(57)【要約】  本発明は、２，６−キノリニル誘導体、それらを調製するための方法、それらを含む医薬組成物及び医薬品としてのそれらの使用に関する。例えば、本発明による化合物は、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害並びにアテローム性動脈硬化の治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉを有する化合物、そのエナンチオマー、ジアステレオ異性体又はそれらの医薬として許容される塩
【化１】
2008542407.tif 000007
［式中、
Ｒ１は、水素、ヒドロキシル又はＣ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は、水素又はハロゲンであり；
ｎは、０から５であり；
Ｒ３は、水素又はハロゲンであり；
ｎ’は、０から４である］。
【請求項２】
Ｒ１が、ヒドロキシル又はメトキシであり；
Ｒ２がクロライドであり；
ｎが２であり；
Ｒ３がクロライドであり；
ｎ’が２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
不斉炭素原子が「Ｓ」配置である、請求項１及び２に記載の化合物。
【請求項４】
メチル−（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパノエート及び（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパン酸から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
化合物（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパン酸。
【請求項６】
活性成分として請求項１から５までのいずれか一項に記載の化合物の治療有効量及び医薬として許容される補助剤、希釈剤又は担体を含む医薬組成物。
【請求項７】
医薬として使用するための、請求項１から５までのいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
薬剤の製造における、請求項１から５までのいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項９】
α４β１及び／又はα４β７依存性の炎症状態又は病状を治療するための薬剤の製造における、請求項１から５までのいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化の治療用薬剤を製造するための、請求項８又は９に記載の使用。
【請求項１１】
α４に関連のある癌のための薬剤を製造するための、請求項８又は９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２，６−キノリニル誘導体、それらを調製するための方法、それらを含む医薬組成物及び医薬品としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インテグリンα４β１（ＶＬＡ−４又は最遅延抗原−４とも呼ばれ、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９を表す）は、主に好酸球、リンパ球、単球及び好塩基球に発現する。これは、炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１並びに選択的にＩＬ−４及びＩＬ−１３）に応答して内皮細胞に発現される血管細胞表面接着分子ＶＣＡＭ−１に最初に結合し、それから細胞外マトリクスタンパク質であるフィブロネクチンに結合する。
【０００３】
α４β１は、感染に対する最初の防御である、循環好中球に発現されないため、α４β１は炎症性疾患の薬理学的管理の標的である。
【０００４】
いくつかのｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ研究は、炎症性病変を介する細胞接着においてα４β１が重要な役割を果たすこと、及びその機能を阻害することは有益であることを示している。疾患には、喘息、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）又は炎症性腸疾患が含まれる。
【０００５】
骨髄間質細胞に発現されるフィブロネクチンに結合することによって長期生存を示す白血病細胞にも、α４β１は発現される。化学療法の存在下で、この相互作用を阻害することは、急性骨髄性白血病の再発を予防するのに有益である。
【０００６】
α４β１及びＶＣＡＭ−１は、成人大動脈のアテローム硬化性内膜肥厚由来の平滑筋細胞においても確認されている。この相互作用を阻害することは、平滑筋の分化及びアテローム性動脈硬化を予防するのに有益である。
【０００７】
炎症細胞におけるα４β１とフィブロネクチンとの相互作用は、慢性の同種移植片不全を増加させることも示されている。この相互作用を阻害することは、移植生存を維持するのに有益である。
【０００８】
