(57)【要約】  本発明は、ポリペプチドと、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、テトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーとを含有する薬学的製剤に関する。更に本発明は精製過程中のポリペプチドの安定性を改善するための方法において、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド、ＡＭＰＤ、Ｔ.Ｅ.Ａ.又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーを上記精製過程に適用する工程を含む方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチドと、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、テトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーとを含有する薬学的製剤。
【請求項２】
バッファー又はバッファー組合せが、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、グリシンアミド又はそれらの塩からなる群から選択される請求項１に記載の薬学的製剤。
【請求項３】
バッファー又はバッファー組合せが、シキミ酸、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、テトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はそれらの塩からなる群から選択される請求項１に記載の薬学的製剤。
【請求項４】
バッファー又はバッファー組合せの濃度が０．０１〜１００ｍＭの範囲にある請求項１から３の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項５】
バッファー又はバッファー組合せの濃度が０．１〜５０ｍＭの範囲にある請求項１から４の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項６】
バッファー又はバッファー組合せの濃度が３〜２５ｍＭの範囲にある請求項１から４の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項７】
バッファー又はバッファー組合せの濃度が５〜１６ｍＭの範囲にある請求項１から４の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項８】
ポリペプチドがインスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン、ＧＬＰ-１、エキセンディン-４、ＦＶＩＩ、ＦＸＩＩＩ、ＦＶＩＩとＦＸＩＩＩの混合物、ＩＬ-２０、ＩＬ-２１、ＩＬ-２８ａ、ＩＬ-２９、ＩＬ-３１又はその類似体もしくは誘導体からなる群から選択される請求項１から７の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項９】
ポリペプチドがインスリン又はその類似体もしくは誘導体である請求項８に記載の薬学的製剤。
【請求項１０】
精製過程中又は薬学的製剤中におけるポリペプチドの安定性を改善するための方法において、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド、ＡＭＰＤ、Ｔ.Ｅ.Ａ.又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファー又はバッファー組合せを上記精製過程又は薬学的製剤に適用する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ポリペプチドとバッファーを含有する安定な薬学的製剤と、精製過程中におけるポリペプチドの安定性を改善するための方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
薬学的製剤の貯蔵や製造の間や精製過程の間のポリペプチドの不安定性はよく知られた問題である。様々な物理的及び化学的変性経路のなかでも、ポリペプチド凝集がおそらくはポリペプチド不安定性の最も厄介な顕れである。ポリペプチドの凝集は、主要構造に何らの変化も伴わない二以上のポリペプチド分子の物理的結合によって（物理的不安定性）あるいは新たな供給結合（群）の形成によって（化学的不安定性）生じうる。アミロイド形成又はフィブリル化（つまり、不溶性の生物学的に不活性な凝集体の形成）の形での物理的不安定性は、ポリペプチド医薬の製造や貯蔵に対して大きな問題を引き起こす場合があり、この問題を減じたり解消する方法には製薬業界は強い関心を持っている。加えて、凝集したポリペプチドは、通常は減少した生物学的活性を示すか、多くの場合生物学的活性を示さず、ある種の凝集体は免疫原性又は毒性があるとさえ考えられている。フィブリル化は粘度を有意に増加させるかもしれないので、この現象はしばしばゲル化とも呼ばれる。
【０００３】
ポリペプチドを含む薬学的溶液へのバッファーの添加は、精製中又は薬学的溶液のｐＨを所望のｐＨ範囲内に安定化させるために必須である。従来は、ポリペプチドを含む薬学的製剤に対する好ましいバッファー剤としてホスフェートバッファーが使用されていた。
【０００４】
（発明の概要）
物理的安定性が増大した薬学的ポリペプチド製剤は、ある種のバッファー化合物又はその塩を上記製剤に添加することによって得ることができることが見出された。
よって、一態様では、本発明は、ポリペプチドと、ジエチルマロン酸（ジエチルプロパン二酸）、トリメリット酸（１,２,４-ベンゼントリカルボン酸）、シキミ酸（[３Ｒ-(３α,４α,５β)]-３,４,５-トリヒドロキシ-１-シクロヘキセン-１-カルボン酸）、グリシンアミド、ＡＭＰＤ（２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール）、Ｔ.Ｅ.Ａ.（テトラエチルアンモニウム）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーとを含有する薬学的製剤に関する。
【０００５】
本発明の一実施態様では、バッファーは、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、グリシンアミド又はそれらの塩からなる群から選択される。
