(57)【要約】本発明は、新規な縮合環複素環キナーゼ調節因子、および該新規な縮合環複素環キナーゼ調節因子を用いる、キナーゼ活性により媒介される疾患の治療方法を提供する。
2008508304.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2008508304.tif 000077
［式中、
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレンまたは非置換２〜５員ヘテロアルキレンであり（ここに、ｎは０〜２の整数である）、
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであり、
但し、Ｒ1は置換または非置換ピロリルではなく、Ｒ1およびＲ2が共に非置換フェニルである場合にＬ1は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではなく、Ｒ2が非置換ピペラジニルである場合にＬ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではなく、Ｒ2が非置換ピリジニルである場合にＲ1は置換または非置換イソキサゾリルではない］
で示される化合物。
【請求項２】
Ｌ1およびＬ2が独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−または非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｌ1およびＬ2が結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｌ1またはＬ2が結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1が、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換の５もしくは６員ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1が、置換もしくは非置換６員ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ1が、
（１）非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；
（２）非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；
（３）非置換ヘテロアリール；
（４）非置換アリール；
（５）置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；
（６）置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；
（７）置換アリール；または
（８）置換ヘテロアリール；
（ここに、
（５）および（６）は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ12−Ｃ（Ｘ1）Ｒ7、−Ｌ12−ＯＲ8、−Ｌ12−ＮＲ91Ｒ92、または−Ｌ12−Ｓ（Ｏ）mＲ10で置換されており、
（７）および（８）は、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ11−置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12−置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ12−Ｃ（Ｘ1）Ｒ7、−Ｌ12−ＯＲ8、−Ｌ12−ＮＲ91Ｒ92または−Ｌ12−Ｓ（Ｏ）mＲ10で置換されており、ここに、
（ａ）Ｘ1は、＝Ｓ、＝Ｏまたは＝ＮＲ15（式中、Ｒ15は、Ｈ、−ＯＲ151、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、Ｒ151は、水素またはＲ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキルである）であり；
（ｂ）ｍは、０〜２の整数であり；
（ｃ）Ｒ7は、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−ＯＲ71または−ＮＲ72Ｒ73（式中、Ｒ71、Ｒ72およびＲ73は独立して、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ72およびＲ73は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）であり
（ｄ）Ｒ8、Ｒ91およびＲ92は独立して、水素、−ＣＦ3、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｘ2）Ｒ81、または−Ｓ（Ｏ）wＲ81であり、Ｒ91およびＲ92は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、ここに、
（ｉ）Ｘ2は、＝Ｓ、＝Ｏまたは＝ＮＲ16（式中、Ｒ16はＲ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールである）であり；
（ｉｉ）ｗは、０〜２の整数であり；
（ｉｉｉ）Ｒ81は、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ811Ｒ812（式中、Ｒ811およびＲ812は独立して、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ811およびＲ812は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）であり；
（ｅ）Ｒ10は、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ101Ｒ102（式中、（ｉ）Ｒ101およびＲ102は独立して、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ101およびＲ102は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）であり；
（ｆ）Ｌ12は、結合、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキレン、または非置換ヘテロアルキレンであり；
（ｇ）Ｒ11は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、アミノ、ハロゲン、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ14置換もしくは非置換アリール、またはＲ14置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
（ｈ）Ｒ12は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ14置換もしくは非置換アリール、またはＲ14置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
（ｉ）Ｒ13は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールであり；
（ｊ）Ｒ14は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1が、置換もしくは非置換６員ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｌ1が結合である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ1が、（７）または（８）であり、ここに、（７）および（８）が、−ＯＨ、−ＣＦ3、ハロゲン、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、または−Ｌ12−ＯＲ8（式中、Ｌ12は結合である）で置換されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ8がＣＦ3である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ1が、（７）または（８）であり、ここに、（７）および（８）が、−ＯＣＨ3、−ＯＣＦ3、−ＣＨ3、−ＣＦ3、−ＯＣＨ2ＣＨ3、ハロゲン、またはシクロプロピルオキシで置換されている、請求項７に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｌ1およびＬ2が結合である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ2が、
（１）非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；
（２）非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；
（３）非置換ヘテロアリール；
（４）非置換アリール；
（５）置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；
（６）置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；
（７）置換アリール；または
（８）置換ヘテロアリール
（ここに、
（５）および（６）は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3、−Ｌ22−ＯＲ4、−Ｌ22−ＮＲ51Ｒ52、または−Ｌ22−Ｓ（Ｏ）qＲ6で置換されており、
（７）および（８）は、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3、−Ｌ22−ＯＲ4、−Ｌ22−ＮＲ51Ｒ52、または−Ｌ22−Ｓ（Ｏ）qＲ6で置換されており、ここに、
（ａ）Ｘ3は、＝Ｓ、＝Ｏ、または＝ＮＲ17（式中、Ｒ17は、Ｈ、−ＯＲ171、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、Ｒ171は、ＨまたはＲ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキルである）であり；
（ｂ）ｑは、０〜２の整数であり；
（ｃ）Ｒ3は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−ＯＲ31、または−ＮＲ32Ｒ33（式中、（ｉ）Ｒ31、Ｒ32およびＲ33は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ32およびＲ33は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）であり；
（ｄ）Ｒ4、Ｒ51およびＲ52は独立して、水素、−ＣＦ3、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｘ4）Ｒ41、または−Ｓ（Ｏ）vＲ41であり、Ｒ51およびＲ52は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、ここに、
（ｉ）Ｘ4は、＝Ｓ、＝Ｏまたは＝ＮＲ18（式中、Ｒ18は、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールである）であり；
（ｉｉ）ｖは、０〜２の整数であり；
（ｉｉｉ）Ｒ41は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ411Ｒ412（式中、Ｒ411およびＲ412は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され、Ｒ411およびＲ412は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）であり；
（ｅ）Ｒ6は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ61Ｒ62（式中、（ｉ）Ｒ61およびＲ62は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ61およびＲ62は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキルまたはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）であり；
（ｆ）Ｌ22は、結合、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキレンまたは非置換ヘテロアルキレンであり；
（ｇ）Ｒ21は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、アミノ、ハロゲン、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ24置換もしくは非置換アリール、またはＲ24置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
（ｈ）Ｒ22は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ24置換もしくは非置換アリール、またはＲ24置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
（ｉ）Ｒ23は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールであり；
（ｊ）Ｒ24は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである）である、請求項１、７または１３の一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｌ2が結合である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ2が、（３）、（４）、（７）または（８）である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ2が、（７）または（８）である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
（７）および（８）が、−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3、−Ｌ22−ＯＲ4、−Ｌ22−ＮＲ51Ｒ52、−Ｌ22−Ｃ（ＮＨ）−ＮＲ32Ｒ33または−Ｌ22−Ｓ（Ｏ）qＲ6で置換されている、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ3が、−ＮＲ32Ｒ33であり；
Ｘ3が、＝Ｏまたは＝ＮＲ17であり；
Ｒ6が、−ＮＲ61Ｒ62であり；
Ｒ51が、−Ｃ（Ｏ）Ｒ41または−Ｓ（Ｏ）vＲ41である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ41が−ＮＲ411Ｒ412である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ2が、（７）または（８）であり、ここに、（７）および（８）が、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールまたは−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3
（式中、
Ｘ3は、＝Ｏであり；
Ｒ3は、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ32Ｒ33（式中、Ｒ32およびＲ33は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ32およびＲ33は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）である）
で置換されている、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ2が、（７）または（８）であり、ここに、（７）および（８）は、非置換２〜１０員ヘテロアルキルまたは−Ｌ22−Ｃ（Ｏ）Ｒ3
（式中、
Ｌ22は、結合であり、
Ｒ3は、−ＮＲ32Ｒ33（式中、Ｒ32およびＲ33は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ32およびＲ33は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい）である）
で置換されている、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ1が、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換縮合環ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ2が、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換キノリニル、または置換もしくは非置換ベンゾジオキソリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ2が、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換縮合環ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ1が、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換キノリニル、または置換もしくは非置換ベンゾジオキソリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ1およびＲ2が独立して、置換もしくは非置換ヒダントイニル、置換もしくは非置換ジオキソラニル、置換もしくは非置換ジオキサニル、置換もしくは非置換トリオキサニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチエニル、置換もしくは非置換テトラヒドロフラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオフェニル、置換もしくは非置換テトラヒドロピラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオピラニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、置換もしくは非置換モルホリノ、置換もしくは非置換ピペリジニル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換イソキサゾリル、置換もしくは非置換オキサジアゾリル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ピリジル、置換もしくは非置換ピラジル、置換もしくは非置換ピリミジル、置換もしくは非置換ピリダジニル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換イソチオアゾリル、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換チエニル、置換もしくは非置換トリアジニル、置換もしくは非置換チアジアゾリル、または置換もしくは非置換テトラゾリルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２８】
式：
【化２】
2008508304.tif 000078
［式中、
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである］
で示される化合物。
【請求項２９】
式：
【化３】
2008508304.tif 000079
［式中、
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである］
で示される化合物。
【請求項３０】
プロテインキナーゼを請求項１、２８または２９の一項に記載の化合物と接触させることを特徴とする、プロテインキナーゼの活性を調節する方法。
【請求項３１】
治療を必要とする対象における癌、アレルギー、喘息、炎症、閉塞性気道疾患、自己免疫疾患、代謝疾患、感染、ＣＮＳ疾患、脳腫瘍、肥満、喘息、血液学的疾患、神経変性疾患、心血管疾患、または血管新生、新血管新生もしくは脈管形成を伴う疾患の治療方法であって、対象に、治療的有効量の請求項１、２８または２９の一項に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項３２】
プロテインキナーゼを、式：
【化４】
2008508304.tif 000080
［式中、
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである］
で示される化合物と接触させることを特徴とする、プロテインキナーゼの活性を調節する方法。
【請求項３３】
プロテインキナーゼが、アベルソンチロシンキナーゼ、Ｒｏｎ受容体チロシンキナーゼ、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３、オーロラキナーゼ、ｐ２１活性化キナーゼ−４、または３−ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
プロテインキナーゼが、Ｍ２４４Ｖ、Ｌ２４８Ｖ、Ｇ２５０Ｅ、Ｇ２５０Ａ、Ｑ２５２Ｈ、Ｑ２５２Ｒ、Ｙ２５３Ｆ、Ｙ２５３Ｈ、Ｅ２５５Ｋ、Ｅ２５５Ｖ、Ｄ２７６Ｇ、Ｆ３１１Ｌ、Ｔ３１５Ｉ、Ｔ３１５Ｎ、Ｔ３１５Ａ、Ｆ３１７Ｖ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３４３Ｔ、Ｍ３５１Ｔ、Ｅ３５５Ｇ、Ｆ３５９Ａ、Ｆ３５９Ｖ、Ｖ３７９Ｉ、Ｆ３８２Ｌ、Ｌ３８７Ｍ、Ｈ３９６Ｐ、Ｈ３９６Ｒ、Ｓ４１７Ｙ、Ｅ４５９ＫおよびＦ４８６Ｓからなる群から選択される変異を有するＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
プロテインキナーゼが、Ｔ３１５Ｉ変異を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
治療を必要とする対象における癌、アレルギー、喘息、炎症、閉塞性気道疾患、自己免疫疾患、代謝疾患、感染、ＣＮＳ疾患、脳腫瘍、肥満、喘息、血液学的疾患、神経変性疾患、心血管疾患、または血管新生、新血管新生もしくは脈管形成を伴う疾患の治療方法であって、対象に、式：
【化５】
2008508304.tif 000081
［式中、
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである］
で示される治療的有効量の化合物を投与することを含む方法。
【請求項３７】
癌が、白血病または脊髄増殖性疾患から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
医薬的に許容される賦形剤と、請求項１、２８もしくは２９の一項に記載の化合物または式：
【化６】
2008508304.tif 000082
［式中、
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである］
で示される化合物とを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００４年７月２７日に出願された米国仮特許出願第６０／５９１７７８号、２００４年７月２７日に出願された米国仮特許出願第６０／５９１８８６号、および２００５年５月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／６８００９１号の利益を主張し、それぞれが全ての目的のためにそのまま本明細書に引用される。
【０００２】
（発明の背景）
哺乳動物のプロテインキナーゼは、細胞機能の重要な制御因子である。プロテインキナーゼ活性の機能不全がいくつかの疾患および障害に関連するので、プロテインキナーゼは、薬剤開発の標的である。
【０００３】
チロシンキナーゼ受容体であるＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、および脊髄異形成のような白血病を含む癌に関係している。ＡＭＬ患者の約４分の１から３分の１は、ＦＬＴ３突然変異を有し、これはキナーゼおよび下流のシグナル伝達経路の常時活性化に導く。正常なヒトではＦＬＴ３は正常な脊髄前駆細胞およびリンパ球前駆細胞により主に発現されるが、ＦＬＴ３はＡＭＬおよびＡＬＬの患者の７０〜８０％の白血病細胞において発現される。ＦＬＴ３を標的とする阻害剤は、変異および／または常時活性型ＦＬＴ３を発現する白血球細胞に毒性であることが報告されている。従って、白血病のような疾患および障害を治療するために用いることができる有効なＦＬＴ３阻害剤を開発する必要がある。
【背景技術】
【０００４】
アベルソン非受容体チロシンキナーゼ（ｃ−Ａｂｌ）は、その基質タンパク質のリン酸化を介してシグナル伝達に関わる。細胞内で、ｃ−Ａｂｌは細胞質と核との間を往復し、その活性は、通常、いくつかの異なる機構により厳密に制御されている。Ａｂｌは、成長因子およびインテグリンシグナル伝達、細胞周期、細胞分化および神経発生、アポトーシス、細胞接着、細胞骨格構造、ならびにＤＮＡ損傷および酸化ストレスに対する応答の制御に関係している。
【０００５】
ｃ−Ａｂｌタンパク質は、Ｎ末端キャップ領域、ＳＨ３およびＳＨ２ドメイン、チロシンキナーゼドメイン、核局在化配列、ＤＮＡ結合ドメインならびにアクチン結合ドメインに編成される約１１５０のアミノ酸残基を含有する。
【０００６】
慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）は、染色体９と２２の間のフィラデルフィア染色体転座に関連している。この転座は、ｂｃｒ遺伝子とｃ−Ａｂｌをコードする遺伝子との間の異所融合を発生する。得られるＢｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質は、常時活性型のチロシンキナーゼ活性を有する。上昇したキナーゼ活性は、ＣＭＬの主要な原因因子であると報告され、細胞形質転換、成長因子依存性の欠失および細胞増殖の原因である。
【０００７】
２−フェニルアミノピリミジン化合物であるイマチニブ（ＳＴＩ−５７１、ＣＧＰ  ５７１４８またはグリベックともよばれる）は、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ならびに他の２つのチロシンキナーゼであるｃ−ｋｉｔおよび血小板由来成長因子受容体の特異的且つ有効な阻害剤であるとして同定されている。イマチニブは、これらのタンパク質のチロシンキナーゼ活性をブロックする。イマチニブは、ＣＭＬの全ての段階の治療のための効果的な治療剤であると報告されている。しかし、進行段階または急性転化のＣＭＬの患者の大多数は、薬剤に対する耐性の発生のために、継続的なイマチニブでの治療にもかかわらず、再発に苦しんでいる。しばしば、この耐性の分子的な基礎は、Ｂｃｒ−Ａｂｌのキナーゼドメインのイマチニブ耐性変異形の出現である。最も一般的に観察される根底にあるアミノ酸置換は、Ｇｌｕ２５５Ｌｙｓ、Ｔｈｒ３１５Ｉｌｅ、Ｔｙｒ２９３ＰｈｅおよびＭｅｔ３５１Ｔｈｒを含む。
【０００８】
ＭＥＴは、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−ニトロソグアニジンで治療されたヒト骨肉腫細胞系統におけるトランスフォーミングＤＮＡ再構成（ＴＰＲ−ＭＥＴ）として最初に同定された（Ｃｏｏｐｅｒら，１９８４）。ＭＥＴ受容体チロシンキナーゼ（肝細胞成長因子受容体、ＨＧＦＲ、ＭＥＴまたはｃ−Ｍｅｔとしても知られる）およびそのリガンドである肝細胞成長因子（「ＨＧＦ」）は、増殖、生存、分化および形態形成の刺激、分枝管形成（branching tubulogenesis）、細胞運動ならびに侵入性成長を含む多数の生物活性を有する。病理学的には、ＭＥＴは、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、肝癌および乳癌を含む多くの異なる形態の癌の成長、侵入および転移に関係している。ＭＥＴにおける活性化体細胞変異は、ヒト癌腫転移および乳頭状腎細胞癌のような散発性癌において見出されている。ＭＥＴが転移の進行を制御する長年捜し求められてきた腫瘍遺伝子の１つであり、よって非常に興味深い標的であるとの証拠が増え続けている。癌のほかに、ＭＥＴ阻害は、リステリア侵入、多発性骨髄腫に付随する骨溶解、マラリア感染、糖尿病性網膜症、乾癬および関節炎を含む種々の適応症の治療において価値があり得るとの証拠がある。
【０００９】
チロシンキナーゼＲＯＮは、マクロファージ刺激タンパク質の受容体であり、受容体チロシンキナーゼのＭＥＴファミリーに属する。ＭＥＴと同様に、ＲＯＮは、胃癌および膀胱癌を含むいくつかの異なる形態の癌の増殖、侵入および転移に関係する。
【００１０】
セリン／スレオニン（theronine）キナーゼのオーロラファミリーは、有糸分裂の進行に必須である。オーロラ（Arurora）キナーゼの発現および活性は、細胞周期の間に厳密に制御される。細胞分裂において役割を有する種々のタンパク質は、オーロラキナーゼ基質として同定されている。オーロラキナーゼの既知の機能に基づいて、それらの活性の阻害は、細胞周期を妨害し、増殖をブロックし、よって腫瘍細胞生存力をブロックすると考えられる。Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｎｌｉｎｅ（２００４）。
【００１１】
３−ホスホイノシチド依存性キナーゼ１（ＰＤＫ１）は、Ａｋｔ／ＰＫＢ、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、ＰＫＣ関連キナーゼ（ＰＲＫ１およびＰＲＫ２）、ｐ７０リボソームＳ６−キナーゼ（Ｓ６Ｋ１）、ならびに血清およびグルココルチコイド制御キナーゼ（ＳＧＫ）を含むＡＧＣキナーゼスーパーファミリーの中のいくつかのキナーゼをリン酸化および活性化できるＳｅｒ／Ｔｈｒプロテインキナーゼである。最初に同定されたＰＤＫ１基質は、癌原遺伝子Ａｋｔである。多くの研究は、黒色腫、ならびに乳癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、血液の癌および卵巣癌を含む一般的な腫瘍の種類の多くの割合（３０〜６０％）において高レベルの活性Ａｋｔを見出している。したがって、ＰＤＫ１／Ａｋｔシグナル伝達経路は、癌の治療に有用であり得る小分子阻害剤の開発の魅力ある標的である。Ｆｅｌｄｍａｎら，ＪＢＣ  Ｐａｐｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ．２００５年３月１６日出版、Ｍａｎｕｓｃｒｉｐｔ  Ｍ５０１３６７２００。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
キナーゼは、癌のような多くの疾患および状態に関係しているので、治療に用い得る新規で有効なプロテインキナーゼ阻害剤の開発が必要とされる。本発明は、当技術分野におけるこれらのおよびその他の必要性を充足する。特定のプロテインキナーゼが本明細書において具体的に挙げられているが、本発明は、これらのキナーゼの阻害剤に限定されず、その範囲内に、関連するプロテインキナーゼの阻害剤および同種のタンパク質の阻害剤を含む。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の概要）
驚くべきことに、本発明の縮合環ヘテロ環化合物が、キナーゼ活性を調節し、キナーゼ活性により媒介される疾患を治療するために用い得ることが見出された。これらの新規な縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子は、以下に詳細に説明される。さらに、選択される化合物の阻害活性も本明細書で開示される。
【００１４】
ある態様において、本発明は、式：
【化１】
2008508304.tif 000003
で示される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子を提供する。
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレンである。記号ｎは、０〜２の整数である。Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである。いくつかの具体的態様において、Ｒ1は、置換または非置換ピロリルではない。他の具体的態様において、Ｌ1は、Ｒ1およびＲ2が共に非置換フェニルである場合、非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない。他の具体的態様において、Ｒ2が非置換ピペラジニルである場合、Ｌ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではない。
【００１６】
別の態様において、本発明は、式：
【化２】
2008508304.tif 000004
で示される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（本明細書において、これもまた「本発明の化合物」という）を提供する。
【００１７】
式（ＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1およびＲ2は、式（Ｉ）の説明において上記で定義されるとおりである。
【００１８】
別の態様において、本発明は、式：
【化３】
2008508304.tif 000005
で示される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（本明細書において、これもまた「本発明の化合物」という）を提供する。
【００１９】
式（ＩＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1およびＲ2は、式（Ｉ）の説明において上記で定義されるとおりである。
【００２０】
別の態様において、本発明は、本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子を用いる、プロテインキナーゼ活性の調節方法を提供する。該方法は、プロテインキナーゼを、縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子と接触させることを含む。
【００２１】
別の態様において、本発明は、キナーゼ活性により媒介される疾患（キナーゼ媒介疾患または障害）をその治療を必要とする対象（例えばヒトのような哺乳動物）において治療する方法を提供する。該方法は、治療的有効量の本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子を該対象に投与することを含む。
【００２２】
別の態様において、本発明は、医薬的に許容される賦形剤と混合して縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子を含む医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
（発明の詳細な記載）
定義
本明細書において用いる略語は、化学および生物学の技術におけるそれらの通常の意味を有する。
【００２４】
置換基が、左から右に記載されるそれらの慣例的な化学式で特定されている場合、これらは、構造を右から左に記載して得られる化学的に同一の置換基を等しく包含し、例えば、−ＣＨ2Ｏ−は、−ＯＣＨ2−と等価である。
【００２５】
用語「アルキル」は、それ自体でまたは別の置換基の一部分として、特に明記しない限りは、完全に飽和、モノ不飽和またはポリ不飽和であってよく、示される炭素原子数を有する（すなわち、Ｃ1〜Ｃ10は１〜１０の炭素を意味する）二価および多価の基を含むことができる、直鎖（すなわち分岐していない）または分岐鎖または環状の炭化水素基、あるいはそれらの組合せを意味する。飽和炭化水素基の例は、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどの同族体および異性体などの基を含む。不飽和アルキル基は、１以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例は、限定されないが、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニルならびに高級同族体および異性体を含む。炭化水素基に限定されるアルキル基を、「ホモアルキル」とよぶ。
【００２６】
用語「アルキレン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部分として、アルキルから誘導される二価の基を意味し、限定されないが、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨＣＨ2−、−ＣＨ2Ｃ≡ＣＣＨ2−および−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2−が例示される。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有し、１０以下の炭素原子を有する基が本発明において好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、通常、８以下の炭素原子を有する短鎖アルキルまたはアルキレン基である。
【００２７】
用語「ヘテロアルキル」は、それ自体でまたは別の用語と組み合わせて、特に明示しない限りは、少なくとも１個の炭素原子とＯ、Ｎ、Ｐ、ＳｉおよびＳからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子（ここに、窒素、硫黄およびリン原子は適宜酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は適宜四級化されていてよい）とからなる安定な直鎖または分岐鎖または環状の炭化水素基あるいはそれらの組合せを意味する。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、ＰおよびＳおよびＳｉは、へテロアルキル基のいずれの内部の位置またはアルキル基が分子の残部に結合している位置に位置してもよい。例としては、これらに限定されないが、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ3、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ3、−Ｓｉ（ＣＨ3）3、−ＣＨ2−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ3、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、Ｏ−ＣＨ3、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ3および−ＣＮが挙げられる。例えば−ＣＨ2−ＮＨ−ＯＣＨ3および−ＣＨ2−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ3）3のように、２または３個までのヘテロ原子が連続してよい。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部分として、ヘテロアルキルから誘導される二価の基を意味し、限定されないが、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−および−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−が例示される。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子は、鎖末端のいずれかまたは両方を占めることもできる（例えばアルキレンオキソ、アルキレンジオキソ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基について、連結基の式が記載される方向に、連結基の方向は関係しない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’−は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’−および−Ｒ’ＯＣ（Ｏ）−の両方を表す。上記のように、本明細書で用いる場合、ヘテロアルキル基は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＲ’、−ＳＲ’および／または−ＳＯ2Ｒ’のようにヘテロ原子を介して分子の残部に結合する基を含む。「ヘテロアルキル」と記載して、次いで−ＮＲ’Ｒ’’などの具体的なヘテロアルキル基と記載する場合、用語ヘテロアルキルと−ＮＲ’Ｒ’’とは、重複または互いに排他的ではないことが理解されよう。むしろ、具体的なヘテロアルキル基は、明確性を加えるために記載される。従って、用語「ヘテロアルキル」は、本明細書において、−ＮＲ’Ｒ’’などの具体的なヘテロアルキル基を除外すると解釈されるべきでない。
【００２８】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、それら自体でまたは他の用語と組み合わせて、特に明示しない限りは、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状の種類を表す。さらに、ヘテロシクロアルキルについて、ヘテロ原子は、ヘテロ環が分子の残部に結合している位置を占めることができる。シクロアルキルの例は、限定されないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどを含む。ヘテロシクロアルキルの例は、限定されないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニルなどを含む。用語「シクロアルキレン」および「ヘテロシクロアルキレン」は、それぞれシクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルの二価の誘導体をいう。
【００２９】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、それら自体でまたは別の置換基の一部分として、特に明示しない限りは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」のような用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、用語「ハロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル」は、限定されないが、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピルなどを含むことを意味する。
【００３０】
用語「アリール」は、特に明示しない限りは、共に縮合しているかもしくは共有結合している単環または多環（好ましくは１〜３環）であり得るポリ不飽和で芳香族の炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子（ここに、窒素および硫黄原子は適宜酸化されていてもよく、窒素原子は適宜四級化されていてもよい）を（多環の場合はそれぞれの別個の環の中に）含むアリール基（または環）をいう。ヘテロアリール基は、炭素またはヘテロ原子を介して分子の残部に結合できる。アリールおよびヘテロアリール基の非限定的な例は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリルおよび６−キノリルを含む。上記のアリールおよびヘテロアリール環系のそれぞれについての置換基は、以下に記載する許容される置換基の群から選択される。用語「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」は、それぞれアリールおよびヘテロアリールの二価の基をいう。
【００３１】
簡略のために、用語「アリール」は、他の用語と組み合わせて用いる場合に（例えばアリールオキソ、アリールチオキソ、アリールアルキル）、上記で定義するようなアリールおよびヘテロアリール環の両方を含む。したがって、用語「アリールアルキル」は、アリール基が、炭素原子（例えばメチレン基）が例えば酸素原子で置換されたアルキル基（例えばフェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピルなど）を含むアルキル基に結合した基（例えばベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど）を含むことを意味する。しかし、本明細書で用いる場合、用語「ハロアリール」は、１以上のハロゲンで置換されるアリールのみに用いられることを意味する。
【００３２】
ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールが特定の数の員を含む場合（例えば「３〜７員」）、用語「員」は、炭素またはヘテロ原子をいう。
【００３３】
用語「オキソ」は、本明細書で用いる場合、炭素原子に二重結合している酸素を意味する。
【００３４】
上記の用語（例えば「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」ならびにそれらの二価の基の誘導体）のそれぞれは、記載した基の置換体および非置換体の両方を含むことを意味する。各種類の基の好ましい置換基は、以下に示す。
【００３５】
アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルの一価および二価の誘導基の置換基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニルおよびヘテロシクロアルケニルとしばしばよばれる基を含む）は、限定されないが、０〜（２ｍ’＋１）（式中、ｍ’はこのような基の炭素原子の合計数である）の範囲の数の−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ2Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2から選択される１種または複数種の基であり得る。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’はそれぞれ、好ましくは独立して水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール（例えば１〜３個のハロゲンで置換されたアリール）、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基をいう。本発明の化合物が二以上のＲ基を含む場合、例えば、各Ｒ基は独立して、二以上のこれらの基が存在する場合のＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基のそれぞれと同様に選択される。Ｒ’およびＲ’’が同じ窒素原子に結合している場合、これらは窒素原子と一緒になって４−、５−、６−または７−員環を形成することができる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、限定されないが、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むことを意味する。上記の置換基の説明から、当業者は、用語「アルキル」が、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ3および−ＣＨ2ＣＦ3）およびアシル（例えば−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＯＣＨ3など）のような水素基以外の基に結合する炭素原子を含む基を含むことを意味することを理解する。
【００３６】
上記のアルキル基について記載した置換基と同様に、アリールおよびヘテロアリール基（ならびにそれらの二価の誘導体）についての置換基の例は多様であり、例えば、０から芳香環系の開放原子価（open valence）の総数までの範囲の数でのハロゲン、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ2Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2、−Ｒ’、−Ｎ3、−ＣＨ（Ｐｈ）2、フルオロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルコキソおよびフルオロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルから選択される（ここに、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’は好ましくは独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールおよび置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される）。本発明の化合物が二以上のＲ基を含む場合、例えば、各Ｒ基は独立して、二以上のこれらの基が存在する場合にＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基のそれぞれと同様に選択される。
【００３７】
アリールまたはヘテロアリール環に隣接する原子上の２つの置換基は、適宜式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）q−Ｕ−（式中、ＴおよびＵは独立して、−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−または単結合であり、ｑは０〜３の整数である）の環を形成してもよい。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環に隣接する原子上の２つの置換基は、適宜式−Ａ−（ＣＨ2）r−Ｂ−（式中、ＡおよびＢは独立して、−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’−または単結合であり、ｒは１〜４の整数である）の置換基で置換されていてもよい。このようにして形成された新しい環の単結合の１つは、適宜二重結合で置換されていてもよい。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環に隣接する原子上の２つの置換基は、適宜式−（ＣＲＲ’）s−Ｘ’−（Ｃ’’Ｒ’’’）d−（式中、ｓおよびｄは独立して、０〜３の整数であり、Ｘ’は、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、または−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’−である）の置換基で置換されていてもよい。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は好ましくは独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールおよび置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。
【００３８】
本明細書で用いる場合、用語「ヘテロ原子」または「環ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）およびケイ素（Ｓｉ）を含むことを意味する。
【００３９】
本明細書で用いる場合、「アミノアルキル」は、アルキレンリンカーに共有結合したアミノ基をいう。アミノ基は−ＮＲ’Ｒ’’（式中、Ｒ’およびＲ’’は、典型的に、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される）である。
【００４０】
本明細書で用いる場合、「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する：
【００４１】
（Ａ）−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、オキソ、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
【００４２】
（Ｂ）以下から選択される少なくとも一つの置換基で置換される、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール：
【００４３】
（ｉ）オキソ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
【００４４】
（ｉｉ）以下から選択される少なくとも一つの置換基で置換される、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール：
【００４５】
（ａ）オキソ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、および
【００４６】
（ｂ）オキソ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリールおよび非置換ヘテロアリールから選択される少なくとも一つの置換基で置換される、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール。
【００４７】
本明細書で用いる場合、「サイズ限定置換基（size-limited substituent）」または「サイズ限定置換基（size-limited substituent group）」は、「置換基」についての上記全ての置換基から選択される基を意味し、ここに、それぞれの置換または非置換アルキルは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または非置換２〜２０員ヘテロアルキルであり、それぞれの置換または非置換シクロアルキルは、置換または非置換Ｃ4〜Ｃ8シクロアルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換４〜８員ヘテロシクロアルキルである。
【００４８】
本明細書で用いる場合、「低級置換基（substituent）」または「低級置換基（substituent group）」は、「置換基」についての上記全ての置換基から選択される基を意味し、ここに、それぞれの置換または非置換アルキルは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または非置換２〜８員ヘテロアルキルであり、それぞれの置換または非置換シクロアルキルは、置換または非置換Ｃ5〜Ｃ7シクロアルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換５〜７員ヘテロシクロアルキルである。
【００４９】
本発明の化合物は、塩として存在することができる。本発明は、そのような塩を含む。適用可能な塩形態の例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（例えば（＋）−酒石酸塩、（−）−酒石酸塩またはそのラセミ混合物を含む混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩、およびグルタミン酸などのアミノ酸との塩を含む。これらの塩は、当業者に知られる方法により調製することができる。ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、またはマグネシウムの塩あるいは類似の塩のような塩基付加塩も含まれる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、無溶媒または適切な不活性溶媒中のいずれかで、そのような化合物の中性形態を十分量の所望の酸と接触させることにより、酸付加塩を得ることができる。許容される酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素（monohydrogencarbonic）、リン酸、リン酸一水素（monohydrogenphosphoric）、リン酸二水素（dihydrogenphosphoric）、硫酸、硫酸一水素（monohydrogensulfuric）、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などの無機酸から誘導されるもの、および酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの有機酸から誘導される塩を含む。アルギネートなどのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸（galactunoric）などの有機酸の塩も含まれる。本発明の特定の具体的な化合物は、化合物が塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性および酸性の官能基の両方を含む。
【００５０】
化合物の中性形態は、塩を塩基または酸と接触させ、かつ親化合物を従来の方法で単離することにより、再生することが好ましい。化合物の親形態は、極性溶媒での溶解性のようなある物理的特性において、種々の塩形態と異なる。
【００５１】
本発明のある化合物は、非溶媒和形態および水素化された形態を含む溶媒和形態で存在できる。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と均等であり、本発明の範囲内に含まれる。本発明のある化合物は、多結晶体または非晶質体で存在し得る。一般に、全ての物理的な形態は、本発明により意図される使用について均等であり、本発明の範囲内であることを意図する。
【００５２】
本発明のある特定の化合物は、不斉炭素原子（光学またはキラル中心）または二重結合を有し；絶対立体化学の点で（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−またはアミノ酸については（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−として定義され得る、鏡像異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、立体異性体、および個別の異性体は、本発明の範囲に含まれる。本発明の化合物は、不安定すぎて合成および／または単離できないと当技術分野において知られているものは含まない。本発明は、ラセミ体および光学的に純粋な形態の化合物を含むことを意味する。光学活性な（Ｒ）−および（Ｓ）−、または（Ｄ）−および（Ｌ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて製造してよいか、または従来の技術を用いて分割してよい。本明細書で記載される化合物がオレフィン結合または他の幾何不斉中心を含む場合、特に明示しない限りは、該化合物はＥおよびＺの幾何異性体の両方を含むことを意図する。
【００５３】
本明細書で用いる場合、用語「互変異性体」は、平衡して存在し、一方の異性体から他方へと容易に変換される２以上の構造異性体の１つをいう。
【００５４】
当業者には、本発明の特定の化合物が互変異性体にて存在してよく、該化合物のこのような互変異性体の全てが本発明の範囲内であることが明らかである。
【００５５】
特に明記しない限りは、本明細書において記載する構造は、該構造の全ての立体化学的形態、すなわち、各不斉中心についてのＲおよびＳ立体配置を含むことも意味する。よって、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体ならびに鏡像異性およびジアステレオ混合物は、本発明の範囲内である。
【００５６】
特に明記しない限りは、本明細書において記載する構造は、１以上の同位体濃縮された原子の存在のみが異なる化合物を含むことも意味する。例えば、重水素もしくはトリチウムによる水素の置換、または13Ｃ−もしくは14Ｃ−富化された炭素による炭素の置換を除き、本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００５７】
本発明の化合物は、該化合物を構成する１以上の原子において原子同位体の非天然の割合を有してもよい。例えば、化合物は、例えばトリチウム（3Ｈ）、ヨウ素−１２５（125Ｉ）または炭素−１４（14Ｃ）のような放射活性同位体で放射性標識することができる。本発明の化合物の全ての同位体の種は、放射活性であろうとなかろうと、本発明の範囲内に包含される。
【００５８】
用語「医薬的に許容される塩」は、本明細書に記載される化合物について見出される特定の置換部分に応じて、比較的無毒性の酸または塩基を用いて製造される活性化合物の塩を含むことを意味する。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、このような化合物の中性形態を、無溶媒または適切な不活性溶媒中のいずれかで、十分量の所望の塩基と接触させることにより、塩基付加塩を得ることができる。医薬的に許容される塩基付加塩の例は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノもしくはマグネシウム塩または類似の塩を含む。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、該化合物の中性形態を、無溶媒または適切な不活性溶媒中のいずれかで、十分量の所望の酸と接触させることにより、酸付加塩を得ることができる。医薬的に許容される酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素、リン酸、リン酸一水素、リン酸二水素、硫酸、硫酸一水素、ヨウ化水素酸、またはリン酸などの無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの比較的無毒性の有機酸から誘導される塩を含む。アルギネートなどのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸（galactunoric）のような有機酸の塩も含む（例えばＢｅｒｇｅら，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７７，６６，１〜１９を参照されたい）。本発明のいくつかの特定の化合物は、化合物が塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性および酸性の両方の官能基を含む。
【００５９】
塩の形態に加えて、本発明は、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理条件下で化学変化を容易に受けて本発明の化合物を与える化合物である。さらに、プロドラッグは、生体外（ex vivo）環境において化学的または生化学的方法により本発明の化合物に変換できる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学薬品と共に経皮パッチ容器内に置いた場合、本発明の化合物に徐々に変換することができる。
【００６０】
本明細書において置換基の基について用いる場合、用語「ａ」、「ａｎ」または「ａ（ｎ）」は、少なくとも１つを意味する。例えば、ある化合物が「ａｎ」アルキルまたはアリールで置換される場合、該化合物は、適宜少なくとも１つのアルキルおよび／または少なくとも１つのアリールで置換される。さらに、ある部分がＲ置換基で置換される場合、その基は「Ｒ置換」ということができる。ある部分がＲ置換である場合、該部分は少なくとも１つのＲ置換基で置換されており、各Ｒ置換基は適宜異なる。
【００６１】
本発明の化合物の記載は、当業者に知られる化学結合の原理により制限される。よって、ある基が１以上の置換基により置換されてよい場合、このような置換基は、化学結合の原理に適合し、本来不安定ではなくかつ／または水性、中性およびいくつかの既知の生理条件のような周囲条件の下で不安定になりそうであると当業者に知られていると考えられる化合物を与えるように選択される。例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、当業者に知られる化学結合の原理に従って、分子の残部に環ヘテロ原子を介して結合し、それにより本来不安定な化合物を回避する。
【００６２】
特定の疾患についての用語「治療する」または「治療」は、疾患の予防を含む。
【００６３】
記号
【化４】
2008508304.tif 000006
は、分子の残部への部分の結合点を表す。
【００６４】
Ｉ．縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子
ある態様において、本発明は、式：
【化５】
2008508304.tif 000007
で示される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（本明細書において「本発明の化合物」ともいう）を提供する。
【００６５】
式（Ｉ）において、Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または置換もしくは非置換２〜５員ヘテロアルキレンである。いくつかの具体的態様において、Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレンである。記号ｎは、０〜２の整数である。Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールである。
【００６６】
いくつかの具体的態様において、Ｒ1は、置換または非置換ピロリルではない。他の具体的態様において、Ｒ1およびＲ2が共に非置換フェニルである場合、Ｌ1は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない。他の具体的態様において、Ｒ2が非置換ピペラジニルである場合、Ｌ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではない。
【００６７】
いくつかの具体的態様において、Ｒ1は、置換または非置換５員ヘテロアリールではない。他の具体的態様において、Ｒ1は、置換もしくは非置換６員ヘテロアリール、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ1は、置換もしくは非置換６員ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであることができる。
【００６８】
他の具体的態様において、Ｒ1およびＲ2が共に非置換アリールである場合、Ｌ1は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない。他の具体的態様において、Ｒ1およびＲ2が共に置換もしくは非置換フェニルである場合、Ｌ1は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない。他の具体的態様において、Ｌ1は、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−および非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレンから選択される。他の具体的態様において、ｎは０または１である。他の具体的態様において、Ｌ1は、結合、−Ｏ−、−ＮＨ−および非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレンから選択される。
【００６９】
いくつかの具体的態様において、Ｒ2が置換もしくは非置換ピペラジニルである場合、Ｌ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではない。他の具体的態様において、Ｒ2が非置換ヘテロシクロアルキルである場合、Ｌ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではない。他の具体的態様において、Ｒ1が置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルである場合、Ｌ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではない。他の具体的態様において、ｎは０または１である。他の具体的態様において、Ｌ2が結合である場合、Ｌ1は−Ｓ（Ｏ）2−ではない。
【００７０】
いくつかの具体的態様において、Ｒ2は非置換６員ヘテロシクロアルキルではない。他の具体的態様において、Ｒ2は置換または非置換６員ヘテロシクロアルキルではない。他の具体的態様において、Ｒ2は、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換５員ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換シクロアルキルから選択される。Ｒ2は、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであることもできる。
【００７１】
いくつかの具体的態様において、Ｒ2が非置換ピリジニルである場合、Ｒ1は置換または非置換イソキサゾリルではない。他の具体的態様において、Ｌ1が結合または−ＣＨ2−である場合、Ｒ1は置換または非置換イソキサゾリルではない。他の具体的態様において、Ｒ1は置換または非置換イソキサゾリルではない。他の具体的態様において、Ｒ1は４−置換イソキサゾリルではない。他の具体的態様において、Ｒ1は５−イル−イソキサゾリルではない。他の具体的態様において、Ｒ1は４−置換−５−イル−イソキサゾリルではない。他の具体的態様において、Ｒ1は、フルオロ置換アリールで置換されたイソキサゾリルではない。
【００７２】
Ｌ1およびＬ2は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−または非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレンであることができる。いくつかの具体的態様において、Ｌ1およびＬ2は結合である。他の具体的態様において、Ｌ1またはＬ2は結合である。
【００７３】
Ｒ1は、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換５もしくは６員ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであることができる。Ｒ1は、置換もしくは非置換６員ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであることもできる。
【００７４】
他の具体的態様において、Ｒ1は、（１）非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；（２）非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；（３）非置換ヘテロアリール；（４）非置換アリール；（５）置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；（６）置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；（７）置換アリール；または（８）置換ヘテロアリールである。いくつかの関連する具体的態様において、（５）および（６）は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ12−Ｃ（Ｘ1）Ｒ7、−Ｌ12−ＯＲ8、−Ｌ12−ＮＲ91Ｒ92、または−Ｌ12−Ｓ（Ｏ）mＲ10で置換される。Ｘ1は、＝Ｓ、＝Ｏまたは＝ＮＲ15（ここに、Ｒ15は、Ｈ、−ＯＲ151、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールである）である。Ｒ151は、水素またはＲ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキルである。記号ｍは、０〜２の整数である。
【００７５】
他の関連する具体的態様において、（７）および（８）は、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ12−Ｃ（Ｘ1）Ｒ7、−Ｌ12−ＯＲ8、−Ｌ12−ＮＲ91Ｒ92、または−Ｌ12−Ｓ（Ｏ）mＲ10で置換される。Ｌ12は、結合、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキレン、または非置換ヘテロアルキレンである。Ｘ1およびｍは、上記で定義するとおりである。
【００７６】
Ｒ7は、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−ＯＲ71、または−ＮＲ72Ｒ73である。Ｒ71、Ｒ72およびＲ73は独立して、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ72およびＲ73は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００７７】
Ｒ8、Ｒ91およびＲ92は独立して、水素、−ＣＦ3、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｘ2）Ｒ81、または−Ｓ（Ｏ）wＲ81である。Ｘ2は、＝Ｓ、＝Ｏ、または＝ＮＲ16である。Ｒ16は、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールである。記号ｗは、０〜２の整数である。Ｒ91およびＲ92は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００７８】
Ｒ81は、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ811Ｒ812である。
【００７９】
Ｒ811およびＲ812は独立して、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ811およびＲ812は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００８０】
いくつかの具体的態様において、Ｒ81およびＲ16は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。他の具体的態様において、Ｒ811およびＲ16は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。他の具体的態様において、Ｒ81およびＲ92は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。他の具体的態様において、Ｒ811およびＲ92は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００８１】
Ｒ10は、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、Ｒ12置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ101Ｒ102である。Ｒ101およびＲ102は独立して、水素、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ11置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ12置換もしくは非置換アリール、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ101およびＲ102は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ11置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ12置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００８２】
Ｒ11は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、アミノ、ハロゲン、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ14置換もしくは非置換アリール、またはＲ14置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８３】
Ｒ12は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ13置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ13置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ14置換もしくは非置換アリール、またはＲ14置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８４】
Ｒ13は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである。
【００８５】
Ｒ14は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである。
【００８６】
いくつかの具体的態様において、Ｒ1は、（１）、（２）、（４）、（５）、（６）または（７）である（すなわち、それぞれ、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、または置換アリールである）。いくつかの具体的態様において、Ｒ1が（３）または（８）である場合、ヘテロアリールは６員ヘテロアリールである。
【００８７】
Ｒ1が（７）または（８）である場合（すなわち、置換アリールまたは置換ヘテロアリール）、（７）および（８）は、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、ハロゲン、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、または−Ｌ12−ＯＲ8で置換することができる。関連する具体的態様において、Ｌ12は結合である。他の関連する具体的態様において、（７）および（８）は、−ＯＣＨ3、−ＯＣＦ3、−ＣＨ3、−ＣＦ3、−ＯＣＨ2ＣＨ3、ハロゲン、またはシクロプロピルオキシで置換することができる。
【００８８】
Ｒ2は、（１）非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；（２）非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；（３）非置換ヘテロアリール；（４）非置換アリール；（５）置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル；（６）置換３〜７員ヘテロシクロアルキル；（７）置換アリール；または（８）置換ヘテロアリールであることができる。いくつかの関連する具体的態様において、（５）および（６）は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3、−Ｌ22−ＯＲ4、−Ｌ22−ＮＲ51Ｒ52、または−Ｌ22−Ｓ（Ｏ）qＲ6で置換される。Ｘ3は、＝Ｓ、＝Ｏ、または＝ＮＲ17（ここに、Ｒ17は、Ｈ、−ＯＲ171、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールである）である。Ｒ171は、ＨまたはＲ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキルである。記号ｑは、０〜２の整数である。
【００８９】
他の関連する具体的態様において、（７）および（８）は、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、シアノ、ハロゲン、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3、−Ｌ22−ＯＲ4、−Ｌ22−ＮＲ51Ｒ52、または−Ｌ22−Ｓ（Ｏ）qＲ6で置換される。Ｌ22は、結合、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキレン、または非置換ヘテロアルキレンである。Ｘ3およびｑは、上記で定義されるとおりである。
【００９０】
Ｒ3は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−ＯＲ31、または−ＮＲ32Ｒ33である。Ｒ32およびＲ33は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００９１】
Ｒ31、Ｒ32およびＲ33は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９２】
Ｒ4、Ｒ51およびＲ52は独立して、水素、−ＣＦ3、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｘ4）Ｒ41、または−Ｓ（Ｏ）vＲ41である。Ｒ51およびＲ52は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００９３】
Ｘ4は、＝Ｓ、＝Ｏ、または＝ＮＲ18（ここに、Ｒ18は、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールである）である。記号ｖは、０〜２の整数である。
【００９４】
Ｒ41は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ411Ｒ412である。Ｒ411およびＲ412は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。Ｒ411およびＲ412は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００９５】
いくつかの具体的態様において、Ｒ41およびＲ18は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。他の具体的態様において、Ｒ411およびＲ18は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。他の具体的態様において、Ｒ41およびＲ52は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。他の具体的態様において、Ｒ411およびＲ52は、適宜それらが結合している原子と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００９６】
Ｒ6は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、Ｒ22置換もしくは非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ61Ｒ62である。Ｒ61およびＲ62は、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ61およびＲ62は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【００９７】
Ｒ21は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、アミノ、ハロゲン、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ24置換もしくは非置換アリール、またはＲ24置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９８】
Ｒ22は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員アルキル、Ｒ23置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ23置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ24置換もしくは非置換アリール、またはＲ24置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９９】
Ｒ23は、オキソ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである。
【０１００】
Ｒ24は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−ＣＮ、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである。
【０１０１】
いくつかの具体的態様において、Ｒ2は、（１）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）または（８）である（すなわち、それぞれ、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換ヘテロアリール、非置換アリール、置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、置換アリール、または置換ヘテロアリール）。Ｒ2は、（３）、（４）、（７）または（８）であることもできる。他の具体的態様において、Ｒ2は、（７）または（８）である。
【０１０２】
いくつかの具体的態様において、Ｒ2が（７）および（８）であるときは、（７）および（８）は、−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3、−Ｌ22−ＯＲ4、−Ｌ22−ＮＲ51Ｒ52、−Ｌ22−Ｃ（ＮＨ）−ＮＲ32Ｒ33、または−Ｌ22−Ｓ（Ｏ）qＲ6で置換される。
【０１０３】
いくつかの具体的態様において、Ｒ3は−ＮＲ32Ｒ33である。Ｘ3は、＝Ｏまたは＝ＮＲ17であることができる。Ｒ6は−ＮＲ61Ｒ62であることができる。Ｒ4は−Ｃ（Ｏ）Ｒ41または−Ｓ（Ｏ）vＲ41であることができる。Ｒ41は−ＮＲ411Ｒ412であることができる。
【０１０４】
Ｒ2が（７）および（８）である他の具体的態様において、（７）または（８）は、−ＯＨ、−ＣＦ3、−ＣＯＯＨ、アミノ、ハロゲン、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、または−Ｌ22−Ｃ（Ｘ3）Ｒ3で置換することができる。Ｘ3は、＝Ｏであることができる。
【０１０５】
Ｒ3は、非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、または−ＮＲ32Ｒ33であることができる。Ｒ32およびＲ33は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであることができる。Ｒ32およびＲ33は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【０１０６】
Ｒ2が（７）または（８）である別の具体的態様において、（７）および（８）は、非置換２〜１０員ヘテロアルキル、または−Ｌ22−Ｃ（Ｏ）Ｒ3で置換することができる。Ｌ22は結合であることができる。Ｒ3は−ＮＲ32Ｒ33であることができる。Ｒ32およびＲ33は独立して、水素、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｒ21置換もしくは非置換２〜１０員ヘテロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ7シクロアルキル、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、Ｒ22置換もしくは非置換アリール、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールであることができる。Ｒ32およびＲ33は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、Ｒ21置換もしくは非置換３〜７員ヘテロシクロアルキル、またはＲ22置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成する。
【０１０７】
いくつかの具体的態様において、Ｒ1は、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換縮合環ヘテロアリールである。他の具体的態様において、Ｒ2は、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換キノリニル、または置換もしくは非置換ベンゾジオキソリルである。Ｒ2は、置換もしくは非置換縮合環アリール、または置換もしくは非置換縮合環ヘテロアリールであることができる。Ｒ1は、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換キノリニル、または置換もしくは非置換ベンゾジオキソリルであることができる。
【０１０８】
Ｒ1およびＲ2は独立して、置換もしくは非置換ヒダントイニル、置換もしくは非置換ジオキソラニル、置換もしくは非置換ジオキサニル、置換もしくは非置換トリオキサニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチエニル、置換もしくは非置換テトラヒドロフラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオフェニル、置換もしくは非置換テトラヒドロピラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオピラニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、置換もしくは非置換モルホリノ、置換もしくは非置換ピペリジニル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換イソキサゾリル、置換もしくは非置換オキサジアゾリル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ピリジル、置換もしくは非置換ピラジル、置換もしくは非置換ピリミジル、置換もしくは非置換ピリダジニル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換イソチオアゾリル（isothioazolyl）、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換チエニル、置換もしくは非置換トリアジニル、置換もしくは非置換チアジアゾリル、または置換もしくは非置換テトラゾリルであることができる。
【０１０９】
別の具体的態様において、本発明の化合物は、表１〜１８または２０、および／または以下の実施例の項の方法２〜６１の化合物のいずれか１つである。
【０１１０】
別の態様において、本発明は、式：
【化６】
2008508304.tif 000008
で示される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（本明細書において、「本発明の化合物」ともいう）を提供する。
【０１１１】
式（ＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1およびＲ2は、式（Ｉ）の説明において上記で定義されるとおりである。
【０１１２】
別の態様において、本発明は、式：
【化７】
2008508304.tif 000009
で示される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（本明細書において、「本発明の化合物」ともいう）を提供する。
【０１１３】
式（ＩＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1およびＲ2は、式（Ｉ）の説明において上記で定義されるとおりである。
【０１１４】
