(57)【要約】  本出願はHib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在する前記免疫原性組成物を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
【請求項２】
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートのそれぞれの糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが血清群A、B、C、W135およびYからなる群より選択される菌株由来の髄膜炎菌莢膜糖類を含む、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群C莢膜糖類（MenC）を含む、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群Y莢膜糖類（MenY）を含む、請求項３または４に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群A莢膜糖類（MenA）を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群W135莢膜糖類（MenW）を含む、請求項３〜６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
髄膜炎菌血清群B外膜小胞調製物を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび33Fからなる群より選択される菌株由来の肺炎連鎖球菌莢膜糖類を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートがチフス菌Vi莢膜糖類を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
Hib糖類コンジュゲートの糖類用量が0.1〜9μg、1〜5μgまたは2〜3μgの糖類である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートのそれぞれの糖類用量が2〜20μg、3〜10μgまたは4〜7μgの糖類である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
Hib糖類コンジュゲートの糖類用量が、少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートの平均糖類用量の90％、75％または60％未満であるか、または20％〜60％であるかまたはほぼ50％である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
Hib糖類コンジュゲートの糖類用量が、少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートのそれぞれの糖類用量の90％、75％または60％未満であるか、または20％〜60％であるかまたはほぼ50％である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートと少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの２以上に用いられる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートとMenAコンジュゲートに用いられる、請求項３に記載の場合の請求項１５に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートとMenCコンジュゲートに用いられる、請求項３に記載の場合の請求項１５または１６に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートとMenYコンジュゲートに用いられる、請求項３に記載の場合の請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートとMenWコンジュゲートに用いられる、請求項３に記載の場合の請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートと肺炎連鎖球菌莢膜糖類コンジュゲートに用いられる、請求項８に記載の場合の請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートとチフス菌Vi莢膜糖類コンジュゲートに用いられる、請求項９に記載の場合の請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
Hib糖類がTT、DT、CRM197、TTの断片C、プロテインD、OMPCおよびニューモリシンからなる群より選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類がTT、DT、CRM197、TTの断片C、プロテインD、OMPCおよびニューモリシンからなる群より選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
Hib糖類コンジュゲート中のHib対担体タンパク質の比が1：5〜5：1（w/w）である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
Hib糖類コンジュゲート中のHib対担体タンパク質の比が1：1〜1：4、1：2〜1：3.5、またはほぼ1：3（w/w）である、請求項２４に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
Hib糖類がリンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
リンカーが二官能性である、請求項２６に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
リンカーが２つの反応性アミノ基を有する、請求項２７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
リンカーが２つの反応性カルボン酸基を有する、請求項２７に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
リンカーが１つの末端に反応性アミノ基をそして他の末端にカルボン酸基を有する、請求項２６に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
リンカーが4〜12個の炭素原子を有する、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３２】
リンカーがADHである、請求項２６または２７に記載の免疫原性組成物。
【請求項３３】
Hib糖類がCNBrまたはCDAPを用いて担体タンパク質またはリンカーにコンジュゲートされた、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３４】
担体タンパク質がカルボジイミド化学、任意にEDAC化学を用いてHib糖類またはリンカーにコンジュゲートされた、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３５】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全てが1：5〜5：1または1：1〜1：4（w/w）の糖類：担体比を有する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３６】
少なくとも２つのさらなる糖類の少なくとも1つが担体タンパク質と直接コンジュゲートしている、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３７】
２つのさらなる糖類の少なくとも1つがMenWおよび／またはMenY、MenWおよび／またはMenC、MenYおよび／またはMenC、またはMenWおよびMenCおよびMenYである、請求項３６に記載の免疫原性組成物。
【請求項３８】
少なくとも２つのさらなる糖類の少なくとも1つがCDAP化学により直接コンジュゲートされた、請求項３６または３７に記載の免疫原性組成物。
【請求項３９】
担体タンパク質に対するMenWおよび／またはY糖類の比が1：0.5〜1：2である、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４０】
担体タンパク質に対するMenC糖類の比が1：0.5〜1：2である、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４１】
少なくとも２つのさらなる糖類の１以上がリンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４２】
リンカーが二官能性である、請求項４１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４３】
リンカーが２つの反応性アミノ基を有する、請求項４２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４４】
リンカーが２つのカルボン酸基を有する、請求項４２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４５】
リンカーが１つの末端に反応性アミノ基および他の末端にカルボン酸基を有する、請求項４２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４６】
リンカーが4〜12個の炭素原子を有する、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４７】
リンカーがADHである、請求項４１または４２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４８】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類のそのまたはそれぞれの１以上がCDAP化学を介してリンカーとコンジュゲートされた、請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４９】
担体タンパク質がカルボジイミド化学、任意にEDAC化学を用いてリンカーとコンジュゲートされた、請求項４１〜４８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５０】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類のそのまたはそれぞれの１以上がリンカーとコンジュゲートされた後に、担体タンパク質がリンカーとコンジュゲートされた、請求項４１〜４９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５１】
MenAがリンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項４１〜５０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５２】
担体タンパク質に対するMenA糖類の比が1：2〜1：5である、請求項５８に記載の免疫原性組成物。
【請求項５３】
MenCがリンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項４１〜５２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５４】
担体タンパク質に対するMenC糖類の比が1：2〜1：5である、請求項５３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５５】
存在するMenA糖類が約50kDa、75kDa、100kDaを超える分子量または50〜100kDa、55〜90KDaまたは60〜80kDaの平均サイズを有する、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５６】
存在するMenC糖類が約50kDa、75kDa、100kDaを超える分子量または100〜200kDa、100〜150kDaまたは150〜200kDaの平均サイズを有する、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５７】
存在するMenY糖類が約50kDa、75kDa、100kDaを超える分子量または60〜190kDa、70〜180kDa、80〜170kDa、90〜160kDa、100〜150kDaまたは110〜140kDaの平均サイズを有する、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５８】
存在するMenW糖類が約50kDa、75kDa、100kDaを超える分子量または60〜190kDa、70〜180kDa、80〜170kDa、90〜160kDa、100〜150kDaまたは110〜140kDaの平均サイズを有する、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５９】
存在するMenCは少なくとも部分的にO-アセチル化され、反復ユニットの少なくとも30％が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６０】
存在するMenYは少なくとも部分的にO-アセチル化され、反復ユニットの少なくとも20％が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６１】
存在するMenWは少なくとも部分的にO-アセチル化され、反復ユニットの少なくとも30％が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている、請求項１〜６０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６２】
