(57)【要約】  精製されたリン脂質−選択的および／または非選択的非ステロイド系抗炎症薬の結合複合体を含む新しい薬剤組成物ならびにそれらを作製および使用するための方法が開示される。リン脂質結合複合体を形成する化合物を同定するためのスクリーニング方法もまた、開示される。
2008515977.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤおよび１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップと、
所望のレベル未満まで前記溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびＣＯＸ−２阻害剤からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＮＳＡＩＤが、フェノプロフェンカルシウム（Ｎａｌｆｏｎ（登録商標））、フルルビプロフェン（Ａｎｓａｉｄ（登録商標））、スプロフェン、ベノキサプロフェン、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ（登録商標）、Ａｄｖｉｌ（登録商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｄｕｉｓ、Ｏｒｕｖａｌｌ（登録商標））、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ（登録商標））、Ａｎａｐｒｏｘ（登録商標）、Ａｆｌａｘｅｎ（登録商標））、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（登録商標））、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））、ジクロフェナクカリウム（Ｃａｔａｆｌａｍ（登録商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ（登録商標））、ケトロラクトロメタミン（Ａｃｕｌａｒ、Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標）、筋肉内用）、ケトロラク（経口用Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標））、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（登録商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（登録商標））、トルメチンナトリウム（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（登録商標））、メクロフェナマートナトリウム（Ｍｅｃｌｏｍｅｎ（登録商標））、メフェナム酸（Ｐｏｎｓｔｅｌ（登録商標））、ピロキシカム（Ｄｏｌｉｂｉｄ（登録商標））、ジフルニサル（Ｆｅｌｄｅｎｅ（登録商標））、アスピリン、オキシフェンブタゾン（Ｔａｎｄｅａｒｉｌ（登録商標））、フェニルブタゾン（Ｂｕｔａｚｏｌｉｄｉｎ（登録商標））、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標））、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェン、アスピリン、サリチル酸、ナプロキセン、インドメタシン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フルオビプロフェン、ケトプロフェン、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＣＯＸ−２阻害剤が、セレコキシブ、ルミラコキシブ、メロキシカム、メロキシカム、ピロキシカム、もしくは新規に認可されたＣＯＸ−２阻害剤、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記リン脂質が、一般式：
【化１】
2008515977.tif 000004
（式中、Ｒ１およびＲ２は、炭素原子８〜３２個の範囲の飽和または不飽和置換基であり；Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、かつＸはＨまたはＣＯＯＨであり；かつＲ４は、＝ＯまたはＨ２である。）
で表される、１種または複数種の化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、他の二飽和ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンスフィンゴミエリンもしくは他のセラミド、ダイズ由来のレシチン油、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＬ−ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ダイズホスファチジルコリン（ダイズＰＣもしくはＰＣＳ）、卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣもしくはＰＣＥ）、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択されるホスファチジルコリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記溶媒が、アセトン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトンなど、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、イソプロピルアセタート、ブチルアセタート、イソブチルアセタートなどのアセタート、アセトニトリルなどのニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル、エチルホルマートなどのホルマート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトロメタン、四塩化炭素、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、１，１−ジクロロエテン、１，２−ジクロロエテン、ジクロロメタン、１，１，１−トリクロロエタンなどの塩化炭化水素、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記所望のレベルが、ＦＤＡによって認可されたレベル以下、または溶媒の検出限界以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記溶媒がアセトンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ヒトを含む動物に治療有効量の組成物を投与するステップを含む方法であって、
前記組成物が、１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤおよび１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを、ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップと、
所望のレベルまで前記溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップとを含む方法によって調製される方法。
【請求項１２】
組成物を調製する前記方法が、
除去するステップの前に、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤと結合していないＰＬまたは結合される量より過剰なＰＬがあれば沈殿させるのに十分な冷却時間、かつ冷却温度で前記溶液を冷却するステップと、
沈殿物があれば分離して溶液を生成させるステップと
をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記投与するステップが、経口投与ステップ、経腸投与ステップ、直腸投与ステップ、局所投与ステップ、無菌製剤用の静脈内投与ステップ、無菌製剤用の動脈内投与ステップ、無菌製剤用の筋肉内投与ステップ、無菌製剤用の組織への直接注射投与ステップ、無菌製剤用の皮下ポンプ投与ステップ、または経鼻投与ステップからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびＣＯＸ−２阻害剤からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＮＳＡＩＤが、フェノプロフェンカルシウム（Ｎａｌｆｏｎ（登録商標））、フルルビプロフェン（Ａｎｓａｉｄ（登録商標））、スプロフェン、ベノキサプロフェン、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ（登録商標）、Ａｄｖｉｌ（登録商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｄｕｉｓ、Ｏｒｕｖａｌｌ（登録商標））、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ（登録商標））、Ａｎａｐｒｏｘ（登録商標）、Ａｆｌａｘｅｎ（登録商標））、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（登録商標））、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））、ジクロフェナクカリウム（Ｃａｔａｆｌａｍ（登録商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ（登録商標））、ケトロラクトロメタミン（Ａｃｕｌａｒ、Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標）、筋肉内用）、ケトロラク（経口用Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標））、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（登録商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（登録商標））、トルメチンナトリウム（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（登録商標））、メクロフェナマートナトリウム（Ｍｅｃｌｏｍｅｎ（登録商標））、メフェナム酸（Ｐｏｎｓｔｅｌ（登録商標））、ピロキシカム（Ｄｏｌｉｂｉｄ（登録商標））、ジフルニサル（Ｆｅｌｄｅｎｅ（登録商標））、アスピリン、オキシフェンブタゾン（Ｔａｎｄｅａｒｉｌ（登録商標））、フェニルブタゾン（Ｂｕｔａｚｏｌｉｄｉｎ（登録商標））、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標））、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェン、アスピリン、サリチル酸、ナプロキセン、インドメタシン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フルオビプロフェン、ケトプロフェン、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＯＸ−２阻害剤が、セレコキシブ、ルミラコキシブ、メロキシカム、メロキシカム、ピロキシカム、もしくは新規に認可されたＣＯＸ−２阻害剤、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記リン脂質が、一般式：
【化２】
2008515977.tif 000005
（式中、Ｒ１およびＲ２は、炭素原子８〜３２個の範囲の飽和または不飽和置換基であり；Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、かつＸはＨまたはＣＯＯＨであり；かつＲ４は、＝ＯまたはＨ２である。）
で表される、１種または複数種の化合物である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、他の二飽和ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンスフィンゴミエリンもしくは他のセラミド、ダイズ由来のレシチン油、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＬ−ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ダイズホスファチジルコリン（ダイズＰＣもしくはＰＣＳ）、卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣもしくはＰＣＥ）、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択されるホスファチジルコリンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記溶媒が、アセトン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトンなど、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、イソプロピルアセタート、ブチルアセタート、イソブチルアセタートなどのアセタート、アセトニトリルなどのニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル、エチルホルマートなどのホルマート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトロメタン、四塩化炭素、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、１，１−ジクロロエテン、１，２−ジクロロエテン、ジクロロメタン、１，１，１−トリクロロエタンなどの塩化炭化水素、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記所望のレベルが、ＦＤＡによって認可されたレベル以下、または溶媒の検出限界以下である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
前記溶媒がアセトンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項２３】
１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬおよび１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの精製された結合複合体を含む組成物であって、ＰＬが中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である極性溶媒に前記組成物を溶解させた場合にＰＬの沈殿を防ぐのに十分な量でｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが存在する重量比のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤとＰＬを有する組成物。
【請求項２４】
前記ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびＣＯＸ−２阻害剤からなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＮＳＡＩＤが、フェノプロフェンカルシウム（Ｎａｌｆｏｎ（登録商標））、フルルビプロフェン（Ａｎｓａｉｄ（登録商標））、スプロフェン、ベノキサプロフェン、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ（登録商標）、Ａｄｖｉｌ（登録商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｄｕｉｓ、Ｏｒｕｖａｌｌ（登録商標））、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ（登録商標））、Ａｎａｐｒｏｘ（登録商標）、Ａｆｌａｘｅｎ（登録商標））、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（登録商標））、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））、ジクロフェナクカリウム（Ｃａｔａｆｌａｍ（登録商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ（登録商標））、ケトロラクトロメタミン（Ａｃｕｌａｒ、Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標）、筋肉内用）、ケトロラク（経口用Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標））、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（登録商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（登録商標））、トルメチンナトリウム（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（登録商標））、メクロフェナマートナトリウム（Ｍｅｃｌｏｍｅｎ（登録商標））、メフェナム酸（Ｐｏｎｓｔｅｌ（登録商標））、ピロキシカム（Ｄｏｌｉｂｉｄ（登録商標））、ジフルニサル（Ｆｅｌｄｅｎｅ（登録商標））、アスピリン、オキシフェンブタゾン（Ｔａｎｄｅａｒｉｌ（登録商標））、フェニルブタゾン（Ｂｕｔａｚｏｌｉｄｉｎ（登録商標））、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標））、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェン、アスピリン、サリチル酸、ナプロキセン、インドメタシン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フルオビプロフェン、ケトプロフェン、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ＣＯＸ−２阻害剤が、セレコキシブ、ルミラコキシブ、メロキシカム、メロキシカム、ピロキシカム、もしくは新規に認可されたＣＯＸ−２阻害剤、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２８】
前記リン脂質が、一般式：
【化３】
2008515977.tif 000006
（式中、Ｒ１およびＲ２は、炭素原子８〜３２個の範囲の飽和または不飽和置換基であり；Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、かつＸはＨまたはＣＯＯＨであり；かつＲ４は、＝ＯまたはＨ２である。）
