(57)【要約】【課題】乾癬の予防及び治療に利用可能な新規の薬剤の使用、および治療方法を提供する。【解決手段】乾癬の初期発生で、形質細胞様樹状細胞前駆体（ＰＤＣ）がＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）を高産生する重要なエフェクター細胞であるという発見に基づき、乾癬の予防及び治療用の薬剤製造にＩ型ＩＦＮ拮抗剤（例えば、抗ＩＦＮ−α抗体）又はＩ型ＩＦＮレセプター拮抗剤等のＩ型インターフェロンブロッキング剤を使用する、及びＩ型インターフェロンブロッキング剤を用いて乾癬の予防及び治療を行う。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾癬の予防及び治療用の薬剤製造ためのＩ型インターフェロンブロッキング剤の使用。
【請求項２】
Ｉ型インターフェロンブロッキング剤はＩ型インターフェロン拮抗剤である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｉ型インターフェロン拮抗剤はＩＦＮ−α拮抗剤である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ＩＦＮ−α拮抗剤は抗ＩＦＮ−α抗体又は抗体断片である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
Ｉ型インターフェロンブロッキング剤はＩ型インターフェロンレセプター融合タンパク質である、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
Ｉ型インターフェロンブロッキング剤はＩＦＮ−α産生を阻害する短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ又はアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
Ｉ型インターフェロンブロッキング剤はＩ型インターフェロンレセプター拮抗剤である、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
Ｉ型インターフェロンレセプター拮抗剤は抗ＩＦＮ−α／βレセプター抗体、変異型Ｉ型ＩＦＮ／Ｆｃ融合タンパク質、又はＩ型ＩＦＮシグナル伝達を特異的に干渉する低分子である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
Ｉ型インターフェロンレセプター拮抗剤は抗ＩＦＮ−α／βレセプター抗体又は抗体断片である、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
抗体はヒト化抗体である、請求項４又は９に記載の使用。
【請求項１１】
Ｉ型インターフェロンブロッキング剤を使用する乾癬の予防及び治療の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乾癬の予防及び治療用の薬剤製造のためのＩ型インターフェロンブロッキング剤の使用、並びにＩ型インターフェロンブロッキング剤を使用する乾癬の予防及び治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
乾癬は、ヒトの皮膚に影響を及ぼす一般的な自己免疫性関連炎症性疾患である。乾癬形成は、クローン病やリウマチ性関節炎と同様に、ＩＦＮ−γ分泌自己反応性Ｔ細胞の明白な自己永続的活性化の結果で生じるという動かぬ証拠がある。皮膚病変の最初の発現の後、典型的には感染、機械的ストレス、及び薬を始めとする環境的要因によって誘発されてこの病気が慢性的に再発する。これらの傷害は、未だ同定されていない自然免疫反応を介して病原性Ｔ細胞カスケードをドライブしている可能性が提唱されている。
