(57)【要約】【化１】2008508235.tif 000133  本発明は、ヒストンデアセチラーゼ抑制酵素活性を有する、そのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ及びＹが定義された意味をもつ式（Ｉ）の新化合物、それらの調製、それらを含有する組成物並びに医薬としてのそれらの使用、を含んでなる。
2008508235.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2008508235.tif 000121
［式中、
ｎはそれぞれ値０、１又は２を有する整数であり、そしてｎが０である時は直接結合が意図され、
ｍはそれぞれ値１又は２を有する整数であり、
Ｘはそれぞれ独立にＮ又はＣＨであり、
Ｙはそれぞれ独立にＯ、Ｓ又はＮＲ４であり、ここで
Ｒ４はそれぞれ水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルメチル、フェニルＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＲ５Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここで
Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素、アミノ、Ｃ１−６アルキル又はアミノＣ１−６アルキルであり、そして
ＹがＮＲ４であり、そしてＲ２がインドリルの７−位上にある時は、Ｒ２及びＲ４は一緒になって２価の基
−（ＣＨ２）２−        （ａ−１）又は
−（ＣＨ２）３−        （ａ−２）
を形成することができ、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノスルホニルであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、Ｃ２−６アルケニル、ポリハロＣ１−６アルキル、ニトロ、フェニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−６アルキルオキシ又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシであり、そして
Ｒ２及びＲ３が隣接する炭素原子上にある時は、それらは２価の基−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を形成することができる］
の化合物、そのＮ−オキシド形態、製薬学的に許容できる付加塩及び立体化学的異性体形態。
【請求項２】
ｎがそれぞれ値０又は１を有する整数であり、Ｒ４がそれぞれ水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル又はフェニルＣ１−６アルキルであり、Ｒ１が水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はＣ１−６アルキルスルホニルであり、そしてＲ２が水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、ニトロ、ポリハロＣ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ｎがそれぞれ値１を有する整数であり、ｍがそれぞれ値１を有する整数であり、Ｘがそれぞれ独立にＮであり、Ｙがそれぞれ独立にＮＲ４であり、Ｒ４がそれぞれＣ１−６アルキルであり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素又はハロであり、そしてＲ３が水素である、請求項１及び２に記載の化合物。
【請求項４】
化合物が化合物番号１ａ、化合物番号３０、化合物番号３９及び化合物番号５０である、請求項１、２及び３に請求される化合物。
【表１】
2008508235.tif 000122
【請求項５】
製薬学的に許容できる担体及び有効成分として治療的に有効量の請求項１〜４に請求される化合物を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項６】
製薬学的に許容できる担体及び請求項１〜４に請求される化合物が均一に混合されている、請求項５に請求される製薬学的組成物を調製する方法。
【請求項７】
医薬としての使用のための請求項１〜４のいずれかに請求される化合物。
【請求項８】
増殖性疾患の処置のための医薬の製造のための請求項１〜４のいずれかに請求される化合物の使用。
【請求項９】
抗ガン剤及び請求項１〜４のいずれかに請求されるＨＤＡＣインヒビターの組み合わせ物。
【請求項１０】
ａ）式（ＩＩ）の中間体［ここでＱはテトラヒドロピラニルオキシアミノカルボニルであり、本明細書中では式（ＩＩ−ａ）の中間体と呼ばれる］を例えば、トリフルオロ酢酸のような適当な酸と反応させて、式（Ｉ）のヒドロキサム酸を与え、
【化２】
2008508235.tif 000123
ｂ）式（ＩＩ）の中間体［ここでＱはＣ１−２アルキルオキシカルボニルであり、本明細書中で式（ＩＩ−ｃ）の中間体と呼ばれる］を塩基の存在下でそして適当な溶媒中で、ヒドロキシルアミンと反応させて、式（Ｉ）のヒドロキサム酸を生成する工程、
【化３】
2008508235.tif 000124
を特徴とする、請求項１に請求される化合物を調製する方法。
【請求項１１】
式（ＩＩ）
【化４】
2008508235.tif 000125
［式中、
ｎはそれぞれ値０、１又は２を有する整数であり、そしてｎが０である時は直接結合が意図され、
ｍはそれぞれ値１又は２を有する整数であり、
Ｘはそれぞれ独立にＮ又はＣＨであり、
Ｙはそれぞれ独立にＯ、Ｓ又はＮＲ４であり、ここで
Ｒ４はそれぞれ水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルメチル、フェニルＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＲ５Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここで
Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素、アミノ、Ｃ１−６アルキル又はアミノＣ１−６アルキルであり、そして
ＹがＮＲ４であり、そしてＲ２がインドリルの７−位上にある時は、Ｒ２及びＲ４は一緒になって２価の基
−（ＣＨ２）２−        （ａ−１）又は
−（ＣＨ２）３−        （ａ−２）
を形成することができ、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノスルホニルであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、Ｃ２−６アルケニル、ポリハロＣ１−６アルキル、ニトロ、フェニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−６アルキルオキシ又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシであり、
Ｒ２及びＲ３が隣接する炭素原子上にある時は、それらは２価の基−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を形成することができ、そして
ＱはＣ１−２アルキルオキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル又はテトラヒドロピラニルオキシアミノカルボニルである］
の化合物、そのＮ−オキシド形態、製薬学的に許容できる付加塩及び立体化学的異性体形
態。
【請求項１２】
ａ）式（ＩＩ）の化合物［ここでＱはヒドロキシカルボニルであり、本明細書中では式（ＩＩ−ｂ）の化合物と呼ばれる］を、Ｎ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（ＥＤＣ）及び１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）のような適当な試薬の存在下で、式（ＩＩＩ）の中間体と反応させて、式（ＩＩ−ａ）の化合物を形成し、
【化５】
2008508235.tif 000126
ｂ）式（ＶＩ）の中間体を、適当な試薬の存在下で式（Ｖ）［ここでｔは値０又は１をもつ整数であり、そしてｔが０である時は直接結合が意図される］の適当なカルボキシアルデヒドと反応させて、式（ＩＩ−ａ）の化合物を形成し、
【化６】
2008508235.tif 000127
ｃ）式（ＩＩ）の化合物［ここでＱはメチル−又はエチルオキシカルボニル（Ｃ１−２アルキル）であり、本明細書中では式（ＩＩ−ｃ）の化合物と呼ばれる］を適当な酸性溶液又は塩基性溶液と反応させて、式（ＩＩ−ｂ）の化合物を形成し、
【化７】
2008508235.tif 000128
ｄ）式（ＩＶ）のカルボン酸エチルエステルを適当な試薬の存在下で式（Ｖ）の適当なカ
ルボキシアルデヒドと反応させて、式（ＩＩ−ｃ）の化合物を形成し、
【化８】
2008508235.tif 000129
ｅ）式（ＸＩＶ）の中間体を適当な試薬の存在下で適当な溶媒中で式（ＸＶ）の適当な中間体と反応させて、式（ＩＩ−ｃ）の化合物を形成し、
【化９】
2008508235.tif 000130
ｆ）式（Ｘ）の中間体を式（ＸＩ）［ここでＷは例えば、ハロ、例えばフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードあるいは、メチルスルホニルオキシのようなスルホニルオキシ基のような適当な離脱基である］の中間体と反応させて、式（ＩＩ−ｃ）の化合物を形成するか、
【化１０】
2008508235.tif 000131
あるいは
ｇ）式（ＸＩＩ）の中間体を式（ＸＩＩＩ）［ここでＷは前記の通りの適当な離脱基である］の中間体と反応させて、式（ＩＩ−ｃ）の化合物を形成する工程、
【化１１】
2008508235.tif 000132
を特徴とする、請求項１１に請求される化合物を調製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヒストン・デアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）抑制酵素活性を有する化合物に関する。本発明は更にそれらの調製法及びそれらを含んでなる組成物並びに、ＨＤＡＣを抑制するため、そして医薬として、例えば、癌及び乾癬のような増殖状態を抑制するための医薬として、インビトロ及びインビボの双方におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
核のヒストンは遺伝子転写及び、複製、修復、組み換え及び染色体分配のような他のＤＮＡ−鋳型形成過程の制御を引き起こす機序に不可欠な動的成分として知られている。それらはアセチル化、ホスホリル化、メチル化、ユビキチン化及びＡＤＰ−リボシル化を包含する翻訳後修飾の対象である。
【０００３】
本明細書中で「ＨＤＡＣ」と呼ばれる１種又は複数のヒストン・デアセチラーゼは核のヌクレオソームのヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３及びＨ４を包含するタンパク質のリシン残基上のアセチル修飾物の除去を触媒する酵素である。本明細書で「ＨＡＴ」と呼ばれる１種又は複数のヒストン・アセチルトランスフェラーゼと一緒に、ＨＤＡＣはヒストンのアセチル化のレベルを制御する。ヌクレオソームのヒストンのアセチル化のバランスは多数遺伝子の転写において重要な役割を果たす。ヒストンのアセチル化低下は遺伝子転写の抑制をもたらす凝集したクロマチン構造を伴い、他方、アセチル化ヒストンはより開放されたクロマチン構造及び転写の活性化を伴う。
【０００４】
１１種の構造的に関連したＨＤＡＣが記載され、２群に分類される。第Ｉ群のＨＤＡＣはＨＤＡＣ１、２、３、８及び１１からなり、他方、第ＩＩ群のＨＤＡＣはＨＤＡＣ４、５、６、７、９及び１０からなる。ＨＤＡＣの第３群のメンバーは第Ｉ群及び第ＩＩ群のＨＤＡＣと構造的に関連しない。第Ｉ／ＩＩ群のＨＤＡＣは亜鉛依存的機序により作用するが、他方、第ＩＩＩ群のＨＤＡＣはＮＡＤ−依存的である。
【０００５】
ヒストンに加えて、他のタンパク質もまた、アセチル化のための基質、とりわけｐ５３、ＧＡＴＡ−１及びＥ２Ｆのような転写因子、グルココルチコイド受容体、甲状腺受容体、エストローゲン受容体のような核受容体及びｐＲｂのような細胞周期制御タンパク質であった。タンパク質のアセチル化はｐ５３安定化のようなタンパク質の安定化、コファクターの採用及びＤＮＡ結合増加と関連付けられてきた。ｐ５３はＤＮＡ損傷のような種々のストレス信号に反応して細胞周期停止又はアポトーシスを誘発することができる腫瘍サプレッサーである。ｐ５３−誘発細胞周期の停止の主要標的はｐ２１遺伝子であるように見える。ｐ５３によるその活性化の次に、Ｇ１及びＧ２相双方における細胞周期停止をもたらすサイクリン／サイクリン−依存性キナーゼ複合体とのその結合、老化期間中のそのアップレギュレーション及び増殖している細胞核の抗原とのその相互反応のお陰でｐ２１が特定された。
【０００６】
ＨＤＡＣのインヒビターの研究はそれらが細胞周期停止、細胞の分化、アポトーシス及び形質転換表現型の逆転において重要な役割を果たすことを示す。
【０００７】
例えば、インヒビターのトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）はＧ１及びＧ２相の双方において細胞周期停止を誘起し、異なる細胞株の形質転換表現型を逆転させ、そしてフレンド白血病細胞等の分化を誘起する。ＴＳＡ（及びスベロイルアニリド・ヒドロキサム酸ＳＡＨＡ）はマウスにおいて細胞の成長を抑制し、末端の分化を誘起し、そして腫瘍形成を妨げることが報告された（非特許文献１参照）。
【０００８】
トリコスタチンＡはまた、繊維症、例えば、肝繊維症及び肝硬変の処置において有用であることが報告されている（特許文献１参照）。
【０００９】
ＨＤＡＣインヒビターに対する薬局方はリンカードメインのＨＤＡＣの亜鉛含有活性部位と相互反応する金属結合ドメイン及び活性部位の縁上の残基と相互反応する表面認識ドメイン又はキャッピング領域からなる。
【００１０】
ＨＤＡＣインヒビターはまた、ｐ２１遺伝子発現を誘導することが報告されている。これらのインヒビターによるｐ２１遺伝子の転写活性化は、ｐ２１プロモーター領域中のヒストンＨ３及びＨ４のアセチル化後のクロマチンの改造により促進される。ｐ２１のこの活性化はｐ５３依存性の方法で起り、従ってＨＤＡＣインヒビターは多数の腫瘍の特徴である変異ｐ５３遺伝子を含む細胞中で作用する。
【００１１】
更に、ＨＤＡＣインヒビターは宿主免疫反応の増加及び腫瘍脈管形成の抑制のような関節的作用をもつ可能性があり、従って原発的腫瘍の成長を抑制し、転移を妨げることができる（非特許文献２参照）。
【００１２】
以上を考慮すると、ＨＤＡＣインヒビターは変異ｐ５３遺伝子をもつ腫瘍を包含する細胞増殖性疾患又は状態の処置において大きな可能性をもつことができる。
【００１３】
特許文献２はヒストン・デアセチラーゼのインヒビターとしての２環式ヒドロキサメートを開示している（特許文献２参照）。特許文献３〜１０はなかでも、ヒストン・デアセチラーゼのインヒビターとしての置換ピラジニルピリミジニルヒドロキサム酸を開示し、特許文献８は更にＲ３０６４６５を開示している（特許文献３〜１０参照）。特許文献１１はＨＤＡＣインヒビターとしてのピペラジン結合を含んでなるカルバミン酸化合物を開示している（特許文献１１参照）。特許文献１２はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての置換ピラジニルフェニルベンズアミド化合物を開示している（特許文献１２参照）。特許文献１３はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての、アリール基とヒドロキサメート間にアルキルリンカーを含有する誘導体を開示している（特許文献１３参照）。特許文献１４はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての（ヘテロ）アリールアルケニル置換２環式ヒドロキサメートを開示している（特許文献１４参照）。特許文献１５は抗炎症及び抗腫瘍作用をもつＮ−ヒドロキシ−ベンズアミド誘導体を開示している（特許文献１５参照）。特許文献１６はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての置換アリールヒドロキサメート誘導体を開示している（特許文献１６参照）。特許文献１７はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしてのインドール、ベンズイミダゾール及びナフトイミダゾールを開示している（特許文献１７参照）。特許文献１８はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての非芳香族複素環式環系に結合されたヒドロキサメートを開示している（特許文献１８参照）。特許文献１９はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしてのヒドロキサメート誘導体を開示している（特許文献１９参照）。特許文献２０はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしてのベンズイミダゾールを開示している（特許文献２０参照）。特許文献２１及び２２はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしてのベンズアミドを開示している（特許文献２１及び２２参照）。特許文献２３はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしてのアシル尿素結合した及びスルホニル尿素結合したヒドロキサメートを開示している（特許文献２３参照）。特許文献２４はヒストンデアセチラーゼインヒビターとしてのバイアリール結合したヒドロキサメートを開示している（特許文献２４参照）。
【特許文献１】欧州特許出願第０  ８２７  ７４２号明細書（１９９８年３月１１日公開）
【特許文献２】欧州特許出願第１４７２２１６号明細書（２００３年８月１４日公開）
【特許文献３】欧州特許出願第１４８５０９９号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献４】欧州特許出願第１４８５３４８号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献５】欧州特許出願第１４８５３５３号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献６】欧州特許出願第１４８５３５４号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献７】欧州特許出願第１４８５３６４号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献８】欧州特許出願第１４８５３６５号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献９】欧州特許出願第１４８５３７０号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献１０】欧州特許出願第１４８５３７８号明細書（２００３年９月１８日公開）
【特許文献１１】欧州特許出願第１４９２５３４号明細書（２００３年１０月９日公開）
【特許文献１２】欧州特許出願第１４９５００２号明細書（２００３年１０月２３日公開）
【特許文献１３】国際公開出願第０４／００９５３６号パンフレット（２００４年１月２９日公開）
【特許文献１４】欧州特許出願第１５２５１９９号明細書（２００４年２月１２日公開）
【特許文献１５】国際公開出願第０４／０６３１４６号パンフレット（２００４年７月２９日公開）
【特許文献１６】国際公開出願第０４／０６３１６９号パンフレット（２００４年７月２９日公開）
【特許文献１７】国際公開出願第０４／０７２０４７号パンフレット（２００４年８月２６日公開）
【特許文献１８】国際公開出願第０４／０８２６３８号パンフレット（２００４年９月３０日公開）
【特許文献１９】国際公開出願第０４／０９２１１５号パンフレット（２００４年１０月２７日公開）
【特許文献２０】国際公開出願第０５／０２８４４７号パンフレット（２００５年３月３１日公開）
【特許文献２１】国際公開出願第０５／０３０７０４号パンフレット（２００５年４月７日公開）
【特許文献２２】国際公開出願第０５／０３０７０５号パンフレット（２００５年４月７日公開）
【特許文献２３】国際公開出願第０５／０４０１０１号パンフレット（２００５年５月６日公開）
【特許文献２４】国際公開出願第０５／０４０１６１号パンフレット（２００５年５月６日公開）
【非特許文献１】Ｆｉｎｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０１：１８８−１９３，１９９９
【非特許文献２】Ｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２５：２６１−３０９
【発明の開示】
【００１４】
本発明の化合物は構造、それらの薬理作用及び／又は薬理効力において先行技術と異なる。
【００１５】
解決されるべき問題は、増加された生物学的利用能及び／又はインビボの効力を有する高い酵素及び細胞活性をもつヒストンデアセチラーゼインヒビターを提供することである。
【００１６】
本発明の新化合物は前記の問題を解決する。本発明の化合物は優れたヒストンデアセチラーゼ抑制性酵素及び細胞活性を示す。それらは細胞及びインビボ双方のレベルでｐ２１遺伝子を活性化する高い能力を有する。それらは望ましい薬物動態学的プロファイル及び、更に広範な安全領域を許す不都合な薬剤−薬剤相互作用の危険性を減少させる、Ｐ４５０酵素に対する低い親和性を有する。
【００１７】
本発明の化合物の有利な特徴は代謝の安定性、溶解度及び／又はｐ２１の誘発能力である。更にとりわけ本発明の化合物はラット肝細胞における半減期を増加し、水溶液中の溶解度／安定性を増加し、そして／又はインビボのｐ２１プロモーター誘発能力を高めた。
【００１８】
本発明は式（Ｉ）
【００１９】
【化１】
2008508235.tif 000003
【００２０】
［式中、
ｎはそれぞれ値０、１又は２を有する整数であり、そしてｎが０である時は直接結合が意図され、
ｍはそれぞれ値１又は２を有する整数であり、
Ｘはそれぞれ独立にＮ又はＣＨであり、
Ｙはそれぞれ独立にＯ、Ｓ又はＮＲ４であり、ここで
Ｒ４はそれぞれ水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルメチル、フェニルＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＲ５Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここで
Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素、アミノ、Ｃ１−６アルキル又はアミノＣ１−６アルキルであり、そして
