(57)【要約】
2008533077.tif 000005式Ｉの化合物｛式Ｉにおいて、Ｒ１−５は、水素、ニトロ、シアノ、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ３−アルコキシ基から独立して選択される１〜５個の置換基を表し、Ｘは、水素、ハロ、Ｎ３、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、芳香族基、好ましくはフェニルであって、環が上記で定義した通りのＲ１−５基により置換されていてもよい芳香族基、アミノ、モノ−又はジ−置換アミノ基（置換基は、上記で定義した通りのＲ１−５基によって置換されていてもよい、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル又はベンジル基から選択される）であり、Ｙは、水素、アルキルＣ１−Ｃ４、アミノ又は式−（ＣＨ２）０−１Ａの基であり、Ａは、芳香族基、好ましくはフェニルであり、環が上記で定義した通りのＲ１−５基により置換されていてもよく、但し、Ｘ及びＹが水素である場合には、Ｒ１−５は４−ヒドロキシ又は４−アルコキシ基となり得ない｝は、腫瘍壊死因子媒介性免疫病理学的状態並びにインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）の阻害によって治療または緩和され得る疾患の治療のために有用である。【選択図】なし
2008533077.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2008533077.tif 000004
｛式Ｉにおいて、Ｒ１−５は、水素、ニトロ、シアノ、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ３−アルコキシ基から独立して選択される１〜５個の置換基を表し、
Ｘは、水素、ハロ、Ｎ３、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、芳香族基、好ましくはフェニルであって、環が上記で定義した通りのＲ１−５基により置換されていてもよい芳香族基、アミノ、モノ−又はジ−置換アミノ基（置換基は、上記で定義した通りのＲ１−５基によって置換されていてもよい、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル又はベンジル基から選択される）であり、
Ｙは、水素、アルキルＣ１−Ｃ４、アミノ又は式−（ＣＨ２）０−１Ａの基であり、Ａは、芳香族基、好ましくはフェニルであり、環が上記で定義した通りのＲ１−５基により置換されていてもよく、
但し、Ｘ及びＹが水素である場合には、Ｒ１−５は４−ヒドロキシ又は４−アルコキシ基となり得ない｝
の化合物の、腫瘍壊死因子媒介性免疫病理学的状態並びにインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）の阻害によって治療又は軽減され得る疾患の治療のための使用。
【請求項２】
請求項１に記載の、３−フェニル−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸、３−フェニル−５−イソキサゾール酢酸又は薬学的に許容可能なその塩の使用。
【請求項３】
請求項１に記載の、３−フェニル−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸又は薬学的に許容可能なその塩の使用。
【請求項４】
前記疾患が、リウマチ様関節炎、クローン病、乾癬及び炎症性皮膚病、Ｉ型糖尿病、ＨＩＶ感染症、癌、虚血−再灌流、肝炎、多発性硬化症、ギラン−バレー症候群及び急性移植片拒絶反応の予防を包含する、ヒトにおける免疫−炎症性疾患、自己免疫疾患及び感染症から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
式Ｉの化合物又はその非毒性塩を活性成分として含む医薬組成物。
【請求項６】
