(57)【要約】【課題】三七根、熟地黄、五加皮の混合生薬材抽出物及びそれを有効成分とする関節炎予防及び治療用組成物の提供。【解決手段】本発明は、三七根（Ｐａｎａｘ  ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ；Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ  Ｒａｄｉｘ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａｅ  Ｒａｄｉｘ  Ｐｒｅｐａｒａｔａ）、五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｃｉｓ  Ｃｏｒｔｅｘ）の混合生薬材抽出物及びそれを有効成分とする関節炎予防及び治療用組成物に関するのである。本発明の混合生薬材抽出物は、炎症性物質の遊離及び軟骨破壊物質の合成を抑制して、関節炎の病的進行を抑制することにより、関節炎予防または治療に有用に使用することができる。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
三七根、熟地黄及び五加皮からなる混合生薬材抽出物。
【請求項２】
三七根３０〜７０重量部、熟地黄２０〜６０重量部及び五加皮０．５〜２０重量部からなる、請求項１に記載の混合生薬材抽出物。
【請求項３】
前記抽出物が、三七根４０〜６０重量部、熟地黄３０〜５０重量部及び五加皮５〜１５重量部からなる、請求項１に記載の混合生薬材抽出物。
【請求項４】
前記抽出物が、三七根５０重量部、熟地黄４０重量部及び五加皮１０重量部からなる、請求項１に記載の混合生薬材抽出物。
【請求項５】
前記抽出物が、水、アルコールまたは水とアルコールの混合溶液を添加して熱水抽出することを特徴とする、請求項１に記載の混合生薬材抽出物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項の抽出物を有効成分として含む、関節炎予防及び治療用組成物。
【請求項７】
前記関節炎が、リウマチ関節炎であることを特徴とする、請求項６に記載の関節炎予防及び治療用組成物。
【請求項８】
前記関節炎が、退行性関節炎であることを特徴とする、請求項６に記載の関節炎予防及び治療用組成物。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか一項の抽出物を有効成分として含む、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）遊離抑制用組成物。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか一項の抽出物を有効成分として含む、一酸化窒素（ＮＯ）生成抑制用組成物。
【請求項１１】
請求項１〜４のいずれか一項の抽出物を有効成分として含む、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１３（ＭＭＰ−１３）合成抑制用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、三七根（Ｐａｎａｘ  ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ；Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ  Ｒａｄｉｘ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａｅ  Ｒａｄｉｘ  Ｐｒｅｐａｒａｔａ）及び五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｃｉｓ  Ｃｏｒｔｅｘ）の混合生薬材抽出物及びそれを有効成分とする関節炎予防及び治療用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
関節炎関連疾患は、全世界人口の約１２％が苦痛を経験している代表的な退行性、難治性疾患であり、韓国国内にも約２００万人以上の患者がいると言われている。
【０００３】
関節炎は、身体の筋骨格及び結合組織に炎症性変化が生じて、筋骨格系に全身症状が現われることを総称した病名である。前記疾患は、関節、骨、軟骨組織または脊髄に影響を与え、たびたび永久的な組織損傷、奇形、退化及び障害を起こす慢性炎症を特徴とする（非特許文献１）。関節炎は、退行性関節炎（骨関節炎）、リウマチ関節炎、関節外のリウマチまたはコラーゲン疾患に分類される。
【０００４】
関節炎疾患の中で一番よく現われる退行性関節炎は、関節軟骨が擦れてなくなりながら、局所的な退行性変化が現われる疾患である。その原因は不明確であるが、老衰現象や過多な体重と関係が深い疾患と考えられている。この疾患では、一次的に関節軟骨の退行性変化が現われる。退行性変化は、関節軟骨で始まって軟骨細胞が壊死するようになり、基質がカテプシンＢ（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ  Ｂ）、カテプシンＤ（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ  Ｄ）、コラゲナーゼ（Ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）などによって破壊される。プロテオグリカン（Ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ）とコラーゲン（Ｃｏｌｌａｇｅｎ）の生成が破壊の程度に付いて行くことができなくて、外力に対する軟骨の適応能力が、段々減少して結局、軟骨下骨組織に微細骨折などの所見が生じるようになる。疾患が進行すると、軟骨下骨の硬化、関節周辺に骨の過剰形成、関節の変形などが発生するようになって、軟骨の表面が荒れるようになって、関節膜で包まれた関節腔中に炎症反応が繰り返し現われるようになる。したがって、反復的な疼痛、関節の硬直感、関節の漸進的な運動障害などを起こすようになる。
【０００５】
関節炎の中でリウマチ関節炎は、病的症状が主に可動関節に対称的に現われる全身性、慢性炎症性疾患であり、免疫体系に異常が生じることにより発生する、まだその原因は正確に解明されていない自家免疫疾患であると知られている。前記疾患は、周辺関節の構造的奇形を引き起こし、軟骨破壊及び骨侵食を惹起する持続的な炎症性滑膜炎を特徴とする。リウマチ性関節炎と関連した症状には、関節浮腫、関節圧痛及び炎症、骨関節炎と関連した症状には早朝硬直（朝のこわばり）及び特に関節を曲げる時の疼痛が含まれる。関節炎が進行した段階で対象体に、骨浸蝕とともに関節破壊を始めとする構造的損傷が発生するようになる（非特許文献２）。さらに、患者に、自家免疫過程と関連した脈管炎に起因した皮膚、腎臓、心臓、肺、中枢神経系及び目の損傷を含む各種臓器の損傷のような他の臨床的症状が起こり得る。
