(57)【要約】一つの態様において、本発明は、癌に罹った哺乳動物に癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンを投与することを含む、哺乳動物の癌を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明は、癌に罹った哺乳動物に投与された白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強する方法を提供する。一つの態様において、本発明は、癌に罹った哺乳動物に、白金含有化学療法剤の癌に対する化学療法効果を増強するのに十分な量の２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを投与する工程を含む、癌に罹った哺乳動物に投与された白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強する方法を提供する。
2008533021.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌に罹った哺乳動物に、癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンを投与する工程を含む、哺乳動物の癌を治療する方法。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
癌が卵巣癌である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
癌が精巣癌である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
癌が頭部または頸部の癌である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
癌が多剤化学療法耐性を示す、請求項１記載の方法。
【請求項７】
エブセレンを５〜５０００ｍｇ／日の量で投与する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
１ヶ月から２４ヶ月の期間にわたってエブセレンを定期的に哺乳動物に投与する、請求項１記載の方法。
【請求項９】
１ヶ月から２４ヶ月の期間にわたってエブセレンを１日に１回、哺乳動物に投与する、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物にエブセレンに加えて別の化学療法剤を投与しない、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
癌に罹った哺乳動物に、癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンとアロプリノールを投与する工程を含む、哺乳動物の癌を治療する方法。
【請求項１２】
哺乳動物がヒトである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
癌が卵巣癌である、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
癌が精巣癌である、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
癌が頭部または頸部の癌である、請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
癌が多剤化学療法耐性を示す、請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
アロプリノールを１０〜２４００ｍｇ／日、およびエブセレンを５〜５０００ｍｇ／日の量で投与する、請求項１１記載の方法。
【請求項１８】
１ヶ月から２４ヶ月の期間にわたってアロプリノールおよびエブセレンを定期的に哺乳動物に投与する、請求項１１記載の方法。
【請求項１９】
１ヶ月から２４ヶ月の期間にわたってアロプリノールおよびエブセレンを１日に１回、哺乳動物に投与する、請求項１１記載の方法。
【請求項２０】
哺乳動物にアロプリノールとエブセレンに加えて別の化学療法剤を投与しない、請求項１１記載の方法。
【請求項２１】
癌に罹った哺乳動物に、白金含有化学療法剤の癌に対する化学療法効果を増強するのに十分な量の２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを投与する工程を含む、癌に罹った哺乳動物に投与された白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強する方法であって、２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に投与する、方法。
【請求項２２】
癌が女性生殖器系の癌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
癌が卵巣癌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
癌が精巣癌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
癌が頭部または頸部の癌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２６】
癌が多剤化学療法耐性を示す、請求項２１記載の方法。
【請求項２７】
タキサン含有化学療法剤も哺乳動物に投与する、請求項２１記載の方法。
【請求項２８】
白金含有化学療法剤が、シスプラチンおよびカルボプラチンからなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２９】
タキサン含有化学療法剤が、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群から選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを５〜５０００ｍｇ／日の量で投与する、請求項２１記載の方法。
【請求項３１】
癌に罹った哺乳動物に、白金含有化学療法剤の癌に対する化学療法効果を増強するのに十分な量のアロプリノールおよび２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを投与する工程を含む、癌に罹った哺乳動物に投与された白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強する方法であって、アロプリノールおよび２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に投与する、方法。
【請求項３２】
癌が女性生殖器系の癌である、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
癌が卵巣癌である、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
癌が精巣癌である、請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
癌が頭部または頸部の癌である、請求項３１記載の方法。
【請求項３５】
癌が多剤化学療法耐性を示す、請求項３１記載の方法。
【請求項３６】
タキサン含有化学療法剤も哺乳動物に投与する、請求項３１記載の方法。
【請求項３７】
白金含有化学療法剤が、シスプラチンおよびカルボプラチンからなる群から選択される、請求項３１記載の方法。
【請求項３８】
前記アロプリノールを１０〜２４００ｍｇ／日、および２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを５〜５０００ｍｇ／日の量で投与する、請求項３１記載の方法。
【請求項３９】
癌に罹った哺乳動物に、白金含有化学療法剤の少なくとも１つの有害作用を改善するのに十分な量のアロプリノールおよび２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを投与する工程を含む、白金含有化学療法剤の少なくとも１つの有害作用を改善する方法であって、アロプリノールおよび２−フェニルー１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に投与する、方法。
【請求項４０】
白金含有化学療法剤がシスプラチンである、請求項３９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００５年３月８日に出願された米国仮特許出願番号６０／６６１，４２９号（これは、本明細書において、参考として援用される。）の利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、エブセレン（ｅｂｓｅｌｅｎ）、またはエブセレンとアロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）の併用剤を、癌を治療するための化学療法に使用すること、および、シスプラチンなどの白金含有化学療法剤の化学療法効果を高める方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
癌治療に取り組む方法の一つが、癌細胞に対して毒性あるいは有害な１つ以上の化学物質を、癌を患う個体に投与する化学療法である。残念ながら、全部ではないにしても、ほとんどの化学療法剤は、患者の健康に悪影響を与える望ましくない効果をもたらす。
【０００４】
一例を挙げると、化学療法剤であるシスプラチン（シス−ジクロロジアミン白金）は重金属錯体であり、シス位にある２個の塩素原子および２個のアンモニア分子に囲まれた中心原子として白金をもつ。シスプラチンは、急速に分裂している細胞のＤＮＡの中に鎖間および鎖内の架橋を形成させて、ＤＮＡ、ＲＮＡ、および／またはタンパク質の合成を妨害する。
【０００５】
シスプラチンは、典型的には、（他の化学療法剤、例えばパクリタキセル、シクロホスファミド、ビンブラスチン、ドキソルビシン、およびブレオマイシンとしばしば併用されて）転移性精巣癌、転移性卵巣癌、子宮内膜、膀胱、頭または頸の癌腫の患者を治療するために使用される。乳癌や卵巣癌などの固形癌に対するシスプラチンの抗腫瘍活性は十分に確認されている。残念なことに、シスプラチンは、発作、末梢神経障害、聴神経障害、聴力損失、難聴、回転性めまい、非回転性めまい、視覚低下、吐き気、嘔吐、食欲不振、下痢、便秘、骨髄抑制、血小板減少症、貧血、好中球減少症、肝毒性、および腎毒性など、数多くの有害作用の原因となる（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ，Ｔｏｈｏｋｕ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９１：２０９−２２０，２０００；Ｂａｌｄｅｗ，Ｇ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：７０３１−７０３６，１９９０；およびＨｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１８：２５９−２７０，２０００（非特許文献１〜３）参照）。シスプラチン、およびその他の白金含有化学療法剤の副作用は非常に重篤になることがあるため、化学療法剤を長期間患者に投与するのは不可能である。
