(57)【要約】  本発明は、本明細書で定義されている式Ｉ（Ｉ）の化合物を対象とする。式Ｉの化合物は、例えば、β−セクレターゼを阻害することにより治療することができる障害または状態を治療するために使用することができる。    【化１】2008523135.tif 000019
2008523135.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩：
【化１】
2008523135.tif 000016
［式中、
Ｗは、（ｉ）Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、ＮＨＣＯ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいＣ６〜Ｃ１０アリールならびに（ｉｉ）Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、ＮＨＣＯ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ１は、例えば−ＣＨ２Ｆ２、ＣＨＦ２または−ＣＦ３などの３個までのフッ素原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ３〜Ｃ８アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５員から１０員のヘテロアリールおよびＣ６〜Ｃ１４アリールからなる群から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、ＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリールおよびＣ６〜Ｃ１０アリールからなる群から選択され、
ｎは、１〜４であり、
ｍは、１〜４である］。
【請求項２】
前記化合物が、式Ｉａの化合物である、請求項１に記載の化合物：
【化２】
2008523135.tif 000017
［式中、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、ＮＨＣＯ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される］。
【請求項３】
Ｒ２がフルオロである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４がフルオロである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３がＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５が、ネオペンチルおよびｔ−ブチルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ６がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ７が、ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２（メチルスルホニル）、ＣＨ３ＣＯおよびＣＨ３ＯＣＯからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ｍが１または２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
ｎが１または２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２がフルオロであり、Ｒ４がフルオロであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ１がＣＨ３であり、Ｒ５が、ネオペンチルおよびｔ−ブチルからなる群から選択され、Ｒ６がＨであり、Ｒ７が、ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２（メチルスルホニル）、ＣＨ３ＣＯおよびＣＨ３ＯＣＯからなる群から選択され、ｍが１または２であり、ｎが１または２である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、光学異性体Ｉａａまたは該光学異性体Ｉａａの鏡像異性体：
【化３】
2008523135.tif 000018
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記化合物が光学異性体Ｉａａである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１５】
前記化合物が、
Ｎ−［３−｛［（３−ｔ−ブチル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−アゼチジン−３−イル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−（１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−３−｛［［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−（１−メタンスルホニル−アゼチジン−３−イル）−メチル］−アミノ｝−２−ヒドロキシ−プロピル）−アセトアミド；
Ｎ−［３−｛［（１−アセチル−アゼチジン−３−イル）−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（｛（１−アセチル−アゼチジン−３−イル）−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アミノ）−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
３−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アゼチジン−１−カルボン酸メチルエステル；
３−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アゼチジン−１−カルボン酸メチルエステル；
３−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピロリジン−１−スルホン酸；
３−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピロリジン−１−スルホン酸；
Ｎ−［３−｛［（１−アセチル−ピロリジン−３−イル）−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（｛（１−アセチル−ピロリジン−３−イル）−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アミノ）−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
３−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピロリジン−１−カルボン酸メチルエステル；
３−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピロリジン−１−カルボン酸メチルエステル；
４−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピペリジン−１−スルホン酸；
４−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピペリジン−１−スルホン酸；
Ｎ−［３−｛［（１−アセチル−ピペリジン−４−イル）−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（｛（１−アセチル−ピペリジン−４−イル）−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アミノ）−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
４−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル；および
４−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物および薬学的に許容できる担体を含有する医薬組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認識障害、ダウン症、オランダ型のアミロイド症を伴う遺伝性脳出血、脳アミロイド血管障害、血管性および変性性混合型認知症、パーキンソン病に伴う認知症、進行性核上麻痺に伴う認知症、皮質基底変性に伴う認知症、多発梗塞性認知症、アルコール性認知症もしくは他の薬物関連認知症、頭蓋内腫瘍もしくは脳損傷に伴う認知症、ハンチントン病に伴う認知症またはＡＩＤＳ関連認知症、広汎性レビ体型アルツハイマー病、パーキンソン症候群を伴う前頭側頭骨認知症（ＦＴＤＰ）、封入体筋細胞腫、核上白内障、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、ハンチントン病、パーキンソン病、不穏下肢症候群、脳卒中、頭部外傷、脊髄損傷、神経系の脱随疾患、末梢神経障害、ピン、脳アミロイド血管障害、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ドーパミンアゴニスト治療に伴う運動障害、精神発達遅滞、学習障害、加齢性認識低下、健忘性障害、神経弛緩薬誘発パーキンソン症候群、遅発性運動障害、トゥーレット症候群、多発性硬化症ならびに急性および慢性神経変性障害からなる群から選択される障害または状態を治療するための組成物である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
治療を必要とする哺乳動物に、請求項１に記載の化合物を投与することを含む、β−セクレターゼを阻害することにより治療されうる障害または状態の治療方法。
【請求項１９】
治療を必要とする哺乳動物に、請求項１に記載の化合物を投与することを含む、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認識障害、ダウン症、オランダ型のアミロイド症を伴う遺伝性脳出血、脳アミロイド血管障害、血管性および変性性混合型認知症、パーキンソン病に伴う認知症、進行性核上麻痺に伴う認知症、皮質基底変性に伴う認知症、多発梗塞性認知症、アルコール性認知症もしくは他の薬物関連認知症、頭蓋内腫瘍もしくは脳損傷に伴う認知症、ハンチントン病に伴う認知症またはＡＩＤＳ関連認知症、広汎性レビ体型アルツハイマー病、パーキンソン症候群を伴う前頭側頭骨認知症（ＦＴＤＰ）、封入体筋細胞腫、核上白内障、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、ハンチントン病、パーキンソン病、不穏下肢症候群、脳卒中、頭部外傷、脊髄損傷、神経系の脱随疾患、末梢神経障害、ピン、脳アミロイド血管障害、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ドーパミンアゴニスト治療に伴う運動障害、精神発達遅滞、学習障害、加齢性認識低下、健忘性障害、神経弛緩薬誘発パーキンソン症候群、遅発性運動障害、トゥーレット症候群、多発性硬化症ならびに急性および慢性神経変性障害からなる群から選択される障害または状態を治療する方法。
【請求項２０】
治療を必要とする患者に、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む、アルツハイマー病の発症を予防するまたは遅延させるか、軽度認識障害からアルツハイマー病へと進行することが予測される患者においてアルツハイマー病の発症を予防するまたは遅延させるか、あるいは、単発性および再発性大葉出血などの脳アミロイド血管障害の起こりうる結果を予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書に記載の式Ｉの化合物、このような化合物を含有する医薬組成物ならびにこのような化合物を使用して、アルツハイマー病を含む本明細書に記載の障害または状態を治療する方法を対象としている。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、主に加齢に伴う脳の進行性変性疾患である。ＡＤは、記憶、認識、推理、判断および方向の喪失により特徴づけられる。疾患が進行するにつれて、運動、感覚および言語能力も影響を受け、複数認識機能の完全な障害が生ずるまでになる。これらの認識喪失は徐々に生じるが、典型的には、４から１２年の間に重度の障害および最終的な死をもたらす。
【０００３】
アルツハイマー病は、脳における２つの主な病理学的観察：神経原線維変化と、ＡベータペプチドまたはＡベータとして知られていて、本明細書ではＡベータペプチドまたはＡβと称されるペプチド断片の凝集体から主になるベータアミロイド（または神経炎）プラークにより特徴づけられる。ＡＤを伴う個人は、脳（ベータ−アミロイドプラーク）および脳血管（ベータアミロイド血管障害）、さらに神経原線維変化に特徴的なＡベータ堆積を示す。神経原線維変化は、アルツハイマー病においてのみ生じるのではなく、他の認知症誘発障害においても生じる。解剖すると、多数のこれらの病変が一般には、記憶および認識に関して重要なヒトの脳領域で見られる。より限られた解剖学的分布においては、少数のこれらの病変が、臨床的ＡＤを示さない高齢のヒトの大部分の脳で見られる。アミロイド原性プラークおよび血管アミロイド障害も、三染色体性（ダウン症）、オランダ型のアミロイド症を伴う遺伝性脳出血および他の神経変性障害を伴う個人の脳を特徴づけている。ベータ−アミロイドは、ＡＤの発生において原因となる前駆体または因子であると考えられる。認識活性を担う脳の領域におけるベータ−アミロイドの堆積は、ＡＤの発生において重要な因子であると考えられる。ベータアミロイドプラークは、Ａベータ（時にはベータＡとも称される）から主になり、これは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解に由来し、３９〜４２個のアミノ酸を含む。セクレターゼと称される複数のプロテアーゼが、ＡＰＰのプロセッシングに関与している。
【０００４】
ベータ−セクレターゼによるＡベータのＮ末端ならびに１種または複数のガンマセクレターゼによるＣ末端でのＡＰＰの分解が、ベータ−アミロイド原性経路を構成しており、すなわち、この経路によって、Ａベータは形成される。アルファ−セクレターゼによるＡＰＰの分解は、ベータ−アミロイドプラーク形成をもたらさない、分泌形態のＡＰＰＩであるアルファ−ｓＡＰＰを生成する。この別の経路は、Ａベータの形成を妨げる。ＡＰＰのタンパク質分解プロセッシング断片の記載は、例えば米国特許第５４４１８７０号明細書、同第２５５７２１１３０号明細書および同第５９４２４００号明細書に見られる。
【０００５】
アスパルチルプロテアーゼは、ベータ−セクレターゼ分解部位でのＡＰＰのプロセッシングを担う酵素として同定されている。ベータ−セクレターゼ酵素は、ＢＡＣＥ、Ａｓｐおよびメマプシンを含む様々な名称を使用して開示されている。例えば、Ｓｉｎｈａら、１９９９年、Ｎａｔｕｒｅ４０２：５３７〜５５４ページ（ｐ５０１）およびＰＣＴ国際出願公開第００／１７３６９号パンフレット参照。
【０００６】
いくつかの系列の証拠により、Ａベータの進行性脳堆積が、ＡＤの病因において根本的な役割を果たし、認識症状の数年または数十年前に生じうる。例えば、Ｓｅｌｋｏｅ、１９９１年、Ｎｅｕｒｏｎ６：４８７参照。培養で成長させた神経細胞からのＡベータの放出ならびに正常な個人およびＡＤ患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＡベータの存在が実証されている。例えば、Ｓｅｕｂｅｒｔおよび他５名、１９９２年、Ｎａｔｕｒｅ  ３５９：３２５〜３２７ページ参照。Ａベータは、ベータ−セクレターゼによるＡＰＰプロセッシングの結果として蓄積するので、この酵素の活性を阻害することが、ＡＤの治療には望ましいことが提案されている。
【０００７】
ベータ−セクレターゼ分解部位でのＡＰＰのインビボプロセッシングは、Ａベータ産生における律速段階であると考えられるので、ＡＤを治療するための治療ターゲットである。例えば、Ｓａｂｂａｇｈ，Ｍ．ら、１９９７年、Ａｌｚ．Ｄｉｓ．Ｒｅｖ．３、１  １９ページ参照。ＢＡＣＥ１ノックアウトマウスは、Ａベータを産生することができず、正常な表現型を示す。ＡＰＰを過剰発現する遺伝子導入マウスと交配させると、子孫は、対照動物と比較して低量のＡベータを脳抽出物中に示す（Ｌｕｏら、２００１年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ４：２３１〜２３２ページ）。さらにこの証拠により、ベータ−セクレターゼ活性の阻害および脳内でのＡベータの低減はＡＤおよび他のベータアミロイド障害の治療法をもたらすという提案が支持される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
現在、アルツハイマー病の進行を停止、予防または逆転するために有効な治療は存在しない。したがって、まず第１に、アルツハイマー病の進行を遅延させおよび／またはこれを予防しうる医薬品が、緊急に必要とされている。例えば、ベータ−セクレターゼの有効な阻害剤であるか、ＡＰＰのベータ−セクレターゼを介した分解を阻害するか、Ａベータ産生の有効な阻害剤であるか、および／またはアミロイドベータ堆積またはプラークを低減するために有効である化合物が、ＡＤなどのアミロイドベータ堆積またはプラークを特徴とする疾患を治療および予防するために必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を対象としている：
【００１０】
【化１】
2008523135.tif 000003
［式中、
Ｗは、（ｉ）Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、ＮＨＣＯ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいＣ６〜Ｃ１０アリールならびに（ｉｉ）Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、ＮＨＣＯ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルからそれぞれ独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよいＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ１は、例えば−ＣＨ２Ｆ２、ＣＨＦ２または−ＣＦ３などの３個までのフッ素原子で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ３〜Ｃ８アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５員から１０員のヘテロアリールおよびＣ６〜Ｃ１４アリールからなる群から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、ＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ５〜Ｃ１０ヘテロアリールおよびＣ６〜Ｃ１０アリールからなる群から選択され、
