(57)【要約】  血中脂質改善効果と抗肥満効果を有するダルマギクの地上部抽出物の製造方法及びこれから得られる抽出物を含有する組成物を提供する。本発明によるダルマギクの地上部抽出物は、血中脂質改善効果と抗肥満効果を有するゲルマクロン、α−スピナステロール配糖体などのテルペン系化合物の含量を大幅に増やし、ダルマギクに本来多量含有されている塩、不安定して空気の酸化を受け易いフェノ−ル性化合物、粘液性物質をほとんど除去することにより血中脂質改善効果と抗肥満効果を高めると共に、高脂血、肥満による動脈硬化症、心循環系疾患、脳血栓疾患、肝疾患、血栓症、高脂血症、糖尿病などを予防または治療することを補助する機能性食品として使用可能である。
2008533196.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダルマギクの地上部の乾燥粉末を水を使って室温下で洗浄して脱水する第１の段階と、
前記第１の段階において得られるダルマギクの地上部の乾燥粉末をアルコール、アルコールと水との混合溶媒、またはｎ−ヘキサンとアルコールとの混合溶媒に溶かして抽出液を得る第２の段階と、
を含むダルマギクの地上部抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記第１の段階における洗浄は、１時間〜１２時間かけて循環洗浄または超音波洗浄することにより行われ、前記第２の段階は、洗浄済みのダルマギクの地上部の乾燥粉末にアルコール、アルコールと水との混合溶媒、またはｎ−ヘキサンとアルコールとの混合溶媒により８５〜１００℃、１時間〜１２時間かけて還流抽出することにより、あるいは、1日〜７日間パーコレイション抽出を行うことにより抽出液を得る段階であることを特徴とする請求項１に記載のダルマギクの地上部抽出物の製造方法。
【請求項３】
第１の段階における洗浄は、室温下で乾燥されたダルマギクの地上部の乾燥粉末１００重量部に対して５〜２０重量部の水を使って２０℃〜１００℃の温度下で循環洗浄、超音波洗浄、またはパーコレイション洗浄することにより行われ、前記洗浄工程は、１回〜５回繰り返し行われることを特徴とする請求項２に記載のダルマギクの地上部抽出物の製造方法。
【請求項４】
前記第２の段階においては、前記第１の段階において洗浄されたダルマギクの地上部の乾燥粉末１００重量部に対して５〜２０重量部のアルコールを溶媒として使用するか、３：７〜１：２０の混合比（ｖ／ｖ）を有する水とアルコールとの混合物を溶媒として使用するか、または、１：０.５〜１．５の混合比（ｖ／ｖ）を有するｎ−ヘキサンとアルコールとの混合溶媒を使用することを特徴とする請求項２に記載のダルマギクの地上部抽出物の製造方法。
【請求項５】
第２の段階において得られた抽出液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した後に乾燥させる第３の段階をさらに含むことを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載のダルマギクの地上部抽出物の製造方法。
【請求項６】
ダルマギクの地上部抽出物を含む抗肥満及び脂質状態改善用の組成物であって、
前記ダルマギクの地上部抽出物には天然テルペン系化合物が含まれていることを特徴とする抗肥満及び脂質状態改善用の組成物。
【請求項７】
前記テルペン系化合物は、ゲルマクロンと、α−スピナステロール及びその配糖体と、α−またはβ−アミリンと、ラブダジエノール系配糖体とからなる群より選ばれるいずれか１種以上であることを特徴とする請求項６に記載の抗肥満及び脂質状態改善用の組成物。
【請求項８】
前記ダルマギクの地上部抽出物は、ダルマギクの地上部の乾燥粉末を水を使って室温下で洗浄及び脱水し、アルコール、アルコールと水との混合溶媒、またはｎ−ヘキサンとアルコールとの混合溶媒に溶かすことにより得られる抽出物であることを特徴とする請求項６に記載の抗肥満及び脂質状態改善用の組成物。
【請求項９】
前記ダルマギクの地上部抽出物は、カフェオイルキナ酸系成分をさらに含むが、前記カフェオイルキナ酸の含量は、ダルマギクの地上部抽出物の０．３重量％以下であることを特徴とする請求項６に記載の抗肥満及び脂質状態改善用の組成物。
【請求項１０】
前記テルペン系化合物の含量は、ダルマギクの地上部抽出物の８０重量％〜９９．６重量％であることを特徴とする請求項７に記載の抗肥満及び脂質状態改善用の組成物。
【請求項１１】
ダルマギクの地上部抽出物と、機能性食品学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み、抗肥満及び脂質状態を改善して心循環系疾患の予防及び治療を補助する健康機能性食品。
【請求項１２】
前記健康機能性食品は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョンまたはシロップの剤形を有し、ダルマギクの地上部抽出物の含量は、全体の０．１〜６０重量％であることを特徴とする請求項１１に記載の健康機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、血中脂質改善効果と抗肥満効果を有する新規なダルマギクの地上部抽出物（Extract of Aster Spathulifolius Aerial Part：ＥＡＳＡまたはＡＥ−Ｂ）の製造方法及びダルマギクの地上部抽出物を有効成分として含有する組成物に係り、さらに詳しくは、血中脂質改善と抗肥満の作用を有するダルマギクの地上部抽出物を有効成分として含有することにより、動脈硬化症、心循環系疾患、脳血栓疾患、肝疾患、血栓症、高脂血などの疾患を予防し、または、治療を補助するための組成物または機能性食品に関する。
【０００２】
〔背景技術〕
肥満とは、エネルギーの摂取がエネルギーの消費よりも多くて過剰になったカロリーが脂肪組織に蓄積されて代謝性不均衡が長期間続くことをいい、高脂血症、高血圧、関節炎、膽石症、糖尿病、心筋梗塞症、乳房ガン、脂肪肝などの成人病発生の危険因子として働く。
【０００３】
韓国の場合、１９７０年には総熱量の７．３％に過ぎなかった脂肪摂取量が、１９９５年には１８．８％へと急増し、２００５年には２５％に至ることが予測されている。このような脂肪の摂取量の増大に起因する疾病の様相は、肥満、脳卒中、動脈硬化、高血圧、糖尿病などの各種の慢性疾患の増大として現われ、特に、心臓循環系疾患の増大は主な死因の一つとなっている。
【０００４】
２００１年の韓国の統計庁の資料によれば、死亡者の死亡原因は、ガン、脳血管、心臓、糖尿及び肝疾患の順である。特に、心血管系疾患、脳血管疾患、動脈硬化症、血栓症などの循環器系疾患が主な死亡原因として挙げられており、循環器系疾患による死亡者の４２％が肥満であることが報告されており、肥満は成人病の発生に深く関連していると知られている。
【０００５】
このような視点から、現代人の高カロリー、高脂肪の摂取は血中のコレステロール含量を増やすことにより、動脈のプラグの形成を促して心血管系疾患の発生を増大させると言える。このため、血液中のこれらの脂質レベルを下げるための医薬品や自然食品に関する研究が盛んになされている。近年、生理活性を持った機能性食品への関心が高まる一方で、抗肥満効果を示す食品素材を探るための研究が国内外において盛んになされている。
