(57)【要約】  ウィルス性感染症を治療または抑制するための、アミン誘導体を含む組成物およびこれらの使用法を開示する。
2008528697.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウィルス感染症の治療を必要とする患者におけるその治療方法であって、治療上有効量の式：
【化１】
2008528697.tif 000015
［式中：
Ｕは（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
ｎは０、１、２、３、４または５であり；
ＸはＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
ＹはＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
Ｒ１は置換されていてもよいアリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ２は置換されていてもよいヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアルキルシクロアルキルであり；および
Ｒ３は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはアラルキルである］
で示される化合物、あるいはその薬理学的に許容される塩、溶媒和物、水和物または処方を投与することを含む、方法。
【請求項２】
さらに、ＭＡＰＫ経路阻害剤および任意の抗増殖剤を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ウィルスがＨＨＶ−８、ＨＨＶ−４およびＢ型肝炎ウィルスからなる群より選択されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ＭＡＰＫ経路阻害剤が表Ｉに示される阻害剤の群より選択されるところの、請求項２記載の方法。
【請求項５】
抗増殖剤が表Ｉに示される薬剤の群より選択されるところの、請求項２記載の方法。
【請求項６】
ウィルス感染症を治療または予防するための医薬組成物であって、医薬上許容される担体中にて、式：
【化２】
2008528697.tif 000016
［式中：
Ｕは（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
ｎは０、１、２、３、４または５であり；
ＸはＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
ＹはＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
Ｒ１は置換されていてもよいアリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ２は置換されていてもよいヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアルキルシクロアルキルであり；および
Ｒ３は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはアラルキルである］
で示される化合物、あるいはその薬理学的に許容される塩、溶媒和物、水和物または処方と、表Ｉに示される群より選択される薬剤または阻害剤とを含み、該化合物および該薬剤または阻害剤の各々が該組成物中にて該ウィルスの感染力を弱めるのに効果的な量にて存在する、医薬組成物。
【請求項７】
ウィルスがＨＨＶ−８、ＨＨＶ−４およびＢ型肝炎ウィルスからなる群より選択されるところの、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
ウィルス感染症に罹りやすい宿主にて該ウィルス感染症を予防する方法であって、治療上有効量の式：
【化３】
2008528697.tif 000017
［式中：
Ｕは（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
ｎは０、１、２、３、４または５であり；
ＸはＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
ＹはＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり；
Ｒ１は置換されていてもよいアリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ２は置換されていてもよいヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアルキルシクロアルキルであり；および
Ｒ３は置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはアラルキルである］
で示される化合物、あるいはその薬理学的に許容される塩、溶媒和物、水和物または処方を投与することを含む、方法。
【請求項９】
さらに、ＭＡＰＫ経路阻害剤および任意の抗増殖剤を投与することを含む、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
ウィルスがＨＨＶ−８、ＨＨＶ−４およびＢ型肝炎ウィルスからなる群より選択されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
ＭＡＰＫ経路阻害剤が表Ｉに示される阻害剤の群より選択されるところの、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
抗増殖剤が表Ｉに示される薬剤の群より選択されるところの、請求項９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウィルス学および細胞内シグナル伝達の分野に関する。より具体的には、本発明は、ウィルス感染症、特にヘルペスウィルスにより惹起される感染症の治療に有用な組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
いくつかの刊行物および特許文献を本明細書全体を通して引用することにより、本発明に関連する技術の現状を説明する。これらの引用文献はそれぞれ、その内容が十分に開示されているかのように、出典を明示することにより本明細書の一部とする。
【０００３】
ＨＨＶ−８は、最近同定されたウィルスであり、カポジ肉腫（ＫＳ）に関連し、おそらく体腔リンパ腫と呼ばれる型の癌（リンパ組織から起こる腫瘍）に関連している（１）。ＫＳＨＶは、すべての年齢層が世界中で罹る疾患を起こすことのできる、重要な病原体である（２）。カポジ肉腫は、ＨＩＶに感染した男性に主に見られる稀な皮膚腫瘍である。さらにＨＨＶ−８はＨＩＶに感染した個体の精液においても単離されている。これらの要因から、ＨＨＶ−８は性感染症を起こし得ると考えられている。
【０００４】
ＡＩＤＳ流行の当初から、ＨＩＶに加えてＫＳを起こす他の感染因子があるのではないかと考えられていた。１９８０年代には、ＡＩＤＳに感染した同性愛の男性のおよそ３０〜４０％が、その疾病のある時点でカポジ肉腫を発症した。これに反して、ＨＩＶに感染した女性または血友病者では、ＫＳの発症は稀であった。このことは、ＫＳを発症する可能性を高める、ゲイおよび両性愛者の男性間で追加の因子が存在することを示唆していた。１９９４年、研究者らはＫＳ生検試料においてそれまで知られていなかったウィルスを同定した（３）。このウィルスは、ヒトヘルペスウィルス８（カポジ肉腫随伴ヘルペスウィルス−ＫＳＨＶの名でも知られている）と名づけられた。該ウィルスは、水疱帯状疱疹（水痘／帯状疱疹）、エプスタイン・バー・ウィルス（単核症）ならびに単純ヘルペス１および２（口腔ヘルペスおよび陰部ヘルペス）を含む、ヒトヘルペスウィルスの重要なファミリーに属する。ＨＨＶ−８の同定後、研究者らは、ＡＩＤＳの流行前から見られた腫瘍型を含め、カポジ肉腫の実質的にすべての腫瘍型にこのウィルスを検出することができた。
【０００５】
完全なＨＨＶ−８のゲノム配列の分析により、ヘルペスウィルス・サイミリ（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｓａｉｍｉｒｉ）（ＨＶＳ）、マウスガンマヘルペスウィルス６８（ＭＨＶ６８）およびエプスタイン・バー・ウィルス（ＨＨＶ−４）を含む、他のガンマヘルペスウィルスとの類似点が明らかである。約１６５ｋｂのこのゲノムは、Ｇ＋Ｃ含有量が高い８０１ｂｐの末端反復単位が多数個隣接する、長鎖ユニーク領域内に配置された８０個を超えるオープンリーディングフレームを含む。該長鎖ユニーク領域は、ほとんどのヘルペスウィルス中に見られる保存遺伝子のブロックを含み、ＨＨＶ−８および関連ウィルスに特異的な非相同遺伝子のブロックがその間に散在している。
【０００６】
