(57)【要約】  本発明は、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけフルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体を含む医薬組み合わせ物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけフルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩およびｍＴＯＲ阻害剤を含む、医薬組み合わせ物。
【請求項２】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤がフルバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１記載の医薬組み合わせ物。
【請求項３】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤がピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１記載の医薬組み合わせ物。
【請求項４】
ｍＴＯＲ阻害剤がラパマイシンまたは３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)、４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシンおよび１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンから成る群から選択されるラパマイシン誘導体、または薬学的に許容されるそれらの塩である、同時、連続的または別々の使用のための、請求項３記載の医薬組み合わせ物。
【請求項５】
ピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩および４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを含む、同時、連続的または別々の使用のための請求項１記載の医薬組み合わせ物。
【請求項６】
フルバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩および４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを含む、同時、連続的または別々の使用のための請求項１記載の医薬組み合わせ物。
【請求項７】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別に固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防のための、請求項１から６のいずれかに記載の医薬組み合わせ物。
【請求項８】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防用薬剤の製造のための、請求項１から６のいずれかに記載の医薬組み合わせ物の使用。
【請求項９】
２種の医薬組成物を、一つに包装された別々の容器に含むキットであって、第一の容器にピタバスタチンを含む医薬組成物を含み、そして第二の容器にｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体を含む医薬組成物を含む、キット。
【請求項１０】
２種の医薬組成物を、一つに包装された別々の容器に含む、キットであって、第一の容器にフルバスタチンを含む医薬組成物を含み、そして第二の容器にｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体を含む医薬組成物を含む、キット。
【請求項１１】
ｍＴＯＲ阻害剤が４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンである、請求項９または１０記載のキット。
【請求項１２】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけフルバスタチンまたはピタバスタチンを、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防のためにｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体と組み合わせて使用するための指示書と共に包装されている、包装物。
【請求項１３】
フルバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩をｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンと組み合わせて使用するための指示書と共に含む、請求項１２記載の包装物。
【請求項１４】
ピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩をｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンと組み合わせて使用するための指示書と共に含む、請求項９記載の包装物。
【請求項１５】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患の予防または処置方法であって、請求項１から５のいずれかに記載の組み合わせ物および所望により薬学的に許容される担体を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、同時、別々または連続使用のための、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤(別名β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−コエンザイム−Ａレダクターゼ阻害剤)または薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体を、所望により薬学的に許容される担体と共に含む、とりわけＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症、混合性異脂肪血症、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症の予防、進行遅延または処置およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患の予防、進行遅延または処置のための、組み合わせ物、例えば各々組み合わせ製剤または医薬組成物、このような状態の予防、進行遅延または処置用薬剤の製造のためのこのような組み合わせ物の使用；ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症、混合性異脂肪血症、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の予防、進行遅延または処置方法に関する。
【発明の開示】
【０００２】
本発明は、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤または薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体を、所望により薬学的に許容される担体の存在下に含む医薬組み合わせ物または組成物、およびＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症、混合性異脂肪血症、心血管事象の再発予防、高コレステロール血症のようなアテローム性動脈硬化症およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置におけるそれらの使用に関する。
【０００３】
本発明は、さらに同時、連続的または別々の使用のための、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン(以前はイタバスタチン)、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチン、または、いずれの場合も、薬学的に許容されるそれらの塩の一団から選択されるＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤(好ましいのはフルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチンまたはシンバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩である)およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【０００４】
好ましい態様において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のためのフルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体を組み合わせて、所望により薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【０００５】
他の好ましい態様において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、フルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたは３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)、４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシンおよび１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンからなる群から選択されるラパマイシン誘導体および所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【０００６】
他の好ましい態様において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、フルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩および４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを組み合わせて、そして所望により薬学的に許容される担体を含む、医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【０００７】
