(57)【要約】  Ｂ細胞悪性腫瘍又はアルツハイマー病以外のいずれの自己免疫性疾患にも罹っていない患者における、ＣＤ２０抗体を用いたアルツハイマー病(ＡＤ)又は認知症の治療方法を開示する。また、この方法への使用のための製造品も開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病を治療するために有効な量のネイキッドＣＤ２０抗体が被検体に投与されることを含む、被検体のアルツハイマー病の治療方法。
【請求項２】
前記被検体がＢ細胞悪性腫瘍に罹っていない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被検体が、アルツハイマー病以外の自己免疫性疾患を有さない、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記被検体が軽度から中程度のアルツハイマー病を有している、請求項１ないし３の何れか一に記載の方法。
【請求項５】
前記被検体にコリンエステラーゼ阻害薬が投与されることを更に含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記コリンエステラーゼ阻害薬が、ガランタミン、リバスチグミン及びドネペジルからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記被検体が中程度から重度のアルツハイマー病を有する、請求項１ないし３の何れか一に記載の方法。
【請求項８】
さらに、Ｎ-メチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニストが被検体に投与されることを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＮＭＤＡアンタゴニストがメマンチンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記被検体が非定型の自己抗体レベルを有する、請求項１ないし９の何れか一に記載の方法。
【請求項１１】
前記自己抗体が、β-アミロイド、カルジオリピン、チューブリン、グリア線維性酸性タンパク質、神経線維タンパク質(ＮＦＬ)、ガングリオシド、骨格タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質(ＭＢＰ)、セロトニン、ドーパミン、神経成長因子(ＮＧＦ)、プレセニリン、アミロイドβ-ペプチド(Ａｂｅｔａ)、促進した糖化末端生成物に対するレセプター(ＲＡＧＥ)、又は脳応答性抗体(ＢＲＡ)に対する抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＤ２０抗体が第一医薬である場合に、さらに、アルツハイマー病を治療するために有効な量の第二医薬が被検体に投与されることを含む、請求項１ないし１１の何れか一に記載の方法。
【請求項１３】
前記第二医薬が、コリンエステラーゼ阻害薬、ガランタミン、リバスチグミン、リバスチグミン経皮パッチ、ドネペジル、タクリン、ＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニスト、メマンチン、ネラメキサン、ＮＧＦのアデノ関連ウイルス運搬、ＣＥＲＥ-１１０、β遮断薬、抗精神病薬、アセチルコリン前駆体、ニコチン性又はムスカリン性のアゴニスト、抗β-アミロイド抗体、抗ＮＧＦ抗体、ＲＡ６２４、ワクチン、ヒトのアミロイドワクチン、アミロイド形成に伴うβないしはγ分泌酵素の活性を遮断する薬剤、抗アミロイド療法、セロトニン、ノルエピネフリン、ソマトスタチン、ＡＰＰのアミロイド-βへの変換又は老人性プラーク及び神経原線維変化の形成を妨げる薬剤、β-部位アミロイド-前駆体タンパク質切断酵素アンタゴニスト、β-分泌酵素(ＢＡＣＥ)アンタゴニスト、ＢＡＳＥ１アンタゴニスト、ＢＡＳＥ２アンタゴニスト、γ-分泌酵素アンタゴニスト、プレセニリン-１(ＰＳＥＮ-１)アンタゴニスト、プレセニリン-２(ＰＳＥＮ-２)アンタゴニスト、ＡＰＯ-Ｅ４アンタゴニスト、抗鬱薬、抗痙攣薬、セロトニン再取込インヒビター、セルトラリン、トラゾドン、ジバルプロエクス(divalprolex)、ガバペンチン、リスペリドン、オランザピン、クエチアピン、チオリダジン、コレステロール低下薬又はスタチン、ＨＭＧ-ＣｏＡ還元酵素、シンバスタチン、免疫調節性薬、抗酸化薬、ビタミンＥ、魚油、αリポ酸、カロチン、ニコチン、ギンナン抽出物、セレギリン、メシル酸エルゴロイド、エストロゲン、消炎剤、非ステロイド系抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)、アスピリン、イブプロフェン、コックス-２阻害薬、ロフェコキシブ、ナプロキセン、セレコキシブ、ナプロキセン、イチョウ葉エキス、ＰＰＩ-１０１９、ヒューペルジンＡ、ビタミン、葉酸塩、Ｂ６、Ｂ１２、アスコルビン酸、ビタミンＥ、セレニウム、ＧＡＢＡ(Ｂ)レセプターアンタゴニスト、ＳＧＳ７４２、ＮＣ-７５８、Ｃ-１０７３、ＦＫ９６２、クルクミン、ＯＮＯ-２５０６ＰＯ、メシル酸ラサギリン、バルプロエート、ＳＲ５７７４６Ａ、ＮＳ２３３０、ＭＰＣ-７８６９、インターフェロン、インターフェロンα、タンパク分解性βアミロイド軽鎖抗体断片、細胞障害性薬、化学療法剤、免疫抑制薬、ＴＮＦα阻害薬、疾患修飾抗リウマチ薬(ＤＭＡＲＤ)、インテグリンアンタゴニスト又は抗体、副腎皮質ステロイド及びプリンヒポキサンチン誘導体からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被検体がＣＤ２０抗体によって今までに治療されたことがない、請求項１ないし１３の何れか一に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体がキメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体である、請求項１ないし１４の何れか一に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体がリツキシマブを含んでなる、請求項１ないし１５の何れか一に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体がヒト化２Ｈ７を含んでなる、請求項１ないし１５の何れか一に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体が２Ｆ２(ｈｕＭａｘ-ＣＤ２０)を含んでなる、請求項１ないし１５の何れか一に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が静脈内、皮下、又は髄膜下に投与される、請求項１ないし１８の何れか一に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が静脈内に投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
およそ１か月の期間以内で、およそ１〜４回の投薬頻度で、およそ２００ｍｇから２０００ｍｇの範囲の用量で抗体を投与することを含んでなる請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記用量がおよそ５００ｍｇから１５００ｍｇの範囲である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記用量がおよそ７５０ｍｇから１２００ｍｇの範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が１又は２回の投薬で投与される、請求項２０ないし２３の何れか一に記載の方法。
【請求項２５】
前記１又は２回の投薬がおよそ２〜３週間以内で投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＣＤ２０抗体がアルツハイマー病を治療するために被検体に投与される唯一の医薬である、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
ＡＤを治療するために被検体に、前記ＣＤ２０抗体と、コリンエステラーゼ阻害薬及びＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニストからなる群から選択される第二医薬とが投与されることから基本的になる、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
認知症を治療するために有効な量のネイキッドＣＤ２０抗体が被検体に投与されることを含む、被検体の認知症の治療方法。
【請求項２９】
(ａ) ネイキッドＣＤ２０抗体を含む容器、と、
(ｂ) 被検体のアルツハイマー病又は認知症を治療するための指示を有するパッケージ挿入物
を具備してなる製造品。
【請求項３０】
さらに、第二医薬を含むもう一つの容器を具備し、前記のＣＤ２０抗体が第一医薬であって、さらに、被検体を第二医薬で治療することに関する指示をパッケージ挿入物に含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記第二医薬が、コリンエステラーゼ阻害薬又はＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニストである、請求項３０に記載の製造品。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
(関連出願)
本出願は、その全体の開示内容が出典明記により本明細書中に援用される２００５年４月２２日出願の仮出願第６０／６７４０２８号に基づく米国特許法１１９条の優先権を主張する非仮出願である。
【０００２】
(発明の分野)
本発明は、ＣＤ２０抗体を用いた、ヒト患者のＡＤ又は認知症の治療方法、並びにその使用のための指示書を具備する製造品に関する。
【０００３】
(発明の背景)
アルツハイマー病(ＡＤ)は今日の健康管理における重大な問題であり、過去１０年間では、公知の有益な治療がなかった。最も一般的な脳の神経変性疾患であるＡＤはすべての認知症症例のおよそ７０％を占める。この認知症は一般に、記憶、混乱、視覚空間、計算、判断及び、おそらく妄想及び幻覚の問題が明らかとなっている。疾患の初期には、認知症の行動の徴候はわずかであり、気付かれないことが多い。疾患の中間段階では、患者が単独で作業をまだ行うことができる反面、複雑な作業では援助が必要となることが多い。後期の段階では、さらに一般的な身体の機能、例えば咀嚼や嚥下、腸及び膀胱コントロール及び、呼吸行動が失われ、患者は寝たきりになることが多い。一般的に、疾患の発症後およそ５〜１０年に死に至る。現在、ＡＤは米国での主要な死因の第４番目である。
【０００４】
ＡＤにおいて、進行性神経変性は、相対的に、核基底層、海馬、扁桃体、嗅内皮質、そして最終的に側頭部、前頭部及び頭頂部の高位連合野の選択的な併発を含む、脳の複数の領域に起こる。神経系損傷及びシナプス密度の付随欠損は、学習及び記憶の検索に必須であるいくつかの神経系を使用不能にする。
もっとも一般的なＡＤは孤発性ＡＤと称され、すべての診断された症例のおよそ９０％を占める。このＡＤ型は、家族性ＡＤの遺伝的原因と結びつかなかったので、通常、孤発性と称する。それでも、遺伝した危険因子がこの型の疾患において作用するかもしれない。
【０００５】
Lal及びForsterは、自己免疫性及び加齢性の認知減退を再検討し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける脳応答性抗体(ＢＲＡ)の存在を検討している(Lal and Forster, Neurobiology of Aging, 9: 733-742 (1988))。Toro等は、Rev. Neurol. 29(12): 1104-7 (1999)において、プレセニリン-１遺伝子(ＰＳ-１)にＥ２８０Ａ突然変異を有するアルツハイマー病患者の血清のカルジオリピン及びβ-アミロイドに対する自己抗体のレベルを調査した。ＡＤにおける自己抗体は、Terryberry等 Neurobiology of Aging 19(3): 205-216 (1998)、Singh等 Neurosci. Lett 147(1): 25-28 (1992)、Davydova等 Bull Exp. Biol. Med. 134(1): 23-25 (2002)、Capsoni等 Mol. Cell. Neurosci. 21(1): 15-28 (2002)、Evseev等 Bull Exp. Biol. Med. 131(4): 305-308 (2001)、Appel等 Ann. N. Y. Acad. Sci. 747: 183-194 (1994)、D'Andrea, M. Brain Res. 982(1): 19-30 (2003)、Mruthinti等 Neurobiol Aging. 25(8): 1023-1032 (2004)、Nath等 Neuromolecular Med. 3(1): 29-39 (2003)、Weksler及びGoodhardt Exp Gerontol. 37:971-979 (2002)、及びFurlan等 Brain 126(Pt 2): 285-291 (2003)を含む他の文献によって調べられている。
また、ＡＤ療法に関しては、Keimowitz, R. Arch Neurol. 54(4): 485-8 (1997)、Aisen等 Neurology. 54(3): 588-93 (2000)、及びAisen等 Dementia. 7(4): 201-6 (1996)も参照のこと。
５つの処方薬は、ＡＤを治療するために米国食品医薬品局(ＦＤＡ)の承認を得ている。軽度〜中程度のＡＤを治療するために承認されている医薬のうちの４つは、コリンエステラーゼ阻害薬：ガランタミン(REMINYL(登録商標))、リバスチグミン(EXELON(登録商標))、ドネペジル(ARICEPT(登録商標))及びタクリン(COGNEX(登録商標))である。５つ目の承認された医薬はＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニストであり、メマンチン(NAMENDA(登録商標))と称され、中程度〜重度のＡＤの治療のために承認されている。
【０００６】
ＣＤ２０抗体及びそれを用いた治療
リンパ球は、造血過程の間に骨髄において生産される多種ある白血球のうちの１つである。リンパ球の２つの主な分類は、Ｂリンパ球(Ｂ細胞)とＴリンパ球(Ｔ細胞)である。ここで特に対象とするリンパ球はＢ細胞である。
Ｂ細胞は骨髄内で成熟して、その細胞表面上に抗原結合抗体を発現する骨髄を放出する。天然のＢ細胞がその膜結合性抗体に特異的な抗原と初めて遭遇すると、細胞は速やかに分離し、その子孫はメモリーＢ細胞と「プラズマ細胞(形質細胞、plasma cell)」と呼ばれるエフェクター細胞に分化する。メモリーＢ細胞は長い寿命を持ち、本来の親細胞と同じ特異性を有する膜結合性抗体を発現し続ける。プラズマ細胞は、膜結合性抗体を発現する代わりに、分泌型抗体を産生する。分泌された抗体は、体液性免疫の主要なエフェクター分子である。
【０００７】
ＣＤ２０抗原(ヒトＢリンパ球制限分化抗原、Ｂｐ３５とも呼ばれる)はプレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に位置するおよそ３５ｋＤの分子量の疎水性膜貫通型タンパク質である(Valentine等, J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989)；及びEinfeld等, EMBO J. 7(3):711-717(1988))。該抗原はまたＢ細胞非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)の９０％以上に発現されるが(Anderson等, Blood 63(6):1424-1433 (1984))、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常なプラズマ細胞又は他の正常な組織上には見出されない(Tedder等, J. Immunol. 135(2):973-979 (1985))。ＣＤ２０は分化及び細胞周期の開始の活性化過程における初期段階を調節し(上掲のTedderら)、おそらくはカルシウムイオンチャネルとして機能する(Tedder等, J. Cell. Biochem. 14D:195 (1990))。
【０００８】
Ｂ細胞リンパ腫ではＣＤ２０が発現されるため、この抗原はこのようなリンパ腫の「標的とする(ターゲティング)」ための候補となりうる。基本的に標的とするとは以下のことを言う：Ｂ細胞のＣＤ２０表面上抗原特異的な抗体を患者に投与する。これらの抗ＣＤ２０抗体は、正常及び悪性の何れのＢ細胞(表面上)のＣＤ２０抗原にも特異的に結合する；ＣＤ２０表面上抗原に結合する抗体は、腫瘍性Ｂ細胞を破壊及び減少に至らしめることができる。さらに、腫瘍を破壊する可能性を有する化学薬品又は放射性標識は抗ＣＤ２０抗体に結合させて、作用剤が腫瘍性Ｂ細胞特異的に「運ばれる」ようにすることができる。方法にかかわりなく、主たる目的は、腫瘍を破壊することである；特定の方法は、使用する特定の抗ＣＤ２０抗体により測定することができ、ゆえに、ＣＤ２０抗原を標的とする有用な方法はかなり異なる。
【０００９】
リツキシマブ(rituximab)(リツキサン(RITUXAN)(登録商標))抗体は、一般的にＣＤ２０抗原に対する遺伝子的操作を施したキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体である。リツキシマブは１９９８年４月７日に発行の米国特許第５７３６１３７号(Anderson等)において「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれている抗体である。リツキシマブは、再発性又は低抵抗性(refractory low-grade)又は濾胞性(follicular)の、ＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫患者の治療のためのものである。インビトロでは、リツキシマブは、補体依存性細胞障害性(ＣＤＣ)及び抗体依存細胞性細胞障害性(ＡＤＣＣ)を調節して、アポトーシスを誘導することが実証されている(Reff等, Blood 83(2):435-445 (1994)；Maloney等, Blood 88:637a (1996)；Manches等, Blood 101:949-954 (2003))。また、リツキシマブ及び化学療法及び毒素間の相乗効果は、実験的に観察された。特に、リツキシマブは、ドキソルビシン、CDDP、VP-16、ジフテリア毒素及びリシンの細胞障害性効果に対するヒトＢ細胞リンパ腫細胞系の薬物抵抗性の感度を高める(Demidem等 Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12(3):177-186 (1997))。インビボ前臨床研究では、リツキシマブが、カニクイザルの末梢血、リンパ節及び骨髄のＢ細胞を減少させることを示した (Reff等 Blood 83(2):435-445 (1994))。
【００１０】
また、リツキシマブは様々な非悪性腫瘍性自己免疫疾患において研究されており、そこでＢ細胞と自己抗体は疾患病理学上の役割があるようである。Edwards等, Biochem Soc. Trans. 30:824-828 (2002)。リツキシマブは、例えば、関節リウマチ(RA) (Leandro等, Ann. Rheum. Dis. 61:883-888 (2002)；Edwards等, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S46 (2002)；Stahl等, Ann. Rheum. Dis., 62 (Suppl. 1): OP004 (2003)；Emery等, Arthritis Rheum. 48(9): S439 (2003))、ループス(Eisenberg, Arthritis. Res. Ther. 5:157-159 (2003)；Leandro等 Arthritis Rheum. 46: 2673-2677 (2002)；Gorman等, Lupus, 13: 312-316 (2004))、免疫性血小板減少性紫斑病(D’Arena等, Leuk. Lymphoma 44:561-562 (2003)；Stasi等, Blood, 98: 952-957 (2001)；Saleh等, Semin. Oncol., 27 (Supp 12):99-103 (2000)；Zaia等, Haematolgica, 87: 189-195 (2002)；Ratanatharathorn等, Ann. Int. Med., 133: 275-279 (2000))、 赤芽球ろう (Auner等, Br. J. Haematol., 116: 725-728 (2002))；自己免疫性貧血(Zaja等, Haematologica 87:189-195 (2002) (Haematologica 87:336 (2002)に誤植あり)、寒冷凝集素症 (Layios等, Leukemia, 15: 187-8 (2001)；Berentsen等, Blood, 103: 2925-2928 (2004)；Berentsen等, Br. J. Haematol., 115: 79-83 (2001)；Bauduer, Br. J. Haematol., 112: 1083-1090 (2001)；Damiani等, Br. J. Haematol., 114: 229-234 (2001))、重症インスリン耐性のタイプＢ症候群(Coll等, N. Engl. J. Med., 350: 310-311 (2004)、混合クリオグロブリン血症(DeVita等, Arthritis Rheum. 46 Suppl. 9:S206/S469 (2002))、重症筋無力症(Zaja等, Neurology, 55: 1062-63 (2000)；Wylam等, J. Pediatr., 143: 674-677 (2003))、ウェゲナー肉芽腫症(Specks等, Arthritis & Rheumatism 44: 2836-2840 (2001))、難治性尋常性天疱瘡(Dupuy等, Arch Dermatol., 140:91-96 (2004))、皮膚筋炎(Levine, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9):S1299 (2002))、シェーグレン症候群(Somer等, Arthritis & Rheumatism, 49: 394-398 (2003))、急性タイプII混合クリオグロブリン血症(Zaja等, Blood, 101: 3827-3834 (2003))、尋常性天疱瘡(Dupay等, Arch. Dermatol., 140: 91-95 (2004))、自己免疫性ニューロパチー(Pestronk等, J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 74:485-489 (2003))、腫瘍随伴性眼球クローヌス-筋クローヌス症候群(Pranzatelli等 Neurology 60(Suppl. 1) PO5.128:A395 (2003))、及び再発性多発性硬化症(RRMS)の徴候及び症状を潜在的に軽減することが報告されている。Cross等 (abstract) 「Preliminary Results from a Phase II Trial of Rituximab in MS」 Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis, 20-21 (2003)。
【００１１】
第ＩＩ相研究(ＷＡ１６２９１)を関節リウマチ(ＲＡ)患者で行い、リツキシマブの安全性及び有効性に関する４８週フォローアップデータを得ている。Emery等 Arthritis Rheum 48(9): S439 (2003)；Szczepanski等 Arthritis Rheum 48(9): S121 (2003)；Edwards等, "Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patients with rheumatoid arthritis" N Engl. J. Med. 350:2572-82 (2004)。合計１６１人の患者は、４つの治療アームについて均等にランダム化した：メトトレキセート、リツキシマブ単独、リツキシマブとメトトレキセート、及びリツキシマブとシクロホスファミド(ＣＴＸ)。リツキシマブの治療投薬計画は、第１日目と第１５日目に１ｇを静脈内に投与された。ほとんどのＲＡ患者はリツキシマブを注入すると、十分な耐性となり、初めの注入の間でさえ少なくとも一の有害症状を経験するものは３６％に上る(これに対してプラシーボ投与患者は３０％)。概して、大多数の有害症状は、重症度が軽度から中程度のものであると考えられ、すべての治療群全体で等しかった。４８週間の４アーム全体の中に合計１９の重度の有害症状があった。それはリツキシマブ／ＣＴＸ群においてわずかに頻度が多かった。感染の発病は、すべての群全体で等しかった。このＲＡ患者集団の深刻な感染の平均率は年間１００患者につき４．６６であった。それは地域に密着した疫学研究で報告されたＲＡ患者の入院を必要とする感染率より低い(年間１００患者につき９．５７)。Doran等, Arthritis Rheum. 46:2287-2293 (2002)。