本発明の他の実施態様では、バッファーは、シキミ酸、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、テトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はそれらの塩からなる群から選択される。
【０００６】
本発明の他の実施態様では、バッファーはジエチルマロン酸又はその塩である。
本発明の他の実施態様では、バッファーはトリメリット酸又はその塩である。
本発明の他の実施態様では、バッファーはシキミ酸又はその塩である。
本発明の他の実施態様では、バッファーはグリシンアミド又はその塩である。
本発明の他の実施態様では、バッファーは２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はその塩である。
本発明の他の実施態様では、バッファーはテトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はその塩である。
【０００７】
本発明の他の態様では、本発明は、精製過程中のポリペプチドの安定性を改善するための方法に関する。該方法は、ジエチルマロン酸（ジエチルプロパン二酸）、トリメリット酸（１,２,４-ベンゼントリカルボン酸）、シキミ酸（[３Ｒ-(３α,４α,５β)]-３,４,５-トリヒドロキシ-１-シクロヘキセン-１-カルボン酸）、グリシンアミド、ＡＭＰＤ（２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール）、Ｔ.Ｅ.Ａ.（テトラエチルアンモニウム）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーの十分量の添加を含む。
【０００８】
（発明の説明）
安定性が増大した薬学的ポリペプチド製剤は該製剤にジエチルマロン酸（ジエチルプロパン二酸）、トリメリット酸（１,２,４-ベンゼントリカルボン酸）、シキミ酸（[３Ｒ-(３α,４α,５β)]-３,４,５-トリヒドロキシ-１-シクロヘキセン-１-カルボン酸）、グリシンアミド塩酸塩、ＡＭＰＤ（２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール）、塩化Ｔ.Ｅ.Ａ.（塩化テトラエチルアンモニウム）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーを添加することによって得ることができることが見出された。
「安定化溶液」なる用語は、増加した物理的安定性、増加した化学的安定性又は増加した物理的化学的安定性を有するポリペプチド溶液を意味する。薬学的製剤及び様々な処理工程（例えば精製工程）からのポリペプチドの溶液がそのような溶液の例である。
【０００９】
ここで使用されるタンパク質溶液の「物理的安定性」という用語は、熱機械的ストレスへのタンパク質の暴露及び／又は疎水性表面及び界面のような不安定化する界面及び表面との相互作用の結果としてタンパク質の生物学的に不活性な及び／又は不溶性のタンパク質凝集体を形成するタンパク質の傾向を意味する。タンパク質水溶液の物理的安定性は、適切な容器（例えばカートリッジ又はバイアル）中に満たした溶液を機械的／物理的ストレス（例えば撹拌）に様々な時間の間、異なった温度で暴露した後に目視検査及び／又は濁度測定によって評価される。溶液の目視検査は暗い背景中において鋭く集光された光下で実施される。溶液の濁りは例えば濁度を０から３の尺度（濁りを示さない溶液が目視スコア０に相当し、昼光で目視できる濁りを示す溶液は目視スコア３に相当する）でランク付けすることにより特徴付けされる。溶液は、昼光下で目視できる濁りを示す場合にタンパク質凝集について物理的に不安定であると分類される。あるいは、溶液の濁りは当業者によく知られた簡単な濁度測定によって評価することができる。タンパク質水溶液の物理的安定性はまたタンパク質の立体配座状態の分光学的薬剤又はプローブを使用して評価することができる。プローブは好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に優先的に結合する小分子である。分光学的小分子プローブの一例はチオフラビンＴである。
【００１０】
ここで使用されるタンパク質溶液の「化学的安定性」なる用語は、天然タンパク質構造と比較して潜在的に少ない生物学的能力及び／又は潜在的に増加した免疫原性を持つ化学的変性産物の形成に至るタンパク質構造中の化学共有結合の変化を意味する。
よって、上に概説したように、「安定化ポリペプチド溶液」は増加した物理的安定性、増加した化学的安定性又は増加した物理的化学的安定性を有する溶液を意味する。更に、上に概説したように、「安定化製剤」は増加した物理的安定性、増加した化学的安定性又は増加した物理的化学的安定性を有する製剤を意味する。一般に、製剤は、有効期限に達するまで（推奨された使用及び貯蔵条件に応じて）使用及び貯蔵中に安定でなければならない。
【００１１】
上記安定化は、問題のポリペプチドを含有する薬学的製剤又は溶液に、バッファーの選択された群を添加することによって達成される。あるポリペプチドの十分な化学的安定化を達成するためのバッファーの最適濃度は、バッファー、ポリペプチドの濃度や構造などの様々なパラメータに依存する。
しかして、バッファー濃度は、問題のポリペプチド、特定のバッファー、薬学的製剤中の他の成分に依存し、比較的広い範囲で変化しうる。バッファー濃度は典型的には０．０１〜１００ｍＭの範囲にある。
他の実施態様では、バッファー濃度は１〜５０ｍＭの間又は３〜２５ｍＭの間にある。
更なる実施態様では、バッファー濃度は３〜２０ｍＭの間、４〜２０ｍＭの間、５〜２０ｍＭの間、５〜１８ｍＭの間、５〜１７ｍＭの間、５〜１６ｍＭの間にある。
最適なバッファー濃度は、本発明に係る関連バッファー間で僅かに変動しうる。
薬学的製剤のｐＨは、約２から約１０の範囲でありうるが、典型的には約４から約８．５の範囲である。
更なる実施態様では、ｐＨは４．５〜６．５、５．５〜６．５、６．５〜９、６．５〜８．５又は７〜８である。
【００１２】
本発明の一目的は、０．０１ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポリペプチド化合物を含有する薬学的製剤であって、２．０から約１０．０のｐＨを有し、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、テトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーを含有する製剤を提供することにある。