一つの局面において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけピタバスタチンまたはフルバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたは３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)、４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシンおよび１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンから成る群から選択されるラパマイシン誘導体：および所望により薬学的に許容される担体を含む、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患の処置または予防のための、本発明の医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【０００８】
一つの局面において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、フルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを組み合わせて、そして所望により薬学的に許容される担体を含む、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患の処置または予防のための、本発明の医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【０００９】
好ましい局面において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、フルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを組み合わせて、そして所望により薬学的に許容される担体を含む、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患の処置または予防のための、本発明の医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【００１０】
他の局面において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、(ｉ)フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチンまたはシンバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩および(ii)ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたは３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)、４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシンおよび１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンから成る群から選択されるラパマイシン誘導体を組み合わせて、そして所望により薬学的に許容される担体を含む、ｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防のための、本発明の医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【００１１】
好ましい局面において、本発明は、同時、連続的または別々の使用のための、(ｉ)フルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩および(ii)ｍＴＯＲ阻害剤および４０−０−(２−ヒドロキシエチル)を組み合わせて、そして所望により薬学的に許容される担体を含む、ｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防のための、本発明の医薬組み合わせ物または組成物に関する。
【００１２】
これらの組成物において、成分(ｉ)および(ii)を得ることができ、そして一つの組み合わせた単位投与形態で、または２個の別々の単位投与形態で一緒に、交互にまたは別々に投与できる。単位投与形態はまた固定された組み合わせ物であってもよい。
【００１３】
他の態様において、本発明は、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症、混合性異脂肪血症、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防用薬剤の製造のための本発明の医薬組み合わせ物の使用を提供する。
【００１４】
他の態様において、本発明は、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防およびアテローム性動脈硬化症関連状態または疾患の処置または予防のための、本発明の医薬組成物の使用を提供する。
【００１５】
他の態様において、本発明は、ｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防のための本発明の医薬組成物の使用を提供する。
【００１６】
本発明は、２種の医薬組み合わせ物または組成物を、一つに包装された別々の容器に含むキットであって、第一の容器にＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけピタバスタチンまたはフルバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩を含む医薬組成物、および第二の容器にｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたは３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)、４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシンおよび１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンから成る群から選択されるラパマイシン誘導体を含む医薬組成物を含む、キットを提供する。
【００１７】
本発明、２種の医薬組み合わせ物または組成物を、一つに包装された別々の容器に含むキットであって、第一の容器にフルバスタチンまたはピタバスタチンを含む医薬組成物、および第二の容器にｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを含む、キットを提供する。
【００１８】
本キット形は、別々の成分を異なる投与形態で投与しなければならないとき、または異なる投与間隔で投与するとき、特に有利である。
【００１９】
本発明は、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけフルバスタチンまたはピタバスタチンを、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防のために、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたは３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)、４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、３２−デオキソラパマイシンおよび１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンから成る群から選択されるラパマイシン誘導体と組み合わせて使用するための指示書と共に含む、包装物を提供する。
【００２０】
好ましい態様において、本発明の包装物は、フルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを組み合わせて含む。
【００２１】
他の態様において、本発明は、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患の予防または処置方法であって、治療的有効量の好ましい本発明の医薬組成物のいずれかおよび所望により薬学的に許容される担体を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法に関する。
【００２２】
他の態様において、本発明は、ｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の予防または処置方法であって、治療的有効量の好ましい本発明の医薬組成物のいずれかおよび所望により薬学的に許容される担体を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法に関する。
【００２３】
好ましい態様において、本発明はＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患の予防または処置方法であって、治療的有効量のフルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンおよび所望により薬学的に許容される担体を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法に関する。
【００２４】
好ましい態様において、本発明はｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の予防または処置方法であって、治療的有効量のフルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩およびｍＴＯＲ阻害剤４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンおよび所望により薬学的に許容される担体を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、方法に関する。
