(57)【要約】  本発明は、本発明の化合物または組成物を投与することにより、ｍＲＮＡのナンセンス突然変異に関する疾患を治療または阻止するための方法、化合物および組成物に関する。より具体的には、本発明は、ｍＲＮＡのナンセンス突然変異に関する未熟な翻訳終了を抑制するための方法、化合物および組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
体細胞突然変異により生じる疾患を治療または阻止する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の式１の化合物
【化１】
2008515992.tif 000074
（式中、
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、ＮまたはＣ−Ｒａから独立して選択され、Ｒａは水素またはＣ１−Ｃ４アルカリ基であり、少なくともＷ、Ｘ、Ｙ、またはＺのうち１つがＮであり、
ｎは０、１、２、または３であり、
Ｒ１はシアノ基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されるカルバモイル基、またはヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基であり、
Ｒは、ヒドロキシ基、ハロゲン、一つ以上の独立して選択されるハロゲンまたはヒドロキシ基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、一つ以上の独立して選択されるハロゲンまたはフェニル基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたＣ４−Ｃ８シクロアルキル基、−Ｒｂ基、−Ｏ−Ｒｂ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基、オキソ基、または−Ｒｂ基で任意に置換された５から６員複素環、二つの環構造を有する９から１０員複素環、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたチオ基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたスルホニル基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基、スルホニル基、またはカルボニル基で任意に置換されたアミノ基（アミノスルホニル基は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、または−Ｒｂ基で任意に置換され、アミノカルボニル基はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ベンズオキシ基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたアミノ基から任意に置換された）、または結合するフェニル環とともにベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシンイル基を形成する二つのＲ基から選択され、
ここで−Ｒｂは一つのヒドロキシ基、一つのハロゲン、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基によって置換された一つのアミノ基のうちの一つ以上で任意に置換されたＣ６−Ｃ８アリールである）、
または前記式１の化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包接体、多型体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする前記方法。
【請求項２】
式１の化合物、またはその薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包接体、多型体、ラセミ体、または立体異性体は、前記化合物および薬学的に許容しうる担体または希釈剤を含む組成物として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記投与が皮下である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１はメタまたはパラ位にある、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｗ、Ｙ、およびＺはそれぞれＮであり、ＸはＣ−Ｒａ（式１−Ａ）である、請求項１に記載の方法。
【化２】
2008515992.tif 000075
【請求項６】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒａは水素である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
ｎは１または２である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
ｎは１である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基から独立して選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
ＹおよびＺはともにＮであり、ＷおよびＸはともにＣ−Ｒａ（式１−Ｂ）である、請求項１に記載の方法。
【化３】
2008515992.tif 000076
【請求項１３】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒａは水素である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
ｎは０、１または２である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
ｎは１または２である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
ｎは０または１である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒは、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基、またはアミノ基から独立して選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒは一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
ＷおよびＹはともにＮであり、ＸおよびＺはともにＣ−Ｒａ（式１−Ｃ）である、請求項１に記載の方法。
【化４】
2008515992.tif 000077
【請求項２１】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒａは水素である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ｎは１または２である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
ｎは１である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
ＷおよびＺはともにＮであり、ＸおよびＹはともにＣ−Ｒａ（式１−Ｄ）である、請求項１に記載の方法。
【化５】
2008515992.tif 000078
【請求項２８】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒａは水素またはメチル基から独立して選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
ｎは１または２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
ＷはＮであり、Ｘ、Ｙ、およびＺはそれぞれＣ−Ｒａ（式１−Ｅ）である、請求項１に記載の方法。
【化６】
2008515992.tif 000079
【請求項３３】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒａは水素である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
ｎは１または２である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
ｎは１である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
ＸはＮであり、Ｗ、Ｙ、およびＺはそれぞれＣ−Ｒａ（式１−Ｆ）である、請求項１に記載の方法。
【化７】
2008515992.tif 000080
【請求項４０】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｒａは水素である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
ｎは１または２である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
ｎは１である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４６】
ＹはＮであり、Ｗ、Ｘ、およびＺはそれぞれＣ−Ｒａ（式１−Ｇ）である、請求項１に記載の方法。
【化８】
2008515992.tif 000081
【請求項４７】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒａは水素である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
ｎは１または２である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
ｎは１である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５３】
ＺはＮであり、Ｗ、Ｘ、およびＹはそれぞれＣ−Ｒａ（式１−Ｈ）である、請求項１に記載の方法。
【化９】
2008515992.tif 000082
【請求項５４】
Ｒ１はカルボキシ基であり、メタまたはパラ位に位置する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
Ｒａは水素である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
ｎは０、１または２である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
ｎは１または２である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
ｎは０または１である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５９】
ＲはＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
Ｒは、一つ以上のメタ位、一つ以上のパラ位、または一つ以上のメタかつパラ位に位置する、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
自己免疫疾患、血液疾患、膠原病、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、肺疾患、炎症性疾患または中枢神経系疾患を治療または阻止する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。
【請求項６２】
前記投与が皮下である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記自己免疫疾患は関節リウマチまたは移植片対宿主病である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記炎症性疾患は関節炎である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記中枢神経系疾患は、多発性硬化症、筋ジストロフィー症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルツハイマー病、神経変性疾患またはパーキンソン病である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記血液疾患は、血友病、フォン・ヴィレブランド病、血管拡張性失調症、β型サラセミアまたは腎臓結石である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
前記膠原病は骨形成不全症または肝硬変である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６８】
家族性赤血球増加症、免疫不全、腎疾患、嚢胞性線維症、家族性高脂血症、網膜色素変性病、アミロイド症、血友病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、アテローム性動脈硬化、巨人症、低身長病、甲状腺機能亢進症、加齢、肥満症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー症またはマルファン症候群を治療または阻止する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。
【請求項６９】
前記投与が皮下である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
ヒトの癌を治療または阻止する方法であって、これを必要とするヒトに有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。
【請求項７１】
前記投与が皮下である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記癌は、頭および頚、眼、皮膚、口、喉、食道、胸、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓または副腎の癌である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記化合物またはその薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体または立体異性体は，薬学的に許容しうる担体または希釈剤を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記癌は、固形腫瘍である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記癌は、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽種、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽種、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血行性腫瘍（ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎ  ｔｕｍｏｒ）または多発性骨髄腫である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記癌は、急性リンパ性白血病、急性リンパ性β細胞白血病、急性リンパ性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄芽球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病または多発性骨髄腫である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７７】
前記ｐ５３遺伝子の突然変異に関連した疾患を治療または阻止する方法であって、これを必要とする患者に有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。
【請求項７８】
前記投与が皮下である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記疾患は、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、髄索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳糖腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮癌、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血行性腫瘍（ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎ  ｔｕｍｏｒ）または多発性骨髄腫である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
癌細胞増殖を阻害する方法であって、癌細胞を有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体と接触させることを特徴とする方法。
【請求項８１】
哺乳類のタンパク質を選択的に産生する方法であって、
前記哺乳類のナンセンス突然変異を含む遺伝子を転写することと、
前記タンパク質がナンセンス突然変異を含む前記遺伝子から産生される、式１の有効量の化合物を前記哺乳類に提供することを特徴とし、
前記タンパク質は前記哺乳類によって産生されるものである前記方法。
【請求項８２】
式１の化合物
【化１０】
2008515992.tif 000083
（式中、
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、ＮまたはＣ−Ｒａから独立して選択され、Ｒａは水素またはＣ１−Ｃ４アルカリ基であり、少なくともＷ、Ｘ、Ｙ、またはＺのうち１つがＮであり、
ｎは０、１、２、または３であり、
Ｒ１はシアノ基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基に任意に置換されたカルバモイル基、またはヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基であり、
Ｒは、ヒドロキシ基、ハロゲン、一つ以上の独立して選択されるハロゲンまたはヒドロキシ基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基、一つ以上の独立して選択されるハロゲンまたはフェニル基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたＣ４−Ｃ８シクロアルキル基、-Ｒｂ基、−Ｏ−Ｒｂ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基、オキソ基、または−Ｒｂ基で任意に置換された５から６員複素環、二つの環構造を有する９から１０員複素環、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基または−Ｒｂ基で任意に置換されたチオ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたスルホニル基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基、スルホニル基、またはカルボニル基で任意に置換されたアミノ基から独立して選択され、ここでアミノスルホニル基は、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、または−Ｒｂ基で任意に置換され、アミノカルボニル基はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ベンズオキシ基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたアミノ基（アミノスルホニル基は、ヒドロキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、または−Ｒｂ基で任意に置換され、アミノカルボニル基はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ベンズオキシ基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたアミノ基から任意に置換される）、または結合するフェニル環とともにベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシンイル基を形成する二つのＲ基から選択され、
ここで−Ｒｂは一つのヒドロキシ基、一つのハロゲン基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基によって置換された一つのアミノ基のうちの一つ以上で任意に置換されたＣ６−Ｃ８アリールである）、
または、前記式１の化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包接体、多型体、ラセミ体、または立体異性体。
【請求項８３】
前記化合物は化合物１〜８９から選択されるものである、請求項８３の化合物。
【請求項８４】
下記式（化合物番号１）を有する化合物。
【化１１】
2008515992.tif 000084
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００４年１０月１３日に出願された米国出願番号６０／６１７，６３４、２００４年１０月１３日に出願された米国出願番号６０／６１７，６５５、２００４年１０月１３日に出願された米国出願番号６０／６１７，６３３、２００４年１０月１３日に出願された米国出願番号６０／６１７，６７０（の３５ＵＳＣ§１１９に基づく優先権および利益を主張し、その全体は、参照により本明細書に組入れるものとする。本出願は、２００４年１０月１３日に出願された米国出願番号６０／６１７，６５３および２００４年１１月３日に出願された米国出願番号６０／６２４，１７０についても、３５ＵＳＣ§１１９に基づく優先権および利益を主張する。２００４年１１月３日に出願された米国特許番号６０／６２４，１７０も、参照によりその全体を本明細書に組入れるものとする。本出願はまた、２００５年１０月１３日に出願され、代理人文書番号１９０２５．０４０、１９０２５．０４１、１９０２５．０４２、１９０２５．０４３および１９０２５．０４４として特定される「ナンセンス抑制のための化合物とその使用方法」と題する国際特許出願についても、参照によりその全体を本明細書に組入れる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、本発明の化合物または組成物を投与することにより、ｍＲＮＡのナンセンス突然変異に関する疾患を治療または阻止するための方法、化合物および組成物に関する。より具体的には、本発明は、ｍＲＮＡのナンセンス突然変異に関する未熟な翻訳終了を抑制するための方法、化合物および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
細胞の遺伝子発現は、転写および翻訳の順序プロセスに依存する。ともに、これらのプロセスは、その対応する遺伝子のヌクレオチド配列からタンパク質を生産する。
【０００４】
転写は、ＲＮＡポリメラーゼによるＤＮＡからのｍＲＮＡ合成を伴う。転写は、遺伝子のプロモーター領域で始まり、新生ＲＮＡにおけるステムループ構造の形成またはｒｈｏ遺伝子産物の結合などにより終結が誘発されるまで継続する。
【０００５】
タンパク質は、それから、ｔＲＮＡ、ｔＲＮＡ合成酵素および様々な他のタンパク質およびＲＮＡ種の助けによりリボソーム上に生じる翻訳プロセスによりｍＲＮＡから生産される。翻訳は、開始、伸張および終結の三つのフェーズからなる。翻訳は、タンパク質因子、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、補助因子およびｍＲＮＡ上で翻訳を開始するように翻訳装置を導くｍＲＮＡ上のシグナルを認識するリボソームサブユニットからなる開始複合体の形成により開始される。一旦、開始複合体が形成されると、ポリペプチド鎖の成長は、リボソームだけでなくｔＲＮＡおよびｔＲＮＡ合成酵素のペプチド生成酵素活性によるアミノ酸の反復的添加により生じる。リボソームのＡ部位における三つの終結コドン（ＵＡＡ、ＵＡＧ、ＵＧＡ）のうちの一つの存在が、ポリペプチド鎖終結因子（ＲＦｓ）に終結シグナルを結合し、認識するよう合図する。次に、リボソームのＰ部位に位置するｔＲＮＡの３ヌクレオチドと新生ポリペプチド鎖間のエステル結合が、加水分解され、完全ポリペプチド鎖が遊離し、リボソームサブユニットは、次回の翻訳のために再利用される。
【０００６】
塩基数が変化するＤＮＡ配列の変異は、挿入または欠失変異（例えば、フレームシフト変異）として分類され、ゲノムの主な破壊を生じる可能性がある。一つの塩基を別の塩基に変化させ、アミノ酸置換を生じるＤＮＡの変異は、ミスセンス変異と標識される。塩基置換は、移行（一つのプリンから別のプリンに、または一つのピリミジンから他のピリミジンに）およびトランスバージョン（プリンからピリミジンに、またはピリミジンからプリンに）のクラスに細分される。
【０００７】
移行およびトランスバージョン変異は、アミノ酸コドンを三つの停止コドンの一つに変化させるナンセンス変異を生じる可能性がある。これらの未熟な終結コドンは、未熟な翻訳終結の結果により、細胞において異常タンパク質を生産する可能性がある。必須遺伝子におけるナンセンス変異は致命的で、いくつか例をあげると、癌、リソソーム病、筋ジストロフィー症、嚢胞性線維症および血友病などの数多くのヒト疾患も引き起こす可能性がある。
【０００８】
ヒトｐ５３遺伝子は、ヒト癌のなかで最も一般的な変異遺伝子である（Ｚａｍｂｅｔｔｉ，Ｇ．Ｐ．およびＬｅｖｉｎｅ，Ａ．，ＦＡＳＥＢ７：８５５〜８６５（１９９３））。遺伝および自然発生癌の双方で発見された５０以上の異なるタイプのヒトにおける癌はｐ５３変異を含み、この遺伝子の変異はヒトにおける癌全体の５０〜５５％の確率で生じる（Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎ，Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：３５５１〜５５（１９９４）；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ（ＩＡＲＣ）ｄａｔａｂａｓｅ）。結腸直腸癌の約７０％、肺癌の５０％および乳癌の４０％が、変異体ｐ５３を含む（Ｋｏｓｈｌａｎｄ，Ｄ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１９５３（１９９３））。ｐ５３の異常型は、予後不良、より進行性の腫瘍、転移および低い５年生存率（Ｉｄ．）と関連する。ＤＮＡ損傷に対する細胞増殖停止および／またはアポトーシスの誘発におけるｐ５３の役割は、増殖の優位性を得た変異細胞の破壊に必要不可欠であると信じられている。さらに、ｐ５３は、急速に分化する細胞をアポトーシスシグナルに感作させる。ｐ５３遺伝子において１５，０００以上の報告された変異の約７％が、ナンセンス変異である。つまり、ｐ５３ナンセンス変異に向けられた安全で効果的な治療が必要とされる。
【０００９】
ナンセンス変異を伴う菌種および真核生物菌株において、ナンセンス変異の抑制は、変異体ｔＲＮＡがナンセンスコドンを認識できるためｔＲＮＡ分子の一つにおける変異の結果として、翻訳プロセスに関わるタンパク質における変異の結果として、リボソーム（リボソームＲＮＡまたはリボソームタンパク質のいずれか）における変異の結果として、または翻訳プロセス（例えば、シクロヘキシミドまたはアミノグリコシド系抗生物質）を変更することで知られる化合物の添加により起こる。結果は、アミノ酸がナンセンス変異の部位でポリペプチド鎖に組み込まれ、翻訳がナンセンスコドンで未熟に終結しない。挿入されたアミノ酸は、野生型タンパク質の本来のアミノ酸と必ず一致しないが、多くのアミノ酸置換は、タンパク質構造または機能において大きな作用をもたない。よって、ナンセンス変異の抑制により生産されたタンパク質は、野生型タンパク質のそれに近い活性を有する可能性がある。このシナリオは、ナンセンス変異の抑制を通して翻訳の未熟な終結を避けることによりナンセンス変異に関連する疾患を治療する機会を提供する。
【００１０】
真核生物停止コドンの読み通しを促進するアミノグリコシド抗生物質の能力は、ナンセンス変異により生じるヒト疾患において有力な治療薬としてこれらの薬剤で関心を集めている。このような治療手段が実行可能である疾患の一つは、現在効果的な治療がない致命的な小児神経変性疾患である、ニューロンセロイド脂褐素症（ＬＩＮＣＬ）である。リソソームトリペプチジル−ポリペプチターゼ１（ＴＰＰ−Ｉ）をエンコードした遺伝子ＣＬＮ２における未熟な終結コドン変異は、ＬＩＮＣＬと診断された子供の約半分において疾患と関係する。ＬＩＮＣＬ細胞株におけるＴＰＰ−Ｉ活性を回復するためのアミノグリコシドゲンタマイシンの能力が、調査されている。一般的に見られるナンセンス変異（Ａｒｇ２０８Ｓｔｏｐ）と異なる稀なナンセンス変異に化合ヘテロ接合である患者から得られた細胞株において、ＴＰＰ−Ｉの正常なレベルの約７％が、ゲンタマイシン治療を用いて、最大限に回復された。これらの結果は、アミノグリコシドまたは機能的に類似した薬剤によるナンセンス変異の薬理的抑制が、ＬＩＮＣＬにおいて治療的に有効であることを示唆する（Ｓｌｅａｔら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｅｄ．、Ｎｅｕｒｏｌ．、５：ＳｕｐｐｌＡ５７〜６２（２００１））。
【００１１】
嚢胞性線維症膜透過性調節因子（ＣＦＴＲ）遺伝子における未熟な終結コドンを有する培養細胞において、アミノグリコシドを用いた治療は、完全長のＣＦＴＲの生産を導いた（Ｂｅｄｗｅｌｌら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３：１２８０〜１２８４（１９９７）；Ｈｏｗａｒｄら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：４６７〜４６９（１９９６））。ジュシェンヌ型筋ジストロフィーのためのマウスモデルにおいて、硫酸ゲンタマイシンが未熟な終結コドンで翻訳終結を抑制するのが観察され、結果として完全長ジストロフィンを生じた（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４：３７５〜３８１（１９９９））。４６７−４６９  （１９９６））。ジュシェンヌ型筋ジストロフィーのためのマウスモデルにおいて、硫酸ゲンタマイシンが未熟な終結コドンで翻訳終結を抑制するのが観察され、結果として完全長ジストロフィンを生じた（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４：３７５〜３８１（１９９９））。完全長ジストロフィン量のわずかな増加は、ｍｄｘマウスの縮小誘導（contraction-induced）された損傷に対して保護を提供した。ナンセンスコドンの部位に挿入されたアミノ酸は、これらの研究では判断されなかった。
【００１２】
従って、ナンセンスコドンの誤読を媒介することにより未熟な翻訳終結を抑制する小型分子の治療法または予防法は、数多くの疾患の治療に役立つだろう。社会にナンセンス変異により生じる疾患に対して使用することができる選択的治療法または予防法の広範なスペクトラムを導く、小型分子薬剤、特に経口生物利用薬剤の発見は、まだ始まったばかりである。
【００１３】
クリトシン（Ｃｌｉｔｏｃｉｎｅ）（６−アミノ−５−ニトロ−４−（β−Ｄ−リボ−  ｆｕｒａｎｏｓｙｌａｍｉｎｏ）ピリミジン）は、マッシュルームＣｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｉｎｖｅｒｓａから最初に分離された自然発生する環外アミノヌクレオシドである（Ｋｕｂｏら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，２７：４２７７（１９８６））。クリトシンの全合成も報告されている（Ｍｏｓｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３１：７８６〜７９０（１９８８）およびＫａｍｉｋａｗａら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９５（１９９８））。４２７７  （１９８６））。クリトシンは、白血病細胞系に対して殺虫作用および細胞増殖抑制作用を保持すると報告されている（Ｋｕｂｏら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，２７：４２７７（１９８６）およびＭｏｓｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３１：７８６〜７９０（１９８８））。しかし、ナンセンス変異に関連する疾患の治療としてのクリトシンの使用は、現在まで開示されていなかった。また、ナンセンス変異に関連する癌または疾患の治療として利用性をもつクリトシンの類似体または誘導体の開発を誰も報告していない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
よって、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患の治療または予防のための新薬の開発のために、主要分子を開発、特徴付けおよび最適化する必要がいまだ存在する。従って、このような化合物を提供することが、本発明の目的である。
【００１５】
本明細書に記載される全ての資料は、本明細書の説明を通して、参照により本出願に組入れるものとする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の要約
本発明により、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結を抑制する化合物が同定され、それらの使用方法が提供される。
【００１７】
本発明の様態の１つとして、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結を抑制するため、およびｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患を治療するために役立つ、式（１）の化合物が提供される。
【化１】
2008515992.tif 000002
【００１８】
式中：
Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺはＮまたはＣ−Ｒａより独立して選択され、Ｗ，Ｘ，Ｙ，またはＺはＮである、Ｒａが水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基の場合；
ｎは０，１，２，または３であり；
Ｒ１は一つのシアノ基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、または一つのヒドロキシ基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、または一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基であり、
Ｒは、ヒドロキシ基、ハロゲン、一つまたはそれ以上の独立して選択されるハロゲンまたはヒドロキシ基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキル、一つまたはそれ以上の独立して選択されるハロゲンまたはフェニル基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたＣ４−Ｃ８シクロアルキル、−Ｒｂ基、−Ｏ−Ｒｂ基、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、または−Ｒｂ基で任意に置換された５から６員へテロ環、二つの環構造を有する９から１０員へテロ環、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換されたチオ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換されたスルホニル、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、スルホニル、またはカルボニル基で任意に置換されたアミノから独立して選択され、ここでアミノスルホニル基は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換され、アミノカルボニル基はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ベンズオキシ基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたアミノ基から任意に置換された、またはベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシンイル基に付随するフェニル環を有する二つのＲ基であり、−Ｒｂは以下の一つまたはそれ以上で任意に置換されたＣ６−Ｃ８アリールである、体細胞突然変異により生じる疾患を治療または阻止する方法。
【００１９】
ここで−Ｒｂは一つのＣ６−Ｃ８アリールであり、一つ以上の以下のものによって任意に置換された：一つのヒドロキシ基、一つのハロゲン基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基によって置換された一つのアミノ基；
または、前述の式１の化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒化合物、多形体、ラセミ体、または立体異性体。
【００２０】
本発明の一態様では、ナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結の抑制のために、またｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾病の予防または治療法のための方法が提供される。このような疾患は、これに制限されるものではないが、ＣＮＳ疾患、炎症性疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、心血管疾患または肺疾患などのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結により生じる遺伝性疾患、より好ましくは疾患は癌（または他の増殖性疾患）、アミロイド症、アルツハイマー症、アテローム性動脈硬化、巨人症、低身長病、甲状腺機能低下、甲状腺機能亢進病、嚢胞性線維症、加齢、肥満症、パーキンソン病、ニーマン・ピック病、家族性高脂血症、網膜色素変性病、マルファン症候群、リソソーム病、筋ジストロフィー症、嚢胞性線維症、血友病またはニューロンセロイド脂褐素症（ＬＩＮＣＬ）である。
【００２１】
実施形態の一つとして、本発明は、本発明の少なくとも一つの化合物のナンセンス抑制量を必要とする患者に投与することを含む、ｍＲＮＡにおけるナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結の抑制方法に方向づけられる。
【００２２】
さらに他の実施形態において、治療効果のある量の少なくとも一つの本発明の化合物を必要とする患者に投与することを含む、癌、リソソーム病、筋ジストロフィー症、嚢胞性線維症、血友病またはニューロンセロイド脂褐素症を治療する方法を提供する。
【００２３】
これらと本発明の他の様態は、以下の好適な実施形態および詳細な説明を参照することにより、より明確に理解されるであろう。
【００２４】
特定の実施形態
1.  体細胞突然変異により生じる疾患を治療または阻止する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の式１の化合物
【化２】
2008515992.tif 000003
【００２５】
式中：
Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺはＮまたはＣ−Ｒａより独立して選択され、Ｗ，Ｘ，Ｙ，またはＺはＮである、Ｒａが水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基の場合；
ｎは０，１，２，または３であり；
Ｒ１は一つのシアノ基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、または一つのヒドロキシ基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、または一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基であり、
Ｒは、ヒドロキシ基、ハロゲン、一つまたはそれ以上の独立して選択されたハロゲンまたはヒドロキシ基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキル、一つまたはそれ以上の独立して選択されたハロゲンまたはフェニル基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたＣ４−Ｃ８シクロアルキル、−Ｒｂ基、−Ｏ−Ｒｂ基、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、または−Ｒｂ基で任意に置換された５から６員へテロ環、二つの環構造を有する９から１０員へテロ環、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換されたチオ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換されたスルホニル、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、スルホニル、またはカルボニル基で任意に置換されたアミノから独立して選択され、ここでアミノスルホニル基は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換され、アミノカルボニル基はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ベンズオキシ基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたアミノ基から任意に置換される、またはベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシンイル基に付随するフェニル環を有する二つのＲ基であり、−Ｒｂは以下の一つまたはそれ以上で任意に置換されたＣ６−Ｃ８アリールである、体細胞突然変異により生じる疾患を治療または阻止する方法。一つのヒドロキシ基、一つのハロゲン基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基によって置換された一つのアミノ基；
