(57)【要約】本発明の一態様は、３'位にてホスホロアミダイト基で置換されたリボヌクレオシドに関する。一部の実施形態では、ホスホロアミダイトはアルキルホスホロアミダイトである。本発明の別の一態様は、少なくとも１つの非リン酸結合を含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。代表的な非リン酸結合は、ホスホナート、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、およびカルバマート結合を含む。一部の実施形態では、非リン酸結合はホスホナート結合である。一部の実施形態では、非リン酸結合は一方の鎖だけに存在する。一部の実施形態では、非リン酸結合は両方の鎖に存在する。一部の実施形態では、リガンドは二本鎖オリゴヌクレオチドを構成するオリゴヌクレオチド鎖の一方に結合している。一部の実施形態では、リガンドは二本鎖オリゴヌクレオチドを構成するオリゴヌクレオチド鎖の両方に結合している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖は少なくとも１つの修飾糖部分を含む。本発明の別の一態様は、少なくとも１つの非リン酸結合を含む一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。代表的な非リン酸結合は、ホスホナート、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、およびカルバマート結合を含む。一部の実施形態では、非リン酸結合はホスホナート結合である。一部の実施形態では、リガンドはオリゴヌクレオチド鎖に結合している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾糖部分を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式Iで表される化合物。
【化１】
2008504840.tif 000159
（Ｒ１は必要に応じて置換されたアラルキル、−Ｓｉ（Ｒ７）３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯ２Ｒ４、または−Ｃ（Ｏ）（ＮＲ８）Ｒ４であり；
Ｒ２はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ７はそれぞれ独立してアルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ５は−Ｓｉ（Ｒ７）３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯ２Ｒ４、または−Ｃ（Ｏ）（ＮＲ８）Ｒ４であり；
Ｒ６は
【化２】
2008504840.tif 000160
であり；
Ｒ８はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ９はそれぞれ独立してＨまたはアルキルを表し；さらに
式Iで表される化合物の任意の立体中心での立体化学配置はＲ、Ｓ、またはそれら配置の混合物である。）
【請求項２】
Ｒ１は必要に応じて置換されたアラルキルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は必要に応じて置換されたトリチルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１は
【化３】
2008504840.tif 000161
であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２はＨであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３はアルキルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはペンチルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３はメチルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４はアルキルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４はそれぞれ独立してメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはペンチルを表すことを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４はイソプロピルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ７はアルキルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ６は
【化４】
2008504840.tif 000162
であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ６は
【化５】
2008504840.tif 000163
であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであり；Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであり；およびＲ６は
【化６】
2008504840.tif 000164
であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチル、およびＲ６は
【化７】
2008504840.tif 000165
であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は
【化８】
2008504840.tif 000166
であり、およびＲ６は
【化９】
2008504840.tif 000167
であることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項２２】
下記の式Ｉａによって表されることを特徴とする請求項１記載の化合物。
【化１０】
2008504840.tif 000168
【請求項２３】
Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであることを特徴とする請求項２２記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３でありおよびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであり；Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであり；およびＲ６は
【化１１】
2008504840.tif 000169
であることを特徴とする請求項２２記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであり、およびＲ６は
【化１２】
2008504840.tif 000170
であることを特徴とする請求項２２記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は
【化１３】
2008504840.tif 000171
であり、およびＲ６は
【化１４】
2008504840.tif 000172
であることを特徴とする請求項２２記載の化合物。
【請求項２７】
第一鎖および第二鎖を含み、該第一鎖および第二鎖は独立して下記の式ＩＩにより表されることを特徴とする二本鎖オリゴヌクレオチド。
【化１５】
2008504840.tif 000173
（ここで
Ｘ１はＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、または−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｍはそれぞれ独立してアルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
Ｒ１およびＲ５はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ４はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ｒ６、Ｒ７、およびＲ９はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ８はそれぞれ独立してアルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
ｋはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
ｎ１は１、２、または３を表し；
ｎ２は約１５〜２８の範囲を含む整数であり；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、または３を表し；
ｘはそれぞれ独立して０、１、２、または３を表し；
ｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して：
【化１６】
2008504840.tif 000174
を表し；
Ａ２はそれぞれ独立して：
【化１７】
2008504840.tif 000175
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して：
【化１８】
2008504840.tif 000176
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表すか、または式：
【化１９】
2008504840.tif 000177
を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４との間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５との間の結合であり；
Ｒはそれぞれ独立して水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ｙはそれぞれ独立してアルキルジラジカル、シクロアルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、ヘテロシクロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アリールジラジカル、ヘテロアリールジラジカル、アラルキルジラジカル、ヘテロアラルキルジラジカル、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（ＮＲ６）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｓ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２−、
【化２０】
2008504840.tif 000178
−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｎ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＣ（Ｏ）Ｓ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＮ（Ｒ７）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳｉ（Ｒ８）２Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）ＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（モルホリノ）−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ１）２］ｔＳ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］、Ｓ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ＝ＮＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ（Ｏ）Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］、Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、または−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−を表し；
Ｘ２はそれぞれ独立して結合、Ｏ、またはＮ（Ｒ６）を表し；
Ｚはそれぞれ独立してＯ、Ｓ、またはＮ（Ｒ８）を表し；
Ｚ２はそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、Ｂ（Ｒ９）３、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、Ｆ、Ｓｅ、−ＳｅＲ８、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、または−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、アルキル、またはアリールを表し；またはＲ１０およびＲ１１は合わせて３−、４−、５−、６−、または７員環を形成し；
Ｒ１２はそれぞれ独立してＨ、アルキル、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
ｔはそれぞれ独立して０、１、２、３、または４を表し；
ｖはそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ａ５はそれぞれ独立してアリール、アラルキル、またはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルを表し；
Ａ６はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を表すかまたは式：
【化２１】
2008504840.tif 000179
で表され；
Ｚ３はそれぞれ独立してＯまたはＳを表し；
Ｚ４はそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１９）２Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、アリール、またはアルキルを表し；
Ｒ１３はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ３を表し；
Ｒ１４はそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、またはシリルを表し；
Ｒ１５はそれぞれ独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド、またはシリルを表し；
Ｒ１６はそれぞれ独立してシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールを表し；
Ｂ３はＡ６とＡ７との間の結合であり；
Ｂ４はＡ６とＯとの間の結合であり；
ｎ３はそれぞれ独立して１〜１５を含む範囲の整数を表し；
ｎ４は原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ７はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２を表すか、または式：
【化２２】
2008504840.tif 000180
を有し；
ｐはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
Ｂ５はＡ５とＡ７との間の結合であり；
Ａ８は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルであるか、または式：
【化２３】
2008504840.tif 000181
によって表され；
Ｒ１７はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ６を表し；
Ｒ１８はそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシル、−Ｎ（Ｒ６）２、−ＣＮ、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＣ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）２を表し；
Ｒ１９はそれぞれ独立してＨまたはアルキルを表し；
Ｂ６はＡ８とＡ９との間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＰとの間の結合であり；
Ａ９は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ６Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ６Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ６Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ６Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ６Ｎ（Ｂ８）２であるか、または式：
【化２４】
2008504840.tif 000182
を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９との間の結合であり；および
ただし、少なくとも１つのＹは
【化２５】
2008504840.tif 000183
ではない。）
【請求項２８】
Ａ１はそれぞれ独立して：
【化２６】
2008504840.tif 000184
を表し；およびｄは１または２であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項２９】
Ｙが
【化２７】
2008504840.tif 000185
であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３０】
Ｙが
【化２８】
2008504840.tif 000186
であり、およびＺ２がそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、Ｂ（Ｒ９）３、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３１】
Ｙが
【化２９】
2008504840.tif 000187
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してアルキルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３２】
Ｙが
【化３０】
2008504840.tif 000188
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、または−ＯＭを表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３３】
Ｙが
【化３１】
2008504840.tif 000189
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してメチルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３４】
Ｙが
【化３２】
2008504840.tif 000190
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも２つ存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３５】
Ｙが
【化３３】
2008504840.tif 000191
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも５つ存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３６】
Ｙが
【化３４】
2008504840.tif 000192
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも７つ存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３７】
Ｙが
【化３５】
2008504840.tif 000193
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも１０存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３８】
前記第一鎖の末端での第一ヌクレオシドと第二ヌクレオシドとの間の結合において、Ｙが
【化３６】
2008504840.tif 000194
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項３９】
前記第一鎖の３'末端での第一ヌクレオシドと第二ヌクレオシドの間の結合において、Ｙが
【化３７】
2008504840.tif 000195
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４０】
前記第一鎖および前記第二鎖の３'末端での第一ヌクレオシドと第二ヌクレオシドの間の結合において、Ｙが
【化３８】
2008504840.tif 000196
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４１】
ｎ１が１であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４２】
ｔが０または１であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４３】
ｘが１であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４４】
ｎ２が１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４５】
ｎ２が１９、２０、または２１であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４６】
ｎ２が２０であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４７】
ｎ２が２０であり、および前記第一鎖および第二鎖が、該第一鎖および第二鎖上に１個のハイブリダイズしていないヌクレオシドが存在するようにハイブリダイズしていることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４８】
ｎ２が２０であり、および前記第一鎖および第二鎖が、該第一鎖および第二鎖上に２個のハイブリダイズしていないヌクレオシドが存在するようにハイブリダイズしていることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項４９】
ｎ２が第一鎖について２０であり、およびｎ２が第二鎖について２２であることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５０】
Ｒ１がＨであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５１】
Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｎ（Ｒ１９）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５２】
Ｒ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５３】
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５４】
Ｒ５がＨであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５５】
Ｚ３がＯであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５６】
Ａ２がそれぞれ独立して
【化３９】
2008504840.tif 000197
を表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５７】
Ａ４がそれぞれ独立して
【化４０】
2008504840.tif 000198
を表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５８】
Ａ４はそれぞれ独立して
【化４１】
2008504840.tif 000199
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化４２】
2008504840.tif 000200
を表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項５９】
Ａ４はそれぞれ独立して
【化４３】
2008504840.tif 000201
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化４４】
2008504840.tif 000202
を表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６０】
Ａ５が少なくとも１つ存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６１】
Ａ５が少なくとも５つ存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６２】
Ａ５が少なくとも１０存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６３】
Ａ５が前記第一鎖だけに存在することを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６４】
第一鎖および第二鎖がそれぞれＡ５の少なくとも１つの存在を含むことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６５】
Ａ５が−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であり、Ａ９９は必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、またはテトラゾリルであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６６】
Ａ５が下記の式ＩＩＩ：
【化４５】
2008504840.tif 000203
で表され、
Ｒ１−ＩＩＩ、Ｒ２−ＩＩＩ、およびＲ３−ＩＩＩがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒを表すことを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項６７】
Ｒ１−ＩＩＩがアルキルであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項６８】
Ｒ１−ＩＩＩが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項６９】
Ｒ１−ＩＩＩがメチルであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項７０】
Ｒ２−ＩＩＩがＨであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項７１】
Ｒ３−ＩＩＩがアルコキシルであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項７２】
Ｒ３−ＩＩＩが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ、またはｔｅｒｔ−ブトキシであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項７３】
Ｒ３−ＩＩＩがメトキシであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項７４】
Ｒ１−ＩＩＩがメチルであり、Ｒ２−ＩＩＩがＨであり、およびＲ３−ＩＩＩがメトキシであることを特徴とする請求項６６記載の化合物。
【請求項７５】
Ａ５が下記の式ＩＶ：
【化４６】
2008504840.tif 000204
で表され、
Ｒ１−ＩＶ、Ｒ２−ＩＶ、およびＲ３−ＩＶがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒであることを特徴とする請求項２７記載の化合物。
【請求項７６】
Ｒ１−ＩＶがアルキルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項７７】
Ｒ１−ＩＶがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項７８】
Ｒ１−ＩＶがメチルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項７９】
Ｒ２−ＩＶがＨであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項８０】
Ｒ３−ＩＶがアルキルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項８１】
Ｒ３−ＩＶが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、またはヘプチルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項８２】
Ｒ３−ＩＶがイソブチルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項８３】
Ｒ１−ＩＶがメチルであり、Ｒ２−ＩＶがＨであり、およびＲ３−ＩＶがイソブチルであることを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項８４】
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項７５記載の化合物。
【請求項８５】
下記の式Ｖで表される一本鎖オリゴヌクレオチド。
【化４７】
2008504840.tif 000205
（Ｘ１はＨ，−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２，−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２，−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２，−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２，または−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｍはそれぞれ独立してアルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
Ｒ１およびＲ５はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ４はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ｒ６、Ｒ７、およびＲ９はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ８はそれぞれ独立してアルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
ｋはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
ｎ１は１、２、または３を表し；
ｎ２は約１５〜２８の範囲を含む整数であり；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、または３を表し；
ｘはそれぞれ独立して０、１、２、または３を表し；
ｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して：
【化４８】
2008504840.tif 000206
を表し；
Ａ２はそれぞれ独立して：
【化４９】
2008504840.tif 000207
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して：
【化５０】
2008504840.tif 000208
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表すか、または式：
【化５１】
2008504840.tif 000209
を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４との間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５との間の結合であり；
Ｒはそれぞれ独立して水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ｙはそれぞれ独立してアルキルジラジカル、シクロアルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、ヘテロシクロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アリールジラジカル、ヘテロアリールジラジカル、アラルキルジラジカル、ヘテロアラルキルジラジカル、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（ＮＲ６）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｓ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２−、
【化５２】
2008504840.tif 000210
−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｎ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−
［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＣ（Ｏ）Ｓ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＮ（Ｒ７）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳｉ（Ｒ８）２Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−
［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）ＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（モルホリノ）−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ１）２］ｔＳ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ＝ＮＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ（Ｏ）Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、または−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−を表し；
Ｘ２はそれぞれ独立して結合、Ｏ、またはＮ（Ｒ６）を表し；
Ｚはそれぞれ独立してＯ、Ｓ、またはＮ（Ｒ８）を表し；
Ｚ２はそれぞれ独立してアルキル，アリール，アラルキル，Ｂ（Ｒ９）３，−ＯＭ，−Ｏアルキル，−Ｏアリール，−Ｏアラルキル，−ＳＭ，−Ｓアルキル，−Ｓアリール，−Ｓアラルキル，−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２，−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２，−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ８，Ｈ，−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８，−ＣＯ２Ｒ８，Ｆ，Ｓｅ，−ＳｅＲ８，−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９，−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９，−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９，−Ｎ（Ｒ１９ＸＣ（Ｒ１９^ＳＲ１９，−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル，−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル，または−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、アルキル、またはアリールを表し；またはＲ１０およびＲ１１は合わせて３−、４−、５−、６−、または７員環を形成し；
Ｒ１２はそれぞれ独立してＨ、アルキル、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
ｔはそれぞれ独立して０、１、２、３、または４を表し；
ｖはそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ａ５はそれぞれ独立してアリール、アラルキル、またはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルを表し；
Ａ６はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を表すかまたは式：
【化５３】
2008504840.tif 000211
で表され；
Ｚ３はそれぞれ独立してＯまたはＳを表し；
Ｚ４はそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１９）２Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、アリール、またはアルキルを表し；
Ｒ１３はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ３を表し；
Ｒ１４はそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、またはシリルを表し；
Ｒ１５はそれぞれ独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド、またはシリル；
Ｒ１６はそれぞれ独立してシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールを表し；
Ｂ３はＡ６とＡ７との間の結合であり；
Ｂ４はＡ６とＯとの間の結合であり；
ｎ３はそれぞれ独立して１〜１５を含む範囲の整数を表し；
ｎ４は原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ７はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２を表すか、または式：
【化５４】
2008504840.tif 000212
を有し；
ｐはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
Ｂ５はＡ５とＡ７との間の結合であり；
Ａ８は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルであるか、または式：
【化５５】
2008504840.tif 000213
によって表され；
Ｒ１７はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ６を表し；
Ｒ１８はそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシル、−Ｎ（Ｒ６）２、−ＣＮ、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＣ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）２を表し；
Ｒ１９はそれぞれ独立してＨまたはアルキルを表し；
Ｂ６はＡ８とＡ９との間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＰとの間の結合であり；
Ａ９は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ６Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ６Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ６Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ６Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ６Ｎ（Ｂ８）２であるか、または式：
【化５６】
2008504840.tif 000214
を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９との間の結合であり；および
ただし、少なくとも１つのＹは
【化５７】
2008504840.tif 000215
ではない。）
【請求項８６】
Ａ１はそれぞれ独立して：
【化５８】
2008504840.tif 000216
を表し；およびｄは１または２であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項８７】
Ｙが
【化５９】
2008504840.tif 000217
であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項８８】
Ｙが
【化６０】
2008504840.tif 000218
であり、およびＺ２がそれぞれ独立して、アルキル、アリール、アラルキル、Ｂ（Ｒ９）３、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項８９】
Ｙが
【化６１】
2008504840.tif 000219
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してアルキルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９０】
Ｙが
【化６２】
2008504840.tif 000220
であり、およびＺ２はそれぞれ独立して、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、または−ＯＭを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９１】
Ｙが
【化６３】
2008504840.tif 000221
であり、およびＺ２はそれぞれ独立して、メチルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９２】
Ｙが
【化６４】
2008504840.tif 000222
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも２つ存在することを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９３】
Ｙが
【化６５】
2008504840.tif 000223
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも５つ存在することを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９４】
Ｙが
【化６６】
2008504840.tif 000224
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも７つ存在することを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９５】
Ｙが
【化６７】
2008504840.tif 000225
であり、およびＺ２がアルキルであるものが少なくとも１０存在することを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９６】
前記第一鎖の末端での第一ヌクレオシドと第二ヌクレオシドとの間の結合において、Ｙが
【化６８】
2008504840.tif 000226
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９７】
前記第一鎖の３'末端での第一ヌクレオシドと第二ヌクレオシドの間の結合において、Ｙが
【化６９】
2008504840.tif 000227
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９８】
前記第一鎖および前記第二鎖の３'末端での第一ヌクレオシドと第二ヌクレオシドの間の結合において、Ｙが
【化７０】
2008504840.tif 000228
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項９９】
ｎ１が１であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１００】
ｔが０または１であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０１】
ｘが１であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０２】
ｎ２が１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０３】
ｎ２が１９、２０、または２１であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０４】
ｎ２が２０であることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０５】
Ｒ１がＨであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０６】
Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｎ（Ｒ１９）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０７】
Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏアルキルアミン、または−Ｎ（Ｒ１９）２を表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０８】
Ｒ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１０９】
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１０】
少なくとも２つのＲ４がＯＨであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１１】
少なくとも５つのＲ４がＯＨであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１２】
少なくとも１０のＲ４がＯＨであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１３】
少なくとも１５のＲ４がＯＨであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１４】
Ｒ５がＨであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１５】
Ｚ３がＯであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１６】
Ｚ４がそれぞれ独立して、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１７】
Ａ４がそれぞれ独立して
【化７１】
2008504840.tif 000229
を表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１８】
Ａ４はそれぞれ独立して
【化７２】
2008504840.tif 000230
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化７３】
2008504840.tif 000231
を表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１１９】
Ａ４はそれぞれ独立して
【化７４】
2008504840.tif 000232
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化７５】
2008504840.tif 000233
を表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１２０】
Ａ５が少なくとも１つ存在することを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１２１】
Ａ５が少なくとも５つ存在することを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１２２】
Ａ５が−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であり、Ａ９９は必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、またはテトラゾリルであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１２３】
Ａ５が下記の式ＶＩ：
【化７６】
2008504840.tif 000234
で表され、
Ｒ１−ＶＩ、Ｒ２−ＶＩ、およびＲ３−ＶＩがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒを表すことを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１２４】
Ｒ１−ＶＩがアルキルであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１２５】
Ｒ１−ＶＩが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１２６】
Ｒ１−ＶＩがメチルであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１２７】
Ｒ２−ＶＩがＨであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１２８】
Ｒ３−ＶＩがアルコキシルであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１２９】
Ｒ３−ＶＩが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ、またはｔｅｒｔ−ブトキシであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１３０】
Ｒ３−ＶＩがメトキシであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１３１】
Ｒ１−ＶＩがメチルであり、Ｒ２−ＶＩがＨであり、およびＲ３−ＶＩがメトキシであることを特徴とする請求項１２３記載の化合物。
【請求項１３２】
Ａ５が下記の式ＶＩＩ：
【化７７】
2008504840.tif 000235
で表され、
Ｒ１−ＶＩＩ、Ｒ２−ＶＩＩ、およびＲ３−ＶＩＩがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒであることを特徴とする請求項８５記載の化合物。
【請求項１３３】
Ｒ１−ＶＩＩがアルキルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１３４】
Ｒ１−ＶＩＩが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１３５】
Ｒ１−ＶＩＩがメチルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１３６】
Ｒ２−ＶＩＩがＨであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１３７】
Ｒ３−ＶＩＩがアルキルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１３８】
Ｒ３−ＶＩＩが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、またはヘプチルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１３９】
Ｒ３−ＶＩＩがイソブチルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１４０】
Ｒ１−ＶＩＩがメチルであり、Ｒ２−ＶＩＩがＨであり、およびＲ３−ＶＩＩがイソブチルであることを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１４１】
Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して、−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする請求項１３２記載の化合物。
【請求項１４２】
治療的有効量の請求項２７または８５記載のオリゴヌクレオチドを必要とする患者に投与する工程を含む、望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経疾患、およびヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患より成る群から選択される疾患の患者を治療する方法。
【請求項１４３】
前記疾患が望ましくない細胞増殖であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１４４】
前記疾患が、睾丸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、扁平上皮細胞癌腫、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頸癌、基底細胞癌腫、腺癌腫、肝細胞癌腫、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮内膜癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳腫瘍または上皮由来の腫瘍であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１４５】
前記疾患が関節リウマチまたは網膜血管新生であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１４６】
前記疾患がウイルス感染であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１４７】
前記疾患が、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、Ｈ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバーウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＪＣウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子、サルウイルス４０、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱ウイルス、ポリオウイルス、またはポックスウイルスによって媒介される疾患であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１４８】
前記疾患が、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染または真菌感染であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１４９】
前記疾患が、マラリア原虫（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を媒介とする疾患であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５０】
前記疾患が、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、または糖尿病であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５１】
前記疾患が、虚血、再灌流傷害、移植臓器または組織に対する反応、再狭窄または炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５２】
前記疾患が急性疼痛または慢性疼痛であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５３】
前記疾患が神経疾患であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５４】
前記疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、または神経変性トリヌクレオチド反復疾患であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５５】
前記疾患がヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患であることを特徴とする請求項１４２記載の方法。
【請求項１５６】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項２７または８５記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類細胞に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子遺伝子、成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１５７】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項２７または８５に記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類細胞に投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ラ���ノウイルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１５８】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項２７または８５に記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子又は成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１５９】
遺伝子サイレンシング法であって、請求項２７または８５記載のオリゴヌクレオチドの治療的有効量を哺乳類に投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウ���ルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
【請求項１６０】
前記哺乳類が霊長類、ウマ、イヌまたはネコであることを特徴とする請求項１５９記載の方法。
【請求項１６１】
前記哺乳類がヒトであることを特徴とする請求項１５９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本明細書は、共に参照により本開示に含まれる、２００４年６月３０日出願の米国仮特許出願第６０／５８４，０６１号；および２００４年９月３０日出願の米国仮特許出願第６０／６１４，５２８号の優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
オリゴヌクレオチド化合物は医療において重要な治療上の用途を有する。オリゴヌクレオチドは、特定の疾患の原因である遺伝子の発現を抑制できる。遺伝子サイレンシングは、翻訳を阻害することによってタンパク質の生成を妨げる。重要なことに、遺伝子サイレンシング剤は、疾患に関連するタンパク質の機能を阻害する従来の低分子有機化合物の、有望な代替物である。ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡは、遺伝子サイレンシングによってタンパク質の生成を妨げるオリゴヌクレオチドである。
【０００３】
ｓｉＲＮＡ
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は線虫Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ（非特許文献１；非特許文献２）の研究において最初に発見された、進化上保存された遺伝子サイレンシング機構である。その機構は適当な分子機械を発現している細胞へｄｓＲＮＡを導入することによって誘発され、分子機械は次いで対応する内因性ｍＲＮＡを分解する。その機構は、リボヌクレアーゼを相同ｍＲＮＡ標的へ導く短いＲＮＡへのｄｓＲＮＡの変換を含む（要約、非特許文献３）。この過程は、ウイルスに対する正常な防御、およびトランスポゾンの流動化に関係する。
【０００４】
二本鎖(double-stranded)リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）は天然に稀であり、および酵母またはウイルスといった一部の微生物においてのみ見出されている。近年の報告は、ｄｓＲＮＡが発現の調節の現象に、および細胞によるインターフェロンの合成の開始に関与していることを示す（非特許文献４；非特許文献５）。加えて、ｄｓＲＮＡは抗増殖特性を有すると報告されており、これは治療用途の想定も可能にする（非特許文献６）。たとえば、合成ｄｓＲＮＡはマウスにおいて腫瘍増殖を阻害すること（非特許文献７）、白血病マウスの治療において活性であること（非特許文献８）；およびマウス皮膚において化学的に誘導された腫瘍形成を阻害すること（非特許文献９）が示されている。
【０００５】
ｄｓＲＮＡを用いた処理は、無脊椎生物において遺伝子機能を分析するための重要な方法になっている。たとえば、Ｄｚｉｔｏｖｅｖａらは、麻酔したＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの腹部へｄｓＤＮＡを注射することによってＲＮＡｉを誘導できること、およびこの方法はまた標的中枢神経系で発現されている遺伝子を標的にできることを示した（非特許文献１０）。導入遺伝子および内因性遺伝子の両方を、それぞれのｄｓＤＮＡの腹部内注射によってＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ成虫において発現抑制に成功した。さらに、Ｅｌｂａｓｈｉｒらは、ｄｓＲＮＡプロセシングの方向が、センスまたはアンチセンス標的ＲＮＡが低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）−タンパク質複合体によって切断されうるかどうかを決定するという証拠を与えた（非特許文献１１）。
【０００６】
２つの近年の報告が、ＲＮＡｉは線虫Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓにおける遺伝子の機能を試験するための迅速な方法を提供することを明らかにし；およびＣ．ｅｌｅｇａｎｓ 第Ｉおよび第ＩＩＩ染色体上の遺伝子の大部分が現在ＲＮＡｉ表現型について試験されている（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。機能消失情報を得るための迅速な手法として用いられる場合、ＲＮＡｉは卵巣転写産物のランダムな組を分析するのに用いられ、およびＣ．ｅｌｅｇａｎｓ胚形成において必須の役割を有する８１個の遺伝子を同定している（非特許文献１５）。ＲＮＡｉはまた、Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ蛹の血球タンパク質を破壊するのに用いられている（非特許文献１６）。
【０００７】
無脊椎動物におけるＲＮＡｉのように、植物における転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）はＲＮＡ分解機構である。植物では、これは転写および転写後レベルの両方で起こりうる；しかし、無脊椎動物では転写後ＲＮＡｉだけが現在までに報告されている（非特許文献１７）。実際、共に局所の開始部位から生物内で広がる二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が関与し、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の蓄積に相関し、および、推定されるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡヘリカーゼおよびＰＡＺおよびＰｉｗｉドメインを含む機能未知のタンパク質を必要とする。
【０００８】
ＲＮＡｉとＰＴＧＳとの間で明らかであるいくつかの違いが非特許文献１８によって報告された。最初に、植物でのＰＴＧＳは、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓには存在せずおよびしたがってＲＮＡｉには必要でない少なくとも２つの遺伝子−ＳＧＳ３（コイルがコイルしたドメインを含む機能未知のタンパク質をコードする）およびＭＥＴ１（ＤＮＡ−メチルトランスフェラーゼをコードする）−を必要とする。次に、ＰＴＧＳ異常を示すＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ変異体のすべてが、ククモウイルスＣＭＶによる感染に著しく高感受性であり、ＰＴＧＳはウイルスに対する植物の耐性のための機構に関与することを示す。ＲＮＡｉ媒介発癌遺伝子サイレンシングはまた、植物えい瘤腫瘍形成に対する耐性を与えることが報告されている（非特許文献１９）。
【０００９】
ＲＮＡｉは、サイレンシングトリガーと相同であるメッセンジャーＲＮＡを破壊する配列特異的多成分ヌクレアーゼであるＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって媒介される。ＲＩＳＣは二本鎖ＲＮＡトリガーに由来する低分子ＲＮＡ（約２２ヌクレオチド）を含むことが知られているが、しかしこの活性のタンパク質成分は不明のままである。Ｈａｍｍｏｎｄら（非特許文献２０）は、ＲＮＡｉエフェクターヌクレアーゼの培養Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ細胞からの生化学的精製を報告し，および活性画分のリボ核タンパク質複合体のタンパク質ミクロシークエンシングは、この複合体の１つの成分が、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、および Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓにおける遺伝子サイレンシングに必須である、タンパク質のＡｒｇｏｎａｕｔｅファミリーのメンバーであることを示した。この観察は、多様な生物からのＲＮＡｉの遺伝子分析と、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａのｉｎ ｖｉｔｒｏ系から生じるＲＮＡｉの生化学モデルとの間の繋がりを示唆する。
【００１０】
Ｓｖｏｂｏｄａらは非特許文献２１において、ＲＮＡｉはマウス卵母細胞において不活性な母性ｍＲＮＡの機能を試験するのに適当なおよび頑健な手法を提供することを報告した。Ｍｏｓ（最初の名称はｃ−ｍｏｓ）および組織プラスミノーゲン活性化因子ｍＲＮＡは不活性な母性ｍＲＮＡであって卵母細胞成熟中に動員され、およびＭｏｓ ｍＲＮＡの翻訳の結果としてＭＡＰキナーゼの活性化が生じる。マウス卵母細胞においてＭｏｓまたはＴＰＡ ｍＲＮＡへ向けられたｄｓＲＮＡは、時間および濃度の両方に依存的に標的ｍＲＮＡを特異的に減少させ、およびＭＡＰキナーゼ活性の出現を阻害した。非特許文献２２も参照。
【００１１】
干渉ＲＮＡ技術における進歩にかかわらず、薬理特性が改善されたｓｉＲＮＡ複合体が必要とされている。特に、オリゴヌクレオチド配列は血清溶解度が不良であり、細胞分布および取り込みが不良であり、および腎臓から速やかに排泄される。天然のホスホジエステル（Ｐ＝Ｏ）骨格を有するオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ媒介分解に感受性であることが知られている。非特許文献２３を参照。オリゴヌクレオチドの安定性は、Ｐ＝Ｏ結合をｉｎ ｖｉｖｏでヌクレアーゼによる分解により感受性が低いＰ＝Ｓ結合へ変換することによって高められている。代替的に、リン酸基を、天然のリン酸よりも酵素分解を受けにくいホスホロアミデートへ変換できる。非特許文献２４を参照。オリゴヌクレオチドの糖基への修飾は、酵素分解に対する安定性を与えることができる。たとえば、リボ核酸を含むオリゴヌクレオチドは、糖の２’−ＯＨ基がメトキシエトキシ基へ変換されている場合、核酸分解をより受けにくい。非特許文献２５およびそれに引用された文献を参照。
【００１２】
ｓｉＲＮＡ化合物はさまざまな診断および治療目的に有望な物質である。ｓｉＲＮＡ化合物は、遺伝子の機能を同定するために用いることができる。加えて、ｓｉＲＮＡ化合物は、疾患の原因となる遺伝子を発現抑制することによって作用する新しい型の薬剤として非常に大きな潜在性を提供する。中枢神経系疾患、炎症性疾患、代謝障害、癌、感染症、および眼疾患を含む多数の疾患の治療のための干渉ＲＮＡ治療剤を開発するために現在研究が行われている。
【００１３】
一本鎖オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増加させることに関して、複合体を介した膜透過性およびオリゴヌクレオチドの細胞デリバリーを高めることを含め、いくらかの進歩が成されている。特許文献１でＭ．Ｍａｎｏｈａｒａｎは、血清、血管、または細胞のタンパク質を結合するリガンドがオリゴヌクレオチド上の１つ以上の部位への選択的結合部分を介して結合しうる組成物を記載する。これらの部位は、２’位、３’位、５’位、ヌクレオチド間結合、および任意のヌクレオチド残基の核酸塩基原子のうち１つ以上を含むがそれらに限定されない。
【００１４】
アンチセンスＲＮＡ
アンチセンス法は、ｍＲＮＡまたはＤＮＡへの、これらの細胞内核酸のたとえばタンパク質合成のような正常な必須機能が破壊されるような、相対的に低分子のオリゴヌクレオチドの相補的ハイブリダイゼーションである。ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡへのオリゴヌクレオチドの、ワトソン・クリック塩基対を介した配列特異的水素結合である。そのような塩基対は互いに相補的であると言われる。Ｃｏｈｅｎ（非特許文献２６）によって考察された、核酸機能の破壊を与える天然に生じる現象は、二種類のものであると考えられている。１つ目の、ハイブリダイゼーション停止は、オリゴヌクレオチド阻害剤が標的核酸に結合しおよびしたがって、単純な立体障害によって、必須のタンパク質（ほとんどの場合リボソーム）の核酸への結合を妨げる終止現象を表す。メチルホスホナートオリゴヌクレオチド（非特許文献２７）、およびα−アノマーオリゴヌクレオチドは、最も良く研究された二種類のアンチセンス剤であり、ハイブリダイゼーション停止によって核酸機能を破壊すると考えられている。
【００１５】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが核酸機能を破壊するもう１つの方法は、標的ｍＲＮＡへのハイブリダイゼーション後の、細胞内ＲＮアーゼＨによる標的ＲＮＡの酵素的切断による。２’−デオキシリボフラノシルオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドアナログは標的ＲＮＡとハイブリダイズし、およびこの二重鎖(duplex)はＲＮＡ鎖を切断するためのＲＮアーゼＨ酵素を活性化して、従ってＲＮＡの正常な機能を破壊する。ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドは、この型のアンチセンス終止現象によって作動するアンチセンス剤の最も著名な例である。
【００１６】
診断、研究用途および潜在的な治療目的のためのアンチセンス剤としてのオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログの用途に、相当な研究が向けられている。ｉｎ ｖｉｖｏで一部しか克服されていない主要な問題の１つは、オリゴヌクレオチドの迅速な分解および排出によって重度に妨げられている、効率的な細胞取り込みである。細胞取り込みの一般に受け入れられた過程は、温度ならびに血清および血管外液中のオリゴヌクレオチドの濃度に依存する、受容体媒介エンドサイトーシスによる。
【００１７】
核酸およびオリゴヌクレオチドの膜貫通デリバリーの改善を狙った努力は、タンパク質キャリヤー、抗体キャリヤー、リポソームデリバリー系、エレクトロポレーション、直接注入、細胞融合、ウイルスベクター、およびリン酸カルシウム媒介形質転換を利用してきた。しかし、これらの方法の多くは、膜貫通輸送が可能である細胞の種類によって、およびそのような輸送を達成するのに必要な条件によって、制限される。オリゴヌクレオチドの膜貫通デリバリーのために特に魅力的な１つの選択肢は、オリゴヌクレオチドの生理化学的特性の修飾である。
【００１８】
マイクロＲＮＡ
マイクロＲＮＡは、生物において天然に産生される低分子ＲＮＡの大きな群であり、少なくともその一部は、標的遺伝子の発現を調節する。マイクロＲＮＡはダイサーによって約７０ヌクレオチドの一本鎖ヘアピン前駆体転写物から形成される。多くの場合、マイクロＲＮＡは、以前は知られた機能を持たなかった、ＤＮＡ配列の一部から転写される。マイクロＲＮＡはタンパク質へ翻訳されず、しかしそれどころか特定のメッセンジャーＲＮＡと結合して翻訳を遮断する。マイクロＲＮＡは標的と不正確に塩基対形成して翻訳を阻害すると考えられている。マイクロＲＮＡファミリーの基礎メンバーはｌｅｔ−７およびｌｉｎ−４である。ｌｅｔ−７遺伝子は、虫発生中に内因性タンパク質をコードする遺伝子の発現を調節する、低分子の高度に保存されたＲＮＡ種をコードする。活性ＲＮＡ種は最初７０ｎｔまでの前駆体として転写され、それが転写後プロセシングされて成熟２１ｎｔ形になる。ｌｅｔ−７およびｌｉｎ−４の両方がヘアピンＲＮＡ前駆体として転写され、ダイサー酵素によって成熟形へプロセシングされる。
【００１９】
改良された血清溶解度、細胞分布および取り込み、およびｉｎ ｖｉｖｏ安定性を有するオリゴヌクレオチド複合体が必要とされている。本発明の非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド化合物は、この必要性を満たしおよび他の関連する利益を提供する。
【特許文献１】米国特許第６，６５６，７３０号明細書
【非特許文献１】Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ７５：８４３ （１９９３）
【非特許文献２】Ｒｅｉｎｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０３：９０１ （２０００）
【非特許文献３】Ｒｕｖｋｕｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９４：７９７ （２００１）
【非特許文献４】Ｄｅｃｌｅｒｑ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７８：２９１ （１９８１）
【非特許文献５】Ｗｕ− Ｌｉ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：５４７０ （１９９０）
【非特許文献６】Ａｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ ８８：９０６ （１９９１）
【非特許文献７】Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６２：３５７−３６１ （１９６９）
【非特許文献８】Ｚｅｌｅｚｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１３０：１２６−１２８ （１９６９）
【非特許文献９】Ｇｅｌｂｏｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １６７：２０５−２０７（１９７０）
【非特許文献１０】Ｄｚｉｔｏｖｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ６（６）：６６５−６７０ （２００１）
【非特許文献１１】Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５（２）： １８８−２００ （２００１）
【非特許文献１２】Ｂａｒｓｔｅａｄ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（ｌ）：６３−６６ （２００１）
【非特許文献１３】Ｔａｖｅｍａｒａｋｉｓ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２４（２）：１８０−１８３ （２０００）
【非特許文献１４】Ｚａｍｏｒｅ，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．８（９）：７４６−７５０ （２００１）
【非特許文献１５】Ｐｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０（２４）：１６１９−１６２２ （２０００）
【非特許文献１６】Ｎｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６８（２０）：５２９５−５２９９ （２００１）
【非特許文献１７】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０９（６８１８）：２９５−２９６ （２００１）
【非特許文献１８】Ｖａｕｃｈｅｒｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１１４（Ｐｔ １７）：３０８３−３０９１ （２００１）
【非特許文献１９】Ｅｓｃｏｂａｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９８（２３）：１３４３７−１３４４２ （２００１）
【非特許文献２０】Ｈａｍｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９３（５５３２）： １１４６−１１５０ （Ａｕｇｕｓｔ ２００１）
【非特許文献２１】Ｓｖｏｂｏｄａ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２７（１９）：４１４７−４１５６ （２０００）
【非特許文献２２】Ｓｖｏｂｏｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８７（５）： １０９９− １１０４ （２００１）
【非特許文献２３】Ｌ．Ｌ．Ｃｕｍｍｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５，２３，２０１９
【非特許文献２４】Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．； Ｐｅｙｍａｎ，Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９０，９０，５４４
【非特許文献２５】Ｍ．Ｍａｎｏｈａｒａｎ ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．２００２，３，１２５７
【非特許文献２６】Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ： Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８９，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．
【非特許文献２７】Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７） Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，２：１１７−１２８
【非特許文献２８】Ｖ．Ａｍｂｒｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００３，１３，８０７
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明の一態様は、３’位にてホスホナミダイト基で置換されたリボヌクレオシドに関する。一部の実施形態では、ホスホナミダイトはアルキルホスホナミダイトである。本発明の別の一態様は、少なくとも１つの非リン酸結合を含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。代表的な非リン酸結合は、ホスホナート、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、およびカルバマート結合を含む。一部の実施形態では、非リン酸結合はホスホナート結合である。一部の実施形態では、非リン酸結合は一方の鎖だけに存在する。一部の実施形態では、非リン酸結合は両方の鎖に存在する。一部の実施形態では、リガンドは二本鎖オリゴヌクレオチドを構成するオリゴヌクレオチド鎖の一方に結合している。一部の実施形態では、リガンドは二本鎖オリゴヌクレオチドを構成するオリゴヌクレオチド鎖の両方に結合している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖は少なくとも１つの修飾糖部分を含む。本発明の別の一態様は、少なくとも１つの非リン酸結合を含む一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。代表的な非リン酸結合は、ホスホナート、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、およびカルバマート結合を含む。一部の実施形態では、非リン酸結合はホスホナート結合である。一部の実施形態では、リガンドはオリゴヌクレオチド鎖に結合している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾糖部分を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明の一態様は、３’位にてホスホナミダイト基で置換されたリボヌクレオシドに関する。これらの化合物は、遺伝子治療に用いられるオリゴヌクレオチドを調製するのに用いることができる。３’−ホスホナミダイト置換ヌクレオシドから調製されたオリゴヌクレオシドは、ｉｎ ｖｉｖｏで分解する傾向がより小さいホスホナート結合を有する。一部の場合には、ホスホナミダイトはアルキルホスホナミダイトである。加えて、リボヌクレオシドの２’位は、穏和な条件下で容易に除去されうる保護基で保護されうる。穏和な条件下で除去されうる保護基の一例は、シリル保護基である。好ましい一実施形態では、保護基はｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルである。
【００２２】
本発明の別の一態様は、少なくとも１つの非リン酸結合を含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。非リン酸部分は、オリゴヌクレオチドのｉｎ ｖｉｖｏで分解する傾向をより小さくする。多数の非リン酸官能基が本分野で公知であり、および本発明に従う。非リン酸結合は、リン原子を含む官能基、またはリン原子を含まない官能基でありうる。本発明に従う代表的な非リン酸結合は、ホスホナート、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、およびカルバマート結合である。一部の実施形態では、非リン酸結合はホスホナート結合である。非リン酸結合は一方の鎖だけにまたは両方の鎖に存在しうる。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド毎に約１〜５個の非リン酸結合が存在する。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド毎に約５〜１０個の非リン酸結合が存在する。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド毎に約１０〜２０個の非リン酸結合が存在する。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド中の鎖毎に約１〜２個の非リン酸結合が存在する。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド中の鎖毎に約３〜５個の非リン酸結合が存在する。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド中の鎖毎に約５〜１０個の非リン酸結合が存在する。一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチド中の鎖毎に約１０〜１５個の非リン酸結合が存在する。非リン酸結合は、オリゴヌクレオチド鎖の末端付近に、またはオリゴヌクレオチド鎖の内部に位置しうる。一部の場合には、非リン酸結合はオリゴヌクレオチド鎖の３’末端の一番目と二番目のヌクレオシドの間に位置する。一部の場合には、非リン酸結合はオリゴヌクレオチド鎖の５’末端の一番目と二番目のヌクレオシドの間に位置する。一部の場合には、非リン酸結合がオリゴヌクレオチド鎖の３’末端の一番目と二番目のヌクレオシドの間に位置し、および非リン酸結合がオリゴヌクレオチド鎖の５’末端の一番目と二番目のヌクレオシドの間に位置する。一部の場合には、２個の隣接する非リン酸結合が存在する。
【００２３】
他の非リン酸結合の例は、たとえば、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび３’−アルキレンホスホナート、５’−アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含む他のアルキルホスホナート、ホスフィナート、３’−アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダート、チオノホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、通常の３’−５’結合を有するセレノリン酸およびボラノリン酸、これらの２’−５’結合アナログ、および１つ以上のヌクレオチド間結合が３’−３’、５’−５’、または２’−２’結合であることを特徴とする逆の極性を有するものを含む。一部の場合には、オリゴヌクレオチドは最も３’側のヌクレオチド間結合で３’−３’結合を含む逆の極性、すなわち塩基脱落（核酸塩基が失われているかまたはその代わりに水酸基を有する）しうる１個の逆方向ヌクレオシド残基を有する。さまざまな塩、塩混合物および遊離酸型もまた含まれる。
【００２４】
リン原子を含む非リン酸結合の代表的な例は、ホスホロアミダート（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＪ）−Ｏ−）、ホスホナート（−Ｏ−Ｐ（Ｊ）（Ｏ）−Ｏ−）、チオノホスホロアミダート（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＮＪ）−Ｓ−）、チオノアルキルホスホナート（−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（Ｊ）−Ｏ−）、チオノアルキルホスホトリエステル（−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＪ）−Ｓ−）、ホスホロアミダート（−Ｎ（Ｊ）−Ｐ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−）、およびボラノリン酸（−Ｒ−Ｐ（Ｏ）（Ｏ）−Ｊ−）を含み、ここでは、通常は水素またはアルキル基または互いに結合の種類が異なるより複雑な基（たとえば、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルケニル、など）である置換基を示す。上記のリンを含む結合の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許第３，６８７，８０８号；第４，４６９，８６３号；第４，４７６，３０１号；第５，０２３，２４３号；第５，１７７，１９６号；第５，１８８，８９７号；第５，２６４，４２３号；第５，２７６，０１９号；第５，２７８，３０２号；第５，２８６，７１７号；第５，３２１，１３１号；第５，３９９，６７６号；第５，４０５，９３９号；第５，４５３，４９６号；第５，４５５，２３３号；第５，４６６，６７７号；第５，４７６，９２５号；第５，５１９，１２６号；第５，５３６，８２１号；第５，５４１，３０６号；第５，５５０，１１１号；第５，５６３，２５３号；第５，５７１，７９９号；第５，５８７，３６１号；第５，１９４，５９９号；第５，５６５，５５５号；第５，５２７，８９９号；第５，７２１，２１８号；第５，６７２，６９７号；および第５，６２５，０５０号明細書を含むがそれらに限定されない。
【００２５】
リン原子を含まない非リン酸結合は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子およびアルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子またはヘテロ環ヌクレオシド間結合を含む。これらは、モルホリノ結合（一部がヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；リボアセチル骨格；アルケンを含む骨格；スルファマート骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホナートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格を持つもの；およびその他Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２成分を持つものを含む。追加の詳細については、参照により本開示に含まれるＹ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉの Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂａｒｔｏｎ，Ｂ．； Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．； Ｍｅｔｈ−Ｃｏｔｈ，Ｏ．； ａｎｄ Ｋｏｏｌ，Ｅ．Ｔ．Ｅｄｓ．； Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９，ｖｏｌ ７，２８５を参照。
【００２６】
代表的なリンを含まない結合は、チオジエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−）、チオノカルバマート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（ＮＪ）−Ｓ−）、シロキサン（−Ｏ−Ｓｉ（Ｊ）２−Ｏ−）、カルバマート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−および−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）、スルファマート（−Ｏ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｎ−および−Ｎ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｎ−、モルホリノスルファミド（−Ｏ−Ｓ（Ｏ）（Ｎ（モルホリノ）−）、スルホンアミド（−Ｏ−ＳＯ２−ＮＨ−）、スルフィド（−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２、スルホナート（−Ｏ−ＳＯ２−ＣＨ２−）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−）、チオホルムアセタール（−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−）、ホルムアセタール（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−）、チオケタール（−Ｓ−Ｃ（Ｊ）２−Ｏ−）、ケタール（−Ｏ−Ｃ（Ｊ）２−Ｏ−）、アミン（−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−）、ヒドロキシルアミン（−ＣＨ２−Ｎ（Ｊ）−Ｏ−）、ヒドロキシルイミン（−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−）、およびヒドラジニル（−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｎ（Ｈ）−）を含み；ここでＪは、通常は水素またはアルキル基または互いに結合の種類が異なるより複雑な基である置換基を示す。上記のオリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許第５，０３４，５０６号；第５，１６６，３１５号；第５，１８５，４４４号；第５，２１４，１３４号；第５，２１６，１４１号；第５，２３５，０３３号；第５，２６４，５６２号；第５，２６４，５６４号；第５，４０５，９３８号；第５，４３４，２５７号；第５，４６６，６７７号；第５，４７０，９６７号；第５，４８９，６７７号；第５，５４１，３０７号；第５，５６１，２２５号；第５，５９６，０８６号；第５，６０２，２４０号；第５，６１０，２８９号；第５，６０２，２４０号；第５，６０８，０４６号；第５，６１０，２８９号；第５，６１８，７０４号；第５，６２３，０７０号；第５，６６３，３１２号；第５，６３３，３６０号；第５，６７７，４３７号；第５，７９２，６０８号；第５，６４６，２６９号；および第５，６７７，４３９号明細書を含むがそれらに限定されない。
【００２７】
本発明の特に好ましい実施形態は、ホスホロチオアート骨格およびホスホナート骨格を持つオリゴヌクレオチドである。加えて、ホスホロチオアート骨格およびヘテロ原子骨格を持つオリゴヌクレオチドが好ましく、および特に米国特許第５，４８９，６７７号明細書に記載の通りの−ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−[メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られる］、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−および−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−、および米国特許第５，６０２，２４０号明細書に記載のアミド骨格が好ましい。米国特許第５，０３４，５０６号明細書に記載の通りのモルホリノ骨格構造を有するオリゴヌクレオチドもまた好ましい。
【００２８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドは非リン酸結合を含むリボヌクレオチドであり、および非リン酸結合はホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ボラノリン酸、ホスホロフルオリダート、ホスホロセレノアート、ホスホロアミダート、アミノアルキルホスホナート、アルキルホスホナート、ホスホロアミダート、ホスホラミドイミダート、ホスホロトリエステル、ホスフィナート、アミド、グアニジン、尿素、カルバマート、チオカルバマート、アミン、ヒドロキシルアミン、シロキサン、スルフィド、スルホン、スルホナート、スルホンアミド、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、エーテル、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、アルケニル、アルキニル、アクリリル、ジメチルヒドラジニル、ヒドロキシヒドラジニル、ケタール、チオケタール、またはホルムアセタールである。
【００２９】
本発明の別の一態様は、少なくとも１つの非リン酸結合を含む一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。代表的な非リン酸結合は、ホスホナート、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、およびカルバマート結合を含む。考慮される非リン酸結合のより詳細な一覧は上に記載される。一部の実施形態では、非リン酸結合はホスホナート結合である。一部の実施形態では、リガンドがオリゴヌクレオチド鎖に結合している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドはリボヌクレオチドである。
【００３０】
好ましい一実施形態では、一本鎖オリゴヌクレオチドは非リン酸結合を含むリボヌクレオチドであり、および非リン酸結合はホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ボラノリン酸、ホスホロフルオリダート、ホスホロセレノアート、ホスホロアミダート、アミノアルキルホスホナート、アルキルホスホナート、ホスホロアミダート、ホスホラミドイミダート、ホスホロトリエステル、ホスフィナート、アミド、グアニジン、尿素、カルバマート、チオカルバマート、アミン、ヒドロキシルアミン、シロキサン、スルフィド、スルホン、スルホナート、スルホンアミド、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、エーテル、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、アルケニル、アルキニル、アクリリル、ジメチルヒドラジニル、ヒドロキシヒドラジニル、ケタール、チオケタール、またはホルムアセタールである。
【００３１】
１つ以上のアルキルホスホナート、アルキルチオホスホナート、およびアルキルホスホナート／アルキルチオホスホナート骨格修飾を含む本発明の一本鎖および二本鎖オリゴヌクレオチドの両方に従うオリゴヌクレオチドの代表的な例を下記の表に示す：
【表１−１】
2008504840.tif 000002
【表１−２】
2008504840.tif 000003
【表２−１】
2008504840.tif 000004
【表２−２】
2008504840.tif 000005
【表３−１】
2008504840.tif 000006
【表３−２】
2008504840.tif 000007
【表４−１】
2008504840.tif 000008
【表４−２】
2008504840.tif 000009
【表５−１】
2008504840.tif 000010
【表５−２】
2008504840.tif 000011
【表６−１】
2008504840.tif 000012
【表６−２】
2008504840.tif 000013
【表７−１】
2008504840.tif 000014
【表７−２】
2008504840.tif 000015
【表８−１】
2008504840.tif 000016
【表８−２】
2008504840.tif 000017
【表９−１】
2008504840.tif 000018
【表９−２】
2008504840.tif 000019
【表１０−１】
2008504840.tif 000020
【表１０−２】
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【表１１−１】
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【表１１−２】
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【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１３−１】
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【表１３−２】
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【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１５−１】
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【表１５−２】
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【表１６−１】
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【表１６−２】
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一部の場合には、リガンドがオリゴヌクレオチドと結合している。リガンドはオリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善する。二本鎖オリゴヌクレオチドについては、リガンドは一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチドを構成するオリゴヌクレオチドのうち一方に結合する。二本鎖オリゴヌクレオチドについて、リガンドは一部の場合には、二本鎖オリゴヌクレオチドを構成するオリゴヌクレオチドの両方に結合する。リガンドは芳香族基、アラルキル基、またはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルである。一部の実施形態では、リガンドはアラルキル基である。加えて、オリゴヌクレオチドは一部の場合には修飾糖部分を含みうる。糖は２’−水酸基をフッ素原子または−Ｏ−アリル基で置換することによって修飾されうる。この修飾は、オリゴヌクレオチドの核酸分解する傾向を小さくする。
【００３２】
たとえば、本発明は、ｓｉＲＮＡ剤に改良された薬物動態特性を与えるアラルキルリガンド複合化ｓｉＲＮＡ化合物を提供する。そのような化合物は、アラルキルリガンドをｓｉＲＮＡへ共有結合することによって調製される。アラルキルリガンド、たとえばナプロキセンは、１つ以上の血清、血管または細胞タンパク質と可逆的に結合するため、ｓｉＲＮＡの薬理特性を改善する。この可逆的結合は、尿中排泄を減少させ、血清半減期を増大させ、およびそのように複合化したオリゴマー化合物の分布を大幅に増加させると予想される。加えて、オリゴヌクレオチドの骨格は、ｓｉＲＮＡ化合物の安定性を改善するために修飾される。
【００３３】
リガンドをｓｉＲＮＡと複合化することはその細胞吸収を増大させうる。一部の場合には、細胞膜の直接透過を円滑にするため、疎水性リガンドがｓｉＲＮＡと複合化される。代替的に、ｓｉＲＮＡと複合化したリガンドは、受容体媒介性エンドサイトーシスの基質である。これらの手法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞透過を円滑にするために用いられている。たとえば、コレステロールはさまざまなアンチセンスオリゴヌクレオチドと複合化され、非複合化アナログと比較して相当により活性である化合物を結果として生じている。Ｍ．Ｍａｎｏｈａｒａｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２００２，１２，１０３を参照。オリゴヌクレオチドと複合化されている他の親油性化合物は、１−ピレン酪酸、１，３−ビス−Ｏ−（ヘキサデシル）グリセロール、およびメントールを含む。受容体媒介性エンドサイトーシスのためのリガンドの一例は葉酸である。葉酸は葉酸受容体媒介性エンドサイトーシスによって細胞へ進入する。葉酸を持つｓｉＲＮＡ化合物は葉酸受容体媒介性エンドサイトーシスを介して細胞内へ効率的に輸送される。Ｌｉおよび共同研究者らは、オリゴヌクレオチドの３’末端への葉酸の付加が、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みに８倍の増加を結果として生じたことを報告する。Ｌｉ，Ｓ．； Ｄｅｓｈｍｕｋｈ，Ｈ．Ｍ．； Ｈｕａｎｇ，Ｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９９８，１５，１５４０．オリゴヌクレオチドと複合化されている他のリガンドは、ポリエチレングリコール、糖質クラスター、架橋剤、ポルフィリン複合体、および運搬ペプチドを含む。
【００３４】
一部の場合には、陽イオン性リガンドのオリゴヌクレオチドとの複合化はしばしば、ヌクレアーゼに対する耐性の改善を結果として生じる。代表的な陽イオン性リガンドの例はプロピルアンモニウムおよびジメチルプロピルアンモニウムである。興味深いことに、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、陽イオン性リガンドがオリゴヌクレオチド全体に分散された場合、ｍＲＮＡに対する高い結合親和性を維持すると報告された。Ｍ．Ｍａｎｏｈａｒａｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２００２，１２，１０３およびその中の参考文献を参照。
【００３５】
オリゴヌクレオチドの治療効果は、それが細胞核酸と相互作用しおよびその機能を効果的に打ち消す際に実現される。好ましい標的は、疾患状態の原因であるタンパク質をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡである。ｍＲＮＡ機能とのそのような干渉の全体的効果は、タンパク質の発現の調節であり、ここで「調節」とはタンパク質の発現における増加（刺激）または減少（阻害）のどちらかを意味する。本発明との関連で、阻害は遺伝子発現の調節の好ましい形である。にもかかわらず、究極の目標はそのようなタンパク質の量を調節することである。投与後に標的核酸に到達するためには、オリゴヌクレオチドは、血清中での迅速な分解、血清中での短い半減期、および腎臓による速やかなろ過とその後の尿中排泄といった固有の要因を克服できるべきである。これらの固有の要因を克服するオリゴヌクレオチドは、血清半減期、分布、細胞取り込みが増加しており、およびしたがって改善された効力を有する。
【００３６】
これらの薬物動態学的パラメーターの強化は、血漿タンパク質と結合する選ばれた薬物分子について示されている（Ｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，３１：３２７）。ほとんどのものよりもよく研究されている二種類のタンパク質が、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）およびα−ｌ−酸性糖タンパク質である。ＨＡＳは、典型的には１０４から１０６Ｍ−１の範囲の結合定数を有するさまざまな内因性および外因性リガンドと結合する。α−ｌ−酸性糖タンパク質とのリガンドについての結合定数は、ＨＡＳについてのものと同様である。
【００３７】
本発明の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされるタンパク質は血清タンパク質である。複合化したオリゴマー化合物によって標的にされる血清タンパク質は免疫グロブリン（抗体）であることが好ましい。好ましい免疫グロブリンは、免疫グロブリンＧおよび免疫グロブリンＭである。免疫グロブリンは、脊椎動物の血清および組織中に現れることが知られている。
【００３８】
本発明の別の一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされる血清タンパク質はリポタンパク質である。リポタンパク質は、一般的に２０，０００を上回る分子量を持ち脂質を有する血中タンパク質であり、および特異的細胞表面受容体によって見分けられる。血清中のリポタンパク質との結合は、最初に半減期および分布といった薬物動態学的パラメーターを増加させる。次の考慮すべき事項は、リポタンパク質が受容体媒介エンドサイトーシスを介して細胞取り込みを増大させる能力である。
【００３９】
さらに別の一実施形態では、オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質はα−２−マクログロブリンである。さらに別の一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされる血清タンパク質はα−１−糖タンパク質である。
【００４０】
少なくとも治療目的では、オリゴヌクレオチドは、分布および細胞取り込みを可能にするために、血清中でのある程度の安定性を有すべきである。血清中のアンチセンス剤の治療レベルの長期維持は、おそらく分布および細胞取り込みに顕著な効果を有し、および特異的細胞受容体を標的とする複合体群とは異なり、血清安定性の増大はおそらくすべての細胞に作用する。
【００４１】
本発明との関連で、ｓｉＲＮＡは二本鎖オリゴヌクレオチドを含み、ただし「オリゴヌクレオチド」の語はリボ核酸またはデオキシリボ核酸のオリゴマーまたはポリマーをいう。この語は、天然に存在する核酸塩基、糖および糖間の共有（骨格）結合から成るオリゴヌクレオチド、および、同様に機能する天然に存在しない部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、たとえば、細胞取り込みの増大、標的への結合の増大、およびヌクレアーゼ存在下での安定性の増大といった望ましい特性のために、しばしば天然形よりも好ましい。本発明のオリゴヌクレオチドは、好ましくは約５ないし約５０ヌクレオシドを含む。そのようなオリゴヌクレオチドは、約８ないし約３０ヌクレオシドを含むことがより好ましく、１５から２５ヌクレオシドが特に好ましい。
【００４２】
オリゴヌクレオチドとは、ヌクレオチドまたはヌクレオシドとして総称的に知られる反復単位のポリマーである。非修飾（天然に存在する）ヌクレオチドは三つの成分を有する：（１）含窒素塩基、その窒素原子のうちの１つが（２）環状５炭糖と結合し、および糖の５位炭素とエステル化された（３）リン酸。オリゴヌクレオチド鎖へ組み込まれる場合、第一のヌクレオチドのリン酸もまた、第二の、隣接するヌクレオチドの糖の３位炭素とエステル化される。非修飾オリゴヌクレオチドの「骨格」は、（２）および（３）、すなわち、第一のヌクレオチドの糖のＣ５（５’）位と第二の隣接するヌクレオチドのＣ３（３’）位との間のホスホジエステル結合によって結合した糖から成る。「ヌクレオシド」とは、（１）核酸塩基および（２）糖の、リン酸部分の非存在下での組み合わせである（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ，ＤＮＡ 複製，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９８０，ｐａｇｅｓ ４−７）。オリゴヌクレオチドの骨格は、一連の塩基を特定の順序に配置する；この一連の塩基の表記は、従来５’から３’の順に表記されるが、ヌクレオチド配列として知られる。
【００４３】
オリゴヌクレオチドは、特定の核酸と特異的ハイブリダイゼーションを行うのに十分な同一性および数のヌクレオシドまたはヌクレオチド配列を含みうる。遺伝子のセンス鎖の一部と特異的にハイブリダイゼーションするそのようなオリゴヌクレオチドは、一般的に「アンチセンス」と表される。本発明との関連で、「ハイブリダイゼーション」は、相補的ヌクレオシドまたはヌクレオチド間の水素結合を意味し、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ、Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎまたは逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合でありうる。たとえば、アデニンおよびチミンは、水素結合の形成を介して対合する相補的核酸塩基である。「相補的」とはここでは、２つのヌクレオチド間の正確な対合の能力をいう。たとえば、オリゴヌクレオチドの一定位置のヌクレオチドが、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子の同一位置のヌクレオチドと水素結合できるならば、そのオリゴヌクレオチドおよびそのＤＮＡまたはＲＮＡはその位置で互いに相補的であると考えられる。各分子の対応する位置の十分な数が、互いに水素結合できるヌクレオチドによって占められている場合、オリゴヌクレオチドおよびＤＮＡまたはＲＮＡは互いに相補的である。このように、「特異的にハイブリダイズ可能な」および「相補的」とは、オリゴヌクレオチドとＤＮＡまたはＲＮＡ標的との間に安定なおよび結合が起こるような、十分な程度の相補性または正確な対合を示すのに用いられる語である。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズ可能となるために標的ＤＮＡ配列と１００％相補的である必要は無いことが本分野で理解されている。標的ＤＮＡまたはＲＮＡ分子とのオリゴヌクレオチドの結合が標的ＤＮＡまたはＲＮＡの正常な機能に干渉して機能の減少または消失を引き起こし、および特異的結合が望まれる条件下、すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイまたは治療処置の場合には生理条件下、またはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの場合にはそのアッセイが実施される条件下で、非標的配列とのオリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性がある場合、オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリダイズ可能である。
【００４４】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、リガンドをオリゴヌクレオチドへ、たとえば、オリゴヌクレオチド剤に組み込まれた化学的に修飾されたモノマーのようなモノマーを介して結合させることによって調製されうる。好ましい一実施形態では、そのカップリングは下記の通りテザーまたはリンカー（または両方）により、およびその複合体は下記によって表される式を有する：
リガンド−[リンカー］任意−[テザー］任意−オリゴヌクレオチド剤
ほとんどの場合で、実施形態はいくつかのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド剤に関して記載される一方、本発明はまた下記の構造を有するモノマーサブユニットを含む：
リガンド−[リンカー］任意−[テザー］任意−モノマー
モノマーを作製およびオリゴヌクレオチド剤へ組み込む方法、およびそれらの物質を使用する方法が本発明に含まれる。好ましい実施形態では、ｔｈｅ糖、たとえば、オリゴヌクレオチド剤のヌクレオチド（たとえば、リボヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、または修飾ヌクレオチド）サブユニットのうち１つ以上のリボース糖は、別の部分、たとえば、非糖質キャリヤーと置換されうる。一部の場合には、非糖質は環状である。サブユニットの糖がそのように置換されたヌクレオチドサブユニットを、ここでは糖置換修飾サブユニット（ＳＲＭＳ）という。これはしばしばテザーと呼ばれる。環状キャリヤーは炭素環式環系、すなわち、すべての環原子が炭素原子でよく、またはヘテロ環系、すなわち、１つ以上の環原子がヘテロ原子、たとえば、窒素、酸素、または硫黄でよい。環状キャリヤーは単環系でよく、または２つ以上の環、たとえば縮合環を含みうる。環状キャリヤーは完全に飽和した環系でよく、または１つ以上の二重結合を含みうる。
【００４５】
本発明のオリゴヌクレオチド剤は、核酸標的化（ＮＡＴ）オリゴヌクレオチド剤およびタンパク質標的化（ＰＴ）オリゴヌクレオチド剤を含む。ＮＡＴおよびＰＴオリゴヌクレオチド剤は、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはＤＮＡおよびＲＮＡの組み合わせ（キメラ）修飾の一本鎖オリゴマーまたはポリマーをいう。この語は、天然に存在する核酸塩基、糖、およびヌクレオシド間（骨格）共有結合から成るオリゴヌクレオチド、および、同様に機能する天然に存在しない部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、たとえば、細胞取り込みの増大、核酸標的への親和性の増大、および／またはヌクレアーゼ存在下での安定性の増大といった望ましい特性のために、しばしば天然形よりも好ましい。特異的ＲＮＡまたはＤＮＡ標的に結合するように設計されたＮＡＴは、実質的な相補性を有し、たとえば、標的核酸の少なくとも１０、２０、または３０またはより多数の塩基と少なくとも７０、８０、９０、または１００％相補的であり、およびアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、および、発現を調節できる他の非二重鎖構造を含む。他のＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、ＤＮＡザイム、およびリボザイムを含む。これらのＮＡＴは、標的に対しＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ相補性によって結合するのでもそうでなくてもよい。ＰＴオリゴヌクレオチド剤はタンパク質標的と、好ましくは三次元相互作用によって結合し、およびタンパク質活性を調節する。それらはおとりＲＮＡ、アプタマー、などを含む。
【００４６】
本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド化合物は、好ましくは約８ないし約５０核酸塩基（すなわち約８ないし約５０個の結合したヌクレオシド）を含む。ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は好ましくは長さ約１５ヌクレオチド、またはより好ましくは長さ約３０ヌクレオチドである。ＰＴオリゴヌクレオチド剤は好ましくは長さ約１８ヌクレオチド、またはより好ましくは長さ約２３ヌクレオチドである。特に好ましい化合物は、ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド、さらにより好ましくは約１２ないし約３０核酸塩基を含むものである。
【００４７】
理論に限定されることを望まない一方、オリゴヌクレオチド剤は切断依存性または切断非依存性機構を含む１つ以上のいくつかの機構によって作用しうる。切断を基礎とする機構は、ＲＮアーゼＨ依存性である可能性がありおよび／またはＲＩＳＣ複合体機能を含みうる。切断非依存性機構は、ｍｉＲＮＡによって媒介されるような占有を基礎とする翻訳停止、またはアプタマーがするようなオリゴヌクレオチド剤のタンパク質への結合を含む。オリゴヌクレオチド剤はまた、プレｍＲＮＡ中のスプライス部位の選択を変えることによって、遺伝子の発現を変化させるのに使用できる。スプライシングの阻害はまた、不適切にプロセシングされたメッセージの分解を結果として生じる可能性があり、そのようにして遺伝子発現をダウンレギュレートする。Ｋｏｌｅおよび共同研究者ら（Ｓｉｅｒａｋｏｗｓｋａ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３：１２８４０−１２８４４）は、２’−Ｏ−Ｍｅホスホロチオアートオリゴヌクレオチドが異常なベータ−グロビンスプライシングを細胞系において訂正できたことを示した。完全に修飾された２’−メトキシエチルオリゴヌクレオチドおよびペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＩＬ−５受容体−αプレｍＲＮＡのスプライシングを再指示できた（Ｋａｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００，５８：３８０−３８７； Ｋａｒｒａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００１，４０：７８５３−７８５９）。
【００４８】
マイクロＲＮＡ
オリゴヌクレオチド剤はマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含む。マイクロＲＮＡは、たとえば標的ｍＲＮＡの翻訳の阻害によって、または分解を通じて、細胞において特定遺伝子の転写後サイレンシングを引き起こす能力がある低分子非コードＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、標的核酸と完全に相補的であり、または非相補の領域を含むことができ、結果として非相補の領域に「バルジ」を生じる。非相補の領域（バルジ）には、二重鎖形成を可能にするための十分な相補性、好ましくは完全な相補性の領域が隣接しうる。好ましくは、相補性領域は少なくとも長さ８から１０ヌクレオチド（たとえば、長さ８、９、または１０ヌクレオチド）である。ｍｉＲＮＡは、マイクロＲＮＡが標的核酸と完全に相補的ではない場合のように翻訳を抑制することによって、またはｍｉＲＮＡが標的と完全な相補性で結合する場合にだけ起こると考えられている標的ＲＮＡ分解を生じることによって、遺伝子発現を阻害できる。本発明はまた、標的と結合した際にバルジを形成してもしなくてもよいｍｉＲＮＡの二本鎖前駆体を含みうる。
【００４９】
ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは長さ約１８〜１００ヌクレオチド、およびより好ましくは長さ約１８〜８０ヌクレオチドでありうる。成熟ｍｉＲＮＡは、約１９〜３０ヌクレオチド、好ましくは約２１〜２５ヌクレオチド、特に２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドの長さを有しうる。マイクロＲＮＡ前駆体は約７０〜１００ヌクレオチドの長さおよびヘアピン立体構造を有しうる。マイクロＲＮＡはｉｎ ｖｉｖｏでプレｍｉＲＮＡから、特異的に高分子プレｍｉＲＮＡを機能するｍｉＲＮＡへプロセシングするダイサーおよびドローシャと呼ばれる酵素によって生じうる。本発明で扱われるマイクロＲＮＡまたは前駆体ｍｉＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞系によって合成でき、または化学的に合成できる。マイクロＲＮＡは、希望の特性を与える修飾を含むように合成できる。たとえば、修飾は安定性、標的核酸とのハイブリダイゼーション熱力学、特定の組織または細胞型への標的化、または、たとえばエンドサイトーシス依存性または非依存性機構による細胞透過性を改善しうる。修飾はまた、増加配列特異性を増加させ、および結果として部位を外れた標的化を減少させうる。合成および化学修飾の方法は下により詳細に記載される。
【００５０】
特に、本発明で扱われるｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、標的核酸との非相補性を有する内部（すなわち非末端）領域中のオリゴヌクレオチド上に化学修飾を有しうる。たとえば、修飾ヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡのバルジを形成する領域に組み込むことができる。修飾は、たとえばリンカーによって、ｍｉＲＮＡと結合するリガンドを含みうる。修飾は、たとえば、治療ｍｉＲＮＡの薬物動態または安定性を改善でき、または標的核酸へのｍｉＲＮＡのハイブリダイゼーション特性（たとえば、ハイブリダイゼーション熱力学）を改善できる。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡのバルジ領域に組み込まれたかまたはテザー（繋留）された修飾またはリガンドの方向は、バルジ領域の空間を占めるような向きであることが好ましい。この方向は、ハイブリダイゼーション特性の改善または他のｍｉＲＮＡの望ましい特性を促進する。たとえば、修飾は、核酸鎖上の修飾塩基または糖、または介入物として機能するリガンドを含みうる。これらは好ましくはバルジ中に位置する。介入物は、芳香族、たとえば、多環式芳香族またはヘテロ環芳香族化合物でありうる。多環式介入物は積層能力を持つ可能性があり、および２、３、または４縮合環を有する系を含みうる。ユニバーサル塩基もまたｍｉＲＮＡに組み込まれうる。
【００５１】
一実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡはアミノグリコシドリガンドを含むことができ、それはｍｉＲＮＡにハイブリダイゼーション特性の改善または配列特異性の改善を生じうる。典型的なアミノグリコシドは、グリコシル化ポリリジン；ガラクトシル化ポリリジン；ネオマイシンＢ；トブラマイシン；カナマイシンＡ；およびアミノグリコシドのアクリジン複合体、たとえばＮｅｏ−Ｎ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｓ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｃ−アクリジン、Ｔｏｂｒａ−Ｎ−アクリジン、およびＫａｎａＡ−Ｎ−アクリジンを含む。アクリジンアナログの使用は、配列特異性を増大させうる。たとえば、ネオマイシンＢはＤＮＡに比較してＲＮＡに対し高い親和性を有するが、しかし配列特異性は低い。アクリジンアナログであるＮｅｏ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶＲｅｖ−応答配列（ＲＲＥ）に対して親和性が増大している。一部の実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジンアナログ（グアニジノグリコシド）がオリゴヌクレオチド剤に繋留されている。グアニジノグリコシドでは、アミノ酸上のアミン基がグアニジン基に交換されている。グアニジンアナログの付加は、オリゴヌクレオチド剤の細胞透過性を増大しうる。
【００５２】
一実施形態では、リガンドは、標的核酸の切断によって標的遺伝子阻害に寄与する切断基を含みうる。好ましくは、切断基はバルジ領域に位置するような方法でｍｉＲＮＡに繋留され、そこで切断基は標的ＲＮＡに接近およびそれを切断できる。切断基は、たとえば、ブレオマイシン（たとえば、ブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２、またはブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（たとえば、Ｏ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（たとえば、ｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド）、または金属イオンキレート基でありうる。金属イオンキレート基は、たとえば、Ｌｕ（ＩＩＩ）またはＥＵ（ＩＩＩ）大環状複合体、Ｚｎ（ＩＩ）２，９−ジメチルフェナントロリン誘導体、Ｃｕ（ＩＩ）テルピリジン、またはアクリジンを含むことができ、バルジの部位での標的ＲＮＡの選択的切断をＬｕ（ＩＩＩ）のような遊離金属イオンによって促進できる。一部の実施形態では、ペプチドリガンドは、たとえばバルジ領域で、標的ＲＮＡの切断を促進するようにｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡに繋留されうる。たとえば、１，８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（サイクラム）は、標的ＲＮＡ切断を促進するために、ペプチドと（たとえば、アミノ酸誘導体によって）複合化されうる。本発明で扱われる方法および組成物は、切断または非切断依存性機構によって標的遺伝子を阻害するｍｉＲＮＡを含む。
【００５３】
ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、二重鎖を形成するための十分な相補性の領域（たとえば、長さ７、８、９、１０、または１１ヌクレオチドの領域）に隣接される、非相補の領域（たとえば、長さ３、４、５、または６ヌクレオチドの領域）を含むように設計および合成されうる。ヌクレアーゼ耐性および／または標的への結合親和性の増大のために、ｍｉＲＮＡ配列は２’−Ｏ−メチル、２’−フッ素、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−アミノ、および／またはホスホロチオアート結合を含みうる。フラノース糖がオリゴヌクレオチド骨格に含まれることはまた、ヌクレオチド鎖切断を減少させうる。ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、３’−陽イオン基を含めることによって、またはヌクレオシドを３’末端にて３’−３’結合で逆転させることによってさらに修飾されうる。別の選択肢では、３’末端はアミノアルキル基、たとえば、３’−Ｃ５−アミノアルキルｄＴを用いてブロックされうる。他の３’−複合体は３’−５’ヌクレオチド鎖末端切断を阻害しうる。理論に縛られない一方、ナプロキセンまたはイブプロフェンといった３’−複合体は、エキソヌクレアーゼをオリゴヌクレオチドの３’末端との結合から立体的にブロックすることによって、ヌクレオチド鎖末端切断を阻害しうる。低分子アルキル鎖、アリール基、またはヘテロ環複合体または修飾糖（Ｄ−リボース、デオキシリボース、グルコースなど）さえも、３’−５’−エキソヌクレアーゼをブロックできる。
【００５４】
一実施形態では、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、たとえば上記の標的化修飾のような、標的化を改善する修飾を含む。ｍｉＲＮＡ分子を特定の細胞型へ標的化する修飾の例は、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、マンノースのような糖；葉酸のようなビタミン；ＲＧＤおよびＲＧＤミミックのような他のリガンド；および、ナプロキセン、イブプロフェンまたは他の公知のタンパク質結合分子を含む低分子を含む。
【００５５】
ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、本分野で公知の手順を用いて、化学合成および／または酵素的ライゲーション反応を用いて構築されうる。たとえば、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡは、天然に存在するヌクレオチドまたは、分子の生物学的安定性を増大するように、またはｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡおよび標的核酸の間に形成される二重鎖の物理的安定性を増大するように設計されたさまざまに修飾されたヌクレオチドを用いて化学合成でき、たとえば、ホスホロチオアート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用できる。他の適当な核酸修飾が本明細書に記載される。代替的に、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡ核酸を、核酸がアンチセンス方向にサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に作製でき、すなわち、その挿入された核酸から転写されるＲＮＡは目的の標的核酸に対してアンチセンス方向となる。
【００５６】
アンチセンス核酸配列
本発明で扱われる一本鎖オリゴヌクレオチド剤はアンチセンス核酸を含む。「アンチセンス」核酸は、遺伝子発現産物をコードする「センス」核酸と相補的である、たとえば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖と相補的、またはたとえば、プレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはプレｍｉＲＮＡのようなＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチド配列を含む。したがって、アンチセンス核酸は、センス核酸標的と水素結合を形成できる。
【００５７】
ｃＤＮＡ分子のセンス鎖の配列といったコード鎖配列を考えると、アンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋ塩基対形成の規則に従って設計できる。アンチセンス核酸分子は、たとえばプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡといったＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部と相補的でありうる。たとえば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、プレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡの翻訳開始部位周辺の領域、たとえば、５’ＵＴＲと相補的でありうる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは長さ約１０から２５ヌクレオチド{たとえば、長さ１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチド）でありうる。アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、ｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡと相補的でありうる。
【００５８】
アンチセンス核酸は、本分野で公知の手順を用いて、化学合成および／または酵素的ライゲーション反応を用いて構築されうる。たとえば、アンチセンス核酸は、天然に存在するヌクレオチドまたは、分子の生物学的安定性を増大するように、またはアンチセンスおよび標的核酸の間に形成される二重鎖の物理的安定性を増大するように設計されたさまざまに修飾されたヌクレオチドを用いて化学合成でき、たとえば、ホスホロチオアート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用できる。他の適当な核酸修飾が本明細書に記載される。代替的に、アンチセンス核酸を、核酸がアンチセンス方向にサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に作製でき、すなわち、その挿入された核酸から転写されるＲＮＡは目的の標的核酸に対してアンチセンス方向となる。
【００５９】
アンチセンス剤は、リボヌクレオチドのみ、デオキシリボヌクレオチドのみ{たとえば、オリゴデオキシヌクレオチド）、またはデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドの両方を含みうる。たとえば、リボヌクレオチドのみから成るアンチセンス剤は、相補的ＲＮＡとハイブリダイズでき、および標的ＲＮＡ転写物への翻訳機構の接近を妨害し、それによってタンパク質合成を妨害する。デオキシリボヌクレオチドのみ、またはデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含むアンチセンス分子、たとえば、アンチセンス剤の５’および３’末端でＲＮＡ配列に隣接されるＤＮＡ配列は、相補的ＲＮＡとハイブリダイズでき、およびそのＲＮＡ標的は次いでＲＮアーゼＨのような酵素によって切断されうる。標的ＲＮＡの分解は翻訳を妨げる。隣接するＲＮＡ配列は、２’−Ｏ−メチル化ヌクレオチド、およびホスホロチオアート結合を含むことができ、および内部ＤＮＡ配列はホスホロチオアートヌクレオチド間結合を含むことができる。ＲＮアーゼＨ活性による標的化が望まれる場合、内部ＤＮＡ配列は好ましくは少なくとも長さ５ヌクレオチドである。
【００６０】
ヌクレアーゼ耐性の増加については、アンチセンス剤はさらに、ヌクレオシドを３’末端にて３’−３’結合で逆転させることによってさらに修飾されうる。別の選択肢では、３’末端はアミノアルキル基を用いてブロックされうる。一部の場合には、アンチセンスオリゴヌクレオチド剤は、標的化を改善する修飾、たとえば標的化修飾を含む。
【００６１】
おとり核酸
本発明で扱われるオリゴヌクレオチド剤は、おとりＲＮＡのようなおとり核酸でありうる。おとり核酸は天然核酸に似るが、しかし天然核酸の活性を阻害または妨害するように修飾されている。たとえば、おとりＲＮＡはリガンドのための天然結合ドメインを模倣でき、および特異的リガンドの結合に関して天然結合標的と競合できる。ＨＩＶトランス活性化応答（ＴＡＲ）ＲＮＡの過剰発現は「おとり」として作用できおよびＨＩＶｔａｔタンパク質と効率的に結合でき、それによってＨＩＶｔａｔタンパク質がＨＩＶ ＲＮＡにコードされたＴＡＲ配列と結合するのを妨げることが示されている。一実施形態では、おとりＲＮＡは標的化を改善する修飾を含む。ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡについて上に記載される、および本明細書で別に記載される化学修飾もまた、おとり核酸での使用に適している。
【００６２】
アプタマー
本発明のオリゴヌクレオチド剤はまたアプタマーを含む。アプタマーは、有機低分子または、たとえば転写または翻訳因子のようなタンパク質といった、非核酸リガンドに結合し、および次いでその活性を修飾する。アプタマーは、非核酸リガンド上の標的となる結合部位の認識を導く特異的構造へ折りたたまれることが可能である。アプタマーは本明細書に記載の修飾のうち任意のものを含みうる。一部の場合には、アプタマーは、は、標的化を改善する修飾、たとえば標的化修飾を含む。ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡについて上に記載される、および本明細書で別に記載される化学修飾もまた、おとり核酸での使用に適している。
【００６３】
本発明のオリゴヌクレオチドのその他の特性
ＮＡＴ（「核酸標的化」）するオリゴヌクレオチド剤は、オリゴヌクレオチド剤が標的核酸と二重鎖を形成するように、標的遺伝子に対し十分な相補性の領域を含み、およびヌクレオチドに関して十分な長さである。オリゴヌクレオチド剤は標的となる分子の機能を調節できる。たとえば、標的となる分子がｍＲＮＡまたはプレｍＲＮＡである場合、ＮＡＴは遺伝子発現を阻害できる；標的がｍｉＲＮＡである場合、ＮＡＴはｍｉＲＮＡ機能を阻害しおよびそのようにしてその特定のｍｉＲＮＡによって標的にされるｍＲＮＡの発現をアップレギュレートする。代替的に、標的がスプライシングに影響するプレｍＲＮＡの領域である場合、ＮＡＴはスプライス部位の選択に、およびしたがってｍＲＮＡ配列に影響しうる；ＮＡＴがｍｉＲＮＡとして機能する場合、標的となるｍＲＮＡの発現は阻害される。説明の便宜上、ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドの語は時々本明細書で、オリゴヌクレオチド剤の１つ以上のモノマーサブユニットについて用いられる。「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」の語は、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチド代用物の場合には、１つ以上の位置での、修飾ヌクレオチド、または代用物置換部分もまたいうことができると解される。
【００６４】
ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、標的ＲＮＡと少なくとも部分的に、および一部の実施形態では完全に、相補的な領域であるかまたはそれを含む。オリゴヌクレオチド剤と標的との間に完全な相補性がある必要は無いが、しかし対応はオリゴヌクレオチド剤、またはその切断産物が、標的遺伝子発現を調節（たとえば阻害）することができるために十分でなければならない。
【００６５】
オリゴヌクレオチド剤は、下記の特性のうち好ましくは１つ以上を有する：（１）１つ以上のリン酸基または１つ以上のリン酸基アナログを含む５’修飾を有する；（２）非常に多数の塩基にさえの修飾にかかわらず、特異的に塩基対形成しおよび十分な熱力学的安定性の相同な標的ＲＮＡと二重鎖構造を生じ、標的にされるＲＮＡの活性の調節を可能にする；および（３）非常に多数またはすべてのヌクレオシドにさえの修飾にかかわらず、なお「ＲＮＡ様」特性を有する、すなわち、リボヌクレオチドだけを基礎としない、または一部だけがリボヌクレオチドを基礎とする内容であっても、ＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的および物理的特性を有する。たとえば、すべてのヌクレオチド糖が２’−フルオロ基を２’−水酸基の代わりに含みうる。このデオキシリボヌクレオチド含有剤はなおＲＮＡ様特性を示すと予想できる。理論に縛られることを望まない一方、電気陰性なフッ素は、リボースのＣ２’位に結合する場合、アキシアル方向を優先する。フッ素のこの空間的優先傾向は、糖がＣ３’エンド歪みを取ることを強制できる。これは、ＲＮＡ分子に観察されるのと同一の歪み形式であり、およびＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じる。さらに、フッ素は、良好な水素結合受容体であるため、ＲＮＡ構造を安定化することが知られている水分子と同一の水素結合相互作用に参加できる。一般的に、２’−糖位置の修飾部分が、デオキシリボヌクレオチドの２’−Ｈ部分よりもリボヌクレオチドの２’−ＯＨ部分に特徴的である水素結合に入れることが好ましい。好ましいオリゴヌクレオチド剤は：Ｃ３’エンド歪みを糖の全部または少なくとも約５０、７５、８０、８５、９０、または９５％に示す；ＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じることができるように、Ｃ３’エンド歪みを十分な量の糖に示す；一般的にＣ３’エンド歪み構造でない糖を約２０、１０、５、４、３、２、または１個しか持たない。一部の場合には、オリゴヌクレオチドはＣ３’エンド糖歪みを示しおよび２’位で修飾されている。典型的な修飾は、２’−ＯＨ、２’−Ｏ−Ｍｅ、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−Ｆ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨＭｅ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（Ｍｅ）２、およびＬＮＡを含む。一部の場合には、修飾の性質にかかわらず、およびオリゴヌクレオチド剤はデオキシヌクレオチドまたは修飾デオキシヌクレオチドを含みうるとはいえ、ＤＮＡ分子、または分子中のヌクレオチドの５０、６０、または７０％より大がデオキシリボヌクレオチドである任意の分子、または２’位がデオキシである修飾デオキシリボヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド剤の定義から除外されるのが好ましい。Ｃ２’エンド糖歪みを示す糖部分を伴う一部の好ましい２’−修飾は、２’−Ｈ、Ｔ−Ｍｅ、２’−Ｓ−Ｍｅ、２’−エチニル、および２’−ａｒａ−Ｆを含む。他の糖修飾はＬ−糖および２’−５’結合糖を含む。
【００６６】
ここでは，「特異的にハイブリダイズ可能な」および「相補的」とは、本発明の化合物と標的ＲＮＡ分子との間に安定なおよび特異的な結合が生じるような、十分な程度の相補性を示すのに用いられる語である。この命名はまた、ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤が標的ＲＮＡへ結合する場合にも適用される。特異的結合は、特異的結合が望まれる条件下で、すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイまたは治療処置の場合には生理条件下で、またはｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの場合にはアッセイが実施される条件下で、非標的配列に対して相補性の十分な欠如を必要とする。標的にされる標的と標的にされない配列との間の単一のミスマッチは、ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡ標的化のための識別を与えるのに十分であることが示されている（Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００２，２：２４３）。
【００６７】
一部の場合には、ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、標的ＲＮＡに対して「十分に相補的」であり、そのためオリゴヌクレオチド剤が標的ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の産生を阻害するほどである。標的ＲＮＡは、対象にとって内因性であるプレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡでありうる。別の一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は標的ＲＮＡと「正確に相補的」（ＳＲＭＳ含有サブユニットを除く）であり、たとえば、標的ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチド剤は、アニーリングして正確な相補性の領域においてＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対だけからできたハイブリッドを形成できる。「十分に相補的な」標的ＲＮＡは、標的ＲＮＡと正確に相補的である領域（たとえば、少なくとも約７ヌクレオチドの）を含みうる。さらに、一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は特異的に一ヌクレオチドの差異を識別する。この場合、オリゴヌクレオチド剤は、一ヌクレオチドの差異の領域に正確な相補性が見られる場合にのみ遺伝子発現をダウンレギュレートする。
【００６８】
考察されるオリゴヌクレオチド剤は、それ以外は未修飾であるＲＮＡおよびＤＮＡならびに修飾されているＲＮＡおよびＤＮＡを含む。修飾ＲＮＡおよびＤＮＡの例は、効率を改善する修飾、およびヌクレオシド代用物のポリマーを含む。未修飾ＲＮＡとは、核酸の成分、すなわち糖、塩基、およびリン酸部分が、天然に存在するもの、好ましくは人体に天然に存在するものと同一または本質的に同一である分子をいう。文献は、修飾ＲＮＡとして、稀なまたは異常なしかし天然に存在するＲＮＡに言及している。Ｌｉｍｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９４，２２，２１８３−２１９６を参照。そのような稀なまたは異常なＲＮＡは、しばしば修飾ＲＮＡと言われるが、典型的には転写後修飾の結果であり、およびここでは未修飾ＲＮＡという語の範囲内にある。修飾ＲＮＡとはここでは、１つ以上の核酸の成分、すなわち糖、塩基、およびリン酸部分が、天然に存在するもの、好ましくは人体に天然に存在するものと異なる分子をいう。「修飾ＲＮＡ」と呼ばれる一方、それらはもちろん、修飾のために、厳密に言ってＲＮＡではない分子を含む。ヌクレオシド代用物とは、リボリン酸骨格が、塩基を正しい空間関係で提示することが可能である非リボリン酸構造で置換されている分子であり、そのためハイブリダイゼーションはリボリン酸骨格で見られるものと実質的に同様であり、たとえば、リボリン酸骨格の非荷電ミミックである。
【００６９】
糖置換モノマーサブユニット（ＳＲＭＳ）
サブユニットの糖がそのように置換されているヌクレオチドサブユニットは、ここでは糖置換修飾サブユニット（ＳＲＭＳ）という。ＳＲＭＳは、２つの「骨格結合点」（水酸基）、「テザー（繋留）結合点」、および介在するテザーを介してＳＲＭＳと間接的に結合するリガンドを含む。ＳＲＭＳはオリゴヌクレオチド剤の５’−または３’末端サブユニットでよく、および２つ以上の未修飾または修飾リボヌクレオチドと隣接して位置しうる。代替的に、ＳＲＭＳは１つ以上の未修飾または修飾リボヌクレオチドと隣接して位置する内部の位置を占める可能性がある。２個以上のＳＲＭＳがオリゴヌクレオチド剤に存在しうる。ある部分（たとえば、コレステロールのような親油性部分）にテザーされたＳＲＭＳを含めるのに好ましい位置は、３’末端、５’末端、または内部位置である。
【００７０】
リガンド
さまざまなものがオリゴヌクレオチド剤に繋留されうる。オリゴヌクレオチド剤に繋留されたリガンドは、本剤に有益な作用を有しうる。たとえば、リガンドは、安定性、標的核酸とのハイブリダイゼーション熱力学、特定の組織または細胞型への標的化、または、たとえばエンドサイトーシス依存性または非依存性機構による、細胞透過性を改善しうる。リガンドおよび随伴する修飾はまた、配列特異性を増大し、および結果的に、部位を外れた標的化を減少させうる。繋留されたリガンドは、介入物として機能しうる１つ以上の修飾塩基または糖を含みうる。これらは、好ましくはｍｉＲＮＡ／標的二重鎖のバルジでのように、内部領域に位置する。介入物はまた、多環式芳香族またはヘテロ環芳香族化合物を含む芳香族基でありうる。多環式介入物は積層能力を持つ可能性があり、および２、３、または４縮合環を有する系を含みうる。ユニバーサル塩基もまたリガンド上に含まれうる。
【００７１】
一実施形態では、リガンドは、標的核酸の切断によって標的遺伝子阻害に寄与する切断基を含みうる。切断基は、ブレオマイシン（たとえば、ブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２、またはブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（たとえば、Ｏ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（たとえば、ｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド）、または金属イオンキレート基でありうる。金属イオンキレート基は、Ｌｕ（ＩＩＩ）またはＥＵ（ＩＩＩ）大環状複合体、Ｚｎ（ＩＩ）２，９−ジメチルフェナントロリン誘導体、Ｃｕ（ＩＩ）テルピリジン、またはアクリジンを含むことができ、バルジの部位での標的ＲＮＡの選択的切断をＬｕ（ＩＩＩ）のような遊離金属イオンによって促進できる。一部の場合には、ペプチド リガンドは標的ＲＮＡの切断を促進するようにｍｉＲＮＡに繋留されうる。一部の場合には、切断は バルジ領域で起こりうる。たとえば、１，８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（サイクラム）は、標的ＲＮＡ切断を促進するために、ペプチドとたとえばアミノ酸誘導体によって、複合化されうる。
【００７２】
繋留されたリガンドは、オリゴヌクレオチド剤に改善されたハイブリダイゼーション特性または改善された配列特異性を持たせることができるアミノグリコシドリガンドでありうる。典型的なアミノグリコシドは、グリコシル化ポリリジン、ガラクトシル化ポリリジン、ネオマイシンＢ、トブラマイシン、カナマイシンＡ、アミノグリコシドのアクリジン複合体、たとえばＮｅｏ−Ｎ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｓ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｃ−アクリジン、Ｔｏｂｒａ−Ｎ−アクリジン、およびＫａｎａＡ−Ｎ−アクリジンを含む。アクリジンアナログの使用は、配列特異性を増大させうる。たとえば、ネオマイシンＢはＤＮＡに比較してＲＮＡに対し高い親和性を有するが、しかし配列特異性は低い。アクリジンアナログであるＮｅｏ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶＲｅｖ−応答配列（ＲＲＥ）に対して親和性が増大している。一部の実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジンアナログ（グアニジノグリコシド）がオリゴヌクレオチド剤に繋留されている。グアニジノグリコシドでは、アミノ酸上のアミン基がグアニジン基に交換されている。グアニジンアナログの付加は、オリゴヌクレオチド剤の細胞透過性を増大しうる。繋留されたリガンドは、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進しうるポリアルギニンペプチド、ペプトイドまたはペプチドミメティックでありうる。
