(57)【要約】本発明は、新規ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレータ、およびキナーゼ活性により媒介される疾患を治療するための新規ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレータの使用方法を提供する。2008508303.tif 000167
2008508303.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2008508303.tif 000157
［式中、
Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換の２〜５員のヘテロアルキレンであり、ｎは０〜２の整数であり；
Ａ1は、６員の置換もしくは非置換アリールまたは６員の置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ａ2は、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ1は、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｘ1は、−Ｃ（Ｒ2）＝、−Ｃ（Ｒ2）（Ｒ3）−、−Ｎ＝、−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり；
Ｒ2およびＲ3は、独立して、水素、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ4は、水素、−Ｃ（Ｏ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ11、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｚは、Ｎ（Ｒ23）、Ｓ、またはＯであり、ここに、Ｒ23は水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり；
ｗは０〜２の整数であり；
Ｒ5は、独立して、水素、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）Ｒ10、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ11、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、−ＮＲ12Ｒ13、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12およびＲ13は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ8は、独立して、水素、−ＮＲ14Ｒ15、−ＯＲ16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ14、Ｒ15、およびＲ16は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ9は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、ｗが２である場合は、Ｒ9は適宜−ＮＲ17Ｒ18であってもよく；
Ｒ17およびＲ18は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
ここに、Ｒ6およびＲ7、Ｒ12およびＲ13、Ｒ14およびＲ15、ならびにＲ17およびＲ18は、独立して、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成してもよい］
で示される化合物。
【請求項２】
Ａ1が６員の置換アリールまたは６員の置換ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａ1が置換フェニル、置換ピリジニル、置換ピリミジニル、置換ベンゾジオキソリル、置換ベンズイミダゾリル、または置換インドリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ａ1がハロゲンで置換されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ａ1が置換フェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ａ1が式：
【化２】
2008508303.tif 000158
［式中、
ｘは１〜５の整数であり；
Ｒ19は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
ここに、２つのＲ19基は、適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成してもよい］
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
１位で結合しているＲ19が２位で結合しているＲ19と一緒になって置換または非置換の環を形成する、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
２位で結合しているＲ19が３位で結合しているＲ19と一緒になって置換または非置換の環を形成する、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
２つのＲ19基が適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成してもよく、その置換または非置換の環が置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ19が独立してハロゲン、−ＮＲ6Ｒ7、ＯＲ5、または置換もしくは非置換アルキルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7が独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ6およびＲ7が、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成してもよい、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7が独立して水素、または置換もしくは非置換アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7が独立して水素、または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ6アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１４】
ｘが１であり、Ｒ19が２位で結合している、請求項６に記載の化合物。
【請求項１５】
ｘが１であり、Ｒ19が１位で結合している、請求項６に記載の化合物。
【請求項１６】
ｘが２〜５の整数であり、少なくとも１つのＲ19が１位で結合している、請求項６に記載の化合物。
【請求項１７】
ｘが２〜５の整数であり、少なくとも１つのＲ19が２位で結合している、請求項６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ａ2が置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
Ａ2が置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換チオペニル、置換もしくは非置換ピリジニル、置換もしくは非置換ピロリル、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換ピラジニル、または置換もしくは非置換イミダゾリルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ａ2が式：
【化３】
2008508303.tif 000159
［式中、
ｙは０〜４の整数であり；
Ｒ20は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
２つのＲ20基が適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換もしくは非置換の環を形成してもよいか、または
１つのＲ20とＲ1とが適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換もしくは非置換の環を形成してもよい］
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ20が独立してハロゲン、−ＮＲ6Ｒ7、ＯＲ5、または置換もしくは非置換アルキルである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7が、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、Ｒ6およびＲ7が、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成してもよい、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7が独立して水素、または置換もしくは非置換アルキルである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7が独立して水素、または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ6アルキルである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２５】
ｙが１であり；Ｒ20が３’位で結合している、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２６】
ｙが２であり；Ｒ20が３’位および４’位で結合している、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２７】
Ａ2が式：
【化４】
2008508303.tif 000160
［式中、
ｙは０〜３の整数であり；
Ｒ20は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
１つのＲ20とＲ1とが適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成してもよい］
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項２８】
ｙが１であり；Ｒ20が３’位で結合している、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｌ1が結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｌ2が結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｌ1およびＬ2が結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ1が−Ｃ（Ｚ）Ｒ8であり、ＺがＯであり、Ｒ8が−ＮＲ14Ｒ15である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ1が−Ｃ（Ｚ）Ｒ8であり、ＺがＯであり、Ｒ8が−ＮＲ14Ｒ15である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ1が−Ｃ（Ｚ）Ｒ8であり、ＺがＯであり、Ｒ8が−ＮＲ14Ｒ15である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ1が−Ｃ（Ｚ）Ｒ8であり、
ＺがＯであり；
Ｒ8が−ＮＲ14Ｒ15であり；
Ｒ14およびＲ15が、独立して、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキルであるか、あるいはそれらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ピペリジニル、または置換もしくは非置換ピペラジニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、または置換もしくは非置換モルホリノを形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３６】
ｙが０である、請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｒ14およびＲ15が、それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換アルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアルキルで置換されているピペラジニルを形成する、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３８】
ピペラジニルが、式：
−（ＣＨ2）t−ＮＲ21Ｒ22
［式中、
ｔは０〜６の整数であり；
Ｒ21およびＲ22は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ21およびＲ22は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい］
で示される置換基で置換されている、請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｒ21およびＲ22が、それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ピペラジニル、置換もしくは非置換ピペリジニル、または置換もしくは非置換モルホリノを形成する、請求項３８に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｒ21およびＲ22が独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換アミノアルキルである、請求項３８に記載の化合物。
【請求項４１】
Ａ1が少なくとも１つの−ＯＲ5で置換されており、Ｒ5が、独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４２】
Ａ2が式：
【化５】
2008508303.tif 000161
［式中、
ｙは０〜４の整数であり；
Ｒ20は、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
２つのＲ20基が適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換もしくは非置換の環を形成してもよいか、または
１つのＲ20とＲ1とが適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換もしくは非置換の環を形成してもよい］
で示される、請求項６記載の化合物。
【請求項４３】
３’位で結合しているＲ20がＲ1と一緒になって、置換または非置換の環を形成する、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
３’位で結合しているＲ20が４’位で結合しているＲ20と一緒になって、置換または非置換の環を形成する、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｒ1が−Ｃ（Ｚ）Ｒ8であり、ＺがＯであり、Ｒ8が−ＮＲ14Ｒ15であり、Ｒ15とＲ20とが一緒になって、Ｒ20が結合している炭素およびＲ15が結合している窒素と共に置換または非置換の環を形成する、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４６】
Ｌ1およびＬ2が結合である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４７】
ｘが１であり、ｙが０である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ19が１位で結合している、請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
Ｒ19が２位で結合している、請求項４７に記載の化合物。
【請求項５０】
ｘが２であり；ｙが０であり；Ｒ19が１位および４位で結合している、請求項４２に記載の化合物。
【請求項５１】
ｘが２であり；ｙが０であり；Ｒ19が１位および５位で結合している、請求項４２に記載の化合物。
【請求項５２】
ｘが１であり；ｙが１であり；Ｒ20が３’位で結合しており；Ｒ19が１位で結合している、請求項４２に記載の化合物。
【請求項５３】
ｘが１であり；ｙが２であり；Ｒ20が３’位および４’位で結合しており；Ｒ19が１位で結合している、請求項４２に記載の化合物。
【請求項５４】
ｘが２であり；ｙが０であり；１つのＲ19が２位で結合している、請求項４２に記載の化合物。
【請求項５５】
Ａ2が式：
【化６】
2008508303.tif 000162
［式中、
ｙは０〜３の整数であり；
Ｒ20は、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである］
で示される、請求項６記載の化合物。
【請求項５６】
ｙが１であり、Ｒ20が３’位で結合している、請求項５５に記載の化合物。
【請求項５７】
プロテインキナーゼを請求項１に記載の化合物と接触させることを含む、プロテインキナーゼ活性の調節方法。
【請求項５８】
アベルソンチロシンキナーゼ、Ｒｏｎ受容体チロシンキナーゼ、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３、オーロラキナーゼ、ｐ２１活性化キナーゼ−４、および３−ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１からなる群から選択されるプロテインキナーゼ活性の調節方法であって、該キナーゼを式：
【化７】
2008508303.tif 000163
［式中、
Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または置換もしくは非置換の２〜５員のヘテロアルキレンであり、ｎは０〜２の整数であり；
Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである］
で示される化合物と接触させることを含む方法。
【請求項５９】
Ｌ1およびＬ2が、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換の２〜５員のヘテロアルキレンである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
Ｌ1およびＬ2が結合である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
Ａ1およびＡ2が独立して置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
Ａ1およびＡ2が独立して置換もしくは非置換アリール、または６員の置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
Ａ2が、少なくとも１つの−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（ここに、ＺはＮ（Ｒ23）、ＳまたはＯであり、Ｒ23は水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり；Ｒ8は水素、−ＮＲ14Ｒ15、−ＯＲ16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は、独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである）で置換されている、請求項５８に記載の方法。
【請求項６４】
ＺがＯであり、Ｒ8が−ＮＲ14Ｒ15である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
化合物が請求項１に記載の化合物である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６６】
プロテインキナーゼが、Ｍ２４４Ｖ、Ｌ２４８Ｖ、Ｇ２５０Ｅ、Ｇ２５０Ａ、Ｑ２５２Ｈ、Ｑ２５２Ｒ、Ｙ２５３Ｆ、Ｙ２５３Ｈ、Ｅ２５５Ｋ、Ｅ２５５Ｖ、Ｄ２７６Ｇ、Ｆ３１１Ｌ、Ｔ３１５Ｉ、Ｔ３１５Ｎ、Ｔ３１５Ａ、Ｆ３１７Ｖ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３４３Ｔ、Ｍ３５１Ｔ、Ｅ３５５Ｇ、Ｆ３５９Ａ、Ｆ３５９Ｖ、Ｖ３７９Ｉ、Ｆ３８２Ｌ、Ｌ３８７Ｍ、Ｈ３９６Ｐ、Ｈ３９６Ｒ、Ｓ４１７Ｙ、Ｅ４５９ＫおよびＦ４８６Ｓからなる群から選択される突然変異を有するＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６７】
プロテインキナーゼがＴ３１５Ｉ突然変異を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
治療を必要としている対象において癌、アレルギー、喘息、炎症、閉塞性気道疾患、自己免疫疾患、代謝性疾患、感染症、ＣＮＳ疾患、脳腫瘍、肥満症、喘息、血液疾患、変性性神経疾患、心血管病、または血管形成、血管新生もしくは脈管形成を伴う疾患を治療する方法であって、治療上有効な量の請求項１に記載の化合物を該対象に投与することを含む方法。
【請求項６９】
癌が白血病または骨髄増殖性疾患である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
治療を必要としている対象において癌を治療する方法であって、式：
【化８】
2008508303.tif 000164
［式中、
Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または置換もしくは非置換の２〜５員のヘテロアルキレンであり、ｎは０〜２の整数であり；
Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである］
で示される治療上有効な量の化合物を該対象に投与することを含む方法。
【請求項７１】
癌が白血病または骨髄増殖性疾患である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
医薬的に許容される賦形剤および式：
【化９】
2008508303.tif 000165
［式中、
Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または置換もしくは非置換の２〜５員のヘテロアルキレンであり、ｎは０〜２の整数であり；
Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである］
で示される化合物を含む、医薬組成物。
【請求項７３】
医薬的に許容される賦形剤および式：
【化１０】
2008508303.tif 000166
［式中、
Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換の２〜５員のヘテロアルキレンであり、ｎは０〜２の整数であり；
Ａ1は、６員の置換もしくは非置換アリールまたは６員の置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ａ2は、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ1は、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｘ1は、−Ｃ（Ｒ2）＝、−Ｃ（Ｒ2）（Ｒ3）−、−Ｎ＝、−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり；
Ｒ2およびＲ3は、独立して、水素、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ4は、水素、−Ｃ（Ｏ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ11、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｚは、Ｎ（Ｒ23）、Ｓ、またはＯであり、ここに、Ｒ23は水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり；
ｗは０〜２の整数であり；
Ｒ5は、独立して、水素、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）Ｒ10、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ11、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、−ＮＲ12Ｒ13、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12およびＲ13は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ8は、独立して、水素、−ＮＲ14Ｒ15、−ＯＲ16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ14、Ｒ15、およびＲ16は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
Ｒ9は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、ｗが２である場合は、Ｒ9は適宜−ＮＲ17Ｒ18であってもよく；
Ｒ17およびＲ18は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ6およびＲ7、Ｒ12およびＲ13、Ｒ14およびＲ15、ならびにＲ17およびＲ18は、独立して、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成してもよい］
で示される化合物を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００４年７月２７日出願の米国仮特許出願第６０／５９１，８８８号、２００４年７月２７日出願の米国仮特許出願第６０／５９１，８８７号、および２００５年５月１９日出願の米国仮特許出願第６０／６８３，５１０号の利益を主張し、そのそれぞれがそのまますべての目的のために本明細書中に引用される。
【０００２】
発明の背景
哺乳動物プロテインキナーゼは細胞機能の重要なレギュレーターである。プロテインキナーゼ活性の機能不全はいくつかの疾患および障害に関連づけられているので、プロテインキナーゼは薬剤開発の標的である。
【背景技術】
【０００３】
チロシンキナーゼ受容体、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、および骨髄異形成などの白血病を含めた癌に関連するとされている。ＡＭＬ患者の約１／４〜１／３が、キナーゼおよび下流のシグナル伝達経路の構成的活性化をもたらすＦＬＴ３突然変異を有する。正常なヒトにおいては、ＦＬＴ３は主に正常な骨髄およびリンパ系前駆細胞によって発現されるが、ＡＭＬおよびＡＬＬ患者の７０〜８０％ではＦＬＴ３は白血病細胞中で発現されている。ＦＬＴ３を標的とする阻害剤は、突然変異したおよび／または構成的に活性のあるＦＬＴ３を発現している白血病細胞に対して毒性があることが報告されている。したがって、白血病などの疾患および障害の治療に用い得る強力なＦＬＴ３阻害剤を開発する必要性がある。
【０００４】
アベルソン非受容体チロシンキナーゼ（ｃ−Ａｂｌ）は、その基質タンパク質のリン酸化を介したシグナル伝達に関与している。細胞内においてｃ−Ａｂｌは細胞質と核とを往復し、その活性は通常いくつかの多様な機構によってしっかりと調節されている。Ａｂｌは、成長因子およびインテグリンシグナル伝達の制御、細胞周期、細胞分化および神経発生、アポトーシス、細胞接着、細胞骨格構造、ならびにＤＮＡ損傷および酸化的ストレスに対する応答に関連するとされている。
【０００５】
ｃ−Ａｂｌタンパク質は、Ｎ末端キャップ領域、ＳＨ３およびＳＨ２ドメイン、チロシンキナーゼドメイン、核移行配列、ＤＮＡ結合ドメイン、ならびにアクチン結合ドメイン内に組織化された約１１５０個のアミノ酸残基を含む。
【０００６】
慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）は、染色体９と２２との間のフィラデルフィア染色体転座に関連している。この転座は、ｂｃｒ遺伝子とｃ−Ａｂｌをコードしている遺伝子との異常な融合をもたらす。その結果生じるＢｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質は構成的に活性なチロシンキナーゼ活性を有する。キナーゼ活性の上昇が、ＣＭＬの主要な原因因子であり、かつ細胞の形質転換、成長因子依存性の損失、および細胞増殖の原因であると報告されている。
【０００７】
２−フェニルアミノピリミジン化合物のイマチニブ（ＳＴＩ−５７１、ＣＧＰ５７１４８、またはＧｌｅｅｖｅｃとも呼ばれる）が、Ｂｃｒ−Ａｂｌならびに２つの他のチロシンキナーゼ、すなわちｃ−ｋｉｔおよび血小板由来成長因子受容体の特異的かつ強力な阻害剤として同定されている。イマチニブは、これらのタンパク質のチロシンキナーゼ活性を遮断する。イマチニブはＣＭＬのすべての段階の治療に有効な治療剤であると報告されている。しかし、進行期のＣＭＬまたは急性転化ＣＭＬに罹患している患者の大多数では、イマチニブ治療を継続しても、この薬物に対して耐性が発生するために再発を経験する。多くの場合、この耐性の分子基盤は、Ｂｃｒ−Ａｂｌのキナーゼドメインのイマチニブ耐性変異体の発生である。最も一般的に観察される潜在的なアミノ酸置換には、Ｇｌｕ２５５Ｌｙｓ、Ｔｈｒ３１５Ｉｌｅ、Ｔｙｒ２９３ＰｈｅおよびＭｅｔ３５１Ｔｈｒが含まれる。
【０００８】
ＭＥＴは最初、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−ニトロソグアニジンで処理したヒト骨肉腫細胞系における形質転換ＤＮＡ再配置（ＴＰＲ−ＭＥＴ）として同定されていた（Ｃｏｏｐｅｒ他、１９８４）。ＭＥＴ受容体チロシンキナーゼ（肝細胞成長因子受容体、ＨＧＦＲ、ＭＥＴまたはｃ−Ｍｅｔとしても知られる）およびそのリガンド肝細胞成長因子（「ＨＧＦ」）は、増殖、生存、分化および形態形成の刺激、分枝管形成（branching tubulogenesis）、細胞運動性ならびに侵襲性増殖を含めた数々の生物活性を有する。病理学的には、ＭＥＴは腎臓癌、肺癌、卵巣癌、肝臓癌および乳癌を含めた癌の多くの異なる形態の増殖、侵襲ならびに転移に関連するとされている。ＭＥＴの体細胞活性化性の突然変異が、ヒト癌転移および乳頭性腎細胞癌などの散発性癌において見つかっている。ＭＥＴが長い間探し求められてきた転移への進行を制御する癌遺伝子の１つであり、したがって非常に興味深い標的であるという証拠が増えてきている。ＭＥＴの阻害は、癌に加えて、リステリア侵襲、多発性骨髄腫に付随する骨溶解、マラリア感染症、糖尿病性網膜症、乾癬、および関節炎を含めた様々な適応症の治療において価値があり得る証拠も存在する。
【０００９】
チロシンキナーゼＲＯＮはマクロファージ刺激タンパク質の受容体であり、受容体チロシンキナーゼのＭＥＴファミリーに属する。ＭＥＴと同様、ＲＯＮは、胃癌および膀胱癌を含めた癌のいくつかの異なる形態の増殖、侵襲ならびに転移に関連する。
【００１０】
セリン／トレオニン（theronine）キナーゼのオーロラファミリーは、有糸分裂の進行に必須である。オーロラ（Arurora）キナーゼの発現および活性は細胞周期の間しっかりと調節されている。細胞分裂において役割を果たす様々なタンパク質がオーロラキナーゼの基質として同定されている。オーロラキナーゼの既知の機能に基づいて、その活性の阻害は、細胞周期を乱し、増殖を遮断し、したがって腫瘍細胞の生存を阻害すると考えられている。Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｎｌｉｎｅ（２００４）。
【００１１】
３−ホスホイノシチド依存性キナーゼ１（ＰＤＫ１）とは、Ａｋｔ／ＰＫＢ、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、ＰＫＣ関連キナーゼ（ＰＲＫ１およびＰＲＫ２）、ｐ７０リボソームＳ６−キナーゼ（Ｓ６Ｋ１）、ならびに血清および糖質コルチコイド調節キナーゼ（ＳＧＫ）を含むＡＧＣキナーゼスーパーファミリー内のいくつかのキナーゼをリン酸化かつ活性化することができるＳｅｒ／Ｔｈｒプロテインキナーゼである。最初に同定されたＰＤＫ１基質はプロトオンコジーンＡｋｔである。数々の研究により、黒色腫ならびに乳癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、血液癌および卵巣癌を含む一般的な腫瘍型のうち高い割合（３０〜６０％）で高レベルの活性化Ａｋｔが見つかっている。したがって、ＰＤＫ１／Ａｋｔシグナル伝達経路は、癌の治療に有用であり得る小分子阻害剤の開発の魅力的な標的を表している。Ｆｅｌｄｍａｎ他、ＪＢＣ  Ｐａｐｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｒｅｓｓ、原稿第Ｍ５０１３６７２００として２００５年３月１６日に出版。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
キナーゼは、癌などの数々の疾患および状態に関連しているので、治療に用いることができる新しい強力なプロテインキナーゼモジュレーターを開発する必要性がある。本発明はこれらおよび当分野における他の要求を満たしている。本明細書中では特定のプロテインキナーゼを具体的に挙げているが、本発明はこれらのキナーゼのモジュレーターに限定されず、その範囲内には関連プロテインキナーゼのモジュレーターおよび相同タンパク質のモジュレーターが含まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明の概要
驚くべきことに、本発明のピロロ−ピリジン化合物を、キナーゼ活性を調節するため、およびキナーゼ活性によって媒介される疾患を治療するために用い得ることが判明した。これらの新規ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターを以下に詳述する。さらに、選択化合物の阻害活性を本明細書中に開示する。
【００１４】
一態様では、本発明は、式：
【化１】
2008508303.tif 000003
で示されるピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーター（本明細書中では「本発明の化合物」とも呼ぶ）を提供する。
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または置換もしくは非置換の２〜５員のヘテロアルキレンである。記号ｎは０〜２の整数を表す。
【００１６】
Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００１７】
別の態様では、本発明は、本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターを用いたプロテインキナーゼ活性の調節方法を提供する。この方法には、前記キナーゼを本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターと接触させることが含まれる。
【００１８】
別の態様では、本発明は、そのような治療を必要としている対象（たとえばヒトなどの哺乳動物）において、キナーゼ活性に媒介される疾患（キナーゼ媒介性疾患または障害）を治療する方法を提供する。この方法には、対象に本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターを有効量で投与することが含まれる。
【００１９】
別の態様では、本発明は、医薬的に許容される賦形剤と混合したピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターを含む医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
定義
本明細書中で用いた略記は、化学および生物分野におけるその通常の意味を有する。
【００２１】
置換基を左から右へと記載するその通常の化学式によって指定した場合は、それは同様に、構造を右から左へと記載することによる化学的に同一の置換基も包含し、たとえば、−ＣＨ2Ｏ−は−ＯＣＨ2−と等価である。
【００２２】
用語「アルキル」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、別段に記述しない限りは、完全に飽和、モノ不飽和またはポリ不飽和であり得る直鎖（すなわち枝分かれしていない）、分枝鎖、もしくは環状の炭化水素基、あるいはその組合せを意味し、指定された炭素原子数を有する二価および多価基が含まれていることができる（すなわち、Ｃ1〜Ｃ10とは１〜１０個の炭素を意味する）。飽和炭化水素基の例には、それだけには限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチルなどの基、たとえば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどの相同体および異性体が含まれる。不飽和アルキル基とは、１以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例には、それだけには限定されないが、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−および３−プロピニル、３−ブチニル、ならびにより高級な相同体および異性体が含まれる。炭化水素基に限定されるアルキル基は、「ホモアルキル」と呼ばれる。
【００２３】
用語「アルキレン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、それだけには限定されないが、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨＣＨ2−、−ＣＨ2Ｃ≡ＣＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2−によって例示される、アルキルから誘導される二価の基を意味する。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は１〜２４個の炭素原子を有し、１０個以下の炭素原子を有する基が本発明において好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、より短い鎖のアルキルまたはアルキレン基であり、一般に８個以下の炭素原子を有する。
【００２４】
用語「ヘテロアルキル」は、それ自体でまたは別の用語と組み合わせて、別段に記述しない限りは、少なくとも１つの炭素原子ならびにＯ、Ｎ、Ｐ、ＳｉおよびＳからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子からなる、安定した直鎖もしくは分枝鎖、または環状炭化水素基、あるいはその組合せを意味する（ここに、窒素、リン、および硫黄原子は、適宜酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は適宜四級化されていてもよい）。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、ＰおよびＳならびにＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置、またはアルキル基が分子の残りの部分に結合している位置に配置され得る。その例には、それだけには限定されないが、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−ＣＨ3、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ3、−Ｓｉ（ＣＨ3）3、−ＣＨ2−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ3、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ3、Ｏ−ＣＨ3、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ3および−ＣＮが含まれる。たとえば、−ＣＨ2−ＮＨ−ＯＣＨ3および−ＣＨ2−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ3）3など、２個までのヘテロ原子または３個のヘテロ原子が連続することができる。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、それだけには限定されないが、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−および−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−に例示されるヘテロアルキルから誘導される二価の基を意味する。ヘテロアルキレン基では、ヘテロ原子が鎖の一方または双方の末端を占有していることもできる（たとえば、アルキレンオキソ、アルキレンジオキソ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基では、連結基の式を記述した方向によっては連結基の配向を暗示しない。たとえば、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’−は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’−および−Ｒ’ＯＣ（Ｏ）−の両方を表す。上述のように、本明細書中で使用するヘテロアルキル基には、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＲ’、−ＳＲ’、および／または−ＳＯ2Ｒ’などの、ヘテロ原子を介して分子の残りの部分に結合している基が含まれる。「ヘテロアルキル」を列挙し、次いで−ＮＲ’Ｒ’’などの具体的なヘテロアルキル基を列挙した場合は、用語ヘテロアルキルおよび−ＮＲ’Ｒ’’は冗長でも相互排他的でもないことを理解されたい。むしろ、具体的なヘテロアルキル基は、明瞭性を与えるために列挙する。したがって、用語「ヘテロアルキル」は、本明細書中で−ＮＲ’Ｒ’’などの具体的なヘテロアルキル基を排除すると解釈されるべきでない。
【００２５】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、それら自体でまたは他の用語と組み合わせて、別段に記述しない限りは、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状形を表す。さらに、ヘテロシクロアルキルでは、ヘテロ原子は、ヘテロ環が分子の残りの部分に結合している位置を占有することができる。シクロアルキルの例には、それだけには限定されないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが含まれる。ヘテロシクロアルキルの例には、それだけには限定されないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニルなどが含まれる。用語「シクロアルキレン」および「ヘテロシクロアルキレン」は、それぞれシクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルの二価の誘導体をいう。
【００２６】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、それら自体でもしくは別の置換基の一部として、別段に記述しない限りは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」などの用語には、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルが含まれることを意図する。たとえば、用語「ハロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル」には、それだけには限定されないが、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピルなどが含まれることを意図する。
【００２７】
用語「アリール」は、別段に記述しない限りは、単環であるか、または一緒になって縮合しているもしくは共有結合している複数環（好ましくは１〜３個の環）であることができる、ポリ不飽和の芳香族炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む（複数環の場合はそれぞれ別々の環内に含む）アリール基（または環）をいう（ここに、窒素および硫黄原子は適宜酸化されていてもよく、窒素原子は適宜四級化される）。ヘテロアリール基は、炭素またはヘテロ原子を介して分子の残りの部分に結合することができる。アリール基およびヘテロアリール基の非限定的な例には、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、および６−キノリルが含まれる。上述のアリール環系およびヘテロアリール環系のそれぞれの置換基は、以下に記述する許容される置換基の群から選択される。用語「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」は、それぞれアリールおよびヘテロアリールの二価の基をいう。
【００２８】
簡潔にするために、用語「アリール」には、他の用語（たとえば、アリールオキソ、アリールチオキソ、アリールアルキル）と組み合わせて用いた場合に、上に定義したアリール環およびヘテロアリール環の両方が含まれる。したがって、用語「アリールアルキル」には、アリール基が、炭素原子（たとえばメチレン基）がたとえば酸素原子によって置き換えられているもの（たとえば、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピルなど）を含むアルキル基（たとえば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど）に結合している基が含まれることを意図する。しかし、本明細書中で使用する用語「ハロアリール」とは、１以上のハロゲンで置換されるアリールのみに及ぶことを意味する。
【００２９】
ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールが具体的な数の員（たとえば「３〜７員」）を含む場合は、用語「員」とは炭素またはヘテロ原子を意味する。
【００３０】
本明細書中で使用する用語「オキソ」は、炭素原子と二重結合した酸素を意味する。
【００３１】
上記それぞれの用語（たとえば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「シクロアルキル、および「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」ならびにそれらの二価基誘導体）には、示した基の置換体および非置換体がどちらも含まれることを意図する。それぞれの基の種類の好ましい置換基を以下に提供する。
【００３２】
アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルの一価および二価の誘導体基（しばしばアルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルと呼ばれる基を含む）の置換基は、それだけには限定されないが、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ2Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2から、０から（２ｍ’＋１）の範囲の数（ここに、ｍ’は、このような基中の炭素原子の合計数である）にて選択される様々な基のうちの１以上であることができる。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’は、好ましくはそれぞれ独立して、水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール（たとえば１〜３個のハロゲンで置換されるアリール）、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基をいう。本発明の化合物が二以上のＲ基を含む場合は、たとえば、これらの基が二以上存在する場合は、Ｒ基のそれぞれが独立してそれぞれＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基として選択される。Ｒ’およびＲ’’が同一窒素原子に結合している場合は、これらは窒素原子と一緒になって４、５、６、または７員の環を形成することができる。たとえば、−ＮＲ’Ｒ’’には、それだけには限定されないが、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルが含まれることを意図する。置換基の上記議論から、当業者は、用語「アルキル」には、ハロアルキル（たとえば、−ＣＦ3および−ＣＨ2ＣＦ3）ならびにアシル（たとえば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ2ＯＣＨ3など）などの、水素基以外の基に結合する炭素原子を含む基が含まれることを意図することを理解されよう。
【００３３】
上記アルキル基について記載した置換基と同様に、アリール基およびヘテロアリール基（ならびにそれらの二価の誘導体）の例示的な置換基は様々であり、たとえば、ハロゲン、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ2Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ2Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ2、−Ｒ’、−Ｎ3、−ＣＨ（Ｐｈ）2、フルオロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルコキソ、ならびにフルオロ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルから、０から芳香環系上の空いている結合価の合計数の範囲で選択される（ここに、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’ならびにＲ’’’’は、好ましくは、独立して水素、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリールおよび置換または非置換ヘテロアリールから選択される）。本発明の化合物が二以上のＲ基を含む場合は、たとえば、これらの基が二以上存在する場合は、Ｒ基のそれぞれが独立してそれぞれＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’基として選択される。
【００３４】
アリール環またはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つは、適宜式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）q−Ｕ−（式中、ＴおよびＵは、独立して、−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−または単結合であり、ｑは０〜３の整数である）の環を形成していてもよい。あるいは、アリール環またはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つは、適宜式−Ａ−（ＣＨ2）r−Ｂ−（式中、ＡおよびＢは、独立して、−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’−または単結合であり、ｒは１〜４の整数である）で示される置換基で置き換えられていてもよい。このようにして形成された新しい環の単結合のうち１つは、適宜二重結合で置き換えられていてもよい。あるいは、アリール環またはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つは、適宜式−（ＣＲＲ’）s−Ｘ’−（Ｃ’’Ｒ’’’）d−（式中、ｓおよびｄは、独立して、０〜３の整数であり、Ｘ’は、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、または−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ’−である）で示される置換基で置き換えられていてもよい。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、好ましくは、独立して水素、置換または非置換アルキル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換ヘテロアリールから選択される。
【００３５】
本明細書中で使用する用語「ヘテロ原子」または「環ヘテロ原子」には、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）、およびケイ素（Ｓｉ）が含まれることを意図する。
【００３６】
本明細書中で使用する「アミノアルキル」は、アルキレンリンカーと共有結合したアミノ基をいう。アミノ基は−ＮＲ’Ｒ’’であり、式中、Ｒ’およびＲ’’は、典型的には水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。
【００３７】
本明細書中で使用する「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する：
【００３８】
（Ａ）−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、オキソ、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
【００３９】
（Ｂ）以下の基から選択される少なくとも１つの置換基で置換されるアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール：
【００４０】
（ｉ）オキソ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
【００４１】
（ｉｉ）以下の基から選択される少なくとも１つの置換基で置換されるアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール：
【００４２】
（ａ）オキソ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、ならびに
【００４３】
（ｂ）オキソ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＣＮ、−ＣＦ3、−ＮＯ2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、および非置換ヘテロアリールから選択される少なくとも１つの置換基で置換される、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール。
【００４４】
本明細書中で使用する「サイズ限定置換基（size-limited substituent）」または「サイズ限定置換基（size-limited substituent group）」は、「置換基」について上述したすべての置換基から選択される基を意味し、それぞれの置換または非置換アルキルは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または非置換の２〜２０員のヘテロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換シクロアルキルは、置換または非置換Ｃ4〜Ｃ8シクロアルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換の４〜８員のヘテロシクロアルキルである。
【００４５】
本明細書中で使用する「低級置換基（substituent）」または「低級置換基（substituent group）」は、「置換基」について上述したすべての置換基から選択される基を意味し、それぞれの置換または非置換アルキルは、置換または非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロアルキルは、置換または非置換の２〜８員のヘテロアルキルであり、それぞれの置換または非置換シクロアルキルは、置換または非置換Ｃ5〜Ｃ7シクロアルキルであり、それぞれの置換または非置換ヘテロシクロアルキルは、置換または非置換の５〜７員のヘテロシクロアルキルである。
【００４６】
本発明の化合物は塩として存在し得る。本発明にはそのような塩が含まれる。当てはまる塩の形態の例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（たとえば（＋）−酒石酸塩、（−）−酒石酸塩、またはラセミ混合物を含むそれらの混合物、コハク酸塩、安息香酸塩およびグルタミン酸などのアミノ酸との塩が含まれる。これらの塩は、当業者に知られている方法によって調製し得る。また、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩もしくはマグネシウム塩などの塩基付加塩、または類似の塩も含まれる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合は、酸付加塩は、このような化合物の中性の形態を、十分な量の所望の酸と、無溶媒または適切な不活性溶媒中で接触させることによって得ることができる。許容される酸付加塩の例には、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素、リン酸、リン酸一水素、リン酸二水素、硫酸、硫酸一水素、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などの無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの有機酸から誘導される塩が含まれる。また、アルギニン酸塩などのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸（galactunoric acid）などの有機酸の塩も含まれる。本発明の特定の具体的な化合物は、塩基性官能基および酸性官能基をどちらも含み、化合物が塩基または酸付加塩のどちらにも変換することができる。
【００４７】
化合物の中性の形態は好ましくは、塩を塩基または酸と接触させ、従来の方法で親化合物を単離することによって再生する。化合物の原型は、極性溶媒への溶解度などの特定の物理特性において様々な塩の形態と異なる。
【００４８】
本発明の特定の化合物は、非溶媒和形態および水和形態を含めた溶媒和形態で存在することができる。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と均等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明の特定の化合物は、複数の結晶形態または非結晶形態で存在し得る。一般に、本発明によって企図される使用に関してすべての物理的形態が均等であり、本発明の範囲内にあることが意図される。
【００４９】
本発明の特定の化合物は、不斉炭素原子（光学的中心もしくはキラル中心）または二重結合を有し；絶対立体化学の観点から（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−としてまたはアミノ酸では（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−として定義することができる、鏡像異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、立体異性体、および個々の異性体が本発明の範囲内に包含される。本発明の化合物には、当分野において合成および／または単離するには不安定すぎることが知られているものは含まれない。本発明には、ラセミ体および光学的に純粋な形態の化合物が含まれることを意図する。光学活性な（Ｒ）−および（Ｓ）−、または（Ｄ）−および（Ｌ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて調製するか、または従来技術を用いて分離し得る。本明細書中に記載の化合物がオレフィン結合または他の幾何学的な不斉中心を含み、かつ別段に指定しない限りは、化合物にはＥおよびＺ幾何異性体のどちらも含まれることが意図される。
【００５０】
本明細書中で使用する用語「互変異性体」とは、平衡して存在しており、１の異性体から別のものへと容易に変換される２つ以上の構造異性体のうちの１つをいう。
【００５１】
当業者には、本発明の特定の化合物が互変異性体として存在し得、該化合物のこのような互変異性体すべてが本発明の範囲内にあることが明らかであろう。
【００５２】
別段に記述しない限りは、本明細書中に示す構造には、その構造のすべての立体化学形態、すなわち、それぞれの不斉中心についてＲおよびＳ立体配置も含まれることを意図する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学異性体、ならびに鏡像異性混合物およびジアステレオマー混合物が本発明の範囲内にある。
【００５３】
別段に記述しない限りは、本明細書中に示す構造には、１以上の同位体的に富化された原子が存在するかどうかのみが異なる化合物も含まれることを意図する。たとえば、水素を重水素もしくは三重水素で置き換えたか、または炭素を13Ｃもしくは14Ｃを富化した炭素で置き換えた以外は本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内にある。
【００５４】
また、本発明の化合物は、このような化合物を構成する１以上の原子において、非天然な原子同位体の割合で含み得る。たとえば、化合物を、たとえば三重水素（3Ｈ）、ヨウ素−１２５（125Ｉ）または炭素−１４（14Ｃ）などの放射性同位体で放射標識し得る。本発明の化合物のすべての同位体変異体は、放射性であっても放射性でなくても、本発明の範囲内に包含される。
【００５５】
用語「医薬的に許容される塩」には、本明細書中に記載の化合物上に見つかる特定の置換基部分に応じて比較的無毒性の酸または塩基を用いて調製される活性化合物の塩が含まれることを意図する。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合は、塩基付加塩は、このような化合物の中性の形態を、十分な量の所望の塩基と、無溶媒または適切な不活性溶媒中で接触させることによって得ることができる。医薬的に許容される塩基付加塩の例には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩、もしくはマグネシウム塩、または類似の塩が含まれる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合は、酸付加塩は、このような化合物の中性の形態を、十分な量の所望の酸と、無溶媒または適切な不活性溶媒中で接触させることによって得ることができる。医薬的に許容される酸付加塩の例には、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などの無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの比較的無毒性の有機酸から誘導される塩が含まれる。また、アルギニン酸塩などのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツノル酸などの有機酸の塩も含まれる（たとえば、Ｂｅｒｇｅ他、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７７、６６、１〜１９参照）。本発明の特定の具体的な化合物は、該化合物が塩基または酸付加塩のいずれかに変換され得る、塩基性官能基および酸性官能基をどちらも含む。
【００５６】
塩の形態に加えて、本発明はプロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書中に記載の化合物のプロドラッグとは、生理的条件下で容易に化学変化を受けて本発明の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、ｅｘ  ｖｉｖｏ環境における化学的または生化学的方法によって本発明の化合物へと変換することができる。たとえば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬と共に経皮パッチ容器内に入れた場合に、本発明の化合物へとゆっくりと変換することができる。
【００５７】
用語「ａ」、「ａｎ」、または「ａ（ｎ）」とは、本明細書中において置換基に関して用いた場合は、少なくとも１つを意味する。たとえば、化合物が「ａｎ」アルキルまたはアリールで置換されている場合は、その化合物は、適宜少なくとも１つのアルキルおよび／または少なくとも１つのアリールで置換されていてもよい。さらに、ある部分がＲ置換基で置換されている場合は、その基を「Ｒ置換された」と呼び得る。ある部分がＲ置換されている場合は、その部分は少なくとも１つのＲ置換基で置換されており、それぞれのＲ置換基は適宜異なる。
【００５８】
本発明の化合物の説明は、当業者に知られている化学結合の原理によって制限される。したがって、ある基がいくつかの置換基のうちの１以上によって置換されていてもよい場合は、そのような置換は、化学結合の原理に従うように、また、本質的に不安定でない、かつ／または水性条件、中性条件、およびいくつかの知られている生理的条件などの周囲条件下において不安定となる可能性が高いことが当業者に知られている化合物が与えられるように、選択される。たとえば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、当業者に知られている化学結合の原理に従って、環ヘテロ原子を介して分子の残りの部分に結合しており、これにより本質的に不安定な化合物が回避される。
