(57)【要約】  本発明は、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス移植不全を治療および予防する方法であって、ピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量の投与を含む方法を提供する。本発明は、ピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩と可逆的に結合した少なくとも１つの表面を有する狭くなった動脈に使用するための血管内ステントをさらに提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態を治療または予防する方法であって、これらの必要な患者に対してピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法。
【請求項２】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が糖尿病である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり0.5〜50mg／kg体重の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり1〜15mg／kg体重の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記状態は、再狭窄であり、かつ前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的塩は、前記効果がもたらされる患者の動脈内に血管内ステントを移植することによって投与され、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量は、血管内ステントから放出される方法。
【請求項７】
抗炎症薬の治療上有効量を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
心保護薬の治療上有効量を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
アテローム性動脈硬化症に罹患している患者においてこれらを治療する方法であって、前記患者が経皮的冠状動脈インターベンションを受ける前に、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法。
【請求項１０】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、経皮的冠状動脈インターベンションの前に1〜14日間毎日投与される、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記経皮的冠状動脈インターベンションが、経皮的冠動脈形成術、回転式粥腫切除、方向性粥腫切除、摘出粥腫切除、レーザ血管形成術、冠動脈内ステントの移植およびカテーテルの移植からなる群より選択される、請求項9に記載の方法。
【請求項１２】
前記経皮的冠状動脈インターベンション後に、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与する工程をさらに含む、請求項9に記載の方法。
【請求項１３】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、前記経皮的冠状動脈インターベンション後に1〜30日間毎日投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、前記経皮的冠状動脈インターベンション後に少なくとも30日間毎日投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１５】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり0.5〜50mg/kg体重の間である、請求項9に記載の方法。
【請求項１６】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり1〜15mg/kg体重の間である、請求項9に記載の方法。
【請求項１７】
血管炎症、アテローム性動脈硬化症、プラーク不安定化、再狭窄およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態の予防または治療のための、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量の使用。
【請求項１８】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、1日あたり0.5〜50mg/kg体重の間である、請求項17に記載の使用。
【請求項１９】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、1日あたり1〜15mg/kg体重の間である、請求項17に記載の使用。
【請求項２０】
血管炎症、アテローム性動脈硬化症、プラーク不安定化、再狭窄およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態の予防または治療に有用な医薬の製造のための、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項２１】
狭くなった動脈で使用するための血管内ステントであって、前記ステントは、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩と可逆的に結合した少なくとも１つの表面を有する血管内ステント。
【請求項２２】
請求項21に記載の血管内ステントであって、前記少なくとも１つの表面は、生理的適合性マトリックスを含み、前記マトリックスは、患者内の前記ステントの移植による前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の時間遅延放出のために適応された血管内ステント。
【請求項２３】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、10mg〜10,000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【請求項２４】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、1000mg〜10,000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【請求項２５】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、1000mg〜5000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【請求項２６】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、10mg〜1000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アテローム性動脈硬化症および再狭窄を治療および予防するための化合物、並びに方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アテローム発生の過程は、主に動脈のコレステロール蓄積からなると長らく考えられてきた。コレステロール（特に、低密度リポタンパク質またはLDL）の血漿濃度が高いことは、疾患の主要な危険因子のうちの1つを構成するが（1）、アテローム発生は、現在、ずっと複雑な過程であると理解されている。実際に、スタチンなどの脂質低下薬の広範な使用にもかかわらず、心臓血管疾患は、カナダ、米国および残りの世界における主要な死因のままである（2）。本症を治療するための新たなストラテジーを発明する際に、コレステロールを越えて調べることが必要なことが明らかになってきた。アテローム性動脈硬化症は、現在、多因子病であることが既知である。
【０００３】
経皮的冠動脈形成術は、アテローム性動脈硬化症を含む冠状動脈疾患を治療するために最も一般に使用される血管再生法である。しかし、血管形成術の長期間の成功は、6月以内の患者の30〜60%において観察される再狭窄の発生によって制限される（5）。再狭窄を経験した患者は、繰り返し血管再生法を受けなければならないことが多い。ステント、特に薬物溶出ステントの導入により、再狭窄の発病率が10〜30%に減少したが（6）、再狭窄は、なおもこれらの発病率野天でかなり問題がある。問題を悪化させているのは、複合冠状動脈疾患、左冠動脈疾患または下鼠径動脈疾患（標的血管の病巣または解剖学的型が、ステント術に適していない場合）である患者については、再狭窄の割合が高いままであるという事実である（6、7）。同様に、糖尿病患者における再狭窄の発病率は、ステントが使用されたときでさえも、非糖尿病患者のおよそ2倍である（8）。血管形成術後の新生内膜形成は、アテローム性動脈硬化症と同様に、複雑な過程であり、炎症、高ホモシステイン血症、遊走、増殖および血管壁の再造形を含む（9-11）。
【０００４】
現在の療法では、アテローム性動脈硬化症および再狭窄の複数の面に効率的に対処することができない。現在、アテローム性動脈硬化症を治療または予防することを目標とした薬剤療法は、主に脂質の減少に焦点をあてており、スタチンが選択の脂質低下薬である。また、スタチンは、強力な抗炎症薬であるが、これらでは、アテローム性動脈硬化症の発症および進行に寄与するその他の多数の要因（脂質酸化、血管細胞増殖、高ホモシステイン血症および血栓症を含む）に対処がなされない。したがって、1つまたは複数の脂質低下薬、抗血栓症薬剤および／またはホモシステイン低下薬を含む併用療法が提唱されている。たとえば、アテローム性動脈硬化症の積極的治療のために、アスピリン、β遮断薬およびアンジオテンシン変換酵素（ACE）阻害剤と組み合わせたスタチンの使用が提唱されている（126）。
【０００５】
異なる種類の薬物を含む併用療法により、複数の危険因子を治療することができるが、このような療法の有用性は、有害な薬物間相互作用のために制限され得る。多剤の同時投与により、1つまたは  複数の薬物の毒性の増大および／または有効性の減少を生じ得る。たとえば、一方の薬物が、別の同時投与された薬物の代謝にネガティブな影響を及ぼし得る。スタチン、アトルバスタチンは、血小板凝集の阻害剤であるクロピドグレルの有効性を減少させることが示された（127）。CYP3A4の基質であるアトルバスタチンは、クロピドグレルのCYP3A4活性化を競合的に阻害する。
【０００６】
また、治療処方計画があまりに複雑な場合、たとえば、個々の薬物を1日の異なる時間に別々に摂取しなければならない場合、またはある薬物は空腹時に摂取しなければならないが、その他の薬剤は満腹時に摂取しなければならない場合、患者の服薬遵守が不十分でのために併用療法の有用性が制限され得る。治療の複雑度の増大が患者の服薬遵守の減少と直接相関することは、十分に確立されている。したがって、併用療法の有効性は、薬物の特定の組み合わせにおける薬学的有効性だけでなく、治療の実施の容易性および簡易性にも関連がある
ピリドキサール-5’-リン酸（P5P）は、周知のビタミンB6化合物である。本発明者らは、肥大、高血圧症、鬱血性心不全および虚血などの心臓血管疾患の治療のためのP5Pの有用性を以前に開示した（米国特許第6,677,356号を参照されたい）。
【０００７】
アポトーシスは、動脈壁統合の制御において重要な役割を果たす。アテローム発生の間に、アポトーシスが調節解除されることにより、動脈形態形成、壁構造安定性および代謝の異常を生じ得る。機械的力、反応性酸素種および窒素種、サイトカイン、成長因子、酸化型リポタンパク質、その他を含む多く生物生理学的および生化学的因子が、血管細胞のアポトーシスを誘導し、または影響を及ぼし得る。また、アポトーシスは、プラーク不安定化において有意な役割を果たす。マクロファージは、アテローム硬化型病変の最も優勢な細胞型である。最近の報告では、マクロファージアポトーシスが、進行したアテローム硬化型病変におけるプラーク不安定化を促進することが示唆された。
【０００８】
