(57)【要約】本開示は、一般に、フラビウイルス科のウイルスによって引き起こされたか、または、これに関連する感染（特に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされたか、または、ＨＣＶに関連する感染）を処置または防止するための別の治療剤と併用したカスタノスペルミンの使用、および、ＨＣＶ感染の生物学的機構を調べるためのこのような化合物の使用に関する。本出願は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法を提供し、この方法は、被験体に対して、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とを、投与する工程；を包含する。
2008515816.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法であって、
被験体に対して、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、免疫機能を変更する因子とを、投与する工程；
を包含する、方法。
【請求項２】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法であって、
被験体に対して、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅの複製を変更する因子とを、投与する工程；
を包含する、方法。
【請求項３】
請求項１または請求項２のいずれかに記載の方法であって、前記被験体は、ヒトである、方法。
【請求項４】
請求項１または請求項２のいずれかに記載の方法であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、フラビウイルス属のメンバーである、方法。
【請求項５】
請求項１または請求項２のいずれかに記載の方法であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、ペスチウイルス属のメンバーである、方法。
【請求項６】
請求項４に記載の方法であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、Ｈｅｐａｃｉｖｉｒｕｓであり、該Ｈｅｐａｃｉｖｉｒｕｓは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）である、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法であって、前記免疫機能を変更する因子は、インターフェロンである、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記インターフェロンは、インターフェロンαである、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記インターフェロンαは、ペグ化されている、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記免疫機能を変更する因子とが、連続的に投与される、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記免疫機能を変更する因子が、前記カスタノスペルミンの前に投与される、方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンが、前記免疫機能を変更する因子の前に投与される、方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記免疫機能を変更する因子とが、同時に投与される、方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記免疫機能を変更する因子とが、単一の組成物として混合されて同時に投与される、方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の方法であって、
被験体に対して、（ａ）前記カスタノスペルミンと薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物；および（ｂ）前記免疫機能を変更する因子と薬学的に受容可能な因子とを含む組成物；を投与する工程；
を包含する、方法。
【請求項１６】
請求項２に記載の方法であって、前記ウイルス複製を変更する因子が、リバビリンである、方法。
【請求項１７】
請求項２に記載の方法であって、前記ウイルス複製を変更する因子が、インターフェロンαである、方法。
【請求項１８】
請求項２に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記ウイルス複製を変更する因子とが、連続的に投与される、方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、前記ウイルス複製を変更する因子が、前記カスタノスペルミンの前に投与される、方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンが、前記ウイルス複製を変更する因子の前に投与される、方法。
【請求項２１】
請求項２に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記ウイルス複製を変更する因子とが、同時に投与される、方法。
【請求項２２】
請求項２に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記ウイルス複製を変更する因子とが、単一の組成物として混合されて同時に投与される、方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記免疫機能を変更する因子とが、相乗作用的に相互作用する、方法。
【請求項２４】
請求項２に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記ウイルス複製を変更する因子とが、相乗作用的に相互作用する、方法。
【請求項２５】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法であって、カスタノスペルミンを、
（ａ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅによる細胞の感染を阻害する化合物；
（ｂ）ウイルスキャプシドからのウイルスＲＮＡの放出を阻害するかもしくはＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物の機能を阻害する、化合物；
（ｃ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ複製を変更する化合物；
（ｄ）免疫機能を変更する化合物；
（ｅ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の症状を変更する化合物；および
（ｆ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅに関連した感染を処置するための化合物；
から選択される因子と組み合せて含む、方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法であって、前記免疫機能を変更する因子は、インターフェロンである、方法。
【請求項２７】
請求項２５に記載の方法であって、前記インターフェロンは、インターフェロンαである、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、前記インターフェロンαは、ペグ化インターフェロンαである、方法。
【請求項２９】
請求項２５に記載の方法であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス複製を変更する化合物は、リバビリンまたはインターフェロンαである、方法。
【請求項３０】
請求項２５に記載の方法であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅに関連した感染は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染またはレトロウイルス感染である、方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法であって、前記レトロウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である、方法。
【請求項３２】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法であって、
被験体に対して、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、インターフェロンとを投与する工程；
を包含する、方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、前記インターフェロンは、インターフェロンαである、方法。
【請求項３４】
請求項３２に記載の方法であって、前記インターフェロンαは、ペグ化インターフェロンαである、方法。
【請求項３５】
請求項３２に記載の方法であって、前記カスタノスペルミンと、前記インターフェロンとが、相乗作用的に相互作用する、方法。
【請求項３６】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の処置のための医薬の製造のための組成物の使用であって、該組成物は、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、免疫機能を変更する因子とを含む、使用。
【請求項３７】
請求項３６に記載の使用であって、前記免疫機能を変更する因子は、インターフェロンである、使用。
【請求項３８】
請求項３７に記載の使用であって、前記インターフェロンは、インターフェロンαである、使用。
【請求項３９】
請求項３７に記載の使用であって、前記インターフェロンは、ペグ化インターフェロンαである、使用。
【請求項４０】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の処置のための医薬の製造のための組成物の使用であって、該組成物は、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅの複製を変更する因子とを含む、使用。
【請求項４１】
請求項３６に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅの複製を変更する因子は、リバビリンである、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本開示は、一般に、感染病の処置に関し、そして、より具体的には、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅによって引き起こされるかまたはＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅと関連した感染、具体的には、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされるかまたはＨＣＶと関連した感染を処置または防止するための、抗ウイルス化合物と組み合せたカスタノスペルミン（ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｉｎｅ）の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
フラビウイルス群は、多数のヒトの疾患および家畜産業にかなりの損害をもたらす種々の動物の疾患の、原因となる因子を含む。フラビウイルス科（この科のメンバーを、本明細書中ではフラビウイルスと呼ぶ）としては、以下が挙げられる：フラビウイルス属（例えば、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、およびダニ媒介脳炎ウイルス）；ペスチウイルス属（例えば、ウシウイルス性下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）；標準的な豚コレラウイルス、およびボーダー病ウイルス）；ヘパシウイルス属（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス）；およびＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅの現在未分類のメンバー（例えば、ＧＢウイルスＡ型、Ｂ型およびＣ型）。Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅのメンバーは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｏｆ  Ｖｉｒｕｓｅｓ（現在一般に認められた分類学的な定義は、非特許文献１に記載されている）（この内容は、本明細書により参考として援用される）によって詳細に記載されている。
【０００３】
フラビウイルス科の臨床上有意なメンバーは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）である。ＨＣＶは、１９８９年に初めて同定された。これは、急性肝炎の主な原因であり、輸血後の非Ａ型非Ｂ型の肝炎のほとんどの症例の原因となっている。さらに、ＨＣＶは、慢性肝臓疾患（肝硬変および肝癌を含む）の主要な原因である（非特許文献２）。世界保健機関は、１億７千万人が、慢性的にＨＣＶに感染していると推測する。毎年、およそ３〜４百万人が新たに感染しており、そして、これらの感染者のうちの８０〜８５％が、慢性の感染症を発症し、これらの患者のうちのおよそ２０〜３０％が、肝硬変および末期段階の肝臓疾患（肝細胞癌（ＨＣＣ）を併発することが多い）へと進行する。（例えば、非特許文献３を参照のこと）。
【０００４】
ＨＣＶは、エンベロープを有するプラス鎖ＲＮＡウイルスである。このゲノムは、５’末端および３’末端に、安定な二次構造および三次構造を形成する非翻訳領域（ＮＴＲ）を有する。５’ＮＴＲは、オープンリーディングフレームの開始コドンの直ぐ近くで、リボソームと直接結合することを可能にする、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を有する。従って、ＨＣＶ  ＲＮＡの翻訳は、細胞ｍＲＮＡの翻訳に代表的に使用されるＣＡＰ依存性の機構ではなく、ＩＲＥＳによって媒介される。
【０００５】
ＨＣＶゲノムは、およそ３０００個のアミノ酸残基のポリタンパク質をコードする、単一の長いオープンリーディングフレームからなる。このポリタンパク質は、翻訳と同時に、そして、翻訳後に、少なくとも１０個の異なる生成物（２つのＮ結合グリコシル化タンパク質Ｅ１およびＥ２を含む）へとプロセシングされる。このポリタンパク質の内部で、分解産物は、以下のとおりの順序になる：コア（Ｃ）；エンベロープタンパク質１（Ｅ１）；Ｅ２；ｐ７（イオンチャネル形成ポリペプチドであり得る）；非構造タンパク質２（ＮＳ２）；ＮＳ３；ＮＳ４Ａ；ＮＳ４Ｂ；ＮＳ５Ａ；およびＮＳ５Ｂ。このコアタンパク質は、ヌクレオキャプシドの主要な成分を形成する、極めて塩基性のＲＮＡ結合タンパク質である。エンベロープタンパク質Ｅ１およびＥ２は、高度にグリコシル化された、１型の膜タンパク質であり、カルボキシ末端領域を介して係留される。これらは、ウイルス粒子の脂質エンベロープ内に埋め込まれ、そして、安定なヘテロダイマーを形成するように会合する。上記の非構造タンパク質は、ウイルスの複製に関与し、そして、プロテアーゼ活性（ＮＳ２／ＮＳ３）、ヘリカーゼ活性（ＮＳ３）、およびＲＮＡポリメラーゼ活性（ＮＳ５Ｂ）を有する。ＨＣＶの宿主細胞への結合は、おそらく、Ｅ２またはＥ１／Ｅ２複合体の、細胞表面上に存在するレセプターとの相互作用を必要とする。