ＹがＮＲ４であり、そしてＲ２がインドリルの７−位上にある時は、Ｒ２及びＲ４は一緒になって２価の基
−（ＣＨ２）２−        （ａ−１）又は
−（ＣＨ２）３−        （ａ−２）
を形成することができ、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノスルホニルであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、Ｃ２−６アルケニル、ポリハロＣ１−６アルキル、ニトロ、フェニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−６アルキルオキシ又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシであり、そして
Ｒ２及びＲ３が隣接する炭素原子上にある時は、それらは２価の基−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を形成することができる］
の化合物、それらのＮ−オキシド形態、製薬学的に許容できる付加塩及び立体化学的異性体形態に関する。
【００２１】
置換基から２環式環系中に引かれた線は、結合が２環式環系の任意の適当な環原子に結合されることができることを示す。
【００２２】
用語「ヒストンデアセチラーゼインヒビター」又は「ヒストンデアセチラーゼのインヒビター」はヒストンデアセチラーゼと相互反応し、その活性、より特にはその酵素活性を抑制することができる化合物を特定するために使用される。ヒストンデアセチラーゼの酵素活性を抑制することはヒストンからアセチル基を除去するためのヒストンデアセチラーゼの能力を減少させることを意味する。このような抑制は好ましくは、特異的である、すなわちヒストンデアセチラーゼインヒビターは、何か他の無関係の生物学的効果をもたらすために必要なインヒビターの濃度より低い濃度でヒストンからアセチル基を除去するためのヒストンデアセチラーゼの能力を減少させる。
【００２３】
前記の定義及び以下で使用されるハロはフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを包含し、Ｃ１−２アルキルは、例えばメチル又はエチルのような１個又は２個の炭素原子を有する直鎖の飽和炭化水素基を定義し、Ｃ１−６アルキルはＣ１−２アルキル及び、例えばプロピル、ブチル、１−メチルエチル、２−メチルプロピル、ペンチル、２−メチル−ブチル、ヘキシル、２−メチルペンチル等のような３〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖の飽和炭化水素基を定義し、そしてポリハロＣ１−６アルキルは３個の同一又は異なるハロ置換基を含有するＣ１−６アルキル、例えば、トリフルオロメチルを定義し、Ｃ２−６アルケニルは、例えばエテニル、２−プロペニル、３−ブテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、３−メチル−２−ブテニル、等のような、１個の二重結合を含有しそして２〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖の炭化水素基を定義し、Ｃ３−６シクロアルキルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、等のような３〜６個の炭素を有する環式炭化水素基を包含する。
【００２４】
製薬学的に許容できる付加塩は製薬学的に許容できる酸付加塩及び製薬学的許容できる塩基付加塩を包含する。前記の製薬学的に許容できる酸付加塩は、式（Ｉ）の化合物が形成することができる治療的に有効な無毒の酸付加塩形態を含んでなることを意味する。塩基性特性を有する式（Ｉ）の化合物は適当な酸で該塩基形態を処理することによりそれらの製薬学的に許容できる酸付加塩に転化させることができる。適当な酸は、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸、臭化水素酸；硫酸；硝酸；リン酸等のような無機酸；又は、例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、蓚酸、マロン酸、コハク酸（すなわちブタンジオン酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノ−サリチル酸、パモエ酸、等の酸のような有機酸を含んでなる。酸性の特性を有する式（Ｉ）の化合物は適当な有機又は無機塩基で該酸形態を処理することによりそれらの製薬学的に許容できる塩基形態の塩に転化させることができる。適当な塩基塩形態は、例えばアンモニウム塩、アルカリ及びアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩等、有機塩基との塩、例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩並びに、例えばアルギニン、リシン等のようなアミノ酸との塩を含んでなる。用語の「酸又は塩基付加塩」はまた、式（Ｉ）の化合物が形成することができる水和物及び溶媒付加物形態を含んでなる。このような形態の例は例えば、水和物、アルコラート等である。
【００２５】
本明細書で使用される用語の「式（Ｉ）の化合物の立体化学的異性体形態」は、式（Ｉ）の化合物が有することができる、互換性ではない、同一配列の結合により結合された同一原子からなり、しかし異なる三次元構造を有する、すべての可能な化合物を表わす。別に言及又は指摘されない限り、化合物の化学名は、該化合物が有することができるすべての可能な立体化学的異性体形態の混合物を包含する。該混合物は該化合物の基礎的分子構造のすべてのジアステレオマー及び／又はエナンチオマーを含有することができる。純粋な形態又は相互との混合物双方の式（Ｉ）の化合物のすべての立体化学的異性体形態が本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物のＮ−オキシド形態は、１個又は数個の窒素原子がいわゆるＮ−オキシドに酸化されている式（Ｉ）の化合物、特には、１個又は数個のピペリジン−、ピペラジン又はピリダジニル−窒素がＮ−酸化されているＮ−オキシドを含んでなることを意味する。
【００２７】
式（Ｉ）の幾つかの化合物はまた、それらの互変異性体形態で存在することができる。このような形態は前記の式中に明白には示されていないが、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００２８】
以後使用される場合はいつも、用語の「式（Ｉ）の化合物」はまた、製薬学的に許容できる付加塩及びすべての立体異性体形態を包含することを意味する。
【００２９】
本明細書で使用される用語「ヒストンデアセチラーゼ」及び「ＨＤＡＣ」はヒストンのＮ−末端におけるリシン残基のε−アミノ基からアセチル基を除去する酵素の任意の１つの族を表わすことが意図される。文脈により別記されない限り、用語［ヒストン」は任意の種からのＨ１、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４及びＨ５を包含する任意のヒストンタンパク質を表わすことを意味する。ヒトのＨＤＡＣタンパク質又は遺伝子産物はそれらに限定はされないが、ＨＤＡＣ−１、ＨＤＡＣ−２、ＨＤＡＣ−３、ＨＤＡＣ−４、ＨＤＡＣ−５，ＨＤＡＣ−６、ＨＤＡＣ−７、ＨＤＡＣ−８、ＨＤＡＣ−９、ＨＤＡＣ−１０及びＨＤＡＣ−１１を包含する。ヒストンデアセチラーゼはまた、原生動物又はカビ・真菌源から誘導することができる。
【００３０】
興味深い化合物の第１の群は１つ又は複数の以下の制約が適用される式（Ｉ）の化合物からなる：
ａ）Ｒ４がそれぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルメチル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＲ５Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（ＣＨ３）２であり、
ｂ）Ｒ１が水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルホニル又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノスルホニルであるか、あるいは
ｃ）Ｒ３が水素である。
【００３１】
興味深い化合物の第２の群は１つ又は複数の以下の制約が適用される式（Ｉ）の化合物からなる：
ａ）ｎがそれぞれ値０又は１を有する整数であり、
ｂ）Ｘがそれぞれ独立にＮであり、
ｃ）Ｒ４がそれぞれ水素又はＣ１−６アルキルであり、
ｄ）Ｒ１が水素、Ｃ１−６アルキル又はヒドロキシＣ１−６アルキルであるか、
あるいは
ｅ）Ｒ２が水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシである。
【００３２】
興味深い化合物の第３の群は１つ又は複数の以下の制約が適用される式（Ｉ）の化合物からなる：
ａ）ｎがそれぞれ値０又は１を有する整数であり、
ｂ）Ｒ４がそれぞれ、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル又はフェニルＣ１−６アルキルであり、
ｃ）Ｒ１が水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はＣ１−６アルキルスルホニルであるか、あるいは
ｄ）Ｒ２が水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、ニトロ又はＣ１−６アルキルオキシである。
【００３３】
興味深い化合物の第４の群は１つ又は複数の以下の制約が適用される式（Ｉ）の化合物からなる：
ａ）ｎがそれぞれ値０又は１を有する整数であり、
ｂ）ｍがそれぞれ値１を有する整数であり、
ｃ）Ｒ４がそれぞれ、水素、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル又はフェニルＣ１−６アルキルであり、
ｃ）Ｒ１が水素、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はＣ１−６アルキルスルホニルであり、
ｄ）Ｒ２が水素、ハロ、シアノ、ニトロ又はＣ１−６アルキルオキシであるか、あるいはｅ）Ｒ３がＣ１−６アルキルオキシであるか、あるいは
ｆ）Ｒ２及びＲ３が隣接した炭素原子上にある時は、それらが２価の基−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を形成することができる。
【００３４】
興味深い化合物の第５の群は１つ又は複数の以下の制約が適用される式（Ｉ）の化合物からなる：
ａ）ｎがそれぞれ値１を有する整数であり、
ｂ）ｍがそれぞれ値１を有する整数であり、
ｃ）Ｘがそれぞれ独立にＮであり、
ｄ）Ｙがそれぞれ独立にＮＲ４であり、
ｅ）Ｒ４がそれぞれＣ１−６アルキルであり、
ｆ）Ｒ１が水素であり、
ｇ）Ｒ２が水素又はハロであるか、あるいは
ｈ）Ｒ３が水素である。
【００３５】
好ましい化合物の群は、ｎがそれぞれ値０又は１をもつ整数であり、Ｒ４がそれぞれ水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル又はフェニルＣ１−６アルキルであり、Ｒ１が水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はＣ１−６アルキルスルホニルであり、そしてＲ２が水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、ニトロ、ポリハロＣ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシである、式（Ｉ）の化合物からなる。
【００３６】
より好ましい化合物の群は、ｎがそれぞれ値１をもつ整数であり、ｍがそれぞれ値１をもつ整数であり、Ｘがそれぞれ独立にＮであり、Ｙがそれぞれ独立にＮＲ４であり、Ｒ４がそれぞれＣ１−６アルキルであり、Ｒ１が水素であり、そしてＲ２が水素又はハロであり、そしてＲ３が水素である、式（Ｉ）の化合物からなる。
【００３７】
もっとも好ましい化合物は化合物Ｎｏ．１ａ、化合物Ｎｏ．３０、化合物Ｎｏ．３９及び化合物Ｎｏ．５０である。
【００３８】
【表１】
2008508235.tif 000004
【００３９】
式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物、それらの製薬学的に許容できる塩及びＮ−オキシド及び立体化学的異性体形態は従来の方法で調製することができる。出発物質及び幾つかの中間体は既知の化合物であり、そして市販されているか又は当該技術分野で一般に知られた又は特許出願物、欧州特許出願第１４８５０９９号、第１４８５３４８号、第１４８５３５３号、第１４８５３５４号、第１４８５３６４号、第１４８５３６５号、第１４８５３７０号及び第１４８５３７８号明細書に記載された従来の反応法に従って調製することができる。幾つかの調製法は更に詳細に以下に記載されるであろう。式（Ｉ）の最終化合物を得る他の方法は実施例中に記載される。
【００４０】
ａ）式（Ｉ）のヒドロキサム酸は式（ＩＩ）の中間体［ここでＱはテトラヒドロピラニルオキシアミノカルボニルであり、本明細書では式（ＩＩ−ａ）の中間体と呼ばれる］を、例えばトリフルオロ酢酸のような適当な酸と反応させることにより調製することができる。該反応は、例えばメタノール又はジクロロメタンのような適当な溶媒中で実施される。
【００４１】
【化２】
2008508235.tif 000005
【００４２】
ｂ）あるいはまた、式（Ｉ）のヒドロキサム酸は式（ＩＩ）の中間体［ここでＱはＣ１−２アルキルオキシカルボニルであり、本明細書では式（ＩＩ−ｃ）の中間体と呼ばれる］を、例えば水酸化ナトリウムのような塩基の存在下でヒドロキシルアミンと反応させることにより調製することができる。該反応は、例えばメタノールのような適当な溶媒中で実施される。
【００４３】
【化３】
2008508235.tif 000006
【００４４】
ｃ）式（Ｉ）の化合物はまた、当該技術分野で知られた反応又は官能基交換（ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）により相互に転化させることができる。多数のこのような交換はすでに前述されている。他の例は対応するカルボン酸又はアルコールへのカルボン酸エステルの加水分解、対応するカルボン酸又はアミンへのアミドの加水分解、対応するアミドへのニトリルの加水分解であり、イミダゾール又はフェニル上のアミノ基は既知のジアゾ化反応及びその後の水素によるジアゾ基の置換により水素により置換することができ、アルコールはエステル及びエーテルに転化させることができ、第一級アミンは第二級又は第三級アミンに転化させることができ、二重結合は対応する一重結合に水素化することができ、フェニル基上のヨードラジカルは適当なパラジウム触媒の存在下での一酸化炭素挿入によりエステル基に転化させることができる。
【００４５】
本発明はまた式（ＩＩ）
【００４６】
【化４】
2008508235.tif 000007
【００４７】
［式中、
ｎはそれぞれ値０、１又は２を有する整数であり、そしてｎが０である時は直接結合が意図され、
ｍはそれぞれ値１又は２を有する整数であり、
Ｘはそれぞれ独立にＮ又はＣＨであり、
Ｙはそれぞれ独立にＯ、Ｓ又はＮＲ４であり、ここで
Ｒ４はそれぞれ水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキルメチル、フェニルＣ１−６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＲ５Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここで
Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素、アミノ、Ｃ１−６アルキル又はアミノＣ１−６アルキルであり、そして
ＹがＮＲ４であり、そしてＲ２がインドリルの７−位上にある時は、Ｒ２及びＲ４は一緒になって２価の基
−（ＣＨ２）２−        （ａ−１）又は
−（ＣＨ２）３−        （ａ−２）
を形成することができ、
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスル
ホニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノスルホニルであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、シアノ、Ｃ２−６アルケニル、ポリハロＣ１−６アルキル、ニトロ、フェニル、Ｃ１−６アルキルカルボニル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−６アルキルオキシ又はモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルオキシであり、
Ｒ２及びＲ３が隣接する炭素原子上にある時は、それらは２価の基−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を形成することができ、そして
ＱはＣ１−２アルキルオキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル又はテトラヒドロピラニルオキシアミノカルボニルである］
の中間体、それらのＮ−オキシド形態、製薬学的に許容できる付加塩及び立体化学的異性形態に関する。
【００４８】
興味深い、好ましい、より好ましいそしてもっとも好ましい化合物の群は式（Ｉ）の化合物に対して定義された群に従って、式（ＩＩ）の化合物に対して定義することができる。
【００４９】
ａ）式（ＩＩ−ａ）の中間体は式（ＩＩＩ）の中間体をＮ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（ＥＤＣ）及び１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）のような適当な試薬の存在下で式（ＩＩ）の中間体［ここでＱはヒドロキシカルボニルであり、本明細書では式（ＩＩ−ｂ）の中間体と呼ばれる］と反応させることにより調製することができる。反応はジクロロメタン及びテトラヒドロフランの混合物のような適当な溶媒中で、トリエチルアミンのような塩基の存在下で実施することができる。
【００５０】
【化５】
2008508235.tif 000008
【００５１】
ｂ）式（ＩＩ−ａ）の中間体はまた、式（ＶＩ）の中間体を、ジクロロエタン又はメタノールのような適当な溶媒中で、ホウ水素化ナトリウムのような適当な試薬の存在下で、式（Ｖ）［ここでｔは値０又は１をもつ整数であり、そしてｔが０である時は直接結合が意図される］の適当なカルボキシアルデヒドと反応させることにより調製することができる。
【００５２】
【化６】
2008508235.tif 000009
【００５３】
ｃ）式（ＩＩ−ｂ）の中間体は、式（ＩＩ）の中間体［ここでＱはメチル−又はエチルオキシカルボニル（Ｃ１−２アルキル）であり、本明細書中では式（ＩＩ−ｃ）の中間体と呼ばれる］を、適当な溶媒、例えばエタノール又はプロパノールのようなアルコール中で、適当な酸性溶液、例えば塩酸、又は塩基性溶液、例えば臭化水素又は水酸化ナトリウムと反応させることにより調製することができる。
【００５４】
【化７】
2008508235.tif 000010
【００５５】
ｄ）式（ＩＩ−ｃ）の中間体は式（ＩＶ）のカルボン酸エチルエステルを、アルコール、例えばメタノールのような適当な溶媒中で、ホウ水素化ナトリウム、例えばテトラヒドロホウ酸ナトリウムのような適当な試薬の存在下で式（Ｖ）の適当なカルボキシアルデヒドと反応させることにより調製することができる。
【００５６】
【化８】
2008508235.tif 000011
【００５７】
ｅ）同様な方法で、式（ＩＩ−ｃ）の中間体は式（ＸＩＶ）の中間体を、アルコール、例
えばメタノールのような適当な溶媒中で、ホウ水素化ナトリウム、例えばテトラヒドロホウ酸ナトリウムのような適当な試薬の存在下で、式（ＸＶ）の適当な中間体と反応させることにより調製することができる。
【００５８】
【化９】
2008508235.tif 000012
【００５９】
ｆ）式（ＩＩ−ｃ）の中間体はまた、式（Ｘ）の中間体を式（ＸＩ）［ここでＷは、例えばハロ、例えばフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードあるいはメチルスルホニルオキシ、４−メチルフェニルスルホニルオキシ等のようなスルホニルオキシ基のような適当な離脱基である］の中間体と反応させることにより調製することができる。反応は、例えばアルコール（例えばメタノール、エタノール、２−メトキシ−エタノール、プロパノール、ブタノール等）、エーテル（例えば４，４−ジオキサン、１，１’−オキシビスプロパン等）、ケトン（例えば４−メチル−２−ペンタノン）又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ニトロベンゼン、アセトニトリル等のような反応不活性溶媒中で実施することができる。反応過程中に放出される酸を取り上げるためには、例えばアルカリ又はアルカリ土類金属炭酸塩又は炭酸水素塩（例えばトリエチルアミン又は炭酸ナトリウム）のような適当な塩基の添加を利用することができる。反応を促進するために少量の適当な金属ヨウ化物（例えばナトリウム又はカリウムヨウ化物）を添加することができる。撹拌は反応速度を高めることができる。反応は好都合には室温と反応混合物の還流温度の間の範囲の温度で実施することができ、そして所望される場合は、高められた圧力下で反応を実施することができる。
【００６０】
【化１０】
2008508235.tif 000013
【００６１】
ｇ）同様な方法で、式（ＩＩ−ｃ）の中間体は式（ＸＩＩ）の中間体を式（ＸＩＩＩ）［ここでＷは前記のような適当な離脱基である］の中間体と反応させることにより調製することができる。
【００６２】
【化１１】
2008508235.tif 000014
【００６３】
式（ＶＩ）の中間体は式（ＶＩＩ）の中間体を適当な溶媒、例えばジクロロメタン中でピペリジンと反応させることにより調製することができる。
【００６４】
【化１２】
2008508235.tif 000015
【００６５】
式（ＶＩＩ）の中間体は式（ＶＩＩＩ）の中間体を、Ｎ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸（ＥＤＣ）及び１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）のような適当な試薬の存在下で、式（ＩＩＩ）の中間体と反応させることにより調製することができる。反応はジクロロメタン及びテトラヒドロフランの混合物のような適当な溶媒中で、トリエチルアミンのような塩基の存在下で実施することができる。
【００６６】
【化１３】
2008508235.tif 000016
【００６７】
式（ＶＩＩＩ）の中間体は式（ＩＸ）の中間体を、テトラヒドロフランのような適当な溶媒中で水酸化ナトリウムの存在下で式（ＩＶ）の中間体［ここでＲ１は水素であり、本明細書では式（ＩＶ−ａ）と呼ばれる］と反応させ、次に塩酸で中和し、炭酸ナトリウム
