(57)【要約】  本発明は、固体および溶液状態の両方で改良された安定性を有する新規チゲサイクリン組成物、およびこれらの組成物の製造方法に関する。これらの組成物は、チゲサイクリン、適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
チゲサイクリン、少なくとも１種の適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む組成物。
【請求項２】
１種の適当な炭水化物が、ラクトース、マンノース、シュークロースまたはグルコースから選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
適当な炭水化物がラクトースである、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
組成物が凍結乾燥される、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
医薬上許容される希釈剤をさらに含む、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
医薬上許容される希釈剤が、生理食塩水、乳酸加リンガー注射溶液またはデキストロース溶液である、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
ｐＨが、約３．０から約７．０の間である、請求項５記載の組成物。
【請求項８】
ｐＨが、約４．０から約５．０の間である、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
ｐＨが、約４．２から約４．８の間である、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
酸が１．０Ｎ  ＨＣｌである、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
酸がゲンチジン酸である、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
エピマー化を低減するのに適した少なくとも１種の炭水化物をチゲサイクリンおよび水と合わせて溶液を形成すること、酸または緩衝剤で該溶液のｐＨを低下させて酸化分解を低減すること、および該溶液を乾燥状態まで凍結乾燥することを含む、チゲサイクリン組成物の調製方法。
【請求項１３】
エピマー化を低減するのに適した１種の炭水化物が、ラクトース、マンノース、シュークロースまたはグルコースから選択される、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
エピマー化を低減するのに適した炭水化物がラクトースである、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
溶液を乾燥状態まで凍結乾燥することによって得られる組成物を、生理食塩水、乳酸加リンガー注射溶液またはデキストロース溶液と合わせることをさらに含む、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
酸または緩衝剤が、溶液のｐＨを約３．０から約７．０の間に低下させる、請求項１２から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
溶液のｐＨを約４．０から約５．０の間に低下させる、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
溶液のｐＨを約４．２から約４．８の間に低下させる、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
酸が１．０Ｎ  ＨＣｌである、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
酸がゲンチジン酸である、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
チゲサイクリン、適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む医薬組成物。
【請求項２２】
適当な炭水化物が、二糖またはアルドース単糖である、請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
適当な炭水化物をチゲサイクリンおよび水と合わせて溶液を形成すること、酸または緩衝剤で該溶液のｐＨを低下させること、該溶液を乾燥状態まで凍結乾燥することを含む、チゲサイクリン医薬組成物の調製方法。
【請求項２４】
適当な炭水化物が、二糖またはアルドース単糖である、請求項２３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、出典明示によりその全内容を本明細書の一部とする、２００５年３月１４日付出願の同時継続の仮出願番号６０／６６１，０３０より優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、改良されたチゲサイクリン（ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ）組成物およびこのような組成物の製造方法に関する。本発明の組成物は、固体および溶液状態の両方で改良された安定性を有する。本発明の組成物は、チゲサイクリン、適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む。適当な炭水化物および酸または緩衝剤を組み合わせると、後で説明するようにチゲサイクリンの分解が低減する。本発明は、安定なチゲサイクリン組成物、ならびに酸化分解およびエピマー化の両方に対する安定性をもたらすような組成物の製造方法を準備することによって従来技術に優る利点を提供する。それゆえ、これらの組成物は、溶解、凍結乾燥、復元、および／または希釈された場合、本発明に従って製造されていないチゲサイクリン組成物よりも安定である。