で表される、１種または複数種の化合物である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２９】
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、他の二飽和ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンスフィンゴミエリンもしくは他のセラミド、ダイズ由来のレシチン油、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＬ−ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ダイズホスファチジルコリン（ダイズＰＣもしくはＰＣＳ）、卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣもしくはＰＣＥ）、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択されるホスファチジルコリンである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３０】
前記溶媒が、アセトン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトンなど、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、イソプロピルアセタート、ブチルアセタート、イソブチルアセタートなどのアセタート、アセトニトリルなどのニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル、エチルホルマートなどのホルマート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトロメタン、四塩化炭素、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、１，１−ジクロロエテン、１，２−ジクロロエテン、ジクロロメタン、１，１，１−トリクロロエタンなどの塩化炭化水素、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３１】
前記溶媒がアセトンである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３２】
前記重量比が、少なくとも１：２のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤとＰＬである、請求項２３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００４年１０月１２日に出願された米国特許仮出願第６０／６１７，７３２号明細書および２００５年５月１９日に出願された第６０／６８２，４４０号明細書に対して仮の優先権を主張する。
【０００２】
政府の権益
本出願において開示される主題の一部は、ＮＩＨ助成金番号Ｒ４２  ＤＫ０６３８８２のもとに米国政府によって供給される資金をある程度受けた。
【０００３】
本発明は、リン脂質（ＰＬ）ならびに選択的および／または非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）の高純度の結合複合体、ならびにそれらを作製および使用するための方法に関する。本発明はまた、リン脂質（ＰＬ）が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒におけるリン脂質の溶解度を上昇させる能力に基づいて、薬学的物質（ＰＡ）を含む化合物をスクリーニングするための方法にも関する。
【０００４】
より具体的には、本発明は、リン脂質（ＰＬ）ならびに選択的および／または非選択的非ステロイド系抗炎症薬の高純度の結合複合体、ならびにそれらを作製および使用するための方法であって、それらの複合体が極性溶媒に可溶性のＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ複合体を含む方法に関する。この方法は、選択的および／または非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）ならびにリン脂質（ＰＬ）を極性溶媒に添加するステップと、次いで、減圧下もしくは非減圧下で、冷却して、もしくは冷却せずにその極性溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を形成させるステップとを含む。本発明はまた、薬学的物質（ＰＡ）をスクリーニングするための方法であって、ＰＬが中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒にＰＡを添加するステップと、次いでＰＬを添加して、ＰＬの溶解度が上昇するかどうか判定するステップとを含む方法にも関する。
【背景技術】
【０００５】
リン脂質は、胃十二指腸潰瘍および出血が最も一般的である、胃腸管（ＧＩ）、肝臓、および腎臓の有害な副作用を伴うことが周知である選択的および非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤおよび／またはＣＯＸ−２阻害剤が含まれるｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）などの薬学的物質に結合し、かつこれらの有害な健康上のリスクを排除しない場合には低減させる傾向があることが公知である。
【０００６】
以下の外国特許、米国特許、および係属中の米国特許出願は、本出願に関連する従来技術を示す：参照により本明細書に組み入れられる、ＧＢ００９２１２１、ＵＳ４，３３２，７９５；ＵＳ４，３６９，１８２；ＵＳ４，３７８，３５４；ＵＳ４，４２１，７４７；ＵＳ４，５２８，１９３；ＵＳ４，６８７，７６６；ＵＳ４，７４８，１５７；ＵＳ４，９１８，０６３；ＵＳ４，９５０，６５６；ＵＳ５，０３２，５８５；ＵＳ５，０４３，３２９；ＵＳ５，７６３，４２２；ＵＳ５，９５５，４５１；ＵＳＳＮ１０／４３３，４５４；ＵＳＳＮ１０／９０９７４８、およびＵＳＳＮ１０／９０９７５１。これらの参考文献は、リン脂質が、ＮＳＡＩＤのＧＩ毒性を減少または消失させ得ることを実証した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
リン脂質がＮＳＡＩＤのＧＩ毒性を減少させ、かつ結合複合体を形成することは公知であるが、高純度のＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体、それらを作製および使用するための方法が当技術分野において必要とされている。リン脂質と結合複合体を形成することができる薬学的物質をスクリーニングするための方法もまた、当技術分野において必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
高純度のＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合組成物を調製するための方法
本発明は、１種の選択的および／もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤならびに１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップを含む方法であって、その精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体が、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの不在下で溶媒に溶解できるＰＬの量より過剰な量のＰＬを含む方法を提供する。一実施形態では、過剰なＰＬの量は、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの量に基づき、ＰＬが溶液から沈殿し始める量より少ない。ＰＬとｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの所望の比率が実現した後で、蒸発、凍結乾燥、減圧蒸留、真空蒸発、強制ガス流による（ｆｏｒｃｅ  ｇａｓ）蒸発、回転式蒸発を含む任意の標準的な溶媒除去プロセス、または任意の同様な溶媒のストリッピングもしくは除去プロセスによって、溶媒を除去する。
【０００９】
精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物
本発明は、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物であって、その精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体が、ＰＬが中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である極性有機溶媒にｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの不在下で溶解できるＰＬの量より多量のＰＬを含む組成物を提供する。
【００１０】
本発明はまた、本発明の精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む医薬品であって、軟カプセル剤または硬カプセル剤、錠剤、水不浸透性のコーティングを有する錠剤、生体適合性油中の分散剤、水溶液中の分散剤の形態である医薬品も提供する。
【００１１】
医薬品を投与するための方法
本発明はまた、有効量の医薬品を動物に投与するステップを含む、ヒトを含む動物に医薬品を投与するための方法であって、その医薬品が、１種の選択的および／もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤならびに１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップによって調製され、その精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体が、ＮＳＡＩＤの不在下で溶媒に通常溶解できるＰＬの量より過剰な量のＰＬを含む方法も提供する。一実施形態では、過剰なＰＬの量は、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの量に基づき、ＰＬが溶液から沈殿し始める量より少ない。ＰＬとｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの所望の比率が実現した後で、蒸発、凍結乾燥、減圧蒸留、真空蒸発、強制ガス流による蒸発、回転式蒸発を含む任意の標準的な溶媒除去プロセス、または任意の同様な溶媒のストリッピングもしくは除去プロセスによって、溶媒を除去する。
【００１２】
化合物をスクリーニングするための方法
本発明はまた、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中でリン脂質（ＰＬ）を可溶化する能力に基づいて化合物をスクリーニングするための方法も提供する。本発明者は、このような溶媒におけるＰＬの溶解度を上昇させる化合物が、ＰＬとの結合複合体を形成する化合物であると考える。この方法は、ＰＬが中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒に、その溶媒におけるＰＬの溶解度を上回り、その結果、沈殿物が存在するような量のＰＬを添加して、ＰＬ−溶媒混合物を形成させるステップを含む。ＰＬ−溶媒混合物が形成された後、攪拌しながら、かつ加熱下または非加熱下で、試験化合物をＰＬ−溶媒混合物に添加する。沈殿物の一部またはすべてが溶解する場合には、次いで、沈殿物を実質的に完全に無くすのに必要とされる化合物の量、または試験化合物を用いて溶液中に引き込み得るＰＬの量を決定する。沈殿物を全く含まない溶液が形成される場合には、次いで溶媒を除去して、ＰＬおよび化合物の組成物を形成させる。本発明者は、このような溶媒中でＰＬを可溶化することができる化合物が、ＰＬとの結合複合体を形成することができるものであり、かつ結果として生じる組成物が、精製されたＰＬ−化合物複合体に相当すると考える。   
【００１３】
本発明は、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中でＰＬを可溶化する能力に基づいて化合物をスクリーニングするための代替方法を提供する。この方法は、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中にスクリーニングしようとする化合物を溶解させるステップを含む。化合物溶液を調製した後、その溶媒における溶解度を上回る量のＰＬを、攪拌しながら、かつ加熱下または非加熱下で、添加する。沈殿が全く形成しない場合、または沈殿が形成され、次いで消失する場合には、次に、残留する沈殿物の形成をもたらすのに必要とされるＰＬの量を決定する。沈殿物を全く含まない溶液が形成される場合には、次いで溶媒を除去して、ＰＬおよび化合物の組成物を形成させることができ、この組成物はこの溶媒に可溶性であり、かつ精製されたＰＬ−化合物結合複合体に相当すると考えられる。一実施形態では、スクリーニング方法は、ＰＬ−ＰＡ結合複合体を含む組成物を形成させるための薬学的に活性な物質（ＰＡ）をスクリーニングすることを対象としている。新しいＰＬ−ＰＡ組成物は、結合複合体中のＰＬの存在から利益を受けることができ、このような利益としては、ＧＩ毒性の減少、化合物のバイオアベイラビリティの増大、膜透過性の上昇、およびＰＡの治療活性の増大、またはリン脂質に関連することが公知である他の同様な利益を挙げることができる。別の実施形態では、本方法は、他の産業分野および研究分野において使用するためのこのようなＰＬ複合体を形成する化学物質を発見するために使用される。
本発明は、添付した例示的な図面と共に以下の詳細な説明を参照すると、より良く理解することができる。図面中、同様の要素には同じ番号をつけた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明者は、１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のリン脂質（ＰＬ）ならびに１種の選択的および／もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤおよびＣＯＸ−２阻害剤が含まれるｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤを含む濃縮および／または精製された組成物であって、これらの複合体が、ＰＬが中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である極性溶媒におけるＰＬの溶解度をＮＳＡＩＤが上昇させることを特徴とする、組成物を調製できることを発見した。溶媒を除去すると、ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ組成物は、実質的に純粋なＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物に相当する。本発明者は、このような高純度のＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ組成物が、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ単独と比べて、高い胃腸管（ＧＩ）安全性または低いＧＩ毒性を有することを発見した。本発明者はまた、精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物が、上記の極性溶媒プロセスにおいて形成されていないＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物と同様、および多くの場合、より優れたＧＩ安全性特性を有し、当然、ＮＳＡＩＤ単独よりも優れたＧＩ安全性および高い有効性を有することも発見した。これらの精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物はまた、従来の方法によって作製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物よりも、ｉｎ  ｖｉｖｏの動物試験において、同様、および多くの場合、より優れたＮＳＡＩＤ有効性を示す。別段の指定が無い限り、比率は重量パーセント（ｗｔ％）比率であり、かつすべての処方は、重量パーセント（ｗｔ％）で表される。ＰＩと選択的および非選択的非ステロイド系抗炎症薬（例えば、従来のＮＳＡＩＤおよびＣＯＸ−２阻害剤）の間で形成される結合複合体の正確な性質および構造を決定するために、様々な分析的証拠が現在示されているが、このような複合体の正確な性質および構造は、なお考察すべき事案である。したがって、結合複合体（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｘ）または結合複合体（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）という用語は、ＰＬとｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ、またはアセトンなどの極性溶媒におけるＰＬの溶解度を上昇させる他の任意の化合物との間の任意の化学的および／もしくは物理的結合体を意味することを意図している。
【００１５】
本発明の新規な方法およびそれに由来する組成物は、ＰＬがある種の極性有機溶媒において限られた溶解度を有し、かつそのような溶媒におけるＰＬの溶解度をＮＳＡＩＤが実質的に上昇させるという本発明者による観察結果に基づいている。本発明者は、このＰＬ溶解度の上昇が、ＰＬとＮＳＡＩＤの結合複合体の形成によって引き起こされると考える。実際に、ＮＳＡＩＤは、溶媒に溶解できるＰＬの量を、溶媒１５ｍＬ当たり数グラム（２グラム未満／１５ｍＬ）から溶媒１５ｍＬ当たり５０グラム超に上昇させることができる。さらに、溶媒を除去した後に結果として生じる組成物が、精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体に相当し、これらの精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体をベースとしてＮＳＡＩＤ組成物を調製することができると本発明者は考え、かつ分析データによって裏付ける。次いで、このようなＮＳＡＩＤ組成物を、炎症、疼痛、発熱、血栓症、またはＮＳＡＩＤが治療効果を有することが公知である他の症状および／もしくは状態（例えば、癌、心臓疾患、アルツハイマー病）を改善するために、ヒトを含む動物に、経口的に、経腸的に、直腸経由で、局所的に、静脈内に、動脈内に、または組織部位に直接、投与することができる。
【００１６】