本発明の他の目的は、０．０１ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポリペプチド化合物を含有する薬学的製剤であって、２．０から約１０．０のｐＨを有し、ジエチルマロン酸、トリメリット酸、グリシンアミド又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーを含有する製剤を提供することにある。
本発明の他の目的は、０．０１ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポリペプチド化合物を含有する薬学的製剤であって、２．０から約１０．０のｐＨを有し、シキミ酸、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、テトラエチルアンモニウム（Ｔ.Ｅ.Ａ.）又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファーを含有する製剤を提供することにある。
【００１３】
本発明の一実施態様では、薬学的製剤は水性製剤、つまり水を含有する製剤である。かかる製剤は典型的には溶液又は懸濁液である。本発明の更なる実施態様では、薬学的製剤は水溶液である。「水性製剤」なる用語は少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含有する製剤として定義される。同様に、「水溶液」なる用語は少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含有する溶液として定義され、「水性懸濁液」なる用語は少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含有する懸濁液として定義される。
他の実施態様では、薬学的製剤は凍結乾燥製剤であり、医療提供者又は患者が使用前に溶媒及び／又は希釈剤を添加する。
他の実施態様では、薬学的製剤は事前の溶解の必要がない使用準備が整った乾燥製剤（例えば凍結乾燥又はスプレードライ）である。
【００１４】
薬学的製剤は、一又は複数の一般的なバッファー又はバッファー系を更に含有しうる。そのような一般的なバッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸、及び／又はそれらの混合物及び／又は塩からなる群から選択されうる。特にそのような一般的なバッファー又はバッファー系はホスフェートバッファーを含む。
一実施態様では、バッファーの全濃度は０．０１〜１００ｍＭの範囲にあり、特にバッファーの全濃度はせいぜい５０ｍＭ、例えば１〜５０ｍＭである。
一実施態様では、薬学的製剤は、安定剤、アミノ酸塩基、抗菌保存料、キレート剤、界面活性剤、等張化剤からなる群から選択される成分を更に含有する。
【００１５】
薬学的組成物中における安定剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。一実施態様では、本発明の組成物は、液体薬学的製剤として貯蔵中に凝集体形成を示すおそれのあるポリペプチドがその治療的に活性な成分に含まれる安定化された液体薬学的組成物である。「凝集体形成」とは、可溶性のままでありうるオリゴマーか、溶液から沈殿する大きな目視できる凝集体の形成を生じるポリペプチド分子間の物理的相互作用のことである。「貯蔵中」とは、ひとたび調製された液体薬学的組成物又は製剤が直ぐには患者に投与されないことを意図する。むしろ調製後に、液体形態、凍結状態、又は液体形態もしくは患者への投与に適した他の形態へ後で再構成するための乾燥形態の何れかで貯蔵のために包装される。「乾燥形態」とは、液体薬学的組成物又は製剤が、フリーズドライ（つまり凍結乾燥；例えばWilliams及びPolli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59）、スプレードライ（Masters (1991), Spray-Drying Handbook (5版; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp.491-676；Broadhead等 (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206；及びMumenthaler等 (1994) Pharm. Res. 11:12-20を参照）又はエアードライ（Carpenter及びCrowe (1988) Cryobiology 25:459-470；及びRoser (1991) Biopharm. 4:47-53）の何れかによって乾燥されていることを意図する。
【００１６】
液体薬学的組成物の貯蔵中におけるポリペプチドによる凝集体形成はそのポリペプチドの生物学的活性に悪影響を及ぼし得、薬学的組成物の治療効果を損なわしめる。更に、凝集体形成は、そのポリペプチド含有薬学的組成物を、注入系を使用して投与する場合、チューブ、膜、又はポンプの詰まりのような他の問題を生じうる。
本発明の薬学的組成物は組成物の貯蔵の間におけるポリペプチドの凝集体形成を減少させるのに十分な量のアミノ酸塩基を更に含みうる。「アミノ酸塩基」とは、アミノ酸又はアミノ酸の組合せのことであり、任意の与えられたアミノ酸はその遊離塩基形態又はその塩形態で存在する。アミノ酸の組合せが使用される場合、アミノ酸の全てがその遊離塩基形態で存在し得、全てはその塩形態で存在し得、あるいは幾つかがその遊離塩基形態で存在し得る一方、他のものはその塩形態で存在する。一実施態様では、本発明の組成物を調製する際に使用するアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸のような荷電側鎖を担持しているものである。特定のアミノ酸（例えばメチオニン、ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン及びそれらの混合物）の任意の立体異性体（つまりＬ、Ｄ、又はその混合体）又はこれら立体異性体の組み合わせは、特定のアミノ酸がその遊離塩基形態又はその塩形態の何れかで存在している限り、本発明の薬学的組成物中に存在しうる。一実施態様では、Ｌ立体異性体が使用される。本発明の組成物はまたこれらのアミノ酸の類似体と共に製剤化されうる。「アミノ酸類似体」とは、本発明の液体薬学的組成物の貯蔵中にポリペプチドによる凝集体形成を減少させるという所望の効果をもたらす天然に生じるアミノ酸の誘導体のことである。適切なアルギニン類似体には、例えばアミノグアニジン、オルニチン及びＮ-モノエチルＬ-アルギニンが含まれ、適切なメチオニン類似体には、エチオニン及びブチオニンが含まれ、適切なシステイン類似体にはＳ-メチル-Ｌシステインが含まれる。他のアミノ酸の場合と同様に、アミノ酸類似体はその遊離の塩基形態又はその塩形態で組成物中に導入される。本発明の更なる実施態様では、アミノ酸又はアミノ酸類似体は、タンパク質の凝集を防止又は遅延させるのに十分な濃度で使用される。
