(57)【要約】  ２４個未満のアミノ酸を含むペプチドが提供される。前記ペプチドは、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する。また、非ミリストイル化ＭＡＮＳペプチドも提供される。また、ペプチドを使用する様々な方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物においてムチンの過剰分泌を抑制する方法であって、ムチンの過剰分泌を抑制するペプチドのムチン過剰分泌抑制量を哺乳動物に投与することを含み、前記ペプチドが２４個未満のアミノ酸から成り、
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記ペプチドの１以上のアミノ酸が場合により独立して化学修飾されている、方法。
【請求項２】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＮ末端アミノ酸で始まる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の２位のアミノ酸から２１位のアミノ酸で始まる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の隣接残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥ（配列番号２１９）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の８から１４個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の１０から１２個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ペプチドのＮ末端アミノ酸が、Ｎ末端アミノ基でアルキル化、アミド化又はアシル化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でミリストイル化されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でアセチル化されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でミリストイル化されていない、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ペプチドが、アセチル−ペプチド１０６、ペプチド１０６及びペプチド１０６−ＮＨ２から成る群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ペプチドが、ペプチド１５、ペプチド４５、ペプチド９１及びペプチド１５３から成る群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項１４】
ペプチドが、ペプチド７９、ペプチド２３３、ペプチド２３４、ｍｙｒ−ペプチド２３４−ＮＨ２及びペプチド２３５から成る群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
ペプチドがアセチル−ペプチド２１９である、請求項４に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
哺乳動物におけるムチンの過剰分泌が、哺乳動物における肺疾患によって引き起こされる、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
肺疾患が、喘息、慢性気管支炎、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症から成る群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、標準配列で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で標準配列で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
哺乳動物においてムチンの過剰分泌を抑制する方法であって、ムチンの過剰分泌を抑制するペプチドのムチン過剰分泌抑制量を哺乳動物に投与することを含み、前記ペプチドが、
（ａ）配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がミリストイル化されておらず、場合により独立して化学修飾されていてもよく、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が、場合により独立して化学修飾されており、
前記ペプチドが、ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたときムチンの過剰分泌抑制作用を有する、方法。
【請求項２１】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がアセチル化されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
２３個未満のアミノ酸から成り、
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、
前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がアセチル化されており、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン過剰分泌抑制作用を有する、ペプチド。
【請求項２４】
ペプチドのＣ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基でアミド化又はエステル化されている、請求項２３に記載のペプチド。
【請求項２５】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、アンモニア、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアミド化されている、請求項２３に記載のペプチド。
【請求項２６】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコール又は２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］でエステル化されている、請求項２３に記載のペプチド。
【請求項２７】
ペプチドが、アセチル−ペプチド１０６及びアセチルペプチド２１９から成る群より選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項２３に記載のペプチド。
【請求項２９】
２４個未満のアミノ酸から成り、
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、
ＡがＫで置換される；Ｆ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ及び／又はＥがＡで置換される；又はＱがＥで置換される、少なくとも１個のアミノ酸置換を含み、
前記ペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、及び
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン過剰分泌抑制作用を有する、ペプチド。
【請求項３０】
Ｎ末端アミノ酸がＮ末端アミンにおいて、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアルキル化されている、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３１】
Ｎ末端アミノ酸がＮ末端アミンにおいて、Ｃ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸又はＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸でアミド化されている、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３２】
ペプチドのＣ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基でアミド化又はエステル化されている、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３３】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、アンモニア、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアミド化されている、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３４】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコール又は２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］でエステル化されている、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３５】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３６】
ペプチドが、ペプチド２３３から２４５及びペプチド２４７から２５１から成る群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３７】
２４個未満のアミノ酸から成り、
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、
前記ペプチドのＮ末端配列が前記標準配列の２位から２１位で始まり、及び
前記ペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、及び
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン過剰分泌抑制作用を有する、ペプチド。
【請求項３８】
Ｎ末端アミノ基が、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアルキル化されている、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項３９】
Ｎ末端アミノ基が、Ｃ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸又はＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸でアミド化されている、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項４０】
ペプチドのＣ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基でアミド化又はエステル化されている、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項４１】
Ｃ末端カルボキシル基が、アンモニア、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアミド化されている、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項４２】
Ｃ末端カルボキシル基が、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコール又は２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］でエステル化されている、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項４３】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項３７に記載のペプチド。
【請求項４４】
１７個未満のアミノ酸から成り、
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から１６個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドであって、
前記ペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、及び前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がミリストイル化されておらず、
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン過剰分泌抑制作用を有する、ペプチド。
【請求項４５】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＮ末端アミノ酸で始まる、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項４６】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の残基ＡＫＧＥ（配列番号２１９）を含む、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項４７】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項４８】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の８から１４個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項４９】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の１０から１２個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項５０】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でアセチル化されている、請求項４４に記載のペプチド。
【請求項５１】
（ａ）配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択される配列から成るペプチドであって、
前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がミリストイル化されておらず、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン過剰分泌抑制作用を有する、ペプチド。
【請求項５２】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がアセチル化されている、請求項５１に記載のペプチド。
【請求項５３】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項５１に記載のペプチド。
【請求項５４】
請求項２３から５３のいずれか１項に記載のペプチド及び場合により、医薬的に許容される担体及び／又は希釈剤を含有する医薬組成物。
【請求項５５】
哺乳動物における肺疾患によって引き起こされる哺乳動物でのムチン過剰分泌の治療のための医薬組成物を調製するための、請求項２３から５３のいずれか１項に記載のペプチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般にペプチドを含む組成物及びこれらの使用のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
粘液は、ゲルを形成することができる生体液である。水及び様々な細胞からの分泌産物を含む、成分の混合物である。粘液糖タンパク質又は上皮糖タンパク質とも称されるムチンは、粘液の主要成分であり、Ｎ及びＯ結合によってペプチドコアに連結された数多くのオリゴ糖側鎖によって特徴付けられる複合糖質である。ムチン（粘液の糖タンパク質成分）の過剰分泌は、喘息、慢性気管支炎及び嚢胞性線維症（ＣＦ）を含むいくつかの呼吸器系疾患で起こり、これらの疾患を有する患者における死亡の危険因子である。
【０００３】
気道において、ムチンは、胚上皮の杯細胞から及び粘膜下腺の粘液細胞から気道表面に放出される。気道内の表面液（粘液）の総量は、粘液の清掃率（上皮再吸収、蒸発、毛様体輸送及び咳輸送による）と合わせた粘液分泌の割合の結果、すなわち粘液分泌率と粘液清掃率の差の結果である。「正常」条件下では、粘液の分泌率と清掃率は、液体の薄い表面層だけが気管気管支樹を覆うように均衡を保っている。粘液の過剰分泌は（粘液清掃率の同時上昇を伴わない場合）、正常な状態に比べて粘液の量の正味の上昇を生じさせ、気道粘液の蓄積を導き、気流閉塞及び吸入した微粒子及び微生物の停留増加をもたらし得る。
【０００４】
粘液の過剰分泌は、ヒト及び非ヒト動物の両方において多数の気道炎症性疾患の病因に寄与する。粘液分泌増加は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び慢性気管支炎のような慢性疾患状態において；嚢胞性線維症のような遺伝疾患において；アレルギー状態（アトピー、アレルギー性炎症）において：気管支拡張症において；及び肺炎、鼻炎、インフルエンザ及び普通の風邪のような多くの急性、感染性呼吸器系疾患において認められる。
【０００５】
これらの呼吸器系疾患の多くにおいて粘液の過剰分泌に付随するのは、気道内の炎症細胞の存在の増加である。これらの細胞は、これらの細胞から放出される炎症伝達物質によって為される組織損傷と破壊を通してこれらの疾患の病理学に大きく寄与する。この慢性炎症によるこのような破壊の一例は、好中球から放出される伝達物質（すなわちミエロペルオキシダーゼ）が気道上皮組織の剥離を誘導する、嚢胞性線維症患者において起こる。
【０００６】
哺乳動物の気道は、気道上皮（杯）細胞及び粘膜下腺によって生産され、分泌される粘液の薄い層で裏打ちされている。喘息、ＣＯＰＤ、慢性気管支炎及び嚢胞性線維症のような疾患では、粘液の過剰分泌は一般的な病変である。過剰の粘液は、閉塞、感染に対する感受性、さらには気道壁と隣接組織の破壊に寄与し得る。粘液の主要成分は、分泌細胞（すなわち杯細胞と粘液細胞）によって合成され、細胞質膜結合顆粒内に貯蔵されるムチン糖タンパク質である。ムチンは、気道、胃腸管及び女性生殖管におけるものを含む、上皮細胞によって分泌される糖タンパク質のファミリーである。ムチンは粘液の粘弾性の原因であり、少なくとも８個のムチン遺伝子が知られている。米国特許出願第１０／１８０，７５３号（特許公開第Ｕ．Ｓ．２００３／００１３６５２号）参照。ムチンの過剰分泌及び／又は粘液細胞過形成によって引き起こされる粘液線毛損傷は、慢性感染、気流閉塞及び時として死亡を促進する気道粘液栓形成を導く。慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、気管支拡張症、喘息、嚢胞性線維症及び細菌感染のような多くの気道疾患がムチンの過剰産生によって特徴付けられる。米国特許出願第１０／１８０，７５３号（特許公開第Ｕ．Ｓ．２００３／００１３６５２号）参照。適切な刺激時に、ムチン顆粒は、顆粒が細胞の周辺部へと移動するエキソサイトーシス過程によって放出され、細胞周辺部で顆粒の膜が血漿膜と融合して、内容物を管腔に分泌する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
この過程の明らかな病態生理学的重要性にもかかわらず、細胞表面での刺激をムチン顆粒放出に結びつける細胞内シグナル伝達機構は最近になって初めて解明された。Ｌｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７６：４０９８２−４０９９０（２００１）参照。ミリストイル化された、アラニンに富むＣキナーゼ基質（ＭＡＲＣＫＳ）タンパク質は、ヒト気管支上皮細胞による粘液分泌のために必要であると考えられる。ＭＡＲＣＫＳは、種々の部位で、分泌顆粒膜及びアクチン細胞骨格に結合して、収縮性細胞骨格とムチン顆粒の間の物理的結合として役目をし、分泌顆粒を細胞膜上の結合部位へと導く上で役割を有し得るという仮説が立てられた。Ｓｉｎｇｅｒら、「Ａ  ＭＡＲＣＫＳ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｂｌｏｃｋｓ  ｍｕｃｕｓ  ｈｙｐｅｒｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｓｔｈｍａ」，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１０：１９３−１９６（２００４）参照。ＭＡＮＳペプチド（ｍｙｒ−ペプチド１）は、通常はＭＡＲＣＫＳタンパク質と略される、「ミリストイル化されたアラニンに富むＣキナーゼ基質」と呼ばれるタンパク質のミリストイル化されたＮ末端の２４アミノ酸配列である。ＭＡＲＣＫＳの２４アミノ酸フラグメント、ミリストイル化Ｎ末端配列（ＭＡＮＳ）ペプチドは、インビトロでムチンの放出を抑制することが示され、また、喘息のマウスモデルにおいて粘液の過剰分泌をブロックすることも示された。Ｌｉら及びＳｉｎｇｅｒら、前出参照。
【０００８】
脂質二重層を通って膜を横切るペプチドのトランスロケーションを促進するミリストイル化の重要性は公知である。最近の試験は、ミリストイル化ペプチドと比較して、非ミリストイル化ペプチドが細胞膜を通過しないことを示すことによってこの重要性を明らかにした。Ａ．Ｈａｒｉｓｈｃｈａｎｄｒａｎら、「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｐｓｅｕｄｏｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｍｙｒｉｓｔｏｙｌａｔｅｄ  Ｆｏｒｍ  ｗｉｔｈ  Ｌｉｐｉｄ  Ｖｅｓｉｃｌｅｓ．Ｏｎｌｙ  ｔｈｅ  Ｍｙｒｉｓｔｏｙｌａｔｅｄ  Ｆｏｒｍ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ  ｉｎｔｏ  Ｌｉｐｉｄ  Ｂｉｌａｙｅｒ．，」Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｙｓ．Ａｃｔａ，１７１３：７３−８２（２００５）参照。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
１つの態様では、２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）ＭＡＮＳペプチドとしても知られる、ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドが提供される。このペプチドの１以上のアミノ酸は場合により独立して化学修飾されており、このペプチドは、ムチン抑制量で哺乳動物に投与されたときムチン抑制作用を有する。
【００１０】
もう１つの態様では、２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドが提供される。このペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸は、場合により独立して化学修飾されている。このペプチドは、ムチン抑制量で哺乳動物に投与されたときムチン抑制作用を有し、等濃度で投与されたとき、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい哺乳動物へのムチン抑制作用を有する。
【００１１】
さらなる態様では、２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドが提供される。このペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸は、場合により独立して化学修飾されている。このペプチドは、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい水溶解度を有し、ムチン抑制量で哺乳動物に投与されたときムチン抑制作用を有する。
【００１２】
さらにもう１つの態様では、哺乳動物においてムチンの過剰分泌を抑制する方法が提供される。この方法は、ムチンの分泌を抑制するペプチドのムチン抑制量を哺乳動物に投与することを含む。このペプチドは、２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する。このペプチドの１以上のアミノ酸は、場合により独立して化学修飾されている。
【００１３】
さらなる態様では、哺乳動物においてムチンの過剰分泌を抑制する方法が提供される。この方法は、ムチンの分泌を抑制するペプチドのムチン抑制量を哺乳動物に投与することを含む。このペプチドは、２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する。このペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸は、場合により独立して化学修飾されており、このペプチドは、等濃度で投与されたとき、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい哺乳動物へのムチン抑制作用を有する。