いくつかの具体的態様において、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物において上記で定義される各置換基は、少なくとも１つの置換基で置換される。より具体的には、いくつかの具体的態様において、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物において上記で定義される置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、および／または置換ヘテロアルキレンのそれぞれは、少なくとも１つの置換基で置換される。他の具体的態様において、少なくとも１つまたは全てのこれらの基は、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換される。あるいは、少なくとも１つまたは全てのこれらの基は、少なくとも１つの低級置換基で置換される。
【０１１５】
式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の化合物の他の具体的態様において、置換もしくは非置換アルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロアルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換２〜２０員ヘテロアルキルであり、置換もしくは非置換シクロアルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換Ｃ4〜Ｃ8シクロアルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換４〜８員ヘテロシクロアルキルであり、置換もしくは非置換アルキレンのそれぞれは、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキレンであり、かつ／または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンのそれぞれは、置換もしくは非置換２〜２０員ヘテロアルキレンである。
【０１１６】
あるいは、置換もしくは非置換アルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロアルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換２〜８員ヘテロアルキルであり、置換もしくは非置換シクロアルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換Ｃ5〜Ｃ7シクロアルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルのそれぞれは、置換もしくは非置換５〜７員ヘテロシクロアルキルであり、置換もしくは非置換アルキレンのそれぞれは、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキレンであり、かつ／または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンのそれぞれは、置換もしくは非置換２〜８員ヘテロアルキレンである。
【０１１７】
合成例
本発明の化合物は、一般的によく知られた合成方法の適切な組合せにより合成される。本発明の化合物を合成するのに有用な技術は、当業者に明らかでありかつ当業者が利用できる。以下の説明は、本発明の下で請求する化合物を基本的にどのようにして入手するかを説明し、本発明の化合物を製造するのに用いるために利用可能ないくつかの多様な方法の詳細を提供するために与えられる。しかし、以下の説明は、本発明の化合物の製造において有用な反応または反応順序の範囲を規定または限定することを意図しない。本発明の化合物は、以下の実施例の項で開示される手順および技術により、および既知の有機合成技術により製造してよい。反応式１、２および３において、Ｌ1、Ｒ1、Ｌ2およびＲ2は、上記で定義されるとおりである。
【０１１８】
３，５−二置換１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン誘導体の合成のための重要な中間体は、５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンおよび５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンである。これらの構成単位に存在するｓｐ2混成芳香族炭素原子上のヨウ素および／または臭素の置換基は、いずれかの位置での官能化のための多数の合成の可能性を提供する。このような合成方法は多種存在し、これらの手順は一般に当業者によく知られておりかつ当業者が精通しており、限定しない例として、遷移金属触媒法（最も著名な方法はパラジウム、鉄、ニッケルまたは銅の触媒を用いる）、および金属−ハロゲン交換反応（最も著名なこのような方法は、リチウムまたはマグネシウムを導入する）、および直接または有機金属種の反応性を最適化するために金属交換反応を介しての、適切な反応性の求電子体との一過性または単離された有機金属誘導体のその後の反応を含む。
【化８】
2008508304.tif 000010
【０１１９】
このような方法を用いて、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンコアの３位および５位への異なる置換基の導入が、５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンから出発して、選択した置換基の５位での導入、およびその後の１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンコアの３位でのハロゲン化、特にヨウ素化により達成でき、上記の方法を用いてその位置に最適な別の置換基を導入することを可能にする。あるいは、上記で概説したいくつかの方法を用いて、臭化置換基を越えてヨウ化置換基と選択的に反応することにより、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを３位にて選択的に官能化してもよい。芳香族臭化置換基に比べて芳香族ヨウ化置換基とより高い反応性を示す種々のパラジウム触媒が知られており、容易に利用可能であるかまたは入手可能であること、およびこのような触媒は選択的にヨウ素を置換する適切な条件下で用いてよいことは、一般的に当業者によく知られておりかつ当業者が精通している。
【０１２０】
５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンまたは適切な保護基を有する誘導体は、フリーデル−クラフツアシル化のような一般的に当業者によく知られておりかつ当業者が精通している種々の求電子的芳香族置換反応を介して、３位にて官能化してもよい。
【０１２１】
このようにしていずれかの位置に導入された置換基は、本発明の下で請求されるもののような完全に修飾された化合物であってもよいし、または限定しない例として、アミン、カルボン酸もしくはエステル、ニトリル、オレフィンまたはハロゲンのような官能基を、遊離または適切な保護基を有して含有してもよく、これは次いで一般的によく知られている合成変換における出発材料として用いて本発明の下で請求される化合物を合成してもよい。
【０１２２】
本発明の化合物を合成するのに有用な、適切に官能化されたピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン誘導体、特に５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンおよび５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンは、市販の５−ブロモ−２−フルオロピリジンから反応式１に概説するようにして製造できる。５−ブロモ−２−フルオロピリジンは、Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ，Ｍ．，Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２；Ｃｌａｙｄｅｎ，Ｊ．，Ｏｒｇａｎｏｌｉｔｈｉｕｍｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ，２００２；およびＭｏｎｇｉｎら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００１）５７，４０５９〜４０９０に記載される一般的方法に類似する方法での２−フルオロピリジンの一般的によく知られている選択的メタル化により３位にて選択的に官能化できる。つまり、メタル化は、非プロトン性溶媒（例えばＴＨＦ、ヘキサン、エーテルまたはそれらの混液）中で、低温、典型的には−７８℃またはそれ未満にて、適切な非求核性の強塩基（例えばリチウムジ−イソ−プロピルアミドまたはリチウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジド）との処理により達成してよい。
【０１２３】
未精製のメタル化された中間体は、ＤＭＦ、Ｎ−ホルミル−Ｎ−メチルアニリン、Ｎ−ホルミルモルホリン、Ｎ−ホルミルピペリジンまたはギ酸エチルのようなホルミル化試薬との処理により、対応する３−カルバルデヒド２に変換できる。直接または適切な保護基（例えばアセタール）を用いるアルデヒドを保護しながらのカルバルデヒドとヒドラジンまたは適切なヒドラジン誘導体（例えばカルバジン酸ヒドラジン−ｔｅｒｔ−ブチル、またはヒドラジン塩酸塩のようなヒドラジンから誘導される溶解性の有機もしくは無機の塩）との反応により、５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンが得られる。さらなる修飾のための３位での適切な基の導入は、求電子的芳香族置換（例えば臭素化またはヨウ素化）のような当技術分野において一般的によく知られている方法により達成できる。つまり、ヨウ化物４は、このような変換を促進する条件下でのＮ−ヨードスクシンイミド、一塩化ヨウ素またはヨウ素のような適切な試薬との処理により、３から得られる。求電子的芳香族置換による官能化のその他の例は、限定しない例として、例えばブロモアセチルクロリド、アクリロイルクロリドまたはトリクロロアセチルクロリドのような官能化されたハロゲン化アシルを、ジクロロメタン中の三塩化アルミニウムの存在下に、周囲温度またはそれ未満で用いるフリーデル−クラフツアシル化である。当業者に認識されるように、このような反応の生成物は、あるヘテロ環式化合物の合成の出発材料として用いてよい。
【０１２４】
あるいは、５−ブロモ−２−フルオロピリジンの脱プロトン化から誘導されるメタル化中間体は、適切な条件下でトランスメタル化して、有機銅酸塩試薬を作ることができる（Ｌｉｐｓｈｕｔｚ，Ｂ．，Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２参照）。ハロゲン化アシルを用いてこのようにして作製した銅酸塩の反応により、一般構造５のケトンを得て、これをヒドラジンまたはヒドラジンから誘導される溶解性の有機もしくは無機の塩（例えばヒドラジン塩酸塩）を用いる反応により閉環して、一般構造６の対応する３−置換５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを得ることができる。
【化９】
2008508304.tif 000011
【０１２５】
ハロゲン化物３、４または６の修飾は、以下の反応式２に概説するもののような一般的によく知られている方法により容易に達成できる。例えば、金属触媒クロスカップリング反応は、種々の既知の遷移金属化合物（例えばパラジウム、鉄またはニッケルから誘導される化合物）を用いて行ってよい。このような変換の例は、次の参考文献で見い出すことができる：Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｆ．，Ｓｔａｎｇ，Ｐ．Ｊ．−Ｍｅｔａｌ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，１９９８；Ｂｅｌｌｅｒ，Ｍ．，Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｍｅｔａｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，１９９８；Ｔｓｕｊｉ，Ｊ．，Ｐａｌｌａｄｉｕｍ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，第１および第２版，１９９５，２００４；Ｆｕｅｒｓｔｎｅｒ，Ａ．ら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００２）１２４，１３８５６；ならびにＢｏｌｍ，Ｃ．ら，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００４）１０４，６２１７。その他の有用な方法は、一般的によく知られている方法（例えば金属ハロゲン交換、および適切または必要であれば、その後の溶解性で反応性のホウ素、マグネシウム、亜鉛、錫、ケイ素もしくは銅の化合物を用いるトランスメタル化；このような方法の代表的な例は：Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ，Ｍ．，Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２を参照されたい）を用いる、臭素またはヨウ素置換基の金属またはメタロイド置換基（例えば有機ホウ素、有機リチウム、有機錫、有機ケイ素、有機亜鉛、有機銅または有機マグネシウム化合物）への変換を含む。このようにして得られる有機金属誘導体は、芳香族またはオレフィン性のハロゲン化物またはトリフレートとの遷移金属触媒カップリング反応においてそれ自体で有用であり得るか、あるいは十分に反応性があれば、例えばある有機ハロゲン化物、マイケル受容体、オキシラン、アジリジン、アルデヒド、ハロゲン化アシル、またはニトリルのような適切な求電子体と直接反応してよい。
【０１２６】
３位または５位のいずれかでの選択的官能化は、いずれかの位置で官能基を導入するために用いる変換の性質、特にいずれかの位置での官能化の順序に応じて、異なる手順を必要とし得る。つまり、導入される具体的な基の性質、このような変換を達成するために必要な方法、または用いる方法の本来の選択性に応じて、５位での官能化の前に３位での官能化を達成することが有利または必要であり得る場合があり、逆のアプローチが必要とされる場合もあり得る。例えば、電子が欠乏しており、かつ／または１つもしくは複数の置換基をホウ素−炭素結合に対してオルトに有する、例えばいくつかのボロン酸またはそれらのエステルのようないくつかの反応物（例えば１つもしくは複数の電子求引性置換基を有するか、またはあるヘテロ環系の誘導体であるもの）は、反応性が高いパラジウム触媒（例えばＶｉｌａｒ，Ｒ．，Ｃｈｒｉｓｔｍａｎ，Ｕ．−Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００５）１１７，３７０；Ｌｉｔｔｋｅ，Ａ．Ｆ．，Ｆｕ，Ｇ．−Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００２）１１４，４３５０で言及されるもの）の使用、ならびに高温および／または長い反応時間のような、より促進的な条件を必要とし得る。このような条件は、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの反応においてかなりの選択性を達成するために行うことは可能ではないと考えられる。よって、このような場合、５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンにおける臭素の逐次置換、３位でのヨウ素化、および上記の方法によるその後の３位での第二の置換基の導入により、選択性の問題を全て回避することが有利であろう。一般的に、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンに存在する２つのハロゲン原子間の高レベルの選択性には一般的に好ましくない条件下で、いずれかの位置でのハロゲン原子の置換が高反応性の触媒または試薬を用いる条件を必要とする場合、この逐次アプローチを用いることが有利であり得る。
【０１２７】
適切な保護基でのＬ1、Ｌ2、Ｒ1および／またはＲ2ならびにピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン骨格（例えば１位のプロトン）のうちの反応性基の保護が有利または必要であり得ることも認識される。例えば、いくつかのクロスカップリング反応において、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン骨格の１位の窒素を、（２−トリメチルシリルエトキシ）−メチルまたは（２−メトキシ−エトキシ）メチル基のその位置での導入により保護することが有利であることが見い出された。これらの保護基の導入および除去は、化学文献においてよく知られている方法により簡便に達成できる。上記のいずれの方法により得られる化合物は、遊離または保護された官能基を有してよく、これを一般的によく知られている方法によりさらに修飾することができる。
【０１２８】
本発明の下で請求される化合物の合成におけるクロスカップリング法の利用のより詳細な説明を、反応式２に示す：Ｘ1およびＸ2は、限定されないが、ハロゲン、ボロン酸もしくはエステル、トリフルオロホウ酸塩、有機マグネシウム、有機亜鉛または有機錫から選択される。個別の残基である−Ｌ1−Ｒ1または−Ｌ2−Ｒ2の導入について、上記で概説したような変換は、標準的なハロゲンクロスカップリング法により達成できる。
【化１０】
2008508304.tif 000012
【０１２９】
対応する臭化物またはヨウ化物（Ｘ1、Ｘ2＝Ｂｒ、Ｉ）の、ボロン酸およびボロネート、有機ボラン、有機スタンナン、有機亜鉛化合物、有機マグネシウム化合物、オレフィンまたは末端アルキン（購入するかまたは一般的によく知られている実験計画により得る）のような適切な試薬とのカップリングは、適切な遷移金属触媒（例えばパラジウム化合物）の存在下で行うことができる。カップリングは、適宜ホスフィン、ジホスフィン、アルデュエンゴ型のヘテロ環カルベンまたはアルシンのような配位子の存在下で行ってもよい。有機または無機の塩基（例えば第３級もしくは第２級アミン、アルカリ炭酸塩、重炭酸塩またはリン酸塩）および／またはその他のよく知られている添加物（例えば塩化リチウム、ハロゲン化銅または銀塩）を用いてこのような変換を補助または促進してよい。
【０１３０】
これらのクロスカップリング反応は、ＴＨＦ、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジグライム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン、水、またはそれらの混液のような適切な溶媒中で、２５℃〜２００℃の範囲の温度を用いて行い得る。温度は、適宜加熱、従来の加熱またはマイクロ波照射を用いて維持してよい。３−ヨード−５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの場合、ブロモ置換基よりもヨード置換基の選択的または優先的な置換は、適切な遷移金属触媒を用いてより低い温度またはより短い反応時間のような一般的により促進的でない条件下で可能である。遷移金属触媒変換によるジハロゲン化合物またはオリゴハロゲン化合物の選択的官能化は、化学文献に詳しく記載されている：例えばＪｉ，Ｊ．ら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ（２００３）５，４６１１；Ｂａｃｈ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ（２００２）６７，５７８９，Ａｄａｍｃｚｙｋ，Ｍ．ら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００３）５９，８１２９を参照されたい。
【０１３１】
この方法は、適宜アルコール、チオールまたはアミンの適切な保護基を含んでいてもよい非炭素ベースの求核試薬（例えばアルコール、チオール、第１級または第２級アミン）の組込みまで延長してよい。このような基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．ら，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９に見い出すことができる。保護の方法の例は、Ｌｅｙ，Ｓ．ら，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００３）１１５，５５５８；Ｗｏｌｆｅ，Ｊ．ら，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１，８０５；Ｈａｒｔｗｉｇ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１，８５２；Ｎａｖａｒｒｏ，Ｏ．ら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００４）６９，３１７３，Ｊｉ，Ｊ．ら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ（２００３）５，４６１１に記載されている。このような方法により得られる化合物は、よく知られている方法によりさらに修飾して、本発明の別の化合物を得ることができる。
【０１３２】
それぞれのハロゲン誘導体を、対応する有機金属誘導体（例えばボロン酸またはエステル、トリフルオロボレート塩、有機マグネシウム、有機亜鉛または有機錫化合物）にまず変換することにより、炭素または非炭素原子へのクロスカップリングを達成することが有利になり得る場合がある。このような化合物は、ハロゲン化物部分を適切な金属またはメタロイドで置換することにより得ることができる。存在するいずれの官能基（例えばピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの１位の環窒素）は、適切な保護基（「ＰＧ」）により保護する必要があると考えられる。Ｇｒｅｅｎｅら，１９９９を参照されたい。
【０１３３】
このような金属またはメタロイドの導入は、金属を用いるメタル化または金属−ハロゲン交換反応のような一般的によく知られている方法により達成できる。メタル化に有用な金属は、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属またはこのような金属の活性形を含む。金属ハロゲン交換反応における使用に適する試薬は、有機リチウムまたは有機マグネシウム化合物（例えばｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムまたは塩化もしくは臭化イソ−プロピルマグネシウム）を含む。有機金属中間体のその後のトランスメタル化反応は、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、塩化トリ−ｎ−ブチル錫、塩化トリメチル錫、トリメチルボレート、トリエチルボレート、トリ−イソ−プロピルボレート、亜鉛トリフレートまたは塩化亜鉛のような適切な溶解性で反応性の金属化合物を用いて必要により行ってよい。ボロン酸ピナコールエステルの導入は、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）および適切な塩基（例えば酢酸カリウムまたは酢酸ナトリウム）の存在下に、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡまたはＮ−メチルピロリドンのような溶媒中で、８０〜１６０℃の範囲の温度にて、ハロゲン誘導体をビス（ピナコラート）ジボロンと直接反応させることにより簡便に達成できる。従来の加熱またはマイクロ波照射を用いて、適切な温度を維持してよい（類似の変換について記載した文献については、Ｉｓｈｉｙａｍａ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）６０，７５０８を参照されたい）。
【０１３４】
この方法により得られたボロン酸ピナコールエステルの、ボロン酸、ボロネートまたはトリフルオロボレート塩のような他のボロン酸誘導体への変換の方法は、一般的によく知られている。当業者には明らかなように、このような有機金属誘導体は、ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンのハロゲン含有誘導体の場合に上述したものと同様のクロスカップリング反応において用いてよい。このようなカップリングは、上記の方法と同一もしくは明らかに類似のおよび／または上記の方法に関連する条件下で、芳香族、ヘテロ芳香族ハロゲン化物またはオレフィン性試薬のような適切なカップリングパートナーを用いて行うことができる。
【０１３５】
その他の方法は、上記のいずれの方法によりピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンのハロゲン含有誘導体から作製した有機金属誘導体の反応性を利用してよい。例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属を含有する誘導体（例えば有機リチウム、有機マグネシウムまたは有機亜鉛化合物）は、例えば活性化オレフィン（マイケル受容体）、アルデヒド、ニトリル、芳香族ニトロ化合物、カルボン酸誘導体、オキシラン、アジリジン、有機ジスルフィドまたは有機ハロゲン化物のような一連のその他の求電子性のカップリングパートナーへの直接のカップリングにおいて用いてよい。このような変換は、当技術分野において一般的によく知られている（芳香族ニトロ化合物を用いる反応について、例えばＳａｐｏｕｎｔｚｉｓ，Ｉ．ら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００２）１２４，９３９０を参照されたい）。
【０１３６】
３，５−二置換１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン誘導体を得るために用いる合成法は、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン誘導体について上述した方法に近接に関連し、主要な違いは、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン骨格自体の合成に関連する。用いられる重要な中間体は、３−置換５−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン誘導体および５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン自体である。
【化１１】
2008508304.tif 000013
【０１３７】
３，５−二置換１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン誘導体を、５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンから得るための上記で概説した一般的な合成方法は、３，５−二置換１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン誘導体を５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンおよび３−置換５−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン誘導体から得ることにも関係する。しかし、そうでなければ類似または同一の変換についての厳密な条件は、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン誘導体について非常によく異なり、用いられる骨格に応じた最適化が望まれると考えられる。
【０１３８】
５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンは、３−アミノ−２，６−ジブロモ−ピラジンのトリメチルシリルアセチレンとの位置選択的なソノガシラカップリング（Ａｄａｍｃｚｙｋ，Ｍ．ら．−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００３）５９，８１２９を参照されたい）、Ｎ−アシル化およびその後の−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（この反応の先の開示についてはＷＯ２００４／０３２８７４Ａ２を参照されたい）を用いる閉環により得ることができる。市販の３−アミノ−２，６−ジブロモ−ピラジンから出発して、５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミンを、テトラキス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（０）のようなパラジウム触媒および触媒量の銅（Ｉ）ヨウ化物のような銅助触媒の存在下で、ＤＭＦとトリエチルアミンのような塩基性第３級有機アミンの混合物中に、上昇した温度にて、トリメチルシリルアセチレンとの反応により得ることができる。２０〜６０℃でのピリジン中の塩化アセチルを用いるアセチル化により、Ｎ−（５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イル）−アセトアミドが得られ、還流でのＴＨＦ中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリドを用いるその後の閉環により、５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを得る。
【０１３９】
さらなる修飾のための３位での適切な基の導入は、求電子的芳香族置換（例えば臭素化またはヨウ素化）のような当技術分野で一般的によく知られている方法により達成できる。つまり、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンは、５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンから、このような変換を促進する条件下で、Ｎ−ヨードスクシンイミド、一塩化ヨウ素またはヨウ素のような適切な試薬での処理により得ることができる。
【０１４０】
求電子的芳香族置換による官能化のその他の例は、限定しない例として、例えば塩化ブロモアセチル、塩化アクリロイルまたは塩化トリクロロアセチルのような官能化したハロゲン化アシルを、ジクロロメタン中の三塩化アルミニウムの存在下で、周囲温度またはそれ未満にて用いるフリーデル−クラフツアシル化である。当業者に認識されるように、このような反応の生成物は、本発明の下で請求される化合物であるか、またはこのような化合物、最も顕著にはあるヘテロ環式化合物の合成の出発材料として用いてよい。
【０１４１】
５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンにおけるハロゲン化物Ｄ（Ｘ2＝Ｂｒ、Ｉ）のさらなる修飾、および両方のハロゲン置換基の選択的逐次置換は、一般的によく知られている方法により容易に達成でき、例えば種々の既知の遷移金属化合物（例えばパラジウム、鉄またはニッケルから誘導される化合物）を用いる逐次金属触媒クロスカップリング反応を行ってよい。このような変換の例は、次の参考文献：Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｆ．，Ｓｔａｎｇ，Ｐ．Ｊ．−Ｍｅｔａｌ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，１９９８；Ｂｅｌｌｅｒ，Ｍ．，Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｍｅｔａｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，１９９８；Ｔｓｕｊｉ，Ｊ．，Ｐａｌｌａｄｉｕｍ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，第１および第２版，１９９５，２００４；Ｆｕｅｒｓｔｎｅｒ，Ａ．ら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００２）１２４，１３８５６；およびＢｏｌｍ，Ｃ．，ら，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００４）１０４，６２１７に見い出すことができる。化学文献において既知でありかつ当業者が精通している一般的な方法は、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン誘導体を用いる類似または同一の変換について上述した方法と本質的に同じである。
【０１４２】
１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンについて説明したように、当業者は、３位または５位のいずれかでの選択的官能化が、いずれかの位置での官能基の導入のために用いる変換の性質、特にいずれかの位置での官能化の順序に依存して異なる方法を必要とし得ることを認識する。つまり、導入される具体的な基の性質、このような変換を達成するために必要な方法、または用いる方法の固有の選択性に応じて、５位での官能化の前に３位での官能化を達成することが有利または必要な場合があり、逆のアプローチが必要とされる場合もあり得る。
【０１４３】
３−ヨード−５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの場合、ブロモ置換基よりもヨード置換基の選択的または優先的な置換は、適切な遷移金属触媒を用いてより低い温度またはより短い反応時間のような一般的により促進的でない条件下で可能である。遷移金属触媒変換によるジハロゲン化合物またはオリゴハロゲン化号物の選択的官能化は、化学文献に詳しく記載されている：例えばＪｉ，Ｊ．ら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ（２００３）５，４６１１；Ｂａｃｈ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ（２００２）６７，５７８９，Ａｄａｍｃｚｙｋ，Ｍ．ら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００３）５９，８１２９を参照されたい。
【０１４４】
ハロゲン化物Ｄ（Ｘ2＝Ｂｒ、Ｉ）の場合、その他の有用な方法は、一般的によく知られている方法（例えば金属ハロゲン交換、および適切であるかもしくは必要である場合に、その後のホウ素、マグネシウム、亜鉛、錫、ケイ素または銅の溶解性で反応性の化合物を用いるトランスメタル化；そのような方法の代表的な例は：Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ，Ｍ．，Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２を参照されたい）を用いる臭素またはヨウ素置換基の金属またはメタロイド置換基（例えば有機ボロン、有機リチウム、有機錫、有機ケイ素、有機亜鉛、有機銅または有機マグネシウム化合物）への変換を含んでよい。このようにして得られる有機金属誘導体は、芳香族またはオレフィン性のハロゲン化物またはトリフレートとの遷移金属触媒カップリング反応においてそれ自体で有用であり得るか、あるいは十分に反応性があれば、例えばある有機ハロゲン化物、マイケル受容体、オキシラン、アジリジン、アルデヒド、ハロゲン化アシル、またはニトリルのような適切な求電子体と直接反応してよい。ここでも、化学文献において知られる一般的な方法は、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン誘導体を用いる類似または同一の変換について上述した方法と本質的に同じである。
【０１４５】
特定のこのような変換において、例えば必要により窒素または酸素に結合した水素原子、および特に１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン骨格の１位の水素原子のような酸性プロトンを一時的に置換するために、化学文献においてよく知られている方法（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９を参照されたい）により１つまたは複数の適切な保護基を導入することが有利または必要であり得る。
【０１４６】
上記のクロスカップリング法は、アルコール、チオールまたはアミンの適切な保護基を所望により有してよい非炭素ベースの求核試薬（例えばアルコール、チオール、第１級または第２級アミン）の組み込みまで延長してよい。このような基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．ら，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９に見い出すことができる。保護の方法の例は、Ｌｅｙ，Ｓ．ら，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００３）１１５，５５５８；Ｗｏｌｆｅ，Ｊ．ら，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１，８０５；Ｈａｒｔｗｉｇ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１，８５２；Ｎａｖａｒｒｏ，Ｏ．ら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００４）６９，３１７３，Ｊｉ，Ｊ．ら，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ（２００３）５，４６１１に記載されている。このような方法により得られる化合物は、反応式の方法によりさらに修飾して、本発明の別の化合物を得ることができる。１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの５−ヨードまたは５−ブロモ置換基のアミン、アルコールまたはチオールでの直接置換は、それぞれそのままのアミン、アルコールもしくはチオールのいずれかの中でまたは例えばＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＭＳＯもしくはアセトニトリルのような適切な非プロトン性溶媒中で、例えば酢酸のような弱酸または例えば水素化ナトリウムのような非求核性強塩基の存在下で、周囲温度または上昇した温度にて順調に達成し得る場合がある。
【化１２】
2008508304.tif 000014
【０１４７】
３，５−二置換１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン誘導体の合成の別の方法は、メチル２−アミノ−３−ピラジンカルボキシレートから出発して開発され、５位へヨウ素原子を導入してメチル２−アミノ−５−ヨード−３−ピラジンカルボキシレートを得ることは、Ｎ−ヨードスクシンイミドとのエタノール中での還流による反応のような種々の既知の方法により達成できる。このような手段により得られるハロゲン化エステルは、次いで、標準的な方法により加水分解してよい。例えば、周囲温度でのＴＨＦ−水の混液中の水酸化リチウムとの処理により、対応する酸が得られる。
【０１４８】
ケトン中間体Ｂの合成は、対応するワインレブアミドＡ（３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド）またはその塩酸塩を、適切な有機金属種と、例えば有機マグネシウムまたは有機リチウム化合物を用いて処理することにより達成できる。（例えばＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド（ワインレブアミド）をケトン合成において用いる、Ｓ．Ｎａｍ，Ｓ．Ｍ．Ｗｅｉｎｒｅｂ−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８１，２２，３８１５を参照されたい。）３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド（Ａ）は、酸の予めの活性化または現場での直接縮合もしくは直接縮合を経由することのいずれかによる、アミド形成の標準的な方法を用いる、親の酸のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンとの縮合により得ることができる。両方の変換のための方法および試薬は、限定されないが、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵまたはＨＡＴＵのような適切なカップリング試薬を用いる直接法の場合のように化学文献に記載され、当業者によく知られている。
【０１４９】
Ｂにケトン残基Ｌ1Ｒ1を導入するために必要な有機金属試薬は、市販されているかまたは限定されないが有機塩化物、臭化物またはヨウ化物のマグネシウムとのグリニャール反応（Ｊ．Ｍａｒｃｈ−Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９２を参照されたい）、限定されないがｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムまたは塩化もしくは臭化イソ−プロピルマグネシウムのような適切な有機リチウムあるいは有機マグネシウム化合物を用いる有機臭化物またはヨウ化物の金属ハロゲン交換反応（例えばＪ．Ｃｌａｙｄｅｎ−Ｏｒｇａｎｏｌｉｔｈｉｕｍｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ，２００２；Ａ．Ｂｏｕｄｉｅｒ，Ｌ．Ｏ．Ｂｒｏｍｍ，Ｍ．Ｌｏｔｚ，Ｐ．Ｋｎｏｃｈｅｌ−Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．編（２０００）３９，４４１４．）、あるいは例えばピリミジン、ピラジン、２−クロロ−もしくは２−フルオロピリジンのような十分に酸性の化合物の、例えばリチウムＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミドまたはリチウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジドのような適切な塩基を用いる脱プロトン化（Ｊ．Ｃｌａｙｄｅｎ−Ｏｒｇａｎｏｌｉｔｈｉｕｍｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ，２００２；Ａ．Ｔｕｒｃｋ，Ｎ．Ｐｌｅ，Ｆ．Ｍｏｎｇｉｎ，Ｇ．Ｑｕｅｇｕｉｎｅｒ−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００１）５７，４４８９；Ｆ．Ｍｏｎｇｉｎ，Ｇ．Ｑｕｅｇｕｉｎｅｒ−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００１）５７，４０５９を参照されたい）のように文献に記載される種々の方法により合成できる。特定のこのような変換において、化学文献においてよく知られている方法（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９を参照されたい）により、酸性プロトン（例えば窒素または酸素に結合した水素原子）を必要により一時的に置換するために、１つまたは複数の適切な保護基を導入することが有利または必要であると考えられる。
【０１５０】
ケトン中間体Ｂのメトキシビニル誘導体Ｃへの変換は、いくつかの既知の方法により達成できるが、市販のメトキシメチルトリフェニルホスホニウムクロリドと、適切な塩基、限定されないが例えばビス（トリメチルシリル）アミンのリチウム、ナトリウムまたはカリウム塩のような限定されないが非求核性アミドのような有機金属強塩基とから得られるイリドを用いるウィッティヒ反応により最も簡便に行われる（Ｂ．Ｅ．Ｍａｒｙａｎｏｆｆ，Ａ．Ｂ．Ｒｅｉｔｚ−Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（１９８９）８９，８６３を参照されたい）。
【０１５１】
ＥもしくはＺ形またはこれらの両方の形の混合物のいずれかで用いることができる得られたオレフィンＣのその後の閉環は、通常の酸触媒条件下で達成でき、３−置換１Ｈ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを得る。このような方法は、０〜１６０℃の範囲の温度にて適切な溶媒（例えばＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジメトキシエタン、ジグライム、ジクロロメタン、ジクロロエタンもしくはクロロホルム、水、メタノールもしくはエタノールまたはこれらの混液）中の硫酸、過塩素酸、塩酸、トリフルオロメタンスルホン酸もしくはトリフルオロ酢酸のような無機または有機の強酸を用いてよい。同様の閉環は、Ｓａｋａｍｏｔｏら，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ（１９９２），３４（１２），２３７９〜８４により記載されている。ここで、著者らは、２−ニトロ−３−（２−エトキシビニル）ピリジンの、親のピロロ［２，３−ｂ］ピリジンへの変換を記載している。ビニル基の形成は、３−ブロモ類縁体のトリブチル−２−エトキシビニルスタンナンとのスティルカップリングにより達成されることが報告された。
【０１５２】
３−置換１Ｈ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの、本発明の下で請求する化合物の合成における使用は、上記の方法に基づいて、当業者に明らかである。当業者は、以下の実施例の項を含む本明細書に記載された合成方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物を得るために用いるかおよび／または修飾できることを容易に理解するだろう。
【０１５３】
Ａ．保護基