【００１７】
本発明の更なる実施態様では、治療剤として作用するポリペプチドが酸化を受けやすい少なくとも一のメチオニン残基を含むポリペプチドである場合、メチオニン（又は他の含硫アミノ酸又はアミノ酸類似体）を添加してメチオニン残基がメチオニンスルホキシドへ酸化するのを阻害することができる。「阻害する」とは、メチオニンが酸化された種の経時的な蓄積の最小化のことである。メチオニンの酸化を阻害することはポリペプチドをその正しい分子形態に、より維持することとなる。メチオニンの任意の立体異性体（Ｌ又はＤ）又はその組み合わせを使用することができる。付加される量は、メチオニンスルホキシドの量が規制機関に受け入れられるようにメチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量でなければならない。典型的には、これは、組成物が約１０％以下から約３０％以下のメチオニンスルホキシドしか含まないことを意味する。一般に、これは、メチオニン残基に加えられるメチオニンの比が約１：１から約１０００：１、例えば１０：１から約１００：１の範囲であるようにメチオニンを添加することによって達成することができる。
【００１８】
本発明の更なる実施態様では、製剤は高分子量ポリマー又は低分子化合物の群から選択される安定剤を更に含有する。本発明の更なる実施態様では、安定剤はポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシ／ヒドロキシセルロース又はその誘導体（例えばＨＰＣ、ＨＰＣ-ＳＬ、ＨＰＣ-Ｌ、ＨＰＭＣ）、シクロデキストリン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２-メチルチオエタノールのような硫黄含有物質、及び異なった塩（例えば塩化ナトリウム）から選択される。これらの特定の安定剤の各一が本発明の他の実施態様を構成する。
薬学的組成物はまたその中の治療的に活性なポリペプチドの安定性を更に向上させる更なる安定剤を含有しうる。本発明にとって特に興味がある安定剤には、限定するものではないが、メチオニンの酸化からポリペプチドを保護するメチオニン及びＥＤＴＡと、凍結融解又は機械的せん断に伴う凝集からポリペプチドを保護する非イオン性界面活性剤が含まれる。
【００１９】
一実施態様では、組成物は一又は複数の抗菌保存料を更に含有する。適切な薬学的に許容可能な保存料は、フェノール、ｏ-クレゾール、ｍ-クレゾール、ｐ-クレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ-ヒドロキシ安息香酸プロピル、２-フェノキシエタノール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸ブチル、２-フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、チメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロロフェネシン（３ｐ-クロルフェノキシプロパン-１,２-ジオール）又はそれらの混合物からなる群から選択されうる。本発明の更なる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、保存料は、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、保存料は、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これら特定の保存料の各一が本発明の別の実施態様を構成する。薬学的組成物中における保存料の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。
【００２０】
本発明の更なる実施態様では、製剤は等張剤を更に含有する。等張剤は、塩（例えば塩化ナトリウム）、糖又は糖アルコール、アミノ酸（例えばＬ-グリシン、Ｌ-ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン）、アルジトール（例えばグリセロール（グリセリン）、１,２-プロパンジオール（プロピレングリコール）、１,３-プロパンジオール、１,３-ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００）、又はそれらの混合物からなる群から選択されうる。例えばフルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンブン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロース-Ｎａを含む単糖類、二糖類、又は多糖類、又は水溶性グルカン類のような任意の糖を使用することができる。一実施態様では、糖添加剤はスクロースである。糖アルコールは少なくとも一つの-ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素として定義され、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、アラビトールを含む。一実施態様では、糖アルコール添加剤はマンニトールである。上述の糖類又は糖アルコールは個々に又は組み合わせて使用することができる。糖又は糖アルコールが液体調製物中で可溶性であり、本発明の方法を使用して達成される安定化効果に悪影響を及ぼさない限り、使用される量に決まった制限はない。一実施態様では、糖又は糖アルコール濃度は約１ｍｇ／ｍｌと約１５０ｍｇ／ｍｌの間である。本発明の更なる実施態様では、等張剤は１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、等張剤は１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、等張剤は８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、等張剤は２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定の等張剤の各一は本発明の別の実施態様を構成する。薬学的組成物中における等張剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。
