(57)【要約】  抗血管形成剤をヒトまたは動物に投与する方法であって、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の血漿濃度が、１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように抗血管形成剤を投与することを含む方法。【選択図】図３Ａ
2008521822.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療薬をヒトまたは動物に投与する方法であって、ヒトまたは動物に対し以下の式
【化１】
2008521822.tif 000013
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、アルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である］
から選択されるある量の治療薬を、ヒトまたは動物における該治療薬の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように投与することを含む方法。
【請求項２】
該治療薬の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該治療薬の血漿濃度は、約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
治療薬の投与は、経口、非経口、経皮、局所、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、点眼、硬膜外、気管内、舌下、口腔、直腸、膣内、経鼻または吸入投与である請求項１に記載の方法。
【請求項７】
治療薬は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、液体担体、溶質、懸濁化剤、増粘剤、香料、ゼラチン、グリセリン、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤、分散剤、生分解性ポリマー、またはそれらの任意の組合せから選択される添加剤を含む組成物で投与される請求項１に記載の方法。
【請求項８】
治療薬は、錠剤、カプセル、トローチ剤、カシェ剤、溶液、懸濁物、エマルジョン、粉末、煙霧剤、坐薬、噴霧剤、薬用ドロップ、軟膏、クリーム、ペースト、泡、ゲル、タンポン、膣坐薬、顆粒、巨丸剤、口腔洗浄薬または経皮貼布の形態で投与される請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ヒトまたは動物における疾病を治療する方法であって、ヒトまたは動物に対し以下の式
【化２】
2008521822.tif 000014
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、アルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である］
から選択されるある量の治療薬を、ヒトまたは動物における該治療薬の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように投与することを含む方法。
【請求項１０】
該治療薬の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間である請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
該治療薬の血漿濃度は、約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
治療薬の投与は、経口、非経口、経皮、局所、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、点眼、硬膜外、気管内、舌下、口腔、直腸、膣内、経鼻または吸入投与である請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
治療薬は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、液体担体、溶質、懸濁化剤、増粘剤、香料、ゼラチン、グリセリン、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤、分散剤、生分解性ポリマー、またはそれらの任意の組合せから選択される添加剤を含む組成物で投与される請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
治療薬は、錠剤、カプセル、トローチ剤、カシェ剤、溶液、懸濁物、エマルジョン、粉末、煙霧剤、坐薬、噴霧剤、薬用ドロップ、軟膏、クリーム、ペースト、泡、ゲル、タンポン、膣坐薬、顆粒、巨丸剤、口腔洗浄薬または経皮貼布の形態で投与される請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
疾病は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障、後水晶体線維増殖症、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ過剰装用、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、翼状乾燥角膜炎、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡、phylectenulosis、梅毒、ミコバクテリア感染、脂質変性、化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原虫感染、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺変性症、辺縁表皮剥奪（marginal keratolysis）、外傷、関節炎、関節リウマチ、多発性動脈炎、全身性狼蒼、ウェゲナーサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、放射状角膜切開、黄斑変性、鎌形赤血球貧血、サルコイドーシス、弾力線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎、慢性硝子体炎、ライム病、イールズ病、ベーチェット病、近視、乳頭小窩、シュタルガルト病、扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘度症候群、トキソプラズマ症、レーザ後合併症、線維血管または線維組織の異常増殖、血管腫、オスラー−ウェバー−ランデュ病、固体腫瘍、血液由来腫瘍、後天性免疫不全症候群、眼血管新生病、加齢黄斑変性、ルベオーシス、変形性関節症、慢性炎症によって引き起こされる疾病、クローン病、潰瘍性大腸炎、横紋筋肉腫、網膜芽腫、ユーイング肉腫、神経芽腫、骨肉腫、白血病、乾癬、アテローム性動脈硬化症、類天疱瘡、網膜炎を引き起こす感染症、脈絡膜炎を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病、増殖性硝子体網膜症、バルトネラ症、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ、化膿性肉芽腫、腫瘍転移、良性腫瘍、血管機能障害、異常創傷治癒、痛風、痛風性関節炎、遺伝性出血毛細管拡張症、閉経後症状、骨粗鬆症、心臓血管病、心筋血管新生、プラーク血管新生、血友病関節、血管線維腫、創傷肉芽形成、腸管癒着、強皮症、ケロイドまたは子宮内膜腫に関連する請求項９に記載の方法。
【請求項１８】
疾病は、乳癌、疲弊した癌、腎細胞癌、脳腫瘍、卵巣癌、結腸癌、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、黒皮腫、肝臓癌、小細胞および非小細胞肺癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮頚癌、リンパ腫、副甲状腺癌、陰茎癌、直腸癌、小腸癌、甲状腺癌、子宮癌、ホジキンリンパ腫、口唇癌、口腔癌、皮膚癌、白血病または多発性骨髄腫から選択される血管形成依存性癌に付随する疾病である、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
ヒトまたは動物における疾病を治療する方法であって、ヒトまたは動物に対し以下の式
【化３】
2008521822.tif 000015
を有するある量の治療薬を、ヒトまたは動物における該治療薬の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように投与することを含む方法。
【請求項２０】
該治療薬の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間である請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
該治療薬の血漿濃度は、約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
治療薬の投与は、経口、非経口、経皮、局所、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、点眼、硬膜外、気管内、舌下、口腔、直腸、膣内、経鼻または吸入投与である請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
治療薬は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、液体担体、溶質、懸濁化剤、増粘剤、香料、ゼラチン、グリセリン、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤、分散剤、生分解性ポリマー、またはそれらの任意の組合せから選択される添加剤を含む組成物で投与される請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
治療薬は、錠剤、カプセル、トローチ剤、カシェ剤、溶液、懸濁物、エマルジョン、粉末、煙霧剤、坐薬、噴霧剤、薬用ドロップ、軟膏、クリーム、ペースト、泡、ゲル、タンポン、膣坐薬、顆粒、巨丸剤、口腔洗浄薬または経皮貼布の形態で投与される請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
ヒトまたは動物における疾病を治療する方法であって、ヒトまたは動物に対し以下の式
【化４】
2008521822.tif 000016
を有するある量の治療薬を、ヒトまたは動物における該治療薬の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように投与することを含む方法。
【請求項２８】
該治療薬の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
該治療薬の血漿濃度は、約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
該治療薬の血漿濃度は、約３ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間である請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