以前の研究では、アデノシン三リン酸の相当量が、種々の生理学的および病態生理学的条件下で細胞外空間に蓄積し得ることが示されている（80-82）。ATPは、P2プリン受容体を経て細胞に作用して、分泌、走化性、増殖、転写因子活性化および細胞障害性を含む多くの異なる反応をトリガーする（83）。加えて、ATPは、P2X7受容体の特異的活性化を介してその効果を媒介する強力なプロアポトーシス薬であることが既知である（84、85）。ATPが、P2X7受容体と結合するときに、これが陽イオンの迅速な双方向性流束を促進し、これにより脱分極、Na+およびK+勾配の崩壊およびCa2+の大量流入をトリガーする。さらに、P2X7受容体の継続刺激により、大きな非特異的な孔の形成を引き起こし、別個の孔形成部分の補充を介して800Daまでの分子を透過することができる（86-88）。いくつかの研究では、P5Pが心臓（89、90）、迷走神経（91）、輸精管（91）および平滑筋細胞（92）を含む多数の異なる組織型における細胞外ATPの効果を阻害することを示した。
【０００９】
本発明者らは、P5Pが新たに単離された成人ラット心筋細胞においてATPで誘導されるカルシウム流入を阻害し（89、93）、単離された灌流したラット心臓に対するATPの陽性変力効果を阻害すること（89、90）を以前に見いだした。アポトーシスの阻害に対するP5Pの効果またはこれが再狭窄後の血管形成速度を減少させる能力は、これまで想定されておらず、また既知でもない。
【００１０】
炎症は、脂肪線条から開始して進行した複雑な病変へのアテローム生成過程における鍵となる構成要素である（3、94、95）。内皮下の空間に酸化型LDLおよびその他の脂質が存在すると、炎症反応を生じて、単球を血管壁に付着させる原因となり得る。単球は、酸化型LDLを取り込んで泡沫細胞を形成することができるマクロファージに形質転換される。次いで、脂肪線条の形成部分に加えて、これらの細胞は、また、サイトカインおよび成長因子を放出して、これが血管細胞遊走および増殖を刺激する（3、94、95）。また、血小板は、ダメージを受けた血管壁に付着し得る。活性化されたときに、血小板は、血管細胞遊走および増殖にも寄与し得るサイトカインおよび成長因子を含むこれらの顆粒を放出する（3）。また、血小板の活性化により、遊離アラキドン酸の形成を生じる（3）。アラキドン酸は、トロンボキサンA2（強力な血管収縮薬および血小板アグリゲーター）またはロイコトリエン（これは、炎症反応に寄与し得る）などのプロスタグランジンに変換され得る（3）。また、血管壁に付着する活性化された血小板は、その他の血小板を補充して、血栓の形成を引き起こし、これが動脈の封鎖を引き起こし得る（3）。炎症および血栓症は、両者ともアテローム生成過程の重要な構成要素である。したがって、疾患を治療する際には、両者に対処しなければならない。
【００１１】
研究では、危篤状態または慢性疾患の患者（96）またはリウマチ様関節炎であるもの（97）などにおいて見られる全身性炎症反応の間に、血漿中のP5Pレベルが減少することを示した。同様に、血漿P5Pレベルは、これらの患者における（98）、並びに脳卒中患者における（99）、C反応性タンパク質（炎症のマーカー）と逆相関する。リウマチ様関節炎である患者（97）では、低血漿P5Pレベルは、腫瘍壊死因子-αなどの炎症のためのその他のマーカーとも関連していた。多くの疫学調査では、低血漿P5Pレベルが心臓血管疾患にリンクしており、数名の著者は、低血漿P5Pレベルが独立した心血管危険因子であり得ることを示唆するに至った（70、100-104）。低血漿P5Pと虚血性発作との間で、その他の危険因子とは独立して、強力な関連が見いだされた（105）。
【００１２】
インターロイキン1は、活性化された単球およびマクロファージによって大量に産生される重要な炎症性メディエーターである（106）。IL-1生物活性は、2つの関連した、しかし異なったポリペプチドのIL-1αおよびIL-1βに由来する（106、107）。ヒトIL-1βは、1型IL-1受容体と結合する能力のない31kDaのプロサイトカインとして合成される（108）。活性を得るためには、プロIL-1がカスパーゼ-1によって切断されて、17kDaのカルボキシ末端由来のポリペプチドを生じなければならない（109、110）。IL-1βは、小胞体およびゴルジ体を含まない非典型的分泌機序を経て単球およびマクロファージから放出される（111）。IL-1βを産生するように刺激された細胞からのこのサイトカインの放出は、一般に非効率的な過程である。大部分の新たに合成されたサイトカイン分子は、細胞に結合したままであり、および／または分解される（112-114）。プロIL-1βの効率的なタンパク分解性切断および17kDaの成熟したペプチドの放出を促進するためには、サイトカイン産生細胞をATPなどの分泌刺激で処置しなければならない（115-117）。
【００１３】
細胞外ATPは、リポ多糖（LPS）で刺激された単球およびマクロファージの両方におけるIL-1βのプロセシング、並びに放出の速度を著しく促進する（116-118）。ATPで誘導される変化は、細胞外Na+およびCa2+の迅速な流入および細胞内K+の流出を容易にする非選択的カチオンチャネルとして役立つP2X7プリン受容体の活性化を経て媒介される（117、119）。また、P2X7受容体の長期または繰り返し刺激により、分子≦800Daを細胞内または細胞外に拡散することができる非選択的孔の活性化が生じる（120）。単球およびマクロファージ内の陽イオン恒常性の摂動、特に細胞内K+の喪失およびNa+およびCa2+獲得により、プロカスパーゼ-1の活性化を生じ、これによりIL-1βのプロセシングおよび放出を促進することが確立されている（113、118、121）。
【００１４】
また、血栓症は、アテローム性動脈硬化症の発症にも関係している。抗血栓活性に関して、P5Pは、ADP、トロンビン、アドレナリン、血小板活性化因子、並びにアラキドン酸で誘導されるヒト血小板凝集およびインビトロでの14C-5HT放出を阻害することが報告された（122）。この同じ研究では、これらの薬剤の全てによって誘導されるトロンボキサンB2産生（アラキドン酸以外）が、P5Pによっても阻害された（122）。別のインビトロ実験では、P5PがプロスタグランジンE1およびテオフィリンの両者で誘導される血小板凝集を阻害できることが示された（123）。同様に、ピリドキシン（100mgを15日間１日2回）で処置した患者からの血漿を使用したインビボ研究では、アゴニストADPまたはエピネフリンで誘導される血小板凝集が有意に阻害されたこと、および出血時間が有意に延長されたことを示した（124）。最後に、ピリドキシンで処置したアテローム硬化型患者における臨床研究では、血漿抗トロンビンIII（AT III；凝固カスケードの反応の強力な阻害剤）活性が有意に増大された（16）。また、ピリドキシン処置により、遺伝的ホモシステイン尿素である患者におけるAT III活性を増大することを示した（125）。
【００１５】
炎症に対するP5P処置の役割、およびこれが再狭窄後の血管形成の速度を減少させる能力は、これまで想定されておらず、また既知でもない。
【発明の開示】
【００１６】
発明の概要
第1の側面において、本発明は、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態を治療または予防する方法であって、これらの必要な患者に対してピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
本発明のある態様において、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス移植不全を治療する方法は、抗炎症薬または心保護薬の治療上有効量を投与することをさらに含む。
【００１８】
第2の側面において、本発明は、アテローム性動脈硬化症に罹患している患者においてこれらを治療する方法であって、患者が経皮的冠状動脈処置を受ける前にピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量を投与することを含む方法を提供する。
【００１９】
第3の側面において、本発明は、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス不全からなる群より選択される状態の予防または治療のための、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量の使用を提供する。
【００２０】
第4の側面において、本発明は、血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス不全からなる群より選択される状態の予防または治療のために有用な医薬の製造のための、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００２１】
第5の側面において、本発明は、狭くなった動脈に使用するための血管内ステントであって、前記ステントは、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩と可逆的に結合した少なくとも１つの表面を有する血管内ステントを提供する。
【００２２】
詳細な説明
本発明者らは、驚くべきことに、P5Pがアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある個体における動脈プラークの形成を予防するのに有効であることを見いだした。また、本発明者らは、P5Pが、罹患した個対におけるアテローム性動脈硬化症の進行を遅らせるのに有効であることを見いだした。また、本発明者らは、P5Pが、アテローム性動脈硬化症の治療のための外科的介入を受けた個体における再狭窄の発病率および重症度を減少させるために有効であることを見いだした。
【００２３】
本発明者らの知見を考慮して、本発明は、アテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある個体、アテローム性動脈硬化症を有する個体、再狭窄を発症するリスクがある個体および再狭窄を有する個体を治療するための、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。また、本発明は、アテローム性動脈硬化症および／または再狭窄によって引き起こされるか、またはこれらに関連したに血管炎症、プラーク不安定化およびバイパス移植不全を治療、並びに予防するための、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩の使用を提供する。本発明に従った治療方法は、アテローム性動脈硬化症および再狭窄の発症および進行に寄与する複数因子を調整するためのP5Pの使用を包含する。
【００２４】
現在の併用療法とは対照的に、本発明は、安全で、複数の危険因子を寛解させるために有効で、患者の服薬遵守に貢献し、かつ低コストである治療の使用および方法を提供する。本発明に従ったアテローム性動脈硬化症を治療および予防する方法は、これらの必要な患者に対してP5Pの治療上有効量を投与することを含む。動物およびヒト研究では、P5Pが容易に許容され、かつ低毒性を有することを示す。P5P処置は、アテローム性動脈硬化症の発症および進行の根底にある主要因、すなわち高コレステロール血症、脂質酸化、血管細胞増殖、高ホモシステイン血症、血管細胞アポトーシス、炎症および血栓症を調整するために有効である。したがって、P5Pは、非常に費用のかかる複数種の薬物の投与が必要な現在利用可能な併用療法の代わりの単純なものを提供する。1つの薬物、すなわちP5Pのみを投与する必要があるだけなので、本発明に従った治療方法の実施の容易さは、従来技術の併用療法と比較して非常に優れており、したがって、患者の服薬遵守の可能性が非常に増大される。一部の環境では、より効率的に患者を治療するために、P5Pを別の選択的抗アテローム生成薬と組み合わせて投与することが望ましいかもしれない。しかし、P5Pは、複数の原因因子を調整するので、現在の併用療法によって対処される危険因子と同数に対処するために必要とされる薬物の種類は、より少ない。さらに、P5Pは、肝臓チトクロム酵素を阻害しないので、P5Pを含む併用療法は、有害な薬物間相互作用の発病率がより低い。