【０００６】
関節炎と関連した他の症状には、赤血球沈降速度の増加及び血清Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び（または）可溶性ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２ｒ）濃度の増加が含まれる。赤血球沈降速度は、活性リウマチ性関節炎にかかったほとんどすべての患者で増加する。血清Ｃ−反応性タンパク質の濃度も増加し、これは疾患活性度及び進行性関節損傷の可能性と関連がある。さらに、活性リウマチ性関節炎にかかった患者の血清及び滑液でＴ−細胞活性化の産物である可溶性ＩＬ−２ｒの濃度も増加する（非特許文献３）。
【０００７】
リウマチ性関節炎の展開と持続にＴｈ１類型のＣＤ４＋Ｔ細胞が重要な役割をすることが知られている。すなわち、ＣＤ４＋Ｔリンパ球は、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−ｒ）及びＩＬ−１７のような可溶性物質とＣＤ６９のような細胞表面物質による信号伝達を通じて大食細胞、滑膜細胞を刺激して炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｒ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−６）とマトリックスメタロプロテイナーゼ（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ、ＭＭＰ）を分泌する。このように分泌したサイトカインは、滑膜の増殖を促進してパンヌス（ｐａｎｎｕｓ）形成して、ＭＭＰとともに軟骨破壊を起こす。また、活性化したＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２８、ａ１ｂ２インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）などが媒介した細胞表面接触を通じてＢ細胞を活性化してリウマチ性因子（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ｆａｃｔｏｒ）を含んだ抗体を生産する。ＣＤ４＋Ｔ細胞は活性化することによって表面にオステオプロテゲリンリガンド（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ  ｌｉｇａｎｄ、ＯＰＧＬ）を発現して破骨細胞生成（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）を促進して骨破壊に決定的な役割をする（非特許文献４）。活性化した大食細胞、繊維芽細胞などは、ＶＥＧＦ、ＦＧＦのような物質を分泌して新しい血管形成を促進する。滑膜組織内の活性化した血管内皮細胞は、ＩＬ−８のようなケモカインを分泌して結合分子（ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）発現を誘導して、炎症性細胞の浸潤を促進して炎症反応の増幅サイクルを成す。また、リウマチ関節炎は、Ｔ−リンパ球と抗原提示細胞間の抗原−非特異性細胞間相互作用と関連するＴ−細胞−媒介の自家免疫疾患と考えられる。一般的に、Ｔ−細胞反応の大きさは、Ｔ−細胞表面分子とそのリガンド間の相互作用によって誘導された同時刺激反応によって決定される。主な同時刺激信号は、Ｔ−細胞表面受容体ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４とそのリガンド、例えば、抗原提示細胞上のＢ７−関連分子ＣＤ８０（すなわち、Ｂ７−１）及びＣＤ８６（すなわち、Ｂ７−２）間の相互作用によって提供される（非特許文献５）。同時刺激がない時のＴ−細胞活性化は、免疫システムが刺激に対して反応しない無力性（ａｎｅｒｇｉｃ）Ｔ−細胞反応をもたらす（非特許文献６）。
【０００８】
現在、使用されている退行性関節炎及びリウマチ関節炎の治療方法は、次のようである。初期治療に多く使用される薬物は、非ステロイド性消炎剤（ＮＳＡＩＤ：ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇ）で、これらＮＳＡＩＤは、症状を若干好転させることはできるが関節部位軟骨損失や疾病の進行を防ぐことはできず、長期間にわたって投与すると、長期服用によって胃腸系、中枢神経系、造血器官、腎臓、肝臓などにひどい副作用が現われて、この治療法を使用する患者の半分程度が１年以内に治療を中断しなければならない（非特許文献７）。次の段階としては、金を含む化合物薬剤（ｇｏｌｄ  ｄｒｕｇｓ；ｇｏｌｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｔｈｉｏｍａｌａｔｅ，ｇｏｌｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｔｈｉｏｓｕｌｆａｔｅ）やペニシルアミン（ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、抗マラリア剤（ａｎｔｉ−ｍａｌａｒｉａｌｓ）のような抗関節炎製剤（ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ａｎｔｉ−ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ、ＤＭＡＲＤｓ）などが使用される。しかし、この製剤も関節炎の進行を多少減少させるが深刻な副作用を伴い得ることから、ＤＭＡＲＤを使用した治療法が始まった５年以後には、５〜１５％の患者だけがこの薬物を継続使用している。以上の治療剤がそれ以上効果を示さない場合には、関節炎が発生した関節部位を外科関節手術によって人工関節に入れ替えなければならない場合もある（非特許文献８）。
【０００９】
したがって、現在の関節炎治療剤が有している限界である毒性と副作用を最小化した新しい作用及び骨格構造を持った関節炎の治療及び予防に効果的な新物質の開発が切実に求められている。
【００１０】
以上のことに鑑みて、本発明者等は、三七根（Ｐａｎａｘ  ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ；Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ  Ｒａｄｉｘ）、熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａｅ  Ｒａｄｉｘ  Ｐｒｅｐａｒａｔａ）及び五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｃｉｓ  Ｃｏｒｔｅｘ）の多様な生理活性研究を遂行中、三七根、熟地黄及び五加皮の混合生薬材抽出物は、毒性がないのみならず、炎症性物質遊離と基質破壊物質の合成を抑制して、関節炎の病的進行を抑制する活性を示すので、副作用がない関節炎治療剤または予防剤及び健康食品に有用に使用できることを明らかにすることにより、本発明を完成した。
