(57)【要約】  本発明は、ポリペプチド、特に、抗体など、例えば抗Ａβ抗体などの治療用抗原結合性ポリペプチドの安定化を維持するための処方を提供する。該処方は、一般に、副生物形成、例えば、高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解断片およびそれらの組み合わせの形成を阻害するように、十分量の酸化防止剤を含んでいる。本発明の処方は、マンニトールなどの等張化剤、および緩衝剤またはヒスチジンなどのアミノ酸を所望により含んでおり、したがって該処方は、幾つかの異なる投与経路に適合している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
貯蔵の間に副生成物の形成を示す、治療活性な抗原結合性ポリペプチドと、
処方を貯蔵する間のポリペプチドの副生成物の形成を減少させるのに十分な量にて存在する、酸化防止剤とを含む、液体処方。
【請求項２】
治療活性な抗原結合性ポリペプチド成分が、抗体、抗体Ｆｖ断片、抗体Ｆａｂ断片、抗体Ｆａｂ’（２）断片、抗体Ｆｄ断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体断片（Ｄａｂ）、少なくとも１個の抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むβ−プリーツシートポリペプチド、および少なくとも１個の抗体相補性決定領域を含む非球状ポリペプチドからなる群より選択される、ところの請求項１記載の処方。
【請求項３】
治療活性な抗原結合性ポリペプチドが抗体である、ところの請求項１記載の処方。
【請求項４】
抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群より選択される亜型のものである、ところの請求項３記載の処方。
【請求項５】
副生成物が高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解生成物およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ところの請求項１記載の処方。
【請求項６】
高分子量凝集体が、抗体：抗体の複合体、抗体：抗体フラグメントの複合体、抗体フラグメント：抗体フラグメントの複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ところの請求項５記載の処方。
【請求項７】
低分子量ポリペプチド分解生成物が抗体軽鎖、抗体重鎖、抗体軽鎖と重鎖の複合体、抗体断片およびそれらの組み合わせから選択される、ところの請求項５記載の処方。
【請求項８】
酸化防止剤がメチオニンおよびその類縁体からなる群より選択される、ところの請求項１記載の処方。
【請求項９】
メチオニンが約０．１ｍＭないし約２５ｍＭの量にて存在する、ところの請求項８記載の処方。
【請求項１０】
メチオニンが約１０ｍＭの量にて存在する、ところの請求項８記載の処方。
【請求項１１】
処方が非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外に投与するのに適する、ところの請求項１記載の処方。
【請求項１２】
処方が血液−脳−関門の横断能を有する、ところの請求項１記載の処方。
【請求項１３】
処方がさらに等張化剤を含む、ところの請求項１記載の処方。
【請求項１４】
等張化剤がマンニトールである、ところの請求項１３記載の処方。
【請求項１５】
静脈内投与に適する、ところの請求項１３記載の処方。
【請求項１６】
さらにヒスチジンを含む、ところの請求項１記載の処方。
【請求項１７】
抗原結合性ポリペプチド、メチオニン、ヒスチジンおよびマンニトールを含む、液体処方。
【請求項１８】
静脈内投与に適しているところの、請求項１７記載の処方。
【請求項１９】
抗原結合性ポリペプチドが癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体からなる群より選択される抗原種の抗原に結合するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２０】
抗原結合性ポリペプチドが約０．１ｍｇ／ｍｌないし約２００ｍｇ／ｍｌにて存在するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２１】
抗原結合性ポリペプチドが約１７ｍｇ／ｍｌにて存在するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２２】
抗原結合性ポリペプチドが約２０ｍｇ／ｍｌにて存在するところの、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２３】
抗原結合性ポリペプチドが約３０ｍｇ／ｍｌにて存在するところの、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２４】
マンニトールが処方の等張性を維持するのに十分な量で存在するところの、請求項１４および１７ないし２３のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２５】
マンニトールが約２％ｗ／ｖないし約１０％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項１４および１７ないし２４のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２６】
マンニトールが約４％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項１４および１７ないし２４のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２７】
マンニトールが約６％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項１４および１７ないし２４のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２８】
マンニトールが約１０％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項１４および１７ないし２４のいずれか一項に記載の処方。
【請求項２９】
ヒスチジンが生理的に適当なｐＨを維持するのに十分な量にて存在するところの、請求項１６ないし２８のいずれか一項に記載の処方。
【請求項３０】
ヒスチジンが約０．１ｍＭないし約２５ｍＭにて存在するところの、請求項１６ないし２９のいずれか一項に記載の処方。
【請求項３１】
ヒスチジンが約１０ｍＭにて存在するところの、請求項１６ないし２９のいずれか一項に記載の処方。
【請求項３２】
さらに安定剤を含む、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項３３】
安定剤がポリソルベート８０を含むところの、請求項３２記載の処方。
【請求項３４】
ポリソルベート８０が約０．００１％ｗ／ｖないし約０．０１％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項３３記載の処方。
【請求項３５】
ポリソルベート８０が約０．００５％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項３３記載の処方。
【請求項３６】
ポリソルベート８０が約０．０１％ｗ／ｖにて存在するところの、請求項３３記載の処方。
【請求項３７】
約４ないし約９のｐＨを有するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項３８】
約６ないし約７のｐＨを有するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項３９】
凍結に対して安定的であるところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４０】
少なくとも約１２ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４１】
少なくとも約１８ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４２】
少なくとも約２４ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４３】
少なくとも約３０ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４４】
約−８０℃ないし約４０℃で安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４５】
約０℃ないし約２５℃で安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４６】
約２℃ないし約８℃で安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
【請求項４７】
患者への投与を介して該患者における疾患を治療するための、上記した請求項のいずれか一項に記載の有効量の処方を含む、医薬単位剤形
【請求項４８】
処方を含有する容器である、請求項４７記載の医薬単位剤形。
【請求項４９】
約１ｍｇないし約２０００ｍｇのＡβ結合性ポリペプチドを含有するバイアルである、請求項４７記載の容器。
【請求項５０】
約５０ｍｇないし約１５００ｍｇのＡβ結合性ポリペプチドを含有するバイアルである、請求項４７記載の容器。
【請求項５１】
約５ｍｇないし約５０ｍｇのＡβ結合性ポリペプチドを含有するバイアルである、請求項４７記載の容器。
【請求項５２】
バイアルが約２ないし約１００ｍｌの容量を有するところの、請求項４７記載の医薬単位剤形。
【請求項５３】
バイアルが約２ないし約１０ｍｌの容量を有するところの、請求項４７記載の医薬単位剤形。
【請求項５４】
患者への静脈内注射に適する、請求項４７ないし５３のいずれか一項に記載の医薬単位剤形。
【請求項５５】
ａ）請求項４７ないし５４のいずれか一項に記載の医薬単位剤形；および
ｂ）使用説明書
を含む、キット。
【請求項５６】
使用のためのラベルが付されている容器である、請求項４７に記載の医薬単位剤形を含む容器。
【請求項５７】
予防的使用のためにラベルが付されている、請求項５６記載の容器。
【請求項５８】
治療的使用のためにラベルが付されている、請求項５６記載の容器。
【請求項５９】
貯蔵の間に液体処方中にて副生成物の形成を示す抗原結合性ポリペプチドの、液体医薬処方中でのその安定性を向上させる方法であって、酸化防止剤を該ポリペプチドの副生成物を形成する量を減少させるのに十分な量にて該処方に配合することを含む、方法。
【請求項６０】
抗原結合性ポリペプチド成分が、抗体、抗体Ｆｖ断片、抗体Ｆａｂ断片、抗体Ｆａｂ’（２）断片、抗体Ｆｄ断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体断片（Ｄａｂ）、少なくとも１個の抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むβ−プリーツシートポリペプチド、および少なくとも１個の抗体相補性決定領域を含む非球状ポリペプチドからなる群より選択される、ところの請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
副生成物が高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解生成物およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ところの請求項５９記載の方法。
【請求項６２】
酸化防止剤がメチオニンおよびその類縁体からなる群より選択される、ところの請求項５９記載の方法。
【請求項６３】
処方の賦形剤を合して含む、請求項１ないし４６のいずれか一項に記載の処方の製法。
【請求項６４】
抗原結合性ポリペプチドと１種または複数の希釈剤とを合し、ここで該１種または複数の希釈剤が処方の賦形剤を含む、請求項１ないし４６のいずれか一項に記載の処方の製法。
【請求項６５】
請求項１ないし４６のいずれか一項に記載の処方を適当な容器中にて合して含む、医薬単位剤形の製法。
【請求項６６】
抗原結合性ポリペプチドと、少なくとも一部の賦形剤とを含む溶液を、残りの賦形剤を含む希釈剤と合して含む、請求項１ないし４６のいずれか一項に記載の処方の製法。
【請求項６７】
凍結する前の温度から約１０℃で少なくとも約１２ヶ月間安定しており、約５．５ないし約６．５のｐＨを有する処方であって、
ｉ．約１ｍｇ／ｍｌないし約３０ｍｇ／ｍｌの濃度の最低限の抗原結合性ポリペプチドと、
ｉｉ．約４％ｗ／ｖの濃度のマンニトールまたは約１５０ｍＭの濃度のＮａＣｌと、
ｉｉｉ．約５ｍＭないし約１０ｍＭのヒスチジンまたはスクシナートと、および
ｉｖ．１０ｍＭのメチオニンと
を含む、処方。
【請求項６８】
約２℃ないし８℃の温度で少なくとも約２４ヶ月間安定しており、約０．００１％ｗ／ｖないし約０．０１％ｗ／ｖの濃度のポリソルベート８０を含む、請求項６７記載の処方。
【請求項６９】
約６．０ないし約６．５のｐＨを有し、約１０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約４％ｗ／ｖのマンニトールおよび約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、請求項６７記載の処方。
【請求項７０】
約６．０ないし約６．２のｐＨを有し、約２０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのヒスチジン、約４％ｗ／ｖのマンニトールおよび約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、請求項６７記載の処方。
【請求項７１】
約６．０ないし約６．２のｐＨを有し、約３０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのヒスチジン、約４％ｗ／ｖのマンニトールおよび約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、請求項６７記載の処方。
【請求項７２】
さらに約４％ｗ／ｖのマンニトールを含む、請求項７１記載の処方。
【請求項７３】
さらに約０．００１％ｗ／ｖないし約０．０１％ｗ／ｖの濃度のポリソルベート８０を含む、請求項７１記載の処方。
【請求項７４】
約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、請求項７３記載の処方。
【請求項７５】
抗原結合性ポリペプチドが約１７ｍｇ／ｍｌないし約２３ｍｇ／ｍｌの濃度にて存在するところの、請求項７１記載の処方。
【請求項７６】
約２℃ないし約８℃の温度で少なくとも約２４ヶ月間安定しており、約５．５ないし約６．５のｐＨを有する処方であって、約２ｍｇ／ｍｌないし約２３ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチドと、約１０ｍＭのスクシナートと、約１０ｍＭのメチオニンと、約４％ｗ／ｖのマンニトールと、約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０とを含む、処方。
【請求項７７】
約−５０℃ないし約−８０℃で融解させた場合に安定しており、約４０ないし約６０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチドと、約１．０ｍｇ／ｍｌないし約２．０ｍｇ／ｍｌのヒスチジンと、約１．０ｍｇ／ｍｌないし２．０ｍｇ／ｍｌのメチオニンと、約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０とを含み、約６．０のｐＨを有する、処方。
【請求項７８】
マンニトールが除外されているところの、請求項７７記載の処方。
【請求項７９】
約２０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトールを含み、約６のｐＨを有する、処方。
【請求項８０】
約３０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのスクシナート、約１０ｍＭのメチオニン、約６％のマンニトールを含み、約６．２のｐＨを有する、処方。
【請求項８１】
約２０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、約６のｐＨを有する、処方。
【請求項８２】
約１０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約１０ｍＭのスクシナート、約１０ｍＭのメチオニン、約１０％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、約６．５のｐＨを有する、処方。
【請求項８３】
約５ｍｇ／ｍｌないし約２０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約５ｍＭないし約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、約６．０ないし約６．５のｐＨを有する、処方。
【請求項８４】
約５ｍｇ／ｍｌないし約２０ｍｇ／ｍｌの抗原結合性ポリペプチド、約５ｍＭないし約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、約６．０ないし約６．５のｐＨを有する、処方。
【請求項８５】
ａ．約１０ｍｇないし約２５０ｍｇの抗原結合性ポリペプチド；
ｂ．約４％マンニトールまたは約１５０ｍＭのＮａＣｌ；
ｃ．約５ｍＭないし約１０ｍＭのヒスチジンまたはスクシナート；および
ｄ．約１０ｍＭのメチオニン
を含む処方からなる、医薬単位剤形。
【請求項８６】
約０．００１％ないし約０．１％のポリソルベート８０を含む、請求項８５記載の医薬単位剤形。
【請求項８７】
約４０ｍｇないし約６０ｍｇの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項８６記載の医薬単位剤形。
【請求項８８】
約６０ｍｇないし約８０ｍｇの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項８６記載の医薬単位剤形。
【請求項８９】
約８０ｍｇないし約１２０ｍｇの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項８６記載の医薬単位剤形。
【請求項９０】
約１２０ｍｇないし約１６０ｍｇの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項８６記載の医薬単位剤形。
【請求項９１】
約１６０ｍｇないし約２４０ｍｇの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項８６記載の医薬単位剤形。
【請求項９２】
ａ．
ｉ．約１０ｍｇないし約２５０ｍｇの抗原結合性ポリペプチド、
ｉｉ．約４％マンニトールまたは約１５０ｍＭのＮａＣｌ、
ｉｉｉ．約５ｍＭないし約１０ｍＭのヒスチジン、および
ｉｖ．約１０ｍＭのメチオニン
を含むガラスバイアルと、
ｂ．約０．１５ｍｇ／ｋｇないし約５ｍｇ／ｋｇの用量を得るのに必要な適当容量を用いるための説明書を含む、使用のためのラベルと
を含む、治療製品。
【請求項９３】
用量が約０．５ｍｇ／ｋｇないし約３ｍｇ／ｋｇであるところの、請求項９２記載の治療製品。
【請求項９４】
用量が約１ｍｇ／ｋｇないし約２ｍｇ／ｋｇであるところの、請求項９２記載の治療製品。
【請求項９５】
抗原結合性ポリペプチドの濃度が約１０ｍｇ／ｍｌないし約６０ｍｇ／ｍｌであるところの、請求項９２記載の治療製品。
【請求項９６】
抗原結合性ポリペプチドの濃度が約２０ｍｇ／ｍｌであるところの、請求項９２記載の治療製品。
【請求項９７】
さらに約０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む、請求項９２記載の治療製品。
【請求項９８】
皮下投与にて用いるところの、請求項９２記載の治療製品。
