(57)【要約】  本発明は、本発明の化合物または組成物を投与することにより、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患を治療または予防するための方法、化合物および組成物に関する。さらに特定すると、本発明は、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結を抑制するための方法、化合物および組成物に関する。【選択図】図１
2008515985.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体細胞変異により生じる疾患を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の式１の化合物または前記式１の化合物の薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多形体を投与することを含んでなる、上記方法：
［式中：
Ｘ、ＹおよびＺは、Ｎ、Ｓ、ＯおよびＣから独立して選択され、ここでＸ、ＹまたはＺの少なくとも一つがヘテロ原子であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮａ＋もしくはＭｇ２＋であり、
Ｒ２は、独立して、存在しないか、水素、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、シアノ基、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、または水素、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基であり、
Ｒ３は、独立して、存在しないか、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはニトロ基であり、
Ｒ４は、独立して、存在しないか、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＷと一緒のとき、Ｒ４は結合であってよく、ＷおよびＲ４とＷが結合するヘテロ環は１１〜１３員ヘテロ三環式環構造を形成し、
Ｗは、以下から選択され：
（ａ）フェニルで置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルキニル、
（ｂ）一つ以上の以下の独立して選択される基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ８直鎖または分枝鎖アルキル基：Ｃ１−Ｃ６アルキル；ハロゲン；フェニルが一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよい−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−フェニル；５〜６員のヘテロ環；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ基、
（ｃ）Ｃ２−Ｃ８アルケニル、
（ｄ）Ｃ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル、
（ｅ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ；ハロゲン；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４直鎖または分枝鎖アルキル；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはフェニル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール；以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、もしくは以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環；アミノ、アミノアルキルもしくはアルコキシ基で置換されていてもよいナフチル基；−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；イソインドール−１，３−ジオン基；ニトロ基；シアノ基；−ＳＯ３Ｈ基；アルキルチオ基；アルキルスルホニル基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｒｚ基；−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−ＳＯ２−Ｒｚ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒｚ基；
（ｆ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、アミノ基もしくはアミノアルキル基またはアルコキシ基で置換されていてもよいＣ１０−Ｃ１４アリール基、
（ｇ）−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基、
（ｈ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：オキソ基；ハロゲン；Ｃ１−Ｃ４アルキル基；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基；アリールオキシ基；−ＮＲｘＲｙ基；アルキルチオ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；もしくは一つ以上の独立して選択されたハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、
（ｉ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、オキソ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基もしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよい２〜３環構造を有するヘテロ環基、
（ｊ）Ｒ４が結合であるときを含み、ＷとＲ４が、Ｒ４とＷが結合するヘテロ環と一緒になって、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成し、
ここで、Ｒｘは水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員の炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、一つ以上の独立して選択されたＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアリール基であり、またはＲｘおよびＲｙはこれらが結合している原子とともに、４〜７員炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｚは、アリール基もしくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、またはハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ基で置換されていてもよいアリール基である］
【請求項２】
化合物、またはその薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体が、該化合物および製薬上許容される担体または稀釈剤を含む組成物として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
投与が静脈内である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
自己免疫疾患、血液疾患、膠原病、糖尿病、神経変性疾患、循環器疾患、肺疾患、炎症性疾患または中枢神経系疾患を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体を投与する投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項５】
投与が静脈内である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
自己免疫疾患は関節リウマチまたは移植片対宿主病である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
炎症性疾患が関節炎である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
中枢神経系疾患が、多発性硬化症、筋ジストロフィー症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルツハイマー病、神経変性疾患またはパーキンソン病である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
血液疾患が、血友病、フォン・ヴィレブランド病、血管拡張性失調症、β型サラセミアまたは腎臓結石である、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
膠原病が、骨形成不全症または肝硬変である、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
家族性赤血球増加症、免疫不全、腎疾患、嚢胞性線維症、家族性高脂血症、網膜色素変性病、アミロイド症、血友病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー症またはマルファン症候群を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、もしくは立体異性体を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項１２】
投与が静脈内である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ヒトの癌を治療または予防する方法であって、それを必要とするヒトに、有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、もしくは立体異性体を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項１４】
投与が静脈内である、請求項１３に記載の方法。    
【請求項１５】
癌が、頭頸部、眼、皮膚、口、喉、食道、胸、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓または副腎の癌である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
化合物またはその薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多型体が製薬上許容される担体または稀釈剤を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
癌が、固形腫瘍である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
癌が、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽種、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来の腫瘍（ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎ  ｔｕｍｏｒ）または多発性骨髄腫である、請求項１３に記載の方法。  
【請求項１９】
癌が、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性B細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄芽球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病または多発性骨髄腫である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
ｐ５３遺伝子の突然変異に関連した疾患を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体を投与することを含んでなる、上記方法。
【請求項２１】
投与が静脈内である、請求項２０に記載の方法。    
【請求項２２】
疾病が、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽種、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫または網膜芽細胞腫である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
癌細胞の増殖を阻止する方法であって、癌細胞を有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体に接触させることを含んでなる、上記方法。    
【請求項２４】
哺乳動物のタンパク質を選択的に生産する方法であって、哺乳動物においてナンセンス変異を含む遺伝子を転写させ、本発明の有効量の化合物を哺乳動物に提供することを含んでなり、該タンパク質は該哺乳動物によって生産される、上記方法。
【請求項２５】
治療または予防を必要とする患者における疾患を治療または予防するための方法に使用するための式１の化合物を含む医薬組成物の調製方法であって、治療有効量の式１の化合物または前記式１の化合物の薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多型体をそれを必要とする患者に投与することが可能な医薬組成物の調製方法。
【請求項２６】
式１の化合物または前記式１の化合物の薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多形体：
【化１】
2008515985.tif 000248
［式中：
Ｘ、ＹおよびＺは、Ｎ、Ｓ、ＯおよびＣから独立して選択され、ここでＸ、ＹまたはＺの少なくとも一つがヘテロ原子であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮａ＋もしくはＭｇ２＋であり、
Ｒ２は、独立して、存在しないか、水素、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、シアノ基、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、または水素、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基であり、
Ｒ３は、独立して、存在しないか、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはニトロ基であり、
Ｒ４は、独立して、存在しないか、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＷと一緒のとき、Ｒ４は結合であってよく、ＷおよびＲ４とＷが結合するヘテロ環は１１〜１３員ヘテロ三環式環構造を形成し、
Ｗは、以下から選択され：
（ａ）フェニルで置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルキニル、
（ｂ）一つ以上の以下の独立して選択される基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ８直鎖または分枝鎖アルキル基：Ｃ１−Ｃ６アルキル；ハロゲン；フェニルが一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよい−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−フェニル；５〜６員のヘテロ環；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ基、
（ｃ）Ｃ２−Ｃ８アルケニル、
（ｄ）Ｃ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル、
（ｅ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ；ハロゲン；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４直鎖または分枝鎖アルキル；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはフェニル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール；以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、もしくは以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環；アミノ、アミノアルキルもしくはアルコキシ基で置換されていてもよいナフチル基；−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；イソインドール−１，３−ジオン基；ニトロ基；シアノ基；−ＳＯ３Ｈ基；アルキルチオ基；アルキルスルホニル基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｒｚ基；−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−ＳＯ２−Ｒｚ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒｚ基；
（ｆ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、アミノ基もしくはアミノアルキル基またはアルコキシ基で置換されていてもよいＣ１０−Ｃ１４アリール基、
（ｇ）−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基、
（ｈ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：オキソ基；ハロゲン；Ｃ１−Ｃ４アルキル基；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基；アリールオキシ基；−ＮＲｘＲｙ基；アルキルチオ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；もしくは一つ以上の独立して選択されたハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、
（ｉ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、オキソ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基もしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよい２〜３環構造を有するヘテロ環基、
（ｊ）Ｒ４が結合であるときを含み、ＷとＲ４が、Ｒ４とＷが結合するヘテロ環一緒になって、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成し、
ここで、Ｒｘは水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員の炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、一つ以上の独立して選択されたＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアリール基であり、またはＲｘおよびＲｙはこれらが結合している原子とともに、４〜７員炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｚは、アリール基もしくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、またはハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ基で置換されていてもよいアリール基である］
【請求項２７】
前記式１の化合物が、式１Ａ〜１Ｚの化合物より選択される、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記式１の化合物が、表Ｘに挙げられている化合物である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２９】
式１の化合物を含む医薬組成物。
【請求項３０】
一つ以上の式１の追加化合物をさらに含む、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
以下の式（化合物番号１）を有する化合物。
【化２】
2008515985.tif 000249
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本発明の化合物または組成物を投与することにより、mRNAにおけるナンセンス変異に関連する疾患を治療または予防するための方法、化合物および組成物に関する。より具体的に、本発明は、ｍＲＮＡにおけるナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結を抑制するための方法、化合物および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
細胞の遺伝子発現は、転写および翻訳の連続的プロセスに依存する。ともに、これらのプロセスは、その対応する遺伝子のヌクレオチド配列からタンパク質を生産する。
【０００３】
転写は、ＲＮＡポリメラーゼによるＤＮＡからのｍＲＮＡ合成を伴う。転写は、遺伝子のプロモーター領域で始まり、新生ＲＮＡにおけるステムループ構造の形成またはｒｈｏ遺伝子産物の結合などにより終結が誘発されるまで継続する。
【０００４】
タンパク質は、その後、ｔＲＮＡ、ｔＲＮＡ合成酵素、様々な他のタンパク質およびＲＮＡ種の助けによりリボソーム上に生じる翻訳プロセスによりｍＲＮＡから生産される。翻訳は、開始、伸長および終結の三つのフェーズからなる。翻訳は、タンパク質因子、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、補助因子、およびリボソームサブユニット（ｍＲＮＡ上で翻訳を開始するように翻訳装置を導くｍＲＮＡ上のシグナルを認識する）からなる開始複合体の形成により開始される。一度、開始複合体が形成されると、ポリペプチド鎖の成長は、ｔＲＮＡおよびｔＲＮＡ合成酵素だけでなくリボソームのペプチジルトランスフェラーゼ活性によるアミノ酸の反復的付加により生じる。リボソームのＡ部位における三つの終結コドン（ＵＡＡ、ＵＡＧ、ＵＧＡ）のうちの一つの存在が、ポリペプチド鎖放出因子（ＲＦｓ）に、その終結シグナルと結合して認識するよう合図する。次に、リボソームのＰ部位に位置するｔＲＮＡの３’ヌクレオチドと新生ポリペプチド鎖との間のエステル結合が加水分解され、完成されたポリペプチド鎖が放出され、リボソームサブユニットは、次回の翻訳のために再利用される。
【０００５】
塩基数が変化するＤＮＡ配列の変異は、挿入または欠失変異（例えば、フレームシフト変異）として分類され、ゲノムの大きな破壊をもたらす可能性がある。一つの塩基を別の塩基に変化させ、アミノ酸置換を生じるＤＮＡの変異は、ミスセンス変異と呼ばれる。塩基の置換は、トランジション（あるプリンから別のプリンに、またはあるピリミジンから他のピリミジンに）およびトランスバージョン（プリンからピリミジンに、またはピリミジンからプリンに）のクラスに細分される。
【０００６】
トランジションおよびトランスバージョン変異は、アミノ酸コドンを三つの終結コドンのうちの一つに変化させるナンセンス変異を生じる可能性がある。これらの未熟な終結コドンは、未熟な翻訳終結の結果により、細胞において異常タンパク質を生産する可能性がある。必須遺伝子におけるナンセンス変異は致命的なことがあり、いくつか例を挙げると、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー症、嚢胞性線維症および血友病などの多くのヒト疾患を引き起こす可能性もある。
【０００７】
ヒトｐ５３遺伝子は、ヒト癌において最も一般的に変異した遺伝子である（Ｚａｍｂｅｔｔｉ，Ｇ．Ｐ．およびＬｅｖｉｎｅ，Ａ．，ＦＡＳＥＢ７：８５５〜８６５（１９９３））。遺伝性の癌および自然発生の癌の双方で発見された５０以上の異なるタイプのヒト癌はｐ５３変異を含み、この遺伝子の変異はヒト癌全体の５０〜５５％に生じる（Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎ，Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：３５５１〜５５（１９９４）；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ（ＩＡＲＣ）ｄａｔａｂａｓｅ）。結腸直腸癌の約７０％、肺癌の５０％および乳癌の４０％が、変異型ｐ５３を含む（Ｋｏｓｈｌａｎｄ，Ｄ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１９５３（１９９３））。ｐ５３の異常型は、予後不良、より進行性の腫瘍、転移および低い５年生存率と関連する（同上）。ＤＮＡ損傷の際の細胞増殖停止および／またはアポトーシスの誘発におけるｐ５３の役割は、変異した細胞（さもなくば増殖の利益を獲得したであろう）の破壊に必要不可欠であると考えられる。さらに、ｐ５３は、急速に分裂する細胞をアポトーシスシグナルに対して敏感にさせる。ｐ５３遺伝子において報告された１５，０００以上の変異のうち、約７％がナンセンス変異である。したがって、ｐ５３ナンセンス変異に向けられた安全で効果的な治療が必要とされる。
【０００８】
ナンセンス変異を含む細菌株および真核生物株において、ナンセンス変異の抑制は、変異体ｔＲＮＡがナンセンスコドンを認識できるようなｔＲＮＡ分子の一つにおける変異の結果として、翻訳プロセスに関わるタンパク質における変異の結果として、リボソーム（リボソームＲＮＡまたはリボソームタンパク質のいずれか）における変異の結果として、または翻訳プロセスを変更することが知られている化合物（例えば、シクロヘキシミドまたはアミノグリコシド系抗生物質）の添加により起こりうる。その結果は、アミノ酸がナンセンス変異の部位でポリペプチド鎖に組み込まれ、翻訳がナンセンスコドンで未熟に終結することがない。挿入されるアミノ酸は、野生型タンパク質の本来のアミノ酸と必ずしも同一ではないが、多くのアミノ酸置換は、タンパク質の構造または機能に大きな影響を及ぼさない。よって、ナンセンス変異の抑制によりもたらされるタンパク質は、野生型タンパク質のそれに近い活性を有する可能性がある。このシナリオは、ナンセンス変異の抑制を通して翻訳の未熟な終結を避けることによりナンセンス変異に関連する疾患を治療する機会を提供する。
【０００９】
真核生物終結コドンの読み通しを促進するアミノグリコシド抗生物質の能力は、ナンセンス変異に起因するヒト疾患において有力な治療薬としてこれらの薬剤に関心を集めている。このような治療ストラテジーが実行可能である疾患の一つは、現在効果的な治療がない致命的な小児神経変性疾患である、古典的晩期幼児型ニューロンセロイド脂褐素症（ＬＩＮＣＬ）である。リソソームトリペプチジル−ペプチダーゼ１（ＴＰＰ−Ｉ）をコードする遺伝子ＣＬＮ２における未熟な終結コドン変異は、ＬＩＮＣＬと診断された子供の約半数において疾患と関係する。ＬＩＮＣＬ細胞株においてＴＰＰ−Ｉ活性を回復するためのアミノグリコシド・ゲンタマイシンの能力が検討されている。一般的に見られるナンセンス変異（Ａｒｇ２０８Ｓｔｏｐ）および異なる稀なナンセンス変異について複合ヘテロ接合性であった患者由来の細胞株では、ＴＰＰ−Ｉの正常レベルの約７％が、ゲンタマイシン治療を用いて、最大限に回復された。これらの結果は、アミノグリコシドまたは機能的に類似した薬剤によるナンセンス変異の薬理学的抑制が、ＬＩＮＣＬにおいて治療的に有効でありうることを示唆する（Ｓｌｅａｔら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｅｄ．、Ｎｅｕｒｏｌ．、５：ＳｕｐｐｌＡ５７〜６２（２００１））。
【００１０】
嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子に未熟な終結コドンを有する培養細胞において、アミノグリコシドを用いた治療は、完全長ＣＦＴＲの生産を導いた（Ｂｅｄｗｅｌｌら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３：１２８０〜１２８４（１９９７）；Ｈｏｗａｒｄら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：４６７〜４６９（１９９６））。ジュシェンヌ型筋ジストロフィーのためのマウスモデルにおいては、硫酸ゲンタマイシンが未熟な終結コドンでの翻訳終結を抑制することが観察され、結果として完全長ジストロフィンをもたらした（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４：３７５〜３８１（１９９９））。完全長ジストロフィン量のわずかな増加は、ｍｄｘマウスにおいて収縮誘発された損傷に対する保護を提供した。ナンセンスコドンの部位に挿入されたアミノ酸は、これらの研究では判断されなかった。
【００１１】
従って、ナンセンスコドンの誤読を媒介することにより未熟な翻訳終結を抑制する小分子治療薬または予防薬は、多くの疾患の治療に役立つだろう。ナンセンス変異により生じる疾患に対して使用することができる、広範囲の選択的治療薬または予防薬を社会に導く、小分子薬剤、特に経口バイオアベイラビリティー薬剤の発見は、まだ始まったばかりである。
【００１２】
クリトシン（Ｃｌｉｔｏｃｉｎｅ）（６−アミノ−５−ニトロ−４−（β−Ｄ−リボ−フラノシルアミノ）ピリミジン）は、キノコＣｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｉｎｖｅｒｓａから最初に分離された、天然の環外アミノヌクレオシドである（Ｋｕｂｏら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，２７：４２７７（１９８６））。クリトシンの全合成も報告されている（Ｍｏｓｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３１：７８６〜７９０（１９８８）およびＫａｍｉｋａｗａら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９５（１９９８））。クリトシンは、殺虫作用および白血病細胞株に対する細胞増殖抑制作用を保持すると報告されている（Ｋｕｂｏら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，２７：４２７７（１９８６）およびＭｏｓｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３１：７８６〜７９０（１９８８））。しかし、ナンセンス変異に関連する疾患の治療薬としてのクリトシンの使用は、現在まで開示されていない。また、癌またはナンセンス変異に関連する疾患の治療薬として有用であるクリトシンの類似体または誘導体の開発を誰も報告していない。
【００１３】
よって、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患の治療または予防のための新薬を開発する際のリード分子を開発し、特徴付け、最適化する必要性が依然として存在する。従って、このような化合物を提供することが本発明の目的である。
【００１４】
本明細書に記載される全ての資料は、本明細書に十分に説明されているかのように、参照により本出願に組み入れるものとする。
【発明の開示】
【００１５】
本発明によると、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結を抑制する化合物が同定され、それらの使用方法が提供される。
【００１６】
本発明の様態の１つとして、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結を抑制するのに有用であり、またｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患を治療するのに有用である、式（１）の化合物、またはその薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体または多形体が提供される：
【化１】
2008515985.tif 000003
【００１７】
［式中：
Ｘ、ＹおよびＺは、Ｎ、Ｓ、ＯおよびＣから独立して選択され、ここでＸ、ＹまたはＺの少なくとも一つがヘテロ原子であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮａ＋もしくはＭｇ２＋であり、
Ｒ２は、独立して、存在しないか、水素、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、シアノ基、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、または水素、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基であり、
Ｒ３は、独立して、存在しないか、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはニトロ基であり、
Ｒ４は、独立して、存在しないか、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＷと一緒のとき、Ｒ４は結合であってよく、ＷおよびＲ４とＷが結合するヘテロ環は１１〜１３員ヘテロ三環式環構造を形成し、
Ｗは、以下から選択され：
（ａ）フェニルで置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルキニル、
（ｂ）一つ以上の以下の独立して選択される基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ８直鎖または分枝鎖アルキル基：Ｃ１−Ｃ６アルキル；ハロゲン；フェニルが一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよい−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−フェニル；５〜６員のヘテロ環；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ基、
（ｃ）Ｃ２−Ｃ８アルケニル、
（ｄ）Ｃ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル、
（ｅ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ；ハロゲン；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４直鎖または分枝鎖アルキル；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはフェニル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール；以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、もしくは以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環；アミノ、アミノアルキルもしくはアルコキシ基で置換されていてもよいナフチル基；−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；イソインドール−１，３−ジオン基；ニトロ基；シアノ基；−ＳＯ３Ｈ基；アルキルチオ基；アルキルスルホニル基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｒｚ基；−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−ＳＯ２−Ｒｚ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒｚ基；
（ｆ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、アミノ基もしくはアミノアルキル基またはアルコキシ基で置換されていてもよいＣ１０−Ｃ１４アリール基、
（ｇ）−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基、
（ｈ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：オキソ基；ハロゲン；Ｃ１−Ｃ４アルキル基；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基；アリールオキシ基；−ＮＲｘＲｙ基；アルキルチオ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；もしくは一つ以上の独立して選択されたハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、
（ｉ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、オキソ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基もしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよい２〜３環構造を有するヘテロ環基、
（ｊ）Ｒ４が結合であるときを含み、ＷとＲ４が、Ｒ４とＷが結合するヘテロ環一緒になって、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成し、
ここで、Ｒｘは水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員の炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、一つ以上の独立して選択されたＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアリール基であり、またはＲｘおよびＲｙはこれらが結合している原子とともに、４〜７員炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｚは、アリール基もしくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、またはハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ基で置換されていてもよいアリール基である］。
【００１８】
本発明の他の様態として、ナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結の抑制方法、およびｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患の予防または治療の方法が提供される。このような疾患は、これに制限されるものではないが、ＣＮＳ疾患、炎症性疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、心血管疾患または肺疾患などのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結に起因する遺伝性疾患を含み、より好ましくは該疾患は癌（または他の増殖性疾患）、アミロイド症、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、巨人症、小人症、甲状腺機能低下、甲状腺機能亢進、嚢胞性線維症、老化、肥満症、パーキンソン病、ニーマン・ピック病、家族性高脂血症、網膜色素変性病、マルファン症候群、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー症、嚢胞性線維症、血友病または古典的晩期幼児型ニューロンセロイド脂褐素症（ＬＩＮＣＬ）である。
【００１９】
実施形態の一つとして、本発明は、ナンセンス抑制量の本発明の少なくとも一つの化合物を、必要とする患者に投与することを含む、ｍＲＮＡにおけるナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結の抑制方法に関する。
【００２０】
さらに他の実施形態において、治療効果のある量の少なくとも一つの本発明の化合物を、必要とする患者に投与することを含む、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー症、嚢胞性線維症、血友病または古典的晩期幼児型ニューロンセロイド脂褐素症を治療する方法を提供する。
【００２１】
これらと本発明の他の様態は、以下の好適な実施形態および詳細な説明を参照することにより、より明確に理解されるであろう。
【００２２】
特定の実施形態
１．体細胞変異により生じる疾患を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の式１の化合物または前記式１の化合物の薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多形体を投与することを含んでなる、上記方法。
【００２３】
２．化合物、またはその薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体が、該化合物および製薬上許容される担体または稀釈剤を含む組成物として投与される、実施形態１に記載の方法。
【００２４】
３．投与が静脈内である、実施形態１に記載の方法。
【００２５】
４．自己免疫疾患、血液疾患、膠原病、糖尿病、神経変性疾患、循環器疾患、肺疾患、炎症性疾患または中枢神経系疾患を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体を投与する投与することを含んでなる、上記方法。
【００２６】
５．投与が静脈内である、実施形態４に記載の方法。
【００２７】
６．自己免疫疾患は関節リウマチまたは移植片対宿主病である、実施形態４に記載の方法。
【００２８】
７．炎症性疾患が関節炎である、実施形態４に記載の方法。
【００２９】
８．中枢神経系疾患が、多発性硬化症、筋ジストロフィー症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルツハイマー病、神経変性疾患またはパーキンソン病である、実施形態４に記載の方法。
【００３０】
９．血液疾患が、血友病、フォン・ヴィレブランド病、血管拡張性失調症、β型サラセミアまたは腎臓結石である、実施形態４に記載の方法。
【００３１】
１０．膠原病が、骨形成不全症または肝硬変である、実施形態４に記載の方法。
【００３２】
１１．家族性赤血球増加症、免疫不全、腎疾患、嚢胞性線維症、家族性高脂血症、網膜色素変性病、アミロイド症、血友病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満症、ジュシェンヌ型筋ジストロフィー症またはマルファン症候群を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、もしくは立体異性体を投与することを含んでなる、上記方法。
【００３３】
１２．投与が静脈内である、実施形態１１に記載の方法。
【００３４】
１３．ヒトの癌を治療または予防する方法であって、それを必要とするヒトに、有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、もしくは立体異性体を投与することを含んでなる、上記方法。
【００３５】
１４．投与が静脈内である、実施形態１３に記載の方法。    
１５．癌が、頭頸部、眼、皮膚、口、喉、食道、胸、骨、血液、肺、結腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓または副腎の癌である、実施形態１３に記載の方法。
【００３６】
１６．化合物またはその薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多型体が製薬上許容される担体または稀釈剤を含む、実施形態１３に記載の方法。
【００３７】
１７．癌が、固形腫瘍である、実施形態１３に記載の方法。
【００３８】
１８．癌が、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽種、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来の腫瘍（ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎ  ｔｕｍｏｒ）または多発性骨髄腫である、実施形態１３に記載の方法。  
１９．癌が、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性B細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄芽球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病または多発性骨髄腫である、実施形態１３に記載の方法。
【００３９】
２０．ｐ５３遺伝子の突然変異に関連した疾患を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体を投与することを含んでなる、上記方法。
【００４０】
２１．投与が静脈内である、実施形態２０に記載の方法。    
２２．疾病が、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽種、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫または網膜芽細胞腫である、実施形態２０に記載の方法。
【００４１】
２３．癌細胞の増殖を阻止する方法であって、癌細胞を有効量の式１の化合物、または、その薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体、もしくは多形体に接触させることを含んでなる、上記方法。    
２４．哺乳動物のタンパク質を選択的に生産する方法であって、哺乳動物においてナンセンス変異を含む遺伝子を転写させ、本発明の有効量の化合物を哺乳動物に提供することを含んでなり、該タンパク質は該哺乳動物によって生産される、上記方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４２】
発明の詳細な説明
未熟な翻訳終結は異常なタンパク質を作り出す原因となり、この異常なタンパク質は致死的であったり、または多くの疾患を引き起こし、これらの疾患として、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症や血友病などが含まれるがこれらに限定されない。本発明によって、ナンセンス変異を抑制する化合物が同定され、またその化合物の使用法が提供される。
【００４３】
Ａ．本発明の化合物
本発明の一つの態様では、ナンセンス変異の抑制に有用な本発明の化合物が提供される。ある実施形態においては、本発明の化合物は特異的にナンセンス変異を抑制し、また他の実施形態においては、本発明の化合物はナンセンス変異の抑制のみならず、疾患の治療にも寄与し、これらの疾患として、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症や血友病などが含まれるがこれらに限定されない。
【００４４】
ナンセンス変異の抑制に有用な本発明の好ましい化合物は、以下に示す式１の化合物またはその化合物の薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多形体を含む：
【化２】
2008515985.tif 000004
【００４５】
［式中：
Ｘ、ＹおよびＺは、Ｎ、Ｓ、ＯおよびＣから独立して選択され、ここでＸ、ＹまたはＺの少なくとも一つがヘテロ原子であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮａ＋もしくはＭｇ２＋であり、
Ｒ２は、独立して、存在しないか、水素、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、シアノ基、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、または水素、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基であり、
Ｒ３は、独立して、存在しないか、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはニトロ基であり、