【００５９】
特定の疾患に関する用語「治療する」または「治療」には、その疾患の予防が含まれる。
【００６０】
記号：
【化２】
2008508303.tif 000004
は、ある部分が分子の残りの部分に結合する点を示す。
【００６１】
ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーター
一態様では、本発明は、以下の式を有するピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーター（本明細書中では「本発明の化合物」とも呼ぶ）を提供する：
【化３】
2008508303.tif 000005
【００６２】
式（Ｉ）において、Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または置換もしくは非置換の２〜５員のヘテロアルキレンである。記号ｎは０〜２の整数を表す。
【００６３】
Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００６４】
いくつかの具体的態様では、Ｌ1およびＬ2は、独立して、結合、−Ｓ（Ｏ）n−、−Ｏ−、−ＮＨ−、非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキレン、または非置換の２〜５員のヘテロアルキレンである。他の具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。
【００６５】
Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり得る。また、Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換アリール、または６員の置換もしくは非置換ヘテロアリールでもあり得る。
【００６６】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は、置換もしくは非置換アリール（たとえばフェニルなどの６員の置換もしくは非置換アリール）または６員の置換もしくは非置換ヘテロアリールである。また、Ａ1は、置換フェニルまたは６員の置換ヘテロアリールでもあり得る。いくつかの具体的態様では、Ａ1は、置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換ピリジニル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換ベンゾジオキソリル、置換もしくは非置換ベンゾジオキサニル、置換もしくは非置換ベンズイミダゾリル、または置換もしくは非置換インドリルである。
【００６７】
Ａ2は、置換アリールまたは置換ヘテロアリールであり得る。いくつかの具体的態様では、Ａ2は、置換フェニル、置換チオペニル（thiopenyl）、置換ピリジニル、置換ピロリル、置換トリアゾリル、置換ピリミジニル、置換ピラジニル、または置換イミダゾリルである。
【００６８】
いくつかの具体的態様では、Ａ1およびＡ2は、独立して、置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換ヒダントイニル、置換もしくは非置換ジオキソラニル、置換もしくは非置換ベンゾジオキソリル、置換もしくは非置換ジオキサニル、置換もしくは非置換トリオキサニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチエニル、置換もしくは非置換テトラヒドロフラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオフェニル、置換もしくは非置換テトラヒドロピラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオピラニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、置換もしくは非置換モルホリノ、置換もしくは非置換ピペリジニル、置換もしくは非置換ピペラジニル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換イソオキサゾリル、置換もしくは非置換オキサジアゾリル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ピリジル、置換もしくは非置換ピラジル、置換もしくは非置換ピリミジル、置換もしくは非置換ピリダジニル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換イソチオアゾリル（isothioazolyl）、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換チエニル、置換もしくは非置換トリアジニル、置換もしくは非置換チアジアゾリル、または置換もしくは非置換テトラゾリルから選択される。
【００６９】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は、少なくとも１つのＲ19基で置換されており、それぞれのＲ19基は適宜異なる。それぞれのＲ19は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され得る。いくつかの具体的態様では、少なくとも２つのＲ19基が一緒になって、それらが結合している原子と共に置換または非置換の環を形成する。本明細書中で使用する用語「置換または非置換の環」とは、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換アリールをいう。他の具体的態様では、Ｒ19は、独立して、ハロゲン（たとえばフッ素もしくは塩素）、−ＮＲ6Ｒ7、ＯＲ5、または置換もしくは非置換アルキルである。
【００７０】
いくつかの具体的態様では、Ａ2は、少なくとも１つのＲ20基および／または１つのＲ1基で置換されており、それぞれのＲ20基は適宜異なる。Ｒ1およびそれぞれのＲ20は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され得る。いくつかの具体的態様では、少なくとも２つのＲ20基またはＲ20とＲ1基とが一緒になって、それらが結合している原子と共に置換または非置換の環を形成する。いくつかの具体的態様では、Ｒ20は、独立して、ハロゲン、−ＮＲ6Ｒ7、−ＯＲ5、または置換もしくは非置換アルキルである。
【００７１】
Ｚは、Ｎ（Ｒ23）、Ｓ、またはＯを表し、ｗは０〜２の整数を表す。Ｒ23は、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様では、Ｒ23は、水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアルキルである。また、Ｒ23は、水素、または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキルでもあり得る。いくつかの具体的態様では、Ｒ23は、水素または非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキルである。
【００７２】
Ｒ5は、独立して、水素、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００７３】
Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）Ｒ10、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ11、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００７４】
Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、−ＮＲ12Ｒ13、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００７５】
Ｒ12およびＲ13は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００７６】
Ｒ8は、独立して、水素、−ＮＲ14Ｒ15、−ＯＲ16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００７７】
Ｒ14、Ｒ15、およびＲ16は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００７８】
いくつかの具体的態様では、Ｒ14およびＲ15は、独立して、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキルであるか、あるいはそれらが結合している窒素と一緒になって置換もしくは非置換ピペリジニル、または置換もしくは非置換ピペラジニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、または置換もしくは非置換モルホリノを形成する。いくつかの具体的態様では、Ｒ14および／またはＲ15は、式−（ＣＨ2）t−ＮＲ21Ｒ22を有する基で置換される。記号ｔは０〜１０の整数を表す。いくつかの具体的態様では、ｔは０〜６の整数を表す。Ｒ21およびＲ22は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様では、Ｒ21およびＲ22は、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成する。
【００７９】
いくつかの具体的態様では、Ｒ21およびＲ22は、それらが結合している窒素と一緒になって置換もしくは非置換ピペラジニルを形成する。他の具体的態様では、Ｒ21およびＲ22は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換アミノアルキルである。
【００８０】
Ｒ9は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ｗが２である場合は、Ｒ9は適宜−ＮＲ17Ｒ18であってもよい。
【００８１】
Ｒ17およびＲ18は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８２】
いくつかの具体的態様では、Ｒ6およびＲ7、Ｒ12およびＲ13、Ｒ14およびＲ15、および／またはＲ17およびＲ18は、独立して、それらが結合している窒素と一緒になって置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成し得る。
【００８３】
いくつかの具体的態様では、Ｒ1、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22および／またはＲ23は、独立して、水素、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキル、置換もしくは非置換の２〜２０員のヘテロアルキル、置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換もしくは非置換の３〜８員のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。他の具体的態様では、Ｒ1、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22および／またはＲ23は、独立して、水素、置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、置換もしくは非置換の２〜２０員のヘテロアルキル、置換もしくは非置換Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。
【００８４】
Ｒ1、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22および／もしくはＲ23が環であるか、または一緒になって環（たとえば、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、もしくはヘテロアリール）を形成する場合は、その環は、独立して、置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換ヒダントイニル、置換もしくは非置換ジオキソラニル、置換もしくは非置換ベンゾジオキソリル、置換もしくは非置換ジオキサニル、置換もしくは非置換トリオキサニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチエニル、置換もしくは非置換テトラヒドロフラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオフェニル、置換もしくは非置換テトラヒドロピラニル、置換もしくは非置換テトラヒドロチオピラニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、置換もしくは非置換モルホリノ、置換もしくは非置換ピペリジニル、置換もしくは非置換ピペラジニル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換イソオキサゾリル、置換もしくは非置換オキサジアゾリル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ピリジル、置換もしくは非置換ピラジル、置換もしくは非置換ピリミジル、置換もしくは非置換ピリダジニル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換イソチオアゾリル、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換チエニル、置換もしくは非置換トリアジニル、置換もしくは非置換チアジアゾリル、または置換もしくは非置換テトラゾリルから選択され得る。当業者は、結合価の通常の規則が適用されることを理解されよう。したがって、２つの基が、それらが結合している窒素と一緒になって環を形成する場合は、環は、典型的には置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは５員のヘテロアリールである。
【００８５】
当業者には、本発明の化合物が二以上のＲ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22および／またはＲ23基を含み得ることがすぐに理解されるであろう。二以上のＲ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22および／またはＲ23基が存在する場合は、それぞれのＲ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22および／またはＲ23基は適宜異なる。
【００８６】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は、ハロゲン、−ＯＲ5、または非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキルで置換される。いくつかの具体的態様では、Ａ1は、少なくとも１つの−ＯＲ5で置換される。いくつかの関連する具体的態様では、Ｒ5は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。他の関連する具体的態様では、Ｒ5は、水素または非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキルである（たとえば、Ａ1は、−Ｏ−ＣＨ3で置換される）。
【００８７】
いくつかの具体的態様では、Ａ2は、少なくとも１つの−Ｃ（Ｚ）Ｒ8基で置換される。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15である。いくつかの関連する具体的態様では、Ｒ14およびＲ15は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキルであるか、あるいは一緒になって置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは５員のヘテロアリール（たとえばピペリジニルもしくはピペラジニル）を形成する。いくつかの具体的態様では、Ｒ14および／またはＲ15は、式−（ＣＨ2）t−ＮＲ21Ｒ22を有する基で置換される。記号ｔ、Ｒ21およびＲ22は、上述のとおりである。
【００８８】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は式：
【化４】
2008508303.tif 000006
で示される基を有する。
【００８９】
式（ＩＩ）において、ｘは１〜５の整数である。
【００９０】
上述のように、それぞれのＲ19は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様では、２つのＲ19基が適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成する。Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、およびＲ9は、式（Ｉ）の議論中で上に定義したとおりである。
【００９１】
いくつかの具体的態様では、Ｒ19は１位および／または２位で結合している。１位で結合しているＲ19は、２位で結合しているＲ19と一緒になって、置換もしくは非置換の環（Ａ1に縮合）を形成し得る。いくつかの具体的態様では、２位で結合しているＲ19は、３位で結合しているＲ19と一緒になって、置換もしくは非置換の環（Ａ1に縮合）を形成し得る。２つのＲ19基の組合せによって形成される環の例は上述のとおりである。いくつかの具体的態様では、形成される環は、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９２】
いくつかの具体的態様では、ｘは１であり、Ｒ19は２位で結合している。他の具体的態様では、ｘは１であり、Ｒ19は１位で結合している。あるいは、ｘは２〜５の整数であり、少なくとも１つのＲ19は１位で結合している。他の具体的態様では、ｘは２〜５の整数であり、少なくとも１つのＲ19は２位で結合している。
【００９３】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7基の例は上述のとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｒ19が−ＯＲ5、または−ＮＲ6Ｒ7である場合は、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。他の具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、水素または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキルである。他の具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、水素または非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキルである。
【００９４】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は以下の式を有する：
【化５】
2008508303.tif 000007
【００９５】
式（ＩＩＩ）において、Ｘ1は、−Ｃ（Ｒ2）＝、−Ｃ（Ｒ2）（Ｒ3）−、−Ｎ＝、−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｓ−、または−Ｏ−である。したがって、Ａ2は、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換置換ヘテロアリールである。式（ＩＩＩ）において、Ａ2が非置換である場合は、Ａ1はＲ1（および水素）の他にはさらなる置換基を有さない。式（ＩＩＩ）において、Ａ2が置換されている場合は、Ａ1は、Ｒ1に加えて他の置換基で（たとえば１以上のＲ20基で）置換されている。
【００９６】
いくつかの具体的態様では、Ａ2は、置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換チオペニル、置換もしくは非置換ピリジニル、置換もしくは非置換ピロリル、置換もしくは非置換トリアゾリル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換ピラジニル、または置換もしくは非置換イミダゾリルである。
【００９７】
Ｒ1は、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９８】
Ｒ2およびＲ3は、独立して、水素、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９９】
Ｒ4は、水素、−Ｃ（Ｏ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）2Ｒ11、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【０１００】
Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11、Ｚ、およびｗは、式（Ｉ）の議論中で上述したとおりである。
【０１０１】
したがって、いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化６】
2008508303.tif 000008
【０１０２】
式（ＩＶ）において、Ｒ1、Ａ2、およびＸ1は、式（ＩＩＩ）において上述したとおりであり、Ｌ2、Ｌ3およびＡ1は、式（Ｉ）および（ＩＩ）に記載したとおりである。したがって、いくつかの具体的態様では、Ａ1は、６員の置換もしくは非置換アリールまたは６員の置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【０１０３】
いくつかの具体的態様では、Ａ2は以下の式を有する：
【化７】
2008508303.tif 000009
【０１０４】
式（ＩＶ）において、ｙは０〜４の整数である。Ｒ1は、式（ＩＩＩ）において上述したとおりである。Ｒ20は、式（Ｉ）の議論中で上述したとおりである。
【０１０５】
上述のように、それぞれのＲ20は、独立して、ハロゲン、−ＯＲ5、−ＮＲ6Ｒ7、−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、−Ｓ（Ｏ）wＲ9、−ＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＦ3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様では、２つのＲ20基が一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成する。他の具体的態様では、１つのＲ20とＲ1とが一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成する。
【０１０６】
Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7基の例は上述のとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｒ20が−ＯＲ5、または−ＮＲ6Ｒ7である場合は、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。他の具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、水素または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキルである。他の具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、水素または非置換Ｃ1〜Ｃ5アルキルである。
【０１０７】
上述したように、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、または置換もしくは非置換アルキルであり得る。Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7も、独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり得る。Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7も、独立して、水素、または非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり得る。
【０１０８】
いくつかの具体的態様では、ｙは１であり、Ｒ20は３’位で結合している。他の具体的態様では、ｙは２であり、Ｒ20は３’位および４’位で結合している。他の具体的態様では、３’位で結合しているＲ20は、４’位で結合しているＲ20と一緒になって、置換もしくは非置換の環を形成する。他の具体的態様では、３’位で結合しているＲ20は、Ｒ1と一緒になって、置換もしくは非置換の環を形成する。
【０１０９】
他の具体的態様では、Ａ2は以下の式を有する：
【化８】
2008508303.tif 000010
【０１１０】
式（ＶＩ）において、ｙは０〜３の整数である。Ｒ1は、式（ＩＩＩ）において上述したとおりである。Ｒ20は、式（Ｉ）の議論中で上述したとおりである。いくつかの具体的態様では、１つのＲ20とＲ1とが適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成する。他の具体的態様では、２つのＲ20基が適宜一緒になって、それらが結合している炭素と共に置換または非置換の環を形成する。
【０１１１】
いくつかの具体的態様では、ｙは１であり、Ｒ20は３’位で結合している。他の具体的態様では、３’位で結合しているＲ20は、Ｒ1と一緒になって、置換もしくは非置換の環を形成する。
【０１１２】
式（Ｉ）〜（ＶＩ）の化合物のいくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。
【０１１３】
式（Ｉ）〜（ＶＩ）の化合物のいくつかの具体的態様では、Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8である。記号Ｚは単にＯであり得る。Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15であり得る。Ｒ14およびＲ15は、上述のとおりである。いくつかの関連する具体的態様では、ｙは０である。したがって、Ｒ14およびＲ15は、独立して、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキルであるか、あるいはそれらが結合している窒素と一緒になって置換もしくは非置換ピペリジニル、または置換もしくは非置換ピペラジニル、置換もしくは非置換ピロリジニル、または置換もしくは非置換モルホリノを形成し得る。また、Ｒ14およびＲ15は、それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ピペリジニル、または置換もしくは非置換ピペラジニルも形成し得る。また、Ｒ14およびＲ15は、それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換アルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアルキルで置換されるピペラジニルを形成し得る。
【０１１４】
Ｒ14および／またはＲ15は、式−（ＣＨ2）t−ＮＲ21Ｒ22を有する置換基で置換されていてもよい。たとえば、Ｒ14とＲ15とが一緒になってヘテロシクロアルキル（たとえばピペラジニルまたはピペリジニル）を形成している場合は、ヘテロシクロアルキルは−（ＣＨ2）t−ＮＲ21Ｒ22で置換されていてもよい。記号ｔ、Ｒ21およびＲ22は、上述のとおりである。
【０１１５】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は式（ＩＩ）の式を有し、Ａ2は式（ＩＩＩ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の式を有する。いくつかの関連する具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。
【０１１６】
式（Ｖ）および／または（ＶＩ）の化合物のいくつかの具体的態様では、Ｒ20は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15である。Ｒ15とＲ1とは、一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルを形成するか、またはＲ1が結合している炭素およびＲ15が結合している窒素と共にヘテロアリールを形成する。
【０１１７】
式（Ｖ）および／または（ＶＩ）の化合物の他の具体的態様では、Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15である。Ｒ15とＲ20とは、一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルを形成するか、またはＲ20が結合している炭素およびＲ15が結合している窒素と共にヘテロアリールを形成する。
【０１１８】
いくつかの具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ6およびＲ7は、それらが結合している窒素と一緒になって置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、または置換もしくは非置換の５員のヘテロアリールを形成し得る。他の具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、または置換もしくは非置換アルキルである。また、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルでもあり得る。他の具体的態様では、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ7は、独立して、水素、または非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルである。
【０１１９】
いくつかの具体的態様では、Ａ1は式（ＩＩ）の式を有し、Ａ2は式（Ｖ）または（ＶＩ）の式を有する。いくつかの関連する具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。他の関連する具体的態様では、ｘは１であり、ｙは０である。他の関連する具体的態様では、Ｒ19は１位で結合している。他の関連する具体的態様では、Ｒ19は２位で結合している。他の関連する具体的態様では、ｘは２であり、ｙは０であり、Ｒ19は１位および４位で結合している。他の関連する具体的態様では、ｘは２であり、ｙは０であり、Ｒ19は１位および５位で結合している。他の関連する具体的態様では、ｘは１であり、ｙは１であり、Ｒ20は３’位で結合しており、Ｒ19は１位で結合している。他の関連する具体的態様では、ｘは１であり、ｙは２であり、Ｒ20は３’位および４’位で結合しており、Ｒ19は１位で結合している。他の関連する具体的態様では、ｘは２であり、ｙは０であり、１つのＲ19は２位で結合している。
【０１２０】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化９】
2008508303.tif 000011
【０１２１】
式（ＶＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、Ｒ20、ｘ、およびｙは、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（Ｖ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。いくつかの具体的態様では、ｘは１であり、ｙは０である。他の具体的態様では、Ｒ19は１位および／または２位で結合している。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。
【０１２２】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１０】
2008508303.tif 000012
【０１２３】
式（ＶＩＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、およびＲ20は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（Ｖ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。いくつかの具体的態様では、Ｒ20は、ハロゲン、−ＯＲ5、または−ＮＲ6Ｒ7（上に定義）である。
【０１２４】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１１】
2008508303.tif 000013
【０１２５】
式（ＩＸ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、およびＲ20は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（Ｖ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。
【０１２６】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１２】
2008508303.tif 000014
【０１２７】
式（Ｘ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、およびＲ19は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（Ｖ）において上に定義したとおりである。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。１位で結合しているＲ19は−ＯＲ5であり得る。４位で結合しているＲ19はハロゲンであり得る。
【０１２８】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１３】
2008508303.tif 000015
【０１２９】
式（ＸＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、およびＲ20は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（Ｖ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。３’位で結合しているＲ20は−ＯＲ5であり得る。４’位で結合しているＲ20はハロゲンまたは置換もしくは非置換アルキル（Ｃ1〜Ｃ5アルキルなど）であり得る。
【０１３０】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１４】
2008508303.tif 000016
【０１３１】
式（ＸＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、Ｒ20、ｘ、およびｙは、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＶＩ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。いくつかの具体的態様では、ｘは１であり、ｙは０である。他の具体的態様では、Ｒ19は１位および／または２位で結合している。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。いくつかの関連具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8は−ＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。Ｒ19は−ＯＲ5であり得る。
【０１３２】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１５】
2008508303.tif 000017
【０１３３】
式（ＸＩＩＩ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、Ｒ20、およびｘは、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＶＩ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。いくつかの具体的態様では、ｘは１である。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8はＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。Ｒ20はハロゲン、または置換もしくは非置換アルキル（Ｃ1〜Ｃ5アルキルなど）であり得る。Ｒ20は−ＯＲ5であり得る。
【０１３４】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１６】
2008508303.tif 000018
【０１３５】
式（ＸＩＶ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、およびｘは、式（Ｉ）および（ＩＩ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。いくつかの具体的態様では、ｘは１である。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8はＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。
【０１３６】
いくつかの具体的態様では、本発明の化合物は以下の式を有する：
【化１７】
2008508303.tif 000019
【０１３７】
式（ＸＶ）において、Ｌ1、Ｌ2、Ｒ1、Ｒ19、およびｘは、式（Ｉ）および（ＩＩ）において上に定義したとおりである。いくつかの具体的態様では、Ｌ1および／またはＬ2は結合である。いくつかの具体的態様では、ｘは１である。Ｒ1は−Ｃ（Ｚ）Ｒ8（上に定義）であり得る。Ｒ19は−ＯＲ5（上に定義）であり得る。いくつかの関連する具体的態様では、ＺはＯであり、Ｒ8はＮＲ14Ｒ15（上に定義）である。
【０１３８】
いくつかの具体的態様では、式（Ｉ）〜（ＸＶ）の化合物において上述したそれぞれの置換基が、少なくとも１つの置換基で置換されている。より具体的には、いくつかの具体的態様では、式（Ｉ）〜（ＸＶ）の化合物において上述したそれぞれの置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、および／または置換ヘテロアルキレンが、少なくとも１つの置換基で置換されている。他の具体的態様では、これらの基のうちの少なくとも１つまたはすべてが、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。あるいは、これらの基のうちの少なくとも１つまたはすべてが、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。
【０１３９】
式（Ｉ）〜（ＸＶ）の化合物の他の具体的態様では、それぞれの置換もしくは非置換アルキルが置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換ヘテロアルキルが置換もしくは非置換の２〜２０員のヘテロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換シクロアルキルが置換もしくは非置換Ｃ4〜Ｃ8シクロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルが置換もしくは非置換の４〜８員のヘテロシクロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換アルキレンが置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ20アルキレンであり、かつ／またはそれぞれの置換もしくは非置換ヘテロアルキレンが置換もしくは非置換の２〜２０員のヘテロアルキレンである。
【０１４０】
あるいは、それぞれの置換もしくは非置換アルキルが置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換ヘテロアルキルが置換もしくは非置換の２〜８員のヘテロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換シクロアルキルが置換もしくは非置換Ｃ5〜Ｃ7シクロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルが置換もしくは非置換の５〜７員のヘテロシクロアルキルであり、それぞれの置換もしくは非置換アルキレンが置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ8アルキレンであり、かつ／またはそれぞれの置換もしくは非置換ヘテロアルキレンが置換もしくは非置換の２〜８員のヘテロアルキレンである。
【０１４１】
別の具体的態様では、本発明の化合物には、表１〜３９のうちの任意の表、または方法１〜６１のうちの任意の方法の化合物が含まれる。他の具体的態様では、本発明の化合物には、表２〜３９のうちの任意の表、または方法２〜６１のうちの任意の方法の化合物が含まれる。
【０１４２】
例示的な合成
本発明の化合物は、一般的に周知の合成方法の適切な組合せによって合成する。本発明の化合物の合成に有用な技術は、関連分野の技術者に容易に明らかかつ利用可能である。以下の議論は、原理上、本発明の下に特許請求する化合物をどのように入手するか、および本発明の化合物を構築するために利用可能な様々な方法のうち特定のものに関する詳細を例示するために提供する。しかし、この議論は、本発明の化合物の調製に有用な反応または一連の反応の範囲を定義または制限することを意図しない。本発明の化合物は、以下の実施例セクション中に開示される手順および技術によって、ならびに既知の有機合成技術によって作製し得る。反応式１、２および３では、Ｌ1およびＬ2は上に定義したとおりである。反応式１、２および３のＲ1は、上に定義したＡ1に相当する。反応式１、２および３のＲ2は、上に定義したＡ2に相当する。
【０１４３】
本発明の特定の化合物の完全な合成の概要を反応式１に示す。これらの化合物の多くは、市販の２−アミノ−ニコチン酸から便利に合成することができる。２−アミノニコチン酸から開始して、５位をブロム化して１（Ｘ＝Ｂｒ）にすることは、それだけには限定されないが、臭素元素またはＮ−ブロモスクシンイミドを用いた反応（反応式１の工程ａ）などの化学文献で周知の様々な方法によって行うことができる。
【化１８】
2008508303.tif 000020
【０１４４】
一般式３のケトン中間体（Ｘ＝Ｂｒ）の合成は、対応するＷＥＩＮＲＥＢ−アミドである２またはその塩酸塩を適切な有機金属種で処理することによって、たとえば有機マグネシウムもしくは有機リチウム化合物を用いることによって［反応式１の工程ｃ］、行うことができる。（ケトン合成におけるＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド（ＷＥＩＮＲＥＢアミド）の使用の例には、Ｓ．Ｎａｍ、Ｓ．Ｍ．ＷＥＩＮＲＥＢ−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９８１、２２、３８１５を参照されたい。）ＷＥＩＮＲＥＢ−アミドである２（Ｘ＝Ｂｒ）は、アミド形成の標準の方法を用いて親酸である１（Ｘ＝Ｂｒ、Ｘ2＝ＣＨ）をＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンと共に縮合することによって入手可能であり、これは、酸を事前に活性化するか、またはｉｎ  ｓｉｔｕでもしくは直接縮合によって行う。どちらの変換のための方法および試薬も化学文献に記載されており、一部の当業者に周知である［反応式１の工程ｂ］。たとえば、アミド形成は、それだけには限定されないが、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵまたはＨＡＴＵなどの適切なカップリング試薬を用いた直接的方法によって行う。
【０１４５】
３（Ｘ＝Ｂｒ）［反応式１の工程ｃ］においてケトン残基Ｒ1の導入に必要な有機金属試薬は、購入することで、あるいは、それだけには限定されないが有機塩化物、臭化物、またはヨウ化物とマグネシウムとのグリニャール反応（Ｊ．Ｍａｒｃｈ−Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２参照）、それだけには限定されないがｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム、イソプロピルマグネシウムクロリドもしくはブロマイドなどの適切な有機リチウムまたは有機マグネシウム化合物を用いた、有機臭化物またはヨウ化物の金属−ハロゲン交換反応（たとえば、Ｊ．Ｃｌａｙｄｅｎ−有機リチウム：合成における選択性（Ｏｒｇａｎｏｌｉｔｈｉｕｍｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ、２００２；Ａ．Ｂｏｕｄｉｅｒ、Ｌ．Ｏ．Ｂｒｏｍｍ、Ｍ．Ｌｏｔｚ、Ｐ．Ｋｎｏｃｈｅｌ−Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．（２０００）３９、４４１４）、たとえばピリミジン、ピラジン、２−クロロ−または２−フルオロピリジンなどの十分に酸性の化合物の、たとえばリチウムＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミドまたはリチウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジドなどの適切な塩基を用いた脱プロトン化（Ｊ．Ｃｌａｙｄｅｎ−有機リチウム：合成における選択性（Ｏｒｇａｎｏｌｉｔｈｉｕｍｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ、２００２；Ａ．Ｔｕｒｃｋ、Ｎ．Ｐｌｅ、Ｆ．Ｍｏｎｇｉｎ、Ｇ．Ｑｕｅｇｕｉｎｅｒ−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００１）５７、４４８９；Ｆ．Ｍｏｎｇｉｎ、Ｇ．Ｑｕｅｇｕｉｎｅｒ−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００１）５７、４０５９参照）等の文献中に記載の様々な方法によって合成することで、得ることができる。前述の基Ｒ1は、１つたは複数の官能基で置換されていることができ、ここで、たとえば窒素または酸素に結合した水素原子などの酸性プロトンは、必要に応じて、化学文献で周知の方法によって適切な保護基で保護されていてもよい（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ−有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９参照）。このような官能基は、このような方法で得られた生成物を、一般的に周知の方法によって本発明の下に特許請求する様々な化合物へと変化させることを可能にする。
【０１４６】
生じたケトンである３（Ｘ＝Ｂｒ）［反応式１の工程ｄ］のオレフィン化は、当業者に知られているいくつかの方法によって行うことができるが、市販の塩化メトキシメチルトリフェニルホスホニウムと、適切な塩基、たとえば、それだけには限定されないが非求核性アミド（それだけには限定されないがビス（トリメチルシリル）アミンのリチウム、ナトリウムまたはカリウム塩など）等の強力な有機金属塩基から作製したイリドとを用いたウィティッヒ反応（Ｂ．Ｅ．Ｍａｒｙａｎｏｆｆ、Ａ．Ｂ．Ｒｅｉｔｚ−Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（１９８９）８９、８６３参照）によって実施することが最も便利である。このようなオレフィン化は、それぞれのケトンである３（Ｘ＝Ｂｒ）を精製しなくても、上述のようなＷＥＩＮＲＥＢアミドである２（Ｘ＝Ｂｒ）と有機金属試薬との反応から得られた粗物質を用いて便利に実施することができる。
【０１４７】
続いて、ＥもしくはＺ形態またはこれらの両形態の混合物で利用することができる、生じたオレフィンである４（Ｘ＝Ｂｒ）［反応式１の工程ｅ］の環化は、それだけには限定されないがＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジメトキシエタン、ジグリム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、水、メタノール、もしくはエタノール、またはそれらの混合物などの適切な溶媒中の、それだけには限定されないが硫酸、過塩素酸、塩酸、トリフルオロメタンスルホン酸もしくはトリフルオロ酢酸などの強力な無機あるいは有機酸を用いて、一般的な酸触媒作用条件下で行うことができる。同様の環化がＳａｋａｍｏｔｏ他、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ（１９９２）、３４（１２）、２３７９〜８４によって記載されている。ここでは、著者らは、２−ニトロ−３−（２−エトキシビニル）ピリジンから親であるピロロ［２，３−ｂ］ピリジンへの変換について記載している。ビニル基の形成は、３−ブロモ類似体とトリブチル−２−エトキシビニルスタナンとのＳＴＩＬＬＥカップリングによって行われる。
【０１４８】
臭化物５の５位において芳香族、オレフィン、アルキン、または脂肪族置換基を導入することで一般式６（Ｘ＝Ｂｒ）［反応式１の工程ｆ］の化合物を得ることは、標準のハロゲンクロスカップリング方法によって行うことができる（Ｆ．Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ、Ｐ．Ｊ．Ｓｔａｎｇ（編）−金属触媒によるクロスカップリング反応（Ｍｅｔａｌ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、１９９８；Ｊ．Ｔｓｕｊｉ−パラジウム試薬および触媒（Ｐａｌｌａｄｉｕｍ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９５参照）。臭化物５（Ｘ＝Ｂｒ）と、それだけには限定されないが、購入したもしくは化学文献で周知のプロトコルによって得たボロン酸およびボロネート、有機ボラン、トリフルオロホウ酸塩（たとえば、Ｇ．Ａ．Ｍｏｌａｎｄｅｒ、Ｇ．−Ｓ．Ｙｕｎ、Ｍ．Ｒｉｂａｇｏｒｄａ、Ｂ．Ｂｉｏｌａｔｔｏ−Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００３）６８、５５３４；Ｇ．Ａ．Ｍｏｌａｎｄｅｒ、Ｂ．Ｂｉｏｌａｔｔｏ−Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００３）６８、４３０２）、有機スタナン、有機亜鉛化合物、有機マグネシウム化合物、オレフィンまたは末端アルキンなどの適切な試薬とのカップリングは、適切な遷移金属触媒、たとえば、それだけには限定されないが適切なパラジウム化合物の存在下で、それだけには限定されないがホスフィン、ジホスフィンもしくは水素化ヒ素などのリガンドの存在下でまたはそれを用いずに、かつ必要に応じて三次もしくは二次アミン、炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリおよびリン酸アルカリなどの有機または無機塩基の存在下で、かつ必要に応じて塩化リチウム、ハロゲン化銅もしくは銀塩などの化学文献においてこのような変換を補助または加速することが知られている他の添加剤の存在下で、実施する。これらのクロスカップリング反応は、それだけには限定されないが、ＴＨＦ、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジグリム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン、エタノール、もしくは水、またはそれらの混合物などの適切な溶媒中で、２５℃〜２００℃の範囲の温度で、加熱なし、通常の加熱、またはマイクロ波照射を用いて実施する。
【０１４９】
この方法は、それだけには限定されないが、アルコール、チオール、一次または二次アミン、および窒素原子に結合した水素を含む、化学文献においてアルコール、チオールもしくはアミンの適切な保護基であることが知られていない基（このような基の例はＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ−有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９に見つかる）を含んでいても含んでいなくてもよい複素環などの非炭素系求核剤を、化学文献で周知の方法によって取り込むことに拡大し得る。その例として、Ｓ．Ｖ．Ｌｅｙ、Ａ．Ｗ．Ｔｈｏｍａｓ−Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００３）１１５、５５５８；Ｊ．Ｐ．Ｗｏｌｆｅ、Ｓ．Ｗａｇａｗ、Ｊ．−Ｆ．Ｍａｒｃｏｕｘ、Ｓ．Ｌ．Ｂｕｃｈｗａｌｄ−Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１、８０５およびＪ．Ｆ．Ｈａｒｔｗｉｇ−Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１、８５２に記載のものが挙げられる。このような方法によって得られた化合物は、化学文献で周知の方法によって、本発明の下に特許請求する他の化合物へとさらに変化させることができる。
【０１５０】
本発明の一実施形態では、ハロゲン化物５（Ｘ＝Ｂｒ）を、アセトニトリル／水またはジメトキシエタン／水などの水性溶媒混合物中の適切なパラジウム触媒、たとえば、それだけには限定されないが、テトラキス（トリフェニルホスフィノ）アラジウム（０）、ジクロルビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）またはジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）、および適切な塩基（たとえば炭酸ナトリウム、炭酸セシウムまたはフッ化セシウム）の存在下で、１１０℃〜２００℃の温度で、通常の加熱またはマイクロ波照射を用いて、ボロン酸で処理する。
【０１５１】
一部の例では、最初にハロゲン化物５を、ボロン酸もしくはエステル、トリフルオロホウ酸塩、有機マグネシウム、有機亜鉛、または有機錫化合物などの有機金属誘導体５ｂへと変換することによって、炭素または上述のものすべてなどの非炭素原子とのクロスカップリングを行うことが有利であり得る。このような化合物は、臭化物部分を適切な金属または半金属で置換することによって入手可能であり、この場合、誘導体５中に存在する任意の官能基、最も顕著にはピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの１位にある環窒素が、適切な保護基によって保護されていてもよい（このような基の例はＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ−有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９に見つかる）。このような金属または半金属の導入は、アルカリもしくはアルカリ土類金属などの金属またはリチウム、マグネシウムもしくはリチウムナフトハリド（ｎａｐｈｔｈａｌｉｄｅ）などのこのような金属の活性形態を用いて還元性メタレーションによって、あるいは、適切な有機リチウムまたは有機マグネシウム化合物（たとえばｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムまたはイソプロピルマグネシウムクロリドもしくはブロマイド）を用いた金属−ハロゲン交換反応、および続いて必要に応じて適切な可溶性かつ反応性の金属化合物（たとえば塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、塩化トリ−ｎ−ブチルスズ、塩化トリメチルスズ、ホウ酸トリメチル、ホウ酸トリエチル、ホウ酸トリ−イソプロピル、亜鉛トリフレートまたは塩化亜鉛）を用いた有機金属中間体のトランスメタレーション反応によってなど、いくつかの方法で行うことができる。ボロン酸ピナコールエステルの導入は、誘導体５を、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］パラジウム（ＩＩ）および適切な塩基（たとえば酢酸カリウムまたはナトリウム）の存在下、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡまたはＮ−メチルピロリドンなどの溶媒中、８０〜１６０℃の範囲の温度で、通常の加熱またはマイクロ波照射を用いて、ビス（ピナコラート）ジボロンと直接反応させることによって、便利に行い得る（同様の変換の先例の文献は、Ｔ．Ｉｓｈｉｙａｍａ、Ｍ．Ｍｕｒａｔａ、Ｎ．Ｍｉｙａｕｒａ−Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）６０、７５０８に見つかる）。この方法によって得られたボロン酸ピナコールエステルを、ボロン酸、ボロネート、またはトリフルオロホウ酸塩などの他のボロン酸誘導体へと変換する方法は、化学文献中に十分に記載されている。
【０１５２】
メタレーションした誘導体５ｂと、購入したまたは化学文献で周知のプロトコルによって得た芳香族、芳香族複素環式もしくはオレフィンの塩化物、臭化物、ヨウ化物、トリフレートもしくはハロゲン化アシルなどの適切な試薬とのクロスカップリングは、適切な遷移金属触媒の存在下で（たとえば適切なパラジウム化合物の存在下で、ホスフィン、ジホスフィンもしくは水素化ヒ素などのリガンドの存在下でまたはそれを用いずに、必要に応じて三次もしくは二次アミン、炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリまたはリン酸アルカリなどの有機または無機塩基の存在下で、かつ必要に応じてハロゲン化銅もしくは銀塩などの化学文献においてこのような変換を補助または加速することが知られている他の添加剤の存在下で）、実施する。これらのクロスカップリング反応は、適切な溶媒（たとえばＴＨＦ、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジグリム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン、またはそれらの混合物）中で、２５℃〜２００℃の範囲の温度で、加熱なし、通常の加熱またはマイクロ波照射を用いて実施する。このような方法によって得られた化合物、特に適切な官能基を含む化合物（たとえばカルボン酸またはエステル、ニトリル、アミン、アルデヒドまたはオレフィン）は、化学文献で周知の方法によって、本発明の下に特許請求する他の化合物へとさらに変化させることができる。
【０１５３】
アルカリ、アルカリ土類または特定の遷移金属を含む有機金属化合物５ｂなどの、より反応性のある有機求核剤（たとえば有機リチウム、有機マグネシウムもしくは有機亜鉛化合物）は、活性オレフィン（マイケルアクセプター）、アルデヒド、ニトリル、芳香族ニトロ化合物（たとえばＩ．Ｓａｐｏｕｎｔｚｉｓ、Ｐ．Ｋｎｏｃｈｅｌ−Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００２）１２４、９３９０参照）、カルボン酸誘導体、二酸化炭素、有機ジスルフィドまたは有機ハロゲン化物などの様々な他の求電子性カップリングパートナーとカップリングさせることもできる。このようなカップリングは、触媒なしで、あるいは適切な溶媒（たとえばエーテル、ＴＨＦ、ジオキサン、ジメトキシエタン、もしくはジグリム、またはそれらの混合物）中の適切な銅、コバルトまたは鉄化合物などの適切な遷移金属触媒を用いて、−１００℃〜１００℃の範囲の温度で、たとえばハロゲン化リチウム、アミンもしくはジアミンまたはそれらの誘導体などの化学文献においてこのような変換を補助または加速することが知られている他の添加剤の存在下で、あるいはそれを用いずに行うことができる。当業者には明らかであるように、このような方法によって得られた化合物、カルボン酸もしくはエステル、ニトリル、アミン、アルデヒドまたはオレフィンなどの特に適切な官能基を含む化合物は、化学文献で周知の方法によって、本発明の下に特許請求する他の化合物へとさらに変化させることができる。
【０１５４】
３，５−二置換ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンは、反応式２に概要を示した別の方法によっても評価するとができる（国際公開公報ＷＯ２００４／０３２８７４号も参照）。２−アミノ−５−ブロモピリジンのヨウ素化は、これを、ＤＭＦ、ＤＭＡまたはＮ−メチルピロリドンなどの適切な溶媒中、１００〜２００℃の高温でヨウ素および過ヨウ素酸ナトリウムと反応させることによって行うことができ、中間体３１が得られる。この中間体３１は、ピリジンなどの適切な溶媒中、２５〜１００℃で塩化アセチルと反応させることなどの標準の条件下でアシル化することができる。臭化物３２とエチニルトリメチルシランとをカップリングさせてアルキン３３を得ることは、ヨウ化第一銅などの銅（Ｉ）塩の存在下、トリエチルアミンなどの有機塩基の存在下で、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中、２５℃以上の温度で、ジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）またはジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）などの適切なパラジウム化合物を触媒として用いることなど、標準のハロゲンクロスカップリング方法（Ｆ．Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ、Ｐ．Ｊ．Ｓｔａｎｇ（編）、金属触媒によるクロスカップリング反応（Ｍｅｔａｌ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、１９９８；Ｊ．Ｔｓｕｊｉ、パラジウム試薬および触媒（Ｐａｌｌａｄｉｕｍ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９５参照）によって行うことができる。生じたアルキニルピリジン３３の環化は、ＴＨＦまたはジオキサンなどの適切な溶媒中、２５〜１１０℃の温度でフッ化テトラブチルアンモニウムなどの可溶性フッ化物に曝すことによって最も都合よく行うことができ、５−ブロモ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３４）が得られる。
【化１９】
2008508303.tif 000021
【０１５５】
ハロゲン化物３４、３５または３８への変化は、一般的に周知の方法によって容易に行うことができる。たとえば、様々な既知の遷移金属化合物（たとえばパラジウム、鉄またはニッケルから誘導した化合物）を用いて、金属で触媒されるクロスカップリング反応を用い得る。このような変換の例は以下の参考文献中に見つかる：Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｆ．、Ｓｔａｎｇ，Ｐ．Ｊ．−金属触媒によるクロスカップリング反応（Ｍｅｔａｌ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、１９９８；Ｍｅｌｌｅｒ，Ｍ．、有機合成用の遷移金属（Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｍｅｔａｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、１９９８；Ｔｓｕｊｉ，Ｊ．、パラジウム試薬および触媒（Ｐａｌｌａｄｉｕｍ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、第１版および第２版、１９９５、２００４；Ｆｕｅｒｓｔｎｅｒ，Ａ．他、Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００２）１２４、１３８５６；およびＢｏｌｍ，Ｃ．他、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００４）１０４、６２１７。他の有用な方法は、一般的に周知の方法（たとえば、金属ハロゲン交換を行い、必要に応じて次いでホウ素、マグネシウム、亜鉛、錫、ケイ素または銅の可溶性かつ反応性の化合物を用いて金属交換反応を行うこと；このような方法の代表的な例には、Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ，Ｍ．、合成における有機金属（Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第２版、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２を参照されたい）を用いて、臭素またはヨウ素置換基を金属または半金属置換基へと変換することを含む（たとえば有機ホウ素、有機リチウム、有機錫、有機ケイ素、有機亜鉛、有機銅もしくは有機マグネシウム化合物）。このような方法で得られた有機金属誘導体自体が、遷移金属で触媒される芳香族もしくはオレフィンのハロゲン化物もしくはトリフレートとのカップリング反応で役立つ場合があり、または、十分な反応性がある場合は、たとえば、特定の有機ハロゲン化物、マイケルアクセプター、オキシラン、アジリジン、アルデヒド、ハロゲン化アシル、またはニトリルなどの適切な求電子剤と直接反応させ得る。
【０１５６】
