(57)【要約】眼病態を処置する方法は、１つまたはそれ以上の処置剤を個体に投与することを含んで成る。１つの態様において、方法は、眼病態に関連する視野欠損に個体が気付いていない時点で、個体に１つまたはそれ以上の処置剤を投与することを含んで成る。他の1つの態様において、方法は、網膜神経変性に関連する眼病態を有する個体に１つまたはそれ以上の処置剤を投与することを含んで成り、処置剤の投与は、網膜神経変性に関連する中枢神経系応答の低下を緩和するのに有効である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼病態を処置または眼病態を軽減する方法であって、
眼病態に関連する視野欠損に個体が気付いていない時点で、個体に処置剤を投与することを含んで成り、処置剤は眼病態の処置または眼病態の軽減に有効である方法。
【請求項２】
処置剤が眼圧降下に実質的に有効でない請求項１に記載の方法。
【請求項３】
処置剤が抗興奮毒性剤である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
処置剤がグルタミン酸受容体阻害剤を含む請求項１に記載の方法。
【請求項５】
処置剤がＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
処置剤が少なくとも１つのアダマンタン誘導体、その塩またはそれらの混合物を含む請求項１に記載の方法。
【請求項７】
処置剤が、メマンチン、アマンタジン、リマンタジン、それらの塩およびそれら混合物から成る群から選択する少なくとも１つの剤を含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
個体の視野欠損が約８０％未満である時点で処置剤を個体に投与する請求項１に記載の方法。
【請求項９】
個体の視野欠損が約４０％未満である時点で処置剤を個体に投与する請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
個体の視野欠損が約２０％未満である時点で処置剤を個体に投与する請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
個体の視野欠損が約１０％未満である時点で処置剤を個体に投与する請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
処置剤が、高眼圧を含む眼病態の処置に有効である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
眼病態が網膜神経変性状態である請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
眼病態が緑内障である請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
眼病態が無症候性または症候性緑内障である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
眼病態が緑内障以外の病態を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
処置剤を長期的に投与する請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
処置剤を、全身的デリバリー、局所的デリバリー、眼内デリバリー、経口デリバリーおよびそれらの組み合わせから成る群から選択するデリバリー経路により投与する請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
処置剤の投与が、眼病態による個体のさらなる視力低下を軽減する予防的手段として有効である請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
処置剤の投与が、個体の視野欠損を軽減するのに有効である請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
処置剤の投与が、眼刺激に対する応答における視覚誘発電位の低下の緩和に有効であり、該低下は眼病態による反応である請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
処置剤の投与が、個体の中枢神経系の少なくとも１つの視覚ニューロン経路においてニューロン成長を促進するのに有効である請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１つの視覚ニューロン経路が眼球外ニューロン経路である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
処置剤の投与が、初期の網膜神経変性疾患の処置に有効である請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
処置剤がＮＭＤＡ受容体阻害剤であり、ＮＭＤＡ受容体阻害剤の長期的投与が、個体の生存網膜神経節細胞から中枢神経系の少なくとも１つの中枢視覚領への視覚シグナル伝達を向上するのに有効である請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
処置剤の投与が、個体への処置剤の初期投与後約１箇月から約１０年の範囲の期間にわたり、個体の視野欠損を抑制するのに有効である請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
期間が約１箇月から約５年の範囲である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
期間が約１箇月から約３年の範囲である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
期間が約１箇月から約１年の範囲である請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
眼病態を処置する方法であって、
網膜神経変性に関連する眼病態を有する個体に処置剤を投与することを含んで成り、処置剤の投与は、網膜神経変性に関連する中枢神経系応答の低下を緩和するのに有効である方法。
【請求項３１】
処置剤が眼圧降下に実質的に有効でない請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
処置剤が抗興奮毒性剤である請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
処置剤がグルタミン酸受容体阻害剤を含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
処置剤がＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
処置剤が少なくとも１つのアダマンタン誘導体、その塩またはそれらの混合物を含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
処置剤が、メマンチン、アマンタジン、リマンタジン、それらの塩およびそれら混合物から成る群から選択する少なくとも１つの剤を含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
眼病態が高眼圧を含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３８】
眼病態が網膜神経変性状態である請求項３０に記載の方法。
【請求項３９】
眼病態が無症候性または症候性緑内障である請求項３０に記載の方法。
【請求項４０】
眼病態が緑内障以外の病態である請求項３０に記載の方法。
【請求項４１】
処置剤を長期的に投与する請求項３０に記載の方法。
【請求項４２】
処置剤を、全身的デリバリー、局所的デリバリー、眼内デリバリー、経口デリバリーおよびそれらの組み合わせから成る群から選択するデリバリー経路により投与する請求項３０に記載の方法。
【請求項４３】
処置剤の投与が、眼刺激に対する応答における視覚誘発電位の低下の緩和に有効であり、該低下は眼病態による反応である請求項３０に記載の方法。
【請求項４４】
該処置剤の投与を受けていない実質的に同じ眼病態を有する別の個体の視覚誘発電位の低下と比較して、該低下を緩和する請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
処置剤の投与が、個体の中枢神経系の少なくとも１つの視覚ニューロン経路においてニューロン成長を促進するのに有効である請求項３０に記載の方法。
【請求項４６】
ニューロン成長が眼球外視覚ニューロン経路において起こる請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
処置剤の投与が、初期の網膜神経変性疾患の処置に有効である請求項３０に記載の方法。
【請求項４８】
処置剤がＮＭＤＡ受容体阻害剤であり、ＮＭＤＡ受容体阻害剤の長期的投与が、個体の生存網膜神経節細胞から中枢神経系の少なくとも１つの中枢視覚領への視覚シグナル伝達を向上するのに有効である請求項３０に記載の方法。
【請求項４９】
眼の硝子体におけるグルタメート濃度が異常に上昇する前の時点で、処置剤を個体に投与する請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５０】
個体の眼内グルタメート濃度が亜毒性であるときに、処置剤を個体に投与する請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
緑内障処置を受ける前の個体に処置剤を投与する請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５２】
眼濾過手術を受けていない個体に処置剤を投与する請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５３】
投与が、眼病態による網膜神経節損失を実質的に軽減することなく、視覚誘発皮質応答を保存するのに有効である請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５４】
処置剤を長期的に投与し、投与が、生存網膜神経節細胞から中枢神経系の少なくとも１つの中枢視覚領への電気シグナル伝達を向上するのに有効である請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５５】
処置剤の投与が、中枢神経系内の損傷に対する適応反応を増強するのに有効である請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５６】
処置剤の投与が、検出可能な視野欠損の防止に有効である請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５７】
処置剤がアダマンタン系神経保護アミンである請求項１または３０に記載の方法。
【請求項５８】
処置剤を、メマンチン、その塩およびそれらの混合物を含んで成る群から選択する請求項１または３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、処置剤を用いて処置効果を提供する方法に関する。本発明はとりわけ、個体（すなわちヒトまたは動物）の眼の病態をその初期において処置する方法、および眼の損傷または障害に対する中枢神経系（ＣＮＳ）の応答を改変する方法であって、処置剤を個体に投与することによる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑内障は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）体の障害および視神経の変性によって特徴付けられる眼疾患群である。緑内障は世界的に失明の主因の一つである。緑内障患者においては、網膜神経節細胞の神経インパルス伝達能力が徐々に失われる。その結果、視力が衰えるが、それはしばしば非常に緩やかである故に、障害が重篤になるまで緑内障患者が視力低下に気付かない。緑内障には明白な症状が少ないので、早期発見が困難である。
【０００３】
緑内障検査のための一つのアプローチは、眼圧計を用いる眼圧（ＩＯＰ）測定である。この検査は、高眼圧が網膜神経節細胞層を損傷しうるという概念に基づく。しかし実際には、眼圧が信頼性のある緑内障指標であると証明されてはいない。しかも、一部の緑内障患者ではＩＯＰは正常範囲内にある。それにもかかわらず、そのような患者に、緑内障に典型的な視野欠損が見られる。
【０００４】
