(57)【要約】本発明は、HCV慢性感染患者の治療のための医薬、医薬組成物、特にワクチンの調製および製造のためのポリカチオン性化合物の使用を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
HCV慢性感染患者の治療のための医薬、医薬組成物、特にワクチンの調製および製造のためのポリカチオン性化合物の使用。
【請求項２】
医薬、医薬組成物、特にワクチンが、HCV抗原またはHCVエピトープを含む、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
該患者が、ペグ化インターフェロン-アルファおよび抗ウイルス薬リバビリンを併用した一次標準的HCV治療に対し、応答がない、応答が不十分である、または該治療から再発したことを特徴とする、請求項1または2に記載の使用。
【請求項４】
ポリカチオン性化合物がポリカチオン性ペプチドであることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一つに記載の使用。
【請求項５】
ポリカチオン性ペプチドが、20と500の間のアミノ酸残基、特に30と200の間のアミノ酸残基を含むことを特徴とする、請求項4に記載の使用。
【請求項６】
ポリカチオン性ペプチドがポリアルギニンまたはポリリシンであることを特徴とする、請求項3に記載の使用。
【請求項７】
該医薬がCD4+ヘルパー-T-細胞およびCD8+細胞傷害性T-細胞の誘導に使用されることを特徴とする、請求項1から6のいずれか一つに記載の使用。
【請求項８】
特に該標準的治療の効果がない、またはもはや効果がない患者において、インターフェロンアルファおよびリバビリンのHCV標準的治療の代替または補助として、該医薬を使用することを特徴とする、請求項1から7のいずれか一つに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
C型肝炎ウイルス(HCV)はフラビウイルス科に属し、世界で1億7000万人が慢性的に感染している。少なくとも6のHCV遺伝子型、および50以上の亜型があると言われている。米国、ヨーロッパおよび日本において、遺伝子型1、2および3は最も一般的である。HCV遺伝子型の地理分布は、遺伝子型によって非常に異なり、1aは米国および西ヨーロッパの一部に多く、1bは南および中央ヨーロッパに多い(Bellentani 2000)。HCVは、非経口または経皮的経路で感染し、および肝細胞で複製する。患者の約15%は、自己限定性急性肝炎を経験するが、ウイルス排除に伴い回復する。感染者の約80%が慢性患者となる。感染はしばしば無症候的にゆっくりと多年にわたって進行するが、最終的にはHCVは、主に肝硬変、末期の肝疾患および肝臓癌(Liang 2000)を引き起こす。HTLおよびCTLの両応答の強度および性質が、患者が回復するか(自然にまたは治療の結果として)、または慢性感染に進行するかを決定する(Liang 2000)。
【０００２】
HCVの標準的な治療には、ペグ化インターフェロン-アルファおよび抗ウイルス薬リバビリンの併用が含まれる(Fried 2002)。ウイルス学的著効(治療中止24週間後に検出可能なHCV RNAが消失することと定義される)は、遺伝子型にもよるが、該標準的治療を受けたHCV患者の約50%にしか得られない。更に、インターフェロン(IFN)およびリバビリンの両方に関係する多くの副作用がある。IFN(またはそのペグ化型)は、非特異的作用の免疫システムを刺激し、インフルエンザ様症候群、発熱、頭痛、関節痛、筋肉痛、うつ、体重減少、脱毛症、白血球減少および血小板減少6を含む相当な副作用を引き起こす。これらの副作用のため、患者によっては治療の中断を余儀なくさせられる。IFNによる治療はまた、既に血液疾患(脾腫を伴う肝硬変のため、白血球減少および血小板減少)を有する患者には禁忌である。