(57)【要約】【解決手段】  本発明は、新規４−または５−アミノサリチル酸誘導体、および活性成分としてこれらの４−または５−アミノサリチル酸誘導体を有し、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および過敏性腸症候群（ＩＢＳ）などの消化管疾患の治療および結腸癌の予防／治療に有用な医薬品を提供する。より具体的には、これらの誘導体は、アゾ、エステル、無水物、チオエステル、またはアミド結合により４−または５−アミノサリチル酸分子に結合した硫化水素放出部分を有する。さらに、本発明はこれらの化合物を調整する工程と、ＩＢＤとＩＢＳの治療および結腸癌の予防／治療のためのその使用法とを提供する。【選択図】      図１
2008542209.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式の化合物であって、
Ａ−Ｌ−Ｒ（Ｉ）
式中、
Ａは
【化１】
2008542209.tif 000076
ここで、−ＮＨ＝は４または５の位置にあるものであり、
【化２】
2008542209.tif 000077
ここで、−ＮＨは４または５の位置にあるものであり、
【化３】
2008542209.tif 000078
ここで、−ＮＨ２は４または５の位置にあるものであるか、又は
【化４】
2008542209.tif 000079
ここで、−ＮＨ２は４または５の位置にあるものであり、
Ｌは、Ｏ、Ｏ−Ｃ＝Ｏ、Ｓ、Ｎ、またはエステル結合、無水物結合、チオエステル結合、アミド結合、またはアゾ結合を形成する共有結合のいずれかであり、
Ｒは、組織中に硫化水素を放出する硫化水素放出部分である
化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物において、Ｒは、以下の群
【化５−１】
2008542209.tif 000080
【化５−２】
2008542209.tif 000081
【化５−３】
2008542209.tif 000082
【化５−４】
2008542209.tif 000083
【化５−５】
2008542209.tif 000084
から選択される硫化水素放出部分である。
【請求項３】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ−４−または５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸である。
【請求項４】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステルである。
【請求項５】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４または５−アミノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルオキシ］−安息香酸である。
【請求項６】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ−４−または５［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルアミノ］−安息香酸である。
【請求項７】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−｛［（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メチル］−アゾ｝−２−ヒドロキシ−安息香酸である。
【請求項８】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メチルエステルである。
【請求項９】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−［（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メトキシカルボニルオキシ］−安息香酸である。
【請求項１０】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−［（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メトキシカルボニルアミノ］−２−ヒドロキシ−安息香酸である。
【請求項１１】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸とＮ−アセチルシステインとの無水物。
【請求項１２】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸である。
【請求項１３】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルオキシ）−４または５−アミノ−安息香酸である。
【請求項１４】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ−４または５−（｛４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシメチル｝−アゾ）−安息香酸である。
【請求項１５】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシメトキシカルボニルオキシ｝−安息香酸である。
【請求項１６】
請求項２記載の化合物において、２−ヒドロキシ−４−または５−｛４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチア−ジホスフェタン−２−イル］−フェノキシメトキシカルボニルアミノ｝−安息香酸である。
【請求項１７】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシメチルエステルである。
【請求項１８】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェニルエステルである。
【請求項１９】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルオキシ｝−安息香酸である。
【請求項２０】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ−４−または５−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルアミノ｝−安息香酸である。
【請求項２１】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルアゾ）−２−ヒドロキシ−安息香酸である。
【請求項２２】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−（４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルアミノ）−４−チオカルバモイル−酪酸である。
【請求項２３】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルカルバモイルオキシ）−安息香酸である。
【請求項２４】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ−４−または５−［３−（１−ヒドロキシメチル−３−チオカルバモイル−プロピル）−ウレイド］−安息香酸である。
【請求項２５】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−（２−アミノ−４−チオカルバモイル−ブチリルオキシ）−安息香酸である。
【請求項２６】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−（２−アミノ−４−チオカルバモイル−ブチリルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸である。
【請求項２７】
請求項２記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸と２−アミノ−４−チオカルバモイル−酪酸との無水物である。
【請求項２８】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、４−チオカルバモイルフェニル４−または５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾエートである。
【請求項２９】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸である。
【請求項３０】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ４−または５−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−安息香酸である。
【請求項３１】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸チオカルバモイルメチルエステルである。
【請求項３２】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−チオカルバモイルメトキシカルボニルオキシ−安息香酸である。
【請求項３３】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、２−ヒドロキシ４−または５−チオカルバモイルメトキシカルボニルアミノ−安息香酸である。
【請求項３４】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸と硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステルとの無水物である。
【請求項３５】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、４−または５−アミノ−２−（２−メルカプト−エトキシスルホニルオキシ）−安息香酸である。
【請求項３６】
請求項２に記載の化合物において、この化合物は、５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステルである。
【請求項３７】
請求項１記載の化合物と、または薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される賦形剤または担体とを有する医薬品。
【請求項３８】
請求項２記載の化合物と、または薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される賦形剤または担体とを有する医薬品。
【請求項３９】
請求項３〜３６のいずれか１つに記載の化合物と、または薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される賦形剤または担体とを有する医薬品。
【請求項４０】
請求項１１、２８、または３６に記載の化合物のうちの１つと、または薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される賦形剤または担体とを有する医薬品。
【請求項４１】
消化管の炎症状態を、そのような治療を必要とする対象において治療する方法であって、
請求項１記載の化合物の前記消化管の炎症状態の治療に効果的な量を、前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項４２】
消化管の炎症状態を、そのような治療を必要とする対象において治療する方法であって、請求項２記載の化合物の前記消化管の炎症状態の治療に効果的な量を、前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項４３】
消化管の炎症状態を、そのような治療を必要とする対象において治療する方法であって、
請求項３〜３６のいずれか１つに記載の化合物の前記消化管の炎症状態の治療に効果的な量を、前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項４４】
消化管の炎症状態を、そのような治療を必要とする対象において治療する方法であって、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つ記載の化合物の前記消化管の炎症状態の治療に効果的な量を、前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項４５】
請求項４１〜４４のいずれか１つに記載の方法において、前記消化管の炎症状態はクローン病である。
【請求項４６】
請求項４１〜４４のいずれか１つに記載の方法において、前記消化管の炎症状態は潰瘍性大腸炎である。
【請求項４７】
請求項４１〜４４のいずれか１つに記載の方法において、前記消化管の炎症状態は過敏性腸症候群である。
【請求項４８】
対象の結腸癌を予防する方法であって、この方法は、
請求項１記載の化合物の有効量を対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項４９】
対象の結腸癌を予防する方法であって、この方法は、
請求項２記載の化合物の有効量を前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項５０】
対象の結腸癌を予防する方法であって、この方法は、
請求項３〜３６記載の化合物の有効量を前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項５１】
対象の結腸癌を予防する方法であって、前記方法は、
請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の有効量を前記対象に投与する工程
を有する方法。
【請求項５２】
対象における消化管の炎症状態の治療薬を調製するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項５３】
対象における消化管の炎症状態の治療薬を調製するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つ記載された化合物の使用法。
【請求項５４】
対象におけるクローン病の治療薬を調製するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項５５】
対象におけるクローン病の治療薬を調製するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項５６】
対象における潰瘍性大腸炎の治療薬を調製するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項５７】
対象における潰瘍性大腸炎の治療薬を調製するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項５８】
対象における過敏性腸症候群の治療薬を調製するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項５９】
被験者における過敏性腸症候群の治療薬を調製するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用法。
【請求項６０】
結腸癌の予防薬を調製するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６１】
結腸癌の予防薬を調製するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６２】
対象における消化管の炎症状態を治療するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６３】
対象における消化管の炎症状態を治療するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６４】
対象におけるクローン病を治療するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６５】
対象におけるクローン病を治療するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６６】
対象における潰瘍性大腸炎を治療するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６７】
対象における潰瘍性大腸炎を治療するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６８】
対象における過敏性腸症候群を治療するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項６９】
対象における過敏性腸症候群を治療するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項７０】