【０００６】
ダルマギク（Aster spathulifolius）は、葉は対生するキキョウ目キク科の多年草であり、海菊とも呼ばれる。茎は多少木質化が進んで枝分かれが多く、斜めに生長して草丈３０〜６０ｃｍとなる。葉は互生するが、倒卵状楕円形で枝の先に根生状に多くつけ、厚目の多肉質である。両面に軟毛が密生して白く見え、葉の周辺は平べったいか多少の鋸があり、へら状である。花は、７〜１１月に咲き、淡紫色であり、枝の先に頭花がつく。総苞は半球状であり、苞片には毛があり、３列に並ぶ。果実は１１月に成熟し、冠毛は薄い褐色であり、強毛である。
【０００７】
ダルマギクは薬用としての使用経験があるという研究結果が未だ報告されてはいないものの、民間においては幼葉を食用に、全草を糖尿病、膀胱炎などに使用しており、冬にも枯れない強靭な生命力と木質化する特性を活かして観賞用の盆栽にすることもある（例えば、下記の非特許文献１参照）。
【０００８】
ダルマギクの成分に関する研究は、全草のラブダ−７、１４−ジエン−１３（Ｒ）−オル−４−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−６−デオキシイドピラノシド（labda-7、14-dien-13(R)-ol-4-O-acetyl-α-L-6-deoxyidopyranoside）やラブダ−７、１４−ジエン−１３（Ｒ）−オル−α−Ｌ−６−デオキシイドピラノシド（labda-7、14-dien-13(R)-ol-α-L-6-deoxyidopyranoside）などのテルペン配糖体、花の色素などに留まっており、その他のダルマギクの成分に関する研究は皆無であるのが現状である。
【０００９】
〔非特許文献１〕デゥサン世界大百科Ｅｎｃｙｂｅｒ
〔発明の開示〕
〔発明が解決しようとする課題〕
ダルマギクの地上部（全草）を民間において糖尿病に活用していることに着目し、本発明者は、ダルマギクの成分分離と並行して高脂肪食餌により誘導した肥満白ねずみにおいてダルマギクのエキス及び精製された成分が血中脂質改善効果と共に抗肥満効果を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明は、血中脂質改善効果と抗肥満効果を有する新規なダルマギクの地上部抽出物の製造方法及びこれから得られるダルマギクの地上部抽出物を有効成分として含有する心血管系疾患、高脂血症の予防及び治療用の組成物または機能性食品を提供することを目的とする。
【００１１】
〔課題を解決するための手段〕
本発明は、ダルマギクの地上部の乾燥粉末を水を使って室温下で洗浄して脱水する第１の段階と、前記第１の段階において得られたダルマギクの地上部の乾燥粉末を溶媒に溶かして抽出液を得る第２の段階とを含むダルマギクの地上部抽出物の製造方法を提供する。
前記製造方法に加えて、本発明は、ダルマギクの地上部から抽出されたテルペン系化合物を含む抗肥満及び脂質状態改善用の組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明は、ダルマギクの地上部抽出物と、機能性食品学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み、抗肥満及び脂質状態を改善して心循環系疾患の予防及び治療を補助する健康機能性食品を提供する。
【００１３】
さらに、本発明は、抗肥満及び脂質状態を改善させ、心循環系疾患を予防すると共に、治療を補助するテルペン系化合物を含むダルマギクの地上部抽出物の用途を提供する。
【００１４】
本発明のダルマギクの地上部抽出物は、ゲルマクロン、α−スピナステロール及びその配糖体、α−及びβ−アミリン、ラブダジエノール系配糖体などのテルペン系化合物を８０％以上含有していると分析され、このようなテルペン系化合物を含んでいるダルマギクの地上部抽出物は、血中脂質改善及び抗肥満という作用を通じて高脂血と肥満を予防または治療するのに役立つものであることが確認された。また、本発明は、高脂血及び肥満と関連する動脈硬化症、心循環系疾患、脳血栓疾患、肝疾患、血栓症、糖尿病などの予防及び治療を補助する食品として使用可能である。
【００１５】
以下、本発明のダルマギクの地上部の抽出精製物の製造方法、これを含有する抗肥満及び脂質状態改善用の組成物及びその用途について詳述する。
【００１６】
本発明のダルマギクの地上部の抽出精製物の製造方法は、ダルマギクの地上部の乾燥粉末を水を使って室温下で洗浄して脱水する第１の段階と、前記洗浄済みのダルマギク地上部の乾燥粉末を溶媒に溶かして抽出液を得る第２の段階と、を含む。
【００１７】
さらに詳しくは、前記第１の段階における洗浄は、室温下で乾燥されたダルマギクの地上部の乾燥粉末をその重量の約５〜２０倍、好ましくは、約１０〜１５倍の重量の水を使って室温〜１００℃、好ましくは、室温下で約１時間〜１２時間、好ましくは、２時間〜３時間かけて循環洗浄、超音波洗浄、またはパーコレイション洗浄することにより行われる。特に、循環洗浄を１回〜５回、好ましくは、２回〜４回繰り返し行うことが好ましい。
【００１８】
また、前記第１の段階において洗浄されて脱水されたダルマギクの地上部の乾燥粉末１００重量部に対して５〜２０重量部のアルコール、約３：７〜１：２０の混合比（ｖ／ｖ）を有する水とアルコールとの混合溶媒、または、約１：１の混合比を有するｎ−ヘキサンとアルコールとの混合溶媒を第２の段階における溶媒として使用することができる。前記アルコールは、９０％エタノールであることが好ましい。
【００１９】
第２の段階においては、前記溶媒を使って室温〜１００℃、好ましくは、約８５〜１００℃下、１時間〜１２時間、好ましくは、２時間〜５時間かけて還流冷却抽出を行うか、または、１日〜７日間パーコレイション抽出を行うことによりダルマギクの地上部抽出物を得ることが好ましい。前記抽出工程は１回〜５回繰り返し行うことが好ましく、特に、３回〜４回繰り返し行うことが好ましい。
【００２０】
さらに、前記第２の段階に続いて、抽出液をろ過、減圧濃縮及び乾燥して精製物を得るように処理（第３の段階）することが好ましい。
【００２１】
前記第１の段階において血中脂質改善効果及び抗肥満効果を示さないカフェオイルキナ酸及びその誘導体、タンニン、塩などが前記第２、第３の段階を経てほとんど除去され、前記第２の段階において得られる精製物を血中脂質改善効果及び抗肥満活性成分として使用することができる。
【００２２】
前記抽出方法により得られる抽出精製物は、血中脂質改善効果及び抗肥満効果を示す成分の含量が増大され、変化し易い化合物と本来ダルマギクに多量含有されている塩など副作用を引き起こし、または、血中脂質改善効果及び抗肥満効果を示さない成分が除去されていることを特徴とする。特に、前記方法により得られるダルマギクの抽出精製物は、血中脂質改善効果及び抗肥満効果を示すが、これは、ダルマギクから最初に分離されたテルペン系成分のためであると見られる。
【００２３】
ここで、テルペン系成分とは、ゲルマクロン（germacron, 本願においては、ＡＥ−１と略称する。）、α−スピナステロール配糖体（α-spinasterol-O-β-D-glucopyranoside、本願においては、ＡＢＰと略称する。）、α−スピナステロール、α−及びβ−アミリン(α−,β−amyrin)、ラブダン系テルペンとしてのラブダ−７、１４−ジエン−１３（Ｒ）−オル−β−フコピラノシド（labda-7,14-dien-13(R)-ol-β-fucopyranoside; 新規化合物）などを意味するものであり、これらのテルペン系化合物は、ダルマギク抽出精製物の８０.０〜９９．６重量％を占める。