ｎは、１〜４であり、
ｍは、１〜４である］。
【００１１】
さらに本発明は、
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩ならびに薬学的に許容できる担体を含む、例えばβ−セクレターゼを阻害することにより治療されうる障害または状態を治療するための医薬組成物；
治療を必要とする哺乳動物に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む、β−セクレターゼを阻害することにより治療されうる障害または状態を治療する方法；
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩ならびに薬学的に許容できる担体を含む、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認識障害、ダウン症、オランダ型のアミロイド症を伴う遺伝性脳出血、脳アミロイド血管障害、血管性および変性性混合型認知症、パーキンソン病に伴う認知症、進行性核上麻痺に伴う認知症、皮質基底変性に伴う認知症、多発梗塞性認知症、アルコール性認知症もしくは他の薬物関連認知症、頭蓋内腫瘍もしくは脳損傷に伴う認知症、ハンチントン病に伴う認知症またはＡＩＤＳ関連認知症、広汎性レビ体型アルツハイマー病、パーキンソン症候群を伴う前頭側頭骨認知症（ＦＴＤＰ）、封入体筋細胞腫、核上白内障、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、ハンチントン病、パーキンソン病、不穏下肢症候群、脳卒中、頭外傷、脊髄損傷、神経系の脱随疾患、末梢神経障害、ピン、脳アミロイド血管障害、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ドーパミンアゴニスト治療に伴う運動障害、精神発達遅滞、読書障害、数学障害もしくは筆記表現の障害を含む学習障害、加齢性認識低下、健忘性障害、神経弛緩薬誘発パーキンソン症候群、遅発性運動障害、トゥーレット症候群、多発性硬化症ならびに急性および慢性神経変性障害からなる群から選択される障害または状態を治療するための医薬組成物；
治療を必要とする哺乳動物に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む、前記で列挙された障害または状態からなる群から選択される障害または状態の治療法；
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩ならびに薬学的に許容できる担体を含む、軽度認識障害（ＭＣＩ）からＡＤへと進行することが予測される患者においてＡＤの発症を予防するまたは遅延させる、ＡＤの発症を予防するまたは遅延させるか、単発性および再発性大葉出血などの脳アミロイド血管障害の起こりうる結果を予防するための医薬組成物；ならびに
治療を必要とする患者に式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む、ＭＣＩからＡＤへと進行することが予測される患者においてＡＤの発症を予防するまたは遅延させる、ＡＤの発症を予防するまたは遅延させるか、単発性および再発性大葉出血などの脳アミロイド血管障害の起こりうる結果を予防する方法
を対象とする。
【００１２】
さらに本発明は、医薬品を製造するための式Ｉの化合物または塩の使用を提供する。
【００１３】
さらに本発明は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）タンパク質のベータ−セクレターゼを介した分解を阻害する化合物、医薬組成物、キットおよび方法を提供し、ここで、この方法は、治療を必要とする患者に式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む。詳細には、本発明の化合物、組成物および方法は、Ａ−ベータの産生を阻害するために、Ａ−ベータの病理形態を伴うヒトまたは動物の疾患または状態を治療または予防するために有効である。
【００１４】
本発明の化合物は、ベータ−セクレターゼ阻害活性を有する。本発明の化合物の阻害活性は、例えば本明細書に記載されているか、当分野で知られている１種または複数のアッセイを使用することにより容易に証明される。
【００１５】
さらに本発明は、本発明の化合物を調製する方法およびその方法で使用される中間体を提供する。
【００１６】
さらに本発明は、１個または複数の容器を含み、その各容器が式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩の１個または複数の単位用量を含む容器キットを包含する。
【００１７】
本発明の医薬組成物および方法は、本明細書に記載の任意の障害または状態の再発を予防するために使用することもできる。このような再発の予防は、予防を必要とする哺乳動物に式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することにより達成され、治療方法として企図される。
【００１８】
本発明の化合物は、光学中心を有し、したがって、様々な鏡像異性体配置で生じうる。前記の式Ｉには、構造式Ｉに示されている化合物の鏡像異性体、ジアステレオ異性体および他の立体異性体すべて、さらにそれらのラセミ混合物および他の混合物が含まれる。個々の異性体は、最終生成物またはその中間体を調製する際の光学分割、光学的選択反応またはクロマトグラフィーによる分離などの知られている方法により得ることができる。
【００１９】
ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴにより検出可能であるように同位体標識されている式Ｉの化合物を含む、式Ｉの同位体標識化合物またはその薬学的に許容できる塩も、本発明の範囲内である。
【００２０】
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩のシスおよびトランス異性体も、本発明の範囲内である。
【００２１】
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の互変異性体も、本発明の範囲内である。
【００２２】
第１の基または置換基が２個またはそれ以上の基または置換基で置換されている場合、本発明は、限定することなく、このような基または置換基の組合せが存在する実施形態を含む。
【００２３】
第１の基または置換基が２個またはそれ以上の基または置換基で置換されている場合、このような置換基の数は、置換のために利用することができる第１の基または置換基における位置の数を上回ることはできないと理解される。
【００２４】
「アルキル」との用語は、直鎖または分枝鎖飽和炭化水素基を指している。アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどが含まれる。「アルケニル」との用語は、ビニル、アリル、ブテニルなどの１個または複数の炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝鎖炭化水素基を示すために使用されている。「アルキニル」との用語は、エチニル、プロパルギル、１−ブチニル、２−ブチニルなどの１個または複数の炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分枝鎖炭化水素基を示すために使用されている。
【００２５】
「アリール」とは、芳香族環上の炭素からの水素の除去により、芳香族炭化水素に由来する有機基を意味する。「芳香族炭化水素」とは、１個または複数の環を有し、そのうちの少なくとも１個が芳香族である炭化水素（例えばフェニル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、ナフチル）を表す。本発明の好ましいアリール基は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、インダニル、インデニル、ジヒドロナフチル、フルオレニル、テトラリニルまたは６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ａ］シクロヘプテニルである。本明細書に記載のアリール基は、非置換であるか、様々な置換基で１、２、３または４個の置換可能な位置で置換されていてよい。このような置換基には、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、モノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルが含まれる。
【００２６】
「アルコキシ」および「アリールオキシ」との用語はそれぞれ、「Ｏ−アルキル」および「Ｏ−アリール」を示している。
【００２７】
「シクロアルキル」との用語は、環炭素からの水素の除去により、飽和炭素環から形成される基を示している。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが含まれる。本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」との用語は、アダマンタニル、デカヒドロナフタリニル、ノルボルナニルなどの、少なくとも２個の縮合環を含む飽和炭素環から形成される基も示すこととする。
【００２８】
「ハロ」との用語は、クロロ、フルオロ、ブロモおよびヨードを表す。
【００２９】
「ヘテロアリール」との用語は、芳香族環上の炭素からの水素の除去により、複素芳香族炭化水素に由来する有機基を示しており、ここで、「複素芳香族炭化水素」は、窒素、酸素およびイオウからなる群から選択される１個または複数の環ヘテロ原子を含む芳香族炭化水素である。ヘテロアリール基が１個よりも多いヘテロ原子を含む場合、ヘテロ原子は、同じでも異なっていてもよい。好ましいヘテロアリール基には、酸素、窒素およびイオウから独立に選択される１から４個のヘテロ原子を含む５員および６員の環が含まれる。好ましい５員および６員のヘテロアリール基の例には、ベンゾ［ｂ］チエニル、クロメニル、フリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリジニル、インドリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、オキサジニル、オキサゾリル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キノリジニル、キノリル、キノキサリニル、チアゾリル、チエニル、トリアジニル、トリアゾリル、テトラゾリルおよびキサンテニルが含まれる。本発明の好ましいヘテロアリール基にはさらに、インドリニル、キナゾリニル、ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、フラニル、チエニル、チアジアゾリル、オキサゾロピリジニル、イミダゾピリジニル、ナフチリジニル、シノリニル、カルバゾリル、ベータ−カルボリニル、イソクロマニル、クロマニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソベンゾテトラヒドロフラニル、イソベンゾテトラヒドロチエニル、イソベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ピリドピリジニル、ベンゾテトラヒドロフラニル、ベンゾテトラヒドロチエニル、ベンゾジオキソリル、フェノキサジニル、フェノチアジニル、ベンゾチアゾリル、イミダゾピリジニル、イミダゾチアゾリル、ジヒドロベンズイソオキサジニル、ベンズイソオキサジニル、ベンゾオキサジニル、ジヒドロベンズイソチアジニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クマリニル、イソクマリニル、クロモニル、クロマノニル、ピリジニル−Ｎ−オキシド、テトラヒドロキノリニル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロキノリノニル、ジヒドロイソキノリノニル、ジヒドロクマリニル、ジヒドロイソクマリニル、イソインドリノニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾオキサゾリノニル、ピロリルＮ−オキシド、ピリミジニルＮ−オキシド、ピリダジニルＮ−オキシド、ピラジニルＮ−オキシド、キノリニルＮ−オキシド、インドリルＮ−オキシド、インドリニルＮ−オキシド、イソキノリルＮ−オキシド、キナゾリニルＮ−オキシド、キノキサリニルＮ−オキシド、フタラジニルＮ−オキシド、イミダゾリルＮ−オキシド、イソオキサゾリルＮ−オキシド、オキサゾリルＮ−オキシド、チアゾリルＮ−オキシド、インドリジニルＮ−オキシド、インダゾリルＮ−オキシド、ベンゾチアゾリルＮ−オキシド、ベンズイミダゾリルＮ−オキシド、ピロリルＮ−オキシド、オキサジアゾリルＮ−オキシド、チアジアゾリルＮ−オキシド、トリアゾリルＮ−オキシド、テトラゾリルＮ−オキシド、ベンゾチオピラニルＳ−オキシド、ベンゾチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、テトラヒドロカルバゾール、テトラヒドロベータカルボリンが含まれる。本明細書に記載のヘテロアリール基は、非置換であるか、前記のように、様々な基で、１個または複数の置換可能な位置で置換されている。例えば、このようなヘテロアリール基は、例えばＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、モノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、モノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルで置換されていてもよい。
【００３０】
「ヘテロシクロアルキル」との用語は、「シクロアルキル」が前記のように定義され、その環炭素原子のうちの１個または複数が、窒素、酸素およびイオウからなる群から選択されるヘテロ原子で置換されているシクロアルキル系を示している。ヘテロシクロアルキル基が１個よりも多いヘテロ原子を含む場合、ヘテロ原子は同じでも異なっていてもよい。このようなヘテロシクロアルキル基の例には、アザビシクロヘプタニル、アゼチジニル、ベンザゼピニル、１，３−ジヒドロイソインドリル、インドリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジル、ピロリジニルおよびテトラヒドロ−２Ｈ−１，４−チアジニルが含まれる。
【００３１】
環式基は、１種を上回る方法で他の基に結合することができる。結合配置が特に記載されていない場合、可能な配置すべてが意図されている。例えば、「ピリジル」との用語には、２−、３−または４−ピリジルが含まれ、「チエニル」との用語には、２−または３−チエニルが含まれる。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「哺乳動物」は、哺乳類の任意のメンバーである。例として、治療または予防を必要とする哺乳動物は、ヒトであってよい。他の例として、治療または予防を必要とする哺乳動物は、ヒト以外の哺乳動物であってよい。
【００３３】
ＡＰＰ、アミロイド前駆体タンパク質は、例えば米国特許第５７６６８４６号明細書に開示されているようなＡＰＰ変異体、突然変異体およびアイソホームを含む任意のＡＰＰポリペプチドと定義される。
【００３４】
Ａベータ、アミロイドベータペプチドは、３９、４０、４１、４２および４３アミノ酸のペプチドを含み、ベータ−セクレターゼ分解部位からアミノ酸３９、４０、４１、４２または４３まで延びている、ＡＰＰのベータ−セクレターゼを介した分解から生じる任意のペプチドと定義される。
【００３５】
ベータ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２、メマプシン２）は、Ａベータのアミノ末端でＡＰＰの分解を媒介するアスパルチルプロテアーゼである。ヒトベータ−セクレターゼは、例えば国際公開第００／１７３６９号パンフレットに記載されている。
【００３６】
好ましくは、本発明の組成物および方法は、治療有効量の式Ｉの化合物を使用する。
【００３７】
そのままでは塩基性である式Ｉの化合物は、様々な無機酸および有機酸と共に、幅広い種々の塩を形成することができる。塩基化合物を、実質的に等量の選択された無機酸または有機酸で、水性溶媒媒体中またはメタノールもしくはエタノールなどの適切な有機溶媒中で処理することにより、酸付加塩は容易に調製される。溶媒を慎重に蒸発させると、所望の固体塩が得られる。
【００３８】
本発明の医薬組成物を製剤する際に使用されるそのままでは塩基性である活性化合物の薬学的に許容できる酸塩を調製するために使用される酸は、非毒性の酸付加塩、すなわち、薬学的に許容できるアニオンを含む塩を形成するものである。塩の非限定的例には、酢酸塩、安息香酸塩、ベータ−ヒドロキシ酪酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、臭化物、ブチン−１，４−ジオン酸塩、カプロン酸塩、塩化物、クロロ安息香酸塩、クエン酸塩、二水素リン酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキシン−１，６−ジオン酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、ヨウ化物、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メタリン酸塩、メタスルホン酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、一水素リン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、シュウ酸塩、フェニル酪酸塩、フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、フタル酸塩、フェニル酢酸塩、プロパンスルホン酸塩、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、ピロリン酸塩、ピロ硫酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、キシレンスルホン酸塩、酸性リン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸水素塩、コハク酸塩、グルコン酸塩、サッカリン酸塩、硝酸塩、メタンスルホン酸塩、パモ酸塩［すなわち１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩）］ならびに次の酸：ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ここでｎは、０から４である）およびＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ここでｎは前記と同様に定義される）の塩が含まれる。