インテグリンα４β７（ＬＰＡＭ−１とも呼ばれる）は、Ｔ及びＢリンパ球の特定の亜母集団並びに好酸球に発現される。α４β１と同様に、α４β７はＶＣＡＭ−１とフィブロネクチンに結び付ける。その上、α４β７は細胞表面接着分子ＭＡｄＣＡＭ−１に結合し、このＭＡｄＣＡＭ−１は、胃腸管に優先的に発現され、白血球の胃腸粘膜へのホーミングに関与していると考えられている。また、α４β７とＭＡｄＣＡＭ−１との間の相互作用は、粘膜組織の外側の炎症の重要な部位であると思われる。
【０００９】
いくつかの研究は、α４β７が炎症性腸疾患に関与しており、その機能を阻害することが有益であることを示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
国際特許出願ＷＯ００／１５６１２には、一般式
【化１】
2008542407.tif 000002
［式中、Ｒは、水素、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯアルキルなどのいくつかの置換基を表す］を有する化合物が開示されている。これらの化合物は医薬化合物の調製における中間化合物として使用され得るが、これら化合物自体については、医薬としての有用性は探求されていない。
【００１１】
国際特許出願ＷＯ０３／０９３２３７は、２，６−キノリニル及び２，６−ナフチル誘導体を、ＶＬＡ−４依存性の炎症性疾患の治療のための医薬品として開示している。
【００１２】
本発明者らは今度、これらの２，６−キノリニル化合物のいくつかの類似体が、α４β１及び／又はα４β７などのα４インテグリンの強力で選択的な阻害剤であり、改良された経口のバイオアベイラビリティー、低クリアランス及び高吸収を実証することを見い出した。これらの化合物は、他の亜群のαインテグリンに対する阻害作用が全くないか、又は最低限である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
したがって、一の態様において、本発明は、式Ｉを有する化合物、そのエナンチオマー、ジアステレオ異性体又はそれらの医薬として許容される塩
【化２】
2008542407.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、水素、ヒドロキシル又はＣ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は、水素又はハロゲンであり；
ｎは、０から５であり；
Ｒ３は、水素又はハロゲンであり；
ｎ’は、０から４である］
を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本明細書において使用される「アルキル」という用語は、直鎖若しくは分枝の部分又はこれらの組合せを有し、１から６個の炭素原子、好ましくは１から２個の炭素原子を含む１価の飽和炭化水素基を表すか、或いはそのメチレン（−ＣＨ２−）の１個が酸素原子に置換されていてもよい。好ましいアルキル基はメトキシである。
【００１５】
本明細書において使用される「ヒドロキシル」という用語は、式−ＯＨの基を表す。
【００１６】
本明細書において使用される「ハロゲン」という用語は、塩素、臭素、フッ素又はヨウ素の原子を表す。好ましいハロゲンは塩素である。
【００１７】
通常、Ｒ１は、水素、ヒドロキシル又はＣ１〜６アルキルである。好ましいＲ１はヒドロキシル及びメトキシである。最も好ましいＲ１はヒドロキシルである。
【００１８】
通常、Ｒ２は、水素又はハロゲンである。好ましいＲ２はハロゲンである。より好ましいＲ２はクロライドである。最も好ましいＲ２は、フェニル環の２位及び６位にあるクロライドである。
【００１９】
通常、ｎは、０から５である。好ましいｎは、１、２又は３である。より好ましいｎは２である。
【００２０】
通常、Ｒ３は、水素又はハロゲンである。好ましいＲ３はハロゲンである。より好ましいＲ３はクロライドである。最も好ましいＲ３は、ピリジン環の３位及び５位にあるクロライドである。
【００２１】
通常、ｎ’は、０から４である。好ましいｎ’は、１、２又は３である。より好ましいｎ’は２である。
【００２２】
通常、Ｒ２は、フェニル環の２位又は４位にある塩素原子である。好ましいＲ２は、少なくとも、フェニル環の２位又は４位にある塩素原子である。より好ましいＲ２は、フェニル環の２位及び４位にある塩素原子である。
【００２３】
通常、Ｒ３は、ピリジン環の３位又は５位にある塩素原子である。好ましいＲ３は、少なくとも、ピリジン環の３位又は５位にある塩素原子である。より好ましいＲ３は、ピリジン環の３位及び５位にある塩素原子である。
【００２４】
好ましい化合物は、メチル−（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパノエート及び（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパン酸並びにそれらの医薬として許容される塩である。
【００２５】
最も好ましい化合物は、（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパン酸及びその医薬として許容される塩である。
【００２６】