または、前述の式１の化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒化合物、多形体、ラセミ体、または立体異性体。 
2.  式１の化合物、またはその薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒化合物、溶媒化合物、ラセミ体、または立体異性体を前記化合物および薬学的に許容しうる担体または希釈剤を含む組成物として投与される、前記実施形態1に記載の方法。 
3.  前記投与が皮下である、前記実施形態1に記載の方法。 
4.  Ｒ１がメタ位またはパラ位にある、前記実施形態1に記載の方法。
【００２６】
5.  Ｗ、Ｙ、およびＺはそれぞれＮであり、ＸがＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ａ）。 
【化３】
2008515992.tif 000004
【００２７】
6.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態5に記載の方法。 
7.  Ｒａが水素である、前記実施形態5に記載の方法。 
8.  ｎが１または２である、前記実施形態5に記載の方法。 
9.  Ｒが一つのハロゲン基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、または一つのアルコキシ基から独立して選択される、前記実施形態5に記載の方法。 
10.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態5に記載の方法。
【００２８】
11.  ＹおよびＺがともにＮであり、ＷおよびＸがともにがＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｂ）。 
【化４】
2008515992.tif 000005
【００２９】
12.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態11に記載の方法。 
13.  Ｒａが水素である、前記実施形態11に記載の方法。 
14.  ｎが１または２である、前記実施形態11に記載の方法。 
15.  Ｒが一つのハロゲン基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つのアルコキシ基、一つのハロアルコキシ基、アミノ、またはピロリル基から独立して選択される、前記実施形態11に記載の方法。 
16.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態11に記載の方法。
【００３０】
17.  ＷおよびＹがともにＮであり、ＸおよびＺがともにがＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｃ）。 
【化５】
2008515992.tif 000006
【００３１】
18.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態17に記載の方法。 
19.  Ｒａが水素である、前記実施形態17に記載の方法。 
20.  ｎが１または２である、前記実施形態17に記載の方法。 
21.  Ｒが一つのＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、前記実施形態17に記載の方法。 
22.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態17に記載の方法。
【００３２】
23.  ＷおよびＺがともにＮであり、ＸおよびＹがともにＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｄ）。 
【化６】
2008515992.tif 000007
【００３３】
24.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態23に記載の方法。 
25.  Ｒａが水素またはメチルから独立して選択された、前記実施形態23に記載の方法。
【００３４】
26.  ｎが１または２である、前記実施形態23に記載の方法。 
27.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態23に記載の方法。
【００３５】
28.  ＷがＮで、Ｘ、Ｙ、およびＺがそれぞれＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｅ）。 
【化７】
2008515992.tif 000008
【００３６】
29.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態28に記載の方法。 
30.  Ｒａが水素である、前記実施形態28に記載の方法。 
31.  ｎが１または２である、前記実施形態28に記載の方法。 
32.  Ｒが一つのＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、前記実施形態28に記載の方法。 
33.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態28に記載の方法。
【００３７】
34.  ＸがＮで、Ｗ、Ｙ、およびＺがそれぞれＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｆ）。 
【化８】
2008515992.tif 000009
【００３８】
35.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態34に記載の方法。 
36.  Ｒａが水素である、前記実施形態34に記載の方法。 
37.  ｎが１または２である、前記実施形態34に記載の方法。 
38.  Ｒが一つのＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、前記実施形態34に記載の方法。 
39.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態34に記載の方法。
【００３９】
40.  ＹがＮで、Ｗ、Ｘ、およびＺがそれぞれＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｇ）。 
【化９】
2008515992.tif 000010
【００４０】
41.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態40に記載の方法。 
42.  Ｒａが水素である、前記実施形態40に記載の方法。 
43.  ｎが１または２である、前記実施形態40に記載の方法。 
44.  Ｒが一つのＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、前記実施形態40に記載の方法。 
45.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態40に記載の方法。
【００４１】
46.  ＺがＮで、Ｗ、Ｘ、およびＹがそれぞれＣ−Ｒａである、前記実施形態1に記載の方法（式１−Ｈ）。 
【化１０】
2008515992.tif 000011
【００４２】
47.  Ｒ１が一つのカルボキシ基であり、メタ位またはパラ位にある、前記実施形態46に記載の方法。 
48.  Ｒａが水素である、前記実施形態46に記載の方法。 
49.  ｎが１または２である、前記実施形態46に記載の方法。 
50.  Ｒが一つのＣ１−Ｃ４アルキル基から独立して選択される、前記実施形態46に記載の方法。 
51.  Ｒがメタ位および／またはパラ位にある、前記実施形態46に記載の方法。
【００４３】
52.  自己免疫疾患、血液疾患、膠原病、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、肺疾患、炎症性疾患または中枢神経系疾患を治療または阻止する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。 
53.  前記投与が皮下である、前記実施形態52に記載の方法。 
54.  前記自己免疫疾患は関節リウマチまたは移植片対宿主病である、前記実施形態52に記載の方法。 
55.  前記炎症性疾患は関節炎である、前記実施形態52に記載の方法。
【００４４】
56.  前記中枢神経系疾患は、多発性硬化症、筋ジストロフィー症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルツハイマー病、神経変性疾患またはパーキンソン病である、前記実施形態52に記載の方法。 
57.  前記血液疾患は、血友病、フォン・ヴィレブランド病、血管拡張性失調症、β型サラセミアまたは腎臓結石である、前記実施形態52に記載の方法。 
58.  前記膠原病は骨形成不全症または肝硬変である、前記実施形態52に記載の方法。
【００４５】
59.  家族性赤血球増加症、免疫不全、腎疾患、嚢胞性線維症、家族性高脂血症、網膜色素変性病、アミロイド症、血友病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、アテローム性動脈硬化、巨人症、低身長病、甲状腺機能亢進症、加齢、肥満症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー症またはマルファン症候群を治療または阻止する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。 
60.  前記投与が皮下である、前記実施形態59に記載の方法。
【００４６】
61.  ヒトの癌を治療または阻止する方法であって、これを必要とするヒトに有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。
【００４７】
62.  前記投与が皮下である、前記実施形態61に記載の方法。 
63.  前記癌は、頭および頚、眼、皮膚、口、喉、食道、胸、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓または副腎の癌である、前記実施形態61に記載の方法。 
64.  前記化合物またはその薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体または立体異性体は，薬学的に許容しうる担体または希釈剤を含む、前記実施形態61に記載の方法。 
65.  前記癌は、固形腫瘍である、前記実施形態61に記載の方法。 
66.  前記癌は、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽種、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽種、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血行性腫瘍（ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎ  ｔｕｍｏｒ）または多発性骨髄腫である、前記実施形態61に記載の方法。 
67.  前記癌は、急性リンパ性白血病、急性リンパ性β細胞白血病、急性リンパ性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄芽球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病または多発性骨髄腫である、前記実施形態61に記載の方法。
【００４８】
68.  前記ｐ５３遺伝子の突然変異に関連した疾患を治療または阻止する方法であって、これを必要とする患者に有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体を投与することを特徴とする方法。 
69.  前記投与が皮下である、前記実施形態68に記載の方法。 
70.  前記疾患は、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、髄索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳糖腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮癌、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血行性腫瘍（ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎ  ｔｕｍｏｒ）または多発性骨髄腫である、前記実施形態68に記載の方法。
【００４９】
71.  癌細胞増殖を阻害する方法であって、癌細胞を有効量の式１の化合物、あるいは、その薬学的に許容しうる塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、または立体異性体と接触させることを特徴とする方法。 
72.  哺乳類のタンパク質を選択的に産生する方法であって、前記哺乳類のナンセンス突然変異を含む遺伝子を転写することと、前記タンパク質がナンセンス突然変異を含む前記遺伝子から産生され、式１の有効量の化合物を前記哺乳類に提供することを特徴とし、前記タンパク質は前記哺乳類によって産生されるものである前記方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
発明の詳細な説明
未熟な翻訳終結は異常な蛋白を作り出す原因となり、この異常な蛋白は致死的であったり、または多くの疾患を引き起こし、これらの疾患として、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症や血友病などが含まれるがこれらに限定されない。本発明によって、ナンセンス変異を抑制する化合物が同定され、またその化合物の使用法が与えられた。
【００５１】
Ａ．本発明の化合物
本発明の一つの態様では、ナンセンス変異の抑制に有用な本発明の化合物が提供された。ある実施形態においては、本発明の化合物は特異的にナンセンス変異を抑制し、また他の実施形態においては、本発明の化合物はナンセンス変異の抑制のみならず、疾患の治療にも寄与し、これらの疾患として、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症や血友病などが含まれるがこれらに限定されない。
【００５２】
ナンセンス変異抑制に本発明の好ましい化合物は、以下に示す式（１）を含む。
【化１１】
2008515992.tif 000012
【００５３】
式中：
Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺはＮまたはＣ−Ｒａより独立して選択され、Ｗ，Ｘ，Ｙ，またはＺはＮである、Ｒａが水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基の場合；
ｎは０，１，２，または３であり；
Ｒ１は一つのシアノ基、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、または一つのヒドロキシ基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、または一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基であり、
Ｒは、ヒドロキシ基、ハロゲン、一つまたはそれ以上の独立して選択されたハロゲンまたはヒドロキシ基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルキル、一つまたはそれ以上の独立して選択されるハロゲンまたはフェニル基で任意に置換されたＣ１−Ｃ４アルコキシ、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたＣ４−Ｃ８シクロアルキル、−Ｒｂ基、−Ｏ−Ｒｂ基、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、または−Ｒｂ基で任意に置換された５から６員へテロ環、二つの環構造を有する９から１０員へテロ環、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル、一つまたは二つのＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換されたチオ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換されたスルホニル、一つまたはそれ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、スルホニル、またはカルボニル基で任意に置換されたアミノから独立して選択され、  ここでアミノスルホニル基は、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−Ｒｂ基で任意に置換され、アミノカルボニル基はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、ベンズオキシ基、または−Ｒｂ基で任意に置換されたアミノ基から任意に置換された、またはベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシンイル基に付随するフェニル環を有する二つのＲ基であり、−Ｒｂは以下の一つまたはそれ以上で任意に置換されたＣ６−Ｃ８アリールである、  体細胞突然変異により生じる疾患を治療または阻止する方法。
【００５４】
ここで−Ｒｂは一つのＣ６−Ｃ８アリールであり、一つ以上の以下のものによって任意に置換された：一つのヒドロキシ基、一つのハロゲン基、一つのＣ１−Ｃ４アルキル基、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基によって置換された一つのアミノ基；
または式１の当該化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶剤和物、包接体、ラセミ体、立体異性体、または多型体。
【００５５】
他の好ましい式１の実施形態では、好ましいナンセンス変異の抑制で有用な本発明の化合物は、式（１）の化合物を含み、
ここで、Ｎは、０、１または２であり、
Ｒ１は、ヒドロキシル基で置換されたシアノ基、カルバモイル、またはカルボニル基であり、
Ｒは、ヒドロキシル基、ハロゲン、１つ以上の独立して選択されるハロゲンで任意に置換されたＣ１‐Ｃ４アルキル、１つ以上の独立して選択されるハロゲンで任意に置換されたＣ１‐Ｃ４アルコキシ、‐Ｒｂ基、５から６員複素環、１または２つの独立して選択されるＣ１‐Ｃ４アルキルで任意に置換されたアミノから独立して選択されるか、または２つのＲ基およびそれらが結合するフェニル環とともに、‐ＲｂがＣ６‐Ｃ８アリールベンゾである、［１，３］ジオキソールまたは２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成するか、
または式１の当該化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶剤和物、包接体、ラセミ体、立体異性体、または多型体を含む。
【００５６】
当業者によって理解されているように、ある本発明の化合物は少なくとも一つのキラル中心を含んでもよく、またそれ自体ラセミ混合物または鏡製像的に純粋な組成として存在してもよい。本明細書で用いられる“鏡製像的に純粋”とは、実質上単一の異性体を含む組成物を示しており、好ましくは９０％、９２％、９５％、９８％、９９％または１００％単一の異性体を含む。
【００５７】
本明細書で用いられる“アルキル”とは、通常直鎖の飽和水酸カルボニル基、分枝または環状配置を示し、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、２−ブチル、３−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、シクロヘキシル、ｎ−ヘプチル、オクチル、ｎ−オクチルなどが含まれる。いくつかの実施形態において、アルキル置換基は、Ｃ１からＣ８、Ｃ１からＣ６、またはＣ１からＣ４アルキル基でもよい。ある実施形態において、アルキル基は一つ以上のハロゲン基またはアルコキシ基によって任意に置換される。例えば、アルキル基はモノハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキルを含む、ハロアルキルであってもよい。
【００５８】
本明細書で用いられるアルキレンとは、一つ以上の炭素―炭素の二重結合を有する直鎖、分枝、または環状のアルケン基を示しており、例えば３−プロペニルを含むＣ２からＣ６のアルキレン基などである。
【００５９】
本明細書で用いられる“アリール”とは炭素環式芳香環構造を示す。アリール基の範囲に含まれるものとして、５から２０個の炭素原子を有する芳香環がある。アリール環構造は一つ以上の環状構造、例えば単環、二重環、三重環化合物を有する化合物を含む。アリール基の例として、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、フェナントレニル（すなわちフェナントレン）、ナフチル（すなわちナフタレン）環状構造がある。ある実施形態において、アリール基は任意に置換されてもよい。
【００６０】
本明細書で用いられる“複素環”とは、一つ以上の原子を有する環構造を示し、ヘテロ原子は炭素以外の元素である。ヘテロ原子として典型的なものは、酸素、窒素、硫黄原子である。ヘテロ環に含まれる範囲の中で、さらに独立して選択可能なものは、酸素、窒素、硫黄複素環構造である。環構造は一つ以上の環構造、例えば単環、二重環、三重環を有する化合物を含んでもよく、また、芳香族であってもよい、すなわち環構造がヘテロアリールであってもよい。複素環基の例として、モルフォリニル、ピロリジノリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、などがある。ある実施形態において、複素環は任意に置換されてもよい。
【００６１】
本明細書で用いられる“ヘテロアリール”とは、一つまたはそれ以上の原子を有する芳香環構造を示し、ヘテロ原子は炭素以外の元素である。ヘテロ原子として典型的なものは、酸素、窒素、硫黄原子である。ヘテロアリールに含まれる範囲の中で、さらに独立して選択可能なものは、酸素、窒素、硫黄ヘテロアリール環構造である。環構造は一つまたはそれ以上の環状構造、例えば単環、二重環、三重環式化合物を有する化合物を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、二つまたはそれ以上、三つまたはそれ以上、四つまたはそれ以上のヘテロ原子をそれぞれ有するヘテロアリール基の中から選択されるてもよい。ヘテロアリール環構造は、五つまたはそれ以上の原子、六つまたはそれ以上の原子、八つまたはそれ以上の原子をそれぞれ有するヘテロアリール環構造の中から選択されてもよい。好ましい実施形態において、ヘテロアリールはは５から１０個の原子を含んでいる。ヘテロアリール環構造の例として、以下のものが含まれる：アクリジン、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾフラン、１、３−ジアジン、１、２−ジアジン、１、２−ジアゾール、１，４−ジアザナフタレン、フラン、フラザン、イミダゾール、インドール、イソキサゾール、イソキノリン、イソチアゾール、オキサゾール、プリン、ピリダジン、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピロール、キノリン、キノキサリン、チアゾール、チオフェン、１、３、５−トリアジン、１、２、４−トリアジン、１、２、３−トリアジン、テトラゾール、キナゾリン。
【００６２】
本明細書で用いられる“アルコキシ”とは、通常−Ｏ−Ｒ構造を有する基を示す。一定の実施形態においてＲはアルキル基であることがある。例えば、Ｃ１からＣ８、Ｃ１からＣ６アルキル基、またはＣ１からＣ４のアルキル基である。一定の実施形態において、アルコキシのＲ基は少なくとも一つのハロゲンよって任意に置換される。例えば、アルコキシのＲ基は、ハロアルキルであることがあり、すなわちハロアルコキシである。
【００６３】
ハロゲン置換基はハロゲン類、例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アスタチン、の中から独立して選択されることがある。
【００６４】
本発明の解釈上、一つまたはそれ以上の官能基または置換基が組み込まれている場合、好ましい実施形態を含め、明らかにされた化合物の中の任意の位置に出現する官能基または置換基は、それぞれ独立して選択され、また必要に応じて置換される。さらに、より一般的な置換基がこれ以後分子の任意の位置に設定される場合には、一般的な置換基はより特異的な置換基によって置換されることがわかっており、結果として生じた分子は本発明の分子の範囲内にある。
【００６５】
式１を参照すると、実施形態においては、Ｒは好ましくはメタ位、および／またはパラ位にあり、好ましくは一つのハロゲン、一つのＣ１−Ｃ４ハロアルキル、一つのＣ１−Ｃ４アルコキシ、一つのハロアルコキシ、一つのアミノであり、これは一つまたはそれ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基、一つの−Ｒｂ基、一つのピロリル基、一つのイミダゾリル基、または二つのＲ基によって任意に置換される。好ましいＲ基は、以下の表に示されるものを含む。
【００６６】
式１の一実施形態では、Ｒは、好ましくはハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、１つ以上のＣ１‐Ｃ４アルキル基で任意に置換されたアミノ、‐Ｒｂ基、５から６員複素環であるか、または２つのＲ基およびそれらが結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソール、または２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成する。
【００６７】
式１の一実施形態では、Ｒは、ハロゲンである。他の式１の実施形態では、Ｒは、フルオリン、塩素、または臭素である。
【００６８】
式１の一実施形態では、Ｒは、５から６員複素環である。他の式１の実施形態では、Ｒは、１つ以上の窒素を含む５員複素環である。式１の実施形態では、Ｒは、１つの窒素を含む５員複素環である。式１の実施形態では、Ｒは、２つの窒素を含む５員複素環である。式１の一実施形態では、Ｒは、３つの窒素を含む５員複素環である。式１の一実施形態では、Ｒは、１つの酸素を含む５員複素環である。式１の一実施形態では、Ｒは、２つの酸素を含む５員複素環である。式１の一実施形態では、Ｒは、３つの酸素を含む５員複素環である。さらなる式１の実施形態では、Ｒは、１つ以上の酸素および１つ以上の窒素を含む５員複素環である。
【００６９】
他の式１の実施形態では、Ｒは、１つ以上の窒素を含む６員複素環である。式１の実施形態では、Ｒは、１つの窒素を含む６員複素環である。式１の一実施形態では、Ｒは、２つの窒素を含む６員複素環である。式１の実施形態では、Ｒは、３つの窒素を含む６員複素環である。式１の実施形態では、Ｒは、１つの酸素を含む６員複素環である。式１の実施形態では、Ｒは、２つの酸素を含む６員複素環である。式１の一実施形態では、Ｒは、３つの酸素を含む６員複素環である。さらなる式１の実施形態では、Ｒは、１つ以上の酸素および１つ以上の窒素を含む６員複素環である。
【００７０】
式１の実施形態において、特に好ましいＲ基は、下表に示したものを含む。
【表１】
2008515992.tif 000013
【００７１】
式１の一実施形態では、ｎは２であり、Ｒ基はともに同一の基である。 
式１の一実施形態では、ｎは３であり、３Ｒ基はすべて同一の基である。
【００７２】
式１の他の実施形態では、Ｒ１は、好ましくはメタ位またはパラ位にあり、好ましくはシアノ、カルバモイルまたはヒドロキシル基、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、またはＣ１‐Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基である。さらなる実施形態では、特に好ましいＲ１基は、下表に示されるものを含む。
【表２】
2008515992.tif 000014
【００７３】
好ましい実施形態では、Ｗ、Ｙ、およびＺは、それぞれＮであり、ＸはＣ‐Ｒａ（式１‐Ａ）である。
【化１２】
2008515992.tif 000015
【００７４】
一実施形態における式１−Ａを参照して、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式１‐Ａの他の好ましい実施形態では、Ｒａは水素である。式１‐Ａ他の好ましい実施形態では、Ｒ１はメタ位またはパラ位にあるカルボキシ基であり、Ｒａは水素である。さらなる実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１または２である。さらなる実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１でありである。式１‐Ａの他の好ましい実施形態では、Ｒ１は、メタ位またはパラ位にあるカルボキシ基であり、Ｒａは水素であり、ｎは１でありまたは２である。式１‐Ａの他の好ましい実施形態では、Ｒ１は、メタ位またはパラ位にあるカルボキシ基であり、Ｒａは水素であり、ｎは１でありである。Ｒは、好ましくは、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、またはＣ１‐Ｃ４アルコキシから独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、Ｒは、メチル基、フルオリン基、メトキシ基、エトキシ  基、およびトリフルオロメチル基から独立して選択される。
【００７５】
他の好ましい実施形態では、ＹおよびＺはともにＮであり、ＷおよびＸはともにＣ‐Ｒａ（式１‐Ｂ）である。
【化１３】
2008515992.tif 000016
【００７６】
式１‐Ｂを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは０、１または２である。他の好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１でありまたは２である。式１‐Ｂのさらなる実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１でありである。
【００７７】
式１‐Ｂの一実施形態では、Ｒは、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、アミノ、またはピロリル基から独立して選択され、メタおよび／またはパラ位にあり、好ましくはパラ位にある。好ましい実施形態では、Ｒは、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、およびアミノ基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。式１‐Ｂのさらなる実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１であり、Ｒは、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、およびアミノ基から独立して選択される。
【００７８】
他の好ましい実施形態では、Ｒは、フルオリン、塩素、アミノ基、メチル基、イソプロピル基、ｔ‐ブチル基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基、およびトリフルオロメトキシ基から独立して選択される。式１‐Ｂのさらなる実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１であり、Ｒは、フルオリン、塩素、アミノ基、メチル基、イソプロピル基、ｔ‐ブチル基、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基、およびトリフルオロメトキシ基から独立して選択される。
【００７９】
さらに他の実施形態では、ＷおよびＹはともにＮであり、ＸおよびＺはともにＣ‐Ｒａ（式１‐Ｃ）である。
【化１４】
2008515992.tif 000017
【００８０】
式１‐Ｃを参照すると、一実施形態では、Ｒ１は好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらなる式１‐Ｃの実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは１でありまたは２である。式１‐Ｃのさらなる実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは好ましくは１である。実施形態では、好ましくはＣ１‐Ｃ４アルキルであり、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。式１‐Ｃの好ましい実施形態では、Ｒはメチル基である。式１‐Ｃの他の好ましい実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは好ましくは１であり、ＲはＣ１‐Ｃ４アルキルである。式１‐Ｃの他の好ましい実施形態では、Ｒａは好ましくは水素であり、ｎは好ましくは１であり、Ｒはメチル基である。
【００８１】
さらに他の実施形態では、ＷおよびＡはともにＮであり、ＸおよびＹはともにＣ‐Ｒａ（式１‐Ｄ）である。
【化１５】
2008515992.tif 000018
【００８２】
式１‐Ｄを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒ１はカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。実施形態では、ＸはＣ‐ＣＨ３であり、ＹはＣＨである。他の実施形態では、ＸはＣＨであり、ＹはＣ‐ＣＨ３である。式１‐Ｄの好ましい実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素またはＣ１‐Ｃ４アルキルから独立して選択され、ｎは、好ましくは１または２である。式１‐Ｄの他の好ましい実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素またはＣ１‐Ｃ４アルキルから独立して選択され、ｎは、好ましくは１である。
【００８３】
さらなる実施形態では、Ｒａは、水素またはメチルから独立して選択され、ｎは１でありまたは２である。他の好ましい実施形態では、Ｒａは、水素またはメチルから独立して選択され、ｎは１でありである。
【００８４】
さらに他の実施形態では、ＷはＮであり、Ｘ、Ｙ、およびＺはそれぞれＣ‐Ｒａ（式１‐Ｅ）である。
【化１６】
2008515992.tif 000019
【００８５】
式１‐Ｅを参照すると、一実施形態では、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらなる実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１または２である。好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１でありである。式１‐Ｅの実施形態では、Ｒは、好ましくはＣ１‐Ｃ４アルキル基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。さらなる実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１であり、Ｒは、好ましくはＣ１‐Ｃ４アルキル基である。式１‐Ｅの他の実施形態では、Ｒは、好ましくはメチル基またはイソプロピル基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。さらなる実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１であり、Ｒは、好ましくはメチル基またはイソプロピル基である。
【００８６】
さらに他の実施形態では、ＸはＮであり、Ｘ、Ｙ、およびＺはそれぞれＣ‐Ｒａ（式１‐Ｆ）である。
【化１７】
2008515992.tif 000020
【００８７】
式１‐Ｆを参照すると、一実施形態では、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式１‐Ｆの他の実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１または２である。式１‐Ｆの好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１でありである。他の好ましい実施形態では、Ｒは、好ましくはＣ１‐Ｃ４アルキル基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１であり、ＲはＣ１‐Ｃ４アルキル基である。他の好ましい実施形態では、Ｒはメチルおよびイソプロピル基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１であり、Ｒは、好ましくはメチルおよびイソプロピル基から選択される。
【００８８】
さらに他の実施形態では、ＹはＮであり、Ｗ、Ｘ、およびＺはそれぞれＣ‐Ｒａ（式１‐Ｇ）である。
【化１８】
2008515992.tif 000021
【００８９】
式１‐Ｇを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒ１はカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１または２である。さらなる実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素であり、ｎは、好ましくは１である。好ましい実施形態では、Ｒは、好ましくはＣ１‐Ｃ４アルキル基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１であり、ＲはＣ１‐Ｃ４アルキル基である。好ましい実施形態では、Ｒは、好ましくはメチルまたはイソプロピル基から独立して選択され、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは１であり、Ｒは、メチルまたはイソプロピル基である。
【００９０】
さらに他の実施形態では、ＺはＮであり、Ｗ、Ｘ、およびＹはそれぞれＣ‐Ｒａ（式１‐Ｈ）である。
【化１９】
2008515992.tif 000022
【００９１】
式１‐Ｈを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらなる実施形態では、Ｒａは水素であり、ｎは、好ましくは０または１である。好ましい実施形態では、ｎは１であり、ＲはＣ１‐Ｃ４アルキル基であり、Ｒは、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、ｎは１であり、Ｒはメチル基またはイソプロピル基であり、Ｒは、好ましくはメタおよび／またはパラ位にあり、さらに好ましくはパラ位にある。
【００９２】
他の実施形態では、本発明の好ましい化合物も式２の化合物、
【化２０】
2008515992.tif 000023
【００９３】
式中、
Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺは、Ｒａが水素またはＣ１‐Ｃ４アルキル基である、ＮまたはＣ‐Ｒａから独立して選択され、
Ｒ１は、シアノ基、１または２つのＣ１‐Ｃ４アルキル基で任意に置換されたカルバモイル、またはヒドロキシル基、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、またはＣ１‐Ｃ４アルコキシ基で置換されたカルボニル基であり、
Ｒ２は、水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル基、またはＣ１‐Ｃ４ハロアルキル基から独立して選択され、
Ｒ３およびＲ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、１つ以上のＣ１‐Ｃ４アルキル基で任意に置換されたアミノから独立して選択されるか、または２つのＲ基およびそれらが結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソール  または２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成し、
ここで、‐Ｒｂは、ヒドロキシル基、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル基、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ基、または１つ以上のＣ１‐Ｃ４アルキル基で任意に置換されたアミノ基のうちの１つ以上で任意に置換されたＣ６‐Ｃ８アリールである）、
または式２の当該化合物の薬学的に許容しうる塩、水和物、溶剤和物、包接体、ラセミ体、立体異性体、または多型体を含む。
【００９４】
式２を参照すると、Ｒ１は、好ましくはシアノ基、カルバモイル基、またはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２の一実施形態では、好ましいＲ２、Ｒ３、およびＲ４基は、以下の表から独立して選択される。
【表３】
2008515992.tif 000024
【００９５】
式２の好ましい実施形態では、Ｘ、Ｙ、およびＺはそれぞれＮであり、ＸはＣ‐Ｒａ（式２‐Ａ）である。
【化２１】
2008515992.tif 000025
【００９６】
式２‐Ａを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２‐Ａの他の好ましい実施形態では、ＲａおよびＲ２は、好ましくは水素である。式２‐Ａの好ましい実施形態では、Ｒ３は、水素、ハロゲン、およびＣ１‐Ｃ４アルコキシ基から独立して選択される。式２‐Ａの他の好ましい実施形態では、Ｒ３は、水素、フルオリン、およびメトキシ基から独立して選択される。式２‐Ａの好ましい実施形態では、Ｒ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、またはＣ１‐Ｃ４アルコキシである。式２‐Ａの他の好ましい実施形態では、Ｒ４は、フルオリン、メチル、トリフルオロメチル、メトキシまたはエトキシ基である。