【００３９】
実施形態の例では、式Ｉの化合物は、式Ｉａの化合物である：
【００４０】
【化２】
2008523135.tif 000004
［式中、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、ＮＨ２、ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）２、ＮＨＣＯ−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ８からなる群から選択される］。
【００４１】
本発明の実施形態の例には、
式中、
（Ａ）Ｒ２がフルオロであり、
（Ｂ）Ｒ４がフルオロであり、
（Ｃ）Ｒ３がＨであり、
（Ｄ）Ｒ１がＣＨ３であり、
（Ｅ）Ｒ５がネオペンチルまたはｔ−ブチルであり、
（Ｆ）Ｒ６がＨであり、
（Ｇ）Ｒ７が、ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２（メチルスルホニル）、ＣＨ３ＣＯおよびＣＨ３ＯＣＯからなる群から選択され、
（Ｈ）ｍが１または２であり、
および／または
（Ｉ）ｎが１または２である
式Ｉａの化合物が含まれる。
【００４２】
さらに本発明の実施形態の例には、前記実施形態（Ａ）〜（Ｉ）の任意の組合せも含まれる。例えば、本発明の一実施形態例では、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ４がフルオロであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ１がＣＨ３であり、Ｒ５がネオペンチルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７が、ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２（メチルスルホニル）、ＣＨ３ＣＯおよびＣＨ３ＯＣＯからなる群から選択され、ｍが１または２であり、ｎが１または２である。
【００４３】
さらに本発明の実施形態の例には、次の式Ｉａａの化合物の光学異性体およびその鏡像異性体が含まれる：
【００４４】
【化３】
2008523135.tif 000005
【００４５】
式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物：
【００４６】
【化４】
2008523135.tif 000006
［式中、Ｅ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシまたはハロで置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）もしくは（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、前記と同様に定義される］と、式ＩＩＩの化合物：
【００４７】
【化５】
2008523135.tif 000007
［式中、ｍ、ｎ、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、前記と同様に定義される］とを反応させるステップと、
（ｉｉ）（ｉ）の生成物を、ホウ素−水素結合を含む還元剤で処理するステップとを含む方法により調製することができる。
【００４８】
還元剤は例えば、ホウ水素化物であってよい。
【００４９】
この方法はさらに、
（ｉｉｉ）水、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアルコールまたは水とＣ１〜Ｃ４アルキルアルコールとの混合物中で、（ｉｉ）の生成物を酸で処理するステップを含んでもよい。
【００５０】
一実施形態での方法を、式Ｉａａの化合物例の調製に関して下記で詳述するが、これは、（ｉ）式ＩＩａａの化合物：
【００５１】
【化６】
2008523135.tif 000008
［式中、Ｅ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシまたはハロで置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）もしくは（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、前記と同様に定義される］と、式ＩＩＩの化合物：
【００５２】
【化７】
2008523135.tif 000009
［式中、ｍ、ｎ、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、前記と同様に定義される］とを反応させるステップと、
（ｉｉ）（ｉ）の生成物を、ホウ素−水素結合を含む還元剤で処理するステップとを含む方法により調製することができる。
【００５３】
還元剤は例えば、ホウ水素化物であってよい。
【００５４】
この方法はさらに、
（ｉｉｉ）水、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアルコールまたは水とＣ１〜Ｃ４アルキルアルコールとの混合物中で、（ｉｉ）の生成物を酸で処理するステップを含んでもよい。
【００５５】
方法の他の実施形態の例では、下記に示されている式ＩＩａの化合物の任意の光学異性体または式ＩＩａの化合物の異性体の任意の混合物もしくはラセミ混合物を使用することができる：
【００５６】
【化８】
2008523135.tif 000010
【００５７】
例えば、本発明の化合物は、本発明の化合物の亜属例に関するスキームＩの実施形態に示されているように調製することもできる：
【００５８】
【化９】
2008523135.tif 000011
【００５９】
スキームＩでは、ＢＯＣ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）に加えて、例えば（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）基または（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）基を含む当業者に知られている基などの任意の適切な保護基Ｐ１を使用することができる。保護基がｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）および／またはベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）であることが好ましく、保護基がｔ−ブトキシカルボニルであることがさらに好ましい。当業者であれば、ｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニル保護基を導入する適切な方法が分かるであろうし、補足的に、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１をガイダンスのために参照することもできる。
【００６０】
同様に、ＰＢＭ（ｐ−メトキシフェニル）に加えて、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシまたはＣ１〜Ｃ６アルキルで置換されていてもよい任意のＣ６〜Ｃ１０アリール基を使用することもできるし、任意の（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）−基を使用することもできる。
【００６１】
方法の一実施形態では、（ｉ）および（ｉｉ）をワンポットで行う。他の実施形態では、式ＶＩの化合物：
【００６２】
【化１０】
2008523135.tif 000012
を、（ｉ）の後、（ｉｉ）の前に単離することもできる。この実施形態では、次いで、式ＶＩの化合物を、別の反応で、ホウ素−水素結合を含む還元剤で処理する。還元剤は例えば、ホウ水素化物であってよい。
【００６３】
さらに本発明の化合物を、式Ｉａの化合物例の調製に関して下記で詳述する方法により調製することができ、これは、（ｉ）式ＩＶの化合物：
【００６４】
【化１１】
2008523135.tif 000013
［式中、Ｐ２は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−ＣＯまたはＣ１〜Ｃ１２アルキル−Ｏ−ＣＯである］と、式Ｖの化合物：
【００６５】
【化１２】
2008523135.tif 000014
［式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｎおよびｍは、前記と同様に定義される］とを反応させるステップを含む方法により調製することができる。
【００６６】
方法はさらに、
（ｉｉ）水、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアルコールまたは水とＣ１〜Ｃ４アルキルアルコールとの混合物中で、（ｉ）の生成物を、酸で処理するステップと、
（ｉｉｉ）（ｉ）の生成物をＲ１ＣＯ−Ｘ（ここでＸはハロである）で処理するステップとを含んでもよい。
【００６７】
例えば、本発明の化合物は、本発明の化合物の亜属例に関するスキームＩＩの実施形態に示されているように調製することができる：
【００６８】
【化１３】
2008523135.tif 000015
【発明を実施するための最良の形態】
【００６９】
本発明の例示的化合物には、
Ｎ−［３−｛［（３−ｔ−ブチル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−アゼチジン−３−イル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−（１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−３−｛［［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−（１−メタンスルホニル−アゼチジン−３−イル）−メチル］−アミノ｝−２−ヒドロキシ−プロピル）−アセトアミド；
Ｎ−［３−｛［（１−アセチル−アゼチジン−３−イル）−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（｛（１−アセチル−アゼチジン−３−イル）−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アミノ）−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
３−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アゼチジン−１−カルボン酸メチルエステル；
３−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アゼチジン−１−カルボン酸メチルエステル；
３−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピロリジン−１−スルホン酸；
３−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピロリジン−１−スルホン酸；
Ｎ−［３−｛［（１−アセチル−ピロリジン−３−イル）−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（｛（１−アセチル−ピロリジン−３−イル）−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アミノ）−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
３−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピロリジン−１−カルボン酸メチルエステル；
３−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピロリジン−１−カルボン酸メチルエステル；
４−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピペリジン−１−スルホン酸；
４−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピペリジン−１−スルホン酸；
Ｎ−［３−｛［（１−アセチル−ピペリジン−４−イル）−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−アミノ｝−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
Ｎ−［３−（｛（１−アセチル−ピペリジン−４−イル）−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−アミノ）−１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−プロピル］−アセトアミド；
４−［［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−（３−ｔ−ブチル−フェニル）−メチル］−ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル；
４−｛［３−アセチルアミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシ−ブチルアミノ］−［３−（２，２−ジメチル−プロピル）−フェニル］−メチル｝−ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル
が含まれる。
【００７０】
本発明の医薬組成物は、式Ｉの化合物および薬学的に許容できる担体を含有する組成物であってよい。慣用の方法で、１種または複数の薬学的に許容できる担体を使用して、医薬組成物を製剤することができる。組成物を、経口、頬、鼻腔内、非経口（例えば静脈内、筋肉内、腹腔内もしくは皮下で、またはインプラントを介して）、鼻、膣、舌下、直腸または局所投与のために、または吸入または注入による投与に適した形態で製剤することができる。本発明の組成物では、式Ｉの化合物は好ましくは、前記状態を治療するために有効な量で存在する。同様に、本明細書に記載されている状態を治療する方法では、投与される式Ｉの化合物の量は好ましくは、状態を治療する際に有効な量である。
【００７１】
本発明には、本明細書に記載の疾患または状態を有する患者を治療するか、それらを患者が得ることを予防する方法が含まれる。
【００７２】
一実施形態では、本発明の治療方法を、アルツハイマー病を治療するために使用する。
【００７３】
一実施形態では、この治療方法により、アルツハイマー病の発症を予防するまたは遅延させることができる。
【００７４】
一実施形態では、この治療方法を、疾患が軽度認識障害である場合に使用することができる。
【００７５】
一実施形態では、この治療方法を、疾患がダウン症である場合に使用することができる。
【００７６】
一実施形態では、この治療方法を、疾患がオランダ型のアミロイド症を伴う遺伝性脳出血である場合に使用することができる。
【００７７】
一実施形態では、この治療方法を、疾患が脳アミロイド血管障害である場合に使用することができる。
【００７８】
一実施形態では、この治療方法を、疾患が変性認知症または認知症である場合に使用することができる。
【００７９】
一実施形態では、この治療方法を、疾患が広汎性レビ体型アルツハイマー病である場合に使用することができる。
【００８０】
一実施形態では、この治療方法により、既存の疾患を治療することができる。
【００８１】
一実施形態では、この治療方法により、疾患が発生することを予防することができる。
【００８２】
一実施形態では、この治療方法は、経口投与では約０．１ｍｇ／日から約１０００ｍｇ／日；非経口、舌下、鼻腔内、クモ膜下投与では約０．５から約１００ｍｇ／日；デポー投与およびインプラントでは約０．５ｍｇ／日から約５０ｍｇ／日；局所投与では約０．５ｍｇ／日から約２００ｍｇ／日；直腸投与では約０．５ｍｇから約５００ｍｇの治療有効量を使用しうる。
【００８３】
一実施形態では、この治療方法は、経口投与では約１ｍｇ／日から約１００ｍｇ／日；および非経口投与では１日約５から約５０ｍｇの治療有効量を使用しうる。
【００８４】
一実施形態では、この治療方法は、経口投与で約５ｍｇ／日から約５０ｍｇ／日の治療有効量を使用しうる。
【００８５】
さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩を含む医薬組成物を含む。
【００８６】
本発明は、本明細書に記載の疾患または状態を有する患者を治療するか、それらを患者が得ることを予防する際に使用するための医薬品を製造するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩の使用を含む。
【００８７】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患がアルツハイマー病である場合に使用することができる。
【００８８】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用により、アルツハイマー病の発症を予防するまたは遅延させることができる。
【００８９】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患が軽度認識障害である場合に使用することができる。
【００９０】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患がダウン症である場合に使用することができる。
【００９１】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患がオランダ型のアミロイド症を伴う遺伝性脳出血である場合に使用することができる。
【００９２】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患が脳アミロイド血管障害である場合に使用することができる。
【００９３】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患が変性認知症または認知症である場合に使用することができる。
【００９４】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物のこの使用は、疾患が広汎性レビ体型アルツハイマー病である場合に使用することができる。
【００９５】