【００２４】
前記テルペン系化合物の他にも、カフェオイルキナ酸系成分としての４、５−ジカフェオイルキナ酸(4,5-dicaffeoylquinic acid)とメチル４、５−ジカフェオイルキナート(methyl 4,5-dicaffeoylquinate)が０.３％以下含有されており、また、副作用を引き起こしうる成分としての塩は０.１％以下しか含有されていない。
【００２５】
詳しくは後述するが、ダルマギクの地上部抽出物は、抗肥満及び脂質状態改善用の組成物の有効成分として使用して好適なものであり、この場合、ダルマギクの地上部から抽出されたゲルマクロンと、α−スピナステロール及びその配糖体と、α−またはβ−アミリンと、ラブダジエノール系配糖体とからなる群より選ばれるいずれか１種以上のテルペン系化合物を含む限り、その効能を得ることができる。
【００２６】
本発明の他の態様として、本発明は、上記の抽出方法により精製されたダルマギクの地上部抽出物を有効成分として含有し、食品学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤または芳香剤を含むと共に、血中脂質及び肥満を予防する健康機能性食品を提供する。
【００２７】
本発明の抽出方法により精製されたダルマギクの地上部抽出物を高脂肪食餌により誘導した肥満実験動物に対して投与した結果、血中脂質改善効果及び抗肥満効果があることが確認された。これは、ダルマギクの地上部抽出物が、エネルギー摂取がエネルギー消費よりも多くて過剰になったカロリーが脂肪組織に蓄積されて代謝性不均衡が長期間続くことに起因する高脂血症、高血圧、関節炎、膽石症、糖尿病、心筋梗塞症、脂肪肝などの成人病の予防及び治療のための機能性食品として利用可能であることを示唆する。
【００２８】
また、前記ダルマギクの地上部抽出物は毒性及び副作用がないため、予防の目的で長期間服用するときにも安心して使用することができる。
【００２９】
本発明の抗肥満及び脂質状態改善用の機能性食品において、ダルマギクの地上部抽出物の含量は、合計の組成物重量の０．１〜６０重量％であることが好ましい。というのは、ダルマギクの地上部抽出物の含量が低すぎると、肥満及び脂質状態を改善する効果があまり発現できず、その一方、ダルマギクの地上部抽出物の含量が高すぎると、溶解度の問題が発生する可能性があり、抽出物のさらなる投与による効果の向上があまり得られないためである。
【００３０】
本発明の機能性食品に使用可能な担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ジェラチン、カルシウムフォスファート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニールピロリドン、水、メチヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク及びマグネシウムステアレートが挙げられる。
【００３１】
機能性食品の剤形は、それぞれ通常の方法に従い、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップなどの経口形に製剤化して使用することができ、特に、錠剤であることが好ましい。
【００３２】
製剤化に際しては、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調製することができる。経口投与のための固形製剤には錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、前記ダルマギクの地上部抽出物に少なくとも１以上の賦形剤、例えば、澱粉、カルシウムカーボネート、スクロース、ラクトース、ジェラチンなどを混ぜて調製することができる。
【００３３】
また、単純な賦形剤に加えて、マグネシウムステアレート、タルクなどの潤滑剤も使用することができる。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが挙げられるが、頻繁に使用する単純希釈剤としての水に加えて、種々の賦形剤、例えば、湿潤剤、感味剤、芳香剤、保存剤などを使用することもできる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水生溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤及び座剤が含まれる。
【００３４】
本発明のダルマギクの地上部抽出物は、服用者の年齢、性別、体重によるが、通常、０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇの量、好ましくは、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を一日につき１回〜数回に分けて投与することができる。また、そのダルマギクの地上部抽出物の投与量は、投与経路、疾病の重軽、性別、体重、年齢などに応じて増減可能である。すなわち、前記投与量は、本発明の範囲に限定されるものではない。
【００３５】
本発明の機能性食品は、ラット、マウス、家畜、人間などの哺乳動物に投与可能である。本発明のダルマギク抽出物は毒性及び副作用がないため、予防の目的で長期間服用するときに安心して使用することができる。
【００３６】
〔発明の効果〕
本発明によるダルマギクの地上部抽出物は、高脂肪食餌を給与したねずみの重量、体脂肪重量、血中脂質と肝脂質の数値、総コレステロール、遊離脂肪酸の含量、血中レプチン、インスリンなどを有意的に低減させ、かつ、ＰＰＡＲγとＵＣＰ遺伝子のｍＲＮＡ発現を増大させるなどの作用を通じて血中脂質状態を改善し、且つ、肥満を抑制するといった効果がある。また、本発明の新規なダルマギクの地上部抽出物の製造方法は、工程が極めて簡単であり、製造コストが安価である他、ダルマギクに本来多量含有されている塩、不安定して酸化を受け易いフェノ−ル性化合物、粘液性物質などをほとんど除去して有効成分としてのテルペンの含量を大幅に高めることができる。本発明の新規なダルマギクの地上部抽出物を有効成分として含有する組成物は、高脂血、肥満により発病する心循環系疾患、動脈硬化症、脳血栓疾患、肝疾患、血栓症、高脂血症、糖尿病などの予防及び治療を補助する機能性食品の原料として利用可能である。
【００３７】
〔発明を実施するための最良の態様〕
以下、本発明を下記の実施例及び実験例を挙げて詳しく説明する。但し、下記の実施例及び実験例は単に本発明を例示するものに過ぎず、本発明の内容が下記の実施例及び実験例により限定されるものではない。
【００３８】
［実施例１．ダルマギク抽出物の製造］
水を用いたダルマギク地上部の洗浄
ダルマギクは、韓国の済州道において１０月〜１２月頃に採取したものであり、ダルマギクの地上部を室温において乾燥して粉末にした後、４寸の篩を通過した粉末を使用した。ダルマギクの地上部の乾燥粉末１０ｋｇに精製水１００Ｌを加えて室温下で循環洗浄、脱水し、洗浄液を捨てた。次いで、前記洗浄、脱水過程を２回さらに繰り返し行った。このとき、最後の洗浄液中の塩素イオンの濃度は１０ｐｐｍ以下にした。
