(57)【要約】  本発明は、例えば、体重超過又は肥満患者の治療において、患者、例えばヒト及び動物において、又は食料貯蔵用動物、例えば、牛、鶏、豚の低脂肪肉を生産する手段として、単独で又は第二の治療薬と併用して、体重及び／又は体脂肪を減少又は維持する方法；糖尿病及び／又は耐糖能低下を治療する方法；及び、ＣＣＲ２血要約を投与することによって治療を必要とする患者におけるメタボリックシンドローム障害を治療する方法、上記で定義した治療的使用のためのキット、及び上述した治療的使用を扱うためのＣＣＲ２治療薬を同定する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
体脂肪及び／又は体重を減少又は維持するために患者を治療する方法であって、体脂肪及び／又は体重を減少又は維持する必要性がある患者に、治療的に有効な量のＣＣケモカイン２（ＣＣＲ２）治療薬を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
糖尿病又は耐糖能低下を治療するために患者を治療する方法であって、糖尿病又は耐糖能低下の治療を必要とする患者に、治療的に有効な量のＣＣケモカイン２（ＣＣＲ２）治療薬を投与することを含む、前記方法。
【請求項３】
メタボリックシンドローム障害を治療するために患者を治療する方法であって、メタボリックシンドローム障害の治療を必要とする患者に、治療的に有効量のＣＣケモカイン２（ＣＣＲ２）治療薬を投与することを含む、前記方法。
【請求項４】
ＣＣＲ２治療薬がＣＣＲ２アンタゴニストである、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項５】
ＣＣＲ２治療薬がＣＣＲ２リガンドに対する阻害剤である、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項６】
体脂肪及び／又は体重を減少するために使用することができる薬剤を同定する方法であって、（ｉ）試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与すること、そして、（ｉｉ）該ＣＣＲ２治療薬が試験患者における体脂肪及び／又は体重の減少及び／又は維持に有効であるかどうかを決定することを含む、前記方法。
【請求項７】
糖尿病又は耐糖能低下を治療するために使用することができる薬剤を同定する方法であって、（ｉ）試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与すること、そして、（ｉｉ）該ＣＣＲ２治療薬が試験患者における糖尿病又は耐糖能低下の治療に有効であるかどうかを決定することを含む、前記方法。
【請求項８】
メタボリックシンドローム障害を治療するために使用することができる薬剤を同定する方法であって、（ｉ）試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与すること、そして、（ｉｉ）該ＣＣＲ２治療薬が試験患者におけるメタボリックシンドローム障害の治療に有効であるかどうかを決定することを含む、前記方法。
【請求項９】
ＣＣＲ２治療薬がＣＣＲ２アンタゴニストである、請求項６、７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＣＲ２治療薬がＣＣＲ２リガンドに対する阻害剤である、請求項６、７又は８に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＣＲ２アンタゴニストを試験患者に投与する前にＣＣＲ２の治療活性に関してインビトロ試験においてＣＣＲ２治療薬を試験することをさらに含む、請求項１、２又は３に記載の方法。
【請求項１２】
患者の体脂肪及び／又は体重を減少又は維持するために病人に治療薬を投与するためのＣＣＲ２治療薬及び使用説明書を含むキット。
【請求項１３】
病人の糖尿病及び／又は耐糖能低下を治療するために病人に治療薬を投与するためのＣＣＲ２治療薬及び使用説明書を含むキット。
【請求項１４】
病人のメタボリックシンドローム障害を治療するために病人にアンタゴニストを投与するためのＣＣＲ２治療薬及び使用説明書を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＣＣケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）治療薬を投与することによって病人における体重及び／又は体脂肪を減少又は維持するための方法を提供する。加えて、本発明は、ＣＣＲ２治療薬を投与することによって病人におけるメタボリックシンドローム障害を治療するための方法を提供する。本発明はまた、ＣＣＲ２治療薬を投与することによって患者における糖尿病、又は耐糖能低下を治療するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
背景
肥満は、現在、世界の大部分を通じて流行していると考えられ、それに関連した健康リスクを減少するための治療を必要とする慢性疾患として認識される。減量それ自体は、重要な治療の成果であるけれども、肥満管理の主要な目的の１つは、肥満に関連した病的状態及び死亡率を減少するための心臓血管値及び代謝値を改善することにある。体重の５−１０％減量が、血糖、血圧、及び脂質濃度のような代謝値及び心臓血管値を実質的に改善できることが示されている。したがって、体重の５−１０％減少は、病的状態及び致死率を減少できると信じられている。
【０００３】
肥満又は体重超過であると診断された個体は、冠状動脈性心疾患、卒中、高血圧、２型真性糖尿病、異脂肪症、睡眠時無呼吸、骨関節炎、胆嚢疾患、うつ病、及びある型の癌（例えば、子宮内膜、乳房、前立腺、及び結腸）のような他の健康症状を発症するリスクの増加を被る。肥満による健康への悪い結果は、米国における予防できる死の２番目に多い原因、並びに社会における経済的及び社会心理的な有意な効果を与える公衆衛生上の大きな関心とさせる（ＭｃＧｉｎｎｉｓ及びＦｏｅｇｅ，（１９９３）ＪＡＭＡ  ２７０，２２０７−２２１２，並びにＣａｌｌｅ，Ｅ．Ｅ．（２００３）ＮＥＪＭ  ３４８，１６２５−１６３８）。
【０００４】
さらに、体重及び／又は体脂肪の増加を防ぐこと、あるいは体重及び／体脂肪を維持することは、個体の健康に利益となるであろう。
最近、いくつかのケモカインは、脂肪組織の制御における役割又は脂肪組織の細胞構成における役割を有し、そして、肥満、糖尿病及び悪液質の治療の基礎を提供することができることが示唆されている（Ｇｅｒｈａｒｄｔ，Ｃ．Ｃ．ら、（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．１７５，８１−９２）。
【０００５】
ケモカインは、特に炎症状態の免疫応答の活性化との関連で、白血球を含む多数の細胞の走化性移動及び活性化を制御する小さい分泌塩基性タンパク質の多様な群を構成する。ケモカインについての新しい分類スキームが、最近、提案されている（Ｚｌｏｔｎｉｋ，Ａ．及びＹｏｓｈｉｅ  Ｏ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２、１２１−１２７）。
【０００６】
ケモカインに対する走化的な応答を示し、ケモカインによって活性化される細胞の例は、好中球、好酸球、好塩基球、樹状突起細胞、単球、マクロファージ、並びにＢリンパ球及び異型Ｔリンパ球である（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｊ．ら、（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９，６１７−４８；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ｄ．及びＫｒａｎｇｅｌ，Ｓ．Ｋ．（１９９２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２，１７−４６；並びに、Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．ら、（１９９４）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５，９７−１７９）。
【０００７】
ケモカインは、成熟タンパク質のジスルフィド結合形成に関与するシステイン残基のパターンに基づいて分類することができる。第一のグループは、ＣＸＣケモカイン、即ちα−ケモカインは、異なるアミノ酸残基が位置するアミノ酸末端領域における２つのシステイン残基の出現によって特徴付けられる。ＣＸＣケモカインは、主に好中球に作用し、特に、そのようなＣＸＣケモカインは、アミノ末端のアミノ酸配列Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇを担持する。
【０００８】
第二のグループのＣＣケモカイン、即ちβ−ケモカインは、アミノ末端領域に発生する２つの隣接するシステイン残基の出現によって特徴付けられる。このＣＣケモカインは、単球、マクロファージ、好酸球、好塩基球、並びにＴ及びＢリンパ球のようなより多くの種類のリンパ球に作用する。これらの例は、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、エオタキシン、ＲＮＴＥＳ及びＩ−３０９を含む。
【０００９】