一実施形態では、化合物のこの使用は、次の酸：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ここでｎは０から４である）、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ（ここでｎは前記と同様に定義される）、ＨＯＯＣ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯＨおよびフェニル−ＣＯＯＨ、酢酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、重硫酸、重酒石酸、酪酸、エデト酸カルシウム、ｄ−ショウノウスルホン酸、炭酸、クロロ安息香酸、クエン酸、エデト酸、エジシル酸、エストル酸、エシル、エシル酸、ギ酸、フマル酸、グルセプト酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコリルアルサニル酸、ヘクサミン酸、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバミン酸（ｈｙｄｒａｂａｍｉｃ）、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシナフト酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、メチル硝酸、メチル硫酸、粘液酸、ムコン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、ｐ−ニトロメタンスルホン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、フタル酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファミン酸、スルファニル酸、スルホン酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、テオクル酸およびトルエンスルホン酸の塩からなる群から選択される薬学的に許容できる塩を使用する。他の許容可能な塩に関しては、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３３、２０１〜２１７ページ（１９８６年）およびＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６（１）、１（１９７７年）参照。
【００９６】
これらの方法はそれぞれ、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩の投与を含む。
【００９７】
さらに本発明は、ベータ−セクレターゼ活性を阻害する方法を含み、これは、前記ベータ−セクレターゼを有効阻害量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩にさらすことを含む。
【００９８】
一実施形態では、この方法は、５０マイクロモル未満の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【００９９】
一実施形態では、この方法は、１０マイクロモル以下の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１００】
一実施形態では、この方法は、１マイクロモル以下の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１０１】
一実施形態では、この方法は、１００ナノモル未満の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１０２】
一実施形態では、この方法は、１０ナノモル以下の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１０３】
一実施形態では、この方法は、前記ベータ−セクレターゼを前記化合物にインビトロでさらすことを含む。
【０１０４】
一実施形態では、この方法は、前記ベータ−セクレターゼを前記化合物に細胞中でさらすことを含む。
【０１０５】
一実施形態では、この方法は、前記ベータ−セクレターゼを前記化合物に、動物内の細胞中でさらすことを含む。
【０１０６】
一実施形態では、この方法は、前記ベータ−セクレターゼを前記化合物にヒト内でさらすことを含む。
【０１０７】
さらに本発明は、ベータ−セクレターゼ活性を阻害するための方法、反応混合物中、ＡＰＰ−６９５アミノ酸アイソタイプでナンバリングされるＭｅｔ５９６とＡｓｐ５９７との間の位置での、またはそのアイソタイプまたは突然変異体の対応する位置でのアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の分解を阻害するための方法、細胞中でのアミロイドベータペプチド（Ａベータ）の産生を阻害するための方法、動物でのベータ−アミロイドプラークの生成を阻害するための方法および脳内でのベータ−アミロイド堆積を特徴とする疾患を治療または予防するための方法を含み、これは、前記反応混合物を有効阻害量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩にさらすことを含む。
【０１０８】
一実施形態では、この方法は、ＡＰＰ−７５１アイソタイプでナンバリングされるＭｅｔ６５２とＡｓｐ６５３との間；ＡＰＰ−７７０アイソタイプでナンバリングされるＭｅｔ６７１とＡｓｐ６７２との間；ＡＰＰ−６９５スウェーデン突然変異のＬｅｕ５９６とＡｓｐ５９７との間；ＡＰＰ−７５１スウェーデン突然変異のＬｅｕ６５２とＡｓｐ６５３との間；またはＡＰＰ−７７０スウェーデン突然変異のＬｅｕ６７１とＡｓｐ６７２との間の分解部位を使用する。
【０１０９】
一実施形態では、この方法は、前記反応混合物をインビトロでさらす。
【０１１０】
一実施形態では、この方法は、前記反応混合物を細胞中でさらす。
【０１１１】
一実施形態では、この方法は、前記反応混合物を動物細胞中でさらす。
【０１１２】
一実施形態では、この方法は、前記反応混合物をヒト細胞中でさらす。
【０１１３】
さらに本発明は、細胞中でのアミロイドベータペプチド（Ａベータ）の産生を阻害する方法を含み、これは、前記細胞に有効阻害量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む。
【０１１４】
一実施形態では、この方法は、動物に投与することを含む。
【０１１５】
一実施形態では、この方法は、ヒトに投与することを含む。
【０１１６】
さらに本発明は、動物中でのベータ−アミロイドプラークの産生を阻害する方法を含み、これは、前記動物に有効阻害量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む。
【０１１７】
一実施形態では、この方法は、ヒトに投与することを含む。
【０１１８】
さらに本発明は、脳内でのベータ−アミロイド堆積を特徴とする疾患を治療または予防する方法を含み、これは、患者に、有効治療量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩を投与することを含む。
【０１１９】
一実施形態では、この方法は、５０マイクロモル未満の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１２０】
一実施形態では、この方法は、１０マイクロモル以下の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１２１】
一実施形態では、この方法は、１マイクロモル以下の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１２２】
一実施形態では、この方法は、１０ナノモル以下の濃度で酵素活性の５０％を阻害する化合物を使用する。
【０１２３】
一実施形態では、この方法は、化合物を約０．１から約１０００ｍｇ／日の範囲の治療量で使用する。
【０１２４】
一実施形態では、この方法は、化合物を約１５から約１５００ｍｇ／日の範囲の治療量で使用する。
【０１２５】
一実施形態では、この方法は、化合物を約１から約１００ｍｇ／日の範囲の治療量で使用する。
【０１２６】
一実施形態では、この方法は、化合物を約５から約５０ｍｇ／日の範囲の治療量で使用する。
【０１２７】
さらに本発明は、ベータ−セクレターゼ複合体を製造する方法を含み、これは、ベータ−セクレターゼを式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩に、反応混合物中、前記複合体を製造するために適した条件下でさらすことを含む。
【０１２８】
一実施形態では、この方法は、インビトロでさらすことを使用する。
【０１２９】
一実施形態では、この方法は、細胞である反応混合物を使用する。
【０１３０】
さらに本発明は、組み立てることができるコンポーネント部品を含むコンポーネントキットを含み、ここで、少なくとも１個のコンポーネント部品が、容器に封入されている式Ｉの化合物を含んでいる。
【０１３１】
一実施形態では、このコンポーネントキットは、凍結乾燥した化合物を含み、少なくとも１個の他のコンポーネント部品が希釈剤を含んでいる。
【０１３２】
さらに本発明は、１個または複数の容器を含み、その各容器が、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩の１個または複数の単位用量を含む容器キットを包含する。
【０１３３】
一実施形態では、この容器キットは、経口送達に適した各容器を含み、錠剤、ゲルまたはカプセルを含んでいる。
【０１３４】
一実施形態では、この容器キットは、非経口送達に適した各容器を含み、デポー製品、シリンジ、アンプルまたはバイアルを含んでいる。
【０１３５】
一実施形態では、この容器キットは、局所送達に適した各容器を含み、パッチ、メディパッド、軟膏またはクリームを含んでいる。
【０１３６】
さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩；ならびに抗酸化剤、抗炎症剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、向精神剤、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、スタチン、Ａベータおよび抗Ａベータ抗体からなる群から選択される１種または複数の治療剤を含む薬剤キットを包含する。
【０１３７】
さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩ならびに不活性希釈剤または可食担体を含む組成物を含む。
【０１３８】
一実施形態では、この組成物は、オイルである担体を含む。
【０１３９】
さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩ならびに結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑剤または流動促進剤を含む組成物を含む。
【０１４０】
さらに本発明は、クリーム、軟膏またはパッチに分配されている式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩を含む組成物を含む。
【０１４１】
本発明は、アルツハイマー病を治療および予防する際に有用な式（Ｉ）および本明細書に含まれる他の式の化合物を提供する。スキームＩに示されている方法に加えて、本発明の化合物を調製するために適用することができる当分野における調製方法の例は、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９８年、６３、４８９８〜４９０６；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７年、６２、９３４８〜９３５３ページ；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６、６１、５５２８〜５５３１ページ；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９３年、３６、３２０〜３３０ページ；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９９年、１２１、１１４５〜１１５５ページおよびそれらに挙げられている参照文献で見られる。さらに、米国特許第６１５０５３０号明細書、同第５８９２０５２号明細書、同第５６９６２７０号明細書および同第５３６２９１２号明細書ならびにそれらに挙げられている参照文献を参照のこと。
【０１４２】
本発明の化合物は、幾何異性体または光学異性体を互変異性体として含みうる。したがって本発明は、すべての互変異性体ならびにＥおよびＺ幾何異性体などの純粋な幾何異性体をその混合物として含む。さらに、本発明は、純粋な鏡像異性体およびジアステレオ異性体を、ラセミ混合物を含むその混合物として含む。個々の幾何異性体、鏡像異性体またはジアステレオ異性体は、これらに限られないが、キラルクロマトグラフィー；ジアステレオ異性体を調製し、ジアステレオ異性体を分離し、次いで、当分野でよく知られている方法を介してジアステレオ異性体を鏡像異性体に変換することを含む当業者に知られている方法により調製または単離することができる。
【０１４３】
示された立体化学を有する本発明の化合物が、他の鏡像異性体、ジアステレオ異性体、幾何異性体または互変異性体と共に、ラセミ混合物を含む混合物中に含まれていてもよい。好ましい態様では、本発明の化合物は典型的には、少なくとも５０％のジアステレオ異性体および／または鏡像異性体過剰率でこれらの混合物中に存在する。好ましくは、本発明の化合物は、少なくとも８０％のジアステレオ異性体および／または鏡像異性体過剰率でこれらの混合物中に存在する。さらに好ましくは、望ましい立体化学を伴う本発明の化合物は、少なくとも９０％のジアステレオ異性体および／または鏡像異性体過剰率でこれらの混合物中に存在する。さらにいっそう好ましくは、望ましい立体化学を伴う本発明の化合物は、少なくとも９９％のジアステレオ異性体および／または鏡像異性体過剰率でこれらの混合物中に存在する。
【０１４４】
本発明の化合物は、本明細書に開示されている疾患または状態を治療または予防するために使用することができる。これらの疾患を治療または予防する場合、本発明の化合物を患者に最良であるように、個別に、または組み合わせて使用することができる。
【０１４５】
「予防する」との用語は、患者が投与の時点では疾患を有するとは診断されていないが、疾患を発生すると通常は予測されるか、疾患のリスクが高い場合に、疾患症状の発生を減速させるか、疾患の発症を遅延させるか、患者が疾患を発生することを完全に予防することを指している。さらに予防は、年齢、家族歴、遺伝または染色体異常により、および／または脳組織または液体中でのＡＰＰまたはＡＰＰ分解産物の知られている遺伝的突然変異などの疾患に関する１つまたは複数の生物学的マーカーの存在により、疾患にかかりやすいと考えられる個人に、本発明の化合物を投与することを含む。
【０１４６】
前記疾患を治療または予防する際に、本発明の化合物を好ましくは、治療有効量で投与する。治療有効量は当業者に知られているように、使用される特定の化合物および投与経路に応じて変動する。
【０１４７】
前記診断状態のいずれかを示す患者を治療する場合、医師は、本発明の化合物を直ちに投与し、必要に応じて無期限に投与を継続することができる。アルツハイマー病を有するとは診断されていないが、アルツハイマー病のリスクを実質的に有すると考えられる患者を治療する際には、医師は好ましくは、加齢に伴う記憶または認識問題などの初期の前アルツハイマー症状を患者が初めて経験したときに、治療を開始すべきである。加えて、ＡＰＯＥ４などの遺伝子マーカーまたはアルツハイマー病を予言する他の生物学的インジケータの検出を介して、アルツハイマーを発生するリスクを有すると決定することができる患者がいる。これらの状況では、患者が疾患の症状を示さなくても、本発明の化合物の投与を、症状が現れる前に開始し、治療を無期限に継続して、疾患の発症を予防するまたは遅延させることができる。
【０１４８】
本発明の化合物は、経口、非経口（ＩＶ、ＩＭ、デポーＩＭ、ＳＱおよびデポーＳＱ）、舌下、鼻腔内（吸入）、クモ膜下、局所または直腸で投与することができる。当業者に知られている投与形態が、本発明の化合物を送達するために適している。
【０１４９】
治療有効量の本発明の化合物を含む組成物を提供する。化合物を好ましくは、経口投与では錠剤、カプセルまたはエリキシルなどの適切な医薬製剤に、または非経口投与では無菌溶液または懸濁液に製剤する。典型的には、前記化合物を、当分野でよく知られている技術および手順を使用して、医薬組成物に製剤する。
【０１５０】
本発明の化合物または化合物の混合物もしくは生理学的に許容できる塩約１から５００ｍｇを、生理学的に許容できる媒体、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香料などと共に、許容される医薬実施により要求される単位投与形態に配合する。これらの組成物または製剤中の活性物質の量は、記載の範囲の適切な用量が得られるような量である。組成物は好ましくは、単位投与形態で製剤されるが、各用量は、活性成分約２から約１００ｍｇ、さらに好ましくは約１０から約３０ｍｇを含有する。「単位投与形態」との用語は、ヒト対象および他の哺乳動物のための単位用量として適している物理的に別々の単位を指しており、各単位は、所望の治療効果を生じさせるために算出された予め決定された量の活性物質を適切な医薬賦形剤と共に含む。
【０１５１】
組成物を調製するために、本発明の１種または複数の化合物を、適切な薬学的に許容できる担体と混合する。化合物を混合または添加して生じる混合物は、溶液、懸濁液、エマルションなどであってよい。リポソーム懸濁液も、薬学的に許容できる担体として適している。これらは、当業者に知られている方法に従い調製することができる。生じる混合物の形態は、所定の投与方法ならびに選択された担体または媒体の化合物の溶解性を含むいくつかのファクターに左右される。有効な濃度は、治療される疾患、障害または状態のうちの少なくとも１つの症状を低減または緩和するために十分なものであり、経験的に決定することができる。
【０１５２】
本明細書で提供される化合物を投与するために適している薬学的担体または媒体には、特定の投与方法に適していると当業者に知られている任意の担体が含まれる。加えて、活性物質を、所望の作用を害さない他の活性物質と、または所望の作用を補足するか、他の作用を有する物質と混合することもできる。化合物を、組成物中で単独の薬学的に活性な成分として製剤することもできるし、他の活性成分と組み合わせることもできる。
【０１５３】
化合物が不十分な溶解性を示す場合には、可溶化のための方法を使用することができる。このような方法は知られていて、これらに限られないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの補助溶媒を使用すること、ツイーン（登録商標）などの界面活性剤を使用すること、および重炭酸ナトリウム水溶液に溶解することが含まれる。塩またはプロドラッグなどの化合物の誘導体も、有効な医薬組成物を製剤するために使用することができる。