【００２５】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤(別名β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−コエンザイム−Ａレダクターゼ阻害剤)は、血中のコレステロールを含む脂質の低下に使用し得る活性剤であると理解されている。
【００２６】
ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤のクラスは、種々の構造特性の化合物を含む。例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン(以前はイタバスタチン)、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチン、または、いずれの場合も、薬学的に許容されるそれらの塩から成る群から選択される化合物を特記し得る。
【００２７】
好ましいＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤は市販されているそのような薬剤、最も好ましいのはフルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチンまたはシンバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩である。
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の製造法は当業者に既知であり、そのような薬剤は市販のものを含む。
【００２８】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤はその遊離酸形、それらのエステル形、またはそれらの薬学的に許容される塩として使用できる。このような薬学的に許容される塩は、例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩、およびエステル塩を含む。
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤はラセミ混合物として、または適当であればより活性な立体異性体として使用できる。
【００２９】
ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、ヒトにおけるコレステロールの生合成の阻害に有効量で存在し得る。一つの態様において、本医薬組成物は、組成物の総重量に基づいて約５から約５０重量％のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤を含む。より好ましくは、本組成物は、組成物の総重量に基づいて約２０から約４０重量％のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤を含む。
【００３０】
ｍＴＯＲ阻害剤は、細胞内ｍＴＯＲ(“ラパマイシンの哺乳動物標的”)を標的とする化合物である。ｍＴＯＲは、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３−キナーゼ)関連キナーゼのファミリーである。ラパマイシンおよびラパマイシン誘導体は、その細胞内受容体ＦＫＢＰ１２(ＦＫ５０６結合タンパク質１２)と複合体形成することによりｍＴＯＲ経路を阻害する。
【００３１】
ラパマイシンはStreptomyces hygroscopicusから産生される既知のマクロライド系抗生物質である。ラパマイシン誘導体は、ｍＴＯＲ阻害特性を有する置換ラパマイシン、例えば４０および／または１６および／または３２位を置換されたラパマイシン、例えば式Ｉ
【化１】
2008542317.tif 000002
〔式中、
Ｒ１はＣＨ３またはＣ３−６アルキニルであり、
Ｒ２はＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチル−プロパノイルまたはテトラゾリルであり、そして
Ｘは＝Ｏ、(Ｈ,Ｈ)または(Ｈ,ＯＨ)である。
ただし、Ｘが＝Ｏであり、そしてＲ１がＣＨ３であるとき、Ｒ２はＨ以外である。〕
の化合物、またはＲ２が−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであるとき、そのプロドラッグ、例えばその生理学的に加水分解可能なエーテルである。
【００３２】
代表的な式Ｉのラパマイシン誘導体は例えば３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(ＳまたはＲ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名ＣＣＩ７７９)または４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン(別名ＡＢＴ５７８)である。好ましい化合物は、例えばＷＯ９４／０９０１０の実施例８に開示の４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン(以後化合物Ａと呼ぶ)、またはＷＯ９６／４１８０７に開示の３２−デオキソラパマイシンまたは１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシンである。
【００３３】
ラパマイシン誘導体はまた、例えばＷＯ９８／０２４４１およびＷＯ０１／１４３８７に開示のような、いわゆるラパログ、例えばＡＰ２３５７３、ＡＰ２３４６４、ＡＰ２３６７５またはＡＰ２３８４１も含み得る。
ラパマイシン誘導体のさらなる例は、名称ＴＡＦＡ−９３、バイオリムス−７またはバイオリムス−９の下に開示のものである。
【００３４】
驚くことに、本発明の医薬組み合わせ物または組成物が、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患、例えば移植、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患(ＩＢＤ)、慢性移植片拒絶反応、血管形成術の再狭窄、固形腫瘍、特別固形腫瘍侵襲性またはこのような腫瘍増殖と関連する症状、異種移植片拒絶反応、移植片対宿主(ＧｖＨ)病、自己免疫性疾患および炎症状態(全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、Ｉ型糖尿病など)、喘息、多剤耐性、増殖性障害(腫瘍、過増殖性皮膚障害、例えば乾癬)、ブドウ膜炎、乾性角結膜炎、真菌感染症、血管形成および骨吸収阻害の処置または予防に使用できることが、判明した。
【００３５】
驚くことに、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけフルバスタチンまたはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩、およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体の組み合わせ物が、フルバスタチンまたはピタバスタチンまたはｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体薬剤単独の投与よりも、大きな治療効果(増強)を達成することが判明した。
【００３６】
好ましくは以下の実験部分の試験を１)ピタバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩および４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを含む組み合わせ物、２)ピタバスタチン単独および３)４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン単独で行う。
【００３７】
好ましくは以下の実験部分の試験を１)フルバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩および４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンを含む組み合わせ物、２)フルバスタチン単独および３)４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン単独で行う。
【００３８】
例えば、各試験を、例えば、以下の方法で適用する、フルバスタチンおよびエベロリムスの組み合わせ物で行う。
【００３９】
我々は、エベロリムス(４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン)単独または、フルバスタチンもしくはピタバスタチンとの組み合わせ物の抗アテローム血栓性効果を、異なる作用機序の薬剤のこの組み合わせの、可能性のある相加的または相乗的利点を解明する最終目的で評価している。
【００４０】
ウサギ頚動脈傷害：アテローム血栓症の実験モデル。
アテローム血栓症の可能性のある薬理学的調節を試験するために、アテローム発生およびその血栓塞栓性合併症中に起こる多くの事象を摸倣する実験モデルの利用が基本である。我々は、軟中空シリコン・カラーの外科的挿入による、ウサギ頚動脈の血管周囲操作に基づき、アテローム発生のインビボモデルを確立している(“カラーモデル”)。この方法は、２週間以内に、無傷の内皮の存在下で発生するＳＭＣの移動および増殖により特徴付けられる、再現可能な過形成性脈管内膜病変を誘発する。特に、我々は、白血球(Ｔリンパ球、ＰＭＮ、単球)接着および浸潤ならびに接着分子、例えばＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１の発現の検出ができた。このモデルで、透過電子顕微鏡法により、我々は、食作用とは異なる他の細胞を貪食する細胞の活発な現象である、エンペリポレシスと呼ばれる、中心多形核白血球とＳＭＣの間の以前は未知であった相関関係を最近観察している。先に記載した病変は脂質増加と無関係に得られる；しかしながら、高コレステロール血症は、このモデルで起こるアテローム生成過程に一般的な有害な作用を有し、豊富なＥＣＭ、脂質沈着、およびコレステロール負荷単球／マクロファージにより特徴付けられる、より重篤で、より複雑な脈管内膜肥厚に至る。ここ１０年の間、我々は、数クラスの薬剤(例えばスタチン、カルシウムアンタゴニスト、アポタンパク質ＡＩ−Ｍｉｌａｎｏ)が、正常および高コレステロール血症動物の両方においてカラー配置後に起こるプラークの形成を阻害する能力、ならびに試験化合物の作用機序を示すことができた。特に、我々は、フルバスタチンまたはピタバスタチが、その主作用(すなわちＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害)を介してプラーク形成を妨害できることを証明した。