【００３９】
ダルマギクの地上部抽出物の製造
前記洗浄済みのダルマギクの地上部の乾燥粉末に１：１０の混合比（ｖ／ｖ）を有する水とアルコールとの混合溶媒１００Ｌを加え、約８５〜１００℃下、２〜５時間かけて還流冷却法により抽出し、抽出液をろ紙に通させてろ過した。前記抽出過程をさらに２回繰り返した後、ろ液を減圧濃縮して乾燥させ、油状のダルマギクの地上部抽出物（ＡＥ−Ｂ）５０３ｇを得た。
【００４０】
［実施例２．剤形による製造例］
散剤の製造
実施例１のダルマギクの地上部の抽出物の乾燥粉末２０ｍｇ、乳糖１００ｍｇ、タルク１０ｍｇを混合し、気密布に充填して散剤を製造した。
錠剤の製造
実施例１のダルマギクの地上部の抽出物の乾燥粉末２０ｍｇ、トウモロコシ澱粉１００ｍｇ、乳糖１０ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法により打錠して錠剤を製造した。
【００４１】
カプセル剤の製造
実施例１のダルマギクの地上部の抽出物の乾燥粉末２０ｍｇ、トウモロコシ澱粉１００ｍｇ、乳糖１００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２ｍｇを通常のカプセル剤の製造方法に従い混合し、これをジェラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００４２】
液剤の製造
実施例１のダルマギクの地上部の抽出物の乾燥粉末２００ｍｇ、ソルビトール２０ｍｇ、ＣＭＣ１０ｍｇ、レモン香り残部、精製水を入れて全量１０００ｍｌにした。通常の液剤の製造方法に従い上記の成分を混合した後、褐色瓶に充填して滅菌させて液剤を製造した。
【００４３】
［実験例１．実施例１の洗浄液からの成分同定］
前記実施例１の１次洗浄液から１０Ｌを取り、これを６０℃以下において約０.５Ｌになるまで減圧濃縮し、濃縮液を凍結乾燥して褐色の粉末９５ｇを得た。得られた粉末にメタノール１Ｌを加えてメタノール可溶性物質とメタノール不溶性物質をそれぞれ１７ｇと７６ｇ得た。メタノール不溶性物質はほとんどが塩と粘液性物質であった。メタノール可溶性物質１７ｇをクロロホルム、メタノール、水混合溶媒（５：１：０.１）を使ってシリカゲルにおいてカラムクロマトグラフィを行い、化合物１と２をそれぞれ０.９８ｇと０.０６ｇ得、化学構造を同定した結果、化合物１は、メチル４、５−ジカフェオイルキナート、化合物２は４、５−ジカフェオイルキナ酸であった。
【００４４】
化合物１（メチル４、５−ジカフェオイルキナート）
EI-MS m/z: 530(C26H26O12) ; [α]25D=-213; IR(KBr)υmax(cm-1) : 3368, 1701; 1H-NMR(CDCl3): 2.08(1H, dd, J=13.8, 6.6 Hz, 2-CH2e), 2.32 (1H, dd, J=13.8, 3.6 Hz, 2-CH2a), 4.34(1H, ddd, J=6.6, 3.6, 3.3 Hz, 3-CH), 5.01 (1H, dd, J=8.1, 3.3 Hz, 4-CH), 5.53(1H, dt, J=8.1, 5.4 Hz, 5-CH), 2.18~2.32 (2H, m, 6-CH2), 3.71(3H, s, 7-OCH3), 7.02(1H, d, J=2.1 Hz, 2'-CH), 7.00(1H, d, J=2.1 Hz, 2''-CH), 6.75(2H, d, J=8.4 Hz, 5'-,5''-CH), 6.92(1H, dd, J=8.4, 2.1 Hz, 6'-CH), 6.91(1H, dd, J=8.4, 2.1 Hz, 6''-CH), 7.60(1H, d. J=15.9 Hz, 7'-CH), 7.50(1H, d, J=15.9 Hz, 7''-CH), 6.29(1H, d, J=15.9 Hz, 8'-CH), 6.16(1H, d, J=15.9 Hz, 8''-CH).。
【００４５】
化合物２（４、５−Ｏ−ジカフェオイルキナ酸）
EI-MS m/z: 516(C25H24O12); mp 192-194℃; [α]25D=-170; IR(KBr)υmax(cm-1) : 3400, 1700, 1610, 1530, 1290, 990, 820; 1H-NMR (CDCl3): 2.10(1H, dd, J=14.4, 4.2 Hz, 2-CH2e), 2.29(1H, dd, J=14.4, 3.0 Hz, 2- CH2a), 4.36 (1H, ddd, J=4.2, 3.3, 3.0 Hz, 3-CH), 5.11(1H, dd, J=9.0, 3.3 Hz, 4-CH), 5.61(1H, dt, J=9.0, 5.1 Hz. 5-CH), 2.18~2.23(2H, m, 6-CH2), 7.02(1H, d, J=2.1 Hz, 2'-CH), 7.00(1H, d, J=2.1 Hz, 2''-CH), 6.73(1H, d, J=8.4 Hz, 5'-CH), 6.74(1H, d, J=8.4 Hz, 5''-CH), 6.90(1H, d, J=8.4, 2.1 Hz, 6'-CH), 6.91(1H, dd, J=8.4, 2.1 Hz, 6'-CH), 6.91(1H, dd, J=8.4, 2.1 Hz, 6''-CH), 7.59(1H, d, J=15.9 Hz, 7'-CH), 7.51(1H, d, J=15.9 Hz, 7''-CH), 6.28(1H, d, J=15.9 Hz, 8'-CH), 6.18(1H, d, J=15.9 Hz, 8''-CH).。
【００４６】
［実験例２．新規なダルマギクの地上部抽出物の有効成分分離］
前記実施例１に従い製造された新規なダルマギク地上部抽出物（ＡＥ−Ｂ）の有効成分の分離を図１の方法と同様にして行った。図１に示すように、新規なダルマギクの地上部抽出物１００ｇにクロロホルム１Ｌを加えて懸濁させ、室温に一晩放置してろ過した。クロロホルム難溶性分画をクロロホルムにより少量ずつ３回洗浄して乾燥させた後、難溶性分画物（ＡＢＰ）と可溶性分画物（ＡＥ−Ｃ）を得た。次いで、クロロホルムろ液及び洗浄液を合わせてシリカゲル２００ｇのカラムに加え、クロロホルムを溶媒としてクロマトグラフィを繰り返し行い、ＡＥ−１（１．８ｇ）、ＡＥ−２（２０ｍｇ）、ＡＥ−３（２００ｍｇ）、ＡＥ−４（１０ｍｇ）、ＡＥ−５（３５０ｍｇ）の順に溶出物を得た。次いで、クロロホルムとメタノールとの混合溶媒（５０：１）により溶出して、さらにＡＢＰ（１．２５ｇ）を得た。
【００４７】
２−１．ＡＢＰの化学構造（α−スピナステロール３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノイド）
Mp: 292-294℃; EI-MS m/z: 574(M+-C35H58O6), 395(M+-C6H11O6) ; IR(KBr)υmax(cm-1):3389, 1074, 1032, 970, 829; 1H-NMR(CDCl3+CD3OD)δ: 0.57(3H, s, 18-CH3), 0.71(3H, s, 19-CH3), 0.84(3H, d, J=6.3 Hz, 29-CH3), 0.88(3H, d, J=7.2 Hz, 26-CH3), 0.89(3H, d, J=6.6 Hz), 1.06(3H, d, J=6.6 Hz, 21-CH3), 5.02(1H, d, J=7.5 Hz, anomeric H).。