ＭＣＰ−１、即ち新規に分類されたＣＣＬ２は、単球、及び種々の組織細胞、例えば内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、滑膜細胞、メサンギウム細胞、骨芽細胞、平滑筋細胞、並びに多数の腫瘍細胞によって産生される（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．ら、（１９９４）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５，９７−１７９）。ＭＣＰ−１はまた、最近、脂肪細胞によって産生されることが示されている（Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｇ．（１９９７）Ｂｌｏｏｄ  ９０，９０９−９２８及びＧｅｒｈａｒｄｔ，Ｃ．Ｃ．ら、（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１７５，８１−９２）。
【００１０】
ＭＣＰ−１は、アテローム性動脈硬化症の病理発生において役割を果たす可能性がある。活性化した内皮から放出されるＭＣＰ−１を通した活性な単球補充は、脂肪線条及びアテローム動脈硬化性プラークの形成における役割を果たすかもしれないことが示唆される（Ｙｌａ−Ｈｅｒｔｔｕａｌａ，Ｓ．ら、（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８，５２５２−５２５６；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｃ．Ｊ．ら、（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．７１，９Ｂ−１４Ｂ；及び、Ｔａｋｅｙａ，Ｍ．（１９９３）Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２４，５３４−９）。ＭＣＰ−１、又はその受容体であるＣＣＲ２の遺伝的崩壊を有する高コレステロール血症マウスは、アテローマの発生を減少される（Ｂｏｒｉｎｇ，Ｌ．ら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９４，８９４−８９７）。
【００１１】
ＭＣＰ−１の発現は、脂肪のない対照と比較して白色脂肪組織及び肥満マウスの血漿において上方制御されることが示された（Ｓａｒｔｉｐｓｙ，Ｐ．及びＬｏｓｋｕｔｏｆｆ，Ｄ．Ｊ．（２００３）ＰＮＡＳ  １００，７２６５−７２７０）。ＭＣＰ−１発現はまた、血漿中のＭＣＰ−１レベルの上昇に導く規定食で誘導した肥満マウスにおいて増加されることを示した（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ．ら、（２００３）Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２７８，４６６５４−４６６６０）。
【００１２】
データの増加はまた、炎症とインスリン耐性との間の相関的で可能な原因となる関係を示唆する。前炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αは、げっ歯類の肥満モデルにおける肥満の結果としてインスリン耐性を媒介することを示している（Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ，Ｇ．Ｓ．（１９９４）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４３，１２７１−１２７８）。ＴＮＦ−α発現の増加はまた、肥満な個体からの脂肪組織のマクロファージに示されている（Ｗｅｉｓｂｕｒｇ，Ｓ．Ｐ．ら（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２，１７９６−１８０８）。
【００１３】
ＣＣＲ２−／−ノックアウト（ＫＯ）マウスは、炎症性疾患の病因の研究において、及びＣＣＲ２アンタゴニストによって症状が改善又は悪化したかを測定する手段として使用されている。
【００１４】
ＣＣＲ２  ＫＯマウスは、ＭＣＰ−１誘導による白血球の微小血管内皮への接着の減少、及び白血球の溢出の減少を示している（Ｋｕｚｉｅｌ，Ｗ．Ａ．（１９９７），ＰＮＡＳ  ９４，１２０５３−１２０５８）。さらに、ＣＣＲ２  ＫＯマウスは、炎症性薬剤に応答して単球補充を減少することを示している（Ｂｏｒｉｎｇ，Ｌ．ら、（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００，２２５２−２２６１）。
【発明の開示】
【００１５】
発明の概要
本発明は、病人にＣＣＲ２治療薬を（単独で又は別の治療薬と併用して）投与することによって体重及び／又は体脂肪を減少又は維持するための方法、並びに関連するキット、及び上述した治療的使用のためのＣＣＲ２治療薬についてスクリーニングする方法を提供する。本発明はまた、病人にＣＣＲ２治療薬を（単独で又は別の治療薬と併用して）投与することによってメタボリックシンドロームを治療するための方法を提供する。さらに、本発明は、病人にＣＣＲ２治療薬を（単独で又は別の治療薬と併用して）投与することによって糖尿病又は耐糖能低下を治療するための方法を提供する。ＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む。付加的なＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２阻害剤及びＣＣＲ２リガンド阻害剤を含む。
【００１６】
一態様において、本発明は、治療を必要とする患者（即ち、病人）に治療的に有効な量のＣＣＲ２治療薬を投与することを含む、体重及び／又は体脂肪を減少するために患者を治療する方法を提供する。この態様において、患者はヒトであり、患者は体重超過若しくは肥満であり、又は肥満になる傾向があり、そして、ＣＣＲ２治療薬はＣＣＲ２アンタゴニストである。付加的なＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２阻害剤及びＣＣＲ２リガンド阻害剤を含む。
【００１７】
第二の態様において、本発明は、治療を必要とする患者にＣＣＲ２治療薬を投与することによって体重超過及び／又は肥満を維持及び／又は安定化するために患者を治療する方法を提供する。ＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２アンタゴニストを含む。付加的なＣＣＲ２治療薬はＣＣＲ２阻害剤及びＣＣＲ２リガンドの阻害剤を含む。
【００１８】
第三の態様において、本発明は、治療を必要とする患者に治療的に有効な量のＣＣＲ２治療薬を投与することを含む、糖尿病又は耐糖能低下を治療する方法を提供する。糖尿病の病人は、１型（ＩＤＤＭ）又は２型（ＮＩＤＤＭ）糖尿病であり得る。１型糖尿病では、ＣＣＲ２治療薬は、インスリン感受性を増加させるのに役立つであろう。ＣＣＲ２治療薬はＣＣＲ２アンタゴニストを含む。付加的なＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２阻害剤及びＣＣＲ２リガンド阻害剤を含む。
【００１９】
第四の態様において、本発明は、治療を必要とする患者に治療的に有効な量のＣＣＲ２治療薬を投与することを含む、メタボリックシンドロームを治療する方法を提供する。
第五の態様において、該方法は、さらに、患者に、第二の治療薬、好ましくは抗肥満薬、例えばリモナバント、オーリスタット、シブトラミン、ブロモクリプチン、レプチン、又はペプチドＹＹ３−３６、又はそれらの類似体を投与することを含む。
【００２０】
本発明の第二の側面は、体脂肪及び／又は体重を減少又は維持し、又は糖尿病、メタボリックシンドローム、若しくは耐糖能低下を治療するために使用することができる薬剤を同定するための方法であり、（ｉ）ＣＣＲ２治療薬を試験患者に投与すること、そして、（ｉｉ）このＣＣＲ２治療薬が、試験患者における体脂肪及び／又は体重の減少又は維持に、あるいは糖尿病、メタボリックシンドローム、又は耐糖能低下に有効であるかどうかを決定することを含む。ＣＣＲ２治療薬はＣＣＲ２アンタゴニストを含む。付加的なＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２阻害剤及びＣＣＲ２のリガンドに対する阻害剤を含む。関連する側面として、該方法は、試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与する前に、ＣＣＲ２活性についてインビトロ試験におけるＣＣＲ２治療薬を試験することをさらに含めることができる。
【００２１】
本発明の第三の側面は、１型又は２型糖尿病を治療するために使用することができる治療薬を同定するための方法であり、（ｉ）試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与すること、そして、（ｉｉ）このＣＣＲ２治療薬が試験患者における糖尿病又は耐糖能低下の治療に有効であるかどうかを決定することを含む。関連する側面として、該方法は、試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与する前に、ＣＣＲ２活性についてインビトロ試験においてＣＣＲ２治療薬を試験することをさらに含めることができる。
【００２２】
本発明の第四の側面は、メタボリックシンドロームを治療するために使用することができる治療薬を同定するための方法であり、（ｉ）試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与すること、そして、（ｉｉ）このＣＣＲ２治療薬が試験患者におけるメタボリックシンドロームを治療するのに有効であるかどうかを決定することを含む。関連する側面として、該方法は、試験患者にＣＣＲ２治療薬を投与する前に、ＣＣＲ２活性についてインビトロ試験においてＣＣＲ２治療薬を試験することをさらに含めることができる。