【００２１】
本発明の更なる実施態様では、製剤はキレート剤を更に含有する。キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、及びアスパラギン酸の塩、及びそれらの混合物から選択されうる。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる実施態様では、キレート剤は２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定のキレート剤の各一は本発明の別の実施態様を構成する。薬学的組成物中におけるキレート剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。
【００２２】
本発明の更なる実施態様では、製剤は界面活性剤を更に含有する。界面活性剤は、洗浄剤、エトキシル化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレンブロックポリマー（例えばプルロニック(登録商標)Ｆ６８、ポロキサマー１８８及び４０７、トリトンＸ-１００のようなポロキサマー類）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン及びポリエチレン誘導体、例えばアルキル化及びアルコキシル化誘導体（トゥイーン類、例えばＴｗｅｅｎ-２０、Ｔｗｅｅｎ-４０、Ｔｗｅｅｎ-８０及びＢｒｉｊ-３５）、そのモノグリセリド又はそのエトキシル化誘導体、ジグリセリド又はそのポリオキシエチレン誘導体、アルコール、グリセロール、レクチン及びリン脂質（例えばホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ジホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン）、リン脂質誘導体（例えばジパルミトイルホスファチジン酸）及びリゾリン脂質誘導体（例えばパルミトイルリゾホスファチジル-Ｌ-セリン及びエタノールアミン、コリン、セリンもしくはスレオニンの１-アシル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスフェートエステル）並びにリゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、アルコキシ（アルキルエーテル）誘導体、例えばリゾホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及び極性頭部基、つまり、コリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、正荷電ＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リゾホスファチジルセリン及びリゾホスファチジルスレオニンの修飾体、及びグリセロリン脂質（例えばケファリン）、グリセロ糖脂質（例えばガラクトピラノシド）、スフィンゴ糖脂質（例えばセラミド、ガングリオシド）、ドデシルホスホコリン、ニワトリ卵白リゾレシチン、フシジン酸誘導体（例えばタウロ-ジヒドロフシジン酸ナトリウム等々）、長鎖脂肪酸及びその塩Ｃ６−Ｃ１２（例えばオレイン酸及びカプリル酸）、アシルカルニチン及び誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンのＮα-アシル化誘導体、又はリジンもしくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンと中性又は酸性アミノ酸の任意の組合せを含むジペプチドのＮα-アシル化誘導体、中性アミノ酸と二つの荷電アミノ酸の任意の組合せを含むトリペプチドのＮα-アシル化誘導体、ＤＳＳ（ドキュセート・ナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７-１１-７］）、ドキュセート・カルシウム、ＣＡＳ登録番号［１２８-４９-４］、ドキュセート・カリウム、ＣＡＳ登録番号［７４９１-０９-０］、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム）、カプリル酸ナトリウム、コール酸又はその誘導体、胆汁酸及びその塩及びグリシンもしくはタウリンコンジュゲート、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ-ヘキサデシル-Ｎ,Ｎ-ジメチル-３-アンモニオ-��-プロパンスルホネート、アニオン性（アルキル-アリール-スルホネート）一価界面活性剤、両性イオン性界面活性剤（例えばＮ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホネート類、３-コールアミド-１-プロピルジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホネート、カチオン性界面活性剤（第４級アンモニウム塩基）（例えば臭化セチル-トリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム）、非イオン性界面活性剤（例えばドデシルβ-Ｄ-グルコピラノシド）、エチレンジアミンへプロピレンオキシド及びエチレンオキシドを連続添加して誘導される四官能性ブロックコポリマーであるポロキサミン（例えばテトロニックス(Tetronic's)）から選択することができ、あるいは該界面活性剤はイミダゾリン誘導体又はその混合物の群から選択されうる。これらの特定の界面活性剤の各一は本発明の別の実施態様を構成する。
薬学的組成物中における界面活性剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19版, 1995が参照される。
【００２３】
本発明の更なる実施態様では、製剤はＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）やベンズアミジン塩酸塩のようなプロテアーゼ阻害剤を更に含有するが、他の市販のプロテアーゼ阻害剤もまた使用することができる。プロテアーゼ阻害剤の使用は、自触媒作用を阻害するためにプロテアーゼのチモーゲンを含有している薬学的組成物において特に有用である。