リバビリンは、一過性の肝酵素の上昇および精神科的症状、溶血および貧血を引き起こし、冠状動脈性心臓病の患者においては心筋梗塞に関与する。リバビリンはまた、催奇原性、変異原性および発癌性作用を有する。したがって、リバビリンでの治療を受ける生殖能力ある男性および女性患者には避妊は必須である。よって、この治療の許容性の低さおよび多くの副作用のため、治療ワクチンを含む新規な治療方法が明らかに必要とされており、効果的な治療が制限され、および欠損しているため、慢性HCV感染の新規な治療法の選択肢が、緊急に必要とされている(Cornberg 2002)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の本質的課題は、慢性HCV感染治療のため、特に一次標準的HCV治療に対し、応答がない、応答が不十分である、または該治療から再発した患者のための、効果的な医薬または医薬組成物、特にワクチンを提供し、標準的なインターフェロン-アルファ/リバビリンの併用療法の制限を克服することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
よって、本発明は、HCV慢性感染患者の治療のための医薬、医薬組成物、特にワクチンの製造のためのポリカチオン性化合物の使用を提供する。好ましくは、該HCV慢性感染患者は、ペグ化インターフェロン-アルファおよび抗ウイルス薬リバビリンを併用した一次標準的HCV治療に対し、応答がない、応答が不十分である、または該治療から再発した患者である。
【０００５】
HCV RNAが、ペグ-インターフェロンアルファおよびリバビリンの一次標準的HCV治療で検出できなくなったが、該治療の中断の後、再び検出された場合、患者は再発したと見なす。治療において、HCV RNA値が変わらない者は、非-応答者と見なし、一方、HCV RNA値が減少(例えば  >2log)するが検出不能には決してならない者を、部分的応答者とする。
【０００６】
本発明で使用するポリカチオン性化合物とは、WO 97/30721に記載される特徴的作用を示すポリカチオン性化合物である。好ましいポリカチオン性化合物は、塩基性ポリペプチド、有機ポリカチオン、塩基性ポリアミノ酸またはその混合物から選ばれる。前記ポリアミノ酸は、少なくとも4アミノ酸残基鎖(WO 97/30721)を有する。特に好ましくは、ポリリシン、ポリアルギニン、および8より多く、特に20より多いアミノ酸残基中に、塩基性アミノ酸を20％より多く、特に50％より多く含むポリペプチドのような物質、またはその混合物である。他の好ましいポリカチオンおよびその医薬組成物は、WO 97/30721(例えばポリエチレンイミン)およびWO 99/38528に記載される。好ましくは、これらのポリペプチドは、20と500の間のアミノ酸残基、特に30と200の間の残基を含む。
【０００７】
これらのポリカチオン性化合物は、化学的にまたは組換えにより製造してよく、若しくは天然物に由来してよい。
【０００８】
カチオン性(ポリ)ペプチドはまた、{Ganz, T., 1999}に記載される性質の抗菌性を有する。これらの(ポリ)ペプチドは、原核生物性、動物または植物由来であり、若しくは化学的にまたは組み換え技術により製造される(WO 02/13857)。ペプチドはまた、デフェンシンのクラスに属していてもよい(WO 02/13857)。該ペプチドの配列は、例えば、以下のインターネットアドレスの抗菌性配列データベースに記載される。:
http://www.bbcm.univ.trieste.it/~tossi/pag2.html
【０００９】
該宿主防御ペプチドまたはデフェンシンはまた、本発明におけるポリカチオン性ポリマーの好ましい形態である。一般的に、好ましくはAPC(樹状細胞を含む)によって媒介される適応免疫系を最終生成物として活性化(または下方制御)する化合物を、ポリカチオン性ポリマーとして用いる。
【００１０】