【非特許文献１】Ｈｏｆｂａｕｓｅ、Ｌ．Ｃ．、Ｈｅｕｆｅｌｄｅｒ、Ａ．Ｅ．：Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａＢ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，２００１年，第４４巻，２５３−２５９頁
【非特許文献２】Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ、Ｇ．Ｓ．：Ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ，２００３年，第４２３巻，３５６−３６１頁
【非特許文献３】Ｕｄａｇａｗａ，Ｎ．，Ｋｏｔａｋｅ，Ｓ．，Ｋａｍａｔａｎｉ，Ｎ．，Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｎ．，ａｎｄ  Ｓｕｄａ，Ｔ：Ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２年，第４巻，２８１−２８９頁
【非特許文献４】Ｋｏｎｇ  Ｙ．Ｙ．，Ｆｅｉｇｅ  Ｕ．，Ｓａｒｏｓｉ  Ｉ．，等：Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ  ａｎｄ  ｊｏｉｎｔ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｏｓｔｅｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ  ｌｉｇａｎｄ．Ｎａｔｕｒｅ，１９９９年，第４０２巻，３０４−３０９頁
【非特許文献５】Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．ａｎｄ  Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ，Ｊ．：Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＤ２８  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３年，第１１巻，１９１−２１２頁
【非特許文献６】Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．：Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ：ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＤ２８，ＣＴＬＡ−４，ａｎｄ  Ｂ７／ＢＢ１  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｅｌｌ，１９９２年，第７１巻，１０６５−１０６８頁
【非特許文献７】Ｌａｎｇｅｎｅｇｇｅｒ，Ｔ．，Ｍｉｃｈｅｌ，Ｂ．Ａ．：Ｄｒｕｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．，Ｃｌｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐ．１９９９年，第３６６巻，２２−３０頁
【非特許文献８】Ｓｉｍｏｎ  Ｌ．Ｓ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．，２０００年，第５４巻，２４３−２４９頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、炎症性物質の遊離と基質破壊物質の合成を抑制する活性を有する三七根、熟地黄、五加皮混合生薬材抽出物を提供する。
【００１２】
また、本発明は、前記抽出物を有効成分とする関節炎予防及び治療用組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記の目的を達成するために、本発明は、炎症性物質の遊離と基質破壊物質の合成を抑制する活性を有する三七根、熟地黄及び五加皮混合生薬材抽出物を提供する。
【００１４】
また、本発明は、前記抽出物を有効成分とする関節炎治療及び予防用組成物を提供する。
【００１５】
以下、本発明に対して詳しく説明する。
【００１６】
三七根（Ｐａｎａｘ  ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ．）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ；Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ  Ｒａｄｉｘ）は、ウコギ科の多年生草本で、高麗人蔘より小さくて側小葉が７枚で、根は小さな糸太鼓（ｔｈｒｅａｄ  ｄｒａｍ）模様の形態をしている。主に中国南部の雲南、四川などで栽培されている。前記植物は、三つの枝（葉柄）に７枚の葉が付いているので三七、その模様が朝鮮人蔘と似ているので三七人蔘と呼ばれたりする。根には、３〜８％のサポニンがあり、その主成分は、ジンセノシド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｅとノートジンセノシド（ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒ１、Ｒ２、Ｆａ、Ｆｃ等であり、少ない量のジンセノシド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒ２、ｂ２、ｄ、ｅ、ｃがあって、Ｒ０はないかまたは非常に少なく含有されている。精油の組成成分は、高麗人蔘より少なくてオレアノール酸なども含有されている。根は止血作用、強心作用があり動物実験で心臓動脈の血流量を増やして心筋の酸素消費量を減らし、血液内の脂質とコレステロール含量を減らす効能があることが明らかにされた。また、三七根は、優秀な消炎、鎮痛、止血作用があり、肝炎を含めた多くの炎症疾患に有効であるのみならず、外傷、切傷で生じた出血と内出血にも有効で、傷に直接塗ったり食べたりしても効果があることが知られている。
【００１７】