もう一つの緑内障検査は、網膜の様々な部分に光を当てて行う視野検査である。光が見えるかを患者に尋ねることによって、網膜感受性のマップを作ることができる。この視野検査は視神経機能をより直接的に調べることができるので、眼圧測定検査よりも正確な緑内障指標となる。
【０００５】
高眼圧または正常眼圧の患者に対する処置は、眼圧が「正常」であっても、ＩＯＰの降下に向けられる。しかし、従来の緑内障処置は、無症候性緑内障と症候性緑内障とを区別するものではない。これは、初期の緑内障の診断が困難であることによるものでありうる。
【０００６】
網膜細胞を処置するために神経保護剤を使用することが知られている。例えば米国特許第５９２２７７３号および第６４８２８５４号（Liptonら）には、グルタミン酸誘発興奮毒性を軽減しうる化合物を、該興奮毒性の軽減をもたらすのに有効な濃度で投与することが開示されている。米国特許第６５７３２８０号（Dreyer）には、増殖性硝子体網膜症の防止のため、抗興奮毒性剤（例えばグルタミン酸受容体アンタゴニスト）およびカルシウム遮断剤が開示されている。米国特許第６５７３２８０号には、増殖性硝子体網膜症処置の促進のためにグルタミン酸誘発網膜細胞移動を軽減するよう、患者に化合物を投与することが開示されている。
【０００７】
また、メマンチンの神経保護作用が多くの文献に記載されている。下記文献を参照されたい：Woldemussie, "Neuroprotection of retinal ganglion cells in experimental models of glaucoma", Minerva Oftalmol, 42(2):71-8 (2000); Wheeler, "Experimental studies of agents with potential neuroprotective properties", Acta Ophthalmol Scand, 77(229):27-28 (1999); Schuettaufら, "Effects of anti-glaucoma medications on ganglion cell survival: the DBA/2J mouse model", Vision Res, 42(20):2333-7 (2002); WoldeMussieら, "Neuroprotective effects of memantine in different retinal injury models in rats", J Glaucoma 11(6):474-480 (2002); およびHareら, "Efficacy and safety of memantine, an NMDA-Type Open-Channel Blocker, for reduction of retinal injury associated with experimental glaucoma in rat and monkey", Surv Ophthalmol 45(Suppl 3): S284-S289 (2001)。
【０００８】
多くの場合、緑内障処置のために処置剤が患者に投与されるのは、患者が実質的な視力低下を経験した後である。そのような場合、さらなる視力低下を防止するか、または緑内障を充分に処置することが困難でありうる。
すなわち、眼の病態、例えば緑内障を包含する高眼圧に関連する病態を処置するための改善された方法が依然必要とされている。
【発明の開示】
【０００９】
＜発明の概要＞
処置剤を用いる新規な処置方法を発明した。本発明の方法は、１つまたはそれ以上の眼病態の処置において所望の処置効果を提供するために、ヒトまたは動物に１つまたはそれ以上の処置剤を全身的投与（例えば経口投与）することを含んで成る。本発明の方法は、投与を疾患の初期に行えば眼病態に関連するさらなる視力低下を効果的に防止することができ、および／または眼病態に通例関連する中枢神経系の視覚応答低下を軽減することができる。
【００１０】
一態様において、眼病態を処置または眼病態を軽減する方法は、該眼病態に関連する視野欠損に個体が気付いていない時点で、個体に処置剤または処置成分を投与することを含んで成る。処置剤は、眼病態の処置または眼病態の軽減に有効である。
【００１１】
他の一態様において、眼病態を処置する方法は、網膜神経変性に関連する眼病態を有する個体に処置剤または処置成分を投与することを含んで成る。処置剤の投与は、網膜神経変性に関連する中枢神経系応答の低下を軽減するのに有効である。
【００１２】
本発明の処置剤は、抗興奮毒性剤、例えばグルタミン酸受容体アンタゴニストでありうる。本発明の処置剤は、全身的に投与した場合、血液脳関門および／または血液網膜関門を通過して、望ましくない副作用または毒性を殆ど伴わずに１つまたはそれ以上の処置効果を提供することができる。ある種の方法においては、処置剤を、メマンチン（１−アミノ−３,５−ジメチルアダマンタン）、その塩およびそれらの混合物から成る群から選択する。
【００１３】
本書に記載する特徴および２つまたはそれ以上の特徴の組み合わせはいずれも、そのような組み合わせに含まれる特徴が相互に矛盾しない限り、本発明の範囲に包含される。さらに、いずれかの特徴または特徴の組み合わせは、本発明のいずれかの態様から特別に排除される場合がある。
本発明の前記態様および他の態様ならびに利点を、以下の詳細な説明、実施例、および特許請求の範囲に記載する。
【００１４】
＜詳細な説明＞
本発明の方法は、ある種の処置剤または処置成分、例えば抗興奮毒性剤または神経保護剤を使用して所望の処置効果を提供する。１つまたはそれ以上の眼病態（個体の片眼または両眼の疾患および障害を包含する）を処置するために、個体、例えばヒトまたは動物に処置剤を投与する。本発明の方法は、眼病態に関連する１つまたはそれ以上の症候を軽減し得、眼病態に関連するさらなる視力低下を防止しうる。
【００１５】
本発明において「抗興奮毒性剤」とは、グルタミン酸誘発細胞毒性を軽減または防止する剤である。
本発明において「神経保護剤」とは、ニューロン変性またはニューロン死を軽減または防止する剤である。
【００１６】
本発明において「処置」とは、１つまたはそれ以上の眼病態の１つまたはそれ以上の症候を治療、防止、軽減および／または緩和することを意味する。したがって、処置は個体の予防的処置を包含する。
【００１７】
本発明において「眼病態」とは、個体の１つまたはそれ以上の眼の疾患および障害を包含する。眼病態は通例、例えば個体の視覚に負に作用することによるかまたは個体に痛みを引き起こすことによって、個体の健康に負の影響を及ぼすものである。例えば、緑内障のような眼病態は、視力低下、眼圧上昇、網膜損傷などに関連しうる。
【００１８】
本発明の方法は、１つまたはそれ以上の眼病態を処置するために、１つまたはそれ以上の処置剤を個体に投与することを含んで成る。処置剤の投与は、剤の経口、局所、眼内投与、または他の全身的経路による投与、例えば静脈内注射、筋肉内注射などを包含しうる。処置剤は通例、薬学的使用に適当な組成物、例えば注射可能な組成物、または経口および／または局所投与に適当な錠剤、カプセル剤、滴剤などとして投与する。
【００１９】
本発明の方法において使用する処置剤の少なくとも１つは、抗興奮毒性剤である。抗興奮毒性剤を、眼病態処置に有効でありうる１つまたはそれ以上の処置剤と共に投与しうる。例えば、抗興奮毒性剤を、個体の眼圧降下に有効な剤とほぼ同時に投与しうる。抗興奮毒性剤は、過剰なグルタメートの濃度または量によって誘発される毒性作用を軽減するので、神経保護剤であると理解されうる。本発明の方法において有用な抗興奮毒性剤は、眼内カルシウム濃度の過剰を防止または軽減する剤でありうる。すなわち、本発明の開示によると、抗興奮毒性剤は、カルシウムチャネル阻害剤、例えばカルシウムチャネル遮断剤およびアンタゴニスト、ならびにグルタミン酸受容体阻害剤、例えばグルタミン酸受容体アンタゴニストまたは遮断剤を包含する。本発明において「阻害剤」とは、チャネルまたは受容体−チャネル複合体を介するイオン流通のような活性を低減する剤を意味する。阻害剤は、チャネルもしくは受容体に直接結合することによって作用しうるか、またはチャネルもしくは受容体活性に影響を及ぼす１つもしくはそれ以上のパラメータに影響を及ぼすことによって間接的に作用しうる。
【００２０】
ある種の本発明方法においては、抗興奮毒性剤は、グルタミン酸受容体のＮ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）サブタイプの阻害剤である。換言すれば、この抗興奮毒性剤はＮＭＤＡ受容体アンタゴニストである。
【００２１】
ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは通例、ＮＭＤＡ受容体複合体により仲介されるニューロン損傷を軽減する剤である。本発明の方法に有用なＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの例は、米国特許第５９２２７７３号、第６４８２８５４号、および第６５７３２８０号に記載されている。すなわち、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、次のものを包含する：ＮＭＤＡ受容体チャネル遮断剤（例えばＮＭＤＡ受容体チャネルを遮断するよう非競合的に作用するアンタゴニスト）；受容体アンタゴニスト（例えばＮＭＤＡまたはグルタメートの結合部位において作用するのに、ＮＭＤＡまたはグルタメートと競合するアンタゴニスト）；グリシンコアゴニスト部位または複数の調節部位のいずれか、例えば亜鉛部位、マグネシウム部位、酸化還元調節部位またはポリアミン部位に作用する剤；あるいはＮＭＤＡ受容体刺激の下流効果を阻害する剤、例えばＮＭＤＡまたはグルタメート刺激によるタンパク質キナーゼＣ活性化の活性化を阻害する剤、抗酸化剤、およびホスファチジル代謝を低下する剤。抗興奮毒性剤のいくつかの例は、アマンタジン誘導体、その塩およびそれらの組み合わせを包含する。例えば、アマンタジン誘導体は、メマンチン、アマンタジンおよびリマンタジンでありうる。他の抗興奮毒性剤は、ニトログリセリン、デキストルファン（dextorphan）、デキストロメトルファンおよびＣＧＳ−１９７５５を包含する。いくつかの化合物は次表に挙げるものを包含する。
【００２２】
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【００２３】
2008507588.tif 000004
【００２４】
2008507588.tif 000005
【００２５】
抗興奮毒性であると理解され、本発明の方法に有用でありうる他の剤は、電位依存性カルシウムチャネルアンタゴニスト、および非ＮＭＤＡ受容体（前記ＮＭＤＡ受容体複合体ではないタイプのグルタミン酸受容体）のアンタゴニストを包含する。そのような非ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、当業者に理解される通り、イオンチャネル型グルタミン酸受容体を遮断するか、または代謝型グルタミン酸受容体と相互作用する剤を包含する。他の抗興奮毒性剤は、細胞からのグルタメート放出を制限または低減するよう作用し、それによって興奮性神経毒性過程においてグルタミン酸受容体の上流に作用しうる。さらに他の剤は、グルタミン酸受容体刺激の下流作用（例えば細胞膜グルタミン酸受容体とのグルタメート相互作用による細胞内変化）を遮断することによって作用し得、例えば膜グルタミン酸受容体の刺激に続く細胞内カルシウムの増加を遮断する剤（例えばダントロレン）でありうる。
【００２６】
本発明において使用する処置剤は好ましくは、血液脳関門または血液網膜関門を通過しうるものである。そのような剤は、経口、静脈内または局所投与し、介在関門（血液脳関門を包含する）を通過して網膜神経節細胞に到達することができる。血液脳関門を自由に通過しない処置剤は、眼内投与、例えば硝子体内注射による眼内投与などによって、網膜にデリバーしうる。血液脳関門通過能が中程度の剤の場合、必要な用量および他の要因に応じて投与様式を変更しうる。
【００２７】
ある種の本発明方法において、処置剤は下記式で示されるアダマンタンを含む：
【化１】
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【００２８】
アダマンタン系アミンは、アダマンタンに直接的または間接的に結合またはカップリングしたアミンを有する化合物である。言い換えると、アダマンタンはアミンの窒素に直接結合していてもよいし、1つ以上の原子からなる連結基がアダマンタンをアミンに結びつけていてもよい。アダマンタンは追加置換基、例えばメチル基または小さいアルキル基をも持っていてもよい。アダマンタンの基本かご構造および1つ以上の置換基を持つ部分を、「アダマンチル」部分という。「アミン」という用語は、当技術分野で一般に理解されているとおり、分子にも部分または官能基にも広く適用されると理解すべきであり、1級アミン、2級アミン、または3級アミンであってよい。