【０００６】
ＨＣＶ粒子のアセンブリ機構についての理解は、限られている。複合体となったグリカンがなく、小胞体（ＥＲ）において発現されるＨＣＶ糖タンパク質が局在化しており、そして、細胞表面上にこれらのタンパク質がないことから総合すると、初期のビリオン形態形成は、ＥＲからの細胞内小胞内への出芽によって起こることが示唆される。さらに、成熟したＥ１−Ｅ２ヘテロダイマーは、ＥＲを出ず、そして、ＥＲ保持シグナルが、Ｅ１およびＥ２の両方のＣ末端領域において同定されている。それゆえ、ウイルスは、構成的な分泌経路を介して外に出されるのであろう。この仮説のとおり、複合体となったＮ結合グリカンが、部分的に精製したウイルス粒子の表面上で見出された。このことは、このウイルスが、ゴルジ体を通過することを示唆する。
【０００７】
最近まで、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）は、ＨＣＶ感染の処置のために有益であることが照明された、唯一の治療であった。およそ５０％の患者が、ＩＦＮ−αを用いた処置に対して初期の応答を示すが、この応答は、大半の患者において持続性ではなく、患者は、かなりの付随する副作用に苦しむ。ＨＣＶ感染を処置するための現在の医療の標準は、ヌクレオシドアナログであるリバビリンと共にＩＦＮ−αを投与することである。しかし、より強力な抗ウイルス活性を有し、所望されない副作用がより少ない治療薬候補の同定が、必要とされている。
【非特許文献１】ｖａｎ  Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌら，Ｖｉｒｕｓ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ：Ｔｈｅ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｔｈｅ  Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｏｆ  Ｖｉｒｕｓｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ（２０００）
【非特許文献２】Ｈｏｏｆｎａｇｌｅ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９７，２６：１５Ｓ
【非特許文献３】Ｋｏｌｙｋｈａｌｏｖら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，２０００，７４：２０４６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、改善された抗ウイルス活性と減少した毒性とを有する抗Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ薬剤、特に、ＨＣＶの処置のための治療薬を同定および開発するための必要性が存在する。本発明は、このような必要性を満たし、そしれされに、他の関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（要旨）
本発明は、一般に、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされたもの）を処置または防止する際に使用するための、カスタノスペルミン組成物を提供する。特に、本開示は、他の抗Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ化合物と組み合せたカスタノスペルミンを提供する。これは、ＨＣＶに対する予想外に高いかまたは相乗作用的な阻害活性を提供する。
【００１０】
１つの実施形態において、本発明は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法を提供し、この方法は、被験体に、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、免疫機能を変更する因子とを投与する工程を包含する。別の実施形態において、被験体に、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、フラビウイルス科のウイルスの複製を変更する因子とを投与する工程を包含する、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法が提供される。特定の実施形態において、被験体は、ヒトである。他の特定の実施形態において、フラビウイルス科のウイルスは、フラビウイルス属のメンバー（ヘパシウイルス属であり得り、ここで、ヘパシウイルス属は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）である）であるか、または、上記ウイルスは、ペスチウイルス属のメンバーである。別の特定の実施形態において、免疫機能を変更する因子は、インターフェロン−αのようなインターフェロンであり、そして、特定の実施形態において、インターフェロン−αは、ペグ化される。本発明はまた、カスタノスペルミンと、免疫機能を変更する因子とが連続して投与される方法（この方法では、カスタノスペルミンが、免疫機能を変更する因子よりも前に投与されるか、または、免疫機能を変更する因子が、カスタノスペルミンよりも前に投与される）、または、カスタノスペルミンと、上記因子とが同時に投与される方法を提供する。別の実施形態において、カスタノスペルミンと、免疫機能を変更する因子とは、単一の組成物として混合され、そして、同時に投与される。別の実施形態において、上記方法は、被験体に、（ａ）カスタノスペルミンおよび薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物と、（ｂ）免疫機能を変更する因子および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物とを投与する工程を包含する。
【００１１】
別の実施形態において、ウイルス複製を変更する因子は、リバビリンであるか、または、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α）であり；そして、特定の実施形態において、インターフェロン−αは、ペグ化される。本発明はまた、カスタノスペルミンと、ウイルス複製を変更する因子とが連続して投与される方法（この方法では、カスタノスペルミンが、ウイルス複製を変更する因子よりも前に投与されるか、または、ウイルス複製を変更する因子が、カスタノスペルミンよりも前に投与される）、または、カスタノスペルミンと、上記因子とが同時に投与される方法を提供する。別の実施形態において、カスタノスペルミンと、ウイルス複製を変更する因子とは、単一の組成物として混合され、そして、同時に投与される。別の実施形態において、上記方法は、被験体に、（ａ）カスタノスペルミンおよび薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物と、（ｂ）ウイルス複製を変更する因子および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物とを投与する工程を包含する。
【００１２】
本発明はまた、被験体に、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、免疫機能を変更する因子とを投与する工程を包含する、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法を提供し、この方法において、カスタノスペルミンと免疫機能を変更する因子とは、相乗作用的に相互作用する。別の実施形態において、被験体に、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、ウイルス複製を変更する因子とを投与する工程を包含する、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法が提供され、この方法において、カスタノスペルミンとウイルス複製を変更する因子とは、相乗作用的に相互作用する。
【００１３】
また、本明細書中では、カスタノスペルミンを、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅによる細胞の感染を阻害する因子；ウイルスＲＮＡのウイルスキャプシドからの放出を阻害するかもしくは、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物の機能を阻害する化合物；Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ複製を変更する化合物；免疫機能を変更する化合物；Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の症状を変更する化合物；または、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅに関連した感染を処置するための化合物と組み合せて含む、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法が提供される。特定の実施形態において、免疫機能を変更する化合物は、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α）であり；そして、特定の実施形態において、インターフェロン−αは、ペグ化される。特定の実施形態において、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス複製を変更する化合物は、リバビリンまたはインターフェロン−αである。特定の実施形態において、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅに関連する感染は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染、または、レトロウイルス感染であり、ここで、レトロウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染である。
【００１４】
また、被験体に、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、インターフェロンとを投与する工程を包含する、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置するための方法が提供される。特定の実施形態において、インターフェロンは、インターフェロン−αであり；そして、特定の他の実施形態において、インターフェロン−αは、ペグ化される。１つの実施形態において、カスタノスペルミンおよびインターフェロンは、相乗作用的に相互作用する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（詳細な説明）
本発明は、一般に、感染病を処置または防止するために、別の抗ウイルス化合物と併用してカスタノスペルミンを使用するための組成物および方法を提供する。具体的には、これらの組成物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染のようなＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染を処置または防止するために有用である。従って、本発明は、一般に、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α、インターフェロン−α、アルファ−インターフェロンまたはα−インターフェロン）もしくはリバビリンのような別の化合物と組み合せたカスタノスペルミンは、ＨＣＶに対して予想外に高い活性を有するという、驚くべき発見に関する。従って、本発明の化合物は、例えば、ＨＣＶ感染およびＨＣＶ関連疾患を処置するために有用であり、そしてまた、ＨＣＶ感染の生物学的機構（例えば、複製および伝達）を研究するための、インビトロおよび細胞ベースのアッセイのための研究ツールとしても有用である。
【００１６】
背景として、糖タンパク質は、糖と、タンパク質のアミノ酸との間の結合に従って、２つの主要なクラスに分類される。最も一般的なのは、タンパク質のアスパラギンと、オリゴ糖のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基との間のＮ−グリコド結合である。Ｎ結合オリゴ糖は、ポリペプチド骨格へと付着した後、小胞体（ＥＲ）内の一連の特定の酵素によってプロセシングされ、そして、このプロセシング経路は、十分に特徴付けられている。
【００１７】
ＥＲにおいて、α−グルコシダーゼＩは、前駆体オリゴ糖に由来する末端α−１，２グルコース残基の除去を担い、そして、α−グルコシダーゼＩＩは、マンノシダーゼによるマンノース残基の除去、そしてさらに、種々のトランスフェラーゼを必要とするプロセシング反応の前に、２つの残存したα−１，３結合グルコース残基を除去する。これらのオリゴ糖の「トリミング」反応は、ゴルジ装置を通る運搬のために、糖タンパク質が正確に折りたたまれ、そして、カルネキシンおよびカルレチキュリンのようなシャペロンタンパク質と相互作用することを可能にする。
【００１８】
この生合成経路における重要な酵素のインヒビター、特に、α−グルコシダーゼおよびα−マンノシダーゼをブロックするインヒビターは、いくつかのエンベロープウイルスの複製を阻止する。このようなインヒビターは、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の折り畳みに干渉すること、従って、初期のウイルス−宿主細胞相互作用、または、その後の融合を阻止することによって、機能し得る。これらのインヒビターはまた、ウイルス膜の完成に必要とされる適切な糖タンパク質の構築を妨げることによって、ウイルス複製を阻止し得る。
【００１９】
例えば、非特異的グリコシル化インヒビターである、２−デオキシ−Ｄ−グルコースおよびβ−ヒドロキシ−ノルバリンは、ＨＩＶ糖タンパク質の発現を阻害し、そして、合胞体の形成をブロックした（Ｂｌｏｕｇｈら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４１：３３−３８（１９８６））。これらの因子で処理されたＨＩＶ感染細胞のウイルス増殖は停止する。これはおそらく、ウイルス膜の形成に必要とされる糖タンパク質が利用できないことに起因する。グリコシル化インヒビターである、２−デオキシ−２−フルオロ−Ｄ−マンノースは、ウイルス膜タンパク質のグリコシル化を妨げることによって、インフルエンザ感染細胞に対して抗ウイルス活性を示した（ＭｃＤｏｗｅｌｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２４：８１４５−５２（１９８５））。Ｌｕらは、Ｎ結合グリコシル化が、Ｂ型肝炎ウイルスの分泌に必須であったという証拠を提示し（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２１３：６６０−６６５（１９９５））、そして、Ｂｌｏｃｋらは、ヒトＢ型肝炎ウイルスの分泌が、イミノ糖Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシン（ｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ）によって阻害されたことを示した（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：２２３５−３９（１９９４）；また、例えば、ＷＯ９９２９３２１も参照のこと）。