式Ｉの化合物及びそれらの中間体のいくつかは、それらの構造中に少なくとも１個の立体中心を有する。この立体中心は、Ｒ又はＳ配置の状態で存在することが可能であり、前記Ｒ及びＳ表記はＰｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７６），４５，１１〜３０に記載されている規則に一致して使用される。
【００２７】
上記範囲のすべてにおいて、不斉炭素原子は「Ｓ」配置であることが好ましい。
【００２８】
本明細書による「医薬として許容される塩」は、式Ｉの化合物が形成することができる、治療上活性な非毒性の、塩基性及び酸性の塩の形態を含む。
【００２９】
遊離形で塩基として存在する式Ｉの化合物の酸付加塩の形態は、遊離塩基を適切な酸で処理することによって得ることができ、このような酸としては、無機酸（例えば、塩酸若しくは臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など）、又は有機酸（例えば、酢酸、ヒドロキシ酢酸、プロパン酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、琥珀酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモン酸など）が挙げられる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ＆Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ），Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ−Ｚｕｒｉｃｈ，２００２，３２９〜３４５）。
【００３０】
酸性プロトンを含む式Ｉの化合物は、適切な有機塩基及び無機塩基で処理することによって、例えば、金属塩又はアミン塩などの、治療上活性な非毒性の塩基付加塩の形態に変換することができる。適切な塩基性塩の形には、例えば、アンモニウム塩、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ金属及びアルカリ土類金属の塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩、ヒドラバミン塩などの有機塩基との塩、及びアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩が含まれる（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ＆Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ），Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ−Ｚｕｒｉｃｈ，２００２，３２９〜３４５）。
【００３１】
反対に、前記塩の形態は、適切な塩基又は酸で処理することによって遊離形に変換することができる。
【００３２】
式Ｉの化合物及びそれらの塩は、溶媒和物の形態をとることができ、この形態は本発明の範囲内に含まれる。かかる溶媒和物には、例えば、水和物、アルコラートなどが含まれる。
【００３３】
本発明はまた、式Ｉの化合物のエナンチオマーの形態及びジアステレオ異性体の形態などの立体異性体のすべての形態又はそれらの混合物（立体異性体の可能なすべての混合物を含む）に関する。
【００３４】
式Ｉの化合物の中には、互変異性形で存在するものもあり得る。かかる形態は、上記式に明白に示されないが、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００３５】
本発明については、１個又は複数の化合物への言及は、特定の異性体の形が具体的に言及されない場合には、その可能な異性体の形のそれぞれにおける化合物、及びそれらの混合物を包含することが意図される。
【００３６】
本発明による化合物は、異なる多形の形態で存在することができる。上記式に明白に示されないが、かかる形態は、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００３７】
本発明は、式Ｉの化合物を調製するための方法にも関する。
【００３８】
それらの発明によると、式Ｉの化合物は、有機合成化学分野における技術者によって理解されているように、ＷＯ０３／０９３２３７に記載されている従来の方法と同じように調製することができる。
【００３９】
式Ｉの化合物に１個の立体中心が存在し、非立体選択的な合成法を使用する場合、立体異性体の混合物の分割は、ジアステレオマーの混合物を、それらを構成しているラセミ化合物に逐次的に分離することを一般に含む１工程又は数工程で最大の効果を発揮することができ、逆相法又は好ましくは直接法で、アキラル相又はキラル相上でのクロマトグラフ分離を使用することが好ましく、次いで、各ラセミ化合物をそのエナンチオマーに分割する少なくとも１つの最終的な１工程を行い段階として、逆相法又は好ましくは直接法で、キラル相上でのクロマトグラフ分離を使用することが最も好ましい。また、部分的に立体選択的な合成法を使用する場合、最終工程はジアステレオマーの分離である可能性があり、逆相法又は好ましくは直接法で、アキラル相又はキラル相上でのクロマトグラフ分離を使用することが好ましい。