Ｒ４は、独立して、存在しないか、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＷと一緒のとき、Ｒ４は結合であってよく、ＷおよびＲ４とＷが結合するヘテロ環は１１〜１３員ヘテロ三環式環構造を形成し、
Ｗは、以下から選択され：
（ａ）フェニルで置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルキニル、
（ｂ）一つ以上の以下の独立して選択される基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ８直鎖または分枝鎖アルキル基：Ｃ１−Ｃ６アルキル；ハロゲン；フェニルが一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよい−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−フェニル；５〜６員のヘテロ環；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ基、
（ｃ）Ｃ２−Ｃ８アルケニル、
（ｄ）Ｃ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル、
（ｅ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ；ハロゲン；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４直鎖または分枝鎖アルキル；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはフェニル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール；以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、もしくは以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環；アミノ、アミノアルキルもしくはアルコキシ基で置換されていてもよいナフチル基；−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；イソインドール−１，３−ジオン基；ニトロ基；シアノ基；−ＳＯ３Ｈ基；アルキルチオ基；アルキルスルホニル基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｒｚ基；−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−ＳＯ２−Ｒｚ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒｚ基；
（ｆ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、アミノ基もしくはアミノアルキル基またはアルコキシ基で置換されていてもよいＣ１０−Ｃ１４アリール基、
（ｇ）−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基、
（ｈ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：オキソ基；ハロゲン；Ｃ１−Ｃ４アルキル基；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基；アリールオキシ基；−ＮＲｘＲｙ基；アルキルチオ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；もしくは一つ以上の独立して選択されたハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、
（ｉ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、オキソ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基もしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよい２〜３環構造を有するヘテロ環基、
（ｊ）Ｒ４が結合であるときを含み、ＷとＲ４が、Ｒ４とＷが結合するヘテロ環一緒になって、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成し、
ここで、Ｒｘは水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員の炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、一つ以上の独立して選択されたＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアリール基であり、またはＲｘおよびＲｙはこれらが結合している原子とともに、４〜７員炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｚは、アリール基もしくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、またはハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ基で置換されていてもよいアリール基である］。
【００４６】
他の実施形態において、ナンセンス変異に関連する疾患を治療するのに有用である本発明の化合物は、式（１）の化合物、またはその薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体または多形体を含む：［式中：
Ｘ、ＹおよびＺは、Ｎ、Ｓ、ＯおよびＣから独立して選択され、ここでＸ、ＹまたはＺの少なくとも一つがヘテロ原子であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮａ＋もしくはＭｇ２＋であり、
Ｒ２は、独立して、存在しないか、水素、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、またはシアノ基であり、
Ｒ３は、存在しないか、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはニトロ基であり、
Ｒ４は、存在しないか、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＷと一緒になって、Ｒ４とＷが結合しているヘテロ環と、１１〜１３員ヘテロ三環式環構造を形成し、
Ｗは、以下から選択され：
一つ以上の以下の基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ８直鎖または分枝鎖アルキル基：Ｃ１−Ｃ６アルキル；ハロゲン；５〜６員のヘテロ環；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基の一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基の一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ基、
Ｃ２−Ｃ８アルケニル、
Ｃ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル、
以下の一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ；ハロゲン；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４直鎖または分枝鎖アルキル；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはフェニル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール；以下から選択される一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基；以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：Ｃ１−Ｃ４アルキル、オキソ、もしくは以下の一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール（ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基）；アミノもしくはアミノアルキル基で置換されていてもよいナフチル基；−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；イソインドール−１，３−ジオン基；ニトロ基；シアノ基；−ＳＯ３Ｈ基；アルキルチオ基；アルキルスルホニル基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｒｚ基；−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−ＳＯ２−Ｒｚ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒｚ基；
−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基、
以下の一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：オキソ基；ハロゲン；Ｃ１−Ｃ４アルキル基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基； −Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基および／または一つ以上の独立して選択されるハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、アリールオキシ基、−ＮＲｘＲｙ基および／もしくはアルキルチオ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、
一つ以上のハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基および／もしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよい２〜３環構造を有するヘテロ環基、
ＷとＲ４が一緒になって、かつＲ４とＷが結合するヘテロ環と、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成し、
ここで、Ｒｘは水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員の炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、任意に置換されているアリール基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｚは、アリール基もしくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、またはハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ基で置換されていてもよいアリール基である］。
【００４７】
式１の好ましい実施形態において、ＹおよびＺがともにＮであり、ＸがＯの場合、フェニル環の−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ１基は、メタ位にない。別の実施形態では、ＹおよびＺがともにＮであり、ＸがＯの場合、フェニル環の−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ１基は、オルトまたはパラ位にない。
【００４８】
式１の他の好ましい実施形態では、Ｗが置換されていてもよい５または６員のヘテロ環である場合、ヘテロ環は、チエニル基、フリル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピペリジル基およびピリジル基を含む基から選択されてよく、ヘテロ環は、一つ以上の独立して選択されるオキソ基、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、−Ｃ（Ｏ）−ＲＸ基、ならびに／または一つ以上の独立して選択されるハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、アリールオキシ基、−ＮＲＸＲＹ基、および／もしくはアルキルチオ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、で任意に置換されてよい。
【００４９】
式１の他の好ましい実施形態では、Ｗが置換されていてもよい５または６員のヘテロ環である場合、置換されていてもよいヘテロ環は、チエニル基、フリル基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいピラジニル基、１または２つのオキソ基で置換されていてもよいピリミジニル基、１または２つのオキソ基で置換されていてもよいピリダジニル基、−Ｃ（Ｏ）−ＲＸ基で置換されていてもよいピペリジル基、およびハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、アリールオキシ基、−ＮＲＸＲＹ基、およびアルキルチオ基で置換されていてもよいピリジル基からなる群より選択できる。
【００５０】
式１のさらに別の好ましい実施形態では、Ｗが２から３つの環構造を有する置換されていてもよいヘテロ環である場合、ヘテロ環は、ベンゾジオキソリル基、一つ以上の独立して選択されるハロゲンで置換されていてもよいベンゾ［１，３］ジオキシニル基、一つ以上の独立して選択される  Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ１−Ｃ４ハロアルキル基で置換されていてもよいベンズイミダゾリル基、ベンゾチアゾリル基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいベンゾトリアゾリル基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいベンゾチエニル基、ベンゾ［１，２，５］オキサジアゾリル基、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル基、ベンゾフリル基、キノキサリニル基、インドリル基、キノリニル基、および以下の基から選択される置換基（＊は結合手を示す）、からなる群より選択できる。
【化３】
2008515985.tif 000005
【００５１】
当業者には理解されるように、本発明の特定の化合物は少なくとも一つのキラル中心を含むことができ、また、そのためラセミ混合物またはエナンチオマー的に純粋な組成物として存在しうる。本明細書で用いる「エナンチオマー的に純粋」とは、実質的に単一の異性体からなる組成物、好ましくは９０％、９２％、９５％、９８％、９９％または１００％の単一の異性体からなる組成物をさす。
【００５２】
本明細書で用いる「アルキル」とは、一般に、直鎖状、分枝状または環状の飽和ヒドロカルビル基を意味し、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、シクロヘキシル、ｎ−ヘプチル、オクチル、ｎ−オクチルなどが含まれる。いくつかの実施形態において、アルキル置換基は、Ｃ１−Ｃ８、Ｃ３−Ｃ８、Ｃ１−Ｃ６、またはＣ１−Ｃ４アルキル基でもよい。特定の実施形態において、アルキル基は一つ以上のハロゲンまたはアルコキシ基によって任意に置換されていてもよい。例えば、アルキル基はハロアルキルを形成するために一以上のハロゲン置換基を含んでもよく、このハロアルキルとしてモノハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキルが含まれる。
【００５３】
本明細書で用いる「アルケニル」とは、一般に、一つ以上の炭素−炭素二重結合を有する直鎖状、分枝状、または環状のアルケン基をさし、例えば３−プロペニルを含むＣ２−Ｃ６アルキレン基などである。
【００５４】
本明細書で用いる「アリール」とは、炭素環式芳香環構造をさす。アリール基の範囲に含まれるものとして、５〜２０個の炭素原子を有する芳香環がある。アリール環構造には一つ以上の環構造を有する化合物、例えば単環式、二環式、三環式化合物が含まれる。アリール基の例として、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、フェナントレニル（すなわちフェナントレン）、ナフチル（すなわちナフタレン）環状構造がある。特定の実施形態において、アリール基は任意に置換されてもよい。
【００５５】
本明細書で用いる「ヘテロ環」とは、一つ以上の環原子が炭素以外のヘテロ原子である環構造をさす。ヘテロ原子として典型的なものは、酸素、硫黄、または窒素原子である。ヘテロ環に含まれる範囲の中で、さらに独立して選択可能なものは、酸素、窒素、硫黄へテロ環構造である。ヘテロ環構造は一つ以上の環構造をもつ化合物、例えば単環式、二環式、または三環式化合物を含み、また、芳香族であってもよい（すなわち、環構造がヘテロアリールであってもよい）。ヘテロ環は、ベンゾ融合へテロ環構造を含みうる。非限定的なヘテロ環基の例として、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、またはテトラヒドロチオピラニルなどがある。特定の実施形態において、ヘテロ環は任意に置換されてもよい。本明細書で用いる「ヘテロアリール」とは、一つ以上の環原子が炭素以外のヘテロ原子である芳香環構造をさす。ヘテロ原子として典型的なものは、酸素、硫黄、または窒素原子である。ヘテロアリールに含まれる範囲の中で、さらに独立して選択可能なものは、酸素、窒素、硫黄ヘテロアリール環構造である。環構造は一つ以上の環構造をもつ化合物、例えば単環式、二環式、三環式化合物を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、二つ以上、三つ以上、または四つ以上のヘテロ原子を含むヘテロアリール基から選択してもよい。ヘテロアリール環構造は、五つ以上の原子、六つ以上の原子、または八つ以上の原子を含むものから選択してもよい。好ましい実施形態では、ヘテロアリールは５〜１０個の原子を含む。ヘテロアリール環構造の例として、以下のものが含まれる：アクリジン、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾジオキソール、ベンゾフラン、１,３−ジアジン、１，２−ジアジン、１，２−ジアゾール、１，４−ジアザナフタレン、フラン、フラザン、イミダゾール、インドール、イソキサゾール、イソキノリン、イソチアゾール、オキサゾール、プリン、ピリダジン、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピロール、キノリン、キノキサリン、チアゾール、チオフェン、１,３，５−トリアジン、１，２，４−トリアジン、１，２，３−トリアジン、テトラゾール、およびキナゾリン。
【００５６】
本明細書で用いる「アルコキシ」とは、通常−Ｏ−Ｒ構造を有する基をさす。特定の実施形態において、Ｒはアルキル基、例えばＣ１−Ｃ８、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、またはＣ１−Ｃ４アルキル基である。ある実施形態において、アルコキシのＲ基は少なくとも一つのハロゲンで任意に置換されていてもよい。例えば、アルコキシのＲ基はハロアルキルであり、すなわちハロアルコキシである。
【００５７】
ハロゲン置換基はハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、およびアスタチンから独立して選択することができる。
【００５８】
本発明の解釈上、一つ以上の官能基または置換基が本発明の化合物に組み込まれている場合、開示された化合物の任意の位置に出現する官能基または置換基は、それぞれ独立して選択され、また必要に応じて独立して置換され得る。さらに、よりジェネリックな置換基が本発明の分子の任意の位置に記載される場合には、そのジェネリックな置換基をより具体的な置換基で置き換えることができ、結果として生じる分子は本発明の分子の範囲内にある。
【００５９】
式１に関して、好ましいＷ基には以下の表に記載のものが含まれる（＊は結合手を示す）。
【化４】
2008515985.tif 000006
【００６０】
2008515985.tif 000007
【００６１】
2008515985.tif 000008
【００６２】
2008515985.tif 000009
【００６３】
2008515985.tif 000010
【００６４】
2008515985.tif 000011
【００６５】
2008515985.tif 000012
【００６６】
好ましい実施形態では、式１の化合物は式１−Ａの化合物を含む。
【化５】
2008515985.tif 000013
【００６７】
式１−Ａを参照すると、好ましい実施形態では、カルボキシ基は、好ましくはメタ位またはパラ位にある。他の好ましい実施形態では、カルボキシ基は、好ましくはパラ位にある。さらに、Ｒ３は、好ましくは存在しないか、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、またはニトロ基である。式１−Ａの化合物の好ましい実施形態では、Ｗは、式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。式１−Ａの他の実施形態では、好ましいＷ基を以下の表に示す。
【化６】
2008515985.tif 000014
【００６８】
2008515985.tif 000015
【００６９】
2008515985.tif 000016
【００７０】
2008515985.tif 000017
【００７１】
2008515985.tif 000018
【００７２】
2008515985.tif 000019
【００７３】
他の好ましい実施形態では、式１の化合物は式１−Ｂの化合物を含む。
【化７】
2008515985.tif 000020
【００７４】
式１−Ｂを参照すると、一つの実施形態では、カルボキシ基は、好ましくはパラ位にある。他の実施形態は、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキルで置換されていてもよいフェニルである。式１−Ｂの好ましい化合物を以下に示す。
【化８】
2008515985.tif 000021
【００７５】
さらに他の実施形態では、好ましい式１の化合物は式１−Ｃの化合物を含む
【化９】
2008515985.tif 000022
【００７６】
式１−Ｃを参照すると、一つの実施形態では、カルボキシ基はパラ位にある。他の実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。
【００７７】
他の実施形態では、好ましいＷ基は以下の表に示されるものを含む。
【化１０】
2008515985.tif 000023
【００７８】
2008515985.tif 000024
【００７９】
さらに他の実施形態では、好ましい式１の化合物は式１−Ｄの化合物を含む。
【化１１】
2008515985.tif 000025
【００８０】
式１−Ｄを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらに、Ｒ１は、好ましくは水素またはメチルである。Ｒ３は、好ましくはメタ位にある。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。他の実施形態では、好ましいＷ基は以下の表に示されるものを含む。
【化１２】
2008515985.tif 000026
【００８１】
2008515985.tif 000027
【００８２】
さらに他の実施形態では、好ましい式１の化合物は式１−Ｅの化合物を含む
【化１３】
2008515985.tif 000028
【００８３】
式１−Ｅを参照すると、一つの実施形態では、カルボキシ基は、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらに、一つの実施形態では、Ｒ４は、好ましくは水素である。一つの実施形態では、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。他の実施形態では、好ましいＷ基は以下の表に示されるものを含む。
【化１４】
2008515985.tif 000029
【００８４】
他の実施形態では、好ましい式１の化合物は、式１−Ｆの化合物を含む。
【化１５】
2008515985.tif 000030
【００８５】
式１−Ｆを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位またはパラ位にあり、さらに好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ４は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。他の実施形態において、好ましいＷ基は、以下の表に示されるものを含む。
【化１６】
2008515985.tif 000031
【００８６】
2008515985.tif 000032
【００８７】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｇの化合物を含む。
【化１７】
2008515985.tif 000033
【００８８】
式１−Ｇを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。他の実施形態において、好ましいＷ基は以下の表に示されるものを含む。
【化１８】
2008515985.tif 000034
【００８９】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は式１−Ｈの化合物を含む。
【化１９】
2008515985.tif 000035
【００９０】
式１−Ｈを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素またはＣ１−Ｃ４アルキルである。Ｒ３は、存在する場合、好ましくはオルト位にあり、好ましくはヒドロキシ基である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはフェニル基である。他の実施形態において、式１−Ｈの好ましい化合物を以下に示す。
【化２０】
2008515985.tif 000036
【００９１】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は式１−Ｉの化合物を含む。
【化２１】
2008515985.tif 000037
【００９２】
式１−Ｉを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ４は、好ましくは水素である。式１−Ｉの一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである。式１−Ｉの他の実施形態において、Ｗは、好ましくはナフチル基、ピリジル基であり、あるいはＷとＲ４は一緒になって、これらが結合するヘテロ環と、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成する。式１−Ｉの好ましい実施形態において、ＷとＲ４は一緒になって、これらが結合するヘテロ環と、以下のようなヘテロ三環式環構造を形成する。＊は、式１−Ｉのフェニル環への結合手を示す。
【化２２】
2008515985.tif 000038
【００９３】
さらに他の実施形態において、式１−Ｉの化合物の好ましいＷ基は、以下の表に示されるものを含む。
【化２３】
2008515985.tif 000039
【００９４】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｊの化合物を含む。
【化２４】
2008515985.tif 000040
【００９５】
式１−Ｊを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ４は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｊの好ましい化合物を以下に示す。
【化２５】
2008515985.tif 000041
【００９６】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｋの化合物を含む。
【化２６】
2008515985.tif 000042
【００９７】
式１−Ｋを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ１は、好ましくは水素またはメチルである。Ｒ２は、存在する場合、好ましくは水素、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、またはシアノ基である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール、または式１と同様に置換されていてもよいナフチル基である。他の実施形態において、好ましいＷ基は、以下の表に示されるものを含む。
【化２７】
2008515985.tif 000043
【００９８】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｌの化合物を含む。
【化２８】
2008515985.tif 000044
【００９９】
式１−Ｌを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位またはパラ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ１は、好ましくは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基である。Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態において、好ましいＷ基は、以下の表に示されるものを含む。
【化２９】
2008515985.tif 000045
【０１００】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｍの化合物を含む。
【化３０】
2008515985.tif 000046
【０１０１】
式１−Ｍを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態において、式１−Ｍの好ましい化合物を以下に示す。
【化３１】
2008515985.tif 000047
【０１０２】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｎの化合物を含む。
【化３２】
2008515985.tif 000048
【０１０３】
式１−Ｎを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ４は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｎの好ましい化合物を以下に示す。
【化３３】
2008515985.tif 000049
【０１０４】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｏの化合物を含む。
【化３４】
2008515985.tif 000050
【０１０５】
式１−Ｏを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｊの好ましい化合物を以下に示す。
【化３５】
2008515985.tif 000051
【０１０６】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｐの化合物を含む。
【化３６】
2008515985.tif 000052
【０１０７】
式１−Ｐを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施実施形態における、式１−Ｐの好ましい化合物を以下に示す。
【化３７】
2008515985.tif 000053
【０１０８】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｑの化合物を含む。
【化３８】
2008515985.tif 000054
【０１０９】
式１−Ｑを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｑの好ましい化合物を以下に示す。
【化３９】
2008515985.tif 000055
【０１１０】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｒの化合物を含む。
【化４０】
2008515985.tif 000056
【０１１１】
式１−Ｒを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｒの好ましい化合物を以下に示す。
【化４１】
2008515985.tif 000057
【０１１２】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｓの化合物を含む。
【化４２】
2008515985.tif 000058
【０１１３】
式１−Ｓを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素であり、または式１同様に置換されていてもよいカルボニル基である。Ｒ４は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｓの好ましい化合物を以下に示す。
【化４３】
2008515985.tif 000059
【０１１４】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｔの化合物を含む。
【化４４】
2008515985.tif 000060
【０１１５】
式１−Ｔを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいカルボニルまたは水素である。Ｒ４は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｔの好ましい化合物を以下に示す。
【化４５】
2008515985.tif 000061
【０１１６】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｕの化合物を含む。
【化４６】
2008515985.tif 000062
【０１１７】
式１−Ｕを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｕの好ましい化合物を以下に示す。
【化４７】
2008515985.tif 000063
【０１１８】
さらに他の実施形態において、好好ましい式１の化合物は、式１−Ｖの化合物を含む。
【化４８】
2008515985.tif 000064
【０１１９】
式１−Ｖを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｖの好ましい化合物を以下に示す。
【化４９】
2008515985.tif 000065
【０１２０】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｗの化合物を含む。
【化５０】
2008515985.tif 000066
【０１２１】
式１−Ｗを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｗの好ましい化合物を以下に示す。
【化５１】
2008515985.tif 000067
【０１２２】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｘの化合物を含む。
【化５２】
2008515985.tif 000068
【０１２３】
式１−Ｘ参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ２は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｘの好ましい化合物を以下に示す。
【化５３】
2008515985.tif 000069
【０１２４】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｙの化合物を含む。
【化５４】
2008515985.tif 000070
【０１２５】
式１−Ｙ参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。さらなる実施形態において、Ｒ４は、好ましくは水素である。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールであり、さらに好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいフェニルである。他の実施形態における、式１−Ｙの好ましい化合物を以下に示す。
【化５５】
2008515985.tif 000071
【０１２６】
さらに他の実施形態において、好ましい式１の化合物は、式１−Ｚの化合物を含む。
【化５６】
2008515985.tif 000072
【０１２７】
式１−Ｚを参照すると、一実施形態において、カルボキシ基は、好ましくはメタ位にある。一実施形態において、Ｗは、好ましくは式１と同様に置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリールである、ピリジル基、またはチエニル基である。他の実施形態において、好ましいＷ基は、以下の表に示されるものを含む。
【化５７】
2008515985.tif 000073
【０１２８】
本発明の他の実施形態において、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する未熟な翻訳終結の抑制、およびｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾患を治療するに有用な、式（２）の化合物、またはその化合物の薬剤として許容される塩、水和物、溶媒和物、包椄体、ラセミ体、立体異性体もしくは多形体  ：
【化５８】
2008515985.tif 000074
【０１２９】
［式中：
Ｘ、ＹおよびＺは、Ｎ、Ｓ、ＯおよびＣから独立して選択され、ここでＸ、ＹまたはＺの少なくとも一つがヘテロ原子であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮａ＋もしくはＭｇ２＋であり、
Ｒ２は、独立して、存在しないか、水素、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＨ基、シアノ基、ヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、または水素、ヒドロキシルもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいカルボニル基であり、
Ｒ３は、独立して、存在しないか、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはニトロ基であり、
Ｒ４は、独立して、存在しないか、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＷと一緒のとき、Ｒ４は結合であってよく、ＷおよびＲ４とＷが結合するヘテロ環は１１〜１３員ヘテロ三環式環構造を形成し、
ｑは、０、１、または２であり、
Ｗは、以下から選択され：
（ａ）フェニルで置換されていてもよいＣ２−Ｃ６アルキニル、
（ｂ）一つ以上の以下の独立して選択される基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ８直鎖または分枝鎖アルキル基：Ｃ１−Ｃ６アルキル；ハロゲン；フェニルが一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよい−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−フェニル；５〜６員のヘテロ環；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基；ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上のＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基から独立して選択された一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ基、
（ｃ）Ｃ２−Ｃ８アルケニル、
（ｄ）Ｃ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル、
（ｅ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ；ハロゲン；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはヒドロキシ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４直鎖または分枝鎖アルキル；一つ以上の独立して選択されるハロゲンもしくはフェニル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ３−Ｃ８シクロアルキル；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール；以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいアリールオキシ：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、もしくは一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基；一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル、オキソ、もしくは以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール：ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、一つ以上の独立して選択されるＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環；アミノ、アミノアルキルもしくはアルコキシ基で置換されていてもよいナフチル基；−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；イソインドール−１，３−ジオン基；ニトロ基；シアノ基；−ＳＯ３Ｈ基；アルキルチオ基；アルキルスルホニル基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−Ｒｚ基；−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−ＳＯ２−Ｒｚ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基；−ＮＲｘ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒｚ基；
（ｆ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、アミノ基もしくはアミノアルキル基またはアルコキシ基で置換されていてもよいＣ１０−Ｃ１４アリール基、
（ｇ）−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘＲｙ基、
（ｈ）以下から独立して選択される一つ以上の基で置換されていてもよい５〜６員のヘテロ環：オキソ基；ハロゲン；Ｃ１−Ｃ４アルキル基；Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基；Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ基；アリールオキシ基；−ＮＲｘＲｙ基；アルキルチオ基；−Ｃ（Ｏ）−Ｒｘ基；もしくは一つ以上の独立して選択されたハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよいＣ６−Ｃ８アリール基、
（ｉ）一つ以上の独立して選択されるハロゲン、オキソ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル基もしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ基で置換されていてもよい２〜３環構造を有するヘテロ環基、
（ｊ）Ｒ４が結合であるときを含み、ＷとＲ４が、Ｒ４とＷが結合するヘテロ環と一緒になって、１１〜１３員のヘテロ三環式環構造を形成し、
ここで、Ｒｘは水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基であり、またはＲｘとＲｙはこれらが結合している原子と一緒になって、４〜７員の炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、一つ以上の独立して選択されたＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアリール基であり、またはＲｘおよびＲｙはこれらが結合している原子とともに、４〜７員炭素環もしくはヘテロ環を形成し、
Ｒｚは、アリール基もしくはハロゲンで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基、またはハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル基もしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ基で置換されていてもよいアリール基である］
。
【０１３０】
式２の実施形態において、式２の好ましい置換基は、式１と同様に選択できる。式２の好ましい実施形態において、式２の置換基は、式１−Ｅで記載されたように選択できる。
【０１３１】
式２の好ましい実施形態において、ｑは０である。式２の他の好ましい実施形態において、ｑは、１または２である。式２の好ましい実施形態において、ｑは１である。他の式２の実施形態において、ｑは２である。
【０１３２】
式２の好ましい実施形態において、Ｒ３は水素であり、ｑは１であり、−ＣＨ２−ＣＯＯＲ１基は、Ｘ、Ｙ、およびＺ置換基を含む５員環に対してパラ位にある。
【０１３３】
式２の化合物の別の実施形態では、Ｚは酸素であり、Ｙは窒素であり、および両方のＲ２基は存在しない。関連したより好ましい実施形態では、Ｘは炭素であり、Ｒ４は水素である。前述の２つの実施形態のいずれかにおいて、ｑは好ましくは１である。
【０１３４】
式２のさらにより好ましい化合物の実施形態では、Ｗは、一つ以上の独立して選択されるハロゲンで置換されているフェニル環である。他のより好ましい実施形態では、Ｚは酸素であり、Ｙは窒素であり、両方のＲ２基は存在せず、Ｘは炭素であり、Ｒ４は水素であり、ｑは１であり、Ｗは２つの独立して選択されるハロゲンで置換されているフェニル環である。さらにより好ましい実施例における、式２の化合物を以下に示す。
【化５９】
2008515985.tif 000075
【０１３５】
式２の化合物は、治療法、および式１の化合物で挙げられるような医薬組成物の調製において有用である。
【０１３６】
好ましい本発明の化合物は、以下に示す表Ｘの化合物を含む：
表Ｘ
2008515985.tif 000076
【０１３７】
2008515985.tif 000077
【０１３８】
2008515985.tif 000078
【０１３９】
2008515985.tif 000079
【０１４０】
2008515985.tif 000080
【０１４１】
2008515985.tif 000081
【０１４２】
2008515985.tif 000082
【０１４３】
2008515985.tif 000083
【０１４４】
2008515985.tif 000084
【０１４５】
2008515985.tif 000085
【０１４６】
2008515985.tif 000086
【０１４７】
2008515985.tif 000087
【０１４８】
2008515985.tif 000088
【０１４９】
2008515985.tif 000089
【０１５０】
2008515985.tif 000090
【０１５１】
2008515985.tif 000091
【０１５２】
2008515985.tif 000092
【０１５３】
2008515985.tif 000093
【０１５４】
2008515985.tif 000094
【０１５５】
2008515985.tif 000095
【０１５６】
2008515985.tif 000096
【０１５７】
2008515985.tif 000097
【０１５８】
2008515985.tif 000098
【０１５９】