さらに、本発明の方法に従って調製した、精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体、およびそれから作製された組成物は、一般に、ＮＳＡＩＤ単独または従来の方法によって調製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物よりも優れた胃腸管（ＧＩ）安全性および高い治療有効性を有することが示された。本発明者は、本発明の方法により、ＰＬからの利益を受けると考えられる他の精製されたリン脂質−薬学的物質（ＰＬ−ＰＡ）結合複合体の調製が可能になると考える。
【００１７】
本発明の組成物は、単独で、または本出願に関連する従来技術を示す以下の外国特許、米国特許、および係属中の米国特許出願において説明されている組成物と組み合わせて使用することができる：参照により本明細書に組み入れられる、ＧＢ００９２１２１、ＵＳ４，３３２，７９５；ＵＳ４，３６９，１８２；ＵＳ４，３７８，３５４；ＵＳ４，４２１，７４７；ＵＳ４，５２８，１９３；ＵＳ４，６８７，７６６；ＵＳ４，７４８，１５７；ＵＳ４，９１８，０６３；ＵＳ４，９５０，６５６；ＵＳ５，０３２，５８５；ＵＳ５，０４３，３２９；ＵＳ５，７６３，４２２；ＵＳ５，９５５，４５１；ＵＳＳＮ１０／４３３，４５４；ＵＳＳＮ１０／９０９７４８、およびＵＳＳＮ１０／９０９７５１。
【００１８】
本発明の組成物は、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤおよびＰＬが効果的であることが現在公知であるか、または後に公知になる任意の医学的状態を治療するのに使用することができる。したがって、これらの組成物は、疼痛、炎症、発熱、血小板凝集などを軽減もしくは抑制するために、かつ／または、関節炎（リウマチ様疾患および変形関節炎）、他の慢性炎症性疾患、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷、末梢神経障害、他の神経学的障害、アルツハイマー病、血栓症、心筋梗塞、他の心血管疾患、それだけには限らないが、結腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、白血病、膵臓癌、食道癌、もしくは他の同様な癌を含めて、いくつかの種類の癌など、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが効果的であることが現在公知であるか、もしくは後に公知になる疾患を治療もしくは予防するために、使用することができる。     
【００１９】
本発明は、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を作製するための方法に広範に関係する。本方法は、一般に、１種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤまたは複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤおよび１種のＰＬまたは複数種のＰＬを、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップを含み、その精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体が、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ組成物のいずれかと比べて、高いＧＩ安全性、ならびに同様または高い治療有効性および／もしくは治療効果を提供する。
【００２０】
本発明はまた、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ組成物と比べて優れたＧＩ安全性および改善された有効性を一般に有する精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物にも広範に関係する。精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体は、所与の温度で極性溶媒に溶解することができ、その際、ＰＬの量は、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの不在下、これらの条件下でその溶媒に溶解できるＰＬの量を上回る。
【００２１】
精製されたＰＬ−結合複合体を調製するための方法
本発明の一実施形態では、１種のＮＳＡＩＤまたは複数種のＮＳＡＩＤおよび１種のＰＬまたは複数種のＰＬを、精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップを含む方法が開示される。溶媒除去後、精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体またはそれらから作製される組成物は、従来の方法で調製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体と比べて、同様、および多くの場合、高いＧＩ安全性、ならびにＮＳＡＩＤ単独と比べて優れたＧＩ安全性を提供する。
【００２２】
本発明の別の実施形態では、１種のＮＳＡＩＤまたは複数種のＮＳＡＩＤおよび１種のホスファチジルコリン（ＰＣ）または複数種のＰＣを、溶媒除去後に精製されたＰＣ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を生成するように適合させた条件下で、極性溶媒中で接触させるステップを含む方法が開示される。
【００２３】
本発明の別の実施形態では、ＮＳＡＩＤおよびＰＬを完全に溶解させるのに十分な溶解時間および溶解温度で、ある量のＮＳＡＩＤおよびある量のＰＬを極性溶媒に添加するステップを含む方法が開示される。ＮＳＡＩＤおよびＰＬが溶解したら、最初に添加したＮＳＡＩＤの量を基準として結合量のＰＬより過剰なＰＬがあれば沈殿させるのに十分な冷却時間、かつ十分な冷却温度まで溶液を冷却する。結合量は、所与の条件下でその量のＮＳＡＩＤと結合する、すなわち冷却した際にＰＬ沈殿が全く形成されない、ＰＬの最大量である。当然、ＰＬの最大量は、各ＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物および使用する各溶媒に応じて変動する。冷却した際に形成される沈殿があれば、ろ過、遠心分離などによって除去する。沈殿除去後、所望のレベル、すなわちＦＤＡに求められるレベル未満、または溶媒の検出限界未満まで溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を生成させる。
【００２４】
本発明の別の実施形態では、ＮＳＡＩＤおよびＰＣを完全に溶解させるのに十分な溶解時間および溶解温度で、ＮＳＡＩＤおよびＰＣを極性溶媒に添加するステップを含む方法が開示される。沈殿がほとんどまたは全く無い状態まで溶解した後、所望の低いレベル、すなわちＦＤＡに求められるレベル未満、または溶媒の検出限界未満まで溶媒を除去するのに十分な除去時間および除去温度での溶媒除去ステップによって溶媒を除去して、精製されたＰＣ−ＮＳＡＩＤ結合複合体または組成物を生成させる。
【００２５】
本発明の別の実施形態では、ＮＳＡＩＤおよびＰＬを完全に溶解させてＰＬ−ＮＳＡＩＤ溶液を形成させるのに十分な時間および温度で、極性溶媒中でＮＳＡＩＤまたは複数種のＮＳＡＩＤおよびＰＬまたは複数種のＰＬを混合するステップを含む方法が開示される。次いで、過剰なＰＬがあれば溶液から沈殿させるのに十分な沈殿温度までＰＬ−ＮＳＡＩＤ溶液を急速冷却する。温度を急激に低下させることによって、遊離のＰＬが溶液から沈殿して、濃縮または精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合組成物を形成させることができる。次いで、非減圧下もしくは減圧下、かつ／または加熱下もしくは非加熱下で、不活性雰囲気下での蒸発によって溶媒を除去して、濃縮または精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合組成物を回収する。あるいは、凍結乾燥、フリーズドライ法、または他の同様な溶媒除去プロセスによって溶媒を除去することもできる。冷却時間中にＰＬの沈殿をもたらさないＰＬとＮＳＡＩＤの特定の比率が決定されたら、その場合は、結果として生じるＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合組成物の活性を失わずに、冷却ステップおよびあり得るろ過ステップを排除することができる。
【００２６】
本発明の別の実施形態では、ＣＯＸ−２阻害剤およびＰＣを完全に溶解させるのに十分な溶解時間および溶解温度で、ＣＯＸ−２阻害剤およびＰＣを極性溶媒に添加するステップを含む方法が開示される。沈殿がほとんどまたは全く無い状態まで溶解した後、所望の低いレベル、すなわちＦＤＡに求められるレベル未満、または溶媒の検出限界未満まで溶媒を除去するのに十分な除去時間および除去温度での溶媒除去ステップによって溶媒を除去して、精製されたＰＣ−ＣＯＸ−２結合複合体または組成物を生成させる。
【００２７】
精製されたＰＬ−結合複合体を投与するための方法
本発明の別の実施形態では、投与プロトコールに従って、ヒトを含む動物に、薬学的に有効な量の本発明の精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を投与するステップを含む方法が開示される。投与プロトコールとしては、１種または複数種の投与ステップを挙げることができ、各投与ステップは、経口投与ステップ、経腸投与ステップ、直腸投与ステップ、局所投与ステップ、鼻腔内投与ステップ、無菌製剤用の静脈内投与ステップ、無菌製剤用の動脈内投与ステップ、無菌製剤用の組織への直接注射投与ステップ、および鼻腔中への噴霧または鼻洗浄などの経鼻送達投与ステップからなる群から選択され得る。当然、投与経路ならびに本発明の濃縮および／または精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体の形態に応じて、組成物は、例えば、安定性（例えば貯蔵寿命）を高めるように、分散を促進するように、バイオアベイラビリティを向上させるように、治療活性を最適化するように適合させた他の成分も含み得る。非経口投与（例えば、静脈内投与、動脈内投与、組織への直接投与、または鼻腔中への噴霧もしくは鼻洗浄などの経鼻送達投与ステップ）の場合、２００４年８月２日に出願され、かつ参照により本明細書に組み入れられる、同時係属中の米国特許出願第１０／９０９７４８号明細書において説明されているように、本発明の濃縮および／または精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を、一般に、送達前に生理食塩水または他の許容される等張性溶液中に分散、懸濁、または溶解させ、かつ滅菌ろ過する。
【００２８】
精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物
本発明のいくつかの実施形態では、これらの組成物は、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ組成物と比べて、優れたＧＩ安全性および改善された有効性を有する精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態では、薬剤は、本発明の精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含み、この薬剤は、軟ゼラチンカプセル剤または硬ゼラチンカプセル剤、錠剤、水不浸透性のコーティングを有する錠剤、生体適合性油中の分散剤、水性懸濁剤などの形態である。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、ＰＬ−ＮＳＡＩＤ混合物の極性溶媒に可溶性の抽出物に由来する濃縮および／または精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体であって、ＮＳＡＩＤ単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物と比べて優れたＧＩ安全性および改善された有効性を有する濃縮および／または精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態では、薬剤は、ＰＬ−ＮＳＡＩＤ混合物の極性溶媒に可溶性の抽出物に由来する精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含み、この薬剤は、ＮＳＡＩＤ単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合組成物と比べて、優れたＧＩ安全性および改善された有効性を有する。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、ＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤混合物の極性溶媒に可溶性の抽出物に由来する濃縮および／または精製されたＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤結合複合体であって、ＣＯＸ−２阻害剤単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤組成物と比べて優れたＧＩ安全性および改善された有効性を有する濃縮および／または精製されたＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤結合複合体を含む。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態では、薬剤は、ＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤混合物の極性溶媒に可溶性の抽出物に由来する精製されたＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤結合複合体を含み、この薬剤は、ＣＯＸ−２阻害剤単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ＣＯＸ−２阻害剤結合組成物と比べて、優れたＧＩ安全性および改善された有効性を有する。
【００３４】
大半のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤに関して、ＰＬの沈殿をもたらさない重量比は、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ対ＰＬが少なくとも１：２である。イブプロフェン、フルルビプロフェン、またはナプロキセンのリン脂質製剤の場合、アセトンに可溶性である結合複合体を生成し、かつ特にＧＩ毒性において、ＮＳＡＩＤ単独と同様、および多くの場合、より優れた特性を有する組成物を生成する重量比は、少なくとも１：２である。大半の実施形態において、重量比１：２は、商業的用途のために許容されるデータ（ｍａｔｅｒｉａｌ）に相当する。アスピリンおよび他のサリチル酸誘導体の場合、１：２の重量比は効果的であるが、約１：３〜約１：４の重量比の方が、いくらか優れたＧＩ安全性特性を有するように思われる。
【００３５】
化合物をスクリーニングするための方法
本発明はまた、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中にＰＬを可溶化する能力に基づいて化合物をスクリーニングするための方法にも関する。本方法は、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中に、ＰＬ沈殿物を形成させるのに十分な量のＰＬを溶解させるステップを含む。ＰＬ沈殿物を有するＰＬ溶液が形成されたら、攪拌しながら、かつ加熱下または非加熱下で、化合物をそれに添加する。沈殿物の一部またはすべてが溶解する場合には、次いで、沈殿物を実質的に完全に無くすのに必要とされる化合物の量を決定する。沈殿物を全く含まない溶液が形成される場合には、次いで溶媒を除去して、この溶媒に溶解できるＰＬおよび化合物の組成物を形成させる。本発明者は、ＰＬを可溶化することができる化合物が、ＰＬとの結合複合体を形成することができるものであると考える。化合物が生物活性、すなわち薬学的活性または栄養補助的活性のいずれかを有する場合には、化合物は、その化合物の有効性を改変する特質を有する可能性がある。
【００３６】
本発明はまた、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中にＰＬを可溶化する能力に基づいて化合物をスクリーニングするための代替方法にも関する。この方法は、リン脂質が中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である溶媒中にスクリーニングしようとする化合物を溶解させるステップを含む。化合物溶液を調製した後、その溶媒における溶解度を上回る量のＰＬを、攪拌しながら、かつ加熱下または非加熱下で、添加する。沈殿が全く形成しない場合、または沈殿が形成され、次いで消失する場合には、次に、沈殿物の形成をもたらすのに必要とされるＰＬの量を決定する。沈殿物を全く含まない溶液が形成される場合には、次いで溶媒を除去して、この溶媒に溶解できるＰＬおよび化合物の組成物を形成させることができる。本発明者は、ＰＬを可溶化することができる化合物が、ＰＬとの結合複合体を形成することができるものであると考える。化合物が生物活性、すなわち薬学的活性または栄養補助的活性のいずれかを有する場合には、化合物は、その化合物の有効性を改変する特質を有する可能性がある。
【００３７】
本発明の方法の別の実施形態は、極性溶媒中にＰＬおよび薬学的に活性な物質（ＰＡ）を溶解させるステップを含む。一般に、ＰＬおよびＰＡの溶解を促進するために、極性溶媒を加熱して、室温と選択した溶媒の沸点の間の温度に昇温させる。いくつかの実施形態では、この昇温された温度は、約３０℃〜約９０℃である。別の実施形態では、この昇温された温度は、約３５℃〜約７５℃である。別の実施形態では、この昇温された温度は、約４０℃〜約６０℃である。溶解は、一般に、溶解および十分な反応物の相互作用を促進するために混合または攪拌しながら実施し、かつＰＬおよびＰＡが溶媒中に完全に溶解するまで継続する。いくつかの実施形態では、溶解は、一般に、約１０分〜約１２０分の間に起こる。別の実施形態では、溶解は、約１５分〜約９０分の間に起こるが、使用するＰＡ、ＰＬ、および極性溶媒に応じてより短い時間およびより長い時間が使用され得る。
【００３８】
溶解が完了したら、次いで、この溶液を、ＰＬ−ＰＡ結合複合体の量より過剰なＰＬがあれば溶液から沈殿させるのに十分な冷却温度まで冷却する。この冷却温度は、一般に、ＰＡおよびＰＬを完全に溶解させるのに使用される昇温された温度より低い温度であり、かつ未結合ＰＬを最終組成物から除去することを可能にする。冷却温度は、使用されるＰＡ、使用されるＰＬ、および使用される溶媒に依存する。本発明の方法のいくつかの実施形態では、冷却温度は、ＰＡおよびＰＬを溶解させるのに使用される昇温された温度より低く、かつ０℃以上である。本発明の方法の別の実施形態では、冷却温度は、ほぼ室温（約２５℃）〜約０℃である。本発明の方法の別の実施形態では、冷却温度は、約０℃〜約２０℃である。本発明の方法の別の実施形態では、冷却温度は、約０℃〜約１０℃である。本発明の方法の別の実施形態では、冷却温度は、約０℃〜約４℃である。