【０１５４】
化合物の濃度は、化合物がそのために投与される障害の少なくとも１つの症状を低減または緩和する投与量を送達するために有効なものである。典型的には、組成物を、単回用量投与のために製剤する。
【０１５５】
本発明の化合物は、時間放出製剤またはコーティングなどの、体から迅速に排出されることを防ぐ担体を用いて調製することができる。このような担体には、これらに限られないが、マイクロカプセル封入送達系などの制御放出製剤が含まれる。活性化合物を、治療される患者に望ましくない副作用を伴わずに、治療的に有用な作用を発揮するために十分な量で、薬学的に許容できる担体に含ませる。治療有効濃度は、治療される障害に関して知られているインビトロおよびインビボモデル系において化合物を試験することにより、経験的に決定することができる。
【０１５６】
本発明の化合物および組成物は、複数または単一の用量容器に封入することができる。封入された化合物および組成物を、例えば使用のために組み立てることができるコンポーネント部品を含むキットの形態で提供することができる。例えば、凍結乾燥された形態の化合物阻害剤および適切な希釈剤を、使用前に組み合わせる別々のコンポーネントとして提供することができる。キットは、化合物阻害剤および同時投与のための第２の治療剤を含んでもよい。阻害剤および第２の治療剤を、別々のコンポーネント部品として提供することができる。キットは、複数の容器を含んでよく、各容器は、本発明の化合物の１個または複数の単位用量を保持する。容器を好ましくは、これらに限られないが、経口投与では錠剤、ゲル、カプセル、持続放出カプセルなど；非経口投与ではデポー製品、予備充填シリンジ、アンプル、バイアルなど；ならびに局所投与ではパッチ、メディパッド、クリームなどを含む望ましい投与方法に合わせる。
【０１５７】
薬物組成物中での活性化合物の濃度は、活性化合物の吸収、失活および排出率、投与スケジュールならびに投与量、さらに当業者に知られている他のファクターに左右される。
【０１５８】
活性成分を、１回で投与することもできるし、いくつかのより小さい用量に分けて、時間を空けて投与することもできる。治療の正確な用量および期間は、治療される疾患に関連しており、知られている試験プロトコルを使用して経験的に、またはインビボまたはインビトロ試験データからの外挿法により決定することができると理解されたい。濃度および用量値はさらに、緩和する状態の重度に伴って変動しうることを特記すべきである。さらに、任意の特定の対象では、特定の投与計画を、個々の必要性および組成物を投与するか、投与を監視する人の専門的判断に応じて時と共に調整すること、本明細書に記載の濃度範囲は、例に過ぎず、請求されている組成物の範囲または実施を限定する意図はないことを理解されたい。
【０１５９】
経口投与が望ましい場合、化合物を、胃の酸性環境から守る組成で提供すべきである。例えば、組成物を、胃においてはその完全性を保持し、腸において活性化合物を放出する腸溶コーティング中で製剤することができる。組成物をさらに、制酸薬または他のこのような成分と組み合わせて製剤することができる。
【０１６０】
経口組成物は通常、不活性希釈剤または可食担体を含み、錠剤に圧縮するか、ゼラチンカプセルに封入することができる。経口治療投与の目的では、１種または複数の活性化合物を、賦形剤と共に導入し、錠剤、カプセルまたはトローチ剤の形態で使用することができる。薬学的に相容性の結合剤および補助剤物質が、組成物の一部として含まれていてもよい。
【０１６１】
錠剤、ピル、カプセル、トローチ剤などは、次の成分または同様の性質の化合物を含むことができる：これらに限られないが、トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤；微結晶性セルロース、デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；これらに限られないが、アルギン酸およびコーンスターチなどの崩壊剤；これらに限られないが、ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤；これらに限られないが、コロイド二酸化シリコンなどの流動促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；ならびにペパーミント、サリチル酸メチルまたはフルーツ香料などの香料。
【０１６２】
投与単位形態がカプセルである場合、これは、前記タイプの物質に加えて、脂肪族油などの液体担体を含有してもよい。加えて、投与単位形態は、投与単位の物理的形態を変更する様々な他の物質、例えば、糖および他の腸溶媒のコーティングを含有してもよい。化合物はさらに、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェファ剤、チューインガムなどの成分として投与することもできる。シロップ剤は、活性化合物に加えて、甘味剤および一定の防腐剤としてのスクロース、染料および着色剤ならびに香料を含有してもよい。
【０１６３】
活性物質を、所望の作用を害さない他の活性な物質と、または所望の作用を補足する物質と混合することもできる。
【０１６４】
非経口、真皮内、皮下または局所投与に使用される溶液または懸濁液は、次の成分のうちのいずれかを含んでもよい：注射用の水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの天然に生じる植物油またはオレイン酸エチルなどの合成脂肪媒体、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールおよびメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸および重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩およびリン酸塩などの緩衝剤；ならびに塩化ナトリウムおよびデキストロースなどの張度を調節するための薬剤。非経口製剤を、ガラス、プラスチックまたは他の適切な材料からなるアンプル、使い捨てシリンジまたは多人数用バイアルに封入することができる。緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤などを、必要に応じて導入することもできる。
【０１６５】
静脈内投与する場合、適切な担体には、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ならびにグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびこれらの混合物などの増粘剤および可溶化剤を含む溶液が含まれる。組織をターゲットとするリポソームを含むリポソーム懸濁液も、薬学的に許容できる担体として適していることがある。これらは、例えば米国特許第４５２２８１１号明細書に記載の知られている方法に従い調製することができる。
【０１６６】
活性化合物は、化合物が体から迅速に排出されることを防ぐ時間放出製剤またはコーティングなどの担体と共に、調製することができる。このような担体には、これらに限られないが、インプラントおよびマイクロカプセル封入送達系などの制御放出製剤ならびにコラーゲン、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸などの生分解性生体親和性ポリマーが含まれる。このような製剤を調製する方法は、当業者に知られている。
【０１６７】
本発明の化合物は、経口で、非経口で（ＩＶ、ＩＭ、デポーＩＭ、ＳＱおよびデポーＳＱ）、舌下、鼻腔内（吸入）、クモ膜下、局所または直腸で投与することができる。当業者に知られている投与形態は、本発明の化合物を送達するために適している。
【０１６８】
経口で投与する場合、本発明の化合物は、当業者によく知られているような経口投与のための通常の投与形態で投与することができる。これらの投与形態には、錠剤およびカプセルの通常の固体単位投与形態、さらに溶液、懸濁液およびエリキシル剤などの液体投与形態が含まれる。固体投与形態を使用する場合、それらが、持続放出性を有し、本発明の化合物を１日１回または２回のみ投与すればよいことが好ましい。
【０１６９】
経口投与形態を、患者に１日１、２、３または４回投与する。本発明の化合物を１日３回以下、さらに好ましくは１日１回または２回投与することが好ましい。したがって、本発明の化合物を経口投与形態で投与することが好ましい。どのような経口投与形態を使用する場合でも、本発明の化合物を胃の酸性環境から守るように、設計されていることが好ましい。腸溶被覆されている錠剤は、当業者によく知られている。加えて、酸性の胃から保護するためにそれぞれコーティングされている小さい球体を充填されているカプセルも、当業者にはよく知られている。
【０１７０】
経口投与する場合、ベータ−セクレターゼ活性を阻害するか、Ａベータ産生を阻害するか、Ａベータ堆積を阻害するか、ＡＤを治療または予防するために治療的に有効な投与量は、約０．１ｍｇ／日から約１０００ｍｇ／日である。経口用量は、約１ｍｇ／日から約１００ｍｇ／日であることが好ましい。経口用量は、約５ｍｇ／日から約５０ｍｇ／日であることが、さらに好ましい。患者が１回用量で開始したとしても、その用量は、患者の状態変化に応じて時間と共に変化しうることは理解されたい。
【０１７１】
本発明の化合物を有利に、ナノ結晶分散製剤で送達することもできる。このような製剤の調製は例えば、米国特許第５１４５６８４号明細書に記載されている。ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤のナノ結晶分散剤およびその使用法は、米国特許第６０４５８２９号明細書に記載されている。ナノ結晶製剤は典型的には、薬物化合物の比較的高い生物学的利用率をもたらす。
【０１７２】
本発明の化合物は、非経口で、例えばＩＶ、ＩＭ、デポーＩＭ、ＳＣまたはデポーＳＣで投与することができる。非経口で投与する場合、約０．５から約１００ｍｇ／日、好ましくは１日約５から約５０ｍｇの治療有効量を送達すべきである。デポー製剤を注射で１カ月に１回または２週間ごとに１回使用する場合、用量は、約０．５ｍｇ／日から約５０ｍｇ／日または約１５ｍｇから約１５００ｍｇの１カ月用量であるべきである。一部では、アルツハイマー病を伴う患者の健忘性により、非経口投与形態はデポー製剤であることが好ましい。
【０１７３】
本発明の化合物は、舌下投与することができる。舌下投与する場合、本発明の化合物を、１日１から４回、ＩＭ投与に関して前記した量で投与すべきである。
【０１７４】
本発明の化合物は、鼻腔内投与することができる。この経路で投与する場合、適切な投与形態は、当業者に知られているような鼻スプレーまたは乾燥粉末である。鼻腔内投与のための本発明の化合物の用量は、ＩＭ投与に関して前記した量である。
【０１７５】
本発明の化合物は、クモ膜下投与することができる。この経路により投与する場合、適切な投与形態は、当業者に知られているような非経口投与形態であってよい。クモ膜下での本発明の化合物の用量は、ＩＭ投与に関して前記した量である。
【０１７６】
本発明の化合物は、局所投与することができる。この経路により投与する場合、適切な投与形態は、クリーム、軟膏またはパッチである。投与される本発明の化合物の量により、パッチが好ましい。局所投与する場合、用量は、約０．５ｍｇ／日から約２００ｍｇ／日である。パッチにより送達することができる量は限られているので、２個またはそれ以上のパッチを使用してもよい。パッチの数およびサイズは、重要ではなく、重要なことは、当業者に知られているように、本発明の化合物の治療有効量を送達することである。本発明の化合物は、当業者に知られているように、座剤により直腸で投与することもできる。座剤により投与する場合、治療有効量は、約０．５ｍｇから約５００ｍｇである。
【０１７７】
通常、１日約０．０１から約１００ｍｇ／体重ｋｇの用量レベルを、ヒトまたは他の哺乳動物に投与する。ヒトにおける好ましい用量範囲は、１日約０．１から約５０ｍｇ／体重ｋｇであり、これを、単回用量として、または複数用量に分けて投与することができる。ヒト以外の哺乳動物における好ましい用量範囲は、１日約０．０１から約１０．０ｍｇ／体重ｋｇであり、これを、単回用量として、または複数用量に分けて投与することができる。ヒト以外の哺乳動物におけるさらに好ましい用量範囲は、１日約０．１から約５．０ｍｇ／体重ｋｇであり、これを、単回用量として、または複数用量に分けて投与することができる。
【０１７８】
本明細書で言及される状態を治療するためのエアロゾル製剤は、平均的な成人においては好ましくは、エアロゾルの各計測用量または「パフ」が式Ｉの化合物約２０μｇから約１０００μｇを含有するように準備されている。エアロゾルでの全１日用量は、約１００μｇから約１０ｍｇの範囲内である。投与は、１日複数回、例えば２、３、４または８回であってよく、例えば各回１、２または３用量を投与する。
【０１７９】
本発明の化合物は、当業者に知られているように、インプラントにより投与することもできる。インプラントにより本発明の化合物を投与する場合、治療有効量は、デポー投与に関して前記した量である。
【０１８０】
本発明の特定の化合物および望ましい投与形態を示されれば、当業者であれば、適切な投与形態を調製し、投与する方法が分かるであろう。
【０１８１】
本発明の化合物は、本明細書に開示されている疾患または状態を予防または治療するために、前記と同じ方法で、同じ投与経路により、同じ医薬投与形態を使用して、同じ投与スケジュールで使用される。
【０１８２】
本発明の化合物は、相互に、または前記で列挙された状態を治療または予防するために使用される他の治療剤または手法と組み合わせて使用することができる。このような薬剤または手法には：タクリン（テトラヒドロアミノアクリジン、ＣＯＧＮＥＸ（登録商標）として販売）、塩酸ドネペジル（アリセプト（登録商標）として販売）およびリバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）として販売）などのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤；ガンマ−セクレターゼ阻害剤；シクロオキシゲナーゼＩＩ阻害剤などの抗炎症剤；ビタミンＥおよびギンコリドなどの抗酸化剤；例えばＡベータペプチドでの免疫化または抗Ａベータペプチド抗体の投与などの免疫学的手法；スタチン；ならびにセレブロリシン（登録商標）、ＡＩＴ−０８２（Ｅｍｉｌｉｅｕ、２０００、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．５７：４５４）などの直接的または間接的な向神経剤および将来の他の向神経剤が含まれる。
【０１８３】
加えて、式（Ｉ）の化合物は、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）の阻害剤と共に使用することもできる。Ｐ−ｇｐ阻害剤およびこのような化合物の使用は、当業者に知られている。例えば、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５３、４５９５〜４６０２ページ（１９９３年）、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２、７〜１２（１９９６年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５６、４１７１〜４１７９ページ（１９９６年）、国際公開第９９／６４００１号パンフレットおよび国際公開第０１／１０３８７号パンフレット参照。Ｐ−ｇｐ阻害剤の血中濃度は、Ｐ−ｇｂによる式（Ａ）の化合物の脳血中濃度の低減を阻害する効果を発揮するような濃度であることが重要である。この目的のために、Ｐ−ｇｂ阻害剤および式（Ａ）の化合物を同時に、同じか異なる投与経路により、または別々の時に投与することができる。重要なことは、投与する時ではなく、Ｐ−ｇｐ阻害剤の有効な血中レベルを得ることである。
【０１８４】
適切なＰ−ｇｐ阻害剤には、シクロスポリンＡ、ベラパミル、タモキシフェン、キニジン、ビタミンＥ−ＴＧＰＳ、リトナビル、酢酸メゲストロール、プロゲステロン、ラパマイシン、１０，１１−メタノジベンゾスベラン、フェノチアジン、ＧＦ１２０９１８、ＦＫ５０６、ＶＸ−７１０、ＬＹ３３５９７９、ＰＳＣ−８３３、ＧＦ−１０２９１８などのアクリジン誘導体および他のステロイドが含まれる。同じ機能を有し、したがって同じ結果を達成するさらなる薬剤も見つかるであろうし、このような化合物も、有用と考えられることを理解されたい。
【０１８５】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、経口、非経口（ＩＶ、ＩＭ、ＩＭデポー、ＳＱ、ＳＱデポー）、局所、舌下、直腸、鼻腔内、クモ膜下およびインプラントにより投与することができる。
【０１８６】
Ｐ−ｇｐ阻害剤の治療有効量は、約０．１から約３００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１日約０．１から約１５０ｍｇ／ｋｇである。患者が１回用量から始めたとしても、その用量は、患者の状態変化に応じて時と共に変化させるべきであることを理解されたい。
【０１８７】
経口で投与する場合、Ｐ−ｇｐ阻害剤は、当業者によく知られているような経口投与のための通常の投与形態で投与することができる。これらの投与形態には、錠剤およびカプセルの通常の固体単位投与形態、さらに溶液、懸濁液およびエリキシル剤などの液体投与形態が含まれる。固体投与形態を使用する場合、それらが、持続放出性を有し、Ｐ−ｇｐ阻害剤を１日１回または２回のみ投与すればよいことが好ましい。経口投与形態を、患者に１日１から４回投与する。Ｐ−ｇｐ阻害剤を１日３回以下、さらに好ましくは１日１回または２回投与することが好ましい。したがって、Ｐ−ｇｐ阻害剤を固体投与形態で投与することが好ましく、さらに、その固体投与形態が、１日１回または２回投与を可能にする持続放出形態であることが好ましい。どのような投与形態を使用する場合でも、Ｐ−ｇｐ阻害剤を胃の酸性環境から守るように、設計されていることが好ましい。腸溶被覆されている錠剤は、当業者によく知られている。加えて、酸性の胃から保護するためにそれぞれコーティングされている小さい球体を充填されているカプセルも、当業者にはよく知られている。
【０１８８】
加えて、Ｐ−ｇｐ阻害剤は、非経口投与することができる。非経口で投与する場合、これらは、ＩＶ、ＩＭ、デポーＩＭ、ＳＱまたはデポーＳＱで投与することができる。
【０１８９】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、舌下投与することができる。舌下投与する場合、Ｐ−ｇｐ阻害剤は、ＩＭ投与に関してと同じ量で１日１から４回投与すべきである。
【０１９０】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、鼻腔内投与することができる。この投与経路で投与する場合、適切な投与形態は、当業者に知られている鼻スプレーまたは乾燥粉末である。鼻腔内投与のためのＰ−ｇｐ阻害剤の用量は、ＩＭ投与に関してと同じである。