活性成分が３−フェニル−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸である、請求項５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自己免疫疾患、慢性炎症、免疫媒介性疾患、ＮＦｋＢの過剰活性化に関与するか又はしない腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、インターロイキン（ＩＬ）１β、ＩＬ−１０サイトカインを含むがこれらに限定されないサイトカインにより媒介される病状、及びＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−１β及びＩＬ−１０を含むがこれらに限定されないサイトカインの阻害又はＮＦｋＢ活性化の阻害によって治療又は軽減され得る病状を治療するための化合物の使用に言及する。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患、慢性炎症又は他の免疫媒介性疾患の発生に関与する免疫病理学的経路のよりよい理解は、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８及びＩＦＮ−γのようなサイトカインによってＴ細胞媒介性自己免疫疾患において果たされている重要な役割を特定することを可能とした。特に、リウマチ様関節炎の病原論におけるＴＮＦ−αの重要な病理学的役割を予想する実験的証拠は、特定の阻害剤、即ち、中和モノクローナル抗体（Infliximab, Humana）及びＴＮＦレセプター融合タンパク質（Embrel）として首尾よく臨床ステージへ移され、これらは現在ＲＡ患者の治療について承認されている。
【０００３】
二重盲検臨床試験は、ＴＮＦの中和抗体が炎症の初期段階を完全に抑制し得ることを証明した。それら特定のＴＮＦ−α阻害剤は、炎症を沈静させるアセチルサリチル酸と対照的に、炎症を予防することができる。先ず、進行した疾患を有する患者に治療が施された。その薬物治療が非常に有益な成功を見せると、医師は当該疾患の初期段階にある患者を治療し始めた。抗ＴＮＦα薬を用いる治療は、現在他の自己免疫疾患において用いられており、それにはクローン病及び乾癬が含まれる。しかしながら、それら特定のＴＮＦ阻害剤の製造は複雑で費用がかかる。その上、抗ＴＮＦ阻害剤は非経口的にしか投与できず、その慢性的な使用は結核を発症する大きなリスクを伴う。
【０００４】
リウマチ様関節炎、クローン病及び乾癬における特定のＴＮＦ阻害剤の有益な効果の立証は、内因性ＴＮＦ、そしてことによるとＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−１２，ＩＬ−１８又は他のサイトカインを包含する他のサイトカインの合成及び／又は作用を阻害し、経口的に利用可能な小さな化合物を見出すための努力を生み出した。
【０００５】
自己免疫疾患は、攻撃される器官によって、攻撃メカニズムによって定義することができる、自己抗体又はＴ−細胞によって媒介される免疫媒介性の疾患であり、慢性炎症の発症はしばしばサイトカインにより媒介されて進行する。増加する証拠が、自己免疫現象の、アテローム性動脈硬化、精神疾患精神分裂病、癲癇、禿頭症、消化性潰瘍性疾患及び他のものへの重要な病理学的寄与を示唆している。
【０００６】
自己免疫疾患は、全ての器官及び組織に影響し得る。神経系に影響を及ぼす自己免疫疾患、例えば多発性硬化症が存在する。この深刻な疾患は脳を損傷し、麻痺を引き起こす。神経系に影響を及ぼす他の自己免疫疾患は、重症筋無力症及びギラン−バレー症候群である。重症筋無力症は、極度の筋肉虚弱を特徴とする疾患であり、電気インパルスを神経から筋肉に伝達するレセプターが破壊されている。そのような伝達がないと筋肉収縮はなく、したがって、筋肉虚弱が発生する。ギラン−バレー症候群は、感染症又は予防接種の後に生じ得る。
【０００７】
関節に影響を及ぼす自己免疫疾患、例えば狼瘡及び関節に変形を引き起こすリウマチ様関節炎が存在する。最後に、心臓、腎臓及び肺を損傷する自己免疫疾患が存在する。
【発明の開示】
【０００８】
発明の説明
イソキサゾリン化合物が、ホスホエステラーゼ  タイプＩＶの阻害剤（ＵＳ５７１６９６７）、フィブリノーゲンレセプターアンタゴニスト（ＵＳ５８４９７３６）、ＴＮＦ放出の阻害剤（ＵＳ６１１４３６７）及びマクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）アンタゴニスト（ＷＯ０２／１００３３２）として開示されている。
【０００９】