【００２３】
本発明の第５の側面として、患者における体脂肪及び／又は体重を減少又は維持するためのＣＣＲ２治療薬及び患者に該治療薬を投与するための使用説明書を含むキットがまた特徴付けられる。本発明の側面として、糖尿病又は耐糖能低下を治療するためのＣＣＲ２治療薬、及び患者にそのアンタゴニストを投与するための使用説明書を含むキットがまた特徴付けられる。本発明の側面として、メタボリックシンドローム障害を治療するためのＣＣＲ２治療薬、及び患者に該治療薬を投与するための使用説明書を含むさらにキットが特徴付けられる。ＣＣＲ２治療薬はＣＣＲ２アンタゴニストを含む。付加的なＣＣＲ２治療薬は、ＣＣＲ２阻害剤及びＣＣＲ２リガンド阻害剤を含む。他の態様において、キットは、さらに、第二の治療薬、より好ましくは抗肥満薬、例えばリモナバント、オーリスタット、シブトラミン、ブロモクリプチン、レプチン、若しくはＹＹ３−３６、又はそれらの類似体を含むことができる。
【００２４】
当業者は、本発明を記述するための明細書及び添付の請求の範囲に使用される用語を十分に理解するであろう。それにもかかわらず、本明細書で他に提供されなければ、下記の用語は、さらに即下に記載される。
用語「ある（ａ）」は、１又はそれより多くを含むことを意味する。
【００２５】
用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、予防（例えば、予防の）及び緩和治療又は予防若しくは緩和治療を提供する行為を含む。
用語「患者」は、ＣＣＲ２活性の減少による有益な効果を有するであろう任意の病人（例えば、ヒト又は動物）又は個体を意味する。
【００２６】
「ＣＣＲ２を介した疾患又は障害」は、ＣＣＲ２が役割を果たすか又はある効果を有することが知られる任意の疾患、障害、有害な症状又は健康状態を意味する。
「治療薬」は、ＣＣＲ２又はＣＣＲ２のリガンドを変更することができる化学的、例えば小分子、又は生物学的物質若しくは分子（天然又は合成）を含む医薬組成物を意味する；このような治療薬は、本明細書に定義されるＣＣＲ２アンタゴニスト若しくはＣＣＲ２阻害剤、又はＣＣＲ２のリガンドに対する阻害剤を含むであろう。
【００２７】
「ＣＣＲ２アンタゴニスト」又は「ＣＣＲ２阻害剤」は、ＣＣＲ２のある（即ち、１又はそれより多くの）生物学的活性を直接的又は間接的に減少させ又は和らげる治療薬を意味する。このような薬剤は、抗ＣＣＲ２抗体のようなタンパク質、核酸、例えば、ＣＣＲ２アンチセンス又はＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）核酸、アミノ酸、ペプチド、炭水化物、小分子（有機若しくは無機）、又は細胞に存在するＣＣＲ２の量を効果的に減少させること、若しくはそれと相互作用するＣＣＲ２リガンドの能力を減少させることのいずれかによって、ＣＣＲ２ポリペプチドの活性を低下させる任意の他の化合物又は組成物を含めることができる。ＣＣＲ２アンタゴニストである化合物は、全てのその化合物の溶媒和物、水和物、医薬として許容される塩、互変異性体、立体異性体、及びプロドラッグを含む。好ましくは、本発明において使用される小分子ＣＣＲ２アンタゴニストは、１０μＭ未満、より好ましくは１μＭ未満、及びさらにより好ましくは０．１μＭ未満のＩＣ５０を有する。発現を阻害するためのＣＣＲ２遺伝子又はｍＲＮＡに指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標準的な手法により作製される（Ａｇｒａｗａｌら、（１９９３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，Ｖｏｌ．２０）。同様に、ＣＣＲ２受容体発現を減少するように機能するＲＮＡ干渉分子を利用することができる（Ｈａｎｎｏｎ，（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  ４１８；２４４−２５１，Ｓｈｉ，（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １９：９−１２，２００３；及び、Ｓｈｕｅｙら、（２００２）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ７：１０４０−１０４６）。
【００２８】
「ＣＣＲ２リガンド阻害剤」は、ＣＣＲ２リガンドの機能、又はその受容体との相互作用を阻害又は減少する治療薬を意味する。
「ＣＣＲ２活性の減少」は、細胞上の機能的ＣＣＲ２ポリペプチドのレベルにおいて減少を引き起こすＣＣＲ２遺伝子機能の遺伝的崩壊若しくは操作の結果として、あるいは、リガンド相互作用を用いて干渉することによって直接的若しくは間接的にＣＣＲ２に影響を与える治療薬の投与の結果としてＣＣＲ２の全体のポリペプチド活性における操作された減少を意味する。
【００２９】
句「医薬として許容される」は、設計された担体、ベヒクル、希釈剤、賦形剤（又は複数）、及び／又は塩が、一般的に、製剤を含むその他の成分と化学的に及び／又は物理的に適合する、及びその受容物と物理的に適合することを示す。
【００３０】
用語「プロドラッグ」は、化学的又は物理学的プロセス（例えば、物理学的なｐＨまでもらすことにより、又は酵素活性を通して）を介してインビボで試薬を投与後に放出する薬物前駆体である化合物を意味する。プロドラッグの合成及び使用の検討は、Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＳｔｅｌｌａ（Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅ  ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓのｖｏｌ．１４、及び、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｌｂｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，監修Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｓｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７年）によって提供される。
【００３１】
用語「塩」及び「医薬として許容される塩」は、化合物の有機及び無機塩、化合物の立体異性体、又は化合物のプロドラッグを意味する。
「体重超過」及びより重大な「肥満」の症状は、理想体重より多い（より具体的には、理想の体脂肪よりも多い）体重を有することを意味し、一般的には、体格指数（ＢＭＩ）によって定義され、それは、全体重と、体重超過又は肥満症状の結果として疾患による早死に又は身体的な障害を被っている相対的リスクと相関する。健康リスクは、過剰な体脂肪の増加と共に増加する。ＢＭＩは、体重（ｋｇ）を身長（メートル）の２乗で割ること（ｋｇ／ｍ２）によって、あるいは、体重（ポンド）に７０３を掛けて、それを身長（インチ）の２乗で割ること（ｌｂｓ×７０３／ｉｎ２）によって計算される。「体重超過」は、典型的には、２５．０−２９．９の間のＢＭＩを構成する。「肥満」は、典型的には、３０又はそれより大きいＢＭＩとして定義される（例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，成人における体重超過及び肥満の定義、評価、及び治療に関する臨床ガイドライン、証拠報告、ワシントンＤＣ：米国、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｉｃｅｓ，ＮＩＨ刊行物第９８−４０８３号、１９９８年）。非常な筋肉質の個体では、ＢＭＩ、体脂肪、及び疾患リスクとの間の相関性は、他の個体よりも弱い。したがって、このような非常に筋肉質な個体が、実際に、体重超過又は肥満であるかどうかの評価は、全体脂肪の直接的な測定又はウエスト：ヒップの比率の評価のような別の測定によってより正確に行うことができる。
【００３２】
「メタボリックシンドローム」は、本明細書で定義されるように、そして、成人治療パネルＩＩＩ（ＡＴＰＩＩＩ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ：成人における高コレステロール血症の検出、評価、及び治療に関する国立コレステロール教育プログラム専門パネルの三次報告；Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００１（ＮＩＨ  ｐｕｂ．ｎｏ．０１−３６７０）に従って、ヒトが３つ又はそれより多くの下記の症候又は障害：
１．異常肥満：男性で＞１０２ｃｍ及び女性で＞８８ｃｍのウエスト周り；
２．高トリグリセリド血：≧１５０ｍｇ／ｄｌ（１．６９５ｍｍｏｌ／ｌ）；
３．低いＨＤＬコレステロール：男性で＜４０ｍｇ／ｄｌ（１．０３６ｍｍｏｌ／ｌ）及び女性で＜５０ｍｇ／ｄｌ（１．２９５ｍｍｏｌ／ｌ）；
４．高血圧：≧１３０／８５ｍｍＨｇ；
５．空腹時の高血糖：≧１１０ｍｇ／ｄｌ（≧６．１ｍｍｏｌ／ｌ）
を有する場合、あるいは、世界保健機関基準（Ａｌｂｅｒｔｉ及びＺｉｍｍｅｔ，Ｄｉａｂｅｔ．Ｍｅｄ．１５：５３９−５３，１９９８）に従って、ヒトが糖尿病、耐糖能障害、障害のある空腹時の血糖、又はインスリン耐性に加えて、２つ若しくはそれより多くの下記の異常：
１．高血圧：≧１６０／９０ｍｍＨｇ；
２．高脂血：トリグリセリド濃度≧１５０ｍｇ／ｄｌ（１．６９５ｍｍｏｌ／ｌ）及び／又は男性でＨＤＬコレステロール＜３５ｍｇ／ｄｌ（０．９ｍｍｏｌ／ｌ）及び女性で＜３９ｍｇ／ｄｌ（１．０ｍｍｏｌ／ｌ）；
