(57)【要約】  α−ヒドロキシ−ω−（２−オキソ−インドリリデン（ｉｎｄｏｌｙｌｉｄｅｎｅ）メチル−ピロール−３’−カルボニル）アミノアルカン酸およびアミド誘導体は、プロテインキナーゼの阻害剤として向上した、かつ予期しない薬物特性を有し、癌などの異常なプロテインキナーゼ活性に関連する障害を治療する際に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2008542294.tif 000050
（上式中、
Ｒ1は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミド、スルホンアミド、シアノ、置換もしくは非置換（Ｃ６−Ｃ１０）アリールからなる群から選択され、
Ｒ2は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ８）アルコキシアルキル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ６−Ｃ１０）アリールアミノからなる群から選択され、
Ｒ3は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、（Ｃ５−Ｃ１０）ヘテロアリール、およびアミドからなる群から選択され、
Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は、独立に水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ7は、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）Ｏ−アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）Ｏ−シクロアルキル、およびＮＲ8Ｒ9からなる群から選択され、この際、Ｒ8およびＲ9は、独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択されるか、あるいはＲ8およびＲ9はＮとともに非置換であるかまたは１以上のヒドロキシル基、ケトン、エーテル、およびカルボン酸で置換された（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成し、
ｎは、１、２、または３である。）
で表される化合物、またはその製薬上許容される塩、互変異性体、互変異性体の製薬上許容される塩、もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
次の構造：
【化２】
2008542294.tif 000051
（上式中、Ｒ2は、水素およびフルオロからなる群から選択される。）
で表される群から選択される請求項１に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項３】
次の構造：
【化３】
2008542294.tif 000052
で表される請求項１に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項４】
式（ＩＩ）：
【化４】
2008542294.tif 000053
（上式中、Ｒ10は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、および（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルからなる群から選択される。）
で表される請求項１に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項５】
Ｒ1およびＲ2が、独立に、水素およびフルオロからなる群から選択され、Ｒ3およびＲ4がメチルであり、Ｒ5、Ｒ6、およびＲ10が水素であり、ｎが１または２である、
請求項４に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項６】
【化５】
2008542294.tif 000054
からなる群から選択される請求項５に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項７】
次の構造：
【化６】
2008542294.tif 000055
で表される請求項５に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項８】
次の構造：
【化７】
2008542294.tif 000056
で表される化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項９】
次の構造：
【化８】
2008542294.tif 000057
で表される請求項６に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１０】
次の構造：
【化９】
2008542294.tif 000058
で表される請求項６に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１１】
式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2008542294.tif 000059
で表される請求項１に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１２】
Ｒ1およびＲ2が、独立に、水素、ハロ、シアノからなる群から選択され、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6が、独立に、水素または（Ｃ１−Ｃ６））アルキルであり、
ｎが１または２であり、
Ｒ8およびＲ9が、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択されるか、または、Ｒ8およびＲ9がＮとともに、非置換または１以上のヒドロキシル基、ケトン、エーテル、およびカルボン酸で置換された（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成する、
請求項１１に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１３】
次の構造：
【化１１】
2008542294.tif 000060
で表される群から選択される請求項１２に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１４】
ｎが１である請求項１２に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１５】
次の構造：
【化１２】
2008542294.tif 000061
で表される請求項１３に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１６】
次の構造：
【化１３】
2008542294.tif 000062
で表される群から選択される請求項１４に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１７】
次の構造：
【化１４】
2008542294.tif 000063
で表される群から選択される請求項１４に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１８】
次の構造：
【化１５】
2008542294.tif 000064
で表される化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項１９】
次の構造：
【化１６】
2008542294.tif 000065
で表される化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２０】
次の構造：
【化１７】
2008542294.tif 000066
で表される化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２１】
次の構造：
【化１８】
2008542294.tif 000067
で表される群から選択される請求項１４に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２２】
次の構造：
【化１９】
2008542294.tif 000068
で表される群から選択される請求項１４に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２３】
ｎが２である請求項１２に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２４】
次の構造：
【化２０】
2008542294.tif 000069
で表される請求項２３に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２５】
次の構造：
【化２１】
2008542294.tif 000070
で表される請求項２３に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２６】
次の構造：
【化２２】
2008542294.tif 000071
で表される請求項２３に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２７】