【背景技術】
【０００３】
チゲサイクリンは、テトラサイクリンファミリーに属する周知の抗生物質であり、ミノサイクリンの化学類似体である。それは、薬剤耐性細菌に対する治療薬として使用することができ、他の抗生物質が作用しない場合に作用することが知られている。例えば、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ペニシリン耐性肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）バンコマイシン耐性腸球菌に対して［Ｄ．Ｊ．Ｂｅｉｄｅｎｂａｃｈら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、４０巻、１７３〜１７７頁（２００１年）；Ｈ．Ｗ．Ｂｏｕｃｈｅｒら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、４４巻、２２２５〜２２２９頁（２０００年）；Ｐ．Ａ．Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｎｅｗｓｌｅｔｔ．、２６巻、１６３〜１６８頁（２００４年）；Ｄ．Ｍｉｌａｔｏｖｉｃら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４７巻、４００〜４０４頁（２００３年）；Ｒ．Ｐａｔｅｌら、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、３８巻、１７７〜１７９頁（２０００年）；Ｐ．Ｊ．Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、４６巻、２５９５〜２６０１頁（２００２年）；Ｐ．Ｊ．Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，４３巻、７３８〜７４４頁（１９９９年）］、ならびにテトラサイクリン耐性の２つの主要形態、すなわち排出およびリボソーム保護のいずれかを所持する微生物に対して［Ｃ．Ｂｅｔｒｉｕら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４８巻、３２３〜３２５頁（２００４年）；Ｔ．Ｈｉｒａｔａら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４８巻、２１７９〜２１８４頁（２００４年）；およびＰ．Ｊ．Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４３巻、７３８〜７４４頁（１９９９年）］活性がある。
【０００４】
チゲサイクリンは、経口投与した場合、一般に、生物学的利用能に乏しいため、歴史的には静脈内投与されてきた。静脈内用溶液は、チゲサイクリンが溶液中で主として酸化により分解するので、たいていは、使用、例えば患者に対する投与の直前に凍結乾燥粉末から調製してきた。即時使用を必要とせず、溶液中で最大２４時間安定なままである、チゲサイクリンの静脈内処方を有することが好ましくかつ望ましい。
【０００５】
チゲサイクリンは、現在、凍結乾燥粉末として製造される。チゲサイクリンは分解する傾向があるので、これらの粉末は、分解を最小にするために低酸素および低温度条件で調製される。このような処理は、特別な装置および取り扱いを必要とするので、費用がかさむ。
【０００６】
これらの粉末組成物の典型的な調製方法には、チゲサイクリンを水に溶解すること（調合）、および該溶液を乾燥状態まで凍結乾燥して非晶質チゲサイクリンの固体ケーキを形成すること（凍結乾燥）が含まれる。次いで、これらのケーキを窒素下で栓の付いたガラスバイアル瓶に充填し、病院調剤部などの最終ユーザーに出荷する。患者に投与するのに先立って、該ケーキを、多くは０．９％生理食塩水中で、例えば約１０ｍｇ／ｍＬの濃度に復元する。この濃度で、チゲサイクリンは、溶液中で急速に分解し、それゆえ、遅滞なく使用しなければならない。従って、これらの復元された溶液は、患者にデリバリーするための静脈内点滴バック中で、生理食塩水またはその他の医薬上許容される希釈剤で約１ｍｇ／ｍＬに直ちに希釈される。
【０００７】
この希釈状態で、チゲサイクリンは、患者に対する静脈内デリバリーの準備が整う。しかし、１ｍｇ／ｍＬの濃度で、チゲサイクリンは、希釈から６時間以内に使用されるべきである。静脈内点滴は、数時間を要する場合があるので、病院の係員は、混和が始まる時刻からチゲサイクリンの投与量を患者に投与してしまう時刻までに６時間を超えないように、迅速に行動しなければならない。例えば、患者に投与することが必要とされる日の前に病院薬剤師が溶液を調製できるように、より長い混和および復元の時間に対応する融通性および利点を病院スタッフに提供することがより好ましい。
【０００８】