結腸癌を予防するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項７１】
結腸癌を予防するための、請求項１１、２８、または３６のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）および過敏性腸症候群（Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＩＢＳ）などの腸疾患の治療、および結腸癌の化学予防に有用な化合物に関する。特に、４−または５−アミノサリチル酸誘導体は、５−または４−アミノサリチル酸分子に対するアゾ、エステル、無水物、チオエステル、またはアミド結合を介して結合した、硫化水素放出部分を有するように開発されたものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）は、小腸および結腸に炎症を引き起こす疾患の一般名である。潰瘍性大腸炎が最も一般的な炎症性腸疾患であり、消化（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ：ＧＩ）管、特に下部消化管、より具体的には結腸および／または直腸の様々な部位に発症する。２番目のＩＢＤはクローン病であり、小腸（回腸）および大腸（結腸）に多く見られる。
【０００３】
潰瘍性大腸炎は、その症状が他の腸障害およびクローン病と類似しているため、診断が困難となる場合がある。クローン病は、腸壁の中のより深いところで炎症を引き起こすため、潰瘍性大腸炎とは異なる。また、クローン病は、口、食道、胃、十二指腸、大腸、虫垂、および肛門にも発症する可能性があるが、通常小腸に発症する。
【０００４】
潰瘍性大腸炎はあらゆる年齢の人に発症するが、１５〜３０歳で発症することが最も多く、またはそれより頻度は少ないが５０〜７０歳でも発症する。小児および青年が本疾患を発症することもある。潰瘍性大腸炎は男女等しく発症し、一部の家系では遺伝するように見える。
【０００５】
潰瘍性大腸炎に罹患した人の約５％が結腸癌を発症することを考慮することも重要である。時間とともに、および結腸患部の範囲によって、癌のリスクは増大する。例えば、下部結腸と直腸のみが罹患している場合は、癌のリスクは通常と変わらない。しかし、結腸全体が罹患している場合、癌のリスクは通常の３２倍程になる可能性がある。従って、ＩＢＤの治療に有用な薬物は結腸癌の予防にも有用である可能性がある。
【０００６】
ＩＢＤの発症機序には、遺伝因子、免疫因子、および環境刺激の間で複数の因子が相互作用している可能性がある。最近の証拠では、ＩＢＤの発症機序において、抗原に反応する粘膜免疫系の病理学的活性化が重要な要因であることを示唆している。
【０００７】
前記炎症プロセスの中で抗原が提示されると、その直後に糖タンパクペプチドの小分子であるサイトカインが生成し、これが様々な細胞集団間の伝達シグナルを提供し、その後の免疫および炎症反応の方向性を決定する。炎症性サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を含む。マクロファージが主なサイトカインの供給源であるが、上皮細胞もこれらのペプチド因子の多くを産生することができる。
【０００８】
Ｔヘルパー（Ｔ  Ｈｅｌｐｅｒ：Ｔｈ）細胞は、さらに重要なサイトカイン供給源である。Ｔｈ１細胞は細胞性免疫反応に関与し、ＩＬ−２、インターフェロンγ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｇａｍｍａ：ＩＦＮ−γ）、およびＴＮＦ−αを産生する。炎症制御に関与する重要な転写因子ＮＦｋＢは、ＩＢＤの発症機序に特に関与しており、前記Ｔｈ１細胞によって産生されるサイトカインの量を調節する（Ｎｅｕｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２：９９８−１００４を参照）。Ｔｈ２細胞はＢ細胞による抗体合成を促進し、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０を産生する。
【０００９】
ケモカインもまた、結腸炎の発症機序に関与していると考えられている。ケモカインは炎症性タンパク質であり、化学誘引および白血球活性化を介して免疫および炎症反応に関与する。例えば、ＲＡＮＴＥＳはＣ−Ｃケモカインであり、単球、リンパ球、肥満細胞、および好酸球などの炎症細胞の補充および活性化を促す。ＲＡＮＴＥＳは最近、結腸炎の慢性期に増加することが示された（Ａｊｕｅｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：５５２−５５８を参照）。
【００１０】
潰瘍性大腸炎の治療は、前記疾患の重症度によって決まる。ほとんどの人は薬物療法で治療される。重度症例では、患部の結腸を切除するため、手術が必要となる患者もいる。
【００１１】
炎症性腸疾患（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＩＢＳ）はよく見られるがあまり理解されていない疾患であり、腹痛、下痢および／または便秘、膨満感、鼓脹（ｇａｓｓｉｎｅｓｓ）、および痙攣を含む様々な腸症状を引き起こす。これらの症状は多数の異なる腸疾患によって引き起こされる可能性があるが、通常、より重篤な問題を除外した後に初めてＩＢＳと診断される。ますます多くの証拠によってＩＢＳの発症機序における炎症の役割が示唆されている。
【００１２】
治療目標は、寛解を導入および維持し、ＩＢＤ／ＩＢＳ患者の生活の質を改善することである。数種類の薬物が利用できる。
【００１３】
アミノサリチル酸塩は５−アミノサリチル酸（５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ：５−ＡＳＡ、メサラミン）または４−アミノサリチル酸（４−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ：４−ＡＳＡ）を含む薬物であり、前記炎症の制御に役立つ。しかし、メサラミンと４−ＡＳＡは、いずれも消化管を通過する際に吸収され、下部消化管、特に結腸および直腸に到達するメサラミンの量に有害な影響を及ぼす可能性がある。そのため、腸および上部消化管を通過するメサラミンを保護するため、様々なメサラミン製剤が導入されてきた。
【００１４】
さらに、メサラミンの結腸特異的送達に役立つ可能性がある、いくつかのメサラミンプロドラッグが導入された。これらのプロドラッグは一般に、腸および上部消化管で容易に吸収されないため、より簡単に結腸に到達することができる。
【００１５】
スルファサラジンはスルファピリジンと５−ＡＳＡの合剤であり、寛解の導入と維持に利用される。スルファサラジンは体内で代謝され、５−ＡＳＡとスルファピリジンを生成する。前記スルファピリジン成分は、抗炎症作用を持つ５−ＡＳＡを腸に輸送する。
【００１６】
しかし、スルファピリジンは悪心、嘔吐、胸焼け、下痢、および頭痛などの副作用を生じることがある。これらの副作用は通常、消化管内でのスルファピリジンの活性と、消化系に吸収されたスルファピリジンの活性によるものである。
【００１７】
オルサラジン、イプサラジド（ｉｐｓａｌａｚｉｄｅ）、およびバルサラザイド（ｂａｌｓａｌａｚｉｄｅ）など、他の５−ＡＳＡ製剤は各々異なる担体を有し、副作用が少なく、スルファサラジンを投与することができない人に使用可能である。スルファサラジンと異なり、これらの５−ＡＳＡ化合物が消化管で分解しても、望まない代謝産物を生じることはない。
【００１８】
一般に５−ＡＳＡ化合物は、結腸内の炎症部位により、経口、浣腸により、または坐剤で投与される。軽度から中等度の潰瘍性大腸炎の人は、ほとんどがまずこの薬物群による治療を受ける。しかし一般に、この治療法は最適とは考えられず、それは主に、前記薬物の効能が低く、患者のコンプライアンスも悪くなるためである。
【００１９】
他に使用される薬物は、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン、ブデソニドなどのコルチコステロイド、およびアザチオプリンおよび６−メルカプトプリン（６−ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ：６−ＭＰ）などの免疫調節薬である。これらの薬物は、高血圧、感染症リスクの上昇などの副作用を生じる可能性がある。
【００２０】
スルファサラジン、オルサラジン、およびバルサラザイドはメサラミン誘導体であり、メサラミン以外の担体がジアゾ結合によりメサラミンに結合している。これらのプロドラッグは腸および上部消化管で容易に吸収されないため、結腸に到達することができ、ここで結腸ミクロフローラのアゾ還元酵素により開裂し、前記メサラミンと担体を直接結腸に放出する。
【００２１】
他のメサラミン誘導体は、前記分子のカルボキシルおよびヒドロキシル官能基を介してメサラミンに結合する担体を有する。このうち、エステルまたはアミドとＬ−セリンおよびＬ−グリシンなどのアミノ酸との調製、またはタウリンなど他の生体化合物の添加が報告されている。これらのプロドラッグの活性は、メサラミンを放出するカルボキシペプチダーゼおよびアミノペプチダーゼＡの作用に基づいている（Ｒ．Ｐｅｌｌｉｃｃｉａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６，ｐｇ．４２０１−７）。
【００２２】
これまでのほとんどの技術では、メサラミンに結合する担体部分が不活性である。そのため、担体部分は、生物活性もあり、ＩＢＤ／ＩＢＳの治療に有用な５−ＡＳＡまたは４−ＡＳＡのいずれかに結合させることが望ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
一般に、組織中に硫化水素（Ｈ２Ｓ）を放出することができるＨ２Ｓ放出部分は、アゾ、エステル、無水物、チオエステル、またはアミド結合を介して４−または５−アミノサリチル酸（４−または５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ：４−または５−ＡＳＡ）分子に結合し、本発明の４−または５−ＡＳＡ誘導体を形成する。前記Ｈ２Ｓ放出部分を４−または５−ＡＳＡに共有結合させることで、本発明の誘導体はプロドラッグとして作用することができ、通常は腸または上部消化管に容易に吸収されないため、より簡単に結腸に到達することができる。
【００２４】
４−または５−ＡＳＡの抗炎症特性とその潰瘍性大腸炎治療での使用については、十分報告されている。４−または５−ＡＳＡは、腸の炎症、下痢（排便回数）、直腸出血、および胃痛を軽減する。Ｈ２Ｓは、最近、神経調節物質として機能し、抗炎症作用を発現することが示された。さらに、Ｈ２Ｓは侵害受容から結腸直腸の膨張を調節することが示された（Ｄｉｓｔｒｕｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｔｈａｔ  Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｓｕｌｆｉｄｅ  Ｅｘｅｒｔｓ  Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ  ｂｙ  Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ＫＡＴＰ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．ａｎｄ  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３１６：３２５−３３５を参照。この文献はこの参照により本明細書に組み込まれる）。最終的に、Ｈ２Ｓは、腸組織で平滑筋弛緩薬になることが示された（Ｔｅａｇｕｅ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｔｈｅ  Ｓｍｏｏｔｈ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｒｅｌａｘａｎｔ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｓｕｌｆｉｄｅ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ：  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｔｏ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１３９−１４５を参照。この文献はこの参照により本明細書に組み込まれる）。
【００２５】
驚くべきことに、前記Ｈ２Ｓ放出部分を４−または５−ＡＳＡに共有結合させることにより、前記Ｈ２Ｓ部分のみの場合と比べ、前記Ｈ２Ｓ部分のＨ２Ｓ放出能力が改善する。このことは、前記Ｈ２Ｓ放出部分が４−または５−ＡＳＡに共有結合していると同時に、加水分解または消化管中にある様々な酵素による加水分解又は開裂で前記Ｈ２Ｓ放出部分が前記４−または５−ＡＳＡから開列し、前記２つの活性成分、すなわち４−または５−アミノサリチル酸と前記Ｈ２Ｓ放出部分を放出し、さらなる作用によってＨ２Ｓが放出されることを示唆している。
【００２６】
本発明の誘導体は、４−または５−ＡＳＡ単独、Ｈ２Ｓ放出部分単独、および４−または５−ＡＳＡとＨ２Ｓ放出部分との混合物よりも、炎症の軽減、結腸炎被験者の下痢および便潜血の軽減、および結腸直腸の膨張に伴う内臓痛の軽減効果が優れている。さらに、本発明の誘導体は、シクロオキシゲナーゼ（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ：ＣＯＸ）−１、ＣＯＸ−２、構成内皮の一酸化窒素シンターゼ（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ：ｅＮＯＳ）、および誘導型ＮＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＮＯＳ：ｉＮＯＳ）のｍＲＮＡ値も低下させるが、これらはすべて炎症に関与すると考えられている酵素である。  
【課題を解決するための手段】
【００２７】
従って、本発明の１つの観点によると、本発明の誘導体は、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）および過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＩＢＳ）などの消化（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ：ＧＩ）管の炎症状態の治療に有用である。理論に固執することはないが、前記硫化水素放出部分から放出された硫化水素は、いくつかの炎症性遺伝子の発現を制御する転写因子であるＮＦｋＢの阻害により抗炎症作用を発現すると考えられている。さらに、Ｈ２Ｓの抗侵害受容作用にはＡＴＰ感受性Ｋ＋（ＫＡＴＰ）チャネルが関与すると考えられている。
【００２８】
本発明の別の観点によると、本発明の４−または５−ＡＳＡ誘導体は、ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞の生存可能性を低下させる効果があるため、結腸癌の予防および／または治療に有用である。
【００２９】
概して述べると、本発明の化合物は以下の一般式を有しており、
Ａ−Ｌ−Ｒ（Ｉ）
式中、
Ａは
【００３０】
【化６】
2008542209.tif 000003
【００３１】
ここで、−Ｎ＝は４または５の位置にあるものであり、
【００３２】
【化７】
2008542209.tif 000004
【００３３】
ここで、−ＮＨは４または５の位置にあるものであり、
【００３４】
【化８】
2008542209.tif 000005
【００３５】
ここで、−ＮＨ２は４または５の位置にあるものであるか、又は
【００３６】
【化９】
2008542209.tif 000006
【００３７】
ここで、−ＮＨ２は４または５の位置にあるものであり、
Ｌは、Ｏ、Ｏ−Ｃ＝Ｏ、Ｓ、Ｎ、またはエステル結合、無水物結合、チオエステル結合、アミド結合、またはアゾ結合を形成する共有結合のいずれかであり、
Ｒは、組織中に硫化水素を放出する硫化水素放出部分である、化合物である。組織存在下でＨ２Ｓを放出する、すべての効果的な非毒性硫化水素放出部分を本発明で使用できることが理解される。
【００３８】
好適な実施形態において、Ｒは、以下の群
【００３９】
【化１０−１】
2008542209.tif 000007
【００４０】
【化１０−２】
2008542209.tif 000008
【００４１】
【化１０−３】
2008542209.tif 000009
【００４２】
【化１０−４】
2008542209.tif 000010
【００４３】
【化１０−５】
2008542209.tif 000011
【００４４】
から選択される硫化水素放出部分である。
【００４５】