３．中心性肥満：男性については＞０．９０及び女性については＞０．８５のウエスト：ヒップ比及び／又はＢＭＩ＞３０ｋｇ／ｍ２；
４．微量アルブミン尿：尿中アルブミン排泄速度≧２０μｇ／分、又はアルブミン：クレアチニン比≧２０ｍｇ／ｋｇ
を有する場合に現れる。
【００３３】
「治療的に有効な」は、適切な対照に対して、体脂肪及び／又は体重の減少に帰着すること；及び／又は糖尿病（ＮＩＤＤＭ及び／又はＩＤＤＭ）；メタボリックシンドローム症候群若しくは障害；及び／又は耐糖能低下の１つ又はそれより多くの症候群の改善に帰着することを意味する。
【００３４】
本発明の他の特徴及び利点は、下記の詳細な説明及び請求の範囲からよりさらに明らかとなるであろう。本発明が、特定の態様との関連で記述されるが、実施することができる他の変更及び修飾はまた、本発明の一部であり、また、添付の請求の範囲内にあることが理解されるであろう。本出願は、一般的に、当該技術分野内の既知の又は慣習的な実施に入る本開示による逸脱を含む本発明の原理に従い、そして、過度の実験なしに究明することができる本発明の任意の均等物、改変体、使用、又は脚色を覆うことが意図される。公開された特許出願及び発行された特許を含む、本明細書中に言及した全ての刊行物は、全体として参照により援用される。
【００３５】
発明の詳細な説明
本発明は、例えば、体重超過又は肥満の病人（例えば、ヒト又は愛玩用動物）の治療において、又は食料貯蔵用動物（例えば、牛、鶏、豚）の低脂肪肉を生産する手段として動物に、治療を必要とする病人に、ＣＣＲ２アンタゴニストを投与することによって体重及び／又は体脂肪を減少する方法に関する。
【００３６】
本発明は、さらに、ＣＣＲ２アンタゴニストを投与することによって治療を必要とする病人（ヒト又は動物）におけるメタボリックシンドローム障害を治療する方法に関する。
本発明はまた、ＣＣＲ２アンタゴニストを投与することによって治療を必要とする病人（ヒト又は動物）における非インスリン依存性糖尿病（インスリン依存及び／又は非インスリン依存）、及び／又は耐糖能低下を治療する方法に関する。
【００３７】
本明細書中の実施例に記載されるように、ＣＣＲ２−／−ノックアウトマウス（ＫＯ）は、進行中の体重増加及び脂肪増加に相対的に耐性である。データはまた、高脂肪規定食（ＨＦＤ）に晒した後にメタボリックシンドロームの症候を減少させたことを示す。実施例は、ＣＣＲ２活性を減少させることが、体重及び／又は体脂肪を減少させるのに効果的な方法であり、メタボリックシンドロームの症候を改善することができ、例えば、体重超過、肥満である、及び／又は１つ若しくはそれより多くのメタボリックシンドロームの症候を被っている病人（ヒト及び動物）を治療し、そして、低脂肪肉を生産するための動物の食料貯蔵種を処理するための効果的な方法であることを示す。
【００３８】
典型的なケモカインアンタゴニスト（阻害剤）
ケモカインアンタゴニスト、具体的にはＣＣＲ２アンタゴニストは、本発明の実施に有用であることができ、また、下記の特許書類：ＷＯ０４／０５００２４；ＷＯ０４／０１６７６９；ＷＯ０３／０９３２６６；ＷＯ０３／０９３２３１；ＷＯ０３／０９２５８６；ＷＯ０３／０５１９２１；ＷＯ０１／５１４６７；ＷＯ００／６９８１５；ＷＯ００／６９４３２；ＷＯ００／４６１９９；ＷＯ９８／２５６１７；ＷＯ９８／２５６０５；米国出願公開第２００３１４４３３９号；米国出願公開第２００３０１６５４９４号；米国出願公開第２００３００８８９３号；米国出願公開第２００２０４２３７０号；米国特許第６，７３７，４３５号；米国特許第６，６８６，３５３号；米国特許第６１３，７６０号；米国特許第６，５６８，８８８号；米国特許第６，４７９，５２７号；米国特許第６，４７２，４１０号；米国特許第６，４５１，８４２号；米国特許第６，４０３，５８７号；米国特許第６，４４１，００４号；米国特許第６，３６２，１７７号；米国特許第６，３８７，９１２号；米国特許第６，２９１，５０１号；米国特許第６，２８８，１０３号；米国特許第６，１４０，３４９号；米国特許第６，１４０，３３８号；米国特許第６，１６６，０３７号；米国特許第６，１３６，８２７号；米国特許第６，１２４，３１９号；米国特許第６，０８４，０７５号；米国特許第６，０１３，６６４号；米国特許第５，９６２，４６２号；及び、米国特許第５，７１９，７７６号に開示されるものを含んでいてもよい。
【００３９】
ＣＣＲ２アンタゴニスト
本明細書中で使用するとき、用語「ＣＣＲ２機能のアンタゴニスト」は、ＣＣＲ２のある（即ち、１又はそれより多くの）機能を阻害することができる薬剤（例えば、分子、化合物）を意味する。例えば、ＣＣＲ２機能のアンタゴニストは、ＣＣＲ２に対する１つ又はそれより多くのリガンド（例えば、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４及びＭＣＰ−５）の結合を阻害し、及び／又はＣＣＲ２を介したシグナル伝達（例えば、ＣＣＲ２に関連したＧタンパク質によるＧＤＰ／ＧＴＰ交換、細胞内カルシウム流動）を阻害することができる。したがって、ＣＣＲ２を介したプロセス及び細胞応答（例えば、増殖、移動、走化的応答、分泌又は脱顆粒）は、ＣＣＲ２機能のアンタゴニストで阻害され得る。本明細書中で使用するとき、「ＣＣＲ２」は、天然に生じるＣＣケモカイン受容体２（例えば、哺乳動物のＣＣＲ２（例えば、ヒト（ホモ・サピエンス）ＣＣＲ２）を意味し、対立遺伝子の変異体及びスプライス変異体（例えば、ＣＣ−ケモカイン受容体２ａ及び／又はＣＣ−ケモカイン受容体２ｂ）のような天然に生じる変異体を包含する。
【００４０】
ＣＣＲ２機能のアンタゴニストは、例えば、小さい有機分子、天然産物、タンパク質（例えば、抗体、ケモカイン、サイトカイン）、ペプチド又はペプチド擬似体である化合物である。
【００４１】
ケモカイン受容体（例えば、ＣＣＲ２）の１又はそれより多くの機能に拮抗し得るいくつかの分子は、当該技術分野において知られ、有機分子；抗体（例えば、ポリクローナル血清、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ヒト）及びその抗原結合断片のようなタンパク質；ケモカイン突然変異体及び類似体；そして、ペプチドを含む。
【００４２】
ＣＣＲ２機能のアンタゴニストは、例えば、本明細書中に記載される、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのような分子の集合体のライブラリーをスクリーニングすること、又は他の適した方法を用いることによって同定することができる。
【００４３】
ＣＣＲ２機能のアンタゴニストの別の供給源は、コンビナトリアル・ライブラリーであって、構造的に異なる分子種を含むことが可能である。コンビナトリアル・ライブラリーは、リード化合物を同定するために、又は予め同定した先駆物を最適化するために使用することができる。このようなライブラリーは、コンビナトリアル・ケミストリーの周知の方法によって製造することができ、本明細書に記載した方法のような適した方法によってスクリーニングすることができる。
【００４４】
前述したように、他のＣＣＲ２アンタゴニストは、ＣＣＲ２選択的アンタゴニストを含み、当業者に既知の標準的なアッセイを用いて同定することができる。簡単には、ＣＣＲ２選択的調節因子を同定するためのスクリーニングの１つタイプは、細胞株を使用し、初代細胞又はトランスフェクトされたＣＣＲ２細胞を含む。その代わりに、動物モデルを利用することができるであろう。
【００４５】
好ましくは、ＣＣＲ２アンタゴニスト又は阻害剤についてのスクリーニングアッセイにおいて使用されるＣＣＲ２タンパク質は、ヒトである（米国特許第５，７０７，８１５号及び米国特許第６，１３２，９８７号、及びＣｈａｒｏら（１９９４）、ＰＮＡＳ、９１：２７５２−２７５６）。ＣＣＲ２タンパク質の他の哺乳動物種はまた知られ、及びアッセイに利用してもよい。
【００４６】
ＣＣＲ２リガンド結合の阻害を検定する代替法として、ＣＣＲ２機能の阻害を評価することがある。
ＣＣＲ２治療薬についてスクリーニングするために使用される試験薬は、個別に、例えば、上記した特許書類から選択してよく、又は化合物ライブラリーから得てもよい。このような試薬は、ペプチド、Ｄ−及び／Ｌ−配置のアミノ酸から作製されるコンビナトリアル・ケミストリー誘導の分子ライブラリー、ホスホペプチド、抗体、例えば修飾されたタンパク質を含む修飾された生体物、並びに小さな有機及び無機化合物を含む。ライブラリーは、生物学的ライブラリー、天然化合物のライブラリー、ペプチドライブラリー（酵素的分解に耐性であり、なお生物活性を残存するペプチドの機能を有するが、新規な非ペプチド骨格をもつ分子のライブラリー）（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ（１９９４），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７；２６７８−８５）、空間的に処理可能なパラレル固相又は液相ライブラリー、解析を要求する合成ライブラリー法、「１ビーズ１化合物」ライブラリー法、及びアフィニティークロマトグラフィー選択を有する合成ライブラリー法を含む。
【００４７】
分子ライブラリーを合成する方法の例は、当該技術分野において見出すことができる（ＤｅＷｉｔｔら（１９９３），ＰＮＡＳ．９０；６９０９；Ｅｒｄら（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７；２６７８；Ｃｈｏら（１９９５），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３０３；及びＧａｌｌｏｐら（１９９４），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３）。
