(57)【要約】本発明は葛根、カイコ蛾の死体又はウドの根からなる一群から選択の一つ以上の薬草の薬草抽出物からなる薬剤組成と健康食品に関する。単独又は混合組成からなる本発明の生薬は腎疾患の予防治療と同様に腎機能改善に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根からなる一群から選択の一つ以上の薬草の薬草抽出物からなる腎障害の予防治療用薬剤組成。
【請求項２】
薬草抽出物が更にソウハクヒ抽出物を含む請求項１に記載の薬剤組成。
【請求項３】
薬草抽出物が葛根抽出物とソウハクヒ抽出物からなる請求項２に記載の薬剤組成。
【請求項４】
薬草抽出物が葛根、ウドの根、カイコ蛾の死体及びソウハクヒ抽出物からなる請求項２に記載の薬剤組成。
【請求項５】
腎疾患が糖尿性合併症により誘発される請求項１乃至４のいずれか一つに記載の薬剤組成。
【請求項６】
腎疾患が腎毒性により誘発される請求項１乃至４のいずれか一つに記載の薬剤組成。
【請求項７】
腎疾患が急性腎不全である請求項１乃至４のいずれか一つに記載の薬剤組成。
【請求項８】
該抽出物が凍結乾燥によるか、噴霧乾燥機又は流動床装置を用いて軟エキス又は乾燥粉末の形で作成する請求項１乃至４のいずれか一つに記載の薬剤組成。
【請求項９】
葛根、ウドの根及びカイコ蛾の死体からなる一群から選択の一つ以上の薬草の薬草抽出物含有の腎機能改善用健康食品。
【請求項１０】
薬草抽出物が更にソウハクヒ抽出物を含む請求項９に記載の健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は腎疾患予防治療用薬草抽出物の新規な使用に関し、抽出物は葛根、カイコ蛾の死体又はウドの根からなる一群から選択の一つ以上の生薬からなる。それ故本発明の薬草抽出物は腎疾患予防治療用の薬剤組成又は健康食品として有効に利用できる。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類は中背部乃至背下部領域の片側に一つずつ二個の腎臓を有する。各腎臓はおおよそ１００万個のネフロンからなる。一つのネフロンは再吸収と排泄に特化した一つの腎小体と一つの腎尿細管からなる。
【０００３】
腎疾患はネフロンの損傷により起こり、その適切な働きができなくなる。腎不全は急性（急激な発症）と慢性（長期にわたる緩徐進行性）に分けられる。
【０００４】
種々の原因により多くの異なる疾患（例えば糸球体腎炎や糖尿病性合併症や高血圧性合併症関連の糖尿病性神経症）が腎疾患を生ずる。腎臓感染や腎臓への薬物毒性による必然的な結果でもある。
【０００５】
慢性腎不全は腎障害又は５０％以下の低い糸球体濾過率のいずれかと定義される。開始傷害に関係なく、これは常に末期腎不全（ESRD）となる進行性過程である。ESRDは長い間血液、神経系、消化器系及び免疫系での他合併症、更には感染又は骨形成異常に起因する生死に関わる疾患である。
【０００６】
腎疾患の患者数は世界的に増加しているが、その症状はしばしば腎不全が進行するまで判らない。韓国では腎不全は約４５０，０００人であり、初期診断患者を含めた全患者数は更に増加しそうである。
【０００７】
ESRD発生後は透析か移植のいずれかの形での腎臓置換治療が必要である。しかし初期及び中期段階での慢性腎不全の根底問題処理に失敗し、且つ患者とその家族に重くのしかかる高額の医療費によりその広範囲な使用は制限される。
【０００８】
最近我が国と海外の多くの研究者により損傷腎機能の機構が熱心に研究され、その結果簡単な化学構造を有する幾つかの化合物が、可能ならいつでも血圧制御と最初の疾患治療手段として利用できるようになった。例えばアンギオテンシン変換酵素（ACE）阻害薬が、ESRDの進行を遅らせることが分かり用いられた。腎臓が処理する二つのホルモンである赤血球生成促進因子（ESF）と活性化ビタミンD3の置換が通常必要である。それにもかかわらずこれら薬剤の使用は高い薬剤費と対症療法のため非常に制限される。これに関連して、医薬品業界では腎疾患治療用新規薬剤の開発が急務である。
【０００９】
最近の薬剤開発は自然源由来の化学的基盤に焦点をあわしてきた。新規の性質、構造及び低毒性を組み合わして、今日の天然産物は多分存在し続け、且つ新規薬剤源に通じるより価値のあるものとして成長しそうである。
【００１０】
薬剤開発の現在の傾向に並行しながら、該発明者は腎不全患者の腎機能改良に有効なことを保証するために多数の生薬を試験した。
【００１１】
マメ科に属する葛根は葛の周皮を除去した根である。この植物は脂質低下性（モダーンチャイニーズメディシンアンドクリニカルアプリケーション（Modern Chinese Medicines and Clinical Application）、６２６−６３２頁、１９９４年）と坑糖尿病性（アンチセニリティチャイニーズメディシンアンドファルマコロジー（Anti-senility Chinese Medicine and Pharmacology）、１８６−１８７頁、１９８９年）を持つことが示された。
【００１２】
カイコ蛾科カイコや白姜蚕であるカイコ蛾の死体は、昆虫病原菌感染により死亡硬化したカイコの乾燥幼虫のカイコ蛾からなる医薬品である。この天然産物は又活性成分としての糖タンパク質と共に坑糖尿病性作用を示すことが示された（ジャーナルオブコリアンソサエティフォハイジェニックサイエンス（Journal of the Korean Society for Hygienic Science）、６巻、１、２号、１１−３３頁（２０００年））。