【００３９】
沈殿が形成する場合には、次いで、それだけには限らないが、重力ろ過、減圧ろ過、加圧ろ過、遠心分離、半透膜による分離、ミリポアろ過を含めて、当技術分野において公知である任意の技術、または上清から沈殿物を分離除去するための他の同様な方法によって、沈殿物を除去する。冷却後、過剰なＰＬがあれば沈殿させ、かつ精製されたＰＬ−ＰＡ結合複合体を含む上清を生成するのに十分な冷却時間、冷却温度で溶液を維持する。いくつかの実施形態では、冷却時間は、約１０〜約６０分である。別の実施形態では、冷却時間は、約１５分〜約３０分である。しかし、溶媒およびＰＬ−ＰＡ複合体に応じて、より短い時間またはより長い時間が使用され得る。当然、当業者には、この冷却ステップが、サブステップ、すなわち所与の温度まで冷却し、かつ結果として生じる組成物をその所与の温度で維持するステップを含むことが認識されよう。冷却速度および維持時間の双方とも変動する場合があり、かつ使用されるＰＡ、ＰＬ、および溶媒に依存している。
【００４０】
次いで、溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ＰＡ結合複合体を生成させる。一般に、溶媒の濃度を許容される低濃度以下に低下させるのに十分な蒸発時間、蒸発させることによって溶媒を除去する。いくつかの実施形態では、蒸発は、不活性雰囲気中で実施し、かつ、非減圧下または減圧下で実施することができる。別の実施形態では、溶媒除去技術は、減圧下で液体を回転させ、かつ溶媒除去を促進するための加熱を含む、回転式蒸発である。別の実施形態では、溶媒除去のための技術は、無視できる量の溶媒しか組成物中で検出され得なくなるまで、長時間に渡って、減圧下のデシケーター中に溶液を入れて置くことである。別の実施形態では、溶媒除去技術は、真空オーブンを用いた溶媒除去であり、その際、オーブンの温度は一般に、溶媒の沸点の約±１０°以内の熱さである。別の実施形態では、沸点が約１００℃より低い溶媒に対する溶媒除去技術は、直留蒸留、フラッシュ蒸留、または減圧蒸留である。いくつかの実施形態では、減圧蒸留が好ましい。当然、直留蒸留は、ＰＡ、ＰＬ、またはＰＬ−ＰＡ結合複合体に蒸留温度が悪影響を及ぼさないという前提で、常に選択肢である。
【００４１】
本発明者は、溶媒除去のためのいくつかの蒸発および蒸留プロセスを記載したが、それだけには限らないが、噴霧乾燥、フリーズドライ法、凍結乾燥などを含めて、他の公知の技術もまた、使用することができる。
【００４２】
当然ながら、固体、半固体、液体、もしくは油であり得る、結果として生じる生成物が、実質的に溶媒を含まないこと、または最終生成物中の溶媒濃度が望ましい低数値以下であることを条件として、これらの溶媒除去技術のうちのいずれかを個別にまたは集合的に使用することができる。溶媒の望ましい低数値は、一般に、薬学的物質の純度に関する規制においてＦＤＡによって規定されているレベル以下である。いくつかの実施形態では、この低数値は、薬剤組成物中に残存する溶媒の測定により承認される、認可された分析技術に対する検出限界以下の数値である。
【００４３】
溶媒の濃度を定量的に低下させるか、または所望の低数値まで低下させた後、最終生成物を後で使用するために保存するか、または、丸剤（コーティングもしくは非コーティング）、軟もしくは硬ゲルカプセル剤、注射剤、軟膏剤など所望の送達系に直ちに加工することができる。保存する場合、いくつかの実施形態では、不活性雰囲気下の容器中に最終生成物を入れる。
【００４４】
一実施形態では、過剰なＰＬがあれば溶液から沈殿させるのに十分な沈殿温度まで溶液を急速冷却する。温度を急激に低下させることによって、遊離もしくは結合していないＰＬの沈殿がより強く促進されて、優れた濃縮および／または精製されたＰＬ−ＰＡ結合組成物を生成させると考えられている。
【００４５】
上記のスクリーニング方法は、薬学的に活性な物質を含む配合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ）がＰＬとの結合複合体を形成するかどうかを決定するのに適しているが、これらの方法は、ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を製造するのにも適している。しかし、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤとＰＬの範囲が一旦決定されたら、その場合は、この方法は、複合体形成とそれに続く単純な溶媒除去を促進するのに十分な溶解温度および溶解時間で溶媒中に成分を混合するステップに単純に移行し得る。結果として生じる組成物は、しばしば、均質な油または均質な粘性液体である。
【００４６】
適切な投与技術
適切な投与手順には、それだけには限らないが、経口投与、経腸投与、直腸投与、局所投与、無菌製剤用の静脈内投与、無菌製剤用の動脈内投与、無菌製剤用の組織への直接注射投与、筋肉内投与、皮下マイクロポンプ投与、または鼻腔中への噴霧もしくは鼻洗浄によるものなどの経鼻投与が含まれる。さらに、これらの投与の１種または複数種を組み合わせて１つの投与プロトコールにすることもできる。したがって、投与プロトコールは、本発明の組成物の持続的、定期的、または間欠的な経口投与のような単純なものから、継続的、定期的、または間欠的な、静脈内投与、動脈内投与、組織への直接投与、筋肉内投与、局所投与、経口投与、および経鼻投与のような複雑なものまであり得、より複雑な投与プロトコールは、戦場および他の緊急状況での投与プロトコールに適していると思われる。
【００４７】
当然、投与経路に応じて、本発明の精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体は、例えば、安定性（例えば貯蔵寿命）を高めるように、分散を促進するように、バイオアベイラビリティを向上させるように、治療活性を最適化するように適合させた他の成分も含み得る。
【００４８】
非経口投与（例えば、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、または組織への直接投与）の場合、２００４年８月２日に出願され、かつ参照により本明細書に組み入れられる、同時係属中の米国特許出願第１０／９０９７４８号明細書において説明されているように、本発明の濃縮および／または精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を、一般に、送達前に生理食塩水または他の許容される等張性溶液中に懸濁させ、かつ滅菌ろ過する。
【００４９】
本発明の組成物は、ＰＡ単独または従来の方法で調製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ組成物と比べて優れたＧＩ安全性および改善された有効性を有する、濃縮および／または精製されたＰＬ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１種もしくは複数種のＰＬおよび１種もしくは複数種のＮＳＡＩＤ、またはアセトンのような極性溶媒に溶解するアセトアミノフェンなど化学的に関係した薬学的物質を含む。この組成物において使用するのに非常に適している薬学的物質は、ＧＩ潰瘍、疼痛、消化不良、胸やけ，粘膜炎、炎症、糜爛、出血、および／もしくは穿孔、または他の有害なＧＩ副作用もしくは限定されたバイオアベイラビリティなどそれらの投与の有害な副作用に関連付けられている。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明の薬剤は、本発明の精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含み、この薬剤は、軟ゼラチンカプセル剤または硬ゼラチンカプセル剤、錠剤、水不浸透性のコーティングを有する錠剤、生体適合性油中の分散剤、水性懸濁剤などの形態である。
【００５１】
適切な反応物
本発明において使用するのに適したリン脂質には、それだけには限らないが、一般式：
【００５２】
【化１】
2008515977.tif 000003
（式中、Ｒ１およびＲ２は、炭素原子８〜３２個の範囲の飽和または不飽和置換基であり；Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、かつＸはＨまたはＣＯＯＨであり；かつＲ４は、＝ＯまたはＨ２である。）
で表されるリン脂質、またはそれらの混合物もしくは組合せが含まれる。特に有用な手法であることが判明した本発明のいくつかの実施形態におけるリン脂質化合物は、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＬ−ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、および卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣまたはＰＣｅ）である。飽和リン脂質であるＤＰＰＣでは、飽和脂肪族置換基Ｒ１およびＲ２は、ＣＨ３−（ＣＨ２）１４であり、Ｒ３はＣＨ３であり、かつＸはＨである。不飽和リン脂質であるＤＬＬ−ＰＣでは、Ｒ１およびＲ２は、ＣＨ３−（ＣＨ２）４−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）７であり、Ｒ３はＣＨ３であり、かつＸはＨである。不飽和リン脂質の混合物である卵ＰＣでは、Ｒ１は、主として飽和脂肪族置換基（例えばパルミチン酸もしくはステアリン酸）を含み、かつＲ２は、主として不飽和脂肪族置換基（例えばオレイン酸もしくはアラキドン酸）またはそれらの混合物もしくは組合せである。
【００５３】
両性イオンリン脂質の例示的な例は、それだけには限らないが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、他の二飽和ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンスフィンゴミエリンもしくは他のセラミド、または他の様々な両性イオンのリン脂質、ダイズ由来のレシチン油などの油を含むリン脂質、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＬ−ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ダイズホスファチジルコリン（ダイズＰＣもしくはＰＣＳ）、および卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣもしくはＰＣＥ）などのホスファチジルコリンである。ダイズＰＣの場合、飽和リン脂質（パルミチン酸およびステアリン酸）に加えて、不飽和リン脂質［オレイン酸、リノール酸、およびリノレン酸］の混合物である。いくつかの実施形態では、両性イオンのリン脂質には、それだけには限らないが、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリンまたはそれらの混合物もしくは組合せが含まれる。
【００５４】
適切な選択的および非選択的非ステロイド系抗炎症（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）には、それだけには限らないが、非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）および選択的非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）もしくはＣＯＸ−２阻害剤、またはそれらの混合物もしくは組合せが含まれる。
【００５５】
適切な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）としては、それだけには限らないが、フェノプロフェンカルシウム（Ｎａｌｆｏｎ（登録商標））、フルルビプロフェン（Ａｎｓａｉｄ（登録商標））、スプロフェン、ベノキサプロフェン、イブプロフェン（処方薬Ｍｏｔｒｉｎ（登録商標））、イブプロフェン（２００ｍｇ一般市販薬Ｎｕｐｒｉｎ、Ｍｏｔｒｉｎ１Ｂ（登録商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｄｕｉｓ、Ｏｒｕｖａｌｌ（登録商標））、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ（登録商標））、Ａｎａｐｒｏｘ（登録商標）、Ａｆｌａｘｅｎ（登録商標）、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（登録商標）））などのプロピオン酸系薬物；ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））、ジクロフェナクカリウム（Ｃａｔａｆｌａｍ（登録商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ（登録商標））、ケトロラクトロメタミン（Ａｃｕｌａｒ（登録商標）、Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標）、筋肉内用）、Ｋｅｔｏｒｏｌａｃ（経口用Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標））などの酢酸系薬物；ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（登録商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（登録商標））、トルメチンナトリウム（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（登録商標））などのケトン系薬物；メクロフェナマートナトリウム（Ｍｅｃｌｏｍｅｎ（登録商標））、メフェナム酸（Ｐｏｎｓｔｅｌ（登録商標））などのフェナマート系薬物；ピロキシカム（Ｄｏｌｉｂｉｄ（登録商標））などのオキシカム系薬物；サリチル酸、サリチル酸マグネシウム、ジフルニサル（Ｆｅｌｄｅｎｅ（登録商標））、アスピリンなどのサリチル酸系薬物；オキシフェンブタゾン（Ｔａｎｄｅａｒｉｌ（登録商標））、フェニルブタゾン（Ｂｕｔａｚｏｌｉｄｉｎ（登録商標））などのピラゾリン酸系薬物、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標））など、またはそれらの混合物もしくは組合せが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、アスピリン、サリチル酸、ナプロキセン、インドメタシン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フルオビプロフェン（ｆｌｕｏｂｉｐｒｏｆｅｎ）、ケトプロフェン、およびそれらの混合物または組合せである。
【００５６】
本発明において使用するのに適したＣＯＸ−２阻害剤としては、それだけには限らないが、セレコキシブ、メロキシカム、ルミラコキシブ、メロキシカム、ピロキシカム、もしくは新規に認可されたＣＯＸ−２阻害剤、またはそれらの混合物もしくは組合せが挙げられる。
【００５７】
本発明において使用するのに適した極性溶媒としては、それだけには限らないが、アセトン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、イソプロピルアセタート、ブチルアセタート、イソブチルアセタートなどのアセタート、アセトニトリルなどのニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル、エチルホルマートなどのホルマート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトロメタン、四塩化炭素、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、１，１−ジクロロエテン、１，２−ジクロロエテン、ジクロロメタン、１，１，１−トリクロロエタンなどの塩化炭化水素、またはそれらの混合物もしくは組合せが挙げられる。いくつかの実施形態では、溶媒はアセトンであるが、溶媒の選択は、選択される薬学的物質およびリン脂質に応じて変わる。すなわち、溶媒は容易に薬学的物質を溶解しなければならず、一方、リン脂質は、薬学的物質の不在下で、中程度または低度の溶解度を有していなければならない。いくつかの実施形態では、リン脂質は、昇温された温度でより高い溶解度を有し、かつ低めの温度でより低い溶解度を有する。
【００５８】
適切な補助物質、補助添加物（ｈｅｌｐｉｎｇ  ａｄｄｉｔｉｖｅ）としては、それだけには限らないが、ｐＨを調節する補助物質および第２の治療的補助物質が挙げられる。第２の治療的補助物質としては、それだけには限らないが、（１）抗ヒスタミン薬、コルチコステロイドなどの抗炎症物質、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（２）オイゲノール、グアヤコール、塩化ゼフィランなどの抗微生物物質、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（３）バシトラシン、硫酸ネオマイシン、硫酸ゲンタマイシン、エリスロマイシンなどの抗生物質、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（４）酸化セルロース、トロンビン、カルボキシメチルセルロースなどの止血物質、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（５）プロカイン、キシロカイン、カルボカインなどの麻酔物質、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（６）安息香酸、サリチル酸、アンホテリシンＢ、ミコナゾール、ニスタチン（ｎｉｓｔａｔｉｎ）、トイナフタート（ｔｏｉｎａｆｔａｔｅ）などの抗真菌物質、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（７）酵素阻害剤の阻害活性を妨害せずに、本発明の組成物の治療的利益を改善または向上させ得る他の添加物質；またはそれらの混合物もしくは組合せ、あるいは上記のグループに記載した補助物質のいずれかが挙げられる。
【００５９】
曝露された、または関連した組織の酵素的傷害を悪化させることが公知である糞便成分を中和することによってｐＨを調節する補助物質としては、それだけには限らないが、カルボナート、マレアート、ボラート、シトラート、アジパートなど、またはそれらの混合物もしくは組合せなどｐＨを約３．０〜約７．０に調節するのに効果的な濃度の無機および有機の緩衝液（ｐＫは２．０〜６．０）が挙げられる。ｐＨを約３．０〜約６．０に調節することにより、アンモニア排出が妨げられ、胆汁酸／塩活性が中和され、かつ酵素活性が最小化されると考えられる。胆汁酸塩／酸を吸着し、またはその中和を促進し、かつｐＨ調整に寄与するアガロース、デキストラン、セルロース、およびポリスチレンからなる弱塩基性の陰イオン交換樹脂、またはそれらの混合物もしくは組合せ。
【００６０】
第１の成分（酵素失活剤）および第２の化学的または治療的成分（補助物質）を、可溶化、安定化、乳化、および／または懸濁化するのに適した化学的賦形剤としては、それだけには限らないが、乳化剤、界面活性剤、懸濁化剤、またはそれらの混合物もしくは組合せが挙げられる。