溶液中でチゲサイクリンの酸化は比較的急速なので、チゲサイクリンは、本質的に零であるような短い混和時間および復元時間を有する。現行の製造、貯蔵、および投与条件の下で、最も優勢な分解形態は、酸化によるものである。先行製剤で酸化が最も優勢な分解形態である理由は、チゲサイクリンの化学構造に関連している。それは、フェノール部分を所持し、フェノール類が特に酸化を受けやすいことは有機化学の技術分野で周知である。凍結乾燥に先立ってチゲサイクリンを水に溶解する場合、そのｐＨはわずかに塩基性（約７．８）である。これは、チゲサイクリン上のフェノール基のｐＫａよりも大きい。従って、水溶液および生理食塩水溶液の両方中で、フェノール基は、脱プロトン化され、酸素との反応により敏感になり、このことが、チゲサイクリンの調合および凍結乾燥が窒素雰囲気下で行われる理由である。従って、病院スタッフは、復元および希釈中の、酸素への不必要な暴露を避けるように注意すべきである。
【０００９】
チゲサイクリン溶液のｐＨが、チゲサイクリン上のフェノール基のｐＫａよりも小さかったなら、酸化は起こるが程度が少ない。実際、チゲサイクリンの酸化分解は、ｐＨを下げた場合に減少することが観察されている。しかし、低いｐＨでは、別の分解過程、すなわちエピマー化が起こる。より低いｐＨでは、最も優勢な分解経路としてエピマー化が出現する。
【００１０】
チゲサイクリンは、たった１箇所でそのエピマーと構造的に相違する。
【００１１】
【化１】
2008533146.tif 000002
【化２】
2008533146.tif 000003
【００１２】
チゲサイクリン中では、４位炭素のＮ−ジメチル基が、上で式Ｉに示したように、隣接水素に対してシスであるのに対して、エピマー、式ＩＩ中では、それらが、指摘した方式で互いにトランスである。チゲサイクリンのエピマーは、非毒性であると思われるが、チゲサイクリンの抗細菌効果を欠き、従って、望ましくない分解生成物である。
【００１３】
凍結乾燥状態で、チゲサイクリンは、溶液中と同様の分解経路に従うが、分解速度はより遅い。従って、チゲサイクリンをｐＨが約７．８であるような水中で凍結乾燥する場合、得られる凍結乾燥ケーキは、たとえ溶液中よりも遅い速度であっても、酸化分解を示す。同様に、チゲサイクリンを酸性溶液中で凍結乾燥する場合、主な分解経路はエピマー化であり、それも、溶液中よりも遅い速度で起こる。
【００１４】
エピマー化は、テトラサイクリン類一般で周知の分解経路であるが、分解速度は、テトラサイクリンに応じて異なる可能性がある。比較上、チゲサイクリンのエピマー化速度は特に速い。テトラサイクリンの論文は、科学者が、テトラサイクリン類におけるエピマーの形成を試みるのに、および最小化するのに使用してきたいくつかの方法を報告している。若干の方法で、テトラサイクリン類とのカルシウム、マグネシウム、亜鉛またはアルミニウム金属塩の形成は、非水溶液中、塩基性ｐＨでなされた場合にエピマー形成を制限する（Ｇｏｒｄｏｎ，Ｐ．Ｎ．、Ｓｔｅｐｈｅｎｓ  Ｊｒ，Ｃ．Ｒ．、Ｎｏｓｅｗｏｒｔｈｙ，Ｍ．Ｍ．、Ｔｅａｒｅ，Ｆ．Ｗ．、英国特許第９０１，１０７号）。他の方法（Ｔｏｂｋｅｓ、米国特許第４，０３８，３１５号）では、金属錯体の形成を酸性ｐＨで実施し、続いて、薬剤の安定な固体形態を調製する。
【００１５】
エピマー形成を低減するその他の方法には、処理中に約６．０を超えるｐＨに維持すること、ギ酸、酢酸、リン酸、またはホウ酸などの弱酸のコンジュゲートとの接触を避けること、および水をベースにした溶液を含む水分との接触を避けることが含まれる。水分からの保護に関して、ＮｏｓｅｗｏｒｔｈｙおよびＳｐｉｅｇｅｌ（米国特許第３，０２６，２４８号）ならびにＮａｓｈおよびＨａｅｇｅｒ（米国特許第３，２１９，５２９号）は、テトラサイクリン類似体を非水性ビヒクル中で処方して薬剤安定性を改良することを提案している。しかし、これらの発明に含まれるビヒクルの大部分は、非経口使用よりも局所使用により適している。テトラサイクリンのエピマー化は、温度依存性であることも周知であり、それゆえ、低温でテトラサイクリンを製造および貯蔵すると、エピマー形成の速度も低下する（Ｙｕｅｎ，Ｐ．Ｈ．、Ｓｏｋｏｌｏｓｋｉ，Ｔ．Ｄ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６巻、１６４８〜１６５０頁、１９７７年；Ｐａｗｅｌｃｚｙｋ，Ｅ．、Ｍａｔｌａｋ，Ｂ．、Ｐｏｌ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈａｒｍ．、３４巻、４０９〜４２１頁、１９８２年）。これらの方法のいくつかを、チゲサイクリンに対して試みたが、付加的な分解生成物を生成することはないが、いずれも、エピマー形成および酸化分解の両方を低減するのに成功しなかった。例えば、金属錯体形成は、塩基性ｐＨでエピマー形成または分解のいずれに対しても、一般にほとんど影響を与えないことが見出された。
【００１６】
リン酸塩、酢酸塩、およびクエン酸塩緩衝剤を使用すると溶液状態での安定性が改良されるが、それらは、凍結乾燥状態でのチゲサイクリンの分解を加速するように思われる。しかし、緩衝剤なしでさえ、エピマー化は、ミノサイクリンなどのその他のテトラサイクリン類よりもチゲサイクリンでより重大な問題である。
【００１７】
これらの方法の中の別な方法も、エピマー化および酸化分解の両方を低減するのに同様に失敗した。約６．０を超えるｐＨを維持すると、上記のようにエピマーの形成を低減するのに役立つが、このような条件はより大きな酸素感受性につながることが見出された。水は、チゲサイクリンの分解を加速することが知られているとはいえ、非水性ビヒクルに関していえば、このようなビヒクルを使用して静脈内薬剤を調製することは非現実的である。
【００１８】
室温より低い約１０℃未満などの温度で処理するとチゲサイクリンの分解速度が低下することが確定されたが、このような処理は費用がかさみ、処理中に費用のかかる冷凍を必要としない組成物を使用するのが有利である。