３位または５位のどちらかにおける選択的官能化は、どちらかの位置に官能基を導入するために利用する変換の性質、特にどちらかの位置における官能基の配列に応じて異なる戦略を必要とし得る。したがって、導入する特定の基の性質、このような変換を達成するために必要な方法、または利用する方法に固有の選択性に応じて、一部の例では５位の官能化の前に３位の官能化を行うことが有利または必要である場合があり、一方で他の例では逆の手法が必要である場合がある。たとえば、たとえば電子不足である（すなわち、１つもしくは複数の電子求引性置換基を含む、または特定の複素環系の誘導体を表す）、かつ／あるいはホウ素−炭素結合に対してオルト位の１つまたは複数の置換基を含む、一部のボロン酸またはそれらのエステルなどの一部の反応物質は、活性の高いパラジウム触媒（たとえば、Ｖｉｌａｒ，Ｒ．、Ｃｈｒｉｓｔｍａｎ，Ｕ．、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００５）１１７、３７０；Ｌｉｔｔｋｅ，Ａ．Ｆ．、Ｆｕ，Ｇ．−Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００２）１１４、４３５０に言及されているものなど）、ならびにたとえばより高い温度および／またはより長い反応時間などのより促進性の高い条件の使用を必要とし得る。このような条件は、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］ピリジンの反応において相当の選択性をもたらすことに貢献してはならない。したがって、このような場合では、５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］ピリジン中の臭素を置換すること、３位をヨウ素化すること、および次いで３位に第２の置換基を導入することを、上述の方法を利用して逐次的に行うことによって選択性の問題を完全に回避することが、有利となる。一般的に、どちらかの位置におけるハロゲン原子の置換が、５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］ピリジン中の２つのハロゲン原子間の高レベルの選択性に対して一般に望ましくない条件下における反応性の高い触媒または試薬を含む条件を要し得る場合は、いつでも、この逐次的な手法を用いることが有利となる。
【０１５７】
Ｒ1および／もしくはＲ2内、ならびにピロロ［３，４−ｂ］ピリジン骨格内（たとえば１位のプロトン）において、適切な保護基を用いた反応基の保護が有利または必要であり得ることが理解されよう。たとえば、一部のクロスカップリング反応では、１Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］ピリジン骨格の１位の窒素を保護することが有利であることが判明し、これは、たとえば、４−トルオイルスルホニル、トリ−イソプロピルシリルまたはテトラヒドロ−１Ｈ−ピラニル基をその位置に導入することによって行う。これらの保護基の導入および除去は、化学文献で周知の方法によって都合よく行うことができる。当業者には明らかであるように、前述の方法のうち任意のものによって得られた化合物は、一般的に周知の方法によってさらに変化させることができる遊離状態または保護された官能基を含み得る。
【０１５８】
本発明の下に特許請求する化合物の合成におけるクロスカップリング手順の利用のより詳細な説明を、反応式３に例示する：Ｘ1およびＸ2は、それだけには限定されないが、ハロゲン、ボロン酸もしくはエステル、トリフルオロホウ酸塩、有機マグネシウム、有機亜鉛、または有機錫から選択される。個々の残基Ｌ1Ｒ1またはＬ2Ｒ2の導入に関しては、上に概要を示したこのような変換は、標準のハロゲンクロスカップリング方法によって行うことができる。
【化２０】
2008508303.tif 000022
【０１５９】
ボロン酸およびボロネート、有機ボラン、有機スタナン、有機亜鉛化合物、有機マグネシウム化合物、オレフィンまたは末端アルキン（購入したもしくは一般に周知のプロトコルによって得たもの）などの適切な試薬を用いた、対応する臭化物またはヨウ化物（Ｘ1、Ｘ2＝Ｂｒ、Ｉ）のカップリングは、適切な遷移金属触媒（たとえばパラジウム化合物）の存在下で実施することができる。カップリングは、所望により、それだけには限定されないが、ホスフィン、ジホスフィン、ＡＲＤＵＥＮＧＯ型複素環式カルベン（Ａ．Ｊ．Ａｒｄｕｅｎｇｏ  ＩＩＩ他−Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ（１９９８）１７、３３７５；Ａ．Ｊ．Ａｒｄｕｅｎｇｏ  ＩＩＩ他−Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９４）１１６、４３９１参照）または水素化ヒ素などのリガンドの存在下で行い得る。有機または無機塩基（たとえば三次もしくは二次アミン、炭酸アルカリ、炭酸水素アルカリ、フッ化アルカリもしくはリン酸アルカリ）および／または他の周知の添加剤（たとえば塩化リチウム、ハロゲン化銅もしくは銀塩）を、このような変換を実行、補助または加速するために利用し得る。
【０１６０】
これらのクロスカップリング反応を、ＴＨＦ、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジグリム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、Ｎ−メチルピロリドン、水、またはそれらの混合物などの適切な溶媒中、２５℃〜２００℃の範囲の温度で実施し得る。温度は、所望により加熱、通常の加熱またはマイクロ波照射を用いて維持し得る。３−ヨード−５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｂ］ピリジンの場合、ヨード置換基をブロモ置換基よりも選択的または優先的に置換させることは、より低い温度およびより短い反応時間などの一般により促進性の低い条件下で、適切な遷移金属触媒を用いることで可能である。遷移金属に触媒される変換によるジ−またはオリゴハロゲン化合物の選択的官能化は、化学文献に十分な先例がある：たとえば、Ｊｉ，Ｊ．他−Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ（２００３）５、４６１１；Ｂａｃｈ，Ｔ．他−Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ（２００２）６７、５７８９、Ａｄａｍｃｚｙｋ、Ｍ．他−Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（２００３）５９、８１２９参照。
【０１６１】
この方法は、所望によりアルコール、チオールもしくはアミンの適切な保護基を含み得る非炭素系求核剤（たとえばアルコール、チオール、一次または二次アミン）を組み込むことに拡張し得る。このような基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．他、有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９に見つけることができる。関連するクロスカップリング反応における非炭素求核剤のこのような利用の例示的な方法は、Ｌｅｙ，Ｓ．他、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．（２００３）１１５、５５５８；Ｗｏｌｆｅ，Ｊ．他、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１、８０５；Ｈａｒｔｗｉｇ、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）３１、８５２；Ｎａｖａｒｒｏ，Ｏ．他、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００４）６９、３１７３、Ｊｉ，Ｊ．他、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ（２００３）５、４６１１に見つけ得る。当業者は、このような方法によって得られた化合物を一般的に周知の方法によってさらに変化させることで本発明の他の化合物が得られることを理解されよう。
【０１６２】
一部の例では、最初にそれぞれのハロゲン誘導体を対応する有機金属誘導体（たとえば、ボロン酸もしくはエステル、トリフルオロホウ酸塩、有機マグネシウム、有機亜鉛または有機錫化合物）へ変換することによって炭素または非炭素原子へのクロスカップリングを行うことが有利であり得る。このような化合物は、ハロゲン化部分を適切な金属または半金属で置換することによって入手可能である。存在する任意の官能基（たとえばピロロ［３，４−ｂ］ピリジンの１位の環窒素）を適切な保護基によって保護する必要があり得る（「ＰＧ」、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．他、有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９参照）。
【０１６３】
このような金属もしくは半金属の導入は、金属を用いたメタレーションまたは金属−ハロゲン交換反応などの一般に周知の方法によって行うことができる。メタレーションに有用な金属には、アルカリもしくはアルカリ土類金属またはそのような金属の活性型が含まれる。金属−ハロゲン交換反応で用いるための適切な試薬には、有機リチウムまたは有機マグネシウム化合物（たとえばｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムまたはイソプロピルマグネシウムクロリドもしくはブロマイド）が含まれる。必要に応じて、次いで適切な可溶性および塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、塩化トリ−ｎ−ブチルスズ、塩化トリメチルスズ、ホウ酸トリメチル、ホウ酸トリエチル、ホウ酸トリ−イソプロピル、亜鉛トリフレートまたは塩化亜鉛などの反応性金属化合物を用いて、有機金属中間体のトランスメタレーション反応を行い得る。ボロン酸ピナコールエステルの導入は、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）および適切な塩基（たとえば酢酸カリウムまたはナトリウム）の存在下、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡまたはＮ−メチルピロリドンなどの溶媒中、８０〜１６０℃の範囲の温度で、ハロゲン誘導体をビス（ピナコラート）ジボロンと直接反応させることによって都合よく行うことができる。適切な温度を維持するために通常の加熱またはマイクロ波照射を用い得る（同様の変換の先例の文献には、Ｉｓｈｉｙａｍａ，Ｔ．他−Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）６０、７５０８を参照されたい）。
【０１６４】
この方法によって得られたボロン酸ピナコールエステルをボロン酸、ボロネート、またはトリフルオロホウ酸塩などの他のボロン酸誘導体へと変換する方法は一般的に周知である。当業者には明らかであるように、このような有機金属誘導体を、ピロロ［３，４−ｂ］ピリジンのハロゲン含有誘導体の場合について上述したものと同様のクロスカップリング反応において利用し得る。このようなカップリングは、芳香族、芳香族複素環のハロゲン化物またはオレフィン試薬などの適切なカップリングパートナーを利用して、上述した方法と同一または明らかに類似かつ／もしくは関連した条件下で行うことができる。
【０１６５】
他の方法では、上述した方法のうち任意のものによってピロロ［３，４−ｂ］ピリジンのハロゲン含有誘導体から作製した有機金属誘導体の反応性を利用し得る。たとえば、アルカリまたはアルカリ土類金属を含む誘導体（たとえば有機リチウム、有機マグネシウムもしくは有機亜鉛化合物）を、たとえば、活性オレフィン（マイケルアクセプター）、アルデヒド、ニトリル、芳香族ニトロ化合物、カルボン酸誘導体、オキシラン、アジリジン、有機ジスルフィドまたは有機ハロゲン化物などの様々な他の求電子性カップリングパートナーへの直接カップリングに用い得る。このような変換は、一般に当分野で周知である（芳香族ニトロ化合物との反応には、たとえばＳａｐｏｕｎｔｚｉｓ，Ｉ．他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００２）１２４、９３９０を参照されたい）。
【０１６６】
保護基
用語「保護基」とは、化合物の反応性部分の一部またはすべてを遮断し、保護基が除去されるまでこのような部分が化学反応に参加することを妨げる化学部分をいい、たとえば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９９）中に示され記載されている部分がある。異なる保護基を用いる場合は、それぞれの（異なる）保護基が異なる手段によって除去可能であることが有利な場合がある。本質的に全く異なる反応条件下で切断される保護基により、そのような保護基を区別して除去することが可能となる。たとえば、酸、塩基、および水素化分解によって保護基を除去することができる。トリチル、ジメトキシトリチル、アセタールおよびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルなどの基は酸に不安定であり、水素化分解によって除去可能なＣｂｚ基および塩基に不安定であるＦｍｏｃ基で保護されたアミノ基の存在下で、カルボキシならびにヒドロキシ反応性部分を保護するために用い得る。カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメートなどの酸に不安定な基、または酸および塩基のどちらにも安定しているが加水分解によって除去可能なカルバメート基で遮断したアミンの存在下で、それだけには限定されないが、メチル、エチル、およびアセチルなどの塩基に不安定な基で遮断し得る。
【０１６７】
カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、ベンジル基などの加水分解によって除去可能な保護基でも遮断してよく、一方で、酸と水素結合することができるアミン基は、Ｆｍｏｃなどの塩基に不安定な基で遮断し得る。カルボン酸反応性部分は、２，４−ジメトキシベンジルなどの酸化によって除去可能な保護基で遮断してよく、一方で、同時に存在するアミノ基は、フッ化物に不安定なシリルカルバメートで遮断し得る。
【０１６８】
アリル遮断基は、酸および塩基の保護基の存在下において有用であり、これは、前者は安定しており、後に、金属またはπ−酸触媒によって除去することができるからである。たとえば、アリルで遮断したカルボン酸は、酸に不安定なｔ−ブチルカルバメートまたは塩基に不安定な酢酸アミン保護基の存在下で、パラジウム（０）に触媒される反応で脱保護することができる。保護基のさらに別の形態は、化合物または中間体を結合し得る樹脂である。残基が樹脂に結合している限りは、その官能基は遮断されており、反応することができない。樹脂から放出されたあとは、官能基は反応できるようになる。
【０１６９】
典型的な遮断／保護基には、それだけには限定されないが、以下の部分が含まれる：
【化２１】
2008508303.tif 000023
【０１７０】
キナーゼの阻害方法
別の態様では、本発明は、本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターを用いたプロテインキナーゼ活性の調節方法を提供する。本明細書中で使用する用語「キナーゼ活性の調節」とは、本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターと接触させた場合に、ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターが存在しない場合の活性と比較して、プロテインキナーゼの活性が増加または減少することを意味する。したがって、本発明は、プロテインキナーゼを本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーター（たとえば式（Ｉ）〜（ＸＶ）のいずれか１つの化合物）と接触させることによってプロテインキナーゼ活性を調節する方法を提供する。一部の実施形態では、式（ＩＶ）の化合物をプロテインキナーゼと接触させる。
【０１７１】
一部の実施形態では、ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターはキナーゼ活性を阻害する。キナーゼ活性に関して本明細書中で使用する用語「阻害」とは、ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターと接触させた場合に、ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターが存在しない場合の活性と比較して、キナーゼ活性が低減することを意味する。したがって、本発明はさらに、プロテインキナーゼを本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターと接触させることによってプロテインキナーゼ活性を阻害する方法を提供する。
【０１７２】
特定の実施形態では、プロテインキナーゼはタンパク質チロシンキナーゼである。本明細書中で使用するタンパク質チロシンキナーゼとは、リン酸ドナー（たとえばＡＴＰなどのヌクレオチドリン酸ドナー）を用いてタンパク質中のチロシン残基のリン酸化を触媒する酵素をいう。タンパク質チロシンキナーゼには、たとえば、アベルソンチロシンキナーゼ（「Ａｂｌ」）（たとえばｃ−Ａｂｌおよびｖ−Ａｂｌ）、Ｒｏｎ受容体チロシンキナーゼ（「ＲＯＮ」）、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ（「ＭＥＴ」）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ（「ＦＬＴ」）（たとえばＦＬＴ３）、ｓｒｃ−ファミリーのチロシンキナーゼ（たとえばｌｙｎ、ＣＳＫ）、およびｐ２１活性キナーゼ−４（「ＰＡＫ」）、ＦＬＴ３、オーロラキナーゼ、Ｂリンパ系チロシンキナーゼ（「Ｂｌｋ」）、サイクリン依存性キナーゼ（「ＣＤＫ」）（たとえばＣＤＫ１およびＣＤＫ５）、ｓｒｃ−ファミリー関連タンパク質チロシンキナーゼ（たとえばＦｙｎキナーゼ）、グリコーゲン合成酵素キナーゼ（「ＧＳＫ」）（たとえばＧＳＫ３αおよびＧＳＫ３β）、リンパ球タンパク質チロシンキナーゼ（「Ｌｃｋ」）、リボソームＳ６キナーゼ（たとえばＲｓｋ１、Ｒｓｋ２、およびＲｓｋ３）、精子チロシンキナーゼ（たとえばＹｅｓ）、ならびにチロシンキナーゼ活性を示すそれらの亜型および相同体が含まれる。特定の実施形態では、タンパク質チロシンキナーゼはＡｂｌ、ＲＯＮ、ＭＥＴ、ＰＡＫ、またはＦＬＴ３である。他の実施形態では、タンパク質チロシンキナーゼはＦＬＴ３またはＡｂｌファミリーのメンバーである。
【０１７３】
別の実施形態では、キナーゼは、突然変異体Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ、ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼなどの突然変異体キナーゼである。有用な突然変異体Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼには、以下の臨床的に単離された突然変異、すなわちＭ２４４Ｖ、Ｌ２４８Ｖ、Ｇ２５０Ｅ、Ｇ２５０Ａ、Ｑ２５２Ｈ、Ｑ２５２Ｒ、Ｙ２５３Ｆ、Ｙ２５３Ｈ、Ｅ２５５Ｋ、Ｅ２５５Ｖ、Ｄ２７６Ｇ、Ｆ３１１Ｌ、Ｔ３１５Ｉ、Ｔ３１５Ｎ、Ｔ３１５Ａ、Ｆ３１７Ｖ、Ｆ３１７Ｌ、Ｍ３４３Ｔ、Ｍ３５１Ｔ、Ｅ３５５Ｇ、Ｆ３５９Ａ、Ｆ３５９Ｖ、Ｖ３７９Ｉ、Ｆ３８２Ｌ、Ｌ３８７Ｍ、Ｈ３９６Ｐ、Ｈ３９６Ｒ、Ｓ４１７Ｙ、Ｅ４５９ＫおよびＦ４８６Ｓを少なくとも１つ有するものが含まれる。一部の実施形態では、突然変異体ＡｂｌキナーゼはＴ３１５Ｉ突然変異を有する。上記でアミノ酸の突然変異の位置を示す番号付けは、ＡＢＬのエクソンＩａに従った周知の野生型ＡＢＬの番号付けである。Ｄｅｉｎｉｎｇｅｒ，Ｍ．他、Ｂｌｏｏｄ、１０５（７）、２６４０（２００５）参照。この番号付けを図１に再現する。一部の実施形態では、突然変異体Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼは、上記に示した突然変異を少なくとも１つ含み、図１の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、突然変異体Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼは、上記に示した突然変異を少なくとも１つ含み、上述のように図１と配列同一性を有し、少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、または１１００個のアミノ酸を含む。
【０１７４】
一部の実施形態では、キナーゼは、アベルソンチロシンキナーゼ、Ｒｏｎ受容体チロシンキナーゼ、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３、オーロラキナーゼ、ｐ２１活性キナーゼ−４、および３−ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１から選択される。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物をキナーゼと接触させる。
【０１７５】
一部の実施形態では、キナーゼは既知のキナーゼと相同的である（本明細書中で「相同キナーゼ」とも呼ぶ）。相同キナーゼの生物活性の阻害に有用な化合物および組成物は、まずたとえば結合アッセイでスクリーニングを行い得る。相同酵素は、完全長の既知のキナーゼのアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一である同じ長さのアミノ酸配列、または既知のキナーゼ活性ドメインと７０％、８０％、もしくは９０％相同であるアミノ酸配列を含む。相同性は、たとえば、それだけには限定されないがＡｌｔｓｃｈｕｌ他、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｃ．、２５：３３８９〜３４０２（１９９７）に記載のものなどのＰＳＩ  ＢＬＡＳＴ検索を用いて決定し得る。特定の実施形態では、配列の少なくとも５０％、または少なくとも７０％がこの解析でアラインメントされる。アラインメントを行うための他のツールには、たとえばＤｂＣｌｕｓｔａｌおよびＥＳＰｒｉｐｔが含まれ、これらを用いてアラインメントのＰｏｓｔＳｃｒｉｐｔ形態を作成し得る。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ他、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２８：２９１９〜２６、２０００；Ｇｏｕｅｔ他、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１５：３０５〜０８ （１９９９）参照。相同体は、ＦＬＴ３、Ａｂｌ、もしくは別の既知のキナーゼ、またはＦＬＴ３、Ａｂｌ、もしくは別の既知のキナーゼの任意の機能的ドメインと、たとえば少なくとも１００個のアミノ酸にわたって１×１０-6のＢＬＡＳＴ  Ｅ値を有し得る（Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、Ｎｕｃｅｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５：３３８９〜４０２（１９９７）。
【０１７６】
相同性は、酵素の活性部位結合ポケットを既知のキナーゼの活性部位結合ポケットと比較することによっても決定し得る。たとえば、相同酵素では、分子または相同体の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のアミノ酸が、α炭素原子の標準偏差が約１．５Å、約１．２５Å、約１Å、約０．７５Å、約０．５Å、およびまたは約０．２５Åまでであるキナーゼドメインに大きさが匹敵するドメインのアミノ酸構造座標を有する。
【０１７７】
本発明の化合物および組成物は、キナーゼ活性の阻害およびＡＴＰに結合する他の酵素の阻害にも有用である。したがって、これらは、このようなＡＴＰ結合酵素の活性を阻害することによって緩和される疾患および障害の治療に有用である。このようなＡＴＰ結合酵素を決定する方法には、タンパク質ファミリーまたはドメインのシグネチャ、配列パターン、モチーフ、もしくはプロフィールを含む公訴を同定し得る、当業者に知られている方法、相同酵素の選択に関して本明細書中で議論されている方法、およびデータベースＰＲＯＳＩＴＥを用いることにより方法が含まれる。
【０１７８】
本発明の化合物およびそれらの誘導体も、キナーゼ結合剤として用い得る。結合剤としては、このような化合物および誘導体は、アフィニティークロマトグラフィーの用途用のテザー基質として安定した樹脂に結合していてもよい。本発明の化合物およびそれらの誘導体は、酵素もしくはポリペプチドの特徴、構造、および／または機能の調査において利用するために、修飾されていてもよい（たとえば、放射標識または親和性標識など）。
【０１７９】
例示的な実施形態では、本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターはキナーゼ阻害剤である。一部の実施形態では、キナーゼ阻害剤は１マイクロモル未満の阻害定数（Ｋi）のＩＣ50を有する。別の実施形態では、キナーゼ阻害剤は５００マイクロモル未満のＩＣ50または阻害定数（Ｋi）を有する。別の実施形態では、キナーゼ阻害剤は１０マイクロモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の実施形態では、キナーゼ阻害剤は１マイクロモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の実施形態では、キナーゼ阻害剤は５００ナノモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の実施形態では、キナーゼ阻害剤は１０ナノモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。別の実施形態ではキナーゼ阻害剤は１ナノモル未満のＩＣ50またはＫiを有する。
【０１８０】
治療方法
別の態様では、本発明は、そのような治療を必要としている対象（たとえばヒトなどの哺乳動物）において、キナーゼ活性に媒介される疾患（キナーゼ媒介性疾患または障害）を治療する方法を提供する。「キナーゼ媒介性」または「キナーゼ関連」の疾患とは、キナーゼ活性を阻害することによって疾患もしくは症状を緩和させることができる疾患を意味する（たとえばキナーゼが疾患プロセスのシグナル伝達、媒介、制御、または調節に関与している場合）。「疾患」とは、疾患または疾患の症状を意味する。この方法には、対象に本発明のピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーター（たとえば式（Ｉ）〜（ＸＶ）のいずれか１つの化合物）を有効量で投与することが含まれる。
【０１８１】
キナーゼ関連疾患の例には、癌（たとえば白血病、腫瘍、および転移）、アレルギー、喘息、肥満症、炎症（たとえば炎症性気道疾患などの炎症性疾患）、血液疾患、閉塞性気道疾患、喘息、自己免疫疾患、代謝性疾患、感染症（たとえば細菌性、ウイルス性、酵母性、真菌性）、ＣＮＳ疾患、脳腫瘍、変性性神経疾患、心血管病、ならびに血管形成、血管新生、および脈管形成に関連する疾患が含まれる。例示的な実施形態では、化合物は、白血病を含めた癌、および骨髄増殖性疾患などの異常細胞増殖に関与する他の疾患または障害の治療に有用である。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物を対象に投与する。
【０１８２】
本発明の化合物で治療する癌のより具体的な例には、乳癌、肺癌、黒色腫、結腸直腸癌、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、扁平細胞癌、膠芽細胞腫、膵臓癌、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、ならびに白血病（たとえば骨髄性、慢性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ芽球性、ホジキン、ならびに他の白血病および血液癌）が含まれる。
【０１８３】
本発明の化合物もしくは組成物が治療または予防に有用である疾患あるいは障害の他の具体的な例には、それだけには限定されないが、移植片拒絶（たとえば、腎臓、肝臓、心臓、肺、島細胞、膵臓、骨髄、角膜、小腸、皮膚同種移植片もしくは異種移植片または他の移植片）、移植片対宿主病、骨関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、糖尿病性網膜症、炎症性腸疾患（たとえば、クローン病、潰瘍性大腸炎、および他の腸疾患）、腎臓病、悪液質、敗血症性ショック、ループス、重症筋無力症、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏症、アルツハイマー病、パーキンソン病、化学療法中の幹細胞保護、自己もしくは同種間骨髄移植のためのｅｘ  ｖｉｖｏ選択またはｅｘ  ｖｉｖｏパージ、眼疾患、網膜症（たとえば、黄斑変性症、糖尿病性網膜症、および他の網膜症）、角膜疾患、緑内障、感染症（たとえば細菌性、ウイルス性、または真菌性）、それだけには限定されないが再狭窄を含めた心臓病が含まれる。
【０１８４】
アッセイ
プロテインキナーゼを調節する能力、プロテインキナーゼに結合する能力、および／または細胞の成長もしくは増殖を妨げる能力を決定するために、本発明の化合物のアッセイを容易に行い得る。有用なアッセイの一部の例を以下に提示する。
【０１８５】
キナーゼ阻害および結合アッセイ
本明細書中に提示した様々な方法およびＵｐｓｔａｔｅ  ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２００３年６月号中に記載の方法などの当業者に知られている方法によって、様々なキナーゼの阻害を測定した。
【０１８６】
たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを行う場合は、キナーゼを典型的には適切な濃度に希釈してキナーゼ溶液を形成する。キナーゼ基質およびＡＴＰなどのリン酸ドナーをキナーゼ溶液に加える。キナーゼによってリン酸をキナーゼ基質に転移させてリン酸化された基質を形成させる。リン酸化された基質の形成は、放射活性（たとえば［γ−32Ｐ−ＡＴＰ］）、または検出可能な二次抗体を用いること（たとえばＥＬＩＳＡ）などの任意の適切な手段によって直接検出し得る。あるいは、リン酸化された基質の形成は、ＡＴＰ濃度の検出（たとえばＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ））などの任意の適切な技術を用いて検出し得る。キナーゼ阻害剤は、試験化合物が存在する場合および存在しない場合におけるリン酸化された基質の形成を検出することによって同定される（以下の実施例セクション参照）。
【０１８７】
化合物が細胞中でキナーゼを阻害する能力も、当分野で周知の方法を用いてアッセイを行い。たとえば、キナーゼを含む細胞を、キナーゼ活性化する活性化剤（成長因子など）と接触させ得る。試験化合物が存在する場合および存在しない場合に形成された細胞内のリン酸化された基質の量は、細胞を溶解して任意の適切な方法（たとえばＥＬＩＳＡ）によってリン酸化された基質の存在を検出することによって検出し得る。試験化合物の存在下で産生されたリン酸化された基質の量が、試験化合物が存在しない場合に産生される量と比較して減少している場合は、キナーゼの阻害が示唆される。より詳細な細胞キナーゼアッセイは以下の実施例セクションに記載する。
【０１８８】
化合物とキナーゼとの結合を測定するためには、当業者に知られている任意の方法を用い得る。たとえば、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ（カリフォルニア州Ｆｒｅｍｏｎｔ）によって製造される試験キットのＥＤ−スタウロスポリンＮＳＩＰ（商標）酵素結合アッセイキット（米国特許第５，６４３，７３４号参照）を用い得る。キナーゼ活性は、２００３年７月８日発行の米国特許第６，５８９，９５０号に記載のようにもアッセイを行い得る。
【０１８９】
適切なキナーゼ阻害剤は、たとえば、その全体が本特許において本明細書中に参考として組み込まれている、Ａｎｔｏｎｙｓａｍｙ他、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３０８７８１６Ａ１号に開示されているように、タンパク質結晶学的スクリーニングによって本発明の化合物から選択し得る。
【０１９０】
本発明の化合物をコンピュータ的にスクリーニングして、様々なキナーゼに結合するかつ／またはそれを阻害するその能力のアッセイおよび可視化を行い得る。構造は、複数の本発明の化合物でコンピュータ的にスクリーニングして、様々な部位においてキナーゼに結合するその能力を決定し得る。そのような化合物は、たとえば、潜在的な治療的重要性を有する阻害剤を同定する医薬品化学的取組みにおいて、標的または手掛かりとして用いることができる（Ｔｒａｖｉｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６２：１３７４、１９９３）。そのような化合物の三次元構造を、キナーゼまたはその活性部位もしくは結合ポケットの三次元表示に重ねて、化合物が表示に空間的に一致し、したがってタンパク質に一致するかどうかを評価し得る。このスクリーニングでは、このような部分もしくは化合物と結合ポケットとの一致の品質は、形状の相補性または推定相互作用エネルギーによって判断し得る（Ｍｅｎｇ他、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．、１３：５０５〜２４、１９９２）。
【０１９１】
本発明に従ってキナーゼに結合するかつおよび／またはそれを調節する（たとえばキナーゼを阻害または活性化する）本発明の化合物のスクリーニングことは、一般に、２つの要素を考慮することを含む。第１に、化合物は、物理的かつ構造的に、共有結合的または非共有結合的にキナーゼと会合する能力を有していなければならない。たとえば、共有結合的な相互作用は、タンパク質の不可逆阻害剤または自殺型阻害剤の設計に有用であり得る。キナーゼと化合物との会合に重要な非共有結合的な分子相互作用には、水素結合、イオン相互作用、ファンデルワールス、および疎水性の相互作用が含まれる。第２に、化合物は、キナーゼとの会合が可能となる、結合ポケットに対するコンホメーションおよび配向をとる能力を有していなければならない。化合物の一定の部分はキナーゼのこの会合に直接参加しないが、その部分はそれでも分子の全体的なコンホメーションに影響を与える場合があり、その効力に有意な影響を与え得る。コンホメーション要件には、結合ポケットのすべてもしくは一部分に関して化学基または化合物の全体的な三次元構造および配向、あるいはキナーゼと直接相互作用するいくつかの化学基を含む化合物の官能基間の間隔が含まれる。
【０１９２】
たとえばＤＯＣＫまたはＧＯＬＤなどの本明細書中に記載のドッキングプログラムを、活性部位および／または結合ポケットに結合する化合物を同定するために用いる。タンパク質の異なる分子動力学的コンホメーションを考慮に入れて、化合物を、タンパク質構造の複数の結合ポケットに対して、または同じタンパク質に関して複数組の座標に対してスクリーニングしてもよい。その後、コンセンサススコア付けを用いて、タンパク質に最もよく一致する化合物を同定し得る（Ｃｈａｒｉｆｓｏｎ，Ｐ．Ｓ．他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４２：５１００〜９（１９９９））。複数のタンパク質分子構造から得られたデータも、「化合物の仮想スクリーニングを行うためのコンピュータシステムおよび方法（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」という題名の、２００２年５月３日出願のＫｌｉｎｇｌｅｒ他の米国特許出願に記載の方法に従ってスコア付けし得る。その後、最もよく一致する化合物を化学ライブラリの作成者から得るか、または合成し、結合アッセイおよびバイオアッセイで用いる。
【０１９３】
コンピュータモデリング技術を用いて、キナーゼに対する化学物質の潜在的な調節または結合効果を評価し得る。コンピュータモデリングが強力な相互作用を示唆する場合は、分子を合成し、キナーゼに結合して（阻害または活性化することによって）活性に影響を与えるその能力を試験し得る。
【０１９４】
キナーゼの調節化合物または他の結合化合物は、化学基もしくは断片を、キナーゼの個々の結合ポケットまたは他の領域と会合するその能力についてスクリーニングを行って選択する一連の工程によって、コンピュータ的に評価し得る。このプロセスは、たとえば、キナーゼ座標に基づいたコンピュータスクリーン上の活性部位の目視検査から始め得る。その後、選択された断片もしくは化学基を、キナーゼの個々の結合ポケット内で様々な配向に配置する、またはドッキングし得る（Ｂｌａｎｅｙ，Ｊ．Ｍ．およびＤｉｘｏｎ，Ｊ．Ｓ．、Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎ、１：３０１、１９９３）。Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）ＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．、カナダ、ケベック州Ｍｏｎｔｒｅａｌ）；およびＳＹＢＹＬ（Ｔｒｉｐｏｓ，Ｉｎｃ．、モンタナ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、１９９２）などのソフトウェアを用いて手動のドッキングを行ってもよく、次いで、ＣＨＡＲＭＭ（Ｂｒｏｏｋｓ他、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．、４：１８７〜２１７、１９８３）、ＡＭＢＥＲ（Ｗｅｉｎｅｒ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１０６：７６５〜８４、１９８４）およびＣ2ＭＭＦＦ（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｆｏｒｃｅ  Ｆｉｅｌｄ；Ａｃｃｅｌｒｙｓ、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）などの標準の分子機構力場を用いたエネルギー最小化ならびに／または分子動力学を行い得る。より自動的なドッキングは、ＤＯＣＫ（Ｋｕｎｔｚ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１６１：２６９〜８８、１９８２；ＤＯＣＫはカリフォルニア大学、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏから入手可能）；ＡＵＴＯＤＯＣＫ（Ｇｏｏｄｓｅｌｌ＆Ｏｌｓｅｎ、タンパク質：構造、機能、および遺伝学（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、８：１９５〜２０２、１９９０；ＡＵＴＯＤＯＣＫはＳｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、カリフォルニア州Ｌａ  Ｊｏｌｌａから入手可能）；ＧＯＬＤ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  Ｄａｔａ  Ｃｅｎｔｒｅ（ＣＣＤＣ）；Ｊｏｎｅｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２４５：４３〜５３、１９９５）；およびＦＬＥＸＸ（Ｔｒｉｐｏｓ、モンタナ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ；Ｒａｒｅｙ，Ｍ．他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６１：４７０〜８９、１９９６）などのプログラムを用いることによって行い得る。他の適切なプログラムは、たとえばＨａｌｐｅｒｉｎ他に記載されている。
【０１９５】
上記方法によって化合物を選択する間、その化合物がキナーゼに結合し得る効率を試験し、コンピュータ評価によって最適化し得る。たとえば、キナーゼ阻害剤として機能するように設計または選択された化合物は、ネイティブ基質が結合している場合に活性部位の残基によって占有されている容量と重ならない容量を占有し得るが、当業者は、ある程度の柔軟性が存在し、主鎖および側鎖の再配置が可能であることを理解されよう。さらに、当業者は、たとえば誘導した一致をもたらすものなど、結合の際にタンパク質の再配置を活用することができる化合物を設計し得る。有効なキナーゼ阻害剤では、その結合状態と遊離状態との間の比較的小さなエネルギー差が実証され得る（すなわち、結合変形エネルギーが小さいかつ／または結合の際にコンホメーションの歪みが低くなければならない）。したがって、最も効率的なキナーゼ阻害剤は、たとえば、１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下、７ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下、５ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下、または２ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の結合変形エネルギーを有するように設計されるべきである。キナーゼ阻害剤は、全体的な結合エネルギーが類似している複数のコンホメーションでタンパク質と相互作用し得る。このような場合、結合変形エネルギーは、遊離化合物のエネルギーと阻害剤が酵素に結合した際に観察されるコンホメーションの平均エネルギーとの差であるとみなされる。
【０１９６】
化合物の変形エネルギーおよび静電気的相互作用を評価するための特定のコンピュータソフトウェアが当分野で利用可能である。このような使用のために設計されたプログラムの例には、Ｇａｕｓｓｉａｎ９４、改修Ｃ（Ｆｒｉｓｃｈ、Ｇａｕｓｓｉａｎ，Ｉｎｃ．、ペンシルバニア州Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、（著作権）１９９５）；ＡＭＢＥＲ、バージョン７（Ｋｏｌｌｍａｎ、カリフォルニア大学、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｓｉｓｃｏ、（著作権）２００２）；ＱＵＡＮＴＡ／ＣＨＡＲＭＭ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、（著作権）１９９５）；Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ／Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、（著作権）１９９５）；ＤｅｌＰｈｉ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、（著作権）１９９５）；およびＡＭＳＯＬ（ミネソタ大学）（量子化学プログラム交換（Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｅｘｃｈａｎｇｅ）、インディアナ大学）が含まれる。これらのプログラムは、たとえば、当分野で周知のコンピュータワークステーション、たとえばＬＩＮＵＸ、ＳＧＩまたはＳｕｎワークステーションを用いて実行し得る。他のハードウェアシステムおよびソフトウェアパッケージが当業者に知られている。
【０１９７】
当業者は、当分野で知られている方法および本明細書中に開示した方法を用いてキナーゼタンパク質発現させ得る。本明細書中に記載のネイティブおよび突然変異キナーゼポリペプチドは、当分野で周知の技術を用いて完全にまたは部分的に化学合成し得る（たとえばＣｒｅｉｇｈｔｏｎ、タンパク質：構造および分子原理（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ）、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．、ニューヨーク、１９８３参照）。
【０１９８】
遺伝子発現系を、ネイティブおよび突然変異したポリペプチドの合成に用い得る。当業者に知られている、ネイティブまたは突然変異したポリペプチドのコード配列および適切な転写／翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築し得る。これらの方法には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術およびｉｎ  ｖｉｖｏ組換え／遺伝的組換えが含まれる。たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、分子クローニング：実験室の手引き（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク、２００１、およびＡｕｓｕｂｅｌ他、分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニューヨーク、１９８９に記載の技術を参照されたい。
【０１９９】
宿主−発現ベクター系を用いてキナーゼを発現させ得る。これらには、それだけには限定されないが、コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡもしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換させた細菌などの微生物；コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換させた酵母；コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（たとえばバキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；コード配列を含む、組換えウイルス発現ベクター（たとえば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染させたまたは組換えプラスミド発現ベクター（たとえばＴｉプラスミド）で形質転換させた植物細胞系；あるいは動物細胞系が含まれる。また、タンパク質を、たとえば、個体内のタンパク質の量を増加させるためまたは遺伝子操作した治療タンパク質を発現させるためにタンパク質を発現させることを含めて、ヒト遺伝子治療系中で発現させ得る。これらの系の発現要素は、その強度および特異性が異なる。
【０２００】
特異的に設計したベクターは、細菌−酵母または細菌−動物の細胞などの宿主間のＤＮＡのシャトルを可能にする。適切に構築された発現ベクターは、宿主細胞中での自律複製のための複製起点、１つまたは複数の選択マーカー、限定された数の有用な制限酵素部位、高コピー数の潜在性、および活性のあるプロモーターを含み得る。プロモーターとは、ＲＮＡポリメラーゼがＤＮＡに結合してＲＮＡ合成を開始するように指示するＤＮＡ配列と定義される。強力なプロモーターは、ｍＲＮＡが高頻度で開始されることを引き起こすものである。
【０２０１】
発現ベクターは、たとえば構成的プロモーターおよび誘導性プロモーターを含めた、転写ならびに翻訳に影響を与える様々な要素も含み得る。これらの要素、多くの場合宿主および／またはベクター依存性である。たとえば、細菌系でクローニングする場合は、Ｔ７プロモーター、バクテリオファージλのｐＬ、ｐｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ−ｌａｃハイブリッドプロモーター）などの誘導性プロモーターを用いてもよく；昆虫細胞系でクローニングする場合は、バキュロウイルスポリヘドリンプロモーターなどのプロモーターを用いてもよく；植物細胞系でクローニングする場合は、植物細胞のゲノムから誘導したプロモーター（たとえば熱ショックプロモーター；ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットのプロモーター；クロロフィルａ／ｂ結合タンパク質のプロモーター）または植物ウイルスから誘導したプロモーター（たとえばＣａＭＶ３５Ｓ  ＲＮＡプロモーター；ＴＭＶの外被タンパク質プロモーター）を用いてもよく；哺乳動物細胞系でクローニングする場合は、哺乳動物プロモーター（たとえばメタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスプロモーター、（たとえば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター；ＳＶ４０プロモーター；ウシパピローマウイルスプロモーターを用いてもよく；また、エプスタイン−バーウイルスプロモーター）を用い得る。
【０２０２】
様々な方法、たとえば、形質転換、形質移入、感染症、プロトプラスト融合、および電気穿孔を用いてベクターを宿主細胞内に導入し得る。発現ベクター含有細胞をクローニングにより増殖させ、それらが適切なポリペプチドを産生するかどうかを決定するために個別に分析する。たとえば抗生物質耐性を含めた様々な選択方法を用いて、形質転換された宿主細胞を同定し得る。ポリペプチドを発現している宿主細胞クローンの同定は、それだけには限定されないが、抗キナーゼ抗体との免疫学的反応性および宿主細胞関連活性の存在を含めたいくつかの手段によって実施し得る。
【０２０３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生させた合成ｍＲＮＡを用いてｃＤＮＡの発現も行い得る。合成ｍＲＮＡは、それだけには限定されないがコムギ胚芽抽出液および網状赤血球抽出液を含めた様々な無細胞系において効率的に翻訳されることができ、また、それだけには限定されないがカエル卵母細胞内への微量注入を含めた細胞系においても効率的に翻訳される。
【０２０４】
最適レベルの活性および／またはタンパク質を生じるｃＤＮＡ配列（もしくは複数の配列）を決定するために、改変ｃＤＮＡ分子を構築する。改変ｃＤＮＡの非限定的な例は、ｃＤＮＡ中のコドン使用頻度が、そのｃＤＮＡを発現させる宿主細胞用に最適化されているものである。宿主細胞をｃＤＮＡ分子で形質転換させ、キナーゼＲＮＡおよび／またはタンパク質のレベルを測定した。
【０２０５】
宿主細胞中のキナーゼタンパク質のレベルは、免疫親和性および／またはリガンド親和性技術などの様々な方法によって定量、キナーゼ特異的親和性ビーズまたは特異的抗体を用いて35Ｓ−メチオニン標識もしくは非標識のタンパク質を単離する。標識または非標識のタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析する。非標識のタンパク質は、特異的抗体を用いたウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡを用いて検出する。
【０２０６】
組換え宿主細胞中でのキナーゼの発現に続いて、活性型のタンパク質を提供するためにポリペプチドを回収し得る。いくつかの精製手順が利用可能であり、使用に適している。組換えキナーゼは、分画もしくは当分野で知られているクロマトグラフィー工程の様々な組合せによって、またはそれらを個別に応用することによって、細胞溶解液または条件培養培地から精製し得る。
【０２０７】
さらに、組換えキナーゼは、完全長の新生タンパク質もしくはそのポリペプチド断片に特異的なモノクローナルまたはポリクローナル抗体で作製した免疫−親和性カラムを用いることによって他の細胞タンパク質から分離することができる。当分野で知られている他の親和性に基づいた精製技術も用い得る。
【０２０８】
あるいは、宿主細胞からポリペプチドを折り畳まれていない活性型で、たとえば細菌の封入体から回収し得る。この型で回収されたタンパク質は、変性剤、たとえば塩酸グアニジニウムを用いて可溶化し、その後、透析などの当業者に知られている方法を用いて活性型へと再折り畳みし得る。
【０２０９】
細胞成長アッセイ
様々な細胞成長アッセイが当分野で知られており、細胞成長および／または増殖を阻害する（たとえば低減させる）ことができるピロロ−ピリジン化合物（すなわち「試験化合物」）の同定に有用である。
【０２１０】
たとえば、様々な細胞が成長および／または増殖に特定のキナーゼを要することが知られている。そのような細胞が試験化合物の存在下で増殖する能力を評価し、試験化合物が存在しない場合の成長と比較することで、試験化合物の抗増殖特性を同定し得る。この種の一般的な一方法は、トリチウム標識したチミジンなどの標識が分裂中の細胞のＤＮＡ内に取り込まれる程度を測定することである。あるいは、細胞数と相関する代用マーカーを用いて細胞の全代謝活性を決定することによって細胞増殖の阻害のアッセイを行い得る。細胞を、試験化合物を存在させてまたは存在させずに代謝指示薬で処理し得る。生細胞は代謝指示薬を代謝するので、検出可能な代謝産物が形成される。検出可能な代謝産物のレベルが、試験化合物が存在しない場合と比較して試験化合物が存在する場合に低減している場合は、細胞成長および／または増殖の阻害が示唆される。例示的な代謝指示薬には、たとえばテトラゾリウム塩およびＡｌａｍｏｒＢｌｕｅ（登録商標）が含まれる（以下の実施例セクション参照）。
【０２１１】
医薬組成物および投与
別の態様では、本発明は、医薬として許容される賦形剤と混合したピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターを含む医薬組成物を提供する。当業者は、医薬組成物には上述したピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターの医薬として許容される塩が含まれることを理解されよう。
【０２１２】
治療的および／または診断的の応用において、本発明の化合物を、全身投与または局所的もしくは局所的投与を含めた様々な投与様式用に処方することができる。技術および処方は、一般に、レミントン：薬学の科学および実行（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）（第２０版）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に見つけ得る。
【０２１３】
本発明による化合物は、広い用量範囲にわたって有効である。たとえば、成人ヒトの治療では、０．０１〜１０００ｍｇ／日、０．５〜１００ｍｇ／日、１〜５０ｍｇ／日、および５〜４０ｍｇ／日の用量が、用い得る用量の例である。最も好ましい用量は１０〜３０ｍｇ／日である。正確な用量は、投与経路、化合物を投与する形態、治療する対象、治療する対象の体重、ならびに担当医の選択および経験に依存する。
【０２１４】
医薬として許容される塩は一般的に当業者に周知であり、例として、それだけには限定されないが、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベシル酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、酒石酸水素塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カルンシレート（ｃａｒｎｓｙｌａｔｅ）、炭酸塩、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート（ｇｌｙｃｏｌｌｙｌａｒｓａｎｉｌａｔｅ）、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、またはテオクル酸塩が含まれうる。他の医薬として許容される塩は、たとえばレミントン：薬学の科学および実行（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）（第２０版）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に見つかる。好ましい医薬として許容される塩には、たとえば、酢酸塩、安息香酸塩、臭化物、炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、ナプシル酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、リン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、または酒石酸塩が含まれる。
【０２１５】
治療する特定の状態に応じて、液体もしくは固体剤形で処方し、全身投与または局所投与し得る。薬剤は、たとえば、当業者に知られているように時効性または徐放性の形態でデリバリーし得る。処方および投与の技術は、レミントン：薬学の科学および実行（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）（第２０版）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）に見つけ得る。適切な経路には、経口、口腔、吸入スプレーによる投与、舌下、直腸、経皮、経膣、経粘膜、経鼻もしくは腸管の投与；筋肉内、皮下、髄内の注射、およびくも膜下腔内、直接脳室内、静脈内、関節内、胸骨内、滑膜内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、もしくは眼内の注射または他のデリバリー様式を含めた非経口デリバリーが含まれる。
【０２１６】
注射には、本発明の薬剤を処方し、ハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液など、生理的に適合性のある緩衝液等の水溶液で希釈し得る。このような経粘膜投与には、浸透する障壁に適切な浸透剤を配合物中で用いる。そのような浸透剤は一般に当分野で知られている。
【０２１７】
本発明を実施するために本明細書中に開示した化合物を、全身投与に適した製剤中に処方するために医薬として許容される不活性担体の使用することは、本発明の範囲内にある。担体の適切な選択および適切な製造の実施により、本発明の組成物、特に液剤として処方されたものを、静脈内注射など非経口投与し得る。化合物は、当分野で周知の医薬として許容される担体を用いて、経口投与に適した製剤中に容易に処方することができる。そのような担体により、本発明の化合物を、治療する対象（たとえば患者）による経口摂取のための錠剤、丸薬、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方することが可能となる。
【０２１８】
経鼻または吸入デリバリーにも、本発明の薬剤を当業者に知られている方法によって処方してもよく、たとえば、それだけには限定されないが、生理食塩水などの可溶化剤、希釈剤、または分散剤の例、ベンジルアルコールなどの保存料、吸収促進剤、および炭化フッ素が含まれ得る。
【０２１９】
本発明での使用に適した医薬組成物には、活性成分が、その意図される目的を達するために有効量で含まれる組成物が含まれる。有効量の決定は、特に本明細書中に提供した詳細な開示に鑑みて、当業者の能力範囲内に十分ある。
【０２２０】
活性成分に加えて、これらの医薬組成物は、活性化合物を医薬上用いることができる調製物へと加工することを容易にする賦形剤および補助剤を含む、適切な医薬として許容される担体を含み得る。経口投与用に処方した調製物は、錠剤、糖衣錠、カプセル、または液剤の形態であり得る。
【０２２１】
経口使用のための医薬調製物は、活性化合物を固体賦形剤と混合し、所望により生じる混合物を粉砕し、所望する場合は適切な補助剤を加えたのちに顆粒の混合物を加工することによって、錠剤または糖衣錠の核を得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、もしくはソルビトールを含めた糖；セルロース調製物、たとえば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチル−セルロースナトリウム（ＣＭＣ）、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ：ポビドン）などの充填剤である。所望する場合は、架橋結合したポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩等の崩壊剤を添加し得る。
【０２２２】
糖衣錠の核は適切なコーティングと共に提供する。この目的のために、濃縮糖溶液を用いてもよく、これは、所望により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ならびに／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。活性化合物の用量の様々な組合せを同定もしくは特徴づけるために、色素または顔料を錠剤あるいは糖衣錠のコーティングに添加し得る。
【０２２３】
経口的に使用することができる医薬調製物には、ゼラチンから作製した押し込み型カプセル、およびゼラチンから作製した柔らかい密封カプセル、ならびにグリセロールまたはソルビトールなどの可塑化剤が含まれる。押し込み型カプセルは、活性成分と混合したラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに所望により安定化剤を含むことができる。軟カプセルでは、活性化合物を脂肪油、流動パラフィン、もしくは液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの適切な液体に溶解または懸濁させ得る。さらに、安定化剤を添加し得る。
【０２２４】
治療もしくは予防する特定の状態または病状に応じて、通常その状態を治療または予防するために投与する追加の治療剤を、本発明の阻害剤と共に投与し得る。たとえば、化学療法剤または他の抗増殖剤を本発明の阻害剤と組み合わせて増殖性疾患または癌を治療し得る。既知の化学療法剤の例には、それだけには限定されないが、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロン、および白金誘導体が含まれる。
【０２２５】
本発明の阻害剤を組み合わせてもよい薬剤の他の例には、それだけには限定されないが、副腎皮質ステロイド、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１  ＲＡ、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびスルファサラジンなどの抗炎症剤；シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン、副腎皮質ステロイド、シクロホファミド、アザチオプリン、およびスルファサラジンなどの免疫調節剤および免疫抑制剤；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＭＡＯ阻害剤、インターフェロン、抗痙攣剤、イオンチャネルブロッカー、リルゾール、および抗パーキンソン病剤などの神経栄養因子；βブロッカー、ＡＣＥ阻害剤、利尿剤、硝酸剤、カルシウムチャネルブロッカー、およびスタチンなどの心血管病治療剤；副腎皮質ステロイド、コレスチラミン、インターフェロン、および抗ウイルス剤などの肝臓疾患治療剤；副腎皮質ステロイド、抗白血病剤、および成長因子などの血液障害治療剤；インスリン、インスリン類似体、αグルコシダーゼ阻害剤、ビグアニド、およびインスリン増感剤などの糖尿病治療剤；ならびにγグロブリンなどの免疫欠乏性障害治療剤が含まれる。
【０２２６】
これらの追加の薬剤は、阻害剤含有組成物とは個別に、または複数用量レジメンの一部として投与し得る。あるいは、これらの薬剤は、単一組成物中で阻害剤と混合した単一剤形の一部であり得る。
【０２２７】
本発明は、本発明の単一の態様の例示として意図する例示した実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書中に記載のものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明から当業者には明らかであろう。このような改変は本発明の範囲内にあることが意図される。さらに、本発明の範囲から逸脱することなしに、本発明の任意の実施形態の任意の１つまたは複数の特徴を、本発明の任意の他の実施形態の任意の１つまたは複数の特徴と組み合わせ得る。たとえば、ピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターのセクションに記載したピロロ−ピリジンキナーゼモジュレーターは、本明細書中に記載の治療方法およびキナーゼ阻害方法のどちらにも同等に適用可能である。本出願中にわたって引用した参考文献は、当分野のレベルの例であり、以前に具体的に組み込まれていたかどうかにかかわらず、それらの全体で本特許において参考として組み込まれている。
【実施例】
【０２２８】
以下の実施例は、特許請求した発明を例示するために提供し、それを限定するものではない。本発明の実施形態の調製を以下の実施例に記載する。当業者は、本発明の他の化合物の多くを調製するために提供した化学反応および合成方法を変更し得ることを理解されよう。本発明の化合物が例示されていない場合は、当業者は、本明細書中に提示する合成方法を変更することによって、および当分野で知られている合成方法を用いることによってそれらの化合物を調製し得ることを理解されよう。アッセイ結果を示した化合物はＡＥと印した。
【０２２９】
化合物の合成：
方法１：
【化２２】
2008508303.tif 000024
【０２３０】
工程１：５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
５００ｍＬの丸底フラスコに５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１０．１１ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）および２５０ｍｌのアセトンを加えた。Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ、１２．７ｇ、５６．４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。沈殿物を収集し、冷アセトンで洗浄することで、１２．２ｇ（７４％）の表題化合物が黄褐色粉末として得られた。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 12.35 (br.s, 1H), 8.29 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J=2.0 Hz 1 H), 7.79 (s, 1H); MS: m/z 322.8/324.8 [MH+].