【００２５】
本発明者らは、P5Pが、アテローム性動脈硬化症および／または再狭窄であるか、またはこれらのリスクがある個体に投与されたときに、有利なことに：（1）高コレステロール血症および脂質酸化、（2）血管細胞増殖、（3）高ホモシステイン血症、（4）血管細胞アポトーシスおよび（5）炎症および血栓症を調整して、実質的利益を提供することを見いだす。
【００２６】
高コレステロール血症および脂質酸化
本発明者らは、P5Pの脂質調整特性を確認する。予想外に、本発明者らは、P5Pの脂質調整特性が、ピリドキシンまたはマグネシウムP5Pグルタメートのものよりも実質的に有効であることを見いだす。本発明者らは、さらに、P5Pで処置した個体は、LDLレベルの減少、HDLレベルの増加および酸化型脂質のレベルの減少を含むこれらの脂質プロフィールに対して、偽薬で処置した個体のプロフィールと比較して、臨床的に有意な変化を示すことを見いだす。さらにまた、本発明者らは、P5Pで調整される脂質プロフィールの変化が、プラーク病変形成の発病率の低下と相関することを見いだす。
【００２７】
したがって、本発明者らは、P5Pが、アテローム性動脈硬化症に関する2つの既知の因子である高コレステロール血症および脂質酸化の調整について、試験したその他のビタミンB6化合物よりも非常に高い有効性を有するように見えることを見いだす。また、本発明者らは、この調整により、プラーク病変形成の発病率がより低くなり、それ故、アテローム性動脈硬化症および／または再狭窄の治療に有効であろうことを見いだす。
【００２８】
血管細胞増殖
本発明者らは、P5Pが効率的に血管細胞増殖を阻害することを見いだす。本発明者らは、血管細胞増殖のP5P阻害が、プレアテローム硬化型個体および進行したアテローム性動脈硬化症を有する個体の両方の治療に有用であることを見いだす。また、本発明者らは、インビボでのP5Pの抗増殖特性が、実質的にピリドキシンのものよりも優れていることを見いだす。本発明者らは、驚くべきことに、P5Pが冠状動脈血管および末梢血管における血管細胞増殖を阻害するために有効であることを見いだす。また、本発明者らは、P5PがビタミンB6と比較して、インビボでの血管細胞増殖を阻害するために実質的により有効であることを見いだす。本発明者らは、血管細胞増殖のP5P阻害が、プラーク形成の発病率の低下およびプラークサイズの減少と相関し得ることを見いだす。
【００２９】
したがって、本発明者らは、P5Pが血管細胞増殖を阻害し、並びにプラーク病変形成の発病率を低下させ、それ故、アテローム性動脈硬化症および／または再狭窄の治療に有効であろうことを示す。
【００３０】
高ホモシステイン血症
本発明者らは、P5Pが、ピリドキシンと比較して、ホモシステイン低下薬として実質的により有効であることを見いだす。さらに、本発明者らは、プレアテローム硬化型個体およびP5Pで処置したアテローム硬化型個体は、偽薬で処置した個体と比較して、臨床的に有意な血漿ホモシステインレベルの減少およびプラーク病変の発病率の低下を有することを見いだす。
【００３１】
したがって、本発明者らは、P5Pがアテローム性動脈硬化症および／または再狭窄の治療に実質的により有効であることを示した。
【００３２】
血管細胞アポトーシス
本発明者によって行われた研究では、アポトーシスにおけるP5P阻害は、P5Pがプリン受容体および特にP2X7受容体をアンタゴナイズする能力に関連があることを見いだす。
【００３３】
本発明者らは、P5Pが血管壁の細胞およびプラーク病変の細胞の両者のアポトーシスを阻害することを見いだす。本発明者らは、P5Pの抗アポトーシス特性は、これがプリン受容体をアンタゴナイズする能力に関連があると思われることを見いだす。
【００３４】
炎症および血栓症
本発明者らは、P5Pが血管炎症の有効な阻害剤であること、およびP5Pの抗炎症性が実質的にピリドキシンの抗炎症性よりも優れていることを見いだす。本発明は、いずれの特定の理論に限定されるわけではないが、アテローム性動脈硬化症および再狭窄を治療および予防する際のP5Pの有効性は、P5Pの脂質低下特性、ホモシステイン低下特性および抗血栓症特性と比較して、実質的にその抗炎症性に関連があると考えられる。また、本発明者らは、P5Pの抗炎症性は、これがプリン受容体をアンタゴナイズする能力に関連があることを見いだす。
【００３５】
本発明者らは、P5PがP2X7受容体を発現する単球およびマクロファージによるIL-1□分泌を阻害し、これにより脈管構造内における炎症を阻害することを見いだす。本発明者らは、P5Pがその他のビタミンB6化合物と比較して、実質的により有効なプリン受容体アンタゴニストであり、したがって抗炎症薬であることをさらに見いだす。
【００３６】
本発明者らは、P5Pの抗血栓特性がその抗アンスロジェニック特性に寄与することを見いだす。本発明者らは、P5Pが、ビタミンB6と比較して、アテローム性動脈硬化症を治療する際に使用するためのより有効な抗血栓薬であることをさらに見いだす。
【００３７】
本発明は、特定の剤形、キャリア等に限定されるわけではなく、したがって変更してもよいことが理解される。また、本明細書に使用される用語法は、特定の態様のみを記述するためのものであり、限定することは企図されないことが理解される。
【００３８】
本発明は、患者におけるアテローム性動脈硬化症を治療または予防する方法であって、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法を提供する。本治療方法は、プレアテローム硬化型個体のために使用することができる。プレアテローム硬化型個体には、アテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある（すなわち、脂質の増大、ホモシステインの増大、CRPレベルの上昇などの別の危険因子を有する）が、脈管構造に最小限の変化（すなわち、プラーク病変の蓄積、動脈の狭細）のみを有するものを含む。プレアテローム硬化型個体の場合、ピリドキサール-5’-リン酸の投与は、アテローム性動脈硬化症の発症を予防し、またはアテローム性動脈硬化症の発症を遅延させるために有用である。また、本治療方法は、さらなる損傷を予防することによって、および既存のプラーク病変の不安定化を予防することによって疾患の進行を遅延させるために、アテローム硬化型個体（すなわち、冠状血管または末梢血管の臨床的に有意な狭細をもつもの）で使用することができる。
【００３９】
もう一つの側面において、本発明は、アテローム性動脈硬化症に罹患している患者においてこれらを治療する方法であって、患者が経皮的冠状動脈インターベンションを受ける前にピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法を提供する。本方法は、薬学的介入単独では不十分であるアテローム硬化型患者のために有用である。一部の環境において、疾患の範囲は、適切な血流を回復するための唯一の方法が、頚動脈粥腫切除などの外科的介入を介する、特に経皮的冠状動脈インターベンションを介するようなものである。
【００４０】
本発明に包含される経皮的冠状動脈インターベンションの例は、経皮的冠動脈形成術（PTCA）、回転式粥腫切除、方向性粥腫切除、摘出粥腫切除、レーザ血管形成術、冠動脈内ステントの移植およびその他のカテーテルデバイスを含むが、これらに限定されるわけではない。
【００４１】
本発明のある態様において、患者には、経皮的冠状動脈インターベンションを受ける前の1〜30日の間に、およびより好ましくはインターベンションの14日前に、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩治療上有効量が投与される。本発明のさらなる態様において、本方法は、経皮的冠状動脈インターベンション後に、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与するさらなる工程を含む。P5Pでの手術後処置の期間は、特定の患者の必要性に依存する。一部の環境では、長期処置およびさらに不定期処置も望ましいかもしれない。その他の環境において、短期処置が望ましいかもしれない。好ましい態様において、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩は、経皮的冠状動脈インターベンション後の1〜30日の間に投与される。さらなる好ましい態様において、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩は、経皮的冠状動脈インターベンション後の少なくとも30日間に投与される。
【００４２】
一部の環境において、経皮的冠状動脈インターベンション後に、さらなる心保護薬を同時投与することが望ましいかもしれない。P5Pまたはその薬学的に許容される塩と共に投与してもよい心保護薬の例は、以下のものなどの血小板凝集阻害薬を含む：トロンボキサンA2阻害剤（たとえば、アセチルサリチル酸（ASA））、糖タンパク質IIb／IIIa阻害剤（たとえば、アブシキマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ラミフィバン、ゼミロフィバン、オルボフィバン（orbofiban）、シブラフィバン（sibrafiban）、フラダフィバン（fradafiban）、ロキシフィバン（roxifiban）、ロトラフィバン（lotrafiban））、アデノシン阻害剤（たとえば、クロピドグレル、ジピリダモール、スルフィンピラゾン）、フィブリノーゲン-血小板結合阻害剤（チクロピジン）またはジピリダモールもしくはシロスタゾールなどの血小板クエン酸c-AMPホスホジエステラーゼ阻害剤またはペントキシフィリン（トレンタール）。
【００４３】
もう一つの側面において、本発明は、患者における血管炎症を治療または予防する方法であって、ピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法を提供する。治療される患者は、プレアテローム硬化型である個体であってもよく、この場合、P5Pの投与は、特に、血管炎症を減少させるだけでなく、アテローム性動脈硬化症を発症する可能性を減少させるためにも有用である。
【００４４】
本発明は、再狭窄に罹患している患者においてこれらを治療または予防する方法であって、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法をさらに提供する。
【００４５】
本発明に従った方法によって治療される再狭窄は、外科的介入、および一部の環境において、経皮的冠状動脈インターベンションの結果であってもよく、これらの例は、上で論議してある。
【００４６】
もう一つの側面において、本発明は、バイパス移植不全を治療または予防する方法であって、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量をこれらの必要な人に投与することを含む方法を提供する。本発明の一つの態様において、バイパス移植不全は、動脈移植片不全および好ましくは冠動脈移植片不全であってもよい。本発明のもう一つの態様において、バイパス移植不全は、静脈移植不全である。静脈移植不全は、末梢または冠状静脈移植不全であってもよい。
【００４７】
本発明は、アテローム性動脈硬化症または再狭窄を治療する方法であって：（a）ピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩および（b）抗炎症薬の治療上有効量を、これらの必要な人に投与することを含む方法をさらに提供する。
【００４８】