【００４８】
化合物のライブラリーは、溶液中（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１３：４１２−４２１）、又はビーズ上（Ｌａｍ，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４１）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３），Ｎａｔｕｒｅ  ３６４；５５５−５５６）；細菌若しくは胞子（Ｌａｄｎｅｒ，米国特許第５，２２３，４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２），ＰＮＡＳ  ８９：１８６５−１８６９）若しくはファージ（Ｓｃｏｔｔら（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４−４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）ＰＮＡＳ  ８７：６３７８−６３８２；及びＦｅｌｉｃｉ（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０）に存在することができる。
【００４９】
スクリーニング法
上記されるように、本発明はまた、本明細書中に記載した治療方法に使用することができる薬物を同定するためのスクリーニング法を含む。これらの方法は、薬物が、体重及び／又は体脂肪の減少又は維持に効果的であるように、（直接的に又は間接的に）ＣＣＲ２、その立体配置に従ったリガンド結合又は機能を調節するかどうかを決定することを含むことができる。メタボリックシンドロームの障害又は症候の効果的な治療の確証。糖尿病、インスリン依存性又は非インスリン依存性、及び／又は耐糖能低下の効果的な治療の確証もまた提供され得る。糖尿病の場合、治療薬の有効性は、ブドウ糖負荷試験によって決定することができる。その代わりに、スクリーニング法は、このような治療法における効能についてＣＣＲ２治療薬であることが知られる薬剤を試験することを単に含めることができる。
【００５０】
ＣＣＲ２活性の変更における効能について薬剤を試験することは、当該技術分野において周知である方法を用いて実行することができる（Ｃｈａｒｏら、（１９９４）ＰＮＡＳ  ）９１，２７５２−２７５６）。
【００５１】
このような活性化合物の治療効果は、細胞培養又は動物モデルにおける標準的な治療法によって、例えばＥＤ５０（最大効果の５０％を産出する化合物濃度）を決定することによって決定することができる。薬物がＣＣＲ２アンタゴニストであると決定されると、又は既知のＣＣＲ２アンタゴニストが試験されるとすれば、次に、その薬物は、本明細書中に記載した治療方法に有効であることを確かめるために試験することができる。このような試験は、本明細書中に掲載した条件について、適切な動物モデル系で実行することができる。例えば、遺伝的に肥満なマウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ（ｏｂ／ｏｂ））、規定食で誘導の肥満マウス（即ち、ＤＩＯマウス）、又はラットを治療薬で試験することができ、本明細書中に記載した条件と関連した種々のパラメータに関する薬剤の効果は、治療薬を用いて治療することを除いて、類似の条件下で維持されている動物と比較することができる。本目的のために試験することができるパラメータは、例えば、体重、体脂肪、インスリン、グルコース、トリグリセリド、遊離脂肪酸、アジポネクチン、ヘモグロビンＡ１ｃ、コレステロール、レプチン及び／又はフルクトサミンを含む。これらのいくつかの例は、実施例において下記に提供される。これらのパラメータに関する肯定的な影響を有することが見出される治療薬は、その後、当業者によって決定することができるような他の前臨床又は臨床研究において試験するために選択することができる。
【００５２】
ＣＣＲ２アンタゴニストの特徴付け
本明細書中で検討した治療法と比較して、パラメータに関する肯定的な影響を有することが見出されるＣＣＲ２アンタゴニスト剤は、当業者によって決定することができるように、前臨床又は臨床研究において試験することができる。
【００５３】
細胞培養アッセイ及び動物モデルから得られたデータは、ヒトにおける使用のための服用量の範囲を明確にするために使用することができる。服用量は、使用される剤形及び投与経路に依存して変化してもよい。本発明の方法に使用される任意の化合物又は薬剤について、治療的に有効な用量は、細胞培養アッセイから初期に推定することができる。用量は、ＩＣ５０を含む循環している血漿濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて明確にすることができる。このような情報は、ヒトにおける有用な用量をより性格に決定するために使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【００５４】
治療法
ＣＣＲ２アンタゴニストとして同定された治療薬は、例えば、脂肪蓄積の量を減少することによる肥満の病人の場合において、あるいは体重及び／又は体脂肪を維持するように探求している個体において、体重及び／又は体脂肪を減少又は維持するのに十分な服用量で投与される。このような治療的に有効な量は、例えば、患者（ヒト又は動物）の状態、投与経路、製剤化、医師の判断、及び本開示に照らして当業者に明らかとなる他の因子に依存する日常的な最適化手法を用いて決定されるであろう。
【００５５】
本発明に従って使用に適したＣＣＲ２治療薬は、単独で投与され得るが、ヒトの治療においては、一般的に、意図された投与経路及び標準的な医薬としての実施に関して、選択された適した医薬としての賦形剤、希釈剤、又は担体と一緒の混合物で投与されるであろう。
【００５６】
例えば、本発明に従って使用に適したＣＣＲ２アンタゴニスト又はその塩若しくは溶媒和物は、即座、遅延、修飾、持続、二重、制御された放出又はパルス的な輸送応用に、香味剤又は着色剤を含んでもよい、錠剤、カプセル剤（ソフトゲルカプセル剤を含む）、マルチ微粒子、ゲル、フィルム、胚殊、エリキシル剤、液剤又は懸濁剤の剤形で経口的に、口内に、又は舌下に投与することができる。このような化合物はまた、即座分散又は即座溶解剤形を通して、又は高エネルギー分散の形態で、又は被覆した微粒子として投与することができる。適した医薬製剤は、所望により、被覆され又は被覆されない形態であってもよい。
【００５７】
このような固形の医薬組成物、例えば、錠剤は、賦形剤、例えば微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、グリシン及びスターチ（好ましくは、コーン、ポテト又はタピオカスターチ）、崩壊剤、例えばグリコール酸スターチナトリウム、クロスカメロース・ナトリウム、及びある種の複合ケイ酸塩、及び顆粒化結合剤、例えばポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＡＳ）、スクロース、ゼラチン及びアカシアを含有してもよい。加えて、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクを含めることができる。
【００５８】
類似の型の固形組成物はまた、ゼラチンカプセル剤又はＨＰＭＣカプセル剤のろ過剤として使用することができる。これに関する賦形剤は、ラクトース、スターチ、セルロース、ミルク糖、又は高分子量ポリエチレングリコールを含む。水性懸濁剤及び／又はエリキシルについては、ＣＣＲ２アンタゴニスト化合物は、種々の甘味剤又は香味剤、着色物質又は色素、乳化剤及び／又は懸濁剤、及び希釈剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリン、及びそれらの組み合わせと組み合わせることができる。
【００５９】
修飾された放出及びパルス的な放出剤形は、賦形剤、例えば即座放出剤形用に詳述されるものを、放出速度修飾剤として作用する追加の賦形剤と一緒に含有することができ、これらは被覆され及び／又は発明品の本体に含められる。放出速度修飾剤は、排他的に制限されないが、ＨＰＭＣ、ＨＰＭＣＡＳ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロース、ポリエチレンオキシド、キサンタンガム、カルボマー、アンモニオ・メタクリレート共重合体、水素化ヒマシ油、カルナウバワックス、パラフィンワックス、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸共重合体及びそれらの混合物を含む。修飾した放出及びパルス的放出剤形は、放出速度を修飾する賦形剤の１つ又は組み合わせを含有することができる。放出速度を修飾する賦形剤は、剤形、即ち、マトリックス内に、及び／又は剤形上、即ち表面又は被覆に応じて存在してもよい。
【００６０】
即座分散又は溶解服用製剤（ＦＤＤＦ）は、下記の成分：アスパルテーム、アセサルフェームカリウム、クエン酸、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ジアスコルビン酸、アクリル酸エチル、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、メタクリル酸メチル、ミント香味料、ポリエチレングリコール、ヒュームド・シリカ、二酸化ケイ素、グリコール酸スターチナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ソルビトール、キシリトールを含有してもよい。ＦＤＤＦを記述するために本明細書中で使用されるように用語「分散」又は「溶解」は、使用される試薬物質の溶解性に依存し、即ち、試薬物質が不溶性である場合には即座分散剤形を製造することができ、及び試薬物質が溶解性である場合には即座溶解剤形を製造することができる。