【００２９】
決して発明の範囲を限定するつもりはないが、アダマンタン系神経保護アミンであり、かつアダマンチル部分およびアミン部分を含む神経保護化合物でもある化合物として、以下の構造を持つアマンタジン、リマンタジン、およびメマンチンの3つが挙げられる：
【化２】
2008507588.tif 000007
【００３０】
本明細書で使用する用語「メマンチン」、「アマンタジン」および「リマンタジン」は、遊離塩基型のアミン、または遊離塩基に酸を加えることによって調製することができるさまざまな塩のいずれかを指す。医薬組成物または眼用組成物中に使用されるメマンチンの量は当業者の能力の範囲内で十分に決定することができる。メマンチンの「有効」量とは、メマンチンまたはメマンチンと同様の作用を有することが期待される他の活性成分を含まない同様の組成物または方法と比較して、検出可能な作用を持つような量である。
【００３１】
本明細書においてメマンチンの濃度に言及する場合、濃度に関する数値は、メマンチンの使用時の形態とは無関係に、遊離塩基の濃度であると理解される。メマンチンが有効である濃度または量は広範囲に及ぶので、本発明に使用するメマンチンの濃度または量は変動しうる。ある方法では、組成物が、0.05〜5％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は、0.05〜2％のメマンチンを含有しうる。ある組成物は0.05〜2.5％のメマンチンを含有しうる。別の組成物は0.2〜3％のメマンチンを含有しうる。ある組成物は0.1〜2％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は0.5〜2％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は、0.5〜3.5％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は0.3〜1.5％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は0.5〜1.3％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は0.1〜1％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は約0.5〜1％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は約0.5％のメマンチンを含有しうる。他の組成物は約1％のメマンチンを含有しうる。
【００３２】
本発明の方法に関し、処置剤はアダマンタン系神経保護アミンでありうる。例えば、処置剤は、メマンチン、アマンタジン、リマンタジン、それらの塩およびそれらの混合物から成る群から選択する剤でありうる。ある種の方法においては、処置剤はメマンチン、その塩およびそれらの混合物を含む。
【００３３】
本発明の方法に有用な処置剤は、Sigma Chemicals（ミズーリ州セントルイス）の様な会社から購入しうるか、または当業者によく知られた従来の化学合成方法を用いて合成しうる。
【００３４】
抗興奮毒性剤（例えばグルタミン酸受容体阻害剤）などの候補を、ルーチンなスクリーニングアッセイによって評価しうる。例えばそのような剤がインビトロでグルタミン酸受容体に結合し、グルタメート仲介電気シグナルを抑制する能力を、電気生理学的方法または本発明の実施例に記載する方法によって試験しうる。抗興奮毒性剤はまた、他の抗興奮毒性剤との、構造または官能基類似性に基づいて決定することもできる。
【００３５】
本明細書中に記載するように、個体の眼、例えば眼の網膜、または脳もしくは脳の一部に処置剤をデリバーするのに有効な任意の方法（当業者に知られた従来の方法を包含する）を用いて、処置剤を個体に投与しうる。処置剤を、注射または経口投与しうる液体組成物、例えば溶液、懸濁液またはエマルジョンとして投与しうる。例えば、処置剤を、水性液体組成物、非水性液体組成物、または油含有エマルジョン（例えば水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョン）中に配合しうる。あるいは組成物は、個体に処置剤の全身的デリバリーを提供するように摂取しうる錠剤またはカプセル剤の形態でありうる。すなわち、本発明の方法に使用する処置剤は、局所、経口、直腸または非経口（例えば静脈内、皮下または筋肉内）経路、または他の経路で投与しうる製剤または組成物中に配合しうる。
【００３６】
組成物は従来の薬学的方法で調製しうる。そのような方法は、処置剤を医薬担体または賦形剤と組み合わせる工程を含んで成りうる。通例、製剤を調製するのに、処置剤を担体または賦形剤と均一に組み合わせる。要すれば処置剤を単一の単位または単一の投与量組成物中に配合しうる。
【００３７】
錠剤は、場合により１つまたはそれ以上の補助成分と共に圧縮または成型することによって製造しうる。圧縮錠剤は、粉末または顆粒状の処置剤および場合により結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、表面活性剤または分散剤を、適当な機械で圧縮することによって製造しうる。成型錠剤は、粉末状化合物を不活性液体希釈剤で湿潤させた混合物を、適当な機械で成型することによって製造しうる。錠剤に場合によりコーティングを施し、また刻み目を入れることができ、処置剤を遅延放出または徐放するよう調製することもできる。
【００３８】
口腔に局所投与するのに適当な組成物は、香味基剤（通例スクロースおよびアラビアガムまたはトラガカント）中に処置剤を含有するロゼンジ；不活性基剤（例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアガム）中に活性成分を含有する香錠を包含する。
【００３９】
皮膚に局所投与するのに適当な組成物は、投与する処置剤を薬学的に許容しうる担体中に含有する軟膏、クリーム、ゲルおよびペーストとして供しうる。好ましい局所デリバリーシステムは、投与する処置剤を含有する経皮パッチである。
【００４０】
非経口投与に適当な組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、制菌剤、および組成物を意図する被投与体の血液と等張にするための溶質を含有しうる、水性および非水性の滅菌注射液剤；ならびに懸濁剤および増粘剤を含有しうる、水性および非水性の滅菌懸濁液剤を包含する。該組成物を単位用量または複数用量の容器（例えば密閉アンプルおよびバイアル）に入れて供することができ、また、滅菌液体担体（例えば注射用水）を使用直前に加えるだけでよい凍結乾燥状態で貯蔵しうる。
【００４１】
好ましい単位用量製剤は、投与成分を、上記のような１日用量もしくは単位１日サブ用量で、またはその適当なフラクションとして含有するものである。
本発明において有用な組成物は、特に先に述べた成分に加えて、組成物の種類に応じた他の従来の剤をも含有しうると理解すべきである。例えば経口投与に適当なそのような剤は香味剤を包含しうる。
【００４２】
処置剤の正確な処方および用量は、投与経路、個体の大きさおよび個体の健康状態を包含する（それらに限定されない）、当業者に知られた多くの要因に依存する。通例、処置剤の１日当たりの有効用量は、0.01〜1000mg／kgでありうる。例えば経口投与法において処置剤用量は約0.01〜100mg／kg／日でありうる。ある種の方法において、処置剤を0.1〜約10mg／kg／日の量で投与しうる。本発明の実施例においては、処置剤がメマンチンで、それを約4mg／kgの用量で経口投与した。
【００４３】
ある種の態様、例えば液体組成物を使用する方法においては、眼用組成物には、pHを最適な快適性のために約6〜8に維持するように緩衝剤を含めることが有用でありうる。使用する緩衝剤としては、当業者に知られているものが挙げられ、限定するわけではなが、その例の一部として、酢酸、ホウ酸、炭酸、クエン酸、およびリン酸緩衝剤が挙げられる。溶解物質濃度を所望の等張性範囲に調節するために、浸透圧調節剤、例えばグリセリン、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムおよび他の電解質を眼用組成物中に使用しうる。界面活性剤、例えばポリソルベート、ポロキサマー、アルコールエトキシレート、エチレングリコール-プロピレングリコールブロックコポリマー、脂肪酸アミド、アルキルフェノールエトキシレート、またはリン脂質も、眼用組成物中に使用しうる。キレート剤も、保存剤の有効性を高めるように眼用組成物中に使用することができる。有用なキレート剤の例として、エデト酸塩、例えばエデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、およびエデト酸二カリウムが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００４４】
本発明の方法による処置剤投与は、１つまたはそれ以上の眼病態の１つまたはそれ以上の症候を処置する、すなわち防止、軽減または緩和するのに有効である。本発明の方法により処置しうる眼病態の例は下記のものを包含するが、それに限定されない：
黄斑／網膜変性：非滲出性加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、滲出性加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、脈絡膜新血管形成、糖尿病性網膜症、Acute Macular Neuroretinopathy、中心性漿液性脈絡網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫。
【００４５】
ブドウ膜炎／網膜炎／脈絡膜炎：急性多発性斑状網膜色素上皮症、ベーチェット病、Birdshot Retinochoroidopathy、感染症（梅毒、ライム病、結核、トキソプラズマ症）、中間部ブドウ膜炎（扁平部炎）、多病巣性脈絡膜炎、多発性消失性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、眼サルコイドーシス、後部強膜炎、匍行性脈絡膜炎、網膜下線維症およびブドウ膜炎症候群、原田症候群。
【００４６】
血管疾患／滲出性疾患：コーツ病、傍中心窩毛細血管拡張症、乳頭静脈炎、Frosted Branch Angitis、鎌状赤血球網膜症および他の異常血色素症、網膜色素線条、家族性滲出性硝子体網膜症。
外傷性／外科的：交感性眼炎、ブドウ膜炎網膜疾患、網膜剥離、外傷、レーザー、ＰＤＴ、光凝固、術中の血流低下、放射線網膜症、骨髄移植網膜症。
増殖性疾患：増殖性硝子網膜症および網膜上膜、増殖性糖尿病網膜症、未熟児網膜症（水晶体後繊維増殖症）。
【００４７】
感染性疾患：眼ヒストプラズマ症、眼トキソカリア症、推定眼ヒストプラズマ症候群（ＰＯＨＳ）、眼内炎、トキソプラズマ症、ＨＩＶ感染に関連する網膜疾患、ＨＩＶ感染に関連する脈絡膜疾患、ＨＩＶ感染に関連するブドウ膜炎疾患、ウイルス性網膜炎、急性網膜壊死、進行性網膜外層壊死、真菌性網膜疾患、眼梅毒、眼結核、広汎性片眼性亜急性神経網膜炎、蝿蛆症。
【００４８】
遺伝性疾患：網膜ジストロフィーを伴う全身性疾患、先天性固定夜盲症、錐体ジストロフィー、ベスト病、網膜色素上皮のパターンジストロフィー、Ｘ連鎖網膜分離症、Sorsby眼底ジストロフィー、良性同心性黄斑症、Bietti's Crystalline Dystrophy、弾性線維性仮性黄色腫、オスラー・ウェーバー症候群。
【００４９】
網膜裂傷／裂孔：網膜剥離、黄斑円孔、巨大網膜裂傷。
腫瘍：腫瘍、固形腫瘍、腫瘍転移、良性腫瘍、例えば血管腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫に関連する網膜疾患、ＲＰＥの先天性肥大、後部ブドウ膜黒色腫、脈絡膜血管腫、脈絡膜骨腫、脈絡膜転移、網膜および網膜色素上皮の複合過誤腫、網膜芽腫、眼底の血管増殖性腫瘍、網膜星細胞腫、眼内リンパ腫。
【００５０】
その他：Punctate Inner Choroidopathy、急性後部多発性小板状色素上皮症、近視性網膜変性、急性網膜色素上皮炎、眼の炎症および免疫疾患、眼血管機能異常、角膜移植片拒絶、新生血管緑内障、閉塞隅角緑内障、原発性開放隅角緑内障、偽落屑緑内障など。
【００５１】