を添加することにより調製することができる。
【００６８】
【化１４】
2008508235.tif 000017
【００６９】
式（Ｉ）の化合物及び幾つかの中間体はそれらの構造中に少なくとも１つのステレオジェン中心をもつことができる。このステレオジェン中心はＲ又はＳ形態で存在することができる。
【００７０】
前記の方法で調製された式（Ｉ）の化合物は概括的に、当該技術分野で知られた分割方法に従って相互から分離することができるエナンチオマーのラセミ混合物である。式（Ｉ）のラセミ化合物は適当なキラル酸との反応により対応するジアステレオマー塩形態に転化させることができる。該ジアステレオマー塩形態はその後に例えば、選択的又は分別結晶化により分離され、エナンチオマーはそこでアルカリにより放出される。式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー形態を分離する代わりの方法はキラル固定相を使用する液体クロマトグラフィーを伴う。該純粋な立体化学的異性体形態はまた、反応が立体特異的に起ると仮定すると、適当な出発物質の、対応する純粋な立体化学的異性体形態から誘導することができる。好ましくは、特異的立体異性体が所望される場合は、該化合物は立体特異的調製法により合成されるであろう。これらの方法は有利には、エナンチオマーとして純粋な出発物質を使用するであろう。
【００７１】
式（Ｉ）の化合物、それらの製薬学的に許容できる酸付加塩及び立体異性体形態はそれらがヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）抑制効果を有する点で貴重な薬理学的特性を有する。
【００７２】
本発明は有効量の本発明の化合物を投与することにより形質転換細胞を包含する細胞の異常な成長を抑制する方法を提供する。細胞の異常な成長は正常な制御機構と独立した細胞成長（例えば、接触阻止の喪失）を意味する。これは癌細胞の成長停止、末端の分化及び／又はアポトーシスを引き起こすことにより直接に、そして腫瘍の新脈管形成を抑制することにより間接的の双方による腫瘍の成長の抑制を包含する。
【００７３】
本発明はまた、このような処置を要する被験者、例えば哺乳動物（そしてより特にはヒト）に、有効量の本発明の化合物を投与することにより、腫瘍の成長を抑制する方法を提供する。とりわけ、本発明は有効量の本発明の化合物の投与による腫瘍の成長の抑制方法を提供する。それらに限定はされないが、抑制することができる腫瘍の例は、肺ガン（例えば、腺癌及び／又は非小細胞肺ガンを包含する）、膵臓癌（例えば外分泌膵臓癌のような膵臓癌）、大腸癌（例えば結腸腺癌及び結腸腺腫のような結腸直腸腺癌）、進行した疾
患を包含する前立腺癌、リンパ系の血球無形成腫瘍（例えば急性リンパ性白血病、Ｂ−細胞リンパ腫、ブルキットリンパ腫）、骨髄性白血病（例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））、甲状腺濾胞腺癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、間葉性腫瘍（例えば繊維肉腫及び横紋筋肉腫）、メラノーマ、奇形芽腫、神経芽細胞腫、神経膠原腫、皮膚の良性腫瘍（例えば、角化棘細胞腫）、乳癌（例えば、進行乳癌）、腎臓癌、卵巣癌、膀胱癌及び表皮癌である。
【００７４】
本発明に従う化合物は他の治療目的、例えば、
ａ）癌を処置するための腫瘍の照射前、期間中又は後に、本発明に従う化合物を投与することによる放射線治療に対する腫瘍の鋭敏化、
ｂ）リウマチ様関節炎、変形性関節炎、若年性関節炎、痛風、多発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎及び全身性紅斑性狼瘡のような関節症及び骨病理学的状態を処置すること、
ｃ）血管増殖障害、アテローム性動脈硬化症及び再狭窄を包含する平滑筋細胞増殖を抑制すること、
ｄ）潰瘍性大腸炎、クローン病、アレルギー性鼻炎、移植片対宿主病、結膜炎、喘息、ＡＲＤＳ、ベーチェット病、移植拒絶反応、蕁麻疹、アレルギー性皮膚炎、円形脱毛症、強皮症、発疹、湿疹、皮膚筋炎、にきび、糖尿病、全身性紅斑性狼瘡、川崎病、多発性硬化症、気腫、嚢胞性繊維症及び慢性気管支炎のような炎症性状態及び皮膚の状態を処置すること、
ｅ）子宮内膜症、子宮筋腫、機能不全性子宮出血及び内膜肥厚を処置すること、
ｆ）網膜及び脈絡膜血管に影響する血管疾患を包含する眼科血管新生を処置すること、
ｇ）心臓機能不全を処置すること、
ｈ）ＨＩＶ感染症の処置のような免疫抑制状態を抑制すること、
ｉ）腎機能不全を処置すること、
ｊ）内分泌障害を抑制すること、
ｋ）糖新生機能不全を抑制すること、
ｌ）神経病理学、例えばパーキンソン病又は、認識障害をもたらす神経病理学、例えばアルツハイマー病又はポリグルタミン関連ニューロン疾患を処置すること、
ｍ）精神障害、例えば精神分裂症、双極性障害、鬱病、心配症及び精神病を処置すること、
ｎ）神経筋肉病理、例えば筋萎縮性側索硬化症を抑制すること、
ｏ）脊髄筋萎縮症を処置すること、
ｐ）遺伝子の発現を強化することにより処置に有効な他の病理的状態を処置すること、
ｑ）遺伝子治療を促進すること、
ｒ）脂質生成を抑制すること、
ｓ）マラリアのような寄生虫病を処置すること、
のために使用することができる。
【００７５】
従って、本発明は医薬としての使用のための式（Ｉ）の化合物並びに、１種又は複数の前記の状態を処置するための医薬の製造のための式（Ｉ）のこれらの化合物の使用を開示する。
【００７６】
式（Ｉ）の化合物、それらの製薬学的に許容できる酸付加塩及び立体異性体形態は標識（ｌａｂｅｌｌｅｄ）化合物とＨＤＡＣ間の複合物の形成を検出又は測定する工程を含んでなる、生体サンプル中のＨＤＡＣを検出又は特定するために使用することができるという貴重な診断特性をもつことができる。
【００７７】
検出又は特定法は放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質、等のような標識物質で標識される化合物を使用することができる。放射性同位元素の例は１２５Ｉ、１３１Ｉ、
３Ｈ及び１４Ｃを包含する。酵素は通常、順次検出可能な反応を触媒する適当な基質の共役により検出可能にさせる。それらの例は、例えばベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ及びリンゴ酸塩脱水素酵素、好ましくは、ホースラディッシュのペルオキシダーゼを包含する。発光物質は、例えばルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、エクオリン及びルシフェラーゼを包含する。
【００７８】
生体サンプルは体組織又は体液と定義することができる。体液の例は脳脊髄液、血液、血漿、血清、尿、精液、唾液等である。
【００７９】
それらの有用な薬理学的特性を考慮すると、主題化合物は投与目的に対して種々の製薬学的形態に調製することができる。
【００８０】
本発明の製薬学的組成物を調製するためには、有効成分として、有効量の、塩基又は酸付加塩形態の特定の化合物を、製薬学的に許容できる担体と均一な混合物に合わせ、その担体は投与のために所望される調製形態に応じて広範な形態を採ることができる。これらの製薬学的組成物は望ましくは、好ましくは、経口、直腸内、皮下又は非経口注射による投与に適した単位投与形態にある。例えば、経口投与形態の組成物を調製する際には、懸濁物、シロップ、エリキシル及び液剤のような経口液体調製物の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコール等；あるいは散剤、ピル、カプセル及び錠剤の場合にはデンプン、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のような固形の担体、のような任意の通常の製薬学的媒質を使用することができる。
【００８１】
それらの投与の容易性のために、その場合は固形の製薬学的担体が明らかに使用される錠剤及びカプセルが最も有利な経口投与単位形態を表わす。非経口組成物に対しては、例えば、溶解度を補助するための他の成分を包含することができるが、担体は通常、少なくとも大部分は滅菌水を包んでなるであろう。例えば、担体が生理食塩水、ブドウ糖溶液又は生理食塩水とブドウ糖液の混合物を含んでなる注射用液を調製することができる。適当な液体の担体、懸濁剤等を使用することができる注射用懸濁液もまた調製することができる。皮下投与に適した組成物中では、担体は場合により、皮膚に有意な悪影響を引き起こさない、少量の任意の性状の適当な添加剤と場合により組み合わせた、透過性促進剤及び／又は適当な湿潤化剤を含んでなる。該添加剤は皮膚への投与を容易にし、そして／又は所望の組成物を調製する補助になることができる。これらの組成物は種々の方法で、例えば経皮パッチとして、スポット−オン剤として又は軟膏として投与することができる。
【００８２】
投与の容易性及び投薬の均一性のためには、前記の製薬学的組成物を投与単位形態に調製することが特に有利である。本明細書及び請求の範囲で使用される投与単位形態は、各単位が要求される製薬学的担体と一緒に所望の治療効果をもたらすように計算された、前以て決定された量の有効成分を含有する、単位投与物として適した、物理的に分割された単位を意味する。このような投与単位形態の例は、錠剤（刻み目付き又はコート錠を包含する）、カプセル、ピル、散剤分包、ウエファー、注射液又は懸濁液、小匙１杯、大匙１杯等、及びそれらの隔離された複数物である。
【００８３】
当業者は以下に提示される試験結果から有効量を容易に決定することができるであろう。概括的に治療的有効量は０．００５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、そしてとりわけ０．００５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと推定される。必要量を１日全体で適当な間隔を空けて２、３、４回又はそれ以上の分割量として投与することが適当かも知れない。該分割量は例えば、単位投与形態当たり０．５〜５００ｍｇ、そしてとりわけ１０ｍｇ〜５００ｍｇの有効成分を含有する単位投与形態として調製することができる。
【００８４】
本発明のもう１つのアスペクトとして、特に医薬としての使用のために、より特には、癌又は関連疾患の処置において、もう１種の抗ガン剤とのＨＤＡＣ−インヒビターの組み合わせ物が想定される。
【００８５】
前記の状態の処置のために本発明の化合物は有利には、１種又は複数の他の医薬と、より特には他の抗ガン剤と組み合わせて使用することができる。抗ガン剤の例は：
−白金配位化合物、例えばシスプラチン、カルボプラチン又はオキサリルプラチン、
−タキサン化合物、例えばパクリタキセル又はドセタキセル、
−カンプトテシン化合物のようなトポイソメラーゼＩインヒビター、例えばイリノテカン又はトポテカン、
−抗腫瘍ポドフィロトキシン誘導体のようなトポイソメラーゼＩＩインヒビター、例えばエトポシド又はテニポシド、
−抗腫瘍ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン又はビノレルビン、
−抗腫瘍ヌクレオシド誘導体、例えば５−フルオロウラシル、ゲムシタビン又はカペシタビン、
−ナイトロジェン・マスタード又はニトロソウレアのようなアルキル化剤、例えばシクロホスホアミド、クロロアンブシル、カルムスチン又はロムスチン、
−抗腫瘍アントラサイクリン誘導体、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン又はミトキサントロン、
−ＨＥＲ２抗体、例えばトラスツズマブ（ｔｒａｎｓｔｕｚｕｍａｂ）、
−エストローゲン受容体アンタゴニスト又は選択的エストローゲン受容体モジュレーター、例えばタモキシフェン、トレミフェン、ドロルオキシフェン、ファスロデックス又はラルオキシフェン、
−エキセメスタン、アナストロゾール、レトラゾール及びヴォロゾールのようなアロマターゼインヒビター、
−レチノイド、ビタミンＤ及びレチノイン酸代謝遮断剤（ＲＡＭＢＡ）のような分化剤、例えばアキュテーン、
−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼインヒビター、例えばアザシチジン、
−キナーゼインヒビター、例えばフラボペリドール、イマチニブメシレート又はゲフィチニブ、
−ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、
−他のＨＤＡＣインヒビター、
−ユビキチン−プロテアソーム経路のインヒビター、例えばヴェルケード（Ｖｅｌｃａｄｅ）、あるいは
−ヨンデリス（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ）、
である。
【００８６】
用語の「白金配位化合物」は本明細書ではイオンの形態の白金を提供する、任意の腫瘍細胞成長抑制白金配位化合物を表わすために使用される。
【００８７】
用語の「タキサン化合物」はタキサン環系を有し、特定の種のイチイ（Ｔａｘｕｓ）の木からの抽出物に関連した、又はそれから誘導される１群の化合物を示す。
【００８８】
用語「トポイソメラーゼインヒビター」は真核細胞中でＤＮＡ位相を変えることができる酵素を示すために使用される。それらは重要な細胞機能及び細胞増殖にとって重要である。真核細胞には２群、すなわちＩ型及びＩＩ型のトポイソメラーゼが存在する。トポイソメラーゼＩは約１００，０００の分子量のモノマー酵素である。該酵素はＤＮＡに結合し、一過性の一本鎖の破壊を導入し、２本螺旋をほどき（又はそれをほどかせ）そしてその後にＤＮＡストランドから分離する前に破壊を再シールする。トポイソメラーゼＩＩは
ＤＮＡストランドの破壊の誘導又はフリーラジカルの形成を伴う類似の作用機序を有する。
【００８９】
用語の「カンプトテシン化合物」は中国の木のカンプトテシン・アクミナタ（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）及びインドの木のノタポジテス・フォエチダ（Ｎｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ  ｆｏｅｔｉｄａ）から採取される非水溶性アルカロイドである親カンプトテシン化合物に関連又はそれから誘導される化合物を示すために使用される。
【００９０】
用語「ポドフィロトキシン化合物」はマンドレーク植物から抽出される親ポドフィロトキシンに関連した又はそれから誘導される化合物を示すために使用される。
【００９１】
用語「抗腫瘍ビンカアルカロイド」はツルニチソウ植物（Ｖｉｎｃａ  ｒｏｓｅａ）の抽出物に関連した又はそれから誘導される化合物を示すために使用される。
【００９２】
用語「アルキル化剤」は、それらが生理学的状態下で、ＤＮＡのような生物学的に必須な高分子にアルキル基をもたらす能力を有するという共通の特徴を有する広範な化学薬品の群を包含する。大部分の、ナイトロジェン・マスタード及びニトロソウレアのようなより重要な物質とともに、活性なアルキル化基は、その幾つかは酵素による複雑な分解反応後にインビボで生成される。アルキル化剤のもっとも重要な薬理学的作用は、細胞増殖、とりわけＤＮＡ合成及び細胞分裂に関与する基礎的機序を混乱させるものである。アルキル化剤の、急速に増殖している組織中のＤＮＡ機能及び完全性を妨げる能力が、それらの治療的適用及びそれらの多数の毒性の基礎を提供する。
【００９３】
用語「抗腫瘍アントラサイクリン誘導体」はグリコシド結合により結合された稀な糖のダウノサミン（ｄａｕｎｏｓａｍｉｎｅ））をもつテトラサイクリン環構造をもつことを特徴とする、真菌Ｓｔｒｅｐ．ｐｅｕｔｉｃｕｓ  ｖａｒ．ｃａｅｓｉｕｓから得られる抗生物質及びそれらの誘導体を含んでなる。
【００９４】
原発性乳癌におけるヒト表皮成長因子受容体２タンパク質（ＨＥＲ２）の増殖は特定の患者に対する低い臨床予後と相関することが示された。トラスツズマブはＨＥＲ２受容体の細胞外領域に高い親和性及び特異性をもって結合する、高度に精製された組み換えＤＮＡ−誘導ヒト化モノクローナルＩｇＧ１カッパ抗体である。
【００９５】
多数の乳癌はエストローゲン受容体を有し、これらの腫瘍の成長はエストローゲンにより刺激される可能性がある。用語「エストローゲン受容体アンタゴニスト」及び「選択的エストローゲン受容体モジュレーター」はエストローゲン受容体（ＥＲ）に対するエストラジオールの結合の競合的インヒビターを示すために使用される。選択的エストローゲン受容体モジュレーターはＥＲに結合される時に、受容体の三次元の形状の変化を誘発し、ＤＮＡ上のエストローゲン反応性要素（ＥＲＥ）に対するその結合を変調する。
【００９６】
閉経後の女性において、循環エストローゲンの主要源は末梢組織中のアロマターゼ酵素による副腎及び卵巣のアンドローゲン（アンドロステンジオン及びテストステロン）のエストローゲン（エストロン及びエストラジオール）への転化からである。アロマターゼ
抑制又は不活性化によるエストローゲンの剥奪は、ホルモン依存性乳癌をもつ何人かの閉経後患者に対して有効で選択的な処置である。
【００９７】
用語「抗エストローゲン剤」は本明細書ではエストローゲン受容体アンタゴニスト及び選択的エストローゲン受容体モジュレーターのみならずまた、前記のようなアロマターゼインヒビターを包含するために使用される。
【００９８】
用語「分化剤」は種々の方法で、細胞増殖を抑制し、分化を誘導することができる化合物を包含する。ビタミンＤ及びレチノイドは広範な正常及び悪性型細胞の成長及び分化を制御する際に主要な役割を果たすことが知られている。レチノイン酸代謝阻害剤（ＲＡＭＢＡ）はレチノイン酸のチトクロームＰ４５０−仲介異化作用を抑制することにより内因性レチノイン酸のレベルを増加する。
【００９９】
ＤＮＡメチル化の変化はヒトの癌においてもっとも一般的な異常の１つである。選択された遺伝子のプロモーター内のメチル化過剰は通常、関与遺伝子の不活性化を伴う。用語「ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ・インヒビター」は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼの薬理学的抑制及び主要抑制遺伝子発現の再活性化により作用する化合物を示すために使用される。
【０１００】
用語「キナーゼ・インヒビター」は細胞周期の進行及びプログラムされた細胞死（アポトーシス）に関与するキナーゼの強力なインヒビターを含んでなる。
【０１０１】
用語「ファルネシルトランスフェラーゼ・インヒビター」はＲａｓ及び他の細胞内タンパク質のファルネシル化を妨げるようになった化合物を示すために使用される。それらは悪性細胞の増殖及び生存に効果をもつことが示された。
【０１０２】
用語「他のＨＤＡＣインヒビター」はそれらに限定はされないが、以下：
−カルボン酸塩、例えば酪酸塩、桂皮酸、４−フェニル酪酸塩又はバルプロ酸、
−ヒドロキサム酸、例えばスベロイルアニロドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ピペラジン含有ＳＡＨＡ類似体、バイアリールヒドロキサメート、Ａ−１６１９０６及びそのカルボゾリルエーテル−、テトラヒドロピリジン−及びテトラロン−類似体、２環式アリール−Ｎ−ヒドロキシカルボキシアミド、ピロキシアミド、ＣＧ−１５２１、ＰＸＤ−１０１、スルホンアミドヒドロキサム酸、ＬＡＱ−８２４、ＬＢＨ−５８９、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、オキサムフラチン、スクリプトエイド、スクリプトエイド関連３環分子、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサム酸（ＣＢＨＡ）、ＣＢＨＡ−様ヒドロキサム酸、トラポキシン−ヒドロキサム酸類似体、Ｒ３０６４６５及び関連ベンゾイル−及びヘテロアリール−ヒドロキサム酸、アミノスベレート及びマロニルジアミド、
−環式テトラペプチド、例えばトラポシキン、アピジシン、デプシペプチド、スピルコスタチン−関連化合物、ＲｅｄＦＫ−２２８、スルフヒドリル−含有環式テトラペプチド（ＳＣＯＰ）、ヒドロキサム酸含有環式テトラペプチド（ＣＨＡＰ）、ＴＡＮ−１７４及びアズモアミド、
−ベンズアミド、例えば、ＭＳ−２７５又はＣＩ−９９４、あるいは
−デプデシン、
を含んでなる。
【０１０３】
用語「ユビキチン−プロテアソーム経路のインヒビター」は、細胞周期制御タンパク質を包含する、プロテアソーム中の細胞タンパク質の標的破壊を抑制する化合物を特定するために使用される。
【０１０４】
癌の処置のためには、本発明に従う化合物を放射線照射と一緒に前記のような患者に投与することができる。放射線照射はイオン化光線、そしてとりわけガンマ光線、特に線型粒子加速装置により又は今日一般に使用される放射性核種により放出されるものを意味する。放射性核種による腫瘍の照射は外部又は内部であることができる。
【０１０５】
本発明はまた、抗ガン剤及び本発明に従うＨＤＡＣインヒビターの本発明に従う組み合わせ物に関する。
【０１０６】
本発明はまた、医学療法における使用のための、例えば腫瘍細胞の成長を抑制するための本発明に従う組み合わせ物に関する。
【０１０７】
本発明はまた、腫瘍細胞の成長を抑制するための本発明に従う組み合わせ物に関する。
【０１０８】
本発明はまた、有効量の本発明に従う組み合わせ物を被験体に投与する工程を含んでなる、ヒトの被験者における腫瘍細胞の成長を抑制する方法に関する。
【０１０９】
本発明は更に、有効量の本発明に従う組み合わせ物を投与することにより、形質変換細胞を包含する細胞の異常成長を抑制する方法を提供する。
【０１１０】
他の医薬及びＨＤＡＣインヒビターを同時に（例えば、別の又は単位組成物中で）又はいずれかの順序で連続的に投与することができる。後者の場合は、２種の化合物は、確実に、有利な又は相乗的効果が達成されるために十分な期間内で、そして量で、そして方法で投与されるであろう。組み合わせ物の各成分に対して好ましい方法及び投与の順序及び各投与量及び計画は投与されている特定の他の医薬及びＨＤＡＣインヒビター、それらの投与経路、処置されている特定の腫瘍並びに処置されている特定の宿主に左右されるであろうことは認識されるであろう。投与の最適な方法及び順序並びに投与量及び投与計画は、従来の方法を使用し、本明細書に提示された情報を考慮して、当業者により容易に決定することができる。
【０１１１】
白金配位化合物は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり１〜５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０〜４００ｍｇ／ｍ２、特にシスプラチンに対しては約７５ｍｇ／ｍ２、そしてカルボプラチンに対しては約３００ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１２】
タキサン化合物は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり５０〜４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７５〜２５０ｍｇ／ｍ２、特にパクリタキセルに対しては約１７５〜２５０ｍｇ／ｍ２、そしてドセタキセルに対しては約７５〜１５０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１３】
