそれらの組み合わせから成る基から選択したものを含むが、これらに限定されない。
【０３２５】
糖等の糖質、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖、および／または糖ポリマー等の誘導体化糖を、賦形剤として存在させてもよい。特定の糖質賦形剤として、例えば、果糖、麦芽糖、ガラクトース、グルコース、Ｄ-マンノース、ソルボース等の単糖類、乳糖、ショ糖、トレハロース、セロビオース等の二糖類、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン等の多糖類、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトール等のアルジトールを含む。
【０３２６】
また、賦形剤は、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、第一リン酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせ等の無機塩またはバッファーを含む。
【０３２７】
また、製剤は、微生物の増殖を防止または抑止する抗菌剤を含んでもよい。本発明の好適な抗菌剤の例は限定されないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサールおよびそれらの組み合わせを含む。
【０３２８】
同様に、抗酸化物質も調製において存在してもよい。抗酸化物質は、酸化防止のために使用され、複合体または製剤の他の成分の劣化を防ぐ。本発明で使用される好適な抗酸化物質は、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒド・スルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびそれらの組み合わせを含む。
【０３２９】
界面活性剤は、賦形剤として存在してもよい。典型的な界面活性剤として、「Ｔｗｅｅｎ２０」および「Ｔｗｅｅｎ８０」等のポリソルベート、Ｆ６８およびＦ８８（両方ともＢＡＳＦ（ＭｏｕｎｔＯｌｉｖｅ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）から市販）等のプルロニック、ソルビタンエステル、レシチンおよび  他のホスファチジルコリン等のリン脂質、ホスファチジルエタノールアミン（好ましくは、リポソーム形態ではないもの）、脂肪酸、脂肪酸エステル等の脂質、コレステロール等のステロイド、ＥＤＴＡ、亜鉛および他の好適な陽イオン等のキレート剤を含む。
【０３３０】
酸または塩基は、調製において賦形剤として存在してもよい。酸の例は限定されないが、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸，トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸およびそれらの組み合わせから成る基から選択された酸を用いることができる。好適な塩基の例として、水酸化ナトリウム，酢酸ナトリウム，水酸化アンモニウム，水酸化カリウム，酢酸アンモニウム，酢酸カリウム，リン酸ナトリウム，リン酸カリウム，クエン酸ナトリウム，ギ酸ナトリウム，硫酸ナトリウム，硫酸カリウム、フマル酸カリウムおよびそれらの組み合わせから成る基から選択される塩基を含むが、これらに限定されない。
【０３３１】
製剤はあらゆる種類の剤形、特に、再構成可能な粉末や、懸濁液および溶液等の注射に好適な剤形を含む。組成中の複合体（本明細書に記載の活性剤およびポリマーから成る複合体）の量は、様々な要因によって異なるが、単位投与量用容器（小瓶等）に組成物を保存した場合に、治療有効量となることが最適である。また、本製剤は、注射器に収容することができる。治療有効量は、臨床的所望のエンドポイントに達成する量を特定するために、複合体の投与量の増加を繰り返し、実験的に決定することが可能である
組成中の各賦形剤の量は、賦形剤の活性および組成の特定のニーズによって異なる。典型的に、各賦形剤最適な量は、繰り返して行なわれる実験、つまり、種々の量の賦形剤（多量から少量）を含む組成物を調製し、安定性および他のパラメータを調べ、その後重大な有害影響を及ぼすことなく達成された最適性能の範囲を特定することによって決定される。
【０３３２】
しかしながら一般には、賦形剤は、組成中約１から９９重量％、好ましくは約５から９８重量％、より好ましくは約１５から９５重量％（３０重量％未満の濃度が最も好ましい）である。
【０３３３】
前述の医薬品賦形剤は、他の賦形剤とともに、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」第１９版  、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ（１９９５）、「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」第５２版、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ、Ｍｏｎｔｖａｌｅ，  ＮＪ（１９９８）、  および  「Ｋｉｂｂｅ，  Ａ．Ｈ．，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」第３版、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．，２０００に記載されている。
【０３３４】
本発明の製剤は、必ずではないが、典型的には注射による投与であり、したがって、一般には、投与直前には溶液または懸濁液である。また、本製剤は、シロップ状物、クリーム状物、軟膏、錠剤、粉末等の他の形態をとることもできる。さらに他の投与方法として、肺、直腸、経皮、経粘膜、経口、髄膜、皮下、動脈内投与等がある。
【０３３５】
前述のように、複合体は、静脈注射によって、またはあまり好ましくはないが、筋内注射あるいは皮下注射によって、非経口的に投与可能である。非経口投与の好適な剤形として、溶解注射液、使用前に溶媒と混合する乾燥粉末、注射用懸濁液、使用前に賦形剤と混合する不溶性乾燥組成物、投与前に希釈する乳剤および原液等が含まれる。
【０３３６】
さらに本発明は、複合体を使用する治療に奏効する症状に苦しむ患者に対し、本明細書で提供される複合体を投与する方法を提供する。該方法とは、治療有効量の複合体（好ましくは、製剤の一部として提供される）を投与（通常は注射によって）することを含む。投与方法として、特定の複合体の投与によって、治癒または防止可能ないかなる症状の治療に使用してもよい。当技術分野において技術を有する者は、特定の複合体によってどの症状が効果的に治療されるかを正しく理解する。実投与量は、年齢、体重、患者の全身状態に加え、治療を受ける症状の重症度、医療専門家の判断、投与される複合体によって異なる。治療有効量は、当技術分野において通常の技術を有する者に周知の量および／または関連する参考文書または文献に記載のものである。一般に、治療有効量は、約０．００１ｍｇから１００ｍｇ、好ましくは０．０１ｍｇ／日から７５ｍｇ／日、より好ましくは０．１０ｍｇ／日から５０ｍｇ／日である。
【０３３７】
いずれの所与の複合体（好ましくは、製剤の一部として提供される）の単位投与量も、臨床医の判断、患者のニーズ等に応じて、種々の投与スケジュールで投与され得る。特定の投与スケジュールは、当技術分野において技術を有する者に知られており、所定の方法を使用して実験的に決定することができる。典型的な投与スケジュールは、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、週３回、週２回、週１回、月２回、月１回、およびそれらのいずれかの組み合わせを含むが、これらに限定されない。臨床的エンドポイントを達成すると、組成物の投与を停止する。
【０３３８】
本発明は、その好適な特定の実施形態と併せて記載されたが、前述の記載および以下の実験は説明を意図したものであり、本発明の範囲を制限するものではないことは理解されるべきである。本発明の範囲内における他の態様、利点および変更は、本発明に関連する当技術分野において技術を有する者には明白である。
【実施例】
【０３３９】
実験
本発明の実施に際しては、明示されていない限り、当技術分野において通常の技術を有する者に理解され、文献に記載されている有機合成等の従来の技術を採用する。以下の実施例において、使用数値（分量、温度等）の正確性を確保するよう努力したが、実験誤差および偏差を考慮に入れるべきである。明示されていない限り、温度は摂氏、圧力は海面における大気圧またはその近傍を示す。すべての試薬は、明示されていない限り、市販されているものを使用した。すべての生成ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）製の３００もしくは４００ＭＨｚのＮＭＲスペクトロメータを使用した。すべての処理は、ガラス製またはガラスの内張容器中で行い、金属含有容器や装置との接触を避けた。
【０３４０】
ｍＰＥＧ-ＣＭ        ＣＨ３Ｏ-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ-ＣＨ２ＣＨ２-Ｏ-ＣＨ２-Ｃ（Ｏ）-ＯＨ）
ａｎｈ．            無水
Ｆｍｏｃ            ９-フルオレニルメトキシ（基）カルボニル
ＨＣｌ            塩酸
ＨＥＰＥＳ        ４-（２-ヒドロキシエチル）-１-スルホン酸ピペラジンエタン
ＮＭＲ                核磁気共鳴
ＤＣＣ            １，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＦ          ジホルムアミド
ＤＭＳＯ          ジメチルスルホキシド
ＭＷ            分子量
ＫまたはｋＤａ    キロダルトン
ＳＥＣ            サイズ排除クロマトグラフィー
ＨＰＬＣ        高速液体クロマトグラフィー
ＳＤＳ-ＰＡＧＥ    ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ    マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析
ＴＬＣ            薄層クロマトグラフィー
ＴＨＦ            テトラヒドロフラン
原料：本実施例に記載のすべての前駆体ポリマー試薬は、明示されていない限り、市販されているものである。本実施例で使用されるグルカゴン様ペプチド  Ｉ（７-３６、「ＧＬＰ-１」）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）から購入した。
【０３４１】
実施例１
可逆性ＰＥＧ化のための９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
【０３４２】
【化１５３】
2008544046.tif 000119
Ａ．２，７-ジ（Ｂｏｃ-アミノ）フルオレンの調製
アロゴン雰囲気下、２，７-ジアミノフルオレン（２．４５ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）を、１，４-ジオキサン（２８ｍＬ）中に溶解した。続いて、脱イオン水（１４ｍＬ）、ＮａＯＨ２Ｍ（２．２ｅｑ，２７．５ｍｍｏｌ，１３．８ｍＬ）およびジ-ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（ＢＯＣ２Ｏ）（２．５ｅｑ，３１．３ｍｍｏｌ，６．８２ｇ）を加えた。反応物を、２０時間室温で激しく撹拌した。生成物が、褐色固体として沈殿した。反応物に水を加え反応を抑制し、ＫＨＳＯ４を１Ｍ  加えｐＨ  ３に酸性化した。生成物をクロロホルム（３Ｘ４００ｍＬ）を用いて抽出し、結合有機層を１／２飽和塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。生成物を、フラッシュ・クロマトグラフィー（クロロホルム中に１％メタノールで溶離させたシリカゲル６０A）を用いて精製した。精製した黄色固体（５．１ｇ，〜９９％）を、ＴＬＣ（ニンヒドリン染色液）を用いて純化した。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）７．７（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨウレタン）；７．６（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）；  ６．５（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；  ３．８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．５（ｓ，１８Ｈ，Ｂｏｃ）。
【０３４３】
Ｂ．９-ホルミル-２，７-ジ（Ｂｏｃ-アミノ）フルオレンの調製
精製した２，７-ジ（Ｂｏｃ-アミノ）フルオレン（５ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）（上記ステップＡにて調製）を、ギ酸エチル（５０ｍＬ）および無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中に弱火で加熱しながら溶解した（注：ギ酸エチルは、ギ酸を除去するため、Ｋ２ＣＯ３上に保存した）。溶液を氷浴中で冷却し、鉱油中６０％水素化ナトリウムを少量ずつ加えた（５．５ｅｑ，６９ｍｍｏｌ，２．７５ｇ）。反応物を、徐々に室温に温め、その後還流冷却器に取付け、５０℃に加熱した。２時間後、反応物を氷浴中で冷却し、脱イオン水（５０ｍＬ）を徐々に加え、反応を抑制した。水層を氷酢酸でｐＨ５に調節し、酢酸エチル（２Ｘ４００ｍＬ）で抽出した。結合有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物（黒褐色固体）を、フラッシュ・クロマトグラフィー（クロロホルム中に１-５％メタノールで段階状勾配溶離させたシリカゲル  ６０A）で精製した。純度によって異なる、収量（４．８ｇ，〜９０％）の黄色から褐色固体を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）１１．０（ｓ，０．９Ｈ，ｅｎｏｌ）；９．３（２ｓ，１．９Ｈ，ＮＨウレタン）；７．２-８．３（ｍ，Ａｒ，Ｃ１０Ｈ  ｅｎｏｌ）；６．５（２ｓ，０．１Ｈ，ＮＨウレタン）；４．１（ｍ，０．３Ｈ，ＣＨ）；１．５（ｓ，１８Ｈ，Ｂｏｃ）。
【０３４４】
Ｃ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（Ｂｏｃ-アミノ）フルオレンの調製
アロゴン雰囲気下、９-ホルミル-２，７-ジ（Ｂｏｃ-アミノ）フルオレン（０．４７ｇ，１．１ｍｍｏｌ）を、無水メタノール（ＭｅＯＨ）（５ｍＬ）に溶解した。ＮａＢＨ４（１．２ｅｑ，１．３ｍｍｏｌ，０．０５ｇ）を反応物に加え、室温で５時間撹拌した。反応物を脱イオン水で希釈し、氷酢酸でｐＨ５に酸性化した。反応物を酢酸エチル（２Ｘ１００ｍＬ）で抽出し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（４Ｘ２０ｍＬ）および塩水（３Ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、  濾過し、蒸発させた。粗生成物である橙色固体を、フラッシュ・クロマトグラフィー（クロロホルム中に１-５％  メタノールで勾配溶離させたシリカゲル６０A（代替物として、ジクロロメタン「ＤＣＭ」中に１５-２０％酢酸エチルで勾配溶離させてもよい））で精製した。生成物として、黄色固体（０．３９，８３％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）７．９（ｓ，０．５Ｈ，ＮＨウレタン）；７．７（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．６（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｄ，２Ｈ，  Ａｒ）；  ４．０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）；３．９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．６（ｓ，１８Ｈ，Ｂｏｃ）。
【０３４５】