ある種の本発明方法においては、眼病態に視野欠損が関連する。例えば、視野欠損（部分的欠損または完全な欠損を包含する）が、眼病態の症候でありうるか、または眼病態の原因でありうる。例えば高眼圧を伴う眼病態は、個体の視野の欠損または視野サイズの縮小をもたらしうる。そのような病態の一例は緑内障である。本発明方法により処置するいくつかの眼病態は、網膜神経変性病態、例えば疾患または障害を包含する。
【００５２】
本発明の一態様においては、眼病態を処置する方法は、個体が視野欠損に気付いていない時点で、１つまたはそれ以上の処置剤を個体に投与することを含んで成る。視野欠損は眼病態に関連する。すなわち、処置剤の投与は眼病態を緩和すると理解しうる。
【００５３】
例えば、患者は視野欠損に気付かないことがあるが（例えば患者は視力が正常であると思っているが）、視野欠損が顕著になるかまたは患者に自覚されるようになる前に医師が初期段階の眼病態の診断を下しうる場合がある。すなわち、眼病態が緑内障である場合、個体または患者は、緑内障の疑いのある者、すなわち緑内障の初期段階にあると疑われるか、または緑内障を進行する傾向のある個体であると理解しうる。高リスクで緑内障が疑われる者、例えば高眼圧であり、および／または陥凹の疑いを示す個体が、正常なSita−Standard視野を有しうる。処置剤は、前記の抗興奮毒性剤、例えばメマンチン、その塩およびそれらの混合物を包含する任意の処置剤でありうる。
【００５４】
本発明の方法によると、個体の視野欠損が約８０％未満の時点で処置剤を投与しうる。ある種の方法においては、個体の視野欠損が約４０％未満の時点で処置剤を投与する。例えば、個体の視野欠損が約２０％未満（例えば約１０％未満）の時点で処置剤を投与しうる。ある種の態様においては、本発明の方法は、検出可能な視野欠損を防止するのに有効である。検出可能な視野欠損の防止は、中枢神経系、例えば脳幹、視床および／または皮質における１つまたはそれ以上の視覚応答の保存に関係付けることができる。
【００５５】
本明細書中で述べるように、眼病態は高眼圧を含むかまたはそれに関連しうる。例えば、本発明の方法を緑内障処置のために実施しうる。本明細書中で述べるように、患者が視野欠損に気付く前に処置剤を投与するので、本発明の方法は無症候性緑内障または症候性緑内障のいずれの処置にも有効でありうる。本発明の方法は、緑内障に関連するかまたはしない、通例視野欠損または狭窄を招く網膜神経変性病態を処置するのに有効でありうる。
【００５６】
処置剤は個体に長期的に投与しうる。例えば、最初の医師による診断時から、個体に処置の必要がなくなるまで（例えば眼病態が解消されたかまたは患者が死亡する時まで）、処置剤を反復スケジュールで投与しうる。ある種の方法において、投与は毎日行うことができ、また、本発明が開示する１単位またはそれ以上の単一用量組成物の投与によって行うことができる。
【００５７】
すなわち、処置剤の投与は、個体の眼病態に由来する視力のさらなる悪化を予防するのに有効でありうる。例えば、処置剤は知覚される視力低下を防止することができ、それによって個体の視力を維持し、眼病態を処置することができる。ある種の方法において、処置剤の投与は、個体の視野のさらなる欠損を軽減するのに有効である。例えば、２０％の視野欠損のある個体に本発明方法に従って処置剤を投与することができ、さらなる視野欠損が患者にもたらされないようにすることができる。
【００５８】
処置剤の投与には、眼刺激に対する応答における視覚誘発電位（ＶＥＣＰ）の低下の緩和が関連しうる。ＶＥＣＰに関するさらなる情報を実施例に記載する。すなわち、視覚刺激は網膜ニューロンを活性化し、該ニューロンが、個体の中枢神経系内の１つまたはそれ以上の視覚領に電気シグナルを送る。視覚シグナルを受け取る個体の視覚皮質に記録されうるシグナルがＶＥＣＰである。眼病態（例えば高眼圧）の故に網膜神経節細胞が損傷または障害を受けると、ＶＥＣＰまたはＶＥＣＰの１つもしくはそれ以上の成分が、眼病態を伴わない眼のＶＥＣＰと比較して低下する。この低下を、本発明の方法により軽減しうる。特定の作用機序による制限を意図するものではないが、本明細書中に開示する抗興奮毒性剤のような処置剤の投与が、さらなる網膜ニューロン変性を防止すると考えられ。したがって、生存網膜ニューロン、例えば生存網膜神経節細胞は、変化を示し、ニューロン成長（例えば軸索終末発芽）の増加を示すことができる。このニューロン間結合の増大が、ＶＥＣＰ低下をもたらす眼病態を有する個体のＶＥＣＰを維持するのに有効でありうる。
【００５９】
すなわち、本発明方法の一態様においては、処置剤はＮＭＤＡ受容体阻害剤であり、ＮＭＤＡ受容体阻害剤の長期的投与が、個体の生存網膜神経節細胞から中枢神経系の少なくとも１つの中枢視覚領への視覚シグナル伝達の増大に有効である。視覚系の１つまたはそれ以上の領域、例えば視床の外側膝状湾曲、視覚皮質または上丘で、ニューロン成長が起こりうる。
【００６０】
眼病態の発生時または発生前、すなわち眼病態の症候が最初に現れた時点で、処置剤を投与しうる。緑内障に関して、眼病態の正確な発生時点を特定し得ないかも知れないが、緑内障の初期診断における高眼圧が眼病態発生における高ＩＯＰを示唆する。
【００６１】
ある種の態様において、個体の眼の硝子体内のグルタメート濃度が異常に上昇する前に処置剤を投与する。例えば、硝子体グルタメート濃度が亜毒性であるときに処置剤を投与しうる。
【００６２】
ある種の態様において、個体が何らかの抗緑内障処置を受ける前に、例えば眼圧降下剤投与を受ける前に、あるいは例えば現在眼圧降下のために行われている眼濾過手術を受ける前に、処置剤を投与する。例えば手術を伴わずに処置剤を個体に投与して眼圧を降下しうる。
【００６３】
視野欠損に気付いていない個体は、当業者に自明でありうる１つまたはそれ以上の方法によって特定しうる。
例えば、そのような個体を、網膜機能の検査によって特定しうる。網膜機能を検査する他の少なくとも一つの方法が、米国特許出願公開第２００２／０１３３０８９号（Pasqualeら）に開示されている。
【００６４】
すなわち、網膜機能が正常である患者は、眼内に位置するシグナル（最も一般的には患者には青い弧として見える）を知覚しうる。患者がこの眼内に位置するシグナルを知覚できない場合、網膜に損傷がある可能性と結び付けられる。すなわち、そのような個体を特定するには、個体の網膜上の試験部位を選択し、該試験部位を刺激して眼内に位置するシグナルを生じさせることができる。眼内に位置するシグナルを感知したかどうかを患者に報告させることができ、あるいは眼内に位置するシグナル（またはその不存在）を眼科用装置を用いて検出することができる。眼内に位置するシグナルの検出は好ましくは、網膜の電気的活動が弱まったかまたは静止した時間の経過後に行う。
【００６５】
もう一つの例を挙げると、眼の病態を有しており、視野欠損に気付いていない個体を特定するのに、米国特許出願公開第２００３／００６８６３２号（Garchon）に開示された緑内障診断法のような方法を用いることができる。
【００６６】
すなわち、Garshon が開示した方法においては、個体のアポリポタンパク質Ｅ（ＡpoＥ）遺伝子の対立遺伝子を調べ、および／またはＡpoＥ遺伝子のプロモーターの対立遺伝子を調べることによって、個体がＡpoＥ４対立遺伝子（または２つのＡpoＥ４対立遺伝子）を有するかどうか、および／または個体が（−４９１）にＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子（または２つの「Ｔ」対立遺伝子）を有するかどうか（例えば、ＡpoＥ４対立遺伝子の存否および／またはＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子の存否の検出による）、および／または個体がＡpoＥ（−２１９Ｇ）遺伝子プロモーター対立遺伝子を有するかどうかを調べる。そのような方法は、小柱網誘導グルココルチコイド応答（ＴＩＧＲ）タンパク質の遺伝子に突然変異を有する個体（「ＴＩＧＲ遺伝子突然変異のキャリア」）、またはＴＩＧＲ遺伝子のプロモーターに突然変異を有する個体（「ＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異のキャリア」）にとって有用でありうる。個体がＴＩＧＲ遺伝子突然変異またはＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異のキャリアであることがわからなければ、ＡpoＥ対立遺伝子および／またはＡpoＥ遺伝子プロモーター対立遺伝子の調査と同時に、ＴＩＧＲ遺伝子またはプロモーターにおける突然変異の存否を調べることができる。
【００６７】
ＴＩＧＲ遺伝子突然変異キャリアにおいて、ＡpoＥ４対立遺伝子が存在する場合、ＴＩＧＲ遺伝子突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在しない場合よりも、若年性緑内障を発症する危険性が高いことの指標となる。ＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在する場合、ＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在しない場合よりも、発症時に高眼圧を伴う緑内障を発症する危険性が低いことの指標となる。ＴＩＧＲ遺伝子突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在しない場合、ＴＩＧＲ遺伝子突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在する場合と比較して、若年性緑内障を発症する危険性が低いことの指標となる。また、ＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在しない場合、ＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子が存在する場合と比較して、発症時に高眼圧を伴う緑内障を発症する危険性が高いことの指標となる。
【００６８】
また、ＴＩＧＲ遺伝子に突然変異を持つ個体において、ＡpoＥ４対立遺伝子と（−４９１における）ＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子との両方があれば、それは、ＴＩＧＲ突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子はあるがＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子は無い場合と比較して、若年性緑内障を発症する危険性が高いことの指標となる。ＴＩＧＲ突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子はあるが、ＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子は無い場合、それは、ＴＩＧＲ突然変異キャリアにおいてＡpoＥ４対立遺伝子およびＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子が存在する場合と比較して、若年性緑内障を発症する危険性が低いことの指標となる。
【００６９】
ＴＩＧＲ遺伝子に突然変異が有るか無いかに関らず、個体においてＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子が存在すれば、それは、ＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子を持たない個体と比較して、発症時に高眼圧を伴う緑内障を発症する危険性が高いことの指標となる。個体においてＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子が存在しなければ、それは、ＡpoＥ遺伝子プロモーターの「Ｔ」対立遺伝子を有する個体と比較して、発症時に高眼圧を伴う緑内障を発症する危険性が低いことの指標となる。さらに、個体がＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異（例えば（−１０００Ｇ）突然変異）のキャリアである場合、ＡpoＥ（−４９１Ｔ）遺伝子プロモーター対立遺伝子が存在すれば、それは、ＡpoＥ（−４９１Ｔ）遺伝子プロモーター対立遺伝子またはＴＩＧＲ遺伝子プロモーター突然変異を持たない個体と比較して、発症時に高眼圧を伴う緑内障を発症する危険性がより一層高いことの示標となる。
【００７０】