治療薬の投与は、経口、非経口、経皮、局所、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、点眼、硬膜外、気管内、舌下、口腔、直腸、膣内、経鼻または吸入投与である請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
治療薬は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、液体担体、溶質、懸濁化剤、増粘剤、香料、ゼラチン、グリセリン、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤、分散剤、生分解性ポリマー、またはそれらの任意の組合せから選択される添加剤を含む組成物で投与される請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
治療薬は、錠剤、カプセル、トローチ剤、カシェ剤、溶液、懸濁物、エマルジョン、粉末、煙霧剤、坐薬、噴霧剤、薬用ドロップ、軟膏、クリーム、ペースト、泡、ゲル、タンポン、膣坐薬、顆粒、巨丸剤、口腔洗浄薬または経皮貼布の形態で投与される請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００４年１１月２９日に出願された米国仮特許出願第６０／５３１，５０２号、２００５年９月８日に出願された米国仮特許出願第６０／７１５，２３８号、および２００５年１１月１日に出願された米国仮特許出願第６０／７３２，０６５号の有益性を主張するものである。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、広くは、抗血管形成剤を投与する方法に関する。本発明は、より詳細には、所望の血漿濃度が、所定の血液濃度より高く実質的に継続的に維持されるように、２−メトキシエストラジオールまたは２−メトキシエストラジオールの類似体を投与する方法に関する。本発明は、より詳細には、所望の血漿濃度が実質的に継続的に維持されるように２−メトキシエストラジオールまたは２−メトキシエストラジオールを投与することによって、異常細胞有糸分裂および／または異常または望ましくない血管形成によって特徴づけられる疾病を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血管形成は、組織または器官内に新しい血管が生成することである。正常な生理的条件下では、ヒトおよび動物は、非常に特異的な制限された状況においてのみ血管形成される。例えば、血管形成は、創傷治癒、胎児および胚発育、黄体、子宮内膜および胎盤の形成において通常観察される。
【０００４】
血管形成は、血管形成刺激剤および阻害剤の高度に調節された系を介して制御される。血管形成の制御は、一定の疾病状態において変化することが確認されており、多くの場合、疾病に対応づけられる病理的損傷は、無制御の血管形成に関連づけられる。制御された血管形成も無制御の血管形成も同じように進行すると考えられる。基底膜に囲まれた内皮細胞および周細胞は、毛細血管を形成する。血管形成は、内皮細胞および白血球により放出された酵素による基底膜の浸食から始まる。次いで、血管の内腔を内張する内皮細胞は、基底膜を通じて突出する。血管形成刺激剤は、内皮細胞を、浸食された基底膜を移動させる。移動細胞は、内皮細胞が有糸分裂して、増殖する親血管からの「新芽」を形成する。内皮新芽は、一緒になって、毛細血管係蹄を形成して、新しい血管を作る。
【０００５】
持続的な無調節血管形成は、多くの疾病、腫瘍転移、および内皮細胞による異常成長において生じる。無調節血管形成が存在する多様な病理的疾病状態は、血管形成依存性または血管形成関連疾病としてグループ化された。
【０００６】
血管形成に依存する疾病の一例は、眼の血管新生疾病である。この疾病は、網膜または角膜等の眼の構造体への新しい血管の侵入によって特徴づけられる。それは、失明の最も一般的な原因であり、約２０の眼病に関与している。年齢に関わる黄斑変性において、対応づけられる視覚的問題は、網膜色素上皮の下の線維血管組織が増殖するブルック膜の欠陥による脈絡毛細管組織の内部成長によって引き起こされる。血管形成性損傷は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障および後水晶体線維増殖症にも対応づけられる。角膜血管新生に対応づけられる他の疾病としては、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ過剰装用、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎および翼状乾燥角膜炎が挙げられるが、それらに限定されない。望ましくない血管形成に対応づけられる他の疾病としては、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡、phylectenulosis、梅毒、ミコバクテリア感染、脂質変性、化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原虫感染、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺変性症、辺縁表皮剥奪（marginal keratolysis）、関節リウマチ、全身性狼蒼、多発性動脈炎、外傷、ウェゲナーサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、類天疱瘡および放射状角膜切開が挙げられる。
【０００７】
血管新生に対応づけられる疾病としては、網膜／脈絡膜血管新生、糖尿病性網膜疾患、黄斑変性、鎌形赤血球貧血、サルコイドーシス、梅毒、弾力線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、ミコバクテリア感染、ライム病、全身性紅斑性狼蒼、未熟児網膜症、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎または脈絡膜炎を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病、近視、乳頭小窩、シュタルガルト病、扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘度症候群、トキソプラズマ症、外傷およびレーザ後合併症が挙げられるが、それらに限定されない。他の眼関連疾病としては、ルベオーシス（虹彩および角の血管新生）に対応づけられる疾病、およびあらゆる形態の硝子体網膜症を含む、線維血管または線維組織の異常増殖によって引き起こされる疾病が挙げられるが、それらに限定されない。
【０００８】
他の血管形成関連疾病は、関節リウマチである。関節の髄膜内層における血管は、血管形成される。新しい血管網を形成するのに加えて、内皮細胞は、パンヌス成長および軟骨破壊をもたらす因子および反応性酸素種を放出する。血管形成は、変形性関節炎においても役割を果たしうる。血管形成関連因子による軟骨細胞の活性化は、関節の破壊に寄与する。後の段階で、血管形成因子は、新しい骨の成長を促進する。軟骨破壊を防ぐ治療介入は、疾病の進行を停止させ、関節炎にかかっている患者の苦痛を軽減することが可能である。
【０００９】
慢性炎症も病理的血管形成に関与しうる。潰瘍性大腸炎およびクローン病のような疾病は、新しい血管の炎症組織への内部成長による組織学的変化を示す。南米に見られるバクテリア感染であるバルトネラ症は、血管内皮細胞の増殖によって特徴づけられる慢性段階をもたらしうる。血管形成に対応づけられる他の病理的役割は、アテローム性動脈硬化症に見られる。血管の内腔内に形成された斑は、血管形成刺激活性を有することが証明された。
【００１０】
腫瘍成長は血管形成依存性であるという仮説は、１９７１年に初めて提案された（Folkman、New Eng. J. Med.、285:1182-86 (1971)）。この仮説は、最も単純な言葉で述べると、「一度腫瘍「生着」が生じると、腫瘍細胞集団が増加する前に、腫瘍に集まる新しい毛細管が増加するはずである」ということになる。腫瘍「生着」は、現在では、数平方ミリメートルの体積を占め、数百万個を超えない腫瘍細胞の集団が、既存の宿主の微小血管上で生存しうる腫瘍成長の前血管段階を指すものと理解されている。この段階を超える腫瘍体積の拡大には、新しい毛細血管の誘発が必要である。例えば、マウスの早期の前血管段階における肺微小転移は、組織切片に対する高出力顕微鏡法以外では検出不可能である。
【００１１】
この概念を裏づける間接的な証拠の例を以下に挙げる：
（１）マウスにおける皮下透明窓に移植された腫瘍の成長速度は、血管新生前は遅く直線的であり、血管新生後は迅速かつほぼ指数関数的になる（Algireら、J. Nat. Cancer Inst.、6: 73-85 (1945)）。
【００１２】
（２）血管が増殖しない単離潅流器官における腫瘍成長は、１〜２ｍｍ３に限定されるが、マウスに移植されると、この体積の１０００倍を上回る体積まで急速に拡大し、血管新生される（Folkmanら、Annals of Surgery、164:491-502 (1966)）。
【００１３】
（３）無血管角膜における腫瘍成長は、ゆっくりと、直線的な速度で進行するが、血管新生後は指数関数的な成長に切り替わる（Gimbrone, Jr.ら、J. Nat. Cancer Inst.、52:421-27 (1974)）。
【００１４】
（４）ウサギの眼の前房の水性流体に懸濁された腫瘍は、存続可能で無血管状態を維持し、大きさが１ｍｍ３未満に限定される。それらが一度虹彩血管床に移植されると、血管新生され、急速に成長し、２週間以内に本来の体積の１６０００倍に達する（Gimbrone, Jr.ら、J. Exp. Med.、136:261-76）。
【００１５】
（５）腫瘍をニワトリ胎児漿尿膜に移植すると、７２時間飲む血管段階中に徐々に成長するが、０．９３＋０．２９ｍｍの平均直径を超えることはない。血管新生の発生後２４時間以内に急速な腫瘍拡大が生じ、７日までには、これらの血管新生化腫瘍の平均直径が８．０＋２．５ｍｍに達する（Knighton, British、J. Cancer、35:347-56 (1977)）。
【００１６】
（６）ウサギ肝臓における転移の血管模型は、転移のサイズが不均一であることを明らかにするが、血管新生が存在するサイズに対するカットオフ点が比較的均一であることを示す。腫瘍は、直径１ｍｍまでは一般には無血管であるが、その直径を超えると血管新生される（Lienら、Surgery、68:334-40 (1970)）。
【００１７】
（７）膵島のベータ細胞に癌を発生させる遺伝子組換えマウスにおいて、前血管過形成島は、サイズが１ｍｍ未満に限定される。６〜７週齢では、島の４〜１０％が血管新生され、これらの島から、前血管島の体積の１０００倍を上回る大きな血管新生腫瘍が生じる（Folkmanら、Nature、339:58-61 (1989)）。
【００１８】
（８）ＶＥＧＦに対する特定の抗体（血管内皮成長因子）は、（ヌードマウスにおいて）微小血管密度を低下させ、血管形成のそれらの唯一の媒介物質としてＶＥＧＦに依存するこれらのヒト腫瘍の成長を「有意かつ著しく」阻害させる。該抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の成長を阻害しない（Kimら、Nature、362:841-44 (1993)）。
【００１９】
（９）抗ｂＦＧＦモノクローナル抗体は、血管形成のその唯一の媒介物質としてのｂＦＧＦの排泄に依存するマウス腫瘍の成長を７０％阻害する。該抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の成長を阻害しない（Horiら、Cancer Res., 51:6180-84 (1991)）。