【０００６】
シスプラチンに関連する聴神経障害に関しては、シスプラチンの投与を受けている患者を調べたところ、９０％もの患者が顕著な聴力損失を経験すること、およびこれらの変化が不可逆的で累積的であることが示された（Ｈｅｌｓｏｎ，Ｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌ，１３：４６９−４７８，１９７８参照）。シスプラチンに関連する聴神経障害の特徴を調べたところ、蝸牛傷害に関係するスーパーオキシドアニオン（Ｏ２−）および一酸化窒素（ＮＯ）などのフリーラジカルまたは反応性酸素種および反応性窒素種が増加することが明らかになった。特に、ペルオキシ亜硝酸（ＯＯＮＯ−）、スーパーオキシドアニオン、および一酸化窒素は、有毛細胞膜を傷害するプロセスである脂質過酸化反応を引き起こす（Ｒｙｂａｃｋ，Ｌ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｏｔｏｌ，２７：５１３−５２０，２０００；Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ，１６：５６９−５７９，２００５（非特許文献４および５）参照）。シスプラチンへの曝露は、還元型グルタチオンの量の変化とも関連している。グルタチオンを利用する酵素の活性は、シスプラチン曝露による有毛細胞損失と相関していた（Ｒａｖｉ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ，７６：３８６−３９４，１９９５；Ｌａｕｔｅｒｍａｎｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．，１１４：７５−８２，１９９７；Ｒｙｂａｋ，Ｌ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ，１０９：１７４０−１７４４，１９９９（非特許文献６〜８））。シスプラチンへの曝露は、腎臓においてキサンチン酸化酵素（ＸＯ）の活性を増大させることが示されている（Ｓｏｇｕｔ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｆｕｎｃｔ，２２：１５７−１６２，２００４（非特許文献９））。カルボプラチン曝露を含む実験では、蝸牛におけるＸＯ活性が同じように増大することが示されている（Ｈｕｓａｉｎ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．，１５９：１４−２２，２００１（非特許文献１０）参照）。シスプラチンに関連する生化学的機構を決定する上での進歩は見られているが、シスプラチンに関係する聴神経障害および腎毒性を軽減するのに有効な化学的予防薬は開発されていない。
【０００７】
卵巣癌は、癌による死因の第５位である（Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．，５２：２１６−２５，２００２（非特許文献１１））。卵巣癌に対する治療法は、白金をベースとする化学療法に対するアルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）をタキサン化合物（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）と組み合わせて使用することから発展してきた（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９８：１４１−１４５，２００５（非特許文献１２）参照）。白金をベースとする化学療法は、上記したように、シスプラチンによる用量規定毒性（例えば、神経毒性および腎毒性）およびカルボプラチンによる用量規定毒性（例えば、骨髄抑制、腎毒性、および聴覚障害）が障害となっている。タキサンは、臨床実験で多種の固形腫瘍を治療する活性を示しているが、パクリタキセルによる用量規定毒性（例えば、末梢神経障害）およびドセタキセルによる用量規定毒性（例えば、神経毒性、腎毒性、および骨髄抑制）も観察されている（例えば、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９８：１４１−１４５，２００５（非特許文献１２）参照）。シスプラチンおよびパクリタキセルに関連した相加的神経毒性のせいで、臨床場面でのこの治療組合せに対する許容性は限定されている。前記文献。
【０００８】
したがって、癌患者に投与しても重篤な副作用をもたらさず、そのため、長期間にわたって患者に投与することが可能な化学療法用組成物および方法が必要とされている。さらに、白金含有化学療法剤の化学療法効果を増進させて、より低い有効投与量で化学療法剤が使用できるようになる組成物および方法が必要とされている。特に、白金含有化学療法剤の化学療法効果を増進させ、かつ、化学療法の望ましくない作用を軽減または排除する組成物および方法が必要とされている。
【非特許文献１】Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ，Ｔｏｈｏｋｕ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９１：２０９−２２０，２０００
【非特許文献２】Ｂａｌｄｅｗ，Ｇ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：７０３１−７０３６，１９９０
【非特許文献３】Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１８：２５９−２７０，２０００
【非特許文献４】Ｒｙｂａｃｋ，Ｌ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｏｔｏｌ，２７：５１３−５２０，２０００
【非特許文献５】Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ，１６：５６９−５７９，２００５
【非特許文献６】Ｒａｖｉ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ，７６：３８６−３９４，１９９５
【非特許文献７】Ｌａｕｔｅｒｍａｎｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．，１１４：７５−８２，１９９７
【非特許文献８】Ｒｙｂａｋ，Ｌ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ，１０９：１７４０−１７４４，１９９９
【非特許文献９】Ｓｏｇｕｔ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｆｕｎｃｔ，２２：１５７−１６２，２００４
【非特許文献１０】Ｈｕｓａｉｎ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅａｒ  Ｒｅｓ．，１５９：１４−２２，２００１
【非特許文献１１】Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．，５２：２１６−２５，２００２
【非特許文献１２】Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９８：１４１−１４５，２００５（非特許文献１３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明者らは、エブセレン、およびエブセレンとアロプリノールの併用剤が化学療法活性を持つことを発見した。したがって、一つの態様において、本発明は、哺乳動物の癌を治療する方法を提供する。一実施形態において、本発明のこの態様に係る方法は、癌に罹った哺乳動物に、癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンを投与する工程を含む。別の実施形態において、本発明のこの態様に係る方法は、癌に罹った哺乳動物に、併用して癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンとアロプリノールを投与する工程を含む。
【００１０】
また、本発明者らは、エブセレン、およびエブセレンとアロプリノールの併用剤が、白金含有化学療法剤の化学療法効果を促進することも発見した。したがって、別の態様において、本発明は、癌に罹った哺乳動物に投与される白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強する方法を提供する。一実施形態において、本発明の本態様に係る方法は、白金含有化学療法剤の癌に対する化学療法効果を増強するのに十分な量の（エブセレンとも呼ばれる）２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを癌に罹った哺乳動物に投与する工程であって、２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に投与する工程を含む。本発明の本態様の別の実施形態において、本方法は、癌に罹った哺乳動物に、併用して癌に対する白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強するのに十分な量のアロプリノールとエブセレンを投与する工程であって、エブセレンとアロプリノールを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に哺乳動物に投与する工程を含む。
【００１１】
さらに、本発明者らは、エブセレンとアロプリノールの併用剤が、化学療法の少なくとも一つの有害作用を改善することを発見した。したがって、別の態様において、本発明は、白金含有化学療法剤の少なくとも一つの有害作用を改善する方法を提供する。本発明の本態様に係る方法は、白金含有化学療法剤の少なくとも一つの有害作用を改善するのに十分な量のアロプリノールとエブセレンを癌に罹った哺乳動物に投与する工程であって、エブセレンとアロプリノールを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に哺乳動物に投与する工程を含む。本発明の方法は、ヒトなどの哺乳動物に適用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本明細書において、「化学療法の少なくとも一つの有害作用を改善すること」という用語は、（ａ）化学療法の少なくとも一つの有害作用の程度および／または継続期間を減少させること；および／または（ｂ）化学療法の少なくとも一つの有害作用を完全になくすこと；および／または（ｃ）エブセレンおよびアロプリノールの併用剤を投与しない場合に生じうる一つ以上の化学療法の有害作用が発生するのを防止することを含む。
