(57)【要約】  １−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを含む水性ゲル製剤の状態で医薬製剤が提供される。使用方法及びキットもまた、提供される。【選択図】図２
2008530014.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、水性ゲル：
水；
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン；
医薬上許容される酸；
少なくとも１０重量％の水混和性共溶媒；及び
負に荷電した増粘剤を含む増粘剤システム；
（ここで水性ゲルは２０℃にて少なくとも１０００ｃｐｓの粘度を有する）。
【請求項２】
以下を含む成分を組み合わせることを含む方法により調製された、水性ゲル；
水；
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン塩；
少なくとも１０重量％の水混和性共溶媒；及び
負に荷電した増粘剤を含む増粘剤システム；
（ここで水性ゲルは２０℃にて少なくとも１０００ｃｐｓの粘度を有する）。
【請求項３】
医薬上許容される酸が、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンに対して化学量論的な量で存在する、請求項１に記載の水性ゲル。
【請求項４】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンが塩として提供される、請求項１に記載の水性ゲル。
【請求項５】
医薬上許容される酸が、アルキルスルホン酸、カルボン酸、ハロ酸、硫酸、リン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１又は請求項３に記載の水性ゲル。
【請求項６】
酸が、酢酸、臭化水素酸、Ｄ−グルコン酸、Ｌ−乳酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロピオン酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５に記載の水性ゲル。
【請求項７】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン塩が、アルキルスルホン酸、カルボン酸、ハロ酸、硫酸、リン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される酸の塩である、請求項２又は請求項４に記載の水性ゲル。
【請求項８】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン塩が、酢酸、臭化水素酸、Ｄ−グルコン酸、Ｌ−乳酸、プロピオン酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される酸の塩である、請求項７に記載の水性ゲル。
【請求項９】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン塩が、アルキルスルホン酸塩である、請求項７に記載の水性ゲル。
【請求項１０】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  アルキルスルホン酸塩が、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホン酸塩又は１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  メタンスルホン酸塩である、請求項９に記載の水性ゲル。
【請求項１１】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンが、水性ゲルの全重量に対して少なくとも０．０００１重量％の量で存在する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項１２】
水混和性共溶媒が、水性ゲルの全重量に対して２５重量％より多い量で存在する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項１３】
水混和性共溶媒が、水性ゲルの全重量に対して少なくとも３０重量％の量で存在する、請求項１２に記載の水性ゲル。
【請求項１４】
水混和性共溶媒が、水性ゲルの全重量に対して９０重量％以下の量で存在する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項１５】
水混和性共溶媒が、モノプロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ヘキシレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、ポリエチレングリコール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項１６】
水混和性共溶媒がモノプロピレングリコールである、請求項１５に記載の水性ゲル。
【請求項１７】
増粘剤システムが、異なる電荷密度を持つ、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項１８】
増粘剤システムが、セルロースエーテル、ポリサッカライドガム、アクリル酸ポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項１９】
増粘剤システムが、ポリサッカライドガム及びアクリル酸ポリマーを含む、請求項１８に記載の水性ゲル。
【請求項２０】
ポリサッカライドガムのアクリル酸ポリマーに対する重量比が、１：２０〜２０：１である、請求項１９に記載の水性ゲル。
【請求項２１】
増粘剤システムが、各々がカルボン酸基及び／又はカルボキシレート基を含んでいる、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項２２】
増粘剤システムが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、アクリル酸ポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤を含む、請求項２１に記載の水性ゲル。
【請求項２３】
増粘剤システムが、水性ゲルの全重量に対して少なくとも０．１重量％の量で存在する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項２４】
増粘剤システムが、水性ゲルの全重量に対して７重量％以下の量で存在する、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項２５】
水が、水性ゲルの全重量に対して少なくとも１０重量％の量で存在する、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項２６】
水が、水性ゲルの全重量に対して９５重量％以下の量で存在する、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項２７】
医薬上許容されるｐＨ調節剤をさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項２８】
医薬上許容されるｐＨ調節剤が、塩酸、水酸化ナトリウム、トロメタミン、水酸化カリウム及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の水性ゲル。
【請求項２９】
ｐＨが２〜５である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項３０】
ｐＨが３〜４である、請求項２９に記載の水性ゲル。
【請求項３１】
防腐剤をさらに含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項３２】
防腐剤が、第四級アンモニウム化合物、塩化ベンゼトニウム、パラベン、ホウ酸、イソチアゾリノン（ｉｓｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｏｎｅ）、有機酸、アルコール、カルバメート、クロルヘキシジン及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３１に記載の水性ゲル。
【請求項３３】
防腐剤が、メチルパラベン、プロピルパラベン及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３２に記載の水性ゲル。
【請求項３４】
防腐剤が、水性ゲルの全重量に対して少なくとも０．００５重量％の量で存在する、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項３５】
防腐剤が、水性ゲルの全重量に対して１．０重量％以下の量で存在する、請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項３６】
キレート剤をさらに含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項３７】
キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３６に記載の水性ゲル。
【請求項３８】
キレート剤がエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物である、請求項３７に記載の水性ゲル。
【請求項３９】
キレート剤が、水性ゲルの全重量に対して少なくとも０．００１重量％の量で存在する、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項４０】
キレート剤が、水性ゲルの全重量に対して２．０重量％以下の量で存在する、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の水性ゲル。
【請求項４１】
請求項１〜４０のいずれか１項に記載の水性ゲル、ただし負に荷電した増粘剤は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンと共有結合していない。
【請求項４２】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを対象の粘膜組織に送達する方法であり、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の水性ゲルを粘膜組織に適用することを含む方法。