特に本発明においてポリカチオン性物質としての使用に好ましいのは、カテリシジン（cathelicidin）由来の抗菌性ペプチドまたはその誘導体(参照することにより本書に引用する、国際特許出願WO 02/13857)、特に哺乳類カテリシジン、好ましくはヒト、ウシまたはマウス由来の抗菌性ペプチドである。
【００１１】
天然物に由来するポリカチオン性化合物としては、HIV-REVまたはHIV-TAT(由来カチオン性ペプチド、アンテナペディアペプチド、キトサンまたは他のキチン誘導体)、または生化学的または組換え製造によるこれらペプチドまたはタンパク質に由来する他のペプチドが含まれる。他の好ましいポリカチオン性化合物は、カテリン（cathelin）またはカテリン関連物質またはカテリン由来物質である。例えば、マウスカテリンはアミノ酸配列、NH2-RLAGLLRKGGEKIGEKLKKIGQKIKNFFQKLVPQPE-COOH（配列番号1）を有すペプチドである。カテリン関連物質またはカテリン由来物質は、カテリン配列の全部または一部を含み、少なくとも15-20アミノ酸残基を有する。
【００１２】
誘導には、20の標準アミノ酸以外のアミノ酸による、天然アミノ酸の置換または修飾を含む。さらに、更なるカチオン性残基を該カテリン分子に導入してもよい。これらのカテリン分子は、該抗原と併用するのが好ましい。これらのカテリン分子はまた、驚くべきことに、さらなるアジュバントを加えなくとも抗原のアジュバントとして有効であることが分かった。それゆえ、該カテリン分子を、さらなる免疫活性物質を用いまたは用いることなく、ワクチン製剤において有効なアジュバントとして用いることが可能である。
【００１３】
本発明において使用する別の好ましいポリカチオン性物質は、3から7の疎水性アミノ酸のリンカーにより隔てられた、少なくとも2のKLK-モチーフを含む合成ペプチドである(参照することにより本書に引用する、国際特許出願WO 02/32451)。WO 02/32451に、1型誘導アジュバント(Immunizer)は、特異的共投与抗原に対する免疫応答を著しく増強することができるため、非常に効果的なアジュバントとなることが、開示されている。WO 02/32451による該アジュバント(Immunizer)は、配列R1-XZXZNXZX-R2を含むペプチドであり、Nは3と7の間の整数で好ましくは5であり、Xは正電荷天然および/または非-天然アミノ酸残基であり、Zは、L、V、I、Fおよび/またはWからなる群から選ばれるアミノ酸残基であり、R1およびR2は、互いに独立して、-H、-NH2、-COCH3、-COH、20までのアミノ酸残基またはペプチド反応性の基を有するペプチド、またはペプチドを有するかまたは有しないペプチドリンカーから選ばれる; X-R2はまた、C-末端アミノ酸残基のアミド、エステルまたはチオエステルであってもよい。特に好ましいペプチドはKLKLLLLLKLK（配列番号2）である。
【００１４】
本発明において、ポリカチオン性化合物は、慢性HCV感染の治療、特にペグ化インターフェロン-アルファおよび抗ウイルス薬リバビリンを併用した一次標準的HCV治療に応答がない、応答が不十分である、または該治療から再発した患者の治療に使用される医薬、医薬組成物、特にワクチンの製造に使用される。
【００１５】
好ましくは、該ポリカチオン性化合物は、医薬、医薬組成物、特にHCV抗原、HCVホットスポットエピトープおよびHCVエピトープを含むワクチンの製造に使用される。最も好ましくは、WO 01/24822およびPCT/EP2004/007540に記載のHCVエピトープである。従って、特に好ましいHCVエピトープは、:１以上、特に2、3、4、５または６の、以下のエピトープを含む: 
【化１】
2008517973.tif 000002
【００１６】
