(57)【要約】  本明細書では、抗体など、少なくとも１種の対象の分析対象物を検出及び／定量するための、免疫測定法などのアッセイ法で使用できる組成物を開示する。また、免疫アッセイなどのアッセイ法で使用できる対照／キャリブレーター組成物、及び対照／キャリブレーター組成物の調製方法、該組成物を用いる分析対象物の検出及び／又は定量方法、並びに該組成物を含むキットを開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）標識及び結合パートナーを含む標識化結合パートナー（該標識化結合パートナーは分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｂ）該結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物であって、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する組成物。
【請求項２】
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、
（ｃ）標識及び結合パートナーを含む標識化第２結合パートナー（該標識化第２結合パートナーは分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｄ）第１結合パートナー及び第２結合パートナーの両方に特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物であって、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する組成物。
【請求項３】
第１及び第２結合パートナーが実質的に等量で存在する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）標識及び分析対象物又は分析対象物類似体を含む標識化された分析対象物又は分析対象物類似体（該標識化された分析対象物又は分析対象物類似体は、第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する）、及び
（ｃ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物であって、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する組成物。
【請求項５】
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合する支持体、
（ｃ）標識及び分析対象物又は分析対象物類似体を含む標識された分析対象物又は分析対象物類似体（該標識化された分析対象物又は分析対象物類似体は、第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する）、及び
（ｄ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物であって、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する組成物。
【請求項６】
組成物の総重量に対して約３重量％以下の水分含有量を有する、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
組成物の総重量に対して約１重量％〜約３重量％の範囲の水分含有量を有する、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
凍結乾燥される、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
凍結乾燥される、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
凍結乾燥される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
支持体が、膜、ビーズ、粒子、電極、及び容器の表面から選択される、請求項２又は５に記載の組成物。
【請求項１２】
支持体が磁化性ビーズである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
支持体が、ニトロセルロース、ポリスチレン、ポリプロピレン、カーボン、カーボンブラック、ＥＶＡ、又はポリ塩化ビニルから選択される材料を含む、請求項２又は５に記載の組成物。
【請求項１４】
支持体が、結合対によって第１結合パートナーに結合されている、請求項２又は５に記載の組成物。
【請求項１５】
支持体が結合対の一方のメンバーに結合され、結合対の他方のメンバーが第１結合パートナーに結合されている、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
結合対が、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンからなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
第１結合パートナーが、支持体に共有結合されている、請求項２又は５に記載の組成物。
【請求項１８】
標識が、放射性同位元素、酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ、及び蛍光基から選択される、請求項１、２、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
標識が、電気化学発光基から選択される、請求項１、２、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
電気化学発光基が金属を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
金属がルテニウム又はオスミウムである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
電気化学発光基がトリス−ビピリジル−ルテニウム基である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記既知量の分析対象物又は前記分析対象物類似体が、いかなる結合パートナーにも実質的に結合されていない、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
標識化結合パートナーと陽性対照／キャリブレーター試薬との密接な物理的混合物を含む、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
物理的に接触した状態の少なくとも２つの隣接する領域を含み、その少なくとも１つの第１領域が標識化結合パートナーを含み、且つ少なくとも１つの第２領域が陽性対照／キャリブレーター試薬を含む、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
競合結合アッセイを実施するための対照／キャリブレーター組成物である、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項２７】
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナーを含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記標識化結合パートナー、及び
（ｉｉ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む対照／キャリブレーター試薬、
を含む、少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を標識化結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法。
【請求項２８】
（ｆ）（ｉ）試料の成功的測定を確認すること、及び
（ｉｉ）試験反応混合物から発生するシグナルを試験分析対象物の濃度に変換すること、から選択される少なくとも１つのステップを実施することによって（ｅ）から得られる測定シグナルを評価することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、及び
（ｉｉｉ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナー、
を含む組成物と混合することによって試験混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記第１結合パートナー、
（ｉｉ）前記支持体
（ｉｉｉ）前記標識化第２結合パートナー、及び
（ｉｖ）第１結合パートナー及び第２結合パートナーの両方に特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、標識化結合パートナーに分析対象物を結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法。
【請求項３０】
（ｆ）（ｉ）試料の成功的測定を確認すること、及び
（ｉｉ）試験反応混合物から発生するシグナルを試験分析対象物の濃度に変換すること、
から選択される少なくとも１つのステップを実施することによって（ｅ）から得られた測定シグナルを評価することをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
方法が、サンドイッチ結合アッセイ法である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、
を含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記結合パートナー、
（ｉｉ）前記標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、及び
（ｉｉｉ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を前記第１結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法。
【請求項３３】
（ｃ）の少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物が、（ｂ）の試験反応混合物を少なくとも１種の乾燥組成物と混合することによって形成される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
（ｆ）（ｉ）試料の成功的測定を確認すること、及び
（ｉｉ）試験反応混合物から発生するシグナルを試験分析対象物の濃度に変換すること、
から選択される少なくとも１つのステップを実施することによって（ｅ）から得られた測定シグナルを評価することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、
（ｉｉｉ）第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、
を含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記第１結合パートナー、
（ｉｉ）前記支持体、
（ｉｉｉ）前記標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、及び
（ｉｖ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を前記第１結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法。
【請求項３６】
（ｃ）の少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物が、（ｂ）の試験反応混合物を少なくとも１種の乾燥組成物と混合することによって形成される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
（ｆ）（ｉ）試料の成功的測定を確認すること、及び
（ｉｉ）試験反応混合物から発生するシグナルを試験分析対象物の濃度に変換すること、
から選択される少なくとも１つのステップを実施することによって（ｅ）から得られる測定シグナルを評価することをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
（ｂ）の組成物が乾燥組成物である、請求項２７、２８、又は３２から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
試料が生物学的体液を含む、請求項２７から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
生物学的流体が、血液、血漿、血清、喀痰、及び唾液から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
試料が、自然に発生する体液である、請求項２７から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
試料が、大気中から濾過された分析対象物を含みうる、請求項２７から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
試料が、さらに水性緩衝液を含む、請求項２７から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
競合結合アッセイ法である、請求項２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
（ｄ）でインキュベートすることが、約１分〜約６０分の範囲の時間で行われる、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
（ｄ）でインキュベートすることが、約１分〜約１５分の範囲の時間で行われる、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
（ｄ）でインキュベートすることが、約０℃を超え約５０℃までの範囲の温度で実施される、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
（ｄ）でインキュベートすることが、ほぼ室温で実施される、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
（ｄ）でインキュベートすることが、約３７℃で実施される、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
（ｄ）でインキュベートすることが、ヒーターを用いて実施される、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
（ｄ）でインキュベートすることが、揺動しながら実施される、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
第２結合パートナーが、電気化学発光基で標識され、且つシグナルが、光検出器によって（ｅ）で測定される、請求項２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
シグナルが、強度、振幅、及び持続時間の中の少なくとも１つである、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
電気化学発光測定法であって、（ｅ）での測定に先立って、インキュベートされた反応混合物にトリプロピルアミンを含むアッセイ緩衝液を添加することをさらに含む、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物のための少なくとも１種の乾燥組成物を再水和する液体が、試料である、請求項２７、２９、３０、３５、又は３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
反応混合物から発生したシグナルレベルを比較して、同混合物中の分析対象物濃度が、高用量フック効果が発生するのに十分な大きさであるか否かを判断するステップをさらに含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
（ａ）結合アッセイに使用される試薬及び陽性対照／キャリブレーター試薬を含む少なくとも１種の乾燥組成物、
（ｂ）各乾燥組成物を配置した少なくとも１つの容器、及び
（ｃ）較正／対照用情報、又は較正／対照用情報を得るための手引きを含むキット。
【請求項５８】
結合アッセイに使用される試薬が、標識及び結合パートナーを含む標識化結合パートナーを含み、該標識化結合パートナーが分析対象物に特異的に結合できる、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
少なくとも１種の乾燥組成物が、それぞれ第１及び第２結合パートナーを含む少なくとも第１及び第２乾燥組成物、を含む、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体をさらに含み、該第１結合パートナーが標識を含まない、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
標識化結合パートナー、支持体、及び
（ａ）分析対象物に特異的に結合せず、
（ｂ）支持体に結合し、且つ
（ｃ）第１結合パートナーと同様の非特異的結合特性を有するように構成された第３結合パートナー、
を含む少なくとも１種の乾燥組成物を含む少なくとも１つの陰性対照／キャリブレーター組成物をさらに含む、請求項６０に記載のキット。
【請求項６２】
異なる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を有する乾燥組成物（ａ）の数がｐ（ｐ≧１）であり、
（ｅ）分析対象物が、ｃ１からｃ２（ｃ１＜ｃ２）の範囲の測定可能な濃度を有し、
（ｆ）陽性対照／キャリブレーター試薬なしで結合アッセイに使用される試薬を含む第２乾燥組成物をさらに含み、
分析対象物を欠く試薬で再水和された場合に、ｐ個の既知量が、ｄ１、ｄ２、．．．、ｄｐ（ｄ１＜ｄ２＜、．．．＜ｄｐ）の較正濃度を作り出し、
（ｉ）ｄ１／ｃ１、（ｉｉ）ｄｍ＋１／ｄｍ（１≦ｍ≦ｐ−１）、及び（ｉｉｉ）ｃ２／ｄｐの中の最大値が約α以下であり、
ｐ＞１ならα＝２（ｃ２／（（ｐ−１）×ｃ１））、及びｐ＝１ならα＝２（ｃ２／ｃ１）である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６３】
α＝２（ｃ２／（ｐ×ｃ１））である、請求項６２に記載のキット。
【請求項６４】
α＝２（ｃ２／（ｐ＋１）ｃ１））である、請求項６２に記載のキット。
【請求項６５】
ｐ＝１である、請求項６２から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６６】
ｐ＝２である、請求項６２から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６７】
ｐ＝３である、請求項６２から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６８】
ｐ＝４である、請求項６２から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６９】
乾燥組成物が、請求項１、２、４、又は５のいずれか一項に記載の組成物である、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項７０】
（ａ）異なる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を有する陽性対照／キャリブレーターの数がｐ（ｐ≧３）であり、