【０００３】
形質細胞様樹状細胞前駆体（ＰＤＣ）は、ウイルス刺激に応答してＩ型インターフェロン（ＩＦＮ−α／β）を大量に分泌するその特有な能力のため先天性の抗ウイルス免疫における重要なエフェクターとなっている。ウイルスに接触したＰＤＣは、その後、Ｔ細胞刺激性の樹状細胞（ＤＣ）自身に分化するか、又はＩＦＮ−αを介してバイスタンダーな骨髄系ＤＣの成熟化を誘導する。このように、ＰＤＣは先天性及び適応性の両者の抗ウイルス免疫をユニークに連結している。恒常性が維持されている間は、ＰＤＣはもっぱら血液とリンパ組織中にのみ存在する。しかし、ウイルス感染によって血液から一次感染の末梢部位へのＰＤＣの動員が活性化される。Ｗｏｌｌｅｎｂｅｒｇらは、ＰＤＣがアレルギー性接触皮膚炎、皮膚エリテマトーデス、及び乾癬等のいくつかの非感染性炎症性疾患の末梢組織にも蓄積している可能性を示した（非特許文献1）。しかし、ＰＤＣやＩ型ＩＦＮのようなＰＤＣ分泌産物についての機能的な関連性は、これまで取り組まれておらず、立証もされていない。
【０００４】
Ｉ型ＩＦＮ（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ω）は、Ｉ型ＩＦＮ表面レセプターに結合する構造的に関連した数種のＩＦＮ−αタンパク質及び単一種のＩＦＮ−βタンパク質を含むサイトカインファミリーのメンバーである。Ｉ型ＩＦＮは、ヒトにおいて、ウイルス複製を阻害し、ＮＫ細胞の細胞溶解能を増加し、ＭＨＣクラスＩ分子の発現を増加し、そしてＴｈ１（１型ヘルパーＴ細胞）の発生を刺激する。
【０００５】
過去において、乾癬とＩ型ＩＦＮとの関連性、又はＩＦＮ−αブロッキング剤の性状を扱ったいくつかの報告が文献中にある。Ｓｃｈｍｉｄらは、乾癬表皮において低レベルのＩＦＮ−α  ｍＲＮＡ発現を検出した（非特許文献２）。しかし、彼らはタンパク質レベルでＩＦＮ−α発現を証明できなかった。さらに、ＩＦＮ−αは、表皮領域でのみ見出された。著者らは乾癬においてＩＦＮ−αシステムが局所的に活性化されていることの直接的な証拠を提供したが、彼らは、これはウイルス感染若しくはサイトカインネットワークの調節不全の結果かもしれないと結論している。
【０００６】
Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｆｉｔｓらは、乾癬病変皮膚における活性化されたＩ型インターフェロンシグナル伝達経路を記載しているが、この経路のブロッキングが乾癬の予防若しくは治療に利用できることは示唆していない（非特許文献３）。唯一のケースとして、病気に罹患し易くなった個体で、メラノーマのアジュバント治療や肝炎治療中に投与される全身的なＩＦＮ−αが、時々乾癬のトリガーとなり得ることを示した報告がある（非特許文献４、５）。しかし、これは乾癬の高罹患率、並びに抗感染治療及びがん患者におけるＩＦＮ−αの頻繁な使用を考えると稀な事象である。さらにＩＦＮ−αは、乾癬を誘導し得る多くの因子の一つと考えられている。肉体的及び精神的ストレス、ＨＩＶ感染、並びにリチウム、βブロッカー及び抗マラリア薬を含む様々な薬剤等の他の因子も、よく知られた乾癬のトリガーである。生体外ルートにより添加される治療用ＩＦＮ−αの投与量は、いくつかの潜在的な下流の乾癬誘導因子の非特異的なトリガーとなる可能性がある。
【０００７】
Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉらは、ＩＦＮ−αを中和する治療薬の開発、即ちヒト化抗体の開発に焦点を当てている（非特許文献６）。治療対象疾患としてインシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）又は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を記載しているが、いずれかの既知自己免疫疾患における予防若しくは治療の実験的データは示していない。本論文は限られた分析患者数からＩＦＮ−αと乾癬若しくはクローン病との関連性について言及することに疑問を唱えている。