熟地黄（Ｒｅｈｍａｎｎｉａｅ  Ｒａｄｉｘ  Ｐｒｅｐａｒａｔａ）は、ゴマノハグサ科に属する薬用植物の根を蒸して乾かしたもので、漢方で薬剤に使用している。生のものを生地黄、乾かしたものを乾地黄と言って、熟地黄の中で特にお酒に浸してから蒸して乾かすことを９回繰り返して作ったものは、九地黄と言ってその薬効は最高を示す。味は甘いながらも苦みがあり、暖かい性質があり、血液を補い、精（生命が発生して活動するのに基本になる物質）を補って、腰や膝が冷えて痛い症状や月経異常、目眩などを治療し、髪を黒くする効能がある。熟地黄は、四物湯の主要薬剤で各種慢性病の中で体が虚弱のため現われる内熱、咽喉乾燥、喉の渇きなどの症状に使用される。民間療法では、豚肉を煮た汁とともに服用すれば習慣性便秘に効果があると知られている。
【００１８】
五加皮（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｃｉｓ  Ｃｏｒｔｅｘ）は、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）に属する潅木植物で、北半球の極東アジアにのみ分布し、韓国南部では絶滅危機にある野生保護植物である。五加皮の種類には、刺五加皮、一般五加皮および香五加皮があって、漢方では毒性も副作用もない上薬に分類され、根と皮を薬剤に使用する。葉には、チイサノサイド（Ｃｈｉｉｓａｎｏｓｉｄｅ）が含まれていて、薬理的機能を有し、根には五加皮配糖体だけではなく、シリンギン（Ｓｙｒｉｎｇｉｎ）、クマリン配糖体などが含まれている。五加皮には、五加皮配糖体であるアカントサイド（Ａｃａｎｔｈｏｓｉｄｅ）Ｂ、Ｄと免疫性を高める水溶性多糖体とがある。五加皮は、味は辛くて苦く、暖かい性質を持っていて、肝経、神経に作用して風湿を無くし、益気昇精を助けると知られている。また、五労（五臓が虚弱で生ずる虚労病）と七傷（男性が虚弱のために生じる七種の症状）を補い、足が不自由な場合に使用され、これを長く服用すると、身体の気を高め、胃を保護し、精力を増強し、精神をすっきりさせ、意志力を高めて身を軽くし、老化を防止して、体内の汚れた血を清くきれいにしくれると知られている、腰や脊椎の痛症、男性陰萎症、嚢湿および女性の陰痒症などの様々な症状を治療してくれると知られている。
【００１９】
本発明の混合生薬材抽出物は、三七根、熟地黄及び五加皮を水、Ｃ１〜Ｃ４アルコールまたは水とアルコールの混合溶液で抽出したものを意味し、前記混合生薬材抽出物は、下記のように製造することができる。
【００２０】
三七根と熟地黄、五加皮各々を水できれいに洗浄した後、日陰で乾燥する。それらを抽出容器に入れて、蒸留水を加えて熱水抽出する。抽出物を室温で冷やした後、ろ紙でろ過する。前記抽出液を真空回転蒸発器を使用して減圧濃縮して凍結乾燥して粉末状態の混合生薬材抽出物を製造する。
【００２１】
より詳細には、三七根３０〜７０重量部、熟地黄２０〜６０重量部及び五加皮０．５〜２０重量部、好ましくは三七根４０〜６０重量部、熟地黄３０〜５０重量部及び五加皮５〜１５重量部、さらに好ましくは、三七根５０重量部、熟地黄４０重量部及び五加皮１０重量部からなる混合生薬材を使用することができる。
【００２２】
本発明の混合生薬材抽出物は、三七根抽出物と熟地黄抽出物、五加皮抽出物を各々単独で一酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ；ＮＯ）のような炎症性物質の遊離抑制効果が約２〜８倍優秀であり、軟骨を破壊する物質である基質破壊物質、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１３の合成を、同一濃度で処理した場合、顕著に阻害する。
【００２３】
また、本発明の混合生薬材抽出物は、三七根抽出物と熟地黄抽出物、五加皮抽出物を各々単独で処理した場合に比べて、関節炎の病的進行を顕著に抑制する。
【００２４】
したがって、本発明の混合生薬材抽出物は、炎症性物質である腫瘍壊死因子−アルファと一酸化窒素、そして基質破壊物質であるマトリックスメタロプロテイナーゼ−１３の合成抑制に対して優れた活性を示し、関節炎動物において関節炎の病的進行を顕著に抑制する効能があるので、関節炎の予防または治療に効果的に使用することができる。
【００２５】
本発明の混合生薬材抽出物をマウスに経口投与して毒性実験を行った結果、経口投与毒性試験による５０％致死量（ＬＤ５０）は、少なくとも５，０００ｍｇ／ｋｇ以上の安全な物質であると判明した。
【００２６】
また、本発明は、前記混合生薬材抽出物を有効成分とする関節炎予防及び治療用組成物を提供する。
【００２７】
本発明の組成物は、前記混合生薬材抽出物に同一または類似の機能を示す有効成分を１種以上さらに含むことができる。
【００２８】
前記混合生薬材抽出物は、臨床投与時に経口または非経口で投与が可能で、一般的な医薬品製剤の形態で使用することができる。
【００２９】
すなわち、本発明の混合生薬材抽出物は、実際臨床投与時に経口及び非経口のさまざまな剤形で投与することができ、製剤化する場合には普通に使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸薬、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが挙げられ、このような固形製剤は、三七根抽出物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用される。経口のための液状製剤では、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当し、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外にさまざまな賦形剤、例えば湿潤剤、甘味料、芳香剤、保存料などを含むことができる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、油剤、凍結乾燥製剤、座薬が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤では、プロピレングリコール（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどを使用することができる。座薬の基材では、ハードファット（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴ−ル、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを使用することができる。また、関節炎予防または治療剤としての効能増進のためにカルシウムやビタミンＤ３を添加することができる。
【００３０】
本発明の組成物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率及び疾患の重症度によってその範囲が多様であり、一日投与量は、混合生薬材抽出物の量を基準に０．１〜１００ｍｇ／ｋｇで、好ましくは３０〜８６ｍｇ／ｋｇで、さらに好ましくは５０〜６０ｍｇ／ｋｇであり、一日に１〜６回投与することができる。