【０２３１】
工程２：５−ブロモ−３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
２５０ｍＬの丸底フラスコに５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（８．００ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）および１２０ｍＬの乾燥ＴＨＦを加えた。溶液を０℃の氷浴中で冷却し、ＮａＨ（２．４０ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を３回に分けて加えた。２０分後、塩化ｐ−トルエンスルホニル（８．７０ｇ、４５．６３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３０分間かけて室温まで暖まらせた。反応混合物を濃縮し、ヘキサンを加えることで沈殿物が得られ、これを収集して氷冷の２ＭのＮａＯＨで洗浄した。粗生成物をＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶化させて、１７．８ｇ（９２％）の表題化合物が淡黄褐色粉末として得られた。  1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.49 (d, J=2.5 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.99 (d, J=2.0 Hz , 1 H), 7.98(d, J=8.5 Hz , 2H), 7.42 (d, J=8.5 Hz, 2H), 2.32(s, 3H); MS: m/z 476.8/478.8 [MH+].
【０２３２】
工程３：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
５００ｍＬの丸底フラスコに５−ブロモ−３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１１．８０ｇ、２０．９６ｍｍｏｌ）、２−メトキシフェニルボロン酸（３．７６ｇ、２４．７４ｍｍｏｌ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（０．７５６ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１００ｍＬ）および１００ｍＬの２ＭのＮａ2ＣＯ3（ａｑ）を加えた。フラスコに還流冷却器をはめ込み、迅速に撹拌しながらＮ2下で８時間、６０℃で加熱した。反応混合物を濾過して、灰色−黄褐色沈殿物を得た。これをＥｔＯＡｃに溶かし、水、次いでブラインで洗浄した。この溶液を濃縮することで、７．７０ｇ（８０％）の表題化合物が黄褐色粉末として得られた。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.50 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J=2.5 Hz, 1H), 8.07(s, 1 H), 8.03(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.54(dd, J=1.5, 7.5 Hz, 1H), 7.43(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.39 (m, 1H), 7.15(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.05(t, J=7.0 Hz, 1H), 3.80(s. 3H), 2.34(s, 3H); MS: m/z 456.9/458.9 [MH+].
【０２３３】
工程４：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
５ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．１０２ｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（０．１２３ｇ、０．４８３ｍｍｏｌ）、二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物（９．１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および無水酢酸ナトリウム（５５ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）ならびに無水ＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。生じた混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ内において１４０℃で６０分間照射し、その後、ＥｔＯＡｃで希釈し、水で４回抽出した。有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって粗生成物を精製することで、９０．９ｍｇ（８１％）の表題化合物が白色粉末として得られた。 1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ8.79 (d, J=1.0 Hz, 1H), 8.32 (d, J=1.0 Hz, 1H), 8.11(d, J=5.5 Hz, 2 H), 7.94 (d, J=3.0 Hz, 1H), 7.50(m, 1H), 7.35(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.25(d, J=7.5 Hz, 2H), 7.05(t, J=7.2 Hz, 1H), 7.01(d, J=7.2 Hz, 1H), 3.85(s, 3H), 2.35(s, 3H), 1.31(s, 12H);  MS: m/z 505.1 [MH+].
【０２３４】
方法１によって調製した他の化合物：
【表１】
2008508303.tif 000025
【０２３５】
方法２：
【化２３】
2008508303.tif 000026
【０２３６】
工程１：５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドの合成。
５ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．１３６ｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミド（０．０７５６ｇ、０．３３２ｍｍｏｌ；調製は以下に記述）、二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物（１６．２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（２ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（２ｍＬ）を加えた。バイアルを密封し、Ｎ2でパージし、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ内において９０℃で１５分間照射し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。粗生成物を３：１のＭｅＯＨ／アセトン（合計４ｍＬ）に溶かし、５００μＬの５０％ｗ／ｗのＫＯＨ（ａｑ）で１時間処理した。氷酢酸を加えてｐＨ７を得た。その後、反応混合物を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃと水との間で分割し、その後、層を分離し、有機相を水で２回洗浄した。有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。酢酸エチル（１０％のＭｅＯＨを含む）およびヘキサンの勾配を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによる精製を行って、表題化合物が黄褐色粉末として得られた（５７ｍｇ、５７％）。 1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 11.96 (br. s, 1H), 8.95 (d, J=2.5 Hz, 1H), 8.56(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.52 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.24(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.13(t, J=2.0 Hz, 1H), 7.72(d, J=3.0 Hz, 1H), 7.59(dd, J=2.0, 5.5 Hz, 1H), 7. 25 (dd, J=1, 7.5 Hz,1H), 7.08(d, J=7.5 Hz, 1H), 6.99(t, J=7.5 Hz, 1H), 3.76(s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.92(s, 3H); MS: m/z 373.1 [MH+].
【０２３７】
中間体の調製：５−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミド：１００ｍＬの丸底フラスコに塩化５−ブロモニコチノイル（０．５３１ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加えた。ＴＨＦ中２Ｍのジメチルアミン溶液（５ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温、Ｎ2下で６時間撹拌し、その後、真空下で濃縮した。粗残渣をＥｔＯＡｃと水との間で分割した。層を分離し、有機相を水で３回洗浄し、その後、ブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮することで、５−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドが茶色油として得られた（０．４９５１ｇ、８９％）。ＭＳ：ｍ／ｚ２２９／２３１［ＭＨ+］。
【０２３８】
方法２によって調製した他の化合物（シリカゲルクロマトグラフィーもしくは質量誘発（ｍａｓｓ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）逆相ＨＰＬＣのどちらか、または両方を以下の化合物の精製に用い得る）：
【表２−１】
2008508303.tif 000027
【０２３９】
【表２−２】
2008508303.tif 000028
【０２４０】
【表２−３】
2008508303.tif 000029
【０２４１】
【表２−４】
2008508303.tif 000030
【０２４２】
【表２−５】
2008508303.tif 000031
【０２４３】
【表２−６】
2008508303.tif 000032
【０２４４】
【表２−７】
2008508303.tif 000033
【０２４５】
【表２−８】
2008508303.tif 000034
【０２４６】
【表２−９】
2008508303.tif 000035
方法３：
【化２４】
2008508303.tif 000036
【０２４７】
工程１：５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸エチルエステルの合成。
２０ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．９９５ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−ニコチン酸エチルエステル（０．６４５ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）、二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物（９５．５ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１０ｍＬ）を加えた。バイアルを密封し、Ｎ2でパージし、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ内において９０℃で１５分間照射した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによる精製を行って、５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸エチルエステルが白色粉末として得られた（０．７９４ｇ、６９％）。ＭＳ：ｍ／ｚ５２８．１［ＭＨ+］。
【０２４８】
工程２：Ｎ−イソプロピル−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチンアミドの合成。
５ｍＬのねじ口バイアルに５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸エチルエステル（５０．２ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン（５００μＬ）を加えた。バイアルを密封し、１００℃で４８時間、加熱ブロック内に入れた。反応溶液を濃縮し、残渣を１：１のＭｅＯＨ／アセトン（合計２ｍＬ）に溶かし、１００μＬの５０％ｗ／ｗのＫＯＨ（ａｑ）で１時間処理した。氷酢酸を加えてｐＨ７を得た。その後、反応混合物を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃと水との間で分割し、その後、層を分離し、有機相を水で２回洗浄した。有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。酢酸エチル（１０％のＭｅＯＨを含む）およびヘキサンの勾配を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによる精製を行って、表題化合物が白色粉末として得られた（１３ｍｇ、３５％）。 1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 11.96 (br. s, 1H), 9.05 (d, J=2.5 Hz, 1H), 8.94(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J=2.0 Hz , 1H), 8.51(d, J=8.0 Hz, 1H), 8.46(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.30(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.76(s, 1H), 7.61(d, J=5.5 Hz, 1H), 7.29(dd, J=2, 7.5 Hz, 1H), 7.12(d, J=7.5 1H), 7.04 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.11(m, 1H), 3.84 (s, 3H), 1.17(s, 6H); MS: m/z 387.1 [MH+].
【０２４９】
方法３によって調製した他の化合物：
【表３】
2008508303.tif 000037
方法４：
【化２５】
2008508303.tif 000038
【０２５０】
工程１：３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸の合成。
マイクロ波バイアル内で、１：１のアセトニトリル／飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（合計２０ｍＬ）中の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１．０１ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルフェニル）ボロン酸（０．５４ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（０．９０ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルにキャップを被せ、Ｎ2を流し、真空下で排気し、次いで、マイクロ波中において９０℃で１８００秒間加熱した。この物質を酢酸エチルで希釈し、有機層をＨ2Ｏで洗浄し、その後、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。溶液をシリカゲルに吸着させ、酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルが白色固体として得られた（１．０７ｇ、８７％の収率）。 1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ8.68 (s, 1H), 8.17 (br s, 3H), 8.09 (s, 1H), 7.99 (m, 2H), 7.71 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 7.06 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.60 (s, 9H).  MS: m/e 555.1 (M + H+).
【０２５１】
１：１のＭｅＯＨ／アセトン溶液（合計４０ｍＬ）中の３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．０７ｇ、１．８２ｍｍｏｌ）に、４ｍＬの５０％ＫＯＨ（ａｑ）溶液を加えた。反応混合物を２０時間、周囲温度で撹拌した。溶液がｐＨ＝６となるまで氷酢酸を滴下した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。この物質をシリカゲルに吸着させ、酢酸エチルおよびヘキサンの勾配でフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルが、白色固体へと結晶化し始めた無色油として得られた（１．９７ｇ、定量的収率）。1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ11.34 (s, 1H), 8.50 (s, 2H), 8.21 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.55 (m, 2H), 7.40 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.10 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 1.25 (s, 9H). MS:  m/e 401.1 (M + H+).
【０２５２】
酢酸（４ｍＬ）中の３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．９７ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）に、臭化水素（酢酸中３３重量％）（８８９ｕＬ、４．９２ｍｍｏｌ）およびメルカプト酢酸（４４４ｕＬ、６．３９ｍｍｏｌ）の事前に混合した溶液を滴下した。フラスコの側面を追加の酢酸（３ｍＬ）ですすぎ、反応溶液を周囲温度で１０分間撹拌し、その結果、生成物が溶液から沈殿し始めた。反応をさらに１時間、周囲温度で撹拌した。沈殿物を濾過し、酢酸およびジエチルエーテルでよくすすぐことで、表題化合物が鮮やかな黄色固体として得られた（４４８ｍｇ、６７％の収率）。 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ12.03 (br s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.21 (d, 2H), 7.99 (d, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.61 (m, 2H), 7.31 (t, 1H), 7.14 (d, 1H), 7.06 (t, 1H), 3.83 (s, 3H).  MS:  m/e 345.1 (M + H+).
【０２５３】
工程２：Ｎ−（２−ジメチルアミノ−エチル）−３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ−メチル−ベンズアミド。
無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸（２１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（２３ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ，Ｎ’−トリメチルエチレンジアミン（７．９μＬ、０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を１６時間、周囲温度で撹拌し、その後、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）で希釈し、０．４５ｕｍのシリンジフィルターで濾過し、Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの移動相（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）で逆相クロマトグラフィーによって精製した。清浄な画分を合わせて凍結乾燥することで、表題化合物が白色粉末として得られた（１４．０ｍｇ、５４％の収率）。 1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ8.51 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.81 (bs, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.49 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13 (d, 8.5 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.90 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.17 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.80 (br s, 2H).  MS:  m/e 429.1 (M + H+).
【０２５４】
方法４によって調製した他の化合物：
【表４−１】
2008508303.tif 000039
【０２５５】
【表４−２】
2008508303.tif 000040
方法５：
【化２６】
2008508303.tif 000041
【０２５６】
工程１：２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステルの合成。
マイクロ波バイアル内で、１．５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ3水溶液および５．０ｍＬのアセトニトリル中の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（５０２ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、５−ブロモサリチル酸メチル（２５３ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（４１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルにキャップを被せ、Ｎ2を流し、真空下で排気し、次いで、マイクロ波中において９０℃で３００秒間加熱した。この物質を酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（ａｑ）およびブライン洗浄し、その後、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。この物質を濾過し、その後、シリカゲルに吸着させ、酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、表題化合物が吸湿性の白色固体として得られた（４８０ｍｇ、９１％の収率）。 1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ8.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.06 (m, 4H), 7.96 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 2.5, 6.0 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 2.0, 6.0 Hz, 1H), 7.40 (m, 3H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz,1H), 7.08 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 2.39 (s, 3H).  MS:  m/z 529.1 (M + H+). 
【０２５７】
工程２：Ｎ−（２−ジメチルアミノ−エチル）−２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ−メチル−ベンズアミドの合成。
ピリジン（０．５ｍＬ）中の２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステル（５２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、過剰のＮ，Ｎ，Ｎ’−トリメチルエチレンジアミン（０．５ｍＬ）を加えた。反応をシンチレーションバイアル内で、１６時間、１００℃で撹拌した。〜５０％の生成物の形成、および〜５０％のメチルエステルからカルボン酸への加水分解が行われたと考えられる。ＰＳ−カルボジイミド樹脂（２４４ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１．２１ｍｍｏｌ／ｇの負荷容量）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を反応溶液に加え、加熱を１６時間、７０℃で続けた。樹脂を濾過して取り出し、ＴＨＦおよびＭｅＯＨでよくすすいだ。濾液を黄色油まで濃縮し、その後、１：１のＭｅＯＨ／アセトン溶液（合計４ｍＬ）に再度溶かした。溶液を２００ｕＬの５０％ＫＯＨ（ａｑ）溶液で処理し、周囲温度で３時間撹拌した。ｐＨ＝７まで氷酢酸を滴下した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、その後、有機層をＨ2Ｏで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。この物質をＭｅＯＨに溶かし、０．４５μｍのシリンジフィルターで濾過した。溶液を、Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによって精製した。清浄な画分を凍結乾燥することで、表題化合物が白色粉末として得られた（５．２ｍｇ、１２％の収率）。 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ11.80 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.74 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 2.0, 6.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.01 (br s, 3H), 2.90 (br s, 2H), 2.59 (m, 2H), 2.36 (br s, 3H), 2.00 (br s, 3H).  MS:  m/z 445.1 (M + H+).
【０２５８】
方法５によって調製した他の化合物：
【表５−１】
2008508303.tif 000042
【０２５９】
【表５−２】
2008508303.tif 000043
【０２６０】
【表５−３】
2008508303.tif 000044
【０２６１】
【表５−４】
2008508303.tif 000045
方法６：
【化２７】
2008508303.tif 000046
【０２６２】
工程１：（３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
ジオキサン／水（１００ｍＬ／２０ｍＬ）中の５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３ｇ、１５ｍｍｏｌ）、３−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルボロン酸（４ｇ、１８ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム（４ｇ、４６ｍｍｏｌ）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）の混合物を、１１０℃で１５時間撹拌した。その後、混合物を氷水中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した（３回）。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィーを行うことで、（３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンが黄色固体として得られた（３．８６ｇ、８４％の収率）。ＭＳ：ｍ／ｚ３０８．１（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２６３】
工程２：（３−（３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
アセトン（１０ｍＬ）中の（３−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（５５０ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＩＳ（６０４ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２０分間撹拌した。減圧によってアセトンを除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することで、（３−（３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンが得られた（６００ｍｇ、７７％の収率）。ＭＳ：ｍ／ｚ４３４．２（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２６４】
工程３：（３−（３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
トルエン（５ｍＬ）中の（３−（３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（６００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）、塩化ｐ−トルエンスルホニル（５２８ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（水中に５０％ｗ／ｖ、０．３８７ｍＬ、３．４５ｍｍｏｌ）およびテトラブチル水酸化アンモニウム（水中に４０％ｗ／ｖ、０．４４８ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１５時間撹拌した。混合物に水を加え、水性混合物を酢酸エチルによって抽出した（３回）。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。粗生成物のシリカゲルクロマトグラフィーを行うことで、（３−（３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンが黄色固体として得られた（６００ｍｇ、７４％の収率）。ＭＳ：ｍ／ｚ５８８．１（Ｍ＋Ｈ+）。
【０２６５】
工程４：（３−（３−（２−フルオロフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
アセトニトリル（１ｍＬ）中の（３−（３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（４０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）、２−フルオロフェニルボロン酸（１８ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（３．９ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ水溶液、０．１０２ｍＬ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌマイクロ波装置内において９０℃で３０分間加熱した。生じた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固することで、粗（３−（３−（２−フルオロフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンが得られ、さらなる精製を行わずにこれを工程５で用いた。
【０２６６】
工程５：（３−（３−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
直前の工程からの粗（３−（３−（２−フルオロフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンををメタノール（１ｍＬ）に溶かし、溶液に水酸化カリウム（５０％ｗ／ｖ、０．０３８ｍＬ、０．１３６ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。その後、粗生成物をＤＭＳＯに溶かし、質量誘発逆相ＨＰＬＣによって精製することで、純（３−（３−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（５．６ｍｇ、（３−（３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンから２１％の収率）が淡茶色シロップとして得られた。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ3.60 (m, br, 8H), 7.33 (m, 3H), 7.39 (m, 1H), 7.55 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.74 (m, 1H), 7.84 (m, 3H), 8.28 (m, 1H), 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 12.17 (s, 1H).  MS: m/z 402.1 (M+H+).  
【０２６７】
方法６によって調製した他の化合物：
【表６−１】
2008508303.tif 000047
【０２６８】
【表６−２】
2008508303.tif 000048
【０２６９】
【表６−３】
2008508303.tif 000049
方法７：
【化２８】
2008508303.tif 000050
【０２７０】
工程１：（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
アセトニトリル（１ｍＬ）中の（３−（３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（４０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）、２，６−ジメトキシフェニルボロン酸（１８．６ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３．９ｍｇ、０．００３４ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２Ｍ水溶液、０．１０２ｍＬ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｅｒｓｏｎａｌマイクロ波装置内において１２０℃で３０分間加熱した。生じた混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固することで、粗（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンが得られ、さらなる精製を行わずにこれを工程５で用いた。
【０２７１】
工程２：（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンの合成。
工程１からの粗（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンにメタノール（１ｍＬ）を加え、生じた溶液に水酸化カリウム（５０％ｗ／ｖ、０．０３８ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間室温で撹拌し、その後、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させた。シリカゲルクロマトグラフィーにより（３−（３−（２，６−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノン（７）（（３−（３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）（モルホリノ）メタノンから３１％の収率）が淡黄色固体として得られた。 1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ3.65 (m, br, 8H), 3.75 (s, 6H), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H),   7.31 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.55 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.67 (m, 1H), 7.74 (m, 1H), 7.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 2.0 Hz, 1H).  MS: m/z 444.1 (M+H+).  
【０２７２】
方法７によって調製した他の化合物：
【表７】
2008508303.tif 000051
方法８：
【化２９】
2008508303.tif 000052
【０２７３】
工程１：１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−エタノンの合成。
無水ＣＨ2Ｃｌ2（１００ｍＬ）中に懸濁させた塩化アルミニウム（６．７７ｇ、５０．７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎ2下で５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（２．００ｇ、１０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を１時間、周囲温度で撹拌し、その後、塩化アセチル（３．６１ｍＬ、５０．７５ｍｍｏｌ）を滴下し、生じた溶液をさらに５時間撹拌した。反応を氷浴中で０℃まで冷却し、溶液が透明になるまでＭｅＯＨを加えることによって注意深く反応停止を行った。反応を真空下で濃縮した。Ｈ2Ｏを加え、ｐＨ＝４まで１ＮのＮａＯＨを滴下した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、残存アルミニウム塩をすべて除去するために有機層を酒石酸ナトリウムカリウムの飽和溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下で濃縮した。この物質を酢酸エチルに再度溶かし、シリカゲル床で濾過した。濾液を濃縮することで、表題化合物がオレンジ色固体として得られた（２．２５ｇ、９３％の収率）。 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ12.70 (br s, 1H), 8.56 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.40 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H). MS: m/z 238.9/240.9 (M + H+).
【０２７４】
工程２：１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ジメチルアミノ−プロペノンの合成。
１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−エタノン（２．２５ｇ、９．４１ｍｍｏｌ）にｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン（５．８３ｍＬ、２８．２３ｍｍｏｌ）（ニート）を加え、油浴中、１００℃で６．５時間還流させた。反応を冷却し、ジエチルエーテルで滴定した。固体を濾過し、真空下で乾燥させることで、表題化合物がオレンジ色粉末として得られた（１．９３ｇ、７０％の収率）。  1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.67 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.49 (s, 6H).  
【０２７５】
工程３：５−ブロモ−３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
マイクロ波バイアル内で、エタノール（５ｍＬ）中の１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ジメチルアミノ−プロペノン（１．９３ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）の溶液に無水ヒドラジン（２４７ｕＬ、７．８５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をマイクロ波中において８０℃で２．５時間加熱した。反応混合物を真空下で濃縮することで、表題化合物が赤褐色粉末として得られた（１．５０ｇ、８７％の収率）。  1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ12.71 (s, 1H), 11.97 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 6.65 (s, 1H).  MS: m/z 263.0 (M + H+).  
【０２７６】
工程４：５−ブロモ−１−（トルエン−４−スルホニル）−３−［２−（トルエン−４−スルホニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
トルエン（５ｍＬ）中の５−ブロモ−３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１．５１ｇ、５．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラブチル水酸化アンモニウム（Ｈ2Ｏ中に４０重量％、２８５ｕＬ）および５０％ＫＯＨ（ａｑ）溶液（５．７ｍＬ）を加えた。反応混合物を２０分間周囲温度で撹拌し、塩化ｐａｒａ−トルエンスルホニル（２．１７ｇ、１１．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応を周囲温度で２．５時間時間撹拌した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、有機層をＨ2Ｏで洗浄し、その後、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。この物質を真空下で濃縮し、シリカゲルに吸着させた。酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、表題化合物が黄色固体として得られた（１．７３ｇ、５３％の収率）。 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ8.68 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.92 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 3 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.32 (s, 3H).  MS: m/z 570.9/571.9 (M + H+).
【０２７７】
工程５：５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−３−［２−（トルエン−４−スルホニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
マイクロ波バイアル内で、ＤＭＦ（７ｍＬ）中の５−ブロモ−１−（トルエン−４−スルホニル）−３−［２−（トルエン−４−スルホニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１．７３ｇ、３．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（ピナコラート）ジボロン（１．５４ｇ、６．０４ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（８６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、および酢酸ナトリウム（０．７４ｇ、９．０６ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルにキャップを被せ、Ｎ2を流し、真空下で排気し、マイクロ波中において１４０℃で３６００秒間加熱した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、Ｈ2Ｏで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、シリカゲルに吸着させた。粗物質を、酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって直ちに精製した。精製を行うことで、表題化合物が白色固体として得られた（０．７２ｇ、３９％の収率）。 1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ8.81 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.16 (m, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.04 (m, 2H), 7.038 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.67 (m, 1H), 2.41 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 2.36 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 1.39 (s, 12H).  MS: m/z 619.1 (M + H+).
【０２７８】
工程６：５−［３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチンアミドの合成。
マイクロ波バイアル内で、１：１のアセトニトリル／飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（合計２ｍＬ）中の５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−３−［２−（トルエン−４−スルホニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（５６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、５−ブロモニコチンアミド（２０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（３．７ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルにキャップを被せ、Ｎ2を流し、真空下で排気し、マイクロ波中において９０℃で１８００秒間加熱した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させた。溶液を濾過し、真空下で濃縮した。残渣を１：１のＭｅＯＨ／アセトン溶液（合計２ｍＬ）に再度溶かし、２００ｕＬの５０％ＫＯＨ（ａｑ）溶液で処理し、周囲温度で１時間撹拌した。ｐＨ＝７までクエン酸（１Ｍ）を滴下し、生成物を酢酸エチル中に抽出した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、シリカゲルに吸着させた。この物質を酢酸エチル（１０％のＭｅＯＨを含む）およびヘキサンの勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、その後、真空下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルで滴定することで、表題化合物がベージュ色固体として得られた（０．８ｍｇ、３％の収率）。 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ12.67 (s, 1H), 11.87 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.5 Hz, 1H).  MS: m/z 305.0 (M + H+).  
【０２７９】
方法８によって調製した他の化合物：
【表８】
2008508303.tif 000053
方法９：
【化３０】
2008508303.tif 000054
【０２８０】
工程１：（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−シクロペンチル−メタノールの合成。
無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−カルボアルデヒド（６３２ｍｇ、３．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルエーテル中の３Ｍメチルマグネシウムブロマイド（６．０６ｍＬ、３４．８ｍｍｏｌ）を−５０℃で加えた。反応混合物を室温まで温め、終夜撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を混合物に加え（１５ｍＬ）、有機層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出した（３回２０ｍＬ）。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣を、ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製した。（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−シクロペンチル−メタノール（４２５．９ｍｇ、５０％の収率）が黄色粉末として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ２７１／２７３［ＭＨ+］。
【０２８１】
工程２：（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−シクロペンチル−メタノンの合成。
ジクロロエタン（１２ｍＬ）中の（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−シクロペンチル−メタノール（４２５．９ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）およびマンガン（ＩＶ）オキシド（２．７３ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で２０時間加熱した。混合物をセライトパッドで濾過し、その後、濾液を蒸発させることで、（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−シクロペンチル−メタノン（３６３．２ｍｇ、８６％の収率）が黄色粉末として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ２６９／２７１［ＭＨ+］。
【０２８２】
工程３：５−ブロモ−３−（１−シクロペンチル−２−メトキシ−ビニル）−ピリジン−２−イルアミンの合成。
０℃まで冷却したＴＨＦ（８ｍＬ）中の塩化メトキシメチルトリフェニルホスホニウム（２．０３ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、カリウム（ビストリメチルシリル）アミドを加えた（１．２６ｇ、６．３２ｍｍｏｌ）。混合物を０℃で３０分間撹拌し、５ｍＬのＴＨＦ中の２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−シクロペンチル−メタノン（３６３．２ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶液をシリカゲルパッドで濾過し、その後、濾液を蒸発させ、残渣をヘキサン中ＥｔＯＡｃの勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィーで精製することで、５−ブロモ−３−（１−シクロペンチル−２−メトキシ−ビニル）−ピリジン−２−イルアミン（１１６．９ｍｇ、２９％の収率）が白色固体として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ２９７／２９９［ＭＨ+］。
【０２８３】
工程４：５−ブロモ−３−シクロペンチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
ジオキサン（１ｍＬ）中の５−ブロモ−３−（１−シクロペンチル−２−メトキシ−ビニル）−ピリジン−２−イルアミン（１１６．９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）および過塩素酸（０．１ｍＬ）の混合物を８０℃で２時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣を２Ｍの炭酸ナトリウム溶液（５ｍＬ）で洗浄した。沈殿物が形成され、これを濾過して取り出した。これを水で洗浄し、乾燥させることで、生成物５−ブロモ−３−シクロペンチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（６９．８ｍｇ、６７％の収率）が茶色固体として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ２６５／２６６［ＭＨ+］。
【０２８４】
工程５：３−（３−シクロペンチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
５−ブロモ−３−シクロペンチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３１．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、３−ホドロキシフェニルボロン酸（３３．１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）および４．２ｍｇ（５ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）の混合物をバイアルに入れ、０．８ｍｌのアセトニトリルおよび０．８ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で９００秒間照射した。生じた混合物を１５ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と３０ｍＬのジクロロメタンとの間で分配した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーで精製することで、３−（３−シクロペンチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノール（４．５ｍｇ、１４％の収率）がオフホワイト色の粉末として得られた。 1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ8.36 (s, 1H), 8.14 (d, 2Hz, 1H), 7.29 (t, 8Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.10 (d, 7Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.79 (dd, 2Hz, 8Hz, 1H), 2.1 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.8 (m, 4H), 1.37 (m, 1H).  MS: m/z 279.1 [MH+]. 
方法１０：
【化３１】
2008508303.tif 000055
【０２８５】
工程１：５−［３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（７２３−ｚｌ−２６ａ）および２−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−イミダゾリジン−２−オールの合成。
０．８ｍｌのアセトニトリル／０．８ｍｌの２Ｎ炭酸ナトリウム中の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（４３ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）、２−（３−ヨード−フェニル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（３４．７ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）および二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロルメタン付加物（３．１ｍｇ、４．２μｍｏｌ）を、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ内において１３５℃で２０分間照射した。粗反応混合物をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。その後、水相をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。その後、粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することで、５−［３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１１．２ｍｇ、ＭＳ：ＭＳ：ｍ／ｚ３６９．１［ＭＨ+］）および２−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−イミダゾリジン−２−オール（１３．２ｍｇ、ｍ／ｚ３８７．１［ＭＨ+］）が、どちらも緑色固体として得られた。
方法１１：
【化３２】
2008508303.tif 000056
【０２８６】
工程１：５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−２−モルホリン−４−イルメチル−フェノールの合成。
４００μｌのメタノール／トルエン（３：７）中の３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノール（１４．２ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、モルホリン（５．８７μｌ、０．０６７ｍｍｏｌ）およびパラホルムアルデヒド（２．７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で１時間、その後９０℃で３時間撹拌した。生じた淡茶色残渣をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することで、５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−２−モルホリン−４−イルメチル−フェノール（１１．７ｍｇ、６３％の収率）が白色固体として得られた。 1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ8.44 (d, 1.5Hz, 1H), 8.22 (d, 1.5Hz, 1H), 7.65 (s, 1H),  7.56 (dd, 1.5Hz, 7Hz, 1H), 7.37 (d, 8Hz, 1H), 7.32 (dt, 2Hz, 7.8Hz, 1H), 7.19 (dd, 2Hz, 8Hz, 1H), 7.17 (d, 1.5Hz, 1H), 7.14 (d, 8Hz, 1H), 7.06 (dt, 1Hz, 7Hz, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.85 (br s, 4H), 3.09 (br s, 4H).  MS: m/z 416.1 [MH+]. 