【００４１】
我々は、高コレステロール血症ウサギにおける血管周囲操作後の、頚動脈壁におけるＴＦ(組織因子)およびＭＭＰ(マトリックスメタロプロテイナーゼ)発現の上方制御、および増加したコレステロールエステル化率も証明した(投稿中)。高いＴＦ発現は、頚動脈にプロトロンビン生成表現型を付与するが、しかしながら、フルバスタチンまたはピタバスタチンはアテローム硬化性病変の炎症性およびプロトロンビン生成特性の減弱を示した。
【００４２】
スタチンおよびアテローム性動脈硬化症
臨床試験は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が血管アテローム性動脈硬化症の緩解を誘発でき、ならびに冠動脈疾患を有するまたは有さない患者の心血管関連罹病および死亡を減少できることをしっかりと確立している。冠血管事象におけるこれらの有益な効果は、一般にスタチンの血中コレステロール低下特性によるものである。しかしながら、酵素反応の産物であるメバロネートが、コレステロールだけでなく、多くの他の非ステロイド性イソプレノイド化合物の前駆体であるため、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害が多面的な効果をもたらし得る。実際に、本メバロン酸経路は、種々の細胞機能に必須の一連のイソプレノイド類を産生する。メバロネート由来イソプレノイド基、ファルネシルまたはゲラニルゲラニル・ピロホスフェートのいずれかの共有結合により翻訳後修飾される数種のタンパク質が同定されている。これらのタンパク質は、機能に必須である膜結合のための必須条件としてプレニル化されるべきである。このファミリーのメンバーは、細胞シグナル伝達、細胞分化および増殖、髄鞘形成、細胞骨格動態およびエンドサイトーシス／開口分泌輸送を含む多くの細胞過程に関与する。
【００４３】
種々の実験データが、スタチンが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害を介して、それらの血中コレステロール低下特性と無関係に、アテローム硬化性病変の形成に関与する数種の過程に作用できることを示す。
【００４４】
臨床事象におけるスタチンの有利な効果は、内皮機能、炎症性応答、循環リポタンパク質の酸化的修飾、泡沫細胞形成、平滑筋細胞活性化、血管形成、プラーク安定化および血栓形成を夕食する非脂質関連機構に関連し得る。スタチンのこの多面的特性は、(スタチンによるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害の結果としての)メバロネートの涸渇がコレステロール合成の減少を超えて細胞機能に影響するため、メバロン酸経路の調節により恐らく説明できる。入手可能なデータは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が、それらの脂質低下作用の他に、動脈壁に対して直接抗アテローム硬化性作用を有し、それが心血管疾患を著しく予防することを証明する。
【００４５】
免疫抑制剤およびアテローム性動脈硬化症。
ｍＴＯＲ(ラパマイシンの哺乳類標的)のマクロライド系免疫抑制剤阻害剤であるラパマイシン(シロリムス)は、造血および非造血細胞の増殖因子依存性増殖を、後期Ｇ１期に細胞サイクルを停止することにより阻害する。シロリムスは血管ＳＭＣ(平滑筋細胞)増殖および移動をインビトロで阻害し、そしてバルーン傷害ラット頸動脈およびブタ冠血管動脈において新生内膜増殖を阻害することが示されている。より最近、シロリムス被覆ステントが、ブタ冠血管動脈における２８日目のステント内新生内膜増殖を阻害し、ヒトにおけるシロリムス溶出ステントでの印象深い最初の結果が報告されている(２１０日目で０％再狭窄率)。
【００４６】
シロリムスと同じファミリーの経口で活性な免疫抑制性かつ抗増殖性の化合物であるエベロリムス[４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン]もまた、腎臓および心臓移植の拒絶予防に、有望な効果を示している。エベロリムスは、リンパ球、ならびに間葉起源の他の造血および非造血細胞の増殖因子誘発増殖の強力な阻害を示す。シロリムスと同様、エベロリムスの生物学的活性は、そのイムノフィリン−ＦＫ５０６結合タンパク質１２(ＦＫＢＰ１２)への結合に依存する。エベロリムス−ＦＫＢＰ１２複合体はｍＴＯＲと相互作用し、ｍＴＯＲは、Ｇ１からＳ期への細胞サイクルの進行に必須のチロシンキナーゼであり、後にＦＲＡＰキナーゼとして同定された。
【００４７】
エベロリムスは、いくつかの実験動物移植モデルにおいて同種移植片生存を延長させ最新のデータは、それが慢性同種移植片機能不全と関連する脈管障害の予防に有益であり得ることを示唆する。心臓移植においてエベロリムスを使用した経験は、また、エベロリムスを受けた患者の中で、血管内冠血管超音波試験により同定された脈管内膜拡張が減少した場所である、血管ＳＭＣおよび線維芽細胞において抗増殖性効果をもたらすとの重要な可能性のある見識も提供している。このような効果は、関連する可能性のある付加的な治療標的を提供する。
【００４８】
ウサギモデルにおいて、免疫抑制に使用されるのと同量での経口エベロリムスは、ステント関連新脈管内膜拡張を予防した。恐らく移植において最も有望なのは、同種移植片冠血管動脈硬化症の発生の劇的な減少が見られた、心臓移植の初回レシピエントにおける免疫抑制のためにエベロリムスを使用して得られた結果であった。
【００４９】
インビボ試験
４群の動物(１０匹／群)を使用する：
・  処置なし(対照)
・  エベロリムス(０.７５−１.５mg／kg／日の範囲の計画投与量)
・  フルバスタチンまたはピタバスタチン(５mg／kg／日の計画投与量)
・  エベロリムス(０.７５−１.５mg／kg／日の範囲の計画投与量)＋フルバスタチンまたはピタバスタチン(５mg／kg／日の計画投与量)。
【００５０】
これらの動物において、我々は以下を測定する：
・  血漿脂質プロファイル(総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、トリグリセリド)；
・  頚動脈における脂質蓄積；
・  病変形成に関連する細胞過程、すなわちＳＭＣ蓄積、および白血球(特に単球／マクロファージ、ＰＭＮ、Ｔリンパ球)浸潤；
・  内皮細胞およびＳＭＣ上への接着分子(ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、およびα１インテグリン)の発現；
・  病変合併症およびプラーク安定化に重要なマクロファージ機能、すなわちＭＭＰ発現および活性；
・  動脈病変における組織因子発現；
・  コラーゲン沈着およびリモデリング；
【００５１】
インビトロ試験
エベロリムス単独、またはフルバスタチンもしくはピタバスタチンとの組み合わせ物の抗アテローム血栓性効果の分子機構のさらなる見識を得るために、培養したウサギおよびラット血管動脈ＳＭＣ、およびマウス腹膜マクロファージを利用する。加えて、リポタンパク質代謝に対するエベロリムスの効果の評価を最終目的として、リポタンパク質代謝の末梢および中枢モデルを表すヒト皮膚線維芽細胞(ＨＳＦ)およびヒト肝細胞株Ｈｅｐ−Ｇ２を使用する。
【００５２】
特に、我々は、試験薬の以下に対する効果を評価する：
・  ＳＭＣ増殖。このインビトロ試験は、我々にエベロリムス±フルバスタチンまたはピタバスタチンの組み合わせの可能性のある相加または相乗効果の評価を可能とする。アイソボログラム分析は、以前に記載の通り行う。
・  細胞性リポタンパク質代謝。このインビトロ試験は、エベロリムスの脂質低下効果を担う可能性のある機構の調査のために非常に有用である。より具体的に、我々は、ＨＳＦおよびＨｅｐ−Ｇ２におけるリポタンパク質異化反応およびコレステロール代謝に対するエベロリムスの効果を探索する。
・  細胞性コレステロールホメオスタシス。我々は、エベロリムス単独でまたはフルバスタチンまたはピタバスタチンとの組み合わせで、脂質代謝、ホメオスタシスおよび血管細胞への沈着に対する効果の明瞭な像を得るために、コレステロール合成、エステル化および流出を試験する。
・  ＭＭＰ発現および活性。この試験は、エベロリムス単独または、フルバスタチンもしくはピタバスタチンとの組み合わせでの可能性のある抗アテローム硬化性効果のいくつかを説明するために非常に有益である。
【００５３】
材料および方法
インビボ試験
試験設計  −  カラー誘発頸動脈病変に対する試験薬の効果を、高コレステロール血症ウサギで、カラー配置１４日後に評価する。ウサギに、経口胃管栄養法(エベロリムス)または餌と混ぜて(フルバスタチンまたはピタバスタチン)のいずれかで与え、血管周囲操作の非に開始する。高コレステロール血症を、カラー挿入４週間前に開始するコレステロールに富む餌(１％コレステロール)により誘発する。
【００５４】
血漿脂質評価  −  血液サンプルを一晩絶食後耳中枢動脈から基準時に、手術時におよび殺したときに採り、脂質分析を行う。総、ＨＤＬコレステロール、およびトリグリセリドレベルを酵素的に決定する。脂質の全体的変化を脂質濃度対時間の曲線下面積(ＡＵＣ)により、台形公式を使用して計算する。
【００５５】
頸動脈におけるＡＣＡＴ活性(活性アシル−コエンザイムコレステロールアシルトランスフェラーゼ)およびコレステロール含量  −  ＡＣＡＴ活性を、本質的にHelgerudの方法により決定する。頸動脈輪を、ウシ血清と複合体化した[１４Ｃ]−オレオイルコエンザイム(０.５μCi／サンプル)を０.１Ｍ  リン酸カリウム緩衝液、ｐｈ７.４中に含むＴＲＩＳ／スクロース緩衝液中に均質化する。２時間、３７℃でインキュベーション後、５mlのクロロホルム／メタノール(２：１ｖ／ｖ)の添加により反応を停止させ、脂質を抽出する。遠心分離後、クロロホルム層をＮ２流下で乾燥させる。大動脈弓中のコレステロール含量を決定するために、反応混合物中への[１４Ｃ]−オレオイルコエンザイムの添加を除いて、同じ方法を繰り返す。抽出した脂質を薄層クロマトグラフィー(ｔ.ｌ.ｃ.)(イソオクタン／ジエチルエーテル／酢酸、７５：２５：２、ｖ／ｖ／ｖ)で分離する。スポット中のコレステロール放射活性を液体シンチレーション計測(Insta-Fluor, Packard, Groningen, The Nether lands)により決定し、一方スポット中のコレステロール質量含量を酵素的方法で決定する。我々は、この方法の直線性を、１.５から５０μgの間のコレステロールで試験した(ｒ２＝０.９９)。全ての測定において、[３Ｈ]−コレステロールを内部標準として添加し、９０％より多く回収された。