【００２０】
（１０）ｂＦＧＦの腹腔内注射は、腫瘍における毛細血管内皮細胞の成長を刺激することによって、一次腫瘍の成長およびその転移を増強する。腫瘍細胞自体は、ｂＦＧＦに対する受容体が不足しており、ｂＦＧＦは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞に対する分裂促進因子ではない（Grossら、Proc. Am. Assoc. Cancer Res.、31:79 (1990)）。
【００２１】
（１１）特定の血管形成阻害剤（ＡＧＭ−１４７０）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでは腫瘍成長および転移を阻害するが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは腫瘍細胞増殖を阻害する活性がはるかに弱い。それは、腫瘍細胞増殖を阻害する濃度より４ログ低い濃度で、血管内皮細胞増殖を最大半減阻害する（Ingberら、Nature、48:555-57 (1990)）。腫瘍成長は、血管形成依存性であるという間接的な臨床的証拠も存在する。
【００２２】
（１２）硝子体に転移するヒト網膜芽細胞腫は、（除核眼から除去され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで分析された場合に）生存可能であり、３Ｈ−チミジンを含んでいるにもかかわらず１ｍｍ３未満に限定される無血管球体になる。
【００２３】
（１３）卵巣の癌は、小さい白色種（１〜３ｍｍ３）として腹膜に転移する。これらの移植体は、それらのうちの１つまたは複数個が血管新生されるまで滅多に成長しない。
【００２４】
（１４）乳癌（Weidnerら、New Eng. J. Med.、324:1-8 (1991)；Weidnerら、J Nat. Cancer Inst.、84:1875-87 (1992)）および前立腺癌（Weidnerら、Am. J. Pathol.、143(2):401-09 (1993)）における血管新生の強さは、将来の転移のリスクに大いに関連している。
【００２５】
（１５）ヒト黒皮腫からの転移は、血管新生前は希である。血管新生の発生は、病変の厚さを増加させ、転移のリスクを高める（Srivastavaら、Am. J. Pathol.、133:419-23 (1988)）。
【００２６】
（１６）膀胱癌において、血管形成タンパク質、すなわちｂＦＧＦの尿値は、細胞診断より、疾病の状態および規模の高感度の指標である（Nguyenら、J. Nat. Cancer Inst.、85:241-42 (1993)）。
【００２７】
したがって、血管形成は、癌の転移に大きな役割を果たす。この血管形成活性を抑制または排除することが可能であれば、腫瘍が存在していても、成長することはない。疾病状態において、血管形成を防止すると、新しい微小血管系の侵入によって引き起こされる損傷を回避することが可能になる。血管形成プロセスの制御に向けられる療法は、これらの疾病の抑止または軽減をもたらすことが可能である。
【００２８】
血管形成は、固体腫瘍および血液由来腫瘍を含むいくつかの異なるタイプの癌に関連づけられてきた。血管形成に関連づけられた固体腫瘍としては、横紋筋肉腫、網膜芽腫、ユーイング肉腫、神経芽腫および骨肉腫が挙げられるが、それらに限定されない。血管形成は、貧血症、障害性血液凝固、およびリンパ節、肝臓および脾臓の肥大を通常伴う、白血球の無制限の増殖が生じる骨髄の様々な急性または慢性腫瘍性疾病のいずれかである白血病等の血液由来腫瘍にも対応づけられる。血管形成は、白血病腫瘍および多発性骨肉腫病を発生させる骨髄の異常にある役割を果たしていると考えられる。
【００２９】
小児の最も高頻度の血管形成病の１つは、血管腫である。血管腫は、新たに形成された血管で構成された腫瘍である。たいていの場合は、腫瘍は良性であり、介入しなくても退行する。より苛酷な場合は、大きな海綿状浸潤性形態に進行し、臨床的併発症を発生させる。血管腫の全身性形態、すなわち血管腫症は、死亡率が高い。現在用いられている療法では治療できない治療抵抗性血管腫が存在する。
【００３０】
血管形成は、オスラー−ウェバー−ランデュ病等の遺伝性疾病、または遺伝性出血性血管拡張症に見られる損傷の原因でもある。これは、多数の小さい血管腫、すなわち血液またはリンパ管の腫瘍によって特徴づけられる遺伝性疾病である。血管形成は、皮膚および粘膜に見られ、エピタキシー（鼻血）または胃腸出血をしばしば伴い、ときには肺または肝臓動脈瘻管を伴う。
【００３１】
したがって、血管形成を阻害しうる組成物および方法が必要とされている。特に主要な胃の血管の望ましくない成長を阻害しうる組成物および方法も必要とされている。
【００３２】
血管形成は、生殖および創傷治癒等の正常な生理的プロセスにも関与する。血管形成は、排卵において、また受精後の胞胚移植においても重要な工程である。無月経の誘発、排卵の阻止、または胞胚による移植の防止に血管形成の防止を利用することが可能である。
【００３３】
創傷治癒において、過度の修復または線維増殖は、外科的処理の有害な副作用であり、血管形成によって引き起こされ、または悪化されうる。癒着は、外科手術の高頻度の併発症であり、小腸閉塞等の問題をもたらす。
【００３４】
血管形成を阻害するためにいくつかの化合物が使用されてきた。Taylorら（Nature、297:307 (1982)）は、血管形成を阻害するためにプロタミンを使用した。プロタミンの毒性は、療法としてのその実用性を制限している。Folkmanら（Science、221:719 (1983)および米国特許第５，００１，１１６号および同第４，９９４，４４３号）は、血管形成を抑制するためにヘパリンおよびステロイドを使用することを開示している。グルココルチコイドおよびミネラルコルチコイド活性が不足しているテトラヒドロコルチソール等のステロイドは、血管形成阻害剤になることが確認された。
【００３５】
血管形成を阻害するために、ウシ硝子体からの４ｋＤａ糖タンパク質および軟骨由来因子等の動物において何人的に見いだされた他の要因も使用された。インターフェロン等の細胞因子は、血管形成を阻害する。例えば、インターフェロンアルファまたはヒトインターフェロンベータは、人腫瘍細胞に刺激されたマウス真皮における腫瘍誘発血管形成を阻害することが証明された。インターフェロンベータは、同種異型脾臓細胞によって誘発される血管形成の強力な阻害剤でもある（Sidkyら、Cancer Res.、47:5155-61 (1987)）。人組換えインターフェロン（アルファＡ）を使用して、血管形成誘発病である肺血管腫症の治療に成功したことが報告された（Whiteら、New Eng. J. Med.、320:1197-1200 (1989)）。
【００３６】
血管形成を阻害するのに使用されてきた他の薬剤としては、アスコルビン酸エーテルおよび関連化合物が挙げられる（特開昭５８−１３号公報（１９７８））。硫酸化多糖類ＤＳ４１５２も血管形成を阻害する（特開昭６３−１１９５００号公報）。さらなる抗血管形成化合物としては、Angiostatin（登録商標）（いずれも参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，６３９，７２５号、同第５，７９２，８４５号、同第５，８８５，７９５号、同第５，７３３，８７６号、同第５，７７８，７０４号、同第５，８３７，６８２号、同第５，８６１，３７２号および同第５，８５４，２２１号）およびエンドスタチン（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，８５４，２０５号）が挙げられる。
【００３７】
血管形成を阻害することが証明された他の化合物は、サリドマイドである（D'Amatoら、Proc. Natl. Acad. Sci.、90:4082-85 (1994)）。サリドマイドは、使用することで、関節リウマチ等のいくつかの疾病の治療に成功した鎮静剤である（Gutierrez-Rodriguez、Arthritis Rheum.、27(10):1118-21 (1984)；Gutierrez-Rodriguezら、J. Rheumatol.、16(2):158-63(1983)）、およびベーチェット病（Handleyら、Br. J. Dermatol.、127 Suppl、40:67-8 (1992)；Gunzler、Med. Hypotheses、30(2):105-9 (1989)）。
【００３８】
サリドマイドは、成人における副作用が最小限であるが、強力な奇形発生因子である。したがって、妊娠可能年齢の女性にそれを使用することには懸念がある。最小限であるが、治療薬としてのサリドマイドのディザイラビリティを制限するいくつかの副作用がある。１つの当該副作用は、眠気である。いくつかの治療試験において、患者が無気力になり、正常に機能するのが困難になるため、サリドマイドの初期投与量を減らさなければならなかった。サリドマイドの使用を制限する他の副作用は、個人が極端な無感覚および機能不全に陥る末梢神経障害である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３９】
血管形成を阻害する、および／または血管形成に対応づけられる疾病または状態を治療するために、ヒトまたは動物に対して抗血管形成剤を投与する最も効果的な方法は何かがこれまで知られていなかった。また、どのような投与量およびどのような投与スケジュールが、血管形成を阻害する、および／または血管形成に対応づけられる、または依存する疾病または状態を治療するために、ヒトまたは動物に対して抗血管形成剤を投与する最も効果的な方法であるかが知られていなかった。したがって、最も効果的に血管形成を阻害する、および／または望ましくない、および／または過度の血管形成および／または細胞有糸分裂に対応づけられる、または依存する疾病または状態を治療するために、ヒトまたは動物に対して抗血管形成剤を投与するための方法、投与量およびスケジュールが大いに必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
（発明の概要）
本発明は、抗血管形成剤をヒトまたは動物に投与する方法であって、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように、抗血管形成剤を投与することを含む方法を提供することによって、先述の必要性を満足させる。好ましくは、該薬剤の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である。最も好ましい血漿濃度範囲は、約３と５０ｎｇ／ｍＬの間である。
【００４１】
代替的な実施形態において、本発明は、エストロゲンの類似体および／または誘導体をヒトまたは動物に投与する方法であって、ヒトまたは動物におけるエストロゲンの類似体および／または誘導体の血漿濃度が、約３から約５０ｎｇ／ｍＬ以上に実質的に継続的に維持されるように、エストロゲンの類似体および／または誘導体を投与することを含む方法を含む。
【００４２】
さらなる実施形態において、本発明は、２−メトキシエストラジオールおよび２−メトキシエストラジオールの類似体および／または誘導体をヒトまたは動物に投与する方法であって、ヒトまたは動物における２−メトキシエストラジオールおよび２−メトキシエストラジオールの類似体および／または誘導体の血漿濃度が、約３ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように、２−メトキシエストラジオールおよび２−メトキシエストラジオールの類似体および／または誘導体を投与することを含む方法を含む。好ましくは、該薬剤の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である。最も好ましい血漿濃度範囲は、約３と５０ｎｇ／ｍＬの間である。