【０２８７】
方法１１によって調製した他の化合物：
【表９】
2008508303.tif 000057
方法１２：
【化３３】
2008508303.tif 000058
【０２８８】
工程１：メチル３−（３−（２−メトキシフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンズイミデートの合成。
ＨＣｌガスの泡を３．５ｍＬの無水ＭｅＯＨ中の３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ベンゾニトリル（２８７．８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の懸濁液に通した。その後、混合物を時間、室温で撹拌し、次いでエーテル（２０ｍＬ）を加えた。その後、沈殿物を濾過によって収集し、乾燥させることで、さらなる精製を行わずにメチル３−（３−（２−メトキシフェニル）−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ベンズイミデートが得られた。
【０２８９】
工程２：（１−（イミノ（３−（３−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）フェニル）メチル）ピペリジン−４−イル）メタノールの合成。
その後、イミデート沈殿物を合計容量１５．０ｍＬまでのＭｅＯＨに溶かし、次いで、１５個の異なるアミンとの反応のために、これを１５個の等しい部分（それぞれ約０．０４ｍｍｏｌ）に分割した。このイミデート溶液に４−ヒドロキシメチルピペリジン（９．９ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ、２当量）およびトリエチルアミン（６０μｌ、０．４３ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、混合物を室温で２日間撹拌した。２日後、スルホンアミドを加水分解するために１００μｌの水中のＮａＯＨ（２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）ををそれぞれの反応混合物に加えた。反応を０℃で終夜実施した。溶媒を除去したのち、粗生成物を逆相ＨＰＬＣで精製することで、５．０ｍｇの［４−（イミノ−｛３−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニル｝−メチル）−シクロヘキシル］−メタノールが白色固体として得られた。 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) ( 8.54 (d, 2Hz, 1H), 8.33 (d, 2.5Hz, 1H), 8.00 (dt, 1.5Hz, 9Hz, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.35 (t, 7.8Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.58 (m, 2H), 7.32 (dt, 1Hz, 8.3Hz, 1H), 7.12 (dd, 1Hz, 8Hz, 1H), 7.07 (dt, 1Hz, 7.3Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.48 (d, 6.5Hz, 2H), 3.38 (m, 4H), 1.78 (m, 1H), 1.42 (m, 4H).  MS: m/z 441.1 [MH+].  
【０２９０】
方法１２によって調製した他の化合物：
【表１０−１】
2008508303.tif 000059
【０２９１】
【表１０−２】
2008508303.tif 000060
方法１３：
【化３４】
2008508303.tif 000061
【０２９２】
工程１：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル（２４．９ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（７８ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（６４．２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の混合物をバイアルに入れ、２ｍｌのＤＭＦを加えた。混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で９００秒間、その後、１６５℃で６００秒間照射した。混合物を濃縮し、フラッシュヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することで、３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（２８ｍｇ、９５％の収率）が淡黄色固体として得られた。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ11.95 (brs, 1H), 8.92 (d, 2Hz, 1H), 8.59 (d, 2Hz, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7/59 (dd, 1.5Hz, 7.5Hz, 1H), 7.33 (t, 7.8Hz, 1H), 7.16 (d, 8Hz, 1H), 7.10 (t, 7.5Hz, 1H), 3.84 (s, 3H).  MS: m/z 293.1 [MH+]. 
方法１４：
【化３５】
2008508303.tif 000062
【０２９３】
工程１：［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノールの合成。
−７８℃で、ヘキサン中の１．５Ｍのｎ−ＢｕＬｉ溶液（１６０μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を、２ｍｌのＴＨＦ中の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（９１．５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）溶液に加えた。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、次いで３ｍＬのＴＨＦ中の３，４，５−トリメトキシ−ベンズアルデヒド（９４．２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−７８℃で１時間、その後０℃で３０分間撹拌し、ＭｅＯＨで反応停止させ、その後、濃縮した。粗残渣をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することで、［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノール（３２ｍｇ、３８％の収率）が白色固体として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ４２０．１［ＭＨ+］。
【０２９４】
方法１４によって調製した他の化合物：
【表１１】
2008508303.tif 000063
方法１５：
【化３６】
2008508303.tif 000064
【０２９５】
工程１：［２−（４−｛５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−イル｝−ピペラジン−１−イル）−エチル］−ジメチル−アミンの合成。
１．５ｍｌのジクロロエタン中の５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−カルボアルデヒド（２４ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）およびジメチル−（２−ピペラジン−１−イル−エチル）−アミン（１０μＬ、０．０６５ｍｍｏｌ）の溶液に、３μＬのＡｃＯＨを加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、トリオキシアセチル水素化ホウ素ナトリウム（２２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温でさらに２時間撹拌し、次いで、濃縮した。その後、生じた残渣を２ｍｌのＭｅＯＨに溶かし、これに１００μＬの５ＮのＮａＯＨを加え、混合物を６０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、酢酸エチル、次いで溶媒混合物（ＮＨ4ＯＨ／ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2／ＥｔＯＡｃ＝０．０５／１／４／４）を用いたフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することで、［２−（４−｛５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−３−イル｝−ピペラジン−１−イル）−エチル］−ジメチル−アミン（４．７０ｍｇ、２０％の収率）が白色固体として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ４７１［ＭＨ+］。
【０２９６】
方法１５によって調製した他の化合物：
【表１２】
2008508303.tif 000065
方法１６：
【化３７】
2008508303.tif 000066
【０２９７】
工程１：５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾールの合成。
マイクロ波バイアル内で、１：１のアセトニトリル／飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（合計２ｍＬ）中の５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−３−［２−（トルエン−４−スルホニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（５０．４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、５−ブロモ２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（４６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（３．７ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルにキャップを被せ、Ｎ2を流し、真空下で排気し、マイクロ波中において１５５℃で１８００秒間撹拌した。生成物を酢酸エチル中に抽出し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させた。溶液を濾過し、真空下で濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製することで、５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾールがベージュ色固体として得られた（１０．１ｍｇ、２８％の収率ｍ／ｅ３５５（Ｍ＋Ｈ+）。
中間体の合成：
５−ブロモ−２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾールの合成
【化３８】
2008508303.tif 000067
【０２９８】
１０ｍＬの水中の４−ブロモ−ベンゼン−１，２−ジアミンのジ−ＨＣｌ塩（１ｇ、３．８ｍｍｏｌ）およびイソブチルアルデヒド（０．７１ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１５時間撹拌した。溶媒を除去することで、粗５−ブロモ−２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾールが暗褐色固体として得られ、これを、さらなる精製を行わずに直接使用した。ＭＳ：ｍ／ｅ２３９．０／２４１．０［ＭＨ+］。
５−ブロモ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾールの合成
【化３９】
2008508303.tif 000068
【０２９９】
１０ｍＬの水中の４−ブロモ−ベンゼン−１，２−ジアミンのジ−ＨＣｌ塩（２ｇ、３．８ｍｍｏｌ）および酢酸（０．８７ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１５時間加熱した。溶媒を除去し、粗５−ブロモ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾールが暗褐色固体として得られ、これを、さらなる精製を行わずに直接使用した。ＭＳ：ｍ／ｅ２３９．０／２４１．０［ＭＨ+］。
【０３００】
方法１６によって調製した他の化合物：
【表１３】
2008508303.tif 000069
方法１７：
【化４０】
2008508303.tif 000070
【０３０１】
工程１：Ｎ−（５−ブロモ−３−ヨード−ピリジン−２−イル）−アセトアミドの合成。
ＤＭＦ（１５０ｍｌ）中の２−アミノ−５−ブロモピリジン（１２．７ｇ、７３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ素（１４．９ｇ、５８．７ｍｍｏｌ）および過ヨウ素酸ナトリウム（６．３ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を９０℃で２０時間撹拌し、その後、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出液を１Ｍのチオ硫酸ナトリウム水溶液で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルパッド濾過した。溶媒を蒸発させることで、１６．５ｇの茶色固体が得られた。固体をＴＨＦ（１５０ｍｌ）に溶かし、０℃まで冷却した。ピリジン（６．７ｍｌ、７１．７ｍｍｏｌ）を加え、次いで塩化アセチル（５．１ｍｌ、７１．７ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で２０時間、その後６０℃で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を水（２００ｍｌ）とジクロロメタン（２５０ｍｌ）との間で分割した。水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過して除去した。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロモトグラフィーによる精製を行うことで、表題化合物がオレンジ色固体として得られた（７．７６ｇ、４１％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ10.17 (s, 1H), 8.55 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.54 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 2.01 (s, 3H); HPLC/MS m/z: 340.8, 342.8 [MH]+.ジアセチル化された物質も淡オレンジ色固体として単離された（７．０ｇ、３３％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ8.78 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.74 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 2.17 (s, 6H); HPLC/MS m/z: 402.8, 404.8 [MNa]+.
【０３０２】
ジアセチル化された物質（７ｇ、１８．２７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１８０ｍｌ）に溶かし、ＰＳ−トリスアミン（２６ｇ、３．５３ｍｍｏｌ／ｇの負荷、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で１７時間処理した。樹脂を濾過して除去し、ジクロロメタンで洗浄し、溶媒を蒸発させることで、１０％の２−アミノ−３−ヨード−５−ブロモピリジンが混入した５．９５ｇの表題化合物が得られた。
【０３０３】
工程２：Ｎ−（５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピリジン−２−イル）−アセトアミドの合成。
ジクロロメタン（９０ｍｌ）中のＮ−（５−ブロモ−３−ヨード−ピリジン−２−イル）−アセトアミド（６．４２ｇ、１８．８３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリエチルアミン（３．１５ｍｌ、２２．６ｍｍｏｌ）を加え、その後、混合物を０℃まで冷却し、ジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（６６ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（Ｉ）（３６ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を逐次的に加えた。最後にトリメチルシリルアセチレン（２．９３ｍｌ、２０．７１ｍｍｏｌ）を滴下し、氷浴を取り外した。室温で１７時間撹拌したのち、粗混合物をシリカゲルに直接吸着させた。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、表題化合物が淡黄色固体として得られた（４．７５ｇ、８１％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ9.99 (s, 1H), 8.31 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 1.82 (s, 3H), 0.00 (s, 9H); HPLC/MS m/z: 311, 313 [MH]+.
【０３０４】
工程３：５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
ＴＨＦ（９０ｍｌ）中のＮ−（５−ブロモ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピリジン−２−イル）−アセトアミド（４．７５ｇ、１５．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中のフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（３０．５ｍｌ、３０．５ｍｍｏｌ）１Ｍ溶液を滴下した。１５時間還流しながら撹拌したのち、反応混合物を真空中で濃縮し、水を加えた。水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた抽出液をシリカゲルに直接吸着させた。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロモトグラフィーによる精製を行うことで、２．２９ｇのベージュ色固体が得られた。酢酸エチル／ヘキサンからの再結晶化により表題化合物が淡ベージュ色フレークとして得られた（１．３３ｇ）。濾液を酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上でさらに精製することで、表題化合物がさらに結晶性粉末として得られ（６７５ｍｇ）、合わせた収量は２．０１ｇ；６７％であった。1H NMR (DMSO-d6):δ11.89 (s, 1H), 8.24 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.17 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.53 (t, J= 3.0 Hz, 1H), 6.42 (dd, J= 1.0, 3.0 Hz, 1H); HPLC/MS m/z: 197 [MH]+.
【０３０５】
工程４：５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
アセトン（１０ｍｌ）中の５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（３７７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を１回で加えた。反応混合物を室温で４５分間撹拌した。生じた沈殿物を濾過して取り出し、必要最低限量のアセトンで洗浄し、真空中で乾燥させることで、表題化合物がクリーム色固体として得られた（３２９ｍｇ、６７％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ12.36 (s, 1H), 8.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 2.5 Hz, 1H); HPLC/MS m/z: 323.  
方法１８：
【化４１】
2008508303.tif 000071
【０３０６】
工程１：４−［３−（２−エチル−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−２−（４−ヒドロキシ−メチル−ピペリジン−１−イルメチル）−フェノールの合成。
５９．８ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）の４−［３−（２−エチル−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールを、０．６ｍｌのメタノールおよび２．４ｍｌのトルエンの混合物に溶かした。１１．４ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のパラホルムアルデヒドおよび３２．３ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の４−ピペリジンメタノールを加え、混合物を９０℃まで２０時間加熱した。
【０３０７】
混合物を酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液との間で分配した。水層を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を質量誘発逆相ＨＰＬＣによって精製することで、２ｍｇ（４μｍｏｌ、２％の収率）の４−［３−（２−エチル−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−２−（４−ヒドロキシメチル−ピペリジン−１−イルメチル）−フェノールがベージュ色固体として得られた。 1H-NMR  (d4-methanol)δ: 8.50 (m, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.90 (d, J= 2 Hz, 1H),  7.52 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.38 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.32-7.34 (m, 2H), 7.26 (t, J= 7.3 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H), 3.44 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 3.38 (d, J= 12.2 Hz, 2H), 2.80 (t, J= 11.2 Hz, 2H), 2.68 (q, J= 7.3 Hz, 2H), 1.91 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.08 (t, J= 7.8 Hz, 3H). MS: m/z 442 [MH+].
方法１９：
【化４２】
2008508303.tif 000072
【０３０８】
４−［３−（２−エチル−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−２−オールの合成。
２６ｍｇ（８２μｍｏｌ）の３−（２−エチル−フェニル）−５−（２−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンを、３ｍｌの１，４−ジオキサン、１．５Ｌｌの水、および０．５ｍＬの濃塩酸水溶液の混合物に溶かした。溶液を室温で１６時間、その後１００℃で３時間撹拌した。
【０３０９】
冷却後、混合物を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。水層を酢酸エチルで２回抽出し、次いで合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させることで、２５ｍｇ（７９μｍｏｌ、９６％の収率）の４−［３−（２−エチル−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ピリジン−２−オールが得られた。 1H-NMR (d4-methanol)δ: 8.52 (s, 1H), 7.97 (d, J= 2 Hz, 1H),  7.44 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.32 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.25-7.28 (m, 2H), 7.18-7.22 (m, 1H), 6.69-6.71 (m, 2H), 2.59-2.63 (m, 2H), 1.02 (m, 3H). MS: m/z 316 [MH+].
【表１４】
2008508303.tif 000073
方法２０：
【化４３】
2008508303.tif 000074
【０３１０】
工程１：トルエン−４−スルホン酸４−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニルエステルの合成。
２．８２ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）の４−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−フェノールおよび３．１０ｇの塩化ｐａｒａ−トルエンスルホニルを、４５℃で４００ｍｌのトルエンに分散させた。４５ｍｌの５０％ＫＯＨ水溶液および１．５ｍｌの４０％テトラ−ｎ−ブチル水酸化アンモニウム水溶液を加え、生じた混合物を周囲温度で６時間激しく撹拌した。生じた混合物を１００ｍｌの飽和臭化ナトリウム水溶液で希釈し、相を分離し、水層をトルエンで３回抽出した。合わせた有機相を２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を１０％ｖ／ｖのトルエンを含むエタノールから結晶化させることで、３．２２ｇ（５．２９ｍｍｏｌ、５５％の収率）のトルエン−４−スルホン酸４−［５−ブロモ−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニルエステルがアイボリー色針状結晶として得られた。
【０３１１】
１．５０ｇ（２．５１ｍｍｏｌ）のこの物質、１．３０ｍｇのビス（ピナコラート）ジボロン、６８０ｍｇの無水酢酸ナトリウム、および１００ｍｇの二塩化［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物をＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れ、バイアルに窒素を流した。１５ｍｌの無水ＤＭＦを加え、混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応器内において１３０℃で１時間照射した。その後、混合物を減圧下、６５℃で蒸発させ、生じた残渣をエーテルと飽和臭化ナトリウム水溶液との間で分配した。水層をエーテルで３回抽出し、有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライトで濾過した。濾液を蒸発させ、真空下で乾燥させた。
【０３１２】
残渣を１５０ｍｌのエーテルに再度溶かし、生じた懸濁液を８０ｍｌの飽和臭化ナトリウム水溶液で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。ベージュ色懸濁液が得られるまで残渣を２００ｍｌのヘキサンと共に撹拌した。不溶性残渣を濾過して取り出し、真空中で乾燥させることで、１．００ｇ（１．５５ｍｍｏｌ、６２％）のトルエン−４−スルホン酸４−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニルエステルがベージュ色粉末として得られた。 1H-NMR (d4-methanol):δ9.19 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.95 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.57 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 8.57 (s, 1H), 8.26 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 8.16 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.96 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 7.88 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.64 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 1.89 (s, 12H).  
【０３１３】
工程２：４−［５−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェノールの合成。
５０ｍｇ（８０μｍｏｌ）のトルエン−４−スルホン酸４−［５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニルエステルおよび７ｍｇの二塩化［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物をＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れた。１ｍｌのアセトニトリル、１ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液および１６μｌの２−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾールを加え、生じた混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応器内において１６５℃で２０分間照射した。生じた混合物を２ｍｌのＤＭＳＯおよび１ｍｌのメタノールで希釈し、次いで、硫酸ナトリウムおよび０．４５μｍのＰＴＦＥシリンジフィルターで濾過した。濾液を質量誘発逆相ＨＰＬＣにより直接精製することで、１２ｍｇ（４１μｍｏｌ、５２％の収率）の４−［５−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェノールが無色固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO):δ11.97 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.53 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.40 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.77 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.86 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H); MS: m/z 291 [MH+].
【０３１４】
方法２０によって調製した他の化合物：
【表１５】
2008508303.tif 000075
方法２１：
【化４４】
2008508303.tif 000076
【０３１５】
工程１：５−ブロモ−３−ヨード−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
２．３０ｇ（１１．６７ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−ヨード−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンを窒素下で９０ｍｌの無水ＴＨＦに溶かした。過剰の水素化ナトリウムを室温で加え、次いで、３ｍｌの塩化トリ−イソプロピルシリルを加えた。反応混合物を周囲温度で４時間撹拌した。
【０３１６】
混合物を酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液との間で分配した。水相を酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗物質をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトルグラフィーによって精製することで、３．４９３ｇ（７．２３５ｍｍｏｌ、６２％の収率）の−ブロモ−３−ヨード−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが結晶性固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO):δ8.34 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.88 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 1.86 (m, 3H), 1.05 (d, J= 7.8 Hz, 18H).
【０３１７】
工程２：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
１．０１ｇ（２．１０ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−ヨード−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、３３６ｍｇの２−メトキシフェニルボロン酸、および７５ｍｇの二塩化（１，１’−ビス（ジフェニル−ホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物をＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れ、１５ｍｌのアセトニトリル、５ｍｌのトルエン、および７ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の混合物に溶かした。混合物を６５℃まで４時間加熱し、その後、室温まで冷ました。粗生成物をジクロロメタンと水との間で分配し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。その後、粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトルグラフィーによって精製することで、７０８ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ、７３％）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが黄色油として得られた（分離不能な混合物として約２０％の残留出発物質を含む）。1H-NMR (d6-DMSO):δ8.33 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.15 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.55 (dd, J=1.3 Hz, 7.3 Hz, 1H), 7.33 (ddd, J= 1.9 Hz, 7.3 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 1.0 Hz, 8.3 Hz 1H), 7.06 (dt, J= 1.0 Hz, 7.3 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 1.88 (m, 3H), 1.10 (d, 18H).
【０３１８】
工程３：［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−メチル−フェニル−アミンの合成。
３０ｍｇのナトリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドおよび１２ｍｇのビス（ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）パラジウム（０）をＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れ、バイアルに窒素を流した。１ｍｌの無水１，４−ジオキサン中の１００ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンおよび３５μｌのＮ−メチルアニリンを加え、生じた混合物を１３０℃まで１５時間加熱した。その後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、０．４ｍｌのＴＨＦ中に１Ｍのフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム溶液を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。２ｍｌのメタノールおよびナトリウムをロードしたａｍｂｅｒｌｙｓｔの強酸性イオン交換樹脂を加えた。室温で２時間振盪したのち、粗物質をシリカゲルに直接吸着させ、ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトルグラフィーによって精製することで、４２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ；６４％の収率）の［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−メチル−フェニル−アミンが茶色残渣として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO):δ11.88 (s, 1H), 8.11 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.48 (dd, J= 1.5 Hz, 7.3 Hz, 1H), 7.26 (ddd, J= 1.5 Hz, 8.3 Hz, 1H), 7.16 (t, J= 7.9 Hz, 2H), 7.08 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.00 (t(d), J= 0.9 Hz, 8.3 Hz, 1H), 6.72-6.68 (m, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.29 (s, 3H); MS: m/z 330 [MH+].
【０３１９】
方法２１によって調製した他の例：
【表１６】
2008508303.tif 000077
方法２２：
【化４５】
2008508303.tif 000078
【０３２０】
工程１：５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
窒素下で、７５５ｍｇ（２．４９ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンを３０ｍｌの無水ＴＨＦに溶かした。２００ｍｇの水素化ナトリウムを加え、生じた混合物を周囲温度で４時間撹拌した。０．５ｍｌの塩化（２−メトキシ−エトキシ）メチルを加え、生じた混合物を室温で７２時間撹拌した。０．７５ｍｌの塩化（２−メトキシ−エトキシ）メチルおよび過剰の水素化ナトリウムを加え、反応混合物を周囲温度でさらに４時間撹拌した。２５０ｍｇのヨウ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムを加え、反応混合物を２時間、室温で撹拌した。その後、メタノールを加えることによって反応を反応停止させ、飽和塩化アンモニウム水溶液とジクロロメタンとの間で分配した。水相をピリジンペタンで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。その後、粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のクロマトルグラフィーによって精製することで、９２２ｍｇ（２．３６ｍｍｏｌ、９５％の収率）の５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが黄色油として得られた。1H-NMR (d6-DMSO):δ8.40 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.17 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.52 (dd, J=1.3 Hz, 7.3 Hz, 1H), 7.34 (dd, J= 1.4 Hz, 8.7 Hz, 1H), 7.15 (d, J= 8.2 Hz 1H), 7.06 (t, J= 7.3 Hz, 1H), 5.71 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3,57 (m, 2H), 3.41 (m, 2H), 3.20 (s, 3H); MS: m/z 315, 317 [MH+-MeOC2H4O].  
【０３２１】
工程２：１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−５−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
１８０ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、１０ｍｇの塩化ビス（ベンゾニトリル）パラジウム（ＩＩ）、１１ｍｇの塩化２，５−ビス−（２，６−ジ−イソプロピルフェニル）イミダゾリウム、および６５ｍｇのカリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドをＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れた。バイアルに窒素を流し、３ｍｌの無水１，４−ジオキサンおよび７０μｌのモルホリンを加えた。生じた混合物を１２０℃まで１４時間加熱した。混合物を室温まで冷まし、シリカゲルに吸着させ、ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトルグラフィーによって精製することで、６５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ、３３％の収率）の１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−５−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが無色油として得られた。1H-NMR (CDCl3):δ8.17 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.54 (dd, J= 1.6 Hz, 7.4 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J= 1.6 Hz, 7.4 Hz, 9 Hz, 1H), 7.07 (ddd, J=  1.1 Hz, 7.4 Hz, 7.4 Hz, 1H), 7.03 (d(m), J= 8.3 Hz, 1H), 5.71 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.68 (m, 2H), 3.49 (m, 2H), 3.35 (s, 3H); MS: m/z 398 [MH+].
【０３２２】
工程３：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成
６５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）の１−（２−メトキシ−エトキシメチル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−５−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンを、３ｍｌのエタノールおよび２ｍｌの水の混合物に溶かした。５００μｌのギ酸を加え、混合物を６５℃まで１６時間加熱し、その後、マイクロ波中において１５０℃で４０分間照射した。炭酸水素ナトリウムおよび水を加えることによって生じた混合物を中和し、粗生成物を酢酸エチルとブラインとの間で分配した。水相を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させることで、４７ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ、９４％の収率）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが得られた。 1H-NMR (d6-DMSO):δ11.58 (s, 1H), 8.11 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.51 (dd, J= 1.4 Hz, 7.3 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.27 (ddd, J= 1.5 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.02 (dd(d), J= 1.5 Hz, 7.3 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.77 (m, 4H), 3.07 (m, 4H); MS: m/z 310 [MH+].
方法２３：
【化４６】
2008508303.tif 000079
【０３２３】
工程１：５−ヨード−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
３３７．３ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、１１．３ｍｇ（５９μｍｏｌ）のヨウ化銅（Ｉ）、および１８５ｍｇ（１．２４ｍｍｏｌ）のヨウ化ナトリウムをＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れ、バイアルに窒素を流した。６ｍｌの無水トルエンおよび１４μｌ（０．１３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンを加え、生じた懸濁液を１２０℃まで１６時間加熱した。
【０３２４】
混合物を室温まで冷まし、酢酸エチルと水との間で分配した。水層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、２６１ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ、７０％の収率）の５−ヨード−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが無色固体として得られた。
【０３２５】
工程２：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−ピロール−１−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
４０ｍｇ（７９μｍｏｌ）の５−ヨード−３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、３０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）の無水リン酸カリウムおよび１．２ｍｇ（６μｍｏｌ）のヨウ化銅（Ｉ）をＳｍｉｔｈ（登録商標）バイアルに入れた。バイアルに窒素を流し、１ｍｌの無水トルエン、６．７μｌ（９５μｍｏｌ）のピロール、および２μｌ（１０μｍｏｌ）のｒａｃ−トランス−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−シクロヘキサンジアミンを加えた。生じた懸濁液を１２０℃まで２２時間加熱した。１．２ｍｇ（６μｍｏｌ）のヨウ化銅（Ｉ）および２μｌ（１０μｍｏｌ）のｒａｃ−トランス−Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−シクロヘキサンジアミンを加え、反応混合物をさらに２０時間加熱した。
【０３２６】
生じた混合物を水と酢酸エチルとの間で分配し、相を分離し、水層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗物質をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、２７．９ｍｇ（６３μｍｏｌ、８０％の収率）の３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−５−ピロール−１−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンがベージュ色固体として得られた。
【０３２７】
この物質をエタノールに溶かし、４００μｌの５０％水酸化カリウム水溶液を加えた。溶液をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃まで２０分間加熱した。粗生成物を水と酢酸エチルとの間で分配し、相を分離し、水層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させることで、２０ｍｇ（７０μｍｏｌ、８７％の収率）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−ピロール−１−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンがベージュ色固体として得られた。 1H-NMR (d6-CDCl3):δ10.48 (s) [1H], 8.49 (s) [1H],  8.09 (d) [1H], 7.73 (s) [1H], 7.56 (d) [1H], 7.34 (t) [1H], 7.05-7.10 (m) [4H], 7.40 (d) [2H], 3.81 (s) [3H]. MS: m/z 290 (88%) [MH+].
方法２４：
【化４７】
2008508303.tif 000080
【０３２８】
工程１：２−（５−ブロモ−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）チアゾールの合成。
無水ジオキサン中の５−ブロモ−３−ヨード−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１．６６ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）、２−トリブチルスタンナニル−チオゾール（１．３ｇ、１．２１ｍＬ、３．４８ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１１６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物を、還流条件下、窒素雰囲気下で３日間撹拌した。反応混合物を室温まで冷まし、活性炭で処理し、セライトで濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチル中で再結晶化させることで、２−（５−ブロモ−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）チアゾールの混合物が得られた（１．１１ｇ、７３％の収率）。ＭＳ：ｍ／ｚ４３４／４３６（Ｍ＋Ｈ+）。
【０３２９】
工程２：２−（５−（ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）チアゾールの合成。
２−（５−ブロモ−１−トシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）チアゾール（７５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、ピリジン−３−イルボロン酸（２７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物（６．９ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１ｍＬ）の混合物を、密封マイクロ波管中、１４０℃で３０分間撹拌した。その後、混合物を室温まで冷まし、酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、濃縮乾固させた。シリカゲルクロマトグラフィーを行うことで、２−（５−（ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）チアゾール（３６ｍｇ、７６％の収率）が白色固体として得られた。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ7.47 (m, 1H), 7.56 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.10 (m, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.55 (dd, J = 2.0, 5.0 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 2.5 Hz, 1H), (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.89 (m, 1H), 12.37 (s, 1H).  MS: m/z 279.0 (M+H+)
【０３３０】
方法２４によって調製した他の化合物：
【表１７】
2008508303.tif 000081
方法２５：
【化４８】
2008508303.tif 000082
【０３３１】
工程１：５−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（４０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）、３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−ボロン酸（１６ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（４ｍｇ、０．００４４ｍｍｏｌ）に、０．６ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。反応混合物を１：１のメタノール／ジクロロメタンで希釈し、濾過し、濾液をシリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、５−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンがベージュ色結晶として得られた（２０ｍｇ、７１％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ2.23 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 7.01 (dt, J =  1.0, 7.0 Hz, 1H), 7.11 (dd, J =  1.0, 8.0 Hz, 1H), 7.28 (dt, J = 1.5, 7.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 11.9 (s, 1H).  MS: m/z 320 (M+H+). 
【０３３２】
方法２５によって調製した他の化合物：
【表１８】
2008508303.tif 000083
方法２６：
【化４９】
2008508303.tif 000084
【０３３３】
工程１：３−（３−フラン−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中のトルエン−４−スルホン酸３−［３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステル（５０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ、方法６で調製）、フラン−３−ボロン酸（１１ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ｉｉ）（３ｍｇ、０．００４６ｍｍｏｌ）に、０．６ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。混合物をＤＭＦ（約５ｍＬ）で希釈し、シリンジフィルター（０．４５ミクロン）で濾過した。濾液を真空中で濃縮し、ＤＭＳＯに再度溶かした。Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによる精製を行うことで、３−（３−フラン−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールがオフホワイト色の固体として得られた（６ｍｇ、５６％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.70 (dd, J = 2.5, 8.0 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.5 (broad s, 1H), 11.8 (s, 1H).  MS: m/z 277 (M+H+). 
【０３３４】
方法２６によって調製した他の化合物：
【表１９−１】
2008508303.tif 000085
【０３３５】
【表１９−２】
2008508303.tif 000086
【０３３６】
【表１９−３】
2008508303.tif 000087
【０３３７】
【表１９−４】
2008508303.tif 000088
【０３３８】
【表１９−５】
2008508303.tif 000089
方法２７：
【化５０】
2008508303.tif 000090
【０３３９】
工程１：３−［３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中のトルエン−４−スルホン酸３−［３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステル（５０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）、３−フルオロ−４−ベンジルオキシフェニルボロン酸（２４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（３ｍｇ、０．００４６ｍｍｏｌ）に、０．６ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。水を加え、次いで飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液をｐＨ６まで加えた。水層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。粗有機物を濃縮し、４ｍＬの（１：１）ＥｔＯＨ／ＫＯＨ水溶液（５０重量％）に溶かした。混合物を１００℃で２１時間撹拌し、その後、水で希釈し、１ＮのＨＣｌ水溶液を用いてｐＨ４まで酸性化した。生じた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させた。灰色固体を１ＮのＨＣｌ水溶液（２ｍＬ）に懸濁させ、還流下で１７時間撹拌した。１ＮのＮａＯＨ水溶液をｐＨ４まで加え、混合物を真空中で濃縮し、ＭｅＯＨで希釈した。塩を濾過し、濾液をシリカゲルに吸着させた。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、３−［３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールが黄色固体として得られた（５ｍｇ、２０％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.75 (dd, J = 2.5, 7.5 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 9.0, 10.0 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 1.5, 8.5 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 1.5, 13.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.54 (s, 1H), 9.80 (broad s, 1H), 11.9 (s, 1H).  MS: m/e 321 (M+H+). 
方法２８：
【化５１】
2008508303.tif 000091
【０３４０】
工程１：１−｛２−ヒドロキシ−３−［５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−４−メトキシ−フェニル｝−エタノンの合成。
３−［３−（２，６−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノール（１２ｍｇ、０．０３４６ｍｍｏｌ）に、０．５ｍＬのＡｃＯＨ中３３重量％の臭素を加えた。混合物を７０℃で６時間撹拌し、その後、１．２ｍＬの５０重量％のＫＯＨ水溶液で処理し、さらに室温で３日間、その後８０℃で３時間撹拌し。１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて混合物をｐＨ４まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。抽出液を合わせ、シリカゲルに吸着させた。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、１−｛２−ヒドロキシ−３−［５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−４−メトキシ−フェニル｝−エタノンが白色固体として得られた（２．６ｍｇ、２０％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ2.65 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 6.72 (dd, J = 2.5, 8.5 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.99 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.49 (s, 1H), 11.9 (s, 1H), 13.0 (s, 1H).  MS: m/z 375 (M+H+). 
方法２９：
【化５２】
2008508303.tif 000092
【０３４１】
工程１：２−［５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ベンゼン−１，３−ジオールの合成。
ジクロロメタン（１ｍＬ）中の３−［３−（２，６−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノール（２３ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、−７８℃で、ジクロロメタン中の１Ｍの三臭化ホウ素溶液（０．２３ｍＬ、０．２３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を４時間かけて室温まで暖め、その後、水で反応停止させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を用いてｐＨ８まで中和した。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出し、抽出液を合わせ、シリカゲルに吸着させた。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、２−［５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ベンゼン−１，３−ジオールがベージュ色固体として得られた（１７ｍｇ、８１％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 2.5, 7.5 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.10 ( broad s, 2H), 9.49 (broad s, 1H), 11.7 (s, 1H).  MS: m/z 319 (M+H+). 
【０３４２】
方法３０：
【化５３】
2008508303.tif 000093
工程１：３−［３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールの合成。
ＥｔＯＨ中の１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−３−ジメチルアミノ−プロペノン（３０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）の懸濁液にヒドラジン（５ｕＬ、０．１２２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃で３時間撹拌し、その後、真空中で濃縮した。粗生成物に、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（１８ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ｉｉ）（４ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）、ならびに１ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で６００秒間実施した。反応混合物をメタノールで希釈し（約６ｍＬ）、濾過し、濾液をシリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することでベージュ色固体が得られ、これをさらにＨ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによって精製することで、３−［３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールが白色固体として得られた（９．６ｍｇ、３４％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.71 (dd, J = 2.5, 8.0 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (broad s, 1H), 7.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.53 (broad s, 1H), 9.51 ( broad s, 1H), 11.8 (broad s, 1H).  MS: m/z 277 (M+H+). 
【０３４３】
方法３０によって調製した他の化合物：
【表２０】
2008508303.tif 000094
方法３１：
【化５４】
2008508303.tif 000095
【０３４４】
工程１：３−（３−フェニルエチニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中のトルエン−４−スルホン酸３−［３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステル（６０ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、方法６に例示したように調製）の溶液に、窒素雰囲気下で、トリエチルアミン（１６ｕＬ、０．１１２ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．６ｍｇ、０．００３１５ｍｍｏｌ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ｉｉ）（０．９ｍｇ、０．００１２８ｍｍｏｌ）、およびフェニルアセチレン（１１ｕＬ、０．１０２ｍｍｏｌ）を次々に加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、その後、シリカゲルに直接吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、４６ｍｇのオフホワイト色の固体が得られ、これをさらに２ｍｌのＥｔＯＨおよび２ｍＬのＫＯＨ水溶液（５０重量％）に懸濁させた。反応混合物を８０℃で４時間撹拌し、その後、１ＮのＨＣｌ水溶液を用いてｐＨ４まで酸性化した。乳状溶液をＥｔＯＡｃで３回抽出し、抽出液を合わせ、シリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、３−（３−フェニルエチニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールがベージュ色固体として得られた（１２ｍｇ、４１％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.77 (dd, J = 2.5, 7.5 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.37-7.43 (m, 3H), 7.58 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 8.18 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 9.55 ( s, 1H), 12.2 (broad s, 1H).  MS: m/e 311 (M+H+).
方法３２：
【化５５】
2008508303.tif 000096
【０３４５】
工程１：３−［３−（２−ピリジン−２−イル−ビニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールの合成。
トルエン−４−スルホン酸３−［３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステル（５０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）、トリ−オルト−トリルホスフィン（１０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２ｍｇ、０．００７７ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）、トリエチルアミン（３２ｕＬ、０．２３２ｍｍｏｌ）、および２−ビニルピリジン（４２ｕＬ、０．３８８ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルに窒素を流し、反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で９００秒間実施した。水を加え、１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて混合物をｐＨ６まで中和し、その後、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。抽出液を合わせ、真空中で濃縮した。粗生成物を１ｍＬのＥｔＯＨおよび１ｍＬのＫＯＨ水溶液（５０重量％）で処理した。反応混合物を８０℃で１５時間撹拌した。１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて混合物をｐＨ７まで中和し、生じた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥させ、シリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、３−［３−（２−ピリジン−２−イル−ビニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールが黄色固体として得られた（１７ｍｇ、３５％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.78 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.15-7.20 (m, 2H), 7.26 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H ), 7.73 (dt, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 9.56 (s, 1H), 12.1 (s, 1H).  MS: m/z 314 (M+H+). 
【０３４６】
方法３２によって調製した他の化合物：
【表２１】
2008508303.tif 000097
方法３３：
【化５６】
2008508303.tif 000098
【０３４７】
工程１：３−［３−（２−ピリジン−２−イル−エチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールの合成。
０．９ｍｌのＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦの（１：１：１）混合物中の、３−［３−（２−ピリジン−２−イル−ビニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノール（１０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）および１０重量％のＰｄ／Ｃ（１．７ｍｇ、０．００１６ｍｍｏｌ）の懸濁液を、２日間、Ｈ2雰囲気下で撹拌した。混合物をシリカゲルに直接吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、３−［３−（２−ピリジン−２−イル−エチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールが黄色固体として得られた（６ｍｇ、６０％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ3.22 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.77 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.11 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.27 (m, 2H), 7.82 (m, 1H), 7.93 (d, J = 7.0 Hz, 1H ), 8.21 (s, 1H), 8.43 (m, 2H), 8.79 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.54 (broad s, 1H), 11.53 (s, 1H).  MS: m/z 316 (M+H+).
方法３４：
【化５７】
2008508303.tif 000099
【０３４８】
工程１：３−［３−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールの合成。
ＴＨＦ（２ｍＬ）中のトルエン−４−スルホン酸３−［３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステル（５０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ、方法６に例示したように調製）の溶液に、−９０℃、窒素雰囲気下で、ペンタン中のｔＢｕＬｉの溶液（１．７Ｍ、９０ｕＬ）を滴下した。５分間撹拌したのち、３−フルオロ−ベンズアルデヒド（４０ｕＬ、０．３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２時間かけて１０℃までゆっくりと暖め、その後、飽和塩化アンモニウム溶液で反応停止させ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。抽出液を合わせ、シリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、２６ｍｇのトルエン−４−スルホン酸３−［３−［（３−フルオロ−フェニル）−ヒドロキシ−メチル］−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステルが得られた。この物質を窒素雰囲気下でジクロロメタン（０．３ｍＬ）に溶かした。トリエチルシラン（２４ｕＬ、０．１４９ｍｍｏｌ）を加え、次いで三フッ化ホウ素エーテラート（７μＬ、０．１４９ｍｍｏｌ）を滴下した。１５時間撹拌したのち、反応を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応停止させ、ジクロロメタンで３回抽出した。抽出液を合わせ、真空下で濃縮した。粗生成物を２ｍＬのＥｔＯＨおよび２ｍＬのＫＯＨ水溶液（５０重量％）で処理した。反応混合物を７０℃で１時間撹拌した。１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて混合物をｐＨ４まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。抽出液を合わせ、シリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、３−［３−（３−フルオロ−ベンジル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールがベージュ色固体として得られた（８ｍｇ、６６％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ4.11 (s, 3H), 6.74 (dd, J = 2.5, 8.5 Hz, 1H), 6.97 (dt, J = 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.30 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.56 (broad s, 1H), 11.6 (s, 1H).  MS: m/z 319 (M+H+). 