2008515985.tif 000099
【０１６０】
2008515985.tif 000100
【０１６１】
2008515985.tif 000101
【０１６２】
2008515985.tif 000102
【０１６３】
2008515985.tif 000103
【０１６４】
2008515985.tif 000104
【０１６５】
2008515985.tif 000105
【０１６６】
2008515985.tif 000106
【０１６７】
2008515985.tif 000107
【０１６８】
2008515985.tif 000108
【０１６９】
2008515985.tif 000109
【０１７０】
2008515985.tif 000110
【０１７１】
2008515985.tif 000111
【０１７２】
2008515985.tif 000112
【０１７３】
2008515985.tif 000113
【０１７４】
2008515985.tif 000114
【０１７５】
2008515985.tif 000115
【０１７６】
2008515985.tif 000116
【０１７７】
2008515985.tif 000117
【０１７８】
2008515985.tif 000118
【０１７９】
2008515985.tif 000119
【０１８０】
2008515985.tif 000120
【０１８１】
2008515985.tif 000121
【０１８２】
2008515985.tif 000122
【０１８３】
2008515985.tif 000123
【０１８４】
2008515985.tif 000124
【０１８５】
2008515985.tif 000125
【０１８６】
2008515985.tif 000126
【０１８７】
2008515985.tif 000127
【０１８８】
2008515985.tif 000128
【０１８９】
2008515985.tif 000129
【０１９０】
2008515985.tif 000130
【０１９１】
2008515985.tif 000131
【０１９２】
2008515985.tif 000132
【０１９３】
2008515985.tif 000133
【０１９４】
2008515985.tif 000134
【０１９５】
2008515985.tif 000135
【０１９６】
2008515985.tif 000136
【０１９７】
2008515985.tif 000137
【０１９８】
2008515985.tif 000138
【０１９９】
2008515985.tif 000139
【０２００】
2008515985.tif 000140
【０２０１】
2008515985.tif 000141
【０２０２】
2008515985.tif 000142
【０２０３】
2008515985.tif 000143
【０２０４】
2008515985.tif 000144
【０２０５】
2008515985.tif 000145
【０２０６】
上記化合物は本発明の方法で用いることができる例を提供することのみを目的として提供される。本開示に基づいて、当業者は、本明細書に記載の方法において有用でありうる他の化合物が本発明の範囲内に含まれるものであることを理解するであろう。
【０２０７】
Ｂ．本発明の化合物の調製
本発明の化合物は、当該分野で公知のいかなる方法でも製造することができる。例として、本発明の化合物は、個々のアジン環コア構造に関して、以下の一般的スキームに従い調製することができる。例えば、式１−Ａの特定の１，３，４−オキサジアゾールは、以下のスキームＡ１に示される方法によって調製できる。
【化６０】
2008515985.tif 000146
【０２０８】
スキームＡ１に従って、例えば、アジ化ナトリウムで処理することにより、構造Ａ１のベンゾニトリルを構造Ａ２のテトラゾールに変換することができる。例えば、酸塩化物などの活性化カルボン酸またはジシクロヘキシルカルボジイミドなどの脱水剤で活性化される酸でテトラゾールＡ２を適当な溶媒において処理すると、式１−Ａの１，３，４−オキサジアゾール化合物が得られる。適当な溶媒には、例えば、これらに限定されないが、トルエンまたはジクロロエタンがある。反応は、通常６０〜１５０℃の温度範囲内で行われる。
【０２０９】
他の実施形態において、式１−Ａの特定の１，３，４−オキサジアゾールは、以下のスキームＡ２に示される方法論で調製することができる。
【化６１】
2008515985.tif 000147
【０２１０】
スキームＡ２に従って、構造Ａ３の活性化安息香酸は、置換ヒドラジドに反応して構造Ａ４の置換ベンゾイルヒドラジドを得ることができる。活性化基は、ハロゲン化物（例えば、酸塩化物または臭化物）または、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの脱水剤で安息香酸を処理することによって得られる。場合によって、例えば、トリエチルアミンなどの塩基を用いてもよい。そして、Ａ４型の化合物は脱水され、式１−Ａの化合物を形成する。標準的な脱水剤には、例えば、これらに限定されないが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、またはオキシ塩化リンがある。反応は、通常２０〜１２０℃の温度範囲内で行われる。
【０２１１】
さらに他の実施形態において、式１−Ａの特定の１，３，４−オキサジアゾールは、以下のスキームＡ３に示される方法で調製することができる。
【化６２】
2008515985.tif 000148
【０２１２】
スキームＡ３に従って、トリチル樹脂、２−クロロトリチルクロライド樹脂、フェニルアセタミドメチル（ＰＡＭ）樹脂、およびｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂などの、市販の酸に不安定な樹脂は、本発明に使用可能である。カルボン酸化合物Ａ６およびトリチル樹脂Ａ５（ここで、Ｘ＝２−クロロトリチルクロライド）の結合は、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの第３アミン試薬の存在下で、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフランなどの、適当な溶媒において行うことができる。樹脂固定化エステルＡ７は、ヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）またはジイソプロピルカルボジイミド、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ  −ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＲＯＰ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロライド（ＥＤＣ）などの、等価物の存在下で、ヒドラジドで処理し、アシルヒドラジドＡ８を得ることができる。あるいは、ヒドラジド樹脂Ａ１０は、ジメチルホルムアミドのジイソプロピルエチルアミンの有無にかかわらず、ジイソプロピルカルボジイミドまたはベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＲＯＰ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロライド（ＥＤＣ）などの等価物を使用して、通常のアミド結合生成反応のもと、Ａ７から適宜調製可能である。あるいは、樹脂固定化ヒドラジド樹脂Ａ１０は、ジイソプロピルカルボジイミドまたはベンゾトリアゾール１−イル−オキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＲＯＰ）などの、等価物を使用して、カルボン酸と反応させ、Ａ８を形成することができる。樹脂固定化Ａ８の閉環反応は、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ジオキサンまたはジメチルホルムアミドなどの不活性溶媒における、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの塩基で２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムクロリドを処理することによって生じ、１，３，４−オキシジアゾール化合物Ａ９を形成することができる。樹脂固定化オキサジアゾール化合物Ａ９は、ジクロロメタンの２Ｎトリフルオロ酢酸、またはジクロロメタンの３Ｎ酢酸などの酸性状態で切断し、式１−Ａの所望される化合物を得ることができる。
【０２１３】
式１−Ｂの特定の１，３，４−チアジアゾールは、以下のスキームＢに示される方法で調製することができる。
【化６３】
2008515985.tif 000149
【０２１４】
スキームＢに従って、例えば、トルエンまたはジオキサンなどの適切な非反応性有機溶媒において、ローソン試薬または五硫化リンなどのチオネートでベンゾイルヒドラジドＢ１を５０〜１２０℃の温度範囲で処理すると、式１−Ｂの１，３，４−チアジアゾール化合物が得られる。
【０２１５】
式１−Ｃの特定の１，２，４−オキサジアゾールは、以下のスキームＣ１に示される方法で調製することができる。  
【化６４】
2008515985.tif 000150
【０２１６】
スキームＣ１に従って、ベンゾニトリル化合物Ｃ１は、ヒドロキシルアミンまたはヒドロキシルアミン−ＨＣｌで処理することによってヒドロキシアミジンに変換することができる。ヒドロキシルアミン−ＨＣｌによる反応は、通常、トリエチルアミン、炭酸カリウムまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下で行われる。反応は、メタノール、エタノール、ｔ−ブタノール、テトラヒドロフランまたはジメチルホルムアミドなどの溶媒において、周囲温度〜選択した溶媒の還流温度の範囲で行われる。ヒドロキシアミジン化合物Ｃ２は、アシル誘導体Ｃ３でアシル化され、Ｌ基がハロ、イミダゾイルまたはｐ−ニトロフェノルなど、いくつかの離脱基を示す、化合物Ｃ４が得られる。反応は、通常、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基で、ジクロロメタン、テトラヒドロフランまたはジメチルホルムアミドなどの溶媒において行われる。代替方法として、アシル化は、ジイソプロピルエチルアミンの有無にかかわらず、ジイソプロピルカルボジイミドまたはベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートまたは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミドハイドロクロライドなどの等価物を使用して、Ｌ基がヒドロキシ基を示す、通常のエステル結合生成反応下で適宜行われる。アシル化した化合物Ｃ４の閉環は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の有無にかかわらず、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエンまたはジメチルホルムアミドなどの溶媒において、周囲温度〜選択した溶媒の還流温度の範囲で成し遂げられる。
【０２１７】
式１−Ｃの特定の１，２，４−オキサジアゾール化合物も、以下のスキームＣ２に示される固相化学を使用して、上記に記載される方法によって調製することができる。
【化６５】
2008515985.tif 000151
【０２１８】
スキームＣ２に従って、トリチル樹脂、２−クロロトリチルクロライド樹脂、フェニルアセタミドメチル（ＰＡＭ）樹脂、およびｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂などの、市販の酸に不安定な樹脂Ｃ５は、本実施例において使用可能である。安息香酸化合物Ｃ６およびトリチル樹脂（ここでＸ＝２−クロロトリチルクロライド）の結合は、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの第三アミン試薬の存在下で、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドまたはトルエンなどの適当な溶媒において行うことができる。樹脂固定化シアノ安息香酸エステルＣ７は、ジイソプロピルエチルアミンの有無にかかわらず、エタノール、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において、ヒドロキシルアミンで処理し、ヒドロキシアミジン化合物Ｃ８を得ることができる。樹脂固定化ヒドロキシアミジン化合物Ｃ８は、ハロ、イミダゾイル、ハロ、イミダゾイル、ｐ−ニトロフェノルなどの、Ｙ基が離脱基を示す、試薬（ＷＣＯＹ）でアシル化される。反応は、通常、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの塩基の存在下で、ジクロロメタン、テトラヒドロフランもしくはジメチルホルムアミドまたは混合物などの不活性溶媒において行われる。あるいは、アシル化は、ジメチルホルムアミドのジイソプロピルエチルアミンの有無にかかわらず、ジイソプロピルカルボジイミドまたはベンゾトリアゾール１−イル−オキシトリスピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートまたは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロライドなどの等価物を使用して、Ｙ基がヒドロキシルを示す試薬（ＷＣＯＹ）で適宜行われる。樹脂固定化アシル化化合物Ｃ９は、ジクロロメタン中の２Ｎトリフルオロ酢酸またはジクロロメタン中の３Ｎ酢酸などの酸性条件で切断され、所望される中間化合物Ｃ１０を得る。遊離酸化合物Ｃ１０上の閉環反応は、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンまたはフッ化テトラブチルアンモニウムなどの塩基試薬の有無にかかわらず、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたは混合物などの不活性溶媒において加熱することによって生じ、式１−Ｃの１，２，４−オキシジアゾール化合物を得ることができる。
【０２１９】
式１−Ｄの特定の１，２，４−オキサジアゾールは、以下のスキームＤ１に示される方法で調製することができる。
【化６６】
2008515985.tif 000152
【０２２０】
スキームＤ１に従って、構造Ｄ１の塩化アシルは、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの塩基の存在下で、ジクロロメタン、テトラヒドロフランもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において、ヒドロキシアミジン試薬Ｄ２で処理することができる。ヒドロキシアミジン化合物Ｄ２は、例えば、エタノール、ジオキサン、またはテトラヒドロフランなどの不活性溶媒においてヒドロキシルアミンでニトリルを処理することによって適宜調製可能である。化合物Ｄ３の閉環は、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンまたはフッ化テトラブチルアンモニウムなどの塩基試薬の有無にかかわらず、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において加熱して、式１−Ｄの１，２，４−オキサジアゾール化合物を得ることができる。
【０２２１】
式１−Ｄの特定の１，２，４−オキサジアゾール化合物も、以下のスキームＤ２に示される固相化学を使用して、上記に記載される方法によって調製することができる。
【化６７】
2008515985.tif 000153
【０２２２】
スキームＤ２に従って、トリチル樹脂、２−クロロトリチルクロライド樹脂、フェニルアセタミドメチル（ＰＡＭ）樹脂、またはｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂、などの市販の酸に不安定な樹脂Ｄ４は、本実施例において使用される。安息香酸化合物Ｄ５およびトリチル樹脂（ここでは、Ｘ＝２−クロロトリチルクロライド）の結合は、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの第三アミン試薬の存在下で、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、またはトルエンなどの適当な溶媒において行われ、アシル化樹脂Ｄ６が得られる。代替方法として、アシル化樹脂Ｄ６は、ジメチルホルムアミド中のジイソプロピルエチルアミンの有無にかかわらず、ジイソプロピルカルボジイミド（フェニルアセトアミドメチル樹脂およびｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂に対する）またはベンゾトリアゾール１−イル−オキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＯＰ）、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰＹＢＲＯＰ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロライド（ＥＤＣ）などの等価物を使用して、標準のエステル結合形成条件によって適宜調製される。樹脂固定化カルボキシ安息香酸エステルＤ６は、ジクロロメタン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、またはジメチルホルムアミドなどの不活性溶媒において、Ｎ−メチルモルホリン、トリエチルアミン、またはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどのシアヌル酸フッ化物および第三アミン塩基で処理され、アシルフッ化物化合物Ｄ７を得ることができる。
【０２２３】
コンビナトリアル化学法は、目的のライブラリ化合物を得るための各槽で使用される試薬の異なる組み合わせがある場合、多重反応槽を使用してよい。樹脂固定化アシルフッ化物化合物Ｄ７は、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、またはトリエチルアミンなどの塩基の存在下で、ジクロロメタン、テトラヒドロフランもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において構造Ｄ８の試薬で処理され、化合物Ｄ９を得る。ヒドロキシアミジンＤ８は、エタノール、ジオキサン、またはテトラヒドロフランなどの不活性溶媒において、ヒドロキシルアミンでニトリルを処理することによって適宜調製できる。樹脂固定化アシル化化合物Ｄ９は、ジクロロメタン中の２Ｎトリフルオロ酢酸またはジクロロメタン中の３Ｎ酢酸などの酸性条件下で切断され、所望される化合物Ｄ１０を得ることができる。遊離酸化合物Ｄ１０の閉環は、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンまたはフッ化テトラブチルアンモニウムなどの塩基試薬の有無にかかわらず、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において加熱することによって生じ、式１−Ｄの１，２，４−オキシジアゾール化合物を得ることができる。
【０２２４】
式１−Ｅの特定のオキサゾールは、以下のスキームＥ１に示される方法で調製することができる。
【化６８】
2008515985.tif 000154
【０２２５】
スキームＥ１に従って、構造Ｅ１のα−ブロモケトンは、例えば、ウロトロピンなどの試薬で構造Ｅ２のα−アミノケトンに変換することができる。塩基の存在下でα−アミノケトンＥ２をＥ３型の活性化酸と反応させると、構造  Ｅ４の化合物を得ることができる。活性化酸Ｅ３は、酸塩化物またはアシルイミダゾライドのいずれかであり得る。周囲温度〜１２０℃の温度範囲内で、五酸化リンまたはオキシ塩化リンなどの試薬で中間体Ｅ４を脱水させると、式１−Ｅのオキサゾールが得られる。
【０２２６】
式１−Ｅの特定のオキサゾールも、以下のスキームＥ２に示される方法で調製することができる。
【化６９】
2008515985.tif 000155
【０２２７】
スキームＥ２に従って、一つのカルボキシ基が酸塩化物または同様の活性化基として活性化されるカルボン酸Ｅ５は、トリエチルアミンなどの塩基の存在下でＥ６型のエチルアミン（Ｌ２が離脱基）と反応し、ジヒドロオキサゾールＥ７を得ることができる。アゾビスイソブチロニトリルなどのラジカル開始剤の触媒量で還流四塩化炭素中のＮ−ブロモスクシンイミドでＥ７を反応させると、ブロモオキサゾールＥ８が得られる。ブロモオキサゾールＥ８は、これらに限定されないが、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）またはジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）などのＰｄ触媒、およびフッ化セシウムまたは炭酸カリウムなどの塩基、およびトルエン、ジメチルホルムアミドまたはジメトキシエタンなどの溶媒の存在下で、アリールボロン酸Ｅ９と反応し、式１−Ｅのオキサゾール  化合物を得ることができる。
【０２２８】
式１−Ｆの特定のオキサゾールは、以下のスキームＦに示される方法で調製することができる。
【化７０】
2008515985.tif 000156
【０２２９】
スキームＦに従って、構造Ｆ１のエステルおよび水酸化アンモニウムのアミド形成は、水、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの適当な溶媒において加熱して行われ、構造Ｆ２の化合物を得ることができる。６０〜１５０℃の温度で、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において、α−ブロモケトンで構造Ｆ２の化合物を加熱すると、式１−Ｆの目的とするオキサゾール化合物を得ることができる。
【０２３０】
式１−Ｇの特定のピラゾールは、以下のスキームＧ１に示される方法論または当業者によって調製可能である。
【化７１】
2008515985.tif 000157
【０２３１】
スキームＧ１に従って、置換ジケトンＧ３は、テトラヒドロフランなどの適当な溶媒において水素化ナトリウムで置換アセトフェノンＧ２を処理し、その後Ｇ１型のシアノ安息香酸エステルで後続反応させることによって調製可能である。１ポットのマイクロ波シーケンスでは、構造Ｇ３の１，３−ジケトンは、３００Ｗの電力で、１００℃以下の温度にて、エタノールなどのプロトン性溶媒における無水ヒドラジンの１．１の等価物と反応し、後に、同一のマイクロ波状態で含水１Ｎ水酸化ナトリウムの６つの等価物と反応し式１−Ｇのピラゾール酸を得る、Ｇ４型のピラゾールベンゾニトリルを得ることができる。
【０２３２】
式１−Ｇの特定のピラゾールも、以下のスキームＧ２に示される方法で調製することができる。
【化７２】
2008515985.tif 000158
【０２３３】
スキームＧ２に従って、例えば、水素化ナトリウムなどの塩基の存在下で、テトラヒドロフランなどの適当な溶媒において、Ｇ６型の置換アセトフェノンでＧ５型のエステルを反応させると、構造Ｇ７の１，３−ジケトンを得ることができる。エステルの加水分解によって、構造Ｇ８のカルボン酸が得れる。その後、酸は、還流のエタノールなどのプロトン性溶媒において、ヒドラジンと反応し、式１−Ｇのピラゾールを得ることができる。
【０２３４】
式１−Ｉの特定のチアゾールは、以下のスキームＩに示される方法で調製することができる。
【化７３】
2008515985.tif 000159
【０２３５】
スキームＩに従って、構造Ｉ１のベンゾニトリルは、還流温度で、水、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において、ジチオリン酸ジエチルエステルで処理することによって、構造Ｉ２のチオアミド化合物に変換することができる。あるいは、硫化水素ガスは、ニトリルをチオアミドに変換するために使用可能である。トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において、チオアミドＩ２を加熱してα−ブロモケトンＩ３と反応させると、式１−Ｉの目的とするチアゾールを得ることができる。
【０２３６】
式１−Ｊの特定のチアゾールは、以下のスキームＪに示される方法で調製することができる。
【化７４】
2008515985.tif 000160
【０２３７】
スキームＪに従って、構造Ｊ１のα−アミノケトンは、例えば、場合によって、トリエチルアミンなどの塩基の存在下で、適当に非反応性有機溶媒において、例えば、酸塩化物またはアシルイミダゾライドなどのＪ２型の活性化カルボン酸誘導体と反応し、構造Ｊ３の化合物を得ることができる。例えば、ピリジンなどの溶媒の存在下で、五硫化リンでＪ３型の化合物を加熱すると、式１−Ｊのチアゾールを得ることができる。
【０２３８】
式１−Ｋの特定のオキサゾールは、以下のスキームＫに示される方法で調製することができる。
【化７５】
2008515985.tif 000161
【０２３９】
スキームＫに従って、構造Ｋ２のオキシムは、エタノールなどのプロトン性溶媒において、ヒドロキシルアミンハイドロクロライドおよびピリジンなどの塩基を使用して、構造Ｋ１の市販のベンズアルデヒドから誘導可能である。塩酸ガス触媒の存在下で、ジメチルホルムアミドのＮ−クロロスクシンイミドでオキシムＫ２を反応させると、構造Ｋ３のα−クロロオキシムを得ることができる。０℃から室温でトリエチルアミンなどの塩基および市販または当業者によって調製された置換アセチレンで、ジクロロメタンなどの適当な有機溶媒においてＫ３を処理すると、式１−Ｋのイソオキサゾールエステルを得ることができる。
【０２４０】
式１−Ｌの特定のイソオキサゾールは、以下のスキームＬに示される方法で調製することができる。
【化７６】
2008515985.tif 000162
【０２４１】
スキームＬに従って、構造Ｌ２のオキシムは、プロトン性溶媒、好ましくはエタノールにおいて、ヒドロキシルアミンハイドロクロライドおよびピリジンなどの塩基を使用して、構造Ｌ１の市販のベンズアルデヒドから誘導することができる。塩酸ガス触媒の存在下で、ジメチルホルムアミドにおけるＮ−クロロスクシンイミドでオキシムＬ２を反応させると、構造Ｌ３のα−クロロオキシムを得ることができる。０℃から室温でトリエチルアミンなどの塩基、および対応するヨウ化物Ｌ５からの二段階シーケンスを使用して当業者によって調製された置換アセチレンＬ４で、ジクロロメタンなどの適当な有機溶媒において、Ｌ３を処理すると、式１−Ｌの化合物を得ることができる。あるいは、ヨウ化物の代わりに臭化物および塩化物などの、式Ｌ５の他のハロゲン化物も、当業者によってアセチレン  Ｌ４への二段階変化を生じさせるために使用可能である。
【０２４２】
式１−Ｍの特定のイミダゾールは、以下のスキームＭに示される方法で調製することができる。
【化７７】
2008515985.tif 000163
【０２４３】
スキームＭに従って、非反応性溶媒の存在下で、構造Ｍ２のα−ブロモケトンで構造Ｍ１のアミジンを加熱すると、式１−Ｍのイミダゾールが得られる。アミジンは、市販で、または例えば、ナトリウムアミドまたはヘキサメチルジシラザンナトリウムなどで適切な  ニトリル前駆体を処理することによって、当業者に周知の方法で得られる。Ｍ１とＭ２の間の反応は、周囲温度〜１５０℃の温度範囲で行うことができる。
【０２４４】
式１−Ｎの特定のイミダゾールは、以下のスキームＮに示される方法で調製することができる。
【化７８】
2008515985.tif 000164
【０２４５】
スキームＮに従って、非反応性溶媒の存在下で、構造Ｎ２のアミジンで構造  Ｎ１のα−ブロモケトンを加熱すると、式１−Ｎのイミダゾールが得られる。アミジンは、リチウムまたはヘキサメチルジシラザンナトリウムなどで適切なニトリル前駆体を処理することによって、当業者に公知の方法で調製することができる。Ｎ１とＮ２の間の反応は、周囲温度〜１５０℃の温度範囲で行うことができる。
【０２４６】
式１−Ｏの特定のチアゾールは、以下のスキームＯに示される方法で調製することができる。
【化７９】
2008515985.tif 000165
【０２４７】
スキームＯに従って、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において、チオアミドＯ１を加熱してα−ブロモケトンＯ２と反応させると、式１−Ｏの目的とするチアゾール化合物が得られる。チオアミドは、市販で、またはローソン試薬または五硫化リンなどの試薬でアミドから調製して、または硫化水素またはジチオリン酸ジエチルエステルなどの試薬でニトリルから調製して得られる。
【０２４８】
式１−Ｐの特定のチアゾールは、以下のスキームＰ１に示される方法で調製することができる。
【化８０】
2008515985.tif 000166
【０２４９】
スキームＰ１に従って、構造Ｐ１のα−ブロモケトンは、例えば、ウロトロピンで構造Ｐ２のα−アミノケトンに変換することができる。塩基の存在下で、Ｐ３型のカルボン酸誘導体とα−アミノケトンＰ２を反応させると、構造Ｐ４の化合物が得られる。周囲温度〜１２０℃の温度範囲内で、五硫化リンなどの試薬で中間体Ｐ４をチオ脱水および同時環化させると、式１−Ｐのチアゾールが得られる。
【０２５０】
式１−Ｐの特定のチアゾールは、以下のスキームＰ２に示される方法で調製することができる。
【化８１】
2008515985.tif 000167
【０２５１】
スキームＰ２に従って、α−アミノケトン  Ｐ５（スキームＲに記載されるように調製された）は、場合によって、例えば、トリエチルアミンなどの存在下で、適当な溶媒において、例えば、酸塩化物またはアシルイミダゾライドなどの活性化カルボン酸誘導体（Ｐ６）と反応し、構造Ｐ７の化合物を得ることができる。周囲温度〜１２０℃の温度範囲内で、五硫化リンまたはローソン試薬などの試薬でＰ７をチオ脱水させると、式１−Ｐのチアゾール化合物が得られる。
【０２５２】
式１−Ｑの特定のオキサゾールは、以下のスキームＱに示される方法で調製することができる。
【化８２】
2008515985.tif 000168
【０２５３】
スキームＱに従って、構造Ｑ１の市販のカルボキサミド、または市販の酸塩化物またはカルボン酸から調製されたカルボキサミドは、構造  Ｑ２のα−ブロモケトンと反応し、式１−Ｑのオキサゾール化合物を得ることができる。反応は、６０〜１５０℃の温度で、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサンもしくはジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物などの不活性溶媒において行われる。
【０２５４】
式１−Ｒの特定のオキサゾールは、以下のスキームＲに示される方法で調製することができる。
【化８３】
2008515985.tif 000169
【０２５５】
スキームＲに従って、構造Ｒ１のα−ブロモケトンは、アジ化ナトリウムとの最初の置換によってα−アミノケトンに変換し、α−アジドケトンＲ２を得ることができる。α−アミノケトンＲ３への変換は、塩酸などの酸の存在下で、接触水素化を介してα−アジドケトンの還元によって行うことができる。還元は、プロトン性または非プロトン性溶媒のいずれかの存在かで、１〜４の大気圧で行うことができる。活性触媒は、例えば、白金または炭上のパラジウム金属であり得る。そして、α−アミノケトンＲ３は、場合によって、例えば、トリエチルアミンなどの塩基の存在下で、適当な溶媒において、例えば、酸塩化物またはアシルイミダゾライドなどの活性化カルボン酸誘導体（Ｒ４）と反応し、構造Ｒ５の化合物を得ることができる。周囲温度〜１２０℃の温度範囲内で、五酸化リンまたはオキシ塩化リンなどの試薬で中間体Ｒ５を脱水させると、式１−Ｒのオキサゾールが得られる。
【０２５６】
式１−Ｔの特定のフランは、以下のスキームＴに示される方法で調製することができる。
【化８４】
2008515985.tif 000170
【０２５７】
スキームＴに従って、構造Ｔ１のケトエステルと構造Ｔ２のα−ブロモケトンの間の反応によって、構造Ｔ３の中間化合物が得られる。ケトエステルＴ１は、当業者に周知の多数の方法によって得ることができる。脱水を容易にする条件の下で中間化合物Ｔ３を加熱すると、Ｒ２がエステル基である、式１−Ｔのフラン化合物が得られる。反応は、例えば、ＨＣｌまたはｐ−トルエンスルホン酸などの酸の存在下で行うことができ、または脱水および環化を誘導するために、オキシ塩化リンまたは五酸化リンなどの試薬の存在下で加熱することができる。
【０２５８】
中間体Ｔ３の脱炭酸によって、Ｔ４型の化合物が得られる。脱炭酸反応の条件には、例えば、Ｈ２Ｏ−ＤＭＳＯの塩化ナトリウムまたはピリジンのＬｉＩなどの非反応性溶媒において求核剤で加熱する、または選択的加水分解、脱炭酸されるエステルがｔ−ブチルの場合はトリフルオロ酢酸、脱炭酸されるエステルがベンジルエステルの場合は接触還元がある。脱水を容易にする条件のもとで得られた中間化合物Ｔ４を加熱すると、式１−Ｔのフラン化合物を得ることができる。反応は、ＨＣｌまたはｐ−トルエンスルホン酸などの酸の存在下で行うことができ、または脱水および環化を誘導するために、オキシ塩化リンまたは五酸化リンなどの試薬の存在下で加熱することができる。
【０２５９】
式１−Ｕの特定の１，２，４−チアジアゾールは、以下のスキームＵに示される方法で調製することができる。
【化８５】
2008515985.tif 000171
【０２６０】
スキームＵに従って、例えば、トリクロロメチルスルフェニルクロライド（Ｕ２）などのチオネート試薬と共に構造Ｕ１のアミド化合物を加熱すると、オキサチアゾール中間化合物Ｕ３を得ることができる。反応は、通常、トルエンまたはキシレンなどの非反応性溶媒において行われ、または８０〜１５０℃で加熱される。それによって構造Ｕ４のニトリルで高温で形成されたオキサチアゾール化合物の反応によって、式１−Ｕの１，２，４−チアジアゾール化合物を得ることができる。
【０２６１】
式１−Ｖの特定の１，２，４−チアジアゾールは、以下のスキームＶに示される方法で調製することができる。
【化８６】
2008515985.tif 000172
【０２６２】
スキームＶに従って、トリクロロメチルスルフェニルクロライド（Ｖ２）などのチオネート試薬と共に構造Ｖ１の第一アミド化合物を加熱すると、中間体オキサチアゾール化合物Ｖ３を得ることができる。この反応は、通常、トルエンまたはキシレンなどの非反応性溶媒で行われ、８０〜１５０℃で加熱される。それによって構造Ｖ４のニトリルで高温で形成されたオキサチアゾール化合物の反応によって、式１−Ｖの１，２，４−チアジアゾール化合物を得ることができる。
【０２６３】
式１−Ｗの特定のチオフェンは、スキームＷに示される方法で調製することができる。
【化８７】
2008515985.tif 000173
【０２６４】
２，４−ジブロモまたはジヨードチオフェンＷ１は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、添加ホスフィンリガンドを有するビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）二塩化物または酢酸パラジウムなどの適切な触媒でボロン酸化合物Ｗ２と反応し、構造Ｗ３の化合物を得ることができる。これらの反応は、添加塩基の存在下で、周囲温度〜１５０℃の温度範囲で、ＤＭＦ、トルエン、ジメトキシエタンまたはジオキサンなどの適当な溶媒において行われる。カップリング反応は、通常、より反応性のハロゲンで、通常、チオフェンの２位で行われる。そして、第二のカップリング反応は、同様の条件の下で残余臭化物またはヨウ化物と反応する、ボロン酸Ｗ４と行われ、式１−Ｗの化合物が得られる。
【０２６５】
式１−Ｘの特定のチオフェンは、上記と同様の方法によって調製することができる。これは、スキームＸで示される。
【化８８】
2008515985.tif 000174
【０２６６】
スキームＸに従って、２，４−ジブロモまたはジヨードチオフェンＸ１は、例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、添加ホスフィンリガンドを有するビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）二塩化物または酢酸パラジウムなどの適切な触媒を用いてボロン酸化合物Ｘ２と反応し、構造Ｘ３の化合物を得ることができる。反応は、添加塩基の存在下で、周囲温度〜１５０℃の温度範囲でＤＭＦ、トルエン、ジメトキシエタンまたはジオキサンなどの適当な溶媒において行われる。カップリング反応は、通常、より反応性のハロゲンで、通常、チオフェンの２位で行われる。そして、第二のカップリング反応は、同様の条件の下で残余臭化物またはヨウ化物と反応するボロン酸Ｘ４と行われ、式１−Ｘの化合物が得られる。
【０２６７】
式１−Ｙの特定のチオフェンは、スキームＹに示される方法で調製することができる。
【化８９】
2008515985.tif 000175
【０２６８】
スキームＹに従って、２，４−ジブロモまたはジヨードチオフェンＹ１は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、添加ホスフィンリガンドを有するビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）二塩化物または酢酸パラジウムなどの適切な触媒でボロン酸化合物Ｙ２と反応し、前記の実施例に記載されるように構造Ｙ３の化合物を得ることができる。そして、第二のカップリング反応は、同様の条件の下で残余臭化物またはヨウ化物と反応するボロン酸Ｙ４と行われ、式１−Ｙの化合物が得られる。
【０２６９】
式１−Ｚの特定の１，２，４−トリアゾールは、スキームＺに示される方法で調製することができる。
【化９０】
2008515985.tif 000176
【０２７０】
スキームＺに従って、構造Ｚ１のシアノ安息香酸は、０℃などの低い温度のメタノール中でＨＣｌでＺ１を処理することによって、メトキシイミデート  Ｚ２にに変換することができる。塩基および適当な非反応性溶媒の存在下で、置換ヒドラジドＳ（Ｚ３）とＺ２を反応させると、６０〜１５０℃の温度範囲で適切な溶媒（例えば、ジオキサン）またはそれら溶媒の混合物の存在下で加熱される中間体を得て、式１−Ｚの目的とする環化化合物が得られる。
【０２７１】
好ましい実施形態において、本発明の化合物は、既知の方法を用いて、鏡像異性的に純粋な組成物に分解されてもよく、または鏡像異性的に純粋な組成物として合成されてもよい。例として、鏡像異性体の直接的な結晶化、鏡像異性体のジアステレオマー塩形成、ジアステレオマーの形成および分離、またはラセミ混合物の酵素的な分解により、本発明の化合物は分解されてもよい。
【０２７２】
これらならびに他の反応方法論は、当業者に認められているように本発明の化合物を調整する上で有用であってもよい。上記スキームおよび方法への、種々の修正は当業者にとって明白であり、本発明は、本発明の調製のための方法によって特別に制限されない。
【０２７３】
Ｃ．本発明の方法
本発明の他の態様では、ナンセンス変異に関連しうる未熟な翻訳終結を抑制するための、また疾病を予防または治療するための方法が提供される。好ましい実施形態では、前記疾病は、ｍＲＮＡの突然変異、特にナンセンス変異に関連している。典型的な疾病は、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症、血友病、表皮水疱症、古典的晩期幼児型ニューロンセロイド脂褐素症を含むがそれらに限定されない。この実施形態では、癌、リソソーム蓄積症、筋ジストロフィー、嚢胞性線維症、血友病、または古典的晩期幼児型ニューロンセロイド脂褐素症の治療法が提供され、この治療法は、それを必要とする被験者に、治療効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物を投与することを含む。
【０２７４】
ある実施形態では、本発明は、１つ以上の特定の機能的タンパク質の発現を増加する方法を対象とする。本発明の化合物はいずれも、特に機能的タンパク質の発現を増加するために使用することができる。他の実施形態では、治療効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物をその必要のある被験者に投与することにより、未熟な翻訳終結が抑制されると、機能的タンパク質の発現の特異的増加が起こる。好ましい実施形態では、未熟な翻訳終結は、ｍＲＮＡ内のナンセンス変異に関連している。他の実施形態では、患者においてｍＲＮＡ崩壊が減少するとき、機能的タンパク質の発現の特異的増加が起こる。好ましい実施形態では、患者における異常状態が、突然変異により媒介されるｍＲＮＡ崩壊により起こる。特に好ましい実施形態では、突然変異媒介ｍＲＮＡ崩壊がナンセンス変異の結果である。本発明の方法は、いかなる特定の理論によっても限定されない。
【０２７５】
本発明は、患者において、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結とナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊の双方を抑制することにより改善される疾病または障害を治療および予防する方法を包含し、かかる方法は、そのような治療または予防を要する患者に、治療効果のある量の本発明の化合物を投与することを含む。
【０２７６】
一つの実施形態では、本発明は、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結とナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊の双方を示す遺伝子に関連するいかなる疾病の治療または予防をも包含する。一つの実施形態では、前記疾病は、一部には、早期停止コドンから起こる遺伝子の発現の欠如または低下に起因する。未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊を示す遺伝子、ならびに未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊に関連する疾病の具体例は、米国仮特許出願第６０／３９０，７４７号「Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｏｒ  Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ  Ａｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｔｈａｔ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｎｏｎｓｅｎｓｅ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍＲＮＡ  Ｄｅｃａｙ（未熟な翻訳終結およびナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊を調節する小分子を同定するための方法）」（２００２年６月２１日出願）、および国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／１９７６０号（２００３年６月２３日出願）に見られ、双方とも参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０２７７】
未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結とナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方の抑制により改善される疾病は、遺伝的疾患、体細胞疾患、癌、自己免疫疾患、血液の病気、膠原病、糖尿病、神経変性疾患、増殖性疾患、心血管疾患、肺疾患、炎症性疾患、または中枢神経系疾患を含むがそれらに限定されない。
【０２７８】
一つの実施形態では、治療効果のある量の本発明の化合物を必要とする患者に投与することにより治療または予防される疾病は、アミロイドーシス、血友病、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、アテローム性動脈硬化症、巨人症、小人症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、老化、肥満、パーキンソン病、嚢胞性線維症、筋ジストロフィー、心臓疾患、腎臓結石、毛細血管拡張性運動失調症、家族性高コレステロール血症、網膜色素変性症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、表皮水疱症およびマルファン症候群を含むがそれらに限定されない。一つの実施形態では、前記疾病はナンセンス変異に関連する。
【０２７９】
一つの実施形態では、本発明の化合物は、自己免疫疾患を治療または予防するために有用である。一つの実施形態では、自己免疫疾患はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は慢性関節リウマチまたは移植片対宿主病である。
【０２８０】
他の実施形態では、本発明の化合物は、血液の病気を治療または予防するために有用である。一つの実施形態では、血液の病気はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、血液の病気は血友病、フォン・ヴィレブランド病、β型サラセミアである。
【０２８１】
他の実施形態では、本発明の化合物は、膠原病を治療または予防するために有用である。一つの実施形態では、膠原病はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、膠原病は骨形成不全症または肝硬変である。
【０２８２】
他の実施形態では、本発明の化合物は、糖尿病を治療または予防するために有用である。一つの実施形態では、糖尿病はナンセンス変異に関連する。
【０２８３】
他の実施形態では、本発明の化合物は、炎症性疾患を治療または予防するために有用である。一つの実施形態では、炎症性疾患はナンセンス変異に関連する。好ましい実施形態では、炎症性疾患は関節炎、慢性関節リウマチまたは骨関節炎である。
【０２８４】
他の実施形態では、本発明の化合物は、中枢神経系疾患を治療または予防するために有用である。一つの実施形態では、中枢神経系疾患はナンセンス変異に関連する。一つの実施形態では、中枢神経系疾患は神経変性疾患である。好ましい実施形態では、中枢神経系疾患は多発性硬化症、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルツハイマー病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、晩期幼児型ニューロンセロイド脂褐素症（ＬＩＮＣＬ）、またはパーキンソン病である。
【０２８５】
他の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、特にヒトにおける癌を治療または予防するために有用である。好ましい実施形態では、癌は頭部頸部、眼、皮膚、口、咽喉、食道、胸、骨、血液、肺、大腸、Ｓ字結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓または副腎におけるものである。一つの実施形態では、癌は腫瘍である。一つの実施形態では、癌はナンセンス変異に関連する。他の実施形態では、癌は遺伝的ナンセンス変異に関連する。他の実施形態では、癌は体細胞突然変異に関連する。いかなる理論によっても制限されることなく、癌に対する本発明の化合物の使用は、ｐ５３遺伝子の突然変異に対するその作用に関係する。
【０２８６】
一つの実施形態では、前記癌は血液の癌ではない。他の実施形態では、前記癌は白血病ではない。他の実施形態では、前記癌は多発性骨髄腫ではない。他の実施形態では、前記癌は前立腺癌ではない。
【０２８７】