【請求項４３】
粘膜組織が、子宮頸部異形成、パピローマウイルスの子宮頸部への感染、低グレードの扁平上皮内病変、高グレードの扁平上皮内病変、重大性が不明の異型の扁平細胞、子宮頸部上皮内癌、アトピー性アレルギー反応、アレルギー性鼻炎、腫瘍病変及び前癌病変からなる群から選択される状態を伴う、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
粘膜組織が子宮頸部上にあり、伴われる状態が子宮頸部異形成、高グレードの扁平上皮内病変、低グレードの扁平上皮内病変及び高リスクＨＰＶの存在を伴う重大性が不明の異型の扁平細胞からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
粘膜組織が子宮頸部上にあり、伴われる状態が高リスクＨＰＶの存在を伴う重大性が不明の異型の扁平細胞である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
粘膜組織が子宮頸部上にあり、伴われる状態がパピローマウイルスの子宮頸部への感染である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
水性ゲルが、バレル型アプリケーター、タンポン、子宮頸部キャップ、ペッサリー、綿棒、フォームスポンジ及び坐剤からなる群から選択される装置を使用して、粘膜組織に適用される、請求項４２〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
装置がバレル型アプリケーターである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
バレル型アプリケーターが予め充填されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
バレル型アプリケーター及び請求項１〜４１のいずれか１項に記載の水性ゲルを含むキット。
【請求項５１】
キットが、水性ゲルを含むアプリケーターとは分離された容器を含む、請求項５０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００５年２月４日に出願された米国仮出願第６０／６４９９３２号、並びに２００５年７月１２日に出願された米国仮出願第６０／６９８４１６号の利益を主張するものであり、両内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
背景
多くのイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、イミダゾテトラヒドロナフチリジンアミン、及びチアゾロナフチリジンアミン化合物は、強力な免疫刺激活性、抗ウイルス活性及び抗腫瘍活性（抗癌活性を含む）を示し、並びにワクチンアジュバントとして並びにＴＨ２を介する病気の処置において有用であることも示されている。これらの化合物を、以下「ＩＲＭ」（免疫反応調整剤）化合物と総称する。
【０００３】
これらＩＲＭ化合物の免疫刺激活性機構は、本質的な部分では、多様な重要なサイトカイン（例えば、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子など）の誘導により免疫反応を増強するためであると考えられている。このような化合物は、ある種の単細胞／マクロファージ由来のサイトカインの急激な放出を刺激することが示され、並びにＢ細胞を刺激して抗体を分泌させるようにすることも可能であり、このことはこれらＩＲＭ化合物の活性において重要な役割を果たす。これらの化合物に対する有力な免疫刺激応答のひとつは、インターフェロン（ＩＦＮ）−α産生の誘導であり、これは観察される急性の抗ウイルス活性及び抗腫瘍活性において非常に重要であると考えられている。さらに、他のサイトカイン（例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６及びＩＬ−１２）のアップレギュレーションも、有益な活性を持つ可能性があり、並びにこれらの化合物の抗ウイルス特性及び抗腫瘍特性に寄与すると考えられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＩＲＭの有益な効果のうちいくつかは公知であるが、特定の部位における特定の状態を処置するために、ＩＲＭ化合物を局所適用することによる治療上の利点を提供する能力は、多様な要因によって妨げられているかもしれない。これらの要因としては、例えば製剤が適用される皮膚又は粘膜組織への刺激、製剤の繊毛クリアランス、製剤の洗い流し、製剤中のＩＲＭ化合物の不溶化及び／又は分解、製剤の物理的不安定性（例えば、成分の分離、硬化、活性成分の沈殿／凝集など）、並びに、低浸透性を含む。従って、この種の化合物から多大な治療上の利点を提供するためには、新規方法及び新規製剤が、引き続き必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
要旨
本発明は、水性ゲル製剤、キット、及び使用方法に向けられたものである。本明細書において、「ゲル」は、実質的に油を含まない組成物である（それ故、クリーム又はローションではない）。好ましくは、本発明のゲルは、室温（すなわち、約２０℃）において、少なくとも１０００センチポアズ（ｃｐｓ）の粘度を持つ。好ましくは、本発明のゲルは、５０，０００ｃｐｓ以下の粘度を持ち、より好ましくは、３０，０００ｃｐｓ以下である。
【０００６】
遊離塩基が水中では低溶解性であるために、あるＩＲＭ、特に１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを使用して、水性ゲルは容易には形成されない。その結果、共溶媒が典型的に使用されるか又はＩＲＭ塩がインサイチュで調製されることになる。そのため、望ましい粘度を提供するために、負に荷電した増粘剤、特に２個の負に荷電した増粘剤が必要となりうる。本発明の好ましい実施態様においては、負に荷電した増粘剤は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンに共有結合されない。
【０００７】
一実施態様においては、このような水性ゲルは以下を含む：水；１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン；医薬上許容される酸；少なくとも１０重量％の水混和性共溶媒；及び負に荷電した増粘剤（好ましくは、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤）を含む増粘剤システム；ここで水性ゲルは２０℃にて少なくとも１０００センチポアズ（ｃｐｓ）の粘度を持つ。
【０００８】
一実施態様においては、このような水性ゲルは以下を含む化合物を組み合わせることを含む方法により調製される：水；１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン塩；少なくとも１０重量％の水混和性共溶媒；及び負に荷電した増粘剤（好ましくは、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤）を含む増粘剤システム；ここで水性ゲルは２０℃にて少なくとも１０００ｃｐｓの粘度を持つ。
【０００９】
本発明の水性ゲル製剤は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの好ましいビヒクルを提供することができ、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンのより容易な製造、及び特に粘膜組織上の滞留時間の増加が可能になりうる。
【００１０】
さらに、本発明の水性ゲル中における負に荷電した増粘剤の使用は、薬剤に対する全身曝露を減らし、それ故サイトカインの全身レベルを減少させる。これは、特定の部位（例えば子宮頸部異形成）での治療が好まれる、多くの状態において望ましい。負に荷電した増粘剤を組み合わせて（すなわち、少なくとも２個）使用することは、薬剤が水に対して低溶解性なため（遊離塩基又は塩形態であったとしても）、より高レベルの共溶媒が使用される場合に望ましい。これにより、全身曝露を減らし、物理的に安定な水性ゲルが生み出される。
【００１１】
本発明はまた、本発明の製剤を使用する方法も提供する。一実施態様においては、本発明は、対象の粘膜組織に１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを送達する方法であり、本発明の水性ゲルの適用を含む方法を提供する。好ましくは、粘膜組織は、子宮頸部異形成、パピローマウイルスの子宮頸部への感染、低グレードの扁平上皮内病変、高グレードの扁平上皮内病変、重大性が不明の異型の扁平細胞、子宮頸部上皮内癌、アトピー性アレルギー反応、アレルギー性鼻炎、腫瘍病変及び前癌病変からなる群から選択される状態を伴っている。
【００１２】
本発明はまた、バレル型アプリケーター及び本発明の水性ゲル（個別の容器内に又はバレル型アプリケーターに予め充填された状態でありうる）を含むキットも提供する。
【００１３】
用語「含む」及びその変形は、これらの用語が本明細書及び請求項中において現れる場所において限定的な意味を持つものではない。
【００１４】
本明細書で使用したように、「ひとつの（ａ）」、「ひとつの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」、「少なくともひとつの」及び「１つ以上の」は、相互に入れ替えて使用できる。従って、例えば、「ひとつの」防腐剤を含む水性ゲルは、ゲルが「ひとつ以上の」防腐剤を含む、という意味に解釈しうる。
【００１５】
本明細書においてはまた、端点による数値範囲の言及は、その範囲内に含められるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む）。
【００１６】
上記の本発明の要旨は、本発明の各々開示された実施態様を記載すること、或いは全ての実例を記載することを、意図されているのではない。以下の記載は、例示的な実施態様の、より特異的な例である。本願全体にわたっていくつかの場所においては、実施例のリスト（実施例は様々な組み合わせで使用されうる）を通して、指針が提供される。各々の事例において、言及されたリストは代表的な群として示されているだけであり、排他的なリストとして解釈されるべきではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
例示的な実施態様の詳細な説明
