(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）のスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物により自己免疫疾患を治療または予防する方法、ならびにこのような疾患と関連する症状を治療、予防または寛解する方法を提供する。この化合物によって治療または予防され得る自己免疫疾患の具体的な例としては、慢性関節リウマチおよび／またはその関連症状、全身性紅斑性狼蒼および／またはその関連症状ならびに多発性硬化症および／またはその関連症状が挙げられる。2008521817.tif 000051
2008521817.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式（Ｉ）：
【化１】
2008521817.tif 000045
に従った化合物であって、その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中：
Ｌ１は、直接結合またはリンカーであり；
Ｌ２は、直接結合またはリンカーであり；
Ｒ２は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ３〜Ｃ８）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている３〜８員シクロヘテロアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１５）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、および１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１５員ヘテロアリールよりなる群から選択され；
Ｒ４は、
【化２】
2008521817.tif 000046
であり；
各Ｗは、他のものとは独立して、−ＣＲ３１Ｒ３１−であり；
Ｘは、−Ｎ−および−ＣＨ−よりなる群から選択され；
ＹおよびＺは、各々互いに独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯＮＲ３６−、−ＮＨ−、−ＮＲ３５−および−Ｒ３７−よりなる群から選択され；
Ｒ５は、水素、陰性基、−ＯＲｄ、−ＳＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキルオキシ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキル、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＳＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリールおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている６〜１６員ヘテロアリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルカニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ２〜Ｃ４）アルケニル、および１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ２〜Ｃ４）アルキニルよりなる群から選択され；
Ｒ６は、水素、陰性基、−ＯＲｄ、−ＳＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキルオキシ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキル、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＳＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリールおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている６〜１６員ヘテロアリールアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｒａ、Ｒｂ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたはＲｂにより置換されているＲａ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたはＲｂにより置換されている−ＯＲａ、−Ｂ（ＯＲａ）２、−Ｂ（ＮＲｃＲｃ）２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−ＣＨＲａＲｂ、−Ｏ−ＣＲａ（Ｒｂ）２、−Ｏ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］、−Ｎ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨＲｂＲｂおよび−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂよりなる群から選択され；
各Ｒ３１は、他のものとは独立して、水素、または１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
各Ｒ３５は、他のものとは独立して、水素およびＲ８よりなる群から選択されるか、あるいは、２つのＲ３５基が一緒になってオキソ（＝Ｏ）、または＝ＮＲ３８基を形成しており；
各Ｒ３６は、他のものとは独立して、水素および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルよりなる群から選択され；
各Ｒ３７は、他のものとは独立して、水素およびプロ基よりなる群から選択され；
Ｒ３８は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび（Ｃ５〜Ｃ１４）アリールよりなる群から選択され；
各Ｒａは、他のものとは独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、シクロヘキシル、（Ｃ４〜Ｃ１１）シクロアルキルアルキル、（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、フェニル、（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、ベンジル、２〜６員ヘテロアルキル、３〜８員シクロヘテロアルキル、モルホリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピペリジニル、４〜１１員シクロヘテロアルキルアルキル、５〜１０員ヘテロアリールおよび６〜１６員ヘテロアリールアルキルよりなる群から選択され；
各Ｒｂは、他のものとは独立して、＝Ｏ、−ＯＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、−ＯＣＦ３、＝Ｓ、−ＳＲｄ、＝ＮＲｄ、＝ＮＯＲｄ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＲａ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＯＨ）Ｒａ、−Ｃ（ＮＯＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＲａ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＲａＣ（ＮＲａ）］ｎＮＲｃＲｃよりなる群から独立して選択される好適な基であり；
各Ｒｃは、他のものとは独立して、保護基またはＲａであるか、あるいは、各Ｒｃは、結合している窒素原子と一緒になって、１つまたは複数の同じかまたは異なるさらなるヘテロ原子を任意に含むことができ１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたは好適なＲｂ基により任意に置換できる５員から８員のシクロヘテロアルキルまたはヘテロアリールを形成し；
各Ｒｄは、他のものとは独立して、保護基またはＲａであり；
各ｍは、他のものとは独立して、１から３の整数であり；
各ｎは、他のものとは独立して、０から３の整数であり；
ｏは、１から６の整数である、
化合物。
【請求項２】
構造式（Ｖ）：
【化３】
2008521817.tif 000047
に従った請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５が、ハロ、フルオロまたは−ＣＦ３である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５が、フルオロである請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ６が、水素である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
ＹおよびＺが、ＯおよびＮＨよりなる群から独立して選択される請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、−ＣＨ−である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
各Ｒ３５が、水素である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
２つのＲ３５基が、オキソ基を形成する請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１０】
ＹがＯであり、ＺがＮＨである請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１１】
ｏが、１から４の整数である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１２】
ｏが、１である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１３】
各Ｒ３１が、独立して水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１４】
各Ｒ３１が、水素である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２が、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニルである請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２が、２つのＲｂ基による二置換フェニル基であるか、またはＲ２が、３つのＲｂ基による三置換フェニル基である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ２が、
【化４】
2008521817.tif 000048
である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ５が、ハロ、フルオロまたは−ＣＦ３であり、Ｒ６が、水素である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ５が、フルオロであり、Ｒ６が、水素である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項２０】
２つのＲ３５基が、オキソ基を形成し、ＹがＯであり、ＺがＮＨであり、ＸがＣＨであり、各Ｒ３１が水素である請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ５が、フルオロであり、Ｒ６が、水素である請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２が、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニルである請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ２が、２つのＲｂ基による二置換フェニル基であるか、またはＲ２が、３つのＲｂ基による三置換フェニル基である請求項２１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ２が、
【化５】
2008521817.tif 000049
である請求項２１に記載の化合物。
【請求項２５】
ｏが、１である請求項２１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ２が、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニルである請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ２が、２つのＲｂ基による二置換フェニル基であるか、またはＲ２が、３つのＲｂ基による三置換フェニル基である請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ２が、
【化６】
2008521817.tif 000050
である請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
製薬的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤をさらに含んでなる請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項３０】
自己免疫疾患を患っているか、または自己免疫疾患を発症する危険性のある被験体に、請求項１または請求項２に記載の２，４−ピリミジンジアミン化合物の有効量を投与するステップを含んでなる、自己免疫疾患および／またはそれに関連する１つまたは複数の症状を治療または予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（１．  関連出願の引用）
本出願は、出願番号６０／６３０，８０８（２００４年１１月２４日出願）に対する米国特許法第１１９条（ｅ）の下の優先権を主張し、この米国出願の内容は、本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
(２．  分野)
本発明は、一般にスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物、該化合物を含んでなる製薬組成物、該化合物を作製する中間体および合成法、ならびに自己免疫疾患および／またはそれと関連する症状の治療または予防など、種々の状況における該化合物および組成物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（３．  背景）
ＩｇＥ（ＦｃεＲＩ）に関する高アフィニティー受容体および／またはＩｇＧＥ（ＦｃγＲＩ）に関する高アフィニティー受容体など、Ｆｃ受容体の架橋結合は、多くの有害事象の原因である化学伝達物質の放出をもたらす肥満細胞、好塩基性細胞および他の免疫細胞におけるシグナル伝達カスケードを活性化する。例えば、このような架橋結合は、脱顆粒によって顆粒中の貯蔵部位からヒスタミンなど、Ｉ型（即時）アナフィラキシー過敏性反応の既に形成された伝達物質を放出するに至る。それはさらに、炎症反応において重要な役割を演じるロイコトリエン類、プロスタグランジン類および血小板活性化因子（ＰＡＦ）類など、他の伝達物質の合成および放出に至る。Ｆｃ受容体の架橋反応の際に合成され、放出されるさらなる伝達物質としては、サイトカイン類および一酸化窒素が挙げられる。
【０００４】
ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩなどのＦｃ受容体の架橋反応により活性化されるシグナル伝達カスケード（１つまたは複数）は、細胞タンパク質のアッセイを含んでなる。最も重要な細胞内シグナル伝播物質には、チロシンキナーゼがある。さらにＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ受容体の架橋反応に関連するシグナル伝達経路、ならびに他のシグナル伝達カスケードに関与する重要なチロシンキナーゼは、Ｓｙｋキナーゼである（レビューに関して非特許文献１を参照）。
【非特許文献１】Ｖａｌｅｎｔら、Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００２年、第７５巻、第４号、２５７−３６２頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＦｃεＲＩおよびＦｃγＲＩ受容体の架橋反応の結果として放出される伝達物質は、多くの有害事象発現の原因であるか、またはそれに重要な役割を演じることから、それらの放出の原因となるシグナル伝達カスケード（１つまたは複数）を阻害できる化合物が利用できるのであれば、非常に望ましいと考えられる。さらに、Ｓｙｋキナーゼが、これらおよび他の受容体シグナル伝達カスケード（１つまたは複数）で重要な役割を果たすため、Ｓｙｋキナーゼを阻害できる化合物が利用できるのであれば、これも非常に望ましいと考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（４．概要）
一態様において、本発明は、下記により詳細に検討されるように、種々の生物活性を有する新規なスピロ２，４−ピリミジンジアミンを提供する。一般に該化合物は、以下の構造および番号付け規約：
【０００７】
【化７】
2008521817.tif 000003
を有する２，４−ピリミジンジアミン「コア」を含んでなる。
【０００８】
本明細書に記載された化合物は、Ｃ２窒素（Ｎ２）およびＣ４窒素（Ｎ４）において置換されて２つの第二級アミンを形成し、１つまたは複数の以下の位置：Ｃ５位および／またはＣ６位で任意にさらに置換される。Ｎ２における置換基、ならびにＮ４以外の他の位置における任意の置換基は、特性および物理化学的性質において広範囲にあり得る。例えば、置換基（１つまたは複数）は、分枝鎖、直鎖または環式アルキル、分枝鎖、直鎖または環式ヘテロアルキル、モノ−または多環式アリール  モノ−または多環式ヘテロアリールまたはこれらの基の組合せであり得る。これらの置換基は、下記にさらに詳細に記載されるように、さらに置換できる。Ｎ４置換基は、下記のスピロへテロ環式基を一般に含む。
【０００９】
Ｎ２および／またはＮ４置換基は、それらそれぞれの窒素原子に直接結合してもよく、同じかまたは異なり得るリンカーを介してそれぞれの窒素原子から離れて配置されてもよい。リンカーの性質は、千差万別で１つの分子部分を別の分子部分と離れて配置するのに有用な原子または基の任意の組合せを実質的に含むことができる。例えば、リンカーは、非環式炭化水素架橋（例えば、メタノ、エタノ、エテノ、プロパノ、プロパ［１］エノ、ブタノ、ブタ［１］エノ、ブタ［２］エノ、ブタ［１，３］ジエノなどの飽和または不飽和アルキルエノ）、単環式または多環式炭化水素架橋（例えば、［１，２］ベンゼノ、［２，３］ナフタレノなど）、単純な非環式へテロ原子またはヘテロアルキルジイル架橋（例えば、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＰＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２など）、単環式または多環式ヘテロアリール架橋（例えば、［３，４］フラノ、ピリジノ、チオフェノ、ピペリジノ、ピペラジノ、ピラジジノ、ピロリジノなど）またはこのような架橋の組合せであり得る。
【００１０】
Ｎ２、Ｎ４、Ｃ５および／またはＣ６位の置換基、ならびに任意のリンカーは、１つまたは複数の同じかまたは異なる置換基によりさらに置換し得る。これら置換基の性質は千差万別である。好適な置換基の非限定例としては、分枝鎖、直鎖または環式アルキル、モノ−または多環式ヘテロアリール、ハロ、分枝鎖、直鎖または環式ハロアルキル、ヒドロキシル、オキソ、チオオキソ、分枝鎖、直鎖または環式アルコキシ、分枝鎖、直鎖または環式ハロアルコキシ、トリフルオロメトキシ、モノ−または多環式アリールオキシ、モノ−または多環式ヘテロアリールオキシ、エーテル、アルコール、スルフィド、チエーテル、スルファニル（チオール）、イミン、アゾ、アジド、アミン（第一級、第二級および第三級）、ニトリル（任意の異性体）、シアネート（任意の異性体）、チオシアネート（任意の異性体）、ニトロソ、ニトロ、ジアゾ、スルホキシド、スルホニル、スルホン酸、スルファミド、スルホンアミド、スルファミン酸エステル、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、アミジン、ホルマジン、アミノ酸、アセチレン、カルバメート、ラクトン、ラクタム、グルコシド、グルコヌリド、スルホン、ケタール、アセタール、チオケタール、オキシム、オキサミド酸、オキサミド酸エステルなど、およびこれらの基の組合せが挙げられる。反応性官能基を持つ置換基は、当業界に周知のとおり、保護されていてもよいし、または非保護であってもよい。
【００１１】
例示となる一実施形態において、本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、構造式（Ｉ）：
【００１２】
【化８】
2008521817.tif 000004
に従った化合物であって、その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中：
Ｌ１は、直接結合またはリンカーであり；
Ｌ２は、直接結合またはリンカーであり；
Ｒ２は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ３〜Ｃ８）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている３〜８員シクロヘテロアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１５）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、および１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１５員ヘテロアリールよりなる群から選択され；
Ｒ４は、
【００１３】
【化９】
2008521817.tif 000005
であり；
各Ｗは、他のものとは独立して、−ＣＲ３１Ｒ３１−であり；
Ｘは、−Ｎ−および−ＣＨ−よりなる群から選択され；
ＹおよびＺは、各々互いに独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯＮＲ３６−、−ＮＨ−、−ＮＲ３５−および−Ｒ３７−よりなる群から選択され；
Ｒ５は、水素、陰性基、−ＯＲｄ、−ＳＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキルオキシ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキル、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＳＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリールおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている６〜１６員ヘテロアリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルカニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ２〜Ｃ４）アルケニル、および１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ２〜Ｃ４）アルキニルよりなる群から選択され；
Ｒ６は、水素、陰性基、−ＯＲｄ、−ＳＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキルオキシ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキル、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＳＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリールおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている６〜１６員ヘテロアリールアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｒａ、Ｒｂ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたはＲｂにより置換されているＲａ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたはＲｂにより置換されている−ＯＲａ、−Ｂ（ＯＲａ）２、−Ｂ（ＮＲｃＲｃ）２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−ＣＨＲａＲｂ、−Ｏ−ＣＲａ（Ｒｂ）２、−Ｏ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］、−Ｎ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨＲｂＲｂおよび−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂよりなる群から選択され；
各Ｒ３１は、他のものとは独立して水素、または１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
各Ｒ３５は、他のものとは独立して、水素およびＲ８よりなる群から選択されるか、あるいは、２つのＲ３５基が一緒になってオキソ（＝Ｏ）、または＝ＮＲ３８基を形成しており；
各Ｒ３６は、他のものとは独立して、水素および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルよりなる群から選択され；
各Ｒ３７は、他のものとは独立して、水素およびプロ基よりなる群から選択され；
Ｒ３８は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび（Ｃ５〜Ｃ１４）アリールよりなる群から選択され；
各Ｒａは、他のものとは独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、シクロヘキシル、（Ｃ４〜Ｃ１１）シクロアルキルアルキル、（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、フェニル、（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、ベンジル、２〜６員ヘテロアルキル、３〜８員シクロヘテロアルキル、モルホリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピペリジニル、４〜１１員シクロヘテロアルキルアルキル、５〜１０員ヘテロアリールおよび６〜１６員ヘテロアリールアルキルよりなる群から選択され；
各Ｒｂは、他のものとは独立して、＝Ｏ、−ＯＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、−ＯＣＦ３、＝Ｓ、−ＳＲｄ、＝ＮＲｄ、＝ＮＯＲｄ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＲａ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＯＨ）Ｒａ、−Ｃ（ＮＯＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＲａ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＲａＣ（ＮＲａ）］ｎＮＲｃＲｃよりなる群から独立して選択される好適な基であり；
各Ｒｃは、他のものとは独立して、保護基またはＲａであるか、あるいは、各Ｒｃは、結合している窒素原子と一緒になって、１つまたは複数の同じかまたは異なるさらなるヘテロ原子を任意に含むことができ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたは好適なＲｂ基により任意に置換できる５員から８員のシクロヘテロアルキルまたはヘテロアリールを形成し；
各Ｒｄは、他のものとは独立して、保護基またはＲａであり；
各ｍは、他のものとは独立して、１から３の整数であり；
各ｎは、他のものとは独立して、０から３の整数であり；
ｏは、１から６の整数である。
【００１４】
一実施形態において、Ｒ５はＦであり、Ｒ６は水素である。
【００１５】
別の態様において、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物のプロドラッグを提供する。このようなプロドラッグは、それらのプロドラッグ形態において活性であってもよいし、使用の生理的条件下または他の条件下で活性薬物形態に変換されるまで不活性であってもよい。本明細書に記載されたプロドラッグにおいて、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の１つまたは複数の官能基が、該官能基を生じさせるために使用条件下で、典型的には加水分解、酵素開裂または幾つかの他の開裂機構により分子から開裂するプロ部分に含まれる。例えば、第一級または第二級アミノ基は、使用条件下で開裂するアミドプロ部分に含まれ、第一級または第二級アミノ基を生成できる。従って、本明細書に記載されたプロドラッグは、使用条件下で開裂するスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の１つまたは複数の官能基をマスクする「プロドラッグ」と称される特殊なタイプの保護基を含み、活性なスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物を生じさせる。プロ部分に含まれるプロ基によりマスクできるスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物内の官能基としては、限定はしないが、アミン（第一級および第二級）、ヒドロキシル、スルファニル（チオール）、カルボキシル、カルボニル、フェノール、カテコール、ジオール、アルキン、ホスフェートなどが挙げられる。所望の使用条件下で開裂可能であるプロ部分を生じさせるこのような官能基をマスクするのに好適な種々のプロ基が、当業界に知られている。これらのプロ基の全てを単独または組合せて、本発明のプロドラッグに含むことができる。本発明のプロドラッグに含むことができる第一級または第二級アミン基を生成するプロ部分の具体例としては、限定はしないが、アミド、カルバメート、イミン、尿素、ホスフェニル、ホスホリルおよびスルフェニルが挙げられる。本発明のプロドラッグに含むことができるスルファニル基を生成するプロ部分の具体例としては、限定はしないが、チオエーテル、例えば、Ｓ−メチル誘導体（モノチオ、ジチオ、オキシチオ、アミノチオアセタール）、シリルチオエーテル、チオエステル、チオカーボネート、チオカルバメート、不斉ジスルフィドなどが挙げられる。本発明のプロドラッグで含まれ得る、開裂してヒドロキシル基を生成するプロ部分の具体例としては、限定はしないが、スルホネート、エステルおよびカーボネートが挙げられる。本明細書に記載されるプロドラッグに含むことができる、カルボキシル基を生成するプロ部分の具体例としては、限定はしないが、エステル（シリルエステル、オキサミド酸エステルおよびチオエステル）、アミドおよびヒドラジドが挙げられる。