【００１９】
中国特許出願第１３９０５５０Ａ号は、酸化分解に対する安定性を増すために、ミノサイクリンを酸と合わせることを開示している。それは、さらに、マンニトールなどのケーキング剤の使用を開示している。この参考文献は、チゲサイクリンについて何も言及していないし、低下したｐＨ環境でのミノサイクリンに対する酸化またはエピマー化を低減するために炭水化物を使用できる可能性を示唆していない。実際、ミノサイクリンは、静脈用製品中でそれほどのエピマー化なしに塩酸塩として処方できる。しかし、チゲサイクリン塩酸塩では、かなりのエピマー化が起こる。従って、ミノサイクリンおよびチゲサイクリンは、異なるエピマー化特性を所持する。
【００２０】
別の実験で、ミノサイクリンを約５．０のｐＨで凍結乾燥し、凍結乾燥ケーキを４０℃および相対湿度７５％で２０日間貯蔵した。２０日間の最後に、ケーキをＨＰＬＣで分析した。ミノサイクリンのエピマーは、質量で２．６５％の濃度で存在することが測定された。比較として、チゲサイクリンを約５．０のｐＨで凍結乾燥し、試料を同一条件下で、但し４日間だけ貯蔵し、続いてＨＰＬＣで分析した場合、チゲサイクリンのエピマーは、たとえミノサイクリンと同じ長さの５分の１のストレスを加えただけでも、２倍程度を超える５．４０％の濃度で存在することが測定された。従って、チゲサイクリンは、ミノサイクリンよりもはるかに容易にエピマー化し、エピマー化は、ミノサイクリンに関してよりもチゲサイクリンではるかに重大な問題である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、固体および溶液形態で安定なチゲサイクリン組成物を提供することによって、従来技術の種々の問題および欠点に取り組む。チゲサイクリンおよび適当な炭水化物を含む酸性ｐＨの水溶液を凍結乾燥することによって、本発明者らは、現行組成物よりも酸化分解およびエピマー化の両方に対してより安定であるチゲサイクリン組成物を調製した。ｐＨが酸性なので、酸化分解は最小になった。さらに、適当な炭水化物は、酸性ｐＨでエピマー形成に対してチゲサイクリンを安定化するように作用すると判定された。
【００２２】
本発明の組成物は、凍結乾燥状態で現行組成物よりも安定であり、低温または低酸素の処理条件を必要としない。このような組成物は、また、現行組成物のそれを超える復元および混和の安定時間を有すると予想される。例えば、本発明の一実施形態では、復元後に６時間安定であり、混和後にさらに１８時間安定である。これらの延長された安定時間は、患者を治療する場合に病院のスタッフに対して必要な融通性を提供することによって、病院環境でチゲサイクリンを使用することをより容易にする。
【００２３】
固体状態の本発明組成物は、チゲサイクリン、適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
適当な炭水化物は、同一のｐＨ環境で適当な炭水化物を欠いて調製された少なくとも１種のチゲサイクリンの固体形態に比較した場合に、少なくとも１つのｐＨ環境で調製された少なくとも１種の固体形態におけるエピマー形成を低減する能力を有するそれら炭水化物である。一実施形態において、ｐＨ環境は、約４．０〜約５．０、または約４．２〜約４．８の範囲のｐＨなど、約３．０〜約７．０の範囲のｐＨ環境である。一実施形態において、少なくとも１種の固体形態は、チゲサイクリンの粉末および凍結乾燥ケーキから選択される。適当な炭水化物の例には、ラクトース、マンノース、シュークロース、およびグルコースなどの化合物の無水、水和、および溶媒和形態が含まれる。適当な炭水化物には、単糖および二糖類、例えば、アルドースである単糖または二糖、好ましくはラクトースおよびシュークロースなどの二糖が含まれる。ラクトースが最も好ましい。従って、適当な炭水化物は、異なる固体形態を含んでいてもよい。例えば、ラクトースに関していえば、本発明者らは、無水ラクトース、ラクトース一水和物、またはラクトースの任意のその他水和もしくは溶媒和形態などの、ラクトースの種々の固体形態を含める。ラクトースおよびシュークロースは二糖類である。それゆえ、部類としての二糖類は、本発明に従って作用することが予想される。
【００２５】
本発明組成物には、チゲサイクリン、適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む、凍結乾燥に先立って調製される溶液などの溶液が包含される。本発明の若干の実施形態において、該溶液は、より大きな製造上の融通性を提供するため、凍結乾燥に先立って数時間貯蔵できる。本発明組成物には、さらに、チゲサイクリン、適当な炭水化物、および酸または緩衝剤を含む凍結乾燥された粉末またはケーキが包含される。
【００２６】
本発明の若干の実施形態において、使用される適当な炭水化物はラクトース一水和物であり、凍結乾燥された粉末またはケーキにおけるチゲサイクリンとラクトース一水和物とのモル比は、約１：０．２〜約１：５である。若干の実施形態は、約１：１．６〜約１：３．３のチゲサイクリンとラクトース一水和物とのモル比を有する。
【００２７】
本発明組成物には、例えば、生理食塩水またはその他の医薬上許容される希釈剤を用いる復元によって、凍結乾燥された粉末またはケーキから調製される溶液も包含される。本発明組成物には、さらに、それらの復元された溶液を医薬上許容される希釈剤で希釈することによって得られる、静脈内バッグで使用するための溶液が包含される。
【００２８】
本発明でエピマー形成を低減する能力のある任意の炭水化物が、適当な炭水化物であり、本発明は、具体的に明らかにしたそれらの炭水化物を採用している組成物に限定されるものではない。