前記部分はすべて生物組織でＨ２Ｓを放出するが、ほとんどの前記Ｈ２Ｓ放出部分はＮ−アセチルシステインとは異なるメカニズムでＨ２Ｓを放出する。Ｎ−アセチルシステインが様々な組織でシステインに変換され、インビボでのシステイン代謝によりＨ２Ｓが生成することは周知である。Ｈ２Ｓは主に、Ｌ−システイン代謝に関与する２種類のピリドキサール５’−リン酸依存性酵素、つまり、シスタチオンγ−リアーゼおよびシスタチオンβ−シンターゼによって産生される（Ｆｕｊｉｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｓｕｌｆｉｄｅ  ａｓ  ａｎ  Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｂｉｌｉａｒｙ  Ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  Ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｌｉｖｅｒ．Ａｎｔｉｏｘｉｄ．  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．７：７８８−７９４を参照。これはこの参照によって本明細書に組み込まれる。）。
【００４６】
例えば、アルカリ金属およびアルカリ土類金属、非毒性アミン、およびアミノ酸との塩などの薬学的に許容される塩も本発明の一部である。好ましい塩はアルギニンおよびアグマチンとの塩である。薬学的に許容される酸付加塩も含まれる。
【００４７】
本発明のさらなる観点によると、本発明の化合物の医薬品、および薬学的に許容される添加物または担体、特に消化管の炎症状態の治療に使用される賦形剤または担体が提供される。
【００４８】
本発明の他の実施形態によると、治療を必要とする対象において炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および過敏性腸症候群（ＩＢＳ）などの消化管の炎症状態を治療する方法において、前記被験者に有効量の４−または５−ＡＳＡ誘導体およびその塩を投与する工程が含まれる。さらに、それを必要とする対象において結腸癌を治療または予防するための方法が提供され、前記対象に有効量の４−または５−ＡＳＡ誘導体およびその塩を投与する工程を有する。
【００４９】
さらなる実施形態において、本発明は、消化管の炎症状態治療用の薬物を製造する際の、本発明の４−または５−ＡＳＡ誘導体およびその塩の使用について提供する。本発明ではまた、消化管の炎症状態を治療する際の、４−または５−ＡＳＡ誘導体とその塩の使用についても提供する。
【００５０】
好ましい化合物は以下の化学式の化合物であり、
【００５１】
【化１１】
2008542209.tif 000012
【００５２】
２−ヒドロキシ−４−または５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸（ＩＩ）、
【００５３】
【化１２】
2008542209.tif 000013
【００５４】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（ＩＩＩ）、
【００５５】
【化１３】
2008542209.tif 000014
【００５６】
４または５−アミノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルオキシ］−安息香酸（ＩＶ）、
【００５７】
【化１４】
2008542209.tif 000015
【００５８】
２−ヒドロキシ−４または５［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルアミノ］−安息香酸（Ｖ）、
【００５９】
【化１５】
2008542209.tif 000016
【００６０】
４−または５−｛［（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メチル］−アゾ｝−２−ヒドロキシ−安息香酸（ＶＩ）、
【００６１】
【化１６】
2008542209.tif 000017
【００６２】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メチルエステル（ＶＩＩ）、
【００６３】
【化１７】
2008542209.tif 000018
【００６４】
４−または５−アミノ−２−［（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メトキシカルボニルオキシ］−安息香酸（ＶＩＩＩ）、
【００６５】
【化１８】
2008542209.tif 000019
【００６６】
４−または５−［（１−カルボキシ−２−メルカプト−エチルカルバモイル）−メトキシカルボニルアミノ］−２−ヒドロキシ−安息香酸（ＩＸ）、
【００６７】
【化１９】
2008542209.tif 000020
【００６８】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸とＮ−アセチルシステインとの無水物（Ｘ）、
【００６９】
【化２０】
2008542209.tif 000021
【００７０】
４−または５−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（ＸＩ）
【００７１】
【化２１】
2008542209.tif 000022
【００７２】
２−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルオキシ）−４または５−アミノ−安息香酸（ＸＩＩ）、
【００７３】
【化２２】
2008542209.tif 000023
【００７４】
２−ヒドロキシ−４または５−（｛４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシメチル｝−アゾ）−安息香酸（ＸＩＩＩ）、
【００７５】
【化２３】
2008542209.tif 000024
【００７６】
４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン２−イル］−フェノキシメトキシカルボニルオキシ｝−安息香酸（ＸＩＶ）、
【００７７】
【化２４】
2008542209.tif 000025
【００７８】
２−ヒドロキシ−４−または５−｛４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチア−ジホスフェタン２−イル］−フェノキシメトキシカルボニルアミノ｝−安息香酸（ＸＶ）、
【００７９】
【化２５】
2008542209.tif 000026
【００８０】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシメチルエステル（ＸＶＩ）、
【００８１】
【化２６】
2008542209.tif 000027
【００８２】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェニルエステル（ＸＶＩＩ）、
【００８３】
【化２７】
2008542209.tif 000028
【００８４】
４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルオキシ｝−安息香酸（ＸＶＩＩＩ）、
【００８５】
【化２８】
2008542209.tif 000029
【００８６】
２−ヒドロキシ−４−または５−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルアミノ｝−安息香酸（ＸＩＸ）、
【００８７】
【化２９】
2008542209.tif 000030
【００８８】
４−または５−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルアゾ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（ＸＸ）、
【００８９】
【化３０】
2008542209.tif 000031
【００９０】
２−（４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルアミノ）−４−チオカルバモイル−酪酸（ＸＸＩ）、
【００９１】
【化３１】
2008542209.tif 000032
【００９２】
４−または５−アミノ−２−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルカルバモイルオキシ）−安息香酸（ＸＸＩＩ）、
【００９３】
【化３２】
2008542209.tif 000033
【００９４】
２−ヒドロキシ−４−または５−［３−（１−ヒドロキシメチル−３−チオカルバモイル−プロピル）−ウレイド］−安息香酸（ＸＸＩＩＩ）、
【００９５】
【化３３】
2008542209.tif 000034
【００９６】
４−または５−アミノ−２−（２−アミノ−４−チオカルバモイル−ブチリルオキシ）−安息香酸（ＸＸＩＶ）、
【００９７】
【化３４】
2008542209.tif 000035
【００９８】
４−または５−（２−アミノ−４−チオカルバモイル−ブチリルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（ＸＸＶ）、
【００９９】
【化３５】
2008542209.tif 000036
【０１００】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸と２−アミノ−４−チオカルバモイル−酪酸との無水物（ＸＸＶＩ）、
【化３６】
2008542209.tif 000037
【０１０１】
４−チオカルバモイルフェニル＝４−または５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾエート（ＸＸＶＩＩ）、
【０１０２】
【化３７】
2008542209.tif 000038
【０１０３】
４−または５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（ＸＸＶＩＩＩ）、
【０１０４】
【化３８】
2008542209.tif 000039
【０１０５】
２−ヒドロキシ−４−または５−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−安息香酸（ＸＸＩＸ）、
【０１０６】
【化３９】
2008542209.tif 000040
【０１０７】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸チオカルバモイルメチルエステル（ＸＸＸ）、
【０１０８】
【化４０】
2008542209.tif 000041
【０１０９】
４−または５−アミノ−２−チオカルバモイルメトキシカルボニルオキシ−安息香酸（ＸＸＸＩ）、
【０１１０】
【化４１】
2008542209.tif 000042
【０１１１】
２−ヒドロキシ−４−または５−チオカルバモイルメトキシカルボニルアミノ−安息香酸（ＸＸＸＩＩ）、
【０１１２】
【化４２】
2008542209.tif 000043
【０１１３】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸と硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステルとの無水物（ＸＸＸＩＩＩ）、
【０１１４】
【化４３】
2008542209.tif 000044
【０１１５】
４−または５−アミノ−２−（２−メルカプト−エトキシスルホニルオキシ）−安息香酸（ＸＸＸＩＶ）、および
【０１１６】
【化４４】
2008542209.tif 000045
【０１１７】
５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（ＸＸＸＶ）である。
【０１１８】
最も好ましい化合物は、
【０１１９】
【化４５】
2008542209.tif 000046
【０１２０】
５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（ＸＸＸＶ）、
【０１２１】
【化４６】
2008542209.tif 000047
【０１２２】
４−チオカルバモイルフェニル＝４−または５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾエート（ＸＸＶＩＩ）、および
【０１２３】
【化４７】
2008542209.tif 000048
【０１２４】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸とＮ−アセチルシステインとの無水物（Ｘ）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１２５】
本発明は以下に、本明細書において説明される好適な実施形態について説明する。ただし、これらの実施形態は本発明を図示するためのものであり、請求項によって定義される本発明の範囲を制限するものとして解釈されないことが理解される。
【０１２６】
本発明の化合物は２つの活性部位、４−または５−ＡＳＡおよび硫化水素放出部分を含み、アゾ、エステル、無水物、チオエステル、またはアミド結合によってともに結合されている。アゾ還元酵素があると、アゾ結合したプロドラッグから４−または５−ＡＳＡを放出することができるため、結腸への標的化輸送が可能となり、同時に全身での吸収が減少する。同様に、カルボキシペプチダーゼおよびアミノペプチダーゼＡがあると、それぞれエステルおよびアミド結合したプロドラッグから４−または５−ＡＳＡを放出することもできる。また、エステラーゼおよびチオエステラーゼは、それぞれエステルおよびチオエステル結合を開裂する。最後に、リパーゼは無水物結合を開裂する。本発明の化合物は、既知の出発原料および試薬を用いて合成可能である。
【０１２７】
本発明の化合物は、粘膜炎、感染症（例えば、ウイルス性、細菌性、および真菌性疾患）、およびクローン病などの口の炎症状態、食道炎、化学的損傷による状態（例えば、アルカリ溶液の摂取）、胃食道逆流疾患、胆汁酸逆流、バレット食道、クローン病、および食道狭窄などの食道の炎症状態；胃炎（例えば、ヘリコバクター・ピロリ、酸性消化性疾患、および萎縮性胃炎）、セリアック病、消化性潰瘍性疾患、胃の前癌病変、非潰瘍性消化不良、およびクローン病などの炎症状態、クローン病、細菌異常増殖、消化性潰瘍性疾患、および腸の亀裂などの胃の炎症状態、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、感染性結腸炎（例えば、ディフィシレ菌結腸炎、サルモネラ腸炎、赤痢菌感染症、エルシニア症、クリプトスポリジウム症、ｍｉｃｒｏｓｐｒｉｄｉａｌ感染、およびウイルス感染などの偽膜性結腸炎）、放射線結腸炎、免疫力がない宿主での結腸炎（例えば、盲腸炎）、結腸の前癌状態（例えば、異形成、腸の炎症状態、および結腸ポリープ）、直腸炎、痔、一過性直腸神経痛、および直腸亀裂に伴う炎症などの結腸の炎症状態；胆管炎、硬化性胆管炎、原発性胆汁性肝硬変、および胆嚢炎などの肝臓胆嚢および／または胆道疾患、および腸膿瘍を含む（これに限定されるものではないが）様々な疾患、特に消化管の炎症状態の予防または治療に利用することができる。
【０１２８】
治療される特定の状態または疾患状態によって、当該分野の技術の範囲内で容易に決定されるように、適切な治療に有効且つ安全な用量で、対象に本発明の化合物を投与することができる。これらの化合物は、１回量または分割量で、最も望ましくは、１日約１〜約２０００ｍｇの範囲の用量で投与されるが、投与される対象の体重および状態、および選択した特定の投与経路により、必然的にばらつきが生じる。しかし、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約５〜９０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約５〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量が最も望ましい。それでもなお、投与される人の体重および状態と前記薬物に対する個人の反応、および選択した剤形の種類とそのような投与が実行される時間および間隔によってばらつきが生じることもある。有害な副作用を引き起こすことなく高用量を使用することも可能であるが、場合によっては、前述の範囲の下限より少ない用量で十分以上なこともあり、ただし、このような高用量では最初にまず少量を数回に分けて１日かけて投与する。
【０１２９】
本発明の化合物は如何なる製剤処方の形態でも投与することが可能であり、その性質は投与経路に依存する。これらの医薬品は、適合する薬学的に許容される賦形剤または溶媒を用い、従来の方法で調整することができる。そのような組成物の例には、即時調製される溶液、注射剤、直腸、経鼻、眼内、経膣などの調整用のカプセル、錠剤、経皮貼布、薬用キャンディー、トローチ剤、噴霧剤、シロップ剤、粉末、顆粒、ゲル剤、エリキシル剤、坐薬などを含む。好ましい投与経路は経口および直腸経路である。
【０１３０】