【０００８】
特許文献１（Ｗｉｅｓｅｒ）では、ＩＦＮ−α２レセプターに結合するペプチドホモ二量体とペプチドへテロ二量体が記載され、またＩＦＮ−α２の代用物となるこれらの化合物の身体的及び生化学的活性に焦点が当てられている。最広義の炎症性及び腫瘍性疾患に対してのこれらの化合物の利用が示唆されており、該疾患のリストには乾癬も含まれている。しかし、ＩＦＮ−α２拮抗剤を使用すべきことについては触れていない。
【特許文献１】ＷＯ００／６４９３６
【非特許文献１】Ｗｏｌｌｅｎｂｅｒｇら，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００２，１１９：１０９６−１１０２．
【非特許文献２】Ｓｃｈｍｉｄら，  J  ｏｆ  ＩＦＮ  Ｒｅｓ  １９９４，１４：２２９−２３４．
【非特許文献３】Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｆｉｔｓら，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００４，１２２：５１−６０．
【非特許文献４】Ｐａｕｌｕｚｚｉら，Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ  １９９３，７３：３９５．
【非特許文献５】Ｆｕｎｋら，Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９１，１２５：４６３−４６５．
【非特許文献６】Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２００１，１５：２５０−２６０．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
現行の乾癬療法は、それらの限られた有効性、副作用、及び新たな再発を予防できない点で限界があることから、新規の乾癬療法を検討する必要性がまだ残されている。抗ＴＮＦ−α標的療法のような新規の薬は、病気の鎮静化を素早く誘導できるが、潜在的毒性が高いため長期療法には向かない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、乾癬の予防及び治療用の薬剤製造のためのＩ型ＩＦＮ拮抗剤、又はＩ型ＩＦＮレセプター拮抗剤等のＩ型インターフェロンブロッキング剤の使用、並びにＩ型インターフェロンブロッキング剤を使用する乾癬の予防及び治療の方法に関する。
【００１１】
特に本発明は、前記使用であって、Ｉ型ＩＦＮ拮抗剤が、ＩＦＮ−α拮抗剤、例えば抗ＩＦＮ−α抗体若しくは抗体断片、好ましくはヒト化抗体、Ｉ型ＩＦＮレセプター融合タンパク質、又はＩＦＮ−α  ｍＲＮＡへの配列特異的な攻撃によってＩＦＮ−α産生を阻害する短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチドである、前記使用に関する。他のＩ型ＩＦＮファミリーのメンバー若しくはＩ型ＩＦＮ群に拮抗する類似の薬剤も、本発明の一部である。本発明は、さらに前記使用であって、Ｉ型ＩＦＮレセプター拮抗剤が、抗ＩＦＮ−α／β−レセプター抗体又は抗体断片、変異型Ｉ型ＩＦＮ／Ｆｃ融合タンパク質、又はＩ型ＩＦＮシグナル伝達を特異的に干渉する低分子である、前記使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