【００１２】
少数の自己免疫神経障害(Pestronk等, 上掲)、眼球クローヌス-筋クローヌス症候群(Pranzatelli等, 上掲)及びＲＲＭＳ (Cross等, 上掲))を含む神経病患者におけるリツキシマブの報告された安全特性は、腫瘍学又はＲＡにおいて報告されたものと同じであった。ＲＲＭＳ患者においてインターフェロンβ(ＩＦＮ-β)又は酢酸グラチラマー(glatiramer acetate)と組み合わせたリツキシマブの現行の研究者主導試験(investigator-sponsored trial, IST)(Cross等, 上掲)では、１０人の治療された患者のうちの１人はリツキシマブの第一注入の後に中程度の熱と悪寒を経験し、一晩観察のために病院に入院したが、その他の９人の患者は有害症状を報告することなく４の注入投薬計画を終えた。
【００１３】
ＣＤ２０抗体及びＣＤ２０結合分子に関する特許文献には、米国特許第５７７６４５６号、同第５７３６１３７号、同第５８４３４３９号、同第６３９９０６１号及び同第６６８２７３４号、並びに米国公開特許第２００２／０１９７２５５号、米国公開特許第２００３／００２１７８１号、米国公開特許第２００３／００８２１７２号、米国公開特許第２００３／００９５９６３号、米国公開特許第２００３／０１４７８８５号(Anderson等)；米国特許第６４５５０４３号、米国公開特許第２００３／００２６８０４号及び国際公開第２０００／０９１６０号(Grillo-Lopez, A.)；国際公開第２０００／２７４２８号(Grillo-Lopez及びWhite)；国際公開第２０００／２７４３３号及び米国公開特許第２００４／０２１３７８４号(Grillo-Lopez及びLeonard)；国際公開第２０００／４４７８８号(Braslawsky等)；国際公開第２００１／１０４６２号(Rastetter, W.)；国際公開第０１／１０４６１号(Rastetter及びWhite)；国際公開第２００１／１０４６０号(White及びGrillo-Lopez)；米国公開特許第２００１／００１８０４１号、米国公開特許第２００３／０１８０２９２号、国際公開第２００１／３４１９４号(Hanna及びHariharan)；米国公開特許第２００２／０００６４０４号及び国際公開第２００２／０４０２１号(Hanna及びHariharan)；米国公開特許第２００２／００１２６６５号及び国際公開第２００１／７４３８８号(Hanna, N.)；米国公開特許第２００２／００５８０２９号(Hanna, N.)；米国公開特許第２００３／０１０３９７１号(Hariharan及びHanna)；米国公開特許第２００５／０１２３５４０号(Hanna等)；米国公開特許第２００２／０００９４４４号及び国際公開第２００１／８０８８４号(Grillo-Lopez, A.)；国際公開第２００１／９７８５８号(White, C.)；米国公開特許第２００２／０１２８４８８号及び国際公開第２００２／３４７９０号(Reff, M.)；国際公開第２００２／０６０９５５号(Braslawsky等)；国際公開第２００２／０９６９４８号(Braslawsky等)；国際公開第２００２／０７９２５５号(Reff及びDavies)；米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第１９９８／５６４１８(Lam等)；国際公開第１９９８／５８９６４(Raju, S.)；国際公開第１９９９／２２７６４号(Raju, S.)；国際公開第１９９９／５１６４２号、米国特許第６１９４５５１号、米国特許第６２４２１９５号、米国特許第６５２８６２４号及び米国特許第６５３８１２４号(Idusogie等)；国際公開第２０００／４２０７２号(Presta, L.)；国際公開第２０００／６７７９６号(Curd等)；国際公開第２００１／０３７３４号(Grillo-Lopez等)；米国公開特許第２００２／０００４５８７号及び国際公開第２００１／７７３４２号(Miller及びPresta)；米国公開特許第２００２／０１９７２５６号(Grewal, I.)；米国公開特許第２００３／０１５７１０８号(Presta, L.)；国際公開第０４／０５６３１２号(Lowman等)；米国公開特許第２００４／０２０２６５８号及び国際公開第２００４／０９１６５７号(Benyunes, K.)；国際公開第２００５／０００３５１号(Chan, A.)；米国公開特許第２００５／００３２１３０号Ａ１(Beresini等)；米国公開特許第２００５／００５３６０２号Ａ１(Brunetta, P.)；米国特許第６５６５８２７号、同第６０９０３６５号、同第６２８７５３７号、同第６０１５５４２号、同第５８４３３９８号、及び同第５５９５７２１号、(Kaminski等)；米国特許第５５００３６２号、同第５６７７１８０号、同第５７２１１０８号、同第６１２０７６７号、同第６６５２８５２号(Robinson等)；米国特許第６４１０３９１号(Raubitschek等)；米国特許第６２２４８６６号及び国際公開第００／２０８６４号(Barbera-Guillem, E.)；国際公開第２００１／１３９４５号(Barbera-Guillem, E.)；米国公開特許第２００５／００７９１７４号Ａ１(Barbera-Guillem等)；国際公開第２０００／６７７９５号(Goldenberg)；米国公開特許第２００３／０１３３９３０号及び国際公開第２０００／７４７１８号(Goldenberg及びHansen)；米国公開特許第２００３／０２１９４３３号及び国際公開第２００３／６８８２１号(Hansen等)；国際公開第２００４／０５８２９８号(Goldenberg及びHansen)；国際公開第２０００／７６５４２号(Golay等)；国際公開第２００１／７２３３３号(Wolin及びRosenblatt)；米国特許第６３６８５９６号(Ghetie等)；米国特許第６３０６３９３号及び米国公開特許第２００２／００４１８４７号(Goldenberg, D.)；米国公開特許第２００３／００２６８０１号(Weiner及びHartmann)；国際公開第２００２／１０２３１２号(Engleman, E.)；米国公開特許第２００３／００６８６６４号(Albitar等)；国際公開第２００３／００２６０７号(Leung, S.)；国際公開第２００３／０４９６９４号、米国公開特許第２００２／０００９４２７号、及び米国公開特許第２００３／０１８５７９６号(Wolin等)；国際公開第２００３／０６１６９４号(Sing及びSiegall)；米国公開特許第２００３／０２１９８１８号(Bohen等)；米国公開特許第２００３／０２１９４３３号及び国際公開第２００３／０６８８２１号(Hansen等)；米国公開特許第２００３／０２１９８１８号(Bohen等)；米国公開特許第２００２／０１３６７１９号(Shenoy等)；国際公開第２００４／０３２８２８号(Wahl等)；及び国際公開第２００２／５６９１０号(Hayden-Ledbetter)；米国公開特許第２００３／０２１９４３３号Ａ１(Hansen等)；国際公開第２００４／０３５６０７号(Teeling等)；米国公開特許第２００４／００９３６２１号(Shitara等)；国際公開第２００４／１０３４０４号(Watkins等)；国際公開第２００５／０００９０１号(Tedder等)；米国公開特許第２００５／００２５７６４号(Watkins等)；国際公開第２００５／０１６９６９号及び米国公開特許第２００５／００６９５４５号Ａ１(Carr等)；及び国際公開第２００５／０１４６１８号(Chang等)が含まれる。また、米国特許第５８４９８９８号及び欧州特許第３３０１９１号(Seed等)；欧州特許第３３２８６５号Ａ２(Meyer及びWeiss)；米国特許第４８６１５７９号(Meyer等)；米国公開特許第２００１／００５６０６６号(Bugelski等)；及び国際公開第１９９５／０３７７０号(Bhat等)も参照のこと。
また、米国公開特許第２００５／００７９１８４号Ａ１、米国公開特許第２００４／００１８５５７号Ａ１、国際公開第２００５／０１６２４１号Ａ２、国際公開第２００５／００９５３９号Ａ２、国際公開第２００４／１０５６８４号Ａ２、国際公開第２００４／０８０３８７号Ａ２、国際公開第２００４／０７４４３４号Ａ２、国際公開第２００４／０６０９１１号Ａ２、国際公開第２００４／０４５５１２号Ａ２、国際公開第２００４／０３２８２８号Ａ２、及び国際公開第２００３／０４３５８３号Ａ２も参照のこと。
【００１４】
リツキシマブを用いた治療法に関する文献には、Perotta及びAbuel, 「Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to rituximab」 Abstract # 3360 Blood 10(1)(part 1-2): p. 88B (1998)；Perotta等, 「Rituxan in the treatment of chronic idiopathic thrombocytopaenic purpura (ITP)」, Blood, 94: 49 (abstract) (1999)；Matthews, R., 「Medical Heretics」 New Scientist (7 April, 2001)；Leandro等, 「Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response」  Arthritis and Rheumatism 44(9): S370 (2001)；Leandro等, 「An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus」, Arthritis and Rheumatism, 46:2673-2677 (2002)、この中では２週間の期間に各患者はリツキシマブ５００ｍｇの２回投与、シクロフォスファミド７５０ｍｇの２回投与、及び高用量経口副腎皮質ステロイドを受け、この治療患者のうち２人はそれぞれ７か月目と８か月目に再発し、異なるプロトコールで再治療されている；「Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy」 Weide等, Lupus, 12: 779-782 (2003)、この中ではある患者はリツキシマブ(３７５ｍｇ／ｍ２×４回、１週間間隔で繰り返す)で治療を受け、更に５〜６か月ごとにリツキシマブを適用し、次いで維持療法として３か月ごとに３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブ投与をした、他方、難治性ＳＬＥ患者はリツキシマブで成功裏に治療され、維持療法を３か月ごとに受けている、両患者はリツキシマブ療法によく応答している；Edwards及びCambridge, 「Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes」 Rheumatology 40:205-211 (2001)；Cambridge等, 「B lymphocyte depletion in patients with rheumatoid arthritis: serial studies of immunological parameters」 Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S1350 (2002)；Edwards等, 「Efficacy and safety of rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis and Rheumatism 46(9): S197 (2002)；Pavelka等, Ann. Rheum. Dis. 63: (S1):289-90 (2004)；Emery等, Arthritis Rheum. 50 (S9):S659 (2004)；Levine及びPestronk, 「IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using rituximab」 Neurology 52: 1701-1704 (1999)；DeVita等, 「Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis」 Arthritis & Rheum 46:2029-2033 (2002)；Hidashida等 「Treatment of DMARD-refractory rheumatoid arthritis with rituximab.」  the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002に公開；Tuscano, J. 「Successful treatment of infliximab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab」 the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002に公開；「Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity; insights from the clinic」 Martin and Chan, Immunity 20:517-527 (2004)；Silverman及びWeisman, 「Rituximab Therapy and Autoimmune Disorders, Prospects for Anti-B Cell Therapy」, Arthritis and Rheumatism, 48: 1484-1492 (2003)；Kazkaz及びIsenberg, 「Anti B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases」, Current opinion in pharmacology, 4: 398-402 (2004)；Virgolini and Vanda, 「Rituximab in autoimmune diseases」, Biomedicine & pharmacotherapy, 58: 299-309(2004)； Klemmer等, 「Treatment of antibody mediated autoimmune disorders with a AntiCD20 monoclonal antibody Rituximab」, Arthritis And Rheumatism , 48: (9) 9,S (SEP), page: S624-S624 (2003)；Kneitz等, 「Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases」, Immunobiology, 206: 519-527 (2002)；Arzoo等, 「Treatment of refractory antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab)」Annals of the Rheumatic Diseases,  61 (10), p922-4 (2002)；Looney, R, 「Treating human autoimmune disease by depleting B cells」Ann Rheum Dis. 61(10): 863-866 (2002)；「Future Strategies in Immunotherapy」 Lake及びDionne, Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (2003 by John Wiley & Sons, Inc.)Article Online Posting Date: January 15, 2003 (Chapter 2 「 Antibody-Directed Immunotherapy」)；Liang and Tedder, Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine, Section: CD20 as an Immunotherapy Target, 文献オンライン登記日: ２００２年１月１５日 表題「CD20」；「Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens」と題するAppendix 4A  Stockinger等, 編集: Coligan等, in Current Protocols in Immunology (2003 John Wiley & Sons, Inc) オンライン登記日: ２００３年３月；印刷物出版日: ２００３年２月；Penichet及びMorrison, 「CD Antibodies/molecules: Definition; Antibody Engineering」 Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine Section: Chimeric, Humanized and Human Antibodies; オンライン登記 ２００２年１月１５日；Specks等 「Response of Wegener’s granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy」 Arthritis & Rheumatism 44:2836-2840 (2001)；online abstract submission and invitation Koegh等, 「Rituximab for Remission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis: Report of a Prospective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients」, American College of Rheumatology, Session Number: 28-100, Session Title: Vasculitis, Session Type: ACR Concurrent Session, Primary Category: 28 Vasculitis, Session 10/18/2004 (<http: //www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp>)；Eriksson, 「Short-term outcome and safety in 5 patients with ANCA-positive vasculitis treated with rituximab」, Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003)；Jayne等, 「B-cell depletion with rituximab for refractory vasculitis」 Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003)；Jayne, poster 88 (11th International Vasculitis and ANCA workshop), 2003 American Society of Nephrology；Stone及びSpecks, 「Rituximab Therapy for the Induction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vasculitis」, the 2002-2003 Immune Tolerance Networkのthe Clinical Trial Research Summary, <http: //www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html>が含まれる。また、Leandro等, 「B cell repopulation occurs mainly from naive B cells in patient with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus」 Arthritis Rheum., 48 (Suppl  9): S1160 (2003)も参照。
【００１５】
(発明の概要)
第一の態様では、本発明は、アルツハイマー病の治療のために有効な量のネイキッドＣＤ２０抗体が被検体に投与されることを含む、被検体のアルツハイマー病の治療方法を提供する。
第二の態様では、本発明は、認知症の治療のために有効な量のネイキッドＣＤ２０抗体が被検体に投与されることを含む、被検体の認知症の治療方法に関する。
さらに、本発明は、
(ａ) ネイキッドＣＤ２０抗体を内包する容器；と
(ｂ) 被検体のアルツハイマー病又は認知症を治療するための指示を含むパッケージ挿入物
を具備する製造品に関する。
【００１６】
(好ましい実施態様の詳細な説明)
Ｉ．定義
「認知症」は、器質性因子又は心理的因子、見当識障害、障害性の記憶、判断及び知性、並びに浅い不安定情動に特徴付けられるものによる一般的な精神悪化を指す。本明細書中の認知症には、血管性認知症、虚血性血管性認知症(ＩＶＤ)、前頭側頭骨認知症(ＦＴＤ)、レビー小体型認知症、アルツハイマー性認知症などが含まれる。高齢者の中で最も一般的な認知症の形態はアルツハイマー病(ＡＤ)である。
「アルツハイマー病(ＡＤ)」は、記憶喪失、混乱及び見当識障害によって明らかになる進行性の精神悪化を指し、一般に高齢期に発症し、共通して５〜１０年で死に至る。アルツハイマー病は、熟練した神経科医又は臨床医により診断されうる。一実施態様では、ＡＤを有する被検体は、可能性のあるＡＤの存在に関して、国立神経病・言語障害・脳卒中研究所／アルツハイマー病及び関連疾患研究所(ＮＩＮＣＤＳ／ＡＤＲＤＡ)判定基準を満たすであろう。
「軽度〜中程度の」又は「早期の」ＡＤなる表現は本明細書中で同義として用いられ、進行しないＡＤを指し、疾患の徴候又は症状が重症でないものを指す。軽度〜中程度又は早期のＡＤを有する被検体は、熟練した神経科医又は臨床医によって同定できる。一実施態様では、軽度〜中程度のＡＤを有する被検体は、簡易精神状態検査(ＭＭＳＥ)を用いて同定される。
【００１７】
本明細書中の「中程度〜重度」又は「後期の」ＡＤは前進し、疾患の徴候又は症状が宣告されるＡＤを指す。このような被検体は、熟練した神経科医又は臨床医によって同定できる。この型のＡＤを有する被検体は、コリンエステラーゼ阻害薬による治療にもはや応答せず、有意に低減したアセチルコリンレベルを有しうる。一実施態様では、中程度〜重度のＡＤを有する被検体は、簡易精神状態検査を用いて同定される。
「簡易精神状態検査(ＭＭＳＥ)」は、記憶の愁訴又は、認知症の診断が考慮されるときに最も一般的に用いられる試験である。１２〜２６ポイントのスコアを有する被検体は、軽度〜中程度の認知症又はＡＤを有するとみなされうる。１２ポイント未満のスコアを有する被検体は、重度の認知症又はＡＤを有するとみなされうる。ＭＭＳＥは一連の質問表及び試験を含んでおり、それぞれは、正しく答えられる場合にポイントを記録する。すべての答えが正しい場合、最大３０ポイントのスコアとなりうる。アルツハイマー病をもつ人々は一般に２６ポイント以下となる。完全な試験のコピーは、心理的判定源(Psychological Assessment Resources、ＰＡＲ)ウェブサイトhttp://www.parinc.comから入手可能である。
「家族性ＡＤ」は、遺伝子欠損によって生じるＡＤの遺伝性の形態である。
「孤発性ＡＤ」は、環境因子と遺伝因子、例えばＡｐｏＥ４＋遺伝子型の組合せによって生じると考えられている最も一般的なＡＤである。すべての診断されたＡＤ患者のほぼ９０％は、孤発性型の疾患を有する。
【００１８】