【００５６】
頸動脈病変  −  雄ニュージーランド白色ウサギ(２,７−３,０kg)を、キシラジン(５mg／kg)およびケタミン(３５mg／kg)の筋肉内注射により麻酔する。次いで、動物を仰臥で置き、頸部正中線切開を外科的に行い、両頚動脈を暴露させる。非閉塞性の、生物学的に不活性の、柔らかい、中空Silasticカラー(SILICOLLAR(登録商標)、MediGene Oy, Kuopio, Finland)を、両方の頚動脈の周りに配置する。本カラーは２５mm長であり、それは動脈外周に、２０mm離れて２点で接触する。各動物で、反対側の頚動脈を、カラーを動脈周囲に配置するが、傷を縫合する直前に除くことにより、偽手術する。試験の最後に、動物を致死ｉ.ｖ．用量のウレタン(１０ml、２５％水性溶液)の投与により殺し、頚動脈からのサンプルを回収し、種々の適当な分析方法に従い処理する。
【００５７】
組織学  −  頚動脈からの切片を殺した直後に直ぐに切開し、摘出する。動脈を凍結させるか、パラフィン包埋し、５μm連続切片を得るために横断面を切断する。組織をヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、血管構造を形態学的分析により同定し、定量する。以下のパラメータをコンピュータ(OPTIMAS 6.2, Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA)を用いる画像分析により測定する：管腔面積(Ｌ)、内弾性板に囲まれた面積(ＩＥＬ)、および外弾性板に囲まれた面積(ＥＥＬ)。次いで、以下のパラメータを決定する：(ａ)脈管内膜面積＝Ｉ＝ＩＥＬ−Ｌ；(ｂ)中膜(medial)面積＝Ｍ＝ＥＥＬ−ＩＥＬ；および(ｃ)中膜対内側比＝Ｉ／Ｍ。さらなる切片をピクロシリウス赤色色素で染色して、コラーゲンを標識する。病変内のピクロシリウス赤色陽性領域を、コンピュータを使用した着色画像分析を使用して測定する。
【００５８】
内皮細胞およびＳＭＣ上の接着分子(ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびα１インテグリン)発現の免疫組織化学的検出  −  脈管内膜頸動脈病変における細胞接着分子の同定を、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１(R&D system)、およびα１インテグリン(Chemicon)に対する抗体を使用して行う。標準方法に従い、頸動脈凍結切片を、特異的一次抗体と、次いでビオチニル化種特異的二次抗体(Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, USA)とインキュベートする。標識を、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキット(Vectastain ABC Elite, Vector Laboratories Inc.)で、続いて、３,３−ジアミノベンジジン(Sigma)で行う。ネガティブコントロールのために、一次抗体を省き、切片を正常ウマ血清とインキュベートする。
病変内のＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１およびα１インテグリン陽性領域を、コンピュータを使用した着色画像分析を使用して測定する。
【００５９】
病変内の単球由来マクロファージおよびＴリンパ球蓄積の定量分析  −  脈管内膜頸動脈病変に浸潤する白血球サブセットの同定を、全白血球(抗ＣＤ１８、Serotec)、多形核細胞(ＰＭＮ)(多核好中球)(ＭＣＡ８０５、Serotec)、単球／マクロファージ(ＲＡＭ１１、ＤＡＫＯ)およびＴリンパ球(抗ＣＤ５、Serotec)のマーカーに対する抗体を使用して、標準法に従い、行う：組織切片を特異的一次抗体と、次いでビオチニル化種特異的二次抗体(Vector Laboratories Inc.)とインキュベートする。標識をアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキット(Vectastain ABC Elite、Vector Laboratories Inc.)、続いて３,３−ジアミノベンジジン(Sigma)で行う。ネガティブコントロールのために、一次抗体を省き、切片を正常ウマ血清とインキュベートする。
【００６０】
病変内の、各々ＣＤ１８、ＭＣＡ８０５、ＲＡＭ１１およびＣＤ５陽性領域として同定される全白血球、ＰＭＮ、単球／マクロファージおよびＴリンパ球領域を、コンピュータを使用した着色画像分析を使用して測定する。
【００６１】
組織因子の免疫組織化学的検出および組織因子タンパク質発現の定量分析  −  組織因子の免疫組織化学的検出のために、予め消化された組織切片を特異的マウス抗ウサギ組織因子抗体(ＡＰ−１)と、次いでビオチニル化ウマ抗マウスＩｇＧ二次抗体(Vector Laboratories Inc.)とインキュベートする。標識を、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼキット(Vectastain ABC Elite、Vector Laboratories Inc.)、続いて３,３−ジアミノベンジジン(Sigma)で、標準ＡＢＣ法(Vector)に従い行う。ネガティブコントロールのために、一次抗体を省き、切片を正常ウマ血清とインキュベートする。組織因子免疫陽性脈管内膜領域の程度を、コンピュータを使用した着色画像分析。
【００６２】
ＭＭＰ発現および活性の分析  −  異なるＭＭＰの分布を、免疫組織化学的に評価する。切片を一次モノクローナル抗体(Amersham-Pharmacia-Biotech, UK)と、次いでビオチニル化種特異的二次抗体(Vector Laboratories Inc.)とインキュベートする。標識はＦＩＴＣ接合extrAvidinで行う。抗ＭＭＰ抗体および細胞特異的抗体(ＳＭＣのために抗αアクチン、内皮細胞のために抗ＣＤ３１および白血球のために抗ＣＤ１８)での連続切片の免疫染色を行い、種々のＭＭＰの発現を担う優勢な細胞型(複数もある)を同定する。
ＭＭＰ活性を、ウサギ頸動脈のホモ下ネートでゼラチンゲルザイモグラフィにより測定する。
【００６３】
インビトロ試験
細胞単離および培養  −  マウス腹膜マクロファージ(ＭＰＭ)を、４％チオグリコレート水溶液の３ml腹腔内注射をしたマウスから、リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)での腹膜洗浄により回収する。ＭＰＭをペレット化し、２回無血清ダルベッコ改変イーグル(ＤＭＥ)培地で洗浄し、３×１０６細胞／３５mm皿の密度で播種し、そして、１０％胎児ウシ血清(ＦＢＳ)含有ＤＭＥ培地中で２時間皿に接着させる。次いで、プレートを３回ＤＭＥ培地で洗浄して、非接着細胞を除き、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥ培地中で、実験開始日までインキュベートする。
【００６４】
ヒト皮膚線維芽細胞(ＨＳＦ)を、正常リポタンパクの臨床的に健康な個体から得た皮膚生検サンプルの外植片から増殖させる。線維芽細胞は、受容体介在ＬＤＬ結合、内在化および分解の観点により特徴付けられる。細胞を単層で増殖させ、７５cm２プラスチック製フラスコに、３７℃で９５％空気、５％ＣＯ２加湿雰囲気中、１０％ＦＣＳ、非必須アミノ酸溶液(１％、ｖ：ｖ)、ペニシリン(１００Ｕ／ml)、ストレプトマイシン(１００ug／ml)、トリシン緩衝液(２０mM、ｐＨ７.４)、ＮａＨＣＯ３(２４mM)を補ったＦ−１１培地中に維持する。全実験について、貯蔵フラスコからの細胞を０.０５％トリプシン−０.０２％ＥＤＴＡで、コンフルエンシーで解離させ(５から１５継代)、３５mmプラスチック製ペトリ皿に播種(１−１,５×１０５細胞)し、結合取り込みおよび分解のためにコンフルエンシーに到達する直前に、通常播種の６日後に使用し、培地を２−３日毎に変える。コレステロールおよび脂肪酸合成の測定のために、細胞を３５mmプラスチック製ペトリ皿(７.５×１０５細胞)に播種し、１０％ＦＣＳを補ったＭＥＭとインキュベートする。２４時間後、培地を１０％ＬＰＤＳを含むものに変え、培養物を２４時間インキュベートする。この時(０時)に、培地を、既知濃度の試験化合物存在下または非存在下で１０％ＬＰＤＳを含むものに変え、さらに７２時間、３７℃でインキュベートを続ける。コレステロール合成を、細胞ステロールへの[１４Ｃ]アセテートの取り込みの測定により概算する２９。
【００６５】
American Type Culture Collectionから得た、リポタンパク質代謝の中枢モデルを代表するヒト肝細胞株、Ｈｅｐ−Ｇ２を単層で増殖させ、ＨＳＦについて記載の通り、０.１１ｇ／ｌ  ピルビン酸ナトリウムを培地に添加して培養する。全実験のために、細胞を２mlの１０％ＦＣＳ含有培地中で３５mm皿(３−５×１０５細胞)に播種し、播種６日後に使用する。
【００６６】
ＳＭＣを、雄Sprague Dawleyラットの大動脈または雄ニュージーランド白色ウサギの頸動脈の内膜−中膜層から単離する。細胞を、１０％(ｖ／ｖ)胎児ウシ血清(ＦＣＳ)、１００Ｕ／ml  ペニシリン、０.１mg／ml  ストレプトマイシン、２０mM  トリシン緩衝液および１％(ｖ／ｖ)非必須アミノ酸溶液を補ったＭＥＭで増殖する。細胞を４回目から１０回目の継代の間に使用する。ＳＭＣを、増殖行動、形態学について、およびα−アクチンに特異的なモノクローナル抗体(Sigma, MO, USA)を使用して同定する。
【００６７】