【００１４】
さらなる態様では、哺乳動物においてムチンの過剰分泌を抑制する方法が提供される。この方法は、ムチンの分泌を抑制するペプチドのムチン抑制量を哺乳動物に投与することを含む。このペプチドは、２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する。このペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸は、場合により独立して化学修飾されており、このペプチドは、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい水溶解度を有する。
【００１５】
もう１つの態様では、２４個未満のアミノ酸から成り、ペプチド１と定義される標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列の変異型から成るアミノ酸配列を有するペプチドが提供される。このペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸は、場合により化学修飾されている。このペプチドは、ムチン抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン抑制作用を有し、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい水溶解度を有し、等濃度で投与されたとき、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい哺乳動物へのムチン抑制作用を有する。
【００１６】
本発明のペプチドは、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び慢性気管支炎のような慢性疾患状態において；嚢胞性線維症のような遺伝疾患において；アレルギー状態（アトピー、アレルギー性炎症）において：気管支拡張症において；及び肺炎、鼻炎、インフルエンザ及び普通の風邪のような多くの急性、感染性呼吸器系疾患において見られるような、ムチンの過剰分泌が示される疾患の治療及び疾患症状の治療において、ムチンの過剰分泌を低減する及び／又はムチンの過剰分泌を抑制する（すなわち正常レベルに又は正常レベル未満に低下させる）ために有用である。
【００１７】
さらなる実施形態では、（ａ）配列、ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列、から成る群より選択される配列から成るペプチドであって、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がミリストイル化されておらず、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたときムチンの過剰分泌抑制作用を有するペプチドが提供される。このペプチドは、肺疾患における粘液過剰分泌を治療するために有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明は、哺乳動物におけるムチン過剰分泌の抑制（すなわちムチン放出の抑制）及びムチン産生の抑制（時として粘液分泌の抑制と称される）を含む、様々な用途のための方法及び組成物に関する。しかしながら、本発明をさらに詳細に説明する前に、以下の用語を最初に定義する。
【００１９】
定義：
「ムチン抑制作用」、「ムチン抑制活性」又は「ムチン分泌を抑制する」は、ムチン分泌（すなわちムチン放出）の量の低下を意味し、必ずしもムチン分泌の完全な停止を意味しない。ムチン抑制作用を有する組成物の投与は、このような組成物の不在下で起こる又は予想されるムチン分泌と比較して、ムチン分泌の低下を生じさせる。１つの態様では、ムチン分泌の低下の量は、正常レベルを上回って分泌される又は過剰分泌される量の約５％から、分泌の正常レベルを上回って分泌される又は過剰分泌される量の約１００％までであり得る。もう１つの態様では、ムチン分泌の低下の量は、正常レベルを上回って分泌される又は過剰分泌される量の約５％から（すなわち正常レベルを上回って分泌される量の約５％から）、分泌の正常レベルで分泌される量の約５０％のような、分泌の正常レベルを下回る量までであり得る。
【００２０】
「粘液抑制作用」、「粘液抑制活性」又は「粘液産生を抑制する」は、粘液産生の量の低下を意味し、必ずしも粘液産生の完全な停止を意味しない。粘液抑制作用を有する組成物の投与は、このような組成物の不在下で起こる又は予想される粘液産生と比較して、粘液産生の低下を生じさせる。
【００２１】
組成物の「ムチン抑制量」は、正常レベルを上回って過剰分泌されるムチンの量の約５％から約１００％までムチン分泌を低下させる量のような、組成物の不在下で起こるムチン分泌と比較してムチン分泌（すなわちムチン放出）を低減する又は抑制する量である。
【００２２】
組成物の「粘液抑制量」は、組成物の不在下で起こる粘液産生と比較して粘液産生を低減する又は抑制する量である。
【００２３】
標準ペプチドＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）において、標準ペプチドのＮ末端位置で、Ｇが１位であり；１位のＧに隣接するのは２位のＡであり；２位のＡに隣接するのは３位のＱであり；３位のＱに隣接するのは４位のＦであり；４位のＦに隣接するのは５位のＳであり；５位のＳに隣接するのは６位のＫであり；６位のＫに隣接するのは７位のＴであり；７位のＴに隣接するのは８位のＡであり；８位のＡに隣接するのは９位のＡであり；９位のＡに隣接するのは１０位のＫであり；１０位のＫに隣接するのは１１位のＧであり；１１位のＧに隣接するのは１２位のＥであり；１２位のＥに隣接するのは１３位のＡであり；１３位のＡに隣接するのは１４位のＡであり；１４位のＡに隣接するのは１５位のＡであり；１５位のＡに隣接するのは１６位のＥであり；１６位のＥに隣接するのは１７位のＲであり；１７位のＲに隣接するのは１８位のＰであり；１８位のＰに隣接するのは１９位のＧであり；１９位のＧに隣接するのは２０位のＥであり；２０位のＥに隣接するのは２１位のＡであり；２１位のＡに隣接するのは２２位のＡであり；２２位のＡに隣接するのは２３位のＶであり；２３位のＶに隣接するのは２４位のＡであり、２４位は標準ペプチドのＣ末端位置である。
【００２４】
標準ペプチドの「変異型」又は標準ペプチドの４から２３アミノ酸セグメントの変異型は、それぞれ標準ペプチド又は標準ペプチドセグメントのアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸位置において、それぞれ標準ペプチドのアミノ酸配列又は標準ペプチドのセグメントのアミノ酸配列と異なるが、ムチン又は粘液抑制活性を保持し、この活性が、典型的には標準ペプチド又はセグメントの活性のそれぞれ０．１から１０倍、好ましくは標準ペプチド又はセグメントの活性のそれぞれ０．２から６倍、より好ましくは標準ペプチド又はセグメントの活性のそれぞれ０．３から５倍である、アミノ酸配列を有するペプチドである。標準アミノ酸配列の「変異型」又は標準アミノ酸配列の４から２３アミノ酸セグメントの変異型は、それぞれ標準アミノ酸配列又は標準アミノ酸配列のセグメントと少なくとも１個のアミノ酸によって異なるが、標準アミノ酸配列によってコードされる、ペプチド又はセグメントのムチン又は粘液抑制活性をそれぞれ保持し、この活性が、典型的には標準配列のペプチド又はセグメントの活性のそれぞれ０．１から１０倍、好ましくは標準配列のペプチド又はセグメントの活性のそれぞれ０．２から６倍、より好ましくは標準配列のペプチド又はセグメントの活性のそれぞれ０．３から５倍である、ペプチドのアミノ酸配列を有する。置換変異型ペプチド又は置換変異型アミノ酸配列は、標準アミノ酸配列内の１以上のアミノ酸置換によって標準ペプチド又は標準アミノ酸配列と異なり得る；欠失変異型ペプチド又は欠失変異型アミノ酸配列は、標準アミノ酸配列内の１以上のアミノ酸欠失によって標準ペプチド又は標準アミノ酸配列と異なり得る；及び付加変異型ペプチド又は付加変異型アミノ酸配列は、標準配列内の１以上のアミノ酸の付加によって標準ペプチド配列又は標準アミノ酸配列と異なり得る。変異型ペプチド又は変異型アミノ酸配列は、標準配列内の１以上のアミノ酸の置換（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸の置換）から生じてもよく、又は標準配列内の１以上のアミノ酸の欠失（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸の欠失）から生じてもよく、又は標準配列内の１以上のアミノ酸の付加（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸の付加）から生じてもよく、又は任意の順序でのこれらの組合せから生じてもよい。置換変異型の４から２３アミノ酸ペプチドセグメント又は置換変異型の４から２３アミノ酸セグメント配列は、標準アミノ酸セグメント配列内の１以上のアミノ酸置換によって標準４から２３アミノ酸ペプチドセグメント又は標準４から２３アミノ酸セグメント配列と異なり得る；欠失変異型の４から２３アミノ酸ペプチドセグメント又は４から２２アミノ酸の欠失変異型アミノ酸セグメント配列は、標準アミノ酸セグメント配列内の１以上のアミノ酸欠失によって５から２３標準ペプチドセグメント又は５から２３アミノ酸の標準アミノ酸セグメント配列と異なり得る；及び４から２３アミノ酸の付加変異型ペプチド又は４から２３アミノ酸の付加変異型アミノ酸配列は、標準配列内の１以上のアミノ酸付加によって４から２２アミノ酸の標準ペプチド配列又は４から２２アミノ酸の標準アミノ酸配列と異なり得る。４から２３アミノ酸の変異型ペプチド又は４から２３アミノ酸の変異型アミノ酸配列は、標準アミノ酸配列の４から２３アミノ酸セグメント内の１以上のアミノ酸の置換（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸の置換）から生じてもよく、又はそれぞれより大きな標準アミノ酸配列内の１以上のアミノ酸の欠失（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸の欠失）から生じ得るか、又はそれぞれより小さな標準アミノ酸配列内の１以上のアミノ酸の付加（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸の付加）から生じてもよく、又はこれらの組合せから生じてもよい。好ましくは、変異型ペプチド又はアミノ酸配列は、１０個未満のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加によって；より好ましくは８個未満のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加によって；さらに一層好ましくは６個未満のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加によって；及びさらに一層好ましくは５個未満のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加によって；及び尚一層好ましくは４個未満のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加によって、それぞれ標準ペプチドと又は標準ペプチドのセグメントと又は標準アミノ酸配列と又は標準アミノ酸配列のセグメントと異なる。最も好ましくは、変異型アミノ酸配列は、１又は２又は３個のアミノ酸によって標準ペプチド又はセグメントのアミノ酸配列と異なる。
【００２５】
「配列同一性」は、２個のペプチドのアミノ酸配列に関して、同一アミノ酸を有する位置の数を、２個の配列の短い方の配列内のアミノ酸の数で除した数を意味する。
【００２６】
「実質的に同一」は、２個のペプチドのアミノ酸配列の比較又は２個のペプチドセグメント（例えば標準ペプチドアミノ酸配列のセグメント）のアミノ酸配列の比較に関して、ペプチド又はペプチドのセグメントのアミノ酸配列が少なくとも７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有することを意味する。
【００２７】
ここで使用する「ペプチド」という用語は、ペプチド並びにペプチドの医薬的に許容される塩を含む。
【００２８】
ここで使用する、「単離」ペプチドは、天然でこれに付随する細胞成分（例えば核酸及び他のペプチド）から、精製、組換え合成又は化学合成によって分離された又は実質的に分離された天然に生じるペプチドを意味し、同様に、細胞成分、生物学的物質、化学的前駆体又は他の化学物質から精製された又は実質的に精製された、非天然に生じる組換え合成又は化学合成ペプチドを包含する。
【００２９】
以下の３文字及び１文字アミノ酸略語を本文全体を通して使用する。アラニン：（Ａｌａ）Ａ；アルギニン：（Ａｒｇ）Ｒ；アスパラギン：（Ａｓｎ）Ｎ；アスパラギン酸：（Ａｓｐ）Ｄ；システイン：（Ｃｙｓ）Ｃ；グルタミン：（Ｇｌｎ）Ｑ；グルタミン酸：（Ｇｌｕ）Ｅ；グリシン：（Ｇｌｙ）Ｇ；ヒスチジン：（Ｈｉｓ）Ｈ；イソロイシン：（Ｉｌｅ）Ｉ；ロイシン：（Ｌｅｕ）Ｌ；リシン：（Ｌｙｓ）Ｋ；メチオニン：（Ｍｅｔ）Ｍ；フェニルアラニン：（Ｐｈｅ）Ｆ；プロリン：（Ｐｒｏ）Ｐ；セリン：（Ｓｅｒ）Ｓ；トレオニン：（Ｔｈｒ）Ｔ；トリプトファン：（Ｔｒｐ）Ｗ；チロシン：（Ｔｙｒ）Ｙ；バリン：（Ｖａｌ）Ｖ。ここで有用なアミノ酸の付加的な３文字記号は、括弧内の、ヒドロキシプロリンについての（Ｈｙｐ）、ノルロイシンについての（Ｎｌｅ）、オルニチンについての（Ｏｒｎ）、ピログルタミン酸についての（Ｐｙｒ）及びサルコシンについての（Ｓａｒ）を含む。慣例により、ペプチドのアミノ末端（又はＮ末端）は、ペプチドの記述されるアミノ酸配列の左端に表記され、カルボキシ末端（又はＣ末端）は、記述されるアミノ酸配列の右端に表記される。ペプチドのアミノ酸配列は、ペプチド内のペプチドアミド結合によって共有結合されているアミノ酸を表わすために１文字記号で表記され得る。
【００３０】
表ＩＸは、１文字略語形式でのアミノ酸配列のリストとそれぞれの対応するペプチド番号及び配列番号を含む。標準ペプチドアミノ酸配列をペプチド１として列挙する。標準アミノ酸配列の４から２３個の隣接アミノ酸のアミノ酸配列を有する本発明のペプチドのアミノ酸配列は、ペプチド２３２としてＭＡＮＳペプチドのアミノ酸を含むランダムＮ末端配列（ＲＮＳ）のアミノ酸配列と共に、ペプチド２から２３１として列挙される。ここで述べる本発明のペプチドのアミノ酸配列の代表的変異型のアミノ酸配列も、ペプチド２３３から２４５及び２４７から２５１として列挙される。列挙されるこの変異型ペプチドは、ペプチドの限定群であることを意図されず、本発明の変異型ペプチドの代表的な例としての役割を果たすためだけに提示されるものである。また、本発明のペプチドの代表的逆アミノ酸配列及び代表的ランダムアミノ酸配列も提示される。表中の逆及びランダムアミノ酸配列は、本発明を代表することを意図されない。
【００３１】
表ＩＸに列挙されるペプチドのアミノ酸配列は化学修飾されていてもよい。例えば表ＩＸに列挙されるペプチドのアミノ酸配列が、カルボン酸とアミドを形成するようにＮ末端アミンで化学修飾される場合、生じるペプチドは、時としてここでは、ハイフンによってペプチド番号に連結される、接頭辞としてのカルボン酸の識別名の組合せによって称される。例えば一例としてペプチド７９に関して、Ｎ末端ミリストイル化ペプチド７９は、時としてここでは「ミリストイル化−ペプチド７９」又は「ｍｙｒ−ペプチド７９」と称され得る；Ｎ末端アセチル化ペプチド７９は、時としてここでは「アセチル−ペプチド７９」又は「Ａｃ−ペプチド７９」と称され得る。ペプチド７９の環状型は、「環状−ペプチド７９」又は「ｃｙｃ−ペプチド７９」と称され得る。また、例えば表ＩＸに列挙されるペプチドのアミノ酸配列がＣ末端カルボキシル基で、例えばアンモニアのようなアミンによってＣ末端アミドを形成するように化学修飾される場合、生じるペプチドは、時としてここでは、ハイフンによってペプチド番号に連結される、接尾辞としてのアミン残基の識別名の組合せによって称される。それ故、例えばペプチド７９のＣ末端アミドは、時として「ペプチド−ＮＨ２」と称され得る。ペプチド（例えばペプチド７９）のＮ末端アミンが、例えばミリストイル基によって化学修飾され、及びＣ末端カルボキシル基が、例えば上記のごとくアミドを形成するようにアンモニア基によって化学修飾される場合、生じるペプチドは、接頭辞及び接尾辞の両表記法を用いて、時として「ｍｙｒ−ペプチド７９−ＮＨ２」と称され得る。
【００３２】
本発明は、ＭＡＮＳペプチド（すなわちＭＡＮＳペプチドはミリストイル−ペプチド１であり、ＭＡＮＳペプチドの標準２４アミノ酸配列がペプチド１である）のアミノ酸に関連するアミノ酸配列を備えた２４個未満のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含む。本発明のペプチドは、２４個未満のアミノ酸を含むアミノ酸配列から成り、８から１４個、１０から１２個、９から１４個、９から１３個、１０から１３個、１０から１４個、少なくとも９個、少なくとも１０個等のアミノ酸から成り得る。ペプチドは、典型的には直鎖であるが、環状ペプチドでもよい。加えて、ペプチドは単離ペプチドでもよい。
【００３３】
標準２４アミノ酸配列、ペプチド１に関して、標準アミノ酸配列の２３個の隣接アミノ酸のセグメントは、時としてここでは２３量体と称される。同じように、標準配列の２２個の隣接アミノ酸のセグメントは、時としてここでは２２量体と称される；２１個のアミノ酸配列は２１量体；２０個のアミノ酸配列は２０量体；１９個のアミノ酸配列は１９量体；１８個のアミノ酸配列は１８量体；１７個のアミノ酸配列は１７量体；１６個のアミノ酸配列は１６量体；１５個のアミノ酸配列は１５量体；１４個のアミノ酸配列は１４量体；１３個のアミノ酸配列は１３量体；１２個のアミノ酸配列は１２量体；１１個のアミノ酸配列は１１量体；１０個のアミノ酸配列は１０量体；９個のアミノ酸配列は９量体；８個のアミノ酸配列は８量体；７個のアミノ酸配列は７量体；６個のアミノ酸配列は６量体；５個のアミノ酸配列は５量体；４個のアミノ酸配列は４量体と称される。１つの態様では、それ自体ペプチドである（時としてここではＨ２Ｎ−ペプチド−ＣＯＯＨと表示される）、これらの「４から２３量体」アミノ酸配列のいずれかは、例えば化学修飾によって、独立して化学的に修飾されてもよく、前記化学修飾は、（ｉ）例えばＣ１又は好ましくはＣ２（酢酸）−Ｃ２２カルボン酸などによる、Ｎ末端アミン基（Ｈ２Ｎ−ペプチド−）でのアミド形成；（ｉｉ）例えばアンモニア又はＣ１−Ｃ２２第一級又は第二級アミンなどによる、Ｃ末端カルボキシル基（−ペプチド−ＣＯＯＨ）でのアミド形成；及び（ｉｉｉ）これらの組合せ、から成る群より選択され得る。
【００３４】
ペプチドは、（ａ）標準配列、ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記変異型は、置換変異型、欠失変異型、付加変異型及びこれらの組合せから成る群より選択される。一部の実施形態では、ペプチドは、（ａ）標準配列、ペプチド１の８から１４個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記変異型は、置換変異型、欠失変異型、付加変異型及びこれらの組合せから成る群より選択される。さらに他の実施形態では、ペプチドは、（ａ）標準配列、ペプチド１の１０から１２個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記変異型は、置換変異型、欠失変異型、付加変異型及びこれらの組合せから成る群より選択される。さらなる実施形態では、ペプチドは、標準配列、ペプチド１の少なくとも９個、少なくとも１０個、９から１４個、９から１３個、１０から１３個、１０から１４個等の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；これと実質的に同一のアミノ酸配列；又はこの変異型を有し、前記変異型は、置換変異型、欠失変異型、付加変異型及びこれらの組合せから成る群より選択される。以下でさらに説明するように、ペプチドのアミノ酸の１以上（例えばＮ末端及び／又はＣ末端アミノ酸）は、場合により独立して化学修飾されていてもよい；一部の実施形態では、ペプチドの１以上のアミノ酸が化学修飾され、他の実施形態では、ペプチドのアミノ酸のいずれも化学修飾されない。１つの態様では、好ましい修飾は、ペプチド又はペプチドセグメントのＮ末端アミノ酸のアミン（Ｈ２Ｎ−）基で起こり得る（前記アミン基は、Ｎ末端位置ではなくペプチド配列の内部に存在する場合はペプチドアミド結合を形成する）。もう１つの態様では、好ましい修飾は、ペプチド又はペプチドセグメントのＣ末端アミノ酸のカルボキシ（−ＣＯＯＨ）基で起こり得る（前記カルボキシ基は、Ｃ末端位置ではなくペプチド配列の内部に存在する場合はペプチドアミド結合を形成する）。もう１つの態様では、好ましい修飾は、Ｎ末端アミン（Ｈ２Ｎ−）基とＣ末端カルボキシ（−ＣＯＯＨ）基の両方で起こり得る。
【００３５】
一部の実施形態では、ペプチドのアミノ酸配列は、標準配列ペプチド１のＮ末端アミノ酸から始まる。例えばペプチドは、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列のＮ末端アミノ酸から始まる（すなわちペプチド２、ペプチド４、ペプチド７、ペプチド１１、ペプチド１６、ペプチド２２、ペプチド２９、ペプチド３７、ペプチド４６、ペプチド５６、ペプチド６７、ペプチド７９、ペプチド９２、ペプチド１０６、ペプチド１２１、ペプチド１３７、ペプチド１５４、ペプチド１７２、ペプチド１９１、またはペプチド２１１）；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し得る。
【００３６】
他の実施形態では、ペプチドのアミノ酸配列は標準配列ペプチド１のＣ末端アミノ酸で終了する。例えばペプチドは、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する（すなわちペプチド３、ペプチド６、ペプチド１０、ペプチド１５、ペプチド２１、ペプチド２８、ペプチド３６、ペプチド４５、ペプチド５５、ペプチド６６、ペプチド７８、ペプチド９１、ペプチド１０５、ペプチド１２０、ペプチド１３６、ペプチド１５３、ペプチド１７１、ペプチド１９０、ペプチド２１０、またはペプチド２３１）；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し得る。
【００３７】
他の実施形態では、ペプチドのアミノ酸配列は、標準配列ペプチド１のＮ末端アミノ酸で始まらず、標準配列ペプチド１の２位のアミノ酸から２１位のアミノ酸までで始まる。例えばペプチドは、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列の２位から２１位までの任意のアミノ酸で始まる。これらのペプチドは、４から２３個の隣接アミノ酸の長さであり得、標準配列（ペプチド１）の中央のペプチドであり得る；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し得る。これらのペプチドを表ＩＸに開示する。
【００３８】