ＡpoＥ（−２１９Ｇ）遺伝子プロモーター対立遺伝子が存在すれば、それは、ＡpoＥ（−２１９Ｇ）遺伝子プロモーター対立遺伝子を持たない個体と比較して、視野スコアの高い緑内障、陥凹／乳頭比の高い緑内障またはその両方を発症する危険性が高いことの指標となる。個体においてＡpoＥ（−２１９Ｇ）遺伝子プロモーター対立遺伝子が存在すれば、それは、ＡpoＥ（−２１９Ｇ）遺伝子プロモーター対立遺伝子を持つ個体と比較して、視野スコアが高いかまたは陥凹／乳頭比が高い緑内障を発症する危険性が低いことの指標となる。
【００７１】
個体のＡpoＥ対立遺伝子および／またはＡpoＥ遺伝子プロモーター対立遺伝子は様々な方法で調べることができる。そのような方法には次のものが含まれる：ハイブリッド形成法（例えばサザンまたはノーザン分析）、遺伝子および／または遺伝子プロモーターの配列決定、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド分析、制限酵素消化による分析、または（ＡpoＥ対立遺伝子の場合）ＡpoＥタンパク質分析（例えば分光法、酵素免疫測定、比色分析、電気泳動、等電点電気泳動、ラジオイムノアッセイ、免疫ブロット法（例えばウェスタンブロット法））。ＡpoＥ対立遺伝子を調べるいくつかの方法が、米国特許第５５０８１６７号（Rosesら）に詳述されている。ＡpoＥプロモーターの対立遺伝子を調べるのにも、同様の方法を用いることができる。
【００７２】
例えば、個体のＡpoＥ対立遺伝子を調べる１つの方法において、ハイブリッド形成法、例えばサザン分析を用いることができる（Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F. ら編，John Wiley & Sons (1998年の全補遺を含む）を参照されたい）。例えばＡpoＥ遺伝子を含むかまたはＡpoＥタンパク質をコードするゲノムＤＮＡ、ＲＮＡまたはｃＤＮＡを含む試験サンプルを使用しうる。そのようなゲノムＤＮＡ、ＲＮＡおよびｃＤＮＡをここでは総称して「ＡpoＥ遺伝子含有核酸」という。個体（「被験個体」）から試験サンプルを採取する。個体は、成体、子供または胎児でありうる。試験サンプルは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはｃＤＮＡを含有する任意の材料、例えば血液サンプル、脳脊髄液サンプルまたは組織サンプル（例えば皮膚または他の器官のもの）に由来するものでありうる。好ましい態様においては、ＡpoＥ遺伝子含有核酸を含有する試験サンプルを、血液サンプル、線維芽細胞皮膚サンプル、毛根、または口腔から採取した細胞（例えば含嗽による）から得る。他の好ましい一態様においては、ＡpoＥ遺伝子含有核酸を含有する試験サンプルを、胎児細胞または組織から適切な方法によって、例えば羊水穿刺または絨毛膜サンプリングによって採取する。
【００７３】
ＡpoＥ対立遺伝子を調べるには、ＡpoＥ遺伝子含有核酸を含有する試験サンプルを、少なくとも１つの核酸プローブと接触させることによって、ハイブリッド形成サンプルを形成する。ＡpoＥ遺伝子含有核酸への核酸プローブの特異的ハイブリッド形成を可能にするのに充分な条件下に、ハイブリッド形成サンプルを維持する。本発明において「特異的ハイブリッド形成」とは、正確なハイブリッド形成（例えばミスマッチを伴わない）を意味する。特異的ハイブリッド形成は、例えばハイ・ストリンジェンシー条件下またはミディアム・ストリンジェンシー条件下に行いうる。ハイブリッド形成に関する「ストリンジェンシー条件」とは、当分野で、ある核酸が別の核酸とハイブリッド形成するのを可能にする温度および緩衝剤濃度条件をさす用語である。ここで、第１の核酸は第２の核酸と完全に相補的であってよく、また、第１および第２の核酸はある程度相補的であるに過ぎないこともある。例えば、完全相補的核酸と相補性のより低い核酸とを識別させる、あるハイ・ストリンジェンシー条件を採用しうる。
【００７４】
核酸ハイブリッド形成に関する「ハイ・ストリンジェンシー条件」および「ミディアム・ストリンジェンシー条件」は、Current Protocols in Molecular Biology（前掲）の第２．１０章および第６．３章、特に第２．１０、１〜２．１０．１６頁および第６．３．１〜６頁に解説されている。該開示を引用により本発明の一部とする。ハイブリッド形成のストリンジェンシーを決定する正確な条件は、核酸の長さ、塩基組成、ハイブリッド形成配列間のミスマッチの率および分布、温度、イオン強度、不安定化物質の濃度などの因子に依存する。すなわち、ハイまたはミディアム・ストリンジェンシー条件は経験的に決定しうる。一態様において、特異的ハイブリッド形成のためのハイブリッド形成条件は、ミディアム・ストリンジェンシーである。特に好ましい態様においては、特異的ハイブリッド形成のためのハイブリッド形成条件は、ハイ・ストリンジェンシーである。
【００７５】
次いで、特異的ハイブリッド形成を、それがある場合、常套の方法で検出する。対立遺伝子特異的核酸プローブと試験サンプル中のＡpoＥ遺伝子との間に特異的ハイブリッド形成が起こった場合、その個体は、該核酸プローブとハイブリッド形成するＡpoＥの対立遺伝子を有する。この方法において１つより多い核酸プローブを同時に使用することもできる（例えば、ＡpoＥ２対立遺伝子とハイブリッド形成するプローブと、ＡpoＥ３対立遺伝子とハイブリッド形成するプローブ）。
【００７６】
ＡpoＥ遺伝子プロモーター対立遺伝子を調べるためにも同様の方法を用いることができる。この場合、遺伝子プロモーター（および増幅を行う場合は、遺伝子プロモーターまたは遺伝子プロモーターの一部の増幅されたコピー）の核酸を含有するサンプル、および２つのＡpoＥ遺伝子プロモーター対立遺伝子の一方のみとハイブリッド形成する対立遺伝子特異的核酸プローブを使用する。さらに、そのような方法で、ＡpoＥ対立遺伝子およびＡpoＥ遺伝子プロモーター対立遺伝子の両方を同時に調べることもできる。この場合、ＡpoＥ遺伝子およびＡpoＥ遺伝子プロモーター（ならびに、増幅を行う場合は、遺伝子および遺伝子プロモーターまたは遺伝子もしくは遺伝子プロモーターの一部の増幅されたコピー）を含む核酸を含有するサンプル、ＡpoＥ対立遺伝子の１つとハイブリッド形成する少なくとも１つの対立遺伝子特異的核酸プローブ、およびＡpoＥプロモーターの対立遺伝子とハイブリッド形成する対立遺伝子特異的核酸プローブを使用する。例えば、ＡpoＥプロモーターおよびＡpoＥ遺伝子を含むゲノムＤＮＡを同時に増幅し、次いで該遺伝子およびプロモーターの対立遺伝子を調べることもできる。
上記方法と組み合わせて、または上記方法の代わりに用いることのできる他の方法は、当業者に周知でありルーチンである。
【００７７】
さらに、または別法として、自覚しうる視野欠損無く眼病態を有する個体を特定するのに、走査レーザー偏光分析法を用いることもできる。例えば、走査レーザー偏光分析法を用いて、個体の一方の眼の視神経を調べることができる。この方法は、正常眼圧緑内障の個体に特に有用でありうる。この方法でイメージング技術を用いて、網膜神経線維層（ＲＮＦＬ）を調べる。すなわち、菲薄化および切痕化に対する神経リムの完全性を調べ、ＲＮＦＬ欠損を調べることが可能である。視神経の輪郭、陥凹、湾曲、および乳頭縁上の出血は、個体の眼の損傷を示唆しうる。
【００７８】
他の一態様において、眼病態を処置する方法は、網膜神経変性に関連する眼病態を有する個体に処置剤を投与することを含んで成る。処置剤の投与は、網膜神経変性に関連する中枢神経系応答の低下を緩和するのに有効である。
【００７９】
前記と同様に、前記方法の眼病態は、上昇した眼圧または高い眼圧を含みうる。例えば、眼病態は、無症候性または症候性緑内障を包含する緑内障でありうる。あるいは眼病態は緑内障以外の病態でありうる。眼病態は初期の網膜神経変性疾患でありうる。
処置剤の投与は全身的または眼内投与であってよく、例えば注射もしくは経口摂取または局所適用によって行う。
前記のように、処置剤の投与は、眼刺激に対する応答におけるＶＥＣＰ低下（眼病態に関連するかまたは眼病態の結果である）を緩和するのに有効でありうる。
【００８０】
本発明のさらなる態様において、眼病態を処置する方法は、眼病態によって起こる視野欠損を有する個体に処置剤を投与することを含んで成る。処置剤の投与は、狭窄した視野を広げるのに有効でありうる。例えば、処置剤（例えばメマンチン）の長期投与後、網膜ニューロンのニューロン成長も見られうると考えられる。このニューロン成長は、視野の大きさを増すかまたは視野内の視覚シグナルの伝達効率を高めるのに有効でありうる。
【００８１】
本発明の方法は、眼病態による網膜神経節細胞損失を実質的に低下することなく視覚誘発皮質応答を保存するのに有効でありうる。しかし前記のように、残存網膜ニューロンでもって視野を広げることが可能でありうる。さらに、処置剤の長期的投与は、生存網膜神経節細胞からの電気シグナルを中枢神経系の少なくとも１つの中枢視覚領に伝達するのを促進するのに有効でありうる。本発明は、中枢神経系内の損傷に対する適応反応を増強するのに有効でありうる。
以下の実施例により、本発明を制限することなく本発明のある種の態様を説明する。
【実施例１】
【００８２】
実験的緑内障におけるメマンチン処置の有効性および安全性を評価する方法
若い成熟したカニクイザルMacaca fascicularis １８匹をランダムに２群に分け、眼圧（ＩＯＰ）のベースライン測定を行った。１群のサルにはメマンチン（４mg／kg）を経口投与し、他方の群には賦形剤対照を経口投与した。この用量のメマンチンは、正常眼圧または高眼圧のサルの眼圧に有意に影響しなかった。
【００８３】
Gaasterlandら，“Experimental glaucoma in the rhesus monkey”，Invest. Ophthalmol., 13:455-457, 1974に記載されているようにして、サルの右眼にアルゴンレーザーを当てることによって右眼に慢性高眼圧（ＣＯＨＴ）を誘発した。前房隅角の上部１８０°にわたって、アルゴンレーザー（モデルNovus 2000, Coherent, Inc., Palo Alto, カリフォルニア）を用い、３０〜４０スポット（直径５０μｍ、出力１ワット、０．５秒間）を適用した。２週間後、前房隅角の下部１８０°の組織を同様に処置した。
【００８４】
レーザー処置後約１６箇月間にわたり定期的に、軽いケタミン鎮静下に（５mg／kg  i.p.）ＩＯＰを測定した。ＩＯＰ測定は午前８時から午後１２時の間に行ったが、これは、この時間帯はＩＯＰの日中変動が少ないからである。４５mmHgまたはそれ以下のＩＯＰにはModel RT pneumatonometer（Digilab, Norwell, マサチューセッツ）を使用し、４５mmHgよりも高いＩＯＰにはAlcon pneumatonometer（Alcon, Fort Worth, テキサス）を使用した。約４．５秒の間の安定な圧力トレースを得た。peak-to-peak振幅２mmHg未満であった心拍に関連する最高値および最低値の平均値としてＩＯＰを求めた。
【００８５】
投与開始の２箇月後およびその後２箇月毎に、経口投与の２時間後に各動物から血液サンプルを採取することによって、メマンチン濃度を測定した。処置動物の屠殺（レーザー処置から約１６箇月後）の前に、各動物の各眼から硝子体液サンプルも採取した。中央硝子体からサンプルを採取するのに１８ゲージ針を使用した。本明細書に記載するグルタメートアッセイを行うまで、硝子体サンプルを−７０℃で保存し、最長で３箇月間保った。
【００８６】
血漿および硝子体サンプル中のメマンチン量を測定した。４０μｌの血漿または硝子体サンプルに、４０μｌのメマンチン塩酸塩標準（０．２Ｍ、０．４Ｍおよび０．８Ｍ）を加えた。タンパク質を沈殿させるためにアセトニトリル１９０μｌを加え、２分間ボルテクスし、次いで５０００ｇで４分間遠心した。次いで上清１５０μｌを９−フルオレニルメチルクロロホルムクロリド（ＦＭＯＣ−Ｃｌ）で誘導体化するために、アセトニトリル中の１５ｍＭ  ＦＭＯＣ−Ｃｌ（１０μｌ）および０．５Ｍ  ｐＨ８．５ホウ酸緩衝液（１０μｌ）と混合した。誘導体化の５分後、Shimadzu  ＲＦ−５５１蛍光検出器（Shimadzu, 日本）につないだGold HPLCシステム（Beckman Instruments, Brea, カリフォルニア）に、誘導体化混合物９０μｌを注入した。Beckman ODS ultrasphere Ｃ−１８カラム（４．６×１５０mm）、６０％アセトニトリルおよび４０％５０ｍＭホウ酸緩衝液から成る移動相を用い、流速２ｍｌ／分で、メマンチン−ＦＭＯＣを約４０分の時点で溶出した。各血漿または硝子体サンプル中のメマンチン量を、各サンプルについて作成した標準曲線から求めた（三重に測定）。
【００８７】