存在するMenAは少なくとも部分的にO-アセチル化され、反復ユニットの少なくとも50％が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている、請求項１〜６１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６３】
アルミニウム塩を含有しない、請求項１〜６２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６４】
アジュバントが使用されてない、請求項１〜６３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６５】
pH 7.0〜8.0に緩衝化されている、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６６】
請求項１〜６５のいずれか１項の免疫原性組成物および製薬上許容される賦形剤を含むワクチン。
【請求項６７】
百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、およびヘモフィルス-インフルエンザ菌が原因である疾患に対して宿主に保護を与えるための２つの多価免疫原性組成物を含む同時または連続投与用のワクチンキットであって、
破傷風トキソイド（TT）、ジフテリアトキソイド（DT）、および全細胞または無細胞性百日咳成分を含む第１の容器；ならびに
請求項１〜６５のいずれか１項の免疫原性組成物を含む第２の容器
から成る前記ワクチンキット。
【請求項６８】
第１の容器がさらに、任意に、リン酸アルミニウム上に吸着された肝炎B表面抗原を含む、請求項６７に記載のワクチンキット。
【請求項６９】
第１または第２の容器がさらに不活化したポリオウイルス（IPV）を含有する、請求項６７または６８に記載のワクチンキット。
【請求項７０】
請求項１〜６５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を作製する方法であって、Hib糖類コンジュゲートを少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートと混合して、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在する組成物を形成させるステップを含んでなる前記方法。
【請求項７１】
ヒト宿主を髄膜炎に対して免疫感作する方法であって、宿主に免疫保護用量の請求項１〜６９のいずれか１つの免疫原性組成物、ワクチンまたはキットを投与するステップを含んでなる前記方法。
【請求項７２】
ヒト宿主をヘモフィルス・インフルエンザ菌が原因である疾患に対して免疫感作する方法であって、宿主に免疫保護用量の請求項１〜６９のいずれか１つの免疫原性組成物、ワクチンまたはキットを投与するステップを含んでなる前記方法。
【請求項７３】
ヒト宿主を髄膜炎菌が原因である疾患に対して免疫感作する方法であって、宿主に免疫保護用量の請求項３〜６９のいずれか１つの免疫原性組成物、ワクチンまたはキットを投与するステップを含んでなり、その場合、少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが血清群A、B、C、W135およびYからなる群より選択される菌株由来の髄膜炎菌莢膜糖類を含む、前記方法。
【請求項７４】
髄膜炎の治療または予防に用いる、請求項１〜６９に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキット。
【請求項７５】
ヘモフィルス・インフルエンザ菌が原因である疾患の治療または予防に用いる、請求項１〜６９に記載のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキット。
【請求項７６】
髄膜炎菌が原因である疾患の治療または予防に用いる、少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートがMenA、MenB、MenC、MenWおよびMenYからなる群より選択される菌株由来の髄膜炎菌莢膜糖類を含む、請求項３〜６９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキット。
【請求項７７】
髄膜炎の治療または予防に用いる医薬品の製造における、請求項１〜６９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキットの使用。
【請求項７８】
ヘモフィルス・インフルエンザ菌が原因である疾患の治療または予防に用いる医薬品の製造における、請求項１〜６９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキットの使用。
【請求項７９】
髄膜炎菌が原因である疾患の治療または予防に用いる医薬品の製造における、少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートがMenA、MenB、MenC、MenWおよびMenYからなる群より選択される菌株由来の髄膜炎菌莢膜糖類を含む、請求項１〜６９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキットの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Hib糖類コンジュゲートと少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物およびワクチン、かかる免疫原性組成物およびワクチンを作製する方法、用途ならびに免疫原性組成物およびワクチンを用いて免疫感作する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌性多糖類は、特に担体タンパク質とコンジュゲートしているときに、ワクチンにおける使用に有効な免疫原であることが示されている。市販のコンジュゲートワクチンは、ヘモフィルス-インフルエンザb型菌（Hibtiter(登録商標)、Wyeth-Lederle）、肺炎球菌多糖類（Prevnar(登録商標)、Wyeth-Lederle）および髄膜炎菌多糖類（Meningitec(登録商標)、Wyeth-LederleおよびMenactra(登録商標)、Sanofi）に対するものが入手しうる。
【０００３】
Hibコンジュゲートおよびさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物およびワクチンも記載されている。例えば、WO 02/00249はHib PRPコンジュゲートおよびさらなる多糖類もしくはオリゴ糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物を開示しており、その場合、多糖類コンジュゲートはアジュバント、特にアルミニウム塩上に吸着されていない。提示された臨床試験結果は、全ての細菌性多糖類の同じ用量を用いている。
【０００４】
Chooらは、Pediatr. Infect.Dis.J. （2000） 19； 854-62において、HbOCとして公知の、ヘモフィルス-インフルエンザb型菌（hib）と混合した7価の肺炎球菌コンジュゲートワクチンによる若年小児の接種を記載している。投与されたhibコンジュゲートの用量は、投与された肺炎球菌多糖類コンジュゲートのそれぞれの用量より５倍高かった。
【発明の開示】
【０００５】
本発明はHibコンジュゲートとさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む複合ワクチンの提供であって、Hibコンジュゲートと他の細菌性多糖類コンジュゲートの用量の最適化によって、改善された免疫原性応答を誘発できる前記提供に関する。
従って、本発明の第１の態様は、Hib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの平均糖類用量より低い糖類用量で存在する前記免疫原性組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
詳細な説明
本発明の免疫原性組成物は、Hib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物であって、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの平均糖類用量より低い糖類用量で存在する前記免疫原性組成物を含む。あるいは、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートのそれぞれの糖類用量より低い糖類用量で存在する。例えば、Hibコンジュゲートの用量は、少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの平均または最低糖類用量より少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％または80％低くてもよい。
【０００７】
用語「糖類」は多糖類もしくはオリゴ糖類を含む。多糖類は細菌から単離されるか、または細菌から単離され、公知の方法（例えば、EP497524およびEP497525を参照）により、任意にミクロ流動化により、ある程度までサイジングする。多糖類は、多糖類サンプルの粘度を低下するおよび／またはコンジュゲート生成物の濾過性を改善するためにサイジングしてもよい。オリゴ糖類は反復ユニット数が低く（典型的には5〜30反復ユニット）、典型的には加水分解された多糖類である。
【０００８】
「平均用量」は、さらなる多糖類の全用量を加えかつさらなる多糖類の数により除することにより決定される。「用量」は、ヒトに投与される免疫原性組成物またはワクチンの量である。
【０００９】
多糖類は、任意に、細菌から単離した多糖類のサイズから1.5、2、4、6、8、10、12、14、16、18または20倍までサイジングする。
【００１０】
「x2までのファクターでサイジングする」は、多糖類のサイズを低下させるが、天然の多糖類のサイズの半分より大きいサイズを保持することを意図する方法で処理することを意味する。X3、x4などは同じように、すなわち、多糖類を、それぞれ、多糖類のサイズを低下させるが、天然の多糖類のサイズの3分の１、4分の１より大きいサイズを保持することを意図する方法で処理すると解釈されるものとする。
【００１１】
MALLSにより測定して、MenA糖類のサイズは例えば5〜200kDa、10〜20kDa、5〜10kDa、20〜30kDa、20〜40kDa、40〜80kDa、60〜80kDa、60〜70kDaまたは70〜80kDaである。
【００１２】
MenC糖類のサイズは例えば5〜200kDa、10〜20kDa、5〜10kDa、5〜15kDa、20〜50kDa、50〜100kDa、100〜150kDa、150〜210kDaである。
【００１３】
MenW糖類のサイズは例えば5〜200kDa、10〜20kDa、5〜10kDa、20〜50kDa、50〜100kDa、100〜150kDaまたは120〜140kDaである。
【００１４】
MenY糖類のサイズは例えば5〜200kDa、10〜20kDa、5〜10kDa、20〜50kDa、50〜100kDa、100〜140kDa、140〜170kDaまたは150〜160kDaである。
【００１５】
ある実施形態において、糖類の多分散度（polydispersity）は1〜1.5、1〜1.3、1〜1.2、1〜1.1または1〜1.05でありかつ担体タンパク質とコンジュゲーション後、コンジュゲートの多分散度は1.0〜2.0、1.0〜1.5、1.0〜1.2または1.5〜2.0である。全ての多分散度測定はMALLSによる。
髄膜炎菌糖類をMALLS分析するためには、２つのカラム（TSKG6000および5000PWxl TOSOH Bioscience）を組み合わせて用いてもよく、そして糖類を水中で溶出する。糖類を光散乱検出器（例えば、488nmの10mWアルゴンレーザーを装備したWyatt Dawn DSP）および干渉型屈折計（例えば、P100セルおよび498nm赤色フィルターを装備したWyatt Optilab DSP）を用いて検出する。
【００１６】
Hib糖類はヘモフィルス-インフルエンザb型菌のポリリボシルリン酸（PRP）莢膜多糖類もしくはオリゴ糖類である。
【００１７】
「少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲート」は、その糖類がHibと異なりかつお互いに異なる、２つの糖類コンジュゲートを意味する。少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートは、１以上の髄膜炎菌（Neisseria meningitidis)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)、A群連鎖球菌(Group A Streptococci)、B群連鎖球菌(Group B Streptococci)、チフス菌(S.typhi)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)または表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)由来であってもよい。ある実施形態において、免疫原性組成物は髄膜炎菌の血清群A、B、C、W135およびYの１以上に由来する莢膜多糖類もしくはオリゴ糖類を含む。さらなる実施形態は、肺炎連鎖球菌由来の莢膜多糖類もしくはオリゴ糖類を含む。肺炎球菌の莢膜多糖類もしくはオリゴ糖類抗原は、任意に、血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび33F（例えば、血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19Fおよび23Fから）から選択される。さらなる実施形態は、黄色ブドウ球菌の5型、8型または336莢膜多糖類もしくはオリゴ糖類を含む。さらなる実施形態は、表皮ブドウ球菌のI型、II型またはIII型莢膜多糖類を含む。さらなる実施形態は、チフス菌からのVi糖類（ポリまたはオリゴ糖類）を含む。さらなる実施形態は、B群連鎖球菌のIa型、Ic型、II型またはIII型莢膜多糖類またはオリゴ糖類を含む。さらなる実施形態は、A群連鎖球菌の莢膜多糖類またはオリゴ糖類を含み、任意にさらに少なくとも１つのMタンパク質または複数の型のMタンパク質を含む。ある実施形態において、本発明の免疫原性組成物はさらに、髄膜炎菌血清群Ｂからの抗原を含む。該抗原は、任意に、髄膜炎菌血清群Ｂ（MenB）からの莢膜多糖類またはサイジングしたそれからの多糖類もしくはオリゴ糖類である。該抗原は、任意に、EP301992、WO 01/09350、WO 04/14417、WO 04/14418およびWO 04/14419に記載の髄膜炎菌血清群Ｂからの外膜小胞調製物である。
