(57)【要約】  短腸症候群を治療または予防するための薬剤組成物を提供する。組成物は、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含む。組成物は、短腸症候群において体重を増加させ、腸内吸収表面積を増加させることが示されている。投与単位、治療方法、使用およびキットも提供される。
2008543790.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含み、該アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比が、１：４５４００００００〜約１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜約１：４５０００（モル：モル）である、短腸症候群を治療または予防するための組成物。
【請求項２】
固体形態の、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
凍結乾燥形態の、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
溶液形態の、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
溶液がヒトへの経口送達に適している、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
溶液がヒトへの経腸送達に適している、請求項４記載の組成物。
【請求項７】
溶液が静脈内投与に適している、請求項４記載の組成物。
【請求項８】
ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
ＥＧＦ受容体アゴニストが合成物であり、場合により化学合成もしくは組み換え技術によって製造される、または天然源に由来する、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
Ｌ−アルギニンを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
製薬上許容される液体で溶解して、短腸症候群のリスクがある被検体への経口投与に適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む、投与単位。
【請求項１２】
製薬上許容される液体で溶解して、短腸症候群と診断された被検体への経口投与に適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む、投与単位。
【請求項１３】
製薬上許容される液体が、水、生理食塩水、乳児用特殊調製乳、緩衝液、搾乳した母乳、他の適切な担体、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１または１２に記載の投与単位。
【請求項１４】
アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比が、１：４５４００００００〜約１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜約１：４５０００（モル：モル）である、請求項１１、１２または１３に記載の投与単位。
【請求項１５】
ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項１６】
Ｌ−アルギニンを含む、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項１７】
製薬上許容される溶液で溶解して、短腸症候群のリスクがある被検体への静脈内投与に適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む、投与単位。
【請求項１８】
製薬上許容される溶液で溶解して、短腸症候群と診断された被検体への静脈内投与に適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む、投与単位。
【請求項１９】
アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比が、１：４５４００００００〜約１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜約１：４５０００（モル：モル）である、請求項１７または１８に記載の投与単位。
【請求項２０】
ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項２１】
Ｌ−アルギニンを含む、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項２２】
製薬上許容される溶液で溶解して、短腸症候群のリスクがある被検体への非経口投与に適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む、投与単位。
【請求項２３】
製薬上許容される液体で溶解して、短腸症候群と診断された被検体への非経口投与に適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む、投与単位。
【請求項２４】
製薬上許容される液体が、水、生理食塩水、緩衝液および完全非経口栄養調合物からなる群から選択される、請求項２２または２３に記載の投与単位。
【請求項２５】
アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比が、１：４５４００００００〜約１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜約１：４５０００（モル：モル）である、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項２６】
ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項２７】