硝子体サンプル中に存在するグルタメートの量を測定した。硝子体サンプル９０μｌに１０、２０または４０μＭのグルタメート標準１０μｌを加えた。タンパク質を沈殿させるのに、アセトニトリル１９０μｌを加え、次いで２分間ボルテクスし、５００ｇで４分間遠心した。上清２０μｌをFluoraldehyde OPA試薬（Pierce, Rockford, イリノイ）４０μｌと混合し、２分後にｐＨ７ホウ酸緩衝液（ＰＢ）１００μｌを加えた。次いで、蛍光検出器（Shimadzu RF-551）につないだBeckman Gold HPLCシステム（Bockman Instruments）に、混合物６０μｌを注入した。Beckman ODS Ultrasphere C-18カラムを用い、移動相勾配を１０％メタノール／９０％  ５０ｍＭリン酸緩衝液から７５％メタノール／２５％リン酸緩衝液とし、流速１．５ｍｌ／分および時間８分間とした。１−アルキルチオ−２−アルキルイソインドールグルタメートの溶出が、約６．５分で見られた。
【００８８】
ソフトウェアを用いてデータを収集し解析した。各濃度を３回ずつ測定し、各硝子体サンプル中のグルタメート量を、各サンプルについて作成した標準曲線から求めた。
【００８９】
レーザー処置の約３箇月後（Ｔ１）、５箇月後（Ｔ２）、および１６箇月後の屠殺直前（Ｔ３）に、すべての動物の両眼の網膜電図（ＥＲＧ）を記録した。各正常眼圧(ＯＳ)眼を、高眼圧の影響についての内部対照として用いた。高眼圧眼の電気生理学的応答振幅を、同時に記録した同一動物の対側眼の応答振幅に対して正規化した。
【００９０】
ＥＲＧ記録は麻酔下に行い、麻痺を持続させるのにケタミン（１５mg／kg）を定期的に注射し、ノルクロニウム（norcuronium）（０．０４mg／kg／h）を常時注入した。記録の間、１％トロピカミド１滴によって、直径５〜６mmの瞳孔閉口を得た。角膜電位を記録するのに、Burian−Allenタイプの双極コンタクトレンズ電極（Hansen Ophthalmic Laboratories, Iowa City, アイオワ）を用い、眉間に配置した皮下（s. c. ）針を不関電極として用いた。通常の（conventional）ＥＲＧ応答を引き起こすのに、Grass Model P33光刺激器（Astro Mod, West Warwick, ロードアイランド）で発生させた約１０マイクロ秒間の散乱フラッシュ刺激を用いた。視軸上で角膜の１０cm前方に配置した刺激は、中心窩を中心とする視角の約５０°に対した。約０．０５フートキャンドルの周囲室内照明で５分間暗順応後、１０秒間隔で与える１２４ photopic cd s／m2強度のフラッシュで、フラッシ応答および律動様小波（ＯＰ）を引き起こした。この最初の５分間の暗順応は、記録中の順応状態の安定性および一貫性（１つの記録セッションから次のセッションに移る際）を確実にするために選択した。そのような条件下に、刺激強度と刺激頻度の組み合わせによって、順応状態を調べた。応答振幅および速度は、刺激シリーズの開始後速やかに安定化した。フリッカー応答のためには、５１２msec間および７８ photopic cd s／m2強度の３０Ｈｚ刺激トレインを、１秒毎に３〜１０００Ｈｚ（フラッシュおよびフリッカー応答）または１００〜１０００Ｈｚ（ＯＰ）の帯域通過フィルタリングと６０Ｈｚノッチフィルタリングで与えた。このような条件下に得られるフラッシュおよびＯＰ応答は、桿体および錐体光受容器の両方の活性を反映するようである（錐体活性の寄与の方が比較的大きい）。３０Ｈｚフリッカー応答は主として錐体による活性を反映する。
【００９１】
多局所記録のためには、２１インチモニタ（Radius Intercolor, Radius Inc. San Joge, カリフォルニア）上に、ＶＥＲＩＳ  １ソフトウェアおよびビデオドライバボード（Electro Diagnostic Imaging, San Mateo, カリフォルニア）を使用し、同一サイズの６１個の六角形要素の並びから成る刺激を発生させた。中心窩が中央の刺激要素の中心に向く
ように刺激野を配置した。３０cmの試験距離で、刺激野は、視角約５０°に対し、すなわち通常の記録のために刺激したのと同じ網膜部分を照らした。各刺激要素の光度は、二進法Ｍ系列に従って最大光度９５ｃｄ／ｍ２（白）ないし最小光度５ｃｄ／ｍ２（黒）の間でフレームレート６７Ｈｚで段階的に経時的変調した。結果としての約８分間の間の記録において、１５のＭ系列（２１５刺激フレーム）を用いた。シグナルは３〜３００Ｈｚで帯域通過フィルタリングし、６０Ｈｚノッチフィルタリングした。
【００９２】
ＶＥＣＰを記録するのに、中線上のイニオンのすぐ前上方の頭皮に配置した活性電極を用いた。眉間のｓ．ｃ．針を参照電極とし、頸後部の基部に配置したａ．ｃ．針を不関電極として用いた。ＥＲＧフラッシュおよびＯＰ応答のために用いたのと同じ刺激を２秒間隔で与えて応答を誘起した。ＶＥＣＰシグナルは３〜１０００Ｈｚ帯域通過フィルタリングし、６０Ｈｚノッチフィルタリングした。
【００９３】
いずれの時点でもすべての動物に対し同じ記録手順を用いた：１）多局所ＥＲＧ、ＯＤ；２）通常のＥＲＧ（ＶＥＣＰ）、ＯＤ；３）多局所ＥＲＧ、ＯＳ；および４）通常のＥＲＧ（ＶＥＣＰ）、ＯＳ。記録中、対側眼は塞いだ。眼にコンタクトレンズ電極を配置した後、網膜が多局所ＥＲＧ刺激モニタと最適に共役するように、最適な球面等価レンズ電圧を検影法により決定した。次いで、このレンズ（通例、＋３〜＋５ジオプター）を、角膜の１cm前方に配置した。次いで、刺激モニタを、推定される視軸が刺激視野の中心に向くように、角膜の３０cm前方に配置した。次いで約２分間の一連の多局所記録（Ｍ系列＝１３）を用いて、モニタ位置を、中心窩が刺激野中心に向き、中心刺激要素に関連する一次応答に関して明らかな振幅最大が得られるように調節した。重篤な網膜神経節細胞損失のある眼においてさえ顕著な中心黄斑ピークが常に見られたので、この方法は、両処置群のすべての眼において信頼性のある刺激アラインメントを提供した。この方法の刺激アラインメントの正確さは、複数の眼において、眼底を刺激モニタに光学的に投影し、視神経乳頭および黄斑像の位置を調べることによって証明した。刺激アラインメントはまた、各記録に関し、一次応答トレース配列中で視神経乳頭投影図（応答最小）の位置を見ることによっても証明した。刺激アラインメントの後、約８分間の多局所記録（Ｍ系列＝１５）を行った。神経筋遮断の維持により、記録セッション全体にわたって適正な刺激アラインメントの維持を確実なものとした。次いで、刺激モニタを遮光シールドで覆い、矯正レンズを外し、キセノンフラッシュ刺激器を配置した。５分間の暗順応後、通常のフラッシュ、ＯＰ、およびフリッカーＥＲＧ応答の記録をこの順序で行った。最終の時点（Ｔ３）においては、フリッカーＥＲＧ応答の後にＶＥＣＰ応答を記録した。
【００９４】
本明細書中に記載するように、１％トロピカミドで直径約６mmの散瞳を起こして、ステレオ眼底カメラ（Nidek Inc., Fremond, カリフォルニア）を用いて同時ステレオ対眼底像を得た。網膜撮影に最適な表面を提供するために、硬質のコンタクトレンズを使用した。Kodak Lumiere 100 ASA カラースライドフィルムを用い、フラッシレベル（強度）３で撮影した。
【００９５】
共焦点走査レーザー検眼鏡（ＨＲＴ；Heidelberg Engineering GMBH, Heidelberg, ドイツ）を用いて、視神経円板形態検査を行った。各画像群は、１．５〜２．５mmのスキャン深度で連続する高さ面で得た３２の眼横断面像を含んだ。各眼に対して、３つの異なる１５°画像を撮り、ＨＲＴソフトウェア・バージョン２．０１を用いて平均トポグラフィーを得た。各画像について、ほぼ同時に得たステレオ視神経円板写真を参考にして、円板縁の輪郭を手描きした。画像拡大誤差を、角膜前面曲率の角膜曲率測定値を用いて補正した。側頭セグメント３５０〜３５６°にわたる視神経円板縁の輪郭の平均高さに対し５０μｍ後方に、標準参照面を位置付けた。スキャンを行うのに、ｉ．ｍ．ケタミン（１０mg／kg）で全身麻酔を誘導し、臭化ノルクロニウム（０．０４mg／kg／時）の連続ＩＶ注入によって麻痺を維持した。図１４に示すように、レーザー処置の約３、５および１０箇月後にスキャンを行った。２つの処置群のそれぞれにおいて最高ＩＯＰ（ＯＤ）を有する５匹を含む１０匹の動物の両眼について、測定を行った。
【００９６】
網膜神経節細胞（ＲＧＣ）のカウントのために、固定化した網膜を平らに載せ、中心窩を中心とする１つの部分を含む８つの部分から３×３mmサンプルを採った。パラフィン包埋後、各サンプル部分から１０の放射状切片を得た。中心窩を中心とするサンプルについては、中心窩中央から５００〜７００μｍにおけるＲＧＣ密度が最高である部分から切片を得た。網膜組織切片を採った部分の位置を図１５に示す。ヘマトキシリン／エオシンで染色後、各サンプル部分からの１０切片すべてについて３mmの全長にわたってＲＧＣ層中の核をカウントした。グリアおよび血管細胞核を大きさおよび形態で特定し（それぞれ直径が４μｍよりも大きく、丸い形）、カウントしないようにした。中心窩周囲部分からの切片については、Bioquant画像化システムおよび立体学ソフトウェア（R&M Biometrics, Nashville, テネシー）を用いて細胞カウントを行った。他のすべてのサンプル部分の切片については、手作業でカウントを行った。賦形剤処置動物の高眼圧（ＯＤ）眼および正常眼圧(ＯＳ)眼から得た中心窩周囲（ＰＦ）切片の例を図１６に示す。
【００９７】
各動物のＯＤ  ＩＯＰを、試験期間にわたり時間の関数としてプロットした。３つの時点（Ｔ１＝３箇月後；Ｔ２＝５箇月後；およびＴ３＝１０箇月後）に、Heidelberg Retina Tomograph（ＨＲＴ）検査を行った。各期間の間（Ｔ０〜Ｔ１、Ｔ０〜Ｔ２、またはＴ０〜Ｔ３）の平均ＩＯＰ上昇を算出するのに、最初に眼圧が上昇した時点（レーザー処置の直後；Ｔ０）と電気生理学的検査を行った時点（Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３のいずれか）との間の期間にわたる上記プロットの面積の第一積分を行った。次いで積分値を当該期間の間の日数で除して、その期間の平均ＩＯＰとした。この方法を図１において、１匹の動物のＯＤ  ＩＯＰプロットに関して示す。全動物から得た、３ベースライン（レーザー処置前）測定の平均値、ピークＩＯＰ測定値、および３期間すべてのＩＯＰ積分の平均値を表１に示す。表１中、正常眼圧（ＯＳ）眼の値は括弧内に示す。各処置群の範囲および平均（±ＳＥＭ）値も示す。正常眼圧眼のＩＯＰはすべての時点でベースラインと同様であったので、これらの眼の３期間の値は各期間の測定値の平均として求めた。
【００９８】
表１
2008507588.tif 000008
正常眼圧（ＯＳ）眼の値は括弧内に示す。
【００９９】
最小二乗法を用いて線形回帰分析を行った（図４、図６、図７および図９参照）。２つのデータセットの回帰の傾きが同じであるとの仮定を検証するためには、各データセットが線形モデルに合理的によく適合しうることを証明した。次いで、共分散分析のための一般線形モデル法を適用することによって、傾きの差が偶然起こり得た確率（Ｐ）を求めた。ＥＲＧおよびＶＥＣＰ測定の全結果をこの手法で分析したので、表２に示す。
【０１００】
表２
2008507588.tif 000009
【０１０１】
平均ＩＯＰの関数として２処置群（賦形剤またはメマンチン）の組織学的（図１６）または形態学的測定値を表すデータセットの線形回帰分析を行うのに、最小二乗法を用いた。この方法により、各データセットについて、傾き（ｍ）および相関係数（ｒ）の値を得た。２処置群の回帰の傾きが等しいかどうか調べるために、処置群および平均ＩＯＰを共変量とする共分散分析を行った。
【実施例２】
【０１０２】
実験的緑内障におけるメマンチン処置の機能的測定
実施例１に記載したサルの電気生理学的測定の３期間における高眼圧（ＯＤ）眼の平均ＩＯＰ評価方法を図１に示す。図１のデータは、表１の番号Ｍ９４のサルから得たものである。Ｔ０は、レーザー処置後の最初のＩＯＰ測定であり、この時、ＩＯＰはベースラインよりも上昇していた。Ｔ０はすべての試験動物において同じである。
【０１０３】
両処置群の全部で１８のＯＤ眼の平均ＩＯＰを図２に示す。レーザー処置後、ＩＯＰは初期に降下した後、上昇した。この初期上昇の程度およびそのＩＯＰを表１に記載する。表１に、２処置群の全動物の高眼圧眼における３期間（Ｔ１、Ｔ２およびＴ３）の平均ＩＯＰを記載する。ＩＯＰ上昇の約３箇月後であるＴ１の時点で、範囲および平均値は２処置群とも同様であった。その後の２箇月（Ｔ１からＴ２）にわたり平均ＩＯＰが降下し、Ｔ２における降下はメマンチン処置動物においてより大きい。Ｔ２からＴ３にかけては、平均眼圧が賦形剤処置動物においてわずかに降下し、メマンチン処置動物では降下がより大きい。このような結果に基づき、メマンチン処置は正常眼圧眼の眼圧には殆どまたは全く影響を及ぼさないと結論付けることができる。