【００１８】
ある実施形態において、少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートは、任意に、髄膜炎菌血清群C莢膜糖類（MenC）、血清群CおよびY莢膜糖類（MenCY）、血清群CおよびA莢膜糖類（MenAC）、血清群CおよびW莢膜糖類（MenCW）、血清群AおよびY莢膜糖類（MenAY）、血清群AおよびW莢膜糖類（MenAW）、血清群WおよびY莢膜糖類（MenWY）、血清群A、CおよびW莢膜糖類（MenACW）、血清群A、CおよびY莢膜糖類（MenACY）；血清群A、W135およびY莢膜糖類（MenAWY）、血清群C、W135およびY莢膜糖類（MenCWY）；または血清群A、C、W135およびY莢膜糖類（MenACWY）、血清群BおよびC莢膜糖類（MenBC）、血清群B、CおよびY莢膜糖類（MenBCY）、血清群B、CおよびA莢膜糖類（MenABC）、血清群B、CおよびW莢膜糖類（MenBCW）、血清群A、BおよびY莢膜糖類（MenABY）、血清群A、BおよびW莢膜糖類（MenABW）、血清群B、WおよびY莢膜糖類（MenBWY）、血清群A、B、CおよびW莢膜糖類（MenABCW）、血清群A、B、CおよびY莢膜糖類（MenABCY）；血清群A、B、W135およびY莢膜糖類（MenABWY）、血清群B、C、W135およびY莢膜糖類（MenBCWY）；または血清群A、B、C、W135およびY莢膜糖類（MenABCWY）を含む。
【００１９】
本発明の免疫原性組成物は、任意に、0.1〜9μg；1〜5μgまたは2〜3μgまたは、ほぼもしくは正確に2.5μgの糖類用量のHib糖類コンジュゲート、ならびに、2〜20μg、3〜10μg、または4〜7μgまたは、ほぼもしくは正確に5μgの用量の少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートのそれぞれを含有する。
【００２０】
「ほぼ」または「近似的に」は本発明の目的に対する所与の数字の多かれ少なかれ10％として定義される。
【００２１】
本発明の免疫原性組成物は、少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートの平均糖類用量の、例えば90％、80％、75％、70％、60％、50％、40％、30％、20％または10％未満であるHib糖類コンジュゲートの糖類用量を含有する。Hib糖類コンジュゲートの糖類用量は、少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートの平均糖類用量の、例えば20％〜60％、30％〜60％、40％〜60％または、ほぼもしくは正確に50％である。
【００２２】
本発明の免疫原性組成物は、少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートの最低糖類用量の、例えば90％、80％、75％、70％、60％、50％、40％、30％、20％または10％未満であるHib糖類コンジュゲートの糖類用量を含有する。Hib糖類コンジュゲートの糖類用量は、少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートの最低糖類用量の例えば、20％〜60％、30％〜60％、40％〜60％または、ほぼもしくは正確に50％である。
【００２３】
本発明のある実施形態において、２以上のさらなる糖類のそれぞれの用量は、任意に同じかまたは近似的に同じである。
【００２４】
本発明の免疫原性組成物の例は、次から成るかまたは次を含む組成物である。
【００２５】
任意に、1：2：2、1：2：1、1：4：2、1：6：3、1：3：3、1：4：4、1：5：5、1：6：6（w/w）の比の糖類用量の、HibコンジュゲートおよびMenAコンジュゲートおよびMenCコンジュゲート（任意に、MenAの糖類用量はMenCの糖類用量より大きい）。
【００２６】
任意に、1：2：2、1：2：1、1：4：2、1：4：1、1：8；4、1：6：3、1：3：3、1：4：4、1：5：5、1：6：6（w/w）の比の糖類用量の、HibコンジュゲートおよびMenCコンジュゲートおよびMenYコンジュゲート（任意に、MenCの糖類用量はMenYの糖類用量より大きい）。
【００２７】
任意に、1：2：2、1：2：1、1：4：2、1：4：1、1：8；4、1：6：3、1：3：3、1：4：4、1：5：5、1：6：6（w/w）の比の糖類用量の、HibコンジュゲートおよびMenCコンジュゲートおよびMenWコンジュゲート（任意に、MenCの糖類用量はMenWの糖類用量より大きい）。
【００２８】
任意に、1：2：2、1：2：1、1：4：2、1：4：1、1：8；4、1：6：3、1：3：3、1：4：4、1：5：5、1：6：6（w/w）の比の糖類用量の、HibコンジュゲートおよびMenAコンジュゲートおよびMenWコンジュゲート（任意に、MenAの糖類用量はMenWの糖類用量より大きい）。
【００２９】
任意に、1：2：2、1：2：1、1：4：2、1：4：1、1：8：4、1：6：3、1：3：3、1：4：4、1：5：5、1：6：6 （w/w）の比の糖類用量の、HibコンジュゲートおよびMenAコンジュゲートおよびMenYコンジュゲート（任意に、MenAの糖類用量はMenYの糖類用量より大きい）。
【００３０】
任意に、1：2：2、1：2：1、1：1：2、1：4：2、1：2：4、1：4：1、1：1：4、1：3；6、1：1：3、1：6：3、1：3：3、1：4：4、1：5：5、1：6：6（w/w）の比の糖類用量の、HibコンジュゲートおよびMenWコンジュゲートおよびMenYコンジュゲート（任意に、MenYの糖類用量はMenWの糖類用量より大きい）。
【００３１】
本発明の医薬組成物に含まれるHibおよび少なくとも２つのさらなる糖類は担体タンパク質にコンジュゲートされていて、かかる担体タンパク質としては、破傷風トキソイド、破傷風トキソイド断片C、無毒の破傷風毒素突然変異体、ジフテリアトキソイド、CRM197、他の無毒のジフテリア毒素突然変異体［例えば、CRM176、CRM197、CRM228、CRM45（Uchidaら, J. Biol. Chem. 218； 3838-3844、1973）；NichollsおよびYoule, Genetically Engineered Toxins, Frankel編, Maecel Dekker Inc、1992に記載のCRM9、CRM45、CRM102、CRM103およびCRM107ならびに他の突然変異；米国特許第4709017号または米国特許第4950740号に開示のGlu-148の欠失またはGlu-148のAsp、GlnまたはSerへのおよび／またはAla-158のGlyへの突然変異ならびに他の突然変異；米国特許第5917017号または米国特許第6455673号に開示の少なくとも１以上の残基Lys516、Lys526、Phe530および／またはLys534の突然変異ならびに他の突然変異；または米国特許第5843711号に開示の断片］、肺炎球菌ニューモリシン、OMPC（通常、髄膜炎菌血清群Bから抽出される髄膜炎菌外膜タンパク質-EP0372501）、合成ペプチド（EP0378881、EP0427347）、熱ショックタンパク質（WO 93/17712、WO 94/03208）、百日咳タンパク質（WO 98/58668、EP0471177）、サイトカイン、リンホカイン、成長因子またはホルモン（WO 91/01146）、様々な病原体由来の抗原からの複数のヒトCD4＋T細胞エピトープを含む人工タンパク質（Falugiら, (2001) Eur J Immunol 31； 3816-3824）例えば、N19タンパク質（Baraldoiら, (2004) Infect Immun 72； 4884-7）、肺炎球菌表面タンパク質PspA（WO 02/091998）、ニューモリシン（Kuoら, (1995) Infect Immun 63; 2706-13）、鉄摂取タンパク質（WO 01/72337）、C. difficile菌毒素AまたはB（WO 00/61761）またはプロテインD（米国特許第6342224号）などが挙げられる。
【００３２】
ある実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、Hibコンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートにおいて、任意に、Hibコンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートのそれぞれ（例えば、免疫原性組成物中に存在する全ての他の糖類コンジュゲート）において前記担体タンパク質（独立して選択される）を用いる。
【００３３】
ある実施形態において、免疫原性組成物は、任意に、Hib糖類コンジュゲートおよびMenA多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートおよびMenC多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートおよびMenW多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートおよびMenY多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenAおよびMenC多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenAおよびMenW多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenAおよびMenY多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenCおよびMenW多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenCおよびMenY多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenWおよびMenY多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenA、MenCおよびMenW多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenA、MenCおよびMenY多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenA、MenWおよびMenY多糖類コンジュゲート、Hib糖類コンジュゲートならびにMenC、MenWおよびMenY多糖類コンジュゲート、またはHib糖類コンジュゲートならびにMenA、MenC、MenWおよびMenY多糖類コンジュゲートを含む。
【００３４】
ある実施形態において、単一の担体タンパク質が２以上の糖類抗原を保持してもよい（WO 04/083251）。例えば、単一の担体タンパク質を、HibおよびMenA、HibおよびMenC、HibおよびMenW、HibおよびMenY、MenAおよびMenC、MenAおよびMenW、MenAおよびMenY、MenCおよびMenW、MenCおよびMenYまたはMenWおよびMenYとコンジュゲートさせてもよい。
【００３５】
ある実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、破傷風トキソイド（TT）、ジフテリアトキソイド（DT）、CRM197、TTの断片CおよびプロテインDからなる群より選択される担体タンパク質とコンジュゲートしたHib糖類を含む。
【００３６】
Hibおよび少なくとも２つのさらなる糖類に対する担体タンパク質がTTまたはその断片である場合、担体の全用量は2.5〜25μg、3〜20μg、4〜15μg、5〜12.5μg、15〜20μg、16〜19μgまたは17〜18μgである。
【００３７】
ある実施形態において、本発明の免疫原性組成物はTT、DT、CRM197、TTの断片CおよびプロテインDからなる群より選択される担体タンパク質とコンジュゲーションした少なくとも２つのさらなる細菌性糖類を含む。
【００３８】
本発明の免疫原性組成物は、任意に、1：5〜5：1、1：2〜2：1、1：1〜1：4、1：2〜1：3.5、または、ほぼもしくは正確に1：2.5または1：3（w/w）のHib：担体タンパク質の比を有するHib糖類コンジュゲートを含む。
【００３９】
本発明の免疫原性組成物は、任意に、少なくとも１つの、1：5〜5：1、1：2〜5：1、1：0.5〜1：2.5または1：1.25〜1：2.5（w/w）のMen糖類：担体タンパク質の比を有する髄膜炎菌糖類（例えばMenAおよび／またはMenCおよび／またはMenWおよび／またはMenY）コンジュゲートを含む。
【００４０】