次の構造：
【化２３】
2008542294.tif 000072
で表される請求項２３に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２８】
次の構造：
【化２４】
2008542294.tif 000073
で表される請求項２３に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項２９】
次の構造：
【化２５】
2008542294.tif 000074
（上式中、Ｒ2は、水素およびフルオロからなる群から選択され、Ｒ7は、ヒドロキシルまたは次の構造：
【化２６】
2008542294.tif 000075
で表される基からなる群から選択される。）
で表される群から選択される請求項１に記載の化合物、塩、互変異性体、またはプロドラッグ。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれかに記載の化合物または塩を用いる、プロテインキナーゼの触媒活性の調節方法。
【請求項３１】
前記プロテインキナーゼが、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ｃ−ｋｉｔ、Ｆｌｔ−３、ＡｘＩ、およびＴｒｋＡからなる受容体の群から選択される請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ステップＡ：次の反応
【化２７】
2008542294.tif 000076
に従って、第１の中間体を第２の中間体へ変換するステップ、ならびに、次に、
ステップＢ：次の反応
【化２８】
2008542294.tif 000077
（上式中、
Ｒ1は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、保護アミノ、保護（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミド、スルホンアミド、シアノ、置換もしくは非置換（Ｃ６−Ｃ１０）アリールからなる群から選択され、
Ｒ2は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ８）アルコキシアルキル、保護アミノ、保護（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ６−Ｃ１０）アリールアミノからなる群から選択され、
Ｒ3は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、（Ｃ５−Ｃ１０）ヘテロアリール、およびアミドからなる群から選択され、
Ｒ4は、水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ7は、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）Ｏ−アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）Ｏ−シクロアルキル、およびＮＲ8Ｒ9からなる群から選択され、この際、Ｒ8およびＲ9は、独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択されるか、または、Ｒ8およびＲ9はＮとともに、非置換であるかまたは１以上のヒドロキシル基、ケトン、エーテル、およびカルボン酸で置換されている（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成する。）
に従って、第２の中間体をピロリル−インドリノンへ変換するステップ、
を含む、キラルなヒドロキシル基を有するピロリル−インドリノンの合成方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロテインキナーゼ阻害剤、ならびに、癌および炎症などの異常なプロテインキナーゼ活性に関連する障害を治療する際のそれらの使用に関する。より具体的には、本発明は、プロテインキナーゼ阻害剤として用いることのできる、α−ヒドロキシ−ω−（２−オキソ−インドリリデン（ｉｎｄｏｌｙｌｉｄｅｎｅ）メチル−ピロール−３’−カルボニル）アミノアルカン酸およびアミド誘導体ならびにそれらの製薬上許容される塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは、タンパク質のチロシン、セリン、およびトレオニン残基のヒドロキシル基のリン酸化を触媒する酵素である。細胞のライフ（例えば、細胞成長、分化、増殖、細胞周期および生存）の多くの態様は、プロテインキナーゼ活性に依存している。さらに、異常なプロテインキナーゼ活性は、癌および炎症などの多くの障害に関与している。それ故に、相当な努力が、プロテインキナーゼ活性を調節するための方法を同定するために向けられている。特に、プロテインキナーゼ阻害剤の役割を果たす小分子を同定するために、多くの試みがなされている。
【０００３】
いくつかのピロリル−インドリノン誘導体が、プロテインキナーゼの阻害剤として優れた活性を示している（Ｌａｒｉｄ  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１６，６８１，２００２；Ｓｍｏｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，９７，１４１３，２００１；Ｍｅｎｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９，３２７，２００３；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６，１１１６，２００３）。これらの化合物の臨床での有用性は期待されているが、比較的低い水溶解度および／または他の薬物特性に起因して部分的に損なわれている。必要とされるものは、阻害活性と向上した薬剤特性の双方を有する、修飾されたピロリル−インドリノン誘導体のクラスである。
【発明の開示】
【０００４】
概要：
本発明は、α−ヒドロキシ−ω−（２−オキソ−インドリリデンメチル−ピロール−３’−カルボニル）アミノアルカン酸およびアミド誘導体ならびにそれらのプロテインキナーゼの阻害剤としての使用を対象とする。本明細書において、α−ヒドロキシ−ω−（２−オキソ−インドリリデンメチル−ピロール−３’−カルボニル）アミノアルカン酸およびアミド誘導体は、プロテインキナーゼ阻害活性を有する公知のピロリル−インドリノン誘導体に対して、およびそれらの対応するβ−ヒドロキシ−ω−（２−オキソ−インドリリデンメチル−ピロール−３’−カルボニル）アミノアルカン酸およびアミド誘導体に対して、このクラスの化合物を有利に識別する、向上した、かつ予期しない薬物特性を有することが開示される。また、本明細書において、α−ヒドロキシ−ω−（２−オキソ−インドリリデンメチル−ピロール−３’−カルボニル）アミノアルカン酸およびアミド誘導体が、癌などの異常なプロテインキナーゼ活性に関連する障害を治療する際に有用であることが開示される。
【０００５】
本発明の一態様は、式（Ｉ）：
【化１】
2008542294.tif 000002
で表される化合物を対象とする。
【０００６】
式（Ｉ）において、Ｒ1は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミド、スルホンアミド、シアノ、置換もしくは非置換（Ｃ６−Ｃ１０）アリールからなる群から選択され；Ｒ2は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ８）アルコキシアルキル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ６−Ｃ１０）アリールアミノからなる群から選択され；Ｒ3は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、（Ｃ５−Ｃ１０）ヘテロアリール、およびアミドからなる群から選択され；Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は、独立に水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され；Ｒ7は、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）Ｏ−アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）Ｏ−シクロアルキル、およびＮＲ8Ｒ9からなる群から選択され；この際、Ｒ8およびＲ9は、独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択されるか、あるいはＲ8およびＲ9はＮとともに非置換であるかまたは１以上のヒドロキシル、ケトン、エーテル、およびカルボン酸で置換された（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成し；ｎは、１、２、または３である。
【０００７】
あるいは、本発明のこの態様は、式（Ｉ）の化合物の製薬上許容される塩、その互変異性体、その互変異性体の製薬上許容される塩、またはプロドラッグを対象とし得る。本発明の好ましい種としては、次の構造：
【化２】
2008542294.tif 000003
で表される化合物が挙げられる。