初期乾癬発生においてＰＤＣがＩ型ＩＦＮの高産生を伴う重要なエフェクター細胞であるという発見が、Ｉ型ＩＦＮブロッキングが乾癬の予防と治療に利用され得るという本発明をもたらした。乾癬プラーク病変と乾癬患者の非病変（正常に見える）皮膚の双方の皮膚に浸潤する多数のＰＤＣは、ＰＤＣに特異的な抗体（抗ＢＤＣＡ−２）を用いて免疫組織化学法及び単一細胞懸濁液のフローサイトメトリーによって示され得る。興味深いことに、非病変皮膚でのＰＤＣの静止表現型と対照的に、乾癬プラーク病変に浸潤するＰＤＣは活性化された表現型を示す。非病変皮膚から乾癬プラーク病変へ移行する間、ＰＤＣ活性化は乾癬の病変形成に寄与する。
【００１３】
Ｉ型ＩＦＮを弱める（即ち拮抗する）こと（例えば、ＩＦＮ−αを弱める一方で、ＩＦＮ−βをそのまま残すこと）は、重要なＩＦＮ−β介在抗ウイルス免疫応答をそのままにしておく可能性がある一方で、乾癬においてＩ型ＩＦＮ介在自己免疫疾患プロセスを特異的に標的とするというユニークな機会を与える。ＩＦＮ−αを弱めることは病気を一掃するだけでなく、関連した前臨床モデルで実証されたような再発も防止する。ＡＧＲ乾癬マウスモデル［Ｂｏｙｍａｎら, Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２００４，１９９：７３１−７３６］は、乾癬の予防と治療におけるＩ型ＩＦＮブロッキングの有効性を証明するための基盤を初めて提供している。この臨床的に関連する乾癬モデルは、Ｉ型ＩＦＮを阻害することがヒトにおいて乾癬の発生をブロックし、また乾癬を予防し、また治療する強力な方法であることを支持している。
【００１４】
乾癬病変発生中のＩＦＮ−α発現を、ＡＧＲ−／−マウスに移植された乾癬患者の非病変皮膚が３５日以内に完全な乾癬皮膚病変に自発転換するという異種移植モデルで検討する。ＲＡＧ−／−であることに加え、Ｉ型（Ａ）及びＩＩ型（Ｇ）ＩＦＮレセプターを欠くＡＧＲ１２９マウスは、研究を通じて無菌状態に維持する。非病変皮膚の角質を、吸収性組織シールを用いてマウスの背中に移植する。このヒト化マウスモデルシステムは、移植された前乾癬皮膚由来の内在ヒトＴ細胞の局所的活性化、及び増殖に依存する。
【００１５】
乾癬プラーク病変の最初のスクリーニングは、健康なドナーの正常皮膚と比べてＩＦＮ−α  ｍＲＮＡの有意な発現上昇を示していない。しかし、ＩＦＮ−α誘導性遺伝子であるＩＲＦ−７の発現の有意な増加（図１ａ）とＩＦＮ−α誘導性ＭｘＡタンパク質の存在（図１ｂ）によって乾癬プラーク病変がＩＦＮ−αのサインを証明しているのに対し、非病変皮膚や正常皮膚は証明できていない。また、これらの結果はＩＦＮ−αが乾癬表現型の発生期間においてより早くから産生されることを示唆している。ヒトＩＦＮ−α発現の解析により、移植後７日目にはｍＲＮＡレベルが増加し、１４日目でピークに達すること、その後急速に減少することが明らかとなっている（図１ｃ）。７日目と１４日目のＩＦＮ−α発現の誘導は、内在Ｔ細胞の局所増幅に対応している。一方、表皮乳頭腫によって定量化される疾患形成は、移植後２１日目に発症し、３５日目で完全な発生に達するという動態遅延を示している（図１ｃ）。これらのデータは、ＩＦＮ−α発現は全疾患過程に重要であるが、乾癬表現型の発生初期段階中で特に重要であることを示している。
【００１６】
細胞内ＩＦＮ−α発現は、ＢＤＣＡ２＋細胞に限定されており（図１ｄ）、これは乾癬皮膚病変の発生の際にＩＦＮ−αが主としてＰＤＣで産生されることを示している。対照的に、ＩＦＮ−α発現は同じ乾癬患者の非病変皮膚由来のＰＤＣでも末梢血由来のＰＤＣでも検出できない。ＰＤＣは大量のＩ型インターフェロンを含むので、ＰＤＣ由来のＩＦＮ−αは乾癬の誘発に重要な役割を果たす。
【００１７】
移植後直ちに開始される中和抗ＩＦＮ−α／β−レセプター抗体の静脈注射は、アイソタイプの一致するコントロール抗体を注射したマウスと比較して、内在Ｔ細胞の局所活性化及び増幅を阻害し（図２ａ）、また乾癬表現型の発生を完全にブロックし、乳頭腫を有意に減少させる（図２ｂ）。