哺乳動物においてムチン過剰分泌を抑制するために本発明において有用であり、哺乳動物においてムチン過剰分泌の量を低減するために有用であり、及びムチン過剰分泌の抑制の方法及びムチン過剰分泌の低減の方法において有用であるペプチドアミノ酸配列は、本発明の単離ペプチドのアミノ酸配列及び場合によりＮ末端及び／又はＣ末端で化学修飾された基を含むペプチドのアミノ酸配列を含み、前記ペプチドアミノ酸配列は、２３量体（すなわち２３個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド２；及びペプチド３；２２量体（すなわち２２個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド４；ペプチド５；及びペプチド６；２１量体（すなわち２１個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド７；ペプチド８；ペプチド９；及びペプチド１０；２０量体（すなわち２０個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１１；ペプチド１２；ペプチド１３；ペプチド１４；及びペプチド１５；１９量体（すなわち１９個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１６；ペプチド１７；ペプチド１８；ペプチド１９；ペプチド２０；及びペプチド２１；１８量体（すなわち１８個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド２２；ペプチド２３；ペプチド２５；ペプチド２６；ペプチド２７；及びペプチド２８；１７量体（すなわち１７個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド２９；ペプチド３０；ペプチド３１；ペプチド３２；ペプチド３３；ペプチド３４；ペプチド３５；及びペプチド３６；１６量体（すなわち１６個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド３７；ペプチド３８；ペプチド３９；ペプチド４０；ペプチド４１；ペプチド４２；ペプチド４３；ペプチド４４；及びペプチド４５；１５量体（すなわち１５個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド４６；ペプチド４７；ペプチド４８；ペプチド４９；ペプチド５０；ペプチド５１；ペプチド５２；ペプチド５３；ペプチド５４；及びペプチド５５；１４量体（すなわち１４個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド５６；ペプチド５７；ペプチド５８；ペプチド５９；ペプチド６０；ペプチド６１；ペプチド６２；ペプチド６３；ペプチド６４；ペプチド６５；及びペプチド６６；１３量体（すなわち１３個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド６７；ペプチド６８；ペプチド６９；ペプチド７０；ペプチド７１；ペプチド７２；ペプチド７３；ペプチド７４；ペプチド７５；ペプチド７６；ペプチド７７；及びペプチド７８；１２量体（すなわち１２個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド７９；ペプチド８０；ペプチド８１；ペプチド８２；ペプチド８３；ペプチド８４；ペプチド８５；ペプチド８６；ペプチド８７；ペプチド８８；ペプチド８９；ペプチド９０；及びペプチド９１；１１量体（すなわち１１個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド９２；ペプチド９３；ペプチド９４；ペプチド９５；ペプチド９６；ペプチド９７；ペプチド９８；ペプチド９９；ペプチド１００；ペプチド１０１；ペプチド１０２；ペプチド１０３；ペプチド１０４；及びペプチド１０５；１０量体（すなわち１０個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１０６；ペプチド１０７；ペプチド１０８；ペプチド１０９；ペプチド１１０；ペプチド１１１；ペプチド１１２；ペプチド１１３；ペプチド１１４；ペプチド１１５；ペプチド１１６；ペプチド１１７；ペプチド１１８；ペプチド１１９；及びペプチド１２０；９量体（すなわち９個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１２１；ペプチド１２２；ペプチド１２３；ペプチド１２４；ペプチド１２５；ペプチド１２６；ペプチド１２７；ペプチド１２８；ペプチド１２９；ペプチド１３０；ペプチド１３１；ペプチド１３２；ペプチド１３３；ペプチド１３４；ペプチド１３５；及びペプチド１３６；８量体（すなわち８のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１３７；ペプチド１３８；ペプチド１３９；ペプチド１４０；ペプチド１４１；ペプチド１４２；ペプチド１４３；ペプチド１４４；ペプチド１４５；ペプチド１４６；ペプチド１４７；ペプチド１４８；ペプチド１４９；ペプチド１５０；ペプチド１５１；ペプチド１５２；及びペプチド１５３；７量体（すなわち７個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１５４；ペプチド１５５；ペプチド１５６；ペプチド１５７；ペプチド１５８；ペプチド１５９；ペプチド１６０；ペプチド１６１；ペプチド１６２；ペプチド１６３；ペプチド１６４；ペプチド１６５；ペプチド１６６；ペプチド１６７；ペプチド１６８；ペプチド１６９；ペプチド１７０；及びペプチド１７１；６量体（すなわち６個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１７２；ペプチド１７３；ペプチド１７４；ペプチド１７５；ペプチド１７６；ペプチド１７７；ペプチド１７８；ペプチド１７９；ペプチド１８０；ペプチド１８１；ペプチド１８２；ペプチド１８３；ペプチド１８４；ペプチド１８５；ペプチド１８６；ペプチド１８７；ペプチド１８８；ペプチド１８９；及びペプチド１９０；５量体（すなわち５個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド１９１；ペプチド１９２；ペプチド１９３；ペプチド１９４；ペプチド１９５；ペプチド１９６；ペプチド１９７；ペプチド１９８；ペプチド１９９；ペプチド２００；ペプチド２０１；ペプチド２０２；ペプチド２０３；ペプチド２０４；ペプチド２０５；ペプチド２０６；ペプチド２０７；ペプチド２０８；ペプチド２０９；及びペプチド２１０；及び４量体（すなわち４個のアミノ酸配列を有するペプチド）：ペプチド２１１；ペプチド２１２；ペプチド２１３；ペプチド２１４；ペプチド２１５；ペプチド２１６；ペプチド２１７；ペプチド２１８；ペプチド２１９；ペプチド２２０；ペプチド２２１；ペプチド２２２；ペプチド２２３；ペプチド２２４；ペプチド２２５；ペプチド２２６；ペプチド２２７；ペプチド２２８；ペプチド２２９；ペプチド２３０；及びペプチド２３１から成る群より選択される。
【００３９】
本発明の単離ペプチド及びＮ末端及び／又はＣ末端で化学修飾されたペプチドの好ましいアミノ酸配列は、２３量体：ペプチド２；及びペプチド３；２２量体：ペプチド４；ペプチド５；及びペプチド６；２１量体：ペプチド７；ペプチド８；ペプチド９；及びペプチド１０；２０量体：ペプチド１１；ペプチド１２；ペプチド１３；ペプチド１４；及びペプチド１５；１９量体：ペプチド１６；ペプチド１７；ペプチド１８；ペプチド１９；ペプチド２０；及びペプチド２１；１８量体：ペプチド２２；ペプチド２３；ペプチド２５；ペプチド２６；ペプチド２７；及びペプチド２８；１７量体：ペプチド２９；ペプチド３０；ペプチド３１；ペプチド３２；ペプチド３３；ペプチド３４；ペプチド３５；及びペプチド３６；１６量体：ペプチド３７；ペプチド３８；ペプチド３９；ペプチド４０；ペプチド４１；ペプチド４２；ペプチド４３；ペプチド４４；及びペプチド４５；１５量体：ペプチド４６；ペプチド４７；ペプチド４８；ペプチド４９；ペプチド５０；ペプチド５１；ペプチド５２；ペプチド５３；及びペプチド５４；１４量体：ペプチド５６；ペプチド５７；ペプチド５８；ペプチド５９；ペプチド６０；ペプチド６１；ペプチド６２；ペプチド６３；及びペプチド６４；１３量体：ペプチド６７；ペプチド６８；ペプチド６９；ペプチド７０；ペプチド７１；ペプチド７２；ペプチド７３；ペプチド７４；及びペプチド７５；１２量体：ペプチド７９；ペプチド８０；ペプチド８１；ペプチド８２；ペプチド８３；ペプチド８４；ペプチド８５；ペプチド８６；及びペプチド８７；１１量体：ペプチド９２；ペプチド９３；ペプチド９４；ペプチド９５；ペプチド９６；ペプチド９７；ペプチド９８；ペプチド９９；及びペプチド１００；１０量体：ペプチド１０６；ペプチド１０７；ペプチド１０８；ペプチド１０９；ペプチド１１０；ペプチド１１１；ペプチド１１２；ペプチド１１３；及びペプチド１１４；９量体：ペプチド１２２；ペプチド１２３；ペプチド１２４；ペプチド１２５；ペプチド１２６；ペプチド１２７；ペプチド１２８；及びペプチド１２９；８量体：ペプチド１３９；ペプチド１４０；ペプチド１４１；ペプチド１４２；ペプチド１４３；ペプチド１４４；及びペプチド１４５；７量体：ペプチド１５７；ペプチド１５８；ペプチド１５９；ペプチド１６０；ペプチド１６１；及びペプチド１６２；６量体：ペプチド１７６；ペプチド１７７；ペプチド１７８；ペプチド１７９；ペプチド及び１８０；５量体：ペプチド１９６；ペプチド１９７；ペプチド１９８；及びペプチド１９９；４量体：ペプチド２１７；及びペプチド２１９；から成る群より選択される。
【００４０】
本発明の単離ペプチド及びＮ末端及び／又はＣ末端で化学修飾されたペプチドのより好ましいアミノ酸配列は、２３量体：ペプチド２；及びペプチド３；及びペプチド３；２２量体：ペプチド４；ペプチド５；及びペプチド６；２１量体：ペプチド７；ペプチド８；ペプチド９；及びペプチド１０；２０量体：ペプチド１１；ペプチド１２；ペプチド１３；ペプチド１４；及びペプチド１５；１９量体：ペプチド１６；ペプチド１７；ペプチド１８；ペプチド１９；ペプチド２０；及びペプチド２１；１８量体：ペプチド２２；ペプチド２３；ペプチド２５；ペプチド２６；ペプチド２７；及びペプチド２８；１７量体：ペプチド２９；ペプチド３０；ペプチド３１；ペプチド３２；ペプチド３３；ペプチド３４；ペプチド３５；及びペプチド３６；１６量体：ペプチド３７；ペプチド３８；ペプチド３９；ペプチド４０；ペプチド４１；ペプチド４２；ペプチド４３；ペプチド４４；及びペプチド４５；１５量体：ペプチド４６；ペプチド４７；ペプチド４８；ペプチド４９；ペプチド５０；ペプチド５１；ペプチド５２；ペプチド５３；及びペプチド５４；１４量体：ペプチド５６；ペプチド５７；ペプチド５８；ペプチド５９；ペプチド６０；ペプチド６１；ペプチド６２；ペプチド６３；及びペプチド６４；１３量体：ペプチド６７；ペプチド６８；ペプチド６９；ペプチド７０；ペプチド７１；ペプチド７２；ペプチド７３；ペプチド７４；ペプチド８０；ペプチド８１；ペプチド８２；ペプチド８３；ペプチド８４；ペプチド８５；ペプチド８６；及びペプチド８７；１１量体：ペプチド９２；ペプチド９３；ペプチド９４；ペプチド９５；ペプチド９６；ペプチド９７；ペプチド９８；ペプチド９９；及びペプチド１００；１０量体：ペプチド１０６；ペプチド１０８；ペプチド１０９；ペプチド１１０；ペプチド１１１；ペプチド１１２；ペプチド１１３；及びペプチド１１４；９量体：ペプチド１２４；ペプチド１２５；ペプチド１２６；ペプチド１２７；ペプチド１２８；及びペプチド１２９；８量体：ペプチド１４１；ペプチド１４２；ペプチド１４３；ペプチド１４４；及びペプチド１４５；７量体：ペプチド１５９；ペプチド１６０；ペプチド１６１；及びペプチド１６２；６量体：ペプチド１７８；ペプチド１７９；及びペプチド１８０；５量体：ペプチド１９８；及びペプチド１９９；４量体：ペプチド２１９から成る群より選択される。
【００４１】
さらに他の実施形態では、ペプチドのアミノ酸配列は、標準配列ペプチド１のペプチド２１９におけるように隣接残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含む。例えばペプチドは、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、但し、ペプチドのアミノ酸配列は、標準ペプチド、ペプチド１のペプチド２１９におけるように隣接残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含む（例えばペプチド２１９、ペプチド４５、ペプチド７９、ペプチド６７、ペプチド８０等）；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し得る。
【００４２】
標準ペプチドアミノ酸配列、ペプチド１のアミノ酸配列ＡＫＧＥを含むペプチドセグメントの例は、（ａ）２３量体：ペプチド２；及びペプチド３；２２量体：ペプチド４；ペプチド５；及びペプチド６；１１量体：ペプチド７；ペプチド８；ペプチド９；及びペプチド１０；２０量体：ペプチド１１；ペプチド１２；ペプチド１３；ペプチド１４；及びペプチド１５；１９量体：ペプチド１６；ペプチド１７；ペプチド１８；ペプチド１９；ペプチド２０；及びペプチド２１；１８量体：ペプチド２２；ペプチド２３；ペプチド２４；ペプチド２５；ペプチド２６；ペプチド２７；及びペプチド２８；１７量体：ペプチド２９；ペプチド３０；ペプチド３１；ペプチド３２；ペプチド３３；ペプチド３４；ペプチド３５；及びペプチド３６；１６量体：ペプチド３７；ペプチド３８；ペプチド３９；ペプチド４０；ペプチド４１；ペプチド４２；ペプチド４３；ペプチド４４；及びペプチド４５；１５量体：ペプチド４６；ペプチド４７；ペプチド４８；ペプチド４９；ペプチド５０；ペプチド５１；ペプチド５２；ペプチド５３；及びペプチド５４；１４量体：ペプチド５６；ペプチド５７；ペプチド５８；ペプチド５９；ペプチド６０；ペプチド６１；ペプチド６２；ペプチド６３；及びペプチド６４；１３量体：ペプチド６７；ペプチド６８；ペプチド６９；ペプチド７０；ペプチド７１；ペプチド７２；ペプチド７３；ペプチド７４；及びペプチド７５；１２量体：ペプチド７９；ペプチド８０；ペプチド８１；ペプチド８２；ペプチド８３；ペプチド８４；ペプチド８５；ペプチド８６；及びペプチド８７；１１量体：ペプチド９３；ペプチド９４；ペプチド９５；ペプチド９６；ペプチド９７；ペプチド９８；ペプチド９９；及びペプチド１００；１０量体：ペプチド１０８；ペプチド１０９；ペプチド１１０；ペプチド１１１；ペプチド１１２；ペプチド１１３；及びペプチド１１４；９量体：ペプチド１２４；ペプチド１２５；ペプチド１２６；ペプチド１２７；ペプチド１２８；及びペプチド１２９；８量体：ペプチド１４１；ペプチド１４２；ペプチド１４３；ペプチド１４４；及びペプチド１４５；７量体：ペプチド１５９；ペプチド１６０；ペプチド１６１；及びペプチド１６２；６量体：ペプチド１７８；ペプチド１７９；及びペプチド１８０；５量体：ペプチド１９８；及びペプチド１９９；及び４量体：ペプチド２１９；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、を含み、前記変異型は、置換変異型、欠失変異型、付加変異型及びこれらの組合せから成る群より選択され、前記セグメントは、４から２３個の隣接アミノ酸を含む又は４から２３個の隣接アミノ酸から成る。
【００４３】
もう１つの実施形態では、好ましいペプチド配列は、（ａ）標準配列、ペプチド１の１０から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列の変異型、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記変異型は、置換変異型、欠失変異型、付加変異型及びこれらの組合せから成る群より選択され、好ましいアミノ酸配列は、２３量体：ペプチド２；２２量体：  ペプチド４；２１量体：  ペプチド７；２０量体：  ペプチド１１；１９量体：  ペプチド１６；１８量体：  ペプチド２２；１７量体：  ペプチド２９；１６量体：  ペプチド３７；１５量体：  ペプチド４６；１４量体：  ペプチド５６；１３量体：  ペプチド６７；１２量体：  ペプチド７９；１１量体：  ペプチド９２；１０量体：  ペプチド１０６を含む。
【００４４】
さらなる実施形態では、ペプチドのアミノ酸配列は、標準配列ペプチド１のＮ末端アミノ酸から始まり、標準配列ペプチドのペプチド２１９におけるように隣接残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含み、一方他の実施形態では、ペプチドのアミノ酸配列は、標準配列ペプチド１のＣ末端アミノ酸で終了し、標準配列ペプチドのペプチド２１９におけるように隣接残基Ａ、Ｋ、Ｇ及びＥを含む。
【００４５】
ペプチドは、標準アミノ酸配列に関して１以上のアミノ酸欠失、置換及び／又は付加を含んでもよい。好ましくは、置換は保存的アミノ酸置換でもあり得、又は置換は非保存的アミノ酸置換であり得る。一部の実施形態では、標準アミノ酸配列と実質的に同一である又は標準アミノ酸配列の変異型であるアミノ酸配列を有するペプチドを含む、ペプチドは、標準アミノ酸配列の対応する隣接アミノ酸と比較して欠失又は付加を有さないが、保存的又は非保存的置換を有し得る。本発明のペプチドにおいて標準アミノ酸配列に施し得るアミノ酸置換は、以下を含むが、これらに限定されない：アラニン（Ａ）はリシン（Ｋ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）又はイソロイシン（Ｉ）で置換され得る；グルタミン酸（Ｅ）はアスパラギン酸（Ｄ）で置換され得る；グリシン（Ｇ）はプロリン（Ｐ）で置換され得る；リシン（Ｋ）はアルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）又はアスパラギン（Ｎ）で置換され得る；フェニルアラニン（Ｆ）はロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）又はアラニン（Ａ）で置換され得る；プロリン（Ｐ）はグリシン（Ｇ）で置換され得る；グルタミン（Ｑ）はグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン（Ｎ）で置換され得る；アルギニン（Ｒ）はリシン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）又はアスパラギン（Ｎ）で置換され得る；セリン（Ｓ）はトレオニンで置換され得る；トレオニン（Ｔ）はセリン（Ｓ）で置換され得る；及びバリン（Ｖ）はロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）又はノルロイシン（Ｎｌｅ）で置換され得る。例えば本発明のペプチドにおいて標準アミノ酸配列に施し得る置換は、フェニルアラニン（Ｆ）をアラニン（Ａ）で（例えば標準アミノ酸配列のアミノ酸位置４において）、グルタミン（Ｑ）をグルタミン酸（Ｅ）で（例えば標準アミノ酸配列のアミノ酸位置３において）、アラニン（Ａ）をリシン（Ｋ）で（例えば標準アミノ酸配列のアミノ酸位置２及び／又は８において）、及び／又はトレオニン（Ｔ）をセリン（Ｓ）で（例えば標準アミノ酸配列のアミノ酸位置７において）置換することを含む。
【００４６】
標準アミノ酸配列に関して本発明のペプチド（非修飾ペプチド並びに、例えばアミド形成などによるＮ末端及び／又はＣ末端修飾によって化学修飾されているペプチドを含む）のアミノ酸配列内に置換が含まれるとき、好ましくはペプチドのアミノ酸配列と標準アミノ酸配列の間に少なくとも８０％の配列同一性が存在する。５から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して１個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約９６％（すなわち約９５．７％）の配列同一性を有する。１０から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して１個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約９０％から約９６％（すなわち約９５．７％）の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して１個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約９５％から約９６％（すなわち約９５．７％）の配列同一性を有する。１０から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して２個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約９２％（すなわち約９１．３％）の配列同一性を有する。１６から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して２個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８７．５％から約９２％（すなわち約９１．３％）の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して２個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約９０％から約９２％（すなわち約９１．３％）の配列同一性を有する。１５から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して３個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約８７％の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して３個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８５％から約８７％の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準アミノ酸配列に関して４個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約８３％（すなわち約８２．６％）の配列同一性を有する。
【００４７】
本発明のペプチドにおいて、標準ペプチド（２４量体である）の隣接アミノ酸に関して、標準２４アミノ酸配列から選択される隣接２３アミノ酸配列（２３量体）内の１個のアミノ酸の置換は、２３量体が同一性を有する標準ペプチド内のアミノ酸セグメントと９５．６５％（又は約９６％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、前記２３量体内の２、３、４及び５個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９１．３０％（又は約９１％）、８６．９６％（又は約８７％）、８２．６１％（又は約８３％）及び７８．２７％（又は約７８％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、２２量体内の１、２、３、４及び５個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９５．４５％（又は約９５％）、９０．９１％（又は約９１％）、８６．３６％（又は約８６％）、８１．８２％（又は約８２％）及び７７．２７％（又は約７７％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、２１量体内の１、２、３、４及び５個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９５．２４％（又は約９５％）、９０．４８％（又は約９１％）、８５．７１％（又は約８６％）、８０．９５％（又は約８１％）及び７６．１９％（又は約７６％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、２０量体内の１、２、３、４及び５個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９５．００％（９５％）、９０．００％（９０％）、８５．００％（８５％）、８０．００％（８０％）及び７５．００％（７５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１９量体内の１、２、３及び４個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９４．７４％（約９５％）、８９．４７％（約８９％）、８４．２１％（約８４％）及び７８．９５％（約７９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１８量体内の１、２、３及び４個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９４．４４％（約９４％）、８８．８９％（約８９％）、８３．３３％（約８３％）及び７７．７８％（約７８％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１７量体内の１、２、３及び４個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９４．１２％（約９４％）、８８．２３％（約８８％）、８２．３５％（約８２％）及び７６．４７％（約７６％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１６量体内の１、２、３及び４個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９３．７５％（約９４％）、８７．５０％（約８８％）、８１．２５％（約８１％）及び７５．００％（７５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１５量体内の１、２及び３個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９３．３３％（約９３％）、８６．６７％（約８７％）及び８０．００％（８０％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１４量体内の１、２及び３個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９２．８６％（約９３％）、８５．７１％（約８６％）及び７８．５７％（７９％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１３量体内の１、２及び３個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９２．３１％（約９２％）、８４．６２％（約８５％）及び７６．９２％（約７７％））の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１２量体内の１、２及び３個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９１．６７％（約９２％）、８３．３３％（約８３％）及び７５．００％（７５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１１量体内の１及び２個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９０．９１％（約９１％）及び８１．８２％（約８２％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、１０量体内の１及び２個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ９０．００％（９０％）及び８０．００％（８０％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、９量体内の１及び２個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ８８．８９％（約８９％）及び７７．７８％（約７８％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、８量体内の１及び２個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドアミノ酸配列とそれぞれ８７．５０％（約８８％）及び７５．００％（７５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。同じように、７量体、６量体、５量体及び４量体内の１個のアミノ酸の置換は、標準ペプチドとそれぞれ８５．７１％（約８６％）、８３．３３％（約８３．３％）、８０．００％（８０％）及び７５．００％（７５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を備えたペプチドを提供する。本発明の好ましいアミノ酸配列は、標準配列内のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性、より好ましくは標準配列内のアミノ酸配列と８１％から９６％の配列同一性、及びより好ましくは標準配列内のアミノ酸配列と８０％から９６％の配列同一性を有する。好ましいアミノ酸配列は、場合により、アミド結合によってＣ２−Ｃ２２直鎖脂肪族カルボン酸部分、より好ましくはＣ２−Ｃ１６直鎖脂肪族カルボン酸部分、最も好ましくはＣ２又はＣ１６直鎖脂肪族カルボン酸部分に末端ペプチドアミノ基でＮ末端化学結合することができ、及び場合により、アミド結合によってアンモニアのようなアミン又はＣ１−Ｃ１６直鎖脂肪族第一級アミンのような第一級又は第二級アミンに末端ペプチドカルボキシル基でＣ末端化学結合することができる。