【００２９】
例えば、糖類の誘導体は、本発明によりエピマー形成を低減するように作用する可能性のあることが予想される。かくして、糖アルコール、グルコースアミン、およびアルキルエステルなどの糖誘導体が、単独または組合せで、本発明によりエピマー形成を低減する範囲まで、それらは適当な炭水化物である。同様に、その他の適当な炭水化物には、多糖類などの高級糖類；ヘタスターチ（ｈｅｔａｓｔａｒｃｈ）、デキストランなどの複合炭水化物類；ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース類を含めることができる。さらに、単糖類および三糖類を含む炭水化物の組合せが、適当な炭水化物であり、本発明によりエピマー形成を低減するように作用することが予想される。
【００３０】
本発明の酸および緩衝剤には、チゲサイクリン／適当な炭水化物溶液のｐＨを約３．０〜約７．０、約４．０〜約５．０、または約４．２〜約４．８に調整する能力のある任意の医薬上許容される酸または緩衝剤が含まれる。このような酸の例には、それに限定はされないが、１．０Ｎ  ＨＣｌを含む塩酸、ゲンチジン酸、乳酸、クエン酸、酢酸、およびリン酸が含まれる。適当な緩衝剤の例にはコハク酸塩が含まれる。
【００３１】
本発明の化合物は、いくつかの許容される方法により調製できる。下記の方法は、例示的なものであり、本発明を制限することを意味しない。
【００３２】
本発明の１つの方法では、チゲサイクリンを水に溶解して溶液を形成する。続いて、酸または緩衝剤を添加して該溶液のｐＨを低下させる。次いで、溶液中に適当な炭水化物を溶解し、溶液を乾燥状態まで凍結乾燥して凍結乾燥された粉末またはケーキを形成する。
【００３３】
チゲサイクリンは、適当な炭水化物とブレンドし、水に溶解することができる。溶液のｐＨを酸性であるように調整した後、溶液を乾燥状態まで凍結乾燥して凍結乾燥された粉末またはケーキを形成する。
【００３４】
本発明の溶液の凍結乾燥は、任意の医薬上許容される手段によって完遂できる。凍結乾燥したら、本発明組成物を、窒素などの不活性気体の下で貯蔵し、分解過程をさらに遅延させることができるが、現行のチゲサイクリン組成物と異なり、本発明の場合、このような低酸素環境は必須ではない。
【００３５】
チゲサイクリンを適当な炭水化物と組み合わせる場合には、水に十分溶解する任意の固体状態形態のチゲサイクリンを使用することができる。このような固体状態の形態には、結晶性チゲサイクリン多形体、非晶質形態、および塩が含まれる。
【００３６】
さらに、凍結乾燥のために本発明のチゲサイクリン溶液を調製する場合には、チゲサイクリンを含む水溶液に十分な酸または緩衝剤を添加して約４．０〜約５．０、および約４．２〜約４．８を含む約３．０〜約７．０のｐＨを得る。
【００３７】
本発明組成物は、単一投与での使用に向けて調製できる。この実施形態では、本発明の溶液を、２０ｍＬバイアル瓶などの個々のバイアル瓶中で凍結乾燥する。凍結乾燥したら、バイアル瓶を任意の医薬上許容される栓で栓をする。次いで、栓をしたバイアル瓶を使用に向けて出荷する。
【００３８】
必要な場合には、十分な希釈剤を添加することによってバイアル瓶を復元し、チゲサイクリンの所望濃度を達成できる。復元された溶液の濃度は、当業者が容易に測定できる。任意の医薬上許容される希釈剤を使用できる。このような希釈剤の例には、水、０．９％生理食塩水などの生理食塩水、乳酸加リンガー注射溶液、および５％デキストロース（Ｄ５Ｗ）を含むデキストロース溶液が含まれる。
【００３９】
現行組成物と異なり、本発明の復元溶液を、次いで、混和に先立って復元された状態で貯蔵できる。混和は、例えば静脈内点滴バック中で行うことができる。混和物を調製するには、生理食塩水溶液、またはＤ５Ｗのようなデキストロース溶液などの医薬上許容される希釈剤を含む静脈内点滴バック中で十分な復元溶液を混合する。混和物の濃度は、当業者が容易に測定できる。本発明組成物のための混和時間は、現行組成物のそれより長くてもよい。混和したら、チゲサイクリン溶液は、患者に投与する準備が整っている。混和物は、単独で、または別の医薬または組成物と一緒に投与できる。
【００４０】
次の６つの実施例は、本発明の各種実施形態を例示し、いかなる意味でも本発明を制約することを意図していない。各実施例は、チゲサイクリンを、炭水化物と共に酸性水溶液中に溶解し、凍結乾燥し、そしてＨＰＬＣで分解生成物について分析するいくつかの実験を詳述する。各実施例のためのＨＰＬＣ条件は、本質的に同一とした。実施例に付随する表は、表中で相対保持時間（ＲＲＴ）０．５０／ＭＷ６０１、およびＲＲＴ０．５５／ＭＷ５８３として確認された酸化生成物、エピマー（ＲＲＴ０．７４／ＭＷ５８５）、および各種条件下で存在するチゲサイクリンの総量（表では「チゲサイクリン」として確認される）を示すＨＰＬＣデータの結果を表す。多くの場合、溶液を凍結乾燥した後、それらを、４０℃および相対湿度７５％の加速安定性条件下においた。これらの条件は、通常の貯蔵条件の下での長期貯蔵の影響を模擬するのに使用される工業的標準である。
【００４１】
実施例１では、チゲサイクリン、ラクトース、および１．０Ｎ  ＨＣｌからなる溶液を凍結乾燥し、得られたケーキを４０℃および相対湿度７５％の安定性チャンバー内に２５日間置いた。２５日間の最後に、ＨＰＬＣでケーキを分析し、分解生成物を確認した。
【００４２】
同様の実験を実施例２ａで詳述する。そこでは、凍結乾燥ケーキを、４０℃および相対湿度７５％で３９日間貯蔵した後に、ＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣ分析の直前に、２つの実験からの凍結乾燥ケーキをＤ５Ｗ（５％デキストロース）中で復元し、残余ケーキからの試料を生理食塩水中で復元した。
