(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−１７の抗原決定基に対する特異性を有する抗体分子、抗体分子の治療上の使用、及び前記抗体分子を生成するための方法に関する。
2008520224.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖を含みヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体であって、重鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号５で与える配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号６で与える配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号７で与える配列を有するＣＤＲの少なくとも１個を含む上記中和抗体。
【請求項２】
重鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号５で与える配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号６で与える配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号７で与える配列を含む、請求項１に記載の中和抗体。
【請求項３】
軽鎖を含みヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体であって、軽鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列を有するＣＤＲの少なくとも１個を含む上記中和抗体。
【請求項４】
軽鎖をさらに含み、軽鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列を有するＣＤＲの少なくとも１個を含む、請求項１又は請求項２に記載の中和抗体。
【請求項５】
軽鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列を含む、請求項３又は請求項４に記載の中和抗体。
【請求項６】
重鎖が配列ｇＨ１１（配列番号１１）を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
軽鎖が配列ｇＬ３（配列番号１３）を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
配列ｇＨ１１（配列番号１１）を含む重鎖及び配列ｇＬ３（配列番号１３）を含む軽鎖を有する、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項９】
軽鎖の可変ドメインが請求項８に記載の抗体の軽鎖可変ドメインと少なくとも６０％同一性又は類似性を有する配列を含み、且つ重鎖の可変ドメインが請求項８に記載の抗体の重鎖可変ドメインと少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項１０】
配列番号２で与える配列を含む重鎖及び配列番号４で与える配列を含む軽鎖を有する、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項１１】
配列番号１６で与える配列を含む重鎖及び配列番号１８で与える配列を含む軽鎖を有する、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項１２】
重鎖及び軽鎖が請求項１１に記載の抗体の対応する重鎖及び軽鎖と少なくとも６０％同一又は類似である、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項１３】
１つ又は複数のエフェクター又はレポーター分子が結合している、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の中和抗体。
【請求項１４】
配列番号１６で与える配列を含む重鎖及び配列番号１８で与える配列を含む軽鎖を有し、且つ２個のエフェクター分子が結合している、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項１５】
１個のエフェクター分子がＣＬの鎖間システインと結合しており、且つ１個のエフェクター分子がＣＨ１の鎖間システインと結合している、請求項１４に記載の中和抗体。
【請求項１６】
ＣＬの鎖間システインが（カバットの番号処理によって）軽鎖の位置２１４に存在し、且つＣＨ１の鎖間システインが（カバットの番号処理によって）重鎖の位置２３３に存在する、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
ＣＬの鎖間システインが（配列の番号処理によって）軽鎖の位置２１８に存在し、且つＣＨ１の鎖間システインが（配列の番号処理によって）重鎖の位置２２２に存在する、請求項１５又は請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
エフェクター分子が１つ又は複数のポリマーを含む、請求項１３から１７までのいずれか一項に記載の中和抗体。
【請求項１９】
１つ又は複数のポリマーがメトキシポリ（エチレングリコール）又はポリ（エチレングリコール）である、請求項１８に記載の中和抗体。
【請求項２０】
以下の構造
【化１】
2008520224.tif 000004
を有し、上式でｎが４００と５２０の間である、請求項１９に記載の中和抗体。
【請求項２１】
５００ｐＭ以下のヒトＩＬ−１７に対する結合親和性を有するヒト化中和抗体。
【請求項２２】
請求項８、１０又は１１に記載の抗体と同じエピトープに結合する、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項２３】
請求項８、１０又は１１に記載の抗体とヒトＩＬ−１７の結合を交差阻害する、或いは請求項８、１０又は１１に記載の抗体によるヒトＩＬ−１７との結合から交差阻害される、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体。
【請求項２４】
請求項８、１０又は１１に記載の抗体によって結合したヒトＩＬ−１７上のエピトープ。
【請求項２５】
請求項１から２３までのいずれか一項に記載の抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードする単離ＤＮＡ配列。
【請求項２６】
請求項２５に記載の１つ又は複数のＤＮＡ配列を含むクローニング又は発現ベクター。
【請求項２７】
配列番号１９で与える配列を含む、請求項２６に記載のベクター。
【請求項２８】
請求項２６又は請求項２７に記載の１つ又は複数のクローニング又は発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２９】
請求項２８に記載の宿主細胞を培養すること、及び抗体を単離することを含む、請求項１から２３までのいずれか一項に記載の抗体を生成するための方法。
【請求項３０】
１つ又は複数の薬剤として許容される賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて、請求項１から２３までのいずれか一項に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項３１】
他の活性成分をさらに含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
ＩＬ−１７によって仲介されるか又は高レベルのＩＬ−１７と関係がある病的障害の治療又は予防において使用するための、請求項１から２３までのいずれか一項に記載の抗体又は請求項３０若しくは請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
ＩＬ−１７によって仲介されるか又は高レベルのＩＬ−１７と関係がある病的障害を治療又は予防するための医薬品の製造における、５００ｐＭ以下のヒトＩＬ−１７に対する結合親和性を有するヒト化中和抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ−１７の抗原決定基に対する特異性を有する抗体分子に関する。本発明はさらに、抗体分子の治療上の使用、及び抗体分子を生成するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＴＬＡ−８又はＩＬ−１７Ａとしても知られるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）は、さまざまな非免疫細胞からの広範囲の他のサイトカインの分泌を刺激する前炎症性サイトカインである。ＩＬ−１７は線維芽細胞、ケラチン生成細胞、上皮及び内皮細胞のような接着性細胞によるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＰＧＥ２、ＭＣＰ−１及びＧ−ＣＳＦの分泌を誘導することができ、照射した線維芽細胞の存在下で同時培養するとＩＣＡＭ−１表面発現、Ｔ細胞の増殖、並びにＣＤ３４＋ヒト原種の増殖及び好中球への分化を誘導することもできる（Ｆｏｓｓｉｅｚら、１９９８、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６、５４１〜５５１）。ＩＬ−１７は主に活性化記憶Ｔ細胞によって生成され、至る所に分布する細胞表面受容体（ＩＬ−１７Ｒ）との結合によって作用する（Ｙａｏら、１９９７、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ」、９、７９４〜８００）。炎症応答を制御する際に類似の役割と異なる役割の両方を有する、ＩＬ−１７の幾つかの相同体が同定されてきている。ＩＬ−１７サイトカイン／受容体ファミリーの総説に関しては、Ｄｕｍｏｎｔ、２００３、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、１３、２８７〜３０３を参照のこと。
【０００３】
ＩＬ−１７は異常な免疫応答によって仲介される幾つかの疾患、慢性関節リウマチ及び気道炎症など、並びに臓器移植拒絶反応及び抗腫瘍免疫に貢献する可能性がある。ＩＬ−１７活性の阻害剤は当技術分野でよく知られており、例えばネズミＩＬ−１７Ｒ：ヒトＦｃ融合タンパク質、ネズミ可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体を使用して、さまざまな慢性関節リウマチのモデルにおいてＩＬ−１７の役割が実証されてきている（Ｌｕｂｂｅｒｔｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１、１６７、１００４〜１０１３；Ｃｈａｂａｕｄら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．２００１、３、１６８〜１７７）。さらに、腹膜癒着形成を減らすために、中和ポリクローナル抗体が使用されてきている（Ｃｈｕｎｇら、２００２、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９５、１４７１〜１４７８）。今日まで、治療において使用するための抗ヒトＩＬ−１７抗体は開発されておらず、したがって、患者を治療するのに適した高親和性の抗ＩＬ−１７抗体に関する必要性が存在する。
【０００４】
我々は現在、ｉｎ  ｖｉｖｏ、例えば本明細書に記載するｉｎ  ｖｉｖｏ炎症モデルにおいて特に有効である、高親和性の中和抗ＩＬ−１７抗体を同定している。
【０００５】
抗体の可変ドメイン中の残基は、Ｋａｂａｔらにより考案されたシステムに従って従来通り番号処理される。このシステムは、Ｋａｂａｔら、１９８７によって、「免疫学的対象のタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」、米国保険会社福祉省、米国ＮＩＨ（本明細書では以後、「Ｋａｂａｔら（上記）」）中で述べられている。別段の記載がない限り、本明細書中では、この番号処理システムを使用する。
【０００６】
カバット残基の表示は、アミノ酸残基の直線的番号処理と常に直接対応するわけではない。実際の直線的アミノ酸配列は、構造要素、塩基の可変ドメイン構造の骨格又は相補性決定領域（ＣＤＲ）の縮小、又は構造要素中への挿入に対応する厳密なカバットの番号処理中より少ない又は多いアミノ酸を含み得る。残基の正確なカバットの番号処理は、抗体の配列及び「標準の」カバットの番号処理配列中の相同な残基のアラインメントによって、所与の抗体に関して決定することができる。
【０００７】
重鎖可変ドメインのＣＤＲは、カバットの番号処理システムに従って、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）及び残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。しかしながら、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃ．及びＬｅｓｋ、Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．、１９６、９０１〜９１７（１９８７））によれば、ＣＤＲ−Ｈ１と同等なループが残基２６から残基３２に伸張する。したがって、本明細書で使用する「ＣＤＲ−Ｈ１」は、カバットの番号処理システムとＣｈｏｔｈｉａのトポロジー的ループの定義の組合せによって記載されたように残基２６〜３５を含む。