【００１３】
ウコギ科に属するウドの根はウドの根である。この天然産物は実際には刺激臭で、苦く且つ柔らかく、強壮剤、抗炎症作用と脂質低下作用を組み合わした性質を有する（コリアンジャーナルオブファルマコグノシー（Korean J. of Pharmacognosy）、２４巻（３号）、２１９−２２２頁（１９９３年））。ウドの根はアンジェロールB、ネロリドール、オステノール、オストール、イソインペラトリン、フェルリン及びオレアノール酸を含有する。
【００１４】
該発明者は腎疾患の予防治療の可能性を見出すため、韓国食品規格（Korean Food Standard Code）に記載の種々の有望生薬と健康食品の選別を試みた。その結果該発明者は葛根、カイコ蛾の死体又はウドの根が腎機能改善に有用であることを発見し、本発明を完成した。
【発明の開示】
【００１５】
（技術の問題）
【００１６】
本発明の目的は韓国食品規格（Korean Food Standard Code）に記載の生薬から選択した腎疾患の予防治療用新規薬剤及び健康食品候補を提供することである。
【技術的解決】
【００１７】
本発明は腎疾患予防治療用の葛根、カイコ蛾の死体又はウドの根の一群から選んだ少なくとも一つ以上の薬草抽出物含有薬剤組成を提供する。
【００１８】
他実施形態では本発明はより良い腎機能を保証する薬草抽出物含有の健康食品を提供する。
【００１９】
本発明を以下に示すようにより詳細に記載する。
【００２０】
本発明は葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根の一群から選んだ少なくとも一つ以上の生薬抽出物を含む。
【００２１】
本発明の薬草抽出物は、血中尿素窒素（BUN）レベル、血中クレアチニンレベル、腎尿細管細胞及び変性糸球体細胞測定により、動物モデルでの腎疾患治療に有効性を示した。
【００２２】
BUNはタンパク質代謝の廃棄物である尿素窒素量を評価し、クリアチニンは筋肉代謝で産生する化学的廃棄分子である。BUNとクリアチニンは血流により腎臓に輸送される。腎臓はBUNとクリアチニンを濾過により除去し、尿中に排泄する。腎臓が損傷すると血中のBUNレベルとクリアチニンレベルは上昇する。それ故BUNと血清クリアチニンは腎不全の動物モデルでの薬剤効果を評価するに適正で信頼のおける指標であることが分かった（アーカイブメディカルリサーチ（Arch. Med. Res.）、２００４年、１１月―１２月、３５巻（６号）、４８４−９４頁）。
【００２３】
ネフロンは腎臓の構造機能の基本単位である。ネフロン数が減少すると腎機能は低下する。糖尿病性腎症が進行すると糸球体数の増加が破壊される。糸球体の血液濾過機能が影響され糸球体変性を起こす。それ故腎尿細管細胞と変性糸球体細胞は腎疾患の重要なマーカーとして使用される。
【００２４】
腎疾患の重要なマーカーである血中のBUNレベルとクリアチニンレベル、腎尿細管細胞と変性糸球体細胞測定の結果、葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根薬草抽出物は、ソウハクヒが利尿作用を有するが腎機能改善ではソウハクヒより有効である。同量を投与した場合、混合薬草抽出物は相乗効果により単独薬草抽出物より良い効果を示した。
【００２５】
それ故本発明の薬草抽出物は、糖尿病、高血圧症、糸球体腎炎、薬物毒性（例えば抗生物質）及び尿路感染のような多くの異なる疾患に起因する腎疾患予防治療用の薬剤組成として有効に使用できる。
【００２６】
他実施形態では、本発明の薬草抽出物は韓国食品規格（Korean Food Standard Code）に掲載の生薬から選ばれ、腎機能障害改善用の健康食品として有効に利用できる。
【００２７】
本発明の薬草抽出物は市販の葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根に水又はアルコールを重量比で薬草の５乃至１０倍を一つ以上の生薬に加えて抽出できる。葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根から選んだ二つより多い薬草を抽出するか、又は各抽出物を本発明の薬草抽出物用に混合しても良い。
【００２８】
本発明の薬草抽出物は更に腎機能障害のより良い管理のために、好ましくはソウハクヒ抽出物を含む他の薬草抽出物を組み入れても良い。ソウハクヒ抽出物は利尿作用があることが示されたが（ヤカークホーエジ（YAKHAK HOETJ）、２６巻（４号）、１９７−１２８頁（１９８２年））、この抽出物の腎不全に対する有効性は解明する必要がある。
【００２９】
本発明の薬草抽出物は減圧下６０−７０℃で軟エキスとして作成するか、又は凍結乾燥或いは噴霧乾燥機又は流動床設備を用いて乾燥粉末形に作成できる。
【００３０】
本発明の薬剤組成は経口形、非経口形、経歯形、舌下形、経鼻形、直腸形又は皮下形のような便利な投与経路をもてる。本発明の薬剤組成は各投薬形態に生理的容認の担体を含有できる。
【００３１】
本発明の薬剤組成は、健康者（標準体重、６０ｋｇ）に１乃至３回の分割量で用量１０―１０００ｍｇ／日が投与できる。用量と投与は年齢、疾患重症度及び薬効分類により変わる。
【００３２】