【０１０４】
メマンチン処置群動物の血清および硝子体メマンチンレベルを表３に示す。血清レベルはすべての時点で約１μＭであった；ただし２箇月後の時点では０．０３〜０．８μＭであった。試験終了時の硝子体メマンチンレベルも１μＭ範囲であった。
【０１０５】
表３
2008507588.tif 000010
【０１０６】
１匹の動物の正常眼圧眼における通常のＥＲＧ応答を図３に示す。パネルＡは、０ミリ秒時点で与えた１０μ秒間の刺激に対するフラッシュ応答を示す（１０応答の平均）。ａ波およびｂ波ピーク電圧の振幅を、矢印で示すように測定した。パネルＢは、パネルＡのフラッシュ応答を引き起こすのに用いたものと同じ刺激に対する律動様小波（ＯＰ）応答を示す（２５応答の平均）。刺激の１０〜７５ミリ秒後のＲＭＳ電位として応答振幅を測定した。パネルＣは、０ミリ秒時点で開始した５１２ミリ秒間の３０Ｈｚ刺激トレインに対するフリッカー応答を示す（３０応答の平均）。最後の３応答サイクル（１、２、３）の平均peak-to-peak電位として振幅を測定した。各応答測定に関して、高眼圧眼の振幅を、正常眼圧眼で得た値に対して正規化した（ＯＤ／ＯＳ）。Ｔ３の時点でのそれらの値を、高眼圧眼における平均ＩＯＰ上昇の関数として図４にプロットする。
【０１０７】
高眼圧は、各処置群のフラッシュ応答（図４Ａおよび４Ｂ）またはＯＰ応答（図４Ｃ）に殆どまたは全く影響を及ぼさず、３０Ｈｚフリッカー応答（図４Ｄ）に小さい影響を及ぼしたに過ぎない。Ｔ１およびＴ２の時点でも同様の結果が得られた。
【０１０８】
図５の左側のパネルは、正常眼圧眼の一次多局所ＥＲＧ応答（Ａ）および二次多局所ＥＲＧ応答（Ｃ）を示す。各パネルにおいて、トレース列中、黄斑からの応答（中心約１６°）にハイライトを施し、それを平均して右側パネルに示す黄斑応答とする（Ｂ、一次；Ｄ、二次）。一次応答のpeak-to-peak値（Ｎ２−Ｐ２、およびＰ２−Ｎ３）および二次応答のpeak-to-peak値（Ｐ−Ｎ）は、ＣＯＨＴにより誘発される網膜神経節細胞層における細胞損失度に相関する（Hareら，Invest. Opthalmol. Vis. Sci., 42:127-135, 2001）。この相関を図６に示す。図６において、正規化（ＯＤ／ＯＳ）黄斑応答振幅を、正規化（ＯＤ／ＯＳ）中心窩周囲ＲＧＣカウントの関数としてプロットする（賦形剤処置群７匹、およびメマンチン処置群８匹の動物）。図６Ｂおよび６Ｃは、ＲＧＣ損失が応答振幅の縮小と相関することを示している。比較のために、一次応答における最初の負のピークの振幅（Ｎ１）をパネルＡにプロットする。この応答成分振幅は、ＲＧＣ損失が顕著であってもあまり影響を受けなかった。多局所ＥＲＧ応答の特定の成分がＲＧＣ損傷の機能的尺度を提供し、該尺度を用いて慢性高眼圧に関連する機能低下度を評価することができると結論付けうる。
【０１０９】
高眼圧誘発から約３箇月後の時点（Ｔ１）で記録した結果を図７に示す。パネル７Ｂおよび７Ｄに示す結果については、賦形剤処置動物の高眼圧眼における応答振幅は、平均ＩＯＰ上昇レベルと反比例的に相関した。言い換えると、ＩＯＰが高いほど、応答振幅が小さい。パネル７Ａに示すように、両処置群においてＩＯＰヒストリーはピークＮ１の振幅に殆どまたは全く影響を及ぼさない。パネル７Ｂおよび７Ｄに示す相関の傾きは（線形回帰線で表す）、ＩＯＰ上昇とＲＧＣ損傷の機能的尺度との関連を表す。これらのパネルにおいて傾きが小さくなっていることから、メマンチン（または他の神経保護剤）の網膜損傷軽減効果が実証される。例えば、パネル７Ｂおよび７Ｄは、メマンチン処置群の傾きが賦形剤処置群の傾きよりも小さいことを示している。Ｔ１、Ｔ２およびＴ３の時点でのそのような３測定結果を表２に示す。図面および表２からわかるように、ＩＯＰ上昇は、負の傾きに反映される応答振幅縮小に関連付けられる。さらに、Ｔ１およびＴ２では、メマンチン処置動物の３測定すべての傾きが対照動物のそれよりも小さい。
【０１１０】
図８には、高眼圧眼の応答の平均振幅（ｎＶ／度２）を時間Ｔ１、Ｔ２およびＴ３の関数として示す。パネル８Ａに示すように、ピークＮ１振幅には経時変化が殆どない。パネル８Ｂおよび８Ｄは、ピークＮ２−Ｐ２およびピークＰ−Ｎが時間の経過につれて上昇することを示している。パネル８Ｃにおいて、賦形剤処置動物はピークＰ２−Ｎ３の応答振幅を増加する傾向を示し、メマンチン処置動物は経時変化を殆ど示していない。
【０１１１】
そのような結果に基づいて、次のように結論付けることができる：ＲＧＣ損傷に相関しない網膜機能測定値（Ｎ１）は、ＩＯＰ上昇の影響が殆どないこと、および経時変化が殆どまたは全くないことを示す。ＲＧＣ損傷に高度に相関し、ＩＯＰ上昇によって顕著に減弱される網膜機能の測定値（例えばＮ２−Ｐ２およびＰ−Ｎ）は、両処置群において経時的に応答振幅を増加する傾向を示す。
【０１１２】
ＶＥＣＰは、網膜から視覚皮質への視覚シグナル伝達を要する。すなわち、網膜神経節細胞およびその軸索が損傷すると、ＶＥＣＰに直接的および間接的に影響が及ぶ。ＶＥＣＰ振幅は、ＣＯＨＴサル眼の神経節細胞層中の生存細胞数と正の相関を示す（Hareら，Eur. J. Ophthalmol., 1（補遺）：30-33, 1999)。
【０１１３】
図９のパネルＡは、正常眼圧(ＯＳ)眼のＶＥＣＰ応答を示す。図９のパネルＢは、両処置群の正規化Ｎ１−Ｐ１振幅を平均ＩＯＰの関数として示す。メマンチン処置群の傾きは賦形剤処置群の傾きよりも小さい。したがって、メマンチン処置は、ＩＯＰが高度に上昇した動物においてすら、ＶＥＣＰ応答の保存に関連付けられる。両群のＶＥＣＰ応答測定から得られた傾きの比較を表２に示す。
【０１１４】
図１０は、ＶＥＣＰ振幅をＲＧＣカウントの関数として示す。図１０から明らかなように、各処置群の３動物においてはＲＧＣ損失が約７２％またはそれ以上であり、ＶＥＣＰ応答に対するＲＧＣ損失の影響を示す傾きは、メマンチン処置動物の方が賦形剤動物よりも小さい。このような結果は、ＲＧＣ損失が３０％を越える３メマンチン処置眼のすべてにおいてＶＥＣＰ応答が見掛け上正常な振幅で得られたことを示している。
【０１１５】
メマンチン（４mg／kg）を１６箇月間毎日経口投与した場合に視覚伝導路に悪影響が及んだかどうかを調べるために、メマンチン処置動物および賦形剤処置動物の全正常眼圧（ＯＳ）眼からＴ３における測定結果を得た。結果を図１１に示す。フラッシュ、ＯＰおよびフリッカーＥＲＧ応答の平均ピーク振幅を、図１１のパネルＡに示す（メマンチン処置群の値を賦形剤処置群に関して正規化する）。図１１のパネルＣは、パネルＡに示すのと同じ応答のtime−to−peak値を同様に比較するものである。２処置群の通常の応答測定の振幅またはタイミングに有意な差はなかった。図１１のパネルＢおよびＤは、一次黄斑多局所応答におけるピークの振幅およびタイミングの測定結果を示す。いずれの通常の応答測定結果にも、２処置群間に有意差は見られなかった。
【０１１６】
図１２は、賦形剤およびメマンチン処置群の硝子体グルタメート濃度を示す。メマンチン処置動物においては、高眼圧眼と正常眼圧眼のグルタメートレベルは平均すると同程度であった。賦形剤処置動物の硝子体グルタメートレベルは、正常眼圧眼よりも高眼圧眼において少し高かった。
【０１１７】
多局所ＥＲＧ応答の成分は、ヒトおよびサルのＲＧＣ活性を反映する（Sutterら，vis. Res., 3：419-436, 1999；Hareら，Documenta Ophthalmologica, 105：189-222, 2002；Hoodら，Vis. Neurosci., 16：411-416, 1999；およびFrishmanら，Doc. Ophthalmol., 100：231-251, 2000）。
【０１１８】
ここに記載する結果は、平均ＩＯＰの高い眼では、高眼圧誘発の３箇月後に明らかなように、ＲＧＣ機能が重篤な障害されていることを示す（図６および図７）。フラッシュＥＲＧのａ波、ｂ波およびＯＰ応答の振幅が高ＩＯＰによって影響を受けない（図４）という知見に基づけば、ＲＧＣ損傷は虚血性障害の影響とは区別されうる。
【０１１９】
最高ＩＯＰの眼では、多局所ＥＲＧ応答のＲＧＣ依存性成分の振幅は通例、メマンチン処置動物において、同様のＩＯＰを有する対照動物の応答と比較して、より大きかった（図７および表３）。このような知見は、そのような眼において、ＲＧＣ損傷速度がメマンチン処置によって低下されたことを示唆しうる。処置効果が見掛け上ないことを潜在的に説明するモデルを図１３に示す。図１３においては、生存ＲＧＣ数を、高眼圧誘発後の時間の関数としてプロットする。プロットの傾きで示される速度でＲＧＣが失われる。メマンチン処置はＲＧＣ傷害／損失の速度を低下するが、二眼における傷害レベルの差の程度は、測定時点毎に異なりうる。すなわち、早い時点では小レベルの保護が得られるという知見、および試験終了時に得るＥＲＧ応答をメマンチン処置が保存する効果を持たないことを、最高ＩＯＰ上昇を示す動物において早期に重篤な損傷が見られることによって示唆される比較的急激な損傷速度に関連付けることができる。
【０１２０】
本発明の結果からの少なくとも１つの予想外の結果は、メマンチン処置動物においてＶＥＣＰ応答が良好に保存されたことであった（図９、パネルＢおよび図１０）。ここで述べるように、この時点（Ｔ３）で、ＲＧＣ傷害のＥＲＧ測定値は、メマンチン処置動物と賦形剤処置動物とで同様であった。このような結果の１つの可能な説明は、活性がＥＲＧには反映されないがＶＥＣＰ発生には比較的大きく寄与するＲＧＣサブタイプのより大きな生存を、メマンチン処置が促進する、というものである。もう１つの可能な説明は、メマンチン処置は、生存ＲＧＣが視覚皮質において活性を発揮する能力を高める、例えばメマンチン処置は、より中枢レベルの視覚路（例えば視床の外側膝状核（ＬＧＮ）または１つもしくはそれ以上の視覚皮質領）で起こる可塑的変化に関与しうる、というものである。可塑性の例は、眼損傷またはＲＧＣ損傷により入力が減少または喪失した可能性のある標的ニューロンにおける、軸索発芽の向上、および／または新しいシナプスの形成を包含しうる。
【０１２１】
すなわち、本発明の結果は、眼圧を降下するようには見えない化合物であるメマンチンで全身的処置を行うことは、安全であり、かつ、慢性高眼圧（例えば緑内障）に関連する中枢神経系視覚活動の機能低下を軽減するのに有効であったことを示している。
【実施例３】
【０１２２】
実験的緑内障に対するメマンチン処置の眼科解剖学的評価
図１４は、前記賦形剤処置サルおよびメマンチン処置サルにおけるレーザー処置高眼圧（ＯＤ）眼の平均ＩＯＰヒストリーを表すグラフである。図１４は図１と同様であるが、図１４はＨＲＴ検査指示を含む。図１５は組織学的分析に使用した網膜サンプルの位置を示す。各サンプルは３mm角で、平らに載せた固定化網膜−ＲＰＥ−脈絡膜から透明テンプレートを用いて切り出した。中心窩周囲（ＰＦ）サンプルは、中心窩を中心とした。サンプル１〜３は、中心窩から水平および垂直方向に３．５〜６．５mm離れ、サンプル４〜７は、中心窩から斜め方向に８．５〜１１．５mm離れて位置した。切片は、太線で示す下端から（サンプルＰＦ）または中心窩に面した端から（サンプル１〜７）切り取った。破線円は、視神経乳頭（ＯＮＨ）の位置を示す。
【０１２３】
図１６は、賦形剤処置動物（Ｍ９１、表５参照）の視神経円板および組織切片の写真である。
【０１２４】
表５
2008507588.tif 000011
対側正常眼圧（ＯＳ）眼の値は括弧内に示す。
【０１２５】
円板写真は、ＩＯＰ上昇後約５箇月の時点（ＨＲＴ測定時点Ｔ２と同時期）に得たもので、この時点で高眼圧眼の平均ＩＯＰヒストリーは約５０mmHgであった。高眼圧（ＯＤ）および正常眼圧（ＯＳ）眼のステレオ対の一つの画像を、図１６の上部のパネルに示す。ＯＤ眼は円板の萎縮した外観および血管の鼻側偏位を示している。各眼底写真の下に示すのは、その眼のＰＦサンプル部分の切片の顕微鏡写真である。ＯＳ眼においては、ＲＧＣ層が６または７層をなすＲＧＣ核を有することが明らかである。ＯＤ眼においては、ＲＧＣ層が１つの核層を含み、高眼圧眼ではＲＧＣが実質的に失われることを示している。外核層（ＯＮＬ）または内核層（ＩＮＬ）には損失が殆どまたは全く見られなかったので、ＲＧＣ損失は選択的であるようである。
【０１２６】