Ｄ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレン二塩酸塩の調製
９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（Ｂｏｃ-アミノ）フルオレン（０．３９ｇ，０．９ｍｍｏｌ）を、１，４-ジオキサン中に溶解した。０℃で、濃縮ＨＣｌ（２．５  ｍＬ）を加え、反応物を０℃で２時間、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を、減圧下（４５℃）で除去した。生成物をメタノール中に溶解し、蒸発させた（２回）。生成物をメタノール（８ｍＬ）中に溶解し、ジエチルエーテルを徐々に加え沈殿させ、冷却した（反復）。生成物として、ＴＬＣ（クロロホルム／メタノール／酢酸  ８５：１５：３，ニンヒドリン染色液）で単一の斑点を示す橙赤色固体（０．２５ｇ，９１％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．１（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）；  ７．８（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）；４．３（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）；４．０（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０３４６】
Ｅ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレンの調製
無水トルエン（８０ｍＬ）中、ｍＰＥＧ-ＣＭ（２０，０００）（ＭＷ＝１９，４５８；２０ｇ，１．０３  ｍｍｏｌ，３．５ｅｑのｍＰＥＧ-ＣＭ）を、ロータリエバポレータを用いて、６０℃で減圧下共沸蒸留させた。アロゴン雰囲気下、固形物を無水ジクロロメタン（４０ｍＬ）中に溶解した後、無水Ｎ-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（３．５ｅｑ，１．０３ｍｍｏｌ，１３９ｍｇ）および１，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（３．７ｅｑ，１．０９ｍｍｏｌ，２２４ｍｇ）を加えた。別のフラスコに、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレン二塩酸塩（１ｅｑ，０．２９４ｍｍｏｌ，８８ｍｇ）および４-ジメチルアミノピリジン（２．２ｅｑ，０．６５ｍｍｏｌ，７９ｍｇ）を、無水ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中に溶解した。ＤＣＣ反応物を数分間（５から１５分）撹拌した後、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレンのＤＭＦ溶液を、定量的にＤＣＣ反応物に転移させた。室温で２７時間反応物を撹拌し、減圧下で溶媒を蒸発させた。濃厚なシロップ状物を、弱火で加熱しながら、乾燥イソプロピル（基）アルコール（「ＩＰＡ」，４００ｍＬを徐々に加え）中に溶解した。室温で放置し、ＰＥＧ生成物を沈殿させた。０℃で３０分間撹拌しながら、さらにＩＰＡ（１００ｍＬ）を加えた。沈殿物を濾過し、低温ＩＰＡ／ジエチルエーテル７：３（８０ｍＬ）およびジエチルエーテルで洗浄した。粗生成物（淡黄色粉末、９-（ｍＰＥＧ（２０，０００）メチルエステル）-メチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン）を、高真空下で乾燥させた（収量１８．３ｇ）。
【０３４７】
アロゴン雰囲気下、粗生成物（１８．３ｇ）を脱イオン水中に溶解し、ＮａＯＨ１ＭでｐＨ１２±０．１に調節した。加水分解反応混合物を、室温で３時間撹拌した。１０％リン酸で、ｐＨを３．０に調節した（水溶液を、セリット層を通して濾過し、水で濯いだ）。ＮａＣｌ（６０ｇ）を、水溶液中に溶解した後、ＤＣＭ（２Ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。結合有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物を、脱イオン水中に溶解し、イオン交換樹脂で脱塩した。ＤＥＡＥセファロース（０．９Ｌ）を用いて、ＰＥＧ  溶液のイオン交換クロマトグラフィーを行い、水で溶離させた。ＰＥＧを含む画分を回収した。精製生成物（淡黄色粉末）中、ｍＰＥＧ-ＣＭ（２０，０００）は不在であった（ＨＰＬＣ分析）。収量  ７．３ｇ（６４％）（構成要素の回収総量を示す）、置換率７５％以上（所望の官能性を有する回収量中のＰＥＧの比率を示す）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）：δ（ｐｐｍ）８．９（ｓ，２Ｈ，ＮＨアミド）；７．９（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）；４．１（ｍ，５Ｈ，ＣＨ２Ｃ＝Ｏ，ＣＨ）；４．０（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．６（ｓ，ＰＥＧ骨格）；３．３（ｓ，３Ｈ，-ＯＣＨ３）。
【０３４８】
Ｆ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
無水アセトニトリル（１０ｍＬ）中、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン（０．５ｇ，０．０１３ｍｍｏｌ）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下５０℃で共沸蒸留させた。固形物を無水ＤＣＭ（２ｍＬ，「ＣＨ２Ｃｌ２」）中に溶解した後、トリホスゲンを加えた（反応物から過剰なホスゲンガスが下部トラップで  捕捉されるよう配慮した）（１．４ｅｑ，０．０１８ｍｍｏｌ，５ｍｇ）。数分後、無水ピリジン（２ｅｑ，０．０２６ｍｍｏｌ，ＤＣＭ中のピリジン２μＬ［２μＬピリジン／５０μＬ  ＤＣＭ］）を加えた。徐々に温めながら（４０℃）、１．５時間後殆どの反応溶媒および過剰なホスゲン（排出口にある下部トラップを使用）が蒸発した。シロップ状物を無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解した後、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（５．３ｅｑ，０．０６８ｍｍｏｌ，８ｍｇ，「ＮＨＳ」）および無水ピリジン（ＤＣＭ中の上記（２：５０）溶液のうち３．２ｅｑ，０．０４１ｍｍｏｌ，８３μＬ）を加えた。４時間後、溶媒をアルゴン流下蒸発させた。シロップ状物を、無水ＩＰＡ中に溶解し、室温で沈殿させた。沈殿物を濾過し、低温ＩＰＡおよびジエチルエーテルで洗浄した。真空下残留溶媒を蒸発させ、極淡黄色粉末を得た。ＨＰＬＣによって、収量０．４ｇ（８０％）、置換率７３％のＮＨＳ炭酸塩を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）：δ（ｐｐｍ）８．９（ｓ，２Ｈ，ＮＨアミド）；７．９（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）；４．７（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）；４．３（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）；４．１（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２Ｃ＝Ｏ）；２．８（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＳ）。
【０３４９】
同様の手順にて、２０，０００以外の分子量を有するｍＰＥＧ-ＣＭ  ポリマー試薬を置換することによって、他の分子量を有するポリマー試薬を調製することができる。
【０３５０】
実施例２
カルバミン酸ＦＭＯＣＰＥＧ２４０，０００を有するインスリンのＰＥＧ化
Ａ．ＰＥＧ化
実施例１にて調製したポリマー試薬（９-ヒドロキシ-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド）を−２０℃で保存し、デシケータで室温に温めた。インスリン（８．９ｍｇ）を検量し、１ｍＬＤＭＳＯ中に溶解した。モル比を３：１（ＰＥＧ：インスリン）とした。１８４．６ｍｇの９-ヒドロキシ-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドを検量し、１ｍＬアセトニトリル中に溶解した後、インスリンに加えた。反応物を窒素下で１時間撹拌した後、２０  ｍＭ  酢酸ｐＨ３．０で１：５に希釈することによって反応を抑制し、反応混合物のｐＨをｐＨ  ３．１に下げた。低ｐＨによって、分解性複合体が安定する。
【０３５１】
Ｂ．精製
陽イオン交換を使用し、２インスリン部位にＰＥＧ化を有する複合体である２-ｍｅｒＰＥＧインスリン複合体から、１インスリン部位にＰＥＧ化を有する複合体１-ｍｅｒに精製した。２０ｍＬ  ＳＰ６５０カラムおよびAＫＴＡ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）を使用して、ＰＥＧ 複合体を精製した。開始バッファーは、２０ｍＭＨＡｃ／ＮａＡｃ（酢酸／酢酸ナトリウム）、ｐＨ３．１、溶離イオンバッファーは、２０ｍＭ  ＨＡｃ／ＮａＡｃ、１Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ３．１とした。流量は１０ｍＬ／分、試料導入量はインスリン量９ｍｇとした。精製方法を表１に記載する。
【０３５２】
【化１５４】
2008544046.tif 000120
Ｃ．精製複合体の特性化および定量化
反応混合物のＨＰＬＣ分析を図１に示す。図２は、ＰＥＧ化１-ｍｅｒ複合体（または、モノＰＥＧ化複合体）のＨＰＬＣ分析を示す。ＰＥＧ化１-ｍｅｒ複合体の純度は９８．１％で、２-ｍｅｒは１．９％である。
【０３５３】
Ｄ．精製複合体の分解試験
生体内遊離試験を、精製複合体を用いて行った。試験は、温度調節機能付きオートサンプラー（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，  Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）Ａｇｉｌｅｎｔ１１００を使用して実施した。ＨＰＬＣ法を使用して、天然タンパク質の遊離および複合体の減少を分析した。１-ｍｅｒ複合体（または、モノＰＥＧ化複合体）を１０：１で、１０Ｘ  ＰＢＳ（リン酸エステル緩衝化生理食塩水）バッファー（ｐＨ７．３５）内で希釈した。３７℃で培養し、適時一定分量を除去した。時間０を、ＰＢＳ希釈前とし、１-ｍｅｒ複合体のＨＰＬＣ結果を使用した。各時点は、５時間、１５時間、２８時間、次いで、８日間、１日時点とした。図３は、その結果をまとめたものである。
【０３５４】
各時点での試料中の各成分の相対パーセントを、Ｐｒｉｓｍ分析ソフト（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）を使用してグラフ化した。データを非線形方程式に当てはめ、その数式を使用し、バッファー中の１-ｍｅｒ複合体における４．５日間の半減期を予測した。
【０３５５】
実施例３
９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（１０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（または、「Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-ＮＨＳ」）の調製
９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（１０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの合成を、以下の構造式２に図式的に表す。
【０３５６】
【化１５５】
2008544046.tif 000121
Ａ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（グルタル酸アミド）フルオレンの調製
アロゴン雰囲気下、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレン  二塩酸塩（実施例１のステップＡからＤに記載の調製）を脱イオン水中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨ８に調製した。混合物を塩水で半分に希釈し、沈殿物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過、蒸発させ、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレン（褐色粉末、単離収率８４％）を得た。
【０３５７】
９-ヒドロキシメチル-２，７-ジアミノフルオレン（０．３８ｇ，１．７ｍｍｏｌ）を、無水テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」、１０ｍＬ）中に溶解し、グルタル酸無水物（９７％，  ２．２ｅｑ，３．７ｍｍｏｌ，０．４３５ｇ）を加えた。反応物を４．５時間撹拌し、ＴＬＣ（ニンヒドリン染色液、９０：１０：３  酢酸エチル／メタノール／酢酸）によってアミンの不在を確認した。反応混合物をヘキサン（１０  ｍＬ）で希釈、濾過し、１：１  ＴＨＦ／ヘキサン、その後ヘキサンで洗浄した。粗生成物を、最少量のメタノール（１ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、ヘキサン（１０ｍＬ）で沈殿させた。混合物を冷却（４℃）、濾過し、１：１ＴＨＦ／ヘキサン、その後ヘキサンで洗浄した。収量は、橙黄色粉末０．５９ｇ（７７％）であった。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）７．９（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｄ，２Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｄｄ，２Ｈ，Ａｒ）；４．０（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）；３．９（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．５（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．４（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【０３５８】
Ｂ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（１０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレンの調製