【００１３】
本明細書において、「化学療法剤」という用語は、癌細胞を死滅させるか、または癌細胞に悪影響を与える（すなわち、癌細胞の増殖を完全または部分的に阻害する）ために投与される薬剤のことである。
【００１４】
本明細書において、「白金含有化学療法剤の化学治療効果を増強すること」という用語は、癌に罹った哺乳動物に投与した際、白金含有化学療法剤の癌細胞を死滅させ、および／または癌細胞の増殖または細胞分裂の速度を遅くする能力を高めることを含む。
【００１５】
本発明者らは、エブセレン、およびエブセレンとアロプリノールの併用剤は、癌に罹った哺乳動物に投与すると化学療法活性を持つことを発見した。したがって、一つの態様において、本発明は、哺乳動物の癌を治療する方法を提供する。一実施形態において、本発明のこの態様に係る方法は、癌に罹った哺乳動物に、癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンを投与する工程を含む。別の実施形態において、本発明のこの態様に係る方法は、癌に罹った哺乳動物に、併用して癌の増殖を阻害するのに十分な量のエブセレンとアロプリノールを投与する工程を含む。本発明の方法は任意の哺乳動物、例えばヒトなどに適用できる。
【００１６】
本発明者らは、実施例５に説明され、表３、表４、および図９Ａ〜１６Ｃに示すように、エブセレンおよびエブセレンとアロプリノールの併用剤は、腫瘍細胞株に接触すると化学療法活性を持つことを発見した。本発明のこの態様の方法は、卵巣癌など、女性生殖器官の癌；精巣癌；頭部または頸部の癌、ならびに多剤耐性を示す癌に対して有効である。エブセレンは、有機セレン化合物であり、優れた経口利用可能性を持つことが知られており、非癌細胞株の中では非毒性であることが分かっており（Ｂａｌｄｅｗ  ＧＳ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４４（２）：３８２−７（１９９２）、急性虚血性脳卒中の治療に関するヒトの臨床試験において評価されているが、そこでは有害事象が全く同定されなかった（Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ，１８：１３４７−１３５９，１９８８；Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｏｋｅ，２９：１２−１７，１９９８；およびＯｇａｗａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．９：１１２−１１８，１９９９参照）。
【００１７】
別様の記載がない限り、本発明では、アロプリノールおよび２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンの任意の異性型または互変異性型を使用することができる。本発明では、アロプリノールおよび２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンの薬学的に許容される任意の塩も使用することができる。
【００１８】
アロプリノールの投与量の例は１０〜２４００ｍｇ／日、例えば５０〜１２００ｍｇ／日、または例えば１００〜８００ｍｇ／日である。エブセレンの投与量の例は５〜５０００ｍｇ／日、例えば５０〜２０００ｍｇ／日、または例えば５００〜１０００ｍｇ／日である。略語「ｍｇ」はミリグラムのことである。
【００１９】
エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールの併用剤を使用して癌を治療することの利点は、その他のほとんどの化学療法剤によって引き起こされる、極めて有害で、生命を脅かす可能性のある副作用（例えば、重要臓器および免疫系に対する障害）を引き起こさない量のエブセレンおよびアロプリノールを、癌に罹った哺乳動物である対象に長期間にわたり投与することができることである。したがって、例えば、使用されている化学療法剤の当技術分野において認知されている投与計画に従って、限られた期間（例えば、数週間または数ヶ月にわたる周期的投与）、従来型の化学療法剤で癌患者を治療することができる。その後、残存している癌細胞を死滅させるか、残存している癌細胞の増殖を完全または部分的に阻害するか、または新たな癌細胞の成長を部分的に阻害するのに有効な量のエブセレンまたはアロプリノールとエブセレンの併用剤を定期的に投与することができる。エブセレン、またはアロプリノールとエブセレンの併用剤は、数ヶ月または数年にわたり投与することができ、用量を選択して、長期間にわたり投与しても、実質的に有害な副作用を癌患者にもたらさないようにすることができる。
【００２０】
例えば、癌患者に４週間各週一回、週用量のシスプラチンを投与する場合、その４週間の各日にエブセレンまたはエブセレンおよびアロプリノールを一日一回投与することができる。その後、シスプラチンによる治療の完了後１ヶ月〜２４ヶ月の間、エブセレンまたはエブセレンおよびアロプリノールを毎日または週一回投与することができる。アロプリノールの投与量の例は１０〜２４００ｍｇ／日、例えば５０〜１２００ｍｇ／日、または例えば１００〜８００ｍｇ／日である。エブセレンの投与量の例は５〜５０００ｍｇ／日、例えば５０〜２０００ｍｇ／日、またはたば５００〜１０００ｍｇ／日である。
【００２１】
別の実施形態において、本発明は、癌に罹った哺乳動物に投与された白金系化学治療剤の化学療法効果を増強する方法を提供するが、この方法は、白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強するのに十分な量の（エブセレンとも呼ばれる）２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを癌に罹った哺乳動物に投与する工程であって、２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンを、化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に投与する工程を含む。
【００２２】
この実施形態に従って、哺乳動物は、典型的には、化学療法剤を投与される度に一用量のエブセレンを投与される。エブセレンが白金含有化学療法剤の化学療法作用を増強するのに十分な期間、エブセレンと白金含有化学療法剤が共に哺乳動物の体の中に存在するように、エブセレンの投与と白金含有化学療法剤の投与とが時間的に十分接近して行われるならば、エブセレンを、白金含有化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中に哺乳動物に投与することができる。
【００２３】
さらに別の実施形態において、本発明は、癌に罹った哺乳動物に投与された化学療法剤の化学療法作用を増強する方法を提供するが、この方法は、癌に対する白金含有化学療法剤の化学療法作用を、併用して増強するのに十分な量のアロプリノールおよびエブセレンを癌に罹った哺乳動物に投与する工程であって、哺乳動物に化学療法剤を投与する前後、またはその最中にアロプリノールおよびエブセレンを投与する工程を含む。
【００２４】
この実施形態に従って、哺乳動物は、典型的には、化学療法剤を投与される度に一用量のエブセレンおよびアロプリノールを投与される。エブセレンおよびアロプリノールが白金含有化学療法剤の化学療法作用を増強するのに十分な期間、エブセレン、アロプリノールおよび白金含有化学療法剤が全部共に哺乳動物の体の中に存在するように、エブセレンおよびアロプリノールの投与と白金含有化学療法剤の投与とが時間的に十分接近して行われるならば、白金含有化学療法剤を哺乳動物に投与する前後またはその最中にエブセレンおよびアロプリノールを哺乳動物に投与することができる。エブセレンは、アロプリノールと別に、またはアロプリノールと共に投与することができる。
【００２５】
例えば、本発明のいくつかの実施形態において、エブセレン、またはエブセレンとアロプリノールの併用剤は、哺乳動物の対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与する１８時間前から、その哺乳動物対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与した１８時間後に至る期間の任意の時点で哺乳動物対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態において、エブセレン、またはエブセレンとアロプリノールの併用剤は、哺乳動物の対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与する１時間前から、その哺乳動物対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与した１時間後に至る期間の任意の時点で哺乳動物対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態において、エブセレン、またはエブセレンとアロプリノールの併用剤は、哺乳動物の対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与する１０分前から、その哺乳動物対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与した１０分後に至る期間の任意の時点で哺乳動物対象に投与される。本発明のいくつかの実施形態において、哺乳動物の対象に一つ以上の白金含有化学療法剤を投与すると同時に、エブセレン、またはエブセレンとアロプリノールの併用剤を哺乳動物対象に投与する。
【００２６】
本発明の方法は、白金含有化学療法剤を使用する何らかの化学療法を受けているヒトなどの哺乳動物に適用することが可能である。白金含有化学療法剤の例は、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチンなどである。
【００２７】
この方法のいくつかの実施形態において、併用療法を開発する際に、白金含有化学療法剤を一つ以上のタキサン系化学療法剤と組み合わせることが可能である。タキサン系化学療法剤は、細胞周期のＭ期およびＧ２期におけるチューブリン重合および細胞停止を安定させる抗チューブリン剤として分類されている。タキサン系化学療法剤の例は、ドセタキセルおよびパクリタキセルなどである。
【００２８】
本発明の方法は、例えば、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌および膀胱癌など、女性の泌尿生殖系の癌；前立腺癌および精巣癌；頭部または頸部の癌；ならびに、より一般的には、起源が上皮性または内皮性である固形腫瘍（例えば、卵巣の腺癌）に対して有効である。
【００２９】