本発明の薬草抽出物は腎機能強化するための健康食品として使用できる。前述の薬草抽出物以外に本発明の薬剤組成は、健康食品部門で単独又は混合形で通常使用されている物質、栄養剤（ビタミン、アミノ酸、抗酸化剤）、ｐH調整剤（クエン酸、クエン酸ナトリウム）、甘み剤（液状ブドウ糖、エリスリトール、パラチノース）、人工香味料、着色剤、賦形剤（乳糖、ブドウ糖、澱粉、ラクツロース）、安定剤、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム）、クリーム（小麦の胚種油、オリーブ油、蜜蝋、ワックス、トコフェロール）を含んでも良い。
【００３３】
本発明の健康食品は関連部門で容認の添加物を用いて、飲料、錠剤、丸薬、硬／軟カプセル及び顆粒のような広範囲の経口投薬形態に調合できる。
【有利な効果】
【００３４】
本発明の抽出物は葛根、カイコ蛾の死体又はウドの根からなる一群から選択の一つ以上の薬草抽出物からなる薬剤組成を提供する。これらの薬草抽出物はBUN及び血液クリアチニン、腎尿細管細胞と変性糸球体細胞レベルの減少に役立ち、腎疾患の予防治療に有用な新規薬剤候補、更には腎機能強化の健康食品を提供する。
【００３５】
従って本発明の薬草抽出物は腎疾患の予防治療用薬剤組成、又は腎機能を増強する健康食品として有効に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
本発明を以下の実施例と実験実施例を参照して説明するが、これらは単に説明のためで本発明の範囲を制限することを意図するものではない。
【００３７】
実施例１  葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの単独抽出物の作成
葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒを市場から購入し、韓国薬局方（Korean Pharmacopoeia）（第８改訂版）により分析した。葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒそれぞれに重量比６：１で水を加えて現行基準にあうようにし、沸騰水で２時間抽出し、濾過して第一沸騰水抽出物を得た。
残渣に更に水を重量比６：１で加え、沸騰水で１時間抽出し、濾過して第二沸騰水抽出物を得た。二つの沸騰水抽出物の混合物を凍結乾燥し、この４つの薬草の単独抽出物を粉末形状で得た。
【００３８】
実施例２−１０  葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒ含有の混合抽出物の作成
表１に示すように実施例１で得た葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの単独抽出物から選んだ二つの薬草抽出物含有する全部で９つの粉末抽出物を異なる重量比で作成した。
【００３９】
表１  異なる重量比の二つの薬草抽出物を含有する９つの粉末抽出物
2008528579.tif 000002
【００４０】
実施例１１  葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒ単一抽出物を重量比１：１：１：１で含有する混合抽出物の作成
実施例１で得た葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの単一抽出物含有の混合粉末抽出物を重量比１：１：１：１で作成した。
【００４１】
実施例１２葛根、カイコの死体、ウドの根及びソウハクヒ単一抽出物を重量１．１：１．９：０．９：１．３で含有の混合抽出物の作成
【００４２】
実施例１で得た葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの単独を抽出物含有する混合粉末抽出物を重量比１．１：１．９：０．９：１．３で作成した。
実験実施例１  糖尿病誘発動物のBUNレベルの測定
腎臓により尿素が血流から除去されるので、尿素窒素が血中にどれだけ残存するかを測定する試験が腎機能試験として用いることができる。従って該発明者は単独抽出物又は混合抽出物を受け入れた糖尿病誘発動物のBUNレベルを測定した。
【００４３】
１．単独抽出物処理グループでのBUNレベルの測定
実施例１で作成の単独抽出物を試験試料に使用した。
生まれて６週間のSDラットを無作為に６つのグループに割り当てた（グループ当たり５匹の動物）。１）一つの正常群、２）無処理のストレプトゾトシン誘発糖尿病の一つの対照群及び各試験試料ｋｇ当たり２００ｍｇを受け入れたストレプトゾトシン誘発糖尿病の４つのグループ。ストレプトゾトシンを腹腔内投与（体重１ｋｇ当たり６０ｍｇ）してラットに糖尿病を誘発した。ストレプトゾトシン注入後３日目と各試験試料で処理後２８日目に二つの血液試料を採取した。フッ化ナトリウム入り血糖測定吸引管と血液分析器を用いて血糖値を測定した。又BUNレベルの測定は血清中で血液分析器を用いて実施した。血清分析は韓国、ソウル、ドンガクグ（Dongjak-gu, Seoul, Korea）にあるイーウオン（E-won）臨床センターで実施した。
表２に示すように抽出物処理のラットと対照のBUNレベルは、正常ラットに比して上昇していた。しかし対照でのレベルに比して、BUNレベルの顕著な低下が葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒを受け入れた動物では観察された。特に葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根抽出物で処理したラットでは、ソウハクヒ抽出物に比べ大きなBUNレベル低下が観察された。