【００４８】
２−２．ＡＥ−１（ゲルマクロン）
Mp: 51-52℃;  [α]25D-24 (c=1, methanol); EI-MS m/z: 218(M+,C15 H12O); IR(KBr)υmax(cm-1):1672, 1443, 1385, 1289, 1178, 1134, 858, 812; UV(MeOH)λmax nm(logε): 217.5(4.03); 1H-NMR(CDCl3)δ: 4.97(1H, dd,  J=10.5, 10 Hz, 2-CH),  2.35(1H, m, 3-CH2), 2.08(1H, m, 3-CH2), 2.10 (2H, m, 4-CH2), 4.70(1H, ddd, J=10.5, 3.0, 1.0Hz, 6-CH) ,2.90(2H, m, 7-CH2), 2.95(1H, d, 10-CH2O), 3.40(1H, d, J=10.5 Hz, 10-CH2O), 1.76(3H, s, 12-CH3), 1.71(3H, s, 13-CH3), 1.61(3H, t-like, 14-CH3), 1.42(3H, t-like, 15-CH3).。
【００４９】
２−３．ＡＥ−２（α−及びβ−アミリン）
Mp: 168℃; [α]20D, 8.8(c=0.2, methanol); EI-MS m/z: 426(M+, C30H50O); IR(KBr)υmax(cm-1):3293, 1650, 1385, 1359, 1036; 1H-NMR (CDCl3)δ: 3.20(2H, m, 3-CH), 5.13(1H, t, J=3.3 Hz, α-amyrinの12-CH), 5.18(1H, t, J=3.6 Hz, β-amyrinの12-CH).。
【００５０】
２−４．ＡＥ−３（α−スピナステロール）
Mp: 169-170℃; [α]20D, 15.2(c=1, methanol); EI-MS m/z: 412(M+, C29H48O); IR(KBr)υmax(cm-1):3418, 1664, 1041, 970;1 H-NMR(CDCl3)δ: 0.54(3H, s, 18-CH3), 0.79(3H, s, 19-CH3), 1.02(3H, d, J=6.9 Hz, 21-  CH3), 0.81(3H, d, J=7.2 Hz, 26- CH3), 0.84(3H, d, J=6.3 Hz, 27-CH3), 0.80(3H, t, J=6.8 Hz, 29-CH3).。
【００５１】
２−５．ＡＥ−４(ラブダ−７、１４−ジエン−１３（Ｒ）−オル−β−Ｌ−デオキシイドピラノシド)
油状; [α]20D,-61.0(c=1, methanol); EI-MS m/z: 436(M+, C26H44O5); 1H-NMR(CD3OD)δ: 4.79(1H, d, J=3.6 Hz, 1'-CH), 3.35 (1H, dd, J=6.0, 3.6 Hz,  2'-CH), 3.66(1H, J=6.0 Hz, 3'-CH), 3.46(1H, dd, J=6.0, 3.6 Hz, 4'-CH), 4.23(1H, dq, J=6.9, 3.6 Hz, 5'-CH), 1.18(3H, d, J=6.9 Hz, 6'-CH3).。
【００５２】
２−６．ＡＥ−５(ラブダ−７、１４−ジエン−１３（Ｒ）−オル−β−Ｌ−フコピラノシド、新規)
[α]25D,8(c=0.1, methanol); EI-MS m/z: 436(M+,C26H44O5); 1H-NMR(CD3OD)δ: 0.75(3H, s, 20-CH3), 0.85(3H, s, 18-CH3), 0.88(3H, s, 19-CH3) 1.21(3H, d, J=6.6Hz, 6'-CH3), 1.32(3H, s, 16-CH3), 1.66(3H, s, 17-CH3), 3.42(1H, d, J=3.3 Hz. 2'-CH), 3.43(1H, d, J=1.8 Hz, 3'-CH), 3.50(1H, dq, J=1.2, 6.6 Hz, 5'-CH), 3.56(1H, dt, J=1.8, 1.2 Hz, 4'-CH), 4.23(1H, d, J=7.8 Hz, 1'-CH), 5.16(1H, dd, J=10.8, 1.2 Hz, 15-CH2), 5.17(1H, dd, J=17.7, 1.2 Hz, 15-CH2), 5.35(1H, m, 7-CH), 6.04(1H, dd, J=10.8, 1.2 Hz, 14-CH); 13C-NMR(CD3OD)δ: 39.1(1-CH2), 18.5(2-CH2),  42.1(3-CH2), 32.7(4-C), 50.3(5-CH), 23.5 (6-CH2), 121.6(7-CH), 135.3(8-C), 55.5(9-CH), 37.2(10-C), 21.2 (11- CH2), 43.5(12-CH2), 80.4(13-C), 143.0(14-CH), 113.5(15-CH2), 21.7 (16-CH3), 21.4(17-CH3), 32.4(18-CH3), 20.9(19-CH3), 12.7(20-CH3), 98.1(1'-CH), 71.0(2'-CH), 73.9(3'-CH), 71.5(4'-CH), 70.2(5'-CH), 15.5 (6'-CH3).。
【００５３】
［実験例３．新規なダルマギクの地上部抽出物中のテルペンの定量］
前記実施例１に従い得られたダルマギクの地上部抽出物（ＡＥ−Ｂ）検体及びα−スピナステロールグルコピナノシド（ＡＢＰ）標準品それぞれ３０ｍｇを正確に秤量してジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）４０ｍｌにそれぞれ溶かし、４０％（ｖ／ｖ）のエタノールを加えて１００ｍｌにした後、これをそれぞれ検液及び標準液にした。バニリン８０ｍｇをエタノール１０ｍｌに溶かし（使用時調製）、７２％（ｗ／ｗ）硫黄酸溶液を調製した。
【００５４】
総テルペンの含量分析：検液及び標準液をそれぞれ１ｍｌずつ正確に取って大きな試験管（直径１５ｍｍ×長さ１８０ｍｍ）に入れ、０.８％バニリンエタノール溶液０.４ｍｌを加えて混合し、あらかじめ氷浴中において冷却させた７２％硫黄酸溶液５ｍｌを試験管にゆっくりと加えた後、急激に震とうして混合した。この混合液を６０℃下、６０分かけて加熱して発色させ、室温まで冷却させた後、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。α−スピナステロールグルコピラノシド標準液の検量線に従って検液の含量を求めた。対照液は、検液１ｍｌに０.８％バニリンエタノール溶液０.４ｍｌを加えて混合し、あらかじめ氷浴中において冷却させた７２％硫黄酸溶液５ｍｌを試験管にゆっくりと加えた後に急激に震とうして混合した液を対照液にし、その吸光度を５４０ｎｍにおいて測定した。総テルペンの含量を下記式により計算した。