【００４３】
他の実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物における疾病を治療する方法であって、該疾病を有するヒトまたは動物に対して、以下の式
【化１】
2008521822.tif 000003
【００４４】
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、アルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である］から選択されるある量の治療薬を、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬより高く実質的に継続的に維持されるように投与することを含む方法を含む。好ましくは、該薬剤の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である。最も好ましい血漿濃度範囲は、約３と５０ｎｇ／ｍＬの間である。
【００４５】
他の実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物における異常で、望ましくなく、および／または過度の血管形成、および／または望ましくない細胞有糸分裂に対応づけられる、または依存する疾病または状態を治療する方法であって、ヒトまたは動物に対して、以下の式：
【化２】
2008521822.tif 000004
【００４６】
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、アルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である］から選択されるある量の抗血管形成剤を、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の血漿濃度が、約３〜約５０ｎｇ／ｍＬに実質的に継続的に維持されるように投与することを含む方法を含む。好ましくは、該薬剤の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である。最も好ましい血漿濃度範囲は、約３と５０ｎｇ／ｍＬの間である。
【００４７】
さらに他の実施形態において、本発明は、以下の式：
【化３】
2008521822.tif 000005
【００４８】
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、アルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である］から選択される化合物を含む医薬製剤を含む。医薬製剤における化合物の量および投与スケジュールは、医薬製剤がヒトまたは動物に投与されたときに、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の血漿濃度が約３から約５０ｎｇ／ｍＬ以上に実質的に継続的に維持されるように選択される。好ましくは、該薬剤の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは約３と１００ｎｇ／ｍＬの間である。最も好ましい血漿濃度範囲は、約３ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間である。医薬製剤は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤を含むことも可能である。
【００４９】
よって、本発明の目的は、抗血管形成剤をヒトまたは動物に投与する方法を提供することである。
【００５０】
本発明の他の目的は、抗血管形成剤をヒトまたは動物に対して、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の所望の血漿濃度を実質的に継続的に維持するように投与することである。
【００５１】
本発明のさらなる目的は、血管形成をより効果的に阻害する、および／または望ましくない、および／または過度の血管形成および／または望ましくない細胞有糸分裂に対応づけられる疾病または状態をより効果的に治療するために、抗血管形成剤を哺乳類に投与するための方法、投与量およびスケジュールを提供する。
【００５２】
本発明のこれらおよび他の目的、特徴および利点は、開示された実施形態および添付の請求項の以下の詳細な説明を読めば明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、抗血管形成剤をヒトまたは動物に投与する方法であって、ヒトまたは動物における抗血管形成剤の血漿濃度が、約１ｎｇ／ｍＬ以上に実質的に継続的に維持されるように抗血管形成剤を投与することを含む方法を含む。好ましくは、該薬剤の血漿濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬの間、より好ましくは約２ｎｇ／ｍＬ〜１５０ｎｇ／ｍＬの間、最も好ましくは約３ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬの間である。最も好ましい血漿濃度範囲は、約３と５０ｎｇ／ｍＬの間である。本明細書に用いられているように、「実質的に継続的に」という用語は、各２４時間のうち７０％を上回る期間を意味する。好ましくは、抗血管形成剤の所望の血漿濃度は、各２４時間のうち８０％を上回る期間、より好ましくは各２４時間のうち９０％を上回る期間、特に、各２４時間における１００％の期間を通じて維持される。
【００５４】
以下に説明するように、抗血管形成剤は、ヒトおよび動物において抗血管形成、抗炎症、抗転移および／または抗腫瘍活性を発揮する化合物である。好ましい薬剤は、ヒトおよび動物において抗血管形成、抗転移および／または抗腫瘍活性を発揮するエストロゲンの類似体および／または誘導体である。特に好ましい化合物は、抗転移、抗血管形成、抗炎症および／または抗腫瘍特性を発揮する２−メトキシエストラジオールおよび２−メトキシエストラジオールの類似体である。本発明の特に好ましい化合物は、２−、３−または１７−位、あるいは２−、３−および１７位の組合せが修飾された２−メトキシエストラジオール類似体および／または誘導体である。最も好ましい化合物は、一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶ
【化４】
2008521822.tif 000006
【００５５】
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択される］の化合物である。本明細書に定められているアルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である。本発明による好ましい種を以下に記載する。
【００５６】
本発明には、抗血管形成剤のプロドラッグも含まれる。当該プロドラッグは、当業者によく知られている化学手順および合成経路を用いて製造される。プロドラッグを作るための手法は、当業者によく知られており、薬剤のアミド、エステル、エーテル、チオエステルおよびチオエーテルを含む。薬剤に結合される化学成分は、天然または非天然アミノ酸、砂糖、ペプチド、酢酸塩、炭酸塩、安息香酸塩およびベンゾイル等の低分子量有機成分、抗体を含むタンパク質、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む（ただし、それに限定されない）ポリマーを含むことが可能である。これらの成分を酵素または非酵素法によって開裂させて、活性抗血管形成剤を生成することが可能である。プロドラッグの特性は、所望の目的および投与経路に有利なように選択される。例えば、アミノ酸を含有するプロドラッグを使用して水溶性を向上させ、ペプチドを含有するプロドラッグを使用して、生物学的利用能および／または標的組織結合性を向上させ、ＰＥＧを含有するプロドラッグを使用して、血漿半減期を増加させることが可能である。
【００５７】
本発明に有用な他の抗血管形成剤は、その開示内容が全面的に参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，５０４，０７４号、同第６，６０５，６２２号、および２０００年８月１８日に出願された米国特許出願第０９／６４１，３２７号、２０００年１２月１３日に出願された同第６０／２５５，３０２号、２００１年２月８日に出願された同第０９／７７９，３３１号、２００１年３月２３日に出願された同第６０／２７８，２５０号、２００１年８月２４日に出願された同第０９／９３９，２０８号、２００２年１月３０日に出願された同第６０／３５４，０４６号、２００３年１月３０日に出願された同第１０／３５４，９２７号、２００３年１月３０日に出願された同第１０／３５４，９２１号、２００３年５月２８日に出願された同第６０／４７４，２８８号、２００４年３月１２日に出願された同第６０／５５２，６９２号、２００４年４月１６日に出願された同第６０／５６２，７９３号、２００４年５月２８日に出願された同第１０／８５６，３４０号、２００５年３月１１日に出願された同第１１／０７７，９７７号、２００５年４月２９日に出願された同第１１／１１８，８５２号、２００５年５月２３日に出願された同第６０／６８３，６８７号、２００５年１０月５日に出願された同第６０／７２３，６５０号、および２００３年３月２０日に出願された同第１０／３９２，４０３号に開示されている。
【００５８】
立体異性体が可能である場合の各々において、ＲおよびＳ立体異性体、ならびに立体異性体の任意の混合物が考えられる。
【００５９】
本発明は、特許請求の範囲に示された定義の範囲内で、記載された特性を有する他の抗血管形成剤に拡大されることを当業者なら理解するであろう。当該技術分野で知られている検定を用いて、これらの特性を試験化合物毎に決定することが可能である。
【００６０】
投与
驚いたことに、抗血管形成剤の投与経路は、所望の血漿濃度を達成するのに重要でなく、医薬組成物をヒトおよび／または動物に投与する任意の知られている方法を用いることが可能である。
【００６１】
知られている技術を用いて、本明細書に記載されている組成物を生理的に許容可能な処方として提供することが可能であり、該処方を標準的な経路で投与することが可能である。概して、化合物を局所、経口、直腸または非経口（例えば静脈内、皮下または筋肉内）経路によって投与することが可能である。加えて、持続放出を可能にするポリマーに組成物を混入することが可能であり、所望の送達場所、例えば腫瘍部位または眼の中もしくは眼付近の近傍にポリマーを移植し、あるいはポリマーを皮下または筋肉内移植、または静脈内または腹腔内送達して、抗血管形成剤を全身に送達させることが可能である。本発明に有用な治療薬の制御長期放出のための他の処方は、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，７０６，２８９号に開示されている。
【００６２】
本発明による処方を錠剤、カプセル、トローチ剤、カシェ剤、溶液、懸濁物、エマルジョン、粉末、煙霧剤、坐薬、噴霧剤、香錠、軟膏、クリーム、ペースト、泡、ゲル、タンポン、膣坐薬、顆粒、巨丸、口腔洗浄薬または経皮貼布の形態で投与することが可能である。
【００６３】