【請求項９９】
静脈内投与にて用いるところの、請求項９２記載の治療製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、「ポリペプチドの安定化液体処方」という名称の出願番号第６０／６４８６３９号（２００５年１月２８日出願）を有する米国仮特許出願の利益を請求する。前掲の出願の全内容を出典明示により本明細書の一部とする。
本願全体を通して引用されるその他の全ての特許、特許出願、および参考文献は、その全体を出典明示により本明細書の一部とする。
【背景技術】
【０００２】
任意のポリペプチドの薬理学的利益を最大限とするためには、安定であり、容易で再現性良く製造され、標準的な投与経路に合わせて設計されている最終剤形を有することが必須である。具体的には、後に所望の投与経路を介して投与できるポリペプチド最終剤形へと、製造を進めるのに適した、安定な濃縮形態のバルクタンパク質、例えば治療用ポリペプチドを有することが望ましい。
【０００３】
バルクポリペプチド、最終剤形の双方で、ポリペプチド安定性は、イオン強度、ｐＨ、温度、凍結／融解の反復サイクル、せん断力などの因子から影響を受けることができる。ほんの数例を挙げると、変性および凝集（可溶性および不溶性凝集体の形成）を含めた物理的不安定性、ならびに例えば加水分解、脱アミノ化および酸化を含めた化学的不安定性の結果、活性なポリペプチドが失われる恐れがある。タンパク質医薬の安定性に関する総説については、例えばＭａｎｎｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６：９０３−９１８（１９８９）を参照されたい。その上、処方中に担体ポリペプチドが含まれていない場合は、安定性を維持することが望ましい。
【０００４】
こうしたポリペプチドの考え得る不安定性が起こり得ることは広く認識されているが、あるポリペプチドの調査を終了するまでは、特定のタンパク質に存在し得る特定の不安定性問題を予測することは、不可能である。こうしたポリペプチドのいずれも、活性の低下、毒性の増加および／または免疫原性の増加を示すポリペプチド副生物または誘導体の形成を起こす可能性を有する。実際、ポリペプチドの析出は、血栓症、剤形の不均一および免疫反応を起こす恐れがある。したがって、ポリペプチドの任意の医薬処方の安全性および効力は、それの安定性と直接関係している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、濃縮工程中のタンパク質安定性を改善すること、ならびに他の担体タンパク質の非存在下、多様な投与経路にとって十分高い濃度で安定性を賦与することを目的とした方法に対する必要性が、当分野に依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、安定性を賦与し、組み入れた生物活性タンパク質、特に抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体またはその断片の生物活性を維持するように設計した処方を提供する。本発明は、更にポリペプチド処方、即ち、不要なポリペプチド副生物の形成に耐性を示す、ポリペプチドの安定化液体処方も提供する。
【０００７】
治療用の抗原結合性ポリペプチドの完全性は、そのポリペプチドが保存中に副生物、例えば凝集体または分解断片を形成すれば、生物活性が失われ、その結果、単位用量当たりのその分子の治療活性が脅かされる恐れがあるので、特に重要である。その上、ある種の生体兆候におけるデリバリーおよび使用、例えば、ポリペプチドが血液脳関門（ＢＢＢ）を通過し、標的抗原に結合しなければならない神経変性状態の治療を目的とする、特化した機能を意図した治療用ポリペプチドを安定化したいという切迫した願望もある。
【０００８】
このような使用のために安定化しなければならない例示的抗体には、疾患標的、特に抗原性疾患標的、例えば癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体との結合に適した抗体が挙げられる。
【０００９】
したがって、本発明は、それだけに限らないが、以下の項目：
酸化防止剤の添加により、ポリペプチド副生物の形成に対して安定化されている、ポリペプチドの安定化液体処方、
多様な投与経路における使用に適切である、ポリペプチドの安定化液体処方、
ポリペプチドの安定化液体処方として医薬に使用するための、治療用ポリペプチドの調製法、および
神経変性疾患の治療における使用に適した、Ａβ結合性ポリペプチドの安定化処方
を包含する幾つかの利点を有する。
【００１０】
したがって一態様では、本発明は、安定性を賦与し、組み入れたポリペプチドの生物活性を維持するように設計した、ポリペプチドの安定化液体処方を提供する。更に別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチドおよび酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類縁体を含有する処方であって、該酸化防止剤が、処方の保存中にポリペプチド副生物の形成を低下させるのに十分な量で存在する処方を提供する。
【００１１】
一実施形態では、該処方の治療活性な抗原結合性ポリペプチド成分は、抗体（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、（例えば、ヒトのＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４イソタイプ抗体）、抗体Ｆｖ断片、抗体Ｆａｂ断片、抗体Ｆａｂ’（２）断片、抗体Ｆｄ断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体断片（Ｄａｂ）、少なくとも１個の抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むβプリーツシートポリペプチド、または少なくとも１個の抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む非球状ポリペプチドである。
【００１２】
特定の実施形態では、該ポリペプチド液体処方は、高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解生成物、またはそれらの組み合わせなどの不要な副生物の形成に対して安定化されている。
【００１３】
治療用の該抗原結合性ポリペプチドが抗体である、関連の実施形態では、通常の高分子量凝集体は、例えば抗体−抗体複合体、抗体−抗体断片複合体、抗体断片−抗体断片複合体、またはそれらの組み合わせである。一般に、高分子量の複合体または副生物は、該抗原結合性ポリペプチドの単量体より大きい、例えばＩｇＧ抗体の場合、約１５０ｋＤより大きい分子量を有する。
【００１４】
該治療用ポリペプチドが抗体である、別の関連実施形態では、通常の低分子量ポリペプチド分解生成物は、例えば、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗体軽鎖・重鎖複合体、またはそれらの組み合わせからなる複合体である。一般に、低分子量の複合体または副生物は、該抗原結合性ポリペプチドの単量体より小さい、例えばＩｇＧ抗体の場合、約１５０ｋＤより小さい分子量を有する。
【００１５】
一態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）と、不要な副生物の形成を抑制するのに十分な量の酸化防止剤として存在するメチオニンと、処方を投与、例えば静脈内注射に適合させるのに十分な量で存在する等張化剤（例えば、マンニトール）と、生理的に適正なｐＨを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸（例えば、ヒスチジン）またはその誘導体との安定化処方を提供する。
【００１６】
一態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）と、不要な副生物の形成を抑制するのに十分な量の酸化防止剤として存在するメチオニンと、処方を静脈内注射に適合させるのに十分な量で存在する等張化剤（例えば、マンニトール）と、生理的に適正なｐＨを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸（例えば、ヒスチジン）またはその誘導体との安定化処方を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）と、マンニトールと、ヒスチジンとを含む処方を提供する。別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）と、メチオニンと、マンニトールと、ヒスチジンとを含む安定化処方を提供する。
【００１８】
ある種の実施形態では、治療活性な該抗原結合性ポリペプチドは、例えば癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体を含む抗原クラスから選択される抗原に結合する、抗体（またはその部分もしくは断片）である。
【００１９】
ある種の実施形態では、治療活性な該抗原結合性ポリペプチドは、Ａβ結合性ポリペプチド、例えば抗Ａβ抗体（またはその部分もしくは断片）である。幾つかの処方では、少なくとも１種のＡβ結合性ポリペプチドは、例えば、Ａβの残基１〜７番、１〜５番、３〜７番、３〜６番、１３〜２８番、１５〜２４番、１６〜２４番、１６〜２１番、１９〜２２番、３３〜４０番、３３〜４２番内、またはそのＦａｂ、Ｆａｂ’（２）もしくはＦｖ断片内のエピトープに特異的に結合する抗Ａβ抗体である。例示的な抗Ａβ抗体は、例えばＡβの残基１〜７番、１〜５番、３〜７番または３〜６番内などの、Ａβの残基１〜１０番内のエピトープに特異的に結合する。他の例示的な抗Ａβ抗体は、例えばＡβの残基１６〜２１番または１９〜２２番内などの、Ａβの残基１３〜２８番内のエピトープに特異的に結合する。更に他の例示的な抗Ａβ抗体は、例えばＡβの３３〜４０番または３３〜４２番などの、ＡβのＣ末端エピトープに特異的に結合する。一実施形態では、該Ａβ抗体は、ヒト化抗体、例えばヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化１５Ｃ１１抗体、またはヒト化１２Ａ１１抗体である。
【００２０】
治療活性な該抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約２０ｍｇ／ｍｌまたは３０ｍｇ／ｍｌ）存在してもよい。該抗体のイソタイプは、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、または他の任意の医薬として許容可能なイソタイプのいずれでもよい。好ましい処方では、該イソタイプは、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４である。幾つかの液体処方では、該抗Ａβ抗体の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌである。
【００２１】
ある種の実施形態では、マンニトールは、処方の等張性を維持するのに十分な量で存在する。マンニトールは、約２％ｗ／ｖ〜約６％ｗ／ｖ（例えば、約４％ｗ／ｖ）で存在することができる。前記各態様の多様な実施形態では、ヒスチジンは、生理的に適正なｐＨを維持するのに十分な量で存在し得る。ヒスチジン（例えば、Ｌ−ヒスチジン）は、約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ（例えば、約１０ｍＭ）で存在してもよい。
【００２２】
他の実施形態では、該処方は、メチオニンなどの酸化防止剤を更に含んでもよい。メチオニンは、約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ（例えば、約１０ｍＭ）で存在してもよい。別の実施形態では、該処方は、ポリソルベート８０などの安定剤を含んでもよい。ポリソルベート８０は、約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．０１％ｗ／ｖ（例えば、約０．００５％ｗ／ｖ）で存在し得る。ある種の実施形態では、該処方は、約５〜約７（例えば、約６）のｐＨを有する。
【００２３】
ある種の実施形態では、該処方は、凍結に対して安定とし得る。その上、該処方は、非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外の投与に適切とし得る。多様な実施形態では、該処方は、対象の脳または脊髄液への標的デリバリーに適切とし得る。他の実施形態では、該処方は、防腐剤を実質的に含まなくもよい。該処方は、最低約１２ヶ月、最低約１８ヶ月、最低約２４ヶ月、または最低約３０ヶ月の間安定とし得る。多様な実施形態では、該処方は、約−８０℃〜約４０℃、約０℃〜約２５℃、または約２℃〜約８℃で安定である。幾つかの処方は、最低約１２ヶ月、最低約１８ヶ月、最低約２４ヶ月、または最低約３０ヶ月の間安定である。幾つかの処方は、約−８０℃〜約４０℃、約０℃〜約２５℃、約０℃〜約１０℃、好ましくは約−８０℃〜約−５０℃、または約２℃〜約８℃で安定である。幾つかの処方は、凍結する前の温度から約１０℃で最低約１２ヶ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有する。
【００２４】
特定の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％を含み、約６のｐＨを有する、静脈内投与に適切な処方を提供する。別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％、ポリソルベート８０約０．０１％を含み、約６のｐＨを有する、静脈内投与に適切な処方を提供する。別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％、ポリソルベート８０約０．００５％を含み、約６のｐＨを有する、静脈内投与に適切な処方を提供する。
【００２５】
幾つかの処方は、凍結する前の温度から約１０℃で最低約１２ヶ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有する。このような処方は、濃度約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１種の治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）、濃度約４％ｗ／ｖのマンニトールまたは濃度約１５０ｍＭのＮａＣｌ、濃度約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンまたはコハク酸、およびメチオニン約１０ｍＭを含む。このような一処方は、約６．０のｐＨ、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約１ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン約１０ｍＭ、およびマンニトール約４％ｗ／ｖを有する。他の処方は、約２℃〜約８℃の温度で最低約２４ヶ月間安定であり、濃度約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．０１％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含む。このような処方の幾つかは、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、ヒスチジン約１０ｍＭ、マンニトール約４％ｗ／ｖ、および治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌまたは約５ｍｇ／ｍｌを含む。このような他の処方は、好ましくは約６．０〜約６．２のｐＨで、ヒスチジン約１０ｍＭ、マンニトール約４％ｗ／ｖ、ポリソルベート８０約０．００５％、および治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌまたは約３０ｍｇ／ｍｌを含む。
【００２６】
好ましい処方は、約２℃〜約８℃の温度で最低約２４ヶ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有し、ヒト化３Ｄ６抗体約２ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン約１０ｍＭ、およびメチオニン約１０ｍＭを含む。好ましくは、該処方はマンニトール約４％ｗ／ｖを更に含む。好ましくは、該処方は、濃度約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．０１％ｗ／ｖのポリソルベート８０、より好ましくはポリソルベート８０約０．００５％ｗ／ｖを含む。このような処方では、該ヒト化３Ｄ６抗体は、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在することができる。
【００２７】
別の処方は、約２℃〜約８℃の温度で最低約２４ヶ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有し、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、コハク酸約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％ｗ／ｖ、およびポリソルベート８０約０．００５％ｗ／ｖを含む。このような処方の幾つかでは、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）は、約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００２８】
本発明は、約−５０℃〜約−８０℃で融解した際に安定であり、約６．０のｐＨを有し、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約４０〜約６０ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、メチオニン約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、およびポリソルベート８０約０．００５ｍｇ／ｍｌを含む処方も提供する。好ましくは、マンニトールが除外される。
【００２９】
本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）、マンニトールおよびヒスチジンを含む液体処方も提供する。このような処方の幾つかでは、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌで存在している。好ましくは、マンニトールは、処方の等張性を維持するのに十分な量で存在する。好ましくは、ヒスチジンは、生理的に適正なｐＨを維持するのに十分な量で存在する。このような一処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％を含み、約６のｐＨを有する。このような別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約３０ｍｇ／ｍｌ、コハク酸約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約６％を含み、約６．２のｐＨを有する。このような更に別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％、ポリソルベート８０約０．００５％を含み、約６のｐＨを有する。このような別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約１０ｍｇ／ｍｌ、コハク酸約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約１０％、ポリソルベート８０約０．００５％を含み、約６．５のｐＨを有する。
【００３０】