無水トルエン（１００ｍＬ）中、ｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）（Ｍｎ＝１０，２００；クロマトグラフィーにより精製、１２．７５ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下５０℃で共沸蒸留した。アロゴン雰囲気下、固形物を無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）中に溶解した。無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（グルタル酸アミド）フルオレン（１ｅｑ．，０．５ｍｍｏｌ，０．２２５ｇ）および無水Ｎ-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（２．２ｅｑ，１．１ｍｍｏｌ，１４９ｍｇ）溶液を、ＰＥＧ溶液（２．５ｍＬＤＭＦ（すすぎ用））に定量的に加えた。その後、１，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２．４ｅｑ，１．２ｍｍｏｌ，２４８ｍｇ）を反応溶液に加えた。反応物を室温で２４時間撹拌し、溶媒を減圧下蒸発させた。濃厚なシロップ状物を、弱火で加熱しながら、乾燥ＩＰＡ（５００ｍＬ、徐々に加え）中に溶解した。ＰＥＧ生成物を、室温で放置し、沈殿させた。沈殿物を、１０℃で１０間冷却、濾過し、低温ＩＰＡ（２００ｍＬ）、その後ジエチルエーテル（２００ｍＬ）で洗浄した。粗生成物（黄色がかった白色粉末）を、高真空下乾燥させ、その後脱イオン水中に溶解した。ＰＥＧ溶液のイオン交換クロマトグラフィーを、ＰＯＲＯＳ媒体（０．１Ｌ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ-Ｍａｎｎｈｅｉｍ，ＧｍｂＨ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して行い、水で溶離させた。中性ＰＥＧを含む画分を回収した。精製生成物は、ｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）（ＨＰＬＣ分析）を含んでいなかった。収量５．５ｇ（５３％）、置換率８５％以上を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）：δ（ｐｐｍ）８．６（ｓ，２Ｈ，ＡｒＮＨアミド）；７．９（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．６（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）；６．４（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨアミド）；４．１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）；４．０（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．６（ｓ，ＰＥＧ骨格）；３．３（ｓ，３Ｈ，-ＯＣＨ３）；２．４（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【０３５９】
Ｃ．９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（１０，０００）-グルタル酸アミド）-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
無水アセトニトリル（１００ｍＬ）中、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（１０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレン（５．３ｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下５０℃で共沸蒸留した。固形物を無水ＤＣＭ（２７ｍＬ）中に溶解し、トリホスゲン（１．４ｅｑ，０．３６ｍｍｏｌ，１０６ｍｇ）を追加した（反応物から過剰なホスゲンガスが下部トラップで捕捉されるよう配慮した）。数分後、無水ピリジン（２ｅｑ，０．５１ｍｍｏｌ，４１μＬ）を加えた。１．５時間後、殆どの反応溶媒および過剰なホスゲン（排出口の下部トラップを使用）は、徐々に温めることにより（４０℃）蒸発した。シロップ状物を無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）中に溶解し、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（５．３ｅｑ，１．３５ｍｍｏｌ，１５５ｍｇ，「ＮＨＳ」）を加えた。１５分後、無水ピリジン（３．２ｅｑ，０．８１ｍｍｏｌ，６６μＬ）を加えた。反応物を２時間撹拌し、溶媒を減圧下蒸発させた。シロップ状物を無水ＩＰＡ（２００ｍＬ）中に溶解し、室温で沈殿させた。沈殿物を濾過し、低温ＩＰＡおよびジエチルエーテル（１５０ｍＬ（１０ｍｇＢＨＴを含む））で洗浄した。残留溶媒を真空下蒸発させ、黄色がかった白色粉末を得た。ＨＰＬＣによって、収量５．１ｇ（９５％）、置換率〜７０％のＮＨＳ炭酸塩を得た。
【０３６０】
重量平均分子量約２０，０００を有するｍＰＥＧ-ＮＨ２（クロマトグラフィーにより精製）でｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）を置換することを除き、同じ方法を使用して別のポリマー試薬を調製した。得られたポリマー試薬は、総分子量約４０，０００ダルトンであった。かかる方法によって調製されたポリマー試薬の名称は、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（または、「Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-ＮＨＳ」）という。
【０３６１】
重量平均分子量約３０，０００を有するｍＰＥＧ-ＮＨ２（従来の方法を用いて高純度で調製）でｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）を置換することを除き、同じ方法を使用して別のポリマー試薬を調製した。得られたポリマー試薬は、総分子量約６０，０００ダルトンであった。かかる方法によって調製されたポリマー試薬の名称は、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（３０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（または、「Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ６０ｋ-ＮＨＳ」）という。
【０３６２】
実施例４
９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（ｍＰＥＧ（１０，０００）グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの合成を、以下の構造式４に図式的に表す。
【０３６３】
【化１５６】
2008544046.tif 000122
Ａ．４-カルボン酸-７-アミノフルオレンの調製
Ｐａｒｒ水素化瓶（Ｐａｒｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｌｉｎｅ  ＩＬ）中に、７-ニトロ-４-フルオレンカルボン酸（８．０ｇ，０．０３１ｍｏｌ）［Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ（１９８４）６７，  ２００９-２０１６記載のようにジフェン酸から調製、またはＳｉｇｍａ-Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯからも市販されている］をアルゴン（Ａｒ）で浄化した１ＭＮａＯＨ（２５０ｍＬ、必要に応じて若干温める）に溶解した。２０％Ｐｄ／Ｃ（含水５０％）５重量％（４００ｍｇ）を慎重に加えた後、Ｐａｒｒ瓶を、Ｐａｒｒ器具を用いて３回真空／充填を繰り返し、水素雰囲気を確保した。懸濁液を、２０ｐｓｉ水素ガス下で１８時間振盪し、その後残留水素を減圧下除去した。懸濁液を、セリット層を通して濾過し、水を加えすすぎ、その後酢酸でｐＨ４に調節した。生成物を、塩水および酢酸エチル（３´８００ｍＬ）で抽出した。各有機層を、少量の塩水で洗浄した。結合有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。酢酸除去の補助として、トルエンを加え、減圧下で蒸発させた（必要に応じて、２-３回繰り返す）。１日以上、高真空下で最終蒸発を行った。収量６．１ｇ（８６％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）８．１（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．６２（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５８（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；６．８（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；６．５（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；３．８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．９（ｓ，＜０．２５Ｈ，ＨＯＡｃ）。
【０３６４】
Ｂ．４-カルボン酸-７-（グルタル酸アミド）フルオレンの調製
４-カルボン酸-７-アミノフルオレン（８．６ｇ，０．０３８ｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中に溶解し、グルタル酸無水物（９７％，４．９４ｇ，０．０４２ｍｏｌ）を加えた。反応物を４．５時間撹拌し、アミンの不在をＴＬＣ（ニンヒドリン染色液、９０：１０：３酢酸エチル／メタノール／酢酸、または同等物）で確認した。反応混合物をヘキサン（１５０ｍＬ）で希釈、冷却、濾過し、１：１低温ＴＨＦ／ヘキサン、その後ヘキサン洗浄した。残留溶媒を減圧下で蒸発させた。収量７．２ｇ（５５％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．４（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；８．０（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．８（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；４．０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．５（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０３６５】
Ｃ．９-ホルミル-４-カルボン酸-７-（グルタル酸アミド）フルオレンの調製
二塩基酸である４-カルボン酸-７-（グルタル酸アミド）フルオレン（７．１６ｇ，０．０２１ｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）およびギ酸エチル（Ｋ２ＣＯ３上に保存、３５０ｍＬ）中に溶解した。カリウムｔｅｒｔ-ブトキシド（９５％，１９．９ｇ，０．１６９ｍｏｌ）を、数回に分けて慎重に加えた。反応物を、４５℃で３０分間緩やかに還流させ、その後室温で２．５時間撹拌した。溶液を氷浴中で冷却し、その後１Ｍ  ＨＣｌ（５００ｍＬ）および塩水（３５０ｍＬ）を加えた。生成物を、酢酸エチル（３´７００ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄し、その後Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。乾燥物を濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。収量＞７．８ｇ（１００％）および含有残留ＤＭＦを得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）１１．５（ｄ，０．５Ｈ，ホルミル）；１１．４（ｄ，０．５Ｈ，ホルミル）；１０．０（ｄ，１Ｈ，ＮＨ）；８．４-７．３（ｍ，７Ｈ，Ａｒ）；２．４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０３６６】
Ｄ．９-ヒドロキシメチル-４-カルボン酸-７-（グルタル酸アミド）フルオレンの調製
９-ホルミル-４-カルボン酸-７-（グルタル酸アミド）フルオレン（７．８ｇ，０．０２１ｍｏｌ）を無水メタノール（ＭｅＯＨ）（１５０ｍＬ）中に溶解した。室温浴中のフラスコに、水素化ホウ素ナトリウム（６．０ｇ，０．１５９ｍｏｌ）を数回に分けて慎重に加えた。２時間および４時間後に水素化ホウ素ナトリウム（２．０ｇ，０．０５３ｍｏｌ）をさらに慎重に加えた。７時間後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を水に溶解し、その後１ＭＨＣｌで酸性化した。黄色沈殿物を、塩水および酢酸エチル（４´７００ｍＬ）で抽出した。各酢酸エチル層を、塩水（２´）で洗浄、結合し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、粗生成物をメタノール／クロロホルムから再結晶させた。収量４．９ｇ（６３％）の黄色結晶を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．４（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；８．０（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．８５（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．８３（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｄｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；４．１-３．９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２，ＣＨ）；２．５（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０３６７】
Ｅ．９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（ｍＰＥＧ（１０，０００）グルタル酸アミド）フルオレンの調製
無水トルエン（７５０ｍＬ）中、ｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）（Ｍｎ＝９，４１８；クロマトグラフィーで精製、７５ｇ、０．００８ｍｏｌ、「ｍＰＥＧ（１０ｋ）-ＮＨ２」とも表される）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下５０℃で共沸蒸留した。アロゴン雰囲気下、固形物を無水ＤＣＭ（ＣＨ２Ｃｌ２）（３００ｍＬ）中に溶解した。無水ＤＭＦ（３３ｍＬ）中の、９-ヒドロキシメチル-４-カルボン酸-７-（グルタル酸アミド）フルオレン（１．３ｇ，０．００３６ｍｏｌ）および無水Ｎ-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１．０ｇ，０．００７６ｍｏｌ）溶液を、定量的にＰＥＧ溶液（すすぎ用２０ｍＬ  ＤＭＦ）に加えた。その後、１，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１．６５ｇ，０．００８ｍｏｌ）を反応溶液に加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させた。濃厚なシロップ状物を、弱火で加熱しながら、乾燥ＩＰＡ（３．６Ｌ、徐々に加え）中に溶解した。ＰＥＧ生成物を室温で放置し、沈殿させた。沈殿物を１０℃で１０分間冷却、濾過し、低温ＩＰＡ（４００ｍＬ）、その後ジエチルエーテル（４００ｍＬ）で洗浄した。粗生成物（黄色がかった白色粉末）を、高真空下乾燥させ、その後脱イオン水中に溶解した。ＰＥＧ溶液のイオン交換クロマトグラフィーを、ＰＯＲＯＳ媒体（１Ｌ）を用いて行い、水で溶離した。中性ＰＥＧを含む画分を回収し、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ媒体（０．５Ｌ）でさらに精製した。精製生成物には、ｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）またはモノＰＥＧ酸生成物（ＨＰＬＣ分析）を含まれていなかった。収量５５ｇ（７９％）（置換率９５％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）：δ（ｐｐｍ）８．７（ｓ，１Ｈ，ＡｒＮＨアミド）；８．０（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．９（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．３（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；６．７（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨアミド）；６．４（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨアミド）；４．０（ｍ，３Ｈ，ＣＨ，ＣＨ２）；３．６（ｓ，ＰＥＧ骨格）；３．３（ｓ，６Ｈ，-ＯＣＨ３）；２．４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０３６８】
