(57)【要約】  本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルスポリメラーゼの阻害剤であるフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物を提供する。これらの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ウィルス感染の治療に有用である。それらは特に、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、および／又はＣ型肝炎感染の治療に有用である。本発明はさらに、単独で、あるいはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染、特にＨＣＶ感染に対して活性な他の薬剤との組み合わせで、そのようなフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシドを含有する医薬組成物に関するものでもある。本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシドを用いたＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス複製の阻害方法、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウィルス感染の治療方法も開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式（Ｉ）：
【化１】
2008517912.tif 000039
［式中、
Ｒ１は水素またはフッ素であり；
Ｒ２はフッ素またはヒドロキシであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、または構造式：
【化２】
2008517912.tif 000040
で示されるアミノアシル残基であり；
Ｒ４は水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、ホスホリルまたはその環状プロドラッグエステル、ジホスホリル、トリホスホリル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１−４アルキル、ＣＨ(Ｃ１−４アルキル)Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１−４アルキル、構造式：
【化３】
2008517912.tif 000041
で示されるアミノアシル残基、構造式：
【化４】
2008517912.tif 000042
で示される残基であり；
Ｒ５はアミノまたはヒドロキシであり；
Ｒ６は水素、アミノ、またはフルオロであり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキル、またはフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、またはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニルまたはベンジルであり；ただし、該アルキルは未置換であるか、またはヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル、および１Ｈ−インドール−３−イルからなる群より選択される１個の置換基で置換されており；ただし、該フェニルおよびベンジルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、およびメトキシからなる群より独立して選択される１ないし２個の置換基で置換されており；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニル、またはベンジルであり；ただし、該アルキルおよびシクロアルキルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されており；ただし、該フェニルおよびベンジルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、およびトリフルオロメチルから独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されており；
Ａｒは未置換のフェニルであるか、またはハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ、およびＣ１−４アルコキシカルボニルからなる群より独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されたフェニルである；
ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ６が水素であり、Ｒ２がヒドロキシである場合、Ｒ５はアミノではない］で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２がヒドロキシであり、Ｒ３およびＲ４が水素である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ３およびＲ４が水素である請求項１記載の化合物。
【請求項４】
式：
【化５】
2008517912.tif 000043
である２,４−ジアミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２,３−ｄ］ピリミジン；
式：
【化６】
2008517912.tif 000044
である２−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン：
式：
【化７】
2008517912.tif 000045
である２,４−ジアミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
式：
【化８】
2008517912.tif 000046
である４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；または
式：
【化９】
2008517912.tif 000047
である２−アミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；または
その医薬的に許容される塩である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
請求項１記載の化合物および医薬的に許容される担体を含有してなる医薬組成物。
【請求項６】
哺乳動物におけるＣ型肝炎ウイルス感染を治療するための請求項１記載の化合物の使用。
【請求項７】
哺乳動物におけるＣ型肝炎ウイルス感染の治療のための医薬の製造における請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそれのある種の誘導体、それらの合成、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ阻害剤としてのそれらの使用に関する。本発明の化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。これら化合物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害薬として、ＨＣＶ複製の阻害薬として、ならびにＣ型肝炎感染の治療において特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は、世界の人口の２〜１５％と推定される感染者のかなりの数において、肝硬変および肝細胞癌などの慢性肝臓疾患に至る主要な健康上の問題となっている。米国疾病管理センターによると、米国のみで感染者数は３９０万人と推定されている。世界保健機構によれば、世界的には感染者は１億７千万人であり、毎年少なくとも３〜４百万人が感染している。一旦感染すると、感染者の約２０％がウイルスを排除するが、それ以外の感染者ではそれ以降の生涯にわたってＨＣＶが常在することになる。慢性感染者の１０〜２０％が、最終的に肝臓破壊性の肝硬変または癌を発症する。このウイルス疾患は、汚染された血液および血液製品、汚染された針によって非経口的に、あるいは性的に、および感染した母親またはキャリアの母親から子供へと垂直に伝染する。組換えインターフェロン−α単独またはヌクレオシド類縁体であるリバビリンと併用したものを用いた免疫療法に制限される現行のＨＣＶ感染治療は、臨床的効果が限定されたものである。さらに、ＨＣＶには確立されたワクチンがない。従って、慢性ＨＣＶ感染と効果的に対処する改良された治療薬が緊急に必要とされている。ＨＣＶ感染治療における最新技術について総説が出されており、各種刊行物が参照される（Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，″Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ″，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，１１：７９−９６（２０００）；Ｈ．Ｒｏｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，″Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ″，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）；Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒ，ｅｔ  ａｌ．，″Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ″，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）；Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，″Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ″，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）；Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，″Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ″，Ｎ．  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）；Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，″Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ″，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）；ａｎｄ  Ｃ．  Ｃｒａｂｂ，″Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ″，Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）；これらの内容はいずれも、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０００３】
ＨＣＶ療法に向けて各種方法が行われており、それにはウイルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼおよびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害、ならびにワクチンの開発などがある。
ＨＣＶビリオンは、約３０１０アミノ酸のポリ蛋白をコードする約９６００塩基の単一のオリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有するエンベロープ正鎖（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｓｔｒａｎｄ）ＲＮＡウイルスである。ＨＣＶ遺伝子の蛋白産生物は、構造蛋白Ｃ、Ｅ１およびＥ２、ならびに非構造蛋白ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ＡおよびＮＳ４Ｂ、そしてＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂからなる。非構造（ＮＳ）蛋白は、ウイルス複製の触媒機構を提供するものと考えられている。ＮＳ３プロテアーゼは、ポリ蛋白鎖から、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを放出する。ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶの複製サイクルにおける鋳型として作用する１本鎖ウイルスＲＮＡから二本鎖ＲＮＡを合成するのに必要である。従ってＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶ複製複合体において必須の構成要素であると考えられる［Ｋ．Ｉｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，″Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ″，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２９：１２２７−１２３５（１９９９）ａｎｄ  Ｖ．  Ｌｏｈｍａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，″Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ″，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）参照］。ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は、二本鎖ＨＣＶＲＮＡの形成を防止することから、ＨＣＶ特異的抗ウイルス療法開発につながる注目すべき方法である。
【０００４】
ＨＣＶ感染の治療に可能性をもつＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤の開発は、文献に概説されている：Ｍ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“慢性Ｃ型肝炎処置のための有望候補”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１２：１２６９−１２８０（２００３）；Ｐ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃ型肝炎ウイルス感染の実験療法に関する最近の特許（１９９９−２００２），”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，”１３：１７０７−１７２３（２００３）；ａｎｄ  Ｖ．Ｂｒａｓｓ，ｅｔ  ａｌ．，“ＨＣＶに対する標的同定における最近の展開”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ，”８：２９５−３０７（２００４）。プリンリボヌクレオシドによるＨＣＶ複製の阻害について、文献（Ａ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐ，ｅｔ  ａｌ．，“ＨＣＶ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ阻害のためのプリンリボヌクレオシドの構造−活性相関”Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４））に報告されている。ＨＣＶ治療のための治療方法として、ＨＣＶポリメラーゼの阻害剤としての構造的に多様なヌクレオシド誘導体がなお引き続き必要とされる。
【０００５】