このような更に別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％、ポリソルベート８０約０．００５％を含み、約６．０〜約６．５のｐＨを有する。このような更に別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、ＮａＣｌ約１５０ｍＭ、ポリソルベート８０約０．００５％を含み、約６．０〜約６．５のｐＨを有する。
【００３１】
本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭ、マンニトール約４％を含み、約６のｐＨを有する、静脈内投与に適切な処方も提供する。好ましくは、このような処方はポリソルベート８０約０．００５％を含む。
【００３２】
本発明は、液体医薬処方中の抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体の安定性を高める方法であって、該ポリペプチドは、そうしないと液体処方中での保存時に副生物形成を示す恐れがある、前記方法を提供する。したがって、この方法は、酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類縁体を、副生物の形成量を低下させるのに十分な量で該処方中に組み入れることを含む。
【００３３】
本発明は、約−５０℃〜約−８０℃の温度で保存後、約２℃〜約８℃の温度で保存することになる、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）処方の安定性を維持する方法であって、（ｉ）治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約４０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、Ｌ−ヒスチジン約１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、メチオニン約１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌおよびポリソルベート８０約０．０５ｍｇ／ｍｌを混合し、（ｉｉ）ｐＨを約６．０に調節し、（ｉｉｉ）ろ過して低温容器中に入れ、更に凍結し、（ｉｖ）融解し、（ｖ）マンニトール約４％またはＮａＣｌ約１５０ｍＭ、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、メチオニン約１０ｍＭおよびポリソルベート８０約０．００５％の最終濃度とするのに十分な量のマンニトールまたはＮａＣｌおよび希釈剤を添加し、（ｖｉ）ろ過し、（ｖｉｉ）ガラスバイアルに移して密封し、（ｖｉｉｉ）約２℃〜約８℃の温度で保存することを含む方法も提供する。
【００３４】
本発明は、本明細書に記載の処方入り容器および使用説明書を含んだキットも提供する。
【００３５】
本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、マンニトール約４％またはＮａＣｌ約１５０ｍＭ、ヒスチジンまたはコハク酸約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、およびメチオニン約１０ｍＭの処方を含む医薬単位剤形も提供する。このような医薬単位剤形の幾つかは、ポリソルベート８０を約０．００１％〜約０．１％含む。このような医薬単位剤形の幾つかは、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）を約４０ｍｇ〜約６０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約８０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１６０ｍｇまたは約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇ含む。このような剤形の幾つかは、患者に投与する前に、約２℃〜約８℃の温度でガラスバイアル中に維持できる。
【００３６】
その上、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、マンニトール約４％またはＮａＣｌ約１５０ｍＭ、ヒスチジン約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、およびメチオニン約１０ｍＭを含む処方入りのガラスバイアルを含んだ治療製品も提供する。このような治療製品の幾つかは、患者において約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を実現するのに必要な適当な容量を使用するために、説明書きを含む使用法ラベルを更に含む。該バイアルは、通常１ｍＬ、２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２５ｍＬ、または５０ｍＬのバイアルである。このような治療製品の幾つかの用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇである。幾つかのこのような治療製品では、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）の濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約２０ｍｇ／ｍｌである。該治療製品は、好ましくはポリソルベート８０を約０．００５％含む。幾つかのこのような治療製品の処方は、皮下投与または静脈内投与のためである。
【００３７】
別の態様では、本発明は、液体医薬処方中の抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体の安定性を高める方法であって、該ポリペプチドは、そうしないと液体処方中での保存時に副生物形成を示す恐れがある、前記方法を提供する。したがって、この方法は、酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類縁体を、副生物の形成量を低下させるのに十分な量で該処方中に組み入れることを含む。
【００３８】
更に別の態様では、本発明は、本明細書に記載の処方入り容器および使用説明書を含んだキットを提供する。
【００３９】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細なる説明および特許請求の範囲から明らかとなろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
本明細書および特許請求の範囲を明確に理解するために、以下の定義を便宜のために下記に示す。
【００４１】
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合性ポリペチド」には、標的分子、例えば抗原、例えばＡβペプチド（複数も）、または前記Ａβペプチド内のエピトープ（複数も）に特異的に結合できるポリペチドが含まれる。抗原結合性ポリペチドは、通常、そのポリペチドに特異結合特性を賦与する１個または複数の可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様ドメイン（例えば、受容体）の少なくとも機能部を含んでいる。好ましい抗原結合性ポリペチドには、抗体、例えばＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４が挙げられる。
【００４２】
用語「抗体」には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体および一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）が含まれる。用語「一本鎖抗体」は、軽鎖および重鎖からなる２ポリペチド鎖構造であって、前記各鎖が例えば連鎖間ペプチドリンカーで安定化された構造を有し、抗原に対する特異的結合能を有するタンパク質を指す。用語「抗体断片」には、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片および単一ドメイン抗体断片が含まれる。
【００４３】
用語「ドメイン」とは、免疫グロブリンの折畳部を含んだ、軽鎖または重鎖ポリペチドの球状領域を指す。該免疫グロブリン折畳部は、βプリーツシート二次構造からなり、ジスルフィド結合を含む。本明細書では更に、ドメインを「定常」または「可変」とも称するが、この呼称は、「定常」ドメインの場合は多様なクラス員のドメイン内で配列変動が相対的に欠如していること、または「可変」ドメインの場合は多様なクラス員のドメイン内で相当な変動があることに基づく。抗体またはポリペプチド「ドメイン」は、当分野では抗体またはポリペプチド「領域」と互換的に称することも多い。抗体軽鎖の「定常」ドメインは、「軽鎖定常領域」、「軽鎖定常ドメイン」、「ＣＬ」領域または「ＣＬ」ドメインと互換的に称する。抗体重鎖の「定常」ドメインは、「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「ＣＨ」領域または「ＣＨ」ドメインと互換的に称する。抗体軽鎖の「可変」ドメインは、「軽鎖可変領域」、「軽鎖可変ドメイン」、「ＶＬ」領域または「ＶＬ」ドメインと互換的に称する。抗体重鎖の「可変」ドメインは、「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「ＶＨ」領域または「ＶＨ」ドメインと互換的に称する。
【００４４】
用語「領域」とは、抗体鎖または抗体鎖ドメインの一部または部分（例えば、本明細書で定義した場合、重鎖または軽鎖の一部または部分、あるいは定常または可変ドメインの一部または部分）、ならびに前記鎖またはドメインのもっと個々の一部または部分を指すこともできる。例えば、重鎖および軽鎖、または重鎖および軽鎖の可変ドメインは、本明細書で定義した場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」の間に分散した「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」を含んでいる。
【００４５】
用語「抗Ａβ抗体」は、Ａβペプチドのエピトープ（複数も）に結合できる抗体（およびその断片）を包含する。抗Ａβ抗体には、例えば米国特許公開第２００３０１６５４９６Ａ１号、米国特許公開第２００４００８７７７７Ａ１号、国際特許公開第ＷＯ０２／４６２３７Ａ３号および国際特許公開第ＷＯ０４／０８０４１９Ａ２号に記載の抗体が挙げられる。他の抗Ａβ抗体は、例えば、共に「Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  Ｂｅｔａ  Ａｍｙｌｏｉｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ」という名称の国際特許公開第ＷＯ０３／０７７８５８Ａ２号および国際特許公開第ＷＯ０４／１０８８９５Ａ２号、「Ａｎｔｉ−Ａβ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」という名称の国際特許公開第ＷＯ０３／０１６４６６Ａ２号、「Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  Ｓｅｑｕｅｓｔｅｒ  Ａｍｙｌｏｉｄ  Ｂｅｔａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ」という名称の国際特許公開第ＷＯ０１６２８０１Ａ２号、および「Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」という名称の国際特許公開第ＷＯ０２／０８８３０６Ａ２号に記載されている。
【００４６】
用語「断片」は、無傷または完全な抗体または抗体鎖より少ないアミノ酸残基を含む、抗体または抗体鎖の一部または部分を指す。断片は、無傷または完全な抗体または抗体鎖の化学的または酵素的処理を介して得ることができる。断片は、組換え手段によっても得ることができる。例示的断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２および／またはＦｖが含まれる。用語「抗原結合性断片」は、抗原に結合するか、または抗原結合（即ち、特異結合）に関して無傷抗体（即ち、それの由来源の無傷抗体）と競合する、免疫グロブリンまたは抗体のポリペプチド断片を指す。
【００４７】
用語「コンホメーション」は、タンパク質またはポリペプチド（例えば、抗体、抗体鎖、そのドメインまたは領域）の三次構造を指す。例えば、語句「軽鎖（または重鎖）コンホメーション」とは、軽鎖（または重鎖）可変領域の三次構造を指し、「抗体コンホメーション」または「抗体断片コンホメーション」とは、抗体またはその断片の三次構造を指す。
【００４８】
抗体の「特異結合」とは、該抗体が、特定の抗原またはエピトープに対して相当な親和性を示し、一般に交差反応性をさほど示さないことを言う。例示的な実施形態では、該抗体は交差反応性を示さない（例えば、非Ａβペプチド、または離れたエピトープ、例えばＡβ上の非隣接エピトープと交差反応をしない）。「相当な」または好ましい結合とは、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９Ｍ−１または１０１０Ｍ−１の親和性を有する結合を包含する。１０７Ｍ−１より大、好ましくは１０８Ｍ−１より大なる親和性が、より好ましい。ここに示した値の中間に入る値も、本発明の範囲に入ることを意図しており、好ましい結合親和性は、ある範囲の親和性、例えば１０６〜１０１０Ｍ−１、好ましくは１０７〜１０１０Ｍ−１、より好ましくは１０８〜１０１０Ｍ−１として示すことができる。「有意な交差反応性を示さない」抗体は、望ましくないもの（例えば、望ましくないタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド）とは相当程度に結合しないと見込まれる抗体である。例えば、Ａβに特異的に結合する抗体は、Ａβに相当程度に結合しようが、非Ａβタンパク質またはペプチド（例えば、プラーク中に含まれる非Ａβタンパク質またはペプチド）とは有意に反応しないであろう。特定のエピトープに特異的な抗体は、例えば、同じタンパク質またはペプチド上の離れたエピトープとはさほど交差反応をしないであろう。特異結合は、このような結合を定量する当分野認知の手段に従って定量することができる。好ましくは、特異結合は、スキャッチャード分析および／または結合タンパク競合アッセイに従って定量する。
【００４９】
結合性断片は、組換えＤＮＡ技法、または無傷な免疫グロブリンの酵素切断もしくは化学切断によって生成される。結合性断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖および一本鎖抗体が含まれる。「二重特異性」または「二官能性」の免疫グロブリンまたは抗体以外では、免疫グロブリンまたは抗体は、同一の結合部位の各々を有すると理解される。「二重特異性」または「二官能性抗体」は、２種の重鎖／軽鎖対および２種の結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含めた多様な方法によって生成できる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
【００５０】
「抗原」は、抗体が特異的に結合する抗原決定基を含んだ分子（例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたは糖質）である。
【００５１】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」とは、免疫グロブリンまたは抗体（もしくはその抗原結合性断片）が特異的に結合する、抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接アミノ酸群、またはタンパク質の三次折畳によって並置された非隣接アミノ酸群から形成できる。隣接アミノ酸群から形成されるエピトープは、変性溶媒に曝しても通常保持されているが、三次折畳によって形成されるエピトープは、変性溶媒で処理すると通常失われる。エピトープは、特異な空間的コンホメーション中にアミノ酸を通常少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個含む。エピトープの空間的コンホメーションを決定する方法には、例えばＸ線結晶解析、二次元核磁気共鳴などが挙げられる。例えばＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
【００５２】
「安定化処方」または「ポリペプチドの安定化液体処方」という用語には、その中のポリペプチドが、保存時に物理的・化学的同一性および完全性を本質的に保持している処方が含まれる。タンパク質安定性を測定する多種の分析法が、当分野で利用でき、本明細書に記載されている（総説としては、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３））。安定性は、選定した温度で選定した期間測定することができる。迅速な試験のためには、該処方をより高いまたは「加速された」温度、例えば４０℃に２週から１ヶ月以上の間保ち、その後安定性を測定してもよい。例示的な実施形態では、該処方は、成分ポリペプチドの副生物、例えば高分子量凝集体生成物、低分子量の分解もしくは断片化生成物、またはそれらの組み合わせの形成に対する耐性が高い。
【００５３】
用語「副生物」には、所与の処方中にある治療性ポリペプチドの割合を減少または低下させる不要な生成物が含まれる。通常の副生物には、治療性ポリペプチドの凝集体、治療性ポリペプチドの断片（例えば、脱アミド化または加水分解による該ポリペプチドの分解で生成する）、またはそれらの組み合わせが含まれる。
【００５４】
用語「高分子量ポリペプチド凝集体」には、治療性ポリペプチドの凝集体、後に凝集する、治療性ポリペプチドの断片（例えば、加水分解などによる該ポリペプチドの分解で生成する）またはそれらの組み合わせが含まれる。高分子量凝集体は、通常、治療性単量体ポリペプチドより大なる分子量を有する複合体である。抗体、例えばＩｇＧ抗体の場合、このような凝集体は約１５０ｋＤより大きい。しかし、他の治療性ポリペプチド、例えば、通常２５ｋＤの分子量を有する一本鎖抗体の場合、このような凝集体は約２５ｋＤより大なる分子量を有しよう。
【００５５】
用語「低分子量ポリペプチド分解生成物」には、例えば、脱アミド化または加水分解で生じる、例えば、治療性ポリペプチドの断片が含まれる。低分子量分解生成物は、通常、治療性単量体ポリペプチドより小なる分子量を有する複合体である。抗体、例えばＩｇＧ抗体の場合、このような分解生成物は約１５０ｋＤより小さい。しかし、他の治療性ポリペプチド、例えば、通常２５ｋＤの分子量を有する一本鎖抗体の場合、このような分解生成物は約２５ｋＤより小なる分子量を有しよう。
【００５６】
用語「投与経路」には、例えば、非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外などの、治療性ポリペプチドをデリバリーする当分野認知の投与経路が含まれる。神経変性疾患の治療のために、治療性ポリペプチドを投与するためには、静脈内、硬膜外または頭蓋内経路が所望経路となり得る。
【００５７】
用語「アミロイド形成性疾患」には、不溶性アミロイド原線維の形成または沈着を付随する（または、原因とする）任意の疾患が含まれる。例示的なアミロイド形成性疾患には、それだけに限らないが、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭骨痴呆、プリオン関連感染性海綿状脳症（それぞれ、人間におけるクールおよびクロイツフェルト・ヤコブ病、ならびにヒツジおよびウシにおけるスクレイピーおよびＢＳＥ）などが挙げられる。様々なアミロイド形成性疾患は、沈着原線維のポリペプチド成分の性質で規定されるか、またはその性質を特徴とする。例えば、アルツハイマー病の対象または患者では、β−アミロイドタンパク質（例えば、野生型、変異型または切断型のβ−アミロイドタンパク質）が、沈着アミロイドの特徴的ポリペプチド成分である。したがって、アルツハイマー病は、例えば、対象または患者の脳内にある「Ａβの沈着物を特徴とする疾患」または「Ａβの沈着物を付随する疾患」の一例である。
【００５８】