用語「保護基」は、化合物のいくつかまたは全ての反応性部分をブロックし、保護基が除去されるまでこのような部分が化学反応に参加することを妨げる化学的部分のことをいい、例えばこれらの部分はＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９９）に列挙され記載されている。異なる保護基を用いる場合、各（異なる）保護基が異なる手段により除去されることが有利であると考えられる。全く異なる反応条件下で切断される保護基は、このような保護基の差動式の除去を可能にする。例えば、保護基は、酸、塩基および加水分解により除去できる。トリチル、ジメトキシトリチル、アセタールおよびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルのような基は、酸不安定性であり、水素化分解により除去可能なＣｂｚ基および塩基不安定性であるＦｍｏｃ基で保護されたアミノ基の存在下でカルボキシおよびヒドロキシの反応性部分の保護に用いてよい。カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメートのような酸不安定性基または酸にも塩基にも安定性であるが加水分解により除去可能なカルバメートでブロックされたアミンの存在下で、限定されないがメチル、エチルおよびアセチルのような塩基不安定性基でブロックしてよい。
【０１５４】
カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、ベンジル基のような加水分解により除去可能な保護基でブロックしてもよく、一方、酸と水素結合可能なアミン基は、Ｆｍｏｃのような塩基不安定性基でブロックしてよい。カルボン酸反応性部分は、例えば２，４−ジメトキシベンジルのような酸化により除去可能な保護基でブロックしてよく、一方、同時に存在するアミノ基はフッ素不安定性のシリルカルバメートでブロックしてよい。
【０１５５】
アリルブロック基は、酸保護基および塩基保護基の存在下で有用である。なぜなら、前者は安定でありかつ金属またはｐｉ酸触媒によりその後除去できるからである。例えば、アリルでブロックされたカルボン酸は、酸不安定性のｔ−ブチルカルバメートまたは塩基不安定性のアセテートアミン保護基の存在下で、パラジウム（０）触媒反応で脱保護できる。保護基のさらに別の形は、化合物または中間体が結合していてもよい樹脂である。樹脂に残基が結合している限り、官能基はブロックされ、反応できない。樹脂から一旦離れると、官能基は反応のために利用できる。
【０１５６】
典型的なブロック／保護基は、限定されないが、以下の部分を含む。
【化１３】
2008508304.tif 000015
【０１５７】
ＩＩ．キナーゼの阻害方法
別の観点において、本発明は、本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子を用いてプロテインキナーゼ活性を調節する方法を提供する。本明細書で用いる場合、用語「キナーゼ活性を調節する」とは、プロテインキナーゼの活性が、本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子と接触した場合、縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子の不在時の活性に比べて増加または減少することを意味する。よって、本発明は、プロテインキナーゼを本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（例えば式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれか１つの化合物）と接触させることによる、プロテインキナーゼ活性を調節する方法を提供する。
【０１５８】
例示的な具体的態様において、縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子は、キナーゼ活性を阻害する。本明細書で用いる場合、キナーゼ活性に関しての用語「阻害する」とは、縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子の不在時の活性に比べて、縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子と接触した場合、キナーゼ活性が減少することを意味する。よって、本発明は、プロテインキナーゼを本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子と接触させることによる、プロテインキナーゼ活性を阻害する方法をさらに提供する。
【０１５９】
ある具体的態様において、プロテインキナーゼは、プロテインチロシンキナーゼである。本明細書で用いる場合、プロテインチロシンキナーゼは、リン酸供与体（例えばＡＴＰのようなヌクレオチドリン酸供与体）を用いてタンパク質中のチロシン残基のリン酸化を触媒する酵素のことをいう。プロテインチロシンキナーゼは、例えばアベルソンチロシンキナーゼ（「Ａｂｌ」）（例えばｃ−Ａｂｌおよびｖ−Ａｂｌ）、Ｒｏｎ受容体チロシンキナーゼ（「ＲＯＮ」）、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ（「ＭＥＴ」）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ（「ＦＬＴ」）（例えばＦＬＴ３）、ｓｒｃファミリーチロシンキナーゼ（例えばｌｙｎ、ＣＳＫ）、ならびにｐ２１−活性化キナーゼ−４（「ＰＡＫ」）、ＦＬＴ３、オーロラキナーゼ、Ｂリンパ球チロシンキナーゼ（「Ｂｌｋ」）、サイクリン依存性キナーゼ（「ＣＤＫ」）（例えばＣＤＫ１およびＣＤＫ５）、ｓｒｃファミリー関連プロテインチロシンキナーゼ（例えばＦｙｎキナーゼ）、グリコーゲンシンターゼキナーゼ（「ＧＳＫ」）（例えばＧＳＫ３αおよびＧＳＫ３β）、リンパ球プロテインチロシンキナーゼ（「Ｌｃｋ」）、リボソームＳ６キナーゼ（例えばＲｓｋ１、Ｒｓｋ２およびＲｓｋ３）、精子チロシンキナーゼ（例えばＹｅｓ）、ならびにチロシンキナーゼ活性を示すサブタイプおよび同族体を含む。ある具体的態様において、プロテインチロシンキナーゼは、Ａｂｌ、ＲＯＮ、ＭＥＴ、ＰＡＫまたはＦＬＴ３である。別の具体的態様において、プロテインチロシンキナーゼは、ＦＬＴ３またはＡｂｌファミリーの構成要素である。
【０１６０】
いくつかの具体的態様において、キナーゼは、アベルソンチロシンキナーゼ、Ｒｏｎ受容体チロシンキナーゼ、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３、オーロラキナーゼ、ｐ２１−活性化キナーゼ−４、および３−ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１から選択される。
【０１６１】
別の具体的態様において、キナーゼは、変異のＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ、ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼのような変異キナーゼである。有用な変異Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼは、以下の臨床的に単離された変異形の少なくとも１つを有するものを含む：Ｍ２４４Ｖ、Ｌ２４８Ｖ、Ｇ２５０Ｅ、Ｇ２５０Ａ、Ｑ２５２Ｈ、Ｑ２５２Ｒ、Ｙ２５３Ｆ、Ｙ２５３Ｈ、Ｅ２５５Ｋ、Ｅ２５５Ｖ、Ｄ２７６Ｇ、Ｆ３１１Ｌ、Ｔ３１５Ｉ、Ｔ３１５Ｎ、Ｔ３１５Ａ、Ｆ３１７Ｖ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３４３Ｔ、Ｍ３５１Ｔ、Ｅ３５５Ｇ、Ｆ３５９Ａ、Ｆ３５９Ｖ、Ｖ３７９Ｉ、Ｆ３８２Ｌ、Ｌ３８７Ｍ、Ｈ３９６Ｐ、Ｈ３９６Ｒ、Ｓ４１７Ｙ、Ｅ４５９ＫおよびＦ４８６Ｓ。ある具体的態様において、変異Ａｂｌキナーゼは、Ｔ３１５Ｉ変異を有する。上記のアミノ酸変異の位置を表す番号付けの規則は、ＡＢＬエキソンＩａによるよく知られている野生型ＡＢＬの番号付けである。Ｄｅｉｎｉｎｇｅｒ，Ｍ．ら，Ｂｌｏｏｄ  １０５（７），２６４０（２００５）を参照されたい。番号付けの規則は、図１に再現する。いくつかの具体的態様において、変異Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼは、上記で列挙した変異の少なくとも１つを含み、図１の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの具体的態様において、変異Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼは、上記で列挙した変異の少なくとも１つを含み、上述したような図１との配列同一性を有し、少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０または１１００のアミノ酸を含む。
【０１６２】
いくつかの具体的態様において、キナーゼは、既知のキナーゼと相同である（本明細書において「相同キナーゼ」ともいう）。相同キナーゼの生物活性を阻害するのに有用な化合物または組成物は、例えば結合アッセイにおいて初期にスクリーニングしてよい。相同酵素は、全長既知キナーゼのアミノ酸配列に少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一である同じ長さのアミノ酸配列を含むか、または既知のキナーゼ活性ドメインに７０％、８０％または９０％の相同性を有する。相同性は、例えば、限定されないがＡｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃ．ＡｃｉｄｓＲｅｃ．２５：３３８９〜３４０２（１９９７）に記載されるもののようなＰＳＩ  ＢＬＡＳＴサーチを用いて決定してよい。ある具体的態様において、配列の少なくとも５０％、または少なくとも７０％がこの分析において整列される。アラインメントを行うその他のツールは、アラインメントのＰｏｓｔＳｃｒｉｐｔバージョンを作製するのに用いられ得る、例えばＤｂＣｌｕｓｔａｌおよびＥＳＰｒｉｐｔを含む。Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２８：２９１９〜２６，２０００；Ｇｏｕｅｔら，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１５：３０５〜０８（１９９９）を参照されたい。同族体は、例えば少なくとも１００アミノ酸にわたってＦＬＴ３、Ａｂｌもしくは他の既知のキナーゼ、またはＦＬＴ３、Ａｂｌもしくは他の既知のキナーゼのいずれの機能的ドメインと１×１０-6のＢＬＡＳＴ  Ｅの値を有する（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２５：３３８９〜４０２（１９９７））。
【０１６３】
相同性は、酵素の活性部位結合ポケットを既知のキナーゼの活性部位結合ポケットと比較することにより決定してもよい。例えば、相同酵素において、分子または同族体のアミノ酸の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が、約１．５Å、約１．２５Å、約１Å、約０．７５Å、約０．５Åおよび／または約０．２５Åまでのアルファ炭素原子の根平均二乗変位を有するキナーゼドメインにサイズにおいて匹敵するドメインのアミノ酸の構造的同調性を有する。
【０１６４】
本発明の化合物および組成物は、キナーゼ活性の阻害およびＡＴＰに結合するその他の酵素の阻害に有用である。これらは、よって、このようなＡＴＰ結合酵素活性を阻害することにより緩和できる疾患および障害の治療のために有用である。このようなＡＴＰ結合酵素を決定する方法は、当業者に知られるもの、相同酵素の選択に関して本明細書において説明するもの、およびタンパク質のファミリーもしくはドメインのサイン、配列パターン、モチーフまたはプロフィールを有する酵素を同定し得るデータベースＰＲＯＳＩＴＥを用いることによるものを含む。
【０１６５】
本発明の化合物およびその誘導体は、キナーゼ結合剤として用いてもよい。結合剤としては、このような化合物および誘導体は、アフィニティークロマトグラフィーでの使用のためにテザー（tethered）基質として安定な樹脂に結合してよい。本発明の化合物およびその誘導体は、それらを酵素もしくはポリペプチドの特徴づけ、構造および／または機能の探索において用いるために、修飾（例えば放射性標識またはアフィニティー標識など）してもよい。
【０１６６】
例示的な具体的態様において、本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子は、キナーゼ阻害剤である。いくつかの具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、１マイクロモル未満のＩＣ50または阻害定数（Ｋi）を有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、５００マイクロモル未満のＩＣ50または阻害定数（Ｋi）を有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、１０マイクロモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、１マイクロモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、５００ナノモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、１０ナノモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、１ナノモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。
【０１６７】
ＩＩＩ．治療方法
別の態様において、本発明は、対象（例えばヒトのような哺乳動物）においてキナーゼ活性により媒介される疾患（キナーゼ媒介疾患または障害）を治療する方法を提供する。「キナーゼ媒介」または「キナーゼ関連」疾患は、疾患または症状がキナーゼ活性の阻害により緩和できる疾患を意味する（例えば、キナーゼが疾患プロセスのシグナル伝達、仲介、調節または調整に携わる）。「疾患」は、疾患または疾患の症状を意味する。上記の方法は、本発明の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子（例えば式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）のいずれか１つの化合物）の有効量を対象に投与することを含む。
【０１６８】
キナーゼ関連疾患の例は、癌（例えば白血病、腫瘍および転移）、アレルギー、喘息、肥満、炎症（例えば炎症性気道疾患のような炎症性疾患）、血液学的疾患、閉塞性気道疾患、喘息、自己免疫疾患、代謝疾患、感染（例えば細菌、ウイルス、酵母、真菌）、ＣＮＳ疾患、脳腫瘍、神経変性疾患、心血管疾患、ならびに血管新生、新血管新生および脈管形成を伴う疾患を含む。例示的な具体的態様において、化合物は、白血病を含む癌、および脊髄増殖性疾患のような異常細胞増殖を伴うその他の疾患または障害の治療のために有用である。
【０１６９】
本発明の化合物により治療される癌のより具体的な例は、乳癌、肺癌、黒色腫、結腸直腸癌、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、扁平細胞癌、神経膠芽細胞腫、膵臓癌、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、および白血病（例えば骨髄性、慢性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ芽球性、ホジキンならびにその他の白血病および血液の癌）を含む。
【０１７０】
本発明の化合物または組成物による治療が治療もしくは予防のために有用である疾患または障害のその他の特定の例は、限定されないが、移植片拒絶（例えば腎臓、肝臓、心臓、肺、島細胞、膵臓、骨髄、角膜、小腸、皮膚の同種移植片または異種移植片およびその他の移植）、移植片対宿主疾患、骨関節炎、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、糖尿病、糖尿病性網膜症、炎症性腸疾患（例えばクローン病、潰瘍性大腸炎およびその他の腸疾患）、腎臓疾患、悪液質、敗血症性ショック、狼瘡、重症筋無力症、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏症、アルツハイマー病、パーキンソン病、化学療法中の幹細胞の保護、自家もしくは同種間の骨髄移植のための体外での選択または体外での除去、眼の疾患、網膜症（例えば黄斑変性、糖尿病性網膜症およびその他の網膜症）、角膜の疾患、緑内障、感染（例えば細菌、ウイルスまたは真菌）、限定されないが再狭窄を含む心臓疾患を含む。
【０１７１】
ＩＶ．アッセイ
本発明の化合物は、プロテインキナーゼを調節し、プロテインキナーゼに結合し、かつ／または細胞成長もしくは増殖を妨げるそれらの能力を決定するために簡単にアッセイできる。有用なアッセイのいくつかの例を、以下に示す。
【０１７２】
Ａ．キナーゼ阻害および結合アッセイ
種々のキナーゼの阻害は、本明細書に示す種々の方法およびＵｐｓｔａｔｅ  ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２００３年６月の出版物で説明されるもののような当業者に知られる方法により測定される。
【０１７３】
例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイが行われる場合、キナーゼは、典型的には、適切な濃度に希釈されてキナーゼ溶液を形成する。キナーゼの基質およびＡＴＰのようなリン酸供与体は、キナーゼ溶液に加えられる。キナーゼは、リン酸をキナーゼ基質に移動してリン酸化基質を形成することを可能にする。リン酸化基質の形成は、放射活性（例えば［γ−32Ｐ−ＡＴＰ］）または検出可能な二次抗体の使用（例えばＥＬＩＳＡ）のようないずれの適切な手段により直接検出してよい。あるいは、リン酸化基質の形成は、ＡＴＰ濃度（例えばＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ））の検出のようないずれの適切な方法を用いて検出してよい。キナーゼ阻害剤は、試験化合物の存否におけるリン酸化基質の形成の検出により同定される（以下の実施例の項を参照されたい）。
【０１７４】
化合物がキナーゼを細胞内で阻害する能力は、当技術分野においてよく知られている方法を用いてアッセイしてもよい。例えば、キナーゼを含有する細胞を、キナーゼを活性化する活性化剤（例えば成長因子）と接触させてよい。試験化合物の存否において形成される細胞内のリン酸化基質の量は、細胞を溶解し、いずれの適切な方法（例えばＥＬＩＳＡ）によりリン酸化基質の存在を検出することにより決定してよい。試験化合物の存在下で産生されたリン酸化基質の量が、試験化合物の非存在下で産生された量に比べて減少する場合は、キナーゼ阻害が示される。より詳細な細胞性キナーゼアッセイは、以下の実施例の項において説明する。
【０１７５】
化合物のキナーゼへの結合を測定するために、当業者に知られるいずれの方法を用いてよい。例えば、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）により製造される試験キットであるＥＤ−Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ  ＮＳＩＰ（商標）Ｅｎｚｙｍｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（米国特許第５６４３７３４号を参照されたい）を用いてよい。キナーゼ活性は、２００３年７月８日に発行された米国特許第６５８９９５０号のようにしてアッセイしてもよい。
【０１７６】
適切なキナーゼ阻害剤は、本発明の化合物から、例えばその全体が全ての目的のために参照として本明細書に組み込まれるＡｎｔｏｎｙｓａｍｙら，ＰＣＴ公報ＷＯ０３０８７８１６Ａ１に開示されるようにして、タンパク質結晶学的スクリーニングにより選択してよい。
【０１７７】
本発明の化合物は、種々のキナーゼに結合し、かつ／または阻害するそれらの能力をアッセイしかつ視覚化するために、計算的にスクリーニングしてよい。構造は、本発明の複数の化合物を用いて計算的にスクリーニングして、種々の部位でキナーゼに結合するそれらの能力を決定してよい。このような化合物は、例えば可能性のある治療上の重要物の阻害剤を同定するための医薬品化学の成果における標的または導入として用いることができる（Ｔｒａｖｉｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６２：１３７４，１９９３）。このような化合物の三次元構造は、キナーゼまたはその活性部位もしくは結合ポケットの三次元表示に重ね合わせて、化合物が該表示に、つまりタンパク質に空間的に適合するかを評価してよい。このスクリーニングにおいて、このような物体または化合物が結合ポケットに適合する質は、形状相補性または推定相互作用エネルギーのいずれかにより判断してよい（Ｍｅｎｇら，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．１３：５０５〜２４，１９９２）。
【０１７８】
キナーゼに結合し、かつ／または調節する（例えばキナーゼを阻害または活性化する）本発明の化合物の本発明によるスクリーニングは、一般的に２つの因子を考慮することを含む。まず、化合物は、物理的にかつ構造的に、共有的または非共有的にキナーゼと結合できなければならない。例えば、共有的相互作用は、タンパク質の不可逆的または自己不活化阻害剤を設計するために重要であり得る。キナーゼの化合物との結合に重要な非共有的分子相互作用は、水素結合、イオン相互作用、ファンデルワールス、および疎水性相互作用を含む。第二に、化合物は、結合ポケットとの関係において化合物のキナーゼとの結合を可能にする立体配置および配向を想定できなければならない。化合物のある部分はキナーゼとのこの結合に直接参加しないが、これらの部分は、分子の全体の立体配置に影響することができ、効力に対して重要な影響を有するとみられる。立体配置の要件は、結合ポケットの全てまたは一部分に関係する化学基または化合物の全体の三次元構造および配向、あるいはキナーゼと直接相互作用するいくつかの化学基を含む化合物の官能基同士の間隔を含む。
【０１７９】
例えばＤＯＣＫまたはＧＯＬＤのような本明細書に記載されるドッキングプログラムは、活性部位および／または結合ポケットに結合する化合物を同定するのに用いられる。化合物は、タンパク質構造の１つより多い結合ポケット、または同じタンパク質について１組より多い座標に対して、タンパク質の異なる分子動力学的立体配置を考慮してスクリーニングしてよい。次いで、コンセンサススコアリングを用いて、タンパク質に最も適合する化合物を同定してよい（Ｃｈａｒｉｆｓｏｎ，Ｐ．Ｓ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：５１００〜９（１９９９））。１つより多いタンパク質分子構造から得られるデータは、Ｋｌｉｎｇｌｅｒら、２００２年５月３日に出願された“Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”の表題の米国特許出願に記載される方法により評点してもよい。最も適合する化合物は、化学ライブラリの製造者から得られるか、または合成されて、結合アッセイおよびバイオアッセイにおいて用いられる。
【０１８０】
コンピュータモデル法は、化合物のキナーゼへの可能性のある調節または結合の影響を評価するのに用いてよい。コンピュータモデルが強い相互作用を示す場合、次いで分子を合成して、キナーゼに結合しその活性に（阻害または活性化により）影響するその能力を試験してよい。
【０１８１】
キナーゼの調節化合物またはその他の結合化合物は、キナーゼの個別の結合ポケットまたはその他の領域と結合するそれらの能力について化学基またはフラグメントがスクリーニングされ、選択される一連の工程により、計算的に評価してよい。このプロセスは、例えば、キナーゼの座標に基いて、コンピュータスクリーン上での活性部位の視覚的探索により開始してよい。選択されたフラグメントまたは化学基は、次いで、キナーゼの個別の結合ポケット内で種々の配向で配置するかまたはドッキングしてよい（Ｂｌａｎｅｙ，Ｊ．Ｍ．およびＤｉｘｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ，１：３０１，１９９３）。手作業のドッキングは、Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）およびＳＹＢＹＬ（Ｔｒｉｐｏｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，１９９２）のようなソフトウェアを用い、続いてＣＨＡＲＭＭ（Ｂｒｏｏｋｓら，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．４：１８７〜２１７，１９８３）、ＡＭＢＥＲ（Ｗｅｉｎｅｒ，ら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：７６５〜８４，１９８４）およびＣ2ＭＭＦＦ（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｆｏｒｃｅ  Ｆｉｅｌｄ；Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のようなエネルギー最小化および／または標準的分子力学力場を用いる分子動力学により達成してよい。より自動化されたドッキングは、ＤＯＣＫ（Ｋｕｎｔｚら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１６１：２６９〜８８，１９８２；ＤＯＣＫは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡから入手可能である）；ＡＵＴＯＤＯＣＫ（ＧｏｏｄｓｅｌｌおよびＯｌｓｅｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１９５〜２０２，１９９０；ＡＵＴＯＤＯＣＫはＳｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡから入手可能である）、ＧＯＬＤ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  Ｄａｔａ  Ｃｅｎｔｒｅ（ＣＣＤＣ）；Ｊｏｎｅｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４５：４３〜５３，１９９５）、およびＦＬＥＸＸ（Ｔｒｉｐｏｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；Ｒａｒｅｙ，Ｍ．，ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６１：４７０〜８９，１９９６）のようなプログラムを用いることにより達成してよい。その他の適切なプログラムは例えばＨａｌｐｅｒｉｎらに記載される。
【０１８２】
上記の方法による化合物の選択の間に、該化合物がキナーゼに結合する効率を試験し、計算的評価により最適化してよい。例えば、キナーゼ阻害剤として機能するように設計されたかまたは選択された化合物は、本来の基質が結合する場合、活性部位残基により占められる嵩と重複しない嵩を占めてよい。しかし、当業者は、主鎖および側鎖の再編成を可能にするある程度の柔軟性が存在することを認識するであろう。さらに、当業者は、例えば適合が誘導されるような、結合の際にタンパク質再編成を利用し得る化合物を設計してよい。効率的なキナーゼ阻害剤は、その結合状態と遊離状態の間で比較的小さいエネルギーの差を示すであろう（すなわち、結合の変形エネルギーが小さく、かつ／または結合の際に立体配置的ゆがみが低いはずである）。つまり、最も有効なキナーゼ阻害剤は、例えば、１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下、７ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下、５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下、または２ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の結合の変形エネルギーを有するように設計するべきである。キナーゼ阻害剤は、全体の結合エネルギーが同様の１つより多い立体配置でタンパク質と相互作用してよい。これらの場合、結合の変形エネルギーは、遊離の化合物のエネルギーと阻害剤が酵素に結合する場合、観察される立体配置の平均エネルギーとの間の差である。
【０１８３】
化合物の変形エネルギーおよび静電的相互作用を評価するための具体的なコンピュータソフトウェアが、当技術分野において利用可能である。このような使用のために設計されたプログラムの例は：Ｇａｕｓｓｉａｎ  ９４、改訂版Ｃ（Ｆｒｉｓｃｈ，Ｇａｕｓｓｉａｎ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ．（Ｃ）１９９５）；ＡＭＢＥＲ、バージョン７．（Ｋｏｌｌｍａｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ａｔ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，（Ｃ）２００２）；ＱＵＡＮＴＡ／ＣＨＡＲＭＭ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，（Ｃ）１９９５）；Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ／Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，（Ｃ）１９９５）；ＤｅｌＰｈｉ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，（Ｃ）１９９５）；およびＡＭＳＯＬ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｅｘｃｈａｎｇｅ，Ｉｎｄｉａｎａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を含む。これらのプログラムは、例えば、ＬＩＮＵＸ、ＳＧＩまたはＳｕｎワークステーションのような当技術分野においてよく知られているコンピュータワークステーションを用いて実行してよい。その他のハードウェアシステムおよびソフトウェアパッケージは、当業者に知られている。
【０１８４】
当業者は、当技術分野において知られる方法および本明細書に記載される方法を用いてキナーゼタンパク質を発現してよい。本明細書に記載される天然および変異のキナーゼポリペプチドは、当技術分野においてよく知られている方法を用いて全体または部分的に化学合成してよい（例えばＣｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，ＮＹ，１９８３を参照されたい）。
【０１８５】
遺伝子発現系は、天然および変異のポリペプチドの合成のために用いてよい。天然または変異のポリペプチドコーディング配列と当業者に知られる適切な転写／翻訳制御シグナルとを含有する発現ベクターを構築してよい。これらの方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術およびｉｎ  ｖｉｖｏ組換え／遺伝子組み換えを含む。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ，１９８９に記載される方法を参照されたい。
【０１８６】
宿主−発現ベクター系は、キナーゼの発現に用いてよい。これらは、限定されないが、コーディング配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌のような微生物；コーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母；コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルスＣａＭＶ；タバコモザイクウイルスＴＭＶ）で感染させたか、または組換えプラスミド発現ベクター（例えばＴｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系；あるいは動物細胞系を含む。タンパク質は、例えば個体においてタンパク質の量を増大させるかまたは工作された治療上のタンパク質を発現するタンパク質を発現することを含むヒト遺伝子治療系において発現させてもよい。これらの系の発現要素は、その強度および特異性が異なっている。
【０１８７】
具体的に設計されたベクターは、細菌−酵母または細菌−動物細胞のような宿主間でＤＮＡが往復することを可能にする。適切に構築された発現ベクターは、宿主細胞内での自己複製のための複製起点、１つまたは複数の選択マーカー、限定数の有用な制限酵素部位、高コピー数のための能力、および活性プロモーターを含んでよい。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼがＤＮＡに結合し、ＲＮＡ合成を開始することを支配するＤＮＡ配列として規定される。強いプロモーターは、ｍＲＮＡを高い頻度で開始させる。
【０１８８】
発現ベクターは、例えば構成性および誘導性プロモーターを含む転写および翻訳に影響する種々の要素も含んでよい。これらの要素は、しばしば宿主および／またはベクター依存性である。例えば、細菌系でクローニングする場合、Ｔ７プロモーター、バクテリオファージλのｐＬ、ｐｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ−ｌａｃハイブリッドプロモーター）などの誘導性プロモーターなどを用いてよい。昆虫細胞系でクローニングする場合、バキュロウイルスポリヘドリンプロモーターのようなプロモーターを用いてよい。植物細胞系にクローニングする場合、植物細胞のゲノムに由来する（例えば熱ショックプロモーター；ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットのプロモーター；クロロフィルａ／ｂ結合タンパク質のプロモーター）か、または植物ウイルスから（例えばＣａＭＶの３５ＳＲＮＡプロモーター；ＴＭＶのコートタンパク質プロモーター）のプロモーターを用いてよい。哺乳動物細胞系においてクローニングする場合、哺乳動物プロモーター（例えばメタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスプロモーター（例えばアデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター、ＳＶ４０プロモーター；ウシ乳頭腫ウイルスプロモーター；エプスタイン−バーウイスルプロモーター）を用いてよい。
【０１８９】
ベクターを宿主細胞に導入するために種々の方法、例えば形質転換、トランスフェクション、感染、プロトプラスト融合およびエレクトロポレーションを用いてよい。発現ベクター含有細胞はクローンとして増殖し、適切なポリペプチドを産生するかを決定するために個別に分析される。例えば抗生物質耐性を含む種々の選択法を用いて、形質転換された宿主細胞を同定してよい。ポリペプチド発現宿主細胞クローンの同定は、限定されないが、抗キナーゼ抗体との免疫学的反応性および宿主細胞関連活性の存在を含むいくつかの方法により行ってよい。
【０１９０】
ｃＤＮＡの発現は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生された合成ｍＲＮＡを用いて行ってもよい。合成ｍＲＮＡは、限定されないが、コムギ胚芽抽出物および網状赤血球抽出物を含む種々の無細胞系において効率的に翻訳できると共に、限定されないが、カエル卵母細胞へのマイクロインジェクションを含む細胞に基づく系で効率的に翻訳できる。
【０１９１】
最適なレベルの活性および／またはタンパク質を産生するｃＤＮＡ配列を決定するために、修飾ｃＤＮＡ分子を構築する。修飾ｃＤＮＡの限定されない例は、ｃＤＮＡが発現される宿主細胞にｃＤＮＡのコドン使用を最適化したものである。宿主細胞は、ｃＤＮＡ分子で形質転換され、キナーゼＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルを測定する。
【０１９２】
宿主細胞でのキナーゼタンパク質のレベルは、イムノアフィニティーおよび／またはリガンドアフィニティー法のような種々の方法を用いて定量され、キナーゼ特異的アフィニティービーズまたは特異的抗体を用いて35Ｓ−メチオニン標識または未標識のタンパク質を単離する。標識または未標識のタンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析される。未標識のタンパク質は、特異的抗体を用いるウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡにより検出される。
【０１９３】
組換え宿主細胞でのキナーゼの発現に続いて、ポリペプチドを回収してタンパク質を活性形にする。いくつかの精製法が利用可能であり、用いるのに適する。組換えキナーゼは、細胞溶解物からまたは馴化培地から、当技術分野において知られる分画またはクロマトグラフィー工程の種々の方法の組合せまたは単独での適用により精製してよい。
【０１９４】
さらに、組換えキナーゼは、全長の新生タンパク質またはそのポリペプチドフラグメントに特異的なモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用いて作製したイムノアフィニティーカラムを用いることにより、その他の細胞性タンパク質から分離できる。当技術分野において知られるその他のアフィニティーに基づく精製法も用いてよい。
【０１９５】
あるいは、ポリペプチドは、折り畳まれていない不活性の形で宿主細胞から、例えば細菌のインクルージョンボディから回収してよい。この形で回収されるタンパク質は、変性剤、例えば塩酸グアニジンを用いて可溶化し、次いで透析のような当業者に知られる方法を用いて活性形に再び折り畳んでよい。
【０１９６】
Ｂ．細胞成長アッセイ
種々の細胞成長アッセイが当技術分野において知られており、細胞成長および／または増殖を阻害（例えば減少）できる縮合環ヘテロ環化合物（すなわち「試験化合物」）を同定するために有用である。
【０１９７】
例えば、種々の細胞は、成長および／または増殖のために特定のキナーゼを必要とすることが知られている。このような細胞が試験化合物の存在下に成長する能力を評価し、試験化合物の非存在下での成長と比較することにより、試験化合物の抗増殖特性が同定される。この種類のある一般的な方法は、分裂細胞のＤＮＡへのトリチウム化チミジンのような標識の取り込みの程度を測定することである。あるいは、細胞増殖の阻害は、細胞数に対応する代用マーカーを用いて細胞の全代謝活性を決定することによりアッセイしてもよい。細胞は、試験化合物の存否において代謝の指標と処理してよい。生細胞は代謝の指標を代謝し、それにより検出可能な代謝産物を形成する。検出可能な代謝産物のレベルが、試験化合物の非存在下に比べて試験化合物の存在下で減少する場合、細胞の成長および／または増殖の阻害を表す。代謝の指標の例は、例えばテトラゾリウム塩およびＡｌａｍｏｒＢｌｕｅ（登録商標）を含む（以下の実施例の項を参照されたい）。
【０１９８】
Ｖ．医薬組成物および投与
別の態様において、本発明は、医薬的に許容される賦形剤を混合した縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子を含む医薬組成物を提供する。当業者は、該医薬組成物が、上記の縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子の医薬的に許容される塩を含むことを認識する。
【０１９９】
治療上および／または診断上の適用において、本発明の化合物は、全身および局所を含む投与または局部投与の種々の形態のために処方できる。方法および処方は、一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２０版）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に見い出し得る。
【０２００】
本発明による化合物は、広い投与量範囲にわたって有効である。例えば、ヒトの成人の治療において、用いてよい投与量の例は、１日当たり０．０１〜１０００ｍｇ、０．５〜１００ｍｇ、１〜５０ｍｇ、および１日当たり５〜４０ｍｇの投与量である。最も好ましい投与量は、１日当たり１０〜３０ｍｇである。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形、治療される対象、治療される対象の体重、ならびに治療する医師の選択および経験に依存する。
【０２０１】
医薬的に許容される塩は、当業者に一般的によく知られており、限定しない例として、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベシル酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、酒石酸水素塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カルニシレート（carnsylate）、炭酸塩、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシレート、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシネート、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオネート、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ムケート、ナプシレート、硝酸塩、パモエート（エンボネート）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩またはテオクル酸塩を含んでよい。その他の医薬的に許容される塩は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２０版）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に見出し得る。好ましい医薬的に許容される塩は、例えば、酢酸塩、安息香酸塩、臭化物、炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、ナプシレート、パモエート（エンボネート）、リン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩または酒石酸塩を含む。
【０２０２】
治療される具体的な状態に応じて、このような作用剤は、液体または固体の剤形に処方され、全身または局部的に投与される。作用剤は、例えば、当業者に知られるような持続性または徐放性の形で送達してよい。処方および投与の方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２０版）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に見出し得る。適切な経路は、経口、頬側、吸入スプレーにより、舌下、直腸、経皮、経膣、経粘膜、経鼻、または腸管の投与；筋肉内、皮下、髄内の注入、ならびにくも膜下腔内、心室内直接、静脈内、関節内、胸骨内、滑膜内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、または眼内の注入を含む非経口デリバリー、あるいはデリバリーのその他の形態を含んでよい。
【０２０３】
注入のために、本発明の作用剤は、ハンク溶液、リンゲル溶液または生理食塩緩衝液のような生理的に適合した緩衝液のような水溶液中に処方して希釈してよい。このような経粘膜投与のために、浸透されるバリアに適する浸透剤を処方中に用いる。このような浸透剤は、当技術分野において一般的に知られている。
【０２０４】
本発明の実施のために、本明細書に開示される化合物を全身投与用に適する剤形に処方するために医薬的に許容される不活性担体を用いることは、本発明の範囲内である。適切な担体の選択および適切な製造の実施により、本発明の組成物、特に溶液として処方されるものは、静脈内注射などにより非経口投与してよい。化合物は、当技術分野においてよく知られている医薬的に許容される担体を用いて、経口投与用に適する剤形に容易に処方できる。このような担体は、本発明の化合物を、治療される患者が経口摂取するための錠剤、丸剤、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などに処方することを可能にする。
【０２０５】
経鼻または吸入のデリバリーのために、本発明の作用剤は、当業者に知られる方法により処方してもよく。例えば、限定しない例として、食塩水のような可溶化物質、希釈物質または分散物質の例、ベンジルアルコールのような防腐剤、吸収促進剤およびフルオロカーボンを含んでよい。
【０２０６】
本発明における使用に適する医薬組成物は、活性成分がその意図する目的を達成する有効量で含有される組成物を含む。有効量の決定は、特に本明細書の詳細な開示に鑑みて、当業者の能力の範囲内である。
【０２０７】
活性成分に加えて、これらの医薬組成物は、活性化合物の製剤への修飾を促進する、医薬的に用いることができる賦形剤および添加剤を含む適切な医薬的に許容される担体を含んでよい。経口投与用に処方される製剤は、錠剤、糖衣剤、カプセル剤または溶液の形であってよい。
【０２０８】
経口用の医薬製剤は、活性化合物を、固体の賦形剤と合わせ、得られた混合物を所望により粉砕し、かつ必要であれば適切な添加剤を加えた後に顆粒混合物を修飾して、錠剤または糖衣剤の核を得ることにより得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖類のような充填剤；例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ：ポビドン）のようなセルロース調製物である。必要であれば、架橋ポリビニルピロリドン、アガーまたはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のような崩壊剤を加えてよい。
【０２０９】
糖衣剤の核には、適切なコーティングを施す。この目的のために濃縮糖溶液を用いてよく、該濃縮糖衣溶液は、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を所望により含有してよい。活性化合物の異なる混合用量を同定または特徴付けるために、錠剤または糖衣錠のコーティングに染料または色素を加えてよい。
【０２１０】