米国特許  ＵＳＰ６，７７７，３９６（２００４年８月１７日発行）は、ＨＣＶ感染の治療に有用なＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、一連の構造的に新規なピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド誘導体を開示した。かかる化合物の生物学的性質は、文献（Ｄ．Ｂ．Ｏｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，“７−デアザ−アデノシン類似体はすぐれた薬物動態学的性質を有するＨＣＶ複製の強力な選択的阻害剤である”Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４８：３９４４−３９５３（２００４）およびＡ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡ複製の阻害剤としてのヘテロ塩基修飾２’−Ｃ−メチルリボヌクレオシドの構造−活性相関”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：５２８４−５２９７（２００４））に記載されている。ここで今回発見されたことは、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン核のＣ−５位置にフッ素を導入する（７−デアザ−７−フルオロアデノシン類似体）と、肝臓へのより良い分布など、すぐれた薬物動態学的性質をもつＨＣＶ  ＲＮＡ複製のより強力な阻害剤であるヌクレオシド誘導体が提供されることである。
【０００６】
【特許文献１】米国特許  ＵＳＰ６，７７７，３９６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、特に、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用なフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそのある種の誘導体を提供することにある。
【０００８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤として、特にＣ型肝炎ウイルス複製の阻害剤として有用なフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそのある種の誘導体を提供することにある。
【０００９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用なフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそのある種の誘導体を提供することにある。
【００１０】
本発明の別の目的は、本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物を医薬的に許容される担体とともに含有してなる医薬組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として使用する本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびその誘導体を含有してなる医薬組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤として、特にＨＣＶ複製の阻害剤として使用する本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびその誘導体を含有してなる医薬組成物を提供することにある。
【００１３】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に使用する本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびその誘導体を含有してなる医薬組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明の別の目的は、本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびその誘導体を、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と組合わせて含有してなる医薬組成物を提供することにある。
【００１５】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法を提供することにある。
【００１６】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法、特にＨＣＶ複製の阻害方法を提供することにある。
【００１７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法、特にＨＣＶ感染の治療方法を提供することにある。
【００１８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して活性な他の薬剤と組合わせてＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療する方法であって、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と組合わせてＨＣＶ感染を治療する方法を提供することにある。
【００１９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ複製の阻害および／またはＨＣＶ感染の治療のための医薬として使用するフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそのある種の誘導体ならびにその医薬組成物を提供することある。
【００２０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ複製の阻害および／またはＨＣＶ感染治療用の医薬の製造における、フッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそのある種の誘導体ならびにその医薬組成物の使用を提供することにある。
【００２１】
これらの目的およびその他の目的は以下の詳細な説明から容易に明らかとなろう。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は表示した立体化学配置を有する構造式（Ｉ）：
【００２３】
【化１】
2008517912.tif 000002
【００２４】
［式中、
Ｒ１は水素またはフッ素であり；
Ｒ２はフッ素またはヒドロキシであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、または構造式：
【００２５】
【化２】
2008517912.tif 000003
【００２６】
で示されるアミノアシル残基であり；
Ｒ４は水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、ホスホリルまたはその環状プロドラッグエステル、ジホスホリル、トリホスホリル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、構造式：
【００２７】
【化３】
2008517912.tif 000004
【００２８】
で示されるアミノアシル残基、構造式：
【００２９】
【化４】
2008517912.tif 000005
【００３０】
で示される残基であり；
Ｒ５はアミノまたはヒドロキシであり；
Ｒ６は水素、アミノ、またはフルオロであり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキル、またはフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、またはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニルまたはベンジルである；ただし、該アルキルは未置換であるか、またはヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル、および１Ｈ−インドール−３−イルからなる群より選択される１個の置換基で置換されており；ただし、該フェニルおよびベンジルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、およびメトキシからなる群より独立して選択される１ないし２個の置換基で置換されており；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニル、またはベンジルであり；ただし、該アルキルおよびシクロアルキルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されており；ただし、該フェニルおよびベンジルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、およびトリフルオロメチルから独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されており；
Ａｒは未置換のフェニルであるか、またはハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ、およびＣ１−４アルコキシカルボニルからなる群より独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されたフェニルである；
ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ６が水素であり、Ｒ２がヒドロキシである場合、Ｒ５はアミノではない］
で示されるヌクレオシド化合物またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００３１】
式（Ｉ）で示される化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用である。それらはまたＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用である。
【００３２】
さらに本発明に包含されるのは、該化合物単独、またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と組合わせて該化合物を含有してなる医薬組成物、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製を阻害する方法、およびＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療する方法である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明は表示した立体化学配置を有する構造式（Ｉ）：
【００３４】
【化５】
2008517912.tif 000006
【００３５】
［式中、
Ｒ１は水素またはフッ素であり；
Ｒ２はフッ素またはヒドロキシであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、または構造式：
【００３６】
【化６】
2008517912.tif 000007
【００３７】
で示されるアミノアシル残基であり；
Ｒ４は水素、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、ホスホリルまたはその環状プロドラッグエステル、ジホスホリル、トリホスホリル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、構造式：
【００３８】
【化７】
2008517912.tif 000008
【００３９】
で示されるアミノアシル残基、構造式：
【００４０】
【化８】
2008517912.tif 000009
【００４１】
で示される残基であり；
Ｒ５はアミノまたはヒドロキシであり；
Ｒ６は水素、アミノ、またはフルオロであり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキル、またはフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、またはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニルまたはベンジルであり；ただし、該アルキルは未置換であるか、またはヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル、および１Ｈ−インドール−３−イルからなる群より選択される１個の置換基で置換されており；ただし、該フェニルおよびベンジルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、およびメトキシからなる群より独立して選択される１ないし２個の置換基で置換されており；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、フェニル、またはベンジルであり；ただし、該アルキルおよびシクロアルキルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されており；ただし、該フェニルおよびベンジルは未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、およびトリフルオロメチルから独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されており；
Ａｒは未置換のフェニルであるか、またはハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ、およびＣ１−４アルコキシカルボニルからなる群より独立して選択される１ないし３個の置換基で置換されたフェニルである；
ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ６が水素であり、Ｒ２がヒドロキシである場合、Ｒ５はアミノではない］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００４２】
式（Ｉ）で示される化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として有用である。それらはまたＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。
【００４３】
本発明化合物の一態様においては、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がヒドロキシであり、Ｒ３およびＲ４が水素である。
【００４４】
本発明化合物の第二の態様においては、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ３およびＲ４が水素である；ただし、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ６が水素であり、Ｒ２がヒドロキシである場合、Ｒ５はアミノではない。
【００４５】
本発明化合物の第三の態様においては、Ａｒが未置換のフェニルである。
【００４６】
本発明化合物の第四の態様においては、Ｒ９が水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、イソブチル、２−メチル−１−プロピル、ヒドロキシメチル、メルカプトメチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、１−ヒドロキシエチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、２−メチルチオエチル、４−アミノ−１−ブチル、３−アミノ−１−プロピル、３−グアニジノ−１−プロピル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチル、フェニル、４−ヒドロキシベンジル、および１Ｈ−インドール−３−イルメチルからなる群より選択される。この態様のクラスにおいて、Ｒ９はメチルまたはベンジルである。
【００４７】
本発明化合物の第五の態様においては、Ｒ１０がＣ１−６アルキル、シクロヘキシル、フェニルまたはベンジルである。この態様のクラスにおいて、Ｒ１０はメチルである。
【００４８】