【００４８】
１２量体であるペプチド７９の置換変異型の例は、例えばペプチド７９の３位のＱがペプチド２３８内でＥによって置換された、ペプチド２３８；ペプチド７９の２位のＡがペプチド２３３内でＫによって置換された、ペプチド２３３；ペプチド７９の８位のＡがペプチド２３４内でＫによって置換された、ペプチド２３４；ペプチド７９の２位と８位のＡがペプチド２３５内でＫによって置換された、ペプチド２３５；ペプチド７９の４位のＦがペプチド２３７内でＡによって置換された、ペプチド２３７；ペプチド７９の１０位のＫがペプチド２３９内でＡによって置換された、ペプチド２３９；ペプチド７９の１１位のＧがペプチド２４０内でＡによって置換された、ペプチド２４０；及びペプチド７９の１２位のＥがペプチド２４１内でＡによって置換された、ペプチド２４１を含む。
【００４９】
１０量体であるペプチド１０６の置換変異型の例は、例えばペプチド１０６の４位のＦがペプチド２３６内でＡによって置換された、ペプチド２３６；ペプチド１０６の１位のＧがペプチド２４２内でＡによって置換された、ペプチド２４２；ペプチド１０６の３位のＱがペプチド２４３内でＡによって置換された、ペプチド２４３；ペプチド１０６の５位のＳがペプチド２４４内でＡによって置換された、ペプチド２４４；ペプチド１０６の６位のＫがペプチド２４５内でＡによって置換された、ペプチド２４５；ペプチド１０６の７位のＴがペプチド２４７内でＡによって置換された、ペプチド２４７；ペプチド１０６の１０位のＫがペプチド２４８内でＡによって置換された、ペプチド２４８；ペプチド１０６の６位と１０位のＫがペプチド２４９内でどちらも各々Ａによって置換された、ペプチド２４９を含む。
【００５０】
８量体であるペプチド１３７の置換変異型の例は、例えばペプチド１３７の４位のＦがペプチド２５０内でＡによって置換された、ペプチド２５０を含む。
【００５１】
４量体であるペプチド２１９の置換変異型の例は、例えばペプチド２１９の２位のＫがペプチド２５１内でＡによって置換された、ペプチド２５１を含む。
【００５２】
ここで述べるような置換変異型ペプチドは、単離ペプチドの形態又は、例えばここで述べるミリストイルアミド、アセチルアミド等のようなＮ末端アミド、及び例えばアンモニアで形成されるアミドのようなＣ末端アミド、及びＮ末端アミドとＣ末端アミドの両方のような、化学修飾ペプチドの形態であり得る。
【００５３】
標準アミノ酸配列に関して本発明のペプチドのアミノ酸配列内に欠失が含まれるとき、好ましくはペプチドのアミノ酸配列と標準アミノ酸配列の間に少なくとも８０％の配列同一性が存在する。５から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して１個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約９６％（すなわち約９５．７％）の配列同一性を有する。１０から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して１個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約９０％から約９６％（すなわち約９５．７％）の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して１個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と９５％から約９６％（すなわち約９５．７％）の配列同一性を有する。１０から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して２個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約９２％（すなわち約９１．３％）の配列同一性を有する。１６から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して２個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８７．５％から約９２％（すなわち約９１．３％）の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して２個のアミノ酸置換を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約９０％から約９２％（すなわち約９１．３％）の配列同一性を有する。１５から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して３個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約８７％の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して３個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８５％から約８７％の配列同一性を有する。２０から２３個のアミノ酸を有し、標準ペプチドに関して４個のアミノ酸欠失を含むペプチドは、標準アミノ酸配列と約８０％から約８３％（すなわち約８２．６％）の配列同一性を有する。
【００５４】
上述したように、ペプチドのアミノ酸の１以上はまた、化学修飾されていてもよい。当技術分野で公知のいかなるアミノ酸修飾も、当技術分野で公知の何らかの方法を用いてペプチドのアミノ酸に対して施され得る。
【００５５】
一部の実施形態では、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸は修飾されていてもよい。例えばペプチドのＮ末端アミノ酸は、Ｎ末端アミノ（Ｈ２Ｎ−）基でアルキル化、アミド化又はアシル化され得、及び例えばペプチドのＣ末端アミノ酸は、Ｃ末端カルボキシル（−ＣＯＯＨ）基でアミド化又はエステル化され得る。例えばＮ末端アミノ基は、アセチル基（すなわちＣＨ−Ｃ（＝Ｏ）−又はミリストイル基を含む、アミドを形成するために何らかのアシル又は脂肪アシル基を含むようにアシル化によって修飾され得る。一部の実施形態では、Ｎ末端アミノ基は、式−Ｃ（Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは１から１５個の炭素原子を有する直鎖又は分枝アルキル基である］を有するアシル基を含むように修飾され得るか、又は式−Ｃ（Ｏ）Ｒ１［式中、Ｒ１は１から１５個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である］を有するアシル基を含むように修飾され得る。ペプチドのＣ末端アミノ酸も化学修飾され得る。例えばＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、ヒドロキシル基の代わりにアミノ基を含むように化学修飾（すなわちアミド化）され得る。一部の実施形態では、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸は化学修飾されていない。
【００５６】
ペプチドは、
（ｉ）Ｃ２−Ｃ２４脂肪族（飽和又は場合により不飽和）カルボン酸（例えば酢酸、プロパン酸、ブタン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸（ミリスチン酸）、ヘキサデカン酸、９−ヘキサデセン酸、オクタデカン酸、９−オクタデセン酸、１１−オクタデセン酸、９，１２−オクタデカジエン酸、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸、６，９，１２−オクタデカトリエン酸、エイコサン酸、９−エイコセン酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸、ドコサン酸、１３−ドコセン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、テトラコサン酸等とのＮ末端アミド）；
（ｉｉ）トリフルオロ酢酸；
（ｉｉｉ）安息香酸；及び
（ｉｖ）脂肪族アルキルスルホンアミドを形成するＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸［但し、スルホン酸のＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキル炭素鎖構造は、上述した脂肪族アルキルカルボン酸における脂肪族アルキルカルボン酸鎖の構造に類似する］
から成る群より選択される酸とＮ−末端アミドを形成するようにＮ末端アミノ酸のアミノ基でアシル化され得る。例えばペプチドは、（Ｃ１−Ｃ２３）−アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨと表わされるカルボン酸基を用いて、カルボン酸基の活性化による脱水結合を通して（Ｃ１−Ｃ２３）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ペプチドと表わされるアミドを形成するようにアシル化され得る。同じように、スルホンアミドは、スルホン酸種（（Ｃ１−Ｃ２３）−アルキル−Ｓ（Ｏ２）−Ｘ［式中、Ｘはハロゲン又はＯＣＨ３又は他の適合性脱離基である］と表わされる）を、（Ｃ１−Ｃ２３）−アルキル−Ｓ（Ｏ２）−ＮＨ−ペプチドと表わされるスルホンアミドを形成するようにＮ末端アミノ基と反応させることによって形成され得る。
【００５７】
もう１つの例として、Ｎ末端アミノ酸のＮ末端アミノ基は、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基でアルキル化され得る［但し、脂肪族アルキル基の構造は上述したとおりである］。アルキル化は、例えば脂肪族アルキルハロゲン化物又は脂肪族アルキルスルホン酸エステル（メシレート、トシレート等）を用いて、好ましくは第一級アルキルハロゲン化物又は第一級アルキルスルホン酸エステルを用いて実施され得る。Ｎ末端アミノ酸はまた、アミド結合によってペプチドの末端アミノ基に共有結合している、アセチル基（すなわち−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）、ミリストイル基、ブタノイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、ドデカノイル基、テトラデカノイル基、ヘキサデカノイル基、９−ヘキサデセノイル基、オクタデカノイル基、９−オクタデセノイル基、１１−オクタデセノイル基、９，１２−オクタデカジエノイル基、９，１２，１５−オクタデカトリエノイル基、６，９，１２−オクタデカトリエノイル基、エイコサノイル基、９−エイコセノイル基、５，８，１１，１４−エイコサテトラエノイル基、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエノイル基、ドコサノイル基、１３−ドコセノイル基、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイル基、テトラコサノイル基を含む、アミドとして何らかのアシル又は脂肪族アシル脂肪アシル基を含むように末端アミノで修飾され得る。
【００５８】
ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基も化学修飾され得る。例えばＣ末端アミノ酸は、アンモニアのアミド；Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、好ましくは直鎖脂肪族アルキルアミンのアミド；ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド；直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基のアミド；及びω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン基（ω−メトキシ−ＰＥＧ−α−アミン基又はω−メトキシ−（ポリエチレングリコール）アミン基とも称される）［式中、ｎは０から１０である］のアミドのようなアミド基を形成する、ペプチドのＣ末端カルボン酸基とアミンの反応によって化学修飾され得る。ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基はまた、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコールのエステル及び２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］のエステルから成る群より選択されるエステルの形態であり得る。
【００５９】
式、ペプチド−Ｃ（Ｏ）ＯＨによって表わされ得る、ペプチド上のＣ末端カルボン酸基はまた、好ましくはペプチド内の他の何らかの反応基が、ベンジルエステル、ｔ−ブチルエステル、フェニルエステル等のような、ペプチド合成、特にペプチド固相合成の技術分野において周知の合成化学的に適合性の保護基によって保護されている間に、カルボン酸ハロゲン化物、カルボン酸無水物、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＯＰｆｐ）エステル、３−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−４−オキソ−ベンゾ−トリアゾン（ＯＤｈｂｔ）エステル等のような活性化形態に変換されることによってアミド化され得る。生じるペプチドアミドは、式、ペプチド−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ３Ｒ４（アミドはペプチドのＣ末端に位置する）［式中、Ｒ３及びＲ４は、水素；上述したメチル、エチル、ブチル、イソブチル、シクロプロピルメチル、ヘキシル、ドデシル、テトラデシル等のようなＣ１−Ｃ２４アルキルから成る群より独立して選択される］によって表わされ得る。
【００６０】
Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸はまた、２−ヒドロキシエチルアミン、４−ヒドロキシブチルアミン及び１２−ヒドロキシドデシルアミン等のようなヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン（ヒドロキシル基はアミンの窒素原子ではなく炭素原子に結合している）のアミドに変換され得る。
【００６１】
Ｃ末端カルボン酸はまた、ヒドロキシル基が、上述したようにＣ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸とエステルを形成するようにアシル化され得る、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミドに変換され得る。好ましくは、式、ペプチド−Ｃ（Ｏ）Ｒ５Ｒ６によって表わされるペプチドのＣ末端のペプチドアミドにおいて、Ｒ５は水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ２４アルキル及びヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４アルキルから成る群より選択される。
【００６２】
Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸は、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミンのアミドに変換され得る。このようなアミドは、例えば直鎖Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルエタノールを与える、２−クロロエタノールを含むジグリム中のハロゲン化カリウムと直鎖Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルコールの反応によって製造でき、前記直鎖Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルエタノールをアルデヒドに酸化し、次にアミンへと還元的アミノ化することによって（例えばアンモニアを用いて）、又はハロゲン化アルキルに変換し（例えば塩化チオニルを用いて）、次にアンモニアのようなアミンで処理することによって、アミンに変換することができる。
【００６３】
Ｃ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸はまた、対応するω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エタノールから、例えば上述したようなアルコールのアミンへの変換によって製造することができる、ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン［式中、ｎは０から１０である］のアミドに変換し得る。
【００６４】
もう１つの実施形態では、Ｃ末端カルボキシルは、式、ペプチド−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ７Ｒ８［式中、Ｒ７は水素であり、Ｒ８は、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基［式中、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル部分は上述したとおりであり、メトキシエチル（すなわちＣＨ３Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−）、２−ドデシルオキシエチル等のような基を含む］であるか；又はＲ７は水素であり、Ｒ８は、ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ポリ（エチレンオキシ）部分のｎは、２−メトキシエチル（すなわちＣＨ３Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−）、ω−メトキシエトキシエチル（すなわちＣＨ３Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−）からＣＨ３Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１０−ＣＨ２ＣＨ２−）までのように、０から１０である］である］によって表わされるアミドに変換され得る。
【００６５】
ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基はまた、上述したようなアルコールの脂肪族アルキル部分、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコールのエステルの形態であり得る。ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基はまた、酸化エチレンの化学量論量［化学量論量はｎの大きさに依存する］とナトリウム２−メトキシエタノレートとしての２−メトキシエタノールの反応から製造できる、２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］のエステルの形態であり得る。
【００６６】
ペプチドのアミノ酸の側鎖も化学修飾され得る。例えばフェニルアラニン又はチロシン内のフェニル基は、以下から成る群より選択される置換基で置換され得る。
【００６７】
メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、シクロプロピル、２−メチルシクロプロピル、シクロヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、エイコサニル、ドコサニル、テトラコサニル、９−ヘキサデセニル、９−オクタデセニル、１１−オクタデセニル、９，１２−オクタデカジエニル、９，１２，１５−オクタデカトリエニル、６，９，１２−オクタデカトリエニル、９−エイコセニル、５，８，１１，１４−エイコサテトラエニル、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエニル、１３−ドコセニル及び４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエニルのようなＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基（すなわち直鎖又は分枝、及び／又は飽和又は不飽和、及び／又は環状基を含む）；
不飽和の部位から離れた少なくとも１個の炭素原子においてヒドロキシル基で置換されたＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基［前記ヒドロキシル基の例は、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシドデシル等を含む］；
酢酸、ブタン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸ヘキサデカン酸、９−ヘキサデセン酸、オクタデカン酸、９−オクタデセン酸、１１−オクタデセン酸、９，１２−オクタデカジエン酸、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸、６，９，１２−オクタデカトリエン酸、エイコサン酸、９−エイコセン酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸、ドコサン酸、１３−ドコセン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、テトラコサン酸等のような酸、コハク酸のようなジカルボン酸、又は乳酸のようなヒドロキシ酸のＣ２−Ｃ２４脂肪族カルボキシル基でエステル化されているヒドロキシル基で置換されたＣ１−Ｃ２４アルキル基［但し、前記エステル置換基の炭素原子の総数は３から２５である］；
フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードのようなハロゲン；ニトロ；ＮＨ２、メチルアミノ、ジメチルアミノのようなアミノ；トリフルオロメチル；カルボキシル（−ＣＯＯＨ）；
メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブチルオキシ、イソブチルオキシ、シクロプロピルオキシ、２−メトキシシクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシ、オクチルオキシ、デシルオキシ、ドデシルオキシ、ヘキサデシルオキシ、オクタデシルオキシ、エイコサニルオキシ、ドコサニルオキシ、テトラコサニルオキシ、９−ヘキサデセニルオキシ、９−オクタデセニルオキシ、１１−オクタデセニルオキシ、９，１２−オクタデカジエニルオキシ、９，１２，１５−オクタデカトリエニルオキシ、６，９，１２−オクタデカトリエニルオキシ、９−エイコセニルオキシ、５，８，１１，１４−エイコサテトラエニルオキシ、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエニルオキシ、１３−ドコセニルオキシ及び４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエニルオキシのようなＣ１−Ｃ２４アルコキシ（チロシンのアルキル化によって形成され得るような）；及び