【００５５】
【数１】
2008533196.tif 000003
【００５６】
実験の結果、前記実施例１の方法により調製された新規なダルマギクの地上部抽出物には、ダルマギクに本来含有されている塩がほとんど除去されてその含有量が０．１％以下となり、血中脂質改善効果及び抗肥満効果を示さないフェノ−ル性化合物としての４、５−ジカフェオイルキナートとそのメチルエステル化合物を０.３％以下に含有し、粘液性物質がほとんど存在していなかった。なお、有効成分としてのテルペン化合物を分析した結果、ゲルマクロン、α−及びβ−アミリン、α−スピナステロール及びその配糖体、ラブダジエノール系配糖体などの化合物は合計で８０．０％以上含有していることが確認できた。
【００５７】
［実験例４］
実験動物の飼育、食餌、体重増加量及び食餌効率
実験動物としては、スプラーグ-ダーレイ（Sprague-Dawley）種の雄性白ねずみ（１７０〜１８０ｇ、６週齢）を韓国のサムタコ社から入手して１週間適応させた後、乱壊法により正常食餌群（ＮＤ、ｎ＝１０匹）と高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ｎ＝５０匹）の２群に分けた。６週間飼育して肥満を誘導した後、ＨＦＤ群を５群に分け、これらに対して、６週間にわたってダルマギクの地上部の抽出物を経口投与した。
ＨＦＤ群：高脂肪食餌＋０.５％カルボキシメチルセルロース
ＨＦＤ＋ＡＥ−Ｂ群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｂ１２５ｍｇ／ｋｇ
ＨＦＤ＋ＡＥ−Ｃ群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｃ１００ｍｇ／ｋｇ
ＨＦＤ＋ＡＥ−１群：高脂肪食餌＋ＡＥ−１１０ｍｇ／ｋｇ
ＨＦＤ＋ＡＢＰ群：高脂肪食餌＋ＡＢＰ１．５ｍｇ／ｋｇ
実験食餌は、下記表１に示すように、正常食餌群に対してはＡＩＮ−７６Ａ diet ＃１０００００（Dyets Inc., Bethlehem, PA, USA）の食餌総熱量の１１．７％を脂肪として供給し、高脂肪食餌群に対しては、脂肪供給源として牛脂を用い、ＡＩＮ−７６high fat diet ＃１００４９６（Dyets Inc., Bethlehem, PA, USA）の総熱量の４０％を脂肪として供給して飼育し、水と食餌は無制限に供給した。実験期間中に食餌摂取量と体重は、一週間に２回測定した。食餌効率は、実験食餌の供給日から犠牲日までを総実験期間にして実験期間中の体重増加量を実験期間中の食餌摂取量で割って算出し、その結果を下記表２に示す。
【００５８】
【表１】
2008533196.tif 000004
【００５９】
【表２】
2008533196.tif 000005
【００６０】
高脂肪食餌による６週間の肥満誘導後における正常食餌群と高脂肪食餌群の体重は、４２２．４０±１５．３２ａｇと４５８．４０±１９．３２ｂを示し、有意差を示している。その後、６週間それぞれの当該物質を経口投与した結果、ほとんどのダルマギクの投与群が、高脂肪食餌を供給されたＨＦＤ群に比べて、有意的に体重増加量が少ないことが分かる。前記表２において、異なるアルファベット文字はダンカンの多重検定テストによる場合、ｐ＜０.０５において有意に異なることを意味する。
【００６１】
白色脂肪の顕微鏡写真と脂肪細胞重量の観察
図２は、白色脂肪細胞の組織様子と白色脂肪細胞のサイズを示す。ＡはＮＤ群であり、ＢはＨＦＤ＋Ｃ群であり、ＣはＨＦＤ＋ＡＥ−Ｂ群であり、ＤはＨＦＤ＋ＡＥ−Ｃ群であり、ＥはＨＦＤ＋ＡＥ−１群であり、ＦはＨＦＤ＋ＡＢＰ群である。実験の結果、ＮＤ群における脂肪細胞のサイズはＨＦＤ群におけるそれよりも小さく、ダルマギク抽出物を摂取した群の場合、脂肪細胞のサイズはＨＤＦ＋Ｃ群に比べてなお一層小さかった。
【００６２】
食餌脂肪のレベルと物質投与による脂肪組織の重量を比較するために、飼育の終わった実験動物を１４時間切食させ、エーテルで軽く麻酔した後、肝門脈から採血した後に臓器を採取した。副睾丸脂肪、腹部脂肪は摘出して重量を測定し、採血した血液は室温下、約１時間放置後に３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離して血清を分離し、これらの試料は分析前まで−７０℃において保管し、その結果を下記表３に示す。ＮＤ群とＨＦＤ＋ＡＥ−Ｃ群との間には副睾丸脂肪の重量差はなく、ダルマギク抽出物投与群（ＡＳＥ）の場合、脂肪細胞のサイズと重量が顕著に低減されていることが分かる。
【００６３】
【表３】
2008533196.tif 000006
【００６４】
磁気共鳴映像（ＭＲＩ）測定による体脂肪測定
１２週間の実験後に、ペントバルビタルソジウム(sodium pentobarbital)（３０ｍｇ／ｋｇ）により腹腔内注射して麻酔させた後、ＭＲＩにより体脂肪を測定して図３に示す。ＮＤ群のねずみの場合、若干の脂肪が存在し、ダルマギク投与群（ＡＳＥ）の場合、ＨＦＤ群よりも蓄積された腹部脂肪の量が少ないことが確認できた。
【００６５】
血中脂質濃度と肝脂質濃度
血清総中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）及び高密度コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の濃度と、ＨＤＬ−Ｃ／ＴＣレベルをキット(Asan Diagnostics, Seoul, Korea)を用いて測定した。図４を参照すると、血清中のＴＧレベルは、全群においてほとんど同様であり、ＨＦＤ＋Ｃ群のＴＣレベルは、ＮＤ群と比較するとき、１４４．１％値に達し、ダルマギク投与群（ＡＳＥ）の場合、かなり低減していることが分かる。血清中のＨＤＬ−Ｃレベルは、各群においてほとんど同様であったが、ＨＤＬ−Ｃ／ＴＣ値は、ダルマギク投与群の方がＨＤＦ群に比べてより高かった。
【００６６】
肝は、Folch法に従い脂質を抽出した後、血清と同法により測定した。ダルマギクの成分物質による肝の脂質濃度は、下記表４に示す。肝の中性脂肪（ＴＧ）は、高脂肪食餌群の方が正常食餌群に比べて２倍程度増大しており、ダルマギクの成分を投与した群においては格段の減少が見られ、コレステロールの場合にもこれとほとんど同じ結果が得られた。肝の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）は有意差が見られなかった。
【００６７】
【表４】
2008533196.tif 000007
【００６８】
血中レプチン、グルコース及びインスリンの含量分析
血清中のレプチン含量はリンコレプチン分析キット（Linco research Immuno-assay, St. Louis, MO）を用いた放射線免疫分析により測定し、インスリン含量は白ねずみインスリン標準品キット（Linco St. Louis, MO）を用いた放射線免疫分析により測定し、その結果を下記表５に示す。
【００６９】
【表５】
2008533196.tif 000008
【００７０】