本発明化合物の第六の態様においては、Ａｒが未置換のフェニルであり、Ｒ９がメチルまたはベンジルであり、Ｒ１０がメチルである。
【００４９】
構造式（Ｉ）で示される本発明化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として有用であり、その例は以下の化合物であるが、これらに限定されるものではない：
式：
【００５０】
【化９】
2008517912.tif 000010
【００５１】
である２，４−ジアミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
式：
【００５２】
【化１０】
2008517912.tif 000011
【００５３】
である２−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン：
式：
【００５４】
【化１１】
2008517912.tif 000012
【００５５】
である２，４−ジアミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
式：
【００５６】
【化１２】
2008517912.tif 000013
【００５７】
である４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；または
式：
【００５８】
【化１３】
2008517912.tif 000014
【００５９】
である２−アミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；または
その医薬的に許容される塩。
【００６０】
本発明の一態様において、本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物は、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤として、および／またはプラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療のために有用である。この態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスは、フラビビリダ（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスまたはピコルナビリダ（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスである。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナビリダウイルスはライノウイルス、ポリオウイルス、またはＡ型肝炎ウイルスである。このクラスの第二のサブクラスにおいて、フラビビリダウイルスはＣ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、西ナイル病ウイルス、日本脳炎ウイルス、バンジ（Ｂａｎｚｉ）ウイルス、およびウシウイルス性下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）からなる群より選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビビリダウイルスはＣ型肝炎ウイルスである。
【００６１】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害する方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製を阻害する方法、および／または哺乳動物に治療法有効量の構造式（Ｉ）で示される化合物を投与することを含む、治療を必要とする哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法に関する。
【００６２】
本発明の別の態様において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼは、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼである。この態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼは、フラビビリダウイルスポリメラーゼまたはピコルナビリダウイルスポリメラーゼである。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナビリダウイルスポリメラーゼは、ライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼ、またはＡ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。このクラスの第二のサブクラスにおいて、フラビビリダウイルスポリメラーゼは、Ｃ型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱病ウイルスポリメラーゼ、デング熱ウイルスポリメラーゼ、西ナイル病ウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、バンジ（Ｂａｎｚｉ）ウイルスポリメラーゼ、およびウシウイルス性下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼからなる群より選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビビリダウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
【００６３】
本発明のこの側面の第二態様において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製は、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製である。この態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製は、フラビビリダウイルス複製またはピコルナビリダウイルス複製である。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナビリダウイルス複製は、ライノウイルス複製、ポリオウイルス複製、またはＡ型肝炎ウイルス複製である。このクラスの第二のサブクラスにおいて、フラビビリダウイルス複製は、Ｃ型肝炎ウイルス複製、黄熱病ウイルス複製、デング熱ウイルス複製、西ナイル病ウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、バンジ（Ｂａｎｚｉ）ウイルス複製、およびウシウイルス性下痢性ウイルス複製からなる群より選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビビリダウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製である。
【００６４】
本発明のこの側面の第三態様において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染は、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染である。この態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染は、フラビビリダウイルス感染またはピコルナビリダウイルス感染である。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナビリダウイルス感染は、ライノウイルス感染、ポリオウイルス感染、またはＡ型肝炎ウイルス感染である。このクラスの第二のサブクラスにおいて、フラビビリダウイルス感染は、Ｃ型肝炎ウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、デング熱ウイルス感染、西ナイル病ウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、バンジ（Ｂａｎｚｉ）ウイルス感染、およびウシウイルス性下痢性ウイルス感染からなる群より選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビビリダウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染である。
【００６５】
本出願全体をとおして、以下の用語は表示した意味を有する：
【００６６】
「アルキル」、ならびにアルコキシおよびアルキルチオなど、接頭語「アル（ａｌｋ）」を有するその他の基は、炭素鎖について特に断りのない限り、直鎖または分枝状、およびその組合わせであり得る炭素鎖を意味する。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニルなどである。特定の炭素原子数、例えば、Ｃ３−１０などが許される場合、用語アルキルはシクロアルキル基、およびシクロアルキル構造と組合わさった直鎖または分枝アルキル鎖をも包含する。
【００６７】
「シクロアルキル」はアルキルのサブセットであり、特定数の炭素原子を有する飽和の炭素環状環を意味する。シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどである。シクロアルキル基は特に断りのない限り、単環状である。シクロアルキル基は特に断りのない限り、飽和状である。
【００６８】
用語「アルケニル」は総炭素数２ないし６個の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝鎖のアルケンを意味するものとする（例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニルなど）。
【００６９】
用語「アルキニル」は総炭素数２ないし６個の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝鎖のアルキンを意味するものとする（例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルなど）。
【００７０】
用語「アルコキシ」は特定した炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝鎖のアルコキシドをいう［例えば、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシなど］。
【００７１】
用語「アルキルチオ」は特定した炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルチオ）の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝鎖のアルキルスルフィドをいう［例えば、メチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオなど］。
【００７２】
用語「アルキルアミノ」は特定した炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルアミノ）の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝のアルキルアミンをいう［例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノなど］。
【００７３】
用語「アルキルスルホニル」は特定した炭素原子数（例えば、Ｃ１−６アルキルスルホニル）の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝鎖のアルキルスルホンをいう［例えば、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニルなど］。
【００７４】
用語「アルキルオキシカルボニル」は特定した炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル）の、またはこの範囲のいずれかの数の本発明カルボン酸誘導体の直鎖もしくは分枝鎖エステルをいう［例えば、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル、またはブチルオキシカルボニル］。
【００７５】
用語「アルキルカルボニル」は特定した炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルカルボニル）の、またはこの範囲のいずれかの数の直鎖もしくは分枝鎖のアルキルアシル基をいう［例えば、メチルカルボニル（ＭｅＣＯ−）、エチルカルボニル、またはブチルカルボニル］。
【００７６】
用語「ハロゲン」はハロゲン原子のフッ素、塩素、臭素およびヨウ素を包含するものとする。
【００７７】
用語「ホスホリル」は−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２をいう。
【００７８】
用語「ジホスホリル」は構造：
【００７９】
【化１４】
2008517912.tif 000015
【００８０】
を有する遊離基をいう。
【００８１】
用語「トリホスホリル」は構造：
【００８２】
【化１５】
2008517912.tif 000016
【００８３】
を有する遊離基をいう。
【００８４】
用語「置換された」は、指定された置換基による複数置換を包含するものとする。複数の置換部分が開示または請求項に記載されている場合、置換された化合物は、独立に１以上の開示または請求項に記載された置換基部分によって、１個または複数個置換されていることができる。
【００８５】
Ｒ３およびＲ４のアミノアシル残基態様におけるＲ７が、式：
【００８６】
【化１６】
2008517912.tif 000017
【００８７】
において水素以外である場合、該アミノアシル残基は不斉中心を含み、個々のＲ−およびＳ−立体異性体ならびにＲＳ−ジアステレオマー混合物を包含するものとする。
【００８８】
用語「５’−三リン酸」とは以下の一般構造式（ＩＩ）を有する本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物のヒドロキシル基の三リン酸エステル誘導体をいう：
【００８９】
【化１７】
2008517912.tif 000018
【００９０】
（ただし、式中、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ５、およびＲ６は上記定義のとおりである）。
また、本発明化合物は該三リン酸エステルの医薬的に許容される塩、ならびに構造式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）にてそれぞれ示される５’−一リン酸および５’−二リン酸エステル誘導体の医薬的に許容される塩をも包含するものとする：
【００９１】
【化１８】
2008517912.tif 000019
【００９２】
「医薬組成物」での場合のような「組成物」という用語は、有効成分および担体を構成する不活性成分を含むもの、ならびに２以上の成分の組み合わせ、複合体化もしくは凝集、または１以上の成分の溶解、または１以上の成分の他の種類の反応もしくは相互作用によって直接または間接に得られるものを包含するものとする。従って本発明の医薬組成物は、本発明の化合物と医薬的に許容される担体とを混合することで得られるあらゆる組成物を包含する。
【００９３】
化合物の「投与」という用語は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを、必要とする個体に提供することを意味するものと理解すべきである。
【００９４】