【００４３】
実験２ｂでは、凍結乾燥ケーキに実施例２ａの条件通りにストレスを加えた後に、いくつかのケーキを０．９％生理食塩水中で復元し６時間溶液中に保持した。他は、デキストロース中で復元した。６時間の最後に、これらの溶液試料の若干を、表２ｂで確認されるように、ＨＰＬＣで試験した。
【００４４】
実施例２ｃは、混和溶液の安定性試験を例示する。これらの溶液では、実施例２ｂの復元溶液を約１０ｍｇ／ｍＬで６時間保持し、次いで、チゲサイクリン用の典型的な静脈内濃度である１ｍｇ／ｍＬまで希釈し、ＨＰＬＣでの分析に先立って１８時間保持した（表２ｃ）。
【００４５】
実施例３では、塩酸ではなくゲンチジン酸を使用して、チゲサイクリンの凍結乾燥前溶液のｐＨを低下させた。凍結乾燥したら、ケーキに４５℃および相対湿度７５％で４８日間ストレスを加え、次いで、ＨＰＬＣで分析した。
【００４６】
実施例４の試料は、凍結乾燥前チゲサイクリン溶液を調製する場合に、ラクトースからその他の炭水化物に変更することがエピマー形成およびチゲサイクリン回収に与える影響を示す。実施例４ａ、４ｂ、および４ｃのそれぞれでは、指示された溶液を、調製し、凍結乾燥した。実施例４ａ〜４ｃに示したパラメーターに従って各ケーキにストレスを加え、溶液にし、そしてＨＰＬＣで分析した。
【００４７】
実施例５では、保持時間、調合から凍結乾燥までの時間、およびチゲサイクリンとラクトースの添加順序を、エピマー形成およびチゲサイクリン回収の要因として研究した。ケーキを凍結乾燥したら、ＨＰＬＣ分析に先立って、それらに４０℃および相対湿度７５％で４８日間ストレスを加えた。ＨＰＬＣデータの要約を表５に示す。
【００４８】
実施例６の実験では、ラクトースとチゲサイクリンの比率を変更した。凍結乾燥を予定した溶液を調製する場合に、ラクトースとチゲサイクリンの変化する比率を採用した。質量比を、表６の最初の縦列に記入する。続いて、それぞれ約５．０のｐＨを有する溶液を乾燥状態まで凍結乾燥し、得られたケーキに４０℃および相対湿度７５％で２０日間ストレスを加え、ＨＰＬＣで分析した。
【実施例１】
【００４９】
チゲサイクリン（１８８０ｍｇ）を７５ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。この原液からのほぼ１００ｍｇのチゲサイクリンを含むアリコートを、２００ｍｇのラクトース一水和物を含む２０ｍＬバイアル瓶中で溶解した。原液からのほぼ１００ｍｇのチゲサイクリンを含む別のアリコートを、空の２０ｍＬ試料バイアル瓶に入れた。これら２つの溶液のどちらにもｐＨ調整を行わなかった。続いて、該溶液を乾燥状態まで凍結乾燥した。
【００５０】
残存している原液のｐＨを、１．０Ｎ  ＨＣｌを添加して約６．０まで低下させた。約６．０のｐＨが得られたら、該原液からの約１００ｍｇのチゲサイクリンを含むアリコートを、約２００ｍｇのラクトース一水和物を含む２０ｍＬ試料バイアル瓶中で溶解し、得られた溶液を乾燥状態まで凍結乾燥した。残存している原液を、約５．５のｐＨが得られるまで１．０Ｎ  ＨＣｌで処理し、この時点で、該原液から１００ｍｇのチゲサイクリンを、２００ｍｇのラクトース一水和物を含む２０ｍＬバイアル瓶中に移送した。溶解後、溶液を乾燥状態まで凍結乾燥した。同様に、約１００ｍｇのチゲサイクリンおよび約２００ｍｇのラクトースを含む２０ｍＬの試料バイアル瓶を、約５．０のおよび約４．５のｐＨで調製した。別の溶液試料を、少しのラクトースもなしにｐＨ４．５で調製した。続いて、場合ごとに、溶液を乾燥状態まで凍結乾燥した。凍結乾燥は、すべて、アセトンの共存するドライアイスを用いて−７０℃で凍結した溶液に対して実施した。
【００５１】
凍結乾燥試料を、４０℃／７５％ＲＴのチャンバー中に２５日間置いた。その後、試料をＨＰＬＣで分析し、試験された各ケーキの主要分解生成物を表す表１に結果の要約を示す。表に挙げた６つの主要分解生成物の概略総計は、分解生成物のすべてを表に挙げている訳ではないので、１００％に等しくない。実施例１で試験した７種のケーキの中で、５つは、本発明の組成物であり、最初の２つ（ｐＨ調整なしのチゲサイクリン単独、およびｐＨ調整なしのチゲサイクリン＋ラクトース）は、対照である。
【００５２】
本発明組成物の利点は、この実施例から明らかである。例えば、ラクトースなしで約４．５のｐＨで調製された組成物では、エピマーが２３．５１％の量で存在するのに、検出されたチゲサイクリンは７４．１０％に留まった。比較として、ラクトースを含めたｐＨ４．５の試料は、たった２．５３％のエピマーを含み、チゲサイクリンの含有量は９７．１７％であった。
【００５３】
【表１】
2008533146.tif 000004
ＮＤ＝検出されない；ＭＷは分子量；ＲＲＴはチゲサイクリンのピークに対する相対保持時間を意味する。
【実施例２】
【００５４】
２ａ．チゲサイクリン（１７００ｍｇ）を８５ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。実施例１でチゲサイクリン／ラクトース／ＨＣｌを調製したのと同様の方式で、約１００ｍｇのチゲサイクリンおよび約２００ｍｇのラクトース一水和物を含むｐＨが約５．２、５．０、４．８、および３．０の溶液を調製した。ｐＨ３．０の原液に１．０Ｎ  ＮａＯＨを添加し、続いて、約２００ｍｇのラクトース一水和物を含む２０ｍＬのバイアル瓶中で約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む原液アリコートを溶解することによって、チゲサイクリンとラクトースとのｐＨが約４．５の溶液を調製した。すべての試料を乾燥状態まで凍結乾燥した（ＡｄＶａｎｔａｇｅ／Ｖｉｒｔｉｓ製凍結乾燥機を用いて−５０℃で凍結）。凍結乾燥試料を４０℃／７５％ＲＨのチャンバー中に３９日間置き、副試料を採取し、ＨＰＬＣで分析した。データを表２ａに示す。