【００６１】
本発明に従って使用に適したＣＣＲ２アンタゴニストはまた、非経口的に、例えば、海面内、静脈内、動脈内、腹腔内、髄膜内、心室内、子宮内、胸骨内、頭蓋内、筋内、又は皮下に投与することができ、あるいは、注射又は無針手法によって投与することができる。このような非経口投与については、無菌の水溶液の形態で使用することが最良であり、他の物質、例えば、溶液を血液と等張にするために十分な塩又はグルコースを含有してもよい。水溶液は、必要であれば、適切に緩衝化すべきである（好ましくは約３−９のｐＨ）。無菌条件での適した非経口製剤の調製は、当業者に周知な標準的な医薬技術によって容易に達成される。
【００６２】
患者（ヒト又は動物）への経口及び非経口投与については、本発明における使用のためのＣＣＲ２アンタゴニストの毎日の投与量レベルは、通常、１−５００ｍｇ（単独又は分割服用）であろう。服用量範囲は、約１ｍｇ−約１００ｍｇである。服用は、１回投与、分割した毎日の投与、又は複数回の毎日の投与によることが可能である。その代わりに、連続服用、例えば、制御された（例えば遅延）放出剤形は、毎日のように、又は一度に１日より長い間投与することができる。
【００６３】
つまり、例えば、本発明に従って使用に適したＣＣＲ２アンタゴニストの錠剤又はカプセル剤は、必要に応じて、１回で又は一度に２回若しくはそれより多い回数で投与するための１ｍｇ−２５０ｍｇの活性化合物を含有することができる。好ましい錠剤又はカプセル剤は、必要に応じて、１回で又は一度に２回若しくはそれより多い回数で投与するための約１ｍｇ−約５０ｍｇの活性化合物を含有するであろう。いずれの事象でも医師は、いずれかの個体の患者に最も適切であろう正確な服用量を決定するであろうし、特定の患者の年齢、体重及び応答を伴って変化するであろう。当然に、より高い又はより低い範囲が値する個々の場合であり、このようなことは本発明の範囲内である。
【００６４】
本発明に従って使用のために適したＣＣＲ２アンタゴニストはまた、鼻腔内又は吸入によって投与することができ、乾燥粉末吸入器の形態で、又は圧縮した容器、ポンプ、スプレイ、若しくは適した高圧ガス、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、例えば１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ（商標）又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ（商標））、二酸化炭素又は他の適したガスの使用を伴う噴霧器からのエアロゾルスプレイ提示の形態で都合よく輸送される。圧縮したエアロゾルの場合、服用量単位は、計量した量を輸送するためのバルブを提供することによって測定することができる。圧縮した容器、ポンプ、スプレイ、又は噴霧器は、活性成分の溶液又は懸濁液を、例えば溶媒としてエタノールと高圧ガスの混合物を用いて含有することができ、付加的に、潤滑剤、例えばトリオレイン酸ソルビタンを含有してもよい。吸入器又は吸い込み器における使用のためのカプセル剤及びカートリッジ（例えば、ゼラチンから作製される）は、本発明の化合物とラクトース又はスターチのような適した粉末ベースの粉末ミックスを含有するように製剤化してもよい。
【００６５】
エアロゾル又は乾燥粉末製剤は、好ましくは、各々の計量又は「噴出し」は治療される動物への輸送のために１−５０ｍｇのＣＣＲ２アンタゴニストを含有するようにアレンジされる。エアロゾルを伴う毎日の服用の全量は、１回投与、又はより通常には、その日を通じて分割した投与で投与してもよい１−５０ｍｇの範囲であろう。
【００６６】
本発明に従って使用のために適したＣＣＲ２アンタゴニストはまた、噴霧器を介した輸送のために製剤化してもよい。噴霧器装置に関する製剤化は、下記の成分、可溶化剤、乳化剤又は懸濁剤；水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、低分子量ポリエチレングリコール、塩化ナトリウム、フルオロカーボン、ポリエチレングリコールエーテル、トリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸を含有してもよい。
【００６７】
その代わりに、本発明に従って使用のために適したＣＣＲ２アンタゴニストは、坐薬又はペッサリーの形態で投与することができ、あるいは、局所的に、ゲル、ハイドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏又は散布剤の形態で適用してもよい。本発明に従って使用のために適したＣＣＲ２アンタゴニストはまた、例えば、皮膚パッチの使用によって、皮膚又は経皮に投与してもよい。それらはまた、肺又は直腸経路によって投与することができる。
【００６８】
ＣＣＲ２アンタゴニストはまた、眼内経路によって投与してもよい。眼の使用については、化合物は、等張、ｐＨ調整、無菌塩溶液中の微粒化した懸濁液として、又は、好ましくは等張、ｐＨ調整、無菌塩溶液中で、場合により塩化ベンジルアルコニウムのような保存剤と一緒の溶液として製剤化することができる。その代わりに、それらは、ワセリンのような軟膏で製剤化してもよい。
【００６９】
皮膚への局所的な応用について、本発明に従って使用のために適したＣＣＲ２アンタゴニストは、例えば、１又はそれより多くの下記：鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、及び水との混合物中に懸濁又は溶解した活性成分又は薬剤を含有する適した軟膏として製剤化することができる。その代わりに、それらは、例えば、１又はそれより多くの下記：鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、液体パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水との混合物中に懸濁又は溶解した適したローション又はクリームとして製剤化することができる。
【００７０】
本発明に従って使用のために適したＣＣＲ２アンタゴニストはまた、シクロデキストリンと組み合わせて使用してもよい。シクロデキストリンは、試薬分子と封入及び非封入複合体を形成することが知られる。試薬−シクロデキストリン複合体の形成は、試薬分子の溶解性、溶解速度、生物学的利用能及び／又は溶解特性を修飾することができる。試薬−シクロデキストリン複合体は、一般的に、最良の剤形及び投与経路に有用である。試薬との直接的な複合化に対する代替として、シクロデキストリンは、補助付加物、例えば、担体、希釈剤又は可溶化剤として使用することができる。アルファ−、ベータ−及びガンマ−シクロデキストリンは、最も一般的に使用されるものであり、適した実施例は、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１１１７２、ＷＯ９４／０２５１８及びＷＯ９８／５５１４８に記載される。
【００７１】
一般的に、ヒトでは、経口投与は、好ましい経路であり、しばしば、最も都合がよい。受容者が嚥下障害又は経口投与後の薬物吸収の機能障害を被っている環境では、薬物は、非経口、舌下腺、又は口内に投与してもよい。薬物が経口的に不活性である事象では、非経口投与を利用することができるであろう。
【００７２】
獣医用の使用について、ＣＣＲ２阻害剤は、正常の獣医的実施に従って適切に許容される製剤化として投与され、そして、獣医は、特定の動物に対して最も適切であろう服用計画及び投与経路を決定するであろう。このような動物は、体重超過、肥満、又は体重超過若しくは肥満の危険にある愛玩用動物を含む。本発明に従って治療することができる他の動物は、本発明に従って治療されない場合に得られるであろうものよりも、低脂肪肉を得るための食料貯蔵用動物である。
【００７３】
本発明に従って使用されるＣＣＲ２アンタゴニストはまた、本明細書中に開示される疾患、症状及び／又は障害の治療のために他の医薬と一緒に使用することができる。これらの第二の薬剤は、患者の治療における組み合わせた有利な効果を有するために選択されるであろう。したがって、他の医薬と組み合わせてＣＣＲ２アンタゴニストを投与することを含む治療法はまた提供される。