２−ヒドロキシエチルオキシのようなＣ２−Ｃ２４ヒドロキシアルキルオキシ及び上述したようなカルボン酸又はトリフルオロ酢酸とのこのエステル。
【００６８】
セリンヒドロキシル基は、
上述したようなＣ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸基；
トリフルオロ酢酸基；及び
安息香酸基
から成る群より選択される置換基でエステル化され得る。
【００６９】
リシン内のεアミノ基は、例えば上述したようなＣ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸基（例えば酸塩化物、無水物、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＯＰｆｐ）エステル、３−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−４−オキソ−ベンゾ−トリアゾン（ＯＤｈｂｔ）エステル等のようなカルボン酸の化学的活性化形態とアミンの反応による）、又は安息香酸基、又はアミノ酸基とのアミド形成によって、化学修飾され得る。加えて、リシン内のεアミノ基は、１又は２個のＣ１−Ｃ４脂肪族アルキル基でのアルキル化によって化学修飾され得る。
【００７０】
グルタミン酸内のカルボン酸基は、アンモニア；メチルアミンを含むＣ１−Ｃ２４第一級脂肪族アルキルアミン（このアルキル部分は上述したとおりである）；又はアミノ酸のアミノ基のようなアミンとのアミドの形成によって修飾され得る。
【００７１】
グルタミン酸内のカルボン酸基は、上述したようなＣ１−Ｃ２４脂肪族ヒドロキシアルキル基とのエステル、好ましくは上述したメタノール、エタノール、プロパン−１−オール、ｎ−ドデカノール等のようなＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルの第一級アルコールとのエステルの形成によって修飾され得る。
【００７２】
本発明のペプチドは、ムチン及び／又は粘液抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン抑制作用及び／又は粘液抑制作用を有する。前記ペプチドはまた、（１）等濃度で投与されたときＭＡＮＳペプチドよりも大きな哺乳動物におけるムチン抑制作用、（２）等濃度で投与されたときＭＡＮＳペプチドよりも大きな哺乳動物における粘液抑制作用、及び／又は（３）ＭＡＮＳペプチドよりも大きな水溶解度を有し得る。
【００７３】
ＭＡＲＣＫＳペプチド及びＭＡＮＳペプチドは各々、アミド結合によってＮ末端アミノ酸でアミンに連結されたミリストイル基を含む。しかし、ここで開示するように、本発明のペプチドのムチン過剰分泌抑制作用は、ペプチド配列のＮ末端アミノ酸におけるミリストイル基の存在によるのではない。実際に、Ｎ末端化学修飾を含まない本発明のある種のペプチドは、ムチン過剰分泌抑制活性を示すことが認められる。Ｎ末端アミドとしてのアセチル基のような、ミリストイル以外の基によるＮ末端化学修飾を含む本発明のある種のペプチドも、ムチン過剰分泌抑制活性を示すことが認められる。実際に、ＭＡＮＳペプチド（非ミリスチル化）のＮ末端アセチル化型は、本発明の方法においてムチン過剰分泌抑制活性を示すことができる。加えて、ＭＡＮＳペプチドアミノ酸配列を含むアミノ酸のペプチド配列及びここで述べるようなこの変異型は、本発明の方法においてムチン過剰分泌抑制活性を示すことができる。
【００７４】
１つの態様では、本発明は、哺乳動物においてムチンの過剰分泌を抑制する方法であって、ムチンの過剰分泌を抑制するペプチドのムチン過剰分泌抑制量を哺乳動物に投与することを含み、前記ペプチドが、（ａ）配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；及び（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；から成る群より選択されるアミノ酸配列を有し、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がミリストイル化されておらず、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が、場合により独立して化学修飾されており、前記ペプチドが、ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたときムチンの過剰分泌抑制作用を有する、前記方法を提供する。１つの実施形態では、このペプチドのＮ末端アミノ酸は、好ましくはアセチル化されている。もう１つの実施形態では、ペプチドは、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す。
【００７５】
一部の実施形態では、Ｎ末端アミノ基は、式、−Ｃ（Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは１から１５個の炭素原子を有する直鎖又は分枝アルキル基である］を有するアシル基を含むように修飾され得るか、又は式、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１［式中、Ｒ１は１から１５個の炭素原子を有する直鎖アルキル基である］を有するアシル基を含むように修飾され得る。ペプチドのＣ末端アミノ酸も化学修飾され得る。例えばＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、ヒドロキシル基の代わりにアミノ基を含むように化学修飾（すなわちアミド化）され得る。一部の実施形態では、Ｎ末端及び／又はＣ末端アミノ酸は化学修飾されていない。
【００７６】
一部の実施形態では、本発明のペプチドは、ヒト血漿におけるよりもヒト気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）においてより長い半減期を有し得る、及びまた、ヒト血漿におけるよりもヒト粘液において（例えば嚢胞性線維症を有する被験者からの粘液において）より長い半減期を有し得る。
【００７７】
本発明のペプチドは、哺乳動物においてムチン分泌及び／又は粘液産生を抑制する方法、哺乳動物においてムチン及び／又は粘液の過剰分泌を治療する方法、及び哺乳動物においてムチン及び／又は粘液の過剰分泌を生じさせる肺疾患（例えば喘息、慢性気管支炎、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症のような）を治療する方法において使用し得る。ペプチドによる治療に適すると考えられる状態は、炎症性、ウイルス性又は細菌性気道疾患（例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、普通の風邪、鼻炎、急性又は慢性気管支炎、肺炎及びケンネルコフ）、アレルギー状態（例えばアトピー、アレルギー性炎症）、気管支拡張症、気腫、気管支喘息及びある種の遺伝的状態（例えば嚢胞性線維症）を含むが、これらに限定されない。ペプチドはまた、この内容全体が参照してここに組み込まれる、米国特許出願第１０／１８０，７５３号（特許公開第Ｕ．Ｓ．２００３／００１３６５２号）及び同第０９／２５６，１５４号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ００／０５０５０号（国際公開広報第ＷＯ００／５００６２号）に述べられている状態及び疾患の治療のため並びにこれらに述べられている方法のために適すると考えられる。
【００７８】
疾患に関連するムチン過剰分泌に加えて、ムチン過剰分泌という用語はまた、ＡＴＰ誘導性のムチン過剰分泌並びに分泌促進物質誘導性のムチン過剰分泌及び刺激性ムチン過剰分泌も包含する。
【００７９】
好ましい実施形態では、本発明は、標準アミノ酸配列、ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸のアミノ酸配列を有するムチン過剰分泌抑制ペプチドを提供し、前記ムチン過剰分泌抑制ペプチドは、
（ａ）ここで述べるペプチド２、及びペプチド３、ペプチド４、ペプチド５、ペプチド６、ペプチド７、ペプチド８、ペプチド９、ペプチド１０、ペプチド１１、ペプチド１２、ペプチド１３、ペプチド１４、ペプチド１５、ペプチド１６、ペプチド１７、ペプチド１８、ペプチド１９、ペプチド２０、ペプチド２１、ペプチド２２、ペプチド２３、ペプチド２４、ペプチド２５、ペプチド２６、ペプチド２７、ペプチド２８、ペプチド２９、ペプチド３０、ペプチド３１、ペプチド３２、ペプチド３３、ペプチド３４、ペプチド３５、ペプチド３６、ペプチド３７、ペプチド３８、ペプチド３９、ペプチド４０、ペプチド４１、ペプチド４２、ペプチド４３、ペプチド４４、ペプチド４５、ペプチド４６、ペプチド４７、ペプチド４８、ペプチド４９、ペプチド５０、ペプチド５１、ペプチド５２、ペプチド５３、ペプチド５４、ペプチド５６、ペプチド５７、ペプチド５８、ペプチド５９、ペプチド６０、ペプチド６１、ペプチド６２、ペプチド６３、ペプチド６４、ペプチド６７、ペプチド６８、ペプチド６９、ペプチド７０、ペプチド７１、ペプチド７２、ペプチド７３、ペプチド７４、ペプチド７５、ペプチド７９、ペプチド８０、ペプチド８１、ペプチド８２、ペプチド８３、ペプチド８４、ペプチド８５、ペプチド８６、ペプチド８７、ペプチド９２、ペプチド９３、ペプチド９４、ペプチド９５、ペプチド９６、ペプチド９７、ペプチド９８、ペプチド９９、ペプチド１００、ペプチド１０６、ペプチド１０７、ペプチド１０８、ペプチド１０９、ペプチド１１０、ペプチド１１１、ペプチド１１２、ペプチド１１３、ペプチド１１４、ペプチド１２２、ペプチド１２３、ペプチド１２４、ペプチド１２５、ペプチド１２６、ペプチド１２７、ペプチド１２８、ペプチド１２９、ペプチド１３９、ペプチド１４０、ペプチド１４１、ペプチド１４２、ペプチド１４３、ペプチド１４４、ペプチド１４５、ペプチド１５７、ペプチド１５８、ペプチド１５９、ペプチド１６０、ペプチド１６１、ペプチド１６２、ペプチド１７６、ペプチド１７７、ペプチド１７８、ペプチド１７９、ペプチド１８０、ペプチド１９６；ペプチド１９７；ペプチド１９８；ペプチド１９９；ペプチド２１６；ペプチド２１７、及びペプチド２１９から成る群；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と８０％から９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列
から選択され、
但し、ムチン過剰分泌抑制ペプチドアミノ酸配列のＮ末端アミノ酸のアミンは、場合により、アミド結合によってミリスチン酸及び酢酸から成る群より選択されるカルボン酸に共有結合されており；及び
ムチン過剰分泌抑制ペプチドアミノ酸配列のＣ末端アミノ酸のカルボキシルは、場合により、アミド結合によってアンモニアに共有結合されている。
【００８０】
ペプチドは、局所的又は全身的に投与され得（例えば本発明のペプチドと医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物の形態で）、粘液及び／又はムチンを生産する身体の部分を含む、哺乳動物の身体のいずれかの部分に（例えば好ましくは気道、鼻腔、口腔、気管、肺、胃腸管、眼、生殖管等に）投与され得る。ペプチドは、局所投与、非経口投与、経直腸投与、経肺投与、経鼻投与、吸入、ガス注入及び経口投与を含むがこれらに限定されない、様々な方法で投与され得る。経肺投与は、例えばエアロゾル投与器、ネブライザ、乾燥粉末吸入器、定量吸入器等によって達成され得る。
【００８１】
ペプチドは、何らかの医薬的に有効な投与経路に適する医薬製剤として調製され、投与され得る。本発明のペプチド（又はこの医薬製剤）は、経口使用（例えば錠剤、ロゼンジ、硬又は軟カプセル、水性又は油性懸濁液、乳剤、分散性粉末又は顆粒、シロップ又はエリキシルとして）、局所使用（例えばクリーム、軟膏、ゲル、又は水性又は油性溶液又は懸濁液として）、吸入による投与（例えば微細分割粉末又は液体エアロゾルとして）、ガス注入による投与（例えば微細分割粉末として）又は非経口投与（例えば静脈内、皮下又は筋肉内投与のための無菌水性又は油性溶液として、又は経直腸投与のための坐薬として）に適する形態であり得る。
【００８２】
ペプチドは、ペプチドを含むエアロゾルを生成することを含む、何らかの適切な方法によって哺乳動物の気道に投与され得る。このようなエアロゾルは、固体又は液体であり得、水ベースであり得る。このようなエアロゾルの適切な大きさの粒子は、当技術分野で公知の様々な方法で生産され得る。このようなエアロゾルの粒子は、典型的には５０μｍ未満の大きさ、好ましくは約０．１μｍ−約１０μｍの範囲内の大きさ、より好ましくは約１μｍ−約１０μｍの範囲内の大きさ、さらに一層好ましくは約２−約７μｍの範囲内の大きさであり、好ましくは約２−約７μｍである。
【００８３】
ペプチド（又はペプチドの医薬製剤）の経鼻投与は、例えばペプチドの水性溶液又は懸濁液の噴霧適用によって、又は例えば場合により緩衝されていてもよい、医薬的に許容される、好ましくは無菌の塩類（ＮａＣｌ）溶液の形態で、点滴注入器又はピペットからのような滴又は小滴としてのペプチドの水性溶液又は懸濁液の適用によって、達成され得る。水溶液の滅菌は、例えば、場合により防腐剤、抗酸化剤、緩衝塩、張度調整剤等のような医薬的に許容される添加物の存在下で、ペプチドを含む水溶液の滅菌ろ過によって達成され得る。ペプチドを含む水性懸濁液の滅菌は、例えば、懸濁物質が０．２μｍより小さい粒径であるとき、例えばミセルを含む懸濁液、リン脂質安定化リポソームのようなリポソーム又は０．２μｍフィルターを通過できる同様の粒子であるときは、照射又は滅菌ろ過によって達成され得る。本発明のペプチドの治療有効量の水溶液（例えば等張食塩水又は高張食塩水、及び場合によりペプチドと化学反応しない糖）は、例えば滅菌ろ過によって滅菌することができ、ペプチドの治療有効量を含むアリコートとして滅菌バイアルに収められ、乾燥粉末を形成するように凍結乾燥されて、好ましくは不活性大気又はガスの存在下で、滅菌栓又は蓋を用いて密封され得る。使用前に、乾燥粉末は、哺乳動物の気道にエアロゾルとして投与できる単回用量として等張液を形成するのに十分な水を添加して再水和することができる。
【００８４】
哺乳動物に投与されるペプチド又はこの医薬製剤の量は、特定ペプチド、哺乳動物の種類、哺乳動物の疾病の程度、哺乳動物の体重及び哺乳動物の年齢を含むが、これらに限定されない多くの因子に依存して異なり得る。加えて、ペプチドで治療される哺乳動物においてムチン分泌／粘液産生のある程度のレベル（例えば正常又は基線レベル）を維持することが望ましいと考えられる。１つの実施形態では、ヒトが、治療を必要とする好ましい哺乳動物であり、投与されるペプチドの量は、単回又は多回用量で投与されてムチン過剰分泌を抑制するのに十分である。本発明のペプチドの単回用量は、０．１ｍｇ−約３０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．１ｍｇ−約１５ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．１ｍｇ−約７．５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり得る。投与の回数及び治療の期間は、治療に対する被験者の応答に依存する。単回投与の量、投与の回数及び治療の期間に関する調整は、症状及びこれらの症状の重症度に依存して医療提供者によって決定され得る。
【００８５】
１つの実施形態では、単離ペプチドは２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸（又は他の実施形態では、８から１４個の隣接アミノ酸又は１０から１２個の隣接アミノ酸）を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列のＮ末端アミノ酸から始まる；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；（ｃ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸（又は他の実施形態では、８から１４個の隣接アミノ酸又は１０から１２個の隣接アミノ酸）を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する；及び（ｄ）（ｃ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する。Ｎ末端アミノ酸のＮ末端アミノ基及び／又はＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、場合により以下のように化学修飾され得る。
【００８６】
（１）ペプチドのＮ末端アミノ酸のＮ末端アミン基は、場合により、
Ｃ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸のアミド、
トリフルオロ酢酸のアミド、
安息香酸のアミド、及び
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸のアミド
から成る群より選択されるアミドの形態であるか；又は
ペプチドのＮ末端アミノ酸のＮ末端アミン基は、場合により、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、
直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基、
ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］
から成る群より選択される基でアルキル化されており；及び
（２）ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、場合により、
アンモニアのアミド、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド、
ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド、
直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基のアミド、及び
ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン基［式中、ｎは０から１０である］のアミド
から成る群より選択されるアミドの形態であるか；又は
ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、場合により、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコールのエステル、
２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］のエステル
から成る群より選択されるエステルの形態である。
ペプチドは、ムチン抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン放出抑制作用を有する。ペプチドはまた、等濃度で投与されたとき、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい哺乳動物へのムチン抑制作用及び／又はＭＡＮＳペプチドよりも大きい水溶解度を有し得る。
【００８７】
もう１つの実施形態では、単離ペプチドは２４個未満のアミノ酸から成り、標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸（又は他の実施形態では、８から１４個の隣接アミノ酸又は１０から１２個の隣接アミノ酸）を有するアミノ酸配列の変異型から成るアミノ酸配列を有し、但し、前記アミノ酸配列は、標準配列のＮ末端アミノ酸から始まるか又は標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する。Ｎ末端アミノ酸のＮ末端アミノ基及び／又はＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、場合により以下のように化学修飾され得る。
【００８８】
（１）ペプチドのＮ末端アミノ酸のＮ末端アミン基は、場合により、
Ｃ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸のアミド、
トリフルオロ酢酸のアミド、
安息香酸のアミド、及び
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸のアミド
から成る群より選択されるアミドの形態であるか；又は
ペプチドのＮ末端アミノ酸のＮ末端アミン基は、場合により、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、
直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基、
ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］
から成る群より選択される基でアルキル化されており；及び
（２）ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、場合により、
アンモニアのアミド、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド、
ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド、
直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基のアミド、及び
ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン基［式中、ｎは０から１０である］のアミド
から成る群より選択されるアミドの形態であるか；又は
ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、場合により、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコールのエステル、
２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］のエステル
から成る群より選択されるエステルの形態である。
ペプチドは、ムチン抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン抑制作用を有する。ペプチドはまた、等濃度で投与されたとき、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい哺乳動物へのムチン抑制作用を有し、及び／又はＭＡＮＳペプチドよりも大きい水溶解度を有する。
【００８９】
さらなる実施形態では、哺乳動物においてムチン過剰分泌を抑制する方法は、ムチンの分泌を抑制する単離ペプチドのムチン抑制量を哺乳動物に投与することを含む。単離ペプチドは２４個未満のアミノ酸から成り、（ａ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸（又は他の実施形態では、８から１４個の隣接アミノ酸又は１０から１２個の隣接アミノ酸）を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列のＮ末端アミノ酸から始まる；（ｂ）（ａ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列；（ｃ）標準配列ペプチド１の４から２３個の隣接アミノ酸（又は他の実施形態では、８から１４個の隣接アミノ酸又は１０から１２個の隣接アミノ酸）を有するアミノ酸配列、但し、アミノ酸配列は標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する；及び（ｄ）（ｃ）で定義されるアミノ酸配列と実質的に類似の配列、から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する。Ｎ末端アミノ酸のＮ末端アミノ基及び／又はＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、場合により以下のように化学修飾され得る。
【００９０】
（１）ペプチドのＮ末端アミノ酸のＮ末端アミン基は、場合により、
Ｃ２−Ｃ２４脂肪族カルボン酸のアミド、トリフルオロ酢酸のアミド、
安息香酸のアミド、及びＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸のアミド
から成る群より選択されるアミドの形態であるか；又は
ペプチドのＮ末端アミノ酸のＮ末端アミン基は、場合により、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基、
ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］
から成る群より選択される基でアルキル化されており；及び