【０００８】
軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、カバットの番号処理システムに従って、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）及び残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本明細書で使用する用語「中和抗体」は、例えばＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒの結合を阻害することによって、ＩＬ−１７の生物学的シグナルの活性を中和することができる抗体を記載する。
【００１０】
第１の態様において本発明は、重鎖を含みヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体であって、重鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号５で与える配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号６で与える配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号７で与える配列を有するＣＤＲの少なくとも１個を含む中和抗体を提供する。
【００１１】
本発明の第１の態様の抗体は、重鎖の可変ドメインのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３の少なくとも２つが以下の：ＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号５で与える配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号６で与える配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号７で与える配列から選択される、重鎖を含むことが好ましい。例えば抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１が配列番号５で与える配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ２が配列番号６で与える配列を有する重鎖を含むことができる。或いは抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１が配列番号５で与える配列を有し、且つＣＤＲ−Ｈ３が配列番号７で与える配列を有する重鎖を含むことができ、或いは抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２が配列番号６で与える配列を有し、且つＣＤＲ−Ｈ３が配列番号７で与える配列を有する重鎖を含むことができる。誤解を避けるために、全ての置換が含まれると理解されたい。
【００１２】
本発明の第１の態様の抗体は、可変ドメインがＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号５で与える配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号６で与える配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号７で与える配列を含む、重鎖を含むことがより好ましい。
【００１３】
一実施形態では、本発明の第１の態様の抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列を含む重鎖を含む。
【００１４】
他の実施形態では、本発明の第１の態様の抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、本発明の第１の態様の抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む重鎖を含む。
【００１５】
本明細書で使用する「同一性」は、一直線に並んだ配列中の任意の特定の位置において、配列間でアミノ酸残基が同一であることを示す。本明細書で使用する「類似性」は、一直線に並んだ配列中の任意の特定の位置において、配列間でアミノ酸残基が類似の型であることを示す。例えば、ロイシンはイソロイシン又はバリンで置換することができる。互いにしばしば置換することができる他のアミノ酸には、以下のものがあるがこれらだけには限られない：
−フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；
−リシン、アルギニン及びヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）；
−アスパラギン及びグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；並びに
−システイン及びメチオニン（イオウ含有側鎖を有するアミノ酸）。同一性及び類似性の程度は容易に計算することができる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｌｅｓｋ、Ａ．Ｍ．編、オックスフォード大学出版、ニューヨーク、１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ１、Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ａ．Ｍ．及びＧｒｉｆｆｉｎ、Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー、１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ、Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７；並びにＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ、Ｍ．及びＤｅｖｅｒｅｕｘ、Ｊ．編、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９１）。
【００１６】
第２の態様において本発明は、軽鎖を含みヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体であって、軽鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列を有するＣＤＲの少なくとも１個を含む中和抗体を提供する。
【００１７】
本発明の第２の態様の抗体は、軽鎖の可変ドメインのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３の少なくとも２つが以下の：ＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列から選択される、軽鎖を含むことが好ましい。例えば抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１が配列番号８で与える配列を有し、且つＣＤＲ−Ｌ２が配列番号９で与える配列を有する軽鎖を含むことができる。或いは抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１が配列番号８で与える配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ３が配列番号１０で与える配列を有する軽鎖を含むことができ、或いは抗体は、ＣＤＲ−Ｌ２が配列番号９で与える配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ３が配列番号１０で与える配列を有する軽鎖を含むことができる。誤解を避けるために、全ての置換が含まれると理解されたい。
【００１８】
本発明の第２の態様の抗体は、その可変ドメインがＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列を含む、軽鎖を含むことがより好ましい。
【００１９】
一実施形態では、本発明の第２の態様の抗体は、軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列を含む軽鎖を含む。
【００２０】
他の実施形態では、本発明の第２の態様の抗体は、軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む軽鎖を含む。本発明の第２の態様の抗体は、軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む軽鎖を含むことが好ましい。
【００２１】
本発明の第１及び第２の態様の抗体分子は、それぞれ相補的軽鎖又は相補的重鎖を含むことが好ましい。
【００２２】
本発明の第１及び第２の態様のいずれかによる抗体は、重鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号５で与える配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号６で与える配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号７で与える配列を含む重鎖、並びに軽鎖の可変ドメインがＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号８で与える配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号９で与える配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号１０で与える配列を含む軽鎖を含むことが好ましい。
【００２３】
本発明の第１及び第２の態様の一実施形態では、抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列を含む重鎖、及び軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列を含む軽鎖を含む。
【００２４】
したがって、本発明の第１及び第２の態様の他の一実施形態では、抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、且つ軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む、重鎖及び軽鎖を含む。抗体は、軽鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む重鎖、及び軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む軽鎖を含むことが好ましい。
【００２５】
本発明の第３の態様では、本発明の第１又は第２の態様のいずれかによる抗体を提供し、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【００２６】
本発明の第３の態様の好ましい実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列を含む重鎖、及び軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列を含む軽鎖を含む。
【００２７】
本発明の第３の態様の他の好ましい実施形態では、モノクローナル抗体はネズミモノクローナル抗体であり、このモノクローナル抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号２で与える配列を含み、且つ軽鎖の可変ドメインが配列番号４で与える配列を含む、重鎖及び軽鎖を含む。このネズミモノクローナル抗体は、本明細書では「ＩＬ−１７Ｆ４．１００」又は「ドナー」抗体と呼ぶ。マウスモノクローナル抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００の重鎖と軽鎖の可変ドメインの完全なヌクレオチド及びアミノ酸配列は図１ａ及び１ｂ中に示し、配列番号１〜４で与える。配列番号５〜１０で与えるＣＤＲは、ネズミモノクローナル抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００に由来する。
【００２８】
本発明の第４の態様では、ネズミモノクローナル抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００から１つ又は複数のＣＤＲ（配列番号５〜１０）を得たＣＤＲ移植抗体分子を提供する。本明細書で使用する用語「ＣＤＲ移植抗体分子」は、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）の重鎖及び／又は軽鎖可変領域骨格に移植したドナー抗体（例えば、ネズミモノクローナル抗体）由来の、（望ましくは、１つ又は複数の修飾ＣＤＲを含む）１つ又は複数のＣＤＲを重鎖及び／又は軽鎖が含む抗体分子を指す。総説に関しては、Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６、５３５〜５３９、１９９８を参照のこと。
【００２９】