【０００８】
上記の構造において、Ｒ2は、水素およびフルオロからなる群から選択される。より具体的には、好ましい立体異性体は、次の構造：
【化３】
2008542294.tif 000004
で表される。
【０００９】
本発明のこの態様の第１の亜属(subgenus)は、式（ＩＩ）：
【化４】
2008542294.tif 000005
で表される。
【００１０】
式（ＩＩ）において、Ｒ10は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、および（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルからなる群から選択される。この第１の亜属の好ましい種(species)では、Ｒ1およびＲ2は、独立に、水素およびフルオロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ4はメチルであり；Ｒ5、Ｒ6、およびＲ10は水素であり；ｎが１または２である。
【００１１】
好ましい種は、次の化合物：
【化５】
2008542294.tif 000006
で表される。
【００１２】
好ましいキラル種は、次の化合物：
【化６】
2008542294.tif 000007
で表される。
【００１３】
本発明のこの態様の第２の亜属は、式（ＩＩＩ）：
【化７】
2008542294.tif 000008
に従う化合物、その塩、互変異性体、またはプロドラッグを対象とする。
【００１４】
この第２の亜属の好ましい種では、Ｒ1およびＲ2が、独立に、水素、ハロ、シアノからなる群から選択され；Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は、独立に、水素または（Ｃ１−Ｃ６））アルキルであり；ｎは１または２であり；かつ、Ｒ8およびＲ9は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択されるか、または、Ｒ8およびＲ9はＮとともに、非置換であるかまたは１以上のヒドロキシル、ケトン、エーテル、およびカルボン酸で置換された（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成する。第２の亜属の好ましい種は、次の構造：
【化８】
2008542294.tif 000009
で表される。
【００１５】
第２の亜属の第１のサブセットでは、ｎは１である。この第１のサブセットの中の好ましい種は、次の構造：
【化９】
2008542294.tif 000010
で表される。
【００１６】
第２の亜属の第１のサブセットの中の好ましいキラル種は、次の構造：
【化１０】
2008542294.tif 000011
で表される。
【００１７】
第２の亜属の第１のサブセットの中のさらに好ましいキラル種は、次の構造：
【化１１】
2008542294.tif 000012
で表される。
【００１８】
第２の亜属の第２のサブセットでは、ｎは２である。この第１のサブセットの中の好ましい種は、次の構造：
【化１２】
2008542294.tif 000013
で表される。
【００１９】
本発明の第１の態様のさらに好ましい種は、次の構造：
【化１３】
2008542294.tif 000014
で表される。
【００２０】
上記の構造において、Ｒ2は、水素およびフルオロからなる群から選択され；Ｒ7は、ヒドロキシルまたは次の構造：
【化１４】
2008542294.tif 000015
で表される基からなる群から選択される。
【００２１】
本発明の第２の態様は、上記式Ｉ〜ＩＩＩで表される化合物または塩を用いるプロテインキナーゼの触媒活性の調節のための方法を対象とする。本発明の第２の態様の好ましい様態では、前記プロテインキナーゼは、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ｃ−ｋｉｔ、Ｆｌｔ−３、ＡｘＩ、およびＴｒｋＡからなる受容体の群から選択される。
【００２２】
有用性：
本発明は、限定されるものではないが、ＶＥＧＦＲおよび／またはＰＤＧＦＲのプロテインキナーゼ活性を制御および／または調節することのできる化合物を提供する。従って、本発明は、これらのキナーゼの異常な機能に関連する障害の治療のための治療的アプローチを提供する。そのような障害としては、限定されるものではないが、神経膠芽腫、黒色腫、およびカポジ肉腫などの固形腫瘍、ならびに、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、膵癌、結腸癌および扁平上皮癌が挙げられる。加えて、ＶＥＧＦＲ／ＰＤＧＦＲ阻害剤は、再狭窄および糖尿病性網膜症の治療にも用いられ得る。
【００２３】
さらに、本発明は、ＶＥＧＦ受容体、および／またはＰＤＧＦ受容体を含む経路をはじめとする、受容体に媒介される経路による脈管形成および血管新生の阻害に関する。従って、本発明は、癌および、血管の制御されない形成を伴うその他の疾患の治療に対する治療的アプローチを提供する。
【実施例】
【００２４】
実施例１〜７：酸（１−３）およびアミド（１−４）の合成を図１に示す。
実施例１：（Ｓ）−４−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシ−酪酸：
【化１５】
2008542294.tif 000016
化合物１−１を、類似の化合物に用いられる次の文献記載手順に従って調製した（Ｌｉ  Ｓｕｎ，Ｃｈｒｉｓ  Ｌｉａｎｇ，ｅｔ  ａｌ；Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ５−［５−Ｆｌｕｏｒｏ−２−ｏｘｏ−１，２−ｄｉｈｙｄｒｏｉｎｄｏｌ−（３Ｚ）−ｙｌｉｄｅｎｅｍｅｔｈｙｌ］−２，４−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−１Ｈ−ｐｙｒｒｏｌｅ−３−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  Ａｃｉｄ（２−Ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）ａｍｉｄｅ，ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｄ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４６，１１１６−１１１９）。化合物１−１およびＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）（３当量）を、室温にて無水ＤＭＦに懸濁した（図１）。超音波処理後（５分）、ＨＡＴＵ（０．９９当量）を添加した。室温にておよそ１分攪拌した後、懸濁液は透明な溶液となった。さらに１５分沈殿を観察した。ＤＭＦを減圧下で除去した後、無水アセトニトリルを添加した。沈殿を濾過により回収し、アセトニトリルを用いて数回洗浄し、高真空下で２日間乾燥させて化合物１−２を得た。ＬＣ−ＭＳおよびＮＭＲ分光分析により、１−２の構造を確認した。化合物１−２（１．２７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３当量）のＤＭＦ溶液に、（２Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシ酪酸メチル（１．５当量、１．２当量のＨＣｌを含む無水メタノール中の遊離アミノ酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）を還流することにより先に調製）の塩化水素塩を添加した。２５℃にて２時間攪拌した後（その時点でＬＣ−ＭＳは反応の終了を示した）、水中のＫＯＨ（５当量）を添加し、加水分解が終了するまで攪拌を継続した（ＬＣ−ＭＳでモニターした）。溶媒を減圧下で蒸発して除去した。ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）を残渣に添加し、沈殿を濾過により回収し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させて標題化合物を得た（０．５ｇ、９８％）。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ20Ｈ20ＦＮ3Ｏ5の計算値：４０２、実測値：４０２。
【００２５】
実施例２−７：実施例１のアミドの合成のための一般的手順：アミン（２当量）を、実施例１由来の酸、ＨＡＴＵ（１．０５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（５当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に添加した。溶液を２５℃にて２時間攪拌した後、ＨＣｌ水溶液（２ｍＬ、１Ｎ）を添加した。この溶液を分取ＨＰＬＣに付して純粋なアミド生成物を得、それを続いてＬＣ−ＭＳおよびＮＭＲ分光分析により特性決定した。
【００２６】
実施例２：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−３−ヒドロキシ−４−オキソ−４−ピロリジン−１−イル−ブチル）−アミド
【化１６】
2008542294.tif 000017