本発明の化合物と組み合わせて使用することができる適した医薬は、アポリポプロテイン−Ｂ分泌／ミクロソームトリグリセリド転移タンパク質（ａｐｏ−Ｂ／ＭＴＰ）阻害剤、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ペプチドＹＹ３−３６若しくはその類似体、ＭＣＲ−４アゴニスト、コレシストキニン−Ａ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニスト、モノアミン再吸収阻害剤（例えばシブトラミン）、カンナビノイド受容体−１アンタゴニスト（例えばリモナバント）、交換神経様作用薬、β３アドレナリン受容体アゴニスト、ドーパミンアゴニスト（例えばブロモクリプチン）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃアゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、レプチン（ＯＢプロテイン）、レプチン類似体、レプチン受容体アゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤（例えばテトラヒドロリプスタチン、即ちオーリスタット）、食欲抑制剤（例えばボンベシンアゴニスト）、神経ペプチド−Ｙ受容体試薬（例えば、ＮＰＹ  Ｙ２アゴニスト）、米国特許第６，５６６，３６７号；米国特許第６，６４９，６２４号；米国特許第６，６３８，９４２号；米国特許第６，６０５，７２０号；米国特許第６，４９５，５５９号；米国特許第６，４６２，０５３号；米国特許第６，３８８，０７７号；米国特許第６，３３５，３４５号；及び米国特許第６，３２６，３７５号；米国公開第２００２０１５１４５６号及び米国出公開第２００３０３６６５２号；及びＰＣＴ公開ＷＯ０３／０１０１７５；ＷＯ０３／０８２１９０及びＷＯ０２／０４８１５２に開示される選択された化合物、甲状腺ホルモン作用剤、デヒドロエピアンドロステロン若しくはその類似体、選択されたグルココルチコイド受容体試薬、オレキシン受容体アンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド−１受容体アゴニスト、毛様体神経栄養因子（例えばＡｘｏｋｉｎｅ（商標）、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹより利用可能）、ヒトアグチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）の阻害剤、グレリン受容体アンタゴニスト、ヒスタミン３受容体アンタゴニスト若しくは逆作動薬、ニューロメジンＵ受容体アゴニスト等を含んでもよい選択された抗肥満薬を含む。他の抗肥満薬は、以下に記載した好ましい薬剤を含み、当業者に周知であり、又は本開示に照らして容易に明らかにあるであろう。
【００７４】
オーリスタット、シブトラミン、ブロモクリプチン、レプチン、リモナバント、ペプチドＹＹ３−３６、又はそれらの類似体；そして、２−オキソ−Ｎ−（５−フェニルピラジニル）スピロ−［イソベンゾフラン−１（３Ｈ），４’−ピペリジン］−１’−カルボキサミドから成る群から選択される抗肥満薬が特に好ましい。好ましくは、本発明の化合物及び併用療法は、運動と理にかなった規定食と結びつけて投与される。
【００７５】
本発明の併用剤、医薬組成物、及び方法における使用のための代表的な抗肥満薬は、当業者に既知の方法を用いて調製することができ、例えば、シブトラミンは、米国特許第４，９２９，６２９号に記載されるように調製することができる；ブロモクリプチンは、米国公開米国特許第３，７５２，８１４号及び米国特許第３，７５２，８８８号に記載されるように調製することができる；オーリスタットは、米国特許第５，２７４，１４３号；米国特許第５，４２０，３０５号；米国特許第５，５４０，９１７号；及び米国特許第５，６４３，８７４号に記載されるように調製することができる；リモナバントは、米国特許第５，６２４，９４１号に記載されるように調製することができる；ＰＹＹ３−３６（その類似体を含む）は、米国公開第２００２０１４１９８５号及びＰＣＴ公開ＷＯ０３／０２７６３７に記載されるように調製することができる；そして、ＮＰＹ  Ｙ５受容体アンタゴニスト２−オキソ−Ｎ−（５−フェニルピラジニル）スピロ［イソベンゾフラン−１（３Ｈ），４’−ピペリジン］−１’−カルボキサミドは、米国公開第２００２０１５１４５６号に記載されるように調製することができる。
【００７６】
本発明はまた、本明細書中に記載された疾患及び症状の予防及び治療における使用のためのＣＣＲ２アンタゴニストを含むキット又は医薬パッケージを提供する。例えば、錠剤、カプセル剤、又は凍結乾燥粉末の形態で１又はそれよりも多くのＣＣＲ２アンタゴニストに加えて、キット又はパッケージは、このような疾患及び症状の予防又は治療におけるアンタゴニストを用いるための使用説明書を含めることができる。アンタゴニストは、ボトル中のキット若しくはパッケージ、又は別の適切な形態（例えばブリスターパック）で提供することができる。場合により、キット又は医薬パッケージはまた、他の医薬として活性な試薬（例えば、上記で列挙した試薬、例えば抗肥満薬を参照）、及び／又は希釈剤、針、シリンジ、塗布剤等のような薬物（又は複数）の投与に使用される材料を含めることができる。
【００７７】
本発明は、部分的には、下記の実験結果に基づく。本発明は特定の態様と結びつけて本明細書中に記載されるが、実施できる他の変化及び修飾はまた、本発明の部分であり、同時に添付した請求の範囲内にあることが理解されるであろう。本出願は、一般的に、当該技術分野内の既知の又は慣習的な実施に入る本開示による逸脱を含む本発明の原理に従い、そして、過度の実験なしに究明することができる本発明の任意の均等物、改変体、使用、又は脚色を覆うことが意図される。
【実施例】
【００７８】
実施例
ＣＣＲ２（ＫＯ）（−／−）マウスはＪ．Ｄａｖｉｄ  Ｇｌａｄｓｔｏｎｅ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓのＤｒ．Ｉｓｒａｅｌ  Ｃｈａｒｏによって提供された。胚幹細胞における同属組換えは、標的としたＣＣＲ２の崩壊を有するこのようなマウスを発生させるために使用することができる（同様に、Ｋｕｚｉｅｌ，Ｗ．Ａ．ら（１９９７）ＰＮＡＳ  ９４，１２０５３−１２０５８及びＢｏｒｉｎｇ，Ｌ．ら（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００，２２５２−２５６１）。年齢を適合させた雄性ＣＣＲ２（ＫＯ）（−／−）マウス（ｎ＝２０）及び野生型（＋／＋）（Ｃ５７）同腹子の対照（ｎ＝２０）は、研究を開始する前に２週間順応させ、水とＰｕｒｉｎａ  ５００１のげっ歯類の食べ物（Ｐｕｒｉｎａ，Ｂｒｅｎｔｗｏｏｄ，ＭＯ）に自由に接するようにさせた。
【００７９】
マウスを個別にゲージに入れ、２つの群に分けた：第一の群は、１０ｋｃａｌ％脂肪（低脂肪規定食（ＬＦＤ））から構成される規定食に関し、及び第二の群は、４５ｋｃａｌ％脂肪（高脂肪規定食（ＨＦＤ））（Ｄ１２３３１  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）から構成される規定食に関し、１５週の研究期間与えられた。マウスは、水に自由に接触させた。食物の取り込みは、２４時間、５日／週のサイクル（月曜日−金曜日）で維持した動物において測定した。体重は、０日目とその後週に１度測定した。
【００８０】
更なる研究は、空腹時の血漿中のインスリンレベルの差異について、ＣＣＲ２  ＫＯマウス及びＣ５７マウスと、正常の規定食を与えた両群と比較した。
エネルギー消耗及び酸素消費をＯｘｙｍａｘシステム（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を用いて測定した。マウスを標準的な実験室条件下でゲージに入れ、実験的な規定食を維持した。マウスは、熱量計の密封したチャンバー（８”×４”×５．５”）に慣れさせた（チャンバー当り１匹）。チャンバーを活動モニターに設置した。熱量計は、各々使用前に較正し、空気流を１．６リットル／分に調整し、そして、システムのセッティング及びサンプリング時間をそれぞれ６０秒及び１５秒にセットした。酸素消費、二酸化炭素産生、及び歩行活動を４時間で１０分毎に測定した。
【００８１】
経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＧＴ）は、４つの実験群によるマウスについて研究の第１６週の終わりの後、一晩空腹にした後の８：３０頃（０時）採取した第一の試料を用いて行われた。眼窩後の血液試料は、示されるように０時に回収し、その後、２ｇ／ｋｇ体重の経口的グルコース負荷を投与した。追加の血液試料は、グルコース負荷後の３０、６０、１２０及び１８０分で回収した。２５μＬの血液をマイクロチューブ（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｔｕｃｈｅｎ，ＮＪ）中の１００μＬの０．０２５パーセントでヘパリン化された塩溶液に添加した。チューブをＭｉｃｒｏｆｕｇｅ（登録商標）１２（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）中で最高設定で２分間回転させた。
【００８２】
研究の最終日の朝に、体重を測定し、次いで、血液試料を血漿グルコース測定について眼窩後の血脈洞により採取した。その後、マウスを屠殺し、約１ミリリットルの血液をリチウムヘパリンを用いてＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）血漿分離チューブに回収した（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）。チューブを最大設定で５分間、Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ１２で回転させた。血漿を１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに回収し、液体窒素中で凍結させた。副睾丸脂肪体もまた除去し、計量し、直に液体窒素中で凍結した。全ての試料を−８０℃で保存した。
【００８３】
血漿グルコースは、製造元の試薬を用いて商業的に利用可能な手段により測定した（Ｒｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ  ９１２  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎａｌｙｚｅｒ，Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｄｉａｎａｏｌｉｓ，ＩＮ）。