【００１６】
例示となる一実施形態において、プロドラッグとしては、ＲｃおよびＲｄの保護基が、プロ基である構造式（Ｉ）に従った化合物が挙げられる。
【００１７】
別の例示となる一実施形態において、プロドラッグは、構造式（ＩＩ）：
【００１８】
【化１０】
2008521817.tif 000006
に従った化合物であって、その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中：
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ２およびＬ２は、構造式（Ｉ）に関して先に定義されたとおりであり；
Ｒ２ｂは、プロ基であり；
Ｒ４ｂは、プロ基またはアルキル基、例えば、メチルである。
【００１９】
別の態様において、本明細書に記載された１つまたは複数の化合物および／またはプロドラッグならびに適切な担体、賦形剤または希釈剤を含んでなる製薬組成物を提供する。担体、賦形剤または希釈剤の正確な性質は、組成物に関する所望の使用法に依存し、獣医学使用に好適なまたは許容できるものからヒト使用に好適なまたは許容できるものまでの範囲であり得る。
【００２０】
さらなる別の態様において、本明細書に記載された２，４−ピリミジンジアミン化合物およびプロドラッグの合成に有用な中間体は、構造式（ＩＩＩ）：
【００２１】
【化１１】
2008521817.tif 000007
に従ったスピロ化合物であって、その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中：ｏ、Ｗ、Ｒ３５、Ｘ、ＹおよびＺは、構造式（Ｉ）に関して先に定義されたとおりであり、Ｄは、水素、ハロゲン、−ＮＯ２または−ＮＨ２である。
【００２２】
別の実施形態において、中間体は、構造式（ＩＶ）：
【００２３】
【化１２】
2008521817.tif 000008
に従った２，４−ピリミジンジアミン化合物であって、その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中：Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１、Ｒ３５、Ｘ、ＹおよびＺは、構造式（Ｉ）に関して先に定義されたとおりであり、ＬＧは、例えば、−Ｓ（Ｏ）２Ｍｅ、−ＳＭｅまたはハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）などの脱離基である。
【００２４】
本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、肥満細胞、好塩基性細胞、好中性細胞および／または好酸性細胞など、免疫細胞の脱顆粒の有効な阻害剤である。したがって、さらなる別の態様において、このような細胞の調節方法、特に阻害方法、脱顆粒方法を提供する。該方法は、一般に細胞の脱顆粒を調節、または阻害する上で有効なスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物またはそのプロドラッグ、許容できるその塩、水和物、溶媒和、Ｎ−オキシドおよび／または組成物の量に、脱顆粒する細胞を接触させることを含む。該方法は、細胞の脱顆粒を特徴とするか、それに起因するか、またはそれに関連する疾患の治療または予防に対する治療アプローチとしてインビトロ状況またはインビボ状況で実施できる。
【００２５】
操作理論のいずれにも拘束される意図はないが、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、ＩｇＥ（「ＦｃεＲＩ」）および／またはＩｇＧＥ（「ＦｃγＲＩ」）に対する高アフィニティーＦｃ受容体の架橋により開始されるシグナル伝達カスケードをブロックするか、または阻害することにより少なくともある程度、それらの脱顆粒阻害効果を発揮できる。実際、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、ＦｃεＲＩ媒介脱顆粒およびＦｃγＲＩ媒介脱顆粒双方の阻害剤であり得る。その結果、２，４−ピリミジンジアミン化合物は、限定はしないが、マクロファージ、肥満細胞、好塩基性細胞、好中性細胞および／または好酸性細胞など、このようなＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ受容体を発現する任意の細胞型におけるこれらのＦｃ受容体シグナル伝達カスケードを阻害するために使用できる。
【００２６】
該方法はまた、このようなシグナル伝達カスケード活性化の結果としてもたらされる下流過程の調節、特に阻害させ得る。このような下流過程としては、限定はしないが、ＦｃεＲＩ媒介および／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒、サイトカイン産生および／またはロイコトリエンおよびプロスタグランジンなどの脂質伝達物質の産生および／または放出が挙げられる。該方法は、一般にこのシグナル伝達カスケードの活性化によりもたらされるＦｃ受容体シグナル伝達カスケードおよび／または下流過程を調節するか、または阻害するために、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物またはそのプロドラッグ、許容できるその塩、水和物、溶媒和物、Ｎ−オキシドおよび／または組成物の有効量を上記に検討された細胞型の１つなど、Ｆｃ受容体発現の細胞と接触させることを含む。該方法は、脱顆粒の際に顆粒特異的な化学伝達物質の放出、サイトカイン産生および／または合成、ロイコトリエンおよびプロスタグランジンなどの脂質伝達物質の放出および／または合成によりもたらされる疾患など、Ｆｃ受容体シグナル伝達カスケードを特徴とするか、それに起因するか、またはそれに関連する疾患の治療または予防に対する治療アプローチとしてインビトロ状況またはインビボ状況で実施できる。
【００２７】
さらに別の態様において、ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ受容体シグナル伝達カスケードなど、Ｆｃ受容体シグナル伝達カスケードを活性化する結果、化学伝達物質の放出を特徴とするか、それに起因するか、またはそれに関連する疾患の治療方法または予防方法を提供する。該方法は、獣医学文脈において動物に、またはヒトにおいて実施できる。該方法は、一般に該疾患を治療または予防するために、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物またはそのプロドラッグ、許容できるその塩、水和物、溶媒和物、Ｎ−オキシドおよび／または組成物の有効量を動物被験体またはヒトに投与することを含む。先に検討されたように、ある免疫細胞におけるＦｃεＲＩまたはＦｃγＲＩ受容体シグナル伝達カスケードの活性化は、広範な疾患の生理的伝達物質である種々の化学物質の放出および／または合成に至る。これらの疾患はいずれも、本発明の方法に従って治療または予防できる。
【００２８】
例えば、肥満細胞および好塩基性細胞において、ＦｃεＲＩまたはＦｃγＲＩ受容体シグナル伝達カスケードの活性化は、脱顆粒過程を介してアトピー性および／またはＩ型過敏症反応（例えば、ヒスタミン、トリプターゼなどのプロテアーゼなど）の伝達物質の即時（すなわち、受容体活性化の１〜３分以内）放出が成される。このようなアトピー性またはＩ型過敏症反応としては、限定はしないが、環境および他のアレルゲン（例えば、花粉、昆虫および／または動物性毒物、食物、薬物、造影染料など）に対するアナフィラキシー反応、枯草熱、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、粘膜障害、組織障害およびある胃腸管障害が挙げられる。
【００２９】
脱顆粒により既に形成された伝達物質の即時放出に続いて、とりわけ血小板活性化因子（ＰＡＦ）、プロスタグランジンおよびロイコトリエン（例えば、ＬＴＣ４）など、種々の他の化学伝達物質放出および／または合成、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３などのサイトカインのデノボ合成および放出が成される。これら２つの過程のうちの第１のものは、受容体活性化の凡そ３〜３０分後に発生し；後者は、受容体活性化の凡そ３０分〜７時間後に発生する。これらの「後期」伝達物質は、ある程度、上記に掲げたアトピー性およびＩ型過敏症反応の慢性症状の原因であると考えられており、さらに炎症および炎症性疾患（例えば、骨関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、特発性炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、刺激結腸など）、低グレード瘢痕（例えば、強皮症、線維症の増加、ケロイド、術後瘢痕、肺線維症、血管痙縮、片頭痛、心筋梗塞後の再灌流傷害）、および乾燥合併症または乾燥症候群の化学伝達物質である。これらの疾患は全て、本発明の方法に従って治療または予防することができる。
【００３０】
本明細書に記載された方法に従って治療または予防できるさらなる疾患としては、好塩基性細胞および／または肥満細胞の病状が挙げられる。このような疾患の例としては、限定はしないが、強皮症などの皮膚疾患、心筋梗塞後などの心疾患、肺筋変化または再構築ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの肺疾患、および炎症性腸症候群（刺激結腸）などの腸疾患が挙げられる。
【００３１】
スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物はまた、チロシンキナーゼＳｙｋキナーゼの強力な阻害剤である。したがって、さらに別の態様において、Ｓｙｋキナーゼ活性を調節する方法、特に阻害する方法を提供する。該方法は一般に、Ｓｙｋキナーゼ活性を調節または阻害するために、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物またはそのプロドラッグ、許容できるその塩、水和物、溶媒和、Ｎ−オキシドおよび／または組成物の有効量を、ＳｙｋキナーゼまたはＳｙｋキナーゼを含んでなる細胞に接触させることを含む。一実施形態において、Ｓｙｋキナーゼは、単離または組換えＳｙｋキナーゼである。別の実施形態において、Ｓｙｋキナーゼは、細胞、例えば、肥満細胞または好塩基性細胞に発現する内因性または組換えＳｙｋキナーゼである。該方法は、Ｓｙｋキナーゼ活性を特徴とするか、それに起因するか、またはそれに関連する疾患の治療または予防に対する治療的アプローチとしてインビトロ状況またはインビボ状況において実施できる。
【００３２】
特定操作理論のいずれによっても拘束される意図はないが、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、ＦｃεＲＩのガンマ鎖ホモダイマーを介して活性化させるＳｙｋキナーゼを主として阻害することにより、細胞内脱顆粒化および／または他の化学伝達物質の放出を阻害し得る（例えば、図２を参照）。このガンマ鎖ホモダイマーは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃαＲＩなど、他のＦｃ受容体により共有される。これらの受容体の全てに関して、細胞内シグナル伝達は、共通のガンマ鎖ホモダイマーにより媒介される。これらの受容体の結合および凝集により、Ｓｙｋキナーゼなどのチロシンキナーゼの動員および活性化をもたらされる。これら共通のシグナル伝達活性の結果、本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃαＲＩなどのガンマ鎖ホモダイマーを有するＦｃ受容体のシグナル伝達カスケード、ならびにこれらの受容体を介して誘発される細胞応答の調節、特に阻害するために使用できる。
【００３３】
Ｓｙｋキナーゼは、他のシグナル伝達カスケードにおいて重要な役割を果たすことが知られている。例えば、Ｓｙｋキナーゼは、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達のエフェクターであり（Ｔｕｒｎｅｒら、２０００年、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ２１：１４８−１５４頁）、好中球においてシグナル伝達するインテグリンベータ（１）、ベータ（２）およびベータ（３）の必須成分である（Ｍｏｃｓａｉら、２００２年、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１６：５４７−５５８頁）。本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、Ｓｙｋキナーゼの強力な阻害剤であるので、それらは、Ｓｙｋが、例えば、Ｆｃ受容体、ＢＣＲおよびインテグリンのシグナル伝達カスケード、ならびにこれらのシグナル伝達カスケードを介して誘発される細胞応答などの役割を果たすいずれのシグナル伝達カスケードの調節、特に阻害するために使用できる。調節または阻害された特定の細胞応答は、当業界に周知のとおり、ある程度、特定の細胞型および受容体シグナル伝達カスケードに依存する。スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物により調節または阻害できる細胞応答の非限定例としては、レスピラトリーバースト、細胞接着、細胞脱顆粒化、細胞伝播、細胞移動、食作用（例えば、マクロファージにおいて）、カルシウムイオンフラックス（例えば、肥満細胞、好塩基性細胞、好中性細胞およびＢ細胞において）、血小板凝集、および細胞成熟（例えば、Ｂ細胞において）が挙げられる。
【００３４】
したがって、別の態様において、Ｓｙｋが役割を果たすシグナル伝達カスケードを調節する方法、特に阻害する方法を提供する。該方法は、一般にシグナル伝達カスケードを調節または阻害するために、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物またはそのプロドラッグ、許容できるその塩、水和物、溶媒和物、Ｎ−オキシドおよび／または組成物の有効量を、Ｓｙｋ依存受容体またはＳｙｋ依存受容体を発現する細胞と接触させることを含む。該方法はまた、特定のＳｙｋ依存シグナル伝達カスケードの活性化により誘発される下流過程または細胞応答の調節、特に阻害するために使用できる。該方法は、Ｓｙｋが、役割を果たすことが知られていないか、または後に発見される任意のシグナル伝達カスケードを調節するために実施できる。該方法は、Ｓｙｋ依存シグナル伝達カスケードの活性化を特徴とするか、それに起因するか、またはそれに関連する疾患の治療または予防に対する治療的アプローチとしてインビトロ状況またはインビボ状況において実施できる。このような疾患の非限定例としては、先に検討されたものが挙げられる。
【００３５】
本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、自己免疫疾患および／またはこのような疾患の症状を治療または予防するために使用できる。該方法は、一般に自己免疫疾患および／またはその関連する症状を治療または予防するために、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物またはそのプロドラッグ、許容できるその塩、水和物、溶媒和物、Ｎ−オキシドおよび／または組成物の有効量を、自己免疫疾患を患っている被験体、または自己免疫疾患を発症する危険性のある被験体に投与することを含む。スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物により治療または予防できる自己免疫疾患としては、非アナフィラキシー過敏症反応（ＩＩ型、ＩＩＩ型および／またはＩＶ型過敏症反応）と一般に関連するもの、および／または、少なくともある程度、単核細胞におけるＦｃγＲシグナル伝達カスケードの活性化により媒介されるこれらの疾患が挙げられる。このような自己免疫疾患としては、限定はしないが、単一臓器または単一細胞型自己免疫障害と称されるこれらの自己免疫疾患および、しばしば全身自己免疫障害としばしば称されるものを含むこれらの自己免疫疾患が挙げられる。しばしば単一臓器または単一細胞型自己免疫障害と称される疾患の非限定例としては：橋本甲状腺炎、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血の自己免疫アトロピー性胃炎、自己免疫脳脊髄炎、自己免疫睾丸炎、グッドバスチャー疾患、自己免疫血小板減少症、交感性眼炎、重症筋無力症、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、慢性攻撃的肝炎、潰瘍性大腸炎および膜性糸球体症が挙げられる。全身自己免疫障害としばしば称されるものを含む疾患の非限定例としては：全身性紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、ライター症候群、多発性筋炎−皮膚筋炎、全身性硬化症、結節性多発動脈炎、多発性硬化症および水疱性類天疱瘡が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
（６．詳細な説明）
６．２  定義
本明細書に用いられる以下の用語は、以下の意味を有するものとする。
【００３７】
単独または別の置換基の一部としての「アルキル」とは、親のアルカン、アルケンまたはアルキンの単一の炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導され、記述された炭素原子数（すなわち、Ｃ１〜Ｃ６は１個から６個の炭素原子を意味する）を有する飽和または不飽和分枝鎖、直鎖または環式一価の炭化水素基を称す。典型的なアルキル基としては、限定はしないが、メチル；エタニル、エテニル、エチニルなどのエチル；プロパン−１−イル、プロパン−２−イル、シクロプロパン−１−イル、プロパ−１−エン−１−イル、プロパ−１−エン−２−イル、プロパ−２−エン−１−イル、シクロプロパ−１−エン−１−イルなどのプロピル；シクロプロパ−２−エン−１−イル、プロパ−１−イン−１−イル、プロパ−２−イン−１−イルなどのプロピル；ブタン−１−イル、ブタン−２−イル、２−メチル−プロパン−１−イル、２−メチル−プロパン−２−イル、シクロブタン−１−イル、ブタ−１−エン−１−イル、ブタ−１−エン−２−イル、２−メチル−プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−２−エン−１−イル、ブタ−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブタ−１−エン−１−イル、シクロブタ−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１−イン−１−イル、ブタ−１−イン−３−イル、ブタ−３−イン−１−イルなどのブチルなどが挙げられる。具体的な飽和レベルが意図される場合、下記に定義されるように、用語「アルカニル」、「アルケニル」および／または「アルキニル」を用いる。幾つかの実施形態において、アルカニル基は、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキルである。他の実施形態において、アルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである。
【００３８】
単独または別の置換基の一部としての「アルカニル」とは、親のアルカンの単一の炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導された飽和分枝鎖、直鎖または環式アルキルを称す。典型的なアルカニル基としては、限定はしないが、メタニル；エタニル；プロパン−１−イル、プロパン−２−イル（イソプロピル）、シクロプロパン−１−イルなどのプロパニル；ブタン−１−イル、ブタン−２−イル（ｓ−ブチル）、２−メチル−プロパン−１−イル（イソブチル）、２−メチル−プロパン−２−イル（ｔ−ブチル）、シクロブタン−１−イルなどのブタニルなどが挙げられる。
【００３９】
単独または別の置換基の一部としての「アルケニル」とは、親のアルケンの単一の炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導された少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する不飽和分枝鎖、直鎖または環式アルキルを称す。該基は、二重結合（１つまたは複数）についてシスまたはトランスコンフォメーションのいずれかであり得る。典型的なアルケニル基としては、限定はしないが、エテニル；プロパ−１−エン−１−イル、プロパ−１−エン−２−イル、プロパ−２−エン−１−イル、プロパ−２−エン−２−イル、シクロプロパ−１−エン−１−イル；シクロプロパ−２−エン−１−イルなどのプロペニル；ブタ−１−エン−１−イル、ブタ−１−エン−２−イル、２−メチル−プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−２−エン−１−イル、ブタ−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブタ−１−エン−１−イル、シクロブタ−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イルなどのブテニルなどが挙げられる。好ましい実施形態において、アルケニル基は、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルである。
【００４０】
単独または別の置換基の一部としての「アルキニル」とは、親のアルキンの単一の炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導された少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和分枝鎖、直鎖または環式アルキルを称す。典型的なアルキニル基としては、限定はしないが、エチニル；プロパ−１−イン−１−イル、プロパ−２−イン−１−イルなどのプロピニル；ブタ−１−イン−１−イル、ブタ−１−イン−３−イル、ブタ−３−イン−１−イルなどのブチニルなどが挙げられる。
【００４１】
単独または別の置換基の一部としての「アルキルジイル」とは、親のアルカン、アルケンまたはアルキンの２個の異なる炭素原子の各々から１個の水素原子の除去によるか、または親のアルカン、アルケンまたはアルキンの単一の炭素原子から２個の水素原子の除去により誘導され、記述された炭素原子数（すなわち、Ｃ１〜Ｃ６は１個から６個の炭素原子を意味する）を有する飽和または不飽和分枝鎖、直鎖または環式二価の炭化水素基を称す。２つの一価基の中心または二価基中心の各価は、同じかまたは異なる原子を有する結合を形成できる。典型的なアルキルジイル基としては、限定はしないが、メタンジイル；エタン−１，１−ジイル、エタン−１，２−ジイル、エテン−１，１−ジイル、エテン−１，２−ジイルなどのエチルジイル；プロパン−１，１−ジイル、プロパン−１，２−ジイル、プロパン−２，２−ジイル、プロパン−１，３−ジイル、シクロプロパン−１，１−ジイル、シクロプロパン−１，２−ジイル、プロパ−１−エン−１，１−ジイル、プロパ−１−エン−１，２−ジイル、プロパ−２−エン−１，２−ジイル、プロパ−１−エン−１，３−ジイル、シクロプロパ−１−エン−１，２−ジイル、シクロプロパ−２−エン−１，２−ジイル、シクロプロパ−２−エン−１，１−ジイル、プロパ−１−イン−１，３−ジイルなどのプロピルジイル；ブタン−１，１−ジイル、ブタン−１，２−ジイル、ブタン−１，３−ジイル、ブタン−１，４−ジイル、ブタン−２，２−ジイル、２−メチル−プロパン−１，１−ジイル、２−メチル−プロパン−１，２−ジイル、シクロブタン−１，１−ジイル；シクロブタン−１，２−ジイル、シクロブタン−１，３−ジイル、ブタ−１−エン−１，１−ジイル、ブタ−１−エン−１，２−ジイル、ブタ−１−エン−１，３−ジイル、ブタ−１−エン−１，４−ジイル、２−メチル−プロパ−１−エン−１，１−ジイル、２−メタニリデン−プロパン−１，１−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，１−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，２−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，３−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，４−ジイル、シクロブタ−１−エン−１，２−ジイル、シクロブタ−１−エン−１，３−ジイル、シクロブタ−２−エン−１，２−ジイル、シクロブタ−１，３−エン−１，２−ジイル、シクロブタ−１，３−エン−１，３−ジイル、ブタ−１−イン−１，３−ジイル、ブタ−１−イン−１，４−ジイル、ブタ−１，３−ジイン−１，４−ジイルなどのブチルジイルなどが挙げられる。飽和の特定のレベルが意図される場合、用語のアルカニルジイル、アルケニルジイルおよび／またはアルキニルジイルが用いられる。２つの価が同じ炭素原子上にあることが特に意図される場合、用語の「アルキリデン」が用いられる。幾つかの実施形態において、アルキルジイル基は、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキルジイルである。他の実施形態において、アルキルジイル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルジイルである。また、基の中心が、末端炭素において、例えば、メタンジイル（メタノ）；エタン−１，２−ジイル（エタノ）；プロパン−１，３−ジイル（プロパノ）；ブタン−１，４−ジイル（ブタノ）など（下記に定義されるようにアルキルエノとも称される）である飽和非環式アルカニルジイル基であることが好ましい。
【００４２】
単独または別の置換基の一部としての「アルキルエノ」とは、直鎖の親のアルカン、アルケンまたはアルキンの２個の異なる炭素原子の各々から１個の水素原子の除去により誘導された２つの末端一価基中心を有する直鎖飽和または不飽和アルキルジイル基を称す。存在する場合の二重結合または三重結合の位置、特にアルキルエノ基は、角括弧で示される。典型的なアルキルエノ基としては、限定はしないが、メタノ；エタノ、エテノ、エチノなどのエチルエノ；プロパ［１］エノ、プロパ［１，２］ジエノ、プロパ［１］イノなどのプロピルエノ；ブタ［１］エノ、ブタ［２］エノ、ブタ［１，３］ジエノ、ブタ［１］イノ、ブタ［２］イノ、ブタ［１，３］ジイノなどのブチルエノなどが挙げられる。飽和の特定のレベルが意図される場合、用語のアルカノ、アルケノおよび／またはアルキノが用いられる。他の実施形態において、アルキルエノ基は、（Ｃ１〜Ｃ１０）アルキルエノである。他の実施形態において、アルキルエノ基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルエノである。さらに他の実施形態において、アルキルエノ基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルエノである。また、直鎖飽和アルカノ基、例えば、メタノ、エタノ、プロパノ、ブタノなどが好ましい。
【００４３】
単独または別の置換基の一部としての「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルカニル」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルキニル」、「ヘテロアルキルジイル」および「ヘテロアルキルエノ」とは、１個または複数個の炭素原子が、同じかまたは異なるヘテロ原子またはヘテロ原子基により各々独立して置換されている、アルキル、アルカニル、アルケニル、アルキニル、アルキルジイルおよびアルキルエノ基をそれぞれ称す。炭素原子を置換できる典型的なヘテロ原子および／またはヘテロ原子基としては、限定はしないが、−Ｏ−，−Ｓ−、−Ｓ−Ｏ−、−ＮＲ’−、−ＰＨ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ’−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−、およびそれらの組合せが挙げられ、各Ｒ’は、独立して水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである。
【００４４】