本発明の別の態様は、ＨＣＶ感染の治療に有用な１以上の薬剤と併用した本発明の化合物によって、ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害する方法、ＨＣＶ複製を阻害する方法、あるいはＨＣＶ感染を治療する方法に関する。そのようなＨＣＶに対して活性な薬剤には、リバビリン、レボビリン（ｌｅｖｏｖｉｒｉｎ）、ビラミジン（ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ）、チモシンα−１、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ＰＥＧ化インターフェロン−α（ＰＥＧインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、インターフェロン−αとレボビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとレボビリンの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。インターフェロン−αには、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン−ラロッシュ社（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，  Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪ）から入手可能なロフェロン（Ｒｏｆｅｒｏｎ）インターフェロンなど）、ＰＥＧ化インターフェロン−α２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（商標名））、インターフェロン−α２ｂ（シェリング社（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ）から入手可能なイントロン（Ｉｎｔｒｏｎ）−Ａインターフェロンなど）、ＰＥＧ化インターフェロン−α２ｂ（ＰｅｇＩｎｔｒｏｎ（商標名））、組換えコンセンサスインターフェロン（インターフェロン・アルファコン（ａｌｐｈａｃｏｎ）−１など）および精製インターフェロン−α製品などがあるが、これらに限定されるものではない。アムゲン社（Ａｍｇｅｎ）の組換えコンセンサスインターフェロンは、インフェルゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ；登録商標）の商品名を有する。レボビリンはリバビリンのＬ−エナンチオマーであり、リバビリンと同様の免疫調節活性が示されている。ビラミジンは、ＷＯ０１／６０３７９（ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡）に開示のリバビリンの類縁体を表す。本発明のこの方法によれば、組み合わせの個々の成分は、分割または単一の組み合わせの形態で、治療の過程における異なる時点で別個に、または同時に投与することができる。従って本発明は、そのような全ての同時または交互の投与法を包含するものと理解すべきであり、「投与」という用語はそれに準じて解釈すべきである。本発明の化合物とＨＣＶ感染の治療に有用な他の薬剤との組み合わせの範囲には基本的に、ＨＣＶ感染治療用のあらゆる医薬組成物とのあらゆる組み合わせが含まれることは明らかであろう。本発明の化合物またはそれの医薬的に許容される塩をＨＣＶに対して活性な第２の治療剤と併用する場合、各化合物の用量は、その化合物を単独で使用する場合と同じであるか、異なり得る。
【００９５】
ＨＣＶ感染の治療においては、本発明の化合物は、ＨＣＶＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害薬である薬剤と併用して投与することもできる。ＨＣＶＮＳ３セリンプロテアーゼは必須のウイルス酵素であり、ＨＣＶ複製阻害の良好な標的であることが報告されている。ＨＣＶＮＳ３プロテアーゼ阻害薬の基質性および非基質性の両方の阻害薬が、ＷＯ９８／２２４９６、ＷＯ９８／４６６３０、ＷＯ９９／０７７３３、ＷＯ９９／０７７３４、ＷＯ９９／３８８８８、ＷＯ９９／５０２３０、ＷＯ９９／６４４４２、ＷＯ００／０９５４３、ＷＯ００／５９９２９、ＧＢ２３３７２６２、ＷＯ０２／４８１１６、ＷＯ０２／４８１７２、およびＵＳＰ  Ｎｏ．６，３２３，１８０に開示されている。ＨＣＶ複製阻害薬の開発およびＨＣＶ感染治療の標的としてのＨＣＶＮＳ３プロテアーゼについては、ディモックの報告に記載されている（Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｃ型肝炎ウイルス感染に対する新しい治療法”，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１））。
【００９６】
リバビリン、レボビリンおよびビラミジンは、細胞内酵素であるイノシンモノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介して、グアニンヌクレオチドの細胞内蓄積を調節することで、抗ＨＣＶ効果を発揮することができる。ＩＭＰＤＨは、デ・ノボのグアニンヌクレオチド生合成における生合成経路に対する速度抑制酵素である。リバビリンは細胞内で容易にリン酸エステル化され、モノリン酸エステル誘導体がＩＭＰＤＨの阻害薬である。そこでＩＭＰＤＨの阻害は、ＨＣＶ複製阻害薬を発見する上での別の有用な標的を代表するものである。従って本発明の化合物は、ＷＯ９７／４１２１１およびＷＯ０１／００６２２（Ｖｅｒｔｅｘに譲渡）に開示のＶＸ−４９７などのＩＭＰＤＨの阻害薬；ＷＯ００／２５７８０（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂに譲渡）に開示のものなどの別のＩＭＰＤＨ阻害薬；またはミコフェノレート・モフェチル（ｍｏｆｅｔｉｌ）［Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎ，４４（Ｓｕｐｐｌ．）：１６５（１９９３）参照］と併用して投与することもできる。
【００９７】
ＨＣＶ感染治療の場合、本発明の化合物は抗ウイルス剤であるアマンタジン（１−アミノアダマンタン）［この薬剤についての詳細な説明については、Ｊ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓ．１２：１−３６（１９８３）参照］との併用で投与することもできる。
【００９８】
本発明の化合物は、ＨＣＶ感染の治療を目的として、文献（Ｒ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ′Ｋｕｒｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：１７５４−１７５９（１９９７）；Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３６：７６１１−７６１４（１９９５）；米国特許第３，４８０，６１３号（１９６９年１１月２５日）；国際特許公開番号ＷＯ０１／９０１２１（２００１年１１月２９日）；国際特許公開番号ＷＯ０１／９２２８２（２００１年１２月６日）；および国際特許公開番号ＷＯ０２／３２９２０（２００２年４月２５日）；国際特許公開番号ＷＯ０４／００２９９９（２００４年１月８日）；国際特許公開番号ＷＯ０４／００３０００（２００４年１月８日）；および国際特許公開番号ＷＯ０４／００２４２２（２００４年１月８日）；これらそれぞれの内容の全体を参照することにより、本明細書に組み込まれる）に開示の抗ウイルス性２′−Ｃ−分岐リボヌクレオシド類と組み合わせることもできる。かかる２′−Ｃ−分岐リボヌクレオシド類には、２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−Ｃ−メチルウリジン、２’−Ｃ−メチルアデノシン、２’−Ｃ−グアノシン、および９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、およびリボースＣ−２’、Ｃ−３’、およびＣ−５’ヒドロキシルの相当するアミノ酸エステル（３’−Ｏ−（Ｌ−バリル）−２’−Ｃ−メチルシチジンおよび５’−リン酸誘導体の相当する任意に置換基を有する環状１，３−プロパンジオールエステルなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９９】
本発明化合物はまたＨＣＶ感染の処置のために、抗ＨＣＶ性を有する他のヌクレオシドとも組合わせ得る；例えば、以下の文献に開示されたものである：ＷＯ０２／５１４２５（２００２年７月４日）、三菱製薬に譲渡；ＷＯ０１／７９２４６、ＷＯ０２／３２９２０、およびＷＯ０２／４８１６５（２００２年６月２０日）、ファルマセット（Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ，Ｌｔｄ．）に譲渡；ＷＯ０１／６８６６３（２００１年９月２０日）、ＩＣＮファーマシューティカルに譲渡；ＷＯ９９／４３６９１（１９９９年９月２日）；ＷＯ０２／１８４０４（２００２年３月７日）、ホフマン−ラ・ロッシュに譲渡；Ｕ．Ｓ．２００２／００１９３６３（２００２年２月１４日）；ＷＯ０２／１００４１５（２００２年１２月１９日）；ＷＯ０３／０２６５８９（２００３年４月３日）；ＷＯ０３／０２６６７５（２００３年４月３日）；ＷＯ０３／０９３２９０（２００３年１１月１３日）：ＵＳ２００３／０２３６２１６（２００３年１２月２５日）；ＵＳ２００４／０００６００７（２００４年１月８日）；ＷＯ０４／０１１４７８（２００４年２月５日）；ＷＯ０４／０１３３００（２００４年２月１２日）；ＵＳ２００４／００６３６５８（２００４年４月１日）；およびＷＯ０４／０２８４８１（２００４年４月８日）。
【０１００】
本発明化合物はまたＨＣＶ感染の処置のために、ＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤とも組合わせ得る；例えば、ＷＯ０１／７７０９１（２００１年１０月８日）、ツラリク（Ｔｕｌａｒｉｋ，Ｉｎｃ．）に譲渡；ＷＯ０１／４７８８３（２００１年月５日）、日本たばこ産業に譲渡；ＷＯ０２／０４４２５（２００２年１月１７日）、ベーリンガー・インゲルハイムに譲渡；ＷＯ０２／０６２４６（２００２年１月２４日）、生物分子研究所（Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  ｄｉ  Ｒｉｃｅｒｃｈｅ  ｄｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅ  Ｐ．Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｓ．Ｐ．Ａ．）に譲渡；およびＷＯ０２／２０４９７（２００２年３月３日）に開示されているものなどである。
【０１０１】
「医薬的に許容される」とは、担体、希釈剤または賦形剤が、製剤の他の成分と適合性でなければならず、それの被投与者に対して有害であってはならないことを意味する。
【０１０２】
医薬的に許容される担体とともに、本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびそれの誘導体を含む医薬組成物も、本発明の範囲に含まれる。本発明の別の例は、上記の化合物のいずれかと、医薬的に許容される担体と組合わせることにより製造される医薬組成物である。本発明の別の例示は、上記記載の化合物のいずれかと、医薬的に許容される担体とを組合わせることによる医薬組成物の製造法である。
【０１０３】
本発明の範囲には、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害に有用な、有効量の本発明の化合物および製薬上許容される担体を含む組成物も含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療に有用な医薬組成物も本発明に含まれ、さらにはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法およびＲＮＡ依存性ウイルス複製、特にＨＣＶ複製の治療方法も含まれる。さらに本発明は、治療上有効量のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性である別の薬剤と組み合わせて、治療上有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物に関するものでもある。ＨＣＶに対して活性な薬剤には、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ＨＣＶＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害薬、インターフェロン−α、ＰＥＧ化インターフェロン−α（ＰＥＧインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、ＰＥＧインターフェロン−αとリバビリンの組み合わせ、インターフェロン−αとレボビリンの組み合わせ、ならびにＰＥＧインターフェロン−αとレボビリンの組み合わせなどがあるが、これらに限定されるものではない。インターフェロン−αには、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン−ラロッシュ社（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪ）から入手可能なロフェロン（Ｒｏｆｅｒｏｎ）インターフェロンなど）、インターフェロン−α２ｂ（シェリング社（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ）から入手可能なイントロン（Ｉｎｔｒｏｎ）−Ａインターフェロンなど）、コンセンサスインターフェロンおよび精製インターフェロン−α製品などがあるが、これらに限定されるものではない。リバビリンおよびそれのＨＣＶに対する活性についての議論は、サンダースらの報告（Ｊ．Ｏ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒａｙｂｕｃｋ，″Ｉｎｏｓｉｎｅ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ″，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２０１−２１０（２０００））を参照。
【０１０４】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用の医薬製造における、フッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびその誘導体ならびにその医薬組成物の使用を提供する。本発明のさらに別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害、および／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用の医薬としての、フッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物およびその誘導体ならびにそれの医薬組成物を提供する。
【０１０５】
本発明の医薬組成物は、有効成分としての構造式Ｉの化合物またはそれの医薬的に許容される塩を含有し、医薬的に許容される担体および適宜に他の治療成分を含むこともできる。
【０１０６】
その組成物には、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉および静脈）、眼（眼球）、肺（経鼻もしくは口腔吸入）または経鼻投与に好適な組成物などがある。ただし、ある場合における最も好適な経路は、治療対象となる状態の性質および重度、ならびに有効成分の性質によって決まる。その組成物は簡便には、単位製剤で提供することができ、製薬業界で公知の方法によって製造することができる。
【０１０７】
実際の使用において構造式Ｉの化合物は、従来の医薬配合法に従って、医薬担体と十分に混和して有効成分として組み合わせることができる。担体は、経口または非経口（静脈投与を含む）などの投与に望まれる剤型に応じて、非常に多様な形態を取り得る。経口製剤用組成物の製造においては、通常の医薬媒体を用いることができ、それには例えば、懸濁液、エリキシル剤および液剤のような経口液体製剤の場合には、水、グリコール類、オイル類、アルコール類、香味剤、保存剤、着色剤などがあり；あるいは例えば粉剤、硬および軟カプセルおよび錠剤などの経口固体製剤の場合には、デンプン類、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体があり、液体製剤より固体製剤の方が好ましい。
【０１０８】