経口使用できる医薬製剤は、ゼラチンでできたプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤でできたソフトシールカプセルを含む。プッシュフィットカプセルは、ラクトースのような充填剤、デンプンのような結合剤および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ならびに所望により安定剤と混合した活性成分を含有できる。ソフトカプセルでは、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような適切な液体に溶解または懸濁してよい。さらに、安定剤を加えてよい。
【０２１１】
治療または予防される具体的な症状または疾患の状態により、その症状を治療または予防するために通常は投与される付加的な治療剤を、本発明の阻害剤と一緒に投与してよい。例えば、化学療法剤またはその他の増殖抑制剤を本発明の阻害剤と組み合わせて、増殖性疾患および癌を治療してよい。既知の化学療法剤の例は、限定されないが、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロンおよび白金誘導体を含む。
【０２１２】
本発明の阻害剤である作用剤のその他の例は、限定されないが、コルチコステロイド、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１  ＲＡ、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびスルファサラジンのような抗炎症剤；シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリンおよびスルファサラジンのような免疫調節剤ならびに免疫抑制剤；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＭＡＯ阻害剤、インターフェロン、抗痙攣剤、イオンチャネルブロッカー、リルゾールおよび抗パーキンソン病剤のような神経向性因子；βブロッカー、ＡＣＥ阻害剤、利尿剤、硝酸塩、カルシウムチャネルブロッカーおよびスタチンのような心血管疾患の治療薬；コルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロンおよび抗ウイルス剤のような肝臓疾患の治療剤；コルチコステロイド、抗白血病薬および成長因子のような血液学的疾患の治療剤；インシュリン、インシュリン類縁体、αグルコシダーゼ阻害剤、ビグアナイドおよびインシュリン感受性改善薬のような糖尿病の治療剤；ならびにγグロブリンのような免疫不全症の治療剤を含んで組み合わせてもよい。
【０２１３】
これらの付加的な作用剤は、阻害剤含有組成物とは別に、複数回投与計画の一部分として投与してよい。あるいは、これらの剤は、単一組成物中に阻害剤と混合した単回投与形態の一部分であってよい。
【０２１４】
本発明は、本発明の一つの態様の説明を意図する実施例によりその範囲を限定されない。実際に、本明細書に記載されるものの他に本発明の種々の修飾が、上記の記載から当業者には明らかになる。このような修飾は、本発明の範囲内であることを意図する。さらに、本発明の任意の具体的態様の１つまたは複数の特徴は、本発明の範囲を逸脱せずに、本発明の任意のその他の具体的態様の任意の１つまたは複数のその他の特徴と組み合わせてよい。例えば、縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子の項に記載される縮合環ヘテロ環キナーゼ調節因子は、本明細書に記載される治療方法およびキナーゼの阻害方法に等しく適用可能である。本明細書を通して引用される参考文献は、当技術分野のレベルの例であり、以前に具体的に組み込まれているか否かによらず、全ての目的のためにその全体が本明細書に参照として組み込まれる。
【実施例】
【０２１５】
以下の実施例は、本発明を限定せずに説明するために与えられる。本発明の実施形態の製造は、以下の実施例に記載される。当業者は、与えられる化学反応および合成方法は、本発明のその他の多くの化合物を製造するために修飾してよいことを理解するであろう。本発明の化合物が例示されていない場合、当業者は、これらの化合物は、本明細書に記載される合成方法を修飾することにより、当技術分野において知られる合成方法を用いることにより製造できることを認識するであろう。
化合物の合成
方法１：
【化１４】
2008508304.tif 000016
【０２１６】
工程１：５−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン−３−カルバルデヒドの合成
リチウムジ−イソ−プロピルアミン（５ｍＬ、３５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を、窒素の下で−７８℃に冷却し、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中に２．５Ｍ、１２ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を−７８℃にて１５分間撹拌した後に、５−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン（５ｇ、２８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、得られた混合物を−７８℃にて９０分間撹拌した。Ｎ−ホルミルピペリジン（４ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）を、懸濁物に−７８℃にて非常に迅速に加え、混合物を６０秒間激しく撹拌した。反応を、１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液の添加により直ちに停止した。混合物を室温まで温め、水とジクロロメタンとに分配した。水層をジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。シクロヘキサンからの粗生成物の結晶化により、５−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン−３−カルバルデヒド（２．９９３ｇ、収率５２％）を、淡いベージュの薄片状の結晶として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ10.07 (s, 1H), 8.70 (dd, 1H), 8.55 (dd, 1H). MS: m/z 236, 238 [MNa+], 204, 206 [MH+], 176, 178 [MH-CO+].
【０２１７】
工程２および３：５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
５−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン−３−カルバルデヒド（１３．６６ｇ、６６．９６ｍｍｏｌ）、ピナコール（８．７５ｇ、７４．０ｍｍｏｌ）およびパラ−トルエンスルホン酸一水和物（１．５０ｇ、７．８９ｍｍｏｌ）を、ディーン−スターク冷却器を備えたフラスコに入れ、無水ベンゼン（４００ｍＬ）に溶解した。混合物を還流まで加熱し、留出物が透明なままになるまで溶媒を留去したところ、残存容量は約２００ｍｌであった。混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液および塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣を、エタノール（４００ｍＬ）とジ−イソ−プロピル−エチル−アミン（２５ｍＬ）との混液に溶解した。次いで、無水ヒドラジン（１５ｍｌ、０．４８ｍｏｌ）を加え、得られた混合物を還流条件下で４時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮乾燥し、得られた残渣を水とトルエンに分配した。有機相を塩水で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣を無水エーテル（７００ｍＬ）に溶解し、無水エーテル（２Ｍ、７０ｍＬ）中の塩化水素を、激しく撹拌している溶液に徐々に加えた。沈殿物をろ過し、エーテルおよびヘキサンで洗浄し、次いで、真空乾燥した。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ10.31 (s,br, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.37 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 6.08 (s, 1H), 3.56 (s,br), 1.27 (s, 6H), 1.19 (s, 6H). MS: m/z 198, 200 [MH+].
【０２１８】
上記の固体を、水（５００ｍＬ）、エタノール（２００ｍＬ）および濃塩酸水溶液（５０ｍＬ）の混液に５０〜６５℃にて溶解した。次いで、混合物を室温にて１６時間撹拌し、その後、炭酸水素ナトリウムでｐＨ＝８に中和した。得られた沈殿物をろ過し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣および得られた沈殿物をエタノールから結晶化して、５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（６．６１５ｇ、収率５０％）を、ベージュから淡いオリーブがかった緑色の結晶固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.91 (s, 1H), 8.60 (d, 1H), 8.54 (d, 1H), 8.16 (s, br, 1H). MS: m/z 198, 200 [MH+].
【０２１９】
工程４：５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（３．００ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）およびＮ−ヨードスクシンイミド（３．６０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロエタン（１００ｍＬ）に溶解した。得られた混合物を還流条件下で６時間撹拌し、室温まで冷却し、ＴＨＦ（３００ｍＬ）で希釈した。得られた溶液を、チオ硫酸ナトリウムの飽和水溶液（１００ｍＬ）および塩水で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣を、ジクロロメタンおよびエーテルの１：１混液、次いでエーテルで粉砕した後に真空乾燥して、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（３．７９５ｇ、収率７７％）を、ベージュがかった茶色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ14.31 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.20 (d, 1H). MS: m/z 323, 325 [MH+].
【０２２０】
工程５：５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
窒素の下で、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（２．６８ｇ、８．２７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解した。溶液を０〜５℃に冷却し、過剰の乾燥水素化ナトリウムを、さらなる添加により水素が形成されなくなるまで加えた。得られた懸濁物に、塩化２−トリメチルシラニル−エトキシメチル（２．５ｍｌ、１４ｍｍｏｌ）を０〜５℃にて滴下した。得られた混合物を０℃にて１時間撹拌し、その後、メタノールおよび続いて塩化アンモニウムの飽和水溶液の添加により反応停止した。次いで、混合物を５０℃にて減圧下に濃縮乾燥した。得られた残渣を水、塩水およびジクロロメタンに分配した。次いで、水層をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（２．９２９ｇ、収率７８％）を、ベージュから茶色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.85 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 5.85 (s, 2H), 3.69 (t, 2H), 0.92 (t, 2H), 0.11 (s, 9H).
【０２２１】
工程６：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
アセトニトリル（８ｍＬ）中の５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．６０６ｇ、３．５３７ｍｍｏｌ）、２−メトキシ−フェニル−ボロン酸（５７５ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（１４５ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）と炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、８ｍＬ）の混合物を、密閉バイアル中で８５℃にて１００分間撹拌した。次いで、得られた混合物を、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液とジクロロメタンに分配し、水相をジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．００２ｇ、収率６５％）を、オフホワイトの油として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.70 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.50 (ddd, 1H), 7.23 (dd, 1H), 7.10 (ddd, 1H), 5.81 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 0.84 (t, 2H), -0.10 (s, 9H). MS: m/z 456, 458 [MNa+].
【０２２２】
工程７：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
ビス（ピナコラート）ジボロン（１．２０ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（１００ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）および無水酢酸ナトリウム（６２５ｍｇ、７．６２ｍｍｏｌ）を、窒素を通気したバイアルに入れた。ここに、５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．００２ｇ、２．３０７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液を加えた。得られた混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１３０℃にて６０分間放射線照射し、次いで、５０℃にて減圧下に濃縮した。得られた残渣をエーテルと塩水に分配し、水相をエーテルで抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、組成生物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．３７０ｇ、収率１２３％）を、淡いオリーブがかった緑色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.76 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.12 (ddd, 1H), 5.84 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 1.33 (s, 12H), 0.84 (t, 2H), -0.10 (s, 9H). 
【０２２３】
工程８：｛２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
アセトニトリル（２ｍＬ）中の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、（５−ブロモ−２−ヒドロキシ−フェニル）−モルホリン−４−イル−メタノン（６６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（９ｍｇ、１１μｍｏｌ）と、炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、２ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１３５℃にて２０分間放射線照射した。粗反応混合物をジクロロメタンと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。次いで、水相をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、｛２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノン（３５ｍｇ、収率３０％）を無色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.86 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.64 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.49 (ddd, 1H), 7.24 (d,br, 1H), 7.11 (ddd, 1H), 7.00 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.69 (t, 2H), 3.7-3.2 (m, 8H), 0.86 (t, 2H), -0.08 (s, 9H). MS: m/z 583 [MNa+], 561 [MH+], 443 [MH+-(Me3Si(CH2)2O)]
【０２２４】
｛２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノン（３４ｍｇ、６１μｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液を０〜５℃に冷却し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯塩（１００μｌ、０．８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、混合物を０〜５℃にて４０分間撹拌した後に、１０ｍｌの１０％（ｗ／ｖ）水酸化カリウム溶液を加えた。混合物を室温にてさらに１時間撹拌した。次いで、ｐＨを約３〜４にクエン酸の添加により調整し、水相を硫酸ナトリウムで飽和した。得られた混合物をジクロロメタン（３×）で抽出した。有機相を合わせ、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて｛２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノン（１１．５ｍｇ、収率４４％）を、無色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.76 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 8.78 (d, 1H), 8.23 (d, 1H), 7.64 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.10 (t, 1H), 6.99 (d, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.7-3.2 (m, 8H). MS: m/z 431 [MH+].
【０２２５】
方法１により製造されるその他の化合物：
【表１】
2008508304.tif 000017
方法２：
【化１５】
2008508304.tif 000018
【０２２６】
工程１：モルホリン−４−イル−［３−（１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−メタノンの合成
ジメトキシエタン（８ｍＬ）中の５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．５０ｇ、７．５７ｍｍｏｌ）、３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルボロン酸（２．１３６ｇ、９．０９ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４３５ｍＬ、０．３７６ｍｍｏｌ）と炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（８ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で、１７５℃にて６０分間放射線照射した。粗反応混合物を、ジクロロメタンと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。次いで、水相をジクロロメタン、次いで酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮することにより、８０％のモルホリン−４−イル−［３−（１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−メタノン（２．３０ｇ、収率８０％）および２０％のトリフェニルホスフィンオキシドを含有する淡い緑色の泡状物を得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.75 (s, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.54 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.85 (m, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.58 (t, 1H), 7.41 (m, 1H).
【０２２７】
工程２：［３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
モルホリン−４−イル−［３−（１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−メタノン（２．３０ｇ、純度８０％、約６ｍｍｏｌ）およびＮ−ヨードスクシンイミド（２．５０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）を、ジクロロエタン（１８０ｍＬ）に溶解した。混合物を還流条件下で５時間撹拌し、次いで、室温まで冷却し、ジクロロメタンで希釈した。溶液を、チオ硫酸ナトリウムの飽和水溶液（１×）、次いで臭化ナトリウムの飽和水溶液（２×）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。得られた残渣をエーテル（８０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、［３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−モルホリン−４−イル−メタノンを、ベージュの粉末として得た（２．８８１ｇ、２工程の収率８８％）。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ14.19 (s, 1H), 8.92 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.91 (m, 1H), 7.83 (m, 1H), 7.59 (ddd, 1H), 7.44 (dt, 1H), 3.75-3.35 (m, 8H). 
【０２２８】
工程３：モルホリン−４−イル−｛３−［３−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−メタノンの合成
アセトニトリル（２ｍＬ）中の［３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−モルホリン−４−イル−メタノン（２５ｍｇ、５８μｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（５ｍｇ、６μｍｏｌ）および１Ｈ−ピラゾール−４−イルボロン酸（１１ｍｇ、９８μｍｏｌ）と炭酸ナトリウムの２Ｍ溶液（１ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１７５℃にて３０分間放射線照射した。粗反応混合物を、水（１ｍＬ）および酢酸エチル（３ｍＬ）で希釈し、有機相を分離し、ろ過して濃縮した。次いで、得られた粗混合物を、０．１％ギ酸を含有する水中のアセトニトリルの勾配を用いる質量誘発逆相ＨＰＬＣにより精製して、モルホリン−４−イル−｛３−［３−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−メタノン（６．２ｍｇ、収率２９％）を、無色の粉末として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.59 (s, 1H), 13.17 (s, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.73 (d, 1H), 8.60 (s, br, 1H), 8.17 (s, br, 1H), 7.95 (ddd, 1H), 7.89 (t, 1H), (t, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.43 (ddd, 1H), 3.80-3.35 (m, 8H).  MS: m/z 397 [MNa+], 375 [MH+].
【０２２９】
方法２により製造されるその他の化合物：
【表２】
2008508304.tif 000019
方法３：
【化１６】
2008508304.tif 000020
【０２３０】
工程１：｛３−［３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
［３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェニル］−モルホリン−４−イル−メタノン（２．１２ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（鉱物油中に６０％、７５０ｍｇ、３０ｍｍｏｌ）を０〜５℃にて加えた。混合物を数分間撹拌した後に、塩化トリメチルシリルエトキシメチル（２．０ｍｌ、１１ｍｍｏｌ）を同じ温度にて滴下した。混合物を０℃〜室温にて４時間撹拌し、次いで、０〜５℃に冷却し、メタノールの添加により反応を停止した。次いで、得られた懸濁物を水、塩化アンモニウムの飽和水溶液およびエーテルに分配した。水層をエーテルで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、｛３−［３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノンを、ベージュがかった茶色の泡状物として得た（１．８０６ｇ、1Ｈ−ＮＭＲにより６６％、副生成物はモルホリン−４−イル−｛３−［２−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−メタノンと同定された）。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ9.08 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.95 (t, br, 1H], 7.69 (t, 1H), 7.55 (d, br, 1H), 5.88 (s, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.85-3.45 (m, 8H), 0.94 (t, 2H), -0.2 (s, 9H).  MS: m/z 565 [MNa+], 537 [MH+], 447 [MH+-(Me3Si(CH2)2O)].
【０２３１】
工程２：｛３−［３−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
アセトニトリル（２ｍＬ）中の｛３−［３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノン（３３ｍｇ、純度６６％、３８μｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（５ｍｇ、６μｍｏｌ）および３−トリフルオロメチルフェニルボロン酸（１４ｍｇ、９２μｍｏｌ）と炭酸ナトリウムの２Ｍ溶液（１ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１７５℃にて２０分間放射線照射した。粗反応混合物を、臭化ナトリウムの飽和水溶液（１ｍＬ）および酢酸エチル（４ｍＬ）で希釈し、有機相を分離し、シリカに吸着させ、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、｛３−［３−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノン（２４ｍｇ、収率１１６％）を、オフホワイトの残渣として得た。MS: m/z 568 [MNa+], 546 [MH+], 428 [MH+-(Me3Si(CH2)2O)]
【０２３２】
この残渣をＴＨＦ（２ｍｌ）に溶解し、４Åの活性モレキュラーシーブを混合物に加えた。ＴＨＦ中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ溶液、０．５ｍｌ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃にて２６時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、１ｍｌのカチオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ、Ｎａ+型）を加え、混合物を４０分間振とうした。残渣およびシーブをろ過し、ジクロロメタンおよびメタノールで洗浄し、得られたろ過物を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、酢酸エチル中に１５％（ｖ／ｖ）のメタノールを含有する酢酸エチルの勾配を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物のフラクションを合わせ、濃縮し、０．１％ギ酸を含有する水中のアセトニトリルの勾配を用いる質量誘発逆相ＨＰＬＣで精製して、｛３−［３−（２−メトキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノン（３．２ｍｇ、収率２０％）を、無色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ14.01 (s, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.31 (dd, 1H], 8.11 (dd, 1H), 7.87 (ddd, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.43 (dt, 1H), 7.18 (dd, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.70-3.35 (m, 8H). MS: m/z 416 [MH+].
【０２３３】
方法３により製造されるその他の化合物：
【表３】
2008508304.tif 000021
方法４：
【化１７】
2008508304.tif 000022
【０２３４】
工程１：Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（５−（３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成
アセトニトリル（１ｍＬ）中の（３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（５０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）、３−（ジメチルカルバモイル）フェニルボロン酸（３４ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン錯体（３．６ｍｇ、０．００４５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ水溶液、０．１３４ｍＬ、０．２６７ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌマイクロ波中で９０℃にて３０分間加熱した。得られた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィー精製により、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（５−（３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ベンズアミドを、透明な油で得た。MS: m/z 586.2 [M+H+]. 
【０２３５】
工程２：Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（５−（３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（５−（３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ベンズアミドの５％過塩素酸含有酢酸（１ｍＬ）溶液を、室温にて１時間撹拌した。次いで、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を、上記の溶液にｐＨ約８までゆっくりと加え、混合物を室温にて２４時間撹拌した。次いで、酢酸エチルを抽出に用い、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。質量誘発逆相ＨＰＬＣ精製により、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（５−（３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−イル）ベンズアミド（７．４ｍｇ、２工程の収率１８％）を、明黄色の固体として得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.99 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 3.46 (br, 2H), 3.61 (br, 2H), 3.76 (br, 4H), 7.40 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.64 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.98 (m, 2H), 8.62 (s, 1H), 8.85 (br, 1H).  MS: m/z 456.1 (M+H+).  
【０２３６】
方法４により製造されるその他の化合物：
【０２３７】
工程２での条件は、以下の表の化合物について変動してよい。炭酸水素ナトリウムの代わりに炭酸ナトリウムが必要な場合があり、反応時間は３０分〜２４時間で変動する。
【表４−１】
2008508304.tif 000023
【０２３８】
【表４−２】
2008508304.tif 000024
【０２３９】
【表４−３】
2008508304.tif 000025
方法５：
【化１８】
2008508304.tif 000026
【０２４０】
工程１：メチル３−（１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンゾエートの合成
ジオキサン／水（４０ｍＬ／１０ｍＬ）中の５−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（２．００ｇ、１０．１０ｍｍｏｌ）、３−（メトキシカルボニル）フェニルボロン酸（２．２０ｇ、１２．１２ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム（２．２ｇ、６．００ｍｍｏｌ）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．２５０ｇ、０．２０２ｍｍｏｌ）の混合物を、１１０℃にて１５時間撹拌した。次いで、混合物を氷水に注ぎ、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィーにより、メチル３−（１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンゾエート（８）（１．６５ｇ、収率６５％）を、黄色の固体として得た。MS: m/z 254.0 (M+H+).
【０２４１】
工程２：メチル３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンゾエートの合成
メチル３−（１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンゾエート（１．６５ｇ、６．５２ｍｍｏｌ）のジクロロエタン（４０ｍＬ）溶液に、ＮＩＳ（１．８１ｇ、８．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃にて６時間撹拌した。溶媒を減圧により除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、メチル３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンゾエート（９）（９８８ｍｇ、収率４０％）を得た。MS: m/z 379.9 (M+H+).
【０２４２】
工程３：３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）安息香酸の合成
メチル３−（３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンゾエート（９８８ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液に、水素化ナトリウム（鉱物油中に６０％、５２５ｍｇ、１３．０３ｍｍｏｌ）を−４０℃にて加えた。混合物を６０分間撹拌した後に、ＳＥＭＣｌ（９２０μｌ、５．２２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温まで温め、メタノールおよび水で反応を停止した。次いで、酢酸を用いてｐＨを４〜５に調整した。次いで、混合物を酢酸エチル（３×）で抽出し、有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。得られた粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィー精製により、３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）安息香酸（２００ｍｇ、収率１５％）を固体として得た。MS: m/z 517.9 (M+Na+).
【０２４３】
工程４：（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノンの合成
ＤＭＦ（２ｍｌ）中の粗３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）安息香酸（２００ｍｇ、０．４０４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（ピペラジン−１−イル）エタナミン（７６ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１８５ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．７００ｍｌ、０．４８５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ中で９０℃にて１時間撹拌した。次いで、水を混合物に加え、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィーにより、（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノン（１１０ｍｇ、収率４３％）を、オフホワイトの固体として得た。MS: m/z 635.1 (M+H+).  
【０２４４】
工程５：（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノンの合成
アセトニトリル（１ｍＬ）中の（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノン（５０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）、５−フルオロ−２−メトキシフェニルボロン酸（２０ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン錯体（７．９ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ水溶液、０．１１９ｍＬ、０．２３７ｍｍｏｌ）を、Ｐｅｒｓｏｎａｌマイクロ波中で９０℃にて３０分間加熱した。得られた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィー精製により、（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノンを、明黄色の油として得た。MS: m/z 633.3 (M+H+).
【０２４５】
工程６：（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノンの合成
工程５からの（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノンの５％過塩素酸含有メタノール（１ｍＬ）中の溶液を、室温にて４５分間撹拌した。次いで、水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ）を溶液に、ｐＨ約８までゆっくりと加えた。次いで、酢酸エチルを抽出に用い、有機相を合わせ、濃縮乾燥し、次いでこれをメタノール（１ｍＬ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ、１ｍＬ）に再溶解した。混合物を室温にて１５時間撹拌した後に、水で希釈して、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。質量誘発逆相ＨＰＬＣ精製により、（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノン（２５．６ｍｇ、１２からの収率６４％）を、白色の固体として得た。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 2.42 (s, 6H), 2.49 (br, 2H), 2.59 (m, 4H), 2.69 (m, 2H), 3.54 (br, 2H), 3.81 (br, 2H), 3.85 (s, 3H), 7.17 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 3.0, 9.5 Hz, 1H), 7.44 (d, br, J = 7.5 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (br, 1H), 7.77 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.80 (d, J = 2.5 Hz, 1H).  MS: m/z 503.2 (M+H+).  
方法６：
【化１９】
2008508304.tif 000027
【０２４６】
工程１：（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノンの合成
アセトニトリル（１ｍＬ）中の（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）（３−（３−ヨード−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メタノン（５０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）、２，６−ジメトキシフェニルボロン酸（２２ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（９．１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ水溶液、０．１１９ｍＬ、０．２３７ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌマイクロ波中で１２０℃にて３０分間加熱した。得られた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィー精製により、（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノンを透明な油として得た。MS: m/z 645.3 (M+H+).  