【００２０】
本明細書中に記載される場合、あらゆる濃度の範囲、百分率の範囲、割合の範囲、または、整数の範囲は、そうでないと示されない限り、列挙される範囲内のあらゆる整数値を含み、そして、適切な場合、その分数（例えば、ある整数の１０分の１および１００分の１）を含むことが理解されるべきである。本明細書中で使用される場合、「約」または「〜から本質的になる」は、そうでないと示されない限り、示される値または範囲の、±１５％を意味する。選択肢（例えば、「または」、「もしくは」）の使用は、その選択肢のいずれか一方、両方、または、そのあらゆる組み合わせを意味するものと理解されるべきである。
【００２１】
（カスタノスペルミン）
上記のように、本発明は、カスタノスペルミンを含む組成物、その薬学的に受容可能な塩を含む組成物と、その使用とを提供する。本明細書中では、抗ウイルス活性を有する別の化合物もしくは分子と組み合せてカスタノスペルミンを有する組成物、または、宿主の機能もしくは応答を変更する別の化合物もしくは分子（例えば、免疫機能もしくは免疫応答を変更する化合物）と組み合せてカスタノスペルミンを有する組成物が開示され、これらの併用は、予想外に高い抗ウイルス活性、特に、（例えばＨＣＶに対する）高い抗Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ活性を有する。
【００２２】
カスタノスペルミンおよび特定のイミノ糖（例えばデオキシノジリマイシン（ＤＮＪ））は、ＥＲ  α−グルコシダーゼインヒビターであり、これらは共に、糖タンパク質のプロセシングの初期段階を強く阻害する（例えば、Ｒｕｐｒｅｃｈｔら，Ｊ．Ａｃｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．２：１４９−  ５７（１９８９）を参照のこと；また、例えば、Ｗｈｉｔｂｙら，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１５：１４１−５１（２００４）；Ｂｒａｎｚａ−Ｎｉｃｈｉｔａら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：３５２７−３６（２００１）；Ｃｏｕｒａｇｅｏｔら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  ７５：５６４−７２（２０００）；Ｃｈｏｕｋｈｉら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：３８５１−５８（１９９８）；ＷＯ  ９９／２９３２１；ＷＯ  ０２／０８９７８０も参照のこと）。しかし、インヒビターの効果は、実質的に、これらのインヒビターが適用される系に依存して異なり、そして、極めて異なる特異性を示し得る（カスタノスペルミンは、α−グルコシダーゼＩに対して比較的特異的である）。
【００２３】
カスタノスペルミンは、黒豆またはモアトンクリの木（Ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｕｍ  ａｕｓｔｒａｌｅ）に由来する、天然のアルカロイドである（Ｈｏｈｅｎｓｃｈｕｔｚら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０：８１１−１４（１９８１））。カスタノスペルミンは水溶性であり、従って、当該分野で実施される手順に従って容易に単離される（例えば、Ａｌｅｘｉｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡを参照のこと）。最も高い濃度のこの化合物は、種子および種子の鞘において見られる（Ｐａｎら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３０３：１３４−４４（１９９３））。α−グルコシダーゼＩの酵素活性を阻害することに加えて、カスタノスペルミンはまた、マルターゼおよびスクラーゼのような腸グリコシダーゼを阻害し、所望されない副作用をもたらし得る（Ｓａｕｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：９３−９７（１９８５））。被験体の食事を、デンプンを含まない、高グルコース食に変えることによって、カスタノスペルミンを受ける被験体において、多くの副作用が最小にされ得るか、または、防止され得る（例えば、Ｓａｕｌら，上掲を参照のこと）。
【００２４】
カスタノスペルミンは、以下の式：
【００２５】
【化１】
2008515816.tif 000003
を有する。体系的には、この化合物は、いくつかの方法で命名され得る：［１Ｓ−（１α，６β，７α，８β，８αβ）］−オクタヒドロ−１，６，７，８−インドリ−ジンテトロール、または、［１Ｓ，（１Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＲ）−１，６，７，８−テトラヒドロキシ−インドリジジン、または、１，２，４，８−テトラデオキシ−１，４，８−ニトリロ−Ｌ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−オクチトール。用語カスタノスペルミンまたはその最初の体系的な名称が、本明細書中で使用される。
【００２６】
薬学的に受容可能な塩は、薬学的に受容可能でありかつ所望の薬理学的（例えば、抗ウイルス）活性を有する、カスタノスペルミンまたは本明細書中に記載される他の化合物の塩を指す。このような塩としては、以下が挙げられる；（１）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など）；または、有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸（ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸など）を用いて形成された酸付加塩；あるいは（２）親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン（例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアルミニウムイオン）によって置換されるか；または、有機塩基（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミンなど）と配位する場合に形成された塩。
【００２７】
構造的に純粋な化合物とは、組成物を構成する個々の分子のうちのかなりの百分率（例えば、９５％〜１００％、好ましくは、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の程度）が、各々、互いに同じ順序かつ同じ結合によって結合した、同じ数および型の原子を含む、化合物の組成物を指す。本明細書中で使用される場合、用語「構造的に純粋」は、異なる幾何異性体、または、異なる光学異性体を互いに区別することは意図されない。例えば、シス−ブタ−２，３−エンおよびトランス−ブタ−２，３−エンの混合物は、構造的に純粋であると考えられ、ラセミ混合物としてもそうである。組成物が、かなりの百分率の単一の幾何異性体または光学異性体を含むことが意図される場合、用語「幾何的に純粋」および「光学的または鏡像異性的に純粋」が、それぞれ使用される。
【００２８】
用語「構造的に純粋」はまた、分子の異なる互変異性形態もしくはイオン化状態、または、平衡現象もしくは他の可逆的な相互変換から生じる分子の他の形態の間を区別することは意図されない。従って、例えば、有機酸の組成物は、そのカルボキシル基のうちのいくつかがプロトン化状態（ＣＯＯＨ）にあり得、そして、その他のカルボキシル基が脱プロトン化状態（ＣＯＯ−）にあり得る場合でさえも、構造的に純粋である。同様に、ケト互変異性体およびエノール互変異性体の混合物を含有する組成物は、そうでないと具体的に言及されない限り、構造的に純粋であると考えられる。
【００２９】
（治療用処方物およびその使用方法）
本明細書中で使用される場合、カスタノスペルミンは、特に、免疫機能を変更する因子および／またはウイルス複製を変更する因子のような別の因子（化合物または分子）との併用において、ウイルス感染またはウイルス複製を阻害するように、相乗作用的に作用し得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載される組み合わせは、統計的に測定可能な基準に従って臨床上適切な濃度において、フラビウイルス科のウイルス（好ましくは、ＨＣＶ）のウイルス複製を阻害し得る。本明細書中に記載される少なくとも１つの他の治療剤と併用してカスタノスペルミンを処置として使用することは、治療上の適用、すなわち、ＨＣＶのようなフラビウイルス科のウイルスに感染したことが知られているかまたは感染したと考えられる被験体への、上記組み合わせの投与を包含する。また、カスタノスペルミンの、インターフェロン−αのような因子との併用もまた本明細書において企図されており、この場合、カスタノスペルミンとの併用により、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の処置に関して、インターフェロン−αまたはリバビリンの有効性（効力）が変更（統計的に有意な様式で、増加または減少、好ましくは増加）され得る。
【００３０】
処置はまた、本明細書中に記載される組み合わせの、予防法、または、予防的な投与も包含する。Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の有効な処置としては、感染の治癒（すなわち、宿主または宿主組織からのウイルスの根絶）；例えば、ＨＣＶ  ＲＮＡが、治療レジメンの完了から６ヶ月後に、被験体の血液においてもはや検出できないといった、持続性の応答（このような持続性の応答は、順調な予後と同等に扱われ得、そして、治癒と等価であり得る）；肝臓の瘢痕化（線維症）の減速または減少；ウイルス産生の減速または減少；被験体における症状の減少、緩和または抑止；あるいは、症状または感染の悪化または進行の防止、が挙げられ得る。
【００３１】
従って、本明細書中に記載される組成物は、以下の目的のうちの少なくとも１つを達成するために使用され得る：（１）ＨＣＶ感染のようなＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の、別の被験体への感染性および潜在的な伝達の排除；（２）肝臓疾患の進行の停止および臨床上の予後の改善；（３）肝硬変およびＨＣＣの発症の防止；ならびに（４）現在使用されている治療分子または治療様式の臨床上の利益の改善。今日まで、重篤な副作用を伴うことなく、ＨＣＶ感染およびあらゆる付随する疾患を適切に処置または防止する治療剤は、分かりにくいままである。
【００３２】
治療または予防法は、好ましくは、上記のようなウイルスによる感染の処置または防止である。具体的には、治療または予防法は、Ｃ型肝炎、黄熱病、デング熱、日本脳炎、マーレーバレー脳炎、ロチオウイルス感染、西ナイル熱、セントルイス脳炎、ダニ媒介脳炎、跳躍病ウイルス感染、ポーワッサンウイルス感染、オムクス出血熱、キャサヌール森林病、ウシの下痢、標準的な豚コレラウイルス、ボーダー病ウイルス、および豚コレラから選択される疾患の処置または防止であり得る。Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染（例えば、ＨＣＶ感染）のようなウイルス感染は、被験体または患者の細胞または身体内に存在するフラビウイルスが関与する（すなわち、このようなフラビウイルスにより引き起こされるか、悪化させられるか、または、特徴付けられる）あらゆる状態（ｓｔａｔｅ）または健康状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）を指す。患者または被験体は、ヒト、非ヒト霊長類、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、または他の哺乳動物であり得る。
【００３３】
ＨＣＶは、細胞培養において効率的に増殖することが難しく、従って、潜在的な抗ＨＣＶ剤の分析および同定を難しくしている。ヒトＨＣＶの複製およびインビトロでの細胞の再感染を支持し得る適切な細胞培養系がないので、フラビウイルス科の別のメンバーであるウシウイルス性下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）の使用は、細胞培養モデルにおいて使用するために、当該分野で認められた代理のウイルスである（Ｓｔｕｙｖｅｒら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４７：２４４−５４（２００３）；Ｗｈｉｔｂｙら，上掲）。ＨＣＶおよびＢＶＤＶは、かなりの程度の局所的タンパク質相同性、共通した複製ストラテジー、および、おそらくはウイルスのエンベロープ形成（ｅｎｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）のための同じ細胞下の位置を共有する。ＨＣＶおよびＢＶＤＶは、共に、Ｅ１エンベロープ糖タンパク質およびＥ２エンベロープ糖タンパク質を含む、９つの機能的に類似する遺伝子産物をコードする、一本鎖ゲノム（それぞれ約９，６００ヌクレオチドおよび約１２，６０００ヌクレオチド）を有する（例えば、Ｒｉｃｅ，Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ｉｎ  Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，９３１−５９（１９９６）を参照のこと）。
【００３４】
本明細書中に記載される化合物はまた、好ましくはＨＣＶについての、ウイルスの感染、増殖および複製の生物学的な機構を研究するための、インビトロアッセイおよび細胞ベースのアッセイのための有用な研究ツールであり得る。背景として、そして、理論に束縛されることは望まないが、ＨＣＶの形態形成は複雑であり、予めアセンブリされたウイルスコア粒子が、ウイルスエンベロープ（表面）タンパク質のサイトゾル側に付着し、このウイルスエンベロープタンパク質が、小胞体（ＥＲ）膜内に挿入されると考えられる。エンベロープを獲得した後、ビリオンは、ＥＲの内腔へと出芽し、次いで、ゴルジ装置を通って細胞外流体へと輸送される。未熟なウイルス糖タンパク質からのＮ結合グルコース残基の除去（トリミングは、α−グルコシダーゼのような細胞酵素により行われる）は、ＥＲからゴルジ体へのウイルス糖タンパク質の移行において一定の役割を果たし得る。
【００３５】
１つの実施形態において、抗ウイルス化合物を同定するための方法が提供され、この方法は、ウイルスに感染した宿主細胞を、ウイルス複製に十分な条件下で、ウイルス複製に十分な時間にわたって、カスタノスペルミンおよび１つの他の試験化合物もしくは因子と接触させる工程、ならびに、感染、ウイルス複製および／またはウイルスのアセンブリを阻害する（防止する、減速する、抑止する、干渉する）候補因子を同定する工程を包含する。特定の実施形態において、本明細書中に記載される方法は、カスタノスペルミンと併用した場合に、相加的または相乗作用的に作用する試験化合物を同定するために使用され得る。別の実施形態において、ウイルス感染を有することが疑われる細胞を同定するための方法が提供され、この方法は、ウイルスに感染したことが疑われる宿主細胞を、感染、ウイルス複製および／またはウイルスのアセンブリを阻害するのに十分な条件下で、感染、ウイルス複製および／またはウイルスのアセンブリを阻害するのに十分な時間にわたって、カスタノスペルミンおよび１つの候補化合物または因子と接触させる工程、ならびに、ウイルスに感染した細胞を同定する工程を包含する。好ましくは、ウイルス感染は、ＨＣＶによって引き起こされるか、または、ＨＣＶと関連する。本明細書中に記載されるアッセイは、候補化合物および／または組み合わせの治療価を決定するために使用され得、そしてまた、治療を必要とする被験体を処置する際に有用な投薬パラメータを決定するためにも有用であり得る。