（ｂ）ｐ個の既知量が、分析対象物を欠いた試薬で再水和された場合に、ｄ１、ｄ２、．．．、ｄｐ（ｄ１＜ｄ２＜、．．．＜ｄｐ）の較正濃度を作り出し、
（ｃ）（ｉ）１≦ｍ≦ｐ−２の場合（ｄｍｄｍ＋２）／（ｄｍ＋１ｄｍ＋１）、及び（ｉｉ）１≦ｍ≦ｐ−２の場合（ｄｍ＋１ｄｍ＋１）／（ｄｍｄｍ＋２）の中の最大値が約γ以下であり、且つ
（ｄ）γ＝１００である、請求項５７に記載のキット。
【請求項７１】
γ＝１０である、請求項７０に記載のキット。
【請求項７２】
γ＝２である、請求項７０に記載のキット。
【請求項７３】
（ａ）分析対象物に特異的に結合せず、
（ｂ）支持体に結合し、且つ
（ｃ）第１結合パートナーと同様の非特異的結合特性を有するように構成された第３結合パートナー、
を含み、
第１結合パートナーの代わりに第３結合パートナーを使用する反応が、陰性対照／キャリブレーターとして機能する、請求項７０に記載のキット。
【請求項７４】
前記少なくとも１つの容器が、マルチウェルプレートの少なくとも１つのウェルである、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項７５】
前記少なくとも１つの容器が、直径が約９ｍｍ以下で且つ高さが約４０ｍｍ以下の管である、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項７６】
前記乾燥組成物を、２５℃、相対湿度１００％で少なくとも１カ月間乾燥状態に保持する水分遮断物をさらに含む、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項７７】
前記乾燥組成物を、４５℃、相対湿度１００％で少なくとも３カ月間乾燥状態に保持する水分遮断物をさらに含む、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項７８】
２つの水分遮断物及び乾燥剤をさらに含み、該乾燥剤が２つの水分遮断物の間に配置される、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項７９】
湿度インディケーターをさらに含み、該湿度インディケーターが前記２つの水分遮断物の間に配置され、且つ前記湿度インディケーターが、前記２つの水分遮断物の外側から目視可能である、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項８０】
マルチウェルプレートをさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項８１】
直径が約９ｍｍ以下で、且つ高さが約４０ｍｍ以下である管をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項８２】
前記標識がルテニウムを含む、請求項８１に記載のキット。
【請求項８３】
乾燥組成物を、２５℃、相対湿度１００％で少なくとも１カ月間乾燥状態に保持する水分遮断物をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項８４】
乾燥組成物が、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する、請求項８３に記載のキット。
【請求項８５】
乾燥組成物を、４５℃、相対湿度１００％で少なくとも１カ月間乾燥状態に保持する水分遮断物をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項８６】
乾燥組成物が、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する、請求項８５に記載のキット。
【請求項８７】
前記標識が、電気化学発光部分である、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項８８】
電気化学発光部分が、トリス−ビピリジル−ルテニウム基を含む、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項８９】
前記乾燥組成物が、請求項２又は５に記載の組成物であり、且つ前記支持体が磁化性ビーズである、請求項５７から６４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項９０】
サンドイッチ結合アッセイを実施するための説明書をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項９１】
電気化学発光アッセイを実施するための説明書をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項９２】
トリプロピルアミンをさらに含む、請求項９１に記載のキット。
【請求項９３】
競合結合アッセイを実施するための説明書をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項９４】
（ａ）標識化結合パートナーを含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された溶液を凍結すること、
（ｃ）陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を凍結混合物に、第２溶液を凍結するのに十分な温度で添加すること、及び
（ｄ）第１及び第２溶液を乾燥することを含む、組成物の調製方法。
【請求項９５】
第１溶液が、第２結合パートナー、及び、任意選択で、該第２結合パートナーと事前結合できる又はできない支持体をさらに含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
組成物が、サンドイッチ結合アッセイを実施するための対照／キャリブレーター組成物である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
（ａ）アッセイ緩衝液、及び分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナーを含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された混合物を凍結すること、
（ｃ）第２溶液を凍結混合物に、第２溶液を凍結するのに十分な温度で添加すること（前記第２溶液は、陽性対照／キャリブレーター試薬、及び結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体を含む）、及び
（ｄ）第１及び第２溶液を乾燥すること、
を含む、組成物の調製方法。
【請求項９８】
前記第１溶液が、分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合する支持体をさらに含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
第２溶液が（ｃ）で凍結する温度が、十分に低く、結合パートナーと少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター試薬との間の反応又は結合を防止する、請求項９４、９５、９７、又は９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
（ａ）標識化結合パートナーを含む第１溶液を乾燥すること、
（ｂ）陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を乾燥すること、及び
（ｃ）乾燥した第１及び第２溶液を混合すること、
を含む、組成物の調製方法。
【請求項１０１】
第１溶液が、第２結合パートナー、及び任意選択で、該第２結合パートナーと事前結合できる又はできない支持体をさらに含む、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
組成物が、サンドイッチ結合アッセイを実施するための対照／キャリブレーター組成物である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を乾燥すること、
（ｂ）（ｉ）陽性対照／キャリブレーター試薬、及び（ｉｉ）結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体を含む第２溶液を乾燥すること、及び
（ｃ）乾燥した第１及び第２溶液を混合すること、
を含む、組成物の調製方法。
【請求項１０４】
前記第１溶液が、分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合する支持体をさらに含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
第１溶液が、マルチウェルプレートの少なくとも１つのウェル中で調製される、請求項９４から９８まで、又は１００から１０４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
第１溶液が、直径が約９ｍｍ以下で且つ高さが約４０ｍｍ以下である管中で調製される、請求項９４から９８まで、又は１００から１０４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記支持体及び前記第１結合パートナーが、一緒に結合されている、請求項９５、９８、１０１、又は１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
乾燥することが、凍結乾燥によって実施される、請求項９４、９５、９８、１００、１０１、１０３、又は１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
乾燥するに先立って、混合された第１及び第２溶液が、凍結乾燥緩衝液を含む、請求項９４、９５、９８、１００、１０１、１０３、又は１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
支持体が、標識化第２結合パートナーの、標識化分析対象物の、又は分析対象物の標識化類似体の支持体に対する非特異的結合を遮断又は低減するように処理される、請求項９５、９８、１０１、又は１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
少なくとも１種の遮断剤が、ヤギ血清、ウシ血清アルブミン、ビオチン、及び乳タンパク質から選択される、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
請求項９４、９５、９７、９８、１００、１０１、１０３、又は１０４のいずれか一項に記載の方法によって調製される組成物。
【請求項１１３】
（ａ）少なくとも１種の標識化結合パートナー（ここで、各標識化結合パートナーは標識及び結合パートナーを含み、前記標識化結合パートナーは少なくとも１種の分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｂ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の少なくとも１種の分析対象物又はその類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物であって、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する組成物。
【請求項１１４】
陽性対照／キャリブレーター試薬が、２種以上の陽性対照／キャリブレーター試薬を含み、各陽性対照／キャリブレーター試薬が、既知量の少なくとも１種の分析対象物又はその類似体を含む、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
（ａ）少なくとも１種の分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）少なくとも１種の分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、
（ｃ）標識及び結合パートナーを含む標識化第２結合パートナー（ここで、前記標識化第２結合パートナーは、少なくとも１種の分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｄ）第１結合パートナー及び第２結合パートナーの両方に特異的に結合できる既知量の少なくとも１種の分析対象物又はその類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物であって、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する組成物。
【請求項１１６】
（ａ）少なくとも１種の乾燥組成物（各乾燥組成物は、結合アッセイに使用される試薬及び陽性対照／キャリブレーター試薬を含む）、
（ｂ）少なくとも１種の乾燥組成物が配置されている少なくとも１つの容器、及び
（ｃ）較正／対照用情報、又は較正／対照用情報を得るための手引きを含むキット。
【請求項１１７】
少なくとも１つの乾燥組成物が、２種以上の乾燥組成物を含み、且つ少なくとも１つの容器が２つ以上の容器を含み、各容器が２種以上の乾燥組成物中の１種を含む、請求項１１６に記載のキット。
【請求項１１８】
結合アッセイに使用される試薬が、標識及び結合パートナーを含む標識化結合パートナーを含み、ここで、該標識化結合パートナーが、少なくとも１種の分析対象物に特異的に結合することが可能であり、且つ少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬が、２つ以上の陽性対照／キャリブレーター試薬を含み、各試薬が、既知量の少なくとも１種の分析対象物の１つを含む、請求項１１６に記載のキット。
【請求項１１９】
（ａ）少なくとも１種の分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、少なくとも１種の組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること［各組成物は、（ｉ）少なくとも１種の分析対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナー、を含む］、
（ｃ）少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること［各乾燥組成物は、
（ｉ）前記標識化結合パートナー、及び
（ｉｉ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の少なくとも１種の分析対象物又はその類似体の１つを含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む］、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、少なくとも１種の分析対象物の１つを標識化結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、少なくとも１種の分析対象物の検出及び／又は定量方法。
【請求項１２０】
（ｃ）の少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物が、（ｂ）の試験反応混合物を少なくとも１種の乾燥組成物と混合することによって形成される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
（ａ）少なくとも１種の分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を少なくとも１種の組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること［各組成物は、
（ｉ）少なくとも１種の分析対象物中の１種に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）１種の分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、及び
（ｉｉｉ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナー、を含む］、
（ｃ）（ｉ）前記第１結合パートナー、
（ｉｉ）前記支持体、
（ｉｉｉ）前記標識化第２結合パートナー、及び
（ｉｖ）第１結合パートナー及び第２結合パートナーの両方に特異的に結合できる既知量の１種の分析対象物又はその類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬を含む少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、及び
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、１種の分析対象物を標識化結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、少なくとも１種の分析対象物の検出及び／又は定量方法。
【請求項１２２】
（ａ）標識及び結合パートナーを含む標識化結合パートナー（ここで、前記標識化結合パートナーは、分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｂ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための少なくとも１種の乾燥組成物を含むキットであって、
該組成物が組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有し、
少なくとも１種の乾燥組成物のそれぞれが、容器内に配置されているキット。
【請求項１２３】
標識化結合パートナー及び陽性対照／キャリブレーター試薬が、それらが互いに接触できる能力があるように管内に配置される、請求項１２２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００４年１１月１７日に出願の米国特許仮出願第６０／６２８，１２２号に基づく優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、試料中の抗原又はハプテンなどの少なくとも１種の分析対象物を検出するためのアッセイを含む、アッセイ用組成物、方法、及びキットに関する。分析対象物（群）は、例えば生物学的試料の状態で準備できる。
【背景技術】
【０００３】
医療、環境、生体防御、及び食品安全性の社会で、免疫学的診断試験は、社会に対して有害な疾患及び汚染物質の簡単な評価及び迅速な同定を提供することができる。長引く疾病及び／又は風土病の発生を防止するためには、臨床標本、土壌若しくは水試料、又は食品中の抗原などの分析対象物を検出するための定性的、半定量的、及び定量的評価を提供する簡単な確認アッセイ法が必要である。さらに、近年、全国的テロ行為の脅威が現実化していることに鑑み、多くの診断試験は、常設的実験室以外のサテライト現場で実施されるように設計されている。
【０００４】