【０２４７】
工程２：（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノンの合成
（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノンの５％過塩素酸含有酢酸（１ｍＬ）溶液を、室温にて４５分間撹拌した。次いで、水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ）を、ｐＨ約８までゆっくりと溶液に加えた。次いで、酢酸エチルを抽出に用い、有機相を合わせ、濃縮乾燥し、次いでこれをメタノール（１ｍＬ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ、１ｍＬ）中に再溶解した。混合物を室温にて１５時間撹拌した後に、水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮乾燥した。質量誘発逆相ＨＰＬＣ精製により、（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノン（２２．７０ｍｇ、２工程の収率５６％）を白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 2.48 (br, 2H), 2.52 (s, 6H), 2.60 (m, 4H), 2.69 (m, 2H), 3.51 (br, 2H),  3.74 (s, 6H), 3.80 (br, 2H), 6.80 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.81 (d, J = 2 Hz, 1H).  MS: m/z 515.2 (M+H+).  
【０２４８】
方法６により製造されるその他の化合物：
【０２４９】
工程２での条件は、以下の表の化合物について変動してよい。炭酸水素ナトリウムの代わりに炭酸ナトリウムが必要な場合があり、反応時間は３０分〜２４時間で変動する。
【表５】
2008508304.tif 000028
方法７：
【化２０】
2008508304.tif 000029
【０２５０】
工程１：５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸エチルエステルの合成
３−エトキシカルボニル−５−ピリジルボロン酸（５２９ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（６６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）および５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（７８０ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）アセトニトリル（５ｍＬ）の混合物および２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加え、混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で９０℃にて３０分間放射線照射した。粗反応混合物を酢酸エチルおよび水に分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。粗生成物は、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸エチルエステル（５５２ｍｇ、収率６１％）を、黄色の油として得た。1H-NMR (500 MHz,  d6-DMSO)δ9.24 (d, 1H), 9.12 (d, 1H), 9.03 (d, 1H), 8.60 (t, 1H), 8.56 (d, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (dd, 1H), 7.12 (dt, 1H), 5.88 (s, 2H), 4.40 (q, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 1.37 (t, 3H), 0.87 (t, 2H), -0.073 (t, 9H). MS: m/z 505 [MH+].
【０２５１】
工程２：５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸の合成
５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸エチルエステル（４９４ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、ＴＨＦ中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ、１０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）および４Åの活性モレキュラーシーブを加えた。得られた混合物を７０℃にて７時間撹拌した。シーブをろ過し、酢酸エチルで洗浄し、得られたろ液を濃縮した。残渣を、ジクロロメタンおよび水に分配した。水相をジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮することにより、５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸（６５４ｍｇ、純度６２％、４０５ｍｇ、収率１１９％）を、茶色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.98 (s, 1H), 8.99 (d, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.88 (d, 1H), 8.43 (t, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.10 (dt, 1H), 3.86 (s, 3H). MS: m/z 345 (96%) [M-H-].
【０２５２】
工程３：｛５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−イル｝−ピロリジン−１−イル−メタノンの合成
（５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸（３５０ｍｇ、純度６２％、０．６３ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）に５０〜６０℃にて溶解し、ＰＳ−ＨＯＢｔ樹脂（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（０．９ｍｍｏｌ・ｇ-1ロード、２．２０ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（３７５ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を加えたとき、溶液を室温まで冷却した。混合物を室温にて１６時間振とうした。樹脂をろ過し、ＤＭＦで６回、続いてエーテルで３回洗浄して乾燥した。樹脂および（５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチネート）（４６０ｍｇ、理論上のロード１０５μｍｏｌ）を、ピロリジン（１１０μｌ、１．３ｍｍｏｌ）含有無水ＤＭＦ（３ｍＬ）に懸濁し、２２時間振とうした。樹脂をろ過し、ジクロロメタン、エーテルおよびＤＭＦで洗浄する。ろ過物および洗浄物を合わせて濃縮した。得られた残渣を、０．１％ギ酸含有水中のアセトニトリルの勾配を用いる、質量誘発逆相ＨＰＬＣで精製して、｛５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−イル｝−ピロリジン−１−イル−メタノン（２．４ｍｇ、６μｍｏｌ、収率６％）を、明茶色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-MeOH)δ8.98 (d, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.31 (t, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.48 (ddd, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 3.58 (t, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.96 (m, 2H). MS: m/z 400 [MH+].
【０２５３】
方法７により製造されるその他の化合物：
【表６−１】
2008508304.tif 000030
【０２５４】
【表６−２】
2008508304.tif 000031
【０２５５】
【表６−３】
2008508304.tif 000032
方法８：
【化２１】
2008508304.tif 000033
【０２５６】
工程１：［４−（２−ジメチルアミノ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−メタノンの合成
３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸（３３８ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（３００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を、２０ｍｌのアセトニトリルと１０ｍｌのメタノールの混液に溶解した。１３１ｍｇ（０．８３ｍｍｏｌ）の１−（２−ジメチルアミノエチル）−ピペラジンを加え、混合物を周囲温度にて６時間撹拌した。得られた混合物を、ジクロロメタンと２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液に分配した。相を分離し、水層をジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機層を合わせ、臭化ナトリウムの飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発した。粗物質を、酢酸エチルと、３５重量％アンモニア水溶液を２容量％含有する酢酸エチル、ジクロロメタンおよびメタノールの４：４：１の混合溶媒の段階勾配を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、［４−（２−ジメチルアミノ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−メタノン（１６０ｍｇ、４２％）を、油として得た。1H-NMR (d6-CDCl3) (: 8.87 (d) [1H], 8.36 (d) [1H],  7.75 (dd) [1H], 7.68 (t) [1H], 7.67 (m) [1H], 7.53 (m) [1H], 7.46 (mt) [1H], 7.42 (md) [1H], 7.13 (dt) [1H], 7.10 (d) [1H], 3.89 (s) [3H], 3.81-3.86 (m) [2H], 3.48-3.55 (m) [2H], 2.58-2.64 (m) [2H], 2.56 (m) [2H], 2.50 (m) [2H], 2.44-2.52 (m) [2H].  MS: m/z 485 (M+H+).  
方法９：
【化２２】
2008508304.tif 000034
【０２５７】
工程１：５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（４７０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、鉱物油中の６０％の水素化ナトリウム（１０４ｍｇ、４．３５ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（１３４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、塩化メトキシエトキシメチル（２４８μｌ、２．１８ｍｍｏｌ）を室温にて加え、混合物を同温度で４時間撹拌し、続いてメタノールの添加により反応停止した。次いで、混合物をエーテルと塩水に分配し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（２５４ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、収率７４％）を、無色の固体として得た（位置異性体５−ブロモ−３−ヨード−２−（２−メトキシ−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンとの１：１混合物）。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO) isomer A (50%)δ8.75 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 5.78 (s, 1H), 3.61-3.63 (m, 2H), 3.37-3.39 (m, 2H), 3.17 (s, 3H); isomer B (50%)δ8.74 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 5.77 (s, 1H), 3.61-3.63 (m, 2H), 3.37-3.39 (m, 2H), 3.16 (s, 3H).
【０２５８】
工程２：５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
密閉バイアル中のアセトニトリル（３ｍＬ）中の５−ブロモ−３−ヨード−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１８０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（１８ｍｇ、２５μｍｏｌ）および２−メトキシフェニルボロン酸（８２ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）と２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（３ｍｌ）の混合物を、６０℃にて２時間撹拌した。粗混合物を酢酸エチルと塩水に分配した。水層を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、粗物質を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（８０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、収率４６％）を、黄色の油として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.70 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.49 (ddd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.09 (dt, 1H), 5.85 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.68-3.70 (m, 2H), 3.39-3.41 (m, 2H), 3.18 (s, 3H). MS: m/z 316, 318 [MH+].
【０２５９】
工程３：３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸の合成
アセトニトリル（４ｍＬ）中の５−ブロモ−３−ヨード−１／２−（２−メトキシ−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（５６０ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ、位置異性体混合物）、２−メトキシフェニルボロン酸（２１７ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（５０ｍｇ、６８μｍｏｌ）と、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）の混合物を、密閉バイアル中で７０℃にて１０５分間撹拌した。次いで、粗生成物を酢酸エチルと水に分配した。水相を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（７８０ｍｇ、純度７５％、１．１２ｍｍｏｌ、収率８２％）を、濃い色の粗油として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.70 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.49 (ddd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.09 (dt, 1H), 5.85 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.68-3.70 (m, 2H), 3.39-3.41 (m, 2H), 3.18 (s, 3H). MS: m/z 316, 318 [MH+].
【０２６０】
アセトニトリル（５ｍＬ）中の上記の粗油（１．１２ｍｍｏｌ）、３−カルボキシフェニルボロン酸（２５９ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（５４ｍｇ、７５μｍｏｌ）と、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１６５℃にて２０分間放射線照射した。粗生成物をアセトニトリルで希釈し、有機相を分離して濃縮した。残渣を、水酸化カリウム水溶液（１０％ｗ／ｖ、１５ｍＬ）に溶解し、酢酸エチル（３×）で洗浄し、セライトを通してろ過した。次いで、ろ液を濃塩酸水溶液の添加によりｐＨ３〜４まで酸性化し、沈殿物を回収した。次いで、ジクロロメタンを沈殿物に加え、不溶性の物質をろ過し、ろ液を濃縮して３−［１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸（３６９ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、収率５７％）を、濃い色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.95 (d, 1H), 8.42 (d, 1H),  8.26 (t, 1H), 8.02 (dt, 1H), 7.98 (dt, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.12 (dt, 1H), 5.91 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.73-3.75 (m, 2H), 3.43-3.45 (m, 2H), 3.21 (s, 3H). MS: m/z 432 [M-H-].
【０２６１】
得られた固体をジクロロメタンに溶解し、ＰＳ−チオフェノール（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（１．４ｍｍｏｌ・ｇ-1、１．２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（６ｍｌ）を加えた。得られた混合物を、５０℃にて８．５時間静かに撹拌した。樹脂をろ過し、ジクロロメタンおよびエーテルで洗浄した。合わせたろ液を濃縮し、炭酸水素ナトリウムの飽和溶液とジクロロメタンに分配した。水相をジクロロメタンで３回洗浄し、次いで、濃塩酸の添加によりｐＨ３〜４まで酸性化した。得られた水相を、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた酢酸エチル相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸（１１７ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、収率４０％、３工程で２５％）を、黄色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.87 (d, 1H), 8.37 (d, 1H),  8.24 (t, 1H), 8.02 (dt, 1H), 7.98 (dt, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.86 (s, 3H). MS: m/z 346 [MH+].  
【０２６２】
工程４：｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メタノンの合成
３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸（２５ｍｇ、７２μｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に、ＰＳ−ＤＣＣ樹脂（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（１８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．２１ｍｍｏｌ・ｇ-1）およびＮ−メチルピペラジン（９．６μｌ、８６μｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、６０℃にて１６時間撹拌した。樹脂をろ過し、ジクロロメタンおよびエーテルで洗浄し、ろ液を濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、ＰＳ−トリスアミン樹脂（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（２０ｍｇ）で処理した。樹脂をろ過により再び除去し、ジクロロメタンおよびエーテルで洗浄した。ろ液を濃縮して、得られた粗生成物を、０．１％ギ酸を含有する水中のアセトニトリルの勾配を用いる質量誘発逆相ＨＰＬＣにより精製して、｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メタノン（１．７ｍｇ、４．０μｍｏｌ、収率６％）を得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.87 (d, 1H), 8.37 (d, 1H),  8.24 (t, 1H), 8.02 (dt, 1H), 7.98 (dt, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.86 (s, 3H). MS: m/z 346 [MH+].
【０２６３】
方法９により製造されるその他の化合物：
【表７】
2008508304.tif 000035
方法１０：
【化２３】
2008508304.tif 000036
【０２６４】
工程１：３−［１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステルの合成
アセトニトリル（７ｍＬ）中の５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（５３５ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、３−メトキシカルボニルフェニルボロン酸（２５８ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（５０ｍｇ、６８μｍｏｌ）と、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（７ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で９０℃にて１０分間放射線照射した。得られた混合物を、酢酸エチルと水に分配した。水相を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。粗物質を、酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、３−［１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステル（６１２ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ、収率１００％）を、黄色の油で得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.96 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.28 (t, 1H), 8.07 (td, 1H), 7.99 (td, 1H), 7.67-7.69 (m, 2H), 7.51 (ddd, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.12 (dt, 1H), 5.92 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.73-3.75 (m, 2H), 3.43-3.45 (m, 2H), 3.21 (s, 3H). MS: m/z 372 [MH+].
【０２６５】
工程２：３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステルの合成
３−［１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステル（５７３ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）溶液を、０〜５℃に冷却し、三フッ化ホウ素エーテル錯塩（０．８ｍｌ、６．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、室温までゆっくりと温め、１６時間撹拌した。形成された黄色の沈殿物をろ過して、３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステル（１１０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、収率２３％）を得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.88 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.27 (t, 1H), 8.06 (td, 1H), 7.99 (td, 1H), 7.65-7.68 (m, 2H), 7.48 (ddd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H). MS: m/z 360 [MH+].
【０２６６】
工程３：｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−ピロリジン−１−イル−メタノンの合成
３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステル（３０ｍｇ、８３μｍｏｌ）をピロリジン（０．３５ｍｌ、４．１５ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を９０℃にて１６時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、粗生成物を、酢酸エチル中の１０容量％のメタノールの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−ピロリジン−１−イル−メタノンを、黄色の固体として得た（２２ｍｇ、５５μｍｏｌ、収率６７％）。1H-NMR (500 MHz, d6-MeOH)δ8.82 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 7.83 (t, 1H), 7.79 (td, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.55-7.59 (m, 2H), 7.48 (ddd, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.11 (dt, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.63 (t, 2H), 3.52 (t, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.92 (m, 2H).  MS: m/z 399 [MH+].
方法１１：
【化２４】
2008508304.tif 000037
【０２６７】
工程１：｛２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−イル｝−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
１２２ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン、１５０ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）の（５−ブロモ−２−フルオロ−ピリジン−３−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン、および１５ｍｇ（１８μｍｏｌ）の１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物を、スミスバイアルに入れた。２ｍＬのアセトニトリル、１ｍｌの水および１ｍｌの炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液を加え、得られた混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１００℃にて３０分間放射線照射した。得られた残渣を、ジクロロメタンと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。相を分離し、水相をジクロロメタンで２回抽出した。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、粗生成物を、１５容量％のメタノールおよびヘキサンを含有する酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、１３７ｍｇのベージュの油を得た。
【０２６８】
油を、２４ｍＬのジメトキシエタンおよび濃塩酸水溶液の１：１混液に溶解した。混合物を５５℃にて１時間加熱し、次いで、炭酸水素ナトリウムの添加により中和した。得られた混合物を、酢酸エチルと水に分配し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発した。粗物質を、０．１％ギ酸を含有する水中のアセトニトリルの勾配を用いる質量誘発逆相ＨＰＬＣにより精製して、１２．３ｍｇ（２８μｍｏｌ、収率１１％）の｛２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−イル｝−モルホリン−４−イル−メタノンを、凍結乾燥してオフホワイトの固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.79 (s, 1H), 12.25 (s, 1H), 8.77 (d, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.46 (ddd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.09 (ddd, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.7-3.2 (m, 8H).  MS: m/z 432 [MH+].  
方法１２：
【化２５】
2008508304.tif 000038
【０２６９】
工程１：（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
８ｍＬのねじ蓋つきバイアルに、５−ブロモイサトイン酸無水物（０．２００ｇ、０．８２６ｍｍｏｌ）、無水ＴＨＦ（５ｍＬ）およびモルホリン（１０１ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密閉し、６０℃のヒートブロックに１．５時間入れた後、これを真空濃縮した。粗生成物を、Ｅｔ2Ｏ／ヘキサンで粉砕して、１１１ｍｇ（９４％）の（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−モルホリン−４−イル−メタノンを、黄褐色の固体として得た。m/z 285/287 [MH+].  
【０２７０】
工程２：｛２−アミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−モルホリン−４−イル−メタノンの合成
５ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに、３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．０４９８ｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−モルホリン−４−イル−メタノン（０．０３７８ｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（１３．４ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１ｍＬ）を加えた。バイアルを密閉し、Ｎ2でパージし、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で９０℃にて５分間放射線照射した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。粗生成物を、１部のＨＣｌＯ4（７０％、ＡＣＳ）および２０部の氷酢酸からなる溶液５ｍＬに溶解し、溶液を室温にて８時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ3の後に固形ＮａＨＣＯ3を用いてｐＨ７に中和した。反応停止した反応混合物を、ＥｔＯＡｃと水に分配し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。Ｃ−１８逆相カラム（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．ＯＤＳ−Ａ  １００Ａ、５μ、５０×２１．３ｍｍ、２０ｍＬ／分にて５〜９５％勾配のアセトニトリル（０．１％ギ酸含有）および水（０．１％ギ酸含有）で溶出）での質量誘発ＬＣ（ポジティブモード、ＥＳＩ）による精製により、表題の化合物を得て、これは凍結乾燥により茶色の粘性の油となった（１２．９ｍｇ、２９％）。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.71 (br. s, 1H), 8.74 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.16(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.62(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.49(dd, J=2.5, 8.0 Hz, 1H), 7.45(m, 1H), 7.37(d, J=2.0 Hz, 1H), 7. 20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.08(t, J=8.5 Hz, 1H), 6.81(d, J=8.0 Hz, 1H), 5.37(s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.60 (m, 4 H), 3.49(m, 4 H); MS: m/z 430.1 [MH+].
【０２７１】
方法１２により製造されるその他の例：
【表８】
2008508304.tif 000039
方法１３：
【化２６】
2008508304.tif 000040
【０２７２】
工程１：２−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−チアゾール−５−カルボン酸の合成
２０ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに、３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．４９９２ｇ、１．０３８ｍｍｏｌ）、２−ブロモ−チアゾール−５−カルボン酸メチルエステル（０．２５９２ｇ、１．１６７ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（９５．４ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５ｍＬ）および２Ｍ  Ｎａ2ＣＯ3水溶液（５ｍＬ）を加えた。バイアルを密閉し、Ｎ2でパージし、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で１３０℃にて３０分間放射線照射した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、酢酸を用いてｐＨ５まで酸性化した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで５回抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。粗生成物を、１部のＨＣｌＯ4（７０％、ＡＣＳ）および２０部の氷酢酸からなる溶液１０ｍＬに溶解し、溶液を室温にて４時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ3の後に固形ＮａＨＣＯ3を用いてｐＨ７に中和した。反応停止した反応混合物を、ＥｔＯＡｃと水に分離し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した。次いで、水相を、酢酸を用いてｐＨ４まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで５回抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。Ｅｔ2Ｏを用いた粉砕により、表題の化合物を緑がかった茶色の粉末として得た（０．２９６ｇ、収率８１％）。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ13.73 (br. s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.71(s, 1H), 8.40(s, 1H), 7.68(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.48(t, J=8.0 Hz, 2H), 7.24(d, J=8.0 Hz, 1H), 7. 10 (t, J=7.5 Hz 1H), 3.87(s, 3H); MS: m/z 353.1 [MH+].
【０２７３】
方法１３により製造されるその他の例：
【表９−１】
2008508304.tif 000041
【０２７４】
【表９−２】
2008508304.tif 000042
【０２７５】
【表９−３】
2008508304.tif 000043
方法１４：
【化２７】
2008508304.tif 000044
【０２７６】
工程１：３−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンスルホンアミドの合成
２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、塩化３−ブロモベンゼンスルホニル（０．３０１ｇ、１．１７９ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加えた。２ＭのジメチルアミンのＴＨＦ溶液（１．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温にてＮ2の下で５時間撹拌した後に、これを真空濃縮した。粗残渣を、ＥｔＯＡｃと１Ｍクエン酸に分配した。層を分離し、有機相を１Ｍクエン酸で３回洗浄し、塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。Ｅｔ2Ｏでの粉砕により、３−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンスルホンアミドを白色粉末として得た（０．２９７ｇ、９６％）。MS: m/z 263.9/265.9 [MH+].
【０２７７】
工程２：３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンスルホンアミドの合成
５ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに、３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．０４９６ｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、３−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンスルホンアミド（０．０４１７ｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）−ジクロリドジクロロメタン付加物（１３．９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１ｍＬ）を加えた。バイアルを密閉し、Ｎ2でパージし、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で９０℃にて１５分間放射線照射した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。粗生成物を、１部のＨＣｌＯ4（７０％、ＡＣＳ）および２０部の氷酢酸からなる溶液５ｍＬに溶解し、溶液を室温にて１時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ3の後で固形ＮａＨＣＯ3を用いてｐＨ７まで中和した。反応停止した反応混合物をＥｔＯＡｃと水に分配し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を塩水で処理し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、ろ過して濃縮した。Ｃ−１８逆相カラム（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．ＯＤＳ−Ａ  １００Ａ、５μ、５０×２１．３ｍｍ、２０ｍＬ／分にて５〜９５％勾配のアセトニトリル（０．１％ギ酸含有）および水（０．１％ギ酸含有）を用いて溶出）での質量誘発ＬＣ（ポジティブモード、ＥＳＩ）による精製により、表題の化合物を得て、これは凍結乾燥により明黄色の粉末となった（１０．４ｍｇ、２５％）。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 13.91 (br. s, 1H), 8.92 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.44(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.12(m, 1H), 8.01(br.s, 1H), 7.76(m, 2H), 7.67(dd, J=2.0, 7.5 Hz, 1H), 7. 45 (m,1H), 7.22(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.09(t, J=8.0 Hz, 1H), 3.85(s, 3H), 2.66 (s, 6H); MS: m/z 409.1 [MH+].
【０２７８】
方法１４により製造されるその他の化合物：
【表１０−１】
2008508304.tif 000045
【０２７９】
【表１０−２】
2008508304.tif 000046
方法１５：
【化２８】
2008508304.tif 000047
【０２８０】
工程１：３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸の合成
マイクロ波バイアル中の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（９９７ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１５ｍＬ）溶液および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１０ｍＬ）に、３−カルボキシフェニルボロン酸、ピナコールエステル（６２５ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタン錯体（１：１）（９４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルに蓋をし、Ｎ2を通気し、真空下で排気し、マイクロ波中で９０℃にて１５００秒間加熱した。アセトニトリルを回転蒸発により除去した。酢酸エチルを加え、次いで、水層から分離した。有機層は濃い茶色であり、ＬＣ／ＭＳは、生成物がこの層に残存することを示した。濃い茶色の油まで濃縮し、５％過塩素酸含有酢酸溶液（１０ｍＬ）に再溶解した。反応溶液を、周囲温度にて４．５時間撹拌した。過塩素酸を回転蒸発により除去して、酢酸エチルおよびＨ2Ｏを加えた。炭酸水素ナトリウムの粉末を、ｐＨ＝３まで加えた。有機層を分離し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、真空濃縮して茶色の粉末を得た（５８０ｍｇ、収率６２％）。1H NMR (500 MHz, d6-DMSOδ13.81 (br s, 1H), 8.81 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.95 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.59 (m, 2H), 7.41 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.04 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H).  MS: m/e 346.1 (M + H+).
【０２８１】
工程２：｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−（４−ピリミジン−２−イル−ピペラジン−１−イル）−メタノンの合成
３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸（１８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および１−（２−ピリミジル）ピペラジン（１１ｕＬ、０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を、周囲温度にて１６時間撹拌した。粗生成物を酢酸エチルに抽出し、Ｈ2Ｏで洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過してシリカゲルに吸着させた。酢酸エチル（１０％のＭｅＯＨ含有）およびヘキサンの勾配を用いるフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、表題の化合物を白色粉末として得た（７．２ｍｇ、収率２８％）。1H NMR (500 MHz, CD3ODδ8.85 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.64 (m, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.64 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 3.96 (br s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.86 (br s, 4H), 3.60 (br s, 2H).  MS: m/z 492.1 (M + H+).
【０２８２】
方法１５により製造されるその他の化合物：
【表１１−１】
2008508304.tif 000048
【０２８３】
【表１１−２】
2008508304.tif 000049
方法１６：
【化２９】
2008508304.tif 000050
【０２８４】
工程１：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（２６０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（１ＭのＴＨＦ溶液を６ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ）およびモレキュラーシーブを加えた。溶液を、撹拌せずに４時間還流加熱した（７０℃）。溶液を周囲温度まで冷却し、希酢酸のＭｅＯＨ溶液の滴下によりｐＨ＝５まで酸性化した。溶液をろ過し、ろ液を回転蒸発により濃縮した。物質をＥｔＯＡｃに抽出し、Ｈ2Ｏで３回洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮して５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを、オレンジ色の固体として得た（１７７ｍｇ、収率９７％）。ＭＳ：ｍ／ｚ３０３．９，３０５．９［Ｍ＋Ｈ+］．物質は、さらなる精製を行わずに工程２で直接用いた。
【０２８５】
工程２：４−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ−メチル−ベンズアミドの合成
マイクロ波バイアル中の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（２６ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１ｍＬ）に、４−（Ｎ−メチルアミノカルボニル）フェニルボロン酸（１７ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタン錯体（１：１）（３．５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルに蓋をし、Ｎ2を通気し、真空下で排気し、マイクロ波中で１３０℃にて１８００秒間加熱した。物質をＥｔＯＡｃに抽出し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した。物質をＳｉＯ2に吸着させ、ＥｔＯＡｃ（１０％ＭｅＯＨ含有）およびヘキサンの勾配でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。清明なフラクションを回転蒸発により濃縮して、表題の化合物を白色粉末として得た（５．９ｍｇ、収率２０％）。1H NMR (500 MHz, CD3ODδ8.85 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.78 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (t, 7.0 Hz, 1H), 7.21 (d, J =  8.5 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.95 (s, 3H).  MS: m/z 359.1 [M + H+].  
【０２８６】
方法１６により製造されるその他の化合物：
【表１２−１】
2008508304.tif 000051
【０２８７】
【表１２−２】
2008508304.tif 000052
方法１７：
【化３０】
2008508304.tif 000053
【０２８８】
工程１：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（３−ピロリジン−１−イルメチル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの合成
３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ベンズアルデヒド（２３ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）およびピロリジン（５ｕｌ、０．０８２ｍｍｏｌ）の１．５ｍｌジクロロエタン溶液に、３ｕｌのＡｃＯＨを加えた。混合物を室温にて３０分間撹拌し、次いで混合物に、トリオキシアセチル水素化ホウ素ナトリウム（２２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を一度に加えた。反応を、室温にてさらに２時間継続し、次いで、混合物を濃縮してＳＥＭ生成物を得て、これを５％過塩素酸塩の酢酸溶液（２ｍＬ）で、室温にて１時間処理した。溶媒を蒸発させ、残渣を炭酸水素ナトリウムの粉末で中和し、次いで、酢酸エチル、次にＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（４／４／１／０．０５）の混液を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（３−ピロリジン−１−イルメチル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（８．５０ｍｇ、収率４４％）を、白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1.89 (d, J = 3 Hz, 4H), 2.76 (d, J =1.5 Hz, 4H), 3.89 (s, 2H), 3.9 (s, 2H), 7.11 (t, J=1 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J =2 Hz, 1H), 7.51 (d, J =2.5 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 6.75 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 8.39 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.83 (d, J = 2 Hz, 1H).  MS: m/z 385 [MH+].
【０２８９】
方法１７により製造されるその他の化合物：
【表１３】
2008508304.tif 000054
方法１８：
【化３１】
2008508304.tif 000055
【０２９０】
工程１：５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミンの合成
３，５−ジブロモ−ピラジン−２−イルアミン（３．００ｇ、１１．８６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（１６ｍｌ）、次いでテトラキストリフェニルフィンパラジウム（０）（６８５ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（Ｉ）（２７１ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。最後に、トリメチルシリルアセチレン（２．０ｍｌ、１４．３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を１２０℃にて３０分間撹拌し、次いで、シリカゲルに直接吸着させた。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、表題の化合物（２．３０ｇ、収率７１％）を、黄色の油として得た。MS: m/z 270.0/272.0 [MH+].
【０２９１】
工程２：Ｎ−（５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イル）−アセトアミドの合成
５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミン（２．３０ｇ、８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３５ｍｌ）溶液およびピリジン（１．６２ｍｌ、２０．０ｍｍｏｌ）に、塩化アセチル（６８２μｌ、９．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて一晩撹拌し、次いで６０℃にて５時間撹拌した。溶媒を真空除去し、得られた茶色の残渣を、酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題の化合物（４７４ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を、明黄色でオフホワイトの固体として得た。MS: m/z 311.9/313.9 [MH+].  
【０２９２】
工程３：２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
Ｎ−（５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イル）−アセトアミド（４７４ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍｌ）溶液に、１Ｍのフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムのＴＨＦ溶液（３．３ｍｌ、３．３ｍｍｏｌ）を滴下した。還流にて１５時間撹拌した後に、反応混合物を真空濃縮し、水を加えた。水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた抽出物をシリカゲルに直接吸着させた。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、表題の化合物（１３０ｍｇ、収率４３％）を、黄色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ12.38 (s br, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.95 (d, 3.5Hz, 1H), 6.61 (d, 3.5Hz, 1H). MS: m/z 197.9/199.9 [MH+].  
