(57)【要約】本発明はジカルボン酸誘導体に関し、生理学的に活性な物質であり、腫瘍の細胞増殖抑制化学療法において既知の細胞増殖抑制剤（シクロホスファンおよびシスプラチン）の抗腫瘍活性および抗転移活性を増大するための、毒性の低いおよび毒性のない薬剤として用いることができるジカルボン酸モノオキシジアミンおよびジオキシアミドに関する。本発明の目的は、既知の細胞増殖抑制剤の抗腫瘍および抗転移効果を増大するために生体に作用を及ぼす薬剤の組合せを拡大することである。本発明の本質は、明細書に記載した式で示されるジカルボン酸誘導体を、細胞増殖抑制剤の抗腫瘍および抗転移効果を増大するための薬剤として提案するということである。請求の範囲に記載の化合物は、既知の細胞増殖抑制剤の抗腫瘍および抗転移効果を増大するための毒性の低い薬剤として用いることができると同時に細胞増殖抑制剤の治療用量を１／４に減少させる。提案された化合物の最小用量をシスプラチンと併用することにより、Ｂ−１６メラノーマ実験細胞における転移プロセスを完全に阻害することが可能である。さらに、提案された化合物の最小用量での、細胞増殖抑制剤の最小用量（調製物のいずれも単独では効果を示さない）との併用は、白血病の処置において高い治療効果を得ることが可能である（試験群におけるＰ−３８８白血病を有する動物の生存率は１００％である）。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式２：
ＲＣＯＮＨＯＨ（２）
［式中、ＲはＨＯＮＨＣＯ；ＨＯＮＨＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）；ＨＯＯＣＣＨ2ＣＨ2；またはＨＯＯＣＣＨ＝ＣＨ］
で示されるジカルボン酸の、転移阻害剤および抗腫瘍調製物の化学療法活性を増大する薬剤としての使用。
【請求項２】
細胞増殖抑制剤を式２：
ＲＣＯＮＨＯＨ（２）
［式中、ＲはＨＯＮＨＣＯ；ＨＯＮＨＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）；ＨＯＯＣＣＨ2ＣＨ2；またはＨＯＯＣＣＨ＝ＣＨ］
で示されるジカルボン酸誘導体と組み合わせて用いることを特徴とする、腫瘍の細胞増殖抑制化学療法における効果を増大するための方法。
【請求項３】
腫瘍を、既知の細胞増殖抑制剤および式２：
ＲＣＯＮＨＯＨ（２）
［式中、ＲはＨＯＮＨＣＯ；ＨＯＮＨＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）；ＨＯＯＣＣＨ2ＣＨ2；またはＨＯＯＣＣＨ＝ＣＨ］
で示されるジカルボン酸誘導体の組合せの作用に付することを特徴とする、転移プロセスの阻害方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生理学的に活性な物質であり、腫瘍の細胞増殖抑制化学療法において既知の細胞増殖抑制剤の抗腫瘍活性および抗転移活性を増大するための毒性の低い薬剤として医療行為に用いることができる、ジカルボン酸誘導体に関する。本発明は特に、
式２：ＲＣＯＮＨＯＨ  （２）
［式中、ＲはＨＯＮＨＣＯ；ＨＯＮＨＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）；ＨＯＯＣＣＨ2ＣＨ2；またはＨＯＯＣＣＨ＝ＣＨ］
で示されるジカルボン酸モノオキシアミドおよびジオキシアミドに関する。
【背景技術】
【０００２】
式２で示される化合物は生理学的に活性な物質であり、細胞増殖抑制剤の抗腫瘍効果および抗転移効果を増大するための薬剤として使用することができる。さらに、生体異物とは異なりこれらの化合物は、有意の細胞内エネルギー源を用いた複雑な反応が進行してその化合物の中和を来すということはない[Saprin A.N. Fermenty metabolizma i detoksikatsii xenobioticov (Metabolism and detoxication enzymes of xenobiotics). Uspekhi Biologicheskoj Khimii (Advances in Biological Chemistry) 1991, vol.32, p.146-175]。
【０００３】
