(57)【要約】  本発明は、新規3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノネン誘導体およびこれらのエナンチオマー、並びに医薬組成物の製造における活性成分としてのこれらの使用に関する。また、本発明は、少なくとも1つの式（I）または（I’）の化合物を含む医薬組成物および特にレニン阻害剤としてのこれらの使用を含む関連した側面にも関する。  本発明のレニン阻害剤は、非ペプチド性の性質で、低分子量であり、長期作用を有し、かつ組織レニン-キマーゼ系が活性化されて、腎臓、心臓、および血管の再造形、アテローム性動脈硬化症、並びにおそらく再狭窄などの病態生理学的に変化した局所機能を引き起こす可能性のある血圧調節の範囲を越えた徴候において活性な、式（I）および（I'）の経口活性レニン阻害剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1R*,5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミドと命名される式（I）の化合物、および光学的に純粋なエナンチオマーまたはエナンチオマーの混合物；並びにこれらの塩、溶媒錯体および形態型：
【化１】
2008528478.tif 000007
【請求項２】
式（I’）によって表され、かつ(1R,5S)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミドと命名される請求項1に記載の式（I）の化合物のエナンチオマー、並びにこれらの塩、溶媒錯体および形態型
【化２】
2008528478.tif 000008
【請求項３】
請求項1もしくは2に記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩と薬学的に許容されるキャリア物質とを含む医薬組成物。
【請求項４】
医薬として使用するための、請求項1もしくは2に記載の化合物もしくはこれらの薬学的に許容される塩または請求項3に記載の組成物。
【請求項５】
高血圧症、鬱血性心不全、肺性高血圧、腎機能不全、腎虚血、腎不全、腎線維症、心不全、心肥大、心臓線維症、心筋虚血症、心筋症、糸球体腎炎、腎疝痛、腎症、脈管障害および神経障害などの糖尿病によって生じる合併症、緑内障、眼内圧上昇、アテローム性動脈硬化症、血管形成術後の再狭窄、血管または心臓外科手術後の合併症、勃起障害、高アルドステロン症、肺線維症、強皮症、不安症、認知障害、免疫抑制剤で治療の合併症、並びにレニン-アンジオテンシン系に関連があるその他の疾患から選択される疾患の治療および／または予防のための医薬組成物の製造のための、請求項1もしくは2に記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規式（I）の化合物および式（I’）のこれらのエナンチオマーに関する。また、本発明は、化合物の製造のための方法、式（I）または（I’）の少なくとも1つの化合物を含む医薬組成物、並びに特に心血管イベントおよび腎機能不全におけるレニン阻害剤としてのこれらの使用を含む関連した側面に関する。
【背景技術】
【０００２】
レニン-アンジオテンシン系（RAS）において、生物学的に活性なアンジオテンシンII（Ang II）は、2段階機構によって産生される。高度に特異的な酵素レニンは、アンジオテンシノーゲンを切断してアンジオテンシンI（Ang I）とし、次いでこれをそれほど特異的ではないアンジオテンシン変換酵素（ACE）によってさらにAng IIにプロセスする。AngIIは、AT1およびAT2と呼ばれる少なくとも2つの受容体サブタイプに対して作用することが知られている。AT1は、Ang IIの既知の機能のほとんどを伝達するようであるが、AT2の役割は、いまだ不明である。
【０００３】
RASの調整は、心臓血管疾患の治療において主な進歩を意味する。ACE阻害剤およびAT1遮断薬は、高血圧症を治療するために承認されている（非特許文献１；非特許文献２）。加えて、ACE阻害剤は、腎保護のために（非特許文献３；非特許文献４）、鬱血性心不全（非特許文献５；非特許文献６）および心筋梗塞（非特許文献７）の予防に使用されている。
【０００４】
レニン阻害剤を開発する理論的根拠は、レニンの特異性である（非特許文献８）。レニンに対する既知の唯一の基質は、アンジオテンシノーゲンであり、これはレニンによってのみプロセスされ得る（生理学的条件下で）。対照的に、ACEは、Ang Iの他にブラジキニンも切断することができ、セリンプロテアーゼのキマーゼによってバイパスされ得る（非特許文献９）。したがって、患者において、ACEを阻害することにより、ブラジキニン蓄積を引き起こし、咳（5〜20%）および致命的となる可能性のある血管神経性浮腫（0.1〜0.2%）を生じさせる（非特許文献１０）。キマーゼは、ACE阻害剤によって阻害されない。したがって、ACE阻害剤で治療した患者でも、Ang IIの形成が依然として起こり得る。一方、AT1受容体の遮断（たとえば、ロサルタンによる）は、AT1受容体の遮断によってその濃度が有意に増大されたAng IIに対して、その他のAT受容体サブタイプ（たとえば、AT2）を過剰露出させる。要約すると、レニン阻害剤は、RASを遮断する際の有効性に関して、また安全の側面において、ACE阻害剤およびAT1遮断薬とは異なる薬学的プロフィールを示すことが予想される。
【０００５】
レニン阻害剤は、これらのペプチド模倣特性のために経口活性が不十分であるので、限られた臨床経験（非特許文献１１；非特許文献１２）が得られただけである。いくつかの化合物の臨床開発は、この問題と共に製品の高価格を理由として中止されている。4つのキラル中心を含む1つの化合物のみが、臨床試験に入っている（非特許文献１３；非特許文献１４）。したがって、優れた経口生物学的利用能および長い作用期間をもつレニン阻害剤が必要とされる。最近、高いインビトロ活性を示す最初の非ペプチドレニン阻害剤が記述されている（非特許文献１５；特許文献１；非特許文献１６）。しかし、これらの化合物の開発状況は不明である。