投与が容易であることから、錠剤およびカプセルが最も有利な経口単位製剤を代表するものであり、その場合には固体の医薬担体を用いることは明らかである。所望に応じて、錠剤を標準的な水系もしくは非水系法によってコーティングすることができる。そのような組成物および製剤は、少なくとも０．１％の活性化合物を含むものでなければならない。当然のことながら、その組成物注の活性化合物のパーセントは変動し得るものであり、簡便にはその単位の重量の約２％〜約６０％とすることができる。そのような治療上有用な組成物における活性化合物の量は、有効な用量が得られる程度のものである。活性化合物はまた、例えば液体滴剤または噴霧剤として経鼻投与することもできる。
【０１０９】
錠剤、丸薬、カプセルなどは、トラガカントガム、アカシア、コーンスターチもしくはゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；ショ糖、乳糖もしくはサッカリンなどの甘味剤も含むことができる。単位製剤がカプセルである場合にそれは、上記の種類の材料以外に、脂肪油などの液体担体を含むことができる。
【０１１０】
各種の他の材料が、コーティング剤として、あるいは単位製剤の物理形状を変えるために存在していても良い。例えば錠剤は、シェラック、糖またはその両方によってコーティングすることができる。シロップまたはエリキシル剤は、有効成分以外に、甘味剤としてのショ糖、保存剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素およびチェリーもしくはオレンジ香味などの香味剤を含むことができる。
【０１１１】
構造式Ｉの化合物は、非経口投与することもできる。これら活性化合物の液剤または懸濁液は、ヒドロキシ−プロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合して水で調製することができる。グリセリン、液体ポリエチレングリコール類およびオイル中でのそれの混合物で、分散液を調製することもできる。通常の保管および使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防止するために保存剤を含有する。
【０１１２】
注射に好適な医薬剤型には、無菌の水溶液または分散液ならびに無菌注射溶液もしくは分散液の即時調製用の無菌粉剤などがある。いずれの場合も、その製剤は無菌でなければならず、容易に注射できる程度の流動性を有するものでなければならない。それは、製造および保管条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して防腐しなければならない。担体は、例えば水、エタノール、多価アルコール（例：グリセリン、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物ならびに植物油を含む溶媒または分散媒体であることができる。
【０１１３】
哺乳動物、特にヒトに対して、治療上有効な用量の本発明の化合物を提供するため、いずれかの好適な投与経路を用いることができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼、肺、経鼻投与などを用いることができる。製剤には、錠剤、トローチ、分散液、懸濁液、液剤、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルなどがある。好ましくは式Ｉの化合物は、経口投与する。
【０１１４】
ヒトへの経口投与の場合に用量範囲は、分割投与で０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇである。１実施形態において用量範囲は、分割投与で０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では用量範囲は、分割投与で０．５〜２０ｍｇ／ｋｇである。経口投与の場合、組成物は好ましくは、有効成分１．０〜１０００ｍｇ、特には治療対象患者への用量を症状に応じて調節するために、１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００および１０００ｍｇ含む錠剤またはカプセルの形態で提供される。
【０１１５】
使用される有効成分の有効投与量は、用いられる特定の化合物、投与形態、治療される状態ならびに治療される状態の重度に応じて変動し得る。そのような用量は、当業者であれば容易に確認することができる。その投与法を調節して、至適な治療応答を得ることができる。
【０１１６】
本発明の化合物は１以上の不斉中心を有することから、ラセミ体およびラセミ混合物、単独のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして得られる場合がある。本発明は、下記の構造式で示したような５員フラノース環についてβ−Ｄ立体化学配置を有するフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物、すなわち、５員フラノース環のＣ−１およびＣ−４での置換基がβ−立体化学配置（太字線によって示した「上」向き）を有するフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物を包含するものである
【０１１７】
【化１９】
2008517912.tif 000020
【０１１８】
本明細書に記載された化合物の一部のものは、オレフィン二重結合を含み、特に断りのない限り、ＥおよびＺの幾何異性体両方を含むことを意味する。
【０１１９】
本明細書に記載された化合物の一部のものは、ケト−エノールおよびイミン−エナミン互変異性体などの互変異性体として存在し得る。個々の互変異性体ならびにその混合物は構造式（Ｉ）で示される化合物に包含される。本発明化合物に包含されるものとするケト−エノールおよびイミン−エナミン互変異性体の例は以下に示される：
【０１２０】
【化２０】
2008517912.tif 000021
【０１２１】
構造式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、適当な溶媒（例えば、メタノールまたは酢酸エチルまたはその混合物）からの分別結晶化により、または光学活性の固定相を用いるキラルクロマトグラフィーを介して個々のジアステレオマーに分離することができる。
【０１２２】
あるいは、構造式（Ｉ）で示される化合物のいずれかの立体異性体は、既知立体配置の光学的に純粋な出発原料または試薬を用いて、立体特異的合成により入手し得る。
【０１２３】
本発明の化合物は、医薬的に許容される塩の形で投与することができる。「医薬的に許容される塩」という用語は、無機もしくは有機塩基および無機もしくは有機酸などの医薬的に許容される無毒性の塩基または酸から製造される塩を指す。「医薬的に許容される塩」に包含される塩基性化合物の塩は、一般に遊離塩基を好適な有機もしくは無機酸と反応させることで製造される本発明の化合物の無毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩（ｅｓｔｏｌａｔｅ）、エシル酸塩（ｅｓｙｌａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチルブロマイド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボネート（ｅｍｂｏｎａｔｅ））、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート（ｔｅｏｃｌａｔｅ）、トシル酸塩、トリエチオジドおよび吉草酸塩などがあるが、これらに限定されるものではない。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、それの好適な製薬上許容される塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、第二マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛の塩などの無機塩基から誘導される塩などがあるが、これらに限定されるものではない。特に好ましいものは、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。製薬上許容される有機無毒性塩基から誘導される塩には、１級、２級および３級アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂の塩などがあり、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどの塩がある。
【０１２４】
また、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）、リン酸［−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２］、またはアルコール基が本発明化合物に存在する場合、カルボン酸誘導体の医薬的に許容されるプロドラッグエステル、例えば、メチル、エチル、またはピバロイルオキシメチルエステル；フッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシドの５’−リン酸誘導体の医薬的に許容されるプロドラッグエステル（５’−一リン酸、５’−二リン酸、および５’−三リン酸を含む）；またはリボースＣ−２’、Ｃ−３’、およびＣ−５’ヒドロキシルのプロドラッグアシル誘導体（Ｏ−酢酸エステル、Ｏ−マレイン酸エステル、およびＯ−アミノアシルなど）などを採用し得る。持続性放出またはプロドラッグ製剤として使用するために、生物利用能、組織分布、溶解性、および加水分解特性を改変するための、技術上既知のこれらエステルおよびアシル基が包含される。また、Ｃ−２’およびＣ−３’加水分解の５員環状炭酸エステル誘導体も包含される。意図した誘導体はインビボで容易に所望の化合物に変換し得る。従って、本発明の治療方法においては、用語の「投与する」および「投与」は、記載されたウイルス感染を具体的に開示されている化合物により、または具体的に開示されてはいないが、ヒト患者を含む哺乳動物に投与した後、インビボで特定の化合物に変化する化合物により治療することも含むことを意味する。適当なプロドラッグ誘導体の選択および調製の従来の方法は、例えば、文献（Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（プロドラッグの設計）”ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）に記載されている；これらの内容はいずれも、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１２５】
本発明化合物の調製：
本発明化合物調製のための出発原料は、４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−９）であり、その合成について反応工程図１に示す。
【０１２６】
【化２１】
2008517912.tif 000022
【０１２７】
５−フルオロ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−４）の調製：
工程Ａ：５−ブロモ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−２）
４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−１）（１．５３ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）に、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＮ−ブロモコハク酸イミド（１．７８ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応混合物を０℃で３０分間攪拌し、次いで室温で１時間攪拌した。メタノール（２５ｍＬ）を加え、反応混合物をさらに１時間攪拌した。溶媒を留去し、残渣をメタノールから結晶化して標題化合物を白色固体として得た。
【０１２８】
工程Ｂ：５−（トリメチルスタンニル）−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−３）
工程Ａの化合物（０．９２ｇ；４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２５ｍＬ）に、ｎ−ＢｕＬｉ  （２．５Ｍ／ヘキサン溶液；３．４８ｍＬ）を−７８℃で滴下した。添加後、反応混合物を−７８℃でさらに３０分間攪拌した。この溶液に塩化トリメチルスズ（０．８８ｇ、４．４ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（８ｍＬ）を１０分間で滴下した。反応混合物をゆっくりと室温とし、室温で終夜攪拌した。飽和塩化アンモニウム水（６０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３×７０ｍＬ）で抽出した。併せた有機抽出液を食塩水で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上で精製し、標題化合物を無色固体として得た。
【０１２９】
工程Ｃ；５−フルオロ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−４）
工程Ｂの化合物（１．９７ｇ；６．２０ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ溶液（６０ｍＬ）に、［１−（クロロメチル）−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタン・ビス（テトラフルオロボレート）］（セレクトフルオル（ＳＥＬＥＣＴＦＬＵＯＲ；登録商標；フッ素化試薬）（２．４０ｇ；６．５ｍｍｏｌ）を一度に加え、反応混合物を室温で７時間攪拌した。白色沈殿を濾去し、濾液を蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上酢酸エチル／ヘキサン（３：７）を溶出液として精製した。生成物を含むフラクションを集め、減圧留去し、標題化合物を無色固体として得た。
【０１３０】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ８．５３（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）；１９Ｆ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−１７１．５。
【０１３１】
２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（ｐ−トルオイル）−Ｄ−リボフラノース（１−６）の調製：
３−Ｏ−ベンジル−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｃ−メチル−α−Ｄ−アロフラノース（１−５）（調製法については、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，４４：２７５−２８３（１９７５）参照）（５．０ｋｇ；１５．４ｍｏｌ）、ピリジン（３．７ｋｇ；４６．２ｍｏｌ）およびアセトニトリル（３５Ｌ）からなる溶液に、塩化ｐ−トルオイル（５．２ｋｇ；３３．９ｍｏｌ）を加え、反応物を５０〜５５℃で１２時間加熱した。６．０Ｌ（４６．２ｍｏｌ）の４８ｗｔ％ＨＢＦ４（テトラフルオロホウ酸）の水溶液（９Ｌ）を５０〜５５℃で加えた。２時間後に、アセトニトリル１０Ｌを留去し、１０Ｌのアセトニトリルを加えた。変換率９７％で、アセトニトリル１０Ｌを留去し、反応溶液を０〜５℃に冷やした。過ヨウ素酸（４．２ｋｇ；１８．５ｍｏｌ）の水溶液（１０Ｌ）を加えた。反応物を３０分間熟成した後、酢酸イソプロピル（３５Ｌ）および水（１０Ｌ）を加えた。有機相を水（２５Ｌ），次いでＮａＨＣＯ３水（２０Ｌ）、５％チオ硫酸ナトリウム水（１５Ｌ）、および水（１５Ｌ）で洗浄した。酢酸イソプロピル溶液を１０〜１５Ｌに濃縮し、メタノール４０Ｌを加えた。この溶液を０℃に冷却し、ジイソプロピルアミン（０．７８ｋｇ；７．７ｍｏｌ）を加えた。２日間０℃に放置した後、１Ｎ−ＨＣｌ水（７．７Ｌ）を０〜５℃で加え、次いで酢酸イソプロピル（３０Ｌ）および水（４０Ｌ）を加えた。有機相を１Ｎ−ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３、および食塩水で洗った。有機相を共沸蒸留により乾燥し、活性炭で処理した。炭素を濾去し、得られる溶液を酢酸イソプロピルで７５Ｌに希釈し、２４時間、水素化した（４５ｐｓｉ、５０℃、１．５ｋｇの１０％Ｐｄ／Ｃ）。濾液を１５Ｌに濃縮し、ヘプタン６０Ｌを５０℃で加えた。結晶性産物を濾取し、２０％酢酸イソプロピル／ヘプタン１０Ｌで洗浄した。乾燥して、４．０３ｋｇの所望のジオール（１−６）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：ＣＤＣｌ３中のα：β異性体の比は約５：１であった。主要異性体：δ７．９５−７．９０（ｍ，４Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．５３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６５−４．４９（ｍ，３Ｈ），３．０８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，１Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ；マイナー異性体：δ７．９５−７．９０（ｍ，４Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．１６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６６−４．４９（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｓ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１３２】