経口投与では、微結晶性セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、およびグリシンなど様々な添加物を含む錠剤を、デンプン（好ましくは、コーン、ポテト、またはタピオカスターチ）、アルギン酸、および特定の複合ケイ酸塩などの様々な錠剤分解物質に加え、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、およびアカシアなどの造粒結合剤と一緒に利用することができる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなどの潤滑剤を錠剤化の目的で使用することができる。ゼラチンカプセルの充填剤として同種の固体組成を利用することもでき、この充填の好適な素材には、ラクトースまたは乳糖、および高分子量ポリエチレングリコールも含む。水性懸濁液および／またはエリキシル剤が経口投与に必要な場合、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、およびその様々な組み合わせなどの希釈剤と一緒に、前記活性成分を甘味剤または香料、着色料、および必要な場合は、乳化剤および／または懸濁剤と併用することができる。
【０１３１】
剤形は、即効性、徐放性、持続放出、遅延放出、または標的遅延放出（ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）として設計することができる。これらの用語の定義は当業者に周知である。さらに、前記剤形の放出特性は、重合体の混合物組成、コーティングされた基質組成、複数微粒子組成、コーティングされた複数微粒子組成、イオン交換樹脂を基本とした組成、浸透現象を基本とした組成、または生分解性重合体組成により達成することができる。理論に固執することなく、前記放出は、好ましい拡散、溶出、浸食、イオン交換、浸透、またはその組み合わせにより達成することができると考えられる。
【０１３２】
非経口投与では、活性化合物のゴマまたはピーナッツ油または水性プロピレングリコール溶液を利用することができる。水性溶液は、適切な緩衝液を加え（好ましくはｐＨ８以上とする）、必要であれば、液体希釈液をまず等張にする。前記水性溶液は、静脈注射の目的に適している。滅菌状態でのこれらの全溶液の調整は、当業者に周知の標準的な薬学技術で容易に達成される。
【０１３３】
以下の限定されない実施例は、さらに説明を加えて当業者が本発明を作成および利用することができるようにするものである。
【０１３４】
化合物の調整
【実施例１】
【０１３５】
２−ヒドロキシ−５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸（４）［化学式ＩＩの化合物］の合成
【０１３６】
【化４８】
2008542209.tif 000049
【０１３７】
（４−プロペニル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２）の合成
４−プロペニル−フェニルアミン（１）（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。前記反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒を蒸発させた後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、（４−プロペニル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２）が得られた（収率９０％）。
【０１３８】
５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン（３）の合成
（４−プロペニル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２、４．５ｍｍｏｌ）および硫黄（３１．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５００ｍｌ）中で８時間加熱し、溶媒を除去した後の残渣をトルエンにほぼ完全に溶解した。２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液によりトルエン溶液を抽出しようとすることにより、橙色の固体沈殿物が得られた。この生成物を沸騰水に溶解し、室温にて３０分間４Ｎ塩酸で処理し、４Ｎ  ＮａＯＨを添加すると望みの生成物（３）が得られた（収率５５％）。
【０１３９】
２−ヒドロキシ−５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸（４）の合成
５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン（３、０．５６ｍｍｏｌ）を５ｍＬの濃縮ＨＣｌと２．５ｍＬ水の混合物に溶解し、亜硝酸ナトリウム（０．５６ｍｍｏｌ）溶液でジアゾ化した。その間にサリチル酸（０．５６ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（１．１２ｍｍｏｌ）、および炭酸ナトリウムを水に溶解する。ジアゾ懸濁液を数回に分けて前記サリチル酸のアルカリ溶液に添加し、水酸化カリウム溶液の量をさらに添加することで、全反応中、アルカリ度を十分高い値に維持する。２日後、反応混合物を５０℃で３０分加熱する。アゾ化合物（４）はＨＣｌを用いて沈殿させ、ろ過すると（収率８５％）、前記化学式ＩＩの化合物２−ヒドロキシ−５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸が得られた。
【実施例２】
【０１４０】
２−ヒドロキシ−４−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸（２）［科学式ＩＩの化合物］の合成
【０１４１】
【化４９】
2008542209.tif 000050
【０１４２】
２−ヒドロキシ−４−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸（２）の合成
４−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１、１ｍｍｏｌ）を濃縮ＨＣｌ  １０ｍＬと水５ｍＬの混合物に溶解し、亜硝酸ナトリウム（１ｍｍｏｌ）溶液でジアゾ化した。ジアゾ懸濁液は、５−フェニル−［１，２］ジチオール−３−チオン（１ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド溶液に数回に分けて添加した。２日後、反応混合物を５０℃で３０分加熱する。冷却後、アゾ化合物（２）はＨＣｌを用いて沈殿させ、ろ過すると（収率６５％）、前記式ＩＩの化合物２−ヒドロキシ−５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルアゾ］−安息香酸が得られた。
【実施例３】
【０１４３】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（４）［化学式ＸＸＸＶの化合物］
【０１４４】
【化５０】
2008542209.tif 000051
【０１４５】
５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）の合成
アネトール（１）（３２．５ｇ；０．２１ｍｏｌ）および硫黄（４５ｇ；１．４０ｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）中８時間加熱し、溶媒除去後の残渣をトルエンにほぼ完全に溶解した。２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液によりトルエン溶液を抽出することを試みることにより、橙色の固体沈殿物（８．５ｇ）が得られた。融点３００℃以上。この生成物を沸騰水に溶解し、塩酸を添加後、橙色の沈殿物（２）が得られた（収率５０％）、融点１８８〜１８９℃。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ６．８６（ｄ，２Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），１０．５１（ｓ，−ＯＨ）；ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｚ２２５（Ｍ−）。
【０１４６】
【化５１】
2008542209.tif 000052
【０１４７】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０１４８】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス雰囲気下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（２）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１４９】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（４）の合成
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液にヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（３）の粗生成物を４０％  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物３を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（４）［式ＸＸＸＶの化合物］が得られた（収率４０％）。
【０１５０】
化合物５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（４）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ７．０７（ｄ，２Ｈ），７．３８（ｄ，２Ｈ），７．４６（ｄ，２Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｄ，２Ｈ），１０．３５（ｓ，−ＯＨ）；ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｚ３６２（Ｍ＋）。
【実施例４】
【０１５１】
一般的な合成手順：２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−アミノフェニル炭酸水素塩（５）
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ヒドロキシフェニル−カルバミン酸（６）
【０１５２】
【化５２】
2008542209.tif 000053
【０１５３】
４−または５−アミノ−２−エトキシカルボニルオキシ−安息香酸（１）および４−または５−エトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（２）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（３．０ｍｍｏｌ）を乾燥管を付けた丸底フラスコ中、４０ｍＬのクロロホルムに溶解した。エチルクロロギ酸（３．０ｍｍｏｌ）を徐々に添加し、溶液を２時間還流した。前記クロロホルムを減圧留去し、残渣をエーテルに取った。活性炭を用いてエーテル層を脱色し、ろ過、溶媒を減圧除去した。得られた残渣をエタノールに溶解し、生成物はｎ−ヘキサンを用いた沈殿により、油状半固体の粗生成物として回収した。前記粗生成物はシリカゲルを充填したフラッシュクロマトグラフィーでジエチルエーテル／ヘキサン（７：３、ｖ／ｖ）を溶出して精製し、前記表題化合物の４−または５−アミノ−２−エトキシカルボニルオキシ−安息香酸（１：収率：５８％）および４−または５−エトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（２：収率：３４％）を得た。
【０１５４】
４−または５−アミノ−２−エトキシカルボニルオキシ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）の合成
（１）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物にｔ−ブタノール（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−エトキシカルボニルオキシ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）が得られた（収率５５％）。
【０１５５】
４−または５−エトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４）の合成
化合物（４）は、化合物（３）を得るために報告された手順に沿って得られた。収率：７４％
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−アミノフェニル炭酸水素塩（５）の合成
前記化合物（３）（３．５ｇ；０．０１１ｍｏｌ）のエタノール（８０ｍｌ）溶液にＮａＯＨ  １Ｎ（４０ｍｌ）を添加した。反応混合物を２時間室温で攪拌した。次に前記溶液をＨＣｌ  １Ｎで中和した。エタノールを除去し、酢酸エチル（３×１５０ｍｌ）で抽出を行い、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過、溶媒を留去し、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−アミノフェニル炭酸水素塩（５）が白色固体として得られた（３ｇ；０．０１０ｍｏｌ；収率：８９％）。
【０１５６】
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ヒドロキシフェニル−カルバミン酸（６）の合成
化合物（６）は、化合物（５）を得るために報告された手順に沿って得られた。収率：９１％
【実施例５】
【０１５７】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルカルバモイルオキシ）−安息香酸（１１）（式ＸＸＩＩの化合物）
４−または５−［３−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピル）−ウレイド］−２−ヒドロキシ−安息香酸（１２）
【０１５８】
【化５３】
2008542209.tif 000054
【０１５９】
５−チオ−Ｌ−グルタミン−ＯｔＢｕ（２）の合成
Ｌ−グルタミン−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（１）（１．２ｍｍｏｌ；０．３ｇ）およびローソン試薬（０．７５ｍｍｏｌ；０．３ｇ）をベンゼン（２０ｍＬ）に添加し、混合物を１５分間、還流しながら加熱した。次に反応液を冷却し、減圧留去した。粗生成物を１００ｇのシリカゲルでクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物で溶出した。白色固体として０．２ｇ（収率７６％）の生成物（２）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４（ｓ，９Ｈ），１．８−２．８（ｍ，５Ｈ），４．０−４．８（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｚ２１９（Ｍ＋）。
【０１６０】
【化５４】
2008542209.tif 000055
【０１６１】
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）の合成
（５）（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）が得られた（収率８０％）。
【０１６２】
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ヒドロキシフェニル−カルバミン酸（８）の合成
化合物６（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１６３】
４−または５−アミノ−２−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルカルバモイルオキシ）−安息香酸（１１）の合成
（７）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、２−アミノ−４−チオカルバモイル−酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（９）の粗生成物を４０％  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（１１）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／１）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピルカルバモイルオキシ）−安息香酸（１１）である化学式ＸＸＩＩの化合物が得られた（収率４５％）。
【０１６４】
４−または５−［３−（１−カルボキシ−３−チオカルバモイル−プロピル）−ウレイド］−２−ヒドロキシ−安息香酸（１２）の合成