【０３４９】
方法３４によって調製した他の化合物：
【表２２】
2008508303.tif 000100
方法３５：
【化５８】
2008508303.tif 000101
【０３５０】
工程１：３−（３−シクロヘキサ−１−エニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）の溶液にシクロヘキサノン（５２ｕＬ、１．０１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃で１６時間撹拌し、その後、真空中で濃縮した。残渣に、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（９１ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（１８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、および２ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で６００秒間実施した。反応混合物をメタノールで希釈し、濾過し、濾液をシリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、３−（３−シクロヘキサ−１−エニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールがオフホワイト色の固体として得られた（１２．６ｍｇ、１２％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ1.64 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 2.23 (m, 2H), 2.42 (m, 2H), 6.27 (m, 1H), 6.74 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.51 (broad s, 1H), 11.7 (s, 1H).  MS: m/z 291 (M+H+). 
【０３５１】
方法３５によって調製した他の化合物：
【表２３】
2008508303.tif 000102
方法３６：
【化５９】
2008508303.tif 000103
【０３５２】
工程１：３−（３−シクロヘキシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
メタノール（０．９ｍｌ）中の３−（３−シクロヘキサ−１−エニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノール（６．７ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）および１０重量％のＰｄ／Ｃ（３ｍｇ）の懸濁液を２４時間、Ｈ2雰囲気下で撹拌した。反応混合物をシリカプラグで濾過し、溶媒を蒸発させることで、３−（３−シクロヘキシル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールが白色固体として得られた（２．５ｍｇ、３７％の収率）。 1H NMR (500 MHz, MeOH-d4)δ1.35 (m, 1H), 1.54 (m, 4H), 1.80 (m, 1H), 1.88 (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 2.87 (m, 1H), 6.79 (dd, J = 2.5, 8.0 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.29 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.51 (broad s, 1H), 11.7 (s, 1H).  MS: m/e 293 (M+H+).
【０３５３】
方法３６によって調製した他の化合物：
【表２４】
2008508303.tif 000104
方法３７：
【化６０】
2008508303.tif 000105
【０３５４】
工程１：３−（３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールの合成。
トルエン−４−スルホン酸３−［３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェニルエステル（５０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（１．５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１６ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）に、窒素雰囲気下で、イソプロパノール（０．２ｍＬ）、ベンゼンチオール（８μＬ、０．０７７ｍｍｏｌ）、およびエチレングリコール（９ｕＬ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃で２４時間撹拌した。２ＭのＫＯＨ水溶液およびＭｅＯｈ（１ｍＬ）の（１：１）混合物を加え、反応混合物をさらに５０℃で３時間撹拌した。１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて混合物をｐＨ５まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。抽出液を合わせ、真空下で濃縮した。Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによる精製を行うことで、３−（３−フェニルスルファニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−フェノールが白色固体として得られた（４．３ｍｇ、１７％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.74 (dd, J = 2.5, 9.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.08 (m, 4H), 7.23 (m, 3H), 7.85 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.55 (broad s, 1H), 12.4 ( broad s, 1H).  MS: m/z 319 (M+H+). 
【０３５５】
方法３７によって調製した他の例：
【表２５】
2008508303.tif 000106
方法３８：
【化６１】
2008508303.tif 000107
【０３５６】
工程１：（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−フェニル−メタノンの合成。
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＡｌＣｌ3（３３８ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）を加えた。４５分間撹拌したのち、塩化ベンゾイル（０．３ｍＬ、２．５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間撹拌し、その後、０℃のＭｅＯＨで反応停止させた。混合物を真空下で濃縮し、１ＮのＮａＯＨ水溶液を加えることによってｐＨを４に変え、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、シリカゲルに吸着させた。ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−フェニル−メタノンが白色固体として得られた（６１ｍｇ、４０％の収率）。
【０３５７】
工程２：［５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニル−メタノンの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−フェニル−メタノン（５０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）、３−ヒドロキシフェニルボロン酸（３０ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）、およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（６ｍｇ、０．００８３ｍｍｏｌ）に、１ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で１２００秒間実施した。混合物をＤＭＦ（約５ｍＬ）で希釈し、シリカプラグで濾過した。濾液をシリカゲルに吸着させた。ＭｅＯＨ／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、［５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニル−メタノンが黄色固体として得られた（３７ｍｇ、７１％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.80 (dd, J = 2.0, 7.5 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 8.14 (s, 1H), 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.65 (broad s, 1H).  MS: m/z 315 (M+H+).
方法３９：
【化６２】
2008508303.tif 000108
【０３５８】
工程１：３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−ピリジン−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の５−ブロモ−３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３０ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）、３−ピリジルボロン酸ピナコールエステル（３０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）、およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（４ｍｇ、０．００５７ｍｍｏｌ）に、１ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で９００秒間実施した。混合物をＤＭＦ（約５ｍＬ）で希釈し、シリカプラグで濾過し、溶媒を蒸発させた。Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによる精製を行うことで、３−（２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−ピリジン−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンのギ酸塩が白色固体として得られた（４．５ｍｇ、１３％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.61 (broad s, 1H), 6.73 (broad s, 1H), 7.53 (dd, J = 5.5, 7.0 Hz, 1H), 7.71 (broad s, 1H), 7.94 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.18 (broad s, 1H), 8.60 (m, 2H), 8.68 (broad s, 1H), 8.98 (broad s, 1H), 12.0 (broad s, 1H), 12.7 (broad s, 1H).  MS: m/z 262 (M+H+).
【０３５９】
方法３９によって調製した他の化合物：
【表２６】
2008508303.tif 000109
方法４０：
【化６３】
2008508303.tif 000110
【０３６０】
工程１：３−（２−エチル−フェニル）−５−ピリジン−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の５−ブロモ−３−ヨード−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１５ｍｇ、０．０３１４ｍｍｏｌ、方法１に記載のように調製）、２−エチルフェニルボロン酸（５．２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）、およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（１．３ｍｇ、０．０００２ｍｍｏｌ）に、０．５ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応混合物を６時間撹拌し、その後、３−ピリジルボロン酸ピナコールエステル（８．４ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）（１．３ｍｇ、０．０００２ｍｍｏｌ）を加え、反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で９００秒間実施した。混合物をＤＭＦ（２ｍＬ）で希釈し、シリカプラグで濾過し、溶媒を蒸発させた。Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによる精製を行うことで、３−（２−エチル−フェニル）−５−ピリジン−３−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが固体として得られた（５．８ｍｇ、６１％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 2.66 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 7.27 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.45 (dd, J = 5.5, 8.5 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 1.5, 8.0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 12.0 (s, 1H).  MS: m/z 300 (M+H+).
【０３６１】
方法４０によって調製した他の化合物：
【表２７−１】
2008508303.tif 000111
【０３６２】
【表２７−２】
2008508303.tif 000112
【０３６３】
【表２７−３】
2008508303.tif 000113
【０３６４】
１，３−ジブロモ−２−（２−ブロモ−エトキシ）−ベンゼンの合成。
【化６４】
2008508303.tif 000114
１，２−ジブロモエタン（５．０ｍｌ、５８ｍｍｏｌ）を、４５ｍｌの水中の水酸化ナトリウム（２．５ｇ、６３ｍｍｏｌ）および２，６−ジブロモフェノール（１４．５ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を還流下で２０時間撹拌し、その後、エーテルで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮することで、無色油が得られた。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーを行うことで、１，３−ジブロモ−２−（２−ブロモ−エトキシ）−ベンゼン（１１．５５ｇ、５７％の収率）が無色油として得られた。
【０３６５】
７−ブロモ−２，３−ジヒドロ−ベンゾフランの合成。
【化６５】
2008508303.tif 000115
２．５Ｍのｎ−ＢｕＬｉ（１３．０ｍｌ、３２．５ｍｍｏｌ）の溶液を、１１５ｍｌのＴＨＦおよび２８ｍｌのヘキサン中の１，３−ジブロモ−２−（２−ブロモ−エトキシ）−ベンゼン（１１．５、３２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、３０分間かけて加えた。反応を−７８℃で３０分間持続させ、その後、０℃まで暖めた。混合物を水（１００ｍｌ）中に注ぎ、水相をエーテルで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮することで、淡黄色油が得られた。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーを行うことで、７−ブロモ−２，３−ジヒドロ−ベンゾフランが無色の針として得られた（５．００ｇ、７８％）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ7.27(dd, 1Hz, 8Hz, 1H), 7.20 (dd, 1Hz, 7.5Hz, 1H), 6.75 (t, 7.8Hz, 1H), 4.59 (t, 9Hz, 2H), 3.28 (t, 8.8Hz, 2H).  
【０３６６】
２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−７−ブロン酸の合成。
【化６６】
2008508303.tif 000116
ペンタン中の１．７Ｍのｔ−ＢｕＬｉ（６．５ｍｌ、１１．１ｍｍｏｌ）の溶液を、１５ｍｌのＴＨＦ中の７−ブロモ−２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン（２．００ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、１５分間かけて加えた。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、その後、トリメチルボロエート（１．３４ｍｌ、１２．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をゆっくりと０℃まで暖め、水（１００ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水相をエーテルで抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮することで、白色の粘性残渣が得られた。その後、粗生成物を水、次いでヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃで洗浄することで、２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−７−ブロン酸（１．４８ｇ、９０％の収率）が白色固体として得られた。
【０３６７】
同様に、ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−ボロン酸および２，２−ジフルオロ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−４−ボロン酸を調製した。
方法４１：
【化６７】
2008508303.tif 000117
【０３６８】
工程１：２−ブロモ−１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−エタノンの合成。
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＡｌＣｌ3（３３８ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌したのち、塩化ブロモアセチル（０．２１ｍＬ、２．５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２時間撹拌し、その後、０℃のＭｅＯＨで反応停止させた。混合物を真空中で濃縮し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えることによってｐＨを７に変え、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、シリカゲルプラグで濾過した。溶媒を蒸発乾固することで、２−ブロモ−１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−エタノンが淡黄色固体として得られた（１６０ｍｇ、定量的）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ4.70 (s, 2H), 8.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 12.9 (s, 1H). MS: m/z 316 (M+H+).
【０３６９】
工程２：４−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−チアゾール−２−イルアミンの合成。
ＥｔＯＨ（１ｍＬ）中の、淡黄色固体としての２−ブロモ−１−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−エタノン（８０ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）およびチオ尿素（２１ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）の溶液を、８０℃で１．５時間撹拌した。生じた沈殿物を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空中で乾燥させることで、４−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−チアゾール−２−イルアミンの臭化水素酸塩がベージュ色固体として得られた（６６ｍｇ、７０％の収率）。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ7.11 (s, 1H), 8.00 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.39 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 12.4 (s, 1H). MS: m/z 295 (M+H+).
【０３７０】
工程３：４−［５−（１Ｈ−インドール−５−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−チアゾール−２−イルアミンの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の、４−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−チアゾール−２−イルアミンの臭化水素酸塩（２０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）、５−インドリルボロン酸（１３ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン複合体（１：１）（２ｍｇ、０．００２６ｍｍｏｌ）に、０．５ｍＬのアセトニトリルと２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液との１：１混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で１２００秒間実施した。混合物をＤＭＦ（３ｍＬ）で希釈し、シリカプラグで濾過し、溶媒を蒸発させた。Ｈ2Ｏおよびアセトニトリルの勾配（修飾剤として０．１％ギ酸を含む）を用いた逆相クロマトグラフィーによる精製を行うことで、４−［５−（１Ｈ−インドール−５−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−チアゾール−２−イルアミンのギ酸塩がオフホワイト色の固体として得られた（８．５ｍｇ、４２％の収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ6.44 (m, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.91 (s, 2H), 7.32 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.67 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 11.0 (s, 1H), 11.7 (s, 1H).  MS: m/z 332 (M+H+).
方法４２：
【化６８】
2008508303.tif 000118
【０３７１】
工程１：（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−メタノンの合成。
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の５−ブロモ−２−フルオロピリジン（５．６ｍｌ、５４．２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃、窒素下で、ＴＨＦ（２７ｍｌ）中のイソプロピルマグネシウムクロリドの２Ｍ溶液を１０分間かけて滴下した。氷浴を取り除き、反応混合物を室温で２時間撹拌した。生じたスラリーを、ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の塩酸２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−ニコチンアミド（３．０ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の溶液に、室温、窒素下で、３０分間かけてカニューレによって滴下した。３時間撹拌したのち、反応に飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）を０℃で加えることによって反応停止させ、混合物を室温でさらに２０分間撹拌した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、その後、濾過し、濃縮した。メタノール（約６０ｍｌ）から結晶化させることで、表題化合物が暗黄色結晶として得られた（１．４８ｇ、４９％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ8.49 (s, 1H), 8.34 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.23 (dt, J= 2.5, 8.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.74 (broad s, 2H), 7.36 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H); MS: m/z 295.9, 297.9 [MH]+.
【０３７２】
工程２：５−ブロモ−３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−ピリジン−２−イルアミンの合成。
ＴＨＦ（４ｍｌ）中の塩化（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウム（１．１６ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０℃、窒素下で、ＴＨＦ中のリチウムビス（トリメチルシリル）アミドの１Ｍ溶液（３．４ｍｌ、３．４ｍｍｏｌ）を滴下した。生じた暗赤色混合物を０℃で１０分間撹拌して、イリド試薬を作製した。ＴＨＦ（６ｍｌ）中の（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−メタノン（４００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（１．３５ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリドの１Ｍ溶液を０℃、窒素下で滴下した。反応混合物を０℃で５分間撹拌し、その後、イリド試薬を５分間で滴下した。反応混合物を４５分間で室温まで暖め、その後、０℃の飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）で反応停止させた。混合物を１．５時間、室温で激しく撹拌した。水を加え、次いで酢酸エチルで抽出する（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、シリカゲルに直接吸着させた。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、表題化合物（単一の異性体）が暗色泡沫として得られた（２２０ｍｇ、５０％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ8.15 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.00 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.78 (dt, J= 2.5, 8.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.10 (dd, J= 3.0, 8.5 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.73 (broad s, 2H), 3.80 (s, 3H); MS: m/z 324, 326 [MH]+.
【０３７３】
工程３：５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−オールの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の１，４−ジオキサン（３ｍｌ）中の５−ブロモ−３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−ピリジン−２−イルアミン（２２０ｍｇ、０．６７８ｍｍｏｌ）の溶液に、０．３ｍｌの７０％過塩素酸水溶液を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波内において１５０℃で３００秒間照射した。反応混合物を水で希釈し、水酸化ナトリウム水溶液を加えることによってｐＨ７まで中和した。生じた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥させることで、表題化合物がベージュ色固体として得られた（１５２ｍｇ、７７％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ12.1 (broad s, 1H), 11.7 (broad s, 1H), 8.32 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.30 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.83 (dd, J= 2.5, 11.5 Hz, 1H), 7.82 (s, 2H), 7.67 (s, 1H), 6.43 (d, J= 11.5 Hz, 1H); MS: m/z 290 [MH]+.
【０３７４】
工程４：５−［５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ピリジン−２−オールの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−オール、３，４−ジメトキシフェニルボロン酸（１．３当量）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ｉｉ）（６ｍｏｌ％）に、アセトニトリル、水、および２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液の３：２：１の混合物を加え、出発物質の全体濃度０．１０Ｍを得た。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。水を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、５−［５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ピリジン−２−オールがオフホワイト色の固体として得られた（３４％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ11.86 (broad s, 1H), 11.67 (broad s, 1H), 8.52 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J= 2.5, 10 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.44 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.79 (s, 3H); MS: m/z 348.1 [MH]+.
【０３７５】
方法４２によって調製した他の化合物：
【表２８】
2008508303.tif 000119
５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−オールからの５−ブロモ−３−（６−クロロ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
【化６９】
2008508303.tif 000120
【０３７６】
５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−オール（１５２ｍｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）を、キャップ付きバイアル内の２ｍｌのオキシ塩化リン中で加熱した。反応混合物を１１０℃で２時間撹拌し、その後、氷上に注ぎ、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ４まで中和した。沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し、真空中で乾燥させた。生じた固体をメタノール中で３０分間加熱し、その後、冷却して濾過し、メタノールで洗浄し、真空中で乾燥させることで、表題化合物がベージュ色固体として得られた（１１７ｍｇ、７２％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ12.4 (broad s, 1H), 8.80 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.53 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.36 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.23 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.54 (d, J= 7.5 Hz, 1H); MS: m/z 307.9, 309.9 [MH]+. 
【０３７７】
５−ブロモ−３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−ピリジン−２−イルアミンからの５−ブロモ−３−（６−クロロ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
【０３７８】
【化７０】
2008508303.tif 000121
【０３７９】
５−ブロモ−３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−ピリジン−２−イルアミン（３７５ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の４ＭのＨＣｌ溶液で処理した。反応混合物を密封管内において１１０℃で１６時間撹拌し、その後、氷上に注ぎ、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ６まで中和した。沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し、真空中で乾燥させることで、３３３ｍｇのベージュ色固体が得られた。固体をキャップ付きバイアル内で２ｍｌのオキシ塩化リンと共に加熱した。反応混合物を１１０℃で２時間撹拌し、その後、氷上に注ぎ、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ２〜３まで中和した。沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し、真空中で乾燥させた。ジクロロメタン中メタノールの勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、表題化合物がベージュ色固体として得られた（２４１ｍｇ、６７％の収率）。
方法４３：
【化７１】
2008508303.tif 000122
【０３８０】
工程１：［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−（６−アミノ−ピリジン−３−イル）−メタノンの合成。
無水エタノール（０．２Ｍ）中の（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−メタノン（１２０ｍｇ、０．４０５ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（５当量）、およびトリエチルアミン（５当量）の溶液をＳｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル内に密封した。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において２００℃で２５分間加熱した。混合物を水で希釈し、生じた黄色沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し、真空中で乾燥させた。粗生成物を、３，４−ジメトキシフェニルボロン酸（１．３当量）、６ｍｏｌ％のジクロルビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）、ならびにアセトニトリル、水、および２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液（０．１１Ｍ）の３：２：１の混合物と混合した。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。水を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製を行うことで、［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−（６−アミノ−ピリジン−３−イル）−メタノンが黄色固体として得られた（３７ｍｇ、３１％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ8.50 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.75 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.15 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.06 (m, 3H), 6.98 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.92 (broad s, 2H), 6.50 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 3H). HPLC/MS m/z: 351 [MH+].
【０３８１】
工程２：５−［５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ピリジン−２−イルアミンの合成。
ＴＨＦ（１ｍｌ）中の塩化（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウム（１６６ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０℃、窒素下で、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（９７ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、これを［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−（６−アミノ−ピリジン−３−イル）−メタノン（３４ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）に１回で加えた。反応混合物を２時間撹拌し、その後、湿メタノールで反応停止させ、真空中で濃縮した。粗生成物を２ｍｌの１，４−ジオキサンで希釈し、０．１ｍｌの７０％過塩素酸水溶液で処理した。混合物を８０℃で１９時間撹拌し、ＴＨＦ／メタノール（１：１）で希釈し、２．０ｇのＰＳ−トリスアミン（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、用いた酸１当量あたり４当量）で３０分間処理した。樹脂を濾過して取り出し、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１）で洗浄した。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロモトグラフィーによって精製を行うことで、５−［５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ピリジン−２−イルアミンが黄色固体として得られた（９．７ｍｇ、２９％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ11.8 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.31 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.25 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 2.0, 10.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.24 (dd, J= 2.0, 7.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.55 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 5.90 (broad s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (s, 3H). HPLC/MS m/z: 347.1 [MH]+.
方法４４：
【化７２】
2008508303.tif 000123
【０３８２】
工程１：（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−［６−（２−メトキシ−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−メタノンの合成。
無水ＥｔＯＨ（０．１７Ｍ）中の（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−メタノン、２−メトキシエチルアミン（１当量）およびトリエチルアミン（１．２当量）の溶液をＳｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル内に密封した。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６０℃で９００秒間実施した。混合物を水で希釈し、生じた沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し、真空中で乾燥させることで、（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−［６−（２−メトキシ−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−メタノンが黄色固体として得られた（８６％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ8.28 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 2.0, 9.0 Hz, 1H), 7.64 (broad s, 1H), 7.12 (broad s, 2H), 6.59 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 3.51 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 3.47 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H); HPLC/MS m/z: 351, 353 [MH]+.
【０３８３】
工程２：［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−［６−（２−メトキシ−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−メタノンの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−［６−（２−メトキシ−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−メタノン、３，４−ジメトキシフェニルボロン酸（１．３当量）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ｉｉ）（６ｍｏｌ％）に、アセトニトリル、水、および２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液の３：２：１の混合物を加えて、出発物質の全体濃度０．１０ｍを得た。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。水を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いてシリカゲル上で精製することで、［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−［６−（２−メトキシ−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−メタノンが黄色固体として得られた（７４％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ8.49 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.33 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.58 (broad s, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.05 (m, 3H), 6.98 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.50 (broad t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.46 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H); HPLC/MS m/z: 409.2 [MH]+.
【０３８４】
工程３：｛５−［５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−（２−メトキシ−エチル）−アミンの合成。
ＴＨＦ（０．４５Ｍ）中の塩化（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウム（７〜１０当量）の懸濁液に、０℃、窒素下で、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（塩化ホスホニウムに対して１当量）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。生じた混合物を［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−［６−（２−メトキシ−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−メタノンに加え、ＴＨＦ（０．１〜０．２Ｍ）に１回で溶かした。反応混合物を１〜１６時間撹拌し、その後、メタノールで希釈し、シリカゲルに吸着させた。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、次の反応で用いる対応するビニルエーテルが得られた。
【０３８５】
ビニルエーテルを１，４−ジオキサン（０．１Ｍ）に溶かし、２．６当量の７０％過塩素酸水溶液で処理した。混合物を８０〜１００℃で１９〜２４時間撹拌し、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１）で希釈し、ＰＳ−トリスアミン（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、用いた酸１当量あたり１０当量）で３０分間処理した。樹脂を濾過して取り出し、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１：１）で洗浄した。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、｛５−［５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−ピリジン−２−イル｝−（２−メトキシ−エチル）−アミンが白色固体として得られた（６５％の収率）。1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：実施例８３に従って調製した化合物を出発物質として使用。1H-NMRδ11.8 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.39 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 2.5, 9.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.25 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.62 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.55 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.47 (m, 4H), 3.28 (s, 3H). HPLC/MS m/z: 405.2 [MH]+.
【０３８６】
一部の例では、以下のワンポット手順を用いた：
【化７３】
2008508303.tif 000124
【０３８７】
（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−メタノン、１．１当量のイソブチルアミンおよび１．２当量（または塩形態のアミンでは２．３当量）のトリエチルアミンの溶液を、無水エタノール（出発物質の全体濃度：０．２２Ｍ）に溶かし、Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル内に密封した。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で９００秒間実施した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を、１．３当量の３，４−ジメトキシフェニルボロン酸、６ｍｏｌ％のジクロロビス（トリフェニルホスフィノール）パラジウム（ＩＩ）ならびにアセトニトリル、水、および２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液の３：２：１の混合物と混合した（出発物質の全体濃度：０．１８Ｍ）。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。水を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル／ヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、［２−アミノ−５−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−ピリジン−３−イル］−（６−イソブチルアミノ−ピリジン−３−イル）−メタノンが黄色固体として得られた（７１％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ8.49 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.57 (broad s, 1H), 7.14 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.03 (broad s, 2H), 6.98 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.15 (broad s, 2H), 1.83 (m, 1H), 0.89 (d, J= 6.5 Hz, 6H); HPLC/MS m/z: 407.2 [MH]+.
【０３８８】
方法４４によって調製した他の化合物：
【表２９】
2008508303.tif 000125
方法４５：
【化７４】
2008508303.tif 000126
【０３８９】
工程１：５−｛５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル｝−ピリジン−２−オールの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中の５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−オール、４−（４−メトキシフェニルメトキシ）−３−メトキシフェニルボロン酸（１．３当量）、および６ｍｏｌ％のジクロロビス（トリイフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）に、アセトニトリル、水および２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液（０．１０Ｍ）の３：２：１の混合物を加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。水を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。勾配またはメタノール／ジクロロメタンを用いてフラッシュクロマトグラフィーによってシリカゲル上で精製することで、５−｛５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル｝−ピリジン−２−オールが黄褐色固体として得られた（４６％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ11.86 (broad s, 1H), 11.67 (broad s, 1H), 8.51 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.89 (dd, J= 2.5, 9.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.38 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.20 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.44 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 5.03 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.75 (s, 3H); HPLC/MS m/z: 454.1 [MH]+.
【０３９０】
工程２：５−（５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリジン−２−オールの合成。
１．５ｍｌのジクロロメタン中の５−｛５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル｝−ピリジン−２−オール（２５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、７８ｍｇのＰＳ−チオフェノール樹脂（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１．４１ｍｍｏｌ・ｇ-1）、次いでＴＦＡ（０．３ｍｌ）を加えた。透明な懸濁液を室温で１時間撹拌し、その後、樹脂を濾過して取り出し、酢酸エチル、次いでメタノールで洗浄した。濾液を蒸発させ、残渣を２ｍｌの酢酸エチルおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に入れた。生じた沈殿物を濾過して取り出し、水、次いで作戦エチルで洗浄し、真空中で乾燥させることで、５−（５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリジン−２−オールが淡ベージュ色固体として得られた（１５ｍｇ、８０％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ11.83 (broad s, 1H), 11.67 (broad s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.49 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J= 3.0, 9.5 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 2.0, 8.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.44 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H); HPLC/MS m/z: 334.1 [MH]+.
方法４６：
【化７５】
2008508303.tif 000127
【０３９１】
工程１：３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−ピリジン−２−イルアミンの合成。
５−ブロモ−３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−ピリジン−２−イルアミンを方法２０、工程１に共することで、３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−ピリジン−２−イルアミンが黄色固体として得られた（７０％の収率）。1H NMR (DMSO-d6):δ8.27 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.83 (dt, J= 2.5, 8.5 Hz, 1H), 7.61 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.18 (s, 1H), 7.10 (m, 2H), 7.07 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.63 (s, 1H), 5.53 (broad s, 2H), 5.00 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.75 (s, 3H); HPLC/MS m/z: 488.2 [MH]+.
【０３９２】
工程２：２−メトキシ−４−｛３−［６−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−フェノールの合成。
無水Ｎ−メチルピロリドン（０．５ｍｌ）中の３−［１−（６−フルオロ−ピリジン−３−イル）−２−メトキシ−ビニル］−５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−ピリジン−２−イルアミン（５０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）および２−モルホリン−４−イル−エチルアミン（０．６ｍｌ、４．５９ｍｍｏｌ）の溶液をＳｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル内に密封した。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において２５０℃で１２００秒間実施した。混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍｌ）で希釈し、生じた沈殿物を濾過して取り出し、飽和塩化アンモニウム水溶液および水で洗浄した、その後、真空中で乾燥させた。固体をＳｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアルに移し、ジオキサン（１ｍｌ）に溶かした。過塩素酸水溶液（７０％、０．１ｍｌ）を加え、反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で３００秒間実施した。混合物を（１：１）ＴＨＦ／メタノール（１０ｍｌ）で希釈し、２．０ｇのＰＳ−トリスアミン（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、３．５３ｍｍｏｌ・ｇ-1）で１時間処理した。樹脂を濾過して取り出し、（１：１）ＴＨＦ／メタノールで洗浄し、濾液を蒸発させることで、７５ｍｇの暗色油が得られた。質量誘発調製用ＨＰＬＣ上で精製することで、２−メトキシ−４−｛３−［６−（２−モルホリン−４−イル−エチルアミノ）−ピリジン−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−フェノールがオフホワイト色の綿毛状固体として得られた（１０．７ｍｇ、２１％の収率、０．７５当量のギ酸塩）。 1H NMR (DMSO-d6):δ11.70 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.42 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.16 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.08 (s, 0.75H, formate), 7.71 (dd, J= 2.5, 9.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.53 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 6.32 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.52 (t, J= 4.5 Hz, 4H), 3.33 (m, 2H), 2.44 (m, 2H), 2.36 (broad s, 4H); HPLC/MS m/z: 446.2 [MH]+.
方法４７：
【化７６】
2008508303.tif 000128
【０３９３】
工程１：トランス−４−［５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサノールの合成。
無水Ｎ−メチルピロリドン（１ｍｌ）中の５−ブロモ−３−（６−クロロ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）、トランス４−アミノシクロヘキサノール（４８５ｍｇ、４．２１ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン塩酸塩（１３４ｍｇ、０．９７４ｍｍｏｌ）の溶液をＳｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル内に密封した。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において２５０℃で１時間実施した。混合物を水で希釈し（４０ｍｌ）、生じた沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し、真空中で乾燥させた。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、トランス−４−［５−（５−ブロモ５−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサノールが白色固体として得られた（８２ｍｇ、６６％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ12.00 (s, 1H), 8.32 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.21-8.32 (m, 2H), 7.75 (d, J= 11.5, 1H), 7.67 (dt, J= 2.5, 9.0 Hz, 1H), 6.51 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.36 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.55 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.42 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 1.22 (m, 4H); HPLC/MS m/z: 387.0, 389.1 [MH]+.
【０３９４】
工程２：トランス−４−｛３−［６−（４−ヒドロキシ−シクロヘキシルアミノ）−ピリジン−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−２−メトキシ−フェノールの合成。
Ｓｍｉｔｈ  ｐｒｏｃｅｓｓバイアル中のトランス−４−［５−（５−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−ピリジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサノール（５２ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）、４−（４−メトキシフェニルメトキシ）−３−メトキシフェニルボロン酸（６５ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）、および（６ｍｇ．６ｍｏｌ％）ジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）に、アセトニトリル、水および２Ｍの炭酸ナトリウム水溶液の３：２：１の混合物を０．９ｍｌ加えた。反応をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間実施した。メタノールを加え、混合物をシリカゲルに吸着させた。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、５７ｍｇの暗色泡沫が得られた。暗色泡沫をジクロロメタン（３ｍｌ）に溶かし、ＰＳ−チオフェノール樹脂（１５０ｍｇ、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１．４１ｍｍｏｌ／ｇの負荷）を加え、次いでＴＦＡ（０．６ｍｌ）を加えた。透明な懸濁液を室温で１時間撹拌し、その後、樹脂を濾過して取り出し、酢酸エチル、次いでメタノールで洗浄した。濾液を蒸発させ、残渣を塩基性のｐＨになるまで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理し、酢酸エチルで抽出した。メタノール／ジクロロメタンの勾配を用いてシリカゲル上のフラッシュクロモトグラフィーによる精製を行うことで、トランス−４−｛３−［６−（４−ヒドロキシ−シクロヘキシルアミノ）−ピリジン−３−イル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−２−メトキシ−フェノールが白色固体として得られた（１８ｍｇ、４１％の収率）。 1H NMR (DMSO-d6):δ11.75 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.47 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.37 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.73 (dd, J= 2.5, 9.0, 1H), 7.66 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 7.25 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.53 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.31 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.55 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.65 (m, 1H), 3.43 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 1.21 (m, 4H); HPLC/MS m/z: 431.2 [MH]+.
方法４８：
【化７７】
2008508303.tif 000129
【０３９５】
工程１：２−アミノ−５−ブロモニコチン酸の合成。
２５．００ｇ（０．１８１ｍｏｌ）の２−アミノニコチン酸を１００ｍｌの氷酢酸に分散させた。この懸濁液に、５０ｍｌの氷酢酸中の１２．０ｍｌ（０．２３ｍｏｌ）の臭素の溶液を加えた。混合物を室温で２０時間撹拌した。形成された沈殿物を濾過して取り出し、濾液が無色に保たれるまで１００ｍｌの氷酢酸で数回に分けて洗浄した。粗生成物を吸引によって乾燥させ、沸騰メタノールから結晶化させることで、３８．６３ｇ（０．１７８ｍｏｌ、９８％の収率）の２−アミノ−５−ブロモニコチン酸が、わずかに緑がかった色からオフホワイト色の針状結晶として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.45 [1H] d, 8.34 [1H] d.; MS: m/z 217 [MH+].
【０３９６】
工程２：Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−アミノ−５−ブロモニコチンアミドの合成。
ａ）遊離塩基として単離
２−アミノ−５−ブロモニコチン酸（４．０００ｇ、１８．４３ｍｍｏｌ）、塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（４．５５０ｇ、４６．６ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（ヘキサフルオロリン酸１−ベンゾトリアゾリルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウム）（１５．００ｇ、２８．８２ｍｍｏｌ）を、窒素を流したフラスコに入れた。１５０ｍｌのアセトニトリルおよび２５ｍｌのジ−イソプロピルエチルアミンを加え、混合物を９５℃まで２０時間加熱した。その後、溶媒を蒸発させ、残渣を２００ｍｌのクロロホルムと１００ｍｌの１０％クエン酸水溶液との間で分配した。有機相を分離し、１００ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を蒸発させ、粗物質を、酢酸エチルおよびヘキサンの非直線勾配を用いたシリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製することで、２．１９３ｇ（８．４３６ｍｍｏｌ、４６％の収率）のＮ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−アミノ−５−ブロモニコチンアミドがオフホワイト色の固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.10 [1H] d, 7.71 [1H] d, 6.35 [2H] s, 3.55 [3H] s, 3.24 [3H] s.; MS: m/z 260 [MH+].
【０３９７】
ｂ）塩酸塩として単離
窒素を流したフラスコ中で、３．００ｇ（３０．７６ｍｍｏｌ）の塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンおよび３．５３ｇ（１６．２７ｍｍｏｌ）の２−アミノ−５−ブロモニコチン酸を、３５０ｍｌのジクロロメタン、および３０ｍｌのＮ−メチルモルホリンの混合物に溶かした。１２．７０ｇ（２４．４０ｍｍｏｌ）のＰｙＢＯＰ（ヘキサフルオロリン酸１−ベンゾトリアゾリルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウム）を加え、反応混合物を室温で５時間撹拌した。その後、混合物を１５０ｍｌの２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで１００ｍｌの１０％クエン酸水溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を蒸発させ、生じた油を３００ｍｌのエーテルに溶かした。形成された沈殿物を濾過して除去し、廃棄した。透明な濾液をその容量の約半分まで濃縮し、３０〜６０ｍｌのジクロロメタンで希釈した。生じた溶液を激しく撹拌し、無水エーテル中の１Ｍの塩化水素溶液を、生じる沈殿物の形成が完了するまで加えた。沈殿物を濾過して取り出し、エーテルで洗浄し、吸引によって乾燥させることで、３．１５ｇ（１２．０４ｍｍｏｌ、７４％の収率）の塩酸Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−アミノ−５−ブロモニコチンアミドがオフホワイト色からベージュ−茶色の粉末として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.24 [1H] d, 7.97 [1H] d, 3.56 [3H] s, 3.26 [3H] s. MS: m/z 260 [MH+]
【０３９８】
塩酸塩は、生成物を酢酸エチルと２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液との間で分配し、水層を酢酸エチルで３回洗浄し、その後、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、残渣を真空下で蒸発乾固させることによって、遊離塩基へと便利に変換することができる。
【０３９９】
工程３：（２−アミノ−５−ブロモ−３−ピリジル）−フェニルケトン。
１．００ｇ（３．３８ｍｍｏｌ）の塩酸Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−アミノ−５−ブロモニコチンアミドを５０ｍｌの無水ＴＨＦに窒素下で懸濁させた。懸濁液を−５０℃まで冷却し、１３．５ｍｌのエーテル中１．０Ｍのフェニルマグネシウムブロマイド溶液を迅速に加えることで、オレンジ色溶液が得られた。混合物を撹拌し、ゆっくりと室温まで暖めた。生じた黄色−オレンジ色の溶液を７５ｍｌの１０％クエン酸水溶液と２００ｍｌの酢酸エチルとの間で分配した。有機相を分離し、７５ｍｌの１０％クエン酸水溶液および７５ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。その後、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させることで、９８５ｍｇの黄色の結晶性固体が得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.34 [1H] d, 7.72 [2H] s, 7.70 [1H] d, 7.65 [1H] t(m), 7.63 [2H] d(m), 7.56 [2H] t(m).  MS: m/z 277 [MH+].  
【０４００】
工程４：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−１−フェニルビニル）−２−ピリジルアミンの合成。
２．６００ｇ（８．７７ｍｍｏｌ）の塩酸Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−アミノ−５−ブロモニコチンアミドを５０ｍｌの無水ＴＨＦに窒素下で懸濁させた。懸濁液を−５０℃まで冷却し、３２ｍｌのエーテル中１．０Ｍのフェニルマグネシウムブロマイド溶液を迅速に加えすることで、オレンジ色溶液が得られた。混合物を撹拌し、ゆっくりと室温まで暖めた。１．５時間後、生じた溶液を５０ｍｌの１０％クエン酸水溶液と４００ｍｌの酢酸エチルとの間で分配した。有機相を分離し、５０ｍｌの飽和臭化ナトリウム水溶液で洗浄した。その後、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させることで、２．６７６ｇの（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−フェニル−メタノンが黄色固体として得られた。単離した固体を５０ｍｌの無水ＴＨＦに窒素下で溶かし、以下のようにして得た溶液に室温で加えた：０℃で、３．８３６ｇ（１９．２３ｍｍｏｌ）のカリウムビス（トリメチルシリル）アミドを１００ｍｌの無水ＴＨＦに窒素下で溶かした。０℃で、７．２１４ｇ（２１．０４ｍｍｏｌ）の塩化メトキシメチルトリフェニルホスホニウムを加え、生じた混合物を室温で７５分間撹拌した。
【０４０１】
（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−フェニル−メタノンを溶液に加えたのち、生じた混合物を室温で７５分間撹拌した。その後、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えることによって反応停止させ、１００ｍｌの水と２５０ｍｌの酢酸エチルとの間で分配した。水相をそれぞれ１００ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗物質を、酢酸エチル／ヘキサン混合物および非直線勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、１．７１８ｇ（５．６３０ｍｍｏｌ、２つの工程にわたって６４％の収率）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−１−フェニルビニル）−２−ピリジルアミンが得られた。 1H-NMR (d6-DMSO) (E)-isomerδ: 8.00 [1H] d, 7.44 [1H] d, 7.34 [2H] d(m), 7.29 [2H] t(m), 7.18 [1H] t(m), 6.51 [1H] s, 5.50 [2H] s, 3.78 [3H] s; (Z)-isomerδ: 7.97 [1H] d, 7.28 [1H] d, 7.27 [2H] t(m), 7.17 [1H] t(m), 7.14 [1H] d(m), 6.95 [1H] s, 5.60 [2H] s, 3.73 [3H] s. MS: m/z 305 [MH+].  
【０４０２】
工程５：５−ブロモ−３−フェニルピロロ［２，３−ｂ］ピリジン。
１．０９３ｇ（３．５８２ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−１−フェニルビニル）−２−ピリジルアミンを６０ｍｌの無水１，４−ジオキサンに溶かした。８００μｌの７０％過塩素酸水溶液を加え、混合物を１００℃まで１３時間加熱した。その後、混合物を室温まで冷まし、３ｍｌのトリエチルアミンを加え、混合物を蒸発乾固した。生じた粗物質を熱エタノールから結晶化させることで、７６３ｍｇ（２．７９ｍｍｏｌ、７８％の収率）の５−ブロモ−３−フェニルピロロ［２，３−ｂ］ピリジンがベージュ色−茶色から茶色の結晶性固体として得られた。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 12.19 [1H] s, 8.44 [1H] d, 8.34 [1H] d, 7.97 [1H] d, 7.72 [2H] d(m), 7.45 [2H] t, 7.27 [1H] t(m).  MS: m/z 273 [MH+].
【０４０３】
工程６：５−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−フェニルメチルピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
バイアルに５０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−フェニルピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、４３ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）の３，４−ジメトキシフェニルボロン酸および６．５ｍｇ（９．３μｍｏｌ、５ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）を入れた。この混合物に１ｍｌのアセトニトリルおよび１ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加えた。バイアルを密封し、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃の温度設定で２０分間照射した。生じた混合物を７５ｍｌのジクロロメタンと２０ｍｌの水中の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。得られた残渣をアセトニトリルおよびエタノールの熱混合物から再結晶化させることで、２０ｍｇ（６１μｍｏｌ、３４％の収率）の５−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−フェニルメチルピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが無色の結晶性固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 11.97 [1H] s, 8.55 [1H] d, 8.38 [1H] d, 7.90 [1H] d, 7.79 [2H] d, 7.45 [2H] t, 7.30 [1H] d, 7.26 [2H] t(m), 7.06 [1H] d, 3.87 [3H] s, 3.81 [3H] s.  MS, m/z: 331 [MH+].  