Ｆ．９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（ｍＰＥＧ（１０，０００）グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
無水トルエン（１４０ｍＬ）中、９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（ｍＰＥＧ（１０，０００）グルタル酸アミド）フルオレン（１４ｇ，０．０００７２ｍｏｌ）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下４５℃で共沸蒸留した。固形物を、無水ＤＣＭ（５６ｍＬ（すすぎ用７ｍＬ））中に溶解し、注射器で新たに調製したトリホスゲン（下部トラップを使用して、反応物から過剰なホスゲンガスを捕捉した）（０．２１４ｇ，０．０００７２ｍｏｌ）および無水ピリジン（０．０５７ｇ、０．０００７２ｍｏｌ、溶液としてＣＨ２Ｃｌ２（〜５ｍＬ）に添加）溶液に移動した。１時間後、急速アルゴン流（室温を維持）を開始し、過剰なホスゲン（排出口の下部トラップを使用）を蒸発させた。アルゴン浄化３０分後、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（０．４３ｇ，０．００３７ｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。無水ピリジン（０．２８５ｇ、０．００３６ｍｏｌ、溶液としてＣＨ２Ｃｌ２（〜２５ｍＬ）に添加）を加えた。アルゴン流を継続し、１．５時間後、殆どの反応溶媒が蒸発した。濃厚なシロップ状物を、無水ＩＰＡ（７００ｍＬ）中に溶解し、室温で沈殿させた。沈殿物を濾過し、低温ＩＰＡおよびジエチルエーテル（１００ｍＬ（１０ｍｇＢＨＴ含有））で洗浄した。残留溶媒を真空下蒸発させ、黄色がかった白色粉末を得た。ＨＰＬＣによって、収量１３．５ｇ（９６％）、置換率８７％のＮＨＳ炭酸塩を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ  Ａｒアミド）；７．９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．６（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．３（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；６．８（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）；６．４（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）；４．７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；４．３（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）；３．６（ｓ，ＰＥＧ骨格）；３．３（ｓ，６Ｈ，-ＯＣＨ３）；２．８（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２）；２．５（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０３６９】
重量平均分子量約２０，０００を有するｍＰＥＧ-ＮＨ２（クロマトグラフィーにより精製）でｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）を置換することを除き、同じ方法を使用して別のポリマー試薬を調製した。得られたポリマー試薬は、総分子量約４０，０００ダルトンであった。
【０３７０】
重量平均分子量約３０，０００を有するｍＰＥＧ-ＮＨ２（従来の方法を用いて高純度で調製）でｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）を置換することを除き、同じ方法を使用して別のポリマー試薬を調製した。得られたポリマー試薬は、総分子量約６０，０００ダルトンであった。
【０３７１】
実施例５
典型的なポリマー試薬を有するグリシン複合体の調製と放性データ
実施例１にしたがって調製した９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（１０ｍｇ，〜７０％活性ＮＨＳ）を、１％グリシン＋２５ｍ  ＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４（２５μＬ）のバッファー溶液中に溶解し、渦流で混合し、室温で３０分間反応させ、複合溶液を生成した。その後、複合溶液を２つの分割量として、以下のように処理した。一方は、２５ｍ  ＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４（１．２５ｍＬ）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入し、他方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．２（バッファー）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入した。
【０３７２】
実施例３にしたがって調製されたＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-ＮＨＳを、１％グリシン＋２５ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４（２５μＬ）のバッファー溶液中に溶解し、渦流で混合し、渦流で混合し、室温で３０分間反応させ、複合溶液を生成した。その後、複合溶液を２つの分割量として、以下のように処理した。一方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（１．２５ｍＬ）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入し、他方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．２（バッファー）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入した。
【０３７３】
実施例３にしたがって調製されたＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-ＮＨＳを、１％グリシン＋２５ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４（２５μＬ）のバッファー溶液中に溶解し、渦流で混合し、渦流で混合し、室温で３０分間反応させ、複合溶液を生成した。その後、複合溶液を２つの分割量として、以下のように処理した。一方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（１．２５ｍＬ）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入し、他方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．２（バッファー）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入した。
【０３７４】
実施例４にしたがって調製された９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（ｍＰＥＧ（１０，０００）グルタル酸アミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドを、１％グリシン＋２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（２５μＬ）のバッファー溶液中に溶解し、渦流で混合し、渦流で混合し、室温で３０分間反応させ、複合溶液を生成した。その後、複合溶液を２つの分割量として、以下のように処理した。一方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（１．２５ｍＬ）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入し、他方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．２（バッファー）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入した。
【０３７５】
実施例１２にしたがって調製された４，７-ＣＡＣ-ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ２０Ｋ-ＮＨＳを、１％グリシン＋２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（２５μＬ）のバッファー溶液中に溶解し、渦流で混合し、渦流で混合し、室温で３０分間反応させ、複合溶液を生成した。その後、複合溶液を２つの分割量として、以下のように処理した。一方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（１．２５ｍＬ）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入し、他方は、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．２（バッファー）で希釈し、３７℃で培養し、ＨＰＬＣ系上に種々の間隔で注入した。
【０３７６】
一次速度式にしたがって、ｔ１／２値の放性データを線形傾斜から求め、ｌｎ（［複合体］）対時間としてグラフ化した。
【０３７７】
３７℃での９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（１０，０００）-メチルアミド）フルオレン-グリシンカルバメート複合体の放性データは、ｐＨ７．４，ｔ１／２＝９．９日、ｐＨ８．２，ｔ１／２＝５．５日（１実験）である。
【０３７８】
３７℃でのＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-グリシンカルバメート複合体の放性データは、ｐＨ７．５２±０．１３，ｔ１／２＝１４．８±２．８日、ｐＨ８．１４±０．０４，ｔ１／２＝７．０±１日（ここで、±範囲は２実験による）。
【０３７９】
３７℃でのＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-グリシンカルバメート複合体の放性データは、ｐＨ７．５２±０．１３，ｔ１／２＝１２．２±２．６日、ｐＨ８．１４±０．０４，ｔ１／２＝６．７±０．１日（ここで、±範囲は２実験による）。
【０３８０】
３７℃での９-ヒドロキシメチル-４-（カルボキシアミドｍＰＥＧ（１０，０００）-７-（グルタル酸アミドｍＰＥＧ（１０，０００））フルオレン-グリシンカルバメート複合体の放性データは、ｐＨ７．５２±０．１３，ｔ１／２＝４．０±１日、ｐＨ８．１４±０．０４，ｔ１／２＝１．９５±０．１５日（ここで、±範囲は２実験による）。
【０３８１】
３７℃での４，７-ＣＡＣ-ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ２０Ｋ-グリシンカルバメート複合体の放性データは、ｐＨ７．４，ｔ１／２＝１８．０±０．１日、ｐＨ８．２，ｔ１／２＝７．５±０．１日（ここで、±範囲は２実験による）。
【０３８２】
実施例６
模範的ポリマー-タンパク質複合体の調製：
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の調製
例示的ポリマー試薬Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-ＮＨＳは、例示的ポリペプチドＧＬＰ-１のＮ-末端に共有結合し、放出可能なＰＥＧ-部分が結合されたタンパク質のプロドラッグ構造を提供した。二本のアームを有するポリマー試薬の性質によって、投与後のＧＬＰ-１部分の安定性が増し、その結果放出機能が持続され、ＧＬＰ-１が加水分解によって複合体から放出され、天然または未修飾ＧＬＰ-１前駆体を提供する。Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の構造を以下に示す（構造中、「ＧＬＰ-１」はＧＬＰ-１の残留物を示す）。その他のポリペプチドおよびタンパク質は、ＧＬＰ-１と置換可能である。
【０３８３】
【化１５７】
2008544046.tif 000123
ポリマー試薬Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-ＮＨＳは、上記実施例３にしたがって調製した。
【０３８４】
ｐＨ５．５０の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー２５ｍＬ中、５０ｍｇＧＬＰ-１（公称１．２２７６×１０-５ｍｏｌ）（ＧＬＰ-１実純度９８．５％（ＨＰＬＣによる）、ペプチド含有量８２．２％）溶液を調製した後、撹拌しながらＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-ＮＨＳ（３．０６９２×１０-５ｍｏｌ）８７６．８ｍｇを加えた。溶液を１６時間室温で撹拌し、その結果ＰＥＧ化ＧＬＰ-１複合体Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１を生成した。その後、反応混合物を２０ｍＭ  ＨＡｃでｐＨ４．３０に酸性化した。反応物をＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析で観測した（図４）。
【０３８５】
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１をｐＨ４．３０の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ａ）およびｐＨ４．３０の１Ｍ  ＮａＣｌを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ｂ）の移動相を使用して、AＫＴＡＢａｓｉｃＳｙｓｔｅｍの陽イオン交換クロマトグラフィー（図５）によって、精製して、ＧＬＰ-１のモノＰＥＧ化複合体を得た。カラムは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されている７５ｍＬ樹脂充填ＨｉＴｒａｐＴＭ  ＳＰ  ＨＰ（同じくＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されているＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅイオン交換媒体を充填）を使用し、カラムの流量は１４ｍＬ／分とした。精製する溶液を、まずカラムに搭載した。その後、搭載した生成物を、勾配を使用して、移動相によって溶離した。以下の勾配を使用した。保持容量０ｍＬから５５０ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量５５０ｍＬから１０４１ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量１０４１ｍＬから１０９３ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１０％、保持容量１０９３ｍＬから１３３８ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量１３３８ｍＬから１４８６ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量１４８６ｍＬ以上には、溶液Ｂを含む移動相０％。溶離液のＵＶ吸収率を、２１５ｎｍで観測した。Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（モノＰＥＧ化構造）の保持容量ピーク６８９．３ｍＬに対応する画分（図５）を回収し、凍結乾燥させた。凍結乾燥させた粉末を、ｐＨ４．３の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー２５ｍＬ中に溶解し、同じ陽イオン交換クロマトグラフィー条件下で、精製工程を再度繰り返した。収量１７９．４ｍｇを得た。