レプチンは、脂肪組織において生成されて血液に分泌されるため、脂肪を大量貯蔵可能な脂肪細胞は多量のレプチンを作り出し、レプチン受容体を介して脳に伝わって食品摂取、食欲及びエネルギー平衡などを調節する神経系に働くことにより、体重を減らすことが知られている。最近の研究によれば、高脂肪食餌の摂取の際にマウスの血中レプチンの濃度が有意的に増大し、これは、増大された体脂肪のサイズを反映することができると報告されている。この研究結果によれば、高脂肪食餌群においては、レプチン濃度が正常食餌群のそれに比べて２倍以上高くなっていたものの、ダルマギクの成分を投与した群においては正常食餌群とほぼ同様に維持されていた。
【００７１】
血糖の場合には、高脂肪食餌群の方が正常食餌群に比べて高く、ダルマギク抽出物投与群はＨＦＤ群に比べて顕著に低い傾向にあった。特に、投与群のうちＡＥ−Ｃ、ＡＥ−Ｂ投与群は正常値を示し、卓越した効能が確認できた。このとき、インスリンの血中濃度は葡萄糖の濃度が低くなった程度に比例して低い傾向にあった。
【００７２】
この結果は、肥満の解消によるインスリン感受性の増大により分泌されるインスリン量と血糖値が正常値に戻っていることに起因すると推察できる。
【００７３】
急性毒性実験−経口投与
ＩＣＲ系マウス（体重２５±５ｇ）とスプラーグ-ダーレイ系ラット（体重２３０±１０ｇ）をそれぞれ１０匹ずつに分けて本発明の実施例１の新規ダルマギクの地上部の抽出精製物（ＡＥ−Ｂ）をそれぞれ１００、５００、１０００及び２０００ｍｇ／ｋｇの容量で１％ＣＭＣ水溶液に懸濁させて経口投与した後、２週間毒性有無を観察した結果、４群ともにおいて死亡した例が一匹もなく、見掛け上、対照群とも別に相違する症状が見られず、体重増加、飼料摂取量などにおいても有意な異常がまったく見られないことから、本発明の組成物は急性毒性がほとんどないことが確認できた。
【００７４】
［実験例５］
実験動物の飼育、食餌、体重増加量及び食餌効率
実験動物は、スプラーグ-ダーレイ種の雄性白ねずみ（１７０〜１８０ｇ、６週齢）を韓国のサムタコ社から入手して１週間適応させた後、乱壊法により正常食餌群（ＮＤ、ｎ＝８匹）と高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ｎ＝８８匹）との両群に分けた。６週間飼育して肥満を誘導した後、ＨＦＤ群を１１群（ｎ＝８匹）に分け、これらに対して、６週間にわたってダルマギクの地上部の抽出物を経口投与した。
ＨＦＤ群：高脂肪食餌
ＡＥ−Ｂ２５０群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｂ２５０ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−Ｂ１２５群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｂ１２５ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−Ｂ６２．５群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｂ６２．５ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−Ｃ２００群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｃ２００ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−Ｃ１００群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｃ１００ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−Ｃ５０群：高脂肪食餌＋ＡＥ−Ｃ５０ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−１２０群：高脂肪食餌＋ＡＥ−１（ゲルマクローン）２０ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−１１０群：高脂肪食餌＋ＡＥ−１（ゲルマクローン）１０ｍｇ／ｋｇ
ＡＥ−１５群：高脂肪食餌＋ＡＥ−１（ゲルマクローン）５ｍｇ／ｋｇ
陽性対照群：高脂肪食餌＋シブトラミン（陽性対照群）７．５ｍｇ／ｋｇ
実験食餌は実験例４の表１に示す通りであり、食餌摂取量、体重増加量、食餌効率は下記表６に示す通りである。
【００７５】
【表６】
2008533196.tif 000009
【００７６】
前記表６から明らかなように、１２週後にＨＦＤ群の体重はＮＤ群に比べてさらに高く、ダルマギク抽出物投与群（ＡＳＥ）の場合、ＨＤＦ群に比べて体重が低かった。ＦＥＲは、ＮＤ群とＡＳＥ群に比べて、ＨＤＦ群の方が有意に大きな値を示し、ＡＳＥ群とＮＤ群との有意差はなかった。ダルマギク投与のねずみにおいて、脂肪の蓄積は抑えられていると認められる。
【００７７】
脂肪細胞重量の変化
脂肪組織の重量は、前記実験例4の方法と同様にして測定し、その結果は、下記表７に示す。ダルマギク抽出物投与群（ＡＳＥ）の場合、ＨＦＤ群に比べて相対的に白色脂肪組織を低減させ、ダルマギク抽出物の投与量が増えるにつれて脂肪組織の重量が減少することが確認できた。
【００７８】
【表７】
2008533196.tif 000010
【００７９】
ＭＲＩ測定による体脂肪測定
前記実験例４の方式により腹部皮下脂肪と内臓脂肪を測定し、その結果を図５に示す。白抜きは脂肪が存在する個所のイメージであり、ダルマギク抽出物投与群（ＡＳＥ）の場合、ＨＤＦ群よりも腹部脂肪の蓄積が少ないことが分かる。図５中、ＡはＮＤ群であり、ＢはＨＦＤ群であり、Ｃはシブトラミン群であり、ＤはＡＥ−Ｂ２５０群であり、ＥはＡＥ−Ｃ２００群であり、ＦはＡＥ−１１０群である。
【００８０】
血中脂質濃度と肝脂質濃度
血清総中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）及び高密度コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の濃度を実験例４の方法と同様にして測定し、その結果を下記表８に示す。ＴＧレベルは、高脂肪食餌群と正常食餌群との間に大差はなく、ダルマギク抽出物投与群（ＡＳＥ）は、高脂肪食餌群に比べてＴＧ値が低かった。総コレステロールレベルは、正常食餌群に比べて、高脂肪食餌群の方が遥かに高かった。このようなコレステロールの増加はダルマギク抽出物の投与により抑制され、さらには、正常食餌群に比べて総コレステロール濃度をさらに低くできることが確認できた。
【００８１】
【表８】
2008533196.tif 000011
【００８２】
肝脂質濃度は、前記実験例４の方法と同様にして測定し、その結果を下記表９に示す。高脂肪食餌群の肝ＴＧとＴＣ濃度は正常食餌群に比べて高かったものの、ダルマギク抽出物を投与した場合、肝脂質の蓄積量を低減させることが確認できた。なお、ダルマギク抽出物投与群の場合、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）よりもＦＦＡの増加が抑えられていることが確認できた。
【００８３】
【表９】
2008533196.tif 000012
【００８４】
血中レプチン、インスリンの含量分析