免疫アッセイ法に基づく従来の検出システムは、抗体−抗原相互作用に依拠し、検出可能な事象を作り出すために、逐次的方式で複数のアッセイ用成分を添加することを必要とする。陽性の確認については一般に信頼できるが、これらのアッセイ法及び試薬調製方法は、複雑で、時間がかかる場合がある。現行法に伴う１つの欠点は、測定を実施するのに、複数の試薬を逐次的に添加及び移動することが必須であることである。検出アッセイのための各添加ステップは、分析者が実行する際の困難度を増大させる可能性がある。結果として、アッセイを間違いやすい傾向があり、しばしばより高い誤差の余地が生じる可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、専門的でない又は本職でない職員が実施できる、信頼性があり且つ使用するのが容易な診断的アッセイのための新規な方法及び試薬を開発する必要性が相変わらず存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書では、例えばアッセイで使用できる乾燥組成物を開示する。乾燥組成物は、該乾燥組成物が単一の試薬として機能できるように、分析対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナー及び／又は陽性対照／キャリブレーター試薬などの２種以上の試薬又はアッセイ用成分を含むことができる。これらの試薬を乾燥組成物で供給することによって、分析者は、分析を実施するのに一般的には必須である複数の試薬の逐次的添加及び移動を潜在的に回避することによって、アッセイを実施する際に行われるステップ数を最小にできる。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）標識及び結合パートナーを含む標識化結合パートナー（ここで、前記標識化結合パートナーは分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｂ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物を提供し、ここで、該組成物は、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する。
【０００８】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、
（ｃ）標識及び結合パートナーを含む標識化第２結合パートナー（ここで、前記標識化第２結合パートナーは、同じ分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｄ）第１結合パートナー及び第２結合パートナーの両方に特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物を提供し、ここで、該組成物は、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する。
【０００９】
各種の実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）標識及び分析対象物又は分析対象物類似体を含む、標識化された分析対象物又は標識化された分析対象物類似体（ここで、前記標識化された分析対象物又は標識化された分析対象物類似体は、第１結合パートナーに対する結合に関して分析対象物と競合する）、及び
（ｃ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物を提供し、ここで、該組成物は、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合する支持体、
（ｃ）標識及び分析対象物又は分析対象物類似体を含む、標識化された分析対象物又は標識化された分析対象物類似体（ここで、前記標識化された分析対象物又は分析対象物類似体は、第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する）、及び
（ｄ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための乾燥組成物を提供し、ここで、該組成物は、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有する。
【００１１】
各種の実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、分析対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナーを含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記標識化結合パートナー、及び
（ｉｉ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む対照／コントロール試薬、
を含む少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって、少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を標識化結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法を提供する。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、及び
（ｉｉｉ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナー、
を含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記標識化結合パートナー、
（ｉｉ）前記支持体、
（ｉｉｉ）前記標識化第２結合パートナー、及び
（ｉｖ）第１結合パートナー及び第２結合パートナーの両方に特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を標識化結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法を提供する。
【００１３】
各種の実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、
を含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記第１結合パートナー、
（ｉｉ）前記標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、及び
（ｉｉｉ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を前記第１結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法を提供する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｉｉ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、
（ｉｉｉ）第１結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、
を含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）（ｉ）前記第１結合パートナー、
（ｉｉ）前記支持体、
（ｉｉｉ）前記標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、及び
（ｉｖ）第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む少なくとも１種の乾燥組成物を再水和することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を前記第１結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、分析対象物の検出及び／又は定量方法を提供する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）結合アッセイに使用される試薬及び陽性対照／キャリブレーター試薬を含む乾燥組成物、
（ｂ）該乾燥組成物が配置された少なくとも１つの容器、及び
（ｃ）較正／対照用情報、又は較正／対照用情報を得るための手引き、
を含むキットを提供する。
【００１６】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）標識化結合パートナーを含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された溶液を凍結すること、
（ｃ）該凍結混合物に、陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を、第２溶液を凍結するのに十分な温度で添加すること、及び
（ｄ）第１及び第２溶液を乾燥すること、
を含む、組成物の調製方法を提供する。
【００１７】
各種の実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された混合物を凍結すること、
（ｃ）該凍結混合物に第２溶液を、第２溶液を凍結するのに十分な温度で添加すること（前記第２溶液は、陽性対照／キャリブレーター試薬及び結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体を含む）、並びに
（ｄ）第１及び第２溶液を乾燥すること、
を含む、組成物の調製方法を提供する。
【００１８】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）標識化結合パートナーを含む第１溶液を乾燥すること、
（ｂ）陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を乾燥すること、及び
（ｃ）乾燥した第１及び第２溶液を混合すること、
を含む、組成物の調製方法を提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を乾燥すること、
（ｂ）（ｉ）陽性対照／キャリブレーター試薬及び（ｉｉ）結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、
を含む第２溶液を乾燥すること、並びに
（ｃ）乾燥した第１及び第２溶液を混合すること、
を含む、組成物の調製方法を提供する。
【００２０】
前述の一般的説明及び以下の詳細な説明は、両方とも単に例示的且つ説明的なものであり、特許請求される本発明を限定するものではないことを理解されたい。
【００２１】
本開示に組み込まれ且つその一部を構成する付随の図面は、本発明の実施形態を図解する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本明細書では、免疫測定法などのアッセイ法で使用するための組成物、分析対象物を検出及び／又は定量する方法におけるこれら組成物の使用、並びにこれらの組成物を組み込んだキットを開示する。乾燥組成物は、該乾燥組成物が単一の試薬として機能できるように、分析対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナー及び／又は陽性対照／キャリブレーター試薬などの２種以上の試薬又はアッセイ用成分を含むことができる。これらの試薬を乾燥組成物の状態で供給することによって、分析者は、アッセイを実施するのに一般的には必須である複数試薬の逐次的な添加及び移動を潜在的に回避することによって、アッセイを実施する際に行われるステップ数を最小化できる。
【００２３】
その開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００３／０１０８９７３号には、使用者が実施するステップ数を最小にする免疫測定法が開示されている。‘９７３号公報には、（ａ）固定化された捕捉用抗体及び（ｂ）標識化レポーター抗体を含む試薬が記載されており、ここで、固定化された捕捉用抗体及び標識化レポーター抗体は、同一の分析対象物に特異的に結合する。この公報には、また、固定化された捕捉用抗体の存在下に標識化レポーター抗体を含む液体を乾燥することによる試薬の調製が記載されている。アッセイは、抗原試料を用いて試薬を再構成することによって実施できる。
【００２４】
アッセイ用試薬を単一の試薬として提供するとアッセイ方法を単純化できるが、周囲の条件又は不純物から発生するような多くの変数が、アッセイの結果にやはり影響を及ぼす可能性がある。これらの因子を補償するため、アッセイに対照を組み込んで、使用者が結果を評価することを可能にするのが常套手段である。例えば、特定の結果が予想される場合、陽性対照は、そのアッセイがその意図した目的に向かって機能することを示すのに役立つ可能性がある。より具体的な例で、そのアッセイが、例えばある特定の抗原の存在を判断するために使用される場合、供試試料は、既知量の該抗原を含むことができる。この既知量は、試料を評価するための基準として機能することができる。抗原の不在は、使用者に該アッセイが予想される結果を生み出したことを知らせる。さらに、陽性対照を使用して、アッセイの結果を定量的に評価できる。しかし、本発明者らの知る限り、陽性対照／キャリブレーターは、これまで湿式試薬として添加されてきた。
【００２５】
さらに、利用可能な方法は、競合結合アッセイのための、乾燥され事前混合された試薬の調製を可能にしない。このようなアッセイは、一般に、少なくとも１種の結合パートナー（例えば、対象の分析対象物に結合する抗体）、及びやはり該結合パートナーに結合する競合物質（例えば、対象の分析対象物の類似体又は既知量の分析対象物自体）を含む。これらの成分を事前混合した後に試料を添加すれば、競合物質は、結合パートナーに結合できる。液体試料を添加して乾燥試薬を再構成する場合に、反応が平衡に達する速度が事前結合によって乱れる。
【００２６】
定義
本発明をより明瞭に理解するため、特定の用語を次のように定義する。
【００２７】
用語「乾燥組成物」は、本明細書中で使用する場合、該組成物が、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有することを意味する。乾燥組成物の例には、組成物の総重量に対して約３重量％以下の水分含有量を有する組成物、組成物の総重量に対して約１重量％以下の水分含有量を有する組成物、及び組成物の総重量に対して約１重量％〜約３重量％の範囲の水分含有量を有する組成物が含まれる。
【００２８】
用語「結合パートナー」は、本明細書中で使用する場合、対象の分析対象物に特異的に結合できる物質を意味する。一般に、特異的結合は、比較的高い親和性、及び比較的低いものから中程度までの収容能力で特徴付けられる。非特異的結合は、通常、中程度から高い収容能力を伴う低い親和性を有する。典型的には、親和定数Ｋａが約１０６Ｍ−１より大きい、又は約１０８Ｍ−１より大きい場合に、結合は特異的と考えられる。親和定数が大きいほど、より大きな親和性を、従って典型的にはより大きな特異性を示す。例えば、抗体は、典型的には、１０６Ｍ−１〜１０９Ｍ−１以上の範囲の親和定数で抗原に結合する。
【００２９】
結合パートナーの例には、相補的核酸配列（例えば、互いにハイブリッドを形成する２つのＤＮＡ配列、互いにハイブリッドを形成する２つのＲＮＡ配列、互いにハイブリッドを形成するＤＮＡとＲＮＡの配列）、抗体と抗原、受容体とリガンド（例えば、ＴＮＦとＴＮＦｒ−１、ＣＤ１４２とＶＩＩａ因子、Ｂ７−２とＣＤ２８、ＨＩＶ−１とＣＤ４、ＡＴＲ／ＴＥＭ８、又はＣＭＧと炭疽菌毒素の保護抗原部分）、酵素と基質、又は分子と結合タンパク質（例えば、ビタミンＢ１２と内因子、葉酸と葉酸結合タンパク質）が含まれる。
【００３０】
結合パートナーのさらなる例には、抗体が含まれる。用語「抗体」は、本明細書中で使用する場合、免疫グロブリン又はその部分を意味し、起源、産生方法、又はその他の特性に関係なく、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。該用語には、例えば、ポリクロナール、モノクロナール、単一特異性、多特異性、ヒト化、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異、及びＣＤＲグラフト抗体、並びに融合タンパク質が含まれる。抗体の部分としては、抗原に結合できる任意のフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、Ｆｄ、ＶＨ、及びＶＬを挙げることができる。
【００３１】
結合パートナーのさらなる例には、モノクロナール抗体が含まれる。その開示が参照により本明細書に組み込まれる、ミズーリ州セントルイス６３１７８、私書箱１４５０８、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社のＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｃｈ（１９９９年）；メリーランド州ゲーサーズバーグ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのカタログ；及びイリノイス州ロックフォード６１１０５、私書箱１１７、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社のＰｉｅｒｃｅのカタログ（１９９４年）などの各種カタログに列挙されているもので例示されるように、対象の各種分析対象物に結合する多数のモノクロナール抗体が利用できる。
【００３２】
その他の典型的なモノクロナール抗体には、β−アクチン、ＤＮＡ、ジゴキシン、インスリン、プロゲステロン、ヒト白血球マーカー、ヒトインターロイキン−１０、ヒトインターフェロン、ヒトフィブリノーゲン、ｐ５３、Ｂ型肝炎ウイルス又はその一部、ＨＩＶウイルス又はその一部、腫瘍壊死因子、及びＦＫ−５０６に特異的に結合する抗体が含まれる。特定の実施形態において、モノクロナール抗体は、Ｔ４、Ｔ３、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）、チログロブリン、ＴＳＨ受容体、プロラクチン、ＬＨ（黄体形成ホルモン）、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）、テストステロン、プロゲステロン、エストラジオール、ｈＣＧ（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン）、ｈＣＧ＋β、ＳＨＢＧ（性ホルモン結合グロブリン）、ＤＨＥＡ−Ｓ（硫酸デヒドロエピアンドロステロン）、ｈＧＨ（ヒト成長ホルモン）、ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）、コルチゾール、インスリン、フェリチン、葉酸、ＲＢＣ（赤血球）葉酸、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、Ｃ−ペプチド、トロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢ（クレアチンキナーゼ−ミオグロビン）、ミオグロビン、プロ−ＢＮＰ（脳ナトリウム利尿ペプチド）、ＨｂｓＡｇ（Ｂ型肝炎表面抗原）、ＨｂｅＡｇ（Ｂ型肝炎ｅ抗原）、ＨＩＶ抗原、複合ＨＩＶ、Ｈ．ピロリ、β−ｃＲＯＳＳＬＡＰＳ、オステオカルシン、ＰＴＨ（副甲状腺ホルモン）、ＩｇＥ、ジゴキシン、ジギトキシン、ＡＦＰ（α−フェトプロテイン）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、遊離ＰＳＡ、ＣＡ（癌抗原）１９−９、ＣＡ１２−５、ＣＡ７２−４、シフラ２１−１、ＮＳＥ（ニューロン特異エノラーゼ）、Ｓ１００、Ｐ１ＮＰ（１型プロコラーゲンＮ−プロペプチド）ＰＡＰＰ−Ａ（妊娠関連血漿タンパク質−Ａ）、Ｌｐ−ＰＬＡ２（リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２）、ｓＣＤ４０Ｌ（溶性ＣＤ４０リガンド）、ＩＬ１８、及びサバイビン（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ）の中の少なくとも１つに特異的に結合する抗体から選択される。
【００３３】
その他の典型的なモノクロナール抗体には、抗−ＴＰＯ（抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体）、抗−ＨＢｃ（Ｂ型肝炎ｃ抗原）、抗ＨＢｃ／ＩｇＭ、抗ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）、抗ＨＡＶ／ＩｇＭ、抗−ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、抗−ＨＩＶ、抗−ＨＩＶ  ｐ−２４、抗−風疹ＩｇＧ、抗−風疹ＩｇＭ、抗−トキソプラズマ症ＩｇＧ、抗−トキソプラズマ症ＩｇＭ、抗−ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）ＩｇＧ、抗−ＣＭＶ  ＩｇＭ、抗−ＨＧＶ（Ｇ型肝炎ウイルス）、及び抗−ＨＴＬＶ（ヒトＴ−リンパ親和性ウイルス）が含まれる。