化合物（１２）は、化合物（１１）を得るために報告された手順に沿って得られた。収率：３８％
【実施例６】
【０１６５】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルオキシ］−安息香酸（１５）［化学式ＩＶの化合物］
２−ヒドロキシ−４−または５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルアミノ］−安息香酸（１６）［化学式Ｖの化合物］
【０１６６】
【化５５】
2008542209.tif 000056
【０１６７】
５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）の合成
アネトール（１）（３２．５ｇ；０．２１ｍｏｌ）および硫黄（４５ｇ；１．４０ｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）中８時間加熱し、溶媒除去後の残渣をトルエンにほぼ完全に溶解した。２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液によりトルエン溶液を抽出しようと試みると、橙色の固体沈殿物（８．５ｇ）が得られた。融点３００℃以上。この生成物を沸騰水に溶解し、塩酸を添加後、橙色の沈殿物（２）が得られた（収率５０％）、融点１８８〜１８９℃。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ６．８６（ｄ，２Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），１０．５１（ｓ，−ＯＨ）；ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｚ２２５（Ｍ−）。
【０１６８】
【化５６】
2008542209.tif 000057
【０１６９】
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）の合成
（５）（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）が得られた（収率８０％）。
【０１７０】
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ヒドロキシフェニル−カルバミン酸（８）の合成
化合物（６）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１７１】
４−または５−アミノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルオキシ］−安息香酸（１５）の合成
（７）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（１３）の粗生成物を４０％  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（１５）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルオキシ］−安息香酸（１５）である式ＩＶの化合物が得られた（収率４５％）。
【０１７２】
２−ヒドロキシ−４−または５−［４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェノキシカルボニルアミノ］−安息香酸（１６）の合成
化合物（１６）、つまり式Ｖの化合物は、化合物（１５）を得るために報告された手順に沿って得られた。収率：３８％
【実施例７】
【０１７３】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルオキシ｝−安息香酸（１９）［式ＸＩＶの化合物］
２−ヒドロキシ−４−または５−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルアミノ｝−安息香酸（２０）［化学式ＸＩＩＩの化合物］
【０１７４】
【化５７】
2008542209.tif 000058
【０１７５】
（ｐ−ヒドロキシフェニル）ジチオホスホン酸無水物の合成
Ｒｅｄ  Ｐ（４ｇ；０．１２９ｍｏｌ）、Ｓ（４ｇ；０．１２５ｍｏｌ）、およびＰｈＯＨ（４ｇ；０．０４２ｍｏｌ）を１５５〜１５８℃で５．５時間加熱し、反応混合物を室温で冷却し、沈殿物を回収した（５．５ｇ、収率３４％）。融点２２４〜２２６℃。ＮＭＲおよびＭＳ分析はｐ−ヒドロキシフェニルジチオホスホン酸無水物と一致している。
【０１７６】
【化５８】
2008542209.tif 000059
【０１７７】
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）の合成
（５）（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）が得られた（収率８０％）。
【０１７８】
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ヒドロキシフェニル−カルバミン酸（８）の合成
化合物（６）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１７９】
４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルオキシ｝−安息香酸（１９）の合成
（７）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物にｐ−ヒドロキシフェニルジチオホスホン酸無水物（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（１７）の粗生成物を４０％  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（１９）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５[MSOffice1]−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルオキシ[MSOffice2]｝−安息香酸（１９）である化学式ＸＩＶの化合物が得られた（収率６５％）。
【０１８０】
２−ヒドロキシ−４−または５−｛４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェノキシカルボニルアミノ｝−安息香酸（２０）の合成
化合物（２０）、つまり化学式ＸＩＩＩの化合物は、化合物（１９）を得るために報告された手順に沿って得られた。収率：４８％
【実施例８】
【０１８１】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（２３）［式ＸＸＶＩＩＩの化合物］
２−ヒドロキシ−４−または５−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−安息香酸（２４）［化学式ＸＸＩＸの化合物］
【０１８２】
【化５９】
2008542209.tif 000060
【０１８３】
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）の合成
（５）（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノフェニル炭酸水素塩（７）が得られた（収率８０％）。
【０１８４】
３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−または５−ヒドロキシフェニル−カルバミン酸（８）の合成
化合物（６）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１８５】
４−または５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（２３）の合成
（７）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に４−ヒドロキシ−チオベンズアミド（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（２１）の粗生成物を４０％  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（２３）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（２３）である化学式ＸＸＩＩの化合物が得られた（収率７１％）。
【０１８６】
２−ヒドロキシ−４−または５−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルアミノ）−安息香酸（２４）の合成
化合物（２４）、つまり化学式ＸＸＩＸの化合物は、化合物（２３）を得るために報告された手順に沿って得られた。収率：６８％
【実施例９】
【０１８７】
一般的な合成手順：２−（４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルアミノ）−４−チオカルバモイル−酪酸（６）［化学式ＸＸＩの化合物］
【０１８８】
【化６０】
2008542209.tif 000061
【０１８９】
５−チオ−Ｌ−グルタミン−ＯｔＢｕ（２）の合成
Ｌ−グルタミン−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（１）（１．２ｍｍｏｌ；０．３ｇ）およびローソン試薬（０．７５ｍｍｏｌ；０．３ｇ）をベンゼン（２０ｍＬ）に添加し、混合物を１５分間、還流しながら加熱した。次に反応液を冷却し、減圧留去した。粗生成物を１００ｇのシリカゲルでクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルおよびｎ−ヘキサンの混合物で溶出した。白色固体として０．２ｇ（収率７６％）の生成物（２）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４（ｓ，９Ｈ），１．８−２．８（ｍ，５Ｈ），４．０−４．８（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｚ２１９（Ｍ＋）。
【０１９０】
【化６１】
2008542209.tif 000062
【０１９１】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０１９２】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガスの下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１９３】
２−（４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルアミノ）−４−チオカルバモイル−酪酸（６）の合成
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液にヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、２−アミノ−４−チオカルバモイル−酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（５）の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（６）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、２−（４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルアミノ）−４−チオカルバモイル−酪酸（６）である化学式ＸＸＩの化合物が得られた（収率８０％）ＭＳ（ＥＳＩ），ｍ／ｚ２９８（Ｍ＋）。
【実施例１０】
【０１９４】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−チオカルバモイルフェニルエステル（８）［化学式ＸＸＶＩＩの化合物］
【０１９５】
【化６２】
2008542209.tif 000063
【０１９６】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０１９７】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（２）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０１９８】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−チオカルバモイルフェニルエステル（８）の合成
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液にヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に４−ヒドロキシ−チオベンズアミド（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（７）の粗生成物を４０％  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（８）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−チオカルバモイル−フェニルエステル（８）である化学式ＸＸＶＩＩの化合物が得られた（収率４８％）。
【実施例１１】
【０１９９】
一般的な合成手順：４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェニルエステル（１０）［化学式ＸＶＩＩの化合物］
【０２００】
【化６３】
2008542209.tif 000064
【０２０１】
（ｐ−ヒドロキシフェニル）ジチオホスホン酸無水物の合成
Ｒｅｄ  Ｐ（４ｇ；０．１２９ｍｏｌ）、Ｓ（４ｇ；０．１２５ｍｏｌ）、およびＰｈＯＨ（４ｇ，０．０４２ｍｏｌ）を１５５〜１５８℃で５．５時間加熱し、反応混合物を室温で冷却し、沈殿物を回収した（５．５ｇ、収率３４％）。融点２２４〜２２６℃。ＮＭＲおよびＭＳ分析はｐ−ヒドロキシフェニルジチオホスホン酸無水物と一致している。
【０２０２】
【化６４】
2008542209.tif 000065
【０２０３】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０２０４】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０２０５】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェニルエステル（１０）の合成
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液にヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物にｐ−ヒドロキシフェニルジチオホスホン酸無水物（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧除去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体９の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物１０を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−［４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２，４−ジチオキソ−２λ５，４λ５−［１，３，２，４］ジチアジホスフェタン−２−イル］−フェニルエステル（１０）である式ＸＶＩＩの化合物が得られた（収率７３％）。
【０２０６】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸メルカプトエタンスルホン酸塩（２）の合成
【０２０７】
【化６５】
2008542209.tif 000066
【０２０８】
亜硫酸２−メルカプト−エチルエステル（０．１ｍｏｌ）を１００ｍｌの酢酸エチルに入れた混合物を、不活性雰囲気下、２０〜２５℃、３０〜４５分間で前記４−または５−アミノサリチル酸（１）（１００ｍｌの酢酸エチル中０．１ｍｏｌｅ）溶液に添加した。前記混合物を０〜５℃で１時間攪拌し、ろ過すると、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸メルカプトエタンスルホン酸塩（２）が得られた（収率：９８％）。
【実施例１２】
【０２０９】
４または５−アミノ−２−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルオキシ）−安息香酸（３）［化学式ＸＩＩの化合物］の合成
【０２１０】
【化６６】
2008542209.tif 000067
【０２１１】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０２１２】