その他の成分が本発明のペプチド薬学的製剤中に存在することもありうる。そのような更なる成分には、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、張度調節剤、キレート剤、金属イオン、油性媒体、タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質）及び双性イオン（例えばベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン、ヒスチジンのようなアミノ酸）が含まれる。そのような更なる成分は、当然ながら、本発明の薬学的製剤の全体の安定性に悪影響を及ぼしてはならない。
【００２４】
本発明の一実施態様では、薬学的製剤は、インスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン、ＧＬＰ-１、エキセンディン-４、ＦＶＩＩ、ＦＸＩＩＩ、ＦＶＩＩとＦＸＩＩＩの混合物、ＩＬ-２０、ＩＬ-２１、ＩＬ-２８ａ、ＩＬ-２９、ＩＬ-３１及び／又はそれらの類似体及び／又は誘導体を含む群から選択されるポリペプチドを含有する。
他の適したポリペプチドは、ＡＣＴＨ、コルチコトロピン放出因子、アンジオテンシン、カルシトニン、ＩＧＦ-１、ＩＧＦ-２、エンテロガストリン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、トロンボポエチン、エリスロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、オキシトシン、オピオイド、及びそれらの類似体、スーパーオキシドジスムターゼ、インターフェロン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ及びリボヌクレアーゼからなる群から選択されうる。
【００２５】
本発明の一実施態様では、ポリペプチドはインスリンである。インスリンの薬学的製剤において、インスリン分子は、インスリン単量体、インスリン二量体、インスリン六量体間の平衡下で存在し、（部分的に折り畳まれていないインスリン単量体中間体の形態の）インスリン単量体を通じてインスリンのフィブリル化が生じると考えられている。亜鉛イオンが存在すると平衡を六量体形態にシフトさせ、それが次にフィブリル化に対して製剤を安定化させるので、亜鉛イオンが製剤安定化のために市販インスリン製剤にしばしば加えられる。しかしながら、多くのインスリン製剤は（ｐＨを安定させるために）ホスフェートバッファーを含んでおり、ホスフェートが亜鉛イオンに結合する（潜在的に亜鉛ホスフェート錯体の沈殿を生じる）ので、インスリン六量体のコアに結合した亜鉛イオンとホスフェートに結合した亜鉛イオンの間に微妙な平衡が存在している。本発明は、既知のホスフェート含有薬学的製剤と比較して安定性が増大したポリペプチド製剤を提供する。
【００２６】
従って、本発明の特定の実施態様では、ポリペプチドはインスリンである。インスリンは、二つのジスルフィド結合によって互いに連結されたＡ鎖とＢ鎖の二つのアミン酸鎖からなるポリペプチドである。インスリンは天然に生じるインスリン、インスリン類似体、インスリン誘導体に分類できるが、その定義は互いに排他的なものではなく、様々な分子が一を越えるその定義に合致しうる。
天然に生じるインスリンとは、哺乳動物インスリン−つまり、哺乳動物源（例えばヒト、ウシ又はブタ）から得られたかそれからのインスリン分子と同一のインスリン分子のことである。天然に生じるインスリンのＡ鎖は２１のアミノ酸からなり、天然に生じるインスリンのＢ鎖は３０のアミノ酸からなる。天然に生じるインスリンは膵腺からの抽出又は様々な宿主細胞においての組換えＤＮＡ法によって産生され得る。
【００２７】
一実施態様では、本発明に係る薬学的製剤は、ポリペプチドがインスリン誘導体又はインスリン類似体である製剤である。
インスリン類似体は、天然に生じるインスリン、つまりヒトインスリン又は動物インスリンの類似体で、他の点は同一の対応する天然に生じるインスリンとは、他のアミノ酸残基での少なくとも一の天然に生じるアミノ酸残基の置換、及び／又は少なくとも一のアミノ酸残基の付加／欠失の点で異なる。付加されるアミノ酸残基はまた天然に生じないものでありうる。インスリン類似体の例は、Ｂ２８位のアミノ酸残基がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、又はＡｌａであり、Ｂ２９位のアミノ酸残基がＬｙｓ又はＰｒｏであるか；又はＢ３がＬｙｓでＢ２９がＧｌｕであるか；又はＡ２１がＧｌｙで、ＡｒｇがＢ３１及びＢ３２に付加されたか；又はＢ２８−Ｂ３０のアミノ酸残基が欠失されているか；又はＢ２７のアミノ酸残基が欠失されているか；又はＢ３０のアミノ酸残基が欠失されているヒトインスリン類似体である。
【００２８】
インスリン誘導体は、少なくとも一つの有機分子がアミノ酸残基の一又は複数に結合している天然に生じるインスリン又はインスリン類似体の誘導体である。インスリン誘導体の例は、アミノ酸残基に結合した有機分子が脂溶性分子である天然に生じるインスリン又はインスリン類似体の誘導体である。アミノ酸残基に結合した有機分子が脂溶性分子であるインスリン誘導体の例は、Ｂ２９-Ｎε-テトラデカノイル-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎε-テトラデカノイルヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎε-ヘキサデカノイルヒトインスリン、Ｂ２８-Ｎε-テトラデカノイル-ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、Ｂ２８-Ｎε-ヘキサデカノイル-ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎε-テトラデカノイル-ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎε-ヘキサデカノイル-ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎε-(Ｎ-ヘキサデカノイル-γ-グルタミル)-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎε-(Ｎ-リトコリル-γ-グリタミル)-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎε-(ω-カルボキシヘプタデカノイル)-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリン、ＮεＢ２９-テトラデカノイルｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリン、ＮεＢ２８-テトラデカノイルＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、ＮεＢ２９-テトラデカノイルＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２９(Ｎε-ヘキサデカンジオイル-γ-Ｇｌｕ)-ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンである。