ＣＤＲを移植すると、マウス、霊長類及びヒト骨格領域を含めた、ＣＤＲが由来するクラス／タイプのドナー抗体を有する、任意の適切なアクセプター可変領域の骨格配列を使用することができる。本発明の第４の態様のＣＤＲ移植抗体は、ヒトアクセプター骨格領域を含む可変ドメイン、及び前に言及したドナー抗体由来の１つ又は複数のＣＤＲを有することが好ましい。したがって、可変ドメインがヒトアクセプター骨格領域及び非ヒト、好ましくはネズミ、ドナーＣＤＲを含む、中和ＣＤＲ移植抗体を提供する。
【００３０】
本発明中で使用することができるヒト骨格の例は、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ、ＥＵ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＬＡＹ及びＰＯＭである（Ｋａｂａｔら、上記）。例えば、ＫＯＬ及びＮＥＷＭは重鎖に使用することができ、ＲＥＩは軽鎖に使用することができ、且つＥＵ、ＬＡＹ及びＰＯＭは重鎖と軽鎖の両方に使用することができる。或いは、ヒト生殖系配列を使用することができ、これらはｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／において入手可能である。
【００３１】
本発明のＣＤＲ移植抗体では、アクセプターの重鎖及び軽鎖は必ずしも同じ抗体に由来する必要はなく、望むならば異なる鎖に由来する骨格領域を有する複合鎖を含むことができる。
【００３２】
本発明のＣＤＲ移植抗体の重鎖に関する好ましい骨格領域は、（図２中に示す；配列番号２０及び２１）ヒト亜群ＶＨ３配列１−３  ３−３３及びＪＨ４に由来する。したがって、少なくとも１つの非ヒトドナーＣＤＲを含み、重鎖骨格領域がヒト亜群配列１−３  ３−３３及びＪＨ４に由来する、中和ＣＤＲ移植抗体を提供する。ヒトＪＨ４の配列は以下の：（ＹＦＤＹ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１）である。ＹＦＤＹモチーフはＣＤＲ−Ｈ３の一部分であり、骨格４の一部分ではない（Ｒａｖｅｔｃｈ、ＪＶ．ら、１９８１、Ｃｅｌｌ、２７、５８３〜５９１）。ドナー配列は、図１ａ中に示すＩＬ−１７Ｆ４．１００ＶＨ配列（配列番号２）である。
【００３３】
本発明のＣＤＲ移植抗体の軽鎖に関する好ましい骨格領域は、図２中に示すヒト生殖系亜群ＶＫ１配列２−１−（１）Ｏ１２及びＪＫ１（配列番号２２及び２３）に由来する。したがって、少なくとも１つの非ヒトドナーＣＤＲを含み、軽鎖骨格領域がヒト亜群配列ＶＫ１２−１−（１）Ｏ１２及びＪＫ１に由来する、中和ＣＤＲ移植抗体を提供する。ＪＫ１配列は以下の：（ＷＴ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２３）である。ＷＴモチーフはＣＤＲ−Ｌ３の一部分であり、骨格４の一部分ではない（Ｈｉｅｔｅｒ、ＰＡ．ら、１９８２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５７、１５１６〜１５２２）。ドナー配列は、図１ｂ中に示すＩＬ−１７Ｆ４．１００ＶＬ配列（配列番号４）である。
【００３４】
さらに、本発明のＣＤＲ移植抗体では、骨格領域はアクセプター抗体の骨格領域と全く同じ配列を有している必要はない。例えば異常な残基を、そのアクセプター鎖クラス又はタイプに関してより高頻度で存在する残基に変えることができる。或いは、アクセプター骨格領域中の選択した残基を、それらがドナー抗体中の同じ位置において見られる残基に対応するように変えることができる（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３〜３２４を参照）。ドナー抗体の親和性を回復させるために、このような変化は必要最小限に保たなければならない。変えることが必要とされ得るアクセプター骨格領域中の残基を選択するためのプロトコルは、ＷＯ９１／０９９６７中に述べられている。
【００３５】
好ましくは、本発明のＣＤＲ移植抗体分子では、アクセプター重鎖がヒトＶＨ３配列１−３  ３−３３及びＪＨ４を有する場合、したがって重鎖のアクセプター骨格領域は、１つ又は複数のドナーＣＤＲ以外に、位置２４と７８の少なくとも１箇所、好ましくは位置２４と７８の両方にドナー残基を含む（Ｋａｂａｔら、（上記）による）。したがって、重鎖の可変ドメインの少なくとも位置２４及び７８の残基がドナー残基である、ＣＤＲ移植抗体を提供する。
【００３６】
好ましくは、本発明によるＣＤＲ移植抗体分子では、アクセプター軽鎖がヒト亜群ＶＫ１配列２−１−（１）Ｏ１２及びＪＫ１を有する場合、したがって軽鎖のアクセプター骨格領域は、位置２にドナー残基を含む（Ｋａｂａｔら、（上記）による）。したがって、少なくとも位置２の残基がドナー残基である、ＣＤＲ移植抗体を提供する。
【００３７】
ドナー残基は、ドナー抗体、即ちＣＤＲが本来由来する抗体由来の残基であり、本発明の場合、ドナー抗体はネズミモノクローナル抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００である。
【００３８】
本発明の第１又は第４の態様の他の実施形態では、重鎖はｇＨ１１の配列（配列番号１１）を含むことが好ましい。この移植重鎖の可変ドメインの配列は、図３ａ中に示す（塩基６４で始まる）。
【００３９】
本発明の第２又は第４の態様の他の実施形態では、軽鎖はｇＬ３の配列（配列番号１３）を含むことが好ましい。この移植軽鎖の可変ドメインの配列は、図３ｂ中に示す（塩基６４で始まる）。
【００４０】
本発明の第１、第２又は第４の態様の他の実施形態による抗体分子は、ｇＨ１１の配列（配列番号１１）を含む重鎖、及びｇＬ３の配列（配列番号１３）を含む軽鎖を含むことがより好ましい。
【００４１】
本発明の第４の態様の一実施形態では、抗体は、重鎖の可変ドメインが配列番号１１で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、且つ軽鎖の可変ドメインが配列番号１３で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む、重鎖及び軽鎖を含む。抗体は、軽鎖の可変ドメインが配列番号１１で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む重鎖、及び軽鎖の可変ドメインが配列番号１３で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む軽鎖を含むことが好ましい。
【００４２】
本発明の抗体分子は、完全長の重鎖及び軽鎖、或いはＦａｂ、修飾Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片などのその断片を有する完全な抗体分子を含むことができる。或いは本発明の抗体分子は、軽鎖又は重鎖モノマー又はジマー又は単鎖抗体、例えば重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインがペプチドリンカーによって接合している単鎖Ｆｖを含むことができる。同様に、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を、他の抗体ドメインと適切に組み合わせることができる。これらの抗体断片を作製及び製造するための方法は、当技術分野でよく知られている（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５〜１８１を参照）。
【００４３】
本発明の抗体分子の定常領域のドメインは、存在する場合、必要とされ得る抗体分子の示す機能、及び特にエフェクター機能を有することに関して選択することができる。例えば、定常領域のドメインはヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭドメインであってよい。特に、抗体分子が治療用途を目的とし抗体のエフェクター機能が必要とされるとき、詳細にはＩｇＧ１及びＩｇＧ３イソ型の、ヒトＩｇＧの定常領域のドメインを使用することができる。或いは、抗体分子が治療用途を目的とし抗体のエフェクター機能が必要とされない、例えば単にＩＬ−１７活性を阻害することを目的とするとき、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４イソ型を使用することができる。
【００４４】
本発明中で使用するための具体的な抗体断片には、Ｆａｂ及びＦａｂ’断片、並びに国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０及びＷＯ２００５／００３１７１（２００５年１月１３日に公開済み）中に記載された断片がある。特に、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９中に記載された修飾抗体Ｆａｂ断片が好ましい。これらのＦａｂ断片は重鎖と軽鎖の対、重鎖と軽鎖の定常領域中で鎖間システインによって共有結合したＶＨ／ＣＨ１とＶＬ／ＣＬを含み、重鎖の定常領域がＣＨ１の鎖間システインで終わることを特徴とする。用語「鎖間システイン」は、天然に存在する生殖系抗体遺伝子中にコードされる対応する重鎖又は軽鎖の定常領域中のシステインとジスルフィド結合すると思われる、重鎖又は軽鎖の定常領域中のシステインを指す。特に鎖間システインは、天然に存在する抗体中で互いにジスルフィド結合する、軽鎖（ＣＬ）の定常領域中のシステイン、及び重鎖（ＣＨ１）の第１の定常領域中のシステインである。このようなシステインの例は、Ｋａｂａｔら、１９８７によって、「免疫学的対象のタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」、米国保険会社福祉省、米国ＮＩＨ中で定義されたように、軽鎖の位置２１４、及びヒトＩｇＧ１の重鎖の２３３、ヒトＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の重鎖の１２７、並びにヒトＩｇＤ及びＩｇＡ２Ｂの重鎖の１２８において典型的に見ることができる。ネズミＩｇＧでは、軽鎖の位置２１４及び重鎖の２３５において鎖間システインを見ることができる。欠失、挿入及び／又は置換などの何らかの修飾を抗体Ｆａｂ断片に施した場合、これらのシステインの正確な位置は、天然に存在する抗体のそれとは異なる可能性があることは理解されよう。これらの抗体Ｆａｂ断片は、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって調製することができる。例えば抗体Ｆａｂ断片は、任意の適切な酵素による切断及び／又は消化技法を使用して、例えばペプシン又はパパイン及びｃ−末端プロテアーゼを用いた処理によって、任意の完全抗体、特に完全モノクローナル抗体から得ることができる。これらの抗体Ｆａｂ断片は、抗体可変領域及び定常領域をコードするＤＮＡの操作及び再発現に関する、組換えＤＮＡ技法を使用することによって調製することが好ましい。標準的な分子生物学の技法を使用して、望むように他のアミノ酸又はドメインを修飾、付加又は欠失することができる。可変又は定常領域に対する任意の改変が、本明細書で使用する用語「可変」及び「定常」領域によってさらに含まれる。ＰＣＲを使用して、ＣＨ１ドメインの翻訳が鎖間システインで終わるように、ＣＨ１の鎖間システインをコードするコドンの直後に停止コドンを導入することが好ましい。適切なＰＣＲプライマーを設計するための方法は当技術分野でよく知られており、抗体のＣＨ１ドメインの配列は容易に入手可能である（Ｋａｂａｔら、上記）。或いは停止コドンは、Ｗｈｉｔｅ（編）、「ＰＣＲプロトコル（ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）」：「現在の方法及び適用例（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」（１９９３）中に記載された技法などの、部位特定突然変異導入法の技法を使用して導入することができる。一例では、これらの断片中の定常領域はＩｇＧ１に由来し、ＣＬの鎖間システインは軽鎖の位置２１４に存在し、ＣＨ１の鎖間システインは重鎖の位置２３３に存在する。
【００４５】
本発明の第１、第２又は第４の態様の好ましい実施形態では、本発明によって提供される抗体は中和抗体分子であり、その重鎖は配列番号１６で与える配列を含むか或いはそれからなり、且つ軽鎖は配列番号１８で与える配列を含むか或いはそれからなる。最も好ましくは、本発明によって提供される抗体は、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９中に記載されたのと同様の抗体形式を有する中和抗体分子であり、その重鎖は配列番号１６で与える配列を含むか或いはそれからなり、且つその軽鎖は配列番号１８で与える配列を含むか或いはそれからなる。
【００４６】
本発明のこの態様の一実施形態では、抗体は、重鎖が配列番号１６で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、且つ軽鎖が配列番号１８で与える配列と少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む、重鎖及び軽鎖を含む。抗体は、重鎖が配列番号１６で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む重鎖、及び軽鎖が配列番号１８で与える配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む軽鎖を含むことが好ましい。