単独または別の置換基の一部としての「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」とは、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」基の環式型を称す。ヘテロアルキル基に関して、ヘテロ原子は、分子の残部に結合している位置を占めることができる。典型的なシクロアルキル基としては、限定はしないが、シクロプロピル；シクロブタニルおよびシクロブテニルなどのシクロブチル；シクロペンタニルおよびシクロペンテニルなどのシクロペンチル；シクロヘキサニルおよびシクロヘキセニルなどのシクロヘキシルなどが挙げられる。典型的なヘテロシクロアルキル基としては、限定はしないが、テトラヒドロフラニル（例えば、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イルなど）、ピペリジニル（例えば、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イルなど）、モルホリニル（例えば、モルホリン−３−イル、モルホリン−４−イル）、ピペラジニル（例えば、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イルなど）などが挙げられる。
【００４５】
「非環式へテロ原子架橋」とは、主鎖原子が、ヘテロ原子および／またはヘテロ原子基に限定される二価の架橋を称す。典型的な非環式へテロ原子架橋としては、限定はしないが、−Ｏ−，−Ｓ−、−Ｓ−Ｏ−、−ＮＲ’−、−ＰＨ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）ＮＲ’−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−、およびそれらの組合せが挙げられ、各Ｒ’は、独立して水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである。
【００４６】
「親の芳香族環系」とは、共役π電子系を有する不飽和環式環系または多環式環系を称す。具体的には、１つまたは複数の環が、芳香族であり、１つまたは複数の環が、例えば、フルオレン、インダン、インデン、フェナレン、テトラヒドロナフタレンなどである縮合環系が、「親の芳香族環系」の定義内に含まれる。典型的な親の芳香族環系としては、限定はしないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ−２，４−ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、テトラヒドロナフタレン、トリフェニレン、トリナフタレンなど、ならびにそれらの種々のヒドロ異性体が挙げられる。
【００４７】
単独または別の置換基の一部としての「アリール」とは、親の芳香族環系の単一炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導され、記述された炭素原子数（すなわち、Ｃ５〜Ｃ１５は、５個から１５個の炭素原子を意味する）を有する一価芳香族炭化水素基を称す。典型的なアリール基としては、限定はしないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、インダセン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ−２，４−ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなど、ならびにそれらの種々のヒドロ異性体から誘導された基が挙げられる。幾つかの実施形態において、アリール基は、（Ｃ５〜Ｃ１５）アリールであり、（Ｃ５〜Ｃ１０）であるものが、さらにより好ましい。好ましいアリールは、シクロペンタジエニル、フェニルおよびナフチルである。
【００４８】
単独または別の置換基の一部としての「アリールアリール」とは、２つ以上の同一または非同一の親の芳香族環系が、単結合により一緒に直接結合している環系の単一炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導された一価炭化水素基を称し、このような直接環結合数は、含まれる親の芳香族環系の数より１つ少ない。典型的なアリールアリール基としては、限定はしないが、ビフェニル、トリフェニル、フェニル−ナフチル、ビナフチル、ビフェニル−ナフチルなどが挙げられる。アリールアリール基における炭素原子数が、明記される場合、該炭素数は、各々親の芳香族環を含んでなる複数の炭素を称す。例えば、（Ｃ５〜Ｃ１５）アリールアリールは、各芳香族環が、例えば、ビフェニル、トリフェニル、ビナフチル、フェニルナフチルなどの５個から１５個の炭素を含んでなるアリールアリール基である。好ましくは、アリールアリール基の各親の芳香族環系は、独立して（Ｃ５〜Ｃ１５）芳香族であり、より好ましくは、（Ｃ５〜Ｃ１０）芳香族である。また、全ての親の芳香族環系は同一である、例えば、ビフェニル、トリフェニル、ビナフチル、トリフェニルであるアリールアリール基であることが好ましい。
【００４９】
単独、または別の置換基の一部としての「ビアリール」とは、単結合により一緒に直接結合した２つの同一の親芳香族系を有するアリールアリール基を称す。好ましくは、芳香族環系は、（Ｃ５〜Ｃ１５）芳香族環、より好ましくは、（Ｃ５〜Ｃ１０）芳香族環である。特に好ましいビアリール基はビフェニルである。
【００５０】
単独または別の置換基の一部としての「アリールアルキル」とは、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがアリール基により置換されている非環式アルキル基を称す。典型的なアリールアルキル基としては、限定はしないが、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられる。特定のアルキル部分が意図される場合、用語のアリールアルカニル、アリールアルケニルおよび／またはアリールアルキニルが用いられる。好ましい実施形態において、アリールアルキル基は（Ｃ６〜Ｃ２１）アリールアルキルであり、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル部分は（Ｃ６〜Ｃ１３）であり、アリール部分は（Ｃ５〜Ｃ１５）である。幾つかの実施形態において、アリールアルキル基は、（Ｃ６〜Ｃ１３）であり、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル部分は（Ｃ１〜Ｃ３）であり、アリール部分は（Ｃ５〜Ｃ１０）である。
【００５１】
「親のヘテロ芳香族環系」とは、１個または複数個の炭素原子が、同じかまたは異なるヘテロ原子またはヘテロ原子基により各々独立して置換されている親の芳香族環系を称す。炭素原子を置換する典型的なヘテロ原子またはヘテロ原子基としては、限定はしないが、Ｎ、ＮＨ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｓｉなどが挙げられる。具体的には、１つまたは複数の環が芳香族であり、１つまたは複数の環が、例えば、ベンゾジオキサン、ベンゾフラン、クロマン、クロメン、インドール、インドリン、キサンテンなどの飽和または不飽和である縮合環系は、「親のヘテロ芳香族環系」の定義内に含まれる。また、例えば、ベンゾピロンおよび１−メチル−１，２，３，４−テトラゾールなどの共通の置換基を含む認められた環が、「親のヘテロ芳香族環系」の定義内に含まれる。環式ポリエチレングリコール類などの環式ポリアルキレングリコール類に縮合したベンゼン環は、「親のヘテロ芳香族環系」の定義から具体的に除外される。典型的な親のヘテロ芳香族環系としては、限定はしないが、アクリジン、ベンズイミダゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾジオキサン、ベンゾジオキソール、ベンゾフラン、ベンゾピロン、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾトリアゾール、ベンゾキサキシン、ベンゾキサゾール、ベンゾキサゾリン、カルバゾール、β−カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフトリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどが挙げられる。
【００５２】
単独または別の置換基の一部としての「ヘテロアリール」とは、親のヘテロ芳香族環系の単一炭素原子から１個の水素原子の除去により誘導され、記述された炭素原子数（例えば、「５〜１４員」とは、５個から１４個の環原子を意味する）を有する一価ヘテロ芳香族基を称す。典型的なヘテロアリール基としては、限定はしないが、アクリジン、ベンズイミダゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾジオキサン、ベンゾジオキソール、ベンゾフラン、ベンゾピロン、ベンゾチアジアゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾトリアゾール、ベンゾキサジン、ベンゾキサゾール、ベンゾキサゾリン、カルバゾール、β−カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフトリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなど、ならびに種々のそれらのヒドロ異性体から誘導された基が挙げられる。幾つかの実施形態において、該ヘテロアリール基は、５〜１４員ヘテロアリールであり、５〜１０員ヘテロアリールが特に好ましい。
【００５３】
単独または別の置換基の一部としての「ヘテロアリール−ヘテロアリール」とは、２つ以上の同一または非同一の親のヘテロ芳香族環系が、単結合により一緒に直接結合している単一原子から１個の水素原子の除去により誘導された一価ヘテロ芳香族基を称し、このような直接的環結合数は、含まれる親のヘテロ芳香族環系の数よりも１つ少ない。典型的なヘテロアリール−ヘテロアリール基としては、限定はしないが、ビピリジル、トリピリジル、ピリジルプリニル、ビプリニルなどが挙げられる。原子数が特定される場合、その数は、各親のヘテロ芳香族環系を含んでなる原子数を称す。例えば、５〜１５員ヘテロアリール−ヘテロアリールは、各親のヘテロ芳香族環系が５個から１５個の原子、例えば、ビピリジル、トリピリジルなどを含んでなるヘテロアリール−ヘテロアリール基である。好ましくは、各親のヘテロ芳香族環系は、独立して５〜１５員ヘテロ芳香族であり、より好ましくは、５〜１０員ヘテロ芳香族である。親のヘテロ芳香族環系の全てが同一であるヘテロアリール−ヘテロアリール基であることも好ましい。
【００５４】
単独または別の置換基の一部としての「ビヘテロアリール」とは、単結合により一緒に直接結合している２つ以上の同一の親のヘテロ芳香族環系を有するヘテロアリール−ヘテロアリール基を称す。典型的なビヘテロアリール基としては、限定はしないが、ビピリジル、ビプリニル、ビキノリニルなどが挙げられる。好ましくは、ヘテロ芳香族環系は、５〜１５員ヘテロ芳香族環であり、より好ましくは、５〜１０員ヘテロ芳香族環である。
【００５５】
単独または別の置換基の一部としての「ヘテロアリールアルキル」とは、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがヘテロアリール基により置換されている非環式アルキル基を称す。特定のアルキル部分が意図される場合、用語のヘテロアリールアルカニル、ヘテロアリールアルケニルおよび／またはヘテロアリールアルキニルが用いられる。好ましい実施形態において、ヘテロアリールアルキル基は、６〜２１員ヘテロアリールアルキルであり、例えば、ヘテロアリールアルキルのアルカニル、アルケニルまたはアルキニル部分は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、ヘテロアリール部分は、５〜１５員ヘテロアリールである。特に好ましい実施形態において、ヘテロアリールアルキルは、６〜１３員ヘテロアリールアルキルであり、例えば、該アルカニル、アルケニルまたはアルキニル部分は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、ヘテロアリール部分は、５〜１０員ヘテロアリールである。
【００５６】
単独または別の置換基の一部としての「ハロゲン」または「ハロ」とは、他に記述されない限り、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを称す。
【００５７】
単独または別の置換基の一部としての「ハロアルキル」とは、１個または複数個の水素原子がハロゲンにより置換されているアルキル基を称す。したがって、用語の「ハロアルキル」は、モノハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキルなど、ペルハロアルキルまでを含むことが意図されている。例えば、表示の「（Ｃ１〜Ｃ２）ハロアルキル」としては、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、１−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、１，１，１−トリフルオロエチル、ペルフルオロエチルなどが挙げられる。
【００５８】
上記に定義された基は、さらに十分に認められた置換基を創製するために一般に使用されている接頭部および／または接尾部を含むことができる。例として、「アルキルオキシ」または「アルコキシ」とは、式−ＯＲ’’の基を称し、「アルキルアミン」とは、式−ＮＨＲ’’の基を称し、「ジアルキルアミン」とは、式−ＮＲ’’Ｒ’’の基を称し、式中各Ｒ’’は、独立してアルキルである。別の例として、「ハロアルコキシ」または「ハロアルキルオキシ」とは、式−ＯＲ’’’の基を称し、式中Ｒ’’’は、ハロアルキルである。
【００５９】
「保護基」とは、分子内の反応性官能基に結合した場合、その官能基の反応性を妨げるか、減少させるかまたは阻止する原子基を称す。典型的に保護基は、合成の過程中で望まれる場合、選択的に除去できる。保護基の例は、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、１９９９年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州およびＨａｒｒｉｓｏｎら、Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１〜８巻、１９７１〜１９９６年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州、に見ることができる。代表的なアミノ保護基としては、限定はしないが、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（「ＣＢＺ」）、ｔ−ブトキシカルボニル（「Ｂｏｃ」）、トリメチルシリル（「ＴＭＳ」）、２−トリメチルシリル−エタンスルホニル（「ＴＥＳ」）、トリチルおよび置換トリチル基、アリルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（「ＦＭＯＣ」）、ニトロ−ベラトリルオキシカルボニル（「ＮＶＯＣ」）などが挙げられる。代表的なヒドロキシル保護基としては、限定はしないが、ヒドロキシル基が、ベンジルおよびトリチルエーテル類、ならびにアルキルエーテル類、テトラヒドロピラニルエーテル類、トリアルキルシリルエーテル類（例えば、ＴＭＳまたはＴＩＰＰＳ基）およびアリルエーテル類などアシル化またはアルキル化されるものが挙げられる。
【００６０】
「プロドラッグ」とは、活性スピロ２，４−ピリミジンジアミン薬物を遊離させるために、体内などでの使用条件下で変換を必要とする活性なスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物（薬物）の誘導体を称す。プロドラッグは、活性な薬物に変換されるまで、生理的に不活性であることが多いが、必ずしもそうではない。プロドラッグは、官能基の遊離、したがって、活性スピロ２，４−ピリミジンジアミン薬物の遊離のため、特定の使用条件下で開裂などの変換を受けるプロ部分を形成するためにプロ基（下記に定義）による活性のためにある程度必要と考えられるスピロ２，４−ピリミジンジアミン薬物の官能基をマスクすることにより典型的に得られる。プロ部分の開裂は、加水分解反応などにより自然に進行し得るか、または開裂は、酵素、光、酸あるいは塩基などの別の試剤により、または温度変化など物理的または環境パラメータの変化またはそれらへの曝露により触媒または誘導できる。該試剤は、プロドラッグが投与される細胞内に存在する酵素、または胃の酸性条件などの使用条件に対して内因的であり得るか、または外因的に供給できる。
【００６１】
プロドラッグを得るために活性スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の官能基をマスクするのに好適な広範囲のプロドラッグ、ならびに得られたプロ部分は、当業界に周知である。例えば、ヒドロキシル官能基は、スルホネート、エステルまたはカーボネートプロ部分としてマスクでき、これらはインビボで加水分解されてヒドロキシル基を提供できる。アミノ官能基は、アミド、カルバメート、イミン、尿素、ホスフェニル、ホスホリルまたはスルフェニルプロ部分としてマスクでき、これらはインビボで加水分解されてアミノ基を提供できる。カルボキシル基は、エステル（シリルエステル類およびチオエステル類）、アミドまたはヒドラジドプロ部分としてマスクでき、これらはインビボで加水分解されてカルボキシル基を提供できる。本発明の窒素保護基および窒素プロドラッグとしては、低級アルキル基ならびにアミド類、カルバメート類などを挙げることができる。好適なプロドラッグおよびそれぞれのプロ部分の他の具体例は、当業者にとって明らかであろう。
【００６２】
「プロ基」とは、プロ部分を形成するため、活性スピロ２，４−ピリミジンジアミン薬物内の官能基をマスクするために使用される場合、該薬物をプロドラッグに変換する保護基のタイプを称す。プロドラッグは、典型的には、特定の使用条件下で開裂可能な結合を介して薬物の官能基に結合している。したがって、プロ基は、特定の使用条件下で官能基を遊離させるために開裂するプロ部分の一部である。具体例として、式−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３のアミド部分は、プロ基−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３を含んでなる。
【００６３】
「Ｆｃ受容体」とは、免疫グロブリンのＦｃ部分（特定の定常領域を含有する）に結合する細胞表面分子のファミリーの一メンバーを称す。各Ｆｃ受容体は、特定タイプの免疫グロブリンに結合する。例えば、Ｆｃα受容体（「ＦｃαＲ」）はＩｇＡに結合し、ＦｃεＲはＩｇＥに結合し、ＦｃγＲはＩｇＧに結合する。
【００６４】
ＦｃαＲファミリーは、ＩｇＡ／ＩｇＭの上皮輸送に関与するポリマーＩｇ受容体、ミクロイド（ｍｙｃｌｏｉｄ）特異的受容体ＲｃαＲＩ（ＣＤ８９とも呼ばれる）、Ｆｃα／μＲおよび少なくとも２つの代替ＩｇＡ受容体を含む（最近のレビューについては、Ｍｏｎｔｅｉｒｏ  ＆  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、２００３年、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、ａｄｖａｎｃｅｄ  ｅ−ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎを参照）。ＲｃαＲＩは、好中球、好酸球、単球／マクロファージ、樹状細胞およびクッパー細胞上に発現する。ＲｃαＲＩは、１本のアルファ鎖および細胞質ドメイン内の活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有し、Ｓｙｋキナーゼをリン酸化するＦｃＲガンマホモダイマーを含む。
【００６５】
ＦｃεＲファミリーは、ＦｃεＲＩおよびＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３としても知られている）と称される２つのタイプを含む。ＦｃεＲＩは、モノマーＩｇＥを細胞表面に係留する肥満細胞、好塩基性細胞および好酸性細胞上に見られる高アフィニティー受容体（約１０１０Ｍ−１のアフィニティーでＩｇＥに結合する）である。ＦｃεＲＩＩは、単核食細胞、Ｂリンパ球、好酸球および血小板上に発現する低アフィニティー受容体である。ＦｃεＲＩＩは、一本鎖ポリペプチドを含んでなり、ガンマ鎖ホモダイマーを含まない。
【００６６】
ＦｃγＲファミリーは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４としても知られている）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２としても知られている）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６としても知られている）と称される３つのタイプを含む。ＦｃγＲＩは、モノマーＩｇＧを細胞表面に係留する肥満細胞、好塩基性細胞、単核細胞、好中性細胞、好酸性細胞、樹状細胞および食細胞上に見られる高アフィニティー受容体（約１０８Ｍ−１のアフィニティーでＩｇＧ１に結合する）である。ＦｃγＲＩは、１本のアルファ鎖およびＦｃαＲＩおよびＦｃεＲＩにより共有されるガンマ鎖ダイマーを含む。
【００６７】
ＦｃγＲＩＩは、好中球、単球、好酸球、血小板およびＢリンパ球上に発現する低アフィニティー受容体である。ＦｃγＲＩＩは、１本のアルファ鎖を含んでなり、上記に検討されたガンマ鎖ホモダイマーを含まない。
【００６８】
ＦｃγＲＩＩＩは、ＮＫ、好酸性細胞、マクロファージ、好中性細胞および肥満細胞上に発現する低アフィニティー（５×１０５Ｍ−１のアフィニティーでＩｇＧ１に結合する）である。ＦｃγＲＩＩＩは、１本のアルファ鎖およびＦｃαＲＩ、ＦｃεＲＩおよびＦｃγＲＩにより共有されるガンマ鎖ホモダイマーを含んでなる。
【００６９】
当業技術者は、これらの種々のＦｃ受容体のサブユニット構造および結合性、それらを発現する細胞型が完全に特性化されていないことを認識するであろう。上記の考察は、これらの受容体に関する技術の現状を単に反映するものであり（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｄｉｓｅａｓｅ、第５版、Ｊａｎｅｗａｙら編集、２００１年、ＩＳＢＮ  ０−８１５３−３６４２−ｘ、３７１頁の図９．３０を参照）、本明細書に記載された化合物により調節できる種々の受容体シグナル伝達カスケードに関して限定する意図はない。
【００７０】
「Ｆｃ受容体媒介脱顆粒化」または「Ｆｃ受容体誘導脱顆粒化」とは、Ｆｃ受容体の架橋により開始されるＦｃ受容体シグナル伝達カスケードを介して進行する脱顆粒化を称す。
【００７１】
「ＩｇＥ誘導脱顆粒化」または「Ｆｃε媒介脱顆粒化」とは、ＦｃεＲＩ結合ＩｇＥの架橋により開始されるＩｇＥ受容体シグナル伝達カスケードを介して進行する脱顆粒化を称す。架橋は、ＩｇＥ特異的アレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体などの他の多価結合剤により誘導できる。図２を参照すると、肥満細胞および／または好塩基性細胞において、脱顆粒化をもたらすＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードは、２つの段階：上流および下流に分けることができる。上流段階は、カルシウムイオンの動員（図２において「Ｃａ２＋＋として図示されている；また図３も参照」）前に生じる全ての過程を含む。下流段階は、カルシウムイオンの動員およびその下流の全ての過程を含む。ＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化を阻害する化合物は、ＦｃεＲＩ媒介シグナル伝達カスケードに沿った任意の点で作用できる。上流のＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化を選択的に阻害する化合物は、カルシウムイオンの動員が誘導される点の上流にあるＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードの部分を阻害するように作用する。細胞ベースアッセイにおいて、上流のＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化を選択的に阻害する化合物は、ＩｇＥ特異的アレルゲンまたは結合剤（抗ＩｇＥ抗体など）により活性化または刺激される肥満細胞または好塩基性細胞などの細胞の脱顆粒化を阻害するが、例えば、カルシウムイオノフォアのイオノマイシンおよびＡ２３１８７などのＦｃεＲＩシグナル伝達経路を迂回する脱顆粒化剤により活性化または刺激される細胞の脱顆粒化は評価できるほどには阻害しない。
【００７２】
「ＩｇＧ誘導脱顆粒化」または「Ｆｃγ媒介脱顆粒化」とは、ＦｃγＲＩ結合ＩｇＧの架橋により開始されるＦｃγシグナル伝達カスケードを介して進行する脱顆粒化を称す。架橋は、ＩｇＧ特異的アレルゲンまたは抗ＩｇＧ抗体または抗体断片などの別の多価結合剤により誘導できる。ＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードと同様に、肥満細胞および／または好塩基性細胞において、脱顆粒化もまたもたらすＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードは、同じ２つの段階：上流および下流に分けることができる。ＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化と同様、上流のＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化を選択的に阻害する化合物は、カルシウムイオンの動員が誘導される点の上流に作用する。細胞ベースアッセイにおいて、上流のＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化を選択的に阻害する化合物は、ＩｇＧ特異的アレルゲンまたは結合剤（抗ＩｇＧ抗体または断片など）により活性化または刺激される肥満細胞または好塩基性細胞などの細胞の脱顆粒化を阻害するが、例えば、カルシウムイオノフォアのイオノマイシンおよびＡ２３１８７などのＦｃγＲＩシグナル伝達経路を迂回する脱顆粒化剤により活性化または刺激される細胞の脱顆粒化は評価できるほどには阻害しない。
【００７３】
「イオノフォア誘導脱顆粒化」または「イオノフォア媒介脱顆粒化」とは、例えば、イオノマイシンおよびＡ２３１８７などのカルシウムイオノフォアに対する曝露の際に生じる肥満細胞または好塩基性細胞などの細胞の脱顆粒化を称す。
【００７４】
「Ｓｙｋキナーゼ」とは、Ｂ細胞および他の造血細胞に発現する周知の７２ｋＤａの非受容体（細胞質）脾臓タンパク質チロシンキナーゼを称す。Ｓｙｋキナーゼは、リン酸化免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ類」）に結合する縦並びの２つのコンセンサスＳｒｃ−ホモロジー２（ＳＨ２）ドメイン、「リンカー」ドメインおよび触媒ドメインを含む（Ｓｙｋキナーゼの構造および機能のレビューに関しては、Ｓａｄａら、２００１年、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（東京）１３０：１７７−１８６頁を参照；またＴｕｒｎｅｒら、２０００年、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ２１：１４８−１５４頁を参照）。Ｓｙｋキナーゼは、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達のエフェクターとして広範に研究されている（Ｔｕｒｎｅｒら、２０００年、上記文献）。Ｓｙｋキナーゼは、Ｃａ２＋の動員および窒素活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケード（例えば、図２を参照）および脱顆粒化などの免疫受容体から導かれる重要な経路を調節する多数のタンパク質のチロシンリン酸化にとっても重要である。Ｓｙｋキナーゼはまた、好中球におけるインテグリンシグナル伝達において重要な役割を果たす（例えば、Ｍｏｃｓａｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １６：５４７−５５８頁を参照）。
【００７５】
本明細書に用いられるＳｙｋキナーゼとしては、限定はしないが、Ｓｙｋファミリーに属するものとして認識されている、ヒト、サル、ウシ、ブタ、げっ歯類など、任意の種の動物由来のキナーゼ類が挙げられる。具体的に、天然および人工双方のイソ体、接合変異体、対立遺伝子変異体、突然変異体が挙げられる。このようなＳｙｋキナーゼのアミノ酸配列は、周知であり、ＧＥＮＢＡＮＫから入手できる。ヒトＳｙｋキナーゼの種々のイソ体をコードするｍＲＮＡ類の具体例は、ＧＥＮＢＡＮＫ登録番号ｇｉ｜２１３６１５５２｜ｒｅｆ｜ＮＭ＿００３１７７．２｜、ｇｉ｜４９６８９９｜ｅｍｂ｜Ｚ２９６３０．１｜ＨＳＳＹＫＰＴＫ［４９６８９９］およびｇｉ｜１５０３０２５８｜ｇｂ｜ＢＣ０１１３９９．１｜ＢＣ０１１３９９［１５０３０２５８］に見ることができ、それらは、参照として本明細書に組み込まれている。
【００７６】
他のファミリーに属するチロシンキナーゼが、Ｓｙｋと３次元構造が類似している活性部位または結合ポケットを有し得ることを、当業技術者は認識されるであろう。この構造的類似性のために、本明細書で「Ｓｙｋ模倣物」と称されるこのようなキナーゼ類は、Ｓｙｋによりリン酸化される基質のリン酸化を触媒することが予想される。したがって、このようなＳｙｋ模倣物、このようなＳｙｋ模倣物が役割を演じるシグナル伝達カスケード、Ｓｙｋ模倣物およびＳｙｋ模倣物依存シグナル伝達カスケードによって達成される生物学的応答が、本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物により調節、特に阻害できることが認識されるであろう。
【００７７】
「Ｓｙｋ依存シグナル伝達カスケード」とは、Ｓｙｋキナーゼが役割を演じるシグナル伝達カスケードを称す。このようなＳｙｋ依存シグナル伝達カスケードの非限定例としては、ＦｃαＲＩ、ＦｃεＲＩ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＢＣＲおよびインテグリンシグナル伝達カスケードが挙げられる。
【００７８】
