(57)【要約】  アジュバント凝固、及び付随するワクチン有効性増大の消失を緩和又は回避する、アジュバント免疫活性剤、特にワクチンを配合し、送達するための組成物及び方法。アジュバント免疫活性剤は氷結、乾燥、凍結乾燥、又は凍結乾燥に処することができ、還元したとき高レベルの有効性を保持している。本発明はさらに、経皮送達器具又は微小突起又はこれらのアレイ上に析出させることができる、安定なアジュバント免疫活性剤を配合し、送達するための組成物及び方法を提供する。
2008514644.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的に有効な量の免疫活性剤、
安定化量の炭水化物糖、及び
乾燥したときに免疫活性剤の免疫原性の消失を最小限にする量のアルミニウム塩
を含む免疫活性剤含有配合物。
【請求項２】
アルミニウム塩の凝固を最小限にして配合物の有効性及び免疫原性を保つ、請求項１に記載の配合物。
【請求項３】
アルミニウム塩が水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、又はこれらの混合物である、請求項１に記載の配合物。
【請求項４】
配合物の全重量に対して約０．０００１重量％〜３重量％のアルミニウム塩を含む、請求項１に記載の配合物。
【請求項５】
前記糖がスクロース、メテジトース、ラフィノース、トレハロース、スタキオース、ラクトース、マルトース及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の配合物。
【請求項６】
配合物の全重量に対して約２重量％〜４０重量％の範囲の前記糖を含む、請求項１に記載の配合物。
【請求項７】
増粘剤をさらに含む、請求項１に記載の配合物。
【請求項８】
配合物が約１〜５０センチポイズの範囲の粘度を有するように増粘剤が存在する、請求項７に記載の配合物。
【請求項９】
膜形成剤をさらに含む、請求項１に記載の配合物。
【請求項１０】
配合物の全重量に対して約０．００１重量％〜１０重量％の範囲で配合物中に膜形成剤が存在する、請求項９に記載の配合物。
【請求項１１】
配合物が少なくとも１種の他のアジュバントをさらに含む、請求項１に記載の配合物。
【請求項１２】
免疫活性剤がウイルス、細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、核酸系ワクチン及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の配合物。
【請求項１３】
免疫活性剤の経皮送達に適合した複数の角質層貫通性微小突起を有する部材、及び
少なくとも１個の前記微小突起上にコーティングした請求項１に記載の配合物を含む、免疫活性剤を経皮送達するための器具。
【請求項１４】
前記部材が複数の角質層貫通性微小突起を有する、請求項１３に記載の器具。
【請求項１５】
前記部材がステンレス鋼、チタン、ニッケルチタン合金の群からなる金属、又は類似の生体適合性材料から製造される、請求項１３に記載の器具。
【請求項１６】
ミョウバンアジュバント免疫活性剤塗膜を調製する方法であって、
適切な溶媒中の１種又は複数のアルミニウム塩、少なくとも１種の炭水化物糖、任意選択の増粘剤、及び免疫活性剤を含むコーティング組成物を調製するステップであって、全アルミニウム塩濃度がコーティング組成物の全重量に対して約３重量％未満であるステップ、
前記コーティング組成物を支持体に塗布するステップ、及び
前記塗布済みコーティング組成物を乾燥、又は放置乾燥させて、前記乾燥塗膜を調製するステップを含む上記方法。
【請求項１７】
コーティング組成物に膜形成剤を加えるステップをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
噴霧乾燥、空気乾燥、噴霧凍結乾燥、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｌｉｚａｔｉｏｎ）又はこれらの組合せからなる群から選択される乾燥プロセスにコーティング組成物を施すステップをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
溶媒でコーティング組成物を復元するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
復元コーティング組成物を少なくとも１個の角質層貫通性微小突起に施して、生体適合性塗膜を形成するステップをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ディップコーティング、マイクロ流体噴霧、印刷及び噴霧からなる群から選択される方法により、生体適合性塗膜を少なくとも１個の角質層貫通性微小突起に施す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
生体適合性塗膜を乾燥又は放置乾燥させる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
一連の塗布中にコーティング組成物を少なくとも１個の角質層貫通性微小突起に施す、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
実質的に全ての前記塗布の間に乾燥ステップを実施する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
常温で乾燥ステップを実施する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
乾燥時間が約０．５〜３６０分の範囲である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
約０〜３０％の相対湿度及び常圧未満の条件下で乾燥ステップを実施する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
生体適合性塗膜が約０．５〜５ミクロンの範囲の厚さを有する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
凝集塗膜厚が約０．５〜５ミクロンの範囲である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
請求項２０に記載のミョウバンアジュバント免疫活性剤塗膜を調製すること、及び
免疫活性剤が被験体の皮膚を介して送達されるように部材を塗布すること
を含む、免疫活性剤を経皮送達する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、免疫活性剤組成物、並びにこのような組成物を配合及び送達する方法に関する。より詳細には本発明は、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
当技術分野でよく知られているように、免疫活性剤、特に抗原物質又はワクチンは全ウイルス（生、弱毒化ウイルス）及び細菌、多糖複合体、タンパク質又は核酸を含み得る。他の抗原物質は合成、組換え、又は精製サブユニット抗原から構成される。
【０００３】
サブユニット（又はサブビリオン）ワクチンは防御免疫に必要とされる抗原のみを含むように設計されており、完全不活化又は弱毒化生ワクチンより安全であると考えられている。しかしながら、サブユニットワクチン単独では弱い免疫原性を示す可能性がある。このようなワクチンの考えられる弱い免疫原性に対する１つの解決策は、特異的免疫応答を増大させる、アジュバントを含むサブユニットワクチンを配合することである。
【０００４】
免疫活性剤は通常は経口的或いは注射によって投与され、さらに近年は経皮送達によって投与されている。本明細書で使用する用語「経皮」は、外科手術用ナイフによる切断又は皮下注射針による皮膚の貫通などの皮膚の実質的な切断又は浸透を伴わない、皮膚から局所組織又は全身循環系への活性剤（例えば薬剤のような治療剤、又はワクチンなどの免疫活性剤）の送達を指す一般用語である。経皮剤送達には、受動拡散による送達、並びに電気（例えばイオン導入法）及び超音波（例えば音波泳動法）などの外部エネルギー源に基づく送達がある。
【０００５】
小さな皮膚貫通要素を利用して経皮剤送達を向上させる、多数の経皮剤送達系及び装置が開発されてきている。このような系及び装置の例は、いずれもその全容が参照として本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８７９，３２６号、第３，８１４，０９７号、第５，２５０，０２３号、第３，９６４，４８２号、再発行第２５，６３７号及びＰＣＴ公報ＷＯ９６／３７１５５、ＷＯ９６／３７２５６、ＷＯ９６／１７６４８、ＷＯ９７／０３７１８、ＷＯ９８／１１９３７、ＷＯ９８／００１９３、ＷＯ９７／４８４４０、ＷＯ９７／４８４４１、ＷＯ９７／４８４４２、ＷＯ９８／００１９３、ＷＯ９９／６４５８０、ＷＯ９８／２８０３７、ＷＯ９８／２９２９８、及びＷＯ９８／２９３６５中に開示されている。