シスプラチンおよびシクロホスファンは、単独または他の細胞増殖抑制剤と組み合わせてまたは腫瘍疾患の治療における医薬として用いることは知られている[Protivoopukholevaya khimioterapiya (Anti-tumor Chemotherapy). Edited by N.I.Perevozchikova, a reference book, Moscow, "Meditsina" publisher 1986. N.P. Konovalova, S.A. Goncharova, L.M. Volkova, T.A. Raevskaya, L.T. Eremenko and A.M. Korolev. "Donor oxida azota povyshajet effectivnost' cytostaticheskoj terapii i zaderzhivajet razvitije lekarstvennoj rezistantnosti (Nitrogen oxide donor enhances efficiency of cytostatic therapy and delays development of drug resistance)", 2003, vol. 49, No 1, p. 71-75]。しかしながら、好ましい効果を達成するため、そしてこの細胞増殖抑制剤が温血動物に対して非常に高い毒性を示すが故に、通常、細胞増殖抑制剤の最大許容量が白血病の化学療法やその他の腫瘍疾患において用いられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、温血動物に対して毒性が低く、既知の細胞増殖抑制剤の最小用量と組み合わせて上記に示す誘導体の最小用量を用いて白血病の併用療法において有意の治療効果および転移の阻害を達成することが可能な、これまで知られていないジカルボン酸を開発することである
【課題を解決するための手段】
【０００５】
式２で示される新規化合物は、既知の製造方法にしたがい、カルボン酸アルキルエーテルをヒドロキシルアミンで処理することによって合成した (Ber. 1953, Bd 86, page 1186)。
【実施例】
【０００６】
本発明は以下の実施例によって特徴付けられる。
【０００７】
実施例１  酒石酸ジヒドロキシジアミド（＋）．
無水メタノール１０ｍＬ中の酒石酸ジメチルエーテル（＋）２．６９ｇ（０．０１５モル）の溶液を、無水メタノール中の１Ｍヒドロキシルアミン溶液４ｍＬを室温にて攪拌しながら、これに滴加した後、室温にて２〜３日放置した。白色の結晶が析出したらこれを濾取し、乾燥した。酒石酸ジヒドロキシジアミド（＋）を１．３３ｇ（７３．８％）得た。融点１７０〜１７１℃。
1H((DMSO-d6，δ， m.d.,J, Hz) NMR スペクトル4.22 (d.CH); 5.33(d,OH アルコール); 8.75 (br.s, NH); 10.38 (br.s, OH from COOH). 実測値 (%): C 26.18; H 4.16; N 15.25. C4H8N2O6. 計算値 (%): C 26.6; H 4.44; N 15.6.
【０００８】
実施例２  マレイン酸モノオキサミド（ＦＢ−１３）
反応は実施例１と同様に行った。慣用的に処理し、マレイン酸モノオキサミドを得た（収率７４％）。融点１１９〜１２０℃。実測値（％）: C 36.50; H 3.88; N 10.41. C4H5NO4.計算値（％）: C 36.64; H 3.82; N 10.69.1H((DMSO-d6, δ, m.d.) NMR スペクトル 10.0 (br.s, 3H, ＣＯＯＨ, NHOH); 6.25 (br.s, 2, ＣＨ＝ＣＨ）
【０００９】
実施例３  アスパラギン酸モノオキサミド（ＦＢ−１４）
反応は実施例１と同様に行った。慣用的に処理した後、白色の結晶性物質のアスパラギン酸モノオキサミドを１Ｍヒドロキシルアミン溶液１５ｍＬおよび０．００７５Ｍアスパラギン酸メチルエーテルから得た（収率６９．５％）。融点１４２〜１４２℃。
C4H8N2O4. 実測値（％）: C 32.42; H 5.6; N 19.00.計算値: C 32.43; H 5.40; N 18.92.1H(DMSO-d6, δ, m.d.) NMR スペクトル 8.35 (br.s, 5H, ＣＯＯＨ, NH2, NHOH); 3.96 (m, 1H, ＣＨ）, 271 (m, 2H, CH2).
【００１０】
実施例４  コハク酸モノオキサミド
反応は実施例１と同様に行った。慣用的に処理し、コハク酸モノオキサミドを白色または無色の物質として得た（収率７０．２％）。慣用的に処理し乾燥した後、この物質の融点は、１１６〜１１８℃、収率は６４％であった。
1H(DMSO-d6, δ, m.d.) NMR スペクトル 12.1 s. (br. 1H, OH); 10.4 (s. br., 1H, OH); 10.4 (s. br., 1H, ＣＯＯＨ); 8.73 (s. br. 1H, NH); 2.42 (t, 2H, CH2); 2.20 (t, 2H, CH2C=O). 実測値（％）: C 35.94; H 5.08; N 7.89. C4H7NO4.計算値 (%): C 36.09; H 5.26; N 10.5.