【００４４】
表２  BUNレベル（ｍｇ／ｄL、平均値±標準誤差）
2008528579.tif 000003
＊P＜０．０５（正常ラットと比較）。＊P＜０．０５（対称ラットと比較）。
【００４５】
２．混合抽出物処理グループでのBUNレベルの測定
実施例１１で作成した混合抽出物を試験試料に用いた。
動物を無作為に５つのグループに割り当てた。１）一つの正常群、２）一つの対照群及び３）三つの抽出物処理グループ。抽出物処理群と対照群の動物にストレプトゾトシン注入後８日目にストレプトゾトシン（試験資料）を投与した。ストレプトゾトシン服用後８日目から２８日間毎日三つ異なる用量１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ及び３００ｍｇ／ｋｇの試験試料を経口投与した。血液試料を基準とストレプトゾトシン注入後５日目と、試験試料の経口投与後２８日目で取得した。その後BUNレベル測定を単独抽出物で行ったと同じ方法で実施した。
図３に示すように正常ラットのBUNレベルは変化しないままであったが、糖尿病誘発対照ラットのBUNレベルは５倍まで増加した。抽出物処理のラットでは対照の半分までBUNレベルが顕著に減少した。用量２００ｍｇ／ｋｇと３００ｍｇ／ｋｇでの抽出物処理ラットは用量依存性を全く示さず、用量約２００ｍｇ／ｋｇで最大治療効果が判定された。
【００４６】
表３  処理後のBUNレベル（ｍｇ／ｄL、平均値±標準誤差）
2008528579.tif 000004
＊P＜０．０１５。＊＊P＜０．０５（正常群と比較）。
【００４７】
実験実施例２  糖尿病誘発対照ラットの腎尿細管細胞測定
本発明の薬草抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、腎尿細管細胞の測定を実施した。
【００４８】
１．材料と方法
試験試料（実施例１と実施例１１）を用量２００ｍｇ／ｋｇでラット（実験実施例１）に与えた。腎尿細管細胞を画像解析装置で測定した。
【００４９】
２．結果
表４に示すように腎尿細管細胞数は対照に比して抽出物処理ラット全てで低く（８分の一）観察された。４匹の単独抽出物処理ラットの中で、腎尿細管細胞に対する最大阻害効果が葛根抽出物処理ラットで検出された。カイコ蛾の死体やウドの根抽出物処理のラットでは、腎尿細管壊死に対して坑阻害効果を示し、ソウハクヒ抽出物と同程度であった。更に混合抽出物処理ラット（実施例１１）の阻害効果は他の単独抽出物処理ラットより高かった（５倍）。
【００５０】
表４  腎尿細管細胞（死亡細胞／１０００腎尿細管細胞、平均値±標準偏差）
2008528579.tif 000005
＊P＜０．０５（正常群と比較）。＃P＜０．０１／＃＃P＜０．０５（対照群と比較）。
【００５１】
実験実施例３  糖尿病誘発対照ラットの変性糸球体細胞測定
本発明の薬草抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、変性糸球体細胞の測定を実施した。
【００５２】
１．材料と方法
実験実施例２と同様の試験試料と動物を用いて、腎臓の変性糸球体細胞数を画像解析装置用いて計算した。
【００５３】
２．結果
表５に示すように変性糸球体細胞数の顕著な増加が、正常ラットに比してストレプトゾトシン処理の対照ラットで観察された。対照ラットに比し葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒ単独抽出物で処理のラットの糖尿性変性糸球体細胞は顕著に減少した。変性糸球体細胞数の減少はソウハクヒ抽出物処理ラットに比べて、葛根、カイコ蛾の死体及びウドの根抽出物処理のラットではっきりと観察された。更に混合抽出物（実施例１１）処理のラットでは他の単独抽出物で処理のラットより、変性糸球体細胞増加に対して阻害効果が高かった（約２倍）。
【００５４】
表５  変性糸球体細胞数（平均値±標準偏差）
2008528579.tif 000006
＊P＜０．０５（正常群と比較）。＃P＜０．０１／＃＃P＜０．０５（対照群と比較）。
【００５５】
実験実施例４  糖尿病誘発ラットの病理組織試験
腎臓で検出される変性と線維症は腎疾患のマーカーとして用いることができる（ジャーナルオブパソロジー（J Pathol.）、２０００年、３月、１９０巻（４号）、４８４−８頁）。従って腎疾患に対する本発明の薬草抽出物の有効性を評価するために、病理組織試験を実行した。
【００５６】
１．材料と方法
実験実施例１と同じ試験試料と動物を本実験でも用いた。
試験試料投薬後２８日目にメスSDラットを一晩絶食し、大動脈での失血により屠殺した。解剖腎臓を１０％フォルマリンで固定しパラフィンに包埋した。厚さ３−４ｍに切片を切りヘマトキシリンーエオシン染色した。
【００５７】
２．結果
変性糸球体細胞と腎尿細管壊死による腎症進行に伴い、影響を受けた部位の線維症関連の柔組織変化により慢性腎不全が生じる。これに関連して腎線維症が慢性腎不全の重要なマーカーとなる。