【００１８】
ＡＧＲ−／−マウスにおける非病変前乾癬皮膚の乾癬への自発転換は、ＰＤＣ活性化とＩＦＮ−αの分泌によって仲介される。抗ＢＤＣＡ２抗体は、特異的にヒトＰＤＣを標的とし、インビトロでＰＤＣによるＩ型ＩＦＮ産生を阻害する。抗ＢＤＣＡ２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の静脈注射は、移植後１３日目の病変のＩＦＮ−αを１／１４に減少させ（図３ａ）、皮膚のＴ細胞増幅（図３ｂ）、及び表皮乳頭腫（図３ｃ）と皮膚肥厚（図３ｄ）で定量化される乾癬表現型の発生を阻害する。
【００１９】
抗ＢＤＣＡ２処理によるＰＤＣブロッキングに対する外来ＩＦＮ−αの添加は、Ｔ細胞増幅の阻害（図３ｂ）と乾癬発生の誘導（図３ｃ、ｄ）を完全に戻す。これにより乾癬の発生がＰＤＣによるＩＦＮ−α生産に仲介されることが確認される。これらのデータは、ＩＦＮ−αが乾癬発生に対して応答可能型のＩＦＮであることを証明している。
【００２０】
ＩＦＮ−αの特異的抑制が乾癬をブロックする一方で、潜在的な抗ウイルス免疫応答のためのＩＦＮ−βシグナル伝達そのままで残る。
【００２１】
ブロックキング剤は、炎症性疾患におけるＩ型ＩＦＮシグナル伝達と機能、及び／又はＰＤＣによるＩ型ＩＦＮ産生を干渉するあらゆるＤＮＡ、ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子）、ペプチド、タンパク質（融合タンパク質を含む）、抗体、又は低分子が該当する。特に、上記ブロッキング剤は（ｉ）分泌されたＩＦＮ−αを弱めるヒト化若しくはヒト抗ＩＦＮ−α全抗体又は抗体断片（Ｆａｂ若しくはｓｃＦｖ）、（ｉｉ）ＩＦＮ−α産生を阻害する短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチド、（ｉｉｉ）抗ＩＦＮ−α／βレセプター抗体、変異型Ｉ型ＩＦＮ／Ｆｃ融合タンパク質、Ｉ型ＩＦＮレセプター融合タンパク質、又はＩ型ＩＦＮシグナル伝達を干渉する低分子である。
【００２２】
本発明の一形態は、乾癬に対して有効な量で抗ＩＦＮ−α抗体若しくは抗体断片を、それを必要とする哺乳動物に対して、例えば、上記治療を必要とするヒトに対して、投与することを含む乾癬治療方法に関する。治療は、予防若しくは治療目的のためであり得る。投与に関して、抗ＩＦＮ−α抗体は、好ましくは抗ＩＦＮ−α抗体及び任意に薬剤上許容される担体及び任意にアジュバントを含む医薬品の形態をとる。抗ＩＦＮ−α抗体は乾癬に対して有効な量で使用される。活性成分の投薬量は、生物種、その年齢、体重、及び個々の状態、個々の薬物動態学的なデータ、投与の様式、及び投与が予防若しくは治療目的のためであるかどうかによる。約７０ｋｇの体重を有する個体のケースで一日あたりの投与量は、抗ＩＦＮ−α抗体で約１ｍｇから約５００ｍｇであり、好ましくは約１０ｍｇから約１００ｍｇである。
【００２３】
上述した他のブロッキング剤を投与すること、特に、ＩＦＮ−α産生を阻害する短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチド、又は抗ＩＦＮ−α／β−レセプター抗体、変異型Ｉ型ＩＦＮ／Ｆｃ融合タンパク質、Ｉ型ＩＦＮレセプター融合タンパク質、又はＩ型ＩＦＮシグナル伝達を干渉する低分子を包含する薬剤を投与することも、本発明に包含される。これらの化合物は乾癬に対する有効量で同様に使用される。投薬量は、投与される特定の化合物及び個々の薬物動態学的なデータ、並びに生物種、その年齢、体重、及び個々の状態及び投与の様式に基づき、開業医によって選択される。
【００２４】