細胞増殖  −  ラットＳＭＣを、２×１０５細胞／ペトリ皿(３５mm)の密度で播種し、１０％ＦＣＳを補ったＭＥＭとインキュベートする。２４時間後、培地を０.４％ＦＣＳを含むものに変えて、細胞増殖を停止させ、培養物を７２時間インキュベートする。その後(０時)、培地を、増殖刺激として１０％ＦＣＳおよび種々の濃度の試験化合物とインキュベートする。０時に、薬剤の添加直前に、細胞計測のために３個のペトリ皿を使用する。細胞数を３日間のインキュベーション後にCoulter Counterで評価する。別のグループのペトリ皿で、サイクリンＤおよびＰＣＮＡの免疫ブロット分析を行う。実験の他のセットで、ＳＭＣの細胞サイクルのＧ０／Ｇ１間期への同期化が、対数増殖している培養物(２,５×１０５細胞／プレート)を９６−１２０時間、０.４％ＦＣＳ含有培地とインキュベートすることにより達成される。休眠細胞を、試験薬存在下、１０％ＦＣＳを有する新鮮培地中で、２０時間インキュベートする。次いで、ＤＮＡ合成を[３Ｈ]チミジンの、細胞(１μCi／ml培地)と２時間インキュベートした、核取り込みにより概算する。放射活性を、Aquasolシンチレーションカクテル(Packard, Groningen, NL)で測定する。
【００６８】
ウサギＳＭＣを２×１０５細胞／ペトリ皿(３５mm)の密度で播種し、１０％ＦＣＳを補ったＭＥＭとインキュベートする。１８時間後、培地を０.４％ＦＣＳを含むものと変えて、細胞増殖を停止させ、培養物を４８時間インキュベートする。この時間の後(０時)、培地を１０％ＦＣＳおよび種々の濃度の化合物を含むものに変える。０時に、薬剤添加の直前に、数個のペトリを細胞計測のために使用する。細胞増殖を、１−７日のインキュベーション後の細胞計数により評価する。細胞数を、単層のトリプシン処理後Coulter Counterにより決定する。
等効果曲線を記載の通り引く。
【００６９】
サイクリンＤおよびＰＣＮＡ発現細胞単層を凍らせ、冷リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)で洗浄し、プロテアーゼ阻害剤のカクテル(Boehringer Mannheim)を含むＰＢＳ中に削り入れ、遠心分離する(２０００rpm、１０分)。次いで、細胞ペレットを８０μlのサンプル緩衝液(３％ＳＤＳ、６２.５μM  ＴＲＩＳ−ＨＣｌ、ｐＨ＝６.８  ５％β−メルカプトエタノール、１０％グリセロール)に可溶化する。１０−２５マイクログラムのタンパク質をＰＣＮＡおよびサイクリンＤについて各々１２％ポリアクリルアミドアミドまたは５−２０％勾配ゲルで電気泳動する。サンプルをポリビニリデンフルオライド膜に電気泳動的に移し、抗サイクリンＤウサギポリクローナル抗体または抗ＰＣＮＡモノクローナル抗体とインキュベートする。抗体を、ペルオキシダーゼコンジュゲートで標識したロバ抗ウサギおよびウサギ抗マウス免疫グロブリンで検出する。ペルオキシダーゼ活性をECL plus(Amersham)で確認する。
【００７０】
サイクリンＤおよびＰＣＮＡ発現の修飾を、ウェスタンブロットの濃度走査により評価し、対照濃度(１０％ＦＣＳ)の平均パーセントとして示す。
【００７１】
ＭＭＰ発現および活性  −  ＭＭＰ発現をヒトＭＭＰに対する特異的抗体を使用して、細胞馴化培地のウェスタンブロット分析により評価する。ＭＭＰ活性をゼラチンゲルザイモグラフィにより測定する。
【００７２】
ゼラチンゲルザイモグラフィ  −  タンパク質分解(proteinolytic)活性を有するタンパク質を、非還元条件下、および沸騰なしで、１０％ＳＤＳおよびゼラチン(１mg／ml)を含む７.５％ポリアクリルアミドゲルで同定する。次いで、それらを一晩、３７℃でＮａＣｌ  １５０mM、ＣａＣｌ２  １０mM、ＺｎＣｌ２  １μMを含むＴＲＩＳ  ５０mMol／ｌ  ｐＨ７.５中で穏やかに振盪しながらインキュベートし、メタロプロテイナーゼ活性を基質を消化するために活性化させる。インキュベーションの最後に、ゲルをクーマシーブルーで染色する。青色背景に対する透明部分は、タンパク質分解活性の存在を示す。
【００７３】
ウェスタンブロット分析  −  馴化培地(４０μl／レーン)の一定量を、ＳＤＳ含有１０％ポリアクリルアミドアミドゲルで、非還元条件下流す(Bellosta et al., 1998)。タンパク質をニトロセルロース膜(Bio-Rad Laboratories, Milan, Italy)にブロットし、マウスモノクローナル抗体抗マウスＭＭＰ−９(R&D)を使用して同定する。
【００７４】
リポタンパク質およびリポタンパク質欠損血清−  リポタンパク質を、臨床的に健康な正常リポタンパクボランティアの血漿から調製した。ＬＤＬ(ｄ  １.０１９−１.０６３ｇ／ml)を連続調製長遠心により単離し、１２５Ｉでヨウ素化する。放射活性ＬＤＬを調製後３日以内に使用し、細胞とのインキュベーションの直前にMilliporeフィルター(０.２２μm孔サイズ)を通すことにより滅菌する。
【００７５】
ＬＤＬ結合取り込み、および分解  −  コンフルエント細胞を、４８時間、３７℃で、１０％ヒトＬＰＤＳ含有培地中で予めインキュベートする。ＬＤＬ受容体活性を上方制御するために２４時間、試験化合物の存在下または非存在下リポタンパク質欠損培地で処理後、各層に１ml新鮮培地を入れる。１２５Ｉ標識ＬＤＬを７,５μg／mlの最終濃度で添加し、細胞を３７℃で４時間、リポタンパク質欠損培地中、または４℃で１０％リポタンパク質−欠損血清含有培地(１０mM  Ｈｅｐｅｓ緩衝液を補った)中のいずれかでインキュベートする。次いで、細胞を氷上に置き、３回氷冷０.２％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝化食塩水、ｐＨ７.４、および３回氷冷リン酸緩衝化食塩水で洗浄する。
【００７６】
４℃での追跡前処置。細胞層を、４℃で３０分、１０％リポタンパク質欠損血清含有培地でインキュベートすることによりさらに洗浄した。ある実験では、受容体結合ＬＤＬを、ナトリウムヘパリン(１０mg／ml  ナトリウムヘパリンを６０分、４℃)に暴露することにより、追跡前に除く。この培地の一定量を、１２５Ｉ(ヘパリン放出可能)のその含量について分析する。全追跡前処置後、細胞をさらに２回リン酸緩衝化食塩水で、４℃で洗浄する。
【００７７】
３７℃での追跡のために、細胞に２mlのリポタンパク質欠損培地を添加する。４℃での追跡のために、細胞を氷冷１０％リポタンパク質欠損血清含有培地に暴露し、氷上に維持する。２時間の追跡時間後、培地を除去し、分析のために保持する分析(下記参照)。細胞層を３回リン酸緩衝化食塩水で洗浄し、細胞を一晩、３７℃で１Ｎ  ＮａＯＨ中でインキュベートすることにより溶解する。可溶化層の一定量を計数して、細胞に結合した１２５Ｉ放射活性を決定し、一定量をLowryの方法に従った細胞タンパク質の概算に使用する。
【００７８】
培地分析  −  ０.３ml  １００％トリクロロ酢酸を２ml培地に添加する。３０分、氷上に静置後、沈殿を１０００×ｇで３０分遠心分離することにより回収し、ペレットを１２５Ｉ標識トリクロロ酢酸沈殿可能物質の含量について計数する。酸上清の１ml量を計数して、総トリクロロ酢酸可溶性放射活性を決定し、次いで、非ヨウ素トリクロロ活性の決定に使用する。
【００７９】
全ステロールの合成  −  コレステロールの合成を、放射活性アセテートの細胞性ステロールへの取り込みの測定により決定する。細胞単層を、[２−１４Ｃ]アセテート(１μCi／ml)と７２時間インキュベート後、ＰＢＳで洗浄し、０.１Ｍ  ＮａＯＨで消化させる。一定量を、内部標準(０.０４μCi／サンプル)として[１,２(ｎ)−３Ｈ]コレステロールを添加後、６０℃で１時間、アルコール性ＮａＯＨで鹸化化する。非鹸化化物質を低沸点石油エーテルで抽出し、放射活性について計測する。標識アセテートの細胞性ステロールへの取り込みの評価のために、石油エーテル(沸点、４０−６０℃)／ジエチルエーテル／酢酸(７０：３０：１)を使用した薄層クロマトグラフィーにより、非鹸化化フラクションから分離させる。放射活性をInsta-Fluorシンチレーションカクテル(Packard, Milan, Italy)で測定する。
【００８０】
脂肪酸合成  −  石油エーテル抽出物からの水性相を一緒に溜め、濃ＨＣｌで酸性化し、３回石油エーテルで抽出する。貯留した有機相を次いで蒸発乾固し、１００μgのリノール酸を担体として含むクロロホルムに差異懸濁させ、ヘプタン／ジエチルエーテル／酢酸蒸気から成る溶媒系を用いるシリカゲルＧ上の薄層クロマトグラフィーに付し、コレステリル１４Ｃ−エステルについて先に記載の通り定量する。データを１４Ｃ−脂肪酸／総細胞タンパク質mgに取りこまれた[１４Ｃ]アセテートのピコモル量として示す。
【００８１】
コレステロールエステル化アッセイ(ＡＣＡＴ活性)：細胞を試験薬およびＡｃＬＤＬ(５０μg／ml)と示す通りインキュベートする。コレステロールエステル化を、インキュベーションの最後の２時間の間にウシ血清アルブミンと複合体化した[１−１４Ｃ]オレイン酸(０.６８μCi／サンプル)を添加後に測定し、その後、細胞性コレステリルエステルと関連する放射活性を決定する。
【００８２】
インキュベーションの最後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、脂質をヘキサン／イソプロパノール(３：２)で抽出する。抽出脂質をＴＬＣ(イソオクタン／ジエチルエーテル／酢酸、７５：２５：２、ｖ／ｖ／ｖ)で分離する。スポット中のコレステロール放射活性を液体シンチレーション計測により決定する。
【００８３】
ステロールおよびコレステロール流出  −  細胞を２４ウェルプレートで８０％コンフルエントまで増殖させる。細胞を３０μg／ml  [３Ｈ]−アセチル化ＬＤＬを２４時間添加することにより、または放射標識細胞性コレステロールのために３μCi／ml  [１,２−３Ｈ]コレステロールと３０μg／ml  アセチル化ＬＤＬを２４時間添加することにより標識する。次いで、細胞を１８時間、ＨＤＬまたはａｐｏＡＩを含むまたは含まない０.２％ＢＳＡ含有培地とインキュベートする。
【００８４】
統計学  −  公平な結果を確認するために、形態学的データを盲検方式で回収する。切片を、全数学的データが得られた後、それぞれの処置群に割り当てるデータを平均±ＳＤとして示す。グループ間の差異を１方向ＡＮＯＶＡ、続く対応のないスチューデントのｔ検定で評価する。統計学的有意を９５％信頼レベル(Ｐ＜０.０５)と指定する。
【００８５】
フルバスタチンまたは薬学的に許容されるその塩、およびエベロリムス(４０−０−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン)の組み合わせ物が、アテローム血栓症の予防または処置においてより大きな治療効果(増強)を達成することが、驚くべきことに判明した。
【００８６】