【００３６】
特定の実施形態において、カスタノスペルミンは、付加的な治療薬と併用される場合、会合物（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）または組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）（例えば、混合物において、あるいは、カスタノスペルミンおよび他のもう１つの化合物が、各々の抗ウイルス効果が、相加的であるか、または、好ましくは、相乗作用的であり得るように、全身でまたは感染部位において利用可能となるような様式で、同時に包装されるかまたは投与される）で投与される。１つの好ましい実施形態において、カスタノスペルミンは、インターフェロン−αのような免疫機能を変更する因子と併用され、そして、別の好ましい実施形態においては、カスタノスペルミンは、ウイルス（例えば、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）複製を変更する因子（例えば、リバビリン（Ｓｉｇｍａ）のようなヌクレオシドアナログ）と併用される。別の実施形態において、カスタノスペルミンは、インターフェロン−αのような免疫機能を変更する因子、または、リバビリンのようなウイルス複製を変更する因子（化合物）と併用されるか、これらと共に投与される。
【００３７】
１つの実施形態において、カスタノスペルミンと、免疫機能を変更する因子との組み合わせ、または、カスタノスペルミンとウイルス複製を変更する因子との組み合わせは、被験体において相加的に作用する。すなわち、カスタノスペルミンと別の化合物との相互作用が、各化合物もしくは因子が単独で投与された場合の各化合物もしくは因子の作用とほぼ等しい治療効果（または抗ウイルス効果）をもたらす。
【００３８】
抗ウイルス活性を有する化合物または分子は、例えば、（例えば、ウイルスの細胞への結合または付着を防止することによって）細胞の感染を阻害もしくは防止し得；ウイルスの複製もしくはアセンブリを阻害、減少もしくは防止し得；ウイルスキャプシドからのウイルスＲＮＡの放出を阻害、減少もしくは防止し得；そして／または、ＨＣＶ遺伝子産物の機能を阻害、減少もしくは干渉し得る。免疫機能を変更する（統計的に有意な様式で、または、臨床上有意な様式で、増加または減少させる）化合物または分子は、好ましくは、感染性ウイルスに対する免疫機能または免疫応答を増加または増強する。
【００３９】
好ましい実施形態において、カスタノスペルミンと、免疫機能を変更する因子との組み合わせ、または、カスタノスペルミンと、ウイルス複製を変更する因子との組み合わせは、被験体において、相乗作用的に作用する。相乗作用的に作用する２以上の化合物は、化合物の併用効果が、単独で投与された場合の各化合物の個々の効果の和よりも大きくなるように相互作用する（例えば、Ｏｕｚｏｕｎｏｖら．Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｒｅｓ．５５：４２５−３５（２００２）；Ｂｅｒｅｎｂａｕｍ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４１：９３（１９８９）を参照のこと）。カスタノスペルミンと、別の因子または化合物との間の相互作用は、種々の機構的および経験的なモデルによって分析され得る（例えば、Ｏｕｚｏｕｎｏｖら，上掲を参照のこと）。因子の組み合わせの間の相互作用を分析するために一般に使用されるアプローチは、アイソボール（ｉｓｏｂｏｌｅ）（等効果曲線（ｉｓｏ−ｅｆｆｅｃｔ  ｃｕｒｖｅｓ））の作成を用い、ここでは、因子（ｄａ、ｄｂ）の組み合わせが、グラフ上の点によって表され、グラフの軸は、個々の因子の量軸である（例えば、Ｏｕｚｏｕｎｏｖら，上掲；ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙＴＭＩＩソフトウェアマニュアル（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩを参照のこと）。免疫機能を変更する因子と組み合わせたカスタノスペルミン、あるいは、ウイルス複製を変更する因子、または、本明細書中に記載される別の因子もしくは化合物と組み合せたカスタノスペルミンは、相乗作用ピークの量によって計算したときに生成される相乗作用量が、相加効果（すなわち、各因子単独の効果を互いに加えたもの）よりも１５％多い場合、または、相加効果よりも２倍多い場合、または、相加効果よりも３倍以上多い場合に、相乗作用的に作用するか、または、相乗効果を有する。相乗作用は、三次元（３Ｄ）グラフと、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙＴＭＩＩソフトウェアによって、アイソボログラム（ｉｓｏｂｏｌｏｇｒａｍ）に対する補完的な分析として提供される相乗作用量の計算とを用いて説明され得る。従って、免疫機能を変更する因子と組み合わせたカスタノスペルミン、あるいは、ウイルス複製を変更する因子または本明細書中に記載される別の因子もしくは化合物と組み合せたカスタノスペルミンは、μＭ／ｍｌ２％またはμＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％で表される値が、２５μＭ／ｍｌ２％と５０μＭ／ｍｌ２％との間、または２５μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％と５０μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％との間（軽微ではあるが、統計的には有意）である場合；５０μＭ／ｍｌ２％または５０μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％と、１００μＭ／ｍｌ２％または１００μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％との間（中程度の相乗作用）である場合；あるいは、１００μＭ／ｍｌ２％または１００μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％よりも多い（強い相乗作用）場合に、相乗作用的に作用するか、または、相乗効果を有する。Ｂｕｃｋｗｏｌｄらは、リバビリンとインターフェロン−αとの併用は（これらの薬物の併用は、ＨＣＶ感染を処置するための現在の医療の標準である）、６６±２５ＩＵ（μｇ）／ｍＩ（ｗｅｌｌ）２％の相乗作用量を有したと報���した（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４７：２２９３（２００３））。本明細書中に記載されるカスタノスペルミンとインターフェロン−αとの併用は、１９３μＭ／（ＩＵ／ｍｌ）２％〜２４４μＭ／（ＩＵ／ｍｌ）２％の範囲の相乗作用量を有した。
【００４０】
特定の実施形態において、ＨＣＶのようなＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅによる細胞への結合および／または細胞の感染を阻害する化合物と組み合せてカスタノスペルミンを含有する組成物が提供される。このような化合物の例としては、１以上のＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物（例えば、ＨＣＶ  Ｅ１タンパク質および／またはＥ２タンパク質）に特異的に結合する抗体、または、ＨＣＶが結合する細胞レセプターに結合する抗体が挙げられる。この抗体は、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であっても、これらの抗原結合フラグメント（遺伝子操作された、キメラ、ヒト化、ｓＦｖ、または、他のこのような免疫グロブリンを含む）であってもよい。ウイルスによる細胞への結合、または、細胞の感染を防止する他の化合物としては、グルコサミノグリカン（例えば、ヘパラン硫酸塩およびスラミン）が挙げられる。
【００４１】
カスタノスペルミンはまた、ウイルスキャプシドからのウイルスＲＮＡの放出を阻害するか、または、ＨＣＶのようなＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物の機能を阻害する化合物（ＩＲＥＳのインヒビター、セリンプロテアーゼインヒビター、ヘリカーゼインヒビター、および、ウイルスポリメラーゼ／レプリカーゼのインヒビターが挙げられる）（例えば、Ｏｌｓｅｎら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４８：３９４４−５３（２００４）；Ｓｔａｎｓｆｉｅｌｄら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４：５０８５−８８（２００４）を参照のこと）とも併用され得る。ＩＲＥＳのインヒビターとしては、例えば、ヌクレオチド配列特異的なアンチセンス（例えば、ＭｃＣａｆｆｒｅｙら，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３８：５０３−５０８（２００３）を参照のこと）；短い（ｓｍａｌｌ）酵母ＲＮＡ（例えば、Ｌｉａｎｇら  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ９：１００８−１３（２００３）を参照のこと）；または、ｍＲＮＡの翻訳を阻害する小型干渉ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）分子（ｓｉＲＮＡ）；および、シアノコバラミン（ＣＮＣｂｌ、ビタミンＢ１２）（Ｔａｋｙａｒら，Ｊ．ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ．３１９：１−８（２００２））が挙げられる。ＮＳ３プロテアーゼ（ヘリカーゼ）インヒビターとしては、ＮＳ３基質に由来しかつ酵素活性をブロックするように作用するぺプチドが挙げられる。ＢＩＬＮ  ２０６１と命名されたプロテアーゼインヒビター（例えば、Ｌａｍａｒｒｅら，Ｎａｔｕｒｅ  ４２６：１８６−８９（２００３）を参照のこと）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａ，Ｑｕｅｂｅｃ）およびＶＸ−９０５（Ｖｅｒｔｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）は、潜在的なＨＣＶ治療薬として研究されている。
【００４２】
別の実施形態において、カスタノスペルミンは、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ複製に関与するかまたは影響を及ぼす細胞機能を乱す化合物、または、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ複製を直接変更する化合物（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼのインヒビター、または、ＨＣＶ  ｐ７のインヒビター（例えば、ＤＧＪおよびその誘導体）、糖タンパク質プロセシングの他のインヒビター（例えば、デオキシガラクトノジリマイシン（ＤＧＪ）およびデオキシノジリマイシン（ＤＮＪ）などのイミノ糖、ならびにこれらの誘導体（例えば、Ｎ−ブチル−ＤＮＪ、Ｎ−ノニル−ＤＮＪ、および長いアルキル鎖イミノ糖（例えば、Ｎ７−オキサノニル−ＤＮＪ、Ｎ７−オキサノニル−ＤＧＪ））、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼのインヒビターを含む、ヌクレオシドアナログ（例えば、リバビリン、ミコフェノール酸およびＶＸ４９７）、ならびに、他の抗ウイルス化合物（例えば、アマンタジン（Ｓｙｍｍｅｔｒｅｌ（登録商標）、Ｅｎｄｏ  Ｐｈａｒａｍｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、リマンタジン（Ｆｌｕｍａｄｉｎｅ（登録商標）、Ｆｏｒｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｉｎｃ．）、バロピシタビン（ｖａｌｏｐｉｃｉｔａｂｉｎｅ）（ＮＭ２８３、Ｉｄｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる）と併用され得る。
【００４３】
別の実施形態において、カスタノスペルミンは、免疫機能を変更する（統計的に有意な様式、臨床上有意な様式、または、生物学的に有意な様式で増加または減少する）ように（好ましくは、免疫機能またはＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染に対する免疫応答を増強または刺激するように）作用する化合物と併用され得る。例えば、化合物は、Ｔ細胞応答を刺激し得るか、もしくは、特異的な免疫応答を増強し得る（例えば、サイモシン−α、およびインターフェロン（例えば、α−インターフェロンおよびβ−インターフェロン））か、または、体液性応答を刺激または増強し得る。免疫機能を変更する化合物の例としては、インターフェロン−α（例えば、Ｎａｇａｔａら，Ｎａｔｕｒｅ  ２８７：４０１−４０８（１９８０）を参照のこと）、インターフェロン−β（例えば、Ｔａｎｉｇｕｓｈｉら，Ｎａｔｕｒｅ  ２８５：５４７−４９（１９８０）を参照のこと）およびインターフェロン−ω（Ａｄｏｌｆ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６８：１６６９−７６（１９８７））のようなＩ型インターフェロン、ならびに、インターフェロン−γ（Ｂｅｌａｒｄｅｌｌｉ，ＡＰＭＩＳ  １０３：１６１，１９９５）およびインターフェロン−γ−１ｂ（Ａｌｆｅｒｏｎ）のようなＩＩ型インターフェロンが挙げられる。インターフェロン−αの例としては、インターフェロン−α−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ（登録商標）−Ａ；Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、インターフェロン−α−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ，ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、インターフェロン−α−ｃｏｎ−１（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）、インターフェロン−α−ｎ３（Ａｌｆｅｒｏｎ）、アルブミンインターフェロン−α（Ａｌｂｕｆｅｒｏｎ−αＴＭ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＲｏｃｋｖｉＨｅ，ＭＤ）およびＶｅｌｄｏｎａ（Ａｍａｒｉｌｌｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｅｅｓ，Ｉｎｃ．）が挙げられる。インターフェロン−βの例としては、インターフェロン−β−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ）およびインターフェロン−β−１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ）が挙げられる。
【００４４】