「β−アミロイドタンパク質」、「β−アミロイドペプチド」、「β−アミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド」の各用語は、本明細書では互換的に使用される。
【００５９】
本明細書で使用する場合の用語「治療」は、患者に対する治療剤の適用または投与、あるいは疾患、疾患症状または疾患素因を有する患者由来の分離組織または細胞系に対する治療剤の適用または投与と定義され、その目的は、その疾患、疾患症状または疾患素因を治癒し、治し、軽減し、遅らせ、緩和し、改変し、改善し、改良し、好転させまたはそれに影響を及ぼすことである。
【００６０】
用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果を実現する、または少なくとも部分的に実現するのに十分な量と定義される。用語「治療有効用量」は、既に疾患に罹っている患者において、疾患およびその合併症を治癒する、または少なくとも部分的にその進行を阻止するのに十分な量と定義される。この使用に有効な量は、感染症の重度および患者自身の免疫系の全般状態に左右されよう。
【００６１】
用語「患者」には、予防的治療、治癒的治療のいずれかを受ける人間および他の哺乳動物の対象が含まれる。
【００６２】
用語「投与単位形態」（または「単位剤形」）とは、本明細書で使用する場合、治療を受ける患者にとって単一投与量として適当な物理的に個別の単位であって、各単位が、必要な医薬用の担体、希釈剤または賦形剤と共同して所望の治療効果を生むと計算された、所定量の活性化合物を含む単位を指す。本発明の投与単位形態の規格は、該活性化合物の特異な特性および実現をめざす特定の治療効果、ならびに患者の治療のためにこのような活性化合物を調合することの当分野公知のパラメーターに影響され、直接左右される。
【００６３】
本発明の処方における該活性成分（例えば、Ａβポリペプチド）の実投与量は、特定の患者、組成および投与方式に対して、患者に毒性を示さずに所望の治療反応を実現するのに有効な活性成分量を得るように変更してもよい。選定される該投与量は、使用する本発明の特定組成物の活性、投与経路、投与時間、使用する特定化合物の排泄速度、治療期間、使用する特定組成物と併用する他の薬物、化合物および／または物質、治療する患者の年齢、性別、体重、体調、全般的健康状態および過去の病歴、ならびに医療分野で周知の類似要因を含めた多様な薬物動態要因に左右されよう。
【００６４】
用語「希釈剤」とは、本明細書で使用する場合、本明細書に記載するような例示的または適当な１つまたは複数の濃度の変更または実現に適切な溶液を指す。
【００６５】
概説
本発明は、抗原結合性ポリペプチド、特に抗体ならびにその部分および／または断片のための処方を提供する。ある種の態様では、本発明は、治療用途に向けたポリペプチドの安定化液体処方を提供する。特に、本発明は、疾患および／または障害の治療に使用するために、抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体およびその抗原結合性断片の安定化を提供する。特に、本発明は、活性な該治療用ポリペプチドが、長期間安定であり、多様な投与経路を介して投与できるように、安定化されている処方を提供する。このことは、ある種の疾患および／または障害、例えば神経性の疾患または障害の治療に使用する予定の抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体）にとって、特に肝要である。他の態様では、本発明は、例えば、凍結、凍結乾燥、熱および／または復元などの様々なストレスに安定である、特異に安定な抗体処方を提供する。更に、本発明の例示的処方は、長期間に亘り、不利な温度でも（例えば、該処方を保存する１年）抗体の安定性、生物活性、純度および品質を維持できる。その上、本発明の例示的処方は、対象または患者、例えば、神経性の疾患または障害、例えば、アミロイドＡβポリペプチドが関わるアミロイド形成性疾患を有する、または有すると予測された人へ投与する（例えば、対象または患者へ静脈内投与をする）のに適している。
【００６６】
処方
一態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）と、処方を静脈内注射に適切とするのに十分な量で存在する等張化剤（例えば、マンニトール）と、生理的に適正なｐＨを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸（例えば、ヒスチジン）またはその誘導体とを含む処方を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合性断片）、マンニトールおよびヒスチジンを含む処方を提供する。
【００６７】
別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチドを含む安定化処方を提供する。本発明の処方中での安定化に適切な抗原結合性ポリペプチドには、抗体およびその断片、特に、疾患または障害に関与する治療標的に結合できる抗体が含まれる。したがって、該治療用ポリペプチドは、副生物、通常は高分子量凝集体、低分子量分解断片またはそれらの組み合わせの形成を回避するために、このような副生物の形成を抑制するのに十分な量の酸化防止剤の添加によって、本発明に従って安定化される。酸化防止剤には、以下に考察するように、不要な副生物を所望通り抑制するのに十分な濃度のメチオニンおよびその類縁体が含まれる。所望により、本発明の該安定化ポリペプチド処方は、該処方を幾種かの投与経路、例えば静脈内注射に適切とするのに十分な量で存在する等張化剤（例えば、マンニトール）と、生理的に適正なｐＨを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸（例えば、ヒスチジン）またはその誘導体とを更に含む。例示的な実施形態では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド、メチオニン、マンニトールおよびヒスチジンを含む処方を提供する。
【００６８】
本発明の処方に使用するためのポリペプチド
本明細書に記載するような本発明により処方すべきポリペプチドは、当分野で十分に確立されており、例えば合成的技法（組換え技法、ペプチド合成など、またはこうした技法の併用）を包含する技法を用いて調製される、あるいは該ポリペプチドの内因性供給源から単離してもよい。本発明のある種の実施形態では、精選されるポリペプチドは、抗原結合性ポリペプチド、より好ましくは抗体、特に抗Ａβ抗体である。抗原結合性ポリペプチド、特に抗体の製造技法は、以下で説明する。
【００６９】
抗体
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫活性部、即ち、抗原を特異的に結合する（認識する）抗原結合部位を含む分子を指す。免疫グロブリン分子の免疫活性部の例には、ペプシンなどの酵素による該抗体の処理で生成でき、または当分野認知の組換え操作技法により産生できるＦ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２断片などが挙げられる。本明細書の実施形態は、抗体、例えば、抗原、例えばＡβなどの治療標的抗原に結合する、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の安定化に適切である。用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体処方」とは、本明細書で使用する場合、標的抗原の特定のエピトープ、例えばＡβのエピトープ（複数も）を認識および結合できる抗原結合部位を１種だけ含んだ抗体分子の集団を指す。したがって、モノクローナル抗体処方は、免疫反応をする対象の特定の標的抗原に対して、単一の結合特異性および親和性を通常示す。
【００７０】
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、適当な対象を免疫原で免疫することにより、上記のようにして調製できる。免疫された対象における抗体力価は、固定化標的抗原を用いた酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）などの標準的技法によって、経時的にモニターすることができる。所望であれば、標的抗原に対する抗体分子をその哺乳動物（例えば、血液）から単離し、プロテインＡセファロース（商標）クロマトグラフィーなどの周知の技法によって更に精製することにより、その抗体、例えばＩｇＧの分画を得ることができる。免疫後の適当な時期、例えば抗抗原抗体力価が最高のときに、抗体産生細胞を対象から得て、使用することにより、標準的技法、例えばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７により最初に記載されたハイブリドーマ法によってモノクローナル抗体を調製できる（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７：５３９−４６；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：４９８０−８３；Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７６：２９２７−３１；およびＹｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２９：２６９−７５も参照されたい）。キメラポリクローナル抗体の調製については、Ｂｕｅｃｈｌｅｒ他の米国特許第６４２０１１３号を参照されたい。
【００７１】
モノクローナル抗体
リンパ球および不死化細胞系を融合するために用いる周知の多くの手順は、モノクローナル抗体を生成するためにいずれも適用できる（例えば、Ｇ．Ｇａｌｆｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ  ２６６：５５０５２；Ｇｅｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．（前掲）；Ｌｅｒｎｅｒ，Ｙａｌｅ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．（前掲）；Ｋｅｎｎｅｔｈ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（前掲）を参照されたい）。更に、通常技術の研究者であれば、このような方法に、やはり有用と思われる多くの変法があることを認識されよう。不死細胞系（例えば、骨髄腫細胞系）は、通常、リンパ球と同じ哺乳動物種に由来する。例えば、マウスハイブリドーマは、本発明の免疫原調製物で免疫したマウスのリンパ球をマウス不死化細胞系と融合することにより、作製できる。好ましい不死細胞系は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含有する培地（「ＨＡＴ培地」）に感受性のマウス骨髄腫細胞系である。幾種もの骨髄腫細胞系のいずれも、例えばＰ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨髄腫系は、標準的技法に従って融合パートナーとして使用できる。これらの骨髄腫系はＡＴＣＣから入手できる。ＨＡＴ感受性マウス骨髄腫細胞は、通常、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を用いてマウス脾細胞と融合する。融合から生じたハイブリドーマ細胞は、次いでＨＡＴ培地を用いて選択されるが、非融合および非生産的融合骨髄腫細胞はこの培地で死滅する（非融合脾細胞は、形質転換していないため数日後に死ぬ）。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、標準的なＥＬＩＳＡ法を用いる標的抗原、例えばＡβに結合する抗体について、ハイブリドーマ培地上清をスクリーニングすることにより検出される。
【００７２】
組換え抗体
モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代わりに、組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディスプレーライブラリー）をスクリーニングすることにより、モノクローナル抗体を同定、単離し、それにより標的抗原に結合する免疫グロブリンライブラリー構成員を単離できる。ファージディスプレーライブラリーを産生し、スクリーニングするキットは、市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４００−０１、およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｋｉｔ、カタログ番号２４０６１２）。その上、抗体ディスプレーライブラリーの生成およびスクリーニングに特に使用し易い方法および試薬の例を、例えばＬａｄｎｅｒ他の米国特許第５２２３４０９号；Ｋａｎｇ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９２／１８６１９号；  Ｄｏｗｅｒ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９１／１７２７１号；Ｗｉｎｔｅｒ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９２／２０７９１号；Ｍａｒｋｌａｎｄ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９２／１５６７９号；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９３／０１２８８号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９２／０１０４７号；Ｇａｒｒａｒｄ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９２／０９６９０号；Ｌａｄｎｅｒ他のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；  Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４に見出すことができる。
【００７３】
キメラおよびヒト化抗体
その上、ヒト部、非ヒト部双方を含む、キメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体などの、標準的組換えＤＮＡ技法を用いて作製できる組換え抗体も本発明の範囲に入る。
【００７４】
用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」とは、ヒト化免疫グロブリン鎖または抗体鎖を少なくとも１個（即ち、ヒト化軽鎖または重鎖を少なくとも１個）含む、免疫グロブリンまたは抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（即ち、ヒト化免疫グロブリン軽鎖またはヒト化免疫グロブリン重鎖）とは、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、少なくとも１個のＣＤＲ、好ましくは２個のＣＤＲ、より好ましくは３個のＣＤＲ）とを含む可変領域を有する、免疫グロブリン鎖または抗体鎖（即ち、それぞれ軽鎖または重鎖）を指し、更に定常領域（例えば、軽鎖の場合、少なくとも１個の定常領域またはその一部、および重鎖の場合、好ましくは３個の定常領域）を含む。用語「ヒト化可変領域」（例えば、「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）とは、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む可変領域を指す。
【００７５】
「ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的にヒトの」という語句は、比較のためにヒト免疫グロブリンまたは抗体のアミノ酸配列と整列した際、その領域が、ヒトフレームワーク領域または定常領域の配列と少なくとも８０〜９０％、９０〜９５％または９５〜９９％の同一性（即ち、局部的配列同一性）を共有し、例えば保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰突然変異などを可能とすることを意味している。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰突然変異などの導入は、ヒト化抗体またはヒト化連鎖の「最適化」としばしば呼称する。「非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的に非ヒトの」という語句は、非ヒト生物、例えば非ヒト哺乳動物の対応配列と少なくとも８０〜９５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％または９９％同一の免疫グロブリンまたは抗体を有することを意味している。
【００７６】
したがって、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体、またはヒト化免疫グロブリン鎖もしくは抗体鎖の全ての領域または残基は、ＣＤＲを別とすれば、１種または複数の自然のヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。用語「対応する領域」または「対応する残基」とは、第１および第２の配列を比較のために最適に整列したとき、アミノ酸またはヌクレオチドの第１の配列上の領域または残基と同じ（即ち、等価な）位置を占める、アミノ酸またはヌクレオチドの第２の配列上の領域または残基を指す。
【００７７】
用語「有意な同一性」とは、２種のポリペプチド配列が、デフォルトギャップ加重を用いるプログラム、ＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどにより最適に整列したとき、少なくとも５０〜６０％の配列同一性、好ましくは少なくとも６０〜７０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも７０〜８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８０〜９０％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９０〜９５％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９５％またはそれより高い配列同一性（例えば、９９％以上の高い配列同一性）を共有することを意味している。用語「実質的な同一性」とは、２種のポリペプチド配列が、デフォルトギャップ加重を用いるプログラム、ＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどにより最適に整列したとき、少なくとも８０〜９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％またはそれより高い配列同一性（例えば、９９％以上の高い配列同一性）を共有することを意味している。配列比較については、通常１つの配列が基準配列として作用し、それに試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験および基準配列をコンピュータに入力し、必要であれば部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムのプログラムパラメーターを指定する。次いで、この配列比較アルゴリズムは、指定したプログラムパラメーターに基づいて、基準配列に対する試験配列（複数も）の配列一致率（％）を計算する。
【００７８】