本発明を実施するために使用することができる抗炎症薬は、以下を含むが、これらに限定されるわけではない：セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブなどのCOX-2阻害剤；フェニルブタゾンなどのピラノロン（pyralones）；メファナム酸、メクロフェナマートなどのフェナマート（fenamates）；ジフルニサルなどのサリチル酸誘導体；ジクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ナブメトン、トレメチン（tolemetin）などの酢酸誘導体；イブプロフェン、フェノプロフェン、フルリビプロフェン（fluribiprofen）、カルプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセンなどのプロピオン酸誘導体；チアプロフェン酸、オキサプロジン；ピロキシカム、テノキシカム、メロキシカムなどのオキシカム；アナキンラ、エタナーセプト、インフリキシマブなどの生体応答調節剤；ベタメタゾン、コルチゾン、デキサメサゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンなどのコルチコステロイド；アザチオプリン、メトトレキセートなどの細胞障害薬；金チオグルコース、金チオリンゴ酸塩、オーラノフィンなどの金製剤；ヒドロキシクロロキン；スルファサラジンD-ペニシラミン；ミノサイクリン；アザチオプリン；シクロスポリン；またはレフノミド（lefunomide）。
【００４９】
本発明に包含される治療方法は、哺乳動物患者およびより好ましくはヒト患者で使用することができる。また、本発明に包含される治療方法は、糖尿病患者で使用してもよい。
【００５０】
本発明による治療方法は、ピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量の投与を含む。薬理学的に活性な薬剤の「有効量」または「治療上有効量」とは、薬物または薬剤の無毒であるが、所望の効果を提供するために十分な量を意味する。本発明の併用療法において、組み合わせの1つの成分の「有効量」は、組み合わせのその他の成分と組み合わせて使用したときに、所望の効果を提供するために有効な化合物の量である。「有効」である量は、個体の年齢および全身状態、特定の活性薬剤などに応じて、被験体間で変化する。したがって、正確な「有効量」を特定することは、必ずしも可能ではない。しかし、いずれの個々の場合の適切な「有効」量も、ルーチン試験を使用して当技術分野の当業者によって決定され得る。
【００５１】
本発明に包含される活性薬剤のいずれの治療上有効量も、当技術分野の当業者に明らかであろう多くの要因に依存し、本明細書の開示が考慮されるであろう。特に、これらの要因には、投与される化合物の認識、製剤、使用される投与の経路、患者の性、年齢、および体重、並びに治療される状態の重症度および胃腸管、肝嘴に属する系および腎臓系に影響を及ぼす同時発生疾病の存在を含む。併用療法では、投与される化合物の1つまたは複数をより小量与えることが望ましく、または有効であり得る。投薬量および毒性を決定するための方法は、当技術分野において周知であり、研究は、一般に動物において、次いで有意な動物毒性が観察されない場合、ヒトにおいて開始する。投薬量の妥当性は、血圧、脂質レベル、CRPレベルおよびホモシステインレベルをモニタリングすることによって評価することができる。本用量により、処置の少なくとも2〜4週後に代謝機能、血管機能および／または内皮機能を改善しないか、または血圧を減少させない場合、用量を増加することができる。
【００５２】
一般に、P5Pの治療上有効量は、1日あたり0.1〜100mg/kg体重の間である。本発明のある態様において、P5Pの好ましい治療上有効量は、1日あたり0.5〜50mg/体重の間である。本発明のさらなる態様において、P5Pの好ましい治療上有効量は、1日あたり1〜25mg／kg体重の間である。本発明のさらにもう一つの態様において、P5Pの治療上有効量は、好ましくは1日あたり1〜15mg/kg体重の間である。
【００５３】
P5Pまたはその薬学的に許容される塩は、いずれの適切な経路によってこれらの必要な患者に投与してもよい。好ましくは、本発明に従った治療方法は、P5Pまたはこれらの薬学的塩の経口投与を含む。好ましい経口投与形態は、１日１回の経口投与のために適した治療情有効な単位投与量を含む。典型的には、P5Pのための単位投薬量は、100、300、750および1000mg/日の間である。
【００５４】
一部の場合では、インサイチューにおいて血管障害の特定部位にP5Pまたはこれらの薬学的塩を投与することが好ましいかもしれない。本発明は、P5Pまたはこれらの薬学的に許容される塩のインサイチュー送達のための血管内ステントを提供する。本発明に従った血管内ステントは、狭くなった動脈内で使用するためのものであり、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩と可逆的に結合した少なくとも１つの表面を有する。好ましい態様において、ステントの外側は、治療される動脈内にステントを移植することにより、可逆的に結合したピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の遅延性放出のために適応された生理的適合性マトリックスでコーティングしてもよい。
【００５５】
一つの態様において、血管内ステントは、10mg〜10,000mgの間のピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩を使用して製造される。もう一つの態様において、血管内ステントは、1000mg〜10,000mgの間のピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩を使用して製造される。さらなる態様において、血管内ステントは、1000mg〜7,500mgの間のピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩を使用して製造される。なおさらなる態様において、血管内ステントは、1000mg〜5000mgの間のピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩を使用して製造される。さらなる態様において、血管内ステントは、10mg〜1000mgの間のピリドキサール-5’-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩を使用して製造される。
【００５６】
本発明に従った血管内ステントは、適切な従来技術の方法および材料を使用して製造してもよい。狭くなった動脈で使用するための血管内ステントの構築は、当技術分野において周知である。また、インサイチューでのドラッグデリバリーのために適応させた血管内ステントの製造も当技術分野において周知である。
【００５７】
本発明は、例示の態様に関して記述されたが、本発明は、これらの正確な態様に限定されるわけではないこと、および当業者によって種々の変更および修飾がその中になされてもよいことが理解される。全てのこのような変更および修飾は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【実施例】
【００５８】
実施例1−ピリドキサール5'-リン酸は、P2X7受容体を発現する細胞に対するATPのプロアポトーシス効果を阻害する
株化細胞−HEK 293株化細胞（ヒト）にP2X7受容体を安定にトランスフェクトしてHEK 293 P2X7細胞を作製する[9]。この株化細胞は、その他のP2X受容体のいずれをも発現しないが；これは、P2Y1およびP2Y2受容体を発現する[15]。
【００５９】
細胞生存度−細胞死を誘導するために、HEK 293 P2X7細胞をATPおよび／またはBzATPで処置する（Wen et al (2003) Mol Pharmacol 63:706-713）。細胞生存度は、MTTアッセイ法を使用して決定する（Wen et al., 2003）。種々の用量のP5Pを細胞に添加して、これがATPで誘導される細胞死を阻害する能力を決定する。OxATP（Murgia M et al (1993) J Biol Chem 268:8199-8203）、PPADS（Chessell IP et al (1998) Br J Pharmacol 124:1314-1320）および／またはKN-62（Humphreys BD et al (1998) Mol Pharmacol 54:22-32）をポジティブ対照として使用する。
【００６０】
アポトーシス−アポトーシスを誘導するために、HEK 293 P2X7（ヒト）細胞をATPおよび／またはBzATPで処置する（Wen et al., 2003）。アポトーシスのレベルは、DNAラダー形成に基づく細胞死検出ELISAを使用して決定する。種々の用量のP5Pを細胞に添加して、これがATPで誘導されるアポトーシスを阻害する能力を決定する。OxATP（Murgia et al., 1993）、PPADS（Chessell IP et al., 1998）および／またはKN-62（Humphreys BD et al., 1998）をポジティブ対照として使用する。
【００６１】
膜小疱形成／孔形成−膜小疱形成または小孔形成を誘導するために、P2X7（ヒト）細胞HEK 293をATPおよび／またはBzATPで処置する（Virginio C et al (1999) J Physiol 519:335-346. Verhoef PA et al (2003) J Immunol 170:5728-5738）。膜小疱形成は、YO-PRO 1を使用して評価する（Virginio C et al., 1999. Verhoef PA et al., 2003）。種々の用量のP5Pを細胞に添加して、これがATPで誘導される膜小疱形成を阻害する能力を決定する。OxATP（Murgia et al., 1993）、PPADS（Chessell IP et al., 1998）および／またはKN-62（Humphreys BD et al., 1998）をポジティブ対照として使用する。
【００６２】
対照−全ての実験は、対照として野生型HEK 293細胞で行ってある。
【００６３】
結果−ATPおよびBzATPは、野生型HEK 292細胞における細胞アポトーシスを誘導しない。P5P処置したHEK293 P2X7細胞は、未処置のHEK 293 P2X7細胞と比較して、ATPまたはBzATPを媒介した細胞アポトーシスに耐性である。結果は、ATPおよびBzATPがP2X7発現細胞における細胞アポトーシスを誘導することを示す。結果は、P5PがP2X7発現細胞におけるTPを媒介した細胞アポトーシスを阻害することをさらに示す。
【００６４】
実施例2−ピリドキサール5'-リン酸は、P2X7受容体を発現する単球およびマクロファージによるATPを媒介したIL-β分泌を阻害する
LPS刺激されたTHP-1細胞をATPで処置して、IL-1β分泌を誘導する（Grahames CBA et al (1999) Br J Pharm 127:1915-1921）。IL-1β分泌レベルは、ELISAによって決定する。種々の用量のP5Pを細胞に添加して、これがATPで誘導されるIL-1β分泌を阻害する能力を決定する。OxATP（Murgia et al., 1993）、PPADS（Chessell IP et al., 1998）および／またはKN-62（Humphreys BD et al., 1998）をポジティブ対照として使用する。
【００６５】
結果−LPS刺激したTHP-1細胞のATP処置では、IL-1□□分泌を誘導する。プリン受容体アンタゴニストのOxATP、PPADSまたはKN-62でのLPS刺激したTHP-1細胞の処置では、IL-1β分泌を阻害する。LPS刺激したTHP-1細胞のP5P処置では、IL-1β分泌を阻害する。
【００６６】
実施例3−ピリドキサール5'-リン酸は、大動脈バルーン（Ballon）傷害を被ったウサギにおける再狭窄を寛解させる
ウサギ大動脈バルーン傷害モデル−40匹の雄ニュージランドホワイト種ウサギ（2.5〜3.0kg）を使用する。ウサギには、規則的なウサギ固型飼料（対照、20匹のウサギ）または1%のコレステロール食餌（処置、20匹のウサギ）を8週間与える。それぞれの群の半分には、胃管栄養法によって毎日10mg/kgのP5P（CanAm Bioresearch Inc.によって提供される）を受けさせ、他方の半分には、胃管栄養法によって塩類溶液を受けさせる。4週後に、3F Fogarty塞栓摘出カテーテル（Baxter）をそれぞれのウサギの右大腿動脈に挿入し、近位に25cm進めて、次いでバルーンを0.2mLの塩類溶液に膨張させながら元に引き抜き、工程を2回繰り返す（Lau et al., Probucol promotes functional reendothelialization in balloon-injured rabbit aortas. Circulation. 2003; 107(15): 2031-6）。8週にて、左右の大腿動脈をそれぞれの動物（左の大腿動脈は、無処置の対照として役立つ）から収集する。組織学のためのセグメントをホルマリンで圧力灌流し、70%（vol／vol）エタノール中に貯蔵し、次いでパラフィンに包埋する。