Ｌ−アルギニンを含む、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項２８】
短腸症候群と診断された患者を治療する方法であって、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを、それらが必要な患者に投与することを含む、治療方法。
【請求項２９】
短腸症候群のリスクがある患者を治療する方法であって、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを、それらが必要な患者に投与することを含む、治療方法。
【請求項３０】
患者が既に小腸の切除を受けている、または将来小腸の切除を受ける、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
好適には少なくとも１日に１回、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを、それらが必要な患者に経腸的に投与することを含む、患者において短腸症候群を治療または予防する方法。
【請求項３２】
ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とが混合物として一緒に投与される、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
混合物が少なくとも１日に１回投与される、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
ＥＧＦ受容体アゴニストがＥＧＦである、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ＥＧＦが組み換え技術または合成化学プロセスにより合成される、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
Ｌ−アルギニンを含む、請求項３１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
治療量のＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体と短腸症候群の治療または予防において使用するための指示とを含む、キット。
【請求項３８】
ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とが、固体形態で配合されて供給される、請求項３７記載のキット。
【請求項３９】
指示が、経口投与に適した溶液に固体形態を溶解する工程を含む、請求項３８記載のキット。
【請求項４０】
指示が、静脈内投与に適した溶液に固体形態を溶解する工程を含む、請求項３８記載のキット。
【請求項４１】
アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とが別々に供給される、請求項３８記載のキット。
【請求項４２】
アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とのうちの少なくとも１つが固体形態である、請求項４１記載のキット。
【請求項４３】
アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とのうちの少なくとも１つが溶液である、請求項４１記載のキット。
【請求項４４】
指示が、投与前にアゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを混合する工程を含む、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４５】
患者においてＳＢＳを治療または予防する方法であって、
（ｉ）第１治療期間にわたり、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含む組成物を患者の皮下にまたは静脈内に投与すること；および
（ｉｉ）第１治療期間の後の第２治療期間にわたり、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含む組成物を患者に経腸的に投与すること
を含む、ＳＢＳの治療または予防方法。
【請求項４６】
第２治療期間が、イレウスの治癒後に開始される、請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
経腸投与が浣腸による投与を含む、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
経腸投与が経口投与を含む、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４９】
第２治療期間が２つの段階を含み、第１段階の投与が経口投与であり、第２段階の投与が浣腸により行われる、請求項４５記載の方法。
【請求項５０】
第１治療期間の間の投与が静脈内投与により行われる、請求項４５〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
第２治療期間の間の投与が経口的な経路によるものであり、切除の４〜６日後に行われる、請求項４５〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
患者においてＳＢＳを治療する方法であって、患者の腸管にＥＧＦ受容体アゴニストを送達すること、および患者の腸管内においてＮＯの生体内産生を増大させることを含む、ＳＢＳの治療方法。
【請求項５３】
ＮＯの生体内産生を増大させることが、患者に酸化窒素シンターゼの基質を投与することを含む、請求項５１記載の方法。
【請求項５４】
ＮＯの生体内産生を増大させることが、ＮＯ供与体を投与することを含む、請求項５１記載の方法。
【請求項５５】
ＳＢＳのリスクがある人を治療する方法であって、患者の腸管にＥＧＦ受容体アゴニストを送達すること、および患者の腸管内においてＮＯの生体内産生を増大させることを含む、治療方法。
【請求項５６】