また、本発明は、多化学療法剤耐性を示す腫瘍に対する白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強するのにも有効である。多剤耐性（ＭＤＲ）の発生が癌化学療法の失敗の主な原因である。ＭＤＲの表現型は、白金含有化学療法剤に対する耐性など、広範囲の細胞毒性薬に対して耐性であるという特徴を持っている。ＭＤＲは、（化学療法剤への曝露以前からの）内因性であっても、または化学療法後に獲得されたものであってもよい。いくつかのＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターの過剰発現がＭＤＲと関連していた（Ｖａｎｄｅｎ  Ｈｅｕｖｅｌ−Ｅｉｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．ａｎｄ  Ｔｈｅｒ．，３８：９４−１１０，２０００参照）。ＡＢＣトランスポーターの固有の仕事は、アミノ酸、ヌクレオチド、糖類、脂質およびペプチドなど、さまざまなの異なった分子を、細胞膜を通って輸送することである。このような輸送は、癌細胞においては、細胞毒性薬を細胞膜の外側へ能動輸送してしまうことで、癌の治療薬による治療を妨害することとなり、特に問題である。このような腫瘍細胞は「多化学療法剤耐性」細胞と呼ばれている。本発明者らは、エブセレンおよびエブセレンとアロプリノールの併用剤が、多化学療法剤耐性を示すことが知られているヒト卵巣腫瘍細胞株であるＥＳ―２（図９Ａ〜Ｃ参照）、ＳＫＯＶ−３（図１０Ａ〜Ｃ参照）およびＯＶＣＡＲ−３（図１１Ａ〜１１Ｃ参照）に対する白金含有化学療法剤の細胞毒活性を増強することを明らかにした（Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９８：１４１−１４５，２００５参照）。
【００３０】
別様の記載がない限り、本発明では、アロプリノールおよび２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンの任意の異性型または互変異性型を使用することができる。本発明では、アロプリノールおよび２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレンアゾール−３（２Ｈ）−オンの薬学的に許容される任意の塩も使用することができる。
【００３１】
一例として、以下の代表的なアロプリノール誘導体が、本発明を実施して白金含有化学療法剤の化学療法効果を増強するために有用である：１−メチルアロプリノール；２−メチルアロプリノール；５−メチルアロプリノール；７−メチルアロプリノール；１，５−ジメチルアロプリノール；２，５−ジメチルアロプリノール；１，７−ジメチルアロプリノール；２，７−ジメチルアロプリノール；５，７−ジメチルアロプリノール；２，５，７−トリメチルアロプリノール；１−エトキシカルボニルアロプリノール；および１−エトキシカルボニル−５−メチルアロプリノール。
【００３２】
アロプリノールの投与量の例は１０〜２４００ｍｇ／日、例えば５０〜１２００ｍｇ／日、または例えば１００〜８００ｍｇ／日である。エブセレンの投与量の例は５〜５０００ｍｇ／日、例えば５０〜２０００ｍｇ／日、または例えば５００〜１０００ｍｇ／日などである。略語「ｍｇ」はミリグラムのことである。哺乳動物の対象に投与される化学療法剤を一回投与する毎に、少なくとも一用量のエブセレンを、単独または少なくとも一用量のアロプリノールと併用して、哺乳動物対象に投与する。化学療法剤の投与計画は当技術分野において周知である。エブセレン単独で、またはエブセレンとアロプリノールの併用剤が、白金含有化学療法剤の化学療法活性を増強することができるため、白金含有化学療法剤をエブセレン単独、またはエブセレンとアロプリノールの併用剤とともに投与すれば、エブセレンも、エブセレンおよびアロプリノールもなしで化学療法剤を投与した場合と比較して、より低い有効量の白金含有化学療法剤を投与することが可能になる。
【００３３】
したがって、例えば、従来のように、シスプラチンにより癌患者を治療することは、患者の体面積１ｍ２あたり８０ｍｇ〜１００ｍｇの用量で静脈内に投与される、３または４週用量のシスプラチンを含むことができる。エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールの併用剤と併用すれば、シスプラチンの投与量は、例えば、わずか２５ｍｇ／ｍ２患者体面積にすることが可能である。一例として、本発明を実施する際、エブセレンについては一日の用量が少なくとも５０ｍｇ、または少なくとも５０ｍｇ／日のエブセレンと少なくとも５０ｍｇ／日のアロプリノールとの併用剤を、白金含有化学療法剤と併用することができる。例えば、３００ｍｇ／日のエブセレン一日量を、単独または３００ｍｇ／日のアロプリノール一日量と併用したものを、白金含有化学療法剤と併用することができる。
【００３４】
エブセレンおよびアロプリノールの投与は、例えば、経口的でも非経口的でも効率的経路で行われる。非経口的送達法は、局所投与、動脈内投与、皮下投与、髄内投与、静脈内投与、または鼻腔内投与などである。エブセレンおよびアロプリノールは、化学療法を受けている哺乳動物対象へのエブセレンおよびアロプリノールの投与を容易にする賦形剤その他の化合物を含む、薬学的に許容される担体とともに処方することが可能である。処方および投与に関する技術のさらなる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版に記載されている。
【００３５】
経口投与用に処方されたエブセレンおよびアロプリノールは、当技術分野においてよく知られた、薬学的に許容される担体を使用して、経口投与に適した用量で処方することができる。そのような担体により、エブセレンおよびアロプリノールを哺乳動物の経口摂取に適した錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などにして処方することができる。
【００３６】
経口で使用するためのエブセレンまたはエブセレンとアロプリノールの併用剤を含む組成物は、例えば、エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールを固体賦形剤と混合して、任意には、得られた混合物を粉砕し、必要ならば、さらに適当な付加的化合物を加えてから、この顆粒混合物を処理して錠剤または糖衣錠のコアを得ることができる。適当な賦形剤は炭水化物またはタンパク質の充填剤である。これらは、乳糖、蔗糖、マンニトール、もしくはソルビトールなどの糖類、トウモロコシ、小麦、米、ジャガイモ、もしくはその他の植物に由来するデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、もしくはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；ならびにアラビアゴムおよびトラガカントゴムなどのゴム類；また、ゼラチンおよびコラーゲンなどのタンパク質を含むが、これらに限定されない。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤または溶解剤を加えてもよい。
【００３７】
糖衣錠のコアには、濃縮糖溶液など、適当なコーティング剤が施されているが、この溶液は、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適当な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含むこともできる。製品識別のため、または活性化合物の量（すなわち、投与量）を特定するために、錠剤はまた糖衣錠のコーティングに染料または色素を加えてもよい。
【００３８】
経口的に使用することができる、エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールを含む組成物は、例えば、ゼラチンで作られた硬カプセル剤（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ  ｃａｐｓｕｌｅ）、およびゼラチンと、グリセロールまたはソルビトールなどのコーティング剤から作られた軟かい密封カプセル剤（ｓｏｆｔ，ｓｅａｌｅｄ  ｃａｐｓｕｌｅ）として処方することができる。硬カプセル剤は、乳糖またはデンプンなどの充填剤または結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに、任意には安定剤と混合されたエブセレンおよびアロプリノールを含むことができる。軟カプセル剤では、エブセレンおよびアロプリノールを、安定剤を含むか含まない適当な液体、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁させることができる。
【００３９】
エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールを含む非経口投与用の組成物は、エブセレンおよび／またはアロプリノールの水溶液を含む。注射用には、エブセレンおよび／またはアロプリノールを含む組成物を、水溶液、好ましくは、ハンクス液、リンゲル液、または生理学的緩衝食塩水など、生理学的に適合する緩衝液の中で処方することができる。水性注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を上げる物質、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどを含むことも可能である。さらに、エブセレンおよび／またはアロプリノールの懸濁液は、油性の注射用懸濁液として調製することも可能である。適当な親油性溶媒または賦形剤は、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームなどである。また、任意には、この懸濁液は、化合物の溶解度を上げて、高濃度溶液の調製を可能にする、適当な安定剤または薬剤を含むこともできる。
【００４０】
局所的投与または鼻腔内投与には、典型的には、浸透対象となる具体的な障壁に適した浸透剤を処方剤に使用する。そのような浸透剤は当技術分野において一般的に知られている。
【００４１】
エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールを含む組成物は、当技術分野において周知の方法と同様の方法で（例えば、通常の混合工程、溶解工程、造粒工程、糖衣錠製造工程、粉末化工程、乳化工程、カプセル封入工程、封入工程、または凍結乾燥工程によって）製造することができる。また、エブセレンまたはエブセレンとアロプリノールを含む組成物を通常の手段（例えば、コーティング）によって改変して、適当な放出特性、例えば、持続放出または標的化放出をもたらすことが可能である。
【００４２】
エブセレンおよびアロプリノールは、それぞれ塩として提供することができ、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などであるが、これらに限定されない多くの酸によって生成させることができる。塩は、水性溶媒またはその他のプロトン性溶媒の中で、対応する遊離塩基型であるものより可溶性になりやすい。