分取ＨＰＬＣにより、９０ｍｇの出発物質（酸）から３２ｍｇの標題化合物（３４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ24Ｈ27ＦＮ4Ｏ4の計算値：４５５、実測値：４５５。
【００２７】
実施例３：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［（Ｓ）−３−ヒドロキシ−４−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−ピロリジン−１−イル）−４−オキソ−ブチル］−アミド
【化１７】
2008542294.tif 000018
分取ＨＰＬＣにより、６１ｍｇの出発物質（酸）から２７ｍｇの標題化合物（４１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ24Ｈ27ＦＮ4Ｏ5の計算値：４７１、実測値：４７１。
【００２８】
実施例４：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−３−ジメチルカルバモイル−３−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【化１８】
2008542294.tif 000019
分取ＨＰＬＣにより、６１ｍｇの出発物質（酸）から２２ｍｇの標題化合物（３７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ22Ｈ25ＦＮ4Ｏ4の計算値：４２９、実測値：４２９。
【００２９】
実施例５：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−３−ジ−エチルカルバモイル−３−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【化１９】
2008542294.tif 000020
分取ＨＰＬＣにより、１４０ｍｇの出発物質（酸）から４３ｍｇの標題化合物（２７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ24Ｈ29ＦＮ4Ｏ4の計算値：４５７、実測値：４５７。
【００３０】
実施例６：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−３−カルバモイル−３−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【化２０】
2008542294.tif 000021
分取ＨＰＬＣにより、８１ｍｇの出発物質（酸）から１５ｍｇの標題化合物（２０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ20Ｈ21ＦＮ4Ｏ4の計算値：４０１、実測値：４０１。
【００３１】
実施例７：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−３−ヒドロキシ−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチル）−アミド
【化２１】
2008542294.tif 000022
分取ＨＰＬＣにより、８１ｍｇの出発物質（酸）から１８ｍｇの標題化合物（２１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ24Ｈ27ＦＮ4Ｏ5の計算値：４７１、実測値：４７１。
【００３２】
実施例８〜１１：酸（２−２）およびアミド（２−３）の合成を、図２に示す。
実施例８：３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシ−プロピオン酸
【化２２】
2008542294.tif 000023
化合物１−２（１．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３当量）のＤＭＦ溶液に、３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオン酸メチルのＨＣｌ塩（１．２当量、１．２当量のＨＣｌを含む無水メタノール中のイソセリンを還流することにより調製）を添加した。２５℃にて２時間攪拌した後（その時点でＬＣ−ＭＳは反応の終了を示した）、水中のＫＯＨ（５当量）を添加し、加水分解が終了するまで攪拌を継続した（ＬＣ−ＭＳでモニターした）。溶媒を減圧下で蒸発して除去した。ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）を残渣に添加し、沈殿を濾過により回収し、水で洗浄し、高真空下で乾燥させて化合物２−２を得た（０．３３ｇ、８５％）。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ19Ｈ18ＦＮ3Ｏ5の計算値：３８８、実測値：３８８。
【００３３】
実施例９〜１１：実施例８のアミドの合成のための一般的手順：アミン（２当量）を、酸、ＨＡＴＵ（１．０５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（５当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に添加した。溶液を２５℃にて２時間攪拌した後、ＨＣｌ水溶液（２ｍＬ、１Ｎ）を添加した。この溶液を分取ＨＰＬＣに付して純粋なアミド生成物を得、それを続いてＬＣ−ＭＳおよびＮＭＲ分光分析により特性決定した。
【００３４】
実施例９：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミド
【化２３】
2008542294.tif 000024
分取ＨＰＬＣにより、６５ｍｇの出発物質（酸）から５０ｍｇの標題化合物（７２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ21Ｈ23ＦＮ4Ｏ4の計算値：４１５、実測値：４１５。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6、４００ＭＨｚ）δ  １３．６７（ｓ，１Ｈ）、１０．８７（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０（ｓ，１Ｈ）、７．５６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｍ，１Ｈ）、６．８３（ｄｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．５３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４８−３．２５（ｍ，２Ｈ）、３．０８（ｓ，３Ｈ）、２．８５（ｓ，３Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【００３５】
実施例１０：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ヒドロキシ−３−（モルホリン−４−イル）−３−オキソ−プロピル）−アミド
【化２４】
2008542294.tif 000025
分取ＨＰＬＣにより、６５ｍｇの出発物質（酸）から１４ｍｇの標題化合物（１８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ23Ｈ25ＦＮ4Ｏ5の計算値：４５７、実測値：４５７。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6、４００ＭＨｚ）δ  １３．６８（ｓ，１Ｈ）、１０．９０（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｍ，１Ｈ）、６．８３（ｄｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．２（ｂ，１Ｈ）、４．５１（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６５−３．３５（ｍ，１０Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【００３６】
実施例１１：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−ヒドロキシ−２−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−エチル］−アミド
【化２５】
2008542294.tif 000026
分取ＨＰＬＣにより、８０ｍｇの出発物質（酸）から１６ｍｇの標題化合物（１８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍにて単一ピーク、ＭＨ+  Ｃ21Ｈ23ＦＮ4Ｏ5の計算値：４３１、実測値：４３１。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6、４００ＭＨｚ）δ  １３．６７（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，９．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｍ，１Ｈ）、６．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．７４（ｓ，３Ｈ）、３．５５−３．４０（ｍ，２Ｈ）、３．１３（ｓ，３Ｈ）、２．４２（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【００３７】