フェニル環のパラ位においてヒドロキシまたはアルコキシ基が存在しない点でＵＳ５７１６９６７、ＵＳ５８４９７３６及びＷＯ０２／１００３３２中に開示されている化合物とは異なる式Ｉの化合物が、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１０合成を阻害し、ＮＦｋＢ活性化を予防することを見出した。
【００１０】
【化１】
2008533077.tif 000003
【００１１】
式Ｉにおいて、Ｒ１−５は、水素、ニトロ、シアノ、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ３−アルコキシ基から独立して選択される１〜５個の置換基を表し、
Ｘは、水素、ハロ、Ｎ３、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、芳香族基、好ましくはフェニルであって、環が上記で定義した通りのＲ１−５基により置換されていてよい芳香族基、アミノ、モノ−又はジ−置換アミノ基（置換基は、上記で定義した通りのＲ１−５基によって置換されていてもよい、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル又はベンジル基から選択される）であり、
Ｙは、水素、アルキルＣ１−Ｃ４、アミノ又は式−（ＣＨ２）０−１Ａの基であり、Ａは、芳香族基、好ましくはフェニルであり、環が上記で定義した通りのＲ１−５基により置換されていてもよく、
但し、Ｘ及びＹが水素である場合には、Ｒ１−５は４−ヒドロキシ又は４−アルコキシ基とはなり得ない。
【００１２】
式Ｉの化合物のいくつかは知られており、又は知られている方法によって製造され得る。Ｒ及びＲ’が両方とも水素であり、そして４，５−ジヒドロイソキサゾリン環系である化合物は、Synth. Comm., 1998, 28(13), 2457-2466 によって、及びSynth. Comm., 1997, 27(16), 2733-2742 から報告されている。
【００１３】
したがって、本書類中に記載されている発明は、制御困難な（dysregulated）ＮＦｋＢ活性化に関連するか又はしないＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＬ−１β及び／又はＩＬ−１０の阻害により軽減され得る疾患を治療するための医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用に関する。好ましい式Ｉの化合物は、３−フェニル−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸（以下、ＧＩＴ２７と称する）及び３−フェニル−５−イソキサゾール酢酸並びにそれらの薬学的に許容可能な塩、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム塩等である。ＧＩＴ２７が特に好ましい。
【００１４】
本発明の化合物は、ＮＦｋＢの活性化に関連するか又はしないＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＩＬ−１β及び／又はＩＬ−１０により媒介されるヒトの病状の治療に特に有用である。これら病状には、免疫炎症性疾患、自己免疫疾患及び感染症が含まれ、これらには、リウマチ様関節炎、クローン病、乾癬及び炎症性皮膚病、１型糖尿病、ＨＩＶ感染症、癌、虚血−再灌流、肝炎、多発性硬化症、ギラン−バレー症候群及び急性移植片拒絶反応の予防が含まれる。
【００１５】
したがって、本発明は、活性成分としての式Ｉの化合物を適切な担体又は希釈剤と混合して含む医薬組成物にも関する。
発明の詳しい説明
ＧＩＴ−２７の薬理学的活性をin vitroとin vivoの両方で詳細に研究した。より詳細には、公知の充分に確立された方法に従って以下の実験が行われた：
・リンパ増殖、ＴＮＦα、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０及びＭＩＦ合成／分泌；
・ヒトマクロファージ中のＮＦ−ｋＢ活性化；
・ネズミ  ＬＰＳ−誘発致死；
・ネズミ  カラゲニン誘発胸膜炎；
・ネズミ  タイプＩＩコラーゲン誘発関節炎；
・ネズミ  オキサゾロン誘発過敏症；
・複数回の低投与量のストレプトゾトシンにより誘発されたマウス免疫炎症性糖尿病；
・ネズミにおいて化学的に誘発された大腸炎；