【０００６】
【特許文献１】国際公開第97/09311号パンフレット
【非特許文献１】GWaeber B. et al., “The renin-angiotensin system： role in experimental and human hypertension”, in Birkenhager W. H., Reid J. L. (eds)： Hypertension, Amsterdam, Elsevier Science Publishing Co, 1986, 489-519
【非特許文献２】Weber M. A., Am. J. Hypertens., 1992, 5, 247S
【非特許文献３】Rosenberg M. E. et al., Kidney International, 1994, 45, 403
【非特許文献４】Breyer J. A. et al., Kidney International, 1994, 45, S156
【非特許文献５】Vaughan D. E. et al., Cardiovasc. Res., 1994, 28, 159
【非特許文献６】Fouad-Tarazi F. et al., Am. J. Med., 1988, 84 (Suppl. 3A), 83
【非特許文献７】Pfeffer M. A. et al., N. Engl. J. Med., 1992, 327, 669
【非特許文献８】Kleinert H. D., Cardiovasc. Drugs, 1995, 9, 645
【非特許文献９】Husain A., J. Hypertens., 1993, 11, 1155
【非特許文献１０】Israili Z. H. et al., Annals of Internal Medicine, 1992, 117, 234
【非特許文献１１】Azizi M. et al., J. Hypertens., 1994, 12, 419； Neutel J. M. et al., Am. Heart, 1991, 122, 1094
【非特許文献１２】Kleinert H. D., Cardiovasc. Drugs, 1995, 9, 645
【非特許文献１３】Rahuel J. et al., Chem. Biol., 2000, 7, 493
【非特許文献１４】Mealy N. E., Drugs of the Future, 2001, 26, 1139
【非特許文献１５】Oefner C. et al., Chem. Biol., 1999, 6, 127
【非特許文献１６】Marki H. P. et al., Il Farmaco, 2001, 56, 21
【発明の開示】
【０００７】
本発明は、非ペプチド性の性質で、低分子量のレニン阻害剤に関する。長期作用を有し、かつ組織レニン-キマーゼ系が活性化されて、腎臓、心臓、および血管の再造形、アテローム性動脈硬化症、並びにおそらく再狭窄などの病態生理学的に変化した局所機能を引き起こす可能性のある血圧調節の範囲を越えた徴候において活性な、式（I）および（I’）の経口活性レニン阻害剤を記述する。
【０００８】
特に、本発明は、構造式（I）の新規化合物、および光学的に純粋なエナンチオマーまたはラセミ化合物などのエナンチオマーの混合物；並びにこれらの薬学的に許容される塩、溶媒錯体および形態型に関する：(1R*,5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミド;
【化１】
2008528478.tif 000002
【０００９】
好ましいエナンチオマーは、式（I’）によって表されるものである：(1R,5S)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミド;
【化２】
2008528478.tif 000003
本開示内において、化合物、塩、医薬組成物、疾患その他のために複数形が使用される場合、これは、また、単一の化合物、塩その他も意図する。
【００１０】
式（I）の化合物に対するいずれの言及も、適切かつ好都合なように、光学的に純粋なエナンチオマー、またはラセミ化合物などのエナンチオマーの混合物、並びにこのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）および溶媒錯体（水和物を含む）、および形態型も言及するものとして理解されるが、式（I’）の化合物に対するいずれの言及も、適切かつ好都合なように、このような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）および溶媒錯体（水和物を含む）、並びに形態型も言及するものとして理解される。
【００１１】
薬学的に許容される塩という表現には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、クエン酸、ギ酸、酢酸、マレイン酸、酒石酸、フマル酸、安息香酸、パルモ酸（palmoic acid）、ステアリン酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸その他のような無機酸または有機酸との生体に対し有毒でないいずれかの塩を包含する。ビス-メタンスルホン酸塩が、特に好ましい。薬学的に許容される塩のその他の例については、"Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217を参照することができる。
【００１２】