本明細書に記載される化合物は、現在好ましい実施形態の代表であり、例であって、本発明の範囲を制限するものではない。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明に置換および修飾の変更がなされ得ることは、当業者には直ちに明白である。
【００３８】
例示的なキラル種
本発明のキラル種を合成するための一般的なスキームを下に概説する：
【化２６】
2008542294.tif 000027
ステップ１：
５−フルオロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１．６２ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１．９６ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）、ピロリジン（１２滴）および無水エタノールの混合物を、３時間還流まで加熱した。混合物を２５℃まで冷却し、固体を濾過により回収した。固体をエタノール（３０ｍＬ）とともに７２℃にて３０分間攪拌した。混合物を２５℃まで冷却し、固体を再び濾過により回収し、エタノール（６ｍＬ）で洗浄し、真空下で一晩乾燥させて、橙色の固体、（Ｚ）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３．０９４ｇ、９６％）を得た。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+３００．９５（Ｃ16Ｈ13ＦＮ2Ｏ3の計算値３００．０９）。
ステップ２：
（Ｚ）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３．０９４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に懸濁し、５分間攪拌した。次に、ＤＩＥＡ（２．７ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０分間攪拌した。ＨＡＴＵ（３．９１ｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を終了させるために２５℃にて攪拌した。ＬＣ／ＭＳは反応の終了を検出した。ＤＭＦの大部分を除去し、残渣をＡＣＮに懸濁し、さらに４０分間攪拌した。固体を濾過により回収し、ＡＣＮで洗浄し、高真空下で一晩乾燥させた。（Ｚ）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル  ５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシレート（３．９７ｇ、９２％）を得た。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４１８．６８（Ｃ21Ｈ15ＦＮ6Ｏ3の計算値４１８．１２）。
ステップ３：
（Ｚ）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル  ５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシレート（１．０当量）のＤＭＦ溶液に、アミン（１．２当量）を添加し、反応混合物を２５℃にて２時間攪拌した。ＬＣ／ＭＳを適用して反応の終了を検出した。ＤＭＦを減圧下で除去し、粗物質を超音波処理下で５％ジエチルアミン／メタノール（３ｍＬ）で沈殿させ、固体を濾過により回収し、５％ジエチルアミン／メタノール（１ｍＬ）で２回洗浄した。
【００３９】
実施例１２：（Ｓ）−３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシプロパン酸の合成
【化２７】
2008542294.tif 000028
（Ｓ）−メチル  ３−アミノ−２−ヒドロキシプロパノアート  ヒドロクロリドの合成：
【化２８】
2008542294.tif 000029
メタノール（２０ｍＬ）中の（Ｓ）−イソセリン（９２１．６ｍｇ、８．７７ｍｍｏｌ）に、濃ＨＣｌ（０．５ｍＬ）を添加し、混合物を一晩還流した。混合物を２５℃まで冷却し、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を乾燥させ、次のステップに直接用いた。
【００４０】
（Ｓ）−３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシプロパン酸メチルエステルの合成：
【化２９】
2008542294.tif 000030
（Ｓ）−メチル  ３−アミノ−２−ヒドロキシプロパノアート  ヒドロクロリド（１７２．３ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）ＤＭＦ溶液に、ＤＩＥＡ（０．４８ｍＬ、２．７６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃にて２０分間攪拌した。（Ｚ）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル  ５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシレート（１７４．８ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を終了させるために２５℃にて攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、（Ｓ）−３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシプロパン酸メチルエステルを得た（定量的収量）。生成物を、精製を行わずに次のステップに用いた。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４０１．９８（Ｃ20Ｈ20ＦＮ3Ｏ5の計算値４０１．１５）。
【００４１】
（Ｓ）−３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシプロパン酸の合成：
【化３０】
2008542294.tif 000031
（Ｓ）−３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシプロパン酸メチルエステル（１６７ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ・Ｈ2Ｏ（３６ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）およびメタノール／水（１０ｍｌ／２ｍＬ）を２５℃にて一晩攪拌した。溶媒の大部分を減圧下で除去し、過剰な１Ｎ  ＨＣｌを添加して混合物を酸性化した。橙色の固体を濾過により回収し、冷メタノールで洗浄して、（Ｓ）−３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−２−ヒドロキシプロパン酸を得た（収量８８％）。ＬＣＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+３８７．９６（Ｃ19Ｈ１８ＦＮ3Ｏ5の計算値３８７．１２）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．９１（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０（ｓ，１Ｈ）、７．５７（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ）、４．１７−４．１４（ｍ，１Ｈ）、３．６４（ｓ，１Ｈ）、３．５５−３．４９（ｍ，１Ｈ）、３．４５−３．３９（ｍ，１Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【００４２】
実施例１３〜１７：アミドの合成のための一般的手順：アミン（１．２当量）を、（Ｚ）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル  ５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシレート（１．０当量）のＤＭＦ中懸濁液に添加した。混合物を２５℃にて２時間攪拌し、ＬＣ／ＭＳを適用して反応の終了を検出した。最終溶液を取り除いて粗固体を得、それを５％ジエチルアミン／メタノールに沈殿させ、固体を濾過により回収し、５％ジエチルアミン／メタノールで洗浄して純粋なアミド生成物を得、それを続いてＬＣ−ＭＳおよびＮＭＲ分光分析により特性決定した。
【００４３】
実施例１３：５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−２−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミドの合成
【化３１】
2008542294.tif 000032
（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ヒドロキシプロパン酸の合成：
【化３２】
2008542294.tif 000033