処方としては、経口、直腸、経鼻、吸入、局所（皮膚、経皮、口腔および舌下を含む）、膣内、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、点眼、気管内および硬膜外を含む）または吸入投与に好適な処方が挙げられる。処方を単位投与形態で便利に提供することが可能であり、従来の製薬技術によって調製することが可能である。当該技術は、活性成分と医薬担体または賦形剤を会合させる工程を含む。概して、処方は、活性成分を液体担体または微細固体担体またはその両方と均一かつ均質に会合させ、次いで、必要に応じて製品を成形することによって調製される。
【００６４】
経口投与に好適な本発明の処方を、それぞれ所定量の活性成分を含有するカプセル、カシェ剤または錠剤等の個別的単位として、粉末または顆粒として、水性液または非水性液の溶液または懸濁物として、あるいは水中油液体エマルジョンまたは油中水エマルジョン等として調製することができる。
【００６５】
場合によって１つまたは複数の補助成分とともに圧縮または成型することによって錠剤を製造することができる。結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と場合によって混合された粉末または顆粒等の自由流動形態の活性成分を好適な機械で圧縮することによって圧縮錠剤を調製することができる。不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を好適な機械で成型することによって成型錠剤を製造することができる。錠剤を場合によって被覆し、または刻みを入れることができ、そのなかの活性成分の緩慢または制御放出をもたらすように配合することができる。
【００６６】
口内の局所投与に好適な処方としては、香味基剤、通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントに成分を含むトローチ剤、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴム等の不活性基剤に活性成分を含む薬用ドロップ、および好適な液体担体で投与される成分を含む口腔洗浄薬が挙げられる。
【００６７】
皮膚に対する局所投与に好適な処方は、薬学的許容担体で投与される成分を含む軟膏、クリーム、ゲルおよびペーストとして提供することができる。好ましい局所送達系は、投与される成分を含有する経皮貼布である。
【００６８】
直腸投与のための処方は、例えばココアバターまたはサリチル酸塩を含む好適な基剤による坐薬として提供することができる。
【００６９】
担体が固体である経鼻投与に好適な処方としては、例えば、鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻路を通じて迅速に吸入することにより、鼻から吸い込むようにして投与される、例えば２０から５００ミクロンの粒径を有する粗粉末が挙げられる。担体が液体である、例えば鼻噴霧剤として、または点鼻剤としての投与のための好適な処方としては、活性成分の水溶液または油性溶液が挙げられる。
【００７０】
膣内投与に好適な処方は、活性成分に加えて、当該技術分野で適切であることが知られている担体等の成分を含有する膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡または噴霧処方として提供することができる。
【００７１】
吸入に好適な処方は、活性成分に加えて、当該技術分野で適切であることが知られている担体等の成分を含有するミスト、ダスト、粉末または噴霧処方として提供することができる。
【００７２】
非経口投与に好適な処方としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および処方を意図する受給者の血液に対して等張性にする溶質、を含有することができる水性および非水性無菌注射液、および懸濁化剤および増粘剤を含むことができる水性および非水性無菌懸濁物が挙げられる。非経口投与に好適な処方としては、低ミクロン、またはナノミクロン（例えば、平均断面が２０００ナノメートル未満、好ましくは１０００ナノメートル未満、最も好ましくは５００ナノメートル未満）の粒径の粒子であって、抗血管形成剤単独、または補助成分と組み合わせた薬剤、または持続放出のためのポリマー内の薬剤で構成されている粒子を含む（ただし、それらに限定されない）抗血管形成剤の微粒子製剤が挙げられる。該処方を単位投与または複数投与容器、例えば密封アンプルおよびバイアルで提供することができ、使用直前に無菌液体担体、例えば注射用水を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保管することができる。先述した種類の無菌粉末、顆粒および錠剤から即時注射液および懸濁物を調製することができる。
【００７３】
好ましい単位投与製剤は、投与成分の、本明細書において上述した一日投与量または単位、一日準投与量、またはその適切な画分を含有する処方である。
【００７４】
経口投与については、特に好ましい処方が、全面的に参照により本明細書に組み込まれている、２００３年３月２０日に出願された米国特許出願第１０／３９２，４０３号に開示されている。
【００７５】
具体的に上述した成分に加えて、本発明の処方は、対象の処方のタイプに関する当該技術分野で慣例的な他の薬剤を含んでいてもよく、例えば、経口投与に好適な処方は、香料を含んでいてもよく、ナノ粒子製剤（例えば、平均断面が２０００ナノメートル未満、好ましくは１０００ナノメートル未満、最も好ましくは５００ナノメートル未満）は、粒子凝集を防止するように選択された１つまたは複数の賦形剤を含んでいてもよい。
【００７６】
適応症
本発明を用いて、異常細胞有糸分裂および／または異常または望ましくない血管形成によって特徴づけられる任意の疾病を治療することが可能である。当該疾病としては、内皮細胞の異常刺激（例えばアテローム硬化）、固体腫瘍、白血病等の血液由来腫瘍、腫瘍転移、例えば血管腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマおよび化膿性肉芽腫のような良性腫瘍、ベーチェット病、痛風または痛風性関節炎、付随異常血管形成、関節リウマチ、乾癬等の皮膚病、糖尿病性網膜症および未熟児網膜症（後水晶体線維増殖症）、黄斑変性角膜移植片拒絶および血管新生緑内障等の他の眼血管形成病、肝臓病、およびオスラー−ウェバー症候群（オスラー−ウェバーランデュ病）が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７７】
他の望ましくない血管形成は、排卵、および胞胚移植を含む通常のプロセスを含む。上述の組成物は、胚芽移植に必要な子宮血管新生を低減または防止することによる受胎調節剤として使用されうる。したがって、本発明は、胚芽移植を防止するのに十分な量の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物を女性に投与すると効果的な受胎調節方法を提供する。受胎調節方法の一態様において、胚芽移植を阻止するのに十分な量の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物を性交および受精が生じる前または後に投与することで、効果的な受胎調節方法、恐らくは「事後的」方法を提供する。この理論に拘束されることを望まないが、子宮内膜の血管新生の阻害は、芽細胞の移植を妨害する。卵管の粘膜の血管新生の同様の阻害は、芽細胞の移植を妨害して、卵管妊娠の発生を防止すると考えられる。上述の組成物を使用して、排卵を阻止し、または月経を阻止する（無月経を誘発する）ことも可能である。
【００７８】
血管新生に対応づけられる疾病を本発明に従って治療することが可能である。当該疾病としては、眼の血管新生疾病、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障および後水晶体線維増殖症、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ過剰装用、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、翼状乾燥角膜炎、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡、phylectenulosis、梅毒、ミコバクテリア感染、脂質変性、化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原虫感染、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺変性症、辺縁表皮剥奪（marginal keratolysis）、外傷、関節リウマチ、全身性狼蒼、多発性動脈炎、ウェゲナーサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、類天疱瘡、放射状角膜切開および角膜移植片拒絶が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７９】
血管新生に対応づけられる他の疾病を本発明に従って治療することが可能である。当該疾病としては、鎌形赤血球貧血、サルコイドーシス、弾力線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、ライム病、全身性紅斑性狼蒼、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎または脈絡膜炎を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病、近視、乳頭小窩、シュタルガルト病、扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘度症候群、トキソプラズマ症およびレーザ後合併症が挙げられるが、それらに限定されない。他の疾病としては、ルベオーシス（虹彩および角の血管新生）に対応づけられる疾病、および糖尿病に関連するものであれそうでないものであれあらゆる形態の硝子体網膜症を含む、線維血管または線維組織の異常増殖によって引き起こされる疾病が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８０】
本発明を用いて、横紋筋肉腫、網膜芽腫、ユーイング肉腫、神経芽腫および骨肉腫のいずれか１つまたは組合せを含む（ただし、それらに限定されない）血管形成依存性癌を治療することもできる。本発明により治療可能な他の血管形成依存性癌としては、乳癌、疲弊した癌、腎細胞癌、脳腫瘍、卵巣癌、結腸癌、膀胱癌、膵臓癌、胃癌、食道癌、黒皮腫、肝臓癌、小細胞および非小細胞肺癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮頚癌、リンパ腫、副甲状腺癌、陰茎癌、直腸癌、小腸癌、甲状腺癌、子宮癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、口唇癌、口腔癌、皮膚癌、白血病または多発性骨髄腫が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８１】
上述のように、本発明に従って治療できる他の疾病とは、関節リウマチである。関節の髄膜内層における血管は、血管形成されると考えられる。新しい血管網を形成するのに加えて、内皮細胞は、パンヌス成長および軟骨破壊をもたらす因子および反応性酸素種を放出する。血管形成に関与する因子は、関節リウマチの慢性炎症状態に積極的に貢献し、その維持を支援する。
【００８２】