【００４３】
実際に投与されるエブセレンおよびアロプリノールの量は、治療が行われる個人に応じて変わり、好ましくは、所望の結果が顕著な副作用を伴わずに達成されるように最適化される。有効用量を決定することは、当業者が十分になしうることである。
【００４４】
本発明者らは、白金含有化学療法剤の化学治療効果を増強することに加えて、エブセレンとアロプリノールの併用剤が、白金含有化学療法剤の有害作用のいくつかまたはすべてを改善する化学的予防薬として作用することを見出した。したがって、別の実施形態において、本発明は、白金含有化学療法剤の少なくとも一つの有害作用を改善する方法を提供するが、この方法は、白金含有化学療法剤の少なくとも一つの有害作用を改善するのに十分な量のアロピリノールおよびエブセレンを、癌に罹った哺乳動物に投与する工程を含む。白金含有化学療法剤の主な有害作用は、腎毒性、神経毒性、聴覚障害、骨髄抑制、脱毛症、体重減少、嘔吐、吐き気、および免疫抑制である。
【００４５】
本発明者らは、（上記したように）エブセレンとアロプリノールが白金含有化学療法剤の化学治療効果を増強すること、および、エブセレンとアロプリノールが白金含有化学療法剤による化学療法の望ましくない作用を改善または除去することを発見した。本明細書記載の実施例３は、アロピリノールとエブセレンの併用剤が、化学療法剤のシスプラチンによって引き起こされる損傷からラット内耳細胞を保護することを示す実験の結果について記載している。
【００４６】
以下の実施例は、本発明を実施するために現在最良の形態と考えられているものを例示したに過ぎず、本発明を制限するものと解すべきではない。本明細書における文献の引用はすべて、参照して明示的に組み込まれる。
【実施例】
【００４７】
実施例１
本実施例では、ＭＴＳ細胞生存率アッセイ法を用いて測定すると、エブセレンおよびアロプリノールが、単独でも、併用しても、培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌腫瘍細胞を死滅させるシスプラチンの能力を阻害しないことを示す。
【００４８】
ＮｕＴｕ−１９細胞を、９６穴培養皿の中に、１ウエルあたり細胞３，０００個の密度でプレートし、５％二酸化炭素の存在下、３７℃で２４時間インキュベートした。Ｎ−アセチルステイン、エブセレンまたはアロプリノールを、ＮｕＴｕ−１９細胞とともに、１時間、または４時間インキュベートしてから、この培養物にシスプラチンを添加し、５％二酸化炭素の存在下、３７℃で２４時間さらにインキュベートした。次に、ＮｕＴｕ−１９細胞を培地ですすぎ、シスプラチン存在下でさらに２４時間インキュベートした。
【００４９】
そして、ＮｕＴｕ−１９細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回すすいでから、ＭＴＳアッセイ法を行って、生きた細胞の数を数えた。ＭＴＳは、３−（４，５−  ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムの略称である。ＭＴＳ法は、組織培養培地において可溶性であるホルマザン産物に対するＭＴＳの生理学的異化作用に基づいて、生存細胞数を測定する比色法である。４９０ｎｍにおけるホルマザン産物の吸光度を、プレートリーダーを用いて９６穴プレートから直接測定することができる。４９０ｎｍにおける吸光度の増加は、ウエルの中でのホルマザン産生の増加と相関する。これは、一般的には、ウエルの中に生存細胞がより多く存在するせいである。
【００５０】
図１は、培養培地中のシスプラチン濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示している。図１に示したデータは、培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞が、シスプラチンの存在下で２４時間培養すると死滅することを示している。
【００５１】
図２は、培養培地中のエブセレン濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示している。エブセレンは存在するが、シスプラチンは存在しない条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を上方のグラフで示す。エブセレンおよびシスプラチンが（濃度４３μＭで）ともに存在する条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を下方のグラフで示す。図２に示したデータは、エブセレンが、培養中のＮｕＴｕ−１９卵巣癌腫瘍細胞を死滅させるシスプラチンの能力を阻害しないことを示している。
【００５２】
図３は、培養培地中のアロプリノール濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示している。アロプリノールは存在するが、シスプラチンは存在しない条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を上方のグラフで示す。アロプリノールおよびシスプラチンが（濃度４３μＭで）ともに存在する条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を下方のグラフで示す。図３に示したデータは、アロプリノールが、培養中のＮｕＴｕ−１９卵巣癌腫瘍細胞を死滅させるシスプラチンの能力を阻害しないことを示している。
【００５３】
図４は、培養培地中のアロプリノール濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示している。アロプリノールおよびエブセレンは（濃度４７μＭで）存在するが、シスプラチンは存在しない条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を上方のグラフで示す。アロプリノールおよびエブセレン（濃度４７μＭ）ならびにシスプラチン（濃度４３μＭ）がともに存在する条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を下方のグラフで示す。図４に示したデータは、アロプリノールおよびエブセレンの併用剤が、培養中のＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞を死滅させるシスプラチンの能力を阻害しないことを示している。
【００５４】
実施例２
本実施例は、エブセレンが、インビトロでシスプラチンによる損傷から内耳有毛細胞を保護することを示す。
【００５５】
Ｐ３〜４仔マウスから得た、一処理あたり三個の蝸牛を、ＮｅｕｒｏＢａｓａｌ  Ａ培地にＢ２７添加剤を加えた０．４マイクロメートルのＭｉｌｌｉＣｅｌｌ−ＣＭインサート中で培養した。培養開始２４時間後に、エブセレンをこの培地に添加し、１０分間インキュベートしてから、シスプラチンをこの培地に最終濃度４３μＭで添加した。第一の対照処理は４３μＭシスプラチンを含んでいた。第二の対照処理は、シスプラチンを添加せずに、４７μＭエブセレンを含んでいた。培養物はすべて、５％二酸化炭素中、３７℃で２４時間インキュベートした。
【００５６】
次に、外植片を回収、固定して、（有毛細胞を検出する）カルビンジンおよびＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール；核ＤＮＡ検出用）により染色した。図５は、４３μＭシスプラチン（１０）または４３μＭシスプラチン＋４７μＭエブセレン（１２）、または４７μＭエブセレン（１４）の存在下、インビトロで培養されたラット蝸牛内有毛細胞の数を示す。図５に示したデータは、エブセレンが、インビトロでシスプラチンによる損傷から内耳有毛細胞を保護することを示す。
【００５７】
本実施例に記載されている実験で使用したシスプラチンおよびエブセレンの濃度は、実施例１で説明されている細胞培養アッセイで使用したシスプラチンおよびエブセレンと同じ濃度である。このように、実施例１および実施例２で報告されている実験は共に、これらの実験で利用された濃度では、エブセレンは、ＮｕＴｕ−１９卵巣癌腫瘍細胞をシスプラチンの有毒作用から保護しないが、内耳有毛細胞をシスプラチンの有毒作用から保護することを示している。
【００５８】
実施例３
本実施例では、エブセレン、およびエブセレンとアロプリノールの併用剤が、インビボにおいて、ラット内耳有毛細胞をシスプラチンによる損傷から保護することを示す。
【００５９】
聴性誘発脳幹反応（ＡＢＲ）を用いて、シスプラチンおよび化学防御剤に曝露した前後のラットの聴力を評価した。用量１６ｍｇ／ｋｇ体重でシスプラチンを腹腔内に投与する１時間前に、エブセレンまたはＤＭＳＯ（賦形剤対照）をラットの腹腔内に導入した。シスプラチン送達から７２時間経過後に、ＡＢＲデータを収集し、動物を殺して、蝸牛を回収、切開し、（有毛細胞のＦ−アクチンを検出するための）ＦＩＴＣ−ファロイジンおよび（核ＤＮＡを検出するために）ＤＡＰＩで染色した。
【００６０】
図６は、エブセレン（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）（２２）、または食塩水およびＤＭＳＯ（賦形剤対照）（２０）存在下でシスプラチン（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）によって処理されたラットの８ｋＨｚ、１６ｋＨｚ、２４ｋＨｚ、および３２ｋＨｚにおける聴力の永久閾値移動（ＰＴＳ）を示す。１処理あたり、１０個の蝸牛を検査した。ＰＴＳは聴力損失の尺度である。図６に示されたデータは、エブセレンとシスプラチンを併用したもので処理したラットのＰＴＳのほうが、エブセレンなしでシスプラチンによって処理されたラットと比較して低い（すなわち、聴覚損失が少ない）ことを示している。
【００６１】
図７は、アロプリノール（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）存在下（３０）、またはアロプリノール（用量８ｍｇ／ｋｇ体重）とエブセレン（用量８ｍｇ／ｋｇ体重）の共存下（３２）でシスプラチン（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）によって処理されたラットの８ｋＨｚ、１６ｋＨｚ、２４ｋＨｚ、および３２ｋＨｚにおける聴力の永久閾値移動（ＰＴＳ）を示す。一処理あたり、四つの蝸牛を検査した。図７に示されたデータは、エブセレンとアロプリノール併用したもので処理したラットのＰＴＳのほうが、エブセレンなしでアロプリノールによって処理されたラットと比較して低いことを示している。
【００６２】