コンジュゲートにおける糖類：担体タンパク質の比（w/w）は、無菌化したコンジュゲートを用いて決定することができる。タンパク質の量はLowryアッセイ（例えば、Lowryら, (1951) J. Biol. Chem. 193、265-275またはPetersonら, Analytical Biochemistry 100, 201-220 (1979)）を用いて決定し、そして糖類の量はICP-OES（誘導結合高周波プラズマ発光分光分析装置）を用いてMenAを、DMAPアッセイを用いてMenCを、そしてレゾルシノールアッセイ（Monsignyら, (1988) Anal. Biochem. 175、525-530）を用いてMenWおよびMenYを決定する。
【００４１】
本発明のある実施形態、免疫原性組成物において、Hib糖類は担体タンパク質とリンカー、例えば二官能性リンカーを介してコンジュゲートしている。リンカーは、任意に、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であり、例えば、反応性アミノ基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基、または２つの反応性カルボン酸基を有する。リンカーは、例えば4〜20、4〜12、5〜10個の炭素原子を有する。リンカーはADHであってもよい。他のリンカーには、B-プロピオアミド（WO 00/10599）、ニトロフェニル-エチルアミン（Gever ら, （1979） Med. Microbiol. Immunol. 165； 171-288）、ハロアルキルハロゲン化物（米国特許第4057685号）グリコシド連鎖（米国特許第4673574号、米国特許第4808700号）および6-アミノカプロン酸（米国特許第4459286号）が含まれる。
【００４２】
本発明の免疫原性組成物中に存在する糖類コンジュゲートはいずれかの公知のカップリング技法により調製することができる。例えば、糖類をチオエーテル連鎖を介してカップリングさせることができる。コンジュゲーション方法は、1-シアノ-4-ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（CDAP）を用いて糖類のシアン酸エステルを生成することによる活性化に依ってもよい。活性化した糖類を次いで直接またはスペーサー（リンカー）基を介して、担体タンパク質上のアミノ基とカップリングさせることができる。任意に、シアン酸エステルをヘキサンジアミンまたはADHとカップリングし、アミノ誘導体化した糖類を、チオエーテル連鎖の形成に関わるヘテロライゲーション化学を用いて担体タンパク質とコンジュゲートするか、またはカルボジイミド（例えば、EDACまたはEDC）化学を用いて担体タンパク質とコンジュゲートする。かかるコンジュゲートは、PCT公開出願WO 93/15760 Uniformed Services UniversityおよびWO 95/08348およびWO 96/29094に記載されている。
【００４３】
他の好適な技法は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、p-ニトロ安息香酸、N-ヒドロキシスクシンイミド、S-NHS、EDC、TSTUを用いる。WO 98/42721に多数記載されている。コンジュゲーションは、糖類のヒドロキシル基のCDIとの反応により形成できるカルボニルリンカー（Bethellら, J. Biol. Chem. 1979、254； 2572-4、Hearnら, J. Chromatogr. 1981. 218； 509-18）と次のタンパク質との反応に関わってもよい。これは、アノマー端末の一級ヒドロキシル基への還元、場合による一級ヒドロキシル基の保護／脱保護、一級ヒドロキシル基のCDIとの反応によるCDIカーバメート中間体の生成、およびCDIカーバメート中間体のタンパク質上のアミノ基とのカップリングに関わりうる。
【００４４】
コンジュゲートはまた、米国特許第4365170号（Jennings）および米国特許第4673574号（Anderson）に記載の、直接還元アミノ化方法により調製してもよい。他の方法は、EP-0-161-188、EP-208375および EP-0-477508に記載されている。
【００４５】
さらなる方法は、臭化シアン（またはCDAP）活性化したアジピン酸ヒドラジド（ADH）を用いて誘導体化した糖類の、例えばEDACを用いる、カルボジイミド縮合による担体タンパク質へのカップリング（Chu C.ら, Infect. Immunity, 1983 245 256）に関わる。
【００４６】
ある実施形態においては、糖類上のヒドロキシル基をタンパク質上のアミノまたはカルボン酸基と直接または間接に（リンカーを介して）連結させる。リンカーが存在する場合、糖類上のヒドロキシル基を、任意に、リンカー上のアミノ基と、例えば CDAP コンジュゲーションを用いて連結する。リンカー、例えばADH中のさらなるアミノ基を、タンパク質上のカルボン酸基と、例えば、カルボジイミド化学を用いることにより、例えば、EDACを用いることによりコンジュゲートしてもよい。ある実施形態においては、Hibまたは少なくとも２つのさらなる糖類を最初にリンカーとコンジュゲートした後に、リンカーを担体タンパク質とコンジュゲートする。
【００４７】
ある実施形態においては、Hib糖類を、CNBr、またはCDAP、またはCDAPとカルボジイミド化学（EDACなど）の組合わせ、またはCNBrとカルボジイミド化学（EDACなど）の組合わせを用いて担体タンパク質とコンジュゲートする。場合により、Hibを、CNBrおよびカルボジイミド化学（EDACなどの）を用いてコンジュゲートする。例えば、CNBrを用いて糖類とリンカーを接合し、次いでカルボジイミド化学を用いてリンカーを担体タンパク質と接合する。
【００４８】
ある実施形態においては、少なくとも２つのさらなる糖類の少なくとも1つを担体タンパク質、任意に、MenWおよび／またはMenYおよび／またはMenC糖類（s）を担体タンパク質と直接コンジュゲートする。例えばMenW；MenY；MenC；MenWおよびMenY；MenWおよびMenC；MenYおよびMenC；またはMenW、MenYおよびMenCを担体タンパク質と直接連結する。任意に、少なくとも２つのさらなる糖類の少なくとも1つをCDAPにより直接コンジュゲートする。例えばMenW；MenY；MenC；MenWおよびMenY；MenWおよびMenC；MenYおよびMenC；またはMenW、MenYおよびMenCをCDAPにより担体タンパク質と直接連結する。（WO 95/08348およびWO 96/29094を参照）。
【００４９】
ある実施形態において、とりわけこれらの糖類をタンパク質と、任意にCDAPを用いて、直接連結する場合、MenWおよび／またはY糖類-対-担体タンパク質の比は、1：0.5〜1：2（w/w）であり、またはMenC糖類-対-担体タンパク質の比は1：0.5〜1：2または1：1.25〜1：1.5または1：0.5〜1：1（w/w）である。
【００５０】
ある実施形態において、少なくとも２つのさらなる糖類の少なくとも1つはリンカー、例えば二官能性リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている。リンカーは、任意にヘテロ二官能性またはホモ二官能性であり、例えば反応性アミノ基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基および２つの反応性カルボン酸基を有する。リンカーは例えば、4〜20、4〜12、5〜10個の炭素原子を有する。リンカーはADHであってもよい。
【００５１】
ある実施形態において、MenA；MenC；またはMenAおよびMenCは担体タンパク質とリンカーを介してコンジュゲートしている。
【００５２】
ある実施形態において、さらなる糖類は、担体タンパク質とリンカーを介してCDAPおよびEDACを用いてコンジュゲートしている。例えば、MenA；MenC；またはMenAおよびMenCは、前記の通り、担体タンパク質とリンカー（例えば、ADHのようにその両末端の２つのアミノ基をもつ）を介してCDAPおよびEDACを用いてコンジュゲートしている。例えば、CDAPを用いて糖類をリンカーとコンジュゲートし、かつEDACを用いてリンカーをタンパク質とコンジュゲートしている。任意に、リンカーを介するコンジュゲーションにより、MenA；MenC；またはMenAおよびMenCに対して、1:0.5〜1:6；1:1〜1:5；または1:2〜1:4の糖類-対-担体タンパク質の比を得る。
【００５３】
本発明のある実施形態において、免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートした血清群A、C、WおよびYの少なくとも１、２、３または４つからの髄膜炎菌莢膜多糖類を含み、その場合、少なくとも１、２、３または４つまたはそれぞれの髄膜炎菌多糖類は天然の多糖類であるかまたはx2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9、x10またはx20までのファクターでサイジングされている。例えば、少なくとも１、２、３または４つまたはそれぞれの髄膜炎菌多糖類の平均サイズは50kDa、60kDa、75kDa、100kDa、110kDa、120kDaまたは130kDaより大きい。
【００５４】
「天然の多糖類」は、多糖類のサイズを低下することを目的とする方法で処理されてない多糖類を意味する。
【００５５】
本発明のある態様において、免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートした血清群A、C、WおよびYの少なくとも１、２、３または４つからの髄膜炎菌莢膜多糖類を含み、その場合、少なくとも１、２、３または４つまたはそれぞれの髄膜炎菌多糖類は天然の多糖類である。
【００５６】
本発明のある態様において、免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートした血清群A、C、WおよびYの少なくとも１、２、３または４つからの髄膜炎菌莢膜多糖類を含み、その場合、少なくとも１、２、３または４つまたはそれぞれの髄膜炎菌多糖類はx2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9またはx10までのファクターでサイジングされている。
【００５７】
ある実施形態において、存在する少なくとも１、２、３または４つまたはそれぞれの髄膜炎菌多糖類の平均サイズは、MALLSで測定して、50KDa〜1500kDa、50kDa〜500kDa、50kDa〜300KDa、101kDa〜1500kDa、101kDa〜500kDa、101kDa〜300kDaである。
【００５８】
ある実施形態において、存在するMenA糖類は、50〜500kDa、50〜100kDa、100〜500kDa、55〜90KDa、60〜70kDaまたは70〜80kDaまたは60〜80kDaの分子量を有する。
【００５９】
ある実施形態において、存在するMenC糖類は100〜200kDa、50〜100kDa、100〜150kDa、101〜130kDa、150〜210kDaまたは180〜210kDaの分子量を有する。
【００６０】
ある実施形態において、存在するMenY糖類は、60〜190kDa、70〜180kDa、80〜170kDa、90〜160kDa、100〜150kDaまたは110〜140kDa、50〜100kDa、100〜140kDa、140〜170kDaまたは150〜160kDaの分子量を有する。
【００６１】
ある実施形態において、存在するMenW糖類は、60〜190kDa、70〜180kDa、80〜170kDa、90〜160kDa、100〜150kDa、110〜140kDa、50〜100kDaまたは120〜140kDaの分子量を有する。
【００６２】
糖類の分子量は、コンジュゲーション前に測定した多糖類の分子量を意味し、MALLSにより測定される。
【００６３】
ある実施形態において、存在するいずれかの髄膜炎菌糖類は天然の多糖類、または正常な抽出過程においてサイズを低下させた天然の多糖類である。
ある実施形態において、存在するいずれかの髄膜炎菌糖類は、機械的切断により、例えば、ミクロ流動化または超音波処理によりサイジングしたものである。ミクロ流動化および超音波処理は、より大きい天然の多糖類を、濾過可能なコンジュゲートを提供するために十分なサイズに低下させる利点を有する。
ある実施形態において、糖類の多分散度は1〜1.5、1〜1.3、1〜1.2、1〜1.1または1〜1.05であり、そして、担体タンパク質とのコンジュゲーション後に、コンジュゲートの多分散度は1.0〜2,5、1.0〜2.0.1.0〜1.5、1.0〜1.2、1.5〜2.5、1.7〜2.2または1.5〜2.0である。全ての多分散度はMALLSにより測定する。
髄膜炎菌糖類のMALLS分析については、２つのカラム（TSKG6000および5000PWxl、TOSOH Bioscience）を組合わせて使用してもよく、そして糖類を水中に溶出させる。糖類は光散乱検出器（例えば、488nmの10mWアルゴンレーザーを装備したWyatt Dawn DSP）および干渉型屈折計（例えば、P100セルおよび498nmの赤色フィルターを装備したWyatt Optilab DSP）を用いて検出する。
【００６４】
ある実施形態においては、存在するMenA糖類は、少なくとも部分的にO-アセチル化され、例えば少なくとも反復ユニットの50％、60％、70％、80％、90％、95％または98％が少なくとも１つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は少なくともO-3位置に存在する。
【００６５】
ある実施形態において、存在するMenC糖類は、少なくとも部分的にO-アセチル化され、例えば少なくとも（α2→9）連結のNeuNAc反復ユニットの少なくとも30％.40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または98％が少なくとも１つまたは２つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、例えば、少なくともO-7および／またはO-8位置に存在する。