（配列番号3〜134）、またはT-細胞エピトープ (少なくとも7、好ましくは少なくとも8、さらに好ましくは少なくとも9アミノ酸残基)を含むフラグメントである。好ましくは、本発明のワクチンは、該エピトープを組み合わせて、2以上、さらに好ましくは3以上、特に4以上を含む。好ましいワクチンは、１製剤中(または2製剤を保存し、別々に再構成して、合わせて投与する)に、個々のエピトープを3、4、5、6または7含む。
【００１７】
本発明において使用される医薬は、好ましくはCD4+ヘルパー-T-細胞およびCD8+細胞傷害性T-細胞の誘導に用いられる。特に好ましい使用分野は、特定の患者群への該医薬の施用である。: インターフェロンアルファおよびリバビリンによるHCV標準的治療の代替または補助として、特に該標準的治療が有効でない、またはもはや有効でない患者における、本発明にかかる医薬の使用。
【００１８】
好ましくは、本発明の医薬は、インターフェロン治療のような標準的治療と組み合わせて使用される。好ましくは、慢性HCV患者のI型T-細胞応答を誘導するため、および/または良好な標準的治療の間／後にみられる類似T-細胞応答を誘導するため、および/または標準的治療後の応答者率を増加させおよび/または再発率を減らすため、それを使用する。とりわけ、臨床試験において、本発明の医薬を、標準的治療に遅れて追加して使用する; 該結果から、該医薬は白血球減少のような標準的治療の副作用を悪化させず、優れた安全性を有することが確認される。
【００１９】
好ましくは本発明の医薬は、HCV遺伝子型1用に特異的に設計される。遺伝子型1患者は、標準的治療の間の応答者率が最も低いことが示された。本発明の医薬は、慢性HCV患者におけるI型T-細胞応答を誘導すること可能であるため、これを好ましくはリバビリンの代替または補助するのに使用する(すなわち IFN/ribaの代わりとしてIFN/IC41)。
【００２０】
本発明の医薬はまた、小-分子プロテアーゼ阻害剤と組み合わせて使用してもよい。好ましくは、それは、慢性HCV患者にI型T-細胞応答を誘導するため、および/または 良好な標準的治療の間／後にみられる類似T-細胞応答を誘導するために、使用される。
【００２１】
従って、本発明の医薬は、小-分子阻害剤とは明らかに異なる作用機序を提供する。よって、応答率、応答継続時間、再発率、最適投与量/スケジュールに関して、小分子阻害剤の有効性を補完する。本発明の医薬に有意な副作用はなく、特に小分子阻害剤の効力/副作用率を改善する。
【００２２】
本発明の医薬を、イミキモド(すでに実施許諾された製品Aldara/3MであるTLR7アゴニスト)と組み合わせて使用しても良い。特に抗原提示細胞の局所動員により、本発明の医薬の免疫学的効力を増大する。特に、より少ないワクチン接種で、より多くのペプチドに対して、より強い応答が期待される; 免疫学的応答者率および応答継続時間、並びにそれ故ウイルス学的著効もまた増加する;より多くのペプチドに対するより強いT-細胞応答により、例えば本発明の医薬を用いたIC41-201研究において見られるように、RNAリバウンド効果を克服する。
【００２３】
本発明はまた、有効量の上記医薬による本明細書記載のHCV患者の治療方法を含む。
【００２４】
更なる特徴、態様および利点を示す以下の図面、実施例により、本発明を、更に説明する。本実施例は、単に説明のための手段として用いるものであり、開示事項を制限するものではないと理解する。
【実施例】
【００２５】
実施例I: 慢性HCV患者におけるHCVペプチドワクチンのヒト臨床研究:
【００２６】
第一ワクチンは、完全合成C型肝炎ウイルス(HCV)治療ワクチンで、そのポリ-L-アルギニンはヒトに投与されたことがある。このワクチンをIC41と言い、HCVの保護T細胞エピトープに合成T細胞アジュバントとしてポリ-L-アルギニンをプラスした合成ペプチドの混合物からなる。IC41は、HCVポリペプチド、すなわち以下の3エピトープ: HMWNFISGIQYLAGLSTLPGNPA、CINGVCWTVおよびDLMGYIPAV（配列番号135〜137）、とは異なる領域の5ペプチドを含む。
【００２７】