【０３８６】
精製したＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１を、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ（図６列２）および逆相ＨＰＬＣ（図７Ａ）で分析した。また、水性媒体［５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）溶液、ｐＨ１０、５０℃で一晩］中のＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体の開裂性も、両ＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析（図６列３）および逆相ＨＰＬＣ（図７Ｂ）で分析し、複合体からのＧＬＰ-１の完全放出を確認した。カラムは、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐから市販されている５μｍ粒子の１００ｍｍ  Ｘ２．１ｍｍ  ＩＤ  Ｂｅｔａｓｉｌ  Ｃ１８カラムを使用した。脱イオン水中０．１％ＴＦＡ（溶液Ｃ）およびアセトニトリル中０．１％ＴＦＡ（溶液Ｄ）の移動相を使用した逆相ＨＰＬＣを、３７℃で実施した。以下の勾配を、逆相ＨＰＬＣに使用した。０．００から２０．００分には、溶液Ｄを含む移動相３５％、２０．００から２１．００分には、溶液Ｄを含む移動相５５％、２１．００から２３．００分には、溶液Ｄを含む移動相８０％、２３．００から２４．００分には、溶液Ｄを含む移動相８０％、２４．００から２５．００分には、溶液Ｄを含む移動相３５％、２５．００以上には、溶液Ｄを含む移動相３５％。
【０３８７】
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体（モノＰＥＧ化種）のＮ-末端ＰＥＧ化部位（Ｈｉｓ７）は、Ｓｔｒａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｖ８のエンドプロテアーゼＧｌｕ-Ｃによって複合体をプロテアーゼ消化した後、ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ分析で確認された。
【０３８８】
実施例７
典型的なポリマー-タンパク質複合体の調製：
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の調製
【０３８９】
【化１５８】
2008544046.tif 000124
ポリマー試薬Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-ＮＨＳを、上記実施例３にしたがって調製した。
【０３９０】
ｐＨ５．５０の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー２５ｍＬ中、５０ｍｇＧＬＰ-１（名目上１．２２７６×１０-５ｍｏｌ）（ＧＬＰ-１実純度９８．５％（ＨＰＬＣによる）、ペプチド含有量８２．２％）溶液を調製した後、撹拌しながら、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-ＮＨＳ（３．０６９２×１０-５ｍｏｌ）１．４９７１ｇｍを加えた。溶液を１５時間室温で撹拌し、その結果、ＰＥＧ化ＧＬＰ-１複合体Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１を生成した。反応混合物を２ＮＨＡｃでｐＨ４．００に酸性化した後、ｐＨ４．００の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファーで５０ｍＬに希釈した。
【０３９１】
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１は、AＫＴＡＢａｓｉｃＳｙｓｔｅｍ（図８）を用いて、陽イオン交換クロマトグラフィーで精製し、ＧＬＰ-１のモノＰＥＧ化複合体を得た。カラムは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されている７５ｍＬ樹脂充填ＨｉＴｒａｐＴＭ  ＳＰ  ＨＰ（同じくＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されているＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅイオン交換媒体を充填）を使用し、カラムの流量は１４ｍＬ／分とした。精製に使用した移動相は、ｐＨ４．００の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ａ）およびｐＨ４．００の１Ｍ  ＮａＣｌを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ｂ）で構成した。精製する溶液を、まずカラムに搭載した。その後、搭載した生成物を、勾配を使用して、移動相によって溶離した。以下の勾配を使用した。保持容量０ｍＬから５５０ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量５５０ｍＬから１０４１ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量１０４１ｍＬから１０９３ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１０％、保持容量１０９３ｍＬから１３３８ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量１３３８ｍＬから１４８６ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量１４８６ｍＬ以上には、溶液Ｂを含む移動相０％。溶離液のＵＶ吸収率を、２１５ｎｍで観測した。モノＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の保持容量ピーク６６８．４ｍＬに対応する画分（図８）を回収し、凍結乾燥させた。凍結乾燥させた粉末を、ｐＨ４．０の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー２５ｍＬ中に溶解し、同じ陽イオン交換クロマトグラフィー条件下で、精製工程を再度繰り返した。６６８ｍＬの回収した画分を凍結乾燥させた。
【０３９２】
精製したＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１を、ＳＤＳ-ＰＡＧＥで分析した（図９，列２）。また、水性媒体［５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）溶液、ｐＨ１０、５０℃で一晩］中のＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体の開裂性も、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析（図９，列３）で分析し、複合体からのＧＬＰ-１の完全放出を確認した。
【０３９３】
実施例８
模範的ポリマー-タンパク質複合体の調製：
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の調製
典型的な放出可能ポリマー試薬Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-ＮＨＳは、ＧＬＰ-１のリシン位置に解放可能なように共有結合された（本明細書においてはＧＬＰ-１の「内部」ＰＥＧ化と称する）。
【０３９４】
ｐＨ１０．０の２０ｍＭ炭酸ナトリウム-重炭酸塩バッファー２４．５ｍＬ中、３０ｍｇＧＬＰ-１（公称７．３６５８×１０-６ｍｏｌ）（ＧＬＰ-１実純度９８．５％（ＨＰＬＣによる）、ペプチド含有量８２．２％）溶液を調製した後、撹拌しながら、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-ＮＨＳ（１．１０４９×１０-５ｍｏｌ、上記実施例３にしたがって調製）２７６．３ｍｇを加えた。溶液を１０分間室温で撹拌し、その後反応混合物を２ＮＨＡｃでｐＨ４．３０に酸性化した。
【０３９５】
モノＰＥＧ化構造におけるＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１を得るため、反応混合物を５つに分割し、AＫＴＡ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、陽イオン交換クロマトグラフィーで各分割量を個別に精製した。カラムは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されている５ｍＬ樹脂充填ＨｉＴｒａｐＴＭ  ＳＰ  ＨＰ（同じくＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されているＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  イオン交換媒体を充填）を使用し、カラムの流量は５ｍＬ／分とした。精製に使用した移動相は、ｐＨ４．３０の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ａ）およびｐＨ４．３０の１Ｍ  ＮａＣｌを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ｂ）で構成した。移動相は、勾配を使用して移動させた。以下の勾配を使用した。０ｍＬから１１８．６ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量１１８．６ｍＬから２１９．１ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量２１９．１ｍＬから２２９．２ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１０％、保持容量２２９．２ｍＬから２６９．４ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量２６９．４ｍＬから２７９．４ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量２７９．４ｍＬ以上には、溶液Ｂを含む移動相０％。溶離液のＵＶ吸収率を、２１５ｎｍで観測した。Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の保持容量ピーク１５０．４ｍＬに対応するモノＰＥＧ化ＧＬＰ-１画分を、各精製移動において回収した（図１０）。その後、各精製移動から精製したＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１（モノＰＥＧ化ＧＬＰ-１構造中）をＳＤＳ-ＰＡＧＥで分析した（図１１）。回収した画分を結合し、凍結乾燥させた。収量４１ｍｇを得た。
【０３９６】
実施例９
模範的ポリマー-タンパク質複合体の調製：
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の調製
模範的放出可能ポリマー試薬Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-ＮＨＳは、ＧＬＰ-１のリシン位置に解放可能なように共有結合された（本明細書においてはＧＬＰ-１の「内部」ＰＥＧ化と称する）。
【０３９７】
ｐＨ１０．０の２０ｍＭ炭酸ナトリウム-重炭酸塩バッファー４５ｍＬ中、５０ｍｇＧＬＰ-１（公称１．２２７６×１０-５ｍｏｌ）（ＧＬＰ-１実純度９８．５％（ＨＰＬＣによる）、ペプチド含有量８２．２％）溶液を調製した後、撹拌しながら、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-ＮＨＳ（１．８４１４×１０-５ｍｏｌ、上記実施例３にしたがって調製）８９８．０ｍｇを加えた。溶液を１０分間室温で撹拌し、その後反応混合物を２Ｎ  ＨＡｃでｐＨ４．００に酸性化した。
【０３９８】
モノＰＥＧ化構造におけるＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１を得るため、酸性化した反応混合物（５０ｍＬ）を１０に分割し、AＫＴＡＢａｓｉｃＳｙｓｔｅｍを用いて、陽イオン交換クロマトグラフィーで各５ｍＬの分割量を精製した。カラムは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから市販されている５ｍＬ樹脂充填ＨｉＴｒａｐＴＭ  ＳＰ  ＨＰを使用し、カラムの流量は５ｍＬ／分とした。精製に使用した移動相は、ｐＨ４．００の２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ａ）およびｐＨ４．００の１Ｍ  ＮａＣｌを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（溶液Ｂ）で構成した。移動相は、勾配を使用して移動させた。以下の勾配を使用した。０ｍＬから１１８．６ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量１１８．６ｍＬから２１９．１ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相０％、保持容量２１９．１ｍＬから２２９．２ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１０％、保持容量２２９．２ｍＬから２６９．４ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量２６９．４ｍＬから２７９．４ｍＬには、溶液Ｂを含む移動相１００％、保持容量２７９．４ｍＬ以上には、溶液Ｂを含む移動相０％。溶離液のＵＶ吸収率を、２１５ｎｍで観測した。Ｇ２ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の保持容量ピーク１５８．３ｍＬに対応するモノＰＥＧ化ＧＬＰ-１画分を、各精製移動において回収した（図１２）その後、各精製移動から精製したＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１（モノＰＥＧ化ＧＬＰ-１構造中）をＳＤＳ-ＰＡＧＥで分析した（図１３）。回収した画分を結合し、限外濾過によって濃縮し、凍結乾燥させた。収量１８７．５ｍｇを得た。
【０３９９】
実施例１０
実例的ＧＬＰ-１ポリマー複合体の血糖値降下効果試験のためのマウスの生体内実験
オスの糖尿病マウス（ＢＫＳ．Ｃｇ-＋Ｌｅｐｒ  ｄｂ／＋Ｌｅｐｒ  ｄｂ／０１ａＨｓｄ）をＨａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｌｔｄ．（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ，  Ｉｓｒａｅｌ）から購入した。８から９週齢のマウス（３０から４０ｇｍ）をマウス用ケージに入れ（ケージにつき２匹）、実験開始前に少なくとも４８時間環境順化させた。
【０４００】
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（実施例６）、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（実施例７）、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１（実施例８）およびＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１（実施例９）の調製は、前述のとおりである。投与量（ＧＬＰ-１当量に基づく）に適合する濃度および注入量１００μＬを調製するため、各化合物をガラス製薬瓶に正確に計量し、生理食塩水中に溶解した。
【０４０１】
実験は、実現可能性試験段階および評価段階の二相に分割して行った。