【００６７】
組織学−1つの5μmの厚さの横断切片を6つの大腿大動脈のセグメントのそれぞれから採取し、ヘマトキシリン−エオジンで染色する。動物あたり6つの動脈の横断切片の形態計測解析をImagespaceソフトウェア（Molecular Dynamics）を使用して行う。それぞれの動脈横断切片検体の内膜および中央領域を測定して、それぞれの群について平均内膜／中央領域比を決定する。
【００６８】
炎症性マーカー、脂質プロフィールおよびホモシステインレベル−研究の始めと終わり、および全体にわたって2週ごとに、意識があるウサギの耳動脈に挿入したテーテルを介して血液試料を収集する。血漿インターロイキン6（IL-6）レベルは、ラットのためにの市販のキット（R&D Systems）を使用して定量的サンドイッチ酵素イムノアッセイで測定する（Oubina et al., Synergistic effect of angiotensin-converting enzyme (ACE) and 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA (HMG-CoA) reductase inhibition on inflammatory markers in atherosclerotic rabbits. Clin Sci (Lond). 2003; 105(6): 655-62）。ウサギについて、CRP血漿レベルは、免疫アッセイキット（Alpco Diagnostics）で測定する。血漿コレステロールレベルは、市販のキット（Roche Diagnostics）を使用して、比色反応を使用して測定する。ホモシステインレベルは、前述したように高速液体クロマトグラフィーによって決定する（Zhloba and Blashko, Liquid chromatographic determination of total homocysteine in blood plasma with photometric detection. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2004; 800(1-2): 275-80）。
【００６９】
超音波による内皮機能の評価−大腿大動脈の内皮機能の超音波評価は、研究の始めと終わり、および全体にわたって2週ごとに行う（Drolet et al., Early endothelial dysfunction in cholesterol-fed rabbits: a non-invasive in vivo ultrasound study. Cardiovasc Ultrasound. 2004; 2(1): 10）。ミダゾラム（0.5mg/kg）、ブトルファノール（0.5mg/kg）およびケタミン（30mg/kg）IMを使用してウサギを鎮静させる。薬物注入および動脈圧モニタリングのために、それぞれ、耳周辺静脈および動脈をカニューレ処置する。心拍数は、手順の全体にわたって連続的にモニターする。大腿大動脈は、二次元およびカラードップラー超音波を使用して位置を確認する。イメージ設定は、内皮血液界面の解像度に対して最適化する。全ての研究は、Sonos 5500自記音響測探器（Phillips）に結合させた血管7.5MHzプローブで行う。
【００７０】
一旦大動脈イメージングが最適であれば、動物には、1）1ml／分の塩類溶液；2）0.05マイクログラム/ミリリットル／分のアセチルコリン（Ach）および0.5マイクログラム/ミリリットル／分のAchの薬物灌流静注をそれぞれ2分間連続して受けさせる。ニトログリセリン（5マイクログラム/ミリリットル／分）をポジティブ対照として使用する。薬物注射終了後、次の注入が始まる前に、少なくとも１分間血圧をベースラインに戻させる。腿大動脈のイメージは、オフライン解析のために、全手順にわたって連続して標準的S-VHSビデオテープに記録する。
【００７１】
統計解析−特定の群間の相違の有意性を評価するために、結果を一元分散分析、続くTukey試験の適用によって解析する。p<0.05の確率値は、有意であると考えられている。
【００７２】
結果−P5P処置は、改善された脂質プロフィール、ホモシステインレベルの低下、CRPレベルの低下および改善された内皮機能と相関する。P5P処置は、PCI後の再狭窄の発病率の減少と相関する。
【００７３】
実施例4−ピリドキサール5'-リン酸は、血管形成術患者における再狭窄を寛解させる
研究デザインおよび集団−研究は、多中心の、二重盲検の、プラセボ対照の、ランダム化した試行である。プロトコルは、開始前に治験審査委員会の承認を得てある。選択的経皮的冠状動脈インターベンション（PCI）が適用される患者は、これらの予定の手順の14日前に評価する。適格患者には、書面にしたインフォームドコンセントを提供し、病歴、理学的検査、心電図検査、血液学および臨床生化学を受けるよう依頼する。患者は、1つの未処置の冠動脈に対するステント術の有無にかかわらず、PCIを受ける予定があり、かつ50%管腔狭細である1つの新規標的病変を有する場合は、彼らは適格である。重篤な肝疾患または血清クレアチニン200μmol/Lを有するか；過去7日以内の心筋梗塞；左主幹狭窄＞50%；駆出率＜30%；直前6月における別の病変のためにPCIを有したか；再狭窄の病変のための治療がなされたか；またはランダム化の前に粥腫切除、近接照射療法もしくはバイパス移植のPCIの予定があった被験者は除外する。合計120人の患者が登録されており、60人は、P5Pを受けるようにランダム化され、60人は、偽薬を受けるようにランダム化されている。
【００７４】
一次エンドポイントは、6月時に標的病変血管再生を必要とする臨床再狭窄である。二次エンドポイントは、死亡、心筋梗塞および血管再生を含む主要な有害心臓イベント（MACE）である。
【００７５】
ランダム化および剤併用療法−予定されるPCIの14日前に開始して、1日に1回P5P（CanAm Bioresearch Inc.によって提供される）750mか、または偽薬を受けるように、患者をランダムに割り当てる。P5Pまたは対応する偽薬は、１日１回与えられる3個の錠剤として投与される。また、全ての患者は、ランダムな治療割当に従って、PCIの前の夕方に、余分のP5Pまたは対応する偽薬の用量を受ける。PCIの後、全ての患者は、これらの割り当てられた研究処方計画でさらに4週間維持する。
【００７６】
PCIおよび追跡評価−PCIは、ステント設置およびPCI後管理の有無にかかわらず、現在の臨床実務に従って行う。ECGは、PCI前と、その直後とPCI後の朝とに得る。クレアチンキナーゼ、クレアチンキナーゼ-MB画分およびトロポニンIをPCI後の晩および翌朝に測定する。患者は、4週の研究薬物療法でのPCI後に退院させる。アスピリン325mg／dを募集時から、全研究期間与える。また、ステントで処置した全ての患者は、PCI後の30日間クロピドグレル75mg／dを受ける。臨床評価およびアカウンタビリティーのために、患者を1月、3月および6月に戻す。患者が研究薬物療法またはPCI手順に関連があったか否かにかかわらず、虚血症候および有害事象について患者を評価する。ベースラインにて評価した血液化学値は、PCI退院時に、および追跡訪問時に再び測定する。PCIの5〜7月後に、追跡カテーテル法およびIVUSのために患者を再び入院させる。明確な再狭窄がその人の拡張部位に存在しない場合、臨床面のために5月前にカテーテル法が行われた型を、5〜7月時に繰り返しIVUS検査のために戻す。
【００７７】
IVUS検査および測定−IVUS検査は、30MHz、3.2F超音波カテーテル（Tardif et al., Canadian Antioxidant Restenosis Trial (CART-1) Investigators. Effects of AGI-1067 and probucol after percutaneous coronary interventions. Circulation. 2003; 107(4): 552-8）で行う。IVUS研究は、可能な限りPCIの前に記録して、常にPCI後（最終バルーンインフレーション後）および追跡調査時に（その後のあらゆるインターベンションの前に）行う。IVUSは、常にニトログリセリン（0.3mg）の冠動脈内注射後に行う。全てのIVUSイメージは、心臓専門医によって監督された経験豊かな技術者によって解釈され、彼らの全員が治療割当に対して盲検にされている。インターベンション前、PCI後および追跡調査は、並行して解析する。
【００７８】
定量的冠動脈造影法−PCI後および追跡調査時の対照血管造影法は、ニトログリセリン（0.3mg）の冠動脈内投与後に行う。二分法により再狭窄率合を決定するために定量的解析を行う。PCIセグメントは、直径狭窄が追跡調査時に50%であり、PCI後の血管造影図と比較して、狭窄の程度が15%増大している場合に、再狭窄と定義される。
【００７９】
炎症性マーカー、脂質プロフィール、ホモシステインレベルおよび内皮機能−血液試料の炎症性マーカー、生化学および脂質プロフィールは、病院入院時に、および1月、3月および6月に再び得る。CRPレベルは、高感度アッセイ法（Dade Behring Marburg GmbH）を使用して比濁分析によって決定し、IL-6レベルは、酵素結合抗体免疫吸着アッセイ法（R&D Systems）によって評価する（Monakier et al., Rofecoxib, a COX-2 inhibitor, lowers C-reactive protein and interleukin-6 levels in patients with acute coronary syndromes. Chest. 2004; 125(5): 1610-5）。ホモシステインレベルは、前述したように高速液体クロマトグラフィーによって決定する（Zhloba and Blashko, Liquid chromatographic determination of total homocysteine in blood plasma with photometric detection. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2004; 800(1-2): 275-80）。内皮機能は、腕動脈の高頻度超音波を使用して、充血（内皮依存的血管拡張）およびニトログリセリンスプレー（内皮非依存的血管拡張）に対する血液血流反応を評価して、非侵襲的に評価する（Dupuis et al., Cholesterol reduction rapidly improves endothelial function after acute coronary syndromes. The RECIFE (reduction of cholesterol in ischemia and function of the endothelium) trial. Circulation. 1999; 99(25): 3227-33）。
【００８０】
統計解析−IVUSおよびその他の連続的エンドポイントは、二元分散分析で解析する。CRP、IL-6レベル、脂質プロフィール、ホモシステインレベルおよび内皮機能の統計解析は、1月、3月および6月の結果をそれぞれの群のベースライン値と比較してウィルコクソン試験によって行う。確率値＜0.05を統計学的に有意であるとみなす。
【００８１】
結果−P5P処置は、脂質プロフィールの改善、ホモシステインレベルの低下、CRPレベルの低下および内皮機能の改善と相関する。P5P処置は、再狭窄の発病率の減少と相関する。
【参照文献】
【００８２】
1  Steinberg D. Low density lipoprotein oxidation and its pathobiological significance. J Biol Chem 1997; 272:20963-20966.