（２）ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、場合により、
アンモニアのアミド、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド、
ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミンのアミド、
直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン基のアミド、及び
ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン基［式中、ｎは０から１０である］のアミド
から成る群より選択されるアミドの形態であるか；又は
ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボン酸基は、場合により、
Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコールのエステル、
２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］のエステル
から成る群より選択されるエステルの形態である。
【００９１】
ペプチドは、等濃度で投与されたとき、ＭＡＮＳペプチドよりも大きい哺乳動物へのムチン抑制作用及び／又はＭＡＮＳペプチドよりも大きい水溶解度を有し得る。
【００９２】
本発明のペプチドは、例えばフルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭｏｃ）化学とＣＳ−Ｂｉｏ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒのような適切なペプチド合成装置を使用する、又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）化学とＡＢＩ  ４３０Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒのような適切なペプチド合成装置を使用するような、固相ペプチド合成を含む何らかの適切な方法によって製造し得る。ＦＭｏｃ又はＢｏｃ合成における使用に適する保護アミノ酸は、例えばＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡのユニットであるＣａｌｂｉｏｃｈｅｍから市販されている。固相ペプチド合成では、Ｎ−α−保護アミノ酸として所望ペプチドのＣ末端カルボキシル基をポリマー支持体に共有結合する。次にＮ−α−アミノ保護基を除去し、２番目のＮ−α−保護アミノ酸を、樹脂に連結されたアミノ酸の脱保護Ｎ−α−アミンへのアミド結合の形成によって結合アミノ酸にカップリングする。これらの工程を、所望配列が得られるまで所望ペプチド配列のそれぞれの保護アミノ酸に関して反復する。合成の終了時に、ペプチドを遊離させるためにＣ末端アミノ酸とポリマー支持体の間の結合を開裂する。ペプチドはＨＰＬＣによって単離し、精製することができる。有用なＨＰＬＣ精製法は、イオン交換クロマトグラフィー及び逆相クロマトグラフィーを含む。固体形態の単離ペプチドを与えるためにペプチドの溶液を蒸発させる又は凍結乾燥することができる。メチオニン、システイン、トリプトファン残基のような酸化性基を含むペプチドは、好ましくは無酸素雰囲気中に保持し、溶液又は懸濁液中で製剤し、保存するときは、無酸素溶媒中で使用する。
【００９３】
合成の間の樹脂結合ペプチドのアミン末端への活性化エステルのカップリングは、例えば４倍過剰のような過剰のアミノ酸とベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ジメチルアミノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、及び６倍過剰のような過剰のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いて実施することができる。Ｆｍｏｃ合成からのペプチドは、２０℃で４時間のトリフルオロ酢酸／チオアニソール／トリイソプロピルシラン／メタノール（例えば９０：５：２．５：２．５、ｖｏｌ／ｖｏｌ／ｖｏｌ／ｖｏｌの比率で）で樹脂から開裂され、Ｂｏｃ合成からのペプチドは、例えば４℃で１時間のＨＦ／アニソール（９：１、ｖｏｌ／ｖｏｌ）で樹脂から開裂される。
【００９４】
Ｆｍｏｃペプチド戦略では、最初のＦｍｏｃアミノ酸を酸不安定リンカーによって不溶性支持体樹脂に結合する。Ｆｍｏｃの脱保護は、ピペリジンのような塩基でのアミノ酸の処理によって実施される。２番目のＦｍｏｃアミノ酸は、前活性化種又はインサイチュー活性化を利用してカップリングする（カップリング反応は、ＤＣＣ、ＨＢＴＵ、ＴＢＴＵ、ＢＯＰ、ＢＯＰ−Ｃｌ等のようなペプチド化学において公知の活性化試薬を用いてインサイチューで実施できる）。所望ペプチドを合成した後、樹脂結合ペプチドを、例えばチオール化合物、フェノール及び水のような捕捉剤の存在下にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又はＴＭＳＢｒのような弱酸での酸分解開裂によって脱保護し、固体支持体から分離する。１つの態様では、側鎖官能基の脱保護及び樹脂からの開裂の前に、ペプチドの末端アミン基を、カルボン酸のアミドを形成するようにペプチド結合の形成と同様にしてカルボン酸（例えば脂肪族カルボン酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸等）、例えばペンタフルオロエステルのような脂肪族カルボン酸の活性化形態などの脂肪族カルボン酸種で、又はペプチドのＮ末端にスルホンアミドを形成するように脂肪族スルホン酸種（塩化スルホニルのような）で処理することができる。あるいはＮ末端アミンは、例えば、脂肪族カルボン酸の還元（例えば水素化アルミニウムリチウムによる）によって入手できる脂肪族アルコールと、対応する塩化スルホニル及びピリジンのような塩基との反応によって得られる脂肪族アルキル化剤（例えば脂肪族メシレート又はトシレート）でアルキル化することができる。もう１つの態様では、残りをＬアミノ酸として有する対応するＤアミノ酸（例えば４個までのＤアミノ酸）を、場合により上述したように化学修飾できる本発明のペプチドを提供するためのペプチド合成手順において使用することができる。もう１つの態様では、所望ペプチドアミノ酸配列が、例えば固相合成によって形成され、側鎖保護基が、樹脂からペプチドを遊離するためのエステル開裂工程に耐えるように選択されているとき、ペプチドのＣ末端に遊離カルボン酸を有する側鎖保護ペプチドが形成される。Ｃ末端カルボン酸は、活性エステル（例えばペンタフルオロフェニルエステル）に変換し、アミド（ペプチド−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２と表わされる）を形成するようにアンモニアなどのアミンで、又はペプチドの脂肪族アミドを形成するように上述した脂肪族アミンで処理することができ、残存する保護基は、本発明の所望ペプチドを与えるために除去することができる。加えて、Ｃ末端カルボン酸エステルは、Ｃ末端カルボン酸と脂肪族アルコールから、カルボジイミド試薬の使用などの脱水カップリングによって形成することができる。アスパラギン酸及びグルタミン酸のような酸官能基含有アミノ酸は、上記方法と同様にしてアミド及びエステルに変換することができ、リシン内のイプシロンアミン基は、末端アミノ基に関する化学について上述したようにアミド及び脂肪族アミンに変換することができる。
【００９５】
本発明のペプチドのＦＭｏｃ固相合成において有用な保護アミノ酸の例は、以下の非限定的な例を含む：Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アラニンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−アラニンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−グリシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−グリシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸ｇ−２−フェニルイソプロピルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸α−４−｛Ｎ−［１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル］−アミノ｝ベンジルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−４−｛Ｎ−［１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル］−アミノ｝ベンジルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸α−アリルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸ｇ−ベンジルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸α−ｔ−ブチルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−ｔ−ブチルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−ｔ−ブチルエステルペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α，ε−ジ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α，ε−ジ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リシン；Ｎ−α−１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキス−１−イリデン）エチル−Ｎ−ε−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−Ｎ−ε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキス−１−イリデン）−３−メチルブチル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキス−１−イリデン）エチル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−２−クロロ−ＣＢＺ−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−４−メチルトリチル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−アセチル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−リシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ε−トリフルオロアセチル−Ｌ−リシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−クロロ−Ｌ−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−シアノ−Ｌ−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−メチル−Ｌ−フェニルアラニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−γ−（４，４’−ジメトキシベンズヒドリル）−Ｌ−グル���ミン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−γ−トリチル−Ｌ−グルタミンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−γ−トリチル−Ｌ−グルタミン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−ＮＧ−（４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−ＮＧ−２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル−Ｌ−アルギニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−ＮＧ−４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル−Ｌ−アルギニンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−ＮＧ−ニトロ−Ｌ−アルギニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−ＮＧ−トシル−Ｌ−アルギニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｌ−セリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−セリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−ホスホセリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−セリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−セリンＮ−ヒドロキシスクシンイミド；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−トリチル−Ｌ−セリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−トレオニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−ホスホトレオニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−トレオニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−トリチル−Ｌ−トレオニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｌ−トレオニン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−バリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−バリンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−バリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−バリンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−メチル−Ｌ−バリン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−（ビス−ジメチルアミノ−ホスホノ）−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−２−ブロモ−ＣＢＺ−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−２−クロロトリチル−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−ホスホチロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ホスホノ−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−チロシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−チロシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−１−アダマンチルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−２−アダマンチルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−２−フェニルイソプロピルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−４−｛Ｎ−［１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル］−アミノ｝ベンジルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸α−４−｛Ｎ−［���−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル］−アミノ｝ベンジルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸α−アリルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ベンジルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸α−ｔ−ブチルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステルペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−２−アダマンチルエステルペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−ロイシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−ロイシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−ロイシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−（２−Ｆｍｏｃ−オキシ−４−メトキシベンジル）−ロイシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−メチル−Ｌ−ロイシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−イソロイシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−イソロイシンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−α−メチル−Ｌ−イソロイシン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−β−２，４，６−トリメトキシベンジル−Ｌ−アスパラギン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−β−トリチル−Ｌ−アスパラギンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギンペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−β−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−（アセチルアミノ）−デオキシ−２−β−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−β−トリチル−Ｌ−アスパラギン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−イム−メチルトリチル−Ｌ−ヒスチジン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−イム−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジンシクロヘキシルアンモニウム塩；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−イム−トシル−Ｌ−ヒスチジン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−イム−トリチル−Ｌ−ヒスチジン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−アセトアミドメチル−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−アセトアミドメチル−Ｌ−システインペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ベンジル−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ｐ−メトキシベンジル−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ｐ−メトキシトリチル−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ｔ−ブチル−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ｔ−ブチル−Ｌ−システインペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ｔ−ブチルチオ−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−ｔ−ブチルチオ−Ｌ−システインペンタフルオロフェニルエステル；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−トリチル−Ｌ−システイン；Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｓ−トリチル−Ｌ−システインペンタフルオロフェニルエステル。ペプチドの固相合成における使用のためのこれらや他のアミノ酸試薬は、例えばＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている。脂肪族カルボン酸も、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能である。
【００９６】