【００３１】
本発明の組成物は、関節炎の予防及び治療のために単独で、または手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療及び生物学的反応調節剤を使用する方法と併用して使用することができる。
【００３２】
本発明の組成物は、関節炎改善を目的に健康食品に添加することができる。本発明の混合生薬材抽出物を食品添加物に使用する場合、前記混合生薬材抽出物をそのまま添加したり他の食品または食品成分とともに使用したりすることができ、通常的な方法によって適切に使用することができる。有効成分の混合量は、その使用目的（予防、健康または治療的処置）によって適合するように決定することができる。しかし、健康及び衛生を目的にしたりまたは健康調節を目的にしたりする長期間摂取の場合には、前記量は前記範囲以下があり得るが、安全性面で何らの問題がないので有効成分は、前記範囲以上の量でも使用することができることは明確である。
【００３３】
前記食品の種類には、特別な制限はない。前記物質を添加することができる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンデー類、スナック類、お菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などが挙げられ、通常的な意味での健康食品をすべて含む。
【００３４】
本発明の健康飲料組成物は、通常の飲料のようにさまざまな香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含むことができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖のような単糖類、マルトース、スクロースのような二糖類、及びデキストリン、サイクロデキストリンのような多糖類、キリシトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。甘味料としては、タウマチン、ステビア抽出物のような天然甘味料や、サッカリン、アスパルテームのような合成甘味料などを使用することができる。前記天然炭水化物の割合は、本発明の組成物１００ｍｌ当り一般的に約０．０１〜０．０４ｇ、好ましくは約０．０２〜０．０３ｇである。
【００３５】
前記の外に本発明の組成物は、さまざまな栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色料、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含むことができる。その他に本発明の組成物は、天然果物ジュース、果物ジュース飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含むことができる。このような成分は、独立的にまたは混合して使用することができる。このような添加剤の割合は、それほど重要ではないが本発明の組成物１００重量部当り０．０１〜０．１重量部の範囲で選択されるのが一般的である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例及び実験例を提示する。しかし、下記の実施例及び実験例は、本発明をより易しく理解するために提供するだけのものであって、実施例によって本発明の内容が限定されるものではない。
【００３７】
実施例１：生薬材抽出物の製造
三七根、熟地黄及び五加皮は、漢方薬材の卸商から購入して使用した。
【００３８】
＜１−１＞三七根抽出物の製造
三七根を水できれいに洗浄した後、日陰で乾燥した。乾燥した三七根１００ｇを３ｌ抽出容器に入れて蒸留水１ｌを加えて１００℃で４時間熱水抽出した。前記過程を３回繰り返した後、得られた溶液を室温で冷やした後、ろ紙でろ過した。前記抽出液は、真空回転蒸発器を使用して４０℃以下で減圧濃縮して凍結乾燥して粉末状態の三七根抽出物を得た（収率：１５％）。
【００３９】
＜１−２＞熟地黄抽出物の製造
熟地黄を水できれいに洗浄した後、日陰で乾燥した。乾燥した熟地黄１００ｇを３ｌ抽出容器に入れて蒸留水１ｌを加えて１００℃で４時間熱水抽出した。前記過程を３回繰り返した後、得られた溶液を室温で冷やした後、ろ紙でろ過した。前記抽出液は、真空回転蒸発器を使用して４０℃以下で減圧濃縮して熟地黄抽出物を得た（収率：４２％）。
【００４０】
＜１−３＞五加皮抽出物の製造
五加皮を水できれいに洗浄した後、日陰で乾燥した。乾燥した五加皮１００ｇを３ｌ抽出容器に入れて蒸留水１ｌを加えて１００℃で４時間熱水抽出した。前記過程を３回繰り返した後、得られた溶液を室温で冷やした後、ろ紙でろ過した。前記抽出液は、真空回転蒸発器を使用して４０℃以下で減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末状の五加皮抽出物を得た（収率：１０％）。
【００４１】
＜１−４＞三七根／熟地黄／五加皮混合生薬材抽出物の製造
各々の薬剤を水できれいに洗浄した後、日陰で乾燥した。三七根５０ｇは、破砕機で細かく粉砕して、熟地黄４０ｇ、五加皮１０ｇを準備した。３ｌ抽出容器に生薬材を混合して入れて２０倍数の水を入れた後、９５℃で８時間熱水抽出した。前記加熱抽出液を室温で冷やした後、ろ過した。前記抽出液を４０℃以下で回転式真空濃縮蒸発器（ｖａｃｕｕｍ  ｒｏｔａｒｙ  ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を使用して真空減圧濃縮して凍結乾燥し、混合生薬抽出粉末２８．７ｇを得た。この粉末を１２０ｍｌの蒸留水に溶かして下記の実験に使用した。
【００４２】
実験例１：混合生薬材抽出物による腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）遊離抑制効能分析
本発明の混合生薬材抽出物が、人体単球性細胞株（Ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＴＨＰ−１細胞で遊離されるサイトカインである腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）の遊離抑制に及ぼす影響を調べるために、下記のような実験を実施した。
【００４３】
＜１−１＞細胞の選別及び細胞培養
本発明の混合生薬材抽出物が、ヒトの腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）遊離に及ぼす影響を評価するためにヒトに由来した細胞株であるＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＴＩＢ−２０２）は、アメリカ細胞株銀行（ＡＴＣＣ，米国）から購入した。１０％ＦＢＳ（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）と０．０５ｍＭ２−メルカプトエタノール（２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）を添加したＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ，ＢＲＬ，米国）培地で３７℃  ＣＯ２培養器で培養して実験に使用した。