式（I）の化合物は、相対立体化学（1R*,5S*）を有する2つの相互依存的不斉炭素原子を含み、光学的に純粋なエナンチオマーの(1R,5S)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミド（すなわち、好ましい式（I’）の化合物）および(1S,5R)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミドの形態で、またはラセミ化合物などの2つのエナンチオマーの混合物として製造してもよい。本発明は、これらの形態の全てを包含する。混合物は、それ自体既知の様式で、すなわちカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、HPLCまたは結晶化によって分離してもよい。同様に酸性部分を有するエナンチオマー的に純粋な物質を使用して、最終化合物またはいずれの中間化合物のラセミ化合物の分割も可能である。たとえば、スキーム1の化合物1と共に酒石酸を使用して、このような分割が可能である。
【００１３】
式（I）および（I’）の化合物は、レニン-アンジオテンシン系の調節不全と関連する疾患、特に高血圧症、鬱血性心不全、肺性高血圧、腎機能不全、腎虚血、腎不全、腎線維症、心不全、心肥大、心臓線維症、心筋虚血症、心筋症、糸球体腎炎、腎疝痛、腎症、脈管障害および神経障害などの糖尿病によって生じる合併症、緑内障、眼内圧上昇、アテローム性動脈硬化症、血管形成術後の再狭窄、血管もしくは心臓外科手術後の合併症、勃起障害、高アルドステロン症、肺線維症、強皮症、不安症、認知障害、免疫抑制剤で治療の合併症、並びにレニン-アンジオテンシン系に関連があるその他の疾患などの、または関連した疾患の治療および／または予防のために有用である。
【００１４】
式（I）および（I’）の化合物は、特に高血圧症、鬱血性心不全、肺性高血圧、腎機能不全、腎虚血、腎不全、腎線維症、心不全、心肥大、心臓線維症、心筋虚血症、心筋症、腎症、脈管障害および神経障害などの糖尿病によって生じる合併症の治療および／または予防のために有用である。
【００１５】
一つの態様において、本発明は、レニン-アンジオテンシン系の調節不全と関連する疾患の治療または予防のための方法に、特に上述の疾患の治療または予防のための方法に関し、前記方法は、式（I）または（I’）の化合物の薬学的に活性な量をヒトまたは動物に対して投与することを含む。
【００１６】
本発明のさらなる側面は、式（I）または（I’）の化合物と薬学的に許容されるキャリア物質とを含む医薬組成物に関する。これらの医薬組成物は、上述の疾患の治療および／または予防のために使用してもよい。医薬組成物は、経腸、非経口、または局所的投与のために使用することができる。たとえば、これらはたとえば錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬および軟ゼラチンカプセル、溶液、乳剤、もしくは懸濁液の形態で経口的に、たとえば坐薬の形態で直腸に、たとえば注射溶液もしくは輸液の形態で非経口的に、またはたとえば軟膏、クリームもしくは油の形態で局所的に投与することができる。
【００１７】
本発明は、上述の疾患の治療および／または予防のための医薬組成物の製造のための、式（I）または（I’）の化合物の使用にも関する。
【００１８】
医薬組成物の製造は、当業者になじみがあるであろういずれの様式で（たとえば、Mark Gibson, Editor, Pharmaceutical Preformulation and Formulation, IHS Health Group, Englewood, CO, USA, 2001； Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Philadelphia College of Pharmacy and Scienceを参照されたい）、記述された式（I）もしくは（I’）の化合物またはこれらの薬学的に許容される酸付加塩を、任意にその他の治療に役立つ物質と組み合わせて、適切な無毒の不活性な治療適合性の固体または液体キャリア物質、および必要に応じて、通常の薬学的アジュバントと共にガレノス投与形態にすることによって行うこともできる。
【００１９】
適切なキャリア物質には、無機的キャリア物質だけでなく、有機的キャリア物質もある。したがって、たとえば、乳糖、コーンスターチまたはこれらの誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩を錠剤、コーティング錠、糖衣錠および硬ゼラチンカプセルのためのキャリア物質として使用することができる。軟ゼラチンカプセルのために適したキャリア物質は、たとえば、植物油、蝋、脂肪、並びに半固体ポリオールおよび液体ポリオールである（しかし、活性成分の性質に応じて、軟らかいゼラチンカプセルの場合には、キャリアは必要とされない）。溶液およびシロップの製造のために適したキャリア物質は、たとえば水、ポリオール、ショ糖、転化糖などである。注射のために適したキャリア物質は、たとえば、水、アルコール、ポリオール、グリセロールおよび植物油である。坐薬のために適したキャリア物質は、たとえば、天然油または硬化油、蝋、脂肪および半液体または液体ポリオールである。局所製剤のために適したキャリア物質は、グリセリド、半合成および合成グリセリド、硬化油、液体蝋、流動パラフィン、液体脂肪アルコール、ステロール、ポリエチレングリコールおよびセルロース誘導体である。
【００２０】
通常の安定剤、防腐剤、湿潤および乳化剤、粘稠度-改良剤、香味-改良剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝物質、可溶化剤、着色剤、並びにマスキング剤および抗酸化剤も、薬学的アジュバントとして考慮される。
【００２１】
式（Ｉ）および（I’）の化合物の投薬量は、制御される疾患、患者の年齢および個人的条件、並びに投与様式に応じて幅広い範囲内で変化することができ、もちろん、それぞれの具体的症例の個々の要求にあわせることとなる。
【００２２】
好ましい態様において、この量は、1日あたり2mg〜1000/mgの間で構成される。
【００２３】
特定の好ましい態様において、この量は、1日あたり1mg〜500/mgの間で構成される。
【００２４】
特により好ましい態様において、この量は、1日あたり5mg〜200/mgの間で構成される。
【００２５】