【００６１】
適切な乳化剤としては、それだけには限らないが、（１）ラウラート、ソルビタンなどの単分子膜、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（２）アラビアゴム、ゼラチンなどの多分子膜、またはそれらの混合物もしくは組合せ、（３）ベントナイトなどの固体粒子膜、またはそれらの混合物もしくは組合せ、（４）天然もしくは合成の、陰イオン性、陽イオン性、もしくは非イオン性の界面活性剤などの界面活性剤、またはそれらの混合物もしくは組合せ；あるいは（５）上記に記載した乳化剤の組合せまたは混合物が挙げられる。
【００６２】
適切な局所用製剤としては、それだけには限らないが、軟膏剤、乳剤、懸濁剤、散剤などが挙げられる。
【００６３】
適切な乳化剤としては、それだけには限らないが、（１）ラウラート、ソルビタンなどの単分子膜、またはそれらの混合物もしくは組合せ；（２）アラビアゴム、ゼラチンなどの多分子膜、またはそれらの混合物もしくは組合せ、（３）ベントナイトなどの固体粒子膜、またはそれらの混合物もしくは組合せ、（４）天然もしくは合成の、陰イオン性、陽イオン性、もしくは非イオン性の界面活性剤などの界面活性剤、またはそれらの混合物もしくは組合せ；あるいは（５）上記に記載した乳化剤の組合せまたは混合物が挙げられる。
【００６４】
適切な生体適合性の乳化剤としては、それだけには限らないが、ヒトまたは動物の摂取用または内服用に認可されている、任意のイオン性または非イオン性の乳化剤または界面活性剤が挙げられる。例示的な例としては、アセチル化モノグリセリド、脂肪酸のアルミニウム塩、アラビノガラクタン、パン酵母グリカン、炭酸カルシウム、脂肪酸のカルシウム塩、イナゴマメ（Ｃａｒｏｂ  ｂｅａｎ）ゴム（イナゴマメ（ｌｏｃｕｓｔ  ｂｅａｎ）ゴム）、カードラン、食用脂肪もしくは油、または食用脂肪形成脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、リン酸水素二ナトリウム（相互参照−リン酸ナトリウム、モノ、ジ、およびトリ）、エトキシル化モノグリセリドおよびジグリセリド、キリンサイ・コットニー（Ｅｕｃｈｅｕｍａ  ｃｏｔｔｏｎｉｉ）抽出物、キリンサイ・スピノサム（Ｅｕｃｈｅｕｍａ  ｓｐｉｎｏｓｕｍ）抽出物、脂肪酸、（アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、およびナトリウム）の塩、βアミラーゼで処理した、ｎ−オクテニル無水コハク酸とエステル結合した食品デンプン、フラゾリドン、ファーセレラン、ファーセレラン、アンモニウム、カルシウム、カリウム、もしくはナトリウムの塩、ガティゴム、スギノリ（Ｇｉｇａｒｔｉｎａ）抽出物、脂肪酸のグリセリル−ラクトエステル、ヘキシトールオレアート、水酸化レシチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、グリセリンおよびプロピレングリコールのラクチル化脂肪酸エステル、脂肪酸のラクチル酸エステル、レシチン、水酸化レシチン、メチルエチルセルロース、食用脂肪もしくは油、または食用脂肪形成酸のモノグリセリドおよびジグリセリド、クエン酸モノイソプロピル、食用脂肪もしくは油、または食用脂肪形成脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリドのリン酸一ナトリウム誘導体、Ｍｙｒｊ４５（８−ステアリン酸ポリオキシエチレン）、雄ウシ胆汁抽出物、ペクチン（修飾されたペクチンを含む）、ポリエチレングリコール（４００）ジオレアート、脂肪酸のポリグリセロールエステル、ポリオキシエチレングリコール（４００）モノオレアートおよびジオレアート、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレン（２０）モノステアリン酸ソルビタン）、ポリソルベート６５（ポリオキシエチレン（２０）トリステアリン酸ソルビタン）、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート）、脂肪酸のカリウム塩、アルギン酸プロピレングリコール（アルギン酸のプロピレングリコールエステル）、脂肪および脂肪酸のプロピレングリコールモノエステルおよびジエステル、ナタネ油、完全に水素添加され、超グリセリン化された（ｓｕｐｅｒｇｌｙｃｅｒｉｎａｔｅｄ）、酸性ピロリン酸ナトリウム、リン酸アルミニウムナトリウム、次亜リン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、メチル硫酸ナトリウム、ペクチン酸ナトリウム、脂肪酸のナトリウム塩、ステアロイルラクチル酸ナトリウム、スルホ酢酸ナトリウム誘導体（モノグリセリドおよびジグリセリド）、ソルビタンモノオレアート、ソルビタンモノステアラート、スクシニル化モノ��リセリド、スクシステアリン（ステアロイルプロピレングリコール水素スクシナート）、イソ酪酸酢酸スクロース（ＳＡＩＢ）、ショ糖脂肪酸エステル、硫酸化オレイン酸ブチル、リン酸三ナトリウム、キサンタンゴムなど、あるいはそれらの混合物または組合せが挙げられる。
【００６５】
適切な中性脂質としては、それだけには限らないが、トリグリセリドなど任意の中性脂質が挙げられる。トリグリセリドなどの代表的な中性脂質の一部のリストに関しては、米国特許第４，９５０，６５６号明細書および第５，０４３，３２９号明細書を具体的に参照されたい。飽和トリグリセリドおよび不飽和トリグリセリドの双方が、本発明の組成物において使用され得、トリパルミチン（飽和）、トリオレインおよびトリリノレイン（不飽和）のようなトリグリセリドが挙げられる。しかし、これらの具体的なトリグリセリドは、便宜のためにのみここに記載され、様々な有用なトリグリセリドの代表に過ぎず、さらに、包括的であることを意図しない。
【００６６】
適切な生体適合性、生分解性ポリマーの非限定的な例としては、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリ無水物、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリカルボナート、ポリオルトカルボナート、ポリホスファゼン、ポリヒドロキシブチラート、ポリヒドロキシバレラート、ポリアルキレンオキサラート、ポリアルキレンスクシナート、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（メチルビニルエーテル）、ポリ（無水マレイン酸）、キチン、キトサン、およびコポリマー、ターポリマー、もしくはそれらのより高次のポリモノマーポリマー、またはそれらの組合せもしくは混合物が挙げられる。いくつかの実施形態では、好ましい生分解性のポリマーは、加水分解によってすべて分解される。
【００６７】
典型的には、これらのポリマーは、ポリ無水物など浸食され得る表面ポリマーまたはポリオルトエステルなど浸食され得るバルクポリマーのいずれかである。ポリ（ｌ−乳酸）（ＰｌＬＡ）、ポリ（ｄｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン、コポリマー、ターポリマー、それらのより高次のポリモノマーポリマー、またはそれらの組合せもしくは混合物。いくつかの好ましい実施形態では、これらのポリマーは、好ましい生体適合性、生分解性ポリマーである。生分解性コポリマーは、ポリ（ｄｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧ）と呼ばれることがある、乳酸およびグリコール酸のコポリマーである。いくつかの好ましい実施形態では、ポリ（ＤＬ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）のコモノマー（ラクチド：グリコリド）比率は、約１００：０〜約５０：５０の乳酸対グリコール酸である。いくつかの好ましい実施形態では、コモノマー比率は、約８５：１５〜約５０：５０の乳酸対グリコール酸である。好ましくはＰＬＧ対ＰＬＡが約８５：１５〜約５０：５０の、ＰＬＡとＰＬＧの配合物もまた、ポリマー材料を調製するのに使用される。
【００６８】
ＰＬＡ、ＰＩＬＡ、ＰＧＡ、ＰＬＧ、およびそれらの組合せまたは混合物もしくは配合物は、ヒトでの臨床使用向けに認可されている合成ポリマーの一例である。これらは現在、外科的縫合材料として、かつ制御放出器具において、ならびに他の医学的用途および薬学的用途において利用されている。これらは生体適合性であり、かつこれらの分解産物は、正常な代謝経路中に入る、乳酸やグリコール酸などの低分子量化合物である。さらに、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）のコポリマーは、乳酸とグリコール酸のコポリマー比率を変更するだけで、数日から数年に及ぶ広範囲の分解速度という利点を与える。  
【００６９】
生物学的用途において使用されるポリマーの生分解を促進するために、本発明の組成物は、組成物中で使用されるポリマーの生分解を促進することができる酵素の添加も含み得る。いくつかの好ましい実施形態では、これらの酵素または同様の反応物は、エステル加水分解能を有するプロテアーゼまたはヒドロラーゼである。このような酵素としては、それだけには限らないが、プロテイナーゼＫ、ブロメライン、プロナーゼＥ、セルラーゼ、デキストラナーゼ、エラスターゼ、プラスミンストレプトキナーゼ、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、キモパパイン、コラゲナーゼ、サブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｎ）、クロストリドペプチダーゼ（ｃｈｌｏｓｔｒｉｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）Ａ、フィシン、カルボキシペプチダーゼＡ、ペクチナーゼ、ペクチンエステラーゼ、オキシドレダクターゼ、オキシダーゼなどが挙げられる。このような分解促進物質の適切な量を含めることは、埋め込み剤の持続期間を調節するのにも利用することができる。
【００７０】
適切な生体適合性油としては、それだけには限らないが、植物油もしくは動物油やそれらの誘導体などの天然油または合成油、および特に、ダイズ由来のレシチン油などリン脂質に富んだ天然油を含めて、ＦＤＡによってヒトまたは動物による摂取用に認可されている任意の油が挙げられる。このような油の例示的な例としては、ピーナッツ油、カノーラ油、アボカド油、サフラワー油、オリーブ油、トウモロコシ油、ダイズ油、ゴマ油、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、魚油などの精油、植物油、硬化植物油、動物油が挙げられる。
【００７１】
本発明の製剤または組成物は、抗酸化剤（例えば、ビタミンＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅなど）、微量金属および／または多価陽イオン（アルミニウム、金、銅、亜鉛、カルシウムなど）、表面活性剤および／または溶剤（例えば、プロピレングリコール／ＰＰＧ、ジメチルスルホキシド／ＤＭＳＯ、中鎖トリグリセリド／ＭＣＴなど）など他の化学物質を含んでもよく、非毒性色素および風味増強剤は、安定性、流動性／伸展性、透過性、有効性、および消費者の許容性を改善するために、製剤を調製する際に添加され得る。
【００７２】
本発明の実施形態の実施例の詳細の考察
本発明者は、イブプロフェンなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）の存在下で、精製されたホスファチジルコリン（ＰＣ）またはＰＣの豊富なレシチン油のいずれかをアセトンと組み合わせることによって、ＮＳＡＩＤを最初に、２番目に、またはＰＣと同時にアセトンに添加するかどうかに関わらず、溶解および冷却後にアセトンから沈殿する物質の量が著しく減少することを発見した。一般に、ＰＣおよびＮＳＡＩＤは、約４０℃〜約６０℃の温度で、約１５分〜約９０分の時間でアセトンに溶解する。その際、ＰＣに応じて、より短い時間またはより長い時間が許容される。ＰＣおよびＮＳＡＩＤがアセトンに溶解した後、その溶液を含む容器を氷浴中に約１５分〜約３０分間置くことによって、アセトン溶液を約０℃〜約４℃の温度まで冷却する。その際、ＰＣおよびＮＳＡＩＤに応じて、より短い時間またはより長い時間が許容される。次いで、結果として生じる混合物を遠心分離し、かつ上清をデカントする。次いで、アセトンに沈殿可能な物質を回収し、計量する。次いで、約６０℃〜約１１０℃に昇温させた温度のオーブン中で、残存する溶媒を除去するのに十分な時間、上清を乾燥させる。この十分な時間は、通常、１時間〜数日間である。
【００７３】
この手順を用いて、図１に示すように、イブプロフェンとＰＣを３５％含有するレシチン油（Ｐ３５ＳＢ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｅｃｉｔｈｉｎ（オックスフォード、ＣＮ）から購入）との重量比を、比率０．０：１．０（イブプロフェン無し）から２．５：１．０まで増分０．５で規則的に増加させると、アセトンに沈殿可能な物質が５０％から８％未満まで段階的に減少することを測定した。したがって、イブプロフェンの存在により、ＰＣがアセトンから沈殿することが防がれて、精製されたＰＣ−イブプロフェン結合複合体が生成する。
【００７４】
別のｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験では、イブプロフェンの量を０．５ｇで一定に保ち、これに、段階的に増量した０．２５ｇ〜１．０ｇの精製ダイズ（９０％を上回る純度）ＰＣ（Ｐｈｏｓａｌ  ９０Ｇ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｅｃｉｔｈｉｎ（オックスフォード、ＣＮ）から購入）を添加した。９０Ｇ：イブプロフェンの重量比が１．０：０．５ｇに達するまで、アセトンに沈殿可能な物質は全く検出されなかったことを、図２において認めることができる。したがって、精製されたダイズレシチンリン脂質を使用する場合、精製されたＰＣ−イブプロフェン結合組成物は、重量比２：１（ＰＣ：イブプロフェン）で最適に実現される。
【００７５】
ｉｎ  ｖｉｖｏの実施例
これらの実験に基づいて、本発明者らは、結果として生じる重量比２：１の精製されたＰＣ：イブプロフェン複合体のＧＩ安全性および治療有効性を評価するために２種のｉｎ  ｖｉｖｏ実験を実施した。精製されたＰＣ−イブプロフェン複合体をげっ歯動物の試験系において評価する前に、アセトンを徹底的に除去したことに留意すべきである。
【００７６】
第１のｉｎ  ｖｉｖｏ実施例において、本発明者らは、参照により本明細書に組み入れられる、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｗａｎｇ  Ｚ−Ｍ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、  Ｕｌｌｏａ  Ｃ、  Ｐｅｒｅｚ  ＪＣ、Ｇｉｒａｕｄ  Ｍ−Ｎ、  Ｂａｒｒｅｔｏ  ＪＣ．Ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ（ＮＳＡＩＤｓ）  ａｓｓｏｃｉａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ：Ｉｎｓｉｇｈｔ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ＮＳＡＩＤ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：１５４〜１５８頁、１９９５年において記載されているように、一酸化窒素合成酵素阻害剤であるＮ−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）で処置したラットにおける、ＮＳＡＩＤによって誘発したＧＩ出血のげっ歯動物急性モデルを使用した。図３において提供する結果は、同程度の濃度のイブプロフェン（２５０ｍｇ／ｋｇ）を用いた場合、アセトンを用いて調製したＰＣ（９０Ｇ）−イブプロフェン複合体は、対照のイブプロフェン、またはアセトンに前もって曝露させ、続いて徹底的な蒸発によって溶媒を除去したイブプロフェンを投与した動物の群において認められるよりも、（腸灌流液中のヘモグロビンを測定することによって判定されるように）ＧＩ出血の著しい（９５％超の）減少を引き起こしたことを示す。
【００７７】
第２のｉｎ  ｖｉｖｏ実験において、本発明者らは、ラットにおいて、ＰＣ−イブプロフェンのアセトン調製物の鎮痛活性をイブプロフェン単独の活性と（２０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの用量で）比較し、かつ閾値下の用量のインドメタシン（１ｍｇ／ｋｇ）に対する応答を比較した。これらの測定は、圧力に対する患足の感受性を増大させるために４日前に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）０．１ｍＬを左後足の背面に皮下注射したラットにおいて実施した。実験当日に、ランダル・セリット法（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｕｌｌｏａ  Ｃ、Ｖａｎｏｕｓ  ＡＬ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、Ｄｉａｌ  ＥＪ、Ｉｌｌｉｃｈ  ＰＡ、Ｗａｌｔｅｒｓ  ＥＴ．Ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ａｓｐｉｒｉｎ’ｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｓ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ．ＪＰＥＴ  １９９６；２７７：１２２１〜１２２７頁を参照されたい）の本発明者らによる改良法を用いて、ベースライン（投与前）の圧痛閾値を測定し、次いで、試験物質の投与後２時間目にこの手順を繰り返した。図４は、未修飾のイブプロフェンおよびアセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェンの双方とも、圧痛閾値の明らかな用量依存的上昇を誘導したが、インドメタシンの閾値下用量は効果を示さなかったことを示す。さらに、鎮痛活性のこの指数は、アセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェンの治療活性が、未修飾のイブプロフェンの治療活性に匹敵し、かつ／またはより優れていることを示した。
【００７８】
げっ歯動物における急性胃潰瘍モデル