【００４７】
本発明の第５の態様では、重鎖配列ｇＨ１１（配列番号１１）及び軽鎖配列ｇＬ３（配列番号１３）を含むＩＬ−１７Ｆ４．１００又は抗体の結合がＩＬ−１７タンパク質の活性を完全に中和する、ヒトＩＬ−１７の特異的領域又はエピトープを提供する。
【００４８】
ヒトＩＬ−１７ポリペプチドのこの特異的領域又はエピトープは、本発明によって提供される抗体のいずれか１つと組み合わせた、当技術分野で知られている任意の適切なエピトープマッピング法によって同定することができる。このような方法の例には、抗体によって認識されるエピトープの配列を含む抗体と特異的に結合し得る最小断片を有する本発明の抗体との結合に関して、ＩＬ−１７由来のさまざまな長さのペプチドをスクリーニングすることがある。ＩＬ−１７ペプチドは合成的に、或いはＩＬ−１７ポリペプチドのタンパク質分解による消化によって生成することができる。抗体と結合するペプチドは、例えば質量分析法によって同定することができる。他の例では、ＮＭＲ分光法を使用して本発明の抗体によって結合したエピトープを同定することができる。一度同定した後、本発明の抗体と結合するエピトープ断片を、同じエピトープに結合する他の中和抗体を得るための免疫原として、必要な場合使用することができる。
【００４９】
ＩＬ−１７と本発明の第１〜第４の態様の抗体の結合を交差阻害する抗体は、ＩＬ−１７活性を中和する際に同様に有用である可能性がある。したがって、本発明の第６の態様では、本発明の第１〜第４の態様において提供する抗体のいずれか１つとヒトＩＬ−１７の結合を交差阻害する、且つ／或いはこれらの抗体のいずれか１つによるヒトＩＬ−１７との結合から交差阻害される、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体を提供する。一実施形態では、本発明の第６の態様の中和抗体は、本発明の第１〜第４の態様によって提供する抗体と同じエピトープと結合する。他の実施形態では、本発明の第６の態様の中和抗体は、本発明の第１〜第４の態様の抗体によって結合したエピトープと接する且つ／或いは重複するエピトープと結合する。さらに他の実施形態では、本発明の第６の態様の中和抗体は、本発明の第１〜第４の態様の抗体と同じエピトープ、又は前記エピトープと接する且つ／或いは重複するエピトープとは結合しない。
【００５０】
本発明の第６の態様による交差阻害抗体は、当技術分野の任意の適切な方法を使用して、例えば競合ＥＬＩＳＡ又はＢＩＡｃｏｒｅを使用することによって同定することができ、この場合、本発明の第６の態様の交差阻害抗体とヒトＩＬ−１７の結合は、本発明の第１〜第４の態様において提供する抗体の結合を妨げ、或いは逆も然りである。
【００５１】
一実施形態では、その重鎖が配列ｇＨ１１（配列番号１１）を含みその軽鎖が配列ｇＬ３（配列番号１３）を含むＩＬ１７Ｆ４．１００又は抗体とヒトＩＬ−１７の結合を交差阻害する、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体を提供する。一実施形態では、本発明の第６の態様によって提供する交差阻害抗体は、ＩＬ１７Ｆ４．１００又はその重鎖が配列ｇＨ１１（配列番号１１）を含みその軽鎖が配列ｇＬ３（配列番号１３）を含む抗体の結合を、８０％を超えて、好ましくは８５％を超えて、より好ましくは９０％を超えて、さらにより好ましくは９５％を超えて阻害する。
【００５２】
代替的或いは追加的に、本発明のこの態様による抗体は、本発明の第１〜第４の態様の抗体のいずれか１つによって、ヒトＩＬ−１７との結合から交差阻害することができる。したがって、抗体ＩＬ１７Ｆ４．１００又はその重鎖が配列ｇＨ１１（配列番号１１）を含みその軽鎖が配列ｇＬ３（配列番号１３）を含む抗体によってヒトＩＬ−１７との結合から交差阻害される、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体分子も提供する。一実施形態では、本発明の第６の態様によって提供する交差阻害抗体は、ＩＬ１７Ｆ４．１００又はその重鎖が配列ｇＨ１１（配列番号１１）を含みその軽鎖が配列ｇＬ３（配列番号１３）を含む抗体によってヒトＩＬ−１７との結合から、８０％を超えて、好ましくは８５％を超えて、より好ましくは９０％を超えて、さらにより好ましくは９５％を超えて阻害される。
【００５３】
本発明の任意の態様の抗体分子は、好ましくはピコモルの高い結合親和性を有することが好ましい。本発明の抗体分子は、約１ｐＭと５００ｐＭの間の結合親和性を有することが好ましい。一実施形態では、本発明の抗体分子は約１００ｐＭと約４００ｐＭの間の結合親和性を有する。本発明によって提供される抗体の親和性は、当技術分野で知られている任意の適切な方法を使用して変更することができることは理解されよう。したがって本発明は、ＩＬ−１７に対する改善された親和性を有する、本発明の抗体分子の変形にも関する。このような変形は、ＣＤＲの突然変異（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５４、３９２〜４０３、１９９５）、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７９〜７８３、１９９２）、大腸菌の突然変異菌株の使用（Ｌｏｗら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５０、３５９〜３６８、１９９６）、ＤＮＡシャッフリング（Ｐａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８、７２４〜７３３、１９９７）、ファージディスプレー（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５６、７７〜８８、１９９６）及びセクシャルＰＣＲ（Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、２８８〜２９１、１９９８）を含めた幾つかの親和性成熟プロトコルによって得ることができる。Ｖａｕｇｈａｎら（上記）は、これらの親和性成熟の方法を論じている。
【００５４】
望むならば、本発明中で使用するための抗体は、１つ又は複数のエフェクター分子と結合させることができる。エフェクター分子は、本発明の抗体と結合することができる一部分を形成するように結合した、１つのエフェクター分子又は２つ以上のこのような分子を含むことができることは理解されよう。エフェクター分子と結合した抗体断片を得ることが望ましい場合、抗体断片を直接或いはカップリング剤を介してエフェクター分子と結合させる標準的な化学又は組換えＤＮＡ手順によって、これを調製することができる。このようなエフェクター分子と抗体を結合させるための技法は、当技術分野でよく知られている（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２ｎｄ  Ｅｄ．、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７、ｐｐ．６２３〜５３；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２：１１９〜５８及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７〜１２３を参照）。個々の化学手順には、例えばＷＯ９３／０６２３１、ＷＯ９２／２２５８３、ＷＯ８９／００１９５、ＷＯ８９／０１４７６及びＷＯ０３０３１５８１中に記載された手順がある。或いは、エフェクター分子がタンパク質又はポリペプチドである場合、例えばＷＯ８６／０１５３３及びＥＰ０３９２７４５中に記載されたのと同様の組換えＤＮＡ手順を使用して結合を得ることができる。
【００５５】
本明細書で使用する用語エフェクター分子は、例えば抗腫瘍薬、薬剤、毒素、生物学的活性があるタンパク質、例えば酵素、他の抗体又は抗体断片、合成又は天然に存在するポリマー、核酸及びその断片、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ及びその断片、放射性核種、特に放射性ヨウ素、放射性同位体、キレート金属、ナノ粒子、及び蛍光化合物などのレポーター基、或いはＮＭＲ又はＥＳＲ分光法によって検出することができる化合物を含む。
【００５６】
エフェクター分子の例は、細胞に対して有害である（例えば殺傷する）任意の物質を含めた細胞毒又は細胞毒性物質を含み得る。例にはコンブレスタチン、ドラスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、メイタンシノイド、スポンジスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン、ヘミアステリン、タクソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピュロマイシン、並びにこれらの類似体又は相同体がある。
【００５７】
エフェクター分子はさらに、代謝拮抗剤（例えばメトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン系（例えばダウノルビシン（以前はダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えばダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ベロマイシン、ミトラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリケアマイシン又はデュオカルマイシン）、及び細胞分裂抑制薬（例えばビンクリスチン及びビンブラスチン）を含むが、これらだけには限られない。
【００５８】
他のエフェクター分子は、例えば１１１Ｉｎ及び９０Ｙ、Ｌｕ１７７、ビスマス２１３、カリホルニウム２５２、イリジウム１９２及びタングステン１８８／レニウム１８８などのキレート化放射性核種；或いはアルキルホスホコリン、トポイソメラーゼ１阻害剤、タクソイド及びスラミンなどだけには限られないが、これらの薬剤を含み得る。
【００５９】
他のエフェクター分子にはタンパク質、ペプチド及び酵素がある。当該の酵素にはタンパク質分解酵素、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼを含むが、これらだけには限られない。当該のタンパク質、ポリペプチド及びペプチドには、免疫グロブリン、アブリン、リシンＡ、緑膿菌エクソトキシン、又はジフテリア毒素などの毒素、インシュリン、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロンなどのタンパク質、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノゲン活性化因子、血栓溶解剤又は抗血管新生剤、例えばアンギオスタチン又はエンドスタチン、又は生物応答改変物質、例えばリンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）など、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、或いは他の成長因子及び免疫グロブリンがあるが、これらだけには限られない。
【００６０】
他のエフェクター分子は、例えば診断において有用な検出可能な物質を含むことができる。検出可能な物質の例にはさまざまな酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、（陽電子射出撮影法において使用するための）陽電子射出金属、及び非放射性常磁性金属イオンがある。診断物質として使用するための抗体と結合させることができる金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号を概略的に参照のこと。適切な酵素にはホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼがあり；適切な補欠分子団にはストレプトアビジン、アビジン及びビオチンがあり；適切な蛍光物質にはウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル及びフィコエリスリンがあり；適切な発光物質にはルミノールがあり；適切な生物発光物質には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンがあり；且つ適切な放射性核種には１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ及び９９Ｔｃがある。
【００６１】
他の例では、エフェクター分子はｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗体の半減期を増大させ、且つ／或いは抗体の免疫原性を低下させ、且つ／或いは上皮障壁から免疫系への抗体の送達を増大させる可能性がある。このタイプの適切なエフェクター分子の例には、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質又はアルブミン結合化合物、ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００２０８４中に記載されたものがある。
【００６２】