【００４０】
式Ｉの化合物及びそれらの医薬として許容される塩は、種々の薬学的適応症に有用であることが現在見い出されている。
【００４１】
例えば、本発明による化合物は、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化の治療に有用である。
【００４２】
したがって、本発明は、さらなる態様では、上記のような障害の治療用薬剤を製造するための、式Ｉの化合物又はその医薬として許容される塩の使用に関する。
【００４３】
特に、本発明は、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化などの、α４β１及び／又はα４β７依存性の炎症状態又は病状の治療用薬剤を製造するための、式Ｉの化合物又はその医薬として許容される塩の使用に関する。
【００４４】
本発明の化合物は、接着機構が介在する状態を治療するのに有用である。これらの状態には、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化が含まれることが好ましい。
【００４５】
α４β１及び／又はα４β７依存性の炎症状態又は病状、好ましくは、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化のための治療を必要としている患者については、酸素ラジカルの形成を低減するために、医薬として許容される担体又は希釈剤中で、上記特定の１種若しくは複数種の化合物又は医薬として許容される誘導体又はその塩の有効量を、該患者に投与することによって治療することができる。活性物質を、任意の適切な経路によって、例えば、経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、筋肉内又は局所に、液剤、クリーム、ジェル又は固体剤形態で、口腔内若しくは鼻内スプレー又はエアゾール剤によって投与することができる。
【００４６】
本発明はさらに、治療に適用することを目的とした薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。特に、本発明は、α４β１及び／又はα４β７依存性成分が存在することが見込まれる状態を治療するのに有用な薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。本発明は、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化を治療するのに有用な薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４７】
本発明はさらに、薬剤として使用するための、式Ｉの化合物に関する。本発明は、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化の治療用薬剤として使用するための、式Ｉの化合物に関する。
【００４８】
活性化合物の活性及び特性、経口のアベイラビリティー並びにｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ安定性は、開示される化合物の光学異性体の間で著しく異なる可能性がある。
【００４９】
好ましい実施形態では、活性化合物は、エナンチオマーが豊富な形態、すなわち、実質的に１つの異性体の形態で投与される。
【００５０】
本発明はまた、α４β１及び／又はα４β７依存性の炎症状態又は病状（好ましくは、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、結膜炎、食物アレルギー；皮膚炎、乾癬、じんま疹、痒み及び湿疹を含む炎症性皮膚障害、関節リウマチ；クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症及び他の自己免疫障害、急性骨髄性白血病、移植並びにアテローム性動脈硬化）を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする哺乳類において、式Ｉの少なくとも１種の化合物又はその医薬として許容される塩の治療用量を患者に投与することを含む方法に関する。
【００５１】
本発明の方法は、上記の状態又は障害に罹患している哺乳類（好ましくはヒト）に、本発明による化合物を、該障害又は状態を緩和又は予防するために十分な量で投与することを含む。
【００５２】
本発明の化合物は都合に合わせ任意の好適な単位剤形で投与され、これには、単位剤形当たり、０．０１から２０００ｍｇ、好ましくは０．０５から５００ｍｇの活性成分を含む単位剤形が含まれるが、これらに限定するものではない。
【００５３】
本明細書において使用される「治療」という用語には、治癒的治療及び予防的治療が含まれる。
【００５４】
本明細書において使用される「実質的に」という用語は、１種の異性体が９５％以上の組成、好ましくは９８％の組成を指す。
【００５５】
「治癒的」とは、障害又は状態の、現下の症状発現を治療する点での有効性を意味する。
【００５６】
「予防的」とは、障害又は状態の、発生又は再発の、予防を意味する。
【００５７】