カンプトテシン化合物は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり０．１〜４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１〜３００ｍｇ／ｍ２、特にイリノテカンに対しては約１００〜３５０ｍｇ／ｍ２、そしてトポテカンに対しては約１〜２ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１４】
抗腫瘍ポドフィロトキシン誘導体は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり３０〜３００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０〜２５０ｍｇ／ｍ２、特にエトポシドに対しては約３５〜１００ｍｇ／ｍ２、そしてテニポシドに対しては約５０〜２５０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１５】
抗腫瘍ビンカアルカロイドは有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり２〜３０ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、特にビンプラスチンに対しては約３〜１２ｍｇ／ｍ２、そしてビンクリスチンに対しては約１〜２ｍｇ／ｍ２、そしてビノレルビンに対しては約１０〜３０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１６】
抗腫瘍ヌクレオシド誘導体は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり２００〜２５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７００〜１５００ｍｇ／ｍ２、特に５−ＦＵに対しては２００〜５００ｍｇ／ｍ２、ゲムシタビンに対しては約８００〜１２
００ｍｇ／ｍ２、そしてカペシタビンに対しては約１０００〜２５００ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１７】
ナイトロジェン・マスタード又はニトロソウレアのようなアルキル化剤は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり１００〜５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１２０〜２００ｍｇ／ｍ２、特にシクロホスファミドに対しては約１００〜５００ｍｇ／ｍ２、クロランブシルに対しては約０．１〜０．２ｍｇ／ｍ２、カルムスチンに対しては約１５０〜２００ｍｇ／ｍ２、そしてロムスチンに対しては１００〜１５０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１８】
抗腫瘍のアントラサイクリン誘導体は有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり１０〜７５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１５〜６０ｍｇ／ｍ２、特にドキソルビシンに対しては約４０〜７５ｍｇ／ｍ２、ダウノルビシンに対しては約２５〜４５ｍｇ／ｍ２、そしてイダルビシンに対しては約１０〜１５ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１１９】
トラスツズマブは有利には、処置１コース当たり、体表面積１平方メートル当たり１〜５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、特に２〜４ｍｇ／ｍ２の投与量で投与される。
【０１２０】
抗エストローゲン剤は有利には、処置されている特定の薬剤及び状態に応じて１日約１〜１００ｍｇの投与量で投与される。タモキシフェンは有利には５〜５０ｍｇ、好ましくは１０〜２０ｍｇを１日２回経口投与され、治療効果を達成し、維持するのに十分な期間、治療を継続する。トレミフェンは有利には、１日１回約６０ｍｇの投与量で経口投与し、治療効果を達成し、維持するのに十分な期間、治療を継続する。アナストロゾールは有利には、１日１回約１ｍｇの投与量で経口投与される。ドロルオキシフェンは有利には、１日１回約２０〜１００ｍｇの投与量を経口投与される。ラルオキシフェンは有利には、１日１回約６０ｍｇの投与量で経口投与される。エキセメスタンは有利には、１日１回約２５ｍｇの投与量で経口投与される。
【０１２１】
これらの投与量は、例えば処置１コース当たり１回、２回又は３回以上投与され、例えば、７、１４、２１又は２８日毎に反復することができる。
【０１２２】
それらの有用な薬理学的特性を考慮すると、本発明に従う組み合わせ物の成分、すなわち他の医薬及びＨＤＡＣインヒビターは投与目的のための種々の製薬学的形態に調製することができる。成分は個々の製薬学的組成物に別個に、又は双方の成分を含有する単位製薬学的組成物に調製することができる。
【０１２３】
従って、本発明はまた、１種又は複数の製薬学的担体と一緒に他の医薬及びＨＤＡＣインヒビターを含んでなる製薬学的組成物に関する。
【０１２４】
本発明はまた、１種又は複数の製薬学的担体と一緒に抗ガン剤及び本発明に従うＨＤＡＣインヒビターを含んでなる製薬学的組成物の形態の、本発明に従う組み合わせ物に関する。
【０１２５】
本発明は更に、腫瘍細胞の成長を抑制するための製薬学的組成物の製造における本発明に従う組み合わせ物の使用に関する。
【０１２６】
本発明は更に、癌を罹患している患者の処置における同時の、別個の又は連続的使用のための組み合わせ調製物としての、第１の有効成分としての本発明に従うＨＤＡＣインヒビター及び第２の有効成分としての抗ガン剤を含有する製品に関する。
【実施例】
【０１２７】
実験部門
以下の実施例は具体的に示す目的のために提供される。以後、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを定義し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを定義し、「ＤＭＡ」はＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを定義し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを定義し、「ＥＤＣ」はＮ’−（エチルカルボンイミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン、一塩酸を定義し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを定義し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを定義し、「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールを定義し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを定義し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を定義し、そして「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを定義する。
Ａ．中間体化合物の調製
実施例Ａ１
ａ）中間体１の調製
【０１２８】
【化１５】
2008508235.tif 000018
【０１２９】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．０１１４モル）、１−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（０．０１７モル）及びＭｇＳＯ４（０．５ｇ）の混合物（８０ｍｌのＭｅＯＨ中）を１５時間撹拌、還流し、次に室温に冷却した。テトラヒドロホウ酸ナトリウム（０．０１８モル）を分割添加した。混合物を室温で５時間撹拌し、水中に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（６．６ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９４／６／０．５）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、４．３ｇ（９０％）の中間体１を与えた。
ｂ）中間体２の調製
【０１３０】
【化１６】
2008508235.tif 000019
【０１３１】
中間体１（０．００３７モル）及び水酸化ナトリウム（０．００７４モル）の混合物（６０ｍｌのＥｔＯＨ中）を５０℃で１５時間撹拌し、次に室温に冷却し、そして乾燥するまで溶媒を蒸発させると、１．５ｇ（１００％）の中間体２を与えた。
ｃ）中間体３の調製
【０１３２】
【化１７】
2008508235.tif 000020
【０１３３】
ＥＤＣ（０．００７５モル）、次にＨＯＢｔ（０．００７５モル）、次にＯ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０１５モル）を中間体２（０．００５モル）の混合物（１００ｍｌのＤＣＭ及び１００ｍｌのＴＨＦ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を４０℃で４時間撹拌し、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（４ｇ）をシリカゲル（１５〜４０μｍ）上カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９６／４／０．５）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、１ｇ（４２％）の中間体３を与えた。画分（０．０５１ｇ）をＤＩＰＥから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．０３ｇの中間体３、融点７０℃を与えた。
実施例Ａ２
ａ）中間体４の調製
【０１３４】
【化１８】
2008508235.tif 000021
【０１３５】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．００７２モル）の混合物（４０ｍｌのＴＨＦ及び４０ｍｌの１Ｎの水酸化ナトリウム中）を室温で１晩撹拌した。１Ｎの塩酸（４０ｍｌ）を添加した。混合物を１０分間撹拌した。炭酸ナトリウム（０．０２１６モル）を添加した。混合物を１０分間撹拌した。１−［［９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］オキシ］−２，５−ピロリジンジオン（０．００７２モル）を分割添加した。混合物を室温で６時間撹拌し、次に０℃に冷却し、そして塩酸で酸性化した。沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥すると４．１ｇ（１００％）の中間体４を与えた。
ｂ．中間体５の調製
【０１３６】
【化１９】
2008508235.tif 000022
【０１３７】
トリエチルアミン（０．０２モル）、ＥＤＣ（０．００８２モル）及びＨＯＢｔ（０．００８２モル）を中間体４（０．００６８モル）の混合物（２００ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００８２モル）を添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を１０％のＮａＨＣＯ３で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（４ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．１）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、３．４ｇ（８９％）の中間体５を与えた。
ｃ．中間体６の調製
【０１３８】
【化２０】
2008508235.tif 000023
【０１３９】
中間体５（０．０３５５モル）及びピペリジン（０．０８９モル）の混合物（４００ｍｌのＤＣＭ中）を３５℃で７２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ８０／２０／２）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、６．７ｇ（５６％）を与えた。残渣の一部（０．７９ｇ）をジエチルエーテルから結晶化させた。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．６２ｇの中間体６、融点１２９℃を与えた。
ｄ）中間体７の調製
【０１４０】
【化２１】
2008508235.tif 000024
【０１４１】
中間体６（０．０００９モル）及び５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（０．００１２モル）の混合物（３０ｍｌの１，２−ジクロロ−エタン中）を室温で１晩撹拌した。トリス（アセタト−α−Ｏ）ヒドロ−ホウ酸（１−）ナトリウム（０．００１３モル）を分割添加した。混合物を室温で４時間撹拌し、水／３ＮのＮａＯＨ中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．５ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９３／７／０．５）。２画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．０７ｇ（１６％）の中間体７を与えた。
実施例Ａ３
ａ．中間体８の調製
【０１４２】
【化２２】
2008508235.tif 000025
【０１４３】
２−（メチルスルホニル）−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．０９４モル）の溶液（４０ｍｌのアセトニトリル中）を４−ピペリジンメタノール（０．０８６モル）及び炭酸カリウム（０．１７２モル）の懸濁液（２００ｍｌのアセトニトリル中）にＮ２流下で１０℃で添加した。混合物を室温にもたらし、次に４時間撹拌し、水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、
そして溶媒を蒸発させた。残渣（２３ｇ）をアセトニトリル／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると７．８ｇ（３４％）の中間体８を与えた。母液を蒸発させた。残渣（１７ｇ）をシリカゲル上（２０〜４５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、４．６ｇ（２０％）の中間体８、融点１２９℃を与えた。
ｂ．中間体９の調製
【０１４４】
【化２３】
2008508235.tif 000026
【０１４５】
トリエチルアミン（０．０３８モル）、次に塩化メタンスルホニル（０．０２５モル）を中間体８（０．０１８９モル）の溶液（８０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で０℃で添加した。混合物を０℃で２時間撹拌し、氷水中に注入した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させると６．５ｇ（１００％）の中間体９を与えた。
ｃ．中間体１０の調製
【０１４６】
【化２４】
2008508235.tif 000027
【０１４７】
中間体９（０．０１８９モル）、Ｎ−メチル−１Ｈ−インドール−３−エタンアミン（０．０１７２モル）及び炭酸カリウム（０．０３４４モル）の混合物（１８０ｍｌのアセトニトリル中）を２４時間、撹拌、還流し、水中に注入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（８．５ｇ）をシリカゲル上（７０〜２００μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０〜９７／３／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、１．２５ｇ（２０％）の中間体１０を与えた。
ｄ）中間体１１の調製
【０１４８】
【化２５】
2008508235.tif 000028
【０１４９】
中間体１０（０．００３モル）及び水酸化ナトリウム（０．００６モル）の混合物（８０ｍｌのＥｔＯＨ中）を１晩撹拌、還流し、次に室温に冷却し、そして乾燥するまで溶媒を蒸発させると１．３ｇ（１００％）の中間体１１、ｍｐ．＞２６０℃を与えた。
ｅ）中間体１２の調製
【０１５０】
【化２６】
2008508235.tif 000029
【０１５１】
ＥＤＣ（０．００４５モル）、次にＨＯＢｔ（０．００４５モル）を中間体１１（０．００３モル）の混合物（１００ｍｌのＴＨＦ及び１００ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０１２モル）を添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（３ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９４／６／０．１）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．８２ｇ）をジエチルエーテル中に取り込んだ。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、０．７８ｇの中間体１２、融点１５４℃を与えた。
実施例Ａ４
ａ）中間体１３の調製
【０１５２】
【化２７】
2008508235.tif 000030
【０１５３】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．００４９モル）、１Ｈ−インドール−３−エタノール、メタンスルホネート（エステル）（０．００５４モル）及び炭酸カリウム（０．０１モル）の混合物（２０ｍｌのアセトニトリル中）を１晩撹拌、還流し、次に冷却し、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（２．２ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９６／４／０．２）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．４４２ｇ（２２％）の中間体１３、融点２３８℃を与えた。
ｂ）中間体１４の調製
【０１５４】
【化２８】
2008508235.tif 000031
【０１５５】
中間体１３（０．００２５モル）、（２−ブロモエトキシ）（１，１−ジメチルエチル）ジメチル−シラン（０．００３４モル）及びＮ−エチル−Ｎ−（１−メチルエチル）−２−プロパンアミン（０．００３８モル）の混合物（２０ｍｌのＤＭＳＯ中）を５０℃で１５時間撹拌し、次に室温に冷却し、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．７ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．７６ｇ（５４％）の中間体１４を与えた。
ｃ）中間体１５の調製
【０１５６】
【化２９】
2008508235.tif 000032
【０１５７】
中間体１４（０．００１３モル）及び水酸化ナトリウム（０．００２７モル）の混合物（４０ｍｌのＥｔＯＨ中）を８０℃で１晩撹拌し、次に室温に冷却し、そして溶媒を蒸発させると０．７５ｇ（１００％）の中間体１５を与えた。
ｄ）中間体１６の調製
【０１５８】
【化３０】
2008508235.tif 000033
【０１５９】
ＥＤＣ（０．００２モル）、次にＨＯＢｔ（０．００２モル）を中間体１５（０．００１３モル）の混合物（８０ｍｌのＴＨＦ及び８０ｍｌのＤＣＭ中）に室温でＮ２流下で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００６８モル）を添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．３ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．３８ｇの中間体１６を与えた。
ｅ）中間体１７の調製
【０１６０】
【化３１】
2008508235.tif 000034
【０１６１】
中間体１６（０．００１１モル）及びフッ化テトラブチルアンモニウム（０．００３２モル）の混合物（１０ｍｌのＴＨＦ中）を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させると０．５ｇ（８８％）の中間体１７を与えた。
実施例Ａ５
ａ．中間体４５の調製
【０１６２】
【化３２】
2008508235.tif 000035
【０１６３】
２−クロロ−５−ピリミジンカルボン酸、メチルエステル（０．０５８モル）の溶液（８０ｍｌのＤＭＡ中）を４−ピペリジンメタンアミン（０．１１６モル）及びＮ−エチルジイソプロピルアミン（０．１４５モル）の溶液（１５０ｍｌのＤＭＡ中）にＮ２流下で滴下した。混合物を室温で１時間３０分間撹拌し、氷水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで、次にＤＣＭで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をＤＩＰＥから結晶化させた。沈殿物を濾取し、乾燥すると１０ｇ（６５％）の中間体４５を与えた。
ｂ．中間体４６の調製
【０１６４】
【化３３】
2008508235.tif 000036
【０１６５】
中間体４５（０．００２４モル）、１−メチル−５−ニトロ−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（０．００３６モル）及びＭｇＳＯ４（０．２５ｇ）の混合物（８０ｍｌのＭｅＯＨ中）を６０℃で１晩撹拌し、次に室温に冷却した。テトラヒドロホウ酸ナトリウム（０．００４１モル）を分割添加した。混合物を室温で１８時間撹拌し、水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（１．１ｇ）をアセトニトリルから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．９ｇ（８６％）の中間体４６、融点１５０℃を与えた。
ｃ）中間体４７の調製
【０１６６】
【化３４】
2008508235.tif 000037
【０１６７】
中間体４６（０．００２モル）及び水酸化ナトリウム（０．００８モル）の混合物（６０ｍｌのＥｔＯＨ中）を６０℃で１晩撹拌し、次に室温に冷却し、蒸発させた。残渣をジエチルエーテル中に取り込んだ。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．６ｇ（６７％）の中間体４７を与えた。
ｄ）中間体４８の調製
【０１６８】
【化３５】
2008508235.tif 000038
【０１６９】