【００６６】
ある実施形態において、存在するMenW糖類は、少なくとも部分的にO-アセチル化され、例えば少なくとも反復ユニットの30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または98％が少なくとも１つまたは２つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、例えば、少なくともO-7および／またはO-9位置に存在する。
【００６７】
ある実施形態において、存在するMenY糖類は、少なくとも部分的にO-アセチル化され、例えば少なくとも反復ユニットの40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％または98％が少なくとも１つまたは２つの位置においてO-アセチル化されている。O-アセチル化は、例えば、少なくともO-7および／またはO-9位置に存在する。
【００６８】
O-アセチル化の百分率はO-アセチル化を含有する反復ユニットの百分率を意味する。これは、コンジュゲートする前および／または後の糖類で測定することができる。
【００６９】
本発明のさらなる態様は、本発明の免疫原性組成物および製薬上許容される賦形剤を含むワクチンである。
【００７０】
任意に、免疫原性組成物またはワクチンは、免疫原に対する免疫応答を増強するために十分な量のアジュバントを含有する。好適なアジュバントとしては、限定されるものでないが、アルミニウム塩（リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、スクワレン混合物（SAF-1）、ムラミルペプチド、サポニン誘導体、放線菌細胞壁調製物、モノホスホリル脂質A、ミコール酸誘導体、非イオン性ブロックコポリマー界面活性剤、QuilA、コレラ毒Bサブユニット、ポリホスファゼンおよび誘導体、および、例えばTakahashi ら （1990） Nature 344：873-875に記載の免疫刺激性コンジュゲート（ISCOM）が挙げられる。
【００７１】
以上考察したHibMen組合わせについては、いずれかのアルミニウム塩アジュバントまたはいずれのアジュバントも全く使用しないことが有利でありうる。
【００７２】
ある実施形態において、免疫原性組成物は、リンカーを介して破傷風トキソイドとコンジュゲートしたHib糖類、および直接もしくはリンカーを介して破傷風トキソイドとコンジュゲートしたMenC糖類および破傷風トキソイドとコンジュゲートしたMenY糖類を含む。
【００７３】
ある実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、pH7.0〜8.0、pH7.2〜7.6または、ほぼもしくは正確に、pH7.4に緩衝化、または調節されている。
【００７４】
本発明の免疫原性組成物またはワクチンは、任意に、例えば、スクロースまたはトレハロースなどのポリオールの存在のもとで凍結乾燥される。
【００７５】
全ての免疫原性組成物またはワクチンについて、免疫原の免疫学的に有効な量は実験によって決定しなければならない。考慮すべき因子としては、免疫原性、免疫原をアジュバントもしくは担体タンパク質もしくは他の担体と複合するかまたは共有結合させるかどうか、投与の経路、および投与する免疫感作用量の数が挙げられる。かかる因子はワクチン技術の分野で公知であり、不要な実験をすることなくかかる決定を行うことは十分に免疫関係者の技能に包含される。
【００７６】
活性薬は、本発明の医薬組成物またはワクチン中に様々な濃度で存在しうる。典型的には、その物質の最小濃度はその意図する用途を達成するために十分な量である一方、最大濃度は、最初の混合物中に溶液でまたは均一に懸濁して残りるうる最大量である。例えば、治療薬の最小量は単一の治療上有効な用量を提供しうる量である。生理活性物質について、最小濃度は再構成したときに生理活性に必要な量であり、最大濃度は均一な懸濁液を維持することができない点である。単一投与単位の場合、その量は単一治療に施用する量である。一般的に、各用量は1〜100μg、例えば5〜50μgまたは5〜25μgのタンパク質抗原を含みうると予想される。ある実施形態において、個々の細菌性糖類の用量は10〜20μg、10〜5μg、5〜2.5μgまたは2.5〜1μgである。その物質の好ましい量は、物質毎に変化するが、当業者は容易に決定しうる。
【００７７】
本発明のワクチン調製物は、全身または粘膜経路を介して前記ワクチンを投与する手法により、哺乳動物（例えば、ヒト患者）を保護または治療するために利用することができる。これらの投与は、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下経路を介する注入；または、経口／消化、呼吸器、尿生殖器管への粘膜を介する投与を含みうる。肺炎または中耳炎を治療するためにはワクチンの鼻腔内投与は好ましい（肺炎球菌の鼻咽頭保因をより効果的に防止し、そして、その最初の段階に感染を減弱化できる）。本発明のワクチンを単一用量で投与することはできるが、その諸成分を一緒に同時に、または異なる時点に共投与してもよい（例えば、もし糖類がワクチン中に存在すれば、これらを別々に、同時にまたは細菌性タンパク質ワクチンの投与後1〜2週に投与して、お互いに関する免疫応答が最適となるように調整してもよい）。単一投与の経路だけでなく、２つの異なる投与経路を用いることができる。例えば、ウイルス抗原をID（皮内）投与してもよい一方、細菌性タンパク質をIM（筋肉内）またはIN（鼻腔内）投与してもよい。もし糖類が存在すれば、それらをIM（またはID）投与してもよく、そして細菌性タンパク質をIN（またはID）投与してもよい。さらに、本発明のワクチンを、初回刺激投与にはIM投与しかつブースター投与にはIN投与してもよい。
【００７８】
ワクチン調製の概要は、Vaccine Design, "The subunit and adjuvant approach（サブユニットおよびアジュバント手法）", Powell M.F. & Newman M.J.編, (1995) Plenum Press New Yorkに記載されている。リポソーム内のカプセル封入は、Fullerton、米国特許第4,235,877号に記載されている。
【００７９】
本発明のさらなる態様は、同時または逐次投与用のワクチンキットであって、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、ヘモフィルス・インフルエンザ菌および髄膜炎菌が原因の疾患に対する保護を宿主に与える２つの多価免疫原性組成物を含むワクチンキットである。例えば、前記キットは、任意に、
破傷風トキソイド（TT）、ジフテリアトキソイド（DT）、および全細胞または無細胞性百日咳成分の１つ以上を含む第１の容器、
ならびに
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲート、
または
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全てのそれぞれより低い糖類用量で（例えば、その組成中に存在するいずれの糖類より低い糖類容量で）存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む第２の容器から成る。
【００８０】
Hibコンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの例は、前記の通りである。
【００８１】
本発明のさらなる態様は、同時または逐次投与用のワクチンキットであって、肺炎連鎖球菌（S.pneumoniae)、ヘモフィルス・インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae)および髄膜炎菌(Neisseria meningitides)が原因である疾患に対して宿主に保護を与える２つの多価免疫原性組成物を含むワクチンキットである。例えば前記キットは、任意に、
担体タンパク質と肺炎連鎖球菌由来の莢膜糖類［ここで、莢膜糖類は、任意に、1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび 33Fからなる群より選択される肺炎球菌血清型由来である］の１以上のコンジュゲートを含む第１の容器、
ならびに
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲート、および少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲート、
または
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全てのそれぞれより低い糖類用量で（例えば、その組成中に存在するいずれの糖類より低い糖類容量で）存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲート、および少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む第２の容器から成る。
【００８２】
Hibコンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの例は前記の通りである。
【００８３】
典型的には、本発明のワクチンキット中の肺炎連鎖球菌ワクチンは、多糖類が1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび33Fからなる群より選択される肺炎球菌の少なくとも4種類の血清型由来である、多糖類抗原（任意にコンジュゲートされた）を含みうる。任意に、4種類血清型は6B、14、19Fおよび23Fを含む。さらに任意に、少なくとも7種類の血清型がその組成中に含まれ、例えば血清型4、6B、9V、14、18C、19F、および23F由来のものである。任意に、7種類より多い血清型、例えば少なくとも10、11、12、13または14種類の血清型がその組成中に含まれる。例えば、一実施形態における前記組成は、血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19Fおよび23F由来の11種類の莢膜多糖類（任意にコンジュゲートした）を含む。本発明のある実施形態においては、少なくとも13種類の多糖類抗原（任意にコンジュゲートされた）が含まれるが、さらなる多糖類抗原、例えば23価（血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび33Fなどの）も本発明で考えられている。
【００８４】
肺炎球菌糖類は、担体タンパク質、例えばCRM197、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、プロテインDまたは上述したいずれの他の担体タンパク質ともコンジュゲーションされる。
【００８５】
任意に、本発明のワクチンキットは第３成分を含む。
【００８６】
例えば、前記キットは任意に
１以上の破傷風トキソイド（TT）、ジフテリアトキソイド（DT）、および全細胞または無細胞性百日咳成分を含む第１の容器、
ならびに
担体タンパク質と肺炎連鎖球菌由来の莢膜糖類［ここで、莢膜糖類は、任意に、1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび33Fからなる群より選択される肺炎球菌血清型由来である］の１以上のコンジュゲートを含む第２の容器
ならびに
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲート、および少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲート、
または
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全てのそれぞれより低い糖類用量で（例えば、その組成中に存在するいずれの糖類より低い糖類容量で）存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲート、および少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む第３の容器から成る。
【００８７】
髄膜炎菌コンジュゲートを含む免疫原性組成物、例えばHibMenC、HibMenAC、HibMenAW、HibMenAY、HibMenCW、HibMenCY、HibMenWY、MenAC、MenAW、MenAY、MenCW、MenCY、MenWYまたはMenACWYは、以上に記載したのと類似組成のキットを含めて、任意に、麻疹および／またはおたふく風邪および／または風疹および／または水痘由来の抗原を含む。例えば、髄膜炎菌免疫原性組成物は、麻疹、おたふく風邪および風疹または麻疹、おたふく風邪、風疹および水痘由来の抗原を含有する。ある実施形態においては、これらのウイルス抗原は、任意に、髄膜炎菌および／またはHib糖類コンジュゲートと同じ容器中に存在する。ある実施形態において、これらのウイルス抗原は凍結乾燥されている。
【００８８】
本発明のさらなる態様は本発明の免疫原性組成物を作製する方法であって、Hib糖類コンジュゲートを少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートと混合して、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの平均糖類用量より低い糖類用量で存在する組成を形成するステップを含んでなる前記方法である。
【００８９】
ワクチン調製の概要は、Vaccine Design, "The subunit and adjuvant approach（サブユニットおよびアジュバント手法）", Powell M.F. & Newman M.J.編, (1995) Plenum Press New Yorkに記載されている。リポソーム内のカプセル化はFullerton、米国特許第4,235,877号に記載されている。