【００７３】
好ましい部分は、好ましくは共有結合によって、直接にまたは介在するテザーを介して、ＳＲＭＳキャリヤーと結合しているリガンドである。好ましい実施形態では、リガンドは介在するテザーを介してキャリヤーと結合している。上記で考察した通り、リガンドまたは繋留されたリガンドは、ＳＲＭＳモノマーが成長中の鎖に組み込まれる場合、ＳＲＭＳモノマー上に存在しうる。一部の実施形態では、リガンドは「前駆体」ＳＲＭＳモノマーが成長中の鎖に組み込まれた後、「前駆体」ＳＲＭＳに組み込まれうる。たとえば、アミノ末端のあるテザー（すなわち、随伴するリガンドを持たない）またはＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨ２を有するＳＲＭＳモノマーが、成長中のオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれうる。以降の操作で、求電子基を有するリガンドを前駆体ＳＲＭＳへ、リガンドの求電子基を前駆体ＳＲＭＳテザーの末端求核基と結合することによって、続いて付加できる。代表的な求電子基は、ペンタフルオロフェニルエステルまたはアルデヒドを含む。本発明に従う他の求電子基は当業者によって容易に決定されうる。
【００７４】
ｓｉＲＮＡによるＤＮＡメチル化の誘導
細胞質におけるｓｉＲＮＡ誘導性遺伝子サイレンシングのよく特徴づけられた機構に加えて、近年の研究は、ｓｉＲＮＡはまた核においてＤＮＡメチル化のパターン、ヘテロクロマチン形成、およびプログラムＤＮＡ消失に変化を引き起こし、したがって結果として遺伝子サイレンシングを生じることを示す。総説はＮ．Ａｇｒａｗａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．２００３，６７，６５７−６８５； Ｋｅｎｔ，Ｏ．Ａ．； ＭａｃＭｉｌｌａｎ，Ａ．Ｍ．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４，２，１９５７−１９６１； Ｌｉｐｐｍａｎ，Ｚ．； Ｍａｒｔｉｅｎｓｓｅｎ，Ｒ．Ｎａｔｕｒｅ ２００４，４３１，３６４−３７０； Ｍ．Ｍａｔｚｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．２００４，１６７７，１２９−１４１；およびＳｃｈｒａｍｋｅ，Ｖ．； Ａｌｌｓｈｉｒｅ，Ｒ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．２００４，１４，１７４−１８０を参照。このサイレンシングはＲＮＡｉ機構の成分を必要とするが、しかしその機構はよくわかっていない。
【００７５】
他の核ＤＮＡとは異なり、ヘテロクロマチンは細胞周期を通じて凝縮したままである。ヘテロクロマチンは近傍の遺伝子の調節に影響する能力のために興味が持たれる。ヘテロクロマチン反復は配列が種間で類似していないが、しかしすべての種で、ヘテロクロマチンＤＮＡは転写されず、代わりにヒストンおよびＤＮＡ自体の保存されたエピジェネティック修飾によって発現抑制される。このサイレンシングは非正統的組み換えを防ぐと考えられている。サイレンシングにおけるＤＮＡメチル化の役割は長く知られている。ほとんどすべてのＤＮＡメチル化がトランスポゾンおよび反復配列に限定されているため、これらの領域は何らかの方法で遺伝子から識別されなければならない。ＲＮＡｉは、メチル化の配列特異的標的化を可能にする１つの機構に見える。
【００７６】
ＲＮＡｉ機構とヘテロクロマチン形成との間に関連があるという最初の兆候は、ＲＮＡｉ関連タンパク質の欠失が動原体ヘテロクロマチンに挿入された遺伝子の発現抑制を解除したことを示した、酵母における研究からもたらされた。Ｔ．Ａ．Ｖｏｌｐｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２，２９７，１８３３−１８３７を参照。その後、ＳｃｈｒａｍｋｅおよびＡｌｌｓｈｉｒｅは、合成低分子ヘアピンＲＮＡの発現が真性染色質 遺伝子の発現を抑制できたことを分裂酵母において実証した。Ｓｃｈｒａｍｋｅ，Ｖ．； Ａｌｌｓｈｉｒｅ，Ｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００３，３０１，１０６９−１０７４を参照。サイレンシングは、クロマチン修飾およびヘテロクロマチンタンパク質およびコヒーシンの標的遺伝子座への動員と繋がっていた。この機構を介するサイレンシングは、ｉＲＮＡ機構の既知の成分であるアルゴノート、ダイサー、およびＲＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼを必要とする。上記で引用したＶｏｌｐｅらを参照。
【００７７】
分裂酵母におけるクロモドメイン複合体の生化学的精製は、ＲＩＴＳ（ＲＮＡｉ誘導性転写遺伝子サイレンシング）複合体を与えている。Ａ．Ｖｅｒｄｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００４，３０３，６７２−６７６を参照。ＲＩＴＳは特異的染色体領域を認識および結合し、ヘテロクロマチン遺伝子サイレンシングを開始する。特異的配列認識はｓｉＲＮＡによって導かれる。ＲＩＴＳはタンパク質のアルゴノートファミリーのＳ．ｐｏｍｂｅホモログであるＡｇｏ１を含む。ＲＩＴＳ複合体の少なくとも２つのサブユニット、Ｃｈｐ１およびＴａｓ３は、ヘテロクロマチンＤＮＡ領域と特異的に結合し、それはその複合体が標的ＤＮＡへ直接局在化することを示唆する。ＲＩＴＳはまた、ヘテロクロマチンＤＮＡ領域全体に局在化しおよびクロマチンへの局在化にメチルトランスフェラーゼＣｌｒ４およびヒストンＨ３−Ｋ９メチル化を必要とするクロモドメインタンパク質Ｃｈｐ１を含む。このようにＲＩＴＳは、ｓｉＲＮＡに結合しおよび配列特異的対合相互作用によってＲＮＡまたはＤＮＡ標的化において機能できるサブユニット（Ａｇｏ１）、および特異的に修飾されたヒストンと結合しおよびクロマチンとの結合をさらに安定化するのに関与している可能性があるサブユニット（Ｃｈｐ１）の両方を含む。
【００７８】
２つのグループが近年、ｓｉＲＮＡがヒト細胞においてＤＮＡメチル化およびヒストンＨ３メチル化を誘導できることを実証している。Ｋａｗａｓａｋｉ，Ｈ．； Ｔａｉｒａ，Ｋ．Ｎａｔｕｒｅ ２００４，４３１，２１１−２１７およびＭｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００４，３０５，１２８９−１２９２を参照。ｓｉＲＮＡを前駆体からプロセシングするヌクレアーゼであるダイサーが、ニワトリ細胞においてヘテロクロマチン形成に必要であることもまた示されている。Ｆｕｋａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００４，６，７８４−７９１．
本発明のオリゴヌクレオチドの合成
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は二段階手順で調製されうる。最初に、二本鎖ＲＮＡ分子の各鎖は別々に調製される。次に、成分鎖はアニーリングされる。ｓｉＲＮＡ化合物の各鎖は、溶液相または固相有機合成または両方を用いて調製されうる。有機合成は、非天然または修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が容易に調製されうるという長所を提供する。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、溶液相または固相有機合成または両方を用いて調製されうる。
【００７９】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドへの結合分子の結合に由来するもののような突出した反応性官能基を有するオリゴヌクレオチドを用いることによって合成されうる。この反応性オリゴヌクレオチドは、市販のリガンド、任意のさまざまな保護基を有する合成されたリガンド、または結合部分が付加されたリガンドと直接反応させることができる。本発明の方法は、一部の好ましい実施形態では、リガンドと適当に複合体化されておりおよびさらに固相担体材料へ結合されうるヌクレオシドモノマーの使用によって、リガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成を円滑にする。必要に応じて固相担体へ結合された、そのようなリガンド−ヌクレオシド複合体はヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドの５’位置にある結合部分との選択された血清結合リガンドの反応を介して、本発明の方法の一部の好ましい実施形態に従って調製される。一部の場合には、オリゴヌクレオチドの３’末端に結合したアラルキルリガンドを有するオリゴヌクレオチドが、まずモノマー構築単位を一定の孔を持つガラス担体へ長鎖アミノアルキル基を介して共有結合によって結合することにより調製される。次いで、ヌクレオチドが、標準的な固相合成法によって、固相担体へ結合されたモノマー構築単位へ結合される。モノマー構築単位は、ヌクレオシドまたは固相合成に適合した他の有機化合物でありうる。
【００８０】
本発明の複合体に用いられるオリゴヌクレオチドは、固相合成のよく知られた方法によって便利におよび定型的に作製されうる。そのような合成のための装置は、たとえば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を含むいくつかの販売者によって販売されている。本分野で公知であるそのような合成のための任意の他の方法を、加えてまたは代替的に用いることができる。ホスホロチオアートおよびアルキル化誘導体といった、他のヌクレオチドを調製するのに同様の方法を用いることもまた知られている。
【００８１】
特定の修飾オリゴヌクレオチドの合成に関する教示は、下記の米国特許に見出すことができる：ポリアミン複合化したオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，１３８，０４５号および第５，２１８，１０５号明細書；キラルリン結合を有するオリゴヌクレオチドの調製のためのモノマーに対する米国特許第５，２１２，２９５号明細書；修飾骨格を有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，３７８，８２５号および第５，５４１，３０７号明細書；骨格修飾オリゴヌクレオチドおよび還元的カップリングによるその調製に対する米国特許第５，３８６，０２３号明細書；３−デアザプリン環系を基礎とする修飾核酸塩基およびその合成方法に対する米国特許第５，４５７，１９１号明細書；Ｎ−２置換プリンを基礎とする修飾核酸塩基に対する米国特許第５，４５９，２５５号明細書；キラルリン結合を有するオリゴヌクレオチドの調製のための製法に対する米国特許第５，５２１，３０２号明細書；ペプチド核酸に対する米国特許第５，５３９，０８２号明細書；β−ラクタム骨格を有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５５４，７４６号明細書；オリゴヌクレオチドの合成のための方法および材料に対する米国特許第５，５７１，９０２号明細書；アルキルチオ基を有しそのような基がヌクレオシドの任意のさまざまな位置に結合した他の部分とのリンカーとして用いられることを特徴とするヌクレオシドに対する米国特許第５，５７８，７１８号明細書；高いキラル純度のホスホロチオアート結合を有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５８７，３６１号および第５，５９９，７９７号明細書；２’−Ｏ−アルキルグアノシン、および２，６−ジアミノプリン化合物を含む関連化合物の調製のための製法に対する米国特許第５，５０６，３５１号明細書；Ｎ−２置換プリンを有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５８７，４６９号明細書；３−デアザプリンを有するオリゴヌクレオチドに対する米国特許第５，５８７，４７０号明細書；共に複合化４’−デスメチルヌクレオシドアナログに対する米国特許第５，２２３，１６８号明細書および米国特許第５，６０８，０４６号明細書；骨格修飾オリゴヌクレオチドアナログに対する米国特許第５，６０２，２４０号明細書および第５，６１０，２８９号明細書；特にＴ−フルオロ−オリゴヌクレオチドを合成する方法に対する米国特許第６，２６２，２４１号明細書、および第５，４５９，２５５号明細書。
【００８２】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドおよびリガンド分子を有する配列特異的に結合したヌクレオシドでは、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシドは、適当なＤＮＡ合成装置で、標準的なヌクレオチドまたはヌクレオシド前駆体、または既に結合部分を有するヌクレオチドまたはヌクレオシド複合体前駆体、既にリガンド分子を有するリガンド−ヌクレオチドまたはヌクレオシド−複合体前駆体、または非ヌクレオシドリガンドを有する構築単位を利用して組み立てることができる。
【００８３】
既に結合部分を有するヌクレオチド複合体前駆体を用いる時、配列特異的に結合したヌクレオシドの合成は典型的には完了し、およびリガンド分子が次いで結合部分と反応させられ、リガンド複合化オリゴヌクレオチドを形成する。ステロイド、ビタミン、脂質およびレポーター分子といったさまざまな分子を有するオリゴヌクレオチド複合体は以前に記載されている（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ出願国際公開第９３／０７８８３号パンフレットを参照）。好ましい一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドまたは結合ヌクレオシドは、市販のおよびオリゴヌクレオチド合成に通常用いられる標準的なホスホラミダイトおよび標準的でないホスホラミダイトに加えて、リガンド−ヌクレオシド複合体に由来するホスホラミダイトを用いて、自動合成装置によって合成される。
【００８４】
オリゴヌクレオチドのヌクレオシドへの２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−エチル、２’−Ｏ−プロピル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｏ−アミノアルキルまたは２’−デオキシ−２’−フルオロ基の組み込みは、オリゴヌクレオチドに高いハイブリダイゼーション特性を与える。さらに、ホスホロチオアート骨格を含むオリゴヌクレオチドは、高いヌクレアーゼ安定性を有する。このように、本発明の官能化された結合ヌクレオシドは、ホスホロチオアート骨格または２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−エチル、２’−Ｏ−プロピル、２’−Ｏ−アミノアルキル、２’−Ｏ−アリルまたは２’−デオキシ−２’−フルオロ基のどちらかまたは両方を含むように増加させることができる。
【００８５】
一部の好ましい実施形態では、アミノ基を５’末端に有する本発明の官能化ヌクレオシド配列は、ＤＮＡ合成装置を用いて調製され、および次いで選択されたリガンドの活性エステル誘導体と反応させられる。活性エステル誘導体は当業者によく知られている。代表的な活性エステルは、Ｎ−ヒドロスクシンイミドエステル、テトラフルオロフェノールエステル、ペンタフルオロフェノールエステルおよびペンタクロロフェノールエステルを含む。アミノ基および活性エステルの反応は、選択されたリガンドが結合基を介して５’位に結合したオリゴヌクレオチドを生じる。５’末端のアミノ基は、５’−Ａｍｉｎｏ−ＭｏｄｉｆｉｅｒＣ６試薬を用いて調製されうる。好ましい一実施形態では、リガンド分子は、リガンドが５’−水酸基に直接、またはリンカーを介して間接的に結合していることを特徴とするリガンド−ヌクレオシドホスホラミダイトの使用によって、５’位でオリゴヌクレオチドと複合化されうる。そのようなリガンド−ヌクレオシドホスホラミダイトは、典型的には自動合成手順の最後に用いられ、リガンドを５’末端に有するリガンド複合化オリゴヌクレオチドを与える。
【００８６】
本発明の方法の好ましい一実施形態では、リガンド複合化オリゴヌクレオチドの調製は、リガンド分子を構築するための適当な前駆体分子の選択で始まる。典型的には、前駆体は、一般的に用いられるヌクレオシドの、適当に保護された誘導体である。たとえば、本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成のための合成前駆体は、分子の核酸塩基部分で保護されうる２’−アミノアルコキシ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、２’−６−アミノアルキルアミノ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、５’−６−アミノアルコキシ−２’−デオキシ−ヌクレオシド、５’−６−アミノアルコキシ−２−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ−ヌクレオシド、３’−６−アミノアルコキシ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシド、および３’−アミノアルキルアミノ−５’−ＯＤＭＴ−ヌクレオシドを含むがそれらに限定されない。そのようなアミノ結合保護ヌクレオシド前駆体の合成のための方法は当業者に公知である。
【００８７】
多くの場合で、本発明の化合物の調製中に保護基が用いられる。ここでは、「保護」の語は、指定部分がそれに付属した保護基を有することを意味する。本発明の一部の好ましい実施形態では、化合物は１つ以上の保護基を含む。さまざまな保護基を本発明の方法に用いることができる。一般的に、保護基は、特定の反応条件に対して不活性である化学官能性を与え、および分子のそのような官能性から実質的に分子の残りを損傷することなく付加および除去されうる。
【００８８】
代表的なヒドロキシル保護基は、たとえば、Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．によって開示される（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９２，４８：２２２３−２３１１）。他のヒドロキシル保護基、および他の代表的な保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ２，２ｄ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１，およびＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．Ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ，１９９１に開示される。
【００８９】
ヒドロキシル保護基の例は、ｔ−ブチル、ｔ−ブトキシメチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、２−トリメチルシリルエチル、ｐ−クロロフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、ｐ−ニトロベンジル、トリフェニルメチル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリフェニルシリル、ギ酸ベンゾイル、酢酸、クロロ酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、ピバロン酸、安息香酸、ｐ−フェニル安息香酸、炭酸９−フルオレニルメチル、メシル酸およびトシル酸を含むがそれらに限定されない。
【００９０】
酸処理に対して安定なアミノ保護基は、塩基処理で選択的に除去され、および置換に選択的に用いることができる反応性アミノ基を作製するのに使用される。そのような基の例は、Ｆｍｏｃ（Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｓ．Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ，Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，１９８７，ｖｏｌｕｍｅ ９，ｐ．１）およびＮｓｃ基に例示されるさまざまな置換スルホニルエチルカルバマート（Ｓａｍｕｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９４，３５：７８２１； Ｖｅｒｈａｒｔ ａｎｄ Ｔｅｓｓｅｒ，Ｒｅｃ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ，１９８７，１０７：６２１）である。
【００９１】
他のアミノ保護基は、カルバマート保護基、たとえば２−トリメチルシリルエトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エトキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）；アミド保護基、たとえばホルミル、アセチル、トリハロアセチル、ベンゾイル、およびニトロフェニルアセチル；スルホンアミド保護基、たとえば２−ニトロベンゼンスルホニル；およびイミンおよび環状イミド保護基、たとえばフタルイミドおよびジチアスクシノイルを含むがそれらに限定されない。これらのアミノ保護基の同等物もまた本発明の化合物および方法によって包含される。
【００９２】
多数の固相担体が市販されており、および当業者は固相合成段階に使用すべき固相担体を容易に選択できる。一部の実施形態では、ユニバーサル担体が用いられる。ユニバーサル担体は、オリゴヌクレオチドの３’末端に位置する異常なまたは修飾されたヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドの調製を可能にする。Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｕｐｐｏｒｔ ５００およびＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｕｐｐｏｒｔ ＩＩは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社（２２８２５ Ｄａｖｉｓ Ｄｒｉｖｅ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から市販されているユニバーサル担体である。ユニバーサル担体についてさらに詳細は、Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，１９９４，Ｅｄ．Ｒｏｇｅｒ Ｅｐｔｏｎ，Ｍａｙｆｌｏｗｅｒ Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ，１１５−１２４］； Ａｚｈａｙｅｖ，Ａ．Ｖ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９９，５５，７８７−８００；およびＡｚｈａｙｅｖ ａｎｄ Ａｎｔｏｐｏｌｓｋｙ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００１，５７，４９７７−４９８６を参照。加えて、塩基性加水分解をより容易に受けるｓｙｎ−１，２−アセトキシリン酸基を介してオリゴヌクレオチドが固相担体へ結合している場合、オリゴヌクレオチドはユニバーサル担体からより穏和な反応条件下で切断されうることが報告されている。Ｇｕｚａｅｖ，Ａ．Ｌ； Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３，１２５，２３８０を参照。
【００９３】
一部の場合には、ヌクレオシド中に天然に存在する糖部分がヘキソース糖、多環式ヘテロアルキル環、またはシクロヘキセニル基で置換される。一部の場合には、ヘキソース糖はアロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、またはその誘導体である。好ましい一実施形態では、ヘキソースはＤ−ヘキソースである。好ましい一実施形態では、ヘキソース糖はグルコースまたはマンノースである。一部の場合には、多環式ヘテロアルキル基は環に１個の酸素原子を含む二環である。一部の場合には、多環式ヘテロアルキル基はビシクロ[２．２．１］ヘプタン、ビシクロ[３．２．１］オクタン、またはビシクロ[３．３．１］ノナンである。一部の場合には、糖部分はＡ’またはＡ"によって表され、およびＡ２、Ｙ、Ｒ５、およびｘの定義は式ＩＩのオリゴヌクレオチドについて下に記載されるものと一致する：
【化１】
2008504840.tif 000034
【００９４】
一部の場合には、糖部分は下記より成る群から選択される非天然糖で置換され；
【化２】
2008504840.tif 000035
ここで
Ｒ１はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ５はそれぞれ独立してＨを表し、またはＲ５およびＲ１２を合わせた場合に４、５、６、７、または８員環を形成し；またはＲ５およびＲ６を合わせた場合に結合を形成し；
Ｒ６はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表し；またはＲ５およびＲ６を合わせた場合に結合を形成し；またはＲ６およびＲ８を合わせた場合に結合を形成し；
Ｒ７、Ｒ９、およびＲ１１はそれぞれ独立してＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表し；
Ｒ８はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表し；またはＲ６およびＲ８を合わせた場合に結合を形成し；またはＲ８およびＲ１０を合わせた場合に結合を形成し
Ｒ１０はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表し；またはＲ８およびＲ１０を合わせた場合に結合を形成し；またはＲ１０およびＲ１２を合わせた場合に結合を形成し；
Ｒ１２はそれぞれ独立してＨを表し、またはＲ５およびＲ１２を合わせた場合に４−、５−、６−、７−、または８員環を形成し；またはＲ１０およびＲ１２を合わせた場合に結合を形成し；
Ｒ２５はそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アルコキシル、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ２６はそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルコキシル、アルキル、アルキルアミノ、アリール、アラルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２７、−ＣＯ２Ｒ２７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２７、−Ｎ（Ｒ２７）ＣＯＲ２７、または−Ｎ（Ｒ２７）ＣＯ２Ｒ２７を表し；
Ｒ２７はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
ｗ１はそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、または６を表し；
ｘはそれぞれ独立して０、１、２、または３を表し；および
ＹおよびＡ２の定義は式ＩＩのオリゴヌクレオチドについて下記に示すのと同一である。
【００９５】
本発明の化合物の治療的使用
本発明の好ましい一実施形態では、非リン酸結合は、オリゴヌクレオチド治療剤または診断剤の薬物動態学的特性を高める。そのような薬物動態学的特性の改善は、アンチセンス化合物の血清タンパク質との結合の増加、アンチセンス化合物の血漿濃度の増大、組織分布の増加、アンチセンス化合物の血清タンパク質との結合能力の増加、および半減期の増大を含む。
【００９６】
本発明は、血清中でのオリゴヌクレオチドの濃度を高めるための方法を提供する。そのような方法によると、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチドが合成されおよび次いで血清に添加される。
【００９７】
本発明はさらに、オリゴヌクレオチドに対する血清の容量を高めるための方法を提供する。そのような方法によると、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチドが合成されおよび次いで血清に添加される。
【００９８】
本発明はまた、血管系の一部へのオリゴヌクレオチドの結合を増加させるための方法を提供する。そのような方法によると、一部が循環する血清中に、および一部が血管系の非循環部分に存在する血管タンパク質が選択される。次いで、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチドが合成されおよび次いで血清に添加される。一部の場合には、血管系の一部へのオリゴヌクレオチドの結合を増加させるため、オリゴヌクレオチドはリガンドと複合化されうる。
【００９９】
本発明はさらに、細胞におけるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進するための方法を提供する。そのような方法によると、細胞タンパク質が選択される。この細胞タンパク質は、細胞膜上に存在しおよび一部が細胞外へ伸長しそのためこの細胞タンパク質の一部が細胞膜の外側へ伸長するタンパク質である。次に、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチドが合成されおよび次いで、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進すべき細胞と接触させられる。
【０１００】
本発明はまた、生物を本発明のオリゴヌクレオチドと接触させることを含み前記オリゴヌクレオチドが非リン酸結合を含む、細胞におけるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増加させるための方法を提供する。
【０１０１】
本発明の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされるタンパク質は血清タンパク質である。オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質は免疫グロブリン（抗体）であることが好ましい。好ましい免疫グロブリンは、免疫グロブリンＧおよび免疫グロブリンＭである。免疫グロブリンは、脊椎動物の血清および組織中に現れることが知られている。
【０１０２】
本発明の別の一実施形態では、オリゴヌクレオチドによって標的にされる血清タンパク質は、リポタンパク質である。リポタンパク質は、一般的に２０，０００を上回る分子量を有し脂質を持ちおよび特異的細胞表面受容体によって認識される血中タンパク質である。血清中でのリポタンパク質との結合はまず、半減期および分布といった薬物動態学的パラメーターを増加させる。次の考慮すべき事項は、リポタンパク質が受容体媒介エンドサイトーシスを介して細胞取り込みを増大させる能力である。
【０１０３】
さらに別の一実施形態では、オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質は、α−２−マクログロブリンである。さらに別の一実施形態では、オリゴヌクレオチド化合物によって標的にされる血清タンパク質は、α−１−糖タンパク質である。
【０１０４】
遺伝子および疾患
本発明の一態様は、望ましくない細胞増殖、たとえば、悪性または非悪性細胞増殖の危険があるかまたはそれに罹患した対象を治療する方法に関する。本方法は、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；およびそのオリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１０５】
好ましい一実施形態では、遺伝子は成長因子または成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ、たとえば、タンパク質チロシン、セリンまたはスレオニンキナーゼ遺伝子、アダプタータンパク質遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、または転写因子をコードする遺伝子である。
【０１０６】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＤＧＦベータ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＤＧＦベータ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、睾丸癌および肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０７】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥｒｂ−Ｂ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥｒｂ−Ｂ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＳｒｃ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＳｒｃ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１０９】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＣＲＫ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＣＲＫ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌および肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１０】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＧＲＢ２遺伝子を発現抑制し、およびしたがって望ましくないＧＲＢ２発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１１】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＲＡＳ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＲＡＳ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、膵癌、大腸癌および肺癌、および慢性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１２】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＥＫＫ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＥＫＫ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、扁平上皮細胞癌、黒色腫または白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１３】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＪＮＫ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＪＮＫ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、膵癌または乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１４】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＲＡＦ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＲＡＦ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌または白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１５】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥｒｋ１／２遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥｒｋ１／２発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１６】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＣＮＡ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１７】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＹＢ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＹＢ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌または慢性骨髄性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｃ−ＭＹＣ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｃ−ＭＹＣ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、バーキットリンパ腫または神経芽細胞腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１１９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＪＵＮ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＪＵＮ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、卵巣癌、前立腺癌または乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２０】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＦＯＳ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＦＯＳ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、皮膚癌または前立腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＢＣＬ−２遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＢＣＬ−２発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌または前立腺癌または非ホジキンリンパ腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサイクリンＤ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサイクリンＤ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２３】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＶＥＧＦ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＶＥＧＦ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２４】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥＧＦＲ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥＧＦＲ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２５】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサイクリンＡ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサイクリンＡ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌および子宮頸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２６】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサイクリンＥ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサイクリンＥ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肺癌および乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２７】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＷＮＴ−１遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＷＮＴ−１発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、基底細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２８】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はベータ−カテニン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないベータ−カテニン発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、腺癌または肝細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１２９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｃ−ＭＥＴ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｃ−ＭＥＴ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肝細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３０】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＫＣ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＫＣ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＮＦＫＢ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＮＦＫＢ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＳＴＡＴ３遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＳＴＡＴ３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、前立腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３３】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はサバイビン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないサバイビン発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、子宮頸癌または膵癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３４】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＨｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＨｅｒ２／Ｎｅｕ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３５】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はトポイソメラーゼＩ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないトポイソメラーゼＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、卵巣癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３６】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はトポイソメラーゼＩＩアルファ遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないトポイソメラーゼＩＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌および大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３７】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ７３遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ７３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、結腸直腸腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肝癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１３９】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ２７（ＫＩＰ１）発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、肝癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４０】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＰＭ１Ｄ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＰＭ１Ｄ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＲＡＳ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＲＡＳ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４２】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はカベオリンＩ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないカベオリンＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４３】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＩＢ Ｉ遺伝子における突然変異を発現抑制し、および したがって、望ましくないＭＩＢ Ｉ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、男性乳癌（ＭＢＣ）を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４４】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＴＡＩ遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＴＡＩ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、卵巣癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４５】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭ６８遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭ６８発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、食道、胃、大腸、および直腸のヒト腺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４６】
好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、アポトーシス活性を促進する方法として化学療法と組み合わせて用いることができる。
【０１４７】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ５３腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐ５３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、胆嚢癌、膵癌および肺癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４８】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＤＮ−ｐ６３発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１４９】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はｐＲｂ腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないｐＲｂ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、口腔扁平上皮細胞癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５０】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＡＰＣ１腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＡＰＣ１発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、大腸癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＢＲＣＡ１腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＢＲＣＡ１発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、乳癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＴＥＮ腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＴＥＮ発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、過誤腫、神経膠腫、および前立腺癌および子宮体癌を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５３】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＭＬＬ融合遺伝子、たとえばＭＬＬ−ＡＦ９を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＭＬＬ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、急性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５４】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、急性および慢性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５５】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、小児急性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５６】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、ユーイング肉腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５７】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、粘液性脂肪肉腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５８】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、粘液性脂肪肉腫を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１５９】
別の好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子発現によって特徴づけられる疾患、たとえば、急性白血病を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１６０】
本発明の別の一態様は、血管新生阻害によって利益を受ける可能性がある疾患または障害、たとえば、癌の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法に関する。本方法は、血管新生を媒介する遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１６１】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はアルファｖ−インテグリン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないアルファＶインテグリンによって特徴づけられる疾患、たとえば、脳腫瘍または上皮起源の腫瘍を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１６２】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＦｌｔ−１受容体遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないＦｌｔ−１受容体によって特徴づけられる疾患、たとえば、癌および関節リウマチを有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１６３】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はチューブリン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないチューブリンによって特徴づけられる疾患、たとえば、癌および網膜血管新生を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１６４】
好ましい一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はチューブリン遺伝子を発現抑制し、およびしたがって、望ましくないチューブリンによって特徴づけられる疾患、たとえば、癌および網膜血管新生を有するかまたはその危険がある対象を治療するのに用いることができる。
【０１６５】
本発明の別の一態様は、ウイルスに感染したかまたはウイルス感染に伴う障害または疾患の危険があるかまたはそれに罹患した対象を治療する方法に関する。本方法は、たとえば侵入または増殖のようなウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１６６】
したがって、本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に感染したかまたはＨＰＶに媒介される疾患、たとえば子宮頸癌の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。ＨＰＶは子宮頸癌の９５％と関連し、およびしたがって抗ウイルス治療はこれらの癌およびウイルス感染の他の症状を治療するための魅力的な方法である。
【０１６７】
好ましい一実施形態では、ＨＰＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＰＶ遺伝子はＥ２、Ｅ６、またはＥ７の群のうちの１つである。
【０１６８】
好ましい一実施形態では、ＨＰＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１６９】
本発明はまた、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染したかまたはＨＩＶに媒介される疾患、たとえば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＨＩＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＩＶ遺伝子はＣＣＲ５、Ｇａｇ、またはＲｅｖである。好ましい一実施形態では、ＨＩＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、遺伝子はＣＤ４またはＴｓｇ１０１である。
【０１７０】
本発明はまた、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染したかまたはＨＢＶに媒介される疾患、たとえば、肝硬変および肝細胞癌の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＨＢＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、標的とされるＨＢＶ遺伝子は、ＨＢＶコアタンパク質の尾部領域、プレｃｒｅｇｉｏｕｓ（プレｃ）領域、またはｃｒｅｇｉｏｕｓ（ｃ）領域の群のうち１つをコードする。別の好ましい一実施形態では、標的にされるＨＢＶ−ＲＮＡ配列はポリ（Ａ）尾部から成る。好ましい実施形態では、ＨＢＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７１】
本発明はまた、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）に感染したかまたはＨＡＶに媒介される疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＨＡＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７２】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染したかまたはＨＣＶに媒介される疾患、たとえば、肝硬変の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＨＣＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＣＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７３】
本発明はまた、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、またはＨ型肝炎を含む肝炎ウイルス株の群のいずれかに感染した患者、または任意のこれらの肝炎株に媒介される疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、またはＨ型肝炎遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧまたはＨ型肝炎複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７４】
本発明の方法はまた、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染したかまたはＲＳＶに媒介される疾患、たとえば乳児下気道感染症および小児喘息、肺炎およびたとえば高齢者における他の合併症、の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＲＳＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、標的とされるＨＢＶ遺伝子は遺伝子Ｎ、Ｌ、またはＰの群のうち１つをコードする。好ましい一実施形態では、ＲＳＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７５】
本発明の方法は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に感染したかまたはＨＳＶに媒介される疾患、たとえば性器ヘルペスおよびヘルペスおよび主に免疫低下患者における生命に関わるまたは視覚障害を生じる疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＨＳＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、標的とされるＨＳＶ遺伝子はＤＮＡポリメラーゼまたはヘリカーゼ−プライマーゼをコードする。好ましい一実施形態では、ＨＳＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７６】
本発明はまた、ヘルペスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に感染したかまたはＣＭＶに媒介される疾患、たとえば、先天性ウイルス感染、および免疫低下患者における合併症の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＣＭＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＣＭＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７７】
本発明の方法はまた、ヘルペス・エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に感染したかまたはＥＢＶに媒介される疾患、たとえば、ＮＫ／Ｔ−細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキン病の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、ＥＢＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＥＢＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７８】
本発明の方法はまた、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、別名ヒトヘルペスウイルス８に感染した患者、またはＫＳＨＶに媒介される疾患、たとえば、カポジ肉腫、多中心性キャッスルマン病およびＡＩＤＳ関連原発性滲出性リンパ腫の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ＫＳＨＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＫＳＨＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１７９】
本発明はまた、ＪＣウイルス（ＪＣＶ）に感染した患者またはこのウイルスに関連する疾患または障害、たとえば、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、ＪＣＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい実施形態では、ＪＣＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８０】
本発明の方法はまた、ミクソウイルスに感染したかまたはミクソウイルスに媒介される疾患、たとえば、インフルエンザの危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ミクソウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ミクソウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８１】
本発明の方法はまた、ライノウイルスに感染したかまたはライノウイルスに媒介される疾患、たとえば、感冒の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ライノウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい実施形態では、ライノウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８２】
本発明の方法はまた、コロナウイルスに感染したかまたはコロナウイルスに媒介される疾患、たとえば、感冒の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、コロナウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい実施形態では、コロナウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８３】
本発明の方法はまた、西ナイル・フラビウイルスに感染したかまたは西ナイルウイルスに媒介される疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、西ナイルウイルス遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、西ナイルウイルス遺伝子はＥ、ＮＳ３、またはＮＳ５を含む群のうちの１つである。好ましい一実施形態では、西ナイルウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８４】
本発明の方法はまた、セントルイス脳炎フラビウイルスに感染したかまたはこのウイルスに関連する疾患、たとえば、ウイルス性出血熱または神経疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、セントルイス脳炎遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、セントルイス脳炎ウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８５】
本発明の方法はまた、ダニ媒介脳炎フラビウイルスに感染したかまたはダニ媒介脳炎ウイルスに媒介される疾患、たとえば、ウイルス性出血熱および神経疾患の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ダニ媒介脳炎ウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８６】
本発明の方法はまた、一般的にウイルス性出血熱および神経疾患を結果として生じるマレー渓谷脳炎フラビウイルスに感染した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、マレー渓谷脳炎ウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８７】
本発明はまた、デング・フラビウイルスに感染した患者、またはこのウイルスに関連する疾患または障害、たとえば、デング出血熱を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、デングウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、デングウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８８】
本発明の方法はまた、サルウイルス４０（ＳＶ４０）に感染したかまたはＳＶ４０に媒介される疾患、たとえば、腫瘍形成の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ＳＶ４０遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＳＶ４０複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１８９】
本発明はまた、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）に感染した患者、またはこのウイルスに関連する疾患または障害、たとえば、白血病およびミエロパシーを治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、ＨＴＬＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、ＨＴＬＶ１遺伝子はＴａｘ転写活性化因子である。好ましい一実施形態では、ＨＴＬＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９０】
本発明の方法はまた、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ−ＭｕＬＶ）に感染したかまたはＭｏ−ＭｕＬＶに媒介される疾患、たとえば、Ｔ細胞白血病の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、Ｍｏ−ＭｕＬＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｏ−ＭｕＬＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９１】
本発明の方法はまた、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）に感染したかまたはＥＭＣＶに媒介される疾患、たとえば心筋炎の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。ＥＭＣＶはマウスおよびブタで心筋炎に繋がり、およびヒト心筋細胞を感染させる能力がある。このウイルスは、したがって、異種移植を受ける患者にとって重要である。好ましい一実施形態では、ＥＭＣＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＥＭＣＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９２】
本発明はまた、麻疹ウイルス（ＭＶ）に感染したかまたはＭＶに媒介される疾患、たとえば、麻疹の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＭＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＭＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９３】
本発明はまた、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）に感染したかまたはＶＺＶに媒介される疾患、たとえば水痘または帯状疱疹の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＶＺＶ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ＶＺＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９４】
本発明はまた、アデノウイルスに感染したかまたはアデノウイルスに媒介される疾患、たとえば気道感染の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、アデノウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、アデノウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９５】
本発明は、黄熱ウイルス（ＹＦＶ）に感染したかまたはＹＦＶに媒介される疾患、たとえば気道感染の危険があるかまたはそれに罹患した患者を治療する方法を含む。好ましい一実施形態では、ＹＦＶ遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、好ましい遺伝子はＥ、ＮＳ２Ａ、またはＮＳ３遺伝子を含む群のうちの１つである。好ましい一実施形態では、ＹＦＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９６】
本発明の方法はまた、ポリオウイルスに感染したかまたはポリオウイルスに媒介される疾患、たとえば、ポリオの危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ポリオウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ポリオウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９７】
本発明の方法はまた、ポックスウイルスに感染したかまたはポックスウイルスに媒介される疾患、たとえば天然痘の危険があるかまたはそれに罹患した患者の治療を提供する。好ましい一実施形態では、ポックスウイルス遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、ポックスウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０１９８】
別の一態様では、本発明は、病原体、たとえば、細菌、アメーバ、寄生虫、または真菌病原体に感染した対象を治療する方法を扱う。本方法は、病原体遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。
【０１９９】
標的遺伝子は、増殖、細胞壁合成、タンパク質合成、転写、エネルギー代謝、たとえば、クレブス回路、または毒素産生に関与するものでありうる。したがって、本発明は、マラリアを引き起こすマラリア原虫に感染した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態では、マラリア原虫遺伝子の発現が低減される。別の好ましい一実施形態では、遺伝子は頂端膜抗原１（ＡＭＡ１）である。好ましい一実施形態では、マラリア原虫複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２００】
本発明はまた、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえばブルーリ潰瘍を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０１】