【００９７】
式２の他の好ましい実施形態では、ＹおよびＺはともにＮであり、ＷおよびＸはともにＣ‐Ｒａ（式２‐Ｂ）である。
【化２２】
2008515992.tif 000026
【００９８】
式２‐Ｂを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒ１はカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらなる実施形態では、Ｒａは水素である。式２‐Ｂの好ましい実施形態では、Ｒ２は、水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、およびＣ１‐Ｃ４ハロアルコキシから独立して選択される。式２‐Ｂの他の好ましい実施形態では、Ｒ２は、水素、フルオリン、塩素、メチル、トリフルオロメチルおよびトリフルオロメトキシ基から独立して選択される。
【００９９】
式２‐Ｂの一実施形態では、Ｒ３は、好ましくは水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、およびＣ１‐Ｃ４ハロアルコキシから独立して選択される。式２‐Ｂの好ましい実施形態では、Ｒ３は、水素、フルオリン、塩素、メトキシ、およびトリフルオロメトキシ基から独立して選択される。
【０１００】
式２‐Ｂの一実施形態では、Ｒ４は、水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、アミノ、またはピロリル基である。式２‐Ｂの他の実施形態では、Ｒ４は、好ましくは水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、またはアミノ基である。式２‐Ｂの好ましい実施形態では、Ｒ４は、水素、フルオリン、塩素、メチル、イソプロピル、ｔ‐ブチル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、またはアミノ基である。
【０１０１】
式２のさらに他の実施形態では、ＷおよびＹはともにＮであり、ＸおよびＺはともに  Ｃ‐Ｒａ（式２‐Ｃ）である。
【化２３】
2008515992.tif 000027
【０１０２】
式２‐Ｃを参照すると、好ましい実施形態では、Ｒ１はカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２‐Ｃの好ましい実施形態では、Ｒａは水素である。式２‐Ｃの他の好ましい実施形態では、Ｒ３は、水素またはＣ１‐Ｃ４アルキルから独立して選択される。式２‐Ｃのさらなる実施形態では、Ｒ３は、水素またはメチル基から独立して選択される。式２‐Ｃの他の好ましい実施形態では、Ｒ４は水素またはＣ１‐Ｃ４アルキルである。式２‐Ｃのさらなる実施形態では、Ｒ４は水素またはメチル基である。
【０１０３】
式２のさらに他の実施形態では、ＷおよびＡはともにＮであり、ＸおよびＹはともにＣ‐Ｒａ（式２‐Ｄ）である。
【化２４】
2008515992.tif 000028
【０１０４】
式２‐Ｄを参照すると、一実施形態では、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２‐Ｄの他の実施形態では、Ｒａは、好ましくは水素またはメチルから独立して選択される。実施形態では、ＸはＣ‐ＣＨ３であり、ＹはＣＨである。他の実施形態では、ＸはＣＨであり、ＹはＣ‐ＣＨ３である。
【０１０５】
式２‐Ｄの実施形態では、Ｒ２は、好ましくは水素またはハロゲンから独立して選択される。式２‐Ｄの好ましい実施形態では、Ｒ２は、水素またはフルオリンから独立して選択される。式２‐Ｄの実施形態では、Ｒ３は、好ましくは水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシから独立して選択されるか、またはＲ４およびＲ３とＲ４が結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成する。式２‐Ｄの他の実施形態では、Ｒ３は、水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ基から独立して選択されるか、またはＲ４およびＲ３とＲ４が結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成する。式２‐Ｄの好ましい実施形態では、Ｒ３は、好ましくは水素、フルオリン、メチル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基から独立して選択されるか、またはＲ４およびＲ３とＲ４が結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成する。
【０１０６】
式２‐Ｄの一実施形態では、Ｒ４は、好ましくは水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、１または２つのＣ１‐Ｃ４アルキル基で任意に置換されたアミノ、‐Ｒｂ基、イミダゾリル基、モルホリニル基であるか、またはＲ３およびＲ３とＲ４が結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成する。式２‐の他の実施形態では、Ｒ４は、好ましくは水素、ハロゲン、Ｃ１‐Ｃ４アルキル、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１‐Ｃ４アルコキシ、Ｃ１‐Ｃ４ハロアルコキシ、１または２つのＣ１‐Ｃ４アルキル基で任意に置換されたアミノ、‐Ｒｂ基、イミダゾリル基であるか、またはＲ３およびＲ３とＲ４が結合するフェニル環とともに、ベンゾ［１，３］ジオキソールまたは２，３‐ジヒドロ‐ベンゾ［１，４］ジオキシニル基を形成する。式２‐Ｄの好ましい実施形態では、Ｒ４は、フルオリン、臭素、メチル、イソプロピル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシ、フェニル、イミダゾリル、モルホリニル、および２つのメチル基で置換されたアミノから選択される。
【０１０７】
式２のさらに他の実施形態では、ＷはＮであり、Ｘ、Ｙ、およびＺはそれぞれＣ‐Ｒａ（式２‐Ｅ）である。
【化２５】
2008515992.tif 000029
【０１０８】
式２−Ｅを参照すると、一実施形態において、Ｒ１は好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２−Ｅの他の実施形態において、Ｒａ、Ｒ２、およびＲ３は好ましくは水素である。式２−Ｅの好ましい実施形態において、Ｒ４は一つのＣ１−Ｃ４アルキル基である。式２−Ｅの好ましい実施形態において、Ｒ４は一つのメトキシ基またはイソプロピル基である。
【０１０９】
さらに式２の別な好ましい実施形態において、ＸがＮで、Ｗ、Ｙ、およびＺがそれぞれＣ−Ｒａである（式２−Ｆ）。
【化２６】
2008515992.tif 000030
【０１１０】
式２−Ｆを参照すると、一実施形態において、Ｒ１は好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２−Ｅの好ましい実施形態において、Ｒａ、Ｒ２そしてＲ３は好ましくはハイドロゲンである。式２−Ｆの他の好ましい実施形態において、Ｒ４は一つのＣ１−Ｃ４アルキル基である。式２−Ｆの好ましい実施形態において、Ｒ４は一つのメトキシ基またはイソプロピル基である。  さらに別な式２の実施形態において、ＹがＮで、Ｗ、Ｙ、およびＺがそれぞれＣ−Ｒａである（式２−Ｇ）。
【化２７】
2008515992.tif 000031
式２−Ｇを参照すると、一実施形態において、Ｒ１は好ましくはカルボキシ基であり、好ましくはメタ位またはパラ位にある。式２−Ｇの好ましい実施形態において、Ｒａ、Ｒ２そしてＲ３は好ましくはハイドロゲンである。式２−Ｇの他の好ましい実施形態において、Ｒ４は一つのＣ１−Ｃ４  アルキル基である。式２−Ｇの好ましい実施形態において、Ｒ４は一つのメトキシ基またはイソプロピル基である。式２のさらに他の実施形態では、ＺはＮであり、Ｗ、Ｘ、およびＹはそれぞれＣ‐Ｒａ（式２‐Ｈ）である。
【化２８】
2008515992.tif 000032
【０１１１】
式２‐Ｈを参照すると、ある実施形態においては、Ｒ１は、好ましくはカルボキシ基であり、また好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらに、式２‐Ｈの好ましい実施形態では、Ｒａ、Ｒ２、およびＲ３は、好ましくは水素である。好ましい実施形態では、Ｒ４は、水素またはＣ１‐Ｃ４アルキル基である。他の好ましい実施形態では、Ｒ４は、水素またはメチルまたはイソプロピル基である。さらなる実施形態では、Ｒ４は水素である。他の好ましい実施形態では、Ｒ４は、メチルまたはイソプロピル基である。
【０１１２】
好ましい本発明の化合物は、以下のものを含む：
【表４】
2008515992.tif 000033
2008515992.tif 000034
2008515992.tif 000035
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2008515992.tif 000041
2008515992.tif 000042
特に好ましい化合物の化合物番号は：１０，３３，３５，３６，３７，４０，４２，４３，５６，６０，６３，６４，６５，６６，および７１。
【０１１３】
上記実施形態Ａにおいて説明される方法は、本発明における以下の化合物の調合に使用されてもよい。当該の明細に基づいて、熟練した技術者は、ここで記述された方法に有用であると考えられる、本請求内に記載された発明の範囲内に含まれるよう意図された他の化合物を理解するであろう。
【０１１４】
Ｂ．本発明の化合物の調製
本発明の化合物は、当業者に既知のいかなる方法でも産生できる。例として、本発明の化合物は個々のアジン環コア構造を参照して、以下の普遍的なスキームに従い調合されてもよい。例えば、式１‐Ａおよび２‐Ａのトリアジン化合物は、スキームＡに示される方法で調製されてよい。
【化２９】
2008515992.tif 000043
【０１１５】
スキームＡに従って、式Ａ１のベンズアミド基質は、ＲＮはが通常、小さいアルキルであるか、ＲＮ基とともに、５または６員環（例えば、ピロリジン、ピペラジン、モルフォリンなど）を形成し、Ｏアルキルが、メトキシまたはエトキシなどの小さいアルコキシ基である、式（ＲＮ）２ＮＣＨ（Ｏアルキル）２の試薬で処理される。この縮合反応は、無水のホルムアミドアセタール試薬または、エタノールまたは酢酸などの高い沸点を持つ溶剤のいずれかにおいて行われ、式Ａ２のベンゾイルホルムアミジン生成物を得てよい。
【０１１６】
別の反応では、式Ａ３のシアノ安息香酸試薬は、式Ａ４のエステル化合物に変換されてよい。基ＲＰは、アルキル基、直鎖または分枝鎖を意味する。かかるエステル化反応は、当業者に周知であり、これらに限定されないが、ａ）ベンゾイル塩化物に変換し、塩基の存在下で式ＲＰＯＨの対応するアルコール試薬で処理する、ｂ）カルボジイミドなどでｉｎ  ｓｉｔｕ活性化する、Ｃ）ホスフィン化合物およびジアゾカルボン酸塩試薬を使用する光延条件の使用を含む。ＲＰは、上記で記述したように、好ましくはできるだけ大きく、ｔ‐ブチルであってよく、
イソブチレンとの酸触媒反応、またはベンゾイル塩化物でのｔ‐ブタノールの縮合によって結合してよい。他の実施形態では、固相は、中間体の精製において援助するかもしれないＲＰとして使用されてよい。Ｗａｎｇ樹脂、Ｊａｎｄａ樹脂などを含む、組み合わせ合成化学において共通する固相は、使用されてよい。
【０１１７】
Ａ４の化合物におけるニトリル基は、その後、アミジン基に変換され、式Ａ５の化合物が得られてよい。この変換は、氷点下から還流の範囲の温度で、テトラヒドロフランまたは１，４‐ジオキサンなどのプロトン性溶剤において、リチウム、ナトリウムまたはカリウムヘキサメチルジシラザンなどの試薬で処理することによって成し遂げられてよい。水性精密検査および中和は、その後、シリコン基の除去およびアミジン生成物の生産に使用されてよい。他のかかる変換は、ニトリル基の酸触媒アミノ化を含んでよい。
【０１１８】
式Ａ２およびＡ５の化合物は、その後、式Ａ６の化合物におけるトリアジン環に対して環縮合を行うことができてよい。この反応は、酢酸、グリムなどの高い沸点を持つ溶剤において酸触媒されてよい。反応は、マイクロ波反応器を使用して、加速されてもよい。合成の最終段階は、通常、必要に応じて、式Ａ６の化合物におけるカルボキシレート基の脱保護を含む。立体的に込み合っていないＲＰ基に対して、これは、好ましくは、通常、大気から高温の少量の水の存在下で、エタノール、ＴＨＦなどの溶剤において、水酸化物塩（リチウム水酸化物または水酸化ナトリウムなど）で処理されることによって成し遂げられる。小さいＲＰ基（特にメチル）は、ジメチルスルホキシドまたはピリジンなどの極性溶剤における、リチウムヨウ化物などの求核剤によって除去されてよい。最終的に、ｔ‐ブチルなどの、酸に不安定なＲＰ基は、以前の反応（例えば、Ａ６を得るため）の条件の下で切断され、必要ならば、強い酸性条件で、直接カルボン酸を得てよい。
【０１１９】
ピリミジンの合成（式１‐Ｂおよび２‐Ｂ）で使用された一般的な方法をスキームＢに示す。
【化３０】
2008515992.tif 000044
【０１２０】
式Ｂ１のアセトフェノン基質は、変換Ａ１からＡ２と同様の方法で、ホルムアミドアセタール試薬と反応させ、式Ｂ２の生成物を得てよい。別の反応では、式Ｂ３のベンゾニトリル化合物は、Ａ４からＡ５の変換に類似する方法で、式Ｂ４のアミジンに変換されてよい。式Ｂ２およびＢ４の化合物の縮合反応は、その後、式１‐Ｂまたは２‐Ｂのピリミジン生成物を生産してよい。この反応は、高温で極性溶剤（エタノールまたは１，４‐ジオキサンなど）において塩基（水素化ナトリウムまたはナトリウムエトキシド）の存在下で行われてよい。Ｒ１基の相互交換は可能であり、式Ｂ５のニトリル化合物の反応によって裏付けられる。ニトリルは、強い酸性水溶液（塩化水素系または硫黄系）を使用してカルボキサミドに加水分解し、式Ｂ６の化合物を得てよい。同様に、基本の条件（例えば、水酸化ナトリウム）を使用して、式Ｂ７の生成物におけるカルボキシ基にニトリル基を加水分解してよい。
【０１２１】
式１‐Ｃおよび２‐Ｃの４，６‐ジアリールピリミジンの合成において使用される一般的な方法を、以下のスキームＣに示す。
【化３１】
2008515992.tif 000045
【０１２２】
式Ｃ１の４，６‐ジハロピリミジンは、Ｘが、クロロ、ブロモ、ヨウ素またはトリフルオロメタンスルホニルなどのアリールクロスカップリング反応において変位可能な基を意味する、２つのアリール基（式Ｃ２およびＣ３）のボロン酸誘導体との逐次的な鈴木反応で使用されてよい。変換全体の選択性を改善するために、基質を異なるハロゲン（例えば、Ｘ≠Ｘ’）とともに使用することが必要かもしれない。他の方法は、例えば、ハロゲンによる変位の前に行われるジアゾ化によってハロゲンに変換することができるアリールアミノ基など、潜在性ハロゲンであるＸ’基の使用を含んでよい。式Ｃ２またはＣ３の化合物が市販の供給源から入手できない場合、それらは、トリメチルホウ酸塩またはトリイソプロピルホウ酸塩などの、ホウ素の源で急冷する前に行われる金属‐ハロゲン交換（リチウム、マグネシウム、亜鉛などでのブロモまたはヨウ素の金属‐ハロゲン交換）によって、調製されてよい。
【０１２３】
クロスカップリング反応は、任意にトリフェニルホスフィン、ＢＩＮＡＰなどのホスフィンリガンドを添加して、テトラキス（トリフェニルホスフィン）、酢酸パラジウムまたはビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム二塩化物などの化合物によって触媒されてよい。反応は、炭酸ナトリウム、カリウム三リン酸塩またはセシウムフッ化物などの塩基の存在も必要としてよい。鈴木クロスカップリング反応に対する適切な溶剤は、エタノール、トルエン、１，４‐ジオキサンまたはグリムを含み、反応は、選択的に酸素の非存在下で進むため、溶剤は、好ましくは脱気されてよい。中間体のモノ結合した化合物の分離は、最終生成物精製に関して有利であるかもしれない。また、カルボン酸塩保護基は、必要に応じて、最終段階で除去され、式１‐Ｃおよび２‐Ｃの最終生成物を得てよい。
【０１２４】
スキームＢに関連して記述された一般的な方法は、以下のスキームＤに示されるように、式１‐Ｄおよび２‐Ｄの逆転ピリミジン位置異性体に適用されてよい。
【化３２】
2008515992.tif 000046
【０１２５】
式Ｄ１のアセトフェノンは、式Ｄ４のピリミジンを生産するために式Ｄ３  （その合成は上記で記載されている）のアミジン試薬で、その後、凝縮されてよい、式Ｄ２のアミノアクリロイル化合物を調製するために使用されてよい。従来のように、保護されたカルボン酸塩は、その後、式１‐Ｄおよび２‐Ｄの化合物において、必要に応じて、遊離カルボキシレート基を遊離するために使用されてよい。
【０１２６】
上記のスキームＣと同様のアリールクロスカップリング法は、式１‐Ｅおよび２‐Ｅのピリジン化合物を調製するために使用されてよい（以下のスキームＥ参照）。
【化３３】
2008515992.tif 000047
【０１２７】
式Ｅ１のピリジン試薬は、Ｘが、クロロ、ブロモ、ヨウ素またはトリフルオロメタンスルホニルなどの、アリールクロスカップリング反応において変位可能な基を意味する、出発物質としてよい。カップリング反応は、式Ｅ２のボロン酸などの試薬と行われてよい。式Ｅ２の化合物が市販の供給源から入手できない場合、それらは、トリメチルホウ酸塩またはトリイソプロピルホウ酸塩などの、ホウ素の源で急冷する前に行われる金属‐ハロゲン交換（リチウム、マグネシウム、亜鉛などでのブロモまたはヨウ素の金属‐ハロゲン交換）によって、調製されてよい。クロスカップリング反応は、任意にトリフェニルホスフィン、ＢＩＮＡＰなどのホスフィンリガンドを添加して、テトラキス（トリフェニルホスフィン）、酢酸パラジウムまたはビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム二塩化物などの化合物によって触媒されてよい。反応は、炭酸ナトリウム、カリウム三リン酸塩またはセシウムフッ化物などの塩基の存在も必要としてよい。鈴木クロスカップリング反応に対する適切な溶剤は、エタノール、トルエン、１，４‐ジオキサンまたはグリムを含み、反応は、選択的に酸素の非存在下で進むため、溶剤は、好ましくは脱気されてよい。
【０１２８】
式Ｅ３のピリジン化合物を一度得ると、窒素原子は、式Ｅ４のピリジンＮ‐酸化物化合物に酸化してよい。この変換の試薬は、ｍ‐クロロ過安息香酸または過酸化水素（さらに様々な添加剤）を含む。酸化物は、その後、式Ｅ５の化合物を生産するための転位反応が行われてよい。この変換の試薬は、オキシ塩化リン、三臭化リンまたはトリフルオロメタンスルホン酸を含む。Ｘ’基は、ハロゲンまたは疑似ハロゲン（Ｃｌ、ＢＲ、ＯＴｆ）を意味し、ピリジン酸化物活性化反応条件および使用された試薬に依存する。反応で２‐ピリドンが得られる場合、これは、簡便に２‐Ｘ’‐ピリジンに変換される。例えば、ピリドンは、オキシ塩化リンに反応し、２‐クロロピリジンが得られる。２‐ハロピリジンは、その後、上記で記載された鈴木パラジウム触媒反応を使用して、式Ｅ６のボロン酸化合物とのクロスカップリング反応において使用され、式Ｅ７の２，４‐ジアリールピリジン化合物を得てよい。カルボン酸塩は、その後、必要に応じて、従来のように脱保護され、式１‐Ｅおよび２‐Ｅの最終生成物を生産してよい。
【０１２９】
上記のスキームＥと同様の他の二重クロスカップリング法は、式１‐Ｆおよび２‐Ｆのピリジン化合物の合成（スキームＦ）に使用されてよい。
【化３４】
2008515992.tif 000048
【０１３０】
式Ｆ１の３，５‐ジハロピリジンは、２つのアリール基（式Ｆ２およびＦ３）のボロン酸誘導体との逐次的鈴木反応において使用される。中間体モノ結合した化合物の分離は、最終生成物精製に関して有利であるかもしれない。変換全体の選択性を改善するために、基質を異なるハロゲン（例えば、Ｘ≠Ｘ’）とともに使用することが望ましいかもしれない。他の方法は、例えば、ハロゲンによる変位の前に行われるジアゾ化によってハロゲンに変換することができるアリールアミノ基など、潜在性ハロゲンであるＸ’基の使用を含んでよい。従来のように、カップリング反応の触媒の多くは、Ｐｄ（０）またはＰｄ（２）ベースの触媒である。また、カルボン酸塩保護基は、最終段階で必要に応じて除去され、式１‐Ｆおよび２‐Ｆの最終生成物を得てよい。
【０１３１】
式１‐Ｇおよび２‐Ｇ（スキームＧ）のピリジン化合物は、式１‐Ｆおよび２‐Ｆ（スキームＦ）の位置異性体の合成に類似する方法で調整されてよい。
【化３５】
2008515992.tif 000049
【０１３２】
式１‐Ｇおよび２‐Ｇ（スキームＧ）のピリジン３，５‐異性体の調製方法は、式１‐Ｈおよび２‐Ｈ（スキームＨ）の２，６‐異性体に使用可能である。従来のように２つのカップリング反応は、どちらがより便利であるかによって、いずれかの順序で行われてよい。
【化３６】
2008515992.tif 000050
【０１３３】
ある好ましい実施形態において本発明の化合物は、既知の方法を用いて、鏡像異性的に純粋な組成物に分解されてもよく、または鏡像異性的に純粋な組成物として合成されてもよい。例として、鏡像異性体の直接的な結晶化、鏡像異性体のジアステレオマー塩形成、ジアステレオマーの形成および分離、またはラセミ混合物の酵素的な分解により、本発明の化合物は分解されてもよい。
【０１３４】
これらならびに他の反応方法論は、当業者に認められているように本発明の化合物を調整する上で有用であってもよい。上記スキームおよび方法への、種々の修正は当業者にとって明白であり、本発明は、本発明の調製のための方法によって特別に制限されない。
【０１３５】
Ｃ．本発明の方法
本発明の一態様では、ナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結の抑制のために、また疾病の予防または治療法のための方法が提供される。好ましい実施形態では、前記疾病は、ｍＲＮＡの突然変異、特に、ナンセンス変異に関連している。典型的な疾病は、癌、リソソーム貯蔵障害、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症、血友病、表皮水疱症、典型的な後期乳児型神経セロイドリポフスチン症を含むがそれらに限定されない。この実施形態では、癌、リソソーム貯蔵障害、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症、血友病、または典型的な後期乳児型神経セロイドリポフスチン症の治療法が提供され、この治療法は、その必要のある対象に対する、本発明の少なくとも１つの化合物の治療効果のある量の投与を含む。
【０１３６】
一実施形態では、本発明は、１つ以上の特効のある、機能的なタンパク質の発現を増加する方法を対象とする。本発明の化合物はいずれも、特に機能的なタンパク質の発現を増加するために使用することができる。他の実施形態では、その必要のある対象に本発明の少なくとも１つの化合物の治療効果のある量を投与することにより未熟な翻訳終結が抑制されると、機能的なタンパク質の発現の特異的増加が起こる。好ましい実施形態では、未熟な翻訳終結は、ｍＲＮＡ内のナンセンス突然変異に関連している。他の実施形態では、患者においてｍＲＮＡ崩壊が減少する場合、タンパク質の発現の特異的増加が起こる。好ましい実施形態では、患者における異常は、ｍＲＮＡ崩壊を突然変異媒介することにより起こる。特に好ましい実施形態では、変異媒介ｍＲＮＡ崩壊は、ナンセンス変異の結果である。本発明の方法は、いかなる特定の理論によって限定されない。
【０１３７】
本発明は、患者において、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方の抑制により改善される疾病または疾患を治療および予防する方法を含み、そのような治療または予防を要する患者に対する、治療効果のある量の本発明の化合物の投与を含む。
【０１３８】
一実施形態では、本発明は、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方を示す遺伝子に関連するいかなる疾病の治療または予防を含む。一実施形態では、前記疾病は、早期停止コドンから起こる遺伝子の発現の予定、発現の一部、発現の欠如、または低下である。未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊に関連する未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊および疾病を示す遺伝子の具体例を米国暫定特許出願第６０／３９０，７４７号表記中から入手する。２００２年６月２１日に出願され、２００３年６月２３日に出願された、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０３／１９７６０号の未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊を調節する小分子を同定するための方法を、そのまま参照として、ここに取り入れる。
【０１３９】
未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方の抑制により改善される疾病は、遺伝的疾患、体細胞疾患、癌、自己免疫疾患、血液の病気、膠原病、糖尿病、神経変性疾患、増殖性疾患、循環器疾患、肺疾患、炎症性疾患、または中枢神経系疾患を含むがそれらに限定されない。
【０１４０】
一実施形態では、治療効果のある量の本発明の化合物を必要とする患者に投与することにより治療または予防される疾病は、アミロイドーシス、血友病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、パーキンソン病、嚢胞性線維症、筋ジストロフィー、心臓疾患、腎臓結石、血管拡張性失調症、家族性高コレステロール血症、網膜色素変性症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、表皮水疱症およびマルファン症候群を含むがそれらに限定されない。一実施形態では、疾病はナンセンス変異に関連する。
【０１４１】
一実施形態では、本発明の化合物は、自己免疫疾患を治療または予防するために有用である。一実施形態では、自己免疫疾患はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は関節リウマチまたは移植片対宿主病である。
【０１４２】
他の実施態様では、本発明の化合物は、血液の病気を治療または予防するために有用である。一実施形態では、血液の病気はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態において、前記血液疾患は、血友病、フォン・ヴィレブランド病、血管拡張性失調症、β型サラセミアまたは腎臓結石である。
【０１４３】
他の実施形態では、本発明の化合物は、膠原病を治療または予防するために有用である。一実施形態では、膠原病はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、膠原病は骨形成不全症または肝硬変である。
【０１４４】
他の実施形態では、本発明の化合物は、糖尿病を治療または予防するために有用である。一実施形態では、糖尿病はナンセンス変異に関連する。
【０１４５】
他の実施形態では、本発明の化合物は、炎症性疾患を治療または予防するために有用である。一実施形態では、炎症性疾患はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、炎症性疾患は関節炎、関節リウマチまたは骨関節炎である。
【０１４６】
他の実施形態では、本発明の化合物は、中枢神経系疾患を治療または予防するために有用である。一実施形態では、中枢神経系疾患はナンセンス変異に関連する。一実施形態では、中枢神経系疾患は神経変性疾患である。好ましい実施形態では、中枢神経系疾患は多発性硬化症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、後期乳児型神経セロイドリポフスチン症（ＬＩＮＣＬ）、パーキンソン病である。
【０１４７】
他の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、特に人間における癌を治療または予防するために有用である。好ましい実施形態では、癌は頭および首、眼、皮膚、口、咽喉、食道、胸、骨、血液、肺、大腸、Ｓ  字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓または副腎におけるものである。一実施形態では、癌は腫瘍である。一実施形態では、癌はナンセンス変異に関連する。他の実施形態では、癌は遺伝子ナンセンス変異に関連する。他の実施形態では、癌は体細胞突然変異に関連する。いかなる理論により制限されることなく、癌に対する本発明の化合物の使用は、ｐ５３の遺伝子の突然変異に対する作用に関連する。
【０１４８】
一実施形態では、前記癌は血液癌ではない。他の実施形態では、前記癌は白血病ではない。他の実施形態では、前記癌は多発性骨髄腫ではない。他の実施形態では、前記癌は前立腺癌ではない。
【０１４９】
他の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、癌抑制遺伝子の突然変異に関連する癌を治療または予防するために有用である。そのような遺伝子は、ＰＴＥＮ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、Ｒｂ、およびｐ５３遺伝子を含むがそれらに限定されない。一実施形態では、前記突然変異は遺伝子突然変異である。他の実施形態では、前記突然変異は体細胞突然変異である。本発明の方法は、癌抑制遺伝子のナンセンス変異に関連する癌を治療または予防するために特に有用である。好ましい実施形態では、本発明の方法は、アポトーシス内のｐ５３の役割によるｐ５３の遺伝子に関連する癌を治療または予防するために特に有用である。理論により限定されることなく、ナンセンス変異の抑制を生じる、有効量の本発明の化合物を備える細胞に接触することにより、アポトーシスを誘発することができ、言い換えれば、それは、全長のｐ５３の生成を生じることができると考えられる。ナンセンス変異は、ｐ５３遺伝子で特定され、癌に関係があると見なされる。ｐ５３遺伝子におけるいくつかのナンセンス変異が特定されている（例えば、Ｍａｓｕｄａら、Ｔｏｋａｉ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ．、６９−７７、２５（２）、（２０００）；Ｏｈら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌｓ、２７５−８０、１０（３）、（２０００）；Ｌｉら、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．、４９３−９、８０（４）、（２０００）；Ｙａｎｇら、Ｚｈｏｎｇｈｕａ  Ｚｈｏｎｇ  Ｌｉｕ  Ｚａ  Ｚｈｉ、１１４−８、２１（２）、（１９９９）；Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎら、Ｍｏｌ  Ｄｉａｇｎ．、３７−４１、３（１）、（１９９８）；Ｋａｊｉｙａｍａら、Ｄｉｓ  Ｅｓｏｐｈａｇｕｓ．、２７９−８３、１１（４）、（１９９８）；Ｋａｗａｍｕｒａら、Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ．、１１５−２６、２３（２）、（１９９９）；Ｒａｄｉｇら、Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ．、１３１０−６、２９（１１）、（１９９８）；Ｓｃｈｕｙｅｒら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、２９９−３０３、７６（３）、（１９９８）；Ｗａｎｇ−Ｇｏｈｒｋｅら、Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．、６５−８、５（１）、（１９９８）、；Ｆｕｌｏｐら、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｍｅｄ．、１１９−２７、４３（２）、（１９９８）；Ｎｉｎｏｍｉｙａら、Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ．、１７３−８、１４（３）、（１９９７）；Ｈｓｉｅｈら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、１０７−１３、１００（１−２）、（１９９６）；Ｒａｌｌら、Ｐａｎｃｒｅａｓ．、１０−７、１２（１）、（１９９６）；Ｆｕｋｕｔｏｍｉら、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ．、２７６４−８、５３（１１）、（１９９５）；Ｆｒｅｂｏｕｒｇら、Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．、６０８−１５、５６（３）、（１９９５）；Ｄｏｖｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｒｖ．、３３５−５５、２５、（１９９５）；Ａｄａｍｓｏｎら、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．、６１−６、８９（１）、（１９９５）、；Ｇｒａｙｓｏｎら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．、３４１−７、１６（４）、（１９９４）、；Ｌｅｐｅｌｌｅｙら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．、１３４２−９、８（８）、（１９９４）；ＭｃＩｎｔｙｒｅら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、９２５−３０、１２（５）、（１９９４）、；Ｈｏｒｉｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎ��．、１２３１−５、９（４）、（１９９４）、；Ｎａｋａｍｕｒａら、Ｊｐｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１２９３−８、８３（１２）、（１９９２）；Ｄａｖｉｄｏｆｆら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．、１２７−３３、７（１）、（１９９２）；およびＩｓｈｉｏｋａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、９０１−６、１７７（３）、（１９９１）を参照；全ての参考文献は、参照により本明細書に組み込まれる）。上記の参考文献に記載されているナンセンス変異を含むがそれらに限定されない、未熟な翻訳コドンを符号化するｐ５３遺伝子に関連するいかなる疾病は、本発明の化合物により治療または予防できる。
【０１５０】
他の実施形態では、そのような治療効果のある量の本発明の化合物を要する患者に対する投与により治療または予防される疾病は、非上皮性悪性腫瘍、上皮性悪性腫瘍、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来の腫瘍、または多発性骨髄腫などの固形腫瘍を含むがそれらに限定されない。
【０１５１】
他の実施形態では、そのような治療効果のある量の本発明の化合物を要する患者に対する投与により治療または予防される疾病は、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｔ細胞急性リンパ性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、または多発性骨髄腫などの血液由来の腫瘍を含むがそれらに限定されない。例えば、Ｅｕｇｅｎｅ  Ｂｒａｕｎｗａｌｄ他、ハリソン内科学  第１５版、４９１−７６２、（２００１）参照）。
【０１５２】
さらに他の実施形態では、本発明は、固形腫瘍または血腫で苦しむヒトの治療を含む。
【０１５３】
好ましい実施形態では、本発明は、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊の双方の抑制により改善された疾病または疾患を治療および予防し、それに関連した１つ以上の症状を改善する方法を含み、この方法は、細胞を治療効果のある量の本発明の化合物に接触させることを含む。本発明の方法に含まれる細胞は、動物細胞、哺乳類細胞、細菌性細胞、およびウイルス感染細胞を含む。一実施形態では、ナンセンス変異は、遺伝子変異である（すなわち、前記ナンセンスコドンは前駆ＤＮＡ中に含まれた）。他の実施形態では、ナンセンス変異は、体細胞突然変異である（すなわち、前記ナンセンスコドンは自然発生または突然変異生成から生じた）。
【０１５４】
一実施形態では、本発明の化合物を、植物、は虫類、鳥類、両性類または好ましくは哺乳類、さらに好ましくはヒトを含むがそれらに限定されない対象に、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方の予防策として投与する。
【０１５５】
好ましい実施形態では、患者が未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊に関連する疾病で苦しんでいることを初めに決定する。他の実施形態では、患者がナンセンス変異の存在を決定する選考過程を受け、対象を選考すること、または許容されるナンセンス変異スクリーニング検定により抽出される細胞を含む。好ましい実施形態では、患者のＤＮＡを、サザンブロット、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を配列し、従い、縦列反復配列多型（ＳＴＲ）、または制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析の使用して、ナンセンス変異が患者のＤＮＡに存在するかどうかを決定した。一実施形態では、祖細胞ＤＮＡの比較により、ナンセンス変異が遺伝子変異または体細胞突然変異であるのかを決定する。あるいは、患者において、ナンセンス変異を有するタンパク質の変化レベルを、ウエスタンブロット法または他の免疫学的検定により、発現しているかどうかを決定することができる。他の実施形態では、患者は、ナンセンス変異の存在に対して子宮内にスクリーニングを受ける胎児である。本発明の化合物の投与は、出生前または出生後のどちらでも受けることができる。関連した実施形態では、治療法は、患者をナンセンス変異スクリーニング検定のためにスクリーニングし、本発明の１つ以上の化合物の投与により治療を独自のものにし、特に、例えば、疾病の種類、細胞の種類、および質問内の遺伝子による、特に質問の変異に適した化合物を用いて、患者を治療できる。そのような方法は、当業者には公知のことである。
【０１５６】
他の実施形態では、細胞（例えば、動物細胞、哺乳類細胞、細菌性細胞、植物細胞およびウイルス感染細胞）を上記に記載されたような方法（すなわち、細胞のＤＮＡは、配列を決定し、サザンブロット、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、縦列反復配列多型（ＳＴＲ）の使用、または制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析に供し、ナンセンス変異が細胞のＤＮＡに存在するかどうか決定することができ、また細胞のＲＮＡは定量リアルタイムＰＣＲに供し、転写産物量を決定することができる）を用いて、未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊のためにスクリーニングした。
【０１５７】
本発明の特定の方法は、さらに追加の治療剤（すなわち、本発明の化合物より他の治療剤）の投与を含む。本発明の一実施形態では、本発明の化合物を少なくとも１つの他の治療剤との併用で使用することができる。治療剤は、非オピオイド性鎮痛薬、非ステロイド性抗炎症薬、ステロイド、制吐薬、βアドレナリン遮断薬、抗けいれん薬、抗うつ剤、Ｃａ２＋チャンネル遮断薬、抗癌剤および抗生物質およびその混合物を含むがそれらに限定されない。
【０１５８】
ある実施形態では、本発明の化合物を抗癌剤との併用で投与または作成することができる。適する抗がん剤は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、葉酸きっ抗体、プリン類拮抗物質、ピリミジン拮抗薬、紡錘体毒、トポイソメラーゼ阻害剤、アポプトーシス誘導薬剤、新生阻害剤、ポドフィロトキシン、ニトロソ尿素化合物、シスプラチン、カルボプラチン、インターフェロン、アスパラギナーゼ、タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、メゲストロール、マイトマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イリノテカンおよびタキソールを含むがそれらに限定されない。
【０１５９】
ある実施形態では、本発明の化合物を抗生物質との併用で投与または作成することができる。ある実施形態では、抗生物質は、アミノグルコシド（例えば、トブラマイシン）、セファロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフプロジル、セファクロル、セフィキシムまたはセファドロキシル）、クラリスロマイシン（例えば、クラリスロマイシン）、マクロライド（例えば、エリスロマイシン）、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）またはキノロン系薬剤（例えば、オフロキサシン、シプロフロキサシンまたはノルフロキサシン）である。好ましい実施形態では、抗生物質は、緑膿菌に対して活性を有する。
【０１６０】
理論に制限されることを意図せず、本発明の方法は、ナンセンス変異を抑制する機構の複合を通して行動することを信じる。好ましい実施形態では、本発明の方法は、本発明の少なくとも１つの化合物の治療効果のある量の投与、例えば、式１の化合物を含む。本発明の化合物の相対活量をここにある実施例２に記載された検定を含む、当業者に周知のいかなる方法で決定することができる。
【０１６１】