ＫＳＨＶが腫瘍原性を誘導する発症機序は未だ不明である。しかしＫＳＨＶは、癌遺伝子として機能するＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）をコードし、ＧＰＣＲの発現はげっ歯類の繊維芽細胞を悪性に形質転換させ、ヌードマウスにて腫瘍を発生させる。ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲを発現するトランスジェニックマウスは、高度に血管性の内皮系腫瘍を発症する（４〜６）。このような腫瘍原性は、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）のシグナル伝達カスケードを恒常的に活性化する、ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲの能力に関連している（７）、（８）。ＥＲＫカスケードの主要な活性化因子の１つは、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ１／２−ＥＲＫシグナル伝達軸である（９）。さらにいくつかの事例では、ＧＰＣＲはＲａｓを介してシグナル伝達することが知られている（１０〜１２）。多数のウィルスがこのシグナル伝達軸を利用して感染を確立することを考えると、この経路を撹乱する薬剤は、例えばエプスタイン・バー・ウィルスおよびＢ型肝炎ウィルスを含むウィルスに対して有効であることが分かるはずである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＫＳＨＶを含むウィルス感染症を治療するために有益な組成物および方法の必要性は、明らかに存在する。本願はこのような組成物および方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明により、治療を必要とする患者のウィルス感染症を治療するための方法を提供する。一例となる方法は、式：
【化１】
2008528697.tif 000003
【０００９】
［式中：
Ｕは、（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり、
ｎは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり、
Ｙは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり、
Ｒ１は、所望により置換されていてもよいアリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり、
Ｒ２は、所望により置換されていてもよいヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアルキルシクロアルキルであり、および
Ｒ３は、所望により置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはアラルキルである］
で示される化合物、あるいはそれらの薬理学的に許容される塩、溶媒和物、水和物または処方の治療有効量を患者に投与することを必要とする。
【００１０】
本発明の好ましい実施形態は、上記の化合物をＭＡＰＫ経路抑制剤および／または抗増殖剤を組み合わせて投与することを含む。適切な抑制剤および薬剤は後記の表Ｉに示す。本発明の方法は、ＨＨＶ−８、ＨＨＶ−４およびＢ型肝炎ウィルスにより起こるウィルス感染症の治療において有効であることが分かるはずである。
【００１１】
さらに本発明の他の実施形態において、ウィルス感染症を治療または抑制するための医薬組成物を提供する。例示的組成物は上述の化合物と、表Ｉに示された群より選択される少なくとも１種の薬剤または抑制剤とを、医薬として許容される担体内に含む。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、前記感染症に感染しやすい宿主においてウィルス感染症を予防するための方法を含む。このような方法の１つは上記の化合物の治療有効量と、所望により少なくとも１種のＭＡＰＫ経路抑制剤および／または抗増殖剤とを投与することを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
最近、ヒトＲａｓ癌タンパク質とＲａｆ癌タンパク質との間の相互作用を遮断し、活性化Ｒａｓに関連する様々な癌表現型を抑制し、ＭＣＰ１のＮ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イルエチル）−２−クロロベンズアミド、およびＭＣＰ１１０のＮ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イルエチル）−５−フェニルペンタン酸アミドで代表される、新規な一群のタンパク質−タンパク質相互作用抑制剤が記載された（１３、ＰＣＴ／ＥＰ０２／１２２２（ＷＯ０３／０３７８６５））。ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲの細胞形質転換におけるＲａｓの関与に基づいて、我々は、これらの化合物をＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換細胞に対する有効性に関して評価した。我々は、これらの化合物がＨＨＶ−８（ＫＳＨＶ）ウィルス由来ＧＰＣＲ癌遺伝子により形質転換した、マウス繊維芽細胞の足場依存性増殖および足場非依存性増殖を抑制でき、該化合物をＭＡＰＫ経路抑制剤であるＵ０１２６およびＢＡＹ４３−９００６、ならびに細胞毒性薬タキソールと組み合わせたときに、形質転換細胞の増殖抑制に強力な相加効果を生じ得ると判定した。
【００１４】
本明細書に記載した化合物は、ＲａｓとＲａｆとの間の相互作用を遮断し、したがって抗ウィルス剤としての明らかな有効性を有するはずである。すでに同定されたシグナル伝達カスケードに基づくと、このようなウィルスは、限定するものではないが、ＨＨＶ−８、ＨＨＶ−４およびＢ型肝炎ウィルスを含む。さらに、本発明を実施するのに使用する化合物は、ウィルス感染症の治療法または予防法において、他の公知の抗ウィルス剤または抗増殖剤と組み合わせることができる。
【００１５】
本発明を実施するのに有用な化合物は、式（Ｉ）：
【化２】
2008528697.tif 000004
【００１６】
［式中：
Ｕは、（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり、
ｎは、０、１、２、３、４または５であり、
Ｘは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり、
Ｙは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２またはＣＯＮＨであり、
Ｒ１は、所望により置換されたアリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり、
Ｒ２は、所望により置換されたヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアルキルシクロアルキルであり、および
Ｒ３は、所望により置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはアラルキルである］
で示される化合物あるいはこれらの薬理学的に許容される塩、溶媒和物、水和物または処方物を含む。
【００１７】
アルキルなる語は、１個または２〜１０個までの炭素原子、好ましくは１個または２〜６個までの炭素原子、例えば、１個または２〜６個の炭素原子を含む、飽和または不飽和（すなわちアルケニルおよびアルキニル）の、直鎖または分鎖のアルキル基を指し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−へキシル、２，２−ジメチルブチル、ｎ−オクチル、エテニル（ビニル）、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソプレニルまたはヘキサ−２−エニル；エチニル、プロピニルまたはブチニルの各基を指す。
【００１８】
アルケニルおよびアルキニルなる語は、２〜１０個までの炭素原子、好ましくは２〜６個までの炭素原子、例えば、２〜６個の炭素原子を含む、不飽和の直鎖または分鎖のアルキル基を指し、例えば、エテニル（ビニル）、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソプレニルまたはヘキサ−２−エニル；エチニル、プロピニルまたはブチニルの各基を指す。
【００１９】