ＮＯの生体内産生を増大させることが、患者に酸化窒素シンターゼの基質を投与することを含む、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
ＮＯの生体内産生を増大させることが、ＮＯ供与体を投与することを含む、請求項５５記載の方法。
【請求項５８】
患者が既に小腸主要部の外科的切除を受けている、請求項５５、５６または５７に記載の方法。
【請求項５９】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用するための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用するための、請求項１１〜２６のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項６２】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用するための、請求項１１〜２６のいずれか１項に記載の投与単位。
【請求項６３】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用するための、請求項２７〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用するための、請求項２７〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用するための、請求項３７〜４４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６６】
短腸症候群の、または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用するための、請求項３７〜４４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６７】
短腸症候群の、または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させるための、請求項４５〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用するための、請求項４５〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
短腸症候群を治療または予防するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用。
【請求項７０】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させるための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用。
【請求項７１】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させるための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用。
【請求項７２】
短腸症候群を治療または予防するための薬剤を調製するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用。
【請求項７３】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させるための薬剤を調製するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用。
【請求項７４】
短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させるための薬剤を調製するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用。
【請求項７５】
ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比が、１：１００，０００（モル：モル）である、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的には、短腸症候群（ＳＢＳ）または結腸の切除、小腸の切除および小腸大量切除を含む状態を治療または予防するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
短腸症候群（ＳＢＳ）は、小腸の主要部を外科的に切除した後に生じるさまざまな吸収不良として定義される。この症候群は栄養素の吸収不良を特徴とする。ＳＢＳは、早産児から成人まで、すべての年齢の人々に影響を及ぼす。有意な長さの小腸の外科的除去が必要とされ、ＳＢＳを引き起こす多くの状態が存在し、限定されないが、壊死性腸炎（ＮＥＣ）、腹壁欠損、空腸回腸閉鎖、中腸腸捻転および炎症性腸疾患を含む。
【０００３】
乳児の場合、ＳＢＳは、例えば壊死性腸炎（ＮＥＣ）または腸捻転の外科的介入後、多くの事象により引き起こされ得る。ＳＢＳは、発育不良、成長障害および重度の発達障害、ならびに死亡となり得る栄養素の吸収の低下を引き起こす（Ｂｕｃｈｍａｎ，Ａ．Ｌ．ら、１９９４年；Ｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．Ａ．ら、１９９９年）。更に、小児は、長期間にわたる完全非経口栄養により誘発される胆汁うっ滞に続発する末期肝臓疾患の発症へと進行し得る。
【０００４】
成人の場合、ＳＢＳは、例えばクローン病および他の病気の外科的介入など多くの要因によって起こる可能性があり、栄養素の吸収の低下、時には特定の必須栄養素の欠損をもたらす。これは、遠位回腸が切除されたときに起こる。遠位回腸は、特定の必須栄養素（例えば、ビタミンＢ１２および他の脂溶性ビタミン）の吸収および胆汁酸塩の吸収のためのメカニズムを発現する。成人の場合、ＳＢＳは、乳児の場合よりも生命を脅かす危険性は少ないが、深刻なライフスタイルの変化、例えば、慢性の下痢、慢性の脱水症、筋痙攣、完全非経口栄養（ＴＰＮ）への依存、感染症およびビタミンＢ１２などの外因性栄養補給剤への依存をもたらし得る。