本発明のもう一つの側面は、式（I）または（I’）の化合物を構成する医薬組成物の製造のための方法に関する。前記方法によれば、式（I）および（I’）の1つまたは2つの活性成分を、それ自体既知の様式で不活性賦形剤と混合させる。
【００２６】
また、式（I）および（I’）の化合物または上述の医薬組成物は、ACE-阻害剤、中性エンドペプチダーゼ阻害剤、アンジオテンシンII受容体アンタゴニスト、エンドセリン受容体アンタゴニスト、血管拡張薬、カルシウム拮抗薬、カリウム活性化因子、利尿剤、交感神経抑制薬、β-アドレナリン作動性アンタゴニスト、α-アドレナリン作動性アンタゴニストおよび／またはアルドステロンアンタゴニスト、11β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ1型阻害剤および可溶性グアニル酸シクラーゼ活性化因子などの上述の疾患の予防または治療のために有益なその他の薬剤などのその他の薬理活性化合物との組み合わせに有用である。
【００２７】
また、本発明は、インビボにおいて式（I）または（I’）の化合物それ自体に変換する式（I）または（I’）の化合物のプロドラッグに関する。したがって、式（I）または（I’）の化合物についてのいずれもの言及も、適切かつ好都合な限り、式（I）または（I’）の化合物の対応するプロドラッグをもいうことが理解される。
【００２８】
式（I）および（I’）の化合物は、下記に概説した方法によって、実施例に記述した方法によって、または類似の方法によって製造することができる。
【００２９】
本明細書に記述した式（I）および（I’）の化合物の合成は、多くのその他の変形例のうちの1つの可能性のある合成である。その他の合成経路および方法論が、当技術分野の当業者に明らかであろう。
【００３０】
ビシクロノナン誘導体1（スキーム1）は、以前に記述されたように（国際公開第2003/093267号）ラセミ化合物として製造することができる。ビニルトリフラート2の製造は、水素化ナトリウムおよびN-フェニル-ビス（トリフルオロメタンスルホンイミド）を使用して進行する。ビシクロ系2とブロモフェニル誘導体6との間のネギシ-カップリングにより、ジアザビシクロネン3を導く。ブロモフェニル誘導体6は、4-ブロモフェノールから、2-ブロモエタノール（化合物4）でのアルキル化、次いでヒドロキシル基のヨウ素（化合物5）への変換および最後に化合物6に対するアリールエーテル形成を経て、3工程で製造される。次いで、ビシクロノナン3は、ビシクロノナン7へと別の場所を保護する（transprotect）。強塩基性条件下でのエチルエステルのけん化により、カルボン酸誘導体8および9の混合物を導く。
【００３１】
スキーム1
【化３】
2008528478.tif 000004
【００３２】
化合物8および9の混合物は、分離せず、還元アミノ化（スキーム2）を使用して一段階で製造されるアミン誘導体11とのアミド結合工程にさらに直接使用する。アミドカップリング生成物10が得られる。両方のBoc-保護基の切断により、一般式（I）の化合物を導く。
【００３３】
スキーム2
【化４】
2008528478.tif 000005
【００３４】
エナンチオ選択的合成：
本発明の化合物は、2つのキラル中心を含むが、これらは互いに独立していない。今までに示された合成法により、ラセミ化合物を導いた。ラセミ化合物は、キラルHPLC-カラムを使用して、式（I’）およびそのエナンチオマーの化合物に分離することができる。また、両エナンチオマーは、国際公開第2003/093267号に記載されているように、エナンチオ選択的アシル化（Majewski M., Lasny R., J. Org. Chem., 1995, 60, 5825）を使用して、化合物12（スキーム3）のようなメソ-ビシクロノナン誘導体から選択的に製造されるであろう。もう一つの変形例は、キラル有機酸誘導体を使用するラセミ化合物の分割である。
【００３５】
スキーム3
【化５】
2008528478.tif 000006
【００３６】
以下の実施例は、さらに詳細に本発明を例証するために役立つ。しかし、これらは、その範囲を任意の様式に限定することは意図されない。
【００３７】
実施例
一般所見
化合物は、少なくともLC-MSおよび1H-NMRによって特徴づけてある。LC-MSデータのみを本明細書に示してある（Zorbax Sb-Aquaカラム、5μm、4.6×50 mm；溶出剤A：0.04%のトリフルオロ酢酸の水溶液；溶出剤B：アセトニトリル； 1.5分にわたって勾配5%→100%の溶出剤B、流速1ml／分）。
【００３８】
略語（本明細書に使用したとおり）
ACE  アンジオテンシン変換酵素
Ang  アンジオテンシン
aq.  水性の
Boc  tert-ブチルオキシカルボニル
BSA  ウシ血清アルブミン
BuLi  n-ブチルリチウム
DIPEA  ジイソプロピルエチルアミン
DMAP  4-N,N-ジメチルアミノピリジン
DMSO  ジメチルスルホキシド
EDC.HCl  エチル-N,N-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドハイドロクロライド
EIA  酵素免疫測定法
ES+  エレクトロスプレー、陽イオン化
Et  エチル
EtOAc  酢酸エチル
EtOH  エタノール
FC  フラッシュクロマトグラフィー
h  時間
HOBt  ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC  高速液体クロマトグラフィー
LC-MS  液体クロマトグラフィー-質量分析
min  分
MeOH  メタノール
org.  有機の
Ph  フェニル
Rf  保持指標（TLCにおいて）
rt  室温
sat.  飽和した
sol.  溶液
Tf  トリフルオロメチルスルホニル
THF  テトラヒドロフラン
TLC  薄層クロマトグラフィー
tR  保持時間
【００３９】
(rac.)-(1R*,5S*)-9-メチル-7-トリフルオロメタンスルホニルオキシ-3,9-ジアザビシクロ-[3.3.1]ノン-6-エン-3,6-ジカルボン酸3-tert-ブチルエステル6-エチルエステル(2)