本発明は、水性ゲル製剤、キット、及び使用方法を提供する。このようなゲルは、実質的に油を含まない組成物である（それ故、クリーム又はローションではない）。好ましくは、本発明のゲルは、２０℃において、少なくとも１０００センチポアズ（ｃｐｓ）の粘度を持つ。好ましくは、本発明のゲルは、５０，０００ｃｐｓ以下の粘度を持ち、より好ましくは、３０，０００ｃｐｓ以下である。
【００１８】
一実施態様においては、このような水性ゲルは以下を含む：水；１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン；医薬上許容される酸；少なくとも１０重量％の水混和性共溶媒；及び負に荷電した増粘剤（好ましくは、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤であり、典型的には異なる荷電密度を持つ）を含む増粘剤システム；ここで水性ゲルは２０℃にて少なくとも１０００センチポアズ（ｃｐｓ）の粘度を持つ。
【００１９】
一実施態様においては、このような水性ゲルは以下を含む成分を組み合わせることを含む方法により調製される：水；１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン塩；少なくとも１０重量％の水混和性共溶媒；及び負に荷電した増粘剤（好ましくは、負に荷電した少なくとも２個の増粘剤であり、典型的には異なる荷電密度を持つ）を含む増粘剤システム；ここで水性ゲルは２０℃にて少なくとも１０００ｃｐｓの粘度を持つ。
【００２０】
免疫反応調整剤は、室温にて製剤中に治療レベル（すなわち、治療上有効量）に、実質的に完全に溶解される。この量は、特定の状態を処置及び／又は予防するのに効果的である。一般に、本発明の水性ゲル製剤中に存在する１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの量は、望ましい生理的効果を提供する（例えば、標的とされた状態を処置する）、その状態の再発を予防する、或いはその状態に対する免疫を促進させるために、効果的な量であろう。ある実施態様については、ウイルス感染の処置又は阻害に効果的な量とは、ウイルス感染のひとつ以上の徴候（例えばウイルス負荷、ウイルス産生率、又は治療していない対照動物に比較した死亡率など）の減少を引き起こす量であろう。
【００２１】
本発明のある方法においては、粘膜組織は、子宮頸部異形成、パピローマウイルスの子宮頸部への感染、低グレードの扁平上皮内病変、高グレードの扁平上皮内病変、重大性が不明の異型の扁平細胞、子宮頸部上皮内癌、アトピー性アレルギー反応、アレルギー性鼻炎、腫瘍病変及び前癌病変からなる群から選択される状態を伴っている。
【００２２】
本発明のある方法においては、粘膜組織は、子宮頸部にあり、伴われる状態が子宮頸部異形成、高グレードの扁平上皮内病変、低グレードの扁平上皮内病変及び高リスクＨＰＶの存在を伴う重大性が不明の異型の扁平細胞からなる群から選択される。
【００２３】
本発明のある方法においては、粘膜組織は、子宮頸部にあり、伴われる状態が高リスクＨＰＶの存在を伴う重大性が不明の異型の扁平細胞である。
【００２４】
本発明のある方法においては、粘膜組織は、子宮頸部にあり、伴われる状態がパピローマウイルスの子宮頸部への感染である。
【００２５】
特定の状況下で治療上有効であろう１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの量は、投与レジメン、適用部位、特定の製剤及び処置される状態のような事柄に依存するだろう。従って、本明細書中において、特定の投与量を同定することは一般に実際的ではない；しかし、当業者は、本明細書に提供された指針、ＩＲＭ関連分野にて入手可能な情報、及び常套な試験に基づいて、適切な治療有効量を決定できるであろう。
【００２６】
ある実施態様においては、本発明の方法は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの用量（例えば、対象に対して１００ｎｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ）を提供するのに十分な製剤を投与することを含むが、ある実施態様においては、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンをこの範囲外の濃度にて投与することにより、方法が遂行されてもよい。これらの実施態様のいくつかにおいては、方法は、対象に対して１０μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの用量（例えば、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの用量）を提供するのに十分な製剤を投与すること含む。
【００２７】
本発明の製剤のある実施態様においては、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの量又は濃度は、水性ゲル全重量に対して、重量で少なくとも０．０００１％（重量％）であり、他の実施態様においては少なくとも０．００１重量％であり、他の実施態様においては少なくとも０．０１重量％であり、及び他の実施態様においては少なくとも０．１重量％である。ある実施態様においては、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの量は、水性ゲル全重量に対して、７重量％以下であり、他の実施態様においては５重量％以下であり、他の実施態様においては３重量％以下であり、他の実施態様においては２重量％以下であり、及び他の実施態様においては１重量％以下である。
【００２８】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンは、単独で治療活性成分として、又は他の治療薬と組み合わせて製剤中に存在しうる。このような他の治療薬には、例えば、ペニシリン又はテトラサイクリンのような抗生物質、ヒドロコルチゾン又はベタメタゾンのようなコルチコステロイド、フルリプロフェン、イブプロフェン又はナプロフェンのような非ステロイド性抗炎症剤又はアシクロビルまたはバルシクロビルのような抗ウイルス薬を含みうる。
【００２９】
ある実施態様においては、先に記載した製剤は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの望ましくない全身吸収を伴わずに、所望の治療効果を得るのに十分な時間適用するのに、特に有利である。
【００３０】
本発明のＩＲＭ、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンは、医薬上許容される酸と組み合わせてゲル製剤中に存在する。このような酸は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンに比較して、好ましくは化学量論的な量で存在する。
【００３１】
様々な範囲の医薬上許容される酸が、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの塩を形成するために使用されうる。このような酸の例は、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、６６、１〜１９（１９７７）に記載されている。好ましい医薬上許容される酸（例えば、本発明のゲル中に取り込むのに適する、又は本発明のＩＲＭの塩を形成するに適する）は、例えば、アルキルスルホン酸、カルボン酸、ハロ酸、硫酸、リン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸、及びそれらの組み合わせを含む。より好ましい医薬上許容される酸は、酢酸、臭化水素酸、Ｄ−グルコン酸、Ｌ−乳酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロピオン酸、及びそれらの組み合わせを含む。特に好ましい１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの塩は、アルキルスルホン酸塩（例えば、エタンスルホネート又はメタンスルホネート）である。塩は、ゲル製剤においてインサイチュで調製されうる。或いは、塩はゲル製剤に取り込まれる前に、従来の方法を使用して調製及び単離されうる。
【００３２】
本明細書中に記載した１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン及びその塩は、異性体（例えばジアステレオマー及びエナンチオマー）、溶媒和物、多形などのような、任意の医薬上許容される形態を含む。特に、塩が光学活性である場合には、本発明は特に、各々の塩のエナンチオマーに加えて、エナンチオマーのラセミの組み合わせの使用を含む。
【００３３】
共溶媒
本発明の水性ゲル製剤は、水混和性共溶媒を含む。水混和性共溶媒は、塩形態の免疫反応調整剤の可溶化を補助する。共溶媒は、単一成分又は組み合わせでありうる。適切な共溶媒の例は、モノプロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ヘキシレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、（様々な分子量、例えば、３００又は４００の）ポリエチレングリコール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル及びそれらの組み合わせを含む。モノプロピレングリコール（すなわち、プロピレングリコール）が、特に共溶媒として好ましい。
【００３４】
ある実施態様においては、共溶媒（又は共溶媒の組み合わせ）は、水性ゲル全重量に対して、少なくとも１０重量％の量で存在し、他の実施態様においては２５重量％より多い量で存在し、及び他の実施態様においては少なくとも３０重量％存在する。ある実施態様においては、共溶媒（又は共溶媒の組み合わせ）は、水性ゲル全重量に対して、９０重量％以下の量で存在し、他の実施態様においては８０重量％以下存在し、他の実施態様においては７０重量％以下存在し、及び他の実施態様においては６０重量％以下存在する。
【００３５】
ある実施態様においては、水は、水性ゲル全重量に対して、少なくとも１０重量％の量で存在し、他の実施態様においては少なくとも１５重量％存在し、他の実施態様においては少なくとも２０重量％存在し、及び他の実施態様においては少なくとも２５重量％存在する。ある実施態様においては、水は、水性ゲル全重量に対して、９５重量％以下の量で存在し、他の実施態様においては９０重量％以下の量で存在し、及び他の実施態様においては８５重量％以下存在する。