【０００５】
数多くの研究者らが、小腸大量切除後の腸の適応におけるＥＧＦの役割を実証している（Ｃｈａｅｔ，Ｍ．Ｓ．ら、１９９４年；Ｄｕｎｎ，Ｊ．Ｃ．ら、１９９７年；Ｏ’Ｌｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｖ．ら、１９９４年；Ｓｈａｍ，Ｊ．ら、２００２年；Ｓｈｉｎ，Ｃ．Ｅ．ら、１９９８年；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．、１９９９年）。ＥＧＦ治療は、小腸大量切除に応じて、残存腸における、粘膜過形成を増加させ（Ｃｈａｅｔ，Ｍ．Ｓ．ら、１９９４年；Ｇｏｏｄｌａｄ，Ｒ．Ａ．ら、１９８８年；Ｓｈｉｎ，Ｃ．Ｅ．ら、１９９８年）、グルコース吸収（Ｈａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ．ら、１９９７年；Ｏ’Ｌｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｖ．ら、１９９４年）および消化酵素発現（Ｄｕｎｎ，Ｊ．Ｃ．ら、１９９７年；Ｏ’Ｌｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｖ．ら、１９９４年）を増大させる。ＥＧＦの内因性産生の主要源は唾液腺からである。小腸切除後の適応力は唾液腺切除術により弱まり、外因性ＥＧＦを用いることによりこれを回復に向かわせられる（Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｍ．Ａ．ら、１９９８年）。残存腸において、ＥＧＦ受容体の発現が増大する（Ａｖｉｓｓａｒ，Ｎ．Ｅ．ら、２０００年；Ｗａｒｎｅｒ，Ｂ．Ｗ．ら、１９９７年）。適応力は欠損したＥＧＦ受容体を有する動物において弱められ（Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｍ．Ａ．ら、１９９７年）、腸におけるＥＧＦの過剰発現は小腸切除後の適応力を高める（Ｅｒｗｉｎ，Ｃ．Ｒ．ら、１９９９年）。更に、ＥＧＦ治療は、小腸大量切除後の腸細胞のアポトーシス率を抑制し、ＥＧＦの能力に寄与して障壁の完全性を維持し得る効果が示されている（Ｓｔｅｒｎ，Ｌ．Ｅ．ら、２０００年）。最後に、最近行われたヒト臨床試験において、腸の長さが通常の＜５０％である５人のＳＢＳ小児患者が経口的な組み換えヒトＥＧＦによる治療を受けた。ＥＧＦ治療は、３−Ｏ−メチルグルコース吸収および食事耐性を増大させ、すべての患者の体重が増加した。この治療法に関連する有害事象は存在しなかった（Ｓｉｇａｌｅｔ，Ｄ．ら、２００５年）。
【０００６】
内因性アルギニン産生の主要源、血漿中のＬ−アルギニンおよびＬ−シトルリンは、小腸大量切除後に適応することができない小児患者において減少し（Ｗａｓａ，Ｍ．ら、１９９９年）、ＳＢＳを伴わずに完全非経口栄養（ＴＰＮ）に依存している患者に比べ、ＳＢＳを伴ってＴＰＮに依存している成人および小児患者においても減少する（Ｗａｓａ，Ｍ．ら、１９９９年）。Ｌ−シトルリンは、主に、腸におけるグルタミンの分解により産生され、小腸大量切除が行われたラットにおいて、Ｌ−シトルリン産生の減少（Ｃｈｅｎ，Ｋ．ら、１９９６年；Ｄｅｊｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．ら、１９９８年）、腸におけるグルタミン取り込みの減少（Ｃｈｅｎ，Ｋ．ら、１９９６年）および腎臓におけるシトルリンからアルギニンへの変換の減少（Ｄｅｊｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．ら、１９９８年）が報告されている。アルギニン欠乏食を与えられた切除ラットは、体重減少、負の窒素バランスおよび著しく減少した筋中アルギニン濃度を示し、小腸大量切除後、アルギニンが必須アミノ酸となることを示唆している（Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．ら、１９９４年）。
【０００７】
切除後の腸の適応におけるアルギニンの役割について調べた幾つかの研究は、矛盾する結果をもたらした。小腸大量切除が行われたラットにおいて、Ｌ−アルギニンを有する基本食の補給は、構造的適応力を増大させた（Ｈｅｂｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．ら、１９９７年）。Ｃａｍｌｉら（２００５年）は、ＳＢＳのモデルにおいて、腹腔内アルギニン投与後の体重増加および腸の適応力の増大を報告した。彼らは、また、アルギニン投与後の血清中、唾液中および尿中ＥＧＦの増大についても指摘しており、アルギニンの有益な効果がＥＧＦレベルの上方調節によるものであり得ると結論付けている。腹腔内Ｌ−アルギニン投与は、９０％の小腸切除が行われたラットにおいて、体重増加、細胞増殖および構造的適応力を増大させることが報告されている（Ｏｚｔｕｒｋ，Ｈ．ら、２００２年）。小腸大量切除後のラットへのグルタミンおよびアルギニンの前駆体、オルニチンアルファ−ケトグルタラートの経口供給は、腸の構造的適応力、オルニチンデカルボキシラーゼ活性およびオルニチン含有量、ならびに血漿中および筋肉中のグルタミンレベルを増大させることが報告されている（Ｄｕｍａｓ，Ｆ．ら、１９９８年）。逆に、ＳＢＳのラットモデルにおいて、飲用水でＬ−アルギニンを与えられた動物は、非治療ＳＢＳラットに比べ、空腸および回腸重量が減少し、腸細胞のアポトーシス率が増加するとともに、残存腸の構造的適応力が低下することを示した（Ｓｕｋｈｏｔｎｉｋら、２００３年）。ＳＢＳのラットモデルにおける皮下アルギニン投与は、腸におけるタンパク質の合成およびグルタミンの取り込みを減少させ、アルギニンを与えられたラットにおいては腸透過性が改善されたものの、適応プロセスが抑制されたことを示す（Ｗｅｌｔｅｒｓ，Ｃ．Ｆ．ら、１９９９年）。ＳＢＳのモデルにおいて、アルギニンの非経口投与は、非治療切除動物と比べ、腸の適応力を弱めた（Ｓｕｋｈｏｔｎｉｋら、２００５年）。