2  Braunwald E. Shattuck Lecture - Cardiovascular medicine at the turn of the millennium: triumphs, concerns, and opportunities. N Engl J Med 1997; 337:360-369.
3  Ross R. Atherosclerosis - an inflammatory disease. N Engl J Med 1999; 340(2):115-126.
4  Libby P. Vascular biology of atherosclerosis: overview and state of the art. Am J Cardiol 2003; 91(suppl):3A-6A.
5  Bauters C, Isner JM. The biology of restenosis. In: Topol EJ, ed. Textbook of Cardiovascular Medicine. Philadelphia, Pennsylvania: Lippincott-Raven; 1998:2465-2490.
6  Woods TC, Marks AR. Drug-eluting stents. Annu Rev Med. 2004;55:169-78.
7  Sayers RD, Jones L, Varty K, Allen K, Morgan JD, Bell PR, London NJ. The histopathology of infrainguinal vein graft stenoses. Eur J Vasc Surg. 1993;7(1):16-20. 
8  Suselbeck T, Latsch A, Siri H, Gonska B, Poerner T, Pfleger S, Schumacher B, Borggrefe M, Haase KK. Role of vessel size as a predictor for the occurrence of in-stent restenosis in patients with diabetes mellitus. Am J Cardiol. 2001;88(3):243-7.
9  Welt FG, Rogers C. Inflammation and restenosis in the stent era. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002;22:1769-76.
10  Ross R. Atherosclerosis- an inflammatory disease. N Engl J Med 1999;340:115-26.
11  Schnyder G, Roffi M, Flammer Y, Pin R, Hess OM. Association of plasma homocysteine with restenosis after percutaneous coronary angioplasty. Eur Heart J 2002;23:726-733.
12  Kandzari DE, Labinaz M, Cantor WJ, Madan M, Gallup DS, Hasselblad V, Joseph D, Allen A, Green C, Hidinger KG, Krucoff MW, Christenson RH, Harrington RA, Tcheng JE. Reduction of myocardial ischemic injury following coronary intervention (the MC-1 to Eliminate Necrosis and Damage trial). Am J Cardiol 2003; 92(6):660-664.
13  Palinski W, Rosenfeld ME, Yla Herttuala S, Gurtner GC, Socher SS, Butler SW, Parthasarathy S, Carew TE, Steinberg D, Witztum JL. Low density lipoprotein undergoes oxidative modification in vivo. Proc Natl Acad Sci USA 1989; 86:1372-1376.
14  Berliner JA, Heinecke JW. The role of oxidized lipoproteins in atherogenesis. Free Radic Biol Med 1996; 20:707-727.
15  Rinehart JF, Greenberg LD. Vitamin B6 deficiency in the rhesus monkey with particular reference to the occurrence of atherosclerosis, dental caries, and hepatic cirrhosis. Am J Clin Nutr 1956; 4:318-328.
16  Mushett CW, Emerson GA. Arteriosclerosis in pyridoxine-deficient monkeys and dogs. Fed Proc 1956; 15:526.
17  Kuzaya F. Experiment on arteriosclerosis and arteriolosclerosis induced in pyridoxine deficient monkeys and their recovery. J Primatol 1962; 3:77.
18  Greenberg LD, Rinehart JF. Plasma cholesterol levels of cholesterol fed control and pyridoxine deficient monkeys. Proc Soc Exper Biol Med 1951; 76:580-583.
19  Kleinsorge von H, Zielke A. Untersuchung uber die Einwirkung verschiedener ungesattigter Fettsauren und der Vitamine B6 and E auf die tierexperimentalle Arteriosklerose und das Verhalten der Serumlipoide beim Menschen. Therap Umsch 1959; 16: 367-380.
20  Kuzuya F. Reversibility of atherosclerosis in pyridoxine-deficient monkeys. Atherosclerosis IV, Proceedings of the 4th International Symposium. Berlin: Springer-Verlag, 1977:275-280.
21  Vijayammal PL, Kurup PA. Pyridoxine and atherosclerosis: Role of pyridoxine in the metabolism of lipids and glycocamines in rats fed normal and high fat, high cholesterol diets containing 16% casein. Aust J Biol Sci 1978; 31:7-20.
22  Sheikh-Ali SD. The influence of vitamin B6 on the blood lipids and the cholesterolaemia under clinical and experimental conditions. Ter Arkh 1959; 9:90-93.
23  Brattstrom L, Stavenow L, Galvard H, Nilsson-Ehle P, Berntorp E, Jerntorp P, Elmstahl S, Pessah-Rasmussen H. Pyridoxine reduces cholesterol and low density lipoprotein and increases antithrombin III activity in 80-year-old men with low plasma pyridoxal 5-phosphate. Scand J Clin Lab Invest 1990; 50:873-877.
24  Frolova IA, Oleneva VA, Sirota II, Nikiforova GD. Effect of pyridoxine on patterns of lipid metabolism in patients with alimentary obesity. Vopr Med Khim 1975; 21:299-306.
25  Arnadottir M, Brattstrom L, Simonsen O, Thysell H, Hultberg B, Andersson A, Nilsson-Ehle P. The effect of high-dose pyridoxine and folic acid supplementation on serum lipid and plasma homocysteine concentrations in dialysis patients. Clin Nephrol 1993; 40(4):236-240.
26  De Gomez Dumm NT, Giammona AM, Touceda LA. Variations in the lipid profile of patients with chronic renal failure treated with pyridoxine. Lipids Health Dis 2003; 2(1):7.
27  Jain SK, Lim G. Pyridoxine and pyridoxamine inhibits superoxide radicals and prevents lipid peroxidation, protein glycosylation, and (Na+ + K+)-ATPase activity reduction in high glucose-treated human erythrocytes. Free Radic Biol 2001; 30:232-237.
28  Ravichandran V, Selvam R. Increased lipid peroxidation by vitamin B6 deficient rats. Biochem Int 1990; 21:599-605.
29  Nakamura N, Ishikawa M. Effect of vitamin B6 group in cholesterol and fatty acid biosynthesis. Hokkaido Igaku Zasshi 1975; 50(4):403-409.
30  Yamada K, Fujii T, Motoyasu M. Influence of pyridoxal phosphate upon arteriosclerosis. Vitamins 1961; 22:136-137.
31  Weiss N, Feussner A, Hailer S, Spengel FA, Keller C, Wolfram G. Influence of folic acid, pyridoxal phosphate and cobalamin on plasma homocyst(e)ine levels and the susceptibility of low-density lipoprotein to ex-vivo oxidation. Eur J Med Res 1999; 4(10):425-432.
32  Selmer D, Senekowitsch-Schmidtke R, Schneider W, Elstner EF. Binding and uptake of 125 iodine-labelled, oxidized low density lipoprotein by macrophages: comparison of the effects of alpha-tocopherol, probucol, pyridoxal-5’-phosphate and magnesium-pyridoxal-5’-phosphate-glutamate. Z Naturforsch 1997; 52c:97-104.
33  Panagiotopoulos T, Ketelsen UP, Schmidt A, Heuck CC. Long-term effect of magnesium pyridoxal 5-phosphate glutamate in rabbits developing hypercholesterolemia. Arzneimittelforschung. 1986;36(8):1210-1215.
34  Khayyal MT, Khayyal MA, Sharaf HM, el-Sherbeeny M, Okpanyi SN, Schneider W. Effect of magnesium pyridoxal 5-phosphate glutamate on vascular reactivity in experimental hypercholesterolemia. Drugs Exp Clin Res. 1998;24(1):29-40.
35  Kirsten R, Heintz B, Nelson K, Sieberth HG, Oremek G, Hasford J, Speck U. Magnesium pyridoxal 5-phosphate glutamate reduces hyperlipidaemia in patients with chronic renal insufficiency. Eur J Clin Pharmacol. 1988;34(2):133-137
36  Schuitemaker GE, van der Pol GA, Aretz CP, Dinant GJ. A placebo-controlled, double-blind, randomised trial of magnesium-pyridoxal-5'-phosphate-glutamate for hypercholesterolaemia and other clinical-chemical risk factors of cardiovascular disease in a primary care setting. Eur J Clin Pharmacol. 2001 Mar;56(12):857-863.
37  Kogl C, Schneider W, Elstner EF. The influence of magnesium-pyridoxal-5'-phosphate-glutamate in comparison with probucol, alpha-tocopherol and trolox on copper-induced oxidation of human low density lipoprotein in vitro. Biochem Pharmacol. 1994 Jun 15;47(12):2201-2206.