本発明はまた、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば結核を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０２】
本発明はまた、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえばハンセン病を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０３】
本発明はまた、細菌Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば皮膚および粘膜の感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０４】
本発明はまた、細菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば肺炎または小児下気道感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０５】
本発明はまた、細菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば連鎖球菌性扁桃腺炎または猩紅熱を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０６】
本発明はまた、細菌Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば肺炎または小児下気道感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０７】
本発明はまた、細菌Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染した患者、またはこの病原体に関連する疾患または障害、たとえば肺炎または小児下気道感染を治療するための方法を含む。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ遺伝子の発現が低減される。好ましい一実施形態では、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低減される。
【０２０８】
本発明の別の一態様は、望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患または障害、たとえば炎症性疾患または障害、または自己免疫疾患または障害の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法に関する。本方法は、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、虚血または再灌流傷害、たとえば、急性心筋梗塞に随伴する虚血または再灌流傷害、不安定狭心症、心肺バイパス、外科的介入、たとえば血管形成術、たとえば経皮経管冠動脈形成術、移植臓器または組織、たとえば移植心または血管組織に対する反応；または血栓溶解である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、再狭窄、たとえば、外科的介入、たとえば血管形成術、たとえば、経皮経管冠動脈形成術に随伴する再狭窄である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は炎症性腸疾患、たとえば、クローン病または潰瘍性大腸炎である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、感染または傷害に随伴する炎症である。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、たとえばＩＩ型糖尿病、関節炎、たとえば、関節リウマチまたは乾癬性関節炎である。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、インテグリンまたはその共リガンド、たとえば、ＶＬＡ４、ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭを発現抑制する。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、セレクチンまたはその共リガンド、たとえば、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ）、Ｉ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖タンパク質−１（ＰＳＧＬ−１）を発現抑制する。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、補体系の成分、たとえば、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ３コンバターゼ、Ｃ５コンバターゼを発現抑制する。
【０２０９】
特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、ケモカインまたはその受容体、たとえば、ＴＮＦＩ、ＴＮＦＪ、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１Ｊ、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦＲＩ、ＴＮＦＲＩＩ、ＩｇＥ、ＳＣＹＡ１１、ＣＣＲ３を発現抑制する。
【０２１０】
別の実施形態ではオリゴヌクレオチド剤は、ＧＣＳＦ、Ｇｒｏ１、Ｇｒｏ２、Ｇｒｏ３、ＰＦ４、ＭＩＧ、胞体突起塩基性タンパク質（ＰＰＢＰ）、ＭＩＰ−１Ｉ、ＭＩＰ−１Ｊ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＣＭＢＫＲ１、ＣＭＢＫＲ２、ＣＭＢＫＲ３、ＣＭＢＫＲ５、ＡＩＦ−１、Ｉ−３０９を発現抑制する。
【０２１１】
本発明の別の一態様は、急性疼痛または慢性疼痛の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法を扱う。本方法は、疼痛の処理を媒介する遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はイオンチャンネルの成分を発現抑制する。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は神経伝達物質受容体またはリガンドを発現抑制する。
【０２１２】
本発明の別の一態様は、神経疾患または障害の危険があるかまたはそれに罹患した対象、たとえばヒトを治療する方法に関する。本方法は、神経疾患または障害を媒介する遺伝子と相同でありおよびたとえば切断によってその遺伝子を発現抑制できることを特徴とする、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒト対象へ投与することを含む好ましい一実施形態では、疾患または障害はアルツハイマー病またはパーキンソン病である。特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、アミロイドファミリー遺伝子、たとえばＡＰＰ；プレセニリン遺伝子、たとえばＰＳＥＮ１およびＰＳＥＮ２、またはＩ−シヌクレインを発現抑制する。好ましい一実施形態では、疾患または障害は、神経変性トリヌクレオチド反復障害、たとえば、ハンチントン病、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症または脊髄小脳変性症、たとえば、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３（マシャド・ジョセフ病）、ＳＣＡ７またはＳＣＡ８である。
【０２１３】
特に好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤はＨＤ、ＤＲＰＬＡ、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ１、ＣＡＣＮＬ１Ａ４、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８を発現抑制する。
【０２１４】
ヘテロ接合性の消失（ＬＯＨ）は、ＬＯＨの領域のたとえば遺伝子の配列について、ヘミ接合性を結果として生じうる。これは、正常状態細胞と疾患状態細胞、たとえば癌細胞との間の重大な遺伝的差異を結果として生じる可能性があり、および正常状態細胞と疾患状態細胞、たとえば癌細胞との間の有用な差を提供する。この差は、遺伝子または他の配列が正倍数細胞ではヘテロ接合性であるがしかしＬＯＨを有する細胞ではヘミ接合性であるために起こりうる。ＬＯＨの領域はしばしば、その遺伝子の消失が望ましくない増殖を促進する遺伝子、たとえば腫瘍抑制因子遺伝子、および、たとえば他の遺伝子、一部の場合には正常な機能たとえば増殖に必須である遺伝子を含む他の配列を含む。本発明の方法は、一部が、本発明のオリゴヌクレオチド剤を用いた、必須遺伝子の１つの対立遺伝子の特異的切断またはサイレンシングに依存する。オリゴヌクレオチド剤は、ＬＯＨを有する細胞に見られる必須遺伝子の単一の対立遺伝子を標的にするがしかしＬＯＨを示さない細胞に存在するもう一方の対立遺伝子を発現抑制しないように選択される。本質的に、そのオリゴヌクレオチド剤は２つの対立遺伝子を識別し、選択された対立遺伝子を優先的に発現抑制する。本質的に、多形、たとえばＬＯＨに影響される必須遺伝子のＳＮＰが、ＬＯＨを有する細胞、たとえば、ＬＯＨを有する癌細胞によって特徴づけられる疾患についての標的として用いられる。たとえば、当業者は、腫瘍抑制因子遺伝子に近接しおよび腫瘍抑制因子遺伝子を含むＬＯＨ領域内にある、必須遺伝子を同定できる。ヒトＲＮＡポリメラーゼＩＩの大サブユニットをコードする遺伝子ＰＯＬＲ２Ａは、腫瘍抑制因子遺伝子ｐ５３の近傍に位置する遺伝子であるが、そのような遺伝子である。それはしばしば癌細胞ではＬＯＨの領域内に存在する。ＬＯＨ領域内に存在しおよび多数の癌細胞型では消失している他の遺伝子は、複製タンパク質Ａ７０−ｋＤａサブユニット、複製タンパク質Ａ３２−ｋＤ、リボヌクレオチドレダクターゼ、チミジンシンターゼ、ＴＡＴＡ関連因子２Ｈ、リボソームタンパク質Ｓ１４、真核開始因子５Ａ、アラニルｔＲＮＡシンターゼ、システイニルｔＲＮＡシンターゼ、ＮａＫＡＴＰアーゼ、アルファ−１サブユニット、およびトランスフェリン受容体を含む群を含む。
【０２１５】
したがって、本発明の別の一態様は、ＬＯＨによって特徴づけられる疾患、たとえば癌を治療する方法に関する。本方法は必要に応じて、ＬＯＨの領域中の遺伝子の対立遺伝子の遺伝子型を決定すること、および好ましくは正常細胞中のその遺伝子の両方の対立遺伝子の遺伝子型を決定すること；ＬＯＨ細胞にみられる対立遺伝子を優先的に切断または発現抑制する、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を提供すること；および前記オリゴヌクレオチド剤の治療上有効な用量を、対象、好ましくはヒトへ投与することを含む。
【０２１６】
本発明はまた、ここで開示される非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤、たとえば多形遺伝子の１つの対立遺伝子を優先的に発現抑制、たとえば切断できるオリゴヌクレオチド剤を含む。
【０２１７】
別の一態様では、本発明は、非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を用いて２つ以上の遺伝子を切断または発現抑制する方法を提供する。これらの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、２つ以上の遺伝子に見出される配列と十分なホモロジーを有するように選択される。たとえば、配列ＡＡＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＡＧＡＴはマウス・ラミンＢ１、ラミンＢ２、ケラチン複合体２遺伝子１およびラミンＡ／Ｃ間で保存されている。したがって、この配列を標的とするオリゴヌクレオチド剤は、その遺伝子の集合全体を効果的に発現抑制する。
【０２１８】
本発明はまた、２つ以上の遺伝子を発現抑制できる、ここで開示される非リン酸結合を含むオリゴヌクレオチド剤を含む。
【０２１９】
発明の化合物
本発明の一態様は、式Ｉ：
【化３】
2008504840.tif 000036
で表され、
Ｒ１は必要に応じて置換されたアラルキル、−Ｓｉ（Ｒ７）３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯ２Ｒ４、または−Ｃ（Ｏ）（ＮＲ８）Ｒ４であり；
Ｒ２はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ７はそれぞれ独立してアルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ５は−Ｓｉ（Ｒ７）３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＣＯ２Ｒ４、または−Ｃ（Ｏ）（ＮＲ８）Ｒ４であり；
Ｒ６は
【化４】
2008504840.tif 000037
であり；
Ｒ８はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ９はそれぞれ独立してＨまたはアルキルを表し；および
Ｉによって表される化合物の任意の立体中心での立体化学配置はＲ、Ｓ、またはこれらの配置の混合物である
ことを特徴とする化合物に関する。
【０２２０】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ１は必要に応じて置換されたアラルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ１は必要に応じて置換されたトリチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ１は
【化５】
2008504840.tif 000038
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２はＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３はアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはペンチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２７】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３はメチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２８】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４はアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２２９】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４はそれぞれ独立してメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはペンチルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３０】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４はイソプロピルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ７はアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ６は
【化６】
2008504840.tif 000039
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ６は
【化７】
2008504840.tif 000040
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３７】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであり；Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであり；およびＲ６は
【化８】
2008504840.tif 000041
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３８】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチル、およびＲ６は
【化９】
2008504840.tif 000042
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２３９】
一部の実施形態では、本発明は、
Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は
【化１０】
2008504840.tif 000043
であり、およびＲ６は
【化１１】
2008504840.tif 000044
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２４０】
一部の実施形態では、本発明は、化合物は式Ｉａ：
【化１２】
2008504840.tif 000045
によって表されることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２４１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３であり、およびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２４２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５はＳｉ（Ｒ７）３でありおよびＲ３、Ｒ４、およびＲ７はアルキルであり；Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであり；およびＲ６は
【化１３】
2008504840.tif 000046
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２４３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は必要に応じて置換されたジメトキシトリチルであり、およびＲ６は
【化１４】
2008504840.tif 000047
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２４４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はイソプロピルであり、Ｒ５はＳｉ（ＣＨ３）２−ｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ１は
【化１５】
2008504840.tif 000048
であり、およびＲ６は
【化１６】
2008504840.tif 000049
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０２４５】
本発明の別の態様は、少なくとも１つの非リン酸塩結合を有するオリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、非リン酸塩結合は、ホスホン酸塩である。好ましい実施形態では、ホスホン酸塩結合は、アルキルホスホン酸塩である。ホスホン酸塩結合によって、オリゴヌクレオチドはｉｎ ｖｉｖｏで分解する傾向がより小さくなる。一部の場合には、オリゴヌクレオチドは、リガンドによって置換される。一部の場合には、リガンドはアラルキル基である。アラルキルリガンドによって、オリゴヌクレオチド化合物は、血清、肝臓、脳および目に存在するヌクレアーゼにより分解する傾向がより小さくなる。。一部の実施形態では、本発明の化合物は二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関し、ここでは、アラルキルリガンドは二本の鎖のうち一本のみと結合する。一部の実施形態では、本発明の化合物は二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関し、ここでは、少なくとも１つのアラルキルリガンドが鎖の両方に結合される。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの治療的または診断的特性を改善するために、オリゴヌクレオチドの骨格が修飾された。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの治療的または診断的特性を改善するために、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの塩基のまたは少なくとも１つの糖が修飾された。オリゴヌクレオチドの二本の鎖は、相補的であるかまたは部分的に相補的である。いずれかの鎖または両方の鎖は、キメラオリゴヌクレオチドを含んでもよい。一部の場合には、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ剤である。
【０２４６】
ｓｉＲＮＡ剤は標的遺伝子に対する十分な相同性の領域を含み、およびヌクレオチドに関して十分な長さであり、このためｓｉＲＮＡ剤またはその断片は、標的遺伝子のダウンレギュレーションを仲介することができる。「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」の語は、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチド代用物の場合には、１つ以上の位置にての修飾ヌクレオチド、または代用物置換部分ともいうことができると理解される。したがって、ｓｉＲＮＡ剤は、標的ＲＮＡに対して少なくとも部分的に相補的な領域であるか、またはその領域を含む。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡ剤は、標的ＲＮＡに対して完全に相補的である。ｓｉＲＮＡ剤と標的の間に完全な相補性が存在する必要はないが、しかし、対応は、ｓｉＲＮＡ剤またはその切断生成物が、たとえば標的ＲＮＡのＲＮＡｉ切断による、配列特異的サイレンシングを導くことができるには十分でなければならない。相補性、すなわち標的鎖との相同性の程度は、アンチセンス鎖において最も重要である。完全な相補性が、特にアンチセンス鎖において、多くの場合で望まれる一方、いくつかの実施形態は、１つ以上しかし好ましくは６、５、４、３、２個またはより少数の標的ＲＮＡとの不一致を含みうる。不一致は、末端領域において最も許容され、および存在する場合、好ましくは末端領域またはたとえば５’および／または３’末端の６、５、４、または３個のヌクレオチド中の領域に存在する。センス鎖は、アンチセンス鎖との相補性を、分子の全体の二本鎖特徴を維持するのに十分なだけ必要とする。
【０２４７】
加えて、ｓｉＲＮＡ剤は、多くの場合修飾されるかまたはヌクレオシド代用物を含む。ｓｉＲＮＡ剤の一本鎖領域は、多くの場合修飾されるか、または代用物、たとえば、ヘアピン構造対になってない単数または複数の領域、たとえば、２つの相補的領域を連結する領域を含み、修飾またはヌクレオシド代用物を有しうる。ｓｉＲＮＡ剤、たとえばエキソヌクレアーゼに対する、の１つ以上の３’−または５’−末端を安定させるための、またはＲＩＳＣに進入するアンチセンスｓｉＲＮＡ剤を促進する修飾も好ましい。修正は、Ｃ３（またはＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサ（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、無塩基、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、特別なビオチン、または、ホスホラミダイトとして生じ、および別のＤＭＴ保護水酸基を有するフルオレセイン試薬を含んでよく、それによってＲＮＡ合成中の複数の結合が可能になる。
【０２４８】
ｓｉＲＮＡ剤は、（Ｄｉｃｅｒ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２００１．Ｎａｔｕｒｅ，４０９：３６３−３６６）によって切断でき、およびＲＩＳＣ（ＲＮＡｉ誘発サイレンシング複合体）へ進入できる）インターフェロン反応を誘発するのに十分長い分子；および、インターフェロン反応を誘発しないのに十分短い分子（この分子もＤｉｃｅｒによって切断でき、および／またはＲＩＳＣへ進入することができる）、たとえば、ＲＩＳＣへの進入を許容する大きさの分子、たとえば、Ｄｉｃｅｒ切断産物に類似する分子を含む。インターフェロン反応を誘発しないたのに十分短い分子は、本明細書中では、ｓｉＲＮＡ剤またはより短いｉＲＮＡ剤という。用いられる「ｓｉＲＮＡ剤またはより短いｓｉＲＮＡ剤」は、ヒト細胞中において有害なインターフェロン反応を誘発しないのに十分に短いｓｉＲＮＡ剤、たとえば、６０個未満のしかし好ましくは５０、４０または、３０個未満のヌクレオチド対の二重鎖領域を有するｓｉＲＮＡ剤をいう。ｓｉＲＮＡ剤またはその切断生成物は、たとえば、標的ＲＮＡ、好ましくは内因性または病原性標的ＲＮＡに対するＲＮＡｉを誘発することによって、標的遺伝子をダウンレギュレートすることができる。
【０２４９】
ｓｉＲＮＡ剤の各鎖は、長さ３０、２５、２４、２３、２２、２１、または２０以下のヌクレオチドでありえる。鎖は好ましくは少なくとも長さ１９ヌクレオチドである。たとえば、各鎖が、長さ２１および２５ヌクレオチドの間でありうる。好ましいｓｉＲＮＡ剤は、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、または２５のヌクレオチド対の二重鎖領域、および２〜３個のヌクレオチドの１個または２個の３’位オーバーハングを有する。
【０２５０】
標的ＲＮＡに対する相同性および標的遺伝子をダウンレギュレートする能力に加えて、ｓｉＲＮＡ剤は、好ましくは以下の特性のうち１つ以上を有する：
（１）ｓｉＲＮＡ剤は、非常に多数の、またはすべてのヌクレオシドに対する修飾にもかかわらず、正しい塩基対を形成することができるべく、および、たとえば標的ＲＮＡの切断による、標的のダウンレギュレートを可能にするのに十分な相同性標的ＲＮＡを有する二重構造を形成するべく、適当な三次元フレームワークの塩基（または修飾塩基）を示すことができるアンチセンス鎖を有する。
【０２５１】
（２）ｓｉＲＮＡ剤は、非常に多数の、またはすべてのヌクレオシドに対する修飾にもかかわらず、「ＲＮＡ様」特性を依然として有する、すなわちｓｉＲＮＡ剤は、、リボヌクレオチド系含有物のＲＮＡ分子の全体の構造的、化学的および物理的な特性を、たとえ排他的でなくとも、または、部分的であれ備える。たとえば、ｓｉＲＮＡ剤は、ヌクレオチド糖のすべてがたとえば２’位水酸基の代わりに２’位フルオロを含む、たとえばセンスおよび／またはアンチセンス鎖を含みうる。このデオキシリボヌクレオチド含有剤は、依然としてＲＮＡ様特性を示すと予測できる。理論に縛られることを望まない一方、電気陰性なフッ素は、リボースのＣ２'位に結合する場合、アキシアル方向を優先する。フッ素のこの空間的優先傾向は、次に、糖がＣ３’エンド型歪みを取るよう強制できる。これは、ＲＮＡ分子に観察されるのと同一の歪み形式であり、およびＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じる。さらに、フッ素は、良好な水素結合受容体であるため、ＲＮＡ構造を安定化することが知られている水分子と同一の水素結合相互作用に参加できる。一般に、２’砂糖位の修飾された部分が、デオキシリボヌクレオチドのＨ部分よりもリボヌクレオチドのＯＨ部分により特徴的であるＨ結合に、進入できることが好ましい。好ましいｓｉＲＮＡ剤は：その糖のすべてまたは少なくとも５０、７５、８０、８５、９０または９５％においてＣ３’エンド型歪みを示す；およびＲＮＡに特徴的なＡファミリー型らせんを生じるのに十分な量の糖においてＣ３’エンド型歪みを示す；Ｃ３’エンド型歪み構造でない２０、１０、５、４、３、２またはｌ以下の糖を有する。
【０２５２】
ここで用いられる「一本鎖ｉＲＮＡ剤」は、単一の分子から成るｉＲＮＡ剤である。一本鎖ｉＲＮＡ剤は、鎖内対合によって形成される二重鎖領域を含んでもよく、たとえば、ヘアピンまたはパンハンドル構造であってもよくまたはそれを含んでもよい。一本鎖ｉＲＮＡ剤は、標的分子に対して好ましくはアンチセンスである。一本鎖ｉＲＮＡ剤は、ＲＩＳＣに進入できおよび標的ｍＲＮＡのＲＩＳＣ仲介された切断に参加できるほど十分長いべきである。一本鎖ｉＲＮＡ剤は、少なくとも長さ１４、およびより好ましくは、少なくとも１５、２０、２５、２９、３５、４０、または５０ヌクレオチドである。好ましくは、長さ２００、１００、または６０未満ヌクレオチドである。
【０２５３】
ヘアピンｉＲＮＡ剤は、少なくとも１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、または２５以上のヌクレオチド対の二重鎖領域を有する。二重鎖領域は、好ましくは長さ２００、１００または５０以下である。二重鎖領域のための好ましい範囲は、長さ１５〜３０、１７〜２３、１９〜２３、および１９〜２１のヌクレオチド対である。ヘアピンは、好ましくは３’位にて、および好ましくはヘアピンのアンチセンス側に一本鎖オーバーハングまたは対になってない末端領域を有する。好ましいオーバーハングは、長さ２〜３ヌクレオチドである。
【０２５４】
キメラオリゴヌクレオチド、または「キメラ」は、それぞれが少なくとも１個のモノマー単位、すなわち、オリゴヌクレオチド化合物の場合のヌクレオチド、から成る２個以上の化学的に明確な領域を含むオリゴヌクレオチドである。これらオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ分解に対する抵抗の増大、細胞取り込みの増大および／または標的核酸に対する結合親和性の増大を与えるようオリゴヌクレオチドが修飾される、少なくとも１つの領域を、典型的に含む。結果的に、より短いオリゴヌクレオチドでも、キメラオリゴヌクレオチドが用いられる場合は、多くの場合同等の結果を得ることができる。本発明のキメラオリゴヌクレオチドは、上述の２つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドおよび／またはオリゴヌクレオチド模倣剤の複合体構造として形成してもよい。このようなオリゴヌクレオチドは、本分野では、ハイブリッドまたはギャップマーともいわれてきた。このようなハイブリッド構造の調製を教示する代表的な米国特許は、それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許第５，０１３，８３０号；第５，１４９，７９７号；第５，２２０，００７号；第５，２５６，７７５号；第５，３６６，８７８号；第５，４０３，７１１号；第５，４９１，１３３号；第５，５６５，３５０号；第５，６２３，０６５号；第５，６５２，３５５号；第５，６５２，３５６号；第５，７００，９２２号；および第５，９５５，５８９号明細書を含むがそれらに限定されない。一部の実施形態では、キメラオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡ、またはＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡであり、ここではオリゴヌクレオチドは、長さ５から６０のヌクレオチドの間にある。
【０２５５】
説明目的のため、リガンドを有するヌクレオチドは、４つの領域：リガンド、テザー、リンカー、およびオリゴヌクレオチドに分割することができる。リガンドは、テザーおよびリンカーを介してオリゴヌクレオチドに結合される。テザーの目的は、リガンド、または構造誘導体をリンカーに共有結合することである。テザーの構造は、リガンドを結合するのに用いられる官能基によって決定される。一方、リンカーは、オリゴヌクレオチドをテザーに共有結合させる役割をする。好ましい実施形態では、リンカーは、固相合成技術に従う。それぞれの可変領域のより詳細な説明を下記に論じる：
2008504840.tif 000050
【０２５６】
リガンド
本発明では、本発明において、リガンドは、芳香族基、アラルキル基またはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、炭水化物または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルである。一部の場合では、リガンドはアラルキル基、たとえば２−アリールプロパノイル部分である。リガンドの構造特徴は、リガンドがｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも１つのタンパク質と結合するように選択される。一部の実施形態では、リガンドの構造特徴は、リガンドが血清、血管または細胞タンパク質と結合するように選択される。一部の実施形態では、リガンドの構造特徴はアルブミン、イムノグロブリン、リポタンパク質、α−２−マクログロブリンまたはα−１−グリコプロテインとの結合を促進する。
【０２５７】
多数のステロイドが本分野で公知であり、および本発明に従う。ステロイドの代表例は、コレステロール、５β−コラン酸、プロゲステロン、アルドステロン、デハイドロアルドステロン、イソアンドロステロン、エステロン、エストラジオール、エルゴステロール、デハイドロエルゴステロール、ラノステロール、コレステレン−１、ググルステロン、テストステロン、ノルテストステロン、フォルメスタン、ヒドロキシエクジソン、ケトエストリオール、コルチコステロン、ジヒドロキシプレグナノン、プレグナノン、コポーンモン、エキレニン、エキリン、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール、モクセストロール、ミタトリエネジオール、キネストラジオール、キネストロール、ヘルボル酸、プロトストラジン、クカールビタニンセドレロン、フシジン酸、シクロアルテノール、トリカロール、ユーフォル、ダマーレネジオール、パーケオール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、パラメタゾン、ベタメタゾン、コーチゾン、フルオシノニド、フルオロメトロン、ハルシノニドおよびブデソニド、または、１つ以上の水酸基、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、アルキル、カルボン酸、エステル、アミド、カルボニル、アルコキシル、または、シアノと置換されたそれらの任意の１つを含む。
【０２５８】
多数の胆汁酸が本分野で公知であり、および本発明に従う。胆汁酸はほとんどの脊椎動物の胆汁中のグリシンまたはタウリンとの複合化中に発生し、および、それらの一部は医学的用途を見いだす。したがって、いくつかの胆汁酸は、固有の薬理学的特性を理由にコレレクティクスとして用いられる（たとえばＪａｍｅｓ Ｅ． Ｆ． Ｒｅｙｎｏｌｄｓ （編集者） Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ， ３０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｇｏｎ（１９９３）， １３４１頁を参照）。胆汁酸の代表例は、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸で、タウロデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、および、ケノデオキシコール酸を含む。本発明に従う追加的な胆汁酸は、米国特許第５，６４１，７６７号；５，６５６，２７７号；第５，６１０，１５１号；第５，４２８，１８２号；および第３，９１０，８８８号に記載されているものを含む。
【０２５９】
多数の脂質が本分野で公知であり、および本発明に従う。脂質の代表例は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、トリアシルグリセロール、ホスホアシルグリセロール、スフィンゴ脂質、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セスターテルペン、トリテルペンおよびテトラテルペンを含む。
【０２６０】
多数の芳香族化合物が本分野で公知であり、および本発明に従う。芳香族化合物の代表例は、必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナチリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンジソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、テトラゾイルおよびフラニルを含む。
【０２６１】
多数の炭水化物が本分野で公知であり、および本発明に従う。炭水化物の代表例は、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、ブドウ糖、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースおよびタロース、または、両者間に任意の１，４グリコシド結合を介して形成した二糖類または三糖類を含む。一部の場合には、炭水化物は、ヘキソースまたはペントースである。
【０２６２】
多数の多環式化合物が本分野で公知であり、および本発明に従う。多環式化合物の代表例は、第１および第２の環が、Ｏ、ＮまたはＳより成る群から選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含む、独立した３、４、５、または６員の飽和または不飽和炭素環である二環式化合物を含む。一部の場合には、第一の環が芳香環である。一部の場合には、第二の環が芳香環である。一部の場合には、両方の環は、飽和している。一部の場合には、第一の環は、ヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第二の環は、ヘテロ原子を含む。一部の場合には、第一の環は、窒素原子を含む。一部の場合には、第二の環は、窒素原子を含む。一部の場合には多環式化合物は、第１、第２および第３の環が、Ｏ、ＮまたはＳより成る群から選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含む、独立した３、４、５、または６員の飽和または不飽和炭素環である三環式化合物である。一部の場合には、第一の環は、芳香環である。一部の場合には、第二の環は、芳香環である。一部の場合には、第三の環は、芳香環である。一部の場合には、３つの環はすべて飽和している。一部の場合には、第一の環は、ヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第二の環は、ヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第三の環は、ヘテロ原子を含まない。一部の場合には、第一の環は、窒素原子を含む。一部の場合には、第二の環は、窒素原子を含む。一部の場合には、第三の環は、窒素原子を含む。一部の場合には、多環式化合物は、架橋された多環式化合物である。一部の場合には、多環式化合物は、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［３．２．１］オクタン、ビシクロ［３．２．２］ノナン、またはビシクロ［３．３．１］ノナンである。
【０２６３】
多数のクラウンエーテルが本分野で公知であり、および本発明に従う。クラウンエーテルは、それぞれが２つ以上の炭素原子によって隣と分離された４〜２０個の酸素原子を含む大環状、ポリエーテル、中性の化合物である。大環状ポリエーテルは、アルカリ金属および他の金属およびアンモニウム塩の塩類との安定した複合体を形成することが見出されてきた。“Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ ｐｏｌｙｅｔｈｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ”， Ｃ．Ｊ．Ｐｅｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｅｄ．，Ｖｏｌ．１１，ｐａｇｅ １６，（１９７２）および米国特許第３，５６２，２９５号明細書および第３，６８７，９７８号明細書。大環状ポリエーテルのステレオモデルがクラウン様の外観を与えるため、Ｎ−クラウン−Ｍポリエーテルとして一般的に指定され、ここでＮはポリエーテル環の原子の総数でありおよびＭはポリエーテル環の酸素原子の数である。酸化エチレン（［１２］−クラウン−４）および酸化プロピレン（［１６］−クラウン−４）の環状四量体から６０員ポリエーテル環（ジベンゾ［６０］−クラウン−２０）の大きさの範囲にわたるクラウンポリエーテルが報告されてきた。好ましいクラウンエーテルは、１２−クラウン−４、１５−クラウン−５、および１８−クラウン−６を含む。
【０２６４】
多数のオリゴヌクレオチド干渉物質が本分野で公知であり、および本発明に従う。干渉物質の１種類は、二重鎖ＤＮＡと非共有結合し、およびＤＮＡの二重らせんの塩基対の間に挿入される平坦な分子を特徴とするＤＮＡ干渉物質である。干渉物質の代表例は、ｐ−カルボキシメチジウム、ｐ−カルボキシエチジウム、アクリジン、およびエリプチシンを含む。
【０２６５】
多数のオリゴヌクレオチド切断剤分子が本分野で公知であり、および本発明に従う。切断剤分子は、オリゴヌクレオチド鎖を切断することができる化合物である。ブレオマイシン、グリコペプチド抗生物質が、鉄イオンおよび分子中酸素の存在に依存して、反応中のＤＮＡを結合しおよび切断することは公知である「Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ： Ｃｈｅｍｉｃａｌ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ」； Ｈｅｃｈｔ，Ｓ．Ｍ．，Ｅｄ．； Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９； Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ，Ｅ．Ａ．； Ｐｅｉｓａｃｈ，Ｊ．； Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」１９７８，１７，２７４０．Ｂｕｒｇｅｒ，Ｒ．Ｍ．； Ｐｅｉｓａｃｈ，Ｊ； Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｂ．「Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」１９８１，２８，７１５； ａｎｄ Ｌｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．； Ｓｉｍ，Ｓ．Ｆ．「Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．」１９７７，７７，１１５０。制癌薬ストレプトニグリンも、酸素および第一銅イオンを用いて、ＤＮＡの一本鎖の分断を引き起こすことができる。Ｃｏｎｅ，Ｒ； Ｈａｓａｎ，Ｓ．Ｋ．； Ｌｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．； Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．Ｒ．「Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」１９７６，５４，２１９。近年、１〜１０フェナントロリン−第一銅複合体が、酸素の存在時にＤＮＡを切断することが示されてきた。Ｓｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｓ．；Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｒ．；Ｄ’Ａｕｒｏｒａ，Ｖ．； Ｓｔｅｒｎ，Ａ．Ｍ．「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」１９７９，２５４，１２２６９； Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｒ．； Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｌ．Ｅ．； Ｒｅｉｃｈ，Ｋ．Ａ．； Ｓｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｓ．「Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」１９８０，１０２，５４１９； Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｌ．Ｅ．； Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｒ．； Ｒｅｉｃｈ，Ｋ．Ａ．； Ｓｉｇｍａｎ，Ｄ．Ｓ．「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」１９８１，２０，２４４； ａｎｄ Ｑｕｅ，Ｂ．Ｇ．； Ｄｏｗｎｅｙ，Ｋ．Ｍ．； Ｓｏ．，Ａ．Ｇ．「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」１９８０，１９，５９８７。加えて、メチジウム、エチジウムおよびシスプラチンが、オリゴヌクレオチド配列を切断することが公知である。
【０２６６】
多数の飽和５員環が本分野で公知であり、および本発明に従う。好ましい飽和５員環は、必要に応じて置換されたシクロペンタン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、および１，１−ジフルオロシクロペンタンである。
【０２６７】
一部の場合には、本発明のオリゴヌクレオチドは、リガンドに結合される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。一部の場合には、別々のリガンドに個々に共有結合される３、４、５、１０、または１５のヌクレオチドがある。一部の場合には、リガンドは、末端ヌクレオシドの５’位または３’位に結合される。一部の場合には、アラルキルリガンドは、末端ヌクレオシドの５’位または３’位に結合される。一部の場合には、オリゴンムクレオチドは、末端ヌクレオシドの５’位または３’位に結合される。一部の場合には、リンカーは、２個のヌクレオシドの間で共有結合結合を形成し、および、リンカーはテザーを介してリガンドにも結合される。一部の場合には、リンカーが２個のヌクレオシドの間の共有結合を形成し、およびリンカーがテザーを介してリガンドにも結合される場合、ヘアピン構造が形成される。一部の場合には、複数のリガンドは、テザーに結合される。図１および１０は、リガンドがオリゴヌクレオチドに付加されるいくつかの方法を示す。
【０２６８】
一部の実施形態では、リガンドは、ナプロキセンまたはナプロキセンの構造誘導体である。ナプロキセンの合成のための手順は、米国特許第３，９０４，６８２号明細書および米国特許第４，００９，１９７号明細書中に見いだすことができる。ナプロキセンは化学名（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタリン酢酸を有し、および構造は下記に示される：
【化１７】
2008504840.tif 000051
【０２６９】
一部の実施形態では、リガンドは、イブプロフェンまたはイブプロフェンの構造誘導体である。イブプロフェンの合成のための手順は、米国特許第３，２２８，８３１号明細書中に見いだすことができる。イブプロフェンの構造は下記に示される：
【化１８】
2008504840.tif 000052
【０２７０】
さまざまな追加的なリガンドが、図３〜９に示される。
【０２７１】
オリゴヌクレオチドおよびリンカー
ヌクレオシドは、リン含有または非リン含有ヌクレオシド間共有結合によって結合される。同定のために、このような結合ヌクレオシドは、リガンド保有ヌクレオシドまたはリガンド−ヌクレオシド複合体として特徴づけることができる。複合化されていない類似のｓｉＲＮＡ化合物と比較すると、配列内でヌクレオシド複合化したアラルキルリガンドを有する結合したヌクレオシドはより高いｓｉＲＮＡ活性を示す。
【０２７２】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、リガンドが、オリゴヌクレオチドと結合されたヌクレオシドの複合体も含み、ここではリンカー基の仲介なしにヌクレオシドまたはヌクレオチドに直接付加される。リガンドは、好ましくは、リガンドのカルボキシル、アミノまたはオキソ基での結合基を介して、付加されてもよい。典型的な結合基は、エステル、アミド、またはカルバマート塩基であってもよい。
【０２７３】
本発明のオリゴヌクレオチドは、化学的に修飾されてきた。以下、様々な特異的なオリゴヌクレオチド化学修飾について説明する。重要なことは、所定の化合物のすべての位置が均一に修飾される必要があるわけではない。反対に、複数の変更態様は、一本鎖のｓｉＲＮＡ化合物中に、または、一本鎖のヌクレオチド中にさえ、組み込まれてもよい。
【０２７４】
一部の場合には、ヌクレオシド単位の糖およびヌクレオシド間結合、すなわち骨格の両方が、新しい基に置換される。核酸塩基単位は、適当な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持されている。このようなオリゴヌクレオチドの１つである、優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されているオリゴヌクレオチド模倣薬は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、オリゴヌクレオチドの糖骨格は、アミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格によって置換される。核酸塩基は保持され、および直接または間接的に骨格のアミド部分の原子に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許の例は、それぞれが参照により本開示に含まれる米国特許番号第５，５３９，０８２号、第５，７１４，３３１号および第５，７１９，２６２号を含むがそれらに限定されない。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７において見いだしうる。
【０２７５】
本発明のオリゴヌクレオチドは、追加的にまたは代替的に核酸塩基（多くの場合、本分野では単に「塩基」と呼ばれる）の修飾または置換を含んでもよい。ここで使用される「非修飾の」または「天然の」核酸塩基は、プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、およびピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）を含む。修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル・ウラシルおよびシトシン、６−アゾ・ウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（擬似ウラシル）４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−水酸基および他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンおよび３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンといった、他の合成および天然の核酸塩基を含む。
【０２７６】
さらなる核酸塩基は、米国特許第３，６８７，８０８号明細書に開示された核酸塩基、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｐａｇｅｓ ８５８−８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ，ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９０に開示された核酸塩基、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３らによって開示された核酸塩基、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ１５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ２８９−３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９３によって開示された核酸塩基を含む。これらの核酸塩基の一部は、特に本発明のオリゴヌクレオチドの結合親和性を増加させるために有用である。これらは、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、および２−アミノプロピルアデニン、５−プロピルウラシル、および５−プロピニルシトシンを初めとするＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリンを含む。５−メチルシトシン置換は、核酸の二重鎖の安定性を０．６〜１．２℃（Ｉｄ．ページ２７６−２７８）増加することを示しており、現在のところ好ましい塩基置換であり、２’−メトキシエチル糖修飾と結合した場合はさらに好ましい。
【０２７７】
上記の修飾された核酸塩基の一部ならびに他の修飾された核酸塩基の調製に関連する代表的な米国特許は、すべて参照によって本開示に含まれる、米国特許第６８７，８０８号明細書、ならびに米国特許第４，８４５，２０５号；第５，１３０，３０２号；第５，１３４，０６６号；第５，１７５，２７３号；第５，３６７，０６６号；第５，４３２，２７２号；第５，４５７，１８７号；第５，４５９，２５５号；第５，４８４，９０８号；第５，５０２，１７７号；第５，５２５，７１１号；第５，５５２，５４０号；第５，５８７，４６９号；第５，５９４，１２１号；第５，５９６，０９１号；第５，６１４，６１７号；第５，６８１，９４１号、および第５，８０８，０２７号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２７８】
一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の置換された糖部分を追加的または代替的に含んでもよい。好ましいオリゴヌクレオチドは、２’位にて下記の１つを含む：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルケニル、または、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキニル、ここでアルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換のＣ１〜Ｃ１０アルキル、またはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであってもよい。特に好ましいのは、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２であり、ここでｎおよびｍは１〜約１０までの間にある。他の好ましいオリゴヌクレオチドは、２’位にて下記の１つを含む：Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換された低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリルまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、リポータ基、干渉物質、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善する基、および類似の特性を有する他の置換基。好ましい修飾は２’−メトキシエトキシ［２’−Ｏ−−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２’−ＭＯＥとしても知られる］（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＨｅＩｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６）、すなわちアルコキシアルコキシ基である。さらに好ましい修飾は、１９９８年１月３０日に出願され内容が参照により本開示に含まれる米国特許第６，１２７，５３３号明細書に記載された、２’−ジメチルアミノエトキシ、すなわち、２’−ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基を含む。
【０２７９】
他の好ましい修飾は、２’−メトキシ（２’−Ｏ−−ＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および２’−フルオロ（２’−Ｆ）を含む。類似の修飾は、オリゴヌクレオチド上の他の位置にて、特に３’末端ヌクレオチド上の、または２’−５’位結合オリゴヌクレオチド中の糖の３’位にて行われてもよい。
【０２８０】
ここで使用される「糖置換基」または「２’位置換基」の語は、酸素原子の有無にかかわらずリボフラノシル部分の２’位にて付加される基を含む。糖置換基はフルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアルコキシ、保護Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアミノアルキル、Ｏ−アルキルイミダゾールおよび公式（Ｏ−アルキル）ｍのポリエーテルを含むがそれらに限定されず、ここでｍは１〜約１０である。これらのポリエーテルの中で好ましいものは、クラウンエーテル、およびそれぞれが参照によって全体が本開示に含まれるＯｕｃｈｉら（Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ１９９２，９：９３）；Ｒａｖａｓｉｏら（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９１，５６：４３２９）；およびＤｅｌｇａｒｄｏら（Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ１９９２，９：２４９）によって開示されたクラウンエーテルものといった、線状および環状のポリエチレングリコール（ＰＥＧｓ）、および、（ＰＥＧ）含有基であり、。さらなる糖修飾がＣｏｏｋ（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ、１９９１、６：５８５−６０７）である。フルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルイミダゾール、Ｏ−アルキルアミノアルキル、およびアルキルアミノ置換が、参照により全体が本開示に含まれる米国特許第６，１６６，１９７号明細書、表題「Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｈａｖｉｎｇ Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ｓ） ｗｉｔｈ ２’ ａｎｄ ５’ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ（２’位および５’位置換したピリミジンヌクレオチドを有するオリゴマー化合物）」中に記載されている。
【０２８１】
本発明に従う別の糖置換基は、２’−ＳＲおよび２’−ＮＲ基を含み、ここでそれぞれのＲは独立して、水素、保護基または置換または非置換アルキル、アルケニルまたはアルキニルである。２’−ＮＲヌクレオシドが、参照によって全体が本開示に含まれる米国特許第５，６７０，６３３号明細書に開示されている。２’−ＳＲ単量体シントンの包含は、Ｈａｍｍら（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，６２：３４１５−３４２０）によって開示されている。２’−ＮＲヌクレオシドは、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｍ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，６１，６２７３−６２８１およびＰｏｌｕｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９６，３７，３２２７−３２３０によって開示されている。
【０２８２】
本発明に従う別の代表的な２’位置換基は、式ＩまたはＩＩの１つを有する置換基を含む：
【化１９】
2008504840.tif 000053
ここで、
ＥはＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｎ（Ｑ３）（Ｑ４）、またはＮ＝Ｃ（Ｑ３）（Ｑ４）であり；（Ｑ３）および（Ｑ４）はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、ジアルキルアミノアルキル、窒素保護基、繋留されたまたは繋留されていない複合体基、固相担体へのリンカーであり；またはＱ３およびＱ４はともに、ＮおよびＯから選択される少なくとも１つの追加的なヘテロ原子を必要に応じて含む窒素保護基または環構造を形成し；
ｑ１は１から１０までの整数であり；
ｑ２は１から１０までの整数であり；
ｑ３は０または１であり；
ｑ４は０、１、または２であり；
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３は、それぞれ独立して、Ｃ４〜Ｃ７シクロアルキル、Ｃ５〜Ｃ１４アリール、またはＣ３〜Ｃ１５ヘテロシクリルであり、ここで該ヘテロシクリル基中のヘテロ原子は、酸素、窒素および硫黄から選択されている；
Ｚ４は、ＯＭ１、ＳＭ１、またはＮ（Ｍ１）２であり；Ｍ１はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２またはＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｍ２であり；Ｍ２はＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；および
Ｚ５は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｎ（Ｑ３）（Ｑ４）、ＯＱ３、ハロ、ＳＱ３、またはＣＮである。
【０２８３】
式Ｉの代表的な環状２’−Ｏ−糖置換基は、参照によって全体が本開示に含まれる米国特許第６，１７２，２０９号明細書、表題「Ｃａｐｐｅｄ ２’−Ｏｘｙｅｔｈｏｘｙ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（キャップされた２’−オキシエトキシオリゴヌクレオチド」中に開示されている。式ＩＩの代表的な環状２’−Ｏ−糖置換基は、参照によって全体が本開示に含まれる米国特許第６，２７１，３５８号明細書、表題「ＲＮＡ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ２’−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｈａｔ ａｒｅ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｌｙ Ｐｒｅｏｒｇａｎｉｚｅｄ（立体構造的に事前に組織化されたＲＮＡ標的２’位修飾オリゴヌクレオチド）」中に開示されている。
【０２８４】
リボシル環上にＯ−置換基を有する糖も本発明に従う。代表的な環Ｏの置換は、Ｓ、ＣＨ２、ＣＨＦ、およびＣＦ２を含むがそれらに限定されない。たとえば、Ｓｅｃｒｉｓｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｂｓｔｒａｃｔ ２１， Ｐｒｏｇｒａｍ ＆ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ， Ｔｅｎｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｏｕｎｄｔａｂｌｅ， Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ， Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｐａｒｋ Ｃｉｔｙ， Ｕｔａｈ， Ｓｅｐ． １６−２０， １９９２を参照。
【０２８５】
オリゴヌクレオチドは、ペントフラノシル糖の代わりに、シクロブチル部分といった糖模倣薬を有してもよい。このような修飾糖の調製に関する代表的な米国特許は、すべてが参照により本開示に含まれる米国特許第４，９８１，９５７号；第５，１１８，８００号；第５，３１９，０８０号；第５，３５９，０４４号；第５，３９３，８７８号；第５，４４６，１３７号；第５，４６６，７８６号；第５，５１４，７８５号；第５，５１９，１３４号；第５，５６７，８１１号；第５，５７６，４２７号；第５，５９１，７２２号；第５，５９７，９０９号；第５，６１０，３００号；第５，６２７，０５３１号；第５，６３９，８７３号；第５，６４６，２６５号；第５，６５８，８７３号；第５，６７０，６３３号；第５，７００，９２０号、および第５，８５９，２２１号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２８６】
他の修飾は、オリゴヌクレオチド上の他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位でで行われてもよい。たとえば、本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの他の修飾の１つは、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増大する１つ以上の他の非リガンド部分または複合体をオリゴヌクレオチドに化学的に結合することを伴う。このような部分は、コレストロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３）など脂質部分、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４，１０５３）、チオエーテル、たとえばヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．，１９９２，６６０，３０６； Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３）、脂肪族鎖、たとえばドデカンジオールまたはウンデシル残渣（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１９９１，１０，１１１； Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７； Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９）、リン脂質、たとえばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウムｌ、２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホン酸塩（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１； Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９）、またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３）を含む。
【０２８７】
このようなオリゴヌクレオチド複合体の調製に関する代表的な米国特許は、それぞれが参照により本開示に含まれる米国特許第４，８２８，９７９号；第４，９４８，８８２号；第５，２１８，１０５号；第５，５２５，４６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３０号；第５，５５２，５３８号；第５，５７８，７１７；第５，５８０，７３１号；第５，５８０，７３１号；第５，５９１，５８４号；第５，１０９，１２４号；第５，１１８，８０２号；第５，１３８，０４５号；第５，４１４，０７７号；第５，４８６，６０３号；第５，５１２，４３９号；第５，５７８，７１８号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４号；第４，６０５，７３５号；第４，６６７，０２５号；第４，７６２，７７９号；第４，７８９，７３７号；第４，８２４，９４１号；第４，８３５，２６３号；第４，８７６，３３５号；第４，９０４，５８２号；第４，９５８，０１３号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，２４５，０２２号；第５，２５４，４６９号；第５，２５８，５０６号；第５，２６２，５３６号；第５，２７２，２５０号；第５，２９２，８７３号；第５，３１７，０９８号；第５，３７１，２４１；第５，３９１，７２３号；第５，４１６，２０３号；第５，４５１，４６３号；第５，５１０，４７５号；第５，５１２，６６７号；第５，５１４，７８５号；第５，５６５，５５２号；第５，５６７，８１０号；第５，５７４，１４２号；第５，５８５，４８１号；第５，５８７，３７１号；第５，５９５，７２６号；第５，５９７，６９６号；第５，５９９，９２３号；第５，５９９，９２８号、および第５，６８８，９４１号明細書を含むがそれらに限定されない。
【０２８８】
本発明はまた、オリゴヌクレオチド内の特定の位置に関して略キラル的に純粋なオリゴヌクレオチドを使用する組成物を含む。略キラル的に純粋なオリゴヌクレオチドの例は、少なくとも７５％のＳｐまたはＲｐ（Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， 米国特許第５，５８７，３６１号明細書）のホスホロチオレート結合を有するオリゴヌクレオチド、および略キラル的に純粋な（ＳｐまたはＲｐ）アルキルホスホネート、ホスホロアミデートまたはホスホトリエステル結合（Ｃｏｏｋ， 米国特許第５，２１２，２９５号明細書および第５，５２１，３０２号明細書）を有するオリゴヌクレオチドを含むがそれらに限定されない。
【０２８９】
本発明は、リボザイムを使用するオリゴヌクレオチドをさらに包含する。特異性の高いエンドリボヌクレアーゼ活性を触媒する合成ＲＮＡ分子およびその誘導体は、リボザイムとして公知である。（一般に、Ｈａｓｅｌｏｆｆらの米国特許第５，５４３，５０８号明細書およびＧｏｏｄｃｈｉｌｄらの米国特許第５，５４５，７２９号明細書を参照。）切断反応は、ＲＮＡ分子自体によって触媒される。天然に存在するＲＮＡ分子において、自動触媒された切断箇所は、ＲＮＡの二次構造の高度に保護された領域中に位置する（Ｂｕｚａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８６，８３，８８５９； Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９８７，５０，９）。天然に存在する自己触媒的なＲＮＡ分子は修飾され、高い特異性を有する特定の細胞性または病原性ＲＮＡ分子を標的化しうるリボザイムを生成した。したがってリボザイムは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（すなわち、特異的遺伝子の発現の変調）と同じ一般目的にかなっており、およびオリゴヌクレオチドと同様、一本鎖の重要部分を所有する核酸である。すなわち、リボザイムはオリゴヌクレオチドと化学的および機能的同一性を有し、およびしたがって、本発明の目的のための等価物と考えられる。
【０２９０】
一部の場合には、オリゴヌクレオチドは、非リガンド基によって修飾されてもよい。多くの非リガンド分子は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強するために、オリゴヌクレオチドと複合化され、およびこのような複合化を実施する手順は、科学文献中に入手可能である。このような部分は、コレストロール（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３）など脂質部分、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４，１０５３）、チオエーテル、たとえばヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．，１９９２，６６０，３０６； Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３）、脂肪族鎖、たとえばドデカンジオールまたはウンデシル残渣（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１９９１，１０，１１１； Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９）、リン脂質、たとえばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールまたはトリエチルアンモニウムｌ、２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホン酸塩（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１；Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９），またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１），パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９）またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３）を含む。このようなオリゴヌクレオチド複合体の調製を教示する代表的な米国特許の一覧は上に記載されてきた。
【０２９１】
典型的な複合化手順は、配列の１つ以上の位置にアミノリンカーを有するオリゴヌクレオチドの合成を伴う。次にアミノ基は、適当なカプリングまたは活性化試薬を用いて、複合化されている分子と反応する。複合化反応は、固相担体にまだ結合されているオリゴヌクレオチドによって、または、溶液相中のオリゴヌクレオチドの切断の後に実施してもよい。ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチド複合体の精製は、典型的に純粋な複合体を提供する。
【０２９２】
代替的に、複合化された分子は、分子内に存在するアルコール基を介して、または、ホスフィチル化されるアルコール基を有するリンカーの付加によって、ホスホラミダイトといったビルディングブロックに変換されてもよい。
【０２９３】
重要なことに、これらの手法のそれぞれは、リガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成のために用いられてもよい。アミノ結合されたオリゴヌクレオチドは、カプリング試薬の使用を介して、またはＮＨＳまたはペントフルオロフェノレートエステルとしてのリガンドの活性化の後に、リガンドと直接結合してもよい。リガンドホスホラミダイトは、アミノヘキサノールリンカーのカルボキシル基のへの付加およびそれに続く末端のアルコール官能基のホスフィチル化を介して合成してもよい。システアミンといった他のリンカーは、合成されたオリゴヌクレオチドに存在するクロロアセチルリンカーとの複合化のために利用されることもありえる。
【０２９４】
テザー