小腸大量切除が行われたラットへのグルタミン補強ＴＰＮの投与は、腸におけるグルタミンの取り込み、粘膜のグルタミナーゼ活性、ならびに粘膜のＤＮＡおよびタンパク質含有量を有意に増大させたが、対照に比べ、血中Ｌ−アルギニンレベルを減少させた（Ｃｈｅｎ，Ｋ．ら、１９９６年）。最後に、無アルギニン食を５日間与えられ、腸を切除してからの平均経過時間が４６か月の安定したＳＢＳ患者は、血漿中のアルギニン、オルニチンおよびヒドロキシプロリンレベルの有意な減少、ならびにオロチン酸および窒素化合物の尿中排出量の変化を示したが、不利な臨床事象を何ら伴わなかった（Ｐｉｔａら、２００４年）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、ＳＢＳに対する現在の治療法の選択肢は依然として限られている。蠕動運動を抑制し、且つ、胃酸を減少させるために、薬に加えて、特別食が処方される。時間が経っても治癒しないＳＢＳの場合は、生涯にわたる治療が必要になり得る。重度の場合においては、静脈内に投与される流動食または小腸移植手術が考慮される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の１つの態様は、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含み、アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比が、１：４５４００００００〜１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜１：４５０００（モル：モル）である、短腸症候群を治療または予防するための組成物を提供することである。組成物は固体形態、凍結乾燥形態または溶液形態であり得る。溶液は、ヒトへの経口送達、例えばヒトへの経腸送達に適し得る。また、溶液は、静脈内投与に適し得る。ＥＧＦ受容体アゴニストはＥＧＦであり、合成され、場合により化学合成もしくは組み換え技術によって製造され、または天然源に由来し得る。組成物はＬ−アルギニンを含んでもよい。組成物は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用され得る。また、組成物は、短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用され得る。ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比は１：１００，０００（モル：モル）であり得る。
【００１０】
本発明の別の態様は、製薬上許容される液体で溶解して、短腸症候群のリスクがある、または短腸症候群と診断された被検体に経口投与するのに適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む投与単位を提供することである。該液体は、水、生理食塩水、乳児用特殊調製乳、緩衝液、搾乳した母乳、他の適切な担体、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比は、１：４５４００００００〜１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜１：４５０００（モル：モル）であり得る。ＥＧＦ受容体アゴニストはＥＧＦであり、投与単位はＬ−アルギニンを含んでもよい。
【００１１】
本発明の別の態様は、製薬上許容される溶液で溶解して、短腸症候群のリスクがある、または短腸症候群と診断された被検体に静脈内投与するのに適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とＥＧＦ受容体アゴニストとを含む投与単位を提供することである。アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比は、１：４５４００００００〜１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜１：４５０００（モル：モル）であり得る。ＥＧＦ受容体アゴニストはＥＧＦであり、投与単位はＬ−アルギニンを含んでもよい。
【００１２】
本発明の別の態様は、製薬上許容される溶液で溶解して、短腸症候群のリスクがある、または短腸症候群と診断された被検体に非経口投与するのに適した、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体およびＥＧＦ受容体アゴニストを含む投与単位を提供することである。該液体は、水、生理食塩水、乳児用特殊調製乳、緩衝液、搾乳した母乳、他の適切な担体、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との比は、１：４５４００００００〜１：１（モル：モル）、または１：４５４０００００〜約１：４５００（モル：モル）、または１：４５４００００〜１：４５０００（モル：モル）であり得る。ＥＧＦ受容体アゴニストはＥＧＦであり、投与単位はＬ−アルギニンを含んでもよい。
【００１３】
本発明の投与単位は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重増加を目的として使用され得る。また、投与単位は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用され得る。
【００１４】
本発明の別の態様は、短腸症候群と診断された、または短腸症候群のリスクがある患者を治療する方法であって、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを、それらが必要な患者に投与することを含む方法を提供することである。患者は、小腸切除術を既に受けている、または将来小腸切除術を受ける患者であってもよい。
【００１５】