【０４０２】
実現可能性試験段階では、まず、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスを使用してＧＬＰ-１の有効性を検査することの実現可能性を評価した。実現可能性試験段階実施においては、数群のマウスを使用した（各群４匹）。基準血糖値のデータは、薬剤投与２-３日前に各マウスから収集した。本データは、マウス群内の異常値を特定するために収集した。治療日（０日目）、各マウスの体重を計測した。０日目の血液サンプル（５から１０μＬ）を、尾静脈から採取した。血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を、血糖値分析器を使用して測定した。その後、各マウスの背部に皮下投与（ＳＣ）を行った。被験物質量および投与量（６０および１２０μｇ／マウス）は、マウスの平均体重に基づいて投与し、総投与量は１０ｍＬ／ｋｇを越えないものとした。その後、マウスをそれぞれのケージに戻した。血液サンプル５〜１０μＬ（３５ｇのマウスに対し、血液量２ｍＬの＜０．５％）を、−３、−２、−１、０、０．０４、０．１６、０．３３、１．０、１．１６日の時点で、注射針穿刺／毛細管によって採取した。採取した各血液サンプルの血糖値を調べた。実験終了後、マウスは二酸化炭素窒息により人道的に安楽死させた。
【０４０３】
評価段階では、実現可能性試験段階の結果から、３-５日長効果のＧＬＰ-１の徐放を達成するために必要な適切な投与量を選択した。評価段階実施においては、各群８匹のマウスを使用した。基準血糖値のデータは、薬剤投与３日前に各マウスから収集した。治療日（０日目）、各マウスの体重を計測した。０日目の血液サンプル（５から１０μＬ）を、尾静脈から採取した。血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を、血糖値分析器を使用して測定した。その後、各マウスの背部に皮下投与（ＳＣ）を行った。被験物質量および投与量（６０および１２０μｇ／マウス）は、マウスの平均体重に基づいて投与し、総投与量は１０ｍＬ／ｋｇを越えないものとした。その後、マウスをそれぞれのケージに戻した。血液サンプル５から１０μＬ（３５ｇのマウスに対し、血液量２ｍＬの＜０．５％）を、−３、−２、−１、０、０．０４、０．１６、０．３３、０．５、１、２、３、６日の時点で、注射針穿刺／毛細管によって採取した。採取した各血液サンプルの血糖値を調べた。投与後最初の４時間は、マウスの食物摂取を控えた。実験終了後、マウスは二酸化炭素窒息により人道的に安楽死させた。
【０４０４】
以下の表２は、試験化合物および各マウス群の投与量である。
【０４０５】
【化１５９】
2008544046.tif 000125
【０４０６】
【化１５９Ａ】
2008544046.tif 000126
実験データを回収し分析した。マウスは、単回皮下投与に対し耐用性があることが示された。図１４に示すように、ＧＬＰ-１と各Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１（図では、「ＰＥＧ２０-Ｌｙｓ-ＧＬＰ１」と記載）およびＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０Ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１（図では「ＰＥＧ４０-Ｌｙｓ-ＧＬＰ１」と記載）の複合体の血糖値降下効果が確認された。薬理学的（ＰＤ）測定から、ＧＬＰ-１は急速にマウスから除去されるが、ＧＬＰ-１複合体は３から４日かけてペプチドを放出することが明らかとなった。つまり、本発明の典型的なＧＬＰ-１分解性複合体は、分子ポンプのような機能をし、生体内加水分解によって、時間をかけて不活性ＧＬＰ-１を放出する。共有結合された親水性ポリマー（ＰＥＧ）は、生体内ＧＬＰ-１を安定させる（酵素分解からタンパク質を保護する）だけでなく、タンパク質を３から４日の延長された期間にわたって血流中に徐々に放出することによって循環半減期を延長する機能を果たす。また、４０キロダルトンＰＥＧ複合体は、２０キロダルトンＰＥＧ複合体と比較し、僅かではあるが、延長されたＰＤ効果が確認された。
【０４０７】
図１４のデータから、次のことが示唆される。（ａ）ＧＬＰ-１は、ＰＥＧ化複合体からの拡散および加水分解によって、注射部位からマウス血液に放出される。（ｂ）リシン複合ＰＥＧ-ＧＬＰ１の血糖値降下活性は、不活性複合体の活性および対象複合体からのペプチドの明らかな生体内放出の組み合わせによるものと考えられる。
【０４０８】
図１５は、ＧＬＰ-１とＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（図では「ＰＥＧ２０-Ｈｉｓ-ＧＬＰ１」と記載）およびＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（図では「ＰＥＧ４０-Ｈｉｓ-ＧＬＰ１」と記載）の血糖値降下効果を示す。薬理学的（ＰＤ）測定から、ＧＬＰ-１はマウスから急速に除去されるが、ＰＥＧＧＬＰ-１複合体は、３から４日の時間をかけてペプチドを放出することが明らかである。また、４０キロダルトンＰＥＧ複合体は、２０キロダルトンＰＥＧ複合体と比較し、僅かではあるが、延長されたＰＤ効果が確認された。
【０４０９】
本データ（図１５）から、次のことが示唆される。（ａ）ＧＬＰ-１は、ＰＥＧ化複合体からの拡散および加水分解によって、注射部位からマウス血液に放出される。（ｂ）ヒスチジン複合体ＰＥＧ-ＧＬＰ１は活性ではなく、確認された血糖値降下活性降下活性は、複合体からのペプチド放出の結果である。
【０４１０】
本実験は、本明細書に記載のＰＥＧ化ＧＬＰ-１の１回の投与によって、４８時間以上の長時間糖尿病を制御可能であることを示す。また、ＧＬＰ-１に複合された場合のＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ試薬徐放性を示すする。さらに、ＧＬＰ-１は、Ｎ-末端でＰＥＧ化され、非経口投与のための生成物を提供することが可能であることを示す。
【０４１１】
実施例１１
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の生体内放出特性
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の生体内放出特性を特定した。
【０４１２】
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（モノＰＥＧ化ＧＬＰ-１構造）を実施例６にしたがって調製し、タンパク質の放出評価に使用した。
【０４１３】
Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の生体内放出特性を特定するための条件として、リン酸塩-緩衝化生理食塩水中２ｍｇ／ｍＬＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１（モノＰＥＧ化ＧＬＰ-１構造）、ｐＨ７．４、３７℃、サンプルを種々の時点で採取し、「遊離」または非複合ＧＬＰ-１の存在を試験することを含めた。ＧＬＰ-１の放出を、２１５ｎｍで逆相ＨＰＬＣによって観測した。
【０４１４】
図１６に、実験結果をグラフで示した。ここで、Ｙ＝Ａｔ／Ａｍａｘ（Ａｔは、時間ｔ（時間）における放出されたＧＬＰ-１のＨＰＬＣピーク面積、Ａｍａｘは、ＧＬＰ-１の最大放出に達した時点のＨＰＬＣピーク面積）である。反応速度論は、座標の線形性により一次反応を示すため、ｌｎ１／（１-Ｙ）＝ｋｔ（ｋは勾配、ｔ１／２＝ｌｎ２／ｋ）と結論づけられる。
【０４１５】
実施例１２
９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（３-（ｍＰＥＧ（１０，０００））カルバモイル-プロピル）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド
（または、「４，７-ＣＡＣ-ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ２０Ｋ-ＮＨＳ」）の調製
９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（３-（ｍＰＥＧ（１０，０００））カルバモイル-プロピル）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの合成を、以下の構造式４に図式的に示す。
【０４１６】
【化１６０】
2008544046.tif 000127
Ａ．７-（３-カルボキシ-プロピオニル）-４-フルオレンカルボン酸の調製
アルゴン浄化した乾燥丸底フラスコ中で、無水１，２-ジクロロエタン（６０ｍＬ）中に無水ＡｌＣｌ３（２６．９ｇ，０．２０２ｍｏｌ）を懸濁させた。４-フルオレンカルボン酸（１０．０ｇ，０．０４８ｍｏｌ）を、懸濁液に加えた。反応フラスコを室温浴に入れ、無水コハク酸（５．７２ｇ，０．０５７ｍｏｌ）を慎重に加えた。反応物を５時間撹拌し、その後０℃に冷却した。３Ｍ  ＨＣｌを少しずつ徐々に加え、反応を慎重に抑制した（注意！反応物は、ＨＣｌを急に加えると激しく反応する可能性がある）。最終的に十分混合された懸濁液は酸性であり、追加のＨＣｌ溶液に反応しなかった。有機溶媒を減圧下で除去し、生成物を濾過し、水でよく洗浄した。粗生成物を、温めたＮａＯＨ溶液（約＜１Ｍ  ＮａＯＨ）中に溶解、濾過し、濃縮ＨＣｌを加え沈殿させた。生成物を濾過し、水で洗浄し、その後Ｐ２Ｏ５の存在下、減圧下で乾燥させた。生成物として、淡黄色固体（１４．３ｇ，９７％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）８．４（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；８．２（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；８．０（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；４．１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．６（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）２．５（ＤＭＳＯ下、ＣＨ２）。
【０４１７】
Ｂ．７-（３-カルボキシ-プロピル）-４-カルボン酸フルオレンの調製
アルゴン浄化したフラスコ中で、７-（３-カルボキシ-プロピオニル）-４-フルオレンカルボン酸（１４．０ｇ，０．０４５ｍｏｌ）を、ジエチレングリコール（２００ｍＬ）中に懸濁させた。フラスコを室温油浴に入れ、その後ＮａＯＨ（１８ｇ，０．４５０ｍｏｌ）およびヒドラジン水和物８０％溶液（１３．６ｍＬ，０．２２３ｍｏｌ）を連続的に加えた。反応混合物を徐々に１１０℃に加熱し、約２時間還流させた。加熱過程で、水を除去し、反応温度を２００℃に上昇させた。３時間反応温度２００℃を保った後、反応物を約６０℃に冷却した。反応混合物を慎重に水（約１Ｌ）に注ぎ入れ、混合物を濃縮ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。生成物を濾過し、水で洗浄した。生成物を温めたＮａＯＨ溶液（０．５Ｍ）中に溶解し、ＨＣｌでｐＨ２に酸性化させることによって沈殿させた。生成物を濾過し、水で洗浄した。生成物として、黄色がかった白色固体（１０．９ｇ，８２％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）８．３（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；３．９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．７（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４１８】
Ｃ．９-ホルミル-７-（３-カルボキシ-プロピル）-４-フルオレンカルボン酸の調製
アルゴン浄化した還流冷却器付き乾燥フラスコ中で、７-（３-カルボキシ-プロピル）-４-フルオレンカルボン酸（４．０ｇ，０．０１３５ｍｏｌ）を、４０℃の無水ＤＭＦ（１２０ｍＬ）中に溶解した。ギ酸エチル（４０ｍＬ、無水Ｋ２ＣＯ３上に保存）を加えた後、カリウムｔｅｒｔ-ブトキシド９５％（１２．８ｇ、０．１０８ｍｏｌ、２分割にして添加）を加えた。溶解度を促進するため、無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）、無水ＴＨＦ（５ｍＬ）およびギ酸エチル（２５ｍＬ）を種々の間隔で加えながら、反応物を約４０℃から５０℃で４時間撹拌した。その後、反応物をさらに１７時間室温で撹拌した。ギ酸エチルを減圧下で蒸発させた。反応物を水（１５０ｍＬ）で反応抑制し、濃縮ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。生成物を、酢酸エチル（６００ｍＬ、その後２００ｍＬ）で２回抽出した。結合有機層を３回塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。未反応出発原料を一部含む粗生成物（４．７ｇ，〜１００％、純度８０％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）１１．４（ｓ，１Ｈ，ホルミル）；８．３−７．０（ｍ，７Ｈ，Ａｒ）；２．７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４１９】
Ｄ．９-ヒドロキシメチル-７-（３-カルボキシ-プロピル）-４-フルオレンカルボン酸の調製
アルゴン浄化したフラスコ中で、粗９-ホルミル-７-（３-カルボキシ-プロピル）-４-フルオレンカルボン酸（４．０ｇ，０．０１２３ｍｏｌ）を、無水メタノール（５０ｍＬ）中に溶解した。フラスコを室温浴中に入れ、水素化ホウ素ナトリウム（２．３ｇ，０．０６１５ｍｏｌ）を、反応物に少しずつ慎重に加えた（注意！可燃性のガスが発生する可能性がある）。反応物を２時間撹拌し、水素化ホウ素ナトリウムをさらに加えた（１．２ｇ，０．０３１ｍｏｌ）。さらに６時間後、反応物を少量の水で処理した。有機溶媒を減圧下で一部除去し、混合物を濃縮ＨＣｌで酸性化した。塩水を加え、生成物を酢酸エチル（３００ｍＬおよび1００ｍＬ）で２回抽出した。結合有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物（３．３ｇ，８３％）を、フラッシュ・クロマトグラフィー（５０：５０：２の酢酸エチル／クロロホルム／氷酢酸で溶離したシリカゲル６０A）で精製した。精製生成物として、橙色固体（１．７ｇ，４３％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．３（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；４．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）；２．８（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．４（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４２０】
Ｅ．９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（３-（ｍＰＥＧ（１０，０００））カルバモイル-プロピル）フルオレンの調製