「標準的なケア」の投薬により、ＡＤ又は認知症を治療するために最も一般的に用いられる一又は複数の医薬が意図される。例えば、ＡＤのための標準的なケアは、コリンエステラーゼ阻害薬及び／又はＮＭＤＡ拮抗薬であってもよい。
ＡＤ又は認知症の「症状」は、構造、機能又は感覚の正常からの逸脱又は任意の病的な現象であり、被検体により経験され、ＡＤ又は認知症を表すものである。
本明細書中の「被検体」はヒト被検体である。本明細書のために、被検体はＡＤ又は認知症の被検体を指す。通常、被検体は、ＡＤ又は認知症の治療に適格である。本明細書のために、このような適格性のある被検体は、ＡＤ又は認知症の一又は複数の徴候ないし症状を経験しているか、経験したことがあるか、経験しそうにある者である。ＡＤ又は認知症の診断には混合性認知症(ＭＩＸ)の診断が含まれ、ＡＤの徴候及び症状は虚血性血管性認知症(ＩＶＤ)の徴候及び症状と共に存在する。一実施態様では、被検体は、ＡＤ以外の自己免疫性疾患に罹っていない。場合によっては、ＡＤ又は認知症に罹っているヒト又はその罹患のリスクにあるヒトは、血清、脳脊髄液(ＣＳＦ)及び／又は老人性プラーク(一又は複数)におけるＣＤ２０陽性Ｂ細胞のレベルの上昇についてスクリーニングされているヒトとして同定されうる。あるいは、又は加えて、被検体は自己抗体を検出するためのアッセイを用いてスクリーニングされ、質的、好ましくは量的に評価されうる。例えばＥＬＩＳＡによって、被検体の血清、脳脊髄液(ＣＳＦ)及び／又は老人性プラーク(一又は複数)中の前記の自己抗体が検出されてもよい。
【００１９】
「自己抗体」は、被検体によって増やされた抗体であって、被検体自身の抗原に対するものである。ＡＤ又は認知症と関係している例示的な自己抗体は、脳応答性抗体(ＢＲＡ)及び、β-アミロイド、カルジオリピン、チューブリン、グリア線維性酸性タンパク質、神経線維タンパク質(ＮＦＬ)、ガングリオシド、骨格タンパク質、ミエリン塩基性タンパク(ＭＢＰ)、セロトニン、ドーパミン、プレセニリン、アミロイドβ-ペプチド(Ａｂｅｔａ)、促進した糖化末端生成物に対するレセプター(ＲＡＧＥ)、神経成長因子(ＮＧＦ)などに対する抗体が含まれるが、これらに限定するものではない。
「非定型の」自己抗体レベルは、正常レベルを上回る上記の自己抗体のレベルを意味する。このような正常ないし非定型の自己抗体レベルは、正常な被検体又はＡＤないし認知症に罹っていない被検体の生体サンプルにおいてみられるレベルであってもよい。生体サンプルは血清、ＣＳＦ又は老人性プラークであってもよい。
【００２０】
「脳応答性抗体」又は「ＢＲＡ」は、被検体の血清、脳脊髄液(ＣＳＦ)及び／又は脳組織に存在するヒト抗体の任意の自然発生する集団であり、この抗体は、他の正常なヒト組織と反応するよりも大きな特異性を有してヒトの脳及び／又はヒトの中枢神経系(ＣＮＳ)組織と応答できる。
本明細書中の被検体の「治療」は、治療的処置及び予防又は阻止的な処置を指す。治療を必要とする者には、既にＡＤ又は認知症を有する者、並びにＡＤ又は認知症が予防されるべきものである者が含まれる。したがって、被検体は、ＡＤ又は認知症を有すると診断されているか、ＡＤ又は認知症の素因があるか、又はＡＤ又は認知症に罹りやすいかもしれない。本明細書中で用いる「処置」、「治療する」又は「治療」なる用語には、阻止(例えば、予防)、対症療法及び治癒的療法が含まれる。
【００２１】
「有効量」なる用語は、認知症又はＡＤを予防するか、改善するか又は治療するために有効である抗体(又は、他の薬剤)の量を指す。このような有効量により、通常、認識機能(例えば記憶、言語、臨界思考、読み及び／又は書き能力)の維持、疾患の経過の遅延、疾患の発症の遅延又は疾患の完全な阻止、疾患と関係する行動問題の管理、抑鬱及び／又は無気力の治療、行動、例えば攻撃性及び／又は不安の治療、摂食、着脱衣及び入浴などの日常生活能力の欠如の遅延、自己抗体レベル(一又は複数)の低減、及び(例えば、血清、ＣＮＳ及び／又は老人性プラークにおける)ＣＤ２０陽性Ｂ細胞数の減少、などの認知症又はアルツハイマー病の徴候又は症状の改善が生じる。
「コリンエステラーゼ阻害薬」は、アセチルコリン及び／又は偽コリンの分解を阻止するか、又は阻害する薬剤ないし組成物である。コリンエステラーゼ阻害薬の例には、ガランタミン(REMINYL(登録商標))、リバスチグミン(EXELON(登録商標))、ドネペジル(ARICEPT(登録商標))、タクリン(COGNEX(登録商標))及びヒュープリンＸＴＭ(HUPRINE X)が含まれる。
本明細書中の「ＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニスト」は、ＮＭＤＡにより阻止するか又は阻害する、及び／又は過剰なグルタミン酸及び／又はグルタミン酸活性を制御する薬剤又は組成物を意図する。例示的なＮＭＤＡアンタゴニストにはメマンチン(NAMENDA(登録商標))及びネラメキサンが含まれる。
【００２２】
ここで補助治療として用いる「免疫抑制剤」なる用語は、本明細書中で治療される被検体の免疫系を抑制する又は遮断するように働く物質を表す。これは、サイトカイン産生を抑制する、自己抗原の発現を下方制御又は抑制する、あるいはＭＨＣ抗原を遮断する物質を含む。そのような薬剤の例として、２-アミノ-６-アリル-５-代替ピリミジン(米国特許第４６６５０７７号参照)；非ステロイド性抗炎症剤(ＮＳＡＩＤ)；ガンシクロビル；タクロリムス、糖質ステロイド、例としてコルチゾール又はアルドステロン、抗炎症剤、例としてシクロオキシゲナーゼインヒビター、５-リポキシゲナーゼインヒビター又はロイコトリエンレセプターアンタゴニスト；プリンアンタゴニスト、例えばアザチオプリン又はミコフェノール酸モフェチル(ＭＭＦ)；アルキル化剤、例えばシクロホスファミド；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド (米国特許第４１２０６４９号に記載のように、ＭＨＣ抗原を遮断する)；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣフラグメントに対する抗イデオタイプ抗体；シクロスポリン；６メルカプトプリン；副腎皮質ステロイド又は糖質副腎皮質ステロイド又は糖質ステロイド類似体などのステロイド、例としてプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、例えばSOLU-MEDROL(登録商標) メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム、及びデキサメタゾン；ジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビター、例としてメトトレキサート(経口又は皮下)；クロロキン及びヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカイン又はサイトカインレセプター抗体又はアンタゴニスト、例として抗インターフェロン-γ、-β、又は-α抗体、抗腫瘍壊死因子α抗体(インフリキシマブ(REMICADE(登録商標))又はアダリムマブ)、抗ＴＮＦαイムノアドヘシン(エタネルセプト)、抗腫瘍壊死因子β抗体、抗インターロイキン２(ＩＬ-２)抗体及び抗ＩＬ-２レセプター抗体、抗インターロイキン６(ＩＬ-６)レセプター抗体及びアンタゴニスト；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む抗ＬＦＡ-１抗体；抗-Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ-Ｔ抗体、好ましくは、抗-ＣＤ３又は抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ-３結合ドメインを含む可溶性ペプチド(１９９０年７月２６日公開の国際公開第９０／０８１８７号)；ストレプトキナーゼ；トランスフォーミング成長因子-β(ＴＧＦ-β)；ストレプトドルナーゼ(streptodornase)；宿主由来のＲＮＡ又はＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ-６１４４３；クロランブシル；デオキシスペルグアニン(deoxyspergualin)；ラパマイシン；Ｔ細胞レセプター (Cohen等, 米国特許第５１１４７２１号)；Ｔ細胞レセプターフラグメント(Offner等, Science 251:430-432 (1991)；国際公開第９０／１１２９４号；Ianeway, Nature, 341: 482 (1989)；及び国際公開第９１／０１１３３号)；ＢＡＦＦないしＢＲ３抗体ないしイムノアドヘシンなどのＢＡＦＦアンタゴニスト及びｚＴＮＦ４アンタゴニスト(参考までにMackay及びMackay, Trends Immunol., 23:113-5 (2002)と以下の定義を参照のこと)；Ｔ細胞ヘルパーシグナルを阻害する生物学的な薬剤、例として抗ＣＤ４０レセプター又は抗ＣＤ４０リガンド(ＣＤ１５４)、例えばＣＤ４０-ＣＤ４０リガンドに対する阻止抗体(例えば、Durie等, Science, 261: 1328-30 (1993)；Mohan等, J. Immunol., 154: 1470-80 (1995))及びＣＴＬＡ４-Ｉｇ(Finck等, Science, 265: 1225-7 (1994))；及びＴ１０Ｂ９などのＴ細胞レセプター抗体 (欧州特許第３４０１０９号)を含む。
【００２３】
ここで使用する「細胞障害性剤」なる用語は、細胞の機能阻害又は阻止、及び／又は細胞破壊をもたらす物質を表す。この用語は、放射性同位体(例として、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体)、化学療法剤、及び細菌、真菌、植物、又は動物起源の酵素活性毒素又は小分子毒素などの毒素、又はそれらの断片を含むことを意図する。
【００２４】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びCYTOXAN(登録商標)シクロホスファミドのようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン(特にブラタシン及びブラタシノン)；デルタ-９-テトラヒドロカナビノール(ドロナビノール、MARINOL(登録商標))；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン(合成アナログトポテカン(HYCAMTIN(登録商標))、ＣＰＴ-１１(イリノテカン、CAMPTOSAR(登録商標))、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン(scopolectin)及び９-アミノカンプトテシンを含む)；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む)；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；テニポシド；クリプトフィシン(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８)；ドラスタチン；ドュオカルマイシン(合成アナログ、ＫＷ-２１８９及びＣＢ１-ＴＭ１を含む)；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス(nitrosureas)；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質(例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１(例えばAgnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33:183-186(1994)参照)；ダイネマイシン(dynemicin)Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団)、アクラシノマイシン類(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorbicin)、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン(ADRIAMYCIN(登録商標)、モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣＩリポソーム注射剤(DOXIL(登録商標))及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン(gemcitabine) (GEMZAR(登録商標))、テガフル(tegafur) (UFTORAL(登録商標))、カペシタビン(capecitabine) (XELODA(登録商標))、エポチロン(epothilone)、及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ)；葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)；プリンアナログ、例えばフルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー(replenisher)、例えばフロリン酸(frolinic acid)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシノイド(maytansinoid)類、例えばメイタンシン(maytansine)及びアンサミトシン(ansamitocine)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)多糖複合体(JHS Natural Products, Eugene, OR)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類(特にＴ-２毒素、ベラクリン(verracurin)Ａ、ロリジン(roridine)Ａ及びアングイジン(anguidine))；ウレタン；ビンデシン(ELDISINE(登録商標)、FILDESIN(登録商標))；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド(「Ａｒａ-Ｃ」)；チオテパ；タキソイド類、例えばパクリタキセル(TAXOL(登録商標))、パクリタキセルのクレモフォー無添加アルブミン操作ナノ粒子製剤(ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ)、及びドキセタキセル(TAXOTERE(登録商標))；クロランブシル；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナアナログ、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン(VELBAN(登録商標))；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６)；イホスファミド；マイトキサントロン；ビンクリスチン(ONCOVIN(登録商標))；オキサリプラチン；ロイコボビン(leucovovin)；ビノレルビン(ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ(登録商標))；ノバントロン(novantrone)；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート(ibandronate)；トポイソメラーゼ阻害薬ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸のようなレチノイド；上述したもののいずれかの薬学的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体：並びに上記のうち２以上の組み合わせ、例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロン併用療法の略称であるＣＨＯＰ、及び5-FU及びロイコボビン(leucovovin)とオキサリプラチン(ELOXATINTM)を組み合わせた治療法の略称であるFOLFOXが含まれる。
【００２５】
またこの定義に含まれるものには、癌の増殖を助けるホルモンの作用を調節、低減、遮断又は阻害するように働き、多くの場合全身処置の形態で使用される抗ホルモン剤がある。それらはそれ自体がホルモンであってもよい。それらは例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節物質(ＳＥＲＭ)を含み、例えば、タモキシフェン(NOLVADEX(登録商標)タモキシフェンを含む)、ラロキシフェン(raloxifene)(EVISTA(登録商標))、ドロロキシフェン、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びトレミフェン(ＦＡＲＥＳＴＯＮ(登録商標))；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプター下方調節剤(ERD)；エストロゲンレセプターアンタゴニスト、例えばフルベストラント(fulvestrant) (FASLODEX(登録商標))；卵巣を抑止又は停止させる機能がある作用剤、黄体形成ホルモン放出ホルモン(LHRH)アゴニスト、例えば酢酸リュープロリド(LUPRON(登録商標)及びELIGARD(登録商標))、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプテレリン(tripterelin)；抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド；並びに副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害薬、例えば４(５)-イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール(MEGASE(登録商標))、エキセメスタン(AROMASIN(登録商標))、フォルメスタニー(formestanie)、ファドロゾール、ボロゾール(RIVISOR(登録商標))、レトロゾール(FEMARA(登録商標))、及びアナストロゾール(ARIMIDEX(登録商標))である。加えて、このような化学療法剤の定義には、クロドロネート(例えばBONEFOS(登録商標)又はOSTAC(登録商標))、エチドロン酸(DIDROCAL(登録商標))、ＮＥ-５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート(ZOMETA(登録商標))、アレンドロネート(FOSAMAX(登録商標))、パミドロン酸(AREDIA(登録商標))、チルドロン酸(SKELID(登録商標))、又はリセドロン酸(ACTONEL(登録商標))、並びにトロキサシタビン(troxacitabine)(１,３-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体)；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に接着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-α、Ｒａｆ、及びＨ-Ｒａｓ、及び上皮成長因子レセプター(ＥＧＦ-Ｒ)；THERATOPE(登録商標)ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばALLOVECTIN(登録商標)ワクチン、LEUVECTIN(登録商標)ワクチン、及びVAXID(登録商標)ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害薬(例えばLURTOTECAN(登録商標))；ｒｍＲＨ(例えばABARELIX(登録商標))；ラパチニブ(lapatinib ditosylate)(ＧＷ５７２０１６としても知られるＥｒｂＢ-２及びＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害薬)；及び上記のもののいずれかの製薬的に許容される塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【００２６】
「サイトカイン」なる用語は、一つの細胞集団から放出されるタンパク質であって、他の細胞に対して細胞間メディエータとして作用するものの包括的な用語である。このようなサイトカインの例としては、リンホカイン、モノカイン；ＩＬ-１、ＩＬ-１α、ＩＬ-２、ＩＬ-３、 ＩＬ-４、ＩＬ-５、ＩＬ-６、ＩＬ-７、ＩＬ-８、ＩＬ-９、ＩＬ-１１、ＩＬ-１２、ＩＬ-１５等のインターロイキン(ＩＬ)、例えば、PROLEUKIN(登録商標)ｒＩＬ-２及びヒトＩＬ-４及びヒトＩＬ-４の変異体、例として、ＩＬ-２Ｒγへの結合に関与するＩＬ-４の領域内に突然変異を有する変異体、例えばＡｒｇ２１がＧｌｕ残基に変異したもの；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ-α又はＴＮＦ-β、及びＬＩＦ及びキットリガンド(ＫＬ)を含む他のポリペプチド因子が含まれる。ここで使用される場合、サイトカインなる用語は天然源由来あるいは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物、例えば合成して産生された小分子構成要素及び製薬的に受容可能な誘導体及びその塩類を含む。
【００２７】
「ホルモン」なる用語は通常管を有する腺性器官によって分泌されるポリペプチドホルモンを表す。そのようなホルモンには、例えば、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ-メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラクシン；エストラジオール；ホルモン補充療法；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、エピチオスタノール、メピチオスタン又はテストラクトン；プロリラクシン；卵胞刺激ホルモン(ＦＳＨ)、副甲状腺刺激ホルモン(ＴＳＨ)、及び黄体形成ホルモン(ＬＨ)のような糖タンパク質ホルモン；プロラクチン、胎盤ラクトゲン、マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド性腺刺激ホルモン放出ホルモン；インヒビン；アクチビン；ミュラー阻害物質；及びトロンボポエチンなどがある。本明細中で用いるように、ホルモンなる用語は、天然源由来又は組み換え細胞培養由来のタンパク質及び天然配列ホルモンの生物学的活性な相当物、例えば合成して産生した小分子成分及び製薬的に許容可能な誘導体及びその塩類が含まれる。
【００２８】
「増殖因子」なる用語は増殖を促進するタンパク質を表し、例えば、肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；血管内皮増殖因子；神経成長因子、例えばＮＧＦ-β；血小板由来増殖因子；トランスフォーミング成長因子(ＴＧＦ)、例えばＴＧＦ-α及びＴＧＦ-β；インスリン様成長因子-I及び-II；エリトロポエチン(ＥＰＯ)；骨誘導因子；インターフェロン、例えばインターフェロン-α、-β、及び-γ；及び、コロニー刺激因子(ＣＳＦ)、例えばマクロファージ-ＣＳＦ(Ｍ-ＣＳＦ)、顆粒球-マクロファージ-ＣＳＦ(ＧＭ-ＣＳＦ)及び顆粒球-ＣＳＦ(Ｇ-ＣＳＦ)などがある。本明細書中で用いられる、増殖因子なる用語には、天然源由来あるいは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列増殖因子の生物学的に活性な等価物、例えば合成して産生された小分子構成要素及び製薬的に受容可能な誘導体及びその塩類を含む。
【００２９】
「インテグリン」なる用語は、細胞の細胞外基質への結合と応答の両方をさせるレセプタータンパク質であり、創傷治癒、細胞分化、腫瘍細胞のホーミング及びアポトーシスなどの様々な細胞性機能に関与するものを表す。これらは細胞-細胞外基質及び細胞間相互作用に関与する細胞接着レセプターの大きなファミリーの一部である。機能的なインテグリンは、α及びβと称する２つの膜貫通性グリコプロテインサブユニットから成り、非共有的に結合している。βサブユニットのように、αサブユニットはすべて互いにいくらかの相同性がある。レセプターは常に１のα鎖及び１のβ鎖を含有する。例えば、α６β１、α３β１、α７β１、ＬＦＡ-１などがある。本明細書中で用いられる、インテグリンなる用語には、天然源由来あるいは組換え細胞培養物由来のタンパク質及び天然配列インテグリンの生物学的に活性な等価物、例えば合成して産生された小分子構成要素及び製薬的に受容可能な誘導体及びその塩類を含む。