【００８４】
血漿中のインスリンをＡＬＰＣＯ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｗｉｎｄｈａｍ，ＮＨ）によって供給さえるＭｅｒｃｏｄｉａ  ＥＬＩＳＡインスリンキットを用いて、製造元の使用説明書に従って評価した。
【００８５】
実施例１：高脂肪規定食（ＨＦＤ）を与えた雄性マウスにおける体重、体脂肪及び代謝速度のＣＣＲ２阻害効果
ＣＣＲ２  ＫＯ（ＫＯ）マウスにおけるＣＣＲ２遺伝子崩壊は、高脂肪規定食（ＨＦＤ）を消費しながら、肥満の発症に耐性な健常な表現型に帰着した。ＨＦＤに関する野生型（Ｃ５７）マウスは、低脂肪規定食（ＬＦＤ）のＣ５７マウスと比較して体重の増加を示し、一方、ＣＣＲ２  ＫＯ  ＨＦＤマウスは、ＣＣＲ２  ＫＯ  ＬＦＤマウスに匹敵する程に体重を維持した。ＣＣＲ２ ＫＯ  ＨＦＤマウスの肥満耐性の表現型は、図１に示すように明白な証拠を示す。Ｃ５７  ＨＦＤマウスと比較して、ちょうど７週で基準の体重を約３０−３５％超えた体重を増加させ、ＣＣＲ２  ＫＯ  ＨＦＤマウスの体重は、基準の体重をたった５−１０％超えて増加し、それは、ＣＣＲ２  ＫＯ  ＬＦＤマウス及びＣ５７  ＬＦＤマウスの両方において観察されたものと匹敵する程の増加であった。
【００８６】
図２に示した体重のパーセントとして表した副睾丸脂肪組織の測定は、Ｃ５７  ＨＦＤマウスによって経験された体重増加が脂肪の増加によることを示す。ＣＣＲ２  ＫＯ  ＨＦＤマウスは、研究の進行に渡って体脂肪を増加させたが、同じ規定食で維持したＣ５７マウスよりも有意に低いままであった（それぞれ、全体重の３．２％対５．０％）。
【００８７】
脂肪組織、膵臓及び肝臓切片の組織試験
Ｃ５７マウス及びＣＣＲ２  ＫＯマウス（ｎ＝５／群）に１２週間ＬＦＤ又はＨＦＤのいずれかを与えた。その期間の終わりに、動物を検視し、マウスによる脂肪組織、膵臓及び肝臓を組織試験用に回収した。白色脂肪組織を計量し、体重に対するそれらの相対的パーセントを計算した。
【００８８】
脂肪組織切片をＭａｃ２、マクロファージマーカーについて染色し、染色量、並びに脂肪細胞の大きさを形態計測による分析を通して測定した。Ｍａｃ２の染色の最終量を脂肪細胞の大きさについて補正した。
【００８９】
脂肪組織切片：
臓器重量：表１に示されるように、高脂肪規定食（ＨＦＤ）に関するＣ５７マウス及びＫＯマウスの両方において副睾丸脂肪組織の増加があった。この増加は、Ｃ５７マウスにおいてより明確であった（２．６×対２．１×）。低脂肪規定食（ＬＦＤ）群において、ＫＯマウスの脂肪組織の重量は、Ｃ５７マウスより僅かに低かった。
【００９０】
【表１】
2008508253.tif 000002
【００９１】
顕微鏡試験：脂肪細胞は、ＨＦＤに関するＣ５７マウス及びＫＯマウスの両方において大きかった。図３Ｂ及び３Ｄ（ＨＦＤマウス）と図３Ａ及び３Ｃ（ＬＦＤマウス）の比較。Ｃ５７マウスから採取した脂肪細胞の大きさは、ＫＯマウスから採取したものより大きいようであった。図３Ａ及び３Ｂ（Ｃ５７マウス）と図３Ｃ及び３Ｄ（ＫＯマウス）の比較。この観察は、形態計測による分析によって確かめられ、臓器重量と一致した。
【００９２】
Ｃ５７  ＨＦＤマウスにおいて、脂肪細胞の大きさの増加と相互に関連した脂肪組織中のマクロファージの数が増加した。対照的に、ＫＯ  ＨＦＤマウスは、副睾丸脂肪組織中のマクロファージの数の減少を示した。この観察は、形態計測による分析によって確認された。
【００９３】
上記の組織データは、Ｃ５７  ＨＦＤマウスＫＯ  ＨＦＤマウスの両方における脂肪細胞の大きさが増加したことを示す。この増加は、Ｃ５７マウスにおいてより重篤である。この増加は、脂肪へのマクロファージの浸潤と関連する。
【００９４】
Ｃ５７  ＨＦＤマウス及びＫＯ  ＨＦＤマウスとの間の体重の差は、ＫＯマウスにおける食物消費の減少によっては説明がつかなかった。ＣＣＲ２  ＫＯマウスは、Ｃ５７の対応物と比較して同程度でＨＦＤを消費した（図４）。
【００９５】
代謝速度における変化は、ＨＦＤを与えたＣＣＲ２  ＫＯマウスにおいては明らかではなかった。酸素消費（ＶＯ２）は、全ＶＯ２（図５）又は呼吸交換率（図６）のいずれかとして測定され、ＨＦＤを与えたＫＯマウスにおいて有意な違いはなかった。ＨＦＤ及びＬＦＤの両方に関するＣ５７マウスについての残存ＶＯ２値は、ＣＣＲ２  ＫＯ  ＨＦＤ及びＬＦＤマウスで均等であった。
これらの結果は、ＣＣＲ２活性の減少が体重の減少及び／又は体脂肪の減少、及び増加した脂肪過多と関連した障害の治療の有効な手段であることを示す。
【００９６】
実施例２：高脂肪規定食を与えたマウスにおける代謝パラメータにおけるＣＣＲ２の効果
ＣＣＲ２  ＫＯマウスは、より低い基準のインスリンレベルを有し、グルコース排除の減少によって示されるように、改善されたインスリン感受性を暗示し（図７）、ＯＧＴＴ中のグルコース上昇に耐性である（図９）。さらに、Ｃ５７  ＨＦＤマウスと比較して、ＣＣＲ２  ＨＦＤ  ＫＯマウスは、高インスリン血症及び耐糖能低下を発症しなかった（図８Ａ及び８Ｂ）。
【００９７】
これらの結果は、ＣＣＲ２治療薬が、糖尿病、耐糖能低下、又はインスリン耐性と関連した障害の治療に有効であろうことを示す。ＣＣＲ２治療薬は、メタボリックシンドロームと関連した障害の治療に有効であろう。さらに、ＣＣＲ２治療薬は、体重及び／又は体脂肪の減少又は維持、及び脂肪過多の増加と関連した障害の治療に有効であろう。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、４つの実験群：低脂肪規定食の野生型（Ｃ５７）マウス（Ｃ５７  ＬＦＤ）；低脂肪規定食のＣＣＲ２−／−ノックアウト（ＫＯ）マウス；高脂肪規定食の野生型マウス（Ｃ５７  ＨＦＤ）；、そして、高脂肪規定食のＣＣＲ２  ＫＯマウス（ＫＯ  ＨＦＤ）についてのベースライン変化のパーセントとして、体重の経時変化を示す。Ｃ５７  ＨＦＤマウスは、Ｃ５７  ＬＦＤと比較して体重の増加を示した。しかしながら、ＫＯ  ＨＦＤマウスは、ＫＯ  ＬＦＤマウスと比較して体重の類似の増加を示さなかった。
【図２】図２は、４つの実験群についての体重のパーセントとしての副睾丸脂肪の経時変化を示す折れ線グラフである。ＣＣＲ２  ＫＯマウスは、類似の規定食のＣ５７対照マウスと比較して、体重に対する脂肪過多の減少を示した。
【図３Ａ−Ｂ】１２週間後の４つの実験群からの脂肪組織の組織切片のイメージを提供する。
【図３Ｃ−Ｄ】１２週間後の４つの実験群からの脂肪組織の組織切片のイメージを提供する。
【図４】図４は、４つの実験群についての体重増加について標準化した食物消費の経時変化を詳述する棒グラフである。図１に示すように、ＫＯ  ＨＦＤマウスの体重増加の減少にもかかわらず、ＫＯ  ＨＦＤマウスは、Ｃ５７  ＨＦＤ対照マウスと比較して、ＨＦＤに等しい又は僅かに多くの量を消費した。
【図５】図５は、４つの実験群における酸素消費（ＶＯ２）を示す。代謝速度における有意な変化は、４つの実験群の間では示されなかった。
【図６】図６は、４つの実験群における休止ＶＯ２を示す。４つの実験群の間で有意な変化は示さなかった。
【図７】図７は、４つの実験群における空腹時の血漿中のインスリンのレベルを示す折れ線グラフである。ＣＣＲ２ ＫＯマウスは、インスリンのより低い基準レベルによって示唆されるように、ＨＦＤ及びＬＦＤプロトコールの両方についてのＣ５７の対照マウスよりインスリン感受性であった。
【図８Ａ】図８Ａは、４つの実験群における経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＧＴ）及びインスリンレベルの結果を示す折れ線グラフである。ＣＣＲ２  ＫＯ  ＨＦＤマウスは、Ｃ５７  ＨＦＤと比較してＯＧＧＴ中に有意なグルコース偏位の減少を提示した。
【図８Ｂ】図８Ｂは、４つの実験群における経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＧＴ）及びインスリンレベルの結果を示す折れ線グラフである。ＣＣＲ２  ＫＯ  ＨＦＤマウスは、Ｃ５７  ＨＦＤと比較してＯＧＧＴ中に有意なグルコース偏位の減少を提示した。
【図９】図９は、正常な規定食に関するＣＣＲ２ ＫＯマウス及びＣ５７マウスにおける経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＧＴ）の結果を示す折れ線グラフである。ＣＣＲ２  ＫＯマウスは、Ｃ５７対照マウスと比較して非常に耐糖的であった。
【図１】
2008508253.tif 000003
【図２】
2008508253.tif 000004
【図３Ａ】
2008508253.tif 000005
【図３Ｂ】
2008508253.tif 000006
【図３Ｃ】
2008508253.tif 000007
【図３Ｄ】
2008508253.tif 000008
【図４】
2008508253.tif 000009
【図５】
2008508253.tif 000010
【図６】
2008508253.tif 000011
【図７】
2008508253.tif 000012
【図８Ａ】
2008508253.tif 000013
【図８Ｂ】
2008508253.tif 000014
【図９】
2008508253.tif 000015
【国際調査報告】
2008508253.tif 000016
2008508253.tif 000017
2008508253.tif 000018
2008508253.tif 000019
2008508253.tif 000020