図１と表６に示すように、全対照ラットに比べて全抽出物処理群の４０％以下で軽い腎線維症が起こる。変性細胞数は対照と比べて全抽出物処理ラットでは約１／３乃至１／５減少する。それ故対照群に比べて試験群では腎線維症と変性細胞上昇の著しい抑止が観察されることが分かる。
【００５８】
表６  病理組織試験結果
2008528579.tif 000007
全体所見の程度  １＋、わずか程度。２＋、中程度
【００５９】
実験実施例５  亜急性腎不全ラットでのBUNレベル測定
実施例１２で作成の混合抽出物を試験試料として用いた。
生まれて６週間のメスSDラットを無作為に７つのグループに割り当てた（グループ当たり８匹の動物）。１）一つの正常群、２）四塩化炭素（CCl4）誘発の亜急性腎不全を示す一つの対照群、３）正の対照としてのカプトプリル（CAPT）１００ｍｇ／ｋｇ群、４）正の対照としてのシリマリン（SILY）２５ｍｇ／ｋｇ群及び５）用量５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの三つの抽出物処理群。
CCl4をラットに投与後、試験試料を用量５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇで４２日間毎日同時に投与した。CAPT１００ｍｇ／ｋｇとSILY２５ｍｇ／ｋｇを上と同様な方法で動物に経口投与した。
血糖レベルをフッ化ナトリウム入り血糖測定吸引管を用いて測定した。血清中のBUNレベル測定も又血液分析器で実施した。血清分析は韓国、ソウル、ドンガクグ（Dongjak-gu, Seoul, Korea）にあるイーウオン（E-won）臨床センターで実施した。
【００６０】
表７に示すように媒体処理対照ラットのＢＵＮレベルは正常ラットより著しく高く（ｐ＜０．０１）、CCl4投与後正常ラットより著しく上昇した（ｐ＜０．０１）。処理ラットのＢＵＮレベルは媒体処理対照ラットに比し著しく低い（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。抽出物処理ラット全てのＢＵＮレベルは、SILY処理ラットを除いてCCl4投与後著しく低下した（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。
SILY処理ラットのＢＵＮレベルは媒体処理対照ラットに比べて、ＢＵＮレベルに有意の変化は無いが用量依存傾向で著しく減少する。それ故本発明の薬草抽出物はＢＵＮレベル上昇を抑止することが分かった。
【００６１】
表７  ＢＵＮレベル測定
2008528579.tif 000008
＊P＜０．０１、＊＊Ｐ＜０．０５（正常群と比較）。＃P＜０．０１、＃＃P＜０．０５（対照群と比較）。
【００６２】
実験実施例６  亜急性腎不全ラットの血中クリアチニンレベルの測定
本発明の薬草抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、血中クレアチニンレベル測定を実施した。
１．材料と方法
実験実施例５と同一の試料と動物を本実験に用いた。屠殺し血中クレアチニンレベルを採取血液試料を用いて測定した。
２．結果
表８に示すように媒体処理対照ラットの血中クレアチニンレベルは正常ラットより著しく高く（ｐ＜０．０１）、CCl4投与後正常ラットより著しく上昇した（ｐ＜０．０１）。
抽出物処理ラットのクリアチニンレベルは媒体処理対照に比し著しく低い（ｐ＜０．０１）。抽出物処理群全ての血中クレアチニンレベルは、CCl4投与後対照より著しく低下した（ｐ＜０．０１）。
抽出物処理ラットの血中クリアチニンレベルは媒体処理対照ラットに比べて、用量依存傾向で著しく減少する。それ故本発明の薬草抽出物は血中クレアチニンレベルの大きな上昇を抑止することが分かった。
【００６３】
表８  血中クレアチニンレベル
2008528579.tif 000009
＊P＜０．０１、（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１（対照群と比較）。
【００６４】
実験実施例７  亜急性腎不全ラットの変性糸球体細胞の測定
実験実施例５と同一の試料と動物を用いた。本発明の薬草抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、変性糸球体細胞数を実験実施例３の方法で測定した。
尿細管で異常所見は無かったが、糸球体細胞と血管萎縮糸球体細胞増加を特色とする腎不全が、CCl4処理ラットの全てで観察された。病理組織的神経症が処理群全てで顕著に減少した。
表９に示すように媒体処理対照ラットの変性糸球体細胞数は正常ラットより著しく高い（ｐ＜０．０１）。抽出物処理ラットの変性糸球体細胞数は媒体処理対照ラットに比し病理組織的に用量依存傾向で著しく低い（ｐ＜０．０１）。
このようにして本発明の薬草抽出物は、当量のCAPTと同等の腎臓保護効果を示しながら、CCl4誘発亜急性腎不全を含む神経障害症に有効であると思われる。
５０ｍｇ／ｋｇの薬草抽出物はSILY２５mg／kg群と同等の腎臓保護効果を示した。CCl4誘発亜急性腎不全に対する薬草抽出物の有効量は５０ｍｇ／ｋｇ以下の範囲であった。
【００６５】
表９  変性糸球体細胞の測定
2008528579.tif 000010
＊P＜０．０１、（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１（対照群と比較）。
【００６６】
実験実施例８  急性腎不全ラットのBUNレベル測定