ペプチドはまた、第一Ｂｏｃアミノ酸をＨＦ開裂性リンカーによって不溶性支持体樹脂に結合する、Ｂｏｃ戦略を用いた固相合成によっても生産し得る。Ｂｏｃ基の除去による脱保護は、ＴＦＡによるＢｏｃ−アミノ酸の処理によって実施される。次に前活性化種又はインサイチュー活性化を利用して２番目のＢｏｃアミノ酸を結合する。所望ペプチドが合成された後、樹脂結合ペプチドを脱保護し、ＨＦ、ＴＦＭＳＯＴｆ又はＴＭＳＯＴｆのような強酸を用いた開裂によって固体支持体から分離する。開裂の間に生成されるカルボカチオンからペプチドを保護するためにチオール化合物のような添加物を添加する。以下の保護基はＨＦ開裂と適合性である。Ａｒｇ（Ｍｔｓ）；Ｃｙｓ（４−ＭｅＯＢｚｌ）；Ｈｉｓ（Ｚ）；Ａｒｇ（Ｔｏｓ）；Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）；Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）；Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）；Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）；Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）；Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）；Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）；Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）；Ｃｙｓ（Ａｃｍ）；Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）；Ｔｒｐ（ＣＨＯ）；Ｃｙｓ（４−ＭｅＢｚｌ）；Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）；Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）；Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）；Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）。以下の保護基はＴＦＭＳＯＴｆ開裂と適合性である。Ａｒｇ（Ｍｔｓ）；Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）；Ｍｅｔ（Ｏ）；Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）；Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）；Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）；Ｃｙｓ（Ａｃｍ）；Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）；Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）；Ｃｙｓ（４−ＭｅＢｚｌ）；Ｈｉｓ（Ｚ）；Ｔｒｐ（ＣＨＯ）；Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）；Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）；Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）。以下の保護基はＴＭＳＯＴｆ開裂と適合性である。Ａｒｇ（Ｍｔｓ）；Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）；Ｔｒｐ（ＣＨＯ）；Ａｒｇ（Ｍｂｓ）；Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）；Ｔｒｐ（Ｍｔｓ）；Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）；Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）；Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）；Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）；Ｍｅｔ（Ｏ）；Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）；Ｃｙｓ（Ａｃｍ）；Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）；Ｔｙｒ（Ｃｌ−Ｂｚｌ）；Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）；Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）。ペプチドアミド結合を形成するためのアミノ酸カルボン酸とアミンのカップリングは、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ｔ−ブチルメチル−及びｔ−ブチルエチル−カルボジイミド；ＢＯＰ；ＰｙＢｒｏＰ；ＰｙＢＯＰ；ＨＢＴＵ；ＴＢＴＵ；及びＨＡＴＵのようなカルボジイミドを用いたＢｏｃ戦略で達成でき、前記試薬は全て活性化のために塩基を必要とし、対称無水物の形成によって作用する。あるいは、クロロギ酸イソブチル又はイソプロピル及び置換ホスフィン塩化物をＮ−α−保護アミノ酸又はＮ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）又はＬｅｕｃｈｓ無水物と反応させることによって製造される、カルボン酸−カーボネート又はカルボン酸−ホスフィン混合無水物試薬が使用できる。Ｆｍｏｃ化学に関しては、Ｎ末端アミン及びＣ末端カルボン酸基が上記で概説した合成戦略に従って化学修飾できる。
【実施例】
【００９７】
本発明を、非限定的であることを意図される以下の説明実施例によってさらに説明する。これらの実施例は、本出願において開示するペプチドを代表する特定ペプチドの試験からの結果を提供する。ペプチドは、試験ペプチドのペプチド番号によって指示される、アミノ酸配列のそれぞれ左側と右側のＮ末端アミノ酸のＮ末端アミノ基及び／又はＣ末端アミノ酸のＣ末端カルボキシル基への修飾と共に列挙される。表ＩＸは、ペプチド配列への鍵を含む。Ｍｙｒ及びＡｃは、それぞれのペプチドアミノ酸配列内のＮ末端アミノ酸にアミド結合で共有結合している、それぞれミリストイル及びアセチルの略語であり；−ＮＨ２は、ペプチドアミノ酸配列のＣ末端に共有結合しているアンモニアのアミドを表わす。
【００９８】
（実施例１Ａ）
喘息のマウスモデルにおける試験ペプチドの相対的効果
Ｉ．プロトコール及び方法
ＭＡＮＳペプチド及びこれに関連する他の試験ペプチドがインビボでマウス気道におけるムチンの過剰分泌を抑制するかどうかを調べるための実験を設計した。これらの試験で使用したアレルギー性炎症及び喘息のオボアルブミン感作マウスモデルは、Ｓｉｎｇｅｒら（２００４）、前出によって記述された。陰性対照として、Ｎ末端ミリストイル基及びＭＡＮＳペプチドと同じアミノ酸を含むがランダムな順序に配列された（すなわちランダムＮ末端配列、ＲＮＳ、ミリストイル−ペプチド２３２）対照ペプチドを、提案する活性ペプチドと共に試験した。６から８週齢のＢＰ２マウスを、オボアルブミン１μｇにより週に１回の間隔で２回、皮下経路で免疫した。感作の１４日後、動物を、７２時間後に顕著な杯細胞過形成を生じさせるエアロゾル化オボアルブミンに暴露した。７２時間目の時点で、微細なエアロゾルを９０秒間提供するＢｕｘｃｏシステムネブライザを使用して分泌促進物質、メタコリン（６０ｍＭ）を送達した。分泌促進物質による攻撃誘発の１５分前に、３つの異なる濃度（１０μＭ、１００μＭ又は１４０μＭ）の試験ペプチド５０μＬを気管内経路によって投与した。ＲＮＳペプチドは最高用量レベル（１４０μＭ溶液５０μＬ）でのみ試験した。ＭＡＮＳ並びにＲＮＳペプチドは、１２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７に易溶性であった。これらの実験において使用した様々な対照を以下の表Ｉにまとめる。各々の実験を各時点につき６匹のマウスで実施し、実験の各々のセットを３回反復した。系統ごとの変動を調べるため、上記実験を同様のプロトコールの下にＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて反復した。１２０ｍＭ酢酸ナトリウムで処置したマウスにおいて、刺激したときと刺激しなかったときのムチン分泌はどちらも食塩水対照と同じであった。メタコリン攻撃誘発後、動物を犠牲死させ、分泌されたムチンの分析のため各群につき６匹の動物で気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を実施した。
【００９９】
表Ｉは実験についての一般的プロトコールを示す。
【０１００】
【表１】
2008528500.tif 000002
【０１０１】
ＩＩ．ＢＡＬ液の分析
マウスを頸部脱臼によって犠牲死させ、その後速やかに気管を露出させて、小さな切開を通してカニューレを挿入した。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液を、ＰＭＳＦ（５ｍＭ）、ＥＤＴＡ（５ｍＭ）及びＤＴＴ（５ｍＭ）を含むＰＢＳ０．５ｍｌ、次いで３×１ｍｌで収集した。ＢＡＬ液を、分析を実施する前に短時間の遠心分離によって無細胞分画と細胞分画に分離した。無細胞上清を、マウスムチンと反応することが示された抗ムチン抗体を使用するＥＬＩＳＡ方法によってムチンの存在に関して分析した。詳細には、分泌されたムチンの炭水化物部分を認識するマウス抗ＭＵＣ５ＡＣ抗体をこれらのアッセイにおいて使用した。各々のＢＡＬ試料から生じたデータを、ブラッドフォードアッセイによって測定された総タンパク質に基準化した。ムチン含量は、抗ムチン抗体で得られた数値から非免疫対照抗体で得られた数値を差し引いた値で表わした。全てのＥＬＩＳＡデータを、一方向ＡＮＯＶＡを用いて統計的に検討した。実験データは、ｐ＜０．０５であるとき対照と有意に異なるとみなされた。
【０１０２】
以下の表ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩは、Ｂａｌｂ／Ｃマウス及びＢＰ２マウスにおけるムチン分泌への様々なペプチドの作用を要約している。表ＩＩに示すように、様々な試験ペプチド１００μＭで、ムチン分泌は対照（すなわちペプチドなし）の８％から５６％であった。
【０１０３】
【表２】
2008528500.tif 000003
【０１０４】
【表３】
2008528500.tif 000004
【０１０５】
【表４】
2008528500.tif 000005
【０１０６】
【表５】
2008528500.tif 000006
【０１０７】
喘息のマウスモデルにおいて試験ペプチドの作用期間を測定するための実験を設計した。方法１Ａで述べたように、Ｂａｌｂ／Ｃマウスをオボアルブミンで免疫した。１４日後、動物をエアロゾル化オボアルブミンで攻撃誘発した。７２時間後、分泌促進物質、メタコリンをエアロゾル投与によって送達した。メタコリン攻撃誘発の３０分前、６０分前又は１２０分前に、試験ペプチド（１００Ｍ溶液５０Ｌ）を気管内経路によって投与した。動物を犠牲死させ、分泌されたムチンの分析のためにＢＡＬを実施した。この実験の結果を表ＶＩに示す。
【０１０８】
【表６】
2008528500.tif 000007
【０１０９】
マウス肺においてムチンを定量的に測定する選択的マウス試験モデル及び方法は、本発明のペプチドの活性を評価するために有用である。この方法は、Ｅｖａｎｓら（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．３１，ｐｐ  ３８２−３９４，２００４）によって記述されている。簡単に述べると、雌性マウス（５から８週齢、各々２０から２５ｇ）を、生理食塩水中にミョウバン塩２．２ｍｇ及びオボアルブミン２０μｇを含む溶液１００μＬの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により週に１回４週間にわたって感作する。最後のｉ．ｐ．注射の７日後、生理食塩水中に溶解したオボアルブミンの２．５％溶液の３０分間にわたるエアロゾル投与によってマウスを攻撃誘発する。エアロゾルはＡｅｒｏＭｉｓｔ  ＣＡ−２０９圧縮空気ネブライザ（ＣＩＳ−ＵＳ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）で生成する。
【０１１０】
オボアルブミン攻撃誘発の３日後、試験ペプチド５０μＬを、１０μＬのアリコートとして２から３分かけてマウスの各々の外鼻孔内に送達する。１５分後、マウスをエアロゾル化１００ｍＭ  ＡＴＰ溶液で５分間にわたって処置する。２０分後、マウスをケタミン、キシラジン及びアセプロマジンの混合物のｉ．ｐ．注射によって麻酔し、肺組織から血液を清掃するために右心室を通して肺を食塩水で灌流する。深麻酔下で、２０ゲージの鈍端カニューレを用いて動物を気管切開し、腹部大動脈による瀉血によって犠牲死させる。固定液（０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中４％パラホルムアルデヒド）を１０から１５ｃｍ圧で気管内に注入し、肺をインサイチューで３０分間固定して、胸腔から取り出し、４℃で一晩固定する。肺をパラフィンに包埋し、６μｍ切片に切断する。
【０１１１】
ムチンの蛍光標識のために、過ヨウ素酸蛍光シッフ（ＰＡＦＳ）染色手順を用いて組織を染色する。組織を最初に１％過ヨウ素酸中で酸化し（１０分間）、洗浄して、アクリブラビン蛍光シッフ試薬（０．５％アクリフラビンＨＣｌ、ｗ／ｖ、１％メタ重亜硫酸ナトリウムｗ／ｖ、０．０１Ｎ  ＨＣｌ）で２０分間処理し、二重脱イオン水中で洗浄して、酸アルコール（７０％エタノール中０．１Ｎ  ＨＣｌ）中で２×５分間洗浄する。スライドガラスを段階的エタノール溶液中で脱水し、暗所で空気乾燥させる。ひとたび乾燥すれば、ＰＡＦＳ染色スライドガラスをカナダバルサム封入剤（５０％カナダバルサム樹脂、５０％サリチル酸メチル；Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）で覆ってカバーガラスを載せる。
【０１１２】
ムチンの定量のため、ＰＡＦＳ染色スライドガラスを４０ｘ対物レンズの下で検査する。軸となる気管支から１０視野の画像を捕獲し、ＭａｇｎａＦｉｒｅ２．１（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ）を用いてカメラの設定条件を管理する。二元励起フィルター（ｄｕａｌ  ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｆｉｌｔｅｒ）（５００ｎｍ及び５７３ｎｍピーク）を用いて標本を励起し、５３１ｎｍ（緑色）及び６２７ｎｍ（赤色）でピークを有する二元発光フィルターを用いて標本を観察することによってＰＡＦＳ画像化を実施する。各々の視野について、最初にカメラで赤色獲得チャネル（５９０ｍｓ暴露）だけを用いて画像を生成する。同じ画像を、次に、カメラで赤色と緑色（５９０ｍｓ赤色、４５０ｍｓ緑色）の両方のチャネルを用いて再捕獲した。形態計測分析のために、次にＩｍａｇｅＰｒｏ  Ｐｌｕｓを用いてムチン染色容積密度との蛍光強度を測定する。気道上皮におけるムチン染色の容積密度は立体的に算定される。簡単に述べると、染色の表面積対上皮の総表面積の比を、総上皮表面積、規定膜長及び幾何学的定数４／πの積である、周囲長測定値で除する。結果として、データは、細胞内ムチン含量の容積／規定膜の表面積として提示される。ムチン分泌は総上皮含量の分数で表わされる。
【０１１３】
（実施例１Ｂ）
杯細胞化生及び気道閉塞を有するマウスモデルにおけるムチン過剰分泌へのエアロゾル化Ａｃ−ペプチド１０６のペプチド投与の作用
喘息のマウスモデルにおけるムチン過剰分泌へのエアロゾル化Ａｃ−ペプチド１０６の効果を２つの濃度で測定した。簡単に述べると、５から８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを、実施例１Ａで上述したように週に１回３週間にわたってオボアルブミンで免疫した。２８日目に、エアロゾル化した生理食塩水中２．５％オボアルブミンで３０分間マウスを攻撃誘発した。オボアルブミン攻撃誘発の３日後、マウスの各々の群（ｎ＝２）に、１０ｍＭ又は３０ｍＭのＡｃ−ペプチド１０６のエアロゾル化等張液をＡｅｒｏＭｉｓｔ  ＣＡ−２０９ネブライザで１時間投与した。エアロゾル粒子の空気動力学的中央粒子径は１．４９μｍ（０．４から４．７μｍの範囲）であった。Ａｃ−ペプチド１０６のこれらの濃度とこの粒径を考慮して、Ａｃ−ペプチド１０６の算定肺沈着はそれぞれ０．３８ｍｇ／ｋｇ体重及び１．１ｍｇ／ｋｇ体重であった。
【０１１４】
Ａｃ−ペプチド１０６投与の直後に、分泌促進物質、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）（食塩水中１００ｍＭ）を５分間エアロゾル投与した。マウスを犠牲死させ、２０分以内に肺を採取した。肺を食塩水で洗い、パラホルムアルデヒドで固定して、パラフィンに包埋し、切片にした。切片を、Ｅｖａｎｓら（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．３１，ｐｐ  ３８２−３９４，２００４）の方法に従って定量的免疫組織化学により、ムチンの存在に関して定量的に分析した。結果は、Ａｃ−ペプチド１０６が、それぞれ０．３８及び１．１ｍｇ／ｋｇ体重で、ＡＴＰ誘導性ムチン過剰分泌の３０から６７％の阻害剤として有効であったことを示す。
【０１１５】
（実施例２）
半生理食塩水中の試験ペプチドの定性的溶解度の評価
様々な試験ペプチド（各々１から５ｍｇ）を個別の２ｍＬスクリューキャップ付きガラスバイアルにおいて正確に検量し、半生理食塩水、ｐＨ６．５  ２５μＬのアリコートを２５℃、常圧で添加した。溶解度を視覚的に評価した。試験ペプチドが食塩水の最初のアリコートで完全に溶解する場合は、この溶解度を算定し、算定量以上と表わした。それ故、試験ペプチド３．５ｍｇが０．５Ｎ食塩水の最初の２５μＬアリコートで直ちに溶解する場合、この溶解度は＞１４０ｍｇ／ｍＬと称される。同様に、試験ペプチド１．７ｍｇが０．５Ｎ食塩水１．７ｍＬ中に溶解しない場合、この溶解度は＜１．０ｍｇ／ｍＬと称される。様々な試験ペプチドの溶解度の評価の結果を表ＶＩＩに列挙する。
【０１１６】
半生理食塩水中の様々なペプチドの溶解度はまた、以下の２つの半定量的方法、方法１及び方法２の１つによって測定することができる。方法１は、半生理食塩水中の溶解度が約１０ｍｇ／ｍＬ未満であるペプチドに使用でき、方法２は、約３０ｍｇ／ｍＬ以上で半生理食塩水に可溶性であるペプチドに使用できる。
【０１１７】
方法１
各々のペプチドを１ｍｇ／ｍＬの濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解する。０．２ｍｇ／ｍＬ溶液を得るためにこの溶液のアリコートを半生理食塩水で５倍希釈する。０．２ｍｇ／ｍＬペプチド溶液を、Ｃ１８／５ミクロンのカラムを用いたＨＰＬＣ分析に供する。溶出緩衝液は、水中０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（緩衝液Ａ）及び１００％アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ（緩衝液Ｂ）から成る。ペプチドを約２０分間で５％Ｂから４５％Ｂの勾配によって溶出する。各ペプチドピークについての曲線下面積（ＡＵＣ）をこのようにして決定することができる。このＡＵＣ値を、飽和溶液の上清中の各対応ペプチドの濃度を決定するための標準（ＡＵＣ−Ｓｔｄ）として使用することができる。
【０１１８】
各ペプチドの飽和溶液は、ペプチドの十分な量を、混濁懸濁液が得られるまで半生理食塩水１ｍＬに添加することによって調製できる。混濁懸濁液を、次に、１０，０００×ｇで約１０分間遠心分離する。その後上清をＨＰＬＣに供する。上清を、ＨＰＬＣ分析の前に、必要に応じて半生理食塩水でさらに希釈する。この分析から得られるＡＵＣ（ＡＵＣ−Ｓａｔ）を、以下の式によって飽和溶液中のペプチドの濃度を決定するために使用する。
【０１１９】
飽和溶液中のペプチドの濃度＝ＡＵＣ−Ｓｔｄ×０．２／ＡＵＣ−Ｓａｔ。
【０１２０】
方法２
この方法は、半生理食塩水中のペプチド溶解度の推定値を与えることができる。この方法は、半生理食塩水１ｍＬに溶解するためにペプチドの検量された量（「ｘｘ」ｍｇと表わされる）を添加することから成る。結果は、＞ｘｘｍｇ／ｍＬと提示され、ｘｘは半生理食塩水に添加されたペプチドの量である。
【０１２１】
【表７】
2008528500.tif 000008
2008528500.tif 000009
【０１２２】
（実施例３）
生物学的液体中の試験ペプチドの溶解度
ヒト血漿、ヒトＢＡＬＦ及びＣＦ患者粘液中の様々な試験ペプチドを、生物学的液体中でのタンパク質分解に対する試験ペプチドの感受性を調べるために分析した。加えて、試験ペプチドの半減期を調べるために、濃度減衰を示す試料に関して一次動態分析を実施した。試料を受領日当日に分析するか又は−２０℃で保存してこの２日後以内に分析した。
【０１２３】
１．生物学的液体の収集と処理
Ａ．ヒト血漿：
新鮮ヒト血液試料をクエン酸緩衝ｖａｃｕｕｔｒａｉｎｅｒｓに収集した（ＥＤＴＡ又はヘパリンの不在下で）。赤血球（ＲＢＣ）を４０００×ｇ、４℃で１０分間の血液の遠心分離によって除去した。次に血漿アリコート（０．９ｍＬ）を、ｐＨ７．０の７５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の試験ペプチドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液０．１ｍＬでスパイクし、３７℃に維持した水浴中でインキュベートした。１０μＬの２つのアリコートを５、１５、３０、６０及び１８０分の間隔で採取し、アセトニトリル５０％＋０．２％ギ酸を含む水５０％から成る溶液９９０μＬで直ちに「クエンチング」した。その後試料を液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）に供した。
【０１２４】
Ｂ．ヒトＢＡＬ液：
ＣＯＰＤ患者から採集したＢＡＬＦの試料を入手し、凍結した。ＢＡＬＦ試料を解凍し、一緒に混合して、１０，０００×ｇ、４から８℃で１０分間遠心分離した。上清（０．９ｍＬ）を、ｐＨ７．０の７５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中のペプチドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液０．１ｍＬでスパイクし、上述したように処理して、分析した。
【０１２５】
Ｃ．ヒトＣＦ粘液：
ＣＦ患者からの凍結粘液（痰）を解凍し、ガラス製組織粉砕機を用いて７５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０  ２容量と混合して、１０，０００×ｇ、４から８℃で１０分間遠心分離した。ペレットを酢酸緩衝液１容に再懸濁し、遠心分離した。２つの上清を一緒にし、以下のように使用した。上清（４５０μＬ）を、ｐＨ７．０の７５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中のペプチドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液５０μＬでスパイクし、上述したように処理して、分析した。
【０１２６】
ＩＩ．濃度分析
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（ＭＤＳ／ＳＣＩＥＸ、ＡＰＩ４０００型）を用いて全ての試料を分析した。クロマトグラフィーはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラムを用いて実施し、一方質量分析は正イオンエレクトロスプレーイオン化法を用いて実施した。
【０１２７】
Ａ．ヒト血漿及びＢＡＬＦ中のペプチド、Ａｃ−ペプチド７９−ＮＨ２、ペプチド１０６−ＮＨ２、Ａｃ−ペプチド１０６の分析及びヒト血漿及びヒトＣＦ粘液中のペプチド、ｍｙｒ−ペプチド１０６、ペプチド１０６、ペプチド１０６−ＮＨ２、Ａｃ−ペプチド１０６及びｃｙｃ−ペプチド１０６（環状ペプチド）の分析
０．１００μｇ／ｍＬ、１．００μｇ／ｍＬ、１０．０μｇ／ｍＬ及び７５μｇ／ｍＬの濃度で分析した、ペプチド、ｍｙｒ−ペプチド１０６、ペプチド１０６、ペプチド１０６−ＮＨ２、ペプチド１０６及び環状ペプチド、ｃｙｃ−ペプチド１０６についての検量標準を除き、ヒト粘液中の各々のペプチドについて検量標準を０．１００μｇ／ｍＬ、１．００μｇ／ｍＬ、１０．０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬの濃度でＬＣＭＳによって分析した。標準は、０．２％ギ酸を含む５０／５０水／アセトニトリル混合物中の１％ヒトＢＡＬＦ、血漿又は粘液において調製した。標準の各々のセットに関する機器応答値は、１／（濃度）２線形最小二乗直線を用いて適合させた。試料濃度はこの直線の勾配と切片を用いて算定した。検量範囲の外側の濃度は、検量曲線を外挿することによって決定した。
【０１２８】
Ｂ．ヒト血漿及びＢＡＬＦ中のペプチド、ｍｙｒ−ペプチド２３４−ＮＨ２、ｍｙｒ−ペプチド２３４、ペプチド１０６及びｍｙｒ−ペプチド１０６の分析
２つの検量標準を、各々のペプチドについて５０μｇ／ｍＬの濃度で分析した。標準の各々のセットに関する機器応答値は、非加重線形最小二乗直線を用いて０の切片を通して適合させた。試料濃度はこの直線の勾配と切片を用いて算定した。
【０１２９】
Ｃ．ヒト血漿及びＢＡＬＦ中のペプチド、ペプチド２３７、ｍｙｒ−ペプチド１０６−ＮＨ２、ｍｙｒ−ペプチド２３６及びｍｙｒ−ペプチド２３６−ＮＨ２の分析
血漿中のペプチド濃度の分析については、２つの検量標準を、各々のペプチドについて２５μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬの濃度で分析した。標準の各々のセットに関する機器応答値は、非加重線形最小二乗直線を用いて０の切片を通して適合させた。試料濃度はこの直線の勾配と切片を用いて算定した。検量範囲の外側の濃度は、検量曲線を外挿することによって決定した。
【０１３０】
ＢＡＬＦ試料中のペプチド濃度の分析については、ＢＡＬＦ、水、アセトニトリル及びギ酸の混合物中で調製した１つの５０μｇ／ｍＬの検量標準を各試料セットに関して分析した。
【０１３１】
ＩＩＩ．動態プロフィール
濃度の著しい減衰を示した全ての試料について、Ｗａｔｓｏｎソフトウエアプログラムを用いて一次動態プロフィールを測定した。Ｗａｔｓｏｎは、Ｃｍａｘ（最大濃度）、切片、速度定数、勾配及びＴ１／２（半減期）のようなパラメータを測定するために対数変換データを最小二乗直線と適合させる。生じる動態パラメータは、実際の濃度値ではなく線形適合に基づいた。
【０１３２】
溶液中の０時点での検量標準は動態プロフィールの一部として含めなかった。しかし、本当の一次動態は、濃度変化を時間の関数として正確に表わすために０時点のデータ点を含むことを必要としない。
【０１３３】
ヒト血漿（血漿ｔ１／２）、ヒトＢＡＬＦ（ＢＡＬＦｔ１／２）及びヒトＣＦ粘液（粘液ｔ１／２）、中の試験ペプチドの半減期を表ＶＩＩＩに列挙する。
【０１３４】
【表８】
2008528500.tif 000010
【０１３５】
ペプチド、ｍｙｒ−ペプチド２３６は、ミリストイル−ペプチド２３６である。実験で使用した他の全てのペプチドは上記に述べられている。
【０１３６】
（実施例４）
霊長動物の上気道における粘液分泌へのＭＡＮＳペプチドの効果