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−９）の調製：
工程Ａ：１，２−アンヒドロ−３，５−ジ−Ｏ−（ｐ−トルオイル）−２−Ｃ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−７）
７２Ｌの容器に、乾燥ジクロロメタン（３２Ｌ）、トリエチルアミン（３．０Ｌ）およびジオール（２−２）（３．４４ｋｇ、９０ｗｔ％純度）を入れた。この混合物を３０℃に温め、次いで、塩化メタンスルホニル（０．７９Ｌ）を４０分かけて加えた。１時間後、バッチをｐＨ７のバッファー（２０Ｌ）とメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４４Ｌ）に分配した。有機相を１Ｍ−ＮａＣｌ水（３８Ｌ）で洗い、次いでトルエンに替えて減圧蒸留し、次いで約９Ｌまで濃縮した。得られるエポキシド溶液をそのまま工程Ｂにて使用した。
【０１３３】
工程Ｂ：４−クロロ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（ｐ−トルオイル）−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−８）
４−クロロ−５−フルオロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−４）（２８．４ｇ；０．１６５ｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液（３００ｍＬ）に、６０％水素化ナトリウム（６．６ｇ；０．１６５ｍｏｌ）を室温で分けて添加した。添加後、反応混合物を６０℃で１時間攪拌した。この反応混合物に、１，２−アンヒドロ−３，５−ジ−Ｏ−（ｐ−トルオイル）−２−Ｃ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−７）（６３．４ｇ；０．１６６ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２００ｍＬ）を加え、反応混合物を６０℃で１８時間加熱した。反応混合物を室温に冷やし、水（１Ｌ）と酢酸エチル（２Ｌ）に注入した。有機抽出液を水（５００ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発乾固させた。残渣は１０〜４０％酢酸エチル／ヘキサンを溶出液とするシリカゲル上で精製した。生成物を含むフラクションを併わせて、濃縮して泡状物とし、これを以下の工程Ｃでそのまま使用した。
【０１３４】
工程Ｃ：４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−９）
４−クロロ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（ｐ−トルオイル）−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−８）（２９．４ｇ；０．０５３ｍｏｌ）の無水アンモニア溶液（３００ｍＬ）を密封容器中で、８５℃で４８時間加熱した。反応混合物を室温とし、残渣をメタノール（２００ｍＬ）中にスラリー化し、濾過し、濾液をシリカゲル（２００ｇ）上に吸着させ、０〜３０％メタノール／塩化メチレンを溶出液とするクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含むフラクションを併わせて、溶媒を留去して標題化合物（１−９）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ８．０７（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），４．０９−３．９５（ｍ，３Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１２．５Ｈｚ，１Ｈ）；１９Ｆ−ＮＭＲ（ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ−１７０．４；マス・スペクトル：３２１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０１３５】
中間体（１−９）における６−アミノ−７−デアザプリン（７−デアザアデニン）環のＣ−２位置へのアミノ基の導入は、文献（Ｈ．Ｚｈａｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：７８３２−７８３５（１９９７））記載の合成法に従い、反応工程図２に例示するように実施した。２，６−ジアミノ−７−デアザプリン環は文献（Ｋ．Ａｌａｒｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，４１：７２１１−７２１５（２０００））記載の方法に従い、反応工程図３に例示するように、７−デアザグアニン系に変換することができる。
【０１３６】
以下の実施例は本発明化合物の調製に使用した条件を説明したものである。これらの実施例はどのような方法によっても本発明の範囲を限定しようとするものではなく、またそのように解釈すべきではない。ヌクレオシドおよびヌクレオチドの合成技術に習熟するものは、以下の調製法の条件とプロセスに既知の変更を加え、本発明のこれら化合物および他の化合物を調製し得ることを容易に認識し得よう。温度は特に断りのない限り、摂氏で表す。
【０１３７】
【化２２】
2008517912.tif 000023
【実施例１】
【０１３８】
２，４−ジアミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−４）
工程Ａ：４−アミノ−５−フルオロ−３−Ｎ−オキソ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−１）
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−９）（２６８ｍｇ；０．８９９ｍｍｏｌ）の５０％メタノール／水溶液（２０ｍＬ）に、ｍ−クロロ過安息香酸（４４４ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間攪拌した。溶媒を留去し、残渣をトルエンと２回共沸蒸留し、標題化合物をベージュ色固体として得た。
【０１３９】
工程Ｂ：２，４−ジアミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−４）
臭化シアン（７５ｍｇ、０．７０８ｍｍｏｌ）の水溶液（３ｍＬ）に、４−アミノ−５−フルオロ−３−Ｎ−オキソ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−１）（１６０ｍｇ、０．５０９ｍｍｏｌ）の水溶液（３ｍＬ）を０℃で加えた。得られた溶液を０℃で１．５時間攪拌した。溶媒を留去し、トルエンとの共沸蒸留に付した。残渣にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）とトリエチルアミン（０．２５ｍＬ、１．７９ｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で４５分間攪拌した。ヨードメタン（０．２５ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を分けて添加し、反応混合物を室温暗所で１．５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣に０．２５Ｍ水酸化ナトリウム水（１０ｍＬ）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応混合物を１Ｍ−ＨＣｌで中和し、エタノール（１０ｍＬ）で希釈し、８時間６０℃で加熱した。室温に冷却した後、濃水酸化アンモニウム（１２ｍＬ）を加え、反応混合物を９０℃に加熱してラネーニッケルを加えた。１５分後に、熱時反応混合物をソルカ−フロック（ｓｏｌｋａ−ｆｌｏｃ）で濾過し、溶媒を留去し、残渣をメタノール／塩化メチレンを溶出液とするシリカゲル上で精製した。生成物を含むフラクションを蒸発させて標題化合物（２−４）を固体として得た。
【０１４０】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ７．３（ｓ，１Ｈ），６．１（ｓ，１Ｈ），４．０（ｍ，３Ｈ），３．８（ｄ，１Ｈ），０．９（ｓ，３Ｈ）；
マス・スペクトル：３１４（Ｍ＋１）。
【０１４１】
【化２３】
2008517912.tif 000024
【実施例２】
【０１４２】
２−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（３−２）
この化合物は、文献（Ｋ．Ａｌａｒｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，４１：７２１１−７２１５（２０００）．）記載の条件に従い、ＤＭＦ中の化合物（２−４）を、１，２−ビス［（ジメチルアミノ）メチレン］ヒドラジンで処理してトリアゾール（３−１）とし、これをＤＭＳＯ中、１Ｎ−ＮａＯＨ水で加水分解することにより調製する。
【０１４３】
本発明の２−フルオロ−２−Ｃ−メチルリボヌクレオシド（構造式（Ｉ）におけるＲ２＝Ｆ）は、ヌクレオシドとヌクレオチド化学の実践において確立された合成方法に従って調製する。説明としては、反応工程図４〜６に示すように、化合物（６−３）（実施例３）の調製により説明する。Ｄ−リボース（４−１）を先ず保護する。この場合、酢酸エステルおよび安息香酸エステルなどのエステルが適当な保護基を提供するが、別の保護基も同様に使用し得る。エステル形成はＤ−リボースと適切なハロゲン化アシルまたはアシル無水物とを、場合により、溶媒、例えば、ジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、およびジクロロメタンなどの存在下に反応させることにより達成される。このような変換は化学文献上周知であり、その例は文献（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（有機合成における保護基）”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９９）に見出し得る。
【０１４４】
【化２４】
2008517912.tif 000025
【０１４５】
中間体（４−３）は多くの方法で製造し得る。反応工程図４においては、ホルブルッゲン（Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ）反応（「ヌクレオシドの合成」；Ｈ．Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｒｕｈ−Ｐｏｈｌｅｎｚ，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ｖｏｌ．５５，ｐｐ１−６３０，２０００）を用いて、ヌクレオ塩基５−フルオロ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−４）を結合させて、保護ヌクレオシド（４−３）を形成する。次いで、エステル保護基を適切な方法、例えば、酸−または塩基−触媒加水分解およびエステル交換反応（例えば、メタノール中ナトリウムメトキシドを用いる）により除去し、（４−４）を得る。
【０１４６】
次に、Ｃ−２’メチル基を反応工程図５に示すように導入する。Ｃ−２’ヒドロキシ基の直交の操作を可能とするために、５’および３’位置のヒドロキシル基を先ず保護する。これは多くの方法で達成し得るが、その一つの方法を反応工程図５に示す。前掲の文献（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９９）には多数の実例が含まれている；特に適当なのは、テトライソプロピルジシロキサニリデン環状エーテル（５−１）である。
【０１４７】
【化２５】
2008517912.tif 000026
【０１４８】
次いで、残りの遊離ヒドロキシル基は適当な酸化法、例えば、スワンもしくはモファット酸化またはデス−マーチン・ペルヨーディナン試薬の適用により酸化してケトン（５−２）とする。かかるプロセスの例は、関連の化学文献（例えば、“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ’，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）に見出し得る。次いで、ケトン（５−２）は適当な有機金属試薬、例えば、メチルリチウムおよびハロゲン化メチルマグネシウムなどと反応させる。かかる反応は、好ましくは、低温で、テトラヒドロフランおよびジエチルエーテルなどの適切な溶媒中で実施する。この例では、メチル基が立体障害の少ない面から導入され、この立体制御が一方の異性体を優先的に産生する。かかる立体制御の例は関連の化学文献（例えば、“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｅｒｎｅｓｔ  Ｌ．Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓａｍｕｅｌ  Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９４．）に見出し得る。次いで、反応工程図６に示すようにフルオロ基をＣ−２’位に導入する。
【０１４９】
【化２６】
2008517912.tif 000027
【０１５０】
３’および５’位置に存在するヒドロキシル基は上記のように選択的に保護する。低級アルキルまたは単純な芳香族エステル、例えば、酢酸エステルおよび安息香酸エステルの使用が有利である。選択される反応条件は、立体的に障害のあるＣ−２’ヒドロキシ基が影響を受けずにそのまま残るような条件である。フッ素の導入は、三フッ化ジエチルアミノイオウ（ＤＡＳＴ）または他の適当なフッ素化試薬を使用し、場合により芳香族炭化水素、テトラヒドロフラン、およびクロロホルムなどの溶媒の存在下、低温、室温または高温で実施する。かかる変換の例は米国特許公開２００５／０００９７３７（２００５年１月１３日公開）に記載がある。所望のヌクレオシド（６−３）は、エステル保護基の加水分解除去と、引き続くヌクレオ塩基に存在する塩素原子とアンモニアとの置換により得られる。しかし、後の２工程の操作は、例えば、メタノールなどの適当な溶媒中、室温または高温で、必要なら高圧下に、アンモニアを使用して、ワンポットで行うのが有利である。
【実施例３】
【０１５１】
【化２７】
2008517912.tif 000028
【０１５２】