「自己免疫疾患」とは、内因性および／または外因性起源の１つまたは複数の免疫原性物質に対する被験体自体の体液性応答および／または細胞媒介免疫応答の結果として一般に生じる非アナフィラキシー過敏症反応（ＩＩ型、ＩＩＩ型および／またはＩＶ型過敏症反応）に一般に関連する疾患を称す。このような自己免疫疾患は、アナフィラキシー（Ｉ型またはＩｇＥ媒介）過敏症反応に関連する疾患とは区別される。
【００７９】
６．３  スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物
構造式（Ｉ）に従ったスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物が本明細書に提供され：
【００８０】
【化１３】
2008521817.tif 000009
その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中：
Ｌ１は、直接結合またはリンカーであり；
Ｌ２は、直接結合またはリンカーであり；
Ｒ２は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ３〜Ｃ８）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている３〜８員シクロヘテロアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１５）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、および１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１５員ヘテロアリールよりなる群から選択され；
Ｒ４は、
【００８１】
【化１４】
2008521817.tif 000010
であり；
各Ｗは、他のものとは独立して、−ＣＲ３１Ｒ３１−であり；
Ｘは、−Ｎ−および−ＣＨ−よりなる群から選択され；
ＹおよびＺは、各々互いに独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯＮＲ３６−、−ＮＨ−、−ＮＲ３５−および−Ｒ３７−よりなる群から選択され；
Ｒ５は、水素、陰性基、−ＯＲｄ、−ＳＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキルオキシ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキル、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＳＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリールおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている６〜１６員ヘテロアリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ４）アルカニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ２〜Ｃ４）アルケニル、および１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ２〜Ｃ４）アルキニルよりなる群から選択され；
Ｒ６は、水素、陰性基、−ＯＲｄ、−ＳＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキルオキシ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）ペルハロアルキル、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＳＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＳＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＳＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリールおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている６〜１６員ヘテロアリールアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｒａ、Ｒｂ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたはＲｂにより置換されているＲａ、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたはＲｂにより置換されている−ＯＲａ、−Ｂ（ＯＲａ）２、−Ｂ（ＮＲｃＲｃ）２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−ＣＨＲａＲｂ、−Ｏ−ＣＲａ（Ｒｂ）２、−Ｏ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−Ｏ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−Ｓ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−（ＣＨＲａ）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］、−Ｎ［（ＣＨ２）ｍＲｂ］２、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨＲｂＲｂおよび−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒｂよりなる群から選択され；
各Ｒ３１は、他のものとは独立して、水素、または１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
各Ｒ３５は、他のものとは独立して、水素およびＲ８よりなる群から選択されるか、あるいは、２つのＲ３５基が一緒になってオキソ（＝Ｏ）、または＝ＮＲ３８基を形成しており；
各Ｒ３６は、他のものとは独立して、水素および（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルよりなる群から選択され；
各Ｒ３７は、他のものとは独立して、水素およびプロ基よりなる群から選択され；
Ｒ３８は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび（Ｃ５〜Ｃ１４）アリールよりなる群から選択され；
各Ｒａは、他のものとは独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、シクロヘキシル、（Ｃ４〜Ｃ１１）シクロアルキルアルキル、（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、フェニル、（Ｃ６〜Ｃ１６）アリールアルキル、ベンジル、２〜６員ヘテロアルキル、３〜８員シクロヘテロアルキル、モルホリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピペリジニル、４〜１１員シクロヘテロアルキルアルキル、５〜１０員ヘテロアリールおよび６〜１６員ヘテロアリールアルキルよりなる群から選択され；
各Ｒｂは、他のものとは独立して、＝Ｏ、−ＯＲｄ、（Ｃ１〜Ｃ３）ハロアルキルオキシ、−ＯＣＦ３、＝Ｓ、−ＳＲｄ、＝ＮＲｄ、＝ＮＯＲｄ、−ＮＲｃＲｃ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−ＯＳ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲｄ、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＲａ）ＮＲｃＲｃ、−Ｃ（ＮＯＨ）Ｒａ、−Ｃ（ＮＯＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲｄ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＲｃＲｃ、−ＯＣ（ＮＲａ）ＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＯＲｄ、−［ＮＨＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃ、−［ＮＲａＣ（Ｏ）］ｎＮＲｃＲｃ、−［ＮＨＣ（ＮＨ）］ｎＮＲｃＲｃおよび−［ＮＲａＣ（ＮＲａ）］ｎＮＲｃＲｃよりなる群から独立して選択される好適な基であり；
各Ｒｃは、他のものとは独立して、保護基またはＲａであるか、あるいは、各Ｒｃは、結合している窒素原子と一緒になって、１つまたは複数の同じかまたは異なるさらなるヘテロ原子を任意に含むことができ１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａまたは好適なＲｂ基により任意に置換できる５員から８員のシクロヘテロアルキルまたはヘテロアリールを形成し；
各Ｒｄは、他のものとは独立して、保護基またはＲａであり；
各ｍは、他のものとは独立して、１から３の整数であり；
各ｎは、他のものとは独立して、０から３の整数であり；
ｏは、１から６の整数である。
【００８２】
構造式（Ｉ）の化合物において、Ｌ１およびＬ２は、互いに独立して直接結合またはリンカーを表す。したがって、当業技術者により認識されるように、置換基Ｒ２および／またはＲ４は、それぞれの窒素原子に直接結合し得るか、あるいは、リンカーによりそれぞれの窒素原子から離れて一定の間隔で配置され得る。リンカーの本性は重要ではなく、典型的に好適なリンカーとしては、限定はしないが、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルジイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルケノおよび（Ｃ１〜Ｃ６）ヘテロアルキルジイルが挙げられ、それらの各々は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されていてもよく、Ｒ８は、先に構造式（Ｉ）に関して定義されたとおりである。幾つかの実施形態において、Ｌ１およびＬ２は、各々互いに独立して、直接結合、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａ、好適なＲｂまたはＲ９基により任意に置換されている（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルジイルおよび１つまたは複数の同じかまたは異なるＲａ、好適なＲｂまたはＲ９基により任意に置換されている１〜３員ヘテロアルキルジイルよりなる群から選択され、Ｒ９は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、−ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、１つまたは複数の同じかまたは異なるハロゲンにより任意に置換されている（Ｃ５〜Ｃ１０）アリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるハロゲンにより任意に置換されているフェニル、１つまたは複数の同じかまたは異なるハロゲンにより任意に置換されている５〜１０員ヘテロアリール、１つまたは複数の同じかまたは異なるハロゲンにより任意に置換されている６員ヘテロアリールよりなる群から選択され；ＲａおよびＲｂは、先に構造式（Ｉ）に関して定義されたとおりである。Ｌ１およびＬ２を置換するために使用され得る具体的なＲ９基としては、−ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、フェニル、ハロフェニルおよび４−ハロフェニルが挙げられ、Ｒａは、先に構造式（Ｉ）に関して定義されたとおりである。
【００８３】
他の実施形態において、Ｌ１およびＬ２は、各々互いに独立してメタノ、エタノおよびプロパノよりなる群から選択され、それらの各々は、Ｒ９基により任意にモノ置換されていてもよく、Ｒ９は、先に上記に定義されたとおりである。
【００８４】
上記の実施形態において、Ｒ９基に含まれ得る具体的なＲａ基は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、フェニルおよびベンジルよりなる群から選択される。
【００８５】
さらに他の実施形態において、Ｌ１およびＬ２は各々、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物が構造式（Ｖ）：
【００８６】
【化１５】
2008521817.tif 000011
により記載されているような直接結合であって、その塩類、水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドを含み、式中Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、先に構造式（Ｉ）に関して定義されたとおりである。構造式（Ｉ）および（Ｖ）のスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の他の実施形態は、以下に記載されている。
【００８７】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、Ｒ５は、ハロ、フルオロまたは−ＣＦ３である。他の実施形態において、Ｒ５は、フルオロである。
【００８８】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、Ｒ６は水素である。他の実施形態において、ＹおよびＺは、−Ｏ−および−ＮＨ−よりなる群から独立して選択される。幾つかの他の実施形態において、Ｘは−ＣＨ−である。さらに他の実施形態において、Ｙは−Ｏ−であり、Ｚは−ＮＨ−である。
【００８９】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、各Ｒ３５は水素である。他の実施形態において、２つのＲ３５基は、オキソ基を形成する。
【００９０】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、ｏは、１から４の整数である。他の実施形態において、ｏは１である。
【００９１】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、各Ｒ３１は、独立して水素または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである。他の実施形態において、各Ｒ３１は水素である。
【００９２】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、各Ｒ２は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニルである。他の実施形態において、Ｒ２は、２つのＲｂ基により二置換されているフェニル基であるか、またはＲ２は、３つのＲｂ基により三置換されているフェニル基である。さらに他の実施形態において、Ｒ２は、
【００９３】
【化１６】
2008521817.tif 000012
である。
【００９４】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、Ｒ５は、ハロ、フルオロまたは−ＣＦ３であり、Ｒ６は水素である。他の実施形態において、Ｒ５はフルオロであり、Ｒ６は水素である。さらに他の実施形態において、２つのＲ３５基は、オキソ基を形成し、ＹはＯであり、ＺはＮＨであり、ＸはＣＨであり、各Ｒ３１は水素である。さらに他の実施形態において、Ｒ５はフルオロであり、Ｒ６は水素である。
【００９５】
構造式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の幾つかの実施形態において、Ｒ２は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニルである。他の実施形態において、Ｒ２は、２つのＲｂ基により二置換されているフェニル基であるか、またはＲ２は、３つのＲｂ基により三置換されているフェニル基である。さらに他の実施形態において、Ｒ２は、
【００９６】
【化１７】
2008521817.tif 000013
である。さらに他の実施形態において、ｏは１である。さらに他の実施形態において、Ｒ２は、１つまたは複数の同じかまたは異なるＲ８基により任意に置換されているフェニルである。さらに他の実施形態において、Ｒ２は、２つのＲｂ基により二置換されているフェニル基であるか、またはＲ２は、３つのＲｂ基により三置換されているフェニル基である。さらに他の実施形態において、Ｒ２は、
【００９７】
【化１８】
2008521817.tif 000014
である。
【００９８】
上記の実施形態の組合せもまた具体的に記載されている。
【００９９】
当業者は、本明細書に記載されているスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物が、プロドラッグを創製するためにプロ基によりマスクできる官能基を含み得ることを認識するであろう。このようなプロドラッグは、活性薬物形態に変換されるまで通常生理的に不活性であるが、必ずしも不活性である必要はない。例えば、エステル基は、胃の酸性条件下に曝された場合、一般に酸触媒加水分解を受けるか、または腸または血液の塩基性条件下に曝された場合、塩基触媒加水分解を受けて、親のカルボン酸を生成する。したがって、被験体に経口投与される場合、エステル部分を含む２，４−ピリミジンジアミン類は、エステル形態が薬理学的に活性であるかどうかにかかわらず、それらの対応するカルボン酸のプロドラッグを考慮できる。
【０１００】
本明細書に記載されたプロドラッグにおいて、任意の利用できる官能部分をプロ基によりマスクしてプロドラッグを得ることができる。プロ部分に含有するプロ基によりマスクできるスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物内の官能基としては、限定はしないが、アミン（第一級および第二級）、ヒドロキシル、スルファニル（チオール類）、カルボン酸などが挙げられる。所望の使用条件下で開裂可能であるプロ部分を生成するような官能基のマスクに好適な種々のプロ基が、当業界に知られている。これらのプロ基の全ては、単独でまたは組合せて、本明細書に記載されたプロドラッグに含むことができる。
【０１０１】
幾つかの実施形態において、プロドラッグは、構造式（Ｉ）に従った化合物であり、式中ＲｃおよびＲｄは、先に定義されたそれらの代替基に加えて、プロ基であり得る。
【０１０２】
当業者は、本明細書に記載された多くの化合物およびプロドラッグ、ならびに本明細書に具体的に記載され、および／または図示された種々の化合物種は、互変異性、配座異性、幾何異性および／または光学異性の現象を示し得ることを認識するであろう。例えば、本明細書に記載された化合物およびプロドラッグは、１つまたは複数のキラル中心および／または二重結合を含むことができ、その結果、二重結合異性体（すなわち、幾何異性体）、鏡像異性体およびジアステレオマーならびにラセミ混合物などのそれらの混合物として存在できる。別の例として、本明細書に記載された化合物およびプロドラッグは、例えば、エノール体、ケト体およびそれらの混合物など、幾つかの互変異性体で存在できる。本明細書および請求項内の種々の化合物名、式および化合物の図面が表すことができるのは、可能性のある互変異性体、配座異性体、光学異性体または幾何異性体の１つだけであるので、当然のことながら、本明細書に記載された化合物またはプロドラッグは、全ての可能性のある互変異性体、配座異性体、光学異性体および／または幾何異性体、ならびにこれら種々の異なる異性体を含む。２，４−ピリミジンジアミンコア構造周囲の回転が制限されている場合、アトロプ異性体もまた可能性であり、これらもまた本明細書に記載された化合物に特に含まれる。
【０１０３】
さらに、代替置換基のリストが、原子価要件または他の理由のために特定の基を置換するために使用できないメンバーを含む場合、該リストは、特定の基を置換するために好適な該リストのメンバーを含む文脈で読み取られることが意図されていることを、当業技術者は認識するであろう。例えば、全てのリストされたＲｂの代替基は、アルキル基を置換するために使用できるが、＝Ｏなどの代替基の幾つかは、フェニル基を置換するために使用できないことを当業技術者は認識するであろう。当然のことながら、置換基対の可能性のある組合せのみが意図されている。
【０１０４】
本明細書に記載されている化合物および／またはプロドラッグは、それらの化学構造またはそれらの化学名により同定できる。化学構造および化学名が矛盾する場合、具体的な化合物の識別に決定力があるのは化学構造である。
【０１０５】
種々の置換基の性質に依って、本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物およびプロドラッグは、塩類の形態であってもよい。このような塩類としては、製薬的使用に好適な塩類（「製薬的に許容できる塩類」）、獣医学使用に好適な塩類が挙げられる。このような塩類は、当業界に周知である酸または塩基から誘導できる。
【０１０６】
幾つかの実施形態において、塩は、製薬的に許容できる塩である。一般に、製薬的に許容できる塩類は、親化合物の１つまたは複数の所望の薬理活性を保持し、ヒトへの投与に好適なこれらの塩類である。製薬的に許容できる塩類としては、無機酸または有機酸により形成される酸付加塩類が挙げられる。製薬的に許容できる酸付加塩類の形成に好適な無機酸としては、例により限定はしないが、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸など）、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。製薬的に許容できる酸付加塩類の形成に好適な有機酸としては、例により限定はしないが、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、パルミチン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、経皮酸、マンデル酸、アルキルスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸など）、アリールスルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸）、シクロアルキルスルホン酸（例えば、カンファースルホン酸）、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などが挙げられる。
【０１０７】
製薬的に許容できる塩類としてはまた、親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン（例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンまたはアンモニウムイオン）、アンモニウムまたは有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、モルホリン、ピペリジン、ジメチルアミン、ジエチルアミンなど）との配位により置換される場合に形成される塩類が挙げられる。
【０１０８】
本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物ならびにそれらの塩類は、当業界に周知である水和物、溶媒和物およびＮ−オキシドの形態においてもあり得る。
【０１０９】
６．４  合成法
記載された化合物およびプロドラッグは、市販の出発物質および／または従来の合成法により調製された出発物質を用いて種々の異なる合成ルートを経て合成できる。本明細書に記載された２，４−ピリミジンジアミン化合物およびプロドラッグを合成するためにルーチン的に採用できる好適で代表的な方法は、米国特許第５，９５８，９３５号、２００３年１月３１日出願の米国特許出願第１０／３５５，５４３号（米国特許出願公開第２００４００２９９０２号）、国際公開第０３／０６３７９４号、２００３年７月２９日出願の米国特許出願第１０／６３１，０２９号、および２００４年２月１９日公開の国際公開第２００４／０１４３８２号に見られる。
【０１１０】
スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物を合成するために使用できる種々の代表的な合成ルートは、下記のスキーム（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に記載されている。スキーム（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）において、類似番号の化合物は、類似構造を有している。これらの方法は、構造式（ＩＩ）に従ったプロドラッグを合成するためにルーチン的に採用できる。
【０１１１】
代表的な一実施形態において、該化合物は、下記のスキーム（Ｉ）に図示されている置換または非置換ウラシル類またはチオウラシル類から合成できる：
【０１１２】
【化１９】
2008521817.tif 000015
スキーム（Ｉ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ１およびＬ２は、構造式（Ｉ）に関して先に定義されたとおりであり、Ｘは、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）であり、ＹおよびＹ’は、各々互いに独立してＯおよびＳよりなる群から選択される。スキーム（Ｉ）を参照すると、ウラシルまたはチオウラシル２は、標準的な条件下で標準的なハロゲン化剤ＰＯＸ３（または他の標準的なハロゲン化剤）を用い、２位と４位に二ハロゲン化されて２，４−ビスハロピリミジン４を生成する。ピリミジン４におけるＲ５置換基に依存して、Ｃ４位のハライドは、Ｃ２位のハライドよりも求核試薬に対して反応性である。この反応性の差を利用して、最初に反応性２，４−ビスハロピリミジン４と１当量のアミン１０とを反応させることにより構造式（Ｉ）に従った２，４−ピリミジンジアミン類を合成し、４Ｎ−置換−２−ハロ−４−ピリミジンアミン８を得、次いでアミン６により構造式（Ｉ）に従った２，４−ピリミジンジアミンを得ることができる。
【０１１３】
多くの状況において、Ｃ４位のハライドは、スキームに図示されるように求核試薬に対してより反応性である。しかしながら、当業技術者により認識されるように、Ｒ５置換基の本性によりこの反応性を変えることができる。例えば、Ｒ５がトリフルオロメチルである場合、４Ｎ−置換−４−ピリミジンアミン８および対応する２Ｎ−置換−２−ピリミジンアミンの５０：５０混合物が得られる。Ｒ５置換基の本性に関係なく、反応の選択性は、当業界に周知のとり、溶媒および他の合成条件（温度などの）を調整することにより調節できる。
【０１１４】
スキーム（Ｉ）に描かれた反応は、反応混合物をマイクロ波を介して加熱する場合に、より迅速に進行し得る。この様式において加熱する場合、以下の条件を使用できる：封管中（２０バール圧）、スミス反応器において５〜２０分間エタノール中で１７５℃に加熱。
【０１１５】
出発物質ウラシルまたはチオウラシル２は、市販の供給源から購入できるか、または有機化学の標準的技法を用いて調製できる。スキーム（Ｉ）の出発物質として使用できる市販のウラシル類およびチオウラシル類としては、例により限定はしないが、ウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号１３，０７８−８；ＣＡＳ登録番号６６−２２−８）；２−チオ−ウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号１１，５５８−４；ＣＡＳ登録番号１４１−９０−２）；２，４−ジチオウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号１５，８４６−１；ＣＡＳ登録番号２００１−９３−６）；５−アセトウラシル（Ｃｈｅｍ．Ｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｔ’ｌ  ２０００年；ＣＡＳ登録６２１４−６５−９）；５−アジドウラシル；５−アミノウラシル２−チオ−ウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号８５，５２８−６；ＣＡＳ登録番号９３２−５２−５）；５−ブロモウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号８５，２４７−３；ＣＡＳ登録番号５１−２０−７）；５−（トランス−２−ブロモビニル）−ウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号４５，７４４−２；ＣＡＳ登録番号６９３０４−４９−０）；５−（トランス−２−クロロビニル）−ウラシル（ＣＡＳ登録番号８１７５１−４８−２）；５−（トランス−２−カルボキシビニル）−ウラシル；ウラシル−５−カルボン酸（２，４−ジヒドロキシピリミジン−５−カルボン酸水和物；Ａｌｄｒｉｃｈ番号２７，７７０，３；ＣＡＳ登録番号２３９４５−４４−０）；５−クロロウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号２２，４５８−８；ＣＡＳ登録番号１８２０−８１−１）；５−シアノウラシル（Ｃｈｅｍ．Ｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｔ’ｌ  ２０００年；ＣＡＳ登録４４２５−５６−３）；５−エチルウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号２３，０４４−８；ＣＡＳ登録番号４２１２−４９−１）；５−エテニルウラシル（ＣＡＳ登録番号３７１０７−８１−６）；５−フルオロウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号８５，８４７−１；ＣＡＳ登録番号５１−２１−８）；５−ヨードウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号８５，７８５−８；ＣＡＳ登録番号６９６−０７−１）；５−メチルウラシル（チミン；Ａｌｄｒｉｃｈ番号１３，１９９−７；ＣＡＳ登録番号６５−７１−４）；５−ニトロウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号８５，２７６−７；ＣＡＳ登録番号６１１−０８−５）；ウラシル‐５−スルファミン酸（Ｃｈｅｍ．Ｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｔ’ｌ  ２０００年；ＣＡＳ登録５４３５−１６−５）；５−（トリフルオロメチル）−ウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号２２，３２７−１；ＣＡＳ登録番号５４−２０−６）；５−（２，２，２−トリフルオロエチル）−ウラシル（ＣＡＳ登録番号１５５１４３−３１−６）；５−（ペンタフルオロエチル）−ウラシル（ＣＡＳ登録番号６０００７−３８−３）；６−アミノウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号Ａ５０６０−６；ＣＡＳ登録番号８７３−８３−６）；ウラシル−６−カルボン酸（オロチン酸；Ａｌｄｒｉｃｈ番号０−８４０−２；ＣＡＳ登録番号５０８８７−６９−９）；６−メチルウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号Ｄ１１，５２０−７；ＣＡＳ登録番号６２６−４８−２）；ウラシル−５−アミノ−６−カルボン酸（５−アミノオロチン酸；Ａｌｄｒｉｃｈ番号１９，１２１−３；ＣＡＳ登録番号７１６４−４３−４）；６−アミノ−５−ニトロソウラシル（６−アミノ−２，４−ジヒドロキシ−５−ニトロソピリミジン；Ａｌｄｒｉｃｈ番号２７，６８９−８；ＣＡＳ登録番号５４４２−２４−０）；ウラシル−５−フルオロ−６−カルボン酸（５−フルオロオロチン酸；Ａｌｄｒｉｃｈ番号４２，５１３−３；ＣＡＳ登録番号００００−００−０）；およびウラシル−５−ニトロ−６−カルボン酸（５−ニトロオロチン酸；Ａｌｄｒｉｃｈ番号１８，５２８−０；ＣＡＳ登録番号６００７７９−４９−９）が挙げられる。さらなる５−、６−および５，６−置換ウラシル類および／またはチオウラシル類は、カナダのＧｅｎｅｒａｌ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ社、カナダ国アルバータ州エドモントン、および／またはＩｎｔｅｒｃｈｉｍ、仏国から入手できるか、または標準的な技法を用いて調製できる。好適な合成法を教示する種々の参照教科書は、下記に提供される。