ヘテロアルキルなる語は、１個または複数個の炭素原子が酸素、窒素、リンまたは硫黄の原子で置換された、本明細書中で定義されたアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基を指し、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むアルコキシ基；メトキシメチル、エトキシメチル、１−メトキシエチル、１−エトキシエチル、２−メトキシエチルまたは２−エトキシエチルなどの（１〜４Ｃ）アルコキシ（１〜４Ｃ）アルキル基；あるいはシアノ基；あるいは２，３−ジオキシエチル基を指す。ヘテロアルキルなる語はさらに、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むカルボン酸またはカルボン酸アミドに由来する基を指し、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、またはピバロイルなどの、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むアシル；アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシまたはピバロイルオキシなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むアシルオキシ；カルボキシメチル、カルボキシエチル、カルボキシプロピル、カルボキシブチルなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むカルボキシアルキル；カルボキシアルキルメチルエステル、カルボキシアルキルエチルエステル、カルボキシアルキルプロピルエステル、カルボキシアルキルイソプロピルエステル、カルボキシアルキルブチルエステルまたはカルボキシアルキル−ｔｅｒｔ−ブチルエステルなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むカルボキシアルキルエステル；カルボキシアルキルアミドまたはアルキルカルバモイル、例えばＮ−メチルカルバモイル、Ｎ−エチルカルバモイル、Ｎ−プロピルカルバモイル、Ｎ，Ｎ’−ジメチルカルバモイル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルカルバモイルまたはＮ，Ｎ’−ジプロピルカルバモイルなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むＮ−（１〜４Ｃ）アルキルカルバモイルまたはＮ，Ｎ’−（１〜４Ｃ）ジアルキルカルバモイル）；メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むアルコキシカルボニル；あるいはメトキシカルボニルオキシ、エトキシカルボニルオキシ、プロポキシカルボニルオキシ、イソプロポキシカルボニルオキシ、ブトキシカルボニルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシなどの１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含むアルコキシカルボニルオキシであってよい。
【００２０】
シクロアルキルなる語は、３〜１４個の炭素原子、好ましくは３、４、５または６〜９または１０個の炭素原子を含む骨格により形成される環を、１個または複数個有する飽和または部分的に不飽和の環状基を指し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、テトラリン、シクロペンテニルまたはシクロヘキス−２−エニルの各基を指す。
【００２１】
ヘテロシクロアルキルなる語は、１個または複数個の炭素原子が１個または複数個の酸素、窒素、リンまたは硫黄の原子で置換された、本明細書中で定義されるシクロアルキル基を指す。ヘテロシクロアルキルの具体例は、ピペリジノ、モルホリノ、Ｎ−メチル−ピペラジノまたはＮ−フェニル−ピペラジノの各基である。
【００２２】
アリールなる語は、５〜１４個の炭素原子、好ましくは５または６個から９または１０個の炭素原子を含む骨格により形成される環を、１個または複数個有する芳香環基を指し、例えば、フェニル基、インデン基またはナフチル基を指す。具体例はベンジル、トリル、フェネチル、ビフェニル、キシリル、クミル、２−、３−または４−メトキシフェニル、２−、３−または４−エトキシフェニル、４−カルボキシフェニルアルキルあるいは４−ヒドロキシフェニルの各基である。
【００２３】
ヘテロアリールなる語は、１個または複数個の炭素原子が酸素、窒素、リンまたは硫黄の原子で置換された、本明細書中で定義されるアリール基を指し、例えば、４−ピリジル、２−イミダゾリル、３−ピラゾリル、キノリニル、イソキノリニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、インドリル、インダゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、ピリジニル、ピリミジニルおよびピリダジニルの各基を指す。
【００２４】
アラルキルおよびヘテロアリールアルキルなる語は、本明細書中で定義されるアリールまたはヘテロアリールそれぞれと、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび／またはヘテロアルキル（例えば、アラルキルオキシの場合は、アルコキシ基）および／またはシクロアルキル環状系および／またはヘテロシクロアルキル環状系との両方を含む基を指す。このような基の例は、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、アリールヘテロアルキル、アリールヘテロアルケニル、アリールヘテロアルキニル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ヘテロアリールヘテロアルケニル、ヘテロアリールヘテロアルキニル、アリールシクロアルキル、ヘテロアリールシクロアルキル、アリールヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールヘテロシクロアルキル、アリールシクロアルケニル、ヘテロアリールシクロアルケニル、アリールシクロアルキニル、ヘテロアリールシクロアルキニル、アリールヘテロアルケニル、ヘテロアリールヘテロアルケニル、アリールヘテロアルキニル、ヘテロアリールヘテロアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアルケニルおよびヘテロアリールアルキニルの各基であり、環状基は飽和していてもよく、または１カ所、２カ所または３カ所が不飽和であってもよい。例としては、テトラヒドロイソキノリニル、ベンジル、ベンジルオキシ、２または３−エチル−インドリルまたは４−メチルピリジノの各基である。
【００２５】
アルキルシクロアルキルおよびヘテロアルキルシクロアルキルなる語は、本明細書中で定義されるシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルそれぞれと、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび／またはヘテロアルキル（例えば、アラルキルオキシの場合は、アルコキシ基）の各基との両方を含む基を指す。このような基の例は、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルキル、アルケニルヘテロシクロアルキル、アルキニルヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキルシクロアルキル、ヘテロアルケニルシクロアルキル、ヘテロアルキニルシクロアルキル、ヘテロアルキルヘテロシクロアルキル、ヘテロアルケニルヘテロシクロアルキル、ヘテロアルキニルヘテロシクロアルキルの各基であり、環状基は飽和していてもよく、または１カ所、２カ所または３カ所が不飽和であってもよい。
【００２６】
本明細書中で定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールアラルキルまたはヘテロアリールアルキルの各基はいずれも、１個または複数個のハロゲン原子、ＮＨ２、ＳＨ、ＮＯ２またはＯＨの各基で置換されていてもよく、あるいは本明細書中で定義される、非置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アラルキルオキシ、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルの各基でもよい。
【００２７】
「置換されていてもよい」なる語は、１個または複数個の水素原子が、ハロゲン原子、ＮＨ２、ＳＨ、ＮＯ２またはＯＨの各基により、あるいは本明細書中で定義される、非置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アラルキルオキシ、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルの各基により置換されてもよい基を指す。
【００２８】
Ｕが（ＣＨ２）ｎであり、ｎが０、１または２である、式（Ｉ）の化合物が好ましい。
【００２９】
Ｒ１が所望により置換されたフェニル環である、式（Ｉ）の化合物がさらに好ましく、該フェニル環がベンジルオキシ基により置換されているとさらにより好ましい。
【００３０】
Ｒ２が、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール（窒素を含んだヘテロシクロアルキル基またはヘテロアリール基が特に好ましい）である、式（Ｉ）の化合物もまた好ましい。
【００３１】
Ｒ２がピリジル基またはピペリジル基である式（Ｉ）の化合物がさらに好ましい。
【００３２】
Ｒ３がアリールまたはアラルキルである式（Ｉ）の化合物がさらに好ましい。
【００３３】
Ｒ１が式：
【化３】