さらに、本実施例に記載されているシスプラチンとエブセレンを併用したもので処理したラットから蝸牛を切り出した。また、シスプラチンおよび食塩水およびＤＭＳＯ（対照）により処理されたラットからも蝸牛を切り出した。切り出した蝸牛の外聴覚有毛細胞の数を、蝸牛に沿って０．１ｍｍの間隔で数えた。対照ラットおよび処理ラットから得られた代表的な結果を、それぞれ図８Ａおよび図８Ｂに示す。図８Ａおよび図８Ｂに示したデータは、シスプラチンとエブセレンを併用したもので処理したラットの蝸牛において失われた外有毛細胞の割合が、エブセレンでは処理せず、シスプラチンで処理したラットの蝸牛において失われた外有毛細胞の割合よりも小さいことを示している。
【００６３】
実施例４
本実施例では、エブセレンとアロプリノールの併用剤が、ラットに導入された卵巣癌細胞株ＮｕＴｕ−１９に対するシスプラチンの化学療法効果を増強することを示す。
【００６４】
生後８〜１０週の雌のＦ−３４４ラットの腹腔に１０７個のＮｕＴｕ−１９細胞を注射して、ラットにおける卵巣癌腫瘍モデルを確立した。ＮｕＴｕ−１９細胞を注射したラットには、シスプラチン処理前の２週間、腫瘍負荷を生じさせておいた。１０匹のラットからなる対照組を、記載された条件下での卵巣腫瘍負荷の発生について個別に評価した。対照組のラットはすべて、ＮｕＴｕ−１９腫瘍細胞を注射した５週間後に殺して、腫瘍負荷を評価した。この対照組では、すべての動物が、多発性腫瘍結節の大網肥厚（ｏｍｅｎｔａｌ  ｃａｋｉｎｇ）および腹腔内の大量の腹水（１０〜３０ｍＬ）によって例証される顕著な腫瘍負荷を示した。
【００６５】
また、エブセレンとアロプリノールの併用剤の存在下または不存在下で、シスプラチンに対するＮｕＴｕ−１９腫瘍の応答も評価した。腹水および大網腫瘍肥厚が存在することを、癌が治療に応答していないことを示すものとみなした。腹腔内に腹水は存在しないが、５個より多い可視腫瘍結節（それぞれ０．５ｍｍより大）が存在することを、癌が治療に部分的に応答していることを示すものとみなした。腹水が存在せず、５個よりも少ない数の可視腫瘍結節（それぞれ０．５ｍｍより大）が存在することを、癌が治療に十分に応答していることを示すものとみなした。これらの実験の結果を表１に示す。
【００６６】
【表１】
2008533021.tif 000003
以下の略語が表１で使用されている：「完全（％）」は腫瘍負荷の兆候を示さなかったラットを意味し、「部分（％）」は腫瘍負荷の証拠をいくらか示したラットを意味し、「無（％）」はシスプラチン治療に応答しなかった腫瘍をもつラットを意味する。
【００６７】
結果：卵巣上皮癌細胞ＮｕＴｕ−１９はＦｉｓｈｅｒ３４４ラットと同系であり、卵巣癌について関連した臨床モデルであると認められている。例えば、Ｒｏｓｅ，Ｇ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ，１７５：５９３−５９９，１９９６；Ｃｌｏｖｅｎ，Ｎ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２０（６Ｂ）：４２０５−９，２０００；およびＳｔａｋｌｅｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ，１５：２４６−２５４，２００５参照。ＮｕＴｕ−１９細胞をＦｉｓｈｅｒ３４４ラットに注射すると、シスプラチン治療に応答性である、高侵襲性かつ高転移性の腫瘍を引き起こす（Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ，１６：５６９−５７９，２００５参照）。
【００６８】
上記表１に示された結果は、エブセレンとアロプリノールの併用製剤が、シスプラチンの抗腫瘍活性に対して阻害作用を及ぼさず、ＮｕＴｕ−１９卵巣腫瘍モデルにおいてシスプラチンの効果を実際に高めたことを示している。
【００６９】
実施例５
本実施例では、エブセレンおよびエブセレンとアロプリノールの併用剤が、哺乳動物の卵巣癌細胞株に投与されると化学治療活性を持つことを示す。また、本実施例では、エブセレンおよびにエブセレンとアロプリノールの併用剤が白金含有化学療法剤の化学治療活性を増強するように作用することも示す。
【００７０】
検査した卵巣癌細胞株
ＥＳ−２（ヒト明細胞癌）多剤化学療法耐性
ＳＫＯＶ−３（ヒト腺癌）多剤化学療法耐性
ＯＶＣＡＲ−３（ヒト腺癌）多剤化学療法耐性
ＣＡＯＶ−３（ヒト腺癌）
ＯＶ−９０（ヒト混合形態：漿液性乳頭状腺癌）
ＴＯＶ−１１２Ｄ（ヒト混合形態：腺癌／類内膜癌）
ＴＯＶ−２１Ｇ（ヒト混合型：腺癌／明細胞癌）
ｒＳＰＩ−ｔｕ−ラット上皮性卵巣癌細胞株
培養条件：細胞を対数増殖状態に保ち、週１回または週２回継代した。ＣＡＯＶ−３を、４．５ｇ／Ｌグルコース、および１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ改良イーグル培地中で維持した。ＯＶＣＡＲ−３は、２ｍＭ  １−グルタミン、１．５ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウム、４．５ｇ／Ｌグルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．０１ｍｇ／ｍＬウシインスリン、および２０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地中で維持した。ＳＫＯＶ−３およびＥＳ−２は、１５％ＦＢＳを含む、ＭＣＤＢ１０５培地および１９９培地の１：１混合液中で維持した。ＯＶ−９０は、１０％ＦＢＳを含む、ＭＣＤＢ１０５培地および１９９培地の１：１混合液中で維持した。
【００７１】
パクリタキセルおよびシスプラチンのＩＣ５０阻害アッセイ法
以下の表２に示すように、細胞毒性実験を開始する前に、増殖阻害アッセイを行って、パクリタキセルおよびシスプラチンの存在下で各卵巣細胞株を９６時間インキュベートしたときのＩＣ５０濃度を測定した。
【００７２】
【表２】
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ＩＣ５０解析の結果：パクリタキセルおよびシスプラチンによる併用治療では、パクリタキセルのＩＣ５０濃度は１．９ｎＭから９０ｎＭであり、シスプラチン濃度は１．４μＭから４．８μＭであった。
【００７３】
エブセレンおよびアロプリノールによる細胞毒性実験
上記に列挙した細胞株をそれぞれ９６穴プレートの中に、１ウエルあたり細胞３，５００個の密度でプレートし、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞株をそれぞれ、０から１００μＭの範囲の濃度で、５０μｌのエブセレン、アロプリノール、またはエブセレン＋アロプリノールのいずれかで処理し、１時間インキュベートした。１時間インキュベートした後、５０μｌのシスプラチンおよびパクリタキセルを表２に示したさまざまな濃度で細胞株に添加して、他の薬剤の不存在下でＩＣ５０の濃度になるようにした。次に、シスプラチンおよびパクリタキセルの存在下、５％ＣＯ２中、３７℃で細胞をさらに６７〜７２時間インキュベートした。対照用ウエルを以下の通りにインキュベートした：薬剤なし、エブセレン、アロプリノール、エブセレンおよびアロプリノール、ならびにシスプラチン／パクリタキセル。
【００７４】
６７〜７２時間のインキュベーション時間が経過してから、１０μｌのＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）希釈標準溶液を（ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  ＭＴＴ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｋｉｔ  Ｃａｔ  ＃ＣＴ０１中の説明書に基づいて）各ウエルに添加して、細胞を４時間インキュベートした。次に、１００μｌのイソプロパノール／ＨＣｌ溶液を各ウエルに添加して、５７０ｎｍでの吸光度を測定した。検査したさまざまな卵巣癌細胞株のＭＴＴアッセイの結果を図９Ａ〜１６Ｃに示し、下記の表３にまとめた。
【００７５】
結果：
図９Ａ〜１６Ｃは、エブセレン、アロプリノール、エブセレン＋アロプリノール、およびパクリタキセル＋シスプラチンの存在下でインキュベートされたさまざまな細胞株の結果を示している。図９Ａ〜１６Ｃに示した結果を、下記の表３にまとめた。示されている結果から、１）エブセレンは卵巣癌細胞株に対して化学療法活性を持つこと；２）アロプリノールはエブセレンの化学療法活性を減少させないこと；および３）エブセレンは、シスプラチン＋パクリタキセルの化学療法活性を増強することが明らかである。
【００７６】
エブセレンは卵巣癌細胞株に対して化学療法活性を持つ。
【００７７】
表３に要約されているように、エブセレンは、検査した以下の７種類の哺乳動物卵巣癌細胞株のすべてに対して化学療法剤として作用する：ＥＳ−２（図９Ａ）、ＳＫＯＶ−３（図１０Ａ）、ＯＶＣＡＲ−３（図１１Ａ）、ＣＡＯＶ−３（図１２Ａ）、ＯＶ−９０（図１３Ａ）、ＴＯＶ−１１２Ｄ（図１４Ａ）、ＴＯＶ−２１Ｇ（図１５Ａ）およびｒＳＰＩ−ｔｕ（図１６Ａ）。検査した細胞株のすべてで、エブセレンは、２０μＭ〜１００μＭの濃度範囲で用量依存的に細胞毒性を誘導した。それに対し、図５に示すように、エブセレンは４７μＭで内耳蝸牛細胞に対し細胞毒性作用を持たないようにみえる。表３、表４および図９Ｂ、１０Ｂ、１１Ｂ、１２Ｂ、１３Ｂ、１４Ｂ、１５Ｂおよび１６Ｂに示すように、アロプリノールは、２０μＭ〜１００μＭの濃度範囲では、検査した哺乳動物卵巣癌細胞株のいずれにも毒性作用を持たなかった。さらに、表３、表４および図９Ｃ、１０Ｃ、１１Ｃ、１２Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｃおよび１６Ｃに示すように、アロプリノールがエブセレンと共存する場合、アロプリノールはエブセレンの化学療法効果を減少させなかった。
【００７８】
エブセレンおよびエブセレンとアロプリノールの併用剤は、卵巣癌細胞株に対するシスプラチン＋パクリタキセルの化学療法効果を増強する。
【００７９】
下記の表４にまとめたように、また図９Ａ〜１６Ｃに示すように、２０μＭ〜１００μＭの濃度範囲にあるエブセレン、およびエブセレンとアロプリノールの併用剤は、検査した７種類の哺乳動物卵巣癌細胞株、すなわちＥＳ−２（図９Ｃ）、ＳＫＯＶ−３（図１０Ｃ）、ＯＶＣＡＲ−３（図１１Ｃ）、ＣＡＯＶ−３（図１２Ｃ）、ＯＶ−９０（図１３Ｃ）、ＴＯＶ−１１２Ｄ（図１４Ｃ）、ＴＯＶ−２１Ｇ（図１５Ｃ）およびｒＳＰＩ−ｔｕ（図１６Ｃ）のすべてに対し、シスプラチン＋パクリタキセルの化学療法効果を増強する。
【００８０】
さらに、下記の表４に示すように、エブセレン、およびエブセレンとアロプリノールの併用剤は、検査した多剤化学療法耐性細胞株のそれぞれにおいて、シスプラチンおよびパクリタキセルの化学治療活性を増強したが、これら細胞株はＥＳ−２（図９Ａ、９Ｃ）、ＳＫＯＶ−３（図１０Ａ、１０Ｃ）およびＯＶＣＡＲ−３（図１１Ａ、１１Ｃ）などである。
【００８１】
【表３】
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【００８２】
【表４】
2008533021.tif 000006