この実験の目的は、ＭＡＮＳペプチドが健康な成体アカゲザルの上気道における粘液分泌を抑制する能力を測定することであった。使用した試験は、鼻分泌作用の評価のための標準方法であり、非ヒト霊長動物は、典型的にはヒトにおける作用と良好な相関を提供する。
【０１３７】
方法
鼻炎の既往歴のない合計１７匹の健康な若齢成体雄性アカゲザルを実験のために使用した。いずれのサルも試験前又は試験後に鼻炎を有していなかった。いずれの処置前にも、各々のサルの鼻粘液分泌をこの左外鼻孔において測定した。この数値を１００％粘液分泌とみなす。次にサルを無作為に以下の４つの群に分けた：
第１群：生理食塩水、対照（ｎ＝３）；
第２群：酢酸ナトリウム、溶媒対照（ｎ＝４）；
第３群：ＲＮＳペプチド、陰性対照（ｎ＝５）；及び
第４群：ＭＡＮＳペプチド、試験ペプチド（ｎ＝５）。
【０１３８】
処置の前に１７匹の動物全ての左外鼻孔に食塩水を入れた。右外鼻孔は、食塩水、酢酸ナトリウム、ＲＮＳペプチド又はＭＡＮＳペプチドのいずれか２．０ｍＬで処置した。それ故、各動物はそれ自体の内部対照を有していた。試験物質による処置の１時間後に各動物の両方の外鼻孔で鼻洗浄を実施した。全ての洗浄液を直ちに−８０℃で冷凍し、ＥＬＩＳＡによって粘液含量に関して分析した。
【０１３９】
Ａ．試験物質：
生理食塩水、フィルター滅菌；酢酸ナトリウム、１５０μＭ、フィルター滅菌；ＲＮＳペプチド−１５０μＭフィルター滅菌酢酸ナトリウム中の１４０μＭ溶液及びＭＡＮＳペプチド−１５０μＭフィルター滅菌酢酸ナトリウム中の１４０μＭ溶液。
【０１４０】
Ｂ．試験動物：
アカゲザル；動物数：１７；性別：全て健康な雄性；年齢：３から４歳；体重：４から７ｋｇ、平均５．０３ｋｇ；馴化期間：７日間；識別方法：５桁のＩＤ番号による固有の入れ墨。経歴：全ての動物が、この試験の１２から２４ヶ月前に髄膜炎に対する免疫についてのワクチン試験に使用された。また、全動物が乳児期の間麻疹と破傷風に対する定期予防接種を受けた。
【０１４１】
Ｃ．動物の管理：
飼育：条件は、「実験動物の管理と使用に関する指針」に基づく、標準操作手順に従った。食餌：標準アカゲザル飼料を毎日与えた。水：自由に摂取できる都市用水を、自動給水システムを通して与えた。収容施設：動物を、動物番号、試験コード、性別、動物コードを指示するカードによって識別される承認済みステンレス鋼ケージに個別に収容した。環境：室温を毎日観測した。室内の温度範囲は、２０から２６℃の範囲内であった。毎日観測した部屋の湿度範囲は４０から７０％であった。明暗周期は自動タイマーを用いて管理した（明１２時間、暗１２時間）。人員：関与する要員は適切な資格を有し、霊長動物に関して訓練された。
【０１４２】
結果
結果は、ＲＮＳペプチド、酢酸ナトリウム緩衝液又は生理食塩水は粘液分泌にいかなる作用も及ぼさなかったのに対し、ＭＡＮＳペプチドでは粘液分泌がほとんど７５％抑制されたというデータを提供する。
【０１４３】
（実施例５）
ヒト気管支上皮細胞における分泌ムチンの定量のための組織培養法
ＨＢＥ１は、空気／液体界面で培養したときムチンを分泌することができる乳頭腫ウイルス形質転換ヒト気管支上皮細胞系である。ＨＢＥ１細胞を先に述べられているように（Ｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌｕｍｅ  ２７６，ｐｐ４０９８２−４０９９０，２００１）空気／液体界面で培養した。簡単に述べると、ＨＢＥ１細胞を、ラット尾コラーゲンＩ型（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）で薄く被覆した１２穴のＴｒａｎｓｗｅｌｌ  ｃｌｅａｒ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎｓｅｒｔｓ（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に細胞の適切な数を接種することによって空気／液体界面で培養した。細胞を、最初に、加湿した９５％空気、５％ＣＯ２環境においてほぼ集密まで５から７日間、培地で液内培養した。この時点で、先端培地を除去し、基底の横方向に（ｂａｓａｌａｔｅｒａｌｌｙ）細胞を供給することによって空気／液体界面を創造した。培地をその後毎日新しくした。細胞を完全に分化させるためにさらに１４日間培養した。細胞の先端表面に蓄積したムチンを、リン酸食塩水、ｐＨ７．２で洗浄することによって取り除いた。基線ムチン分泌を収集するため、細胞を培地単独と共に３０分間インキュベートし、先端培地中の分泌ムチンを収集して、ＥＬＩＳＡによって定量した。ムチン分泌促進物質によって誘導されるムチン過剰分泌を測定するため、０．５μＭ酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）を含む培地に３０分間暴露して、ムチンを収集し、ＥＬＩＳＡによって定量した。試験ペプチドによるＰＭＡ誘導のムチン過剰分泌の抑制を測定するため、細胞を、試験ペプチド２０又は２５μＭを含む培地と共に１５分間プレインキュベートし、その後０．５μＭ  ＰＭＡと共に３０分間インキュベートした。６個のウエルを各試験ペプチド及び各対照のために使用した。先端培地中の分泌ムチンを収集し、アルカリホスファターゼ複合ムチン（ＭＵＣ５Ａ）特異的抗体（Ｚｙｍｅｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡ法によって定量した。
【０１４４】
０．５μＭ  ＰＭＡによるＨＢＥ１細胞の処理は、ムチン分泌の２０％上昇を生じさせた。このＰＭＡ誘導のムチン分泌上昇は、２５μＭ  ＭＡＮＳペプチド又は２５μＭ  Ａｃ−ペプチドＮｏ．１０６での前処理によって１００％ブロックされた。２５μＭ  Ａｃ−ペプチドＮｏ．１０６は、ＰＭＡ誘導のムチン分泌を１００％抑制しただけでなく、ムチン分泌を非刺激培地対照より２０％低いレベルまで抑制した。Ａｃ−ペプチドＮｏ．２５１は、ＰＭＡ誘導のムチン分泌上昇に対して最も小さい６％の抑制作用を有していた。
【０１４５】
表ＩＸは、本発明のペプチド及びこれらのそれぞれのアミノ酸配列及び対応する配列番号のリストを含む。
【０１４６】
【表９】
2008528500.tif 000011
2008528500.tif 000012
2008528500.tif 000013
2008528500.tif 000014
2008528500.tif 000015
【０１４７】
本発明を、この特定実施形態を参照しながら詳細に説明したが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な変更及び修正を施し得ることは当業者には明白である。
【配列表】
2008528500000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成19年9月20日(2007.9.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有するアミノ酸配列；
（ｂ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する単離ペプチドであって、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がミリストイル化されておらず、場合により独立して化学修飾されていてもよく、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたときムチンの過剰分泌抑制作用を有する、前記単離ペプチド。
【請求項２】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＮ末端アミノ酸で始まる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の２位のアミノ酸から２１位のアミノ酸で始まる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＣ末端アミノ酸で終わる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の隣接残基ＡＫＧＥ（配列番号２１９）を含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の４から１６個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項１から４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項７】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の８から１４個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項１から４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項８】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の１０から１２個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項１から４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項９】
ペプチドの１以上のアミノ酸が場合により独立して化学修飾されている、請求項１から８のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１０】
ペプチドのＮ末端アミノ酸が、Ｎ末端アミノ基でアルキル化、アミド化又はアシル化されている、請求項１から９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１１】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でアセチル化されている、請求項１から９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１２】
ペプチドが、アセチル−ペプチド１０６、ペプチド１０６及びペプチド１０６−ＮＨ２から成る群より選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１３】
ペプチドが、ペプチド１５、ペプチド４５、ペプチド９１及びペプチド１５３から成る群より選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１４】
ペプチドが、ペプチド７９、ペプチド２３３、ペプチド２３４、ペプチド２３４ＮＨ２及びペプチド２３５から成る群より選択される、請求項１又は請求項９から１１のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１５】
ペプチドがアセチル−ペプチド２１９である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１６】
配列が、Ａの代わりにＫ；Ｆ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ及び／又はＥの代わりにＡ；又はＱの代わりにＥから成る群より選択される少なくとも１個のアミノ酸置換を有する標準配列のアミノ酸配列を含む、請求項１から１５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１７】
ペプチドが、ペプチド２３３から２４５及び２４７から２５１から成る群より選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１８】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の２位のアミノ酸から２１位のアミノ酸で始まる、請求項１６に記載のペプチド。
【請求項１９】
アミノ酸配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項２０】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がアセチル化されている、請求項１９に記載のペプチド。
【請求項２１】
Ｎ末端アミノ酸がＮ末端アミンにおいて、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアルキル化されている、請求項１から９、１３、１４又は１６から１９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２２】
Ｎ末端アミノ酸がＮ末端アミンにおいて、トリフルオロ酢酸、安息香酸又はＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸でアミド化されている、請求項１から９、１３、１４又は１６から１９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２３】
ペプチドのＣ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基でアミド化又はエステル化されている、請求項１から９、１３、又は１５から２０のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２４】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、アンモニア、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン［式中、ｎは０から１０である］から成る群より選択されるアミンでアミド化されている、請求項１から９又は２３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２５】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコール又は２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］でエステル化されている、請求項１から９又は２３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２６】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項１から２５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２７】
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する単離ペプチドであって、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸がアセチル化されており、及び前記ペプチドのＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、
ムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたときムチンの過剰分泌抑制作用を有する、前記単離ペプチド。
【請求項２８】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の８から１４個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項２７に記載のペプチド。
【請求項２９】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の１０から１２個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項２７に記載のペプチド。
【請求項３０】
ペプチドの１以上のアミノ酸が場合により独立して化学修飾されている、請求項２７から２９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項３１】
ペプチドのＣ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基でアミド化又はエステル化されている、請求項２７から３０のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項３２】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、アンモニア、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン［式中、ｎは０から１０である］から成る群より選択されるアミンでアミド化されている、請求項３１に記載のペプチド。
【請求項３３】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコール又は２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］でエステル化されている、請求項３１に記載のペプチド。
【請求項３４】
ペプチドが、アセチル−ペプチド１０６及びアセチル−ペプチド２１９から成る群より選択される、請求項２７に記載のペプチド。
【請求項３５】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項２７から３４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項３６】
（ａ）標準配列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（配列番号１）の４から２３個の隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列；及び
（ｂ）（ａ）で定義される配列と実質的に同一のアミノ酸配列；
から成る群より選択されるアミノ酸配列を有する単離ペプチドであって、
前記ペプチドのＮ末端配列が標準配列の２位から２１位で始まり、及び
前記ペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸が場合により独立して化学修飾されており、及び
前記ペプチドがムチン過剰分泌抑制量で哺乳動物に投与されたとき、ムチン過剰分泌抑制作用を有する、
前記単離ペプチド。
【請求項３７】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の隣接残基ＡＫＧＥ（配列番号２１９）を含む、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項３８】
ペプチドのアミノ酸配列が標準配列のＣ末端アミノ酸で終了する、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項３９】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の４から１６個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項３６又は３８に記載のペプチド。
【請求項４０】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の８から１４個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項３６又は３８に記載のペプチド。
【請求項４１】
ペプチドのアミノ酸配列が、標準配列の１０から１２個の隣接アミノ酸又は前記標準配列と実質的に同一のアミノ酸配列から成る、請求項３６又は３８に記載のペプチド。
【請求項４２】
ペプチドの１以上のアミノ酸が場合により独立して化学修飾されている、請求項３６から４１のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項４３】
ペプチドのＮ末端アミノ酸が、Ｎ末端アミノ基でアルキル化、アミド化又はアシル化されている、請求項３６から４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でアセチル化されている、請求項３６から４２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項４５】
ペプチドのＮ末端アミノ酸がＮ末端アミノ基でミリストイル化されている、請求項３６から４２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項４６】
ペプチドのＮ末端アミノ酸が、Ｎ末端アミノ基でミリストイル化されていない、請求項３６から４２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項４７】
ペプチドが、ペプチド１５、ペプチド４５、ペプチド９１及びペプチド１５３から成る群より選択される、請求項３６に記載のぺプチド。
【請求項４８】
ペプチドがアセチル−ペプチド２１９である、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項４９】
配列が、Ａの代わりにＫ；Ｆ、Ｋ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ及び／又はＥの代わりにＡ；又はＱの代わりにＥから成る群より選択される少なくとも１個のアミノ酸置換を有する標準配列のアミノ酸配列を含む、請求項３６から４８のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５０】
ペプチドが、ペプチド２３３から２４５及びペプチド２４７から２５１から成る群より選択される、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項５１】
Ｎ末端アミノ酸が、Ｎ末端アミンにおいて、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル基、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチル基又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチル基［式中、ｎは０から１０である］でアルキル化されている、請求項３６から４３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５２】
Ｎ末端アミノ酸がＮ末端アミンにおいて、トリフルオロ酢酸、安息香酸又はＣ１−Ｃ２４脂肪族アルキルスルホン酸でアミド化されている、請求項３６から４３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５３】
ペプチドのＣ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基においてアミド化又はエステル化されている、請求項３６から５２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５４】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、アンモニア、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、ヒドロキシル置換Ｃ２−Ｃ２４脂肪族アルキルアミン、直鎖２−（Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキル）オキシエチルアミン又はω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ−エチルアミン［式中、ｎは０から１０である］から成る群より選択されるアミンでアミド化されている、請求項３６又は５３に記載のペプチド。
【請求項５５】
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端カルボキシル基において、Ｃ１−Ｃ２４脂肪族アルキルアルコール又は２−（ω−メトキシ−ポリ（エチレンオキシ）ｎ）−エタノール基［式中、ｎは０から１０である］でエステル化されている、請求項３６又は５３に記載のペプチド。
【請求項５６】
ペプチドが、（ａ）等濃度で哺乳動物に投与されたとき、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな哺乳動物へのムチン過剰分泌抑制作用又は（ｂ）同じ液体中の等濃度で、Ｎ末端アミノ酸がミリストイル化されている配列番号１で示されるペプチドよりも大きな水溶解度、の性質の少なくとも１つを示す、請求項３６から５５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５７】
請求項１から５６のいずれか１項に記載のペプチド及び場合により、医薬的に許容される担体及び／又は希釈剤を含有する医薬組成物。
【請求項５８】
ムチン過剰分泌の治療のための医薬組成物を調製するための、請求項１から５６のいずれか１項に記載のペプチドの使用。
【請求項５９】
ムチン過剰分泌が肺疾患の症状である、請求項５８に記載のペプチドの使用。
【請求項６０】
肺疾患が、喘息、慢性気管支炎、ＣＯＰＤ又は嚢胞性線維症である、請求項５９に記載のペプチドの使用。
【国際調査報告】
2008528500.tif 000016
2008528500.tif 000017
2008528500.tif 000018
2008528500.tif 000019
2008528500.tif 000020