【０００６】
開示された系及び装置は、様々な形状及び大きさの貫通要素を利用して皮膚の最外殻層（即ち角質層）を貫通し、これによって経皮剤の流速を向上させる。貫通要素は一般に、パッド又はシートなどの薄い平面状の部材から垂直に伸びている。貫通要素は通常は非常に小さく、幾つかの貫通要素はわずか約２５〜４００ミクロンの微小突起長さ、及びわずか約５〜５０ミクロンの微小突起厚さを有する。
【０００７】
幾つかの経皮剤送達系は、高濃度の活性剤を含む薬剤貯蔵部を含むことができる。貯蔵部は皮膚との接触に適合しており、これによって活性剤を患者の皮膚を介して身体組織内又は血流内に拡散させることができる。
【０００８】
経皮剤送達系の近年の改良は、送達すべき活性剤が物理的貯蔵部に含まれる代わりに微小突起にコーティングされる系、方法及び配合物を含む。これによって別の物理的貯蔵部の必要性、及び貯蔵部に特別に合わせた活性剤の配合物又は組成物を開発する必要性が排除される。その開示が参照として本明細書に完全に組み込まれる、米国特許出願公開第２００４／００６２８１３号（Ｃｏｒｍｉｅｒ他）、及び第２００４／００９６４５５号（Ｍａｃｙ他）は、微小突起上に配置される塗膜に１種又は複数の活性剤を含めることによって、活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を開示している。
【０００９】
前述の出願中に示されたように、活性剤配合物及び微小突起上に配合物をコーティングする方法は、塗膜付き微小突起を介した経皮送達における重要因子である。実際、不安定であるか或いは充分な貯蔵寿命を有していない活性剤配合物中のワクチンを利用する場合、そのワクチンは多くの場合、所望の（或いは必要とされる）有効性を有していない可能性がある。
【００１０】
したがって、免疫活性剤、例えばワクチンの安定化は、特に活性剤の送達形式が複数の塗膜付き微小突起を有する経皮送達器具を介するときは、活性剤の有効性を確実にする際の重要なステップである。
【００１１】
当技術分野で知られているように、ポリペプチド系ワクチン、サブユニットワクチン、並びに不活化ウイルス及び細菌ワクチンは、一般に主に体液性応答を誘発する。ワクチン（例えば生ウイルス、ポリオ及び天然痘などの弱毒化ウイルスのワクチン）の複製は、最も有効な体液性及び細胞性免疫応答をもたらす。同様の広い免疫応答範囲をＤＮＡワクチンによって得ることができる。
【００１２】
免疫活性剤に対する特異的な免疫応答を増大させるために、アルミニウム塩などのアジュバントを通常は加える。アジュバントは多様な作用機構を有し、通常は投与の経路、及び特定の免疫活性剤に望ましい免疫応答の型（例えば抗体、細胞仲介、粘膜型など）に基づいて選択される。
【００１３】
ミョウバンアジュバント免疫活性剤、特にワクチンの安定性は、しかしながら問題のあるものとなっている。ミョウバンアジュバント免疫活性剤、特にワクチンは、凍結及び乾燥によって有効性を失う傾向がある。氷結−解凍によるアルミニウム塩ゲルの安定性の問題は、（凍結によって形成される）氷結晶はミョウバン粒子に分子間斥力を打ち消させ、それによって強い粒子間引力を生み出すという事実によるものであると考えられる。これは一般に、ミョウバンが濃縮される任意の機構又は系に当てはまると考えられる。したがって、分子間斥力が打ち消されるようにミョウバン粒子が非常に隣接して１つになるミョウバンの懸濁液中では、ミョウバン粒子は凝固又は凝集する傾向がある。
【００１４】
ミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物、特にワクチンの氷結又は乾燥、特に凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）又は凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｌｉｚａｔｉｏｎ）の結果、免疫原性の消失をもたらすことが多い、何故ならミョウバン粒子の表面上に吸着した抗原分子は、凝固した配合物基質内から放出させることができないからである。
【００１５】
したがって、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤、特にワクチンの組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法であって、大規模なミョウバンの凝固を防止し、乾燥時にミョウバンアジュバント活性剤配合物の有効性及び免疫原性を保つ、該組成物及び該方法を提供することが望ましいと思われる。
【００１６】
ミョウバンアジュバント免疫活性剤の送達器具と、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤を含む配合物が、被験体の皮膚を介した該活性剤の送達に適合した複数の皮膚貫通性微小突起を有する経皮送達器具にコーティングされ、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の組成物及びそれを配合する方法が、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の効力及び免疫原性を保つ方法とを提供することは、さらに望ましいと思われる。
【００１７】
ミョウバン粒子の凝固を減らすための「体積最小化」理論がＭａａ他、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、９２：３１９〜３３２（２００３）中で提案されている。この参照文献は、氷結及び乾燥によるミョウバン凝固の機構、及びそのワクチン有効性の消失との関係を記載している。この参照文献は様々なワクチンの脱水プロセス、及び還元時のワクチン有効性に対するそれらの影響を比較している。しかしながら、この参照文献は、このような氷結及び乾燥によるミョウバンアジュバントワクチンの有効性の消失を最少化又は緩和することを対象としたアジュバント配合物、又はそのための方法は教示、示唆又は開示していない。
【００１８】
他の参照文献は、アジュバントワクチンを安定化させるための試みにおいて、氷結−乾燥プロセス自体を対象とした方法を開示している。例えば、米国特許出願公開Ｎｏ．２００３／０２０２９７８は、粉末状の医薬配合物の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を開示している。しかしながら示された出願公開も、如何なる他の知られている参照文献も、常温での薄膜塗膜及び乾燥による、ミョウバンアジュバントワクチンの配合物、又はそれを安定化させるための技法は開示していない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
したがって本発明の目的は、乾燥させ容易に還元し免疫学的に（或いは生物学的に）有効な量投与することができる安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供することである。
【００２０】
本発明の他の目的は、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物に特異的な物理特性を与えることである。
【００２１】
本発明の他の目的は、安定な乾燥状態のミョウバンアジュバントワクチン配合物であって、配合物基質のミョウバン介在型凝固によって引き起こされる大幅な免疫原性の消失、及びその結果生じる利用可能な抗原分子の減少を示さない配合物の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供することである。
【００２２】
本発明のさらに他の目的は、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法であって、免疫活性剤の有効性を最大化又は最適化する該組成物、及びそのような組成物を配合する該方法を提供することである。
【００２３】
本発明のさらに他の目的は、薄膜として表面（又は送達器具）上に析出するのに適した安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法であって、免疫活性剤の有効性を最大化又は最適化する組成物、並びにそのような組成物を配合し、送達する方法を提供することである。
【００２４】
本発明の他の目的は、送達器具上の薄膜塗膜として、或いは薄膜多層塗膜系として容易に利用することができ、薄膜塗膜又は塗膜系が免疫活性剤の有効性を最大又は最適化する、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供することである。
【００２５】
本発明のさらに他の目的は、免疫活性剤を経皮送達器具の複数の微小突起に析出される薄膜塗膜として、或いは薄膜多層塗膜系として容易に利用することができ、薄膜塗膜又は塗膜系が免疫活性剤の有効性を最大又は最適化する、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び経皮送達する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