比較配列の最適な整列は、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局部相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性整列アルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ    ８５：２４４４（１９８８）の類似性探索法、以上のアルゴリズムのコンピュータ計算実施（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）または視覚的検査（全般的にはＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）によって行うことができる。配列一致率（％）および配列類似性の決定に適したアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、それについてはＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析の実行用ソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＮＣＢＩのインターネットサーバーから公的にアクセスできる）から公的に入手できる。通常、デフォルトプログラムパラメーターを用いて配列比較を実施できるが、特別設定のパラメーターも使用できる。アミノ酸配列に関しては、ＢＬＡＳＴプログラムは、デフォルトとしてワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０およびＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列を用いる（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）。
【００７９】
好ましくは、同一でない残基位置は保存的アミノ酸置換によって異なる。アミノ酸置換を保存的または非保存的と分類するために、アミノ酸を以下のように群別する：Ｉ群（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；ＩＩ群（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；ＩＩＩ群（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；ＩＶ群（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；Ｖ群（連鎖配向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびＶＩ群（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存置換は、同じ部類中のアミノ酸間の置換を伴う。非保存置換は、このうちの１部類の構成員で別部類の構成員を交換することに相当する。
【００８０】
好ましくは、ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、対応する非ヒト化抗体の親和性の３倍、４倍または５倍内の親和性で抗原に結合する。例えば、非ヒト化抗体が１０９Ｍ−１の結合親和性を有するならば、ヒト化抗体は少なくとも３×１０９Ｍ−１、４×１０９Ｍ−１または５×１０９Ｍ−１の結合親和性を有することになろう。免疫グロブリン鎖または抗体鎖の結合特性を記す場合、その連鎖を、「抗原（例えば、Ａβ）結合を指示する」能力に基づいて記すことができる。ある連鎖は、無傷の免疫グロブリンまたは抗体（あるいは、その抗原結合性断片）に特異的な結合性または親和性を賦与するとき、「抗原結合を指示する」と言われる。ある突然変異（例えば、復帰突然変異）は、重鎖または軽鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（あるいは、その抗原結合性断片）の結合親和性に、前記突然変異を欠いた等価な連鎖を含む抗体（または、その抗原結合性断片）の結合親和性と比較して、少なくとも１桁の影響を及ぼす（例えば、減少を生じる）場合、前記連鎖が抗原結合を指示する能力に実質的な影響を及ぼすと言われる。ある突然変異は、ある連鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（あるいは、その抗原結合性断片）の結合親和性に、前記突然変異を欠いた等価な連鎖を含む抗体（または、その抗原結合性断片）の結合親和性の２倍、３倍または４倍だけの影響を及ぼす（例えば、減少を生じる）場合、「前記連鎖が抗原結合を指示する能力に実質的な影響を及ぼさ（例えば、減少を生じ）ない」。
【００８１】
用語「キメラ免疫グロブリン」または抗体とは、その可変領域が第１の種に由来し、その定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから、例えば遺伝子操作により構築できる。「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、下記に定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体を包含することを意図していない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、構成上キメラである（即ち、複数種のタンパク質由来の各領域を含む）が、そこには、キメラ免疫グロブリンまたは抗体には見出されない、本明細書に定義するような追加の特徴（即ち、供与ＣＤＲ残基および受容フレームワーク残基を含む可変領域）が含まれる。
【００８２】
このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当分野で公知の組換えＤＮＡ技法によって産生できるが、そこで使用される方法は、例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ他、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号；Ａｋｉｒａ他、欧州特許出願第１８４１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．他、欧州特許出願第１７１４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、欧州特許出願第１７３４９４号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ他、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ８６／０１５３３号；Ｃａｂｉｌｌｙ他、米国特許第４８１６５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙ他、欧州特許出願第１２５０２３号；Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５２２５５３９号；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０に記載されている。
【００８３】
トランスジェニック動物およびファージディスプレーからのヒト抗体
あるいは、免疫した際に、内因性免疫グロブリンを産生しない状態で全範囲のヒト抗体を産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが、現在では可能である。例えば、キメラおよび生殖細胞系突然変異のマウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子をホモ接合的に欠失させると、内因性抗体産生が完全に抑制される。このような生殖細胞系突然変異マウス中に一連のヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子を移入すると、抗原接種時にヒト抗体が産生される。例えば、米国特許第６１５０５８４号、第６１１４５９８号および第５７７０４２９号を参照されたい。
【００８４】
完全なヒト抗体は、ファージディスプレーライブラリーからも誘導できる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１））。
【００８５】
二重特異性抗体、抗体融合ポリペプチドおよび一本鎖抗体
二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。このような抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ）’２  二重特異性抗体）から誘導できる。二重特異性抗体の作製法は当分野で公知である。二重特異性抗体の従来からの生成は、２本の連鎖が異なる特異性を有する、免疫グロブリン軽鎖−重鎖対２対の共発現に基づいている（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン軽鎖−重鎖の無作為な取り合わせのために、こうしたハイブリドーマ（四重ハイブリドーマ）は、異なる抗体分子からなる可能性のある組み合わせを生じる（国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）の中を参照されたい）。
【００８６】
二重特異性抗体は、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体も包含する。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体の一方はアビジンに結合でき、他方はビオチンまたは他の搭載物質に結合できる。ヘテロコンジュゲート抗体は、都合良い任意の架橋法を用いて作製し得る。適当な架橋剤は、当分野で周知であり、幾種もの架橋法と共に米国特許第４６７６９８０号に開示されている。
【００８７】
更に別の実施形態では、該抗体を化学的または遺伝子操作的に、反応性、被検出性または機能性の部分、例えば抗毒素などの搭載物質ドメインに融合することにより、抗体融合ポリペプチドを生成できる。このような搭載物質には、例えば抗毒素、化学療法剤および放射性同位体が含まれ、それらは全て当分野で周知である。
【００８８】
一本鎖抗体も、本発明による安定化にとって適当である。その断片は、各可変領域の相互連結を可能とするリンカーで、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、ＶＬおよびＶＨ領域の由来源である親抗体の抗原結合性ポケットを再生する。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
【００８９】
前出のポリペプチド分子のいずれでも、本発明による安定化処方として、単独または組み合わせて調製するために適切であることは理解される。
【００９０】
治療用抗原結合性ポリペプチド
幾つもの治療用抗原結合性ポリペプチドが、本発明の安定化条件により処方するのに適当である。通常、該抗原結合性ポリペプチドは、標的抗原または免疫系の分子、例えばＦｃ受容体と相互作用できる、抗体可変領域および／または抗体Ｆｃ領域、あるいは免疫グロブリン、免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質、または受容体もしくは受容体様ドメインの少なくとも一部を含む、抗体またはその断片（前記参照のこと）である。便宜上、本発明の方法および処方から受益できる抗原結合性ポリペプチドは、標的抗原クラスに従って以下に考察する。このような代表的抗原結合性ポリペプチドは、例えば癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体を包含する抗原クラスに結合する。
【００９１】
癌抗原に結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、腫瘍細胞に特異的な分子、例えば腫瘍特異抗原に結合できる。このような腫瘍特異抗原には、例えば水疱性類天疱瘡抗原２、前立腺ムチン抗原（ＰＭＡ）、腫瘍関連トムゼン・フリーデンライヒ抗原、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、乳癌および膀胱移行上皮癌（ＴＣＣ）の管腔上皮抗原（ＬＥＡ１３５）、癌関連血清抗原（ＣＡＳＡ）および癌抗原１２５（ＣＡ１２５）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ４０）、へん平上皮癌抗原（ＳＣＣ）、カテプシンＥ、メラノーマ内チロシナーゼ、脳海綿状血管腫（ｃａｖｅｍｏｍａｓ）の細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、ＤＦ３／ＭＵＣ１乳癌抗原、癌胎児性抗原、腫瘍関連抗原ＣＡ１９−９、ヒトメラノーマ抗原ＭＡＲＴ−Ｉ／Ｍｅｌａｎ−Ａ２７−３５およびｇｐ１００、ＴおよびＴｎ膵癌（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ）（ＣＡ）糖ペプチドエピトープ、甲状腺乳頭癌内３５ｋＤ腫瘍関連自己抗原、ＫＨ−１腺癌抗原、Ａ６０マイコバクテリア抗原、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、変異腫瘍遺伝子産物、例えばｐ５３、ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕなどが挙げられる。
【００９２】
炎症および自己免疫疾患の分子に結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、炎症または自己免疫疾患もしくは障害の原因分子に結合できる。このような抗原結合性ポリペプチドは、関節リウマチ、ＳＬＥ、糖尿病、重症筋無力症、反応性関節炎、強直性脊椎炎、多発性硬化症、ＩＢＤ、乾癬、膵炎および様々な免疫不全に関係する分子に結合できる。他の標的抗原には、２−ＧＰＩ、５０ｋＤａ糖タンパンク質、Ｋｕ（ｐ７０／ｐ８０）自己抗原またはその８０ｋｄサブユニットタンパク質、核自己抗原Ｌａ（ＳＳ−Ｂ）およびＲｏ（ＳＳ−Ａ）、強皮症抗原Ｒｐｐ３０、Ｒｐｐ３８またはＳｃｌ−７０、セントロソーム自己抗原ＰＣＭ−１、多発性筋炎・強皮症自己抗原（ＰＭ−Ｓｃｌ）、強皮症（および他の全身性自己免疫疾患）自己抗原ＣＥＮＰ−Ａ、Ｕ５、小核リボ核タンパク質（ｓｎＲＮＰ）、ＰＭ−Ｓｃｌ自己抗原の１００ｋｄタンパク質、核小体Ｕ３およびＴｈ（７−２）リボ核タンパク質、リボソームタンパク質Ｌ７、核マトリックス抗原由来３６ｋｄタンパク質、インスリン、プロインスリン、ＧＡＤ６５およびＧＡＤ６７、熱ショックタンパク質６５（ｈｓｐ６５）、および膵島細胞抗原６９（ＩＣＡ６９）、膵島細胞抗原関連タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）、ＧＭ２−１ガングリオシド、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、膵島細胞抗原６９（ＩＣＡ６９）、Ｔｅｐ６９、糖尿病患者由来Ｔ細胞が認識する単一Ｔ細胞エピトープ、ＩＣＡ５１２、Ｉ型糖尿病自己抗原、膵島細胞タンパク質チロシンホスファターゼおよびそれ由来のＩ型糖尿病中３７ｋＤａ自己抗原（ＩＡ−２、ＩＡ−２を含む）、Ｉｎ−１１１細胞またはヒト甲状腺濾胞細胞由来で、膵島細胞膜抗体（ＩＣＳＡ）を有する患者からの血清で免疫沈降する６４ｋＤａタンパク質が挙げられる。特に、関節リウマチ抗原には、４５ｋＤａ  ＤＥＫ核抗原、発症若年性関節リウマチおよび虹彩毛様体炎、ヒト軟骨糖タンパク質３９、関節リウマチ内自己抗原、関節リウマチ内６８ｋ自己抗原、コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、軟骨結合タンパク質、エズリン、ラジキシンおよびモエシン、マイコバクテリア熱ショックタンパク質６５、甲状腺ペルオキシダーゼおよび甲状腺刺激ホルモン受容体、ヒトグレーブス甲状腺組織由来の甲状腺ペルオキシダーゼ、甲状腺関連眼障害に関係する６４ｋＤａ抗原、ヒトＴＳＨ受容体、ならびにＩｎ−１１１細胞またはヒト甲状腺濾胞細胞由来で、膵島細胞膜抗体を有する患者からの血清で免疫沈降する６４ｋＤａタンパク質が挙げられる。
【００９３】
アレルゲンに結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、アレルゲンまたはアレルギー疾患もしくは障害の原因分子に結合できる。このような抗原結合性ポリペプチドは、ＩｇＥ、ＩｇＥ受容体、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、サイトカイン、またはアレルゲン、例えば、イエダニ、草本花粉、樺の木花粉、ブタクサ花粉、ハシバミ花粉、ゴキブリ、コメ、オリーブの木花粉、真菌、マスタード、ハチ毒、動物アレルゲン、例えばウマ、イヌもしくはネコなどからのアレルゲンに結合できる。アレルゲンにはラテックスアレルゲンも含まれる。
【００９４】
病原体および関連毒素に結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、病原体、例えば、細菌、真菌もしくはウイルス性の病原体、またはその毒素に結合できる。このような抗原結合性ポリペプチドは、エルシニア、例えばペストの原因菌であるペスト菌、特にＶ抗原、炭疽病の原因菌である炭疽菌、特に炭疽菌防御抗原（ＰＡ）または致死因子（ＬＦ）、ブドウ球菌、例えば黄色ブドウ球菌および表皮ブドウ球菌と、連鎖球菌および／またはその関連毒素、大腸菌、例えば食物媒介病を起こすＯ−１５７：Ｈ７株；コレラ菌類、例えばコレラ菌、またはその内毒素；ヘリコバクター・ピロリ、例えば抗原ＣａｇＡおよびＶａｃＡ；クラミジア；淋菌および髄膜炎菌；百日咳菌；ウシ流産菌；髄膜炎菌抗原；肺炎球菌抗原；リステリア菌；サルモネラ；赤痢菌および結核菌；ウイルス病原体、例えばハンタウイルス、フラビウイルス、インフルエンザ；ＨＩＶ、例えばＧａｇ、Ｐｏｌ、ＶｉｆおよびＮｅｆ抗原；ロタウイルス；単純疱疹ウイルスＩ／ＩＩ型；肝炎Ａ、Ｂ、ＣまたはＧ；狂犬病；パピローマウイルス；エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）；麻疹；ＣＭＶ；ならびに寄生生物を包含する病原体（またはその毒素）に結合する。
【００９５】
抗Ａβ抗体
一般に、本発明の処方は、アミロイド形成性疾患、特にアルツハイマー病を、Ａβペプチドを標的とすることにより、治療するための多様な抗体を含んでいる。
【００９６】
「Ａβ抗体」、「抗Ａβ抗体」および「抗Ａβ」という用語は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、Ａβタンパク質またはその両方の１つまたは複数のエピトープまたは抗原決定基に結合する抗体を指すために、本明細書では互換的に使用される。例示的なエピトープまたは抗原決定基は、ＡＰＰ内に見出せるが、好ましくはＡＰＰのＡβペプチド内に見出される。ＡＰＰには多種のアイソフォーム、例えばＡＰＰ６９５、ＡＰＰ７５１およびＡＰＰ７７０が存在する。ＡＰＰ内のアミノ酸には、アイソフォームＡＰＰ７７０の配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｐ０５０６７を参照されたい）に従って番号が割り当てられている。人間中に存在することが現在知られているＡＰＰの特定のイソタイプの例は、Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２５：７３３−７３６に記載され、「正常」ＡＰＰと命名されている６９５アミノ酸ポリペプチド；Ｐｏｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２５−５２７（１９８８）およびＴａｎｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２８−５３０に記載されている７５１アミノ酸ポリペプチド；ならびにＫｉｔａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５３０−５３２に記載されている７７０アミノ酸ポリペプチドである。インビボまたはインシトゥでの異なるセクレターゼ酵素によるＡＰＰのタンパク分解プロセシングの結果、Ａβは、４０アミノ酸長の「短鎖形」、４２〜４３アミノ酸長の範囲の「長鎖形」の双方で見出されている。短鎖形Ａβ４０は、ＡＰＰの６７２〜７１１番残基からなる。長鎖形、例えばＡβ４２またはＡβ４３は、それぞれ６７２〜７１３番または６７２〜７１４番残基からなる。ＡＰＰの疎水性ドメインの一部は、Ａβのカルボキシ末端に見出され、特に長鎖形の場合にＡβの凝集能を説明し得る。Ａβペプチドは、健常個体、アミロイド形成性障害に罹っている個体の双方を含め、人間および他の哺乳類の体液、例えば脳脊髄液中に見出すことができ、またはそれから精製できる。