第２のｉｎ  ｖｉｖｏ実験において、本研究では、ＰＣを３５％含有するダイズレシチン油であるＰｈｏｓａｌ  ３５  ＳＢ、ＰＣを５３％含有するレシチン油であるＰ５３、またはＰＣを９０％超含有するダイズレシチンであるＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ９０Ｇとアスピリンを組み合わせ、かつ、絶食させたラットにアスピリン用量１８ｍｇ／ｋｇで胃内に投与した。その際、ＮＳＡＩＤ：レシチン油の重量比は、図８〜１０において示すように、１：０．５から１：１、１：２まで系統的に変更した。さらに、他の群のラットには、レシチン油を伴わない等用量のアスピリン、または等体積の生理食塩水を与えた。４５分後、すべての動物に０．６Ｎ  ＨＣｌ  １ｍＬを胃内投与し、かつ１５分後、これらの動物を安楽死させ、胃を開き、確立された方法によって胃病変を記録した。
【００７９】
ＮＳＡＩＤによって誘発したＧＩ毒性の慢性モデル
このプロトコールでは、（１ｍＬシリンジに取り付けられた２０ゲージの針を用いて）ラットの左足首に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、セントルイス、ミズーリ州）０．２ｍＬを皮下注射して、急性の関節炎症を誘発した。次いで、これらのラットを調査群に無作為に割り当て、かつ直ちに、生理食塩水溶媒、イブプロフェン（５０〜７５ｍｇ／ｋｇ、１日２回）、またはＰＣ−イブプロフェン（ＮＳＡＩＤ  ５０〜７５ｍｇ／ｋｇ、１日２回）のいずれかを用いた連続した４〜５日間の投与処置計画を開始した。調査期間の完了時に、これらのラットの体重を測定し、ＣＯ２吸入によって安楽死させた後、両側開胸を実施した。本発明者らは、体重、ヘマトクリット値、腸穿孔の存在、およびＧＩ灌流液中のヘモグロビン濃度の変化を測定することによって、本発明者らのイブプロフェン試験調製物の毒性を評価した。さらに、ミエロペルオキシダーゼアッセイを実施するために、炎症を起こした関節から組織試料を採取して、炎症を起こした組織の好中球活性を評価した。最後に、ＮＳＡＩＤ調製物の抗炎症作用を実証するために足首の厚さを測定し、かつ改良したランダルおよびセリットの疼痛試験を利用して、鎮痛活性を示した。ランダルおよびセリットの疼痛試験ならびに改良したランダルおよびセリットの疼痛試験のさらなる詳細は、参照により本明細書に組み入れられる、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｕｌｌｏａ  Ｃ、Ｖａｎｏｕｓ  ＡＬ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、Ｄｉａｌ  ＥＪ、Ｉｌｌｉｃｈ  ＰＡ、Ｗａｌｔｅｒｓ  ＥＴ．Ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ａｓｐｉｒｉｎ’ｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｓ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ．ＪＰＥＴ  １９９６；２７７：１２２１〜１２２７頁；Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、ＤｅＲｕｉｊｔｅｒ  ＷＭＪら、  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＪＰＥＴ  ２９８：２７９〜２８７頁、２００１年、およびＲａｎｄａｌｌ  ＬＯ、Ｓｅｌｉｔｔｏ  ＪＪ．Ａ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ．Ａｒｃｈ  Ｉｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ  １９５７；１１１：４０９〜４１９頁において確認することができる。
【００８０】
ＮＳＡＩＤによって誘発されるＧＩ毒性を評価するために、以下の変数を測定した。
【００８１】
体重の変化分
処置前の最初の体重から調査最終日のラットの体重を引くことによって、投与期間を通しての体重の変化を算出した。これを、「体重の変化分（Δ）」と呼ぶ。
【００８２】
ヘマトクリット値
心臓穿刺によってラットの血液を毛細管チューブ中に抜き取り、次いでそれをスピンダウンし、かつ血清画分全体に対する赤血球の割合を測定することによって、ヘマトクリットを測定した。
【００８３】
ＧＩ灌流液
組織を採取する間、冷たい生理食塩水３ｍｌで小腸の遠位側半分を洗い流し、かつ、回収した灌流液中のヘモグロビン濃度を以前に説明されているようにして測定した。さらなる詳細は、参照により本明細書に組み入れられるＬｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｇｒａｚｉａｎｉ  ＬＡ、Ｄｉａｌ  ＥＪ、Ｂｕｔｌｅｒ  ＢＤ、Ｈｉｌｌｓ  ＢＡ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｉｎ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８３；２１９：１３２７〜２９頁において確認することができる。
【００８４】
糞便のヘモグロビン
安楽死時に糞粒を回収し、水中でホモジナイズし、かつそれらのヘモグロビン濃度を以前に説明されているようにして測定した。さらなる詳細は、参照により本明細書に組み入れられるＬｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｇｒａｚｉａｎｉ  ＬＡ、Ｄｉａｌ  ＥＪ、Ｂｕｔｌｅｒ  ＢＤ、Ｈｉｌｌｓ  ＢＡ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｉｎ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８３；２１９：１３２７〜２９頁において確認することができる。
【００８５】
腸穿孔
小腸の遠位側半分を縦方向に開き、かつ、どの実験群から組織を採取したか盲検化された観察者によって、穿孔および／または癒着が存在するかどうかを検査した。
【００８６】
ＮＳＡＩＤの抗炎症活性および鎮痛活性の評価
参照により本明細書に組み入れられる、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、ＤｅＲｕｉｊｔｅｒ  ＷＭＪら  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＪＰＥＴ  ２９８：２７９〜２８７頁、２００１年においてより詳細に記載されている、以下に手短に概説する技術を用いて、足首の厚さ、ミエロペルオキシダーゼ活性、および炎症を起こした足の圧力に対する感受性を測定することによって、試験用のＮＳＡＩＤ調製物の治療活性を評価した。
【００８７】
足首の厚さ
以前に説明されているように、盲検化された観察者がカリパスを用いて、ＣＦＡを局所注射されたラットの足首の厚さを測定した。
【００８８】
ランダル・セリット疼痛感受性試験によって評価する鎮痛活性
ＮＳＡＩＤによって誘導される鎮痛を評価するために、本発明者らは、以前に説明されているランダルおよびセリットの技術の改良法を使用した。手短に言えば、これは、尖っていない末端を有する小型ステンレス鋼プローブを用いて、ラットの足に経時的に増加する圧力（ｍｍＨｇ）を加えるＡｎａｌｇｅｓｙｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ウッドランドヒルズ、カリフォルニア州）のステージ上に、プレキシガラス製拘束ケージ中に入れられた意識のあるラットの後足を載せることによって遂行する。本発明者らは、「圧痛閾値」を、「盲検化された」観察者によって評価した際に、足指の伸長またはプローブから足を引っ込めようと試みることのいずれかによって示されるように、ラットが疼痛を感知する最低圧力と定義した。
【００８９】
ミエロペルオキシダーゼ活性
死体解剖の際に、炎症を起こした関節組織を動物から慎重に切断し、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液中．５％臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム１ｍｌ中で約３０秒間、Ｐｏｌｙｔｒｏｎによってホモジナイズした。次いで、ホモジネートを（液体窒素中で）凍結し、３回解凍し、微量遠心分離し、上清を回収した。上清試料１０〜２０μｌをマイクロウェルＥＬＩＳＡプレートに添加し、以前に説明されている方法に従ってテトラメチルベンジジン基質２００μｌを添加した。さらなる詳細は、参照により本明細書に組み入れられる、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｕｌｌｏａ  Ｃ、Ｖａｎｏｕｓ  ＡＬ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、Ｄｉａｌ  ＥＪ、Ｉｌｌｉｃｈ  ＰＡ、Ｗａｌｔｅｒｓ  ＥＴ．Ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ａｓｐｉｒｉｎ’ｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｓ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ．ＪＰＥＴ  １９９６；２７７：１２２１〜１２２７頁；およびＳｕｚｕｋｉ  Ｋ、Ｏｔａ  Ｈ、Ｓａｓａｇａｗａ  Ｓ、  Ｓａｋａｔａｎｉ  Ｔ、Ｆｕｊｉｋｕｒａ  Ｔ．Ａｓｓａｙ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ．Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９８３；１３２：３４５〜３５２頁において確認することができる。上清の代わりに０〜２５ｎｇ／ｍｌの用量範囲で、ウェルの緩衝液中にペルオキシダーゼを添加した。暗所、室温で１５分インキュベーションした後、これらのプレートをＥＬＩＳＡ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、メンローパーク、カリフォルニア州）上で、波長６５０ｎｍで読み取った。
【００９０】
統計学的分析
群間の統計学的有意性の境界値としてｐ≦０．０５を用いて、分散分析とそれに続く有意差に関するＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ検定によって、群間比較を実施した。
【実施例】
【００９１】
実施例１
本実施例では、３倍濃度のダイズレシチン１．０グラム（３３〜３５％のＰＣを含有、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｅｃｉｔｈｉｎ社製のＰｈｏｓａｌ  ３５  ＳＢ）を、風袋測定済の５０ｍｌ遠心チューブ中のアセトン１５ｍＬ（０、０．５、１．０、１．５、２．０、および２．５ｇのイブプロフェン酸を含有）に溶解した。すべてのＰＬが溶解するまで、１５〜３０分間、約４０℃〜約４５℃の温度までこれらのチューブを温めた。この時点で、冷アセトン（４℃）をチューブの４０ｍＬのマークまで添加し、溶液を攪拌しながら１５分間、氷浴中にチューブを浸した。次いで、これらのチューブを２，０００ｒｐｍで１５分間、遠心分離し、上清をデカントした。次いで、チューブの底の残留物を攪拌棒で砕き、さらに４０ｍＬの冷却したアセトンをチューブに添加した。次いで、さらに１５分間、氷浴中にチューブを浸し、前述したように遠心分離し、上清をデカントした。次いで、これらのチューブを水平な場所に置き、かつ一定の重量が得られるようになるまで、１０５℃に設定したオーブン中に数日間入れた。図１に提供する結果は、段階的に増量したイブプロフェン（ＩＢＵ）を極性溶媒に添加することによって、アセトンによって沈殿させられるＰＬの量が、５０％（ＩＢＵが０の場合）から、ＩＢＵ：Ｐ３５の重量比が２：１以上の場合の８％未満まで減少したことを実証する。
実施例２
【００９２】
本実施例では、イブプロフェン０．５ｇを、アセトン１５ｍＬを含む風袋測定済チューブ中に予め溶解し、そこに、段階的に増量した（０．２５ｇ、０．５ｇ、１．０ｇ）、精製された（９０％超）ダイズＰＣ（Ｐｈｏｓａｌ９０Ｇ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｅｃｉｔｈｉｎ）を添加した。別の一組のチューブにおいて、段階的に増量したＰＣを、アセトン１５ｍＬを含みイブプロフェンを含まない風袋測定済チューブに添加した。次いで、これらのチューブを前述したようにして処理して溶解させ、次に（温度を４０℃から４℃に調整することによって）ＰＣを沈殿させ、かつアセトンに沈殿可能な物質の重量を測定した。図２に図示した結果は、イブプロフェンの存在下では、ＰＣ：ＩＢＵの重量比が２：１を超えるまで、精製されたＰＣは、アセトン中にほとんどまたは全く沈殿しなかったことを示す。これらの結果は、この比率において、有効なほとんどすべてのＰＣは、ＰＣ−イブプロフェン複合体としてアセトン相中に存在することを示唆する。
実施例３
【００９３】
本実施例では、複合体の最適な形成を確実にするために９０Ｇ：イブプロフェンの重量比を２：１に調整して、前述したようにしてＰＣ−イブプロフェンを調製した。しかし、本実験では、アセトン可溶相を回収し、かつ、Ｎ２ガス流下で蒸発させることによってアセトンを除去した。次いで、ＰＣ−イブプロフェン材料を含むチューブをデシケーターに移し、減圧下で数日間放置した。アセトン中に溶解させた未修飾のイブプロフェン酸に対して、前述のプロセスと同様のプロセスを実施し、次いで、蒸発によって溶媒を徹底的に除去した。
【００９４】
アセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェンのＧＩ安全性を評価するために、本発明者らは、ＮＳＡＩＤのＧＩ副作用に対する感受性を高めるためにＮＯ合成酵素阻害剤であるＬ−ＮＡＭＥで処置されたラットにおける腸出血を評価する、以前に説明されている方法を使用した。１時間前に、絶食させた雄のスプラーグドーリーラット（１５０〜２００ｇ）にＬ−ＮＡＭＥ（２０ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射し、かつ１時間後および６時間後に、ＮＳＡＩＤ試験溶液１ｍＬを溶液または懸濁液としてラットに胃内投与することによって、これを実施した。本実験では、生理食塩水（対照）、または脱イオン蒸留水中に懸濁させた用量２００ｍｇ／ｋｇのイブプロフェン試験溶液（一般用医薬品イブプロフェン、アセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェン、もしくはアセトンを用いて調製したイブプロフェンのいずれか）を、絶食させたラットに胃内投与した。次いで、これらのラットをケージに戻し、食品および水の自由な摂取機会を与え、かつＮＳＡＩＤ投与後１６時間目にＣＯ２吸入によって安楽死させ、この時に、腸の遠位半分を切断し、冷生理食塩水１０ｍＬで洗い流し、また、以前に説明されているようなヘモグロビン分析のために灌流液を回収した。図３に示した結果は、いずれもラットにおいて重度の急性腸出血（ヘモグロビンが８００ｍｇ％超）を誘発した、未処理またはアセトンに曝露させた一般用医薬品イブプロフェン酸と比較して、アセトンを用いて調製した同等の用量のＰＣ−イブプロフェンで処置されたラットは、腸出血をほとんど無いか、または全く無い状態で維持した（ヘモグロビンが２５ｍｇ％未満）ことを実証する。これは、アセトンを用いて調製したＰＣ−ＮＳＡＩＤの方が、未修飾のイブプロフェンよりも著しく安全であった（ＧＩ出血の９５％超の低減）ことを示す。
実施例４
【００９５】
本実施例では、複合体の最適な形成を確実にするために９０Ｇ：イブプロフェンの重量比を２：１に調整して、前述したようにしてＰＣ−イブプロフェンを調製した。しかし、本実験では、アセトン可溶相を回収し、かつ、Ｎ２ガス流下で蒸発させることによってアセトンを除去した。次いで、ＰＣ−イブプロフェン材料を含むチューブをデシケーターに移し、減圧下で数日間放置した。アセトン中に溶解させたイブプロフェン酸に対して、前述のプロセスと同様のプロセスを実施し、次いで、蒸発によって溶媒を徹底的に除去した。
【００９６】
本実験では、本発明者らは、以前に詳細に説明されているげっ歯動物モデル系を用いて試験物質の鎮痛活性を評価した。これは、完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、セントルイス、ミズーリ州）０．１ｍＬを左後足の背面に皮下注射することにより、雄のスプラーグドーリーラットの後足の炎症を最初に誘発することによって実施した。関節炎症の誘発後４日目に、ＮＳＡＩＤによって誘導される鎮痛を評価するために、本発明者らは、以前に説明されているランダルおよびセリットの技術の改良法を使用した。手短に言えば、これは、尖っていない末端を有する小型ステンレス鋼プローブを用いて、ラットの足に経時的に増加する圧力（ｍｍＨｇ）を加えるＡｎａｌｇｅｓｙｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ウッドランドヒルズ、カリフォルニア州）のステージ上に、プレキシガラス製拘束ケージ中に入れられた、意識のある絶食ラットの後足を載せることによって遂行した。本発明者らは、「圧痛閾値」を、「盲検化された」観察者によって評価した際に、足指の伸長またはプローブから足を引っ込めようと試みることのいずれかによって示されるように、ラットが疼痛を感知する最低圧力と定義した。
【００９７】
図４に結果を示す本実験では、本発明者らは、投与前の圧痛閾値を最初に測定し、次いで直ちに、２０または５０ｍｇ／ｋｇの一般用医薬品イブプロフェンまたはアセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェンのいずれかを絶食ラットに胃内投与した。比較のために、本発明者らは、１％メチルセルロース中に懸濁させた、閾値下用量（１ｍｇ／ｋｇ）のＮＳＡＩＤ、すなわちインドメタシンを、ラットの１つの群に胃内投与した。２時間後、圧痛閾値測定を繰り返し、一般用医薬品イブプロフェンおよびアセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェン複合体の双方が、鎮痛活性を示す、圧痛閾値の用量依存的な増加を誘導するようであったことを認めることができる。比較すると、閾値下の用量のインドメタシンを投与されたラットにおいては、有意ではない応答が記録された。アセトンを用いて調製したＰＣ−イブプロフェンを投与されたラットは、等用量の一般用医薬品イブプロフェンを投与されたラットの応答と同等またはそれより大きな、圧痛閾値の有意な上昇を維持したため、イブプロフェンの治療活性は、アセトンを用いた調製手順によって改変されず、かつ実際には増強された可能性があると結論を下すことができる。
実施例５
【００９８】
本実施例では、Ｌ−ＮＡＭＥモデルを用いて、本発明のＰＣ−イブプロフェン結合組成物のＧＩ保護特性を、イブプロフェン（ＩＢＵ）、イブプロフェンのナトリウム塩、および従来の方法で調製された４種のイブプロフェン製剤と比較して、分析した。
【００９９】