【００３４】
結合パートナーのさらなる例には、結合タンパク質、例えば、ビタミンＢ１２結合タンパク質；塩基性ドメインのスーパークラス、亜鉛配位ＤＮＡ結合ドメイン、ヘリックス−ターン−ヘリックス、副溝接触を伴うβ骨格因子、及び抗体でないその他の転写因子などのＤＮＡ結合タンパク質が含まれる。
【００３５】
用語「標識化結合パートナー」は、本明細書中で使用する場合、検出可能なシグナルを発生、変更又は調節する能力のある原子、部分、官能基、又は分子で標識された結合パートナーを意味する。例えば、放射化学アッセイで、標識化結合パートナーは、ヨウ素の放射性同位体で標識されていてよい。別法として、標識化結合パートナー用抗体は、比色アッセイで使用できる酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）で標識されていてよい。標識化結合パートナーは、時間分解蛍光（ｔｉｍｅ−ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）レポーター又は蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）レポーターで標識されていてもよい。典型的なレポーターは、Ｈｅｍｍｉｌａらの論文、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２６巻、２８３〜２９０頁（１９９３年）；Ｋａｋａｂａｋｏｓらの論文、Ｃｌｉｎ，Ｃｈｅｍ．、３８巻、３３８〜３４２頁（１９９２年）；Ｘｕらの論文、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２０３８〜２０４３頁（１９９２年）；Ｈｅｍｍｉｌａらの論文、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、４８巻、３８９〜４００頁（１９８８年）；Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ９ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  １９９６年、Ｊ．Ｗ．Ｈａｓｔｉｎｇｓら編、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６年）；Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｋｎｏｘ  Ｖａｎ  Ｄｙｒｅ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ（１９８５年）；Ｉ．Ｈｅｍｍｉｌａ著、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、１１７巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１年）；及びＢｌａｃｋｂｕｒｎらの論文、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、３７巻、１５３４頁（１９９１年）に開示されており、それらの開示を、参照により本明細書に組み込む。
【００３６】
標識化結合パートナーのさらなる例には、電気化学発光（ＥＣＬ）測定法においてシグナルを発生するのに有用である部分、官能基、又は分子で標識された結合パートナーが含まれる。ＥＣＬ部分は、電気化学的エネルギー源に直接暴露することによって電磁放射線を反復的に放射するように誘導され得る任意の化合物でよい。このような部分、官能基、又は分子は、米国特許出願公開第２００３−００２７３５７号、米国特許第５，９６２，２１８号；５，９４５，３４４号；５，９３５，７７９号；５，８５８，６７６号；５，８４６，４８５号；５，８１１，２３６号；５，８０４，４００号；５，７９８，０８３号；５，７７９，９７６号；５，７７０，４５９号；５，７４６，９７４号；５，７４４，３６７号；５，７３１，１４７号；５，７２０，９２２号；５，７１６，７８１号；５，７１４，０８９号；５，７０５，４０２号；５，７００，４２７号；５，６８６，２４４号；５，６７９，５１９号；５，６４３，７１３号；５，６４１，６２３号；５，６３２，９５６号；５，６２４，６３７号；５，６１０，０７５号；５，５９７，９１０号；５，５９１，５８１号；５，５４３，１１２号；５，４６６，４１６号；５，４５３，３５６号；５，３１０，６８７号；５，２９６，１９１号；５，２４７，２４３号；５，２３８，８０８号；５，２２１，６０５号；５，１８９，５４９号；５，１４７，８０６号；５，０９３，２６８号；５，０６８，０８８号；及び５，０６１，４４５号；Ｄｏｎｇ，Ｌ．らの論文、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，、２３６巻、３４４〜３４７頁（１９９６年）；Ｂｌｏｈｍらの論文、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、２１巻、４号、６０頁（１９９６年）；Ｊａｍｅｉｓｏｎらの論文Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、６８巻、１２９８〜１３０２頁（１９９６年）；Ｋｉｂｂｅｙらの論文、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻、３号、２５９〜２６０頁（１９９６年）；Ｙｕらの論文Ａｐｐｌｉｅｄ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、６２巻、２号、５８７〜５９２頁（１９９６年）；Ｗｉｌｌｉａｍｓの論文、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６頁（１９９６年１月）；Ｄａｒｓｌｅｙらの論文、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、２１巻、１号、１３３頁（１９９６年１月）；Ｋｏｂｒｙｎｓｋｉらの論文、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３巻、１号、４２〜４６頁（１９９６年１月）；Ｗｉｌｌｉａｍｓの論文、ＩＶＤ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２８〜３１頁（１９９５年１１月）；Ｄｅａｖｅｒの論文、Ｎａｔｕｒｅ、３７７巻、７５８〜７６０頁（１９９５年１０月２６日）；Ｙｕらの論文、ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、２０巻、１０号、２０頁（１９９５年１０月）；Ｋｉｂｂｅｙらの論文、ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、２０巻、９号、１１６頁（１９９５年９月）；Ｓｃｈｕｔｚｂａｎｋらの論文、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、３３巻、２０３６〜２０４１頁（１９９５年８月）；Ｓｔｅｒｎらの論文、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８巻、４７０〜４７２頁（１９９５年８月）；Ｃａｒｌｏｗｉｃｚの論文、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｅｗｓ、２１巻、８号、１〜２頁（１９９５年８月）；Ｇａｔｔｏ−Ｍｅｎｋｉｎｇらの論文、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ＆  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、１０巻、５０１〜５０７頁（１９９５年７月）；Ｙｕらの論文、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１０巻、２３９〜２４５頁（１９９５年）；Ｖａｎ  Ｇｅｍｅｎらの論文、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、４９巻、１５７〜１６８頁（１９９４年）；Ｙａｎｇらの論文、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２巻、１９３〜１９４頁（１９９４年）；Ｋｅｎｔｅｎらの論文、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３８巻、８７３〜８７９頁（１９９２年）；Ｋｅｎｔｅｎの論文、Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｋｅｓｓｌｅｒ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、ベルリン、１７５〜１７９頁（１９９２年）；Ｇｕｄｉｂａｎｄｅらの論文、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、６巻、４９５〜５０３頁（１９９２年）；Ｋｅｎｔｅｎらの論文、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７巻、１６２６〜１６３２頁（１９９１年）；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎらの論文、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７巻、１５３４〜１５３９頁（１９９１年）、Ｂａｒｄの論文、Ｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ編（２００４年）、及び米国特許第５，９３５，７７９号に開示されており、参照によりこれらの開示を本明細書に組み込む。一実施形態において、電気化学発光基は、ルテニウム又はオスミウムなどの金属を含む。一実施形態において、第２結合パートナーは、トリス−ビピリジル−ルテニウム基などのルテニウム部分、例えば、ルテニウム（ＩＩ）トリス−ビピリジン（［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋）などで標識される。
【００３７】
用語「分析対象物」は、本明細書中で使用する場合、試料中に見出される、ウイルスの細胞又は細胞構成成分を始めとする任意の分子又は分子の集塊体を意味する。第１結合パートナーが特異的に結合できる分析対象物の例には、細菌毒素、ウイルス、細菌、タンパク質、ホルモン、ＤＮＡ、ＲＮＡ、薬物、抗生物質、神経毒素、及びこれらの代謝産物が含まれる。試料中に見出されるなんらかの分子のフラグメントも含まれる。分析対象物は、有機化合物、有機金属化合物又は無機化合物でよい。分析対象物は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、ベクター、又はオリゴヌクレオチド）、タンパク質（例えば、抗体、抗原、受容体、受容体リガンド、又はペプチド）、リポタンパク質、糖タンパク質、リボ−又はデオキシリボ核タンパク質、ペプチド、多糖、リポ多糖、脂質、脂肪酸、ビタミン、アミノ酸、医薬化合物（例えば、トランキライザー、バルビツール薬、アヘン薬、アルコール、三環系抗うつ薬、ベンゾジアゼピン、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗生物質、ステロイド、強心配糖体、又はこれらの任意の代謝産物）、ホルモン、成長因子、酵素、補酵素、アポ酵素、ハプテン、レクチン、基質、細胞代謝産物、細胞構成成分又は細胞小器官（例えば、膜、細胞壁、リボソーム、染色体、ミトコンドリア、又は細胞骨格構成成分）でよい。定義には、毒素、殺虫剤、除草剤、及び環境汚染物質も含まれる。定義には、この定義内に示された任意の例の１種又は複数を含む複合物がさらに含まれる。
【００３８】
分析対象物のさらなる例には、エロモナスヒドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）及びその他の亜種；炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）；セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）；クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）の種を産生するボツリヌス（Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）神経毒；ウシ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ）；マルタ熱菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）；ブルセラスイス（Ｂｕｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ）；バークホルデリアマレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ）（以前はシュードモナスマレイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ））；バークホルデリアシュードマレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）（以前はシュードモナスシュードマレイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ））；カンピロバクタージェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）；オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）；ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）；クロストリジウムボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）；ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）；コクシジオイデスイミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）；コクシジオイデスポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｐｏｓａｄａｓｉｉ）；カウドリアルミナンツム（Ｃｏｗｄｒｉａ  ｒｕｍｉｎａｎｉｔｕｍ）（心水病）；コキシエラバーネッティイ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ）；腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、Ｏ１５７：Ｈ７腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）、及び腸管組織侵入性大腸菌（ＥＩＥＣ）などの腸管毒性大腸菌（ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）；エーリキアチャフィーニス（Ｅｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｉｓ）などのエーリキア（Ｅｒｌｉｃｈｉａ）亜種；フランシセラツラレンシス（Ｆｒａｎｉｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）；レジオネラニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）；リベロバクターアフリカヌス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｆｒｉｃａｎｕｓ）；リベロバクターアシアティカス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ）；リステリアモノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、アエロバクター（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）及びセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）などの種々の腸内菌；マイコバクテリウムボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）；結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；マイコプラズマカプリコルミ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｒｉｃｏｌｕｍｉ）；マイコプラズママイコイデス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ）；ペロノスクレロポーラフィリッピネンシス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｐｏｒａ  ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓ���ｓ）；ファコプソーラパチリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）；プレジオモナスシゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ  ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）；ラルストニアソラナセアルム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）品種３、生物学的性状型２；発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）；チケッチアリッケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）；サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）亜種；シュレロフソーラライシアレバルジアエ（Ｓｃｈｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ  ｒａｙｓｓｉａｅ  ｖａｒ  ｚｅａｅ）；シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）亜種；黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）；黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｓｓｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）；ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；シンチトリウムエンドビオティカム（Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ）；ビブリオコレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）非−Ｏ１；ビブリオコレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）Ｏ１；ビブリオパラファエモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｐｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）及びその他のビブリオ菌；ビブリオバルニフィカス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）；キサントルモナスオリゼ（Ｘａｎｔｈｏｒｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ）；キシレーラファスティディオーサ（Ｘｙｌｅｌｌａ  ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）（柑橘斑入り萎黄株）；エルシニアエンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）及びエルシニアシュードチューバークローシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；並びにエルシニアペスティス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）などの細菌病原体が含まれる。