本発明の好適な実施形態を例示および説明してきたが、当然のことながら、本発明の本質と範囲を逸脱するものでなければ、さまざまな変更を加えることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
添付の図面とともに下記の詳細な説明を参照することによって上記態様および本発明に付随する利点がよりよく理解できるようになるため、上記態様および本発明に付随する利点をより簡単に評価できるようになるはずである。
【図１】実施例１で説明されているように、培養培地中のシスプラチン濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。生細胞の数は、シスプラチン存在下で細胞を２４時間培養した後に数えた。
【図２】実施例１で説明されているように、培養培地中のシスプラチン濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。エブセレンは存在するが、シスプラチンは存在しない条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を上方のグラフで示す。エブセレンおよびシスプラチンが（濃度４３μＭで）共に存在する条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を下方のグラフで示す。
【図３】実施例１で説明されているように、培養培地中のアロプリノール濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。アロプリノールは存在するが、シスプラチンは存在しない条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を上方のグラフで示す。アロプリノールおよびシスプラチンが（濃度４３μＭで）共に存在する条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を下方のグラフで示す。
【図４】実施例１で説明されているように、培養培地中のアロプリノール濃度に対する生存培養ＮｕＴｕ−１９卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。アロプリノールおよびエブセレンは（濃度４７μＭで）存在するが、シスプラチンは存在しない条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を上方のグラフで示す。アロプリノールおよびエブセレン（濃度４７μＭ）ならびにシスプラチン（濃度４３μＭで）が共に存在する条件下で培養したＮｕＴｕ−１９細胞の生存率を下方のグラフで示す。
【図５】実施例２で説明されているように、４３μＭシスプラチン（１０）または４３μＭシスプラチン＋４７μＭエブセレン（１２）、または４７μＭエブセレン（１４）が存在する中、インビトロで培養されたラット蝸牛内有毛細胞の数を示すグラフである。
【図６】実施例３で説明されているように、食塩水およびＤＭＳＯ（賦形剤対照）（２０）、またはエブセレン（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）存在下でシスプラチン（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）（２２）によって処理されたラットの８ｋＨｚ、１６ｋＨｚ、２４ｋＨｚ、および３２ｋＨｚにおける聴力の永久閾値移動（ＰＴＳ）を示す。
【図７】実施例３で説明されているように、アロプリノール（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）存在下（３０）、またはアロプリノール（用量８ｍｇ／ｋｇ体重）とエブセレン（用量８ｍｇ／ｋｇ体重）の共存下（３２）でシスプラチン（用量１６ｍｇ／ｋｇ体重）により処理されたラットの８ｋＨｚ、１６ｋＨｚ、２４ｋＨｚ、および３２ｋＨｚにおける聴力の永久閾値移動（ＰＴＳ）を示す。
【図８Ａ】実施例３で説明されているように、シスプラチン、食塩水およびＤＭＳＯを合わせたもので処理したラットの左蝸牛の先端からの距離に対してプロットされた、失われた蝸牛外有毛細胞の割合を示す。
【図８Ｂ】実施例３で説明されているように、シスプラチンおよびエブセレンを合わせたもので処理したラットの左蝸牛の蝸牛先端からの距離に対してプロットされた、失われた蝸牛外有毛細胞の割合を示す。
【図９Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＥＳ−２明細胞癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。ＥＳ−２細胞は、実施例５で説明されているように、エブセレン単独、シスプラチン（４μＭ）およびパクリタキセル（７．２ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（４μＭ）およびパクリタキセル（７．２ｎＭ）を合わせたものの存在下で培養した。
【図９Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＥＳ−２明細胞癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。ＥＳ−２細胞は、実施例５で説明されているように、アロプリノール単独、シスプラチン（４μＭ）およびパクリタキセル（７．２ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（４μＭ）およびパクリタキセル（７．２ｎＭ）を合わせたものの存在下で培養した。
【図９Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＥＳ−２明細胞癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。ＥＳ−２細胞は、実施例５で説明されているように、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（４μＭ）およびパクリタキセル（７．２ｎＭ）、またはエブセレン、アロプリノール、シスプラチン（４μＭ）およびパクリタキセル（７．２ｎＭ）を合わせたものの存在下で培養した。
【図１０Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＳＫＯＶ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＳＫＯＶ−３細胞は、エブセレン、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（１０ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（１０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１０Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＳＫＯＶ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＳＫＯＶ−３細胞はアロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（１０ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（１０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１０Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＳＫＯＶ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＳＫＯＶ−３細胞はエブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（１０ｎＭ）、またはエブセレン、アロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（１０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１１Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＯＶＣＡＲ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＯＶＣＡＲ−３細胞は、エブセレン、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．８ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．８ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１１Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＯＶＣＡＲ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＯＶＣＡＲ−３細胞は、アロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．８ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．８ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１１Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＯＶＣＡＲ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＯＶＣＡＲ−３細胞は、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．８ｎＭ）、またはエブセレン、アロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．８ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１２Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＣＡＯＶ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＣＡＯＶ−３細胞は、エブセレン、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．７６ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．７６ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１２Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＣＡＯＶ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＣＡＯＶ−３細胞は、アロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．７６ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．７６ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１２Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＣＡＯＶ−３腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＣＡＯＶ−３細胞は、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．７６ｎＭ）、またはエブセレン、アロプリノール、シスプラチン（１．４μＭ）およびパクリタキセル（１．７６ｎＭ）を合わせたもののいずれか存在下で培養した。