本発明の別の態様は、短腸症候群を治療または予防する方法であって、好適には少なくとも１日に１回、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを、それらが必要な患者に経腸的に投与することを含む方法を提供することである。ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とは、例えば少なくとも１日に１回、混合物として一緒に投与され得る。ＥＧＦ受容体アゴニストはＥＧＦであり得る。ＥＧＦは、組み換え技術または合成化学プロセスにより合成され得る。方法はＬ−アルギニンを含んでもよい。
【００１６】
本発明の方法は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重増加を目的で使用され得る。また、方法は、短腸症候群の人または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用され得る。
【００１７】
本発明の別の態様は、治療量のＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体と短腸症候群の治療または予防において使用するための指示とを含むキットを提供することである。ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とは、固体形態で配合されて供給され得る。また、キットは、固体形態を経口投与、例えば静脈内投与に適した溶液に溶解する工程についての指示を含んでもよい。アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とは別々に供給されてもよい。それらは固体または溶液形態であり得る。指示は、投与する前にアゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを混合する工程を含んでもよい。
【００１８】
キットは、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用され得る。また、キットは、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用され得る。
【００１９】
本発明の別の態様は、患者においてＳＢＳを治療または予防する方法であって、（ｉ）第１治療期間にわたり、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含む組成物を患者の皮下にまたは静脈内に投与すること；および（ｉｉ）第１治療期間の後の第２治療期間にわたり、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体とを含む組成物を患者に経腸的に投与することを含む方法を提供することである。第２治療期間はイレウスの治癒後に開始され得る。経腸投与は、浣腸による投与または経口投与を含み得る。第２治療期間は２つの段階を含み、第１段階では投与が経口的に行われ、第２段階では投与が浣腸により行われてもよい。例えば、第１治療期間の間の投与が静脈内投与により行われ、第２治療期間の間の投与が経口的な経路により、切除の４〜６日後に行われ得る。
【００２０】
本発明の別の態様は、ＳＢＳ患者を治療する方法またはＳＢＳのリスクがある患者を治療する方法であって、患者の腸管へＥＧＦ受容体アゴニストを送達することおよび患者の腸管内においてＮＯの生体内産生を増大させることを含む方法を提供することである。ＮＯの生体内産生を増大させることは、患者に酸化窒素シンターゼの基質を投与すること、例えばＮＯ供与体を投与することを含み得る。患者は、既に小腸の主要部が外科的に切除されていてもよい。
【００２１】
本発明の方法は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させる目的で使用され得る。また、方法は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させる目的で使用され得る。
【００２２】
本発明の別の態様は、短腸症候群を治療または予防するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用を提供することである。
【００２３】
本発明の別の態様は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させるための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用を提供することである。
【００２４】
本発明の別の態様は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させるための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用を提供することである。
【００２５】
本発明の別の態様は、短腸症候群を治療または予防するための薬剤を調製するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用を提供することである。
【００２６】
本発明の別の態様は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において体重を増加させるための薬剤を調製するための、ＥＧＦ受容体アゴニストおよびＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体の使用を提供することである。
【００２７】
本発明の別の態様は、短腸症候群の人、または短腸症候群のリスクがある人において腸の吸収表面積を増大させるための薬剤を調製するための、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの生物学的等価物またはＮＯ供与体との使用を提供することである。
【００２８】