【００９７】
「βアミロイドタンパク質」、「βアミロイドペプチド」、「βアミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド」という用語は、本明細書では互換的に使用される。Ａβペプチド（例えば、Ａβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３）は、ＡＰＰの３９〜４３アミノ酸からなる約４ｋＤａの内部断片である。例えば、Ａβ４０はＡＰＰの６７２〜７１１番残基からなり、Ａβ４２はＡＰＰの６７２〜７１３番残基からなる。Ａβペプチドには、ＡＰＰのセクレターゼ開裂から生じるペプチド、およびその開裂生成物と同じまたは本質的に同じ配列を有する合成ペプチドが含まれる。Ａβペプチドは、多様な源、例えば組織、細胞系または体液（例えば、血清もしくは脳脊髄液）から誘導できる。例えば、Ａβは、例えばＷａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ，４１６，ｐｐ５３５−５３９に記載のように、ＡＰＰ７１７Ｖ→Ｆで安定にトランスフェクトしたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などのＡＰＰ発現細胞から誘導できる。Ａβ調製品は、前記の方法を用いて組織源から誘導できる（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１５５０を参照されたい）。あるいは、Ａβペプチドは、当分野で周知の方法を用いて合成できる。例えば、Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ  Ｕｓｅｒ‘ｓ  Ｇｕｉｄｅ，ｅｄ．Ｇｒａｎｔ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９２，ｐ７７を参照されたい。したがって、αアミノ基をｔ−Ｂｏｃ基またはＦ−ｍｏｃ基で保護した側鎖保護アミノ酸を用いる、固相合成の自動メリフィールド法を用いて、例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒモデル４３０Ａまたは４３１上で合成できる。長めのペプチド抗原は、周知の組換えＤＮＡ法を用いて合成できる。例えば、該ペプチドまたは融合ペプチドをコードするポリヌクレオチドを合成し、または分子的にクローニングし、適当な発現ベクター中に挿入し、適当な宿主細胞によるトランスフェクションおよび異種発現を行うことができる。Ａβペプチドは、正常遺伝子のＡβ領域における突然変異から生じる関連Ａβ配列も指す。
【００９８】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」とは、免疫グロブリンまたは抗体（あるいは、その抗原結合性断片）が特異的に結合する抗原上の部位を指す。Ａβ抗体が結合する例示的なエピトープまたは抗原決定基は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）内に見出すことができ、好ましくはＡＰＰのＡβペプチド内に見出される。Ａβ内の例示的なエピトープまたは抗原決定基は、ＡβのＮ末端、中央領域またはＣ末端内に配置されている。「Ｎ末端エピトープ」は、ＡβペプチドのＮ末端内に配置されているエピトープまたは抗原決定基である。例示的なＮ末端エピトープには、Ａβのアミノ酸１〜１０番または１〜１２番内の残基、好ましくはＡβ４２の残基１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、２〜６、２〜７、３〜６または３〜７番が含まれる。他の例示的なＮ末端エピトープは、Ａβの残基１〜３番に始まり、残基７〜１１番に終わる。追加の例示的なＮ末端エピトープには、Ａβの残基２〜４、５、６、７もしくは８、Ａβの残基３〜５、６、７、８もしくは９、またはＡβ４２の残基４〜７、８、９もしくは１０が含まれる。「中央部」エピトープは、Ａβペプチドの中央部または中心部内に配置された残基を含むエピトープまたは抗原決定基である。例示的な中央部エピトープには、Ａβのアミノ酸１３〜２８番内の残基、好ましくはＡβの残基１４〜２７、１５〜２６、１６〜２５、１７〜２４、１８〜２３または１９〜２２番が含まれる。他の例示的な中央部エピトープには、Ａβのアミノ酸１６〜２４、１６〜２３、１６〜２２、１６〜２１、１８〜２１、１９〜２１、１９〜２２、１９〜２３または１９〜２４番内の残基が含まれる。「Ｃ末端」エピトープまたは抗原決定基は、ＡβペプチドのＣ末端内に配置されており、それには、Ａβのアミノ酸３３〜４０、３３〜４１または３３〜４２番内の残基が含まれる。追加の例示的なＣ末端エピトープまたは抗原決定基には、Ａβの残基３３〜４０番が含まれる。
【００９９】
抗体がＡβ３〜７番などの特定の残基内エピトープに結合すると言う場合、その意味は、該抗体が、特定残基（即ち、この例ではＡβ３〜７番）を含むポリペプチドに特異的に結合することである。このような抗体は、Ａβ３〜７番内の各残基に必ずしも接触するわけではない。Ａβ３〜７番内の単一アミノ酸の各置換または欠失が、必ずしも結合親和性に相当に影響するわけでもない。多様な実施形態では、Ａβ抗体は末端特異的である。本明細書で使用する場合、用語「末端特異的」とは、ＡβペプチドのＮ末端またはＣ末端残基に特異的に結合するが、該残基を含む長めのＡβ種またはＡＰＰ中に存在する場合は、それらの同じ残基を認識しない抗体を指す。多様な実施形態では、Ａβ抗体は「Ｃ末端特異的」である。本明細書で使用する場合、用語「Ｃ末端特異的」とは、抗体が、Ａβペプチドの遊離Ｃ末端を特異的に認識することを意味する。Ｃ末端特異的Ａβ抗体の例には、残基４０番で終わるＡβペプチドを認識するが、残基４１、４２および／または４３番で終わるＡβペプチドは認識しない抗体；残基４２番で終わるＡβペプチドを認識するが、残基４０、４１および／または４３番で終わるＡβペプチドは認識しない抗体などが含まれる。
【０１００】
一実施形態では、該Ａβ抗体は、３Ｄ６抗体もしくはその変異体、または１０Ｄ５抗体もしくはその変異体でもよく、その両者は、米国特許出願公開第２００３０１６５４９６Ａ１号、米国特許出願公開第２００４００８７７７７Ａ１号、国際特許公開第ＷＯ０２／４６２３７Ａ３号および国際特許公開第ＷＯ０４／０８０４１９Ａ２号に記載されている。３Ｄ６および１０Ｄ５抗体の記述は、例えば国際特許公開第ＷＯ０２／０８８３０６Ａ２号および国際特許公開第ＷＯ０２／０８８３０７Ａ２号にも見出すことができる。追加の３Ｄ６抗体が、米国特許出願第１１／３０３４７８号および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５６１４号に記載されている。３Ｄ６は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたＮ末端エピトープ、具体的には残基１〜５番に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。それに対し、１０Ｄ５は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたＮ末端エピトープ、具体的には残基３〜６番に特異的に結合するｍＡｂである。別の実施形態では、該抗体は、１２Ｂ４抗体もしくはその変異体でもよく、それに関しては、米国特許出願公開第２００４００８２７６２Ａ１号および国際特許公開第ＷＯ０３／０７７８５８Ａ２号に記載されている。１２Ｂ４は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたＮ末端エピトープ、具体的には残基３〜７番に特異的に結合するｍＡｂである。更に別の実施形態では、該抗体は、１２Ａ１１抗体もしくはその変異体でもよく、それに関しては、米国特許出願公開第２００５０１１８６５１Ａ１号および国際特許公開第ＷＯ０４／１０８８５Ａ２号に記載されている。１２Ａ１１は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたＮ末端エピトープ、具体的には残基３〜７番に特異的に結合するｍＡｂである。更に別の実施形態では、該抗体は、１５Ｃ１１抗体もしくはその変異体でもよく、それに関しては、「βアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という名称の米国特許出願第１１／３０４９８６号および国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号に記載されている。１５Ｃ１１は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置された中央部エピトープ、具体的には残基１９〜２２番に特異的に結合するｍＡｂである。更に別の実施形態では、該抗体は２６６抗体でもよく、それに関しては、米国特許出願公開第２００５０２４９７２５Ａ１号および国際特許公開第ＷＯ０１／６２８０１Ａ２号に記載されている。本発明に使用するための、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたＣ末端エピトープに特異的に結合するように設計された抗体には、米国特許第５７８６１６０号に記載されるような３６９．２Ｂが含まれるが、それだけに限らない。
【０１０１】
本発明で使用するための抗体は、組換えまたは合成で作製し得る。例えば、該抗体をチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の培養法により作製してもよい。その上、副次的な修飾を有し、Ａβペプチドに結合する主要機能性を保持した抗体も、本発明により想定されている。特定の実施形態では、該抗体は、Ａβペプチドに選択的に結合するヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体である。より具体的には、ヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体は、脳内の沈着斑中に（例えば、アルツハイマー病患者において）見出されるヒトβアミロイド１−４０または１−４２ペプチド中に配置される、ＮＨ２末端エピトープに特異的に結合するように設計されている。
【０１０２】
図１に、ｈ３Ｄ６ｖ２と称する例示的なヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体の予想構造を概略的に表示している。対応する発現ベクターのＤＮＡ配列から予測したｈ３Ｄ６ｖ２軽鎖および重鎖の完全なアミノ酸配列は、図２に示される（図中の残基には、残基番号１としての軽鎖および重鎖のＮＨ２末端から始めた番号が付けられている）。重鎖ＤＮＡ配列がコードする最後のアミノ酸残基Ｌｙｓ４４９は、ｈ３Ｄ６ｖ２の成熟分泌形には認められておらず、特定の理論には拘りたくないが、ＣＨＯ細胞プロテアーゼによる細胞内プロセシング中に除去されると推定している。したがって、ｈ３Ｄ６ｖ２重鎖のＣＯＯＨ末端は、所望によってはＧｌｙ４４８である。ＣＯＯＨ末端リジンのプロセシングは、組換えおよび血漿由来抗体で認められており、その抗体機能には影響しないようである（Ｈａｒｒｉｓ（１９９５）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．７０５：１２９−１３４）。精製ｈ３Ｄ６ｖ２は、Ｎ−グリコシル化コンセンサス部位を１個含むことが知られている、重鎖Ｆｃ部へのＮ連結グリカンの付加によって翻訳後に修飾されている。該Ｎ−グリコシル化部位は、哺乳類ＩｇＧタンパク質の類縁Ｎ−グリコシル化部位で普通に認められる３種の主要複合体二分岐中性オリゴ糖構造を示す。
【０１０３】
別の例示的なヒト化抗Ａβペプチド抗体は、軽鎖の１位のＤ→Ｙ置換を別とすれば、図２に示された配列を有するヒト化３Ｄ６の変形１（ｈｕ３Ｄ６ｖ１）である。
【０１０４】
本発明の様々な実施形態では、該抗Ａβ抗体（例えば、ヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌで、またはそれより高く、例えば約１００ｍｇ／ｍｌまで、約２００ｍｇ／ｍｌまで、約５００ｍｇ／ｍｌまで、もしくは約１０００ｍｇ／ｍｌ以上までで存在している。様々な実施形態では、該抗Ａβ抗体は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５ｍｇ／ｍｌで存在している。特定の実施形態では、該抗Ａβ抗体（例えば、ヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は約１７ｍｇ／ｍｌで存在している。別の特定の実施形態では、該抗Ａβ抗体（例えば、ヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は約２０ｍｇ／ｍｌで存在している。別の特定の実施形態では、該抗Ａβ抗体（例えば、ヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は約３０ｍｇ／ｍｌで存在している。上記各濃度の中間的範囲、例えば約１２ｍｇ／ｍｌ〜１７ｍｇ／ｍｌも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。
【０１０５】
賦形剤
様々な実施形態で、本発明は、それだけに限らないが、緩衝剤、酸化防止剤、等張化剤および安定剤を含めた多種の賦形剤を含み得る処方を提供する。その上、該処方は、ｐＨ調節剤（例えば、ＨＣｌ）および希釈剤（例えば、水）を含んでもよい。該賦形剤は、安定性および抗体の生物活性を（例えば、そのタンパク質の適切なコンホメーションを維持することによって）部分的に維持し、および／またはｐＨを維持するのに部分的に機能する。
【０１０６】
緩衝剤
本発明の様々な態様では、該処方は緩衝作用剤（緩衝剤）を含んでいる。緩衝剤は、該処方の等張性および化学安定性を高めるのに機能することができる。その上、緩衝剤は、生理的に適当なｐＨ（例えば、約６．０のｐＨ）を維持するのに機能する。一般に、該処方は生理的に適当なｐＨを示すべきである。本発明の様々な実施形態では、該処方は、約５〜約７または約５．５〜約６．５のｐＨを示すべきである。特定の実施形態では、該処方は約６のｐＨを示す。上記ｐＨレベルの中間的な範囲、例えば約５．２〜約６．３（例えば、ｐＨ６．２）も、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。このｐＨは、必要な場合、当分野で公知の技法により調整し得る。例えば、必要な場合ＨＣｌの添加により、ｐＨを所望レベルに調整してもよく、または必要な場合異なる形態のヒスチジンの添加により、ｐＨを所望レベルに調整してもよい。
【０１０７】
該緩衝剤には、それだけに限らないが、コハク酸（ナトリウムまたはリン酸）、ヒスチジン、リン酸（ナトリウムまたはカリウム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、クエン酸、他の有機酸およびそれらの組み合わせを挙げ得る。特定の実施形態では、該緩衝剤はヒスチジン（例えば、Ｌ−ヒスチジン）である。別の特定の実施形態では、該緩衝剤はコハク酸である。別の実施形態では、該処方は、その処方を生理的に適当なｐＨに維持するのに十分な量で存在する、ヒスチジンなどのアミノ酸を含む。ヒスチジンは、生理的ｐＨ範囲における緩衝能を有する例示的アミノ酸である。ヒスチジンは、そのイミダゾール基から緩衝能を引き出す。例示的一実施形態では、該緩衝剤はＬ−ヒスチジン（塩基）（例えば、Ｃ６Ｈ９Ｎ３Ｏ２、ＦＷ：１５５．１５）である。別の実施形態では、該緩衝剤はＬ−ヒスチジン一塩化物一水和物（例えば、Ｃ６Ｈ９Ｎ３Ｏ２．ＨＣｌ．Ｈ２Ｏ、ＦＷ：２０９．６３）である。別の例示的実施形態では、該緩衝剤は、Ｌ−ヒスチジン（塩基）およびＬ−ヒスチジン一塩化物一水和物の組み合わせである。
【０１０８】
一実施形態では、該緩衝剤（例えば、Ｌ−ヒスチジンまたはコハク酸）は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、好ましくは約５ｍＭまたは１０ｍＭで存在している。様々な実施形態では、該緩衝剤は、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、または１５ｍＭで存在してもよい。特定の実施形態では、該緩衝剤は約１０ｍＭで存在している。上記各濃度の中間的な範囲、例えば約１２ｍＭ〜約１７ｍＭも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。ある種の実施形態では、該緩衝剤は、生理的に適当なｐＨを維持するのに十分な量で存在する。
【０１０９】
等張化剤
本発明の様々な態様では、該処方は等張化剤を含んでいる。等張化剤は、該処方の等張性の維持およびタンパク質量の維持に部分的に寄与する。等張化剤は、該処方中に存在する治療活性なポリペプチドの量、比または割合の保持に部分的に寄与する。本明細書で使用する場合、用語「張度」とは、液体環境または溶液中での生物学的成分の挙動を指す。等張溶液は、血漿と同じ浸透圧を有し、したがって対象の血漿の浸透圧を変えることなく、その対象に静脈注入することができる。実際に、本発明による一実施形態では、等張化剤が、該処方を静脈注入に適正にするのに十分な量で存在する。該等張化剤は、増量剤として機能することも多い。したがって、該等張化剤により、タンパク質が、凍結、せん断などの多様なストレスを克服することが可能となる場合がある。
【０１１０】
該等張化剤には、それだけに限らないが、ＣａＣｌ２、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、グリシンおよびそれらの組み合わせを挙げ得る。特定の実施形態では、該等張化剤はマンニトールである（例えばＤ−マンニトール、例えばＣ６Ｈ１４Ｏ６、ＦＷ：１８２．１７）。
【０１１１】
一実施形態では、該等張化剤（例えば、マンニトール）は約２％〜約６％ｗ／ｖまたは約３％〜約５％ｗ／ｖで存在している。別の実施形態では、該等張化剤は約３．５％〜約４．５％ｗ／ｖで存在している。別の実施形態では、該等張化剤は、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、または約３５ｍｇ／ｍｌ〜約４５ｍｇ／ｍｌで存在している。特定の実施形態では、該等張化剤は、約４％ｗ／ｖまたは約４０ｍｇ／ｍｌで存在している。別の特定の実施形態では、該等張化剤は約６％ｗ／ｖで存在している。更に別の特定の実施形態では、該等張化剤は約１０％ｗ／ｖで存在している。
【０１１２】
上記各濃度の中間的な範囲、例えば約３．２％〜約４．３％または約３２ｍｇ／ｍｌ〜約４３ｍｇ／ｍｌも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。該等張化剤は、該処方の張度を維持するような十分な量で存在すべきである。
【０１１３】
酸化防止剤
本発明の様々な態様では、該処方は、その処方を部分的に保護するために（例えば、酸化を防止することにより）、酸化防止剤を含んでいる。
【０１１４】
該酸化防止剤には、それだけに限らないが、ＧＬＡ（γ−リノレン酸）−リポ酸、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）−リポ酸、ＧＬＡ−トコフェロール、ジＧＬＡ−３，３’−チオジプロピオン酸、および概して、化学的に連結できる任意の天然または合成の酸化防止剤と合わせた、例えばＧＬＡ、ＤＧＬＡ（ジホモ−γ−リノレン酸）、ＡＡ（アラキドン酸）、ＳＡ（サリチル酸）、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）またはＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）を挙げ得る。こうしたものには、フェノール性酸化防止剤（例えば、オイゲノール、カルノシン酸、カフェイン酸、ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシアニソール）、トコフェロール、トコトリエノールおよびフラベノイド酸化防止剤（ミリセチン、フィセチンなど））、ポリエン（例えば、レチノイン酸）、不飽和ステロール（例えば、Δ５−アベノステロール）、有機硫黄化合物（例えば、アリシン）、テルペン（例えば、ゲラニオール、アビエチン酸）、ならびにアミノ酸酸化防止剤（例えば、メチオニン、システイン、カルノシン）が含まれる。一実施形態では、該酸化防止剤はアスコルビン酸である。特定の実施形態では、該酸化防止剤は、メチオニン、またはその類縁体、例えばセレノメチオニン、ヒドロキシメチルブタン酸、エチオニンもしくはトリフルオロメチオニンである。