インターフェロンは、免疫機能を変更し得、そしてまた、ＨＣＶのようなウイルスの複製を変更（阻害、防止、抑止、減少、または、減速）し得る。ウイルス感染した細胞におけるインターフェロン−αおよびインターフェロン−βの産生は、ウイルス複製に対する抵抗性を誘導し、ＭＨＣクラスＩの発現を増強し、抗原提示を増加させ、そして、ナチュラルキラー細胞（抗原特異的な表面レセプターを持たないリンパ球のサブセット）を活性化して、ウイルスに感染した細胞を殺傷する（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，第５版  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００１）を参照のこと）。従って、これらのインターフェロンは、先天性免疫および適応性免疫の両方に影響を与えることによって、免疫機能を変更する。
【００４５】
１つの実施形態において、カスタノスペルミンは、インターフェロン−αのようなインターフェロンと併用して投与されている。インターフェロン−αは、種々のウイルス感染の処置において、単独療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）として、または、併用療法（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）の一部として使用される（例えば、Ｌｉａｎｇ，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．３３９：１５４９−５０（１９９８）；Ｈｕｌｔｏｎら，Ｊ．Ａｃｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．５：１０８４−９０（１９９２）；Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６１：１０５９−６７（１９９０）を参照のこと）。インターフェロン−αは、細胞表面レセプターに結合し、そして、ウイルス複製を阻止する細胞酵素（例えば、翻訳開始を阻害する二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ、およびウイルスＲＮＡを分解するＲＮａｓｅ  Ｌ）の活性化をもたらす、シグナル伝達経路を刺激する（例えば、Ｓａｍｕｅｌ，  Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１４：７７８−８０９（２００１）；Ｋａｕｆｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１１６９３−９５（１９９９）を参照のこと）。ＨＣＶ  Ｅ２糖タンパク質およびＮＳ５ａは、ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ活性をブロックし得、その結果、いくつかのＨＣＶ株は、インターフェロン−αに対してより抵抗性になり、従って、インターフェロン−αと１以上の他の化合物との併用療法は、持続的なウイルス感染の処置に必須であり得る（例えば、Ｏｕｚｏｕｎｏｖら，上掲、およびこの文献において引用される参考文献を参照のこと）。特定の実施形態において、ポリエチレングリコール部分が、インターフェロン−α（ペグ化インターフェロン−αとして公知）；ペグインターフェロンα−２ｂ（Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ（登録商標）；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−ＰｌｏｕｇｈまたはＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）およびペグインターフェロンα−２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（登録商標）；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）と結合され、これらは、改善された薬物動態学的プロフィールを有し得、そしてまた、より少ない所望されない副作用を発現し得る（例えば、Ｚｅｕｚｅｍら，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１６６６−７２（２０００）；Ｈｅａｔｈｃｏｔｅら，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１６７３−８０（２０００）；Ｍａｔｔｈｅｗｓら，Ｃｌｉｎ．Ｔｈｅｒ．２６：９９１−１０２５（２００４）を参照のこと）。
【００４６】
インターフェロン−α２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ（登録商標）−Ａ；Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、インターフェロン−α−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ（登録商標）−Ａ；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、インターフェロン−α−ｃｏｎ−１（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）；Ｉｎｔｅｒｍｕｎｅ）は、米国において、慢性Ｃ型肝炎感染を有する成人の処置のための単剤としての使用について認可されている。慢性Ｃ型肝炎感染の処置のためのインターフェロン−α−２ｂおよびインターフェロン−α−２ａの推奨される用量は、３，０００，０００単位を１週間に３回であり、皮下注射または筋肉内注射によって投与される。処置は、６ヶ月〜２年にわたり行なわれる。インターフェロン−α−ｃｏｎ−１に関しては、推奨される用量は、最初の処置については９μｇを１週間に３回であり、そして、応答も再発もしない患者については、さらに６ヶ月間、１５μｇを１週間に３回である。これらの組み換え型インターフェロンのうちのいずれかを用いた処置期間の間に、患者は、副作用（風邪様の症状、抑鬱、発疹、および異常な血球数を含む）についてモニターされなければならない。インターフェロン単独での処置は、被験体の１５％未満で持続した応答をもたらす。この低い応答率に起因して、これらのインターフェロンは、慢性のＣ型肝炎感染を有する患者の処置には、単独療法としてはめったに使用されない。
【００４７】
ＨＣＶ感染を処置するためのインターフェロン−αのリバビリンとの併用は、いずれかでの治療単独よりも優れており、そして、この併用は、現在の医療の標準である。投与の有効性、用量および頻度は、３つの大規模な二重盲検法によるプラシーボをコントロールとした臨床治験において研究された（Ｒｅｉｃｈａｒｄら，Ｌａｎｃｅｔ  ３５１：８３−８７（１９９８）；Ｐｏｙｎａｒｄら，Ｌａｎｃｅｔ  ３５２：１４２６−３２（１９９８）；ＭｃＨｕｔｃｈｉｓｏｒｎら，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３９：１４８５−９２（１９９８））、（また、Ｂｕｃｋｗｏｌｄら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４７：２２９３−９３（２００３）；Ｂｕｃｋｈｏｌｄ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５３：４１２−１４（２００４）も参照のこと）。リバビリンに伴う有害な影響としては、異常な胎児の発育が挙げられる。リバビリンはまた、貧血、心臓疾患または腎臓疾患を有する患者において、禁忌である。従って、本明細書中に記載されるもののような、代替的な組成物、治療および治療の組み合わせが必要とされる。
【００４８】
カスタノスペルミンはまた、ＨＣＶ感染のようなＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の症状および影響を調節する（好ましくは、その重篤度もしくは強度を減少もしくは緩和させるか、その数を減らすか、または、抑止する）化合物（例えば、フラビノイドのような抗酸化物質）とも併用され得る。
【００４９】
付加的な治療薬は、ＨＣＶのようなＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅに感染した被験体が、抗ウイルス化合物（例えば、同時に感染しているものとして頻繁に同定される感染因子の処置に使用される抗ウイルス性の化合物または薬物）を含み得る。このような同時感染は、ＨＢＶ、ヒトレトロウイルス（例えば、ＨＩＶ１および２）、および／または、ヒトＴ細胞リンパ増殖性ウイルス（ＨＴＬＶ）１型もしくは２型によって引き起こされ得る。抗ウイルス化合物の例としては、ヌクレオチド逆転写酵素（ＲＴ）インヒビター（例えば、Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ（３ＴＣ）、ジドブジン、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、ジダノシン、アデフォビルジピボキシル（ａｄｅｆｏｖｉｒ  ｄｉｐｉｖｏｘｉｌ）およびアバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ））；非ヌクレオシドＲＴインヒビター（例えば、ネビラピン（ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ））；および、アスパルチルプロテアーゼインヒビター（例えば、サキナビル、インジナビルおよびリトナビル）が挙げられる。
【００５０】
本明細書中に記載される付加的な治療薬は、薬学的に受容可能なキャリア中の単一の組成物として同時に投与されても、各々が薬学的に受容可能なキャリアを有する別個の組成物として同時に投与されてもよい。別の実施形態において、カスタノスペルミンおよび付加的な治療薬は、連続して投与されても、そのあらゆる組み合わせで投与されてもよい（例えば、カスタノスペルミンが最初で、付加的な治療薬が二番目、または、付加的な治療薬が最初で、カスタノスペルミンが二番目）。さらに、一用量より多い併用療法が投与される場合、連続投与の順序は、各投与時点において、変更されても、同じに維持されてもよい。本明細書中に記載されるあらゆる併用療法の効果を決定するための方法は、本明細書中に記載されそして当業者により慣用的に実施され得る方法（例えば、免疫応答が変更されたかどうかの決定、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の症状もしくは効果が調節されたかどうかの決定、または、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ複製が変更された（好ましくは、ウイルス複製に有害な影響を及ぼしたか、防止したか、減少したか、阻害したか、または、抑止した）かどうかの決定）によって決定され得る。
【００５１】
本明細書中に記載されるように、ＢＶＤＶは、細胞培養モデルにおいて使用するための、当該分野で認められた代理のウイルスである（Ｓｔｕｙｖｅｒら，上掲；Ｗｈｉｔｂｙら，上掲）。従って、アッセイは、ウシ腎臓細胞（ＭＤＢＫ）およびウシ鼻甲介（ＢＴ）細胞のようなウシ細胞株を用いて、感染細胞の細胞溶解を引き起こす、ＮＡＤＬ株（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能）のようなＢＶＤＶの細胞傷害性株を用いて実施され得る。カスタノスペルミン単独、または、別の化合物、因子もしくは分子と組み合せたカスタノスペルミンが、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅの感染を処置するためまたはＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅの感染を阻害もしくは防止するために有用であり得るかどうかを決定するために実施され得る例示的なアッセイとしては、ウイルスプラーク形成アッセイ、細胞毒性アッセイ（例えば、Ｂｕｃｋｗｏｌｄら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４７：２２９３−９８（２００３）；Ｗｈｉｔｂｙら，上掲を参照のこと）、ウイルス放出アッセイ、細胞増殖アッセイ（例えば、非放射性ＭＴＳ／ＰＭＳアッセイもしくは非放射性ＭＴＴアッセイ、または、放射性チミジン取り込みアッセイ）、および、本明細書中に記載され、そして、当業者に公知でありかつ実施される他のアッセイが挙げられる。カスタノスペルミンが別の化合物と組み合せて分析されるときの、これらのアッセイからのデータ（例えば、細胞毒性アッセイから得られたデータ）は、本明細書中に記載されるようにして分析されて、それらの因子が相互作用して、相加効果を提供するのか、相乗効果を提供するのかを決定し得る。
【００５２】
本発明はまた、ウイルス感染（例えば、ＨＣＶ）を処置または防止するために使用される別の化合物と組み合せてカスタノスペルミンを含有する薬学的組成物に関する。本発明は、さらに、被験体に、１つの他の化合物と併用してカスタノスペルミンを投与することにより、ウイルス感染を処置または防止するための方法に関し、この方法において、各成分は、本明細書中に記載されるように、ウイルス感染を処置または防止するのに十分な用量で投与される。カスタノスペルミンと、このような化合物の組み合わせまたはカクテルは、好ましくは、本明細書中に記載される方法において使用される場合、薬学的組成物の一部である。カスタノスペルミンは、各化合物を連続して被験体に投与することによって、本明細書中に記載される別の化合物と併用して投与され得る、すなわち、カスタノスペルミンは、別の化合物を投与する前、別の化合物を投与した後に投与され得る；あるいは、カスタノスペルミンは、別の化合物と同時に投与され得る。本明細書中に記載される組み合わせの各化合物（分子、因子）の連続投与または同時の投与に関して、各化合物は、同じかまたは異なる処方物において、同じかまたは異なる経路によって投与され得る（これらは、本明細書中に記載され、そして、部分的には、化合物の特性に従って決定される）。
【００５３】
１つの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される処置方法において使用するための、本明細書中に記載されるようなカスタノスペルミン（またはその薬学的に受容可能な塩）、ならびに、薬学的に受容可能なキャリア、ビヒクル、賦形剤、任意の添加物（例えば、１以上の結合剤、着色剤、乾燥剤、安定剤、希釈剤、または保存薬）を含有する薬学的組成物を含む。同様に、付加的な治療薬（例えば、インターフェロン−αまたはリバビリン）は、薬学的に受容可能なキャリア、ビヒクルまたは賦形剤、および任意の添加物と組み合わされ得る。インターフェロン−αまたはリバビリンを含有する薬学的組成物は、被験体への投与のためにこれらの化合物を調製するために、当該分野において公知でありかつ実施される方法に従って調製され得る。
【００５４】