【００３６】
負に荷電した増粘剤
本発明の水性ゲル製剤は、負に荷電した増粘剤、及び好ましくは負に荷電した少なくとも２個の増粘剤（典型的には異なる荷電密度）を含む。好ましくは、増粘剤は粘膜接着性である。適切な負に荷電した増粘剤の例は以下を含む：カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロースエーテル；キサンタンガムのようなポリサッカライドガム；及び、例えば、米国薬局方においてカルボマーとして示されたポリマーのような、アリルショ糖又はアリルペンタエリトリトールと架橋したアクリル酸から作成されるアクリル酸ポリマー（すなわち、ホモポリマー及びコポリマー）、並びに、米国薬局方においてポリカルボフィルとして示されたポリマーのような、ジビニルグリコールと架橋したアクリル酸から作成されるアクリル酸ポリマー。このような増粘剤の組み合わせは、所望により使用されうる。
【００３７】
本発明のある態様においては、負に荷電した増粘剤は、カルボン酸基及び／又はカルボキシレート基を含む。このような物の例は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、アクリル酸ポリマーを含む。好ましくは、本発明のある実施態様は、アクリル酸ポリマー（すなわち、ポリアクリル酸ポリマー）及びポリサッカライドガム（例えば、キサンタンガム）の組み合わせを含む。
【００３８】
カルボマーは、典型的には（及び好ましくは）アクリル酸ポリマーである。適切なカルボマーは、例えば、商業的に入手可能な、商業名称ＣＡＲＢＯＰＯＬ（Ｎｏｖｅｏｎ、Ｉｎｃ．、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、Ｏｈｉｏ、ＵＳＡから全て入手可能）を含む。ＣＡＲＢＯＰＯＬポリマーは、広いレンジの粘度を提供しうる。例えば、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９７１Ｐ又はＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９４１の０．５％溶液は、４，０００〜１１，０００ｃＰｓ（ｐＨ  ７．５、２５℃、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計  ２０ｒｐｍにて）の粘度を有し；ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９３４Ｐ又はＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９７４Ｐの０．５％溶液は、２９，４００〜３９，４００ｃＰｓ（ｐＨ  ７．５、２５℃、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計  ２０ｒｐｍにて）の粘度を有し；及びＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９４０又はＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９８０の０．５％溶液は、４０，０００〜６０，０００ｃＰｓ（ｐＨ  ７．５、２５℃、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計  ２０ｒｐｍにて）の粘度を有する。ある実施態様については、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９３４Ｐ、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９７４Ｐ、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９４０及びＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９８０のようなカルボマーが好ましい。特に好ましいカルボマーは、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９７４Ｐである。
【００３９】
ある実施態様については、比較的高度に架橋されたカルボマーを有することが望まれる。好ましい比較的高度に架橋されたカルボマーは、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９７４Ｐ、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９４０及びＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９８０を含む。特に好ましい比較的高度に架橋されたカルボマーは、ＣＡＲＢＯＰＯＬ  ９７４Ｐである。
【００４０】
適切なポリカルボフィルは、例えば、商業的に入手可能な商業名称ＮＯＶＥＯＮポリカルボフィル（Ｎｏｖｅｏｎ、Ｉｎｃ．、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、Ｏｈｉｏ、ＵＳＡから全て入手可能）が挙げられる。好ましいポリカルボフィルは、ＮＯＶＥＯＮ  ＡＡ−１  ＵＳＰポリカルボフィルである。
【００４１】
異なる水性粘度を持つ、様々なグレードのカルボキシメチルセルロースナトリウムが、商業的に入手可能である。１％重量／容量（ｗ／ｖ）水溶液の粘度が５〜１３，０００ｃｐｓのものを入手可能である。例として、カルボキシメチルセルロースナトリウム、高粘度、ＵＳＰ（ＣＡ  １９４）；カルボキシメチルセルロースナトリウム、中粘度、ＵＳＰ（ＣＡ１９２）；及びカルボキシメチルセルロースナトリウム、低粘度、ＵＳＰ（ＣＡ１９３）；これらは全てＳｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．、Ｇａｒｄｅｎａ、ＣＡ、ＵＳＡから入手可能；並びにＡＫＵＣＥＬＬ  ＡＦ  ３０８５（高粘度）、ＡＫＵＣＥＬＬ  ＡＦ  ２７８５（中粘度）、及びＡＫＵＣＥＬＬ  ＡＦ  ０３０５（低粘度）、これらは全てＡｋｚｏ  Ｎｏｂｅｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｍｅｒｓｆｏｏｒｔ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから入手可能、が挙げられる。
【００４２】
ある実施態様においては、増粘剤システムは、ポリサッカライドガム及びアクリル酸ポリマーを含む。好ましくは、ポリサッカライドガムのアクリル酸ポリマーに対する重量比は、１：２０〜２０：１の範囲内である。ある実施態様においては、重量比は、１：１０〜１０：１の範囲内であり、他の実施態様においては、重量比は１：５〜５：１の範囲内であり、他の実施態様においては、重量比は１：３〜３：１の範囲内であり、及び他の実施態様においては、重量比は１：２〜２：１の範囲内である。特に好まれる比は、１：２である。
【００４３】
増粘剤システムは、少なくとも１０００センチポアズ（ｃｐｓ）、好ましくは少なくとも５０００ｃｐｓ、より好ましくは少なくとも８０００ｃｐｓ、もっとも好ましくは少なくとも１００００ｃｐｓレベルの粘度をもたらすのに十分な量で、本発明の製剤中に存在する。粘度は、２０±０．５℃にて、３５ｍｍ２°円錐を備えたＨａａｋｅ  ＲＳシリーズのレオメーターを用いて、１〜８０ｓ−１の間で制御された速度段階試験により、１６ｓ−１のせん断速度に対して決定される。以下の実施例において報告した値は、１６ｓ−１における値である。
【００４４】
ある実施態様においては、増粘剤システムの量又は濃度は、水性ゲル全重量に対して、少なくとも０．１重量％であり、他の実施態様においては少なくとも０．５重量％であり、他の実施態様においては少なくとも１．０重量％であり、及び他の実施態様においては少なくとも１．５重量％である。ある実施態様においては、増粘剤システムの量は、水性ゲル全重量に対して、７重量％以下であり、他の実施態様においては６重量％以下であり、他の実施態様においては５重量％以下であり、及び他の実施態様においては４重量％以下である。
【００４５】
ｐＨ調節剤及び緩衝液
本発明の水性ゲル製剤は、製剤のｐＨを望ましい範囲に調節するために、医薬上許容されるｐＨ調節剤をさらに含むことができる。一般に、ｐＨは少なくとも２であり、好ましくは少なくとも３である。一般に、ｐＨは６以下であり、好ましくは５以下であり、より好ましくは４以下である。ｐＨ調節剤は、任意の医薬上許容される酸又は塩基でありうる。適切なｐＨ調節剤の例として、塩酸、水酸化ナトリウム、トロメタミン及び水酸化カリウムが挙げられる。このような薬剤の組み合わせは、所望により使用されうる。
【００４６】
本発明の水性ゲル製剤は、製剤のｐＨを望ましい範囲に維持するために（好ましくは、２〜６であり、より好ましくは３〜４である）医薬上許容される緩衝液をさらに含みうる。緩衝液は、１つ以上の望ましいｐＨ範囲を提供する任意の医薬上許容される緩衝液でありうる。適切な緩衝液の例として、乳酸、酒石酸、クエン酸及びコハク酸を含む緩衝液が挙げられる。緩衝液の組み合わせは、所望により使用されうる。緩衝液はまた、張性調節剤としても機能しうる。
【００４７】
防腐剤
本発明の水性ゲル製剤は、防腐剤をさらに含みうる。防腐剤は、組成物中における微生物の増殖（例えば、真菌及び細菌の増殖）を阻害する１つ以上の化合物を含む。適切な防腐剤としては水溶性であり、及び第四級アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム）、塩化ベンゼトニウム、パラベン（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、ホウ酸、ホルムアルデヒド供与体（例えば、ヒダントイン）、イソチアゾリノン、有機酸（例えば、ソルビン酸）、アルコール（例えば、フェニルエチルアルコール、クレゾール、クロロブタノール、ベンジルアルコール）、カルバメート、クロルヘキシジン及びそれらの組み合わせが挙げられる。好ましくは、防腐剤はメチルパラベン、プロピルパラベン又はそれらの組み合わせである。グリセリン又はプロピレングリコールのようなある種の水混和性共溶媒もまた、抗微生物性特性を持つ。ある実施態様においては、本発明の防腐剤（又は防腐剤の組み合わせ）は、水性ゲル全重量に対して、少なくとも０．００５重量％、他の実施態様においては少なくとも０．０１重量％、他の実施態様においては少なくとも０．０１５重量％、及び他の実施態様においては少なくとも０．０２重量％の量で存在する。ある実施態様においては、本発明の防腐剤（又は防腐剤の組み合わせ）は、水性ゲル全重量に対して、１．０重量％以下、他の実施態様においてはせいぜい０．７５重量％、他の実施態様においてはせいぜい０．５重量％、及び他の実施態様においては０．４重量％以下の量で存在する。