【０１１６】
アミン類１０は、市販供給源から供給できるか、あるいは、標準的な技法を利用して合成できる。例えば、好適なアミン類は、標準的な化学を用いてニトロ前駆体から合成できる。また、Ｖｏｇｅｌ、１９８９年、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａｄｄｉｓｏｎ  Ｗｅｓｌｅｙ  Ｌｏｎｇｍａｎ社およびＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社を参照されたい。アミン類６は、下記のスキーム（ＶＩＩ）および（ＶＩＩＩ）に記載されているように合成できる。
【０１１７】
出発物質として５−フルオロウラシル（Ａｌｄｒｉｃｈ番号３２，９３７−１）を利用するスキーム（Ｉ）の具体的な実施形態は、下記のスキーム（Ｉａ）に図示されている：
【０１１８】
【化２０】
2008521817.tif 000016
スキーム（Ｉａ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｌ１およびＬ２は、構造式（Ｉ）に関して先に定義されたとおりである。スキーム（Ｉａ）によれば、５−フルオロウラシル３は、ＰＯＣｌ３によりハロゲン化されて２，４−ジクロロ−５−フルオロピリミジン５を得る。２，４−ジクロロ−５−フルオロピリミジン５と１当量のアミン１０との反応（２−クロロ−Ｎ４−置換−５−フルオロ−４−ピリミジンアミン７を得るために）、次いで１当量またはそれ以上の当量のアミン６とで反応する。
【０１１９】
さらに別の代表的な実施形態において、本発明の２，４−ピリミジンジアミン化合物は、下記のスキーム（ＩＩ）に図示されている置換または非置換２−アミノ−４−ピリミジノール類から合成できる：
【０１２０】
【化２１】
2008521817.tif 000017
スキーム（ＩＩ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ１、Ｌ２およびＸは、スキーム（Ｉ）に関して先に定義されたとおりであり、Ｚは、下記のスキームＩＩＩと関連してより詳細に検討されている脱離基である。スキーム（ＩＩ）を参照すると、２−アミノ−４−ピリミジノール３０は、アミン６（または任意に保護されたアミン２１）と反応させてＮ２−置換−４−ピリミジノール３２を得、次いで先に記載されたとおりにハロゲン化されてＮ２−置換−４−ハロ−２−ピリミジンアミン３４を得る。任意の脱保護（例えば、保護されたアミン２１が、最初のステップに使用される場合）、次いでアミン１０との反応により構造式（Ｉ）に従った２，４−ピリミジンジアミンが得られる。あるいは、ピリミジノール３０は、アシル化剤３１と反応させることができる。
【０１２１】
スキーム（ＩＩＩ）における出発物質として使用できる好適な市販の２−アミノ−４−ピリミジノール類３０としては、限定はしないが、２−アミノ−６−クロロ−４−ピリミジノール水和物（Ａｌｄｒｉｃｈ番号Ａ４７０２−−８；ＣＡＳ登録番号０００００−００−０）および２−アミノ−６−ヒドロキシ−４−ピリミジノール（Ａｌｄｒｉｃｈ番号Ａ５０４０−１；ＣＡＳ登録番号５６−０９−７）が挙げられる。スキーム（ＩＩＩ）における出発物質として有用な他の２−アミノ−４−ピリミジノール類３０は、カナダのＧｅｎｅｒａｌ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ社、カナダ国アルバータ州エドモントン、および／またはＩｎｔｅｒｃｈｉｍ、仏国から入手できるか、または標準的な技法を用いて調製できる。好適な合成法を教示する種々の参照教科書は、下記に提供される。
【０１２２】
さらに別の代表的な実施形態において、本発明の２，４−ピリミジンジアミン化合物は、下記のスキーム（ＩＩＩ）に図示されている２−クロロ−４−アミノピリミジン類または２−アミノ−４−クロロピリミジン類から合成できる：
【０１２３】
【化２２】
2008521817.tif 000018
スキーム（ＩＩＩ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ１およびＬ２は、スキーム（Ｉ）に関して先に定義されたとおりであり、Ｚは、例えば、ハロゲン、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、ｐ−トルエンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシなどの脱離基である。スキーム（ＩＩＩ）を参照すると、２−アミノ−４−クロロピリミジン５０を、アミノ１０と反応させて４Ｎ−置換−２−ピリミジンアミン５２を得、化合物３１またはアミン６との以下の反応により、構造式（Ｉ）に従ったピリミジンジアミンを得る。あるいは、２−クロロ−４−アミノピリミジン５４を、化合物４４、次いでアミン６と反応させて構造式（Ｉ）に従った化合物を得ることができる。
【０１２４】
スキーム（Ｖ）の出発物質としての使用に好適な種々のピリミジン５０および５４は、例えば、限定はされないが、２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン（Ａｌｄｒｉｃｈ番号Ａ４８６０−１；ＣＡＳ登録番号５６−０５−３）；２−アミノ−４−クロロ−６−メトキシ−ピリミジン（Ａｌｄｒｉｃｈ番号５１，８６４−６；ＣＡＳ登録番号５７３４−６４−５）；２−アミノ−４−クロロ−６−メチルピリミジン（Ａｌｄｒｉｃｈ番号１２，２８８−２；ＣＡＳ登録番号５６００−２１−５）；および２−アミノ−４−クロロ−６−メチルチオピリミジン（Ａｌｄｒｉｃｈ番号Ａ４６００−５；ＣＡＳ登録番号１００５−３８−５）などが市販されている。さらなるピリミジン出発物質は、カナダのＧｅｎｅｒａｌ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ社、カナダ国アルバータ州エドモントン、および／またはＩｎｔｅｒｃｈｉｍ、仏国から入手できるか、または標準的な技法を用いて調製できる。好適な合成法を教示する種々の参照教科書は、下記に提供される。
【０１２５】
あるいは、４−クロロ−２−ピリミジンアミン類５０は、スキーム（ＩＶ）に図示されているように調製できる：
【０１２６】
【化２３】
2008521817.tif 000019
スキーム（ＩＶ）において、Ｒ５およびＲ６は、構造式（Ｉ）に関して先に定義されたとおりである。スキーム（ＩＶ）において、ジカルボニル５３を、グアニジンと反応させて２−ピリミジンアミン５１を得る。ｍ−クロロ過安息香酸、トリフルオロ過酢酸または尿素過酸化水素複合体のような過酸との反応によりＮ−オキシド５５を得、次いでハロゲン化して４−クロロ−２−ピリミジンアミン５０を得る。対応する４−ハロ−２−ピリミジンアミン類は、好適なハロゲン化試薬を用いることにより得ることができる。
【０１２７】
当業技術者により認識されるように、上記の代表的な方法によるか、または他の周知の手段により合成されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン類を、さらなるスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物を合成するために出発物質および／または中間体としても利用できる。具体例は、スキーム（Ｖ）に図示されている：
【０１２８】
【化２４】
2008521817.tif 000020
スキーム（Ｖ）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ２およびＲａは、構造式（Ｉ）に関して先に定義されているとおりである。各Ｒａ’は、独立してＲａであり、図示されたＲａと同じであっても、異なっていてもよい。スキーム（Ｖ）を参照すると、カルボン酸またはエステル１００は、アミン１０２との反応によりアミド１０４に変換できる。アミン１０２において、Ｒａ□は、酸またはエステル１００のＲａと同じであても、異なっていてもよい。同様に、カーボネートエステル１０６は、カルバメート１０８に変換できる。
【０１２９】
第２の具体例は、下記のスキーム（ＶＩ）に図示されている：
【０１３０】
【化２５】
2008521817.tif 000021
スキーム（ＶＩ）において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ２およびＲｃは、構造式（Ｉ）に関して先に定義されているとおりである。スキーム（ＶＩ）を参照すると、アミド１１０または１１６は、ボランメチルスルフィド１１２によるボラン還元により、それぞれアミン１１４または１１８に変換できる。スピロ２，４−ピリミジンジアミンの出発物質からスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物を合成するための他の好適な反応は、当業者にとって明らかであろう。
【０１３１】
スキーム（ＶＩＩ）は、化合物１０（すなわち、Ｒ４−Ｌ２−ＮＨ２）に相当するスピロヘテロ環式アリールアミン類の調製を説明している。下記のスキーム（ＶＩＩ）において、Ｕは、−ＳＨ、−ＮＨＲｃまたは−ＯＨであり、Ｖは、−ＮＯ２、−ＮＨＲｃ、−ＯＲｃまたは−ＳＲｃであり、Ｄは、水素、−ＮＯ２、または−ＮＨＲｃであり、各Ｒｃは、独立して保護基または水素であり、Ｂは、ハロゲン、メシレート、トシレートなどの脱離基であり、ＴおよびＰは、独立して−ＮＲｃ−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり、各Ｍは、独立してハロゲン、メシレート、トシレートなどの脱離基またはＯＲｃであり、Ｒ３１、Ｒ３５、Ｘ、Ｙ、Ｚおよびｏは、先の上記に定義されたとおりである。
【０１３２】
【化２６】
2008521817.tif 000022
スキーム（ＶＩＩ）を参照すると、化合物１２０をエステル１３２によりアルキル化すると、分子内環化後、環形生成物１３４を得る。二官能性試薬１２４による１３４のアルキル化によりモノアルキル生成物１３６が得られ、分子内環化すると１３０を得ることができ、これを当業技術者に公知の従来の方法により化合物１３２に変換できる。例えば、スルフィド類（すなわち、Ｔおよび／またはＰが硫黄である場合）およびアミン類（すなわち、Ｔおよび／またはＰが窒素である場合）は、ルーチン的合成法によりスルホキシド類、スルホネート類、スルホンアミド類、アルキルアミン類、アリールアミン類および保護アミン類に変換できる。化合物１３０の置換基Ｄの種々の実施形態では、Ｈをニトロ化によりＮＯ２に、ＮＯ２を還元などによりＮＨ２に変換できるなど相互変換できる。最後に、当業界に公知のとおり、化合物１３０のカルボニル基は、従来の試薬（例えば、水素化リチウムアルミニウム）を用いる還元によりジヒドロ化合物に変換できる。化合物１２４の幾つかの実施形態において、１つのＭは、ハロゲンであり、他のＭは、ＯＲｃである。したがって幾つかの実施形態において、化合物１３６のＭ基は、脱離基であるか、または従来の方法によって脱離基（すなわち、ＭがＯＲｃの場合）に変換できる。
【０１３３】
上記で検討された多くの合成スキームは、保護基の使用を示してはいないが、幾つかの場合において、置換基Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｌ１および／またはＬ２は、保護を必要とする官能基を含み得ることを、当業技術者は認識するであろう。使用される保護基の正確な本性の中には、保護される官能基の本性および具体的な合成スキームに使用される条件に依存し、当業者にとって明らかとなろう。保護基を選択するガイダンスおよび具体的な適用に好適なそれらの結合および除去に関する化学は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク（１９９９）に見ることができる。
【０１３４】
構造式（ＩＩ）に従ったプロドラッグは、上記の方法のルーチン的修飾により調製できる。あるいは、このようなプロドラッグは、構造式（Ｉ）の好適に保護された２，４−ピリミジンジアミンと好適なプロ基とを反応させることにより調製できる。このような反応を実施するための条件、また式（ＩＩ）のプロドラッグを得るために生成物を脱保護するための条件は十分に知られている。
【０１３５】
一般にピリミジン類を合成するために有用な方法、ならびにスキーム（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に記載された出発物質を教示する種々の引用文献が当業界に知られている。具体的なガイダンスに関して、利用者は、Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ｊ．、「Ｔｈｅ  Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１６巻（Ｗｅｉｓｓｂｅｒｇｅｒ，Ａ．編集）、１９６２年、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、（Ａ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク（「Ｂｒｏｗｎ  Ｉ」）；Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ｊ．、「Ｔｈｅ  Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１６巻、Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉ（Ｗｅｉｓｓｂｅｒｇｅｒ，Ａ．およびＴａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｃ．編集）、１９７０年、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、（Ａ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク（「Ｂｒｏｗｎ  ＩＩ」）；Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ｊ．、「Ｔｈｅ  Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、１６巻、Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ＩＩ（Ｗｅｉｓｓｂｅｒｇｅｒ，Ａ．およびＴａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｃ．編集）、１９８５年、Ａｎ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク（「Ｂｒｏｗｎ  ＩＩＩ」）；Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ｊ．、「Ｔｈｅ  Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、５２巻（Ｗｅｉｓｓｂｅｒｇｅｒ，Ａ．およびＴａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｃ．編集）、１９９４年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク、１−１５０９頁（「Ｂｒｏｗｎ  ＩＶ」）；Ｋｅｎｎｅｒ，Ｇ．Ｗ．およびＴｏｄｄ，Ａ．、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、６巻、（Ｅｌｄｅｒｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｃ．編集）、１９５７年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク、７章（ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ）；Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌ．Ａ．、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９６８年、Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ社、ニューヨーク１−４０１頁（ｕｒａｃｉｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ３１３頁、３１５頁；ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ３１３−３１６頁；ａｍｉｎｏ  ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ３１５頁）；Ｊｏｕｌｅ，Ｊ．Ａ．，Ｊ．Ａ．、Ｍｉｌｌｓ，Ｋ．およびＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｆ．、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、１９９５年、ＣｈａｐｍａｎおよびＨａｌｌ、英国ロンドン、１−５１６頁；Ｖｏｒｂｒuｇｇｅｎ，Ｈ．およびＲｕｈ−Ｐｏｈｌｅｎｚ，Ｃ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨーク、２００１年、１−６３１頁（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ  ｂｙ  ａｃｙｌａｔｉｏｎ  ９０−９１頁；ｓｉｌｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ  ９１−９３頁）；Ｊｏｕｌｅ，Ｊ��Ａ．、Ｍｉｌｌｓ，Ｋ．およびＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｆ．、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第４版、２０００年、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社、英国オックスフォード、１−５８９頁；およびＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１−９巻（Ｔｒｏｓｔ，Ｂ．Ｍ．およびＦｌｅｍｉｎｇ，Ｉ．編集）、１９９１年、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、英国オックスフォード、を参照する。
【０１３６】
当然のことながら、スキームＩからＶＩＩＩを通して、Ｎ４窒素は、本明細書を通して、また本明細書に提供された実施例に記載されているＲ４ｃにより置換できる。
【０１３７】
６．５  Ｆｃ受容体シグナルカスケードの阻害
本明細書に記載されている活性スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、とりわけ細胞の脱顆粒化に導くＦｃ受容体シグナル伝達カスケードを阻害できる。具体例な一例として、該化合物は、好中性細胞、好酸性細胞および／または好塩基性細胞などの免疫細胞の脱顆粒化に導くＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩシグナルカスケードを阻害する。肥満細胞および好塩基性細胞は双方とも、例えば、アレルギー性鼻炎および喘息など、アレルゲン誘導障害において中心的な役割を演じる。図１を参照すると、とりわけ花粉または寄生虫であり得るアレルゲンに曝露されると、アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体は、ＩＬ−４（またはＩＬ−１３）およびＩｇＥクラス特異的な抗体合成に切り替える他のメッセンジャーによって活性化されたＢ細胞によって合成される。これらのアレルゲン特異的ＩｇＥ類は、高アフィニティーＦｃεＲＩに結合する。抗原が結合すると、ＦｃεＲＩ結合ＩｇＥ類が架橋され、ＩｇＥ受容体シグナル伝達経路が活性化され、細胞の脱顆粒化およびその結果、ヒスタミン、プロテアーゼ（例えば、トリプターゼおよびキマーゼ）、ロイコトリエン（例えば、ＬＴＣ４）などの脂質伝達物質、血小板活性化因子（ＰＡＦ）およびプロスタグランジン類（例えば、ＰＧＤ２）ならびにＴＮＦα、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭＣＳＦ、ＶＥＧＦおよびＴＧＦ−βなど一連のサイトカイン類など宿主の化学伝達物質の放出および／または合成が導かれる。肥満細胞および／または好塩基性細胞からのこれらの伝達物質の放出および／または合成は、アレルゲンにより誘導された早期応答および後期応答の原因となり、持続的炎症状態に導く下流事象に直接関連している。
【０１３８】
脱顆粒化および他の化学伝達物質の放出および／または合成により既に形成された伝達物質放出へと至るＦｃεＲＩシグナル伝達経路における分子事象は周知であり、図２に示されている。図２を参照すると、ＦｃεＲＩは、ＩｇＥ結合性のアルファサブユニット、ベータサブユニット、および２つのガンマサブユニット（ガンマホモダイマー）からなるヘテロテトラマー受容体である。多価結合剤（例えば、ＩｇＥ特異的アレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体または断片など）によるＦｃεＲＩ結合ＩｇＥの架橋により、迅速結合およびＳｒｃ関連キナーゼＬｙｎの活性化が誘導される。細胞内のベータおよびガンマサブユニット上の免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ類（ＩＴＡＭＳ）を、Ｌｙｎがリン酸化し、それによってベータサブユニットへのさらなるＬｙｎの動員およびガンマホモダイマーへのＳｙｋキナーゼの動員が導かれる。分子内および分子間リン酸化により活性化されるこれらの受容体関連キナーゼは、Ｂｔｋキナーゼ、ＬＡＴ、およびホスホリパーゼＣ−ガンマ（ＰＬＣ−ガンマ）など、経路の他の成分をリン酸化する。活性化ＰＬＣ−ガンマは、タンパク質キナーゼＣ活性化およびＣａ２＋動員に至る経路を起動させるが、それらは双方とも、脱顆粒化に必要である。ＦｃεＲＩ架橋はまた、細胞有糸分裂活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼの３つの主要クラス、すなわち、ＥＲＫ１／２、ＪＮＫ１／２、およびｐ３８を活性化する。これらの経路の活性化は、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６などの炎症誘発性伝達物質、ならびに脂質伝達物質ロイコトリエンＣＡ（ＬＴＣ４）の転写調節において重要である。
【０１３９】
図示されてはいないが、ＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードは、Ｆｃｅシグナル伝達カスケードと幾つかの共通成分を共有していると考えられている。ＦＣεＲＩのようにＦｃγＲＩは、リン酸化され、Ｓｙｋを動員するガンマホモダイマーを含み、ＦＣεＲＩと同様にＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードの活性化により、とりわけ脱顆粒化に至ることは重要である。ガンマホモダイマーを共有し、活性なスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物によって調節できる他のＦｃ受容体としては、限定はしないが、ＦｃαＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩが挙げられる。
【０１４０】
Ｆｃ受容体シグナル伝達カスケードを阻害するスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の能力は、インビトロアッセイにおいて簡便に判定できるか、または確認できる。ＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化の阻害を確認するための好適なアッセイは、実施例の節で提供する。１つの典型的なアッセイにおいて、肥満細胞または好塩基性細胞などのＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化を受けることができる細胞を、ＦｃεＲＩの発現を増加させるためにＩＬ−４、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ−６およびＩｇＥの存在下で最初に増殖し、本発明の２，４−ピリミジンジアミン試験化合物に曝露し、抗ＩｇＥ抗体（または他にＩｇＥ特異的アレルゲン）により刺激する。インキュベーション後、ＦｃεＲＩ受容体シグナル伝達カスケードが活性化された結果、放出され、および／または合成された化学伝達物質量または他の化学作用物質の量を標準的な技法を用いて定量化し、対照細胞（すなわち、刺激されるが、試験化合物に曝露されない細胞）から放出された伝達物質または作用物質の量と比較できる。対照細胞と比較して測定された伝達物質または作用物質の量において５０％減少を生じる試験化合物の濃度が、試験化合物のＩＣ５０である。このアッセイで使用される肥満細胞または好塩基性細胞の出所は、ある程度、化合物の所望の使用法に依存し、当業者にとって明らかであろう。例えば、化合物が、ヒトにおける特定の疾患を治療または予防するために使用される場合、肥満細胞または好塩基性細胞の好適な出所は、特定の疾患に関して許容されたまたは公知の臨床モデルを構成しているヒトまたは他の動物である。したがって、特定の適用に依って、肥満細胞または好塩基性細胞は、例えば、マウスおよびラットなどの下等哺乳動物から、イヌ、ヒツジおよび臨床試験に一般に使用される他の哺乳動物、サル、チンパンジー、類人猿などの高等哺乳類、ヒトまでの範囲で種々の動物源に由来し得る。インビトロアッセイを実施するのに好適な細胞の具体例としては、限定はしないが、げっ歯類またはヒトの好塩基性細胞、ラットの好塩基性白血病細胞系、一次マウス肥満細胞（骨髄由来マウス肥満細胞「ＢＭＭＣ」など）および臍帯血から単離された一次ヒト肥満細胞（「ＣＨＭＣ」）または肺などの他の組織が挙げられる。これらの細胞系を単離し、培養する方法は周知であるか、または実施例の節に提供される（例えば、Ｄｅｍｏら、１９９９年、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ３６（４）：３４０−３４８頁および２００１年１１月８日に出願の米国同時係属出願第１０／０５３，３５５号を参照されたく、これらの開示は、参照として本明細書に組み込まれている）。もちろん、ＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードの活性化の際に脱顆粒化する免疫細胞の他のタイプ、例えば、好酸球なども使用できる。
【０１４１】