【０１９１】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、クモ膜下投与することができる。この投与経路により投与する場合、適切な投与形態は、当業者に知られているような非経口投与形態であってよい。
【０１９２】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、局所投与することができる。この投与経路により投与する場合、適切な投与形態は、クリーム、軟膏またはパッチである。投与が必要とされるＰ−ｇｐ阻害剤の量により、パッチが好ましい。しかしながら、パッチにより送達することができる量は限られている。したがって、２個またはそれ以上のパッチが必要なこともある。パッチの数およびサイズは、重要ではなく、重要なことは、当業者に知られているように、Ｐ−ｇｐ阻害剤の治療有効量を送達することである。
【０１９３】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、当業者に知られているように、座剤により直腸で投与することもできる。
【０１９４】
Ｐ−ｇｐ阻害剤は、当業者に知られているように、インプラントにより投与することもできる。
【０１９５】
Ｐ−ｇｐ阻害剤を投与する投与経路についても、投与形態についても、新規なことはない。特定のＰ−ｇｐ阻害剤および望ましい投与形態を示されれば、当業者であれば、Ｐ−ｇｐ阻害剤に適した投与形態を調製する方法は分かるであろう。
【０１９６】
投与の正確な用量および回数は、投与される本発明の特定の化合物、治療される特定の状態、治療される状態の重度、特定の患者の年齢、体重、全身的な身体状態ならびに個人が摂取していてよい他の投薬に左右されることは、当分野に熟達している投薬医師によく知られているように、当業者であれば明らかなはずである。
【０１９７】
ＡＰＰ分解の阻害
本発明の化合物は、ＡＰＰ６９５アイソホームまたはその突然変異体でナンバリングされるＭｅｔ５９６とＡｓｐ５９７との間での、またはＡＰＰ７５１もしくはＡＰＰ７７０などの別のアイソホームまたはそれらの突然変異体での対応する部位（場合によっては「ベータセクレターゼ部位」と称される）でのＡＰＰの分解を阻害する。特定の理論に結びつけられることは望まないが、ベータ−セクレターゼ活性の阻害は、ベータアミロイドペプチド（Ａベータ）の産生を阻害することと考えられる。阻害活性は、様々な阻害アッセイのうちのいずれかで証明されるが、その際、ベータ−セクレターゼ酵素の存在下でのＡＰＰ基質の分解を、阻害化合物の存在下、ベータ−セクレターゼ分解部位で分解をもたらすために通常は十分な条件下で分析する。未処理または不活性対照と比較してのベータ−セクレターゼ分解部位でのＡＰＰ分解の低減を、阻害活性と相関させる。本発明の化合物阻害剤の効力を証明するために使用することができるアッセイ系は知られている。代表的なアッセイ系は例えば、米国特許第５９４２４００号明細書、同第５７４４３４６号明細書に、さらに下記の実施例に記載されている。
【０１９８】
ベータ−セクレターゼの酵素活性およびＡベータの産生は、天然、突然変異、短縮および／または合成ＡＰＰ基質、天然、突然変異、短縮および／または合成酵素ならびに試験化合物を使用してインビトロまたはインビボで分析することができる。分析は、天然、突然変異および／または合成ＡＰＰおよび酵素を発現する一次または二次細胞ならびに天然ＡＰＰおよび酵素を発現する動物モデルを必要とするか、基質および酵素を発現する遺伝子導入動物モデルを利用することができる。酵素活性の検出は、例えばイムノアッセイ、蛍光分析または色素産生アッセイ、ＨＰＬＣまたは他の検出手段により、１種または複数の分解産物を分析することにより可能である。阻害化合物は、反応系でベータ−セクレターゼを介した分解が観察され、阻害化合物の不在下で測定される対照に比較して、産生されるベータ−セクレターゼ分解産物の量を低減する能力を有する化合物として決定される。
【０１９９】
ベータ−セクレターゼ
様々な形態のベータ−セクレターゼ酵素が知られており、酵素活性および酵素活性の阻害をアッセイするために利用可能で有用である。これらには、天然、組換えおよび合成形態の酵素が含まれる。ヒトベータ−セクレターゼは、ベータ部位ＡＰＰ分解酵素（ＢＡＣＥ）、Ａｓｐ２およびメマプシン２として知られており、例えば、米国特許第５７４４３４６号明細書ならびに国際公開ＷＯ９８／２２５９７号パンフレット、国際公開第００／０３８１９号パンフレット、国際公開第０１／２３５３３号パンフレットおよび国際公開第００／１７３６９号パンフレット、さらに文献刊行物（Ｈｕｓｓａｉｎら、１９９９年、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１４：４１９〜４２７ページ；Ｖａｓｓａｒら、１９９９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６：７３５〜７４１ページ；Ｙａｎら、１９９９年、Ｎａｔｕｒｅ  ４０２：５３３〜５３７ページ；Ｓｉｎｈａら、１９９９年、Ｎａｔｕｒｅ  ４０：５３７〜５４０ページ；およびＬｉｎら、２０００年、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９７：１４５６〜１４６０ページ）で特性決定されている。合成形態の酵素も、記載されている（国際公開第９８／２２５９７号パンフレットおよび国際公開第００／１７３６９号パンフレット）。ベータ−セクレターゼを抽出し、ヒト脳組織から精製し、細胞、例えば組換え酵素を発現する哺乳動物細胞中で製造することができる。
【０２００】
好ましい化合物は、５０マイクロモル未満の濃度、好ましくは１０マイクロモル以下の濃度、さらに好ましくは１マイクロモル以下、最も好ましくは１０ナノモル以下の濃度でベータ−セクレターゼ酵素活性の５０％を阻害するために有効である。
【０２０１】
ＡＰＰ基質
ＡＰＰのベータ−セクレターゼを介した分解の阻害を証明するアッセイは、Ｋａｎｇら、１９８７年、Ｎａｔｕｒｅ  ３２５：７３３〜６ページに記載されている６９５アミノ酸「正常」アイソタイプ、キタグチら、１９８１年、Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５３０〜５３２ページに記載されている７７０アミノ酸アイソタイプおよびスウェーデン突然変異（ＫＭ６７０−１ＮＬ）（ＡＰＰ−ＳＷ）、ロンドン突然変異（Ｖ７１７６Ｆ）などの突然変異体を含む、知られている形態のＡＰＰを利用することができる。知られている様々な突然変異体の総説に関しては例えば、米国特許第５７６６８４６号明細書、さらにＨａｒｄｙ、１９９２年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１：２３３〜２３４ページ参照。追加的な有用な基質には、二塩基性アミノ酸変異、例えば国際公開第００／１７３６９号パンフレットに開示されているＡＰＰ−ＫＫ、ＡＰＰの断片およびベータ−セクレターゼ分解部位を含む合成ペプチド、野生型（ＷＴ）または突然変異形態、例えば米国特許第５９４２４００号明細書および国際公開第００／０３８１９号パンフレットに記載されているＳＷが含まれる。
【０２０２】
ＡＰＰ基質は、ＡＰＰのベータ−セクレターゼ分解部位（ＫＭ−ＤＡまたはＮＬ−ＤＡ）を含み、例えば、完全ＡＰＰペプチドまたは突然変態、ＡＰＰ断片、組換えまたは合成ＡＰＰまたは融合ペプチドを含む。好ましくは、融合ペプチドは、酵素アッセイで有用な成分を有する、例えば単離および／または検出特性を有するペプチドに融合しているベータ−セクレターゼ分解部位を含む。有用な成分は、抗体結合のための抗原性エピトープ、標識または他の検出成分、結合基質などであってよい。
【０２０３】
抗体
ＡＰＰ分解に特徴的な産物を、例えばＰｉｒｔｔｉｌａら、１９９９年、Ｎｅｕｒｏ．Ｌｅｔｔ．２４９：２１〜４および米国特許第５６１２４８６号明細書に記載されているように、様々な抗体を使用するイムノアッセイにより測定することができる。Ａベータを検出するために有用な抗体には例えば、Ａベータペプチドのアミノ酸１〜１６上のエピトープを特異的に認識するモノクローナル抗体６Ｅ１０（Ｓｅｎｅｔｅｋ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）；それぞれヒトＡベータ１〜４０および１〜４２に特異的な抗体１６２および１６４（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｓｔａｔｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂａｓｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｔａｔｅｎ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）；および米国特許第５５９３８４６号明細書に記載されているベータ−アミロイドペプチドの結合領域、残基１６と１７との間の部位を認識する抗体が含まれる。米国特許第５６０４１０２号明細書および第５７２１１３０号明細書に記載されているように、ＡＰＰの残基５９１から５９６の合成ペプチドに対して生じる抗体およびスウェーデン突然変異の５９０〜５９６に対して生じるＳＷ１９２抗体も、ＡＰＰおよびその分解産物の免疫アッセイにおいて有用である。
【０２０４】
アッセイ系
ベータ−セクレターゼ分解部位でのＡＰＰ分解を決定するためのアッセイは、当分野でよく知られている。アッセイ例は、例えば米国特許第５７４４３４６号明細書および同第５９４２４００号明細書に記載されており、下記の実施例にも記載されている。
【０２０５】
無細胞アッセイ
本発明の化合物の阻害活性を証明するために使用することができるアッセイ例は、例えば国際公開第００／１７３６９号パンフレット、国際公開第００／０３８１９号パンフレットならびに米国特許第５９４２４００号明細書および同第５７４４３４６号明細書に記載されている。このようなアッセイは、無細胞インキュベーションまたは細胞インキュベーションで、ベータ−セクレターゼおよびベータ−セクレターゼ分解部位を有するＡＰＰ基質を発現する細胞を使用して行うことができる。
【０２０６】
ＡＰＰのベータ−セクレターゼ分解部位を含むＡＰＰ基質、例えば完全ＡＰＰまたは変異体、アミノ酸配列：ＫＭ−ＤＡもしくはＮＬ−ＤＡを含むＡＰＰ断片または組換えもしくは合成ＡＰＰ基質を、ベータ−セクレターゼ酵素、ベータ−セクレターゼ活性を有し、ＡＰＰ−ベータ−セクレターゼ分解部位を分解しうるその断片または合成もしくは組換えポリペプチド変異体の存在下に、酵素の分解活性に適しているインキュベーション条件下にインキュベーションする。適切な基質には、ペプチドまたはそのベータ−セクレターゼ分解産物の精製または検出を容易にするために有用な基質ペプチドおよび修飾を含む融合タンパク質またはペプチドであってもよい誘導体も含まれうる。有用な修飾には、抗体結合に関して知られている抗原性エピトープの挿入；標識または検出可能な成分の連結、結合基質の連結などが含まれる。
【０２０７】
無細胞インビトロアッセイに適しているインキュベーション条件は例えば、約１５０ナノモルから１０マイクロモルの基質、約１０から２００ピコモルの酵素および約０．１ナノモルから１０マイクロモルの阻害剤化合物を水溶液中、約ｐＨ４〜７、約３７℃で、約１０分から３時間含む。これらのインキュベーション条件は、例に過ぎず、特定のアッセイ成分および／または所望の測定系のために必要に応じて変化しうる。特性のアッセイ成分のためのインキュベーション条件の最適化は、使用される特定のベータ−セクレターゼ酵素およびそのｐＨ最適値、アッセイで使用されうる任意の追加的な酵素および／またはマーカーなどによるべきである。このような最適化は、常用的であり、過度の実験を必要としない。
【０２０８】
細胞アッセイ
数多くの細胞ベースのアッセイを、ベータ−セクレターゼ活性および／またはＡベータを放出するＡＰＰのプロセッシングを分析するために使用することができる。細胞内および本発明の化合物阻害剤の存在または不在下でのＡＰＰ基質とベータ−セクレターゼ酵素との接触を、化合物のベータ−セクレターゼ阻害活性を証明するために使用することができる。好ましくは、有用な阻害化合物の存在下でのアッセイは、非阻害対照と比較して少なくとも約３０％、最も好ましくは少なくとも約５０％の酵素活性の阻害をもたらす。
【０２０９】
一実施形態では、ベータ−セクレターゼを天然に発現する細胞を使用する。あるいは、細胞を、前記で検討した組換えベータ−セクレターゼまたは合成変異体酵素を発現するように修飾する。ＡＰＰ基質を培地に加えることもできるが、好ましくは細胞内で発現させる。ＡＰＰ、ＡＰＰの変異体もしくは突然変異形体を天然に発現する細胞または、ベータ−セクレターゼＡＰＰ分解部位を含むＡＰＰのアイソホーム、突然変異もしくは変異ＡＰＰ、組換えもしくは合成ＡＰＰ、ＡＰＰ断片または合成ＡＰＰペプチドもしくは融合タンパク質を発現するように形質転換された細胞を使用することができるが、ただし、発現されるＡＰＰは、酵素との接触が可能であり、酵素分解活性を分析することができる。
【０２１０】
ＡＰＰからＡベータを正常にプロセッシングするヒト細胞系は、本発明の化合物の阻害活性をアッセイするために有用な手段を提供する。培地中でのＡベータおよび／または他の分解産物の生成および放出を、例えばウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡなどによる酵素結合イムノアッセイ（ＥＩＡ）などのイムノアッセイにより測定することができる。
【０２１１】
ＡＰＰ基質および活性なベータ−セクレターゼを発現する細胞を、化合物阻害剤の存在下にインキュベーションして、酵素活性の阻害を対照と比較して証明することができる。ベータ−セクレターゼの活性は、ＡＰＰ基質の１種または複数の分解産物を分析することにより測定することができる。例えば、基質ＡＰＰに対するベータ−セクレターゼ活性の阻害は、Ａベータなどの特定のベータ−セクレターゼ誘発ＡＰＰ分解産物の放出を低減すると予測される。
【０２１２】
神経および非神経細胞の両方がＡベータをプロセッシングおよび放出するが、内生ベータ−セクレターゼ活性のレベルは低く、往々にして、ＥＩＡによる検出が難しい。したがって、高いベータ−セクレターゼ活性、ＡＰＰからＡベータへの高いプロセッシングおよび／またはＡベータの高い産生を示すことが知られている細胞型を使用することが好ましい。例えば、ＡＰＰのスウェーデン突然変異形態（ＡＰＰ−ＳＷ）；ＡＰＰ−ＫＫ；またはＡＰＰ−ＳＷ−ＫＫでの細胞のトランスフェクションは、容易に測定することができる高いベータ−セクレターゼ活性およびＡベータ−産生量を示す細胞をもたらす。
【０２１３】
このようなアッセイでは例えば、ＡＰＰおよびベータ−セクレターゼを発現する細胞を、培地中で、ＡＰＰ基質のその分解部位でのベータ−セクレターゼ酵素活性に適している条件下にインキュベーションする。化合物阻害剤に細胞を曝露すると、培地中に放出される細胞溶解産物中でのＡベータの量および／またはＡＰＰのＣＴＦ９９断片の量が、対照と比較して低減される。ＡＰＰの分解産物は例えば、前記で検討したような特定の抗体でのイムノアッセイにより分析することができる。
【０２１４】
ベータ−セクレターゼ活性を分析するために好ましい細胞には、一次ヒト神経細胞、一次モルモット細胞、導入遺伝子がＡＰＰである一次遺伝子導入動物神経細胞およびＡＰＰを発現する安定なＨ４神経芽細胞腫細胞系の細胞、例えばＡＰＰ−ＳＷなどの他の細胞が含まれる。
【０２１５】
インビボアッセイ：動物モデル
様々な動物モデルを使用して、前記のようにベータ−セクレターゼ活性および／またはＡベータを放出するＡＰＰのプロセッシングを分析することができる。例えば、ＡＰＰ基質および／またはベータ−セクレターゼ酵素を発現する遺伝子導入動物を使用して、本発明の化合物の阻害活性を証明することができる。一定の遺伝子導入動物モデルが、例えば米国特許第５８７７３９９号明細書、同第５６１２４８６号明細書、同第５３８７７４２号明細書、同第５７２０９３６号明細書、同第５８５０００３号明細書、同第５８７７０１５号明細書および同第５８１１６３３号明細書ならびにＧａｎｅｓら、１９９５年、Ｎａｔｕｒｅ  ３７３：５２３ページに記載されている。ＡＤの病体生理に随伴する特徴を示す動物が好ましい。本発明の化合物阻害剤を本明細書に記載の遺伝子導入マウスに投与することにより、化合物の阻害活性を証明するための別の方法が得られる。さらに、薬学的に有効な担体中で、ターゲット組織に達する投与経路を介して、化合物を適切な治療量で投与することが好ましい。
【０２１６】
ベータ−セクレターゼ分解部位でのＡＰＰのベータ−セクレターゼを介した分解およびＡベータ放出の阻害を、これらの動物において、脳脊髄液、血漿または組織などの動物の体液中の分解断片を測定することにより分析することができる。さらに、Ａベータ堆積またはプラークに関する脳組織の分析により、ベータ−セクレターゼ活性の阻害が示されうる。
【０２１７】
本発明の阻害化合物の存在下、ＡＰＰの酵素媒介分解および／または基質からのＡベータの放出を可能にするために十分な条件下に、ＡＰＰ基質とベータ−セクレターゼ酵素とが接触する際に、本発明の化合物は、ベータ−セクレターゼ分解部位でのＡＰＰのベータ−セクレターゼを介した分解を低減するために有効であり、および／またはＡベータの放出量を低減するために有効である。このような接触が、例えば前記のような動物モデルへの本発明の阻害化合物の投与である場合には、化合物は、動物の脳組織でのＡベータ堆積を低減し、ベータアミロイドプラークの数および／またはサイズを低減するために有効である。このような投与が、ヒト対象に対してである場合には、化合物は、低い量のＡベータにより特徴づけられる疾患の進行を阻害または遅延させ、ＡＤの進行を遅延させ、および／または疾患のリスクを有する患者におけるＡＤの発症または発生を予防するために有効である。
【０２１８】
他に定義されていない限り、本明細書で使用される科学的および技術的用語はすべて、本発明が属する分野の専門家に一般に理解されると同じ意味を有する。本明細書で言及されている特許および刊行物はすべて、あらゆる目的のために参照により援用される。
【０２１９】
次の実施例を参照すると、本発明を、さらによく理解することができる。これらの実施例は、本発明の具体的な実施形態を代表するものとして意図されており、本発明の範囲を限定するものとは意図されていない。
【実施例】
【０２２０】
調製例
一般的手順：
簡便化および収率の最大化のために、反応はすべて、窒素雰囲気下に運転した。融点は、修正されていない。クロマトグラフィーは、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを指している。ＮＭＲは、プロトン［１Ｈ］ＮＭＲを指している。ＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚで得て、規定の溶媒の溶媒の重水素ロックシグナルに対するｐｐｍ（δ）で報告されている。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、そのまま言及されている。減圧での蒸発または濃縮は、回転蒸発装置の使用を意味している。