前述の目的及び以下で参照し明らかとなる目的に従い、本発明の一実施形態では、ミョウバン介在型凝固、及び付随するワクチン有効性増大の消失を緩和又は回避する、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤、特にワクチンの組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供する。本発明は、氷結、乾燥、凍結乾燥、又は凍結乾燥に処すことができ、還元したとき高レベルの有効性を保持している、安定なアジュバント免疫活性剤、特にワクチンの組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法も提供する。
【００２７】
本発明はさらに、（送達器具を含めた）表面に容易に析出させその上において常温で乾燥させることができる、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供する。本発明はさらに、薄膜単層コーティングとして、或いは薄膜多層塗膜として表面上に析出させることができる、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供する。このようなコーティングは微小突起送達器具を使用する経皮送達に特に適しており、免疫活性剤は生体適合性塗膜中に含まれ、それは少なくとも１個の角質層貫通性微小突起、より好ましくは複数の角質層貫通性微小突起にコーティングされる。
【００２８】
本発明の安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法は、５〜１００ミクロンの範囲、より好ましくは１０〜５０ミクロンの範囲の全厚を有する薄膜多層塗膜の生成を可能にする。本発明によれば、ミョウバン含有薄膜層は、ミョウバン粒子が大規模な配合物基質中に凝固するのを妨げる。
【００２９】
一実施形態では、送達表面に配置することができる、且つ／或いは有効性の大幅な消失無しで乾燥及び復元することができる、ミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物を形成する方法は、以下のステップ：（ｉ）ミョウバン濃度が３％未満である、適切な溶媒に懸濁させたミョウバンの懸濁液を調製するステップ；（ｉｉ）無定形の炭水化物糖をミョウバン懸濁液に加えるステップ；（ｉｉｉ）場合によっては、セルロース又はデンプンなどの増粘剤を加えて、好ましくは３０センチポイズ（ｃＰ）未満の溶液粘度を得るステップ；（ｉｖ）膜形成剤、例えばポリアカルボン酸を加える他のステップ；及び（ｖ）免疫活性剤をミョウバン懸濁液に加えて、ミョウバンアジュバント免疫活性剤溶液を形成するステップを含む。免疫活性剤は従来の濃縮及び緩衝処理によって調製することが好ましい。
【００３０】
一実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の生成溶液を噴霧乾燥、空気乾燥、噴霧凍結乾燥、凍結乾燥又は凍結乾燥させて、保存又は分配用に溶液を安定化させる。復元すると、免疫活性剤の有効性及び免疫応答は最大になる。
【００３１】
他の実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の生成溶液が、微小突起送達器具又は少なくとも１個の角質層貫通性微小突起、より好ましくは複数の角質層貫通性微小突起、又はこれらのアレイのコーティングに適合した活性剤配合物中に含まれる。各コーティングステップ間に乾燥ステップを伴う一連のコーティングステップでコーティング法を実施することが好ましい。本発明の所望の薄膜の形成を最適化するために、それぞれの乾燥サイクル間の乾燥時間は、それぞれの層の乾燥を確実にするほど充分長いことが好ましい。
【００３２】
一実施形態では、常温、好ましくは約１５〜５０℃の範囲、より好ましくは約２０〜３０℃の範囲で乾燥させることによって、送達器具又は微小突起で活性剤配合物を安定化させる。しかしながら、様々な温度及び湿度レベルを利用して、コーティング溶液を乾燥させることができる。
【００３３】
各コーティングステップは、約０．５〜５ミクロンの範囲、より好ましくは約１〜３ミクロンの範囲の層又は塗膜厚をもたらすことが好ましい。凝集塗膜厚は約３ミクロンを超えないことが好ましく、より好ましくは約０．５〜５ミクロンの範囲、さらにより好ましくは約１〜３ミクロンの範囲である。
【００３４】
真空チャンバー型乾燥装置を利用する幾つかの実施形態では、乾燥時間は０〜３０％の相対湿度及び常圧未満の条件下において、好ましくは約０．５〜３６０分の範囲、より好ましくは１〜１００分の範囲である。
【００３５】
本発明の幾つかの実施形態では、免疫活性剤は、ウイルス及び細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、及び核酸系ワクチンからなる群から選択される抗原物質又はワクチンを含む。
【００３６】
適切な免疫活性剤には、したがって非制限的に、タンパク質、多糖複合体、オリゴ糖、及びリポタンパク質の形の抗原がある。これらのサブユニットワクチンには、百日咳菌（組換え体ＰＴワクチン−無細胞性）、破傷風菌（精製、組換え体）、コリネバクテリウム属ジフテリア菌（精製、組換え体）、サイトメガロウイルス（糖タンパク質サブユニット）、Ａ群連鎖球菌（糖タンパク質サブユニット、破傷風トキソイドとの糖複合体Ａ群多糖、毒性サブユニット担体と連結したＭタンパク質／ペプチド、Ｍタンパク質、多価型−特異的エピトープ、システインプロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組換え体Ｐｒｅ−ｂＳ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組換え体コアタンパク質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組換え体−発現された表面タンパク質及びエピトープ）、ヒトパピローマウイルス（キャプシドタンパク質、ＴＡ−ＧＮ組換えタンパク質Ｌ２及びＥ７［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１由来のＭＥＤＩ−５０１組換えＶＬＰＬ１、４価組換えＢＬＰＬ１［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、及びＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６由来］）、レジオネラニューモフィラ（精製細菌表面タンパク質）、髄膜炎菌（破傷風トキソイドとの糖複合体）、緑膿菌（合成ペプチド）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、肺炎球菌（髄膜炎菌ＢＯＭＰと結合した糖複合体［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７と結合した糖複合体［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０と結合した糖複合体［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（表面リポタンパク質）、水痘帯状疱疹ウイルス（サブユニット、糖タンパク質）、及びビブリオコレラ（複合体リポ多糖）ワクチンがある。
【００３７】
全ウイルス又は細菌には非制限的に、弱化又は不活化ウイルス、例えばサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、風疹ウイルス、及び水痘帯状疱疹など、弱化又は不活化細菌、例えば百日咳菌、破傷風菌、コリネバクテリウム属ジフテリア菌、Ａ群連鎖球菌、レジオネラニューモフィラ、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎球菌、梅毒トレポネーマ、及びビブリオコレラ、並びにこれらの混合物などがある。
【００３８】
抗原物質を含む幾つかの市販のワクチンは、本発明に関しても有用性がある。示すワクチンには非制限的に、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、はしかワクチン、おたふくかぜワクチン、水疱瘡ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、及びジフテリアワクチンがある。
【００３９】
本発明の方法に従い送達することも可能である核酸を含むワクチンには、非制限的に、一本鎖及び二本鎖核酸、例えばスーパーコイルプラスミドＤＮＡ、線状プラスミドＤＮＡなど、コスミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母菌人工染色体（ＹＡＣ）、哺乳動物人工染色体、及びＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡなどのワクチンがある。