【００９０】
本発明のさらなる態様は、ヘモフィルス・インフルエンザ菌および任意に髄膜炎菌感染が原因である疾患に対してヒト宿主を免疫感作する方法であって、宿主に本発明の免疫原性組成物またはワクチンまたはキットの免疫保護用量を投与するステップを含んでなる前記方法である。
【００９１】
本発明のさらなる態様は、ヘモフィルス・インフルエンザ菌および任意に髄膜炎菌感染が原因である疾患の治療または予防に使用するための本発明の免疫原性組成物である。
【００９２】
本発明のさらなる態様は、本発明の免疫原性組成物またはワクチンまたはキットの、ヘモフィルス・インフルエンザ菌および任意に髄膜炎菌が原因である疾患を治療または予防するための医薬品の製造における使用である。
【００９３】
本明細書において本発明者らは、用語「含む（comprise）」が、任意に、用語「から成る（consist of）」とそれぞれ、全事例において、置換しうることを意図する。
【００９４】
本特許明細書に引用された全ての参考文献または特許出願は本明細書に参照により組み入れられる。
【００９５】
本発明を付随する実施例で説明する。以下の実施例は、特に断らない限り、当業者にとっては周知かつ日常的である標準技法を用いて実施した。実施例は説明のためのものであって、本発明を限定するものではない。
【００９６】
実施例
実施例１  多糖類コンジュゲートの調製
ヘモフィルス・インフルエンザ菌（Hib）PRP多糖類のTTとの共有結合は、Chuら（Infection and Immunity 1983, 40 (1); 245-256）が開発したカップリング化学により行った。Hib PRP多糖類を、CNBrを加えることにより活性化し、6分間、pH 10.5にてインキュベートした。pHをpH 8.75に低下し、アジピン酸ジヒドラジド（ADH）を加えてさらなるインキュベーションを90分間続けた。活性化PRPを精製破傷風トキソイドと、1-エチル-3-（3-ジメチル-アミノプロピル）カルボジイミド（EDAC）を用いて、カルボジイミド縮合を介してカップリングした。EDACを活性化PRPに加えて0.6mg EDAC/mg活性化PRPの最終比に到達させた。pHを5.0に調節し、精製破傷風トキソイドを加えて、2mg TT/mg活性化PRPに到達させた。得られる溶液を3日間穏やかに攪拌しながら放置した。0.45μm膜を通して濾過した後に、そのコンジュゲートを0.2M NaClで平衡化したセファクリルS500HR（Pharmacia、Sweden）カラム上で精製した。
【００９７】
MenC-TTコンジュゲートは、天然の多糖類（MALLSにより測定して150kDa超）を用いて作った。MenA-TTコンジュゲートは、天然の多糖類または僅かにミクロ流動化した多糖類（実施例２のMALLSにより測定して60kDa超）を用いて作った。MenWおよびMenY-TTコンジュゲートは、サイジングした多糖類（実施例２のMALLSにより測定してほぼ100〜200kDa）を用いて作った。サイジングはミクロ流動化により、ホモジナイザーEmulsiflex C-50装置を用いた。次いで、多糖類を0.2μmフィルターを通して濾過した。
【００９８】
活性化およびカップリングは、WO 96/29094およびWO 00/56360に記載の通り実施した。概要を述べると、2M NaCl pH 5.5〜6.0中に10〜20mg/mlの濃度の多糖類を、CDAP溶液（アセトニトリル/WFI、50/50中に新しく調製した100mg/ml）と混合して、CDAP／多糖類の最終比を0.75/1または1.5/1とした。1.5分後に、pHを水酸化ナトリウムを用いてpH10.0とした。3分後に破傷風トキソイドを加えて、タンパク質／多糖類比を、MenWについては1.5/1、MenYについては1.2/1、MenAについては1.5/1、またはMenCについては1.5/1に到達させた。反応を1〜2時間続けた。
【００９９】
カップリングステップの後にグリシンを加えて、グリシン／PS（w/w）の最終比を7.5/1にそしてpHをpH 9.0に調節した。混合物を30分間放置した。コンジュゲートを、10μm Kleenpakフィルターを用いて清澄化し、次いで150mMNaCl、10mMまたは5mM Tris pH 7.5の溶出バッファーを用いてセファクリルS400HRカラムに供給した。臨床ロットはOpticap 4 無菌化膜上で濾過した。得られるコンジュゲートは1：1〜1：5（w/w）の平均多糖類：タンパク質比を有した。
【０１００】
MenA莢膜多糖類を破傷風トキソイドとスペーサーを介してコンジュゲートするために、次の方法を用いた。多糖類とスペーサー（ADH）の共有結合を、制御した条件下でシアニル化剤、1-シアノ-4-ジメチルアミノ-ピリジニウムテトラフルオロボレート（CDAP）により活性化する、カップリング化学により行った。スペーサーはシアニル化PSとヒドラジン基を介して反応し、スペーサーと多糖類の間に安定したイソウレア結合を形成した。
【０１０１】
MenA 10mg/ml溶液を、新しく調製したアセトニトリル／水（50/50（v/v））中のCDAP 100mg/ml溶液を用いて処理し、0.75（w/w）のCDAP／MenA比を得た。1.5分後、pHをpH 10.0に上げた。3分後に、ADHを加えて8.9のADH／MenA比を得た。溶液のpHを8.75に低下させ、反応を2時間続けた。
【０１０２】
コンジュゲーション反応の前に、精製TT溶液およびPSAAH溶液を希釈して、PSAAHについては10mg/mlおよびTTについては10mg/mlの濃度に到達させた。0.9mg EDAC/mg PSAAHの最終比に到達するために、EDACをPSAH溶液に加えた。pHを5.0に調節した。精製破傷風トキソイドをぜん動ポンプを用いて（60分間で）加え、2mg TT/mg PSAAHに到達させた。得られる溶液を60分間、＋25℃にて攪拌したまま放置し、120分間の最終カップリング時間を得た。コンジュゲートを10μmフィルターを用いて清澄化し、セファクリルS400HRカラムを用いて精製した。
【０１０３】
実施例２  MALLSを用いる分子量の決定
サンプルを溶出するHPLCサイズ排除カラムに検出器を結合した。一方で、レーザー光散乱検出器は巨大分子溶液により16の角度に散乱された光強度を測定し、他方で、ライン上に配置された干渉型屈折計は溶出したサンプルの量の測定を可能にした。これらの強度から溶液中の巨大分子のサイズと形状を決定することができる。
【０１０４】
重量基準の平均分子量は、全ての種の重量にそれらのそれぞれの分子量を乗じたものの和を、全ての種の重量の和により除したものとして定義される。
【０１０５】
a）重量平均分子量：-Mw-は、次式で定義される：
【数１】
2008543905.tif 000002
b)数分子量：-Mn-は、次式で定義される：
【数２】
2008543905.tif 000003
c)根平均二乗半径（Root mean square radius）：-Rw-については、R2wは次式で定義される二乗半径である：
【数３】
2008543905.tif 000004
［式中、-mi-は散乱中心の質量であり、-ri-は散乱中心iと巨大分子の重心との間の距離である］
d)多分散度は比-Mw/Mn-として定義される。
【０１０６】
髄膜炎菌多糖類を、併用した２つのHPLCカラム（TSKG6000および5000PWxl）に供給することにより、MALLSによって分析した。25μlの多糖類をカラムに供給し、0.75mlの濾過水により溶出した。多糖類を、光散乱検出器（488nmの10mWアルゴンレーザーを装備したWyatt Dawn DSP）および干渉型屈折計（P100セルおよび498nmの赤色フィルターを装備したWyatt Optilab DSP）を用いて検出した。
【０１０７】
分子量多分散度および全サンプルの回収率を、Astra 4.72ソフトウエアにおいて1のオーダーの多項式フィットを用いるDebye法により計算した。
【０１０８】
実施例３  DTPw-HepBと混合したHibMenAC-TTコンジュゲートワクチンに対するフェーズII臨床試験
研究設計：５グループによる、オープン、ランダム化（1：1：1：1：1）単センター研究。
【０１０９】
５グループは次のワクチン体制をそれぞれ6、10および14週齢に受給した。
【０１１０】
TritanrixTM-HepB／Hib-MenAC 2.5/2.5/2.5（以後、2.5/2.5/2.5と呼ぶ）
TritanrixTM-HepB／Hib-MenAC 2.5/5/5（以後、2.5/5/5と呼ぶ）
TritanrixTM-HepB／Hib-MenAC 5/5/5（以後、5/5/5と呼ぶ）
TritanrixTM-HepB＋HiberixTM（以後、Hiberixと呼ぶ）
TritanrixTM-HepB／HiberixTM＋MeningitecTM（以後、Meningitecと呼ぶ）
血液サンプルは、最初のワクチン投与時（プレ）および第３のワクチン投与後１ヶ月（ポスト投与3）に採取した。
【０１１１】
Tritanrixは、GlaxoSmithKline Biologicals S.A.により市販されているDTPwワクチンである。
【０１１２】
各５グループは105被験者から成り、全525被験者が本研究に関わった。
【表１】
2008543905.tif 000005
【０１１３】
*2.5/2.5/2.5ワクチンはGSK Biologicals社のHib-MenAC 5/5/5ワクチンの1用量希釈物であり、PRP-TT、MenA-TTおよびMenC-TTをそれぞれ2.5μg含有した。
【０１１４】
Hib-MenACワクチン製剤を用事調製としてTritanirix-HepBと混合した。GSK Biologicals社の複合ジフテリア-破傷風-全細胞百日咳菌-肝炎B（DTPw-HB）ワクチン（Tritanrix-HepB）は、30国際ユニット（IU）以上のジフテリアトキソイド、60 IU以上の破傷風トキソイド、4 IU以上の死滅百日咳菌および10μgの組換え肝炎B表面抗原を含有する。
【０１１５】
対照治療、用量、投与方式、ロット番号：
ワクチン接種スケジュール／部位：１グループはTritanrix-HepBワクチンを左大腿の筋肉内におよびHiberixを右大腿の筋肉内に、6、10および14週齢に受給した。他のグループはTritanrix-HepB／HiberixTMワクチンを左大腿の筋肉内におよびMeningitecTMを右大腿の筋肉内に、6、10および14週齢に受給した。
【０１１６】
ワクチン／組成／用量／ロット番号：使用したTritanrixTM-HepBワクチンは前記の通りであった。
【０１１７】
GSK Biologicalsのヘモフィルス-インフルエンザb型菌コンジュゲートワクチン：HiberixTMの1用量（0.5ml）は10μgの破傷風トキソイドとコンジュゲートしたPRPを含有した。HiberixTMグループでは、無菌希釈剤と、そしてMeningitecTMグループではTritanrixTM-HepBと混合した。
【０１１８】
Wyeth LederleのMENINGITECTMワクチンの1用量（0.5ml）は、15μgのジフテリア菌CRM197タンパク質とコンジュゲートした10μgの髄膜炎菌グループCの莢膜多糖類および塩としてのアルミニウムを含有した。
【０１１９】
結果：Hib、MenAおよびMenCに対する免疫応答
【表２ａ】
2008543905.tif 000006
【表２ｂ】
2008543905.tif 000007
【表２ｃ】
2008543905.tif 000008
【表２ｄ】
2008543905.tif 000009
【表２ｅ】
2008543905.tif 000010
結論
2.5/5/5製剤によるHibMenACコンジュゲートワクチンは一致して、等量のHib、MenAおよびMenC糖類によるコンジュゲートワクチン製剤より高い力価のPRP、MenAおよびMenCに対する免疫応答を与えた。この効果はまた、血清殺菌検定（SBA：serum bacteriocidal assay）でも見られ、その場合、MenAおよびMenCに対する最良の応答は2.5/5/5製剤のHib MenACコンジュゲートワクチンを用いて達成された。
【０１２０】
実施例４  HibMenAC臨床試験：HibMenACコンジュゲートによる初回刺激
フェーズII、オープン、ランダム化研究を実施し、TritanrixTM-HepB／HibMenACワクチンの一次ワクチン接種コースにより誘発される免疫記憶を評価し、かつGSK BiologicalsのHib-MenACコンジュゲートワクチンまたはGSK BiologicalsのHib2.5ワクチンと混合したブースター用量のGSK BiologicalsのTritanrixTM-HepBワクチンの免疫原性と反応原性を、TritanrixTM-HepB／Hib-MenACにより初回刺激した被験者の15〜18月齢に評価した。5グループは、6、10および14週齢に、表３に掲げた一次ワクチン接種体制を受給した。
【表３】
2008543905.tif 000011
【０１２１】
血液サンプルを、グループ1、3、5、7および9から単味の多糖類（PS）ブースターの時点（すなわちプレPS〜第10月）におよび単味の多糖類ブースター後1ヶ月（すなわちポストPS〜第11月）に採取した。
【０１２２】
注記：単味の多糖類ブースターを受給した5グループ（すなわちグループ1、3、5、7および9）で得た免疫原性結果が提示されている。
【０１２３】
被験者の数：計画数：450（1グループ当たり45被験者）
登録数：単味の多糖類ブースターを受給するグループ1、3、5、7および9において全193被験者（グループ1において42、グループ3において39、グループ5において37、グループ7において36およびグループ9において39）を登録した。
【０１２４】
完了数：入手してない。
【０１２５】
免疫原性：全登録コホート＝193被験者