４または５−アミノ−２−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルオキシ）−安息香酸（３）の合成
２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（２）の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（３）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４または５−アミノ−２−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルオキシ）−安息香酸（３）である式ＸＩＩの化合物が得られた（収率５２％）
【実施例１３】
【０２１３】
４または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸との無水物（４）［化学式Ｘの化合物］の合成
【０２１４】
【化６７】
2008542209.tif 000068
【０２１５】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０２１６】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（８）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０２１７】
４または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸との無水物（４）の合成
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液にＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（３）の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物４を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸との無水物（４）である化学式Ｘの化合物が得られた（収率６８％）。
【実施例１４】
【０２１８】
４または５−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（５）［化学式ＸＩの化合物］の合成
【０２１９】
【化６８】
2008542209.tif 000069
【０２２０】
４または５−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液にＮａ２ＣＯ３  １０％（１５ｍＬ）およびＦｍｏｃ−ＯＳｕ（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率９０％）。
【０２２１】
４−または５−アミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（７ｐｓｉ）、２４時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（２）が得られた。中間体（２）の粗生成物をジエチルアミン（３３％）のＴＨＦ溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（３）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）が得られた（収率６７％）。
【０２２２】
４−または５−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（５）の合成
２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、４または５−アミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧除去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体４の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（５）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４または５−（２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオニルアミノ）−２−ヒドロキシ−安息香酸（５）である式ＸＩの化合物が得られた（収率７８％）。
【実施例１５】
【０２２３】
４−または５−アミノ−２−（２−メルカプト−エトキシスルホニルオキシ）−安息香酸（３）の合成［化学式ＸＸＸＩＶの化合物］
【０２２４】
【化６９】
2008542209.tif 000070
【０２２５】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０２２６】
４−または５−アミノ−２−（２−メルカプト−エトキシスルホニルオキシ）−安息香酸（３）の合成
硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステル（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（２）の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物３を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４または５−アミノ−２−（２−メルカプト−エトキシスルホニルオキシ）−安息香酸（３）である化学式ＸＸＸＩＶの化合物が得られた（収率５７％）
【実施例１６】
【０２２７】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステルとの無水物（４）［化学式ＸＸＸＩＩＩの化合物］の合成
【０２２８】
【化７０】
2008542209.tif 000071
【０２２９】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）のジオキサン２５ｍＬと水１２．５ｍＬの溶液に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１／２時間攪拌した。反応混合物を２４時間室温で機械的に攪拌した。溶媒の留去後、３Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）を残渣に滴下した。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させた。残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出すると、４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）が得られた（収率８０％）。
【０２３０】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、濃Ｈ２ＳＯ４（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレンガス下（５ｐｓｉ）、６時間室温で攪拌した。溶液を冷却した１０％  ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。残渣を１：１  ＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、その後１：１  ＭｅＯＨ／水（２×２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、留去すると白色固体（２）が得られ、これをＤＣＭ／ヘキサンで再結晶した（収率８３％）。
【０２３１】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステルとの無水物（４）の合成
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）の５０ｍＬジメチルホルムアミド溶液にＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間攪拌した。反応混合物に硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステル（３．０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で３時間、室温で７２時間機械的に攪拌した。ろ過後、ろ液を減圧留去し、溶媒を除去した。このようにして得られた油状残渣を酢酸エチルに溶解し、有機層を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、ろ過し、溶媒を留去した。中間体（３）の粗生成物をＴＦＡ（４０％）のＣＨ２Ｃｌ２溶液で処理した。２時間後、溶媒を除去し、粗生成物の残渣として化合物（４）を得た。前記残渣をシリカゲルのオープンカラムに載せ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出すると、４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝硫酸モノ−（２−メルカプト−エチル）エステルとの無水物（４）である化学式ＸＸＸＩＩＩの化合物が得られた（収率６８％）。
【０２３２】
化合物の特性解析
【実施例１７】
【０２３３】
５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル［以下化合物ＸＸＸＶと称する］
【０２３４】
【化７１】
2008542209.tif 000072
【０２３５】
Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ（商標）シリカゲル５０プレートで蛍光指示薬を用いて薄層クロマトグラフィーを行い、前記プレートをＵＶ光で観察した（２５４ｎｍ）。カラムクロマトグラフィーにはＫｉｅｓｅｌｇｅｌ（商標）６０を使用した。すべての合成試薬はＡｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入し、精製せずに使用した。溶媒は分析用試薬級またはそれ以上の純度とし、提供されたまま使用した。溶液はＮａ２ＳＯ４で乾燥し、Ｂｕｃｈｉ（商標）Ｒ−１１４  ｒｏｔａｖａｐｏｒを使用し、前記溶媒を減圧除去した。構造はプロトン１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲにより分光学的に確認した。スペクトルはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００装置にて記録した。スペクトルはＤＭＳＯにて記録した。適宜、ピークパターンを説明するため、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）の略語を使用している。化学シフトは内部標準としてＭｅ４Ｓｉを参照している。合成生成物のマススペクトルは、Ａｐｐｌａｙｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ（商標）ＡＰＩ  ２０００マススペクトロメトリーで行った。融点はＫｏｆｌｅｒ（商標）高温装置を用いて決定し、補正していない。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ７．０７（ｄ，２Ｈ），７．３８（ｄ，２Ｈ），７．４６（ｄ，２Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｄ，２Ｈ），１０．３５（ｓ，−ＯＨ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ１１４．６；１１９．６；１２３．９；１２７．７；１２８．７；１２９．４；１２９．８；１３６．１；１５３．８；１５８．８；１６５．４；１７３．２；１８９．７；２１６．２
ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｅ３６２（Ｍ＋）
融点：９３〜９５℃。
【実施例１８】
【０２３６】
５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−チオカルボニル−フェニルエステル［以下化合物ＸＸＶＩＩと称する］
【０２３７】
【化７２】
2008542209.tif 000073
【０２３８】
Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌシリカゲル５０プレートで蛍光指示薬を用いて薄層クロマトグラフィーを行い、前記プレートをＵＶ光で観察した（２５４ｎｍ）。カラムクロマトグラフィーにはＫｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０を使用した。すべての合成試薬はＡｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入し、精製せずに使用した。溶媒は分析用試薬級またはそれ以上の純度とし、提供されたまま使用した。溶液はＮａ２ＳＯ４で乾燥し、Ｂｕｃｈｉ  Ｒ−１１４  ｒｏｔａｖａｐｏｒを使用し、前記溶媒を減圧除去した。構造はプロトン１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲにより分光学的に確認した。スペクトルはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００装置にて記録した。スペクトルはＤＭＳＯにて記録した。適宜、ピークパターンを説明するため、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）の略語を使用している。化学シフトは内部標準としてＭｅ４Ｓｉを参照している。合成生成物のマススペクトルは、Ａｐｐｌａｙｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ＡＰＩ  ２０００マススペクトロメトリーで行った。融点はＫｏｆｌｅｒ高温装置を用いて決定し、補正していない。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ７．０３（ｄ，１Ｈ），７．３１（ｄ，２Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，１Ｈ），７．９７（ｄ，１Ｈ），９．５５（ｓ，ＮＨ２），９．９１（ｓ，ＮＨ２），１０．２５（ｓ，−ＯＨ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１４．４，１１９．５，１２２．１，１２２．７，１２９．２，１２９．５，１３８．１，１５２．１，１５７．７，１６５．９，１８９．７，１９９．７
ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｅ２８９（Ｍ＋）
融点：１９３〜１９５℃。
【０２３９】
化合物の検査
【実施例１９】
【０２４０】
マウスＴＮＢＳ誘導結腸炎における２−ヒドロキシ−５−アミノ安息香酸４−（チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル塩酸塩（化合物ＸＸＸＶ）の投与量決定試験
以下の例では、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）をマウスに結腸内投与して誘導された結腸炎の標準的な実験動物モデルを使用している。このモデルの詳細な説明が公表されており（Ｓａｎｔｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２４：１３８１−９４）、参照によって本明細書に組み込まれている。簡単に言えば、６〜８週齢のＢａｌｂ／ｃマウスに対し、０．１ｍＬの３０％エタノールに１．５ｍｇの用量でＴＮＢＳを結腸内投与した。前記マウスを様々な投与群にランダムに割り付けた（１群あたりｎ＝６）。１時間後に開始し、５日間、１２時間ごとに継続し、前記マウスに賦形剤（１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ））、５−ＡＳＡ（メサラミン）（２５、５０、または７５ｍｇ／ｋｇ）または等モル量の２−ヒドロキシ−５−アミノ−安息香酸４−（チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル塩酸塩（化合物ＸＸＸＶ）（１３０ｍｇ／ｋｇ）、またはこの用量の６６％（１００ｍｇ／ｋｇ）、５０％（６６ｍｇ／ｋｇ）、および２５％（３３ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した。研究の最終日に下痢と便潜血の有無について前記マウスを（盲検的に）評価し、その体重を測定した。これらのデータに基づき「疾患活動性スコア」を計算した（スケール０〜４、前述の論文に概要が示されている）。屠殺後、顆粒球浸潤のマーカーとして、前記結腸のサンプルのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を測定した。すべての結果を健常マウスで得られた結果とも比較した。