【０４０４】
方法４８によって調製した他の化合物：
【表３０】
2008508303.tif 000130
方法４９：
【化７８】
2008508303.tif 000131
【０４０５】
工程１：５−ブロモ−３−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
１．０９２ｇ（３．７７ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−［４−ヒドロキシフェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンおよび２００ｍｇのｐａｒａ−トルエンスルホン酸一水和物を１８０ｍｌのジクロロメタンに溶かした。１０ｍｌのジヒドロ−１Ｈ−ピランを加え、混合物を４時間加熱還流した。その後、混合物を室温まで冷まし、過剰のトリエチルアミンを加えた。混合物を蒸発させ、２．５０ｇ（１３．１１ｍｍｏｌ）の塩化ｐａｒａ−トルエンスルホニルを加えた。混合物を１５０ｍｌのＴＨＦに溶かし、生じた溶液を０℃まで冷却した。過剰の水素化ナトリウム粉末を、さらに加えることによってそれ以上の水素ガスが発生しなくなるまで加え、混合物を１６時間、室温で撹拌した。生じた混合物を０℃まで冷却し、さらに２．５ｇ（１３．１１ｍｍｏｌ）の塩化ｐａｒａ−トルエンスルホニルおよびさらなる水素化ナトリウムを加えた。その後、混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えることによって反応停止させ、５００ｍｌのエーテルと水との間で分配した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、１．１６３ｇ（２．２１ｍｍｏｌ、５８％の収率）の５−ブロモ−３−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが淡黄色またはピンク色固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 8.53 [1H] d, 8.46 [1H] d, 8.20 [1H] s, 8.03 [2H] d(m), 7.71 [2H] d(m), 7.43 [2H] d, 7.14 [2H] d(m), 5.54 [1H] t, 3.78 [1H] m, 3.57 [1H] m, 2.35 [3H] s, 1.95-1.74 [2H] (m), 1.68-1.52 [4H] (m).  MS, m/z: 527 [MH+].
【０４０６】
工程２：４−［５−ブロモ−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェノールの合成。
５７５ｇ（１．０９ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンを２５０ｍｌのジクロロメタンに溶かした。この溶液に２．５０ｇ（３．５３ｍｍｏｌ）のＰＳ−チオフェノール（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１．５ｍｌのエーテル中２Ｍの塩酸溶液を加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、その後、樹脂を濾過して取り出し、ジクロロメタンでしっかり洗浄した。濾液を蒸発させることで、３８９ｍｇ（８７７μｍｏｌ、８１％）の４−［５−ブロモ−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェノールが淡黄色固体として得られた。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 9.67 [1H] s, 8.52 [1H] d, 8.43 [1H] d, 8.11 [1H] s, 8.03 [2H] d, 7.58 [2H] d(m), 7.43 [2H] d, 6.89 [2H] d(m), 2.35 [3H] s. MS, m/z: 443 [MH+].
【０４０７】
工程３：塩酸５−ブロモ−３−［４−（３−ピペリジン−１−イル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
２００ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−［５−ブロモ−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェノールおよび１．２０ｇ（２．８０ｍｍｏｌ）のＰＳ−トリフェニルホスフィン（２．３３ｍｍｏｌ・ｇ-1、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を３０ｍｌの無水トルエンに溶かした。３２５ｍｇ（２．２７ｍｍｏｌ）の３−（１−ピペリジニル）プロパノールおよび３００μｌ（１．５２ｍｍｏｌ）のジ−イソプロピルアゾジカルボキシレートを室温で加え、混合物を７２時間撹拌した。
【０４０８】
樹脂を濾過して取り出し、ジクロロメタンおよびエーテルで繰り返し洗浄した。濾液を合わせて蒸発させた。残留ベージュ色油を、過剰の水酸化カリウムと共に２０ｍｌのメタノールに溶かした。混合物を４８時間、室温で撹拌した。生じた懸濁液をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。相を分離し、水層をジクロロメタンで２回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を、ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたアミン官能化シリカゲル（ＩＳＣＯ  ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）アミンカラム）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。単離した物質を７５ｍｌのエーテルに分散させ、不溶性部分を濾過して除去した。透明な濾液に、過剰のエーテル中２Ｍの塩酸溶液を加えた。沈殿物を濾過して取り出し、真空中で乾燥させることで、１３３ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ、６６％の収率）の塩酸５−ブロモ−３−［４−（３−ピペリジン−１−イル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが黄色固体として得られた。1H-NMR (d6-DMSO)δ: 12.17 [1H] (d), 10.68 [1H] s,br, 8.39 [1H] d, 8.33 [1H] d, 7.87 [1H] d, 7.65 [2H] d, 7.03 [2H] d, 4.10 [2H] t, 8.46 [2H] d, 3.18 [2H] m, 2.89 [2H] m, 2.24 [2H] m, 1.89-1.76 [4H] (m), 1.71 [1H] m, 1.39 [1H] m. MS, m/z: 414 [MH+].
【０４０９】
工程４：２−メトキシ−４−｛３−［４−（３−ピペリジン−１−イル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−フェノールの合成。
１００ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）の塩酸５−ブロモ−３−［４−（３−ピペリジン−１−イル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、１２０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の２−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロランおよび１０ｍｇ（５ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）をバイアルに入れ、１．５ｍｌのアセトニトリルおよび１．５ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加えた。混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間照射した。生じた混合物をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。水層をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物を、ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたアミン官能化シリカゲル（ＩＳＣＯ  ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）アミンカラム）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生じた中間体を３０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、７５０ｍｇ（１．０６ｍｍｏｌ）のＰＳ−チオフェノール（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えた。これに１．５ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。樹脂を濾過して取り出し、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣を２０ｍｌのジクロロメタン中で粉砕し、吸引によって乾燥させることで、９ｍｇ（２０μｍｏｌ、８％の収率）の２−メトキシ−４−｛３−［４−（３−ピペリジン−１−イル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル｝−フェノールがベージュ色粉末として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 11.83 [1H] d, 9.06 [1H] s, 8.50 [1H] d, 8.28 [1H] d, 7.76 [1H], 7.67 [2H] d(m), 7.25 [1H] d, 7.12 [1H] dd, 7.01 [2H] d(m),  6.88 [1H] d, 4.02 [2H] t, 3.87 [3H] s, 2.39 [2H] t, 2.34 [4H] (m),br, 1.88 [2H] t, 1.50 [4H] qui, 1.38 [2H] (m).  MS, m/z: 458 [MH+].
方法５０：
【化７９】
2008508303.tif 000132
【０４１０】
工程１：４−｛５−［３−メトキシ−４−ヒドロキシ−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル｝−フェノールの合成。
１４５ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−［４−ヒドロキシフェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、２４０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）の２−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロランおよび２５ｍｇ（８ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）をバイアルに入れ、１．５ｍｌのアセトニトリルおよび１．５ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加えた。混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１６５℃で１２００秒間照射した。生じた混合物をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。水層をジクロロメタンで２回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生じた中間体を７０ｍｌのジクロロメタンに溶かし、２．００ｇ（２．８２ｍｍｏｌ）のＰＳ−チオフェノール（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えた。これに１ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。樹脂を濾過して取り出し、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。相を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。すべての有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣をアセトニトリルと共に加熱し、室温まで冷却し、上清を除去した。残渣を真空中で乾燥させることで、７２ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ、５０％の収率）の４−｛５−［３−メトキシ−４−ヒドロキシ−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン−３−イル｝−フェノールがベージュ色粉末として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ: 11.77 [1H] d, 9.37 [1H] s,br, 9.06 [1H] s,br, 8.49 [1H] d, 8.27 [1H] d, 7.69 [1H] d, 7.56 [2H] d(m), 7.25 [1H] d, 7.12 [1H] dd, 6.88 [1H] d, 6.86 [2H] d(m), 3.87 [3H] s.  MS, m/z: 333 [MH+].  
方法５１：
【化８０】
2008508303.tif 000133
【０４１１】
工程１：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
火力乾燥させた１００ｍｌの丸底フラスコに２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−ニコチンアミド（６６１ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１５ｍｌ）を加えた。溶液を−５５℃で５分間、窒素下で撹拌し、その後、ＴＨＦ中０．５Ｍの２−メトキシフェニルマグネシウムブロマイド溶液（１８ｍｌ、９．０ｍｍｏｌ）を３分間かけて滴下した。生じた溶液を２時間かけて室温まで暖め、その後、１Ｍのクエン酸（２５ｍｌ）を加えることによって反応停止させた。酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、層を分離した。水性画分を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮することで、粘性黄色固体が得られた。エタノールから再結晶化させることで、６１９．５ｍｇ（７９％）の（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（２−メトキシ−フェニル）−メタノンが黄色針として得られた。ＭＳｍ／ｚ：３０８［ＭＨ］+。
【０４１２】
工程２：５−ブロモ−３−［２−メトキシ−１−（２−メトキシ−フェニル）−ビニル］−ピリジン−２−イルアミンの合成。
５０ｍｌの火力乾燥させた丸底フラスコにカリウムビス（トリメチルシリル）アミド（８３２ｍｇ、３９．２ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）を加えた。スラリーを０℃まで５分間、窒素下で冷却し、その後、塩化（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウム（１．５３ｇ、４．４７ｍｍｏｌ）を加えた。生じた赤−オレンジ色溶液を室温で４５分間撹拌し、その後、（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（２−メトキシ−フェニル）−メタノン溶液（１０ｍｌのＴＨＦ中に６０１ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）をすべて一度に加えた。反応を窒素下で４時間撹拌し、その後、飽和塩化アンモニウム水溶液（２５ｍｌ）を加えることによって反応停止させた。酢酸エチル（１００ｍｌ）を加え、層を分離した。水性画分を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮することで、茶色の粘性油が得られた。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、５５４ｍｇ（８４％）の５−ブロモ−３−［２−メトキシ−１−（２−メトキシ−フェニル）−ビニル］−ピリジン−２−イルアミンがＥおよびＺ異性体の混合物として得られた。
【０４１３】
工程３：５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
５０ｍｌの丸底フラスコに４０３ｍｇの５−ブロモ−３−［２−メトキシ−１−（４−メトキシ−フェニル）−ビニル］−ピリジン−２−イルアミン（１．２ｍｍｏｌ；合わせたＥおよびＺ異性体）、１，４−ジオキサン（５ｍｌ）、ならびに７０％の過塩素酸水溶液（２５０μｌ）を入れた。フラスコに還流冷却器および窒素流入アダプターをはめ込み、油浴中、１００℃で８時間加熱した。反応混合物を濃縮し、その後、１５ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで酢酸エチル（２０ｍｌ）で処理した。層を分離し、水性画分を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。残渣をエーテル中で粉砕することで、３００ｍｇ（８２％）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが黄褐色粉末として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ= 12.16 (br. s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.10 (t, 1H), 3.88 (s, 3H); MS m/z: 303 [MH]+. 
【０４１４】
工程４：５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
２−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロランを以下のように調製した。火力乾燥させた５０ｍｌの丸底フラスコに２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェノール（１．００ｇ、４．００ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）を加えた。水素化ナトリウム（２５１ｍｇ、６．２９ｍｍｏｌ；鉱物油中に６０％の分散液）を３回に分けて加え、懸濁液を窒素下で３０分間撹拌した。塩化ｐａｒａ−メトキシベンジル（６５５μｌ、３．６２ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をさらに１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、その後、氷浴中で冷却し、５０ｍｌの１Ｍクエン酸、次いで１００ｍｌの酢酸エチルを加えた。層を分離し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮することで、黄褐色粉末が得られた。ジエチルエーテル中で粉砕することで、１．３４ｇ（９１％）の２−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロランが黄褐色粉末として得られた。 1H-NMR (CDCl3)δ= 7.35 (m, 2 H), 7.29 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.89(m, 3H), 5.11(s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 1.33 (s, 12H); MS m/z: 393 [M+Na]+.  
【０４１５】
Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波バイアル（２〜５ｍｌサイズ）に５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（９８ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、２−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン（１４８ｍｇ、０．４００ｍｍｏｌ）、６．５ｍｇ（９．３μｍｏｌ、５ｍｏｌ％）のジクロロビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）、１ｍｌのアセトニトリルおよび１ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を入れた。バイアルを密封し、排気し、窒素で３回パージし、その後、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃の温度設定で３０分間照射した。酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、層を分離した。水性画分を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、７５ｍｇ（５０％）の５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが淡黄色固体として得られた。1H-NMR (d6-DMSO)δ= 12.12 (br.s, 1H), 8.51 (d, 1 H), 8.11 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.38 (d, 2H), 7.27 (t, 1H), 7.25(d, 1H), 7.18 (dd, 1H), 7.11 (m, 2H), 7.02 (t, 1H), 6.95 (d, 2H), 5.03 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.75 (s, 3H); MS m/z: 467 [MH]+.  
【０４１６】
方法５１によって調製した他の化合物：
【表３１−１】
2008508303.tif 000134
【０４１７】
【表３１−２】
2008508303.tif 000135
方法５２：
【化８１】
2008508303.tif 000136
【０４１８】
工程１：２−メトキシ−４−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールの合成。
５０ｍｌの丸底フラスコに５−［３−メトキシ−４−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（４８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、塩化メチレン（２．５ｍｌ）および３９６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）ＰＳ−チオフェノール（１．４１ｍｍｏｌ・ｇ-1；Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えた。トリフルオロ酢酸（５００μｌ）を加え、懸濁液をオービタルシェーカーで１時間振盪した。黄色反応混合物を濾過し、樹脂をジクロロメタンおよびエーテルで３回洗浄した、その後、ジクロロメタンで２回洗浄した。合わせた濾液を濃縮することで、黄色残渣が得られ、これを酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。層を分離し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。酢酸エチルおよびヘキサンの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、３１ｍｇ（８６％）の２−メトキシ−４−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−フェノールが淡黄色粉末として得られた。1H-NMR (d6-DMSO)δ= 11.87 (br.s, 1 H), 9.04 (br.s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.27 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.08 (dd, 1H), 7.02 (t, 1H), 6.85 (d, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.82 (s, 3H); MS m/z: 347 [MH]+.
【０４１９】
方法５２によって調製した他の化合物：
【表３２】
2008508303.tif 000137
【０４２０】
（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（２−トリフルオロメトキシ−フェニル）−メタノンの合成。
【化８２】
2008508303.tif 000138
火力乾燥させた１００ｍｌの丸底フラスコに１−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン（２．３９ｇ、９．９ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコにゴム製の隔膜をはめ込み、窒素でパージし、その後、無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）を入れた。溶液を−７８℃まで１０分間冷却し、その後、ヘキサン中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液（３．９ｍｌ、９．８ｍｍｏｌ）を３分間かけて滴下した。生じた溶液を−７８℃で４０分間、窒素下で撹拌し、その後、５ｍｌのＴＨＦ中の７３９ｍｇ（２．８４ｍｍｏｌ）の２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−ニコチンアミドの溶液を３分間かけて滴下した。生じた赤色溶液を５時間かけて室温まで暖め、その後、反応を、１０ｍｌの飽和塩化アンモニウム水溶液を加えることによって反応停止させた。酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、層を分離した。水性画分を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、５３０ｍｇ（５２％）の（２−アミノ−５−ブロモ−ピリジン−３−イル）−（２−トリフルオロメトキシ−フェニル）−メタノンが黄色−オレンジ色の固体として得られた。 1H-NMR (CDCl3)δ= 8.29 (d, 1 H), 7.60 (m, 2H,), 7.45 (t, 1H), 7.42 (m, 3H), 1.79(br. s, 2H); MS m/z: 361 [MH]+.
方法５３：
【化８３】
2008508303.tif 000139
【０４２１】
工程１：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−［３−メトキシ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
８ｍｌのホウケイ酸反応バイアルに、１５０ｍｇ（０．３５０ｍｍｏｌ）のＰＳ−トリフェニルホスフィン（２．３３ｍｍｏｌ・ｇ-1；Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および無水塩化メチレン（５ｍｌ）を加えた。バイアルにゴム製の隔膜をはめ込み、懸濁液を５分間、氷浴中（０℃）で撹拌した。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（６８μＬ、０．３５ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温まで２０分間かけた暖めた。反応バイアルに２−ピロリジン−１−イル−エタノール（５４ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）および２−メトキシ−４−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］フェノール（６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加え、懸濁液を室温で８時間撹拌した。黄色反応混合物を濾過し、樹脂をＤＣＭおよびエーテルで３回洗浄し、その後、ＤＣＭで２回洗浄した。合わせた濾液を濃縮することで黄色残渣が得られ、これをヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたアミン官能化シリカゲル（ＩＳＣＯ  ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）アミンカラム）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、１２ｍｇ（８％）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−［３−メトキシ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが淡黄色粉末として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ= 11.87 (br.s, 1 H), 8.51 (d, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.24 (d, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.12 (dd, 1H), 7.06 (s, 1H), 7.04 (m, 1H), 4.08 (t, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 2.82 (t, 2H), 2.55 (m, 4H), 1.69 (m, 4H); MS m/z: 444 [MH]+.  
【０４２２】
方法５３に従って調製した他の化合物：
【表３３】
2008508303.tif 000140
【０４２３】
上記表中の化合物の精製は、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８；５〜９５％勾配の溶媒Ａ：５％のＡＣＮを含む０．１％ギ酸水溶液、溶媒Ｂ：ＡＣＮ中０．１％のギ酸、質量誘発収集）を用いて行った。
方法５４：
【化８４】
2008508303.tif 000141
【０４２４】
工程１：３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波バイアル（２〜５ｍｌサイズ）に、５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（９６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、１−Ｎ−（ＢＯＣ）ピロール−２−ボロン酸（１０３ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）および１２ｍｇ（５ｍｏｌ％）のジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスヒノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物、１ｍｌのアセトニトリルならびに１ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加えた。バイアルを密封し、排気し、窒素で３回パージし、その後、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃の温度設定で１５分間照射した。酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、層を分離した。水性画分を酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機画分をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮した。ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、２８．１ｍｇ（３０％）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（１Ｈ−ピロール−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが黄褐色固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO)δ= 11.78 (br.s, 1H), 11.32 (br. s, 1H), 8.56 (d, 1 H), 8.20 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.12 (d, 1H), 7.07 (t, 1H), 6.83 (m, 1H), 6.49 (m, 1H), 6.10 (m, 1H), 3.82 (s, 3H); MS m/z: 290 [MH]+.
【０４２５】
方法５４に従って調製した他の化合物：
【表３４】
2008508303.tif 000142
方法５５：
【化８５】
2008508303.tif 000143
【０４２６】
工程１：３，４−ビス（２−メトキシエトキシ）フェニルボロン酸の合成。
６．５１ｇ（０．０３００ｍｏｌ）の４−ブロモベラトロールを５０ｍｌのジクロロメタンに溶かした。この懸濁液に３７．６ｇ（０．１５０ｍｏｌ）の三臭化ホウ素を０℃で加えた。混合物を３時間、室温で撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。生じた茶色油を酢酸エチルに溶かし、シリカゲルパッドで濾過した。濾液を濃縮することで、５．４５ｇの４−ブロモカテコールが淡茶色油として得られた。
【０４２７】
１．８９ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）のこの油を５０ｍｌの無水ＤＭＦに溶かし、５７６ｍｇ（２４．０ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウムを加えた。生じた溶液に、５．５６ｇ（４０．０ｍｍｏｌ）のブロモエチルメチルエーテルを０℃で２５分間かけてを加えた。混合物を終夜、０℃〜室温で撹拌した。５ｍｌの水を加えて反応を停止させた。溶媒を除去したのち、黒色油状残渣をセライトに吸着させ、生じた固体を酢酸エチルで洗浄した。その後、濾液を濃縮することで、３，４−ビス（２−メトキシエトキシ）ブロモベンゼンが黄色がかった固体として得られた。
【０４２８】
固体をに無水ＴＨＦ溶かし、生じた溶液を−７８℃まで冷却した。この溶液に、４．８ｍｌのヘキサン中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液を、−７８℃で１０分間かけて加えた。その後、混合物を３０分間−７８℃で撹拌した。その後、２．７７ｍｌ（１２ｍｍｏｌ）のホウ酸トリ−イソプロピルを加えた。反応をさらに３０分間−７８℃で撹拌し、その後、０℃まで２時間かけて暖めた。その後、混合物を−２０℃まで冷却し、１０ｍｌの２Ｎ塩酸水溶液を混合物に加えた。２０分間撹拌したのち、反応混合物を分液漏斗に移し、１００ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮することで、２．８５ｇの茶色油が得られた。油をエーテル中で滴定することで、６２５ｍｇ（２．４４ｍｍｏｌ；８％の全収率）の３，４−ビス（２−メトキシエトキシ）フェニルボロン酸が無色の粉末として得られた。 1H-NMR (d4-methanol)δ: 7.36 [2H] m, 7.23 [2H] m, 6.98 [1H] d (7.5 Hz), 6.94 [1H] d (8.5 Hz),  4.16 [4H] m, 3.75 [4H] m, 3.43 [3H] s, 3.42 [3H] s.  MS m/z: 271.1 [MH+], 293.1[MNa+].
【０４２９】
工程２：５−［３，４−ビス−（２−メトキシ−エトキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
バイアルに８１．０ｍｇ（０．３００ｍｍｏｌ）の３，４−ビス（２−メトキシエトキシ）フェニルボロン酸、６０．６ｍｇ（０．２００ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンおよび８．３ｍｇ（５ｍｏｌ％）の二塩化ビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）を入れた。１．５ｍｌのアセトニトリルおよび１．５ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で１５分間照射した。混合物を１５ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。暗褐色残渣（１８７ｍｇ）を、ヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリコン上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、５７ｍｇの５−［３，４−ビス−（２−メトキシ−エトキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが無色の粉末として得られた。1H-NMR (d4-methanol)δ: 8.41 [1H] d (2.0 Hz), 8.17 [1H] d (2.0 Hz), 7.63 [1H] s, 7.56 [1H] dd (1.5 Hz, 7.5 Hz), 7.30 [1H] m, 7.26 [1H] d (2.5 Hz), 7.20 [1H] dd (2.3 Hz, 8.3 Hz), 7.11 [1H] d (8 Hz), 7.08 [1H] d (8.5 Hz), 7.05 [1H] dt (1 Hz, 7.5 Hz) 4.24 [2H] m, 4.19 [2H] m, 3.77 [4H] m, 3.44 [3H] s, 3.43 [3H] s.  MS m/z: 449.2 [MH+], 471.1.1[MNa+].  
方法５６：
【化８６】
2008508303.tif 000144
【０４３０】
工程１：３，４−ビス（２−モルホリノエトキシ）フェニルボロン酸の合成。
８６４ｍｇ（３６．０ｍｍｏｌ）の水素化ナトリウムを、５０ｍｌの無水ＤＭＦ中の９００ｍｇ（５．０ｍｍｏｌ）の４−ブロモカテコールおよび３．７２ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）の塩酸２−クロロエチルモルホリンの懸濁液に、０℃で２５分間かけて加えた。混合物を３日間、室温で撹拌した。５ｍｌの水を加えて反応を停止させた。溶媒を除去したのち、黒色油状残渣をセライトに吸着させ、生じた固体を酢酸エチルで洗浄した。その後、濾液を濃縮することで、０．７５ｇ（１．８１ｍｍｏｌ；３６％の収率）の３，４−ビス（２−モルホリノエトキシ）ブロモベンゼンが吸湿性の黄色固体として得られた。1H-NMR (CD3OD)δ: 8.42 [1H] d (2.0 Hz), 8.18 [1H] d (1.5 Hz), 7.64 [1H] s, 7.56 [1H] dd (1.5 Hz, 7.5 Hz), 7.30 [1H] dt (1.5 Hz, 7.5 Hz), 7.25 [1H] d (2.5 Hz), 7.19 [1H] dd (2.5 Hz, 8.5 Hz), 7.12 [1H] d (8.5 Hz), 7.08 [1H] d (8.5 Hz), 7.05 [1H] dt (1 Hz, 7.5 Hz) 4.25 [2H] t (5.75 Hz), 4.20 [2H] t (5.5 Hz), 3.72 [8H] m, 2.84 [4H] m, 2.66 [8H] m.  MS: 559.2 [MH+].
【０４３１】
２．４ｍｌのヘキサン中の２．５Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液を、−７８℃で、ＴＨＦ中の２．０８ｇ（５．０ｍｍｏｌ）３，４−ビス（２−モルホリノエトキシ）ブロモベンゼンに、１０分間かけて溶液に加えた。混合物を３０分間、−７８℃で撹拌し、次いで、１．３９ｍｌ（６．０ｍｍｏｌ）のホウ酸トリ−ｎ−イソプロピルを加えた。混合物をさらに３０分間、−７８℃で撹拌し、その後、０℃まで２時間かけて暖めた。混合物を−２０℃まで冷却し、５ｍｌの２Ｎ塩酸水溶液を加えた。２０分間撹拌したのち、反応混合物を分液漏斗に移し、１００ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮することで、茶色油が得られた。油をエーテル中で滴定することで、９２５ｍｇの非常に吸湿性の高い暗褐色油が得られ、これはＬＣ／ＭＳによって約５０％純粋であり、さらなる精製を行わずに直接用いられていた。
【０４３２】
工程２：５−［３，４−ビス−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの合成。
バイアルに２２８ｍｇ（約０．３ｍｍｏｌの純ボロン酸）の粗ボロン酸、６０．６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンおよび８．３ｍｇ（５ｍｏｌ％）のジクロロルビス（トリフェニルホスフィノ）パラジウム（ＩＩ）を入れた。１．５ｍｌのアセトニトリルおよび１．５ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物をＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（登録商標）マイクロ波反応器内において１５０℃で１５分間照射した。生じた混合物を１５ｍｌの酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。生じた暗褐色残渣をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、９．４ｍｇ（１６μｍｏｌ；８％の収率）の５−［３，４−ビス−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル］−３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンが淡黄色固体として得られた。1H-NMR (d4-methanol)δ: 8.42 [1H] d (2.0 Hz), 8.18 [1H] d (1.5 Hz), 7.64 [1H] s, 7.56 [1H] dd (1.5 Hz, 7.5 Hz), 7.30 [1H] dt (1.5 Hz, 7.5 Hz), 7.25 [1H] d (2.5 Hz), 7.19 [1H] dd (2.5 Hz, 8.5 Hz), 7.12 [1H] d (8.5 Hz), 7.08 [1H] d (8.5 Hz), 7.05 [1H] dt (1 Hz, 7.5 Hz) 4.25 [2H] t (5.75 Hz), 4.20 [2H] t (5.5 Hz), 3.72 [8H] m, 2.84 [4H] m, 2.66 [8H] m.  MS m/z: 559.2 [MH+]. 
方法５７
【化８７】
2008508303.tif 000145
【０４３３】
工程１：２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミドの合成。
１５ｍＬの高圧ガラス製バイアル（テフロンねじ口を備える）に、５−ブロモイサト酸無水物（０．４０１ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、およびジメチルアミン（ＴＨＦ中に２Ｍ；５．０ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密封し、油浴内に７０℃で８時間入れ、その後、これを真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃに溶かし、水、次いでブラインで２回洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、濃縮することで、０．４２８ｇの２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミドがピンク色固体として得られ、これを次の工程で直接用いた。1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 7.19 (dd, J=2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.08 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.63(d, J=8.5 Hz, 1H), 5.31(br. s, 2H), 2.89(br. s, 6H). MS: m/z 198/200 [C=O+].
【０４３４】
工程２：２−アミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミドの合成。
５ｍＬのＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙマイクロ波反応バイアルに３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（０．１６７ｇ、０．３３１ｍｍｏｌ）、２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド（０．０８８ｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）、二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物（１４ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５ｍＬ）を加えた。バイアルを密封し、Ｎ2でパージし、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ内において９０℃で５分間照射し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、シリカゲルに吸着させた。粗物質を、ＥｔＯＡｃ（１０％のＭｅＯＨを含む）およびヘキサンの勾配においてシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。精製した物質をＭｅＯＨ／アセトン溶液（５ｍＬ）に溶かし、２００ｕＬの５０％ＫＯＨ溶液を加え、溶液を室温で３時間撹拌した。反応を、１Ｍのクエン酸をｐＨ＝５まで滴下することによって反応停止させた。反応停止させた反応混合物をＥｔＯＡｃと水との間で分割し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相をブラインで処理し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、シリカゲルに吸着させた。この物質をＥｔＯＡｃ（１０％のＭｅＯＨを含む）およびヘキサンの勾配においてアミノシリカ上で精製することで、表題化合物が淡黄色粉末として得られた（１３．５ｍｇ、１１％の収率）。  1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 11.80 (br. s, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 1.5, 6.0 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 2.0, 6.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.04 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.95 (s, 6H).  MS: m/z 387.1 [MH+].
【０４３５】
方法５７によって調製した他の化合物：
【表３５】
2008508303.tif 000146
方法５８：
【化８８】
2008508303.tif 000147
【０４３６】
工程１：７−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−３−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［１，２，４］チアジアジン１，１−ジオキシドの合成。
８ｍＬのねじ口バイアルに２−アミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ベンゼンスルホンアミド（０．０４９２ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）、アセトアルデヒド（２００μＬ、３．５４ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（７００μＬ）を加えた。バイアルを密封し、加熱ブロック内に９０℃で１時間入れた。反応混合物を真空下で濃縮し、その後、ＴＨＦ（１ｍＬ）に溶かし、生じた溶液に５００μＬの５０％ｗ／ｗのＫＯＨ水溶液を加えた。２時間後、反応を、氷酢酸を加えることによって反応停止させ、その後、真空下で濃縮することで、茶色残渣が得られた。酢酸エチルおよびヘキサン（０〜１００％の勾配）で溶出させるＳｉＯ2ゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製を行うことで、表題化合物が黄色粉末として得られた（２３．３ｍｇ、６１％）。 1H-NMR (500 MHz, d6-DMSO)δ= 11.88 (br.s, 1H), 8.44 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.04(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.71(m, 2H), 7.68(dd, J=2.5, 8.6 Hz, 1H), 7.59(dd, J=2.5, 8.5 Hz, 1H), 7.54(br.d, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.26(br.s, 1H), 7.12(dd, J=8.5, 1Hz, 1H), 7.05(t, J=7.5 Hz, 1H), 6.89 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.86 (m, 1H), 3.81(s, 3H), 1.44(d, J=5.5.0 Hz, 3H).  MS: m/z 421.1 [MH+].
【０４３７】
方法５８によって調製した他の化合物：
【表３６】
2008508303.tif 000148
方法５９：
【化８９】
2008508303.tif 000149
【０４３８】
工程１：５−ブロモ−２−ジエチルアミノ−ニコチン酸の合成。
８８０ｍｇ（４．００ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−２−フルオロニコチン酸を３ｍｌのアセトニトリルに溶かした。１．０ｍｌ（９．７ｍｍｏｌ）のジエチルアミンを加え、生じた混合物を８０℃まで１８時間加熱した。混合物を蒸発させ、生じた茶色油を、さらなる精製を行わずに用いた。ＭＳ：ｍ／ｚ２７３［ＭＨ+］。
【０４３９】
工程２：２−ジエチルアミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸の合成
２３０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、１３７ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−２−ジエチルアミノ−ニコチン酸および１６ｍｇ（２３μｍｏｌ）の二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物を、２．５ｍｌのアセトニトリルおよび２ｍｌの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液の混合物に溶かした。反応混合物を１．５時間、１００℃まで加熱した。
【０４４０】
生じた混合物をブラインと酢酸エチルとの間で分配し、水相を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。その後、粗生成物を、１％ｖ／ｖの３５％ｗ／ｗアンモニア水溶液を含む酢酸エチルと酢酸エチル、ジクロロメタンおよびメタノールの溶媒混合物（４：４：１）との勾配を用いた、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、１５０ｍｇの２−ジエチルアミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸が茶色固体として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ５７１［ＭＨ+］。
【０４４１】
工程３：２−ジエチルアミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドの合成。
４０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）の２−ジエチルアミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−ニコチン酸を１．５ｍｌのジクロロメタンに溶かした。４０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のヘキサフルオロリン酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム、５５μｌ（０．１１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中に２Ｍのジメチルアミン、および１ｍｌのＤＭＦを加え、生じた混合物を１時間撹拌した。溶媒を完全に蒸発させた。
【０４４２】
残渣をメタノールおよびＤＭＳＯの混合物に溶かし、１．１ｍｌの２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を、２４時間かけて３回に分けて加えた。周囲温度で４８時間撹拌したのち、全混合物を蒸発させ、氷酢酸を加えることによって残渣を酸性化し、生じた物質を質量誘発逆相ＨＰＬＣによって精製することで、６．８ｍｇ（１４μｍｏｌ；２０％の収率）の２−ジエチルアミノ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドが茶色固体として得られた。1H-NMR (d6-DMSO):δ11.94 (s, 1H), 8.52 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63 (dd, 1H), 7.29 (ddd, 1H), 7.13 (d(d), 1H), 7.05 (dd(d), 1H), 3.83 (s, 3H), 3.3.46-3.28 (m, 4H), 3.00 (s, 3H), 2.87 (s, 3H), 1.10 (t, 6H).  MS: m/z 444 [MH+].
【０４４３】
方法５９によって調製した他の化合物：
【表３７】
2008508303.tif 000150
方法６０：
【化９０】
2008508303.tif 000151
【０４４４】
工程１：５−ブロモ−２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−ニコチン酸の合成。
５００ｍｇ（４．００ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−２−フルオロニコチン酸を３ｍｌのアセトニトリルに溶かした。６２０μｌの１−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジンを加え、生じた混合物を７０℃まで２４時間加熱した。ｐＨを約１２に調節するために、混合物を、酢酸エチルと３５％ｗ／ｗのアンモニア水溶液を含む水との間で分配した。水相を酢酸エチルで２回抽出した。その後、水相を凍結乾燥させることで、ベージュ色残渣が得られた。
【０４４５】
残渣をジクロロメタン、アセトニトリルおよびメタノールの混合物に溶かし、過剰のＭＰ−イソシアネート樹脂（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標））で処理した。その後、樹脂を濾過して除去し、濾液を蒸発させることで、６３２ｍｇ（１．９１ｍｍｏｌ；８４％の収率）の５−ブロモ−２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−ニコチン酸がベージュ色の部分的に結晶性の残渣として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ３３０［ＭＨ+］。
【０４４６】
工程２：５−ブロモ−２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドの合成。
６３０ｍｇ（１．９０ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−ニコチン酸を５０ｍｌのジクロロメタンに懸濁させた。６ｍｌのＴＨＦ中２Ｍのジメチルアミンおよび８５０ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）のヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムを加え、生じた混合物を１８時間、周囲温度で撹拌した。生じた混合物をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。水相をジクロロメタンで抽出し、有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させることで、トリス（ピロリジニル）ホスホラミデートを汚染物質として含む粗５−ブロモ−２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドが淡茶色油として得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ３５７［ＭＨ+］。
【０４４７】
工程３：２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミド。
５０ｍｇ（９９μｍｏｌ）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、２１５ｍｇの工程２から得られた粗５−ブロモ−２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドおよび５ｍｇ（６μｍｏｌ）の二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物を、３ｍｌのアセトニトリルおよび２ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の混合物に溶かした。反応混合物を１２０℃まで４時間加熱した。
【０４４８】
生じた混合物を水と酢酸エチルとの間で分配し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣をメタノールに溶かし、４００μｌの５０％ｗ／ｖ水酸化カリウム水溶液を加えた。生じた混合物を周囲温度で３時間放置した。粗溶液を質量誘発逆相ＨＰＬＣによって直接精製することで、１４．７ｍｇ（２９μｍｏｌ；２９％の収率）の２−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピペラジン−１−イル］−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ニコチンアミドが無色固体として得られた。 1H-NMR (d6-DMSO):δ11.93 (s, 1H), 8.59 (d, 1H), 8.52 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.63 (dd, 1H), 7.29 (ddd, 1H), 7.12 (d(d), 1H), 7.05 (dd(d), 1H), 3.83 (s, 3H), 3.55 (m, 2H), 3.4-3.3 (m, 4H), 3.01 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2.58 (m, 4H), 2.54-2.46 (m, 2H)  MS: m/z 501 [MH+].  
【０４４９】
方法６０によって調製した他の化合物：
【表３８】
2008508303.tif 000152
方法６１：
【化９１】
2008508303.tif 000153
【０４５０】
工程１：５−ブロモ−３−フルオロ−２−ヒドロキシ安息香酸メチルエステルの合成。
５．００ｇ（３２ｍｍｏｌ）の３−フルオロサリチル酸を５０ｍｌの氷酢酸に懸濁させた。２．２ｍｌの臭素を加え、混合物を周囲温度で４８時間撹拌した。生じた懸濁液を５００ｍｌの水で希釈し、沈殿物を濾過して取り出し、吸引によって乾燥させることで、９．３９４ｇの５−ブロモ−３−フルオロ−２−ヒドロキシ安息香酸がアイボリー色固体として得られた。
【０４５１】
４．０８ｇ（最大１３．９ｍｍｏｌ）の粗生成物を、７０ｍｌのトルエンおよび３０ｍｌのメタノールの混合物に溶かした。混合物が黄色に保たれるまで９ｍｌの２Ｍトリメチルシリルジアゾメタン溶液を加えた。混合物が無色となるまで２００μｌの氷酢酸を加え、溶媒を蒸発させることで、３．０３７ｇ（１２．２０ｍｍｏｌ；両工程にわたって８８％）の５−ブロモ−３−フルオロ−２−ヒドロキシ安息香酸メチルエステルが得られた。1H-NMR (d6-DMSO):δ10.57 (s, br., 1H), 7.83 (dd, 1H), 7.67 (d(d), 1H), 3.90 (s, 3H).
【０４５２】
工程２：３−フルオロ−２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステルの合成。
６００ｍｇ（１．１９ｍｍｏｌ）の３−（２−メトキシ−フェニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン、５０９ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ）の５−ブロモ−３−フルオロ−２−ヒドロキシ安息香酸メチルエステルおよび４３ｍｇ（６０μｍｏｌ）の二塩化１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタン付加物を、１０ｍｌのトルエンおよび１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の混合物に溶かした。反応混合物を７０℃まで２．５時間加熱し、その後、９０℃までさらに１．５時間加熱した。
【０４５３】
粗生成物をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。水相をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物をヘキサン中酢酸エチルの勾配を用いたシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製することで、４２７ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ；６６％の収率）の３−フルオロ−２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステルが得られた。ＭＳ：ｍ／ｚ５４７［ＭＨ+］。
【０４５４】
工程３：３−フルオロ−２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミドの合成。
２２ｍｇ（４０μｍｏｌ）の３−フルオロ−２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−安息香酸メチルエステルを２ｍｌのＴＨＦ中２Ｍのジメチルアミン溶液に溶かした。密閉バイアル内で溶液を１００℃まで２４時間加熱し、その後、濃縮した。残渣を２ｍｌのメタノールに溶かし、３５０μｌの５０％ｗ／ｖ水酸化カリウム水溶液を加えた。混合物を周囲温度で１時間放置し、その後、氷酢酸を加えることによって中和した。粗生成物を質量誘発逆相ＨＰＬＣによって直接精製することで、６．０ｍｇ（１４μｍｏｌ；３７％の収率）の３−フルオロ−２−ヒドロキシ−５−［３−（２−メトキシ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミドがアイボリー色固体として得られた。1H-NMR (d6-DMSO):δ11.91 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.32-7.25 (m, 2H), 7.14 (d, 1H), 7.05 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.87 (s, 3H).  MS: m/z 406 [MH+].