注記：本研究における全登録コホート＝全ワクチン接種コホート
包括のための診断と判定基準：実施例１に記載の3用量の一次ワクチン接種を完了した10月齢の、明らかな健康上の問題の無い、一次研究の研究終結往診以後にジフテリア、破傷風、百日咳、肝炎B、髄膜炎菌血清群AまたはCおよび／またはHib疾患に対する先のブースターワクチン接種を受給したことの無い男子または女子被験者。文書による説明と同意を、研究に入る前に被験者の親／保護者から得た。
【０１２６】
研究ワクチン、用量、投与方式、ロット番号：本研究で用いる全ワクチンはGSK Biologicalsにより開発されかつ製造されたものである。ワクチン接種スケジュール／部位：グループ1、3、5、7および9の被験者はコンジュゲートした多糖類Aおよび多糖類Cワクチン、1/5用量のMencevaxTMACおよび10μgの単味PRPを、左および右の前外側大腿に、それぞれ10月齢に、筋肉内注入として受給した。
【０１２７】
治療期間：全研究期間は、15〜18月齢に投与されたブースターワクチン接種を含めて、1被験者当たりほぼ6〜9ヶ月であった。暫定分析を第11月（すなわち、第10月の単味の多糖類ブースターの投与後1ヶ月）に実施した。
【０１２８】
評価のための判定基準：
単味の多糖類ブースターの投与前および投与後1ヶ月の、グループ1、3、5、7および9に対する評価の判定基準は次の通りであった；
SBA-MenA抗体力価≧1：8
SBA-MenC抗体力価≧1：8
抗-PSA抗体濃度≧0.3μg/ml
抗-PSC抗体濃度≧0.3μg/ml
抗-PRP抗体濃度≧0.15μg/ml。
【０１２９】
統計的方法：この暫定分析は全登録コホートに基づく。全ての分析は純粋に説明のためであって、いずれの終点についての統計的推論も計算しなかった。分析は、単味の多糖類ブースターを10月齢に受給した5グループ（すなわちグループ1、3、5、7および 9）についてだけ実施した。これらの5グループは一次研究における主グループのサブグループであったが、その結果を一次研究グループに当たるものとして提示する。
【０１３０】
免疫原性の分析：３時点、すなわち、一次ワクチン接種研究（実施例１）における第３ワクチン投与後1ヶ月；一次ワクチン接種後の免疫応答の持続を評価するために、多糖類ブースターの投与前（すなわち、10月齢）；ならびに一次ワクチン接種により誘導された免疫記憶を評価するために、多糖類ブースターの投与後1ヶ月（すなわち11月齢）において得た結果を、本実施例で提示する。各時点において：95％信頼区間（CI）内の幾何平均抗体濃度または力価（GMCまたはGMT）を、血清殺菌検定（SBA）-MenC、SBA-MenA、抗-PSC、抗-PSAおよび抗-PRPに対して作表した。血清陽性または血清保護率を95％CIとともに各抗体について計算した。多糖類ブースター前および多糖類ブースター後１ヶ月の抗体濃度または力価を、逆累積曲線（RCC）を用いて、各抗原および血清型について研究した。
【０１３１】
結果
個体群統計学結果：全登録コホートの平均年齢は43.2週で標準偏差6.5であった。雄性対雌性の比は1.3（110/83）であった。全ての被験者は東アジアまたは東南アジア系人種に属した。
【０１３２】
免疫原性結果：全登録コホートに対する免疫原性結果を表４に掲げる。
【表４ａ】
2008543905.tif 000012
【表４ｂ】
2008543905.tif 000013
結論
SBAアッセイにおいて、より低い量のHibを含有するHibMenAC 2.5/5/5コンジュゲートワクチン製剤は、等しい量の３コンジュゲート全てを含有するワクチン接種よりも、MenAおよびMenCに対して優れた免疫記憶応答を与える傾向があった。これはPOST-PS読取値の比較から見ることができる。それ故に、初回刺激における2.5/5/5 製剤の使用は優れた免疫記憶応答をもたらす。
【０１３３】
PIII（M3）データに注目すると、より高い読取値が2.5/5/5製剤に対して、Hib（22.5 v 17）におよびMenC（76 v 48または56、およびSBAによれば5339 v 3342または3863）に見られた。
【０１３４】
実施例5a：2、4および6月の幼児における、Infanrix pentaおよびPrevenarと共に同時に与えたHibMenCYを用いる臨床試験
研究設計：フェーズII、オープン（部分的に二重盲検＊）、ランダム化（1：1：1：1：1）、制御された多センター研究であって、5つの平行グループが次の3用量一次ワクチン接種コースの同時ワクチンを、2、4および6月齢に、受給する：
Hib-MenCY 2.5/5/5グループ：Hib-MenCY（2.5/5/5）＋Infanrix(登録商標)penta＋Prevenar(登録商標)
Hib-MenCY 5/10/10グループ：Hib-MenCY（5/10/10）＋Infanrix(登録商標)penta＋Prevenar(登録商標)
Hib-MenCY 5/5/5グループ：Hib-MenCY（5/5/5）＋Infanrix(登録商標)penta＋Prevenar(登録商標)
Menjugateグループ：Menjugate(登録商標)＋Act HIB(登録商標)＋Infanrix(登録商標)penta**
ActHIBグループ：ActHIB(登録商標)＋Infanrix(登録商標)penta＋Prevenar(登録商標)。
【０１３５】
*Hib-MenCY（2.5/5/5）およびHib-MenCY（5/10/10）は二重盲検の方式で投与した。Hib-MenCY（5/5/5）製剤は、Hib-MenCY（10/10/10）製剤を1.0ml希釈剤を用いて再構成して調製するので二重盲検では投与できなかった（溶液の半分を捨て、残りの0.5mlを投与した）が、Hib-MenCY（2.5/5/5）およびHib-MenCY（5/10/10）製剤は0.5ml希釈剤により再構成した後、投与した。
【０１３６】
**このグループからの被験者には2用量のライセンスされた肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、処方情報によりブースター研究792014/002の終わりに提供されるであろう。
【０１３７】
血液サンプル（4.0ml）を全被験者から、一次ワクチン接種コースの前、およびその完了後1ヶ月（研究第0月および研究第5月）に得た。
【０１３８】
本研究は5グループのそれぞれに80被験者をもつ400被験者について計画した。研究は、全398被験者で完了した（Hib-MenCY2.5/5/5グループ：80；Hib-MenCYグループ5/10/10：81；Hib-MenCY5/5/5グループ：78；Menjugateグループ：81；ActHIBグループ：78）。
【０１３９】
ワクチン接種スケジュール／部位：3用量を筋肉内に2ヶ月間隔で、ほぼ2、4および6月齢に、次の通り注射した。
【表５】
2008543905.tif 000014
【表６】
2008543905.tif 000015
【０１４０】
*Hib-MenCY5/5/5は、Hib-MenCY10/10/10製剤を1.0ml希釈剤により溶解して調製した；0.5mlを投与して残りの0.5mlを廃棄した。
【０１４１】
評価のための判定基準：
免疫原性：  全被験者について、第1用量の前（第0月）の、および第3用量後ほぼ1ヶ月後（第5月）の各ワクチン抗原に対する抗体の力価／濃度の測定。殺菌試験による髄膜炎菌血清群CおよびY（SBA-MenCおよびSBA-MenY）に対する殺菌抗体力価の定量（試験カットオフ：1：8および1：128の希釈）、ならびに髄膜炎菌血清群CおよびYに対する抗体のELISA測定（抗-PSCおよび抗-PSY、試験カットオフ≧0.3μg/mlおよび≧2μg/ml）、Hib多糖類PRP（抗-PRP、試験カットオフ≧0.15μg/mlおよび≧1.0μg/ml）、３つの百日咳抗原（抗-PT、抗-FHA、抗-PRN、試験カットオフ≧5 EL.U/ml）、肝炎B表面抗原に対する抗体（抗-HB、試験カットオフ≧10 mIU/mL）、ジフテリアおよび破傷風トキソイド（抗-ジフテリアおよび抗-破傷風、試験カットオフ0.1 IU/ml）；抗-ポリオウイルス1、2および3型（試験カットオフ1：8）；７つの肺炎球菌性血清型抗-4、抗-6B、抗-9V、抗-14、抗-18C、抗-19F、抗-23F（試験カットオフ0.05μg/ml）。
【０１４２】
百日咳抗原に対する一次ワクチン応答は、抗体が従来不検出であった被験者における第3用量後の血清陽性（検出可能な抗体）、または最初に血清陽性であった被験者における少なくとも前ワクチン接種抗体濃度の維持として定義した。
【０１４３】
安全性（評価のための判定基準）：8日間（0〜7日）フォローアップ、各ワクチン用量の投与後に患者／被験者の保護者により毎日のカードで報じられた、訴えられた局所（疼痛、赤み、腫れ）および全体的な（眠気、熱、刺激性、および食欲不振）症候群；31日間（第0〜30日）フォローアップ、ワクチン投与後に訴えのなかった重症でない有害事象；および全研究期間の間の重篤な有害事象（SAE）。
【０１４４】
統計学的方法：
免疫原性
95％信頼区間（CI）内の幾何平均抗体濃度または力価（GMC／T）を各抗原に対して作表した。GMC／Tの計算は、濃度または力価変換値の平均の、基数10の逆対数（逆log10）をとることにより実施した。GMC／T計算のために、試験カットオフ未満の抗体濃度または力価は、カットオフの任意な半値を与えた。規定した試験カットオフを超える抗体濃度／力価をもつまたは正確な95％CIによるワクチン応答をもつ被験者の百分率を計算した。抗体濃度／力価は、ワクチン接種後の各抗原に対する逆累積抗体曲線を用いて研究した。7つの肺炎球菌性抗原に対する抗体濃度の分布を作表した。SBA-MenYおよび抗-PSYを除く各抗体に対して、Hib-MenCYグループ間の差を対照グループと比較して、探索的な方法で次の項目：(1)規定したカットオフを超えるかまたはそれらの標準化された漸近95％ CIのワクチン応答をもつ被験者の百分率について、対照グループ（マイナス）Hib-MenCYグループの間の差、(2)95％ CIでHib-MenCYグループ-対-対照グループのGMCまたはGMT比について、評価した。SBA-MenCおよび抗-PSCに対する対照グループはMenjugateとした；他の全ての抗原に対する対照グループはグループActHIBとした。同じ比較を行って、抗-PRP、SBA-MenC、抗-PSC、SBA-MenY、抗-PSYおよび抗-破傷風抗体について、Hib-MenCY製剤のそれぞれの対との間の差を評価した。
【０１４５】
血清保護／血清陽性率およびGMC／T(免疫原性に対するATPコホート)
【表７ａ】
2008543905.tif 000016
【表７ｂ】
2008543905.tif 000017
【表７ｃ】
2008543905.tif 000018
【表７ｄ】
2008543905.tif 000019
【表７ｅ】
2008543905.tif 000020
結論
2.5/5/5および5/10/10製剤は、Hib、MenAおよびMenCに対して、免疫原性およびSBA結果の項目で、より高い力価をもたらした。それ故に、複合コンジュゲートワクチンにおいて、より低い用量のHibコンジュゲートを含むことは優れた結果を与えた。
【０１４６】
Hib-MenCYのInfanrix pentaおよびPrevenarとの共投与は、満足な結果を与えた。
【０１４７】
実施例5b  HibMenCYとPrevenarの共投与が肺炎球菌の多糖類に対する応答に与える効果
実施例３の研究のさらなる態様は、Prevenarワクチン中に存在する７つの肺炎球菌の多糖類に対して産生する抗体のレベルを研究して、HibMenCYの共投与が肺炎球菌の多糖類に対して産生する抗体力価に与える効果を評価することであった。
【０１４８】
GMCおよび（7つの肺炎球菌性血清型（7 pneumococcal serotypes）に対する抗体が≧0.05μg/mlおよび≧0.2μg/mlである）被験者の百分率を表８に示す。6B血清型を除く7vPn成分に対する血清陽性率は、全グループにわたって、95.5〜100％（抗体濃度≧0.05μg/ml）および93.9〜100％（抗体濃度≧0.2μg/ml）の範囲にあった。6B血清型については、全グループにわたって、血清陽性率は88.4〜98.6％（抗体濃度≧0.05μg/ml）および81.2〜91.4％（抗体濃度≧0.2μg/ml）の範囲にあった（ActHIBグループ：92.3％≧0.05μg/ml；86.2％≧0.2μg/ml）。
【表８ａ】
2008543905.tif 000021
【表８ｂ】
2008543905.tif 000022
【表８ｃ】
2008543905.tif 000023
【表８ｄ】
2008543905.tif 000024
【表８ｅ】
2008543905.tif 000025
【表８ｆ】
2008543905.tif 000026
【表８ｇ】
2008543905.tif 000027
結論
HibMenCYのPrevnarとの全ての３つの製剤の共投与は、７つの肺炎球菌性血清型に対する満足な免疫応答をもたらす。血清型6Bはそれに対する応答を産生するのが困難な免疫原である。6Bの場合、より高いGMCおよび（２つの閾値レベルを達成する）被験者の百分率が、HibMenCのより低いHib用量製剤を用いて達成された。従って、肺炎球菌の多糖類コンジュゲートとの共投与に、より低い用量のHibコンジュゲートワクチンを用いると、6B抗原に対してより優れた応答をもたらす。
【０１４９】
実施例６  2、3および4ヶ月スケジュールに従ってHibMenCYをInfanrix pentaと同時投与する、フェーズII臨床試験
研究設計：フェーズII、オープン（部分的に二重盲検＊）、ランダム化（1：1：1：1：1）、制御された多センターであって、5グループが3用量の一次スケジュールのワクチンを次の通り受給する：
Hib-MenCY 2.5/5/5グループ：Hib-MenCY（2.5/5/5）＋InfanrixTM penta