静脈内投与、筋肉内投与、若しくは皮下投与等の非経口投与用の医薬組成物が特に好ましい。医薬組成物は、約１％から約９５％の活性成分、好ましくは約２０％から９０％の活性成分を含む。
【００２５】
非経口投与に関して、好ましくは上述した抗ＩＦＮ−α抗体、又は他のＩ型ＩＦＮブロッキング剤の懸濁液、又は分散液を、特に、例えば使用直前に調製できる等張水溶液で使用する。医薬組成物は、滅菌され得、及び／又は例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、及び／又は乳化剤、可溶化剤、増粘剤、浸透圧調節用塩、及び／又はバッファなどの賦形剤を含み得、そして既知の方法、例えば、従来の可溶化法や凍結乾燥工程によって製造される。
【００２６】
本発明において有用な抗体は、標準的な方法で製造される。ヒト化抗体及び抗体断片は、以前に記載された［Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａらによるレビュー，Ｃｕｒｒ  Ｏｐ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １９８８，８：４４３−４５０］ように組換え技術によって得られる。それに代わるものとして、ヒト抗体は、もっぱらファージディスプレイ技術［Ｗｉｎｔｅｒらによるレビュー,  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９４，１２：４３３−４５５］、又はマウスゲノム内に挿入された部分的なヒト重鎖座及び軽鎖座をもつトランスジェニック「ヒト」マウス[Ｂｒｕｇｇｅｍａｎらによるレビュー,Ｃｕｒｒ  Ｏｐ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １９９７，８：５０３−５０８]のいずれかを用いて得ることができる。ｓｉＲＮＡ若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチドの調製は、標準的な技術を用いて同様に行う。
【００２７】
上述した抗ＩＦＮ−α抗体若しくは他のＩ型ＩＦＮブロッキング剤は、単独で、又は一又は二以上の他の治療薬との組み合わせで投与できる。可能な併用療法は、本発明のブロッキング剤と一又は二以上の乾癬治療で知られている他の治療薬との定型的な組合せの形態をとり、該投与はお互いにずらして若しくは独立に投与するか、又は固定された組み合わせの形態をとる。
【００２８】
考えられる組合せのパートナーとして、局所用副腎皮質ステロイド、UV光、レチノイド、メトトレキサート、乾癬において変化した免疫システムを標的とする他の生物製剤又はビタミンＤ３誘導体が挙げられる。
【実施例】
【００２９】
以下の実施例により本発明を説明するが、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３０】
（リアルタイム定量ＰＣＲ）
ホモジェナイズした皮膚試料から総ＲＮＡを抽出し、以前に記載された［Ｂｏｙｍａｎら，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２００４，１９９：７３１−７３６］ように逆転写する。リアルタイムＰＣＲ法によって、ＩＦＮ−α、及びＩＲＦ−７の転写産物の発現に関して相補的なＤＮＡを定量解析する。プライマーは、ヒトＩＦＮ−α配列に対して（ＣＡ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社より購入）、及びヒトＩＲＦ−７に対して（左, ＴＣＣＣＣＡＣＧＣＴＡＴＡＣＣＡＴＣＴＡＣＣＴ−３’； 右，ＡＣＡＧＣＣＡＧＧＧＴＴＣＣＡＧＣＴＴ−３’）デザインされたものを用いる。１８ＳリボソームＲＮＡを規格化に用いる。