【００３０】
本明細書中では、「腫瘍壊死因子α(ＴＮＦα)」とは、Pennica等, Nature, 312:721 (1984)又はAggarwal等, JBC, 260:2345 (1985)に記載のアミノ酸配列を含有するヒトＴＮＦα分子を意味する。
本明細書中の「ＴＮＦαインヒビター」は、一般的にはＴＮＦαへの結合とその活性を中和することを介してＴＮＦαの生物学的活性をある程度阻害する薬剤である。本明細書中で考慮されるＴＮＦインヒビターの具体例は、エタネルセプト(ENBREL(登録商標))、インフリキシマブ(REMICADE(登録商標))及びアダリムマブ(HUMIRATM)である。
「疾患変更性抗リウマチ剤」又は「ＤＭＡＲＤ」の例には、ヒドロキシクロロキノン、スルファサラジン、メトトレキセート、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ、アザチオプリン、Ｄ-ペニシラミン、ゴールド塩類(経口)、ゴールド塩類(筋肉内)、ミノサイクリン、シクロスポリンＡ及び局所性シクロスポリンを含むシクロスポリン、ブドウ球菌プロテインＡ(Goodyear 及びSilverman, J. Exp. Med., 197, (9), p1125-39 (2003))、これらの塩類及び誘導体を含むものなどがある。
【００３１】
「非ステロイド系抗炎症薬」又は「ＮＳＡＩＤ」の例として、アスピリン、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、COX-2インヒビター、例としてセレコキシブ(celecoxib) (CELEBREX(登録商標)；4-(5-(4-メチルフェニル)-3-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾロ-1-イル) ベンゼンスルホンアミド及びバルデコキシブ(valdecoxib) (BEXTRA(登録商標))、及びメロキシカム(MOBIC(登録商標))、これらの塩類及び誘導体などがある。
本明細書中の「インテグリンアンタゴニスト又は抗体」の例として、ＬＦＡ-１抗体、例としてGenentechから市販のエファリズマブ(RAPTIVA(登録商標))、又は、α４インテグリン抗体、例としてBiogenから入手可能なナタリズマブ(ANTEGREN(登録商標))、又は、ジアザサイクリックフェニルアラニン誘導体(国際公開第２００３／８９４１０号)、フェニルアラニン誘導体(国際公開第２００３／７０７０９号、国際公開第２００２／２８８３０号、国際公開第２００２／１６３２９号及び国際公開第２００３／５３９２６号)、フェニルプロピオン酸誘導体(国際公開第２００３／１０１３５号)、エナミン誘導体(国際公開第２００１／７９１７３号)、プロパン酸誘導体(国際公開第２０００／３７４４４号)、アルカノン酸誘導体(国際公開第２０００／３２５７５号)、置換型フェニール誘導体(米国特許第６６７７３３９号及び同第６３４８４６３号)、芳香族アミン誘導体(米国特許第６３６９２２９号)、ＡＤＡＭディスインテグリンドメインポリペプチド(米国公開公報２００２／００４２３６８号)、αｖβ３インテグリンに対する抗体(欧州特許第６３３９４５号)、アザ架橋された二環式アミノ酸誘導体(国際公開第２００２／０２５５６号)などが含まれる。
【００３２】
「副腎皮質ステロイド」は、天然に生じる副腎皮質ステロイドの効果を模倣するかあるいは増大するステロイドの一般的な化学構造を有するいくつかの合成又は天然に生じる物質の何か一つを指す。合成副腎皮質ステロイドの例として、プレドニゾン、プレドニゾロン(メチルプレドニゾロン、例としてSOLU-MEDROL(登録商標) メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムを含む)、デキサメサゾン又はデキサメサゾントリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、及びベタメサゾンが含まれる。本明細書中の好適な副腎皮質ステロイドは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン又はデキサメサゾンである。
【００３３】
「Ｂ細胞」は骨髄内で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞、又はエフェクターＢ細胞(プラズマ細胞)などがある。本明細書中のＢ細胞は正常又は非悪性のＢ細胞でもよい。
ここで「Ｂ細胞表面上マーカー」又は「Ｂ細胞表面上抗原」とは、Ｂ細胞の表面上に発現する抗原であり、それに結合するアンタゴニスト又は抗体の標的となることができる。例示的Ｂ細胞表面上マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５及びＣＤ８６白血球表面上マーカーが含まれる。(詳しくは、The Leukocyte Antigen Facts Book, 2nd Edition. 1997, Barclay等編集, Academic Press, Harcourt Brace & Co., New Yorkを参照)。他のＢ細胞表面上マーカーには、ＲＰ１０５、ＦｃＲＨ２、Ｂ細胞ＣＲ２、ＣＣＲ６、Ｐ２Ｘ５、ＨＬＡ-ＤＯＢ、ＣＸＣＲ５、ＦＣＥＲ２、ＢＲ３、Ｂｔｉｇ、ＮＡＧ１４、ＳＬＧＣ１６２７０、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＡＴＷＤ５７８、ＦｃＲＨ３、ＩＲＴＡ１、ＦｃＲＨ６、ＢＣＭＡ、及び２３９２８７などがある。特に対象とするＢ細胞表面上マーカーは、被検体の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上に主にに発現しており、Ｂ細胞前駆細胞及び成熟Ｂ細胞の両方の細胞上に発現していてもよい。
【００３４】
「ＣＤ２０」抗原又は「ＣＤ２０」は、末梢血又はリンパ系器官に由来するＢ細胞の９０％以上の表面にみられるおよそ３５ｋＤａの非グルコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は正常Ｂ細胞だけでなく悪性のＢ細胞上にも存在し、幹細胞には発現しない。ＣＤ２０を意味する文献中での他の名称には、「Ｂリンパ球限定抗原(B-lymphocyte-restricted antigen)」及び「Ｂｐ３５」などがある。ＣＤ２０抗原は、例としてClark等 PNAS (USA) 82:1766 (1985)に記載されている。
【００３５】
「Ｂ細胞表面マーカーアンタゴニスト」とは、Ｂ細胞上のＢ細胞表面マーカーに結合することによって被検体のＢ細胞を破壊又は枯渇させる、及び／又は一以上のＢ細胞機能を妨げる、例えば、Ｂ細胞に誘導される体液性反応を低減又は阻害する分子である。好ましくは、アンタゴニストは、それによって治療される被検体のＢ細胞を枯渇する(すなわち、循環中のＢ細胞レベルを下げる)ことができる。そのような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)及び／又は補体依存性細胞障害(ＣＤＣ)、Ｂ細胞増殖の阻害及び／又はＢ細胞死の誘導(例えば、アポトーシスを介する)等の多様なメカニズムを介して達成されるであろう。本発明の範囲に包含されるアンタゴニストには、場合によって細胞障害性剤とコンジュゲート又は細胞障害性剤と融合している、ＣＤ２０などのＢ細胞表面マーカーに結合する抗体、合成又は天然配列のペプチド、イムノアドヘシン、及び小分子アンタゴニストが含まれる。好適なアンタゴニストは抗体を含む。
【００３６】
本明細書中の「ＣＤ２０抗体アンタゴニスト」とは、Ｂ細胞上のＣＤ２０に結合することによって被検体のＢ細胞を破壊又は枯渇させる、及び／又は一以上のＢ細胞機能を妨げる、例えば、Ｂ細胞に誘導される体液性反応を低減又は阻害する抗体である。好ましくは、抗体アンタゴニストは、それによって治療する被検体のＢ細胞を枯渇する(すなわち、循環中のＢ細胞レベルを下げる)ことができる。そのような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害(ＡＤＣＣ)及び／又は補体依存性細胞障害(ＣＤＣ)、Ｂ細胞増殖の阻害及び／又はＢ細胞死の誘導(例えば、アポトーシスを介する)等の多様な機能を介して達成されるであろう。
ここで「抗体」なる用語は、広い意味で用いられ、特にモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成した多特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、及び所望の生物学的活性を有する限りにおける抗体断片の範囲にわたる。
【００３７】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、好ましくはその抗原結合領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')２及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体；一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多特異性抗体が含まれる。
本明細書中の「インタクト抗体」とは、２つの抗原結合領域とＦｃ領域を含有してなるものである。好ましくは、インタクト抗体は機能的なＦｃ領域を有する。
【００３８】
ＣＤ２０抗体の例には以下のものが含まれる：現在では「リツキシマブ」(「リツキサン(登録商標)」)と呼称される「Ｃ２Ｂ８」(米国特許第５７３６１３７号)；「Ｙ２Ｂ８」又は「Ibritumomab Tiuxetan」(ゼバリン(登録商標))と命名されるイットリウム-[90]-標識２Ｂ８マウス抗体、IDEC Pharmaceuticals, Inc.から市販(米国特許第５７３６１３７号；１９９３年６月２２日に受託番号ＨＢ１１３８８としてＡＴＣＣに寄託された２Ｂ８)；場合によっては「１３１Ｉ-Ｂ１」又はCorixaから市販の「ヨードＩ１３１ Tositumomab」抗体(BEXXARＴＭ)を生成するために１３１Ｉで標識した「Tositumomab」とも呼称されるマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」(米国特許第５５９５７２１号も参照のこと)；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」(Press等 Blood 69(2):584-591 (1987)及びそれらの変異体、例として「フレームワークパッチ」又はヒト化１Ｆ５(国際公開第２００３／００２６０７号, Leung, S；ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ-９６４５０)；マウス２Ｈ７及びキメラ２Ｈ７抗体(米国特許第５６７７１８０号)；ヒト化２Ｈ７(国際公開第２００４／０５６３１２号(Lowman等)及び以下に挙げるもの)；Ｂ細胞の細胞膜のＣＤ２０分子を標的とした完全なヒト、高親和性抗体である、２Ｆ２(ＨｕＭａｘ-ＣＤ２０)(Genmab, Denmark；例としてGlennie and van de Winkel, Drug Discovery Today 8: 503-510 (2003)及びCragg等, Blood 101: 1045-1052 (2003)；国際公開第２００４／０３５６０７号；米国公開特許第２００４／０１６７３１９号を参照)；国際公開第２００４／０３５６０７号及び米国公開特許第２００４／０１６７３１９号(Teeling等)に記載のヒトモノクローナル抗体；米国公開特許第２００４／００９３６２１号(Shitara等)に記載のＦｃ領域に結合した複合体Ｎグリコシド結合糖鎖を有する抗体；ＣＤ２０に結合するモノクローナル抗体及び抗原結合断片(国際公開第２００５／０００９０１号, Tedder等)、例えばＨＢ２０-３、ＨＢ２０-４、ＨＢ２０-２５、及びＭＢ２０-１１；抗体のＡＭＥシリーズなどのＣＤ２０結合分子、例えば国際公開第２００４／１０３４０４号及び米国公開特許第２００５／００２５７６４号(Watkins等, Eli Lilly/Applied Molecular Evolution, AME)に記載のＡＭＥ３３抗体；ＣＤ２０結合分子、例えば米国公開特許第２００５／００２５７６４号(Watkins等)に記載のもの；Ａ２０抗体又はその変異体、例えばキメラないしはヒト化Ａ２０抗体(それぞれｃＡ２０、ｈＡ２０) (米国公開特許第２００３／０２１９４３３号, Immunomedics)；ＣＤ２０結合抗体、例えばエピトープ劣化Ｌｅｕ-１６、１Ｈ４又は２Ｂ８、場合によってＩＬ-２とコンジュゲートしたもの、米国公開特許第２００５／００６９５４５号Ａ１及び国際公開第２００５／１６９６９号(Carr等)；ＣＤ２２及びＣＤ２０を結合する二重特異性抗体、例えばｈＬＬ２ｘｈＡ２０ (国際公開第２００５／１４６１８号, Chang等)；the International Leukocyte Typing Workshopより入手可能なモノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８-２、９３-１Ｂ３、Ｂ-Ｃ１又はＮＵ-Ｂ２ (Valentine等, Leukocyte Typing III (McMichael, 編集, p. 440, Oxford University Press (1987))；１Ｈ４ (Haisma等 Blood 92:184 (1998))。本明細書中の好適なＣＤ２０抗体は、キメラ、ヒト化ないしはヒトＣＤ２０抗体であり、より好ましくはリツキシマブ、ヒト化２Ｈ７、２Ｆ２(Ｈｕ-Ｍａｘ-ＣＤ２０) ヒトＣＤ２０抗体 (Genmab)、及びヒト化Ａ２��抗体(Immunomedics)である。
【００３９】
本明細書中の「リツキシマブ」又は「リツキサン(登録商標)」なる用語は、ＣＤ２０抗原に対する一般的に遺伝子操作したキメラのマウス／ヒトモノクローナル抗体を指し、米国特許第５７３６１３７号では「Ｃ２Ｂ８」と命名されるものであり、ＣＤ２０を結合する能力を保持する該抗体の断片を含みうる。
本明細書中の目的のためだけに、そして特に明記しなければ、「ヒト化２Ｈ７」抗体はマウス２Ｈ７抗体のヒト化変異体であり、該抗体はインビボで循環Ｂ細胞を減少するために有効である。
【００４０】
一実施態様では、ヒト化２Ｈ７抗体は以下のＣＤＲ配列の１、２、３、４、５又は６を含んでなる。
ＸがＭ又はＬであるＣＤＲＬ１配列RASSSVSYXH(配列番号２１)、例として配列番号４(図１Ａ)、
配列番号５(図１Ａ)のＣＤＲＬ２配列、
ＸがＳ又はＡであるＣＤＲＬ３配列QQWXFNPPT(配列番号２２)、例として配列番号６(図１Ａ)、
配列番号１０のＣＤＲＨ１配列(図１Ｂ)、
ＸがＤ又はＡであるＣＤＲＨ２配列AIYPGNGXTSYNQKFKG(配列番号２３)、例として配列番号１１(図１Ｂ)、及び
位置６のＸがＮ、Ａ、Ｙ、Ｗ又はＤであり、位置７のＸがＳ又はＲである、ＣＤＲＨ３配列VVYYSXXYWYFDV(配列番号２４)、例として配列番号１２(図１Ｂ)。
【００４１】
上記のＣＤＲ配列は一般的に、ヒト可変軽鎖及び可変重鎖のフレームワーク配列、例えばヒト軽鎖κサブグループI(ＶＬκI)の実質的なヒトコンセンサスＦＲ残基、及びヒト重鎖サブグループIII(ＶＨIII)の実質的なヒトコンセンサスＦＲ残基内に存在する。また、国際公報２００４／０５６３１２号(Lowman等)も参照のこと。
可変重鎖領域はヒトＩｇＧ鎖定常領域に結合されてもよく、該領域は例えば天然配列及び変異形の定常領域を含むＩｇＧ１又はＩｇＧ３でもよい。
好適な実施態様では、このような抗体は、配列番号８の可変重鎖ドメイン配列(ｖ１６、図１Ｂに示す)を含有し、場合によっては配列番号２の可変軽鎖ドメイン配列(ｖ１６、図１Ａに示す)を含有し、場合によっては、可変重鎖ドメイン内の位置５６、１００及び／又は１００ａの一又は複数のアミノ酸置換、例えばＤ５６Ａ、Ｎ１００Ａ又はＮ１００Ｙ、及び／又はＳ１００ａＲと、可変軽鎖ドメイン内の位置３２及び／又は９２の一又は複数のアミノ酸置換、例えばＭ３２Ｌ及び／又はＳ９２Ａを含有する。好ましくは、抗体は配列番号１３又は１５の軽鎖アミノ酸配列と、配列番号１４、１６、１７又は２０の重鎖アミノ酸配列を含有するインタクト抗体でる。
好適なヒト化２Ｈ７抗体はオクレリズマブ(ocrelizumab)(Genentech)である。
【００４２】
本明細書中の抗体はさらに、ＡＤＣＣ活性を改善するＦｃ領域内に少なくとも一のアミノ酸置換を含有する、例えば重鎖残基のＥｕ番号付けでいうと、位置２９８、３３３及び３３４にアミノ酸置換、好ましくはＳ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ及びＫ３３４Ａを有するものである。また、米国特許第６７３７０５６号, Prestaを参照のこと。
これら抗体の何れかは、ＦｃＲｎ結合又は血清半減期を改善するようなＦｃ領域内での少なくとも一の置換、例えばＮ４３４Ｗなどの重鎖位置４３４での置換を含有してもよい。また、米国特許第６７３７０５６号, Prestaを参照のこと。
これら抗体の何れかはさらに、ＣＤＣ活性を亢進するＦｃ領域内での少なくとも一のアミノ酸置換、例えば位置３２６での少なくとも一の置換、好ましくはＫ３２６Ａ又はＫ３２６Ｗを含有してもよい。また、米国特許第６５２８６２４号(Idusogie等)を参照のこと。
【００４３】
いくつかの好適なヒト化２Ｈ７変異体は、配列番号２の可変軽鎖ドメインと配列番号８の可変重鎖ドメインを含有するものであり、例として、(存在する場合には)Ｆｃ領域内に置換を有するもの又は有さないもの、配列番号８に変異Ｎ１００Ａ；又はＤ５６ＡとＮ１００Ａ；又はＤ５６Ａ、Ｎ１００ＹとＳ１００ａＲを含有する可変重鎖ドメインと配列番号２に変異Ｍ３２Ｌ；又はＳ９２Ａ；又はＭ３２ＬとＳ９２Ａを含有する可変軽鎖ドメインを有するものなどがある。
２Ｈ７.ｖ１６の可変重鎖のＭ３４は抗体安定性を供給する可能性のあるものとして同定され、新たな置換の候補となりうる。
本発明のいくつかの多様な好適な実施態様をまとめると、２Ｈ７.ｖ１６をベースとした突然変異体の可変領域は、以下の表１に挙げる位置のアミノ酸置換を除いてｖ１６のアミノ酸配列を含有する。特に明記しない限り、２Ｈ７変異体はｖ１６と同じ軽鎖を有する
【００４４】
表１  例示的なヒト化２Ｈ７抗体変異体
2008538767.tif 000002
【００４５】
ある好適なヒト化２Ｈ７は、２Ｈ７.ｖ１６可変軽鎖ドメイン配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR (配列番号：２)；
と、２Ｈ７.ｖ１６可変重鎖ドメイン配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS (配列番号：８)
を含んでなる。
【００４６】
ヒト化２Ｈ７.ｖ１６抗体がインタクト抗体である場合、軽鎖アミノ酸配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (配列番号：１３)；
と、配列番号：１４の重鎖アミノ酸配列又は：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (配列番号：１７)
を含んでなりうる。
【００４７】
他の好適なヒト化２Ｈ７抗体は、２Ｈ７.ｖ５１１可変軽鎖ドメイン配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKR (配列番号：１８)
と、２Ｈ７.ｖ５１１可変重鎖ドメイン配列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSS (配列番号：１９)
を含んでなる。
【００４８】
ヒト化２Ｈ７.ｖ５１１抗体がインタクト抗体である場合、軽鎖アミノ酸配列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (配列番号：１５)；
と、配列番号：１６の重鎖アミノ酸配列又は：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (配列番号：２０)
を含んでなりうる。
【００４９】
「成長阻害(「増殖阻害」ともいう)」抗体は、抗体が結合する抗原を発現している細胞の増殖を阻害又は低減するものである。例えば、アンタゴニストはインビトロ及び／又はインビボでのＢ細胞の増殖を阻害又は低減しうる。
「アポトーシスを誘導する」抗体とは、標準的なアポトーシスアッセイにより測定できるようなＢ細胞などのプログラム細胞死、例えば、アネキシンＶの結合、ＤＮＡ断片化、細胞収縮、小胞体の肥大、細胞断片化、及び／又は膜小嚢の形成(アポトーシス体と呼称)を誘導するものである。
【００５０】
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽(Ｌ)鎖及び２つの同一の重(Ｈ)鎖からなる、約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は一つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は、異なった免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の中で変化する。また各重鎖と軽鎖は、規則的に離間した鎖間ジスルフィド結合を有している。各重鎖は、多くの定常ドメインが続く可変ドメイン(ＶＨ)を一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン(ＶＬ)を、他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。
【００５１】
「可変」という用語は、可変ドメインのある部位が、抗体の中で配列が広範囲に異なっており、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合性及び特異性に使用されているという事実を意味する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメインにわたって一様には分布していない。軽鎖及び重鎖の可変ドメインの両方の高頻度可変領域と呼ばれる３つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保持された部分はフレームワーク領域(ＦＲ)と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、βシート構造を結合し、ある場合にはその一部を形成するループ結合を形成する、３つの高頻度可変領域により連結されたβシート配置を主にとる４つのＦＲをそれぞれ含んでいる。各鎖の高頻度可変領域は、ＦＲによって近接して結合され、他の鎖の高頻度可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している(Kabat等, Sequence of Proteins ofImmunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, BEthesda, MD. (1991))。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関連しているものではないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞性細胞障害(ＡＤＣＣ)への抗体の関与を示す。
【００５２】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片を生成し、その各々は単一の抗原結合部位を持ち、残りは容易に結晶化する能力を反映して「Ｆｃ」断片と命名される。ペプシン処理はＦ(ａｂ')２断片を生じ、それは２つの抗原結合部位を持ち、抗原を交差結合することができる。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この領域は、堅固な非共有結合をなした一つの重鎖及び一つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この配置において、各可変ドメインの３つの高頻度可変領域は相互に作用してＶＨ-ＶＬ二量体表面に抗原結合部位を形成する。集合的に、６つの高頻度可変領域が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン(又は抗原に対して特異的な３つの高頻度可変領域のみを含むＦｖの半分)でさえ、全結合部位よりも親和性が低くなるが、抗原を認識して結合する能力を有している。
【００５３】
またＦａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第一定常領域(ＣＨ１)を有する。Ｆａｂ'断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１領域のカルボキシ末端に数個の残基が付加している点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ'-ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも一つの遊離チオール基を担持しているＦａｂ'に対するここでの命名である。Ｆ(ａｂ')２抗体断片は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ'断片の対として生産された。また、抗体断片の他の化学結合も知られている。
任意の脊椎動物種からの抗体(イムノグロブリン)の「軽鎖」には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ(κ)及びラムダ(λ)と呼ばれる２つの明確に区別される型の一つが割り当てられる。
(存在する場合には)抗体の「重鎖」の定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、抗体は異なるクラスが割り当てられる。インタクト抗体には５つの主なクラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、更にそれらは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２等のサブクラス(イソ型)に分かれる。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。イムノグロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配位はよく知られている。
【００５４】
特に明記しない限り、本明細書中の免疫グロブリン重鎖の残基の番号付けは、出典明記によって本明細書中に特別に援用されるKabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)のＥＵインデックスのものである。「KabatのＥＵインデックス」はヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号を指す。
「Ｆｃ領域」なる用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化するかも知れないが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６の位置又はＰｒｏ２３０からの位置のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端まで伸長すると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン(ＥＵ番号付けシステムによれば残基４４７)は、例えば、抗体の産生又は精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え遺伝子操作することによって取り除かれてもよい。したがって、インタクト抗体の組成物は、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体群、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体群、及びＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体の混合を含む抗体群を含みうる。
【００５５】
「機能的なＦｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域のエフェクター機能を保持する。典型的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞障害活性、Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞障害活性(ＡＤＣＣ)；貪食作用；細胞表面レセプター(すなわち、Ｂ細胞レセプター)の下方制御などである。このようなエフェクターの機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合領域例えば、抗体の可変ドメイン)に結合するのに必要とされており、ここで実施例として開示する様々はアッセイを用いることで評価することが可能である。
「天然配列のＦｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を包含する。天然配列のヒトＦｃ領域は、天然配列のヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域(非Ａ-及びＡ-アロタイプ)；天然配列のヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域；天然配列のヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域；及び天然配列のヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域；並びに、上記何れかの自然に生じる変異体が含まれる。
【００５６】
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは一又は複数のアミノ酸置換により、天然配列のＦｃ領域とは異なるアミノ酸配列を包含するものである。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域もしくは親ポリペプチドのＦｃ領域と比較した場合、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列のＦｃ領域又は親のポリペプチドのＦＣ領域におよそ１からおよそ１０のアミノ酸置換、好ましくはおよそ１からおよそ５のアミノ酸置換を有する。本明細書中の変異体Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び/又は親ポリペプチドのＦｃ領域と好ましくは少なくともおよそ８０％の相同性を有するか、最も好ましくは少なくともおよそ９０％の相同性を、さらに好ましくは少なくともおよそ９５％の相同性を有するものであろう。
【００５７】
「抗体依存性細胞媒介性細胞障害」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃレセプター(ＦｃＲ)を発現する非特異的細胞障害性細胞(例えば、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、好中球、及びマクロファージ)が標的細胞上の結合した抗体を認識し、続いて標的細胞を溶解する細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲIIIのみを発現する一方、単球はＦｃγＲI、ＦｃγＲII及びＦｃγＲIIIを発現する。造血性細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch及びKinet, Annu.Rev.Immunol., 9:457-92(1991)の４６４頁の表３に要約されている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するためには、米国特許第５５００３６２号又は第５８２１３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施されうる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)及びナチュラルキラー(ＮＫ)細胞を含む。あるいは、又は付加的に、対象分子のＡＤＣＣ活性は、例えばClynes等 PNAS(USA), 95:652-656(1998)に開示されたような動物モデルにおいて、インビボで評価されてもよい。
【００５８】
「ヒトエフェクター細胞」とは、１つ又は複数のＦｃＲｓを発現し、エフェクター機能を実行する白血球のことである。好ましくは、その細胞が少なくともＦｃγＲIIIを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例として、末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、単球、細胞障害性Ｔ細胞及び好中球が含まれるが、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好適である。
「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを表す。好適なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体(γレセプター)に結合し、ＦｃγＲI、ＦｃγＲII及びＦｃγＲIIIサブクラスのレセプターを含むものであり、これらのレセプターの対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング型を含む。ＦｃγＲIIレセプターは、ＦｃγＲIIＡ(「活性化レセプター」)及びＦｃγＲIIＢ(「阻害レセプター」)を含み、それらは、主としてその細胞質ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化レセプターＦｃγＲIIＡは、その細胞質ドメインに、免疫レセプターチロシン−ベース活性化モチーフ(ＩＴＡＭ)を有する。阻害レセプターＦｃγＲIIＢは、その細胞質ドメインに、免疫レセプターチロシン−ベース阻害モチーフ(ＩＴＩＭ)を有する(Daeron, Annu. Rev. Immunol., 15:203-234(1997)参照)。ＦｃＲはRavetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；Capel等, Immunomethods 4:25-34 (1994)；及びde Haas等, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)において概説されている。将来同定されるものも含め、他のＦｃＲもここにおける「ＦｃＲ」なる用語によって包含される。この用語は胎児への母性ＩｇＧの移動及び免疫グロブリンホメオスタシスに寄与する新生児レセプターであるＦｃＲｎもまた含む(Guyer等, J. Immumol. 117:587 (1976)及びKim等, J. Immunol. 24:249 (1994))。
【００５９】
「補体依存性細胞障害」もしくは「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解することを意味する。補体活性化経路は補体系(Ｃｌｑ)の第１補体が、同種抗原と結合した分子(例えば、抗体)に結合することにより開始される。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを、例えばGazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載されているように実施することができる。
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、ＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓｃＦｖが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。ｓｃＦｖの概説については、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg及びMoore編集, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)のPluckthunを参照のこと。
「ダイアボディ」なる用語は、二つの抗原結合部位を持つ小さい抗体断片を指し、その断片は同一のポリペプチド鎖(ＶＨ−ＶＬ)内で軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に重鎖可変ドメイン(ＶＨ)が結合してなる。非常に短いために同一鎖上で二つのドメインの対形成が可能であるリンカーを使用して、ドメインを他の鎖の相補ドメインと強制的に対形成させ、二つの抗原結合部位を創製する。ダイアボディーは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；及びHollinger等, Proc.Natl.Acad.Sci. USA 90:6444-6448 (1993)に更に詳細に記載されている。
【００６０】
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、モノクローナル抗体の産生中に生じ得、一般に少量で存在しうる可能な変異を除いて、同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。そのようなモノクローナル抗体は典型的には標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列を選択することを含む方法によって得られている。例えば、選択方法は、ハイブリドーマクローンのプール、ファージクローン又は組換えＤＮＡクローンのような複数のクローンから独特のクローンを選択することでありうる。選択された標的結合配列は、例えば標的への親和性を改善し、標的結合配列をヒト化し、細胞培養においてその生産を改善し、インビボでのその免疫原性を減少させ、多重特異的抗体を作り出す等のために、更に改変することができ、改変された標的結合配列を含む抗体はまた本発明のモノクローナル抗体であることが理解されなければならない。異なった決定基(エピトープ)に対する異なった抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物と異なり、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対する。その特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、典型的には他の免疫グロブリンによって汚染されていない点で有利である。「モノクローナル」との修飾語句は、実質的に均一な抗体の集団から得たものとしての抗体の性質を表すものであり、抗体が何か特定の方法による生成を必要とするものであると考えてはならない。例えば、本発明で使用されるモノクローナル抗体は、例えばハイブリドーマ法(例えばKohler等, Nature, 256:495 (1975)；Harlow等, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2版 1988)；Hammerling等, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681, (Elsevier, N.Y., 1981))、組換えＤＮＡ法(例えば米国特許第４８１６５６７号を参照)、ファージディスプレイ法(例えばClackson等, Nature, 352:624-628 (1991)；Marks等, J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)；Sidhu等, J. Mol. Biol. 338(2):299-310 (2004)；Lee等, J.Mol.Biol.340(5):1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004)；及びLee等 J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004)を参照)、及びヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座又は遺伝子の一部又は全てを有する動物においてヒト又はヒト様抗体を産生する技術(例えば国際公開第１９９８／２４８９３号；同第１９９６／３４０９６号；同第１９９６／３３７３５号；同第１９９１／１０７４１号；Jakobovits等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等, Nature, 362:255-258 (1993)；Bruggemann等, Year in Immuno., 7:33 (1993)；米国特許第５５４５８０６号；同第５５６９８２５号；同第５５９１６６９号(全てGenPharm)；同第５５４５８０７号；国際公開第１９９７／１７８５２号；米国特許第５５４５８０７号；同第５５４５８０６号；同第５５６９８２５号；同第５６２５１２６号；同第５６３３４２５号；及び同第５６６１０１６号； Marks等, Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)；Lonberg等, Nature, 368: 856-859 (1994)；Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994)；Fishwild等, Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996)；Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996)；及びLonberg及びHuszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995)を参照)を含む様々な技術によって作製することができる。
【００６１】
本明細書中のモノクローナル抗体は、特に「キメラ」抗体(免疫グロブリン)を含み、それは特定の種由来又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列に相同な又は同一な重鎖及び／又は軽鎖の一部を含むものであり、残りの鎖は、所望の生物学的活性を表す限り、抗体断片のように他の種由来又は他の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列に相同な又は同一なものである(米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984))。ここで対象とするキメラ抗体には、非ヒト霊長類(例えば、ヒヒ、アカゲザル又はカニクイザルなどの旧世界サル)由来の可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体を含む(米国特許第５６９３７８０号)。
【００６２】
非ヒト(例えばマウス)の抗体の「ヒト化」型は、非ヒトイムノグロブリン(免疫グロブリン)に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト霊長類のような非ヒト種(ドナー抗体)からの高頻度可変領域の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。例として、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(ＦＲ)残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、もしくはドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性を更に洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいは実質的に全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ヒト免疫グロブリン配列の高頻度可変ループが上記のＦＲ置換を除くＦＲのすべて又は実質的にすべてである少なくとも１又は一般的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。また、ヒト化抗体は、場合によっては免疫グロブリン定常領域の一部、一般的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含む。更なる詳細については、Jones等, Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature 332:323-329 (1988)；及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。
【００６３】
本明細書中で使用されるところの「高頻度可変領域」なる用語は、抗原結合に寄与する抗体のアミノ酸残基を意味する。高頻度可変領域は一般には「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基(例えば、軽鎖可変ドメインの残基２４−３４(Ｌ１)、５０−５６(Ｌ２)及び８９−９７(Ｌ３)、及び重鎖可変ドメインの３１−３５(Ｈ１)、５０−６５(Ｈ２)及び９５−１０２(Ｈ３)；Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest,５版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991))及び／又は「高頻度可変ループ」からの残基(例えば、軽鎖可変ドメインの残基２６−３２(Ｌ１)、５０−５２(Ｌ２)及び９１−９６(Ｌ３)及び重鎖可変ドメインの残基２６−３２(Ｈ１)、５３−５５(Ｈ２)及び９６−１０１(Ｈ３)；Chothia及びLesk J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987))を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基はここで定義するように高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書中の目的のための「ネイキッド抗体」は、細胞障害性分子又は放射性標識とコンジュゲートしていない抗体である。
【００６４】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断又は治療への使用を妨害しうる物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様においては、抗体は、(１)ローリー(Lowry)法により定量して、抗体が９５重量％より多くなるまで、最も好ましくは９９重量％より多くなるまで、(２)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、Ｎ末端あるいは内部アミノ酸配列の少なくとも１５の残基を得るのに十分な程度まで、あるいは、(３)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性が得られるように十分な程度まで精製される。抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、単離された抗体には、組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により調製される。
【００６５】
「親和性成熟」抗体は、その一又は複数の高頻度可変領域に一又は複数の変異を有する抗体であって、そのような変異を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性を向上させたものである。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、さらにはピコモル単位の親和性を有する。親和成熟抗体は、当技術分野において既知の方法により産生できる。Marks等は、Bio/Technology, 10:779-783(1992年)において、ＶＨドメインとＶＬドメインのシャフリングによる親和成熟を開示している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダムな突然変異誘発が、Barbas等、Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813(1994)；Schier等、Gene, 169:147-155 (1995)；Yelton等、J. Immunol., 155:1994-2004 (1995)；Jackson等, J. Immunol., 154(7):3310-9 (1995)；及びHawkins等, J. Mol. Biol., 226:889-896 (1992)に開示されている。
【００６６】