【００３９】
分析対象物のさらなる例には、アフリカウマ病ウイルス；アフリカブタ熱ウイルス；アカバネウイルス；ニワトリインフルエンザウイルス（高病原性）；ブハニャ（Ｂｈａｎｊａ）ウイルス；ブルータングウイルス（新種）；ラクダポックスウイルス；オナガザルヘルペスウイルス１；チクングンヤ（Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ）ウイルス；ブタコレラウイルス；コロナウイルス（ＳＡＲＳ）；クリミア−コンゴ出血熱ウイルス；デングウイルス；デグベ（Ｄｕｇｂｅ）ウイルス；エボラウイルス；東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎、及びベネズエラウマ脳炎ウイルスなどの脳炎ウイルス；ウマ麻疹ウイルス；フレクサル（Ｆｌｅｘａｌ）ウイルス；口蹄疫ウイルス；ジャーミストン（Ｇｅｒｍｉｓｔｏｎ）ウイルス；ヤギポックスウイルス；ハンターン又はその他のハンタウイルス；ヘンドラ（Ｈｅｎｄｒａ）ウイルス；イシク−クルウイルス；コウタンゴ（Ｋｏｕｔａｎｇｏ）ウイルス；ラッサ熱ウイルス；跳躍病ウイルス；塊皮病ウイルス；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス；悪性カタル熱ウイルス（新種）；マールブルグ（Ｍａｒｂｕｒｇ）ウイルス；マヤロ（Ｍａｙａｒｏ）ウイルス；メナングル（Ｍｅｎａｎｇｌｅ）ウイルス；サルポックスウイルス；ムカンボ（Ｍｕｃａｍｂｏ）ウイルス；ニューカッスル病ウイルス（ＶＶＮＤ）；ニパーウイルス；ノーウォークウイルス群；オロポウチェ（Ｏｒｏｐｏｕｃｈｅ）ウイルス；オルンゴ（Ｏｒｕｎｇｏ）ウイルス；羊疫ウイルス；ピリ（Ｐｉｒｙ）ウイルス；プラムポックスウイルス；ポリオウイルス；ポテトウイルス；ポーワッサン（Ｐｏｗａｓｓａｎ）ウイルス；リフトバレー熱ウイルス；牛疫ウイルス；ロタウイルス；セムリキ（Ｓｅｍｌｉｋｉ）森林ウイルス；ヒツジポックスウイルス；フレクサル（Ｆｌｅｘａｌ）、グアナリト、ジュニン（Ｊｕｎｉｎ）、マチュポ、及びサビアなどの南アメリカ出血熱ウイルス；スポンドウェンジ（Ｓｐｏｎｄｗｅｎｄｉ）ウイルス；ブタ水疱病ウイルス；中央ヨーロッパ型ダニ媒介脳炎、極東型ダニ媒介脳炎、ロシア春夏脳炎、キャサヌール森林病、及びオムスク（Ｏｍｓｋ）出血熱などのダニ媒介脳炎複合（フラビ）ウイルス；大痘瘡ウイルス（天然痘）；小痘瘡（アラストリム）；水疱性口内炎ウイルス（新型）；ベッセルブロン（Ｗｅｓｓｅｌｂｒｏｎ）ウイルス；西ナイルウイルス；黄熱ウイルス；及びジュニン、マチュポ、サビア、フレクサル、及びグアナリトなどの南アメリカ出血熱ウイルスなどのウイルスが含まれる。
【００４０】
分析対象物のさらなる例には、アブリン；アフラトキシン；ボツリヌス神経毒素；シガテラトキシン；クリストリジウムパーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｉｎｇｅｎｓ）ε−トキシン；コノトキシン；ジアセトキシシルペノール；ジフテリアトキシン；グラヤノトキシン；アマニチン、ジャイロミトリン、及びオレラニンなどのキノコトキシン；フィトヘマグルチニン：ピロリジンアルカロイド；リシン；サキシトキシン；サキシトキシン、アカダイ酸、ジノフィシストキシン、ペクテノトキシン、イエソトキシン、ブレベトキシン、及びドーモイ酸のような貝トキシン（麻痺性、下痢性、神経毒性又は記憶消失性）；シガトキシン；シガ様リボソーム不活性化タンパク質；ヘビ毒；ブドウ球菌性エンテロトキシン；Ｔ−２トキシン；及びテトロドトキシンなどの毒素が含まれる。
【００４１】
分析対象物のさらなる例には、ウシ海綿状脳症病原体などのプリオンタンパク質が含まれる。
【００４２】
分析対象物のさらなる例には、アカントアメーバ（Ａｃａｎｔｈｍｏｅａ）及びその他の自由生活性アメーバ；アニサキス（Ａｎｉｓａｋｉｓ）種及びその他の関連蠕虫アスカリスランブリコイデス（Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）及びトリチュリストリチュウラ（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ）；クリストスポロジウムパルバム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）；シクロスポーラカエタネンシス（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ  ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）；ジフィロボツリウム（Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ）亜種；赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）；ユーストロンギリデス（Ｅｕｓｔｒｏｎｇｙｌｉｄｅｓ）亜種；ギアルジアランブリア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）；ナノフェタス（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）亜種；シストソーマ（Ｓｈｉｓｔｏｓｏｍａ）亜種；トキソプラズマゴンジ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）；及びトリチネラ（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ）などの寄生原生動物及び寄生虫が含まれる。
【００４３】
分析対象物のさらなる例には、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）亜種；ブラストミセスダーマチタイデス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）；カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）；コクシジオイデスイミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）；コクシジオイデスポサダシル（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｐｏｓａｄａｓｉｌ）；クリプトコッカスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；ヒストプラズマカプスラタム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）；トウモロコシサビ病；イネイモチ病；イネゴマ葉枯れ病；ライムギイモチ病；スポロスリックスシェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）；及びコムギ真菌などの真菌類が含まれる。
【００４４】
分析対象物のさらなる例には、
（１）任意の選択病原体の感染性及び／又は複製可能形態をコードできる（合成又は天然由来の、連続の又は断片化された、宿主染色体中又は発現ベクター中の）核酸、
（２）核酸が、
（ｉ）ベクター又は宿主染色体中に存在するか、
（ｉｉ）インビボ又はインビトロで発現可能であるか、或いは
（ｉｉｉ）ベクター中又は宿主染色体中に存在し且つインビボ又はインビトロで発現可能であるなら、
列挙した任意の毒素の機能形態（群）をコードする（合成又は天然由来）核酸、並びに
（３）遺伝子的に変更されたウイルス、細菌、真菌、及び毒素、
などの遺伝子要素、組換え核酸、及び組換え微生物が含まれる。
【００４５】
分析対象物のさらなる例には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭなど、上述の分析対象例に対する免疫応答分子が含まれる。
【００４６】
用語「分析対象物類似体」とは、本明細書中で使用する場合、結合パートナーに対する結合に関して対象の分析対象物と競合する物質を指す。分析対象物類似体は、特異的結合パートナーに対する結合に関して、試料中に存在する対象の分析対象物と競合するように添加される既知量の対象の分析対象物それ自体でよい。分析対象物類似体の例には、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ＨＩＶ逆転写酵素に結合するヌクレオチドの類似体、ピューロマイシン、アミノアシル−ｔＲＮＡの末端アミノアシル−アデノシン部分の類似体、及びメトトレキセート、テトラヒドロ葉酸の類似体が含まれる。その他の類似体は、対象の分析対象物の誘導体でもよい。
【００４７】
用語「陽性対照／キャリブレーター」とは、本明細書中で使用する場合、既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を指す。陽性対照／キャリブレーターを使用して、装置の操作及び／又は試料測定の妥当性を評価できる。陽性対照／キャリブレーターを対照として使用し、試験試料のシグナルレベルを対照のシグナルレベルと比較できる。陽性対照／キャリブレーターは、数理関数と一緒に使用して、シグナルレベルを分析対象物の濃度と関連付けることも可能であり、その１つの使用目的は、試料からのシグナル測定値を分析対象物の濃度に変換することである。用語「陽性対照／キャリブレーター」は、陽性対照と陽性キャリブレーターの両方の一般的定義を包含する。
【００４８】
用語「アッセイ用陽性対照／キャリブレーター」とは、本明細書中で使用する場合、（ａ）試料の測定が成功したことを確認するため、又は（ｂ）試料から得られた測定シグナルを試験された分析対象物の濃度に変換するために使用される試薬を指す。典型的には、アッセイ用陽性対照／キャリブレーターは、分析対象物を含む試料からの測定値をシミュレートするため、陽性対照／キャリブレーター及び結合アッセイに使用される試薬を含む。
【００４９】
本発明は、一般的用語で言えば、試料中に見出される分析対象物の量を検出又は定量するのに使用される結合アッセイのためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用される組成物、キット、及び方法に関する。アッセイ測定で使用する前には、アッセイ用陽性対照／キャリブレーター中でこれらに使用される結合パートナー又はパートナー群は、乾燥しており、且つ陽性対照／キャリブレーター（即ち、乾燥した既知量の分析対象物又は分析対象物類似体）と一緒に容器内に収容される。
【００５０】
乾燥組成物
本発明の特定の実施形態は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための任意選択の第１結合パートナー、
（ｂ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための任意選択の支持体、
（ｃ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナー、及び
（ｄ）第２結合パートナーに特異的に結合することができ、且つ、もし存在するなら第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体、を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、乾燥組成物を提供する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、アッセイで使用する際に、乾燥組成物に水又は緩衝液を添加できる。
【００５２】
特定の実施形態において、試料は、乾燥組成物と直接的に混合できる。例えば、最初に水又は緩衝液を用いて乾燥組成物を再構成することなしに、試料を乾燥組成物に添加できる。これらの実施形態において、シグナルレベルは、陽性対照／キャリブレーター試薬の分析対象物シグナルと試料の分析対象物シグナル（もしあれば）の合計でよい。
【００５３】
各種の実施形態が、
（ａ）分析体対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナー、及び
（ｂ）該標識化結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬を含む、乾燥組成物を提供する。
【００５４】
特定の実施形態は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナー、及び
（ｃ）第１及び第２結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、乾燥組成物を提供する。
【００５５】
いくつかの実施形態は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）該分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための支持体、
（ｃ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナー、及び
（ｄ）第１及び第２結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、乾燥組成物を提供する。
【００５６】
本発明の各種実施形態は、
（ａ）分析対処物に特異的に結合するための第１結合パートナー、
（ｂ）該分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合する支持体、
（ｃ）結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化分析対象物又は分析対象物類似体、及び
（ｄ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、乾燥組成物を提供する。
【００５７】
アッセイ法
いくつかの実施形態では、乾燥組成物に、それをアッセイで使用する際に水又は緩衝液を添加できる。
【００５８】
本発明は、任意の結合アッセイ技術と共に使用できる。多くのこのような技術の説明については、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｉｌｄ編、Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第３版、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（２００５年）及びＰｒｉｃｅ及びＮｅｗｍａｎ編、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９７年）を参照されたい。便宜のため、いくつかの結合アッセイ技術を次に簡単に説明する。
【００５９】
結合アッセイ技術は、多くの方式に細別される。例えば、シグナル検出のために標識化結合パートナーを必要とするアッセイ法もあり、一方、別のアッセイ法は、分析対象物と結合パートナーの相互作用に基づくシグナルを発生する（例えば、質量変化を測定するなど）。標識化結合パートナーを使用しないで、代わりに標識化分析対象物を使用するアッセイ法もある。２種の結合パートナーを使用してサンドイッチアッセイを作り出すアッセイ法もあり、一方、別のアッセイ法は、１種の結合パートナーのみを使用する（競合アッセイ法など）。サンドイッチアッセイ法では、両方の結合パートナーが同じ分析対象物に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、２種の結合パートナーが、分析対象物の異なる部分、例えば異なるエピトープに結合する。分析対象物に結合した標識化結合パートナーと分析対象物に結合していない標識化結合パートナーを差別化する分離段階を必要とするアッセイ法もある。凝集アッセイ法及び標識化結合パートナー上の標識が、分析対象物の結合によって修飾、活性化、又は不活性化されるアッセイ法など、分離ステップを必要としないアッセイ法もある。結合パートナーを付着する支持体を必要とするアッセイ法もある。支持体、分離、サンドイッチアッセイ法は、２種の結合パートナーを使用し、第１結合パートナーは支持体に付着し、一方、第２結合パートナーは、支持体に標識を連結するための標識化結合パートナーであり、後に、標識を測定する前に支持体を洗浄して遊離の標識化結合パートナーを除去する。
【００６０】
本明細書中で使用する場合、用語「支持体」とは、膜、ビーズ、粒子、電極、又はさらには容器の壁又は表面など、当技術分野で知られている、結合パートナーを固定化するための任意の手段を指す。支持体は、ニトロセルロース、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ＥＶＡ、ガラス、カーボン、ガラス状カーボン、カーボンブラック、カーボンナノチューブ若しくはフィブリル、白金、パラジウム、金、銀、塩化銀、イリジウム、又はロジウムなど、その上に結合パートナーを従来通り固定化する任意の材料を含むことができる。一実施形態において、支持体は、ポリスチレンビーズ又は磁化性ビーズなどのビーズである。本明細書で使用する場合、用語「磁化性ビーズ」は、磁性、常磁性、及び超常磁性ビーズを包含する。一実施形態において、支持体は、ミクロ遠心管又はマルチウェルプレートの少なくとも１つのウェルである。
【００６１】
結合パートナーは、任意の従来からの手段、例えば、吸着、吸収、非共有結合、架橋剤を用いる共有結合、又は支持体若しくは第１結合パートナーの一方又は両方の化学的活性化に由来する共有結合によって支持体上に固定化できる。一実施形態において、支持体による第１結合パートナーの固定化は、結合対を使用することによって達成される。例えば、結合対の一方のメンバー、例えば、ストレプトアビジン又はアビジンを支持体に結合することができ、同じ結合対の他方のメンバー、例えば、ビオチンを第１結合パートナーに結合できる。第１結合パートナーを支持体上に固定化するための適切な手段は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅのカタログ（イリノイス州ロックフォード６１１０５、私書箱１１７、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）に開示されており、その開示をこの目的のため参照により本明細書に組み込む。
【００６２】