2008528697.tif 000005
【００３４】
（式中、Ｒ４はＨ、アルキルオキシまたはアラルキルオキシ（Ｈ、メトキシまたはベンジルオキシがより好ましい）であり、Ｒ５はＦ、Ｃｌ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル（Ｃｌ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましく、ベンジルオキシはより好ましい）である）の基である式（Ｉ）の化合物も好ましい。
【００３５】
Ｒ３がＣ１〜Ｃ６アルキル基（特にイソプロピル基）である式（Ｉ）の化合物がさらに好ましい。
【００３６】
ＸがＣＯまたはＳＯ２であり、ＹがＣＨ２である、式（Ｉ）の化合物がより好ましい。
【００３７】
ＸがＣＨ２であり、ＹがＣＯまたはＳＯ２である、式（Ｉ）の化合物がさらに好ましい。
【００３８】
式（ＩＩ）
【化４】
2008528697.tif 000006
【００３９】
（式中、Ｈｅｔはピリジル基であり、ｎは０、１または２であり、ＸはＣＨ２であり、ＹはＣＯまたはＳＯ２であり、Ｒ３はアリールまたはアラルキルであり、Ｒ４はＨ、アルキルオキシまたはアラルキルオキシ（Ｈ、メトキシまたはベンジルオキシがより好ましい）であり、Ｒ５はＦ、Ｃｌ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル（Ｃｌ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましく、ベンジルオキシがより好ましい）の化合物も好ましい。
【００４０】
Ｈｅｔがピリジル基であり、ｎが０、１または２であり、ＸがＣＯまたはＳＯ２であり、ＹがＣＨ２であり、Ｒ３がアリールまたはアラルキルであり、Ｒ４がＨ、アルキルオキシまたはアラルキルオキシ（Ｈ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましい）であり、Ｒ５がＦ、Ｃｌ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル（Ｃｌ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましく、ベンジルオキシがより好ましい）である、式（ＩＩ）の化合物がさらに好ましい。
【００４１】
Ｈｅｔがピペリジル基であり、ｎが０、１または２であり、ＸがＣＨ２であり、ＹがＣＯまたはＳＯ２であり、Ｒ３がアリールまたはアラルキルであり、Ｒ４がＨ、アルキルオキシまたはアラルキルオキシ（Ｈ、メトキシまたはベンジルオキシがより好ましい）であり、Ｒ５がＦ、Ｃｌ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル（Ｃｌ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましく、ベンジルオキシがより好ましい）である、式（ＩＩ）の化合物も好ましい。
【００４２】
Ｈｅｔがピペリジル基であり、ｎが０、１または２であり、ＸがＣＯまたはＳＯ２であり、ＹがＣＨ２であり、Ｒ３がアリールまたはアラルキルであり、Ｒ４がＨ、アルキルオキシまたはアラルキルオキシ（Ｈ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましい）であり、Ｒ５がＦ、Ｃｌ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル（Ｃｌ、メトキシまたはベンジルオキシが好ましく、ベンジルオキシがより好ましい）である、式（ＩＩ）の化合物がさらに好ましい。
【００４３】
Ｒ３が式（ＣＨ２）ｍＰｈの基であり、式中ｍは０、１、２、３、４または５（ｍが２、３または４がより好ましい）であり、フェニル基は所望により置換されていてもよい、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物がさらに好ましい。
【００４４】
式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、Ｎ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イル−エチル）−２−クロロ−ベンズアミドは含まない。
【００４５】
以下の化合物は特に好ましい：
−  Ｎ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシ−ベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−４−イル−エチル）−ベンゼンスルホンアミド、
−  Ｎ−（２−クロロ−ベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イル−エチル）−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシ）−ベンズアミド、
−  Ｎ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシ−ベンジル）−Ｎ−（２−ピペリジン−２−イル−エチル）−４−フェニル−酪酸アミド、
−  Ｎ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシ−ベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イル−エチル）−５−フェニル−ペンタン酸アミド。
【００４６】
式（Ｉ）または（ＩＩ）のある種の化合物は、以下の説明では、その１つのみが具体的に記述、または描写されるかと思われる各互変異性体、異なる幾何異性体（シス／トランス異性体またはより一般的には（Ｅ）または（Ｚ）異性体として通常示される）、あるいは１つまたは複数の不斉炭素原子またはキラル炭素原子により生じる異なる光学異性体（通常Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ則またはＲ／Ｓ法に基づいて命名される）を有してもよいことを認識すべきである。さらに、いくつかの化合物は多形を示してもよい。明確に除外していない限り、これらすべての互変異性体、幾何異性体または光学異性体（ならびにラセミ化合物およびジアステレオマー）および多形は、本発明に含まれる。
【００４７】
本発明はさらに、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の薬理学的に許容される塩、または溶媒和物および水和物のそれぞれと、その組成物および処方物とに関する。本発明による医薬組成物は、有効成分として式（Ｉ）または（ＩＩ）の少なくとも１種の化合物と、所望により担体および／または希釈剤および／または補助剤とを含む。このような薬理学的に許容される、式（Ｉ）または（ＩＩ）の十分に塩基性の化合物の塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの生理学的に許容される無機酸の塩、またはメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、乳酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、サリチル酸などの有機酸の塩である。さらに式（Ｉ）または（ＩＩ）の十分に酸性の化合物は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウムまたはマグネシウムの塩；アンモニウム塩；あるいは有機塩基塩、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、コリン水酸化物、Ｎ−メチル−Ｄ−アミノメタン（メグルミン）、ピペリジン、モルホリン、トリス（２−ヒドロキシエチル）アミン、リジンまたはアルギニンの塩を形成してもよい。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、溶媒和されていてもよく、特に水和されていてもよい。水和は製造の過程で行われても、式（Ｉ）または（ＩＩ）の当初無水の化合物の吸湿性の結果として水和されてもよい。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、不斉炭素原子を含んでおり、アキラル化合物、ジアステレオマーの混合物、エナンチオマーの混合物、または光学的に純粋な化合物のいずれとして存在してもよい。
【００４８】
本発明はまた、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物と、本明細書中に定義されるアルコキシ、アラルキルオキシ、アシルまたはアシロキシの各基、例えばエトキシ、ベンジルオキシ、アセチルまたはアセチルオキシなどの、生理的条件下で開裂すると見込まれる少なくとも１種の薬理学的に許容される保護基とで構成されるプロドラッグに関する。
【００４９】