本治療方法の目的は、HCV慢性感染患者に対するいわゆるI型T細胞応答の回復である。このような応答は、慢性化には進まず感染の急性期にHCVを排除できる、約15%の感染者に典型的に見られる。先に記載したポリ-L-アルギニンについての前臨床試験により、動物モデルにおいてそのI型免疫応答の誘導能が示され、それがHCV治療用ペプチドワクチンの有望なT細胞アジュバントであることが明らかとなった。
【００２８】
上述のワクチンの多様な投与が、既に200を超える患者を含むいくつかの臨床試験で試験された。: 初期第一相試験において、いくつかの投与について、安全性および予備的免疫原性データを得た。該試験結果により、10の異なる投与群の128健常者を含む投与最適化試験の開始は促進された。該試験は、健常者におけるHCVペプチドワクチン、IC41の投与の最適化および安全性を評価するために行う、無作為化、単盲検、平行群間、対照試験であり、オーストリアのあるセンターで実施された。7つの異なる投与量および比率のHCVペプチドワクチンとポリ-L-アルギニンの組み合わせ、HCVペプチドワクチン単独、ポリ-L-アルギニン単独、または生理食塩水の1つを128被検者に無作為に投与した。全被験者は、ワクチン接種を1箇月間隔で4回受けた。1箇月毎のこれらの時点、および最終のワクチン接種から3箇月後に免疫原性を評価した。
【００２９】
標準インターフェロン/リバビリン治療に応答がない、または該治療から再発した慢性C型肝炎ウイルス患者における第2相臨床試験において、ポリ-L-アルギニンのT細胞刺激効力を試験した。
【００３０】
本発明について、一次標準的HCV治療に応答がないまたは該治療から再発した慢性HCV患者における、HCVペプチドワクチン、IC41の無作為、二重盲検試験を行った。該試験は、ドイツ、オーストリア、ポーランドの11センターで行った。3つの異なる投与量および比率のHCVペプチドワクチンとポリ-L-アルギニンの組み合わせ、HCVペプチドワクチン単独またはポリ-L-アルギニン単独を、60患者に無作為に投与した。
【００３１】
該試験には、以下の試験対象患者基準に適合する男性および女性患者が含まれた。:
・少なくとも6箇月裏付けされたC型慢性肝炎の診断(2以上の時点で、ALT >正常上限[ULN]の1.5倍)。
・6から12箇月(HCVの遺伝子型に依存)の一次標準的HCV治療に非-応答または再発。
・HCV-RNA陽性。
・HLA-A2陽性。
・HCV抗体陽性。
・投与前30箇月以内の肝生検で、肝炎および/または線維症が示された者。
・血液学および生化学検査結果が正常である患者集団(最大肝臓値の5×ULN)。
・18から65歳
・試験開始前に書面によるインフォームドコンセントを受けた者
【００３２】
本臨床研究において、各群はHLA-A2陽性の12被験者からなる。被験者は1箇月の間隔で、6回のワクチン接種を受けた(3から8のビジットで)。免疫学的分析のための採血を、ワクチン接種前、ビジット6から8のビジット、最後のワクチン接種の1箇月後(ビジット9)、最後のワクチン接種の3箇月後(ビジット10)および最後のワクチン接種の6箇月後(ビジット11)に行った。臨床試験の免疫学的モニターのため、GLP/GCPに準拠した免疫応答の終点を決定するための最新式のT細胞アッセイには、: インターフェロン-ガンマELIspotアッセイ、T細胞増殖アッセイ、HLA-テトラマー/FACSアッセイを装備した。これらのアッセイは、治療用HCVワクチンIC41により誘導されるエピトープ-特異的T細胞応答の信頼性ある測定を可能にする。該ワクチン-誘導T細胞免疫応答を、有効性の代理パラメーターとして用いる (Keilholz et al. 2002)。
【００３３】