エフェクター分子がポリマーである場合、それは一般に合成又は天然に存在するポリマー、例えば場合によっては置換された直鎖又は分岐鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン又はポリオキシアルキレンポリマー、或いは分岐又は非分岐多糖、例えばホモ又はヘテロ多糖であってよい。
【００６３】
前述の合成ポリマー上に存在する可能性がある個々の任意選択の置換基には、１つ又は複数のヒドロキシ、メチル又はメトキシ基がある。
【００６４】
合成ポリマーの個々の例には、場合によっては置換された直鎖又は分岐鎖ポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）又はその誘導体、特に場合によっては置換されたポリ（エチレングリコール）、メトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体などがある。
【００６５】
個々の天然に存在するポリマーには、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はこれらの誘導体がある。
【００６６】
本明細書で使用する「誘導体」は、例えばマレイミドなどのチオール選択性反応基などの、反応性誘導体などを含むものとする。反応基は直接、或いはリンカーセグメントを介してポリマーと結合させることができる。このような基の残基は幾つかの場合、抗体断片とポリマーの間の結合基として生成物の一部分を形成することは理解されよう。
【００６７】
ポリマーの大きさは望むならば変えることができるが、一般に５００Ｄａ〜５００００Ｄａ、好ましくは５０００〜４００００Ｄａ、及びより好ましくは２００００〜４００００Ｄａの平均分子量範囲であると思われる。ポリマーの大きさは特に、生成物の目的とする用途、例えば腫瘍などの幾つかの組織に局在する能力、又は循環半減期を延長させる能力に基づいて選択することができる（総説に関しては、Ｃｈａｐｍａｎ、２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、５４、５３１〜５４５を参照）。したがって、例えば生成物を循環状態で放置し組織に浸透させることを目的とする、例えば腫瘍を治療するために使用する場合、例えば約５０００Ｄａの分子量を有する小分子量ポリマーを使用することが有利である可能性がある。生成物が循環状態で留まる適用例に関しては、例えば２００００Ｄａ〜４００００Ｄａの範囲の分子量を有する高分子量ポリマーを使用することが有利である可能性がある。
【００６８】
特に好ましいポリマーには、ポリアルキレンポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）、又は特にメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体、及び特に約１５０００Ｄａ〜約４００００Ｄａの範囲の分子量を有するポリマーなどがある。
【００６９】
一例では、本発明中で使用するための抗体はポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）成分と結合させる。１つの具体例では、抗体は抗体断片であり、抗体断片中に位置する任意の利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば任意の遊離アミノ、イミノ、チオール、ヒドロキシル又はカルボキシル基を介してＰＥＧ分子を結合させることができる。このようなアミノ酸は抗体断片中に本来存在するものであってよく、或いは組換えＤＮＡ法を使用して断片に工学処理することができる（例えば、米国特許第５，２１９，９９６号、米国特許第５，６６７，４２５号、ＷＯ９８／２５９７１を参照）。一例では、本発明の抗体分子は、その修飾がエフェクター分子の結合を可能にするためのその重鎖の１つ又は複数のアミノ酸のＣ末端への付加である修飾Ｆａｂ断片である。追加のアミノ酸は、エフェクター分子が結合することができる１つ又は複数のシステイン残基を含む修飾ヒンジ領域を形成することが好ましい。２個以上のＰＥＧ分子を結合させるために、多数の部位を使用することができる。
【００７０】
ＰＥＧ分子は、抗体断片中に位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基を介して共有結合することが好ましい。修飾抗体断片と結合した各ポリマー分子は、断片中に位置するシステイン残基のイオウ原子と共有結合させることができる。共有結合は一般にジスルフィド結合又は、特にイオウ−炭素結合であると思われる。チオール基を結合地点として使用する場合、適切に活性化したエフェクター分子、例えばマレイミド及びシステイン誘導体などのチオール選択的誘導体を使用することができる。前に記載したのと同様のポリマー修飾抗体断片の調製において、出発物質として活性化ポリマーを使用することができる。活性化ポリマーは、α−ハロカルボン酸又はエステル、例えばヨードアセトアミド、イミド、例えばマレイミド、ビニルスルホン又はジスルフィドなどのチオール反応基を含む任意のポリマーであってよい。このような出発物質は商業上得ることができ（例えばＮｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、アラバマ州、米国から）、或いは従来の化学手順を使用して市販の出発物質から調製することができる。個々のＰＥＧ分子には２０Ｋメトキシ−ＰＥＧ−アミン（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ；Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ；及びＳｕｎＢｉｏから入手可能）、及びＭ−ＰＥＧ−ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒから入手可能）がある。
【００７１】
一実施形態では、例えばＥＰ０９４８５４４［Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９２、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ（編）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ及びＳ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、ワシントンＤＣ、及びＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９９８、Ｍ．Ａｓｌａｍ及びＡ．Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ニューヨーク；Ｃｈａｐｍａｎ、Ａ．２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００２、５４：５３１〜５４５も参照］中に開示された方法に従い、抗体はＰＥＧ化した、即ちそこに共有結合したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール）を有する修飾Ｆａｂ断片である。一例では、ＰＥＧはヒンジ領域中のシステインと結合する。一例では、ＰＥＧ修飾Ｆａｂ断片は、修飾ヒンジ領域中の１つのチオール基と共有結合したマレイミド基を有する。リシン残基はマレイミド基、及びリシン残基上のアミン基のそれぞれと共有結合することができ、約２０，０００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーと結合することができる。Ｆａｂ断片と結合するＰＥＧの合計分子量は、したがって約４０，０００Ｄａである可能性がある。
【００７２】
一実施形態では本発明は、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体分子であって、配列番号１１で与える配列を含む重鎖及び配列番号１３で与える配列を含む軽鎖を有し、且つエフェクター分子と結合した少なくとも１個のシステイン残基を含む修飾ヒンジ領域をその重鎖のＣ末端に有する、修飾Ｆａｂ断片である中和抗体分子を提供する。好ましくは、エフェクター分子はＰＥＧであり、（ＷＯ９８／２５９７１及びＷＯ２００４０７２１１６）中に記載された方法を使用して結合させ、この場合、リシル−マレイミド基はシステイン残基と重鎖のＣ末端で結合し、且つリシル残基のそれぞれのアミノ基は約２０，０００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）残基と共有結合している。抗体と結合するＰＥＧの合計分子量は、したがって約４０，０００Ｄａである。
【００７３】
他の例では、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０及びＷＯ２００５／００３１７１中に記載された方法を使用して、エフェクター分子を抗体断片と結合させることができる。
【００７４】
他の好ましい実施形態では、本発明中で使用するための抗体断片は、国際出願番号ＷＯ２００５／００３１６９中に記載されたのと同様の、ＰＥＧ化した（即ち、そこに共有結合したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール）を有する）Ｆａｂ断片である。このＰＥＧ化Ｆａｂ断片は、重鎖がＣＨ１の鎖間システインで終わり、且つ断片と結合したＰＥＧ、好ましくはＰＥＧ−マレイミドがＣＬの鎖間システイン及びＣＨ１の鎖間システインと共有結合しているＦａｂ断片である。ＣＬの鎖間システインは軽鎖の位置２１４に存在し、ＣＨ１の鎖間システインは重鎖の位置２３３に存在することが好ましい。前に論じたように、断片と結合するＰＥＧの合計量は望むように変えることができる。一例では、Ｆａｂと結合するそれぞれのポリマーは、約２０，０００Ｄａの分子量を有することが好ましい。例えば、分子量は１５，０００〜２５，０００Ｄａ、或いは好ましくは１８，０００〜２２，０００Ｄａ、及びさらにより好ましくは２０，０００Ｄａであってよい。抗体と結合するＰＥＧの合計分子量は、したがって約３０，０００〜５０，０００Ｄａ、好ましくは４０，０００Ｄａである。
【００７５】
最初にＣＬ及びＣＨ１の鎖間システイン間の鎖間ジスルフィド結合を還元し、次にＰＥＧと遊離チオールを結合させることによって、ＰＥＧをこれらの断片と結合させる。一度ＰＥＧが鎖間システインと結合すると、重鎖と軽鎖の間に鎖間ジスルフィド結合は存在しない。鎖間ジスルフィド結合を還元するのに適した還元剤、例えばＳｉｎｇｈら、１９９５、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２５１、１６７〜７３中に記載された還元剤は当技術分野で広く知られている。個々の例にはチオール系還元剤、例えば還元型グルタチオン（ＧＳＨ）、β−メルカプトエタノール（β−ＭＥ）、β−メルカプトエチルアミン（β−ＭＡ）及びジチオスレイトール（ＤＴＴ）などがある。他の方法にはＬｅａｃｈら、１９６５、Ｄｉｖ．Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｃｈｅｍ、４、２３〜２７中に記載された方法などの電解法を使用する方法、及びＥｌｌｉｓｏｎら、２０００、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、２８（２）、３２４〜３２６中に記載された方法などの光還元法を使用する方法がある。しかしながら好ましくは、還元剤は非チオール系還元剤、好ましくはトリアルキルホスフィン還元剤の１つであり（Ｒｕｅｇｇ  ＵＴ及びＲｕｄｉｎｇｅｒ、Ｊ．、１９７７、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、４７、１１１〜１２６；Ｂｕｒｎｓ  Ｊら、１９９１、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ、５６、２６４８〜２６５０；Ｇｅｔｚら、１９９９、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７３、７３〜８０；Ｈａｎ及びＨａｎ、１９９４、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２２０、５〜１０；Ｓｅｉｔｚら、１９９９、Ｅｕｒｏ．Ｊ．、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２６、１２６５〜１２７３）、その個々の例にはトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、トリスブチルホスフィン（ＴＢＰ）、トリス−（２−シアノエチル）ホスフィン、トリス−（３−ヒドロキシプロピル）ホスフィン（ＴＢＰ）及びトリス−（２−ヒドロキシエチル）ホスフィンがある。還元剤はＴＣＥＰ及びＴＨＰであることが最も好ましい。例えば還元剤の濃度を変え生成する遊離チオールの数を測定することによって、還元剤の濃度を経験的に決定することができることは、当業者には明らかであると思われる。典型的には、還元剤は抗体断片より過剰に、例えば２〜１０００倍モル過剰に使用する。還元剤は２、３、４、５、１０、１００又は１０００倍過剰であることが好ましい。一実施形態では、還元剤は２ｍＭと５ｍＭの間で使用する。
【００７６】