本発明の化合物は、細胞接着の調節に役立ち、特に、白血球の管外遊出が一因となる疾患又は障害の、予防及び治療に役立ち、また本発明は、かかる使用及びかかる疾患又は障害の治療用薬剤を製造するための化合物の使用にまで及ぶ。
【００５８】
このタイプの疾患又は障害には、関節リウマチなどの炎症性関節炎、血管炎又は多発性皮膚筋炎、多発性硬化症、移植、糖尿病；乾癬又は皮膚炎などの炎症性皮膚病、喘息及び炎症性腸疾患が含まれる。
【００５９】
本発明の一態様には、α４に関連のある癌（固形又は造血性のいずれの癌も含む）を治療するための方法が含まれる。このような癌の例には、肺癌、例えば非小細胞癌、膵臓癌、前立腺癌、腎癌、子宮頚癌、卵巣癌、結腸直腸癌、乳癌、子宮内膜癌、膀胱癌、悪性黒色腫、精上皮腫、甲状腺癌、急性骨髄性白血病及び胃癌が含まれるが、これらに限定するものではない。
【００６０】
式Ｉの化合物を用いて得られた結果は、強力な薬理効果を示す。
【００６１】
疾患を治療するために、式Ｉの化合物又はそれらの医薬として許容される塩は、有効な１日投与量で使用すればよく、医薬組成物の形で投与することができる。
【００６２】
したがって、本発明の他の実施形態は、式Ｉの化合物又はその医薬として許容される塩の有効量を、医薬として許容される希釈剤又は担体と一緒に含む医薬組成物に関する。
【００６３】
本発明による医薬組成物を調製するために、式Ｉの１種若しくは複数種の化合物又はその医薬として許容される塩は、当業者に知られている従来の医薬用配合技術に従って、医薬用の希釈剤又は担体と完全に混合される。
【００６４】
好適な希釈剤及び担体は、所望の投与経路、例えば、経口、直腸又は非経口などに応じて、幅広い種類の形態をとることができる。
【００６５】
本発明による化合物を含む医薬組成物は、例えば、経口又は非経口、すなわち、静脈内、筋肉内、皮下若しくは髄腔内に投与することができる。
【００６６】
経口投与に適した医薬組成物は、固体又は液体であることができ、例えば、錠剤、丸剤、糖衣錠、ゼラチンカプセル剤、液剤、シロップ剤などの形をとることができる。
【００６７】
この目的のために、活性成分は、不活性な希釈剤、又はデンプン若しくは乳糖などの医薬として許容される非毒性の担体と混合してよい。場合によって、これらの医薬組成物はまた、微結晶性セルロース、トラガカントゴム若しくはゼラチンなどの結合剤、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤、蔗糖若しくはサッカリンなどの甘味剤、又は着色剤又はハッカ若しくはサリチル酸メチルなどの着香剤を含むことができる。
【００６８】
本発明はまた、制御された方法で活性物質を放出することができる組成物を企図する。非経口投与に使用することができる医薬組成物は、一般にアンプル、使い捨て注射器、ガラス製若しくはプラスチック製バイアル又は注入容器に収められている、水溶液又は油性溶液又は懸濁液などの従来の形をとる。
【００６９】
活性成分に加えて、これらの溶液又は懸濁液は、注射用の水、生理食塩溶液、油剤、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールなどの抗菌剤、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどの浸透圧調節剤も、場合によって含むことができる。
【００７０】
これらの医薬剤形は、薬剤師によってごく普通に使用される方法を使用して調製される。
【００７１】
医薬組成物中の活性成分の量は、幅広い濃度範囲の中にあることができ、患者の性別、年齢、体重及び病状などの種々の因子並びに投与方法によって決まる。したがって、経口投与用組成物中の式Ｉの化合物の量は、該組成物の総重量に対して少なくとも０．５重量％であり、８０重量％までであることができる。
【００７２】
好ましい経口組成物については、１日投与量は、式Ｉの化合物が０．０１から２０００ミリグラム（ｍｇ）の範囲内にある。
【００７３】
非経口投与用組成物中では、本式Ｉの化合物の量は、該組成物の総重量に対して少なくとも０．５重量％であり、３３重量％までであることができる。好ましい非経口組成物については、投与量単位は、式Ｉの化合物が０．０１ｍｇから２０００ｍｇの範囲内にある。
【００７４】
日用量は、式Ｉの化合物の投与量単位の幅広い範囲内にあることができ、一般に０．０１から２０００ｍｇの範囲内にある。しかし、具体的な用量は、医師の自由裁量で、個々の所要量に応じて特定の症例に適応させ得ることは理解されるべきである。
【００７５】
以下の実施例は、例示を目的としてのみ提供されるものであり、本発明をいずれかの方法に限定するつもりはなく、また限定するものとして解釈されるべきでもない。当業者であれば、以下の実施例のごく普通の改変例及び変更例が、本発明の精神又は範囲を超えずに行われ得ることを認識している。
【００７６】
実施例に記載される化合物のＩＵＰＡＣ名は、ＡＣＤ６．００版を用いた。
【００７７】
実施例において他に特に規定がなければ、化合物の特徴付けは、以下の方法に従って行われる。
【００７８】