（Ｓ）−イソセリン（２．４２９ｇ、２３．１２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／水（５０ｍＬ／５０ｍＬ）溶液に、Ｋ2ＣＯ3（３．８３４ｇ、２７．７４ｍｍｏｌ）およびＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）−スクシンイミド（５．７６ｇ、２３．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃にて一晩攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、過剰なＨＣｌで酸性化した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、合した有機層を希ＨＣｌ、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去して（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ヒドロキシプロパン酸（５．１１ｇ、９２％）を得、それをさらなる精製を行わずに次のステップに用いた。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+２３９．９１（Ｃ11Ｈ13ＮＯ5の計算値２３９．０８）。
【００４４】
（Ｓ）−ベンジル  ３−（ジメチルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−オキソプロピルカルバメートの合成：
【化３３】
2008542294.tif 000034
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ヒドロキシプロパン酸（３７７．８ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）に、ジメチルアミン塩酸塩（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（１９３．２ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．９ｍＬ、５．１７ｍｍｏｌ）を添加した。次に、混合物を５分間攪拌し、ＥＤＣ（４５４．３ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３２０．３ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃にて一晩攪拌した。ＤＭＦを減圧下で除去し、粗物質をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合した有機層を水、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、ＮａＳＯ4で乾燥させた。溶液を濃縮し、粗物質を、０〜２０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いるフラッシュクロマトグラフィーで精製して（Ｓ）−ベンジル  ３−（ジメチルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−オキソプロピルカルバメートを得た（３４９．２ｍｇ、８３％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+２６６．９６（Ｃ13Ｈ18Ｎ2Ｏ4の計算値２６６．１３）。
【００４５】
（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドの合成：
【化３４】
2008542294.tif 000035
エタノール（１０ｍＬ）中の脱気した（Ｓ）−ベンジル  ３−（ジメチルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−オキソプロピルカルバメート（２５６．６ｍｇ、０．９６４ｍｍｏｌ）をアルゴン保護下でＰｄ／Ｃ（１０％、３０ｍｇ）に添加し、次に混合物を脱気した。水素バルーンを用いてＨ2源を準備した。反応物を５０℃にて一晩攪拌した。混合物をセライト５２１で濾過した。濾液を蒸発させて（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドを得た（１２５．２ｍｇ、９８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．６５（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１−３．５９（ｍ，２Ｈ）、３．０７（ｓ，３Ｈ）、３．０４（ｓ，３Ｈ）、１．９４（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ）。
【００４６】
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−２−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミドの合成：
アミド合成のための一般的手順に従って標題化合物を得た（７９％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４１４．９７（Ｃ21Ｈ23ＦＮ4Ｏ4の計算値４１４．１７）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．６８（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ）、５．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．５３（ｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．４７−３．４１（ｍ，１Ｈ）、３．３６−３．３０（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｓ，３Ｈ）、２．８５（ｓ，３Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４０（ｓ，３Ｈ）。
【００４７】
実施例１４．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イル−３−オキソ−プロピル）−アミドの合成
【化３５】
2008542294.tif 000036
（Ｓ）−ベンジル  ２−ヒドロキシ−３−モルホリノ−３−オキソプロピルカルバメートの合成：
（Ｓ）−ベンジル  ３−（ジメチルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−オキソプロピルカルバメートの合成に類似の方法を適用して標題化合物を得た（収量８６％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４０８．９６（Ｃ15Ｈ20Ｎ2Ｏ5の計算値３０８．９６）。
【００４８】
（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−１−モルホリノプロパン−１−オンの合成：
（Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドの合成に類似の方法を適用して標題化合物を得た（収量９４％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．３６−４．３４（ｍ，１Ｈ）、３．７５−３．５４（ｍ，８Ｈ）、３．５０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．９６−２．７９（ｍ，２Ｈ）、１．９４（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ）。
【００４９】
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イル−３−オキソ−プロピル）−アミドの合成：
アミド合成のための一般的手順に従って標題化合物を得た（７５％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４５７．０１（Ｃ23Ｈ25ＦＮ4Ｏ5の計算値４５６．１８）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．６８（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ）、５．１８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５１（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６１−３．５１（ｍ，６Ｈ）、３．４９−３．３６（ｍ，４Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【００５０】
実施例１５．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−２−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミドの合成
【化３６】