上記のように、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物、これらの溶媒和物、塩、および処方物を含む治療上有用な薬剤もまた、本発明の範囲内に含まれる。一般に、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、当分野で知られている、公知であり許容される方式を使用して、単独または他の任意の治療薬との組合せのどちらかにより、投与されるであろう。このような治療上有用な薬剤は、以下の経路のうちの１つ、例えば錠剤、糖衣錠、コーティング錠、ピル、半固体、軟カプセルまたは硬カプセル、例えば軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセル、水性または油性溶液、乳剤、懸濁液あるいはシロップとして経口的に、例えば注射用溶液または懸濁液として静脈注射、筋肉注射および皮下注射を含む非経口的に、座薬として直腸から、例えば粉末処方物、微結晶または噴霧液（例えば液体エアロゾル）として吸入法または吹送法により、例えば有効成分を含む湿布薬などの経皮デリバリーシステム（ＴＤＳ）を介して経皮的に、あるいは経鼻的に投与できる。このような錠剤、ピル、半固体、コーティング錠、糖衣錠および硬カプセル、例えばゼラチンカプセルの製造のために、治療上有用な製品は、医薬として不活性な無機または有機賦形剤、例えばラクトース、スクロース、グルコース、ゼラチン、麦芽、シリカゲル、デンプンまたはこれらの誘導体、タルク、ステアリン酸またはそれらの塩、乾燥スキムミルクなどと混合してもよい。軟カプセルの製造のためには、賦形剤、例えば植物油、石油、動物油または合成油、ワックス、脂質、ポリオールを使用してよい。溶液、乳剤または懸濁液あるいはシロップの製造のためには、賦形剤、例えば水、アルコール、生理食塩水、デキストロース水溶液、ポリオール、グリセリン、植物油、石油、動物油または合成油を使用してよい。座薬に関しては、賦形剤、例えば植物油、石油、動物油または合成油、ワックス、脂質、およびポリオールを使用してよい。噴霧処方物に関しては、本目的に適切な圧縮ガス、例えば酸素、窒素および二酸化炭素を使用してよい。医薬として有用な薬剤は、保存用および安定化用の添加剤、例えばＵＶ安定剤、乳化剤、甘味料、芳香剤、浸透圧を変化させる塩、緩衝剤、コーティング添加剤および酸化防止剤を含んでもよい。
【００５０】
他の治療薬との組合せは、他の治療上有用な薬剤、例えば癌を予防または治療するために使用する薬剤を含んでよい。（表Ｉ参照）
【００５１】
上記の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の合成に使用する方法の詳細な説明は、２００３年５月８日（ＷＯ０３／０３７８６５Ａ１）に発行されたＰＣＴ／ＥＰ０２／１２２２２に示されており、その開示全体は参照により本明細書に組み込まれている。
【００５２】
以下の実施例を提供し、本発明の様々な実施形態を例示する。これらは本発明を少しも限定するものではない。
【実施例１】
【００５３】
以下の材料および方法を、実施例１の実施を容易にするために提供する。
【００５４】
細胞系。Ｋ−Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）を安定に形質移入したＮＩＨ３Ｔ３細胞、Ｎ末端切断型で恒常的活性型のＲａｆ−１（Ｒａｆ２２ｗ）（１３）、（Ｃｈａｎｎｉｎｇ  Ｄｅｒ、Ｊａｎｉｅｌ  Ｍ．Ｓｈｉｅｌｄｓ両博士のご好意で提供された）、またはＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ（７）、ＥＣ−ｖＧＰＣＲ内皮細胞（８０）（Ｓｉｌｖｉｏ  Ｇｕｔｋｉｎｄ博士のご好意で提供された）を、１０％（ｖ／ｖ）子ウシ血清および抗生物質（１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および２．５μｇ／ｍｌのピューロマイシンまたは５００μｇ／ｍｌのＧ−４１８）で補充したダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％ＣＯ２中で３７℃で保存した。酵母Ｇａｌ４結合部位−ルシフェラーゼ転写レポーター遺伝子、およびＥｌｋ１（ＨＬＲ−Ｅｌｋ１、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）とのＧＡＬ４−ＤＮＡ結合ドメイン融合体を安定に形質移入したヒーラ細胞を、供給業者の提言に従って保存した。
【００５５】
化合物。アミン誘導体のＮ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イルエチル）−２−クロロベンズアミド］（ＭＣＰ１）およびＮ−（４−ベンジルオキシ−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−ピリジン−２−イルエチル）−５−フェニルペンタン酸アミド（ＭＣＰ１１０）を（１４）に記載のプロトコルにより合成した。Ｂａｙ４３−９００６であるＮ−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−Ｎ’−（４−（２−（Ｎ−メチルカルバモイル））−４−ピリジロキシ）フェニル）尿素、およびＵ０１２６である１，４−ジアミノ−２，３−ジシアノ−１，４−ビス（２−アミノフェニルチオ）−ブタジエンは、それぞれＣａｌｂｉｏｃｈｅｍおよびＰｒｏｍｅｇａより購入した。タキソールおよびスタウロスポリンはＢｉｏｍｏｌより入手した。
【００５６】
増殖試験。５０００細胞を９６ウェル平底プレートの各ウェルに接種し、３７℃にて５％ＣＯ２中で一晩インキュベートした。接種細胞の増殖は、調製したＷＳＴ−１試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）７．５μｌを３つの対照ウェルに加え、ＯＤ６５０およびＯＤ４５０の吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０プレートリーダーにより測定することで決定した。ＯＤ６５０−ＯＤ４５０値が０．５より大の場合、残りのプレートを使用し、上記のアミン誘導体、他の薬剤または対照の溶媒と共に４８時間インキュベートした。インキュベーション後、ＷＳＴ−１試薬をウェルに加え、ＯＤ６５０−ＯＤ４５０値を先のように計算した。各条件に対して３つのウェルを試験し、標準偏差を決定した。すべての実験を少なくとも独立に３回実施した。
【００５７】
足場非依存性増殖試験。足場非依存性増殖試験を（１５）に記載の方法を少し変更し実施した。細胞を、１０％子ウシ血清および抗生物質を補充したＤＭＥＭ培地に再懸濁し、０．５％寒天と混合し、最終濃度を０．３３％寒天中６０００〜２５０００細胞／ｍｌとした。この細胞懸濁液０．３ｍｌを２４ウェルプレート中の０．５％寒天基層上に積層し、２〜４時間、３７℃でインキュベートした。寒天上層が固化した後、ＤＭＳＯ中の化合物または最終濃度１％に希釈されたＤＭＳＯを加え、その後１２〜２１日インキュベートした。コロニーの視覚化のために、４０μｌのＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌチアゾリルブルー臭化テトラゾリウム）および６０μｌのＰＢＳを各ウェルに加え、その後標準培養条件の下で一晩インキュベートした。６００μｍより大きい染色コロニーを、Ｎｉｋｏｎ  ＳＭＺ１５００解剖顕微鏡をＩｍａｇｅ  Ｐｒｏ−Ｐｌｕｓソフトウェア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ；  Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）により駆動したＲｏｐｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．Ｃｏｏｌ  Ｓｎａｐ冷却電荷結合素子（ＣＣＤ）カラーカメラと連動させて使用して記録した。各化合物に関して、生存曲線は最小で濃度６点に基づいていた。各濃度は、少なくとも３回の個別の実験により試験し、各試験は三重に実施した。ＩＣ５０値は、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅスイートパッケージ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮＪ、ＵＳＡ）のＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して測定した。
【００５８】
Ｅｌｋ１−ルシフェラーゼ転写試験。ＨＬＲ−Ｅｌｋ１細胞を９６ウェルプレートに接種した（３００００細胞／ウェル）。２０時間後、培地を９０μｌ／ウェルの血清非含有飢餓培地に取り替えた。７２時間後、化合物またはＤＭＳＯ溶媒を加えた。さらに１時間後、細胞を１０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦにより誘導した。陰性対照（最小レポーター試験）として、参照細胞はＥＧＦにより誘導されなかった。さらに５時間のインキュベーションの後、該細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性をＢｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して測定した。
【００５９】