【０２４１】
前記疾患活動性スコアとＭＰＯ活性の結果を、それぞれ図１および図２に示している。図１は、等モル量の５０ｍｇ／ｋｇおよび７５ｍｇ／ｋｇで前記活動性スコアを低下させるには、前記化合物ＸＸＸＶがメサラミンよりも優れていたことを示している。さらに、図２に示す通り、検討した最高用量では、ＭＰＯ活性が有意に低下した（ほぼ半分）。
【実施例２０】
【０２４２】
化合物ＸＸＸＶと５−ＡＳＡ（メサラミン）のみ、（ＡＤＴ−ＯＨ）のみ、およびメサラミンとＡＤＴ−ＯＨの混合物の疾患活動性指標とＭＰＯ活性の比較
図３および４はそれぞれ、前述のものと同じ結腸炎実験動物モデルを用い、化合物ＸＸＸＶ（１３０ｍｇ／ｋｇ）を等モル量のその２成分であるメサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）および５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）（８０ｍｇ／ｋｇ）、およびメサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）とＡＤＴ−ＯＨ（８０ｍｇ／ｋｇ）の混合物と比較し、疾患活動性指標とＭＰＯ活性を示している。＊賦形剤投与群と比較しｐ<０．０５。各群５匹以上のラットから成っていた。
【０２４３】
図３は、メサラミンのみ、ＡＤＴ−ＯＨのみ、またはメサラミンおよびＡＤＴ−ＯＨの混合物のほぼ２倍、化合物ＸＸＸＶに疾患の症状を軽減する効果があることを示している。さらに、図４は、顆粒球浸潤の減少（ＭＰＯ活性の減少）で示される通り、化合物ＸＸＸＶが有意に炎症を軽減したことを示している。
【実施例２１】
【０２４４】
５−アミノ−２−（４−チオカルボニル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）の疾患活動性指標とＭＰＯ活性に関する比較
図６および７はそれぞれ、前述のものと同じ結腸炎実験動物モデルを用い、化合物ＸＸＶＩＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）を等モル量のその２成分であるメサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）および４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＴＢ）（５０ｍｇ／ｋｇ）、メサラミンのみ（５０ｍｇ／ｋｇ）、および４−ＨＴＢのみ（５０ｍｇ／ｋｇ）と比較し、疾患活動性指標とＭＰＯ活性を示している。＊賦形剤投与群と比較しｐ<０．０５。各群５匹以上のラットから成っていた。
【０２４５】
図５は、メサラミンのみ、４−ＨＴＢのみ、またはメサラミンおよび４−ＨＴＢの混合物のほぼ３倍、化合物ＸＸＶＩＩに疾患の症状を軽減する効果があることを示している。さらに、図６は、顆粒球浸潤の減少（ＭＰＯ活性の減少）で示される通り、化合物ＸＸＶＩＩが有意に炎症を軽減したことを示している。
【実施例２２】
【０２４６】
マウスＴＮＢＳ誘導結腸炎におけるメサラミンと化合物ＸＸＸＶの効果
前述のものと同じモデルを使用した。この実験では、メサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）の効果を等モル量の化合物ＸＸＸＶと比較した。疾患活動性スコアとＭＰＯ活性を測定することで結腸炎の重症度を測定することに加え、炎症性サイトカインおよび他のメディエーターの遺伝子数を測定するため、組織を処理した。
【０２４７】
特に、参照によって本明細書に組み込まれるＷａｌｌａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１７：５５７−５６６に報告されている通り、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、結腸インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ４０、ＲＡＮＴＥＳ、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−１、ＣＯＸ−２、構成内皮の一酸化窒素シンターゼ（ｅＮＯＳ）、および誘導ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）のマウスにおけるｍＲＮＡ発現を測定した。
【０２４８】
簡単には、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）を利用し、特定サイトカイン／ケモカイン／酵素のｍＲＮＡを検出、定量した。ｍＲＮＡ発現の「ハウスキーピング遺伝子」として（つまり、内部標準として）、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を用いた。各サンプルについて、標的遺伝子の増幅とＧＡＰＤＨの増幅の比（それぞれの発現はゲル上で濃度測定を行うことで測定する）を求めた。次に、健常対照群の組織における発現と比較し、治療群の組織の標的遺伝子の相対的増幅（発現）について比較した。従って、図７〜１４に示したデータは、健常対照群の発現に対する比として、前記標的遺伝子の相対的発現（ＧＡＰＤＨの発現に標準化）を示している。
【０２４９】
図７〜１４に関して、化合物ＸＸＸＶがすべてのエンドポイントでメサラミンよりも優れていたことは注目に値する。化合物ＸＸＸＶが炎症成長疾患の病因に関与していた数種類の炎症性サイトカインおよびケモカインのｍＲＮＡ発現を抑制したことは、特に興味深い。しかし、化合物ＸＸＸＶは炎症性サイトカインであるＩＬ−１０  ｍＲＮＡの発現を抑制しなかった。
【０２５０】
さらに、化合物ＸＸＸＶはＣＯＸ−１とＣＯＸ−２のｍＲＮＡの両方を抑制した。ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２は、炎症に重要なプロスタグランジンの合成に関与している。さらに、化合物ＸＸＸＶはｅＮＯＳとｉＮＯＳのｍＲＮＡも抑制した。ｅＮＯＳとｉＮＯＳは、いずれも消化管の疾患に関与していた。
【実施例２３】
【０２５１】
インビトロにおける化合物ＸＸＸＶとメサラミンのＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞の生存可能性を抑制する効果の比較
ＨＴ−２９細胞は、標準的な方法を用いて培養した。前記細胞に溶媒（ＤＭＳＯ）、メサラミン、または化合物ＸＸＸＶを処理した。０．１〜１０μＭの範囲の濃度を検討し、各濃度６ウェルで検討した。被検薬を７２時間処理した最後に、細胞の生存可能性を参照によって本明細書に組み込まれるＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアキソール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド］法（Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９７８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７，９３６−９４２）により測定した。前記溶媒（ＤＭＳＯ）処理細胞の割合として細胞生存率を計算したが、結果は表１に示されている。
【０２５２】
【表１】
2008542209.tif 000074
【実施例２４】
【０２５３】
内蔵痛知覚ラットモデルにおける化合物ＸＸＸＶとメサラミンの効果の比較
以下の例で過敏性腸症候群の前臨床モデルである内臓痛知覚ラットモデルを使用した。ラット（雄、Ｗｉｓｔａｒ、２００〜２５０ｇ、イタリア、モンツァのＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから入手）をプラスチックケージに入れて飼育し、午前７時に点灯する１２時間の明暗サイクルで制御した条件下、管理した。水道水と標準的な実験動物用飼料は自由に摂取させた。実験前２〜３日、ラットは１匹ずつ、プレキシガラスケージの中で１日２〜３時間過ごすように訓練した。これにより、動きを制限された環境にラットを慣れさせることができる。結腸直腸膨張（ＣＲＤ）記録を行う前に、１２時間飼料を控えた。実験は覚醒したラットで行い、観察者が各動物に投与された薬物を特定できないように盲検化して行った。
【０２５４】
検査日にエーテル吸入にてラットを鎮静し、２ｃｍ長のラテックスバルーンを肛門縁から２ｃｍのところに直腸内挿入し、尾の付け根で固定した。前記バルーンは、二重のカニューレを通じ、コンピュータ（ＰｏｗｅｒＬａｂ  ＰＣ、Ａ．Ｄ．Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）によって直腸内圧を連続的にモニターする圧力トランスデューサ、およびバルーンを膨張／収縮させるシリンジに接続した。次に前記ラットをＰｌｅｘｉｇｌａｓ（商標）の基盤を上げた小ケージ（２０×８×８ｃｍ）で飼育し、１時間覚醒状態で順応させた。鎮静から回復後、動物に前記ＣＲＤ処置を行い、行動反応を検討した。実験前夜、前記バルーンを膨張させ、一晩おくことで、前記ラテックスが伸び、前記バルーンが扱いやすくなった。
【０２５５】
ＣＲＤは２０秒間、５分おきに行い、水０．４ｍｌから開始し、１．６ｍｌまで０．４ｍｌずつ増量した。結腸パラメータと知覚の正確な測定を達成するため、各強度で膨張を２回繰り返し、各動物のデータを平均して分析した。各動物にＣＲＤを２セットずつ行った。１セット目のＣＲＤ（水０．４ｍＬ〜１．６ｍｌ）の２０分後、薬物を腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、２セット目のＣＲＤを行った。１セット目および２セット目のＣＲＤ中の行動反応を評価し、比較した。
【０２５６】
ＣＲＤに対する行動反応は、半定量的スコアを用いて腹部引込め反射（ＡＷＲ）を測定することで評価した（１）。前記ＡＷＲは内臓運動反射と同様の不随意運動反射であるが、内臓運動反射とは対照的に、さらに感作を引き起こす可能性がある腹筋壁に記録電極およびワイヤーを埋め込む腹部手術が必要ないため、非常に利点を有する（参照によって本明細書に組み込まれるＮｅｓｓ，Ｔ．Ｊ．ａｎｄ  Ｇｅｂｈａｒｔ，Ｇ．Ｆ．（１９９０）Ｐａｉｎ  ４１：１６７−２３４を参照）。
【０２５７】
前記ＡＷＲの測定は、参照によって本明細書に組み込まれるＡｌ−Ｃｈａｅｒ，Ｅ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９：１２７６−８５に事前に報告されている通り、盲検化した観察者による分類したＣＲＤに対する動物反応の視覚的観察と、行動スケールに沿ったＡＷＲスコアの割り当てから成り、グレード０はＣＲＤに対する行動反応がないことに対応し、グレード１は刺激開始時に短時間頭部が動くが、その後は動きがないことに対応し、グレード２は腹筋がわずかに収縮するが、ラットが前記基盤から腹部を持ち上げることはないことに対応し、グレード３は前記腹筋が強く収縮し、前記腹筋が前記基盤から持ち上がることに対応し、グレード４は身体が弓状に曲がり、前記腹部および骨盤構造と陰嚢が持ち上がることで示される前記腹筋の重度収縮に対応する。
【０２５８】
合計８匹の絶食したラットを用い、結腸コンプライアンスと感度に対するメサラミンと化合物ＸＸＸＶの効果を決定した。１セット目のＣＲＤ後、メサラミンと化合物ＸＸＸＶの投与によりＣＲＤで誘導される疼痛を軽減することができるか否かを検討するため、４匹のラットにメサラミンを１００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与するか、化合物ＸＸＸＶを１００ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与し、その後、２セット目のＣＲＤを繰り返した。これらの実験結果は図１５（ａ）および（ｂ）に示されている。
【０２５９】
結腸平滑筋に対するメサラミンまたは化合物ＸＸＸＶの効果を決定するため、ＣＲＤ時の結腸直腸コンプライアンスを結腸直腸内容積および圧力から求め、ｍＬ／ｍｍＨｇで表した。これらの結果は図１６（ａ）および（ｂ）に示されている。
【０２６０】
すべてのデータは平均±ＳＥＭで示し、サンプルサイズはラット４匹／群とし、対のデータの統計比較はウイルコクソンの符号付き検定により行った。関連確率（ｐ値）が５％未満の場合に有意とみなした。
【０２６１】
図１５（ａ）および（ｂ）は、結腸直腸膨張に反応した内蔵痛を軽減するためには、化合物ＸＸＸＶがメサラミン（および賦形剤）よりも効果的であることを示している。さらに、図１６（ｂ）に示す通り、化合物ＸＸＸＶは直腸内圧の低下に成功した。
【０２６２】
従って、化合物ＸＸＸＶは効果的な抗炎症活性を有することも示されているが、様々な消化管の炎症状態、および（炎症が伴うか否かにかかわらず）内臓痛覚の亢進で特徴付けられる過敏性腸症候群、消化不良などの機能的胃腸管疾患の治療に有用である。
【実施例２５】
【０２６３】
グリベンクラミドを併用した場合と併用しない場合の化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩの疼痛知覚スコア
上述の内臓痛知覚ラットモデルを用い、ＡＴＰ−感受性Ｋ＋（ＫＡＴＰ）チャネル阻害薬であるグリベンクラミドを併用した場合と併用しない場合の化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩの疼痛知覚スコアを比較した。
【０２６４】
図１７は、賦形剤、メサラミン（１００ｍｇ／ｋｇ）、化合物ＸＸＸＶ（１００ｍｇ／ｋｇ）、または化合物ＸＸＶＩＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）を投与したラット群（１群につき５匹以上）において、０．８ｍＬの結腸直腸膨張に反応した疼痛知覚スコアを示している。化合物ＸＸＸＶおよびＸＸＶＩＩは前記頭痛知覚を有意に低下させたが（＊賦形剤投与群と比べｐ<０．０５）、メサラミンは有意な作用を有していなかった。化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩによる疼痛知覚の低下はグリベンクラミド（３０分前に腹腔内に１０ｍｇ／ｋｇ）を前投与することで回復したが、グリベンクラミドの前投与は賦形剤またはメサラミン投与群の疼痛知覚に影響せず、化合物ＸＸＸＶおよびＸＸＶＩＩの抗侵害受容活性がＡＴＰ感受性Ｋ＋（ＫＡＴＰ）チャネルによって媒介される可能性があることを示している。
【実施例２６】
【０２６５】
メサラミンを併用した場合の化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩの疼痛知覚スコアの比較
図１９は、上述のものと同じ疼痛モデルを使用した実験の結果を示している。メサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）を用いた治療の効果は、等モル量の化合物ＸＸＸＶ（１３０ｍｇ／ｋｇ）、ＡＤＴ−ＯＨ（８０ｍｇ／ｋｇ）、化合物ＸＸＶＩＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）、および４−ＨＴＢ（５０ｍｇ／ｋｇ）と比較した。化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩのみが前記賦形剤投与群と比べ、疼痛知覚を有意に低下させた（＊ｐ<０．０５）。
【実施例２７】
【０２６６】
インビボでの血管内皮への白血球付着に対する化合物ＸＸＸＶおよびＸＸＶＩＩの効果
詳細がこれまでに報告されている通り、生体顕微鏡検査を用いて白血球付着を研究した（参照によって本明細書に組み込まれている、Ｗａｌｌａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６５：９９３−９９８）。ペントバルビタールナトリウム（腹腔内に６０ｍｇ／ｋｇ）でラットを麻酔し、腹部に沿って焼灼切開を行った。呼吸を促すため気管切開を行った。前記ラットを仰臥位とし、腹部切開から腸管膜の一部を露出させた。光がはっきり見える台の上に前記腸管膜を慎重に置き、２ｃｍ２の組織片を透照した。乾燥を最小限にするため、露出した組織はすべて生理食塩水に浸したガーゼで覆った。前記台の温度は３７℃に維持し、前記腸管膜を暖めた重炭酸塩緩衝生理食塩水（ｐＨ  ７．４）で灌流した。生体顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ  Ｌ２５／０．３５）および１０倍の接眼レンズを用い、腸管膜の微小循環を観察した。直径２０〜４０μｍの後毛細管細静脈を選択して研究した。ビデオカメラを前記顕微鏡（Ｐａｎａｓｏｎｉｃ（商標）ｄｉｇｉｔａｌ  ５０００）に取り付け、モニターに画像を投影し、ビデオカセットレコーダーを用いて再生分析用に前記画像を録画した。前記腸管膜の微小循環画像は、アスピリン投与前（ベースライン）、アスピリン投与時（時間０〜５）、および６０分間１５分おきに５分ずつ録画した。白血球付着は、３０秒以上血管壁に静止したままの白血球数として（細静脈の長さ１００μｍあたりの数として表した）、５分間録画した血管画像から盲検的に定量した。アスピリン（または賦形剤）投与の６０分前に、ラット群（各群５匹以上）に化合物ＸＸＸＶ（１３０ｍｇ／ｋｇ）、化合物ＸＸＶＩＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）、メサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）、または賦形剤を前投与した。これらの薬物は胃内投与した。一部の実験では、これらの化合物の投与３０分前にグリベンクラミド（腹腔内に１０ｍｇ／ｋｇ）または賦形剤を投与した。