一次終点として、T-細胞免疫原性をT-細胞増殖アッセイにより測定した。該増殖アッセイにより、ヒト血液のような生体試料のペプチド-特異的T細胞の検出が可能である。このアッセイの基礎は、T細胞が、そのT細胞レセプターによって特異的に認識されたペプチドで刺激され、サイトカインの分泌およびその後の増殖により反応することである。細胞の増殖は様々な手段により測定することができる; 最も感度の高いアプローチとして、細胞分裂の前に合成されたDNAに、放射性標識したチミジンを導入することが挙げられる。この反応は96-ウェルプレートで行うことができる。各ウェルには一定数の細胞が含まれており、これを抗原／ペプチドの存在下で2、3日培養する。最後の16-20時間にトリチウムで標識したチミジン(3H-チミジン)を加える。ついで、細胞をフィルタープレートに回収する: 遊離の放射能を含む培地を洗浄して除き、一方、ＤＮＡはフィルターに固着する。導入された放射能を、counts-per-minute (cpm)を測定するベータ−シンチレーションカウンターにより測定する。通常の出力は、ネガティブコントロールのcpmで割った試験試料のcpmと定義される刺激指数(S.I.)として得られる。
【００３４】
二次終点としてT-細胞免疫原性をインターフェロンガンマELIspotにより測定した。 ELIspotは、ヒト血液などの生体試料中のペプチド-特異的、機能的(すなわちサイトカイン-分泌)T細胞の定量を可能とする。このアッセイの基礎は、T細胞が、そのT細胞レセプターによって特異的に認識されるペプチドで刺激されると、IFN-γなどのサイトカインの分泌により反応するということである。この反応は９６ウェルプレートで行うことができる。このプレートのフィルター−ウェルは、IFN-γに特異的なMabでコーティングされている。その後、IFN-γを分泌する各細胞は、IFN-γスポットを残し、これをその後の発色反応で可視化することができる。スポットは、自動プレート読み取り機を用いてカウントする。得られた数は、試料中のペプチド-特異的IFN-γ-分泌性T細胞の頻度である。
【００３５】
さらなる二次終点としてHLA-テトラマー/FACS分析を行った。HLA 分子と抗原ペプチドとの複合体の可溶性の組換え形態であるHLAクラスIテトラマーを、T細胞認識に用いた抗原-特異的T細胞レセプターに結合する。蛍光テトラマーとともにフローサイトメトリーを用いることにより、抗原-特異的CD8+Tリンパ球を確実に測定し、特徴づける。該アッセイには、Beckman Coulter Immunomics製、HLA-A*0201特別注文iTagTM-テトラマーのIC41クラスIエピトープ複合体を用いた。
【００３６】
被験者を、ビジット4から11のいずれにおいても有意なT-細胞応答を示し、かつ治療前に応答を有しない場合、応答者として分類した。既存の免疫(ワクチン接種前に既にIC41内のペプチドに対する有意なT-細胞応答を有する)の場合には、既存値の少なくとも3倍に増加した場合に応答としての効果と分類した。
【００３７】
重要な結果として第一に、これらの臨床試験により、概して完全合成ペプチド、特にポリ-L-アルギニンの優れた安全性が確認された。更に、ヒトT細胞の活性化に関していくつかの重要な点が得られた: 両試験において、T細胞応答を、[3H]-チミジン増殖およびIFN-γELIspotアッセイ、並びにフローサイトメトリー(FACS)を用いて評価した。これらのアッセイは、Intercell AG's Clinical Immunology Laboratoryで標準化およびバリデートされ、ワクチン接種で誘導されたエピトープ-特異的T細胞応答の信頼性ある測定を可能とする。全アッセイは、医薬品安全性試験実施基準(GLP)/ 医薬品の臨床試験の実施の基準(GCP)の要件に従って行った。異なる治験場所での血液細胞の単離方法の標準化により、評価可能なアッセイの率を高くした。しかしながら、研究室間のT細胞アッセイの標準化はないため、本試験結果と類似の試験の公表データとを比較することは難しい。凍結保存血液細胞を使用したが、新鮮血を使用するアッセイと比較してT細胞応答は過小評価となった可能性がある。
【００３８】