実施例１２で作成の混合抽出物を試験試料として用いた。生まれて６週間のメスSDラットを無作為に７つのグループに割り当てた（グループ当たり８匹の動物）。１）一つの正常群、２）シスプラチン（CCDP）誘発の急性腎不全を示す一つの対照群、３）正の対照としてのカプトプリル（CAPT）１００ｍｇ／ｋｇ群、４）正の対照としてのロサルタン（LOSA）２０ｍｇ／ｋｇ群及び５）用量５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの三つの抽出物処理群。試験試料を用量５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇで、ＣＣＤＰ投与前２８日からＣＣＤＰ投与後４日範囲の期間で動物に経口投与した。ＣＣＤＰ投与５日後に全動物をBUNレベル評価のために屠殺した。
CAPT１００ｍｇ／ｋｇとLOSA２０ｍｇ／ｋｇ両者を受け入れたラット間の試験結果を比較した。試験試料を動物に投与する期間中（CCDP投与前２８日間）、BUNレベルは正常ラットと対照ラット両者で類似の変化が見られた。この期間中対照に対する有意性（ｐ＜０．０５）を評価するため、試験試料２００ｍｇ／ｋｇを受け入れたラットとＬＯＳＡ処理ラットを注意深く観察した。
表１０に示すようにBUNレベルは抽出物処理ラット全てで顕著に減少した。CCDP投与に続いて媒体処理対照ラットのBUNレベルは、正常ラットより著しく高かった（ｐ＜０．０１）。しかし薬剤処理ラット全てのBUNレベルは、媒体処理対照ラットに比し著しく低い（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。
【００６７】
表１０  BUNレベルの測定
2008528579.tif 000011
＊P＜０．０１、＊＊P＜０．０５（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１、＃＃P<０．０５（対照群と比較）。
【００６８】
実験実施例９  急性腎不全ラットの血中クリアチニンレベルの測定
本発明の薬草抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、血中クレアチニンレベル測定を実施した。
【００６９】
１．材料と方法
実験実施例８と同一の試料と動物を用いた。動物を屠殺し血中クレアチニンレベルを採取血液試料を用いて測定した。
２．結果
試験試料が動物に投与された期間中（CCDP投与前２８日間）、血中クレアチニンレベルは正常ラットと対照ラット両者で類似の変化が見られた。この期間中対照に対する有意性（ｐ＜０．０５）を評価するため、試験試料２００ｍｇ／ｋｇを受け入れたラットとLOSA処理ラットを注意深く観察した。
【００７０】
表１１に示すように血中クレアチニンレベルは、抽出物１００ｍｇ／ｋｇ処理のラット以外で抽出物処理ラット全てで顕著に減少した。CCDP投与に続いて媒体処理対照ラットの血中クレアチニンレベルは、正常ラットより著しく高かった（ｐ＜０．０１）。しかし薬剤処理ラット全てでの血中クレアチニンレベルは、媒体処理対照ラットに比し著しく低い（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。
【００７１】
表１１  血中クレアチニンレベルの測定
2008528579.tif 000012
＊P＜０．０１、＊＊P＜０．０５（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１、＃＃P<０．０５（対照群と比較）。
【００７２】
実験実施例１０  急性腎不全ラットの腎臓変性領域の測定
本発明の薬草抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、腎臓変性領域を測定した。
実験実施例８と同一の試料と動物を用いた。
上皮壊死や変性変化のような局所的変性の特色を持つ腎不全が、CCDP処理ラット全てで観察された。表１２に示すように全処理群で病理組織学的神経症が顕著に減少した。媒体処理対照ラットに見られる腎臓の変性柔細胞の割合は正常ラットに比し遙かに高い一方（P<０．０１）、抽出物処理ラットの変性腎細胞数は媒体処理対照ラットに比べて用量依存傾向で組織形態計測的に遙かに低い（ｐ＜０．０１）。薬草抽出物群は５０ｍｇ／ｋｇで、ＣＡＰＴ１００ｍｇ／ｋｇやＬＯＳＡ２０ｍｇ／ｋｇに比べて同等又はより良好な腎臓保護効果を示した。
このようにして本発明の薬草抽出物は、ＣＣＤＰ誘発急性腎不全を含む神経症治療に有効であると思われる。
【００７３】
表１２  腎臓変性領域の測定
2008528579.tif 000013
＊P＜０．０１（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１、＃＃P<０．０５（対照群と比較）。
【００７４】
実験実施例１１  急性腎不全ラットのＢＵＮレベルの測定
実施例２−１０で作成の混合抽出物を試験試料として用いた
生まれて６週間のメスSDラットを無作為に１３のグループに割り当てた（グループ当たり５匹の動物）。１）一つの正常群、２）シスプラチン（CCDP）誘発の急性腎不全を示す一つの対照群、３）正の対照としてのカプトプリル（CAPT）１００ｍｇ／ｋｇ群、４）２００ｍｇ／ｋｇ抽出物（実施例１２）処理の一つの正の対照群及び５）ＣＣＤＰ誘発急性腎不全を示し且つ抽出物（実施例２−１０）２００ｍｇ／ｋｇで処理の９つのグループ。