ヒト化マウスモデルでのＩＦＮ−αの定量化は、大部分のヒトＩＦＮ−α遺伝子を認識するが、そのマウス対応遺伝子は認識しないプライマーキット（Ｇｅｒｍａｎｙ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｓｅａｒｃｈ−ＬＣ社より購入）を用いて行う。ヒトＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡレベルは、ヒト特異的プライマー（左，ＡＴＴＧＣＣＣＴＣＡＡＣＧＡＣＣＡＣＴＴＴＧ−３’； 右，ＴＴＧＡＴＧＧＴＡＣＡＴＧＡＡＡＧＧＴＧＡＧＧ−３’）を用いて定量化し、規格化に用いる。
【００３１】
（動物、及び移植手順）
ＲＡＧ−２−／−であることに加え、Ｉ型（Ａ）及びＩＩ型（Ｇ）ＩＦＮレセプターを欠くＡＧＲ１２９マウスは、本研究を通じて無菌状態に維持される。以前に記載された［Ｂｏｙｍａｎら，上記文中で引用］ように、無症状な前乾癬性皮膚の角質を吸収性組織シールを用いてマウスの背中に移植する。移植後３５日目に、移植した皮膚を取り外し、組織学的又はｍＲＮＡ発現解析のためにすばやく凍らせる。ＣＤ３＋Ｔ細胞数、表皮肥厚及び乳頭腫指数は、以前に発表された［Ｂｏｙｍａｎら，上記文中で引用］ように組織学的に測定される。ＣＤ３＋Ｔ細胞価は、独立した二人の研究者により４００倍拡大率で評価された３箇所のランダムな視野の平均細胞数を表す。図示された乳頭腫価と表皮肥厚価は、各サンプルの１０箇所のランダムな領域の平均を表わす。
【００３２】
（中和検査）
抗体投与の用量とスケジュールについては、他の細胞表面分子に対する抗ヒトモノクローナル抗体を用いた以前のデータに基づいて導き出している。そして、以下のように投与する。（ｉ）移植後０日目から開始して、３５日間毎週２度、３０μｇの中和抗ヒトＩＦＮ−α／βレセプター鎖２（ＣＤ１１８）モノクローナル抗体（Ｃｌｏｎｅ ＭＭＨＡＲ−２；ＰＢＬ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒｔｏｒｉｅｓ社より購入)を静脈注射で投与。；（ｉｉ）移植後０日目から開始して、３５日間毎週２度、３０μｇの抗ＢＤＣＡ−２モノクローナル抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を静脈注射で投与。ＩＦＮ−α再構築実験のため、３０，０００ＩＵの組換えヒトＩＦＮ−α２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ；Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，Ｒｅｉｎａｃｈ， Ｒｏｃｈｅ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ社) （「Ｒｏｆｅｒｏｎ」は同社の登録商標）を、３５日間週３回皮下に投与する。投薬量については、ヒトで用いられる８ＭｉｏＩＵの治療量に対応しており、以前に記載された［Ｂｏｙｍａｎら，上記文中で引用］ようなアロメトリック法から導き出される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１ａ】ＩＦＮ−α産生は、乾癬皮膚病変の発生における初期現象であり、主として皮膚ＰＤＣにより仲介される。
【００３４】
（ａ）乾癬プラーク病変（ＰＰ，ｎ＝２４）と正常皮膚（ＮＮ，ｎ＝１１）における規格化されたＩＦＮ−α及びＩＲＦ−７  ｍＲＮＡの発現：図のｘ軸（ｍＲＮＡ）は、相対的なｍＲＮＡ発現を表す。
【図１ｂ】（ｂ）乾癬プラーク病変（ＰＰ，ｎ＝８）、乾癬患者の非病変皮膚（ＰＮ，ｎ＝４）、健康な個体の正常皮膚（ＮＮ，ｎ＝４）、及びアトピー性皮膚炎の皮膚（ＡＤ，ｎ＝４）の各検体の凍結切片におけるＭｘＡタンパク質に関する免疫組織化学：全皮膚及び表皮細胞中のＭｘＡポジティブ細胞のパーセンテージは、４００倍の拡大率で３箇所のランダムな視野の２回の独立したカウントの平均によって算出している。＋＝０〜２５％、＋＋＝２５〜５０％、＋＋＋＝５０〜７５％、＋＋＋＋＝７５〜１００％、＜＝検出限界を下回る。