還元及びＰＥＧ化反応は一般に溶媒、例えば酢酸又はリン酸などの水性バッファー溶液中において、ほぼ中性ｐＨ、例えば約ｐＨ４．５〜約ｐＨ８．５、典型的にはｐＨ４．５〜８、適切にはｐＨ６〜７で実施することができる。反応は一般に任意の適切な温度、例えば約５℃と約７０℃の間、例えば室温で実施することができる。溶媒はＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＣＤＴＡ又はＤＴＰＡなどのキレート剤を場合によっては含むことができる。溶媒は１ｍＭと５ｍＭの間、好ましくは２ｍＭでＥＤＴＡを含むことが好ましい。代替的或いは追加的に、溶媒はクエン酸、シュウ酸、葉酸、ビシン、トリシン、トリス又はＡＤＡなどのキレート剤バッファーであってよい。ＰＥＧは一般に、抗体断片の濃度と比較して過剰な濃度で使用する。典型的には、ＰＥＧは２〜１００倍モル過剰、好ましくは５、１０又は５０倍過剰である。
【００７７】
必要な場合、望ましい数のＰＥＧ分子を含む望ましい生成物を、任意の出発物質から、或いは従来手段による、例えばイオン交換、サイズ排除、プロテインＡ、Ｇ又はＬ親和性クロマトグラフィー或いは疎水性相互作用クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー技法による生成プロセス中に生じた他の生成物から分離することができる。
【００７８】
したがって、好ましい一実施形態では本発明は、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体分子であって、１つ又は複数、好ましくは２つ以上のエフェクター分子と結合した配列番号１６で与える配列を含む重鎖及び配列番号１８で与える配列を含む軽鎖を有する、国際出願番号ＷＯ２００５／００３１６９中に記載されたのと同様のＦａｂ断片である中和抗体分子を提供する。
【００７９】
本発明の抗体は、国際出願番号ＷＯ２００５／００３１６９中に記載されたのと同様の、ＰＥＧ化した（即ち、そこに共有結合したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール）を有する）Ｆａｂ断片であることが最も好ましい。したがって本発明は、ＰＥＧ、好ましくはＰＥＧ−マレイミドがＣＬの鎖間システイン及びＣＨ１の鎖間システインと共有結合している、配列番号１６で与える配列を含む重鎖及び配列番号１８で与える配列を含む軽鎖を有する、ヒトＩＬ−１７に対する特異性を有する中和抗体分子であるＰＥＧ化Ｆａｂ断片、ＣＤＰ４３５を提供する。ＣＬの鎖間システインは軽鎖の位置２１４に存在し、ＣＨ１の鎖間システインは重鎖の位置２３３に存在することが好ましい（Ｋａｂａｔら（上記））。ＣＤＰ４３５の抗体断片中では、それぞれ重鎖と軽鎖の位置２２２及び２１８における配列の番号処理によって、これらのシステインを発見することができる。好ましくは、Ｆａｂと結合したそれぞれのＰＥＧは約２０，０００Ｄａの分子量を有し、且つＦａｂと結合したＰＥＧの合計分子量は、したがって約４０，０００Ｄａである。ＰＥＧ化Ｆａｂ断片、ＣＤＰ４３５の構造の略図を図１５に示す。ｎは典型的には約４００と約５２０の間である。一例ではｎは４１５と５０５の間である。一例ではｎは約４６０である。
【００８０】
本発明は、本発明の抗体分子の重鎖及び／又は軽鎖をコードする単離ＤＮＡ配列も提供する。ＤＮＡ配列は、本発明の抗体分子の重鎖又は軽鎖をコードすることが好ましい。本発明のＤＮＡ配列は合成ＤＮＡ、例えば化学処理によって生成したＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はこれらの任意の組合せを含むことができる。
【００８１】
本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列は、当業者によく知られている方法によって得ることができる。例えば、抗体重鎖及び軽鎖の一部又は全体をコードするＤＮＡ配列は、所定のＤＮＡ配列から、或いは対応するアミノ酸配列に基づいて望むように合成することができる。
【００８２】
受容体骨格配列をコードするＤＮＡを当業者は広範囲で入手可能であり、それらの知られているアミノ酸配列に基づいて容易に合成することができる。
【００８３】
分子生物学の標準的技法を使用して、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列を調製することができる。オリゴヌクレオチド合成技法を使用して完全又は部分的に、望ましいＤＮＡ配列を合成することができる。部位特定突然変異導入法及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技法を適切に使用することができる。
【００８４】
適切な配列の例は配列番号１、配列番号３、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１７で与える。
【００８５】
本発明は、１つ又は複数の本発明のＤＮＡ配列を含むクローニング又は発現ベクターにも関する。したがって、本発明の抗体をコードする１つ又は複数のＤＮＡ配列を含むクローニング又は発現ベクターを提供する。クローニング又は発現ベクターは、本発明の抗体分子の軽鎖及び重鎖をそれぞれコードする、２つのＤＮＡ配列を含むことが好ましい。本発明によるベクターは、配列番号１９で与える配列を含むことが好ましい。塩基１〜６３及び７２２〜７８４は大腸菌ＯｍｐＡリーダー配列をコードし、これが切断されて本発明の中和抗体分子が生じることが最も好ましい。軽鎖配列と重鎖配列の間の塩基７１８〜７２１は、大腸菌中での抗体発現に使用するための遺伝子間配列となる（ＷＯ０３／０４８２０８）。
【００８６】
ベクターを構築することができる一般的方法、トランスフェクション法及び培養法は当業者によく知られている。この点に関しては、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９９、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニューヨーク、及びＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇによって作成されたＭａｎｉａｔｉｓマニュアルを参照のこと。
【００８７】
本発明の抗体をコードする１つ又は複数のＤＮＡ配列を含む、１つ又は複数のクローニング又は発現ベクターを含む宿主細胞も提供する。任意の適切な宿主細胞／ベクター系を、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列を発現させるために使用することができる。細菌、例えば大腸菌、及び他の微生物系を使用することができ、或いは真核生物、例えば哺乳動物、宿主細胞発現系を使用することもできる。適切な哺乳動物宿主細胞にはＣＨＯ、ミエローマ又はハイブリドーマ細胞がある。
【００８８】
本発明は、本発明の抗体分子を生成するための方法であって、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからのタンパク質の発現をもたらすのに適した条件下で本発明のベクターを含む宿主細胞を培養すること、抗体分子を単離することを含む方法も提供する。
【００８９】
抗体分子は重鎖又は軽鎖ポリペプチドのみを含むことができ、その場合、宿主細胞をトランスフェクトするために重鎖又は軽鎖ポリペプチドコード配列のみを使用することが必要である。重鎖と軽鎖の両方を含む産物を生成するために、細胞系は２つのベクター、軽鎖ポリペプチドをコードする第一ベクター、及び重鎖ポリペプチドをコードする第二ベクターを用いてトランスフェクトすることができる。或いは１つのベクター、軽鎖及び重鎖ポリペプチドをコードする配列を含むベクターを使用することができる。
【００９０】
本発明の抗体は病的状態の治療及び／又は予防において有用であるので、本発明は、１つ又は複数の薬剤として許容される賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて、本発明の抗体分子を含む医薬又は診断用組成物も提供する。したがって、医薬品を製造するための本発明の抗体の使用を提供する。組成物は大抵、薬剤として許容される担体を通常含む滅菌済み医薬組成物の一部として供給される。本発明の医薬組成物は、薬剤として許容されるアジュバントをさらに含むことができる。
【００９１】
本発明は、医薬又は診断用組成物を調製するための方法であって、１つ又は複数の薬剤として許容される賦形剤、希釈剤又は担体と共に本発明の抗体分子を添加及び混合することを含む方法も提供する。
【００９２】
抗体分子は医薬又は診断用組成物中の唯一の活性成分であってよく、或いは他の抗体成分、例えば抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−１β、抗Ｔ細胞、抗ＩＦＮγ又は抗ＬＰＳ抗体など、或いはキサンチンなどの非抗体成分を含めた他の活性成分を伴ってよい。
【００９３】
医薬組成物は、治療有効量の本発明の抗体を含むことが好ましい。本明細書で使用する用語「治療有効量」は、標的の疾患又は状態を治療、改善又は予防する、或いは検出可能な治療又は予防効果を示すのに必要とされる治療剤の量を指す。任意の抗体に関して、細胞培養アッセイ又は動物モデル、通常はげっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタ又は霊長類において治療有効量を最初に推定することができる。動物モデルを使用して、適切な濃度範囲及び投与経路を決定することもできる。次いでこのような情報を使用して、ヒトにおける投与に有用な用量及び経路を決定することができる。
【００９４】
ヒト対象に関する正確な治療有効量は、疾患状態の重度、対象の一般的な健康状態、対象の年齢、体重及び性別、食生活、投与の時間及び頻度、薬剤の組合せ、療法に対する反応感受性及び耐性／応答性に依存すると思われる。この量は通常の実験によって測定することができ、臨床医の判断内にある。一般に治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇであると思われる。医薬組成物は、用量当たり所定量の本発明の活性物質を含む単位剤形で好都合に存在してよい。
【００９５】
組成物は患者に個別に投与することができ、或いは他の物質、薬剤又はホルモンと組み合わせて（例えば同時に、逐次又は別々に）投与することができる。
【００９６】
本発明の抗体分子を投与する用量は、治療する状態の性質、存在する炎症の程度、及び抗体分子を予防的に使用するか或いは既存の状態を治療するために使用するかに依存する。
【００９７】
投与の頻度は、抗体分子の半減期及びその効果の持続期間に依存すると思われる。抗体分子が短い半減期（例えば２〜１０時間）を有する場合、１日当たり１回又は複数回の投与を与えることが必要である可能性がある。或いは、抗体分子が長い半減期（例えば２〜１５日）を有する場合、１日当たり１回、１週間当たり１回、或いはさらに１又は２ヶ月毎に１回の投与のみを与えることが必要である可能性がある。
【００９８】
薬剤として許容される担体は、それ自体が組成物を与える個体に有害である抗体の生成を誘導してはならず、毒性であってはならない。適切な担体は、大きなゆっくりと代謝されるマクロ分子、例えばタンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー及び不活性ウイルス粒子などであってよい。
【００９９】
薬剤として許容される塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩及び硫酸塩などの鉱酸塩、又は酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩及び安息香酸塩などの有機酸の塩を使用することができる。
【０１００】
治療用組成物中の薬剤として許容される担体は、水、生理食塩水、グリセロール及びエタノールなどの液体をさらに含むことができる。さらに、湿潤剤又は乳化剤などの補助物質、或いはｐＨ緩衝物質がこのような組成物中に存在してよい。このような担体によって、患者によって摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー及び懸濁液として医薬組成物を配合することが可能である。
【０１０１】
投与するのに好ましい形には、例えば注射又は注入による、例えば大量注射又は連続注入による、非経口投与に適した形がある。生成物が注射又は注入用である場合、それは油性又は水性媒体中で懸濁液、溶液又は乳濁液の形をとってよく、懸濁剤、防腐剤、安定剤及び／又は分散剤などの調剤を含むことができる。或いは、適切な滅菌液との使用前に還元するために、抗体分子は乾燥形であってよい。
【０１０２】
一度配合した後、本発明の組成物は対象に直接投与することができる。治療する対象は動物であってよい。しかしながら、組成物はヒト対象への投与に適していることが好ましい。
【０１０３】
本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、クモ膜下、心室内、経皮、経皮的（例えば、ＷＯ９８／２０７３４を参照のこと）、皮下、腹膜内、鼻腔内、経腸、局所、舌下、膣内又は直腸経路だけには限られないが、これらを含めた任意の数の経路によって投与することができる。ハイポスプレーを使用して、本発明の医薬組成物を投与することもできる。典型的には、注射可能薬物として、液体溶液又は懸濁液のいずれかとして、治療用組成物を調製することができる。注射前の溶液、又は懸濁液、液状媒体中に適した固体形を調製することもできる。
【０１０４】