【００４８】
キレート剤
本発明の水性ゲル製剤は、キレート剤をさらに含みうる。キレート剤は、金属イオンと複合体を作る化合物である。適切なキレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及び二ナトリウム塩などのその誘導体、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物及びそれらの組み合わせが挙げられる。好ましくは、キレート剤はエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物（エデト酸二ナトリウム塩）である。
【００４９】
ある実施態様においては、キレート剤（又はキレート剤の組み合わせ）は、水性ゲル全重量に対して、少なくとも０．００１重量％、他の実施態様においては少なくとも０．０１重量％、及び他の実施態様においては少なくとも０．０２重量％の量で存在する。ある実施態様においては、キレート剤（又はキレート剤の組み合わせ）は、水性ゲル全重量に対して、２．０重量％以下、他の実施態様においては１．５重量％以下、及び他の実施態様においては１．０重量％以下の量で存在する。
【００５０】
適用
本発明の水性ゲル製剤は、粘膜組織に関連した状態を処置又は予防するために使用されうる。ある実施態様においては、本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に関連した異形成を含む子宮頸部異形成、低グレードの扁平上皮内病変、高グレードの扁平上皮内病変、重大性が不明の異型の扁平細胞（典型的には、高リスクＨＰＶの存在を伴う）及び子宮頸部上皮内癌（ＣＩＮ）のような子宮頸部状態を処置するために、子宮頸部に局所適用するのに特に有利な方法を提供する。
【００５１】
本発明はまた、粘膜関連状態の処置方法も提供する。換言すれば、本発明は、粘膜組織に関連する状態の処置方法を提供する。
【００５２】
本発明の方法においては、本発明の水性ゲルは１週間に１回又は１週間に数回適用されうる。例えば、水性ゲルは週に２回、週に３回、週に５回または毎日でも適用されうる。
【００５３】
本発明の方法においては、本発明の水性ゲルの適用は、望ましい処置レジメンに従って少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月又はそれより長い期間にわたりうる。
【００５４】
所定の状態又は対象に使用する実際の投薬（治療）レジメンは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの物理化学的性質、送達材料、投与される１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの量、対象の免疫システムの状態（例えば、抑制状態、妥協状態、刺激状態）、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの投与方法、及び１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンが適用される種を含むが、これに限定されないような、当該分野で周知の多くの要因に少なくとも部分的には依存しうる。
【００５５】
本発明の方法は、任意の適切な対象に適用可能でありうる。適切な対象として限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ又はトリのような動物が挙げられるが、これに限定されない。
【００５６】
本発明の方法は、治療、予防（例えば、ワクチンアジュバンドとして）又は診断を含む、様々な医学的な目的に適している。本明細書において使用したように、状態又は対象を「処置すること」は、治療的、予防的及び診断的処置を含む。
【００５７】
「有効量」という用語（例えば、治療上又は予防上）は、サイトカインの誘導、ＴＨ２免疫反応の阻害、抗ウイルス又は抗腫瘍活性、腫瘍細胞の減少又は除去のような望ましい（例えば、治療的に又は予防的に）効果を誘導するのに十分な化合物の量を意味する。特定の状況において治療上効果的であろう１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンの量は、投薬レジメン、適用部位、特定の製剤及び処置される状態のような要因に依存するであろう。従って、本明細書中において、特定の投与量を同定することは一般に実際的ではない；しかし、当業者は、本明細書に提供された指針及びＩＲＭ関連分野にて入手可能な情報に基づいて、適切な治療有効量を決定できるだろう。
【００５８】
本発明の方法は、粘膜関連状態の処置のために、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを粘膜組織に適用するために使用されうる。
【００５９】
本明細書中において、「粘膜関連状態」とは、粘膜組織或いは、粘膜組織に局所的に適用された治療薬により影響を受ける粘膜組織に十分近い組織の炎症、感染、腫瘍又は他の状態を意味する。このような状態の例として、パピローマウイルスの子宮頸部への感染、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に関連した異形成を含む子宮頸部異形成、低グレードの扁平上皮内病変、高グレードの扁平上皮内病変、重大性が不明の異型の扁平細胞（典型的には、高リスクＨＰＶの存在を伴う）及び子宮頸部上皮内癌、アトピー性アレルギー反応、アレルギー性鼻炎、腫瘍病変及び前癌病変を含む。
【００６０】
本明細書中において、「粘膜組織」として、口内、歯肉、鼻、目、気管、気管支、胃腸、直腸、尿道、尿管、膣、子宮頸部及び子宮粘膜性膜のような、粘膜性膜が挙げられる。例えば、記載された方法により、口の病変、膣の病変又は肛門の病変を処置できる。また、ワクチンの粘膜への適用と組み合わせて本方法を使用できる。
【００６１】
一実施態様においては、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンは、子宮頸部異形成の処置のために、膣又は膣上の粘膜組織に適用しうる。他の実施態様においては、ＩＲＭは、例えば肛門管コンジロームの処置のために直腸の粘膜組織に適用しうる。
【００６２】
本発明の方法で処置される子宮頸部異形成は、好ましくは低グレードの扁平上皮内病変、高グレードの扁平上皮内病変、重大性が不明の異型の扁平細胞（典型的には、高リスクＨＰＶの存在を伴う）及び子宮頸部上皮内癌（ＣＩＮ）のような異形成状態を含む。
【００６３】
浸潤性子宮頸癌についておよそ１６，０００人の新例が、女性の予測される細胞変化を検出する精力的なスクリーニングにもかかわらず、毎年米国において診断される。また米国のみでも子宮頸癌が原因でおよそ３，０００人が死亡しており、これはおそらく、的確に原発癌性病変を検出しなかったため、２次病変へ移行したものである。
【００６４】
パパニコロー試験（パップスメア）は、炎症及び子宮頸癌を含む異形成を含む、子宮頸部の異常な細胞を検出するための方法として、１９５０年代から受け入れられてきたスクリーニング試験である。このスクリーニング試験は、先進工業国において広く適用され、子宮頸癌に関連する死亡率に多大な影響を与えてきた。異常なパップスメアは、癌組織又は前癌組織の破壊又は切除といった治療的介入の可能性を含む、病気の進行を精査するきっかけとなる。これら切除処置は、高価であり、不快であり、並びに２％〜２３％にわたる失敗率が伴い、より進行した病変についてはより高い失敗率が報告されている。失敗率は最近ではレーザー治療に伴い、およそ１０％と報告されている。
【００６５】
子宮頸癌の病原因子は、当初ヘルペスウイルスであると考えられた。しかし、この焦点は、ヘルペスウイルスから、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に次第にシフトした。最近の改良された実験方法により、ＨＰＶサブタイプの完全なスペクトルが同定可能となり、その結果、高リスク型ＨＰＶ（例えば、ＨＰＶ  １６、１８、及び頻度は低いが３１、３３、３５、４５）は、子宮頸部異形成及びそれに続く癌の排他的な誘発因子（すなわち、発癌性因子）と非常に似ているという結論に至った。正常細胞を異型細胞に形質転換するＨＰＶの機構は、高リスク遺伝型由来のＨＰＶにコードされる癌タンパク質（Ｅ６及びＥ７）が細胞の癌抑制遺伝子産物であるｐ５３及びＲｂに結合し、その結果ｐ５３及びＲｂが重要な役割を果たす細胞周期制御機構を破壊することに関連する。さらに、これらの分子的方法の適用の結果から、ＨＰＶがおよそ９３％の子宮頸癌から単離されるという疫学的観察が生まれ、これによりＨＰＶの感染が子宮頸癌のもっとも重要な誘発因子であるという、一般に受け入れられている結論をさらに強化した。
【００６６】
ＨＰＶへの曝露は、性的に活発な女性には通常のことであるが、曝露された女性のほとんどが必ず異形成又は癌になるというわけではない。持続性ウイルスＤＮＡを持つ感染した女性は、ウイルスを根絶できた女性と比較して、持続性の異形成になる率はおよそ５倍である。ＨＰＶ感染に反応する細胞性免疫の重要性は、確立された感染を除去するのに抗体を介する免疫反応は効果的ではないという観察（すなわち、浸潤性の子宮頸癌の患者は、ウイルスのＥ６及びＥ７タンパク質に対してしばしば高い抗体レベルを示すという事実によって示されている）によって、示されている。この特定の抗体反応は、増加する腫瘍負荷に直面した大規模な抗原提示をおそらく反映しているのだろう。液性免疫反応の一見重要でない効果とは逆に；細胞性免疫反応（Ｔｈ−１型反応）は、腫瘍の進行の制御に有効であるようだ。上皮内病変の退縮は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）及びマクロファージからなる細胞浸潤物により行われる。この炎症反応を起こす能力が欠如した女性及び病気の進行を経験した女性とは対照的に、この炎症性浸潤は、通常腫瘍の退縮と関連していた。さらに、細胞性免疫に欠陥のある患者は、子宮頸癌になる率が増加している一方で、抗体産生に欠陥がある患者は、同様の感受性を示さない。
【００６７】
本発明の水性ゲルは、送達装置を使用して粘膜組織に適用されうる。適切な装置は、バレル型アプリケーター、子宮頸部キャップ、ペッサリー（ｄｉａｐｈｒａｇｍ）、並びにタンポン、綿スポンジ、綿棒、フォームスポンジ及び坐剤のような固形基質を含む。