【００４４】
＜１−２＞腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）の遊離量測定
混合生薬材抽出物が、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）遊離に及ぼす影響を調べるために、前記の実験例１−１に記述した方法で用意した細胞を使用して腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−ａ）の遊離量を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）で測定した。具体的に、９６ウェルプレートに５×１０５個／ウェルで細胞を分注して、リポ多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）を添加して腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）が遊離されるように細胞を活性化させた。ＬＰＳと同時に試験群には、前記実施例１で製造した混合生薬材抽出物を多様な濃度で処理して２４時間培養した。２４時間後、細胞培養液中の腫瘍壊死因子−アルファの量を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）で測定した。酵素免疫測定時の吸光度は、ダイナテックＭＲ−７０００（Ｄｙｎａｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ社）機器を使用して４５０ｍｍで測定した。腫瘍壊死因子−アルファ遊離量は、対照群（ＬＰＳだけ添加した群）に対する百分率で計算した。
【００４５】
前記過程による混合生薬材抽出物の濃度による腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）の遊離量抑制効果を、図１に示した。
【００４６】
図１に示したように、本発明の混合生薬材抽出物を添加した細胞は、２ｍｇ／ｍｌ濃度で対照群と比べて遊離ＴＮＦ−α生成率が１０．６％で、三七根、熟地黄、五加皮抽出物を単独で添加した細胞各々の３９．９％、３８．１％、８０．９％に比べて４〜８倍の腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）遊離抑制効果を示した。
【００４７】
実験例２：混合生薬材抽出物による一酸化窒素（ＮＯ）生成抑制効能分析
本発明の混合生薬材抽出物が、マウス大食細胞細胞株（Ｍｏｕｓｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＲＡＷ２６４．７細胞で生成される炎症を媒介する物質である一酸化窒素（ＮＯ）生成抑制に及ぼす影響を調べるために、下記のような実験を実施した。
【００４８】
＜２−１＞細胞の選別及び細胞培養
本発明の混合生薬材抽出物が、一酸化窒素生成に及ぼす影響を評価するために、マウスに由来した細胞株であるＲＡＷ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＴＩＢ−７１）をアメリカ細胞株銀行（ＡＴＣＣ，米国）から購入して、１０％ＦＢＳ（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）を添加したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ，ＢＲＬ，米国）培地で３７℃  ＣＯ２培養器で培養して実験に使用した。
【００４９】
＜２−２＞一酸化窒素（ＮＯ）生成量測定
混合生薬材抽出物が、一酸化窒素生成に及ぼす影響を調べるために、前記の実験例２−１に記述した方法で用意した細胞を使用して、一酸化窒素生成量を測定した。具体的に、９６ウェルプレートに５×１０５個／ウェルで細胞を分注して、リポ多糖類（ＬＰＳ）を添加してＮＯが遊離されるように細胞を活性化させた。ＬＰＳと同時に試験群には、前記実施例１で製造した混合生薬材抽出物を多様な濃度で処理して１２時間培養した。１２時間後、細胞培養液中の一酸化窒素量をグリース反応（Ｇｒｉｅｓｓ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）で測定した。
【００５０】
前記過程による混合生薬材抽出物の濃度による一酸化窒素生成量抑制効果を、図２に示した。
【００５１】
図２に示したように、本発明の混合生薬材抽出物を添加した細胞は、三七根、熟地黄、五加皮抽出物を単独で添加した細胞に比べて、一酸化窒素生成抑制効果が優れていた。特に、６ｍｇ／ｍｌ濃度では、約２〜６倍程度の一酸化窒素生成抑制効果を示した。
【００５２】
実験例３：混合生薬材抽出物によるマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）合成抑制効能分析
本発明の混合生薬材抽出物が、人体軟骨肉腫細胞株（Ｈｕｍａｎ  ｃｈｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＳＷ１３５３細胞で生成される基質破壊物質であるマトリックスメタロプロテイナーゼ−１３（ＭＭＰ−１３）の合成に及ぼす影響を調べるために、下記のような実験を実施した。
【００５３】
＜３−１＞細胞の選別及び細胞培養
本発明の混合生薬材抽出物が、ＭＭＰ−１３合成に及ぼす影響を評価するためにヒトに由来した細胞株であるＳＷ１３５３細胞（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＨＴＢ−９４）をアメリカ細胞株銀行（ＡＴＣＣ，米国）から購入して、１０％ＦＢＳ（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）を添加したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ，ＢＲＬ，米国）培地で３７℃  ＣＯ２培養器で培養して実験に使用した。
【００５４】
＜３−２＞ＭＭＰ−１３合成量測定