38  Zettler ME, Pierce GN. Growth-promoting effects of oxidized low density lipoprotein. Can J Cardiol 2001; 17(1):73-79.
39  Schwartz SM, Campbell GR, Campbell JH. Replication of smooth muscle cells in vascular disease. Circ Res 1986; 58:427-444.
40  Tryfiates GP, Morris HP, Sonidis GP. Vitamin B6 and cancer (review). Anticancer Res 1981; 1(5):263-267.
41  Komatsu S, Yanaka N, Matsubara K, Kato N. Antitumor effect of vitamin B6 and its mechanisms. Biochim Biophys Acta 2003; 1647(1-2):127-30.
42  DiSorbo DM, Litwack G. Vitamin B6 kills hepatoma cells in culture. Nutr Cancer 1982; 3(4):216-222.
43  Shultz TD, Santamaria AG, Gridley DS, Stickney DR, Slater JM. Effect of pyridoxine and pyridoxal on the in vitro growth of human malignant melanoma. Anticancer Res 1988; 8:1313-1318.
44  DiSorbo DM, Wagner R, Nathanson L. In vivo and in vitro inhibition of B16 melanoma growth by vitamin B6. Nutr Cancer 1985; 7(1-2):43-52.
45  Gridley DS, Stickney DR, Nutter RL, Slater JM, Shultz TD. Suppression of tumor growth and enhancement of immune status with high levels of dietary vitamin B6 in BALB/c mice. J Natl Cancer Inst 1987; 78(5):951-959.
46  Komatsu SI, Watanabe H, Oka T, Tsuge H, Nii H, Kato N. Vitamin B-6-supplemented diets compared with a low vitamin B-6 diet suppress azoxymethane-induced colon tumorigenesis in mice by reducing cell proliferation. J Nutr 2001; 131(8):2204-2207.
47  Komatsu SI, Watanabe H, Oka T, Tsuge H, Kato N. Dietary vitamin B6 suppresses colon tumorigenesis, 8-hydroxyguanosine, 4-hydroxynonenal, and inducible nitric oxide synthase protein in azoxymethane-treated mice. J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo) 2002; 48(1):65-68.
48  Slattery ML, Potter JD, Coates A, Ma KN, Berry TD, Duncan DM, Caan BJ. Plant foods and colon cancer: an assessment of specific foods and their related nutrients (United States). Cancer Causes Control 1997; 8(4):575-590
49  Jansen MC, Bueno-de-Mesquita HB, Buzina R, Fidanza F, Menotti A, Blackburn H, Nissinen AM, Kok FJ, Kromhout D. Dietary fiber and plant foods in relation to colorectal cancer mortality: the Seven Countries Study. Int J Cancer 1999; 81(2):174-179.
50  Hartman TJ, Woodson K, Stolzenberg-Solomon R, Virtamo J, Selhub J, Barrett MJ, Albanes D. Association of the B-vitamins pyridoxal 5'-phosphate (B(6)), B(12), and folate with lung cancer risk in older men. Am J Epidemiol 2001; 153(7):688-694.
51  Key TJ, Silcocks PB, Davey GK, Appleby PN, Bishop DT. A case-control study of diet and prostate cancer. Br J Cancer 1997; 76(5):678-687.
52  Martial J, Zaldivar J, Bull P, Venegas A, Valenzuela P. Inactivation of rat liver RNA polymerases I and II and yeast RNA polymerase I by pyridoxal 5'-phosphate. Evidence for the participation of lysyl residues at the active site. Biochemistry 1975; 14(22):4907-4911.
53  Venegas A, Martial J, Valenzuela P. Active site-directed inhibition of E. coli DNA-dependent RNA polymerase by pyridoxal 5'-phosphate. Biochem Biophys Res Commun 1973; 55(4):1053-1059.
54  Modak MJ. Observations on the pyridoxal 5'-phosphate inhibition of DNA polymerases. Biochemistry 1976; 15(16):3620-3626.
55  Diffley JF. Affinity labeling the DNA polymerase alpha complex. I. Pyridoxal 5'-phosphate inhibition of DNA polymerase and DNA primase activities of the DNA polymerase alpha complex from Drosophila melanogaster embryos. J Biol Chem 1988; 263(29):14669-14677.
56  Matsubara K, Komatsu S, Oka T, Kato N. Vitamin B6-mediated suppression of colon tumorigenesis, cell proliferation, and angiogenesis (review). J Nutr Biochem 2003; 14(5):246-250.
57  Kopelovich L, Wolfe G. Modification of ribonucleic acid by vitamin B6. 1. Specific interaction of pyridoxal 5'-phosphate with transfer ribonucleic acid. Biochemistry 1977; 16(16):3721-3726.
58  Srivastava SK, Beutler E. The effect of normal red cell constituents on the activities of red cell enzymes. Arch Biochem Biophys 1972; 148(1):249-255.
59  Basu A, Tirumalai RS, Modak MJ. Substrate binding in human immunodeficiency virus reverse transcriptase. An analysis of pyridoxal 5'-phosphate sensitivity and identification of lysine 263 in the substrate-binding domain. J Biol Chem 1989; 264(15):8746-8752.
60  Matsubara K, Matsumoto H, Mizushina Y, Lee JS, Kato N. Inhibitory effect of pyridoxal 5'-phosphate on endothelial cell proliferation, replicative DNA polymerase and DNA topoisomerase. Int J Mol Med 2003; 12(1):51-55.
61  Matsubara K, Mori M, Matsuura Y, Kato N. Pyridoxal 5'-phosphate and pyridoxal inhibit angiogenesis in serum-free rat aortic ring assay. Int J Mol Med 2001; 8(5):505-508.
62  Loscalzo J. The oxidant stress of hyperhomocyst(e)inemia. J Clin Invest 1996; 98(1):5-7.
63  Misra HP. Generation of superoxide free radical during the autoxidation of thiols. J Biol Chem 1974; 249(7):2151-2155.
64  Harker LA, Slichter SJ, Scott CR, Ross R. Homocystinemia. Vascular injury and arterial thrombosis. N Engl J Med 1974; 291(11):537-543.
65  Graham IM, Daly LE, Refsum HM, Robinson K, Brattstrom LE, Ueland PM, Palma-Reis RJ, Boers GH, Sheahan RG, Israelsson B, Uiterwaal CS, Meleady R, McMaster D, Verhoef P, Witteman J, Rubba P, Bellet H, Wautrecht JC, de Valk HW, Sales Luis AC, Parrot-Rouland FM, Tan KS, Higgins I, Garcon D, Andria G, et al. Plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease. The European Concerted Action Project. JAMA 1997; 277(22):1775-1781.
66  D’Angelo A, Selhub J. Homocysteine and thrombotic disease. Blood 1997; 90(1):1-11.
67  Selhub J, Jacques PF, Wilson PW, Rush D, Rosenberg IH. Vitamin status and intake as primary determinants of homocysteinemia in an elderly population. JAMA 1993; 270(22):2693-2698.
68  Brattstrom L, Lindgren A, Israelsson B, Malinow NR, Norrving B, Upson B, Hamfelt A. Hyperhomocysteinaemia in stroke: prevalence, cause, and relationships to type of stroke and stroke risk factors. Eur J Clin Invest 1992; 22(3):214-221.
69  Dalery K, Lusseir-Cacan S, Selhub J, Davignon J, Latour Y, Genest J. Homocysteine and coronary artery disease in French Canadian subjects: relation with vitamins B12, B6, pyridoxal phosphate, and folate. Am J Cardiol. 1995; 75(16):1107-1111.
70  Robinson K, Mayer EL, Miller DP, Green R, van Lente F, Gupta A, Kottke-Marchant K, Savon SR, Selhub J, Nissen SE, et al. Hyperhomocysteinemia and low pyridoxal phosphate. Common and independent reversible risk factors for coronary artery disease. Circulation 1995; 92(10):2825-2830.
71  Clarke R, Collins R. Can dietary supplements with folic acid or vitamin B6 reduce cardiovascular risk? Design of clinical trials to test the homocysteine hypothesis of vascular disease. J Cardiovasc Risk 1998; 5(4):249-255.
72  Omenn GS, Beresford SA, Motulsky AG. Preventing coronary heart disease: B vitamins and homocysteine. Circulation 1998; 97(5):421-424.  
73  Boushey CJ, Beresford SA, Omenn GS, Motulsky AG. A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease. Probable benefits of increasing folic acid intakes. JAMA 1995; 274(13):1049-1057.
74  Homocysteine Lowering Trialists’ Collaboration. Lowering blood homocysteine with folic acid based supplements: meta-analysis of randomised trials. BMJ 1998; 316(7135):894-898.
75  Bellamy MF, McDowell IF, Ramsey MW, Brownlee M, Newcombe RG, Lewis MJ. Oral folate enhances endothelial function in hyperhomocysteinaemic subjects. Eur J Clin Invest 1999; 29(8):659-662.
76  Woo KS, Chook P, Lolin YI, Sanderson JE, Metreweli C, Celermajer DS. Folic acid improves arterial endothelial function in adults with hyperhomocystinemia. J Am Coll Cardiol 1999; 34(7):2002-2006
77  Chambers JC, Ueland PM, Obeid OA, Wrigley J, Refsum H, Kooner JS. Improved vascular endothelial function after oral B vitamins: An effect mediated through reduced concentrations of free plasma homocysteine. Circulation 2000; 102(20):2479-2483.
78  Vermeulen EG, Stehouwer CD, Twisk JW, van den Berg M, de Jong SC, Mackaay AJ, van Campen CM, Visser FC, Jakobs CA, Bulterjis EJ, Rauwerda JA. Effect of homocysteine-lowering treatment with folic acid plus vitamin B6 on progression of subclinical atherosclerosis: a randomised, placebo-controlled trial. Lancet 2000; 355(9203):517-522.