上記に挙げた実験を行って得られた結果を以下に要約する。
【００１６】
リンパ球の増殖及びマクロファージ及びリンパ球によるＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０及びＭＩＦ合成及び分泌に対するＧＩＴ２７のＩｎ  ｖｉｔｒｏ効果
腹腔マクロファージ（ＰＭ）及び脾臓単核細胞（ＳＭＮＣ）が正常マウスから単離され、栄養培地中で培養され、ＬＰＳ及び／又はＣｏｎＡを用いて、それぞれＧＩＴ２７の不存在下又は存在下で刺激された。その結果は、ＧＩＴ２７がＰＭ及びＳＭＮＣの両方によるＴＮＦαの産生を著しく阻害し、ＰＭによるＩＬ−１β、ＩＬ−１０の産生を阻害したことを明確に示す。ＧＩＴ２７は、いずれの細胞タイプにおいてもＭＩＦ発現に対して効果を有さず、また、ＳＭＮＣの増殖、及びＳＭＮＣによるＩＬ−１０及びインターフェロン（ＩＦＮ）γ産生に対しても効果を有さなかった。
【００１７】
ＧＩＴ２７で処理されたマウスから単離されたリンパ球及びマクロファージの増殖性及びサイトカイン合成能力
これら実験は、ＧＩＴ２７を用いたマウスの腹腔内（i.p.）又は経口（p.o.）処置がＳＭＮＣの増殖性応答及び単離されたＰＭ及びＳＭＮＣからのＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ及びＭＩＦの産生に影響を及ぼすかどうかを探究するために行われた。ＰＭ及びＳＭＮＣは、ＧＩＴ２７を用いてin vivoで連続７日間 i.p.（０．５ｍｇ／マウス） 又は p.o. （２．５ｍｇ／マウス）で処置されたマウスから、又はＧＩＴ２７ビヒクル（Ｎａ２ＨＰＯ４／Ｈ２Ｏ）を受けた対照マウスから、又は何等処置されないで単離された。最後のＧＩＴ２７処置の少なくとも２４時間後、ＰＭ及びＳＭＮＣがさらなるin vitro刺激及び分析のために採取された。
【００１８】
このex vivo実験は、ＧＩＴ２７処置マウスから単離されたＰＭがＩＬ−１β、ＴＮＦα及びＩＬ−１０合成が損なわれたことを示し、有糸分裂促進性刺激をすると正常なパターンのＭＩＦ発現を示すことを明らかに示す。他方で、ＧＩＴ２７処置マウスから単離されたＳＭＮＣは、正常な増殖能力、刺激時にＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γを産生する正常な能力、及びＭＩＦ発現の正常な発現パターンを示す。
【００１９】
「in vitro」及び「ex vivo」実験からの知見は、ＧＩＴ２７が、ＳＭＮＣのＩＦＮ−γを産生する能力を変動させることなくＰＭによるＩＬ−１β、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１０の産生をダウンレギュレートし、ＰＭ及びＳＭＮＣによるＭＩＦの発現に影響しないことを同じように示す。これに対して、「in vitro」実験は、ＧＩＴ２７がＳＭＮＣによるＴＮＦ−α産生を減少させることを示すが、「ex vivo」実験はこの証拠を支持していない。
【００２０】
ヒトマクロファージにおけるＮＦ−ｋＢ活性化に対するＧＩＴ２７の効果
この in vitro試験からの結果は、ＧＩＴ２７が、単球誘導性ヒトマクロファージ中でＬＰＳが誘発したＮＦ−ｋＢのＤＮＡ結合を用量依存的に強力に阻害することを示す。これら結果は、ＧＩＴ２７の作用機構についての証拠を提供し、ＧＩＴ２７がＩＬ−１β、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１０のマクロファージ合成に対して発揮する阻害作用がＤＮＡに対するＮＦ−ｋＢ結合の阻害に従属的なものであり得ることを示唆する。
【００２１】
in vivo におけるＬＰＳ−誘発致死に対するＧＩＴ２７の効果
この in vivo 研究は、ＧＩＴ２７の治療的投与がマウスにおけるＬＰＳ−誘発致死を強力に打ち消すことを示した。
【００２２】
予測されるように、未処置であるか又はＧＩＴ２７のビヒクルを受けた対照マウスの殆どは、ＬＰＳ−チャレンジに対して３日以内に倒れた。この期間の観察の後、生存したマウスの１週追跡調査が、完全な臨床的回復を明らかに示した。対して、p.o.又はi.p.により与えられるＧＩＴ２７を用いる治療は、マウスをＬＰＳの致死的効果から用量依存的に保護した。p.o.投与された場合には、ＧＩＴ２７は２．５ｍｇ／マウスの投与量で効果的であり、１．５及び３ｍｇ／マウスにおいてドーズアウト（dose out）した。p.o.投与された場合には、ＧＩＴ２７はＬＰＳ誘発致死に対してより広い治療幅で０．２５及び０．５ｍｇ／マウスで用量依存的な保護を示した。ＧＩＴ２７は、予防的処方計画の下で類似した投与量でp.o.及びi.p.の両方で投与された場合には（例えば、ＬＰＳの−２４及び−１時間前）、ＬＰＳ誘発致死を有意に減少させることもできた。