他の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、癌抑制遺伝子の突然変異に関連する癌を治療または予防するために有用である。そのような遺伝子は、ＰＴＥＮ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、Ｒｂ、およびｐ５３遺伝子を含むがそれらに限定されない。一つの実施形態では、前記突然変異は遺伝子突然変異である。他の実施形態では、前記突然変異は体細胞突然変異である。本発明の方法は、癌抑制遺伝子のナンセンス変異に関連する癌を治療または予防するために特に有用である。好ましい実施形態では、本発明の方法は、アポトーシスにおけるｐ５３の役割ゆえに、ｐ５３遺伝子に関連する癌を治療または予防するために特に有用である。理論により限定されないが、アポトーシスは、効果的な量の本発明の化合物を細胞に接触させてナンセンス変異の抑制を生じさせる（ひいては、全長ｐ５３の生産を起こさせる）ことにより誘発しうると考えられる。ナンセンス変異は、ｐ５３遺伝子において同定されており、癌に関係があるとされている。ｐ５３遺伝子におけるいくつかのナンセンス変異が同定されている（例えば、Ｍａｓｕｄａら、Ｔｏｋａｉ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ．、６９−７７、２５（２）、（２０００）；Ｏｈら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌｓ、２７５−８０、１０（３）、（２０００）；Ｌｉら、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．、４９３−９、８０（４）、（２０００）；Ｙａｎｇら、Ｚｈｏｎｇｈｕａ  Ｚｈｏｎｇ  Ｌｉｕ  Ｚａ  Ｚｈｉ、１１４−８、２１（２）、（１９９９）；Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎら、Ｍｏｌ  Ｄｉａｇｎ．、３７−４１、３（１）、（１９９８）；Ｋａｊｉｙａｍａら、Ｄｉｓ  Ｅｓｏｐｈａｇｕｓ．、２７９−８３、１１（４）、（１９９８）；Ｋａｗａｍｕｒａら、Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ．、１１５−２６、２３（２）、（１９９９）；Ｒａｄｉｇら、Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ．、１３１０−６、２９（１１）、（１９９８）；Ｓｃｈｕｙｅｒら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、２９９−３０３、７６（３）、（１９９８）；Ｗａｎｇ−Ｇｏｈｒｋｅら、Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．、６５−８、５（１）、（１９９８）、；Ｆｕｌｏｐら、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｍｅｄ．、１１９−２７、４３（２）、（１９９８）；Ｎｉｎｏｍｉｙａら、Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ．、１７３−８、１４（３）、（１９９７）；Ｈｓｉｅｈら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、１０７−１３、１００（１−２）、（１９９６）；Ｒａｌｌら、Ｐａｎｃｒｅａｓ．、１０−７、１２（１）、（１９９６）；Ｆｕｋｕｔｏｍｉら、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ．、２７６４−８、５３（１１）、（１９９５）；Ｆｒｅｂｏｕｒｇら、Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．、６０８−１５、５６（３）、（１９９５）；Ｄｏｖｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｒｖ．、３３５−５５、２５、（１９９５）；Ａｄａｍｓｏｎら、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．、６１−６、８９（１）、（１９９５）、；Ｇｒａｙｓｏｎら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．、３４１−７、１６（４）、（１９９４）、；Ｌｅｐｅｌｌｅｙら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ．、１３４２−９、８（８）、（１９９４）；ＭｃＩｎｔｙｒｅら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、９２５−３０、１２（５）、（１９９４）、；Ｈｏｒｉｏら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．、１２��１−５、９（４）、（１９９４）、；Ｎａｋａｍｕｒａら、Ｊｐｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１２９３−８、８３（１２）、（１９９２）；Ｄａｖｉｄｏｆｆら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．、１２７−３３、７（１）、（１９９２）；およびＩｓｈｉｏｋａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、９０１−６、１７７（３）、（１９９１）を参照されたい；全ての参考文献は、参照することにより本明細書に組み込まれる）。上記に引用される参考文献に記載されているナンセンス変異を含むがそれらに限定されない未熟な翻訳コドンをコードするｐ５３遺伝子に関連する疾病はどれも、本発明の化合物により治療または予防することができる。
【０２８８】
他の実施形態では、そのような治療効果のある量の本発明の化合物を必要な患者に投与することにより治療または予防される疾病は、非上皮性悪性腫瘍、上皮性悪性腫瘍、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、血液由来の腫瘍、または多発性骨髄腫などの固形腫瘍を含むがそれらに限定されない。
【０２８９】
他の実施形態では、そのような治療効果のある量の本発明の化合物を必要な患者に投与することにより治療または予防される疾病は、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｔ細胞急性リンパ性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、または多発性骨髄腫などの血液由来の腫瘍を含むがそれらに限定されない。例えば、Ｅｕｇｅｎｅ  Ｂｒａｕｎｗａｌｄら、ハリソン内科学  第１５版、４９１−７６２（２００１）を参照されたい。
【０２９０】
さらに他の実施形態では、本発明は、固形腫瘍または血液の腫瘍に罹患したヒトの治療を包含する。
【０２９１】
好ましい実施形態では、本発明は、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結とナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方を抑制することにより改善される疾病または障害を治療および予防し、それに関連した１つ以上の症状を改善する方法を包含し、この方法は、細胞を治療効果のある量の本発明の化合物に接触させることを含む。本発明の方法に包含される細胞は、動物細胞、哺乳類細胞、細菌細胞、およびウイルス感染細胞を含む。一つの実施形態では、ナンセンス変異は遺伝子変異である（すなわち、前記ナンセンスコドンは祖先ＤＮＡ中に含まれていた）。他の実施形態では、ナンセンス変異は体細胞突然変異である（すなわち、前記ナンセンスコドンは自然発生または突然変異から生じた）。
【０２９２】
ある実施形態では、本発明の化合物を、植物、は虫類、鳥類、両性類または好ましくは哺乳類、さらに好ましくはヒトを含むがそれらに限定されない被験者に、未熟な翻訳終結、ナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊、または未熟な翻訳終結とナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊双方の予防策として投与する。
【０２９３】
好ましい実施形態では、患者が未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊に関連する疾病に罹患していることを初めに決定する。他の実施形態では、患者がナンセンス変異の存在を調べるスクリーニング方法を受けているが、この方法は、許容されるナンセンス変異スクリーニングアッセイにより、被験者またはそこから抽出された細胞をスクリーニングするステップを含む。好ましい実施形態では、患者のＤＮＡを配列決定するか、またはサザンブロット、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、縦列反復配列多型（ＳＴＲ）の使用、または制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析に供して、ナンセンス変異が患者のＤＮＡに存在するかどうか決定することができる。一つの実施形態では、祖先ＤＮＡの比較により、ナンセンス変異が遺伝子変異であるかまたは体細胞変異であるかを決定する。あるいはまた、患者において、ナンセンス変異を有するタンパク質の改変されたレベルが発現しているかどうかを、ウェスタンブロット法または他のイムノアッセイにより確認することができる。他の実施形態では、患者がナンセンス変異の存在について子宮内でスクリーニングを受ける胎児である。本発明の化合物の投与は、出生前または出生後のどちらでも受けることができる。関連した実施形態では、患者がナンセンス変異スクリーニングアッセイのために選別され、本発明の１つ以上の化合物の投与により治療されるという点で治療法が個別化される。特に、患者は、例えば疾病のタイプ、細胞型、および対象の遺伝子に応じて、問題の突然変異に特に適する化合物を用いて治療される。そのような方法は当業者に公知である。
【０２９４】
他の実施形態では、細胞（例えば、動物細胞、哺乳類細胞、細菌細胞、植物細胞およびウイルス感染細胞）が、未熟な翻訳終結および／またはナンセンス媒介ｍＲＮＡ崩壊についてスクリーニングされるが、その際、上記のような方法（すなわち、細胞のＤＮＡは、配列決定するか、またはサザンブロット、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、縦列反復配列多型（ＳＴＲ）の使用、または制限断片長多型（ＲＦＬＰ）分析に供して、ナンセンス変異が細胞のＤＮＡに存在するかどうか決定する；細胞のＲＮＡは、定量的リアルタイムＰＣＲに供して、転写産物量を決定する）を用いてスクリーニングする。
【０２９５】
本発明の特定の方法はさらに、さらなる治療剤（すなわち、本発明の化合物以外の治療剤）の投与を含む。本発明のある実施形態では、本発明の化合物を少なくとも１つの他の治療剤と併用することができる。治療剤は、非オピオイド系鎮痛薬、非ステロイド抗炎症薬、ステロイド、制吐薬、βアドレナリン遮断薬、抗けいれん薬、抗うつ剤、Ｃａ２＋チャンネル遮断薬、抗癌剤、抗生物質およびこれらの混合物を含むがそれらに限定されない。
【０２９６】
ある実施形態では、本発明の化合物を抗癌剤との併用で投与したり、または製剤化することができる。適する抗癌剤は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、葉酸拮抗薬、プリン拮抗薬、ピリミジン拮抗薬、紡錘体毒、トポイソメラーゼ阻害剤、アポトーシス誘導薬、血管新生阻害剤、ポドフィロトキシン、ニトロソ尿素化合物、シスプラチン、カルボプラチン、インターフェロン、アスパラギナーゼ、タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、メゲストロール、マイトマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イリノテカンおよびタキソールを含むがそれらに限定されない。
【０２９７】
ある実施形態では、本発明の化合物を抗生物質との併用で投与したり、または製剤化することができる。ある実施形態では、抗生物質は、アミノグリコシド（例えば、トブラマイシン）、セファロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフプロジル、セファクロル、セフィキシムまたはセファドロキシル）、クラリスロマイシン（例えば、クラリスロマイシン）、マクロライド（例えば、エリスロマイシン）、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）またはキノロン系薬剤（例えば、オフロキサシン、シプロフロキサシンまたはノルフロキサシン）である。好ましい実施形態では、抗生物質が緑膿菌に対して活性を有する。
【０２９８】
理論に拘束されるものではないが、本発明の方法は、ナンセンス変異を抑制する作用機構の組合せを通して機能すると考えられる。好ましい実施形態では、本発明の方法は、治療効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物、例えば式１の化合物の投与を含む。本発明の化合物の相対活量は、本明細書中の実施例２に記載されたアッセイを含めて、当業者に周知のいかなる方法でも測定することができる。
【０２９９】
本発明の化合物は、in vitroルシフェラーゼ・ナンセンス抑制アッセイを用いて特徴づけることができる。ルシフェラーゼアッセイは本発明の方法に含まれる。ルシフェラーゼは機能性リポーター遺伝子アッセイとして使用され（タンパク質が機能性である場合のみ光が発生される）、ルシフェラーゼは非常に感度がよい（光の強度はｎＭ範囲のルシフェラーゼ濃度に比例する）。一つの実施形態では、本発明のアッセイは、細胞に基づくルシフェラーゼリポーターアッセイである。細胞に基づくルシフェラーゼリポーターアッセイでは、未熟な終結コドン（ＵＧＡ、ＵＡＡ、またはＵＡＧ）を含むルシフェラーゼリポーター構築物が２９３ヒト胚性腎細胞に安定に導入される。
【０３００】
本発明の他のアッセイにおいて、好ましいアッセイは、ウサギ網状赤血球溶解物およびナンセンス含有ルシフェラーゼリポーターｍＲＮＡからなる生化学的アッセイである。本発明の他のアッセイにおいて、アッセイは、細胞抽出物を調製し、最適化したものからなる生化学的アッセイである（Ｌｉｅ  ＆  Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、４９８９−４９９６、１２６（２２）、（１９９９）およびＬｉｅ  ＆  Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、４７３−４８１、２７０（２）、（２０００））。生化学的アッセイでは、未熟な終結コドン（ＵＧＡ、ＵＡＡ、またはＵＡＧ）を含むｍＲＮＡが、ｔＲＮＡ、ヘミン、クレアチンキナーゼ、アミノ酸類、ＫＯＡｃ、Ｍｇ（ＯＡｃ）２、およびクレアチンリン酸を添加したウサギ網状赤血球溶解物を用いるin vitro翻訳反応においてリポーターとして使用される。ｍＲＮＡの翻訳はウイルス由来のリーダー配列内で開始されるが、これはキャッピングされたＲＮＡを必要としないため、アッセイの費用を大幅に削減する。合成ｍＲＮＡは、Ｔ７プロモーターおよびＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ  in vitro転写キット（Ａｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．；Ａｕｓｔｉｎ、Ｔｅｘａｓ）を用いて、in vitroで調製される。本発明のアッセイでは、ゲンタマイシン（未熟な終結コドンのリードスルーを容認することが知られているアミノグリコシド）の添加は、増強されたルシフェラーゼ活性をもたらし、内部標準として使用することができる。本発明のアッセイをハイスループットスクリーニングで使用することができる。何十万もの化合物を本発明の細胞に基づく生化学アッセイでスクリーニングすることができる。好ましい態様では、機能的な細胞に基づくアッセイは、記載されたものに類似する。
【０３０１】
本発明の化合物は、未熟な終結コドンを含むｍＲＮＡ分子から特定の機能的タンパク質発現を増強できる化合物を含む。一つの実施形態では、本発明の化合物は未熟な翻訳終結を優先的に抑制できる。例えば、本発明の化合物は、ナンセンス変異がＵＡＡを生じる場合には、該変異を抑制することができるが、変異がＵＡＧを生じる場合には、ナンセンス変異を抑制することができない。他の非限定的な例として、本発明の化合物は、変異がＵＡＡを生じ、かつ＋１位置にシトシンがインフレームで続く場合には、ナンセンス変異を抑制することができるが、変異がＵＡＡを生じ、かつ＋１位置にアデニンがインフレームで続く場合には、ナンセンス変異を抑制することができない。
【０３０２】
ＵＧＡナンセンス含有ルシフェラーゼ遺伝子を有する安定した細胞株は、試験化合物を用いて処理することができる。この態様では、細胞を、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）と１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加した標準培地内で７０％コンフルエンシーまでに増殖させ、処理の前日に１：１に分割する。翌日、細胞をトリプシン処理し、４０，０００個の細胞を９６ウェル組織培養皿の各ウェルに添加する。各化合物の連続希釈物を調製して、２  ｌｏｇ（３０μＭ〜０．３μＭ）に及ぶ６ポイントの用量応答曲線を作成する。ＤＭＳＯ溶媒の最終濃度は、各ウェル内に一定の１％で維持する。１％のＤＭＳＯで処理された細胞はバックグラウンド標準として使用し、ゲンタマイシンで処理された細胞は陽性対照として使用する。
【０３０３】
特定の遺伝病で改変されたｍＲＮＡに対するナンセンス抑制化合物の効果を検討するために、アミノ酸１２８２にナンセンスコドン（Ｗ１２８２Ｘ）を有する気管支上皮細胞株を本発明の化合物で処理し、ＣＦＴＲ機能をＳＰＱアッセイでｃＡＭＰ活性化塩素イオンチャンネルとしてモニタリングする（Ｙａｎｇら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、１２５３−１２６１、２（８）、（１９９３）およびＨｏｗａｒｄら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、４６７−４６９、２（４）、（１９９６））。本発明の化合物で処理された細胞内のＳＰＱ蛍光の増加を、ｃＡＭＰ処理細胞および未処理細胞と比較する。細胞内のＳＰＱ蛍光の増加は、ＣＦＴＲ媒介ハロゲンイオン流出の促進およびナンセンスコドンのリードスルーの増加と一致する。本発明の化合物で処理した後のこのナンセンス含有対立遺伝子からの全長ＣＦＴＲ発現は、嚢胞性繊維症細胞株が本発明の化合物で処理したとき塩素イオンチャンネル活性を増加することを実証している。
【０３０４】
Ｄ．本発明の化合物の代謝産物
ここに記載される化合物の生体内代謝産物も本発明の範囲内である。そのような産物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などから、主として酵素的プロセスにより生じる。従って、本発明は、本発明の化合物を哺乳類組織または哺乳動物に、その代謝産物を生成するのに十分な時間にわたり接触させることを含む方法により生じた化合物を含む。そのような産物は、通常、本発明の放射標識（例えば、Ｃ１４またはＨ３）化合物を調製し、それを検出可能な用量（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ以上）でラット、ネズミ、モルモット、サル、またはヒトなどの哺乳動物に投与し、十分な時間（通常、約３０秒から３０時間）代謝を起こさせ、そして尿、血液または他の生物試料からその変換産物を単離することにより、同定される。これらの産物は、それらが標識されているため、容易に単離することができる（他のものは、代謝産物内に残存するエピトープと結合可能な抗体の使用により単離される）。代謝産物の構造は、従来の方法、例えば、ＭＳまたはＮＭＲ分析により決定する。一般には、当業者に周知の従来の薬物代謝研究と同様の方法で、代謝産物の分析を行うことができる。変換産物は、それらが別の方法では生体内で見つけられない限り、それら自体の生物活性が全くなくても、本発明の化合物の治療投与のための診断アッセイにおいて有用である。
【０３０５】
Ｅ．本発明の医薬組成物
本発明の化合物をそのまま投与することは可能であるが、化合物を医薬組成物として製剤化することが好ましい。したがって、本発明のさらに他の態様では、本発明の方法に有用な医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、特定の投与方法および投与形態に応じて、担体、溶媒、安定剤、補助剤、希釈剤などの製薬上許容される添加剤を用いて製剤化される。この医薬組成物は、一般的に、生理学的に適合するｐＨを達成するように製剤化されるべきであり、製剤および投与経路に応じて、約ｐＨ３から約ｐＨ１１まで、好ましくは、約ｐＨ３から約ｐＨ７までの範囲でありうる。他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約ｐＨ４から約ｐＨ７までのｐＨ範囲で製剤化される。別の実施形態では、ｐＨは、約ｐＨ５から約ｐＨ８までの範囲に調整することが好ましい。
【０３０６】
さらに具体的には、本発明の医薬組成物は、治療効果または予防効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物、および１以上の製薬上許容される添加剤を含む。任意で、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物の組合せを含んでもよく、または癌、糖尿病性網膜症、または滲出性の網膜黄斑部変性の治療に有用な第二の活性成分を含んでもよい。
【０３０７】
本発明の製剤（例えば、非経口または経口投与用）は、最も一般的には、固体、溶液、エマルジョン、または懸濁液であるが、肺内投与のための吸入可能な製剤は、一般に液体または粉末であり、粉末製剤が一般に好ましい。本発明の好ましい医薬組成物はまた、投与前に生理学的に適合する溶媒を用いて再調製される凍結乾燥固体として製剤化することもできる。本発明の別の医薬組成物は、シロップ、クリーム、軟膏剤、錠剤などとして製剤化してもよい。
【０３０８】
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の薬物送達経路を介して被験者に投与することができる。特定の代表的な投与経路は、経口、眼、直腸、口腔、局所、鼻腔、点眼、皮下、筋肉内、静脈内（ボーラスおよび注入）、脳内、経皮、および肺を含む。
【０３０９】
用語「製薬上許容される添加剤」とは、本発明の化合物などの薬剤を投与するための添加剤をさす。この用語は、過度の毒性なしに投与できるあらゆる医薬品用添加剤を意味する。製薬上許容される添加剤は、一部には、投与される特定の組成物によって決まるだけでなく、該組成物を投与するために用いる特定の方法によっても決まる。従って、本発明の医薬組成物の多種多様な適切な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ  Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、（１９９０）参照）。
【０３１０】
適当な添加剤は、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、不活性ウイルス粒子などの大きくて、ゆっくり代謝される巨大分子を含む担体分子でありうる。他の代表的添加剤は、アスコルビン酸などの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸などの炭水化物、油、水、塩水、グリセリンおよびエタノールなどの液体、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質などを含む。また、製薬上許容される添加剤の定義にはリポソームも含まれる。
【０３１１】
本発明の医薬組成物は、意図した投与方法に適するあらゆる形態で製剤化される。経口使用を意図する場合、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性または油性懸濁液剤、非水性溶液剤、分散粉剤または顆粒剤（ナノサイズの粒子、つまりナノ粒子を含む）、エマルジョン、ハードまたはソフトカプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤が調製される。経口使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造のための当業者に公知の方法により調製され、そのような組成物は、口当たりのよい製剤を提供するために、甘味剤、着香料、着色剤および保存剤を含んだ１つ以上の作用剤を含むことができる。
【０３１２】
錠剤と併用して使用するのに特に適する製薬上許容される添加剤は、例えば、セルロース、炭酸カルシウムまたはナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはナトリウムなどの不活性希釈剤；クロスカルメロースナトリウム、架橋ポビドン、トウモロコシデンプン、またはアルギン酸などの崩壊剤；ポビドン、デンプン、ゼラチンまたはアカシアなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどの滑沢剤を含む。錠剤は、胃腸管内での分解と吸収を遅らせ、それにより長時間にわたり持続した作用を提供するために、マイクロカプセル化を含む公知の方法でコーティングすることができる。例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの遅延物質を単独でまたはワックスと組み合わせて使用することができる。
【０３１３】
経口使用のための製剤はまた、活性成分が例えばセルロース、乳糖、リン酸カルシウムまたはカオリンなどの不活性固体希釈剤と混合されるハードゼラチンカプセル、または活性成分がグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラッカセイ油、流動パラフィンまたはオリーブ油などの非水性または油性媒体と混合されるソフトゼラチンカプセルとして提示することもできる。
【０３１４】
他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物を、懸濁液の製造に適した少なくとも１つの製薬上許容される添加剤と共に含有する懸濁液剤として製剤化することができる。さらに他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、適当な添加剤を加えることによって懸濁液を調製するのに適した分散粉剤および顆粒剤として製剤化することができる。
【０３１５】
懸濁液と共に使用するのに適した添加剤は以下のものを含む：カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アラビアガムなどの懸濁化剤；天然ホスファチド（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと、脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）などの分散剤または湿潤剤；およびカルボマー、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤。また、懸濁液は酢酸、ｐ−ヒドロキシ−安息香酸メチルおよび／またはｎ−プロピルなどの１つ以上の防腐剤、１つ以上の着色剤、１つ以上の着香料、および蔗糖またはサッカリンなどの１つ以上の甘味剤を含むことができる。
【０３１６】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態でありうる。油相は、オリーブ油やラッカセイ油などの植物油、流動パラフィンなどの鉱油、またはこれらの混合物であってよい。適した乳化剤は、アラビアガムやトラガカントガムなどの天然ゴム、大豆レシチンのような天然ホスファチド、脂肪酸から誘導されるエステルまたは部分エステル；ソルビタンモノオレエートなどのヘキシトール無水物；およびこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含む。エマルジョンはまた、甘味剤および着香料を含んでもよい。シロップ剤とエリキシル剤は、グリセロール、ソルビトールまたは蔗糖などの甘味剤を用いて製剤化してもよい。そのような製剤はまた、粘滑剤、保存剤、着香料または着色剤を含んでもよい。
【０３１７】
さらに、本発明の医薬組成物は、無菌注射用の水性乳剤および油性懸濁液剤などの無菌注射用製剤の形であってもよい。この乳剤または懸濁液剤は、上記の適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知技術に従って製剤化しうる。無菌注射用製剤はまた、１，２−プロパン−ジオール溶液などの、無毒性の非経口的に許容できる希釈剤または溶媒中の無菌注射液または懸濁液であってもよい。また、無菌注射用製剤は、凍結乾燥した粉末として調製されてもよい。使用することができる許容される媒体および溶媒の中には、水、リンゲル液、および等張食塩水がある。さらに、無菌の不揮発性油を溶媒または懸濁用媒体として使用することができる。このために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、刺激の少ない不揮発性油が使用される。さらに、オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の調製に同様に使用してもよい。
【０３１８】
一般に、本発明の方法において有用な本発明の化合物は、水に実質的に不溶性であり、最も製薬上許容されるプロトン性溶媒および植物油にも難溶性である。しかし、本化合物は、一般に、中鎖脂肪酸（例えば、カプリル酸およびカプリン酸）またはトリグリセリドに可溶性であり、中鎖脂肪酸のプロピレングリコールエステルには高い溶解度を有する。また、本化合物を送達により適するようにする（例えば、溶解性、生理活性、嗜好性を高める、副作用を減少させるなど）化学的または生化学的成分による置換またはかかる成分の付加（例えば、エステル化、グリコシル化、ＰＥＧ化など）によって修飾された化合物も本発明に含まれる。
【０３１９】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、低溶解性化合物に適する脂質ベースの製剤として経口投与用に製剤化することができる。脂質ベースの製剤は、一般に、そのような化合物の経口バイオアベイラビリティを増強することができる。したがって、本発明の好ましい医薬組成物は、治療効果または予防効果のある量の本発明の少なくとも１つの化合物を、中鎖脂肪酸またはそのプロピレングリコールエステル（例えば、カプリル酸およびカプリン酸などの食用脂肪酸のプロピレングリコールエステル）およびポリオキシル４０水素添加ヒマシ油などの製薬上許容される界面活性剤からなる群から選択される１つ以上の製薬上許容される添加剤と共に含有する。
【０３２０】
別の好ましい実施形態では、シクロデキストリンを水溶解度促進剤として添加してもよい。好ましいシクロデキストリンは、α、β、およびγシクロデキストリンのヒドロキシプロピル、ヒドロキシルエチル、グルコシル、マルトシル、およびマルトトリオシル誘導体を含む。特に好ましいシクロデキストリン溶解度促進剤は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣ）であり、これは、本発明の化合物の水溶解特性をさらに改善するために上記の組成物に添加される。１つの実施形態では、組成物は、０．１％〜２０％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、さらに好ましくは１％〜１５％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、より一層好ましくは２．５％〜１０％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含む。溶解度促進剤の使用量は、組成物中の本発明の化合物の量に依存する。
【０３２１】
本明細書で用いる治療効果のある量とは、特定された疾病または状態を治療、改善、または調節するための、または検出可能な治療効果または抑制効果を示すための、本発明の医薬組成物の量をさす。その効果は、例えば、本発明のアッセイにより検出することができる。また、その効果は、疾病または状態が個体または集団の高割合のために予測される場合には、疾病または状態の予防でもありうる。
【０３２２】
被験者に対して効果のある正確な量は、被験者の体重、サイズ、および健康、症状の性質および重症度、投与のために選択された治療薬または治療薬の組合せ、タンパク質の半減期、ｍＲＮＡの半減期、およびタンパク質の局在化に依存する。所定の状況に対する治療効果のある量は、医師の技量および裁量の範囲内であるルーチンな実験により決定することができる。
【０３２３】
ある化合物に関して、治療効果のある量は、最初に、細胞培養アッセイ（例えば、腫瘍細胞の培養）で、または動物モデル（通常は、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、またはブタ）において見積ることができる。また、動物モデルは、適切な濃度範囲と投与経路を決定するのに使用することができる。その後、そのような情報を用いて、ヒトにおける有用な用量および投与経路を決定することができる。治療／予防効力および毒性は、培養細胞または実験動物での標準的な薬学的手順、例えば、ＥＤ５０（集団の５０％に対して治療効果のある量）およびＬＤ５０（集団の５０％での致死量）によって確認することができる。毒性および治療効果の間の用量比が治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きい治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータは、ヒトに使用するためにある範囲の投与量を処方する際に使用しうる。そのような組成物に含まれる投与量は、毒性をほとんどまたは全く示さない、ＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内とすることが好ましい。投与量は使用した剤形、患者の感受性、および投与経路に応じてこの範囲内で変えることができる。
【０３２４】
さらに特に、本発明の化合物に関して観測された濃度−生物学的効果の関係は、約５μｇ／ｍＬから約１００μｇ／ｍＬ、好ましくは約１０μｇ／ｍＬから約５０μｇ／ｍＬ、さらに好ましくは約１０μｇ／ｍＬから約２５μｇ／ｍＬの範囲の初期標的血漿濃度を示す。そのような血漿濃度を達成するために、本発明の化合物は、投与経路に応じて１ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇまで変化する用量で投与される。特定の用量および送達方法に関するガイドラインは文献に示されており、当業者に一般に利用可能である。一般に、用量は、約１ｍｇ／日から約１０ｇ／日、または約０．１ｇ／日から約３ｇ／日、または約０．３ｇ／日から約３ｇ／日、または約０．５ｇ／日から約２ｇ／日を、１回用量、分割用量、または連続用量で、約４０から約１００ｋｇの体重の患者（用量はこの体重範囲を越えた患者、特に４０ｋｇ以下の子供に対して調整できる）に投与する。
【０３２５】
しかしながら、疾病または状態の緊急的または常習的な管理における本発明の特定活性成分の予防または治療用量は、その疾病または状態の性質および重症度、および活性成分の投与経路により変化する。また、用量（そして恐らく投与回数）も、個々の患者の年齢、体重、および応答に従って変化するだろう。適当な投薬計画はそのような要因を考慮して当業者が容易に選択することができる。一般に、本明細書に記載した症状のために推奨される１日量の範囲は、１日あたり約１ｍｇ／ｋｇから約１５０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一つの実施形態では、本発明の化合物を１日１回量として与える。他の実施形態では、本発明の化合物を１日の間に分割量として与える。さらに特定すると、１日量は１回量または等分割量で投与される。好ましくは、１日量の範囲は、１日あたり約５ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは１日あたり約１０ｍｇ／ｋｇから約９０ｍｇ／ｋｇ、より一層好ましくは１日あたり２０ｍｇ／ｋｇから６０ｍｇ／ｋｇとするべきである。患者を管理する際には、治療をより低い用量、恐らく１日あたり約２００ｍｇから約３００ｍｇで開始して、必要に応じて、１回量または分割量のどちらかで、１日あたり約６００ｍｇから約４０００ｍｇまで、患者の全体的な応答に応じて増加すべきである。ここに開示した範囲外の活性成分の用量を使用することが必要であるかもしれないが、当業者には明らかであろう。さらに、医師は、個々の患者の応答に関連して治療をどのように、いつ中断し、調整し、または終えるかを知っている。
【０３２６】
「治療効果のある量」「予防効果のある量」および「治療または予防効果のある量」とは、上記の投与量および投与回数スケジュールを含む。様々な治療効果のある量を様々な疾病および状態に適用可能であるが、それは当業者の容易に知るところである。同様に、そのような疾病を治療または予防するのに十分な量であるが、従来の療法に関連する副作用を引き起こすのに不十分な量で、その副作用を減らすのに十分な量はまた、上記の投与量および投与回数スケジュールにより包含される。
【０３２７】
正確な投与量は、治療を必要とする被験者に関係した諸要因を踏まえて、医師によって決定される。用量および投与は、活性薬剤の十分なレベルを提供するように、または望ましい効果を維持するように調整される。考慮に入れる要因としては、疾病状態の重症度、患者の全体的な健康状態、年齢、体重、性別、食事、時期、対象のタンパク質の半減期、対象のＲＮＡの半減期、投与回数、併用薬物、反応感受性、および治療に対する許容性／応答が含まれる。長時間作用型の医薬組成物は、特定の製剤の半減期とクリアランス率に応じて、３〜４日ごと、毎週、または２週間に一度、投与してもよい。
【０３２８】
Ｆ．併用療法
また、本発明の化合物は、ここに記載されるような、ｍＲＮＡのナンセンス変異に関連する疾病の治療に有用な１つ以上の他の活性成分と組み合わせることが可能であり、その場合、これらの化合物は単一の剤形であってもよいし、または治療を必要としている患者への同時投与または連続投与を意図した別々の剤形であってもよい。連続投与する場合、これらの組合せを２回以上の投与で投与することができる。別の実施形態では、本発明の１つ以上の化合物および１つ以上の追加の活性成分を異なる経路で投与することが可能である。
【０３２９】
当業者は、本発明の化合物のナンセンス変異抑制活性を増大するか、または相乗的に高めるように作用するさまざまな活性成分を、本発明の化合物と併用して、投与できることを理解するであろう。
【０３３０】
本発明の方法によると、活性成分の組合せは、（１）組合せ製剤として共製剤化されて、同時に投与または送達される、（２）別々の製剤として交互にまたは平行して送達される、または（３）当技術分野で公知の他のいずれかの併用療法レジメンにより送達される。交互療法で送達する場合、本発明の方法は、活性成分を連続的に、例えば、別々の溶液、エマルジョン、懸濁液、錠剤、丸薬またはカプセル剤として、または別々の注射器での異なる注射により、投与または送達することを含む。一般に、交互療法において、それぞれの活性成分の有効量は連続的に投与されるが、同時療法では、２つ以上の活性成分の有効量が一緒に投与される。さまざまな順序の断続的併用療法を採用することもできる。
【０３３１】
G．遺伝子治療
本発明の化合物または他のナンセンス化合物は、遺伝子治療に関連して使用することができる。この実施形態では、遺伝子を哺乳動物（好ましくは、所望の遺伝子の特定されたナンセンス変異を含むヒト）に導入するか、または提供する。好ましい態様では、所望の遺伝子はＩＧＦ１、ＥＰＯ、ｐ５３、ｐ１９ＡＲＦ、ｐ２１、ＰＴＥＮ、ＥＩ２４およびＡｐｏＡＩからなる群より選択する。患者および哺乳動物において全長のポリペプチドの発現を得るために、そのようなポリペプチドを望む場合、本発明の化合物または他のナンセンス抑制化合物の有効な量を患者および哺乳動物に提供する。
【０３３２】
患者の細胞内にナンセンス変異を含む核酸（場合によりベクター内に保持される）を得るための２つの主要なアプローチ（すなわちin vivoおよびex vivo）が存在する。in vivo送達に関しては、核酸を、患者に、通常はポリペプチドが必要とされる部位に、すなわち、知られている場合にはポリペプチドの合成部位、およびポリペプチドの生物活性が必要とされる部位（例えば、固形腫瘍）に、直接注入する。ex vivo治療に関しては、患者の細胞を取り出し、分離した細胞に核酸を導入し、改変した細胞を患者に直接投与するか、または例えば、患者に埋め込まれる多孔質膜内にカプセル化して投与する（例えば、米国特許第４，８９２，５３８号および第５，２８３，１８７号を参照）。核酸を生存細胞に導入するために利用可能なさまざまな方法がある。核酸が培養細胞にin vitroで導入されるか、または意図した宿主の細胞にin vivoで導入されるかによって、方法は変わる。in vitroで哺乳動物細胞に核酸を導入するのに適切な方法は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、形質導入、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などの使用を含む。形質導入は、複製欠損組換えウイルス（好ましくはレトロウイルス）粒子と細胞受容体との会合、その後の該粒子により運ばれた核酸の細胞への導入を含む。遺伝子のex vivo送達に一般的に使用されるベクターは、レトロウイルスである。
【０３３３】
現在好ましいin vivo核酸導入法は、ウイルスまたは非ウイルスベクター（アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）など）によるトランスフェクション、および脂質ベースのシステム（遺伝子の脂質媒介導入に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、およびＤＣ−Ｃｈｏｌであり、例えば、Ｔｏｎｋｉｎｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、５４−６５、１４（１）、（１９９６）参照）を含む。遺伝子治療で使用するのに最も好ましいベクターはウイルスであり、最も好ましくはアデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス、またはレトロウイルスである。レトロウイルスベクターなどのウイルスベクターは、少なくとも１つの転写プロモーター／エンハンサーつまり遺伝子座を規定するエレメント、または選択的スプライシング、核ＲＮＡ輸出、またはメッセンジャーの翻訳後修飾などの他の手段で遺伝子発現を制御する他のエレメントを含む。さらに、レトロウイルスベクターなどのウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする遺伝子と共に転写されるとき、コード配列に機能的に連結されて翻訳開始配列として機能する核酸配列を含む。また、そのようなベクター構築物は、パッケージングシグナル、長い末端反復配列（ＬＴＲ）またはその部分、使用ウイルスに適切なポジティブおよびネガティブ鎖プライマー結合部位（これらがウイルスベクター中に存在しない場合）をも含む。さらに、そのようなベクターは、宿主細胞からポリペプチドを分泌させるためのシグナル配列を通常含む。好ましくは、そのためのシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列であり、最も好ましくは、そのポリペプチドの天然のシグナル配列である。また、場合により、ベクター構築物は、ポリアデニル化を指示するシグナル、ならびに１つ以上の制限部位および翻訳終結配列をも含みうる。一例として、そのようなベクターは、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第二鎖ＤＮＡ合成のための起点、および３’ＬＴＲまたはその部分を通常含む。使用することができる他のベクターは、カチオン脂質、ポリリシン、デンドリマーなどの非ウイルス性のベクターである。
【０３３４】
いくつかの状況においては、核酸供給源を、標的細胞をターゲッティングする物質と共に提供することが望ましく、例えば、かかる物質としては、細胞表面膜タンパク質または標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上の受容体に対するリガンドなどがある。リポソームを使用する場合は、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質と結合するタンパク質が、ターゲッティングおよび／または取り込みを促進するために用いられるが、かかるタンパク質として、例えば、特定の細胞型に向かうカプシドタンパク質またはその断片、循環中にインターナリゼーションを受けるタンパク質に対する抗体、および細胞内局在を標的にして細胞内半減期を高めるタンパク質がある。受容体媒介エンドサイトーシスの方法は、例えば、Ｗｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、４４２９−４４３２、２６２、（１９８７）、およびＷａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、３４１０−３４１４、８７、（１９９０）に記載されている。現在知られている遺伝子マーキングおよび遺伝子治療プロトコルに関しては、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、８０８−８１３、２５６、（１９９２）を参照されたい。また、ＷＯ９３／２５６７３およびそこにある引用文献も参照されたい。
【０３３５】
適当な遺伝子治療ならびにレトロウイルス粒子および構造タンパク質を作るための方法は、例えば、米国特許第５，６８１，７４６号、第６，８００，６０４号および第６，８００，７３１号に見出せる。
【０３３６】
本発明の理解を助けるために、以下に実施例を示す。当然ながら、本発明に関係する実験は、特に本発明を制限するものとして解釈されるべきではなく、当業者の技量の範囲内に入るそのような本発明の改変（今回知られた改変または後で開発される改変）は、本明細書に記載した特許請求される本発明の範囲内に含まれるものとする。
【実施例】
【０３３７】
本発明は以下の非限定的な実施例によりさらに詳しく説明されるが、これらの実施例は、本発明をさらに完全に解説するために提供され、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきでない。これらの実施例では、本発明における特定の化合物の調製、ならびにこれらの化合物のインビトロおよび／またはインビボ試験ついて説明する。当業者であれば、これらの実施例において説明される技術は、本発明者らによって記載された、本発明を支障なく実施するための技術を表すものであり、したがって本発明の実施の好ましい形態を構成することを理解するであろう。しかし、当業者は、本開示を踏まえて、開示されている特定の方法においては多くの変更が可能であり、それでもなお本発明の精神と範囲から逸脱することなく、類似のまたは同様の結果を得ることができると認識すべきである。
【０３３８】
実施例１：本発明の化合物の調製
実施例Ａ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸（化合物６）の調製
【化９１】
2008515985.tif 000177
【０３３９】
ステップＡ：６０ｍｌのトルエンにメチル３−シアノベンゾエート（５．０５ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（３．０６ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミンハイドロクロライド（６．４７ｇ、４７ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液を１２時間加熱還流し、その後室温まで冷却する。この異種成分から成る混合物を水で希釈し、相に分離する。有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３で抽出し、水相を組合せ、ＥｔＯＡｃで洗浄する。有機層を廃棄した後、組み合わせた水相を６Ｎ  ＨＣｌで約ｐＨ２に酸性化し、その結果得られた濃いペーストをＥｔＯＡｃで抽出する（２×）。組み合わせた有機層を飽和ＮａＣｌで洗浄し、その後乾燥および濃縮して、白色固形物として５．３０ｇ（８３％）のメチル３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ベンゾエートを得る。ｍｐ  １８０〜１８１℃、ＭＳ  ｍ／ｚ  ２０５．１  ［ＭＨ＋］．  
ステップＢ：ジクロロエタン（１０ｍｌ）にメチル３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イルベンゾエート（０．４１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、４−イソプロピル安息香酸（０．３３ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、およびジシクロへキシルカルボジイミド（０．４１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた溶液を２０時間加熱還流する。室温まで冷却した後、混合物をろ過し、固形物をメチレンクロライドですすぎ洗いする。濾液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、その後乾燥および濃縮して白色固形物を得る。シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２，２−５％）のフラッシュ・クロマトグラフィーで、０．５４ｇ（８４％）のメチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを黄褐色の固形物として得る。ｍｐ  ７４〜７７℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ８．７４（ｔ、Ｊ＝１．５、１Ｈ）、８．３３（ｄｔ、Ｊ＝１．５、７．８、１Ｈ）、８．２０（Ｊ＝１．５、７．８、１Ｈ）、８．０６（ｄｔ、Ｊ＝１．５、８．４、２Ｈ）、７．６１（ｔ、Ｊ＝７．９、１Ｈ）、７．３９（ｄｄ、Ｊ＝１．８、８．４、２Ｈ）、３．９９（ｓ、３Ｈ）、３．００（septet、Ｊ＝６．９、１Ｈ）、１．３１（ｄ、Ｊ＝６．９、６Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ３２３．２［ＭＨ＋］．