【００４０】
化合物1（国際公開第2003/093267号、99.58g、305mmol）を窒素雰囲気下で乾燥THF（1450mL）に溶解して、混合物を0℃に冷却した。NaH（16.64g；鉱油（381mmol）中で55%分散）を0〜4℃の間に温度を保持しながら35分の期間にわたって2gずつにより添加した。ガス発生を観察した。添加後、反応混合物を0〜4℃にて75分間撹拌した。次いで、Tf2NPh（128.6g、360mmol）を5分以内に固体として添加した。反応混合物は褐色になった。冷却浴を除いて、反応を室温にて週末にわたって撹拌した。反応混合物を1Lの氷／水上に注ぎ、THFを減圧下で除去した。残りの水相を（3× 500mL）EtOAcで抽出した。合わせた有機層を水（500mL）および鹹水（500mL）で洗浄した。次いで、有機相を、MgSO4上で乾燥させ、濾過して、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗製の茶色残渣（174g）に、50mLのペンタンを添加して、混合物を4℃にて一晩撹拌した。沈殿を濾過して、冷却ヘキサン（70mL）およびヘキサン／ジエチルエーテル（4：1、100mL）の冷却混合物で洗浄した。これにより、いくらかのTfNHPhを含む84gの生成物が生じた。この材料を、シリカゲル（75g）を通して濾過した。TfNHPhをヘプタンで洗い流した。表題生成物をその後にEtOAc（3回1L）で洗い流して、表題生成物を3つの画分で減圧化での蒸発後に得た：a）44.45gのオフホワイトの結晶、b）27.98gのわずかに褐色の結晶およびc）生成物とTfNHPhとを含む15gの黄色の油。2日後、画分c）に含まれるTfNHPhが結晶化した。これを濾過して褐色油として9.43gの生成物を得た。
【００４１】
母液の処置：
上で得られた合わせられた母液を真空下で濃縮した。褐色油残渣（75g）を（EtOAc／ヘプタン1：9 → EtOAc）の勾配を使用するFC（1500g シリカゲル）によって精製した。次いで、カラムをEtOAc／MeOH 9：1で洗浄した。表題化合物は、純粋生成物として25.44gのオフホワイトの固体として単離された。LC-MS：tR = 0.87分；ES+：459.24。
【００４２】
(rac.)-(1R*,5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-9-メチル-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-3,6-ジカルボン酸3-tert-ブチルエステル6-エチルエステル(3)
【００４３】
窒素下において化合物6（49.8g、132mmol）のTHF（1.10L）溶液を-78℃に冷却した。BuLi（1.6Mのヘキサン溶液、88.0mL、143mmol）を添加した。1時間後、ZnCl2（1MのTHF溶液、198mL、198mmol）を添加した。混合物を室温まで温めた。化合物2（55.0g、112mmol）のTHF（100mL）溶液、次いでPd（PPh3）4（3.47g、3.00mmol）を添加した。混合物を加熱して1時間還流し、室温に冷却させた。混合物をEtOAcで希釈して、1MのNaOH（1×）水溶液で洗浄した。有機抽出物をMgSO4上で乾燥させ、濾過して、溶媒は減圧下で除去した。FC（MeOH／CH2Cl21：49→1：24 →3：47 →4：45）による残渣の精製により、表題生成物（47.3g、79%）を得た。LC-MS：tR = 0.95分；ES+：605.34。
【００４４】
2-(4-ブロモフェノキシ)エタノール(4)
4-ブロモフェノール（40g、231mmol）のEtOH（140mL）溶液にNaOH（10.2g、254mmol）を添加した。生じる混合物をNaOHの全量が溶解されるまで、70℃にて30分間撹拌した。2-ブロモエタノール（17.3ml、231mmol）のEtOH（40ml）溶液を70℃にて滴状に添加した。溶液は、迅速に乳状になった。混合物を還流まで一晩加熱した。溶媒を減圧下で除去して、残渣をEtOAcに溶解した。混合物を水および鹹水で洗浄し、MgSO4上で乾燥させて、濾過して、溶媒を減圧下で除去した。FC（EtOAc／ヘプタン 1：5→ 1：4→ 1：3→ 1：2→ EtOAc）による粗製の精製により、淡い褐色油として表題化合物（39.2g、78%）を得て、これを-18℃に置いたら結晶化した。（EtOAc／ヘプタン1：1）中のRf =0.3。
【００４５】
1-ブロモ-4-(2-ヨードエトキシ)ベンゼン(5)
化合物4（39.2g、181mmol）の乾燥トルエン（500mL）溶液にイミダゾール（61.5g、903mmol）、PPh3（90g、343mmol）、およびヨウ素（87.1g、343mmol）を添加した。この混合物を60℃にて2時間撹拌した。混合物をセライトを通して濾過して、濾液を減圧下で濃縮した。FC（EtOAc／ヘプタン1：5→ 1：4→ 1：3 →1：2→ 1：1）による残渣の精製により、表題化合物（39.9g、67%）を得た。
【００４６】
化合物6
機械撹拌器および還流冷却器を備えた500mLの3首フラスコ中で、化合物5（39.9g、122mmol）および2,6-ジクロロ-p-クレゾール（21.6g、122mmol）の乾燥アセトン（1200mL）溶液を混合した。この混合物に、K2CO3（16.86g、122mmol）を添加して、生じる懸濁液を還流まで20時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をEtOAcに溶解して、この有機相を水（2×）で、および鹹水（1×）で洗浄した。有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。短FC（EtOAc／ヘプタン1：9）による残渣の精製により、表題化合物（44.4g、96%）を得た。
【００４７】