混合生薬材抽出物が、ＭＭＰ−１３合成に及ぼす影響を調べるために、前記の実験例３−１で記述した方法で用意した細胞を使用して、ＭＭＰ−１３発現を測定した。具体的に、９６ウェルプレートに５×１０５個／ウェルで細胞を分注して、２４時間後にＰＢＳ緩衝溶液（ＮａＣｌ８ｇ，ＫＣｌ０．２ｇ，Ｎａ２ＨＰＯ４１．４４ｇ，ＫＨ２ＰＯ４０．２４ｇ／１Ｌ蒸留水，ｐＨ７．４）で洗浄した後、無ＦＢＳのＤＭＥＭ培地で２４時間さらに培養した。試験群に前記実施例１で製造した混合生薬材抽出物を１時間処理した後、対照群と試験群に腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−ａ）を処理した。２４時間後、細胞培養液中のＭＭＰ−１３の量を、ウエスタンブロット方法を使用して測定した。すなわち、細胞培養液をＳＤＳ−ポリアミドゲルに適用させて電気泳動した後、半乾燥ブロッター（ＴＲＡＮＳ−ＢＬＯＴ  ＳＤ  ｓｙｓｔｅｍ，Ｂｉｏｒａｄ）を使用して膜に移動させた。膜をＴＢＳ−Ｔ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ，０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０，ｐＨ７．２）で１回洗浄後、遮断液（３％脱脂牛乳）に１時間放置した。１時間後、ＴＢＳ−Ｔで２回洗浄後、ヒトＭＭＰ−１３に対する単一抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社）を１：３，０００〜５，０００に希釈して２時間反応させた。反応後、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄して、ＨＲＰが結合されたヤギ抗−マウスＩｇＧ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ，ｐｒｏｍｅｇａ社）を希釈して１時間反応させた。１時間後、再び膜を３〜４回洗浄後、ＥＣＬ（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｅｎｃｅ）ウエスタンブロット分析システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）を使用して確認した。
【００５５】
前記過程による混合生薬材抽出物のＭＭＰ−１３発現に及ぼす影響を、図３に示した。
【００５６】
図３に示したように、三七根、熟地黄、五加皮各々の単独抽出物と本発明の混合生薬材抽出物を同一濃度（６ｍｇ／ｍｌ）で処理した場合、混合生薬材抽出物を処理した時、抽出物各々を単独で処理した時よりバンドの強度が顕著に減って、ＭＭＰ−１３合成抑制効果が優秀であることを確認した。
【００５７】
実験例４：混合生薬材抽出物の急性毒性試験
本発明に使用された生薬材は、食品原料に分類されていて混合生薬材抽出物の安全性には問題がないと判断されるが、本発明者等は、これを経口投与して安全性を確認するために下記のような方法で急性毒性実験をした。
【００５８】
実験動物で６週齢の特定病原不在（ＳＰＦ）マウスを使用して急性毒性実験を実施した。群当り１０匹ずつの動物に、本発明の混合生薬材抽出物を０．９％ＮａＣｌに溶かして１７時間絶食させたマウスに、２ｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇの用量で単回経口投与した。試験物質投与後動物の斃死の有無、臨床症状、体重変化を観察して血液学的検査と血液生化学的検査を実施した。剖検して肉眼で腹腔臓器と胸腔臓器の異常有無を観察した。
【００５９】
試験結果、試験物質を投与したすべての動物で特記するに値する臨床症状や斃死した動物はなく、体重変化、血液検査、血液生化学検査、剖検所見などでも毒性変化は観察されなかった。以上の結果、本発明の混合生薬材抽出物は、マウスで５ｇ／ｋｇまで毒性変化を現わさないので、経口投与最小致死量（ＬＤ５０）は５ｇ／ｋｇ以上の安全な物質であると判断された。
【００６０】
実験例５：混合生薬材抽出物の第２型コラーゲン誘導関節炎実験動物で関節炎病的進行抑制効果分析
本発明の混合生薬材抽出物が、関節炎の病的進行を抑制することができるかどうかを確認するために、本発明者等は次のような実験を遂行した。
【００６１】
＜５−１＞関節炎実験動物誘導
第２型コラーゲン誘導関節炎実験動物を作るために５〜６週齢の雄ＤＢＡ１マウスを日本のＳＣＩ社から購入した。マウスは、温度２１度、湿度４０％の条件下で飼育した。牛の第２型コラーゲン（日本、コンドレックス社）を、０．０５％酢酸に２ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した後、牛の第２型コラーゲンを同量の完全免疫反応亢進剤（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ，日本、コンドレックス社）と混ぜた。氷で冷却しながら３ｍｌ注射器に連結したＴ−連結器を使用して均質した懸濁液を作った。懸濁液がよく作られたかどうか確認後、マウスの尾筋部分をアルコール綿で消毒して尾筋部の皮下内にコラーゲン懸濁液１００μｌを注射した。
【００６２】
＜５−２＞混合生薬材抽出物の経口投与
前記実施例１で製造した混合生薬材抽出物を水に溶かして、０．２５ｕＭフィルターを使用してろ過して製造した。製造した混合生薬材抽出物を２７６ｍｇ／ｋｇ／日に毎日１回ずつ、３週間１ｍｌ注射器にゾンデを連結してマウスの口に直接投与した。
【００６３】
＜５−３＞関節炎の病的進行有無観察：肉眼観察及び測定
コラーゲン懸濁液を注射したマウスの関節炎の発病は、注射日から３０日頃から発生すると知られている。関節炎病変の肉眼的観察は、参照文献に基づいて次のようなスコアを使用して実施した。０：腫脹及び発赤がなし、１：関節の軽微な発赤及び腫脹、２：明らかな関節部発赤及び腫脹、３：指関節を含み発赤、腫脹の程度がひどい、４：関節の全部位にわたって腫脹が極甚である。したがって、関節病変の最高スコアは、マウス一匹当り左右の前足、後ろ足を合わせて１６であり、足一本当りスコアは、４が最高スコアである（Ｃｏｕｒｔｅｎａｙ  Ｊ．Ｓ．，Ｄａｌｌｍａｎ  Ｍ．Ｊ．，Ｄａｙａｎ  ＡＤ，等：Ｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８０年，第２８３巻，６６６−６６８頁）。
【００６４】
＜５−４＞混合生薬材抽出物投与後、第２型コラーゲン誘導関節炎実験動物で関節炎進行抑制効果観察
前記過程による混合生薬材抽出物を、第２型コラーゲン誘導関節炎実験動物に経口投与した後、関節炎の病的進行を抑制する治療効果を図４と表１に示した。図４と表１に示されたように、本発明の混合生薬材抽出物を投与した場合、三七根、熟地黄及び五加皮抽出物を単独で投与した場合に比べて、関節炎の病的進行を抑制する効能が優れていることを確認した。
【００６５】
【表１】
2008528483.tif 000003
【００６６】
下記に本発明の組成物のための製剤例を例示する。
【００６７】
製剤例１：薬学的製剤の製造
＜１−１＞散剤の製造