【００６８】
ある実施態様においては、装置は、水性ゲル製剤と組み合わせて使用されうる。一実施態様においては、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを含むゲルは、子宮頸部キャップ凹部に配置されえ、それから子宮頸部に直接配置される。他の実施態様においては、綿又はフォームスポンジは、本発明の水性ゲルと組み合わせて使用されうる。
【００６９】
ある実施態様においては、粘膜組織の適切な場所に装置及び／又はゲルを配置するために、アプリケーターが使用されうる。このようなアプリケーターの例として例えば、挿入型タンポン又は坐剤に通常使用される板紙製又はプラスチックチューブアプリケーターが挙げられる。好ましいアプリケーターは、バレル型アプリケーターであり、予め充填されているか、或いはゲルの容器と共に提供されて患者によって充填されうる。
【実施例】
【００７０】
以下の実施例は、ただ単に本発明の特徴、利点及びその他細目をさらに例示するという目的のために、選択されたものである。しかし、実施例がこの目的を果たす限り、使用された特定の材料及び量、及び他の条件や詳細は、本発明の範囲を不当に限定するものと解釈されるべきではないことが明確に理解されるべきである。
【００７１】
１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物の調製
【００７２】
パートＡ
アルゴン雰囲気下において、反応温度を４５．５℃以下に維持しながら、発煙硝酸（１６Ｌ）に、１，５−ナフチリジン−４−オール（１．６ｋｇ、１１モル（ｍｏｌ））を１６０グラム（ｇ）ずつ分割して継続的に攪拌しながら添加した。添加後、反応物を約４５℃にて２３分間攪拌し、２．２５時間加熱還流し、５時間還流状態で加熱し（９０℃〜９５℃）、その後一晩かけて室温まで放冷した。次いで反応混合物を７．５℃まで冷却し、反応温度を２５℃未満に維持しながら、水（１６Ｌ）をゆっくりと添加した。生じた混合物を９℃まで冷却し、温度を１５℃未満に維持しながら、混合物がｐＨ６．２に調整されるように、水酸化アンモニウム（２０Ｌ）をゆっくりと添加した。生じた混合物を１０分間攪拌して、２．８℃まで冷却した。生じた固体を、ろ過により単離し、冷水で洗浄し（２×２．２Ｌ、４℃）２５℃にて真空下で乾燥し、７５℃にて真空下で４７時間乾燥して、３−ニトロ［１，５］ナフチリジン−４−オール、１．７７８ｋｇを得た。
【００７３】
パートＢ
アルゴン雰囲気下において、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１６Ｌ）中にて、３−ニトロ［１，５］ナフチリジン−４−オール溶液（１．７７８ｋｇ、９．３０モル）を４５分間１７℃にて攪拌した。温度を約２０℃に維持しながら、オキシ塩化リン（２．０９５ｋｇ、１３．７モル）をゆっくりと添加し、次いで反応物を２０℃にて１５．２５時間攪拌した。継続的に攪拌しながら、反応混合物を水（７６Ｌ）に５５分間かけて添加して、４．５℃まで冷却した。添加の間、混合物の温度は１０℃を超えないようにし、添加の最後には、温度は９．５℃であった。添加の結果得られた混合物を、９．５℃〜２．５℃に冷却しながら１００分間攪拌した。固体が形成され、ろ過により単離し、水（２×８Ｌ）で洗浄し、吸引により乾燥して３．３ｋｇの４−クロロ−３−ニトロ［１，５］ナフチリジンを得た。
【００７４】
パートＣ
パートＢで得られた物質のジクロロメタン（２６Ｌ）溶液を３１℃まで加熱し、硫酸ナトリウム（２ｋｇ）及び硫酸マグネシウム（５００ｇ）を添加した。生じた混合物を１時間攪拌し、次いでろ過した。ろ過ケークをジクロロメタン（５Ｌ）で洗浄し、ろ液をさらに追加のジクロロメタン（８Ｌ）と共に別の容器に移した。アルゴン雰囲気下において継続的に攪拌しながら、反応温度を１７℃〜２４℃に維持しながら、イソブチルアミン（２．５Ｌ）をろ液に添加した。反応物を１３．５時間、１７℃〜２４℃の温度にて攪拌し、次いで４０℃減圧下にて、濃縮乾燥した。生じた固体を水（１８Ｌ）と混合し、生じた混合物を２０℃〜２１℃にて３時間攪拌し、次いでろ過した。単離した固体を水（３×３Ｌ）で洗浄し、真空下で吸引乾燥し、１６．５時間、７５℃にて真空下でさらに乾燥して、１．９８ｋｇのＮ４−（２−メチルプロピル）−３−ニトロ［１，５］ナフチリジン−４−アミンを得た。生成物を５等分した。
【００７５】
パートＤ
パール容器（Ｐａｒｒ  ｖｅｓｓｅｌ）を、トルエン（３．８６Ｌ）、２−プロパノール（３８６ｍＬ）、Ｎ４−（２−メチルプロピル）−３−ニトロ［１，５］ナフチリジン−４−アミン（３８６ｇ、１．５６モル）及び５％白金担持カーボン（７７．２ｇ、水中にて５０％ｗ／ｗ（重量パーセント））で満たした。容器を密封し、反応混合物を攪拌している間、窒素で３回パージした。次いで温度を１８℃〜２２℃に維持しながら、反応混合物を１３０分間水素圧下（２．１×１０５Ｐａ〜４．１×１０５Ｐａ、３０ｐｓｉ〜６０ｐｓｉ）においた。この反応を、１２０分〜２１５分の範囲の反応時間にて、反応温度は１９℃〜２４℃の範囲にて、さらに４回繰り返した。５回行った分を合わせて、硫酸マグネシウム（２ｋｇ）で処理して、９０分間静置し、次いでＣＥＬＩＴＥフィルター剤層を通してろ過した。ろ過ケークを１：１のトルエン／２−プロパノール（４Ｌ）及び続いてトルエン（１６Ｌ）で洗浄し、次いでろ液を減圧下およそ４０℃にて濃縮して、１．５９ｋｇのＮ４−（２−メチルプロピル）［１，５］ナフチリジン−３，４−ジアミンを油として得た。
パートＡ〜Ｄを同様の量にて繰り返し、さらに１．２３６ｋｇのＮ４−（２−メチルプロピル）［１，５］ナフチリジン−３，４−ジアミンを油として得た。
【００７６】
パートＥ
アルゴン雰囲気下において、反応温度を３０．３℃以下に維持しながら、ジエトキシメチルアセテート（２．２４Ｌ、１３．７モル）をＮ４−（２−メチルプロピル）［１，５］ナフチリジン−３，４−ジアミン（２．８２６ｋｇ、１３．０７モル）のトルエン（３２．５Ｌ）溶液に継続的に攪拌しながら添加した。反応混合物を４０分間３０．１℃〜３０．３℃の温度にて攪拌し、４５分間加熱還流し、１８５分間還流状態で加熱し（９２．５℃〜９８．５℃）、一晩かけて室温まで放冷した。飽和炭酸カリウム水溶液（６Ｌ）を添加し、生じた混合物を３２分間２９．３℃〜３０．３℃の温度にて攪拌し、続いて５３分間静置した。有機画分を分離して、温度５５℃〜６５℃にて７時間にわたって、減圧下で濃縮した。生じた油を、２０℃にてヘプタン（３Ｌ）とともに粉砕して固形化し、振とうしながらろ過により単離して、冷ヘプタン（５℃にて１．５リットル（Ｌ））で洗浄して、空気乾燥し、２．５９３キログラム（ｋｇ）の１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジンを得た。
【００７７】
パートＦ
クロロホルム（２．８Ｌ）中の１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン（２．５９３ｋｇ、１１．４６モル）溶液を１７．５℃〜１８℃の温度にて１時間攪拌し、次いで３−クロロペルオキシ安息香酸（７０％純粋物質が２．８６４ｇ、１１．６モル）を、およそ５分間隔で５回に分けて添加した。添加の間、反応温度は１６．４℃から２６．１℃に上昇した。添加後、反応混合物を２０時間攪拌し、反応温度は２６．１℃から１７．５℃に減少した。次いで反応混合物を３０分間、１％  ｗ／ｗ炭酸ナトリウム水溶液（４×３．２Ｌ、洗浄と洗浄の間は３０分）と共に攪拌した。有機画分を、減圧下にて４０℃で濃縮した。残渣（４．６ｋｇ）をジエチルエーテル（７．５Ｌ）で６８分間粉砕し、生じた固体を振とうしながらろ過して単離し、ジエチルエーテル（４．５Ｌ）で洗浄し、そして吸引下で乾燥して、３．３０４ｋｇの１−（２−メチルプロピル）−５−オキシド−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジンを得た。
【００７８】
パートＧ
反応温度を１１．５℃以下に維持して、パートＦ由来の物質のジクロロメタン（３４Ｌ）溶液を継続的に攪拌しながら、水酸化アンモニウム水溶液（２８％）を添加した。継続的に攪拌しながら、反応温度を１６．４℃〜２５℃に維持して、塩化ｐ−トルエンスルホニル（１．７８６ｋｇ、９．３６８モル）を分割しながら１時間かけて添加した。反応物を１４０分間攪拌し、さらに塩化ｐ−トルエンスルホニル（１８０ｇ、０．９４モル）を添加して、反応物をさらに１時間攪拌した。水（２１Ｌ）を反応混合物に添加し、生じた混合物を３０分間攪拌して、１４．５時間静置した。有機画分を分離して、４０℃にて８．２５時間かけて減圧下濃縮した。残渣（１．００４ｋｇ）を、アセトニトリル（１０．０４Ｌ）中で１２８分間還流状態で加熱した。懸濁物を２０℃まで放冷し、生じた固体をろ過により単離し、冷アセトニトリル（４℃にて１．４Ｌ）で洗浄して、空気乾燥して３６０ｇの１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを得た。残った水層画分に固体が存在するので、その固体をろ過で単離し、水（４×２０００ｍＬ）で洗浄して、吸引下で乾燥して、１．９２５ｋｇの１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを得た。２つの固体を混ぜ合わせて、９０％ｗ／ｗメタノール／水（２２．８５Ｌ）中で３１０分間還流状態で加熱し、懸濁物を一晩かけて２４．１℃まで放冷した。生じた固体をろ過で単離し、９０％ｗ／ｗ冷メタノール／水（５℃にて１．５Ｌ）で洗浄し、７５℃、１×１０５パスカル（Ｐａ）にて５日間真空オーブン中で乾燥して、１．３６８ｋｇの１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミンを薄黄色の固体として得た。
【００７９】
パートＨ