ＥＤＣ（０．００１９モル）及びＨＯＢｔ（０．００１９モル）を中間体４７（０．００１３モル）及びトリエチルアミン（０．００３９モル）の溶液（１００ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ（５０／５０）中）に室温でＮ２流下で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００２６モル）を添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（１ｇ）をクロマシル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．２〜９２／８／０．２）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．１０１ｇ（１５％）の中間体４８を与えた。
実施例Ａ６
ａ．中間体４９の調製
【０１７０】
【化３６】
2008508235.tif 000039
【０１７１】
２−クロロ−５−ピリジンカルボン酸、メチルエステル（０．０３３モル）の溶液（８０ｍｌのＤＣＭ中）を４−ピペリジンメタノール（０．０６６モル）及びＮ−エチルジイソプロピルアミン（０．０８３モル）の溶液（１００ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で３時間３０分間撹拌し、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をペンタン中に取り込んだ。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、７．８８ｇ（９５％）の中間体４９を与えた。
ｂ）中間体５０の調製
【０１７２】
【化３７】
2008508235.tif 000040
【０１７３】
ＤＭＳＯ（０．０５８モル）を二塩化エタンジオイル（０．０２７８モル）の溶液（５０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で−７８℃で滴下した。混合物を１５分間撹拌した。中間体４９（０．０２３モル）の溶液（２００ｍｌのＤＣＭ中）を滴下した。混合物を−７８℃で１時間３０分間撹拌した。トリエチルアミン（０．１１８モル）を滴下した。混合物を−７８℃で１時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると３．０６ｇ（５４％）の中間体５０を与えた。ｃ）中間体５１の調製
【０１７４】
【化３８】
2008508235.tif 000041
【０１７５】
中間体５０（０．０１２２モル）を１−メチル−１Ｈ−インドール−３−エタンアミン（０．０１２２モル）の溶液（２７０ｍｌのＭｅＯＨ中）に５℃でＮ２流下で添加した。混合物を数分間撹拌した。シアノホウ水素化ナトリウム（０．０１８３モル）及び酢酸（０．０１８３モル）を添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、１０％炭酸カリウム中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（４．９ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、１．２ｇ（２４％）の中間体５１を与えた。
ｄ）中間体５２の調製
【０１７６】
【化３９】
2008508235.tif 000042
【０１７７】
中間体５１（０．０００９モル）及び水酸化ナトリウム（０．００３９モル）の混合物（６０ｍｌのＥｔＯＨ中）を１５時間撹拌、還流し、次に乾燥するまで蒸発させると、中間体５２を与えた。この中間体を次の反応段階に直接使用した。
ｅ）中間体５３の調製
【０１７８】
【化４０】
2008508235.tif 000043
【０１７９】
ＨＯＢｔ（０．００１９モル）、次にＥＤＣ（０．００１９モル）を中間体５２（０．０００９モル）及びＯ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００１９モル）の溶液（１３０ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ中）に室温で添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．９３ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．１５５ｇ（３３％）の中間体５３を与えた。
実施例Ａ７
ａ）中間体５４の調製
【０１８０】
【化４１】
2008508235.tif 000044
【０１８１】
２−［４−（アミノメチル）−１−ピペリジニル］−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．００３８モル）、１−エチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（０．００４９モル）及び１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）の混合物（ＥｔＯＨ中１０％のチオペン溶液１ｍｌを含有する、２０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で、３バールの圧力下で２４時間水素化し、次にシーライト上で濾過した。乾燥するまで溶媒を蒸発させた。残渣（１．８ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．２〜９３／７／０．５）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．７ｇ（４４％）の中間体５４を与えた。
ｂ）中間体５５の調製
【０１８２】
【化４２】
2008508235.tif 000045
【０１８３】
６０％水素化ナトリウム（０．００９モル）を中間体５４（０．００４５モル）の溶液（５０ｍｌのＴＨＦ中）にＮ２流下で０℃で添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。ヨード−エタン（０．００６２モル）の溶液（１０ｍｌのＴＨＦ中）を滴下した。混合物を室温で１晩撹拌し、水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾
燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．６ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．１６ｇ（８％）の中間体５５を与えた。
ｃ．中間体５６の調製
【０１８４】
【化４３】
2008508235.tif 000046
【０１８５】
中間体５５（０．０００３モル）及び水酸化ナトリウム（０．０３ｇ）の混合物（１５ｍｌのＥｔＯＨ中）を８０℃で６時間撹拌し、次に乾燥するまで蒸発させると、０．１６ｇ（１００％）の中間体５６を生成した。
ｄ）中間体５７の調製
【０１８６】
【化４４】
2008508235.tif 000047
【０１８７】
ＥＤＣ（０．０００５モル）及びＨＯＢｔ（０．０００５モル）を中間体５６（０．０００３モル）の混合物（２０ｍｌのＤＣＭ及び２０ｍｌのＴＨＦ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０００７モル）を添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．３ｇ）をクロマシル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９３／７／０．３５）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．０３ｇ（１６％）の中間体５７を与えた。
実施例Ａ８
ａ）中間体５８の調製
【０１８８】
【化４５】
2008508235.tif 000048
【０１８９】
水素化ナトリウム（０．０１１モル）を中間体１３（０．００３７モル）の溶液（３０ｍｌのＴＨＦ中）にＮ２流下で５℃で添加した。混合物を３０分間撹拌した。ヨードメタン（０．００８１モル）の溶液（１０ｍｌのＴＨＦ中）を滴下した。混合物を１０℃で２時間撹拌し、次に１時間３０分間室温にもたらし、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．７ｇ）をクロマシル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ＯＨ  ９８／２／０．１）。２画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．２６５ｇの中間体５８及び０．５７ｇ（１７％）の中間体１０を与えた。
ｂ）中間体５９の調製
【０１９０】
【化４６】
2008508235.tif 000049
【０１９１】
中間体５８（０．０００６モル）及び水酸化ナトリウム（０．００１２モル）の混合物（３０ｍｌのＥｔＯＨ中）を８０℃で１晩撹拌し、次に室温に冷却し、そして溶媒を蒸発させると０．２６ｇ（１００％）の中間体５９を与えた。
ｃ）中間体６０の調製
【０１９２】
【化４７】
2008508235.tif 000050
【０１９３】
ＥＤＣ（０．０００９モル）及びＨＯＢｔ（０．０００９モル）を中間体５９（０．０００６モル）の溶液（３０ｍｌのＴＨＦ及び３０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００１２モル）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．６ｇ）をクロマシル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９９／１／０．０５及び９４／６／０．３）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．１ｇ（３３％）の中間体６０を与えた。
実施例Ａ９
ａ）中間体６１の調製
【０１９４】
【化４８】
2008508235.tif 000051
【０１９５】
ＤＭＳＯ（０．１２７モル）を二塩化エタンジオイル（０．０６１モル）の溶液（１１０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で−７８℃で添加した。混合物を１５分間撹拌した。中間体８（０．０５１モル）の溶液（２００ｍｌのＤＣＭ中）を添加した。混合物を−７８℃で１時間３０分間撹拌した。トリエチルアミン（０．２６モル）を滴下した。混合物を−７８℃で１５分間、次に室温に２時間３０分間もたらした。水を添加した。混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１４ｇ）をシリカゲル上（２０〜４５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ７０／３０）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、７．６ｇ（５７％）の中間体６１を与えた。
ｂ）中間体６２の調製
【０１９６】
【化４９】
2008508235.tif 000052
【０１９７】
シアノホウ水素化ナトリウム（０．０４９モル）及び酢酸（０．０３４モル）を５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−インドール−３−エタンアミン（０．０３１モル）及び中間体６１（０．０３４モル）の溶液（７００ｍｌのＭｅＯＨ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で２４時間撹拌し、１０％炭酸カリウム中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１４．８ｇ）をシリカゲル上（２０〜４５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．２）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、４．５２ｇ（３２％）の中間体６２を与えた。
ｃ）中間体６３の調製
【０１９８】
【化５０】
2008508235.tif 000053
【０１９９】
塩化メタンスルホニル（０．００４９モル）を中間体６２（０．００４モル）及びトリエチルアミン（０．００８モル）の溶液（１５０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で５℃で添加した。混合物を室温で２４時間撹拌し、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（２．３９ｇ）をＤＩＰＥ中に取り上げた。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、１．７８ｇ（８４％）
の中間体６３、融点１６２℃を与えた。
ｄ）中間体６４の調製
【０２００】
【化５１】
2008508235.tif 000054
【０２０１】
中間体６３（０．００３２モル）及び水酸化ナトリウム（０．０１２８モル）の混合物（１５０ｍｌのＥｔＯＨ中）を５時間撹拌、還流し、次に室温に冷却し、そしてジエチルエーテル中に取り上げた。沈殿物を濾取し、乾燥すると、１．５７ｇ（９９％）の中間体６４、融点＞２６０℃を与えた。
ｅ）中間体６５の調製
【０２０２】
【化５２】
2008508235.tif 000055
【０２０３】
ＥＤＣ（０．００６４モル）及びＨＯＢｔ（０．００６４モル）を中間体６４（０．００３２モル）の溶液（１６０ｍｌのＴＨＦ及び１６０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００６４モル）を添加した。混合物を室温で３日間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（２．７７ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．３８５ｇ）をＣＨ３ＣＮ／ジエチルエーテルから結晶化させた。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、０．０８４ｇの中間体６５、融点１７９℃を与えた。
実施例Ａ１０
ａ）中間体６６の調製
【０２０４】
【化５３】
2008508235.tif 000056
【０２０５】
２−（メチルスルホニル）−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．０９４モル）の溶液（２４０ｍｌのアセトニトリル中）を４−ピペリジニル−カルバミン酸、１，１−ジメチルエチルエステル（０．０７８モル）及び炭酸カリウム（０．１５６モル）の溶液（１２０ｍｌのアセトニトリル中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で１晩撹拌し、氷水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、１４．４ｇ（５３％）の中間体６６、融点１６０℃を与えた。
ｂ）中間体６７の調製
【０２０６】
【化５４】
2008508235.tif 000057
【０２０７】
ＴＦＡ（２０ｍｌ）を中間体６６（０．０２２５モル）の溶液（１１０ｍｌのＤＣＭ中）に室温で添加した。混合物を室温で１５時間撹拌し、水中に注入し、そして炭酸カリウムで塩基性化した。混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させると、５．５ｇ（９８％）の中間体６７を与えた。
実施例Ａ１１
ａ）中間体６８の調製
【０２０８】
【化５５】
2008508235.tif 000058
【０２０９】
油中６０％水素化ナトリウム（０．００６９モル）を２−メチル−１Ｈ−インドール−３−酢酸、エチルエステル（０．００４６モル）の溶液（１０ｍｌのＴＨＦ中）にＮ２流下で０℃で添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。ヨード−エタン（０．００６モル）を添加した。混合物を室温で１８時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ及び飽和ＮａＣｌ中に注入した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、乾燥するまで溶媒を蒸発させた。残渣（１．１ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．７３ｇ（６５％）の中間体６８を与えた。
ｂ）中間体６９の調製
【０２１０】
【化５６】
2008508235.tif 000059
【０２１１】
水素化ジイソブチルアルミニウム（０．００４５モル）の溶液（トルエン中）を中間体６８（０．００３モル）の溶液（１５ｍｌのＤＣＭ及び１５ｍｌの１，２−ジメトキシエタン（分子ふるい：３オングストローム）中）にＮ２流下で−７８℃で滴下した。混合物を−７８℃で３時間撹拌し、次に３ＮのＨＣｌでクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を乾燥するまで蒸発させると、０．７ｇ（＞１００％）の中間体６９を与えた。
ｃ）中間体７０の調製
【０２１２】
【化５７】
2008508235.tif 000060
【０２１３】
チタン（ＩＶ）エトキシド（０．００２３モル）を中間体６７（０．００２１モル）及び中間体６９（０．００２１モル）の混合物（２５ｍｌの１，２−ジクロロ−エタン中）に添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。トリス（アセタト−α−Ｏ）ヒドロボレート（１−）、ナトリウム（０．００２３モル）を分割添加した。混合物を室温で１８時間撹拌し、次にＮａＨＣＯ３でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして乾燥するまで溶媒を蒸発させた。残渣（１．２ｇ）をシリカゲル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．２ｇ（２１％）の中間体７０を与えた。
ｄ）中間体７１の調製
【０２１４】
【化５８】
2008508235.tif 000061
【０２１５】
中間体７０（０．０００４モル）及び水酸化ナトリウム（０．０００９モル）の混合物（３０ｍｌのＥｔＯＨ中）を６０℃で１晩撹拌し、次に室温に冷却し、そして蒸発させると０．２ｇ（１００％）の中間体７１を与えた。
ｅ）中間体７２の調製
【０２１６】
【化５９】
2008508235.tif 000062
【０２１７】
ＥＤＣ（０．０００７モル）及びＨＯＢｔ（０．１ｇ）を中間体７１（０．０００４モル）及びトリエチルアミン（０．０００９モル）の溶液（４０ｍｌのＤＣＭ／ＴＨＦ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０００９モル）を添加した。混合物を室温で７２時間撹拌し、水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．４ｇ）をクロマシル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．１〜９０／１０／１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．０８７ｇ（３７％）の中間体７２を与えた。
実施例Ａ１２
ａ）中間体７３の調製
【０２１８】
【化６０】
2008508235.tif 000063
【０２１９】
中間体５０（０．００４６モル）を６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−３−エタンアミン（０．００４６モル）の溶液（１００ｍｌのＭｅＯＨ中）にＮ２流下で５℃で添加した。混合物を３０分間撹拌した。シアノホウ水素化ナトリウム（０．００６８モル）、次に酢酸（０．００４６モル）を分割添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、１０％炭酸カリウム中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（４ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９６／４／０．２）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣（２．２ｇ）の一部（０．７ｇ）をアセトニトリルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、０．４３ｇ（６１％）の中間体７３、融点１２２℃を与えた。
ｂ）中間体７４の調製
【０２２０】
【化６１】
2008508235.tif 000064
【０２２１】
中間体７３（０．００１５モル）及び水酸化ナトリウム（０．００６モル）の混合物（９０ｍｌのＥｔＯＨ中）を８時間撹拌、還流し、次に乾燥するまで蒸発させると中間体７４を与えた。
ｃ）中間体７５の調製
【０２２２】
【化６２】
2008508235.tif 000065
【０２２３】
ＨＯＢｔ（０．００３モル）、次にＥＤＣ（０．００３モル）を中間体７４（０．００１５モル）及びＯ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００３モル）の溶液（２００ｍｌのＴＨＦ／ＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．１ｇ）をシリカゲル上（１０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．５）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣（０．２４ｇ）をシリカゲル上（１０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．５）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．１７ｇ（２１％）の中間体７５を与えた。
実施例Ａ１３
ａ）中間体７６の調製
【０２２４】
【化６３】
2008508235.tif 000066
【０２２５】
６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−エタンアミン（０．０５３モル）及び１，３−イソベンゾフランジオン（０．０５８モル）の混合物（１３０ｍｌのトルエン中）を４８時間、撹拌、還流し、次に濾過した。濾液を蒸発させると５．４ｇ（３２％）の中間体７６を与えた。
ｂ）中間体７７の調製
【０２２６】
【化６４】
2008508235.tif 000067
【０２２７】
中間体７６（０．０１７モル）の溶液（１９ｍｌのＤＣＭ中）を水素化ナトリウム（０．０３４モル）の懸濁液（１１ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で滴下した。混合物を室温で１時間３０分間撹拌した。１−ヨード−プロパン（０．０３４モル）を添加した。混合物を室温で１時間１５分間撹拌した。飽和ＮａＣｌを添加した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させると、４．９ｇの中間体７７を与えた。この生成物を次の反応段階に直接使用した。