「抗体曝露」とは、およそ１日から２０日の期間にわたって投与される一又は複数回用量の本明細書中の抗体への接触又は曝露を意味する。前記用量は、この曝露期間にわたって一回又は決まった時間ないしは変則的な時間で、投与されてもよい。初め及びその後(例えば２回目又は３回目)の抗体曝露は、本明細書中で詳述されるようにそれぞれ時間を隔てたものである。
「パッケージ挿入物」は、効能、用途、服用量、投与、配合禁忌、パッケージされている製品と併用される他の治療薬、及び／又はその治療薬の用途に関する警告などについての情報を含む、治療薬の商業的包装を慣習的に含めた指示書を指す。
【００６７】
ＩＩ．ＡＤ又は認知症の治療
本発明は、ＡＤ又は認知症に罹患している患者のＡＤ又は認知症の治療方法であって、Ｂ細胞表面マーカー(好ましくはＣＤ２０抗体)に結合するアンタゴニスト(好ましくは抗体)の有効量を被検体に投与することを含んでなる方法を提供する。本明細書中で治療されるＡＤ又は認知症は、軽度、中程度、重度、軽度〜中程度、中程度〜重度、孤発性、家族性、早期発症性、及び遅発性のＡＤ又は認知症を含む。
例示的な投薬プロトコールに従って、前記方法は、ＡＤ又は認知症の被検体に有効量のネイキッドＣＤ２０抗体を投与して、およそ０．５〜４グラム(好ましくは１．５〜２．５グラム)の初回抗体曝露の後に、およそ０．５〜４グラム(好ましくは１．５〜２．５グラム)の２回目の抗体曝露が供給されることを含み、該２回目の抗体曝露が初回抗体曝露後およそ１６〜６０週までに供給されないものである。本発明のために、前記の２回目の抗体曝露は、被検体が初回抗体曝露後にＣＤ２０抗体で処置される次回であり、初回と２回目の曝露の間にＣＤ２０抗体処置ないしは曝露が介在しない。
【００６８】
初回と２回目ないしはその後の抗体曝露との間隔は、初回抗体曝露の第１又は第２回目の投薬のいずれか、好ましくは初回抗体曝露の第１投薬から測定されうる。
本明細書中の好ましい実施態様では、抗体曝露は、およそ２４週ないしは６か月離れて、又はおよそ４８週又は１２か月離れている。
一実施態様では、２回目の抗体曝露は、初回の曝露からおよそ２０〜３０週までに供給されず、場合によって、その後におよそ０．５〜４グラム(好ましくはおよそ１．５〜２．５グラム)の３回目の抗体曝露が供給され、該３回目の曝露は初回の曝露からおよそ４６から６０週まで(好ましくはおよそ４６から５４週まで)に投与されず、次いで好ましくは、初回曝露から少なくともおよそ７０〜７５週までに更なる抗体曝露が供給されない。
代替実施態様では、２回目の抗体曝露は、初回曝露からおよそ４６〜６０週までに供給されず、場合によって、その後の抗体曝露がその前の抗体曝露からおよそ４６〜６０週までに供給されない。
【００６９】
本明細書中の一又は複数の抗体曝露の何れかは、抗体の単一投薬として、又は、抗体の２つの別々の投薬(すなわち、１回目及び２回目の投薬を構成する)として被検体に供給されうる。各々の抗体曝露に用いられる投薬の回数(１又は２の何れかにかかわらず)は、例えば、治療されるＡＤのタイプ、用いられる抗体の種類、第二医薬を用いるかどうか、及び用いる場合に何を用いるか、投与方法と投与頻度に依存する。２回の別々の用量が投与される場合、２回目の投薬は、１回目の投薬が投与されたときからおよそ３〜１７日、好ましくはおよそ６〜１６日、最も好ましくはおよそ１３〜１６日に投与される。２回の別々の用量が投与される場合、１回目及び２回目の抗体の投薬は、好ましくはおよそ０．５〜１．５グラム、より好ましくはおよそ０．７５〜１．３グラムである。
一実施態様では、被検体は、少なくともおよそ３回又は少なくとも４回の抗体の曝露、例えばおよそ３〜６０曝露、より具体的にはおよそ３〜４０曝露、最も具体的にはおよそ３〜２０曝露が供給される。好ましくは、このような曝露は、それぞれおよそ２４週ないしは６か月、又は４８週ないしは１２か月の間隔で投与される。一実施態様では、各々の抗体曝露は抗体の単回投薬として供給される。代替実施態様では、各々の抗体曝露は２回の別々の抗体投薬として供給される。しかしながら、すべての抗体曝露が、単回投薬又は２回の別々の投薬として供給される必要はない。
【００７０】
好ましい実施態様では、前記方法は、およそ２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、好ましくはおよそ５００ｍｇ〜１５００ｍｇ、最も好ましくはおよそ７５０ｍｇ〜１２００ｍｇの範囲で一又は複数の用量が投与されることを含んでなる。例えば、１から４回の用量、又は１回のみないしは２回のみの用量が投与されてもよい。この実施態様では、抗体がおよそ１か月の期間内、好ましくはおよそ２〜３週間の期間内、最も好ましくはおよそ２週間の期間内に投与されうる。
複数の用量が投与される場合、後の投薬(例えば、２回目又は３回目の投薬)は、前の用量が投与されたときからおよそ１〜２０日、好ましくはおよそ６〜１６日、最も好ましくはおよそ１４〜１６日に投与される。別々の用量が、好ましくは、全期間でおよそ１日から４週間の間、より好ましくはおよそ１日から２０日の間(例えば、６〜１８日間以内)に投与される。各々の別々の抗体の用量は、好ましくはおよそ２００ｍｇ〜２０００ｍｇ、好ましくは５００ｍｇ〜１５００ｍｇ、最も好ましくは７５０ｍｇ〜１２００ｍｇである。
【００７１】
被検体は、アンタゴニストないしは抗体の少なくともおよそ２回の曝露、例えばおよそ２〜６０回の曝露、より具体的にはおよそ２〜４０回の曝露、最も具体的にはおよそおよそ２〜２０回の曝露といった複数の曝露又は一連の用量を与えることによって、アンタゴニストないしは抗体にて再処置してもよい。このような付加的な曝露は間欠的に、例えば上記の間隔をおいて投与されうる。
好適なアンタゴニストは抗体である。本明細書に記載の方法において、ＣＤ２０抗体はネイキッド抗体である。好ましくは、抗体はインタクトな、ネイキッド抗体である。本明細書において、好適なＣＤ２０抗体は、キメラ、ヒト化、又はヒトのＣＤ２０抗体であり、好ましくはリツキシマブ、ヒト化２Ｈ７、２Ｆ２(ＨｕＭａｘ-ＣＤ２０)ヒトＣＤ２０抗体(Genmab)、ヒト化Ａ２０抗体(Immunomedics)である。なお、リツキシマブ又はヒト化２Ｈ７がより好ましい。
【００７２】
一実施態様では、被検体は、ＡＤ又は認知症を治療するために免疫抑制薬(一又は複数)などの薬剤(一又は複数)で今までに治療されたことがない、及び／又はＢ細胞表面マーカーに対する抗体によって、今までに治療されたことがない(例えば、ＣＤ２０抗体にて今までに治療されたことがない)。好ましくは、被検体はＢ細胞悪性腫瘍を有しない。一実施態様では、被検体は、ＡＤ又は認知症以外の自己免疫性疾患に罹患していない。
抗体は、非経口、局所、皮下、腹膜内、肺内、鼻腔内、及び／又は病巣内投与を含む任意の適切な手段により投与される。非経口注入は、筋内、静脈内、動脈内、腹膜内、及び皮下への投与を含む。また、脳間質性注入であり両側性の定位注入であるので、髄腔内投与も考慮される(例として、ＣＤ２０抗体の髄腔内運搬に関しては米国特許公開第２００２／０００９４４４号、Grillo-Lopez, Aを参照)。好ましくは、投薬は、静脈内、皮下、又は髄腔内に、最も好ましくは静脈内注入(一又は複数)によって、与えられる。
一実施態様では、ＣＤ２０抗体は、ＡＤ又は認知症を治療するために被検体に投与される唯一の薬剤である。
【００７３】
しかしながら、通常、ＣＤ２０抗体は一又は複数の第二医薬と組み合わされるであろう。例えば、場合によって、コリンエステラーゼ阻害薬(ガランタミン(REMINYL(登録商標))、リバスチグミン経皮パッチを含むリバスチグミン(EXELON(登録商標))、ドネペジル(ARICEPT(登録商標))、タクリン(COGNEX(登録商標))及びヒュープリンＸＴＭ、ＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニスト(例えば、メマンチン(NAMENDA(登録商標))又はネラメキサン)、ＮＧＦのアデノ関連ウイルス運搬(例えばＣＥＲＥ-１１０)、β遮断薬、抗精神病薬、アセチルコリン前駆体、ニコチン性又はムスカリン性アゴニスト(例えば、XANOMELINETMパッチ)、抗β-アミロイド抗体、抗ＮＧＦ抗体、例えばＲＡ６２４、ワクチン、例えばヒトのアミロイドワクチン、アミロイド形成に関与する酵素(一又は複数)である、β又はγ分泌酵素の活性を阻止する薬剤、抗アミロイド療法、セロトニン、ノルエピネフリン、ソマトスタチン、ＡＰＰのアミロイド-βへの転換又は老人性プラーク及び神経原線維変化の形成を妨げる薬剤、β-部位アミロイド-前駆体タンパク質切断酵素であるβ-分泌酵素(ＢＡＣＥ)アンタゴニスト、ＢＡＳＥ１アンタゴニスト、ＢＡＳＥ２アンタゴニスト、γ-分泌酵素アンタゴニスト、プレセニリン-１(ＰＳＥＮ-１)アンタゴニスト、プレセニリン-２(ＰＳＥＮ-２)アンタゴニスト、ＡＰＯ-Ｅ４アンタゴニスト、抗鬱薬、抗痙攣薬、セロトニン再取込阻害薬、セルトラリン(ZOLOFTTM)、トラゾドン(DESYRELTM)、ジバルプロエクス(DEPAKOTETM)、ガバペンチン(NEURONINTM)、リスペリドン(RISPERDAL(登録商標))、オランザピン(ZYPREXATM)、クエチアピン(SEROQUELTM)、チオリダジン(MELLARILTM)、コレステロール低下薬又はスタチン(例えばＨＭＧ-ＣｏＡ還元酵素又はシンバスタチン)、免疫調節性薬剤、抗酸化剤、例えばビタミンＥ(α‐トコフェロール)、魚油又はαリポ酸、カロチン、ニコチン、ギンナン抽出物、セレギリン、メシル酸エルゴロイド、エストロゲン、抗炎症薬、例えば、非ステロイド系抗炎症薬(ＮＳＡＩＤ)、例として、アスピリン、イブプロフェン、ｃｏｘ-２阻害薬、ロフェコキシブ(VIOXX(登録商標))、ナプロキセン(ALEVE(登録商標))、セレコキシブ(CELEBRIX(登録商標))又はナプロキセン、イチョウ葉エキス、ＰＰＩ-１０１９、ヒューペルジンＡ、ビタミン、例として、葉酸塩(葉酸)、Ｂ６、Ｂ１２、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレニウム(PREADVISETM)、ＧＡＢＡ(Ｂ)レセプターアンタゴニスト、例えばＳＧＳ７４２、ＮＣ-７５８(ALZHEMEDTM)、Ｃ-１０７３(MIFEPRISTONETM)、ＦＫ９６２、クルクミン、ＯＮＯ-２５０６ＰＯ、メシル酸ラサギリン、バルプロエート、ＳＲ５７７４６Ａ(XALIPRODENTM)、ＮＳ ２３３０、ＭＰＣ-７８６９、インターフェロン、例として、インターフェロンα、タンパク質分解性βアミロイド軽鎖抗体断片、細胞障害性剤(上記の定義を参照)、化学療法剤(上記に定義した)、免疫抑制剤(上記の定義)、ＴＮＦα阻害薬、ＤＭＡＲＤ、インテグリンアンタゴニストないしは抗体、副腎皮質ステロイド、プリンヒポキサンチン誘導体(例えばＡＩＴ-０８２)などの第二医薬を投与してもよい。
【００７４】
好ましくは、第二医薬は、特にＡＤ又は認知症が軽度〜中程度である場合、コリンエステラーゼ阻害薬(例として、ガランタミン(REMINYL(登録商標))、リバスチグミン経皮パッチを含むリバスチグミン(EXELON(登録商標))、及びドネペジル(ARICEPT(登録商標)))、又は、特にＡＤ又は認知症が中程度〜重度である場合、ＮメチルＤ-アスパルテート(ＮＭＤＡ)アンタゴニスト(例えば、メマンチン(NAMENDA(登録商標)))である。
第二医薬は、ＣＤ２０抗体の初回の曝露及び／又はその後の曝露により投与されてもよい。このような併用投与は、別々の製剤又は単一の製薬製剤を用いた同時投与、及び何れかの順番での連続的な投与を含み、このとき、両方(又は全て)の活性薬剤が同時に各々の生物活性を及ぼす時間があることが好ましい。
【００７５】
被検体への抗体の投与の他に、本出願は、遺伝子治療による抗体の投与を考慮する。抗体をコードする核酸のこのような投与は、抗体の「有効量」を投与するという表現により包含される。例として、細胞内抗体を生成するための遺伝子治療の使用に関しては、１９９６年３月１４日に公開の国際公開第９６／０７３２１号を参照のこと。
被検体の細胞内への核酸(場合によって、ベクターに含まれている)の取り込みには２つの主な手法があり、それはインビボとエクスビボである。インビボ運搬のために、通常被検体の抗体が必要である部位に核酸が直接注入される。エクスビボ治療のために、被検体の細胞が取り除かれ、核酸がこれら単離した細胞内に導入され、変更した細胞が直接又は、例えば、被検体内に着床される多孔性膜内に被包して被検体に投与される(例として米国特許第４８９２５３８号および同第５２８３１８７号を参照)。核酸を生きた細胞に導入するために有用な様々な技術がある。技術は、核酸が対象とする宿主の細胞内にインビボで移入されるか、又はインビトロで培養細胞に形質移入されるかの何れかによって、異なる。インビトロでの哺乳動物細胞への核酸の移入に適する技術には、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法、などの使用が含まれる。遺伝子のエクスビボ運搬のために一般的に用いられるベクターはレトロウィルスである。
【００７６】
現在のところ、好適なインビボ核酸移入技術には、ウイルスベクター(例として、アデノウイルス、単純ヘルペスＩウイルス又はアデノ関連ウイルス)及び脂質ベースのシステム(遺伝子の脂質が媒介する移入に有用な脂質は、例えばＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ及びＤＣ-Ｃｈｏｌである)を用いる形質移入が含まれる。場合によっては、標的細胞を標的とする薬剤、例えば細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンドなどにより核酸供給源を提供するのが好ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスに関係する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の種類の細胞に対するキャプシドタンパク質ないしはその断片、循環への内部移行を起こすタンパク質に対する抗体、並びに、細胞内局在化を標的とするタンパク質及び細胞内半減期を上げるタンパク質は、ターゲティングのため及び／又は取込を促すために用いられてもよい。レセプターが媒介するエンドサイトーシスの技術は、例えば、Wu等, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)、Wagner等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:3410-3414 (1990)に記載されている。一般に知られている遺伝子マーキング及び遺伝子治療プロトコールの概要については、Anderson等, Science 256:808-813 (1992)を参照のこと。また、国際公開第９３／２５６７３号及びそこに引用される文献を参照のこと。
【００７７】
ＩＩＩ．抗体の製造
本発明の方法及び製造品は、Ｂ細胞表面上のマーカーに結合する抗体、特にＣＤ２０に結合する抗体を好ましくは使用する又は取り込むものである。したがって、該抗体の製造方法をここに記載する。
抗体の製造又はスクリーニングのために用いるＢ細胞表面マーカーは、例えば、所望のエピトープを含む該マーカーないしはその一部の可溶性形態であってもよい。あるいは又は更に、前記マーカーをその細胞表面上に発現する細胞を抗体の製造又はスクリーニングに用いることができる。抗体の製造に有用なＢ細胞表面マーカーの他の形態は当業者に明らかである。
以下は、本発明に従って用いた抗体の製造の例示的技術として記載する。
【００７８】
(i)  ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原とアジュバントを複数回皮下(ｓｃ)又は腹腔内(ｉｐ)注射することにより動物に産生される。免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビターに関連抗原を、二官能性又は誘導体形成剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル(システイン残基による抱合)、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド(リジン残基による)、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、又はＲとＲ１が異なったアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲにより抱合させることが有用である。
動物を、例えばタンパク質又はコンジュゲート１００μｇ又は５μｇ(それぞれウサギ又はマウスの場合)を完全フロイントアジュバント３容量と併せ、この溶液を複数部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体に対して免疫化する。１ヶ月後、該動物を、完全フロイントアジュバントに入れた初回量の１／５ないし１／１０のペプチド又はコンジュゲートを用いて複数部位に皮下注射することにより、追加免疫する。７ないし１４日後に動物を採血し、抗体価について血清を検定する。動物は、力価がプラトーに達するまで追加免疫する。好ましくは、動物は、同じ抗原のコンジュゲートであるが、異なったタンパク質にコンジュゲートさせた、及び／又は異なった架橋剤によってコンジュゲートさせたコンジュゲートで追加免疫する。コンジュゲートはまたタンパク融合として組換え細胞培養中で調製することもできる。また、ミョウバンのような凝集化剤が、免疫反応の増強のために好適に使用される。
【００７９】
(ii)  モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を意味する、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、一般にわずかながら存在する突然変異体などのモノクローナル抗体の産生中に生じうる突然変異体を除いて同一及び／又は同じエピトープに結合するものである。よって、「モノクローナル」との修飾詞は、別個又はポリクローナルの抗体の混合物ではなく、抗体の特性を示すものである。
例えば、モノクローナル抗体は、Kohler等, Nature, 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製でき、又は組換えＤＮＡ法(米国特許第４８１６５６７号)によって作製することができる。
ハイブリドーマ法においては、マウス又はその他の適当な宿主動物、例えばハムスターを上記したようにして免疫し、免疫化に用いられるタンパク質と特異的に結合する抗体を生産するか又は生産することのできるリンパ球を導き出す。別法として、リンパ球をインビトロで免疫することもできる。次に、リンパ球を、ポリエチレングリコールのような適当な融剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,59-103頁(Academic Press, 1986))。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する一又は複数の物質を好ましくは含む適当な培地に蒔き、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニジンホスホリボシルトランスフェラーゼ(ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ)を欠失するならば、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠失細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含有するであろう(ＨＡＴ培地)。
【００８０】
好ましい骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの生産を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に対して感受性である細胞である。これらの中でも、好ましい骨髄腫株化細胞は、マウス骨髄腫系、例えば、ソーク・インスティテュート・セル・ディストリビューション・センター、San Diego, California USAから入手し得るＭＯＰＣ-２１及びＭＰＣ-１１マウス腫瘍、及びアメリカ培養細胞系統保存機関、Rockville, Maryland USAから入手し得るＳＰ-２又はＸ６３-Ａｇ８-６５３細胞から誘導されたものである。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫株化細胞もまたヒトモノクローナル抗体の産生のために開示されている(Kozbor, J.Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,51-63頁(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987))。
ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合検定、例えばラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)又は酵素結合免疫吸着検定(ＥＬＩＳＡ)によって測定する。
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunson等, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャッチャード分析法によって測定することができる。
所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が確定された後、該クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 59-103頁(Academic Press, 1986))。この目的に対して好適な培地には、例えば、Ｄ-ＭＥＭ又はＲＰＭＩ-１６４０培地が包含される。加えて、該ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで増殖させることができる。
【００８１】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ-セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィのような常套的な免疫グロブリン精製法により、培地、腹水、又は血清から好適に分離される。
モノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、常法を用いて(例えば、マウスの重鎖及び軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより)即座に単離され配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたならば、ＤＮＡを発現ベクター中に入れ、ついでこれを、そうしないと免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中にトランスフェクトし、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体の合成を達成することができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌中での組換え発現に関する概説論文には、Skerra等, Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262(1993)及びPlueckthum, Immunol. Revs., 130:151-188(1992)がある。
【００８２】
更なる実施態様では、抗体又は抗体断片は、McCafferty等, Nature, 348:552-554 (1990)に記載された技術を使用して産生される抗体ファージライブラリから単離することができる。Clackson等, Nature, 352:624-628 (1991)及び Marks等, J.Mol.Biol., 222:581-597 (1991)は、ファージライブラリを使用したマウス及びヒト抗体の単離を記述している。続く刊行物は、鎖混合による高親和性(ｎＭ範囲)のヒト抗体の生産(Marks等, Bio/Technology, 10:779-783(1992))、並びに非常に大きなファージライブラリを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換え(Waterhouse等, Nuc.Acids.Res., 21:2265-2266(1993))を記述している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の分離に対する伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ法に対する実行可能な別法である。
ＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード化配列を、相同的マウス配列に代えて置換することにより(米国特許第４８１６５６７号；Morrison等, Proc.Nat.Acad.Sci.,USA,81:6851(1984))、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部又は一部を共有結合させることで修飾できる。
典型的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインに置換され、又は抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換されて、抗原に対する特異性を有する１つの抗原結合部位と異なる抗原に対する特異性を有するもう一つの抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作り出す。
【００８３】
(iii)  ヒト化抗体
非ヒト抗体をヒト化する方法は従来からよく知られている。好ましくは、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入されている。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と呼ばれる。ヒト化は、基本的にはウィンターと共同研究者の方法(Jones等, Nature, 321:522-525 (1986)、Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988)、Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536(1988))に従って、ヒト抗体の該当する配列を高頻度可変領域配列に置換することにより実施することができる。よって、このような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の該当する配列で置換されたキメラ抗体(米国特許第４８１６５６７号)である。実際には、ヒト化抗体は、典型的にはいくつかの高頻度可変領域残基及び場合によってはいくらかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。
抗原性を低減するには、ヒト化抗体を生成する際に使用するヒトの軽重両方の可変ドメインの選択が非常に重要である。「ベストフィット法」では、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列を既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングする。次に齧歯動物のものと最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワーク領域(ＦＲ)として受け入れる(Sims等, J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothia等, J. Mol. Biol., 196:901(1987))。他の方法では、軽又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体全てのコンセンサス配列から誘導される特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用できる(Carter等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta等, J. Immunol., 151:2623(1993))。
【００８４】
更に、抗体を、抗原に対する高親和性や他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化することが重要である。この目標を達成するべく、好ましい方法では、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析工程を経てヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推測三次元立体配座構造を図解し、表示するコンピュータプログラムは購入可能である。これら表示を見ることで、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グログリンの抗原との結合能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、例えば標的抗原に対する親和性が高まるといった、望ましい抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般的に、高頻度可変領域残基は、直接的かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。
【００８５】
(iv)  ヒト抗体
ヒト化のための別法により、ヒト抗体を生産することができる。例えば、内因性の免疫グロブリン産生がなくともヒト抗体の全レパートリーを免疫化することで産生することのできるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作ることが今は可能である。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域(ＪＨ)遺伝子の同型接合除去が内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような生殖系列突然変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子列の転移は、抗原投与時にヒト抗体の産生をもたらす。Jakobovits等, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等, Nature 362:255-258 (1993)；Bruggerman等, Year in Immuno., 7:33 (1993)；米国特許第５５９１６６９号、同５５８９３６９号及び同５５４５８０７号を参照されたい。
【００８６】
あるいは、ファージディスプレイ技術(McCafferty等, Nature 348：552-553(1990))を、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変(Ｖ)ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産出させるために使用することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３のメジャー又はマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれかにおいてイン-フレームをクローンする。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖のＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択により、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択がなされる。よって、ファージはＢ細胞の特性のいくつかを模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる；例えばJohnson, Kevin S. 及びChiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)を参照のこと。Ｖ-遺伝子セグメントのいくつかの供給源がファージディスプレイのために使用可能である。Clackson等, Nature, 352：624-628(1991)は、免疫化されたマウス脾臓から得られたＶ遺伝子の小ランダム組合せライブラリーからの抗オキサゾロン抗体の異なった配列を単離した。非免疫化ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構成可能で、抗原(自己抗原を含む)とは異なる配列の抗体を、Marks等, J. Mol. Biol. 222：581-597(1991)、又はGriffith等, EMBO J. 12：725-734(1993)に記載の技術に本質的に従って単離することができる。また、米国特許第５５６５３３２号及び同５５７３９０５号を参照のこと。
またヒト抗体は、活性化Ｂ細胞によりインビトロで生産してもよい(例えば米国特許第５５６７６１０号及び同５２２９２７５号を参照)。
【００８７】
(v)  抗体断片
抗体断片を生産するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク分解性消化を介して誘導されていた(例えば、Morimoto等, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及びBrennan等, Science, 229:81(1985)を参照されたい)。しかし、これらの断片は現在は組換え宿主細胞により直接生産することができる。例えば、抗体断片は上述において検討した抗体ファージライブラリーから分離することができる。別法として、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合してＦ(ａｂ')２断片を形成することができる(Carter等, Bio/Technology 10:163-167(1992))。他のアプローチ法では、Ｆ(ａｂ')２断片を組換え宿主細胞培養から直接分離することができる。抗体断片の生産のための他の方法は当業者には明らかであろう。他の実施態様では、選択抗体は単鎖Ｆｖ断片(ｓｃＦＶ)である。国際公開９３／１６１８５号；米国特許第５５７１８９４号；及び米国特許第５５８７４５８号を参照のこと。また、抗体断片は、例えば米国特許第５６４１８７０号に記載されているような「直鎖状抗体」であってもよい。このような直線状の断片は単特異的又は二重特異的であってもよい。
【００８８】
(vi)  二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピトープに結合しうる。他のこのような抗体ではＢ細胞表面マーカーを結合し、更に異なるＢ細胞表面上のマーカーが結合しうる。あるいは、抗Ｂ細胞表面マーカーは、Ｂ細胞に細胞防御メカニズムを集中させるように、ＦｃγＲI(ＣＤ６４)、ＦｃγＲII(ＣＤ３２)及びＦｃγＲIII(ＣＤ１６)等のＩｇＧ(ＦｃγＲ)に対するＦｃレセプター、又はＴ細胞レセプター分子(例えばＣＤ２又はＣＤ３)等の白血球上のトリガー分子に結合するアームと結合しうる。また、二重特異性抗体はＢ細胞に細胞障害剤を局在化するためにも使用されうる。これらの抗体はＢ細胞表面マーカー結合アーム及び細胞障害剤(例えば、サポリン(saporin)、抗インターフェロン-α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテン)と結合するアームを有する。二重特異性抗体は全長抗体又は抗体断片(例えばＦ(ａｂ')２二重特異性抗体)として調製することができる。
【００８９】
二重特異性抗体を作成する方法は当該分野において既知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は二つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の同時発現に基づき、ここで二つの鎖は異なる特異性を持っている(Millstein等, Nature, 305:537-539(1983))。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が無作為に取り揃えられているため、これらのハイブリドーマ(四部雑種)は１０個の異なる抗体分子の可能性ある混合物を産生し、そのうちただ一つが正しい二重特異性構造を有する。通常、アフィニティークロマトグラフィ工程により行われる正しい分子の精製は、かなり煩わしく、生成物収率は低い。同様の方法が国際公開第９３／８８２９号及びTraunecker等, EMBO J. 10:3655-3659(1991)に開示されている。
異なったアプローチ法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン(抗原−抗体結合部位)を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているＤＮＡを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。これにより、コンストラクトに使用される３つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率をもたらす態様において、３つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも２つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率が特に重要性を持たないときは、２又は３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【００９０】
このアプローチ法の好適な実施態様では、二重特異性抗体は、第一の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第二の結合特異性を提供する)とからなる。二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖がないと容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体を産生する更なる詳細については、例えばSuresh等, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。
米国特許第５７３１１６８号に記載された他のアプローチ法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーのパーセントを最大にすることができる。好適な界面は抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖(例えばチロシン又はトリプトファン)と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの(例えばアラニン又はスレオニン)と置き換えることにより第２の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモダイマーのような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。
【００９１】
二特異性抗体とは架橋抗体や「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートの一方の抗体がアビジンと結合し、他方はビオチンと結合していても良い。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせること(米国特許第４６７６９８０号)及びＨＩＶ感染の治療(国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／２００３７３号及び欧州特許第０３０８９号)等の用途が提案されている。ヘテロ抱合抗体は適当な架橋方法によって生成できる。当技術分野においては、適切な架橋剤は周知であり、それらは複数の架橋法と共に米国特許第４６７６９８０号などに記されている。
抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennan等, Science, 229:81 (1985) はインタクト抗体をタンパク分解性に切断してＦ(ａｂ')２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルヒド形成を防止する。産生されたＦａｂ'断片はついでチオニトロベンゾアート(ＴＮＢ)誘導体に転換される。Ｆａｂ'-ＴＮＢ誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ'-チオールに再転換し、他のＦａｂ'-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。
【００９２】
組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な方法もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生産された。Kostelny等, J.Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により２つの異なった抗体のＦａｂ'部分に結合させられた。抗体ホモダイマーはヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、ついで再酸化させて抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生産に対して使用することができる。Hollinger等, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)により記述された「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするのに十分に短いリンカーにより軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に重鎖可変ドメイン(ＶＨ)を結合してなる。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成させられ、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーを使用する他の二重特異性抗体断片製造方策もまた報告されている。Gruber等, J.Immunol., 152:5368 (1994)を参照されたい。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt等, J.Immunol. 147:60(1991)。
【００９３】
ＩＶ．抗体の他の修飾
抗体のアミノ酸配列の修飾を考察する。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性が改善されることが望ましい。抗体のアミノ酸配列変異体は、適当なヌクレオチド変化を抗体核酸に導入することにより、又はペプチド合成により調製される。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構造物に達するまでなされるが、その最終構造物は所望の特徴を有する。また、アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置の変化など、抗体の翻訳後過程を変更しうる。
突然変異のための好ましい位置にある抗体の残基又は領域の同定のために有用な方法は、Cunningham及びWells , Science 244: 1081-1085 (1989)に記載されているように「アラニンスキャンニング突然変異誘発」と呼ばれる。ここで、標的残基の残基又は基が同定され(例えば、arg, asp, his, lys,及びglu等の荷電残基)、中性又は負荷電アミノ酸(最も好ましくはアラニン又はポリペプチドアニリン)に置換され、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼす。次いで置換に対する機能的感受性を示すこれらのアミノ酸の位置は、置換部位において又はそれに対して更に又は他の置換を導入することにより精密にされる。即ち、アミノ酸配列変異を導入する部位は予め決定されるが、変異自体の性質は予め決める必要はない。例えば、与えられた部位における性能を分析するために、ａｌａスキャンニング又はランダム突然変異誘発を標的コドン又は領域で実施し、発現された抗体変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【００９４】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドの長さの範囲のアミノ-及び／又はカルボキシル末端融合物、並びに一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入物を含む。末端挿入物の例は、Ｎ-末端メチオニル残基を持つ抗体又は細胞障害ポリペプチドに融合した抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を向上させる酵素又はポリペプチドの抗体のＮ-又はＣ-末端への融合物を含む。
他の型の変異体はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、抗体分子において少なくとも一つのアミノ酸残基に異なる残基が挿入されている。抗体(一又は複数)の置換突然変異について最も関心ある部位は高度可変領域を含むが、ＦＲ交互変化も考慮される。保存的置換は、「好ましい置換」と題して表２に示す。これらの置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表２に「例示的置換」と名前を付けた又はアミノ酸の分類を参照して以下に更に記載するような、より実質的な変化が導入され、生成物がスクリーニングされうる。
【００９５】
表２
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【００９６】
抗体の生物学的性質における実質的な修飾は、(ａ)置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又はヘリックス配置、(ｂ)標的部位の分子の電荷又は疎水性、又は(ｃ)側鎖の嵩を維持するそれらの効果において実質的に異なる置換を選択することにより達成される。アミノ酸はその側鎖の性質の類似性に応じて分類される( Biochemistry, 第２版., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)中のA. L. Lehninger)：
(１)非極性：Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)
(２)荷電のない極性：Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)
(３)酸性：Asp (D), Glu (E)
(４)塩基性：Lys (K), Arg (R), His(H)
あるいは、天然に生じる残基は共通の側鎖性質に基づいてグループに分類してもよい。
(１)疎水性：ノルロイシン、met、ala、val、leu、ile；
(２)中性の親水性：cys、ser、thr、asn、gln；
(３)酸性：asp、glu；
(４)塩基性：his、lys、arg；
(５)鎖配向に影響する残基：gly、pro；
(６)芳香族：trp、tyr、phe。
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
抗体の適切な配置の維持に関与しない任意のシステイン残基は、一般にセリンで置換し、分子の酸化的安定性を向上させて異常な架橋を防止する。逆に、抗体にシステイン結合を付加して、その安定性を向上させてもよい(特にここでの抗体は抗体断片、例としてＦｖ断片である)。
【００９７】
特に好ましい型の置換変異体は、親抗体の一又は複数の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的に、さらなる発展のために選択され、得られた変異体は、それらが作製された親抗体と比較して向上した生物学的特性を有している。そのような置換変異体を作製する簡便な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性突然変異である。簡潔に言えば、幾つかの高頻度可変領域部位(例えば６−７部位)を突然変異させて各部位における全ての可能なアミノ置換を生成させる。このように生成された多価抗体は、繊維状ファージ粒子から、各粒子内に充填されたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物としてディスプレイされる。ファージディスプレイ変異体は、ついで、ここに開示されるようなそれらの生物学的活性(例えば、結合親和性)についてスクリーニングされる。修飾のための候補となる高頻度可変領域部位を同定するために、アラニンスキャンニング突然変異誘発を実施し、抗原結合に有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。別法として、又はそれに加えて、抗原-抗体複合体の結晶構造を分析して抗体と抗原の接点を特定するのが有利である場合もある。このような接触残基及び隣接残基は、ここに述べた技術に従う置換の候補である。そのような変異体が生成されると、変異体のパネルにここに記載するようなスクリーニングを施し、一又は複数の関連アッセイにおいて優れた特性を持つ抗体を更なる開発のために選択する。