当業技術者により認識されるように、定量化される伝達物質または作用物質が重要なのではない。唯一の要件は、それがＦｃ受容体シグナル伝達カスケードの開始、または活性化される結果、放出され、および／または合成される伝達物質または作用物質であることである。例えば、図１を参照すると、肥満細胞および／または好塩基性細胞におけるＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードの活性化により、多数の下流事象が導かれる。例えば、ＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードの活性化により、脱顆粒化により既に形成された種々の化学伝達物質および作用物質の即時放出（すなわち、受容体活性化後１〜３分以内）が導かれる。したがって、一実施形態において、定量化される伝達物質または作用物質は、顆粒に特異的であり得る（すなわち、一般に顆粒に存在するが、細胞の細胞質には存在しない）。本発明の２，４−ピリミジンジアミン化合物の活性化を判定し、および／または確認するために定量化できる顆粒特異的な伝達物質または作用物質の例としては、限定はしないが、ヘキソサミニダーゼならびにトリプターゼなどの顆粒特異的酵素およびヒスタミンならびにセロトニンなどの顆粒特異的成分が挙げられる。このような因子を定量化するアッセイは周知であり、多くの場合市販されている。例えば、トリプターゼおよび／またはヘキソサミニダーゼ放出は、開裂の際に蛍光を発生する開裂物質と共に細胞を定量化することにより、また従来の技法を用いて、産生される蛍光量を定量化することによって定量化できる。このような開裂可能な発光発生物質は、市販されている。例えば、発光発性物質であるＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（Ｚ＝ベンジルオキシカルボニル；ＡＭＣ＝７−アミノ−４−メチルクマリン；ＢＩＯＭＯＬ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、ペンシルバニア州１９４６２、カタログ番号Ｐ−１４２）およびＺ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社部門、Ｌｉｖｅｍｏｒｅ、カリフォルニア州９４５５０、カタログ番号ＡＭＣ−２４６）は、放出されるトリプターゼ量を定量化するために使用できる。蛍光発性物質４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州、カタログ番号６９５８５）は、放出されるヘキソサミニダーゼ量を定量化するために使用できる。ヒスタミン放出は、ＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈヒスタミンＥＬＩＳＡアッセイ番号ＩＭ２０１５（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ社）などが市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて定量化できる。トリプターゼ、ヘキソサミニダーゼおよびヒスタミンを定量化する具体的な方法は、実施例の節に提供される。任意のこれらのアッセイが、スピロ２，４−ピリミジンジアミンの活性を判定するか、または確認するために使用できる。
【０１４２】
図１を再度参照すると、脱顆粒化は、ＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードにより開始される幾つかの応答の中の一つにすぎない。これに加えて、このシグナル伝達経路の活性化により、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１３およびＭＩＰ１−αなどのサイトカイン類およびケモカイン類のデノボ合成および放出、ロイコトリエン類（例えば、ＬＴＣ４）、血小板活性化因子（ＰＡＦ）およびプロスタグランジン類などの放出が導かれる。したがって、活性化細胞により放出および／または合成される１種または複数種のこれらの伝達物質量を定量化することによってもまた、本発明の２，４−ピリミジンジアミン化合物を活性に関して評価できる。
【０１４３】
上記に検討された顆粒特異的成分とは異なり、これらの「後期」の伝達物質は、ＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードの活性化直後には放出されない。したがって、これら後期伝達物質を定量化する場合は、活性化細胞培養が、定量化される伝達物質の合成（必要ならば）および放出を生じるのに十分な時間インキュベートされることを確認するように注意を払う必要がある。一般にＰＡＦおよびロイコトリエンＣ４などの脂質伝達物質は、ＦｃεＲＩ活性化の３〜３０分後に放出される。サイトカイン類および他の後期段階伝達物質は、ＦｃεＲＩ活性化の約４〜８時間分後に放出される。具体的な伝達物質に好適なインキュベーション時間は、当業者にとって明らかであろう。具体的なガイダンスおよびアッセイは、実施例の節に提供する。
【０１４４】
放出される特定の後期段階伝達物質量は、任意の標準的技法を用いて定量化できる。一実施形態において、その量は、ＥＬＩＳＡを用いて定量化できる。放出されるＴＮＦα、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１３の量の定量化に好適なＥＬＩＳＡアッセイキットは、例えば、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、カリフォルニア州９３０１２（例えば、カタログ番号ＫＨＣ３０１１、ＫＨＣ００４２、ＫＨＣ００５２、ＫＨＣ００６１およびＫＨＣ０１３２を参照）から入手できる。細胞から放出されるロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）の量の定量化に好適なＥＬＩＳＡアッセイキットは、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ミシガン州４８１０８（例えば、カタログ番号５２０２１１を参照）から入手できる。
【０１４５】
典型的には、活性な２，４−ピリミジンジアミン化合物は、上記または実施例の節におけるインビトロアッセイの１つなどの、インビトロアッセイで測定される約２０μＭ以下のＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化および／または伝達物質の放出または合成に関するＩＣ５０を示す。もちろん、当業技術者は、例えば、１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、またはさらにより低い桁におけるより低いＩＣ５０を示す化合物は、特に有用であることを認識するであろう。
【０１４６】
上記に検討された種々の伝達物質は、異なる副作用を誘導し得るか、または同じ副作用に関して異なる作用強度を示し得ることも当業技術者は認識するであろう。例えば、脂質伝達物質ＬＴＣ４は、強力な血管収縮剤であり−血管収縮の誘導において、ヒスタミンよりも凡そ１０００倍以上強力である。別の例として、サイトカイン類は、アトピー性またはＩ型過敏症反応を媒介するのに加えて、組織リモデリングおよび細胞増殖もまた引き起こすことができる。したがって、先に検討された化学伝達物質のいずれか１種の放出および／または合成を阻害する化合物は有用であるが、当業技術者は、先に検討された複数種またはさらに全ての化学伝達物質の放出および／または合成を阻害する化合物は、特定の伝達物質により誘導される複数の、またはさらに全ての副作用を寛解または回避するのに有用であるため、特に有用であることを認識するであろう。例えば、３つのタイプの伝達物質全て−顆粒特異的、脂質およびサイトカインの放出を阻害する化合物は、即時Ｉ型過敏症反応ならびにそれと関連する慢性症状の治療、または予防に有用である。
【０１４７】
１種以上のタイプの伝達物質（例えば、顆粒特異的または後期）の放出を阻害できる本明細書に記載された化合物は、上記に記載された種々のインビトロアッセイ（または他の等価なインビトロアッセイ）を用いて各クラスの代表的な伝達物質に関してＩＣ５０を測定することによって確認できる。１種以上のタイプの伝達物質の放出を阻害できる化合物は、試験された各伝達物質タイプに関して約２０μＭ未満のＩＣ５０を典型的に示すであろう。例えば、１μＭのヒスタミン放出に関するＩＣ５０（ＩＣ５０ヒスタミン）および１ｎＭのロイコトリエンＬＴＣ４合成および／または放出に関するＩＣ５０（ＩＣ５０ＬＴＣ４）を阻害する化合物は、即時（顆粒特異的）および後期双方の伝達物質の放出を阻害する。別の具体例として、１０μＭのＩＣ５０トリプターゼ、１μＭのＩＣ５０ＬＴＣ４および１μＭのＩＣ５０ＩＬ−４を示す化合物は、即時（顆粒特異的）、脂質およびサイトカイン伝達物質の放出を阻害する。上記の具体例は、各クラスの１つの代表的な伝達物質のＩＣ５０を利用しているが、当業技術者は、１つまたは複数のクラスを含んでなる複数またはさらに全てのＩＣ５０が得ることができることを認識するであろう。特定の化合物および適用に関してＩＣ５０データを確認すべき伝達物質の量および本性は、当業者にとって明らかであろう。
【０１４８】
ＦｃαＲＩおよび／またはＦｃγＲＩＩＩシグナル伝達などの他のＦｃ受容体により開始されるシグナル伝達カスケードの阻害を確認するために、ルーチン的修飾をして同様のアッセイを利用できる。例えば、ＦｃγＲＩシグナル伝達を阻害する化合物の能力は、例えば、ＩｇＥおよびＩｇＥ特異的アレルゲンまたは抗体の代わりにＩｇＧおよびＩｇＧ特異的アレルゲンまたは抗体と共に細胞をインキュベートすることによりＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードを活性化することを除いて、上記のものと同様なアッセイで確認できる。ガンマホモダイマーを含んでなるＦｃ受容体などの他のＦｃ受容体の阻害を確認する目的で定量化するために好適な細胞型、活性化剤および試剤は、当業者にとって明らかであろう。
【０１４９】
１つの特に有用なクラスの化合物としては、即時顆粒特異的伝達物質および後期段階伝達物質の放出を、ほぼ等しいＩＣ５０で阻害する２，４−ピリミジンジアミン化合物が挙げられる。ほぼ等しいとは、各伝達物質タイプのＩＣ５０が、互いに約１０倍の範囲内であることを意味する。別の特に有用なクラスの化合物としては、即時顆粒特異的伝達物質、脂質伝達物質およびサイトカイン伝達物質の放出を、ほぼ等しいＩＣ５０で阻害する２，４−ピリミジンジアミン化合物が挙げられる。具体的な実施形態において、このような化合物は、以下の伝達物質：ヒスタミン、トリプターゼ、ヘキソサミニダーゼ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＴＮＦαおよびＬＴＣ４の放出をほぼ等しいＩＣ５０で阻害する。このような化合物は、他のものの中で、アトピー性または即時Ｉ型過敏症反応と関連する早期および後期双方の応答を寛解または完全に回避する上で特に有用である。
【０１５０】
所望の全てのタイプの伝達物質の放出を阻害する能力が、単独化合物に存在することが理想的である。しかしながら、化合物の混合物もまた、同じ結果を達成することが確認できる。例えば、顆粒特異的伝達物質の放出を阻害する第１の化合物を、サイトカイン伝達物質の放出および／または合成を阻害する第２の化合物と組合わせて使用できる。
【０１５１】
上記に検討されたＦｃεＲＩまたはＦｃγＲＩ脱顆粒化経路に加えて、肥満細胞および／または好塩基性細胞の脱顆粒化は、他の作用物質により誘導できる。例えば、細胞の早期ＦｃεＲＩまたはＦｃγＲＩシグナル伝達機構を回避するイオノマイシン、カルシウムイオノフォアは、脱顆粒化を開始させるカルシウムフラックスを直接誘導する。再度図２を参照すると、活性化ＰＬＣγは、とりわけカルシウムイオン動員、引き続いて脱顆粒化を導く経路を開始する。図示されるように、このＣａ２＋動員は、ＦｃεＲＩシグナル伝達経路の後期に開始される。上記のとおり、また図３に示されるように、イオノマイシンは、脱顆粒化に導くＣａ２＋動員およびＣａ２＋フラックスを直接誘導する。この様式で脱顆粒化を誘導する他のイオノフォアとしては、Ａ２３１８７が挙げられる。早期のＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードを回避するイオノマイシンなどの顆粒誘導イオノフォアの能力を、上記に検討された早期ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードをブロックするか、または阻害することによって脱顆粒化−阻害活性を特異的に発揮する本発明の活性化合物を確認するためのカウンタースクリーンとして使用できる。このような早期ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化を特異的に阻害する化合物は、ヒスタミン、トリプターゼおよび他の顆粒内容物の脱顆粒化および引き続く迅速な放出を阻害するのみならず、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＬＴＣ４などの脂質伝達物質の放出を引き起こす炎症誘発活性化経路を阻害する。したがって、このような早期ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化を特異的に阻害する化合物は、急性アトピー性Ｉ型過敏症反応のみならず複数の炎症伝達物質に関与する後期応答をブロックするか、または阻害する。
【０１５２】
早期ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化を特異的に阻害する本明細書に記載された化合物は、ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化（例えば、ＩｇＥまたはＩｇＧ結合剤によって刺激された細胞によるインビトロアッセイで測定される顆粒特異的伝達物質または成分の放出に関して約２０μＭ未満のＩＣ５０を有する）を阻害するが、イオノフォア誘導脱顆粒化は感知できるほど阻害しない化合物である。一実施形態において、化合物が、インビトロアッセイで測定される約２０μＭ超のイオノフォア誘導脱顆粒化ＩＣ５０を示す場合、これらの化合物は、イオノフォア誘導脱顆粒化を感知できるほど阻害しないと考えられる。もちろん、イオノフォア誘導脱顆粒化がさらに高いＩＣ５０を示すか、またはイオノフォア誘導脱顆粒化を全く示さない活性化合物は、特に有用である。別の実施形態において、化合物が、インビトロアッセイで測定された際、ＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化およびイオノフォア誘導脱顆粒化のＩＣ５０において１０倍超の差を示す場合、化合物は、イオノフォア誘導脱顆粒化を感知できるほど阻害しないと考えられている。イオノフォア誘導脱顆粒化のＩＣ５０を測定するのに好適なアッセイとしては、抗ＩｇＥ抗体またはＩｇＥ特異的アレルゲンの代わりにイオノマイシンまたはＡ２３１８７（Ａ．Ｇ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カリフォルニア州サンディエゴ）などの脱顆粒化誘導カルシウムイオノフォアによって、細胞を刺激または活性化する修飾をした任意の先に記載された脱顆粒化アッセイが挙げられる。本発明の特定のスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物がイオノフォア誘導脱顆粒化を阻害する能力を評価するための具体的なアッセイは、実施例の節で提供される。
【０１５３】
当業技術者により認識されるように、ＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化に高度の選択性を示す化合物は、このような化合物が、ＦｃεＲＩカスケードを選択的に標的とし、他の脱顆粒化機構を妨害しないため、特定の使用に認められる。同様に、ＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化に高度の選択性を示す化合物は、このような化合物が、ＦｃγＲＩカスケードを選択的に標的とし、他の脱顆粒化機構を妨害しないため、特定の使用に認められる。高度の選択性を示す化合物は、ＦｃεＲＩまたはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化に関してイオノマイシン誘導脱顆粒化などのイオノフォア誘導脱顆粒化よりも一般に１０倍以上選択的である。
【０１５４】
したがって、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の活性は、Ｓｙｋキナーゼ活性の生化学的または細胞アッセイにおいても確認できる。再度図２を参照すると、肥満細胞および／または好塩基性細胞のＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードにおいて、Ｓｙｋキナーゼは、ＬＡＴおよびＰＬＣ−ガンマ１をリン酸化し、これによってとりわけ脱顆粒化が導かれる。これらの活性はいずれも、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の活性を確認するために使用できる。一実施形態において、活性は、単離Ｓｙｋキナーゼまたはその活性断片を、Ｓｙｋキナーゼ基質（例えば、シグナル伝達カスケードにおいてＳｙｋによりリン酸化されることが知られている合成ペプチドまたはタンパク質）の存在下、スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物と接触させて、Ｓｙｋキナーゼが該基質をリン酸化するかどうかを評価することによって確認される。あるいは、該アッセイは、Ｓｙｋキナーゼを発現する細胞により実施できる。該細胞は、内因的にＳｙｋキナーゼを発現し得るか、または該細胞を組換えＳｙｋキナーゼを発現するために操作できる。該細胞はまた、Ｓｙｋキナーゼ基質もまた任意に発現できる。このような確認アッセイを実施するのに好適な細胞、ならびに好適な細胞を操作する方法は、当業者にとって明らかである。スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物の活性を確認するのに好適な生化学的および細胞アッセイの具体例は、実施例の節で提供される。
【０１５５】
一般に、Ｓｙｋキナーゼ阻害剤である化合物は、合成または内因性基質をリン酸化するＳｙｋキナーゼの能力などのＳｙｋキナーゼ活性に関して、インビトロまたは細胞アッセイにおいて約２０μＭまたはそれ以下の範囲のＩＣ５０を示すことになる。当業技術者は、１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ，１ｎＭまたはさらにそれ以下など、低いＩＣ５０を示す化合物が、特に有用であることを認識するであろう。
【０１５６】
６．６  使用および組成物
先に検討されたように、活性化合物は、Ｆｃシグナル伝達カスケード、とりわけ脱顆粒化または他の過程により細胞からの化学伝達物質の放出および／または合成を導くＦｃεＲＩおよび／またはＦｃγＲＩシグナル伝達カスケードなどのガンマホモダイマーを含む、特にＦｃ受容体を阻害する。また検討されたように、活性化合物はＳｙｋキナーゼの強力な阻害剤でもある。これらの活性の結果、種々のインビトロ、インビボおよびエキソビボの状況において、Ｓｙｋキナーゼ、Ｓｙｋキナーゼが役割を果たすシグナル伝達カスケード、Ｆｃ受容体シグナル伝達カスケード、およびこのようなシグナル伝達カスケードによりもたらされる生物学的応答を調節または阻害するために、本発明の活性化合物を使用できる。例えば、一実施形態において、該化合物は、インビトロまたはインビボにおいてＳｙｋキナーゼ、実際にはＳｙｋキナーゼを発現する任意の細胞型を阻害するために使用できる。該化合物はまた、Ｓｙｋキナーゼが役割を果たしているシグナル伝達カスケードを調節するために使用できる。このようなＳｙｋ依存シグナル伝達カスケードとしては、限定はしないが、ＦｃεＲＩ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＢＣＲおよびインテグリンシグナル伝達カスケードが挙げられる。該化合物はまた、インビトロまたはインビボでこのようなＳｙｋ依存シグナル伝達カスケードによりもたらされる細胞または生物学的応答を調節、特に阻害するために使用できる。このような細胞または生物学的応答としては、限定はしないが、レスピラトリーバースト、細胞接着、細胞脱顆粒化、細胞伝播、細胞移動、細胞凝縮、食作用、サイトカイン合成および放出、細胞成熟およびＣａ２＋フラックスが挙げられる。該化合物が、完全にまたはある程度Ｓｙｋキナーゼ活性により媒介される疾患の治療または予防に対する治療的アプローチとしてインビボでＳｙｋキナーゼを阻害するために使用できることは重要である。該化合物により治療または予防できるＳｙｋキナーゼ媒介疾患の非限定例は、下記により詳細に検討される。
【０１５７】
別の実施形態において、該活性化合物は、このようなＦｃ受容体シグナル伝達カスケードまたは脱顆粒化の化学伝達物質の放出または合成を特徴とする引き起こす、および／またはそれに関連する疾患の治療または予防に対する治療的アプローチとしてＦｃ受容体シグナル伝達カスケードおよび／またはＦｃεＲＩ媒介および／またはＦｃγＲＩ媒介脱顆粒化を調節または阻害するために使用できる。このような治療剤は、獣医学の文脈における動物またはヒトに投与できる。このような伝達物質の放出、合成または脱顆粒化を特徴とする、引き起こす、および／またはそれに関連する疾患、したがって活性化合物により治療または予防できる疾患としては、例えば、限定はしないが、アトピー性またはアナフィラキシー過敏症反応またはアレルギー反応、アレルギー（例えば、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎および食物アレルギー）、低グレード瘢痕（例えば、強皮症、線維症の増加、ケロイド、術後瘢痕、肺線維症、血管痙縮、片頭痛、心筋梗塞後の再灌流傷害）、組織破壊（例えば、ＣＯＰＤ、心筋梗塞後の心肺炎症）関連の疾患、組織炎症関連の疾患（例えば、過敏性腸症候群、刺激結腸および炎症性腸疾患）、炎症および瘢痕が挙げられる。
【０１５８】
上記に検討された種々の疾患に加えて、本明細書に記載されたスピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、自己免疫疾患ならびにこのような疾患と関連する種々の症状の治療または予防にも有用であり得る。２，４−ピリミジンジアミン化合物により治療または予防できる自己免疫疾患のタイプとしては、一般に内因性および／または外因性起源の免疫原または抗原に対する体液および／または細胞媒介応答の結果生じる組織傷害に関与する障害が挙げられる。このような疾患は、しばしば非アナフィラキシー（すなわち、ＩＩ型、ＩＩＩ型および／またはＩＶ型）過敏症反応に関与する疾患と称される。
【０１５９】
先に検討されたように、Ｉ型過敏症反応は、特定の外因性抗原と接触した後の肥満細胞および／または好塩基性細胞からのヒスタミンなどの生理活性物質の放出から一般に生じる。上記のように、このようなＩ型反応は、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎など、多くの疾患において役割を果たしている。
【０１６０】
ＩＩ型過敏症反応（細胞毒性、細胞溶解補体依存性または細胞刺激過敏症反応とも称される）は、免疫グロブリンが、細胞または組織の抗原成分と、または細胞または組織と密接に結合している抗原またはハプテンと反応する場合に生じる。一般にＩＩ型過敏症反応に関連する疾患としては、限定はしないが、自己免疫性溶血性疾患、胎児赤芽球症およびグッドバスチャー疾患が挙げられる。
【０１６１】
ＩＩＩ型過敏症反応（毒性複合体、溶解性複合体または免疫複合体過敏症反応とも称される）は、免疫複合体の沈着部位における急性炎症反応を伴う血管または組織における溶解性循環抗原−免疫グロブリン複合体の沈着から生じる。プロトタイプのＩＩＩ型反応疾患の非限定例としては、アルサス反応、慢性関節リウマチ、血清病、全身性紅斑性狼瘡、あるタイプの腎炎、多発性硬化症および水疱性類天疱瘡が挙げられる。
【０１６２】
ＩＶ型過敏症反応（しばしば細胞、細胞媒介、遅延またはツベルクリン型過敏症反応と呼ばれる）は、特定の抗原との接触から生じる感作Ｔリンパ球から引き起こされる。ＩＶ型反応に関与するものとして引用される疾患の非限定例には、接触皮膚炎および同種移植片拒絶反応がある。
【０１６３】
上記の非アナフィラキシー過敏症反応のいずれかに関連する自己免疫疾患は、スピロ２，４−ピリミジンジアミンにより治療または予防できる。特に、限定はしないが：橋本甲状腺炎、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血の自己免疫アトロピー性胃炎、自己免疫脳脊髄炎、自己免疫睾丸炎、グッドバスチャー疾患、自己免疫血小板減少症、交感性眼炎、重症筋無力症、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、慢性攻撃的肝炎、潰瘍性大腸炎および膜性糸球体症など、単一の臓器または単一の細胞型自己免疫障害を特徴とすることが多い自己免疫疾患、ならびに限定はしないが：全身性紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、ライター症候群、多発性筋炎−皮膚筋炎、全身性硬化症、結節性多発動脈炎、多発性硬化症および水疱性類天疱瘡など、全身自己免疫障害を含むことを特徴とすることが多い自己免疫疾患を治療または予防するために、特に該方法が使用できる。
【０１６４】
上記に掲げた自己免疫疾患の多くは、重篤な症状に関連しており、その寛解により、基礎となっている自己免疫疾患が寛解し得ない事例においてもかなりの治療的利益が提供されることは当業技術者により認識されるであろう。多くのこれらの症状、ならびに基礎となっている疾患状態は、単球細胞におけるＦｃγＲシグナル伝達カスケードの活性化の結果生じる。本明細書に記載された２，４−ピリミジンジアミン化合物は、単球細胞および他の細胞におけるこのようなＦｃγＲシグナル伝達の強力な阻害剤であるので、上記に掲げた自己免疫疾患と関連する種々の有害症状の治療および／または予防にこの方法が使用される。
【０１６５】
具体例として、慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、身体の至る所で標的関節の膨潤、痛み、運動損失および圧痛を生じる。ＲＡは、リンパ球が高密度に密集している慢性炎症性滑膜炎を特徴とする。典型的には一細胞層の厚さである滑膜は、極めて細胞状となり、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞ならびにＮＫ細胞、マクロファージおよびプラズマ細胞のクラスターなどのリンパ系組織と同様の形態をとる。この過程、ならびに抗原−免疫グロブリン複合体の形成を含む免疫病理学的機構の過剰によって、やがては関節の完全性の破壊を生じ、関節または関節付近での変形、機能の永続的な損失および／または骨侵食をもたらす。ＲＡのこれらの症状のいずれか１つ、幾つかまたは全てを治療または改善するために該方法が使用できる。したがって、ＲＡの病状において、該方法は、この治療が基礎となっているＲＡの同時治療および／または循環性リウマチ因子（「ＲＦ」）量の減少をもたらすかどうかに関係なく、一般にＲＡと関連するいずれかの症状の軽減または寛解が達成される場合に、治療的利益（下記により一般的に検討される）を提供するものと考えられる。
【０１６６】
別の具体例として、全身性紅斑性狼瘡（「ＳＬＥ」）は典型的に、発熱、関節痛（鉛関節痛）、関節炎、および漿膜炎（胸膜炎または心膜炎）などの症状に関連している。ＳＬＥの病状において、該方法は、この治療が基礎となっているＳＬＥの同時治療をもたらすかどうかに関係なく、一般にＳＬＥと関連するいずれかの症状の軽減または寛解が達成される場合に治療的利益を提供するものと考えられる。
【０１６７】
別の具体例として、多発性硬化症（「ＭＳ］）は、視力障害；複視刺激；歩行および手の使用に影響を及ぼす運動機能障害；腸および膀胱失調の発生；痙攣；および感覚欠損（触覚、痛覚および温度感覚）によって患者を不自由にする。ＭＳの文脈において、該方法は、この治療が基礎となっているＭＳの同時治療をもたらすかどうかに関係なく、一般にＭＳと関連する不自由化作用のいずれか１つまたは複数の進行における寛解または軽減が達成される場合に治療的利益を提供するものと考えられる。
【０１６８】
このような疾患を治療または予防するために使用される場合、活性化合物は、単独で、１種以上の活性化合物の混合物として、あるいはこのような疾患および／またはこのような疾患に関連する症状を治療する上で有用な他の薬剤と混合または併用して投与できる。活性化合物はまた、少数を挙げるステロイド、膜安定化剤、５ＬＯ阻害剤、ロイコトリエン合成および受容体阻害剤、ＩｇＥイソタイプへの切り替えまたはＩｇＥ合成の阻害剤、ＩｇＧイソタイプへの切り替えまたはＩｇＧ合成の阻害剤、β−アゴニスト、トリプターゼ阻害剤、アスピリン、ＣＯＸ阻害剤、メトトレキサート、抗ＴＮＦ薬物、レツキシン（ｒｅｔｕｘｉｎ）、ＰＤ４阻害剤、ｐ３８阻害剤、ＰＤＥ４阻害剤、および抗ヒスタミン剤などの他の障害または疾患を治療するために有用な薬剤と混合または併用して投与できる。活性化合物は、それ自体で、プロドラッグの形態で、あるいは活性化合物またはプロドラッグを含んでなる製薬組成物として投与できる。
【０１６９】
本明細書に記載されている活性化合物を含んでなる製薬組成物（またはそのプロドラッグ）は、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣丸作製湿式粉砕、乳化、カプセル化、エントラッピングまたは凍結乾燥の方法により製造できる。該組成物は、製薬的に使用できる製剤中への活性化合物の処理を促進する１つまたは複数の生理学的に許容できる担体、希釈剤、賦形剤または助剤を用いて従来の様式で製剤化できる。
【０１７０】
活性化合物またはプロドラッグは、先に記載されている製薬組成物それ自体、水和物、溶媒和物、Ｎ−オキシドまたは製薬的に許容できる塩の形態で製剤化できる。典型的には、このような塩類は、水溶液中で対応する遊離酸および遊離塩基よりも溶解性であるが、対応する遊離酸および遊離塩基よりも低い溶解度を有する塩類もまた形成できる。
【０１７１】
本発明の製薬組成物は、例えば、局所、眼内、経口、舌下、全身、経鼻、注射、経皮、経直腸、経膣などの実際に任意の投与様式に好適な形態または吸入あるいはガス注入による投与に好適な形態をとることができる。
【０１７２】
局所投与に関して、活性化合物またはプロドラッグは、当業界に周知である液剤、ゲル剤、軟膏、クリーム剤、懸濁剤などとして製剤化できる。
【０１７３】
全身用製剤としては、注射による投与、例えば、皮下、静脈内、筋肉内、鞘内または腹腔内注射用にデザインされたもの、ならびに経皮、経粘膜口腔または肺投与用にデザインされたものが挙げられる。
【０１７４】
有用な注射用製剤としては、水性または油性媒体中の活性化合物の滅菌懸濁剤、液剤または乳濁剤が挙げられる。該組成物はまた、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの製剤化剤を含有できる。注射用製剤は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数投与用容器において提供でき、添加保存料を含有できる。
【０１７５】
あるいは、注射用製剤は、限定はしないが、使用前にパイロジェンフリーの滅菌水、緩衝液、デキストロース液などの好適な媒体による再構成のために粉末形態で提供できる。最終的に、活性化合物を凍結乾燥などの当業界に公知の任意の技法により乾燥し、使用前に再構成できる。
【０１７６】
経粘膜投与のため、浸透するバリヤーに適切な浸透剤が製剤に使用される。このような浸透剤は、当業界に公知である。