ステップＣ：THF(10mL)にメチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを加えた溶液を、１Ｎ  ＮａＯＨ（２．２５ｍＬ、２．２５ｍｍｏｌ）で処理し、５時間加熱還流する。室温まで冷却し、ＮａＨＣＯ３で塩基性化した後、水相をＥｔＯＡｃで抽出する。有機層をその後ＮａＨＣＯ３で抽出する（２×）。水相を組合せ、ｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出し（３×）、その後乾燥および濃縮して白色固形物を得る。再結晶（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、３２４ｍｇ（７１％）の３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸を白色針状物として得られる。ｍｐ  ２０２〜２０４℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）d ８．５４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２８（ｄ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、８．１２（ｄ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．９７（ｄ、Ｊ＝８．１、２Ｈ）、７．７１（ｔ、Ｊ＝７．７、１Ｈ）、７．４３（ｄ、Ｊ＝７．７、１Ｈ）、２．９５（septet、Ｊ＝６．９、１Ｈ）、１．２０（ｄ、Ｊ＝６．９、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０９．２［ＭＨ＋］、３０７．２［ＭＨ−］
同様に、上記ステップを用いて、開始物質の適切なシアノ安息香酸およびカルボン酸から、次の化合物を調製する：化合物番号：１，２，３，４，５，７，８，８５，８６，１７５，２２２，２２３，２２４，２２５，２７８，２７９，２８３，２８４，２８５，２８６，２９２，２９３，３１５，３１６，３１７，３１８，３１９，４０１，４０２，５９６，６０１，６０５，６０６，６１０，６１５，６２０，６２１，６２２，６２４，６２６，６２８．
実施例Ｂ：３−［５−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸（化合物番号２９）の調製
【化９２】
2008515985.tif 000178
【０３４０】
ステップＡ：２０ｇの２−クロロトリチルクロライド樹脂（ドイツ、Ｒａｐｐ  ｐｏｌｙｍｅｒｅ）を、乾燥ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中で１０分撹拌し、溶媒をその後廃棄する。樹脂に、イソフタル酸（８．０ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）の１％ジソプロピルエチルアミン含有ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）溶液を加え、その後室温で４時間撹拌する。溶媒を廃棄し、樹脂をジクロロメタン（３×２００ｍＬ×１分）、ジメチルホルムアミド（３×２００ｍＬ×１分）、メタノール（３×２００ｍＬ×１分）、そしてジクロロメタン（３×２００ｍＬ×１分）で、順番に洗浄する。樹脂を室温で４時間真空乾燥する。所望される生成物を、トリエチルシラン／トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンに反応を示した樹脂の少量の切断によって分析する。
【０３４１】
ステップＢ：ＤＭＦ（３ｍＬ）に上記ステップＡで調製したイソフタル樹脂（２００ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液に、ＰｙＢＯＰ（５２０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加える。室温で５分撹拌した後、４−ｔ−ブチルベンズヒドラジド（１ｍｍｏｌ）を、反応混合物に加える。反応混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を廃棄し、樹脂をジクロロメタン（３×２０ｍＬ×１０分）、ＤＭＦ（３×２０ｍＬ×１０分）、ＭｅＯＨ（３×２０ｍＬ×１０分）、そしてジクロロメタン（３×２０ｍＬ×１０分）で、洗浄する。樹脂を室温で４時間真空乾燥する。所望される生成物を、トリエチルシラン／トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンに反応を示した樹脂の少量の切断によって分析する。
【０３４２】
ステップＣ：ジクロロメタンに上記ステップＢのヒドラジド樹脂を加えた懸濁液（２００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）に、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリジニウムクロライド（ＣＤＣ、３３．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（５６mＬ、０．４ｍｍｏｌ）を加えて、室温で一晩撹拌する。溶媒を廃棄し、樹脂をジクロロメタン（３×２０ｍＬ×１０分）、ＤＭＦ（３×２０ｍＬ×１０分）、ＭｅＯＨ（３×２０ｍＬ×１０分）、そしてジクロロメタン（３×２０ｍＬ×１０分）で、洗浄する。樹脂を、２０％ＴＦＡ含有ジクロロメタン（４ｍＬ）を用いて、室温で１時間処理する。樹脂を取り出し、濾液は減圧下で、３−［５−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸を得るように濃縮する。所望される生成物を、ＬＣ／ＭＳによって精製する。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２３．１  ［Ｍ＋Ｈ］＋（純度９５％）．  
以下の化合物は、ステップＡのイソフタル酸またはテレフタル酸のいずれかから開始する上述の手順を用いて調製し、適切なヒドラジン誘導体と反応させる。化合物番号：２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、６２、６３、６４、６５、６６、６７、１２３、１２４、１２５、１２６、２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５０、２５２、２５４、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２７２、１６１、１６２、１６３、１７０、１６９、１６６、１７３、１６７、１７２、１６８、１７４、１７１、１６４、１６５、１７２、２６５、１５、１６、１７、１８、１９、２１、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５３、５４、５５、６８、６９、７０、７１、７２、７３、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５１、２５３、２５５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７３、２７４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、１６０．
実施例Ｃ：４−｛５−［３−（トルエン−４−スルホニルアミノ）フェニル］−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル｝安息香酸（化合物番号１３）
【化９３】
2008515985.tif 000179
【０３４３】
ステップＡ：Ｐａｒｒボトルに、メチル４−［５−（３−ニトロフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエート（４．０４ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）、０．８０ｇの１０％  Ｐｄ−Ｃ、ＴＨＦ（２００ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を入れ、その混合物を５０ｐｓｉで５時間水素付加する。反応混合物を、その後飽和ＮａＨＣＯ３およびＥｔＯＡｃで希釈してから、ろ過する。ろ液層を分離し、水層をさらにＥｔＯＡｃを加えることによって抽出する。組み合わせた有機相はＨ２Ｏおよび飽和ＮａＣｌで洗浄し、その後乾燥および濃縮して、２．３４ｇ（６４％）のメチル４−［５−（３−アミノフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを黄色の固形物として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ  ８．２０−８．１４（ｍ、４Ｈ）、７．３１（ｔ、Ｊ＝１．４、１Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝３．３、２Ｈ）、６．７８（ｍ、１Ｈ）、５．５３（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）。
【０３４４】
ステップＢ：ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）にメチル４−［５−（３−アミノフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエート（０．３０ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．１２ｍＬ、１．５３ｍｍｏｌ）および塩化パラトルエンスルホニル（０．２３ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液を、室温で一晩撹拌する。その結果得られた混合物をＨ２ＯおよびＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、０．２５ｇ（５５％）のメチル4−［5−（3−アミノフェニル）−［1,3,4］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを白色固体として得る。融点２２７〜２２８℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６７（ｓ、１Ｈ）、８．２０−８．１３（ｍ、４Ｈ）、７．８５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．７６−７．６９（ｍ、３Ｈ）、７．４６（ｄｔ、Ｊ＝２．７、１０．２、１Ｈ
）、７．３６−７．３３（ｍ、３Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ４５０．０［ＭＨ＋］、４４８．０［ＭＨ−］。
【０３４５】
ステップＣ：ＴＨＦ（１０ｍＬ）にメチル４−｛５−［３−（トルエン−４−スルホニルアミノ）−フェニル］−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル｝ベンゾエート（２２５  ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（０．５５ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液を、一晩加熱還流する。室温まで冷却した後、反応混合物をＥｔＯＡＣと飽和ＮａＨＣＯ３に分割する。相は分離し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３で抽出する（３×）。水相を組合せ、６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２に酸性化する。その結果得られた異種成分から成る混合物を、ろ過および乾燥し、１２９ｍｇ（５９％）の４−｛５−［３−（トルエン−４−スルホニルアミノ）−フェニル］−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル｝安息香酸を黄褐色の粉末として得る。ｍｐ＞２７５℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．１８−８．１１（ｍ、４Ｈ）、７．８４（ｔ、Ｊ＝１．８，１Ｈ）、７．７６−７．６７（ｍ、３Ｈ）、７．４７（ｔ、Ｊ＝７．９、１Ｈ）、７．３５（７．３２（ｍ、３Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ４３６．０［ＭＨ＋］、４３４．０［ＭＨ−］。
【０３４６】
上記ＢからＣのステップを用いて、他の塩化スルホニルまたは酸塩化物を置換して、以下の化合物を調製する。化合物番号：１２および１４。
【０３４７】
実施例Ｄ：４−（５−｛３−［３−（４−イソプロピルフェニル）ウレイド］フェニル｝−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸（化合物番号６０）の調製
【化９４】
2008515985.tif 000180
【０３４８】
ステップＡ：ジクロロメタンに実施例ＣのステップＡのメチル４−［５−（３−アミノフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエート（０．３０ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）および４−イソプロピルフェニルイソシアネート（０．２０ｍＬ、１．２２ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液（１０ｍＬ）を、室温で３日間撹拌する。反応混合物をろ過し、固形物をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、０．２８ｇ（６０％）のメチル４−（５−｛３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−ウレイド］−フェニル｝−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ベンゾエートを白色の固形物として得る。ｍｐ  ＞２７０℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．９７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．６３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３３（ｔ、Ｊ＝１．８，１Ｈ）、８．２２−８．１３（ｍ、４Ｈ）、７．７０（ｄｔ、Ｊ＝１．７、７．５、１Ｈ）、７．６０−７．４７（ｍ、２Ｈ）、７．３６（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）、７．１４（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）；２．８２（septet、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ４５７．２  ［ＭＨ＋］、４５５．３  ［ＭＨ−］。
【０３４９】
ステップＢ：ＴＨＦ（１０ｍＬ）にメチル４−（５−｛３−［３−（４−イソプロピルフェニル）ウレイド］−フェニル｝−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ベンゾエート（0.23ｇ、0.50mmol）、および１Ｎ  ＮａＯＨ（０．５６ｍＬ、０．５６ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液を、２．５時間加熱還流する。室温まで冷却した後、反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡＣで抽出し（３×）、乾燥および濃縮して、１７０  ｍｇ（７７％）のメチル４−（５−｛３−［３−（４−イソプロピルフェニル）ウレイド］フェニル｝−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ベンゾエートを、乳白色の固形物として得る。ｍｐ  ＞２７０℃、１Ｈ  ＮＭＲ：d（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．９７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．６３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２０−８．１０（ｍ、４Ｈ）、７．７０−７．４５（ｍ、３Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝７．２、２Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝７．２、２Ｈ）、２．８１（ｍ、１Ｈ）、１．１６（ｄ、Ｊ＝５．４、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４３．２  ［ＭＨ＋］、４４１．２  ［ＭＨ−］。
【０３５０】
実施例Ｅ：３−［５−（４−モリホリン−４−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸（化合物番号８２）の調製
【化９５】
2008515985.tif 000181
【０３５１】
ステップＡ：火で乾燥させた試験管に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．３８ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）、（トリス）−ジベンジリデンアセトンジパラジウム（１６  ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、ラセミ−ＢＩＮＡＰ（２１  ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、およびメチル３−［５−（４−ブロモフェニル）−］−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエート（実施例ＡのステップＢの方法にて調製）（０．３０ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を入れる。真空にしてＮ２で洗い流した後、モリホリン（０．０９ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）およびトルエン（３．６ｍＬ）を加え、この反応物を２４時間加熱還流し、その後室温まで冷却する。この異種成分から成る混合物を、ろ過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濃縮する。残留物を、シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２，５−１０％）のフラッシュ・クロマトグラフィーで精製し、０．１９ｇ（６３％）のメチル３−［５−（４−モルホリン−４−イル−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを黄褐色の固形物として得る。ｍｐ  １５０〜１５１℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ８．７２（ｔ、Ｊ＝１．８、１Ｈ）、８．３４（ｄ、Ｊ＝７．８，１Ｈ）、８．１９（ｄ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、８．０３（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、７．６１（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、６．９９（ｄ、Ｊ＝８．７、２Ｈ）、３．９９（ｓ、３Ｈ）、３．８９−３．８７（ｍ、４Ｈ）、３．３９−３．３０（ｍ、４Ｈ）。
【０３５２】
ステップＢ：ＴＨＦ（１０ｍＬ）にメチル３−［５−（４−モリホリン−４−イル−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートおよび１Ｎ  ＮａＯＨ（０．４６ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）を加えた溶液を、１５時間加熱還流する。室温まで冷却した後、反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、水相をＥｔＯＡｃで抽出する。有機層をＮａＨＣＯ３で逆抽出する。組み合わせた水相は、０．５Ｎ  ＮａＨ２ＰＯ４でｐＨ４．５に酸性化し、ＥｔＯＡＣで抽出し（３×）、乾燥および濃縮した後、０．１１ｇ（８２％）の３−［５−（４−モリホリン−４−イル−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸を黄色の固形物として得る。ｍｐ  ２３５〜２３７℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．５６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３２（ｄ、Ｊ＝７．５，１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝７．５，１Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）、７．７３（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）、３．７６−３．７２（ｍ、４Ｈ）、３．３２−３．２７（ｍ、４Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５２．３［ＭＨ＋］、３５０．３［ＭＨ−］。
【０３５３】
同様に、上記ステップＡ〜Ｂに従い適切なアミンを用いることで、メチル３−［５−（４−ブロモフェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートの反応によって以下の化合物を調製する。化合物番号：８３、８４、および２８０
実施例Ｆ：３−［５−（３’−メチルビフェニル−４−イル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸（化合物番号２８１）の調製
【化９６】
2008515985.tif 000182
【０３５４】
ステップＡ：火で乾燥させた試験管に、メチル３−［５−（４−ブロモフェニル）−］−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエート（０．４０ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）（実施例ＡのステップＢ：より）、ｍ−トリル−ボロン酸（０．２１ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、（トリス）−ジベンジリジンアセトンジパラジウム（１０  ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、およびＫＦ（０．１９ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を入れる。試験管をＮ２で洗い流してから、ＴＨＦ（４ｍＬ）およびへキサン（０．０８ｍＬ，０．０２７ｍｍｏｌ）に０．７  Ｍ  トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィンを加えた溶液を加える。この反応物を、室温で１５時間撹拌し、その後２時間加熱還流する。室温まで冷却した後、反応物をろ過しＥｔＯＡｃで洗浄し、ろ液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、その後乾燥および濃縮する。シリカゲル（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２，０−２％）のフラッシュ・クロマトグラフィーで、０．１８ｇ（４４％）のメチル３−［５−（３’−メチルビフェニル−４−イル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを白色の固形物として得る。ｍｐ  １４７〜１４８℃、１Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ８．７７（ｔ、Ｊ＝３．１、１Ｈ）、８．３７（ｄｄ、Ｊ＝１．０，７．５、１Ｈ）、８．２４−８．２０（ｍ、３Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）、７．６４（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．４７−７．４４（ｍ、２Ｈ）、３．３４（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、４．００（ｓ、３Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７１．２［ＭＨ＋］。
【０３５５】
ステップＢ：ＴＨＦ（５ｍＬ）にメチル３−［５−（３’−メチルビフェニル−４−イル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエート（０．１５ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、１Ｎ  ＮａＯＨ（０．５１ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）、およびＨ２Ｏ（１ｍＬ）を加えた懸濁液を、一晩加熱還流する。室温まで冷却した後、反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＮａＨ２ＰＯ４および１Ｎ  ＨＣｌを加えることで、ｐＨを４．５〜５に調整する。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し（３×）、その後乾燥および濃縮して、３−［５−（３’−メチルビフェニル−４−イル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］安息香酸を白色の固形物として得る。ｍｐ  ２４０〜２４２℃、１Ｈ  ＮＭＲ：δ（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．５３（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｄｔ，Ｊ＝１．３５，８．１，１Ｈ），８．１４−８．０８（ｍ，３Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ），７．７０（ｔ，Ｊ＝７．８，１Ｈ），７．４９−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．８，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．８，１Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５７．２  ［ＭＨ＋］，３５５．３  ［ＭＨ−］．
実施例ＡのステップＢで調製したように、メチル３−［５−（６−ブロモピリジン）−３−イル］−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］ベンゾエートを置換して上述の手順に従うことにより、以下の化合物を作製する。化合物番号２８２。
【０３５６】
実施例Ｇ：４−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］チアジアゾル−２−イル］安息香酸（化合物番号３２４）の調製
【化９７】
2008515985.tif 000183
【０３５７】
ステップＡ：ＴＨＦ（２０ｍＬ）に４−イソプロピルベンズヒドラザイド（０．７３ｇ、４．１０mmol）を加えた９０℃の溶液を、Ｅｔ３Ｎ（０．６２ｍＬ）およびメチル−４−クロロカルボニルベンゾエート（０．９０ｇ、４．５１mmol）で処理する。反応物をその後室温まで加熱し、一晩攪拌する。この反応混合物をその後Ｈ２Ｏで洗浄し、ＥｔＯＡｃで抽出する（３×）。組み合わせた有機相をＨ２Ｏおよび飽和ＮａＣｌで洗浄し、その後減圧下で乾燥および濃縮して、固形物を得る。ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（０−１５％）を溶離剤として用い、シリカゲルでフラッシュ・クロマトグラフィーによる精製を行うことにより、０．８６ｇ（６２％）の４−［Ｎ’−（４−イソプロピルベンゾイル）−ヒドラジノカルボニル］安息香酸を白色の固形物として得る。ｍｐ  ２３５−２３７℃；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４１．２  ［ＭＨ＋］，３３９．２  ［ＭＨ−］．
ステップＢ：上記ステップＡの４−［Ｎ’−（４−イソプロピルベンゾイル）−ヒドラジノカルボニル］安息香酸（０．２５ｇ、０．７４mmol）およびＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）にローソン試薬（０．５９ｇ、１．４７mmol）を加えた懸濁液を１８時間加熱還流し、その後室温まで冷却する。粗反応混合物を減圧下で濃縮して、フラッシュ・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２，０−１％）によって精製し、０．２２ｇ（８８％）のメチル４−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］チアジアゾル−２−イル］ベンゾエートを白色固形物として得る。ｍｐ  １４７−１５１℃；１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．１６−８．０９（ｍ，４Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８，１Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．９，６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３９．２  ［ＭＨ＋］．
ステップＣ：ＴＨＦにメチル４−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］チアジアゾル−２−イル］ベンゾエートを加えた溶液を、１Ｎ  ＮａＯＨ（０．３６ｍＬ、０．３６mmol）およびＨ２Ｏ（０．６５ｍＬ）で処理し、この二相反応混合物を３０時間加熱還流し、その後室温まで冷却する。さらにＨ２Ｏを加えて希釈したのち、ｐＨが２になるまで十分な６Ｎ  ＨＣｌを加え、白色固体の沈澱物が結果として形成される。この固形物はろ過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥されて、６０ｍｇ（６５％）の４−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］チアジアゾル−２−イル］安息香酸を得る。ｍｐ  ＞３００℃；１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ   ７．９９−７．８８（ｍ，６Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ），２．９７（ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．９，１Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．９，６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２５．１  ［ＭＨ＋］，３２３．２  ［ＭＨ−］．
実施例Ｈ：４−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］安息香酸（化合物番号２７５）の調製
【化９８】
2008515985.tif 000184
【０３５８】
ステップＡ：２．１９ｇ（３１．５mmol）のＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌおよびＨ２Ｏ／ＥｔＯＨ（１／１、５０ｍＬ）に１．２６ｇ（３１．５mmol）のＮａＯＨから調製したヒドロキシルアミンを加えた溶液に、メチル−４−シアノベンゾエート（４．８３ｇ、３０．０mmol）を加える。この反応混合物を、９０℃で一晩攪拌する。この溶媒はＥｔＯＨ／ヘキサン（９／１，５０ｍＬ）で置換し、室温にて０．５時間攪拌する。ろ過によって固形物は除去し、ろ液を乾燥するまで蒸発し、白色粉末を得、これはさらにＥｔＯＨ／ヘキサンから再結晶化して白色針状物を得る（４．５３ｇ、７７．８％）。ＭＳ  ｍ／ｚ  １９５  ［ＭＨ＋］
ステップＢ：上記の０℃のヒドロキシアミジン（０．３９ｇ、２．０５mmol）、４−イソプロピル安息香酸（０．３４ｇ、２．０５mmol）およびジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、ＨＯＢｔ（０．２８ｇ、２．０５mmol）を追加し、その後ＤＣＣ（０．４２ｇ、２．０５mmol）を追加する。混合物を室温で一晩撹拌する。沈殿物をろ過によって除去し、ろ液を濃縮して、シリカゲルでクロマトグラフィーを行いメチル４−（（Ｚ）−アミノ｛［（４−イソプロピルベンゾイル）オキシ］イミノ｝メチル）ベンゾエート（０．６０ｇ、７７％）を得る。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４１  ［ＭＨ＋］．
ステップＣ：上記で調製した中間体（０．４８ｇ、１．４mmol）を、トルエン（５．０ｍＬ）中で１３０℃にて一晩加熱し、冷却し、クロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２／８）を行い、メチル−４−［５−（４−イソプロピルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］ベンゾエートを白色粉末として得る（０．４１ｇ、９１％）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２３  ［ＭＨ＋］．
ステップＤ：上記で調製したメチルエステル（０．３７ｇ、１．１５mmol）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）にＢＢｒ３（ジクロロメタン中１Ｍ、２．３ｍＬ、２．３mmol）を加えた溶液で、室温にて一晩処理する。揮発物を真空にて除去し、残留物を水で処理し、粗生成物をクロロホルムから再結晶化し、所望される生成物、４−［５−（４−イソプロピル−フェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］安息香酸（０．２３ｇ、６６％）を得る：融点２１０〜２１３℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）d１．２３（ｄ、６Ｈ）、２．８９〜２．９９（ｍ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、２Ｈ）、８．０３〜８．１７（ｍ、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０７［ＭＨ−］。
【０３５９】
以下の化合物は、主に上記のステップにのっとり、ステップＢ：において適切なカルボン酸誘導体の置換により調製する。化合物番号：１４１および４０７。
【０３６０】
実施例Ｉ：４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］安息香酸（化合物番号４１２）の調製
【化９９】
2008515985.tif 000185
【０３６１】
ステップＡ：４０ｇの２−クロロトリチルクロライド樹脂（ドイツ、Ｒａｐｐ  ｐｏｌｙｍｅｒｅ）を、ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中で１０分間撹拌し、溶媒をその後廃棄する。樹脂には、１％ジイソプロピルエチルアミン／ジメチルホルムアミド３００ｍＬ中の４−シアノ安息香酸（１２．７１ｇ、９６．４mmol）溶液を加え、その後室温で４時間撹拌する。溶媒を廃棄し、樹脂をジクロロメタン（３×２００ｍＬ×１分間）、ジメチルホルムアミド（３×２００ｍＬ×１分間）、メタノール（３×２００ｍＬ×１分間）、そしてジクロロメタン（３×２００ｍＬ×１分間）で洗浄する。樹脂を室温で４時間真空乾燥する。所望される生成物を、トリエチルシラン／トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１０／５０／４０）に反応を示した樹脂の少量の切断によって分析する。ＭＳ  ｍ／ｚ  １４８  ［ＭＨ＋］（純度９７％）。
【０３６２】
ステップＢ：エタノール（３００ｍＬ）中の４−シアノ安息香酸樹脂を室温で１０分間攪拌し、溶媒をその後廃棄する。エタノール（２００ｍＬ）にヒドロキシルアミンハイドロクロライド（３５．８１ｇ、５１６mmol）を加えた溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（８９．３ｍＬ、５１６mmol）を加え、混合物を室温で５分間撹拌する。上記の反応混合物を樹脂に加えられ、４０℃で２４時間攪拌する。溶媒を廃棄し、樹脂をジクロロメタン（３×２００ｍＬ×１０分間）、ジメチルホルムアミド（３×２００ｍＬ×１０分間）、メタノール（３×２００ｍＬ×１０分間）、そしてジクロロメタン（３×２００ｍＬ×１０分間）で洗浄する。樹脂を室温で４時間真空乾燥する。所望される生成物を、トリエチルシラン／トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１０／５０／４０）に反応を示した樹脂の少量の切断によって分析する。ＭＳ  ｍ／ｚ  １８１［ＭＨ＋］（純度９２％）。
【０３６３】
ステップＣ：無水ジクロロメタン（３ｍＬ）にヒドロキシジアミン樹脂（５００ｍｇ、０．４mmol）を加えた懸濁液に、４−フルオロベンゾイルクロライド（９５δＬ、０．８mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（１３８δＬ、０．８mmol）を加える。反応混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を廃棄し、樹脂をジクロロメタン（３×１０ｍＬ  １０分間）、ジメチルホルムアミド（３×１０ｍＬ  １０分間）、メタノール（３×１０ｍＬ  １０分間）、そしてジクロロメタン（３×１０ｍＬ  １０分間）で洗浄する。樹脂を室温で４時間真空乾燥する。所望される生成物を、トリエチルシラン／トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１０／５０／４０）に反応を示した樹脂の少量の切断によって分析する。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０３［ＭＨ＋］
ステップＤ：無水ジクロロメタン（１．５ｍＬ）にアシル化樹脂を加えた懸濁液に、ジクロロメタン（１．５ｍＬ）中５０％トリフルオロ酢酸を加える。反応混合物を室温で２時間撹拌する。樹脂を除去し、ろ液を減圧下において濃縮する。残留物をトルエン（４ｍＬ）中１０％ジメチルホミドに溶解し、その後１３０℃で２時間攪拌する。溶媒を除去し、所望される生成物４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イル］安息香酸を、ＬＣ／ＭＳによって精製する。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８５［ＭＨ＋］
以下の化合物を、上記に記載の手順によって精製する。化合物番号：４０８，４０９，４１０，４１１，４１２，４１３，４１４，４１５，４１６，４１７，４１８，４１９，４２０，４２１，４２２，４３０，４３１，４３２，４３３，４３４，４３５，４３６，４３７，４３８，４３９，４４０，４４１，４４２，４４３，４４５，４４６，４４７，４４８，４４９，４５０，４５１，４５２，４５３，４４４．
実施例Ｊ：４−［３−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］安息香酸の調製（化合物番号１４０）
【化１００】
2008515985.tif 000186
【０３６４】
ステップＡ：Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＨ（１／１、５０ｍＬ）に３．１３ｇ（４５．０mmol）のＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌおよび１．８９ｇ（４５mmol）のＮａＯＨから調製したヒドロキシルアミンを加えた溶液に、４−イソプロピルベンゾニトリル（４．３５ｇ、３０．０mmol）を加える。この反応混合物を、９０℃で一晩攪拌する。溶媒をＥｔＯＨ／ヘキサン（９／１、５０ｍＬ）で置換し、室温にて０．５時間攪拌する。ろ過によって固形物は除去し、ろ液を乾燥するまで蒸発し、無色の油、Ｎ’−ヒドロキシ−４−イソプロピルベンゼンカルボキシミドアミドを定量生成で得る。ＭＳ  ｍ／ｚ  １９５［ＭＨ＋］
ステップＢ：上記で調製された０℃の中間体溶液、（０．２７ｇ、１．５０mmol）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のトリエチルアミン（０．１８ｇ、０．２５ｍＬ、１．８mmol）に、メチル４−（クロロカルボニル）ベンゾエート（０．３２ｇ、１．５８mmol）を加える。混合物をその後、室温で４時間撹拌する。混合物をその後、水および塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過する。溶媒をトルエンで置換し、密封した管内で一晩、１３０℃で攪拌する。溶媒を除去したのちに得られる粗組成物を、クロマトグラフィーによってメチル４−［３−（４−イソプロピルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル］ベンゾエート（０．３８ｇ、７９％）を産生する。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２３［ＭＨ＋］
ステップＣ：上記で調製されたメチルエステル（０．３７ｇ、１．１５mmol）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）にＢＢｒ３（ジクロロメタン中１Ｍ、２．３ｍＬ、２．３mmol）を加えた溶液で、室温にて一晩処理する。揮発物質を真空にて除去し、残留物を水で処理し、粗生成物をクロロホルムから再結晶化し、所望される生成物、４−［３−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］安息香酸（０．３４ｇ、９７％）を得る：融点２５３〜２５５℃。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００  ＭＨｚ）d  １．２５（ｄ，６Ｈ），２．９０−３．００（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｄ，２Ｈ），８．０１−８．２４（ｍ，６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０７  ［ＭＨ−］．
類似の方法によって、上記ステップを用いて、上記ステップＡの適切なベンゾニトリルの置換および上記ステップＢのメチル３−（クロロカルボニル）ベンゾエート開始物質との反応により、次の化合物を調製する：化合物番号：３４９，３６４，３９４，３９６，３９７，３９８，３９９，４０３，４０４，４０５，および４０６。
【０３６５】
実施例Ｋ：３−［３−（２−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］安息香酸（化合物番号５０６）の調製
【化１０１】
2008515985.tif 000187
【０３６６】
ステップＡ〜Ｃ（１ポット）：３ｍＬのｔ−ＢｕＯＨに２−フルオロベンゾニトリル（４８４ｍｇ、４．００mmol）を加えた溶液に、５０％ＮＨ２ＯＨ／ＨＣｌ溶液２７４μＬ（４．４８mmol、１．１２等量）を加える。溶液を７３℃まで２０時間加熱し、５０％ＮＨ２ＯＨ／ＨＣｌ溶液を追加し（１００μＬ、１．６０mmol、０．３８等量）、混合物を７３℃で２日間加熱する。得られる粗２−フルオロ−Ｎ−ヒドロキシベンズアミジン混合物をその後１０℃に冷却し、３ｍＬのｔ−ＢｕＯＨで希釈し、Ｅｔ３Ｎ（８３６μＬ、６mmol）で処理し、さらに３−クロロカルボニル安息香酸メチルエステル（１．１９ｇ、６mmol）で処理し、この混合物を１〜２時間かけてゆっくりと室温まで加熱することにより、中間体Ｏ−アシル化ヒドロキシベンズアミジンを形成する。この懸濁液をその後９０℃まで加熱し、３日間攪拌し、室温に冷却し、２００ｍＬの２０％ＴＨＦ／Ｅｔ２Ｏを用いて希釈し、ろ過する。この有機溶液を１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２×５０ｍＬ）、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、減圧下で濃縮して、３−［３−（２−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］安息香酸メチルエステルが得られ、さらなる精製を行わずにに直接次の反応に用いる。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９９．３３、Ｃ１６Ｈ１２ＦＮ３Ｏ３（ＭＨ＋）２９９で算出。
【０３６７】
ステップＤ：ステップ３の粗製固形物（純度＞９３％、ＬＣ／ＭＳによる）を、４０ｍＬの５０％ＴＨＦ／Ｈ２Ｏで希釈し、６５℃まで５時間加熱し、室温まで冷却する。溶液を、ゆっくりと６Ｎ  ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨ４に調整し、ろ過する。得られる固体は３０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサンで洗浄し、７０℃で一晩乾燥し、１．０７ｇ（９４％、４ステップで）の３−［３−（２−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル］安息香酸を白色綿状粉末として得る。：ｍｐ  ２３３−２３４  ℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．４５（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｔ，Ｊ＝７．７  Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｍ，１Ｈ），８．２４（ｄｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｔ，Ｊ＝８．０，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｔ，Ｊ＝１．６  Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ    ２８５．２６，ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１５Ｈ１０ＦＮ３Ｏ２（ＭＨ＋）２８５．
以下の化合物を、原則的に上記の手順によって、適切な置換されたニトリルより調製する。化合物番号：５０７，５０８，５０９，５１０，５１１，５１２，５１３，５５９，５６０，５６１，５６２，５６３，５６４，５６５，５６９，５７１，５７２，５７６，５７７，５７８および５７０。
【０３６８】
実施例Ｌ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−２−イル］安息香酸（化合物番号２８８）の調製
【化１０２】
2008515985.tif 000188
【０３６９】
ステップＡ：乾燥トルエン７０ｍＬにヘキサメチレンテトラアミン（７．０ｇ、５０mmol）を加えた溶液に、乾燥トルエン４０ｍＬに２−ブロモ−１−（ｐ−イソプロピルフェニル）エタノン（１２ｇ、５０mmol）を加えた溶液を０℃で加える。この反応混合物を一晩攪拌する。形成された固形物をろ過によって除去し、２０ｍＬのトルエンで洗浄し、その後固形物（ヘキサメチレンテトラアンモニウム）は、８０ｍＬのエタノール中の濃塩酸（８．５ｍＬ）に加える。混合物をその後、暗所にて室温で２４時間撹拌する。白色固形物（塩化アンモニウム）をろ過によって除去し、ろ液を蒸発する。残留物をエタノール／エーテルから再結晶し、２−アミノ−１−（ｐ−イソプロピルフェニル）エタノンハイドロクロライド（７ｇ、３３mmol）を黄色固形物として得る。