【００２９】
他の実施態様では、本発明に係る薬学的製剤は、ポリペプチドがヒトインスリンのＡｓｐＢ２８類似体である製剤である。
他の実施態様では、本発明に係る薬学的製剤は、ポリペプチドがＢ２９-Ｎε-テトラデカノイル-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリンである製剤である。
他の実施態様では、本発明に係る薬学的製剤は、ポリペプチドがＢ２９-Ｎε-(Ｎ-リトコリル-γ-グリタミル)-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリンである製剤である。
他の実施態様では、本発明に係る薬学的製剤は、ポリペプチドがＬｙｓＢ２９(Ｎε-ヘキサデカンジオイル-γ-Ｇｌｕ)-ｄｅｓ(Ｂ３０)ヒトインスリンである製剤である。
本発明に係るバッファーの存在が７ｍＭのホスフェートバッファーの存在と比較してポリペプチドの安定性を増加させることが証明された。
【００３０】
他の実施態様では、本発明は精製過程のような処理の間におけるポリペプチドの安定性を改善するための方法に関する。本発明の方法は精製されるポリペプチドを含む溶液にジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド塩酸塩、ＡＭＰＤ、塩化Ｔ.Ｅ.Ａ.又はそれらの塩からなる群から選択されるバッファー又はバッファーの組合せを適用する工程を含む。
該方法は、精製されるポリペプチドを含む溶液に十分な量のバッファー又はその塩を添加することを含む。バッファーは典型的には最後の２又は３の精製工程（ポリッシング工程）で加えられる。精製工程はイオン交換クロマトグラフィー、ＨＰＬＣクロマトグラフィー、限外濾過又は透析濾過あるいは他のバッファー交換プロセスでありうる。
【実施例】
【００３１】
実施例１
インスリンアスパルト（ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン）を含む水溶液を、（バッファー成分を含む）個々の成分を含むサブ溶液を混合した後、希塩酸又は水酸化ナトリウムの添加によりｐＨ調整することにより調製し、表１に示した組成物を得た。
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【００３２】
本発明によってカバーされるバッファー成分を含有する組成物を、上述のようにして調製し、バッファー成分として７ｍＭのリン酸ナトリウムを含む参照組成物を並行して調製した。
組成物の物理的安定性（つまりフィブリル形成の傾向）をチオフラビンＴ（ＴｈＴ）アッセイを使用して評価した。ＴｈＴアッセイの原理は、遊離（つまりフィブリルに結合していない）状態で、それぞれ３５０及び４３８ｎｍの最大励起及び発光にて微かに蛍光を発するというＴｈＴの蛍光特性に基づいている。しかしながら、フィブリルが存在すると、ＴｈＴは４５０ｎｍに新しい最大励起を、４８２ｎｍに高い発光を示す。
【００３３】
各組成物のサンプルを、９７５：２５の容量比でＴｈＴ水溶液（０．１ｍＭのＴｈＴ）と混合し、各混合物の１２のサンプルをマイクロタイタープレートに移した。そのマイクロタイタープレートをFluoroskan AscentＦＬリーダーに配し、フィブリル形成過程を加速することが知られている条件をサンプルに与えた（例えば３７℃、振盪：１２００ｒｐｍ、１ｍｍ振幅）。各プレートウェル中の蛍光（λＥｘ＝４４４ｎｍ；λＥｍ＝４８５ｎｍ）を１５時間まで（５分間隔）測定した。蛍光対時間のプロットを作成し、蛍光の増加が観察されるまでの時間（ここではラグタイムと定義する）を、ラグゾーンとフィブリル化ゾーンの線形近似間の切片として推定した。ラグタイムの増加は物理的安定性の増大に対応する。１２回のラグタイム観察結果が各組成物に対して得られた。
【００３４】
実施例２
バッファー成分としてジエチルマロン酸１〜１００ｍＭ又はホスフェート７ｍＭを含有する組成物を、実施例１に従って調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファー（７ｍＭ）を含有する組成物と比較してジエチルマロン酸を含有する組成物において増加した。結果を図１に示す。５℃又は３７℃で３ヶ月の貯蔵中に生じた変性産物の量を測定したところ（量は示さず）、ポリペプチドの化学的安定性に対して有意な影響は観察されなかった。
【００３５】
実施例３
バッファー成分としてトリメリット酸１〜１００ｍＭ又はホスフェート７ｍＭを含有する組成物を、実施例１に従って調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファー（７ｍＭ）を含有する組成物と比較してトリメリット酸を含有する組成物において増加した。結果を図２に示す。５℃又は３７℃で３ヶ月の貯蔵中に生じた変性産物の量を測定したところ（量は示さず）、ポリペプチドの化学的安定性に対して有意な影響は観察されなかった。
【００３６】
実施例４
バッファー成分としてシキミ酸１〜１００ｍＭ又はホスフェート７ｍＭを含有する組成物を、実施例１に従って調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファー（７ｍＭ）を含有する組成物と比較してシキミ酸を含有する組成物において増加した。結果を図３に示す。５℃又は３７℃で３ヶ月の貯蔵中に生じた変性産物の量を測定したところ（量は示さず）、ポリペプチドの化学的安定性に対して有意な影響は観察されなかった。
【００３７】
実施例５