【００４０】
本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチンを含む。このような実施形態では、免疫活性剤はサブビリオンインフルエンザワクチンを含むことがより好ましい。
【００４１】
本発明の他の実施形態によれば、免疫活性剤を経皮送達するための装置は、角質層を介した根底の表皮層、又は表皮及び真皮層中への貫通に適合した複数の微小突起を含む微小突起部材を含み、この微小突起部材は、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤を含むその上に配置された生体適合性塗膜を有する。
【００４２】
本発明の一実施形態によれば、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤を送達する方法は、以下のステップ：（ｉ）複数の微小突起を有する微小突起部材を提供するステップ、（ｉｉ）多量の免疫活性剤を提供するステップ、（ｉｉｉ）約３％未満のミョウバンを溶媒に懸濁させた懸濁液を調製するステップ、（ｉｖ）少なくとも１つの無定形の炭水化物糖をミョウバン懸濁液に加えるステップ、（ｖ）場合によっては、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、又はヒドロキシメチルスターチなどの増粘剤を加えるステップ、（ｖｉ）膜形成剤を加えるステップ、（ｖｉｉ）ミョウバン懸濁液及び免疫活性剤を含む生体適合性コーティング配合物を形成するステップ、（ｖｉｉｉ）生体適合性コーティング配合物で微小突起部材をコーティングして、生体適合性塗膜を形成するステップ、（ｉｘ）乾燥させ、薄膜塗膜を確立することによって生体適合性塗膜を安定化させるステップ、及び（ｘ）塗膜付き微小突起部材を被験体の皮膚に施すステップを含む。
【００４３】
本発明の幾つかの実施形態によれば、ステップ（ｉ）〜（ｖｉｉ）に次いで（ａ）乾燥、凍結乾燥又は凍結乾燥によって生成した生体適合性塗膜配合物を安定化させて、安定状態の生体適合性塗膜配合物を形成するステップ、（ｂ）溶媒（例えば水）で生体適合性塗膜配合物を還元して、（免疫活性剤を含む）生体適合性塗膜配合物を形成するステップ、（ｃ）還元状態の生体適合性塗膜配合物で微小突起部材をコーティングして、生体適合性塗膜を形成するステップ、（ｄ）乾燥させ、薄膜塗膜を確立することによって生体適合性塗膜を安定化させるステップ、及び最後に（ｅ）塗膜付き微小突起部材を被験体の皮膚に施すステップが続く。塗膜は薄膜として施して、それぞれ免疫活性剤及びミョウバンの免疫原性及びアジュバント性を保つことが好ましい。
【００４４】
他の特徴及び利点は、添付の図面中に示すように、図中の同じ部分又は要素を一般的に参照する参照した特徴と同様に、本発明の好ましい実施形態の以下の記載及びさらに特定の記載から明らかになると思われる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４５】
本発明を詳細に記載する前に、本発明は特に例示した物質、配合物、方法又は構造などに限られず、当然ながら変わる可能性があることを理解されたい。したがって、本明細書に記載したものと類似又は均等である幾つかの物質及び方法は、本発明を実施する際に使用することができ、好ましい物質及び方法を本明細書に記載する。
【００４６】
本明細書で使用する用語は単に本発明の特定の実施形態を記載することを目的とするものであり、制限することは意図しないことも理解されたい。
【００４７】
他に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。
【００４８】
さらに、本明細書に引用した全ての刊行物、特許及び特許出願は、前のものであれ後のものであれ、その全容は参照として本明細書に組み込まれる。
【００４９】
最後に、本明細書及び添付の特許請求の範囲中で使用するように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、内容が別途明示しない限り複数形を含む。したがって、例えば「１種の免疫活性剤」という参照は２種以上のこのような物質を含み；「１種の微小突起」という参照は２個以上のこのような微小突起などを含む。
【００５０】
定義
本明細書で使用する用語「経皮」は、局所又は全身療法のための、皮膚中への物質の送達及び／又は皮膚を介した物質の送達を意味する。
【００５１】
本明細書で使用する用語「経皮流動」は、経皮送達の割合を意味する。
【００５２】
配合物、又はコーティングを参照するために本明細書で使用する用語「安定状態」は、配合物が過度の化学的又は物理的分解、破壊、又は不活性化を受けていないことを意味する。コーティングを参照するために本明細書で使用する用語「安定状態」は、機械的に安定状態であること、即ちコーティングが析出されている表面からの過度の排除、又は損失を受けていないことも意味する。
【００５３】
本明細書で使用する用語「同時送達」は、物質を送達する前、物質の経皮流動の前及び最中、物質の経皮流動の最中、物質の経皮流動の最中及び後、及び／又は物質の経皮流動の後に、少なくとも１つの補助物質を経皮投与することを意味する。さらに、２種以上の免疫活性剤を本発明の生体適合性塗膜中に配合して、異なる免疫活性剤の同時送達をもたらすことができる。
【００５４】
本明細書で使用する用語「免疫活性剤」は、免疫学的に有効な量投与すると有益な免疫応答を誘発することができる、抗原物質を含む物体又は混合物の組成物、及び／又は任意及び全ての供給源由来の「ワクチン」を指す。免疫活性剤の具体例はインフルエンザワクチンである。
【００５５】
免疫活性剤の他の例には、非制限的に、ウイルス及び細菌、タンパク質系ワクチン、多糖系ワクチン、及び核酸系ワクチンがある。
【００５６】
本明細書で使用する用語「生物学的に有効な量」又は「生物学的に有効な割合」は、有益な結果をもたらすことが多い、望ましい免疫を刺激又は開始するのに必要とされる免疫活性剤の量又は割合を指す。本発明のコーティングに利用する免疫活性剤の量は、望ましい免疫結果を得るのに必要な量の免疫活性剤を送達するのに必要な量であると思われる。実際これは、送達する個々の免疫活性剤、送達部位、並びに皮膚組織中への免疫活性剤の送達に関する分解及び放出動態に応じて広く変わると思われる。
【００５７】
本明細書で使用する用語「コーティング配合物」は、液体又は固体状の自由に流動する組成物又は混合物を意味しかつこれを含むことを意味し、これを利用して複数の微小突起及び／又はそれらのアレイを含めた送達表面をコーティングする。
【００５８】
本明細書で使用する用語「生体適合性塗膜」は、充分な接着性を有し免疫活性剤との有害な相互作用が無いか或いは最小限である「コーティング配合物」を意味しこれを含む。
【００５９】
本明細書で使用する用語「微小突起」は、生きている動物、特に哺乳動物、及びより詳細にはヒトの皮膚の角質層を介した根底の表皮層、又は表皮及び真皮層中の貫通又は切断に適合した貫通要素を指す。
【００６０】
本明細書で使用する用語「微小突起部材」は、角質層に貫通させるためのアレイ中に配置された複数の微小突起を含む微小突起アレイを一般的に意味する。薄いシートから複数の微小突起をエッチング又は打ち抜くことによって、及びシートの平面から微小突起を折る又は曲げて輪郭を形成することによって、微小突起部材を形成することができる。その全容が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第６，０５０，９８８号中に開示されているように、それぞれのストリップ片の端に沿って微小突起を有する１つ又は複数のストリップ片の形成などの、他の知られている方法で微小突起部材を形成することもできる。
【００６１】
本発明と共に利用することができる微小突起部材には、その全容が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第６，０８３，１９６号、第６，０５０，９８８号及び第６，０９１，９７５号、及び米国特許公開第２００２／００１６５６２号中に開示された部材があるが、これらだけには限られない。当業者によって理解されるように、微小突起アレイを利用する場合、送達する免疫活性剤の用量は、微小突起アレイ（又はパッチ）の大きさ、密度などを変えることによって変更又は操作することもできる。
【００６２】
発明の詳細な説明
当業者に知られているように、免疫活性剤、特にワクチンに対する望ましい生理的応答は、免疫応答の刺激である。免疫応答、特に抗体の生成は、物質に対する特異的免疫応答を増大させるアジュバントなどの補助成分を含むワクチンを配合することによって増大する。現代の免疫活性剤、特にワクチン、及びより詳細にはサブユニット型、又はサブビリオンワクチンは、通常はこのようなアジュバントを用いて配合して、物質の有効性及び効能を向上させる。
【００６３】