2008542294.tif 000037
（Ｒ）−メチル  ３−アジド−２−ヒドロキシプロパノアートの合成：
【化３７】
2008542294.tif 000038
アジ化ナトリウム（５．４８７ｇ、８４．３９ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（２．２５７ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を、メチル（２Ｒ）−グリシデート（２．８７２ｇ、２８．１３ｍｍｏｌ）のメタノール（４０ｍＬ）および水（２ｍＬ）中溶液に添加した。１０時間還流した後、メタノールを蒸発させた。混合物をＣＨＣｌ3で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（５ｍＬ）で洗浄し、抽出した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、有機相を濃縮し、フラッシュクトマトグラフィーで精製して（Ｒ）−メチル  ３−アジド−２−ヒドロキシプロパノアートを得た（２．８２ｇ、６９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．３９−４．３６（ｍ，１Ｈ）、３．８４（ｓ，３Ｈ）、３．６７−３．４８（ｍ，２Ｈ）、３．１８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【００５１】
（Ｒ）−３−アジド−２−ヒドロキシプロパン酸の合成：
【化３８】
2008542294.tif 000039
０℃の（Ｒ）−メチル  ３−アジド−２−ヒドロキシプロパノアート（７．３ｇ、５０．３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）溶液に、１Ｎ  ＮａＯＨ（６５ｍＬ、６５ｍｍｏｌ）を添加した。室温にて１時間攪拌した後、混合物を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮して酸を白色固体として得た。この化合物を、さらなる精製を行わずに次のステップに用いた。
【００５２】
（Ｒ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドの合成：
（Ｓ）−ベンジル  ３−（ジメチルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−オキソプロピルカルバメートの合成に類似の方法を適用し、標題化合物を得た（収量９３％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．３９−４．３６（ｍ，１Ｈ）、３．６７−３．４８（ｍ，２Ｈ）、３．１８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．０８（ｓ，３Ｈ）、３．０４（ｓ，３Ｈ）。
【００５３】
（Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドの合成：
【化３９】
2008542294.tif 000040
エタノール（１５０ｍＬ）中の脱気した（Ｒ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミド（８．３７ｇ、４６．６ｍｍｏｌ）をアルゴン保護下でＰｄ／Ｃ（１０％、８３７ｍｇ）に添加し、次に混合物を脱気した。水素バルーンを用いてＨ2源を準備した。反応物を２５℃にて２時間攪拌し、ＴＬＣを適用して反応の終了を検出した。混合物をセライト５２１で濾過した。濾液を蒸発させて所望の化合物を得た（５．３８ｇ、８７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．６５（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１−３．５９（ｍ，２Ｈ）、３．０７（ｓ，３Ｈ）、３．０４（ｓ，３Ｈ）。
【００５４】
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−２−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミドの合成：
アミド合成のための一般的手順に従って標題化合物を得た（収量８５％）、ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４１４．９７（Ｃ21Ｈ23ＦＮ4Ｏ4の計算値４１４．１７）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．６７（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ）、５．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．５３（ｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．４７−３．４１（ｍ，１Ｈ）、３．３６−３．３０（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｓ，３Ｈ）、２．８５（ｓ，３Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４０（ｓ，３Ｈ）。
【００５５】
実施例１６．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イル−３−オキソ−プロピル）−アミドの合成
【化４０】
2008542294.tif 000041
（Ｒ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−１−モルホリノプロパン−１−オンの合成：
（Ｓ）−ベンジル  ３−（ジメチルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−オキソプロピルカルバメートの合成に類似の方法を適用し、標題化合物を得た（収量９０％）、1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．５５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１−３．６０（ｍ，６Ｈ）、３．４８−３．４１（ｍ，３Ｈ）、３．４０−３．３５（ｍ，２Ｈ）。
【００５６】
（Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−１−モルホリノプロパン−１−オンの合成：
（Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドの合成に類似の方法を用い、標題化合物を高収量で得た（収量９５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ４．３６−４．３４（ｍ，１Ｈ）、３．７５−３．５４（ｍ，８Ｈ）、３．５０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．９６−２．７９（ｍ，２Ｈ）、１．９４（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ）。
【００５７】
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イル−３−オキソ−プロピル）−アミドの合成：
アミド合成のための一般的手順に従って標題化合物を得た（収量７５％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４５７．０１（Ｃ23Ｈ25ＦＮ4Ｏ5の計算値４５６．１８）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．６８（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ）、５．１８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．５４−４．４９（ｍ，１Ｈ）、３．６１−３．５１（ｍ，６Ｈ）、３．４９−３．３６（ｍ，４Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【００５８】
実施例１７．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−メチルカルバモイル−エチル）−アミドの合成
【化４１】
2008542294.tif 000042
（Ｒ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−Ｎ−メチルプロパンアミドの合成：
【化４２】
2008542294.tif 000043
（Ｒ）−メチル  ３−アジド−２−ヒドロキシプロパノアート（５０５．４ｍｇ、３．４８ｍｍｏｌ）およびメチルアミンエタノール溶液（１５ｍＬ）を密封し、６０℃の油浴中で一晩攪拌した。ＴＬＣ分析を適用して反応の終了を検出した。溶媒を除去し、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（０〜２０％  メタノール／ＤＣＭ）により精製して（Ｒ）−３−アジド−２−ヒドロキシ−Ｎ−メチルプロパンアミド（３８５．２ｍｇ、収量７７％）、1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ６．９０−６．７０（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）、４．２８−４．２４（ｍ，１Ｈ）、３．６９−３．５７（ｍ，３Ｈ）、２．８７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ）を得た。