ｃ）中間体７８の調製
【０２２８】
【化６５】
2008508235.tif 000068
【０２２９】
中間体７７（０．０６８モル）及びヒドラジン一水和物（０．０６８モル）の混合物（６０ｍｌのＥｔＯＨ中）を１時間撹拌、還流し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させると、３．５３ｇの中間体７８を与えた。この生成物を次の反応段階に直接使用した。
ｄ）中間体７９の調製
【０２３０】
【化６６】
2008508235.tif 000069
【０２３１】
シアノホウ水素化ナトリウム（０．０２４モル）及び酢酸（０．０１６７モル）を中間体６１（０．０１６７モル）及び中間体７８（０．０１５モル）の溶液（３８０ｍｌのＭｅＯＨ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を３０分間撹拌し、１０％炭酸カリウム中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（８．８４ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９６／４／０．２）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、２．８５ｇ（４０％）の中間体７９を与えた。
ｅ）中間体８０の調製
【０２３２】
【化６７】
2008508235.tif 000070
【０２３３】
中間体７９（０．００２８モル）、ヨード−エタン（０．００５６モル）及びトリエチルアミン（０．００８５モル）の混合物（６０ｍｌのＤＭＦ中）を５０℃で７時間撹拌し、氷水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．８ｇ）をクロマシル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜９５／５）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、１．１ｇ（７８％）の中間体８０を与えた。
ｆ）中間体８１の調製
【０２３４】
【化６８】
2008508235.tif 000071
【０２３５】
中間体８０（０．００２２モル）及び水酸化ナトリウム（０．００８８モル）の混合物（１００ｍｌのＥｔＯＨ中）を６時間撹拌、還流し、次に室温で１晩撹拌し、そして乾燥するまで蒸発させた。残渣をジエチルエーテル中に取り上げた。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．９６５ｇ（８８％）の中間体８１、融点＞２６０℃を与えた。
ｇ）中間体８２の調製
【０２３６】
【化６９】
2008508235.tif 000072
【０２３７】
ＥＤＣ（０．００３８モル）及びＨＯＢｔ（０．００３８モル）を中間体８１（０．００１９モル）の溶液（１００ｍｌのＴＨＦ及び１００ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００３８モル）を添加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．２ｇ）をクロマシル上（５μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９９／１／０．０５〜９３／７／０．３５）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．１１４ｇの中間体８２を与えた。
実施例Ａ１４
ａ）中間体８３の調製
【０２３８】
【化７０】
2008508235.tif 000073
【０２３９】
中間体６２（０．００３４モル）及び水酸化ナトリウム（０．０１３４モル）の混合物（１５０ｍｌのＥｔＯＨ中）を８０℃で３時間撹拌し、次に室温に冷却し、乾燥するまで蒸発させた。残渣をジエチルエーテル中に取り上げた。沈殿物を濾取し、乾燥すると１．１８ｇ（７８％）の中間体８３、融点＞２６０℃を与えた。
ｂ）中間体８４の調製
【０２４０】
【化７１】
2008508235.tif 000074
【０２４１】
ＥＤＣ（０．００５２モル）及びＨＯＢｔ（０．００５２モル）を中間体８３（０．００２６モル）の溶液（１２０ｍｌのＴＨＦ及び１２０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００５２モル）を添加した。混合物を室温で６日間撹拌し、氷水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（２ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９６／４／０．０５）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．７５ｇ、５５％）をクロマシル上（１０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９６／４／０．５）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．６２５ｇの中間体８４を与えた。この生成物を次の反応段階に直接使用した。
実施例Ａ１５
中間体８５の調製
【０２４２】
【化７２】
2008508235.tif 000075
【０２４３】
４−ピペリジンメタンアミン（０．６５モル）及び炭酸カリウム（９６ｇ）をアセトニトリル（１０００ｍｌ）中に撹拌し、次に２−（メチルスルホニル）−５−ピリミジンカルボン酸、エチルエステル（０．３７モル）の溶液（５００ｍｌのアセトニトリル中）を室温で１時間にわたり滴下した。反応混合物を室温で１晩撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣を水中に撹拌し、混合物をＤＣＭ（２×５００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣をシリカゲル上カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤１：ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１／１；溶離剤２：ＭｅＯＨ＋少量のＮＨ４ＯＨ）。生成物画分を回収し、炭酸カリウムスラーリとともに撹拌し、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させると、３１ｇ（３２％）の中間体８５を与えた。
実施例Ａ１６
ａ）中間体８６の調製
【０２４４】
【化７３】
2008508235.tif 000076
【０２４５】
水素化ナトリウム（０．００９５モル）を５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアルデヒド（０．００５６モル）の溶液（５２ｍｌのＴＨＦ中）にＮ２流下で５℃で添加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。１−ヨード−プロパン（０．００６７モル）を添加した。混合物を室温で２日間撹拌し、水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させると１．５ｇの中間体８６を与えた。生成物を次の反応段階に直接使用した。
ｂ）中間体８７の調製
【０２４６】
【化７４】
2008508235.tif 000077
【０２４７】
シアノホウ水素化ナトリウム（０．００６８モル）及び酢酸（０．００４６モル）を中間体８５（０．００４２モル）及び中間体８６（０．００５１モル）の溶液（１２０ｍｌのＭｅＯＨ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を２日間撹拌、還流し、次に室温に冷却し、１０％炭酸カリウム中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（２．４２ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．２）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、１．２ｇ（６０％）の中間体８７を与えた。
ｃ）中間体８８の調製
【０２４８】
【化７５】
2008508235.tif 000078
【０２４９】
中間体８７（０．００２５モル）及び水酸化ナトリウム（０．０１モル）の混合物（１２０ｍｌのＥｔＯＨ中）を４時間撹拌、還流し、次に乾燥するまで蒸発させた。残渣をジエチルエーテル中に取り上げた。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．８４５ｇ（７２％）の中間体８８、融点＞２６０℃を与えた。
ｄ）中間体８９の調製
【０２５０】
【化７６】
2008508235.tif 000079
【０２５１】
ＥＤＣ（０．００３６モル）及びＨＯＢｔ（０．００３６モル）を中間体８８（０．００１８モル）の溶液（９０ｍｌのＴＨＦ及び９０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で室温で添加した。混合物を３０分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．００３６モル）を添加した。混合物を室温で３日間撹拌し、氷水中に注入し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣（１．３ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９２／８／０．５）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．５４ｇ（５６％）の中間体８９を与えた。
実施例Ａ１７
ａ）中間体９０の調製
【０２５２】
【化７７】
2008508235.tif 000080
【０２５３】
塩化メタンスルホニル（０．００４モル）を１，２−ジメチル−１Ｈ−インドール−３−エタノール（０．００２６モル）及びトリエチルアミン（０．００８モル）の溶液（１０ｍｌのＤＣＭ中）にＮ２流下で１０℃で添加した。混合物を１０℃で４時間撹拌した。乾燥するまで溶媒を蒸発させると中間体９０を与えた。この生成物を次の反応段階に直接使用した。
ｂ）中間体９１の調製
【０２５４】
【化７８】
2008508235.tif 000081
【０２５５】
中間体８５（０．００５４モル）、中間体９０（０．００７５モル）及び炭酸カリウム（０．０２１モル）の混合物（１５０ｍｌのアセトニトリル中）を２日間撹拌、還流し、次に室温に冷却し、氷水中に注入し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（１．８８ｇ）をシリカゲル上（１５〜４０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９７／３／０．１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．１５ｇ（７％）の中間体９１を与えた。
ｃ）中間体９２の調製
【０２５６】
【化７９】
2008508235.tif 000082
【０２５７】
中間体９１（０．０００３モル）の混合物（０．００１４モルの水酸化ナトリウム及び
２０ｍｌのＥｔＯＨ中）を１日間撹拌、還流し、次に室温に冷却し、そして乾燥するまで蒸発させた。残渣をジエチルエーテル中に取り上げた。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．１２ｇ（８２％）の中間体９２、融点＞２６０℃を与えた。
ｄ）中間体９３の調製
【０２５８】
【化８０】
2008508235.tif 000083
【０２５９】
ＥＤＣ（０．０００５モル）及びＨＯＢｔ（０．０００５モル）を中間体９２（０．０００２モル）の溶液（１５ｍｌのＴＨＦ及び１５ｍｌのＤＣＭ中）に室温で添加した。混合物を１５分間撹拌した。Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（０．０００５モル）を添加した。混合物を室温で４日間撹拌し、氷水中に注入し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残渣（０．１４ｇ）をシリカゲル上（１０μｍ）カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．３）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、０．０３５ｇ（２５％）の中間体９３を与えた。
【０２６０】
表Ｆ−１は前記の実施例の１つに従って調製された中間体を挙げる。
【０２６１】
【表２】
2008508235.tif 000084
【０２６２】
【表３】
2008508235.tif 000085
【０２６３】
【表４】
2008508235.tif 000086
【０２６４】
【表５】
2008508235.tif 000087
【０２６５】
【表６】
2008508235.tif 000088
【０２６６】
【表７】
2008508235.tif 000089
【０２６７】
【表８】
2008508235.tif 000090
【０２６８】
【表９】
2008508235.tif 000091
【０２６９】
【表１０】
2008508235.tif 000092
【０２７０】
【表１１】
2008508235.tif 000093
【０２７１】
【表１２】
2008508235.tif 000094
【０２７２】
【表１３】
2008508235.tif 000095
【０２７３】
Ｂ．最終化合物の調製
実施例Ｂ１
化合物１ａの調製
【０２７４】
【化８１】
2008508235.tif 000096
【０２７５】
ＴＦＡ（２ｍｌ）を中間体３（０．０００６モル）の混合物（４０ｍｌのＭｅＯＨ中）に添加した。混合物を室温で３０時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテルから結晶化させた。沈殿物を濾取し、そして乾燥させると０．３１ｇ（８６％）の化合物１ａ、融点１３０℃を与えた。
化合物１の代わりの合成法
化合物１ｂの調製
【０２７６】
【化８２】
2008508235.tif 000097
【０２７７】
ヒドロキシルアミン（水中５０％、７．５ｍｌ）そして次に１ＮのＮａＯＨ（１５ｍｌ）を中間体１（０．００９８モル）の混合物（１０ｍｌのＭｅＯＨ中）に１０℃で添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。１ＮのＨＣｌ溶液を添加することにより混合物をｐＨ５〜６に酸性化した。沈殿物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄し、そして乾燥した。残渣（４．５ｇ）をシリカゲルＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（Ｒ）ＮＨ２（２５〜４０μｍ）上カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ９０／１０／１）。純粋な画分を回収し、溶媒を蒸発させると、３．１ｇ（８０％）を与えた。ＥｔＯＨ中の画分（０．５ｇ）上にＨＣｌ塩を調製し、沈殿物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄し、そして乾燥すると０．４３ｇの化合物１ｂ、融点２２０℃を与えた。
実施例Ｂ２
化合物２の調製
【０２７８】
【化８３】
2008508235.tif 000098
【０２７９】
ＴＦＡ（０．５ｍｌ）を中間体７（０．０００１モル）の混合物（１０ｍｌのＭｅＯＨ中）に添加し、そして混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をアセトニトリル／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．０３６ｇ（５０％）の化合物２、融点２０５℃を与えた。
実施例Ｂ３
化合物３の調製
【０２８０】
【化８４】
2008508235.tif 000099
【０２８１】
ＴＦＡ（５ｍｌ）を中間体１２（０．００１４モル）の混合物（１００ｍｌのＭｅＯＨ中）に室温で添加した。混合物を室温で４８時間撹拌した。溶媒を蒸発させて乾燥した。残渣をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．５４５ｇ（７４％）の化合物３、融点１２１℃を与えた。
実施例Ｂ４
化合物４の調製
【０２８２】
【化８５】
2008508235.tif 000100
【０２８３】
ＴＦＡ（０．５ｍｌ）を中間体１７（０．０００９モル）の混合物（８０ｍｌのＭｅＯＨ中）に添加した。混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．１９ｇ（３２％）の化合物４、融点１０３℃を与えた。
実施例Ｂ５
化合物１８の調製
【０２８４】
【化８６】
2008508235.tif 000101
【０２８５】
中間体４８（０．０００２モル）の混合物（０．７５ｍｌのＴＦＡ及び１５ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、乾燥すると０．０７１ｇ（５９％）の化合物１８を与えた。実施例Ｂ６
化合物１９の調製
【０２８６】
【化８７】
2008508235.tif 000102
【０２８７】
中間体５３（０．０００３モル）の混合物（１ｍｌのＴＦＡ及び２０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を乾燥するまで蒸発させた。残渣をＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＮ／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．１３３ｇ（８０％）の化合物１９、融点１７４℃を与えた。
実施例Ｂ７
化合物２０の調製
【０２８８】
【化８８】
2008508235.tif 000103
【０２８９】
中間体５７（０．００００５モル）の混合物（０．２５ｍｌのＴＦＡ及び１０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣（０．０４ｇ）をＣＨ３ＣＮ／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥した。残渣（０．０４ｇ）をシリカゲルＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（Ｒ）ＮＨ２（２５〜４０μｍ）上カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ８０／２０／２）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．０２ｇ（８０％）の化合物２０、融点９０℃、を与えた。
実施例Ｂ８
化合物２１の調製
【０２９０】
【化８９】
2008508235.tif 000104
【０２９１】
中間体６０（０．０００１モル）の混合物（０．５ｍｌのＴＦＡ及び１０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で１晩撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣（０．１５ｇ）をシリカゲルＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（Ｒ）ＮＨ２（２５〜４０μｍ）上カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ８０／２０／２）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させると、０．０６４ｇ（７８％）の化合物２１、融点８３℃、を与えた。
実施例Ｂ９
化合物２２の調製
【０２９２】
【化９０】
2008508235.tif 000105
【０２９３】
中間体６５（０．００２モル）の混合物（６ｍｌのＴＦＡ及び１２０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を乾燥するまで蒸発させた。残渣をＣＨ３ＣＮ／ＭｅＯＨ／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥させると、０．９ｇ（８７％）の化合物２２、融点１８３℃、を与えた。
実施例Ｂ１０
化合物２３の調製
【０２９４】
【化９１】
2008508235.tif 000106
【０２９５】
中間体７２（０．０００１モル）の混合物（０．５ｍｌのＴＦＡ及び１０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で４８時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．０５９ｇ（５９％）の化合物２３、融点１８２℃、を与えた。
実施例Ｂ１１
化合物２４の調製
【０２９６】
【化９２】
2008508235.tif 000107
【０２９７】
中間体７５（０．０００３モル）の混合物（１ｍｌのＴＦＡ及び２０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を乾燥するまで蒸発させた。残渣をＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＮ／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると０．１４７ｇ（７８％）の化合物２４、融点１６０℃、を与えた。
実施例Ｂ１２
化合物２５の調製
【０２９８】
【化９３】
2008508235.tif 000108
【０２９９】
中間体８２（０．０００９モル）の混合物（２．５ｍｌのＴＦＡ及び５６ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。溶媒を乾燥するまで蒸発させた。残渣をシリカゲル（２５〜４０μｍ）上カラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ９０／１０／１）。純粋な画分を回収し、そして溶媒を蒸発させた。残渣をＤＩＰＥから結晶化した。沈殿物を濾取し、そして乾燥すると、０．２８６ｇ（５３％）の化合物２５、融点８０℃、を与えた。
実施例Ｂ１３
化合物２６の調製
【０３００】
【化９４】
2008508235.tif 000109
【０３０１】
中間体８４（０．００１２モル）の混合物（３ｍｌのＴＦＡ及び６０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌した。乾燥するまで溶媒を蒸発させた。残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨから結晶化した。沈殿物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄し、そして乾燥すると、０．３２２ｇ（５０％）の化合物２６、融点１８８℃、を与えた。