当技術分野で知られているように、ワクチン配合物中のアジュバントの使用に関する利点には、（１）ワクチンに適した免疫応答を誘導及び最適化する能力；（２）ワクチンの粘膜送達を容易にする能力；（３）細胞仲介の免疫応答を助長する能力；（４）弱性抗原の免疫原性を増大させる能力；（５）防御免疫を与えるのに必要とされる抗原の量及び／又は投与の頻度を低下させる能力；及び（６）弱性の免疫応答を有する個体におけるワクチンの有効性を向上させる能力がある。
【００６４】
アジュバントの作用機構には通常は、（１）ワクチン抗原の生物学的又は免疫学的貯蔵寿命を増大させること；（２）抗原提示細胞への抗原送達を改善すること；（３）抗原提示細胞による抗原処理を改善すること；及び（４）免疫調節サイトカインの生成を誘導することがある。
【００６５】
鉱物アジュバントは、１つの広く使用されているクラスのアジュバントである。このようなアジュバントには、例えばセリウム、亜鉛、鉄、アルミニウム及びカルシウムなどの金属の塩がある。アルミニウム塩、特にリン酸アルミニウム塩及び水酸化アルミニウム塩が広く利用されている。実際このような塩は、Ｂ型肝炎ワクチン（ミョウバン−ＨＢｓＡｇ）及びジフテリア及び破傷風トキソイドワクチン（ミョウバン−ＤＴ）を含めた５０％を超える市販のワクチン製品で利用されている。本明細書で使用するように、文脈から他に明らかでない限り、用語「ミョウバン」を使用して水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムの両方を包含する。
【００６６】
図１を参照すると、従来技術の配合及び方法によって調製されたミョウバン基質１０を示す。図１が表す配合物はＡｌ（ＯＨ）３（２．９％）＋トレハロース（４．１％）、ＡｌＰＯ３（３．０％）＋デキストラン（１．２％）、又はＡｌＰＯ３（５．０％）＋マンニトール（２．２％）を含み、空気乾燥又は凍結乾燥によって調製された（Ｍａａ他、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．、Ｖｏｌ．２０、Ｎｏ．７、２００３年７月、ｐｐ．９６９〜９７７を参照）。
【００６７】
図１中に示す黒色領域１２は、大規模なミョウバン介在の凝固を表す。このような大規模な凝固は、ミョウバン表面に吸着し凝固中に捕捉され、したがって望ましい免疫応答を誘発することができない多量の抗原をもたらす。
【００６８】
前に示したように、本発明は、ミョウバン介在型凝固、及び付随する抗原物質の有効性増大の消失を緩和又は回避する、安定なミョウバンアジュバント免疫活性剤、特にワクチンの組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を含む。本発明は、氷結、乾燥、凍結乾燥、又は凍結乾燥に施すことができ、還元したとき高レベルの有効性を保持している、安定なアジュバント免疫活性剤、特にワクチンの組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法も提供する。本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤はワクチンを含み、アジュバントは水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、及びこれらの混合物を含む。
【００６９】
図２を参照すると、乾燥及び還元後の、本発明のミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物を表す基質１４を示す。図２が表す配合物は実施例１中にさらに記載し、噴霧乾燥及び噴霧凍結乾燥によって調製した。
【００７０】
図１中に示す基質と比較すると、ミョウバン介在型凝固を表す黒色領域１６は、大幅に狭い領域を占めることを見ることができる。結果として、より高い割合の抗原が望ましい免疫応答を誘導するために利用可能である。
【００７１】
一実施形態では、本発明はしたがって、表面上（又は送達器具）に容易に析出させその上において常温で乾燥させることができる、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を含む。本発明はさらに、薄膜塗膜として表面上（又は送達器具）に析出させることができる、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法を提供する。
【００７２】
薄膜塗膜は単層を含むことができるか、或いは多層であってよい。単層及び多層薄膜塗膜は微小突起系送達器具を使用する経皮送達に特に適している。このような器具によって、物質、例えばワクチンを、少なくとも１つ、より好ましくは複数の角質層貫通性微小突起にコーティングされる生体適合性塗膜中に含ませる。
【００７３】
本発明の一実施形態では、安定なアジュバント免疫活性剤の組成物、並びにそれらを配合及び送達する方法は、５〜１００ミクロンの範囲、より好ましくは１０〜５０ミクロンの範囲の全厚を有する薄膜多層塗膜の生成を可能にする。本発明によれば、ミョウバン含有薄膜層は、ミョウバン粒子が大規模な配合物基質中に凝固するのを妨げる。間質液による皮膚内での溶解によって、ワクチン抗原は容易に放出され、したがって投与され得る。抗原物質の免疫原性及びミョウバンのアジュバント性もコーティング配合物中で保たれ、それによって生じる抗原物質の有効性は向上する。
【００７４】
図４を参照すると、一実施形態では、送達表面に配置することができる、且つ／或いは有効性の大幅な消失無しで乾燥及び復元することができる、ミョウバンアジュバント免疫活性剤を形成する方法は、以下のステップ：（ｉ）ミョウバン濃度が３％未満である、適切な溶媒に懸濁させたミョウバンの懸濁液を調製するステップ（２０）；（ｉｉ）無定形の炭水化物糖（即ち、バルク剤及びタンパク質安定剤）をミョウバン懸濁液に加えるステップ（２１）；（ｉｉｉ）場合によっては、セルロース又はデンプンなどの増粘剤を加えて溶液粘度を得るステップ（２２）；（ｉｖ）膜形成剤、例えばポリアカルボン酸を加えるステップ（２３）；及び（ｖ）多量の免疫活性剤をミョウバン懸濁液に加えるステップ（２４）を含む。本発明によれば、当技術分野で知られているように、濃縮及び緩衝処理によって免疫活性剤を調製することができる。
【００７５】
一実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の生成溶液を噴霧乾燥、空気乾燥、噴霧凍結乾燥、凍結乾燥又は凍結乾燥させて、それを保存又は分配用に溶液を安定化させる（２６）。復元すると、免疫活性剤の有効性及び免疫応答は最大になる。
【００７６】
他の実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の生成溶液を、送達器具、１個の角質層貫通性微小突起、又は複数の角質層貫通性微小突起、又はこれらのアレイ上のコーティングとして利用することができる生体適合性塗膜配合物中に含ませる（２７）。各コーティングステップ間で乾燥ステップを伴う一連のコーティングステップでコーティング法を実施することが好ましい。本発明の所望の薄膜の形成を最適化するために、それぞれの乾燥サイクル間の乾燥時間は、それぞれの層の乾燥を確実にして、新しいコーティングと以前に非乾燥状態であったコーティングの混合を回避するほど充分長いことが好ましい。
【００７７】
本発明の、ミョウバンアジュバント配合物の望ましい薄膜塗膜及び方法によって得られる有益な結果を、図３中に図式的に示す。図３中に示すように、配合物基質１８の凝固は、本発明の薄膜コーティング法によって最小になり、ミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物の薄膜のアレイ（即ち層）１９を与える。図３中に示す基質が表す配合物は実施例２中にさらに記載し、膜コーティングによって調製した。
【００７８】
本発明のミョウバンアジュバント免疫活性剤を配合するために使用した方法及び物質は、以下でさらに詳細に記載する。
【００７９】
ミョウバン懸濁液の調製（２０）
水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムの懸濁液は、約０．０００１重量％〜３重量％、好ましくは約０．０５重量％〜２重量％の水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムを適切な溶媒に加えることによって調製する。適切な溶媒には水及びエタノールがある。生成する溶液の粘度は約１〜５０ｃＰの範囲、より好ましくは約１０〜３０ｃＰの範囲内でなければならない。水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムは好ましい金属化合物であるが、リン酸カルシウム、水酸化マグネシウム及びヒドロキシ炭酸アルミニウム塩などの他の金属塩も有用である可能性がある。
【００８０】