より一般的に、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤、とりわけフルバスタチンもしくはピタバスタチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩、およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体の組み合わせ物が、アテローム血栓症の予防または処置においてより大きな治療効果(増強)を達成することが、驚くべきことに判明した。
【００８７】
本発明の組み合わせ物はまた驚くことに症状を軽減し、副作用、例えば筋毒性を改善する。
【００８８】
より大きな効果が、作用の持続期間の延長としても立証される。作用の持続期間は、対の投与の前のベースラインに戻るまでの時間として、または曲線下面積(ＡＵＣ)のいずれかとして追跡でき、水銀柱ミリメートルでの血圧の変化(mmHgの変化)と作用期間(分、時間または日)の積として示す。
【００８９】
さらなる利点は、本発明に従い組み合わせるべき個々の薬剤の低用量を、用量を減少させ、例えば、必要な投与量がしばしば少ないだけでなく、少ない頻度で投与できるように使用でき、または、副作用の事象を低下させるために使用できることである。
【００９０】
好ましいのは、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤およびｍＴＯＲ阻害剤の低用量組み合わせ物である。ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤とりわけフルバスタチンまたはピタバスタチン、または薬学的に許容されるそれらの塩とｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシンの組み合わせ投与は、状態の根底の病因に関係なく、処置患者の大きなパーセンデージに顕著な応答をもたらし、すなわち、より大きな応答者率をもたらす。これは処置すべき患者の要望および要求に合う。
【００９１】
フルバスタチンまたはピタバスタチン剤とｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体の組み合わせ治療は、改善された効果ならびに大きな応答者率を介して、より有効なＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤関連状態または疾患、例えば高コレステロール血症関連状態または疾患、混合性異脂肪血症関連状態または疾患、心血管事象の再発予防、アテローム性動脈硬化症関連状態または疾患およびｍＴＯＲ阻害剤関連状態または疾患の治療をもたらす。
【００９２】
フルバスタチンまたはピタバスタチンと、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシン誘導体組み合わせ治療が、ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤処置が原因の副作用の低下、例えば、毒性の低下において有益であることが証明されることを、さらに示すことができる。
【００９３】
故に、本明細書において、用語“処置”または“処置する”は、該疾患を発症する危険のある患者または該疾患を有することが疑われる患者、ならびに病気であるか、または該疾患もしくは医学的状態に罹患していることが診断されている患者の処置を含む、予防的または防止的処置、ならびに治癒的または疾患修飾的処置の両方を意味する。
【００９４】
本発明の薬剤、すなわちＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤またはフィブラート剤は、好ましくは適切な治療的有効量の各活性成分を(別々にまたは組み合わせて)、所望により投与に適当な無機または有機、固体または液体、薬学的に許容される担体と共にまたは混合して含む、医薬製剤の形で使用される。本発明の薬剤は同じ医薬組成物中に存在し得るが、好ましくは別々の医薬組成物に存在する。故に、これらの活性成分は、同時に(例えば一緒に)または異なる時間に(例えば連続的に)、および互いに離れても重複していてもよい異なる時期にわたり投与し得る。単位投与形態はまた固定された組み合わせ物でもよい。
【００９５】
好ましくは、本医薬組成物は経口または経腸(とりわけ経口)投与に適合する。静脈内および経口、とりわけ経口投与が特に重要であると見なされる。
【００９６】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で製造でき、ヒトを含む哺乳動物(温血動物)への例えば経口、直腸、エアロゾル吸入または経鼻投与、および非経腸、例えば静脈内または皮下投与に適する組成物、または経皮投与(例えば受動的またはイオン泳動的(iontophoretic))のための組成物である。このような組成物は、治療的有効量の薬理学的活性化合物を、単独でまたは、とりわけ経腸または非経腸投与に適する１種以上の薬学的に許容される担体と共に含む。典型的な経口製剤は、錠剤、カプセル、シロップ、エリキシルおよび懸濁液を含む。典型的な注射可能製剤は溶液および懸濁液を含む。
錠剤は、当分野で既知の方法に従いフィルムコーティングまたは腸溶性コーティングのいずれかを施されていてよい。
【００９７】
好ましいのは、活性成分を、ａ)希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；ｂ)滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまたｃ)結合剤例えばマグネシウムアルミニウムシリケート、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン；所望によりｄ)崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または起沸性混合物；および／またはｅ)吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤と共に含む、錠剤およびゼラチンカプセルである。注射可能組成物は、好ましくは水性等張溶液または懸濁液であり、坐薬は有利には脂肪エマルジョンまたは懸濁液から製造する。該組成物は滅菌してよく、および／またはアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝液を含んでよい。加えて、それらはまた他の治療的に価値ある物質を含んでよい。該組成物は、通常の混合、造粒またはコーティング法で各々製造でき、約０.１から８５％、好ましくは約１から７０％の活性成分を含む。
【００９８】
上記製剤で使用する薬学的に許容される担体は：一般的に医薬製剤に使用される糖、例えばラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトール；デンプン、例えばコーンデンプン、タピオカデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよび誘導体、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよびメチルセルロース；リン酸カルシウム、例えばリン酸二カルシウムおよびリン酸三カルシウム；硫酸ナトリウム；硫酸カルシウム；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルコール；ステアリン酸；アルカリ土類金属ステアリン酸塩、例えばステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸カルシウム；ステアリン酸；植物油、例えばピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油およびコーン油；非イオン性、カチオン性およびアニオン性界面活性剤；エチレングリコールポリマー；ベータ・シクロデキストリン；脂肪アルコール；および加水分解された固体穀類、ならびに他の非毒性、適合性増量剤、結合剤、崩壊剤、緩衝液、防腐剤、抗酸化剤、滑剤、香味剤などが例である。
【００９９】
経腸および非経腸投与用医薬製剤は、例えば、投与単位形のもの、例えば糖衣錠、錠剤またはカプセルおよびまたアンプルである。それらは、それ自体既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、糖衣付加、溶解または凍結乾燥工程により製造できる。例えば、経口投与用医薬製剤は、活性成分と固体担体を組み合わせ、適当であれば得られる混合物を造粒し、そして該混合物または顆粒を、所望によりまたは必要であれば適当な補助剤の添加後、錠剤または糖衣錠コアに加工することにより得ることができる。
【０１００】
他の経口投与可能医薬製剤は、ゼラチン製の乾燥充填カプセル、およびまたゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールから成る、軟、密封カプセルである。乾燥充填カプセルは、例えば増量剤、例えばラクトース、結合剤、例えばデンプン、および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および、適当であれば、安定化剤と混合された、顆粒の形の活性成分を含み得る。軟カプセルにおいて、活性成分は、好ましくは適当な液体、例えば脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁しており、安定化剤を添加することもまた可能である。
【０１０１】
非経腸製剤は、とりわけ、種々の方法に、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、皮内または皮下に有効な注射可能液体である。このような液体は、好ましくは等張水性溶液または懸濁液であり、これは、使用前に、例えば活性成分を単独でまたは薬学的に許容される担体と共に含む凍結乾燥製剤から製造することができる。医薬製剤は滅菌してよくおよび／または補助剤、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝液を含んでよい。
【０１０２】
経皮適用のための適当な製剤は、有効量の本発明の化合物と担体を含む。有利な担体は、宿主の皮膚を介した通過を助けるための、吸収可能な薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、裏打ち部材、本化合物を所望により担体と共に含む貯蔵部、所望により化合物を宿主の皮膚に制御され、そして予定された速度で長時間にわたり送達させるための速度制御バリア、および皮膚に該デバイスを固定するための手段を含む、バンデージの形である。