【０１７７】
経口投与のため、製薬組成物は、例えば、結合剤などの製薬的に許容できる賦形剤（例えば、アルファ化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）により従来の手段によって調製される舐剤、錠剤またはカプセル剤の形態をとることができる。錠剤は、例えば、糖類、膜または腸溶性コーティングによる当業界に周知の方法によりコーティングできる。
【０１７８】
経口投与用の液体製剤は、例えば、エリキシル剤、液剤、シロップ剤または懸濁剤の形態をとることができるか、または使用前に水または他の好適な媒体による構成用に乾燥製品として提供できる。このような液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル類、エチルアルコール、クレモフォア（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ（商標））または分画植物油類）；および保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルあるいはプロピルまたはソルビン酸）などの製薬的に許容できる添加物と共に従来の手段により調製できる。該製剤はまた、適切な場合、緩衝塩類、保存剤、風味剤、着色剤および甘味剤を含有できる。
【０１７９】
経口投与用製剤は、周知のとおり、活性化合物またはプロドラッグを制御放出させるために好適に製剤化できる。
【０１８０】
舌下投与のために、該組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤または舐剤の形態をとることができる。
【０１８１】
直腸および膣経路投与のため、活性化合物は、溶液（浣腸保持のために）座薬またはカカオ脂または他のグリセリド類などの従来の座薬用基剤を含有する軟膏として製剤化できる。
【０１８２】
経鼻投与または吸入もしくはガス注入による投与のため、活性化合物またはプロドラッグは、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、フルオロ炭素、二酸化炭素または他の好適なガスの使用による加圧パックまたはネブライザーからのエーロゾルスプレーの形態で好適に送達できる。加圧エーロゾルの場合、投与量単位は、計量送達のためのバルブを提供することにより定量できる。吸入器またはガス注入器における使用のためのカプセルおよびカートリッジ（例えば、ゼラチンから成るカプセルおよびカートリッジ）は、化合物およびラクトースまたは澱粉などの好適な粉末基剤の粉末混合物を含有して製剤化できる。
【０１８３】
市販の鼻腔スプレー用デバイスを用いる経鼻投与に好適な水性懸濁製剤の具体例としては、以下の成分が挙げられる：活性化合物またはプロドラッグ（０．５〜２０ｍｇ／ｍｌ）；塩化ベンザルコニウム（０．１〜０．２ｍｇ／ｍｌ）；ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０；０．５〜５ｍｇ／ｍｌ）；カルボキシメチルセルロースナトリウムまたは微結晶性セルロース（１〜１５ｍｇ／ｍｌ）；フェニルエタノール（１〜４ｍｇ／ｍｌ）；およびデキストロース（２０〜５０ｍｇ／ｍｌ）。最終懸濁液のｐＨは、約ｐＨ５からｐＨ７までの範囲、典型的には約ｐＨ５．５に調整できる。
【０１８４】
吸入による化合物の投与、特に本発明の化合物の投与に好適な水性懸濁剤の別の具体例は、１〜２０ｍｇ／ｍｌの化合物またはプロドラッグ、０．１〜１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、５０ｍＭのクエン酸塩および／または０．９％の塩化ナトリウムを含有する。
【０１８５】
眼内投与のため、活性化合物またはプロドラッグは、眼への投与に好適な液剤、乳濁剤、懸濁剤などとして製剤化できる。化合物の眼への投与に好適な種々の媒体は、当業界に公知である。具体的な非限定例は、米国特許第６，２６１，５４７号；米国特許第６，１９７，９３４号；米国特許第６，０５６，９５０号；米国特許第５，８００，８０７号；米国特許第５，７７６，４４５号；米国特許第５，６９８，２１９号；米国特許第５，５２１，２２２号；米国特許第５，４０３，８４１号；米国特許第５，０７７，０３３号；米国特許第４，８８２，１５０号；および米国特許第４，７３８，８５１号に記載されている。
【０１８６】
持続性送達のため、活性化合物またはプロドラッグは、移植または筋肉内注射による投与のためのデポー製剤として製剤化できる。活性製剤は、好適なポリマーまたは疎水性材料（例えば、許容できる油中の乳濁液として）またはイオン交換樹脂と共に、またはわずかに溶解性の誘導体、例えばわずかに溶解性の塩として製剤化できる。あるいは、経皮吸収用に活性化合物を緩やかに放出させる接着ディスクまたはパッチとして製造される経皮送達系を使用できる。最後に、活性化合物の経皮浸透を促進させるために浸透増強剤を使用できる。好適な、経皮パッチは、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号；米国特許第５，３５２，４５６号；米国特許第５，３３２，２１３号；米国特許第５，３３６，１６８号；米国特許第５，２９０，５６１号；米国特許第５，２５４，３４６号；米国特許第５，１６４，１８９号；米国特許第５，１６３，８９９号；米国特許第５，０８８，９７７号；米国特許第５，０８７，２４０号；米国特許第５，００８，１１０号；および米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１８７】
あるいは、他の製薬送達系を用いることができる。リポソームおよび乳濁液は、活性化合物またはプロドラッグを送達するために使用できる周知の送達媒体の例である。通常、より大きな毒性という代価を払うことにはなるが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などのある一定の有機溶媒もまた使用できる。
【０１８８】
所望ならば、活性化合物を含有する１つまたは複数単位剤形を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイス中に製薬組成物を提供できる。該パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックフォイルを含んでなり得る。該パックまたはディスペンサーデバイスには、投与のための取扱説明書を添付できる。
【０１８９】
６．７  有効投与量
活性化合物またはプロドラッグ、あるいはそれらの組成物は、一般に目的とする成績を達成するのに有効な量、例えば、治療を受ける特定の疾患を治療または予防するために有効な量で使用される。該化合物を、治療的利益を達成するために治療的に、または予防的利益を達成するために予防的に投与できる。治療的利益とは、患者が、基礎的障害を依然として患っているとしても、患者が、感覚または病態の改善を報告するような、治療を受ける基礎的障害の根絶または寛解および／または基礎的障害に関連する１つまたは複数の症状の根絶または寛解を意味する。例えば、アレルギーを患っている患者への化合物の投与により、基礎的アレルギー応答が、根絶または寛解する場合のみならず、患者が、アレルゲンへの曝露後にアレルギーと関連する症状の重症度または持続期間の減少を報告する場合に治療的利益が提供される。別の例として、喘息の文脈における治療的利益としては、喘息発作の発症後の呼吸の改善、または喘息発症の頻度または重症度の減少が挙げられる。また治療的利益として、改善が認められるかどうかにかかわらず、疾患進行の停止または緩徐化が挙げられる。
【０１９０】
予防的投与に関して、該化合物を、先に記載された疾患を発症する危険性のある患者に投与できる。例えば、患者が特定の薬物に対してアレルギー性であるかどうかが不明である場合、薬物に対するアレルギー応答を避けるか、または寛解するために薬物の投与前に該化合物を投与してもよい。あるいは、基礎的疾患と診断された患者における症状の発症を避けるために予防的投与を適用してもよい。例えば、アレルゲンに対して予想される曝露前にアレルギー罹患者に化合物を投与できる。上記の疾患の１つに対して公知の薬剤に反復して曝される健常な個体に対しても障害の発症を防止するために、予防的に化合物を投与できる。例えば、ラテックスなどのアレルギーを誘導することが知られているアレルゲンに反復して曝される健常な個体に対して、個体をアレルギー発症から予防する意図で化合物を投与できる。あるいは、喘息発症の重症度を低下させるか、または全体的に喘息発症を避けるために、喘息発作を開始させる活性になる前に喘息を患っている患者に投与できる。
【０１９１】
投与される化合物の量は、例えば、治療を受ける特定の適応症、投与様式、所望の利益が予防的か、または治療的かどうか、治療を受ける適応症の重症度、患者の年齢および体重、具体的な活性化合物の生物学的利用能など、種々の因子に依存する。有効投与量の決定は、十分当業者の能力の範囲内にある。
【０１９２】
有効投与量は、最初はインビトロアッセイから推定できる。例えば、動物に使用するための最初の投与量は、インビトロでのＣＨＭＣまたはＢＭＭＣおよび実施例の節で記載されている他のインビトロアッセイなど、インビトロアッセイで測定された具体的な化合物のＩＣ５０、またはそれ以上である活性化合物の循環血中濃度または血清中濃度を達成するように製剤化できる。具体的な化合物の生物学的利用能を考慮に入れ、このような循環血中濃度または血清中濃度を達成する循環投与量は、十分当業者の能力の範囲内にある。ガイダンスに関しては、利用者は、Ｆｉｎｇｌ  ＆  Ｗｏｏｄｂｕｒｙ、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１章、１−４６頁の「Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ」、最新版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓおよびそれに引用されている文献を参照されたい。
【０１９３】
最初の投与量は、動物モデルなどのインビボデータからも推定できる。上記の種々の疾患を治療または予防する目的で化合物の有効性を試験するために有用な動物モデルは、当業界に周知である。過敏症またはアレルギー反応の好適な動物モデルは、Ｆｏｓｔｅｒ、１９９５年、Ａｌｌｅｒｇｙ  ５０（２１Ｓｕｐｐｌ）：６−９頁、考察３４−３８頁およびＴｕｍａｓら、２００１年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７（６）：１０２５−１０３３頁に記載されている。アレルギー性鼻炎の好適な動物モデルは、Ｓｚｅｌｅｎｙｉら、２０００年、Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ５０（１１）：１０３７−４２；Ｋａｗａｇｕｃｈｉら、１９９４年、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ２４（３）：２３８−２４４頁およびＳｕｇｉｍｏｔｏら、２０００年、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４８（１）：１−７頁に記載されている。アレルギー性結膜炎の好適な動物モデルは、Ｃａｒｒｅｒａｓら、１９９３年、Ｂｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．７７（８）：５０９−５１４頁；Ｓａｉｇａら、１９９２年、Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓ．２４（１）：４５−５０頁；およびＫｕｎｅｒｔら、２００１年、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４２（１１）：２４８３−２４８９頁に記載されている。全身性肥満細胞症の好適な動物モデルは、Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、１９８７年、Ｊ．Ｖｅｔ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１（２）：７５−８０頁およびＢｅａｎ−Ｋｎｕｄｓｅｎら、１９８９年、Ｖｅｔ．Ｐａｔｈｏｌ．２６（１）：９０−９２頁に記載されている。過剰ＩｇＥ症候群の好適な動物モデルは、Ｃｌａｍａｎら、１９９０年、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．５６（１）：４６−５３頁に記載されている。Ｂ細胞リンパ腫の好適な動物モデルは、Ｈｏｕｇｈら、１９９８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：１３８５３−１３８５８頁およびＨａｋｉｍら、１９９６年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７（１２）：５５０３−５５１１頁に記載されている。アロピー性皮膚炎、アロピー性湿疹およびアロピー性喘息などのアトピー性障害の好適な動物モデルは、Ｃｈａｎら、２００１年、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１７（４）：９７７−９８３頁およびＳｕｔｏら、１９９９年、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２０（Ｓｕｐｐｌ  １）：７０−７５頁に記載されている。ヒト投与に好適な投与量を決定するために、通常の当業者はこのような情報をルーチンに採用できる。さらなる好適な動物モデルは、実施例の節に記載されている。
【０１９４】
投与量は、典型的に約０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日または０．００１ｍｇ／ｋｇ／日または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約１００ｍｇ／ｋｇ／日までの範囲であるが、他の因子の中でも、化合物の活性、その生物学的利用能、投与様式および上記に検討された種々の因子に依ってそれより高くても、低くてもよい。投与量および投与間隔は、治療効果または予防効果を維持するのに十分な化合物の血漿レベルを提供するために個々に調整できる。例えば、とりわけ投与様式、治療を受ける具体的な適応症および処方医師の判定に依って週に１回、週に数回（例えば、１日おきに）、１日１回または１日複数回該化合物を投与できる。局所の局在性投与などの局所投与または選択的取込みの場合、活性化合物の有効な局所濃度は、血漿濃度に関連していなくてもよい。当業技術者は、過度の実験をすることなく有効な局所投与量を最適化できるであろう。
【０１９５】
化合物は、実質上毒性を引き起こすことなく治療的または予防的利益を提供することが好ましい。化合物の毒性は、標準的な薬学的手法を用いて判定できる。毒性と治療（または予防）効果との間の用量比は、治療指数である。高治療指数を示す化合物が好ましい。
【０１９６】
本発明を説明したので、例示として以下の実施例を提供するが、限定ではない。
【実施例】
【０１９７】
（７．  実施例）
７．２  スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物
７．２．１  ラセミ−２−（２−ｔ−ブチルジメチルシロキシエチル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン
【０１９８】
【化２７】
2008521817.tif 000023
４．８ｇのラセミ−２−（２−ヒドロキシエチル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジンのジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）と３．４ｍＬのジエチルイソプロピルアミンとの溶液に、０℃で４．７ｇのｔ−ブチルジメチルシリルクロリドを加えた。反応混合物を０℃で２０分間、室温で３時間攪拌し、濃縮し、生じた残渣を重炭酸ナトリウム液とＥｔＯＡｃとに分配した。水相を、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせて水、ブラインで洗浄してからＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧留去し、粗製物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン類／ＥｔＯＡｃ）により精製して１ｇの所望の生成物ラセミ−２−（２−ｔ−ブチルジメチルシロキシエチル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジンを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：３５３（ＭＨ＋）。
【０１９９】
７．２．２  ラセミ−２−２−ｔ−ブチルジメチルシロキシエチル−６−ニトロ−３−オキソ−４−ｐ−メトキシベンジル−ベンズ［１，４］オキサジン
【０２００】
【化２８】
2008521817.tif 000024
２５ｍＬのＥｔＯＨ中１％濃塩酸中、４５０ｍｇのラセミ−２−（２−ｔ−ブチルジメチルシロキシエチル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン溶液を、２時間攪拌した。溶媒をロータリー蒸発により除去すると、３７０ｍｇのラセミ−２−（２−ヒドロキシエチル−６−ニトロ−３−オキソ−４−ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジンを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：３５７（ＭＨ＋）。
【０２０１】
７．２．３  ラセミ−２−２−メタンスルホニルエチル）−６−ニトロ−３−オキソ−４−ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジン
【０２０２】
【化２９】
2008521817.tif 000025
６４０ｍｇのラセミ−２−（２−ヒドロキシエチル−６−ニトロ−３−オキソ−４−ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジンのＴＨＦ（３０ｍＬ）と１ｍＬのＤＩＥＡとの溶液に、０℃で３３０μＬのＭｓＣｌを加えた。反応混合物を０℃で２０分間、室温で３時間攪拌してから濃縮した。生じた残渣を重炭酸液とＥｔＯＡｃとに分配した。水相を、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせて水、ブラインで洗浄してからＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧留去し、粗製物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン類／ＥｔＯＡｃ）により精製して１ｇの標題化合物を得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：４３７（ＭＨ＋）。
【０２０３】
７．２．４  ２−２−（シクロプロピル）−６−ニトロ−３−オキソ−４−ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジン
【０２０４】
【化３０】
2008521817.tif 000026
５００ｍｇのラセミ−２−２−メタンスルホニルエチル）−６−ニトロ−３−オキソ−４−ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジンのＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に、−１５℃で２．５ｍＬの１．０Ｍのリチウムヘキサメチルシリルアジドをゆっくりと（滴下により）加え、反応混合物を−１５℃で３時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、生じた残渣を重炭酸液とＥｔＯＡｃとに分配した。水相を、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせて水、ブラインで洗浄してからＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧留去し、粗製物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン類／ＥｔＯＡｃ）により精製して１５０ｍｇの所望の生成物２−２−シクロプロピル）−６−ニトロ−３−オキソ−４−（ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジンを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：３４１（ＭＨ＋）。
【０２０５】
７．２．５  ２−（２−シクロプロピル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン
【０２０６】
【化３１】
2008521817.tif 000027
４００ｍｇの２−（２−シクロプロピル）−６−ニトロ−３−オキソ−４−（ｐ−メトキシベンジル）−ベンズ［１，４］オキサジンのアセトニトリル／水（５０ｍＬ）溶液に、２．５当量の硝酸セリウムアンモニウムを加えた。反応混合物を、周囲温度で１８時間攪拌し、ろ過、濃縮し、生じた残渣を重炭酸液とＥｔＯＡｃとに分配した。水相を、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせて水、ブラインで洗浄してからＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を減圧留去し、粗製物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン類／ＥｔＯＡｃ）により精製して２５０ｍｇの所望の生成物２−（２−シクロプロピル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジンを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：３４１（ＭＨ＋）。
【０２０７】
７．２．６  ６−アミノ−２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン
【０２０８】
【化３２】
2008521817.tif 000028
２００ｍｇの２−（２−シクロプロピル）−６−ニトロ−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジンのＥｔＯＨ／水（２０ｍＬ；２：１ｖ／ｖ）溶液に、５当量の鉄および５当量の塩化アンモニウムを加え、反応液を９０℃で４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタンで希釈し、ろ過した。各層を分離し、水層をジクロロメタンで１回抽出し、有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥し、溶液をろ過し、ろ液を減圧蒸発させると所望の生成物６−アミノ−２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジンを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：１９１（ＭＨ＋）。
【０２０９】
７．２．７  ピロガロール１−ベンゼンスルホネート２，３−ジメチルエーテル
【０２１０】
【化３３】
2008521817.tif 000029
１０ｍＬの２，３−ジメトキシフェノールおよび１３．３ｍＬのＴＥＡと１５０ｍＬのＤＣＭとの溶液に、０℃で１１．２５ｍＬの塩化ベンゼンスルホニルを攪拌しながらゆっくりと滴下により加えた。反応混合物を室温に温めて一晩攪拌した。反応混合物をろ過し、ロータリー蒸発により容量を減少させた。ＤＣＭ溶液を、希釈ＨＣｌ液、５０％飽和重炭酸液、次いでブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶液をろ過し、ろ液を減圧蒸発させると１１ｇの所望の生成物ピロガロール１−ベンゼンスルホネート２，３−ジメチルエーテルを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：２９５（ＭＨ＋）。
【０２１１】
７．２．８  ５−ニトロピロガロール１−ベンゼンスルホネート２，３−ジメチルエーテル
【０２１２】
【化３４】
2008521817.tif 000030
６．２６ｇのピロガロール１−ベンゼンスルホネート２，３−ジメチルエーテルの６０ｍＬの氷酢酸溶液に、０℃で１２ｍＬの発煙硝酸を加えた。反応混合物を室温に温めて一晩攪拌してから、４００ｍＬの氷水を加えた。この溶液を固体重炭酸ナトリウムで中和し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせて飽和重炭酸液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、蒸発させ、生じた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン類／ＥｔＯＡｃ８５：１５）により精製して６ｇの所望の生成物５−ニトロピロガロール１−ベンゼンスルホネート２，３−ジメチルエーテルを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：３４０（ＭＨ＋）。
【０２１３】
７．２．９  ２，３−ジメトキシ−５−ニトロフェノール
【０２１４】
【化３５】
2008521817.tif 000031
６０ｍＬのメタノールおよび３６ｍＬの２０重量％ＫＯＨ水溶液中、６ｇの（±）−５−ニトロピロガロール１−ベンゼンスルホネート２，３−ジメチルエーテル懸濁液を、攪拌しながら摂氏５０°で３０分間加熱してから冷却し、３５０ｍＬのＤ．Ｉ．水で希釈し、過剰の濃ＨＣｌで酸性にすると沈殿物が得られ、これを吸引ろ過により採取し、乾燥して４．６ｇの所望の生成物２，３−ジメトキシ−５−ニトロフェノールを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：２００（ＭＨ＋）。
【０２１５】
７．２．１０  ４，５−ジメトキシ−３−ヒドロキシアニリン
【０２１６】
【化３６】
2008521817.tif 000032
２００ｍｇの１０％Ｐｄ−Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａ）と共に１．１ｇの２，３−ジメトキシ−５−ニトロフェノールの４５ｍＬ乾燥メタノール溶液を、水素バルーン下で一晩水素化した。反応液をセライトベッドを通してろ過し、蒸発させ、残渣を、シリカゲル（酢酸エチル／ヘキサン類３：２勾配から１００％酢酸エチル）上でクロマトグラフを行った。適切なフラクションを蒸発乾固して油が得られ、これをメタノールに溶解し、メタノール性ＨＣｌ液を加え、溶媒を蒸発させると、１．０ｇの所望の生成物の塩酸４，５−ジメトキシ−３−ヒドロキシアニリンを得た。ＭＳ（ｍ／ｅ）：１７０（ＭＨ＋）。
【０２１７】
７．２．１１  ２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミン
【０２１８】
【化３７】
2008521817.tif 000033
２０ｍＬの１：１メタノール／水中、３２５ｍｇの２，４−ジクロロ−５−フルオロピリミジンおよび１２４ｍｇの６−アミノ−２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジンの混合物を、８０℃で一晩加熱し、冷却して１Ｎ  ＨＣｌ液で希釈した。沈殿物を吸引ろ過により採取し、乾燥、ヘキサンにより粉砕し、再度乾燥して１７０ｍｇの所望の生成物２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミンを得た。
【０２１９】
【化３８】
2008521817.tif 000034
；ＬＣＭＳ：保持時間１１．３０分；純度９４％；ＭＳ（ｍ／ｅ）：３２１（ＭＨ＋）。
【０２２０】
７．２．１２  Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−［３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシフェニル］２，４−ピリミジンジアミン（化合物１）
【０２２１】
【化３９】
2008521817.tif 000035
７００μＬのＥｔＯＨ中、４０ｍｇの２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミンおよび４８ｍｇの３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシアニリンの混合物を、１８０℃で４２００秒間マイクロ波中で加熱した。形成された沈殿物を吸引ろ過により採取し、乾燥、希釈重炭酸液に懸濁し、超音波処理し、吸引ろ過により再度採取し、乾燥して２５ｍｇの所望の生成物Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−［３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシフェニル］２，４−ピリミジンジアミンを得た。
【０２２２】
【化４０】
2008521817.tif 000036
；ＬＣＭＳ：保持時間９．３５分；純度９６％；ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６５（ＭＨ＋）。
【０２２３】
７．２．１３  Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（インダゾール−６−イル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物２）
【０２２４】
【化４１】
2008521817.tif 000037
Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−［３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシフェニル］２，４−ピリミジンジアミンの調製と同様の様式で、２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミンと６−アミノインダゾールとを反応させて所望の生成物Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（インダゾール−６−イル）−２，４−ピリミジンジアミンを得た。