４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
工程Ａ：
【０１５３】
【化２８】
2008517912.tif 000029
【０１５４】
Ｄ−リボース（５．００ｇ；３３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４６ｍＬ、３３０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（８１０ｍｇ、６．６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）溶液に、塩化ｐ−トルオイル（２２ｍＬ、１６５ｍｍｏｌ）を滴下処理し、室温で３時間攪拌を続けた。３００ｇの氷上に注入して反応を停止させた。氷が融けた後、粗生成物をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、溶媒を減圧留去した。残った油状残渣をアセトンで練和した。溶媒を傾斜法により除去し、固形残渣をイソプロピルアルコール（２００ｍＬ）から結晶化した。生成物を次工程で使用した。
工程Ｂ：
【０１５５】
【化２９】
2008517912.tif 000030
【０１５６】
本化合物は文献（Ｈ．Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ  ａｎｄ  Ｕ．Ｎｉｅｄｂａｌｌａ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３９：３６５４−３６６０（１９７４））記載の手法を用いて合成する。この変換に使用される４−クロロ−５−フルオロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−４）は文献（Ａ．Ｂ．Ｅｌｄｒｕｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：５２８４（２００４））記載の方法に従って調製する。
工程Ｃ：
【０１５７】
【化３０】
2008517912.tif 000031
【０１５８】
本化合物は文献（Ｋ．Ｌ．Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１４：３５１７−３５２０（２００４））記載の方法に従って、工程Ｂの生成物から合成する。
工程Ｄ：
【０１５９】
【化３１】
2008517912.tif 000032
【０１６０】
本化合物は文献（Ｇ．Ｇａｕｂｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，４５：５６２９−５６３２（２００４））に公開された方法を用いて、工程Ｃの生成物から出発して合成する。
工程Ｅ：
【０１６１】
【化３２】
2008517912.tif 000033
【０１６２】
本化合物は文献（Ｖ．Ｌ．Ｍｏｏｒｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１：１４０６６−１４０７５（２００２））記載の方法に従って、工程Ｄの生成物から合成する。
工程Ｆ：
【０１６３】
【化３３】
2008517912.tif 000034
【０１６４】
本化合物は文献（Ｖ．Ｌ．Ｍｏｏｒｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１：１４０６６−１４０７５（２００２））記載の方法に従って、工程Ｅの生成物から合成する。
工程Ｇ：
【０１６５】
【化３４】
2008517912.tif 000035
【０１６６】
本化合物は文献（Ｍ．Ｇａｌｌｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５７：５７０７−５７１３（２００１））記載の方法を用いて、工程Ｆの生成物から合成する。
工程Ｈ：
【０１６７】
【化３５】
2008517912.tif 000036
【０１６８】
本ジエステルは文献（Ｍ．Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３５：３９６７−３９７０（１９８７））記載の方法に従って、工程Ｇの生成物から合成する。
工程Ｉ：
【０１６９】
【化３６】
2008517912.tif 000037
【０１７０】
本化合物は文献（米国特許公開２００５／０００９７３７）記載の方法に従って、工程Ｈの生成物をＤＡＳＴで処理することにより調製する。
工程Ｊ：
【０１７１】
【化３７】
2008517912.tif 000038
【０１７２】
実施例３はＵＳＰ６，７７７，３９５の実施例６２の工程Ｆに記載された条件に従って、工程Ｉの化合物をメタノール性アンモニアで処理して合成する；この文献の内容はいずれも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例４】
【０１７３】
ヌクレオシド５’−三リン酸
本発明のヌクレオシド５’−三リン酸は文献（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１００：２０４７（２０００））記載の一般的方法に従って調製された。
【実施例５】
【０１７４】
ヌクレオシド５’−三リン酸の精製と純度分析
三リン酸エステルは、３０×１００ｍｍのモノＱカラム（ファルマシア）および５０ｍＭトリスのバッファー系（ｐＨ８）を使用するアニオン交換（ＡＸ）クロマトグラフィーにより精製した。溶出勾配は一般的に２本のカラム容積で６．５ｍＬ／分として、４０ｍＭ−ＮａＣｌないし０．８Ｍ−ＮａＣｌとした。アニオン交換クロマトグラフィーからの適切なフラクションを集め、ルナ（Ｌｕｎａ）Ｃ１８  ２５０×２１ｍｍカラム（フェノメネックス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ））による逆相（ＲＰ）クロマトグラフィーにより、流速１０ｍｌ／分で脱塩した。溶出勾配は一般に、５ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＡ）の一定濃度で、１％〜９５％メタノール（１４分）とした。
【０１７５】
精製した三リン酸エステルのマス・スペクトルは、ヒューレット−パッカード（パロアルト、カリフォルニア）ＭＳＤ１１００上、オンラインＨＰＬＣ質量分析を用いて測定した。ＲＰ  ＨＰＬＣには、フェノメネックス・ルナ（Ｃ１８（２））、１５０×２ｍｍ、プラス３０×２ｍｍガードカラムを用いた。アセトニトリル／２０ｍＭ−ＴＥＡＡ（酢酸トリメチルアンモニウム）（ｐＨ７）の０〜５０％直線勾配（１５分）は、マイナスイオン形成モードのマス・スペクトル検出と直接連結して実施した。窒素ガスとニューマティック・ネブライザーを用いて電子スプレーを生成させた。質量範囲１５０〜９００をサンプルとした。分子質量はＨＰケムステーション（Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ）分析パッケージを用いて測定した。
【０１７６】
精製した三リン酸エステルの純度は分析用ＲＰおよびＡＸ  ＨＰＬＣにより決定した。フェノメネックス・ルナまたはジュピターカラム（２５０×４．６ｍｍ）、５μｍ粒径によるＲＰ  ＨＰＬＣは一般的に１００ｍＭ−ＴＥＡＡ（ｐＨ７）中、２〜７０％アセトニトリル勾配（１５分）で実施した。ＡＸ  ＨＰＬＣは１．６×５ｍｍのモノＱカラム（ファルマシア）で実施した。三リン酸エステルは、５０ｍＭトリス（ｐＨ８）の一定濃度で、０〜０．４Ｍ−ＮａＣｌにより溶出した。三リン酸エステルの純度は、一般的に＞８０％であった。
【０１７７】
生物検定（アッセイ法）
ＨＣＶＮＳ５ＢポリメラーゼおよびＨＣＶ複製の阻害を測定するのに用いたアッセイについて、以下に説明する。
【０１７８】
本発明の化合物のＨＣＶＮＳ５ＢＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害薬としての有効性を、以下のアッセイで測定した。
【０１７９】
Ａ．ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害アッセイ
このアッセイを用いて、本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド三リン酸がヘテロメリックＲＮＡ鋳型上のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の酵素活性を阻害する能力を測定した。
【０１８０】
手順
アッセイ緩衝液条件：（５０μＬ−総量／反応）
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５
５０μＭ  ＥＤＴＡ
５ｍＭ  ＤＴＴ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
８０ｍＭ  ＫＣｌ
０．４Ｕ／μＬ  ＲＮＡｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ、原液は４０単位／μＬである）
０．７５μｇ  ｔ５００（Ｃ型肝炎ゲノムのＮＳ２／３領域からの配列によるＴ７流出（ｒｕｎｏｆｆ）転写を用いて得た５００−ｎｔＲＮＡ）
１．６μｇ  精製Ｃ型肝炎ＮＳ５Ｂ（Ｃ−末端切断した２１アミノ酸で形成）
１μＭＡ、Ｃ、Ｕ、ＧＴＰ（ヌクレオシド三リン酸混合物）
［α−３２Ｐ］−ＧＴＰまたは［α−３３Ｐ］−ＧＴＰ。
【０１８１】
該ヌクレオシド三リン酸については、最終濃度１００μＭまでの各種濃度で試験を行った。
【０１８２】
酵素および鋳型ｔ５００を含む適切な容量の反応緩衝液を調製した。本発明のヌクレオシド三リン酸をピペットを用いて９６ウェルプレートのウェルに入れた。放射能標識したＧＴＰを含むヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）の混合物を調製し、ピペットで９６ウェルプレートに入れた。酵素−鋳型反応溶液を加えることで反応開始し、室温で１〜２時間反応を進行させた。
【０１８３】
０．５Ｍ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０  ２０μＬを加えることで反応を停止した。反応停止溶液をＮＴＰに加えてから反応緩衝液を加えるブランク反応を含めた。
【０１８４】
反応停止した反応液５０μＬをＤＥ８１フィルター円板（ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ））にスポット添加し、３０分間乾燥させた。フィルターを０．３Ｍギ酸アンモニウムｐＨ８で洗浄した（洗浄液１ｍＬ中のｃｐｍが１００未満となるまで１５０ｍＬ／洗浄で実施する。通常は６回の洗浄）。フィルターについて、シンチレーションカウンターにおいて５ｍＬシンチレーション液中でのカウンティングを行った。
【０１８５】
阻害パーセントを、阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って計算した。
【０１８６】
ＨＣＶＮＳ５Ｂポリメラーゼアッセイで調べた代表的化合物は、１００μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０１８７】
Ｂ．ＨＣＶＲＮＡ複製阻害アッセイ
本発明の化合物について、サブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞におけるＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの複製に影響する能力も評価した。このアッセイの詳細について、以下に説明する。このレプリコンアッセイは、ローマンらの報告に記載の方法の変法である（Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎ，Ｆ．Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ−Ｏ．Ｋｏｃｈ，Ｕ．Ｈｅｒｉａｎ，Ｌ．Ｔｈｅｉｌｍａｎｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，″Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｕｂ−ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ａ  Ｈｅｐａｔｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ″，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１１０（１９９９））。
【０１８８】
プロトコール
このアッセイは、ｉｎ  ｓｉｔｕでのリボヌクレアーゼ保護、シンチレーション近似に基づくプレートアッセイ（ＳＰＡ）であった。細胞１００００〜４００００個を、９６ウェルのサイトスター（ｃｙｔｏｓｔａｒ）プレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で、０．８ｍｇ／ｍＬのＧ４１８を含む培地１００〜２００μＬ中で平板培養した。０〜１８時間の時点で、１％ＤＭＳＯ中１００μＭまでの各種濃度で化合物を細胞に加え、次に２４〜９６時間培養を行った。細胞を固定し（２０分、１０％ホルマリン）、浸透性とし（２０分、０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウイルスゲノムに含まれている（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（または他の遺伝子）に対して相補性である一本鎖３３ＰＲＮＡプローブでハイブリダーゼーションを行った（終夜、５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、加熱して６５℃とし、トップカウント（Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔ）でカウンティングを行った。複製の阻害を、毎分カウント数（ｃｐｍ）における低下として読み取った。
【０１８９】
サブゲノムレプリコンを含むように選択したヒトＨｕＨ−７肝癌細胞は、ＨＣＶ５′非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択可能マーカー、ＥＭＣＶＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）およびＨＣＶ非構造蛋白ＮＳ３〜ＮＳ５Ｂからなる細胞質ＲＮＡとそれに続く３′ＮＴＲを有する。
【０１９０】
複製アッセイで調べた代表的な化合物は、１００μＭ未満のＥＣ５０値を示した。
【０１９１】
本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物について、以下に記載のカウンタースクリーニング（ｃｏｕｎｔｅｒｓｃｒｅｅｎ）で、細胞傷害性および抗ウイルス特異性の評価も行った。
【０１９２】
Ｃ．カウンタースクリーニング
本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物がヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を、以下のアッセイで測定した。
【０１９３】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼαおよびβの阻害
反応条件
反応容量５０μＬ。
【０１９４】
反応緩衝液成分
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５
２００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミン
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  ｐ−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０１９５】
酵素および鋳型
０．０５ｍｇ／ｍＬギャップ（ｇａｐｐｅｄ）魚精子ＤＮＡ鋳型
０．０１Ｕ／μＬ  ＤＮＡポリメラーゼαまたはβ。
【０１９６】
ギャップ魚精子ＤＮＡ鋳型の製造
活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ７００７６）５００μＬに、１Ｍ  ＭｇＣｌ２  ５μＬを加える。