79  Schnyder G, Roffi M, Pin R, Flammer Y, Lange H, Eberli FR, Meier B, Turi ZG, Hess OM. Decreased rate of coronary restenosis after lowering of plasma homocysteine levels. N Engl J Med 2001; 345(22):1593-1600.
80  Vassort G (2001) 81:767-807.
81  Harden TK et al (1994) Annu Rev Pharmacol Toxicol 35:541-579.
82  Dubyak GR et al (1993) Am J Physiol 265:577-606
83  Di Virigilio et al (2001) Blood 97:587-600
84  Apasov et al (1995) Immunol Rev 146:5-19.
85  Zoeteweij et al (1996) Hepatology 23:858-865.
86  Zanovello et al (1990) J Immunol 145:1545-1550.
87  Zheng et al (1991) J Cell Biol 112:279-288.
88  Surprenant et al (1996) Science 272:735-738.
89  Wang X et al (1999) Moll Cell Cardiol 31:1063-1072.
90  CanAm Bioresearch  (2003) MC1-PCe-08-03-01-360. 
91  Trezise DJ et al (1994) Eup J Pharm 259:295-300.
92  Lal KJ et al (1993) Clin Exper Hypertension 15:489-500.
93  CanAm Bioresearch  (2003) MC1-PCe-02-03-01-47 (not published). 
94  Libby P, Ridker PM, Maseri A. Inflammation and atherosclerosis. Circulation 2002; 105(9):1135-1143.
95  Libby P, Hansson GK. Involvement of the immune system in human atherogenesis: current knowledge and unanswered questions. Lab Invest 1991; 64(1):5-15.
96  Talwar D, Quasim T, McMillan DC, Kinsella J, Williamson C, O'Reilly DS.  Pyridoxal phosphate decreases in plasma but not erythrocytes during systemic inflammatory response. Clin Chem 2003; 49(3):515-518.
97  Roubenoff R, Roubenoff RA, Selhub J, Nadeau MR, Cannon JG, Freeman LM, Dinarello CA, Rosenberg IH. Abnormal vitamin B6 status in rheumatoid cachexia. Association with spontaneous tumor necrosis factor alpha production and markers of inflammation. Arthritis Rheum 1995; 38(1):105-109.
98  Chiang EP, Bagley PJ, Selhub J, Nadeau M, Roubenoff R. Abnormal vitamin B(6) status is associated with severity of symptoms in patients with rheumatoid arthritis. Am J Med 2003; 114(4):283-287.
99  Kelly PJ, Kistler JP, Shih VE, Mandell R, Atassi N, Barron M, Lee H, Silveira S, Furie KL. Inflammation, homocysteine, and vitamin B6 status after ischemic stroke. Stroke 2004; 35(1):12-15.
100  Serfontein WJ, Ubbink JB, De Villiers LS, Rapley CH, Becker PJ. Plasma pyridoxal-5-phosphate level as risk index for coronary artery disease. Atherosclerosis 1985; 55(3):357-361.
101  Vermaak WJ, Barnard HC, Potgieter GM, Marx JD. Plasma pyridoxal-5'-phosphate levels in myocardial infarction. S Afr Med J 1986; 70(4):195-196.
102  Chasan-Taber L, Selhub J, Rosenberg IH, Malinow MR, Terry P, Tishler PV, Willett W, Hennekens CH, Stampfer MJ. A prospective study of folate and vitamin B6 and risk of myocardial infarction in US physicians. J Am Coll Nutr 1996; 15(2):136-143.
103  Folsom AR, Nieto FJ, McGovern PG, Tsai MY, Malinow MR, Eckfeldt JH, Hess DL, Davis CE. Prospective study of coronary heart disease incidence in relation to fasting total homocysteine, related genetic polymorphisms, and B vitamins: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) study. Circulation 1998; 98(3):204-210.
104  Robinson K, Arheart K, Refsum H, Brattstrom L, Boers G, Ueland P, Rubba P, Palma-Reis R, Meleady R, Daly L, Witteman J, Graham I. Low circulating folate and vitamin B6 concentrations: risk factors for stroke, peripheral vascular disease, and coronary artery disease. European COMAC Group. Circulation 1998; 97(5):437-443.
105  Kelly PJ, Shih V, Kistler JP, Barron M, Lee H, Mandell R, Furie KL. Low vitamin B6 but not homocyst(e)ine is associated with increased risk of stroke and transient ischemic attack in the era of folic acid grain fortification. Stroke 2003; 34(6):e51-54.
106  Dinarello CA (1996) Blood 87:2095-2147.
107  Dinarello CA (1998) Int Rev Immunol 16:457-499.
108  Mosely et al (1987) J Biol Chem 262:2941-2944.
109  Thornberry NA et al (1992) Nature 356:768-774.
110  Ceretti DP et al (1992) Science 256:97-100.
111  Rubartelli A et al (1990) EMBO J 9:1503-1510
112  Hogquist KA et al (1991) J Immunol 147:2181-2186.
113  Perregaux D et al (1992) J Immunol 149:1294-1303.
114  Chin J et al (1993) J Immunol 151:5574-5585.
115  Perregaux DG et al (1998) J Immunol 160:2469-2477.
116  Labiberte RE et al (1999) J Biol Chem 274:36944-36951.
117  Grahames CBA et al (1999) Br J Pharm 127:1915-1921.
118  Perregaux DG et al (1998) Am J Physiol Cell Physiol 275:1538-1547.  119  Labassi JM et al (2002) J Immunol 168:6436-6445.
120  Surprenant A et al (1996) 272-735-738.
121  Perregaux DG et al (1994) J Biol Chem 269:15195-15203.
122  Krishnamurthi S, Westwick J, Kakkar VV. Effect of pyridoxal 5'-phosphate (PALP) on human platelet aggregation, dense granule release and thromboxane B2 generation--role of Schiff base formation. Thromb Haemost 1982; 48(2):136-141
123  Zahavi M, Zahavi J, Kakkar VV. The effect of pyridoxal-5-phosphate on the inhibition of platelet aggregation and adenosine-3'-5'-cyclic monophosphate accumulation in human platelets. Life Sci 1984; 35(14):1497-1503.
124  van Wyk V, Luus HG, Heyns AD. The in vivo effect in humans of pyridoxal-5'-phosphate on platelet function and blood coagulation. Thromb Res 1992; 66(6):657-668.
125  Palareti G, Salardi S, Piazzi S, Legnani C, Poggi M, Grauso F, Caniato A, Coccheri S, Cacciari E. Blood coagulation changes in homocystinuria: effects of pyridoxine and other specific therapy. J Pediatr 1986; 109(6):1001-1006.
126  Fonarow, GC. Cleveland Clinic Journal of Medicine, 2003, 70(5), pp. 431-440.
127  Lau et al., Circulation, 2003, 107:32-37.
【手続補正書】
【提出日】平成18年7月18日(2006.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管炎症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、プラーク不安定化およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態を治療する方法であって、これらの必要な患者に対してピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法。
【請求項２】
前記患者がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が糖尿病である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり0.5〜50mg／kg体重の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり1〜15mg／kg体重の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記状態は、再狭窄であり、かつ前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的塩は、前記効果がもたらされる患者の動脈内に血管内ステントを移植することによって投与され、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量は、血管内ステントから放出される方法。
【請求項７】
抗炎症薬の治療上有効量を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
心保護薬の治療上有効量を投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
アテローム性動脈硬化症に罹患している患者においてこれらを治療する方法であって、前記患者が経皮的冠状動脈インターベンションを受ける前に、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与することを含む方法。
【請求項１０】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、経皮的冠状動脈インターベンションの前に1〜14日間毎日投与される、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記経皮的冠状動脈インターベンションが、経皮的冠動脈形成術、回転式粥腫切除、方向性粥腫切除、摘出粥腫切除、レーザ血管形成術、冠動脈内ステントの移植およびカテーテルの移植からなる群より選択される、請求項9に記載の方法。
【請求項１２】
前記経皮的冠状動脈インターベンション後に、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量を投与する工程をさらに含む、請求項9に記載の方法。
【請求項１３】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、前記経皮的冠状動脈インターベンション後に1〜30日間毎日投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、前記経皮的冠状動脈インターベンション後に少なくとも30日間毎日投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１５】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり0.5〜50mg/kg体重の間である、請求項9に記載の方法。
【請求項１６】
前記ピリドキサール-5'-リン酸の治療上有効量が、1日あたり1〜15mg/kg体重の間である、請求項9に記載の方法。
【請求項１７】
血管炎症、アテローム性動脈硬化症、プラーク不安定化、再狭窄およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態の治療のための、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量の使用。
【請求項１８】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、1日あたり0.5〜50mg/kg体重の間である、請求項17に記載の使用。
【請求項１９】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の治療上有効量が、1日あたり1〜15mg/kg体重の間である、請求項17に記載の使用。
【請求項２０】
血管炎症、アテローム性動脈硬化症、プラーク不安定化、再狭窄およびバイパス移植不全からなる群より選択される状態の治療に有用な医薬の製造のための、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項２１】
狭くなった動脈で使用するための血管内ステントであって、前記ステントは、ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩と可逆的に結合した少なくとも１つの表面を有する血管内ステント。
【請求項２２】
請求項21に記載の血管内ステントであって、前記少なくとも１つの表面は、生理的適合性マトリックスを含み、前記マトリックスは、患者内の前記ステントの移植による前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の時間遅延放出のために適応された血管内ステント。
【請求項２３】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、10mg〜10,000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【請求項２４】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、1000mg〜10,000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【請求項２５】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、1000mg〜5000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【請求項２６】
前記ピリドキサール-5'-リン酸またはこれらの薬学的に許容される塩の量が、10mg〜1000mgの間である、請求項21に記載の血管内ステント。
【国際調査報告】
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