次に図５を参照すると、ＧＩ保護特性のプロットであり、各バーは以下を示す：バー１−生理食塩水；バー２−ＩＢＵ；バー３−ＮａＩＢＵ（イブプロフェンナトリウム塩）；バー４−室温で６カ月間保存された、ＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物；バー５−４０℃で３カ月間、および動物試験前に室温で残りの３カ月の期間保存された、ＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物；バー６−新しく調製した、ＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物（４０℃、混合時間１０分）；バー７−新しく調製した、ＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物（４０℃、混合時間３０分）；ならびに、バー８−溶媒としてアセトンを用いて調製した、本発明の精製されたＰＣ−ＩＢＵ結合組成物（最後のバー）。本発明の精製されたＰＣ−ＩＢＵ結合組成物が、他のすべてのＩＢＵ製剤よりも実質的に機能が優れており、生理食塩水に類似したＧＩ保護特性を示していることは明らかである。
【０１００】
ＮＳＡＩＤによって誘導されるＧＩ毒性および治療活性を評価するための慢性モデル
このプロトコールでは、（１ｍＬシリンジに取り付けられた２０ゲージの針を用いて）ラットの左足首に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、セントルイス、ミズーリ州）０．２ｍＬを皮下注射して、急性の関節炎症を誘発した。次いで、これらのラットを調査群に無作為に割り当て、かつ直ちに、生理食塩水溶媒、イブプロフェン（５０〜７５ｍｇ／ｋｇ、１日２回）、またはＰＣ−イブプロフェン（ＮＳＡＩＤ  ５０〜７５ｍｇ／ｋｇ、１日２回）のいずれかを用いた連続した４〜５日間の投与処置計画を開始した。調査期間の完了時に、これらのラットの体重を測定し、ＣＯ２吸入によって安楽死させた後、両側開胸を実施した。本発明者らは、体重、ヘマトクリット値、腸穿孔の存在、ＧＩ灌流液中のヘモグロビン濃度の変化を測定することによって、本発明者らのイブプロフェン試験調製物の毒性を評価した。さらに、ミエロペルオキシダーゼアッセイを実施するために、炎症を起こした関節から組織試料を採取して、炎症を起こした組織の好中球活性を評価した。最後に、ＮＳＡＩＤ調製物の抗炎症作用を実証するために足首の厚さを測定し、かつ改良したランダルおよびセリットの疼痛試験を利用して、鎮痛活性を示した。ランダルおよびセリットの疼痛試験ならびに改良したランダルおよびセリットの疼痛試験のさらなる詳細は、参照により本明細書に組み入れられる、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｕｌｌｏａ  Ｃ、Ｖａｎｏｕｓ  ＡＬ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、Ｄｉａｌ  ＥＪ、Ｉｌｌｉｃｈ  ＰＡ、Ｗａｌｔｅｒｓ  ＥＴ．Ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ａｓｐｉｒｉｎ’ｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｓ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ．ＪＰＥＴ  １９９６；２７７：１２２１〜１２２７頁；Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＬＭ、Ｒｏｍｅｒｏ  ＪＪ、ＤｅＲｕｉｊｔｅｒ  ＷＭＪら、  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＪＰＥＴ  ２９８：２７９〜２８７頁、２００１年、およびＲａｎｄａｌｌ  ＬＯ、Ｓｅｌｉｔｔｏ  ＪＪ．Ａ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ．Ａｒｃｈ  Ｉｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ  １９５７；１１１：４０９〜４１９頁において確認することができる。
【０１０１】
これら２種の手順を使用して、２種のＮＳＡＩＤ調製物のバイオアベイラビリティおよび総合的な治療活性を確かめた。試験製剤の局所的な抗炎症活性および鎮痛活性を評価する実験では、前述したようにしてＣＦＡを後足に注射し、３日後、足首の厚さおよび圧痛閾値を（以下に概説するようにして）分析して、ベースライン（処置前）の測定値を記録した。その後直ちに、油として、またはプロピレングリコール溶媒中に溶解して、説明した用量で、試験薬物を患足に局所投与した。また、その後３〜５日の期間、この適用処置を毎日２回実施し、盲検様式の観察者によって、これらの時点の抗炎症活性および鎮痛活性を評価した。
【０１０２】
ＰＣ−イブプロフェン製剤の調製
必要とされる濃度のイブプロフェン（または別の試験用ＮＳＡＩＤ）を、その２倍濃度の、ＰＣを約９３〜９６％含有するＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｇ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｅｃｉｔｈｉｎ）を含むアセトン中に溶解させることによって、ＰＣ−イブプロフェン製剤を調製した。ＮＳＡＩＤおよびＰＣ（重量比１：２）を溶解するまで４０℃、アセトン中でインキュベートし、次いで、最初に窒素流下で、次に減圧下で蒸発させることによって、極性溶媒を除去した。最終生成物は油であり、かつ精製されたＰＣ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む。次いで、その生成物を試験動物に直接投与するか、または水もしくは（記載するような）別の溶媒中に再懸濁させる。特定のイブプロフェン用量範囲でのこの製剤の胃内送達を容易にするために、必要とされる体積を水中に懸濁させ、かつボルテックスした後、胃内投与する。局所送達の場合、生成物を患足に直接（希釈せずに）投与するか、またはプロピレングリコール（ｐｇ）中に再懸濁させる。
実施例６
【０１０３】
次に図６を参照すると、生理食塩水、イブプロフェン（ＩＢＵ）、アセトンを用いて、冷却せずに調製した、重量比２：１の精製されたＰＣ：ＩＢＵ、およびアセトンを用い、冷却して調製した、重量比２：１の精製されたＰＣ：ＩＢＵを比較した、上述のラットにおける急性腸出血モデル（Ｌ−ＮＡＭＥ）研究からの結果が示されている。明らかに、アセトン調製物は、アセトンを用いた調製が冷却ステップを含むかどうかに関わらず、ヘモグロビンの有意な減少を示す。
実施例７
【０１０４】
次に図７を参照すると、生理食塩水、イブプロフェン（ＩＢＵ）、アセトンを用いて調製した、重量比２：１の精製されたＰＣ：ＩＢＵ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰｌｘ−２Ａ−２を比較した、ラットにおける別の急性腸出血モデル（Ｌ−ＮＡＭＥ）研究からの結果が示される。この研究では、アセトンを用いて調製したＰＣ：ＩＢＵ製剤は、２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製した、油ベースのＰＣ：ＩＢＵ（ＰＬｘ−２Ａ−２）物質よりも優れた、かつ／または匹敵する結果を示した。
実施例８
【０１０５】
次に図８を参照すると、胃潰瘍のげっ歯動物急性モデルにおける、アスピリン（ＡＳＡ）と予め結合させた場合のホスファチジルコリン（ＰＣ）の保護効果を生理食塩水と比較した結果が、錠剤のＡＳＡ、アセトンを用いて調製した１：１のＰＣ−ＡＳＡ、アセトンを用いて調製した２：１のＰＣ−ＡＳＡ、アセトンを用いて調製した３：１のＰＣ−ＡＳＡ、およびアセトンを用いて調製した３．５：１のＰＣ−ＡＳＡ、に関して示されている。この研究は、上述した実施例の説明に従って実施した。本研究は、３：１の比率のＰＣとＡＳＡが、試験したＡＳＡ製剤のうちで最も良く保護したことを示す。
実施例９
【０１０６】
次に図９を参照すると、生理食塩水、ＡＳＡ（アスピリン）、１：１のＡＳＡ：Ｐ５３、１：１のＡＳＡ：Ｐ３５、およびアセトンを用いて調製した１：３のＡＳＡ：９０Ｇを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果が示されている。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。この研究は、１：３のＡＳＡ：ＰＣアセトン調製物が、２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製した、油ベースの１：１  ＡＳＡ：Ｐ３５物質と同様の有効性を有し、かつ両方とも、ＡＳＡおよびＡＳＡ：ＰＣ５３より優れていることを示す。
実施例１０
【０１０７】
次に図１０を参照すると、生理食塩水、ＡＳＡ（アスピリン）、アセトンを用い、冷却して調製した１：４のＡＳＡ：９０Ｇ、およびアセトンを用い、冷却せずに調製した１：４のＡＳＡ：９０Ｇを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果が示されている。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。この研究は、冷却ステップを伴って調製された、および伴わずに調製された、２種のアセトン調製物が、ＡＳＡ単独と同様に、かつより優れて機能したことを示す。
実施例１１
【０１０８】
次に図１１を参照すると、生理食塩水、フルルビプロフェン（ＦＵＲＩＢ）、およびアセトンを用いて調製した１：２のＦＵＲＩＢ：ＰＣを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果が示されている。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。この研究は、アセトンを用いて調製したフルルビプロフェン：ＰＣが、フルルビプロフェン単独より優れていることを示す。
実施例１２
【０１０９】
次に図１２を参照すると、生理食塩水、ナプロキセン（Ｎａｐ）ナトリウム塩、１：１のＮａｐ：Ｐ３５、およびアセトンを用いて調製した１：２のＮａｐ：９０Ｇを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果が示されている。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。この研究は、アセトンを用いて調製した１：２のＮａｐ：９０Ｇの方が、Ｎａｐ単独、または２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製した１：１のＮａｐ：Ｐ３５よりも優れていることを示す。
実施例１３
【０１１０】
次に図１３を参照すると、ＡＳＡ（アスピリン）、１：１のＡＳＡ：Ｐ３５、およびアセトンを用いて調製した１：３のＡＳＡ：９０Ｇを比較した、ランダル・セリット法を用いた、ラットにおけるＣＦＡによって誘発した炎症に対する疼痛閾値の結果が示されている。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。この研究は、３種のＡＳＡ製剤のすべてが、同様に機能したことを示す。
実施例１４
【０１１１】
次に図１４Ａ〜Ｇを参照すると、ＣＦＡで処置して関節炎症を誘発されたラットに対する様々なイブプロフェン（ＩＢＵ）製剤の効果が研究された。ＣＦＡ処置無しの生理食塩水、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油の組成物、すなわちＰＬｘ−２Ａ−２を、ラットに投与した。ＰＬｘ−２Ａ−２物質は、２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製した。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。
【０１１２】
図１４Ａを参照すると、３種のＩＢＵ製剤すべてが同等に有効であることを示唆する抗炎症効果が示されている。図１４Ｂを参照すると、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ製剤が、試験したＩＢＵ製剤すべてのうちで最も良い結果を与えたことを示唆するヘマトクリットレベルが示されている。図１４Ｃを参照すると、ＩＢＵ：ＰＣ製剤が、ＩＢＵ単独より優れていることを示唆し、また、２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製したＰＬｘ−２Ａ−２物質が、アセトンを用いて調製した本発明の１：２のＩＢＵ：９０Ｇよりいくらか優れていたことを示すヘモグロビンレベルが示されている。図１４Ｄを参照すると、ＩＢＵ：ＰＣ製剤が、ＩＢＵ単独より優れていること、および、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇが、２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製したＰＬｘ−２Ａ−２物質より優れ、かつ生理食塩水単独と同様であることを示唆するヘモグロビンレベルが示されている。図１４Ｅを参照すると、ＩＢＵ：ＰＣ製剤が、ＩＢＵ単独より優れていることを示唆し、また、２００３年１１月６日に出願された米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製したＰＬｘ−２Ａ−２物質が、アセトンを用いて調製した本発明の１：２のＩＢＵ：９０Ｇよりいくらか優れていたことを示す疼痛閾値の結果が示されている。図１４Ｆを参照すると、ＩＢＵ：ＰＣ製剤が、ＩＢＵ単独より優れていること、および、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇが、米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製したＰＬｘ−２Ａ−２物質より優れていたことを示唆する体重減少の結果が示されている。図１４Ｇを参照すると、ＩＢＵ：ＰＣ製剤が、ＩＢＵ単独より優れていることを示唆し、また、米国特許出願第１０／４３３，４５４号明細書において発表されている手順に従って調製したＰＬｘ−２Ａ−２物質が、アセトンを用いて調製した本発明の１：２のＩＢＵ：９０Ｇよりいくらか優れていたことを示す、ミエロペルオキシダーゼ活性の結果が示されている。
実施例１５
【０１１３】
次に図１５Ａを参照すると、ＣＦＡによって誘発した関節炎症後のラットに対する局所適用されたイブプロフェン（ＩＢＵ）製剤の効果を研究した。ＣＦＡ処置無しの生理食塩水、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のプロピレングリコール中イブプロフェン（ＩＢＵ／ｐｇ）、ＣＦＡ処置後にアセトンを用いて調製した２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ  ２：１／油）油、およびＣＦＡ処置後にアセトンを用いて調製したプロピレングリコール中２：１のイブプロフェン：９０Ｇ油（ＰＣ：ＩＢＵ／ｐｇ）で、ラットを処置した。やはり、この研究も、上述した実施例の説明に従って実施した。
【０１１４】
図１５Ａを参照すると、すべてのＩＢＵ製剤が生理食塩水より優れていたこと、およびＩＢＵ：ＰＣ製剤が、３日目にはＩＢＵと同様であったが、５日目にはＩＢＵより優れていたことを示唆する疼痛閾値結果が示されている。図１５Ｂを参照すると、すべてのＩＢＵ製剤が、生理食塩水と比べると、足首の炎症を低減させること、および両方のＩＢＵ：ＰＣ製剤が、３日目の試験でも５日目の試験でも、ＩＢＵ単独より優れていたことを示唆する、足首の厚さの変化分の結果が示されている。図１５Ｃを参照すると、ＩＢＵ製剤の類似した挙動を示唆し、アセトンを用いて調製したプロピレングリコール中２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ／ｐｇ）が最も低いＭＰＯ活性を示している、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の結果が示されている。
【０１１５】
本明細書に引用するすべての参考文献は、参照により本明細書に組み入れられる。本発明を、その好ましい実施形態に関連して開示したが、本明細書を読むことによって、当業者は、上述し、かつ以下に特許請求する本発明の範囲および精神から逸脱しない、実施し得る適切な変更および修正を理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１】ＰＣの供給源としてＰ３５ＳＢを使用した、添加されたイブプロフェンの重量に対する、アセトンに沈殿可能な物質のプロットを表すグラフである。
【図２】一連の重量比の９０Ｇ（ＰＣ供給源）とイブプロフェンに対する、アセトンに沈殿可能な物質のプロットを表すグラフである。
【図３】イブプロフェン単独、アセトンに溶解させたイブプロフェン、および本発明の精製されたＰＣ−イブプロフェン組成物を比較した、ラットにおける誘発された急性（Ｌ−ＮＡＭＥ）腸出血のデータのプロットを表すグラフである。
【図４】後足にＣＦＡ０．１ｍＬの注射を受けたラットにおける、イブプロフェン、インドメタシン、および本発明の精製されたＰＣ−イブプロフェン組成物を用いた４日間のＮＳＡＩＤ試験の疼痛閾値データのプロットを表すグラフである。
【図５】イブプロフェン単独、イブプロフェン単独のナトリウム塩、４種の油ベースのＰＣ−イブプロフェン組成物、および本発明の精製されたＰＣ−イブプロフェン組成物を比較した、ラットにおける誘発された急性（Ｌ−ＮＡＭＥ）腸出血のデータのプロットを表すグラフである。
【図６】生理食塩水、イブプロフェン（ＩＢＵ）、アセトンを用いて冷却せずに調製した、重量比２：１の精製されたＰＣ：ＩＢＵ、およびアセトンを用い、冷却して調製した、重量比２：１の精製されたＰＣ：ＩＢＵを比較した、ラットにおける急性腸出血モデル（Ｌ−ＮＡＭＥ）から得られた結果を表すグラフである。
【図７】生理食塩水、イブプロフェン、アセトンを用いて調製した重量比２：１の精製されたＰＣ：ＩＢＵ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２を比較した、ラットにおける急性腸出血モデル（Ｌ−ＮＡＭＥ）からの結果を表すグラフである。
【図８】生理食塩水、ＡＳＡ錠剤、アセトンを用いて調製した１：１のＰＣ−ＡＳＡ、アセトンを用いて調製した２：１のＰＣ−ＡＳＡ、アセトンを用いて調製した３：１のＰＣ−ＡＳＡ、およびアセトンを用いて調製した３．５：１のＰＣ−ＡＳＡを比較した、胃潰瘍のげっ歯動物急性モデルにおける、アスピリン（ＡＳＡ）と予め結合させた場合のホスファチジルコリン（ＰＣ）の保護効果の結果を表すグラフである。
【図９】生理食塩水、ＡＳＡ（アスピリン）、１：１のＡＳＡ：Ｐ５３、１：１のＡＳＡ：Ｐ３５、およびアセトンを用いて調製した１：３のＡＳＡ：９０Ｇを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果を表すグラフである。
【図１０】生理食塩水、ＡＳＡ（アスピリン）、アセトンを用い、冷却して調製した１：４のＡＳＡ：９０Ｇ、およびアセトンを用い、冷却せずに調製した１：４のＡＳＡ：９０Ｇを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果を表すグラフである。