無水トルエン（２５０ｍＬ）中、ｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）（Ｍｎ＝９，４１８；クロマトグラフィーにより精製、２５．８ｇ、０．００２６ｍｏｌ、「ｍＰＥＧ（１０ｋ）-ＮＨ２」とも表される）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下４５℃で共沸蒸留させた。固形物を、不活性雰囲気下、無水ＤＣＭ（ＣＨ２Ｃｌ２）（１３０ｍＬ）中に溶解した。無水ＤＭＦ（１２．５ｍＬ）中の、９-ヒドロキシメチル-７-（３-カルボキシ-プロピル）-４-フルオレンカルボン酸（０．３８ｇ，０．００１２ｍｏｌ）および無水Ｎ-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．３３ｇ，０．００２５ｍｏｌ）溶液を、定量的にＰＥＧ溶液（５ｍＬＤＭＦｔｏｒｉｎｓｅ）に加えた。その後、１，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．５４ｇ，０．００２６ｍｏｌ）を反応溶液に加えた。反応物を室温で２１時間撹拌し、溶媒を減圧下蒸発させた。濃厚なシロップ状物を、弱火で加熱しながら、乾燥ＩＰＡ（９００ｍＬ、徐々に加え）中に溶解した。室温でジエチルエーテル（４００ｍＬ）を加え、ＰＥＧ生成物を沈殿させた。沈殿物を１０℃まで１０分間冷却し、濾過し、低温ＩＰＡ（３００ｍＬ）、その後ジエチルエーテル（３００ｍＬ）で洗浄した。粗生成物（黄色がかった白色粉末）を高真空下乾燥させ、その後脱イオン水中に溶解した。ＰＥＧ溶液のイオン交換クロマトグラフィーを、ＰＯＲＯＳ媒体（５００ｍＬ）を使用して行い、水で溶離させた。中性ＰＥＧを含む画分を回収し、さらにＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ媒体（２００ｍＬ）で精製した。精製生成物中に、ｍＰＥＧ-ＮＨ２（１０，０００）またはモノＰＥＧ酸性生成物は含まれていなかった（ＨＰＬＣ分析）。収量１７ｇ（７１％）（置換率９５％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）：δ（ｐｐｍ）７．９（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；７．３（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；６．７（ｂｓ，１Ｈ，アミド）；６．２（ｂｓ，１Ｈ，アミド）；４．１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）；３．６（ｓ，ＰＥＧ骨格）；３．３（ｓ，６Ｈ，-ＯＣＨ３）；２．７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；１．９（水＋ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４２１】
Ｆ．９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（３-（ｍＰＥＧ（１０，０００））カルバモイル-プロピル）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
無水トルエン（５０ｍＬ）中、９-ヒドロキシメチル-４-（ｍＰＥＧ（１０，０００）-カルボキシアミド）-７-（３-（ｍＰＥＧ（１０，０００））カルバモイル-プロピル）フルオレン（２．９ｇ，０．０００１５ｍｏｌ）を、ロータリエバポレータを用いて、減圧下４５℃で共沸蒸留させた。固形物を無水ＤＣＭ（１５ｍＬ（すすぎ用１ｍＬ））中に溶解し、注射器で新たに調製したトリホスゲン（下部トラップで、反応物から過剰なホスゲンガスを捕捉した）（０．０４７ｇ，０．０００１６ｍｏｌ）および無水ピリジン（０．０１３ｇ、０．０００１６ｍｏｌ、溶液としてＣＨ２Ｃｌ２（〜０．９ｍＬ）に添加）溶液に移動した。１時間後、急速アルゴン流（室温を維持）を開始し、過剰なホスゲン（排出口の下部トラップを使用）を蒸発させた。アルゴン浄化３０分後、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（０．０９ｇ，０．０００７８ｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。無水ピリジン（０．０５９ｇ、０．０００７５ｍｏｌ、溶液としてＣＨ２Ｃｌ２（〜４．５ｍＬ）に添加）を加えた。アルゴン流を継続し、１．５時間後、殆どの反応溶媒が蒸発した。濃厚なシロップ状物を、無水ＩＰＡ（１５０ｍＬ）中に溶解し、室温で沈殿させた。沈殿物を濾過し、低温ＩＰＡおよびジエチルエーテル（３０ｍＬ（５ｍｇＢＨＴ含有））で洗浄した。残留溶媒を真空下蒸発させ、黄色がかった白色粉末を得た。ＨＰＬＣによって、収量２．７ｇ（９０％）、置換率７６％のＮＨＳ炭酸塩を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）７．９（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；６．８（ｂｓ，１Ｈ，アミド）；６．１（ｂｓ，１Ｈ，アミド）；４．７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；４．３（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）；３．６（ｓ，ＰＥＧ骨格）；３．３（ｓ，６Ｈ，-ＯＣＨ３）；２．７（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２）；２．７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．２（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４２２】
実施例１３
９-ヒドロキシメチル-２，７-（ビス-ｍＰＥＧ１０Ｋ-カルボキシアミド）-フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（２，７-Ｃ２-ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ２０Ｋ-ＮＨＳ）の調製のための中間体９-ヒドロキシメチル-２，７-フルオレンジカルボン酸の調製
９-ヒドロキシメチル-２，７-フルオレンジカルボン酸の合成を、以下の構造式５に図式的に表す。
【０４２３】
【化１６１】
2008544046.tif 000128
Ａ．２，７-フルオレンジカルボン酸の調製
アルゴン浄化したフラスコ中で、９-フルオレノン-２，７-ジカルボン酸（１０．０ｇ，０．０３７ｍｏｌ）を、ジエチレングリコール（７５ｍＬ）中に懸濁させた。フラスコを室温油浴に入れ、その後ＮａＯＨ（６．２ｇ，０．１５５ｍｏｌ）およびヒドラジン水和物８０％溶液（７．４ｍＬ，０．１２ｍｏｌ）を連続的に加えた。反応混合物を１１０℃に徐々に加熱し、約４時間還流させた。反応混合物を冷却し、慎重に水に注ぎ入れ、濃縮ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。生成物を濾過し、水で洗浄した。生成物を温めたＮａＯＨ溶液（０．５Ｍ、温かい）中に溶解し、ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、沈殿させた。生成物を濾過し、水で洗浄した。生成物として、黄色固体（９．０ｇ，９６％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）８．２（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；８．１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；８．０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；４．１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４２４】
Ｂ．２，７-フルオレンジカルボン酸ジベンジルエステルの調製
窒素浄化した乾燥フラスコ中で、２，７-フルオレンジカルボン酸（８．０ｇ，０．０３１ｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（４００ｍＬ）中に溶解した。無水ベンジルアルコール（８２ｍＬ，０．７８８ｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．５８ｇ，０．００４７ｍｏｌ）およびＥＤＡＣ塩酸塩（１６ｇ，０．０８２ｍｏｌ）を、反応混合物に室温で加えた。２４時間撹拌後、反応混合物を温め、十分希釈したＨＣｌ（１．５Ｌ）を加え反応を抑制した。懸濁液を冷却、濾過し、水で洗浄した。生成物を温めたアセトン（８００ｍＬ）中に溶解し、温めながら濾過した。濾液を、減圧下蒸発乾固した（収量５．９ｇ、４３％）（構造式５の「Ｂｚ」は、ベンジルを示す）。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）８．３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；８．２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；８．１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．５-７．４（ｍ，１０Ｈ，Ｂｚ）；５．４（ｓ，４ＨＣＨ２）；４．１（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）。
【０４２５】
Ｃ．９-ホルミル-２，７-フルオレンジカルボン酸ジベンジルエステルの調製
アルゴン浄化した乾燥フラスコ中で、２，７-フルオレンジカルボン酸ジベンジルエステル（３．０ｇ，０．００６５ｍｏｌ）を、室温で無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中に溶解した。ギ酸ベンジル（４．２ｍＬ、０．０３５ｍｏｌ、無水Ｋ２ＣＯ３上で保存）を加えた後、カリウムｔｅｒｔ-ブトキシド９５％（２．７ｇ，０．０２３ｍｏｌ）を加えた。反応物を３時間撹拌し、その後反応物に水を加え反応を抑制し、ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。有機溶媒を、一部減圧下で蒸発させた。生成物を、酢酸エチル（６００ｍＬ、その後２００ｍＬ）で２回抽出した。結合有機層を塩水で３回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物を、ヘキサンおよびメタノールで洗浄した（１．９ｇ，６０％）。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：d（ｐｐｍ）１１．９（ｓ，〜１Ｈ，ホルミル）；８．８（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；８．５（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；８．４（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；８．２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．５-７．４（ｍ，１０Ｈ，Ｂｚ）；５．４（ｓ，４Ｈ，Ａｒ）。
【０４２６】
Ｄ．９-ホルミル-２，７-フルオレンジカルボン酸の調製
Ｐａｒｒ水素化瓶（Ｐａｒｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  ＭｏｌｉｎｅＩＬ）に、９-ホルミル-２，７-フルオレンジカルボン酸ジベンジルエステル（３．０ｇ，０．００６１ｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（３５０ｍＬ）中に溶解した。２０％Ｐｄ／Ｃ（５０％含水）２０重量％（６００ｍｇ）を慎重に加えた後、Ｐａｒｒ瓶を、Ｐａｒｒ器具を用いて３回真空／充填を繰り返し、水素雰囲気を確保した。懸濁液を、２０から３０ｐｓｉ水素ガス下で約６０時間振動させ、その後残留水素を減圧下除去した。懸濁液を、セリット層を通して濾過し、さらにＴＨＦを加えすすぎ、蒸発させた。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）９．０（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；８．５から８．１（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）。
【０４２７】
Ｅ．９-ヒドロキシメチル-２，７-フルオレンジカルボン酸の調製
少量の９-ホルミル-２，７-フルオレンジカルボン酸（５-１０ｍｇ）試料を、少量のＴＨＦとともに水に溶解した。過剰な水素化ホウ素ナトリウムを加え、２時間反応させた。酸性になるまで１ＭＨＣｌを慎重に加えながら、反応を抑制した。生成物を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．４（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；８．２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；８．０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；４．２（ｔ，１Ｈ，ＣＨ）；４．０（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０４２８】
実施例１４
９-ヒドロキシメチル-２，７-ビス-（３-（ｍＰＥＧ１０Ｋカルバモイル-プロピル））フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（２，７-ＣＡ２-ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ２０Ｋ-ＮＨＳ）の調製のための中間体９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレンの調製
９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレンの合成を、以下の構造式６に図式的に示す。
【０４２９】
【化１６２】
2008544046.tif 000129
Ａ．２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピオニル）フルオレンの調製
アルゴン浄化した乾燥丸底フラスコ中で、無水ＡｌＣｌ３（９８ｇ，０．７３５ｍｏｌ）を、無水１，２-ジクロロエタン（１４０ｍＬ）中に懸濁させた。別のフラスコに、フルオレン（２３ｇ，０．１３８ｍｏｌ）を無水１，２-ジクロロエタン（１２５ｍＬ）中に溶解し、その後ＡｌＣｌ３懸濁液に加えた。反応フラスコを、室温浴に入れ、無水コハク酸（３４．５ｇ，０．３４５ｍｏｌ）を慎重に加えた。反応物を１６時間撹拌し、その後低温３Ｍ  ＨＣｌに徐々に加え、極めて慎重に反応を抑制した（注意！ＨＣｌを急に加えると、反応物が激しく反応する可能性がある）。最終的に十分混合された懸濁液は酸性であり、追加のＨＣｌ溶液に反応しなかった。有機溶媒を減圧下で除去し、生成物を濾過し、水でよく洗浄した。粗生成物を、温めたＮａＯＨ溶液（約＜１Ｍ  ＮａＯＨ）中に溶解、濾過し、濃縮ＨＣｌを加え沈殿させた。生成物を濾過し、水で洗浄し、その後Ｐ２Ｏ５の存在下、減圧下で乾燥させた。生成物として、淡黄色固体（４９．３ｇ，９７％）を得た。１Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）８．３（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；８．２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；８．１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；４．１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．５（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．８（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【０４３０】
Ｂ．２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレンの調製