【０３７０】
ステップＢ：２０ｍＬの塩化チオニルにイソフタル酸モノエチルエステル（５．２ｇ、２７mmol）を加えた溶液を３時間還流し、その後濃縮して過剰な塩化チオニルを除去する。残留物を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の２−アミノ−１−（ｐ−イソプロピルフェニル）エタノンハイドロクロライド溶液（４．７ｇ、２２mmol）およびピリジン（５ｍＬ、６１mmol）溶液に０℃で滴下する。２４時間攪拌したのち、溶媒を蒸発する。残留物を１０ｍＬの水に溶解し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。減圧下で濃縮したのち、残留物をカラム・クロマトグラフィーによって精製し、Ｎ−［２−（４−イソプロピルフェニル）−２−オキソ−エチル］−イソフタル酸エチルエステルを褐色の固形物（５．５ｇ、７１％）として得る。
【０３７１】
ステップＣ：５ｍＬのオキシ塩化リン中の上記のエステル（５００  ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）溶液は、２．５時間還流した。溶媒を蒸発した後、残留物を２０ｍＬの濃縮アンモニア溶液に溶解し、ＥｔＯＡＣで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を濃縮することにより、茶色の油（３４０ｍｇ、７２％）の粗エチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−２−イル］ベンゾエートを得る。
【０３７２】
ステップＤ：メタノール／水（９ｍＬ／３ｍＬ）にエチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−２−イル］ベンゾエート（１５０  ｍｇ、０．４５  ｍｇ）および水酸化リチウム（９４  ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を加えた混合物を２時間攪拌する。溶媒を蒸発した後、残留物を１０ｍＬの水に溶解し、１ｇのクエン酸で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を減圧下で濃縮して、生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサンから再結晶し、淡黄色の固形物として、７１  ｍｇ（５２％）の３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−２−イル］安息香酸を得る。：融点１５０〜１５３℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）    δ８．９７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３３（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、８．２１（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．６８（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、７．６２（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．５０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、２．９７（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．２５（ｄ、Ｊ＝６．９、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０８．２  ［ＭＨ＋］．
実施例Ｍ：４−［５−（２，４−ジフルオロフェニル）オキサゾール−２−イル］安息香酸（化合物  ５４８号）の調製
【化１０３】
2008515985.tif 000189
【０３７３】
ステップＡ：メチル  ４−（４，５−ジヒドロ−オキサゾール−２−イル）−ベンゾエート：トルエン（２００ｍＬ）にメチル４−クロロカルボニルベンゾエート（１０．９２ｇ、５４．９８ｍｍｏｌ）を加えた溶液に、室温で攪拌しながら２−ブロモエチルアミンハイドロブロミド（１０．２５ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を加える。トリエチルアミン（３５．０ｍＬ、２５１ｍｍｏｌ）を加えながら、反応混合物を室温で攪拌する。反応混合物を１５時間加熱還流し、その後、室温まで冷却する。水（２００ｍＬ）を加え、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４×５０ｍＬ）で抽出する。抽出物を水（２×５０ｍＬ）、ＮａＣｌ飽和水溶液（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、回転式エバポレーターで濃縮して、６７％の収率で褐色の固形物として、６．８６ｇのメチル４−（４，５−ジヒドロ−オキサゾール−２−イル）ベンゾエートを得る。
【０３７４】
ステップＢ：メチル  ４−（５−ブロモ−オキサゾール−２−イル）ベンゾエート：メチル  ４−（４、５−ジヒドロオキサゾール−２−イル）ベンゾエート（６．８６ｇ、３３．４３ｍｍｏｌ）を、ＣＣｌ４（３３５ｍＬ）中に懸濁する。Ｎ−ブロモスクシンイミド（１８．４５ｇ、１０３．７ｍｍｏｌ）、続いて、アゾビスイソブチロニトリル（５０  ｍｇ）を加える。反応混合物を窒素（５減圧／窒素循環）でパージし、１７時間加熱還流する。固形物をろ過し、ＣＣｌ４で洗浄し、廃棄する。ろ過した液体は、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３飽和水溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、回転式エバポレーターで濃縮して、粗生成物を得る。生成物をシリカゲルクロマトグラフィーでさらに精製し、１−６％  酢酸エチル／ヘキサンで溶離し、白色固形物として、４．４２  ｇ（４７％）のメチル  ４−（５−ブロモオキサゾール−２−イル）ベンゾエートを得る。
【０３７５】
ステップＣ：メチル  ４−［５−（２，４−ジフルオロフェニル）オキサゾール−２−イル］ベンゾエート：メチル  ４−（５−ブロモオキサゾール−２−イル）ベンゾエート（２．２３ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）を、無水ジメトキシエタン（２６ｍＬ）に溶解し、２５℃で攪拌する。２，４−ジフルオロフェニルボロン酸（１．３９ｇ、８．８０ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（２．８９ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）（０．２８１ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）をその後加える。反応混合物を、１６時間窒素のもとで加熱還流する。反応混合物を室温まで冷却し、固形物をろ過し、ジメトキシエタンで洗浄し、廃棄する。ろ過した液体を水で希釈し、生成物を沈殿し、これをろ過し、水で洗浄し、乾燥し、褐色の固形物として粗生成物を得る。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０−２０％  酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、淡黄色の固形物として、１．１６  ｇ（４７％）のメチル  ４−［５−（２，４−ジフルオロフェニル）オキサゾール−２−イルベンゾエートを得る。
【０３７６】
ステップＤ：４−［５−（２，４−ジフルオロ−フェニル）オキサゾール−２−イルｌ］安息香酸：メチル  ４−［５−（２，４−ジフルオロフェニル）−オキサゾール−２−イル］ベンゾエートを、ｔ−ブタノール（６ｍＬ）および水（２ｍＬ）の混合物に懸濁する。水酸化ナトリウム（０．２４ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１５時間加熱還流する。反応混合物を室温まで冷却し、１０％  塩酸水溶液を加えることによってｐＨ３まで酸性にし、生成物を沈殿させる。固形物をろ過し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、白色の固形物として、１．０４  ｇ（９４％）の４−［５−（２，４−ジフルオロフェニル）オキサゾール−２−イル］安息香酸を得る。融点  ３０１〜３０２℃、１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ  ７．３０（１Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝２．４、８．１）、７．５２（１Ｈ、ｍ）、７．７１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．６）、８．０３−８．１１（ｍ、４  Ｈ）、８．２２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．９）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０２．３２  ［ＭＨ＋］．
以下の化合物は、適切なボロン酸を使用して、上記方法によって作製される。：化合物番号：５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４９、５５０、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５２７、５２８、６２９、６３０、６３１、６３２、６３３、６３４、６３５、６３６、６３７、６３８、６３９、６４０、６４１、６４２、６４３、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６４９と６５０。
【０３７７】
実施例Ｎ：３−［４−（４−ピロリジン−１−イル−フェニル）−オキサゾール−２−イル］−安息香酸（化合物３３５）の調製
【化１０４】
2008515985.tif 000190
【０３７８】
ステップＡ：イソフタル酸メチルエステル（２０ｇ）の水酸化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を１２０℃で１８時間撹拌する。減圧下で溶媒を除去すると、白色の固形物として所望される生成物が得られる。
【０３７９】
ステップＢ：上記のイソフタルアミド酸（１６０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に加えた溶液を室温で２−ブロモ−１−（４−ピロリジン−１−イル−フェニル）−エタノン（１５８ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）に加える。この反応混合物を１５０℃で１８時間攪拌し、周囲温度まで冷却する。減圧下で溶媒を除去し、所望される生成物である、３−［４−（４−ピロリジン−１−イル−フェニル）オキサゾール−２−イル］安息香酸をＬＣ−ＭＳにより精製する（ＭＨ＋＝３５５．０）。
【０３８０】
上述の方法で、適当なブロモまたはクロロケトンを置換し、以下の化合物を調製する。化合物番号３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３２５、および２７６。
【０３８１】
実施例Ｏ：３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−４−イル］安息香酸（化合物番号３１３）の調製
【化１０５】
2008515985.tif 000191
【０３８２】
ステップＡ：４−イソプロピルベンズアミド（３０１ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）とメチル３−（２−ブロムアセチル）ベンゾエート（５００ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）をｍ−キシレン溶液（５ｍｌ）に加えた溶液を１４０〜１５０℃で７時間加熱する。冷却後、反応物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、生成物をフラッシュ・クロマトグラフィーで精製し、１６１ｍｇ（２７％）のメチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−４−イル］−ベンゾエートを得る。
【０３８３】
ステップＢ：メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）オキサゾール−４−イル］ベンゾエート（１００ｍｇ、０．３１１ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（６４ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）をメタノール／Ｈ２Ｏ（５ｍＬ／１．７ｍＬ）に加えた溶液を室温で０．５時間撹拌する。反応混合物を４５℃まで加熱し、３時間撹拌する。反応の完了後、減圧下で溶媒を除去する。残留物を１０ｍＬの水に溶解し、中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して９０ｍｇ（９４％）の３−［２−（４−イソプロピルフェニル）オキサゾール−４−イル］安息香酸を得る。融点１８７〜１８９℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．５３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．１２−８．０４（ｍ、５Ｈ）、７．５６（ｔ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、２．９８（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ３０８．３［ＭＨ＋］。
【０３８４】
実施例Ｐ：３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−オキサゾール−５−イル］安息香酸（化合物番号３２０）の調製
【化１０６】
2008515985.tif 000192
【０３８５】
ステップＡ：３−アセチル安息香酸（０．６７ｇ、４．１ｍｍｏｌ）および触媒量のＴｓＯＨを５０ｍＬのメタノールに加えた溶液を２０時間還流する。溶媒を蒸発により除去し、残留物を５０ｍＬのエーテルに溶解し、２０ｍＬの５％ＮａＨＣＯ３および２０ｍＬの塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発し、淡黄色の油としてメチル３−アセチル安息香酸（０．７１ｇ、９７％）を得る。
【０３８６】
ステップＢ：メチル３−アセチルベンゾエート（６．６ｇ、３７ｍｍｏｌ）をエチル・エーテルと１，４−ジオキサンの混合物（Ｖ：Ｖ＝１０：１、合計５７．５ｍＬ）に加えた溶液を臭素（１．９１ｍＬ、３７ｍｍｏｌ）を用いて３０分間室温で滴下する。添加後、混合物をさらに４０分間撹拌する。氷冷下で混合物をＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ中に４ｇ、４７ｍｍｏｌ）で処理し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出する。有機層を５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３、５０ｍＬの水、および５０ｍＬの塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発する。この残留物をシリカゲルのカラム・クロマトグラフィー（石油エーテル−ＥｔＯＡｃ、１５：１）によって精製し、白色固形物として、メチル３−（ブロムアセチル）安息香酸エステル（６．５ｇ、６８％）を得る。
【０３８７】
ステップＣ：メチル３−（ブロモアセチル）ベンゾエート（３．８ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＤＭＦに加えた溶液に室温でＮａＮ３を加え、この混合物を３５分間撹拌する。反応混合物を１００ｍＬ冷水で希釈し、エーテル（３×５０ｍＬ）で抽出する。組み合わせた有機層を水（２×４０ｍＬ）と塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、灰色固形物として、メチル３−（２−アジドアセチル）ベンゾエート（２．１ｇ、６５％）を得る。
【０３８８】
ステップＤ：メチル３−（２−アジドアセチル）ベンゾエート（１．８９ｇ、８．６ｍｍｏｌ）、０．４ｇの１０％Ｐｄ−Ｃを４０ｍＬのＭｅＯＨに加えた溶液、および２．５ｍＬの濃ＨＣｌの混合物を一晩、室温、１ａｔｍで水素化する。触媒をろ過したのち、ろ液を蒸発乾固させ、白色固形物としてアミンハイドロクロライド（１．２５ｇ、６３．２％）を得る。
【０３８９】
ステップＥ：メチル３−（２−アミノアセチル）ベンゾエートのハイドロクロライド（１．２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を０℃に冷却した１０ｍＬの乾燥ＴＨＦに加えた溶液を５ｍＬの無水ピリジンに加える。この混合物を３０分間撹拌し、４−イソプロピルベンゾイルクロライドをＴＨＦ（５ｍＬの溶媒中に１０ｍｍｏｌ）に加えた溶液を１５分以上かけて滴加する。添加後、反応混合物を２時間撹拌し、蒸発させる。残留物を１００ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、水（３×３０ｍＬ）、塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。この残留物をシリカゲルのカラム・クロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、３／１）によって精製し、淡黄色の固形物として、メチル３−［２−（４−イソプロピルベンゾイルアミノ）アセチル］ベンゾエート（１．２ｇ、６７．７％）を得る。
【０３９０】
実施例Ｆ：メチル３−［２−（４−イソプロピルベンゾイルアミノ）アセチル］ベンゾエート（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＰＯＣｌ３に加えた溶液を６時間還流し、室温まで冷却する。反応混合物を１００ｍＬの冷水に加え、２Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ１０に調整する。この混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を水（２×５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発する。この残留物をシリカゲルのカラム・クロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、３／１）によって精製し、淡黄色の固形物として、メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）オキサゾール−５−イル］安息香酸エステル（０．４ｇ、８４．５％）を得る。
【０３９１】
ステップＧ：メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）オキサゾール−５−イル］ベンゾエート（０．４ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＭｅＯＨに加えた溶液にＬｉＯＨ（０．１ｇ）を１０ｍＬの水に加えたものを添加し、この反応物を２時間加熱還流する。ＭｅＯＨを蒸発させて除去し、６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、１５分間撹拌する。この混合物をろ過し、水（３ｘ１０ｍＬ）、石油エーテル（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、灰色固形物として３−［２−（４−イソプロピルフェニル）オキサゾール−５−イル］安息香酸（０．３５ｇ、９１％）を得る。融点１９３〜１９５℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．４６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．１０−８．０５（ｍ、３Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、７．５８（ｔ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．５６（ｓ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．４、２Ｈ）、２．９９（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．９、１Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝６．９、６Ｈ）；質量スペクトル（ｍ／ｚ）３０８．２［ＭＨ＋］。
【０３９２】
実施例Ｑ：３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］安息香酸（化合物番号５５２）の調製
【化１０７】
2008515985.tif 000193
【０３９３】
ステップＡ：３−［３−（４−フルオロフェニル）−３−オキソプロピオニル］ベンゾニトリルの調製：メチル３−シアノベンゾエート（１．０５ｇ、６．５２ｍｍｏｌ）と水素化ナトリウム（１７．２５ｍｍｏｌのヘキサン中、０．６９ｇ、６０％、17.25ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に加えた混合物に４−フルオロアセチルフェノン（０．８６ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に加えた水溶液に添加する。得られた混合物を、開始物質がＴＬＣに消滅したと判定されるまで、１時間撹拌下で加熱還流する。室温まで冷却後、混合物を１５ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌに添加し、この溶液を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出する。組み合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、次いで塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で除去する。残留物をフラッシュカラムで更に精製し、ヘキサンおよびヘキサンに５０％メチレンクロライドで順に溶離する。単離した固形物をエチル・エーテル中に懸濁、ろ過し、白色粉末として１．２８ｇ（７４％）の３−［３−（４−フルオロフェニル）−３−オキソプロピオニル］ベンゾニトリルを得る。得られた化合物は、１ＨＮＭＲおよびＬＣ−ＭＳによる判定で、純度＞９５％である。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．２５（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｍ、１Ｈ）、８．０３（ｍ、２Ｈ）、７．８３（ｍ、１Ｈ）、７．６４（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．２０（ｍ、２Ｈ）、６．７９（ｓ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ−）２６６．２５。
【０３９４】
ステップＢ：３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］ベンゾニトリルの調製：３−［３−（４−フルオロフェニル）−３−オキソ−プロピオニル］ベンゾニトリル（２５０ｍｇ、０．８９５ｍｍｏｌ）を３ｍＬの無水ＥｔＯＨに加えた溶液に無水ヒドラジン（３０δＬ、０．９８５ｍｍｏｌ）を添加し、密封した反応混合物を１００℃まで、２１分以上、マイクロ波で加熱し（電力３００Ｗ、１分間で１００℃まで上昇、２０分間維持）、３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］ベンゾニトリルの粗溶液を得る。ＭＳ  ｍ／ｚ２６４．２９．３３、Ｃ１６Ｈ１２ＦＮ３Ｏ３（ＭＨ＋）２６４で算出。
【０３９５】
ステップＣ：３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］安息香酸の調製：３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］−ベンゾニトリルの混合物を５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ、５ｍｍｏｌ）に添加し、この混合物を再密封し、１００℃まで、３１分以上、マイクロ波で（電力３００Ｗ、１分間で１００℃まで上昇、３０分間維持）加熱し、３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］安息香酸を含む粗溶液を室温まで冷却する。溶液を、ゆっくりと２Ｎ  ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨ４に調整し、ろ過する。得られた固形物を水（２×５ｍＬ）、５０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン（２×５ｍＬ）で洗浄し、一晩乾燥させ（５０℃、１トル）、白色粉末として２１１．５ｍｇ（８６％−２ステップ）の３−［５−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］安息香酸を得る。融点ｍｐ２７０．５〜２７２℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．２７（ｍ、３Ｈ）、７．５６（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．８９（ｍ、３Ｈ）、８．０５（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．３９（ｍ、１Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ  ２８３．３２、Ｃ１６Ｈ１２ＦＮ２Ｏ２（ＭＨ＋）２８３で算出。
【０３９６】
原則的に同じ方法で以下の化合物を作製する：化合物番号５５１。
【０３９７】
実施例Ｒ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−２Ｈ−ピラゾ−ル−３−イル］安息香酸の調製（化合物番号２８７）
【化１０８】
2008515985.tif 000194
【０３９８】
ステップＡ：水素化ナトリウム（1.56 g, ３９ mmol, 鉱油中に６０%分散）を無水ＴＨＦに加えた懸濁液に、１−（４−イソプロピル−フェニル）エタノン（４．８６ｇ、30 mmol）およびイソフタル酸ジメチルエステル（５．８３ｇ、30 mmol）をＴＨＦに加えた溶液を２０ｍｌ加え、室温で３０分間撹拌する。混合物を５時間加熱還流し、氷上で冷却し、３．５ｍＬの濃ＨＣｌを添加してクエンチし、濃縮する。粗メチル３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−ベンゾエートをジクロロメタンに溶解し、１／１のジクロロメタン／石油エーテルを溶離剤として用い、フラッシュ・クロマトグラフィーで精製し、６．４ｇの中間体を油として得る（６６％）。
【０３９９】
ステップＢ：６００ｍｇのメチル３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−３−オキソ−プロピオニル］安息香酸エステルを２５ｍＬの４／１ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏに加えたものに、５１８ｍｇのＬｉＯＨを添加する。反応物を２時間加熱還流し、室温まで冷却し、ＨＣｌ水溶液で中和する。沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥し、ＥｔＯＨから再結晶化させて、白色固形物として３５０ｍｇの３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−３−オキソ−プロピオニル］安息香酸を得る。
【０４００】
ステップＣ：３１０ｍｇの３−［３−（４−イソプロピルフェニ）−３−オキソ−プロピオニル］−安息香酸を５ｍＬのＥｔＯＨに加えたものに０．０５ｍＬのヒドラジン一水和物を添加する。この反応混合物を２４時間還流し、その後室温まで冷却する。沈殿物を採取し、ＥｔＯＨで洗浄し、トルエンから再結晶化させ、白色固形物をして１９０ｍｇの３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］安息香酸を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．０４（ｄ、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．７４（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、７．５４（ｔ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、７．１９（ｓ、１Ｈ）、２．９０（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．２１（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０８．２［ＭＨ＋］。
【０４０１】
実施例Ｓ：３−（４−ｐ−トリルチアゾール−２−イル）安息香酸（化合物３５０）の調製
【化１０９】
2008515985.tif 000195
【０４０２】
ステップＡ：３−シアノ安息香酸（１．２ｇ、８．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に加えた溶液にジチオリン酸ジエチルエステルおよび水（５ｍＬ）を添加し、その混合物を１８時間、８０℃で撹拌する。減圧下で溶媒を除去し、白色固形物として目的の３−チオカルバモイル安息香酸が得られる。
【０４０３】
ステップＢ：３−チオカルバモイル安息香酸を無水ＤＭＦに加えた溶液を２−ブロモ−１−ｐ−トリル−エタノンに添加し、反応物を１８時間、１５０℃で撹拌する。窒素ストリーム下で溶媒を除去し、所望される生成物３−（４−ｐ−トリルチアゾール−２−イル）安息香酸をＬＣ−ＭＳによって精製する。
【０４０４】
以下の化合物を、上記の手順によって精製する。化合物番号：３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３。
【０４０５】
実施例Ｔ：３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−２−イル］−安息香酸（化合物２８９）の調製
【化１１０】
2008515985.tif 000196
【０４０６】
ステップＡ：エチル−３−シアノベンゾエート（３．３６ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解し、その溶液を７０〜７５℃に加熱する。この溶液中にＨ２Ｓの気泡が発生し、そこに０．５ＭＬのヘキサヒドロ・ピリジンを添加する。２時間後、反応混合物を５０ｍＬの水に注ぎ、生成した沈殿物を採取し、減圧下で乾燥し、３ｇのエチル３−チオカルバモイルベンゾエートを得る。
【０４０７】
ステップＢ：エチル３−チオカルバモイルベンゾエート（０．５ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）および２−ブロモ−１−（４−イソプロピルフェニル）−エタノン（５７６ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ）を２ｍＬの無水ＤＭＦに加えた溶液を６０〜６５℃で２時間加熱する。反応終了後、反応物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、生成物をフラッシュ・クロマトグラフィーで精製し、０．７ｇ（８４％）のエチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−２−イル］−ベンゾエートを得る。
【０４０８】
ステップＣ：エチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−２−イル］−ベンゾエート（９２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（５５ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）をメタノール／Ｈ２Ｏ（５ｍＬ／１．７ｍＬ）に加えた溶液を室温で０．５時間撹拌する。反応混合物を５０℃まで加熱し、３時間撹拌する。完了後、真空下で溶媒を除去し、残留物を１０ｍＬの水に溶解し、中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して８２ｍｇ（９７．６％）の３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−２−イル］安息香酸を得る。融点２０６〜２０８℃；１Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）δ８．７８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３３（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．９３（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．４８（ｓ、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、２．９７（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．９、１Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２４．２［ＭＨ＋］。以下の化合物は、上記に記載の手順によって精製する。化合物番号：３５０、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３。
【０４０９】
実施例Ｕ：３−［５−（４−イソプロピル−フェニル）チアゾール−２−イル］−安息香酸（化合物３１０）の調製
【化１１１】
2008515985.tif 000197
【０４１０】
ステップＡ：Ｎ−［２−（４−イソプロピルフェニル）−２−オキソエチル］イソフタル酸エチルエステル（上記実施例Ｌ  ステップＢ：より、５００ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、および五硫化リン（１．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの乾燥ピリジンに加えた混合物を２時間還流し、冷却後、混合物を冷水（２０ｍＬ）および飽和アンモニア溶液（１０ｍＬ）に注入する。反応物をＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。濃縮後、残留物をカラム・クロマトグラフィーによって精製し、褐色の油として、エチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−チアゾール−２−イル］−ベンゾエート（１５０ｍｇ、３０％）を得る。
【０４１１】
ステップＢ：エチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−２−イル］−ベンゾエート（１２０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム（９４ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）をメタノール／水（９ｍＬ／３ｍＬ）に加えた混合物を２時間撹拌する。溶媒が蒸発したのち、残留物を１０ｍＬの水に溶解し、１ｇのクエン酸で処理し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮し、粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサンから再結晶化させ、褐色固形物として３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−２−イル］安息香酸（６４ｍｇ、５９％）を得る。融点２１８〜２２０℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２２−８．１６（ｍ、２Ｈ）、８．０７（ｓ、１Ｈ）、７．６１−７．５５（ｍ、３Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、２．９６（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．４、１Ｈ）、１．３２（ｄ、Ｊ＝６．４、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２４．３［ＭＨ＋］。
【０４１２】
実施例Ｖ：３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−４−イル］−安息香酸（化合物３１２）の調製
【化１１２】
2008515985.tif 000198
【０４１３】
ステップＡ：４−イソプロピルベンゾニトリル（２．０ｇ、１４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解し、その溶液を７０〜７５℃に加熱する。この溶液中にゆっくりとＨ２Ｓの気泡を発生し、そこに０．５ｍＬのヘキサヒドロ・ピリジンを添加する。１．５時間後、反応混合物を５０ｍＬの水に注ぎ、生成した沈殿物を採取し、減圧下で乾燥し、１．５ｇの４−イソプロピルチオベンズアミドを得る。
【０４１４】
ステップＢ：４−イソプロピル−チオベンズアミド（３３１ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）およびエチル３（２−ブロムアセチル）ベンゾエート（５００ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を５ｍＬの無水ＤＭＦに加えた溶液を６０〜６５℃で２時間加熱する。この生成混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮する。フラッシュ・クロマトグラフィーで精製することで、４６８ｍｇ（７２％）の、メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−４−イル］ベンゾエートが得られる。
【０４１５】
ステップＣ：メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−４−イル］−ベンゾエート（９２ｍｇ、０．２６２ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（５５ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）をメタノール／Ｈ２Ｏ（５ｍＬ／１．７ｍＬ）に加えた溶液を室温で０．５時間撹拌する。その後、反応混合物を５５℃に加熱し、３時間撹拌する。減圧下で溶媒を除去し、残留物を１０ｍＬの水に溶解し、酸で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して９２ｍｇの３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−４−イル］安息香酸を得る。融点１９３〜１９５℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．６８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２９（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、８．０８、（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．５９−７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、２．９８（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．３１（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２４．３［ＭＨ＋］。
【０４１６】
実施例Ｗ：３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−５−イル］−安息香酸（化合物３２１）の調製
【化１１３】
2008515985.tif 000199
【０４１７】
ステップＡ：メチル３−［２−（４−イソプロピルベンゾイルアミノ）アセチル］ベンゾエート（実施例Ｐ、ステップＥ）（０．６ｇ、１．８ｍｍｏｌ）および１ｇＰ２Ｓ５を５ｍＬのピリジンに加えた溶液を６時間還流し、室温まで冷却する。反応混合物を１００ｍＬの冷水に加え、２Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ１０に調整する。この混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を水（２×５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発する。この残留物をシリカゲルのカラム・クロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、３／１）によって精製し、淡黄色の固形物として、メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−５−イル］ベンゾエート（０．３１ｇ、５２．０％）を得る。
【０４１８】
ステップＢ：メチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−５−イル］ベンゾエート（０．３１ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＭｅＯＨに加えた溶液にＬｉＯＨ（０．１ｇ）を１０ｍＬの水に加えたものを添加し、この反応物を１時間加熱還流する。ＭｅＯＨを蒸発により除去し、反応物を６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、１５分間撹拌する。この混合物をろ過し、水（３ｘ１０ｍＬ）、石油エーテル（１０ｍＬ）で洗浄、乾燥し、淡黄色固形物として３−［２−（４−イソプロピルフェニル）チアゾール−５−イル］安息香酸（０．２８ｇ、９４％）を得る。融点２３７−２３９℃；１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３７（ｓ、１Ｈ）、８．１７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．９９−７．８８（ｍ、４Ｈ）、７．５９（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、２．９５（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、１．２２（ｄ、Ｊ＝７．２、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２２．０［ＭＨ＋］。
【０４１９】
実施例Ｘ：３−［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］安息香酸（化合物４７９）の調製
【化１１４】
2008515985.tif 000200
【０４２０】
ステップＡ：３−（ヒドロキシイミノメチル）安息香酸メチルエステルの調製：メチル３−ホルミルベンゾエート（５ｇ、３０．５ｍｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ）を５０ｍＬの無水ＥｔＯＨに加えた溶液に、塩酸ヒドロキシルアミン（２．４０ｇ、３３．６０ｍｍｏｌ）およびピリジン（４．０ｍＬ、４９．５ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を２時間加熱還元し、室温まで冷却し、減圧下で濃縮する。残留物を５００ｍＬのＥｔ２Ｏに溶解し、１Ｎ ＨＣｌs水溶液（２×５０ｍＬ）、水（２×５０ｍＬ）、で分割し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮し、白色粉末として５．５ｇ（１００％）のメチル３−（ヒドロキシイミノメチル）−ベンゾエートを得る。融点１０７〜１０８℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ３．９４（ｓ、３Ｈ）、７．４６（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．０５（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．２０（ｍ、２Ｈ）、８．４１（ｓ、１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  １７８．２３［ＭＨ＋］。  
ステップＢ：３−カルボメトキシフェニヒドロキシモイルクロライドの調製：メチル３−（ヒドロキシイミノメチル）ベンゾエート（５．５ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）を０℃まで冷却した７ｍＬのＤＭＦに加えた溶液にＮＣＳ（４．９７ｇ、３６．８ｍｍｏｌ）を添加し、次いで濃塩酸ボトルの上部ガスから１〜２ｍＬのガス状ＨＣｌをピペットで添加する。この混合物を１５分以上にわたり強い発熱反応を起こすが、氷浴を使用することで制御できる。混合物を９０分間撹拌し、２００ｍＬの９０％Ｅｔ２Ｏ／ＴＨＦに溶解し、水（４×５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶液を約５ｍＬの溶媒が残留するまで減圧下で濃縮し、１５０ｍＬのヘキサンを添加して生成物を沈殿させ、１〜２時間後にスラリーろ過を行い、白色の固形物として、５ｇ（６１％）の３−カルボメトキシフェニヒドロキシモイルクロライドを得る。安定性を維持するために、原料をデシケーターの冷凍庫に保存する。ＭＳ  ｍ／ｚ２１４．２０［ＭＨ＋］。
【０４２１】
ステップＣ：メチル３−［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］ベンゾエートの調製：３−カルボメトキシフェニルヒドロキシモイルクロライド（２．０ｇ、９．４ｍｍｏｌ）および１−クロロ−４−エチニルベンゼン（２．６ｇ、１９．９ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を０℃に冷却した５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に加えた溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１．８ｍＬ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１〜２時間かけて室温に戻し、２４時間撹拌する。この溶液を２００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、１ＮのＮａＯＨ水溶液（７５ｍＬ）、水（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で〜１５ｍＬが残留するよう濃縮する。この溶液を８ｍＬのＭｅＯＨで希釈し、１１０ｍＬのヘキサンを添加し、顕著な沈殿が生じるまで、周囲温度で溶媒をゆっくりと濃縮する。スラリーをろ過し、固形生成物を乾燥させ（７０℃、１０トル）、白色粉末として２．２５ｇ（７７％）のメチル３−［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］ベンゾエートを得る。濃縮母液において、この沈殿の手順を繰返し、更に３１０ｍｇ（１１％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）δ３．９５（ｓ、３Ｈ）、７．５５（ｓ、１Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、８．１３（ｄｍ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．２０（ｄｍ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．５４（ｓ、１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ３１４．２１、Ｃ１７Ｈ１３ＣｌＮＯ３（ＭＨ＋）３１４で算出。