本発明の化合物を生体外ルシフェラーゼ・ナンセンス抑制検定を用いて特徴とすることができる。ルシフェラーゼ検定は、本発明の方法に含まれる。ルシフェラーゼを、機能リポーター遺伝子アッセイとして使用し（タンパク質が機能する場合のみ、光が生成される）、ルシフェラーゼは非常に敏感である（光度は、範囲内でルシフェラーゼ濃度に比例する）。一つの実施形態では、本発明のアッセイは、細胞に基づいたルシフェラーゼリポーターアッセイである。好ましい細胞に基づいたルシフェラーゼリポーターアッセイでは、未熟な終結コドン（ＵＧＡ、ＵＡＡ、またはＵＡＧ）を含むルシフェラーゼリポーター構図を、２９３のヒト胚腎臓細胞を安定に導入する。
【０１６２】
本発明の他の検定では、好ましい検定は、ウサギの網赤血球溶解物およびナンセンスを含むルシフェラーゼリポーターｍＲＮＡから成る生化学分析である。本発明の他のアッセイでは、検定は、細胞抽出物を調製し、最適化することから成る生化学分析である（Ｌｉｅ  ＆  Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、４９８９−４９９６、１２６（２２）、（１９９９）およびＬｉｅ  ＆  Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、４７３−４８１、２７０（２）、（２０００））。生化学分析では、未熟な終結コドン（ＵＧＡ、ＵＡＡ、またはＵＡＧ）を含むｍＲＮＡを、ｔＲＮＡ、ヘミン、クレアチンキナーゼ、アミノ酸類、ＫＯＡｃ、Ｍｇ（ＯＡｃ）２、およびホスホクレアチンで補うウサギの網赤血球溶解物を用いてインビトロ翻訳反応におけるリポーターとして、使用する。ｍＲＮＡの翻訳を、ウイルス由来のリーダー配列内で開始し、それは、ｃａｐｐｅｄ  ＲＮＡが必要としないため、検定費用を大幅に削減する。合成ｍＲＮＡを、Ｔ７プロモーターおよびＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ生体外ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ、Ｉｎｃ．；Ａｕｓｔｉｎ、Ｔｅｘａｓ）を用いて、生体外調製する。本発明の検定では、ゲンタマイシンの相加、未熟な終結コドンのリードスルーを容認するのが知られているアミノグルコシドは、増強されたルシフェラーゼ活性をもたらし、内標準として使用することができる。本発明の検定をハイスループットスクリーンで使用することができる。何十万もの化合物を細胞に基づいてスクリーニングし、本発明の生化学分析をすることができる。好ましい態様では、機能的な細胞に基づいた検定は、記載されたものに類似する。
【０１６３】
本発明の化合物は、未熟な終結コドンを含む、ｍＲＮＡ分子から特定の、機能的タンパク質発現を増強できる化合物を含む。一つの実施形態では、本発明の化合物は、未熟な翻訳終結を優先的に抑制できる。例えば、本発明の化合物は、変異がＵＡＡを生じると、ナンセンス変異を抑制でき、変異がＵＡＧを生じると、ナンセンス変異を抑制できない。他の限定されない実施形態は、本発明の化合物は、変異がＵＡＡを生じ、＋１位置においてシトシンによるインフレームに続くと、ナンセンス変異を抑制でき、変異がＵＡＡを生じ、＋１位置においてアデニンによるインフレームに続くと、ナンセンス変異を抑制できない。
【０１６４】
ＵＧＡのナンセンスを含むルシフェラーゼ遺伝子を提供する安定細胞株を、検定化合物を用いて治療することができる。この実施態様では、細胞は、１％ペニシリンストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）と１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）で補う標準培地内に７０％の密集度までに育て、治療の前の日に１：１に分割することができる。翌日、細胞をトリプシン処理し、４０，０００の細胞を９６のウェルのある組織培養皿の各ウェルに追加する。各化合物の連続希釈法を２つのログ（３０mＭ〜０．３mＭ）に及ぶ６つのポイント投与応答曲線を生成するために、調製する。ＤＭＳＯ溶剤の終末濃度は、各ウェル内に一定の１％で維持する。１％のＤＭＳＯを用いて処理される細胞は、バックグラウンド標準としての機能を果たし、ゲンタマイシンを用いて処理される細胞は、陽性対照としての機能を果たす。
【０１６５】
特定の遺伝病で変更されたｍＲＮＡ上のナンセンス抑制化合物の効果に態様するために、アミノ酸１２８２（Ｗ１２８２Ｘ）でナンセンスコドンを有する気管支上皮細胞株を本発明の化合物と共に処理し、ＣＦＴＲ機能は、ＳＰＱ分析を用いてｃＡＭＰ活性化塩素チャンネルとしてモニターされる（Ｙａｎｇら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、１２５３−１２６１、２（８）、（１９９３）およびＨｏｗａｒｄら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、４６７−４６９、２（４）、（１９９６））。本発明の化合物と共に処理される細胞内のＳＰＱ蛍光における増加を、ｃＡＭＰおよび未処理の細胞と共に処理されたものと比較する。細胞内のＳＰＱ蛍光における増加は、ＣＦＴＲ媒介ハロゲン流出およびナンセンスコドンのリードスルーにおける増加の刺激と一致する。本発明の化合物と共に処理に続いて、このナンセンスを含む対立遺伝子からの全長ＣＦＴＲ発現は、本発明の化合物と共に処理されると、嚢胞性繊維症細胞系列が塩素チャンネル活性を増加することを示す。
【０１６６】
Ｄ．本発明の化合物の代謝産物
本発明の化合物の範囲内の低下も、ここに記載される化合物の生体内の代謝産物である。そのような生成物は、主として酵素過程のため、例えば、酸化、整復、加水分解、アミド化、エステル化、および投与された化合物の同等のものから生じる。従って、本発明は、その代謝産物を生じるのに十分な時期を有するほ乳類組織または哺乳動物を用いてこの発明の化合物に接触することを含む処理により産出した化合物を含む。そのような生成物は、通常、本発明の放射標識した（例えば、Ｃ１４またはＨ３）化合物を調製し、検出可能な適用量（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ以上）でラット、ネズミ、モルモット、サル、またはヒトなどの哺乳動物に投与し、新陳代謝が起こるのに十分な時間（通常、約３０秒から３０時間）を許容し、尿、血液または他の生物試料から得た変換産物を隔離することにより、特定する。これらの生成物を、それらが標識化されているため、容易に隔離する（他のものを代謝物内で生存するエピトープを結合できる抗体の使用で隔離する）。代謝物構造は、従来の方法、例えば、ＭＳまたはＮＭＲ分析により決定する。一般に、当業者に周知の従来の薬物代謝研究と同様の方法で、代謝物の分析をすることができる。それらが別の方法で生体内で見つけられない限り、変換産物は、それらにそれら自身の生物活性が全くなくても、本発明の化合物の治療投与量のための診断分析で有用である。
【０１６７】
Ｅ．本発明の医薬組成物
本発明の化合物にきちんと投与することが可能であるが、医薬組成物として化合物を調合することが好ましい。本発明のさらに他の実施態様では、本発明の方法に有用な医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、キャリヤー、溶剤、安定剤、補助剤、賦形剤などの薬学的に許容しうる賦形剤と共に調合され、投与と剤形の特定の方法による。この医薬組成物は、一般的に、生理学的に適合するｐＨを達成するように調合されるべきであり、約ｐＨ３から約ｐＨ１１まで、好ましくは、約ｐＨ３から約ｐＨ７まで及び、投与の調合および投与法による。他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約ｐＨ４から約ｐＨ７までのｐＨ範囲で調整される。別の実施形態では、ｐＨは、約ｐＨ５から約ｐＨ８までの範囲に調節することが好ましい。
【０１６８】
さらに詳しく、本発明の医薬組成物は、治療効果または予防効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物を含み、それは、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤と共に含む。任意で、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物の合成を含み、癌、糖尿病性網膜症、または滲出性の網膜黄斑部変性の治療に有用な２番目の活性成分を含む。
【０１６９】
肺内投与のための吸入可能な剤形は、一般に好ましい粉末製剤を用いた、一般に液体または粉末であるが、非経口または経口投与のための本発明の剤形は、例えば、固体、溶液、エマルジョン、懸濁液が最も通常である。本発明の好ましい医薬組成物も、投与前の生理学的に適合する溶剤で再編成される凍結乾燥した固体として調合される。本発明の別の医薬組成物は、シロップ、クリーム、軟膏剤、錠剤、および同様のものとして調合される。
【０１７０】
本発明の医薬組成物は、当業者に既知であるいかなる薬物送達経路を介して対象に対して投与できる。特定の模範的投与経路は、経口、眼球、直腸、口腔、局所、鼻、そして、点眼、皮下、筋肉内、静脈内（ボーラスと注入）、脳内の経皮、および肺を含む。
【０１７１】
用語「薬学的に許容しうる賦形剤」は、本発明の化合物などの医薬品投与の賦形剤を示す。用語は、過度の毒性がなく投与できるいかなる医薬品賦形剤を示す。薬学的に許容しうる賦形剤を、組成物を投与するのに使用される特定の方法と同様に、投与する特定の組成物による一部において決定する。従って、本発明の医薬組成物の多種多様な適切な調合が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ  Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、（１９９０）参照）。
【０１７２】
適当な賦形剤は、タンパク質、多糖体、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、不活性ウイルス粒子などの大きくて、ゆっくり代謝された高分子を含んでいる担体分子である。他の模範的賦形剤は、アスコルビン酸などの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸などの炭水化物、油、水、塩水、グリセリンおよびエタノールなどの液体、湿潤剤または乳化剤、ｐＨバッファリング物質、および同等のものを含む。また、リポソームを薬学的に許容しうる賦形剤の定義内に含む。
【０１７３】
本発明の医薬組成物は、投与を意図する方法に適するあらゆる形で調合される。経口使用を意図する場合、例えば、錠剤、トローチ、トローチ剤、水か油の懸濁物、非水性溶液、分散粉末薬または顆粒のエマルジョン、硬カプセル剤または軟カプセル剤、シロップまたはエリキシル剤が調製される。経口使用を意図する組成物は、医薬組成物の製造のために当業者に既知のいかなる方法により調製され、そのような組成物は、口当たりのよい調合を提供するために、甘味剤、着香料、着色剤および保存剤を含んだ１つ以上の製剤を含む。
【０１７４】
錠剤と併用して使用するのに特に適する薬学的に許容しうる賦形剤は、例えば、セルロース、カルシウム、炭酸ソーダ、乳糖、カルシウムまたはリン酸水素ナトリウムなどの不活性希釈剤、クロスカルメロース、交差結合ポピドン、トウモロコシデンプン、またはアルギン酸などの崩壊剤、ポピドン、デンプン、ゼラチンまたはアカシアなどの結合剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸または滑石などの平滑剤を含む。錠剤は、消化管内で分解と吸着を遅らせるために、マイクロカプセル化を含む既知の方法でコーティングされたり、コーティングを施したりでき、その結果、長期間にわたり、持続した作用を提供する。例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはグリセリルジステアリン酸などの遅延物質は、単独またはワックスを用いて使用することができる。
【０１７５】
経口使用のための錠剤はまた、活性成分が例えば、セルロース、乳糖、リン酸カルシウムまたはカオリンなどの不活性固体希釈剤と混合される硬ゼラチンカプセル、または活性成分がグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラッカセイ油、流動パラフィンまたはオリーブ油などの非水性か油の媒体に混ぜられる軟ゼラチンカプセルとして示すことができる。
【０１７６】
他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、懸濁液の製造に適した少なくとも１つの薬学的に許容しうる賦形剤を備える混合物に、本発明の化合物を含む懸濁液として調合させることができる。さらに他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、適した賦形剤の追加による懸濁液の調合に適した分散粉末薬および顆粒として調合させることができる。
【０１７７】
懸濁液に併用して使用に適した賦形剤は、繊維素グリコール酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガント、アラビアゴムなどの懸濁化剤、自然発生ホスファチド（例えば、レシチン）などの分散剤または湿潤剤、脂肪酸（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）を有するアルキレンオキシドの縮合物、長鎖脂肪族アルコール（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）を有する酸化エチレンの縮合物、脂肪酸とヘキシトール無水物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）から生じる部分エステルを有する酸化エチレンの縮合物、およびカルボマ、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの濃稠化剤を含む。また、懸濁液は酢酸、メチル、および／または、ｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ−安息香酸などの１つ以上の保存料、１つ以上の着色剤、１つ以上の着香料、および蔗糖またはサッカリンなどの１つ以上の甘味剤を含むことができる。
【０１７８】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳剤の形であることができる。油の位相は、オリーブ油やラッカセイ油などの植物油、流動パラフィンなどの鉱油、またはこれらの混合物であってよい。適した乳化剤は、アラビアゴムやトラガントなどの自然発生ゴム、脂肪酸から生じる大豆レシチン、エステルまたは部分エステルなどの自然発生ホスファチド、モノオレイン酸ソルビタンなどのヘキシトール無水物、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどの酸化エチレンを有するこれらの部分エステルの縮合物を含む。エマルジョンはまた、甘味料および着香料を含んでもよい。シロップとエリキシル剤は、グリセリン、ソルビットまたは蔗糖などの甘味剤で調合されてもよい。そのような錠剤はまた、粘漿薬、保存剤、または着色剤を含んでもよい。
【０１７９】
さらに、本発明の医薬組成物は、無菌注射剤水性乳剤および油性の懸濁液などの無菌注射剤調合の形であってもよい。既知の技術によると、このエマルジョンまたは懸濁液は、上記に記載されたそれらの適した分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用することで調合されてもよい。１，２−プロパンージオールにおける溶液などの非毒性非経口許容できる希釈剤か溶剤における滅菌注射液か懸濁液であってもよい。また、滅菌注射調合は、凍結乾燥した粉末として調製されてもよい。使用することができる許容される媒体および溶剤の中には、水、リンガー溶液、および生理食塩液がある。さらに、滅菌固定油は、溶剤または懸濁化剤として使用することができる。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、いかなる無菌性の固定油が使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射の調合で同様に使用することができる。
【０１８０】
一般に、本発明の方法で有用な本発明の化合物は、水に相当不溶性であり、最も薬学的に許容しうるプロトン性溶媒内、および植物油内でやや溶けにくいである。しかし、化合物は、一般に、中鎖脂肪酸（例えば、カプリル酸およびカプリン酸）またはトリグリセリドの中で可溶性であり、中鎖脂肪酸のプロピレングリコールエステルの中に高可溶性を有する。また、発明で熟考されているのは、例えば、エステル化、グリコシレーション、ペグ化など、それらを送達により適する化学的または生化学的部分の代替および相加によって変更された化合物（例えば、溶解性、生理活性、嗜好性の増加、副作用の減少など）である。
【０１８１】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、低溶解化合物に適する脂質ベースの剤形において経口投与のために調合されてもよい。脂質ベースの剤形は、一般に、そのような化合物の経口バイオアベイラビリティを強化することができる。そのような、本発明の好ましい医薬組成物は、治療効果または予防効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物を含み、それは、中鎖脂肪酸（例えば、カプリル酸およびカプリン酸などの食用の脂肪酸のプロピレングリコールエステル）またはそれのプロピレングリコールエステルおよびポリオキシル４０を水素添加ひまし油などの薬学的に許容しうる界面活性剤を構成する基から選択した１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤と共に含む。
【０１８２】
別の好ましい実施形態では、シクロデキストリンは、水溶解エンハンサーとして添加してもよい。好ましいシクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシルエチル、グルコシル、マルトシル、およびα、β、およびγサイクロデキストリンのマルトトリオシル派生物を含む。特に好ましいシクロデキストリン溶解エンハンサーは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣ）であり、それは、本発明の化合物の水溶解特性をさらに改善するために上記に記載された組成物のいずれかに添加してもよい。一実施形態では、化合物は、０．１％から２０％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、さらに好ましくは１％から１５％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、およびまたさらに好ましくは２．５％から１０％までヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含む。使用された溶解エンハンサーの量は、化合物における、本発明の化合物の量に依存する。
【０１８３】
ここで使用される治療効果のある量は、特定された疾病か状態を治療、改善、または調節し、検出可能な治療効果または抑制効果を示すための、本発明の医薬組成物量を示す。例えば、本発明のアッセイで効果を検出することができる。また、効果は疾病または状態が集団の個々の百分率または高い百分率のために予測される疾病または状態の予防である。    
対象に対して正確な効果のある量は、対象の体重、サイズ、および健康、状態の本質および程度、投与のために選択された治療または治療の併用、タンパク質半減期、ｍＲＮＡ半減期、およびタンパク質局在性に依存する。与えられた状況に対する治療効果のある量は、臨床家の技術および判断内である通常の実験で決定することができる。
【０１８４】
いかなる化合物に対して、治療効果のある量は、例えば、腫瘍細胞の細胞培養アッセイにおいて、または通常ラット、ネズミ、ウサギ、犬、またはブタの動物モデルにおいてのどちらかで、初めに見積ることができる。また、動物モデルは、適切な濃度域と投与経路を決定するのに使用することができる。その後、そのような情報は、ヒトに対して、有用な量および投与経路を決定するのに使用することができる。治療／予防の効果および毒性は、培養細胞または実験動物で標準の製薬の手順、例えば、ＥＤ５０、（集団の５０％に対して治療効果のある量）および、ＬＤ５０（集団の５０％での致死量）によって測定してもよい。毒性、および治療効果の間の用量比は治療係数であり、率、ＬＤ５０／ＥＤ５０として、言い表すことができる。大きい治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータは、ヒトに使用するために一連の投与量を調合するのに使用してもよい。そのような組成物に含まれた投与量は、少しの毒性または毒性がないＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内で好ましい。使用された剤形、患者の感度、および投与経路によって、投与量はこの範囲内で異なってもよい。
【０１８５】
さらに特に、本発明の化合物に関して観測された濃度生物学的効果の関係は、約５μｇ／ｍＬから約１００μｇ／ｍＬまで、好ましくは、約１０μｇ／ｍＬから約５０μｇ／ｍＬ、さらに好ましくは、約１０μｇ／ｍＬから約２５μｇ／ｍＬまでの範囲の初期標的血漿濃度を示す。そのような血漿濃度を達成するために、本発明の化合物を、１ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇに異なる用量で投与し、それは投与経路により異なる。特定の用量および送達の方法に関する指導は、文学に提供し、当業者における練習生には、一般に、利用可能である。一般に、用量は、約１ｍｇ／日から約１０ｇ／日まで、または約０．１ｇ／日から約３ｇ／日まで、または約０．３ｇ／日から約３ｇ／日、または約０．５ｇ／日から約２ｇ／日まで、１回で、分割して、または連続用量で、約４０から約１００ｋｇの間の体重の患者に対しての範囲である（用量は、この体重範囲の上下の患者、特に４０ｋｇ以下の子供に対して調節できる）。
【０１８６】
しかしながら、疾病または状態の急性投与または慢性投与における本発明の特定の活性成分の予防薬か治療量の重要性は、疾病または状態の本質および重症度、および活性成分の投与経路で異なる。また、個々の患者の年齢、体重、および反応に従って、用量、および恐らく用量数は異なる。当業者はそのような要因の慎慮で、容易に適当な投薬処方を選択することができる。一般に、ここに説明された状態に対する推奨される日用量の範囲は、１日あたり約１ｍｇ／ｋｇから約１５０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一つの実施形態では、本発明の化合物を、単一の１日１回の用量で与える。他の実施形態では、本発明の化合物を、１日を通して分割量で与える。さらに特に、日用量を単一用量または等しく分割量で与える。好ましくは、日用量の範囲は、１日あたり約５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、さらに好ましくは、１日あたり約１０ｍｇ／ｋｇと約９０ｍｇ／ｋｇ、またさらに好ましくは、１日あたり２０ｍｇ／ｋｇから６０ｍｇ／ｋｇの間であるべきである。患者を管理するにおいて、療法は、より低い用量、恐らく約２００ｍｇから約３００ｍｇの投与から始め、必要に応じて、単一用量または分割量のどちらかで、１日あたり約６００ｍｇから約４０００ｍｇまで、患者のグローバルな反応によって増加されるべきである。症例によっては、ここに公開される範囲外で活性成分の用量を使用する必要があり、当業者には明らかである。さらに、臨床家または処理する医師は、どのように、いつ、個々の患者の反応に併用して療法を中断し、調整し、または終えるかを知ることを留意する。
【０１８７】
本明細書で使用される語句である、「治療効果のある量」、「予防効果のある量」および「治療または予防効果のある量」は、上記に記載される用量および投薬回数予定を含む。異なる治療効果のある量は、異なる疾病および状態に対して適応され、それは、当業者に周知の容易なことである。同様に、そのような疾病を治療または予防するのに十分な量であるが、従来の療法に関連する副作用を引き起こすのに不十分な量であり、その副作用を減らすのに十分である量はまた、上記に記載された用量および投薬回数スケジュールに含む。
【０１８８】
正確な服用量は治療を必要とする対象と関係がある要因を踏まえて、専門家によって決定される。用量および投与は、活性剤の十分なレベルを提供し、または望ましい効果を維持するように調整される。考慮に入れる要因は、疾病状態の重症度、対象の全体的な健康、年齢、体重、対象の性別、食事、時期、注目中半減期のタンパク質、注目中半減期のＲＮＡ、投与回数、複合薬、反応感度、および療法に対する耐性／反応を含む。長時間作用型の組成物は、３から４日間ごと、毎週、または２週間に一度に投与され、それは、特定の調合の半減期とクリアランス率による。
【０１８９】
Ｆ．併用療法
また、本発明のいかなる化合物をここに記載されるように、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾病の治療に有用な１つ以上の他の活性成分に組み合わせることが可能であり、それは、治療を必要としている患者に対して同時投与、または、連続投与を意図する単一の剤形、または別々の剤形を含む。連続投与する場合、併用は２つ以上の投与で投与してもよい。別の実施形態では、異なる経路で本発明の１つ以上の化合物および１つ以上の追加活性成分を投与することが可能である。
【０１９０】
当業者は、本発明の化合物のナンセンス変異抑制する活性を増大し、相乗的に増加する本発明の化合物と併用して、さまざまな活性成分を投与することを認識する。
【０１９１】
本発明の方法によると、活性成分の併用は、（１）併用調合において同時に共同調合および投与、または送達され、（２）代替で、別々の調合として同時に送達され、または（３）または、当業者に既知であるいかなる他の併用療法計画による。代替療法で提供される場合、本発明の方法は、例えば、別々の溶液、エマルジョン、懸濁液、錠剤、丸薬またはカプセル剤において、または別々の注射器の異なる注射において、活性成分を連続投与または提供することを含んでもよい。一般に、代替療法の間、それぞれの活性成分の有効量は、連続投与され、すなわち、同時の療法において、２つ以上の活性成分の有効量は一緒に投与される。また、間欠併用療法の様々な連鎖を使用してもよい。
【０１９２】
Ｇ．遺伝子療法
遺伝子療法との併用で、本発明の化合物または他のナンセンス化合物を利用することができる。この実施形態では、哺乳動物、好ましくは望ましい遺伝子において、特定のナンセンス変異を含むヒトに、遺伝子を導入するか、または提供することができる。好ましい態様では、望ましい遺伝子をＩＧＦ１、ＥＰＯ、ｐ５３、ｐ１９ＡＲＦ、ｐ２１、ＰＴＥＮ、ＥＩ２４およびＡｐｏＡＩを構成する基より選択する。患者および哺乳動物において、全長のポリペプチドの発現を得るために、そのようなポリペプチドを望む場合、本発明の化合物または他のナンセンス化合物の有効な量を患者および哺乳動物に提供する。
【０１９３】
生体内および生体外にある患者の細胞内に、ナンセンス変異（ベクターにオプションで含まれている）を含む核酸を得る２つの主要な手法がある。生体内の提供に関しては、核酸は、患者に、通常ポリペプチドが必要である場所、すなわち、ポリペプチド統合の場所に、周知であれば、ポリペプチドの生物活性が必要である場所（例えば、固体の腫瘍）に、直接注入する。生体外治療において、患者の細胞を取り除き、核酸をこれらの分離細胞に導入し、修正細胞を直接患者に直接投与するか、または例えば、患者に植えつけられる多孔質膜内でカプセル化するかのどちらかである（例えば、米国特許第４，８９２，５３８号および第５，２８３，１８７号を参照）。核酸を生存細胞に導入するために利用可能なさまざまな方法がある。核酸を生体外に培養細胞に移すか、または意図されたホストの細胞内で生体内で移すかによって、方法は異なる。生体外ほ乳細胞への核酸の転送に適せつな方法は、に、リポソーム、エレクトロポレーション、微量注射法、形質導入、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などの使用を含む。形質導入は、複製欠損の会合、細胞受容体を有する組換え型ウイルス性（好ましくはレトロウイルス）粒子を含み、粒子を細胞に含んだ核酸の導入に続く。遺伝子の生体外送達のための一般的に使用されるベクターは、レトロウイルスである。
【０１９４】
現在好ましい生体内核および移動法は、ウイルス性または非ウイルス性のベクター（アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）など）、および脂質ベースのシステム（遺伝子の脂質媒介移動の有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、およびＤＣ-Ｃｈｏｌであり、例えば、Ｔｏｎｋｉｎｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、５４-６５、１４（１）、（１９９６）参照）があるトランスフェクションを含む。５４-６５  （１９９６））。遺伝子療法における使用の最も好ましいベクターは、ウイルスであり、最も好ましくはアデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス、またはレトロウイルスである。レトロウイルスベクターなどのウイルス性ベクターは、少なくとも１つの転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子定義要素、または代替スプライシング、核ＲＮＡ輸出、またはメッセンジャーの翻訳後修飾などの他手段で、遺伝子発現を制御する他の要素を含む。さらに、レトロウイルスベクターなどのウイルス性ベクターは、ポリペプチドをコード化している遺伝子を転写されると、コード配列に実施可能にリンクされ、翻訳開始配列として機能する核酸配列を含む。また、そのようなベクター構造は、パッケージングシグナル、長い末端反復配列（ＬＴＲ）またはそれの部分、使用ウイルスに適切な正負ストランドプライマ結合部位を含む（これらがウイルス性ベクターで既に存在していない場合）。さらに、そのようなベクターは、それが置かれる宿主細胞からのポリペプチドの分泌のためのシグナル配列を通常含む。好ましくは、この目的に対するシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列であり、最も好ましくは、ポリペプチドのための天然シグナル配列である。また、オプションで、ベクター構造は、１つ以上の制限部位および翻訳終結連鎖と同様に、ポリアデニル化を示す信号を含んでもよい。一例として、そのようなベクターは、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第二ストランドＤＮＡ合成の原点、および３’ＬＴＲかそれの部分を通常含む。使用することができる他のベクターは、カチオン脂質、ポリリジン、デンドリマなどの非ウイルス性である。
【０１９５】
いくつかの状況で、標的細胞、細胞表面膜タンパク質または標的細胞のための特定の抗体、標的細胞の受容体のための配位子などを対象とする薬剤を有する核酸源に提供するのは望ましい。リポソームが使用される場所で、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質は、標的にするために使用、および／または、例えば、カプシドタンパク質または特定の細胞種のその屈性残留物、循環に対して内面を受けるタンパク質の抗体、および細胞内局在性を標的にし、細胞内半減期を強化するタンパク質を摂取するのを促進することができる。受容体媒体のエンドサイトーシスの方法を、例えば、Ｗｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、４４２９−４４３２、２６２、（１９８７）、およびＷａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、３４１０-３４１４、８７、（１９９０）に示す。現在既知の遺伝子標識および遺伝子療法実験計画書のレビューに関しては、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、８０８−８１３、２５６、（１９９２）を参照。８０８-８１３  （１９９２）．    また、ＷＯ９３／２５６７３およびそこにある引用文献を参照。
【０１９６】
レトロウイルス粒子および構造タンパク質を作るための適当な遺伝子療法および方法を、例えば、米国特許第５，６８１，７４６号、第６，８００，６０４号および第６，８００，７３１号で検出できる。
【０１９７】
本発明を理解するのに役立てるために、以下の実施例を含む。もちろん、この発明に関連する実験は、明確に本発明に制限すると解釈すべきではなく、本発明の変異、現在既知または、後に発展するものは、当業者の範囲内で、ここに記載され、以下に請求されるように、本発明の範囲内に入る。
【実施例】
【０１９８】
本発明は、これをさらに詳細に解説するために提供される以下の非限定的実施例により説明されるが、これは本発明の範囲を限定するものと解釈されるものではない。本実施例は、本発明における特定の化合物の調製ならびに、これらの化合物のインビトロおよび／またはインビボ試験ついて解説する。当業者であれば、これらの実施例において説明される技術は、発明者によって説明される、本発明を支障なく実施するための技術を表すものであり、ために本発明の実施の好ましい形態を構成するということを理解するであろう。しかし、当業者は、本開示を踏まえて、開示されている特定の方法においては多くの変更が可能であり、それでもなお本発明の精神と範囲から逸脱することなく、類似のまたは同様の結果を得ることができると認識すべきであるということが理解されねばならない。
【０１９９】
実施例１：本発明の化合物の調合
Ａ．３、５トリアジンの製造
製法１−Ａおよび２−Ａのトリアジンは、通常以下の図式Ａにのっとって調製されてもよい。
【０２００】
３−（４−ｐ−Ｔｏｌｙｌ−［１、３、５］トリアジン−２−ｙｌ）安息香酸（化合物４３）の調製
パートＡ．１０ｍＬのマイクロ波管に、４−メチルベンゼン（０．９９ｇ，７．３２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２．２３ｇ，１８．６７ｍｍｏｌ）を加える。管は、２５０ｐｓｉ、３００Ｗにて、１５０℃で１０分間加熱される。エーテル／ヘキサン（１：１）を加えることにより、白色の固体が沈澱する。１）．    目的の生成物（１．２６ｇ、生成率９１％）は、ろ過により収集され、ヘキサンにて洗浄される。採取された化合物、Ｎ−ジメチルアミノメチレン−４−メチル−ベンズアミドは、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による測定で純度＞９０％である。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  １９１．１７．１１。
【０２０１】
パートＢ。ｔｅｒｔ−ブタノール（３．５０ｇ、４７．２２ｍｍｏｌ）、ピリジン（３．７２ｇ、４６．７８ｍｍｏｌ）およびメチレンクロライド中（１５ｍＬ）のｃａｔ．ＤＭＡＰに、滴状の３−シアノ安息香酸クロライド（６．８１ｇ、４１．０７ｍｍｏｌ）および０℃のメチレンクロライド中（１０ｍＬ）のピリジン（３ｍＬ）が加えられる。得られた混合物は、室温にて２０時間攪拌される。この溶剤は気化され、残滓はフラッシュ・クロマトグラフィー（１：１  メチレンクロライド／ヘキサン）によって精製され、３−シアノ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６．８４ｇ、生成率８２．１％）を白色固体として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ  ８．２４（１Ｈ、ｓ）、８．２０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１．２Ｈｚ）、７．７８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．７、１．１Ｈｚ）、７．５２（１Ｈ、ｍ）、１．５８（９Ｈ、ｓ）。
【０２０２】
パートＣ。１５ｍＬのＴＨＦ（無水）中の３−シアノ−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル溶液（６．５４ｇ、３１．９８ｍｍｏｌ）に、Ｎ２の保護のもとにリチウムヘキサメチルジシラザン（８．６５ｇ、５１．１７ｍｍｏｌ、１．０Ｍ  ＴＨＦ中）が加えられる。この溶液は、出発原料が消滅するまで、室温にて３時間攪拌される（ＴＬＣによるモニター）。この反応混合物は、ＴＨＦ（１２０ｍＬ）中のシリカゲル（８０ｇ）スラリー内に注ぎ込まれ、５分間攪拌され、その後シリカゲルはろ過される。ろ過ケーキは、ＴＨＦ／メタノール（２：１）によってさらに洗浄される。ろ過された液体の気化および真空下における残滓の結晶化により、目的の生成物である、３−カルバミミドリル−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５．８０ｇ、生成率８２．５％）を得る。採取された化合物、は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による測定で純度＞９０％である。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２１２．２０．１１。
【０２０３】
パートＤ。Ｎ−ジメチルアミノメチレン−４−メチル−ベンズアミド（２２１．９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）および無水酢酸（８ｍＬ）中のカルバミミドリル−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１９６．０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の混合物は、マイクロ波反応装置内において、１５０Ｗ、２５０ｐｓｉで１１５℃まで３０分間、出発原料の完全な消滅がＴＬＣによって確認されるまで加熱される。白色固体は１  Ｎ  ＨＣｌを加えることにより沈澱され、ろ過によって収集され、水およびヘキサンによって洗浄される。採取された固体は、フラッシュカラム・クロマトグラフィーによってさらに精製され、メタノール／メチレンクロライド（１：２０）と溶離され、標題生成物を生成した（２３．１ｍｇ、生成率５．３％）、ｍ．ｐ．２９８−３００℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ９．４０（１Ｈ、ｓ）、８．６３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、８．４８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、８．１３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．４１（２Ｈ、ｍ）、２．４１（３Ｈ、ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２９２．３０．１１。
【０２０４】
上記実施例Ａにおいて説明される方法は、本発明における以下の化合物の調合に使用されてもよい。 
化合物４４
３−［４−（４−フルオロフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−ｙｌ］−安息香酸：ｍ．ｐ．２６６〜２６９℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．４３（１Ｈ、ｓ）、９．０８（１Ｈ、ｓ）、８．７７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．１、０．９Ｈｚ）、８．６２（２Ｈ、ｍ）、８．２０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．２、１．０Ｈｚ）、７．７４（１Ｈ、ｍ）、７．４３（２Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２９７．２５  （２０），  ２９６．２８  （１００）．ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ２９５．２４  （２０），  ２９４．２６  （１００）。
【０２０５】
化合物４５
３−［４−（４−エトキシフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２６９−２７２  ℃。
【０２０６】
化合物４５
３−［４−（４−エトキシフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点２６９〜２７２７℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．３３（１Ｈ、ｓ）、９．０９（１Ｈ、ｓ）、８．７４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．４、１．０Ｈｚ）、８．５０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、８．２０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．４、０．８Ｈｚ）、７．７１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）、７．１３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、４．１４（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、１．３６（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３２３．３０（２０）、３２２．３３（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ３２１．３０（２０）、３２０．２８（１００）。
【０２０７】
化合物４６