細胞周期試験。細胞周期の分画をフローサイトメトリーにより調べた。細胞をトリプシン処理し、遠心分離により収集し、滅菌ＰＢＳで２度洗浄し、再懸濁し、７０％エタノールを用いて−２０℃で２〜１２時間固定した。細胞を再度遠心分離にかけ、冷たいＰＢＳで２度洗浄し、１００μｌのＰＢＳに再懸濁した。細胞懸濁液を０．５ｍｌの３０ｍＭクエン酸ナトリウム、２０μｇ／ｍｌヨウ化プロピジウムおよび１μｌの１０ｍｇ／ｍｌＤＮａｓｅ非含有ＲＮａｓｅ  Ａと混合した。該細胞を３７℃、遮光下で１時間インキュベートし、その後１００００細胞からのＤＮＡ含有量を、４８８ｎｍ波長のアルゴン−イオンレーザーを備えたＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔプログラム（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して測定した。結果は所定のＤＮＡ含有量を有する相対的細胞数で表わしたヒストグラムとして示した。
【００６０】
アポトーシス試験。上記のアミン誘導体および／またはタキソールを用いて処理した、安定に形質移入した細胞系のアポトーシスを評価するために、５０００００細胞を６ウェルプレートに接種した。細胞は多様な濃度のアミン誘導体および／またはタキソールを用いて７２時間処理し、フローサイトメトリー用に回収、またはこれらを使用し溶解物を調製した。細胞をトリプシン処理により回収し、蛍光活性セルソーター試験（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に関する供給業者の提言（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に従ってアネキシンＶ−ＦＩＴＣおよびヨウ化プロピジウムにより標識した。
【００６１】
結果および考察
ＭＣＰ１およびＭＣＰ１１０はＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３繊維芽細胞における増殖および軟寒天コロニー形成を強力に抑制する。ＭＣＰ１およびＭＣＰ１１０を、ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲを用いて安定に形質転換されたＮＩＨ３Ｔ３マウス繊維芽細胞系の、足場依存性増殖および非依存性増殖を抑制する能力に関して試験した。ＭＣＰ１およびＭＣＰ１１０は共に、細胞増殖のＷＳＴ−１試験において、ＮＩＨ３Ｔ３−ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞の増殖を十分に抑制し、ＩＣ５０はそれぞれ２４μＭおよび２８μＭであった。（図１）。ＭＣＰ１およびＭＣＰ１１０の化合物は、同じ細胞による軟寒天コロニー形成も十分に抑制し、ＩＣ５０値は、それぞれ１６μＭおよび１４μＭであった（図２）。さらにＫＳＨＶ−ＧＰＣＲはＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達モジュールを介してシグナル伝達を中継するという見解を試験するために、我々は、Ｒａｆキナーゼ触媒作用抑制剤のＢＡＹ４３−９００６、およびＭｅｋキナーゼ抑制剤のＵ０１２６を含む他の関連経路の抑制剤もＮＩＨ３Ｔ３−ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞の増殖を抑制できるかどうかも評価した。ＢＡＹ４３−９００６およびＵ０１２６は、どちらもＮＩＨ３Ｔ３−ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞の増殖も抑制し、ＩＣ５０値はＭＣＰ化合物と同等であった（図１、２）。
【００６２】
ＭＣＰ１１０と、ＢＡＹ４３−９００６およびＵ０１２６との併用効果。我々は、ＭＣＰ１およびＭＣＰ１１０がＲａｓとＲａｆとの相互作用を調節することにより、ＥＲＫシグナル伝達経路を介するシグナル伝達を低下させるが、内因性ＥＲＫのリン酸化、またはＥＬＫ１などのＥＲＫ依存性プロモーターの転写活性化（１６）により判断されるように、ＥＲＫシグナル伝達を１００％は抑制しないことを示した。我々は、このＲａｓ依存性シグナル伝達軸の２種の異なる抑制剤の組合せは、ＥＲＫ抑制において、および細胞増殖について相加効果または相乗効果を有し得る可能性を考えた。第１の工程として、我々はＲａｆキナーゼ抑制剤のＢＡＹ４３−９００６、およびＭＥＫキナーゼ抑制剤のＵ０１２６と組み合わせたＭＣＰ化合物が、恒常的活性化Ｋ−Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）癌遺伝子を用いて形質転換したＮＩＨ３Ｔ３モデル細胞系の軟寒天での増殖および繁殖を抑制する度合いを評価した。ＭＣＰ１１０とこれらの抑制剤の各々との組合せの結果、軟寒天コロニー形成試験において強力な相乗効果が観察された（図３Ａ）。これらの結果は、ヒーラ細胞におけるＥｌｋ１−ルシフェラーゼレポーター試験においても、ＭＣＰ１１０とＢＡＹ４３−９００６との間に、およびそれほどではないがＵ０１２６との間に併用効果が確定されるという観察結果により十分に裏付けられた（図３Ｂ）。これらの化合物すべては、ＭＡＰＫシグナル伝達経路を介したシグナル伝達を調節し、したがってＥｌｋ１−ルシフェラーゼレポーターの発現を調節することを示したので、軟寒天試験における相乗的増強の可能な機序はＭＡＰＫシグナル伝達がより完全に抑制されたことにより説明できる。これに反して、ＭＣＰ１１０とスタウロスポリン（タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）抑制剤）との組合せは増殖を相乗的に抑制はせず（図３Ｃ）、ＭＣＰ１１０は混用において無差別な細胞毒性がないことを示した。
【００６３】
ＭＣＰ１１０とタキソールとの併用効果：足場非依存性増殖の抑制における相乗効果。タキソール（パクリタキセル）は、肺癌、卵巣癌および乳癌の治療に広く使用される（１７）。最近ＦＤＡは、タキソールをＡＩＤＳ患者のカポジ肉腫の二次治療法として承認した（１８）。タキソールの主な作用様式は、微小管動態を撹乱する細胞毒性薬剤としてであり、タキソールは直接ＭＡＰＫ経路を介したシグナル伝達に影響は及ぼさないが、タキソールは、Ｒａｆ−１活性化を調節し、かつＲａｆ−１状態に依存する異なる活性を有する化合物としても関与してきており（１９〜２５）、そのためＭＣＰ化合物とタキソールとの相互作用を試験することは興味深い。我々はまず、Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）、ｃＲａｆ２２Ｗ（恒常的活性化Ｒａｆ、Ｒａｓとの相互作用に非依存性である）およびＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞を用いて形質転換されたＮＩＨ３Ｔ３細胞における、タキソールによる足場依存性増殖または足場非依存性増殖の抑制に関するＩＣ５０を確定した。ＷＳＴ−１増殖試験におけるタキソールのＩＣ５０値は、Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）形質転換細胞において０．９μＭ、Ｒａｆ２２Ｗ形質転換細胞において０．２μＭ、ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換細胞において０．７５μＭと定めた（図４Ａ）。軟寒天コロニー形成試験におけるタキソールのＩＣ５０は、Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）、Ｒａｆ２２ＷおよびＫＳＨＶ−ＧＰＣＲでそれぞれ４９．７、８．７および６３．３ｎＭと確定した（図４Ａ）。我々はその後ＮＩＨ３Ｔ３−Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）細胞を用いて実施された軟寒天コロニー形成試験において、濃度１または１０μＭのＵ０１２６、ＢＡＹ４３−９００６またはＭＣＰ１１０の存在下でタキソールのＩＣ５０値を定めた。顕著なことに、１μＭのＭＣＰ１またはＭＣＰ１１０の存在下でタキソールのＩＣ５０は４９．７ｎＭから１０．７ｎＭへ減少し、１０μＭのＭＣＰ１またはＭＣＰ１１０の存在下ではタキソールのＩＣ５０値は１〜１．５ｎＭへ減少した（図４Ｂ）。Ｕ０１２６またはＢＡＹ４３−９００６とタキソールとの組合せの結果では、最小限の効果しか得られなかったので、このＩＣ５０値における減少は、ＭＣＰ化合物に特異的であった（図４Ｂ）。ＮＩＨ３Ｔ３−Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）細胞の足場依存性増殖の抑制において、ＭＣＰ１１０とタキソールとの組合せの間には同様の結果が得られたが、ＢＡＹ４３−９００６はこれらの細胞においてはいくらかの有効性を有する（図４Ｃ）。
【００６４】
我々は次に、上記のアミン誘導体、ＢＡＹ４３−９００６およびＵ０１２６の化合物を組み合わせる効果を、ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞において調べた。この場合、足場非依存性増殖の抑制の著しい増強が認められ、Ｒａｓ形質転換細胞での結果も同様であった（図４Ｄ）。同時にこれらのデータは、上記のアミン誘導体とタキソールとの相乗効果はＨＨＶ−８関連疾患の治療に関して有益となり得ることを示唆しており、このような効果の機序はＫ−Ｒａｓ（Ｖ１２）形質転換細胞において観察された機序と関連している可能性がある。