【００５９】
（Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ−メチルプロパンアミドの合成：
（Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミドの合成に類似の方法を用い、標題化合物を得た（収量９８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ７．０５（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ）、３．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．１２−２．９６（ｍ，２Ｈ）、２．８５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．９０（ｂｒｏａｄ，２Ｈ）。
【００６０】
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−メチルカルバモイル−エチル）−アミドの合成：
アミド合成のための一般的手順に従って標題化合物を得た（収量８６％）、ＬＣ−ＥＳＩＭＳ観察値［Ｍ＋Ｈ］+４００．９６（Ｃ20Ｈ21ＦＮ4Ｏ4の計算値４００．１５）；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．６９（ｓ，１Ｈ）、１０．８９（ｓ，１Ｈ）、７．８７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９５−６．９０（ｍ，１Ｈ）、６．８５−６．８２（ｍ，１Ｈ）、５．８３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．０７−４．０３（ｍ，１Ｈ）、３．５７−３．５１（ｍ，１Ｈ）、３．３７−３．３０（ｍ，１Ｈ）、２．６２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，３Ｈ）２．４５（ｓ，３Ｈ）、２．４２（ｓ，３Ｈ）。
【００６１】
実施例１８〜２１７：一層さらなるアミドの例を、次の表に示す。
【化４３】
2008542294.tif 000044
上記のコア構造において、Ｒ2は、水素およびフルオロからなる群から選択され；かつ、Ｒ7は、ヒドロキシルまたは次の構造：
【００６２】
【表１Ａ】
2008542294.tif 000045
【表１Ｂ】
2008542294.tif 000046
【表１Ｃ】
2008542294.tif 000047
で表される基からなる群から選択される。
【００６３】
上記の表において、Ｒ7は、次の基：
【化４４Ａ】
2008542294.tif 000048
【化４４Ｂ】
2008542294.tif 000049
から選択される。
【００６４】
これらのアミドの実施例１８〜２１７は、上記の手順および／または公知の手順に従って当業者により作成され得る。
【００６５】
ＶＥＧＦＲ生化学アッセイ
化合物を、次の手順に従って、Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｌｔｄ  ａｔ  Ｄｕｎｄｅｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍにより生化学活性について評価した。最終の反応容積２５μｌ中で、ＫＤＲ（ｈ）（５−１０ｍＵ）を、８ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．０、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ  酢酸マグネシウムおよび［γ−33Ｐ−ＡＴＰ］（約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌの比放射能、必要に応じた濃度）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰミックスの添加により反応を開始させる。室温にて４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液の添加により反応を停止させる。次に、１０μｌの反応物をＰ３０フィルターマットにスポットし、７５ｍＭリン酸中で５分間３回洗浄し、乾燥およびシンチレーション計数の前にメタノール中で１回洗浄する。
【００６６】
細胞アッセイ：ＨＵＶＥＣ：ＶＥＧＦ誘導性増殖
化合物を、ＨＵＶＥＣ細胞のＶＥＧＦ誘導性増殖の際の細胞活性についてアッセイした。ＨＵＶＥＣ細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＣＣ−２５１７）を、３７℃および５％ＣＯ2にてＥＧＭ（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＣＣ−３１２４）中で維持した。ＨＵＶＥＣ細胞を、ＥＧＭ中に５０００細胞／ウェルの密度で蒔いた（９６ウェルプレート）。細胞の付着後（１時間）、ＥＧＭ−培地をＥＢＭ（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＣＣ−３１２９）＋０．１％  ＦＢＳ（ＡＴＴＣ、３０−２０２０）と交換し、細胞を３７℃にて２０時間培養した。培地をＥＢＭ＋１％  ＦＢＳに交換し、化合物をＤＭＳＯに連続希釈し、終濃度が０〜５，０００ｎＭおよび１％  ＤＭＳＯとなるまで細胞に添加した。３７℃にて１時間の前保温の後、細胞を１０ｎｇ／ｍｌ  ＶＥＧＦ（Ｓｉｇｍａ、Ｖ７２５９）で刺激し、３７℃にて４５時間培養した。細胞増殖を、４時間のＢｒｄＵのＤＮＡ取り込みにより測定し、反応を停止させるために１Ｍ  Ｈ2ＳＯ4を用いるＥＬＩＳＡ（Ｒｏｃｈｅ  ｋｉｔ、１６４７２２２９）によりＢｒｄＵ標識を定量した。吸光度を、６９０ｎｍでの参照波長を用いて４５０ｎｍで測定した。
【００６７】
図面の詳細な説明：
図１は、酸１−３および対応するアミド１−４の合成を示すスキームである。出発カルボン酸は、Ｓｕｎ，Ｌ．；ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４６，１１１６−１１１９の追加材料に従って合成される。中間体１−２は、３当量のヒューニッヒ塩基、またはジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）の存在下で、酸とＨＡＴＵの反応によって形成される。固体は１５分後に沈殿し、その固体を単離し特性決定した。次に、これをＤＭＦ中１．５当量の（２Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシ酪酸メチルおよび３当量のヒューニッヒ塩基と反応させた。メチルエステルを水中５当量のＫＯＨで加水分解した。反応混合物を酸性化させることにより、遊離酸１−３の単離が可能となった。次に、ＤＭＦ中３当量のＤＩＥＡの存在下でこの酸をＨＡＴＵと反応させた。アミン（２当量）を添加し、２時間反応させた後、アミドを分取ＨＰＬＣにより単離した。
【００６８】
図２は、アミド系２−３の合成を示すスキームである。活性化した酸１−２を、ＤＭＦ中３当量の塩基（ＤＩＥＡ）の存在下で、メチル  ３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオナートヒドロクロリドと反応させる。室温にて２時間攪拌した後、水中５当量のＫＯＨを添加し、エステル加水分解が終了するまで攪拌を継続した。反応混合物の酸性化の後に酸を単離した。次に、遊離酸を、ＤＭＦ中のＨＡＴＵ（１．０５当量）、ＤＩＥＡ（５当量）、およびアミン（２当量）に添加した。混合物を室温にて２時間攪拌し、混合物を酸性化した。純粋な生成物を分取ＨＰＬＣにより単離した。
【００６９】
図３は、実施例化合物およびＫＤＲに対するそれらの活性の一部を示す。ＩＣ50の単位はμＭである。
【００７０】
図４は、活性について試験したさらなる化合物を示す。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】酸１−３および対応するアミド１−４の合成を示すスキームを説明する図である。出発カルボン酸は、Ｓｕｎ，Ｌ．；ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４６，１１１６−１１１９の追加材料に従って合成される。
【図２】アミド系２−３の合成を示すスキームを説明する図である。
【図３】実施例化合物およびＫＤＲに対するそれらの活性の一部を示す図である。
【図４】活性について試験したさらなる化合物を示す。
【図１】
2008542294.tif 000078
【図２】
2008542294.tif 000079
【図３】
2008542294.tif 000080
【図４】
2008542294.tif 000081
【国際調査報告】
2008542294.tif 000082