実施例Ｂ１４
化合物２７の調製
【０３０２】
【化９５】
2008508235.tif 000110
【０３０３】
中間体８９（０．００１モル）の混合物（２．５ｍｌのＴＦＡ及び５０ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で２４時間撹拌し、次に乾燥するまで溶媒を蒸発させた。残渣をＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＮ／ジエチルエーテルから結晶化した。沈殿物を濾取し、水で洗浄し、そして乾燥させると、０．３３ｇ（５５％）の化合物２７、融点１７１℃、を与えた。
実施例Ｂ１５
化合物２８の調製
【０３０４】
【化９６】
2008508235.tif 000111
【０３０５】
中間体９３（０．００００７モル）の混合物（０．２ｍｌのＴＦＡ及び４ｍｌのＭｅＯＨ中）を室温で３日間撹拌し、次に乾燥するまで蒸発させると、０．０４１ｇ（１００％）の化合物２８、融点８０℃、を与えた。
【０３０６】
表Ｆ−２は前記実施例の１つに従って調製された化合物を挙げる。表中では以下の略語が使用された：．Ｃ２ＨＦ３Ｏ２はトリフルオロ酢酸塩を意味し、ｍｐ．は融点を表わす。
【０３０７】
【表１４】
2008508235.tif 000112
【０３０８】
【表１５】
2008508235.tif 000113
【０３０９】
【表１６】
2008508235.tif 000114
【０３１０】
【表１７】
2008508235.tif 000115
【０３１１】
【表１８】
2008508235.tif 000116
【０３１２】
【表１９】
2008508235.tif 000117
【０３１３】
【表２０】
2008508235.tif 000118
【０３１４】
Ｃ．薬理学的実施例
ヒストンデアセチラーゼの抑制のインビトロのアッセイ（実施例Ｃ．１参照）は式（Ｉ）の化合物で得られたＨＤＡＣ酵素活性の抑制を測定する。
【０３１５】
式（Ｉ）の化合物の細胞活性は細胞毒性又は生存率に対する比色分析アッセイを使用してＡ２７８０腫瘍細胞上で決定された（Ｍｏｓｍａｎｎ  Ｔｉｍ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３、１９８３）（実施例Ｃ．２参照）。
【０３１６】
化合物の溶解度は化合物が溶液中に留まる能力を測定する。第１の方法においては、希釈時の化合物の水溶液中に留まる能力（実施例Ｃ．３．ａ参照）を測定する。ＤＭＳＯ−ストック溶液を３連続段階で単一の水性バッファー溶媒で希釈する。各希釈に対し比濁計で濁度を測定する。第２の方法においては、異なるｐＨにおける化合物の溶解度をＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒの使用により測定することができる（実施例Ｃ．３．ｂ参照）。
【０３１７】
薬剤透過性は１種の媒質からもう１種中に又はそれを通って移動する能力を表わす。特
に腸膜を通って血流中にそして／又は血流から標的中へ移動するその能力を表わす。透過性（実施例Ｃ．４参照）はフィルター−固定された人工膜のリン脂質の２層の形成により測定することができる。フィルター固定人工膜アッセイにおいては、系がバッファー水溶液と接触すると多層の２層（ｍｕｌｔｉ−ｌａｍｅｌｌａｒ  ｂｉｌａｙｅｒｓ）がフィルターチャンネル内に形成する条件下で、ジオレオイルホスファチジル−コリンの２％（重量／容量）ドデカン溶液でコートされた１２５μｍのミクロ−フィルターディスク（０．４５μｍの微細孔）により分離された、各複合ウエルが、下部の供与溶液及び上部の受容溶液により２室に分割されるように、９６−ウエル微量滴定プレートと９６−ウエルのフィルタープレートで「サンドイッチ」が形成される。この人工膜を通過する化合物の透過性はｃｍ／秒で測定される。その目的は２種の異なるｐＨ、４．０と７．４における平行な人工膜を通る薬剤の透過性を探索することである。化合物の検出は２５０〜５００ｎｍ間の最適波長におけるＵＶ−分光分析により実施される。
【０３１８】
薬剤の代謝は脂質可溶性の生体異物又は生物体内生化合物が、１種又は複数の極性の、水溶性のそして排泄可能な代謝物に酵素により転化されることを意味する。薬剤代謝の主要器官は肝臓である。代謝生成物はしばしば、親の薬剤より活性が弱いか又は不活性である。しかし、幾つかの代謝物は高められた活性又は毒性効果をもつかも知れない。従って薬物代謝は「解毒」及び「中毒」過程双方を包含するすることができる。薬物及び化学薬品を処理する生物体の能力を決定する主要な酵素系の１つは、ＮＡＤＰＨ依存性酵素であるチトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼにより表わされる。化合物の代謝安定性は非細胞（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）ヒトの組織の使用によりインビトロで決定することができる（実施例Ｃ．５．ａ．参照）。ここで化合物の代謝安定性はミクロソームとこれらの化合物の１５分間のインキュベート後に代謝された薬剤の％として表わされる。化合物の定量はＬＣ−ＭＳ分析により決定された。化合物の代謝安定性はまた、ラット肝細胞中の化合物の半減期を計算することにより決定することができる（実施例Ｃ．５．ｂ．参照）。
【０３１９】
ＤＮＡ損傷物質及びヒストンデアセチラーゼインヒビターを包含する広範な抗腫瘍物質がｐ２１タンパク質を活性化することが示された。ＤＮＡ損傷物質は腫瘍サプレッサーｐ５３によりｐ２１遺伝子を活性化し、他方、ヒストンデアセチラーゼインヒビターは転写因子Ｓｐ１によりｐ２１遺伝子を転写により活性化する。従って、ＤＮＡ損傷物質はｐ５３反応性要素によりｐ２１プロモーターを活性化し、他方、ヒストンデアセチラーゼインヒビターはｓｐ１サイト（ＴＡＴＡボックスに対して−６０ｂｐ〜＋４０ｂｐに位置する）によりｐ２１プロモーターを活性化し、双方とも、ｐ２１タンパク質の発現増加をもたらす。細胞中のｐ２１プロモーターがｐ５３反応性要素を包含しないｐ２１  １３００ｂｐプロモーターフラグメントからなる時は、それは従ってＤＮＡ損傷物質に非反応性である。ｐ２１を誘導する化合物の能力は幾つかの方法で評価することができる。第１の方法は興味深い化合物で腫瘍細胞を処理し、そして細胞の溶解（ｌｙｓｉｓ）後に、ｐ２１酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＯｎｃｏｇｅｎｅのＷＡＦ１  ＥＬＩＳＡ）によりｐ２１誘導を検出する。ｐ２１アッセイはマウスのモノクローナル及びウサギのポリクローナル抗体双方を使用する「サンドイッチ」酵素イムノアッセイである。ヒトｐ２１タンパク質に特異的なウサギのポリクローナル抗体がキット中に提供されるプラスチックのウエルの表面上に固定された。アッセイされるサンプル中に存在するあらゆるｐ２１が捕捉抗体と結合するであろう。ビオチニル化検出モノクローナル抗体もまた、ヒトｐ２１タンパク質を認識し、捕捉抗体により保持されていたあらゆるｐ２１に結合するであろう。順次、検出抗体がホースラディッシュペルオキシダーゼ−共役ストレプトアビジンにより結合される。ホースラディッシュペルオキシダーゼは無色の溶液から青色の溶液（又は停止試薬の添加後は黄色）への発色基剤のテトラ−メチルベンジジンの転化を触媒し、その強度はプレートに結合されるｐ２１タンパク質の量と比例する。着色した反応生成物を分光光度計を使用して定量する。定量は既知の濃度のｐ２１（凍結乾燥で提供される）を使用する標準曲線の作成により達成される。このアッセイはＤＮＡ損傷の結果として又はヒストンデアセチラーゼ抑制の結果として、ｐ２１誘導を測定することができる（実施例Ｃ．６．ａ．参照）。
【０３２０】
もう１つの方法は細胞レベルのＨＤＡＣ抑制の結果として化合物がｐ２１を誘導する能力を試験する。細胞はｐ５３反応性要素を包含しないｐ２１  １３００ｂｐプロモーターフラグメントを含有する発現ベクトルにより安定してトランスフェクトされることができ、そしてそこで、対照レベルに比較したレポーター遺伝子の発現の増加がｐ２１誘導能を有するものと化合物を特定する。レポーター遺伝子は蛍光タンパク質であり、レポーター遺伝子の発現は発光された蛍光の量として測定される（実施例Ｃ．６．ｂ．参照）。最後の方法は化合物の製薬学的活性をスクリーニングするためにマウスが使用されるインビボの方法である。腫瘍の産生をもたらすのに十分な量の、前記の安定に形質転換された腫瘍細胞をマウスに投与することができる。腫瘍細胞が腫瘍を形成するのに十分な時間を経過した後に、活性の可能性のある化合物を動物に投与して、腫瘍細胞に対する該化合物の効果をレポーター遺伝子の発現を測定することにより評価する。製薬学的活性化合物によるインキュベートが対照レベルに比較したレポーター遺伝子発現の増加をもたらすであろう（実施例Ｃ．６．ｃ．参照）。
【０３２１】
特定のＨＤＡＣインヒビターは豊富なＣＹＰ  Ｐ４５０タンパク質のような他の酵素を抑制するべきではない。ＣＹＰ  Ｐ４５０（大腸菌発現された）タンパク質３Ａ４、２Ｄ６及び２Ｃ９はそれらの特定の基質を蛍光分子に転化させる。ＣＹＰ３Ａ４タンパク質は７−ベンジルオキシ−トリフルオロメチルクマリン（ＢＦＣ）を７−ヒドロキシ−トリフルオロメチルクマリンに転化させる。ＣＹＰ２Ｄ６タンパク質は３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｎ−メチルアミノ）エチル］−７−メトキシ−４−メチルクマリン（ＡＭＭＣ）を３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン塩酸に転化させ、そしてＣＹＰ２Ｃ９タンパク質は７−メトキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＭＦＣ）を７−ヒドロキシ−トリフルオロメチルクマリンに転化させる。酵素反応を抑制する化合物は蛍光信号の減少をもたらすであろう（実施例Ｃ．７参照）。
【０３２２】
実施例Ｃ．１．ヒストンデアセチラーゼの抑制のインビトロのアッセイ
実施例Ｃ．１．ａ．［３Ｈ］−標識基質によるインビトロのアッセイ
ＨｅＬａ核抽出物（供給会社：Ｂｉｏｍｏｌ）を７５μＭの基質とともに６０μｇ／ｍｌでインキュベートした。ＨＤＡＣ活性を測定するための基質として合成ペプチド、すなわちヒストンＨ４のアミノ酸１４〜２１を使用した。基質を６−アミノヘキサン酸スペーサーによりＮＨ２−末端部でビオチニル化させ、アミド基によりＣＯＯＨ−末端部で保護され、特にリシン１６において［３Ｈ］アセチル化される。基質、ビオチン−（６−アミノヘキサン）Ｇｌｙ−Ａｌａ−（［３Ｈ］−アセチル−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−ＮＨ２）を、ｐＨ７．４の、２５ｍＭのＨｅｐｅｓ、１Ｍの蔗糖、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ及び０．０１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有するバッファー中に添加した。３０分後に、脱アセチル化反応をＨＣｌ及び酢酸の添加により（最終濃度はそれぞれ０．０３５ｍＭ及び３．８ｍＭ）終結させた。反応停止後、遊離３Ｈ−酢酸塩を酢酸エチルで抽出した。混合そして遠心分離後、上部（有機）相のアリコート中の放射能をβ−計数器で計測した。各実験に対して、対照（化合物を含まずにＨｅＬａ核抽出物及びＤＭＳＯを含有）、ブランクのインキュベート物（ＤＭＳＯを含有するが、ＨｅＬａ核抽出物も化合物も含有しない）及びサンプル（ＤＭＳＯに溶解された化合物及びＨｅＬａ核抽出物を含有）を平行して実施した。第１に、化合物を１０−５Ｍの濃度で試験した。化合物が１０−５Ｍで活性を示した時、濃度−反応曲線を作成し、そこで化合物は１０−５Ｍ〜１０−１２Ｍの間の濃度で試験された。各試験において、対照値及びサンプル値双方からブランクの値を差し引いた。対照のサンプルは基質の１００％の脱アセチル化を表わした。各サンプルに対し、放射能は対照の平均値の百分率として表わした。適当な場合は、ＩＣ５０−値（代謝物の量を対照の５０％まで減少させるために要する薬剤の濃度）は漸変データに対するプロビット解析を使用して計算した。ここで試験化合物の効果はｐＩＣ５０（ＩＣ５０−値のマイナスｌｏｇ値）として表わされる（表Ｆ−３参照）。
【０３２３】
実施例Ｃ．１．ｂ．蛍光−標識基質によるインビトロのアッセイ
ＨＤＡＣ蛍光活性アッセイ／Ｂｉｏｍｏｌの薬剤発見キット（カタログ番号：ＡＫ−５００−０００１）を使用した。ＨＤＡＣ蛍光活性アッセイはＦｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ（Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅＡｃｅｔｙｌａｓｅ  Ｌｙｓｙｌ）基質及び顕色剤組み合わせ物に基づく。Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ基質はアセチル化リシンの側鎖を含んでなる。基質の脱アセチル化は、第２段階でＦｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ顕色剤による処理が蛍光団を生成するように基質を増感させる。ＨｅＬａ核抽出物（供給会社：Ｂｉｏｍｏｌ）は７５μＭの基質で６０μｇ／ｍｌでインキュベートした。Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓ基質を、２５ｍＭのトリス、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ及び１ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏを含有するｐＨ７．４のバッファー中に添加した。３０分後、１容量の顕色剤を添加した。蛍光団が３５５ｎｍ光線で励起され、放出された光（４５０ｎｍ）を蛍光プレート読取り装置上で検出した。各実験に対し、対照（ＨｅＬａ核抽出物及びバッファーを含有）、ブランクインキュベート（バッファーを含有するが、ＨｅＬａ核抽出物を含有しない）及びサンプル（ＤＭＳＯに溶解し、更にバッファー中に希釈した化合物及びＨｅＬａ核抽出物を含有）を平行に実施した。第１に、化合物を１０−５Ｍの濃度で試験した。化合物が１０−５Ｍで活性を示した時に、濃度反応曲線を作成し、そこで化合物は１０−５Ｍ〜１０−９Ｍの間の濃度で試験された。すべてのサンプルを４回試験した。各試験において、ブランクの値を対照及びサンプルの値双方から差し引いた。対照のサンプルは１００％の基質の脱アセチル化を表わした。各サンプルに対し、蛍光は対照の平均値の百分率として表わした。適当な場合には、ＩＣ５０−値（代謝物の量を対照の５０％まで減少させるために要する薬剤の濃度）は漸変データに対するプロビット解析を使用して計算した。ここで試験化合物の効果はｐＩＣ５０（ＩＣ５０−値のマイナスｌｏｇ値）として表わされる（表Ｆ−３参照）。
【０３２４】
実施例Ｃ．２  Ａ２７８０細胞における抗増殖活性の決定
試験されたすべての化合物をＤＭＳＯに溶解し、更に培地中に希釈した。最終ＤＭＳＯ濃度は細胞増殖アッセイ中０．１％（ｖ／ｖ）を決して超えなかった。対照は化合物を伴わずにＡ２７８０細胞及びＤＭＳＯを含有し、そしてブランクはＤＭＳＯを含有したが、細胞を含有しなかった。ＭＴＴはＰＢＳ中５ｍｇ／ｍｌで溶解した。ＮａＯＨ（１Ｎ）によりｐＨ１０．５にバッファーされた０．１Ｍのグリシン及び０．１ＭのＮａＣｌからなるグリシンバッファーを調製した（すべての試薬はＭｅｒｃｋからのものであった）。ヒトＡ２７８０卵巣癌細胞（Ｔ．Ｃ．Ｈａｍｉｌｔｏｎ博士［Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ癌センター、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ］からの好意の送呈品）を２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び１０％のウシ胎仔血清を添加されたＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。細胞を湿った５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で単層培養物として定常的に保存した。細胞を１：４０の分率のトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を使用して１週間に１度継代させた。すべての培地及び補助物はＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。細胞はＧｅｎ−Ｐｒｏｂｅ  Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅキット（供給会社：ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）を使用して決定されるようにマイコプラズマ汚染はなかった。細胞をＮＵＮＣＴＭ９６−ウエルの培養プレート（供給会社：Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に播種し、１晩プラスチックに付着させた。プレート付着に使用された密度は総容量２００μｌの培地中１５００細胞／ウエルであった。プレートへの細胞付着後、培地を変え、薬剤及び／又は溶媒を２００μｌの最終容量まで添加した。４日間のインキュベート後、培地を２００μｌの新鮮な培地と交換し、ＭＴＴ基剤のアッセイを使用して細胞密度及び生存率を測定した。各ウエルに対し、２５μｌのＭＴＴ溶液を添加し、細胞を３７℃で更に２時間インキュベートした。次に培地を注意して吸引して、青色のＭＴＴ−ホルマザン生成物を２５μｌのグリシンバッファー、次に１００μｌのＤＭＳＯ添加により可溶化させた。微量試験プレートをミクロプレート−シェーカー上で１０分間震盪し、Ｅｍａｘ  ９６−ウエル分光分析装置（供給会社：Ｓｏｐａｃｈｅｍ）を使用して、５４０ｎｍにおける吸収を測定した。実験中、各実験条件に対する結果は３回の同型ウエルの平均である。最初のスクリーニングの目的のために、化合物は１０−６Ｍの単一固定濃度で試験された。活性化合物に対しては、完全な濃度−反応曲線を確立するために実験を反復した。各実験に対し、対照（薬剤を包含しない）及びブランクインキュベート（細胞も薬剤も含有しない）を平行して実施した。ブランクの値はすべての対照及びサンプルの値から差し引いた。各サンプルに対し、細胞成長の平均値（吸収単位における）は対照の細胞成長の平均値の百分率として表わされた。適当な場合には、ＩＣ５０−値（細胞成長を対照の５０％まで減少させるために要する薬剤濃度）を漸変データのプロビット解析を使用して計算した（Ｆｉｎｎｅｙ，Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｂｉｔ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｇｒａｄｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，Ｃａｍｂｒｉ���ｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｐｒｉｄｇｅ  １９６２）。ここで試験化合物の効果はｐＩＣ５０（ＩＣ５０−値のマイナスｌｏｇ値）として表わされる（表Ｆ−３参照）。
【０３２５】
実施例Ｃ．３．溶解度／安定性
Ｃ．３．１．水性溶媒中の安定性
第１の希釈段階において、ＤＭＳＯ（５ｍＭ）中に可溶化された活性化合物の濃厚ストック溶液１０μｌを１００μｌのリン酸クエン酸バッファーｐＨ７．４に添加して、混合した。第２の希釈段階において、第１の希釈段階のアリコート（２０μｌ）を更に１００μｌのリン酸クエン酸バッファーｐＨ７．４中に分配し、混合した。最後に、第３の希釈段階において、第２の希釈段階のサンプル（２０μｌ）を更に１００μｌのリン酸クエン酸バッファーｐＨ７．４中に希釈し、混合した。すべての希釈を９６−ウエルのプレート中で実施した。最後の希釈段階の直後に３回の連続希釈段階の溶液の混濁度を混濁測定装置で測定した。時々起る誤差を排除するために希釈は各化合物につき３重に実施された。混濁度測定値に基づいて、評価を３群に実施した。高い溶解度をもつ化合物は３点を得、そしてこの化合物に対しては第１の希釈物が透明である。中間の溶解度をもつ化合物は２点を得た。これらの化合物に対しては第１の希釈物は不透明であり、第２の希釈物は透明であった。低い溶解度をもつ化合物は１点を得て、これらの化合物に対しては、第１及び第２の希釈物は双方とも不透明である（表Ｆ−３参照）。
【０３２６】
Ｃ．３．ｂ．異なるｐＨにおける溶解度／安定性
異なるｐＨにおける化合物の溶解度はまた、化学発光窒素検出装置の使用により測定することができる（表Ｆ−３参照）。
【０３２７】
実施例Ｃ．４  平行な人工膜の透過性の分析
ストックサンプル（１００％ＤＭＳＯ中５ｍＭのストック溶液１０μｌのアリコート）をｐＨ４又はｐＨ７．４の水性バッファー系２ｍｌを含有するディープウェル又はＰｒｅ−ｍｉｘプレート（ＰＳＲ４  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（ｐＩＯＮ））中で希釈した。サンプルを対照プレートに添加する前に、バッファー１５０μｌをウェルに添加し、ブランクのＵＶ−測定を実施した。その後バッファーを廃棄し、そのプレートを対照のプレートとして使用した。すべての測定をＵＶ−抵抗プレート（供給会社：Ｃｏｓｔａｒ又はＧｒｅｉｎｅｒ）中で実施した。対照プレートのブランク測定後、希釈サンプル１５０μｌを対照プレートに添加し、希釈サンプル２００μｌを供与プレート１に添加した。受容フィルタープレート１（供給会社：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，タイプ：ＭＡＩＰ  Ｎ４５）を人工膜形成溶液（０．１％の２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノールを含有するドデカン中の１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセル−３−ホスホコリン）４μｌでコートし、供与プレート１の上に配置して、「サンドイッチ」を形成した。バッファー（２００μｌ）を上部の受容ウェル中に分配した。サンドイッチを蓋で覆い、暗所室温で１８時間保存した。受容プレート２のブランク測定はウェルに１５０μｌのバッファーを添加し、次にＵＶ−測定により実施した。受容プレート２のブランク測定後、バッファーを廃棄し、受容溶液１５０μｌを受容フィルタープレート１から受容プレート２に移した。次に受容フィルタープレート１をサンドイッチから取り除いた。供与プレート２のブランク測定後（前記を参照）、供与溶液１５０μｌを供与プレート１から供与プレート２に移した。供与プレート２、受容プレート２及び対照プレートのウェルのＵＶスペクトルをスキャンした（ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ  １９０により）。すべてのスペクトルをＰＳＲ４ｐ  Ｃｏｍｍａｎｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅで処理して、透過性を計算した。すべての化合物を３重に測定した。カルバムアゼピン、グリセオフルヴィン、アシクログアニジン、アテノロール、フロセミド及びクロロチアジドを各実験の基準として使用した。化合物を低い透過性（平均効果＜０．５×１０−６ｃｍ／秒、１点）、中間の透過性（１×１０−６ｃｍ／秒＞平均効果≧０．５×１０−６ｃｍ／秒、２点）又は高い透過性（≧１×１０−６ｃｍ／秒、３点）をもつものとして３群に分類した。