【図１ｃ】（ｃ）ＡＧＲ−/−マウス上に移植した非病変皮膚から乾癬病変への自発的発生期間における病変部のＩＦＮ−α発現：ヒトＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡに対するヒトＩＦＮ−α ｍＲＮＡの相対的発現（ＩＦＮ−α  ｍＲＮＡ，棒グラフ）の動態と、内在性ＣＤ３ Ｔ細胞の増幅（ＣＤ３，実線）及び乾癬乳頭腫の誘導（Ｐａｐ，破線）の動態との比較：ｄ＝移植後の日数。データは２回の独立した実験の平均値＋／−標準偏差（ＳＤ）を表している。
【図１ｄ】（ｄ）発生中の乾癬病変（ｄ−ＰＰ，乾癬プラークの先端縁部）と非病変皮膚（ＰＮ）由来の皮膚単一細胞懸濁液における細胞内ＩＦＮ−αと細胞表面ＢＤＣＡ−２の二重染色：四分割図中の数字は％を表す。
【図２ａ】ＩＦＮ−α／βシグナル伝達は移植局所のＴ細胞増幅及び乾癬発生にとって重要である。
【００３５】
（ａ）移植前（非病変皮膚０日目，ＰＮ）、及びアイソタイプの一致するコントロール抗体（ＩｇＧ）若しくは抗ＩＦＮ−α／βレセプターモノクローナル抗体（α−ＩＦＮ‐Ｒ）の投与を経た移植後３５日目（ｐ．ｔ．）の皮膚移植片における、又は移植ドナーの乾癬プラーク（ＰＰ）における総ＣＤ３ Ｔ細胞のカウント：エラーバーは、一標準偏差（ＳＤ）を表す。
【図２ｂ】（ｂ）移植前（非病変皮膚０日目，ＰＮ）、及びアイソタイプの一致するコントロール抗体（ＩｇＧ）若しくは抗ＩＦＮ−α／βレセプターモノクローナル抗体（α−ＩＦＮ‐Ｒ）の投与を経た移植後３５日目（ｐ．ｔ．）の皮膚移植片における、又は移植ドナーの乾癬プラーク（ＰＰ）における表皮乳頭腫（Ｐａｐ）：ドットは、独立して移植されたマウスを表す。
【図３ａ】乾癬の発生はＰＤＣによるＩ型インターフェロン産生に依存する。
【００３６】
（ａ）アイソタイプのコントロール抗体（ＩｇＧ）、又は抗ＢＤＣＡ−２モノクローナル抗体（α−ＢＤＣＡ−２）の投与を経た移植後（ｐ．ｔ．）１３日目に回収された皮膚移植片におけるヒトＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡに対するヒトＩＦＮ‐αの総ｍＲＮＡ発現
【図３ｂ】移植前（非病変皮膚０日目，ＰＮ）、及びアイソタイプの一致するコントロール抗体（ＩｇＧ）、抗ＢＤＣＡ−２モノクローナル抗体（α−ＢＤＣＡ−２）、又は抗ＢＤＣＡ−２＋ヒト組換えＩＦＮ−α２（α−ＢＤＣＡ−２＋ＩＦＮ−α）の投与を経た移植後（ｐ．ｔ．）３５日目の皮膚移植片における総ＣＤ３ Ｔ細胞のカウント。
【図３ｃ】移植前（非病変皮膚０日目，ＰＮ）、及びアイソタイプの一致するコントロール抗体（ＩｇＧ）、抗ＢＤＣＡ−２モノクローナル抗体（α−ＢＤＣＡ−２）、又は抗ＢＤＣＡ−２＋ヒト組換えＩＦＮ−α２（α−ＢＤＣＡ−２＋ＩＦＮ−α）の投与を経た移植後（ｐ．ｔ．）３５日目の皮膚移植片における上皮乳頭腫（Ｐａｐ）。
【図３ｄ】移植前（非病変皮膚０日目，ＰＮ）、及びアイソタイプの一致するコントロール抗体（ＩｇＧ）、抗ＢＤＣＡ−２モノクローナル抗体（α−ＢＤＣＡ−２）、又は抗ＢＤＣＡ−２＋ヒト組換えＩＦＮ−α２（α−ＢＤＣＡ−２＋ＩＦＮ−α）の投与を経た移植後（ｐ．ｔ．）３５日目の皮膚移植片における表皮肥厚（Ａｃ）。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図３ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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