本発明に従って治療できる他の疾病は、遺伝性出血毛細管拡張症、骨関節炎、慢性炎症、クローン病、潰瘍性大腸炎、バルトネラ症、炎症性または免疫媒介腸疾患および後天性免疫不全症候群である。
【００８３】
本発明を用いて、ヒトまたは動物における眼状態を治療することが可能であり、眼状態としては、眼の血管新生疾病、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、黄斑変性、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障、後水晶体線維増殖症、流行性角結膜炎、コンタクトレンズ過剰装用、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、翼状乾燥角膜炎、近視、慢性網膜剥離、乳頭小窩、テリエン周辺変性症、過粘度症候群、慢性ブドウ膜炎、慢性硝子体炎、推定眼ヒストプラスマ症、ルベオーシス、網膜炎、脈絡膜炎、増殖性硝子体網膜症、強膜炎、イールズ病、ベスト病、トラコーマまたはレーザ後併発症が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８４】
本発明を用いて、ヒトまたは動物における炎症性または免疫媒介疾患を治療することが可能であり、炎症性または免疫媒介疾患としては、関節リウマチ、骨関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、モーレン潰瘍、関節炎、サルコイドーシス、炎症性または免疫媒介腸疾患、全身性狼蒼、ヴェーグナー症候群、スティーブンス−ジョンソン症候群、ベーチェット病、類天疱瘡、ライム病、喘息または後天性免疫不全症候群が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８５】
本発明を用いて、ヒトまたは動物における感染病を治療することが可能であり、感染病としては、梅毒、細菌感染、ミコバクテリア感染、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原虫感染、バルトネラ感染症またはトキソプラズマ症が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８６】
本発明を用いて、ヒトまたは動物における血液または血管病を治療することが可能であり、血液または血管病としては、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、多発性動脈炎、アテローム性硬化症、オスラー−ウェバー−ランデュ病、鎌形赤血球貧血、白血病、骨髄の急性または慢性腫瘍疾患、遺伝性出血性血管拡張症、骨髄の疾患、障害性血液凝固、およびリンパ節、肝臓および脾臓の肥大が挙げられるが、それらに限定されない。本発明を用いて、骨髄の慢性腫瘍疾患を治療することが可能であり、それらの疾患としては、多発性骨髄腫および骨髄形成異常症候群が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８７】
本発明を用いて、ヒトまたは動物における皮膚状態を治療することが可能であり、皮膚状態としては、異常創傷治癒、酒さ性ざ瘡、皮膚の化学熱傷、皮膚炎または乾癬が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８８】
加えて、本発明を用いて、様々な閉経後症状、骨粗鬆症、心臓血管病、心筋血管新生、プラーク血管新生、血友病関節、血管線維腫、創傷肉芽形成、腸管癒着、強皮症、肥厚性傷、すなわちケロイドを治療することが可能である。それらは、猫ひっかき病およびヘリコバクターピロリ潰瘍等の病的な結果としての血管形成を有する疾病の治療にも有用である。アルツハイマー病を治療するために、卒中の発生を抑えるために、また先のエストロゲン置換療法の代わりとして本発明を用いることも可能である。本発明の化合物は、エストロゲンおよび非エストロゲン生化学経路によって作用することができる。
【００８９】
また、本発明を用いて、子宮腺筋症を治療することが可能である。子宮線維症は、月経プロセスで毎月脱皮する子宮を内張する同一細胞である子宮内膜細胞の異常成長である。ウェイワード子宮内膜細胞は、盲管、直腸腔中隔、胃、卵管、卵巣および膀胱等の部分の下部腹部に位置することが可能である。月経を通じて、正常な子宮内層は、脱皮し、膣を通して追い出されるが、移植された子宮内膜組織は、体から出ることはない。その代わりに、子宮内膜組織および細胞は、接着し、位置する個所で成長する。その結果は、内部出血、炎症および瘢痕化である。子宮内膜瘢痕化の深刻な結果の１つは、不妊症である。子宮内膜成長物は、一般には、悪性腫瘍または癌ではない。他の併発症のなかでも、該成長物は、破裂し、子宮内膜症を下部腹部の新しい部分に拡大しうる。子宮内膜症は、進行性疾病である。成長物または病変は、最初は透明水疱として見られ、次いで赤色になり、最終的に進行して７から１０年間にわたって黒色の病変になる。
【００９０】
医薬製剤
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物または薬物、そのプロドラッグ、薬物またはプロドラッグが持続放出のための生分解性または非生分解性ポリマーに配合される参照により含まれる他の抗血管形成剤で構成された移植体または他のデバイスも本発明に意図される。非生分解性ポリマーは、ポリマーそのものは分解することなく、物理的または機械的プロセスを通じて薬物を調節的に放出する。生分解性ポリマーは、体内の自然のプロセスによって徐々に加水分解または可溶化されて、混合薬物またはプロドラッグの漸進的放出を可能にするように設計される。薬物またはプロドラッグをポリマーに化学結合させるか、または混合によってポリマーに組み込むことが可能である。生分解性および非生分解性ポリマー、および薬物を徐放のためのポリマーに組み込むプロセスは、当業者によく知られている。当該ポリマーの例を、Bremら、J. Neurosurg 74: pp. 441-446 (1991)等の多くの文献に見いだすことが可能である。これらの移植体またはデバイスは、送達場所、例えば腫瘍または狭窄部位の近傍に移植されるか、または薬剤の全身送達をもたらすように導入されうる。
【００９１】
天然成分として体内に形成されないものは、血栓形成または痙攣による血管閉鎖等の極端かつ予想外の応答を顕在化させうるため、また血管ステントの挿入動作による血管の損傷が血管表面に対する極端かつ過度の障害になりうるため、当該事象に対して保護することが妥当である。再狭窄は、血管形成術またはステント処理等の治療が既に行われた同一部位における動脈の再狭細または閉塞である。動脈内に配置されたステント内で再狭窄が生じる場合は、専門的に「ステント内再狭窄」と呼ばれ、最終的な結果は、究極的に血液の流れを阻止しうる物質の蓄積によって引き起こされる動脈内の狭細になる。本発明の一部である化合物は、再狭窄を防止するために血管ステントを被覆するのに特に有用である。被膜は、本発明の化合物の緩慢な放出を可能にして、再狭窄事象を防止する生分解性または非生分解性ポリマーであるのが好ましい。
【００９２】
本発明は、結合プロドラッグ、およびその使用にも関する。より詳細には、本発明は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物等のステロイド化合物の結合体、および癌等の強い血管形成および加速的な細胞分裂に対応づけられる状態、喘息および関節リウマチ、および乾癬を含む過剰増殖性皮膚疾患等の炎症状態の予防または治療における当該結合体の使用に関する。本発明は、本発明のプロドラッグを含む組成物、およびプロドラッグを合成する方法にも関する。
【００９３】
一態様において、本発明は、生物活性修飾剤に結合するエストラジオール化合物、好ましくは式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物の結合プロドラッグを提供する。
【００９４】
あるいは、本発明による結合プロドラッグは、ペプチド成分に結合する式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物を含む。
【００９５】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物等のエストラジオール化合物を疾病依存活性化プロドラッグに組み込むと、この抗癌および抗炎症剤の効力および選択性を有意に向上させることが可能になる。
【００９６】
本発明の化合物に加えて、本発明の医薬組成物は、上述した１つまたは複数の疾病状態を治療するのに有用な１つまたは複数の薬理剤を含有する、あるいはそれらとともに（同時にまたは順次）投与することができる。
【００９７】
RemingtonのPharmaceutical Science第17版等の標準的なテキストを参照することにより、処方をどのように製造するか、およびこれらをどのように投与できるかを当業者なら判断できるであろう。
【００９８】
本発明のさらなる態様において、血管形成、または加速度的細胞分裂または炎症に対応づけられる状態の予防または治療のための医薬品を調製するための本発明による式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物またはそのプロドラッグの使用が提供される。
【００９９】
本発明のさらなる態様において、本発明による式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物またはそのプロドラッグを薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とともに含む医薬組成物が提供される。
【０１００】
該医薬組成物を、血管形成、または加速的細胞分裂または炎症に対応づけられる状態の予防または治療に使用することが可能である。
【０１０１】
本発明のさらなる態様において、血管形成、または加速的または大量の細胞分裂、肥厚性成長、または炎症に対応づけられる状態の予防または治療方法であって、当該予防または治療を必要とする患者に対して、本明細書に記載されている有効量の本発明による式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物、またはそのプロドラッグを投与することを含む方法が提供される。前記状態の予防または治療は、前記状態の改善を含むことを理解すべきである。
【０１０２】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物、またはそのプロドラッグの薬学的に許容可能な塩を従来の任意の方法、例えば遊離塩基および酸から調製することが可能である。式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのｉｎ  ｖｉｖｏ加水分解性エステル、アミドおよびカルバミド酸塩、および他の許容可能なプロドラッグを従来の任意の方法で調製することが可能である。
【０１０３】
本発明は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物を投与することによって、病原性血管形成により特徴づけられる哺乳類の疾病を治療するための組成物および方法を含む。２−メトキシエストラジオール、およびその類似体および／または誘導体は、２−、３−および１７位、またはそれらの組合せが修飾されている。５つの結合を含有する炭素原子等の物理的に不可能な組合せは本発明に意図されない。
【０１０４】