アルゴン浄化したフラスコ中で、２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピオニル）フルオレン（１２．８ｇ，０．０３５ｍｏｌ）を、ジエチレングリコール（１５０ｍＬ）中に懸濁させた。フラスコを室温油浴に入れ、その後ＮａＯＨ（１４ｇ，０．３５ｍｏｌ）およびヒドラジン水和物８０％溶液（１３．１ｍＬ，０．２１ｍｏｌ）を連続的に加えた。反応混合物を徐々に１１０℃に加熱し、約２時間還流させた。反応温度を２００℃に上昇させ、その加熱過程で、水を除去した。３時間反応温度を２００℃に保った後、反応物を約６０℃まで冷却した。反応混合物を慎重に水（５００ｍＬ）に注ぎ入れ、混合物を濃縮ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。生成物を濾過し、水で洗浄した。生成物を温めたＮａＯＨ溶液（０．５Ｍ）中に溶解し、ＨＣｌでｐＨ２に酸性化させることによって沈殿させた。生成物を濾過し、水で洗浄した（収量１０．９ｇ、９２％）。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）１２．０（ｓ，２Ｈ，ＣＯＯＨ）；７．８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｓ，２Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；３．９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．７（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．３（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；１．８（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【０４３１】
Ｃ．２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレンジベンジルエステルの調製
窒素浄化した乾燥フラスコ中で、２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレン（３．０ｇ，０．００９ｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）中に溶解した。無水ベンジルアルコール（２３ｍＬ，０．２２ｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２７ｇ，０．００２２ｍｏｌ）およびＥＤＡＣ塩酸塩（４．５ｇ，０．０２３ｍｏｌ）を、反応混合物に室温で加えた。２１時間撹拌後、反応混合物を温め、十分希釈したＨＣｌ（４００ｍＬ）を加え反応を抑制した。懸濁液を冷却、濾過し、水で洗浄した。生成物を温めたアセトン中に溶解し、温めながら濾過した。濾液を、減圧下蒸発乾固した（収量３．８ｇ、７８％）。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）７．７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．４（ｍ，１２Ｈ，Ａｒ）；７．１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；５．１（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２）；３．８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．７（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．４（ｔ，４Ｈ，ＣＨ２）；１．９（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【０４３２】
Ｄ．９-ホルミル-２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレンジベンジルエステルの調製
アルゴン浄化した乾燥フラスコ中で、２，７-ジ（３-カルボキシ-プロピル）フルオレンジベンジルエステル（２．０ｇ，０．００３９ｍｏｌ）を、室温で無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）中に溶解した。ギ酸ベンジル（２．３ｍＬ、０．０１９ｍｏｌ、無水Ｋ２ＣＯ３上に保存）を加えた後、カリウムｔｅｒｔ-ブトキシド９５％（１．５ｇ，０．０１３ｍｏｌ）を加えた。反応物を４時間撹拌し、その後水を加え反応を抑制し、ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。有機溶媒を、一部減圧下で蒸発させた。生成物を、酢酸エチルで２回抽出した。結合有機層を、３回塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した．粗生成物を、ヘキサンで滴定した（一部ギ酸ベンジル残留）。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）１１．０（ｓ，〜１Ｈ，ホルミル）；８．０（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．９（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；７．６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；７．４から７．２（ｍ，Ｂｚ）；７．０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）；５．０（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．７（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）；２．４（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）；１．９（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【０４３３】
実施例１５
９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）-スルホン酸-フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドの調製
【０４３４】
【化１６３】
2008544046.tif 000130
アルゴン浄化した乾燥フラスコ中で、９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド（１ｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ無水（１０ｍＬ）中に溶解した。クロロスルホン酸（５０ｍＬトリフルオロ酢酸中０．０５ｍＬ、２．１ｍＬ）溶液を、反応混合物に加えた。数時間経過後、クロロスルホン酸（０．２８７ｍＬ）をさらに反応物に加え、５時間以上撹拌した。溶媒を減圧下蒸発させ、その後ＤＣＭ中に溶解した。溶媒を、再度減圧下蒸発させた。ＨＰＬＣによる分析によって、粗生成物にスルホン酸修飾構造の存在が実証された。１Ｈ-ＮＭＲ（ｄ６-ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）８．２（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨアミド）；７．６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；７．５（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）；７．２（ｔ，１Ｈ，Ａｒ）；６．７（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）；６．５（ｄ，１Ｈ，Ａｒ）；５．３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨアミド）；３．８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；３．５（ｓ）；３．３（ｂｓ，ＰＥＧ骨格）；２．５ｐｐｍ以下の不純物の転移の存在が、さらに粗生成物中に認められた。
【０４３５】
スルホン酸電子代替基を、本発明に含まれる９-ヒドロキシメチル-２，７-ジ（ｍＰＥＧ（２０，０００）-メチルアミド）フルオレン-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド以外のポリマー試薬（実験に記載のそれらポリマー試薬を含む）に加えることができる。
【図面の簡単な説明】
【０４３６】
【図１】図１は、実施例２に記載のように調製される、インシュリンと、ポリマー試薬との反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２】図２は、実施例２に記載のように調製されるＰＥＧ化１ｍｅｒ複合体のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３】図３は、実施例２に記載の分解性ＰＥＧ-インシュリン１ｍｅｒ複合体の分解研究（ｐＨ７．３５および３７℃で実施）の結果を示すグラフである。
【図４】図４は、実施例６に記載されるＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-ＧＬＰ-１反応混合物のＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析に対応する。レーン１：インビトロジェン社のマーク１２未着色スタンダード。レーン２：Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０Ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１反応混合物。
【図５】図５は、実施例６に記載の陽イオン交換クロマトグラフィーによる、モノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の精製の結果を示す。
【図６】図６は、ＧＬＰ-１の放出前と後のモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１のＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析に対応する（実施例６）。レーン１：インビトロジェン社のマーク１２未着色スタンダード。レーン２：イオン交換クロマトグラフィーによる精製後のモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体。レーン３：Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体からＧＬＰ-１を完全に放出後。
【図７】図７Ａ、７Ｂは、実施例６に記載されるように、イオン交換クロマトグラフィーによる精製後（図７Ａ）およびＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体からのＧＬＰ-１放出後（図７Ｂ）のモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体の逆相ＨＰＬＣ分析を示す。
【図８】図８は、実施例７に記載の陽イオン交換クロマトグラフィーによるモノＰＥＧ化Ｇ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１の精製の結果を示す。
【図９】図９は、ＧＬＰ-１放出前および放出後のモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１のＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析の結果を示す（実施例７）。レーン１：インビトロジェン社のマーク１２未着色スタンダード。レーン２：イオン交換クロマトグラフィーによる精製後のモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体。レーン３：Ｇ２ＰＥＧ２-Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体からのＧＬＰ-１放出後。
【図１０】図１０は、陽イオン交換クロマトグラフィーによるモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の精製を示す（実施例８）。
【図１１】図１１は、陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製されたモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１のＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析に対応する（実施例８）。レーン１：インビトロジェン社のマーク１２未着色スタンダード。レーン２から６：イオン交換クロマトグラフィーによる５回の個別の精製後のモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１複合体を含む分画。
【図１２】図１２は、陽イオン交換クロマトグラフィーによるモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の精製の結果を示す（実施例９）。
【図１３】図１３は、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１反応混合物および実施例９に記載の１回の陽イオン交換クロマトグラフィー精製からの分画のＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析を表す。レーン１：インビトロジェン社のマーク１２未着色スタンダード。レーン２：Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の反応混合物。レーン３-５：保持容量９．３７ｍＬでピークの分画。レーン６-１０：保持容量１５８．３ｍＬでピークから収集されるモノＰＥＧ化Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１の分画。
【図１４】図１４は、実施例１０に記載のｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与される場合の、ＧＬＰ-１、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１複合体、およびＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ４０ｋ-Ｌｙｓ-ＧＬＰ-１複合体の経時的な血糖降下効果を比較して示すプロットである。
【図１５】図１５は、実施例１０に記載のｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与される場合の、ＧＬＰ-１、Ｇ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体、およびＧ２ＰＥＧ２Ｆｍｏｃ２０ｋ-Ｎｔｅｒ-ＧＬＰ-１複合体の経時的な血糖降下効果を比較して示すプロットである。
【図１６】図１６は、実施例１１で実施された実験から得た結果のプロットである。
【図１】
2008544046.tif 000169
【図２】
2008544046.tif 000170
【図３】
2008544046.tif 000171
【図４】
2008544046.tif 000172
【図５】
2008544046.tif 000173
【図６】
2008544046.tif 000174
【図７】
2008544046.tif 000175
【図８】
2008544046.tif 000176
【図９】
2008544046.tif 000177
【図１０】
2008544046.tif 000178
【図１１】
2008544046.tif 000179
【図１２】
2008544046.tif 000180
【図１３】
2008544046.tif 000181
【図１４】
2008544046.tif 000182
【図１５】
2008544046.tif 000183
【図１６】
2008544046.tif 000184
【国際調査報告】
2008544046.tif 000185
2008544046.tif 000186
2008544046.tif 000187
2008544046.tif 000188
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