(rac.)-(1R*,5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-3,6,9-トリカルボン酸3,9-ジ-tert-ブチルエステル6-エチルエステル(7)
化合物3（57.3g、94.6mmol）を乾燥1,2-ジクロロエタン（1.00L）に溶解した。NaHCO3（80.4g、946mmol）および1-クロロエチルクロロホルマート（103mL、946mmol）を添加して、懸濁液を80℃まで3時間加熱した。反応混合物を室温に冷却させた。混合物を濾過して、濾液を減圧下で蒸発させた。残渣を高真空下で15分乾燥させた。次いで、生成物をMeOH（900mL）に希釈して、混合物を60℃まで30分間加熱した。反応混合物を室温に冷却させて、溶媒を減圧下で除去した。残渣を高真空下で1時間乾燥させた。残渣をCH2Cl2（1.00L）に溶解して、溶液を0℃に冷却した。DIPEA（97.2mL、567mmol）およびBoc2O（62.0g、283mmol）を添加した。反応混合物は、0℃にて30分間、次いで室温にて30分間撹拌した。反応混合物をCH2Cl2（110mL）で希釈した。有機層を1MのHCl水溶液（2× 300mL）および飽和NaHCO3水溶液（300mL）で洗浄した。有機層をMgSO4上で乾燥させて、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。FC（EtOAc／ヘプタン1：5→ 1：38→ 1：1→EtOAc）による残渣の精製により、表題化合物（47.9g、73%）を得た。LC-MS：tR =1.22分；ES+：691.37。
【００４８】
(rac.)-(1R*,5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]-フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-3,6,9-トリカルボン酸3,9-ジ-tert-ブチルエステル(8)および(rac.)-(1R*、5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)-エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-7-エン-3,6,9-トリカルボン酸3,9-ジ-tert-ブチルエステル(9)の混合物
化合物7(47.8g、69.1mmol)の1M NaOH水溶液（350mL）およびEtOH（700mL）の混合物を80℃にて一晩撹拌した。混合物を減圧下で部分的に蒸発させて、EtOAc（500mL）を添加した。水相を3M HCl水溶液で酸性化し、混合物を抽出した。有機層を分離して、MgSO4上で乾燥させて、濾過して、溶媒を減圧下で除去した。残渣を高真空下で乾燥させ、化合物8および9の1：1混合物を得て、これをさらに精製することなく使用した（50.2g、定量的収率）。LC-MS：tR =1.12および1.14分；ES+：663.33
【００４９】
(rac.)-(1R*,5S*)-6-[シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)カルバモイル]-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-3,9-ジカルボン酸ジ-tert-ブチルエステル(10)
化合物8および9（14.6g、22.0mmol）、化合物11（9.64g、55mmol）、EDC.HCl（12.7g、66.0mmol）、HOBt（3.72g、27.5mmol）、DMAP（672mg、5.50mmol）およびDIPEA（15.1mL、88mmol）のCH2Cl2（300mL）溶液の混合物を室温にて4日間撹拌した。EDC.HCl（2.10g、10.6mmol）および化合物11（3.85g、22.0mmol）を2回添加した。混合物をより多くのCH2Cl2で希釈して、1MのHCl水溶液（3×）および飽和NaHCO3水溶液（2×）で洗浄した。有機層をMgSO4上で乾燥させて、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。FCによる精製により、表題化合物（13.8g、76%）を得た。LC-MS：tR =1.20分；ES+：820.53。
【００５０】
シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミン(11)
2,3-ジクロロベンズアルデヒド（68.9g、514mmol）およびシクロプロピルアミン（72mL、1.02mol）の乾燥MeOH（1300mL）溶液の混合物を室温にて一晩撹拌した。反応混合物を0℃に冷却して、NaBH4（25.3g、668mmol）を添加した。反応混合物を再び室温にて一晩撹拌した。氷を反応混合物に添加して、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をEtOAcに溶解して、1MのNaOH水溶液で洗浄した。水層をEtOAc（3×）で抽出した。合わせた有機抽出物をMgSO4上で乾燥させて、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。FC（EtOAc／ヘプタン9：1→1：1）による残渣の精製により、表題化合物（78.4g、87%）を得た。LC-MS：tR=0.84分；ES+：176.13。
【００５１】
化合物(I)：(rac.)-(1R*,5S*)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)-エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロ-プロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミド
化合物10（13.8g、16.9mmol）のCH2Cl2（120mL）溶液を0℃に冷却した。HCl（4Mのジオキサン溶液、120mL）を添加した。混合物を0℃にて1時間、次いで室温にて2時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、残渣を高真空下で乾燥した。残渣をCH2Cl2で希釈して、水層が塩基性に落ち着くまで1MのNaOH水溶液で洗浄した。有機抽出物をMgSO4上で乾燥させて、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。FC（常に1%のEt3Nを含むMeOH／CH2Cl25：95→10：90→20：80）による残渣の精製により、表題化合物（9.45g、90%）を得た。LC-MS：tR = 0.87分；ES+：620.40。
【００５２】
化合物(I’)：(1R,5S)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]-フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミド
化合物（I）（9.45g、15.2mmol）を、均一溶媒条件（25%のEtOH、0.1%のジエチルアミン、75%のヘキサン）および100mL／分の流速を使用して、Regis Whelk 01カラム、50×250mmで精製した。所望の化合物が、第1のエナンチオマー（tR = 17.85分）として出てきた。減圧下で溶媒を蒸発させた後、残渣を高真空下で乾燥させた。残渣をCH2Cl2に溶解して、10%のK2CO3水溶液で洗浄した。有機抽出物をMgSO4上で乾燥させて、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。高真空下で残渣を乾燥させることにより、表題化合物（3.40g）を得た。
【００５３】
生物学的アッセイ法
1. AngI蓄積およびレニン阻害を推定するための酵素免疫アッセイ法（EIA）
1.1 AngI-BSA抱合体の製造
1.3mg（1μmol）のAngI[1-10（Bachem, H-1680）]および17mg（0.26μmol）のBSA（Fluka, 05475）を4mLの0.1M リン酸緩衝液（pH 7.4）に溶解し、その後、2mLの1：100希釈のグルタルアルデヒドのH2O溶液（Sigma G-5882）を滴状に添加した。混合物を4℃にて一晩インキュベートし、次いで2リットルの0.9%のNaClに対して2回、室温にて4時間透析し、続いて室温にて2リットルのPBS 1Xに対して一晩透析した。次いで、溶液をシリンジフィルター、0.45μm（Nalgene, Cat番号194-2545）で濾過した。抱合体は、ポリプロピレン・チューブ内の0.05%のアジ化ナトリウム中に4℃にて少なくとも12月間貯蔵することができる。
【００５４】
1.2 BSA-AngIコーティングしたMTPの製造
マイクロタイタープレート（MPT384, MaxiSorp（商標）, Nunc）をテフロン(登録商標）・ビーカー内のPBS 1×中に1：100,000に希釈（正確な希釈は、抱合体のバッチに依存する）した80μlのAngI（1-10）/BSA抱合体と共に4℃にて一晩インキュベートし、空にして、90μlのブロッキング溶液[0.5%のBSA（Sigma A-2153）のPBS 1×溶液、0.02%のNaN3]で満たし、室温にて少なくとも2時間、または4℃にて一晩インキュベートした。ブロッキング溶液が3%のBSAを含んでいたことを除いては、上記のように、96ウェルMTP（MaxiSorp（商標）, Nunc）を200μlの抱合体でコーティングして、250μlのブロッキング溶液でブロックした。プレートを4℃にて1月間ブロッキング溶液中に貯蔵することができる。
【００５５】
1.3 384ウェルMTP中のAngI-EIA
AngI（1-10）/BSAコーティングしたMTPを洗浄緩衝液（PBS 1×、0.01%のTween 20）で3回洗浄して、75μlの一次抗体溶液（抗AngI抗血清、ウマ血清中に1：10に事前に希釈した）を満たし、アッセイ緩衝液（PBS 1X、1mM EDTA、0.1%のBSA、pH 7.4）中に1：100,000の終濃度に希釈した。5μlのレニン反応液（またはアッセイ緩衝液中の標準）（下記を参照されたい）を一次抗体溶液に添加して、プレートを4℃にて一晩インキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄緩衝液で3回洗浄して、二次抗体[洗浄緩衝液中に1：2,000に希釈した、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗ウサギIgG（Amersham Bioscience, NA 934V）]と共に室温にて2時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で3回洗浄し、次いで基質溶液[1.89mM ABTS（2.2’-アジノ-ジ-（3-エチル-ベンズチアゾリンスルホネート）]（Roche Diagnostics, 102 946）および2.36mM H2O2[30%（Fluka, 95300]の基質緩衝液（0.1M 酢酸ナトリウム、0.05Mのリン酸二水素ナトリウム、pH 4.2）溶液と共に室温にて1時間インキュベートした。プレートのODをマイクロプレートリーダー（BMGからのFLUOStar Optima）で405nmにて読み込んだ。レニン反応の間のAngIの産生は、平行して測定したAngI（1-10）の標準曲線のODと試料のODを比較することによって定量化した。
【００５６】
2. 一次レニン阻害アッセイ法：緩衝液（384ウェルMTP）中のIC50
レニン・アッセイ法は、以前に記述されたアッセイ法（Fischli W. et al., Hypertension, 1991, 18：22-31）から適応させており、2工程からなる：第1工程において、組換えヒト・レニンをその基質（市販のヒトテトラデカペプチドレニン基質）と共にインキュベートして生成物のアンジオテンシンI（AngI）を産生させる。第2工程において、蓄積されたAngIを免疫学的なアッセイ法（酵素免疫アッセイ法、EIA）によって測定する。このアッセイ法の詳細な説明は、下記に見いだされる。EIAは、非常に感受性であり、かつ緩衝液中、または血漿中でのレニン活性化の測定のために非常に適している。このアッセイ法に使用されるレニンは低濃度であるため（1アッセイ法あたり2fmolチューブまたは10pM）、この一次アッセイ法における阻害剤親和性の測定を低pM濃度まで下げることができる。