１００％純粋の異性体は、本発明に意図されるが、（αまたはβ、あるいはＲまたはＳとして標示される）立体化学異性体は、両者の任意の割合の混合物であってもよく、当業者により化学的に可能である。PataniおよびLavoie（「生物学的等価性：薬物設計における合理的手法」、Chem. Rev. (1996) p.3147-3176）に記載されているような古典的および非古典的生物学的等価性原子および置換基置換も本発明に意図されており、当業者によく知られている。当該生物学的等価性置換としては、例えば、＝Ｏに対する＝Ｓまたは＝ＮＨの置換が挙げられるが、それに限定されない。
【０１０５】
本発明に有用な特に好ましい処方は、（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれている）２００３年３月２０日に出願された米国特許出願第１０／３９２，４０３号に開示されている２−メトキシエストラジオールのナノ粒子液体懸濁物である。この処方は、Panzem（登録商標）ＮＣＤの名称で、EntreMed,Inc.（メリーランド州Rockville）から入手可能である。
【０１０６】
改良型エストラジオール誘導体合成
本発明に従って使用される、知られている化合物、および本発明による新規の化合物の前駆体を、例えばSigma Chemical Co.、SteraloidsまたはResearch Plusから購入することが可能である。本発明による他の化合物を公的に入手可能な前駆体から、知られている方法に従って合成することが可能である。
【０１０７】
（ともに参照により本明細書に組み込まれている）米国特許第６，１３６，９９２号および２００５年３月１１日に出願された米国特許出願第１１／０７７，９７７号、（参照により本明細書に組み込まれている）Siya Ramら「２−アルコキシエストラジオールおよびその誘導体」、Cushmanら、J. Med. Chem. (1995) 38、2041-2049、Cushmanら、J. Med. Chem. (1997) 40、2323-2334、米国特許第６，４４８，４１９号（２００２）、Paarenら、Wangら、Synthetic Comm 1998、28、4431、Cushmanら、J. Med. Chem. 1995、38、2041、Cushmanら、J. Med. Chem. 2002、45、4748、または参照により本明細書に組み込まれている他の出版物に記載されている方法等の知られている方法に従ってエストラジオールの類似体および／または誘導体を調製することが可能である。
【実施例】
【０１０８】
（実験データ）
以下の実施例は、以下の一般式：
【化５】
2008521822.tif 000007
【０１０９】
［式中、Ｒａは、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＣＣＨ３から選択され、Ｒｘは、−ＮＨ２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨ−ＣＨＯ、−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、Ｚは、＞Ｃ（Ｈ２）、＞Ｃ（Ｈ）−ＣＨ３、＞Ｃ＝ＣＨ２、＞Ｃ＝ＣＨＣＨ３（シスまたはトランス）、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−アルキル、または＞Ｃ（Ｈ）−Ｏ−スルファミン酸塩から選択され、アルキルは、１から１０の炭素を含む直鎖状、分枝および／または環状炭化水素である］の化合物に関連する。本発明に有用である先述の種からの好ましい種としては、表１に示される化合物が挙げられるが、それらに限定されない。
【表１】
2008521822.tif 000008
【０１１０】
上記表１に示される化合物では、アルキルは、１から１０の炭素を含む、飽和または不飽和でありうる直鎖状、分枝および／または環状（またはそれらの組合せの）炭化水素として定められる。
【０１１１】
表１の先述化合物の各々は、抗有糸分裂特性、抗血管形成特性、抗腫瘍特性、抗炎症特性、またはそれらの組合せを有する。
【０１１２】
２ＭＥ２薬物動態をｉｎ  ｖｉｖｏ活性に関連づける薬力学的パラダイムを開発した。（ａ）静脈内大量瞬時投与、（ｂ）経口強制栄養、（ｃ）腹腔内大量瞬時注射、（ｄ）腹腔内分割投与、（ｅ）腹腔内連続投与または（ｆ）実験的肺転移ルイス肺癌モデル、一次腫瘍細胞異種移植片モデルおよびリウマチ様関節炎のモデルを含む動物モデルにおける適宜飲水による投与に続く２ＭＥ２に対する投与応答関係を確立した。ＧＣ−ＭＳまたはＬＣ−ＭＳ／ＭＳ手法により血漿２ＭＥ２濃度を経時的に評価し、効果的な投与量における薬物動態パラメータを定めた。
【０１１３】
（実施例Ｉ）
これらの試験は、マウス肺癌の正所性モデルにおける２ＭＥ２の抗腫瘍活性に対する投与経路の影響を評価するものである。ルイス肺癌（「ＬＬＣ」）の静脈内注射の３日後に、１０匹のマウスの群を経口強制栄養（経口）または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により２４時間毎に１回ずつ２ＭＥ２（２００ｍｇ／ｋｇ）で処理した。２ＭＥ２を経口投与した場合もｉ．ｐ．注射で投与した場合も肺転移に対するほぼ同等の阻害性が観察された（それぞれＴ／Ｃ＝０．２８および０．１７、対照に対してｐ＜０．０５）。
【０１１４】
（実施例ＩＩ）
短期間の高レベルの２ＭＥ２に対する曝露の抗腫瘍効果を判断するために、一連のｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験を行った。水溶性賦形剤を使用して、２ＭＥ２を完全可溶化製剤として配合した。
【０１１５】
図１、パネルＡ：２ＭＥ２溶液を雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（５〜６週齢、Jackson Labs）の尾血管に注射した。２４時間にわたって血液試料を収集し、分析に向けて血漿を分離した。特定のＧＣＭＳ検定を用いて２ＭＥ２のレベルを測定した。パネルＡは、２ＭＥ２の静脈内投与による血漿ＰＫプロファイルを示す。
【０１１６】
図１、パネルＢ：体積が０．２ｍｌの２．５×１０５のルイス肺癌細胞を５〜６週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（Jackson Labs）の側方尾血管に静脈内注射した。２ＭＥ２を毎日静脈内注射することによる処理を３日後に開始した。治療の最終日の後に、マウスを殺し、胚を取り出し、リン酸緩衝食塩水で洗浄し、秤量した。結果は、処理動物と対照動物の肺重量増加量として表されている。
【０１１７】
図１、パネルＣ：静脈内投与後の曝露プロファイルを模擬する「洗い出し」ｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖試験を設計した。ＬＬＣ細胞系を９６ウェルプレートに蒔いた。２４時間後に、３マイクロモル２ＭＥ２を含有する培地を添加した。２時間にわたって細胞を３マイクロモル２ＭＥ２に曝露させた。次いで、培地を除去し、培地だけを交換した（培地：ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン）。パネルＣは、２ＭＥ２に対するＬＬＣ細胞の短期間曝露の抗増殖効果が低いことを示している。
【０１１８】
図１は、静脈内投与に続く短期間に高レベルの２ＭＥ２に対する短時間の曝露は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの有意な抗腫瘍活性をもたらさなかったことを示している。これは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの２ＭＥ２に対する短期間の曝露は、高い抗増殖活性をもたらさなかったことを示すデータと一致している。
【０１１９】
（実施例ＩＩＩ）
２ＭＥ２の毎日大量瞬時投与の後に、肺転移の用量依存性阻害性が観察された。大量瞬時１日１回注射（２４時間毎に１回、２ｍｇ／注射、１００ｍｇ／ｋｇ／日）を４つのより小さい同一投与量（ｑ６ｈｒ、０．５ｍｇ／注射、１００ｍｇ／ｋｇ／日）に分割すると、２ＭＥ２の抗腫瘍活性が向上した（それぞれＴ／Ｃ＝０．３０および０．０５、ｐ＜．０５）。
【０１２０】
雄の非腫瘍Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６週齢）を、腫瘍療法に用いたスケジュールと同等の２ｍｇ（１日１回）または０．５ｍｇ（１日４回）のスケジュールを用いて、２ｍｇ／日（１００ｍｇ／ｋｇ／日）の２ＭＥ２を腹腔内注射することにより７日間処理した。７日目に、選択された時点毎に血漿試料を収集し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ手法を用いて、血漿未結合２ＭＥ２レベルを測定した。結果を以下の表２に示す。
【表２】
2008521822.tif 000009
【０１２１】
最初の６時間にわたる０．５ｍｇ１日４回投与に対するデータを用いて、図２に示すように２４時間にわたる定常レベルをモデル化した。WinNonLin（Pharsight（カリフォルニア州Mountain View））を使用した非区画化分析によって、薬物動態パラメータを測定した。大量瞬時ｐ．ｄ．処理とｑ６ｈｒ投与を比較する薬物動態試験は、２ＭＥ２の短期間初期高ピーク濃度は、最大抗腫瘍活性をもたらさないと結論づける先の所見を裏づけるものであるが、このモデルにおける２ＭＥ２の活性には「時間対閾値」に関連するパラメータが推薦される（図２参照）。
【０１２２】
（実施例ＩＶ）
このパラダイムのさらなる裏づけにおいて、Alzetポンプを使用した連続注入によって２ＭＥ２が与えられた腫瘍マウスでは肺転移の有意な阻害性が得られた。ＬＬＣ細胞を注入してから３日後に、７日間の浸透圧ポンプを介して媒体対照または２ＭＥ２を送達して療法（腹腔内）を開始した（図３Ａ参照）。平均ポンプ速度を１．０ｍＬ／ｈと想定して、２ＭＥ２の日標的レベルを計算した。２００ｍｇ／ｋｇ／日の標的レベルを達成するために、浸透圧ポンプにおける２ＭＥ２の濃度を１５０ｍｇ／ｍＬとした。星印は、Ａに示されるように、媒体対照（α＝．０５）と統計的に異なる群を指す。この送達スキームを用いて２ＭＥ２のＰＫプロファイルを測定するために、７日間の浸透圧ポンプを使用して、雄の非腫瘍Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６週齢）を１．８ｍｇ／日（１００ｍｇ／ｋｇ／日以下）の２ＭＥ２で７日間まで処理（腹腔内）した。２、４および７日目に、血漿試料を収集し、上述のように血漿２ＭＥ２レベルを測定した（図３Ｂ参照）。
【０１２３】
継続的注入効果をもたらすために、２ＭＥ２の複数の処方をAlzetポンプに使用した。これらの処方としては、１００％ＰＥＧ６００に２ＭＥ２を２５０ｍｇ／ｍＬ含むもの、５０％ＰＥＧ４００／５０％ＤＭＳＯに２ＭＥ２を１３０ｍｇ／ｍＬ含むもの、１００％ＰＥＧ４００に２ＭＥ２を２２ｍｇ／ｍＬ含むもの、４５％シクロデキストリン／２５％ＰＶＰに２ＭＥ２を１２ｍｇ／ｍＬ含むもの、４５％シクロデキストリンに２ＭＥ２を９．５ｍｇ／ｍＬ含むもの、および４５％シクロデキストリンに２ＭＥ２を８．５ｍｇ／ｍＬ含むものが挙げられるが、それらに限定されない。使用できるシクロデキストリンとしては、未修飾スルホブチル、ヒドロキシプロピル−ガンマおよびヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンが挙げられるが、それらに限定されない。Alzet浸透圧ポンプを使用して２ＭＥ２を継続的に曝露すると、ＬＬＣ実験的転移モデルにおいて有意な抗腫瘍活性が生じる。肺転移の成長阻害が８９％であった、計算された１００ｍｇ／ｋｇ／日以下の２ＭＥ２投与では、血漿曝露レベルが９から２５ｎｇ／ｍＬの範囲であった。