本発明の好ましい実施例では、リガンドがテザーおよび結合基を介してオリゴヌクレオチドに付加されて、リガンド複合化オリゴヌクレオチドを形成する。好適な本発明のテザーには、６−アミノアルコキシリンカー、６−アミノアルキルアミノリンカー、システアミン、ヘテロ二機能リンカー、ホモ型二官能基リンカー、および（３−ジメトキシトリチルオキシ−２−アミノプロパノールから誘導された）汎用テザーを含むがそれらに限定されない。本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドの合成のために特に好ましいテザーは、６−アミノヘキシルオキシ基である。様々なヘテロ型二官能基およびホモ型二官能基テザーが、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ（ＩＩＩ）．）から入手可能である。このようなヘテロ型二官能基およびホモ型二官能基テザーは、６−アミノアルコキシおよび６−アミノアルキルアミノ部分に関連して、リガンドをヌクレオシドへと結合させるために有用な拡張テザーを形成するために特に有用である。さらに有用な市販のテザーは、５’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ Ｃ６（５’−アミノ−修飾子Ｃ６）および３’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ（５’−アミノ−修飾子）試薬であり、ともにＧｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ， Ｖａ．）から入手可能である。５’−Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ Ｃ６はＡｍｉｎｏｌｉｎｋ−２としてＡＢＩ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， Ｃａｌｉｆ．）からも入手可能であり、一方３’−Ａｍｉｎｏ−ＭｏｄｉｆｉｅｒはＣｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）からも入手可能である。加えて、ヌクレオシドに前付加されたテザーを有するヌクレオチド類似体は、商品名「Ａｍｉｎｏ−Ｍｏｄｉｆｉｅｒ−ｄＴ」の下でＧｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている。このヌクレオシド−テザー試薬は、ピリミジン環の５位にて［Ｎ−（７−トリフルオロアセチルアミノ−ヘプチル）３−アクリルアミド］置換基を有するウリジン誘導体であり、Ｊａｂｌｏｎｓｋｉら（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９８６，１４：６１１５）の手順に従って合成される。
【０２９５】
一部の場合には、リガンド分子の複合化は、ヌクレオシド上のアミノテザーとのリガンドの複合化によって達成される。これは、いくつかの方法で実施することができる。たとえば、本発明のリガンド−ヌクレオシド複合体は、ＥＤＣ／スルホ−ＮＨＳ（すなわち、ｌ−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド）を用いたリガンド分子をヌクレオシドと複合化による調製によって、リガンドのカルボン酸塩官能基をヌクレオシド上の結合基のアミノ官能基と複合化することができる。
【０２９６】
本発明のリガンド複合化オリゴヌクレオチドは、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）またはサクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−ｌ−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）といったヘテロ型二官能基テザーを介したリガンド（たとえば、ナプロキセン）分子のヌクレオシド配列との複合化による調製によって、リガンド分子上の求核位置をヌクレオシド配列上のテザー基のアミノ官能基と結合してもよい。この機序によって、結合されたヌクレオシド上のテザーのアミノ基と、ＭＢＳまたはＳＭＣＣマレイミドリンカーとの反応によって、オリゴヌクレオシド−マレイミド複合体が形成される。次に、複合体はリガンドと反応する。
【０２９７】
代替的に、リガンド複合化オリゴヌクレオチドは、スベリン酸ジスクシニミヂル（ＤＳＳ）といったホモ型二官能基テザーを介したオリゴヌクレオチドまたはヌクレオシドのリガンド分子との複合化による調製によって、リガンド上のアミノ官能基をオリゴヌクレオチド配列上のテザーのアミノ基と結合させてもよい。この機序によって、ヌクレオシド配列上のテザーのアミノ基とスベリン酸ジスクシニミヂルテザーとの反応によって、オリゴヌクレオシド−サクシンイミジル複合体が形成される。スベリン酸ジスクシニミヂルテザーは、ヌクレオシド上のアミンテザーと結合して、テザーの大きさを拡張する。次に、延長したテザーは、リガンド分子のアミノ基と反応する。
【０２９８】
本発明の一部の化合物が、より詳細に下記に記載される。重要なことに、下記の実施形態は、本発明の一部の態様および実施形態の説明目的のみに含められ、および本発明を制限しないことが意図される。
【０２９９】
本発明の一態様は、第一の鎖および第二の鎖を含み、前記第一の鎖および前記第二の鎖は独立して式ＩＩ：
【化２０】
2008504840.tif 000054
によって表されることを特徴とし、
ここで
Ｘ１はＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２、または−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｍはそれぞれ独立してアルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
Ｒ１およびＲ５はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ４はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ｒ６、Ｒ７、およびＲ９はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ８はそれぞれ独立してアルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
ｋはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
ｎ１は１、２、または３を表し；
ｎ２は約１５〜２８の範囲を含む整数であり；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、または３を表し；
ｘはそれぞれ独立して０、１、２、または３を表し；
ｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して：
【化２１】
2008504840.tif 000055
を表し；
Ａ２はそれぞれ独立して：
【化２２】
2008504840.tif 000056
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して：
【化２３】
2008504840.tif 000057
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表すか、または式：
【化２４】
2008504840.tif 000058
を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４との間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５との間の結合であり；
Ｒはそれぞれ独立して水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ｙはそれぞれ独立してアルキルジラジカル、シクロアルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、ヘテロシクロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アリールジラジカル、ヘテロアリールジラジカル、アラルキルジラジカル、ヘテロアラルキルジラジカル、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（ＮＲ６）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｓ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２−、
【化２５】
2008504840.tif 000059
−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｎ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＣ（Ｏ）Ｓ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＮ（Ｒ７）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳｉ（Ｒ８）２Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）ＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（モルホリノ）−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ１）２］ｔＳ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］、Ｓ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ＝ＮＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ（Ｏ）Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］、Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、または−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−を表し；
Ｘ２はそれぞれ独立して結合、Ｏ、またはＮ（Ｒ６）を表し；
Ｚ１はそれぞれ独立してＯ、Ｓ、またはＮ（Ｒ８）を表し；
Ｚ２はそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、Ｂ（Ｒ９）３、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、Ｆ、Ｓｅ、−ＳｅＲ８、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、または−Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、アルキル、またはアリールを表し；またはＲ１０およびＲ１１は合わせて３−、４−、５−、６−、または７員環を形成し；
Ｒ１２はそれぞれ独立してＨ、アルキル、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
ｔはそれぞれ独立して０、１、２、３、または４を表し；
ｖはそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ａ５はそれぞれ独立してアリール、アラルキル、またはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルを表し；
Ａ６はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を表すかまたは式：
【化２６】
2008504840.tif 000060
で表され；
Ｚ３はそれぞれ独立してＯまたはＳを表し；
Ｚ４はそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１９）２Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、アリール、またはアルキルを表し；
Ｒ１３はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ３を表し；
Ｒ１４はそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、またはシリルを表し；
Ｒ１５はそれぞれ独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド、またはシリルを表し；
Ｒ１６はそれぞれ独立してシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールを表し；
Ｂ３はＡ６とＡ７との間の結合であり；
Ｂ４はＡ６とＯとの間の結合であり；
ｎ３はそれぞれ独立して１〜１５を含む範囲の整数を表し；
ｎ４は原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ７はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２を表すか、または式：
【化２７】
2008504840.tif 000061
を有し；
ｐはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
Ｂ５はＡ５とＡ７との間の結合であり；
Ａ８は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルであるか、または式：
【化２８】
2008504840.tif 000062
によって表され；
Ｒ１７はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ６を表し；
Ｒ１８はそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシル、−Ｎ（Ｒ６）２、−ＣＮ、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＣ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）２を表し；
Ｒ１９はそれぞれ独立してＨまたはアルキルを表し；
Ｂ６はＡ８とＡ９との間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＰとの間の結合であり；
Ａ９は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ６Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ６Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ６Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ６Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ６Ｎ（Ｂ８）２であるか、または式：
【化２９】
2008504840.tif 000063
を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９との間の結合であり；および
ただし少なくとも１つの場合のＹは
【化３０】
2008504840.tif 000064
でない
ことを特徴とする二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【０３００】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ１はそれぞれ独立して：
【化３１】
2008504840.tif 000065
を表し；およびｄは１または２であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３２】
2008504840.tif 000066
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３３】
2008504840.tif 000067
であり、およびＺ２がそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、Ｂ（Ｒ９）３、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３４】
2008504840.tif 000068
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してアルキルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３５】
2008504840.tif 000069
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、または−ＯＭを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３６】
2008504840.tif 000070
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してメチルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３７】
2008504840.tif 000071
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも２つの場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０７】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３８】
2008504840.tif 000072
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも５つの場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０８】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化３９】
2008504840.tif 000073
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも７つの場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３０９】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化４０】
2008504840.tif 000074
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも１０の場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１０】
一部の実施形態では、本発明は、第一のヌクレオシドと第二のヌクレオシドとの間の前記第一の鎖の末端での結合において、Ｙが
【化４１】
2008504840.tif 000075
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１１】
一部の実施形態では、本発明は、第一と第二のヌクレオシドの間の前記第一の鎖の３'末端での結合において、Ｙが
【化４２】
2008504840.tif 000076
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１２】
一部の実施形態では、本発明は、第一と第二のヌクレオシドの間の前記第一の鎖および前記第二の鎖の３’末端での結合において、Ｙが
【化４３】
2008504840.tif 000077
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１３】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ１が１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１４】
一部の実施形態では、本発明は、ｔが０または１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１５】
一部の実施形態では、本発明は、ｘが１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１６】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１７】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が１９、２０、または２１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１８】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が２０であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３１９】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が２０であり、および第一の鎖および第二の鎖が、前記第一の鎖および前記第二の鎖上に１個のハイブリダイズしていないヌクレオシドが存在するようにハイブリダイズしていることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２０】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が２０であり、および前記第一の鎖および前記第二の鎖が、前記第一の鎖および前記第二の鎖上に２個のハイブリダイズしていないヌクレオシドが存在するようにハイブリダイズしていることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２１】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が第一の鎖について２０であり、およびｎ２が第二の鎖について２２であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ１がＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏアルキルアミン、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｎ（Ｒ１９）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３がそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１９）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、またはＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２７】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２８】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４がそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１９）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、またはＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３２９】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３０】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５がＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ２がそれぞれ独立してメチル、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリル、−Ｓアラルキル、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、または−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２を表す上記化合物に関する。
【０３３４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ３がＯであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ４がそれぞれ独立してメチル、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアラルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ４がそれぞれ独立してメチル、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリル、−Ｓアラルキル、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、または−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２を表す上記化合物に関する。
【０３３７】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ２がそれぞれ独立して
【化４４】
2008504840.tif 000078
を表すことを特徴とするオリゴヌクレオチドに関する。
【０３３８】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して
【化４５】
2008504840.tif 000079
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３３９】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ４はそれぞれ独立して
【化４６】
2008504840.tif 000080
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化４７】
2008504840.tif 000081
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４０】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ４はそれぞれ独立して
【化４８】
2008504840.tif 000082
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化４９】
2008504840.tif 000083
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４１】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が少なくとも１つ存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４２】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が少なくとも５つ存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４３】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が少なくとも１０存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４４】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が前記第一の鎖だけに存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４５】
一部の実施形態では、本発明は、第一の鎖および第二の鎖がそれぞれＡ５の少なくとも１つの存在を含むことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４６】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であることを特徴とし、Ａ９９は必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、またはテトラゾリルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４７】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩ：
【化５０】
2008504840.tif 000084
で表されることを特徴とし、
Ｒ１−ＩＩＩ、Ｒ２−ＩＩＩ、およびＲ３−ＩＩＩがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４８】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、およびＲ１−ＩＩＩがアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３４９】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ１−ＩＩＩがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５０】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ１−ＩＩＩがメチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５１】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ２−ＩＩＩがＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５２】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ３−ＩＩＩがアルコキシルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５３】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ３−ＩＩＩがメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ、またはｔｅｒｔ−ブトキシであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５４】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ３−ＩＩＩがメトキシであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５５】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＩＩで表され、Ｒ１−ＩＩＩがメチルであり、Ｒ２−ＩＩＩがＨであり、およびＲ３−ＩＩＩがメトキシであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５６】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶ：
【化５１】
2008504840.tif 000085
で表されることを特徴とし、
Ｒ１−ＩＶ、Ｒ２−ＩＶ、およびＲ３−ＩＶがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５７】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ１−ＩＶがアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５８】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ１−ＩＶがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３５９】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ１−ＩＶがメチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６０】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ２−ＩＶがＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６１】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ３−ＩＶがアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６２】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ３−ＩＶがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、またはヘプチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６３】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ３−ＩＶがイソブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６４】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ１−ＩＶがメチルであり、Ｒ２−ＩＶがＨであり、およびＲ３−ＩＶがイソブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６５】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６６】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＩＶで表され、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６７】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化５２】
2008504840.tif 000086
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６８】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１つの場合のＹは
【化５３】
2008504840.tif 000087
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３６９】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化５４】
2008504840.tif 000088
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７０】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１つの場合のＹは
【化５５】
2008504840.tif 000089
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７１】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化５６】
2008504840.tif 000090
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７２】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１つの場合のＹは
【化５７】
2008504840.tif 000091
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７３】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化５８】
2008504840.tif 000092
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７４】
本発明の別の実施態様は、式Ｖ： 
【化５９】
2008504840.tif 000093
で表され、
Ｘ１ は Ｈ，−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２，−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＭ）２，−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２，−Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）−Ｏ− Ｐ（Ｏ）（Ｏアルキル）２，または −Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙであり；
Ｍはそれぞれ独立してアルカリ金属または総電荷＋１の遷移金属を表し；
Ｒ１およびＲ５はそれぞれ独立してＨ、アルキル、またはハロゲンを表し；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ４はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳＲ１９、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（Ｒ１９）２、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｎ（Ｒ１９）２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＳ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２、または−Ｏ（Ｃ（Ｒ１９）２）ｋＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２を表し；
Ｒ６、Ｒ７、およびＲ９はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
Ｒ８はそれぞれ独立してアルキル、アリール、またはアラルキルを表し；
ｋはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
ｎ１は１、２、または３を表し；
ｎ２は約１５〜２８の範囲を含む整数であり；
ｗは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、または３を表し；
ｘはそれぞれ独立して０、１、２、または３を表し；
ｙは原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ１はそれぞれ独立して：
【化６０】
2008504840.tif 000094
を表し；
Ａ２はそれぞれ独立して：
【化６１】
2008504840.tif 000095
を表し；
Ａ３はそれぞれ独立して：
【化６２】
2008504840.tif 000096
を表し；
Ａ４はそれぞれ独立して、結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ１Ｃ（Ｒ）２Ｂ２、Ｂ１Ｃ（Ｒ）（Ｂ２）２、Ｂ１Ｃ（Ｂ２）３、Ｂ１Ｎ（Ｒ）（Ｂ２）、Ｂ１Ｎ（Ｂ２）２を表すか、または式：
【化６３】
2008504840.tif 000097
を有し；
Ｂ１はＡ３とＡ４との間の結合であり；
Ｂ２はＡ４とＡ５との間の結合であり；
Ｒはそれぞれ独立して水素またはアルキルを表し；
ｍはそれぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
ｍ１はそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ｙはそれぞれ独立してアルキルジラジカル、シクロアルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、ヘテロシクロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アリールジラジカル、ヘテロアリールジラジカル、アラルキルジラジカル、ヘテロアラルキルジラジカル、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（ＮＲ６）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｓ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２−、−Ｘ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２−、
【化６４】
2008504840.tif 000098
−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ６）Ｎ（Ｒ６）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）Ｃ（Ｓ）Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＣ（Ｏ）Ｓ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＮ（Ｒ７）ＣＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳｉ（Ｒ８）２Ｏ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）ＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（モルホリノ）−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳＯ２Ｎ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ１）２］ｔＳ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯＳＯ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＳ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｙＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＮ（Ｒ７）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ＝ＮＯ［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ（Ｏ）Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＣ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−、または−［Ｃ（Ｒ５）２］ｔＸ２Ｃ（Ｏ）Ｘ２［Ｃ（Ｒ５）２］ｔ−を表し；
Ｘ２はそれぞれ独立して結合、Ｏ、またはＮ（Ｒ６）を表し；
Ｚ１はそれぞれ独立してＯ、Ｓ、またはＮ（Ｒ８）を表し；
Ｚ２ はそれぞれ独立してアルキル，アリール，アラルキル，Ｂ（Ｒ９）３，−ＯＭ，− Ｏアルキル，−Ｏアリール，−Ｏアラルキル，−ＳＭ，−Ｓアルキル，−Ｓアリール，−Ｓアラルキル，−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２，−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２，−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ８，Ｈ，−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８，−ＣＯ２Ｒ８，Ｆ，Ｓｅ，−ＳｅＲ８，− （Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９，−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９，−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９，−Ｎ（Ｒ１９ＸＣ（Ｒ１９^ＳＲ１９，− Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル，−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル，または −Ａ８−［Ａ９−（Ａ５）ｗ］ｙを表し；
Ｒ１０およびＲ１１は独立してＨ、アルキル、またはアリールを表し；またはＲ１０およびＲ１１は合わせて３−、４−、５−、６−、または７員環を形成し；
Ｒ１２はそれぞれ独立してＨ、アルキル、または−ＮＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表し；
ｔはそれぞれ独立して０、１、２、３、または４を表し；
ｖはそれぞれ独立して０、１、２、３、４、５、６、７、または８を表し；
Ａ５はそれぞれ独立してアリール、アラルキル、またはステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、糖質、または必要に応じて置換された飽和５員環のラジカルを表し；
Ａ６はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−を表すかまたは式：
【化６５】
2008504840.tif 000099
で表され；
Ｚ３はそれぞれ独立してＯまたはＳを表し；
Ｚ４はそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ１９）２Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＯＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＳＲ１９、−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、−（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）Ｃ（Ｏ）アルキル、アリール、またはアルキルを表し；
Ｒ１３はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ３を表し；
Ｒ１４はそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、またはシリルを表し；
Ｒ１５はそれぞれ独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド、またはシリル；
Ｒ１６はそれぞれ独立してシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールを表し；
Ｂ３はＡ６とＡ７との間の結合であり；
Ｂ４はＡ６とＯとの間の結合であり；
ｎ３はそれぞれ独立して１〜１５を含む範囲の整数を表し；
ｎ４は原子価則に従ってそれぞれ独立して１、２、３、４、または５を表し；
Ａ７はそれぞれ独立して結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ３Ｃ（Ｒ）２Ｂ５、Ｂ３Ｃ（Ｒ）（Ｂ５）２、Ｂ３Ｃ（Ｂ５）３、Ｂ３Ｎ（Ｒ）（Ｂ５）、Ｂ３Ｎ（Ｂ５）２を表すか、または式：
【化６６】
2008504840.tif 000100
を有し；
ｐはそれぞれ独立して１、２、３、または４を表し；
Ｂ５はＡ５とＡ７との間の結合であり；
Ａ８は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキルであるか、または式：
【化６７】
2008504840.tif 000101
によって表され；
Ｒ１７はそれぞれ独立してＨ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、またはＢ６を表し；
Ｒ１８はそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシル、−Ｎ（Ｒ６）２、−ＣＮ、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｖＣ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ５）２を表し；
Ｒ１９はそれぞれ独立してＨまたはアルキルを表し；
Ｂ６はＡ８とＡ９との間の結合であり；
Ｂ７はＡ８とＰとの間の結合であり；
Ａ９は結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、Ｂ６Ｃ（Ｒ）２Ｂ８、Ｂ６Ｃ（Ｒ）（Ｂ８）２、Ｂ６Ｃ（Ｂ８）３、Ｂ６Ｎ（Ｒ）（Ｂ８）、Ｂ６Ｎ（Ｂ８）２であるか、または式：
【化６８】
2008504840.tif 000102
を有し；
Ｂ８はＡ５とＡ９との間の結合であり；および
ただし少なくとも１つの場合のＹは
【化６９】
2008504840.tif 000103
でないことを特徴とする一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
【０３７５】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ１はそれぞれ独立して：
【化７０】
2008504840.tif 000104
を表し；およびｄは１または２である
ことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７１】
2008504840.tif 000105
であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７７】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７２】
2008504840.tif 000106
であり、およびＺ２がそれぞれ独立してアルキル、アリール、アラルキル、Ｂ（Ｒ９）３、−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７８】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７３】
2008504840.tif 000107
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してアルキルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３７９】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７４】
2008504840.tif 000108
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、または−ＯＭを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８０】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７５】
2008504840.tif 000109
であり、およびＺ２はそれぞれ独立してメチルまたは−ＯＭを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７６】
2008504840.tif 000110
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも２つの場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７７】
2008504840.tif 000111
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも５つの場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７８】
2008504840.tif 000112
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも７つの場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｙが
【化７９】
2008504840.tif 000113
であり、およびＺ２がアルキルである少なくとも１０の場合が存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８５】
一部の実施形態では、本発明は、第一のヌクレオシドと第二のヌクレオシドとの間の前記第一の鎖の末端での結合において、Ｙが
【化８０】
2008504840.tif 000114
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８６】
一部の実施形態では、本発明は、第一と第二のヌクレオシドの間の前記第一の鎖の３'末端での結合において、Ｙが
【化８１】
2008504840.tif 000115
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８７】
一部の実施形態では、本発明は、第一と第二のヌクレオシドの間の前記第一の鎖および前記第二の鎖の３'末端での結合において、Ｙが
【化８２】
2008504840.tif 000116
であり、およびＺ２がアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８８】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ１が１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３８９】
一部の実施形態では、本発明は、ｔが０または１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９０】
一部の実施形態では、本発明は、ｘが１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９１】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９２】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が１９、２０、または２１であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９３】
一部の実施形態では、本発明は、ｎ２が２０であることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ１がＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏアルキルアミン、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９６】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９７】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏアルキルアミン、−Ｎ（Ｒ１９）２、または−Ｏ−Ａ６−［Ａ７−（Ａ５）ｗ］ｙを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９８】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、−Ｏアルキルアミン、または−Ｎ（Ｒ１９）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０３９９】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３がそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１９）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、またはＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４００】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、または−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４がそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、−ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＲ１９、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（Ｒ１９）２、−ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、またはＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４がそれぞれ独立してＯＨ、Ｆ、−Ｏアルキル、−Ｏアリル、または−Ｏアルキルアミンを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立してＯＨ、−Ｏアルキル、または−Ｏアリルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０５】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０６】
一部の実施形態では、本発明は、少なくとも２つの場合のＲ４がＯＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０７】
一部の実施形態では、本発明は、少なくとも５つの場合のＲ４がＯＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０８】
一部の実施形態では、本発明は、少なくとも１０の場合のＲ４がＯＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４０９】
一部の実施形態では、本発明は、少なくとも１５の場合のＲ４がＯＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１０】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ５がＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ２はそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、または−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１２】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ３がＯであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ４がそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、または−Ｏアラルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１４】
一部の実施形態では、本発明は、Ｚ４はそれぞれ独立して−ＯＭ、−Ｏアルキル、−Ｏアリール、−Ｏアラルキル、−ＳＭ、−Ｓアルキル、−Ｓアリール、−［Ｃ（Ｒ５）２］ｍＮ（Ｒ６）２、−Ｓアラルキル、−Ｎ（Ｒ１０）Ｒ１１、または−Ｎ（Ｒ１９）（Ｃ（Ｒ１９）２）ｍＮ（Ｒ１９）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１５】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ２がそれぞれ独立して
【化８３】
2008504840.tif 000117
を表すことを特徴とする上記オリゴヌクレオチドに関する。
【０４１６】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ４がそれぞれ独立して
【化８４】
2008504840.tif 000118
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１７】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ４はそれぞれ独立して
【化８５】
2008504840.tif 000119
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化８６】
2008504840.tif 000120
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１８】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ４はそれぞれ独立して
【化８７】
2008504840.tif 000121
を表し、およびＡ５はそれぞれ独立して
【化８８】
2008504840.tif 000122
を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４１９】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が少なくとも１つ存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２０】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が少なくとも５つ存在することを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２１】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が−（Ｃ（Ｒ）２）ｍ−Ａ９９であることを特徴とし、Ａ９９は必要に応じて置換されたフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、１，７−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、またはテトラゾリルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２２】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩ：
【化８９】
2008504840.tif 000123
で表されることを特徴とし、
Ｒ１−ＶＩ、Ｒ２−ＶＩ、およびＲ３−ＶＩがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２３】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ１−ＶＩがアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２４】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ１−ＶＩがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２５】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ１−ＶＩがメチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２６】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ２−ＶＩがＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２７】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ３−ＶＩがアルコキシルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２８】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ３−ＶＩがメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ、またはｔｅｒｔ−ブトキシであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４２９】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ３−ＶＩがメトキシであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３０】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩで表され、Ｒ１−ＶＩがメチルであり、Ｒ２−ＶＩがＨであり、およびＲ３−ＶＩがメトキシであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３１】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩ：
【化９０】
2008504840.tif 000124
で表されることを特徴とし、
Ｒ１−ＶＩＩ、Ｒ２−ＶＩＩ、およびＲ３−ＶＩＩがそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−ＣＯＲ、または−ＣＯ２Ｒであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３２】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ１−ＶＩＩがアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３３】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ１−ＶＩＩがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３４】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ１−ＶＩＩがメチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３５】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ２−ＶＩＩがＨであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３６】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ３−ＶＩＩがアルキルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３７】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ３−ＶＩＩがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、またはヘプチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３８】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ３−ＶＩＩがイソブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４３９】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ１−ＶＩＩがメチルであり、Ｒ２−ＶＩＩがＨであり、およびＲ３−ＶＩＩがイソブチルであることを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４０】
一部の実施形態では、本発明は、Ａ５が式ＶＩＩで表され、Ｒ２がそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、Ｆ、または−Ｏアルキルを表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４１】
一部の実施形態では、本発明は、Ｒ３およびＲ４がそれぞれ独立して−ＮＨ２、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２を表すことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４２】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化９１】
2008504840.tif 000125
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４３】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化９２】
2008504840.tif 000126
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４４】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１つの場合のＹは
【化９３】
2008504840.tif 000127
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４５】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化９４】
2008504840.tif 000128
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４６】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１つの場合のＹは
【化９５】
2008504840.tif 000129
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４７】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１０の場合のＹは
【化９６】
2008504840.tif 000130
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４８】
一部の実施形態では、本発明は、およびただし少なくとも１つの場合のＹは
【化９７】
2008504840.tif 000131
でないことを特徴とする上記化合物に関する。
【０４４９】
本発明の方法
本発明の一態様は、治療を必要とする患者へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与する工程を含む、望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経疾患、およびヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患より成る群から選択される疾患の患者を治療する方法に関するものであり、前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式Ｖで表される一本鎖オリゴヌクレオチドであるかまたは前記オリゴヌクレオチドが第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第一の鎖および前記第二の鎖が独立して上記の通りの式ＩＩによって表されることを特徴とする。
【０４５０】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が望ましくない細胞増殖であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５１】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が、睾丸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、扁平上皮細胞癌腫、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頸癌、基底細胞癌腫、腺癌腫、肝細胞癌腫、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮内膜癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳腫瘍または上皮由来の腫瘍であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５２】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が関節リウマチまたは網膜血管新生であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５３】
一部の実施形態では、本発明は、疾患がウイルス感染であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５４】
一部の実施形態では、本発明は、疾患がヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、Ｈ型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバーウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＪＣウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介脳炎ウイルス遺伝子、マレー渓谷脳炎ウイルス遺伝子、デングウイルス遺伝子、サルウイルス４０、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱ウイルス、ポリオウイルス、またはポックスウイルスによって媒介される疾患であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５５】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、または真菌感染であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５６】
一部の実施形態では、本発明は、疾患がマラリア原虫（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、マイコバクテリウム・アルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって媒介される疾患であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５７】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、または糖尿病であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５８】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が虚血、再灌流傷害、移植臓器または組織に対する反応、再狭窄、または炎症性腸疾患であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４５９】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が急性疼痛または慢性疼痛であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６０】
一部の実施形態では、本発明は、疾患が神経疾患であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６１】
一部の実施形態では、本発明は、疾患がアルツハイマー病、パーキンソン病、または神経変性トリヌクレオチド反復疾患であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６２】
一部の実施形態では、本発明は、疾患がヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる疾患であることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６３】