４−（４−ｐ−トリル−［１、３、５］トリアジン−２−イル）−安息香酸：融点２８８〜２９０℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．４１（１Ｈ、ｓ）、８．６５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、８．４７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、８．１３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．４２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、２．０６（３Ｈ、ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２９３．３１（２０）、２９２．３０（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ２９１．２８（２０）、２９０．３０（１００）。
【０２０８】
化合物４７
４−［４−（４−フルオロフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点２９５〜２９８℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．４４（１Ｈ、ｓ）、８．６５（４Ｈ、ｍ）、８．１３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、７．４５（２Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２９７．２４（２０）、２９６．２２（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ２９５．２３（２０）、２９４．２１（１００）。
【０２０９】
化合物４８
３−［４−（４−メトキシフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点３０７〜３０９℃．ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３０９．２７（２０）、３０８．２６（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ３０７．２６（２０）、３０６．２５（１００）。
【０２１０】
化合物４９
３−［４−（３−フルオロフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点２７３〜２７６℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．４９（１Ｈ、ｓ）、８．６８（２Ｈ、ｍ）、８．４３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．７、１．１Ｈｚ）、８．３１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．８、１．４Ｈｚ）、８．１４（２Ｈ、ｍ）、７．６７（１Ｈ、ｍ）、７．５５（１Ｈ、ｍ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２９７．２７（２０）、２９６．２５（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ２９５．２６（２０）、２９４．２４（１００）。
【０２１１】
化合物５０
３−［４−（４−トリフルオメチルフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点２９０〜２９３℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．５３（１Ｈ、ｓ）、８．６７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、８．５２（２Ｈ、ｍ）、８．１１（２Ｈ、ｍ）、７．９７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３４７．２３（２０）、３４６．２２（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ３４５．２１（２０）、３４４．２４（１００）。
【０２１２】
化合物５１
３−［４−（３−メトキシフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点２２７〜２２９．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．４４（１Ｈ、ｓ）、８．６５（２Ｈ、ｍ）、８．１５（３Ｈ、ｍ）、８．０６（１Ｈ、ｓ）、７．５４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．２４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．０、１．２Ｈｚ）、３．８７（３Ｈ、ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３０９．２７（２０）、３０８．２６（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ３０７．２６（２０）、３０６．２３（１００）。
【０２１３】
化合物５３
４−［４−（４−メトキシフェニル）−［１、３、５］トリアジン−２−イル］−安息香酸：融点＞３００℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d９．３５（１Ｈ、ｓ）、８．６４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、８．５３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ）、８．１２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．１３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ）、３．８７（３Ｈ、ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３０９．２７（２０）、３０８．２６（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ３０７．２６（２０）、３０６．２５（１００）。
【０２１４】
Ｂ．４、２−ピリミジンの調製
本発明のピリミジンは、通常以下の図式Ｂにしたがって調製されてもよい。 
３−［２−（４−アミノフェニル）−ピリミジン−４−イル］−ベンゾニトリル（化合物１）の調製  
パートＡ．無水エタノール（１０ｍＬ）が入ったフラスコを０℃まで冷却し、水酸化ナトリウム（４２ｍｇ、鉱物油との重量比６０％、１．０５ｍｍｏｌ）が加えられる。０、５時間の攪拌ののち、溶液は４−アミノベンズアミジン二塩酸塩（１０４ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）で処理され、混合物は５分間攪拌される。次に、３−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）が加えられ、得られた混合物は３時間加熱還流され、次に室温まで冷却され、６０時間攪拌される。混合物は気化され、得られた混合物はジエチルエーテルとともに粉砕され、ろ過される。ろ過されたものは気化され、黄色の油を得、これはカラムクロマトグラフィー（１：１  酢酸エチル−ヘキサン）によって分離され、生成物３−［２−（４−アミノフェニル）−ピリミジン−４−イル］−ベンゾニトリル（７６ｍｇ、５６％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：d８．７５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、８．４９（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝２Ｈｚ）、８．３７−８．３１（３Ｈ、ｍ）、７．７５（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝８、２Ｈｚ）、７．５９（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、６．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、４．０３（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：d１６４．６、１６０．８、１５８．０、１４９．２、１３８．２、１３３．６、１３１．０、１３０．７、１２９．８（２Ｃ）、１２９．５、１２７．２、１１８．５、１１４．５（２Ｃ）、１１３．０、１１２．９。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２７４（２０）、２７３（１００）。
【０２１５】
３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−ピリミジン−４−イル］−ベンズアミド（化合物４）の調製  
３−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−ベンゾニトリル（５０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）と水溶液の混合物Ｈ２ＳＯ４（２５７mＬ、０．６５Ｍ）は７０℃で１２時間加熱される。混合物は、冷却され、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ）によりｐＨ７に調製される。混合物は、水と酢酸エチル間で分割され、有機層は、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化され、白色結晶性固体の標題化合物を得る（５２ｍｇ、９８％）、融点１６７〜１６９℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）。d８．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、８．８７（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝２Ｈｚ）、８．５４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、８．５２（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝８、２、１Ｈｚ）、８．１５（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝８、２、１Ｈｚ）、７．９３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、７．８０（１Ｈ、ｂｒｓ）、７．６８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、６．９６（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）、３．０１（１Ｈ、ｈｅｐｔｅｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）、１．３０（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ）．１３Ｃ  ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：d２０５．９、１６８．４、１６４．８、１６３．４、１５９．０、１５２．４、１３７．８、１３６．２、１３５．９、１３０．６（２Ｃ）、１２９．７、１２８．９、１２７．２（２Ｃ）、１２６．８、１１５．４、３４．７、２４．１（２Ｃ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３１９（２５）、３１８（１００）。
【０２１６】
４−［２−（４−イソプロピルフェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸（化合物５）の調製
パートＡ．エタノール（５ｍＬ）中のメチル４−アセチル安息香酸エステル（１．００ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）とジメチルホルムアミドジメチルアセタール（７４６mＬ、５．６１ｍｍｏｌ）の溶液は１２時間加熱還流される。溶液は冷却され、気化され、残留物は、カラム・クロマトグラフィによって分離され、４−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）安息香酸（６７９ｍｇ）のメチルとエチルエステルの混合物の生成物を得る。この物資の一部分（１２１ｍｇ）は、エタノール（５ｍＬ）中に溶解し、４−イソプロピル−ベンズアミジン（８１ｍｇ）で処理される。溶液は１２時間加熱還流され、冷却され、セライトろ過され、気化される。残留物はクカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１：４酢酸エチル−ヘキサン）によって分離され、生成物エチル４−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸エステルを得る。  パートＢ．  ＴＨＦ〜水〜エタノール（２ｍＬ／２ｍＬ／１ｍＬ）中のエチル４−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸エステル溶液は、水酸化リチウム水和物で処理され、１２時間攪拌される。溶液は気化され、その残留物は１Ｍ水溶液の間で分割される。ＨＣｌと酢酸エチル有機相は水（２０ｍＬ）で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化され、白色固体の標題化合物を得る（６５  ｍｇ、４１％）、融点２６２〜２６４℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）：d８．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、８．４８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、８．２３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、８．１２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、７．９８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、７．４４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、３．０２（１Ｈ、ｈｅｐｔｅｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）、１．３３（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ）．ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ３２０（２０）、３１９（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ３１８（２０）、３１７（１００）。
【０２１７】
以下の化合物は、上記に説明された化合物５を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物１０
４−（２−ｐ−トリル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３１０℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d８．４０．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）、８．０３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７．３５Ｈｚ）、７．９９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）、７．８２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、７．０９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）、７．０７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、３．７９（３Ｈ、ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９２  （２０）、  ２９１  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９０  （２０）、  ２８９  （１００）。
【０２１８】
３−（２−ｐ−トリル−ピリミジン−４−イル）安息香酸（化合物９）の調製  
パートＡ．上記に説明したように、４−メチルベンゾニトリルは、４−メチルベンズアミジンを調製するのに使用され、これまでに説明した条件で、３−（２−ｐ−トリル−ピリミジン−４−イル）−ベンゾニトリルの合成過程で、３−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−ベンゾニトリルとともに使用される。
【０２１９】
パートＢ．エタノール（２ｍＬ）中の３−（２−ｐ−トリル−ピリミジン−４−イル）−ベンゾニトリル（８７ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）溶液は、水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ、１０Ｎ）で処理され、得られた溶液は、出発原料が液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって決定されるとおりに消滅するまで加熱還流される。冷却した後、溶液は気化され、水性精密検査を受ける。アミドと酸化合物の混合物を有する抽出物は、カラムクロマトグラフィーによって分離され、白色固形の純粋な標題化合物を得る、融点２２５〜２２６℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d８．９４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、８．８２（１Ｈ、ｓ）、８．５３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）、８．３９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、８．１１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ）、８．０３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、７．７１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、２．４０（３Ｈ、ｓ）。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ  ２９２（２０）、２９１（１００）。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｅ  ２９０（２０）、２８９（１００）。
【０２２０】
以下の化合物は、上記に説明された化合物９を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物１６  
４−［２−（３−メトキシ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２７０−２７３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２２  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．４４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１４−８．０３  （５Ｈ、  ｍ）、  ７．４８  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．１６−７．１１  （１Ｈ、  ｍ）、  ３．８６  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３０７．１１  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０５．１３  （１００）。
【０２２１】
化合物１７
４−［２−（４−ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２９３−２９６  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２３  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ８．９７  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．４３  （４Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．０３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ７．５７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３３３．１８  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３３１．１５  （１００）。
【０２２２】
化合物１８  
４−［２−（４−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２１  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ８．９９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．５７  （２Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８、  ６  Ｈｚ）、  ８．４４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．０８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ７．３８  （２Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９５．１０  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９３．０６  （１００）。
【０２２３】
化合物１９  
４−［２−（３−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０７−９．０４  （１Ｈ、  ｍ）、  ８．３７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１８−８．１６  （１Ｈ、  ｍ）、  ８．１３−８．０８  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．７１−７．５３  （３Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３６１．０９  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３５９．０５  （１００）。
【０２２４】
化合物２０  
４−［２−（３−クロロ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２９１−２９４  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．４９−８．４３  （４Ｈ、  ｍ）、  ８．１４−８．１１  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．６５−７．６０  （２Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１１．０７  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０９．０６  （１００）。
【０２２５】
化合物２１  
４−［２−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸：  融点  ＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２２  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ９．０６  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．７０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．４６  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．１２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．９３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４５．１６  （１００）。
【０２２６】
化合物６１  
４−［２−（２−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸：  融点．  ２５８−２６１  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．３６  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１６−８．０６  （４Ｈ、  ｍ）、  ７．７０−７．５１  （３Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３６１．１２  （１００）。
【０２２７】
化合物２２  
４−［２−（４−クロロ−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸：  融点＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２４  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ９．０１  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．５２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．４４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１３−８．０８  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．６２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１１．１１  （１００）。
【０２２８】
化合物２３  
４−［２−（２−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸：  融点＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２２  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ９．０４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．３９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１４−８．０８  （４Ｈ、  ｍ）、  ７．６２−７．５８  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．４０−７．３６  （２Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９５．１５  （１００）。
【０２２９】
化合物６２  
４−［２−（３−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸：  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．８２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．７６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．４２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１６  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．０７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．９４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．８２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．５５  （１Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４５．２１  （１００）。
【０２３０】
化合物２５  
４−［２−（３−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−４−イル］−安息香酸：  融点３００−  ３０３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２２  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．４５−８．０９  （７Ｈ、  ｍ）、  ７．５９  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．３９  （１Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９５．１５  （１００）。
【０２３１】
化合物２６  
４−（２−ｏ−トリル−ピリミジン−４−イル）−安息香酸：  融点．  １９８−２００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２１  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ９．０２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．３７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１１−８．０７  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．８９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ７．３８−７．３３  （３Ｈ、  ｍ）、  ２．５８  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９１．２０  （１００）。
【０２３２】
化合物２７  
４−［２−（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２９９−３０２  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．６２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．４４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．１１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．５４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３６１．１８  （１００）。
【０２３３】
化合物２８  
４−（２−フェニル−ピリミジン−４−ｙｌ）−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．５４−８．５０  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．４５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．０８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ７．５７−７．５４  （３Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２７７．２２  （１００）。
【０２３４】
化合物３０  
４−［２−（４−メトキシ−フェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３００  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  １３．２０  （１Ｈ、  ｂｒ  ｓ）、  ８．９３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．４６  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．４２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．９８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ７．０９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ３．８４  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３０７．２７  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０５．２３  （１００）。
【０２３５】
化合物３１  
４−［２−（２−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−４−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２５１−２５２  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．３５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５  Ｈｚ）、  ８．０８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．９２−７．７３  （４Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４５．２９  （１００）。
【０２３６】
Ｃ．４、６−ピリミジン
通常以下のように図式Ｃにしたがって、式１−Ｃおよび２−Ｃの４、６ピリミジンを調製してもよい。 
４−（６−ｍ−トリル−ピリミジン−４−ｙｌ）−安息香酸  （化合物２）の調製
パートＡ．  ５０ｍＬの三つ口丸底フラスコは、２、４−ジクロロピリミジン（０．５８ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、３−メチルフェニルボロン酸（０．３１ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（０．７３ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１３．０ｍｇ、１．１２ｘ１０‐２ｍｍｏｌ）で満たされる。フラスコは気化され、Ｎ２．ＤＭＦ（１５ｍＬ、無水）で再び満たされ、その次にフラスコに加えられる。フラスコは再び気化され、Ｎ２で再び満たされ、２度繰り返される。反応物は一晩中１００度に加熱される。反応混合物は、エチルエーテルと水との間に分割される。有機層は塩水で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、その後、除去される。残留物はフラッシュカラムクロマトグラフィーよってさらに精製され、塩化メチレン／ヘキサン（１：１０）と溶離され、４５．７ｍｇ（生成率５．８％）の目的の生成物を得る。採取された化合物（４−クロロ−６−ｍ−トリル−ピリミジン）は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による測定で純度＞８０％である。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ２０５．２３。
【０２３７】
パートＢ．  １０ｍＬのマイクロ波管は、４−クロロ−６−ｍ−トリル−ピリミジン（４５．７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸（３９．２ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、（２３５．３ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（７０．６ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムヨウ化物（８３．０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（０．５ｍｇ、２．２ｘ１０−３ｍｍｏｌ）および２ｍＬの水で満たされる。反応混合物は、２５０ｐｓｉ、６０ｗにて、マイクロ波反応装置内において１５０℃で１０分間加熱される。反応混合物は、５ｍＬｌの６ＮＨＣｌに加えられ、酢酸エチル（１０ｍＬ）よって抽出される。有機部分は飽和ＮａＨＣＯ３  および  塩水でで洗浄され、（ＭｇＳＯ４）乾燥され、回転式蒸発器で濃縮される。油状の  残留物は、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）中で懸濁され、目的の生成物融点  ２１１〜２１３  ℃の９．８ｍｇ（生成率１５．１％）の白色粉末を得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ９．３１  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．６６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．４６  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．２０  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．１５  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．０、  １．２  Ｈｚ）、  ８．０９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．４５  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ７．３８  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  １．０  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９１．５８。
【０２３８】
以下の化合物は、上記に説明された化合物２を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物３  
３−（６−ｐ−トリル−ピリミジン−４−イル）−安息香酸：  融点．  ２０１〜２０３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ９．１９  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．６９  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．３０  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．９、  １．１  Ｈｚ）、  ８．１１  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  １．０  Ｈｚ）、  ８．０６  （１Ｈ、  ｓ）、  ７．９７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ）、  ７．５２  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ７．２５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９２．４０  （２０）、  ２９１．３７  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９１．４６  （２０）、  ２９０．４７  （１００）。
【０２３９】
Ｄ．  ２、４−ピリミジンの調製
通常以下のように図式Ｄにしたがって、式１−Ｄおよび２−Ｄの２、４ピリミジンを調製してもよい。 
３−［４−（４−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−２−イル］−安息香酸（化合物３２）の調製。
【０２４０】
パートＡ．  ４−フルオロアセトフェノン（１．０１ｇ、７．３１ｍｍｏｌ）およびＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（０．８７ｇ、７．３２ｍｍｏｌ）が１０ｍＬのマイクロ波管に加えられた。管は、２５０ｐｓｉ、３００Ｗにて、１００℃で１０分間加熱される。ヘキサンを加えることにより、黄色固形物が沈殿する。目的の生成物（１．０３ｇ、生成率７３．０％）は、ろ過により収集され、ヘキサンにて洗浄される。採取された化合物、３−ジメチルアミノ−１−（４−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オンは、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による測定で純度＞９０％である。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ１９４．１４。