組成物の直接送達は、一般に皮下、腹膜内、静脈内又は筋肉内注射によって実施され、或いは組織の間質空間に組成物を送達する。組成物を病巣に投与することもできる。投与治療は、１回の投与スケジュール又は多数回の投与スケジュールであってよい。
【０１０５】
組成物中の活性成分が抗体分子であろうことは理解されよう。このように、抗体分子は胃腸管内で分解を受けやすいと思われる。したがって、胃腸管を使用する経路によって組成物を投与する場合、抗体を分解から保護するが一度胃腸管から吸収されると抗体を放出する物質を、組成物は含む必要があると思われる。
【０１０６】
薬剤として許容される担体の完全な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．１９９１）において入手可能である。
【０１０７】
遺伝子療法を使用することによって、本発明の抗体を投与することも想定される。これを実施するために、抗体分子の重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列を、適切なＤＮＡ要素の制御下において、抗体鎖がＤＮＡ配列から発現されｉｎ  ｓｉｔｕで構築されるように患者に導入する。
【０１０８】
本発明は、炎症疾患の制御において使用するための抗体分子も提供する。抗体分子を使用して炎症プロセスを低下させることができるか、或いは炎症プロセスを予防することができることが好ましい。
【０１０９】
本発明は、ＩＬ−１７によって仲介されるか或いは高レベルのＩＬ−１７と関係がある病的障害の、治療又は予防において使用するための本発明の抗体分子も提供する。病的状態は感染（ウイルス、細菌、真菌及び寄生虫）、感染と関係があるエンドトキシンショック、関節炎、慢性関節リウマチ、喘息、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、ペーロニー病、小児脂肪便症、胆嚢疾患、毛巣疾患、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、多発性硬化症及びギラン−バレー症候群などの中枢及び末梢神経系の免疫仲介炎症障害、他の自己免疫障害、膵炎、（外科手術による）外傷、移植片対宿主疾患、移植片拒絶、癌（メラノーマ、肝芽腫、肉腫、有棘細胞癌などの固形腫瘍、転移性細胞癌、卵巣癌及び血液悪性腫瘍、及び特に急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、胃癌及び結腸癌の両方）、心筋梗塞などの虚血疾患を含めた心臓疾患、並びにアテローム動脈硬化症、血管内凝固、骨再吸収、骨粗しょう症、歯周炎及び低塩酸症からなる群から選択されることが好ましい。
【０１１０】
本発明は、痛みの治療又は予防において使用するための本発明による抗体分子も提供する。
【０１１１】
本発明はさらに、ＩＬ−１７によって仲介されるか或いは高レベルのＩＬ−１７と関係がある病的障害を治療又は予防するための医薬品の製造における、本発明による抗体分子の使用を提供する。病的障害は、慢性関節リウマチ又は多発性硬化症であることが好ましい。
【０１１２】
本発明はさらに、痛みを治療又は予防するための医薬品の製造における、本発明による抗体分子の使用を提供する。
【０１１３】
本発明の抗体分子は、ヒト又は動物身体中でのＩＬ−１７の影響を減らすことが望ましい場合、任意の療法において使用することができる。ＩＬ−１７は身体中を循環する可能性があり、或いは望ましくない高レベルで存在する可能性があり、身体中の特定部位、例えば炎症部位に局在する可能性がある。
【０１１４】
本発明の抗体分子は、炎症疾患を制御するために使用することが好ましい。
【０１１５】
本発明は、ＩＬ−１７によって仲介される障害に罹患しているか或いはその危険があるヒト又は動物対象を治療する方法であって、有効量の本発明の抗体分子を対象に投与することを含む方法も提供する。
【０１１６】
本発明の抗体分子は診断、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ診断、及びＩＬ−１７に関する病状の画像化において使用することもできる。
【０１１７】
以下の実施例において単なる例示によって本発明をさらに記載し、これらは以下の添付の図面を引用する：
【０１１８】
ＤＮＡ操作及び一般的方法
大腸菌菌株ＩＮＶαＦ’（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、形質転換及び通常の培養増殖用に使用した。ＤＮＡ制限及び修飾酵素は、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．及びＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓから得た。プラスミド調製は、Ｍａｘｉプラスミド精製キット（ＱＩＡＧＥＮ、カタログ番号１２１６５）を使用して実施した。ＤＮＡ塩基配列決定反応は、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  Ｂｉｇ  Ｄｙｅターミネーター塩基配列決定キット（カタログ番号４３０４１４９）を使用して実施し、ＡＢＩ３１００自動塩基配列決定装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で行った。データはプログラムＡｕｔｏＡｓｓｅｍｂｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して分析した。オリゴヌクレオチドはＯＳＷＥＬから入手した。Ｆａｂの濃度はＦａｂ構築ＥＬＩＳＡを使用して測定した。
【０１１９】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和アッセイ：初代繊維芽細胞
ヒト真皮繊維芽細胞を、９６ウエルプレート中で８０％の融合状態まで増殖させた。抗体を１μｇ／ｍｌから半対数希釈で滴定し、ヒトＩＬ−１７を加えて２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度を得た。抗体及びヒトＩＬ−Ｉ７を含むプレートを、室温で３０分間インキュベートした。培養培地を繊維芽細胞培養物から除去し、１００μｌ抗体／ＩＬ−１７混合物を適切なウエルに加え、３７℃で一晩培養した。ＩＬ−１７に応答して生じたＩＬ−８の量を、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−８  ＤｕｏｓｅｔキットＤＹ２０８を使用して次いで推定した。
【実施例】
【０１２０】
（実施例１：ＩＬ−１７Ｆ４．１００の単離）
抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００は、従来のハイブリドーマ技法を使用して得た。メスＢＡＬＢ／Ｃマウスを、（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓから購入した）組換えヒトＩＬ−１７で免疫処置した。１００μｌのフロインドのアジュバントに溶かした１０μｇのＩＬ−１７の２週間間隔で、マウスに３回腹膜内免疫処置を施した。融合を実施する前の３日間、マウスの静脈内に１００μｌのＰＢＳに溶かした１μｇのヒトＩＬ−１７を追加抗原刺激した。融合はＧａｌｆｒｅら、１９７７、Ｎａｔｕｒｅ、２６６、５５０〜５５２の方法を使用して実施し、マウスミエローマ細胞系ＳＰ２／０を融合パートナーとして使用した。ＥＬＩＳＡによりヒトＩＬ−１７と結合した抗体に関して融合をスクリーニングし、幾つかの抗体産生ハイブリドーマをこの一次スクリーニングから選択し、その１つをＩＬ−１７Ｆ４．１００と名付けた。ＩＬ−１７Ｆ４．１００を産生したハイブリドーマ細胞は限界希釈法によってクローニングした。この抗体はイソ型を決定し、ｋａｐｐａ軽鎖を有するＩｇＧγ２ｂであることが分かった。
【０１２１】
（実施例２：ネズミモノクローナル抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００由来の可変領域の遺伝子のクローニング及び発現）
ＶＨ及びＶＬ領域のＰＣＲクローニング
ＩＬ−１７Ｆ４．１００の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の遺伝子を単離し、逆転写ＰＣＲによるクローニング後に塩基配列決定した。
【０１２２】
Ｖ領域の配列は、配列番号１〜４で図１中に示す（塩基５８で始まる）。
【０１２３】
ネズミＶ領域遺伝子をヒト抗体定常領域遺伝子（ヒトｋａｐｐａ軽鎖及びγ−４重鎖）を含む発現ベクターにサブクローニングし、マウス／ヒトキメラをＣＨＯ細胞中で一時的に発現させた。ＣＨＯ細胞のトランスフェクションは、製造者の教示書（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１８３２４）に従いリポフェクタミン手順を使用して実施した。
【０１２４】
（実施例３：ＩＬ−１７Ｆ４．１００のＣＤＲ移植）
ＣＤＲ超可変領域及びＩＬ−１７Ｆ４．１００由来のさまざまな数の骨格残基をヒトＶ領域アクセプター骨格に移植した、一連のヒト化ＶＬ及びＶＨ領域を設計した。
【０１２５】
３つの移植ＶＬ領域（ｇＬ１〜３）を設計し、オリゴヌクレオチド構築及びＰＣＲ突然変異誘発によって遺伝子を構築した。合計１６の移植ＶＨ領域をさらに構築した（ｇＨ１〜１６）。これらのヒト化配列を、ヒト抗体定常領域遺伝子を含むベクターにサブクローニングし、ＣＨＯ細胞中で一時的に発現させ、ＩＬ−１７結合及び中和アッセイにおけるそれらの活性を、ＩＬ−１７Ｆ４．１００可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体と比較した。
【０１２６】
ＩＬ１７の中和において最も強力であった移植片は、Ｌ鎖中に１つのマウス骨格残基（Ｖａｌ−２）及びＨ鎖中に２つのマウス骨格残基（Ｖａｌ−２４、Ｖａｌ−７８）を含むｇＨ１１ｇＬ３であった。
【０１２７】
図２は、ドナーマウス配列とアクセプターヒト骨格の間のアラインメントを示す。重鎖アクセプター骨格は、ヒトＪＨ領域生殖系ＪＨ４のこの部分に由来する骨格４を有する、ヒト生殖系配列ＶＨ３  １−３  ３．３３である。軽鎖アクセプター骨格は、ヒトＪＫ領域生殖系ＪＫ１のこの部分に由来する骨格４を有する、ヒト生殖系配列ＶＫ１  ２−１−（１）Ｏ１２である。ｇＨ１１及びｇＬ３の移植配列は、図３ａ（塩基６４〜４２０）及び３ｂ（塩基６４〜３９９）中にそれぞれ与える（配列番号１１〜１４）。
【０１２８】
（実施例４：ＣＤＰ４３５の生成及び特徴付け）
ＣＤＰ４３５は、抗体成分が実施例３で生成した移植断片から構築した抗体Ｆａｂ断片である、本発明によるＰＥＧ化抗体断片である。ＣＤＰ４３５の抗体Ｆａｂ断片要素は、ヒトＣγ１重鎖ＣＨ１ドメイン及びヒトＣｋａｐｐａ軽鎖ドメインをコードするＤＮＡを含むＣｅｌｌｔｅｃｈの大腸菌発現ベクターｐＴＴＯＤにサブクローニングした、選択したヒト化可変ドメイン移植断片（ｇＨ１１ｇＬ３）をコードする遺伝子を使用して構築した（ＷＯ０３／０４８２０８中に以前に記載されたのと同様に）。ＷＯ０３／０４８２０８とは対照的に、鎖間ジスルフィドシステイン（カバットの番号処理システムによってｃｙｓ−２３３、配列の番号処理によってｃｙｓ−２２２）がＣ末端残基であるように、定常領域中でヒト重鎖を切断した。このＣＤＲ移植Ｆａｂのタンパク質配列は、図４ａ及び４ｂ中に示す（配列番号１５〜１８）。ｐＴＴＯＤ（ＣＤＰ４３５）２シストロン性発現ベクターのマップを図６中に示し、これは図５及び配列番号１９で与える構築体を含む。この構築体は軽鎖遺伝子と重鎖遺伝子の間に遺伝子間配列、ＩＧＳ−２（ＷＯ０３／０４８２０８を参照）、及び軽鎖遺伝子と重鎖遺伝子の両方の開始部位にＯｍｐＡリーダー配列を含む。
【０１２９】
ｐＴＴＯＤ（ＣＤＰ４３５）ベクターを宿主菌株大腸菌Ｋ１２Ｗ３１１０に形質転換し、ＣＤＰ４３５の抗体Ｆａｂ断片要素を、標準的な方法を使用する高細胞密度培養によって大腸菌において生成させた。カチオン交換クロマトグラフィーを使用して、次に標準的な方法を使用するアニオン交換クロマトグラフィーによって抗体を精製した（Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓら、２００２、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、２６、３０９〜３２０）。
【０１３０】
ＣＤＰ４３５の生成
２つの２０ｋＤａのＰＥＧ分子を、以下の方法を使用して精製ＣＤＰ４３５の抗体Ｆａｂ断片要素と結合させた（国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９中に与えられた方法も参照）。前に記載したように生成した精製抗体Ｆａｂ断片を、１０ｍＭのトリス−（２−カルボキシエチル）−ホスフィン（ＴＣＥＰ）を用いて周囲温度において１時間で還元処理して、Ｆａｂ当たり２個のチオール（両方の鎖間システイン）を生成させた。０．１Ｍリン酸＋２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ６．０へのダイアフィルトレーションによって還元剤を除去した。還元処理したＣＤＰ４３５の抗体断片を、周囲温度において一晩Ｆａｂより３倍モル過剰な２０ｋＤａＰＥＧ−マレイミドを用いて鎖間システインにおいてＤｉＰＥＧ化して、合計４０ｋＤａのＰＥＧ（即ち２×２０ｋＤａのＰＥＧ）を結合させてＣＤＰ４３５を生成した。ＣＤＰ４３５の略図は図１５に示す。
【０１３１】