【０２６７】
図１９は、アスピリンの胃内投与に反応した白血球付着、および前記化合物の効果を示している。アスピリンはベースライン期間に観察されたものよりも白血球付着を顕著に増加させた（＊賦形剤＋賦形剤群と比べｐ<０．０５）。化合物ＸＸＸＶの前投与はアスピリンにより誘導される白血球付着の増加を予防したが、メサラミンは予防しなかった。グリベンクラミドのみでは白血球付着に影響せず、アスピリンにより誘導される白血球付着の程度に影響しなかった。グリベンクラミドはメサラミン＋アスピリン投与群にも影響しなかった。ただし、グリベンクラミドはアスピリンにより誘導される白血球付着に対する化合物ＸＸＸＶの抑制作用を無効にした。
【０２６８】
図２０は、実験の最終時間（６０〜６５分）の白血球付着を示している。このグラフは、化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩがアスピリンにより誘導される白血球付着を抑制する効果、およびこの白血球付着に対する抑制作用を無効にするグリベンクラミド前投与の効果を図示している。
【実施例２８】
【０２６９】
５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸４−（５−チオキソ−５Ｈ−［１，２］ジチオール−３−イル）−フェニルエステル（化合物ＸＸＸＶ）および４−または５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩと称する）によるＨ２Ｓの生成
３種類の条件下、化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩの２つの化合物のＨ２Ｓ生成を検討した。濃度１ｍＭのＬ−システイン、化合物ＸＸＸＶのＨ２Ｓ放出部分、ＡＤＴ−ＯＨ（５−（４−アミノ−フェニル）−［１，２］ジチオール−３−チオン、化合物ＸＸＶＩＩのＨ２Ｓ放出部分、４−ＨＢＴ（４−ヒドロキシチオベンズアミド）の使用から１時間以内に発生したＨ２Ｓの濃度も測定した。Ｈ２Ｓの放出は、３条件、つまり、（ｉ）前記化合物を緩衝液に入れた場合、（ｉｉ）前記化合物を肝ホモジェネートに入れた場合、（ｉｉｉ）前記化合物をシスタチオニンγ−リアーゼ阻害剤（ＰＡＧ＝ＤＬ−プロパルギルグリシン；２ｍＭ）と一緒に肝ホモジェネートに入れた場合で検討した。結果は図１３に示している。＊賦形剤群の放出と比べｐ<０．０５。Ψ対応するホモジェネート群と比べｐ>０．０５。酵素のＨ２Ｓ産生力は、これまでに報告されたものと同様の反応装置を用いて決定した（参照によって本明細書に組み込まれる、Ｋｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍ  Ｊ．２５：３８８−３９５）。測定用反応混合物２ｍｌを前記反応装置に入れた。前記混合物には、１ｍＭのＬ−システイン（または化合物）、２ｍＭの５’−リン酸ピリドキサル、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）を含めた。ガス吸気管から前記混合物に一定流の窒素を通気した。反応は、前記管を氷浴から３７℃の水浴に移して開始させた。前記窒素流が、４ｍｌの硫化物抗酸化剤緩衝液（ＳＡＯＢ）溶液を含み、２ＭのＫＯＨ、１Ｍのサリチル酸、および０．２２Ｍのアスコルビン酸から成る、ｐＨ１２．８の第二反応装置に酸硫化物を運んだ［５］。３７℃で９０分間インキュベート後、１ｍｌの１０％トリクロロ酢酸溶液を混合物に添加し、前記反応を停止させた。前記混合物中の残りのＨ２Ｓは、３７℃でさらに６０分間インキュベートすることで、窒素流から運んだ。ＳＡＯＢ溶液中の硫化物濃度は、硫化物に反応する電極（モデル９６１６  Ｓ２−／Ａｇ＋電極、Ｏｒｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、米国マサチューセッツ州Ｂｅｖｅｒｌｙ）で測定した。被験化合物を肝ホモジェネートにインキュベートした研究では、単離したラットの肝臓１００〜１５０ｍｇを１ｍｌの氷冷したＴ−ＰＥＲタンパク質抽出液中で均質化した。前記ホモジェネートを１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）の濃度で前記反応混合物に添加した。酵素反応の前に、ＤＬ−プロパルギルグリシン２ｍＭを３７℃で５分間、肝ホモジェネートとともにインキュベートした。参照によって本明細書に組み込まれる、Ｋｈａｎ，Ｓ．Ｕ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｇ．Ｆ．ａｎｄ  Ｈｉｄｉｒｏｇｌｏｕ，Ｍ．（１９８０）Ｒａｐｉｄ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｉｎ  ｒｕｍｅｎ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｕｌｆｉｄｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｏｎ  ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ．Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍ  Ｊ．２５：３８８−３９５を参照。
【０２７０】
図２１に示される結果は、本発明の４−または５−ＡＳＡ誘導体、および特に化合物ＸＸＸＶとＸＸＶＩＩが以下の明確な特徴を有することを示唆している：
１．前記誘導体は（緩衝液中で）自然にＨ２Ｓを放出し、この作用は腸の局所作用に望ましい。前記Ｈ２Ｓ放出部分のみ、ＡＤＴ−ＯＨ、および４−ＨＴＢとＬ−システインは、緩衝液のみにインキュベートした場合は有意にＨ２Ｓを放出しなかった；
２．Ｈ２Ｓの放出は組織存在下で多くなる；
３．（４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸＝Ｎ−アセチルシステインとの無水物（化学式Ｘ）以外の）４−または５−ＡＳＡ誘導体からのＨ２Ｓの放出は、内因性のＨ２Ｓ合成を司る２つの主な酵素（シスタチオニンβ−シンターゼおよびシスタチオニン−γ−リアーゼ）活性と独立している。これは、化合物ＸＸＸＶと化合物ＸＸＶＩＩからのＨ２Ｓ生成に対し、これらの酵素（ＰＡＧ；ＤＬ−プロパルギルグリシン）の阻害薬に効果がないことで証明される。対照的に、Ｌ−システインからのＨ２Ｓの放出はＰＡＧによって著しく阻害される；
４．化合物ＸＸＸＶおよび化合物ＸＸＶＩＩから生成したＨ２Ｓの濃度は、１ｍＭの化合物を用いた場合、１０〜２０ｕＭの範囲である。最高５ｍＭのメサラミンの濃度は、患者に本薬物の通常量を投与した後、結腸管腔で測定することができる（Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．１９８９；３４：５７３−５７８）。内因性Ｈ２Ｓ濃度は１６０μＭ程と考えられる（Ａｎｔｉｏｘｉｄ．Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．２００３；５，４９３−５０１）。化合物ＸＸＸＶとＸＸＶＩＩはいずれも生理学的範囲内の濃度でＨ２Ｓを放出することで、Ｈ２Ｓに関連した毒性が発生する可能性を最小限とする。しかし、ｎ−アセチルシステインがＨ２Ｓ放出部分（式Ｘの化合物）の場合は、システインからのＨ２Ｓ放出が大きいために低用量が用いられることは理解される。
【実施例２９】
【０２７１】
Ｈ２Ｓ放出部分の血管弛緩作用
以下の実験は基本的に、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｂｕｃｃｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ  ｉｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｔｏ  ａｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｃａｖｅｏｌｉｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  ２４：７２１−７２６で公表されたプロトコールを用いて行った。ＣＤ−１マウスを屠殺し、胸部大動脈を迅速に解剖し、脂肪および結合組織を取り除いた。１．５〜２ｍｍの長さの輪を切断し、３７℃で気体を注入したＫｒｅｂｓ溶液（９５％  Ｏ２＋５％  ＣＯ２）で満たした摘出臓器槽（Ｆｏｒｔ  １０  Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国）に取り付けた。等尺性張力の変化は、ＰｏｗｅｒＬａｂ（商標）データ取得システム（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ、イタリア）で記録した。前記Ｋｒｅｂｓ溶液の組成（ｍｏｌ／ｌ）は、ＮａＣｌ  ０．１１８、ＫＣｌ  ０．００４７、ＭｇＣｌ２  ０．００１２、ＫＨ２ＰＯ４  ０．００１２、ＣａＣｌ２  ０．００２５、ＮａＨＣＯ３  ０．０２５、グルコース０．０１０であった。静止張力が１．５ｇになるまで最初に輪を伸ばし、４０分以上平衡に保ち、この間、必要であれば１．５ｇに張力を調節し、摘出臓器槽の溶液は定期的に交換した。予備研究では、静止張力１．５ｇが収縮試薬の刺激に対して最適張力を発生させることが分かった。
【０２７２】
各実験で、Ｌ−フェニレフリン（ＰＥ）１μｍｏｌ／ｌを用い、反応が再現できるようになるまで輪を標準化した。被験化合物の血管弛緩作用を評価するため、ＰＥ（１μＭ）で事前に収縮した輪について累積濃度反応曲線を作成し（１０ｎＭ〜３ｍＭ）、
【０２７３】
【化７３】
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【０２７４】
２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３，２，４−ジチアジホスフェタン２，４−ジスルフィド（Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬）、チオアセトアミド、ＮａＨＳ、４−ＨＴＢ、およびＮａ２Ｓを用いた。賦形剤は緩衝液であり、化合物は含まれていない。内皮存在下で被験化合物の曲線を作成した。内皮の統合性を評価するため、ＰＥで事前に収縮したリングについてＡｃｈ（１０ｎＭ〜３０μＭ）に対する累積濃度反応曲線を作成した。
【０２７５】
得られたデータは図２２に示し、平均±ＳＥＭで表している。統計有意水準は二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により決定し、複数の比較はＧｒａｐｈＰａｄ（商標）ソフトウェアを用いてＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定を行った。
【０２７６】
図２２は、本発明のＨ２Ｓ放出部分、つまりＬａｗｅｓｓｏｎ試薬、４−ＨＴＢ、およびチオアセトアミドが、すべて有意な血管弛緩作用を示し、賦形剤と比べ濃度依存的であることを示している。さらに、％弛緩曲線はすべてＮａＨＳおよびＮａ２Ｓを用いた場合の曲線と同等であった。
【図面の簡単な説明】
【０２７７】
【図１】図１は、メサラミンおよび本発明の化合物ＸＸＸＶの用量を増量して投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの疾患活動性指数を示している。
【図２】図２は、メサラミンおよび本発明の化合物ＸＸＸＶの用量を増量して投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を示している。
【図３】図３は、化合物ＸＸＸＶ、メサラミンのみ、５−ｐ−ヒドロキシフェニル−１，２−ジチオン−３−チオン（ＡＤＴ−ＯＨ）のみ、およびメサラミンとＡＤＴ−ＯＨの混合物を投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの疾患活動性指数を示している。
【図４】図４は、化合物ＸＸＸＶ、メサラミンのみ、ＡＤＴ−ＯＨのみ、およびメサラミンとＡＤＴ−ＯＨの混合物を投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を示している。
【図５】図５は、化合物ＸＸＶＩＩ、メサラミンのみ、４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＴＢ）のみ、およびメサラミンと４−ＨＴＢの混合物を投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの疾患活動性指数を示している。
【図６】図６は、化合物ＸＸＶＩＩ、メサラミンのみ、４−ＨＴＢのみ、およびメサラミンと４−ＨＴＢの混合物を投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を示している。
【図７】図７は、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇおよび等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を示している。
【図８】図８は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの疾患活動性指数を示している。
【図９】図９は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの結腸腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）ｍＲＮＡの発現について示している。
【図１０】図１０は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスのインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）ｍＲＮＡの発現について示している。
【図１１】図１１は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスにおける、様々なインターロイキン（ＩＬ）ｍＲＮＡの発現、つまり、ＩＬ−１、−２、１０、および−１２  ｍＲＮＡの発現について示している。
【図１２】図１２は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの結腸ＲＡＮＴＥＳ  ｍＲＮＡレベルについて示している。
【図１３】図１３は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの結腸ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２  ｍＲＮＡの発現について示している。
【図１４】図１４は、賦形剤（１％ＣＭＣ）、メサラミン５０ｍｇ／ｋｇ、および等モル量の本発明の化合物ＸＸＸＶを投与後、ＴＮＢＳで誘導された結腸炎を有するマウスの結腸ｅＮＯＳおよびｉＮＯＳ  ｍＲＮＡの発現について示している。
【図１５】図１５（ａ）および（ｂ）は、それぞれ本発明のメサラミンおよび化合物ＸＸＸＶを用い、内臓痛知覚ラットモデルの知覚指数を示している。
【図１６】図１６（ａ）および（ｂ）は、それぞれ本発明のメサラミンおよび化合物ＸＸＸＶを用い、内臓痛知覚ラットモデルの直腸内圧を示している。
【図１７】図１７は、グリベンクラミドを併用した場合と併用しない場合で、メサラミン、化合物ＸＸＸＶ、および化合物ＸＸＶＩＩの疼痛知覚スコアを示している。
【図１８】図１８は、化合物ＸＸＸＶ、化合物ＸＸＶＩＩ、メサラミン、ＡＤＴ−ＯＨ、および４−ＨＢＴの疼痛知覚スコアを示している。
【図１９】図１９は、アミピリンの胃内投与に反応した白血球付着について示している。
【図２０】図２０は、実験の最終時間（６０〜６５分）の白血球付着に関する棒グラフである。
【図２１】図２１は、システイン、ＡＤＴ−ＯＨ、化合物ＸＸＸＶ、４−ＨＴＢ、および化合物ＸＸＶＩＩのＨ２Ｓ生成を示した棒グラフである。
【図２２】図２２は、本発明のＨ２Ｓ放出部分の血管弛緩作用を示した濃度反応曲線である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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