一部の実施形態では、本発明は、オリゴヌクレオチドが第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第一の鎖および前記第二の鎖が独立して上記の通りの式ＩＩによって表されることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６４】
本発明の別の一態様は、遺伝子サイレンシング法に関するものであり、哺乳類細胞へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子遺伝子、成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、細菌病原体の遺伝子、アメーバ病原体の遺伝子、寄生虫病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛の処理を媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の１つの対立遺伝子の発現を抑制する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式Ｖで表される一本鎖オリゴヌクレオチドであるか、または前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式ＩＩによって表される第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする。
【０４６５】
一部の実施形態では、本発明は、オリゴヌクレオチドが第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第一の鎖および前記第二の鎖が独立して上記の通りの式ＩＩによって表されることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６６】
本発明の別の一態様は、遺伝子サイレンシング法に関するものであり、哺乳類細胞へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子���ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式Ｖで表され���一本鎖オリゴヌクレオチドであるか、または前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式ＩＩによって表される第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする。
【０４６７】
一部の実施形態では、本発明は、オリゴヌクレオチドが第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第一の鎖および前記第二の鎖が独立して上記の通りの式ＩＩによって表されることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４６８】
本発明の別の一態様は、遺伝子サイレンシング法に関するものであり、哺乳類へオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子または成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管新生を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、細菌病原体の遺伝子、アメーバ病原体の遺伝子、寄生虫病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛の処理を媒介する遺伝子、神経疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の消失によって特徴づけられる細胞にみられる対立遺伝子、または多型遺伝子の１つの対立遺伝子の発現を抑制する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式Ｖで表される一本鎖オリゴヌクレオチドであるか、または前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式ＩＩによって表される第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする。
【０４６９】
一部の実施形態では、本発明は、オリゴヌクレオチドが第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第一の鎖および前記第二の鎖が独立して上記の通りの式ＩＩによって表されることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４７０】
本発明の別の一態様は、遺伝子サイレンシング法に関するものであり、哺乳類にオリゴヌクレオチドの治療的有効量を投与して、ＰＤＧＦベータ遺伝子、Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子、Ｓｒｃ遺伝子、ＣＲＫ遺伝子、ＧＲＢ２遺伝子、ＲＡＳ遺伝子、ＭＥＫＫ遺伝子、ＪＮＫ遺伝子、ＲＡＦ遺伝子、Ｅｒｋ１／２遺伝子、ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、ＭＹＢ遺伝子、ＪＵＮ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子、サイクリンＤ遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、サイクリンＡ遺伝子、サイクリンＥ遺伝子、ＷＮＴ−１遺伝子、ベータカテニン遺伝子、ｃ−ＭＥＴ遺伝子、ＰＫＣ遺伝子、ＮＦＫＢ遺伝子、ＳＴＡＴ３遺伝子、サービビン遺伝子、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、トポイソメラーゼＩ遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、ｐ７３遺伝子内の突然変異、ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子内の突然変異、ＰＰＭ１Ｄ遺伝子内の突然変異、ＲＡＳ遺伝子内の突然変異、カベオリンＩ遺伝子内の突然変異、ＭＩＢＩ遺伝子内の突然変異、ＭＴＡＩ遺伝子内の突然変異、Ｍ６８遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｐ５３ファミリー成員ＤＮ−ｐ６３内の突然変異、ｐＲｂ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＡＰＣ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＢＲＣＡ１腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ＰＴＥＮ腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、ｍＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、アルファｖ−インテグリン遺伝子、Ｆｌｔ−１レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス遺伝子、Ａ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｃ型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｄ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｅ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｆ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｇ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルス遺伝子、Ｈ型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ＪＣウイルス遺伝子、ＪＣウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ラ���ノウイルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス４０遺伝子、シミアンウイルス４０の複製に必要とされる遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトＴ細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、ＧＣＳＦ遺伝子、Ｇｒｏ１遺伝子、Ｇｒｏ２遺伝子、Ｇｒｏ３遺伝子、ＰＦ４遺伝子、ＭＩＧ遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、ＭＩＰ−１Ｉ遺伝子、ＭＩＰ−１Ｊ遺伝子、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子、ＭＣＰ−１遺伝子、ＭＣＰ−２遺伝子、ＭＣＰ−３遺伝子、ＣＭＢＫＲ１遺伝子、ＣＭＢＫＲ２遺伝子、ＣＭＢＫＲ３遺伝子、ＣＭＢＫＲ５ｖ、ＡＩＦ−１遺伝子、Ｉ−３０９遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、ＨＤ遺伝子、ＤＲＰＬＡ遺伝子、ＳＣＡ１遺伝子、ＳＣＡ２遺伝子、ＭＪＤ１遺伝子、ＣＡＣＮＬ１Ａ４遺伝子、ＳＣＡ７遺伝子、ＳＣＡ８遺伝子、ＬＯＨ細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の１つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式Ｖで表される一���鎖オリゴヌクレオチドであるか、または前記オリゴヌクレオチドが上記の通りの式ＩＩによって表される第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする。
【０４７１】
一部の実施形態では、本発明は、前記哺乳類が霊長類、ウマ、イヌ、またはネコであることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４７２】
一部の実施形態では、本発明は前記哺乳類がヒトであることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４７３】
一部の実施形態では、本発明は、前記オリゴヌクレオチドが第一の鎖および第二の鎖を含む二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記第一の鎖および前記第二の鎖が独立して上記の通りの式ＩＩによって表されることを特徴とする前述の方法に関する。
【０４７４】
定義
便宜上、本明細書、実施例、および付属の請求項で用いられる一部の用語をここに集める。
【０４７５】
「発現抑制する」の語は、少なくとも部分的に抑制することを意味する。たとえば、一部の場合では、本発明のオリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約２５％、３５％、または５０％抑制される。好ましい一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約６０％、７０％、または８０％抑制される。より好ましい一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約８５％、９０％、または９５％抑制される。非常に好ましい一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドの投与によって、遺伝子は少なくとも約９８％または９９％抑制される。
【０４７６】
「ヘテロ原子」の語はここでは炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子はホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄およびセレンである。
【０４７７】
「アルキル」の語は直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基のラジカルをいう。好ましい実施形態では、直鎖または分枝鎖アルキルは骨格中に約３０以下の炭素原子（たとえば、直鎖についてＣ１〜Ｃ３０、分枝鎖についてＣ３〜Ｃ３０）、および代替的に、約２０以下を有する。同様に、好ましいシクロアルキルは環構造中に約３ないし約１０個の炭素原子を有し、およびより好ましくは環構造中に約５、６または７個の炭素を有する。
【０４７８】
炭素の数が別に指定されない限り、「低級アルキル」はここでは上で定義された通りのしかし１ないし１０個の炭素、より好ましくは１ないし６個の炭素原子を骨格構造中に有するアルキル基を意味する。同様に、「低級アルケニル」および「低級アルキニル」は同様の鎖長を有する。好ましいアルキル基は低級アルキルである。好ましい実施形態では、ここではアルキルと示される置換基は低級アルキルである。
【０４７９】
「アラルキル」の語は、ここでは、アリール基（たとえば、芳香族またはヘテロ芳香族基）で置換されたアルキル基をいう。
【０４８０】
「アルケニル」および「アルキニル」の語は、上記のアルキルと長さおよび可能な置換で同様であるがしかし少なくとも１つの二重または三重結合をそれぞれ含む不飽和脂肪族基をいう。
【０４８１】
「アリール」の語はここでは０ないし４個のヘテロ原子を含みうる５、６および７員単環芳香族基、たとえば、ベンゼン、アントラセン、ナフタレン、ピレン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジンおよびピリミジンなどをいう。ヘテロ原子を環構造中に有するそれらのアリール基はまた、「アリールヘテロ環」または「ヘテロ芳香族」ともいう。芳香族環は、１つ以上の環位置にて、上記のような置換基、たとえば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、などで置換されうる。「アリール」の語はまた、環のうちの少なくとも１つが芳香族であることを特徴とする２つの隣接する環（その環は「縮合環」である）に２個以上の炭素が共通している、２つ以上の環を有する多環式環系を含み、たとえば、他方の環はシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリルでありうる。
【０４８２】
オルト、メタおよびパラの語はそれぞれ１，２−、１，３−および１，４−二置換ベンゼンに用いられる。たとえば、１，２−ジメチルベンゼンおよびオルト−ジメチルベンゼンの名称は同義である。
【０４８３】
「ヘテロシクリル」または「ヘテロ環基」の語は、環構造が０ないし４個のヘテロ原子を含む３〜１０員環構造、より好ましくは３〜７員環をいう。ヘテロ環はまた多環でありうる。ヘテロシクリル基は、たとえば、チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサンテン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ラクトン、アゼチジノンおよびピロリジノンのようなラクタム、スルタム、スルトンなどを含む。ヘテロ環は、１つ以上の位置にて、上記のような置換基、たとえば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどで置換されうる。
【０４８４】
「ポリシクリル」または「多環式基」の語は、２つの隣接する環に２個以上の炭素が共通している、２つ以上の環（たとえば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリル）をいい、たとえば、その環は「縮合環」である。隣接しない原子を介して結合している環は「架橋」環という。多環の各環は、上記のような置換基、たとえば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどで置換されうる。
【０４８５】
ここでは、「ニトロ」の語は−ＮＯ２を意味する；「ハロゲン」の語は−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを示す；「スルフヒドリル」の語は−ＳＨをいう；「ヒドロキシル」の語は−ＯＨを意味する； および「スルホニル」の語は−ＳＯ２−を意味する。
【０４８６】
「アミン」および「アミノ」の語は本分野で知られており、および非置換および置換アミンの両方、たとえば次の一般式で表されうる部分をいう：
【化９８】
2008504840.tif 000132
ここでＲ９、Ｒ１０およびＲ’１０はそれぞれ独立して、原子価則に許容される基を表す。
【０４８７】
「アシルアミノ」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分をいう：
【化９９】
2008504840.tif 000133
ここでＲ９は上で定義された通りであり、およびＲ’１１は水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８を表し、ｍおよびＲ８は上で定義される通りである。
【０４８８】
「アミド」の語はアミノ置換カルボニルとして本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分を含む：
【化１００】
2008504840.tif 000134
ここでＲ９、Ｒ１０は上で定義された通りである。アミドの好ましい実施形態は、不安定でありうるイミドを含まない。
【０４８９】
「アルキルチオ」の語は、結合した硫黄ラジカルを有する、上で定義された通りのアルキル基をいう。好ましい実施形態では、「アルキルチオ」部分は−Ｓ−アルキル、−Ｓ−アルケニル、−Ｓ−アルキニル、および−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８のうちの１つによって表され、ここでｍおよびＲ８は上で定義される。代表的なアルキルチオ基はメチルチオ、エチルチオなどを含む。
【０４９０】
「カルボニル」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうるような部分を含む：
【化１０１】
2008504840.tif 000135
ここでＸは結合であるかまたは酸素または硫黄を表し、およびＲ１１は水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８または医薬として許容される塩を表し、Ｒ’１１は水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８を表し、ここでｍおよびＲ８は上で定義される。Ｘが酸素でありおよびＲ１１またはＲ’１１が水素でない場合、式は「エステル」を表す。Ｘが酸素でありおよびＲ１１が上で定義される通りである場合、その部分はここではカルボン酸基と呼ばれ、および特にＲ１１が水素である場合、式は「カルボン酸」を表す。Ｘが酸素でありおよびＲ’１１が水素である場合、式は「ギ酸」を表す。一般的に、上式の酸素原子が硫黄で置換される場合、式は「チオールカルボニル」基を表す。Ｘが硫黄でありおよびＲ１１またはＲ’１１が水素でない場合、式は「チオールエステル」を表す。Ｘが硫黄でありおよびＲ１１が水素である場合、式は「チオールカルボン酸」を表す。Ｘが硫黄でありおよびＲ’１１が水素である場合、式は「チオールギ酸」を表す。一方、Ｘが結合でありおよびＲ１１が水素でない場合、上式は「ケトン」基を表す。Ｘが結合でありおよびＲ１１が水素である場合、上式は「アルデヒド」基を表す。
【０４９１】
「アルコキシル」または「アルコキシ」の語はここでは、結合した酸素ラジカルを有する、上で定義された通りのアルキル基をいう。代表的なアルコキシル基は、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどを含む。「エーテル」は１個の酸素によって共有結合した２個の炭化水素である。したがって、アルキルをエーテルにするアルキルの置換基は、アルコキシルであるかまたはそれに類似し、たとえば−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８のうちの１つによって表すことができ、ここでｍおよびＲ８は上に記載される。
【０４９２】
「スルホナート」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分を含む：
【化１０２】
2008504840.tif 000136
ここでＲ４１は電子対、水素、アルキル、シクロアルキル、またはアリールである。
【０４９３】
トリフリル、トシル、メシル、およびノナフリルの語は本分野で知られており、およびそれぞれトリフルオロメタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、メタンスルホニル、およびノナフルオロブタンスルホニル基をいう。トリフラート、トシラート、メシラート、およびノナフラートの語は本分野で知られており、およびそれぞれトリフルオロメタンスルホナートエステル、ｐ−トルエンスルホナートエステル、メタンスルホナートエステル、およびノナフルオロブタンスルホナートエステル官能基および前記の基を含む分子をいう。
【０４９４】
略語Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、Ｔｆ、Ｎｆ、Ｔｓ、Ｍｓはそれぞれメチル、エチル、フェニル、トリフルオロメタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルおよびメタンスルホニルを表す。当業者である有機化学者に利用される略語のより包括的な一覧が、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの各巻の第一号にある；この一覧は典型的にはＳｔａｎｄａｒｄ Ｌｉｓｔ ｏｆ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓと題する表で示される。前記表に含まれる略語、および当業者である有機化学者に利用されるすべての略語が、参照により本開示に含まれる。
【０４９５】
「硫酸」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分を含む：
【化１０３】
2008504840.tif 000137
ここでＲ４１は上で定義される通りである。
【０４９６】
「スルホニルアミノの語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分を含む：
【化１０４】
2008504840.tif 000138
【０４９７】
「スルファモイル」の語は本分野で知られており、および次の一般式で表されうる部分を含む：
【化１０５】
2008504840.tif 000139
【０４９８】
「スルホニル」の語は、ここでは、次の一般式で表されうる部分を含む：
【化１０６】
2008504840.tif 000140
ここでＲ４４は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールより成る群から選択される。
【０４９９】
「スルホキシド」の語はここでは、次の一般式で表されうる部分をいう：
【化１０７】
2008504840.tif 000141
ここでＲ４４は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アラルキル、またはアリールより成る群から選択される。
【０５００】
「セレノアルキル」とは、結合した置換セレノ基を有するアルキル基をいう。アルキル上で置換されうる典型的な「セレノエーテル」は、−Ｓｅ−アルキル、−Ｓｅ−アルケニル、−Ｓｅ−アルキニル、および−Ｓｅ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７のうちの１つから選択され、ｍおよびＲ７は上記で定義されている。
【０５０１】
類似の置換をアルケニルおよびアルキニル基に行い、たとえば、アミノアルケニル、アミノアルキニル、アミドアルケニル、アミドアルキニル、イミノアルケニル、イミノアルキニル、チオアルケニル、チオアルキニル、カルボニル置換アルケニルまたはアルキニルを生じることができる。ここでは、たとえばアルキル、ｍ、ｎ、などの各表現の定義は、それが任意の構造中に１個より多数存在する場合、同一構造中の他の場所での定義とは独立していることが意図される。
【０５０２】
「置換」または「〜で置換」は、そのような置換は置換原子および置換基の許容される原子価に従うという、および置換の結果としてたとえば転位、環化、脱離などによるような変化を自発的に生じない安定化合物を生じるという黙示条件を含むと理解される。
【０５０３】
ここでは、「置換」の語は有機化合物のすべての許容される置換基を含むと考えられる。広い見方では、許容される置換基は有機化合物の非環式および環式、分枝鎖および非分枝鎖、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族置換基を含む。例となる置換基は、たとえば、ここで上に記載されたものを含む。許容される置換基は、適当な有機化合物について１つ以上および同一または異なりうる。本発明の目的については、窒素のようなヘテロ原子は、水素置換基および／またはそのヘテロ原子の原子価を満たすここで記載された有機化合物の任意の許容される置換基を有しうる。本発明は、有機化合物の許容される置換基によっていかなる形でも限定されないことが意図される。
【０５０４】
「保護基」の語はここでは、潜在的に反応性の官能基を、望まれない化学的変化から守る一時的な置換基を意味する。そのような保護基の例は、カルボン酸のエステル、アルコールのシリルエーテル、および、アルデヒドおよびケトンのアセタールおよびケタールをそれぞれ含む。保護基の化学の分野は総説がある（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．； Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．； Ｗｉｌｅｙ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）。
【０５０５】
本発明の一部の化合物は、特定の幾何または立体異性形で存在しうる。本発明はシスおよびトランス異性体、Ｒ−およびＳ−鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、そのラセミ混合物、および他のその混合物を含むそのような化合物すべてを、本発明の範囲内にあると考える。追加の不斉炭素原子が、アルキル基のような置換基に存在しうる。そのような異性体すべて、およびその混合物は、本発明に包含されることが意図される。
【０５０６】
たとえば、本発明の化合物の特定の鏡像異性体が望まれる場合、不斉合成によって調製でき、またはキラル助剤を用いた誘導体化によって調製できここで結果として生じるジアステレオマー混合物は分離されおよび補助基は切断されて純粋な目的鏡像異性体を与える。代替的に、分子がアミノ基のような塩基性官能基を含む場合、またはカルボン酸基のような酸性官能基を含む場合、適当な光学的に活性な酸または塩基を用いてジアステレオマー塩が形成され、次いで本分野でよく知られる分別再結晶またはクロマトグラフィー法によって、そのように形成されたジアステレオマーの分割、およびその後の純粋な鏡像異性体の回収を実施する。
【０５０７】
上記の化合物の考えられる同等物は、化合物がシグマ受容体と結合する効力に悪影響を与えない置換基の１つ以上の単純な改変がなされていることを特徴とする、他の面ではそれに相当し、およびその同一の一般的特性（たとえば、鎮痛剤として機能）を有する化合物を含む。一般的に、本発明の化合物は、たとえば下記の通りの一般反応スキームに説明される方法またはその改変によって、容易に入手可能な開始材料、試薬および従来の合成手順を用いて調製されうる。これらの反応では、それ自身公知であるがここでは言及されない変形を利用することもまた可能である。
【０５０８】
本発明の目的のためには、化学元素はＰｅｒｉｏｄｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，６７ｔｈ Ｅｄ．，１９８６−８７，内表紙に従って同定される。
【０５０９】
医薬組成物
別の一態様では、本発明は、一種類以上の医薬品として許容されるキャリヤー（添加剤）および／または希釈剤と共に処方された、一種類以上の上記の化合物の治療的有効量を含む、医薬品として許容される組成物を提供する。下記に詳細に示す通り、本発明の医薬組成物は、下記に適合させたものを含む固体または液体の形での投与のために特に処方することができる：（１）経口投与、たとえば、水薬（水系または非水系液剤または懸濁剤）、錠剤、たとえば、口腔、舌下、および全身吸収を目的とするもの、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への投与用のペースト；（２）非経口投与、たとえば皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射によって、たとえば、滅菌液剤または懸濁剤、または徐放性処方として；（３）局所使用、たとえば、皮膚に使用するクリーム、軟膏、または徐放性パッチまたはスプレーとして；（４）膣内にまたは直腸内に、たとえば、ペッサリー、クリーム、または泡として；（５）舌下に；（６）眼に；（７）経皮で；または（８）経鼻で。
【０５１０】
ここで用いられる「治療的有効量」の語句は、本発明の化合物を含む化合物、材料、または組成物が、任意の医療処置に適用可能な合理的な利益／リスク比で、少なくとも、動物の中の細胞の部分集団において何らかの目的の治療効果を生じるために有効である量を意味する。
【０５１１】
「医薬品として許容される」の語句はここでは、健全な医療上の判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適当であり、過剰な毒性、刺激性、アレルギー反応、またはその他の問題または合併症がなく、合理的な利益／リスク比に相応した、化合物、材料、組成物、および／または剤形をいうのに用いられる。
【０５１２】
ここで用いられる「医薬品として許容されるキャリヤー」の語句は、医薬品として許容される材料、組成物、または媒体、たとえば液体または固体増量剤、希釈剤、添加物、製造補助剤（たとえば、滑沢剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、または、一種類臓器または身体の部分から、別の臓器または身体の部分へ、当該化合物を運搬または輸送するのに関与する材料を封入する溶媒を意味する。各キャリヤーは、処方のその他の成分と適合性であり患者に有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。医薬品として許容されるキャリヤーとして用いることができる材料の一部の例は下記を含む：１）糖類、たとえば乳糖、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、たとえばトウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；（３）セルロース、およびその誘導体、たとえばナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、および酢酸セルロース；（４）トラガント末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）添加物、たとえばカカオ脂および坐剤ロウ；（９）油、たとえば落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油；（１０）グリコール、たとえばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、たとえばグリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール；（１２）エステル、たとえばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、たとえば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；および（２２）医薬処方に用いられるその他の無毒性の適合性物質。
【０５１３】
上記に示す通り、本化合物の一部の実施形態は、アミノまたはアルキルアミノといった塩基性官能基を含むことができ、および、したがって医薬品として許容される酸と共に、医薬品として許容される塩を形成することができる。「医薬品として許容される塩」の語はこの点で、本発明の化合物の、相対的に無毒性の、無機および有機酸付加塩をいう。これらの塩は、ｉｎ ｓｉｔｕで投与媒体中で、または剤形製造過程で、または精製した本発明の化合物を遊離塩基の形で、適当な有機酸または無機酸と別々に反応させ、およびそのように生じた塩を続く精製の間に単離することによって、調製することができる。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリル酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフテン酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などを含む（たとえば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６： １−１９を参照）。
【０５１４】
本化合物の医薬品として許容される塩は、たとえば、無毒性の有機酸または無機酸からの、従来の無毒性塩またはその化合物の第四級アンモニウム塩を含む。たとえば、そのような従来の無毒性塩は、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、などといった無機酸に由来するもの；および有機酸、たとえば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオ酸などといった有機酸から調製された塩を含む。
【０５１５】
別の場合には、本発明の化合物は１個以上の酸性官能基を含むことができ、および、したがって、医薬品として許容される塩基と、医薬品として許容される塩を形成することができる。「医薬品として許容される塩」の語はこの場合、本発明の化合物の、相対的に無毒性の、無機および有機塩基付加塩をいう。これらの塩は同様に、ｉｎ ｓｉｔｕで投与媒体中で、または剤形製造過程で、または精製した本化合物を遊離酸の形で、たとえば医薬品として許容される金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩といった適当な塩基と、アンモニアと、または医薬品として許容される有機一級、二級、または三級アミンと、別々に反応させることによって調製することができる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム塩などを含む。塩基付加塩の形成に有用である代表的な有機アミンは、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを含む。（たとえば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，上記を参照）
湿潤剤、乳化剤、および滑沢剤、たとえばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、および着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香料、保存料および酸化防止剤もまた、本組成物中に存在しうる。
【０５１６】
医薬品として許容される酸化防止剤の例は下記を含む：（１）水溶性酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）脂溶性酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸パルミチン酸エステル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール、など；および（３）金属キレート剤、たとえばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸、など。
【０５１７】
本発明の処方は、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含む）、直腸内、膣内および／または非経口投与に適当であるものを含む。処方は単位用量剤形で便利に与えることができ、および薬学の分野でよく知られている任意の方法によって調製することができる。キャリヤー材料と組み合わせて単一用量剤形を製することができる有効成分の量は、治療する宿主、特定の投与形態に応じて変化する。キャリヤー材料と組み合わせて単一用量剤形を製することができる有効成分の量は、一般的に、治療効果を生じる化合物の量となる。一般的に、百パーセントのうち、この量は有効成分の約０．１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、非常に好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの範囲である。
【０５１８】
一部の実施形態では、本発明の処方は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤たとえば胆汁酸、および高分子キャリヤー、たとえば、ポリエステルおよびポリ無水物より成る群から選択された添加物；および本発明の化合物を含む。一部の実施形態では、前述の処方は、経口的に生物が利用可能な本発明の化合物を与える。
【０５１９】
これらの処方または組成物を調製する方法は、本発明の化合物を、キャリヤーおよび、必要に応じて、一種類以上の副成分と会合させる段階を含む。一般的に、その処方は、本発明の化合物を液体キャリヤー、または微細に分割された固体キャリヤー、または両方と均一におよび密に会合させ、その後、必要に応じて、製品を成形することによって調製される。
【０５２０】
本発明の経口投与に適した処方は、それぞれ有効成分として本発明の化合物の規定量を含む、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、トローチ剤（香味つき基剤、通常スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガントを用いる）、散剤、顆粒剤の形、または水系または非水系液体中の液剤または懸濁剤として、または水中油型または油中水型液体の乳剤として、またはエリキシル剤またはシロップ剤として、または香錠剤として（不活性基剤、たとえばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアゴムを用いて）および／または含漱剤としてなどであることができる。本発明の化合物はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与することができる。
【０５２１】
経口投与用の本発明の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、散剤、顆粒剤、トローチなど）では、有効成分は、一種類以上の医薬品として許容されるキャリヤー、たとえばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または下記のうち任意のものと混合される：（１）賦形剤または増量剤、たとえばデンプン、乳糖、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸；（２）結合剤、たとえば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアラビアゴム；（３）湿潤剤、たとえばグリセロール；（４）崩壊剤、たとえば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム；（５）溶液抑制剤、たとえばパラフィン；（６）吸収加速剤、たとえば四級アンモニウム化合物、および界面活性剤、たとえば、ポロクサマーおよびラウリル硫酸ナトリウム；（７）湿潤剤、たとえば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤；（８）吸収剤、たとえばカオリンおよびベントナイト粘土；（９）滑沢剤、たとえばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびその混合物；（１０）着色剤；および（１１）徐放剤、たとえばクロスポビドンまたはエチルセルロース。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、医薬組成物はまた緩衝剤を含むことができる。同様の種類の固体組成物もまた、ラクトースすなわち乳糖、および高分子量ポリエチレングリコールなどといった添加物を用い、硬質および軟質ゼラチンカプセル剤で、賦形剤として用いることができる。
【０５２２】
錠剤は、必要に応じて一種類以上の副成分と共に、圧縮または成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、結合剤（たとえば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存料、崩壊剤（たとえば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性または分散剤を用いて調製することができる。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を適当な機械で成形することによって製造できる。
【０５２３】
本発明の医薬組成物の錠剤、およびその他の固体剤形、たとえば糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤は、必要に応じてコーティングおよび被覆、たとえば腸溶コーティングおよび医薬処方技術でよく知られているその他のコーティングを用いて得るまたは調製することができる。それらはまた、たとえば、目的の放出プロファイルを与えるためのさまざまな割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリクス、リポソームおよび／またはマイクロスフィアを用いて、有効成分の遅放性または徐放性を与えるように処方することができる。それらはまた迅速な放出のために処方することができ、たとえば、凍結乾燥することができる。それらはまた、たとえば、細菌を保持するフィルターを通した濾過によって、または使用直前に滅菌水または他の注射用滅菌媒体に溶解することができる滅菌固体組成物の形での滅菌剤の組み込みによって、滅菌することができる。これらの組成物はまた、必要に応じて不透明化剤を含むことができ、および消化管の特定の部分で、必要に応じて徐放性に、有効成分だけを、または優先的に、放出する組成のものであることができる。使用することができる埋め込み組成物の例は、ポリマー物質およびロウを含む。有効成分はまた、適切な場合には、上記の添加物の一種類以上を用いた、マイクロカプセル化形態であることができる。
【０５２４】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形は、医薬品として許容される乳剤、マイクロエマルション、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。有効成分に加えて、液体剤形は本分野で一般的に用いられる不活性な賦形剤、たとえば水またはその他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、たとえばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびその混合物を含むことができる。
【０５２５】
不活性な希釈剤の他に、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香料、着色料、着香料、および保存料といった助剤を含むこともできる。
【０５２６】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、たとえば、エトキシルイソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガント、およびその混合物を含むことができる。
【０５２７】
本発明の医薬組成物の直腸内または膣内投与のための処方は、坐剤として提供することができ、これは一種類以上の本発明の化合物を、たとえば、カカオ脂、ポリエチレングリコール、坐剤用ロウまたはサリチル酸塩を含む一種類以上の適当な非刺激性添加物またはキャリヤーと混合することによって調製することができ、および固体室温にて固体であるが、体温では液体であり、したがって、直腸または膣腔内で溶解しおよび活性化合物を放出する。
【０５２８】
膣内投与に適した本発明の処方はまた、本分野で適当であることが知られているキャリヤーを含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト剤、泡、またはスプレー処方を含む。
【０５２９】
本発明の化合物の局所または経皮投与のための剤形は、散剤、スプレー、軟膏、ペースト剤、クリーム、ローション、ゲル、液剤、パッチ、および吸入剤を含む。活性化合物は、医薬品として許容されるキャリヤーと、および必要な任意の保存料、緩衝剤、または推進剤と、滅菌条件下で混合することができる。
【０５３０】
軟膏、ペースト剤、クリーム、およびゲルは、本発明の活性化合物に加えて、添加物、たとえば動植物脂肪、油、ロウ、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、および酸化亜鉛、またはその混合物を含むことができる。
【０５３１】
散剤およびスプレーは、本発明の化合物に加えて、添加物、たとえば乳糖、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を含むことができる。スプレーは、さらに従来の推進剤たとえば塩化フッ化炭化水素および揮発性非置換炭化水素、たとえばブタンおよびプロパンを含むことができる。
【０５３２】
経皮パッチは、本発明の化合物の身体への徐放を与える付加的な利点を有する。そのような剤形は、化合物を適当な媒体に溶解または分散することによって得ることができる。吸収促進剤もまた、皮膚を通した化合物の流入を増加させるために用いることができる。そのような流入の速度は、速度調節膜を用意するかまたは化合物を高分子マトリクスまたはゲル中に分散させることによって調節することができる。
【０５３３】
眼科用処方、眼軟膏、散剤、液剤などもまた本発明の範囲内にあると考えられる。
【０５３４】
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、本発明の一種類以上の化合物を、医薬品として許容される一種類以上の滅菌等張水系または非水系液剤、分散剤、懸濁剤または乳剤、または滅菌注射用液剤または分散剤へ使用直前に再構成することができる滅菌散剤、と組み合わせて含み、糖類、アルコール、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、処方を目的の対象の血液と等張にする溶質、または懸濁化剤または濃厚化剤を含むことができる。
【０５３５】
本発明の医薬組成物に使用することができる適当な水系および非水系キャリヤーの例は、水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、など）、およびその適当な混合物、植物油、たとえばオリーブ油、および注射用有機エステル、たとえばオレイン酸エチルを含む。適当な流動性は、たとえば、レシチンのようなコーティング材料の使用によって、分散剤の場合には必要な粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【０５３６】
これらの組成物はまた、保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散化剤といった助剤を含むことができる。対象化合物に対する微生物の作用の防止は、さまざまな抗菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、などの添加によって確保することができる。また、等張剤、たとえば糖類、塩化ナトリウムなどを組成物に含めることが望ましい可能性がある。加えて、注射用剤形の持続性吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンといった、吸収を遅らせる物質の添加によって実現することができる。
【０５３７】
一部の場合には、医薬の効果を持続させるために、皮下または筋肉内注射からの医薬の吸収を遅らせることが望ましい。これは、水溶性が低い結晶性または非晶性材料の液体懸濁剤の使用によって達成することができる。医薬の吸収の速度はその結果、溶解の速度に依存し、溶解の速度は今度は結晶の大きさおよび結晶形に依存しうる。代替的に、非経口的に投与される剤形の持続性吸収は、その医薬を油媒体に溶解または懸濁することによって達成される。
【０５３８】
注射用デポ形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドといった生分解性ポリマー中に対象化合物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって製造される。ポリマーに対する薬物の比、および使用した特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出の速度を調節することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）を含む。デポ注射用処方はまた、体組織に適合性であるリポソームまたはマイクロエマルションに薬物を封入することによって調製される。
【０５３９】
本発明の化合物が医薬として、ヒトおよび動物に投与される場合、それ自体を、またはたとえば０．１ないし９９％（より好ましくは、１０ないし３０％）の有効成分を医薬品として許容されるキャリヤーと組み合わせて含む医薬組成物として投与することができる。
【０５４０】
本発明の調製物は、経口的に、非経口的に、局所に、または直腸内に投与することができる。それらはもちろん各投与経路に適した剤形で投与される。たとえば、それらは、錠剤またはカプセル剤の形態で、注射、吸入、眼科用ローション、軟膏、坐剤、などによって、注射、注入、または吸入による投与；ローションまたは軟膏によって局所；および坐剤によって直腸内に投与される。経口投与が好ましい。
【０５４１】
ここで用いられる「非経口投与」および「非経口的に投与される」の語句は、経腸および局所投与以外の、通常は注射による投与形態を意味し、および、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、関節包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、角皮内、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射および輸液を制限無しに含む。
【０５４２】
ここで用いられる「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」および「末梢に投与される」の語句は、化合物、医薬、または他の材料が、患者の全身に入りおよびしたがって代謝およびその他の同様の処理に供されるような、たとえば皮下投与のような、直接に中枢神経系へ以外の投与を意味する。
【０５４３】
これらの化合物は、ヒトおよびその他の動物へ治療のために、経口的に、経鼻的にたとえばスプレーによって、直腸内に、膣内に、非経口的に、大槽内に、および局所的にたとえば散剤、軟膏またはドロップによって、口腔におよび舌下にを含む任意の適当な投与経路によって、投与することができる。
【０５４４】
選択した投与経路にかかわらず、適当な水和形で用いることができる本発明の化合物、および／または本発明の医薬組成物は、当業者に既知である従来の方法によって、医薬品として許容される剤形に処方される。
【０５４５】
本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成物、および投与形態について、患者に対して毒性にならずに、目的の治療反応を達成するのに有効である有効成分の量を得られるように変えることができる。
【０５４６】
選択された用量レベルは、使用する本発明の特定の化合物、またはそのエステル、塩、またはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用する特定の化合物の排泄速度または代謝速度、治療期間、使用する特定の化合物と組み合わせて用いられる他の医薬、化合物および／または材料、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、症状、全身的健康、および以前の病歴、および医療分野においてよく知られている同様の因子を含むいろいろな因子に依存する。
【０５４７】
当業者である医師または獣医師は、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し処方することができる。たとえば、医師または獣医師は、医薬組成物に使用される本発明の化合物の用量を、目的の治療効果を達成するために必要であるよりも低いレベルで開始し、目的の効果が達成されるまで徐々に用量を増やすことができる。
【０５４８】
一般的に、本発明の化合物の適当な一日量は、治療効果を生じるのに有効である最低の用量である化合物の量である。そのような有効量は一般的に上記の因子に依存する。一般的に、本発明の化合物の患者に対する経口、静脈内、脳室内および皮下投与量は、適応の鎮痛作用のために使用する場合、１日当たりの体重キログラム当たり約０．０００１ｍｇないし約１００ｍｇの範囲である。
【０５４９】
必要に応じて、活性化合物の有効一日量は、一日を通じて適当な間隔で別々に、必要に応じて単位剤形で投与される、２、３、４、５、６またはそれより多数の部分投与量として投与することができる。好ましい投薬は一日１回投与である。
【０５５０】
本発明の化合物を単独で投与することが可能である一方、当該化合物を医薬処方（組成物）として投与することが好ましい。
【０５５１】
本発明に記載の化合物は、他の医薬から類推して、ヒトまたは動物用薬における使用に便利な任意の方法での投与のために処方することができる。
【０５５２】
別の一態様では、本発明は、一種類以上の医薬品として許容されるキャリヤー（添加剤）および／または希釈剤と共に処方された、一種類以上の対象化合物の治療的有効量を上記の通り含む、医薬品として許容される組成物を提供する。下記に詳細に示す通り、本発明の医薬組成物は、下記に適合させたものを含む固体または液体の形での投与のために特に処方することができる：（１）経口投与、たとえば、水薬（水系または非水系液剤または懸濁剤）、錠剤、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への投与用のペースト；（２）非経口投与、たとえば、皮下、筋肉内、または静脈内注射によって、たとえば、滅菌液剤または懸濁剤として；（３）局所使用、たとえば、皮膚、肺、または粘膜に使用するクリーム、軟膏、またはスプレーとして；または（４）膣内にまたは直腸内に、たとえば、ペッサリー、クリームまたは泡として；（５）舌下にまたは口腔内に；（６）眼に；（７）経皮的に；または（８）経鼻で。
【０５５３】
「治療」の語は、予防、治療、および治癒もまた包含することが意図される。
【０５５４】
この治療を受ける患者は、必要とする任意の動物であり、霊長類、特にヒト、およびその他の哺乳類たとえばウマ、ウシ、ブタ、およびヒツジ；および家禽および一般的に愛玩動物を含む。
【０５５５】
本発明の化合物は、それ自体で、または医薬品として許容されるキャリヤーとの混合物として投与することができ、および、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグリコシド、および糖ペプチドといった抗菌剤と併せて投与することもできる。併用治療は、このように、先に投与されたものの治療効果が完全に消えないうちに次のものが投与される方法での、活性化合物の、連続的な、同時の、および別々の投与を含む。
【０５５６】
本発明の活性化合物を動物飼料へ添加することは、好ましくは活性化合物を有効量で含む適当な飼料プレミックスを調製し、そのプレミックスを完成飼料に組み込むことによって達成される。
【０５５７】
代替的に、有効成分を含む中間濃縮物または飼料添加剤を飼料に混合することができる。そのような飼料プレミックスおよび完成飼料を調製および投与できる方法は参考書に記載されている（たとえば“Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｄｍａｎ ａｎｄ ＣＯ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９６９または“Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ Ｆｅｅｄｓ ａｎｄ Ｆｅｅｄｉｎｇ」Ｏ ａｎｄ Ｂ ｂｏｏｋｓ，Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ，Ｏｒｅ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９７７）。
【０５５８】
ミセル
近年、製薬産業はマイクロエマルジョン化技術を、一部の親油性（水に不溶性）の薬剤の生物学的利用能を改善するために導入した。例は、トリメトリン（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１７ （１２），１６８５−１７１３，１９９１およびＲＥＶ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ８０ （７），７１２−７１４，１９９１）を含む。特に、マイクロエマルジョン化は、循環系の代わりにリンパ系への吸収を優先的に導き、それによって肝臓をバイパスし、および肝循環における化合物の分解を防ぐことによる生物学的利用能の向上を与える。
【０５５９】
発明の一態様では、処方は本発明の化合物および少なくとも一種類の両親媒性キャリヤーから形成されたミセルを含み、そのミセルは約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。より好ましい実施形態は約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、およびさらにより好ましい実施形態は約３０ｎｍ未満、またはさらに約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０５６０】
すべての適当な両親媒性キャリヤーが考慮される一方、現在好ましいキャリヤーは一般的に、一般に安全と認められる（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ−Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ−ａｓ−Ｓａｆｅ、ＧＲＡＳ）ものであり、および、本発明の化合物を可溶化すること、および以後の段階で溶液が複雑な水相（たとえばヒト胃腸管で見られるもののような）と接触する際にマイクロエマルジョン化することの両方が可能なものである。通常は、これらの必要条件を満たす両親媒性成分は、ＨＬＢ（親油性に対する親水性バランス）値２〜２０を有し、およびそれらの構造はＣ−６からＣ−２０の範囲の直鎖脂肪族ラジカルを含む。例はポリエチレン−グリコール化脂肪グリセリドおよびポリエチレングリコールである。
【０５６１】
特に好ましい両親媒性キャリヤーは、飽和およびモノ不飽和ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリド、たとえば、完全にまたは一部が水素化されたさまざまな植物油から得られるものである。そのような油は、有利にトリ、ジ、およびモノ脂肪酸グリセリド、および対応する脂肪酸のジおよびモノポリエチレングリコールエステルから成り、カプリン酸４〜１０％、カプリン酸３〜９％、ラウリン酸４０〜５０％、ミリスチン酸１４〜２４％、パルミチン酸４〜１４％、およびステアリン酸５〜１５％を含む特に好ましい脂肪酸組成を有しうる。両親媒性キャリヤーの別の有用な種類は、部分エステル化ソルビタンおよび／またはソルビトールを含み、飽和またはモノ不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ系）または対応するエトキシル化類縁体（ＴＷＥＥＮ系）を含む。
【０５６２】
市販の両親媒性キャリヤーが特に考慮され、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ系、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（すべてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（仏国Ｓａｉｎｔ Ｐｒｉｅｓｔ）により製造販売）、モノオレイン酸ＰＥＧ、ジオレイン酸ＰＥＧ、モノラウリン酸およびジラウリン酸ＰＥＧ、レシチン、ポリソルベート８０など（米国および世界の数社により製造販売）を含む。
【０５６３】
ポリマー
本発明における使用に適した親水性ポリマーは、容易に水に溶解し、小胞を形成する脂質と共有結合でき、およびｉｎ ｖｉｖｏで毒性作用無しに耐容される（すなわち、生体適合性である）ものである。適当なポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（別名ポリラクチド）、ポリグリコール酸（別名ポリグリコリド）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体、およびポリビニルアルコールを含む。好ましいポリマーは、約１００または１２０ダルトンから最大約５，０００または１０，０００ダルトン、およびより好ましくは約３００ダルトンないし約５，０００ダルトンの分子量を有するものである。特に好ましい一実施形態では、ポリマーは、約１００ないし約５，０００ダルトンの分子量を有する、およびより好ましくは約３００ないし約５，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特に好ましい一実施形態では、ポリマーは７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーはまた、含まれるモノマーの数によって定義されうる；本発明の好ましい一実施形態は、少なくとも約３個のモノマーのポリマー、たとえば３個のモノマーから成るＰＥＧポリマー（約１５０ダルトン）を利用する。
【０５６４】
本発明における使用に適しうる他の親水性ポリマーは、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、および、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースといった誘導体化セルロースを含む。
【０５６５】
一部の実施形態では、本発明の処方は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリルおよびメタクリルエステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびその共重合体、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（ｂｕｔｉｃ ａｃｉｄ）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−カプロラクトン共重合体）、多糖、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリレート、およびその配合物、混合物、または共重合体より成る群から選択される生体適合性ポリマーを含む。
【０５６６】
シクロデキストリン
シクロデキストリンは、６、７または８個のグルコース単位から成る環状オリゴ糖であり、それぞれギリシャ文字のアルファ、ベータまたはガンマで表される。グルコース単位６個より少ないシクロデキストリンは存在が知られていない。グルコース単位はアルファ−１，４−グルコシド結合によって繋がっている。糖単位の椅子型配座の結果として、すべての二次水酸基（Ｃ−２、Ｃ−３の）は環の片側に位置し、一方、Ｃ−６のすべての一次水酸基は反対側に位置する。結果として、外側面は親水性であり、シクロデキストリンは水溶性になる。対照的に、シクロデキストリンの凹部は、Ｃ−３およびＣ−５原子の水素によって、およびエーテル様酸素によって覆われているため、疎水性である。これらのマトリクスは、たとえば、１７ベータ−エストラジオールといったステロイド化合物を含む、さまざまな相対的に疎水性の化合物との錯体形成を可能にする（たとえば、ｖａｎ Ｕｄｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．３８ ： １−３−１１３ （１９９４）を参照）。錯体形成はファンデルワールス相互作用によっておよび水素結合形成によって起こる。シクロデキストリンの化学の全般的総説については、Ｗｅｎｚ，Ａｇｎｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３： ８０３−８２２ （１９９４）を参照。
【０５６７】
シクロデキストリン誘導体の生理化学的性質は、置換の種類および程度に大きく依存する。たとえば、水への溶解度は、不溶性（たとえば、トリアセチル−ベータ−シクロデキストリン）から１４７％可溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−ベータ−シクロデキストリン）の範囲にわたる。加えて、シクロデキストリン誘導体は多数の有機溶媒に可溶である。シクロデキストリンの性質は、さまざまな処方成分の溶解度を上昇または低下させることにより、その溶解度の調節を可能にする。
【０５６８】
多数のシクロデキストリンおよびその調製方法が記載されている。たとえば、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ），ｅｔ ａｌ．（米国特許第３，４５３，２５９号明細書）およびＧｒａｍｅｒａ，ｅｔ ａｌ．（米国特許第３，４５９，７３１号明細書）は、電気的中性のシクロデキストリンを記載した。他の誘導体は、陽イオン的性質を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩ）、米国特許第３，４５３，２５７号明細書］、不溶性架橋化シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ、米国特許第３，４２０，７８８号明細書）、および陰イオン的性質を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、米国特許第３，４２６，０１１号明細書］を含む。陰イオン的性質を有するシクロデキストリン誘導体の中で、カルボン酸、亜リン酸、亜ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸、チオリン酸、チオスルフィン酸、およびスルホン酸が親シクロデキストリンに付加されている［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、上記を参照］。さらに、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体が、Ｓｔｅｌｌａ，ｅｔ ａｌ．（米国特許第５，１３４，１２７号明細書）によって記載されている。
【０５６９】
リポソーム
リポソームは、水系の内部区画を封入する少なくとも１つの脂質二重層膜から成る。リポソームは、膜の種類によって、および大きさによって特徴づけることができる。小型の単層小胞（ＳＵＶ）は一枚の膜を有しおよび典型的には直径０．０２ないし０．０５μｍの範囲である；大型の単層小胞（ＬＵＶ）は典型的には０．０５μｍより大きい。少数層の大型小胞および多層小胞は、複数の、通常は同心状の、膜層を有し、および典型的には０．１μｍより大きい。いくつかの非同心状の膜を有するリポソーム、すなわち、大きい小胞の中に含まれるいくつかの小さい小胞は、多小胞性小胞と呼ばれる。
【０５７０】
本発明の一態様は、本発明の化合物を含むリポソームを含む処方に関し、リポソーム膜はより大きい運搬容量を有するリポソームを提供するために処方される。代替的にまたは加えて、本発明の化合物は、リポソームのリポソーム二重層の内部に含まれるかまたは二重層上に吸着されることが可能である。本発明の化合物は、脂質界面活性剤と凝集しおよびリポソームの内腔内に保持されうる；これらの場合には、リポソーム膜は、有効成分−界面活性剤凝集物の破壊作用に耐えるように処方される。
【０５７１】
本発明の一実施形態によると、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化された脂質を含み、そのためＰＥＧ鎖は脂質二重層の内表面から、リポソームによって封入される内腔内へ伸び、および脂質二重層の外側から周囲の環境へ伸びる。
【０５７２】
本発明のリポソームの内部に含まれる有効成分は、可溶化形である。界面活性剤および有効成分の凝集物（たとえば、目的の有効成分を含むエマルジョンまたはミセル）は、本発明に記載のリポソームの内腔に捕捉されうる。界面活性剤は有効成分を分散および可溶化させる作用をし、および、さまざまな鎖長（たとえば約Ｃ１４〜約Ｃ２０）の生体適合性リソホスファチジルコリン（ＬＰＣ）を含む任意の適当な脂肪族、環式脂肪族または芳香族界面活性剤から選択されうる。ＰＥＧ脂質のようなポリマー誘導体化脂質はまた、ミセル／膜の融合を阻害するように作用するため、および界面活性剤分子へのポリマーの付加が界面活性剤のＣＭＣを減少させおよびミセル形成を助けるため、ミセル形成に利用されうる。マイクロモルの範囲のＣＭＣを有する界面活性剤が好ましい；より大きいＣＭＣの界面活性剤は、本発明のリポソーム内に捕捉されたミセルを調製するために利用しうるが、しかし、ミセル界面活性剤モノマーはリポソーム二重層安定性に影響を与える可能性があり、および目的の安定性のリポソームを設計する上での因子となる。
【０５７３】
本発明に記載のリポソームは、本分野で公知であるさまざまな手法のうち任意のものによって調製されうる。たとえば，米国特許第４，２３５，８７１号明細書；国際公開第９６／１４０５７号パンフレット；Ｎｅｗ ＲＲＣ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ： Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ （１９９０），ｐａｇｅｓ ３３−１０４； Ｌａｓｉｃ ＤＤ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｆｒｏｍ ｐｈｙｓｉｃｓ ｔｏ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ ＢＶ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９９３を参照。
【０５７４】
たとえば、本発明のリポソームは、たとえばリポソームで目的とされる誘導体化脂質の最終モルパーセントに相当する脂質濃度で、予め形成されたリポソームを脂質を組み込んだポリマーから成るミセルへ曝露することにより、親水性ポリマーを用いて誘導体化した脂質を、予め形成されたリポソームへ拡散させることによって調製されうる。親水性ポリマーを含むリポソームはまた、本分野で公知である通り、ホモジナイズ、脂質分野の水和、または押出技術によって形成されうる。
【０５７５】
別の典型的な処方手順では、有効成分はまず超音波処理により、疎水性分子を容易に可溶化するリソホスファチジルコリンまたは他の低ＣＭＣ界面活性剤（ポリマーグラフト化脂質を含む）中に分散される。結果として生じる有効成分のミセル懸濁物は、次いで、適当なモルパーセントのポリマーグラフト化脂質、またはコレステロールを含む、乾燥脂質試料を再水和するのに用いられる。本分野で公知である通りの押出技術を用いて、脂質および有効成分懸濁物が次いでリポソーム中に形成され、および、カプセル化されなかった溶液から標準的なカラム分離によって分離されたリポソームが結果として得られる。
【０５７６】
本発明の一態様では、リポソームは選択されたサイズ範囲で実質的に均一な大きさを有するように調製される。１つの効果的なサイズ処理法は、リポソームの水系懸濁液を、選択された均一の孔径を有する一連のポリカーボネート膜を通して押し出すことを含む；膜の孔径は、その膜を通した押し出しによって生じるリポソームの最大サイズに概ね対応する。たとえば、米国特許第４，７３７，３２３号明細書を参照。
【０５７７】
放出修飾剤
本発明の処方の放出特性は、封入材料、封入された医薬の濃度、および放出修飾剤の存在に依存する。たとえば、胃内のように低ｐＨでだけ、または腸内でのように高ｐＨでだけ放出するｐＨ感受性コーティングを用いて、放出がｐＨ依存性となるように操作しうる。胃を通過後まで放出が起きるのを防ぐために、腸溶コーティングを用いることができる。複数のコーティング、または、異なる材料に封入されたシアナミドの混合物を、胃での最初の放出に次いで後の放出を腸で得るために用いることができる。放出はまた、カプセルからの拡散による水取り込みまたは薬物の放出を増加させることができる、塩または孔形成剤を含めることによって操作されうる。薬物の溶解度を改変する添加物もまた、放出速度を調節するのに用いることができる。マトリクスの分解またはマトリクスからの放出を促進する物質もまた組み込むことができる。それらは、化合物に応じて、薬物に添加でき、分離した相として（すなわち、粒子として）添加でき、またはポリマー相に一緒に溶解することができる。すべての場合で、量は０．１ないし３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）とすべきである。分解促進剤の種類は、硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウムといった無機塩、クエン酸、安息香酸、およびアスコルビン酸といった有機酸、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、および水酸化亜鉛といった無機塩基、および硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミンといった有機塩基、および、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）といった界面活性剤を含む。マトリクスに微小構造を加える孔形成剤（すなわち、無機塩および糖といった水溶性化合物）が粒子状物質として添加される。範囲は１ないし３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）とすべきである。
【０５７８】
取り込みはまた、腸内での粒子の滞留時間を変化させることによって操作可能である。これは、たとえば、粘膜接着性ポリマーで粒子をコーティングするかまたはそれを封入材料として選択することによって達成しうる。例は、遊離カルボキシル基を有するポリマーの大部分、たとえばキトサン、セルロース、および特にポリアクリレートを含む（ここでは、ポリアクリレートとはアクリレート基および修飾アクリレート基を含むポリマー、たとえばシアノアクリレートおよびメタクリレートをいう）。
【実施例】
【０５７９】
本発明を一般的に説明したが、下記の実施例を参照することによって本発明はより容易に理解され、実施例は単に本発明の一部の態様および実施形態の説明の目的のために含められ、および本発明を制限しないことが意図される。
【０５８０】
実施例１
モノマー合成
【化１０８】
2008504840.tif 000142
ａ（ｉ）Ｘ−Ｐ（Ｃｌ）−Ｎ（ｉＰｒ）２、ＴＥＡ／ジクロロメタンまたはＸ−Ｐ−[Ｎ（ｉＰｒ）２］２、テトラゾール／テトラゾール−ジイソプロピルアンモニウム塩／ＭｅＣＮ；またはＸ−Ｐ（Ｃｌ２）、１当量のＨＮ（ｉＰｒ）２、次いで１当量の１を含むＭｅＣＮ／ジクロロメタン
【０５８１】
メチルホスホナミダイトの合成[２、Ｒ＝ＯＴＢＤＭＳ、Ｘ＝Ｍｅ、Ｂ＝アデニン（Ｎ−ｂｚ）；シトシン（Ｎ−Ａｃ）；５−メチルシトシン（Ｎ−Ｂｚ）；ウラシル；５−メチルウラシル；グアニン（Ｎ−ｉＢｕ）；またはイノシン、スキーム１）：
方法１
ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，３３ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｗａｙ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡより購入した、適当に塩基保護された５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＳ−ヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、シチジン、５−メチルシチジン、ウリジン、５−メチルウリジンまたはイノシン）を、１．２当量のクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィン（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，３３ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｗａｙ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡより入手）と、３．０当量のジイソプロピルエチルアミンを含む無水ジクロロメタン（またはＴＨＦ）中で反応させ、Ｓｉｎｈａら（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９４，２２，３１１９）によって報告された通り、目的のメチルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０５８２】
（Ｎ−Ｂｚ）−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−アデノシン−３’−Ｏ−（Ｐ−メチル）ホスホナミダイト：（Ｎ−Ｂｚ）−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−アデノシン（５ｇ，６．４ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液へ、無水ジイソプロピルアミン（２．０６ｇ、２．８ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）およびメチル−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルアミノ−クロロホスフィン（２．３ｇ、２．３ｍＬ、１２．８ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で加えた。反応混合物を室温にて１６時間攪拌した。それをその後ジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、および氷冷水（５０ｍＬ）中へ注ぎ、振とうしおよび分離した。水層をジクロロメタン（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥しおよびろ過した。減圧下での溶媒の除去に際して、粗産物５．５ｇが得られた。粗産物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーに供した。ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：Ｅｔ３Ｎ（７４：２５：１）混合物を用いて産物を溶出した。産物は白色泡状固体として得られた。（４．４ｇ、７４％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８ （ｓ，１Ｈ），７．９８ （ｓ，１Ｈ），７．７．−７．８ （ｍ，４Ｈ），７．５４ （ｍ，４Ｈ），７．２ （ｍ，２Ｈ），７．０５ （ｍ，２Ｈ），６．９４ （ｍ，２Ｈ），６．７８ （ｍ，４Ｈ），６．２ （ｄ，１Ｈ），６．０８ （ｄ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），５．４５ （ｍ，１Ｈ），５．１６ （ｍ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），４．５８ （ｍ，２Ｈ），３．７８ （ｍ，１Ｈ），３．６４ （ｍ，１Ｈ），３．３２ （ｓ，６Ｈ），２．４ （ｍ，２Ｈ），１．４ （ｄ，２Ｈ），１．０５ （ｍ，７Ｈ），０．９−１．０ （ｍ，８Ｈ），０．８ （ｓ，９Ｈ），０．２ （ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ ＮＭＲ （１６１．８２ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １２２．０１，１１８．８１．１３Ｃ ＮＭＲ （１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １５９．２３，１５９．２１，１５２．１８，１５０．８２，１４５．５５，１４２．４４，１３６．３１，１３６．２６，１３６．１４，１３６．０７，１３４．７９，１３１．９，１３０．６７，１３０．６４，１２８．８５，１２８．６５，１２８．１２，１２７．８８，１２７．１９，１２７．１２，１２４．５８，１１３．６１，８８．９６，８７．２５，８５．２８，７６．８８，７６．７３，７５．３，６４．３５，６０．０２，５４．７８，４６．７１，４４．４３，４４．３３，２５．９３，２５．８７，２０．５２，１８．３，１８．１５，１７．９６，１７．８４，１７．７２，１４．１７，１２．３５
【０５８３】
（Ｎ−ｉＢＵ）−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−グアノシン−３’−Ｏ−（Ｐ−メチル）ホスホナミダイト：（Ｎ−ｉＢｕ）−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−グアノシン（１０ｇ、１２．９８ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（７５ｍＬ）溶液へ、無水ジイソプロピルアミン（５．０３ｇ、６．７８ｒｎＬ、３８．９４ｍｍｏｌ）およびメチル−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルアミノ−クロロホスフィン（４．７ｇ、４．７ｍＬ、２５．９ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で加えた。反応混合物を室温にて５時間攪拌した。それをその後ジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、および氷冷水（５０ｍＬ）中へ注ぎ、振とうしおよび分離した。水層をジクロロメタン（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥しおよびろ過した。減圧下での溶媒の除去に際して、粗産物１１．１ｇが得られた。粗産物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーに供した。ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：Ｅｔ３Ｎ（５９：４０：１）混合物を用いて産物を溶出した。産物は白色泡状固体として得られた。（９．０ ｇ，７３％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ ７．８４ （ｓ，１Ｈ），７．７２ （ｄ，２Ｈ），７．５６ （ｍ，５Ｈ），７．０−７．２ （ｍ，４Ｈ），６．８ （ｍ，５Ｈ），６．１６ （ｄ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），６．０２ （ｄ，１Ｈ），５．３８ （ｍ，１Ｈ），５．０２ （ｍ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），４．７２ （ｍ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），４．５８ （ｍ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），３．９８ （ｓ，１Ｈ），３．８８ （ｍ，１Ｈ，微量ジアステレオマー），３．７２ （ｍ，１Ｈ），３．３２ （ｄ，６Ｈ），２．３ （ｓ，１Ｈ），２．１ （ｓ，１Ｈ），１．５ （ｍ，１Ｈ），１．３６ （ｄ，２Ｈ），，１．０ （ｍ，９Ｈ），０．９ （ｓ，９Ｈ）。３１Ｐ ＮＭＲ （１６１．８２ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １２２．５３，１１５．８８
【０５８４】
（Ｎ−Ａｃ）−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−シチジン−３’−Ｏ−（Ｐ−メチル）ホスホナミダイト：目的のホスホナミダイト（４．８０ｇ、６６．３％）は、（Ｎ−Ａｃ）−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−シチジン（６．０ｇ、８．５４８ｍｍｏｌ）およびメチル−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルアミノ−クロロホスフィン（５．０ｇ、２７．５２６ｍｍｏｌ）から、ジイソプロピルエチルアミン（９ｍＬ、５１．６６ｍｍｏｌ）の存在下で調製され、および上記の通り精製された。３１Ｐ ＮＭＲ （１６１．８１ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １２２．５４，１２１．６３
【０５８５】
５−Ｍｅ−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−ウリジン−３’−Ｏ−（Ｐ−メチル）ホスホナミダイト：目的のホスホナミダイト（１．９０ｇ、５２．１％）は、５−Ｍｅ−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−ウリジン（３．０ｇ、４．４４９ｍｍｏｌ）およびメチル−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルアミノ−クロロホスフィン（１．７ｇ、９．３５４ｍｍｏｌ）から、ジイソプロピルエチルアミン（２．４ｍＬ、１３．７７７ｍｍｏｌ）の存在下で調製され、および上記の通り精製された。３１Ｐ ＮＭＲ （１６１．８１ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）： δ １２４．１２，１１７．３８
【０５８６】
方法２
ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，３３ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｗａｙ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡより購入した、適当に塩基保護された５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＳ−ヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、シチジン、５−メチルシチジン、ウリジン、５−メチルウリジンまたはイノシン）を、ビス（ジイソプロピルアミノ）メチルホスフィンおよび１Ｈ−テトラゾールとアセトニトリル中で反応させ、文献（Ｌａｕｒｉｔｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２００３，１３，２５３）で報告された通り、目的のメチルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。ビス（ジイソプロピルアミノ）メチルホスフィン試薬は、Ｍｏｒｉａｒｔｙら（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９９０，１１２，８５７５）に報告された通り得られる。
【０５８７】
方法３
メチルジクロロホスフィン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を１当量の無水ジイソプロピルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）と、３当量のジイソプロピルエチルアミンを含むジクロロメタン中で反応させる。結果として生じる反応混合物へ、１当量の適当に保護されたヌクレオシドを、絶えず攪拌しながら室温にて加える。標準的な作製後の目的のメチルホスホナミダイトのジアステレオマー混合物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、純粋な化合物２を得る（Ｖａｇｈｅｆｉ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，３６００）。
【０５８８】
実施例２
イソプロピルホスホナミダイトの合成[２、Ｒ＝Ｈ、ＯＴＢＤＭＳまたはＯＭｅ、Ｘ＝イソプロピル、Ｂ＝アデニン（Ｎ−ｂｚ）；シトシン（Ｎ−Ａｃ）；５−メチルシトシン（Ｎ−Ｂｚ）；ウラシル；５−メチルウラシル；グアニン（Ｎ−ｉＢｕ）；またはイノシン、スキーム１）：
イソプロピルジクロロホスフィン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を、１当量の無水ジイソプロピルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）と、３当量のジイソプロピルエチルアミンを含むジクロロメタン中で反応させる。結果として生じる反応混合物へ、１当量の適当に保護されたヌクレオシドを、絶えず攪拌しながら室温にて加える。標準的な作製後の目的のイソプロピルホスホナミダイトのジアステレオマー混合物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、純粋な化合物２を得る（Ｖａｇｈｅｆｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，３６００）。
【０５８９】
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシ−チミジン−３’−Ｏ−（Ｐ−イソプロピル）ホスホナミダイト：ｉ−Ｐｒ２ＮＨ（０．３１ｍｌ）を含む乾燥ＣＨ３ＣＮ（４ｍＬ）溶液へ−２０℃にて、ジクロロイソプロピルホスフィン（１１ｕＬ）を加え、および同じ温度にて２０から４０分間攪拌した。５’−ＤＭＴｒ−２’−デオキシ−Ｔ（５００ｍｇ）を含む乾燥ジクロロメタン（２〜３ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．１８ｍＬ）を加え、および室温にて１６時間アルゴン雰囲気下で攪拌した。反応混合物を濃縮して粗産物とし、シリカゲルのカラムへ加え、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出して、純粋な化合物（４５０ｍｇ、６５％）を２種類の異性体として得た。３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）：δ １３３．６１，１３２．１７
【０５９０】
実施例３
ｔｅｒｔ−ブチルホスホナミダイトの合成[２、Ｒ＝Ｈ、ＯＴＢＤＭＳまたはＯＭｅ、Ｘ＝ｔｅｒｔ−ブチル、Ｂ＝アデニン（Ｎ−ｂｚ）；シトシン（Ｎ−Ａｃ）；５−メチルシトシン（Ｎ−Ｂｚ）；ウラシル；５−メチルウラシル；グアニン（Ｎ−ｉＢｕ）；またはイノシン、スキーム１）：
ｔｅｒｔ−ブチルジクロロホスフィン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を１当量の無水ジイソプロピルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）と、３当量のジイソプロピルエチルアミンを含むジクロロメタン中で反応させる。結果として生じる反応混合物へ、１当量の適当に保護されたヌクレオシドを、絶えず攪拌しながら室温にて加える。標準的な作製後の目的のｔｅｒｔ−ブチルホスホナミダイトのジアステレオマー混合物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、純粋な化合物２を得る（Ｖａｇｈｅｆｉ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，３６００）。
【０５９１】
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシ−チミジン−３’−Ｏ−（Ｐ−ｔｅｒｔ−ブチル）ホスホナミダイト：ｉ−Ｐｒ２ＮＨ（６．１７ｍｌ）を含む乾燥ＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）溶液へ−２０℃にて、ｔｅｒｔ−ブチルジクロロホスフィン（３．０ｇ）を加え、および−２０から０℃にて２０から４０分間攪拌した。５’−ＤＭＴｒ−２’−デオキシ−Ｔ（１０ｇ）を含む乾燥ジクロロメタン（５０ｍＬ）およびトリエチルアミン（３．５６ｍＬ）を加え、および室温にて４〜６日間アルゴン雰囲気下で攪拌した。反応混合物を濃縮して粗産物とし、シリカゲルのカラムへ加え、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出して、純粋な化合物（２００ｍｇ、１．４２％）を２種類の異性体として与えた。一方の異性体のＮＭＲデータ：１Ｈ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ ８．１５ （ｂｒ，ＮＨ），７．５８ （ｓ，１ Ｈ），７．４０−７．２０ （ｍ，９Ｈ，ＡｒＨ），６．８０ （ｄ，４ Ｈ），６．５０−６．４０ （ｄｄ，１ Ｈ，Ｈ’−ｌ），５．４０ （ｔ，１ Ｈ），４．２３ （ｄｄ，１ Ｈ），３．７９ （ｓ，６ Ｈ，２ ＯＣＨ３），３．５０−３．３８ （ｍ，２ Ｈ，Ｈ’−５ａ，Ｈ’−５ｂ），２．８０ （ｄｄ，１ Ｈ，Ｈ’−２ａ），２．５０−２．４０ （ｍ，１ Ｈ，Ｈ’−２ｂ），２．１０ （ｓ，３ Ｈ，５− ＣＨ３），１．５０−１．００ （ｍ，２３ Ｈ）。３１Ｐ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ ＭＨｚ）： δ １３３．４７
【０５９２】
実施例４
シュードウリジンのメチルホスホナミダイトの合成（２、Ｒ＝ＨまたはＯＴＢＤＭＳおよびＺ＝Ｈ、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳシュードウリジンは文献（Ｈａｌｌ ａｎｄ ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，１８８３）に報告された通り得られる。目的のシュードウリジンメチルホスホナミダイトは５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳシュードウリジンおよびクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンから、実施例１、方法２に記載された通り調製される。
【０５９３】
シュードウリジンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（２、Ｒ＝ＨまたはＯＴＢＤＭＳおよびＺ＝Ｈ、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳシュードウリジンは文献（Ｈａｌｌ ａｎｄ ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，１８８３）に報告された通り得られる。目的のシュードウリジンイソプロピルホスホナミダイト２は５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳシュードウリジンおよびジクロロイソプロピルホスフィンから、実施例１、方法３に記載された通り調製される。
【０５９４】
シュードウリジンのメチルホスホナミダイトの合成（２、Ｒ＝ＯＭｅおよびＺ＝Ｈ、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−ＯＭｅシュードウリジンは文献（Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，１５４７）に報告された通り得られる。目的のシュードウリジンメチルホスホナミダイト２は５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅシュードウリジンおよびクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンから、実施例１、方法２に記載された通り調製される。
【０５９５】
シュードウリジンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（２、Ｒ＝ＯＭｅおよびＺ＝Ｈ、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅシュードウリジンは文献（Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，１５４７）に報告された通り得られる。目的のシュードウリジンイソプロピルホスホナミダイト２は５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅシュードウリジンおよびジクロロイソプロピルホスフィンから、実施例１、方法３に記載された通り調製される。
【０５９６】
実施例５
２’−Ｏ−Ｍｅ−２−チオウリジンのメチルホスホナミダイトの合成（２、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅ−２−チオウリジンは文献（Ｓｈｏｄａ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０００，１０，１７９５）に報告された通り得られる。目的のメチルホスホナミダイト２は５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅ−２−チオウリジンおよびクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンから、実施例１、方法２に記載された通り調製される。
【０５９７】
２’−Ｏ−Ｍｅ−２−チオウリジンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（２、スキーム１）：５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅ−２−チオウリジンは文献（Ｓｈｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０００，１０，１７９５）に報告された通り得られる。目的のイソプロピルホスホナミダイト２は５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−Ｍｅ−２−チオウリジンおよびジクロロイソプロピルホスフィンから、実施例１、方法３に記載された通り調製される。
【０５９８】
２’−デオキシ−２−チオチミジンのメチルホスホナミダイトの合成（２、スキーム１）：
目的のメチルホスホナミダイト２は、５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシ−２−チオチミジン（Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８９，１７，４９５７）およびクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンから、実施例１、方法２に記載された通り調製される。
【０５９９】
２’−デオキシ−２−チオチミジンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（２、スキーム１）：
目的のイソプロピルホスホナミダイト２は、５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシ−２−チオチミジン（Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８９，１７，４９５７）およびジクロロイソプロピルホスフィンから、実施例１、方法３に記載された通り調製される。
【０６００】
実施例６
７−デアザアデノシンのメチルホスホナミダイトの合成（Ｎ６−ｂｚ，２，スキーム１）：
Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−（ジメトキシトリチル）−７−デアザ−２’−デオキシアデノシン（１）はＢｅｒｒｙ ＆ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．２４３４ Ｂｉｓｈｏｐ Ｃｉｒｃｌｅ Ｅａｓｔ Ｄｅｘｔｅｒ，ＭＩ，４８１３０ ＵＳＡから購入する。化合物１をクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンと、実施例１、方法２に記載された通り反応させ、目的のメチルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０６０１】
７−デアザイノシンのメチルホスホナミダイトの合成（２、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−７−デアザイノシン（１）は、文献（Ｓｅｅｌａ ａｎｄ Ｋｌａｕｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８６，１４，１８２５）で報告された通り合成される。化合物１をクロロ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンと、実施例１、方法２に記載された通り反応させ、目的のメチルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０６０２】
７−デアザグアノシンのメチルホスホナミダイトの合成（Ｎ２−／Ｂｕ、２、スキーム１）：
Ｎ２−ｉｓｏＢｕ−５’−Ｏ−ＤＭＴ−７−デアザグアノシン（１）は、文献（Ｓｅｅｌａ ａｎｄ Ｄｒｉｌｌｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８５，１３，９１１）で報告された通り合成される。化合物１をクロロ−Ｎ．Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィンと、実施例１、方法２に記載された通り反応させ、目的のメチルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０６０３】
７−デアザアデノシンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（Ｎ６−ｂｚ、２、スキーム １）：
Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−（ジメトキシトリチル）−７−デアザ−２’−デオキシアデノシン（１）はＢｅｒｒｙ ＆ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．２４３４ Ｂｉｓｈｏｐ Ｃｉｒｃｌｅ Ｅａｓｔ Ｄｅｘｔｅｒ，ＭＩ，４８１３０ ＵＳＡから購入する。化合物１をジクロロイソプロピルホスフィンと、実施例１、方法３に記載された通り反応させ、目的のイソプロピルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０６０４】
７−デアザイノシンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（２、スキーム１）：
５’−Ｏ−ＤＭＴ−７−デアザイノシン（１）は、文献（Ｓｅｅｌａ ａｎｄ Ｋｌａｕｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８６，１４，１８２５）で報告された通り合成される。化合物１をジクロロイソプロピルホスフィンと、実施例１、方法３に記載された通り反応させ、目的のイソプロピルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０６０５】
７−デアザグアノシンのイソプロピルホスホナミダイトの合成（Ｎ２−ｉＢｕ、２、スキーム１）：
Ｎ２−ｉｓｏＢｕ−５’−Ｏ−ＤＭＴ−７−デアザグアノシン（１）は、文献（Ｓｅｅｌａ ａｎｄ Ｄｒｉｌｌｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９８５，１３，９１１）で報告された通り合成される。化合物１をジクロロイソプロピルホスフィンと、実施例１、方法３に記載された通り反応させ、目的のイソプロピルホスホナミダイト２のジアステレオマー混合物を得る。
【０６０６】
実施例７
アルキルホスホナミダイトのＲおよびＳ異性体の分離：
実施例１〜６から得られたアルキルホスホナミダイトのそれぞれのジアステレオマー混合物の一部を順相高速液体クロマトグラフィーに供し、それぞれのＲおよびＳ立体異性体を、ＣｏｒｍｉｅｒおよびＰｌｏｍｌｅｙ（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ａ，１９９４，６６２，４０１）によって記載された通り得る。
【０６０７】
実施例８
【化１０９】
2008504840.tif 000143
ａ（ｉ）Ｘ−Ｐ（Ｃｌ）−Ｎ（ｉＰｒ）２、ＴＥＡ／ジクロロメタンまたはＸ−Ｐ−[Ｎ（ｉＰｒ）２］２、テトラゾール／テトラゾール−ジイソプロピルアンモニウム塩／ＭｅＣＮ；またはＸ−Ｐ（Ｃｌ２）、１当量のＨＮ（ｉＰｒ）２、次いで１当量の１を含むＭｅＣＮ／ジクロロメタン
【０６０８】
α−アノマーＢのメチルホスホナミダイトの一般的合成手順[４、Ａ（Ｎ６−Ｂｚ）、Ｃ（Ｎ４−Ｂｚ）、Ｇ（Ｎ２−Ａｃ）およびＵ；Ｒ＝ＯＴＢＤＭＳ、Ｘ＝Ｍｅ、スキーム２）：
方法１
５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−６−Ｎ−ベンゾイル−α−アデノシン、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−４−Ｎ−ベンゾイル−α−シチジン、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−２−Ｎ−アセチル−α−グアノシンおよび５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−α−ウリジンは、Ｄｅｂａｒｔ ｅｔ ａｌ，（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，１１９３）によって報告された通り調製される。そのようにして得られた保護されたヌクレオシド３を、ビス（ジイソプロピルアミノ）メチルホスフィンおよび１Ｈ−テトラゾールとアセトニトリル中で反応させ、文献（Ｌａｕｒｉｔｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２００３，１３，２５３）で報告された通り、目的のメチルホスホナミダイト４のジアステレオマー混合物を得る。ビス（ジイソプロピルアミノ）メチルホスフィン試薬は、Ｍｏｒｉａｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９９０，１１２，８５７５）に報告された通り得られる。
【０６０９】
方法２
５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−６−Ｎ−ベンゾイル−α−アデノシン、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−４−Ｎ−ベンゾイル−α−シチジン、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−２−Ｎ−アセチル−α−グアノシンおよび５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−α−ウリジンは、Ｄｅｂａｒｔ ｅｔ ａｌ．，{Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，１１９３）によって報告された通り調製される。そのようにして得られた保護されたヌクレオシド３を、１．２当量のクロロ−Ｎ．Ｎ−ジイソプロピルアミノメチルホスフィン（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，３３ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｗａｙ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡから入手）と、３．０当量のジイソプロピルエチルアミンを含む無水ジクロロメタン（またはＴＨＦ）中で反応させ、Ｓｉｎｈａ ｅｔ ａｌ．（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９４，２２，３１１９）によって報告された通り、目的のメチルホスホナミダイト４のジアステレオマー混合物を得る。
【０６１０】
方法３
メチルジクロロホスフィン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を１当量の無水ジイソプロピルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）と、３当量のジイソプロピルエチルアミンを含むジクロロメタン中で反応させる。結果として生じる反応混合物へ、１当量の適当に保護されたヌクレオシド３を、絶えず攪拌しながら室温にて加える。標準的な作製後の目的のメチルホスホナミダイトのジアステレオマー混合物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、純粋な化合物４を得る（Ｖａｇｈｅｆｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，３６００）。
【０６１１】
実施例９
α−アノマーＢのイソプロピルホスホナミダイトの一般的合成手順[４、Ａ（Ｎ６−Ｂｚ）、Ｃ（Ｎ４−Ｂｚ）、Ｇ（Ｎ２−Ａｃ）およびＵ；Ｒ＝ＯＴＢＤＭＳ、Ｘ＝Ｍｅ、スキーム２）：
イソプロピルジクロロホスフィン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を、１当量の無水ジイソプロピルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）と、３当量のジイソプロピルエチルアミンを含むジクロロメタン中で反応させる。結果として生じる反応混合物へ、１当量の適当に保護されたヌクレオシド３を、絶えず攪拌しながら室温にて加える。標準的な作製後の目的のイソプロピルホスホナミダイトのジアステレオマー混合物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、純粋な化合物４を得る（Ｖａｇｈｅｆｉ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，３６００）。
【０６１２】
実施例１０
α−アノマーＢのｔｅｒｔ−ブチルホスホナミダイトの一般的合成手順[４、Ａ（Ｎ６−Ｂｚ）、Ｃ（Ｎ４−Ｂｚ）、Ｇ（Ｎ２−Ａｃ）およびＵ；Ｒ＝ＯＴＢＤＭＳ、Ｘ＝Ｍｅ、スキーム２）：
ｔｅｒｔ−ブチルジクロロホスフィン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を１当量の無水ジイソプロピルアミン（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）と、３当量のジイソプロピルエチルアミンを含むジクロロメタン中で反応させる。結果として生じる反応混合物へ、１当量の適当に保護されたヌクレオシド３を、絶えず攪拌しながら室温にて加える。標準的な作製後の目的のイソプロピルホスホナミダイトのジアステレオマー混合物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、純粋な化合物４を得る（Ｖａｇｈｅｆｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，３６００）。
【０６１３】
実施例１１
アルキルホスホナミダイトのＲおよびＳ異性体の分離：
実施例８〜１０から得られたアルキルホスホナミダイト（４）のそれぞれのジアステレオマー混合物の一部を順相高速液体クロマトグラフィーに供し、それぞれのＲおよびＳ立体異性体を、ＣｏｒｍｉｅｒおよびＰｌｏｍｌｅｙ （Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ａ，１９９４，６６２，４０１）によって記載された通り得る。
【０６１４】
実施例１２
オリゴヌクレオチド合成および精製
【表１７−１】
2008504840.tif 000144
【表１７−２】
2008504840.tif 000145
【表１７−３】
2008504840.tif 000146
【表１７−４】
2008504840.tif 000147
オリゴヌクレオチドの合成：
設計されたＲＮＡ分子は、３９４ＡＢＩ装置で、リン酸およびホスホロチオアート骨格用の、無水酢酸および４−（ジメチルアミノ）（ピリジン（ＤＭＡＰ）をキャッピング試薬として用いることによるキャッピング段階でのわずかな改変を含む標準手順を用いて合成される。アルキルホスホナート骨格はＨｏｇｒｅｆｅらによって記載された通り導入される（Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ） （１９９３），２０ {Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ），１４３−６４．）。アルキルホスホナートオリゴヌクレオチドを合成するためからの一般的手順を下記に示す：
１．アセトニトリルで洗浄
２．脱トリチル化
３．アセトニトリルでよく洗浄しカラムを乾燥する
４．サブルーチンを用いてカップリング
ａ．モノマー（ホスホナミダイト２または４）および活性化剤（５−（エチルチオ）−１Ｈ−テトラゾール、ＥＴＴ）を添加（モノマー対活性化剤比１：４）
ｂ．カップリング（標準のアミダイトと等しい時間、または必要に応じて延長または二倍のカップリング）
ｃ．前洗浄無しで、水分含量の低い酸化剤を用いて、直ちに酸化
ｄ．酸化剤を洗い去るまで洗浄
５．無水酢酸およびＤＭＡＰを用いてキャッピング
６．アセトニトリルでよく洗浄
７．サイクルを再開。
【０６１５】
Ｈｏｇｒｅｆｅ ｅｔ ａｌ．（Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ） （１９９３），２０ （Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ），１４３−６４．）によって推奨された通りの最適試薬および条件を用いて、ホスホナートおよびチオホスホナート骨格修飾オリゴヌクレオチドを得る。特記されない限り、市販のＤＮＡおよびＲＮＡホスホラミダイトおよび担体を用いる。迅速保護基を持つ市販のホスホラミダイト（５’−Ｏ−ジメトキシトリチルＮ６−フェノキシアセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルアデノシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−シアノエチルホスホラミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルシチジン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホラミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−ｐ−イソプロピルフェノキシアセチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルグアノシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホラミダイト、および５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリルウリジン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−２−シアノエチルホスホラミダイトは、Ｐｉｅｒｃｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから、またはＰｒｏｌｉｇｏ ＬＬＣ，Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏから購入する。ＡＵ ２’−Ｏ−Ｍｅ アミダイトはＧｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈから入手する。すべてのアミダイトは、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）中で０．１５Ｍの濃度で、およびａカップリング時間８〜１５分間で使用する。活性化剤は５−（エチルチオ）−１Ｈ−テトラゾール（０．２５Ｍ）であり、ＰＯ−酸化にはヨウ素／水／ピリジンを使用し、およびＰＳ−酸化には２％Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬（Ｉｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９９０，１１２，１２５３）を含む無水アセトニトリルを使用する。硫化時間は約６分間である。
【０６１６】
脱保護−Ｉ（核酸塩基脱保護）
合成の完了後、担体を完全に乾燥しおよびスクリューキャップバイアルに移す。担体を次いで無水エタノール：アセトニトリル：水酸化アンモニウム（４５：４５：１０、５℃保存または用時調製、１μＭスケール合成に約１ｍＬ）の溶液と混合する。懸濁液を３０分間ボルテックスし、３０分後に１容のエチレンジアミンを加え、および６時間ボルテックスする。溶液をデカントし、および担体をアセトニトリル：水（１：１）で２回洗浄する。洗液および脱保護溶液を合わせ、および凍結乾燥する。
【０６１７】
脱保護−ＩＩ（２’ＴＢＤＭＳ基の除去）
得られた白色の残渣をトリエチルアミン，トリエチルアミン三フッ化水素酸塩（ＴＥＡ．３ＨＦ）およびＮＭＰ（４：３：７）４００μｌに再懸濁し、および５０℃にて一夜加熱して、２’位のｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基を除去する（Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９５，２３，２６７７）。反応を次いでイソプロポキシトリメチルシラン（ｉＰｒＯＭｅ３Ｓｉ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）４００μｌで停止し、およびさらにヒートブロック上でキャップを開けたまま１０分間加熱する；（これは揮発性のフッ化イソプロポキシトリメチルシリル付加物を蒸発させる）。残留する反応停止試薬をスピードバックでの乾燥によって除去する。３％トリエチルアミンを含むジエチルエーテル１．５ｍｌを加え、およびオリゴヌクレオチドを遠心分離によって沈澱させる。上清を、沈澱を乱さないでピペットで除去し、および沈澱をスピードバックで乾燥させ、粗オリゴヌクレオチドを白色綿状物質として得る。
【０６１８】
粗オリゴマーの定量または原分析(raw analysis)
試料をＲＮａｓｅフリー脱イオン水（１．０ｍＬ）に溶解し、および下記の通り定量する：ブランク設定を水のみ（１ｍＬ）で最初に実施する；試料２０μＬおよび水９８０μＬを微量遠心管中でよく混合し、キュベットに移し、および２６０ｎｍにて吸光度を測定する。粗物質を乾燥しおよび−２０℃にて保存する。
【０６１９】
オリゴマーの精製：
（ａ）ＰＡＧＥ精製
合成されたオリゴマーのＰＡＧＥ精製は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９）によって報告された通り実施する。１２％変性ゲルを、未修飾および修飾オリゴヌクレオチドの精製のために調製する。濃縮液１２０ｍＬ、希釈液１０５ｍＬおよび緩衝液２５ｍＬ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）の混合物へ、ＴＥＭＥＤ５０μＬ１０％ＡＰＳ１．５ｍＬを加える。ゲルを注いだ後、３０分間放置して重合させる。オリゴヌクレオチドを水２０μＬおよびホルムアミド８０μＬに懸濁する。ゲル追跡用色素を左レーンに装填し、次いで試料をゆっくりゲルに装填する。ゲルをＩＸ ＴＢＥ緩衝液を用いて３６Ｗにて４〜６時間泳動する。泳動が完了すれば、ゲルを調製ＴＬＣプレートへ転写し、およびＵＶ光線下で観察する。バンドを切り出し、ＲＮａｓｅフリー水に浸漬および破砕し、および精製オリゴヌクレオチドを含むバイアルを振とう機に一夜放置する。溶出液を採取し、残渣を追加のＲＮａｓｅフリー水で洗浄し、洗液を合わせておよび凍結乾燥し、純粋なオリゴヌクレオチドを得る。
【０６２０】
精製オリゴマーの脱塩
精製した乾燥オリゴマーを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５ Ｍ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて脱塩する。カートリッジをＲＮａｓｅフリー脱イオン水１０ｍＬで３回コンディショニングする。最後に精製オリゴマーをＲＮａｓｅフリー水２．５ ｍＬに溶解し、 およびごく低速の滴下溶出でカートリッジを通す。塩を含まないオリゴマーを、ＲＮａｓｅフリー水３．５ ｍＬで直接にスクリューキャップバイアルへ溶出する。
【０６２１】
分析：
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）およびエレクトロスプレーＬＣ／ＭＳ
約０．１０ＯＤのオリゴマーをまず乾燥し、次いで水（５０□Ｌ）に再溶解し、およびＣＧＥおよびＬＣ／ＭＳ分析用の専用バイアルにピペットで入れる。
【０６２２】
実施例１３
アルキルホスホナートまたはアルキルチオホスホナート骨格を含むｓｉＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ培養細胞活性：
二重ルシフェラーゼ遺伝子サイレンシングアッセイ
センスおよびアンチセンス鎖をＰＣＲチューブまたはプレート（ＶＷＲ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ）へ、アニーリング緩衝液（１００ ｍＭ ＫＯＡｃ、３０ ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ ｍＭ ＭｇＯＡｃ、ｐＨ ７．４）中で配列し、二重鎖の終濃度２０μＭとした。アニーリングは、ＰＣＲチューブまたはプレートを収容可能なサーマルサイクラー（ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７０００，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて実施した。オリゴリボヌクレオチドを９０℃にて２分間、および３７℃にて１時間保持した。二重鎖形成はセンスおよびアンチセンスの組み合わせの無作為試料の未変性アガロースゲル電気泳動によって検証された。
【０６２３】
ＨｅＬａ ＳＳ６細胞を３７℃にて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００単位／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）添加ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ中で増殖させた。ＨｅＬａ Ｄｕａｌ−ｌｕｃ細胞（ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼの両方を安定に発現しているＨｅＬａ細胞）を３７℃にて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００単位／ｍＬペニシリン、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、０．５μｇ／ｍＬピューロマイシン、５００μｇ／ｍＬゼオシン添加イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で増殖させた。細胞は指数増殖を維持するため定期的に継代した。ｓｉＲＮＡトランスフェクションの２４時間前に、細胞を不透明白色９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ） 上に濃度１５，０００細胞／ウェルにて、抗生物質非含有フェノールレッド非含有ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に播種した。
【０６２４】
ｓｉＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性は、高処理量 ９６ウェルプレート 形式 ルシフェラーゼ サイレンシングアッセイを用いて測定した。アッセイは、２つの可能な形式のうち一方で実施した。第一の形式では、ＨｅＬａ ＳＳ６細胞をまず、ホタル（標的）およびウミシイタケ（対照）ルシフェラーゼをコードするプラスミドで一過性トランスフェクションした。ＤＮＡトランスフェクションは、リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびプラスミドｇＷｉｚ−Ｌｕｃ（Ａｌｄｅｖｒｏｎ，Ｆａｒｇｏ，ＮＤ）（２００ｎｇ／ウェル）およびｐＲＬ−ＣＭＶ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）（２００ｎｇ／ウェル）を用いて実施した。２時間後、プラスミドトランスフェクション培地を除去し、およびホタルルシフェラーゼ標的化ｓｉＲＮＡをさまざまな濃度で細胞に加えた。第二の形式では、ＨｅＬａＤｕａｌ−ｌｕｃ細胞（ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼの両方を安定に発現している）をホタルルシフェラーゼ標的化ｓｉＲＮＡで直接トランスフェクションした。ＳｉＲＮＡトランスフェクションはＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯ（Ｍｉｎｉｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）またはリポフェクタミン２０００のどちらかを取扱説明書に従って用いて実施した。２４時間後、細胞をホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼ発現の両方について、プレートルミノメーター（ＶＩＣＴＯＲ２，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）およびＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて分析した。ホタル／ウミシイタケルシフェラーゼ発現比を用いて、空処理（ｓｉＲＮＡ無し）対照と相対的なパーセント遺伝子サイレンシングを測定した：
【表１８】
2008504840.tif 000148
センスおよびアンチセンスの３’末端でのメチルホスホナート結合の１個の組み込みは、ルシフェラーゼ活性を維持する（表１８）。
【０６２５】
実施例１４
アルキルホスホナートまたはアルキルチオホスホナート骨格を含むｓｉＲＮＡの血清安定性：
センス（Ｓ）またはアンチセンス鎖（ＡＳ）のどちらかが痕跡量の５’−３２Ｐ標識物質（たとえば３２Ｐ−Ｓ／ＡＳおよびＳ／３２Ｐ−ＡＳ）を含む、ｓｉＲＮＡ二重鎖をストック濃度１μＭで調製した。末端標識化センスまたはアンチセンス鎖の存在は、ｓｉＲＮＡ二重鎖という状況の中で個別の鎖の監視を可能にする。したがって、二種類の二重鎖調製物を、被験ｓｉＲＮＡ配列それぞれについて作製する。ｓｉＲＮＡ二重鎖を９０％ヒト血清中で、二重鎖の終濃度１００ｎＭにてインキュベートした。適当な時に試料を取り出し、および停止混合物中で反応停止した。典型的な時間経過については、１０秒間、１５分間、３０分間、１時間、２時間および４時間時点を取る。試料を、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって、対照試料（４時間緩衝液単独インキュベート）およびマーカーとして標識化センスまたはアンチセンス鎖の部分アルカリ加水分解ラダーと共に分析した。ゲルはＦｕｊｉホスホイメージャーを用いて撮影し、完全長センスおよびアンチセンス鎖を、インキュベート中に血清ヌクレアーゼによって生じた任意の分解断片と共に検出する。
【０６２６】
メチルホスホナート骨格修飾の血清安定性を試験し、および結果は未修飾ｓｉＲＮＡ二重鎖と比較して高い血清安定性を示した。各修飾の説明、ｓｉＲＮＡ二重鎖中でのその位置、および血清安定性データを下記に示す。
【０６２７】
二重鎖１０１および１０４についてのヒト血清安定性アッセイの変性ゲル分析からの結果（表１８）を図１３に示す。ＣはＰＢＳ緩衝液単独中でインキュベートしたｓｉＲＮＡ二重鎖について４時間時点であり、ＯＨ−は部分アルカリ加水分解マーカーであり、＊ｓ／ａｓは５’末端標識化センスＲＮＡを含むｓｉＲＮＡ二重鎖を表し、およびｓ／＊ａｓは５’末端標識化アンチセンスＲＮＡを含む二重鎖を表す。試料を９０％ヒト血清中でインキュベートし、および１０秒間、５分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間および４時間時点にてアッセイした。バンドの右側の黒線はヌクレオチド鎖末端分解断片を示し、および赤線はヌクレオチド鎖内分解断片のいくつかをハイライトする。３’末端でのメチルホスホナート置換は、３’オーバーハングのエキソヌクレアーゼ分解を阻害する。
【０６２８】
ヌクレアーゼ耐性に対する化学修飾の作用を評価するための血清安定性ベースラインを設定するのに用いた親二重鎖を図１３に示す。二重鎖１０１（表１８）を、その固有のヌクレアーゼ耐性を評価するためおよびその分解パターンを定義するために血清安定性アッセイに供した（図１３、二重鎖１０１）。この未修飾二重鎖は３’−５’エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼの両方によって分解される。
【０６２９】
センスおよびアンチセンス鎖の両方の３’末端の、３’−５’エキソヌクレアーゼによる切断は、インキュベートの最初の５分間に起こり、３’末端ｄＴ残基（図１３、二重鎖１０１での黒線）の消失を結果として生じる。エキソヌクレアーゼ分解に加えて、両方の鎖はエンドヌクレアーゼによって切断される。主なエンドヌクレアーゼ部位がアンチセンス鎖の１６位に存在し（図１３、二重鎖１０１での赤線）１０秒の早さで出現する。ヒト血清中で１時間後、ごくわずかの完全長センスまたはアンチセンス鎖しか残っていない。
【０６３０】
ｓｉＲＮＡ二重鎖の特異的ホスホジエステル結合をメチルホスホナートによって置換し、およびその安定性をヒト血清安定性アッセイで評価した（図１３、二重鎖１０４）。センスおよびアンチセンス鎖の両方の３’末端でのホスホジエステル結合の置換は、未修飾親二重鎖１０１と比較して、３’オーバーハングのヌクレオチド鎖末端分解を阻害する（図１３、二重鎖１０４）。完全長開始材料は、センスおよびアンチセンス鎖の両方について、４時間まで存在した。未修飾二重鎖で見られるヌクレオチド鎖内分解パターンは変化しない。要約すると、２個の３’末端ヌクレオチド間の１個のメチルホスホナートは、３’末端をエキソヌクレアーゼ分解から保護するために十分である。
【０６３１】
方法
方法１
アルキルホスホナートまたはアルキルチオホスホナート骨格を含むｓｉＲＮＡの血漿タンパク質への結合親和性
結合親和性の測定：
ｓｉＲＮＡの血漿タンパク質への結合親和性を測定するためにｓｉＲＮＡ二重鎖のセンス鎖の５’末端を、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標準的手順を用いて３２Ｐで標識化する。表Ｉに示すｓｉＲＮＡ二重鎖が本アッセイで試験される。未結合の標識をＧ２５カラムを用いて除去し、および標識化をポリアクリルアミドゲル電気泳動によって確認する。固定濃度の標識化ＲＮＡ（５０ｎＭ）および相補鎖（５０ｎＭ）を、漸増濃度の血漿タンパク質と共に２５℃にて１時間、０．１ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．００５％Ｔｗｅｅｎ８０を含むリン酸緩衝生理食塩緩衝液中でインキュベートする。インキュベート後、試料を分子量カットオフ３０，０００の低結合性再生セルロースフィルター膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に装填する。試料を微量遠心機（ＮＹＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５４１５Ｃ； Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）で３０００ｒｐｍ（７３５ｇ）にて３から６分間穏やかに遠心し、ろ液中に装填量の２０％までの回収を可能にする。
【０６３２】
ろ液および最初の（未ろ過）溶液に由来する部分試料中に存在する放射能を、シンチレーションカウンター（型式ＬＳ６０００ＩＣ，Ｂｅｃｋｍａｎ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を用いて測定する。ろ液部分試料中に得られるカウントは遊離（未結合）ＲＮＡを表し、および適当な計算を実施して遊離ＲＮＡの濃度を得る。さらなる計算が、タンパク質と結合したＲＮＡの濃度を与える。Ｒ．Ｚｉｎｉ，Ｊ．Ｂａｒｒｅ，Ｆ．Ｂｒｅｅ，Ｊ．Ｐ．Ｔｉｌｌｅｍｅｎｔ，Ｂ．Ｓｅｂｉｌｌｅ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９８１，２１６，１９１およびＡ．Ｎ．Ｋｕｚｎｅｔｓｏｖ，Ｇ．Ｖ．Ｇｙｕｌ’ｋｈａｎｄａｎｙａｎ，Ｂ．Ｅｂｅｒｔ，ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．（Ｍｏｓｃｏｗ） １９７７，１１，１０５７を参照。血漿タンパク質へのｓｉＲＮＡ結合の程度は、平衡ろ過法を用いて測定する。結合ＲＮＡの画分を総タンパク質濃度に対してプロットする。平衡定数Ｋｄは、遊離タンパク質濃度（ｆｆｒｅｅ）の関数としての結合ｓｉＲＮＡの画分（ｆｂｏｕｎｄ）の非線形回帰分析から決定する。したがって、データは次の二状態モデルに合致させうる：
2008504840.tif 000149
ここでＯは未結合ｓｉＲＮＡであり、Ａは未結合タンパク質であり、ＯＡはｓｉＲＮＡ−タンパク質複合体であり、およびＫＡは平衡結合定数である。
【０６３３】
方法２
ｓｉＲＮＡ処理Ｂａｌｂ−ＣマウスにおけるｍＲＮＡ発現の阻害：雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）３個体を１つのケージに、米国立衛生研究所の規定（１９）に適合する条件下で飼育する。未結合およびスクランブル対照を含むｓｉＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、０．９％ＮａＣｌ中で腹腔内に、記載の用量レベルで１日１回３日間投与し、および組織を分析用に採取する。
【０６３４】
総ｍＲＮＡをマウス肝臓から、４Ｍグアニジニウムイソチオシアナート中での組織の迅速ホモジナイズ、次いで塩化セシウム勾配中での遠心分離によって抽出する。ＲＮＡ（２０〜４０μｇ）を１．１％ホルムアルデヒド含有１．２％アガロースゲルで分離し、およびナイロン膜へ転写する。ブロットを放射性標識化ヒトｃＤＮＡプローブとハイブリダイズする。ｍＲＮＡ転写産物とハイブリダイズしたプローブを、ＰｈｏｓＰｈｏｒＩｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を用いて可視化および定量する。放射性標識化プローブのブロットを除去後、Ｇ３ＰＤＨｃＤＮＡで再プロービングして、等しい装填を確認する。
【０６３５】
方法３
ヌードマウスにおけるヒト腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ処理−腹腔内注射：ヒト肺癌Ａ５４９細胞を採集し、および５ｘ１０６細胞（２００μＬ）をヌードマウスの大腿内側に皮下注射した。触診できる腫瘍が約一ヶ月のうちに生じる。ステロイド／脂質複合体化ＲＮＡおよびスクランブル対照を含む、ｃ−ｒａｆおよびＨ−ｒａｓメッセージを標的とするｓｉＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、マウスへ用量２０ｍｇ／ｋｇ体重にて、一日おきに約１０週間腹腔内投与する。マウスをこの期間中、腫瘍増殖について監視する。
【０６３６】
方法４
ヌードマウスにおけるヒト乳房腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ処理：ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を採取し、および５ｘ１０５細胞（２００μＬ）を胸腺欠損ヌードマウスの乳腺脂肪体内へ皮下注射する。触診できる腫瘍が約一ヶ月のうちに生じる。ステロイド／脂質複合体化ＲＮＡおよびスクランブル対照を含む、ｃ−ｒａｆおよびＨ−ｒａｓメッセージを標的とするｓｉＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、マウスへ用量５、１０、および２５ｍｇ／ｋｇ／日・体重にて毎日約２０日間腹腔内投与する。マウスをこの期間中、腫瘍増殖について監視する。
【０６３７】
方法５
ヌードマウスにおけるヒト肺腫瘍細胞のｓｉＲＮＡ処理：ヒト肺癌Ａ５４９細胞を採取し、および５ｘ１０６細胞（２００μＬ）をヌードマウスの大腿内側に皮下注射する。触診できる腫瘍が約一ヶ月のうちに生じる。コレステロールまたはコラン酸複合体化ＲＮＡおよびスクランブル対照を含む、ｃ−ｒａｆおよびＨ−ｒａｓメッセージを標的とするｓｉＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、マウスへ腫瘍部位にて皮下投与する。薬物処理は腫瘍細胞接種の１週間後に開始し、および週２回４週間投与する。マウスを計９週間、腫瘍増殖について監視する。
【０６３８】
方法６
ｓｉＲＮＡ処理ＨｅｐＧ−２細胞およびＢａｌｂ−ＣマウスにおけるＡｐｏ−ＢｍＲＮＡ発現の阻害：ｓｉＲＮＡによるＡｐｏ−ＢｍＲＮＡ発現の阻害（表Ｉ、ｓｉＲＮＡ１４１〜１４６）をｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで評価する。ＨＥＰ−Ｇ２細胞におけるメッセージレベルに対するｓｉＲＮＡの作用を処理後に分析する。手順はＹａｏ ＺＱ，Ｚｈｏｕ ＹＸ，Ｇｕｏ Ｊ，Ｆｅｎｇ ＺＨ，Ｆｅｎｇ ＸＭ，Ｃｈｅｎ ＣＸ，Ｊｉａｏ ＪＺ，およびＷａｎｇ ＳＱによって"Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．" Ａｃｔａ Ｖｉｒｏｌ．１９９６，４０（１），３５−９に記載されている。
【０６３９】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）３個体を１つのケージに、米国立衛生研究所の規定（１９）に適合する条件下で飼育する。未結合およびスクランブル対照を含むｓｉＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡを含まない媒体を、０．９％ＮａＣｌ中で腹腔内に、記載の用量レベルで１日１回３日間投与し、および組織を分析用に採取する。
【０６４０】
総ｍＲＮＡをマウス肝臓から、４Ｍグアニジニウムイソチオシアナート中での組織の迅速ホモジナイズ、次いで塩化セシウム勾配中での遠心分離によって抽出する。ＲＮＡ（２０〜４０μｇ）を１．１％ホルムアルデヒド含有１．２％アガロースゲルで分離し、およびナイロン膜へ転写する。ブロットを放射性標識化ヒトＡｐｏ−ＢｃＤＮＡプローブと、記載の通りハイブリダイズする（２０）。ｍＲＮＡ転写産物とハイブリダイズしたプローブを、ＰｈｏｓＰｈｏｒＩｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を用いて可視化および定量する。放射性標識化プローブのブロットを除去後、Ｇ３ＰＤＨｃＤＮＡで再プロービングして、等しい装填を確認する。
【０６４１】
実施例１５
ナプロキセンを有するテザーの合成：
【化１１０】
2008504840.tif 000150
（ｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）ＬｉＯＨ／ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ；（ｉｉｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタン；（ｉｖ）セリノール、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体、および（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノｂ−塩化シアノエチルフォスホンアミド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃ１）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝，ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトライソプロパノールホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル
【０６４２】
Ｎ−ナプロキシル−６−アミノヘキサン酸メチルエステル（３ａ）：
エステル３を、は文献（Ｏｒｇ．Ｓｙｎ．，１９８４，６３，１８３）の手順に報告された通り調製した。ナプロキセン（１ａ １０．００ｇ、４３．４２７ｍｍｏｌ、（Ａｌｄｒｉｃｈより購入）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、０．５３ｇ、４．３３８ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、および１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣＣ、６．８ｍｌ、４３．９１４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を溶液へ加え、および室温にて５分間攪拌した。ＤＩＣＣを５分間加えた後に、６−アミノヘキサン酸塩酸メチルエステル（２、１０．００ｇ、５７．４０８ｍｍｏｌ、Ｆｌｕｋａより購入）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、１０ｍｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を、攪拌中の溶液に付加し、および室温にて一夜攪拌した。
【０６４３】
ＤＭＦを減圧下で反応から除去し、産物を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、２００ｍｌ）へと抽出し、水溶性ＫＨＳＯ４、水、重炭酸ナトリウム溶液および水で連続的に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）上で乾燥しおよびろ過した。ヘキサンを加えてＥｔＯＡｃ抽出物から白色固体が沈殿し、目的の化合物３ａ、１１．２０ｇ（７２．１４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．９５−７．９２ （ｔ， Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝ ５．２ ＆ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ），７．７６−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．４３−７．４０ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ）＝１．６およびＪ”（Ｈ，Ｈ）＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．２４ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．１１ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ）＝２．４およびＪ”（Ｈ，Ｈ）＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．８４ （ｓ，３Ｈ），３．７０−３．６５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝６．８および７．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．５４ （ｓ，３Ｈ），３．００− ２．９７ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝６．８ Ｈｚ，２Ｈ），２．２１−２．１７ （ｔ，２Ｈ），１．４８−１．２９ （ｍ，７Ｈ），１．１９−１．１３ （ｍ，２Ｈ）．
【０６４４】
Ｎ−ナプロキシル−６−アミノヘキサン酸（４ａ）：
以前に報告された通り（Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ．，２００２，４，４３９５）、エステル３ａの加水分解を実施した。化合物３ａ（１０．８０ｇ、３０．２４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン−水（ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ）混合物（４：１、４０ｍｌ）中で懸濁し、およびＬｉＯＨ（１．６５ｇ、３９．３２ｍｍｏｌ）で室温にて４時間攪拌した。ＴＨＦを減圧下で反応から除去し、濃縮ＫＨＳＯ４溶液を加えて水から遊離酸が沈殿し、水で完全に洗浄し、焼結フィルターでろ過し、ジエチルエーテルで粉砕し、減圧下で一夜Ｐ２Ｏ５上で乾燥し、白色固体として目的の酸４ａ、１０．２２ｇ（９８．４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ１１．９６（ｂｓ，１Ｈ）， ７．９５−７．９２ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，１Ｈ），７．７７−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．４３−７．４１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．２４ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．１１ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ １．９５，２．４４およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９，９．２７ Ｈｚ，１Ｈ），３．８４ （ｓ，３Ｈ），３．７１−３．６５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ）＝ ６．８４，７．３３ Ｈｚ，１Ｈ），３．０２−２．９７ （ｍ，２Ｈ），２．１３−２．０９ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４６−１．３０ （ｍ，７Ｈ）， １．２１−１．１５ （ｍ，２Ｈ）．
【０６４５】
Ｎ−ナプロキシル−６−アミノヘキサン酸ペンタフルオロフェニルエステル（５ａ）：
化合物４ａ（５．００ｇ、１４．５７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１８ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、およびペンタフルオロフェノール（３．５０ｇ、１９．０２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）をジクロロメタン（４０ｍｌ）中で採取し、およびＤＣＣ（３．００ｇ、１４．５４ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応混合物を室温にて８時間攪拌した。ＥｔＯＡｃを加えて反応混合物を１００ｍｌへと希釈し、沈殿したＤＣＵをろ過によって除去した。合わせたろ過物、減圧下で蒸発した溶媒、および残渣を連続的にシリカゲルコラムおよび溶出液ヘキサン／ＥｔＯＡｃ４：１でろ過し、目的のエステル５ａおよび反応からの過剰なペンタフルオロフェノールの混合物（７．９０ｇ）を得た。こうして得た粗産物は、さらなる精製を行うことなく実験に直接用いた。
【０６４６】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノール複合体（６ａ）
ペンタフルオロフェノールエステル５ａをＴＥＡの存在下でセリノールで攪拌し、化合物６ａ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，５６，１７１３）を得た。化合物５ａ（４．００ｇ、７．８６ｍｍｏｌ）およびセリノール（１．５ｇ、１６．４６ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中で懸濁し、および室温にて２時間攪拌した。白色の沈殿物が、反応の経過中に形成された。２時間後、沈殿物を焼結フィルターでろ過し、過剰量のジクロロメタン、水およびジエチルエーテルで連続的に洗浄し、目的の産物６ａ（２．８２ｇ、８６．２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．９５−７．９２ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．４９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．７７−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．４３−７．３９ （ｍ，２Ｈ，Ｄ２Ｏ交換から１時間後に評価），７．２６−７．２５ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．１４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．１１ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） − ２．４４およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．８５ Ｈｚ，１Ｈ），４．５８−４．５５ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．４９ Ｈｚ，２Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），３．８４ （ｓ， ３Ｈ），３．７１−３．６５ （ｍ，２Ｈ），３．３７−３．３５ （ｔ，Ｄ２Ｏ交換後に二重となった，４Ｈ），３．０２−２．９５ （ｍ，２Ｈ），２．０３−２．０１ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３２，７．６３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４６−１．３０ （ｍ，７Ｈ），１．２０−１．１２ （ｍ，２Ｈ）．
【０６４７】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノールモノDMT（７ａ）：