特定の実施形態において、組成物は、例えば、サンドイッチ結合アッセイを実施するためのアッセイ用対照として使用できる。各種の実施形態において、分析対象物又は分析対象物類似体は、乾燥組成物中の第１及び第２結合パートナーに実質上結合しない。
【００６３】
いくつかの実施形態において、支持体は、固定化第１結合パートナー及び標識化第２結合パートナーによる分析対象物の結合によって形成されるサンドイッチ複合体に起因するシグナルの発生又は検出を容易にすることができる。例えば、電気化学発光（ＥＣＬ）測定法では、支持体は、磁化性ビーズでよい。このような磁化性ビーズは、標識化結合試薬を定義している段落に列挙されている参考文献中に開示されている。いくつかの実施形態において、第１結合パートナーは、磁化性ビーズ上に固定化され、第２結合パートナーは、ルテニウム部分、例えば、［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋で標識され、電気化学発光シグナルの発生及び検出に依拠して分析対象物の存在を確認及び／又は定量する。
【００６４】
いくつかの実施形態において、組成物は、等モル又は等価量の第１及び第２結合パートナーを含むことができる。しかし、第１結合パートナーの第２結合パートナーに対する正確な比率は、第１及び第２結合パートナーの相対的結合特異性、依拠するシグナルの種類、及びアッセイ条件のその他のパラメーターに応じて変更できる。任意の与えられた条件セットに対する第１結合パートナーの第２結合パートナーに対する最適比率を決定することは、当業者の技術範囲にある。第１結合パートナーの第２結合パートナーに対する所望の比率は、乾燥される組成物に対してこれらの成分を単純にその所望の比率で添加することによって達成される。
【００６５】
特定の実施形態において、乾燥組成物は、結合アッセイに使用される試薬及び陽性対照／キャリブレーター試薬を含むことができる。いくつかの実施形態において、組成物は、凍結乾燥した固体などの固体でよい。
【００６６】
特定の実施形態において、結合アッセイを実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物は、
（ａ）標識化第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された溶液を凍結すること、
（ｃ）陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を凍結混合物に、第２溶液を凍結するのに十分な温度で添加すること、並びに
（ｄ）第１及び第２溶液を乾燥すること、によって調製できる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、第１溶液は、標識化第２結合パートナー、及び該第２結合パートナーと事前結合できる又はできない任意選択の支持体をさらに含む。
【００６８】
各種の実施形態において、結合アッセイを実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物は、
（ａ）標識化第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む凍結した第１溶液を、陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液と混合すること（ここで、該混合は、第２溶液を凍結するのに十分な温度で実施される）、及び
（ｂ）第１及び第２溶液を乾燥すること、によって調製できる。
【００６９】
特定の実施形態において、本発明による結合アッセイを実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された混合物を凍結すること、
（ｃ）第２溶液を該凍結混合物に、第２溶液を凍結するのに十分な温度で添加すること（前記第２溶液は、陽性対照／キャリブレーター試薬、及び結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体を含む）、並びに
（ｄ）第１及び第２溶液を乾燥すること、によって調製できる。
【００７０】
いくつかの実施形態において、本発明による結合アッセイを実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物は、
（ａ）分析対象物に特異的に結合するための第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む凍結した第１溶液を、陽性対照／キャリブレーター試薬、及び結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物を競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体を含む第２溶液と混合すること（ここで、該混合は、第２溶液を凍結するのに十分な温度で実施される）、並びに
（ｂ）第１及び第２溶液を乾燥すること、によって調製できる。
【００７１】
各種の実施形態において、第１溶液は、分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合する支持体をさらに含む。
【００７２】
特定の実施形態において、第２溶液が凍結する温度は、十分に低く、第１溶液由来の試薬と第２溶液に由来する試薬の間の反応又は結合を防止できる。
【００７３】
いくつかの実施形態において、（ａ）での混合は、アッセイ容器、例えば、ミクロ遠心管又はマルチウェルプレートの少なくとも１つのウェル中で実施できる。
【００７４】
いくつかの実施形態において、乾燥した第１及び第２溶液は、互いに物理的に接触した状態にある。
【００７５】
特定の実施形態において、乾燥した第１及び第２溶液は、同じ容器中に存在はするが、互いに分離されていてよい。例えば、凍結した第１溶液が、容器内に存在し、且つ物理的に互いに分離されている凍結した第１及び第２溶液を生ずるように、同じ容器中に第２溶液を凍結するに十分な温度で第２溶液と混合されていてもよい。第１及び第２溶液を乾燥すると、同じ容器中で互いに分離された乾燥第１及び第２溶液が生じる。
【００７６】
当業者は、第１溶液を含む構成要素を、それ自体、１種又は複数の別個の溶液として添加できることを認識するであろう。さらに、当業者は、本発明が、第１及び第２溶液をアッセイ容器に添加する順序を変更することも包含することを認識するであろう。例えば、第２溶液をアッセイ容器に添加、凍結し、その後に第１溶液を添加してもよい。いくつかの実施形態において、第１及び第２溶液を、別個に凍結し、凍結固体として混合できる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、第１及び第２溶液を、当技術分野で周知の任意の手段によって別個に乾燥できる。続いて、乾燥した第１及び第２溶液を混合して本発明の組成物を調製できる。従って、特定の実施形態は、結合アッセイを実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物の調製方法を提供する。
（ａ）標識化第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された溶液を乾燥すること、
（ｃ）陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を乾燥すること、及び
（ｄ）乾燥した第１及び第２溶液を混合すること。
【００７８】
いくつかの実施形態は、上記の第１溶液が、第２結合パートナー、及び該第２結合パートナーと事前結合できる又はできない支持体をさらに含む、結合を実行するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物の調製方法を提供する。
【００７９】
特定の実施形態は、結合アッセイを実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物の調製方法を提供する。
（ａ）第１結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を調製すること、
（ｂ）（ａ）で形成された溶液を乾燥すること、
（ｃ）陽性対照／キャリブレーター試薬、及び結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化分析対象物又は分析対象物類似体を含む第２溶液を乾燥すること、並びに
（ｄ）乾燥した第１及び第２溶液を混合する。
【００８０】
各種の実施形態は、上記の第１溶液が、結合パートナーと事前結合できる又はできない支持体をさらに含む、結合を実施するためのアッセイ用陽性対照／キャリブレーター組成物の調製方法を提供する。
【００８１】
特定の実施形態において、支持体は、ビーズ、例えばポリスチレン又は磁化性ビーズでよい。
【００８２】
本発明のいくつかの実施形態において、支持体は、例えば、アッセイ容器の壁でよく、第１結合パートナーを、標識化第２結合パートナー及びアッセイ緩衝液を含む第１溶液を添加するアッセイ容器の壁上に固定化できる。第１溶液を凍結することができ、陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第２溶液を凍結した第１溶液に、第２溶液が直ちに凍結する程十分に低い温度で添加できる。凍結した第１及び第２溶液を、次いで、当技術分野で周知の技術によって乾燥できる。特定の実施形態において、第２溶液は、それが、結合パートナーと陽性対照／キャリブレーター試薬の間の結合を防止するのに十分速い速度で凍結する場合に「直ちに凍結する」。
【００８３】
いくつかの実施形態において、乾燥した第１及び第２溶液は、互いに物理的に接触した状態でよい。各種の実施形態において、乾燥した第１及び第２溶液は、同じ容器中に存在するが、互いに分離され得る。即ち、乾燥した第１及び第２溶液は、例えば、容器の配向に応じて互いに接触して存在できる。
【００８４】
特定の実施形態では、第１及び第２溶液を、凍結乾燥で乾燥できる。材料、特に生物学的材料を凍結乾燥するための方法及び装置は、当業者にとって周知である。凍結乾燥は、材料の保存及び安定性の目的にとって周知の利用法である。
【００８５】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥緩衝液をさらに含むことができる。凍結乾燥緩衝液は、当技術分野で周知であり、リン酸塩緩衝液、及び場合によっては１種又は複数の凍結防止剤を含むことができる。
【００８６】
本発明の組成物は、トレハロース又は蔗糖などの化合物を含むことができる。特定の実施形態において、第１及び第２溶液の両方が、トレハロース又は蔗糖を含む。いくつかの実施形態において、第１及び第２溶液の一方のみがトレハロース又は蔗糖を含む。いくつかの実施形態において、トレハロース又は蔗糖は、固定化された捕捉抗体と標識化レポーター抗体の間の層として存在できる。このような組成物は、第１溶液を凍結した後ではあるが第２溶液を添加する前に、トレハロース又は蔗糖を含む溶液を添加及び凍結することによって形成できる。
【００８７】
特定の実施形態では、支持体を処理して、標識化第２結合パートナー、分析対象物、又は分析対象物類似体の、支持体に対する非特異的結合を遮断又は低減できる。任意の従来からの遮断剤を使用できる。適切な遮断剤は、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、例えば、米国特許第５，８０７，７５２号、５，２０２，２６７号、５，３９９，５００号、５，１０２，７８８号、４，９３１，３８５号、５，０１７，５５９号、４，８１８，６８６号、４，６２２，２９３号、４，４６８，４６９号中に、及びカナダ特許第１，３４０，３２０号、国際公開第９７／０５４８５号、欧州特許公開第Ａ１−５６６，２０５号、欧州特許公開第Ａ２−４４４，６４９号、及び欧州特許公開第Ａ１−１６５，６６９号に記載されている。典型的な遮断剤には、動物血清（例えば、ヤギ血清）、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、ビオチン、及び乳タンパク質（「ｂｌｏｔｔｏ」）などの血清及び血清アルブミンが含まれる。サンドイッチ結合アッセイの場合は第１結合パートナーの、又は競合結合アッセイの場合は結合パートナーの固定化の前又は後に遮断剤を吸収することによって支持体を遮断できる。いくつかの実施形態では、結合パートナーの固定化の後に遮断剤を吸収することによって支持体を遮断できる。支持体を遮断するための正確な条件は、使用する遮断剤の正確な量を含め、遮断剤及び支持体の本体よって決まるが、後記実施例に記載のアッセイ法及び実験計画を使用することによって決定することもできる。
【００８８】
いくつかの実施形態において、乾燥組成物は、結合アッセイのために使用される試薬及び陽性対照／キャリブレーター試薬を含む。乾燥組成物は、多くの種類の容器に入れることができる。いくつかの実施形態において、容器は、例えば、各ウェルが１種又は複数の乾燥組成物を含むことができる２４、９６、３８４、１５３８、又は６１４４個のウェルを含むマルチウェルプレートでよい。特定の実施形態において、マルチウェルプレートは、装置中で使用される場合、フットプリント寸法に関するＡＮＳＩ／ＳＢＳ２０００４マイクロプレート規格（ＡＮＳＩ／ＳＢＳ  １−２００４）に指定されている最大の概略寸法を超えない外形寸法であればよい。マルチウェルプレートの第３寸法（即ち、高さ）は、装置中で使用される場合、約４４ｍｍを超えない外形寸法であればよい。各種の実施形態において、容器は、直径が約９ｍｍ以下、高さが約４０ｍｍ以下の管でよい。いくつかの実施形態において、容器は、約８．６ｍｍの最大外径及び約３３．８ｍｍの高さを有する管でよい。いくつかの実施形態では、二次元配列容器を、上記のマルチウェルプレート寸法の範囲内であるホルダーに配置することができる。各種の実施形態において、ホルダー中の二次元配列容器は、高さが約３５ｍｍでよい。
【００８９】
いくつかの実施形態では容器を密閉的にシールできる。いくつかの実施形態では、容器を、容器開口部へ押し込まれたＥＶＡ又はＳａｎｔｏｐｒｅｎｅ（登録商標）などのエラストマー性、熱硬化性、又は熱可塑性材料でシールできる。いくつかの実施形態では、容器を、フォイルマイクロプレートシールなどの、金属層を含むラミネートでシールできる。各種の実施形態では、容器を、容器にヒートシールできるラミネートなど、熱的に変形可能な層を含むラミネートでシールできる。いくつかの実施形態では、容器を、容器にラミネートを結合できる接着層を含むラミネートでシールできる。
【００９０】
いくつかの実施形態において、容器は、シールされた袋の内部に、１つ又は複数のシールされた封入材（容器）などの少なくとも１つの封入材を含む。いくつかの実施形態において、シールされた袋は、例えば、ポリエチレン、ポリエステル、アルミニウム、ニッケル、ポリエステル−フォイル−ポリエチレン３層ラミネート、又はポリエステル−ポリエチレン２層ラミネートを含んでなる。いくつかの実施形態では、最内側の封入材と最外側の封入材の間に乾燥剤を入れることができる。乾燥剤は、例えば、酸化カルシウム、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、シリカ、非晶質ケイ酸塩、ケイ酸アルミニウム、クレイ、活性アルミナ、ゼオライト、又はモレキュラーシーブを含む。いくつかの実施形態では、最内側の封入材と最外側の封入材の間に湿度インディケーターを入れることができる。湿度インディケーターは、例えば、乾燥組成物が、未だ十分に乾燥しておりその安定性が問題ないことの指標として使用できる。いくつかの実施形態では、最外側の封入材を通して湿度インディケーターを目視できる。特定の実施形態において、湿度インディケーターは、米軍規格ＭＳ２０００３に合致するように設計されたものなど、色変化によって湿度を指示するカード又はディスクでよい。
【００９１】
いくつかの実施形態において、容器による湿気遮断は、４５℃、相対湿度１００％の外部条件で、乾燥組成物を１０日間、２０日間、４０日間、６７日間、３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はそれ以上、十分に乾燥状態に保持できる。
【００９２】
いくつかの実施形態において、容器による湿気遮断は、２５℃、相対湿度１００％の外部条件で、乾燥組成物を１日間、１週間、３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はそれ以上、十分に乾燥状態に保持できる。
【００９３】
いくつかの実施形態において、容器による湿気遮断は、４℃、相対湿度１００％の外部条件で、乾燥組成物を３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はそれ以上、十分に乾燥状態に保持できる。
【００９４】
本発明の特定の実施形態は、
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための任意選択の第１結合パートナー、
（ｉｉ）分析対象物の結合を遮断することなしに第１結合パートナーに結合するための任意選択の支持体、及び
（ｉｉｉ）同じ分析対象物に特異的に結合するための標識化第２結合パートナーを含む組成物、
と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）該試料を、
（ｉ）前記任意選択の第１結合パートナー、
（ｉｉ）前記任意選択の支持体、
（ｉｉｉ）前記標識化第２結合パートナー、及び
（ｉｖ）第２結合パートナーに特異的に結合することができ、且つ、存在するなら、第１結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む、少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む、少なくとも１種の乾燥組成物と混合することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、標識化結合パートナーに分析対象物を結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、非競合アッセイ法を利用する分析対象物の検出及び／又は定量方法を提供する。
【００９５】
いくつかの実施形態において、分析対象物の検出及び／又は定量方法は、
（ｆ）データ、例えば、少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物から得られる測定シグナルを
（ｉ）試料の成功的測定を確認すること、及び
（ｉｉ）試験反応混合物から発生したシグナルを試験分析対象物の濃度に変換すること、
から選択される少なくとも１つのステップを実施することによって評価することをさらに含む。
【００９６】
特定の実施形態において、該方法は、サンドイッチ結合アッセイ法でよい。
【００９７】
本発明の各種実施形態は、
（ａ）分析対象物を含む可能性のある試料を準備すること、
（ｂ）該試料を、
（ｉ）分析対象物に特異的に結合するための結合パートナー、
（ｉｉ）分析対象物の結合を遮断することなしに結合パートナーに結合する任意選択の支持体、及び
（ｉｉｉ）結合パートナーに対する結合に関して試料中の分析対象物と競合する標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、
を含む組成物と混合することによって試験反応混合物を形成すること、
（ｃ）該試料を、
（ｉ）前記結合パートナー、
（ｉｉ）前記任意選択の支持体、
（ｉｉｉ）前記標識化された分析対象物又は分析対象物類似体、及び
（ｉｖ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む少なくとも１種の陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含む少なくとも１つの乾燥組成物と混合することによって少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物を形成すること、