【０４２２】
ステップＤ：３−［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］安息香酸の調製：２．５６ｇ（８．２ｍｍｏｌ）のメチル３−［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］ベンゾエートを５６ｍＬの５０％ＴＨＦ／Ｈ２Ｏに加えた溶液を３時間６５℃まで加熱し、室温まで冷却する。溶液を、ゆっくりと６Ｎ  ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨ４に調整し、ろ過する。得られた固体を水、３０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサンで洗浄し、７０℃で一晩乾燥させ（１０トル）、１．８１ｇ（７４％）の３−［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］安息香酸を白色綿状粉末として得る。母液の沈殿物から、更に３７６ｍ（１５％）が得られる。融点２９３〜２９５℃；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．６５（ｍ、３Ｈ）、７．８０（ｓ、１Ｈ）、７．９４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、８．０６（ｄｍ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１４（ｄｍ、Ｊ＝  ７．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．４４（ｍ、１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ３００．１９、Ｃ１６Ｈ１１ＣｌＮＯ３（ＭＨ＋）３００で算出。
【０４２３】
原則として上記と同じ手順を使用して、またステップ４における他のアセチレン誘導体で置換することで、以下の化合物が得られる。化合物番号：４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５６６、５６７、５６８、５７３、５７４、および５７５。
【０４２４】
実施例Ｙ：３−［３−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−５−イル］安息香酸（化合物５０３）の調製
【化１１５】
2008515985.tif 000201
【０４２５】
ステップＡ：４−クロロベンズアルデヒドオキシムの調製：４−クロロベンズアルデヒド（２．８３ｇ、２０．１５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を１７ｍＬの無水ＥｔＯＨに加えた溶液に、塩酸ヒドロキシルアミン（１．６１ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．５ｍＬ、３０．９ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を３時間加熱還元し、室温まで冷却し、減圧下で濃縮する。残留物を１２５ｍＬのＥｔ２Ｏに溶解し、１ＮＨＣｌ水溶液（２×３０ｍＬ）、水（２×３０ｍＬ）分割し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下で濃縮し、白色粉末として２．７７ｇ（８８．４％）の４−（クロロベンズアルデヒド・オキシムを得る。ＭＳ  ｍ／ｚ１５６．００、Ｃ７Ｈ７ＣｌＮＯ（ＭＨ＋）１５６で算出。調製に関する参考として、Ｌｕｃａ、Ｌ．Ｄ．；Ｇｉａｃｏｍｅｌｌｉ、Ｇ．；Ｒｉｕ、Ａ．；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００１、６６（２０）、６８２３−６８２５参照。
【０４２６】
ステップＢ：４−クロロフェニル・ヒドロキシイミノイル・クロライドの調製４−クロロベンズアルデヒド・オキシム（１．２２ｇ、７．９ｍｍｏｌ）を０℃に冷却した２ｍＬのＤＭＦに加えた溶液にＮＣＳ（１．２０ｇ、８．３０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで濃塩酸ボトルの上部ガスから１〜２ｍＬのガス状ＨＣｌをピペットで添加する。この混合物を１５分以上にわたり強い発熱反応を起こすが、氷浴を使用することで制御できる。混合物を１２０分間撹拌し、１２５ｍＬのＥｔ２Ｏに溶解し、水（３×３５ｍＬ）、塩水（３５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。この溶液を減圧下で濃縮し、白色粉末として、１．４６ｇ（９８％）の４−クロロフェニルヒドロキシイミノイルクロライドを得る。安定性を維持するために、原料をデシケーターの冷凍庫に保存する。ＭＳ  ｍ／ｚ１９０．０２、Ｃ７Ｈ６Ｃｌ２ＮＯ（ＭＨ＋）１９０で算出。
【０４２７】
エチル３−ヨードベンゾエートからエチル３−エチリニルベンゾエートの２段階調製：エチル３−ヨードベンゾエート（２５ｇ、９０．６ｍｍｏｌ）を４３ｍＬのＤＭＦに加えた溶液に、トリメチルシリルアセチレン（１７ｍＬ、１１９．５ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２５ｍＬ、１８１．１ｍｍｏｌ）を添加する。この混合物をアルゴン下で数回ガス抜きし、ＣｕＩ（１７５ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで１．０４ｇのＰｄ（ＰＰｈ３）４触媒を添加する。反応混合物を５０℃で２４時間加熱し、室温まで冷却し、４００ｍＬの５０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサンで希釈する。この混合物を水（４×７５ｍＬ）で分割し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、２３．２９ｇの褐色の油を得る。この残留物に２００ｇのＳｉＯ２（３０％ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン溶離）でクロマトグラフィーを行い、淡黄色の油として２２．２ｇ（９９％）の３−トリメチルシラニルエチニル安息香酸エチルエステルを得るが、これを直接次の反応に使用する。ＭＳ  ｍ／ｚ２４７．１２、Ｃ１４Ｈ１９ＳｉＯ２（ＭＨ＋）２４７で算出。
【０４２８】
この原料を２５０ｍｌのＥｔＯＨに溶解し、１．２５ｇ（９．０ｍｍｏｌ）のＫ２ＣＯ３触媒を添加し、この混合物を室温で５時間撹拌し、減圧下で濃縮する。この残留物に２００ｇのＳｉＯ２（４０％ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサンで溶離）でクロマトグラフィーを行い、オレンジ色の固形物として、１５．７ｇ（１００％）のエチル３−エチニルベンゾエート（ＬＣ／Ｍで純度９０％）を得る。この物質を最少量のヘキサンから再結晶化し、１２．２ｇ（７８％全体２ステップ）の淡黄色固体を得る。融点３６〜３８℃。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．３８（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、３．１２（ｓ、１Ｈ）、４．３６（ｑ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４０（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．６３（ｄｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．１４（ｔ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  １７４．９８、Ｃ１１Ｈ１１Ｏ２（ＭＨ＋）１７５で算出。  
ステップＣ：エチル３−［３−（４−クロロフェニル）イソキサゾ−ル−５−イル］ベンゾエートの調整：４−クロロフェニルヒドロキシイミノイルクロライド（０．６０ｇ、３．１５ｍｍｏｌ）およびエチル３−エチニルベンゾエートを２５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に加えた溶液をＥｔ３Ｎ（０．６６ｍＬ、４．７３ｍｍｏｌ）に加え、この混合物を４８時間攪拌する。この溶液を６０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、１ＮのＮａＯＨ水溶液（３０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、真空下で濃縮する。固体の残留物を最少量のＥｔ２Ｏ／ヘキサンから再結晶化し、７００ｍｇ（６８％）のエチル３−［３−（４−クロロフェニル）イソキサゾ−ル−５−イル］ベンゾエートを白色粉末として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）δ１．４１（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、４．４１（ｑ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．５７（ｍ、３Ｈ）、７．７２（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７０（ｄｔ、Ｊ＝８、４，１．８Ｈｚ，２Ｈ）、８．１５（ｔｔ、Ｊ＝８．５、１．８Ｈｚ、２Ｈ）、８．５５（ｔ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ３１４．２１、Ｃ１８Ｈ１５ＣｌＮＯ３（ＭＨ＋で算出）３２８．    
ステップＤ：３−［３−（４−クロロフェニル）イソキサゾ−ル−５−イル］安息香酸の調整：６７８ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）のエチル３−［３−（４−クロロフェニル）イソキサゾ−ル−５−イル］ベンゾエートを１４ｍＬで５０％のＴＨＦ／Ｈ２Ｏに加えた溶液を６０℃で５時間加熱し、室温まで冷却する。溶液を、ゆっくりと６Ｎ  ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨ４に調整し、ろ過する。得られた固体を水とヘキサンで洗浄し、７０℃（１０トル）で一晩乾燥させ、５９４ｍｇ（９６％）の３−［３−（４−クロロフェニル）イソキサゾ−ル−５−イル］安息香酸を白色綿状粉末として得る。融点２６５〜２６６℃。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．６１（ｄｍ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．７０（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．８２（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄｍ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、８．０６（ｄｍ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１３（ｄｍ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．４１（ｍ、１Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３００．１６、Ｃ１６Ｈ１１ＣｌＮＯ３（ＭＨ＋）３００で算出。
【０４２９】
原則的に、上記の同一の手順を用いてステップＡ：で他のベンズアルデヒド誘導体と置換することによって、以下の化合物を得た。化合物番号：４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、および５４１。
【０４３０】
実施例Ｚ：３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］安息香酸（化合物番号３１１）の調製
【化１１６】
2008515985.tif 000202
【０４３１】
ステップＡ：４−イソプロピルベンゾアミド（３５６ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）および５１４ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）のメチル３−（２−ブロモ−アセチル）ベンゾエートを２０ｍＬのＣＨＣｌ３に加えたものを８時間加熱還流し、室温まで冷却し、蒸発する。この残留物を含水Ｋ２ＣＯ３とＥｔＯＡｃとの間に分離し、この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発する。この残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、２１０ｍｇ（３３％）のメチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−安息香酸を黄色固体として得る。
【０４３２】
ステップＢ：１９０ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）のメチル３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］ベンゾエートを６ｍＬの含水ＭｅＯＨ（５／１）に加えた懸濁液に１２０ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏに加える。この反応混合物を１時間加熱還流し、室温まで冷却し、酢酸で中和する。沈殿物をろ過し、水で洗浄し風乾する。白色固体の残留物をアセトンから再結晶化し、１４０ｍｇ（７６％）の３−［２−（４−イソプロピルフェニル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−安息香酸を白色固体として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｂｒｓ、１Ｈ）、８．０６（ｄ，Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．９１（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、７．８３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．７５（ｄ、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、７．４７（ｔ、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝８．０，２Ｈ）、２．９１（septet、Ｊ＝６．６、１Ｈ）、１．２２（ｄ、Ｊ＝６．６、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０７．２［ＭＨ＋］。
【０４３３】
実施例ＡＡ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸の調製（化合物番号２７７）
【化１１７】
2008515985.tif 000203
【０４３４】
ステップＡ：５０ｍＬのＣＨＣｌ３に１．２０ｇ（４．９７mmol）の２−ブロモ−１−（４−イソプロピルフェニル）エタノンを加えた溶液に、１．０５ｇ（５．４７mmol）のエチル３−カルバムイミドイルベンゾエートを加え、その反応物を、３時間加熱還流し、その後、室温まで冷却し、水性Ｋ２ＣＯ３で塩基性化した。この有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物を、シリカゲルのフラッシュ・クロマトグラフィーで精製し、白色固形物として、０．８５ｇ（５１％）のメチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾエートを得た。
【０４３５】
ステップＢ：１４ｍＬの含水ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（５／１）に４８０ｍｇ（１．４７mmol）のメチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］ベンゾエートを加えた懸濁液に、１０３ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加え、その反応物を、１時間加熱還流し、室温まで冷却し、酢酸によって中和された。沈殿物をろ過し、水で洗浄ののち風乾する。得られた３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］安息香酸は、アセトンから再結晶し、３００ｍｇ（６３％）の白色固形物を得る。融点２９６−２９８℃、１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２３（ｄ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．５６（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．３１（ｔ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．２３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、２．９３（septet、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．１１（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）。
【０４３６】
実施例ＢＢ：２−（３−カルボキシフェニル）−４−（４−イソプロピルフェニル）フラン−３−カルボン酸（化合物番号３１４）の調製
【化１１８】
2008515985.tif 000204
【０４３７】
ステップＡ：６８０ｍｇ（２．９０mmol）のメチル３−（２−メトキシカルボニルアセチル）安息香酸、３０ｍＬのアセトン、４．０ｇのＫ２ＣＯ３、および７８０ｍｇ（３．２４mmol）の２−ブロモ−１−（４−イソプロピルフェニル）エタノンの混合物を３０分間加熱還流する。その後、溶媒を減圧下で除去し、その残留物をＨＣｌ水溶液およびＥｔＯＡｃの間で分割する。この有機層は塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。その残留物を、カラムクロマトグラフィーで精製し、黄色の油として、６６０ｍｇ（５７％）のメチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）−２−メトキシカルボニル−４−オキソ−ブチリル］ベンゾエートを得た。
【０４３８】
ステップＢ：１０ｍＬのＭｅＯＨに４８０ｍｇ（１．２１mmol）のメチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）−２−メトキシカルボニル−４−オキソ−ブチリル］ベンゾエートを加えた溶液に、１５ｍＬの６Ｎ  ＨＣｌを加え、その反応を５時間加熱還流する。この反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで抽出する。組み合わせた有機相を水、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、その後、蒸発する。その残留物を、カラムクロマトグラフィーで精製し、黄色の油として、２６０ｍｇ（５７％）のメチル５−［（４−イソプロピルフェニル）−２−（３−メトキシカルボニルフェニル）−フラン−３−カルボキシレートを得た。
【０４３９】
ステップＣ：１２ｍＬの５：１のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏに２６０ｍｇ（０．６９mmol）のメチル５−［４−（４−イソプロピルフェニル）−２−（３−メトキシカルボニルフェニル）−フラン−３−カルボキシレートを加えた溶液に、１６０ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加え、その反応物を、１時間加熱還流し、室温まで冷却し、酢酸によって中和した。沈殿物回収し、水で洗浄し、乾燥する。粗生成物をアセトンから再結晶し、黄色の油として、１４０ｍｇ（５８％）の２−（３−カルボニルフェニル）−５−（４−イソプロピルフェニル）フラン−３−カルボン酸を得る。融点２３６〜２３９℃、１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．６０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２８（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．７４（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、７．７４（ｔ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、７．２５（ｓ、１Ｈ）、２．９１（septet、Ｊ＝６．６、１Ｈ）、１．２１（ｄ、Ｊ＝６．６、６Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ３４９．０［ＭＨ−］。
【０４４０】
実施例ＣＣ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）フラン−２−イル］安息香酸（化合物番号３２２）の調製
【化１１９】
2008515985.tif 000205
【０４４１】
ステップＡ：乾燥アセトンに３−（３−メトキシカルボニルフェニル）−３−オキソ−プロピル酸エチルエステル（１．８ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、粉末のＫ２ＣＯ３（４ｇ、２９ｍｍｏｌ）および４−（ブロムアセチル）イソプロピルベンゼン（１．８ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を加えた懸濁液を、２時間還流する。溶媒を蒸発により除去し、残留物を５０ｍＬの冷水に加え、６Ｎ  ＨＣｌによりｐＨ４まで酸性にし、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出する。有機相を３０ｍＬの水および３０ｍＬの塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル、６／１）で精製し、淡黄色の油として、メチル３−［２−エトキシカルボニル−４−（４−イソプロピルフェニル）−４−オキソブチリル］ベンゾエート（１．５ｇ、５１％）を得る。
【０４４２】
ステップＢ：２０ｍＬのＤＭＳＯにメチル３−［２−エトキシカルボニル−４−（４−イソプロピルフェニル）−４−オキソブチリル］ベンゾエート（１．５ｇ、３．７ｍｍｏｌ）、０．２９ｇのＮａＣｌおよび０．１５ｍＬの水を加えた混合物を、１４０〜１５０℃まで加熱し、３．５時間攪拌する。混合物を室温まで冷却し、５０ｍＬの冷水に加える。その後、混合物をエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機層を、水（２×５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、淡黄色の固形物としてメチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）−４−オキソ−ブチリル］安息香酸（０．７ｇ）を得る。
【０４４３】
ステップＣ：１０ｍＬの無水トルエンにメチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）−４−オキソ−ブチリル］ベンゾエート（０．７ｇ）および触媒量のＴｓＯＨを加えた溶液を、一晩中還流する。反応混合物を１００ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、水（２×５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、黄色の油としてメチル３−［５−（４−イソプロピル−フェニル）フラン−２−イル］ベンゾエート（０．３ｇ）を得る。
【０４４４】
ステップＤ：５ｍＬのＴＨＦにメチル３−［５−（４−イソプロピル−フェニル）フラン−２−イル］ベンゾエート（０．３ｇ）を加えた溶液に１５ｍＬの水に溶解したＬｉＯＨ（０．２ｇ）を加え、この反応物を２時間攪拌する。反応混合物を室温まで冷却し、エーテル（２×３０ｍＬ）で抽出する。有機層を水（２×３０ｍＬ）、塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発する。残留物をＨＰＬＣで精製し、白色の固形物として、３−［５−（４−イソプロピルフェニル）フラン−２−イル］安息香酸（７  ｍｇ、０．６２％、３  ステップの間）を得る。：融点１７２〜１７６℃；；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ  ８．４６（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｔ、Ｊ＝７．８、２Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝８、２Ｈ）、７．５３（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．２９、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝３．６、１Ｈ）、６．７１（ｄ、Ｊ＝３．６、１Ｈ）、２．９５（ｓｅｐｔｅｔ、６．８、１Ｈ）、１．２９（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）。
【０４４５】
実施例ＤＤ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］チアジアゾール−３−イル］−安息香酸（化合物３２３）の調製
【化１２０】
2008515985.tif 000206
【０４４６】
ステップＡ：１０ｍＬの無水トルエンにイソフタル酸メチルエステル（１．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）およびトリクロロメチルスルフォニルクロライド（１．０３９ｇ、５．６ｍｍｏｌ、０．６ｍＬ）を加えた溶液を、窒素下で一晩加熱還流する。混合物を室温まで冷却し、水を加えて反応を停止させる。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割し、その後この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２７４ｍｇ（２１％）の、メチル３−（２−オキソ−［１，３，４］オキサチアゾール−５イル）ベンゾエートが得られる。
【０４４７】
ステップＢ：３等分したメチル３−（２−オキソ−［１，３，４］オキサチアゾール−５−イル）−ベンゾエート（２６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を、５分間隔で、４−イソプロピルベンゾニトリル（７９５ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）に１９０℃にて加える。反応物をその後３０分間攪拌する。混合物を室温まで冷却し、残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層は塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１１ｍｇ（３％）の、メチル３−（５−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］チアジアゾール−３イル）ベンゾエートが得られる。
【０４４８】
ステップＣ：１１ｍｇの上記エステルを４ｍｌのメタノール／水（３／１）に加えた溶液に、７ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加える。混合物を４０−５０℃で一晩攪拌し、室温まで冷却し、３Ｎの塩酸で中和する。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去すると、８ｍｇ（７９％）の３−［５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］チアジアゾール−３−イル］安息香酸が得られる。融点１６５−１６７℃；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ８．７５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３３−８．２７（ｍ、４Ｈ）、７．６７（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝７．６、２Ｈ）、３．００（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２５．１［ＭＨ＋］
実施例ＥＥ：３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］チアジアゾール−５−イル］−安息香酸（化合物３２６）の調製
【化１２１】
2008515985.tif 000207
【０４４９】
ステップＡ：１０ｍＬの無水トルエンに、４−イソプロピルベンズアミド（１．０ｇ、６．１ｍｍｏｌ）およびトリクロロメチルスルフェニルクロライド（１．１４ｇ、６．１ｍｍｏｌ）を加えた溶液を、一晩加熱還流する。混合物を室温まで冷却し、水を加えて反応を停止させる。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割し、その後この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２５０ｍｇ（１８％）の５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］オキサチアゾール−２−オンが得られる。
【０４５０】
ステップＢ：３等分した５−（４−イソプロピルフェニル）−［１，３，４］オキサチアゾール−２−オン（２５０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を、５分間隔で、エチル−３−シアノベンゾエート（２．７７ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）に１９０℃にて加える。反応物をその後３０分間攪拌する。混合物を室温まで冷却し、残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層は塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１２ｍｇ（３％）のエチル３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］チアジアゾール−５イル］ベンゾエートが得られる。
【０４５１】
ステップＣ：１２ｍｇの上記エステルを４ｍｌのメタノール／水（３／１）に加えた溶液に、７ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加える。混合物を４０−５０℃で一晩攪拌し、室温まで冷却し、３Ｎの塩酸で中和する。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去すると、６ｍｇ（５４％）の３−［３−（４−イソプロピルフェニル）−［１，２，４］チアジアゾール−５−イル］安息香酸が得られる。融点  １６６−１６８℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．７４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．３３−８．２５（ｍ、５Ｈ）、７．６７（ｔ、Ｊ＝７８．０、１Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、３．００（ｓｅｐｔｅｔ、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．３１（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２５．１［ＭＨ＋］
実施例ＦＦ：３−［４−（４−イソプロピルフェニル）−チオフェン−２−イル］−安息香酸（化合物３２７）の調製
【化１２２】
2008515985.tif 000208
【０４５２】
ステップＡ：２，４−ジブロモチオフェン（４３３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）および３−（エトキシカルボニル）フェニルボロン酸（３４７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）をエタノール／トルエン／水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）に加えた溶液に、５６８ｍｇのＮａ２ＣＯ３を加える。２度のガス抜き後、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を窒素雰囲気下で加える。この反応混合物を８０℃で一晩攪拌する。この混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発する。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層を塩水で洗浄後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、３５０ｍｇ（６３％）のエチル３−（４−ブロモチオフェン−２−イル）ベンゾエートが得られる。
【０４５３】
ステップＢ：エチル３−（４−ブロモチオフェン−２−イル）ベンゾエート（３５０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）および４−イソプロピルフェニルボロン酸（１８７ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）をエタノール／トルエン／水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）に加えた溶液に、３５８ｍｇのＮａ２ＣＯ３を加える。２度のガス抜き後、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を窒素雰囲気下で加える。ＴＬＣ分析が反応の終了を示すまで、この反応混合物を８０℃で攪拌する。この混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発する。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層は塩水で洗浄後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１５０ｍｇ（３８％）の、エチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］ベンゾエートが得られる。
【０４５４】
ステップＣ：５０ｍｇのエチル３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］ベンゾエートを４ｍＬのメタノール／水（３／１）に加えた溶液に、３０ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加え、混合物を４０−５０℃で、ＴＬＣ分析が反応の終了を示すまで攪拌する。混合物を室温まで冷却し、３Ｎの塩酸で中和する。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去すると、３０ｍｇ（６５％）の３−［４−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］安息香酸が得られる。融点２２０−２２２℃；１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ８．３５（（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．０２（ｄ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．８３（ｄ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．６０―７．５７（ｍ、３Ｈ）、７．５２（ｔ、Ｊ＝８．０、１Ｈ）、７．４５（ｓ、１Ｈ）、７．２９（ｓ、１Ｈ）、２．９５（septet、Ｊ＝６．８、１Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝６．８、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２３．１［ＭＨ＋］。
【０４５５】
実施例ＧＧ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−３−イル］−安息香酸（化合物３４８）の調製
【化１２３】
2008515985.tif 000209
【０４５６】
ステップＡ：２，４−ジブロモチオフェン（５００ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）および４−イソプロピルフェニルボロン酸（３３９ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）をエタノール／トルエン／水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）に加えた溶液に、６５７ｍｇのＮａ２ＣＯ３を加える。２度のガス抜き後、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を窒素雰囲気下で加える。この反応混合物を８０℃で一晩攪拌する。この混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発する。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２０７ｍｇ（３６％）の４−ブロモ−２−（４−イソプロピルフェニル）チオフェンが得られる。
【０４５７】
ステップＢ：４−ブロモ−２−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン（２０７ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）および３−（エトキシカルボニル）フェニルボロン酸（１４３ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）をエタノール／トルエン／水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）に加えた溶液に、２３４ｍｇのＮａ２ＣＯ３を加える。２度のガス抜き後、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を窒素下で加える。ＴＬＣ分析が反応の終了を示すまで、この反応混合物を８０℃で攪拌する。この混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発する。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１８０ｍｇ（７０％）のエチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−３−イル］ベンゾエートが得られる。
【０４５８】
ステップＣ：１００ｍｇのエチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−３−イル］ベンゾエートを４ｍｌのメタノール／水（３／１）に加えた溶液に、６５ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加える。混合物を４０−５０℃で一晩攪拌し、室温まで冷却し、３Ｎの塩酸で中和する。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去すると、８０ｍｇ（８７％）の３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−３−イル］安息香酸が得られる。融点２０８−２０９℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３７．（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．０１（ｄ、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ＝７．６、１Ｈ）、７．６６（ｄ、Ｊ＝１．６、１Ｈ）、７．５６（ｄ、Ｊ＝８．０、２Ｈ）、２．９５（septet、Ｊ＝７．２、１Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝７．２、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２３．２［ＭＨ＋］。
【０４５９】
実施例ＨＨ：３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］−安息香酸（化合物４００）の調製
【化１２４】
2008515985.tif 000210
【０４６０】
ステップＡ：チオフェン（５．９４ｇ、７１ｍｍｏｌ）を０℃の等量のトルエンに加えた攪拌溶液に、臭素（２３ｇ、１４２ｍｍｏｌ）を加えた５０ｍＬのトルエンを迅速に加え、その後さらに３０分間攪拌する。その後、５ｇの水酸化ナトリウムを加える。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発する。残留物である２、５ジブロモチオフェンを蒸留して精製する。
【０４６１】
ステップＢ：２，５−ジブロモチオフェン（１．０ｇ、４．０ｍｍｏｌ）および３−（エトキシカルボニル）フェニルボロン酸（７９３ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）をエタノール／トルエン／水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）に加えた溶液に、１．３２ｇのＮａ２ＣＯ３を加える。２度のガス抜き後、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を窒素雰囲気下で加える。この反応混合物を８０℃で一晩攪拌する。この混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発する。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割する。この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、４５６ｍｇ（３６％）の、エチル３−（５−ブロモチオフェン−２−イル）ベンゾエートが得られる。
【０４６２】
ステップＣ：エチル３−（５−ブロモチオフェン−２−イル）ベンゾエート（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）および４−イソプロピルフェニルボロン酸（１０５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）をエタノール／トルエン／水（１０ｍＬ／５ｍＬ／３ｍＬ）に加えた溶液に、２０４ｍｇのＮａ２ＣＯ３を加える。２度のガス抜き後、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を窒素下で加える。ＴＬＣ分析が反応の終了を示すまで、この反応混合物を８０℃で攪拌する。この混合物を室温まで冷却し、濾過し、蒸発する。残留物を水とＥｔＯＡｃ間で分割し、その後この有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、蒸発する。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１５４ｍｇ（６９％）の、エチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］ベンゾエートが得られる。
【０４６３】
ステップＤ：１００ｍｇのエチル３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］ベンゾエートを４ｍｌのメタノール／水（３／１）に加えた溶液に、４６ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを加える。混合物を４０−５０℃で一晩攪拌し、室温まで冷却し、３Ｎの塩酸で中和する。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去すると、７８ｍｇ（８５％）の３−［５−（４−イソプロピルフェニル）チオフェン−２−イル］安息香酸が得られる：融点２３３−２３５℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１６（ｓ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝８．１、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．１、２Ｈ）、７．３２（ｔ、Ｊ＝７．８、１Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝３．６、１Ｈ）、７．１３（ｄ、Ｊ＝３．６，１Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝８．４，２Ｈ）、２．８０（septet、６．８、１Ｈ）、１．１４（ｄ、Ｊ＝６．９、６Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２１．５［ＭＨ―］。
【０４６４】
実施例ＩＩ：３−［５−（４−メトキシ−フェニル）−］２Ｈ［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−安息香酸（化合物４２４）の調製
【化１２５】
2008515985.tif 000211
【０４６５】
ステップＡ：ｍ−メトキシカルボニイミドイル安息香酸エステルハイドロクロライド：メチル３−シアノベンゾエート（０．６５ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）をメタノール（１５ｍＬ）に加えた溶液に、塩化アセチル（１２ｍＬ）を０℃にて滴下する。滴下後、反応混合物を０℃〜室温にて、６時間攪拌する。溶媒を除去すると、白色固体が得られ、ジエチルエーテルによって洗浄したのち、直ちに次のステップに使用する。
【０４６６】
ステップＢ：３−（５−（４−メトキシフェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−ベンゾエート：ナトリウムメトキシド（メタノール中０．５Ｎ）（８．５ｍＬ、４．２５ｍｍｏｌ）を無水エタノールに加えた溶液に、ｍ−メトキシカルボニイミドイル安息香酸メチルエステルハイドロクロライドをエタノール（１０ｍＬ）に加えた室温の溶液を加える。乳濁状のこの混合物を室温にて３０分間攪拌後、濾過する。濾液を４分の１の量まで濃縮し、これに４−メトキシベンゾヒドラジド（０．５５ｇ、３．３１ｍｍｏｌ）およびジオキサン（１０ｍＬ）を加える。得られる溶液を、１５時間加熱還流する。１Ｎ 塩酸を加えて白色固体（０．６６ｇ、７１．０％収率）を得た後、濾過収集し、水で洗浄後、水／エタノール（１／５）で洗浄する。採取された化合物は、ＬＣ−ＭＳによる測定で純度＞９０％である。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１０［ＭＨ＋］。
【０４６７】