ＰＥＧ化の後、ｐＨを４．５に低下させること（酢酸の添加）、及び伝導率を３ｍＳ／ｃｍに低下させること（水の添加）によって、ＣＤＰ４３５の精製に関して反応の条件を整えた。５０ｍＭ酢酸ｐＨ４．５中でのＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰクロマトグラフィーによってＣＤＰ４３５を精製した。精製した物質を濃縮し、５０ｍＭの酢酸、１２５ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ５．５にダイアフィルトレーションし、０．２２μｍで滅菌濾過した。
【０１３２】
ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ
このアッセイ形式は抗ヒトＩｇＧＦ（ａｂ）２によって捕捉したＣＤＰ４３５、及び溶液相中での組換えヒトＩＬ−１７の滴定を使用した。ＢＩＡ（Ｂｉａｍｏｌｅｃｕｌａｒ相互作用分析）を、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（ＢＩＡｃｏｒｅＡＢ）を使用して実施した。ＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅＦ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ）２特異的断片（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＪｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、アミンカップリング化学法によってＣＭ５センサーチップ上に〜９０００応答単位（ＲＵ）の捕捉レベルまで固定した。ＨＢＳ−ＥＰバッファー（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０、ＢＩＡｃｏｒｅＡＢ）を、１０μｌ／分の流速でランニングバッファーとして使用した。ＣＤＰ４３５の注入は１０μｌ／分で行って、表面に固定された抗ヒトＩｇＧ−Ｆ（ａｂ）２によって捕捉された約２００ＲｕのＦａｂを得た。３０μｌ／分の流速でさまざまな濃度において、捕捉抗体Ｆａｂ断片に対してヒトＩＬ−１７を滴定した。４０ｍＭのＨＣｌの２×１０μｌ注入、次に１０μｌ／分の流速での５ｍＭのＮａＯＨの５μｌ注入によって表面を再生した。
【０１３３】
バックグラウンドサブトラクション結合曲線を、標準的な手順に従いＢＩＡ評価ソフトウェア（バージョン３．２）を使用して分析した。運動パラメータは適合アルゴリズムから測定した。１２．５ｎＭ以下のヒトＩＬ−１７濃度において親和性を測定した。ＣＤＰ４３５に関して測定した親和性の値は１３３〜３６５ｐＭの範囲、２２３．８±９４．５ｐＭの平均±ＳＤであった（表１）。
【表１】
2008520224.tif 000003
【０１３４】
図７は、ＣＤＰ４３５の抗体Ｆａｂ断片の中和活性は、Ｈｅｌａ細胞ヒトＩＬ−１７中和アッセイ（実施例５中に記載したのと同様の方法）における、ネズミ親抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００の中和活性と等しいことを実証する。
【０１３５】
（実施例５：ＣＤＰ４３５を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和アッセイ）
Ｈｅｌａ細胞
Ｈｅｌａ細胞中でのヒト組換え体ＩＬ−１７、サル組換え体ＩＬ−１７及びヒト組換え体ＩＬ−１７Ｆに対するＣＤＰ４３５の有効性を試験した。Ｈｅｌａ細胞は細胞バンクからＡＴＣＣ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）で得た。１０％ウシ胎児血清、ペニシリン、ゲンタマイシン及びグルタミンを補ったダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で細胞を増殖させた。１×１０４個の細胞を、９６ウエルの平底組織培養プレートに平板培養した。細胞は一晩インキュベートし、アッセイバッファー中で一度洗浄した。ヒトＩＬ−１７（２５ｎｇｍｌ−１）、サルＩＬ−１７（２５ｎｇｍｌ−１）又はヒトＩＬ−１７Ｆ（１００ｎｇｍｌ−１）のいずれかを一定濃度のヒトＴＮＦ−αの存在下でインキュベートし、この混合物はＣＤＰ４３５とプレインキュベートした。サイトカイン及び抗体を次いでＨｅｌａ細胞に加え、これらを一晩インキュベートした。細胞培養物上清中のＩＬ−６の生成は、細胞に加えたＩＬ−１７／ＩＬ−１７Ｆの量に比例した。ヒトＩＬ−６のレベルはＥＬＩＳＡによって測定し、知られている標準濃度のヒトＩＬ−６との比較によって定量化した。
【０１３６】
データ（図８、９及び１０）は、ＣＤＰ４３５はヒト組換え体ＩＬ−１７とサル組換え体ＩＬ−１７の両方を効率よく中和したが、ヒト組換え体ＩＬ−１７Ｆの活性は阻害しなかったことを示す。これらの実験からのデータは、ＣＤＰ４３５はヒト組換え体ＩＬ−１７（２５ｎｇｍｌ−１）に対して１５８ｎｇｍｌ−１±４８のＩＣ５０、及びサル組換え体ＩＬ−１７（２５ｎｇｍｌ−１）に対して１４７ｎｇｍｌ−１±４５を与えたことを示した。
【０１３７】
マウスＩＬ−１７中和アッセイ（３Ｔ３−ＮＩＨ細胞）
マウス組換え体ＩＬ−１７に対するＣＤＰ４３５の中和有効性を測定した。３Ｔ３−ＮＩＨ細胞は細胞バンクからＡＴＣＣ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５８）で得た。１０％子ウシ血清、ペニシリン、ゲンタマイシン及びグルタミンを補ったＤＭＥＭ中で細胞を増殖させた。使用したアッセイバッファーは、ウシ胎児血清を子ウシ血清に交換したこのバッファーと同じであった。１×１０４個の細胞を、９６ウエルの平底組織培養プレートに平板培養した。細胞は一晩インキュベートし、アッセイバッファー中で一度洗浄した。一定濃度のヒトＴＮＦ−αの存在下でネズミＩＬ−１７を、ＣＤＰ４３５とプレインキュベートした。サイトカイン及びＣＤＰ４３５を次いで３Ｔ３−ＮＩＨ細胞に加え、これらを一晩インキュベートした。細胞培養物上清中のＩＬ−６の生成は、細胞に加えたマウスＩＬ−１７の量に比例した。マウスＩＬ−６のレベルはＥＬＩＳＡによって測定し、知られている標準濃度のネズミＩＬ−６との比較によって定量化した。
【０１３８】
データは、ＣＤＰ４３５はマウス組換え体ＩＬ−１７の活性を阻害しなかったことを示す（図１１）。
【０１３９】
（実施例６：ＣＤＰ４３５を用いたラットの薬物動態試験）
ラットに１２５Ｉ標識ＣＤＰ４３５を皮下注射した。さまざまな時間で動物を出血させ、放射活性に関して血液を測定した。薬物動態の概略は図１２に示す。ＡＵＣ０−∞＝２６５１％用量＊時間、ｔ１／２β＝５２時間、Ｃｍａｘ＝２２．７％用量。これらの結果は、ＣＤＰ４３５が５２時間の半減期で優れた薬物動態を有していたことを示した。
【０１４０】
ＣＤＰ４３５は０．０７μＣｉ／μｇの比放射能で１２５Ｉを用いて標識し、７７．６μｇの抗体を１００μｌの体積で皮下投与した。
【０１４１】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ中和アッセイ
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＤＰ４３５の中和有効性を測定するために、２つのｉｎ  ｖｉｖｏ炎症モデルにおいてＣＤＰ４８５を試験した。
【０１４２】
マウスにおける腹膜内ＣＤＰ４３５／腹膜内ｈＩＬ−１７
オスＢａｌｂ／ｃマウス（１８〜２５ｇ）にＣＤＰ４３５又は対照Ｆａｂ’Ａ３３−ＰＥＧを腹膜内（ｉ．ｐ．）注射し、次いでｈＩＬ−１７を５分後に腹膜内注射した。１８０分後、マウスを頚椎脱臼によって殺傷し、腹膜内洗浄を行い（３ｍｌのＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩）＋０．２５％のＢＳＡ、１２ｍＭのＨＥＰＥＳ）、ＦＡＣＳによって好中球の蓄積を定量化した（抗ＣＤ４５シクローム及び抗ＧＲ１フィコエリスリン抗体を用いた染色によって、ＣＤ４５及び高レベルのＧＲ１を発現する細胞として好中球を同定した）。３００ｎｇのｈＩＬ−１７に応じた好中球の蓄積は、０．０１及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量でＣＤＰ４３５を用いて有意に低下した（図１３）。
【０１４３】
別の実験では、２０ｍｇ／ｋｇのＣＤＰ４３５を動物に皮下投与し、２４時間後、３００ｎｇのｈＩＬ−１７で腹膜内を攻撃した。さらに３時間後、腹膜洗浄によって、ＣＤＰ４３５治療が好中球の蓄積を阻害したことが示された（図１４）。したがってＣＤＰ４３５は、抗原と共に局所に与えるか或いは遠隔部位に皮下投与すると、ｈＩＬ−１７に対して有効である。
【０１４４】
本発明を単なる例示によって記載してきたが、決して制限することは意味せず、詳細な説明の変更形態を本明細書に添付の特許請求の範囲内で作製することができることは、当然ながら理解されよう。本発明のそれぞれの実施形態の好ましい特徴は、必要な変更を加えて他の実施形態のそれぞれと同様である。本明細書中に列挙した特許及び特許出願だけには限られないが、これらを含めた全ての刊行物は、それぞれ個々の刊行物が詳細且つ個々に完全に述べるように参照として本明細書に組み込まれることが示されるが如く、参照として本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１ａ】重鎖の可変ドメインのヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２）を示す図である。
【図１ｂ】ネズミモノクローナル抗体ＩＬ−１７Ｆ４．１００の軽鎖の可変ドメインの、ヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号３及び４）を示す図である。図１ａ及び１ｂにおいて、位置１〜５７（ヌクレオチド配列番号）は、これらの可変領域と関係がある天然のマウスリーダー配列である。
【図２】ＩＬ−１７Ｆ４．１００重鎖（図２ａ；配列番号１１）及び軽鎖（図２ｂ；配列番号１３）配列の移植設計を示す図である。記号（│）はドナー：アクセプター：移植骨格配列の間の違いを示す。ＣＤＲには１本下線を引く。ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの定義の両方を含むＣＤＲ−Ｈ１以外、これらはＫａｂａｔによって定義されたものと同様である。２本下線を引いた配列は、移植配列中に保持されるドナー残基である。星印（＊）の残基はヒト亜群ＶＨ３生殖系の配列に共通であるが、この特定の生殖系中には存在しない。
【図３】設計遺伝子ｇＨ１１（図３ａ）及びｇＬ３（図３ｂ）のヌクレオチド及びアミノ酸配列を示す図である。両鎖において、大腸菌ＯｍｐＡリーダー配列を示す（ヌクレオチド配列の塩基１〜６３）。
【図４】ＣＤＰ４３５の（ａ）軽鎖及び（ｂ）重鎖の抗体Ｆａｂ断片のアミノ酸配列を示す図である。
【図５】ＣＤＰ４３５の抗体Ｆａｂ断片のアミノ酸及びヌクレオチド配列を示す図である。塩基１〜６３及び７２２〜７８４は、大腸菌ＯｍｐＡリーダー配列を表す。
【図６】ｐＴＴＯＤ（ＣＤＰ４３５）のプラスミドマップの図である。
【図７】Ｈｅｌａ細胞からのヒトＩＬ−１７誘導型のＩＬ−６生成に対する、ＣＤＰ４３５及びＩＬ−１７Ｆ４．１００の影響の比較の図である。
【図８】Ｈｅｌａ細胞からのヒトＩＬ−１７誘導型のＩＬ−６生成に対する、ＣＤＰ４３５の影響の図である。
【図９】Ｈｅｌａ細胞からのサルＩＬ−１７誘導型のＩＬ−６生成に対する、ＣＤＰ４３５の影響の図である。
【図１０】Ｈｅｌａ細胞からのヒトＩＬ−１７Ｆ誘導型のＩＬ−６生成に対する、ＣＤＰ４３５の影響の図である。
【図１１】３Ｔ３−ＮＩＨ細胞からのマウスＩＬ−１７誘導型のＩＬ−６生成に対する、ＣＤＰ４３５の影響の図である。
【図１２】ラットにおいて皮下に投与した１２５Ｉ標識ＣＤＰ４３５の薬物動態の図である。
【図１３】マウスにおけるＣＤＰ４３５の局所投与による、ｈＩＬ−１７誘導型の好中球蓄積のＩｎ  ｖｉｖｏ中和の図である。
【図１４】マウスにおけるＣＤＰ４３５の皮下投与による、ｈＩＬ−１７誘導型の好中球蓄積のＩｎ  ｖｉｖｏ中和の図である。
【図１５】ＣＤＰ４３５の構造の略図である。ｎは４００と５２０の間である。
【図１ａ】
2008520224.tif 000005
【図１ｂ】
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【図２】
2008520224.tif 000007
【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
2008520224.tif 000014
【図８】
2008520224.tif 000015
【図９】
2008520224.tif 000016
【図１０】
2008520224.tif 000017
【図１１】
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【図１２】
2008520224.tif 000019
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2008520224.tif 000022
【配列表】
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【国際調査報告】
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