ミョウバンに加えて、他の免疫応答増大アジュバントをワクチン抗原と配合して、ワクチンを構成することができる。このようなアジュバントには非制限的に、藻類グルカン、β−グルカン；コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５：ｘ＝８及びｙ＝２０５の平均値を有するＡＢＡブロックポリマー；γインスリン：線状（非分岐状）β−Ｄ（２−＞１）ポリフルクトフラノキシル−α−Ｄ−グルコース；Ｇｅｒｂｕアジュバント：Ｎ−アセチルグルコースアミン−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ジメチルジオクタデシル塩化アンモニウム（ＤＤＡ）、亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（Ｚｎ−Ｐｒｏ−８）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）：Ｎ−アセチルグルコアミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミチン酸グリセロール；ＭＴＰ−ＰＥリポソーム：Ｃ５９Ｈ１０８Ｎ６Ｏ１９ＰＮａ−３Ｈ２Ｏ（ＭＴＰ）；Ｍｕｒａｍｅｔｉｄｅ：Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３；Ｐｌｅｕｒａｎ：β−グルカン；ＱＳ−２１；Ｓ−２８４６３：４−アミノ−ａ、ａ−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；サルボペプチド：ＶＱＧＥＥＳＮＤＫ・ＨＣｌ（ＩＬ−１β  １６３〜１７１ペプチド）；及びスレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標））：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン、及びインターロイキン１８、ＩＬ−２ＩＬ−１２、ＩＬ−１５がある。アジュバントには、ＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドなどもある。さらに、ＩＬ−１８、ＩＬ−２ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−４、ＩＬ１０などの免疫制御調節リンホカイン、γインターフェロン、及びＮＦκＢ制御シグナルタンパク質をコードする核酸配列を使用することができる。
【００８１】
無定形の糖の添加（２１）
当技術分野で知られているように、無定形の糖はバルク剤及びタンパク質安定剤として働く。本発明によれば、無定形の糖は一般的なクラスのガラス形成糖から選択することができる。特にスクロース、メテジトース、ラフィノース、トレハロース、スタキオース、ラクトース、マルトース及びこれらの組合せが有用である。糖は体積増大に有効な量又はタンパク質安定化に有効な量加えることが好ましい。重量％単位に基づくと、糖は約２重量％〜４０重量％の範囲、より好ましくは約１０重量％〜３０重量％の範囲で存在してよい。
【００８２】
増粘剤の添加（２２）
場合によっては、ポリマー物質などの増粘剤を配合物に加えることができる。適切なポリマーの例には、非制限的に、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシエチルメチルセルロース（ＨＥＭＣ）、又はエチルヒドロキシエチルセルロース（ＥＨＥＣ）などのセルロース誘導体がある。
【００８３】
増粘剤を利用する場合、好ましくは約１００ｃＰ未満、より好ましくは約２０〜６０ｃＰの範囲の最終溶液粘度を与えるのに充分な量で加える。本発明によれば、増粘剤は約０．１重量％〜１０重量％の範囲で存在してよい。
【００８４】
膜形成剤の添加（２３）
膜形成剤の多くの例が存在する。一般に膜形成剤は、約１，０００〜１，０００，０００ダルトンの範囲、より好ましくは約３０，０００〜５００，０００ダルトンの範囲の分子量を有するポリカルボン酸、及びその塩を含む。非制限的な例には、アクリル酸、メタアクリル酸、アクリルアミド、アクリルニトリル及びその他のポリマーがある。カルボン酸のコポリマーも適切である。好ましいポリマーは、商品名ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）、ＡＣＵＳＯＬ（登録商標）の市販品などのポリアクリレートなど、並びにヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、及びポリビニルアルコール（ＰＶＯＨ）である。
【００８５】
膜形成剤は、膜を形成するのに有効な量加えることが好ましい。本発明によれば、膜形成剤は約０．００１重量％〜１０重量％の範囲、より好ましくは約０．１重量％〜５重量％の範囲で存在してよい。
【００８６】
免疫活性剤の添加（２４）
ワクチンなどの免疫活性剤は通常は、適切な担体を、適切なアジュバント、賦形剤、保護物質、溶媒、塩、界面活性剤、緩衝剤及び他の要素と共に使用して水性形で調製する。免疫活性剤は当技術分野で知られているような濃縮及び緩衝処理によって、通常は調製される。
【００８７】
適切な免疫活性剤には、したがって非制限的に、タンパク質、多糖複合体、オリゴ糖、及びリポタンパク質の形の抗原がある。これらのサブユニットワクチンには、百日咳菌（組換え体ＰＴワクチン−無細胞性）、破傷風菌（精製、組換え体）、コリネバクテリウム属ジフテリア菌（精製、組換え体）、サイトメガロウイルス（糖タンパク質サブユニット）、Ａ群連鎖球菌（糖タンパク質サブユニット、破傷風トキソイドとの糖複合体Ａ群多糖、毒性サブユニット担体と連結したＭタンパク質／ペプチド、Ｍタンパク質、多価型−特異的エピトープ、システインプロテアーゼ、Ｃ５ａペプチダーゼ）、Ｂ型肝炎ウイルス（組換え体Ｐｒｅ−Ｓ１、Ｐｒｅ−Ｓ２、Ｓ、組換え体コアタンパク質）、Ｃ型肝炎ウイルス（組換え体−発現された表面タンパク質及びエピトープ）、ヒトパピローマウイルス（キャプシドタンパク質、ＴＡ−ＧＮ組換えタンパク質Ｌ２及びＥ７［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１由来のＭＥＤＩ−５０１組換えＶＬＰＬ１、４価組換えＢＬＰＬ１［ＨＰＶ−６由来］、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１６、及びＨＰＶ−１８、ＬＡＭＰ−Ｅ７［ＨＰＶ−１６由来］）、レジオネラニューモフィラ（精製細菌表面タンパク質）、髄膜炎菌（破傷風トキソイドとの糖複合体）、緑膿菌（合成ペプチド）、風疹ウイルス（合成ペプチド）、肺炎球菌（髄膜炎菌ＢＯＭＰと結合した糖複合体［１、４、５、６Ｂ、９Ｎ、１４、１８Ｃ、１９Ｖ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７と結合した糖複合体［４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、ＣＲＭ１９７０と結合した糖複合体［１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ］、梅毒トレポネーマ（表面リポタンパク質）、水痘帯状疱疹ウイルス（サブユニット、糖タンパク質）、及びビブリオコレラ（複合体リポ多糖）ワクチンがある。
【００８８】
全ウイルス又は細菌には非制限的に、弱化又は不活化ウイルス、例えばサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、風疹ウイルス、及び水痘帯状疱疹など、弱化又は不活化細菌、例えば百日咳菌、破傷風菌、コリネバクテリウム属ジフテリア菌、Ａ群連鎖球菌、レジオネラニューモフィラ、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎球菌、梅毒トレポネーマ、及びビブリオコレラ、並びにこれらの混合物などがある。
【００８９】
抗原物質を含む幾つかの市販のワクチンは、本発明に関しても有用性がある。示すワクチンには非制限的に、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン、狂犬病ワクチン、はしかワクチン、おたふくかぜワクチン、水疱瘡ワクチン、天然痘ワクチン、肝炎ワクチン、百日咳ワクチン、及びジフテリアワクチンがある。
【００９０】
本発明の配合及び方法に従い利用することも可能である核酸を含むワクチンには、非制限的に、一本鎖及び二本鎖核酸、例えばスーパーコイルプラスミドＤＮＡ、線状プラスミドＤＮＡなど、コスミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母菌人工染色体（ＹＡＣ）、哺乳動物人工染色体、及びＲＮＡ分子、例えばｍＲＮＡなどのワクチンがある。核酸の大きさは、数千キロベースまでであってよい。核酸はタンパク質物質と結合することもでき、或いは１つ又は複数の化学修飾、例えばホスホロチオエート成分などを含むことができる。
【００９１】