【０２２５】
【化４２】
2008521817.tif 000038
；ＬＣＭＳ：保持時間９．２９分；純度９０％；ＭＳ（ｍ／ｅ）：４１８（ＭＨ＋）。
【０２２６】
７．２．１４  Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（３−ヒドロキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物３）
【０２２７】
【化４３】
2008521817.tif 000039
Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−［３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシフェニル］２，４−ピリミジンジアミンの調製と同様の様式で、２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミンと３−ヒドロキシアニリンとを反応させて所望の生成物Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（３−ヒドロキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミンを得た。
【０２２８】
【化４４】
2008521817.tif 000040
；ＬＣＭＳ：保持時間９．３０分；純度９６％；ＭＳ（ｍ／ｅ）：３９４（ＭＨ＋）。
【０２２９】
７．２．１５  Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物４）
【０２３０】
【化４５】
2008521817.tif 000041
Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−［３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシフェニル］２，４−ピリミジンジアミンの調製と同様の様式で、２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミンと３，４，５−トリメトキシアニリンとを反応させて所望の生成物Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミンを得た。
【０２３１】
【化４６】
2008521817.tif 000042
；ＬＣＭＳ：保持時間１０．２５分；純度９６．５％；ＭＳ（ｍ／ｅ）：４６８（ＭＨ＋）。
【０２３２】
７．２．１６  Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（３，４−ジメトキシ−５−ヒドロキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミン（化合物５）
【０２３３】
【化４７】
2008521817.tif 000043
Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−［３−（Ｎ−メチルアミノ）カルボニルメチレンオキシフェニル］２，４−ピリミジンジアミンの調製と同様の様式で、２−クロロ−Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−４−ピリミジンアミンと塩酸５−ジメトキシ−３−ヒドロキシアニリンとを反応させて所望の生成物Ｎ４−［２−（２−シクロプロピル）−３−オキソ−４Ｈ−ベンズ［１，４］オキサジン−６−イル］−５−フルオロ−Ｎ２−（３−ヒドロキシ−４，５−トリメトキシフェニル）−２，４−ピリミジンジアミンを得た。
【０２３４】
【化４８】
2008521817.tif 000044
；純度９９％；ＭＳ（ｍ／ｅ）：４５４（ＭＨ＋）。
【０２３５】
７．３  スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物が、ＦｃεＲＩ受容体媒介脱顆粒化を阻害するかどうかを判定するためのアッセイ
スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物がＩｇＥ誘導脱顆粒化を阻害する能力は、培養ヒト肥満細胞（ＣＨＭＣ）および／またはマウス骨髄由来細胞（ＢＭＭＣ）による種々の細胞アッセイにおいて実証することができる。脱顆粒化阻害は、顆粒特異的因子のトリプターゼ、ヒスタミンおよびヘキソサミニダーゼの放出を定量化することにより高低双方の細胞密度で測定される。脂質伝達物質の放出阻害および／または合成阻害は、ロイコトリエンＬＴＣ４の放出を測定することによって評価され、サイトカインの放出阻害および／または合成阻害は、ＴＮＦα、ＩＬ−６およびＩＬ−１３を定量化することによってモニターされた。トリプターゼおよびヘキソサミニダーゼは、それぞれの実施例において記載されるように、蛍光原基質を用いて定量化される。ヒスタミン、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−１３およびＬＴＣ４は、以下の市販のＥＬＩＳＡキットを用いて定量化される：ヒスタミン（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ番号２０１５、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、ＴＮＦα（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ番号ＫＨＣ３０１１）、ＩＬ−６（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ番号ＫＭＣ００６１）、ＩＬ−１３（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ番号ＫＨＣ０１３２）およびＬＴＣ４（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ番号５２０２１１）。種々のアッセイプロトコルは、下記に提供される。
【０２３６】
７．３．１  ヒト肥満細胞および好塩基性細胞の培養
ヒト肥満細胞および好塩基性細胞は、下記のとおりＣＤ３４ネガティブ始原細胞から培養される（また、２００１年１１月８日出願の同時係属米国特許出願第１０／０５３，３５５号に記載されている方法を参照）。
【０２３７】
７．３．２  ＳＴＥＭＰＲＯ−３４完全培地の調製
ＳＴＥＭＰＲＯ−３４完全培地（「ＣＭ］）を調製するために、２５０ｍＬ  ＳＴＥＭＰＲＯ−３４（商標）無血清培地（「ＳＦＭ」；ＧｉｂｃｏＢＲＬ、カタログ番号１０６４０）をフィルターフラスコに加える。これに、１３ｍＬのＳＴＥＭＰＲＯ−３４  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（「ＮＳ］；ＧｉｂｃｏＢＲＬ、カタログ番号１０６４１）（下記により詳細に記載されとおりに調製）を添加する。ＮＳ容器を、凡そ１０ｍＬのＳＦＭでリンスし、リンス液をフィルターフラスコに加える。５ｍＬのＬ−グルタミン（２００ｍＭ；Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、カタログ番号ＭＴ２５−００５−ＣＩ）および５ｍＬ  １００Ｘペニシリン／ストレプトマイシン（「ｐｅｎ−ｓｔｒｅｐ」；ＨｙＣｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＶ３００１０）の添加後、この容量をＳＦＭにより５００ｍＬに調整して溶液をろ過する。
【０２３８】
ＣＭを調製する最も可変性がある態様は、ＮＳを解凍し、ＳＦＭへの添加前に混合する方法である。ＮＳは、３７℃の水浴中で解凍する必要があり、完全に溶液になるまでスワールさせ、渦巻き攪拌したりまたは振とうさせない。スワーリング中、まだ溶液となっていない脂質があるかどうかを注意する。脂質が存在し、ＮＳが外見上均一でない場合、これを水浴にに戻し、外見上均一になるまでスワーリング工程を繰り返す。時にはこの成分は、直ちに溶液となり、時には２回のスワーリングサイクル後に溶液となり、時には全く溶液にはならない。２，３時間後、ＮＳが依然として溶液にならない場合、それを廃棄し、新鮮なユニットを解凍する。解凍後不均一に見えるＮＳは使用してはならない。
【０２３９】
７．３．３  ＣＤ３４＋細胞増殖
比較的少数（１〜５×１０６細胞）のＣＤ３４ポジティブ（ＣＤ３４＋）の出発集団を、下記の培養培地および方法を用いて比較的多数のＣＤ３４ネガティブ始原細胞（約２〜４×１０９細胞）に増殖させる。ＣＤ３４＋細胞（単一ドナーから）は、Ａｌｌｃｅｌｌｓ（カリフォルニア州バークレー）から入手する。Ａｌｌｃｅｌｌｓが一般に提供するＣＤ３４＋細胞には種々の品質程度と数があるので、新たに納入された細胞を１５ｍＬのコニカルチューブに移し、使用前にＣＭにより１０ｍＬに調整する。
【０２４０】
０日目に、細胞カウントを生（ブライト相）細胞に対して実施し、該細胞を１２００ｒｐｍの回転でペレットにした。該細胞を、２００ｎｇ／ｍＬの組換えヒト幹細胞因子（「ＳＣＦ」；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号３００−０７）および２０ｎｇ／ｍＬのヒトｆｌｔ−３リガンド（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号３００−１９）（「ＣＭ／ＳＣＦ／ｆｌｔ−３培地」）を含有するＣＭにより２７５，０００細胞／ｍＬの密度に再懸濁する。約４日目または５日目に、培養密度を、細胞カウントを実施することによりチェックし、培養物を、新鮮なＣＭ／ＳＣＦ／ｆｌｔ−３培地により２７５，０００細胞／ｍＬの密度に希釈する。約７日目に、培養物を滅菌チューブに移し、細胞カウントを実施する。該細胞を１２００ｒｐｍで回転させ、新鮮なＣＭ／ＳＣＦ／ｆｌｔ−３培地により２７５，０００細胞／ｍＬの密度に再懸濁する。
【０２４１】
０日目から出発して、増殖期間に亘って全部で３〜５回このサイクルを繰り返す。
【０２４２】
培養が大型であり、複数フラスコに維持され、再懸濁される場合、全てのフラスコの内容物を、細胞カウントを実施する前に単一容器に合わせる。これは、正確な細胞カウントが達成され、全集団に関して均等度の処理を提供することを保証する。各フラスコは、合わせる前に顕微鏡下で個々に雑菌汚染をチェックして全集団の雑菌汚染を防止する。
【０２４３】
１７日目と２４日目との間に、培養は、下降し始める可能性があり（すなわち、全数の５〜１０％が細胞死）、前と同じの迅速増殖ができなくなる。培養の完全な不成功は、わずか２４時間で生じ得るので、細胞はこの期間、毎日を基準にしてモニターする。下降が始まったら、細胞をカウントし、８５０ｒｐｍで１５分間回転させ、ＣＭ／ＳＣＦ／ｆｌｔ−３培地に３５０，０００細胞／ｍＬの密度で再懸濁し、培養から１回または２回以上の分裂を誘導させる。培養の不成功を避けるために細胞をモニターする。
【０２４４】
１５％超の細胞死が始原細胞培養物に明白であり、何らかの細片が培養物に存在する場合、ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞は、分化されようとしている。
【０２４５】
７．３．４  ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の粘膜肥満細胞への分化
第二相は、増殖ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の分化粘膜肥満細胞へ変換するために実施される。これらの粘膜培養ヒト肥満細胞（「ＣＨＭＣ」）は、臍帯血より単離されたＣＤ４＋細胞から由来し、上記のとおりＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の増殖集団を形成するために処理される。ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞を生産するために、培養のための再懸濁サイクルは、培養が４２５，０００細胞／ｍＬの密度で接種され、１５％の追加培地が、細胞カウントを実施することなく約４日目または５日目に添加されること以外、上記のものと同じである。また、培地のサイトカイン組成物は、ＳＣＦ（２００ｎｇ／ｍＬ）および組換えヒトＩＬ−６（２００ｎｇ／ｍＬ；滅菌１０ｍＭ酢酸中１００μｇ／ｍＬに再構成されたＰｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−０６）（「ＣＭ／ＳＣＦ／ＩＬ−６培地」）を含むように修飾される。
【０２４６】
第Ｉ相および第ＩＩ相は共に、凡そ５週間に及ぶ。培養物中の何らかの死および細片は、１〜３週目の期間に明白であり、２〜５週目に、小パーセンテージの培養物はもはや懸濁されていない期間があるが、その代わり培養容器の表面に付着されている。
【０２４７】
第Ｉ相の期間として、培養物を各サイクルの７日目に再懸濁する場合、全てのフラスコの内容物は、細胞カウントを実施する前に単一容器に合わせられ、全集団の均一性を確保する。各フラスコは、合わせる前に顕微鏡下で個々に雑菌汚染をチェックして全集団の雑菌汚染を防止する。
【０２４８】
フラスコを合わせる場合、容量の凡そ７５％を共通容器に移し、フラスコに約１０ｍＬほどが残る。残りの容量を含有するフラスコは、付着細胞を剥がすために鋭くかつ側方からトントンと叩く。この叩きは、完全に細胞を剥がすために第１の叩きに対して直角で繰り返される。
【０２４９】
フラスコを２，３分間４５°の角度で傾けてから、残りの容量をカウント用容器に移す。細胞は、１フラスコ当り３５〜５０ｍＬ（４２５，０００細胞／ｍＬの密度で）で接種する前に９５０ｒｐｍで１５分間回転させた。
【０２５０】
７．３．５  ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の結合組織タイプの肥満細胞への分化
ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の増殖集団は、上記のとおり調製し、トリプターゼ／キマーゼポジティブ（結合組織）表現型を形成するために処理する。上記の粘膜肥満細胞に関する方法が実施されるが、培養培地中のＩＬ−６の代わりにＩＬ−４を使用する。得られた細胞は、結合組織タイプの肥満細胞である。
【０２５１】
７．３．６  ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の好塩基生細胞への分化
ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞の増殖集団は、上記７．２．１．３節に記載されたとおり調製し、好塩基生細胞の増殖集団を形成するために使用する。ＣＤ３４−ネガティブ始原細胞は、粘膜肥満細胞に関して記載されたとおり処理するが、培養培地中のＩＬ−６の代わりにＩＬ−３（２０〜５０ｎｇ／ｍＬで）を使用する。
【０２５２】
７．３．７  ＣＨＭＣ低細胞密度のＩｇＥ活性化：トリプターゼおよびＬＴＣ４アッセイ
二組の９６ウェルＵ字底プレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３７９９）に、２％ＭｅＯＨおよび１％ＤＭＳＯを含有するＭＴ［１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ２、１．０ｍＭのＭｇＣｌ２、５．５ｍＭのグルコース、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）、０．１％ウシ血清アルブミン、（Ｓｉｇｍａ  Ａ４５０３）］中で調製された６５μｌの希釈化合物または対照サンプルを加える。ペレットＣＨＭＣ細胞（９８０ｒｐｍ、１０分）を予め加温されたＭＴに再懸濁する。６５μｌの細胞を各９６ウェルプレートに加える。各特定のＣＨＭＣドナーに関する脱顆粒化活性に依って、１０００〜１５００細胞／ウェルを装填する。４回混合し、次いで３７℃で１時間インキュベーションする。１時間のインキュベーション中、６×抗ＩｇＥ溶液［ウサギ抗ヒト（１ｍｇ／ｍｌ、Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ａ８０−１０９Ａ）をＭＴ緩衝液中１：１６７に希釈］を調製する。２５μｌの６×抗ＩｇＥ溶液を適切なプレートに添加することにより細胞を刺激する。２５μｌのＭＴを非刺激化対照ウェルに加える。抗ＩｇＥの添加後２回混合する。３７℃で３０分間インキュベートする。３０分のインキュベーション時に、２０ｍＭのトリプターゼ基質ストック溶液［（Ｚ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＡＭＣ２ＴＦＡ；Ｅｎｚｙｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、番号ＡＭＣ−２４６］をトリプターゼアッセイ緩衝液［０．１ＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０％ｗ／ｖグリセロール、１０μＭのヘパリン（Ｓｉｇｍａ  Ｈ−４８９８）０．０１％ＮａＮ３］中１：２０００に希釈する。プレートを１０００ｒｐｍで１０分間回転させて細胞をペレットにする。２５μｌの上澄液を９６ウェル黒色底プレートに移し、１００μｌの新鮮に希釈されたトリプターゼ基質溶液を各ウェルに加える。プレートを室温で３０分間インキュベートする。分光光度プレートリーダー上３５５ｎｍ／４６０ｎｍの光学密度を読み取る。
【０２５３】
ロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）はまた、供給元の取扱説明書に従って適切に希釈された上澄液サンプルに対してＥＬＩＳＡキットを用いて定量化される（サンプル測定が標準曲線内に入るように、各ドナー細胞集団に関して経験的に測定される）。
【０２５４】
７．３．８  ＣＨＭＣ高細胞密度のＩｇＥ活性化：脱顆粒化（トリプターゼ、ヒスタミン）、ロイコトリエン（ＬＴＣ４）、およびサイトカイン（ＴＮＦアルファ、ＩＬ−１３）アッセイ
培養ヒト肥満細胞（ＣＨＭＣ）を、ＣＭ培地中、ＩＬ−４（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＳＣＦ（２００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ）、およびヒトＩｇＥ（Ｃｏｒｔｘ  ＢｉｏｃｈｅｍからのＣＰ  １０３５Ｋ、世代に依って１００〜５００ｎｇ／ｍｌ）により５日間感作する。感作後、細胞をカウントし、ペレット化（１０００ｒｐｍ、５〜１０分間）、およびＭＴ緩衝液に１〜２×１０６細胞／ｍｌで再懸濁する。１００μｌの細胞懸濁液および１００μｌの化合物希釈液を各ウェルに加える。最終媒体濃度は、０．５％ＤＭＳＯである。３７□Ｃ（５％ＣＯ２）で１時間インンキュベートする。化合物処理の１時間後、６Ｘ抗ＩｇＥにより細胞を刺激する。ウェルを細胞と混合し、プレートを３７□Ｃ（５％ＣＯ２）で１時間インンキュベートする。１時間のインキュベーション後、細胞をペレット化し（１０分、１０００ＲＰＭ）、注意深くペレットを乱すことなく、１ウェル当り２００μｌの上澄液を採取する。上澄液プレートを氷上に置く。７時間のステップ時間中（次を参照）、１：５００で希釈された上澄液に対してトリプターゼアッセイを実施する。０．５％ＤＭＳＯおよび対応する濃度の化合物を含有する２４０μｌのＣＭ培地に細胞ペレットを再懸濁する。ＣＨＭＣ細胞を３７℃（５％ＣＯ２）で７時間インキュベートする。インキュベーション後、細胞をペレット化し（１０００ＲＰＭ、１０分）、１ウェル当り２２５μｌを採取し、ＥＬＩＳＡＳを実施する準備段階まで−８０℃に置く。ＥＬＩＳＡＳは、供給元の取扱い説明書に従って適切に希釈されたサンプルに対して実施される（サンプル測定が標準曲線内に入るように、各ドナー細胞集団に関して経験的に測定される）。
【０２５５】
７．４  本発明の２，４−ピリミジンジアミン化合物は、上流のＩｇＥ受容体カスケードを選択的に阻害できる
スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、下記のとおりイオノマイシン誘導脱顆粒化に関する細胞アッセイで試験して、該化合物が、早期ＩｇＥ受容体シグナル伝達カスケードをブロックするか、または阻害するかどうかを判定できる。
【０２５６】
７．４．１  ＣＨＭＣ低細胞密度のイオノマイシン活性化；トリプターゼアッセイ
イオノマイシン誘導肥満細胞脱顆粒化に関するアッセイは、１時間のインキュベーション時間中、６×イオノマイシン溶液［ＭｅＯＨ（ストック）中、５ｍＭイオノマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ｉ−０６３４）をＭＴ緩衝液（最終２□Ｍ）に１：４１６．７で希釈］を調製し、細胞を２５μｌの６×イオノマイシン溶液を適切なプレートに加えることによって刺激する。
【０２５７】
７．５  スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、ＩｇＥ受容体シグナル伝達カスケードを阻害する
化合物１〜５を、ＣＨＭＣ細胞による８ポイントアッセイにおいてＩｇＥ受容体シグナル伝達カスケードを阻害する能力に関する試験を行った。このアッセイでは、トリプターゼ放出量を測定した。全て５つの化合物は、１００ｎＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０２５８】
７．６  ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、生化学的アッセイにおいてＳｙｋキナーゼを阻害する
スピロ２，４−ピリミジンジアミン化合物は、単離Ｓｙｋキナーゼによる生化学的蛍光分極アッセイにおいてペプチド基質のＳｙｋキナーゼ触媒リン酸化を阻害する能力に関する試験を行うことができる。本実験において、化合物を、キナーゼ緩衝液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＭｎＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬのアセチル化ウシガンマグロブリン）中１％ＤＭＳＯに希釈する。１％ＤＭＳＯ（最終０．２％ＤＭＳＯ）中の化合物を、ＡＴＰ／基質溶液と室温で混合する。Ｓｙｋキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ、ニューヨーク州レークプラシド）２０μＬの最終反応容量に加え、この反応液を室温で３０分間インキュベートする。最終酵素反応条件は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＭｎＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬのアセチル化ウシガンマグロブリン、０．１２５ｎｇのＳｙｋ、４μＭのＡＴＰ、２．５μＭのペプチド基質（ビオチン−ＥＱＥＤＥＰＥＧＤＹＥＥＶＬＥ−ＣＯＮＨ２、ＳｙｎＰｅｐ社）である。ＥＤＴＡ（最終１０ｍＭ）／抗ホスホチロシン抗体（最終１×）／蛍光ホスホペプチドトレーサー（最終０．５×）は、ＦＰ希釈緩衝液に加えて、製造元の取扱説明書（ＰａｎＶｅｒａ社）に従って全量４０μＬの反応を中止させる。プレートを、暗所室温で３０分間インキュベートする。プレートを、Ｐｏｌａｒｉｏｎの蛍光分極プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）上で読み取る。データは、チロシンキナーゼアッセイキット、グリーン（ＰａｎＶｅｒａ社）に提供されるホスホペプチド競合物との競合により作成された検量線を用いて存在するホスホペプチド量に変換した。
【０２５９】
化合物１〜４をこのアッセイで試験した。全ての化合物は、１２５ｎＭ未満のＳｙｋ阻害のＩＣ５０を示した。
【０２６０】
７．７  自己免疫疾患に対する化合物のインビボ効力は、コラーゲン抗体誘導関節炎（ＣＡＩＡ）のマウスモデルにおいて実証できる
７．７．１  モデル
げっ歯類におけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）は、ＩＣ媒介組織傷害に関する実験モデルの１つとして用いられることが多い。ＩＩ型コラーゲンのマウスまたはラットへの投与により、周囲組織の同時腫脹と共に遠位関節の軟骨および骨の炎症性破壊に特徴的に関与する免疫反応を生じる。ＣＩＡは、慢性関節リウマチおよび他の慢性炎症性病態の治療用薬物として使用できる場合の化合物を評価するために一般に使用される。
【０２６１】
近年、ＣＩＡモデリングにおいて新規な技法が出現しており、抗ＩＩ型コラーゲン抗体が、抗体媒介ＣＩＡを誘導させるために適用される。この方法の利点は：疾患誘導が短時間であり（抗体の静脈内（ＩＶ）注射後２４〜４８時間以内に発症）；関節炎は、ＣＩＡ感受性およびＣＩＡ耐性マウス株の双方において誘導性であり；その手法は、抗炎症性治療薬の迅速なスクリーニングとって理想的であることである。
【０２６２】
Ａｒｔｈｒｏｇｅｎ−ＣＩＡ（登録商標）誘導モノクローナル抗体カクテル（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社）を、０日目にＢａｌｂ／ｃマウスに静脈内投与する（２ｍｇ／マウス）。４８時間後、１００μｌのＬＰＳ（２５μｇ）を静脈内注射する。４日目に、足指の腫脹が現れ得る。５日目までに、１本または２本の足（特に後肢）が、赤くなって腫脹する。６日目までおよびそれ以後、赤く腫脹した足は、少なくとも１〜２週間存続する。試験期間中、炎症の臨床的徴候は、足の浮腫強度を評価するためにスコア化される。関節炎の重症度は、各動物の両後足の合計スコア（可能性として最大８のスコア）として記録される。関与足による炎症度は、足の直径測定により評価される。体重変化をモニターする。
【０２６３】
動物は、０日目に開始して関節炎の誘導時期に処置できる。試験化合物および対照化合物は、先に確立されたＰＫプロフィルに依って、経口的に（ＰＯ）１日１回（ｑ．ｄ．）または２回（ｂ．ｉ．ｄ．）投与できる。
【０２６４】
試験終了時に（関節炎誘導１〜２週後）、マウスを安楽死させ、ギロチンを用いて遠位脛骨で切除し、重量を計る。各群の平均値±平均標準誤差（ＳＥＭ）を、個々の動物臨床スコアから各日に測定し、各実験群の後足重量を算出し、試験終了時に記録する。足の組織病理学的評価が得られる。
【０２６５】
７．７．２  結果
炎症および腫脹の減少は、本明細書に記載された化合物で処置された動物において明白であるはずであり、関節炎はより緩徐に進行すると思われる。化合物による処置により、媒体のみで処置された動物と比較して臨床的関節炎を有意に減少させるはずである（ｂ．ｉ．ｄ．）。
【０２６６】
７．８  化合物は、ラットコラーゲン誘導関節炎において有効であり得る
自己免疫疾患に対して本明細書に記載された化合物のインビボ有効性は、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）のラットモデルにおいて実証できる。
【０２６７】
７．８．１  モデルの説明
慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、慢性関節炎を特徴とし、最後には不可逆的軟骨破壊に至る。ＩｇＧ含有ＩＣは、ＲＡ患者の滑膜組織に富んでいる。この疾患の原因および病理においてこれらの複合体がどのような役割を果たすかは依然として論争中であるが、ＩＣは、ＦｃγＲを経て造血細胞に通じ合う。
【０２６８】
ＣＩＡは、パンヌス形成および関節劣化を特徴とする慢性炎症性滑膜炎をもたらす広く受け入れられている動物モデルである。このモデルにおいて、不完全フロイントアジュバントで乳化された天然ＩＩ型コラーゲンにより皮内免疫処置により、１０日または１１日内で炎症性多発関節炎、引き続き３週から４週で関節破壊をもたらす。
【０２６９】
７．８．２  試験プロトコル
同系ＬＯＵラットを、０日目に天然ニワトリＣＩＩ／ＩＦＡにより免疫化する（ＵＣＬＡで実施された；Ｅ．Ｂｒａｈｎ、主研究者）。関節炎発症日（１０日目）から開始して、５９匹のラット全部を、媒体対照または本明細書に記載された化合物の４つの用量レベル（１，３，１０、および３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．胃管栄養法によるｑ．ｄ．）のうちの１つにより処置する。
【０２７０】
７．８．３  結果
後肢を、関節炎症度を基準にして標準化法を用いて臨床的関節炎重症度関して毎日スコア化する。後肢の高分解能デジタルＸ線写真を、試験の終結時（２８日目）に得ることができる。これらの肢は、組織病理学的な変化に関しても分析できる。天然ＣＩＩに対するＩｇＧ抗体は、ＥＬＩＳＡによる四通りに測定できる。
【０２７１】
前述の発明は、理解を容易にするためにいくらか詳細に記載されているが、ある一定の変更および修飾が、添付の請求項の範囲内で実施し得ることは明らかとなろう。したがって、記載された実施形態は、例示として限定することなく考慮でき、本発明は、本明細書に提供された詳細に限定されることはないが、添付の請求項の範囲内で等価物を修飾できる。
【０２７２】
本出願書を通して引用された全ての文献および特許文献は、全ての目的のために参照としてその全体が本出願書に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【０２７３】
【図１】図１は、ＩｇＥのアレルゲン誘導産生、およびその結果として生じる肥満細胞からの既に形成された化学伝達物質、および他の化学伝達物質の放出を説明する略画を提供する
【図２】図２は、肥満細胞および／または好塩基性細胞の脱顆粒化に導くＦｃεＲＩシグナル伝達カスケードを説明する略図を提供する。
【図３】図３は、上流のＦｃεＲＩ媒介脱顆粒化を選択的に阻害する化合物およびＦｃεＲＩ媒介およびイオノマイシン誘導双方の脱顆粒化を阻害する化合物の推定上の作用点を説明する略図を提供する。
【図１】
2008521817.tif 000052
【図２】
2008521817.tif 000053
【図３】
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【国際調査報告】
2008521817.tif 000055
2008521817.tif 000056
2008521817.tif 000057