【０２４１】
パートＢ．  ３−カルバミミドリル−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２２０．２ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）、３−ジメチルアミノ−１−（４−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オン（１８２．６ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（３９．２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、ヘキサン中６０％）の混合物に乾燥エタノール（５．０ｍＬ）を加える。出発原料の完全な消滅がＴＬＣによって確認されるまで、得られた混合物は８時間還流で攪拌される。溶剤は除去され、残留物は１ＮＨＣｌ（１５ｍＬ）に加えられ、黄色固形物を沈殿させる。標題生成物（１３７．８ｍｇ、生成率４１．３％）は、水で、その次に順にエチルエーテル融点．２３９〜２４１℃で洗浄後、生成される。  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ９．０５  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．９７  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ）、  ８．７３  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  １．２  Ｈｚ）、  ８．３８  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．１１  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．０、  １．２  Ｈｚ）、  ８．０４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）、  ７．６８  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ）、  ７．４３  （２Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９５．２７。
【０２４２】
以下の化合物は、上記に説明された化合物３２を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物３３  
４−［４−（４−ブロモ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ３０２−３０５  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ）、  ８．６０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．３０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．１０  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．８５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３５８．１３  （２０）、  ３５７．１２  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３５６．０１  （２０）、  ３５５．０８  （１００）。
【０２４３】
化合物３４  
４−［４−（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２３４−２３６  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０１  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．４  Ｈｚ）、  ８．５８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．４６  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ）、  ８．０９  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．５７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３６２．２２  （２０）、  ３６１．２３  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３６０．２０  （２０）、  ３５９．２０  （１００）。
【０２４４】
化合物３５  
４−（４−ｐ−トリル−ピリミジン−２−イル）−安息香酸：  融点  ２８７〜２８９  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．９４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．４  Ｈｚ）、  ８．６０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．２３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．１０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．０２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．４  Ｈｚ）、  ７．３８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ）、  ２．４０  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９２．２９  （２０）、  ２９１．２６  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９０．２４  （２０）、  ２８９．２６  （１００）。
【０２４５】
化合物３６  
４−［４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリミジン−２−イル］−安息香酸：  融点．  ２４３〜２４５  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．９５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ）、  ８．６０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ８．２５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．１０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．０１  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ）、  ７．４５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ２．９７  （１Ｈ、  ｍ）、  １．２５  （６Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．１  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３２０．３０  （２０）、  ３１９．２９  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３１８．３０  （２０）、  ３１７．３０  （１００）。
【０２４６】
化合物３７  
４−［４−（４−メトキシ−フェニル）−ピリミジン−２−イル］−安息香酸：  融点  ２６３〜２６５  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．８９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．５９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ）、  ８．３２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）、  ８．１０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ）、  ８．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ７．１２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ）、  ３．８４  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３０８．２６  （２０）、  ３０７．２５  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０６．３４  （２０）、  ３０５．２５  （１００）。
【０２４７】
化合物３８  
４−［４−（３−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−２−イル］−安息香酸：  融点．  ２４９−２５２  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．６１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ８．１２  （５Ｈ、  ｍ）、  ７．６５  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．４１  （１Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９６．２２  （２０）、  ２９５．２０  （１００）。  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９４．２６  （２０）、  ２９３．２１  （１００）。
【０２４８】
化合物３９
４−（４−Ｂｉフェニル−４−ｙｌ−ピリミジン−２−イル）−安息香酸：  融点．  ２９３−２９６  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０１  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．６３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．４５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ８．１２  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．８９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．７７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．４４  （３Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３５４．２６  （２０）、  ３５３．２４  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３５２．２５  （２０）、  ３５１．２３  （１００）。
【０２４９】
化合物４０  
４−［４−（２、３−Ｄｉｈｙｄｒｏ−ｂｅｎｚｏ［１、４］ｄｉｏｘｉｎ−６−ｙｌ）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２７２−２７４  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．８９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）、  ８．５８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ）、  ８．０９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ）、  ７．９７  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）、  ７．８７  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．０３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ）、  ４．３２  （４Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３３６．２７  （２０）、  ３３５．２５  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３３４．３１  （２０）、  ３３３．２９  （１００）。
【０２５０】
化合物４１  
４−［４−（４−Ｉｍｉｄａｚｏｌ−１−ｙｌ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３０５  ℃．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４４．２５  （２０）、  ３４３．２３  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３４２．２８  （２０）、  ３４１．２７  （１００）。
【０２５１】
化合物６３  
４−［４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２７１−２７３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．６０  （４Ｈ、  ｍ）、  ８．２０  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．１０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．９５  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．４、  ０．９  Ｈｚ）、  ７．８２  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４６．２８  （２０）、  ３４５．２６  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３４４．２５  （２０）、  ３４３．２５  （１００）。
【０２５２】
化合物６４  
４−（４−ｍ−トリル−ピリミジン−２−ｙｌ）−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２２０−２２２  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．９７  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ４．３  Ｈｚ）、  ８．６０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ）、  ８．１２  （４Ｈ、  ｍ）、  ８．０６  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ４．３  Ｈｚ）、  ７．４５  （２Ｈ、  ｍ）、  ２．４３  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９２．２９  （２０）、  ２９１．２８  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９０．２９  （２０）、  ２８９．２９  （１００）。
【０２５３】
化合物６５  
４−［４−（２−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２３４−２３６  ℃．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９６．２２  （２０）、  ２９５．２０  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９４．２５  （２０）、  ２９３．２３  （１００）。
【０２５４】
化合物６６  
４−［４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２８２−２８５  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．５９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ８．５１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．１４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．０９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ７．９２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４６．３９  （２０）、  ３４５．４２  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３４４．４５  （２０）、  ３４３．４５  （１００）。
【０２５５】
化合物６７  
４−［４−（４−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎ−４−ｙｌ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２８９−２９１  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．８３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．５８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．２２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．０８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．９０  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ７．０８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ３．７４  （４Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ）、  ３．２６  （４Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３６３．３２  （２０）、  ３６２．３１  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３６１．３１  （２０）、  ３６０．２９  （１００）。
【０２５６】
化合物６８  
３−［４−（４−ブロモ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３００  ℃．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３５７  （１００）、  ３５５  （１００）。
【０２５７】
化合物６９  
３−［４−（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２４１−２４３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０５  （１Ｈ、  ｓ）、  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．７３  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．０、  １．１  Ｈｚ）、  ８．４３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ）、  ８．０７  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．６８  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ７．５７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３６２．２４  （２０）、  ３６１．２３  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３６０．２５  （２０）、  ３５９．２５  （１００）。
【０２５８】
化合物７０  
３−［４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２４２−２４４  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０７  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．９４  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．７３  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  １．０  Ｈｚ）、  ８．２３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ）、  ８．１０  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．０、  １．２  Ｈｚ）、  ７．９８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ７．６９  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ７．４５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ）、  ２．９５  （１Ｈ、  ｍ）、  １．２３  （６Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３２０．３０  （２０）、  ３１９．２９  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３１８．４０  （２０）、  ３１７．３０  （１００）。
【０２５９】
化合物７１  
３−［４−（４−メトキシ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２４３−２４４  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．８９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．７２  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．４、  １．０  Ｈｚ）、  ８．３０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ）、  ８．０９  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．４、  １．０  Ｈｚ）、  ７．９５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ７．６６  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ７．１３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ）、  ３．８５  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３０８．３０  （２０）、  ３０７．２９  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０６．２６  （２０）、  ３０５．２５  （１００）。
【０２６０】
化合物７２  
３−［４−（２−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２０１−２０３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０１  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．７０  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  １．０  Ｈｚ）、  ８．２３  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ）、  ８．１０  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  ０．９  Ｈｚ）、  ７．８５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ３．６  Ｈｚ）、  ７．６１  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．４１  （２Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９６．２７  （２０）、  ２９５．２７  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９４．２８  （２０）、  ２９３．２６  （１００）。
【０２６１】
化合物４２  
３−［４−（２、３−Ｄｉｈｙｄｒｏ−ｂｅｎｚｏ［１、４］ｄｉｏｘｉｎ−６−ｙｌ）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２３９−２４１  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０５  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．８８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．７０  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．０、  １．２  Ｈｚ）、  ８．０９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ）、  ７．９５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ）、  ７．８６  （１Ｈ、  ｓ）、  ７．８２  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．６７  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ７．０１  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．３、  １．３  Ｈｚ）、  ４．３２  （４Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３３６．２７  （２０）、  ３３５．２５  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３３４．２２  （２０）、  ３３３．２３  （１００）。
【０２６２】
化合物７３  
３−（４−ｐ−トリル−ピリミジン−２−ｙｌ）−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２５２−２５３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．９３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ）、  ８．７３  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．４、  １．０  Ｈｚ）、  ８．２２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ８．０９  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ６．９、  ０．８  Ｈｚ）、  ７．９９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ７．６８  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ）、  ７．３９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ）、  ２．３８  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９２．３０  （２０）、  ２９１．２８  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９０．３３  （２０）、  ２８９．１５  （１００）。
【０２６３】
化合物７４  
３−［４−（３−フルオロ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２５３−２５５  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０５  （１Ｈ、  ｓ）、  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ）、  ８．７４  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．２、  １．０  Ｈｚ）、  ８．１８  （４Ｈ、  ｍ）、  ７．６８  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．４３  （１Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９６．４１  （２０）、  ２９５．３９  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９４．４１  （２０）、  ２９３．４２  （１００）。
【０２６４】
化合物７５  
３−（４−Ｂｉフェニル−４−ｙｌ−ピリミジン−２−ｙｌ）−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２９６−２９９  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．１８  （１Ｈ、  ｓ）、  ９．００  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．４  Ｈｚ）、  ８．７７  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．８、  １．１  Ｈｚ）、  ８．４３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ８．１７  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．９５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ７．８７  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．４３  （３Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３５４．２８  （２０）、  ３５３．３１  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３５２．２９  （３０）、  ３５１．２１  （１００）。
【０２６５】
化合物７６  
３−（４−ｍ−トリル−ピリミジン−２−ｙｌ）−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２１７−２１９  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．９６  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．７７  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．９、  １．０  Ｈｚ）、  ８．１３  （３Ｈ、  ｍ）、  ８．０２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ７．６９  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ）、  ７．４１  （２Ｈ、  ｍ）、  ２．４３  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９２．３０  （２０）、  ２９１．２８  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ２９０．１８  （２０）、  ２８９．２６  （１００）。
【０２６６】
化合物７７  
３−［４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２７１−２７３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０２  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．７０  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．８、  １．２  Ｈｚ）、  ８．６８  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．１５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．０８  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．２、  １．０  Ｈｚ）、  ７．９１  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．８０  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．６７  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４６．２６  （２０）、  ３４５．２６  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３４４．２６  （２０）、  ３４３．２５  （１００）。
【０２６７】
化合物７８  
３−［４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２７１−２７３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．０４  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．７２  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．７、  １．０  Ｈｚ）、  ８．４９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．１０  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．９３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．６８  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４６．２６  （２０）、  ３４５．２６  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３４４．２２  （２０）、  ３４３．２４  （１００）。
【０２６８】
化合物７９  
３−［４−（４−Ｉｍｉｄａｚｏｌ−１−ｙｌ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ＞３１０  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ９．６４  （１Ｈ、  ｓ）、  ９．０３  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．７３  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ７．８、  １．０  Ｈｚ）、  ８．５２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．３２  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．１５  （４Ｈ、  ｍ）、  ７．７０  （２Ｈ、  ｍ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３４４．３０  （２０）、  ３４３．３０  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３４２．２７  （２０）、  ３４１．２７  （１００）。
【０２６９】
化合物５７  
４−［４−（３、４−Ｄｉメトキシ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２５０−２５２  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．８９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．５９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．１０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．０１  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ７．９３  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ７．８８  （１Ｈ、  ｓ）、  ７．１２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ３．９０  （３Ｈ、  ｓ）、  ３．８４  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３３８．２７  （２０）、  ３３７．２２  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３３６．２６  （２０）、  ３３５．２６  （１００）。
【０２７０】
化合物５８  
３−［４−（３、４−Ｄｉメトキシ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２４０−２４３  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．９０  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ８．６０  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．０９  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．０２  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ）、  ７．８６  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．５、  １．３  Ｈｚ）、  ７．７０  （１Ｈ、  ｓ）、  ７．１４  （１Ｈ、  ｄｄ、  Ｊ  ＝  ８．３、  １．２  Ｈｚ）、  ３．９１  （３Ｈ、  ｓ）、  ３．８４  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３３８．２８  （２０）、  ３３７．２５  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３３６．２７  （２０）、  ３３５．２６  （１００）。
【０２７１】
化合物５９  