【００２３】
カラゲニン（ＣＡＲ）誘発胸膜炎に対するＧＩＴ２７の効果
ＧＩＴ２７は、マウスにおけるＣＡＲ誘発胸膜炎を強力に抑制する。ＣＡＲを用いてチャレンジされ、処置されないか又はＧＩＴ２７のビヒクルで処置された全てのマウスは、急性胸膜塩を発症し、肺中に混濁浸出液の産生、ＰＭＮ浸潤、及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性蓄積が生じた。対して、ＧＩＴ２７を用いた予防的治療は、肺中の浸出液の産生、ＰＭＮ浸潤、及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の蓄積を減少させ、陽性対照薬として用いられたマウスＴＮＦ−αに対する抗体を用いる治療で達成されたものに匹敵する強力な保護効果を発揮した。
【００２４】
タイプIIコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）に対するＧＩＴ２７の効果
関節炎におけるＧＩＴ２７の治療効果を評価するため、タイプIIＣＩＡを発症しているマウスを連続１０日処置した。処置は、マウスが臨床スコア≧１を示した時に開始した。対照マウスは、ＧＩＴ２７のビヒクルを用いて同じ実験的処方計画の下で処置された。
【００２５】
ビヒクル処置対照マウスは、タイプIIＣＩＡの完全な臨床徴候をすばやく発生し、関節炎臨床的スコアの進行性の増強及び重度の後肢（hind paw）水腫を有していた。この臨床像は、組織学的評価によって測定される関節炎組織学的スコアの高度の進行性の増強により示される重度の炎症性関節炎により反映された。これに対して、ＧＩＴ２７処置マウスは、ビヒクル処置マウスよりも有意に遅い関節炎疾患の進行を、より低い臨床的関節炎スコア及び組織学的関節炎スコアと共に示した。ＧＩＴ２７での治療的処置は、ネズミタイプIIＣＩＡに対して顕著な抗炎症効果を生成し、当該疾患の発生に関連した臨床的パラメーター及び組織学的パラメーターの両方の有意な減少をもたらした。ＧＩＴ２７の治療効力は、陽性対照薬デキサメタゾンのものに匹敵した。
【００２６】
オキサゾロン誘発皮膚炎に対するＧＩＴ２７の効果
オキサゾロン誘発過敏症は、オキサゾロンに対する２回の皮膚上暴露によって誘発され得る免疫媒介皮膚炎である。最初のオキサゾロンの適用は、マウスを感作し、第二の適用が、過敏症反応を惹起する。皮膚炎の発現は、オキサゾロンに対する第二の皮膚上曝露の１８時間後に現われ、耳の厚さ及び重量の両方が顕著に及び進行的に増加する。ＧＩＴ２７の薬理学的活性を評価するためのin vivo研究は、２組の実験を用いて計画された。第一の組において、マウスは感作相の間又は前に処置された。この実験は、ＧＩＴ２７のビヒクルで処置されたか又は未処置のままとされたマウスにおいて耳の厚さ及び重さが顕著に進行的に増加したことを示す。これに対して、耳の厚さ及び重さの増強として測定される耳の炎症性腫脹は、ＧＩＴ２７によって有意に抑制された。類似の条件において、デキサメタゾンは耳の厚さを減少させたが、重量は減少させなかった。
【００２７】
オキサゾロン誘発皮膚炎の顕在化相に対するＧＩＴ２７の効果を評価するため、ＧＩＴ２７を用いる処置が、免疫炎症性応答の進行が始まるオキサゾロンに対する第二の皮膚上曝露の１時間後に与えられた。この実験処方計画の下では、ＧＩＴ２７はアレルギー性皮膚炎の発症に部分的に影響しただけであった。対照動物と比較して、ＧＩＴ２７で処置されたマウスは耳の厚さの有意な減少を示しただけであり、耳の重量の有意な減少は示さなかった。この実験処方計画においては、デキサメタゾンは耳の厚さ及び重さの増加に影響を及ぼさなかった。
【００２８】
この実験の結果は、ＧＩＴ２７を用いる処置が、ＧＩＴ２７が予防的処方計画により、即ち当該疾患の感作相の前に投与された場合に、オキサゾロンに対する繰返し皮膚上曝露により誘発される皮膚炎を首尾よく抑制することができることを示す。
【００２９】