本明細書中に示されるように、カスタノスペルミン、および１以上の付加的な治療用化合物または分子は、これらの投与を必要とする被験体に投与するための薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤中に、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染（特に、ＨＣＶ感染）を処置または防止するために有効な量で含まれ得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載されるすべての適応症に対する活性化合物の用量は、レシピエントの体重１ｋｇあたり、１日につき約０．０１ｍｇ〜約３００ｍｇの範囲、好ましくは、レシピエントの体重１ｋｇあたり、１日につき約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲、または、より好ましくは、レシピエントの体重１ｋｇあたり、１日につき約０．５ｍｇ〜約２５ｍｇの範囲で投与される。局所投与される投薬量は、適切なキャリア中、約０．０１％ｗｔ／ｗｔ〜約３％ｗｔ／ｗｔの範囲であり得る。インターフェロン−αまたはリバビリンは、カスタノスペルミンと併用して投与される場合、当該分野で公知であり、当該分野において実施されている投薬レジメンに従って投与され得る（例えば、Ｍａｔｔｈｅｗｓら，上掲；Ｆｏｓｔｅｒ，Ｓｅｍｉｎ．Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．２４  補遺２：９７−１０４（２００４）；Ｃｒａｘｉら，Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．２３  補遺１：３５−４６（２００３）を参照のこと）か、または、投薬は、カスタノスペルミンと共に投与されるときに調節され得る。
【００５５】
活性成分は、好ましくは、約０．００１μＭ〜約３０μＭ、そして、好ましくは、約０．０１μＭ〜約１０μＭのピーク血漿濃度を達成するように投与される。これは、例えば、必要に応じて、生理食塩水または他の水性媒体中にあるカスタノスペルミン処方物の組成物を静脈内注射することによって達成され得る。別の実施形態において、カスタノスペルミンは、ボーラスとして投与される。カスタノスペルミンおよび本明細書中に記載される処置方法において使用される他の化合物は、経口投与されても、筋肉内投与されても、腹腔内投与されても、皮下投与されても、経皮投与されても、エアロゾルもしくは吸入を介して投与されても、直腸投与されても、膣投与されても、または、局所投与（口腔内（ｂｕｃｃａｌ）投与および舌下投与を含む）されてもよい。
【００５６】
薬学的組成物中の活性化合物の濃度は、その化合物の吸収、分布、不活性化、および排泄速度、ならびに、当業者に公知の他の要因に依存する。用量もまた、軽減されるべき状態の重篤度と共に変化する。特定の投薬レジメン（用量の投与頻度を含む）は、個々の被験体の必要性、および、組成物の投与を行なうかまたは指導する人物の専門的な判断に従って、経時的に調節され得る。用量のレベルおよびレジメンは、種々の要因（年齢、体重、食事、性別、全身的な健康状態、および病歴（被験体が、ＨＢＶまたはＨＩＶのような別のウイルスに同時に感染しているかどうかを含む）を含む）に依存する。従って、本明細書中に示される濃度範囲は、例示目的のみのものであり、本願組成物の範囲または実施を制限することは意図されない。活性成分は、一度に投与されても、変動する時間間隔で、多数回の細かい用量に分割されてもよい。
【００５７】
本明細書中に記載されるような薬学的使用のための組成物は、パーツの一つのキットの形態であり得る。このキットは、例えば、カスタノスペルミンを、単位投薬形態中の組成物の１つの成分として含み得、そしてまた、免疫機能を変更する因子（たとえば、インターフェロン−α）またはウイルス複製を変更する因子（例えば、リバビリン）の各々を、それぞれの単位投薬形態中に含み得る。キットは、使用説明書および他の関連の情報、ならびに、監督機関により要求される情報を含み得る。
【００５８】
経口用組成物は、一般に、不活性な希釈剤または食用のキャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入されても、錠剤中に圧縮されてもよい。経口の治療的投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤と共に組み込まれ得、そして、錠剤、トローチまたはカプセルの形状で使用され得る。薬学的に適合性の結合剤、および／または、アジュバント物質は、組成物の一部として含められ得る。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の成分または同様の性質の化合物のいずれかを含み得る：結合剤（例えば、微結晶性セルロース、トラガントガムまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたは乳糖）；分散剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはトウモロコシデンプン）；潤滑剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｒｅｓ）；滑沢剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；または、嬌味矯臭剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、または、オレンジフレーバー（ｏｒａｎｇｅ  ｆｌａｖｏｒｉｎｇ））。単位投薬形態がカプセルである場合、このカプセルは、上記の型の材料に加えて、脂肪油のような液体キャリアを含み得る。さらに、単位投薬形態は、物理的な投薬単位の形態を修正する種々の他の材料（例えば、糖コーティング、シェラック、または、腸溶性剤）を含み得る。一般的には、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照のこと。
【００５９】
活性化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体は、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤、チューインガムなどの成分として投与され得る。シロップは、活性化合物に加え、甘味剤としてスクロースを、そして、特定の保存薬、色素、および着色剤および嬌味矯臭剤を含み得る。
【００６０】
本明細書中に記載される薬学的組成物は、カスタノスペルミンに加えて、好ましくは、薬学的に受容可能なビヒクル、キャリア、希釈剤または賦形剤のうちの少なくとも１つ、および他の成分もしくは活性成分（例えば、他の抗ＨＢＶ薬）を含み、この他の成分もしくは活性成分としては、ウイルス複製を変更する因子、または、免疫機能もしくは応答を変更する因子、および／または、抗Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（抗ＨＢＶ）性である因子（本明細書中に詳細に記載される）が挙げられる。本発明の組成物は、カスタノスペルミンもしくはその薬学的に受容可能な塩のような、種々の活性成分、または、１以上の抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、もしくは、他の抗ウイルス化合物のカクテルもしくは組み合わせを有し得る。
【００６１】
組成物と共に使用するために適切な薬学的に受容可能なキャリアは、例えば、増粘剤、緩衝剤、溶剤、湿潤剤、保存薬、キレート剤、アジュバントなど、およびこれらの組み合わせを含み得る。治療用途の薬学的に受容可能なキャリアは、製薬の分野において周知であり、そして、本明細書、ならびに、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，第１８版，１９９０）およびＣＲＣ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ，Ｄｒｕｇ，ａｎｄ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｅｘｃｉｐｔｅｎｔｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ（Ｓ．Ｃ．Ｓｍｏｌｉｎｓｋｉ編，１９９２）に記載される。
【００６２】
非経口適用、皮内適用、皮下適用、または、局所適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤（例えば、注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または、他の合成溶剤）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝剤（例えば、酢酸、クエン酸またはリン酸、および張度調節のための因子（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース））。非経口用調製物は、ガラス製またはプラスチック製の、アンプル、使い捨て用シリンジ、または、複数用量用のバイアル中に封入され得る。静脈内投与される場合、好ましいキャリアは、生理学的食塩水またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）またはアジュバントである。例示的なアジュバントは、ミョウバン（水酸化アルミニウム，ＲＥＨＹＤＲＡＧＥＬ（登録商標））；リン酸アルミニウム；ビロゾーム（ｖｉｒｏｓｏｍｅ）、Ｌｉｐｉｄ  Ａ，Ｄｅｔｏｘ（Ｒｉｂｉ／Ｃｏｒｉｘａ）を含むか、または含まないリポソーム；ＭＦ５９；または、他の油および水のエマルジョン型アジュバント（例えば、ナノエマルジョン（例えば、米国特許第５，７１６，６３７号を参照のこと）およびサブミクロンエマルジョン（例えば、米国特許第５，９６１，９７０号を参照のこと））、ならびに、フロイントの完全アジュバントおよび不完全アジュバントである。好ましい実施形態において、薬学的組成物は無菌である。
【００６３】
特定の実施形態において、活性化合物は、身体からの迅速な排泄に対して化合物を保護するキャリアを用いて調製される（例えば、制御放出処方物、インプラントおよびマイクロ被包性（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ）送達系を含む）。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性生体適合性のポリマーが使用され得る。このような処方物の調製方法は、当業者に明らかである。例えば、当該分野で公知であるように、これらの物質のいくつかは、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ＣＡ）およびＧｉｌｆｏｒｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）から市販され得る。
【００６４】
リポソームの懸濁液もまた、薬学的に受容可能なキャリアであり得る。これらは、当業者に公知の方法に従って調製され得る（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；米国特許第６，３２０，０１７号；米国特許第５，５９５，７５６号）。例えば、リポソーム処方物は、無機溶媒中に適切な脂質（例えば、ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイル（ａｒａｃｈａｄｏｙｌ）ホスファチジルコリンおよびコレステロール）を溶解し、次いで、これを蒸発させ、容器の表面上に乾燥した脂質の薄膜を残すことによって調製され得る。活性化合物、または、その一リン酸誘導体、二リン酸誘導体および／もしくは三リン酸誘導体の水性溶液が、次いで、容器内に導入される。次いで、容器を手で旋回し、容器の側面から脂質物質を離し、そして、脂質凝集体を分散させ、それによって、リポソーム懸濁液を形成する。カスタノスペルミンのような親水性化合物は、おそらく、水性のリポソーム内部に取り込まれ得る。
【００６５】
本明細書中で言及した、全ての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許文献は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。以下の実施例は、本発明を例示することが意図され、本発明を限定することは意図されない。
【実施例】
【００６６】
（実施例１）
（カスタノスペルミン、インターフェロンα２ＢおよびリバビリンによるＢＶＤＶ誘発性細胞毒性からのＭＤＢＫ細胞の保護）
細胞増殖アッセイを、非放射性細胞増殖ＭＴＳ／ＰＭＳアッセイ（ＭＴＳ：３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）；ＰＭＳ：フェナジンメトサルフェート（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ．Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を用いて行った。ＭＤＢＫ細胞は、９６ウェルプレートに１ウェルあたり約２×１０４細胞の密度で播種した。感染および化合物の添加の前に、この培養物を、３〜２４時間インキュベートして、上記プレートに対する上記細胞の付着を可能にした。ＢＶＤＶのプラーク形成単位の適当な数を、望ましい感染多重度（０．１または０．０１）に達するまで各ウェルに添加した。上記細胞を、１％ウマ血清を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で適切な濃度に薄めたウイルスに１〜２時間曝露した。その後、そのウイルス接種物を除去し、上記細胞を、１％ウマ血清を含むリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。この試験化合物、カスタノスペルミン、リバビリンおよびインターフェロンαを、２％ウマ血清を含む細胞増殖培地で溶解させ、様々な濃度で上記細胞に加えた後、５％ＣＯ２存在下で、３〜４日間、３７℃でインキュベートした。感染させていない細胞および感染させた未処理の細胞（つまり、化合物処理していない細胞）を、付加的なコントロールとして用いた。３〜４日間のインキュベーションの後、混合ＭＴＳ／ＰＭＳの溶液を、最終濃度３３３μｇ／ｍｌ  ＭＴＳおよび２５μＭ  ＰＭＳになるように、培地中に１００μＬの細胞を含む各ウェルアッセイプレートに加えた。この９６ウェルプレートを、加湿５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃において１〜４時間インキュベートした後、分光光度計のプレートレーダーを使用して、４９０ｎｍでの吸光度で測定した。三連のウェルの各セットの平均吸光度を決定した。抗ウイルス活性を、細胞（感染させていない細胞）についての変換とウイルス（薬物処理していない細胞）コントロールについての変換との間での差に対するＭＴＳ変換として測定した。抗ウイルス活性に相関する上記試験化合物の各濃度の細胞変性効果（ＣＰＥ）の減少を、次のように計算した。ＣＰＥ減少％＝［（Ｄ−ＮＤ）／（ＮＩ−ＮＤ）］×１００（ここでＤ（薬物処理）は薬物処理した細胞の吸光度であり、ＮＤ（非薬物処理）は未処理の感染細胞の吸光度であり、ＮＩ（非感染）は、非感染細胞の吸光度である）。そのデータを表１に示す。
【００６７】
【表１】
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ＥＣ５０は、ＢＶＤＶ誘発性細胞毒性から５０％のうちの上記細胞を保護する薬物の濃度を示している（つまり５０％のＣＰＥ減少）。ＣＣ５０は、ＭＤＢＫ細胞のうちの５０％生存度に影響する濃度に等しい。これらの結果は、上記試験化合物の各々が、直接的あるいは間接的であり得る、抗ウイルス活性を有していることを示している。実施例２および３は、上記抗ウイルス効果が、実際には上記ウイルスに対する直接的な効果であることを開示している。
【００６８】
（実施例２）
（カスタノスペルミン、インターフェロンα２Ｂおよびリバビリンによる、ＭＤＢＫ細胞からのＢＶＤＶ放出のインビトロにおける抑制）