抗体のアミノ酸変異の他の型は、抗体の元のグリコシル化パターンを変更する。このような変更とは、抗体に見い出される一又は複数の糖鎖部分の欠失、及び／又は抗体に存在しない一又は複数のグリコシル化部位の付加等を含む。
【００９８】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合の何れかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を意味する。アスパラギン-Ｘ-セリン及びアスパラギン-Ｘ-スレオニン(ここでＸはプロリンを除く任意のアミノ酸)のトリペプチド配列は、アスパラギン側鎖への糖鎖部分の酵素的結合のための認識配列である。従って、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列の何れかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作出される。Ｏ結合グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに、Ｎ-アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの糖類のうち一つが結合することを意味するが、５-ヒドロキシプロリン又は５-ヒドロキシリジンもまた用いられる。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を、それが一又は複数の上述したトリペプチド配列(Ｎ結合グリコシル化部位のもの)を含むように変化させることによって簡便に達成される。該変化は、元の抗体の配列への一又は複数のセリン又はスレオニン残基の付加、又はこれによる置換によってもなされる(Ｏ-結合グリコシル化部位の場合)。
【００９９】
抗体がＦｃ領域を含有する場合、それに接着する炭水化物を変更してもよい。例えば、抗体のＦｃ領域に接着するフコースを欠損する成熟炭水化物構造の抗体は、米国特許公開出願番号２００３／０１５７１０８号(Presta, L.)に記載される。ＣＤ２０抗体組成物に関しては米国公開特許第２００４／００９３６２１号(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.)も参照のこと。抗体のＦｃ領域に接着した炭水化物内のＮ-アセチルグルコサミン(ＧｌｃＮＡｃ)を二分する抗体は、国際公開第０３／０１１８７８号(Jean-Mairet等)、及び米国特許第６６０２６８４号(Umana等)に参照されている。抗体のＦｃ領域に接着するオリゴサッカライド内の少なくとも一のガラクトース残基を有する抗体は、国際公開第９７／３００８７号(Patel等)に報告される。また、抗体のＦｃ領域に接着する変更された炭水化物を有する抗体については、国際公開第９８／５８９６４号(Raju, S.)及び国際公開第９９／２２７６４号(Raju, S.)も参照のこと。
【０１００】
抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、この分野で知られた種々の方法によって調製される。これらの方法は、限定するものではないが、天然源からの単離(天然に生じるアミノ酸配列変異体の場合)又は初期に調製された抗体の変異体又は非変異体のオリゴヌクレオチド媒介(又は部位特異的)突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、及びカセット突然変異誘発による調製を含む。
エフェクター機能に関して、例えば抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞毒性(ＡＤＣＣ)及び／又は補体依存性細胞毒性(ＣＤＣ)を向上させるために、本発明の抗体を修飾することが望ましい。このことは、抗体のＦｃ領域に一又は複数のアミノ酸修飾を導入することで達成される。あるいは又は加えて、Ｆｃ領域にシステイン残基を導入することによってこの領域での鎖間のジスルフィド結合形成が起こりうる。故に、生成されたホモ二量体抗体は内部移行能を向上及び／又は補体媒介性細胞障害及びＡＤＣＣを増強する。Caron等, J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) 及びShopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)を参照。抗腫瘍活性が亢進されたホモ二量体抗体もまた、Wolff等, Cancer Research 53:2560-2565 (1993)に記載されているような異種性二機能性交差結合を用いて調製されうる。又は、抗体を二重のＦｃ領域を持つように操作して、それによって補体媒介性溶解及びＡＤＣＣ能を亢進した。Stevenson等, Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)を参照。
【０１０１】
国際公開第００／４２０７２号(Presta, L.)は、抗体がそのＦｃ領域内にアミノ酸置換を含有する場合のヒトエフェクター細胞の存在下で改善されたＡＤＣＣ機能を有する抗体を述べる。好ましくは、改善されたＡＤＣＣを有する抗体はＦｃ領域内の位置２９８、３３３及び／又は３３４に置換を有する。好ましくは、変更されたＦｃ領域は、それらの位置のうちの１、２又は３つに置換を含有する又はそれらからなるヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。
変更したＣ１ｑ結合及び／又はＣＤＣを有する抗体については、国際公開第９９／５１６４２号、米国特許第６１９４５５１号Ｂ１、米国特許第６２４２１９５号Ｂ１、米国特許第６５２８６２４号Ｂ１及び米国特許第６５３８１２４号 (Idusogie等)に記載される。抗体は、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２６、３２７、３２９、３１３、３３３及び／又は３３４の一以上にアミノ酸置換を含有する。
【０１０２】
抗体の血清半減期を延長するために、例として米国特許第５７３９２７７号に記載されているように抗体(特に抗体断片)内にサルベージレセプター結合エピトープを組み込む方法がある。ここで用いる、「サルベージレセプター結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期延長に関与するＩｇＧ分子(例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４)のＦｃ領域のエピトープを表す。また、Ｆｃ領域内に置換を有し、血清半減期が延長された抗体は国際公開第００／４２０７２号(Presta, L.)に記載される。
３つ以上(好ましくは４つ)の機能的抗原結合部位を有する遺伝的に操作した抗体もまた考慮される(米国公開特許第２００２／０００４５８７号Ａ１, Miller等)。
【０１０３】
Ｖ．治療用製剤
本発明に関連して使用される抗体の治療的剤形は、所望の純度を有する抗体を選択的に薬剤的許容可能な担体、賦形剤、安定剤と混合して凍結乾燥の剤形又は液状溶液の形態の貯蔵に適するものである(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))。許容可能な担体、賦形剤、又は安定化剤は、用いられる用量及び濃度で受容者に非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤(オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンズアルコニウムクロライド；ベンズエトニウムクロライド；フェノール；ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３-ペンタノール；及びｍ-クレゾールなど)；低分子量(約１０残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体(例えば、Ｚｎ-タンパク質錯体)又はTWEENTM、PLURONICSTM、又はポリエチレングリコール(ＰＥＧ)等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１０４】
例示的抗ＣＤ２０抗体の剤形は国際公開第９８／５６４１８号に記載されており、出典明記により特別に本明細書中に援用される。この公報は、２−８℃で２年間の最小限の貯蔵期間を持つように、リツキシマブ４０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍＭ酢酸塩、１５０ｍＭトレハロース、０．９％ベンジルアルコール、及び０．０２％ポリソルベート２０, ｐＨ５．０を含む液状複数回用量の剤形である。目的の他の抗ＣＤ２０剤形は、リツキシマブ１０ｍｇ／ｍＬ、塩化ナトリウム９．０ｍｇ／ｍＬ、クエン酸ナトリウム二水和物７．３５ｍｇ／ｍＬ、ポリソルベート８０ ０．７ｍｇ／ｍＬ、及び注入用の滅菌水を含むｐＨ  ６．５のものである。
凍結乾燥剤形は米国特許第６２６７９５８号(Andya等)に記載されるように、皮下的投与に適する。そのような凍結乾燥剤形は適当な希釈剤で高いタンパク質濃度に再編成されるかもしれない、また再編成された剤形はここで治療される哺乳動物に皮下注射されうる。
また、抗体又はアンタゴニストの結晶形態も考慮される。例えば米国公開第２００２／０１３６７１９号Ａ１(Shenoy等)も参照のこと。
【０１０５】
また、本明細書中の製剤は、治療される特定の徴候のための必要に応じて、一以上の活性な化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものを含有してもよい。例えば、上記の治療項目ＩＩにおいて検討されたものなどの第二の医薬をさらに提供することが望ましい場合もある。そのような他の薬剤の種類と有効量は、例えば製剤中に存在する抗体の量、治療されるＡＤや認知症のタイプ、及び被検体の臨床的パラメータに依存する。これらは一般的に、前記の使用と同じ服用量と投薬経路で用いられるか、又は前記の用いた服用量のおよそ１から９９％で用いられる。
また、活性成分は、例としてコアセルべーション技術又は界面重合化により調製したマイクロカプセル、例として、個々のコロイド状のドラッグデリバリーシステム(例として、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル)又はマクロエマルジョン中の、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ-(メチルメタサイクリン)マイクロカプセル中に包まれているかもしれない。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
【０１０６】
持続性徐放剤が調製される。持続性徐放剤の好適な例は、抗体を含む固形疎水性ポリマーの準透過性基質を含むものであり、基質は、造形品、例としてフィルム、又はマイクロカプセルの形である。持続性徐放基質の例として、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2ヒドロキシエチル-メタクリレート)、又はポリ(ビニルアルコール))、ポリ乳酸(米国特許第３７７３９１９号), L-グルタミン酸及びエチルＬグルタミン酸の共重合体、非分解性のエチレンビニール酢酸塩、分解性の乳酸グリコール酸共重合体、例としてLUPRON DEPOTTM(乳酸-グリコール酸共重合体及びロイプロリド酢酸塩で構成された注入可能ミクロスフェア)、及びポリＤ-(−)-３ヒドロキシブチリン酸を含む。
【０１０７】
ＡＤ又は認知症において、血液脳関門が崩壊されているか又はその透過性ないしは運搬が変化しているかもしれないが、その透過性を上げる及び／又は治療剤を運搬する薬剤又は方法が抗体とともに調製されてもよい。例えば、プロカルバジンなどの親油性ベクターを用いて、血液脳関門を透過させる、及び／又は治療剤を脳へ運搬してもよい。また、イムノリポソーム、抗体指向性リポソーム及び生体分子親油性複合体が、血液脳関門を越える担体として用いられてもよい。好ましくは、これらは、脂肪酸、例えばω-３系列又はこの系列の脂質誘導体を含む。さらに、親油性分子には、他の脂肪酸、リゾ-リン脂質、ジアシルリン脂質、ジアシルグリセロール、コレステロール、ステロイド、例えば１８−４６の炭素原子のポリ不飽和の炭化水素基を有するものが含まれるが、これらに限定されるものではない。加えて、バイオポリマーが使われてもよい。これらには、ヒトのアルブミン、アミノデキストラン及びカゼインに結合して連結するポリ(α)-アミノ酸であるヒト血清アルブミン又は薬剤が含まれるが、これに限定されるものではない。好ましくは、このような担体は、運搬システムとしての使用に好適な生体親和性及び薬物動態を有する。例として米国特許第５７１６６１４号を参照のこと。血液脳関門の透過性を増加しうる薬剤の他の例は、トランスフェリンレセプター抗体である。トランスフェリンレセプターは、脳の毛細管内皮細胞上で検出可能である。このような抗体の例には、Ｂ３／２５、ＯＫＴ-９、ＯＸ-２６、Ｔｆ６／１４、Ｌ５.１、５Ｅ-９、Ｔ５８／３０及びＲＩ７ ２１７が含まれ、米国特許第５１８２１０７号を参照のこと。さらに、血液脳関門は浸透圧が崩壊されていてもよい。
インビボ投与のために使用される製剤は無菌でなければならない。これは濾過滅菌膜による濾過によって容易に達成されうる。
【０１０８】
ＶＩ．製造品
本発明の他の実施態様では、上記のＡＤ又は認知症の治療に有用な材料を含有してなる製造品が提供される。好ましくは、製造品は、(ａ) Ｂ細胞表面抗原アンタゴニスト(例えばＣＤ２０抗体)と薬学的に受容可能な担体又は希釈液を含有してなる組成物を含む容器、と、(ｂ) ＡＤ又は認知症を有する被検体への組成物の投与に関する指示を有するパッケージ挿入物とを具備する。
製造品は、容器と該容器に貼付けられるか付随するラベル又はパッケージ挿入物とを具備する。適切な容器には、例えばボトル、バイアル、シリンジなどが含まれる。容器はガラス又はプラスチックのような様々な材料で形成されうる。容器はＡＤ又は認知症の治療に有効な組成物を収容するか含んでおり、滅菌した出入口を有している(例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパーを有する静脈溶液用のバック又はバイアルであってよい)。組成物中の少なくとも一つの活性剤は抗体である。ラベル又はパッケージ挿入物は、前記組成物が、供給される抗体及び任意の他の薬剤の用量及び間隔に関する具体的なガイドラインによって、ＡＤ又は認知症を患っている被検体のＡＤ又は認知症を治療するために用いられることを示している。製造品は、製薬的に許容可能な希釈バッファ、例えば注入用の静菌性水(ＢＷＦＩ)、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びブドウ糖液を含む第二の容器を更に具備してもよい。更に、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含め、市販及び使用者の観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
場合によって、本明細書中の製造品は、治療のための抗体以外の薬剤を収容する第二の容器と、さらに該薬剤によって、哺乳動物を治療することに関する指示書を具備する。この第二の医薬の例は上記の治療の項目ＩＩにおいて、検討されている。
さらに、本発明の詳細は以下の非制限的な実施例により例示される。本明細書中のすべての引用文献の開示内容は、出典明記によって、本明細書中に特別に援用される。
【実施例】
【０１０９】
実施例１  軽度〜中程度のアルツハイマー病の治療
軽度〜中程度のＡＤを有する被検体は、この実施例において、ＣＤ２０抗体により治療される。
ＮＩＮＣＤＳ／ＡＤＲＤＡ判定基準(McKhann 等 "Clinical diagnosis of Alzheimer's disease: report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of Department of Health and Human Services Task Force on Alzheimer's Disease." Neurology 34, 939-944 (1984))により定義されるアルツハイマー病を有する５０〜８０歳の男性又は女性の被検体が、本明細書において、治療される。前記の被検体は、簡易精神状態検査(ＭＭＳＥ)を用いて測定される軽度〜中程度のＡＤを有する。例えば、ＭＭＳＥスコアが１６〜２４の範囲であってもよい。被検体は、ＣＤ２０抗体による治療の前の３か月間はＡＤのための標準的なケア薬物治療(すなわちアセチルコリンエステラーゼ阻害薬)下にあるのが好ましい。さらに、被検体は、神経心理学的試験が可能な程度に視力と聴力を有するであろう。
Genentechから市販されているリツキシマブは、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム無水和物、及び注入用の滅菌水(ｐＨ６．５)にて滅菌生成物として静注用に製剤化される。あるいは、インタクトヒト化２Ｈ７.ｖ１６又はインタクトヒト化２Ｈ７.ｖ５１１を含んでなる製剤が投与される。
【０１１０】
治療の第一クールでは、１日目及び１５日目のそれぞれに１ｇ用量の静注(ＩＶ)用ＣＤ２０抗体が投与される。被検体は、各々の注入開始の前３０〜６０分に、アセトアミノフェン(１ｇ)及びジフェンヒドラミンＨＣｌ(５０ｍｇ)を経口投与される。
治療のその次のクールでは、２４週目(１６９日目)、４８週目(３３７日目)及び７２週目(５０５日目)に投与を開始する。治療の続くクールの２回目の注入は、１回目の注入後１４±１日目とする。
本明細書中に記載のＣＤ２０抗体の投与により、認知機能の維持、疾患進行の緩徐化、疾患に伴う行動問題の制御、日常生活能力の欠失の緩徐化、自己抗体ないしＢＲＡレベルの減少、及び／又は循環ＣＤ２０陽性Ｂ細胞の減少が生じる。例えば、ＣＤ２０抗体の投与により、ＭＭＳＥスコアが同じに維持されるか又は４ポイント以下の減少が生じる(未処置の軽度〜中程度のＡＤでは、ＭＭＳＥスコアで１年につき２〜４ポイントの衰えが予測される)。このような改善される結果は、標準的なケア薬物単独により達成されるものより優れる。
【０１１１】
実施例２  中程度〜重度のアルツハイマー病の治療
この実施例は、ＣＤ２０抗体を用いた中程度〜重度のＡＤの治療を記述する。この実施例では、中程度〜重度のＡＤを有する５０歳以上の男性及び女性が治療される。このような被検体は、ＮＰＩの不穏／攻撃性ドメインに関して４以上のスコアをもつ中程度〜重度のＡＤを有する。被検体は、少なくとも３か月間、メマンチンを一定投薬されている。
Genentechから市販されているリツキシマブは、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム無水和物、及び注入用の滅菌水(ｐＨ６．５)にて滅菌生成物として静注用に製剤化される。あるいは、インタクトヒト化２Ｈ７.ｖ１６又はインタクトヒト化２Ｈ７.ｖ５１１を含んでなる製剤が投与される。
【０１１２】
治療の第一クールでは、１日目及び１５日目のそれぞれに１ｇ用量の静注(ＩＶ)用ＣＤ２０抗体が投与される。被検体は、各々の注入開始の前３０〜６０分に、アセトアミノフェン(１ｇ)及びジフェンヒドラミンＨＣｌ(５０ｍｇ)を経口投与される。
治療のその次のクールでは、２４週目(１６９日目)、４８週目(３３７日目)及び７２週目(５０５日目)に投与を開始する。治療の続くクールの２回目の注入は、１回目の注入後１４±１日目とする。
日々の機能は、被検体の機能的能力を測定するために使用するＡＤＬ質問表の包括的バッテリーを含む、日常生活動作(ＡＤＬ)表を用いて評価してもよい。各々のＡＤＬ項目は、個々の行動の最も高いレベルから完全に欠失するまで等級分けされている。臨床医は、被検体の行動を理解している介護者と面談することによって表を作成する。
【０１１３】
認知能力は、中程度〜重度の認知症患者の認知機能の評価に有効な多種目計測器を用いて評価してもよい。例えば、計測器は、注意力、順応、言語、記憶、視覚空間に関する能力、解釈、慣習及び社会的相互作用の構成要素を含む認知能力の選択された態様を調べうる。例えば、０から１００の範囲のスコアであり、スコアが低いほど大きな認知障害を示す重度機能障害バッテリー(ＳＩＢ)を用いてもよい。
本明細書中に記載のＣＤ２０抗体の投与により、認知機能の維持、疾患進行の緩徐化、疾患に伴う行動問題の制御、日常生活能力の欠失の緩徐化、自己抗体ないしＢＲＡレベルの減少、及び／又は循環ＣＤ２０陽性Ｂ細胞の減少が生じる。ＣＤ２０抗体の投与により、プラセボにより達成されるスコアよりも優れたＡＤＬスコアとなり、又は前記のＣＤ２０抗体がメマンチンと組み合わされる場合にはメマンチン単独よりも優れたスコアとなる。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１Ａ】マウス２Ｈ７の軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)(配列番号１)、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異体の軽鎖可変ドメイン(配列番号２)、及びヒトκ軽鎖サブグループＩの軽鎖可変ドメイン(配列番号３)のアミノ酸配列を比較した配列アライメント。２Ｈ７及びｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶＬのＣＤＲは以下の通りである：ＣＤＲ１(配列番号４)、ＣＤＲ２(配列番号５)、及びＣＤＲ３(配列番号６)。それぞれの鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は示すように大括弧で囲っており、フレームワーク領域であるＦＲ１-ＦＲ４に隣接している。２Ｈ７はマウス２Ｈ７抗体を示す。２配列間にあるアスタリスクは２配列間で異なる箇所を示す。 Kabat等, Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に従って残基番号を示し、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、及びｅで挿入を示す。
【図１Ｂ】マウス２Ｈ７の重鎖可変ドメイン(ＶＨ)(配列番号７)、ヒト化２Ｈ７．ｖ１６変異体の重鎖可変ドメイン(配列番号８)、及び重鎖サブグループＩＩＩのヒトコンセンサス配列の重鎖可変ドメイン(配列番号９)のアミノ酸配列を比較した配列アライメント。２Ｈ７及びｈｕ２Ｈ７．ｖ１６のＶＨのＣＤＲは以下の通りである：ＣＤＲ１(配列番号１０)、ＣＤＲ２(配列番号１１)、及びＣＤＲ３(配列番号１２)。それぞれの鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は示すように大括弧で囲っており、フレームワーク領域、ＦＲ１-ＦＲ４に隣接している。２Ｈ７はマウス２Ｈ７抗体を示す。２配列間にあるアスタリスクは２配列間で異なる箇所を示す。 Kabat等, Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に従って残基番号を示し、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、及びｅで挿入を示す。
【図２】Kabatの可変ドメイン残基番号付け及びＥｕ定常ドメイン残基番号付けを用いて、成熟２Ｈ７.ｖ１６及び２Ｈ７.ｖ５１１の軽鎖(それぞれ配列番号１３及び１５)のアライメントを示す。
【図３】Kabatの可変ドメイン残基番号付け及びＥｕ定常ドメイン残基番号付けを用いて、成熟２Ｈ７.ｖ１６及び２Ｈ７.ｖ５１１の重鎖(それぞれ配列番号１４及び１６)のアライメントを示す。
【図１Ａ】
2008538767.tif 000004
【図１Ｂ】
2008538767.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2008538767.tif 000009
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