バッファー成分としてグリシンアミド塩酸塩１〜１００ｍＭ又はホスフェート７ｍＭを含有する組成物を、実施例１に従って調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファー（７ｍＭ）を含有する組成物と比較してグリシンアミド塩酸塩（１００ｍＭ以下）を含有する組成物において増加した。結果を図５に示す。５℃又は３７℃で３ヶ月の貯蔵中に生じた変性産物の量を測定したところ（量は示さず）、ポリペプチドの化学的安定性に対して有意な影響は観察されなかった。
【００３８】
実施例６
バッファー成分としてＡＭＰＤ（２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール）１〜１００ｍＭ又はホスフェート７ｍＭを含有する組成物を、実施例１に従って調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファー（７ｍＭ）を含有する組成物と比較してＡＭＰＤを含有する組成物において増加した。結果を図５に示す。５℃又は３７℃で３ヶ月の貯蔵中に生じた変性産物の量を測定したところ（量は示さず）、ポリペプチドの化学的安定性に対して有意な影響は観察されなかった。
【００３９】
実施例７
バッファー成分として塩化Ｔ.Ｅ.Ａ.（塩化テトラエチルアンモニウム）１〜１００ｍＭ又はホスフェート７ｍＭを含有する組成物を、実施例１に従って調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファー（７ｍＭ）を含有する組成物と比較して塩化Ｔ.Ｅ.Ａ.を含有する組成物において増加した。結果を図６に示す。５℃又は３７℃で３ヶ月の貯蔵中に生じた変性産物の量を測定したところ（量は示さず）、ポリペプチドの化学的安定性に対して有意な影響は観察されなかった。
【００４０】
実施例８
ヒトインスリンと６．７ｍＭのジエチルマロン酸（レジェンド：ＤＩＥ）、トリメリット酸（レジェンド：ＴＲＩ）、シキミ酸（レジェンド：ＳＨＩ）、グリシンアミド塩酸塩（レジェンド：ＧＬＹ）、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（レジェンド：ＡＭＰＤ）、塩化テトラエチルアンモニウム（レジェンド：ＴＥＡ）又はホスフェートを含有する組成物を調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファーを含有する組成物と比較してジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド塩酸塩、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール、塩化テトラエチルアンモニウムを含有する組成物において増加した。結果を図７に示す。
【００４１】
アシル化インスリン誘導体Ｂ２９-Ｎε-テトラデカノイル-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリンと５ｍＭのジエチルマロン酸（レジェンド：ＤＩＥ）、トリメリット酸（レジェンド：ＴＲＩ）、シキミ酸（レジェンド：ＳＨＩ）、グリシンアミド塩酸塩（レジェンド：ＧＬＹ）、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（レジェンド：ＡＭＰＤ）、塩化テトラエチルアンモニウム（レジェンド：ＴＥＡ）又はホスフェートを含有する組成物を調製した。その組成物の物理的安定性を、実施例１に従って調べた。ポリペプチドの安定性は、ホスフェートバッファーを含有する組成物と比較してジエチルマロン酸、トリメリット酸、シキミ酸、グリシンアミド塩酸塩、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール、塩化テトラエチルアンモニウムを含有する組成物において増加した。結果を図８に示す。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】ジエチルマロン酸又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図２】トリメリット酸又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図３】シキミ酸又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図４】グリシンアミド塩酸塩又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムとして表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図５】ＡＭＰＤ（２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール）又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図６】塩化Ｔ.Ｅ.Ａ.（塩化テトラエチルアンモニウム）又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図７】ジエチルマロン酸（レジェンド：ＤＩＥ）、トリメリット酸（レジェンド：ＴＲＩ）、シキミ酸（レジェンド：ＳＨＩ）、グリシンアミド塩酸塩（レジェンド：ＧＬＹ）、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（レジェンド：ＡＭＰＤ）、塩化テトラエチルアンモニウム（レジェンド：ＴＥＡ）又はホスフェートを含むポリペプチド（インスリンアスパルト）組成物の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図８】ジエチルマロン酸（レジェンド：ＤＩＥ）、トリメリット酸（レジェンド：ＴＲＩ）、シキミ酸（レジェンド：ＳＨＩ）、グリシンアミド塩酸塩（レジェンド：ＧＬＹ）、２-アミノ-２-メチル-１,３-プロパンジオール（レジェンド：ＡＭＰＤ）、塩化テトラエチルアンモニウム（レジェンド：ＴＥＡ）又はホスフェートを含むポリペプチド（アシル化インスリン誘導体Ｂ２９-Ｎε-テトラデカノイル-ｄｅｓ(Ｂ３０)-ヒトインスリン）の物理的安定性。図は相対ラグタイム（物理的不安定性の尺度）を示す。結果は各組成物の平均相対ラグタイムで表している（比較を容易にするために、データはホスフェートバッファーにインデックス１００を与えて正規化した）。誤差バーはＳＥＭ、ｎ＝１２を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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