ＮＭＲスペクトルは、プロトンに対して３００．１３ＭＨｚ又は４００．１３ＭＨｚで作動し、Ｂｒｕｋｅｒ  ＸＷＩＮＮＭＲソフトウェアパッケージを実行する、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ−３００分光器又はＤＲＸ−４００分光器に記録される。特に明記しない限り、スペクトルは室温で得られる。化学シフトは、残留溶媒又は内部のＴＭＳのどちらか一方のシグナルを基準としてｐｐｍ単位で示される。
【００７９】
ＨＰＬＣ分析は、１つの以下のシステムを使用して行う。すなわち、ＨＰ１１００（Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ）がＦｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣ−Ｑ質量分析計、Ｐｏｓ／ＮｅｇＥＳＩモードイオン化装置、検出器波長ＤＡＤ２００〜４００ｎｍに連結されており、ＬＵＮＡ  Ｃ１８（２）、ＤＰ５μｍ、１００×４．６ｍｍ分析用カラムを取り付けて行う。勾配は、溶媒Ａ（水＋０．０８％ギ酸）から溶媒Ｂ（アセトニトリル＋０．０８％ギ酸）までを６．５分で実行し、９５％Ｂで９．７分保持し、５％Ｂで１１．８２分保持した。流速は３ｍｌ／ｍｉｎに設定する。クロマトグラフィーは３５℃で行う。
【００８０】
実施例では以下の略語を使用する。
ＴＦＡ                      トリフルオロ酢酸
ＴＥＡ                      トリエチルアミン
ＤＣＭ                      ジクロロメタン
ＮａＯＨ                    水酸化ナトリウム
ＨＣｌ                      塩酸
ＮａＨＣＯ３                炭酸水素ナトリウム
ＭｇＳＯ４                  硫酸マグネシウム
ＴＨＦ                      テトラヒドロフラン
ＭｇＣｌ  Ｈ２Ｏ            塩化マグネシウム一水和物
ＮａＣｌ                    塩化ナトリウム
Ｈ２Ｏ２                    過酸化水素
ＭｅＯＨ                    メタノール
ＥｔＯＨ                    エタノール
ＥｔＡｃ                    酢酸エチル
ＣａＣｌ２                  塩化カルシウム
ＫＣｌ                      塩化カリウム
ＭｎＣｌ２                  塩化マンガン
ＮａＨ２ＰＯ４  ２Ｈ２Ｏ    リン酸二水素ナトリウム二水和物
ＴＭＢ                      テトラメチルベンジジン
ＰＢＳ                      リン酸緩衝生理食塩水
ＴＢＳ                      トリス緩衝生理食塩水
ＡＤＰ                      アデノシン５’−二リン酸
ＢＳＡ                      ウシ血清アルブミン
ＦＣＳ                      ウシ胎児血清
室温                        ＲＴ
Ｗ                          重量
Ｖ                          体積
【実施例】
【００８１】
（実施例１）
メチル−（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパノエート（１）の合成
【化３】
2008542407.tif 000004
メチル−（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパノエート（化合物番号２６、国際特許出願ＷＯ０３／０９３２３７）（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶かし、ＤＣＭ（２ｍｌ）中のＴＦＡ（０．８ｍｌ、１０．５ｍｍｏｌ）溶液を１０分かけて滴下した。滴下完了後、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を０℃に冷却し、ＤＣＭ（２ｍｌ）中ＴＥＡ（２．１ｍｌ、１５．８ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した。反応物を−１０℃に冷却し、３，５ジクロロ−イソニコチノイルクロライド（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１５９１〜１５９４）（６６３ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した後、反応物を室温に暖めた。１時間後、反応物をＨＣｌ水（１Ｎ、１０ｍｌ）で洗浄し、次いでＮａＨＣＯ３水溶液（飽和、１０ｍｌ）で洗浄した。ＤＣＭ層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除去して灰白色固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（溶離液ＥｔＡｃ）を使用して該固体を精製し、目的の化合物を白色粉末（４３２ｍｇ、７５％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋１（５５２、５５０、５４８）、保持時間３．８２分、