慢性HCV患者の第2相試験群において、若干異なる様相が得られた: 概して、IC41ペプチドへのCD4+およびCD8+T細胞応答は、ペプチドまたはポリ-L-アルギニン単独を免役した患者の試料と比べ、ペプチドおよびポリ-L-アルギニンを共に免疫した患者の末梢血試料でより高頻度でより活力があり、T細胞アジュバントとしてポリ-L-アルギニンの必要性が確認された。ワクチンの応答者率は、組み合わせ（verum）群では対照群(図1)に比べ約2から3-倍高かった。T細胞増殖応答者は、組み合わせ群(30-60%)では対照群(0-17%)と比較し非常に多かった。
【００３９】
しかしながら最も重要なことは、インターフェロン-ガンマELIspot応答者は、組み合わせ群にのみ認められたことである(図2)。これらの結果は、ポリ-L-アルギニンが、インターフェロン/リバビリン標準的治療では治療不可である慢性HCV感染患者においてさえ、I型応答を誘導することが可能であることを初めて示した。有意なインターフェロン-ガンマELIspot応答が、HLA-クラスII(ヘルパーT細胞に認識される)およびHLA-クラスI(細胞傷害性T細胞に認識される)の両ペプチドに対して検出された。最後の免疫6箇月後に行った第二免疫学的チェック(ビジット11)より前のデータとこれを含めたデータの解析から、ビジット1から10で得られたデータと比較して、免疫学的応答者率に重大な差はないことが明らかとなり、IC41-誘導免疫応答の持続可能性を示した。該研究はまた、ウイルスに対するT細胞免疫は、ワクチン摂取した健常者で誘導されるレベルとあまり差はないことを開示する。従って、免疫抑制は患者において予想されたほど一般的でない。該T細胞応答は疾患の進行を抑制しまたは症状を改善し最終的には感染を排除するために、いかに適用するのが最適であるかは依然不明である。
【００４０】
総合すれば、ポリ-L-アルギニンは、最初の合成T細胞アジュバントの一つであり、常にインビトロ試験から治療不能の慢性感染患者まで所望の種類の免疫応答を誘導し増大することが可能である。その容易な製造可能性、優れた安全性、および慢性HCV感染のような困難な状況においても有効であることから、それは、感染性疾患および癌との戦いにおいて新規な手段であることが保証される。
【００４１】
実施例II: 慢性HCV患者におけるCD4+ヘルパー-T-細胞の増殖はIC41により誘導されるが、ペプチド単独またはポリ-L-アルギニン単独では誘導されない。
【００４２】
図1に示されるように、IC41は、慢性HCV患者において有意な増殖応答を誘導することができる。興味深いことに、ペプチド単独およびポリ-L-アルギニン単独のどちらもこの性能はなく、ポリ-L-アルギニンのアジュバント効果を立証する。
【００４３】
実施例III: ポリ-L-アルギニンは、慢性HCV患者におけるI型T-細胞応答(インターフェロンガンマ)の誘導に必要である。
【００４４】
図2に示されるように、IC41は、慢性HCV患者においてインターフェロンガンマ分泌T-細胞を誘導し、ペプチド単独またはポリ-L-アルギニン単独ではいずれの応答も誘導しない。重要な点は、CD4+ヘルパー-T-細胞およびCD8+細胞傷害性T-細胞の両方が誘導されることである。
【００４５】
インターフェロンガンマ分泌は顕著なI型T-細胞応答の一つである。該応答は、HCV患者の一部において感染の急性期にみられ、該患者の該ウイルスは減少し、慢性感染への進行はない。I型T-細胞応答はまた、インターフェロンおよびリバビリンの標準的治療を受けた患者にもみられる。よって、IC41によるI型T-細胞応答の誘導は、HCVに対する治療的ワクチン接種の主要目的である。
【非特許文献１】Bellentani S, Miglioli L, Masutti F, Saccoccio G, Tiribelli C. Epidemiology of hepatitis C virus infection in Italy: the slowly unraveling mystery.