【０１２４】
（実施例Ｖ）
毎日投与後に見られる２ＭＥ２の周期的レベルの効果を模擬するために、そしてこれを２ＭＥ２に対する継続的な曝露の効果と比較するために、一連の洗い出しｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗増殖試験を行った。２ＭＥ２の濃度を変えながら、様々な時間にわたって、腫瘍細胞系（ルイス肺癌またはＭＤＳ−ＭＢ−２３１）をｉｎ  ｖｉｔｒｏで処理した。３日間の試験を通じて、各試験日に、細胞を指定濃度で様々な時間（１、２、４、６または２４時間）にわたって２ＭＥ２に曝露させた。次いで、媒体を除去し、各２４時間の期間の残りの時間のために、２ＭＥ２を含まない培地と交換した。３日目の処理後に製造元の説明書に従って、ＢｒｄＵ増殖検定を用いて抗増殖活性を測定した（図４Ａおよび４Ｂ参照）。
【０１２５】
さらに高濃度の２ＭＥ２とともに細胞を短時間インキュベートしても、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで高い抗増殖活性は得られない。この知見は、静脈内投与後、短期間に高レベルの２ＭＥ２に短時間曝露してもｉｎ  ｖｉｖｏの有意な抗腫瘍活性は得られなかったことを示すデータと一致する。
【０１２６】
腫瘍細胞を２ＭＥ２に対して継続的に曝露すると、ｉｎ  ｖｉｖｏでの増殖に対する阻害が最大になり、ｉｎ  ｖｉｖｏで２ＭＥ２に対して実質的に継続的に曝露させた後に抗腫瘍活性は向上したことを示すデータと一致する。
【０１２７】
（実施例ＶＩ）
このパラダイムのさらなる裏づけにおいて、飲料水を通じて適宜２ＭＥ２が与えられた腫瘍マウスにおいて、肺転移に対する有意な阻害性が得られた。この試験では、２４時間の期間にわたって、３から１５ｎｇ／ｍＬの範囲の血漿２ＭＥ２濃度でＴ／Ｃ＝０．１６が達成された（図４Ａおよび５Ｂ参照）。
【０１２８】
ヒトまたは動物における所定の処方（この場合は適宜に飲料水処方）に対する該当ＰＫデータを用いると、所望の濃度範囲内の薬剤の血漿レベルを実質的に継続的に維持することで、薬理学的活性、この場合は抗腫瘍活性を最大にする投与方針、すなわち投与レベルと投与頻度の組合せを考案することは当業者にとって可能である。
【０１２９】
（実施例ＶＩＩ）
さらなるラット腫瘍モデル（正所性Ｈ２１２２  ＮＳＣＬＣ）において、経口強制栄養後の２４時間の期間にわたる３から１７ｎｇ／ｍＬの範囲の血漿２ＭＥ２濃度により、希釈剤処理対照（ｐ＜．０５）と比較して生存期間中央値が２．５倍大きくなった。雌の無胸腺ヌードマウスにＨ２１２２ヒトＮＳＣＬＣ細胞（０．２ｍＬ中１×１０６）を胸腔内注射した。７日後に、媒体対照、または１０または６０または３３００ｍｇ／ｋｇ／日の２ＭＥ２により毎日療法を開始した（経口）（ｎ＝１５ラット／群）。疾病率について動物を厳密に監視し、生存期間中央値（ＭＳＴ）を測定した。細胞注射後５０日目に試験を終了した。非腫瘍ラットの個別的な集団において、６０および３００ｍｇ／ｋｇの単一経口強制栄養の後の選択された時点で、血漿２ＭＥ２濃度を測定した。表３におけるＰＫデータは２４時間の期間における２ＭＥ２濃度の範囲を表す。一例比較として、この系統および性のラットは、雄のヌードマウスに対して全く異なるＰＫパラメータを有するが、この試験において、ＰＫ（閾値にわたる実質的に継続的な曝露）と薬力学（抗腫瘍活性）の間に同様の関係が見られた。ヒトまたは動物における所定の処方に対する該当ＰＫデータを用いると、所望の濃度範囲内の薬剤の血漿レベルを実質的に継続的に維持することで、薬理学的活性、この場合は抗腫瘍活性を最大にする投与方針、すなわち投与レベルと投与頻度の組合せを考案することは当業者にとって可能である。結果を表３に示す。
【表３】
2008521822.tif 000010
【０１３０】
（実施例ＶＩＩＩ）
Alzetポンプを使用した連続注入によって２ＭＥ２で処理した後のラットコラーゲン誘発関節炎モデルにおいて、溶骨性病変に対する有意な阻害性が得られた。この試験では、コラーゲン誘発関節炎から１０日目に、ラットの群（ｎ＝１０）に対して、Alzetポンプを使用した連続注入による（ａ）媒体単独、（ｂ）２ＭＥ２  １００ｍｇ／ｋｇ経口１日１回、（ｃ）５０ｍｇ／ｋｇ経口１日２回投与、または（ｄ）６０ｍｇ／ｋｇ皮下注射による処理を開始した。２８日目に、媒体４．３±０．１９；２ＭＥ２  １００ｍｇ／ｋｇを経口１日１回投与した。２．８８±０．２１；２ＭＥ２  ５０ｍｇ／ｋｇを経口１日２回投与し２．１１±０．１８；および２ＭＥ２  ６０ｍｇ／ｋｇ皮下注射により連続注入１．５±０．１８のＸ線撮影スコアを得た。これらのデータは、２ＭＥ２の活性を最大にする閾値超過時間の薬力学パラダイムをさらに裏づけるものである。ヒトまたは動物における所定の処方に対する該当ＰＫデータを用いると、所望の濃度範囲内の薬剤の血漿レベルを実質的に継続的に維持することで、薬理学的活性、この場合は抗腫瘍活性または抗炎症活性を最大にする投与方針、すなわち投与レベルと投与頻度の組合せを考案することは当業者にとって可能である。
【０１３１】
（実施例ＩＸ）
毎日投与後に見られるＥＮＭＤ−１１９８の周期的レベルの効果を模擬するために、そしてこれをＥＮＭＤ−１１９８に対する継続的な曝露の効果と比較するために、一連の洗い出しｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗増殖試験を行った。
【０１３２】
ＥＮＭＤ−１１９８の構造は、
【化６】
2008521822.tif 000011
【０１３３】
である。
【０１３４】
ＥＮＭＤ−１１９８の濃度を変えながら、様々な時間にわたって、腫瘍細胞系（ルイス肺癌またはＭＤＳ−ＭＢ−２３１）をｉｎ  ｖｉｔｒｏで処理した。３日間の試験を通じて、各試験日に、細胞を指定濃度で様々な時間（１、２、４、６または２４時間）にわたってＥＮＭＤ−１１９８に曝露させた。次いで、媒体を除去し、各２４時間の期間の残りの時間のために、ＥＮＭＤ−１１９８を含まない培地と交換した。２４時間曝露ウェルでは、培地を毎日交換して、７２時間連続曝露を行った。３日目の処理後に、細胞計数により、抗増殖活性を測定した。
【０１３５】
さらに高濃度のＥＮＭＤ−１１９８とともに細胞を短時間インキュベートしても、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで高い抗増殖活性は得られない。この知見は、短期間に高レベルの２ＭＥ２に短時間曝露してもｉｎ  ｖｉｖｏの有意な抗腫瘍活性は得られなかったことを示すデータと一致する。腫瘍細胞をＥＮＭＤ−１１９８に対して継続的に曝露すると、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの増殖に対する阻害が最大になる（図６参照）。
【０１３６】
（実施例Ｘ）
所望の閾値超過時間範囲を達成するために採用できる２ＭＥ２の複数の処方が利用可能である。表４のデータは、選択された投与で経口送達された広範な処方の種類について達成された選択ＰＫパラメータを示している。経口投与後にＰＫデータを生成するのに使用された処方の提案としては、ナノメートルサイズの結晶、粒径が調節された非晶質沈殿物、非水性媒体、およびコポリマーの噴霧乾燥沈殿物が挙げられるが、それらに限定されない。この表のデータを用いると、所望の濃度範囲内の薬剤の血漿レベルを実質的に継続的に維持することで、所望の活性を最大にする投与方針、すなわち投与レベルと投与頻度の組合せを考案することは当業者にとって可能である。結果を表４に示す。
【表４】
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【０１３７】
本明細書に記載されている発明は、血漿薬物レベルを所望の期間にわたって特定の標的範囲内に実質的に維持することによって、諸記載の薬剤についての抗血管形成活性、抗増殖活性、抗有糸分裂活性または抗炎症活性、またはそれらの組合せを最大にすることを達成できるものである。示されている実施例は、限定的なものではない。本発明に記載されている他の薬剤は、あらゆる毒性または他の有害な活性または影響を最小限に抑えながら、臨床的利点を最大限にする特定の「治療窓」を有する。上記実施例は、最大の抗血管形成活性、抗増殖活性、抗有糸分裂活性または抗炎症活性、またはそれらの組合せを達成するために各薬剤に対して適切である血漿レベルおよび曝露長さの範囲を求めるための方法を提供する。当業者であれば、これらの実施例を用い、請求されている薬剤にそれらを適用して、最大の活性に必要とされる特定の標的濃度範囲および閾値超過時間の長さを求めることが可能である。
【０１３８】
移植または非経口ポリマー、または緩慢放出または脈動放出経口処方を含む持続放出薬物送達系を使用することによって、継続的な曝露を達成することが可能である。薬物／処方組合せを投与レベルおよび投与スケジュールに合わせることによって、血漿曝露を閾値レベル以上に維持できることも当業者によく知られている。これらの手順は、当該分野では、「上方投与」または「定常状態に対する投与」を含む様々な名称で知られている。一例として、血漿中の薬物レベルの半減期を短くする経口処方をより高レベルまたはより高頻度で投与して、血漿レベルを所望の閾値より高く維持することが可能であり、当該投与または投与スケジュールは、公開された公式または計算法、または市販のソフトウェアプログラムを用いて、処方の薬物動態プロファイルの数学モデルに基づいて選択される。
【０１３９】
他の例として、高レベルで長時間の曝露をもたらす処方をより低頻度のスケジュールで投与することが可能であり、当該投与または投与スケジュールは、公開された公式または計算法、または市販のソフトウェアプログラムを用いて、処方の薬物動態プロファイルの数学モデルに基づいて選択される。他の例として、低レベルで長時間の曝露をもたらす処方を、血漿レベルが、規定の範囲内にあることが示され、または予測されるまでより高頻度の投与スケジュールを用いて「上方投与」することが可能であり、当該投与または投与スケジュールは、公開された公式または計算法、または当業者に知られている市販のソフトウェアプログラムを用いて、処方の薬物動態プロファイルの数学モデルに基づいて選択される。
【０１４０】
上記実施例は、抗血管形成剤の血漿レベルを各投与期間において特定の時間、所望の範囲内に維持できるように、処方の曝露特性を整合するために、投与レベルおよび投与スケジュールをどのように調整できるかを示している。
【０１４１】
本明細書に言及されている出版物は、いずれも全面的に参照により本明細書に組み込まれている。上記実施例は、本発明を実証しているにすぎず、本発明または添付の特許請求の範囲を制限することを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１４２】
【図１】短期間に高レベルの２−メトキシエストラジオール（２ＭＥ２）の効果を示す図である。
【図２】２ＭＥ２の血漿レベルを示す図である。
【図３Ａ】肺転移の阻害を示す図である。
【図３Ｂ】移植後の２ＭＥ２の血漿レベルを示す図である。
【図４】一連の洗い出し抗増殖試験後の２ＭＥ２濃度を示す図である。
【図５】適宜２ＭＥ２が与えられた腫瘍マウスにおける肺転移の阻害を示す図である。
【図６】ＥＮＭＤ−１１９８の継続的な曝露の効果と比較したＥＮＭＤ−１１９８の循環レベルの効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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