昇温させて３７℃とし、６５Ｕ／μＬのエキソヌクレアーゼＩＩＩ（ギブコＢＲＬ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）１８０１３−０１１）３０μＬを加える。
３７℃で５分間インキュベートする。
６５℃で１０分間加熱することで、反応を終了させる。
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で平衡としたバイオ−スピン（Ｂｉｏ−ｓｐｉｎ）６クロマトグラフィーカラム（バイオ−ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）７３２６００２）に小分けサンプル５０〜１００μＬを負荷する。
１０００×ｇで４分間遠心することで溶離を行う。
溶出液を合わせ、２６０ｎｍでの吸光度を測定して、濃度を求める。
【０１９７】
ＤＮＡ鋳型を適切な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５で希釈し、酵素を２ｍＭ  β−メルカプトエタノールおよび１００ｍＭ  ＫＣｌを含む適切な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで希釈した。鋳型および酵素をピペットで微量遠心管または９６ウェルプレートに入れた。酵素を含まないブランク反応液および被験化合物を含まない対照反応液も、それぞれ酵素希釈緩衝液および被験化合物溶媒を用いて調製した。上記のような成分を含む反応緩衝液によって、反応を開始した。反応液を３７℃で１時間インキュベートした。０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ２０μＬを加えることで反応停止した。反応停止した反応液５０μＬをワットマンＤＥ８１フィルター円板にスポット添加し、風乾させた。洗浄液１ｍＬが＜１００ｃｐｍとなるまで、フィルター円板を０．３Ｍギ酸アンモニウム１５０ｍＬで繰り返し洗浄した。円板を純粋エタノール１５０ｍＬで２回、脱水エーテル１５０ｍＬで１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション液５ｍＬ中でカウンティングした。
【０１９８】
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って、阻害パーセントを計算した。
【０１９９】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８，２ｍＭメルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含む緩衝液中で０．５ｎｇ／μＬ酵素；１０μＭ  ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰおよびＴＴＰ；２μＣｉ／反応［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰおよび０．４μｇ／μｇＬ活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入）を含む反応で、ヒトＤＮＡポリメラーゼγ阻害の能力を測定した。反応を３７℃で１時間進行させ、最終濃度１４２ｍＭまで０．５Ｍ  ＥＤＴＡを加えることで停止した。アニオン交換フィルター結合およびシンチレーションカウンティングによって、生成物形成を定量した。化合物について、５０μＭまで試験を行った。
【０２００】
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００という式に従って、阻害パーセントを計算した。
【０２０１】
本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物がＨＩＶ感染力およびＨＩＶ伝播を阻害する能力を、以下のアッセイで測定した。
【０２０２】
ｃ．ＨＩＶ感染力アッセイ
低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現に関して選択したＣＸＣＲ４およびＣＣＲ５の両方を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異株を用いてアッセイを行った。細胞を４８時間感染させ、組み込まれたＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を、化学発光基質（Ｇａｌａｃｔｏｌｉｇｈｔ  Ｐｌｕｓ，Ｔｒｏｐｉｘ，Ｂｅｄｆｏｒｄｍ，ＭＡ）を用いて定量した。１００μＭから開始する２倍連続希釈で、阻害薬の力価測定を行った（２連で）。各濃度での阻害パーセントを、対照感染との関連で計算した。
【０２０３】
ｄ．ＨＩＶ伝播の阻害
本発明の化合物がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の伝播を阻害する能力を、米国特許第５４１３９９９号（１９９５年５月９日）およびバッカらの報告（Ｊ．Ｐ．Ｖａｃｃａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：４０９６−４１００（１９９４））（これらは参照によって、その全内容が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって測定した。
【０２０４】
本発明のフッ素化ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド化合物については、下記のアッセイに記載の方法に従って、ＭＴＳ細胞に基づくアッセイでサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞傷害性のスクリーニングも行った。ＨｕＨ−７細胞系については、ナカバヤシらの報告（Ｈ．Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４２：３８５８（１９８２））に記載されている。
【０２０５】
ｅ．細胞傷害性アッセイ
３日間のインキュベーションでの懸濁培養用には細胞約１．５×１０５個／ｍＬ、３日間のインキュベーションでの付着培養用には細胞５．０×１０４個／ｍＬの濃度で、細胞培養物を適切な培地中で製造した。細胞培養物９９μＬを９６ウェル組織培養液処理プレートのウェルに移し入れ、１００倍最終濃度の被験化合物のＤＭＳＯ溶液１μＬを加えた。プレートを、所定の期間にわたって３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベーション期間終了後、アッセイ試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  ｒｅａｇｅｎｔ）（ＭＴＳ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）２０μＬを各ウェルに加え、さらに３時間にわたって、プレートを３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。プレートを撹拌して十分に混和し、４９０ｎｍでの吸光度をプレート読取装置を用いて読み取った。懸濁培養細胞の標準曲線を、ＭＴＳ試薬添加直前の既知細胞数で作成した。代謝活性細胞は、ＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは、４９０ｎｍで吸収を示す。化合物存在下での４９０ｎｍでの吸光度を、化合物を添加しなかった細胞での吸光度と比較した。
【０２０６】
参考文献：Ｃｏｒｙ，Ａ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，″Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ／ｆｏｒｍａｚａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｓｓａｙｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ″，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．３：２０７（１９９１）。
【０２０７】
以下のアッセイを用いて、他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対する本発明の化合物の活性を測定した。
【０２０８】
ａ．ライノウイルスに対する化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（細胞変性効果阻害アッセイ）
アッセイ条件は、シドウェルおよびハフマンによる論文（Ｓｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ，″Ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ″，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：７９７−８０１（１９７１））に記載されている。
【０２０９】
ウイルス
シドウェルおよびハフマンの参考文献に記載の方法に従って、ライノウイルス２型（ＲＶ−２）ＨＧＰ株を、ＫＢ細胞および培地（０．１％ＮａＨＣＯ３、抗生物質なし）とともに用いた。ＡＴＣＣから入手したウイルスは、軽度の急性熱性上気道病の成人男性の咽頭スワブからのものであった。
【０２１０】
ライノウイルス９型（ＲＶ−９）２１１株およびライノウイルス１４型（ＲＶ−１４）Ｔｏｗ株も、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手した。ＲＶ−９は、ヒト咽頭うがい液からのものであり、ＲＶ−１４は気道病の成人男性の咽頭スワブからのものであった。これらのウイルスはいずれも、ヒト頸部類上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（Ｄｒ．Ｆｒｅｄ  Ｈａｙｄｅｎ，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  ＶＡ）とともに用いた。５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および０．１％ＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ（イーグル最小必須培地）を、増殖培地として用いた。
【０２１１】
これら３種類のウイルスについての抗ウイルス試験培地は、５％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３、５０μｇゲンタマイシン／ｍＬおよび１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含むＭＥＭとした。
【０２１２】
本発明の化合物のアッセイを行う上での最高濃度は、２０００μｇ／ｍＬとした。被験化合物から約５分後に、アッセイプレートにウイルスを加えた。適切な対照についても行った。アッセイプレートを、加湿空気および５％ＣＯ２で３７℃にてインキュベートした。形態変化に関して顕微鏡観察にて、対照細胞で細胞傷害性をモニタリングした。ウイルスＣＰＥデータおよび細胞傷害性対照データの回帰分析によって、ＥＤ５０（５０％有効用量）およびＣＣ５０（５０％細胞傷害性濃度）を得た。ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０という式によって、選択性指数（ＳＩ）を計算した。
【０２１３】
ｂ．デング熱ウイルス、バンジウイルスおよび黄熱病ウイルスに対する化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細については、上記のシドウェルおよびハフマンの参考文献に記載されている。
【０２１４】
ウイルス
デング熱ウイルス２型ニューギニア株を、疾病対策センターから入手した。２系統のアフリカミドリザル腎臓細胞を用いて、ウイルスを培養し（ベロ）、抗ウイルス試験を行った（ＭＡ−１０４）。感染マウス脳から得た黄熱病ウイルス１７Ｄ株および南アフリカの発熱した少年の血清から単離したバンジウイルスＨ３３６株のいずれも、ＡＴＣＣから入手した。ベロ細胞を、これら両方のウイルスとともに用い、アッセイに供した。
【０２１５】
細胞および培地
ＭＡ−１０４細胞（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）およびベロ細胞（ＡＴＣＣ）を、５％ＦＢＳおよび０．１％ＮａＨＣＯ３を含み、抗生物質を含まない培地１９９中で用いた。デング熱ウイルス、黄熱病ウイルスおよびバンジウイルス用のアッセイ培地は、ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、０．１８％ＮａＨＣＯ３および５０μｇゲンタマイシン／ｍＬとした。
【０２１６】
本発明の化合物の抗ウイルス試験を、シドウェルおよびハフマンの参考文献に従い、上記のライノウイルス抗ウイルス試験と同様にして行った。これら各ウイルスについて、５〜６日後に十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取が行われた。
【０２１７】
ｃ．西ナイルウイルスに対する化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細については、上記で引用のシドウェルおよびハフマンの参考文献に記載されている。カラス脳由来の西ナイルウイルスニューヨーク単離株を、疾病対策センターから入手した。上記の方法に従って、ベロ細胞を増殖させ、使用した。試験培地は、ＭＥＭ、１％ＦＢＳ、０．１％ＮａＨＣＯ３および５０μｇゲンタマイシン／ｍＬとした。
【０２１８】
ライノウイルス活性についてのアッセイに用いたものと同様であるシドウェルおよびはハフマンの方法に従って、本発明の化合物の抗ウイルス試験を行った。５〜６日後に、十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取が行われた。
【０２１９】
ｄ．ライノウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、バンジウイルスおよび西ナイルウイルスに対する化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（ニュートラルレッド取り込みアッセイ）
上記のＣＰＥ阻害アッセイを行った後、文献（″Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ：Ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔ″，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：３５−３８（１９７６））に記載の別の細胞変性検出法を用いた。ＥＬ３０９型微量プレート読取装置（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を用いて、アッセイプレートの読取を行った。ＥＤ５０およびＣＤ５０を上記の方法に従って計算した。
【０２２０】
医薬製剤の例
本発明の化合物の経口組成物の具体的な実施形態として、実施例１または実施例２の化合物５０ｍｇを、十分に微粉砕した乳糖とともに製剤して総量５８０〜５９０ｍｇを得て、サイズＯ硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０２２１】
以上、本発明の具体的な実施形態を参照しながら、本発明についての説明を行ったが、当業者には、本発明の精神および範囲を逸脱しない限りにおいて、各種の変更、修正および置き換えが可能であることは明らかであろう。例えば、ＨＣＶ感染の重度に関して治療対象のヒトの応答における変動の結果として、上記のような好ましい用量以外の治療上有効な用量が適用可能な場合がある。同様に、認められる薬理応答は、選択される特定の活性化合物または医薬担体の有無、ならびに製剤の種類および用いられる投与形態に応じて変動し得るものであり、結果におけるそのような予想される変動もしくは差異は、本発明の目的および実務に従って想到されるものである。従って、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定され、そのような特許請求の範囲は妥当な限り広く解釈すべきものである。
【国際調査報告】
2008517912.tif 000048
2008517912.tif 000049