化合物６ａを、報告された文献の手順を修正して調製した（Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２００３，５，３００５）。化合物６ａ（２．５０ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０７５ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の固体混合物を、減圧下で一夜Ｐ２Ｏ５上で乾燥した。固体混合物は、アルゴン下で無水ピリジン（１００ｍｌ）中で懸濁し、および加熱して均一の溶液を得た。混合物の温度を室温にして、および攪拌した。４，４−ジ−Ｏ−塩化メチルトリチル（２．２４ｇ、６．６１ｍｍｏｌ、Ｃｈｅｍ Ｇｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入）を、無水ジクロロメタン２０ｍｌ中に別途溶解し、および、攪拌中のピリジン溶液へとアルゴン下で４５分間液滴で加えた。反応混合物を、一夜さらに攪拌した。溶媒を反応混合物から除去し、および産物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）へと抽出し、および水、ＮａＨＣＯ３溶液および水で連続的に洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、および蒸発して固体の塊とした。目的の産物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。（ａ）溶出物：ジクロロメタン中１％メチルアルコール（ＭｅＯＨ）−所望しないビスＤＭＴ誘導体１．６０ｇ（２６．１％）および（ｂ）ジクロロメタン中５％ＭｅＯＨ−目的の産物７ａ２．５０ｇ（５７．９％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．９４−７．９１ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．４９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．７−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．６０−７．５８ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） − ８．５５ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能，７．４３−７．１０ （ｍ，１２Ｈ），６．８６−６．８４ （ｄ，４Ｈ），４．６２−４．５９ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．１８，５．４９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），４．０１−３．９６ （ｍ，１Ｈ），３．８３ （ｓ，３Ｈ），３．７１−３．６５ （ｍ，７Ｈ），３．４４−３．４２ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．１９，５．４９ Ｈｚ，２Ｈ），３．０３−２．８７ （ｍ，４Ｈ），２．０５−２．０１ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３，７．６３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４８−１．３０ （ｍ，７Ｈ），１．２１−１．１４ （ｍ，２Ｈ）．
【０６４８】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノールＣＰＧ（８ａ）
目的の固相担体８ａを、報告された手順の通り調製した（コハク酸化の参照：Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２００３，５，３００５、複合化のための参照：Ｋｕｍａｒｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９６，１５，８７９）。化合物７ａ（１．００ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（０．１７ｇ、１．６９ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）、およびＤＭＡＰ（０．２１ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の混合物を、無水二塩化エチレン７ｍｌ中で２４時間懸濁した。反応混合物を、ジクロロメタンを加えて５０ｍｌへと希釈し、および希釈したクエン酸水溶液（２０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、および蒸発して乾燥させた。得られた残渣を、減圧下でＰ２Ｏ５上で乾燥し、白色固体としてほぼ純粋であるが、粗モノコハク酸塩（１．１０ｇ、９６．５％）を与えた。得られた産物は、さらなる精製を行うことなく引き続く反応に直接用いた。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．９４−７．９１ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．１９，５．４９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．８３−７．８１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．９４ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．７６−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．４２−７．１０ （ｍ，１２Ｈ），６．８８−６．８６ （ｄ，４Ｈ），４．１８−４．１２ （ｍ，２Ｈ），４．０７−３．９８ （ｍ，２Ｈ），３．８３ （ｓ，３Ｈ），３．７１−３．６６ （ｍ，７Ｈ），３．００−２．９１ （ｍ，４Ｈ），２．４０ （ｓ，４Ｈ），２．０４−２．００ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３２ Ｈｚ，２Ｈ），１．４４−１．２２ （ｍ，７Ｈ），１．１９−１．１５ （ｍ，２Ｈ）．
【０６４９】
２，２’−ジチオビス（５−ニトロピリジン）（０．３８ｇ、１．２２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を、アセトニトリルおよび二塩化エチレン（５ｍｌ）の１：１混合物中で溶解し、およびナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノール複合体モノＤＭＴモノコハク酸塩（１．００ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１６ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を含む無水アセトニトリル２ｍｌの懸濁液に添加した。トリフェニルホスフィン（Ｐｈ３Ｐ、０．３２ｇ、１．２２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を反応混合物に添加し、および３〜４分間振とうさせた。５００フィートの大きさおよび１１２．７μＭ／ｇの装填を有する長鎖アミノアルキル制御孔ガラス（ＣＰＧ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入）５．５ｇ、および（完全にＣＰＧを浸漬するために）過剰量のアセトニトリルを反応混合物に加え、および、懸濁液を室温にて４５分間振とうした（かき回した）。ＣＰＧを、焼結漏斗でろ過し、アセトニトリル、ジクロロメタンおよびジエチルエーテルで広範囲に洗浄し、それをその後、ピリジン−ジクロロメタン中で再懸濁し、およびＤＩＥＡの存在下で無水酢酸で処理し、ＣＰＧ上の未反応のアミノ基を覆った。１０分後にＣＰＧをろ過し、およびジクロロメタン、アセトニトリルおよびジエチルエーテルで広範囲に洗浄し、続いて減圧下で乾燥して装填５４．１２μＭ／ｇの目的のＣＰＧ８ａを得た。装填は文献中で報告された通り決定した（Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００２，６７，３５７および本明細書中の引例）。
【０６５０】
ナプロキセン−６−アミノヘキサン酸−セリノールモノＤＭＴホスホラミダイト（９ａ）
ホスホラミダイトを、文献中で報告された通り調製した（Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２００３，５，３００５および本明細書中の引例）。化合物７ａ（１．００ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（０．１２ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を、Ｐ２Ｏ５上で減圧下で一夜乾燥し、それをその後、アルゴン雰囲気下で無水アセトニトリル（５ｍｌ）の中で懸濁した。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン（０．６９ｍｌ、２．０９ｍｍｏｌ）を、懸濁液に加え、および室温で１４時間攪拌した。溶媒を、減圧下で反応から除去し、および残渣をＥｔＯＡｃ（４０ｍｌ）中で懸濁し、および希釈したＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、標準的な作業が続いた。目的のアミダイト９ａをフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。溶出物：ＥｔＯＡｃ、収率０．７９ｇ（６１．８％）。３１Ｐ ＮＭＲ（１６１．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５２５℃）： δ１４６．０１，１４５．６９．
【０６５１】
ナプロキセンペンタフルオロフェノールエステル（１ｃ）：
ナプロキセン（１、１１．２５ｇ、４８．８６ｍｍｏｌ）、ペンタフルオロフェノール（１０．００ｇ、５４．３３ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．６０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（４０ｍｌ）中で溶解し、周囲温度にて攪拌した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１１．００ｇ、５３．３１ｍｍｏｌ）を溶液に加え、および一夜攪拌を続けた。１，３−ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）が反応の経過中に沈殿した。沈殿したＤＣＵをろ過して除去し、ＤＭＦで洗浄し、ろ液と合わせ、および減圧下で除去した。得られた油状残渣は、シリカゲルの小さいカラムでろ過し、ヘキサン中の１０％ＥｔＯＡｃで溶出して溶解されたＤＣＵを除去し、目的のエステル１ｃおよび過剰量のペンタフルオロフェノール（２０．３０ｇ）を得た。こうして得た粗産物は、さらなる精製を行うことなく実験を実施するために直接用いた。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８５−７．８１ （ｍ，３Ｈ），７．４８− ７．４６ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ １．５３およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．５５ Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．３１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１８−７．１６ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．８５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４７−４．４４ （ｑ， Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．０２ Ｈｚ），３．８６ （ｓ，３Ｈ），１．６３−１．６１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３４ Ｈｚ，３Ｈ）．
【０６５２】
実施例１６
イブプロフェンを有するテザーの合成：
【化１１１】
2008504840.tif 000151
（ｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）ＬｉＯＨ／ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ；（ｉｉｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタン；（ｉｖ）セリノール、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体、および（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノｂ−塩化シアノエチルフォスホンアミド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃ１）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝，ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトライソプロパノールホスファン，テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル
【０６５３】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸メチルエステル（３ｂ）：
イブプロフェン（１ｂ、５．０ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃから購入）、メチル６−アミノヘキサン酸モノ塩酸塩（２、６．６０ｇ、３６．３３ｍｍｏｌ、Ｆｌｕｋａから購入）、およびＤＭＡＰ（０．３０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）を、２００ｍｌ丸底フラスコ中でジクロロメタン（６０ｍｌ）中に懸濁し、および、ＤＣＣ（５．００ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ）を懸濁液に加え、３分間攪拌した。３分後に、ＴＥＡ３．６ｍｌ（２５．８３ｍｍｏｌ）を反応に添加し、および室温にて１８時間攪拌を続けた。溶媒および過剰なＴＥＡを減圧下で反応から除去し、および、得られた残渣をジエチルエーテルで粉末化し、および焼結漏斗にろ過してＤＣＵを除去した。合わせたろ液を回転蒸発器上で蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）中で再融解し、および連続して、ＫＨＳＯ４溶液、水、ＮａＨＣＯ３溶液および水で洗浄し、続いて無水Ｎａ２ＳＯ４上での乾燥および溶媒の減圧下での蒸発を行い、化合物３ｂ（８．０ｇ）の黄色味を帯びた粘性の残渣を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８６−７．８４ （ｂｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３９，５．００ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．１９−７．０３ （ｍ，４Ｈ），３．５６ （ｓ，３Ｈ），３．５３−３．４７ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．０５ Ｈｚ，１Ｈ），３．００−２．９５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．６４，５．８１ Ｈｚ，２Ｈ），２．３９−２．３７ （ｍ，２Ｈ，回転異性体の混合物），２．２３−２．２０ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．４５，７．０５ Ｈｚ，２Ｈ），１．８１−１．７４ （ｍ，１Ｈ），１．４９−１．４１ （ｍ，２Ｈ），１．３６−１．２６ （ｍ，５Ｈ），１．１９−１．１１ （ｍ，２Ｈ），０．８４−０．８２ （ｍ，６Ｈ，回転異性体の混合物 ）
【０６５４】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸（４ｂ）：
化合物３ｂ（８．００ｇ、２４．０１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ（４：１、４０ｍｌ）中でＬｉＯＨ(１．２１ｇ、２８．８４ｍｍｏｌ)で４時間攪拌した。溶媒を減圧下で反応混合物から除去し、および残渣を濃縮ＫＨＳＯ４溶液で洗浄した。対応するナプロキセンアナログ４ａとは異なり、遊離酸４ｂは水相から沈殿しなかったため、水相をＥｔＯＡｃで繰り返し抽出し、合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、および減圧下で蒸発させて、淡黄色の粘性残渣６．６０ｇ（８６．１％）を得た。こうして得た酸４ｂは、さらなる精製を行うことなく次の実験に直接用いた。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ１１．９６ （ｂｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．８７−７．８４ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．１９−７．０４ （ｍ，４Ｈ），４．０４−３．９９ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．０５ Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．５７ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．０５ Ｈｚ，０．１Ｈ，微量回転異性体），３．５３−３．４７ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．０５ Ｈｚ，１．９Ｈ），３．００−２．９５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．２２ Ｈｚ，２Ｈ），２．４１−２．３７ （ｍ，２Ｈ，回転異性体の混合物），２．１４−２．１０ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） − ７．４７，７．０５ Ｈｚ，２Ｈ），１．８１−１．７４ （ｍ，１Ｈ），１．４６−１．４０ （ｍ，２Ｈ），１．３６−１．２６ （ｍ，５Ｈ），１．２０−１．１２ （ｍ，２Ｈ），０．８５−．８２ （ｍ，６Ｈ，回転異性体の混合物）
【０６５５】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸セリノール複合体（６ｂ）：
化合物４ｂ（６．６０ｇ、２０．６７６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２６ｇ、２．１２８ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（５．７０ｇ、３０．９７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍｌ）中で溶解し、およびＤＣＣ（４．２７ｇ、２０．７０ｍｍｏｌ）を攪拌中の溶液に加えた。反応混合物を８時間攪拌した。沈殿したＤＣＵをろ過して除去し、およびろ液を蒸発させて目的のエステル５ｂを含む原油を得た。こうして得た粗産物５ｂを、ＴＥＡ（８ｍｌ）の存在下で、ジクロロメタン中のセリノール（３．５ｇ、３８．４２ｍｍｏｌ）で２時間攪拌した。白い沈殿物が反応の経過中に形成され、これをろ過し、ジクロロメタン、水およびジエチルエーテルによって連続的に洗浄し、およびＰ２Ｏ５上で乾燥して、２．４ｇの産物６ｂを得た。ＥｔＯＡｃで水相を抽出して、目的の産物６ｂをさらに１．０５ｇ得た。合わせた収率は４２．５％であった。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８７−７．８４ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．８６，５．３７ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．４２−７．４０ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．８１ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．１９−７．１７ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，２Ｈ），７．０６−７．０４ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，２Ｈ），４．５７ （ｂｓ，２Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），３．６９−３．６３ （ｍ，１Ｈ），３．５３−３．４７ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８３ Ｈｚ，１Ｈ），３．３６−３．３４ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，４Ｈ），３．０２−２．９１ （ｍ，２Ｈ），２．３９−２．３７ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３４ Ｈｚ，２Ｈ），２．０４−２．００ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），１．８１−１．７５ （ｍ，１Ｈ），１．４４−１．２６ （ｍ，７Ｈ），１．１８−１．１２ （ｍ，２Ｈ），０．８４−０．８３ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．３５ Ｈｚ，６Ｈ）
【０６５６】
Ｎ−イブプロフィル−６−アミノヘキサン酸セリノールモノＤＭＴ（７ｂ）：
化合物６ｂ（３．００ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）、４，４’−ジメトキシトリチル塩化物（２．８５ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．２０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）の固体混合物を、２００ｍｌのＲＢ中で採取し、および減圧下で一夜Ｐ２Ｏ５上で乾燥した。無水ピリジン（４０ｍｌ）をアルゴン下で混合物に加え、および一夜攪拌した。ピリジンを反応から除去し、および残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）中に懸濁させ、それをその後標準的な作製を行った。目的のモノＤＭＴおよびビスＤＭＴ産物を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィでへと分離した。溶出物：ジクロロメタン中の２〜３％メタノール、１７０ｇ（２２．３％、ビスＤＭＴ誘導体）、および溶出物：ジクロロメタン中の４％メタノール１．８９ｇ（３５．６％、目的のモノＤＭＴ産物７ｂ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８３−７．８０ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．５８−７．５５ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．３４−７．３２ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），７．２６−７．１４ （ｍ，９Ｈ），７．０２−７．００ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．８１ Ｈｚ，２Ｈ），６．８３−６．８１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，４Ｈ），４．５８−４．５６ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７，４．８８ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），３．９５−３．９３ （ｍ，１Ｈ），３．６８ （ｓ，６Ｈ），３．４８−３．４５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３４ Ｈｚ，１Ｈ），３．４１−３．３８ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，２Ｈ），２．９６−２．８４ （ｍ，４Ｈ），２．３４−２．３３ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），２．０２−１．９８ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３，７．８１ Ｈｚ，２Ｈ），１．７６−１．６９ （ｍ，１Ｈ），１．４４−１．３６ （ｍ，２Ｈ），１．３３−１．２３ （ｍ，５Ｈ），１．１６−１．０８ （ｍ，２Ｈ），０．８０−０．７８ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．３５ Ｈｚ，６Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃： δ１７４．０，１７２．８，１５８．３，１４５．４，１３９．９，１３９．７，１３６．２，１３０．１，１２９．２，１２８．２，１２８．１，１２７．３，１１３．５，８５．５，６１．０，５５．４，５１．１，４５．１，４４．６，３５．７，３０．０，２９．１，２６．３，２５．４，２２．５，１８．８
【０６５７】
イブプロフェン−６−アミノヘキサン酸−セリノールＣＰＧ（８ｂ）：
対応するナプロキセン誘導体のために記載された通りに、目的のコハク酸塩（０．９８ｇ、８５．７％）を、対応する前駆体７ｂ（１．００ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２７ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）および無水コハク酸（０．２２ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）から合成した。コハク酸誘導体を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製した。溶出物：ジクロロメタン中の５％メタノール。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８６−７−８０ （ｍ，２Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．３４−７．３２ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），７．２８−７．１３ （ｍ，９Ｈ），７．０２− ７．００ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，２Ｈ），６．８５−６．８３ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，４Ｈ），４．１４−１．１０ （ｂｍ，２Ｈ），４．０２−３．９８ （ｍ，１Ｈ），３．６８ （ｓ，６Ｈ），３．５０−３．４４ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３，６．８３ Ｈｚ，２Ｈ），２．９６−２．８７ （ｍ，２Ｈ），２．３５−２．３３ （ｍ，６Ｈ），２．５１−２．４５ （ｍ，７Ｈ，２Ｈ ＋ ＤＭＳＯ−ｄ６），２．０１−１．９６ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３２ Ｈｚ，２Ｈ），１．７７−１．６９ （ｍ，１Ｈ），１．４２−１．２２ （ｍ，７Ｈ），１．１５−１．０７ （ｍ，２Ｈ），０．８０−０．７８ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６，３５ Ｈｚ，６Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃： δ１７４．９，１７４．３，１７３．２，１５８．５，１４５．３，１３９．９，１３９．８，１３６．０，１３０．２，１２９．３，１２８．４，１２８．１，１２７．４，１１３．６，８５．８，５５．５，４６．１，４６．１，４５．３，４４．７，３５．６，３０．１，２９．０，２６．２，２５．４，２２．６，１８．８
【０６５８】
装填能力(loading capacity)８５．６２μＭ／ｇの目的のＣＰＧ８ｂ（４．５０ｇ）を、こうして得た０．９２ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）のコハク酸イブプロフェン、２，２’−ジチオビス（５−ニトロピリジン）（０．３７ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１５ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、Ｐｈ３Ｐ（０．３１ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）および大きさが５００フィートおよび装填１１２．７μＭ／ｇを有する長鎖アミノアルキル制御孔ガラス（ＣＰＧ）から、対応するナプロキセンアナログ８ａの調製のために記載された通りに調製した。
【０６５９】
イブプロフェンペンタフルオロフェノールエステル（１ｄ）：
イブプロフェンペンタフルオロフェノールエステル（１ｄ）を、イブプロフェン（１ｂ、５．００ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ）、ペンタフルオロフェノール（５．４ｇ、２９．０２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（５．００ｇ、２４．２３ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．３０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）から、ナプロキセン（１ａ）のペンタフルオロフェノールエステル（１ｃ）の合成のために記載された通りに調製した。
【０６６０】
実施例１７
ナプロキセンを有するリンカーの合成：
【化１１２】
2008504840.tif 000152
ａ（ｉ）Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ／ジクロロメタン−ＤＭＦ；（ｉｉ）ペンタフルオロフェノール、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ／ジクロロメタン；（ｉｉｉ）セリノール、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｖ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖ）Ｐｄ−Ｃ（１０％）、ギ酸アンモニウム；（ｖｉ）ナプロキセン−ＮＨＳエステル（１４）、ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｖｉｉ）イブプロフェン−ＮＨＳエステル（１５）、ＴＥＡ／ジクロロメタン
【０６６１】
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸ペンタフルオロフェノールエステル１１ｂ：
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸（１０、３０．３１ｇ、１１４．２５ｍｍｏｌ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから購入）、ペンタフルオロフェノール（２５．００ｇ、１３５．８３ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（１．５４ｇ、１２．６０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍｌ）中で採取し、およびＤＣＣ（２６．００ｇ、１２１．０１ｍｍｏｌ）をこれに攪拌下でゆっくりと加えた。添加中に反応の温度は上昇し、およびジクロロメタンは沸騰を始めたため、室温まで冷却しおよび一夜攪拌した。反応混合物にジエチルエーテルを加えて２００ｍｌまで希釈し、それをその後、焼結漏斗でろ過してＤＣＵを除去し、残渣をジエチルエーテルで洗浄し、および蒸発させて乾燥させた。目的の産物１１ｂを、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製した。溶出物：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ２：１、収率４３．５４ｇ（８８．４％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．３６−７．２３ （ｍ，６Ｈ），４．９９ （ｓ，２Ｈ），３．０１−２．９６ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） − ６．３５ Ｈｚ，２Ｈ），２．７８−２．５２ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），１．６９−１．６１ （ｍ，２Ｈ），１．４７−１．２９ （ｍ，４Ｈ）
【０６６２】
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸セリノール（１２）：
化合物１１ｂ（２６．００ｇ、６０．３１ｍｍｏｌ）およびセリノール（５．００ｇ、５４．８８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２００ｍｌ中で懸濁し、およびＴＥＡ（１７ｍｌ（１２１）、９７ｍｍｏｌ）の存在下で、室温にて一夜攪拌した。厚い白色の沈殿物が反応の経過中に形成された。反応混合物にジエチルエーテルを加えて、２００ｍｌへと希釈し、粉末化し、およびろ過した。沈殿物をジエチルエーテルで十分に洗浄し、およびＰ２Ｏ５上で減圧下で乾燥させ、白色固体として１６．５１ｇの目的の化合物１２（８１．０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．４４−７．４２ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．８１ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．３７−７．２７ （ｍ，５Ｈ），７．２４−７．２０ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．８６，５．３７ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），４．９９ （ｓ，２Ｈ），４．５８−４．５５ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，２Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），３．７０−３．６５ （ｍ，１Ｈ），３．３７−３．３４ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．８６，３．３７ Ｈｚ，Ｄ２Ｏ交換の後二重化，Ｊ（Ｈ，Ｈ，Ｄ２Ｏ交換の後） − ５．３７ Ｈｚ，４Ｈ），２．９８−２．９２ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４，６．３５ Ｈｚ，２Ｈ），２．０６−２．０２ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４９−１．３３ （ｍ，４Ｈ），１．２４−１．１６ （ｍ，２Ｈ）
【０６６３】
Ｎ−Ｃｂｚ−６−アミノヘキサン酸セリノールモノＤＭＴ（１３）：
化合物１２（１４．１０ｇ、４１．６６ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．６０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）を、２００ｍｌのＲＢ中で採取し、およびＰ２Ｏ５上で減圧下で乾燥した。固体混合物を、次にアルゴン下で無水ピリジン５０ｍｌ中で懸濁し、塩化４，４−ジメトキシトリチル（１５．５ｇ、４４．２７ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン４０ｍｌ中で別に溶解し、およびアルゴン下で攪拌中のピリジン溶液に加えた。反応混合物を一夜室温にて攪拌させた。溶媒を反応混合物から除去し、および残渣をＥｔＯＡＣ（２００ｍｌ）へと抽出し、ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した後、標準的な作製を行った。目的の産物１３を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製した。溶出物：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３：２、８．６２ｇ（２８．０％、ビスＤＭＴ誘導体）およびクロロホルム中３〜４％ＭｅＯＨ１５．２８ｇ（５７．３％、目的のモノＤＭＴ誘導体１３）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．６３−７．６０ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．３８− ７．１７ （ｍ，１５Ｈ，Ｄ２Ｏ交換の２４時間後に対応），６．８７−６．８４ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，４Ｈ），４．９８ （ｓ，２Ｈ），４．６２−４．５９ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），４．００−３．９５ （ｍ，１Ｈ）， ３．７２ （ｓ，６Ｈ），３．４６−３．４１ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ５．３７ Ｈｚ，２Ｈ），３．００−２．８７ （ｍ，４Ｈ），２．０８−２．０４ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ） １．５０−１．３３ （ｍ，４Ｈ），１．２５−１．１６ （ｍ，２Ｈ）
【０６６４】
化合物１３からの化合物７ａの合成
ＤＣＣ（１４．８０ｇ、７１．７３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ８０ｍｌ中で、ナプロキセン（１５．００ｇ、６５．１４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．８０ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）、およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（１０．００ｇ、８６．８２ｍｍｏｌ）の攪拌中の混合物に、室温にて加え、および攪拌を一夜続けた。沈殿したＤＣＵを、反応からろ過して取り除き、ＤＭＦで洗浄し、減圧下で蒸発し乾燥させた。得られた残渣を、ジエチルエーテルによって粉末化し、ろ過し、残渣をジエチルエーテルで広範囲に洗浄し、および乾燥して、白色固体のナプロキセンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル２２．００ｇを得た（２１．３１ｇの理論値）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８３−７．７８ （ｍ，３Ｈ），７．４６−７．４３ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） − １．９５，１．４６およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９，８．３０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．３１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１７−７．１５ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，１Ｈ），４．４１−４．３５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４，７．３３ Ｈｚ，１Ｈ），３．８６ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｓ，４Ｈ），１．５９−１．５７ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４ Ｈｚ，３Ｈ）
【０６６５】
化合物１３ａ：
化合物１３およびギ酸アンモニウムを、メタノール−ＥｔＯＡｃの１：１混合物中で懸濁し、および重量比１０％のＰｄ−Ｃ（１０％）を懸濁液に加えた。反応混合物を、ヒートガンを用いて少し温め、および室温にて２時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃおよび不溶性ギ酸アンモニウムをろ過によって除去し、ろ液を合わせておよび蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ中で懸濁し、および水性ＮａＨＣＯ３溶液によって洗浄して、化合物１３ａを得た。
【０６６６】
化合物１３からの化合物７ａの合成：
ナプロキセンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（２１．０ｇ）を、ナプロキセン（１ａ、１５．００ｇ、６５．１４ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（１０．００ｇ、８６．８２ｍｍｏｌ）から、結合剤としてＤＣＣ（１４．８０ｇ、７１．７３ｍｍｏｌ）を用いて、実施例１５に記載した通りのＤＭＡＰ（０．８０ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）の存在下で、対応するペンタフルオロフェノールエステル１ｃの合成のために調製した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．８３−７．７８ （ｍ，３Ｈ），７．４６−７．４３ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ １．９５，１．４６およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９，８．３０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．３１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１７− ７．１５ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４４およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ，１Ｈ），４．４１−４．３５ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４，７．３３ Ｈｚ，１Ｈ），３．８６ （ｓ，３Ｈ），２．７４ （ｓ，４Ｈ），１．５９−１．５７ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４ Ｈｚ，３Ｈ）
ナプロキセンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルを、化合物１３ａとともに攪拌し、化合物７ａを得た。分析データについては、実施例１５を参照のこと。
【０６６７】
化合物１３からの化合物７ｂの合成
ＤＣＣ（６．６０ｇ、３１．９９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ３０ｍｌ中で、イブプロフェン（６．００ｇ、２９．０９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４０ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（４．４０ｇ、３８．２３ｍｍｏｌ）の攪拌中の混合物に加え、および一夜攪拌させた。対応するナプロキセン誘導体の合成のために記載された通りに、ＤＣＵをろ過して取り除き、産物をエーテル中で溶解した。合わせたろ液を、回転蒸発器上で、小さな体積へと減少させた。ヘキサンを濃縮溶液へと加えて目的の産物を沈殿させ、産物をろ過し、ヘキサンで洗浄し、および乾燥させて、目的のエステル７．４８ｇ（収率：８４．８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．２８−７．２５ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，２Ｈ），７．１６−７．１３ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，２Ｈ），４．２４−４．１８ （ｑ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４，７．３２ Ｈｚ，１Ｈ），２．７７ （ｓ，４Ｈ），２．４３−２．４１ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３２ Ｈｚ，２Ｈ），１．８４−１．７７ （ｍ，１Ｈ），１．４９−１．４７ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３２ Ｈｚ，３Ｈ），０．８５−０．８３ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．８４ Ｈｚ，６Ｈ）
ナプロキセンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルを、化合物１３ａとともに攪拌し、化合物７ｂを得た。分析データについては、実施例１６を参照のこと。
【０６６８】
実施例１８
固相担体に結合したナプロキセンの合成：
【化１１３】
2008504840.tif 000153
（ｉ）ＴＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉ）（ａ）ＬｉＢＨ４／ＭｅＯＨおよび（ｂ）ＤＭＴ−Ｃｌ（ＤＭＡＰ／Ｐｙ）；（ｉｉｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン、および（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体、および（ｉｖ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノｂ−塩化シアノエチルホスホナミド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン、または、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル
【０６６９】
化合物６ｃ：
化合物５ａ（２．９０ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）および市販のトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン塩酸メチルエステル（１．２５ｇ、６．８８ｍｍｏｌ、ＣＮＨ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．から入手）をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に懸濁し、過剰量のＴＥＡを懸濁液に加え、および室温にて２時間攪拌した。溶媒および過剰量のＴＥＡを、減圧下で反応混合物から除去し、および、産物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）へと抽出した。有機層を、水性のＫＨＳＯ４溶液、水、ＮａＨＣＯ３溶液および水で連続的に洗浄し、それをその後標準的な作製を行った。得られた残渣を、フラッシュスライスゲルカラムクロマトグラフィによって精製し、ジクロロメタン中で５％ＭｅＯＨを溶出し、化合物６ｃ、２．１ｇ（７８．４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．９４−７．９２ （ｂｔ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．７７−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．４３−７．４１ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） − １．６６，１．４０およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．２５ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．１０ Ｈｚ，１Ｈ）， ７．１４−７．１１ （ｄｄ，Ｊ’（Ｈ，Ｈ） ＝ ２．４９およびＪ”（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７１ Ｈｚ，１Ｈ），５．１６−５．１５ （ｄ，０．８５Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能，大量の回転異性体），５．０９−５．０８ （ｄ，０．１５Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能，微量の回転異性体），４．５９−４．５７ （ｍ，０．１５Ｈ），４．３０−４．２０ （ｍ，１．８５Ｈ），３．８４ （ｓ，３Ｈ），３．６９−３．５２ （ｍ，６Ｈ，溶媒からのＨ２Ｏを含む），３．３４−３．３２ （ｂｄ，２．５Ｈ，Ｄ２Ｏ交換後１時間に相当），３．０２−２．９７ （ｍ，２Ｈ），２．１５−２．０４ （ｍ，３Ｈ），１．８９−１．８２ （ｍ，１Ｈ），１．４４−１．３０ （ｍ，７Ｈ），１．１５−１．１４ （ｍ，２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃： δ１７３．９，１７３．０，１７１．７，１５７．３，１３７．８，１３３．４，１２９．４，１２８．７，１２６．９，１２６．７，１２５．５，１１８．９，１０６．０，６９．１，５７．５，５５．５，５５．０，５２．１，４５．５，３８．７，３３．７，２９．０，２６．１，２４．１，１８．７
【０６７０】
化合物７ｃ：
化合物６ｃを、メタノール中のＬｌｉＢＨ４で処理し、対応するジオール（Ｒａｊｅｅｖ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，６２，５１６９）を得る。こうして得られたジオールを、ＤＭＡＰの存在下で無水ピリジン中ＤＭＴ−Ｃｌで攪拌して、化合物７ｃを得る。
【０６７１】
固相担体８ｃ：
目的のＣＰＧ８ｃを、化合物８ａの合成のための実施例１５に記載した通り、化合物７ｃから調製する。
【０６７２】
ホスホラミダイト９ｃ：
目的のホスホラミダイト９ｃを、化合物９ａの合成のために実施例１５に記載した通り、化合物７ｃから調製する。
【０６７３】
実施例１９
固相担体に結合したナプロキセンの合成：
【化１１４】
2008504840.tif 000154
（ｉ）グリオキシル酸エチル、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ；（ｉｉ）ブロモプロピオン酸エチル、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン；（ｉｉｉ）ＫＯ１Ｂｕ／トルエン：（ｉｖ）パン酵母／Ｈ２Ｏ；（ｖ）ＬｉＢＨ４／ＭｅＯＨ；（ｖｉ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｖｉｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタン、および（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体、および（ｖｉｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノｂ−塩化シアノエチルホスホナミド｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタン、または、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル。
【０６７４】
化合物１５：
化合物１４を、文献に報告された通り調製する。アミン１５を合成するための一般的手順（参照： Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６，６１（１１），３８４９−３８６２）。この還元的アミノ化の代表例は、アミン１４とグリオキシル酸エチルの反応によって示される：グリオキシル酸エチル（トルエン中４５％溶液；１当量）およびアミン（１当量）を無水ＴＨＦ中で混合し、および次にナトリウム三アセトキシボロハイドライド（１．５当量）で処理する。混合物を室温にて２４時間攪拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えて急冷し、および、産物をＥｔＯＡｃへと抽出する。アミン１５を、有機層の濃縮によって得る。
【０６７５】
化合物１６：
ジエステル１６の合成（参照：Ｓｔ−Ｄｅｎｉｓら。Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２０００，７７６）：
トルエン中の調製された３−ブロモプロピオン酸エチル（１．２当量）を、トルエン中の新たに調製されたアミン１５（１当量）溶液に加える。懸濁液を、６０℃にて６時間加熱し、および水性炭酸ナトリウム溶液に注入する。水相を、クロロホルムで抽出し、および濃縮してジエステル１６を与える。
【０６７６】
化合物１７および１８：
ケトエステル１７および１８の合成（参照：Ｂｌａｋｅら。Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９６４，５２９３）
窒素の存在下での０℃のトルエン中のカリウムｔ−ブトキシド（１．５当量）の懸濁液に、３０分間にわたってトルエン中の１当量のジエステル１６を加える。出発材料が消失するまで、溶液を０℃にて攪拌し、および氷酢酸を加え、それをその後直ちに、氷水中のＮａＨ２ＰＯ４−Ｈ２Ｏの溶液を加える。結果として生じる混合物をクロロホルムで抽出し、および合わせた有機抽出液をｐＨ７．０のリン酸塩緩衝剤で２回洗浄し、乾燥し、および蒸発して残渣とした。残渣をトルエン中で溶解し、０℃へと冷却し、および冷たいｐＨ９．５の炭酸塩緩衝剤の部分で抽出する。水性抽出物をリン酸をゆっくりと加えてｐＨ３とし、およびクロロホルムで抽出する（３×１００ｍｌ）。合わせた有機層は、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、および蒸発させてケトエステル１８を与える。トルエン層を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、および蒸発して乾燥させて、ケトエステル１７を算出する。
【０６７７】
化合物１９：
化合物１９を得るための１８のパン酵母還元（参照：Ｓｔ−Ｄｅｎｉｓら。Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．２０００，７７６）：パン酵母（重量比１．５当量）を、蒸留水中の蔗糖（重量比２当量）の溶液に加える。懸濁液を、回転蒸発器上で３２℃にて加熱する。次に、フラスコ内容物を、ジエステル１８（重量比１つの当量）に注入する。攪拌を一日続け、次いで温蒸留水（４０℃）中の追加的な蔗糖を加える。２日後に、セライトを混合物に加え、および焼結ガラス漏斗でろ過する。ろ液を珪藻土のパッドで再ろ過する。洗浄後、水層をジクロロメタンで抽出する。有機層を合わせ、および蒸発して、エステルアルコール１９を産出する。
【０６７８】
ジオール２０：
化合物１９（１当量）を、無水ＴＨＦ中で溶解し、および０℃にて無水ＴＨＦのＩＭリチウムボロハイドライド（１当量）へ加える。反応混合物を、開始材料の消失まで、０℃にて攪拌する。過剰量のリチウムボロハイドライドを、水を加えて急冷する。反応混合物を減圧下で濃縮する。残渣に、３Ｎ塩酸を加え、３時間攪拌する。結果として生じた水層を、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、および濃縮して、ジオール２０を産出し、ジオール２０をカラムクロマトグラフィによって精製する。
【０６７９】
化合物２１：
化合物２１を、ジオール６ａからの化合物７ａの調製のための実施例１５に記載の通りに、ジオール２０から得る。
【０６８０】
固相担体２２：
固相担体２２を、化合物７ａからの化合物８ａの調製のための実施例１５に記載の通りに、化合物２２から得る。
【０６８１】
ホスホラミダイト２３：
ホスホラミダイト２２を、化合物７ａからの化合物９ａの調製のための実施例１５に記載の通りに、化合物２１から得る。
【０６８２】
実施例２０  
固相担体に結合したナプロキセンの合成：
【化１１５】
2008504840.tif 000155
（ｉ）ＤＭＴ−Ｃｌ、ＤＭＡＰ／Ｐｙ；（ｉｉ）（ａ）ピペリジン／ＤＭＦ（ｂ）１１ａ、ＴＥＡ／ジクロロメタン（ｉｉｉ）Ｈ２／Ｐｄ−Ｃまたはギ酸アンモニウム（Ｐｄ−Ｃ）；（ｉｖ）１ｃ、ＴＥＡ／ジクロロメタン（ｖ）ＤＬ−６−メトキシα−メチル−２−ナフタレンメタノール、ＣＤＩ／ＴＨＦ（ｖｉ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体および（ｖｉｉ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノｂ−シアノエチルホスホナミド塩化物｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル
【０６８３】
化合物２５：
化合物２４を、文献（Ｆｉｌｉｃｈｅｖ ａｎｄ Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， ２００１， ５７， ９１６３−６８）中に報告された通りに調製する。モノＤＭＴ化合物２５を、化合物６ａからの化合物７の調製のための実施例１５で記載した通りに、化合物２４から調製する。
【０６８４】
化合物２６：
Ｆｍｏｃ基を、文献（Ａｔｈｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９８７，９，１，Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）で報告された通りに、ピペリジンで処理することによって化合物２５から除去する。Ｆｍｏｃを除去した後、得られた遊離アミンをＴＥＡの存在下で化合物１１ａ（スキーム２を参照）とともに攪拌し、化合物２６を得る。
【０６８５】
化合物２７
化合物２６の触媒水素化処理によって、化合物２７を産生する。
【０６８６】
化合物２８
化合物２７をＴＥＡの存在下でエステル１ｃ（スキーム１）とともに攪拌し、化合物２８を得る。
【０６８７】
化合物２９
ホスホラミダイト２９は、７ａからのホスホラミダイト９ａの調製のための実施例１５で記載した通りに、化合物２８から調製される。
【０６８８】
固相担体３０
固相担体３０は、７ａからの担体８ａの調製のための実施例１５で記載した通りに、２８から調製される。
【０６８９】
化合物３１：
化合物２７を、文献中に報告された通りに、ＴＨＦ中のｌ，ｌ’−カルボニルジイミダゾールおよび市販のＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ）で処理し、化合物３１を得る（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ａｎｄ Ｈｏｄｇｅｓ，ＪＯｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，６２，３１５３）。
【０６９０】
化合物３２：
ホスホラミダイト３２は、化合物７ａからの化合物９ａの調製のための実施例１５で記載した通りに、化合物３１から調製される。
【０６９１】
化合物３３：
固相担体３３を、化合物７ａからの担体８ａの調製のために記載した通りに、化合物３１から得る。
【０６９２】
実施例２１
固相担体に結合したナプロキセンの合成：
【化１１６】
2008504840.tif 000156
（ｉ）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ、イミダゾール／ピリジン；（ｉｉ）Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ；（ｉｉｉ）３６ａには、ＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタンアミン、ＣＤＩ／ＴＨＦおよび３６ｂにはメトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール、ＣＤＩ／ＴＨＦ；（ｉｖ）（ａ）無水コハク酸、ＤＭＡＰ／ジクロロエタンおよび（ｂ）ＤＴＮＰ、ＤＭＡＰ、Ｐｈ３Ｐ、アミノアルキル固相担体および（ｖ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノｂ−塩化シアノエチルフォスホンアミド酸塩｛［（ＣＨ３）２ＣＨ］２Ｎ−Ｐ（Ｃｌ）−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ｝、ＤＩＥＡ／ジクロロメタンまたは２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスファン、テトラゾール（またはテトラゾールジイソプロプルアンモニウム塩）／アセトニトリル
【０６９３】
化合物３４
化合物１３（１２．９１ｇ、２０．１６ｍｍｏｌ）を、イミダゾール（６．３０ｇ、９２．５４ｍｍｏｌ）の存在下で、ピリジン中のＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（４．６０ｇ、３０．５２ｍｍｏｌ）で、室温にてアルゴン下で６時間攪拌した。ピリジンを減圧下で反応混合物から除去し、および残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）へと抽出し、およびＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、その後標準的な作製を行った。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、化合物３４を得た。溶出物：ジクロロメタン中２〜３％メタノール、収率：１５．１０ｇ（９９．３％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ７．６５−７．６３ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．３０ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），７．３８−７．１７ （ｍ，１５Ｈ，Ｄ２Ｏ交換後１４時間に相当），６．８６−６．８４ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ８．７９ Ｈｚ），４．０１−３．９６ （ｍ，１Ｈ），３．７１ （ｓ，６Ｈ），３．５８−３．５４ （ｍ，２Ｈ），３．０４−２．８８ （ｍ，４Ｈ），２．０８−２．０４ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ７．３３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４９−１．３１ （ｍ，４Ｈ），１．２３−１．１７ （ｍ，２Ｈ），０．７２ （ｓ，９Ｈ），−０．０８ （ｓ，３Ｈ），−０．１０ （ｓ，３Ｈ）
【０６９４】
化合物３５：
化合物３４を、化合物１３からの化合物１３ａの調製のための実施例１７に記載した通りに、ギ酸アンモニウムおよびＰｄ−Ｃで攪拌し、化合物３５を得る。
【０６９５】
化合物３６ａ：
化合物３５を、化合物２７からの化合物３１の調製のための実施例２０に記載した通りに、ｌ，ｌ’−カルボニルジイミダゾールおよびＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタンアミンで処理する。ＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタンアミンを、文献手順の通りに調製する（Ｗｏｌｂｅｒ ａｎｄ Ｒｕｅｃｈａｒｄｔ，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９９１，１２４，１６６７）。完全に保護された尿素誘導体を作成した後に、得られた産物を、過剰のＴＥＡの存在時に、ＴＨＦ中でＴＥＡ．３ＨＦ（Ｎｙｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１９８５，２６，５３９３）で処理し、化合物３６ａを得る。
【０６９６】
化合物３６ｂ：
化合物３５を、化合物２７からの化合物３１の調製のための実施例２０に記載した通りに、ｌ，ｌ’−カルボニルジイミダゾールおよび市販のＤＬ−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレンメタノール（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ）で処理する。完全に保護されたカルバメート誘導体を作成した後に、得られた産物を、過剰のＴＥＡの存在時に、ＴＨＦ中でＴＥＡ．３ＨＦ（Ｎｙｓｔｒｏｍｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， １９８５， ２６， ５３９３）で処理し、化合物３６ｂを得る。
【０６９７】
化合物３７ａ：
ホスホラミダイト３７ａを、７ａからのホスホラミダイト９ａの調製のための実施例１５に記載した通りに、化合物３６から調製する。
【０６９８】
化合物３８ａ：
固相担体３８ａを、７ａからの担体８ａの調製のための実施例１５に記載した通りに、３６ａから得る。
【０６９９】
化合物３７ｂ：
ホスホラミダイト３７ｂを、化合物７ａからの化合物９ａの調製のための実施例１５に記載した通りに、化合物３６ｂから調製する。
【０７００】
化合物３８ｂ：
固相担体３８ｂを、化合物７ａからの担体８ａの調製のための実施例１５に記載した通りに、化合物３６ｂから得る。
【０７０１】
実施例２２
固相担体に結合したナプロキセンの合成：
【化１１７】
2008504840.tif 000157
【０７０２】
化合物４２ａ：
化合物３９を、Ｃｈｅｍ Ｇｅｎｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。化合物３９（１．５０ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）および化合物１ｃ（１．３０ｇ、３．２８ｍｍｏｌ、１ｃの調製のための実施例１５を参照）を、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中で、過剰なＴＥＡの存在下で、４時間攪拌した。その後、より多量のジクロロメタンを加えることによって、反応混合物を８０ｍｌまで希釈し、およびＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、有機層を蒸発して乾燥させた。得られた残渣を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製し、化合物４２ａ（０．８５ｇ、４３．５％、溶出物：ジクロロメタン中４％ＭｅＯＨ）を与えた。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ１１．６１ （ｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能）， ８．００−７．９１ （ｂｍ，３Ｈ，一部Ｄ２Ｏと交換可能）， ７．７６−７．６８ （ｍ，３Ｈ），７．４３−７．０１ （ｍ，１５Ｈ），６．８７−６．８３ （ｍ，４Ｈ）， ６．１７−６．１４ （ｔ， Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．４１，６．７１ Ｈｚ，１Ｈ），５．２８−５．２７ （ｄ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ４．８８ Ｈｚ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），４．２３−４．１９ （ｍ，１Ｈ），３．８９−３．８２ （ｍ，４Ｈ），３．７１−３．６５ （ｍ，８Ｈ），３．３２ （ｓ，３Ｈ），３．３２−２．９０ （ｍ，６Ｈ），２．４９−２．３１ （ｍ，１Ｈ），２．２９−２．１３ （ｍ，１Ｈ），１．３８−１．１８ （ｍ，９Ｈ）
【０７０３】
化合物４３ａ：
化合物４２ａ（０．６５ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の３’−Ｏ−コハク酸塩（０．６７ｇ、９２．８％）を、実施例１５に記載した通りに調製した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，２５℃）： δ１２．１９ （ｂｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），１１．６４−１１．６０ （ｂｍ，１Ｈ，Ｄ２Ｏと交換可能），８．０３−７．７５ （ｍ，３Ｈ），７．７６−７．６７ （ｍ，３Ｈ），７．４２−７．０１ （ｍ，１５Ｈ），６．８７−６．７６ （ｍ，４Ｈ），６．１６−６．１２ （ｔ，Ｊ（Ｈ，Ｈ） ＝ ６．７１，７．０２ Ｈｚ，１Ｈ），５．１７−５．１５ （ｍ，１Ｈ），４．０８−３．９９ （ｍ，２Ｈ）， ３．８４−３．８２ （ｍ，３Ｈ），３．７１−３．６５ （ｍ，９Ｈ），３．３０−３．１９ （ｍ，２Ｈ），３．１１−２．９８ （ｍ，６Ｈ），２．６５−２．４０ （ＨＨ），２．３４−２．２８ （ｍ，１Ｈ），１．３７−１．２８ （ｍ，９Ｈ），１．１７−１．１３ （ｍ，１０Ｈ）
こうして得た３’−Ｏ−コハク酸塩（０．５１ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を、化合物８ａの調製のための実施例１５に記載した通りに、ＣＰＧに結合して、目的のＣＰＧを得た。装填１２μＭ／ｇは、文献に記載した通りに決定した。（Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００２，６７，３５７および本明細書中に引用された参照文献）。
【０７０４】
実施例２３
ｓｉＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｌｕｃ活性
【表１９】
2008504840.tif 000158
表１９における配列の合成の詳細は、実施例１２に提供される。ルシフェラーゼ活性アッセイ法の詳細は、実施例１３に提供される；対照の二重鎖１０１は、上記の表１８、入力１０１中に一覧にて記載されてきた。
【０７０５】
参照による組み込み
本明細書中に引用される特許および刊行物のすべては、参照によって本開示に含まれる。
【０７０６】
等価物
当業者は、本明細書中に記載されている本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識し、または、ルーチン試験だけを用いて確認することができる。このような等価物は、下記の請求項に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０７０７】
【図１】図１はリガンドと複合化されたさまざまなオリゴヌクレオチドを示す。ＮＡはＲＮＡまたはＤＮＡまたはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡまたはＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡを含むオリゴヌクレオチド（または核酸）であることに注意する。一部の場合には、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうち少なくとも１つは芳香族または置換芳香族であり、Ｒ１が芳香族または置換芳香族である場合は、Ｒ２はＨまたは任意の有機置換基であり、およびＲ３はＨまたは任意の有機置換基である。
【図２】図２はリガンドと複合化されたさまざまなオリゴヌクレオチドを示す。注意：一部の場合には、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうち少なくとも１つは芳香族または置換芳香族である。行Ａ〜Ｅ：ＮＡ＝ＤＮＡまたはＲＮＡ。行Ａ：ラセミおよびＲおよびＳ異性体。行ＢおよびＣ：ラセミおよび４種類すべての立体異性体（ＲＲ、ＲＳ、ＳＲおよびＳＳ）。行ＤおよびＥ：Ｒ＝ＨまたはＯＨ。
【図３】図３はアルキルおよびＰＥＧテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つセリノールリンカー（図２、行Ａ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図４】図４はアルキルおよびＰＥＧテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つピロリジンリンカー（図２、行Ｂ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図５】図５はアルキルおよびＰＥＧテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つヒドロキシプロリノールリンカー（図２、行Ｃ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図６】図６は選択されたテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つヌクレオシドリンカー（図２、行Ｄ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図７】図７は選択されたテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つヌクレオシドリンカー（図２、行Ｄ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図８】図８は選択されたテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つヌクレオシドリンカー（図２、行Ｅ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図９】図９は選択されたテザーを介して結合したアラルキルリガンドを持つヌクレオシドリンカー（図２、行Ｅ参照）を有するさまざまなＮＡ構築単位を示す。示される各リガンドは、ラセミまたは光学濃縮または純粋なＲまたはＳ異性体である。
【図１０】図１０はリガンドと複合化されたさまざまなオリゴヌクレオチドを示す。ＮＡはＲＮＡまたはＤＮＡまたはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡまたはＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡを含むオリゴヌクレオチド（または核酸）である。一部の場合には、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうち少なくとも１つは芳香族または置換芳香族であり、Ｒ１が芳香族または置換芳香族である場合は、Ｒ２はＨまたは任意の有機置換基であり、およびＲ３はＨまたは任意の有機置換基である。
【図１１】図１１はナプロキセンと複合化されたさまざまなｓｉＲＮＡ二重鎖を示す。Ｉ：各鎖の３’末端にオーバーハングを持つ未修飾ｓｉＲＮＡ。ＩＩ：センス鎖の３’末端にてナプロキセン複合化されたｓｉＲＮＡ二重鎖。ＩＩＩ：アンチセンス鎖の３’末端にてナプロキセン複合化されたｓｉＲＮＡ二重鎖。ＩＶ：センスおよびアンチセンス鎖の３’末端にてナプロキセン複合化されたｓｉＲＮＡ二重鎖。Ｖ：センス鎖の３’および５’末端にてナプロキセン複合化されたｓｉＲＮＡ二重鎖。ＶＩ：センス鎖の５’末端にてナプロキセン複合化されたｓｉＲＮＡ二重鎖。ＶＩＩ：センス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端にてナプロキセン複合化されたｓｉＲＮＡ二重鎖。
【図１２】図１２は固相オリゴヌクレオチド合成のための手順を示す。
【図１３】図１３は二重鎖１０１および１０４についてのヒト血清安定性アッセイの変性ゲル分析からの結果を示す（実施例１４参照）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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