【００１１】
実施例５および６に示すとおり、化学療法増感剤としてのＦＢ−１３調製物の抗腫瘍活性の実験をＰ３８８白血病およびＬｅｗｉｓ転移性肺癌の腫瘍モデルに対して行った。
【００１２】
実施例５
白血病Ｐ３８８を交雑マウスＢＤＦ1の腹腔内に接種した（生理食塩水０．２ｍＬ中、１０6白血病細胞）。調製物を用量１０ｍｇ／ｋｇで、シスプラチンを用量２ｍｇ／ｋｇで、移植後１、３、５、７日目に投与した。治癒した（６０日間生存）マウスの数を評価基準とした。シスプラチンのみを投与したとき、この値は６６．７％であり、シスプラチンおよびＦＢ−１３の併用投与では１００％のマウスが生存した。
【００１３】
実施例６
Ｌｅｗｉｓ肺癌細胞を交雑マウスＢＤＦ1の皮下に移植した。接種量は腫瘍細胞５ｘ１０6個であった。ＦＢ−１３およびシスプラチンの併用効果を調べた。肺における転移阻害指数（ＩＭＩ：％）を評価基準とした。シスプラチンを単独で投与した場合のＩＭＩは８０％であり、ＦＢ−１３と併用した場合、ＩＭＩは１００％であった。
【００１４】
実施例７  Ｂ−１６メラノーマ実験細胞を交雑マウスＢＤＦ1の皮下に移植した。接種量は腫瘍細胞５ｘ１０6個であった。ＦＢ−１３およびシスプラチンの併用効果を調べた。肺における転移阻害指数（ＩＭＩ：％）を評価基準とした。シスプラチンを単独で投与した場合のＩＭＩは５２％であり、ＦＢ−１３と併用した場合、ＩＭＩは１００％であった。急性毒性の試験を、ＢＤＦ1マウスに水中の調製物を腹腔内投与することによりＲＡＳのＩＰＫｈＦの実験腫瘍学の群において行った。請求項の記載の物質は、１，０００ｍｇ／ｋｇの用量で毒性がないことが示された。これらのデータから、請求項に記載の化合物が毒性の低い化合物のカテゴリーであると言うことができる。これらの化合物の最小用量での、最小用量の細胞増殖抑制剤（単独投与したいずれの調製物も治療効果をもたらさない）との併用は、Ｂ−１６メラノーマ実験細胞またはＬｅｗｉｓ肺癌細胞における転移プロセスの完全な阻害を可能にする。さらに、ジカルボン酸オキシアミドの、抗腫瘍効果を増大するための薬剤としての使用は、オキシアミドと細胞増殖抑制剤との最小用量（細胞増殖抑制剤の単位用量は治療用量の１／４である）の組合せにおいて、Ｐ−３８８白血病の治療における効果を増大する（動物生存率は１００％である）ことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
（原文に記載なし）
【図１】
2008543932.tif 000002
【図２】
2008543932.tif 000003
【図３】
2008543932.tif 000004
【図４】
2008543932.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成19年1月24日(2007.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生理学的に活性な物質であり、腫瘍の細胞増殖抑制化学療法において既知の細胞増殖抑制剤の抗腫瘍活性および抗転移活性を増大するための毒性の低い薬剤として医療行為に用いることができる、ジカルボン酸誘導体に関する。本発明は特に、
式２：ＲＣＯＮＨＯＨ  （２）
［式中、ＲはＨＯＮＨＣＯ；ＨＯＮＨＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）；ＨＯＯＣＣＨ2ＣＨ2；またはＨＯＯＣＣＨ＝ＣＨ］
で示されるジカルボン酸モノオキシアミドおよびジオキシアミドに関する。
【背景技術】
【０００２】
式２で示される化合物は生理学的に活性な物質であり、細胞増殖抑制剤の抗腫瘍効果および抗転移効果を増大するための薬剤として使用することができる。さらに、生体異物とは異なりこれらの化合物は、有意の細胞内エネルギー源を用いた複雑な反応が進行してその化合物の中和を来すということはない[Saprin A.N. Fermenty metabolizma i detoksikatsii xenobioticov (Metabolism and detoxication enzymes of xenobiotics). Uspekhi Biologicheskoj Khimii (Advances in Biological Chemistry) 1991, vol.32, p.146-175]。
【０００３】