攪拌しながら、２％（ｖ／ｖ）水／イソプロピルアルコール（１００ｍＬ）でリンスした後に、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン（３００ｇ、１．２４モル）を、２％（ｖ／ｖ）水／イソプロピルアルコール（２０００ｍＬ）を含む容器に添加し、生じた混合物を８１℃に加熱した。２％（ｖ／ｖ）水／イソプロピルアルコール（６００ｍＬ）中のエタンスルホン酸（９５％を１５１ｇ、１．３７モル）溶液を、およそ２０分かけて、反応混合物にゆっくりと添加した。添加の間に、混合物は透明な溶液になり、温度は８１℃〜８２℃だった。滴下漏斗を２％ｖ／ｖ水／イソプロピルアルコール（３２０ｍＬ）でリンスした；添加の間に温度は下降したが、戻して還流した。生じた溶液を８分間還流状態で加熱し、次いで０．２℃／分の速度でゆっくりと室温まで冷却した（２３４分かけて、５７℃）。生じたスラリーをさらに、０．２℃／分の速度で０℃〜５℃の温度まで冷却した（すなわち、スラリーは１３０分かけて２１℃冷却された）。固体を、リンスと転移の補助のために、冷２％（ｖ／ｖ）水／イソプロピルアルコール（４００ｍＬ、３．５℃）を用いてろ過して単離した。固体を冷２％（ｖ／ｖ）水／イソプロピルアルコール（３００ｍＬ、３．５℃）で洗浄し、約４３℃にて１．６９×１０３Ｐａ〜１．７０×１０３Ｐａ（１６９ｍｂａｒ〜１７０ｍｂａｒ）下で２３時間４０分かけて乾燥し、４５５ｇの１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物が得られた。物質をＨａｍｉｌｔｏｎ  Ｂｅａｃｈ  １４−ｓｐｅｅｄ  ｂｌｅｎｄｅｒ中で処理して、白い「綿様の」固体、ｍｐ２２１．５℃〜２２３．４℃、Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．Ｃ１３Ｈ１５Ｎ５・Ｃ２Ｈ６Ｏ３Ｓ・Ｈ２Ｏ：Ｃ，４８．７７；Ｈ，６．２８；Ｎ，１８．９６．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４８．７０；Ｈ，６．２５；Ｎ，１８．９６を得た。この物質は、粉末Ｘ線回折解析、１３Ｃ  ＮＭＲ法、水分収着解析、熱重量分析及び示差走査熱量測定により、同定された。粉末Ｘ線回折パターン及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、図１及び２に示す。ＤＳＣ／ＴＧＡオーバーレイを図３に示し、水分収着等温線を図４に示す。
【００８０】
試験方法
以下の実施例において、血清及び膣内サイトカインのデータは、以下の一般的な試験方法を使用して得られた。
【００８１】
ラットは、実際の投薬前に２日間続けて首に首かせ（Ｌｏｍｉｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ｍａｌｏｎｅ、ＮＹ）をつけて順応させた。ラットは、薬剤の摂食を防ぐために首かせをした。次いで動物に、膣内に５０μＬのゲルを投与した。膣内投与を一度受けた単回投与ラットは、投薬後様々な時間でサンプルを回収した。以下の実施例に記載したように投薬された複数回投与ラットは、最終投薬の後様々な時間でサンプルを回収した。血液を心臓穿刺により回収した。血液を室温で簡単に凝固させ、血清は遠心により凝固物から分離した。サイトカイン濃度を解析するまで、血清は−２０℃に保存した。
【００８２】
血液の回収後、ラットを安楽死させ、次いで子宮頸部を含む膣道を取り出して、組織の重量を測定し、１．８ｍＬクライオバイアルに密封して入れて液体窒素中で急速凍結した。凍結した膣組織サンプルを、１０％ウシ胎仔血清（Ａｔｌａｓ、Ｆｏｒｔ  Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン及び２−メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ培地（Ｃｅｌｏｘ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ、ＭＮ）（完全なＲＰＭＩ）１．０ｍＬにプロテアーゼインヒビターカクテルセットＩＩＩ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を混合したものの中に懸濁した。Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅａｒｏｒ（Ｂｉｏｓｐｅｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｂａｒｔｌｅｓｖｉｌｌｅ、ＯＫ）を用いて、およそ１分間組織をホモジェナイズした。次いで組織懸濁物を冷却下で２０００ｒｐｍにて１０分間遠心して、デブリスをペレットにして、上清を回収して、サイトカイン濃度を測定するまで、−２０℃にて保存した。
【００８３】
ラット腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）用のＥＬＩＳＡキットをＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入し、ラット単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）ＥＬＩＳＡキットをＢｉｏＳｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｌ．（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、ＣＡ）から購入した。どちらのキットも製造元指示書に従って行った。ＴＮＦ及びＭＣＰ−１どちらの結果もｐｇ／ｍＬで表し、組織２００ｍｇあたりに標準化している。ＴＮＦ  ＥＬＩＳＡの感度は、標準曲線を作成するときに使用した一番低い値に基づくと、６３ｐｇ／ｍＬであり、ＭＣＰ−１  ＥＬＩＳＡでは１２ｐｇ／ｍＬである。
【００８４】
実施例１〜５
以下の表１に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール又はヘキシレングリコールのいずれかに溶解した。エタンスルホン酸水溶液をグリコール溶液に添加した。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン（薬剤）を溶液中に溶解した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した。場合によっては、カルボマー９７４Ｐ及びキサンタンガムを溶液中に分散した。
段階３：段階１の溶液を、混合しながら段階２の分散物に添加した。最終的な製剤のｐＨが４になるように、２０％トロメタミン溶液を混合物に添加した。
ゲルをアルミニウム合金チューブに充填した。
【００８５】
【表１】
2008530014.tif 000003
【００８６】
実施例３のゲルが単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表２に示し、ここで各々の値は、５動物の平均値±ＳＥＭ（標準誤差）である。
【００８７】
【表２】
2008530014.tif 000004
【００８８】
１ビヒクル（２．００％カルボマー９７４、３０．００％プロピレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、０．５８％  ２０％トロメタミン溶液、及び６７．１９％水）
【００８９】
実施例３及び５のゲルが単回及び複数回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。複数回投与された動物は、１日１回、３週間にわたって週２回（月曜日と木曜日）で合計６回、膣内投与を受けた。結果を以下の表３に示し、ここで各々の値は、５動物の平均値±ＳＥＭである。
【００９０】
【表３】
2008530014.tif 000005
【００９１】
１ビヒクル（２．００％カルボマー９７４、３０．００％プロピレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、０．５８％  ２０％トロメタミン溶液、及び６７．１９％水）
１ビヒクル（１．００％カルボマー９７４、１．００％キサンタンガム、３０．００％ヘキシレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、及び６７．１９％水）
【００９２】
実施例６〜８
以下の表４に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を溶液中に溶解した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した。カルボマー９７４Ｐを溶液中に分散した。
段階３：段階１の溶液を、混合しながら段階２の分散物に添加した。ｐＨを調整するために、２０％トロメタミン溶液を混合物に添加した。
【００９３】
【表４】
2008530014.tif 000006
【００９４】
実施例９〜１０
以下の表５に示したゲルは、実施例６〜８の一般的な方法を使用して調製した。
【００９５】
【表５】
2008530014.tif 000007
【００９６】
実施例１、３、９及び１０のゲルが、単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表６に示し、ここで各々の値は、５動物の平均値±ＳＥＭである。
【００９７】
【表６】
2008530014.tif 000008
【００９８】
１ビヒクル（２．００％カルボマー９７４、３０．００％プロピレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、０．５８％  ２０％トロメタミン溶液、及び６７．１９％水） 
【００９９】
実施例１１〜１８
実施例１１、１２及び１４のゲルは、実施例６〜８の一般的な方法を使用して調製した。実施例１３、１５、１６、１７及び１８のゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した（全量のおよそ６６重量％を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を溶液中に溶解した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した。プロピレングリコールの残りを添加した。カルボマー９７４Ｐを添加して、カルボマーが完全に水和化されるまで継続して混合した。
段階３：段階１の溶液を、混合しながら段階２の分散物に添加した。混合が終了した後に、ｐＨを測定した。
【０１００】
【表７】
2008530014.tif 000009
【０１０１】
実施例１１〜１８のゲルが単回投与の後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定されたが、以下の例外がある：組織サンプルを３０００ｒｐｍにて１０分間遠心し、全てのサンプルについてＴＮＦの場合には１：２及びＭＣＰ−１の場合には１：４希釈係数を適用し、並びにＴＮＦ  ＥＬＩＳＡの感度は、標準曲線を作成するときに使用した一番低い値に基づくと、３１ｐｇ／ｍＬであった。結果を以下の表８に示し、ここで各々の値は３動物の平均値±ＳＥＭである。   
【０１０２】