【０２９３】
工程４：２−ブロモ−７−ヨード−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２５８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５ｍｌ）に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（３２４ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を一度に加えた。反応混合物を室温にて４５分間撹拌した。得られた沈殿物をろ過紙、最少量のアセトンで洗浄し、真空乾燥して、表題の化合物を明茶色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ12.81 (s br, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.19 (d, 3.0Hz, 1H). MS: m/z 323.8/325.8 [MH+].  
【０２９４】
工程５：２−ブロモ−７−ヨード−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
２−ブロモ−７−ヨード−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２９０ｍｇ、０．８９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中の懸濁液（５ｍｌ）に、ＮａＨ（６０％、４３ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を一度に０℃にて加えた。得られた混合物を２０分間撹拌した後に、塩化パラ−トルエンスルホニル（１８８ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を加えた。次いで、反応混合物を室温にて３時間撹拌した。溶媒を除去し、得られた濃い茶色の残渣をＫＯＨ水溶液、水で洗浄し、乾燥して表題化合物（４２３ｍｇ、収率９９％）を、明茶色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.60 (d, 11.5Hz, 1H), 7.99 (d, 11.5Hz, 2H), 7.44 (d, 7.5Hz, 2H), 2.34 (s, 3H). MS: m/z 477.8/479.8 [MH+].  
【０２９５】
工程６：２−ブロモ−７−（２−メトキシ−フェニル）−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
５０ｍｌの丸底フラスコに、２−ブロモ−７−ヨード−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４２３ｍｇ、０．８８５ｍｍｏｌ）、２−メトキシフェニルボロン酸（１４８ｍｇ、０．９７３ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（３１ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を入れた。この混合物に、アセトニトリル（１０ｍＬ）および２Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えた。反応混合物を４０℃にて１時間、次いで５５℃にてさらに１時間撹拌した。粗反応混合物を、酢酸エチルと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。次いで、水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、２−ブロモ−７−（２−メトキシ−フェニル）−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１３９ｍｇ、収率３４％）を、明黄色の固体として得た。ビス−付加産物である２，７−ビス−（２−メトキシ−フェニル）−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２１３ｍｇ、収率５０％）も得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ４５７．９／４６０．０［ＭＨ+］；ＭＳ：ｍ／ｚ４８６．１［ＭＨ+］（ビス−付加産物）。
【０２９６】
工程７：３−［７−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル］−安息香酸の合成
アセトニトリル（２ｍＬ）中の２−ブロモ−７−（２−メトキシ−フェニル）−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、３−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−安息香酸（５７ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（５．４ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）と炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、２ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で９５℃にて２０分間放射線照射した。粗反応混合物を、ジクロロメタンと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。次いで、水相をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。
【０２９７】
次いで、茶色の粗残渣をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解し、５Ｎ  ＫＯＨ（１５０μＬ）を加えた。次いで、混合物を４０℃にて２時間撹拌した後に、溶媒を除去した。得られた黄色の残渣を、希ＨＣｌ（２ｍｌ）、水で洗浄し、乾燥して、粗酸である３−［７−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル］−安息香酸を得て、これを直接工程８に用いた。MS: m/z 346.0 [MH+].  
【０２９８】
工程８：［４−（２−ジメチルアミノ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−｛３−［７−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル］−フェニル｝−メタノンの合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の３−［７−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル］−安息香酸（３５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（７７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．８ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１７５μｌ、１．０ｍｍｏｌ）の混合物に、２−（ジメチルアミノ）エチルピペルジン（piperzine）（５５μｌ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７０℃にて５時間撹拌した後に、溶媒を除去した。得られた黄色の油を水で洗浄し、ＤＭＳＯに溶解し、逆相ＨＰＬＣで精製して、表題の化合物（８．６ｍｇ、２工程で１２％）を、黄色の固体として得た。MS: m/z 485.2 [MH+].  
【０２９９】
方法１８により製造されるその他の化合物：
【表１４】
2008508304.tif 000056
方法１９：
【化３２】
2008508304.tif 000057
【０３００】
工程１：３−［７−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミドの合成
アセトニトリル（１ｍＬ）中の２−ブロモ−７−（２−メトキシ−フェニル）−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３０ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）、３−ジメチルアミノカルボニルフェニルボロン酸（２５．３ｍｇ、０．１３０  ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（２．５ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）と炭酸水素ナトリウム水溶液（２Ｍ、１ｍＬ）の混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ中で９０℃にて１５分間放射線照射した。粗反応混合物を、ジクロロメタンと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。次いで、水相をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。次いで、茶色の粗残渣をＭｅＯＨ（５ｍＬ）、５Ｎ  ＫＯＨ（５０μＬ）に溶解し、混合物を室温にて７５分間撹拌した。溶媒の除去により、黄色の残渣が得られ、次いでこれをヘキサン中の酢酸エチル、次いでＥｔＯＡｃ中の１０％ＭｅＯＨの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、３−［７−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド（１３．０ｍｇ、収率５４％）を、淡黄色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ8.89 (m, 1H),8.80 (m, 1H), 8.40 (m, 1H), 8.25 (m, 2H), 7.62(m, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.10 (m, 2H), 3.97 (m, 3H), 3.17 (m, 3H), 3.10 (m, 3H).  MS: m/z 373.1 [MH+].  
【０３０１】
方法１９により製造されるその他の化合物：
【表１５】
2008508304.tif 000058
方法２０：
【化３３】
2008508304.tif 000059
【０３０２】
工程１：２，７−ビス−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
２，７−ビス−（２−メトキシ−フェニル）−５−（トルエン−４−スルホニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２００ｍｇ、０．４１２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ＮａＯＨ（６６ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の水（２００μＬ）溶液を加えた。混合物を室温にて３．５時間撹拌した後に、溶媒を除去した。次いで、得られた黄色の残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、２，７−ビス−（２−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４３ｍｇ、収率３２％）を、淡黄色の固体として得た。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ12.21 (s br, 1H), 8.80 (dd, 6.0Hz, 1.75Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.76(dd, 6.0Hz, 1.75Hz, 1H), 7.43 (dt, 7.5Hz, 1.75Hz, 1H), 7.20 (m, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.04(t, 7.3Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85(s, 3H).  MS: m/z 332.1 [MH+].  
方法２１：
【化３４】
2008508304.tif 000060
【０３０３】
工程１：３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メチルエステルの合成
メチル３−アミノ−２−ピラジンカルボキシレート（１０ｇ、６５．３ｍｍｏｌ）およびＮ−ヨードスクシンイミド（２４ｇ、１０６．７ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１５０ｍＬ）に溶解し、混合物を７０℃にて１５時間、窒素雰囲気下に撹拌した。次いで、混合物を室温まで冷却し、チオ硫酸ナトリウムの飽和水溶液（４００ｍＬ）を加えた。懸濁物を１５分間超音波処理し、真空濃縮して水に分散させた。粗生成物をろ過し、冷エタノールで洗浄した。残渣をエタノールから脱色炭を用いて結晶化させて、３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メチルエステル（１１．２ｇ、収率６１％）を、オレンジ色の針状物として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.57 [1H] s, 7.59 [2H] s,br, 3.93 [3H] s.  MS: m/z 280 [MH+].
【０３０４】
工程２：３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸の合成
３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メチルエステル（４５ｇ、１６１ｍｍｏｌ）を、７５０ｍｌのＴＨＦに溶解した。９０ｍｌの水および４０ｍｌの４Ｍの水酸化リチウム水溶液を加えた。混合物を室温にて２時間、またはＴＬＣ分析がベースライン物質のみを示すまで撹拌した。１０％クエン酸水溶液を加えてｐＨを約３〜４に調整した。混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を分離した。水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発した。残渣を減圧乾燥して、３７．０ｇ（１４０ｍｍｏｌ、収率８７％）の３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸を、黄色の粉末として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 11.70 s, weak, 8.44 [1H] s, 7.50 [2H] s,br.  MS: m/z 266 [MH+].
【０３０５】
工程３：３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミドの合成
２７．５０ｇ（０．１０４ｍｏｌ）の３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸、６３．０ｇ（０．１２５ｍｏｌ）のＰｙＢＯＰ（１−ベンゾトリアゾイルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）および１８．７０ｇ（０．１９３ｍｏｌ）のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩を、窒素を通気したフラスコに入れ、次いで、１００ｍｌの無水ＤＭＦおよび２７ｍｌのＮ，Ｎ−ジ−イソ−プロピルエチルアミンの混液に溶解した。混合物を、８０℃にて１６時間加熱した。溶媒を、減圧下で５０〜６０℃にて蒸発させて、濃い色の油を得た。この油を、３００ｍｌのトルエンで３〜４回抽出した。トルエン相を合わせて、蒸発させた。得られた油を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、１８．４０ｇ（５９．７２ｍｍｏｌ、５８％）の３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミドを、黄色の固体として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.28 [1H] s, 6.78 [2H] s, 3.66 [3H] s, 3.25 [3H] s. MS: m/z 309 [MH+].
【０３０６】
工程４：（３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−イル）−フェニル−メタノンの合成
８．００ｇ（２５．９７ｍｍｏｌ）の３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミドを、窒素の下で１００ｍｌの無水ＴＨＦに溶解した。溶液を５５℃に冷却し、２７ｍｌの３Ｍ臭化フェニルマグネシウムのエーテル溶液を加えた。混合物を１０℃まで温め、１０％クエン酸水溶液を加えた。混合物をジクロロメタンで希釈し、相を分離した。水相を、ジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発した。得られた固体をエタノールから結晶化させて、５．７４ｇ（１７．６６ｍｍｏｌ；６８％）の（３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−イル）−フェニル−メタノンを、黄色がかったオレンジ色の結晶として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.52 [1H] s, 7.94 [2H] s,br, 7.85 [2H] d, 7.62 [1H] t, 7.52 [2H] t.  MS: m/z 326 [MH+].
【０３０７】
工程５：５−ヨード−３−（２−メトキシ−１−フェニル−ビニル）−ピラジン−２−イルアミンの合成
２．５２ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）のビス（トリメチルシリル）アミドカリウムを、１５０ｍｌの無水ＴＨＦに、窒素の下で溶解した。３．８０ｇ（１１．１ｍｍｏｌ）の塩化メトキシメチルトリフェニルホスホニウムを加え、混合物を室温にて１時間撹拌した。得られた混合物に、２．５０ｇ（７．６９ｍｍｏｌ）の（３−アミノ−６−ヨード−ピラジン−２−イル）−フェニル−メタノンを加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌した。得られた反応混合物を、２０時間還流加熱した。冷却後に、混合物をジクロロメタンで希釈し、塩化アンモニウムの飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させ、残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、１．９４２ｇ（５．５０ｍｍｏｌ；７２％）の部分的に分割されたＥ−およびＺ−５−ヨード−３−（２−メトキシ−１−フェニル−ビニル）−ピラジン−２−イルアミンを、淡黄色の固体として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: isomer A 8.12 [1H] s, 7.33-7.26 [4H] m, 7.20 [1H] m, 6.66 [1H] s, 6.00 [2H] s,br, 3.81 [3H] s; isomer B 8.09 [1H] s, 7.27 [2H] t, 7.17 [1H] t, 7.11 [2H] d, 6.98 [1H] s, 6.24 [2H] s,br, 3.76 [3H] s.  MS: m/z 354 [MH+].
【０３０８】
工程６：５−ヨード−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
７８０ｍｇの５−ヨード−３−（２−メトキシ−１−フェニル−ビニル）−ピラジン−２−イルアミン（Ｅ形、Ｚ形または混合物）を、４０ｍｌの希塩酸水溶液（約１〜２Ｎ）とエタノールの１：１混液に分散させた。混合物を、２時間還流加熱した。得られた懸濁物に氷を加え、沈殿物をろ過して４８０ｍｇの５−ヨード−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを、淡黄色の粉末として得た。ろ液を、炭酸水素ナトリウムの添加により塩基性にし、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣をエタノールから結晶化して、７６ｍｇの５−ヨード−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを、緑がかった茶色の結晶針状物として得て、合わせた収量は５５６ｍｇであった（７８％）。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 12.56 [1H] s,br, 8.53 [1H] s, 8.46 [1H] d, 8.14 [2H] d, 7.45 [2H] dd, 7.25 [1H] dd.  MS: m/z 322 [MH+].
【０３０９】
工程７：５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
５０ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の５−ヨード−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン、３８ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）の３，４−ジメトキシフェニルボロン酸および６ｍｇ（５ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）を、バイアルに入れ、１ｍｌのアセトニトリルおよび１ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器中で１６５℃にて１２００秒間放射線照射した。得られた混合物を、１５ｍｌの炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液および７５ｍｌのジクロロメタンに分配した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。粗物質を、ジクロロメタン中のメタノールの勾配を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。単離した生成物を、熱エタノールから結晶化させて、１４ｍｇ（４３μｍｏｌ、収率２７％）の５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを、オレンジ色の粉末として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 12.30 [1H] s, 8.92 [1H] s, 8.43 [1H] s, 8.35 [2H] d, 7.80 [1H] (m), 7.79 [1H] d(m), 7.46 [2H] dd, 7.25 [1H] dd(d), 7.13 [1H] d, 3.92 [3H] s, 3.84 [3H] s.  MS: m/z 332 [MH+].
【０３１０】
方法２１により製造されるその他の化合物：
【表１６】
2008508304.tif 000061
方法２２：
【化３５】
2008508304.tif 000062
【０３１１】
工程１：５−（モルホリン−４−イル）−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンの合成
２５ｍｇ（８０μｍｏｌ）の５−ヨード−３−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを、１ｍｌのモルホリンに溶解した。２００μｌの氷酢酸を加え、混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器中で２５０℃まで２４００〜４８００秒間加熱した。粗物質を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いる、予めのワークアップなしのシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１３ｍｇ（４６μｍｏｌ、収率５８％）の２−モルホリン−４−イル−７−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジンを、ベージュの固体として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 11.89 [1H] s, 8.19 [1H] s, 8.18 [2H] d, 7.39 [2H] dd, 7.17 [1H] dd, 3.80 [4H] t, 3.52 [4H] t.  MS, m/z: 281 [MH+].
【表１７】
2008508304.tif 000063
方法２３：
【化３６】
2008508304.tif 000064
【０３１２】
工程１：４−（５−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−フェノールの合成
６８０ｍｇの５−ヨード−３−｛２−メトキシ−１−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−ビニル｝−ピラジン−２−イルアミンを、７０ｍｌの希塩酸水溶液（１〜２Ｎ）に分散させた。メタノールを加えて出発原料を溶解（１０〜２０容量％）することにより、清明な溶液を得た。０．５ｍｌの濃塩酸を加え、混合物を７時間還流まで加熱した。混合物を室温に冷却し、１６時間撹拌した。混合物を、炭酸水素ナトリウムの添加により中性にし、塩を溶液に保つのに必要であれば水を加えた。得られた混合物をジクロロメタンで４回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて４２８ｍｇ（１．２７ｍｍｏｌ、収率８５％）の４−（５−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−フェノールを、十分な純度（＞８５％）のオレンジ色の固体として得て、これはジクロロメタン−酢酸エチルから再結晶化でき、１９５ｍｇ（５７８μｍｏｌ、収率３９％）の純粋な４−（５−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−フェノールを、黄色がかったオレンジ色の結晶として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 12.37 [1H] (d), 9.43 [1H] s, 8.49 [1H] s, 8.26 [1H] d, 7.92 [2H] d, 8.85 [2H] d.  MS: m/z 338 [MH+].
【０３１３】
工程２：４−｛５−［３−メトキシ−４ヒドロキシフェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル｝−フェノールの合成
８４ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の４−（５−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル）−フェノール、１２０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の２−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン、および１５ｍｇ（８ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）をバイアルに入れ、１．５ｍｌのアセトニトリルおよび１．５ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加えた。混合物に、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器中で１６５℃まで１２００秒間放射線照射した。得られた混合物を、ジクロロメタンと炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液に分配した。水層をジクロロメタンで２回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発した。粗物質を、ヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。得られた中間体を、１２０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、１．５ｇ（２．１２ｍｍｏｌ）のＰＳ−チオフェノール（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えた。ここに、２ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、混合物を室温にて１時間撹拌した。樹脂をろ過し、ジクロロメタンで洗浄した。ろ液を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液で洗浄した。相を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。全ての有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣をアセトニトリルと共に加熱し、室温まで冷却し、上清を除去した。残渣を真空乾燥して、１５ｍｇ（４５μｍｏｌ、収率１８％）の４−｛５−［３−メトキシ−４ヒドロキシフェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル｝−フェノールを、ベージュの粉末として得た。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 12.06 [1H] d, 9.35 [1H] s, 9.30 [1H] s, 8.83 [1H] s, 8.20 [1H] d, 8.12 [2H] d(m), 7.75 [1H] d, 7.65 [1H] dd, 6.93 [1H] d, 6.85 [2H] d(m), 3.91 [3H] s.  MS, m/z: 334 [MH+].  
方法２４：
【化３７】
2008508304.tif 000065
【０３１４】
工程１：メチル３−（３−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンズイミデートの合成
ＨＣｌの気体を、３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−ベンゾニトリル（４０ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の２．５ｍｌの無水ＭｅＯＨ中の懸濁物に、０℃にて３分間通気した。室温にて２３時間の撹拌の後に、エーテル（１０ｍＬ）を加え、沈殿物が発生した。ろ過の後に固体を回収して乾燥することにより、メチル３−（３−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンズイミデートを、黄色の固体として得た。
【０３１５】
工程２：Ｃ−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−Ｃ−モルホリン−４−イル−メチレンアミンの合成
工程からのメチル３−（３−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンズイミデートのＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）溶液に、モルフィリン（１５．３ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（９０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて３日間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、Ｃ−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−Ｃ−モルホリン−４−イル−メチレンアミン（３．７ｍｇ、２工程の収率１０％）を、白色固体として得た。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ8.86 (d, 2Hz, 1H), 8.45 (d, 2Hz, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.96 (t, 1.8Hz, 1H), 7.76 (t, 7.8Hz, 1H), 7.66 (dd, 1.8Hz, 7.8Hz, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.21 (d, 8Hz, 1H), 7.12 (dt, 1Hz, 7.8Hz, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.82 (m, 2H) 3.78 (m, 2H), 3.59 (m, 2H).  MS: m/z 414.1 [MH+]. 
【０３１６】
方法２４により製造されるその他の化合物：
【表１８】
2008508304.tif 000066
【０３１７】
バイオアッセイ：
当業者に知られるキナーゼアッセイを、本発明の化合物および組成物の阻害活性をアッセイするのに用いてよい。キナーゼアッセイは、限定されないが、次の例を含む。
【０３１８】
これらの例の最初のものは、Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉの変異形のキナーゼドメイン（「Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤ」）を用いるが、キナーゼアッセイは、例えばタンパク質全体、キナーゼドメインまたはそれらの一部分（例えばＡｂｌ  Ｙ３９３Ｆ）を含む変異体および野生型酵素の種々の形を用いてよい。アッセイにおいて用いられるキナーゼは、リン酸化状態も多様であってよい。ｃ−Ａｂｌの例において、ゼロリン酸化状態の変異体キナーゼが用いられた。
【０３１９】
ｃ−Ａｂｌピルビン酸キナーゼ／乳酸デヒドロゲナーゼ連結酵素アッセイ
ｃ−Ａｂｌピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）／乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）連結アッセイにおいて、基質ペプチドのプロテインキナーゼ依存性リン酸化を、ＮＡＤＨの酸化と連結した。ＮＡＤＨからＮＡＤ＋への酸化は、３４０ｎｍでの吸光度の減少を監視することにより検出した。
【０３２０】
材料：Ａｂｌ基質ペプチド＝ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ−ＯＨ  （Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；βＮＡＤＨ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｎ−８１２９，  ＦＷ＝７０９．４）；２Ｍ  ＭｇＣｌ2；１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５；ホスホエノールピルベート（ＰＥＰ）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ−７００２，ＦＷ＝２３４）；乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌカタログ番号２７５６）；ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ−９１３６）；ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７，ＦＷ＝５５１）；Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェルＵＶｓｔａｒプレート；および精製されリン酸化されていないＴ３１５Ｉ  Ａｂｌキナーゼドメイン。
【０３２１】
ストック溶液：１日毎に新たに作製する１０ｍＭ  ＮＡＤＨ（ｍｉｌｉＱＨ2Ｏ中に７．０９  ｍｇ／ｍｌ）；−２０℃にて保存した１０ｍＭのＡｂｌ基質ペプチド（ｍｉｌｉＱＨ2Ｏ中に１３．４ｍｇ／ｍｌ）；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；１００ｍＭ  ＭｇＣｌ2（５ｍｌの２Ｍ  ＭｇＣｌ2＋９５ｍｌ  ｄＨ2Ｏ）；−２０℃にて保存した１００ｍＭ  ＰＥＰ（ｄＨ2Ｏ中に２３．４ｍｇ／ｍｌ）；−２０℃にて保存した１０ｍＭ  ＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中の５．５１ｍｇ／ｍｌ）（５０μｌを合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに１日毎に希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；液体Ｎ2で急速冷凍され−８０℃にて保存された１０００Ｕ／ｍｌ  ＰＫ（Ｕ／ｍｇはロットにより変動する）；および液体Ｎ2で急速冷凍され−８０℃にて保存された１０００Ｕ／ｍｌ  ＬＤＨ（Ｕ／ｍｇはロットにより変動する）。
【０３２２】
３８４ウェルフォーマットの標準的アッセイのセットアップ（反応物５０μｌ）：３００μＭ  ＮＡＤＨ；１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2；２ｍＭ  ＰＥＰ；４５Ｕ／ｍｌ  ＰＫ；６０Ｕ／ｍｌ  ＬＤＨ；２００μＭ  Ａｂｌ基質ペプチド；２．５μｌ試験化合物（ＤＭＳＯ中）；２μｇ／ｍｌ  Ａｂｌキナーゼドメイン；１０μＭ  ＡＴＰ；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液。陽性対照は、試験化合物を含まないＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は、５μｌの０．５Ｍ  ＥＤＴＡ（アッセイ中で５０ｍＭ）を含んでいた。ｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ変異体の脱リン酸化された形は、生化学的スクリーニングアッセイにおいて用いた。キナーゼ反応は、時間ｔ＝０に、ＡＴＰの添加により開始した。
【０３２３】
活性は、３４０ｎｍでの吸光分光によりＮＡＤＨの時間依存的な損失を追跡することにより測定した。次いで、得られた経過曲線の直線部分を直線回帰により分析して、吸光度単位／時間の活性を得て、その最適近似直線の傾きとして報告した（モル数／単位時間は、３４０ｎｍでのＮＡＤＨのモル吸光係数である６２５０Ｍ-1ｃｍ-1を用いて計算できる）。
【０３２４】
データは、等式：Ｚ’＝１−［３*（σ+＋σ-）／│μ+−μ-│］（Ｚｈａｎｇら，１９９９  Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ４（２）６７〜７３）（式中、μは平均を表し、σは標準偏差を表す）を用いて評価した。下付き文字は、ポジティブまたは陰性対照を表す。耐性のあるスクリーニングアッセイについてのＺ’スコアは、≧０．５０であるはずである。典型的な閾値＝μ+−３*σ+。閾値未満のいずれの値も、「ヒット」と表した。
【０３２５】
用量応答は、等式：ｙ＝ｍｉｎ＋｛（ｍａｘ−ｍｉｎ）／（１＋１０[化合物]-logIC50）｝（式中、ｙは観察された初期傾きであり、ｍａｘ＝阻害剤の非存在下での傾き、ｍｉｎ＝無限の阻害剤での傾き、ＩＣ50は観察された全振幅の１／２に相当する［化合物］である（振幅＝ｍａｘ−ｍｉｎ））を用いて分析した。
【０３２６】
Ａｂｌ  ＫＤの調節、活性化または阻害を測定するために、試験化合物を一連の濃度でアッセイに加えた。阻害剤は、マイクロモルの範囲、ナノモルの範囲または例えばナノモル以下の範囲のＩＣ50にてＡｂｌ  ＫＤ活性を阻害し得る。
【０３２７】
付加的なキナーゼアッセイ
ｃ−Ａｂｌ  ＰＫ／ＬＤＨ連結アッセイ（上記）に加えて、同種の発光ベースの阻害剤スクリーニングアッセイを、ｃ−Ａｂｌ、ＭＥＴ、ＡｕｒＡおよびＰＤＫ１のキナーゼ（なかでも）について開発した。これらのアッセイのそれぞれは、ＡＴＰ喪失アッセイ（Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標），Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてキナーゼ活性を定量した。Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）のフォーマットは、熱安定性のルシフェラーゼを用いて、キナーゼ反応の後の溶液中に残存しているＡＴＰからの発光シグナルを発生させる。発光シグナルは、キナーゼ活性の量と反比例の関係にある。
【０３２８】
ｃＡｂｌ発光ベースの酵素アッセイ
材料：Ａｂｌ基質ペプチド＝ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ−ＯＨ（Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７，ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｒｏｃｈｅ  ９２４２３４２０）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、Ｃｏｓｔａｒ白色３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）、Ａｂｌキナーゼ（以下を参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０３２９】
ストック溶液：−２０℃にて保存した１０ｍＭ  Ａｂｌ基質ペプチド（ｍｉｌｉＱＨ2Ｏ中に１３．４ｍｇ／ｍｌ）；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；−２０℃にて保存した１０ｍＭ  ＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）（５０μｌを合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに１日毎に希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１％ＢＳＡ（１００ｍｌの０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５中に１ｇのＢＳＡ、−２０℃にて保存）、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ2；２００μＭスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新たに作製するかまたは−２０℃にて保存する）。
【０３３０】
３８４ウェルフォーマットの標準的アッセイのセットアップ（２０μｌキナーゼ反応、４０μｌ検出反応）：１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2；１００μＭ  Ａｂｌ基質ペプチド；０．１％  ＢＳＡ；１μｌ試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．４μｇ／ｍｌ  Ａｂｌキナーゼドメイン；１０μＭ  ＡＴＰ；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液。陽性対照は、試験化合物を含まないＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は、１０μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時間ｔ＝０に、ＡＴＰの添加により開始した。キナーゼ反応は、２１℃にて３０分間インキュベートし、２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えてキナーゼ反応を停止し、発光反応を開始した。２１℃での２０分間のインキュベーションの後に、発光をプレート読み取りルミノメータで検出した。