しかしながら、ＧＩＴ２７は、オキサゾロンに対する第二の曝露の１時間後（顕在化相）にマウスに投与された場合には、オキサゾロン誘発皮膚炎の発生の予防又は遮断において余り強力でない。しかしながら、この効果は、デキサメタゾンが同じ実験処方計画の下で投与された場合に効果がないことを考慮すると、薬理学的適切性を獲得する。デキサメタゾンは、ヒト炎症性皮膚疾患の局所的治療に広く効果的に用いられる強力な免疫抑制剤であるため、ＧＩＴ２７は、免疫媒介性又はタイプＩサイトカイン依存性皮膚疾患、例えば、乾癬、いくつかの形態の尋常性天疱瘡、及び移植片対宿主疾患の間の皮膚脈管炎（cutaneous vasculitis）の治療における全身性又は局所性の使用のための薬理学的可能性を示す。
【００３０】
ストレプトゾトシン誘発糖尿病に対するＧＩＴ２７の効果
ＧＩＴ２７を用いるi.p.及びp.o.の両方の治療は、ＣＢＡ／Ｈマウスにおいて複数回の低投与量のストレプトゾトシンによって誘発される糖尿病の臨床的発症を抑制した。ＣＢＡ／Ｈマウスは、ＭＬＤ−ＳＴＺ注射の後に２週間に渡って持続的な高血糖症を発症した。予想された通り、ＧＩＴ２７のビヒクルでi.p又はp.o.で処置されたＣＢＡ／Ｈ対照マウスは、糖尿病を発症し、ＭＬＤ−ＳＴＺ注射の後に持続的な高血糖症が２週間に渡って生じる。これに対して、ＭＬＤ−ＳＴＺの糖尿病誘発性効果は、マウスがＧＩＴ２７でi.p.で処置されると有意に減少された。その薬は、p.o.で投与された場合にも高血糖症の発生を有意に減少させることができた。
【００３１】
i.p.及びp.o.で投与されるＧＩＴ２７を用いる予防的処置は、ＳＴＺの５回連続注射の後のβ細胞の細胞媒介性免疫破壊に従属的である高血糖症の発症を首尾よく妨げた。薬物は、i.p.及びp.o.投与の両方の場合で効果的であった。これら結果は、ＧＩＴ２７が、ヒトＩ型糖尿病（Ｔ１Ｄ）の初期的治療、並びにＴ１Ｄ発症の高リスクに関連した代謝的（インスリン分泌異常）及び免疫学的（抗−β細胞自己抗体、ＨＬＡハプロタイプ）パラメーターを示すＴ１Ｄを有する患者の第一度近親者のようなその発症のリスクを有する個体における当該疾患の予防における臨床的使用について更に検討されるに値する薬理学的特性を有することを示唆する。
【００３２】
ＤＮＢ−誘発大腸炎に対するＧＩＴ２７の効果
ジニトロベンゼンスルホン酸（ＤＮＢ）を用いるチャレンジの後５日以内に、マウスは大腸炎を発症する。この疾患の重傷度は、肉眼的スコアに基づいて評価される。ビヒクル処置対照マウス及び未処置マウスは、大腸炎を発症し、予測可能で進行性の、炎症の増加及び体重減少を伴った。炎症性大腸炎の進行は、ＧＩＴ２７を用いて処置された動物において有意に弱力化された（ｐ＜０．００１）。対照群に対して、ＧＩＴ２７処置動物は、体重減少における有意な減少を示す。これらデータと一致して、ＤＮＢ−誘発大腸炎の発症に伴う結腸重量の増加は、対照と比較して、ＧＩＴ２７で処置されたマウスにおいて有意に低かった。
【００３３】
対照マウスの結腸及びＧＩＴ２７処置マウスの結腸が除去され、切片化され、固定され、そしてヘマトキシリン及びエオシンを用いて染色された。炎症性細胞浸潤、粘膜及び筋肉損傷、並びに壁肥厚の低下が、ＤＮＢ−誘発大腸炎の前にＧＩＴ２７を用いて処置された動物において観測された。組織学は、対照マウスと比較してＧＩＴ２７を用いて処置されたマウスにおいて組織損傷が有意に低下していることを明確に示す。これらデータは、大腸炎におけるＧＩＴ２７の抗炎症効果を確認するものである。組織ミエロペルオキシダーゼ活性は、炎症性細胞（主に好中球）浸潤を評価するためのよく確立されたマーカーである。ＧＩＴ２７処置マウス及び対照マウスから採取された結腸組織において測定されたミエロペルオキシダーゼ活性は、ＧＩＴ２７を用いて処置されたマウスが大腸炎の誘発の５日後に対照と比較して炎症性細胞浸潤の有意な低下を示すことを明確に示す（ｐ＜０．０００１）。この結果は、同じ組織学的試料を浸潤する好中球の減少に平行する。我々は、平均して、ＤＮＢ−誘発動物においては８．９±１．２細胞（平均±標準偏差）／高出力領域をカウントしたが、ＧＩＴ２７前処置ＤＮＢ−誘発動物においては３．３７±０．８細胞／高出力領域しか存在しなかった（ｐ＜０．０００１）。これらデータは、ＧＩＴ２７を用いる処置が、ＤＮＢの投与によって誘発される大腸炎から強力に試験動物を保護することを証明している。本データは、この薬物がヒトＩＢＤの治療における可能性ある使用について期待できることを示す。