【化４】
2008542407.tif 000005
【００８２】
（実施例２）
（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパン酸（２）の合成
メチル−（２Ｓ）−２−［（３，５−ジクロロイソニコチノイル）アミノ］−３−［２−（２，６−ジクロロフェニル）−６−キノリニル］プロパノエート（４１０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍｌ）に溶かし、撹拌下のＮａＯＨ水溶液（２Ｍ、２．５ｍｌ）に３時間かけて滴下した。滴下完了後、反応物を室温で一時間撹拌し、その後ＴＨＦを減圧下で除去した。得られたスラリーを水（６ｍｌ）で希釈し、ＨＣｌ（１２Ｍ）を使用してｐＨ−４に酸性化した。結果として生じた沈殿物を、ろ過することによって集め、水（１５ｍｌ）で洗浄し、減圧下（４０℃）で一晩乾燥させて、所望の生成物を白色粉末（２７４ｍｇ、６８％）として得た。ＬＣＭＳ  Ｍ＋１（５３５、５３７）、Ｍ−１（５３４、５３６）、保持時間３．３９分、
【化５】
2008542407.tif 000006
キラルＨＰＬＣ９７％ｅｅ、保持時間６．２９分（カラム−ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ  ２５０×４．６ｍｍ、１０μｍ；溶媒Ａ  １−プロパノール＋０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂイソへキサン；定組成２０％Ａ：８０％Ｂ；温度４０℃；移動時間１５ｍｉｎ；検出２８０ｎＭ）。
【００８３】
（実施例３）
以下の細胞アッセイを使用して、本発明による化合物の効能及び選択性を実証する。これらの各アッセイにおいて、ＩＣ５０値は各試験化合物に対して決定した。ＩＣ５０値は、細胞接着を５０％阻害するのに必要な化合物の濃度を表す。ここで、１００％とは試験化合物の非存在下に評価された接着であり、０％とは細胞を入れなかったウェルでの吸光度である。
【００８４】
α４β１インテグリン依存性のＪｕｒｋａｔ細胞のＶＣＡＭ−Ｉｇへの接着：
９６ウェルＮＵＮＣプレートを、Ｆ（ａｂ）２フラグメントヤギ抗−ヒトＩｇＧ  Ｆｃγ−特異抗体［Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １０９−００６−０９８：０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３中２μｇ／ｍｌで１００μｌ、ｐＨ８．４］で、４℃にて一晩コートした。プレートをＰＢＳで洗浄し（３回）、次いでＰＢＳ／１％ＢＳＡを用いて、揺動台上で室温にて１時間ブロックした。洗浄（ＰＢＳで３回）後、ＰＢＳ／１％ＢＳＡに希釈した精製２ｄ  ＶＣＡＭ−Ｉｇを９ｎｇ／ｍｌ加え、プレートを揺動台上で室温にて６０分間放置した。プレートを洗浄し（ＰＢＳで３回）、次いでアッセイを、２．５×１０５のＪｕｒｋａｔ細胞を含む合計体積２００μｌを用い、滴定される試験化合物の存在下又は非存在下で、３７℃にて３０分間行った。
【００８５】
各プレートを培地で洗浄し（２回）、接着細胞をＭｅＯＨ１００μｌで１０分間固定し、続いて再度洗浄した。ＰＢＳ中０．２５％ローズベンガル（Ｓｉｇｍａ  Ｒ４５０７）１００μｌを室温にて５分間で加え、プレートをＰＢＳで洗浄した（３回）。ＰＢＳ中５０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ１００μｌを加え、プレートを６０分間放置した後、吸光度（５７０ｎｍ）を測定した。
【００８６】
α４β７インテグリン依存性のＪＹ細胞のＭＡｄＣＡＭ−Ｉｇへの接着：
このアッセイは、α４β１アッセイと同様の方法で行ったが、２ｄ  ＶＣＡＭ−Ｉｇの代わりにＭＡｄＣＡＭ−Ｉｇ（１５０ｎｇ／ｍｌ）を使用し、Ｊｕｒｋａｔ細胞の代わりにβ−リンパ芽球状細胞系ＪＹの亜系を使用した。各試験化合物に対するＩＣ５０値は、α４β１インテグリンアッセイに記載の通りに決定した。
【００８７】
α４インテグリンに対する全血ＶＣＡＭ結合アッセイ：
ＦＡＣＳチューブに、以下の試薬、すなわち１００ｍＭ  ＭｎＣｌ２（所要濃度の１００倍）３μｌ、１ｍｇ／ｍｌストレプトアビジン−ＦＩＴＣ（供給業者Ｐｉｅｒｃｅ、所要濃度の１００倍）１μｌ、５００μｇ／ｍｌビオチニル化ｈＶＣＡＭ−１−ｍＦｃ（所要濃度の５０倍）２μｌ、及び所望の最終濃度の５０倍に逐次希釈した試験化合物２μｌを加えた。次いで、健康人提供者からのヘパリン添加血１００μｌを各ＦＡＣＳチューブに加え、次いでこれらを密封し、室温で３０分間揺動させた。「ＦＡＣＳ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ」（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）溶液２ｍｌを室温ＲＴにて５分間でチューブに加え、チューブを１２００ｒｐｍで回転させ、ＴＢＳ３ｍｌで２回洗浄した後、最終的にＴＢＳ１００μｌに懸濁した。次いで、フローサイトメトリーをＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎで行い、ＶＣＡＭを結合させる能力のあるリンパ球ゲートにおける細胞の％を評価した。