【００５５】
２ｂ．３９日間の最後に、実施例２ａの凍結乾燥ケーキを０．９％ＮａＣｌで１０ｍｇ／ｍＬのチゲサイクリン濃度に復元し、室温で６時間保持した。ｐＨが約５．０および約４．５である溶液の個々のアリコートを、生理食塩水に代わって５％デキストロースで約１０ｍｇ／ｍＬの濃度に復元し、室温で６時間保持した。次いで、溶液のそれぞれをＨＰＬＣで分析し、結果を表２ｂに示す。
【００５６】
データは、本発明組成物が、復元溶液中でのエピマー形成を６時間防いでいることを示している。実際、これら実施例中のいずれか１つの最大エピマー含有量は、たった２．４５％であるのに、チゲサイクリン含有量は最小でも９７．１％であった。ｐＨが約４．５で、かつ希釈剤が生理食塩水である一実施形態において、６時間の復元段階の終末に存在するエピマーは、たった１．６０％であった。該実施形態で、チゲサイクリンの量は、測定の結果９８．１５％であり、それは、若干の応用において、病院で使用するのに十分な純度である可能性がある。
【００５７】
２ｃ．チゲサイクリンの混和溶液（１ｍｇ／ｍＬ）は、復元にどちらの希釈剤を使用したかに応じて、復元溶液（実施例２ｂからの）を０．９％ＮａＣｌまたは５％デキストロースで希釈することによって調製した。次いで、該溶液を室温で１８時間保持し、ＨＰＬＣで分析した。結果を表２ｃに要約する。
【００５８】
ラクトースを含むがデキストロースを含まないｐＨが約４．５の試料は、復元から混和までの進行に関して、そのエピマー濃度を１．６０％からたった１．８０％に増加させたのに対し、総チゲサイクリン含有量は、その試料の場合９８．１５％から９７．９７％にほんのわずか低下した。ｐＨが約４．５の試料に関するこれらの結果は、その試料が、凍結乾燥ケーキを加速安定性条件下で３９日間、続いて復元で６時間および混和で１８時間貯蔵した後でも十分安定であることを例証している。
【００５９】
【表２−１】
2008533146.tif 000005
【００６０】
【表２−２】
2008533146.tif 000006
【００６１】
【表２−３】
2008533146.tif 000007
【実施例３】
【００６２】
チゲサイクリン（７００ｍｇ）を２８ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む原液アリコートを対照試料として２０ｍＬのバイアル瓶に充填した。１．０Ｎ  ＨＣｌではなくゲンチジン酸を使用して原液のｐＨを低下させることを除けば実施例１の方法に従って、チゲサイクリン、ラクトース、および酸からなる溶液試料を、約５．８、５．１、および４．５のｐＨで調製した。ラクトースを含まないチゲサイクリン溶液のさらなる２つの試料を、１つは約５．１のｐＨで、もう１つは約４．５のｐＨで調製した。すべての溶液を−７０℃で凍結（アセトンの共存するドライアイスを用いて）し、乾燥状態まで凍結乾燥した。凍結乾燥試料を４０℃／７５％ＲＨのチャンバーに４８日間置き、ＨＰＬＣで分析した。表３にデータを要約するが、データは、この組成物が、本発明により分解を低減するように作用することを示している。
【００６３】
【表３】
2008533146.tif 000008
【実施例４】
【００６４】
４ａ．チゲサイクリン（１６００ｍｇ）を６４ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成し、該原液からそれぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む２つの試料を、それぞれ１６０ｍｇのラクトース一水和物および１６０ｍｇのマンニトールを含む２つの別個の２０ｍＬ試料バイアル瓶に充填した。原液からの約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む第３試料を空の２０ｍＬバイアル瓶に充填した。続いて、実施例１に概略を示した手順通りに、残留原液のｐＨを１．０Ｎ  ＨＣｌで約７．０、６．５、および６．０に調整した。それぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む試料溶液を、各ｐＨ値で１６０ｍｇのラクトース一水和物を含む、１６０ｍｇのマンニトールを含む、またはどちらも含まない２０ｍＬバイアル瓶に充填した。得られた溶液を乾燥状態まで凍結乾燥した（アセトンの共存するドライアイスを用いて−７０℃で凍結）。凍結乾燥試料を４０℃のオーブン中に７０時間置き、次いで、ＨＰＬＣで分析した。データを表４ａに要約する。
【００６５】
４ｂ．チゲサイクリン（１８００ｍｇ）を７２ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。原液からの約１００ｍｇのチゲサイクリンを含むアリコートを、それぞれ約２００ｍｇのラクトース一水和物、果糖、およびシュークロースを含む３つの別個の２０ｍＬバイアル瓶に充填した。続いて、実施例１に概略を示した手順に従って、原液のｐＨを１．０Ｎ  ＨＣｌで約６．０および５．４に調整した。各ｐＨ値で、約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む溶液のアリコートを、２００ｍｇの次の炭水化物、すなわち、ラクトース一水和物、果糖、またはシュークロースの１つを含む２０ｍＬバイアル瓶に採取し、溶解した。炭水化物を含まない溶液も各ｐＨ値で調製した。溶液を乾燥状態まで凍結乾燥した（アセトンの共存するドライアイスを用いて−７０℃で凍結）。凍結乾燥試料を４０℃のオーブン中に８９時間置き、ＨＰＬＣで分析した。結果を表４ｂに要約する。