本発明のミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物は、適切な賦形剤、保護物質、溶媒、塩、界面活性剤、緩衝剤及び他の要素も含むことができる。このような配合物の例は、その開示が参照として本明細書に組み込まれる米国特許出願第６０／６００，５６０号及び第１０／９７０，８９０号中で見ることができる。
【００９２】
本発明によれば、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の生成溶液（２５）を噴霧乾燥、空気乾燥、噴霧凍結乾燥、凍結乾燥又は凍結乾燥させて、それを保存又は分配用に溶液を安定化させる（２６）。復元すると、免疫活性剤の有効性及び免疫応答は最大になる。
【００９３】
他の実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤の生成溶液（２５）を、送達器具、１個の角質層貫通性微小突起、又は複数の角質層貫通性微小突起、又はこれらのアレイ上のコーティングとして利用することができる生体適合性塗膜配合物中に含ませる（２７）。生体適合性塗膜の組成物、及びその配合方法は、その開示が参照として本明細書に組み込まれる米国特許出願第１０／１２７，１０８号及び第１０／６０８，３０４号中に詳細に記載されている。
【００９４】
ここで図５を参照すると、本発明の組成物及び方法と共に使用するための、角質層貫通性微小突起アレイの一実施形態を示す。図５中に示すように、微小突起アレイ３０は複数の微小突起３２を含む。微小突起３２は、開口部３６を有するシート３４からほぼ９０°に伸びている。
【００９５】
図９中に示すように、シート３４用の裏材３５を有する送達パッチ中に、シート３４を組み込むことができる。裏材３５は、裏材３５及び微小突起アレイ３０を患者の皮膚に接着させるための接着剤３６をさらに含むことができる。この実施形態では、シート３４の平面から複数の微小突起３２をエッチング又はパンチングすることによって、微小突起３２を形成する。
【００９６】
微小突起アレイ３０は、ステンレス鋼、チタン、ニッケルチタン合金などの金属、或いはプラスチックなどの類似の生体適合性材料で製造することができる。微小突起アレイ３０はチタンで構成されることが好ましい。金属微小突起部材は、その開示が参照として本明細書に組み込まれるＴｒａｕｔｍａｎ他、米国特許第６，０３８，１９６号；Ｚｕｃｋ、米国特許第６，０５０，９８８号；及びＤａｄｄｏｎａ他、米国特許第６，０９１，９７５号中に開示されている。
【００９７】
本発明と共に使用することができる他の微小突起部材は、シリコンをエッチングすることによって、チップのエッチング技法を利用することによって、或いはエッチングした微小金型を使用してプラスチック成形することによって形成する。シリコン及びプラスチック製微小突起部材は、その開示が参照として本明細書に組み込まれるＧｏｄｓｈａｌｌ他、米国特許第５，８７９，３２６号中に開示されている。
【００９８】
このような微小突起器具に関しては、免疫活性剤を有する生体適合性塗膜を、微小突起に均質且つ均一に、好ましくは微小突起自体に限定して施すことが重要である。これによって、ひとたび器具が皮膚に施され角質層に貫通した後に、間質液中で物質を溶解させることができる。さらに、均質なコーティングは、保存中と皮膚への挿入中の両方でさらに高い機械的安定性を与える。弱性及び／又は不連続コーティングは、製造及び保存中に剥がれ落ち、塗布中に皮膚から拭き取られる可能性が高い。
【００９９】
さらに、物質の最適な安定性及び貯蔵寿命は、固体及びほぼ乾燥状態である生体適合性塗膜によって達成される。しかしながら、コーティングの溶解及び物質の放出の動態は、幾つかの要因に応じて相当変化する可能性がある。保存安定性以外に、生体適合性塗膜は物質の望ましい放出を可能にすることは容易に理解されよう。
【０１００】
ここで図６を参照すると、微小突起３２が生体適合性塗膜５０でコーティングされた、微小突起アレイ３０を示す。本発明によれば、生体適合性塗膜５０は微小突起３２を部分的又は完全に覆うことができる。微小突起３２が形成される前又は後に、生体適合性塗膜５０を微小突起に施すことができる。
【０１０１】
微小突起上のコーティング５０は、様々な周知の方法によって形成することができる。１つのこのような方法はディップコーティングである。免疫活性剤含有生体適合性塗膜溶液中に微小突起を部分的又は完全に浸すことによって微小突起をコーティングするための手段として、ディップコーティングを説明することができる。或いは、器具全体を生体適合性塗膜溶液中に浸すことができる。多くの場合、コーティング内の免疫活性剤は非常に高価である可能性がある。したがって、微小突起の先端のみをコーティングすることが好ましい可能性がある。微小突起の先端コーティング装置及び方法は、その開示が参照として本明細書に組み込まれるＴｒａｕｔｍａｎ他、米国特許出願公開第２００２／０１３２０５４号中に開示されている。
【０１０２】
前述の出願中に記載されたように、コーティング装置は微小突起のみにコーティングを施し、そこから微小突起が突出している支持体／シートには施さない。このことは、免疫活性剤のコストが比較的高く、したがって免疫活性剤を含む生体適合性塗膜を、被験体の角質層に貫通する微小突起アレイの一部分のみに配置しなければならない場合に望ましい可能性がある。このコーティング技法は、皮膚貫通中に微小突起から容易に除去されない滑らかなコーティングを自然に形成する追加的利点を有する。微小突起先端コーティングの滑らかな断面は、図６Ａ中でさらに明確に示す。
【０１０３】
マイクロ流体噴霧又は印刷技法などの、他のコーティング技法を使用して、図６中に示すように微小突起３２の先端上のコーティング３８を正確に析出することもできる。
【０１０４】
本発明を実施する際に利用することができる他のコーティング法には、微小突起３２上へのコーティング溶液の噴霧がある。噴霧はコーティング組成物のエアロゾル懸濁液の形成を含むことができる。一実施形態では、約１０〜約２００ピコリットルの滴の大きさを形成するエアロゾル懸濁液を微小突起に噴霧し、次いで乾燥させる。
【０１０５】
本発明によれば、微小突起３２は、孔（示さず）、溝（示さず）、表面の凸凹（示さず）、又は類似の変形などの、コーティング３８の容量を受け入れる且つ／或いは増大させるように適合した手段であって、多量のコーティングを析出させることができる増大した表面積を与える手段をさらに含むことができる。
【０１０６】
ここで図７を参照すると、微小突起アレイ３１の他の実施形態を示す。図７中に示すように、微小突起アレイ３１は６０〜６３で示す幾つかの部分に分けることができ、異なるコーティングをそれぞれの部分に施し、それによって１種の微小突起アレイを利用して２種以上の有益剤を使用中に送達することができる。
【０１０７】
ここで図８を参照すると、複数の微小突起３２を有する微小突起アレイ３０の断面図を示すが、微小突起３２は、参照番号６１〜６４によって示すように、異なる生体適合性塗膜及び／又は異なる免疫活性剤で一続きにコーティングされる。即ち、別々のコーティングを望ましい数の個々の微小突起３２に施す。
【０１０８】
好ましい実施形態では、パターンコーティングを利用して微小突起３２をコーティングする。微小突起アレイの表面上に被覆液を位置決めするための分配システムを使用して、パターンコーティングを適用することができる。析出液の量は、微小突起当たり０．１〜２０ナノリットルの範囲であることが好ましい。適切な正確な目盛り付きの液体ディスペンサーの例は、その開示が参照として本明細書に組み込まれる、Ｔｉｓｏｎｅの米国特許第５，９１６，５２４号、第５，７４３，９６０号、第５，７４１，５５４号及び第５，７３８，７２８号中に開示されている。
【０１０９】
周知のソレノイドバルブ付きディスペンサー、電場の使用により一般に制御される任意選択の流体動力手段及び位置決め手段を使用するインクジェット技術を使用して、微小突起コーティング溶液を塗布することもできる。印刷産業由来の他の液体分配技術、又は当技術分野で知られている類似の液体分配技術を、本発明のパターンコーティングを塗布するために使用することができる。
【０１１０】
好ましい実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤を含む生体適合性塗膜を微小突起部材の少なくとも１個の角質層貫通性微小突起、より好ましくは複数のこのような角質層貫通性微小突起に塗布する方法は、常温で乾燥させることによって生体適合性塗膜をさらに安定化させるステップを含む。
【０１１１】
コーティング法は、各コーティングステップ間の乾燥ステップを伴う一連のコーティングステップで実施することが好ましい。本発明の望ましい薄膜の形成を最適化するために、それぞれの乾燥サイクル間の乾燥時間は、それぞれの層の乾燥を確実にするほど充分長くなければならない。
【０１１２】