【図１１】生理食塩水、フルルビプロフェン（ＦＵＲＩＢ）、およびアセトンを用いて調製した１：２のＦＵＲＩＢ：ＰＣを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果を表すグラフである。
【図１２】生理食塩水、ナプロキセン（Ｎａｐ）ナトリウム塩、１：１のＮａｐ：Ｐ３５、およびアセトンを用いて調製した１：２のＮａｐ：９０Ｇを比較した、ラットにおける急性胃病変の結果を表すグラフである。
【図１３】ＡＳＡ（アスピリン）、１：１のＡＳＡ：Ｐ３５、およびアセトンを用いて調製した１：３のＡＳＡ：９０Ｇを比較した、ランダル・セリット法を用いた、ラットにおけるＣＦＡによって誘発した炎症に対する疼痛閾値の結果を表すグラフである。
【図１４Ａ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットにおける足首の厚さに対する長期的な抗炎症効果の結果を表すグラフである。
【図１４Ｂ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットにおけるヘマトクリットレベルに対する長期的効果の結果を表すグラフである。
【図１４Ｃ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットにおけるＧＩ出血に対する長期的効果の結果を表すグラフである。
【図１４Ｄ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットにおける糞便失血に対する長期的効果の結果を表すグラフである。
【図１４Ｅ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットにおける長期的鎮痛作用の結果を表すグラフである。
【図１４Ｆ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットの体重に対する長期的ＮＳＡＩＤ処置の結果を表すグラフである。
【図１４Ｇ】ＣＦＡ処置無しの生理食塩水のＣＦＡ、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、ＣＦＡ処置後のＩＢＵ（イブプロフェン）、アセトンを用いて調製した１：２のＩＢＵ：９０Ｇ、およびＩＢＵ／ＰＣを３５％含有するレシチン油組成物であるＰＬｘ−２Ａ−２で処置したラットにおいてミエロペルオキシダーゼを用いて測定した、長期的な抗炎症効果の結果を表すグラフである。
【図１５Ａ】ＣＦＡ処置を伴う生理食塩水、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、プロピレングリコール中イブプロフェン（ＩＢＵ／ｐｇ）、アセトンを用いて調製した２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ  ２：１／油）油、およびアセトンを用いて調製したプロピレングリコール中２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ／ｐｇ）を用いた、ＣＦＡによって関節炎症を誘発した後のラットに対する局所的鎮痛効果から得られた疼痛閾値の結果を表すグラフである。
【図１５Ｂ】ＣＦＡ処置を伴う生理食塩水、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、プロピレングリコール中イブプロフェン（ＩＢＵ／ｐｇ）、アセトンを用いて調製した２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ  ２：１／油）油、およびアセトンを用いて調製したプロピレングリコール中２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ／ｐｇ）を用いた、ＣＦＡによって関節炎症を誘発した後のラットに対する局所的抗炎症効果から得られた足首の厚さの変化分の結果を表すグラフである。
【図１５Ｃ】ＣＦＡ処置を伴う生理食塩水、ＣＦＡ処置後の生理食塩水、プロピレングリコール中イブプロフェン（ＩＢＵ／ｐｇ）、アセトンを用いて調製した２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ  ２：１／油）油、およびアセトンを用いて調製したプロピレングリコール中２：１のイブプロフェン：９０Ｇ（ＰＣ：ＩＢＵ／ｐｇ）を用いた、ＣＦＡによって関節炎症を誘発した後のラットに対する局所的抗炎症効果から得られたミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の結果を表すグラフである。
【図１】
2008515977.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１４Ｇ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
2008515977.tif 000029
【手続補正書】
【提出日】平成18年10月20日(2006.10.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤおよび１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを極性溶媒中で接触させるステップであって、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を生成するのに十分な量で存在し、その結果、冷却時間の間、冷却温度まで冷却した際に溶液からＰＬがほとんどまたはまったく沈殿しないステップと、
前記溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップと
を含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５】
前記ＣＯＸ−２阻害剤が、セレコキシブ、ルミラコキシブ、メロキシカム、メロキシカム、ピロキシカム、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項９】
前記溶媒が、ＦＤＡによって認可されたレベル以下、または溶媒の検出限界以下である所望のレベルまで除去される、請求項１に記載の方法。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１１】
ヒトを含む動物に治療有効量の組成物を投与するステップを含む方法であって、
前記組成物が、１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤおよび１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを極性溶媒中で接触させるステップであって、ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を生成するのに十分な量で存在し、その結果、冷却時間の間、冷却温度まで冷却した際に溶液からＰＬがほとんどまたはまったく沈殿しないステップと、
前記溶媒を除去して、精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップと
を含む方法によって調製される方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２１】
前記溶媒が、ＦＤＡによって認可されたレベル以下、または溶媒の検出限界以下である所望のレベルまで除去される、請求項１１に記載の方法。
【手続補正６】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２３】
ある重量比のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤとＰＬを有する、１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬおよび１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤの精製された結合複合体を含む組成物であって、前記ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、ＰＬが中程度の溶解度を有するか、低度の溶解度を有するか、または不溶性である極性溶媒に前記組成物を溶解させ、かつＰＬ沈殿を促進することが公知である十分な冷却時間、冷却温度まで冷却し、かつ前記冷却温度で維持した場合に、ＰＬの沈殿を防ぐのに十分な量で存在する組成物。
【手続補正７】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３３】
１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬを極性溶媒に添加するステップと、
過剰なＰＬを含まないＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を生成するのに十分な量の、１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤを添加するステップと、
前記溶媒を除去して、ＦＤＡによって認可された溶媒レベル以下、または溶媒の検出限界以下の溶媒濃度を有する精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップと
を含む方法。
【手続補正８】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３４】
１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬおよびある量の１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤを、ＰＬおよびｓｎｓ−ＮＳＡＩＤを完全に溶解させるのに十分な時間かつ温度で、極性溶媒に接触させるステップと、
結果として生じる溶液を冷却温度まで冷却するステップと、
結合される量より過剰なＰＬを冷却された溶液から沈殿させるのに十分な時間、前記冷却温度で冷却溶液を維持するステップと、
沈殿したＰＬがあれば除去して、過剰なＰＬを含まないＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を形成させるステップと、
前記溶媒を除去して、ＦＤＡによって認可された溶媒レベル以下、または溶媒の検出限界以下の溶媒濃度を有する精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップと
を含む方法。
【手続補正９】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３５】
１種のリン脂質（ＰＬ）または複数種のＰＬおよびある量の１種の選択的もしくは非選択的非ステロイド系抗炎症薬（ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ）または複数種のｓｎｓ−ＮＳＡＩＤを、ＰＬおよびｓｎｓ−ＮＳＡＩＤを完全に溶解させるのに十分な時間かつ温度で、極性溶媒に接触させて、ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を形成させるステップと、
前記ＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体の粒子サイズ分布を低減するのに十分な時間および温度で、結果として生じる溶液を超音波処理するステップと、
結果として生じる溶液を冷却温度まで冷却するステップと、
結合される量より過剰なＰＬを冷却された溶液から沈殿させるのに十分な時間、前記冷却温度で冷却溶液を維持するステップと、
沈殿したＰＬがあれば除去して、過剰なＰＬを含まないＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む溶液を形成させるステップと、
前記溶媒を除去して、ＦＤＡによって認可された溶媒レベル以下、または溶媒の検出限界以下の溶媒濃度を有する精製されたＰＬ−ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤ結合複合体を含む組成物を形成させるステップと
を含む方法。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３６】
前記ｓｎｓ−ＮＳＡＩＤが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびＣＯＸ−２阻害剤からなる群から選択される、請求項３３、３４、または３５に記載の方法。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３７】
前記ＮＳＡＩＤが、フェノプロフェンカルシウム（Ｎａｌｆｏｎ（登録商標））、フルルビプロフェン（Ａｎｓａｉｄ（登録商標））、スプロフェン、ベノキサプロフェン、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ（登録商標）、Ａｄｖｉｌ（登録商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｄｕｉｓ、Ｏｒｕｖａｌｌ（登録商標））、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ（登録商標））、ナプロキセンナトリウム（Ａｌｅｖｅ（登録商標）、Ａｎａｐｒｏｘ（登録商標）、Ａｆｌａｘｅｎ（登録商標））、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（登録商標）、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））、ジクロフェナクカリウム（Ｃａｔａｆｌａｍ（登録商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ（登録商標））、ケトロラクトロメタミン（Ａｃｕｌａｒ、Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標）、筋肉内用）、ケトロラク（経口用Ｔｏｒａｄｏｌ（登録商標））、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（登録商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（登録商標））、トルメチンナトリウム（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（登録商標））、メクロフェナマートナトリウム（Ｍｅｃｌｏｍｅｎ（登録商標））、メフェナム酸（Ｐｏｎｓｔｅｌ（登録商標））、ピロキシカム（Ｄｏｌｉｂｉｄ（登録商標））、ジフルニサル（Ｆｅｌｄｅｎｅ（登録商標））、アスピリン、オキシフェンブタゾン（Ｔａｎｄｅａｒｉｌ（登録商標））、フェニルブタゾン（Ｂｕｔａｚｏｌｉｄｉｎ（登録商標））、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ（登録商標））、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３８】
前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェン、アスピリン、サリチル酸、ナプロキセン、インドメタシン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フルオビプロフェン、ケトプロフェン、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３９】
前記ＣＯＸ−２阻害剤が、セレコキシブ、ルミラコキシブ、メロキシカム、メロキシカム、ピロキシカム、もしくは新規に認可されたＣＯＸ−２阻害剤、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４０】
前記リン脂質が、一般式：
【化４】
2008515977.tif 000030
（式中、Ｒ１およびＲ２は、炭素原子８〜３２個の範囲の飽和または不飽和置換基であり；Ｒ３はＨまたはＣＨ３であり、かつＸはＨまたはＣＯＯＨであり；かつＲ４は、＝ＯまたはＨ２である。）
で表される１種または複数種の化合物である、請求項３３、３４、３５、３６、３７、３８、または３９に記載の方法。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４１】
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、他の二飽和ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンスフィンゴミエリンもしくは他のセラミド、ダイズ由来のレシチン油、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＬ−ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ダイズホスファチジルコリン（ダイズＰＣもしくはＰＣＳ）、卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣもしくはＰＣＥ）、およびそれらの混合物または組合せからなる群から選択されるホスファチジルコリンである、請求項３３、３４、３５、３６、３７、３８、または３９に記載の方法。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４２】
前記溶媒が、アセトン、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトンなど、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、イソプロピルアセタート、ブチルアセタート、イソブチルアセタートなどのアセタート、アセトニトリルなどのニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル、エチルホルマートなどのホルマート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ニトロメタン、四塩化炭素、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、１，１−ジクロロエテン、１，２−ジクロロエテン、ジクロロメタン、１，１，１−トリクロロエタンなどの塩化炭化水素、またはそれらの混合物もしくは組合せからなる群から選択される、請求項３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、または４１に記載の方法。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４３】
前記溶媒がアセトンである、請求項３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、または４１に記載の方法。
【国際調査報告】
2008515977.tif 000031
2008515977.tif 000032
2008515977.tif 000033
2008515977.tif 000034