【図１３Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＯＶ−９０漿液性乳頭状腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＯＶ−９０細胞は、エブセレン、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（３８．５ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（３８．５ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１３Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＯＶ−９０漿液性乳頭状腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＯＶ−９０細胞は、アロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（３８．５ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（３８．５ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１３Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＯＶ−９０漿液性乳頭状腺癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＯＶ−９０細胞は、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（３８．５ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（４．４μＭ）およびパクリタキセル（３８．５ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１４Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＴＯＶ−１１２Ｄ腺癌／類内膜癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＴＯＶ−１１２Ｄ細胞は、エブセレン、シスプラチン（１．０５μＭ）およびパクリタキセル（２．６ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（１．０５μＭ）およびパクリタキセル（２．６ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１４Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＴＯＶ−１１２Ｄ腺癌／類内膜癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＴＯＶ−１１２Ｄ細胞は、アロプリノール、シスプラチン（１．０５μＭ）およびパクリタキセル（２．６ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（１．０５μＭ）およびパクリタキセル（２．６ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１４Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＴＯＶ−１１２Ｄ腺癌／類内膜癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＴＯＶ−１１２Ｄ細胞は、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（１．０５μＭ）およびパクリタキセル（２．６ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（１．０５μＭ）およびパクリタキセル（２．６ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１５Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ヒトＴＯＶ−２１Ｇ腺癌／明細胞癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＴＯＶ−２１Ｇ細胞は、エブセレン、シスプラチン（４．８μＭ）およびパクリタキセル（８０ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（４．８μＭ）およびパクリタキセル（８０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１５Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＴＯＶ−２１Ｇ腺癌／明細胞癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＴＯＶ−２１Ｇ細胞は、アロプリノール、シスプラチン（４．８μＭ）およびパクリタキセル（８０ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（４．８μＭ）およびパクリタキセル（８０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１５Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ヒトＴＯＶ−２１Ｇ腺癌／明細胞癌卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ＴＯＶ−２１Ｇ細胞は、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（４．８μＭ）およびパクリタキセル（８０ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（４．８μＭ）およびパクリタキセル（８０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１６Ａ】エブセレンの濃度に対して、生きた培養ラットｒＳＰＩ−ｔｕ上皮性卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ｒＳＰＩ−ｔｕ細胞は、エブセレン、シスプラチン（１．５μＭ）およびパクリタキセル（９０ｎＭ）、またはエブセレン、シスプラチン（１．５μＭ）およびパクリタキセル（９０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１６Ｂ】アロプリノールの濃度に対して、生きた培養ラットｒＳＰＩ−ｔｕ上皮性卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ｒＳＰＩ−ｔｕ細胞は、アロプリノール、シスプラチン（１．５μＭ）およびパクリタキセル（９０ｎＭ）、またはアロプリノール、シスプラチン（１．５μＭ）およびパクリタキセル（９０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１６Ｃ】エブセレンおよびアロプリノールの濃度に対して、生きた培養ラットｒＳＰＩ−ｔｕ上皮性卵巣癌細胞の割合をプロットしたものを示す。実施例５で説明されているように、ｒＳＰＩ−ｔｕ細胞は、エブセレンおよびアロプリノール、シスプラチン（１．５μＭ）およびパクリタキセル（９０ｎＭ）、またはエブセレン、アロプリノール、シスプラチン（１．５μＭ）およびパクリタキセル（９０ｎＭ）を合わせたものいずれかの存在下で培養した。
【図１】
2008533021.tif 000007
【図２】
2008533021.tif 000008
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2008533021.tif 000012
【図７】
2008533021.tif 000013
【図８Ａ】
2008533021.tif 000014
【図８Ｂ】
2008533021.tif 000015
【図９Ａ】
2008533021.tif 000016
【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
2008533021.tif 000019
【図１０Ｂ】
2008533021.tif 000020
【図１０Ｃ】
2008533021.tif 000021
【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
2008533021.tif 000023
【図１１Ｃ】
2008533021.tif 000024
【図１２Ａ】
2008533021.tif 000025
【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
2008533021.tif 000027
【図１３Ａ】
2008533021.tif 000028
【図１３Ｂ】
2008533021.tif 000029
【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ】
2008533021.tif 000031
【図１４Ｂ】
2008533021.tif 000032
【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
2008533021.tif 000035
【図１５Ｃ】
2008533021.tif 000036
【図１６Ａ】
2008533021.tif 000037
【図１６Ｂ】
2008533021.tif 000038
【図１６Ｃ】
2008533021.tif 000039
【国際調査報告】
2008533021.tif 000040