マディン−ダービーウシ腎臓細胞（ＭＤＢＫ）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ；ＡＴＣＣ  ＣＣＬ２２）細胞を、９６ウェルプレートに１ウェルあたり約２×１０４細胞の密度で、２％熱非働化ウマ血清（ＨＳ）含有増殖培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）；Ｇｉｂｃｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）中に播種した。感染および化合物の添加の前に、この細胞培養物を、３〜２４時間インキュベートして、上記組織培養プレートに対する上記細胞の付着を可能にした。１％ＨＳ含有滅菌ＰＢＳ中に希釈したＢＶＤＶ株ＮＡＤＬ（ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３４）のプラーク形成単位（ＰＦＵ）の適当な数を、望ましい感染多重度（ＭＯＩ）（約０．０１）に達するまで各ウェルに添加した。上記細胞を、３７℃、５％ＣＯ２にて１．５時間ウイルスに曝露させた後、ＰＢＳで洗浄した。そして、２％ＨＳ含有細胞増殖培地中に溶解させた上記試験化合物を、様々の濃度にて上記細胞に添加した。上記プレートを３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした（１サイクルのＢＶＤＶ複製）。その後、上記９６ウェルプレートを低速で遠心分離して、細胞をペレットにした。上清を連続的に希釈し、１２ウェルプレート中の新しい細胞単層に感染させるために用いた。その後、上記細胞単層を、（１）カスタノスペルミン（Ｐｈｙｔｅｘ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を含む５％ＨＳ；（２）リバビリン（Ｒｉｖａｖｉｒｉｎ，Ｓｉｇｍａ）を含む５％ＨＳ；（３）ＩＦＮ−α２ｂ（ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を含む５％ＨＳ；あるいは（４）５％ＨＳ単独（つまり、試験化合物を何も加えない）を含む、細胞増殖培地中に溶解した０．５％アガロースで覆った。上記処理細胞を、３〜５日間３７℃、５％ＣＯ２存在下でインキュベートし、ホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレットもしくはメチレンブルーで染色し、２回蒸留水で洗浄し、最後に、室温で風乾した。形成したウイルスプラークを手動で数えることにより定量化し、力価を決定した。そのデータを表２に示す。
【００６９】
【表２】
2008515816.tif 000005
ＥＣ５０は、未処理のコントロールと比較して感染細胞の培地中でウイルス放出のうちの５０％を抑制する化合物の濃度である。これらの結果は、実施例１で見出されたデータを支持しており、さらに上記試験化合物の各々が直接的な抗ウイルス効果を有していることを証明している。このことは、ＨＣＶもまた、カスタノスペルミン、インターフェロンおよびリバビリンにより直接的に抑制されることを示している。
【００７０】
（実施例３）
（プラーク抑制アッセイ）
上記ＢＶＤＶウイルスストックを、１〜５％ウマ血清（ＨＳ）含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に連続的に希釈した。ＭＤＢＫ細胞を、培養ディッシュ中でコンフルエントになるまで増殖させ、３７℃で様々な感染多重度（＜１〜＞０．００１）でＢＶＤＶに感染させた。１．５時間の吸着の後、その接着物を除去した。その細胞単層を、試験化合物（カスタノスペルミン、リバビリンあるいはＩＦＮ−α）を含むかまたは含まない５％ＨＳを含む、細胞増殖培地中に溶解した０．５％アガロースで覆った。上記ディッシュを３〜５日間３７℃にて５％ＣＯ２存在下でインキュベートした。上記ＭＤＢＫ細胞の単層を、ホルムアルデヒドで固定し、定法に従い、クリスタルバイオレットもしくはメチレンブルーで染色し、その後、２回蒸留水で洗浄した。洗浄に引き続き、上記プレートを室温で風乾した。上記ＭＤＢＫ細胞培養物中に形成したウイルスプラークを、手動で数えることにより定量化した。試験化合物の抑制活性を、プラークの減少割合（％）を以下のように計算することにより決定した。プラーク減少％＝（プラーク数（薬物処理感染細胞）÷プラーク数（コントロール（非化合物処理）感染細胞））×１００。そのデータを表３に示す。
【００７１】
【表３】
2008515816.tif 000006
ＥＣ５０は、未処理のコントロールと比較してプラーク形成単位のうちの５０％を抑制する化合物の濃度である。さらに、これらの結果は、確かに実施例２で示したように、上記試験化合物の各々がウイルス増殖に対して直接的な効果を有していることを証明している。
（実施例４）
（ＩＦＮ−α２ｂあるいはリバビリンとの併用によるカスタノスペルミンの相乗効果およびに細胞毒性）
カスタノスペルミンがインターフェロン−α２ｂあるいはリバビリンと相乗作用的に働く力価を決定するために、細胞変性アッセイを行った。二方向併用アッセイを、次に記すような細胞変性効果（ＣＰＥ）抑制アッセイにおける、平均バックグランドならびに色合いを補正したデータを用いて行った。二方向薬物併用は、ＭＯＩ  ０．０１でＢＶＤＶに感染させたＭＤＢＫ細胞に対して、一方の薬物を横系列に滴定し、もう片方の薬物を縦系列に滴定したチェッカーボード表を作成することにより実施した。上記同じアプローチを、上記薬物の細胞毒性に対する併用の影響を調べるために、非感染ＭＤＢＫ細胞で用いた。二方向併用の各々を２回実施した。ＥＣ５０は、ＢＶＤＶ誘発性細胞毒性（ＣＰＥ）のうちの５０％の保護を提供する化合物の濃度を示している。ＭａｃＳｙｎｅｇｙ（登録商標）ソフトウェアプログラム（Ｄｒ．Ｍａｒｋ  Ｐｒｉｃｈａｒｄ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｌａｂａｍａ、Ｔｕｓｃａｌｏｏｓａ、ＡＬから贈与）を用いて、あらゆる相乗効果を決定するために上記ＥＣ５０のデータを解析した（例えば、Ｏｕｚｏｕｎｏｖら上記；Ｂｕｃｋｗｏｌｄら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４７：２２９３、２００３を参照のこと）。
【００７２】
第２の抗ウイルス剤の用量添加から誘導されたある抗ウイルス剤のＥＣ５０値を、上記第２の抗ウイルス剤の濃度に対してプロットしてアイソボール（ｉｓｏｂｏｌｅ）（用量対）を作成し、この全てのアイソボールをアイソボログラム上にプロットすることで、相乗作用、拮抗作用、または相加性の存在を判定した。２つの試験化合物（すなわち、カスタノスペルミンおよびインターフェロン、もしくはカスタノスペルミンおよびリバビリン）の各々の単剤療法ＥＣ５０値をつなげることにより、相加性線をプロットした。上記単剤療法ＥＣ５０値をつなぐ線は、２剤化合物の理論的な相加性効果値を示している。上記相加性線の下方の併用療法のアイソボールは、相乗作用であることを示し、一方、上記相加性線の上方のアイソボールは、拮抗作用であることを示している。ＭＤＢＫ細胞に対する各化合物単独および併用の細胞毒性％（あるいは生存度％）も決定し、ＣＣ５０値を計算するために用いた。抗ウイルス剤のＣＣ５０は、未処理の細胞と比較した場合に、上記細胞のうちの５０％において細胞毒性を引き起こす用量である。
【００７３】
上記アイソボログラムと組み合わせて、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙＴＭＩＩソフトウェアもまた使用して、二重併用データについての相乗作用量の％あるいは拮抗作用量の％を得た。相乗作用的効果（正の％値により示されている）もしくは拮抗的効果（負の％値により示されている）が観察される領域および相当する薬物濃度を明らかにするために、実験的に定められた値から計算上の上記相加性相互作用を差し引いた。０％抑制における水平面は、相加性（相加性面）を示している。灰色のグラデーション明から暗への推移は、相乗作用の水準を示している。実験的な用量応答面について９５％信頼区間を使用して、データを統計的に評価した。
【００７４】
表４は、各実験で用いた各化合物についての濃度域を一覧にしている。
【００７５】
【表４】
2008515816.tif 000007
初めに、実施例１で実施されたように、ＭＤＢＫ細胞におけるＢＶＤＶ誘発性細胞変性効果の抑制に関する個々の化合物の効力（ＥＣ５０）を、各併用実験について決定した（表５を参照のこと）。個々の薬物効力における実験間での最小の変動性が、観察された。
【００７６】
【表５】
2008515816.tif 000008
【００７７】
（ＥＣ５０に対する用量効果）
カスタノスペルミンのＥＣ５０は、インターフェロン−α２ｂの濃度の上昇とともに用量依存的に減少することを示した（表６）。０ＩＵ／ｍＬから６０ＩＵ／ｍＬにインターフェロン−α２ｂの濃度を上げていったところ、カスタノスペルミンのＥＣ５０は、５２μＭから１μＭに減少し、２０ＩＵ／ｍＬのインターフェロン−α２ｂでは約５０分の１減少した（表６）。同様に、０μＭから１００μＭにカスタノスペルミンの濃度を上げていったところ、インターフェロン−α２ｂのＥＣ５０は、１６μＭから１μＭに減少し、１１μＭのインターフェロン−α２ｂでは約２分の１減少した。（表６）。
【００７８】
【表６】
2008515816.tif 000009
（二重併用の効力）
より大きい正の量％（相乗作用）は、相乗作用的効果を示す。２５μＭ／ｍｌ２％の値あるいは２５μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％未満の値は有意でない；２５μＭ／ｍｌ２％〜５０μＭ／ｍｌ２％の値あるいは２５μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％〜５０μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％の値は、微小だが有意であると考えられる。５０μＭ／ｍｌ２％〜１００μＭ／ｍｌ２％の値あるいは５０μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％〜１００μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％の値は、インビボにおいて有意な相乗作用的効果を示し得る、中程度の相乗作用を表す；１００μＭ／ｍｌ２％あるいは１００μＭ（ＩＵ）／ｍｌ（ウェル）２％よりも大きな値は、インビボにおいて有意な相乗作用的効果を示すらしい相乗作用を表す。
【００７９】
インターフェロンα２ｂと併用したカスタノスペルミンは、ＢＶＤＶに感染させたＭＤＢＫ細胞に対する効力において強い相乗作用を示し（表７）、試験した濃度のどの併用でも有意な拮抗的な効果がないことを実証した（＞−２５μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％の値；−２５μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％未満のどの値も、有意な拮抗的な効果である）。相乗作用のピークは、２５μＭ〜３３μＭのカスタノスペルミンの濃度および１０ＩＵ／ｍＬのインターフェロン−α２ｂの濃度に位置していた（図１を参照のこと）。アイソボログラムグラフを用いた併用データの解析は、強い相乗作用が見られることを確証させた；例えば、１０ＩＵ／ｍＬのインターフェロン−α２ｂでは、カスタノスペルミンのＥＣ５０は、２分の１より小さな減少を予想していたものの、７分の１より小さな程度にまで減少していた（図２を参照のこと）。
【００８０】
リバビリンと併用したカスタノスペルミンは、ＢＶＤＶに感染させたＭＤＢＫ細胞における効力において中程度の相乗作用を示した（表７）。相乗作用のピークは、１０μＭ〜５０μＭのカスタノスペルミンの濃度ならびに１μＭ〜６μＭのリバビリンの濃度に位置していた（図３を参照のこと）。到達した最大の相乗作用％は、２２μＭ２％〜３１μＭ２％であった（図３を参照のこと）。効力における拮抗的効果（−１４５μＭ２％）が、極めて高い上記化合物の濃度において確認された−例えば、３００μＭのカスタノスペルミンの濃度および３０μＭのリバビリンの濃度において、拮抗作用のピークが生じた。これは、インビボでは関連性は有りそうにない。到達した最大の拮抗作用割合は、およそ−６８μＭ２％だった。リバビリンとカスタノスペルミンとの併用から導かれたアイソボログラムグラフも、カスタノスペルミンとリバビリンとの間での相乗作用を示している；例えば、約２μＭのリバビリンでは、カスタノスペルミンのＥＣ５０は、２分の１より小さな減少を予想していたものの、２分の１まで〜３分の１にまで減少している（図４を参照のこと）。
【００８１】
リバビリンと併用したインターフェロンα２ｂは、ＢＶＤＶに感染させたＭＤＢＫ細胞に対する効力において中程度の相乗作用（６８μＭ（ＩＵ／ｍｌ）％）を示した（表７）。類似の相乗作用量が、２００３年にＢｕｃｋｗｏｌｄらにより文献として報告されていた。相乗作用のピークは、２ＩＵ／ｍＬ〜１０ＩＵ／ｍＬのインターフェロン−α２ｂ濃度ならびに０．７μＭ〜３．３μＭのリバビリン濃度に位置していた（データは示さず）。到達した最大の相乗作用割合は、２０％〜３０％であった。高い薬物の濃度において、効力における拮抗作用効果（−１０２（ＩＵ／ｍＬ）％）もまた確認され、５０ＩＵ／ｍＬ以上のインターフェロン−α２ｂ濃度および２０μＭ以上のリバビリンの濃度で拮抗作用のピークが生じた。到達した最大の拮抗作用割合は、およそ−６３μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％だった。リバビリンとインターフェロンα２ｂとの併用から導かれたアイソボログラムグラフも、インターフェロン−α２ｂとリバビリンとの間に相乗作用が存在することを示している。例えば、約１０ＩＵ／ｍＬのインターフェロン−α２ｂでは、リバビリンのＥＣ５０は、約２分の１の減少を予想していたものの、６分の１より小さな程度に至るまで減少している（データは示さず）。
【００８２】
【表７】
2008515816.tif 000010
（二重併用細胞毒性）
より大きい負の量％（拮抗剤）は、細胞毒性に対する影響が、より小さい併用であることを示す。−２５μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％未満の値は、有意な拮抗作用効果と考えられる（つまり、有意な細胞毒性はない）。
【００８３】
インターフェロン−α２ｂと併用したカスタノスペルミンは、非感染ＭＤＢＫ細胞における細胞毒性において中程度の拮抗的効果（−６３μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％）を示した。一方、相乗作用的効果（＞２５μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％）は観察されなかった（表８）。拮抗作用のが、５０μＭ〜１００μＭのカスタノスペルミン濃度ならびに０．４ＩＵ／ｍＬよりも大きいインターフェロン−α２ｂ濃度に位置していた（図５を参照のこと）。到達した最大の拮抗作用％は、−９％〜−１７％であった。
【００８４】
リバビリンと併用したカスタノスペルミンもまた、未感染ＭＤＢＫ細胞における細胞毒性において中程度の拮抗的効果（−４６μＭ２％）を示した。一方、相乗作用的効果（＞２５μＭ２％）は観察されなかった（表８）。拮抗作用の谷が、２０μＭより大きなカスタノスペルミン濃度ならびに約３μＭのリバビリン濃度に位置していた。到達した最大の拮抗作用％は、−６％〜−７％であった（図６を参照のこと）。
【００８５】
リバビリンと併用したインターフェロンα２ｂは、未感染ＭＤＢＫ細胞における細胞毒性において、平均−８３μＭ（ＩＵ／ｍＬ）％という中程度の拮抗的効果を示した。一方、有意な相乗作用的効果（＞２５μＭ２％）は観察されなかった（表８）。拮抗作用は、上記の２つの抗ウイルス剤の濃度範囲全体にわたって極めて均一であり、他の領域よりも有意に高い拮抗作用をする領域は存在しなかった（データは示さない）。到達した最大の拮抗作用％は、、−８％〜−１８％であった。