Hib-MenCY 5/10/10グループ：Hib-MenCY（5/10/10）＋InfanrixTM penta
Hib-MenCY 5/5/5グループ：Hib-MenCY（5/5/5）＋InfanrixTM penta
Hib-MenCグループ：Hib-MenC（5/5）＋InfanrixTM penta
Menjugateグループ：MenjugateTM**＋InfanrixTM hexa（対照）。
【０１５０】
*Hib-MenCY 2.5/5/5、Hib-MenCY 5/10/10およびHib-MenCは二重盲検の方式で投与される一方、Hib-MenCY 5/5/5グループおよびMenjugateグループはオープンであった。
【０１５１】
**MenjugateTMはグループの全被験者に投与されたワクチンであった。ワクチン接種を+/-2、3、4月齢（研究第0月、第1月および第2月）に、および全被験者からの血液サンプリング（3.5ml）を一次ワクチン接種の前および1ヶ月後に（研究第0月および第3月）行った。
【０１５２】
研究ワクチン、用量、投与方式、ロット番号：3用量を筋肉内に、1ヶ月間隔で、ほぼ2、3および4月齢に、次の通り注射した。
【表８】
2008543905.tif 000028
【０１５３】
免疫原性：各ワクチン抗原に対する抗体力価／濃度の測定：
第1用量の前に（第0月）および第3用量後ほぼ1ヶ月に（第3月）に全被験者において、SBA-MenCおよびSBA-MenY、抗-PSCおよび抗-PSY、抗-PRP、抗-T、抗-FHA、抗-PRNおよび抗-PTについて測定。髄膜炎菌血清群CおよびYに対しては血清殺菌活性（SBA-MenCおよびSBA-MenYカットオフ：1：8および1：128）を用い；ELISAアッセイのカットオフは：抗-髄膜炎菌血清群CおよびY多糖類（抗-PSC IgGおよび抗-PSY IgG）に対して≧0.3μg/mlおよび≧2μg/ml；Hib多糖類ポリリボシル-リビトール-リン酸（抗-PRPIgG）に対して≧0.15μg/mlおよび≧1.0μg/ml；抗-FHA、抗-PRN、抗-PTに対して5EL.U/ml；抗-破傷風トキソイド（抗-TT）に対して≧0.1 IU/mlを用いた。全被験者において、第3用量の1ヶ月後（第3月）にだけ：抗-D、抗-HBおよび抗-ポリオ1、2および3について測定。ELISAのカットオフは：抗-ジフテリア（抗-D）に対して0.1 IU/ml；抗-肝炎B（抗-HB）に対して≧10mIU/ml；およびミクロ中和試験カットオフ：抗-ポリオ1、2および3型（抗-ポリオ1、2および3）に対して1：8を用いた。
【０１５４】
統計学的方法：
95％信頼区間（95％CI）の血清保護／血清陽性率および幾何平均濃度／力価（GMC/GMT）を、グループ当たり、SBA-MenC、抗-PSC、SBA-MenY、抗-PSY、抗-PRP、抗-破傷風、抗-PT、抗-FHAおよび抗-PRNに対してワクチン接種前および後1ヶ月に；抗-ジフテリア、抗-HBs、抗-ポリオ1、抗-ポリオ2および抗-ポリオ3に対してワクチン接種後1ヶ月に計算した。95％ CIでの抗-PT、抗-PRNおよび抗-FHAに対するワクチン応答（最初血清陰性の被験者における抗体の出現または最初血清陽性の被験者における少なくとも抗体濃度の維持）もワクチン接種後1ヶ月に計算した。第3月における各抗体に対する逆累積曲線も提示した。SBA-MenYおよび抗-PSYを除く各抗体に対して、Hib-MenCYおよびHib-MenCグループ間の差をMenjugateTM対照グループと比較して、探索的な方法で次の項目：(1)規定したカットオフを超えるかまたはそれらの標準化された漸近95％ CIのワクチン応答をもつ被験者の百分率について、MenjugateTMグループ（マイナス）Hib-MenCYおよびHib-MenCグループの間の差、(2)95％ CIでHib-MenCYおよび Hib-MenCグループ-対-MenjugateTMグループのGMCまたはGMT比について評価した。同じ比較を行って、抗-PRP、SBA-MenC、抗-PSC、SBA-MenY、抗-PSYおよび抗-TT抗体に対するHib-MenCY製剤のそれぞれの対との間の差を評価した。
【０１５５】
局所および一般的な訴えられた症候群の全発生率を、症候の型、それらの強度およびワクチン接種との関係（ワクチン接種後8日内の一般的、局所、およびいずれかの訴えられた症候群を報じる被験者の百分率およびそれらの正確な95％CIとして）によってグループにより計算した。訴えのない症候群の発生率をグループ当たりに計算した。グレード3症候群、発症≦48時間について、医療上の留意、期間、ワクチン接種との関係および結果を提供した。重症の有害な事象を全て記載した。
【０１５６】
血清保護／血清陽性率およびGMC／T（免疫原性用のATPコホート）
【表９ａ】
2008543905.tif 000029
【表９ｂ】
2008543905.tif 000030
【表９ｃ】
2008543905.tif 000031
【表９ｄ】
2008543905.tif 000032
【表９ｅ】
2008543905.tif 000033
【表９ｆ】
2008543905.tif 000034
グループHib-MenCY 2.5/5/5：Hib-MenCY(2.5/5/5)＋InfanrixTMpenta
グループHib-MenCY 5/10/10：Hib-MenCY(5/10/10)＋InfanrixTMpenta
グループHib-MenCY 5/5/5：Hib-MenCY(5/5/5)＋InfanrixTMpenta
グループHib-MenC：Hib-Men(5/5)＋InfanrixTMhexa
グループMenjugate：MenjugateTM＋InfanrixTMpenta
N＝結果を利用しうる被験者数。％＝規定した範囲内の濃度／力価をもつ被験者の百分率
GMC／T：幾何平均濃度／力価；95％ CI＝95％信頼区間；LL＝下限、UL＝上限
結論
HibおよびMenCに対する免疫応答は、Hib用量の低い２つの製剤を用いると優れていた。MenYについては、5/5/5製剤と比較して、2.5/5/5および5/10/10製剤を用いるとSBA応答は改善されることがわかった。
【手続補正書】
【提出日】平成20年2月26日(2008.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、Hib糖類コンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
【請求項２】
Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートのそれぞれの糖類用量より低い糖類用量で存在することを特徴とする、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが血清群A、B、C、W135およびYからなる群より選択される菌株由来の髄膜炎菌莢膜糖類を含む、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群C莢膜糖類（MenC）を含む、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群Y莢膜糖類（MenY）を含む、請求項３または４に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群A莢膜糖類（MenA）を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが髄膜炎菌血清群W135莢膜糖類（MenW）を含む、請求項３〜６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
髄膜炎菌血清群B外膜小胞調製物を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートが血清群1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23Fおよび33Fからなる群より選択される菌株由来の肺炎連鎖球菌性莢膜糖類を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートがチフス菌Vi莢膜糖類を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
Hib糖類コンジュゲートの糖類用量が0.1〜9μg、1〜5μgまたは2〜3μgの糖類である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
少なくとも２つのさらなる糖類コンジュゲートのそれぞれの糖類用量が2〜20μg、3〜10μgまたは4〜7μgの糖類である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
同じ担体タンパク質がHibコンジュゲートおよび少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの２つ以上に用いられる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
Hib糖類がTT、DT、CRM197、TTの断片C、プロテインD、OMPCおよびニューモリシンからなる群より選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
少なくとも２つのさらなる細菌性糖類がTT、DT、CRM197、TTの断片C、プロテインD、OMPCおよびニューモリシンからなる群より選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
存在するMenC糖類が約50kDa、75kDa、100kDaを超える分子量または100〜200kDa、100〜150kDaまたは150〜200kDaの平均サイズを有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
存在するMenY糖類が約50kDa、75kDa、100kDaを超える分子量または60〜190kDa、70〜180kDa、80〜170kDa、90〜160kDa、100〜150kDaまたは110〜140kDaの平均サイズを有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
存在するMenCは少なくとも部分的にO-アセチル化され、反復ユニットの少なくとも30％が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
存在するMenYは少なくとも部分的にO-アセチル化され、反復ユニットの少なくとも20％が少なくとも1つの位置においてO-アセチル化されている、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
アルミニウム塩を含有しない、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
アジュバントが使用されてない、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物および製薬上許容される賦形剤を含むワクチン。
【請求項２３】
百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、およびヘモフィルス-インフルエンザ菌が原因である疾患に対して宿主に保護を与えるための２つの多価免疫原性組成物を含む同時または連続投与用のワクチンキットであって、
破傷風トキソイド（TT）、ジフテリアトキソイド（DT）、および全細胞または無細胞性百日咳成分を含む第１の容器；ならびに
請求項１〜２１のいずれか１項の免疫原性組成物を含む第２の容器を含んでなる前記ワクチンキット。
【請求項２４】
第１の容器がさらに、任意に、リン酸アルミニウム上に吸着された肝炎B表面抗原を含む、請求項２３に記載のワクチンキット。
【請求項２５】
第１または第２の容器がさらに不活化したポリオウイルス（IPV）を含有する、請求項２３または２４に記載のワクチンキット。
【請求項２６】
請求項１〜２１のいずれか１項の免疫原性組成物を作製する方法であって、Hib糖類コンジュゲートを少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートと混合して、Hibコンジュゲートが少なくとも２つのさらなる細菌性糖類コンジュゲートの全ての平均糖類用量より低い糖類用量で存在する組成物を形成させるステップを含んでなる前記方法。
【請求項２７】
ヒト宿主を髄膜炎に対して免疫感作する方法であって、宿主に免疫保護用量の請求項１〜２５のいずれか１つの免疫原性組成物、ワクチンまたはキットを投与するステップを含んでなる前記方法。
【請求項２８】
ヒト宿主をヘモフィルス・インフルエンザ菌が原因である疾患に対して免疫感作する方法であって、宿主に免疫保護用量の請求項１〜２５のいずれか１つの免疫原性組成物、ワクチンまたはキットを投与するステップを含んでなる前記方法。
【請求項２９】
髄膜炎の治療または予防に用いる、請求項１〜２５に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキット。
【請求項３０】
ヘモフィルス・インフルエンザ菌が原因である疾患の治療または予防に用いる、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキット。
【請求項３１】
髄膜炎の治療または予防に用いる医薬品の製造における、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキットの使用。
【請求項３２】
ヘモフィルス・インフルエンザ菌が原因である疾患の治療または予防に用いる医薬品の製造における、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、ワクチンまたはキットの使用
【国際調査報告】
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