【００８８】
α５β１インテグリン依存性のＫ５６２細胞のフィブロネクチンへの接着：
９６ウェル組織培養プレートを、ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌのヒト血漿フィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ  Ｆ０８９５）で、３７℃にて２時間コートした。該プレートを洗浄し（ＰＢＳで３回）、次いで１００μｌのＰＢＳ／１％ＢＳＡを用いて、揺動台上で室温にて１時間ブロックした。ブロックしたプレートを洗浄し（ＰＢＳで３回）、次いでアッセイを、２．５×１０５のＫ５６２細胞、ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート１０ｎｇ／ｍｌを含み、滴定した試験化合物の存在下又は非存在下、合計体積２００μｌを用いて３７℃で行った。インキュベーション時間は３０分であった。上のα４β１アッセイに記載の通り、各プレートを固定し染色した。
【００８９】
αｍβ２依存性のヒト多形核好中球のプラスチックへの接着：
９６ウェル組織培養プレートを、ＲＰＭＩ１６４０／１０％ＦＣＳで、３７℃にて２時間コートした。１０ｎｇ／ｍｌホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートの存在下、及び試験化合物の存在下又は非存在下、新たに単離したヒト静脈多形核好中球（ＰＭＮ）２×１０５を該ウェルに加えて合計体積２００μｌにし、３７℃で２０分間、続いて室温ＲＴで３０分間インキュベートした。該プレートを培地で洗浄し、０．０５Ｍリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ６．０中０．１％（ｗ／ｖ）臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（Ｓｉｇｍａ  Ｈ５８８２）１００μｌを各ウェルに加えた。次いで、該プレートを揺動器上で室温ＲＴにて６０分間放置した。次いで、内因性ペルオキシダーゼ活性をＴＭＢを使用して以下の通り評価した。すなわち、ＰＭＮ溶解物サンプルを、０．１Ｍ酢酸ナトリウム／クエン酸緩衝液、ｐＨ６．０中０．２２％Ｈ２Ｏ２（Ｓｉｇｍａ）及び５０μｇ／ｍｌＴＭＢ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）と混合し、吸光度を６３０ｎｍで測定した。
【００９０】
αＩＩｂ／β３依存性のヒト血小板凝集：
ヒト血小板凝集を、インピーダンス凝集を使用して、Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｌｏｏｄ  Ｌｕｍｉａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｅｒで評価した。新鮮なヒト静脈血に、０．３８％（ｖ／ｖ）クエン酸三ナトリウムを加えて血液凝固を阻止し、２２０×ｇで１０分間回転させることによって、ヒト血小板の豊富な血漿（ＰＲＰ）を得、自己血漿で６×１０８／ｍｌの細胞密度に希釈した。キュベットに、同体積のＰＲＰ及びろ過済タイロード緩衝液（ｇ／ｌｉｔｅｒ：ＮａＣｌ  ８．０；ＭｇＣ１２．Ｈ２Ｏ  ０．４２７；ＣａＣ１２  ０．２；ＫＣｌ  ０．２；Ｄ−グルコース１．０；ＮａＨＣＯ３  １．０；ＮａＨ２ＰＯ４．２Ｈ２Ｏ  ０．０６５）を入れた。２．５μＭ  ＡＤＰ（Ｓｉｇｍａ）を加えた後、阻害剤の存在下又は非存在下で、凝集をモニターした。
【００９１】
αｖβ３インテグリン依存性のＪＹのビトロネクチンへの接着：
９６ウェルＮＵＮＣプレートを、ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍｌのヒトビトロネクチン（Ｐｒｏｍｅｇａ）で３７℃にて２時間コートした。該プレートを洗浄し（ＰＢＳで２回）、次いで１００μｌのＰＢＳ／１％ＢＳＡを用いて、揺動台上で室温にて１時間ブロックした。次いで、ブロックしたプレートを洗浄し（ＰＢＳで２回）、次いでアッセイを、２×１０５のＪＹ細胞、ｌ０ｎｇ／ｍｌのホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートを含み、滴定した試験化合物の存在下又は非存在下、合計体積２００μｌを用いて３７℃で行った。ＪＹ細胞を、６．５Ｅと称されるβ２インテグリンに対するモノクローナル抗体５μｇ／ｍｌで１５分間プレインキュベートし、β２依存性の非特異性結合が起こらないようにした。上述したα４β１アッセイに記載したようにして、各プレートを固定し染色した。
上記アッセイにおいて、実施例の化合物などの本発明の化合物は、一般に、α４β１アッセイでは１μＭ以下の、α４β７アッセイでは１μＭ以下のＩＣ５０値を有する。他の亜群のαインテグリンを特徴付ける他のアッセイにおいて、同化合物は５０μＭを超えるＩＣ５０値を有した。従ってα４インテグリンに対するそれらの作用の効能及び選択性が実証された。
【国際調査報告】
2008542407.tif 000008
2008542407.tif 000009