シスプラチンおよびシクロホスファンは、単独または他の細胞増殖抑制剤と組み合わせてまたは腫瘍疾患の治療における医薬として用いることは知られている[Protivoopukholevaya khimioterapiya (Anti-tumor Chemotherapy). Edited by N.I.Perevozchikova, a reference book, Moscow, "Meditsina" publisher 1986. N.P. Konovalova, S.A. Goncharova, L.M. Volkova, T.A. Raevskaya, L.T. Eremenko and A.M. Korolev. "Donor oxida azota povyshajet effectivnost' cytostaticheskoj terapii i zaderzhivajet razvitije lekarstvennoj rezistantnosti (Nitrogen oxide donor enhances efficiency of cytostatic therapy and delays development of drug resistance)", 2003, vol. 49, No 1, p. 71-75]。しかしながら、好ましい効果を達成するため、そしてこの細胞増殖抑制剤が温血動物に対して非常に高い毒性を示すが故に、通常、細胞増殖抑制剤の最大許容量が白血病の化学療法やその他の腫瘍疾患において用いられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、温血動物に対して毒性が低く、既知の細胞増殖抑制剤の最小用量と組み合わせて上記に示す誘導体の最小用量を用いて白血病の併用療法において有意の治療効果および転移の阻害を達成することが可能な、これまで知られていないジカルボン酸を開発することである
【課題を解決するための手段】
【０００５】
式２で示される新規化合物は、既知の製造方法にしたがい、カルボン酸アルキルエーテルをヒドロキシルアミンで処理することによって合成した (Ber. 1953, Bd 86, page 1186)。
【実施例】
【０００６】
本発明は以下の実施例によって特徴付けられる。
【０００７】
実施例１  酒石酸ジヒドロキシジアミド（＋）．
無水メタノール１０ｍＬ中の酒石酸ジメチルエーテル（＋）２．６９ｇ（０．０１５モル）の溶液を、無水メタノール中の１Ｍヒドロキシルアミン溶液４ｍＬを室温にて攪拌しながら、これに滴加した後、室温にて２〜３日放置した。白色の結晶が析出したらこれを濾取し、乾燥した。酒石酸ジヒドロキシジアミド（＋）を１．３３ｇ（７３．８％）得た。融点１７０〜１７１℃。
1H((DMSO-d6，δ， m.d.,J, Hz) NMR スペクトル4.22 (d.CH); 5.33(d,OH アルコール); 8.75 (br.s, NH); 10.38 (br.s, OH from COOH). 実測値 (%): C 26.18; H 4.16; N 15.25. C4H8N2O6. 計算値 (%): C 26.6; H 4.44; N 15.6.
【０００８】
実施例２  マレイン酸モノオキサミド（ＦＢ−１３）
反応は実施例１と同様に行った。慣用的に処理し、マレイン酸モノオキサミドを得た（収率７４％）。融点１１９〜１２０℃。実測値（％）: C 36.50; H 3.88; N 10.41. C4H5NO4.計算値（％）: C 36.64; H 3.82; N 10.69.1H((DMSO-d6, δ, m.d.) NMR スペクトル 10.0 (br.s, 3H, ＣＯＯＨ, NHOH); 6.25 (br.s, 2, ＣＨ＝ＣＨ）
【０００９】
実施例３  アスパラギン酸モノオキサミド（ＦＢ−１４）
反応は実施例１と同様に行った。慣用的に処理した後、白色の結晶性物質のアスパラギン酸モノオキサミドを１Ｍヒドロキシルアミン溶液１５ｍＬおよび０．００７５Ｍアスパラギン酸メチルエーテルから得た（収率６９．５％）。融点１４２〜１４２℃。
C4H8N2O4. 実測値（％）: C 32.42; H 5.6; N 19.00.計算値: C 32.43; H 5.40; N 18.92.1H(DMSO-d6, δ, m.d.) NMR スペクトル 8.35 (br.s, 5H, ＣＯＯＨ, NH2, NHOH); 3.96 (m, 1H, ＣＨ）, 271 (m, 2H, CH2).