ステップＣ：３−［５−４−メトキシ−フェニル］―２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−安息香酸：メチル３−［５−（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−ベンゾエート（０．３２ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）と１Ｎ水酸化ナトリウム（３．０ｍＬ、３．００ｍｍｏｌ）／ＴＨＦ（１：１）の混合物をＴＬＣで開始物質がＴＬＣにて完全消費されたと判定されるまで６時間攪拌還流する。ＴＨＦを真空中で除去する。１Ｎの塩酸を加えると白色固体が沈殿する。所望される生成物（０．２６ｇ、生成率８５．２％）は、ろ過により収集され、水で洗浄後、ジエチルエーテルで洗浄する。融点２８７〜２７９℃．１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１３．２０（１Ｈ、ｓ）、８．６４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．７、０．８Ｈｚ）、８．０１（３Ｈ、ｍ）、７．６０（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１．２Ｈｚ）、７．６１（２Ｈ、ｍ）、２．４９（３Ｈ、ｓ）；ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９６  ［ＭＨ＋］．
本発明の特定の好ましい化合物についての、融点および質量スペクトルデータを下記表１に示す。
【表１】
2008515985.tif 000212
【０４６８】
2008515985.tif 000213
【０４６９】
2008515985.tif 000214
【０４７０】
2008515985.tif 000215
【０４７１】
2008515985.tif 000216
【０４７２】
2008515985.tif 000217
【０４７３】
2008515985.tif 000218
【０４７４】
2008515985.tif 000219
【０４７５】
2008515985.tif 000220
【０４７６】
2008515985.tif 000221
【０４７７】
2008515985.tif 000222
【０４７８】
2008515985.tif 000223
【０４７９】
2008515985.tif 000224
【０４８０】
2008515985.tif 000225
【０４８１】
2008515985.tif 000226
【０４８２】
2008515985.tif 000227
【０４８３】
2008515985.tif 000228
【０４８４】
2008515985.tif 000229
【０４８５】
2008515985.tif 000230
【０４８６】
2008515985.tif 000231
【０４８７】
実施例２：ナンセンス抑制活性
ルシフェラーゼ媒介化学発光に基づく機能的な細胞系翻訳アッセイ（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２３１８５、２００３年７月２３日出願、参照することにより、その全体がここに組み込まれる）により、ナンセンス抑制レベルの定量的評価が可能となる。ヒト胚性腎細胞（２９３細胞）をウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む培地で培養する。この細胞には、アミノ酸位置１９０に未熟な終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子を安定的に導入することができる。この位置のルシフェラーゼ遺伝子に通常存在するトレオニンコドン（ＡＣＡ）の代わりに、３つの可能なナンセンスコドン（ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）のそれぞれ、および前後関係上重要な、ナンセンスコドンの次の下流＋１位置に、４つの可能なヌクレオチド（アデニン、チミン、シトシン、またはグアニン）のそれぞれを、部位特異的変異導入によって導入する。したがって、未熟な終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子のアミノ酸１９０は、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡのいずれかである。各停止コドンに関して、未熟な終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子のアミノ酸１９０に続くヌクレオチドが、アデニン、チミン、シトシン、あるいはグアニン（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ）で置換されるが、これらの変異は、ルシフェラーゼ遺伝子のリーディングフレームを変更しない。これらの構築物の模式図を図１に示す。
【０４８８】
上述した本発明の細胞系ルシフェラーゼレポーターアッセイからのナンセンス抑制活性を以下の表（表２）に示す。ヒト胚性腎２９３細胞は、１９０位置にＵＧＡナンセンス変異を含み、インフレームでアデニンヌクレオチドが後続するルシフェラーゼレポーター構築物を安定的に導入される。
【０４８９】
表２における活性測定は、細胞に基づくルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて測定されるが、構築物はＵＧＡ未熟終結コドンを含有する。アミノグリコシド系抗生物質であり、未熟な終結コドンのリードスルーを可能にすることが知られるゲンタマイシンを、内部標準として使用する。活性測定は、細胞内で所定のタンパク質を産生するために必要な化合物の最低濃度と、その濃度で細胞によって産生されるタンパク質の量と、の定性比に基づいている。タンパク質合成の非常に高い能力および効力、あるいはそのどちらかを有すると確認された化合物は、「＊＊＊＊＊」と分類される。タンパク質合成の中程度の能力および／または効力を有すると確認された化合物は、「＊＊＊＊」、「＊＊＊」、あるいは「＊＊」と分類される。同様に、タンパク質合成の低度の能力および／または効力を有すると確認された化合物は、「＊」と分類される。
【０４９０】
本発明の好ましい化合物の活性を下記の表に示す。
【表２】
2008515985.tif 000232
【０４９１】
2008515985.tif 000233
【０４９２】
2008515985.tif 000234
【０４９３】
2008515985.tif 000235
【０４９４】
2008515985.tif 000236
【０４９５】
2008515985.tif 000237
【０４９６】
2008515985.tif 000238
【０４９７】
2008515985.tif 000239
【０４９８】
2008515985.tif 000240
【０４９９】
2008515985.tif 000241
【０５００】
2008515985.tif 000242
【０５０１】
2008515985.tif 000243
【０５０２】
2008515985.tif 000244
【０５０３】
前述のアッセイにおけるナンセンス抑制活性は、１９０位置にＵＡＧナンセンス変異を有し、その後にインフレームでアデニンヌクレオチドが続く構築物（ＵＡＧＡ）、１９０位置にＵＡＡナンセンス変異を有し、その後にインフレームでアデニンヌクレオチドが続く構築物（ＵＡＡＡ）に関して、以下の表３に示す。「ＰＯＳ  ＷＢ」は、本発明の化合物が本発明のアッセイで使用される場合、ポジティブシグナルがウエスタンブロットで生じることを示している。「ＮＤ」は、結果が確定されていないことを示している。
【表３】
2008515985.tif 000245
【０５０４】
2008515985.tif 000246
【０５０５】
2008515985.tif 000247
【０５０６】
実施例３：リードスルーアッセイ
ルシフェラーゼ媒介化学発光に基づく機能的な細胞系翻訳アッセイ（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０２３１８５、２００３年７月２３日出願、参照することにより、その全体がここに組み込まれる）により、ｍＲＮＡにおける通常の停止コドンの翻訳リードスルーの評価が可能となる。ヒト胚性腎細胞（２９３細胞）をウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む培地で培養する。この細胞には、アミノ酸位置１９０に未熟終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子を安定的に導入することができる。この位置のルシフェラーゼ遺伝子に通常存在するトレオニンコドン（ＡＣＡ）の代わりに、３種の可能なナンセンスコドン（ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）のそれぞれ、および前後関係上重要な、ナンセンスコドンの次の下流＋１位置に、４種の可能なヌクレオチド（アデニン、チミン、シトシン、またはグアニン）のそれぞれを、部位特異的変異導入によって導入する。したがって、未熟な終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子のアミノ酸１９０は、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡのいずれかである。各停止コドンに関して、未熟な終結コドンを含むルシフェラーゼ遺伝子のアミノ酸１９０に続くヌクレオチドが、アデニン、チミン、シトシン、あるいはグアニン（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ）で置換されるが、これらの変異は、ルシフェラーゼ遺伝子のリーディングフレームを変更しない。これらの構築物の模式図を図１に示す。
【０５０７】
本発明の別のアッセイにより、ナンセンス変異抑制を促進する化合物を評価することができる。上記の図１に示すルシフェラーゼ構築物を、ルシフェラーゼタンパク質のＮ末端に２つのエピトープタグを含むように遺伝子操作する。ルシフェラーゼタンパク質産生に基づき、これらの構築物は翻訳リードスルーのレベルを定性的に評価する。未熟終結コドンの抑制によって産生された全長ルシフェラーゼタンパク質の存在は、抑制されたルシフェラーゼタンパク質の免疫沈降（Ｈｉｓタグに対する抗体を使用）と、これに続く第二のエピトープ（ＸｐｒｅｓｓＴＭエピトープ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に対する抗体を使用してのウエスタンブロット法で測定される。これらの構築物を図２に示す。
【０５０８】
図２の構築物を有する細胞は、本発明の化合物で処理したとき、全長タンパク質産生の増加を示す。２０時間の処理後、図２の構築物を有する細胞を収集し、Ｈｉｓエピトープを認識する抗体を用いて、ルシフェラーゼタンパク質を免疫沈降させる。免疫沈降に続いて、ＸｐｒｅｓｓＴＭエピトープ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に対する抗体を使用してウエスタンブロット法を実施し、短縮ルシフェラーゼ（ナンセンス抑制が起こらなかった場合に産生される）を検出し、また全長タンパク質（ナンセンスコドンの抑制によって産生される）を検出する。試験化合物による細胞の処理では、全長タンパク質が産生され、リードスルータンパク質は産生されない（例えば、図３参照）。リードスルータンパク質は通常の終結コドンの抑制が起こる場合に産生される。本発明の化合物は、ルシフェラーゼｍＲＮＡにおいて、未熟、すなわちナンセンス変異を抑制するが、通常の終結コドンは抑制しない。
【０５０９】
本発明の化合物は、哺乳類において、未熟な終結コドンには選択的に作用するが、通常の終結コドンには作用しない。
【０５１０】
ラットとイヌに、高用量の化合物（最高１８００ｍｇ／ｋｇ）を１日１回、１４日間にわたり強制的に（経口）投与する。処置後、組織を採取し、溶解物を調製し、ウエスタンブロット分析を実施する。通常の終結コドンのリードスルーを評価するためのタンパク質の選択は、主に、通常の終結コドンとインフレームの３’−ＵＴＲに２番目の停止コドンを有する対応するｍＲＮＡに基づく。これら２つの停止コドン間に、選択された各タンパク質は、１番目の終結コドンのリボソームリードスルーの場合にタンパク質の伸長をコードするヌクレオチドの介在配列を有する。化合物に非特異的なリボソームリードスルーを誘発する能力がある場合、伸長タンパク質はウエスタンブロット法により野生型タンパク質から区別される。ラットから組織を採取し、ビメンチンｍＲＮＡにおける通常の終結コドン（ＵＡＡ）の抑制を分析する。抑制の証拠は見られない。本発明の化合物で処理したイヌから組織を採取する。ＵＡＧ停止コドンを有するβアクチンの通常の終結コドンの抑制は確認されない。
【０５１１】
健康なヒトのボランティアに、本発明の化合物を１回（２００ｍｇ／ｋｇ）経口投与する。血液検体を採取し、血漿を調製し、男女被験者の血漿検体を使用してウエスタンブロット法を実施する。ＵＧＡ終結コドンを有するＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を用いて、本発明の化合物で被験者を治療することにより、ＣＲＰ  ｍＲＮＡの通常の終結コドンが抑制されるかどうかを確認する。ルシフェラーゼアッセイと未熟終結アッセイとの組み合わせで、未熟終結コドンの選択的抑制は実証されるが、通常の終結コドンの抑制は実証されない。
【０５１２】
実施例４：動物モデル
また、動物モデル系を用いて、本発明の化合物の安全性と有効性を実証することもできる。関心のある疾患、症状、または症候群に対する動物モデルを用いて本発明の化合物の生物学的活性を試験する。これには機能的なリードアウト系に連結された標的ＲＮＡエレメントを有するように操作された動物、例えばトランスジェニックマウスなどが含まれる。
【０５１３】
嚢胞性線維症
嚢胞性線維症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ｃｆｔｒ（−／−）マウス（例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎら、２００１、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２１（４）：９５０−７参照）、ｃｆｔｒ（ｔｍ１ＨＧＵ／ｔｍ１ＨＧＵ）マウス（例としては、Ｂｅｒｎｈａｒｄら、２００１、Ｅｘｐ  Ｌｕｎｇ  Ｒｅｓ  ２７（４）：３４９−６６参照）、ｃＡＭＰ媒介Ｃｌ（−）コンダクタンス障害を有するＣＦＴＲ欠損マウス（例えば、Ｓｔｏｔｌａｎｄら、２０００、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｐｕｌｍｏｎｏｌ  ３０（５）：４１３−２４参照）、およびＣ５７ＢＬ／６−Ｃｆｔｒ（ｍ１ＵＮＣ）／Ｃｆｔｒ（ｍ１ＵＮＣ）ノックアウトマウス（例えば、Ｓｔｏｔｌａｎｄら、２０００、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｐｕｌｍｏｎｏｌ  ３０（５）：４１３−２４参照）が挙げられる。
【０５１４】
筋ジストロフィー
筋ジストロフィーの動物モデルの例としては、限定するものではないが、マウス、ハムスター、ネコ、イヌ、およびシー・エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）が挙げられる。筋ジストロフィーのマウスモデルの例としては、限定するものではないが、ｄｙ−／−マウス（例えば、Ｃｏｎｎｏｌｌｙら、２００２、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １２７（１−２）：８０−７参照）、筋ジストロフィー筋炎（ｍｄｍ）マウス変異体（例えば、Ｇａｒｖｅｙら、２００２、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ７９（２）：１４６−９参照）、ｍｄｘマウス（例えば、Ｎａｋａｍｕｒａら、２００１、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １１（３）：２５１−９参照）、ユートロフィン−ジストロフィンノックアウト（ｄｋｏ）マウス（例えば、Ｎａｋａｍｕｒａら、２００１、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １１（３）：２５１−９参照）、ｄｙ／ｄｙマウス（例えば、Ｄｕｂｏｗｉｔｚら、２０００、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １０（４−５）：２９２−８参照）、ｍｄｘ（Ｃｖ３）マウスモデル（例えば、Ｐｉｌｌｅｒｓら、１９９９、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １０９（８）：１３１０−２参照）、および筋緊張症ＡＤＲ−ＭＤＸ変異マウス（例えば、Ｋｒａｍｅｒら、１９９８、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  ８（８）：５４２−５０参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのハムスターモデルの例としては、限定するものではないが、サルコグリカン欠損ハムスター（例えば、Ｎａｋａｍｕｒａら、２００１、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８１（２）：Ｃ６９０−９参照）、およびＢＩＯ  １４．６  ジストロフィーハムスター（例えば、Ｓｃｈｌｅｎｋｅｒ、Ｂｕｒｂａｃｈ共著、１９９１、Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ７１（５）：１６５５−６２参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのネコモデルの例としては、限定するものではないが、肥大性筋ジストロフィーネコモデル（例えば、Ｇａｓｃｈｅｎ、Ｂｕｒｇｕｎｄｅｒ共著、２００１、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （Ｂｅｒｌ）  １０１（６）：５９１−６００参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのイヌモデルの例としては、限定するものではないが、筋ジストロフィーゴールデンレトリバー（例えば、Ｆｌｅｔｃｈｅｒら、２００１、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ  Ｄｉｓｏｒｄ  １１（３）：２３９−４３参照）、およびイヌＸ−連鎖筋ジストロフィー（例えば、Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、１９９２、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ  ４２（３）：３５２−６参照）が挙げられる。筋ジストロフィーのシー・エレガンスモデルの例は、Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ、Ｂｅｎｉａｎ共著、２０００、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  １０（２１）：Ｒ７９５−７、およびＣｕｌｅｔｔｅ、Ｓａｔｔｅｌｌｅ共著、２０００、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ９（６）：８６９−７７に記載される。
【０５１５】
家族性高コレステロール血症
家族性高コレステロール血症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、機能性ＬＤＬ受容体遺伝子欠損マウス（例えば、Ａｊｉら、１９９７、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９５（２）：４３０−７参照）、Ｙｏｓｈｉｄａラット（例えば、Ｆａｎｔａｐｐｉｅら、１９９２、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５０（２４）：１９１３−２４参照）、ＪＣＲ：ＬＡ−ｃｐラット（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎら、１９９８、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １３８（１）：１３５−４６）、ブタ（例えば、Ｈａｓｌｅｒ−Ｒａｐａｃｚら、１９９８、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ  ７６（５）：３７９−８６参照）、およびＷａｔａｎａｂｅ遺伝性高脂血症ウサギ（例えば、Ｔｓｕｔｓｕｍｉら、２０００、Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ５０（２）：１１８−２１；Ｈａｒｓｃｈら、１９９８、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １２４（２）：２２７−８２；およびＴａｎａｋａら、１９９５、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １１４（１）：７３−８２参照）が挙げられる。
【０５１６】
ヒト癌
ヒト癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、一般的に、コンパニオンアニマルに自然に生じる腫瘍（例えば、Ｖａｉｌ、ＭａｃＥｗｅｎ共著、２０００、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ  １８（８）：７８１−９２参照）が挙げられる。肺癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、Ｚｈａｎｇ、Ｒｏｔｈ共著により記述される肺癌動物モデル（１９９４、Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ８（５）：７５５−６９）、およびｐ５３機能破壊トランスジェニックマウスモデル（例えば、Ｍｏｒｒｉｓら、１９９８、Ｊ  Ｌａ  Ｓｔａｔｅ  Ｍｅｄ  Ｓｏｃ  １５０（４）：１７９−８５参照）が挙げられる。乳癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、サイクリンＤ１過剰発現トランスジェニックマウス（例えば、Ｈｏｓｏｋａｗａら、２００１、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒｅｓ  １０（５）：４７１−８参照）が挙げられる。結腸癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ＴＣＲｂｅｔａおよびｐ５３ダブルノックアウトマウス（例えば、Ｋａｄｏら、２００１、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６１（６）：２３９５−８参照）が挙げられる。膵臓癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、膵臓腫瘍Ｐａｎｃ０２マウス膵臓腺癌転移モデル（例えば、Ｗａｎｇら、２００１、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌ  ２９（１）：３７−４６参照）および皮下膵臓腫瘍を発生させたｎｕ−ｎｕマウス（例えば、Ｇｈａｎｅｈら、２００１、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ８（３）：１９９−２０８参照）が挙げられる。非ホジキンリンパ腫の動物モデルの例としては、限定するものではないが、重症複合型免疫不全症（「ＳＣＩＤ」）マウス（例えば、Ｂｒｙａｎｔら、２０００、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ８０（４）：５５３−７３参照）、およびＩｇＨｍｕ−ＨＯＸ１１トランスジェニックマウス（例えば、Ｈｏｕｇｈら、１９９８、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５（２３）：１３８５３−８参照）が挙げられる。食道癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ヒトパピローマウイルス１６型Ｅ７腫瘍遺伝子導入トランスジェニックマウス（例えば、Ｈｅｒｂｅｒら、１９９６、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７０（３）：１８７３−８１参照）が挙げられる。結腸直腸癌の動物モデルの例としては、限定するものではないが、Ａｐｃマウスモデル（例えば、Ｆｏｄｄｅ、Ｓｍｉｔｓ共著、２００１、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ７（８）：３６９−７３、およびＫｕｒａｇｕｃｈｉら、２０００、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（５０）：５７５５−６３参照）が挙げられる。神経線維腫症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、変異ＮＦ１マウス（例えば、Ｃｉｃｈｏｗｓｋｉら、１９９６、Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  ７（５）：２９１−８）が挙げられる。網膜芽腫の動物モデルの例としては、限定するものではないが、網膜にシミアンウイルス４０  Ｔ抗原発現のトランスジェニックマウス（例えば、Ｈｏｗｅｓら、１９９４、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５（２）：３４２−５１、およびＷｉｎｄｌｅら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ  ３４３（６２５９）：６６５−９参照）、および近交系ラット（例えば、Ｎｉｓｈｉｄａら���１９８１、Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  １（１）：５３−５、およびＫｏｂａｙａｓｈｉら、１９８２、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （Ｂｅｒｌ）  ５７（２−３）：２０３−８参照）が挙げられる。ウィルムス腫瘍の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ＷＴ１ノックアウトマウス（例えば、Ｓｃｈａｒｎｈｏｒｓｔら、１９９７、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ  ８（２）：１３３−４３参照）、神経芽細胞腫を高率で発生するラット亜系（例えば、Ｍｅｓｆｉｎ、Ｂｒｅｅｃｈ共著、１９９６、Ｌａｂ  Ａｎｉｍ  Ｓｃｉ  ４６（３）：３２１−６参照）、およびＷｉｓｔａｒ／Ｆｕｒｔｈウィルムス腫瘍ラット（例えば、Ｍｕｒｐｈｙら、１９８７、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７（４Ｂ）：７１７−９参照）が挙げられる。
【０５１７】
網膜色素変性症
網膜色素変性症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、Ｒｏｙａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｏｎｓ（「ＲＣＳ」）ラット（例えば、Ｖｏｌｌｒａｔｈら、２００１、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（２２）；１２５８４−９、およびＨａｎｉｔｚｓｃｈら、１９９８、Ａｃｔａ  Ａｎａｔ  （Ｂａｓｅｌ）１６２（２−３）：１１９−２６参照）、ロドプシンノックアウトマウス（例えば、Ｊａｉｓｓｌｅら、２００１、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ４２（２）：５０６−１３参照）、およびＷａｇ／Ｒｉｊラット（例えば、Ｌａｉら、１９８０、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ９８（１）：２８１−４参照）が挙げられる。
【０５１８】
肝硬変
肝硬変の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ＣＣｌ４暴露ラット（例えば、Ｋｌｏｅｈｎら、２００１、Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  ３３（７）：３９４−４０１参照）、および細菌性細胞成分または結腸炎により誘発されたげっ歯類モデル（例えば、Ｖｉｅｒｌｉｎｇ、２００１、Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １５（４）：５９１−６１０参照）が挙げられる。
【０５１９】
血友病
血友病の動物モデルの例としては、限定するものではないが、血友病Ａげっ歯類モデル（例えば、Ｒｅｉｐｅｒｔら、２０００、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ８４（５）：８２６−３２；Ｊａｒｖｉｓら、１９９６、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ７５（２）：３１８−２５；およびＢｉら、１９９５、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １０（１）：１１９−２１参照）、血友病Ａイヌモデル（例えば、Ｇａｌｌｏ−Ｐｅｎｎら、１９９９、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０（１１）：１７９１−８０２、およびＣｏｎｎｅｌｌｙら、１９９８、Ｂｌｏｏｄ  ９１（９）；３２７３−８１参照）、血友病Ｂマウスモデル（例えば、Ｓｎｙｄｅｒら、１９９９、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ５（１）：６４−７０；Ｗａｎｇら、１９９７、  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９４（２１）：１１５６３−６；およびＦａｎｇら、１９９６、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ３（３）：２１７−２２参照）、血友病Ｂイヌモデル（例えば、Ｍｏｕｎｔら、２００２、Ｂｌｏｏｄ  ９９（８）：２６７０−６；Ｓｎｙｄｅｒら、１９９９、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ５（１）：６４−７０；Ｆａｎｇら、１９９６、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ３（３）：２１７−２２；および、Ｋａｙら、１９９４、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１（６）：２３５３−７参照）、および血友病Ｂアカゲザルモデル（例えば、Ｌｏｚｉｅｒら、１９９９、Ｂｌｏｏｄ  ９３（６）：１８７５−８１参照）が挙げられる。
【０５２０】
フォン・ヴィレブランド病
フォン・ヴィレブランド病の動物モデルの例としては、限定するものではないが、近交系マウス系統ＲＩＩＩＳ／Ｊ（例えばＮｉｃｈｏｌｓら、１９９４、８３（１１）：３２２５−３１、およびＳｗｅｅｎｅｙら、１９９０、７６（１１）：２２５８−６５参照）、ボトロセチン投与ラット（例えば、Ｓａｎｄｅｒｓら、１９８８、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ５９（４）：４４３−５２参照）、およびフォン・ヴィレブランド病ブタモデル（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓら、１９９５、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２（７）：２４５５−９；Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｂｏｗｉｅ共著、１９９２、Ｊ  Ｌａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  １２０（４）：５５３−８；およびＢｒｉｎｋｈｏｕｓら、１９９１、Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ  ６６（７）：７３３−４２参照）が挙げられる。
【０５２１】
βサラセミア
βサラセミアの動物モデルの例としては、限定するものではないが、グロビン遺伝子変異マウスモデル（例えば、Ｌｅｗｉｓら、１９９８、Ｂｌｏｏｄ  ９１（６）：２１５２−６；Ｒａｊａら、１９９４、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ８６（１）：１５６−６２；Ｐｏｐｐら、１９８５、４４５：４３２−４４；およびＳｋｏｗら、１９８３、Ｃｅｌｌ  ３４（３）：１０４３−５参照）が挙げられる。
【０５２２】
腎臓結石
腎臓結石の動物モデルの例としては、限定するものではないが、遺伝性高カルシウム尿症ラット（例えば、Ｂｕｓｈｉｎｓｋｙら、１９９９、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ５５（１）：２３４−４３、およびＢｕｓｈｉｎｓｋｙら、１９９５、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ４８（６）：１７０５−１３）、化学物質で処理されたラット（例えば、Ｇｒａｓｅｓら、１９９８、Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｕｒｏｌ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ３２（４）：２６１−５；Ｂｕｒｇｅｓｓら、１９９５、Ｕｒｏｌ  Ｒｅｓ  ２３（４）：２３９−４２；Ｋｕｍａｒら、１９９１、Ｊ  Ｕｒｏｌ  １４６（５）：１３８４−９；Ｏｋａｄａら、１９８５、Ｈｉｎｙｏｋｉｋａ  Ｋｉｙｏ  ３１（４）：５６５−７７；およびＢｌｕｅｓｔｏｎｅら、１９７５、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ３３（３）：２７３−９）、高シュウ酸尿症ラット（例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９９１、Ｊ  Ｕｒｏｌ  １４５（４）：８６８−７４）、片側逆行軟性腎盂鏡検査におけるブタ（例えば、Ｓｅｉｆｍａｈら、２００１、５７（４）：８３２−６）、および上部尿路閉塞ウサギ（例えば、Ｉｔａｔａｎｉら、１９７９、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｕｒｏｌ  １７（３）：２３４−４０参照）が挙げられる。
【０５２３】
毛細血管拡張性運動失調症
毛細血管拡張性運動失調症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、毛細血管拡張性運動失調症マウスモデル（例えば、Ｂａｒｌｏｗら、１９９９、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６（１７）：９９１５−９、およびＩｎｏｕｅら、１９８６、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４６（８）：３９７９−８２参照）が挙げられる。
【０５２４】
リソソーム蓄積症
リソソーム蓄積症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ムコ多糖症ＶＩＩ型マウスモデル（例えば、Ｂｒｏｏｋｓら、２００２、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９９（９）：６２１６−２１；Ｍｏｎｒｏｙら、２００２、Ｂｏｎｅ３０（２）：３５２−９；Ｖｏｇｌｅｒら、２００１、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｄｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．４（５）：４２１−３３；およびＶｏｇｌｅｒら、２００１，  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ。４９（３）：３４２−８；およびＷｏｌｆｅら、２０００、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ。２（６）：５５２−６参照）、異染性白質萎縮症マウスモデル（例えば、Ｍａｔｚｎｅｒら、２００２、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ。９（１）：５３−６３参照）、サンドホフ病マウスモデル（例えば、Ｓａｎｇｏら、２００２、Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ。２８（１）：２３−３４）、ムコ多糖症ＩＩＩＡ型マウスモデル（例えば、Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａら、２００１、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １１（１）：９９−１０、およびＢｈａｕｍｉｋら、１９９９、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ９（１２）：１３８９−９６参照）、アリールスルファターゼＡ（ＡＳＡ）欠損マウス（例えば、Ｄ’Ｈｏｏｇｅら、１９９９、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ。８４７（２）：３５２−６、およびＤ’Ｈｏｏｇｅら、１９９９、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ。２７３（２）：９３−６参照）；アスパルチルグルコサミン尿症変異マウス（例えば、Ｊａｌａｎｋｏら、１９９８、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．  ７（２）：２６５−７２参照）；ムコ多糖症ＶＩ型ネコモデル（例えば、Ｃｒａｗｌｅｙら、１９９８、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０１（１）：１０９−１９、およびＮｏｒｒｄｉｎら、１９９５、Ｂｏｎｅ  １７（５）：４８５−９参照）；ニーマン・ピック病Ｃ型ネコモデル（例えば、Ｍａｒｃｈら、１９９７、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（Ｂｅｒｌ）．  ９４（２）：１６４−７２参照）；酸性スフィンゴミエリナーゼ欠損マウス（例えば、Ｏｔｔｅｒｂａｃｈ、Ｓｔｏｆｆｅｌ共著、１９９５、Ｃｅｌｌ  ８１（７）：１０５３−６参照）、およびウシマンノシドーシス（例えば、Ｊｏｌｌｙら、１９７５、Ｂｉｒｔｈ  Ｄｅｆｅｃｔｓ  Ｏｒｉｇ  Ａｒｃｔｉｃ  Ｓｅｒ．  １１（６）：２７３−８参照）が挙げられる。
【０５２５】
結節硬化症
結節硬化症の動物モデルの例としては、限定するものではないが、ＴＳＣ１マウスモデル（例えば、Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉら、２００２、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ。１１（５）：５２５−３４参照｝、Ｔｓｃ１（ＴＳＣ１ホモログ）ノックアウトマウス（例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、２００１、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００１年７月１７日；９８（１５）：８７６２−７参照）、ＴＳＣ２遺伝子変異（Ｅｋｅｒ）ラットモデル（例えば、Ｈｉｎｏ２０００、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  ５８（６）：１２５５−６１；Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉら、２０００、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ。５９（３）：１８８−９；およびＨｉｎｏら、１９９９、Ｐｒｏｇ  Ｅｘｐ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｓ。３５：９５−１０８）；およびＴｓｃ２（＋／−）マウス（例えば、Ｏｎｄａら、１９９９、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ。１０４（６）：６８７−９５参照｝が挙げられる。
【０５２６】
実施例５：ｍｄｘマウス、動物モデル研究
ｍｄｘマウスにおいて４２７ｋＤａのジストロフィンポリペプチドの未熟な翻訳終結を起こす変異は、エクソン２３の３１８５位置でのＣからＴへの変異であることが示されている（Ｓｉｃｉｎｓｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４（４９１２）：１５７８−１５８０（１９８９））。生後１日目のｍｄｘマウス由来のマウス骨格筋初代培養物を以前に記載されたように調製する（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））。細胞を本発明の化合物の存在下で１０日間培養する。４日ごとに培地を取り替え、筋芽細胞培養物中のジストロフィンの存在を以前に記載されたように免疫染色によって検出する（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））。ジストロフィンタンパク質のＣ末端に対するモノクローナル一次抗体を未希釈で使用し、ローダミンコンジュゲート抗マウスＩｇＧを二次抗体として使用する。この抗体が、ナンセンスコドンの抑制によって産生された全長タンパク質を検出する。ライカＤＭＲ顕微鏡、デジタルカメラ、および関連画像ソフトを使用して染色を観察する。
【０５２７】
以前に記載されたように（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））、化合物は麻酔マウスの皮膚に埋め込んでアルゼット浸透圧ポンプによって送達される。本発明の化合物を２回投与する。ゲンタマイシンを陽性コントロールとし、溶媒のみを満たしたポンプを陰性コントロールとして用いる。ポンプを適当な化合物で満たし、算出した用量（これに組織が暴露される）が１０ｍＭおよび２０ｍＭとなるようにする。約２００ｍＭの組織暴露が得られるよう、ゲンタマイシンの濃度を計算する。初期実験にてマウスを１４日間処置し、その後マウスにケタミン麻酔をかけ、放血させる。次に実験動物の前脛骨（ＴＡ）筋を摘出し、凍結し、横紋筋へのジストロフィンの取り込みの免疫蛍光分析に使用する。以前に記載されたように（Ｂａｒｔｏｎ−Ｄａｖｉｓら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４（４）：３７５−３８１（１９９９））、免疫染色によってＴＡ筋のジストロフィンの存在を検出する。
【０５２８】
ウエスタンブロット分析
本発明の化合物で４週間処置したｍｄｘマウスの大腿四頭筋を市販のジストロフィン抗体を用いてウエスタンブロット法で分析する。野生型マウスの大腿四頭筋から抽出したタンパク質が陽性コントロールの役割を果たす。処置動物において、全長ジストロフィンの産生が見られる。産生された全長ジストロフィンの量は、ナンセンス抑制の結果（この理論には拘束されないが）、野生型の発現レベルの約１０％である。
【０５２９】
免疫蛍光分析
ｍｄｘ雄マウス（生後９〜１１週）を、本発明の様々な化合物で処置する（少なくとも各化合物についてｎ＝２）。これらの化合物を１日１回、２週間にわたり、２５ｍｇ／ｋｇでＳＱ投与する。２週間の処置後、マウスを屠殺して筋肉を摘出し、ジストロフィンのリードスルー効率を測定する。
【０５３０】
１０μｍの凍結切片に対し、ジストロフィン抗体を用いて免疫蛍光分析（ＩＦ）を実施する。この抗体は、ｍｄｘマウスに見られる未熟な停止変異のＣ末端にあるエピトープを認識する。全ての切片について同一の方法で画像分析を行う。処置マウスと未処置マウスの画像を解析し、未処置コントロールにおけるシグナルよりも大きなシグナルを陽性とし、ジストロフィンｍＲＮＡにおける未熟終結コドンの抑制が起こったことを示す。
【０５３１】
筋力学
動物のＥＤＬ筋に対して、摘出された全筋の筋力学を実施する。最適筋長（Ｌｏ）を最大単収縮張力を産み出す長さと定義する。Ｌｏでの強直性の最大力を、１２０Ｈｚ、５００ミリ秒パルス、最大上電圧で測定する。一連の５回の伸張性の強直性収縮による機械的損傷に対する防御をモニターする。これらの測定は７００ミリ秒の刺激時間で実施され、その間、最初の５００ミリ秒間は筋肉を等尺性収縮に保持し、その後０．５Ｌｏ／秒の速度で８または１０％Ｌｏの伸張に保持する。機械的損傷に対する防御を８０Ｈｚの刺激頻度で判定する。損傷は、最初と最後の伸張性収縮間の力の低下として判定される。図4に示すように、本発明の化合物による処置は、未処置コントロールと比較して、ＥＤＬ筋の伸張性収縮により誘発された損傷からの防御をもたらす。
【０５３２】
実施例６：ｐ５３遺伝子におけるナンセンス変異の抑制
動物モデル系において、ＣＡＯＶ−３細胞（１ｘ１０７個）をｎｕｄｅ／ｎｕｄｅマウスの脇腹に注入する。１２日後、マウスをランダム抽出し（１群１０匹）、３ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物を皮下投与（週５日）するか、あるいは３０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物を腹腔内投与（週１日）する。毎週、腫瘍の大きさを測定する。本発明の化合物によってｐ５３におけるナンセンス変異を抑制することで、生体内での癌増殖を阻害することができる。
【０５３３】
実施例７：本発明の化合物により、２８Ｓ  ｒＲＮＡの特定のヌクレオチドへのアクセスを修正する。
以前の研究では、翻訳の忠実度を低下させるゲンタマイシンおよびその他のアミノグリコシド系のメンバーが、１６Ｓ  ｒＲＮＡのＡ部位に結合することが実証された。化学的なフットプリンティング、ＵＶ架橋、およびＮＭＲによって、ゲンタマイシンはｒＲＮＡのＡ部位（ヌクレオチド１４００−１４１０および１４９０−１５００を含む；大腸菌番号付け）に、ヌクレオチド１４０６、１４０７、１４９４、および１４９６で結合することが示された（（Ｍｏａｚｅｄ、Ｎｏｌｌｅｒ共著、Ｎａｔｕｒｅ  ３２７（６１２１）：３８９−３９４（１９７８）；Ｗｏｏｄｃｏｃｋら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０（１０）：３０９９−３１０３  （１９９１）；および、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  １９：１−９（２０００））。
【０５３４】
ＨｅＬａ細胞から調製されたリボソームを小分子（１００ｍＭの濃度）とインキュベートし、その後化学修飾剤（硫酸ジメチル［ＤＭＳ］およびケトキサール［ＫＥ］）で処理する。化学修飾に続いて、ｒＲＮＡをフェノール−クロロホルム抽出し、エタノール沈殿させ、３つのｒＲＮＡの異なる領域にハイブリダイズする末端標識オリゴヌクレオチドを用いてプライマー伸長反応で分析し、そして６％ポリアクリルアミドゲルで分離させた。プライマー伸長用のプローブは、１８Ｓ（７つのオリゴヌクレオチドプライマー）、２８Ｓ（２４のオリゴヌクレオチドプライマー）、および５Ｓ（１つのプライマー）ｒＲＮＡの全体をカバーする。これらの実験のコントロールには、ＤＭＳＯ（ＤＭＳＯにより誘導されるｒＲＮＡ接近可能性の変化に対するコントロール）、パロモマイシン（１８Ｓ  ｒＲＮＡ結合のマーカー）、およびアニソマイシン（２８Ｓ  ｒＲＮＡ結合のマーカー）が含まれる。
【０５３５】
ここで引用する刊行物および特許出願書類の全ては、個々の刊行物あるいは特許出願書類が特異的かつ個別に参照することによって組み込まれることが示唆される程度に、参照することにより本明細書に組み込まれるものとする。
【０５３６】
特定の実施形態を詳細に説明してきたが、当業者は、その教示内容から逸脱することなく、実施形態への多くの変更が可能であることを理解するであろう。そのような変更全ては本発明の特許請求の範囲に含まれるものである。
【図面の簡単な説明】
【０５３７】
【図１】ナンセンス変異の抑制を評価するための、ルシフェラーゼに基づくアッセイのための構築物の概略図である。
【図２】ルシフェラーゼタンパク質のＮ末端に一つ以上のエピトープタグを有するように操作されたルシフェラーゼ構築物の概略図である。
【図３】リードスルーの効率を評価するための、ルシフェラーゼに基づくアッセイのための構築物の概略図である。
【図４】ｍｄＸマウスの細胞および筋肉の結果である。
【図１】
2008515985.tif 000250
【図２】
2008515985.tif 000251
【図３】
2008515985.tif 000252
【図４】
2008515985.tif 000253
【国際調査報告】
2008515985.tif 000254
2008515985.tif 000255