【表８】
2008530014.tif 000010
【０１０３】
１投薬前に回収した血液サンプル
ＮＤ＝決定していない
【０１０４】
実施例１５、１７及び１８のゲルが単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表９に示し、ここで各々の値は、６動物の平均値±ＳＥＭである。
【０１０５】
【表９】
2008530014.tif 000011
【０１０６】
１ビヒクル（２．５０％カルボマー９７４、６０．００％プロピレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、及び３７．２７％水）
【０１０７】
実施例１９〜２３
以下の表１０に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した（全量のおよそ６６重量％を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を溶液中に溶解した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した。プロピレングリコールの残りを添加した。場合によっては、カルボマー９７４Ｐ及びキサンタンガムを連続して添加し、増粘剤（単数及び複数）が完全に水和化するまで、継続的に混合した。
段階３：段階１の溶液を、混合しながら段階２の分散物に添加した。混合が完了した後に、ｐＨを測定した。
【０１０８】
【表１０】
2008530014.tif 000012
【０１０９】
実施例１９〜２３のゲルが単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表１１に示し、ここで各々の値は、４動物の平均値±ＳＥＭである。
【０１１０】
【表１１】
2008530014.tif 000013
【０１１１】
実施例２４〜２７
実施例２４〜２６のゲルは、実施例１９〜２３の一般的な方法を使用して調製された。実施例２７のゲルは、トロメタミンを除くこと以外は、実施例６〜８の一般的な方法を使用して調製された。
【０１１２】
【表１２】
2008530014.tif 000014
【０１１３】
ＮＤ＝決定していない
【０１１４】
実施例２４〜２７のゲルが単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表１３に示し、ここで各々の値は、６動物の平均値±ＳＥＭである。
【０１１５】
【表１３】
2008530014.tif 000015
【０１１６】
実施例２８〜３２
実施例２８〜３２のゲルは、カルボマー及びキサンタンガムの両方を段階２中に添加することを除いて、実施例６〜８の一般的な方法を使用して調製された。
【０１１７】
【表１４】
2008530014.tif 000016
【０１１８】
実施例３３
以下の表１５に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：エデト酸二ナトリウムを水に溶解した（全量のおよそ９９重量％を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）。
段階２：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を溶液中に溶解した。
段階３：カルボマー９７４Ｐ及びキサンタンガムを、混合しながら段階１の溶液に連続して添加し、増粘剤が完全に水和化するまで、継続的に混合した。
段階４：段階２の溶液を、混合しながら段階３の分散物に添加した。
段階５：トロメタミンを水中に溶解し（トロメタミン重量で２０％）、混合しながら段階４のゲルに溶液を添加した。ゲルが均一化されるまで混合を継続した。混合が完了した後に、ｐＨを測定した。
【０１１９】
【表１５】
2008530014.tif 000017
【０１２０】
実施例３４
以下の表１６に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を溶液中に溶解した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した（全量のおよそ半量を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）。
段階３：カルボマー９７４Ｐ、キサンタンガム、段階２の溶液及び水（全量のおよそ半量を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）を、混合しながら段階１の溶液に連続して添加し、増粘剤が完全に水和化するまで、継続的に混合した。
段階４：トロメタミンを水中に溶解し（トロメタミン重量で２０％）、混合しながら段階３のゲルに溶液を添加した。ゲルが均一化されるまで混合を継続した。混合が完了した後に、ｐＨを測定した。
【０１２１】
【表１６】
2008530014.tif 000018
【０１２２】
実施例３５
以下の表１７に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を混合しながら３回に分けて添加した。薬剤が完全に溶解するまで、継続的に混合した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した（全量のおよそ３分の１を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）。
段階３：カルボマー９７４Ｐ、キサンタンガム、段階２の溶液及び水（全量のおよそ３分の２を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）を、混合しながら段階１の溶液に連続して添加し、増粘剤が完全に水和化するまで、継続的に混合した。
段階４：トロメタミンを水中に溶解し（トロメタミン重量で２０％）、溶液を混合しながら段階３のゲルに添加した。ゲルが均一化されるまで混合を継続した。混合が完了した後に、ｐＨを測定した。
【０１２３】
【表１７】
2008530014.tif 000019
【０１２４】
実施例３４及び３５のゲルが単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表１８に示し、ここで各々の値は、６動物の平均値±ＳＥＭである。
【０１２５】
【表１８】
2008530014.tif 000020
【０１２６】
１ビヒクル（１．７５％カルボマー９７４、０．８８％キサンタンガム、５０．００％プロピレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、０．０５トロメタミン、及び４７．０９％水）
【０１２７】
実施例３６
以下の表１９に示したゲルは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を２回に分けて添加した点を除いて、実施例３５の方法を使用して調製した。
【０１２８】
【表１９】
2008530014.tif 000021
【０１２９】
実施例３６のゲルが単回投与後にサイトカインを誘導する能力は、先に記載した試験方法を使用して決定された。結果を以下の表２０に示し、ここで各々の値は、６動物の平均値±ＳＥＭである。
【０１３０】
【表２０】
2008530014.tif 000022
【０１３１】
１ビヒクル（１．７５％カルボマー９７４、０．８８％キサンタンガム、５０．００％プロピレングリコール、０．１５％メチルパラベン、０．０３％プロピルパラベン、０．０５％エデト酸ナトリウム、０．０５トロメタミン、及び４７．０９％水）
【０１３２】
実施例３７
以下の表２１に示したゲルは、以下の方法を使用して調製した。
段階１：パラベンをプロピレングリコール中に溶解した。次いで、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物を溶液中に溶解した。
段階２：エデト酸二ナトリウムを水中に溶解した（全量のおよそ５分の２を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）。
段階３：カルボマー９７４Ｐ、キサンタンガム、段階２の溶液及び水（全量のおよそ５分の３を、ゲル中の最終重量％を得るために使用した）を、混合しながら段階１の溶液に連続して添加し、増粘剤が完全に水和化するまで、継続的に混合した。
段階４：トロメタミンを水中に溶解し（トロメタミン重量で２０％）、混合しながら段階３のゲルに溶液を添加した。ゲルが均一化されるまで混合を継続した。混合が完了した後に、ｐＨを測定した。
【０１３３】
【表２１】
2008530014.tif 000023
【０１３４】
本明細書中に引用した特許、特許文献、及び刊行物の全開示は、あたかも各々が個々に取り込まれるかのように、その全体が参照によって取り込まれている。本発明の様々な改変及び変形は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明は、本明細書中に記載した例示的な実施態様及び実施例によって不当に限定されるべきことを意図するものではなく、又、そのような実施例や実施態様はここで記載した請求の範囲によってのみ限定されるべきであることが意図される発明の範囲にある実施例のみによって提示されるものであることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】図１は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物の結晶の代表的なＸ線回折パターンである。
【図２】図２は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物の結晶の代表的な固体１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物の結晶の代表的な水分収着等温曲線である。
【図４】図４は、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］［１，５］ナフチリジン−４−アミン  エタンスルホネート一水和物の結晶の代表的な温度記録図であり、ＤＳＣ及びＴＧＡにより得られたデータを重ね合わせて示す。
【図１】
2008530014.tif 000024
【図２】
2008530014.tif 000025
【図３】
2008530014.tif 000026
【図４】
2008530014.tif 000027
【国際調査報告】
2008530014.tif 000028
2008530014.tif 000029