【００６５】
ＭＣＰ１１０はタキソール処理したＮＩＨ３Ｔ３−Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）細胞のＧ２／Ｍ期停止およびアポトーシスを誘導する。Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）およびＫＳＨＶ−ＧＰＣＲにおける上記のアミン誘導体およびタキソールに関して著しい用量依存性併用効果が確定されたため、認められた相乗作用の可能な機序を調査した。我々は、以前にＩＣ５０濃度で使用されたＭＣＰ１１０が、ＧＩ期において細胞周期停止を促進することを示した（１６）。細胞のＤＮＡ損傷および紡錘体チェックポイントの状態に依存して、タキソールは分裂停止を起こし、細胞死に導く（２５、２６）。
【００６６】
我々は、低濃度のＭＣＰ１１０またはタキソールを単独または組み合わせて処理した、Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）およびｃＲａｆ２２Ｗ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ならびに対照のＤＭＳＯの細胞周期の分画を調べた（図５）。我々はまず、Ｇ２／Ｍ期における各々の細胞系（各々の事例に１μＭ）のタキソール依存性停止に必要な臨界濃度を明らかにした。我々は次に、１μＭのＭＣＰ１１０により処理された細胞の細胞周期プロフィールは、対照のＤＭＳＯによる細胞増殖のプロフィールと同一であったことを明らかにした。同様に、ＩＣ５用量のタキソール（Ｋ−Ｒａｓ（ＶＩ２）細胞において１００ｎＭ、ｃＲａｆ２２Ｗ細胞において１０ｎＭ）により処理された細胞は対照と違いがなかった。しかし１μＭのＭＣＰ１１０とＩＣ５濃度のタキソールとの組合せはＫ−Ｒａｓ（Ｖ１２）細胞において、細胞をＧ１期からＧ２／Ｍ期の分画に実質的に推移させたが（Ｇ２／Ｍ期中の細胞１８〜１９％からＧ２／Ｍ期中の８６％に）、このような効果はｃＲａｆ２２Ｗ細胞においては認められなかった（図５）。この細胞周期推移は、細胞アポトーシスの増加と連動していたかどうかを究明するために、我々はＦＡＣＳ試験においてアネキシンＶとヨウ化プロピジウムの二重染色を使用し、アポトーシス細胞またはネクローシス細胞の同定を行った。示した通り（図６）、１μＭのＭＣＰ１１０とＩＣ５用量のタキソールとの組合せにより、Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）においてアネキシンＶ陽性細胞の量は有意に増加するが、ｃＲａｆ２２Ｗ形質転換細胞においては増加しない。さらに、対照実験において２０μＭ以下の濃度のＵ０１２６は、試験した細胞系のいずれにおいてもアポトーシスまたは細胞周期停止の誘導に効果はなく（結果は示さず）、アポトーシス促進効果はタキソールおよびＭＣＰ１１０を用いた細胞の処理に応じてＭｅｋ１、２キナーゼの上流レベルで誘導されたことがわかった。
【００６７】
本明細書中に記載したアミン誘導体のＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞の増殖および足場非依存性増殖性を抑制する実証済み能力と共に、タキソールの併用結果によって、抗ＫＳＨＶ薬剤としてＭＣＰ化合物類を使用することが、論理的に支持される。さらにこの結果は上記のアミン誘導体（またはＢＡＹ４３−９００６などのＲａｆ触媒性抑制剤）とタキソールとの組合せ、あるいはＭＣＰ化合物とＢＡＹ４３−９００６との組合せは、ＫＳＨＶまたはＲａｓ形質転換細胞を抑制する特に有力な手段となり得ることを示唆している。
【００６８】
実際に、以下の表Ｉは、本明細書中に記載されたアミン誘導体との組合せで使用する時に、ウィルス感染症の治療に関する治療的有効性を有するはずの様々な抗増殖性薬剤および細胞毒性薬剤を載せている。
【００６９】
【表１】
2008528697.tif 000007
【００７０】
先の実施例はＨＨＶ−８感染症の抑制を対象としているが、多くのウィルスは細胞性シグナル伝達経路を吸収し、ウィルスの複製を促進することが公知であり、いくつかの事例では腫瘍形成を誘導することもできる。これらのウィルスのいくつか（例えば、ＨＨＶ−８、ＨＨＶ−４およびＢ型肝炎ウィルス）の説明は以下である。
【００７１】
１）上記の実施例において述べたように、ＨＨＶ−８により起こるカポジ肉腫は、カポジ肉腫ヘルペスウィルス／ヒトヘルペスウィルス８（ＫＳＨＶ／ＨＨＶ−８）による長期感染症の後に誘導される多発性血管増殖腫瘍である。この腫瘍の発現は、多発性血管新生因子およびサイトカインの有効性に完全に依存しており、これらは、ＫＳＨＶがコードするウィルス性Ｇタンパク質共役受容体（ｖＧＰＣＲ）などのタンパク質により提供される、ウィルスがコードする癌遺伝子シグナルから協力して作用する。図７に示すように、ＫＳＨＶ感染細胞の形質転換をｖＧＰＣＲが誘導するためには、自己分泌／傍分泌機序が直接的にも間接的にも関与しているが、その誘導には多くの血管新生因子およびサイトカインの発現および分泌の増強が必要である。これらの因子はＶＥＧＦ、ＩＬ−８、ＩＬ−６、Ｇｒｏ  α（４２〜４４）を含み、自己分泌型においてｖＧＰＣＲの直接形質転換効果を強化することにより、ｖＧＰＣＲシグナル伝達を促進する（４５、４６）。最近、ＫＳＨＶ−ｖＧＰＣＲは、ＶＥＧＦ受容体−２／ＫＤＲタンパク質の活性化を介して、ヒト内皮ＨＵＶＥＣ細胞の不死化に関係していた（４７）。最終的にｖＧＰＣＲは、Ｒａｆ−１キナーゼおよびＩＫＫキナーゼについてのシグナル伝達を進めるｐ２１活性化キナーゼ−１（Ｐａｋ１）の活性化を介して（７）、ＡＰ−１、ＮＦ−κＢおよびＮＦ−ＡＴを含む鍵となる転写因子を活性化することにより、サイトカインおよび増殖因子の発現を誘導する（４８、７）。ＭＣＰ化合物は発癌性Ｒａｓ増殖因子およびＴＮＦにより誘導されるＡＰ−１およびＮＦ−κＢ転写因子の活性化を調節し（５０）、ＲａｆおよびＲａｓのシグナル伝達は細胞のＧＰＣＲにより誘導されるシグナル伝達に関連があることが示されているので（５１、５２）、Ｒａｓ−Ｒａｆの相互作用を遮断することがＫＳＨＶ−ｖＧＰＣＲ依存性機能を妨害すると考えることは妥当である。本明細書中に提供される予備的データは、ＫＳＨＶ−ｖＧＰＣＲ依存性細胞形質転換に関するこの提案された機序を裏付けている。
【００７２】
ＨＨＶ−４／エプスタイン・バー・ウィルス（ＥＢＶ）はＫＳＨＶのようなガンマヘルペスウィルスの同じ群に属している。エプスタイン・バー・ウィルスは、風土性バーキットリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、未分化鼻咽頭癌およびいくつかの他の癌を含む、多くのリンパ球および内皮起源の悪性腫瘍と関連している（５３〜５６）。ＫＳＨＶのように、ＥＢＶのゲノムは免疫不全の移植患者およびＡＩＤＳを有する個体のリンパ腫およびリンパ球増殖性疾患において頻繁に見い出される（５７、５８）。２型および３型の潜伏感染の間にＥＢＶにより発現する内在性膜タンパクであるＬＭＰ１は、Ｒａｔ−１細胞およびＮＩＨ３Ｔ３細胞中、ならびにＢ細胞中で典型的な発癌効果を生じる唯一のＥＢＶタンパク質である（５６、５９）。ＬＭＰ１トランスジェニックマウスはリンパ腫を発現する頻度を増加させるので、ＬＭＰ１に対する動物モデルは存在する（６０）。重要なことには、ＬＭＰ１は２つの主要なシグナル伝達カスケードであるＮＦ−κＢ経路およびＲａｓ−ＭＡＰＫシグナル伝達経路の活性化を介して、その効果を発生させる（６１〜６３）（図７参照）。これらのシグナル伝達カスケードの誘導は、ＬＭＰ１の細胞性ドメインとＴＲＡＦおよびＴＲＡＤＤタンパク質との相互作用を介して生じ（６４、６５）、該タンパク質は続いてＮＩＫキナーゼおよびＩＫＫキナーゼを介してＩκＢリプレッサーへとシグナルを伝達する（６６）。重要なことには、Ｒａｆキナーゼ抑制タンパク質（ＲＫＩＰ）はＮＦκＢ経路の負の調節因子としても機能することが見い出されており（６７）、２つの複合体の間に物理的架橋を提供できる。いずれにせよ、このことおよび非ウィルス系からの他のデータ（６８）から、ＭＡＰＫおよびＮＦκＢシグナル伝達カスケードは、ＥＢＶ感染症の進路を明確にする上で重要と思われる相当程度のクロストークに関与していることが示される。
【００７３】
Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）は、持続性肝臓感染症および肝硬変を起こす小型肝親和性パラレトロウィルスであり、原発性肝癌（肝細胞癌、ＨＣＣ）の発現に強く関わっている（６９）。ＨＣＣは、世界中で最も蔓延しているヒトの癌形態の１つであり、治療法の選択肢が非常に限られている（７０）。この点から、多くの研究が有力なウィルス性癌遺伝子の同定に集中してきた。ＨＢＶは、２つの転写活性因子であるＨＢｘ（７１）およびＬＨＢ／ＭＨＢタンパク質のｐｒｅ−Ｓ２／Ｓ領域（７２）をコードし、該転写活性化因子は細胞標的を活性化し、感染細胞の形質転換を促進する（７３）。図９を参照していただきたい。ＨＢＶのＨＢｘタンパク質は感染に必須であり、さらにＨＣＣの発現に必須の補因子であると考えられる。ＨＢｘ依存性活性化因子の機能を仲介する機序は、ｃ−Ｒａｆ−１／ＭＥＫ／Ｅｒｋ２、ＰＩ３Ｋ／ＡｋｔおよびＭＥＫＫ１／ＪＮＫのカスケードのＲａｓ依存性活性化を含み、これらのカスケードはＡＰ−１およびＮＦ−κＢを含むいくつかの主要な転写因子の誘導を起こす（７４、７５）。ＨＢｘタンパク質はＲａｓ−Ｒａｆ−ＭＡＰＫシグナル伝達経路を活性化し、大抵はＰｙｋ２キナーゼ（７６）、ｃ−ＳｒｃキナーゼおよびＦｙｎキナーゼ（７７）の活性化を介する。さらに、ＨＢｘタンパク質の活性および細胞局在化は、ＥＲＫ１／２キナーゼによるリン酸化反応を介して厳密に調節されており、ＨＢＶの複製および細胞の形質転換にとって重要な遺伝子の転写を誘導する核へ、ＨＢｘタンパク質を往復させる。したがって、ＨＢｘタンパク質のリン酸化反応は、ＨＢＸおよびＭＡＰＫのシグナル伝達経路の間に可能なフィードバック調節回路を作り出し（７８）、ＭＡＰＫ経路が新規な抗ＨＢＶ治療薬の開発のための適切な標的であり得ることを示唆している。
【００７４】
ＭＣＰ１１０とタキソールとの併用効果：ＥＣ−ｖＧＰＣＲ内皮細胞中の足場依存性増殖の抑制における相乗効果。
ＫＳＨＶ誘導癌は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が引き起こす血管新生の促進におけるｖＧＰＣＲの作用により特徴付けられるので、この内皮モデルは繊維芽細胞モデルより高い生理的関連性を有する。ＥＣ−ｖＧＰＣＲ細胞は軟寒天中でコロニー形成はしないが、ＭＣＰ１１０はこれらの細胞中でＮＩＨ３Ｔ３−ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞中と同様に、増殖の抑制に関して効果的であった。増殖は、ＷＳＴ−１試験によりＩＣ５０値として２２μＭを用いて測定した。ＮＩＨ−３Ｔ３−ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞と同様に、ＭＣＰ１１０はタキソールとの強力な相乗効果を内皮細胞中で生じた。タキソールのＥＣ−ｖＧＰＣＲ細胞中のＩＣ５０は、１〜１０μＭのＭＣＰ１１０を加えることにより著しく減少した。さらに同様の相乗効果が、Ｒａｆキナーゼ抑制剤であるＢＡＹ４３−９００６とタキソールとの組合せ、および程度は低くなるがＭＥＫ１キナーゼ抑制剤であるＵ０１２６との組合せにおいても認められた（図４Ｅ）。この観察結果は、Ｒａｆ活性はＡｋｔおよびＮＦ−κＢを含む生存促進シグナル伝達を必要とすることを示す科学文献（７９〜８１）、およびＫＳＨＶ形質転換はＡｋｔシグナル伝達の活性化と関連があり、それを必要とすることを示した科学文献（８２）中の報告と一致する。
【００７５】
引用文献
【表２−１】
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【表２−２】
2008528697.tif 000009
【表２−３】
2008528697.tif 000010
【表２−４】
2008528697.tif 000011
【表２−５】
2008528697.tif 000012
【表２−６】
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【表２−７】
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【００７６】
本発明の特定の好ましい実施態様が上記したように記載かつ具体的に説明されているが、本発明がかかる実施態様に限定されると解釈されるべきではない。添付した特許請求の範囲に記載されるように、本発明の範囲および精神を逸脱することなく、種々の修飾を行うことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ癌遺伝子を用いて形質転換したＮＩＨ３Ｔ３細胞の、足場依存性増殖のＭＣＰ化合物による抑制を示す図である。ＷＳＴ−１増殖試験におけるＩＣ５０値を、ＭＣＰ１、ＭＣＰ１１０、または対照化合物であるＢＡＹ４３−９００６およびＵ０１２６を用いて処理した、ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞について確定した。
【図２】ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ癌遺伝子を用いて形質転換したＮＩＨ３Ｔ３細胞の、足場非依存性増殖のＭＣＰ化合物による抑制を示す図である。コロニー形成試験におけるＩＣ５０値を、ＭＣＰ１、ＭＣＰ１１０、または対照化合物であるＢＡＹ４３−９００６およびＵ０１２６を用いて処理した、ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞について確定した。
【図３】足場非依存性増殖の抑制：１０μＭのＭＣＰ１１０とＢＡＹ４３−９００６、Ｕ０１２６およびスタウロスポリンとの併用効果について示す図である。Ａ．Ｋ−Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）を用いて形質転換したＮＩＨ３Ｔ３細胞を、対照のＤＭＳＯ、１０μＭのＭＣＰ１１０、表示濃度の各化合物、またはＭＣＰ１１０と各化合物との組合せで処理し、軟寒天中で２１日間増殖させ、その後コロニーを記録した。Ｂ．ＨＬＲ−Ｅｌｋ１細胞を、対照のＤＭＳＯ、５μＭのＭＣＰ１１０、表示濃度の各化合物、またはＭＣＰ１１０と各化合物との組合せと共に６時間インキュベートした（材料および方法を参照のこと）。ルシフェラーゼの残留活性割合をＤＭＳＯ処理した細胞と比較して判定した。Ｃ．スタウロポリンを用いた以外はＡと同様の実験である。黒無地の棒−ＤＭＳＯ処理細胞；白無地の棒−抑制剤のみで処理した細胞；黒ドット模様の棒−ＭＣＰ１１０と各化合物との組合せで処理した細胞を表している。結果は、少なくとも３回の独立した実験の平均を表しており、個々の試験は３回反復している。
【図４Ａ】足場非依存性および依存性増殖の抑制：ＭＣＰ１またはＭＣＰ１１０とタキソールとの組合せについて示す図である。Ａ．タキソールに関するＩＣ５０値を、Ｒａｆ２２Ｗ、Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）およびＫＳＨＶ−ｖＧＰＣＲ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞について、軟寒天中での増殖に関して、またはＷＳＴ−１試験により確定した。
【図４Ｂ】軟寒天中でのＮＩＨ３Ｔ３−Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）細胞の増殖がタキソールにより抑制されるＩＣ５０値を、表示濃度のＭＣＰ１、ＭＣＰ１１０、ＢＡＹ４３−９００６またはＵ０１２６の存在下で再評価した。
【図４Ｃ】ＮＩＨ３Ｔ３−Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）細胞の増殖がタキソールにより抑制されるＩＣ５０値を、表示濃度のＭＣＰ１１０、ＢＡＹ４３−９００６またはＵ０１２６の存在下で再評価した。
【図４Ｄ】軟寒天中でのＮＩＨ３Ｔ３−ＫＳＨＶ−ＧＰＣＲ細胞の増殖がタキソールにより抑制されるＩＣ５０値を、表示濃度のＭＣＰ１、ＭＣＰ１１０、ＢＡＹ４３−９００６またはＵ０１２６の存在下で再評価した。
【図４Ｅ】ＷＳＴ−１増殖試験におけるＥＣ−ｖＧＰＣＲ細胞の増殖が、タキソールにより抑制されるＩＣ５０値を、表示濃度のＭＣＰ１１０、ＢＡＹ４３−９００６またはＵ０１２６の存在下で決定した。
【図５】Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）およびｃＲａｆ２２Ｗ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞において、ＭＣＰ１１０およびタキソールにより誘導された細胞周期のプロフィールを比較して示す図である。細胞は表示濃度の化合物により７２時間処理し、その後固定し、ヨウ化プロピジウムを用いて染色し、ＦＡＣＳにより分析した。ソフトウェアプログラムのＣｅｌｌＱｕｅｓｔを使用し、Ｇ１期細胞対Ｇ２／Ｍ期細胞の頻度を確定した。
【図６】Ｋ−Ｒａｓ（Ｖ１２）およびｃＲａｆ２２Ｗ形質転換ＮＩＨ３Ｔ３細胞において、ＭＣＰ１１０およびタキソールによる細胞死の誘導を示した図である。細胞は表示濃度の化合物で７２時間処理した後、固定し、アネキシンＶを用いて染色し、ＦＡＣＳにより分析した。アネキシンＶ陽性細胞の頻度を示す。
【図７】ＫＳＨＶ感染症に関連する細胞の形質転換を導くシグナル伝達カスケードの系統図である。
【図８】ＨＨＶ−４／エプスタイン・バー・ウィルス感染症に関連する細胞の形質転換を起こすシグナル伝達カスケードの系統図である。
【図９】Ｂ型肝炎感染症に関連する細胞の形質転換を導くシグナル伝達カスケードの系統図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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