（ｄ）試験反応混合物及び少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物をインキュベートすること、並びに
（ｅ）反応混合物のそれぞれについて、分析対象物を前記結合パートナーに結合することによって形成される複合体に起因するシグナルを測定すること、
を含む、競合結合アッセイ法を利用する分析対象物の検出及び／又は定量方法を提供する。
【００９８】
いくつかの実施形態において、分析対象物の検出及び／又は定量方法は、
（ｆ）データ、例えば、少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物から得られる測定シグナルを
（ｉ）試料の成功的測定を確認すること、及び
（ｉｉ）試験反応混合物から発生したシグナルを試験分析対象物の濃度に変換すること、
から選択される少なくとも１つのステップを実施することによって評価することをさらに含む。
【００９９】
以下の段落では、上記非競合及び競合アッセイ法の両方のさらなる実施形態について説明する。いくつかの実施形態において、（ｂ）の組成物は、本明細書に記載した任意の乾燥組成物などの乾燥組成物でよい。特定の実施形態では、アッセイで使用する際に、乾燥組成物（群）に水又は緩衝液を添加できる。いくつかの実施形態では、例えば、水又は緩衝液を用いて乾燥組成物を最初に再構成することなしに、乾燥組成物（群）を試料と直接混合できる。特定の実施形態において、支持体は、ビーズ、例えば、ポリスチレン又は磁化性ビーズでよい。いくつかの実施形態では、第２結合パートナーをＥＣＬ部分で標識できる。各種の実施形態において、ＥＣＬ部分は［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋でよい。特定の実施形態において、「分析対象物を検出する」とは、分析対象物の存在を判定することを指す。即ち、分析対象物を含むと推測される試料は、分析対象物を含む場合もあるし、含まない場合もある。いくつかの実施形態において、「分析対象物を定量する」とは、試料中に存在する分析対象物の量を確定することを指す。試料は、分析対象物を含有することはわかっているが、量が未知である場合がある。或いは、試料は、分析対象物を含有する又は含有しない可能性があり、且つ該方法は、分析対象物を検出すること及び定量することの両方を含む。
【０１００】
以下の段落では、上記非競合及び競合アッセイ法の両方のさらなる実施形態について説明する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物からのデータを使用して、試料の成功的測定を確認できる。これらの混合物から得られる測定シグナルを前以て測定したシグナル範囲と対比できる。測定シグナルが前以て測定したシグナル範囲内であるなら、該測定は有効と考えることができ、試験試薬混合物からの測定値が記録される。測定シグナルが前以て測定したシグナル範囲内でないなら、再較正が必要である。陽性対照／キャリブレーター反応混合物から得られる測定シグナルは、数理的較正曲線の使用を通して分析対象物の濃度に変換することもできる。この変換値を、前以て測定した濃度範囲と対比できる。即ち、測定濃度が前以て測定した濃度範囲内であるなら、該測定は、有効と考えることができ、試験試薬混合物から得られる測定値が記録される。
【０１０１】
試料を陽性対照／キャリブレーター反応混合物に直接添加（即ち、混合物を再構成するため）する各種の実施形態において、試料中の分析対象物濃度は、測定シグナルから、測定シグナルの一部を試料に帰属するアルゴリズム、例えばシグナルのレベルを分析対象物の濃度に関連付ける数理関数によって決定できる。例えば、水又は緩衝液を用いて再構成された陽性対照／キャリブレーター反応混合物から得られる測定シグナルを、試料を用いて再構成された陽性対照／キャリブレーター反応混合物から得られる測定シグナルと比較できる。このような実施形態において、２つのシグナル間の差異（もし存在するなら）を利用して試料中の分析対象物の量を計算することが可能であり、該対照／キャリブレーターは内部対照として機能する。
【０１０２】
１つを超える（例えば、２つ又は３つ）陽性対照／キャリブレーター反応混合物を使用する実施形態において、分析対象物の濃度は、異なってもよいし同一でもよい。複数の陽性対照／キャリブレーター反応混合物の中のすべて又はいくつかのみを使用して試験試薬混合物からの測定値が記録されるか否かを判断できる。例えば、後掲実施例７のＢｉｏ  Ｒａｄ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｐｌｕｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｌｅｖｅｌ２及び３を、陽性対照／キャリブレーター試薬中で使用して試料の成功的測定を確認できる。
【０１０３】
以下の段落では、上記非競合及び競合アッセイ法の両方のさらなる実施形態について説明する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーター反応混合物から得られるデータを使用して、試験反応混合物から発生するシグナルを、数学的較正曲線の作成を援助することで、試験分析対象物の濃度に変換できる。較正曲線は、分析対象物量が未知の試料のシグナル測定値に関して、既知の分析対象物濃度を用いて試料に対するシグナル測定値の内挿及び外挿の両方を可能にする。曲線の適合に使用される数理関数の形態は、ピースワイズ一定、ピースワイズ線形、三次スプラインなどの関数を用いて測定値を内挿することによって、或いはすべてのデータを一次、二次、三次、又は四次多項式を用いて適合させることによって基礎をなす関係の連続性及び／又は平滑性を仮定することができ、一方、過剰束縛系の場合、パラメーターは、最小二乗（例えば、Ｐｒｅｓｓ，Ｗ．、Ｔｅｕｋｏｌｓｋｙ，Ｓ．、Ｖｅｔｔｅｒｌｉｎｇ  Ｗ．、Ｆｌａｎｎｅｒｙ，Ｂ．のＮｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｒｅｃｉｐｅｓ  ｉｎ  Ｃ、Ｔｈｅ  Ａｒｔ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ、第２版、１９９２年、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）又は総合最小二乗（例えば、Ｖａｎ  Ｈｕｆｆｅｌ，Ｓ．及びＶａｎｄｅｒｗａｌｌｅ，Ｊ．のＴｈｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｌｅａｓｔ  Ｓｑｕａｒｅｓ  Ｐｒｏｂｌｅｍ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９９１年）、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ）などの誤差関数を最小にすることによって計算される。数理関数の形態は、１位置飽和、２位置飽和、非特異的結合を伴う１位置飽和、非特異的結合を伴う２位置飽和、可変勾配を伴う又は伴わないＳ字状容量応答曲線、１位置競合、２位置競合、又は４パラメーター論理などのアッセイ機構について仮定できる。較正曲線の生成は、数理関数の形態を選択すること、次いで関数のパラメーターを測定値と適合させることを必要とする場合がある。測定値は装置上で処理することができ、或いは部分的に又は全部別の場所（例えば、アッセイがなされる場所）で処理できる。測定値は、数理関数を完全束縛又は過剰束縛できる。過剰束縛系の場合には、モデルパラメーターを、最小二乗（例えば、Ｐｒｅｓｓら、１９９２年）又は総合最小二乗（例えば、Ｖａｎ  Ｈｕｆｆｅｌら、１９９１年）などの誤差関数を最小にすることによって計算できる。例えば、後掲の実施例７のＰＳＡキャリブレーターＡ〜Ｇを４パラメーター論理関数と共に使用して、試験反応混合物から発生するシグナルを試験分析対象物の濃度に変換するのに使用される数学的較正曲線を構成できる。
【０１０４】
特定の実施形態において、本発明の結合アッセイ法は、測定段階に先立って、試料を組成物と共にインキュベートすることを含む。インキュベーションの時間は、６０分未満又は１〜３０分の範囲など、分の桁でよい。インキュベーションは、約室温又は約３７℃など、約０℃を超え約５０℃までの温度範囲で実施できる。その他の温度は、加熱又は冷却浴の手段により、又は当技術分野で周知のその他の温度調節手段により達成できる。インキュベーションは、例えば、攪拌機又は振とう機などの手段で攪拌して又は揺動して実施できる。
【０１０５】
特定の実施形態において、アッセイは、アッセイ試薬及び使用するなら少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーターを、適切に希釈された試料を添加できる１つの組成物中に含めることができるシングル−ステップアッセイでよい。いくつかの実施形態において、アッセイは、アッセイ試薬及び使用するなら少なくとも１つの陽性対照／キャリブレーターを、試料及び適切な希釈剤を添加できる１つの組成物中に含めることができる２−ステップアッセイでよい。「シングル−ステップ」及び「２−ステップ」とは、本明細書中で使用する場合、分析対象物の結合事象を実際に実施するために要求される処理を指す。シングル及び２−ステップアッセイは、測定のための試料の調製など、分析対象物の結合事象に続くその他の工程を組み込むことができる。例えば、ＥＣＬアッセイでは、参照により本明細書に組み込まれる、例えば、米国特許第６，４５１，２２５号に記載されているように、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、トリ−ｎ−プロピルアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラプロピル−１，３−ジアミノプロパン、及び／又はそれらの塩を含むアッセイ緩衝液をアッセイ混合物に添加して、ＥＣＬ測定を容易にすることができる。さらなる例において、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，３２５，９７３号に記載されているように、シングル−又は２−ステップアッセイは、反応混合物を測定セル、例えば、電気化学セルへ移動することを含むこともできる。シングル−ステップ法は、アッセイ試薬及び陽性対照／キャリブレーターなど、アッセイを実施するための複数試薬の逐次添加及び移動を排除してアッセイ工程を簡単にすることができる。
【０１０６】
特定の実施形態において、本発明の方法は、単一試料中の複数の分析対象物（すなわち、２以上の分析対象物）をアッセイすることを含む。各分析対象物種を、変化する分析対象物濃度の陽性対照／キャリブレーター試薬を用いて評価する場合、特定の分析対象物種に対するキャリブレーターの配列を潜在的に形成して、測定される分析対象物ごとに複数のキャリブレーターを使用できる。アッセイは、当技術分野で周知の９６ウェルトレー又はその他のマルチウェルトレーなどのマルチウェルトレーと連携して使用できる。
【０１０７】
固定化された捕捉抗体及び標識化レポーター抗体の分析対象物に対する結合によって形成される複合体に起因するシグナルの測定又は検出の正確なステップ及び手段は、標識化結合パートナー、分析対象物、又は類似体の正確な性質によって、さらには結合パートナーを固定化する支持体によって決めることができる。このような技術は当技術分野で周知である。例えば、アッセイ混合物中の標識化成分を放射性原子で標識し、次いで、シグナルをシンチレーションカウンターの手段で検出できる。別法として、アッセイ混合物の標識化成分を、ＥＣＬ部分、化学発光部分、又は蛍光部分で標識すると、シグナルは、ＣＣＤ、光電子増倍管、フォトダイオード、ＣＭＯＳ検出器、ＮＭＯＳ検出器、フォトトランジスター又はアバランシュフォトダイオードなどの光検出器を使用して検出できる。
【０１０８】
標識化アッセイ成分からのシグナルを測定した後、検出されたシグナルの特性、例えば、強度、振幅、持続時間などを、該特性と分析対象物の存在若しくは量との間の既知の、又は前以て測定した相互関係と比較することによって、分析対象物の存在及び／又は量を決定できる。このような方法は、当業者にとって周知である。
【０１０９】
分析対象物を含む可能性のある試料は、分析することが望まれる任意の供給源から抜き取ることができる。例えば、試料は、身体、又は、血液、血漿、血清、乳、精液、羊水、脳脊髄液、喀痰又は唾液などのその他の生物学的流体から発生する可能性がある。或いは、試料は、湖沼又は川などの多量の水から得られる水試料でよい。試料は、試料を水又は水性緩衝液などの液体中に溶解又は懸濁することによっても調製できる。試料源は、大気由来でもよく、例えば、大気を濾過することができ、フィルターを液体で洗浄し、それによって分析対象物を大気から液体中に移動させる。試料は、アッセイ処理に先立って、濾過又はｐＨ調整などの処理又は加工に付すことができる。試料は、固定化された捕捉抗体及び標識化レポーター抗体の分析対象物に対する結合によって形成される複合体に起因するシグナルの発生又は検出を容易にする薬剤をさらに含むか又はそれに添加していてもよい。例えば、レポーター抗体が酵素で標識されている場合、試料は、その酵素に対する基質をさらに含んでいるか又はそれに添加していてもよい。
【０１１０】
キット
いくつかの実施形態において、本発明は、また、
（ａ）結合アッセイに使用される試薬及び陽性対照／キャリブレーター試薬を含む少なくとも１種の乾燥組成物、
（ｂ）少なくとも１種の乾燥組成物のそれぞれを配置した少なくとも１つの容器、
（ｃ）較正／対照用情報又は較正／対照用情報を得るための手引き、
（ｄ）場合によっては、そのキットの使用法を記載した挿入物又は梱包の形態での説明書、
を含むキットを提供する。
【０１１１】
特定の実施形態において、乾燥組成物は、本明細書中に記載された任意の乾燥組成物でよい。乾燥組成物は、
−  分析対象物に特異的に結合するための標識化結合パートナー、
−  同じ分析対象物に特異的に結合するための第２結合パートナー（ここで、標識化結合パートナーは第１結合パートナーである）、及び
−  第１の結合パートナーに結合することができる又は結合する少なくとも１種の支持体から選択される、結合アッセイに使用される少なくとも１つの試薬を含むことができる。
【０１１２】
本発明による特定のキットにおいて、試薬は、ＥＣＬ部分である標識を含む。関連する実施形態において、標識は、ルテニウム又はオスミウムを含むＥＣＬ部分であってよい。本発明のさらにその他の関連する実施形態において、ＥＣＬ部分は、［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋でよい。
【０１１３】
本発明のいくつかの実施形態において、試薬はビーズを含む。関連する実施形態において、ビーズは磁化性ビーズでよい。
【０１１４】
キット組成物は、本明細書に記載の任意の試薬、及び本明細書に記載の任意の容器、湿気インディケーター、及び湿気遮断物を含むことができる。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、キットに含まれる較正／対照用情報は、陽性対照／キャリブレーターに関する有効シグナル範囲又は有効濃度範囲でよい。いくつかの実施形態において、数学的較正曲線の形態を含むことができる。いくつかの実施形態において、数学的較正曲線の形態及び一部又はすべての曲線パラメーターを含めることができる。いくつかの実施形態において、較正／対照用情報は、キット中に、単に、他の場所に貯蔵された較正／対照用情報を調べるのに使用される手引き（ｋｅｙ）を確認することを介して含めることができる。確認の手引きは、例えば、試験予定分析対象物の名称のような簡単なものでよく、該情報は、例えば、装置又は測定キットのためのオペレーターマニュアル中に、或いは装置又は測定キットのためのソフトウェア中に貯蔵できる。確認の手引きは、例えば、数字列、英数字列、又は２進数列を含むことができる。確認の手引きは、例えば、較正／対照用情報を貯蔵している装置中への立ち入りを容易にするため、測定キット上でバーコード化されていてもよい。
【０１１６】
これらの実施形態では、陰性対照／キャリブレーターを使用できるものもある。陰性対照／キャリブレーター及び陽性対照／キャリブレーターを所持することによって、内挿法を利用して分析対象物濃度を決定できる。陰性対照／キャリブレーターを所持することによって、試料中の分析対象物の存否に関する信頼性のある閾値を利用できる。典型的には、それにも拘わらず、分析対象物を欠く試料でもバックグラウンドシグナルと呼ばれる測定可能なシグナルを呈示する。バックグラウンドシグナルは、多くの考え得る供給源を有する。例えば、標識化結合パートナーの非特異的結合は、バックグラウンドシグナルをもたらすことができる。いくつかのバックグラウンドシグナル源は、検出方法に特異的であり、例えば、同位体検出の場合のバックグラウンド放射線及び蛍光測定の場合の自己蛍光である可能性がある。バックグラウンドシグナルのいくつかの供給源は、試料に特異的である場合もある。環境もまた、例えば、温度、圧力及び／又はその他の依存関係を通してシグナルに影響を及ぼす。試料は分析対象物を含む可能性があるので、陰性対照／キャリブレーターを再水和するのに試料を使用することは、分析対象物の測定に余分なステップを付加する場合がある。試料は、所与の分析対象物の濃度に対する特異的シグナルを高める又は低減する化合物を含む可能性があるので、陰性対照／キャリブレーターを再水和するのに試料以外の緩衝液を使用することは、やはり、分析対象物の測定に余分なステップを付加する場合がある。反応混合物から標識化結合パートナーを除去すると、標識化結合パートナーの非特異的結合によるシグナル変化を低減できる。いくつかの実施形態において、支持体を使用する実施形態における第１結合パートナーの代わりに第３結合パートナーを使用できる。第３結合パートナーは、（１）分析対象物に特異的に結合できず、且つ／又は（２）第１結合パートナーと類似の非特異的結合特性を有し、例えば、それらは両方とも抗体又はそのフラグメントでよい。支持体を含む実施形態において、第３及び第１結合パートナーは、両方とも支持体に結合できる。陰性対照を再水和するのに、試料を、第１結合パートナーの代わりに第３結合パートナーと共に使用すると、類似のマトリックス効果、非特異的結合、及びその他のアッセイ効果を伴って、分析対象物を欠く試料に比較できるシグナルレベルを発生させることができる。
【０１１７】
他の実施形態は、
（ａ）標識及び結合パートナーを含む標識化結合パートナー（ここで、前記標識化結合パートナーは、分析対象物に特異的に結合できる）、及び
（ｂ）結合パートナーに特異的に結合できる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を含む陽性対照／キャリブレーター試薬、
を含むアッセイ用陽性対照／キャリブレーターとして使用するための少なくとも１種の乾燥組成物を含むキットを提供し、該組成物は、組成物の総重量に対して約５重量％以下の水分含有量を有し、且つ、少なくとも１種の乾燥組成物のそれぞれは容器内に配置されている。
【０１１８】
一実施形態において、標識化結合パートナーと陽性対照／キャリブレーター試薬は、互いに物理的に接触した状態であり、例えば、容器内に、例えば容器の配向に応じて互いに接触できる能力があるように配置される。一実施形態において、乾燥組成物は、密接な物理的混合物を含む。他の実施形態において、「物理的接触」は、物理的接触状態にある少なくとも２つの隣接している領域を含み、そこでは、少なくとも１つの第１領域が標識化結合パートナーを含み、少なくとも１つの第２領域が陽性対照／キャリブレーター試薬を含む。参照により本明細書に組み込まれる、例えば、２００５年６月２３日出願の米国特許仮出願第６０／６９３，０４１号「Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ」の図１６に記載されているような、例えば、管、瓶、又は容器などの当技術分野で周知の任意の容器を使用できる。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、キットは、分析者が測定又は検出可能な濃度範囲（又は、範囲の一部）を拡げることを可能にするための陽性対照／キャリブレーター試薬を含む。一実施形態において、分析対象物は、ｃ１〜ｃ２（ｃ１＜ｃ２）の範囲の測定可能濃度を有する。キットは、さらに、