【００３４】
自己免疫疾患及び慢性炎症のような免疫媒介性疾患に対するＧＩＴ２７の効果
ＧＩＴ２７を用いて得られたin vitro及びin vivo結果は、この分子が、免疫機構によって媒介される疾患、例えば自己免疫疾患及び慢性炎症及びいくつかの皮膚疾患及び内分泌性疾患の治療のための興味深い薬物となる薬理学的可能性を有することを示す。一般に、ＧＩＴ２７は、ＩＬ−１β、ＴＮＦ又は他のサイトカインによって媒介される疾患の治療における可能性を有する。
【００３５】
ＩＬ−１０抗炎症特性（World J. Gastroenterol., 10:620, 2004）のため、ＧＩＴ２７がこのサイトカインのマクロファージ合成に対して発揮する阻害効果は、免疫炎症性疾患におけるこの薬物の使用と呼応しないようである。しかしながら、ＩＬ−１０はエンドトキシン誘発ブドウ膜炎（J. Immunol., 1995, 155: 4090-4）、Ｉ型糖尿病（J.immunol.2000, 165:2841-9）、全身性エリテマトーデス（Arthritis Rheum. 2000, 43: 1790-800）及び実験的自己免疫精巣炎（Cytokine. 2003, 22:50-3）のような異なる齧歯類モデルにおいて炎症誘発性効果を発揮することも示されている。従って、一定の環境下では、ＩＬ−１０合成の低下は、実際には薬物の抗炎症性効力を増強し得る。これは、自己免疫疾患の治療のための臨床的場面において広く用いられるシクロスポリンＡもＩＬ−１０合成をin vitroでダウンレギュレートするという事実とも一致する（J. Exp Med. 199317:551-5）。さらに、ＩＬ−１０の豊富化産生は一定の癌（Immunol Rev. 2004 Dec; 202:223-36., Br J Haematol. 2003, 122:927-33）及びＨＩＶ感染症（Blood. 2003, 101:2514-20.）において病原的役割を果たすと考えられているため、このサイトカイン合成をダウンレギュレートするＧＩＴ２７の能力は、これら疾患におけるこの薬物の可能性ある調査のための可能性ある理論的根拠を表す。
【００３６】
考慮された治療的用途のために、式Ｉの化合物は経口、非経口、経皮又は経粘膜ルートにより、知られた方法に従って調製される慣用的な担体又は希釈剤と混合された適切な組成物の形態で投与される。投与量は、病状の深刻度、患者の種類（年齢、性別及び体重）のようないくつかの要素に依存し、薬物の毒性学的及び薬物動力学的特性に基づいて、熟練した医師によってどのようにでも容易に決定される。
【００３７】
ＧＩＴ２７の製造
ベンズアルデヒド（１、３２．８ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（３３ｍｍｏｌ）がメタノール（１００ｍｌ）中に溶解された後、炭酸ナトリウム（６５ｍｍｏｌ）を添加した。一晩反応させることによって、オキシム誘導体が９５％で得られた（２、３０．４ｍｍｏｌ）。ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＮ−クロロスクシンイミド（３１．６ｍｍｏｌ）を用いるオキシムの塩素化により、定量的にクロロオキシム（３）が生成した。次いで、化合物３がＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（＊０／２０）中に溶解され、３−ブテノエート（２４．５ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（７３．６ｍｍｏｌ）で処理された。完結後（１２時間）、生成物が酢酸エチルを用いて抽出され、有機抽出液が食塩水で洗浄され、そして硫酸マグネシウムで乾燥された。ＧＩＴ−２７は、酢酸エチル／へプタン混合物から結晶化された。その構造は、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ及びマススペクトルによって確認された。１日あたりの投与処方計画は、恐らく広い範囲内、例えば０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内で変動する。
【国際調査報告】
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