【０４５５】
方法６１によって調製した他の化合物：
【表３９】
2008508303.tif 000154
【０４５６】
（実施例２）
バイオアッセイ
当業者に知られているキナーゼアッセイを用いて、本発明の化合物および組成物の阻害活性のアッセイを行い得る。キナーゼアッセイには、それだけには限定されないが、以下の例が含まれる。
【０４５７】
これらの例のうちの最初のものではＡｂｌ  Ｔ３１５Ｉの突然変異体のキナーゼドメイン（「Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤ」）を用いるが、キナーゼアッセイでは、たとえばタンパク質全体、キナーゼドメイン、またはその一部分（たとえばＡｂｌ  Ｙ３９３Ｆ）を含めた、突然変異体および野生型酵素の様々な形態を用い得る。また、アッセイで用いるキナーゼは、様々なリン酸化状態であり得る。ｃ−Ａｂｌの例では、０リン酸化状態の突然変異キナーゼを用いた。
【０４５８】
ｃ−Ａｂｌピルビン酸キナーゼ／乳酸デヒドロゲナーゼ結合酵素アッセイ
ｃ−Ａｂｌピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）／乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）結合アッセイでは、プロテインキナーゼ依存性の基質ペプチドリン酸化は、ＮＡＤＨの酸化に連関していた。ＮＡＤＨからＮＡＤ＋への酸化は、３４０ｎｍにおける吸光度の低下を監視することによって検出された。
【０４５９】
材料：Ａｂｌ基質ペプチド＝ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ−ＯＨ（Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）；βＮＡＤＨ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｎ−８１２９、ＦＷ＝７０９．４）；２ＭのＭｇＣｌ2；１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５；ホスホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ−７００２、ＦＷ＝２３４）；乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌカタログ番号２７５６）；ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ−９１３６）；ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７、ＦＷ＝５５１）；Ｇｒｅｉｎｅｒ３８４ウェルＵＶｓｔａｒプレート；および精製未リン酸化Ｔ３１５Ｉ  Ａｂｌキナーゼドメイン。
【０４６０】
ストック溶液：１０ｍＭのＮＡＤＨ（ｍｉｌｉＱＨ2Ｏ中に７．０９ｍｇ／ｍｌ）毎日新しく作製；１０ｍＭのＡｂｌ基質ペプチド（ｍｉｌｉＱＨ2Ｏ中に１３．４ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；１００ｍＭのＭｇＣｌ2（５ｍｌの２ＭＭｇＣｌ2＋９５ｍｌのｄＨ2Ｏ）；１００ｍＭのＰＥＰ（ｄＨ2Ｏ中に２３．４ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存；１０ｍＭのＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存（５０μｌを毎日合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１０００Ｕ／ｍｌのＰＫ（Ｕ／ｍｇはロットに応じて変動する）液体Ｎ2下で瞬間冷凍し、−８０℃で保存；および１０００Ｕ／ｍｌのＬＤＨ（Ｕ／ｍｇはロットに応じて変動する）液体Ｎ2下で瞬間冷凍し、−８０℃で保存。
【０４６１】
３８４ウェル様式の標準のアッセイ設定（５０μｌの反応）：３００μＭのＮＡＤＨ；１０ｍＭのＭｇＣｌ2；２ｍＭのＰＥＰ；４５Ｕ／ｍｌのＰＫ；６０Ｕ／ｍｌのＬＤＨ；２００μＭのＡｂｌ基質ペプチド；２．５μｌの試験化合物（ＤＭＳＯ中）；２μｇ／ｍｌのＡｂｌキナーゼドメイン；１０μＭのＡＴＰ；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液。陽性対照は試験化合物なしのＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は５μｌの０．５Ｍ  ＥＤＴＡを含んでいた（アッセイ中では５０ｍＭ）。生化学的スクリーニングアッセイではｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ突然変異体の脱リン酸化された形態を用いた。キナーゼ反応は、時刻ｔ＝０にＡＴＰを加えることによって開始させた。
【０４６２】
活性は、３４０ｎｍにおける吸光度分光分析によって、ＮＡＤＨの時間依存性損失を追跡することによって測定した。その後、生じた進度曲線の直線部分を直線回帰によって解析して、活性を、その最も合った直線の傾きとして報告される吸光単位／時間として得た（モル／単位時間は、３４０ｎｍにおけるＮＡＤＨのモル吸光係数、すなわち６２５０Ｍ-1ｃｍ-1を用いることで計算することができる）。
【０４６３】
データは次の方程式を用いて評価した：Ｚ’＝１−［３*（σ+＋σ-）／｜μ+−μ-｜］（Ｚｈａｎｇ他、１９９９、Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、４（２）６７〜７３）、式中、μは平均を示し、σは標準偏差を示す。下付き文字は陽性または陰性対照を表す。頑強なスクリーニングアッセイのＺ’スコアは≧０．５０であるべきである。典型的な閾値＝μ+−３*σ+。閾値未満の値はすべて「当たり」とされる。
【０４６４】
用量応答は次の方程式を用いて解析した：ｙ＝ｍｉｎ＋｛（ｍａｘ−ｍｉｎ）／（１＋１０[化合物]-logIC50）｝、式中、ｙは観察された初期の傾きであり、ｍａｘ＝阻害剤が存在しない場合の傾きであり、ｍｉｎ＝無限量の阻害剤での傾きであり、ＩＣ50は観察された合計の振幅の半分に相当する［化合物］である（振幅＝ｍａｘ−ｍｉｎ）。
【０４６５】
Ａｂｌ  ＫＤの調節、活性化、または阻害を測定するために、試験化合物をアッセイに一定範囲の濃度で加えた。阻害剤は、マイクロモル範囲、ナノモル範囲、またはたとえば、ナノモル以下の範囲のＩＣ50でＡｂｌ  ＫＤの活性を阻害し得る。
【０４６６】
さらなるキナーゼアッセイ
ｃ−Ａｂｌ  ＰＫ／ＬＤＨ結合アッセイ（上記）に加えて、均一発光に基づいた阻害剤スクリーニングアッセイを、（とりわけ）ｃ−Ａｂｌ、ＭＥＴ、ＡｕｒＡ、およびＰＤＫ１キナーゼについて開発した。これらのアッセイのそれぞれにおいて、キナーゼ活性を定量するためにＡＴＰ枯渇アッセイ（Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）を用いた。Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）様式では、キナーゼ反応後に溶液中に残存するＡＴＰから発光シグナルを生じさせるために熱安定性のルシフェラーゼを用いる。発光シグナルはキナーゼ活性の量に逆相関している。
【０４６７】
ｃＡｂｌの発光に基づいた酵素アッセイ
材料：Ａｂｌ基質ペプチド＝ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ−ＯＨ（Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７、ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｒｏｃｈｅ９２４２３４２０）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（ストレプトマイセス種、Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、白色Ｃｏｓｔａｒ３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）、Ａｂｌキナーゼ（以下参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０４６８】
ストック溶液：１０ｍＭのＡｂｌ基質ペプチド（ｍｉｌｉＱＨ2Ｏ中に１３．４ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；１０ｍＭのＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存（５０μｌを毎日合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１％のＢＳＡ（１００ｍｌの０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ中に１ｇのＢＳＡ、ｐＨ７．５、−２０℃で保存）、１００ｍＭのＭｇＣｌ2；２００μＭのスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新しく作製または−２０℃で保存）。
【０４６９】
３８４ウェル様式の標準のアッセイ設定（２０μｌのキナーゼ反応、４０μｌの検出反応）：１０ｍＭのＭｇＣｌ2；１００μＭのＡｂｌ基質ペプチド；０．１％のＢＳＡ；１μｌの試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．４μｇ／ｍｌのＡｂｌキナーゼドメイン；１０μＭのＡＴＰ；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液。陽性対照は試験化合物なしのＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は１０μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時刻ｔ＝０にＡＴＰを加えることによって開始させた。キナーゼ反応は２１℃で３０分間インキュベーションを行い、その後、キナーゼ反応を停止させて発光反応を開始させるために２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えた。２１℃で２０分間インキュベーションを行ったのち、発光をプレート読取りルミノメーターで検出した。
【０４７０】
ＭＥＴの発光に基づいた酵素アッセイ
材料：ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ（４：１）基質（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ−０２７５）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７、ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｒｏｃｈｅ９２４２３４２０）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（ストレプトマイセス種、Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、白色Ｃｏｓｔａｒ３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）。ＭＥＴキナーゼ（以下参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０４７１】
ストック溶液：１０ｍｇ／ｍｌの水中のポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、−２０℃で保存；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１Ｍストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；１０ｍＭのＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存（５０μｌを毎日合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１％のＢＳＡ（１００ｍｌの０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ中に１ｇのＢＳＡ、ｐＨ７．５、−２０℃で保存）、１００ｍＭのＭｇＣｌ2；２００μＭのスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新しく作製または−２０℃で保存）。
【０４７２】
３８４ウェル様式の標準のアッセイ設定（２０μｌのキナーゼ反応、４０μｌの検出反応）：１０ｍＭのＭｇＣｌ2；０．３ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒ；０．１％のＢＳＡ；１μｌの試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．４μｇ／ｍｌのＭＥＴキナーゼ；１０μＭのＡＴＰ；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液。陽性対照は試験化合物なしのＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は１０μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時刻ｔ＝０にＡＴＰを加えることによって開始させた。キナーゼ反応は２１℃で６０分間インキュベーションを行い、その後、キナーゼ反応を停止させて発光反応を開始させるために２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えた。２１℃で２０分間インキュベーションを行ったのち、発光をプレート読取りルミノメーターで検出した。
【０４７３】
ＡｕｒＡの発光に基づいた酵素アッセイ
材料：Ｋｅｍｐｔｉｄｅペプチド基質＝ＬＲＲＡＳＬＧ（Ｂｉｏｐｅｐｔｉｄｅ、カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７、ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、１０％のＢｒｉｊ３５（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号２０３７２８）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（ストレプトマイセス種、Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、白色Ｃｏｓｔａｒ３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）、自己リン酸化ＡｕｒＡキナーゼ（以下参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０４７４】
ストック溶液：１０ｍＭのＫｅｍｐｔｉｄｅペプチド（水中に７．７２ｍｇ／ｍｌ）、−２０℃で保存；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液＋０．０１５％のＢｒｉｊ３５、ｐＨ７．５（５ｍｌの１ＭのＨＥＰＥＳストック＋７５μＬの１０％のＢｒｉｊ３５＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；１０ｍＭのＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存（５０μｌを毎日合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに希釈＝５０μＭのＡＴＰ作業ストック）；１００ｍＭのＭｇＣｌ2；２００μＭのスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新しく作製または−２０℃で保存）。
【０４７５】
ＡｕｒＡの自己リン酸化反応：ＡＴＰおよびＭｇＣｌ2を、１〜５ｍｇ／ｍｌのＡｕｒＡに、それぞれ１０ｍＭおよび１００ｍＭの最終濃度で加えた。自己リン酸化反応は２１℃で２〜３時間インキュベーションを行った。ＥＤＴＡを５０ｍＭの最終濃度で加えることによって反応を停止させ、試料を液体Ｎ2で瞬間冷凍し、−８０℃で保存した。
【０４７６】
３８４ウェル様式の標準のアッセイ設定（２０μｌのキナーゼ反応、４０μｌの検出反応）：１０ｍＭのＭｇＣｌ2；０．２ｍＭのＫｅｍｐｔｉｄｅペプチド；１μｌの試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．３μｇ／ｍｌの自己リン酸化ＡｕｒＡキナーゼ；１０μＭのＡＴＰ；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．０１５％のＢｒｉｊ緩衝液。陽性対照は試験化合物なしのＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は５μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時刻ｔ＝０にＡＴＰを加えることによって開始させた。キナーゼ反応は２１℃で４５分間インキュベーションを行い、その後、キナーゼ反応を停止させて発光反応を開始させるために２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えた。２１℃で２０分間インキュベーションを行ったのち、発光をプレート読取りルミノメーターで検出した。
【０４７７】
ＰＤＫ１の発光に基づいた酵素アッセイ
材料：ＰＤＫｔｉｄｅペプチド基質＝
（Ｕｐｓｔａｔｅカタログ番号１２−４０１）、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ−３３７７、ＦＷ＝５５１）、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、１０％のＢｒｉｊ３５（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号２０３７２８）、ＭｇＣｌ2、スタウロスポリン（ストレプトマイセス種、Ｓｉｇｍａカタログ番号８５６６０−１ＭＧ）、白色Ｃｏｓｔａｒ３８４ウェル平底プレート（ＶＷＲカタログ番号２９４４４−０８８）、ＰＤＫ１キナーゼ（以下参照）、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｖ６７１２）。
【０４７８】
ストック溶液：１ｍＭのＰＤＫｔｉｄｅ基質（２００μｌ中に１ｍｇ、Ｕｐｓｔａｔｅにより供給されたまま）、−２０℃で保存；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５（５ｍｌの１ＭのＨＥＰＥＳストック＋４５ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏ）；１０ｍＭのＡＴＰ（ｄＨ2Ｏ中に５．５１ｍｇ／ｍｌ）−２０℃で保存（２５μｌを毎日合計１０ｍｌのｍｉｌｉＱＨ2Ｏに希釈＝２５μＭのＡＴＰ作業ストック）；１００ｍＭのＭｇＣｌ2；１０％のＢｒｉｊ３５、２〜８℃で保存；２００μＭのスタウロスポリン、２×Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬（新しく作製または−２０℃で保存）。
【０４７９】
３８４ウェル様式の標準のアッセイ設定（２０μｌのキナーゼ反応、４０μｌの検出反応）：１０ｍＭのＭｇＣｌ2；０．０１ｍＭのＰＤＫｔｉｄｅ；１μｌの試験化合物（ＤＭＳＯ中）；０．１μｇ／ｍｌのＰＤＫ１キナーゼ；５μＭのＡＴＰ；１０ｍＭのＭｇＣｌ2；１００ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．０１％のＢｒｉｊ緩衝液。陽性対照は試験化合物なしのＤＭＳＯを含んでいた。陰性対照は１０μＭのスタウロスポリンを含んでいた。キナーゼ反応は、時刻ｔ＝０にＡＴＰを加えることによって開始させた。キナーゼ反応は２１℃で４０分間インキュベーションを行い、その後、キナーゼ反応を停止させて発光反応を開始させるために２０μｌのＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を各ウェルに加えた。２１℃で２０分間インキュベーションを行ったのち、発光をプレート読取りルミノメーターで検出した。
【０４８０】
同時発現プラスミドの調製
λホスファターゼ同時発現プラスミドを以下のように構築した。
【０４８１】
オーロラキナーゼのオープンリーディングフレームを、ホモサピエンス（ヒト）ＨｅｐＧ２のｃＤＮＡライブラリ（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６５）から、以下のプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した：
順方向プライマー：TCAAAAAAGAGGCAGTGGGCTTTG
逆方向プライマー：CTGAATTTGCTGTGATCCAGG
【０４８２】
ＰＣＲ産物（７９５塩基対が予測された）を以下のようにゲル精製した。ＰＣＲ産物は、ＴＡＥ緩衝液中の１％アガロースゲル上の電気泳動によって精製し、適切な大きさのバンドをゲルから切り出し、標準のゲル抽出キットを用いて溶出した。溶出されたＤＮＡを５分間室温で、トポイソメラーゼを用いてｐＳＢ２−ＴＯＰＯ内にライゲーションさせた。ベクターｐＳＢ２−ＴＯＰＯとは、トポイソメラーゼによって活性化される、ｐＥＴ２６ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）の変形であり、以下の配列がＮｄｅＩ部位内に挿入されており：CATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGT GGTCATATGTCCCTT
以下の配列がＢａｍＨＩ部位内に挿入されている：AAGGGGGATCCTAAACTGCAGAGATCC
生じたプラスミドの配列、すなわちシャイン−ダルガノ配列から「最初の」ＮｄｅＩ部位、停止部位および「最初の」ＢａｍＨＩ部位にわたる配列は以下のとおりである：
AAGGAGGAGATATACATAATGGGCCATCATCATCATCATCACGGTGGTCATATGTCCCTT [ORF] AAGGGGGATCCTAAACTGCAGAGATCC
このベクターを用いて発現されるオーロラキナーゼは、Ｎ末端に１４個のアミノ酸が付加されており（ＭｅｔＧｌｙＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＧｌｙＧｌｙＨｉｓＭｅｔＳｅｒＬｅｕ）、Ｃ末端に４個のアミノ酸が付加されている（ＧｌｕＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）。
【０４８３】
その後、λバクテリオファージ由来のホスファターゼ遺伝子を上記プラスミド内に挿入することによってホスファターゼ同時発現プラスミドを作製した（Ｍａｔｓｕｉ  Ｔ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２００１、２８４：７９８〜８０７）。ホスファターゼ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、鋳型λバクテリオファージＤＮＡ（ＨｉｎＤＩＩＩ消化、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）からＰＣＲを用いて増幅した：
順方向プライマー（ＰＰｆｏｒ）：GCAGAGATCCGAATTCGAGCTC CGTCGACGGATGGAGTGAAAGAGATGCGC
逆方向プライマー（ＰＰｒｅｖ）：GGTGGTGGTGCTCGAGTGCGGCCGCAA GCTTTCATCATGCGCCTTCTCCCTGTAC
【０４８４】
ＰＣＲ産物（７４４塩基対が予測された）をゲル精製した。その後、精製したＤＮＡならびに非同時発現プラスミドＤＮＡをＳａｃＩおよびＸｈｏＩ制限酵素で消化した。その後、消化したプラスミドおよびＰＣＲ産物をどちらもゲル精製し、８時間、１６℃で、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて一緒にライゲーションさせ、標準の手順を用いてＴｏｐ１０細胞内に形質転換させた。同時発現プラスミド内にホスファターゼ遺伝子が存在することは配列決定によって確認した。ここで従った標準の分子生物学プロトコルには、たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、分子クローニング：実験室の手引き（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク、２００１、およびＡｕｓｕｂｅｌ他、分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニューヨーク、１９８９に記載の技術も参照されたい。
【０４８５】
この同時発現プラスミドは、ｌａｃプロモーターの制御下にオーロラキナーゼおよびλホスファターゼの遺伝子をどちらも含み、そのそれぞれが独自のリボソーム結合部位を有する。ホスファターゼを、標的遺伝子の下流の複数のクローニング部位の真ん中にクローニングすることによって、ホスファターゼを他のプラスミド内にサブクローニングするために便利な制限部位が利用可能となる。これらの部位には、キナーゼとホスファターゼとの間のＳａｃＩ、ＳａｌＩおよびＥｃｏＲＩならびにホスファターゼの下流のＨｉｎＤＩＩＩ、ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩが含まれる。
【０４８６】
プロテインキナーゼの発現
ｃ−Ａｂｌのオープンリーディングフレームを、新しく採取したマウス肝臓から市販のキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて調製したハツカネズミ（マウス）のｃＤＮＡライブラリから、以下のプライマーを用いたＰＣＲによって増幅した：
順方向プライマー：GACAAGTGGGAAATGGAGC
逆方向プライマー：CGCCTCGTTTCCCCAGCTC
【０４８７】
ＰＣＲ産物（８４６塩基対が予測された）を、ＰＣＲクリーンアップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＰＣＲ反応混合物から精製した。精製したＤＮＡを５分間室温で、トポイソメラーゼを用いてｐＳＧＸ３−ＴＯＰＯ内にライゲーションさせた。ベクターｐＳＧＸ３−ＴＯＰＯとは、トポイソメラーゼによって活性化される、ｐＥＴ２６ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）の変形であり、以下の配列がＮｄｅＩ部位内に挿入されており：CATATGTCCCTT
以下の配列がＢａｍＨＩ部位内に挿入されている：AAGGGCATCATCACCATCACCACTGATCC
生じたプラスミドの配列、すなわちシャイン−ダルガノ配列から停止部位およびＢａｍＨＩ部位にわたる配列は以下のとおりである：
AAGGAGGA GATATACATATGTC CCTT[ORF]AAGGGCATCAT CACCATCACCACTGATCC
このベクターを用いて発現されるｃ−Ａｂｌは、そのＮ末端に３個のアミノ酸が付加されており（ＭｅｔＳｅｒＬｅｕ）、そのＣ末端に８個のアミノ酸が付加されている（ＧｌｕＧｌｙＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓ）。
【０４８８】
その後、例１のオーロラ同時発現プラスミドからのホスファターゼを上記プラスミド内にサブクローニングすることによって、ｃ−Ａｂｌ／ホスファターゼ同時発現プラスミドを作製した。オーロラ同時発現プラスミドならびにＡｂｌ非同時発現プラスミドは、どちらも制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩで３時間消化した。ＤＮＡ断片をゲル精製し、オーロラプラスミド由来のホスファターゼ遺伝子を消化したｃ−Ａｂｌプラスミドと共に８時間、１６℃でライゲーションさせ、Ｔｏｐ１０細胞内に形質転換させた。生じた構築体内にホスファターゼ遺伝子が存在することは制限消化分析によって確認した。
【０４８９】
このプラスミドは、ｃ−Ａｂｌおよびλホスファターゼの同時発現をコードしている。これは、標的遺伝子の上流に、このホスファターゼ同時発現プラスミド内に他の標的タンパク質をサブクローニングするために用いることができる２つのユニークな制限部位、すなわちＸｂａＩおよびＮｄｅＩのさらなる利点を有する。
【０４９０】
Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉのプラスミドは、製造者の推奨手順および以下のオリゴヌクレオチドを用いて、Ｑｕｉｃｋ  Ｃｈａｎｇｅ突然変異誘発キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて、Ａｂｌプラスミドを変更することによって調製した：
Mm05582dS4 5'-CCACCATTCTACATAATCATTGAGTTCATGACCTATGGG-3'
Mm05582dA4 5'-CCCATAGGTCATGAACTCAATGATTATGTAGAATGGTGG-3'
【０４９１】
ホスファターゼ同時発現プラスミドからのタンパク質は、以下のように精製した。非同時発現プラスミドを化学的にコンピテントなＢＬ２１（ＤＥ３）コドン＋ＲＩＬ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）細胞内に形質転換させ、同時発現プラスミドをＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＳＡ０１４５（λファージの溶解性遺伝子を発現し、凍結と解凍により溶解する株（Ｃｒａｂｔｒｅｅ  Ｓ、Ｃｒｏｎａｎ  ＪＥ  Ｊｒ．、Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、１９８４年４月；１５８（１）：３５４〜６））内に形質転換させ、カナマイシンを含むＬＢ寒天を含むペトリ皿に蒔いた。単離した単一コロニーを対数期中間まで増殖させ、１５％のグリセロールを含むＬＢ中、−８０℃で保存した。このグリセロールストックを、カナマイシンを含むＬＢ寒天プレートに画線し、単一コロニーを用いてカナマイシンおよびクロラムフェニコールを含むＬＢの１０ｍｌ培養物を接種し、これを、３０℃で終夜、振盪しながらインキュベーションを行った。この培養物を用いてカナマイシンおよびクロラムフェニコールを含む５００ｍｌのＬＢを含む２Ｌのフラスコを接種し、これを３７℃で対数期中間まで増殖させ、ＩＰＴＧを０．５ｍＭの最終濃度で加えることによって誘発させた。誘発後、フラスコを２１℃で１８時間、振盪しながらインキュベーションを行った。
【０４９２】
ｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤ（キナーゼドメイン）を以下のように精製した。遠心分離によって細胞を収集し、超音波処理を用いて希釈したクラッキング緩衝液で溶解し（５０ｍＭのトリスＨＣｌ、ｐＨ７．５、５００ｍＭのＫＣｌ、０．１％のＴｗｅｅｎ２０、２０ｍＭのイミダゾール、遠心分離して細胞細片を除去した。ニッケル（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、スウェーデンＵｐｐｓａｌａ）をチャージしたＩＭＡＣカラムで可溶性画分を精製し、５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．８中に２０ｍＭ〜５００ｍＭのイミダゾールの勾配、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのメチオニン、１０％のグリセロールを用いてネイティブ条件下で溶出させた。その後、ＧＦ５緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのメチオニン、５００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、および１０％のグリセロール）で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ７５調製グレードカラムを用いたゲル濾過によってタンパク質をさらに精製した。精製したｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤキナーゼドメインを含む画分をプールした。得られたタンパク質は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上の電気泳動によって判断して９８％純粋であった。精製したタンパク質の質量分析により、これが主に一リン酸化されていたことが示された。その後、Ｓｈｒｉｍｐアルカリホスファターゼ（ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、カナダＢｕｒｌｉｎｇｔｏｎ）を用いて以下の条件下でタンパク質を脱リン酸化した：１００単位のＳｈｒｉｍｐアルカリホスファターゼ／１ｍｇのｃ−Ａｂｌ  Ｔ３１５Ｉ  ＫＤ、１００ｍＭのＭｇＣｌ2、および２５０ｍＭの追加のＮａＣｌ。反応を終夜２３℃で行った。質量分析によってタンパク質はリン酸化されていないと決定された。すべての沈殿物を遠心して除去し、ＧＦ４緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのメチオニン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、および１０％のグリセロール）で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ７５調製グレードカラムを用いたゲル濾過によって、可溶性画分を反応物質から分離した。
【０４９３】
Ｍｅｔの精製：
ヒトＭｅｔのキナーゼドメインを発現している１２ＬのＳｆ９昆虫細胞培養物の半量から生成した細胞ペレットを、最初の培養物１Ｌあたり約４０ｍｌの容量の、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．７および２５０ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液に再懸濁させた。最初の培養物１Ｌあたり１錠のＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号１８７３５８０）を加えた。懸濁液を１時間、４℃で撹拌した。細片を、３０分間、３９，８００×ｇ、４℃における遠心分離によって除去した。上清を５００ｍｌのビーカーに傾瀉し、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニンで事前に平衡化した、１０ｍｌのＱｉａｇｅｎ  Ｎｉ−ＮＴＡアガロースの５０％スラリー（カタログ番号３０２５０）を加え、３０分間４℃で撹拌した。その後、試料を４℃のドリップカラムに注ぎ、１０倍カラム容量の５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニンで洗浄した。タンパク質を、それぞれ２倍カラム容量の、５０ｍＭ、２００ｍＭ、および５００ｍＭのイミダゾールを逐次的に含む同じ緩衝液の段階勾配を用いて溶出させた。１ｍｇのタンパク質あたり４０単位のＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０１２７０１７）を用いて、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニン中、４℃で透析しながら、６×ヒスチジンタグを終夜切断した。試料を、ニッケルでチャージし、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニンで平衡化したＰｈａｒｍａｃｉａの５ｍｌ  ＩＭＡＣカラム（カタログ番号１７−０４０９−０１）に通すことによって６×ヒスチジンタグを除去した。低い親和性でニッケルカラムに結合している切断されたタンパク質を段階勾配で溶出させた。段階勾配は、それぞれ４倍カラム容量の、１５％、その後、８０％のＢ側（Ａ側＝５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニン；Ｂ側＝５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、５００ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニン）を流した。Ｍｅｔタンパク質は最初の段階（１５％）で溶出され、切断されていないＭｅｔおよび切断されたヒスチジンタグは８０％画分で溶出された。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル分析により切断されたＭｅｔの存在が確認されたのち、１５％画分をプールした；さらなる精製は、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロールおよび５ｍＭのＤＴＴで平衡化したＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＨｉＬｏａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００調製グレード（カタログ番号１７−１０６９−０１）上のゲル濾過クロマトグラフィーによって行った。最も清浄な画分を��わせ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  １０，０００Ｄａ  ＭＷＣＯ遠心分離フィルターユニット（カタログ番号ＵＦＣ９０１０２４）における遠心分離によって〜１０．４ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【０４９４】
ＡｕｒＡの精製：
ヒトＡｕｒｏｒａ−２を発現している６Ｌの培養細胞から生成したＳｆ９昆虫細胞ペレット（〜１８ｇ）を、５０ｍＭのリン酸Ｎａ、ｐＨ８．０、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、０．２％ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＢＯＧ）および３ｍＭのβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）に再懸濁させた。最初の培養物１Ｌあたり１錠のＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号１８７３５８０）および８５単位のＢｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｎｏｖａｇｅｎカタログ番号７０７４６−３））を加えた。ペレットを最初の培養物１Ｌあたり約５０ｍｌに再懸濁させ、その後、２回の３０〜４５秒間の処理を用いて氷上で超音波処理した（１００％負荷サイクル）。細片を遠心分離によって除去し、上清を０．８μｍのシリンジフィルターに通し、その後、５ｍｌのＮｉ2+ＨｉＴｒａｐカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に載せた。カラムを６倍カラム容量の５０ｍＭのリン酸Ｎａ、ｐＨ８．０、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、３ｍＭのＢＭＥで洗浄した。５００ｍＭのイミダゾールを含む同じ緩衝液の直線勾配を用いてタンパク質を溶出させた。溶出液（２４ｍｌ）を、５０ｍＭのリン酸Ｎａ、ｐＨ８．０、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、３ｍＭのＢＭＥおよび１０，０００単位のＴＥＶ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０１２７−０１７）を含む緩衝液中で、終夜４℃で切断した。上述のようにタンパク質を第２のニッケル親和性カラムに通し、流した液を収集した。切断されたタンパク質画分を合わせ、遠心濃縮機を用いて濃縮した。さらなる精製は、５０ｍＭのリン酸Ｎａ（ｐＨ８．０）、２５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．１ｍＭのＡＭＰ−ＰＮＰまたはＡＴＰ緩衝液、および５ｍＭのＤＴＴ中のＳ７５サイズカラム上のゲル濾過クロマトグラフィーによって行った。最も清浄な画分を合わせ、約８〜１１ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、１２０μｌアリコートで液体窒素中で瞬間冷凍して−８０℃で保存したか、または４℃で保存した。
【０４９５】
ＰＤＫ１の精製：
ヒトＰＤＫ１を発現している６ＬのＳｆ９昆虫細胞から生成した細胞ペレットを、最初の培養物１Ｌあたり約４０ｍＬの容量の、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．７および２５０ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液に再懸濁させた。最初の培養物１Ｌあたり１錠のＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号１８７３５８０）および８５単位のＢｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｎｏｖａｇｅｎカタログ番号７０７４６−３））を加えた。懸濁液を１時間、４℃で撹拌した。細片を、３０分間、３９，８００×ｇ、４℃における遠心分離によって除去した。上清を５００ｍｌのビーカーに傾瀉し、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニンで事前に平衡化した１０ｍｌのＱｉａｇｅｎ  Ｎｉ−ＮＴＡアガロースの５０％スラリー（カタログ番号３０２５０）を加え、３０分間、４℃で撹拌した。その後、試料を４℃のドリップカラムに注ぎ、１０倍カラム容量の５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニンで洗浄した。タンパク質を、それぞれ２倍カラム容量の、５０ｍＭ、および５００ｍＭのイミダゾールを逐次的に含む同じ緩衝液の段階勾配を用いて溶出させた。１ｍｇのタンパク質あたり４０単位のＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０１２７０１７）を用いて、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニン中、４℃で透析しながら、６×ヒスチジンタグを終夜切断した。試料を、ニッケルでチャージし、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、および１０ｍＭのメチオニンで平衡化したＰｈａｒｍａｃｉａの５ｍｌ  ＩＭＡＣカラム（カタログ番号１７−０４０９−０１）に通すことによって、６×ヒスチジンタグを除去した。切断されたタンパク質は流した液中に溶出されたが、切断されていないタンパク質およびＨｉｓタグはＮｉ−カラムに結合したままであった。切断されたタンパク質画分を合わせ、遠心濃縮機を用いて濃縮した。さらなる精製は、２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、および５ｍＭのＤＴＴで平衡化したＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＨｉＬｏａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００調製グレード（カタログ番号１７−１０６９−０１）上のゲル濾過クロマトグラフィーによって行った。最も清浄な画分を合わせ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  １０，０００Ｄａ  ＭＷＣＯ遠心分離フィルターユニット（カタログ番号ＵＦＣ９０１０２４）における遠心分離によって〜１５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【０４９６】
（実施例３）
細胞アッセイ
ＭＶ４−１１ならびにＴＨＰ細胞は１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）およびペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＩｓｃｏｖｅ改変ダルベッコ培地中で維持し、Ｂａ／Ｆ３細胞は１０％のＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシンおよび５ｎｇ／ｍｌの組換えマウスＩＬ−３を添加したＲＰＭＩ１６４０中で維持した。
【０４９７】
細胞生存アッセイ
以下のアッセイにおいて化合物は２つ組で試験した。
【０４９８】
９６ウェルＸＴＴアッセイ：細胞は、９６ウェルプレート上で７２時間、３７℃で、様々な濃度の化合物を含む増殖培地（２つ組）で増殖させた。開始細胞数は５０００〜８０００個の細胞／ウェルであり、容量は１２０μｌであった。７２時間のインキュベーション後、４０μｌのＸＴＴ標識混合物（３’−［１−（フェニルアミノ−カルボニル）−３，４−テトラゾリウム］−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸ナトリウムの水和物と電子カップリング試薬ＰＭＳ（Ｎ−メチルジベンゾピラジンメチル硫酸との５０：１の溶液）をプレートの各ウェルに加えた。３７℃でさらに２〜６時間インキュベーションを行ったのち、４０５ｎｍでの吸光度の読取りおよび６５０ｎｍでのバックグラウンド補正を分光光度計で測定した。
【０４９９】
３８４ウェルＡｌｍａｒＢｌｕｅアッセイ：９０μｌの細胞懸濁液を、ＤＭＳＯ中０．５μｌの化合物またはＤＭＳＯのみを事前に印刷した３８４ウェルプレートの各ウェルに蒔いた。開始細胞数は４０００個の細胞／ウェルであった。７２時間のインキュベーション後、１０μｌのＡｌｍａｒＢｌｕｅ溶液（ＰＢＳ中に４４０μＭのリザズリン）をプレートの各ウェルに加えた。３７℃でさらに２時間のインキュベーションを行ったのち、５３５ｎｍの励起および５９１ｎｍの発光を用いて、ＴＥＣＡＮプレート読取り蛍光光度計で蛍光を測定した。
【０５００】
ＢＣＲ−ＡＢＬホスホ−ＥＬＩＳＡアッセイ
以下の表は、ＢＣＲ−ＡＢＬホスホ−ＥＬＩＳＡ（「Ｐ−ＥＬＩＳＡ」）アッセイで典型的に使用される試薬を示す。
【表４０−１】
2008508303.tif 000155
【０５０１】
【表４０−２】
2008508303.tif 000156
【０５０２】
細胞（ＷＴ  ＢＣＲ−ＡＢＬ、他のキナーゼ、またはＴ３１５Ｉ、Ｙ２５３Ｆ、もしくはＢＣＲ−ＡＢＬの他の突然変異体で形質移入したＢａ／Ｆ3細胞）を、ＩＬ−３を存在させずに、アッセイの少なくとも１／２週間に増殖させた。アッセイの前日、アッセイ時に細胞が対数期にあるように、細胞に新しい培地を与えた。９６ウェルプレートの各ウェルが約２００，０００個の細胞を含むように、ＩＬ−３を存在させずに少なくとも１／２週間増殖させたＢａ／Ｆ３細胞をＲＰＭＩ１６４０に再懸濁させた。細胞を、連続希釈した濃度の試験化合物を含む９６ウェルプレートに分配した。細胞は、典型的には試験化合物と共にまたは試験化合物なしで６０〜１２０分間、５％ＣＯ2、３７℃でインキュベーションを行った。インキュベーションは、１０％のＦＣＳまたは５０％のヒト血漿などの添加剤を用いてもしくは用いずに行った。化合物のインキュベーションののち、溶解緩衝液を加え、１０〜１５分間インキュベーションを行った。遠心分離によって溶解物を清澄にした。
【０５０３】
ＥＬＩＳＡプレートを作製するために、市販の抗ＡＢＬ抗体（たとえば（Ａｂ−３、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  ＯＰ２０）をコーティング緩衝液（０．１Ｍの炭酸Ｎａ、ｐＨ９．５）中に０．１２５μｇ／ｍｌの濃度で調製し、１０ｍｌ／プレート（１２．５μｌの１００μｇ／ｍｌのＡｂ／１０ｍｌ）で蒔いた。高結合マルチウェルプレートでは、コーティング緩衝液中に１００μｌのＡｂを各ウェルに加え、各プレートをプレートシールで被い、終夜４℃でインキュベーションを行った。
【０５０４】
過剰の抗体を除去し、ＥＬＩＳＡプレートを２００μｌの洗浄バッファー（ＰＢＳ中に０．０５％のＴｗｅｅｎ、ｐＨ７．４）で３〜４回洗浄した。１５０μｌの溶解物（上記参照）をＥＬＩＳＡプレートに移した。プレートを密封し、２時間、室温でインキュベーションを行った。検出抗体（たとえばＨＲＰにコンジュゲートした抗ｐＴｙｒまたはコンジュゲートしていないα−ｐ−Ｙ  ４Ｇ１０、Ｕｐｓｔａｔｅ）をアッセイ希釈剤中で調製した。抗体をアッセイ希釈剤で１：１０００に希釈し（ストック＝２μｇ／μｌ、１００μｌ中に２００μｇ；最終濃度＝２μｇ／ｍｌ）、１０ｍｌの希釈抗体／プレートを加えた。溶解物をＥＬＩＳＡプレートから除去し、ウェルを２００μｌの洗浄バッファー／ウェルで４回洗浄した。１００μｌの検出抗体を各ウェルに加え、プレートを被い、１時間室温（２１℃）でインキュベーションを行った。過剰の検出抗体をＥＬＩＳＡプレートから除去し、ウェルを２００μｌの洗浄バッファー／ウェルで４回洗浄した。
【０５０５】
必要な場合は（すなわちコンジュゲートしていない抗ｐＴｙｒ抗体では）、二次抗体（ヤギ抗ウサギＨＲＰ）をアッセイ希釈剤で１：３０００に希釈し（１０ｍｌの希釈剤あたり３．３３μｌ）、１０ｍｌの希釈抗体／プレートで加える。過剰の二次抗体をＥＬＩＳＡプレートから除去し、プレートを２００μｌ／ウェルの洗浄バッファーで４回洗浄した。
【０５０６】
基質試薬Ａおよび基質試薬Ｂ（Ｐｉｅｒｃｅカタログ番号３７０７０ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡ  Ｐｉｃｏ化学発光基質）を使用直前に加えた（生じた溶液１０ｍｌ／プレート）。１００μｌ／ウェルの基質を加え、１分間混合し、ルミノメーターで化学発光シグナルを測定した。
【０５０７】
選定した化合物のアッセイ結果：
Ａｂｌ＿Ｔ３１５バイオアッセイ：
ＩＣ50＜０．０５μＭ：ＡＥ１、ＡＥ２、ＡＥ３、ＡＥ４、ＡＥ５、ＡＥ６、ＡＥ７、ＡＥ８、ＡＥ９、ＡＥ１０、ＡＥ１１、ＡＥ１２、ＡＥ１３、ＡＥ１４、ＡＥ１５、ＡＥ１６、ＡＥ１７、ＡＥ１８、ＡＥ１９、ＡＥ２０、ＡＥ２１、ＡＥ２２、ＡＥ２３、ＡＥ２４、ＡＥ２５、ＡＥ２７、ＡＥ２８、ＡＥ２９、ＡＥ３０、ＡＥ３１、ＡＥ３２、ＡＥ３３、ＡＥ３４、ＡＥ３５、ＡＥ３７、ＡＥ４０、ＡＥ４１、ＡＥ４２、ＡＥ４３、ＡＥ４４、ＡＥ４７、ＡＥ４８、ＡＥ４９、ＡＥ５０、ＡＥ５２、ＡＥ５５、ＡＥ５８、ＡＥ５９、ＡＥ６０、ＡＥ６１、ＡＥ６４、ＡＥ６２、ＡＥ６３、ＡＥ６５、ＡＥ６６、ＡＥ６７およびＡＥ６８。
【０５０８】
０．０５μＭ＜ＩＣ50＜０．２μＭ：ＡＥ２６、ＡＥ３６、ＡＥ３８、ＡＥ３９、ＡＥ４５、ＡＥ４６、ＡＥ５１、ＡＥ５３およびＡＥ５４。
【０５０９】
Ａｂｌ＿Ｔ３１５  ｐ−ＥＬＩＳＡ細胞アッセイ：
ＩＣ50＜０．１μＭ：ＡＥ１、ＡＥ３、ＡＥ５、ＡＥ６、ＡＥ７、ＡＥ１４、ＡＥ２０、ＡＥ２５、ＡＥ２６、ＡＥ３０、ＡＥ３１、ＡＥ３７、ＡＥ４１、ＡＥ４２、ＡＥ４４、ＡＥ５４、ＡＥ５５、ＡＥ５８およびＡＥ６４。
【０５１０】
０．１μＭ＜ＩＣ50＜１μＭ：ＡＥ２、ＡＥ４、ＡＥ９、ＡＥ１１、ＡＥ１３、ＡＥ１５、ＡＥ１６、ＡＥ１８、ＡＥ１９、ＡＥ２２、ＡＥ２９、ＡＥ３２、ＡＥ３４、ＡＥ３５、ＡＥ４８、ＡＥ４９、ＡＥ５２、ＡＥ６１、ＡＥ６２およびＡＥ６３。
【０５１１】
ＡｕｒＡバイオアッセイ：
ＩＣ50＜０．５μＭ：ＡＥ６、ＡＥ７、ＡＥ１５、ＡＥ３０、ＡＥ３１、ＡＥ３２、ＡＥ３４、ＡＥ３５、ＡＥ４７、ＡＥ５１、ＡＥ５２、ＡＥ５３、ＡＥ５４、ＡＥ５５およびＡＥ６０。
【０５１２】
０．５μＭ＜ＩＣ50＜５μＭ：ＡＥ１、ＡＥ１１、ＡＥ１３、ＡＥ３３、ＡＥ５９、ＡＥ６２、ＡＥ６７、ＡＥ６８。
【０５１３】
Ｍｅｔバイオアッセイ：
ＩＣ50＜１μＭ：ＡＥ８、ＡＥ１４、ＡＥ４０、ＡＥ４２、ＡＥ４３、ＡＥ４８、ＡＥ５３、ＡＥ５６およびＡＥ６６。
【０５１４】
１μＭ＜ＩＣ50＜５μＭ：ＡＥ２２、ＡＥ２６、ＡＥ４１、ＡＥ４６、ＡＥ５２、ＡＥ５７、ＡＥ５８およびＡＥ６５。
【０５１５】
ＰＤＫ１バイオアッセイ：
ＩＣ50＜１μＭ：ＡＥ５０、ＡＥ５５およびＡＥ５８。
【０５１６】
１μＭ＜ＩＣ50＜５μＭ：ＡＥ２、ＡＥ３、ＡＥ９、ＡＥ１０、ＡＥ１１、ＡＥ２０、ＡＥ２１、ＡＥ３８、ＡＥ４４、ＡＥ４５、ＡＥ４６、ＡＥ４８、ＡＥ４９、ＡＥ５２、ＡＥ５３、ＡＥ５９、ＡＥ６０、ＡＥ６１、ＡＥ６３およびＡＥ６４。
【図面の簡単な説明】
【０５１７】
【図１】図１は、ＡＢＬエクソンＩａに従った野生型ＡＢＬの番号づけを示す。
【図１】
2008508303.tif 000168
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月10日(2007.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008508303000001.app
【国際調査報告】
2008508303.tif 000169
2008508303.tif 000170
2008508303.tif 000171
2008508303.tif 000172