（ａ）結合アッセイに使用される試薬、及びｐ個（ｐ≧１）の異なる既知量の分析対象物又は分析対象物類似体を有する陽性対照／キャリブレーター試薬を含む第１乾燥組成物、
（ｂ）陽性対照／キャリブレーター試薬なしで結合アッセイに使用される試薬を含む第２乾燥組成物、
（ｃ）組成物を配置した少なくとも１つの容器、
（ｄ）較正／対照用情報、又は較正／対照用情報を得るための手引き、
を含み、
ここで、分析対象物を欠く試薬で再水和する場合には、ｐ個の既知量は、ｄ１、ｄ２、．．．．、ｄｐ（ｄ１＜ｄ２、．．．．、＜ｄｐ）の較正濃度を作り出し、
ここで、（ｉ）ｄ１／ｃ１、（ｉｉ）１≦ｍ≦ｐ−１の場合ｄｍ＋１／ｄｍ、及び（ｉｉｉ）ｃ２／ｄｐの中の最大値は約α以下であり、
ここで、ｐ＞１ならα＝２（ｃ２／（（ｐ−１）×ｃ１））、ｐ＝１ならα＝２（ｃ２／ｃ１）である。
【０１２０】
一実施形態において、α＝２（ｃ２／（ｐ×ｃ１））である。他の実施形態において、α＝２（ｃ２／（ｐ＋１）ｃ１）である。さらに他の実施形態において、ｐ＝１、２、３、又は４である。
【実施例】
【０１２１】
これらの実施例により、固定化第１抗体、標識化第２抗体、及び既知量の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を含む凍結乾燥組成物を利用するＰＳＡを検出するための、定量的電気化学発光（ＥＣＬ）をベースにしたサンドイッチ免疫測定法を説明する。
【０１２２】
これらの実施例では、前立腺抗原を検出するための試薬を凍結乾燥し、３種のマトリックス中のＰＳＡを検出するそれらの能力について試験した。結果は、凍結乾燥試薬を使用するアッセイ法の性能が、湿式試薬を使用するアッセイ法の性能に勝るとも劣らないことを示した。
【０１２３】
始めに、ＰＳＡ試薬のための概略的最適化を、特に、ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）アナライザー（ＢｉｏＶｅｒｉｓ社）について実施した。これに続いて、アッセイ平衡に必要なインキュベーション時間を決定した。この測定法に使用される高親和性、高アビディティー（ａｖｉｄｉｔｙ）モノクロナール抗体は、ＰＳＡの迅速な（３０分以下）定量的検出を可能にする。この実施例で、湿式試薬を、凍結乾燥試薬、並びに現在湿式試薬を使用しているＥｌｅｃｓｙｓ１０１０（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）及びＭ−ＳＥＲＩＥＳ  Ｍ１アナライザー（ＢｉｏＶｅｒｉｓ社）を含むＥＣＬをベースにしたその他のシステムと直接対比した。すべてのシステムで、アッセイ法に特異的な標準曲線から得られるＰＳＡ濃度は類似していた。アッセイ法の性能は、この分析対象物に関して臨床的に意味のあるレベルで類似していた。試薬を直接的に比較するため、同一試薬を、Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０、ＯＲＩＧＥＮ及びＭ１アナライザー上で試験した。この実施例で試験したマトリックスには、スパイクキャリブレーター希釈液、全血、及び血漿が含まれる。キャリブレーター希釈液中での検出は、試験したすべてのシステムにおいて血漿中での検出と類似していた。
【０１２４】
（実施例１）
抗体の標識化
モノクロナール抗体ＰＳＡ１０（３０４−０１、ＣａｎＡｇ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を、２倍モル過剰で添加したビオチン−ＮＨＳ−エステルＬＣ（１１０１５、ＢｉｏＶｅｒｉｓ社）と共に回転ミキサー上、室温で１時間インキュベートすることによってビオチン化した。未反応ビオチン−ＮＨＳ−エステルＬＣを、リン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）／０．０５％アジ化ナトリウム中で膨潤させたＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５カラムでゲル濾過して除去した。透析（Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）透析カセット、Ｐｉｅｒｃｅ社）は、２回の室温透析交換（各３時間）及び４℃でのＰＢＳ／０．０５％アジ化ナトリウムに対する終夜透析を必要とした。タンパク質濃度は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイ法で測定した。ビオチン化した第１抗体は４℃で貯蔵した。
【０１２５】
モノクロナール抗体ＰＳＡ６６（３１０−０１、ＣａｎＡｇ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社）を７．５倍モル過剰のＯＲＩ−ＴＡＧ（登録商標）ＮＨＳエステルを用いてルテニウム化した。未反応のＯＲＩ−ＴＡＧ（登録商標）を、ビオチン化抗体の精製について前記したのと同様の方法で除去した。ＯＲＩ−ＴＡＧ（登録商標）：タンパク質の組込み比率を、ＯＲＯ−ＴＡＧ（登録商標）のモル濃度をＯＲＩ−ＴＡＧ（登録商標）で標識されたタンパク質のモル濃度で除して決定した。ＯＲＩ−ＴＡＧ（登録商標）で標識された第２抗体（検出試薬）は４℃で貯蔵した。
【０１２６】
（実施例２）
分析対象物特異的ビーズの調製
ビオチン化第１抗体を、２．８μｍのストレプトアビジン被覆超常磁性ビーズ上に固定化した。ストレプトアビジンビーズを磁気微粒子セパレーター（Ｄｙｎａｌ）を使用し、ビーズ懸濁液初期容量の２倍容のＰＢＳ、０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（ＰＢＳ−Ｔ）を用いて２回予備洗浄し、緩衝液を除去する前にビーズを捕捉した。次いで、ストレプトアビジンビーズを、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０なしのＰＢＳでもう１回洗浄した。ストレプトアビジンビーズをＴｗｅｅｎ（登録商標）２０なしのＰＢＳでそれらの元の容積に再構成した。ビオチン化抗体（１００μｇ）を１ｍＬの予備洗浄したストレプトアビジンビーズと共に、ビーズを懸濁状態に保持するための回転装置上、室温で１時間インキュベートした。インキュベーション期間の後に、予備洗浄の手順を繰り返して、遊離ビオチン化抗体を除去した。第１抗体−被覆超常磁性ビーズ（捕捉ビーズ）は、４℃で貯蔵した。
【０１２７】
（実施例３）
アッセイのプロトコール
ＥＣＬ測定には、ＯＲＩＧＥＮ  Ｉ（登録商標）アナライザー（ＢｉｏＶｅｒｉｓ社）、Ｍ−ＳＥＲＩＥＳ（登録商標）Ｍ１アナライザー（ＢｉｏＶｅｒｉｓ社）、及びＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）１０１０（Ｒｏｃｈｅ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社−ＵＳＡ）を使用した。ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）は、照度計、電位差計、電気化学フローセル、流体取扱い要素、及び５０管カローセルを統合している。装置は、オン−スクリーンメニューのオペレータ操作を介するマイクロコンピューターによって制御される。
【０１２８】
試薬の最適化は、ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）及びＭ１アナライザーでのアッセイについて実施した。アッセイ予定試料（５０μＬ）を、１２×７５ｍｍの反応管又はマイクロタイターウェルに添加した。また、蔗糖、及び抗体希釈液で５μｇ／Ｌまで希釈した２５μＬの検出試薬を含むビーズ希釈液に１：５０で希釈された捕捉ビーズ（２５μＬ）を添加した。これらの濃度は、反応チューブウェルに添加された試薬の操作時濃度を指し、反応チューブウェル中の最終濃度を指すものではない。ＰＢＳ（２００μＬ）及び０．５％Ｔｒｉｔｏｎ×１００（アッセイ希釈液）を添加して３００μＬの最終容積にした。反応物を、ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）のカローセル上又はプレート振とう機上で３０分間（インキュベーション時間を変化させるインキュベーション時間の検討の場合を除き）インキュベートした。ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）で凍結乾燥試薬を使用する場合には、凍結乾燥試薬のペレットを含む反応管に試料を直接添加し、続いて２５０μＬのアッセイ希釈液を添加した。凍結乾燥したＰＳＡキャリブレーターは、３００μＬのアッセイ希釈液を受け入れた。
【０１２９】
Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）１０１０でのアッセイは、特注及びＷＤＰＴ（研究）ソフトウェアを使用して実行した。特注ソフトウェアと異なり、研究ソフトウェアは、使用者に、使用者が自らの線形回帰分析を実行することを可能にするＥＣＬ値を提供する。Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）トータルＰＳＡ（Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ｔＰＳＡ）を、製造業者のプロトコールによる特注ソフトウェアを使用して市販の試験を用いて試験した。研究ソフトウェアを用い、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）１０１０でＯＲＩＧＥＮ（登録商標）Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ＰＳＡ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＰＳＡ  Ｄｅｍｏ）を試験した。また、ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）及びＭ１アナライザーで使用したのと同一の試薬及び希釈液を用いて自己調製ラックパックを調製し、類似のプロトコールで実験した。これにより、プラットフォームの直接比較が可能になった。
【０１３０】
（実施例４）
全血／血漿のサンプリング
リチウムヘパリン抗凝固剤を含む全血試料は、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂａｎｋから受領し、ＰＳＡを加えて４つのレベル（陰性を含む）にスパイクし、１、２、３、４と表した。血漿は、各全血スパイクレベルから調製した。全血及び血漿スパイクを前述の方法に従って測定した。各実験で、キャリブレーター設定、キャリブレーター希釈（ＣＤ）スパイク、全血及び／又は血漿スパイク、及びＢｉｏ  Ｒａｄ対照をアッセイした。
【０１３１】
（実施例５）
試薬の凍結乾燥
捕捉及び検出試薬の操作溶液（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を前述の通り調製し、等部で混合し、アッセイ試薬のバルク製剤を調製した。
【０１３２】
バルクアッセイ試薬及び陽性対照を含む組成物を調製するため、アッセイ試薬及び陽性対照をドライアイス上の管に別個に添加し、管中での抗体／抗原の結合を防止した。先ず、バルクアッセイ試薬を、ドライアイス床上にあるトレー中のポリプロピレン管に添加した。試薬は、管に添加すると直ちに凍結した。次に、キャリブレーター（Ａ〜Ｇ）を含む５０μＬのＰＳＡ抗原を凍結試薬ペレットの頂部に添加すると、それは直ちに凍結した。２つの異なる凍結ペレットが観察された。これらを、試薬のみを含む管に対して使用される同一プロトコールを使用して凍結乾燥した。凍結乾燥のサイクルが完結したら、すべての管をアルゴン下で埋め戻し（ｂａｃｋ−ｆｉｌｌ）、栓をし、クリンプで密封した（「凍結乾燥ＰＳＡキャリブレーター」）。
【０１３３】
５０μＬのこのバルクアッセイ試薬を、ポリプロピレン管に添加し、以下に示す乾燥段階パラメーターに従って１６．５時間にわたって凍結乾燥した。
【０１３４】
【表１】
2008521007.tif 000002
【０１３５】
表中の用語「ホールド」とは、温度及び圧力を、その行に示した時間の間、示した温度及び圧力に保持することを指す。表中の用語「ランプ」は、前段階の条件で出発し、示した時間を費やしてその条件をその行に示した温度及び圧力まで変化させることを意味する。
【０１３６】
（実施例６）
インキュベーション時間
ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）でアッセイするための試料を室温で９、１５、３０、又は６０分間、或いは３７℃で９分間インキュベートした。ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）では、室温での約３０分間のインキュベーションでアッセイ平衡に到達すると思われた。３７℃及び室温での９分間のインキュベーション後に得られる用量応答曲線に有意差はなかった。図１は、異なる時点で得られた用量応答曲線を示す。図２は、３０分のインキュベーション後の陰性及び陽性反応の交互対を示す。
【０１３７】
（実施例７）
プラットフォームの比較
ＰＳＡ含有試料を、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）、ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）、及びＭ１アナライザーでアッセイした。ＢｉｏＶｅｒｉｓ  ＰＳＡデモンストレーション試薬から調製したＰＳＡキャリブレーターを、ＣＤ、全血、及び血漿スパイクと一緒に試験した。各アッセイと共にＢｉｏ  Ｒａｄ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｐｌｕｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌレベル１、２、及び３を実験して各アッセイの精度を確認した。Ｂｉｏ  Ｒａｄ２及び３は、それぞれ３．０〜４．９ｎｇ／ｍＬ及び１７〜２８ｎｇ／ｍＬの濃度範囲を示した。
【０１３８】
図３は、すべての装置（ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）、及びＭ１）に対するキャリブレーターセットのＳ：Ｂ（シグナル：バックグラウンド）比率のグラフ表示である。データを下表Ｉに示す。すべてのアッセイにおいて、高い相関係数を有する線形の用量応答曲線が得られた。ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）で凍結乾燥試薬と湿式試薬の間に性能において有意差はなかった。
【０１３９】
【表２】
2008521007.tif 000003
【０１４０】
ＰＳＡキャリブレーターを用いて各装置について得られた較正曲線からスパイク類の濃度を導出した。スパイクレベルは０〜３０ｎｇ／ｍＬの範囲なので、これらの導出には最初の５つのキャリブレーター（Ａ〜Ｅ）のみを使用した。これらのキャリブレーターは、０〜４１ｎｇ／ｍＬの範囲を有し、ＥｌｅｃｓｙｓのトータルＰＳＡ試験で確認した。図４は、較正用の用量応答曲線を示す。データを下表ＩＩに示す。
【０１４１】
【表３】
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【０１４２】
表ＩＩの濃度を導出するのに使用した等式を以下に示す。即ち、
Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）試験：ｙ＝２０７４３ｘ＋４１１２；Ｒ２＝１、
Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＰＳＡ  Ｄｅｍｏ：ｙ＝１０６８４ｘ＋６２３；Ｒ２＝０．９９９９、
Ｍ１：ｙ＝７１１６．８ｘ＋３２８；Ｒ２＝０．９９９６、
ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）Ｄｒｙ：ｙ＝５５６０．２ｘ＋４１４；Ｒ２＝０．９９９、
ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）Ｗｅｔ：ｙ＝５０８５．３ｘ＋４１０；Ｒ２＝０．９９９５。
【０１４３】
（実施例８）
全血及び血漿試料からの％回収
スパイクされた全血及び血漿試料からの％回収を、キャリブレーター希釈液スパイク中に存在するＰＳＡの量に対するパーセンテージとして計算した。血漿の場合、回収は７６．２％〜９８．９％の範囲であった。Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０を用いて得られたデータは、平均で９６．９％の最も高い回収を一貫して示し、一方、ＯＲＩＧＥＮ及びＭ１アナライザーは、血漿に関してほぼ８２％の平均回収を有した。全血スパイクの回収は、高々２４．９％〜４１．３％の範囲であった。データを下表ＩＩＩに示す。
【０１４４】
【表４】
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【０１４５】
（実施例９）
凍結乾燥ＰＳＡキャリブレーターからの結果
陽性キャリブレーターＡ〜Ｇを、単一の管中でアッセイ試薬と共にそれぞれ凍結乾燥した。これらを、液体キャリブレーターを添加した凍結乾燥アッセイ試薬と比較した。図５に示すように、液体キャリブレーターと比較して、同一の管中でアッセイ試薬と一緒に凍結乾燥したＰＳＡキャリブレーターに関して極めて良好な結果が得られた。
【０１４６】
ＰＳＡキャリブレーターをアッセイ試薬と共に凍結乾燥すると、これらの管は１ステップの再水和を要求するだけなので、使用し易いフォーマットが提供される。これらの管中に２種の異なった凍結乾燥ペレットが見られた。一方のペレットは、凍結乾燥された試薬であり、他方のペレットは、凍結乾燥されたキャリブレーターであった。２種のペレットはまったく異なるので、陽性キャリブレーターとアッセイ試薬の結合反応は、アッセイ試薬と陽性キャリブレーターが、試料又は緩衝液を用いる再水和の際に混合されるまで開始しない。
【０１４７】
これらの実施例は、凍結乾燥ＰＳＡキャリブレーターに関する結果が、キャリブレーターを液体状態で受け入れた管と比較した場合に極めて類似していることを立証している。
【０１４８】
明細書及び本明細書に開示された本発明の実施を考慮することにより、当業者にとって本発明のその他の実施形態も明らかであろう。明細書及び実施例は、単に例示的なものとして考慮されることを意味し、本発明の範囲及び精神は、添付の特許請求の範囲によって示されると解釈される。
【図面の簡単な説明】
【０１４９】
【図１】ＰＳＡキャリブレーター溶液Ａ〜Ｇについて、異なるインキュベーション時点で得られた用量−応答曲線である。
【図２】ＯＲＩＧＥＮ（登録商標）アナライザーによるインキュベーションが３０分間のアッセイにおける１つのカローセルにわたるずれを示す棒グラフである。
【図３】すべての装置におけるＰＳＡキャリブレーター溶液Ａ〜Ｇのシグナル：バックグラウンド比率の棒グラフである。
【図４】湿式試薬及び乾燥試薬によるアッセイを比較した、キャリブレーターの用量−応答曲線である。
【図５】湿式と乾燥のＰＳＡキャリブレーターＡ〜Ｇに関する用量−応答曲線を対比した棒グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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