【０２２１】
調製１
４−（Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル
ＣＨ３ＣＮ（７５ｍＬ）中の１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４４（３）、３２８〜３９ページ、２００１年）（４．２ｇ、１８．３０ミリモル）、塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（１．８ｇ、１８．４５ミリモル）、ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物）、ジイソプロピルエチルアミン（１７．０ｍＬ、６３．１ミリモル）およびＥＤＣ（塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド）を室温で２時間４５分攪拌し、濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃと水との間に分配し、有機物を飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、再濃縮すると、４−（Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル４．１６ｇ（８４％）が無色のオイルとして得られた。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ４．０８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、３．１６（ｓ，３Ｈ）、２．８４〜２．６０（ｍ，３Ｈ）、１．７５〜１．５７（ｍ，５Ｈ）、１．４３（３，９Ｈ）。
【０２２２】
調製２
４−（３−イソプロピル−ベンゾイル）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
Ｅｔ２Ｏ（１０ｍＬ）中の１−ブロモ−３−イソプロピルベンゼン（１．６０ｇ、８．０４ミリモル）を、Ｅｔ２Ｏ（５ｍＬ）と積層されているマグネシウム削り屑（０．２５ｇ、１０．３ミリモル）に加えた。１，２−ジブロモエタン１滴を加え、混合物を室温で４５分間攪拌すると、橙色から黄色の混合物が得られた。ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解されている４−（Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル（１．８２ｇ、６．６８ミリモル）を加え、混合物を１８時間攪拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。水を加え、混合物をＥｔＯＡｃに抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮すると、黄色のオイル（２．５７ｇ）が得られた。５〜１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンでのクロマトグラフィー処理により、４−（３−イソプロピル−ベンゾイル）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル１０．４ｇ（４７％）が濃厚な無色のオイルとして得られた。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．７８（ｓ，１Ｈ）、７．７１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４３〜７．３４（ｍ，２Ｈ）、４．１３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．４０〜３．３３（ｍ，１Ｈ）、３．００〜２．８０（ｍ，３Ｈ）、１．８５〜１．６０（ｍ，６Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．２５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）。
【０２２３】
調製３
（３−イソプロピルフェニル）（ピペリジン−４−イル）メタノン
無水ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の４−（３−イソプロピル−ベンゾイル）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１．００ｇ、３．０２ミリモル）をＨＣｌガスで飽和させ、室温で１８時間放置した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ数ｍＬを加え、オイルをスクラッチして、結晶化を誘発した。生じた固体をＥｔ２Ｏと共に粉砕し、回収すると、塩酸（３−イソプロピルフェニル）（ピペリジン−４−イル）メタノン０．６１ｇ（７５％）が得られた：ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ９．６８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、９．４９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．７３（ｓ，１Ｈ）、７．６６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．３７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．５９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．４７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．１８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、２．９４（七重線，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．２７〜２．１０（ｍ，４Ｈ）、１．２３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）。
【０２２４】
調製４
（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノン
メタンスルホン酸無水物（０．１３６ｇ、０．７８ミリモル）を塩酸（３−イソプロピルフェニル）（ピペリジン−４−イル）メタノン（０．２００ｇ、０．７５ミリモル）およびトリエチルアミン（０．２４ｍＬ、１．７２ミリモル）の氷冷ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）溶液に加えた。１時間攪拌した後に、混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに再溶解させ、水およびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮すると、（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノン０．２３ｇ（１００％）が淡黄色のオイルとして得られ、これは、徐々に凝固して、ろう状の黄色の固体をもたらした：ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．７７（ｓ，１Ｈ）、７．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５〜７．３６（ｍ，２Ｈ）、３．７８〜３．７３（対称的多重線，２Ｈ）、３．４２〜３．３６（対称的多重線，１Ｈ）、２．９９〜２．９２（ｍ，３Ｈ）、２．８０（ｓ，３Ｈ）、２．０２〜１．８５（ｍ，４Ｈ）、１．２５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）。
【０２２５】
調製５
（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノンオキシム
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノン（０．２０ｇ、０．６５ミリモル）、塩酸ヒドロキシルアミン（０．０９０ｇ、１．３０ミリモル）およびピリジン（０．１１ｍＬ、１．３６ミリモル）を６時間環流させ、濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃと水との間に分配し、有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮すると、（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノンオキシムのＥおよびＺ異性体の〜１：１混合物０．２１ｇ（１００％）が無色のオイルとして得られ、これを、混合物として使用した。
【０２２６】
調製６
Ｃ−（３−イソプロピル−フェニル）−Ｃ−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチルアミン
方法Ａ
（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノンオキシム（０．２０９ｇ、０．６４ミリモル）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液をＨＣｌガスで飽和させた。炭素上２０％のＰｄ（ＯＨ）２（０．１００ｇ）を加え、生じた混合物を５０ｐｓｉで３．５時間水素化した。この時点で、追加のＰｄ（ＯＨ）２３００ｍｇを加え、反応をさらに１８時間続けた。濾過（セライト）し、濃縮した後に、残留物をＮＨ４ＯＨ水溶液で処理し、ＥｔＯＡｃに抽出した。この抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮すると、Ｃ−（３−イソプロピル−フェニル）−Ｃ−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチルアミン２００ｍｇ（１００％）が濃厚な淡褐色オイルとして得られた：ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．２４〜７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．１１〜７．０３（ｍ，３Ｈ）、３．８３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．５９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．８６（七重線，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．７１（ｓ，３Ｈ）、２．５８（ｄｔ，Ｊ＝１２．０，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．４８（ｄｔ，Ｊ＝１２．０，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．０７〜２．０３（ｍ，１Ｈ）、１．６０〜１．４７（ｍ，３Ｈ）、１．４５〜１．３０（ｍ，２Ｈ）、１．２７〜１．１７（ｍ（１Ｈ）重複と６Ｈ  ｄ  ＠  １．２１ｐｐｍ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，総計７Ｈ）。
【０２２７】
方法Ｂ
アルミニウムフォイル片（２００ｍｇ）をＨｇＣｌ２の２％水溶液に２０〜３０秒間浸し、水およびＴＨＦですすぎ、（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メタノンオキシム（０．０７４ｇ、０．２２８ミリモル）の攪拌されている１０％ＴＨＦ（１５ｍＬ）水溶液に入れた。３０分後に、フォイルは、黒色の粉末に変化した。混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで、３時間環流した。混合物を冷却し、濾過（セライト）し、ＥｔＯＡｃですすぎ、濃縮した。７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用するクロマトグラフィーにより、未反応のオキシム出発原料の一部（２４ｍｇ、３３％）が得られた。ＥｔＯＡｃでカラムをすすぎ、次いで、２０％および５０％のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶離すると、Ｃ−（３−イソプロピル−フェニル）−Ｃ−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチルアミン１７ｍｇ（２４％）が得られ、これは、方法Ａを使用して調製された物質と同一であった。
【０２２８】
（実施例１）
（１Ｓ，２Ｒ）Ｎ−（１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−３−｛［（３−イソプロピル−フェニル）−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−アセトアミド
ステップ１
（１Ｓ）−２−（３，５−ジフルオロフェニル）−１−［（２Ｓ）−オキシラン−２−イル］エチルカルバミン酸ｔ−ブチル（０．２４ｇ、０．８０ミリモル）およびＣ−（３−イソプロピル−フェニル）−Ｃ−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチルアミン（０．１８９ｇ、０．６０９ミリモル）をイソプロピルアルコール（３ｍＬ）中で５時間環流させた。混合物をＳｉＯ２上で濃縮させ、ＥｔＯＡｃを使用するクロマトグラフィーにより精製すると、（１Ｓ，２Ｒ）（１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−３−｛［（３−イソプロピル−フェニル）−１−（メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル３４７ｍｇ（９４％）がジアステレオマーの〜１：１混合物として得られた：ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ６１０．５（ＭＨ＋）、５１０．４（ＭＨ＋−ＢＯＣ）。
【０２２９】
ステップ２
４ＮのＨＣｌ／ジオキサン（１．４ｍＬ、５．６ミリモル）を、（１Ｓ，２Ｒ）（１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−３−｛［（３−イソプロピル−フェニル）−１−（メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステルジアステレオ異性体の室温のジオキサン（２ｍｌ）溶液に加え、次いで、１８時間攪拌した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５ｍｌ）に再溶解し、Ｅｔ２Ｏを加えると、（１Ｓ，２Ｒ）３−アミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−｛［（３−イソプロピル−フェニル）−１−（メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチル］−アミノ｝−ブタン−２−オール塩酸塩２２８ｍｇ（７１％）が白色の固体として得られ、これは、ジアステレオ異性体の〜１：１混合物として存在した：ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ５１０．４（ＭＨ＋）。
【０２３０】
ステップ３
（１Ｓ，２Ｒ）３−アミノ−４−（３，５−ジフルオロ−フェニル）−１−｛［（３−イソプロピル−フェニル）−１−（メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチル］−アミノ｝−ブタン−２−オールのジアステレオ異性体混合物（０．２２８ｇ、０．３９２ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中に溶かした。Ｎ−メチルモルホリン（０．２２ｍＬ、２．００ミリモル）を加え、混合物を氷中で冷却した。酢酸（０．０２４ｍＬ、０．４１９ミリモル）、ＨＯＢＴ（０．０５９ｇ、０．４３７ミリモル）およびＥＤＣ（０．０８３ｇ、０．４３ミリモル）を加え、混合物を０℃で３時間攪拌した。反応を濃縮し、ＥｔＯＡｃと水との間に分配し、有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮すると、濃厚なわら色のオイル（０．２５６ｇ）が得られた。ＥｔＯＡｃおよび５〜１０％のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃでのクロマトグラフィーにより、（１Ｓ，２Ｒ）Ｎ−（１−（３，５−ジフルオロ−ベンジル）−２−ヒドロキシ−３−｛［（３−イソプロピル−フェニル）−１−（メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−アセトアミドのジアステレオ異性体１３８ｍｇ（６４％）が淡黄色のオイルとして得られた。
【０２３１】
ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２から再結晶化させ、次いで、ＥｔＯＡｃでパルプ化すると、ジアステレオ異性体１  ２５ｍｇが白色の固体として得られた：融点１８６〜１８７℃：ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．２８〜７．２３（ｍ  ＣＨＣｌ３に一部かぶり，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．０２〜６．９９（ｍ，２Ｈ）、６．７１〜６．６３（ｍ，３Ｈ）、５．４８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．１５〜４．０５（ｍ，１Ｈ）、３．８７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．３３〜３．２５（ｍ，２Ｈ）、３．００〜２．８２（ｍ，２Ｈ）、２．８１〜２．７７（ｍ，１Ｈ）、２．７４（ｓ，３Ｈ）、２．６３（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．５３〜２．４３（ｍ，３Ｈ）、２．１３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）、１．８９（ｓ，３Ｈ）、１．７０〜１．５０（ｍ，２Ｈ）、１．５０〜１．３５（ｍ，２Ｈ）、１．２４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）。