【００１０】
実施例４  コハク酸モノオキサミド
反応は実施例１と同様に行った。慣用的に処理し、コハク酸モノオキサミドを白色または無色の物質として得た（収率７０．２％）。慣用的に処理し乾燥した後、この物質の融点は、１１６〜１１８℃、収率は６４％であった。
1H(DMSO-d6, δ, m.d.) NMR スペクトル 12.1 s. (br. 1H, OH); 10.4 (s. br., 1H, OH); 10.4 (s. br., 1H, ＣＯＯＨ); 8.73 (s. br. 1H, NH); 2.42 (t, 2H, CH2); 2.20 (t, 2H, CH2C=O). 実測値（％）: C 35.94; H 5.08; N 7.89. C4H7NO4.計算値 (%): C 36.09; H 5.26; N 10.5.
【００１１】
実施例５および６に示すとおり、化学療法増感剤としてのＦＢ−１３調製物の抗腫瘍活性の実験をＰ３８８白血病およびＬｅｗｉｓ転移性肺癌の腫瘍モデルに対して行った。
【００１２】
実施例５
白血病Ｐ３８８を交雑マウスＢＤＦ1の腹腔内に接種した（生理食塩水０．２ｍＬ中、１０6白血病細胞）。調製物を用量１０ｍｇ／ｋｇで、シスプラチンを用量２ｍｇ／ｋｇで、移植後１、３、５、７日目に投与した。治癒した（６０日間生存）マウスの数を評価基準とした。シスプラチンのみを投与したとき、この値は６６．７％であり、シスプラチンおよびＦＢ−１３の併用投与では１００％のマウスが生存した（図３）。
同様の試験を、調製物ＦＢ−１４（５０ｍg／ｋg）およびシクロホスファン（６０ｍg／ｋg）について行った。結果を図４ａに示す。
さらに、対照群と比較した動物の平均寿命（ＩＬＳ）における有意の増大を図４ｂに示す。
【００１３】
実施例６
Ｌｅｗｉｓ肺癌細胞を交雑マウスＢＤＦ1の皮下に移植した。接種量は腫瘍細胞５ｘ１０6個であった。ＦＢ−１３およびシスプラチンの併用効果を調べた。肺における転移阻害指数（ＩＭＩ：％）を評価基準とした。シスプラチンを単独で投与した場合のＩＭＩは５０％であり、ＦＢ−１３と併用した場合、ＩＭＩは１００％であった（図２）。
【００１４】
実施例７  Ｂ−１６メラノーマ実験細胞を交雑マウスＢＤＦ1の皮下に移植した。接種量は腫瘍細胞５ｘ１０6個であった。ＦＢ−１３およびシスプラチンの併用効果を調べた。肺における転移阻害指数（ＩＭＩ：％）を評価基準とした。シスプラチンを単独で投与した場合のＩＭＩは５２％であり、ＦＢ−１３と併用した場合、ＩＭＩは１００％であった。同様の試験を、シュウ酸に基づくヒドロキサム酸（化合物Ｌ２１５）および酒石酸に基づくヒドロキサム酸（化合物Ｌ２２１）について行った。原発腫瘍（Ｏ）および転移（Ｍ）の成長阻害を図１に示す。急性毒性の試験を、ＢＤＦ1マウスに水中の調製物を腹腔内投与することによりＲＡＳのＩＰＫｈＦの実験腫瘍学の群において行った。請求項の記載の物質は、１，０００ｍｇ／ｋｇの用量で毒性がないことが示された。これらのデータから、請求項に記載の化合物が毒性の低い化合物のカテゴリーであると言うことができる。これらの化合物の最小用量での、最小用量の細胞増殖抑制剤（単独投与したいずれの調製物も治療効果をもたらさない）との併用は、Ｂ−１６メラノーマ実験細胞またはＬｅｗｉｓ肺癌細胞における転移プロセスの完全な阻害を可能にする。さらに、ジカルボン酸オキシアミドの、抗腫瘍効果を増大するための薬剤としての使用は、オキシアミドと細胞増殖抑制剤との最小用量（細胞増殖抑制剤の単位用量は治療用量の１／４である）の組合せにおいて、Ｐ−３８８白血病の治療における効果を増大する（動物生存率は１００％である）ことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
（原文に記載なし）
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2008543932.tif 000006
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
2008543932.tif 000007
【国際調査報告】
2008543932.tif 000008
2008543932.tif 000009
2008543932.tif 000010
2008543932.tif 000011