【０１０３】
例えば皮膚および眼への局所適用に適当な製剤は、水性溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲルまたは、例えば、エアロゾルによる送達のための噴霧可能製剤などを含む。
【０１０４】
例えば、本医薬製剤は、約０.１−９０％、好ましくは約１％から約８０％の本活性化合物を含む。経腸または非経腸投与用医薬製剤は、例えば、単位投与形態、例えばコーティング錠、錠剤、カプセルまたは坐薬およびまたアンプルの形である。これらは、それ自体既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、コーティング、可溶化または凍結乾燥を使用して製造できる。故に、経口使用のための医薬製剤は、活性化合物と固体賦形剤を組み合わせ、適当であれば得られた混合物を造粒し、そして該混合物または顆粒を、所望によりまたは必要であれば適当な補助剤の添加後、錠剤または糖衣錠コアに加工することにより得ることができる。
【０１０５】
活性化合物の投与量は、種々の因子、例えば投与形態、恒温動物種、年齢および／または個々の状態に依存し得る。
本発明の医薬組み合わせ物の活性成分の好ましい投与量は、治療的有効量、とりわけ市販で入手可能な量である。
【０１０６】
フルバスタチンは、適当な投与単位形、例えば、カプセルまたは錠剤の形で供給され、そして治療的有効量、例えば約２０mgから約８０mgを含み、それは患者に適用し得る。本活性成分の適用は１日３回まで行ってよく、例えば、２０mgまたは４０mg／日の一日量で開始し、１日４０mgを介して、そしてさらに１日８０mgまで増加する。好ましくは、フルバスタチンは患者に１日１回または２回、各々８０mgを１回または４０mgを２回摂取で適用する。対応する用量を、例えば、朝に、昼にまたは晩に摂取し得る。
【０１０７】
フルバスタチンの１日量は、もちろん、種々の因子、例えば選択化合物、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化する。一般に、しかしながら、満足行く結果が、２０から８０mg／kg／日の程度の１日量でのフルバスタチンの投与により達成される。好ましい１日投与量範囲は、１回量または分割量として、約２０から４０mg／日である。フルバスタチンは、任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば錠剤、カプセル、飲溶液の形で、または非経腸的に、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で投与できる。経口投与のための適当な単位投与形態は、約２０mgからの活性成分、通常４０mgの、例えばフルバスタチンを、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む。
【０１０８】
ｍＴＯＲ阻害剤の１日量は、もちろん、種々の因子、例えば選択化合物、処置すべき特定の状態および所望の効果におよび所望の効果に依存して変化する。一般に、しかしながら、満足行く結果が、１改良または分割量として、約０.０１から５mg／kg／日、特に０.５から５mg／kg／日の範囲の１日投与量でのｍＴＯＲ阻害剤の投与により達成される。好ましい１日投与量範囲は、１回量または分割量として、約０.１から３０mgである。ｍＴＯＲ阻害剤、例えば化合物Ａは、任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば錠剤、カプセル、飲溶液の形で、または非経腸的に、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で投与できる。経口投与のための適当な単位投与形態は、約０.０５から１５mg  活性成分、通常０.２５から１０mgの、例えば化合物Ａを、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む。
【０１０９】
ラパマイシンまたはその誘導体は、本発明に従った使用のために必要な投与量で十分耐容性である。例えば、４週間毒性試験における化合物ＡのＮＴＥＬは、ラットで０.５mg／kg／日およびサルで１.５mg／kg／日である。
【０１１０】
当業者は、前記および後記の治療適応における本発明の組み合わせ物の効果を確認するための適切な試験モデルを選択することが十分に可能である。
【０１１１】
以下の実施例は上記発明を説明する；しかしながら、本発明の範囲をいかなる方法でも限定することを意図しない。
【実施例】
【０１１２】
Ａ)フルバスタチン製剤例
【表１】
2008542317.tif 000003
【０１１３】
【表２】
2008542317.tif 000004
【０１１４】
【表３】
2008542317.tif 000005
【０１１５】
ピタバスタチン製剤例(実施例１から７)
【０１１６】
実施例１
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：４.１８mg(５.２２５％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ−塩、４２.８２mg(５３.５２５％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、２５mg(３１.２５％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【０１１７】
実施例２
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：８.３６mg(１０.４５％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ塩、３８.６４mg(４８.３％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、２５mg(３１.２５％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【０１１８】
実施例３
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：１６.７２mg(２０.９％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ−塩、３０.２８mg(３７.８５％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、２５mg(３１.２５％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【０１１９】
実施例４
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：３.１３５mg(３.９２％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ−塩、４３.８６５mg(５４.８３％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、１２.５０mg(１５.６２５％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、１２.５０mg(１５.６２５％)のＨＰＭＣ(１０００００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【０１２０】
実施例５
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：６.２７mg(７.８４％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ−塩、４０.７３mg(５０.９１％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、１６.６４mg(２０.８％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、８.３６mg(１０.４５％)のＨＰＭＣ(１０００００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【０１２１】
実施例６
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：１２.５４mg(１５.６７５％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ−塩、３４.４６mg(４３.０７５％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、１８.７５mg(２３.４３７５％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、６.２５mg(７.８１２５％wt)のＨＰＭＣ(１０００００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【０１２２】
実施例７
コア(パーセンテージはコア重量に対する)：１６.７２mg(２０.９％wt)の薬剤物質、例えばピタバスタチンＣａ−塩、３０.２８mg(３７.８５％wt)の微結晶セルロース、４mg(５％wt)のＨＰＭＣ(３cps)、２０mg(２５％wt)のＨＰＭＣ(１００cps)、５mg(６.２５％wt)のＨＰＭＣ(１００  ０００cps)、３.２mg(４％wt)のノイシリン、外相は０.４mg(０.５％wt)のコロイド状二酸化ケイ素および０.４mg(０.５％wt)のステアリン酸マグネシウムを含む。
ＨＰＭＣサブコート(非機能性コート)(パーセンテージはサブコート重量に対する)：２.８５６mg(７１.４％wt)のヒドロキシプロピルメチルセルロース３cps、０.２８６mg(７.１５％wt)のポリエチレングリコール、０.２８６mg(７.１５％wt)のタルクおよび０.５７２mg(１４.３％wt)の二酸化チタン。
腸溶性コート(パーセンテージは腸溶性コート重量に対する)：５mg(８３.３４％wt)のEudragit L30D、０.５mg(８.３３％wt)のタルクおよび０.５mg(８.３３％wt)のポリエチレングリコール。
【国際調査報告】
2008542317.tif 000006
2008542317.tif 000007
2008542317.tif 000008
2008542317.tif 000009
2008542317.tif 000010