４−［４−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−ピリミジン−２−ｙｌ］−安息香酸：  ｍ．ｐ．  ２９２−２９５  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．７８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ８．５８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ８．２１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ）、  ８．０９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ）、  ７．８５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ）、  ６．８４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ）、  ３．０２  （６Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３２１．３２  （２０）、  ３２０．３０  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３１９．３３  （２０）、  ３１８．３０  （１００）。
【０２７２】
化合物６０  
３−［４−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−ピリミジン−２−イル］−安息香酸：  融点２８１−２８３  ℃．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３２１．３２  （５０）、  ３２０．３０  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３１９．３３  （２０）、  ３１８．２９  （１００）。
【０２７３】
４−［４−メチル６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ピリミジン−２−イル］−安息香酸（化合物５２）［ＰＴＣ−０１６９００３］の調製
パートＡ．  １０ｍＬのマイクロ波管に４−トリフルオロメチルアセトフェノン（０．９５ｇ、７．３２ｍｍｏｌ）およびジメチルアセトアミドジメチルアセタール（１．６０ｇ、１２．０１ｍｍｏｌ）を加える。管は、２５０ｐｓｉ、３００Ｗにて１４０℃で３０分間加熱される。ヘキサン加えることによって、白色固形物が沈殿する。目的の生成物（２９０．１ｍｇ、生成率２２．１％）はろ過により収集され、ヘキサンで洗浄される。採取された化合物、３−ジメチルアミノ−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ブタ−２−エン−１−オンは、、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による測定で純度＞９０％である。  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２５８．２０。
【０２７４】
パートＢ．  ３−ジメチルアミノ−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−ブタ−２−エン−１−オン（２９０．１ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）、４−カルバミミドリル−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２２０．３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、３−カルバミミドリル−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルと同じように調製される）および水酸化ナトリウム（７９．９ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ、ヘキサン中６０％）の混合物に乾燥エタノール（５．０ｍＬ）を加える。出発原料の完全な消滅がＴＬＣによって確認されるまで、得られた混合物は１４時間還流で攪拌される。溶剤は除去され、残留物はｐＨが＜７になるまで１Ｎ  ＨＣｌによって中和され、白色固形物を沈殿させ、これはろ過により収集され、続いて水およびエチルエーテル／ヘキサン（１：１）で洗浄される。採取された固形物は、フラッシュカラムクロマトグラフィーによってさらに精製され、メタノール／塩化メチレン（１：４０）と溶離され、標題生成物（１０．７ｍｇ、生成率２．７％）、融点２７２−２７５℃を得る。  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＣＤＣｌ３  ＋  ２  ｄｒｏｐｓ  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．５４  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ８．２３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ）、  ８．０９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ）、  ７．７１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ  ）、  ７．４８  （１Ｈ、  ｓ）、  ２．６１（３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３５９．２７。  
以下の化合物は、上記に説明された化合物５２を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物５６  
３−［４−（４−フルオロ−フェニル）−６−メチルピリミジン−２−イル］−安息香酸：  融点．  ３０５−３０７  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．６０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ８．４１  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．０８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ７．９６  （１Ｈ、  ｓ）、  ７．４１  （２Ｈ、  ｍ）、  ２．６０  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１０．３４  （２０）、  ３０９．３４  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０８．３０  （２０）、  ３０７．３２  （１００）。
【０２７５】
３−［４−（４−フルオロ−フェニル）−５−メチルピリミジン−２−イル］−安息香酸  （化合物５５）の調製
パートＡ．  ４−フルオロプロピオフェノン（１．８３ｇ、１０．６０ｍｍｏｌ）およびＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（４．４５ｇ、３７．３５ｍｍｏｌ）の混合物は加熱され、１６時間還流される。溶剤（３−ジメチルアミノ−１−（４−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オンを含有する）を除去した後で採取される残留物は、精製することなく次のステップで使用される。
【０２７６】
パートＢ．  無水酢酸（８ｍＬ）中の３−ジメチルアミノ−１−（４−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オン（６４１．９ｍｇ、３．１０ｍｍｏｌ）および３−カルバミミドリル−安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４２６．１ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の混合物は、２５０ｐｓｉ、３００Ｗにて、マイクロ波反応装置内において１３０℃で３０分加熱される。１Ｎ  ＨＣｌを加えることによって、白色固形物が沈殿し、ろ過により収集され、続いて、水およびヘキサンで洗浄される。採取された固形物は、フラッシュカラムクロマトグラフィーよってさらに精製され、メタノール／塩化メチレン（１：４０）と溶離され、標題生成物（１１４．１ｍｇ、生成率１２．０％）、融点  ２７２〜２７５  ℃を得る。．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．５０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ８．０６  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）、  ７．８５  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．１３  （２Ｈ、ｍ）、  ７．３８  （２Ｈ、  ｍ）、  ２．４０  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３０９．３４。
【０２７７】
以下の化合物は、上記に説明された化合物５５を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物５４  
３−［４−（２−フルオロ−フェニル）−５−メチルピリミジン−２−イル］−安息香酸：  融点．  ２７９−２８１  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．９２  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．４６  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．０５  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．４３  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．３８  （２Ｈ、  ｍ）、  ２．２２  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１０．２９  （２０）、  ３０９．２７  （１００）．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３０８．２９  （２０）、  ３０７．２７  （１００）。
【０２７８】
Ｅ．２、４−ピリジンの調製
通常以下のように図式Ｅにのっとって、式１−Ｅおよび２−Ｅの２、４ピリミジンを調製してもよい。 
３−［４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−２−イル］−安息香酸（化合物７）の調製
パートＡ．アセトニトリル−水（５０ｍＬ／２０ｍＬ）中の４−ブロモピリジン塩酸塩（１．０ｇ、６．３ｍｍｏｌ）溶液は、４−イソプロピルベンゼンボロン酸（１．０４ｇ、６．３ｍｍｏｌ）および炭酸ソーダ（２．１ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）で処理される。混合物は２度ガス抜きされ、テトラキス（トリフェニルホスフィン）の触媒量が加えられる。混合物は１２時間加熱還流され、その後冷却され、水（５０ｍＬ）に注入される。混合物はろ過され、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）によって抽出される。抽出物を混合し、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、気化し、１．０１ｇの十分な純粋な生成物、４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジンを得る。
【０２７９】
パートＢ．  ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン（１．０１ｇ、５．１ｍｍｏｌ）溶液は０℃まで冷却され、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１．３３ｇ、７．６ｍｍｏｌ）溶液は滴状に加えられる。混合物は１２時間以上攪拌しながら室温に温められ、その後、２時間加熱還流される。ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（０．５ｇ）の超過分が加えられ、引き続き２時間還流される。溶液は冷却され、引き続き、１０％の亜硫酸ナトリウム水溶液、１０％の炭酸ソーダ水溶液および飽和塩水で洗浄される。有機相は無水硫酸マグネシウムで乾燥され、気化される。残留物はフラッシュクロマトグラフィーによって分離され、４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−Ｎ−酸化物（０．８５ｇ、７８％）を得る。
【０２８０】
パートＣ．  ４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−Ｎ−酸化物（１２６ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン（５ｍＬ）の混合物を１２時間加熱還流させる。混合物は冷却され、気化され、残留物は水中に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３飽和水溶液によって中和され、酢酸エチルによって抽出される。抽出物は塩水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化される。残留物はカラムクロマトグラフィーによって分離され、２−クロロ−４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン（１１０ｍｇ、８１％）をえる。
【０２８１】
パートＤ．  アセトニトリル−水（１ｍＬ／０．５ｍＬ）中の２−クロロ−４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン（１１０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）溶液は、３−カルボエトキシベンゼンボロン酸（１８６ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、炭酸ソーダ（１５３ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（触媒量）で処理される。混合物は１２時間加熱還流され、その後冷却され、水と酢酸エチル間で分割される。有機相は塩水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化される。残留物はカラムクロマトグラフィーによって分離され、エチル３−［４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−２−イル］−安息香酸エステル（１１６ｍｇ、７０％）を得る。
【０２８２】
パートＥ．  メタノール水（３ｍＬ／１ｍＬ）中のエチル３−［４−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−２−イル］−安息香酸エステル（１１６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）溶液は、水酸化リチウム水和物（４１ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）で処理される。混合物は室温で１２時間攪拌され、その後、水とジエチルエーテル間で分割される。水相は３Ｎ  ＨＣｌ水溶液によりｐＨ７まで中和され、酢酸エチルによって抽出される。抽出物は塩水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化され、白色粉末（９２ｍｇ、８５％）、融点２３３〜２３４℃の標題化合物を得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  メタノールｄ４）：  d  ８．６６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．６５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．２５  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１４−８．１１  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．７８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．６９−７．６２  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．４２  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  ｈｚ）、  ３．００  （１Ｈ、  ｈｅｐｔｅｔ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  １．３０  （６Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ｘ．  ＭＳ  （ＥＳ−）：  ｍ／ｅ  ３１９  （２０）、  ３１８  （１００）。
【０２８３】
以下の化合物は、上記に説明された化合物７を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物１３  
４−（４−ｐ−トリル−ピリジン−２−イル）−安息香酸：  融点  ２８８〜２９１  ℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．７８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  ８．４２  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．３０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ８．０８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．９４−７．９０  （３Ｈ、  ｍ）、  ７．３８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ２．３９  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９１  （１９）、  ２９０  （１００）。
【０２８４】
Ｆ．３、５−ピリジン
通常以下のように図式Ｆにのっとって、式１−Ｆおよび２−Ｆの３、５ピリミジンを調製してもよい。 
３−［５−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−３−イル］−安息香酸  （化合物１１）の調製
パートＡ．  エタノール−トルエン−水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）の混合物中の３、５−ジブロモピリジン（１．０ｇ、４．２ｍｍｏｌ）と４−イソプロピルベンゼンボロン酸（３４６ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液は、炭酸ソーダ（４５０ｍｇ）で処理される。混合物は２度ガス抜きされ、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの触媒量で処理され、攪拌しながら１２時間８０度まで加熱する。混合物は冷却され、ろ過され、気化される。残留物は水と酢酸エチルとの間で分割され、有機相は塩水洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、気化される。残留物はカラムクロマトグラフィーによって分離され、３−ブロモ−５−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン（３００ｍｇ、５５％）を得る。
【０２８５】
パートＢ．  Ａエタノール−トルエン−水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）中の３−ブロモ−５−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン（３００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）と３−カルボエトキシベンゼンボロン酸（１８０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液は、炭酸ソーダ（３４５ｍｇ）で処理される、２度ガス抜きされ、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの触媒量で処理される。出発原料がＴＬＣによって決定されるとおりに消滅するまで、混合物は攪拌されながら８０℃まで加熱される。その後、混合物は冷却され、ろ過、気化され、残留物質は水と酢酸エチルとの間で分割される。有機相は塩水で洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、気化され、残留物はカラムクロマトグラフィーによって分離され、エチル３−［５−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−３−イル−安息香酸エステル（２５２ｍｇ、７９％）を得る。
【０２８６】
パートＣ．  メタノール水（３ｍＬ／１ｍＬ）中のエチル３−［５−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−３−イル］−安息香酸エステル（１００ｍｇ）溶液は、水酸化リチウム水和物（５０ｍｇ）で処理され、溶液は１２時間４０〜５０℃に加熱される。冷却後、溶液は３Ｎ  ＨＣｌによってｐＨ７まで中和され、酢酸エチルによって抽出される。抽出物は塩水で洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、気化され、粉末（８０ｍｇ、８７％）、融点１５５〜１５６℃の標題化合物を得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＣＤＣｌ３）：  d  ８．９３−８．９０  （２Ｈ、  ｍ）、  ８．４４  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．２１−８．１９  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．８９  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  ７．６４  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．６１  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．３９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ３．００  （１Ｈ、  ｈｅｐｔｅｔ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  １．３０  （６Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１９  （２２）、  ３１８  （１００）。
【０２８７】
以下の化合物は、上記に説明された化合物１１を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物１５  
４−（５−ｐ−トリル−ピリジン−３−イル）−安息香酸：  融点  ２６０〜２６２  ℃．１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  d  ８．９２  （２Ｈ、  ｓ）、  ８．３８  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．０５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．９８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．７５  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．３３  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ２．３６  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９１  （２０）、  ２９０  （１００）。
【０２８８】
Ｇ．４、２−ピリジン
通常以下のように図式Ｇにのっとって、式１−Ｇおよび２−Ｇの４、２ピリミジンを調製してもよい。 
３−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−４−イル］−安息香酸（化合物８）の調製
パートＡ．  アセトニトリル−水（１０ｍＬ／５ｍＬ）中の４−ブロモピリジン（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）溶液は、３−カルボエトキシベンゼンボロン酸（０．９３ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、炭酸ソーダ（２．２ｇ、２１ｍｍｏｌ）および触媒テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムで処理される。溶液は１２時間加熱還流され、その後、冷却され、酢酸エチルによって抽出される。抽出物は塩水で洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、気化される。残留物質はフラッシュクロマトグラフィーによって分離され、エチル３−ピリジン−４−ｙｌ−安息香酸エステル（１．０ｇ、８６％）を得る。
【０２８９】
パートＢ．  Ａジクロロメタン（５ｍＬ）中のエチル３−ピリジン−４−ｙｌ−安息香酸エステル（１５０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）溶液は、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（３４０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）で処理される。２日間攪拌した後、混合物は３５０ｍｇ多いｍ−クロロペルオキシ安息香酸で処理され、反応混合物は一晩中加熱還流される。溶液は冷却され、引き続き、１０％亜硫酸ナトリウム水溶液、１０％炭酸ソーダ水溶液および塩水で洗浄される。有機相は無水硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過さ、気化され、十分純粋なエチル３−ピリジン−４−イル−安息香酸エステル−Ｎ−酸化物を得る。この物質はオキシ塩化リン中に溶解し、１２時間加熱還流される。反応混合物は冷却され、気化され、残留物が酢酸エチル内に得られる。この溶液は炭酸ソーダ飽和水溶液、水および塩水で洗浄され、その後、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化される。残留物はフラッシュクロマトグラフィーによって分離され、エチル３−（２−クロロ−ピリジン−４−イル）−安息香酸エステル（８１ｍｇ、全部で４７％）を得る。
【０２９０】
パートＣ．  Ａアセトニトリル−水（２ｍＬ／０．５ｍＬ）中のエチル３−（２−クロロ−ピリジン−４−イル）−安息香酸エステル（８１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、炭酸ソーダ（９９ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）および４−イソプロピルベンゼンボロン酸（６０ｍｇ）の溶液は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの触媒量で処理され、２４時間加熱還流される。混合物は水（６０ｍＬ）に注入され、この混合物はジエチルエーテル（３×６０ｍＬ）によって抽出される。抽出物は混合され、塩水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、ろ過され、気化され、エチル３−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−４−イル］−安息香酸エステル（７５ｍｇ、７６％）を得る。
【０２９１】
パートＤ．  標準水酸化リチウムエステル加水分解方法が、エチル３−［２−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−４−イル］−安息香酸エステルを標題化合物、融点２４７〜２４９℃に変化させるのに使用される。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＣＤＣｌ３）：  d  ８．８０  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．４５  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．２１  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  ｈｚ）、  ７．９９  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．９８−７．９４  （２Ｈ、  ｍ）、  ７．６４  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．５２−７．４８  （１Ｈ、  ｍ）、  ７．３７  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ２．９９  （１Ｈ、  ｈｅｐｔｅｔ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  １．３０  （６Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１９  （２４）、  ３１８  （１００）。
【０２９２】
以下の化合物は、上記に説明された化合物８を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物１２  
４−（２−ｐ−トリル−ピリジン−４−イル）−安息香酸：  融点  ２８６〜２８９℃．  １Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＣＤＣｌ３）：  d  ８．７１  （１Ｈ、  ｂｒ  ｄ、  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ）、  ８．２２  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．１２−８．０２  （６Ｈ、  ｍ）、  ７．３０  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ２．３６  （３Ｈ、  ｓ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９１  （２０）、  ２９０  （１００）。
【０２９３】
Ｈ．２、６−ピリジン
通常以下のように図式Ｈにのっとって、式１−Ｈおよび２−Ｈの４、２ピリミジンを調製してもよい。
【０２９４】
３−［６−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−２−ｙｌ］−安息香酸  （化合物６）の調製
パートＡ．  Ａアセトニトリル（２０ｍＬ）中の２、６−ジブロモピリジン（６．１６ｇ、２６ｍｍｏｌ）および３−カルボエトキシベンゼンボロン酸（０．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液は、水（５ｍＬ）中の炭酸ソーダ（０．８８ｇ）溶液で処理される。混合物は２度ガス抜きされ、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの触媒量は加えられる。反応混合物は８０℃まで加熱され、１２時間攪拌され、その後、冷却され、ろ過され、気化される。残留物は水と酢酸エチルとの間で分割され、有機相は塩水飽和水溶液で洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、気化される。残留物質はカラムクロマトグラフィーによって分離され、エチル３−（６−ブロモ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エステル（１５４ｍｇ、２０％）を得る。
【０２９５】
パートＢ．  アセトニトリル中のエチル３−（６−ブロモ−ピリジン−２−イル）−安息香酸エステル（１５４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および４−イソプロピルベンゼンボロン酸（８３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液は、水（１ｍＬ）中の炭酸ソーダ溶液（１６０ｍｇ）で処理される。混合物は２度ガス抜きされ、窒素に保護されてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムの触媒量は加えられる。出発原料の消滅がＴＬＣによって観察されるまで、反応混合物は８０℃で攪拌される。混合物は冷却され、ろ過さ、気化され、残留物質は水と酢酸エチルとの間で分割される。有機相は塩水で洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過さ、気化される。残留物はカラムクロマトグラフィーによって精製され、エチル３−［６−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−２−イル］−安息香酸エステル（１２０ｍｇ、６９％）を得る。
【０２９６】
パートＣ．  Ａ３ｍＬメタノール-１ｍＬ水中のエチル３−［６−（４−イソプロピル−フェニル）−ピリジン−２−イル］−安息香酸エステル（９０ｍｇ）溶液は、水酸化リチウム水和物（５０ｍｇ）で処理される。溶液は攪拌されながら４０℃から５０℃の間に１２時間加熱され、その後、冷却され、３Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ７まで中和される。混合物は酢酸エチルによって抽出され、抽出物は塩水で洗浄され、硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、気化され、粉末（７０ｍｇ、８５％）の標題生成物、融点２１５〜２１６℃を得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （３００  ＭＨｚ、  ＣＤＣｌ３）：  d  ８．８６  （１Ｈ、  ｓ）、  ８．４７  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．１８  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ８．０８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ７．８５  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  ７．７７  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  ７．７６  （１Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  ７．６２  （１Ｈ、  ｔ、  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ）、  ７．３８  （２Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ）、  ２．９９  （１Ｈ、  ｈｅｐｔｅｔ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）、  １．３０  （６Ｈ、  ｄ、  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ）．  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ３１９  （２０）、  ３１８  （１００）。
【０２９７】
以下の化合物は、上記に説明された化合物６を参照して、同じように調製されてもよい。 
化合物１４  
４−（６−ｐ−トリル−ピリジン−２−イル）−安息香酸：融点２８３〜２８４℃
３−（６−フェニル−ピリジン−２−ｙｌ）−安息香酸  （化合物２４）の調製
パートＡ．  エタノール（５０ｍＬ）中のメチル４−アセチル安息香酸エステル（５．００ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）懸濁液は、ビス（ジメチルアミノ）−メトキシメタン（７．５０ｍＬ、５６．１ｍｍｏｌ）で処理され、混合物は攪拌されながら２日間８０度まで加熱される。溶剤は減圧下で除去され、白色固形物の目的の生成物（メチル４−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−安息香酸エステル）を得る。
【０２９８】
パートＢ．  Ａ酢酸（５ｍＬ）中の（メチル４−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−安息香酸エステル）（１００ｍｇ）溶液は、アセトフェノンおよび酢酸アンモニウム（７７ｍｇ）で処理される。得られた混合物は１８時間８０℃まで加熱され、その後、冷却され、窒素を流しながら気化される。得られた固形物は、酢酸エチル−ヘキサンで再結晶され、メチル３−（６−フェニル−ピリジン−２−イル）−安息香酸エステルを得る。  ＭＳ  （ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２９０．２  （１００）。
【０２９９】
パートＣ．  水酸化ナトリウムおよび標題酸生成物が得られる精密検査を使用して、メチル３−（６−フェニル−ピリジン−２−イル）−安息香酸エステルは鹸化される。ＭＳ（ＥＳ＋）：  ｍ／ｅ  ２７６  （１００）。
【０３００】
本発明のある好ましい化合物の融点および質量分析データは、以下の表に示されている。
【表５】
2008515992.tif 000051
2008515992.tif 000052
2008515992.tif 000053
2008515992.tif 000054
2008515992.tif 000055
2008515992.tif 000056
2008515992.tif 000057
2008515992.tif 000058
2008515992.tif 000059
2008515992.tif 000060
2008515992.tif 000061
2008515992.tif 000062
2008515992.tif 000063
2008515992.tif 000064
2008515992.tif 000065
2008515992.tif 000066
2008515992.tif 000067
2008515992.tif 000068
2008515992.tif 000069
【０３０１】
実施例２：ナンセンス抑圧活性
ルシフェラーゼを媒介とする化学発光による、機能的な、細胞に基づいた翻訳アッセイ（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２３１８５、２００３年７月２３日出願、参照することによりその全体がここに組み込まれる）により、ナンセンス抑制レベルの定量的評価が可能となる。ヒト胎児腎臓細胞（２９３細胞）をウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む培地で培養する。この細胞には、１９０番のアミノ酸に未熟期終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子を安定的に導入することができる。この位置に通常存在するルシフェラーゼ遺伝子トレオニンコドン（ＡＣＡ）の代わりに、前後関係上重要な、ナンセンスコドンの次の下流プラス１に位置する、３つの可能な各ナンセンスコドン（ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）、および４つの可能な各ヌクレオチド（アデニン、チミン、シトシン、またはグアニン）が、部位指定変異導入によって導入される。このように、未熟期終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子上の１９０番のアミノ酸は、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡである。各終止コドンに対し、未熟期終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子の１９０番のアミノ酸に続くヌクレオチドは、アデニン、チミン、シトシン、あるいはグアニン（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ）で置換することができ、これらの変異は、ルシフェラーゼ遺伝子のリーディングフレームを変更しない。これらの構成の図式を、図１に示す。
【０３０２】
上述の本発明における細胞に基づいたルシフェラーゼレポーターアッセイによる、ナンセンス抑圧活性を以下の表（Table 2）に示す。ヒト胎児腎臓２９３細胞は、１９０番位置にＵＧＡナンセンス変異を含むルシフェラーゼレポーター構成を安定的に導入されるが、インフレームでアデニンヌクレオチドが後続する。
【０３０３】
Table 2における活性測定の決定は、本発明のＵＧＡ未熟期終結コドンを備える構成である細胞に基づいたルシフェラーゼレポーターアッセイにおいておこなわれる。アミノ配糖体系抗生物質であり、未熟期終結コドンのリードスルーを起こすことで知られるゲンタマイシンが、内部標準として使用される。活性測定は、細胞内で一定のタンパク質を産生するために必要な化合物の最低濃度とその濃度で細胞によって産生されるタンパク質の量の定性比に基づいている。タンパク質合成の非常に高い効力および効果、あるいはそのどちらかを有すると確認された化合物は、「＊＊＊＊」と分類される。タンパク質合成の中程度に効力、および／または効果を有すると確認された化合物は、「＊＊＊＊」、「＊＊＊」、あるいは「＊＊」と分類される。同様に、タンパク質合成の低度の効力、および／または効果を有すると確認された化合物は、「＊＊＊＊」、「＊＊＊」、あるいは「＊＊」と分類される。