【０１１５】
一実施形態では、該酸化防止剤（例えば、Ｌ−メチオニンなどのメチオニン、例えばＣＨ３ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＦＷ＝１４９．２１）は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭで存在する。様々な実施形態では、該酸化防止剤は、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、または１５ｍＭで存在してもよい。特定の実施形態では、該酸化防止剤は約１０ｍＭで存在する。別の特定の実施形態では、該酸化防止剤は約１５ｍＭで存在する。上記各濃度の中間的な範囲、例えば約１２ｍＭ〜約１７ｍＭも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。ある種の実施形態では、該酸化防止剤は、部分的に酸化の防止によって、該処方を保護するのに十分な量で存在すべきである。
【０１１６】
安定剤
本発明の様々な態様では、該処方は、界面活性物質としても知られている安定剤を含んでいる。安定剤は、処方中の生体分子および／または一般的な医薬用賦形剤と相互作用し、安定化させる特定の化合物である。ある種の実施形態では、安定剤は、より低温の保存と組み合わせて使用してもよい。一般に、安定剤は、しばしばタンパク質凝集を起こす空気／溶液界面誘発ストレスおよび溶液／表面誘発ストレスからタンパク質を保護する。
【０１１７】
該安定剤には、それだけに限らないが、グリセリン、ポリソルベート８０などのポリソルベート、ジカルボン酸、蓚酸、コハク酸、アジピン酸、フマール酸、フタール酸、およびそれらの組合せを挙げ得る。特定の実施形態では、安定剤はポリソルベート８０である。
【０１１８】
一実施形態では、該安定剤（例えば、ポリソルベート８０）は、約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．０１％ｗ／ｖ、約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．００９％ｗ／ｖ、または約０．００３％ｗ／ｖ〜約０．００７％ｗ／ｖの間で存在している。特定の実施形態では、該安定剤は処方の約０．００５％ｗ／ｖで存在している。別の特定の実施形態では、該安定剤は約０．０１％ｗ／ｖで存在している。上記各濃度の中間的な範囲、例えば約０．００２％ｗ／ｖ〜約０．００６％ｗ／ｖも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。該安定剤は、Ａβ結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）を安定化するのに十分な量で存在すべきである。
【０１１９】
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されるような、医薬として許容可能な他の担体、賦形剤または安定剤は、該処方の所望特性に悪影響を及ぼさない限り、処方中に含めてもよい。特定の実施形態では、該処方は実質的に防腐剤を含まないが、代替的な実施形態では、必要な場合防腐剤を添加してもよい。例えば、該処方を凍結乾燥するのであれば、例えば凍結防止剤または溶解防止剤を含めてもよい。
【０１２０】
本発明の様々な態様では、該処方は、前記の賦形剤各部類の一部または全部を所望により含む。一態様では、本発明の処方は、抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）、マンニトールおよびヒスチジンを含む。特定の実施形態では、該処方は、メチオニンなどの酸化防止剤および／またはポリソルベート８０などの安定剤を含んでもよい。ある種の実施形態では、該処方は約６のｐＨを有する。別の態様では、該処方は、抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）、マンニトール、ヒスチジンおよびメチオニンを含む。更に別の態様では、該処方は、Ａβ結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）、マンニトール、ヒスチジン、メチオニンおよびポリソルベート８０を含む。本発明の特定の態様では、該処方は、約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、４％のマンニトールを含み、約６のｐＨを有する。本発明の別の態様では、該処方は、約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、４％ｗ／ｖのマンニトール、０．０１％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含み、約６のｐＨを有する。本発明の別の態様では、該処方は、約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、４％ｗ／ｖのマンニトール、０．００５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含み、約６のｐＨを有する。
【０１２１】
本発明の例示的実施形態は、バルク医薬品としてしばしば有用である、抗原結合性ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）の濃縮調製物を提供する。更に、本発明の例示的実施形態は、凍結、凍結乾燥および／または復元に安定である。更に、本発明の例示的実施形態は長期間に亘り安定である。例えば、本発明の処方は、少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヶ月間安定である。特定の実施形態では、本発明の処方は、少なくとも約１２ヶ月、少なくとも約１８ヶ月、少なくとも約２４ヶ月、または少なくとも約３０ヶ月間安定である。
【０１２２】
本発明によれば、該処方は、約−８０℃〜約４０℃、約０℃〜約２５℃、約０℃〜約１５℃、または約０℃〜約１０℃、好ましくは約２℃〜約８℃の温度で保存してもよい。様々な実施形態では、該処方は、約０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃または１０℃で保存してもよい。特定の実施形態では、該処方は約５℃で保存される。一般に、該処方はこのような範囲で安定であり、生物活性を保持している。上記各温度の中間的な範囲、例えば約２℃〜約１７℃も本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。
【０１２３】
本発明の処方は、多様な技法によるデリバリーに適当である。ある種の実施形態では、該処方は、静脈内や筋肉内などの非経口で投与される。更に、該処方のデリバリーは、脳（例えば、その抗体が血液脳関門を通過するように）または脊髄液を標的としてもよい。特定の実施形態では、該処方は静脈内に投与される。
【０１２４】
本発明の処方の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理状態、人間であるか動物であるかの患者種、投与される他の薬剤、および予防または治癒であるかの治療目的を含めた多数の異なる要因に応じて変化する。患者は普通人間であるが、トランスジェニック哺乳動物を含めた非ヒト哺乳動物も治療できる。治療投薬量は、安全性および有効性を最適化するために調節する必要がある。
【０１２５】
抗体で受動免疫するためには、例示的用量は、宿主体重に対して約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より普通には約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、用量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは２０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲内、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇもしくは約１５ｍｇ／ｋｇとし得る。例示的な他の実施形態では、用量は、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５、０．６、０．７、０．７５、０．８、０．９、１．０、１．２、１．２５、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．７５、１．８、１．９、または２．０ｍｇ／ｋｇ）、少なくとも０．７５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．２５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．７５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも２ｍｇ／ｋｇとすることができる。このような用量を毎日、隔日、毎週、または実験的分析から決定した他の任意の日程に従って、対象に投与することができる。例示的な治療では、多回用量の投与を長期間、例えば少なくとも６ヶ月に亘り行う。追加の例示的な治療計画では、２週毎に１回または毎月１回または３〜６ヶ月毎に１回投与を行う。例示的な投薬量予定では、連日１〜１０ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇ、隔日３０ｍｇ／ｋｇまたは毎週６０ｍｇ／ｋｇが含まれる。幾つかの実施形態では、結合特異性が異なる２種以上のモノクローナル抗体を同時に投与するが、その場合、各抗体の投与量は指示された範囲内にする。
【０１２６】
抗体は、普通多数の時機に投与する。個々の投薬間の間隔は、１週、１ヶ月または１年となることがある。患者中のＡβに対する抗体の血液濃度を測定することにより指示されるように、間隔が不規則になることもある。幾つかの方法では、血漿抗体濃度が１〜１０００μｇ／ｍｌとなるように投薬量を調節し、幾つかの方法では、２５〜３００μｇ／ｍｌとなるように調節する。あるいは、持続放出処方として抗体を投与することもでき、その場合は必要な投与頻度が減少する。投薬量および頻度は、患者中での抗体の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体の半減期が最も長く、その後ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体の半減期が続く。
【０１２７】
投薬量および投与頻度は、予防または治癒であるかの治療目的に応じて変化し得る。予防用途では、本抗体またはその混合物を含有する処方が、未だ疾患状態にない患者へその患者の抵抗力を高めるために投与される。このような量は「予防有効用量」と定義される。この用途では、その厳密な量は、患者の健康状態および全般的免疫状態にやはり依存するが、一般的には１用量当たり０．１〜２５ｍｇ、特に１用量当たり０．５〜２．５ｍｇの範囲である。相対的に低用量が、長期間に亘り相対的に低頻度間隔で投与される。一部の患者は生涯治療を受け続ける。
【０１２８】
治癒用途では、相対的に短い間隔での相対的に高い投薬量（例えば、１用量当たりの抗体が約０．５または１から約２００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５、１、１．５、２、５、１０、２０、２５、５０もしくは１００ｍｇ／ｋｇ）であり、より一般的に使用する投薬量は５〜２５ｍｇ／ｋｇ）が、疾患の進行が低下または停止するまで、好ましくは患者に疾患症候の部分的または完全な改善が見られるまで時々必要とされる。その後は、予防的な治療計画量を患者に投与することができる。
【０１２９】
投与の簡便性および投薬量の均一性のために、本発明の処方を単位剤形で提供することは有用となり得る。本発明の処方は、カプセルもしくはアンプルで、または多回用量容器で提供してもよい。該単位剤形は、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの処方剤を共用した有効成分の懸濁液、溶液または乳濁液を含めた、本明細書に記載の任意の処方を含んでもよい。例示的な実施形態では、該医薬単位剤形を静脈点滴バッグ（例えば、５０ｍｌ、１００ｍｌ、または２５０ｍｌ、または５００ｍｌの点滴バッグ）に添加するか、または適当な希釈剤、例えば滅菌した発熱物質非含有の水もしくは塩水によりそのバッグ中で復元した後、例えば静脈注射により患者に投与してもよい。幾種かの医薬単位剤形、特に凍結乾燥剤形では、静脈点滴バッグに添加する前に、適当な希釈剤による復元が必要となる場合がある。例示的な実施形態では、該医薬単位剤形は、本明細書に記載の処方を含んだ容器である。用語「容器」とは、対象物または液体を例えば保存のために入れる、または収容することができる物、例えば入れ物、受器または器を指す。例えば、該容器は１０ｍＬのガラス製Ｉ型チュービングバイアルであってもよい。一般に、該容器は処方の無菌性および安定性を維持すべきである。例えば、該バイアルは血清用止め栓で密閉し得るものである。更に、様々な実施形態で、該容器は、処方または有効成分の１００ｍｇ（例えば、単回使用のため）を抜き取れるような設計とすべきである。あるいは、該容器は、より多量の処方または有効成分に適したもの、その量が、例えば約１０ｍｇ〜約５０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、および約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約４０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約８０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１６０ｍｇ、またはその範囲もしくは間隔、例えば約１００ｍｇ〜約２００ｍｇであってもよい。上記各量の中間的な範囲、例えば約２５ｍｇ〜約１９５ｍｇも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および／または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。特定の実施形態では、該処方は単位剤形の液体として供給されることも多い。
【０１３０】
別の態様では、本発明は、医薬単位剤形（例えば、本明細書に開示した処方を含む容器）および使用説明を含んだキットを提供する。したがって、該容器および該キットは、多回使用向けに十分な処方を提供するような設計としてもよい。様々な実施形態では、該キットは更に希釈剤を含んでもよい。該希釈剤は、別個に、または合わせた形で賦形剤を含み得る。例えば、該希釈剤は、マンニトールなどの張度改良剤、ヒスチジンなどの緩衝剤、ポリソルベート８０などの安定剤、メチオニンなどの酸化防止剤、および／またはそれらの組合せを含んでもよい。該希釈剤は、当業者により必要と見なされる場合、他の賦形剤、例えば溶解防止剤を含んでもよい。
【０１３１】
本発明の追加の有用な実施形態は、「本発明の概要」と題する本出願の項に記載されている。
【０１３２】
本発明は、以下の実施例により更に例示されるが、そうした実施例を限定的なものと見なすべきではない。本願全体を通して引用した参考文献、特許および特許出願公開全ての内容、ならびにその図は、参照により本明細書に組み込まれている。
【実施例】
【０１３３】
実施例を通して、別途明記しない限り以下の材料および方法を使用した。
【０１３４】
材料および方法
全般的に本発明の実施では、別途指示しない限り、化学、分子生物学、組換えＤＮＡ法、免疫学（特に、例えば抗体法）の従来技法、およびポリペプチド調製の標準的技法を採用している。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），５１０，Ｐａｕｌ，Ｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｓｅｒｉｅｓ，１６９），ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｅｄ．，Ｉｒｌ  Ｐｒ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｌ．Ｐｒｅｓｓ，Ｐｕｂ．（１９９９）；およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９２）を参照されたい。
【０１３５】
実施例１
治療用ポリペプチドのクローニングおよび発現
この実施例では、治療用ポリペプチド、特に抗原結合性ポリペプチド、即ちＡβに結合できる抗体のクローニングおよび発現を記述する。
【０１３６】
本発明の方法による処方のための例示的抗体は３Ｄ６である。この３Ｄ６  ｍＡｂは、ＡβのＮ末端に特異的であり、アミロイド斑の食作用を媒介する（例えば、食作用を誘発する）ことが示された。３Ｄ６は、分泌ＡＰＰまたは全長ＡＰＰを認識せずに、アミノ末端アスパラギン酸を有するＡβ種だけを検出する。したがって、３Ｄ６は末端特異的な抗体である。該抗体３Ｄ６を産生するＲＢ９６  ３Ｄ６．３２．２．４と命名された細胞系は、ＡＴＴＣ受入番号ＰＴＡ−５１３０を有し、２００３年４月８日に寄託された。３Ｄ６抗体のクローニング、特性決定およびヒト化は、米国特許出願公開第２００３０１６５４９６Ａ１号に記載されている。
【０１３７】
手短に説明すると、抗Ａβペプチドマウスモノクローナル抗体（ｍ３Ｄ６と命名）のヒト化は、ｍ３Ｄ６軽鎖および重鎖可変領域（ＶＬおよびＶＨ）に対するＤＮＡ配列を逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）により単離することによって、実行された。ｍ３Ｄ６の決定したＶＬおよびＶＨ  ＤＮＡ配列に基づいて、相同性のヒトフレームワーク領域を同定した。ヒト化抗体がＡβペプチド抗原との相互作用能を保持することを保証するために、肝要なマウスＶＬおよびＶＨフレームワーク残基をヒト化３Ｄ６配列中に保持することにより、ヒトのκ軽鎖およびＩｇＧ１重鎖配列に関する定常ドメイン領域（ＣＤＲ）の全体構造を維持した。このプロセスにより同定した、ヒト化３Ｄ６のＶＬおよびＶＨ配列をコードするＤＮＡ配列（５‘シグナルペプチド配列および３‘イントロンスプライス−ドナー配列を含む）は、合成したオーバーラップＤＮＡオリゴヌクレオチドをアニーリング後、ＤＮＡポリメラーゼ補充反応をすることにより生成した。ヒト化可変領域配列の各々の完全性は、ＤＮＡ配列決定により実証された。図１は、ｈ３Ｄ６ｖ２と名付けた例示的なヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体の予測構造の概略的描写を示す。図２では、ｈ３Ｄ６ｖ２軽鎖および重鎖の完全なアミノ酸配列を同定している。
【０１３８】
ヒト化３Ｄ６抗体は、抗Ａβ抗体軽鎖および重鎖遺伝子をコードする発現プラスミドによる、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞系のトランスフェクションにより発現した。該抗体を発現するＣＨＯ細胞は、標準的なメトトレキセート系薬物選択／遺伝子増幅操作を用いて分離した。所望の繁殖性および増殖表現型を示すクローンＣＨＯ細胞系を選択し、使用することにより、動物またはヒト由来成分を含まない化学組成の明確な培地を用いて抗体産生細胞系を樹立した。
【０１３９】
実施例２
大規模バイオリアクターを用いた治療用ポリペプチドの調製
この実施例では、治療用ポリペプチド、特に抗Ａβ抗体の調製を記述する。
【０１４０】