【００５７】
2.1 方法論
組換えヒトレニン（3pg/μl）アッセイ緩衝液（PBS 1×、1mM EDTA、0.1%のBSA、pH 7.4）溶液、ヒトテトラデカペプチド（1-14）基質（Bachem, M-1120）[5μMの10mM HCl溶液]、硫酸ヒドロキシキノリン（Fluka, 55100）[30mMのH2O溶液]およびアッセイ緩衝液を4℃にて100：30：10：145の比でプレミックスした。ウェルあたり47.5μlのこのプレミックスをポリプロピレンプレート（MTP384, Nunc）に移した。試験化合物を溶解して、100%のDMSO中に希釈し、2.5μlをプレミックスに添加して、次いで37℃にて3時間インキュベートした。インキュベーション期間終了後、5μlのレニン反応液（またはアッセイ緩衝液中の標準）をEIAアッセイ法（上記の通り）に移して、レニンによって産生されたAngIを定量化した。レニン阻害（AngI減少）の割合を化合物のそれぞれの濃度について算出し、酵素活性を50%まで阻害するレニン阻害の濃度（IC50）を決定した。
【００５８】
式（I’）の化合物は、0.3nMのIC50値を示す。
【００５９】
血行力学的測定（テレメータリング法）
動物−ヒトレニンおよびヒトアンジオテンシノーゲンをもつ雌二重トランスジェニックラットはRCC Ltd, Fullingsdorf, Switzerlandから購入した。全ての動物は、同一条件下で維持し、通常のペレット化されたラット固形飼料および水を自由に摂取させた。ラットには、最初にエナラプリル（1mg/kg/日）で2月間処置した。エナラプリル処置の停止後およそ2週後に、二重トランスジェニックラットは、高血圧になり、160〜170mmHgの範囲の平均動脈血圧に達する。
【００６０】
トランスミッタ移植−ラットを、90mg/kgのケタミン-HCl（Ketavet, Parke-Davis, Berlin FRG）および10mg/kgのキシラジン（Rompun, Bayer, Leverkusen, FRG）の混合物で腹腔内麻酔した。圧力トランスミッタを、無菌条件下にて、上流を示す腎動脈の下の下行大動脈に配置した検知カテーテルと共に腹腔内に移植した。トランスミッタを腹筋系に縫合し、皮膚を閉じた。
【００６１】
テレメータリング-システム−テレメトリーユニットは、Data Sciences（St. Paul, MN）から得た。移植したセンサーは、高度に安定な低コンダクタンスのひずみゲージ圧力トランスデューサー（これにより、真空と比較した絶対動脈圧が測定される）と高周波トランスミッタとに接続された液体充填カテーテル（直径0.7mm、長さ8cm；モデルTA11PA-C40）からなった。カテーテルの先端は、血液還流を防止する粘稠性ゲルで満たして、血栓形成を阻害するために抗血栓性フィルムでコーティングした。インプラント（長さ=2.5cm、直径=1.2cm）は、9gの重量であり、6月の典型的バッテリ寿命を有する。レシーバプラットフォーム（RPC-1、Data Sciences）により、無線信号をデジタル化された入力に接続し、これを専用のパーソナルコンピューター（Compaq, deskpro）に送信させた。動脈圧は、雰囲気圧参照（APR-1、Data Sciences）からの入力を使用することによって較正した。収縮期、平均および弛緩期血圧は、水銀柱ミリメートル（mmHg）で表した。
【００６２】
血行力学的測定−圧力トランスミッタを移植した二重トランスジェニックラットには、媒体または10mg/kgの試験物質を経口胃管栄養法によって投薬し（群あたりn=6）、平均動脈血圧を連続モニターした。試験物質の効果は、処置群対対照群における平均動脈圧（MAP）の最大の減少として表した。
【００６３】
式（I’）の化合物は、この動物モデルにおいて活性であった。10mg/kgの経口1回投与にて30mmHgの血圧減少を、および3mg/kgの経口1回投与にて17mmHgの血圧減少を引き起こした。
【手続補正書】
【提出日】平成20年2月26日(2008.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1R,5S)-7-{4-[2-(2,6-ジクロロ-4-メチルフェノキシ)エトキシ]フェニル}-3,9-ジアザビシクロ[3.3.1]ノン-6-エン-6-カルボン酸シクロプロピル-(2,3-ジメチルベンジル)アミドと命名される式（I’）の化合物、並びにその塩および溶媒錯体
【化１】
2008528478.tif 000009
【請求項２】
請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容されるキャリア物質とを含む医薬組成物。
【請求項３】
高血圧症、鬱血性心不全、肺性高血圧、腎機能不全、腎虚血、腎不全、腎線維症、心不全、心肥大、心臓線維症、心筋虚血症、心筋症、糸球体腎炎、腎疝痛、糖尿病によって生じる合併症、緑内障、眼内圧上昇、アテローム性動脈硬化症、血管形成術後の再狭窄、血管または心臓外科手術後の合併症、勃起障害、高アルドステロン症、肺線維症、強皮症、不安症、認知障害および免疫抑制剤での治療の合併症から選択される疾患の治療および／または予防のための、活性成分として請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬。
【請求項４】
高血圧症の治療および／または予防のための、活性成分として請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬。
【国際調査報告】
2008528478.tif 000010
2008528478.tif 000011