血清中のレプチンとインスリンの含量は前記実験例４の方法と同様にして測定し、その実験結果を下記表１０に示す。レプチンは脂肪組織において生成されるホルモンであり、体脂肪に比例することが知られている。レプチンとインスリンは、エネルギー向上性と深く関連している。レプチンの増加は高インスリン血症を引き起こし、高インスリン血症は脂肪細胞にあるレプチンｍＲＮＡを直接的に刺激する。この理由から、ＨＦＤ群における血中レプチンとインスリンレベルは正常食餌群よりも遥かに高かったものの、ダルマギク抽出物投与群（ＡＳＥ）の場合、投与量に比例してＨＦＤ群よりも低い値を示している。
【００８５】
【表１０】
2008533196.tif 000013
【００８６】
白色脂肪組織のＵＣＰ２、ＰＰＡＲγ発現
白色脂肪組織におけるエネルギー新陳代謝の調節に関与する幾つかのたんぱく質に対するｍＲＮＡレベルを分析した。ダルマギク抽出物投与群は、白色パッド質量を低減したため、遺伝子発現を測定するための十分な程度のＲＮＡを得ることは容易ではなかった。ＰＰＡＲγ ｍＲＮＡに及ぶダルマギク抽出物の効能は、ＲＴ−ＰＣＲを用いて定量的に脂肪組織を測定し、その結果を図６、７に示す。ＷＡＴ ＵＣＰ２ ｍＲＮＡの発現は高脂肪食餌に影響され、ダルマギク抽出物及びその投与量にも影響された。ＷＡＴ ＰＰＡＲγのｍＲＮＡの発現は高脂肪食餌群の場合に低く現われ、ダルマギク抽出物投与群の場合に増大する傾向にある。
【００８７】
ＰＰＡＲγは、脂肪組織において脂肪代謝、脂肪細胞分化、インスリン作用、ＵＣＰの活性を調節する役割を果たし、またＵＣＰは熱発生を通じて体内のエネルギーを消耗する役割を果たすことに照らしたとき、ダルマギク抽出物は、ＰＰＡＲγとＵＣＰ遺伝子のｍＲＮＡ発現を増大することにより肥満治療に有効であることが確認できる。
【００８８】
〔産業上の利用可能性〕
本発明によるダルマギクの地上部抽出物は、高脂肪食餌を給与したねずみの重量、体脂肪重量、血中脂質と肝脂質の数値、総コレステロール、遊離脂肪酸の含量、血中レプチン、インスリンなどを有意的に減少させ、且つ、ＰＰＡＲγとＵＣＰ遺伝子のｍＲＮＡ発現を増大させるなどの作用を通じて血中脂質状態を改善し、肥満を抑制し、心循環系疾患、動脈硬化症、脳血栓疾患、肝疾患、血栓症、高脂血症、糖尿病などの疾病を予防し、または治療を補助する機能性食品として利用可能である。また、本発明の製造方法によりダルマギクに本来多量含有されている塩、不安定して酸化させるためのフェノ−ル性化合物、粘液性物質などを簡単な方法によりほとんど除去して有効成分としてのテルペンの含量を大幅に高めることができ、しかも、製造コストも安価であるというメリットがある。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】新規なダルマギクの地上部抽出物から有効成分を分離する工程を示す図である。
【図２】実験例４における白色脂肪細胞組織の様子と白色脂肪細胞のサイズを示す図である。
【図３】実験例４において、磁気共鳴映像（ＭＲＩ）を通じて腹部皮下脂肪と内臓脂肪を測定した写真である。
【図４】実験例４における血清総中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）、高密度コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の濃度と、ＨＤＬ−Ｃ／ＴＣレベルを示す図である。
【図５】実験例５において、磁気共鳴映像（ＭＲＩ）を通じて腹部皮下脂肪と内臓脂肪を測定した写真である。
【図６】実験例５において、肝ＵＣＰ２ ｍＲＮＡの発現レベルを示す図である。
【図７】実験例５において、肝ＰＰＡＲγ ｍＲＮＡの発現レベルを示す図である。
【図１】
2008533196.tif 000014
【図３】
2008533196.tif 000015
【図４】
2008533196.tif 000016
【図５】
2008533196.tif 000017
【図２】
2008533196.tif 000018
【図６】
2008533196.tif 000019
【図７】
2008533196.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成19年9月21日(2007.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダルマギクの地上部抽出物を有効成分として含有する肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項２】
前記ダルマギクの地上部抽出物が、ダルマギクの地上部の乾燥粉末を水を使って洗浄及び脱水し、アルコール、アルコールと水との混合溶媒、またはｎ−ヘキサンとアルコールとの混合溶媒で抽出して得られることを特徴とする請求項１に記載の肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項３】
前記ダルマギクの地上部抽出物が、８０重量％〜９９．６重量％の天然テルペン系化合物を含有していることを特徴とする請求項１に記載の肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項４】
前記天然テルペン系化合物が、ゲルマクロンと、α−スピナステロールとその配糖体と、α−及びβ−アミリンと、ラブダジエノール系配糖体とからなる群より選ばれるいずれか１種以上であることを特徴とする請求項３に記載の肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項５】
前記ダルマギクの地上部抽出物が、カフェオイルキナ酸系化合物をさらに含有し、該カフェオイルキナ酸系化合物の含量が、ダルマギクの地上部抽出物の０．３重量％以下であることを特徴とする請求項３に記載の肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項６】
ゲルマクロンと、α−スピナステロールとその配糖体と、α−及びβ−アミリンと、ラブダジエノール系配糖体とからなる群より選ばれるいずれか１種以上を有効成分として含有する肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項７】
前記ゲルマクロンを有効成分として含有することを特徴とする請求項６に記載の肥満または高脂血症の予防及び治療用の組成物。
【請求項８】
ダルマギクの地上部抽出物を含有する肥満、高脂血症、または心循環系疾患の予防及び改善用の健康機能性食品。
【請求項９】
散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョンまたはシロップの剤形を有することを特徴とする請求項８に記載の肥満、高脂血症、または心循環系疾患の予防及び改善用の健康機能性食品。
【請求項１０】
ゲルマクロンと、α−スピナステロールとその配糖体と、α−及びβ−アミリンと、ラブダジエノール系配糖体とからなる群より選ばれるいずれか１種以上を含有する肥満、高脂血症、または心循環系疾患の予防及び改善用の健康機能性食品。
【請求項１１】
ゲルマクロンを含有することを特徴とする請求項１０に記載の肥満、高脂血症、または心循環系疾患の予防及び改善用の健康機能性食品。
【国際調査報告】
2008533196.tif 000021
2008533196.tif 000022