抗Ａβ抗体を安定に発現するクローン細胞の開始培養物の融解で、このポリペプチド製造プロセスを開始した。細胞は、動物またはヒト由来タンパク質を含まない化学組成の明確な培地を用いて培養した。次いで培養物を増殖させ、シード用バイオリアクターに接種するために使用し、更にそれを使用して生産用バイオリアクターの多重サイクルに接種した。該生産用バイオリアクターは、フェドバッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）方式で運転した。生産サイクル終了時に、収穫ならし培地を精密ろ過により清澄化し、更なる下流処理に備えた。
【０１４１】
精製プロセスは、標準的なクロマトグラフィー工程とその後のろ過から構成された。精製済み抗体は、限外ろ過により濃縮し、更にポリソルベート８０を含まない処方用緩衝液中にダイアフィルトレーションを行った。所望により、ポリソルベート８０（植物性）を限外ろ過／ダイアフィルトレーション残留液プールに添加した後、細菌残留ろ過を行ってもよい。該薬物は、−８０℃に凍結保存し、本明細書に記載の安定化液体処方を含めた医薬品を更に製造するために、保持した。
【０１４２】
実施例３
安定化液体ポリペプチド処方の調製
この実施例では、安定化液体ポリペプチド処方の典型的な組成物について記述する。
【０１４３】
抗体医薬品を２バッチ製造した。最初のバッチは、薬物を調合して、１ｍＬ当たり２０ｍｇの抗Ａβ抗体活性物質、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、４％のマンニトール、０．００５％のポリソルベート８０を含み、ｐＨ６の動物・ヒトタンパク質非含有処方とすることにより、製造した。該医薬品は、抗Ａβ抗体活性物質１００ｍｇ／バイアルでバイアル中に無菌的に充填した。最終医薬品バイアルは、防腐剤を含んでおらず、単回使用だけを意図していた。
【０１４４】
医薬品の第２バッチは、ポリソルベート８０を含まない処方用緩衝液を用いて、類似の方法により製造した。
【０１４５】
実施例４
安定化液体ポリペプチド処方の分析
この実施例では、様々な安定化液体ポリペプチド処方の分析について記述する。
【０１４６】
該処方の安定性、および特に物理化学的完全性（凝集、脱アミド化など）が、当分野で周知の以下の方法：外観；ｐＨ；タンパク質濃度（Ａ２８０）；生物活性試験を一目的としたＥＬＩＳＡ；凝集試験を一目的としたドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）；凝集および安定性一般の試験を一目的とした、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）；アミノ化および安定性一般の試験を一目的とした、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）；およびペプチドマッピングにより評価した。これらの方法では、様々な温度の試験条件下でタンパク質の回収率および完全性を評価した。
【０１４７】
様々な時点での該処方の品質を決定するために、処方の外観分析を行った。分析は、透明性、色合いおよび微粒子の有無について視覚的検査に基づいて行った。例えば、乳白色度を基準懸濁液から見て分析した。本発明に従って作製したポリソルベート８０入りおよびなしの処方の外観分析で、各々−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で、各々以下の時点：開始時、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月および１２ヶ月で保存したとき、両処方とも許容し得ることが判明した。
【０１４８】
ｐＨ分析では、処方ｐＨの約５．５〜約６．５の許容範囲内での維持を確定しようとした。本発明に従って作製したポリソルベート８０入りおよびなしの処方のｐＨ分析で、各々−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で、各々以下の時点：開始時、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月および１２ヶ月で保存したとき、両処方とも許容し得ることが判明した。全般的に、ｐＨが５．８未満または６．２超の範囲になることはなかった。
【０１４９】
Ａ２８０測定によるタンパク質濃度分析は、処方タンパク質濃度の約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの許容範囲内での維持を確定するために行った。本発明に従って作製したポリソルベート８０入りおよびなしの処方のタンパク質濃度分析で、各々−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で、各々以下の時点：開始時、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月および１２ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。５℃、２５℃および４０℃で、３ヶ月の時点で保存したとき、ポリソルベート８０なしの処方に２３ｍｇ／ｍｌをわずかに超える範囲のタンパク質濃度があったことを別とすれば、その他の場合のタンパク質濃度は許容範囲内にあった。したがって、タンパク質濃度分析により、特にポリソルベート８０入り処方では、加速条件においてもタンパク質の検知可能な損失は生じないことが判明した。その上、タンパク質濃度は、全般的に、開始時点後に有意な時間または温度依存性の変化を示すことはなかった。
【０１５０】
生物活性の維持は、部分的にＥＬＩＳＡ法により試験された。生物活性は、許容活性を≧２５００ＢＵ／ｍｇまたは５０％（即ち、５０００ＢＵ／ｍｇが１００％に等しい）とする、ＢＵ／ｍｇとして分析した。本発明に従って作製したポリソルベート８０入りおよびなしの処方のＥＬＩＳＡ分析で、各々−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で、各々以下の時点：開始時、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月および１２ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。４０℃で保存したとき、両処方の１２ヶ月時点で生物活性が５０％よりわずかに低かったことを別とすれば、その他の場合の生物活性は許容範囲内にあった。
【０１５１】
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、凝集、純度および安定性一般の試験として行った。二塩基性リン酸ナトリウムを緩衝剤とする移動相クロマトグラフィーを用いた条件下でのＳＥＣ−ＨＰＬＣ実験では、高分子量生成物および低分子量生成物の比率（％）と比較して、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析で≧９０％のＩｇＧ単量体が同定された場合、その処方が許容し得ることを示した。本発明に従って作製したポリソルベート８０入りおよびなしの処方のＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析で、各々−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で、各々以下の時点：開始時、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月および１２ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。４０℃で６ヶ月以後の各時点で保存したとき、両処方の単量体比率（％）が９０％未満の範囲にあった（その場合、各時点の両処方に少なくとも１０％より高い低分子量生成物が、分析により同定された）ことを別とすれば、その他の場合の単量体比率（％）は許容範囲内にあった。ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析により、高分子量および低分子量のプロファイルは、ポリソルベート入りおよびなしの試料において経時的に異なっていたが、抗体の単量体は、例えば処方を５℃で保存したときの１２ヶ月時点で、概ね一定に留まっていることが全般的に判明した。
【０１５２】
ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析は、アミノ化および安定性一般の試験として行った。ＮａＣｌを緩衝剤とする移動相クロマトグラフィーを用いた条件下でのＣＥＸ−ＨＰＬＣ実験では、参照標準プロファイルと同じ程度または異なる程度と分析される、主要ピークの溶出プロファイルおよび保持時間が得られた。本発明に従って作製したポリソルベート８０入りおよびなしの処方のＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析で、各々−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で、各々以下の時点：開始時、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月および１２ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。４０℃で３ヶ月以後の各時点で保存したとき、主要ピークの溶出プロファイルおよび保持時間が、両処方について異なる程度であったことを別とすれば、その他の場合の主要ピークは基準ピークと同じ程度であった。
【０１５３】
一般的に、５℃で保存したポリソルベート８０入り処方の分析では、以下の特に重要な結論が得られる：１）乳白度、ｐＨ、ＥＬＩＳＡ、ＣＥＸ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ  ＰＡＧＥの分析は全て、該処方の変化が９ヶ月に亘り最小限であることを示した；２）５℃で保存した処方は、その加速試料より９ヶ月経過基準試料に類似しているようであった；３）ペプチドマッピングは５℃で変化を示した；ならびに４）５℃でのＳＥＣ−ＨＰＬＣ傾向データから、少なくとも１７．２ヶ月の安定性が予測された（図６を参照）が、カラム、機器および緩衝液の変動性を除外すると、そのデータから３０ヶ月超の安定性が予測された（図７を参照）。その上、２５℃で保存したポリソルベート８０入り加速試料は、９ヶ月での全規格に合格した（図４を参照）。
【０１５４】
更に、５℃で保存したポリソルベート８０なしの処方の分析では、以下の特に重要な結論が得られる：１）乳白度、ｐＨおよびＥＬＩＳＡの分析は全て、該処方の変化が９ヶ月に亘り最小限であることを示した；２）ＣＥＸ−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ  ＰＡＧＥの結果は、９ヶ月での基準試料または−８０℃の対照と同等程度の知見を示した；３）ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は９ヶ月に亘って小さな変化を示したが、加速温度では変化がより顕著であった；ならびに４）ＳＥＣ−ＨＰＬＣ傾向データから、測定に変動性の問題があっても、少なくとも１８ヶ月の安定性が予測された（図８を参照）。
【０１５５】
図３〜５は、本発明に従って作製し、それぞれ５℃、２５℃および４０℃で保存した処方（ポリソルベート８０入りおよびなし）に対する保存寿命予測のグラフ表示である。一般的に、図３〜５は、本発明の処方の保存温度が高いほど、予測される保存寿命は減少することを示している。特に図３は、処方を５℃で保存するとき、その処方の予測保存寿命は少なくとも１８ヶ月であることを示している。図４は、室温（２５℃）で処方を保存すると、予測保存寿命が約１２ヶ月に減少するような影響を受ける恐れがあることを示している。更に図５は、４０℃で処方を保存すると、予測保存寿命が約４ヶ月に減少するような影響を受ける恐れがあることを明示している。その上更に、図９は、例えば５℃、１２ヶ月では、ＰＳ８０により高分子量副成物、例えばポリペプチド凝集体の存在量が減少することを示している。
【０１５６】
実施例５
酸化防止剤としてメチオニンを使用した際の安定性試験
この実施例では、酸化防止剤、特にメチオニンで安定化した各種の液体ポリペプチド処方の分析について記述する。
【０１５７】
治療用抗体処方における抗体の安定性の維持に対するメチオニンの効果を決定するために、試験を行った。４種の抗体（抗ＣＤ２２  ＩｇＧ４抗体）試料：２０ｍＭのコハク酸を含み、ｐＨ６．０の抗体処方；２０ｍＭのコハク酸および１０ｍＭのメチオニンを含む抗体処方；２０ｍＭのコハク酸および０．０１％のＰＳ８０を含む抗体処方；ならびに２０ｍＭのコハク酸、１０ｍＭのメチオニンおよび０．０１％のＰＳ８０を含む抗体処方、に関して６ヶ月に亘り様々な温度でＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析を行った。その結果、一般に、メチオニンは、高分子量（ＨＭＷ）形成、例えば凝集体の形成を所望通りに減少させることが示された。更に、メチオニンはＨＭＷの比率（％）の温度依存性増加を減少させる（図１０を参照）。
【０１５８】
更に、以下の４種の抗体（抗Ｂ７．２  ＩｇＧ２抗体）試料：（１）抗体、１０ｍＭのヒスチジンおよび１５０ｍＭのＮａＣｌを含む試料；（２）抗体、１０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０１％のＰＳ８０を含む試料；（３）抗体、１０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび１０ｍＭのメチオニンを含む試料；ならびに（４）抗体、１０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのメチオニンおよび０．０１％のＰＳ８０を含む試料、に関して６週間に亘り様々な温度（５℃および４０℃）でｐＨ安定性試験（ｐＨ５．８、６．０および６．２で）を行った。ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析を行った。その結果、メチオニンは、示したｐＨ範囲に亘る副生物（例えば、ＨＭＷ副生物）形成比率（％）の温度依存性増加を減少させることが実証された（図１１を参照）。図１１に示すように、メチオニンを含んだ試料は、４０℃、６週間維持したとき少量の凝集を示したが、それは、５℃、６週間維持した試料の場合と同様であった。
【０１５９】
実施例６
示差走査熱量測定法を用いた、ポリペプチドの安定化液体処方に関する賦形剤分析
この実施例では、示差走査熱量測定法を用いた、ポリペプチドの様々な液体処方に関する賦形剤分析について記述する。
【０１６０】
タンパク質薬物処方の第一目標は、タンパク質を元のままの生物活性な形態で安定化させることである。通常これは、各種賦形剤を基本処方中でスクリーニングし、その分子の分子量および活性に対する効果をモニターすることによって実現できる。このようなパラメーターは安定性の指標となる。安定性の別の測定項目は、多様な生物物理的技法を用いてモニターできる熱変性である。一般に、タンパク質安定度の増加は、融解、変性または分解の高い温度によるものとされてきた。したがって、例示的な抗原結合性ポリペプチド、特にＩｇＧ１モノクローナル抗体の熱特性を、ＶＰキャピラリー示差走査熱量計を用いて各種賦形剤の存在下でモニターした。具体的には、各種賦形剤と共に１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）を含有する処方について、見掛けＴｍを決定した。幾種かの賦形剤は、熱安定性を増減させることが示された。タンパク質安定度の増加は高い融解温度によるものとされてきたので、対照のＴｍ２／Ｔｍ３値（各々７４．９℃および８３．４℃）と比較して高いＴｍ２またはＴｍ３をもたらす試料中の賦形剤は、特に望ましい賦形剤と見なされた（下記の表１を参照）。
【０１６１】
したがって、グルコース（４％および１０％の濃度で処方）、スクロース（４％および１０％の濃度で処方）、ソルビトール（４％および１０％の濃度で処方）およびマンニトール（４％および１０％の濃度で処方）などの賦形剤は、液体ポリペプチド処方、特に抗体ＩｇＧ処方の安定化に特に良好に機能すると結論を下した。
【０１６２】
【表１】
2008528638.tif 000002
＊対照（１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ６．０）では、２点の遷移、Ｔｍ２およびＴｍ３が認められた。もっと早期の遷移（Ｔｍ１）は幾つかの賦形剤の存在下で見られた。
【０１６３】
同等の実施形態
当業者であれば、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態と同等な多数の実施形態を認識され、または単に日常的な実験の実施でそうした形態を確認できよう。そのような同等な形態は、前記の特許請求の範囲によって包含されることを意図している。
【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】ＩｇＧ抗体の予測構造と、連鎖内および連鎖間ジスルフィド結合、糖鎖付加部位（六角形記号）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、フレームワーク領域（網掛け）ならびに定常領域の概略的描写を示す図である。
【図２】ヒト化３Ｄ６第２型（ｈｕ３Ｄ６．ｖ２）抗Ａβ抗体の軽鎖および重鎖、配列番号１および配列番号２それぞれの完全なアミノ酸配列の特定を示す図である。軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、各々残基位置２４〜３９番、５５〜６１番、および９４〜１０２番にある（上図）。重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、各々残基位置４０〜４４番、５０〜６５番、および９９〜１０８番にある（下図）。予測される分子内ジスルフィド結合は、当該システイン残基の連結で示されている。分子間ジスルフィド結合を形成すると予想されるシステインは、下線で示され、連結の存在が示されている。抗体重鎖のＮ連結糖鎖付加コンセンサス部位は、残基位置２９９〜３０１番に太字イタリック体で示されている（下図）。予測される重鎖Ｃ末端リジンは括弧で示されている。
【図３】本発明により作製し、５℃で保存した抗体処方（ポリソルベート８０（ＰＳ８０）含有および非含有）の予測保存寿命をグラフに示す図である。
【図４】本発明により作製し、２５℃で保存した抗体処方（ＰＳ８０含有および非含有）の予測保存寿命をグラフに示す図である。
【図５】本発明により作製し、４０℃で保存した抗体処方（ＰＳ８０含有および非含有）の予測保存寿命をグラフに示す図である。
【図６】本発明により作製し、５℃で保存したＰＳ８０含有処方の予測分解度をグラフに示す図である。
【図７】本発明により作製し、５℃で保存したＰＳ８０含有処方のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を、試験のばらつきを最小化するように再処理したグラフを示す図である。
【図８】本発明により作製し、５℃で保存したＰＳ８０非含有処方の予測分解度をグラフに示す図である。
【図９】ＰＳ８０が存在すると単量体抗体プロファイルが変化しないまま、安定化ポリペプチド処方内に認められる副生物が、高分子量種から低分子量種へ変化することを示したクロマトグラムを示す図である。
【図１０】遊離メチオニンなどの酸化防止剤を添加すると、ＩｇＧ４含有ポリペプチド処方中での不要な副生物、特に高分子量ポリペプチド凝集体の形成が抑制されることをグラフに示す図である。
【図１１】遊離メチオニンなどの酸化防止剤を添加すると、ＩｇＧ２含有ポリペプチド処方中での不要な副生物、特に高分子量ポリペプチド凝集体の形成が抑制されることをグラフに示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年10月1日(2007.10.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2008528638000001.app
【国際調査報告】
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