【０２３２】
再結晶化残留物を濃縮し、次いで、結晶化をスクラッチングにより、Ｅｔ２Ｏと痕跡量のＥｔＯＡｃおよびＣＨ２Ｃｌ２とを用いて誘発すると、白色の固体が得られた。これを、２：１のＥｔ２Ｏ／ＥｔＯＡｃから再結晶化させると、ジアステレオ異性体２および１の〜９：１混合物が得られた。ジアステレオ異性体２：ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．３１〜７．２１（ｍ  ＣＨＣｌ３に一部かぶり，１Ｈ）、７．１１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９９〜６．９４（ｍ，２Ｈ）、６．６８〜６．５９（ｍ，３Ｈ）、５．６２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．１７〜４．０２（ｍ，１Ｈ）、３．８０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４８〜３．３８（ｍ，１Ｈ）、３．３２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．９７（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．８７（七重線，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．７０（ｓ，３Ｈ）、２．６０〜２．４０（ｍ，４Ｈ）、２．１４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．８４（ｓ，３Ｈ）、１．７３〜１．５８（ｍ，１Ｈ）、１．４３〜１．３２（ｍ，２Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）。
【０２３３】
生物学的実施例
（実施例Ａ）
合成ＡＰＰ基質を利用する無細胞ＢＡＣＥ１阻害アッセイ
ベータ−セクレターゼにより分解することができ、Ｎ−末端ビオチンを有し、Ｃｙｓ残基でのオレゴングリーンの共有結合により蛍光にされている合成ＡＰＰ基質を使用して、阻害化合物の存在または不在下でのベータ−セクレターゼ活性をアッセイする。基質は、ビオチン−ＧＬＴＮＩＫＴＥＥＩＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲＣ［オレゴングリーン］ＫＫ［配列番号１］である。酵素（０．１ナノモル）および試験化合物（０．００００２〜２００マイクロモルを、予備ブロックされている低親和性黒色プレート（３８４ウェル）中、室温で３０分間インキュベーションする。１５０ナノモルの基質を加えて、１ウェル当たり３０マイクロリットルの最終容量にすることにより、反応を開始する。最終アッセイ条件は：０．００００２〜２００マイクロモルの化合物阻害剤；０．１モルの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）；１５０ナノモルの基質；０．１ナノモルの可溶性ベータ−セクレターゼ；０．００１％のツイーン２０および２％のＤＭＳＯである。アッセイ混合物を３時間３７℃でインキュベーションし、飽和濃度の免疫純粋なストレプトアビジン（０．７５マイクロモル）を加えることにより、反応を終了した。室温で１５分間、ストレプトアビジンと共にインキュベーションした後に、蛍光偏光を、例えばＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｅｘ４８５ｎｍ／Ｅｍ５３０ｎｍ）を使用して測定する。ベータ−セクレターゼ酵素の活性は、基質が酵素により分解されると生じる蛍光偏光の変化により検出される。化合物阻害剤の存在下でのインキュベーションにより、その合成ＡＰＰ基質のベータ−セクレターゼ酵素分解の特異的阻害が証明される。このアッセイでは、本発明の好ましい化合物は、５０マイクロモル未満のＩＣ５０を示す。本発明のさらに好ましい化合物は、１０マイクロモル未満のＩＣ５０を示す。本発明のさらにいっそう好ましい化合物は、５マイクロモル未満のＩＣ５０を示す。本発明のさらにいっそう好ましい化合物は、１００ナノモル未満のＩＣ５０を示す。本発明のさらにいっそう好ましい化合物は、１０ナノモル未満のＩＣ５０を示す。
【０２３４】
（実施例Ｂ）
ベータ−セクレターゼ活性の阻害−細胞アッセイ
ベータ−セクレターゼ活性の阻害を分析するためのアッセイ例は、Ｌｙｓ６５１Ｍｅｔ５２からＡｓｎ６５１Ｌｅｕ６５２への天然に生じる二重突然変異（ＡＰＰ７５１でナンバリング）を含み、スウェーデン突然変異と一般に称され、Ａベータを過剰産生することが判明している（Ｃｉｔｒｏｎら、１９９２年、Ｎａｔｕｒｅ  ３６０：６７２〜６７４ページ）、米国特許第５６０４１０２号明細書に記載のＨ４ヒト神経芽細胞腫系（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５７３）を利用する。
【０２３５】
細胞を、通常は３０μＭまでの所望の濃度の阻害化合物（ＤＭＳＯストックから施与）の存在／不在下に、＜５％ＤＭＳＯの最終濃度でインキュベーションする。処置期間の終了時に、調整培地を、ベータ−セクレターゼ活性に関して、例えば分解断片の分析により分析する。特異的検出抗体を使用して、Ａベータをイムノアッセイにより分析することができる。酵素活性を、化合物阻害剤の存在および不在下に測定して、ＡＰＰ基質のベータ−セクレターゼを介した分解の特異的阻害を証明する。
【０２３６】
例えば、細胞を１日目の朝にプレーティングし（３００００細胞／ウェルプレーティング密度、Ｈ４ｓｗｅ）、３７℃で約６時間インキュベーションすることにより、アッセイを２日間で行うことができる。１日目の午後に、細胞を培地またはＰＢＳで１回洗浄して、蓄積したＡＢを除去する。新鮮な培地を加え、次いで、本発明の化合物を各ウェルに加える（培地９５μｌ＋１０％ＤＭＳＯ中の２０×化合物ストック５μｌ）。細胞を３７℃、５％ＣＯ２中で一晩インキュベーションする。
【０２３７】
９６ウェルＮｕｎｃ  ＩｍｍｕｎｏｓｏｒｐプレートセットにＡβ捕獲抗体（６Ｅ１０）をコーティングする；各ウェルに、炭酸塩／重炭酸塩コーティング緩衝液中で調製された１ｍｇ／ｍｌの６Ｅ１０  ５０μｌをコーティングする。炭酸塩／重炭酸塩コーティング緩衝液は、ｐＨ９．５の精製水５００ｍｌ、Ｎａ２ＣＯ３０．８ｇおよびＮａＨＣＯ３１．５ｇを含有した。プレートを密閉し、４℃で一晩インキュベーションする。
【０２３８】
２日目に、６Ｅ１０コーティングされたプレートを１５から３０分室温にし、プレート洗浄機を使用して、０．０５％のＰＢＳＴで３〜４回洗浄する。ＰＢＳＴ中１％の牛乳２００μｌ／ウェルを加えて、後で加えられる調整培地またはＡβ標準の非特異的結合をブロックする。
【０２３９】
プレートをカバーし、室温で少なくとも１時間インキュベーションする。プレートをＰＢＳＴで３〜４回洗浄して、ブロックを除去する。Ｈ４細胞からの細胞調整培地（前記のように化合物で一晩予備処理）またはＡβ標準をウェルに加える（５０μｌ／ウェル、２時間、暗所、室温）。ＭＴＴアッセイを、細胞で行うこともできる（２時間インキュベーション、３７℃）。
【０２４０】
ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳＴで３〜４回洗浄する。ビオチン化レポーターＡβ抗体を加え（５０μ／ウェル（４Ｇ８−ビオチン化、ＰＢＳＴ中１：５０００）、１〜２時間、室温）、暗所）、続いて、ＰＢＳＴで３〜４回洗浄する。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＰＢＳＴ中１：１００００）を加え（５０μｌ／ウェル）、プレートをインキュベーションする（３０分から１時間、室温、暗所）。プレートをＰＢＳＴで３〜４回洗浄する。ＴＭＢ−ペルオキシダーゼ基質５０μｌ／ウェルを室温で加え、所望の青色が発色するまで、インキュベーションを室温で実施する。０．０９ＭのＨ２ＳＯ４５０μｌ／ウェルを加えることにより、反応を停止する。色は、黄色になる。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘで４５０ｎｍで、読み取りを行う。
【０２４１】
（実施例Ｃ）
モルモットニューロン培養アッセイ
混合されている皮質および海馬ニューロンを、モルモット胎芽から単離し、インビトロで培養する。手順例では、ほぼ胎齢２５日目に、モルモットにイソフルラン室で麻酔を掛け、断頭する。胎芽を伴う子宮を除去し、湿った氷上の５０ｍｌ管中の冷Ｈｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ２５ｍｌに入れる。解剖顕微鏡下にある、ちょうど十分なＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅを含有する冷プレート（４℃）上のペトリ皿で、頭蓋を後方に外し、脳および小脳を除去する。半球体を分離した後に、中脳を除去する。髄膜を皮質から剥離する。皮質組織を、湿った氷上の１５ｍｌ管中のＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ／Ｂ２７に入れ、全胎芽からの組織を貯留する（Ｈｉｂ  Ｅ／Ｂ２７１０ｍＬ中３〜６胎芽）。Ｂ２７（５０×溶液Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ＊１７５０４−０４４）を、Ｈｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ培地に対して１：５０の比で加える。
【０２４２】
すべてのＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ／Ｂ２７を管から除去し、粉砕のために新たな１５ｍＬ管に移す。２ｍｇ／ｍｌのパパイン溶液５ｍｌを管中の組織に３７℃で２５分加える。貯留された組織が６胎芽より多い場合、パパイン溶液１０ｍｌを使用する。１０ｍｇ／ｍｌのパパイン（Ｒｏｃｈｅ  ０１０８０１４）１ｍｌおよびＢ２７を伴わないＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ４ｍｌを３７℃で５分間加温し、０．２μｍシリンジフィルターで濾過する。
【０２４３】
Ｈｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ／Ｂ２７  ２ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌのＤＮＡアーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｄ４２６３）２０μＬを用いて、第１の粉砕を行う。パパイン溶液を除去した後に、火炎研磨されたパスツールピペットを介して組織を１０〜１５回粉砕する。１〜２回の追加的な粉砕ステップを行うが、その際、各回Ｈｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ／Ｂ２７  ２ｍＬを用いて１０〜１５回粉砕を行い、ピペット開口部のサイズを各回、火炎で小さくしていく。上澄みを、１００μｍストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ３５２３５０）で濾過し、２５０×ｇで５分間回転させる。０．１ＭのＨＣｌ５０％／Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ５０％中、１：５０の比のＢ２７（５０×溶液、Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ  １７５０４−０４４）、１：４００の比の０．５ｍＭのグルタミン（２００ｍＭのＧｉｂｃｏ  ＢＲＬ  ２５０３０−０８１）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５２４００６２抗生−抗カビ剤（１００×）および２５ｍＭストックからの１：１０００の比の２５μＭのグルタメート（グルタメートは、当初平板培地で使用するのみ）を含む１０ｍｌ平板培地で、ペレットを再懸濁する。ポリ−Ｄ−リシン２４ウェルプレート（Ｂｉｏｃｏａｔ  ３５６４１４）で、１．５×１０５細胞／ｃｍ２＝６×１０５細胞／ｍｌの濃度で、５００μＬ／ウェルを加えて、細胞を平板培養する。
【０２４４】
培地中での培養の後４〜５日ごとに、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７＋グルタミン＋Ｐ／Ｓ／ＦＺ５００μｌ／ウェルと共に、ただしグルタメートは伴わずに、ニューロンを再供給する。ベースライン試料（３００μｌ）を、各ウェルからＤＩＶ１５に採取し（最終再供給の３〜４日後）、９６ウェルプレートに移し、アッセイするまで、−２０℃で凍結する。
【０２４５】
本発明の化合物の希釈試料を、１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストックから、１２ウェルからなるその行に各薬物を含む９６ウェルプレート中で調製するが、その際、ウェルで生じる濃度は、ＤＭＳＯ中１０、３、１、．３、．１、．０３、．０１、．００３、．００１、．０００３、．０００１および．００００３ｍＭである。各ウェルを、再供給された培地で１：１０に希釈する。残りの培地をすべての細胞から吸引し、新鮮な培地５００μＬに代える。化合物を加えて、１：１００の希釈でウェルを重複させる（１ウェル当たり５μＬを加えることにより）。最終化合物濃度範囲は、１０μＭから１００ｐＭである。３〜４日後に、試料を各ウェルから除去し（３００μｌ）、９６ウェルプレートに移す。試料を、アッセイするまで、−２０℃で凍結処理に掛ける。
【０２４６】
ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ３５８１）を使用する細胞毒性に関するアッセイを、バックグラウンドの色を差し引くために培地のみを伴うプレートのウェルを含む、ＭＴＳ１溶液試薬／ウェル（１０μｌ）を伴う各ウェルで、３７℃で２時間行った。各ウェルからの１００μｌを、新規の９６ウェルプレートに移したが、２個の培地のみ／ＭＴＳ試薬ウェルが、バックグラウンドを差し引くために含まれた。読み取りを、４９０ｎｍで行った。試料アッセイのために、試料を室温で解凍し、ＥＬＩＳＡ試料／ブロック緩衝液ＰＢＳＴ＋１％ＢＳＡを使用して１：２に希釈した。
＊  全体Ａβ測定では、Ａβを測定するために、２４時間の短時間でも十分であるが、３日間の培養により、かなり強いシグナルが得られるであろう。
【０２４７】
Ｃ−末端特異的アッセイ（すなわちＡβ１〜３８／１〜４０／１〜４２）では、シグナル（特にＡβ１〜４２）がかなり低いので、培地を集める前に、全部で４日間が必要である。
【０２４８】
（実施例Ｄ）
ＡＤの動物モデルでのベータ−セクレターゼの阻害
様々な動物モデルを使用して、ベータ−セクレターゼ活性の阻害に関してスクリーニングすることができる。本発明で有用な動物モデルの例には、これらに限られないが、マウス、モルモット、イヌなどが含まれる。使用する動物は、野生型、遺伝子導入またはノックアウトモデルであってよい。加えて、哺乳動物モデルは、本明細書に記載されているＡＰＰ６９５−ＳＷなどのＡＰＰにおける突然変異を発現してもよい。遺伝子導入非ヒト哺乳動物モデルの例は、米国特許第５６０４１０２号明細書、同第５９１２４１０号明細書および同第５８１１６３３号明細書に記載されている。
【０２４９】
Ｈｓｉａｏら、１９９６年に記載されているように調製したＴｇ２５７６マウスは、推定阻害化合物の存在下でのＡベータ放出のインビボ抑制を分析するために有用である。Ｔｇ２５７６マウスに、２０％ＤＭＳＯ：２０％エタノール：６０％ポリエチレングリコールなどの媒体中で製剤されている化合物を投与する。マウスに、化合物（１００〜３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇ）を投与する。例えば３〜１０時間の後に、動物をと殺し、分析のために脳を取り出す。
【０２５０】
遺伝子導入動物に、選択された投与方法に適している担体中で製剤されている化合物阻害剤量を投与する。対照動物は、処理しないか、媒体で処理するか、不活性な化合物で処理する。投与は、急性、すなわち、１日単回投与または複数回投与であってもよいし、持続的であってもよく、すなわち、数日間、数週間または数カ月間、投与を毎日繰り返す。０時点で開始する際に、脳組織または脳脊髄液または血漿を選択された動物から得て、例えばＡベータ検出のための特異的抗体を使用するイムノアッセイにより、Ａベータを含むＡＰＰ分解ペプチドの存在に関して分析する。試験期間の終了時に、動物をと殺し、脳組織または脳脊髄液または血漿を、Ａベータ、ｓＡＰＰβおよび／またはベータ−アミロイドプラークの存在に関して分析する。さらに組織を、変性の兆候に関して分析する。
【０２５１】
本発明の化合物阻害剤を投与された動物は、非処置対照と比較して、脳組織または脳脊髄液または血漿中の低減されたＡベータおよび／または脳組織中の低減されたベータアミロイドプラークを証明すると予測される。
【０２５２】
（実施例Ｅ）
ヒト患者でのＡベータ産生の阻害
アルツハイマー病（ＡＤ）を患っている患者は、脳内での多量のＡベータを実証する。ＡＤ患者に、選択された投与方法に適している担体中で製剤されている化合物阻害剤量を投与する。投与を、試験期間の間、毎日繰り返す。認識および記憶試験を、０日目から始めて、例えば１カ月に１回行う。
【０２５３】
化合物阻害剤を投与された患者は、次の疾患パラメーターのうちの１つまたは複数の変化により分析される疾患進行の遅延または安定化を証明すると予測される：対照、非治療患者と比較しての、ＣＳＦまたは血漿中に存在するＡベータ；脳または海馬容量；脳でのＡベータ堆積；脳でのアミロイドプラーク；ならびに認識および記憶機能に関するスコア。
【０２５４】
（実施例Ｆ）
ＡＤのリスクを有する患者におけるＡベータ産生の予防
ＡＤを罹患しやすいか、発生するリスクを有する患者は、家族遺伝パターン、例えばスウェーデン突然変異の存在を認識することにより、および／または診断パラメーターをモニタリングすることにより、同定される。ＡＤを罹患しやすいか、発生するリスクを有すると同定された患者に、選択された投与方法に適している担体中で製剤されている化合物阻害剤量を投与する。投与を、試験期間の間、毎日繰り返す。認識および記憶試験を、０日目から始めて、例えば１カ月に１回行う。
【０２５５】
化合物阻害剤を投与された患者は、次の疾患パラメーターのうちの１つまたは複数の変化により分析される疾患進行の遅延または安定化を証明すると予測される：対照、非治療患者と比較しての、ＣＳＦまたは血漿中に存在するＡベータ；脳または海馬容量；脳でのアミロイドプラーク；ならびに認識および記憶機能に関するスコア。
【０２５６】
本発明を、様々な具体的で好ましい実施形態および技術を参照しつつ記載した。しかしながら、本発明の意図および範囲内でありつつ、多くの変化および変更を行うことができることは、理解されるべきである。
【国際調査報告】
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