ＣＣＣＤＰ投与前２３日からＣＣＤＰ投与後４日範囲の期間で、試験試料を用量２００ｍｇ／ｋｇで動物に経口投与した。ＣＣＤＰ投与５日後に全動物をBUNレベル評価のために屠殺した。
試験結果を二つの正の対照群と比較した。表１３に示すように媒体処理対照ラットのBUNレベルは正常ラットより著しく高かった（ｐ＜０．０１）。しかし薬剤処理ラット全てのBUNレベルは、実施例５−７（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝１：１、３：１、１：３）を除いて、媒体処理対照ラットに比し著しく低い（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。
【００７５】
実施例６−７の抽出物（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝３：１、１：３）処理ラットのＢＵＮレベルは、媒体処理対照ラットに比べて有意差ほどではないがわずかな減少を示した。実施例５の処理群（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝１：１）は、媒体処理対照に非常に近いＢＵＮレベルを示した。ＣＣＤＰ誘発の急性腎不全ラットのＢＵＮレベル上昇が、実施例８の抽出物（葛根：ソウハクヒ＝１：１）により著しく抑制されることが分かる。特に実施例８の抽出物（葛根：ソウハクヒ＝１：１）はＢＵＮレベル阻害で実施例１２より優れる。
【００７６】
表１３  試験試料処理のＢＵＮレベルの測定
2008528579.tif 000014
＊P＜０．０１、＊＊Ｐ＜０．０５（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１、＃＃P<０．０５（対照群と比較）。
【００７７】
実験実施例１２  急性腎不全ラットの血中クリアチニンレベルの測定
本発明の二つの混合抽出物の腎疾患に対する有効性を評価するため、血中クレアチニンレベル測定を実施した。
１．材料と方法
実験実施例１１と同一の試料と動物を本実験に用いた。屠殺し血中クレアチニンレベルを採取血液試料を用いて測定した。
２．結果
表１４に示すように抽出物処理ラットの血中クレアチニンレベルは、正常ラットより著しく高かった（ｐ＜０．０１）。しかし薬剤処理ラット全てでの血中クレアチニンレベルは、実施例５−７（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝１：１、３：１、１：３）以外は媒体処理対照ラットに比し著しく低い（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。
【００７８】
実施例６−７の抽出物（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝３：１、１：３）処理ラットのクリアチニンレベルは、媒体処理対照ラットに比べて有意差ではないがわずかな減少を示した。実施例５の処理群（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝１：１）は媒体処理対照に非常に近いＢＵＮレベルを示した。
ＣＣＤＰ誘発の急性腎不全ラットのクリアチニンレベル上昇が、特に実施例１２の抽出物での血中クレアチニンレベル阻害に比して、実施例８の抽出物（葛根：ソウハクヒ＝１：１）により著しく抑制されることが分かる。
【００７９】
表１４  血中クレアチニンレベルの測定
2008528579.tif 000015
＊P＜０．０１、＊＊Ｐ＜０．０５（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１、＃＃P<０．０５（対照群と比較）。
【００８０】
実験実施例１３  急性腎不全ラットの腎臓変性領域数の測定
【００８１】
実験実施例１１と同一の試料と動物を用いた。腎疾患に対する本発明の薬草抽出物の効果を評価するために、腎臓変性領域数を病理組織的に測定した。
上皮壊死や変性変化のような局所的変性の特色を持つ腎不全がCCDP処理ラット全てで観察された。表１５に示すように全処理群で病理組織学的神経症が顕著に減少した。
媒体処理対象ラットに見られる腎臓の変性柔組織の割合は、正常ラットに比し遙かに高い一方（ｐ<０．０１）、抽出物処理ラットの変性領域数は実施例５−７（カイコ蛾の死体：ソウハクヒ＝１：１、３：１、１：３）を除いて、媒体処理対照ラットに比べて組織形態計測的に遙かに低い（ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０５）。
ＣＣＤＰ誘発急性腎不全ラットの局所変性が、特に実施例１２の抽出物による局所変性阻害に比して、実施例８の抽出物（葛根：ソウハクヒ＝１：１）により著しく抑制されることが分かる。
【００８２】
表１５  腎臓変性領域の測定
2008528579.tif 000016
＊P＜０．０１（正常群と比較）。＃Ｐ＜０．０１、＃＃P<０．０５（対照群と比較）。
【００８３】
実験実施例１４  急性毒性試験
１．材料と方法