各コーティングステップは、約０．５〜５ミクロンの範囲、より好ましくは約１〜３ミクロンの範囲の層又は塗膜厚をもたらすことが好ましい。全塗膜厚又は凝集塗膜厚は約３ミクロンを超えず、好ましくは約５〜１００ミクロンの範囲、より好ましくは約１０〜５０ミクロンの範囲でなければならない。真空チャンバー型乾燥装置を利用する幾つかの実施形態では、乾燥時間は０〜３％の相対湿度及び常圧未満の条件下において、好ましくは約０．５〜３６０分の範囲、より好ましくは１〜１００分の範囲である。
【０１１３】
本発明の一実施形態では、ミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物を含む生体適合性塗膜を周囲の室温で乾燥することにより、所望の薄膜塗膜を得ると、同時に抗原マスキング性凝固を無くす。これを達成するための１つの方法は、噴霧乾燥型の乾燥装置を使用して溶液を乾燥させることである。このような装置では、可溶性物質（例えば、免疫活性剤溶液）の微細な霧を大きな円錐形のチャンバーに導入し、そこで約６０〜２５０℃、好ましくは約８０〜１５０℃の範囲に加熱された空気と接触する。温度、圧力、湿度及び滞留時間の正確な条件は、乾燥させる材料又は物質に依存する。本発明の免疫活性剤に関しては、乾燥条件は約６０℃〜約１５０℃の範囲、より好ましくは約８０℃〜約１２０℃の範囲の入口温度で実施することが好ましい。適切な供給率は約１ｍＬ／分〜約２０ｍＬ／分、より好ましくは約５〜１０ｍＬ／分の範囲である。湿度は約１０〜５０％の範囲であってよい。
【０１１４】
１つの適切な乾燥装置は、その開示が参照として本明細書に組み込まれる、２００４年５月１９日に出願された米国特許出願第６０／５７２，８６１号中に開示されている［整理番号ＡＬＺ５１３４］。
【０１１５】
当業者によって理解されるように、本発明の示した配合物及び方法は、様々なワクチン供給源物質及びその形態を配合するように改変及び適合させることができる。例えば、本法は、Ｂ型肝炎、ジフテリア及び破傷風トキソイドワクチンを配合するように適合させることができると思われる。
【０１１６】
本発明によれば、多数の免疫活性剤又はワクチンを本発明の配合プロセス及び方法に処して、非常に安定なワクチン配合物を得ることができる。本発明の好ましい実施形態では、免疫活性剤はインフルエンザワクチン、より好ましくはサブビリオンインフルエンザワクチンを含む。
【実施例】
【０１１７】
以下の試験及び実施例は、本発明の配合物、方法及びプロセスを例示する。これらの実施例は単なる例示目的であり、決して本発明の範囲を制限することは意味しない。
【０１１８】
（実施例１）
水酸化アルミニウム吸着Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）溶液を、表１中に要約した組成で配合した。
【０１１９】
【表１】
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【０１２０】
この液体配合物を噴霧乾燥又は噴霧凍結乾燥させた。
【０１２１】
噴霧乾燥
卓上噴霧乾燥機（Ｂｕｃｈｉ）を以下の条件で使用した：１３０〜１４０℃の乾燥空気の入口温度、３．５ｍＬ／分の液体供給、及び８０〜８５℃の乾燥空気の出口温度。生成する粉末はＤ１０％＝１．２μｍ、Ｄ５０％＝３．５μｍ、及びＤ９０％＝５．８μｍの粒径分布を有する。
【０１２２】
噴霧凍結乾燥
ステンレス鋼製の鍋中に含まれる液体窒素中に１．５ｍＬ／分の供給率で、超音波噴霧装置（６０ｋＨｚ、Ｓｏｎｏ−Ｔｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｔｏｎ、ＮＹ）を使用して、液体配合物を噴霧した。この鍋を、−５５℃で予め冷却した棚を有する凍結乾燥装置（ＤｕｒａＳｔｏｐ、ＦＴＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓｔｏｎｅ  Ｒｉｄｇｅ、ＮＹ）に移した。
【０１２３】
一次乾燥は−１０℃において１０時間で実施し、二次乾燥は１５℃、次いで２５℃においてそれぞれ５時間実施した。サイクル中、温度勾配率は１℃／分、真空チャンバー圧は１００ｍＴｏｒに設定した。生成する粉末はＤ１０％＝２５μｍ、Ｄ５０％＝４０μｍ、及びＤ９０％＝６０μｍの粒径分布を有する。
【０１２４】
ミョウバン凝固の分析
噴霧乾燥及び噴霧凍結乾燥によって調製した還元粉末において、光学顕微鏡下でミョウバンの凝固を評価した。光学顕微鏡画像下で砂質感を示す未処理ＡＬ（ＯＨ）３／ＨＢｓＡｇ液体とは対照的に、両方の還元粉末配合物共に明らかな粒子を含まない同じ砂構造を示し、粉末配合物中の最少のミョウバン凝固を示唆する。
【０１２５】
有効性及び抗原性の分析
粉末配合物におけるＨＢｓＡｇの有効性／抗原性を、ＡＵＳＺＹＭＥ（登録商標）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌキット（Ａｂｂｏｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）を使用する定量酵素免疫アッセイによって測定した。この試験では、還元粉末配合物のＨＢｓＡｇ有効性は、未処理ＨＢｓＡｇ出発物質に匹敵した。
【０１２６】
（実施例２）
水酸化アルミニウム吸着Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）溶液を、表２中に要約した組成で配合した。
【０１２７】
【表２】
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【０１２８】
生成した溶液の特性を決定した結果、４０ｃｐｓの粘度及びチタン金属上で４０°の接触角を示した。この溶液中に微小突起の上部１００μｍを沈めることによって、ディップコーティングを２２５μｍの微小突起（１ｃｍ２当たり７２５の微小突起）のアレイの先端に施した。それぞれの浸漬後に、液体摂取物を周辺空気条件（２２℃及び５０％相対湿度）下において１０秒間乾燥させた。乾燥塗膜の厚さが約２０μｍになるまで、コーティングプロセスを１０回繰り返した。
【０１２９】
ミョウバン凝固の分析
乾燥塗膜配合物は水中に還元した。光学顕微鏡法を使用して、還元溶液中のミョウバン凝固を測定した。未処理ＡＬ（ＯＨ）３／ＨＢｓＡｇ液体と同様に、還元配合物は明らかな粒子を含まない類似の砂構造を示し、乾燥塗膜中の最少のミョウバン凝固を示唆する。
【０１３０】
有効性及び抗原性の分析
乾燥塗膜配合物におけるＨＢｓＡｇの有効性／抗原性を、ＡＵＳＺＹＭＥ（登録商標）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌキット（Ａｂｂｏｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）を使用する定量酵素免疫アッセイによって測定した。この試験では、還元乾燥塗膜配合物のＨＢｓＡｇ有効性は、未処理ＨＢｓＡｇ出発物質のそれに匹敵した。
【０１３１】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱せずに、当業者は本発明に様々な変化及び変更を加えて、本発明を様々な使用及び条件に適合させることができる。したがって、このような変化及び変更は、適切、公正に添付の特許請求の範囲の均等物の全範囲内に入り、また、そのように意図している。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
【図１】従来技術の配合及び方法によって調製された乾燥したミョウバン吸着状態の免疫活性剤を示し、ミョウバン介在の凝固の領域を示す図である（図１中に黒色領域として示す）。
【図２】図１の従来技術の物質配合と比較した、乾燥状態の本発明のミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物を示し、凝固ミョウバンの有意な最小化を示す図である（再度、黒色領域によって表す）。
【図３】本発明の薄膜塗膜系として実施した、ミョウバンアジュバント免疫活性剤配合を示す図である。
【図４】本発明のミョウバンアジュバント免疫活性剤を配合する方法の、一実施形態を示すフローチャートである。
【図５】本発明のミョウバンアジュバント免疫活性剤配合物を有する生体適合性塗膜をその上に析出することができる、微小突起アレイの斜視図である。
【図６】微小突起の上に析出した生体適合性塗膜を有する、図５の微小突起アレイの斜視図である。
【図６Ａ】図６中のライン６Ａ−６Ａに沿って得た１種の微小突起１０の断面図である。
【図７】様々な部分への微小突起アレイの分割を示す、微小突起アレイの皮膚隣接側の図である。
【図８】異なる生体適合性塗膜を異なる微小突起に施す、他の実施形態を示す微小突起アレイの側断面図である。
【図９】接着裏材を有する微小突起アレイの側断面図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図６Ａ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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