図１７に示すように、ＯＤ眼の中心神経節細胞層の細胞カウントは、平均ＩＯＰと高度に相関した、周辺網膜域でも同様の効果が見られた。すなわち、すべての網膜域をグループ化した場合、メマンチン処置は、ＩＯＰ上昇によるＲＧＣ細胞損失から眼を保護しないようである。しかし、平均ＩＯＰが中程度（２６〜３９mmHg）の動物のサブグループでは、メマンチン処置は部分的に選択的な細胞損失に関連付けられるようであった。例えば、図１８に示すように、メマンチン処置動物の網膜下方部分の細胞損失は、賦形剤処置動物の網膜下方部分の細胞損失よりも少なかった。図１８に示す眼の細胞カウントの詳細は表４に示す。表４はまた、Ｔ０から死までの期間にわたって得た平均ＩＯＰ値の分布が２動物群間で同様であることを示している。
【０１２７】
表４
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＊  ２処置群の比較：両側スチューデントt検定
【０１２８】
上記のように、中程度にＩＯＰ上昇した眼では、メマンチン処置が下部網膜のＲＧＣ層における細胞の明らかな保存と関連したことが明らかである。
【０１２９】
メマンチン処置が網膜毒性の組織学的徴候に関連するかを調べるために、２処置群の全ＯＳ眼の神経節細胞層における細胞カウントを調べた。図１９に示すように、メマンチン処置群のＲＧＣカウントは賦形剤処置群のものと有意に異ならなかった。このことは、いずれの個々のサンプル部分のカウントについても、および全サンプルのカウントの合計についても言えることであった。両群の正常眼圧眼の染色組織切片検査によると、他の網膜細胞層／細胞種のいずれにも密度または外観にメマンチン処置の影響はなかった。
【０１３０】
ＩＯＰ上昇後約５、１０、１４、２０、４８および６０週の時点で全動物の両眼から得たステレオ眼底写真について、媒質の混濁、円板出血、血管非灌流、または視神経乳頭および周辺網膜に対する虚血性傷害の明らかな徴候を調べた。観察された唯一の血管異常は、陥凹の進行した眼の円板における大血管の鼻側偏位であった。両処置群において、最高ＩＯＰ上昇眼（表５参照）は、視神経乳頭辺縁部の顕著な損失を伴う中程度ないし重度の視神経萎縮の徴候を示した。上部および下部乳頭周囲網膜において、神経線維層の軸索損失が見られた。
【０１３１】
慢性高眼圧の誘発から約３、５および１０箇月後に共焦点レーザー断層スキャンによって行った視神経乳頭トポグラフィーのデータを表５に示す。神経乳頭形態は、生理学的陥凹または視神経乳頭辺縁部のいずれかの性質を反映する、表６に示す一連の尺度で特徴付けた。
【０１３２】
表６
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＊  線形回帰分析により測定
＊＊ 共分散分析により測定
値は、ＨＲＴ検査を実施した各処置群の全５動物の測定結果を表す。
【０１３３】
図２０に、ＩＯＰ上昇後約５箇月の時点（Ｔ２）での陥凹の測定結果を示す。図２１に、同じ時点での視神経乳頭辺縁部の測定結果を示す。各プロットにおいて、傾きが急であるほど該測定項目に対する高眼圧の影響が大きい。図２０に示すように、ＩＯＰ上昇は、メマンチン処置動物よりも賦形剤処置動物において、より大きい影響と関連付けられる。図２１に示すように、２処置群におけるＩＯＰ上昇の影響は、視神経乳頭辺縁部の測定結果ではより類似していた。トポグラフィー結果の詳細を表６に示す。図２０および図２１の結果は、高眼圧が視神経乳頭の測定項目に対し明らかに影響を及ぼすことを示している。陥凹に対する高眼圧の影響は、メマンチン処置動物においては賦形剤処置動物よりも明らかに小さかったが、視神経乳頭辺縁部に対する高眼圧の影響は２処置群間でより類似している。各処置群の５動物の高眼圧眼から３測定時に得た未正規化測定値を、図２２（陥凹）および図２３（視神経乳頭辺縁部）にプロットした。図２２の左パネルは、陥凹の表面下容積（Ａ）、陥凹形状（Ｂ）、および陥凹面積／円板比（Ｃ）の測定結果を示す。右パネルは、メマンチン処置動物の対応する測定結果を示す。メマンチン処置動物では平均して、対照動物よりも陥凹容積および相対陥凹面積が小さかった。陥凹形状における最大の圧力関連変化は、ＩＯＰ上昇から約３箇月後までに起こった。図２３に示すように、メマンチン処置動物では平均して、辺縁部面積、辺縁部体積およびＲＮＦＬ厚さがより大きかった。
【０１３４】
３測定時点にわたって、視神経円板の大きさは安定に保たれた。例えば、これらの時点にわたる円板サイズの変化は７％以下であった。
上記結果は、メマンチンの長期投与が組織学的網膜毒性に関連付けられないことを示しており、このことは、先に記載した電気生理学的試験結果と一致する。
【実施例４】
【０１３５】
実験的緑内障のメマンチン処置の中枢神経系解剖学的評価
実施例１に記載した動物の灌流後、脳を頭蓋から外し、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中４％パラホルムアルデヒドに少なくとも４８時間浸漬して固定化した。視床の左外側膝状核（ＬＧＮ）を前頭面でブロックし、グリセロール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびリン酸緩衝液の組成物に数日間浸漬して凍結防止した。そのブロックを、１００％アルコールおよびドライアイスの混合物で冷却したイソペンタン中で凍結させた。ＬＧＮ全体の冠状切片（５０μｍ）をスライドミクロトームで連続的に切断した。７切片毎にスライドグラスに載せ、クレシルバイオレットで染色した。
【０１３６】
モノクローナル抗体（クローンＰＡ−２３５，Sigma, St. Louis、ミズーリ）および従来の方法を用いて、組織切片のパルブアルブミン免疫細胞化学検査を行った。
組織切片の組織学的検査ならびにニューロンの大きさおよび数の測定を、従来の方法で行った。
【０１３７】
メマンチン処置群および賦形剤処置群の３層のそれぞれにおいて、ニューロンは正常なサイズ分布を示した。緑内障における細胞面積変化を調べるために、賦形剤およびメマンチン処置した各緑内障動物の各ＬＧＮ層の平均ニューロン面積を、緑内障のない正常動物の対応するＬＧＮ層の平均ニューロン面積と比較した。正常群の平均ニューロン面積および賦形剤またはメマンチン処置緑内障動物の平均ニューロン面積の差を、正常群の平均ニューロン面積で除することによって、ニューロン縮小率を計算した。正常群の層１、層４および層６の平均ニューロン面積はそれぞれ２３８．５±１２．４μｍ２（平均＋ＳＤ）、２０２．６±２０．８μｍ２および２１９．７±３５．８μｍ２であった。
【０１３８】
本明細書に記載するように、上記のような実験動物において、メマンチン処置群と賦形剤処置群との間で、平均ＩＯＰまたは最高ＩＯＰに顕著な差はなかった。さらに、平均視神経繊維損失率にも、２群間に顕著な差はなかった。
【０１３９】
賦形剤処置動物では、層１、４および６のパルブアルブミン免疫反応ニューロンの細胞体は、メマンチン処置動物のパルブアルブミン免疫反応ニューロンと比較して、縮小し、卵形に見えた。全体的に、メマンチン処置動物の層１、４および６のパルブアルブミン免疫反応ニューロンは、賦形剤処置対照動物のものと比較して、大きいサイズを示した。しかし、層６のニューロンにおける差は統計学的に有意ではなかった。
【０１４０】
メマンチン処置動物および賦形剤処置対照動物の平均ＬＧＮニューロン数には、有意差がなかった。
上記のような結果から、慢性高眼圧、例えば実験的緑内障において、メマンチンはＬＧＮニューロンにおいて経シナプス萎縮を軽減すると結論付けることができる。
【実施例５】
【０１４１】
抗興奮毒性剤による緑内障の処置
ルーチンな眼検診を受けた４８歳の男性が、緑内障の初期兆候があることを眼科医から告げられる。患者は視野損失または眼痛の増大を感じていなかったので驚く。医師は患者に、更なる視野欠損を緩和するよう予防的療法を試すよう提案する。医師は数ある可能な抗興奮毒性処方の中から経口メマンチン処方を選択する。患者は、１日２回１錠ずつ服用し、６箇月後に再診を受けるよう指示される。
【０１４２】
６箇月後の再診時に、処置が有効であったかどうかを判断することができる。眼圧上昇および／または視野狭窄が、緑内障の眼症候進行の指標となりうる。しかし、視覚皮質の機能的脳造影（例えばＦＭＲＩまたは機能的ＰＥＴスキャンを用いることによる）によって、視覚皮質の電気的活性を測定することもできる。処置が最終的に有効であるかどうかの判断は、対照（例えば薬物療法前の皮質活性）との活性比較によって行いうる。同様の皮質活性検査により、患者が更なる視野欠損を生じておらず、処置が有効であることを示すことができる。
【０１４３】
本発明は、処置剤（例えば抗興奮毒性剤）を、視野欠損を自覚していない個体への投与により眼病態を処置するための医薬の製造において使用することをも包含する。さらに本発明は、処置剤（例えば抗興奮毒性剤）を、網膜神経変性に関連する中枢神経系応答の低下を軽減するために個体に投与することにより網膜神経変性に関連する眼病態を処置する医薬を製造するために使用することをも包含する。
【０１４４】
本明細書中に引用する特許、出願、刊行物および文献はいずれも、引用によりその全体を本発明の一部とする。
いくつかの特定の実施例および態様に関して本発明を説明したが、本発明はそれらに制限されるものではなく、特許請求の範囲内で多様に実施しうると理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】１動物の高眼圧（ＯＤ）眼の平均眼圧（ＩＯＰ）を時間の関数として示すグラフである。
【図２】メマンチン処置動物および賦形剤処置動物の眼の平均ＯＤ  ＩＯＰのグラフである。
【図３】正常眼圧（ＯＳ）眼のＥＲＧ応答のグラフである。パネルＡはフラッシュ応答である。パネルＢは律動様小波（ＯＰ）応答である。パネルＣはフリッカー応答である。
【図４】通常のＥＲＧ応答の振幅［フラッシュａ波（パネルＡ）、ｂ波（パネルＢ）、ＯＰ（パネルＣ）およびフリッカー（パネルＤ）］を、平均ＩＯＰの関数として示すグラフである。
【図５】１つのＯＳ眼の多局所ＥＲＧ応答のグラフである。パネルＡは一次応答のトレース列である。パネルＢは、パネルＡ中の中心７トレースの平均応答である。パネルＣは二次応答のトレース列である。パネルＤは、パネルＣの二次応答の平均応答である。較正は、８００nV、２００msec（パネルＡおよびＣ）；１０nV／deg2、２０msec（パネルＢ）；および５nV／deg2、２０msec（パネルＤ）である。
【図６】正規化した黄斑多局所ＥＲＧ応答の振幅を、ＲＧＣ層のＲＧＣカウントの関数として示すグラフである。
【図７】Ｔ１の時点で得た多局所ＥＲＧ黄斑応答の正規化したピーク振幅を、平均ＩＯＰの関数として示すグラフである。
【図８】Ｔ１、Ｔ２およびＴ３の時点における、賦形剤処置動物（黒四角）またはメマンチン処置動物（白丸）の高眼圧（ＯＤ）眼の平均応答振幅（nV／度2）のグラフである。
【０１４６】
【図９】ＶＥＣＰ応答振幅のグラフである。パネルＡは、正常眼圧（ＯＳ）眼の刺激に対する応答である（較正は、１０マイクロボルト、５０msec）。パネルＢは、両処置群の正規化（ＯＤ／ＯＳ）ピーク振幅の、平均ＩＯＰの関数としてのプロットである。
【図１０】ＶＥＣＰ応答振幅を、中心窩周囲ＲＧＣ層の細胞カウントの関数として示すグラフである。
【図１１】Ｔ３の時点で両処置群のＯＳ眼を刺激して得た電気生理学的測定値のグラフである。
【図１２】Ｔ３の時点で両処置群の動物の両眼から得た硝子体サンプルの平均グルタメートレベルのグラフである。
【図１３】生存ＲＧＣ率を時間の関数として示す仮定的モデルのグラフである。
【図１４】メマンチン処置動物および賦形剤処置動物のレーザー処置高眼圧（ＯＤ）眼の平均ＩＯＰヒストリーのグラフである。
【図１５】組織学的分析に用いた網膜サンプルの位置を示す図である。
【図１６】正常眼圧（ＯＳ）眼および高眼圧（ＯＤ）眼の眼底像（上のパネル）、並びに眼底像を示した同じ眼から得た中心窩周囲網膜サンプル部分の切片の顕微鏡写真（下のパネル）である。
【図１７】ＲＧＣ数をＩＯＰの関数として示すグラフである。
【図１８】賦形剤処置動物およびメマンチン処置動物の下方ＲＧＣ数のグラフである。
【図１９】両処置群のＯＳ眼のＲＧＣカウントのグラフである。
【０１４７】
【図２０】各処置群の最高平均ＩＯＰを有する５動物について、Ｔ２の時点で共焦点レーザースキャンを行って得た正規化陥凹測定値のグラフである。
【図２１】図２０の動物からＴ２の時点で得た正規化視神経乳頭辺縁部測定値のグラフである。
【図２２】各処置群の全５動物の高眼圧眼から得た、図２０に示す５つの陥凹測定値のうちの３つを、時間の関数として示すグラフである。
【図２３】各処置群の全５動物の高眼圧眼から得た、図２１に示す５つの視神経乳頭辺縁部測定値のうちの３つを、時間の関数として示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【国際調査報告】
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