【０３２８】
実施例Ｃ．５  代謝安定性
実施例Ｃ．５．ａ．
非細胞の組織の調製物をＧｏｒｒｏｄ等（Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ  ５：４５３−４６２，１９７５）に従い、組織の機械的ホモジェナイズ後の遠心分離により実施した。肝組織を氷冷０．１ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）バッファー中でリンスして、過剰血液を洗浄した。次に組織をブロット乾燥し、秤量し、外科用はさみを使用して粗刻みした。組織片を、Ｔｅｆｌｏｎの乳棒を備えたＰｏｔｔｅｒ−Ｓ（Ｂｒａｕｎ，イタリー）又はＳｏｒｖａｌｌ  Ｏｍｎｉ−Ｍｉｘホモジェナイザーを使用して、７×１０秒間、３容量の氷冷０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．４）中でホモジェナイズした。双方の場合に、容器はホモジェナイズ工程中氷中／上に維持した。組織ホモジェネートはＳｏｒｖａｌｌ遠心分離又はＢｅｃｋｍａｎ  Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅを使用して４℃で２０分間９０００×ｇで遠心分離した。生成された上澄みを−８０℃で保存し、「Ｓ９」と表示した。Ｓ９画分を更にＢｅｃｋｍａｎ超遠心分離を使用して６０分間（４℃）１００．０００×ｇで遠心分離することができる。生成される上澄みを注意して吸引し、アリコートし、「シトソール」と表示した。ペレットを０．５ｇの最初の組織重量当たり１ｍｌの最終容量で０．１Ｍのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、「ミクロソーム」と表示した。すべての非細胞画分をアリコートし、液体窒素中で瞬間凍結し、使用まで−８０℃で保存した。試験されるサンプルに対しては、インキュベート混合物はＰＢＳ（０．１Ｍ）、化合物（５μＭ）、ミクロソーム（１ｍｇ／ｍｌ）及びＮＡＤＰＨ−生成系（０．８ｍＭのグルコース−６−リン酸塩、０．８ｍＭの塩化マグネシウム及び０．８単位のグルコース−６−リン酸脱水素酵素）を含有した。対照サンプルは同一物質を含有したがミクロソームは熱不活性化（摂氏９５℃で１０分間）ミクロソームと置き換えられた。対照サンプル中の化合物の回収は常に１００％であった。混合物を摂氏３７℃で５分間前保温した。反応は０．８ｍＭのＮＡＤＰの添加によりゼロ時点（ｔ＝０）で開始し、サンプルを１５分間（ｔ＝１５）インキュベートした。反応は２容量のＤＭＳＯの添加により終結させた。次にサンプルを９００×ｇで１０分間遠心分離し、上澄みを分析以前に２４時間以内、室温で保存した。すべてのインキュベートを二重に実施した。上澄みの分析をＬＣ−ＭＳ分析により実施した。サンプルの溶離はＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８（５０×４．６ｍｍ、５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ，米国）上で実施した。Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２７９０（供給会社：Ｗａｔｅｒｓ，米国）ＨＰＬＣシステムを使用した。溶離は２．４ｍｌ／分の流速で、バッファーＡ（Ｈ２Ｏ／アセトニトリル（９５／５）中の２５ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ５．２））、アセトニトルである溶媒Ｂ及び溶媒Ｃのメタノールによった。使用した勾配は、有機相濃度を、０％から５分間で５０％Ｂ及び５０％Ｃに、次に１分間１００％Ｂまでの直線状態で増加し、有機相濃度を更に１．５分間一定に維持した。サンプルの総合注入容量は２５μｌであった。検出装置としては、ＥＳＩ源を備えたＱｕａｔｔｒｏ（供給会社：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，英国）３重４極子質量分析計を使用した��原料及び脱溶媒和温度はそれぞれ１２０及び３５０℃に設定され、ネブライザー及び乾燥ガスとして窒素を使用した。データはポシティブスキャンモード（単一イオン反応）で獲得された。コーン電圧は１０Ｖに設定され、滞留時間は１秒であった。代謝の安定性は活性ミクロソーム（Ｅ（ａｃｔ））の存在下で１５分のインキュベート後の化合物の代謝％として表わした
代謝％＝１００％−［（ｔ＝１５におけるＥ（ａｃｔ）の総イオン電流（ＴＩＣ）÷
ｔ＝０におけるＥ（ａｃｔ）のＴＩＣ）］×１００。２０％未満の代謝百分率を有した化合物は著しく代謝安定性であると規定された。２０〜７０％の間の代謝を有した化合物は中程度に安定性であり、７０％を超る代謝百分率を示した化合物は低い代謝安定性と規定された。代謝安定性のスクリーニングを実施する時は常に、３種の対照化合物が包含された。低い代謝安定性（代謝％＝７３％）をもつ化合物としてベラパミルが包含された。中間の代謝安定性（代謝％＝４５％）をもつ化合物としてシサプリドが包含され、そして中間から高い代謝安定性（２５％の代謝）をもつ化合物としてプロパノールが包含された。対照安定性のアッセイを正当化するためにこれらの対照化合物が使用された。
【０３２９】
実施例Ｃ．５．ｂ．  ラット肝細胞培養物による代謝安定性
ラット肝細胞を牡のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄｏｗｌｅｙラットから単離した。化合物を１００％ＤＭＳＯ中５ｍＭのストック溶液に溶解し、２４−ウェルプレートを使用してラット肝細胞培養物（５０万の生存細胞／０．５ｍｌ）を使用して０、１５、３０、６０及び１２０分間５μＭの最終濃度でインキュベートした。ＬＣ−ＭＳのためのサンプルは２容量のＤＭＳＯの添加により調製した。サンプルを完全に震盪し、次に９００ｇで１０分間（室温）遠心分離した。すべての実験を三重で実施した。生成された上澄みのうち５０μｌをＬＣ−ＭＳにより分析した。ＬＣ−ＭＳのため、サンプルの溶離はＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＢＤＳ  Ｃ１８カラム（５０×４．６ｍｍ、５μｍ、Ｔｈｅｒｍｏｈｙｐｅｒｓｉｌ，英国）上で実施した。ＨＰＬＣシステムはＳｕｒｖｅｙｏｒオートサンプラー装置を備えたＳｕｒｖｅｙｏｒ送達システム（Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，米国）からなった。溶離は１．２ｍｌ／分の流速の、バッファーＡ（Ｈ２Ｏ／アセトニトル（９５：５）中１０ｍＭの酢酸アンモニウム（ｐＨ６．９））及び溶媒Ｂ（アセトニトリル）によった。使用された勾配は開始条件としては０．５分の溶媒Ａ、次に有機相濃度を直線状に２分間０％Ｂから９５％のＢまで増加した。この相は更に２分間一定に維持され、０．５分以内に再度０％のＢまで減少された。サンプルの総注入容量は５０μＬであった。カラムオーブン温度は４０℃に維持された。ＬＣ流速はＭＳ検出及び原料中への０．１ｍｌのレット（ｌｅｔ）に分割された。検出にはＥＳＩ源を備えた３重の４極子質量分析装置ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ，ＬａＪｏｌｌａ，米国）質量分析装置が使用された。源電圧は３８００ボルトに設定され、毛細管温度は３００℃あった。質量分析装置は定量の目的のために１Ｄａのスキャン幅をもつＭ＋Ｈの質量に調整されたＳＩＭにおけるポジティブイオンモードで操作された。装置の制御、データ獲得及び処理はＸｃａｌｉｂｕｒソフトウエア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，米国）を使用して実施した。ラット肝細胞中の化合物の代謝安定性はインビトロの半減期として表わした。対照として化合物Ｒ３０６４６５（国際公開第０３／７６４２２号パンフレット）を使用した（インビトロの半減期、８分）。化合物１及び化合物５を試験し、それぞれ、インビトロの半減期８１分及び６０分を有した。
【０３３０】
実施例ｃ．６．  ｐ２１誘導能
実施例Ｃ．６．ａ  ｐ２１酵素結合イムノソルベントアッセイ
ヒトＡ２７８０卵巣癌細胞中のｐ２１タンパク質発現レベルを決定するために以下のプロトコールを適用した。Ａ２７８０細胞（２００００細胞／１８０μｌ）を２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン及び１０％ウシ胎仔血清を添加されたＲＰＭＩ  １６４０培地中で９６ミクロウェルのプレート中に播種した。細胞溶解の２４時間前に化合物を１０−５、１０−６、１０−７及び１０−８Ｍの最終濃度で添加した。試験
されたすべての化合物をＤＭＳＯに溶解し、培地中に更なる希釈を実施した。化合物添加の２４時間後に上澄みを細胞から除去した。細胞を２００μｌの氷冷ＰＢＳで洗浄した。ウェルを吸引し、３０μｌの溶解バッファー（５０ｍＭのＴｒｉｓ．ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＮｏｎｉｄｅｔ  ｐ４０及び１０％のグリセロール）を添加した。プレートを−７０℃で１晩インキュベートした。適当数の微量滴定ウェルをフォイルのポーチから取り出し、空のウェルホルダー中に入れた。Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒ（２０×プレート洗浄濃厚物：１００ｍｌの、ＰＢＳ及び界面活性剤の２０−倍濃縮溶液。２％のクロロアセトアミドを含有）の作業溶液（１×）を調製した。凍結乾燥ｐ２１ＷＡＦ標準物を蒸留Ｈ２Ｏで再構成し、更にサンプル希釈液（キット中に提供される）で希釈した。サンプルをサンプル希釈液中に１：４に希釈することにより調製した。サンプル（１００μｌ）及びｐ２１ＷＡＦ１標準物（１００μｌ）を適当なウェル中にピペット添加し、室温で２時間インキュベートした。ウェルを１×洗浄バッファーで３回洗浄し、次に１００μｌの検出抗体試薬（ビオチニル化モノクローナルｐ２１ＷＡＦ１抗体の溶液）を各ウェルにピペット添加した。ウェルを室温で１時間インキュベートし、次に１×洗浄バッファーで３回洗浄した。４００×共役物（ペルオキシダーゼストレプトアビジン共役物：４００−倍濃縮溶液）を希釈し、１００μｌの１×溶液をウェルに添加した。ウェルを室温で３０分間インキュベートし、次に１×洗浄バッファーで３回、そして蒸留Ｈ２Ｏで１回洗浄した。基質溶液（発色基剤）（１００μｌ）をウェルに添加し、ウェルを室温の暗所で３０分間インキュベートした。停止溶液を各ウェルに以前に添加された基質溶液と同一順序で添加した。各ウェルの吸収を４５０／５９５ｎｍの二波長における分光光度プレート読取り装置を使用して測定した。各実験に対し、対照（薬剤を含有しない）及びブランクインキュベート（細胞も薬剤も含有しない）を平行に実施した。ブランク値はすべての対照及びサンプル値から差し引いた。各サンプルに対し、ｐ２１ＷＡＦ１誘導値（吸収単位における）は対照中に存在するｐ２１ＷＡＦ１の値の百分率として表わした。１３０％を超る百分率の誘導は有意な誘導と規定された。９種の化合物が試験され、すべてが１０−６Ｍにおいて有意な誘導を示した。
【０３３１】
実施例Ｃ．６．ｂ．細胞法
Ａ２７８０細胞（ＡＴＣＣ）を５％ＣＯ２を含む加湿インキュベーター内で３７℃で、１０％ＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン及びゲンタマイシンを添加されたＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。すべての細胞培養液はＧｉｂｃｏ−ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）により提供された。他の物質はＮｕｎｃにより提供された。ゲノムＤＮＡは増殖Ａ２７８０から抽出し、ｐ２１プロモーターのネストＰＣＲ単離のための鋳型として使用された。第１の増殖は鋳型としてのゲノムＤＮＡを含むオリゴヌクレオチド対、ＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＧＣＴＴＧＧ及びＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＣを使用して５５℃のアニーリング温度で２０周期につき実施された。ＴＡＴＡボックスに対して−４５５１〜＋８８のフラグメントを含有する生成された４．５ｋｂのフラグメントは８８℃におけるアニーリングにより２０周期に対してオリゴヌクレオチドＴＣＧＧＧＴＡＣＣＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＧＣＴＴＧＧ及びＡＴＡＣＴＣＧＡＧＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＣで再増殖して、４．５ｋｂのフラグメントをもたらし、そして次に８８℃におけるアニーリングにより２０周期に対し、オリゴヌクレオチド対、ＴＣＧＧＧＴＡＣＣＧＧＴＡＧＡＴＧＧＧＡＧＣＧＧＡＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣ及びＡＴＡＣＴＣＧＡＧＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＣで再増殖させ、ＴＡＴＡボックスに対して−１３００〜＋８８フラグメントを含有する１．３ｋｂフラグメントをもたらした。オリゴヌクレオチド中に存在する制限部位ＸｈｏＩ及びＫｐｎＩ（下線配列）をサブクローンのために使用した。ＫｐｎＩ及びＸｂａＩ制限部位においてルシフェラーゼレポーターがｐＧＬ３−塩基性から除去され、ＺｓＧｒｅｅｎレポーター（ｐＺｓＧｒｅｅｎ１−Ｎ１プラスミドからの）により置き換えた。ｐＧＬ３−塩基性−ＺｓＧｒｅｅｎ−１３００はＸｈｏＩ及びＫｐｎＩ部位においてｐＧＬ３−塩基性−ＺｓＧｒｅｅｎ中へのヒトｐ２１プロモーター領域の前記の１．３ｋｂフラグメントの挿入により構築された。すべての制限酵素はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ（ドイツ）により提供される。Ａ２７８０細胞を２×１０５細胞の密度で６−ウェルのプレートに入れ、２４時間インキュベートし、製造業者により記載されるように、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，ベルギー）を使用して２μｇのｐＧＬ３−塩基性−ＺｓＧｒｅｅｎ−１３００及び０．２μｇのｐＳＶ２ネオベクトルによりトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞をＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）により１０日間選択し、単一の細胞懸濁物を成長させた。３週間後、単一のクローンを得た。Ａ２７８０選択クローンを９６−ウェルのプレート中に１００００細胞／ウェルでエクスパンドさせ、播種した。播種２４時間後に、細胞を化合物（近位のｐ２１プロモーター領域のｓｐ１部位に影響する）で更に２４時間処理した。その後、細胞を４％ＰＦＡで３０’固定し、Ｈｏｅｃｈｓｔ染料で対比染色した。ＺｓＧｒｅｅｎ産生及び従って蛍光をもたらすｐ２１プロモーター活性化をＡｓｃｅｎｔ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａ��ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，ベルギー）によりモニターした。各実験に対して、対照（薬剤を含有しない）及びブランクインキュベート（細胞も薬剤も含有しない）を平行に実施した。ブランク値はすべての対照値及びサンプル値から差し引いた。各サンプルに対して、ｐ２１誘導の値は対照中に存在するｐ２１の値の百分率として表わした。１３０％を超える誘導百分率を有意な誘導と規定した。７１種の化合物を試験し、すべてが１０−６Ｍにおいて有意な誘導を示した。
【０３３２】
実施例Ｃ．６．ｃ．  インビボの方法
選択されたクローンをヌードマウスの脇腹に皮下注射し（１０７細胞／２００μｌ）、１２日後にキャリパー測定可能な腫瘍を得た。１２日目から、６日間毎日、動物（それぞれ４〜１０匹の動物）に溶媒及び２０〜４０ｍｐｋの化合物を経口又は静脈投与した。腫瘍を、社内開発されたＡｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｗｈｏｌｅ  Ｂｏｄｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＦＰフィルターの付いた、そしてＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｒ）からのＩＭＡＱ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅに基づいたソフトウエアパッケージにより制御されるＣＣＤカメラ型のＪＡＩ（Ｒ）ＣＶ−Ｍ９０に接続された蛍光立体顕微鏡型のＯｌｙｍｐｕｓ（Ｒ）ＳＺＸ１２）により蛍光を評価した。対照として、化合物Ｒ３０６４６５（国際公開第０３／７６４２２号パンフレット）を使用した。化合物を不活性（測定可能な蛍光なし）、Ｒ３０６４６５より弱い、同一又はより強いものとして評価された。化合物１を試験し、Ｒ３０６４６５より有効であった。
【０３３３】
実施例Ｃ．７  Ｐ４５０抑制能
試験されたすべての化合物をＤＭＳＯ（５ｍＭ）に溶解し、アセトニトリル中に５  １０−４Ｍまで更なる希釈を実施した。更なる希釈はアッセイバッファー（０．１ＭのＮａＫリン酸バッファーｐＨ７．４）中で実施し、最終溶媒濃度は２％を超えなかった。ＣＹＰ３Ａ４タンパク質のアッセイは、ウェル当たり、１５ｐモルのＰ４５０／ｍｇタンパク質（０．０１ＭのＮａＫリン酸バッファー＋１．１５％のＫＣｌ中）、ＮＡＤＰＨ生成系（アッセイバッファー中３．３ｍＭのグルコース−６−リン酸、０．４Ｕ／ｍｌのグルコース−６−リン酸脱水素酵素、１．３ｍＭのＮＡＤＰ及び３．３ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ）及び１００μｌの総アッセイ容量の化合物を含んでなる。３７℃における５分間の前保温後に、アッセイバッファー中１５０μＭの蛍光プローブ基剤ＢＦＣの添加により酵素反応を開始させた。室温で３０分間のインキュベート後、２容量のアセトニトリルの添加後、反応を終結させた。蛍光測定は４０５ｎｍの励起波長及び５３５ｎｍの発光波長において実施した。本実験の対照化合物としてケトコナゾール（ＩＣ５０−値＝３×１０−８Ｍ）を包含した。ＣＹＰ２Ｄ６タンパク質のアッセイは，ウェル当たり、６ｐモルのＰ４５０／ｍｇタンパク質（０．０１ＭのＮａＫリン酸バッファー＋１．１５％のＫＣｌ中）、ＮＡＤＰＨ生成系（アッセイバッファー中０．４１ｍＭのグルコース−６−リン酸、０．４Ｕ／ｍｌのグルコース−６−リン酸脱水素酵素、０．００８２ｍＭのＮＡＤＰ及び０．４１ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ）及び１００μｌの総アッセイ容量の化合物を含んでなる。３７℃における５分間の前保温後に、アッセイバッファー中３μＭの蛍光プローブ基剤ＡＭＭＣの添加により酵素反応を開始させた。室温で４５分間のインキュベート後、２容量のアセトニトリルの添加後、反応を終結させた。蛍光測定は４０５ｎｍの励起波長及び４６０ｎｍの発光波長において実施した。本実験の対照化合物としてキニジン（ＩＣ５０−値＜５×１０−８Ｍ）を包含した。ＣＹＰ２Ｃ９タンパク質のアッセイは、ウェル当たり、１５ｐモルのＰ４５０／ｍｇのタンパク質（０．０１ＭのＮａＫリン酸バッファー＋１．１５％のＫＣｌ中）、ＮＡＤＰＨ生成系（アッセイバッファー中３．３ｍＭのグルコース−６−リン酸、０．４Ｕ／ｍｌのグルコース−６−リン酸脱水素酵素、１．３ｍＭのＮＡＤＰ及び３．３ｍＭのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ）及び１００μｌの総アッセイ容量の化合物を含んでなる。３７℃における５分間の前保温後に、アッセイバッファー中２００μＭの蛍光プローブ基剤ＭＦＣの添加により酵素反応を開始させた。室温で３０分間のインキュベート後、２容量のアセトニトリルの添加後、反応を終結させた。蛍光測定は４０５ｎｍの励起波長及び５３５ｎｍの発光波長において実施した。本実験の対照化合物としてスルファフェナゾール（ＩＣ５０−値＝６．８×１０−７Ｍ）を包含した。最初のスクリーニングの目的のために、化合物を１×１０−５Ｍの単一固定濃度で試験した。活性化合物に対しては、全濃度−反応曲線を確立するために実験を反復した。各実験に対し、対照（薬剤を包含しない）及びブランクインキュベート（酵素も薬剤も含有しない）を平行して実施した。��べての化合物を４重にアッセイした。ブランク値をすべての対照値及びサンプル値から差し引いた。各サンプルに対し、サンプルのＰ４５０活性の平均値（相対的蛍光単位における）は対照のＰ４５０活性の平均値の百分率として表わした。抑制百分率は１００％マイナス、サンプルのＰ４５０活性の平均値として表わされる。適当な場合には、ＩＣ５０−値（対照の５０％までＰ４５０活性を減少するために要する薬剤の濃度）を計算した。
【０３３４】
【表２１】
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【０３３５】
【表２２】
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【０３３６】
Ｄ．組成物調製実施例：フィルム−コート錠
錠剤コアの調製
式（Ｉ）の化合物１００ｇ、ラクトース５７０ｇ及びデンプン２００ｇの混合物を十分に混合し、その後、約２００ｍｌの水中にナトリウムドデシルスルフェート５ｇ及びポリビニル−ピロリドン１０ｇの溶液で湿潤化する。湿った粉末混合物をふるい、乾燥し、再度ふるう。次に微細結晶セルロース１００ｇ及び水素化植物油１５ｇを添加する。全体を十分に混合し、打錠すると、式（Ｉ）の化合物各１０ｍｇを含んでなる、１０．０００錠を与える。
【０３３７】
コーティング
変性エタノール７５ｍｌ中メチルセルロース１０ｇの溶液にジクロロメタン１５０ｍｌ中エチルセルロース５ｇの溶液を添加する。次にジクロロメタン７５ｍｌ及び１，２，３−プロパントリオール２．５ｍｌを添加する。ポリエチレングリコール１０ｇをジクロロ
メタン７５ｍｌ中に融解し、溶解する。後者の溶液を前者に添加し、次にオクタデカン酸マグネシウム２．５ｇ、ポリビニルピロリドン５ｇ及び濃縮色素懸濁物３０ｍｌを添加し、全体をホモジェナイズする。錠剤コアをコーティング装置中でこのようにして得られた混合物でコートする。
【国際調査報告】
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