【表６】
2008515992.tif 000070
2008515992.tif 000071
2008515992.tif 000072
【０３０４】
前述のアッセイにおけるナンセンス抑制活性を以下のTable 3に示す。１９０番位置にＵＧＡナンセンス変異を有する構成で、インフレームでシトシンヌクレオチドが後続する（ＵＧＡＣ）、１９０番位置にＵＡＧナンセンス変異を有する構成で、インフレームでアデニンヌクレオチドが後続する（ＵＡＧＡ）、１９０番位置にＵＡＡナンセンス変異を有する構成で、インフレームでアデニンヌクレオチドが後続する（ＵＡＡＡ）。「ＰＯＳ  ＷＢ」は、本発明の化合物がＵＧＡナンセンス変異、続いてシトシンヌクレオチド（ＵＧＡＣ）を有する本発明のアッセイで使用される場合、陽性示唆がウエスタンブロット法で生成されることを示している。
【表７】
2008515992.tif 000073
【０３０５】
実施例３：読み合わせアッセイ
ルシフェラーゼを媒介とする化学発光による、機能的な、細胞に基づいた翻訳アッセイ（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２３１８５、２００３年７月２３日出願、参照することにより、その全体がここに組み込まれる）により、ｍＲＮＡにおける通常終止コドンの翻訳読み合わせの評価が可能となる。ヒト胎児腎臓細胞（２９３細胞）をウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む培地で培養する。この細胞には、１９０番のアミノ酸に未熟期終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子を安定的に導入することができる。この位置に通常存在するルシフェラーゼ遺伝子トレオニンコドン（ＡＣＡ）の代わりに、前後関係上重要な、ナンセンスコドンの次の下流プラス１に位置する、３つの可能な各ナンセンスコドン（ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）、４つの可能な各ヌクレオチド（アデニン、チミン、シトシン、またはグアニン）が、部位指定変異導入によって導入される。このように、未熟期終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子上の１９０番のアミノ酸は、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡである。各終止コドンに対し、未熟期終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子の１９０番のアミノ酸に続くヌクレオチドは、アデニン、チミン、シトシン、あるいはグアニン（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ）で置換することができ、これらの変異は、ルシフェラーゼ遺伝子のリーディングフレームを変更しない。これらの構成の図式は、上記図１に示す。
【０３０６】
本発明の別のアッセイにより、ナンセンス変異抑圧を促進する化合物を評価することができる。上記の図１に示すルシフェラーゼ構成には、ルシフェラーゼタンパクのＮ−末端に２つのエピトープタグを組み込まれている。ルシフェラーゼタンパク産生に基づき、これらの構成は翻訳リードスルーのレベルを定性的に評価する。未熟期終結コドンの抑制によって産生された全長ルシフェラーゼタンパクの存在は、抑制されたルシフェラーゼタンパクの免疫沈降によって測定され（Ｈｉｓ−ｔａｇ抗体を使用）、続いて１番目のエピトープ（ＸｐｒｅｓｓＴＭエピトープ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に対する抗体を使用してのウエスタンブロット法で測定される。これらの構成の図式を、図２に示す。  
図２の構成を有する細胞は、本発明の化合物で処理することで、全長のタンパク質の産生が増加を示す。２０時間の処理後、図２の構成を有する細胞を収集し、Ｈｉｓエピトープを認識する抗体はルシフェラーゼタンパクを免疫沈降させるために使用される。免疫沈降に続いて、ＸｐｒｅｓｓＴＭエピトープ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に抗体を使用してウエスタンブロット法を実施し、短縮ルシフェラーゼ（ナンセンス抑制が行われなかった場合に産生される）を検知し、また全長のタンパク質（ナンセンスコドンの抑制によって産生される）を検知する。試験化合物による細胞処理では、全長のタンパク質が産生され、リードスルータンパク質は産生されなかった（例として図３参照）。リードスルータンパク質は通常終結コドンの抑制が行われた場合に産生される。本発明の化合物は、ルシフェラーゼｍＲＮＡにおいて、未熟期、すなわちナンセンス変異は抑制するが、通常終結コドンは抑制しない。
【０３０７】
本発明の化合物は、哺乳類において、未熟期終結コドンには選択的に作用するが、通常終結コドンには作用しない。  
ラットとイヌに、高用量の化合物（最高１８００ｍｇ／ｋｇ）を１日１回、１４日間にわたり強制経口（経口）投与する。処置後、組織を採取し、溶解物を調整し、ウエスタンブロットアッセイを実行する。通常終結コドンのリードスルーを評価するためのタンパク質の選定は、主に通常終結コドンとともにインフレームである３’−ＵＴＲに２番目の終止コドンを有する対応するｍＲＮＡに基づく。これら２つの終止コドン間で、選択された各タンパク質は、１番目の終結コドンのリボソームのリードスルーが起きた場合にタンパク質の伸長をコードするヌクレオチドの介在配列を備えている。化合物に非特異的なリポゾームのリードスルーを誘発する能力がある場合、ウエスタンブロット法を用いて、細長いタンパク質を野生型タンパク質と区別する。ラットから組織を採取し、ビメンチンｍＲＮＡにおける通常終結コドン（ＵＡＡ）の抑制を分析する。明らかな抑制は確認されない。イヌから組織を採取し、本発明の化合物で処理する。ＵＡＧ終止コドンを有するベータ活性の通常終結コドンの抑制は確認されなかった。  
健康人ボランティアにおいて、本発明化合物の経口単回投与（２００ｍｇ／ｋｇ）を実施する。血液検体を採取し、血漿を調整し、男女被験者の血漿検体を使用してウエスタンブロット法を実施する。ＵＧＡ末端コドンを有するＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を用い、本発明の化合物で被験者を治療することにより、ＣＲＰ  ｍＲＮＡにおいて通常終結コドンが抑制されるかどうかを判断する。ルシフェラーゼアッセイと未熟期終結アッセイとの組み合わせで、未熟期終結コドンの選択的抑制は実証されるが、通常終結コドンの抑制は実証されない。
【０３０８】
実施例４：動物モデル
また、動物モデル系を用いて、本発明の化合物の安全性と有効性を実証することもできる。関心のある疾患、症状、または症候群に対する本発明の化合物の生物活動を動物モデルを用いてテストする。これには機能的な読み出し装置と連結した、標的ＲＮＡ要素を有するように操作された動物、例えばトランスジェニックマウスなどが含まれる。
【０３０９】
嚢胞性線維症
嚢胞性線維症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ｃｆｔｒ（−／−）マウス（例としては、Ｆｒｅｅｄｍａｎら、２００１、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２１（４）：９５０−７参照）、ｃｆｔｒ（ｔｍ１ＨＧＵ／ｔｍ１ＨＧＵ）マウス（例としては、Ｂｅｒｎｈａｒｄら、２００１、Ｅｘｐ  Ｌｕｎｇ  Ｒｅｓ  ２７（４）：３４９−６６参照）、ＣＦＴＲ−欠損ｃＡＭＰ媒介Ｃｌ（−）コンダクタンス障害マウス（例としては、Ｓｔｏｔｌａｎｄら、２０００、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｐｕｌｍｏｎｏｌ  ３０（５）：４１３−２４参照）、またＣ５７ＢＬ／６−Ｃｆｔｒ（ｍ１ＵＮＣ）／Ｃｆｔｒ（ｍ１ＵＮＣ）ノックアウトマウス（例としては、Ｓｔｏｔｌａｎｄら、２０００、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｐｕｌｍｏｎｏｌ  ３０（５）：４１３−２４参照）が挙げられる。
【０３１０】
筋ジストロフィー
筋ジストロフィーの動物モデルの例としては、これらに限定されないが、マウス、ハムスター、ネコ、イヌ、およびシー・エレガンスが挙げられる。筋ジストロフィーのマウスモデルの例としては、これらに限定されないが、ｄｙ−／−マウス（例としては、Ｃｏｎｎｏｌｌｙら、２００２、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １２７（１−２）：８０−７参照）、筋ジストロフィー筋炎（ｍｄｍ）マウス変異体（例としては、Ｇａｒｖｅｙら、２００２、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ７９（２）：１４６−９参照）、ｍｄｘマウス（例としては、Ｎａｋａｍｕｒａら、２００１、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １１（３）：２５１−９参照）、ユートロフィン―ジストロフィンノックアウト（ｄｋｏ）マウス（例としては、Ｎａｋａｍｕｒａら、２００１、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １１（３）：２５１−９参照）、ｄｙ／ｄｙマウス（例としては、Ｄｕｂｏｗｉｔｚら、２０００、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １０（４−５）：２９２−８参照）、ｍｄｘ（Ｃｖ３）マウスモデル（例としては、Ｐｉｌｌｅｒｓら、１９９９、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １０９（８）：１３１０−２参照）、および筋緊張症ＡＤＲ−ＭＤＸ変異マウス（例としては、Ｋｒａｍｅｒら、１９９８、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  ８（８）：５４２−５０参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのハムスターモデルの例としては、これらに限定されないが、サルコグリカン―欠損ハムスター（例としては、Ｎａｋａｍｕｒａら、２００１、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８１（２）：Ｃ６９０−９参照）、およびＢＩＯ  １４．６  ジストロフィーハムスター（例としては、Ｓｃｈｌｅｎｋｅｒ、Ｂｕｒｂａｃｈ共著、１９９１、Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ７１（５）：１６５５−６２参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのネコモデルの例としては、これらに限定されないが、肥大性筋ジストロフィーネコモデル（例としては、Ｇａｓｃｈｅｎ、Ｂｕｒｇｕｎｄｅｒ共著、２００１、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （Ｂｅｒｌ）  １０１（６）：５９１−６００参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのイヌモデルの例としては、これらに限定されないが、筋ジストロフィーゴールデンレトリバー（例としては、Ｆｌｅｔｃｈｅｒら、２００１、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １１（３）：２３９−４３参照）、およびイヌＸ−連鎖筋ジストロフィー（例としては、Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、１９９２、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ  ４２（３）：３５２−６参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのシー・エレガンスモデルの例は、Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ、Ｂｅｎｉａｎ共著、２０００、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  １０（２１）：Ｒ７９５−７、およびＣｕｌｅｔｔｅ、Ｓａｔｔｅｌｌｅ共著、２０００、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ９（６）：８６９−７７に記載される。
【０３１１】
家族性高コレステロール血症
家族性高コレステロール血症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、機能性ＬＤＬ受容体遺伝子欠乏マウス（例としては、Ａｊｉら、１９９７、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９５（２）：４３０−７参照）、Ｙｏｓｈｉｄａラット（例としては、Ｆａｎｔａｐｐｉｅら、１９９２、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５０（２４）：１９１３−２４参照）、ＪＣＲ：ＬＡ−ｃｐラット（例としては、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎら、１９９８、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １３８（１）：１３５−４６）、ブタ（例としては、Ｈａｓｌｅｒ−Ｒａｐａｃｚら、１９９８、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ  ７６（５）：３７９−８６参照）、およびＷａｔａｎａｂｅ遺伝性高脂血症ウサギ（例としては、Ｔｓｕｔｓｕｍｉら、２０００、Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ５０（２）：１１８−２１；Ｈａｒｓｃｈら、１９９８、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １２４（２）：２２７−８２；およびＴａｎａｋａら、１９９５、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １１４（１）：７３−８２参照）が挙げられる。
【０３１２】
ヒト癌
ヒト癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、一般的に、コンパニオンアニマルに自発的に生じる腫瘍（例としては、Ｖａｉｌ、ＭａｃＥｗｅｎ共著、２０００、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ  １８（８）：７８１−９２参照）が挙げられる。肺癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、Ｚｈａｎｇ、Ｒｏｔｈ共著により記述される肺癌動物モデル（１９９４、Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ８（５）：７５５−６９）、およびｐ５３機能破壊トランスジェニックマウスモデル（例としては、Ｍｏｒｒｉｓら、１９９８、Ｊ  Ｌａ  Ｓｔａｔｅ  Ｍｅｄ  Ｓｏｃ  １５０（４）：１７９−８５参照）が挙げられる。乳癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、サイクリンＤ１過剰発現トランスジェニックマウス（例としては、Ｈｏｓｏｋａｗａら、２００１、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒｅｓ  １０（５）：４７１−８参照）が挙げられる。結腸癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ＴＣＲｂｅｔａおよびｐ５３ダブルノックアウトマウス（例としては、Ｋａｄｏら、２００１、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６１（６）：２３９５−８参照）膵臓癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、膵臓腫瘍Ｐａｎｃ０２マウス膵臓腺癌転位モデル（例としては、Ｗａｎｇら、２００１、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌ  ２９（１）：３７−４６参照）および、皮下に脾臓腫瘍を発生させたｎｕ−ｎｕマウス（例としては、Ｇｈａｎｅｈら、２００１、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ８（３）：１９９−２０８参照）が挙げられる。非ホジキンリンパ腫の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、重症複合型免疫不全症（「ＳＣＩＤ」）マウス（例としては、Ｂｒｙａｎｔら、２０００、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ８０（４）：５５３−７３参照）、およびＩｇＨｍｕ−ＨＯＸ１１トランスジェニックマウス（例としては、Ｈｏｕｇｈら、１９９８、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５（２３）：１３８５３−８参照）が挙げられる。食道癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ヒトパローマウイルス１６型Ｅ７腫瘍遺伝子導入トランスジェニックマウス（例としては、Ｈｅｒｂｅｒら、１９９６、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７０（３）：１８７３−８１参照）が挙げられる。結腸直腸癌の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、Ａｐｃマウスモデル（例としては、Ｆｏｄｄｅ、Ｓｍｉｔｓ共著、２００１、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ７（８）：３６９−７３、およびＫｕｒａｇｕｃｈｉら、２０００、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（５０）：５７５５−６３参照）が挙げられる。神経線維腫症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、変異ＮＦ１マウス（例としては、Ｃｉｃｈｏｗｓｋｉら、１９９６、Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  ７（５）：２９１−８）が挙げられる。網膜芽腫の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、網膜にシミアンウイルス４０Ｔ抗原発現のトランスジェニックマウス（例としては、Ｈｏｗｅｓら、１９９４、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５（２）：３４２−５１、およびＷｉｎｄｌｅら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ  ３４３（６２５９）：６６５−９参照）、および近交系ラット（例としては、Ｎｉｓｈｉｄａら、１９８１、Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  １（１）：５３−５、およびＫｏｂａｙａｓｈｉら、１９８２、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （Ｂｅｒｌ）  ５７（２−３）：２０３−８参照）が挙げられる。ウィルムス腫瘍の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ＷＴ１ノックアウトマウス（例としては、Ｓｃｈａｒｎｈｏｒｓｔら、１９９７、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ  ８（２）：１３３−４３参照）、神経芽細胞腫多発の亜系ラット（例としては、Ｍｅｓｆｉｎ、Ｂｒｅｅｃｈ共著、１９９６、Ｌａｂ  Ａｎｉｍ  Ｓｃｉ  ４６（３）：３２１−６参照）、およびＷｉｓｔａｒ／Ｆｕｒｔｈウィルムス腫瘍ラット（例としては、Ｍｕｒｐｈｙら、１９８７、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７（４Ｂ）：７１７−９参照）が挙げられる。
【０３１３】
網膜色素変性症
網膜色素変性症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、英国外科医師会（「ＲＣＳ」）ラット（例としては、Ｖｏｌｌｒａｔｈら、２００１、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（２２）；１２５８４−９、およびＨａｎｉｔｚｓｃｈら、１９９８、Ａｃｔａ  Ａｎａｔ  （Ｂａｓｅｌ）１６２（２−３）：１１９−２６参照）、ロドプシンノックアウトマウス（例としては、Ｊａｉｓｓｌｅら、２００１、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ４２（２）：５０６−１３参照）、およびＷａｇ／Ｒｉｊラット（例としては、Ｌａｉら、１９８０、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ９８（１）：２８１−４参照）が挙げられる。
【０３１４】
肝硬変
肝硬変の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ＣＣｌ４−暴露ラット（例としては、Ｋｌｏｅｈｎら、２００１、Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  ３３（７）：３９４−４０１参照）、および細菌性細胞成分または結腸炎により誘発されたげっ歯類モデル（例としては、Ｖｉｅｒｌｉｎｇ、２００１、Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １５（４）：５９１−６１０参照）が挙げられる。
【０３１５】
血友病
血友病の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、血友病Ａげっ歯類モデル（例としては、Ｒｅｉｐｅｒｔら、２０００、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ８４（５）：８２６−３２；  Ｊａｒｖｉｓら、１９９６、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ７５（２）：３１８−２５；およびＢｉら、１９９５、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １０（１）：１１９−２１参照）、血友病Ａイヌモデル（例としては、Ｇａｌｌｏ−Ｐｅｎｎら、１９９９、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０（１１）：１７９１−８０２、およびＣｏｎｎｅｌｌｙら、１９９８、Ｂｌｏｏｄ  ９１（９）；３２７３−８１参照）、血友病Ｂマウスモデル（例としては、Ｓｎｙｄｅｒら、１９９９、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ５（１）：６４−７０；Ｗａｎｇら、１９９７、  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９４（２１）：１１５６３−６；およびＦａｎｇら、１９９６、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ３（３）：２１７−２２参照）、血友病Ｂイヌモデル（例としては、Ｍｏｕｎｔら、２００２、Ｂｌｏｏｄ  ９９（８）：２６７０−６；Ｓｎｙｄｅｒら、１９９９、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ５（１）：６４−７０；Ｆａｎｇら、１９９６、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ３（３）：２１７−２２；および、Ｋａｙら、１９９４、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１（６）：２３５３−７参照）、および血友病Ｂアカゲザルモデル（例としては、Ｌｏｚｉｅｒら、１９９９、Ｂｌｏｏｄ  ９３（６）：１８７５−８１参照）が挙げられる。
【０３１６】
フォン・ヴィレブランド病
フォン・ヴィレブランド病の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、近交系マウス系統ＲＩＩＩＳ／Ｊ（例としてはＮｉｃｈｏｌｓら、１９９４、８３（１１）：３２２５−３１、およびＳｗｅｅｎｅｙら、１９９０、７６（１１）：２２５８−６５参照）、ボトロセチン投与ラット（例としては、Ｓａｎｄｅｒｓら、１９８８、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ５９（４）：４４３−５２参照）、およびフォン・ヴィレブランド病ブタモデル（例としては、Ｎｉｃｈｏｌｓら、１９９５、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２（７）：２４５５−９；Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｂｏｗｉｅ共著、１９９２、Ｊ  Ｌａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  １２０（４）：５５３−８；およびＢｒｉｎｋｈｏｕｓら、１９９１、Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ  ６６（７）：７３３−４２参照）が挙げられる。
【０３１７】
ベータ・サラセミア
ベータ・サラセミアの動物モデルの例としては、これらに限定されないが、グロビン遺伝子変異マウスモデル（例としては、Ｌｅｗｉｓら、１９９８、Ｂｌｏｏｄ  ９１（６）：２１５２−６；Ｒａｊａら、１９９４、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ８６（１）：１５６−６２；Ｐｏｐｐら、１９８５、４４５：４３２−４４；およびＳｋｏｗら、１９８３、Ｃｅｌｌ  ３４（３）：１０４３−５参照）が挙げられる。
【０３１８】
腎臓結石
腎臓結石の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、遺伝性高カルシウム尿症ラット（例としては、Ｂｕｓｈｉｎｓｋｙら、１９９９、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ５５（１）：２３４−４３、およびＢｕｓｈｉｎｓｋｙら、１９９５、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ４８（６）：１７０５−１３）、化学物質で処理されたラット、（例としては、Ｇｒａｓｅｓら、１９９８、Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｕｒｏｌ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ３２（４）：２６１−５；Ｂｕｒｇｅｓｓら、１９９５、Ｕｒｏｌ  Ｒｅｓ  ２３（４）：２３９−４２；Ｋｕｍａｒら、１９９１、Ｊ  Ｕｒｏｌ  １４６（５）：１３８４−９；Ｏｋａｄａら、１９８５、Ｈｉｎｙｏｋｉｋａ  Ｋｉｙｏ  ３１（４）：５６５−７７；およびＢｌｕｅｓｔｏｎｅら、１９７５、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ３３（３）：２７３−９）、高シュウ酸尿症ラット（例としては、Ｊｏｎｅｓら、１９９１、Ｊ  Ｕｒｏｌ  １４５（４）：８６８−７４）、片側逆行軟性腎盂鏡検査におけるブタ（例としては、Ｓｅｉｆｍａｈら、２００１、５７（４）：８３２−６）、および上部尿路閉塞ウサギ（例としては、Ｉｔａｔａｎｉら、１９７９、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｕｒｏｌ  １７（３）：２３４−４０参照）が挙げられる。
【０３１９】
血管拡張性失調症
血管拡張性失調症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、血管拡張性失調症マウスモデル（例としては、Ｂａｒｌｏｗら、１９９９、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６（１７）：９９１５−９、およびＩｎｏｕｅら、１９８６、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４６（８）：３９７９−８２）が挙げられる。
【０３２０】
リソソーム蓄積症
リソソーム蓄積症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ムコ多糖症ＶＩＩ型マウスモデル（例としては、Ｂｒｏｏｋｓら、２００２、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ９９（９）：６２１６−２１；Ｍｏｎｒｏｙら、２００２、Ｂｏｎｅ  ３０（２）：３５２−９；Ｖｏｇｌｅｒら、２００１、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｄｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．４（５）：４２１−３３；Ｖｏｇｌｅｒら、２００１、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ．４９（３）：３４２−８；およびＷｏｌｆｅら、２０００、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２（６）：５５２−６参照）、異染性白質萎縮症マウスモデル（例としては、Ｍａｔｚｎｅｒら、２００２、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９（１）：５３−６３参照）、サンドホフ病マウスモデル、（例としては、Ｓａｎｇｏら、２００２、Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２８（１）：２３−３４｝、ムコ多糖症IIIＡ型マウスモデル（例としては、Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａら、２００１、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １１（１）：９９−１０、およびＢｈａｕｍｉｋら、１９９９、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ９（１２）：１３８９−９６参照）、アリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）−欠乏マウス（例としては、ＤＨｏｏｇｅら、１９９９、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ。’８４７（２）：３５２−６、およびＤＨｏｏｇｅら、１９９９、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ。’２７３（２）：９３−６参照｝；アスパルチルグルコサミン尿症変異マウス（例としては、Ｊａｌａｎｋｏら、１９９８、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．７（２）：２６５−７２参照）；ムコ多糖症VI型ネコモデル（例としては、Ｃｒａｗｌｅｙら、１９９８、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１０１（１）：１０９−１９、およびＮｏｒｒｄｉｎら、１９９５、Ｂｏｎｅ  １７（５）：４８５−９参照）；ニーマン・ピック病Ｃ型ネコモデル（例としては、Ｍａｒｃｈら、１９９７、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（Ｂｅｒｌ）．９４（２）：１６４−７２参照）；酸性スフィンゴミエリナーゼ−欠損マウス（例としては、Ｏｔｔｅｒｂａｃｈ、Ｓｔｏｆｆｅｌ共著、１９９５、Ｃｅｌｌ  ８１（７）：１０５３−６参照）、およびウシマンノシドーシス（例としては、Ｊｏｌｌｙら、１９７５、Ｂｉｒｔｈ  Ｄｅｆｅｃｔｓ  Ｏｒｉｇ  Ａｒｃｔｉｃ  Ｓｅｒ．  １１（６）：２７３−８参照）が挙げられる。  １１（６）：２７３−８）．
結節硬化症
結節硬化症の動物モデルの例としては、これらに限定されないが、ＴＳＣ１マウスモデル（例としては、Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉら、２００２、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ。１１（５）：５２５−３４参照｝、Ｔｓｃ１（ＴＳＣ１ホモログ）ノックアウトマウス（例としては、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、２００１、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００１年７月１７日；９８（１５）：８７６２−７参照）、ＴＳＣ２遺伝子変異（Ｅｋｅｒ）ラットモデル（例としては、Ｈｉｎｏ２０００、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  ５８（６）：１２５５−６１；Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉら、２０００、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ。５９（３）：１８８−９；およびＨｉｎｏら、１９９９、Ｐｒｏｇ  Ｅｘｐ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｓ。３５：９５−１０８｝；およびＴｓｃ２（＋／−）マウス（例としては、Ｏｎｄａら、１９９９、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ。１０４（６）：６８７−９５参照｝が挙げられる。
【０３２１】
実施例５：ｍｄｘマウス、動物モデル研究
ｍｄｘマウスにおける４２７ｋＤａのジストロフィンポリペプチドの未熟な翻訳終結を起こす変異は、エクソン２３の３１８５の位置でのＣからＴまでの翻訳として示されてきた（Ｓｉｃｉｎｓｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４（４９１２）：１５７８−１５８０（１９８９））。生後１日のｍｄｘマウス由来のマウス骨格筋初代培養を前述のように調整する（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））。細胞を本発明の化合物の存在下で１０日間培養する。４日ごとに培地を取り替え、筋芽細胞培養液内ジストロフィンの存在を前述の免疫染色によって検知する（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９）、参照することにより、その全体がここに組み込まれる）。ジストロフィンタンパク質のＣ−末端に対するモノクローナル一次抗体を不希釈で使用し、ローダミン抱合の抗マウスＩｇＧを二次抗体として使用する。この抗体が、ナンセンスコドンの抑制によって産生された全長のタンパク質を検知する。ライカＤＭＲ顕微鏡、デジタルカメラ、および関連画像ソフトを使用して染色を観察する。
【０３２２】
前述のように（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））、化合物は麻酔マウスの皮下に移植したアルゼット浸透圧ポンプによって供給される。本発明の化合物を２回投与する。ゲンタマイシンが正の制御として働き、溶剤を満たしたポンプは、負の制御としてのみ働く。ポンプを適当な化合物で満たし、組織が暴露される算出した投与量が１０ｍＭおよび２０ｍＭとなるようにする。約２００ｍＭの組織暴露が得られるよう、ゲンタマイシンの濃度を計算する。初期実験にてマウスを１４日間治療し、その後マウスにケタミン麻酔をかけ、放血させる。次に実験動物の前脛骨（ＴＡ）筋を摘出し、凍結し、横紋筋へのジストロフィンの取り込みの免疫蛍光分析に使用する。前述のように、ＴＡ筋内のジストロフィンの存在を免疫染色によって検知する（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））。
【０３２３】
ウエスタンブロット分析
本発明の化合物で４週間処置したｍｄｘマウスの大腿四頭筋を市販のジストロフィン抗体を用いてウエスタンブロット法で分析する。野生型マウスの大腿四頭筋から抽出したタンパク質が、正の対照の役割を果たす。処置動物において、全長のジストロフィンの産生が見られる。ナンセンス抑制の結果産生された全長のジストロフィンの量は、この理論には限定されないが、野生型の発現レベルの約１０％である。
【０３２４】
免疫蛍光分析
ｍｄｘ雄マウス（生後９〜１１週間）を、本発明の別の化合物で処置する（少なくとも各化合物について、ｎ＝２）。これらの化合物のＳＱを１日１回、２週間にわたり、２５ｍｇ／ｋｇで投与する。２週間の処置後、マウスから筋肉を摘出し、ジストロフィンのリードスルー効率を判断する。１０μｍの低温切開片に対し、ジストロフィン抗体を用いて免疫蛍光分析（ＩＦ）を実施する。抗体が、ｍｄｘマウスに見られる未熟停止変異へのエピトープＣ−末端を認識する。全ての部位について同一の方法で画像分析を行う。処置済みおよび未処置のマウスの画像を分析し、未処置の対照におけるシグナルよりも大きなシグナルは陽性とし、ジストロフィンｍＲＮＡにおける未熟期終結コドンの抑制を示す。
【０３２５】
筋力学
動物のＥＤＬ筋において、摘出された全筋の筋力学を実施する。最適筋長（Ｌｏ）を最大単収縮張力を産み出す長さとする。Ｌｏでの強直性の最大力を、１２０Ｈｚ、５００ミリ秒パルス、最大上電圧で  測定する。５回の伸張性の強直性痙攣による機械的損傷に対する防御をモニターする。これらの測定は７００ミリ秒の刺激時間で実施され、その間、最初の５００ミリ秒間は筋肉は等尺性収縮に抑えられ、その後０．５Ｌｏ／秒の率で８または１０％Ｌｏの伸張が続く。機械的損傷に対する防御を８０Ｈｚの刺激頻度で判定する。損傷がある場合は、最初と最後の伸張性収縮間に力が低下したと判断する。  
実施例６：Ｐ５３遺伝子におけるナンセンス変異の抑制  
動物モデル系について、ＣＡＯＶ−３細胞（１ｘ１０７）をｎｕｄｅ／ｎｕｄｅマウスの脇腹に投与する。１２日後、マウスを任意抽出し（グループごとにマウス１０匹）、本発明の化合物を３ｍｇ／ｋｇ皮下に投与（週５日）、あるいは本発明の化合物を３０ｍｇ／ｋｇ腹腔内に投与（週１日）投与する。毎週、腫瘍の容積を測定する。本発明の化合物によってｐ５３におけるナンセンス変異を抑制することで、ｉｎ  ｖｉｖｏでの癌増殖を阻害することができる。
【０３２６】
実施例７：本発明の化合物により、２８Ｓ  ｒＲＮＡの特定のヌクレオチドへのアクセスを修正することができる
以前の研究では、翻訳の忠実度を低下させるゲンタマイシンおよびその他のアミノグルコシド群は、１６Ｓ  ｒＲＮＡのＡ部位に結合することが明らかにされてきた．化学的なフットプリンティング、ＵＶ架橋、およびＮＭＲによって、ゲンタマイシンはｒＲＮＡのＡ部位（ヌクレオチド１４００−１４１０、および１４９０−１５００、大腸菌番号付け）の、ヌクレオチド１４０６、１４０７、１４９４、および１４９６に結合することが示されてきた（（Ｍｏａｚｅｄ、Ｎｏｌｌｅｒ共著、Ｎａｔｕｒｅ  ３２７（６１２１）：３８９−３９４（１９７８）；Ｗｏｏｄｃｏｃｋら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０（１０）：３０９９−３１０３  （１９９１）；および、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  １９：１−９（２０００））。
【０３２７】
ヒーラ細胞から調整されたリボソームを小分子とともに培養し（１００ｍＭの濃度で）、化学変性剤（硫酸ジメチル［ＤＭＳ］およびｋｅｔｈｏｘａｌ［ＫＥ］）で処理する。化学修飾に続いて、ｒＲＮＡをフェノール−クロロフォルム抽出、エタノール沈殿、３つのｒＲＮＡの別のに部位にハイブリダイズする末端標識されたオリゴヌクレオチドを用いてプライマー伸長反応分析を行い、６％ポリアクリルアミドゲルに溶解させる。プライマー伸長は、１８Ｓ（７個のオリゴヌクレオチドプライマー）、２８Ｓ（２４個のオリゴヌクレオチドプライマー）、および５Ｓ（１個のプライマー）ｒＲＮＡの全体について試験する。これらの実験の対照には、ＤＭＳＯ（ＤＭＳＯに起因するｒＲＮＡ到達性の変化の対照）、パロモマイシン（１８Ｓ  ｒＲＮＡ結合のマーカー）、およびアニソマイシン（２８Ｓ  ｒＲＮＡ結合のマーカー）が含まれる。
【０３２８】
ここで引用する出版物および特許出願書類の全ては、個々の出版物あるいは特許出願書類が特異的かつ個別に、参照することによって組み込まれることが示唆される程度に、参照することによりここに組み込まれる。
【０３２９】
特定の実施例を詳細に上述したが、当業者は、その内容から逸脱しない限り、実施例への多くの変更が可能であると明確に理解されたい。それらの変更全ては本発明の請求項の範囲に含まれるよう意図しなければならない。
【図面の簡単な説明】
【０３３０】
【図１】図１は、ナンセンス変異を評価するために用いるルシフェラーゼベースアッセイの構成を概略的に説明している。
【図２】図２は、ルシフェラーゼタンパク質のＮ末端に一つ以上のエピトープタグを有するように操作されたルシフェラーゼ構成の概略図である。
【図３】図３は、リードスルーの効率を評価するために用いるルシフェラーゼベースアッセイの構成を概略的に説明している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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