生まれて６週間のオスとメスのＳＰＦ（特定無菌）ＩＣＲマウスを無作為に割り当てた（グループ当たり５匹の動物）。投与前に０．５％メチルセルロース溶液に懸濁した葛根、ウドの根及びカイコ蛾の死体の単独抽出物（実施例１）とこれら薬草の混合抽出物（実施例１２）を、それぞれ単回用量２０００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ及び１２５ｍｇ／ｋｇでマウスに経口投与した。試験試料で処理した全ての動物に対して、一般的徴候、体重及び死亡動物を観察した。生存者全てを検死した後に、腹腔や胸腔のような器官と組織を肉眼で検査した。更に１２の特定器官を顕微鏡で観察した。
２．結果
試験試料で処理した動物では臨床的徴候や症状或いは死亡動物は観察されなかった。体重及び剖検所見から見て毒性徴候や症状は無かった。本発明の薬草抽出物の経口ＬＤ５０はマウスで２０００ｍｇ／ｋｇより高い。
【００８４】
実験実施例１５  ２週間繰り返し投与での毒性試験
１．材料と方法
生まれて６週間のオスとメスのＳＰＦ（特定無菌）ＩＣＲマウスを無作為に１２のグループに割り当てた（グループ当たり５匹の動物）。投与前に減菌水に懸濁した葛根、ウドの根及びカイコ蛾の死体の単独抽出物（実施例１）とこれら薬草の混合抽出物（実施例１２）をそれぞれ単回用量２０００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ及び１２５ｍｇ／ｋｇで、２週間にわたってマウスに経口投与した。試験試料で処理した全ての動物に対して、一般的徴候、体重及び死亡動物を観察した。生存者全てを検死した後に、腹腔や胸腔のような器官と組織を肉眼で検査した。
２．結果
用量２０００ｍｇ／ｋｇを受け入れたマウスで体重及び食糧摂取量の減少が観察された。最大用量２０００ｍｇ／ｋｇまで異常な所見は報告されていないので、２週間の繰り返し投与の最大許容用量はメスオス両者で２０００ｍｇ／ｋｇより高い。
それ故４週間の繰り返し投与の最大用量はメスオス両者で２０００ｍｇ／ｋｇ／１０ｍｌ／日であることが示唆された。低投与計画や中投与計画は、好ましくはそれぞれ１０００ｍｇ／ｋｇ／１０ｍｌ／日及び５００ｍｇ／ｋｇ／１０ｍｌ／日である。
本発明は以下の製造例を参照に記載するが、説明のためだけであり本発明の範囲を制限する意図ではない。
【００８５】
製造実施例１  錠剤形
１．葛根抽出物含有の錠剤形
一般的製造工程を用いて、単独葛根抽出物（実施例１、７０．０重量％）、乳糖（１７．５重量％）、ステアリン酸マグネシウム（５．０重量％）、ビタミンＣ（２．５重量％）及びマニトール（５．０重量％）の重量比で葛根抽出物含有の錠剤形を調合した。
２．カイコ蛾の死体抽出物含有の錠剤形
カイコ蛾の死体抽出物（実施例１の単独カイコ蛾の死体抽出物、７０．０重量％）含有の錠剤形を葛根抽出物含有錠剤形と同様の方法で調合した。
３．ウドの根抽出物含有の錠剤形
ウドの根抽出物（実施例１のウドの根抽出物、７０．０重量％）含有の錠剤形を葛根抽出物含有錠剤形と同様の方法で調合した。
４．混合抽出物含有の錠剤形
葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの混合抽出物（実施例１２の混合抽出物、７０．０重量％）含有の錠剤形を葛根抽出物含有錠剤形と同様の方法で調合した。
【００８６】
製造実施例２  カプセル形
１．葛根抽出物含有のカプセル形
一般的製造工程を用いて、単独葛根抽出物（実施例１、８５．０重量％）、カルボキシメチルセルロース（１０．０重量％）及びステアリン酸マグネシウム（５．０重量％）の重量比で葛根抽出物含有のカプセルを調合した。
２．カイコ蛾の死体抽出物含有のカプセル形
カイコ蛾の死体抽出物（実施例１の単独カイコ蛾の死体抽出物、８５．０重量％）含有のカプセル形を葛根抽出物含有カプセルと同様の方法で調合した。
３．ウドの根抽出物含有のカプセル形
ウドの根抽出物（実施例１の単独ウドの根抽出物、８５．０重量％）含有のカプセル形を葛根抽出物含有カプセルと同様の方法で調合した。
４．混合抽出物含有のカプセル形
葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの混合抽出物（実施例１２の混合抽出物、８５．０重量％）含有のカプセル形を葛根抽出物含有カプセル形と同様の方法で調合した。
【００８７】
製造実施例３  薬草飲料の作成
１．単独葛根抽出物含有の薬草飲料
一般的製造工程を用いて、実施例１で作成の葛根抽出物（５重量％）を砂糖（７．７８重量％）、クエン酸（０．１１重量％）、香味料（０．１重量％）及び純水（８７．０１重量％）混合物と混合し、葛根抽出物含有の単独薬草飲料を調合した。
２．カイコ蛾の死体抽出物含有の薬草飲料
カイコ蛾の死体抽出物（実施例１で作成、５．０重量％）と他材料含有の薬草飲料を、葛根抽出物含有の薬草飲料と同様の方法で調合した。
３．ウドの根抽出物含有の薬草飲料
ウドの根抽出物（実施例１で作成、５．０重量％）と他材料含有の薬草飲料を、葛根抽出物含有の薬草飲料と同様の方法で調合した。
４．混合抽出物含有の薬草飲料
葛根、カイコ蛾の死体、ウドの根及びソウハクヒの混合抽出物（実施例１２で作成、５．０重量％）と他材料含有の薬草飲料を葛根抽出物含有の薬草飲料と同様の方法で調合した。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】図１は腎臓の病理組織試験の顕微鏡写真である。
【図１】
2008528579.tif 000017
【国際調査報告】
2008528579.tif 000018
2008528579.tif 000019