混合生薬材抽出物                                                ２ｇ
乳糖                                                            １ｇ
前記の成分を混合して気密包に充填して散剤を製造した。
【００６８】
＜１−２＞錠剤の製造
混合生薬材抽出物                                          １００ｍｇ
とうもろこし澱粉                                          １００ｍｇ
乳糖                                                      １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                                      ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法にしたがって打錠して錠剤を製造した。
【００６９】
＜１−３＞カプセル剤の製造
混合生薬材抽出物                                          １００ｍｇ
とうもろこし澱粉                                          １００ｍｇ
乳糖                                                      １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                                      ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法にしたがってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００７０】
製剤例２：食品の製造
本発明の混合生薬材抽出物を含む食品を下記のように製造した。
【００７１】
＜２−１＞小麦粉食品の製造
本発明の混合生薬材抽出物０．５〜５．０重量％を小麦粉に添加して、その混合物を使用してパン、ケーキ、クッキー、クラッカー及び麺類を製造して健康増進用食品を製造した。
【００７２】
＜２−２＞乳製品（ｄａｉｒｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の製造
本発明の混合生薬材抽出物５〜１０重量％を牛乳に添加して、該牛乳を使用してバター及びアイスクリームのような多様な乳製品を製造した。
【００７３】
＜２−３＞禅食の製造
玄米、麦、もち米、ハト麦を公知の方法でアルファ化させて乾燥させたものを焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの粉末に製造した。
【００７４】
黒豆、黒胡麻、荏胡麻も公知の方法で蒸して乾燥させたものを焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの粉末に製造した。
【００７５】
本発明の混合生薬材抽出物を真空濃縮器で減圧濃縮して、噴霧、熱風乾燥器で乾燥して得た乾燥物を粉砕機で粒度６０メッシュに粉砕して乾燥粉末を得た。
【００７６】
前記で製造した穀物類、種実類及び混合生薬材抽出物の乾燥粉末を次の割合で配合して製造した。
【００７７】
穀物類（玄米３０重量％、ハト麦１５重量％、麦２０重量％）、
種実類（荏胡麻７重量％、黒豆８重量％、黒胡麻７重量％）、
混合生薬材抽出物の乾燥粉末（３重量％）、
霊芝（０．５重量％）、
地黄（０．５重量％）
【００７８】
製剤例３：飲料の製造
＜３−１＞炭酸飲料の製造
砂糖５〜１０％、クエン酸０．０５〜０．３％、カラメル０．００５〜０．０２％、ビタミンＣ０．１〜１％の添加物を混合して、そこに７９〜９４％の精製水を混ぜてシロップを作る。前記シロップを８５〜９８℃で２０〜１８０秒間殺菌して、冷却水と１：４の割合で混合した後、０．５〜０．８２％の炭酸ガスを注入して、本発明の混合生薬材抽出物を含む炭酸飲料を製造した。
【００７９】
＜３−２＞健康飲料の製造
液状果糖０．５％、オリゴ糖２％、砂糖２％、食塩０．５％、水７５％のような副材料と混合生薬材抽出物を均質に配合して瞬間殺菌をした後、それをガラス瓶、ＰＥＴ瓶など小容器に包装して健康飲料を製造した。
【００８０】
＜３−３＞野菜ジュースの製造
本発明の混合生薬材抽出物５ｇをトマトまたはにんじんジュース１，０００ｍｌに加えて健康増進用野菜ジュースを製造した。
【００８１】
＜３−４＞果物ジュースの製造
本発明の混合生薬材抽出物１ｇをリンゴまたはぶどうジュース１，０００ｍｌに加えて健康増進用果物ジュースを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
前記で詳しくみたように、本発明の三七根、熟地黄及び五加皮混合生薬材抽出物は、各々の生薬抽出物に比べて関節炎の主な原因中の一つである炎症性物質の遊離抑制能力と軟骨を破壊する基質破壊物質（ＭＭＰ−１３）の合成を抑制する能力が優れている。さらに、関節炎疾患動物でも関節炎の病的進行を抑制する効果が、各々の生薬抽出物を投与した場合より混合生薬材抽出物を投与した場合、さらに優れて現われるので、混合生薬材抽出物（三七根、熟地黄、五加皮）は、関節炎治療剤または予防剤に使用されるだけではなく、健康食品にも広く有用に使用できる。
【００８３】
本明細書に記載された概念および具体的な実施形態は、本発明と同一な目的を遂行するために他の実施形態に変形または設計することが可能である。そのような実施形態、同等物は、添付の請求項のような本発明の技術的思想及び範囲を脱するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】本発明の混合生薬材抽出物が、炎症性物質、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）遊離抑制に及ぼす影響を示した図である。
【図２】本発明の混合生薬材抽出物が、炎症性物質、一酸化窒素（ＮＯ）遊離抑制に及ぼす影響を示した図である。
【図３】本発明の混合生薬材抽出物が、軟骨基質破壊物質、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１３（ＭＭＰ−１３）合成抑制に及ぼす影響を示した図である。
【図４】本発明の混合生薬材抽出物が、第２型コラーゲン誘導関節炎実験動物で関節炎の病的進行抑制に及ぼす影響を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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