【００８６】
【表８】
2008515816.tif 000011
全体としては、カスタノスペルミンのインターフェロン−α２ｂとの併用は、強く相乗作用的であった（相乗作用量＞１００（ＩＵ／ｍＬ）μＭ％）。カスタノスペルミンのリバビリンとの併用は、より穏やかな相乗作用を示した（２５μＭ２％〜１００μＭ２％の間）。併用時に観察された強い拮抗量は、高い薬物濃度において生じた。これは、インビボにおいては明らかではなさそうである。この併用についての細胞毒性の量は、いずれも拮抗的であった。これは、この併用が、その細胞毒性に対して有意な影響を与えなかったことを示唆する。この細胞毒性における拮抗作用は、この併用が、各化合物の個々の細胞毒性を減少し得ることを示し得る。カスタノスペルミンのＥＣ５０における用量依存性の減少（５２分の１未満までの減少）が、漸増する濃度のインターフェロン−α２ｂを加えた際に観察された。ＥＣ５０におけるこの減少は、漸増する濃度のリバビリンを加えると、よりはっきりとした。この併用は、インターフェロンα２ｂの細胞毒性も、リバビリンの細胞毒性も、増加させなかった。これらのデータは、カスタノスペルミンのインターフェロン−α２ｂとの併用、および、カスタノスペルミンのリバビリンとの併用が、ＨＣＶ感染患者の処置に有益であり得ることを示唆する。
【００８７】
（実施例５）
（アマンタジンまたはＮＢ−ＤＮＪと併用した場合のカスタノスペルミンの相乗作用および細胞毒性）
カスタノスペルミンの、アマンタジンまたはＮＢ−ＤＮＪと相乗作用的に作用する能力を決定するために、細胞変性アッセイを行なった。以下に記載するように、細胞変性効果（ＣＰＥ）の阻害アッセイにおける平均バックグラウンドと色の補正を行なったデータを用いて、二方向併用アッセイを行なった。ＭＯＩ  ０．０５においてＢＶＤＶで感染させたＭＤＢＫ細胞について、一方の薬物を水平方向に滴定し、そして、もう一方の薬物を垂直方向に滴定した「チェッカーボード」を作製することにより、二方向薬物併用を達成した。感染させてないＭＤＢＫ細胞についても、同じアプローチを用いて、薬物の細胞毒性に対する併用の効果を観察した。二方向併用の各々を２回行なった。ＥＣ５０は、ＢＶＤＶ誘導性の細胞毒性（ＣＰＥ）の５０％の保護を提供する化合物の濃度を表す。このＥＣ５０のデータを、ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ（登録商標）ソフトウェアプログラム（Ｍａｒｋ  Ｐｒｉｃｈａｒｄ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｌａｂａｍａ，Ｔｕｓｃａｌｏｏｓａ，ＡＬ）から分与された）を用いて分析し、あらゆる相乗効果を決定した（例えば、Ｏｕｚｏｕｎｏｖら，上掲；Ｂｕｃｋｗｏｌｄら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４７：２２９３，２００３を参照のこと）。また、ネガティブコントロールとして、Ｍ−１９１４（ＢＶＤＶを阻害しないＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシドＨＣＶインヒビター）を用いても試験を行なった。
【００８８】
各薬物がＭＤＢＫ細胞におけるＢＶＤＶ誘導性の細胞変性効果を阻害する個々の効力（ＥＣ５０）を、各併用実験について決定した（表９を参照のこと）。
【００８９】
【表９】
2008515816.tif 000012
（二重併用効力研究）
カスタノスペルミンのアマンタジンとの併用は、ＭＤＢＫ細胞におけるＢＶＤＶの細胞変性効果の阻害において、中程度の相乗作用を示した（相乗作用量６０．７μＭ２％）。カスタノスペルミンのＮＢ−ＤＮＪまたはＭ−１９１４との併用は、ＭＤＢＫ細胞におけるＢＶＤＶの細胞変性効果の阻害において、有意な相乗作用を示さなかった（相乗作用量＜２５μＭ２％）。カスタノスペルミンとアマンタジンとの併用の間、カスタノスペルミンとＮＢ−ＤＮＪとの併用の間、または、カスタノスペルミンとＭ−１９１４との併用の間には、有意な拮抗作用は観察されなかった（相乗作用量＞−２５μＭ２％）（表１０）。
【００９０】
【表１０】
2008515816.tif 000013
（二重併用細胞毒性研究）
アマンタジン、Ｍ−１９１４、またはＮＢ−ＤＮＪと併用した場合のカスタノスペルミンの細胞毒性を、感染させていないＭＤＢＫ細胞において決定した。二重併用についての細胞毒性量は、カスタノスペルミンのアマンタジン、Ｍ−１９１４、またはＮＢ−ＤＮＪとの二重併用について相加的であった（相乗作用量＜２５μＭ２％）。ＮＢ−ＤＮＪとのカスタノスペルミンの併用については、有意な拮抗作用が観察されなかった（相乗作用量＞−２５μＭ２％）が、その一方で、アマンタジンとのカスタノスペルミンの併用（相乗作用量−４０．１μＭ２％）についても、カスタノスペルミン−Ｍ−１９１４（相乗作用量−２６．３μＭ２％）についても、中程度の拮抗作用が観察された。これは、アマンタジンまたはＭ−１９１４へのカスタノスペルミンの追加が、その予想される毒性を減少し得ることを示す。
【００９１】
【表１１】
2008515816.tif 000014
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または、慣用的に過ぎない実験を用いて、これらを確認し得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、それぞれ、感染多重度（ＭＯＩ）０．０１においてＢＶＤＶで感染させたＭＤＢＫ細胞に対する、インターフェロン−α２ｂ（ＩＦＮ−α）およびカスタノスペルミン（Ｃａｓｔ）の、三次元および二次元での相乗作用を示す。水平面（加法面（ａｄｄｉｔｉｖｉｔｙ  ｓｕｒｆａｃｅ））より上の正の％は、相乗効果が観察される領域と、その対応する薬物濃度を示す。薄い色から濃い色へと推移するグレーのグラデーションは、相乗作用のレベルを示す。
【図２】図２は、図１に示されるデータのアイソボログラムを示す。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、それぞれ、感染多重度（ＭＯＩ）０．０１においてＢＶＤＶで感染させたＭＤＢＫ細胞に対する、リバビリン（ＲＢＶ）およびカスタノスペルミン（Ｃａｓｔ）の、三次元および二次元での相乗作用を示す。水平面（加法面）より上の正の％は、相乗効果が観察される領域と、その対応する薬物濃度を示す。薄い色から濃い色へと推移するグレーのグラデーションは、相乗作用のレベルを示す。
【図４】図４は、図２に示されるデータのアイソボログラムを示す。
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、それぞれ、ＭＤＢＫ細胞を感染多重度（ＭＯＩ）０．０１においてＢＶＤＶで感染させ、次いで、インターフェロン−α２ｂ（ＩＦＮ−α）およびカスタノスペルミン（Ｃａｓｔ）に曝露させた、細胞変性アッセイの、三次元および二次元での結果を示す。水平面（加法面）より下の負の％は、細胞傷害性が増加されず、おそらくは消失さえした領域と、その対応する薬物濃度を示す。薄い色から濃い色へと推移するグレーのグラデーションは、拮抗作用（すなわち、影響を受けなかった細胞傷害性）のレベルを示す。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、それぞれ、ＭＤＢＫ細胞を感染多重度（ＭＯＩ）０．０１においてＢＶＤＶで感染させ、次いで、リバビリン（ＲＢＶ）およびカスタノスペルミン（Ｃａｓｔ）に曝露させた、細胞変性アッセイの、三次元および二次元での結果を示す。水平面（加法面）より下の負の％は、細胞傷害性が増加されず、おそらくは消失さえもした領域と、その対応する薬物濃度を示す。薄い色から濃い色へと推移するグレーのグラデーションは、拮抗作用（すなわち、影響を受けなかった細胞傷害性）のレベルを示す。
【図１】
2008515816.tif 000015
【図２】
2008515816.tif 000016
【図３】
2008515816.tif 000017
【図４】
2008515816.tif 000018
【図５】
2008515816.tif 000019
【図６】
2008515816.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月31日(2007.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の処置のための組成物であって、該組成物は、
（ａ）カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、
（ｂ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子と、
を含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、リバビリンである、組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、バロピシタビンである、組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅセリンプロテアーゼインヒビターである、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記セリンプロテアーゼインヒビターは、ＶＸ−９５０である、組成物。
【請求項６】
請求項１〜請求項５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、フラビウイルス属のメンバーである、組成物。
【請求項７】
請求項１〜請求項５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、ペスチウイルス属のメンバーである、組成物。
【請求項８】
請求項１〜請求項５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）である、組成物。
【請求項９】
請求項１〜請求項８のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記カスタノスペルミンと、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とは、別個の組成物として処方されている、組成物。
【請求項１０】
請求項１〜請求項８のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記カスタノスペルミンと、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とは、単一の組成物として処方されている、組成物。
【請求項１１】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の処置のための医薬として使用するための組成物であって、該組成物は、
（ａ）カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、
（ｂ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子と、
を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、リバビリンである、組成物。
【請求項１３】
請求項１１に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、バロピシタビンである、組成物。
【請求項１４】
請求項１１に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅセリンプロテアーゼインヒビターである、組成物。
【請求項１５】
請求項１１に記載の組成物であって、前記セリンプロテアーゼインヒビターは、ＶＸ−９５０である、組成物。
【請求項１６】
請求項１１〜請求項１５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、フラビウイルス属のメンバーである、組成物。
【請求項１７】
請求項１１〜請求項１５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、ペスチウイルス属のメンバーである、組成物。
【請求項１８】
請求項１１〜請求項１５のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）である、組成物。
【請求項１９】
請求項１１〜請求項１８のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記カスタノスペルミンと、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とは、別個の組成物として処方されている、組成物。
【請求項２０】
請求項１１〜請求項１８のうちのいずれか１項に記載の組成物であって、前記カスタノスペルミンと、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とは、単一の組成物として処方されている、組成物。
【請求項２１】
Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ感染の処置のための医薬の製造のための、カスタノスペルミンまたはその薬学的に受容可能な塩と、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子との、使用。
【請求項２２】
請求項２１に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、リバビリンである、使用。
【請求項２３】
請求項２１に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、バロピシタビンである、使用。
【請求項２４】
請求項２１に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅセリンプロテアーゼインヒビターである、使用。
【請求項２５】
請求項２１に記載の使用であって、前記セリンプロテアーゼインヒビターは、ＶＸ−９５０である、使用。
【請求項２６】
請求項２１〜請求項２５のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、フラビウイルス属のメンバーである、使用。
【請求項２７】
請求項２１〜請求項２５のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、ペスチウイルス属のメンバーである、使用。
【請求項２８】
請求項２１〜請求項２５のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）である、使用。
【請求項２９】
請求項２１〜請求項２８のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記カスタノスペルミンと、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とは、別個の使用として処方されている、使用。
【請求項３０】
請求項２１〜請求項２８のうちのいずれか１項に記載の使用であって、前記カスタノスペルミンと、前記Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ遺伝子産物を阻害する因子とは、単一の使用として処方されている、使用。
【国際調査報告】
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