【非特許文献２】Microbes Infect. 2000 Nov;2(14):1757-63.
【非特許文献３】Liang TJ, Rehermann B, Seeff LB, Hoofnagle JH. Pathogenesis, natural history, treatment, and prevention of hepatitis C. Ann Intern Med. 2000 Feb 15;132(4):296-305.
【非特許文献４】Cornberg M, Wedemeyer H, Manns MP. Treatment of chronic hepatitis C with PEGylated interferon and ribavirin. Curr Gastroenterol Rep. 2002 Feb;4(1):23-30.
【非特許文献５】Keilholz U, Weber J, Finke JH, Gabrilovich DI, Kast WM, Disis ML, Kirkwood JM, Scheibenbogen C, Schlom J, Maino VC, Lyerly HK, Lee PP, Storkus W, Marincola F, Worobec A, Atkins MB.
【非特許文献６】Immunologic monitoring of cancer vaccine therapy: results of a workshop sponsored by the Society for Biological Therapy. J Immunother. 2002 Mar-Apr;25(2):97-138. Review.
【非特許文献７】Fried M, Shiffman M, et al.  Peginterferon Alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection.  N Engl J Med, Vol. 347, No. 13. September 26, 2002; 975-982.
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】慢性HCV患者におけるCD4+ヘルパー-T-細胞の増殖を示す。ペプチド単独またはポリ-L-アルギニン単独ではないIC41は、有意な増殖を誘導する。0、1、2、3、4、5箇月にワクチンを投与した。CD4+ヘルパー-T-細胞応答を誘導可能なIC41ペプチドの刺激指数をそれぞれ測定し、有意な応答をまとめた。投与群の全12患者のメジアン応答値が示される。
【００４７】
【図２】IC41またはペプチド単独またはポリ-L-アルギニン単独をワクチン接種した患者のインターフェロン-ガンマELIspot応答者率を示す。各群は、12患者からなる。上方パネル: CD4+ヘルパー-およびCD8+細胞傷害性T-細胞、下方パネル: CD8+細胞傷害性T-細胞のみ。
【図１】
2008517973.tif 000003
【図２】
2008517973.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成18年8月29日(2006.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
HCV慢性感染患者の治療のための、HCV抗原またはHCVエピトープを含む医薬または医薬組成物の調製および製造のためのポリカチオン性化合物の使用。
【請求項２】
医薬、医薬組成物がワクチンである、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
該患者が、ペグ化インターフェロン-アルファおよび抗ウイルス薬リバビリンを併用した一次標準的HCV治療に対し、応答がない、応答が不十分である、または該治療から再発したことを特徴とする、請求項1または2に記載の使用。
【請求項４】
ポリカチオン性化合物がポリカチオン性ペプチドであることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一つに記載の使用。
【請求項５】
ポリカチオン性ペプチドが、20と500の間のアミノ酸残基、特に30と200の間のアミノ酸残基を含むことを特徴とする、請求項4に記載の使用。
【請求項６】
ポリカチオン性ペプチドがポリアルギニンまたはポリリシンであることを特徴とする、請求項3に記載の使用。
【請求項７】
該医薬がCD4+ヘルパー-T-細胞およびCD8+細胞傷害性T-細胞の誘導に使用されることを特徴とする、請求項1から6のいずれか一つに記載の使用。
【請求項８】
インターフェロンアルファおよびリバビリンのHCV標準的治療の代替または補助として、該医薬を使用することを特徴とする、請求項1から7のいずれか一つに記載の使用。
【請求項９】
該医薬が、該標準的治療の効果がない、またはもはや効果がない患者のためであることを特徴とする、請求項8に記載の使用。
【手続補正書】
【提出日】平成19年7月5日(2007.7.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008517973000001.app
【国際調査報告】
2008517973.tif 000005
2008517973.tif 000006
2008517973.tif 000007