【００６６】
４ｃ．チゲサイクリン（１０００ｍｇ）を５０ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。原液のｐＨを１．０Ｎ  ＨＣｌで約５．０に調整した。それぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む４つの原液アリコートを、それぞれ約２００ｍｇのグルコース、マンノース、リボース、およびキシロースを含む２０ｍＬバイアル瓶に充填し、溶解した。約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む５番目の原液アリコートを、約１２５ｍｇのトレオースを含む２０ｍＬのバイアル瓶に充填し、溶解した。５種の溶液のすべてを乾燥状態まで凍結乾燥した（ＡｄＶａｎｔａｇｅ／Ｖｉｒｔｉｓ製凍結乾燥機を用いて−５０℃で凍結）。凍結乾燥試料を、２５℃／６０％ＲＨのチャンバーに４２日間置き、ＨＰＬＣで分析した。結果を表４ｃに要約する。表４ａ〜４ｃのデータは、本発明に対するラクトースなどの適当な炭水化物の効果を例示することになる。
【００６７】
【表４−１】
2008533146.tif 000009
【００６８】
【表４−２】
2008533146.tif 000010
【００６９】
【表４−３】
2008533146.tif 000011
【実施例５】
【００７０】
５ａ．チゲサイクリン（１０００ｍｇ）を４０ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。原液のｐＨを１．０Ｎ  ＨＣｌで約５．０に調整した。そのｐＨで、それぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む２つの原液アリコートを、それぞれ約２００ｍｇのラクトース一水和物を含む２つの２０ｍＬバイアル瓶に別個に充填した。１つの試料を直ちに−７０℃で凍結し（アセトンの共存するドライアイスを用いて）、残りの試料は、凍結する前に室温で５時間保持した。続いて、凍結試料を乾燥状態まで凍結乾燥した。凍結乾燥試料を、４０℃／７５％ＲＨのチャンバーに４８日間置き、ＨＰＬＣで分析した。結果を表５に「Ａ」試料として要約する。
【００７１】
５ｂ．ラクトース一水和物（７５０ｍｇ）を１５ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解した。この溶液にチゲサイクリン（３７５ｍｇ）を添加し、１．０Ｎ  ＨＣｌでｐＨを約５．０に調整した。このｐＨで、該溶液からのそれぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンおよび約２００ｍｇのラクトース一水和物を含む２つのアリコートを、２０ｍＬのバイアル瓶にそれぞれ充填した。一方の試料バイアル瓶中の溶液を−７０℃で直ちに凍結した（アセトンの共存するドライアイスを用いて）。他方の試料の溶液は、凍結する前に室温で５時間保持した。凍結試料を乾燥状態まで凍結乾燥した。凍結乾燥試料を、４０℃／７５％ＲＨのチャンバーに４８日間置き、ＨＰＬＣで分析した。結果を表５に「Ｂ」試料として要約する。「Ａ」および「Ｂ」のデータは、本発明組成物が分解生成物を低減していることを例示している。
【００７２】
【表５】
2008533146.tif 000012
【実施例６】
【００７３】
６ａ．チゲサイクリン（１７００ｍｇ）を８５ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。原液のｐＨを１．０Ｎ  ＨＣｌで約５．０に調整した。それぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む４つの原液アリコートを、それぞれ約５０、１００、２００、および３００ｍｇのラクトース一水和物を含む４つの２０ｍＬバイアル瓶に別個に充填した。ラクトースが完全に溶解したら、試料を乾燥状態まで凍結乾燥した（ＡｄＶａｎｔａｇｅ／Ｖｉｒｔｉｓ製凍結乾燥機を用いて−５０℃で凍結）。凍結乾燥試料を４０℃／７５％ＲＨのチャンバーに４日間置き、ＨＰＬＣで分析した。結果は、表６ａに要約され、本発明組成物の例を示す。
【００７４】
６ｂ．チゲサイクリン（４００ｍｇ）を２０ｍＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解して原液を形成した。原液のｐＨを１．０Ｎ  ＨＣｌで約５．０に調整した。それぞれ約１００ｍｇのチゲサイクリンを含む３つの原液アリコートを、それぞれ１５、３１、および６２ｍｇのラクトース一水和物を含む３つの２０ｍＬバイアル瓶に別個に充填した。溶解したら、試料を乾燥状態まで凍結乾燥した（ＡｄＶａｎｔａｇｅ／Ｖｉｒｔｉｓ製凍結乾燥機を用いて−５０℃で凍結）。凍結乾燥試料を、４０℃／７５％ＲＨのチャンバーに２０日間置き、ＨＰＬＣで分析した。結果は、表６ｂに要約され、本発明の組成物を示す。
【００７５】
【表６−１】
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【００７６】
【表６−２】
2008533146.tif 000014
【国際調査報告】
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