【０３３１】
ＭＥＴ発光ベースの酵素アッセイ
材料：ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ（４：１）基質（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ−０２７５）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７，ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｒｏｃｈｅ  ９２４２３４２０）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、Ｃｏｓｔａｒ白色３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）。ＭＥＴキナーゼ（以下を参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０３３２】
ストック溶液：−２０℃にて保存した１０ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒ水溶液；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；−２０℃にて保存した１０ｍＭ  ＡＴＰ（５０μｌを合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに１日毎に希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１％  ＢＳＡ（１００ｍｌの０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５中に１ｇのＢＳＡ、−２０℃にて保存）、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ2；２００μＭスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新たに作製するかまたは−２０℃にて保存する）。
【０３３３】
３８４ウェルフォーマットの標準的アッセイのセットアップ（２０μｌキナーゼ反応、４０μｌ検出反応）：１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2；０．３ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒ；０．１％  ＢＳＡ；１μｌ試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．４μｇ／ｍｌ  ＭＥＴキナーゼ；１０μＭ  ＡＴＰ；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液。陽性対照は、試験化合物を含まないＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は、１０μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時間ｔ＝０に、ＡＴＰの添加により開始した。キナーゼ反応は、２１℃にて６０分間インキュベートし、次いで２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えてキナーゼ反応を停止し、発光反応を開始した。２１℃での２０分間のインキュベーションの後に、発光をプレート読み取りルミノメータで検出した。
【０３３４】
ＡｕｒＡ発光ベースの酵素アッセイ
材料：Ｋｅｍｐｔｉｄｅペプチド基質＝ＬＲＲＡＳＬＧ（Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７，ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、１０％  Ｂｒｉｊ３５（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号２０３７２８）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、Ｃｏｓｔａｒ白色３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）、自己リン酸化されたＡｕｒＡキナーゼ（以下を参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０３３５】
ストック溶液：−２０℃にて保存した１０ｍＭ  Ｋｅｍｐｔｉｄｅペプチド（水中に７．７２ｍｇ／ｍｌ）；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液＋０．０１５％  Ｂｒｉｊ３５、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍ  ＨＥＰＥＳストック＋７５μＬの１０％  Ｂｒｉｊ３５＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；−２０℃にて保存した１０ｍＭ  ＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）（５０μｌを合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに１日毎に希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１００ｍＭ  ＭｇＣｌ2；２００μＭスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新たに作製するかまたは−２０℃にて保存する）。
【０３３６】
ＡｕｒＡ自己リン酸化反応：ＡＴＰおよびＭｇＣｌ2を、それぞれ１０ｍＭおよび１００ｍＭの最終濃度で、１〜５ｍｇ／ｍｌのＡｕｒＡに加えた。自己リン酸化反応は、２１℃にて２〜３時間インキュベートした。反応を、ＥＤＴＡを最終濃度５０ｍＭまで加えて停止し、試料を液体Ｎ2で急速冷凍し、−８０℃にて保存した。
【０３３７】
３８４ウェルフォーマットの標準的アッセイのセットアップ（２０μｌキナーゼ反応、４０μｌ検出反応）：１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2；０．２ｍＭ  Ｋｅｍｐｔｉｄｅペプチド；１μｌ試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．３μｇ／ｍｌ自己リン酸化されたＡｕｒＡ  ｋｉｎａｓｅ；１０μＭ  ＡＴＰ；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋０．０１５％  Ｂｒｉｊ緩衝液。陽性対照は、試験化合物を含まないＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は、５μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時間ｔ＝０に、ＡＴＰの添加により開始した。キナーゼ反応は、２１℃にて４５分間インキュベートし、次いで２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えてキナーゼ反応を停止し、発光反応を開始した。２１℃での２０分間のインキュベーションの後に、発光をプレート読み取りルミノメータで検出した。
【０３３８】
ＰＤＫ１発光ベースの酵素アッセイ
材料：ＰＤＫｔｉｄｅペプチド基質＝
（Ｕｐｓｔａｔｅカタログ番号１２−４０１）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７、ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、１０％  Ｂｒｉｊ３５（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号２０３７２８）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、Ｃｏｓｔａｒ白色３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）、ＰＤＫ１キナーゼ（以下を参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０３３９】
ストック溶液：−２０℃にて保存した１ｍＭ  ＰＤＫｔｉｄｅ基質（２００μｌ中に１ｍｇ、Ｕｐｓｔａｔｅにより供給されたまま）；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍ  ＨＥＰＥＳストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；−２０℃にて保存した１０ｍＭ  ＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）（２５μｌを合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに１日毎に希釈＝２５μＭのＡＴＰ作業ストック）；１００ｍＭ  ＭｇＣｌ2；２〜８℃にて保存した１０％  Ｂｒｉｊ３５；２００μＭスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新たに作製するかまたは−２０℃にて保存する）。
【０３４０】
３８４ウェルフォーマットの標準的アッセイのセットアップ（２０μｌキナーゼ反応、４０μｌ検出反応）：１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2；０．０１ｍＭ  ＰＤＫｔｉｄｅ；１μｌ試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．１μｇ／ｍｌ  ＰＤＫ１キナーゼ；５μＭ  ＡＴＰ；１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2；１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋０．０１％  Ｂｒｉｊ緩衝液。陽性対照は、試験化合物を含まないＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は、１０μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時間ｔ＝０に、ＡＴＰの添加により開始した。キナーゼ反応は、２１℃にて４０分間インキュベートし、次いで２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えてキナーゼ反応を停止し、発光反応を開始した。２１℃での２０分間のインキュベーションの後に、発光をプレート読み取りルミノメータで検出した。
【０３４１】
同時発現プラスミドの調製
λホスファターゼ同時発現プラスミドを、次のようにして構築した。
【０３４２】
オーロラキナーゼについてのオープンリーディングフレームを、ホモ・サピエンス（ヒト）ＨｅｐＧ２  ｃＤＮＡライブラリー（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６５）から、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、次のプライマー：
フォワードプライマー：TCAAAAAAGAGGCAGTGGGCTTTG
リバースプライマー：CTGAATTTGCTGTGATCCAGG
を用いて増幅した。
【０３４３】
ＰＣＲ産物（７９５塩基対が予想された）を、次のようにしてゲル精製した。ＰＣＲ産物を、１％アガロースゲルでのＴＡＥ緩衝液中の電気泳動により精製し、適切なサイズのバンドをゲルから切り出し、標準的なゲル抽出キットを用いて溶出した。溶出したＤＮＡを、トポイソメラーゼを用いてｐＳＢ２−ＴＯＰＯに室温にて５分間連結した。ベクターｐＳＢ２−ＴＯＰＯは、トポイソメラーゼにより活性化されたｐＥＴ２６ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）の修飾型であり、次の配列：
CATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGT GGTCATATGTCCCTT
がＮｄｅＩ部位に、かつ次の配列：
AAGGGGGATCCTAAACTGCAGAGATCC
がＢａｍＨＩ部位にそれぞれ挿入されている。得られたプラスミドの、シャイン−ダルガルノ配列から「元来の」ＮｄｅＩ部位、停止部位および「元来の」ＢａｍＨＩ部位までの配列は、次のとおりである：
AAGGAGGAGATATACATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGTGGTCATATGTCCCTT [ORF] AAGGGGGATCCTAAACTGCAGAGATCC
このベクターを用いて発現させたオーロラキナーゼは、Ｎ末端に１４アミノ酸（ＭｅｔＧｌｙＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＧｌｙＧｌｙＨｉｓＭｅｔＳｅｒＬｅｕ）およびＣ末端に４アミノ酸（ＧｌｕＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）が付加されている。
【０３４４】
次いで、ホスファターゼ同時発現プラスミドを、λバクテリオファージからのホスファターゼ遺伝子を、上記のプラスミドに挿入することにより作製した（Ｍａｔｓｕｉ  Ｔら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００１，２８４：７９８〜８０７）。ホスファターゼ遺伝子を、ＰＣＲを用いて、鋳型であるλバクテリオファージＤＮＡ（ＨｉｎＤＩＩＩ消化、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）から、次のオリゴヌクレオチドプライマー：
フォワードプライマー（ＰＰｆｏｒ）：GCAGAGATCCGAATTCGAGCTC CGTCGACGGATGGAGTGAAAGAGATGCGC
リバースプライマー（ＰＰｒｅｖ）：GGTGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCAA GCTTTCATCATGCGCCTTCTCCCTGTAC
を用いて増幅した。
【０３４５】
ＰＣＲ産物（７４４塩基対が予想された）を、ゲル精製した。次いで、精製ＤＮＡおよび非同時発現プラスミドＤＮＡを、ＳａｃＩおよびＸｈｏＩの制限酵素で消化した。次いで、消化したプラスミドおよびＰＣＲ産物の両方を、ゲル精製し、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼを用いて１６℃にて８時間連結し、標準的な手法を用いてＴｏｐ１０細胞を形質転換した。同時発現プラスミド中のホスファターゼ遺伝子の存在は、配列決定により確認した。ここで行った標準的な分子生物学のプロトコルについては、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ，１９８９に記載される技術も参照されたい。
【０３４６】
この同時発現プラスミドは、オーロラキナーゼとλホスファターゼの両方の遺伝子を、ｌａｃプロモーターの制御下に含み、それぞれがそれ自体のリボソーム結合部位を有している。マルチクローニングサイトの真中で標的遺伝子の下流にホスファターゼをクローニングすることにより、ホスファターゼを他のプラスミドへサブクローニングするための便利な制限部位が利用可能である。これらの部位は、ＳａｃＩ、ＳａｌＩおよびＥｃｏＲＩをキナーゼとホスファターゼの間に含み、ＨｉｎＤＩＩＩ、ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩをホスファターゼの下流に含む。
【０３４７】
プロテインキナーゼの発現
ｃ−Ａｂｌについてのオープンリーディングフレームを、新しく採取したマウスの肝臓から調製したムス・ムスクルス（マウス）のｃＤＮＡライブラリーから、市販のキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、次のプライマーを用いるＰＣＲにより増幅した：
フォワードプライマー：GACAAGTGGGAAATGGAGC
リバースプライマー：CGCCTCGTTTCCCCAGCTC
【０３４８】
ＰＣＲ産物（８４６塩基対が予想された）を、ＰＣＲ反応混合物から、ＰＣＲクリーンアップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。精製ＤＮＡを、トポイソメラーゼを用いてｐＳＧＸ３−ＴＯＰＯに室温にて５分間連結した。ベクターｐＳＧＸ３−ＴＯＰＯは、トポイソメラーゼにより活性化されたｐＥＴ２６ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）の修飾型であり、次の配列：CATATGTCCCTT
がＮｄｅＩ部位に、かつ次の配列：AAGGGCATCATCACCATCACCACTGATCC
がＢａｍＨＩ部位に挿入されている。得られたプラスミドの、シャイン−ダルガルノ配列から停止部位およびＢａｍＨＩ部位までの配列は、次のとおりである：
AAGGAGGA GATATACATATGTC CCTT[ORF]AAGGGCATCAT CACCATCACCACTGATCC
このベクターを用いて発現させたｃ−Ａｂｌは、そのＮ末端に３アミノ酸（ＭｅｔＳｅｒＬｅｕ）およびそのＣ末端に８アミノ酸（ＧｌｕＧｌｙＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓ）が付加されていた。
【０３４９】
次いで、ｃ−Ａｂｌ／ホスファターゼ同時発現プラスミドを、実施例１のオーロラ同時発現プラスミドからホスファターゼを上記のプラスミドにサブクローニングすることにより作製した。オーロラ同時発現プラスミドおよびＡｂｌ非同時発現プラスミドの両方を、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩで３時間消化した。ＤＮＡ断片をゲル精製し、オーロラプラスミドからのホスファターゼ遺伝子を、消化したｃ−Ａｂｌプラスミドと１６℃にて８時間連結し、Ｔｏｐ１０細胞を形質転換した。得られた構築物中のホスファターゼ遺伝子の存在は、制限消化分析により確認した。
【０３５０】
このプラスミドは、ｃ−Ａｂｌおよびλホスファターゼの同時発現をコードする。これは、標的遺伝子の上流に２つのユニークな制限部位であるＸｂａＩおよびＮｄｅＩを有するというさらなる利点を有し、これは、その他の標的タンパク質をこのホスファターゼ同時発現プラスミドにサブクローニングするのに用いることができる。
【０３５１】
Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉを、Ｑｕｉｃｋ  Ｃｈａｎｇｅ突然変異誘発キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を製造業者の推奨手順に従って用い、以下のオリゴヌクレオチド：
Mm05582dS4 5'-CCACCATTCTACATAATCATTGAGTTCATGACCTATGGG-3'
Mm05582dA4 5'-CCCATAGGTCATGAACTCAATGATTATGTAGAATGGTGG-3'
を用いてＡｂｌプラスミドを修飾することにより調製した。
【０３５２】
ホスファターゼ同時発現プラスミドからのタンパク質は、次のようにして精製した。非同時発現プラスミドを、化学的にコンピテントなＢＬ２１（ＤＥ３）Ｃｏｄｏｎ＋ＲＩＬ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）細胞に形質転換し、同時発現プラスミドを、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＳＡ０１４５（λファージの溶菌遺伝子を発現し、凍結融解により溶菌する株（Ｃｒａｂｔｒｅｅ  Ｓ，Ｃｒｏｎａｎ  ＪＥ  Ｊｒ．Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １９８４  Ａｐｒ；１５８（１）：３５４〜６））に形質転換し、カナマイシン含有ＬＢアガーを含むペトリ皿に培養した。単離したシングルコロニーを対数中期まで増殖させ、１５％グリセロール含有ＬＢ中で−８０℃にて貯蔵した。このグリセロールストックを、カナマイシン含有ＬＢアガープレートに画線し、シングルコロニーを、カナマイシンおよびクロラムフェニコール含有ＬＢの１０ｍｌ培養に植菌するのに用い、これを振とうしながら３０℃にて一晩インキュベートした。この培養を、カナマイシンおよびクロラムフェニコール含有ＬＢの５００ｍｌを含む２Ｌフラスコに植菌するのに用い、これを３７℃にて対数中期まで増殖させ、ＩＰＴＧを０．５ｍＭの最終濃度まで添加することにより誘導した。誘導の後に、フラスコを振とうしながら２１℃にて１８時間インキュベートした。
【０３５３】
ｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤ（キナーゼドメイン）は、次のようにして精製した。細胞を遠心分離により回収し、希釈した分解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５００ｍＭ  ＫＣｌ、０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０、２０ｍＭイミダゾール）中で超音波破砕を用いて溶解し、遠心分離して細胞破片を除去した。可溶性画分は、ニッケルを充填したＩＭＡＣカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）にかけて精製し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭメチオニン、１０％グリセロール中にイミダゾールの２０ｍＭ〜５００ｍＭの勾配を用いて、未変性条件下で溶出した。次いでタンパク質を、ＧＦ５緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭメチオニン、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴおよび１０％グリセロール）で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ７５調製グレードのカラムを用いるゲルろ過によりさらに精製した。精製ｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤキナーゼドメインを含む画分をプールした。得られたタンパク質は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲルでの電気泳動から判断して、９８％の純度であった。精製タンパク質の質量分光分析は、これは主に一リン酸化されていることを示した。次いで、タンパク質を、シュリンプアルカリホスファターゼ（ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｃａｎａｄａ）を、次の条件下で用いて、脱リン酸化した：１ｍｇのｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤ当たり１００Ｕのシュリンプアルカリホスファターゼ、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ2および２５０ｍＭのさらなるＮａＣｌ。反応は、２３℃にて一晩行った。タンパク質は、質量分光分析により、リン酸化されていないことが決定された。いずれの沈殿物をスピンにより除去し、ＧＦ４緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５，１０ｍＭメチオニン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴおよび１０％グリセロール）で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５調製グレードカラムを用いるゲルろ過により、可溶性画分を反応物から分離した。
【０３５４】
Ｍｅｔの精製：
ヒトＭｅｔのキナーゼドメインを発現する１２ＬのＳｆ９昆虫細胞培養の半分から得た細胞ペレットを、元の培養物１Ｌ当たり約４０ｍｌの容量の、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．７および２５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する緩衝液に再懸濁した。Ｒｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号１８７３５８０）１錠を、元の培養物１Ｌ当たり加えた。懸濁物を４℃にて１時間撹拌した。３９，８００×ｇで４℃にて３０分間の遠心分離により、破片を除去した。上清を５００ｍｌビーカーにデカントし、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニンで予め平衡化した１０ｍｌのＱｉａｇｅｎ  Ｎｉ−ＮＴＡ  Ａｇａｒｏｓｅ（カタログ番号３０２５０）の５０％スラリーを加え、４℃にて３０分間撹拌した。次いで、試料をドリップカラムに４℃にて注ぎ、１０カラム容量の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニンで洗浄した。５０ｍＭ、２００ｍＭおよび５００ｍＭのイミダゾールを含有する同じ緩衝液のそれぞれ２カラム容量ずつを順次用いる段階勾配を用いて、タンパク質を溶出した。６×ヒスチジンタグは、タンパク質１ｍｇ当たり４０ユニットのＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０１２７０１７）を一晩用いて、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニン中で４℃にて透析しながら切断した。ニッケルを充填し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニンで平衡化したＰｈａｒｍａｃｉａ  ５ｍｌ  ＩＭＡＣカラム（カタログ番号１７−０４０９−０１）に試料を通すことにより、６×ヒスチジンタグを除去した。切断したタンパク質は、ニッケルカラムに低い親和性で結合し、段階勾配を用いて溶出された。段階勾配は、１５％、次いで８０％のＢ−ｓｉｄｅ（Ａ−ｓｉｄｅ＝５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニン；Ｂ−ｓｉｄｅ＝５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、５００ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニン）をそれぞれ４カラム容量用いて行った。Ｍｅｔタンパク質は第一段階（１５％）で溶出されたが、非切断Ｍｅｔおよび切断されたヒスチジンタグは、８０％画分に溶出された。１５％の画分は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル分析により切断されたＭｅｔの存在を確認した後にプールし、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ８．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロールおよび５ｍＭ  ＤＴＴで平衡化したＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＨｉＬｏａｄ  １６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００調製グレード（カタログ番号１７−１０６９−０１）でのゲルろ過クロマトグラフィーによりさらに精製した。最もきれいなフラクションを合わせ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  １０，００���Ｄａ  ＭＷＣＯ遠心フィルターユニット（カタログ番号ＵＦＣ９０１０２４）中での遠心分離により、約１０．４ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【０３５５】
ＡｕｒＡの精製：
ヒトオーロラ−２を発現する培養細胞６Ｌから得たＳｆ９昆虫細胞ペレット（約１８ｇ）を、５０ｍＭリン酸Ｎａ  ｐＨ８．０、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．２％ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＢＯＧ）および３ｍＭ  β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）中に再懸濁した。Ｒｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号１８７３５８０）１錠および８５ユニットのベンゾナーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎカタログ番号７０７４６−３）を、元の培養物１Ｌ当たり加えた。ペレットを、元の培養物１Ｌ当たり約５０ｍｌ中に再懸濁し、次いで、氷上で２回の３０〜４５秒のバーストを用いて超音波破砕した（１００％デューティーサイクル）。破片を遠心分離により除去し、上清を０．８μｍのシリンジフィルターを通した後に、５ｍｌのＮｉ2+  ＨｉＴｒａｐカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にロードした。カラムを、５０ｍＭリン酸Ｎａ  ｐＨ８．０、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、３ｍＭ  ＢＭＥの６カラム容量で洗浄した。５００ｍＭイミダゾールを含有する同じ緩衝液の直線勾配を用いて、タンパク質を溶出した。溶出液（２４ｍｌ）を、５０ｍＭリン酸Ｎａ  ｐＨ８．０、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、３ｍＭ  ＢＭＥおよび１０，０００ユニットのＴＥＶ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０１２７−０１７）を含有する緩衝液中で４℃にて一晩切断した。タンパク質を、上記のような二番目のニッケル親和性カラムに通した。フロースルーを回収した。切断されたタンパク質画分を合わせ、スピン濃縮器を用いて濃縮した。さらなる精製は、５０ｍＭリン酸Ｎａ（ｐＨ８．０）、２５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ  ＡＭＰ−ＰＮＰまたはＡＴＰ緩衝液、および５ｍＭ  ＤＴＴ中でのＳ７５分級カラムでのゲルろ過クロマトグラフィーにより行った。最もきれいな画分を合わせ、約８〜１１ｍｇ／ｍｌに濃縮し、１２０μｌの一定量で液体窒素中で急速冷凍し、−８０℃にて貯蔵するか、または４℃にて貯蔵した。
【０３５６】
ＰＤＫ１の精製：
ヒトＰＤＫ１を発現する６ＬのＳｆ９昆虫細胞から得た細胞ペレットを、元の培養物１Ｌ当たり約４０ｍＬの容量で５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．７および２５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する緩衝液に再懸濁した。Ｒｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号１８７３５８０）１錠および８５ユニットのベンゾナーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎカタログ番号７０７４６−３）を、元の培養物１Ｌ当たり加えた。懸濁物を４℃にて１時間撹拌した。３９，８００×ｇで４℃にて３０分間の遠心分離により、破片を除去した。上清を５００ｍｌビーカーにデカントし、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニンで予め平衡化した１０ｍｌのＱｉａｇｅｎ  Ｎｉ−ＮＴＡ  Ａｇａｒｏｓｅ（カタログ番号３０２５０）の５０％スラリーを加え、４℃にて３０分間撹拌した。次いで、試料をドリップカラムに４℃にて注ぎ、１０カラム容量の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニンで洗浄した。５０ｍＭおよび５００ｍＭのイミダゾールを含有する同じ緩衝液のそれぞれ２カラム容量ずつを順次用いる段階勾配を用いて、タンパク質を溶出した。６×ヒスチジンタグは、タンパク質１ｍｇ当たり４０ユニットのＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０１２７０１７）を一晩用いて、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニン中で４℃にて透析しながら切断した。ニッケルを充填し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾールおよび１０ｍＭメチオニンで平衡化したＰｈａｒｍａｃｉａ  ５ｍｌ  ＩＭＡＣカラム（カタログ番号１７−０４０９−０１）に試料を通すことにより、６×ヒスチジンタグを除去した。切断したタンパク質は、フロースルー中に溶出されたが、切断されていないタンパク質およびＨｉｓタグは、Ｎｉカラムに結合したままであった。切断したタンパク質の画分を合わせ、スピン濃縮器を用いて濃縮した。さらなる精製は、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ  ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび５ｍＭ  ＤＴＴで平衡化したＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＨｉＬｏａｄ  １６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００調製グレード（カタログ番号１７−１０６９−０１）でのゲルろ過クロマトグラフィーにより行った。最もきれいな画分を合わせ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  １０，０００Ｄａ  ＭＷＣＯ遠心分離フィルターユニット（カタログ番号ＵＦＣ９０１０２４）での遠心分離により、約１５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【０３５７】
細胞アッセイ
ＭＶ４−１１およびＴＨＰ細胞を、１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）およびペニシリン／ストレプトマイシンを補ったイスコブ改変ダルベッコ培地中で維持し、Ｂａ／Ｆ３細胞を、１０％  ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシンおよび５ｎｇ／ｍｌの組換えマウスＩＬ−３を補ったＲＰＭＩ１６４０で維持した。
【０３５８】
細胞生存アッセイ
化合物を、以下のアッセイにおいて二重に試験した。
【０３５９】
９６ウェルＸＴＴアッセイ：細胞を、種々の濃度の化合物（二重）を含有する増殖培地中で９６ウェルプレートにおいて、３７℃にて７２時間増殖させた。最初の細胞数は、ウェル当たり５０００〜８０００細胞であり、容量は１２０μｌであった。７２時間のインキュベーションの後に、４０μｌのＸＴＴ標識混合物（３’−［１−（フェニルアミノ−カルボニル）−３，４−テトラゾリウム］−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸ナトリウム水和物と電気的共役試薬：ＰＭＳ（Ｎ−メチルジベンゾピラジンメチルサルフェート）の５０：１溶液）を、プレートの各ウェルに加えた。３７℃にてさらに２〜６時間インキュベーションした後に、６５０ｎｍでのバックグラウンドを補正した４０５ｎｍでの吸光度の読みを、分光光度計で測定した。
【０３６０】
３８４ウェルアラマーブルーアッセイ：９０μｌの細胞懸濁物を、０．５μｌのＤＭＳＯ中の化合物またはＤＭＳＯのみを予め入れた３８４ウェルプレートの各ウェルに入れた。最初の細胞数は、ウェル当たり４０００細胞であった。７２時間のインキュベーションの後に、１０μｌのアラマーブルー溶液（４４０μＭラザズリンのＰＢＳ溶液）を、プレートの各ウェルに加えた。３７℃にてさらに２時間インキュベーションした後に、励起５３５ｎｍおよび発光５９１ｎｍを用いるＴＥＣＡＮプレート読み取り蛍光光度計を用いて蛍光を測定した。
【０３６１】
ＢＣＲ−ＡＢＬホスホ−ＥＬＩＳＡアッセイ
以下の表は、ＢＣＲ−ＡＢＬホスホ−ＥＬＩＳＡ（「Ｐ−ＥＬＩＳＡ」）アッセイにおいて典型的に用いた試薬を示す。
【表１９−１】
2008508304.tif 000067
【０３６２】
【表１９−２】
2008508304.tif 000068
【０３６３】
細胞（ＷＴ  ＢＣＲ−ＡＢＬ、その他のキナーゼ、またはＢＣＲ−ＡＢＬのＴ３１５Ｉ、Ｙ２５３Ｆもしくはその他の変異形でトランスフェクションしたＢａ／Ｆ3細胞）を、ＩＬ−３の非存在下で、アッセイ前に少なくとも１／２週間増殖させた。アッセイの前日に、細胞に新鮮な培地を供給することにより、アッセイ時に細胞を対数期にした。ＩＬ−３の非存在下で少なくとも１／２週間増殖したＢａ／Ｆ３細胞を、ＲＰＭＩ１６４０に再懸濁して、９６ウェルプレートの各ウェルが約２００，０００細胞を含むようにした。細胞を、試験化合物を一連の希釈濃度で含有する９６ウェルプレートに分配した。細胞を、試験化合物の存否で、５％ＣＯ2、３７℃にて６０〜１２０分間典型的にインキュベートした。インキュベーションは、１０％  ＦＣＳまたは５０％ヒト血漿のようなその他の添加物の存否で行った。化合物のインキュベーションの後に、溶解緩衝液を加え、１０〜１５分間インキュベーションした。溶解物は、遠心分離により清明にした。
【０３６４】
ＥＬＩＳＡプレートを作製するために、市販の抗ＡＢＬ抗体（例えば（Ａｂ−３，Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  ＯＰ２０）を、コーティング緩衝液（０．１Ｍ炭酸Ｎａ、ｐＨ９．５）中に０．１２５μｇ／ｍｌの濃度で調製し、プレート当たり１０ｍｌを入れた（１２．５μｌ  １００μｇ／ｍｌ  Ａｂ／１０ｍｌ）。高結合マルチウェルプレートにおいて、コーティング緩衝液中の１００μｌのＡｂを各ウェルに加え、各プレートをプレートシールで覆い、４℃にて一晩インキュベートした。
【０３６５】
過剰の抗体を除去し、ＥＬＩＳＡプレートを、２００μｌの洗浄緩衝液（ＰＢＳ中に０．０５％Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ７．４）で３〜４回洗浄した。１５０μｌの溶解物（上記を参照）を、ＥＬＩＳＡプレートに移した。プレートをシールし、室温にて２時間インキュベートした。検出抗体（例えばＨＲＰ複合抗ｐＴｙｒまたは未複合のα−ｐ−Ｙ  ４Ｇ１０，Ｕｐｓｔａｔｅ）を、アッセイ希釈液中に調製した。抗体を、アッセイ希釈液中に１：１０００（ストック＝２μｇ／μｌ、１００μｌ中に２００μｇ；ｆ．ｃ．＝２μｇ／ｍｌ）に希釈し、プレート当たり１０ｍｌの希釈した抗体を加えた。溶解物をＥＬＩＳＡプレートから除去し、ウェルを、ウェル当たり２００μｌの洗浄緩衝液で４回洗浄した。１００μｌの検出抗体を、各ウェルに加えた；プレートを覆い、室温（２１℃）にて１時間インキュベートした。過剰の検出抗体をＥＬＩＳＡプレートから除去し、ウェルを、ウェル当たり２００μｌの洗浄緩衝液で４回洗浄した。
【０３６６】
所望により（すなわち、未複合の抗ｐＴｙｒ抗体について）、二次抗体（ヤギ抗ウサギＨＲＰ）を、アッセイ希釈液中に１：３０００で希釈し（１０ｍｌの希釈液当たり３．３３μｌ）、プレート当たり１０ｍｌの希釈した抗体を加えた。過剰の二次抗体をＥＬＩＳＡプレートから除去し、プレートをウェル当たり２００μｌの洗浄緩衝液で４回洗浄した。
【０３６７】
基質試薬Ａおよび基質試薬Ｂ（Ｐｉｅｒｃｅカタログ番号３７０７０  ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡ  Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を、使用の直前に加えた（プレート当たり１０ｍｌの得られた溶液）。１００μｌの基質を各ウェルに加え、１分間混合して、化学発光シグナルを、ルミノメータを用いて測定した。
【表２０−１】
2008508304.tif 000069
【０３６８】
【表２０−２】
2008508304.tif 000070
【０３６９】
【表２０−３】
2008508304.tif 000071
【０３７０】
【表２０−４】
2008508304.tif 000072
【０３７１】
【表２０−５】
2008508304.tif 000073
【０３７２】
【表２０−６】
2008508304.tif 000074
【０３７３】
【表２０−７】
2008508304.tif 000075
【０３７４】
【表２０−８】
2008508304.tif 000076
【図面の簡単な説明】
【０３７５】
【図１】図１は、ＡＢＬエキソンＩａによる野生型ＡＢＬの番号付けを示す。
【図１】
2008508304.tif 000083
【手続補正書】
【提出日】平成18年10月25日(2006.10.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３２】
プロテインキナーゼを、式：
【化４】
2008508304.tif 000084
［式中、
Ｌ１およびＬ２は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ１〜Ｃ５アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ１およびＲ２は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであるが、但し、Ｒ１およびＲ２が共に非置換フェニルであるとき、Ｌ１は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない］
で示される化合物と接触させることを特徴とする、プロテインキナーゼの活性を調節する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３６】
治療を必要とする対象における癌、アレルギー、喘息、炎症、閉塞性気道疾患、自己免疫疾患、代謝疾患、感染、ＣＮＳ疾患、脳腫瘍、肥満、喘息、血液学的疾患、神経変性疾患、心血管疾患、または血管新生、新血管新生もしくは脈管形成を伴う疾患の治療方法であって、対象に、式：
【化５】
2008508304.tif 000085
［式中、
Ｌ１およびＬ２は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ１〜Ｃ５アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ１およびＲ２は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであるが、但し、Ｒ１およびＲ２が共に非置換フェニルであるとき、Ｌ１は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない］
で示される治療的有効量の化合物を投与することを含む方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３８】
医薬的に許容される賦形剤と、請求項１、２８もしくは２９の一項に記載の化合物または式：
【化６】
2008508304.tif 000086
［式中、
Ｌ１およびＬ２は独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ１〜Ｃ５アルキレン、または非置換２〜５員ヘテロアルキレン（ここに、ｎは０〜２の整数である）であり、
Ｒ１およびＲ２は独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールであるが、但し、Ｒ１およびＲ２が共に非置換フェニルであるとき、Ｌ１は非置換２〜５員ヘテロアルキレンではない］
で示される化合物とを含む医薬組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成19年3月28日(2007.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2008508304000001.app
【国際調査報告】
2008508304.tif 000087
2008508304.tif 000088
2008508304.tif 000089
2008508304.tif 000090