本発明のこれらのおよび他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照することにより明らかになるであろう。更に、特定の手順、装置または組成についてより詳細に述べている様々な参考文献を以下に示す。本明細書に記載されるすべての参考文献は、各文献の内容全体が本明細書に再掲されたかの如く、参照により本明細書に組み入れられる。出願人は、出願の係属中、裁量により、そのような文献のいずれかまたはすべてを直接に組み入れる権利を留保する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明について説明する前に、以下で使用される特定の用語の定義を説明することが本発明を理解する上で役立つであろう。
【００３０】
本明細書で使用する「含む」という用語は、特定の構成要素を含有すること、特定の構成要素を包含すること、または特定の構成要素からなることを意味するが、それらの構成要素のみに限定するものではない。この用語は非制限的である。例えば、「ＥＧＦおよびＬ−アルギニンを含む薬剤組成物」という用語は、ＥＧＦおよびＬ−アルギニンを含有するあらゆる薬剤組成物を意味し、その組成物は、他の構成要素、例えば別の活性成分、香料、アジュバントなども含み得る。
【００３１】
本明細書で使用する「短腸症候群（ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」もしくはＳＢＳ、または「短消化管症候群（ｓｈｏｒｔ  ｇｕｔ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」という用語は、栄養素の吸収不良からもたらされる種々の症状、例えば小腸の有意な長さを外科的に切除した後に生じる、腹痛、下痢、体液うっ滞、非意図的な体重減少および極端な疲労などを特徴とする胃腸症候群を意味する。従って、本明細書で使用する場合、「短腸症候群」という用語は、短消化管症候群および小腸大量切除をも包含する。腸のホルモン反射およびフィードバックループが乱され、近位胃および小腸分泌物の量の増大、ならびに運動パターンの変質をもたらすことがある。水分、ナトリウムおよびマグネシウムの損失は、電解質平衡異常をもたらし得る。腸の特定部分に固有な特定の特異的吸収機能、例えば回腸によるビタミンＢ１２、胆汁酸塩および他の脂溶性ビタミンの吸収などが損なわれることもあり得る。
【００３２】
本明細書で使用する「ＥＧＦ受容体アゴニスト」は、ｅｒｂＢ（１〜４）受容体のうちのいずれか、特にｅｒｂＢ１受容体に結合したとき、以下の効果のいずれかまたはすべてが起こるように、生化学的な効果を生じさせるあらゆる分子を意味する：腸グルコース輸送を増大させる、腸細胞（小腸の内腔を覆っている細胞）の先端表面を変化させる、粘膜表面を横断する病原体のコロニー形成または転移が抑制される、および腸の成熟が誘発される。分子は、好適には、上皮細胞成長因子である。さもなければ、分子は、抗体、小分子、タンパク質、ペプチド、ペプチド類似体またはペプチド模倣物質であり得る。
【００３３】
本明細書で使用する「上皮細胞成長因子」またはＥＧＦは、正常なヒトの十二指腸および唾液腺で合成され、ヒトの母乳中において発現されることが知られている、５３アミノ酸のタンパク質である。ヒトＥＧＦのアミノ酸配列は：
Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｃｙｓ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｔｒｐ  Ｔｒｐ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ；
である（Ｂｏｏｎｓｔｒａら、１９９５年）。
【００３４】
本明細書で述べる実験において使用したタンパク質は、前述の配列を有していた。本発明において使用されるＥＧＦは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｈｉｇｅｔａ−Ｓｈｏｙｕ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）から入手した組み換えヒトＥＧＦ（純度＞９７％）である。ヒトにおいてＥＧＦとして作用する非ヒトＥＧＦ配列も想定されている。従って、ＥＧＦの変異体、例えばマウス、ラットおよびブタについて報告されているＥＧＦ（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｐ．Ｅ．ら、１９９８年；Ｎｅｘｏ，Ｅ．ら、１９８５年；Ｐａｓｃａｌｌ，Ｊ．Ｃ．ら、１９９１年；およびＳｉｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｊ．ら、１９８５年）、または米国特許出願第２００３００５９８０２号において引用されているウシＥＧＦなど、または種々の異なるＥＧＦ受容体リガンドのいわゆる超アゴニスト（ｓｕｐｒａ−ａｇｏｎｉｓｔｉｃ）キメラ（Ｌｅｎｆｅｒｉｎｋ，Ａ．Ｅ．ら、２０００年）なども含められる。この定義は、精製天然上皮細胞成長因子と実質的に同じ配列および活性を有するポリペプチドに対しても適用される。これは、組み換え技術により化学的に合成されたペプチドまたはタンパク質を包含する。また、この用語は、ＥＧＦの生物学的活性が実質的に保持されている限り、他のアミノ酸での置換、または１以上のアミノ酸の欠失により天然の配列と異なるタンパク質に対しても適用される。更に、この定義は、ＥＧＦの生物学的活性が実質的に保持されている限り、ＥＧＦのフラグメント、ペプチド類似体、ペプチド模倣物質、および米国特許第５，０７０，１８８号におけるアシル化された形態も包含する。ＥＧＦの生物学的活性は、受容体結合アッセイによりスクリーニングし、受容体アゴニストに関して、上記で示したいずれかの方法を用いて確認することができる。従って、例えば、２１位のメチオニン（Ｍｅｔ）がイソロイシン（Ｉｌｅ）で置換されているヒトＥＧＦタンパク質は、「ＥＧＦ」の範囲内に収まる。そのようなタンパク質は、一般的にｈＥＧＦ−Ｉ２１と表され、組み換え技術により調製された場合には、一般的にｒｈＥＧＦ−Ｉ２１と表される（化学的に合成されたｈＥＧＦは、「ｈＥＧＦ」という用語に包含される）。同様に、１１位のＡｓｐがＧｌｕで置換されているｈＥＧＦは、一般的にｈＥＧＦ−Ｅ１１と表される。カルボキシ末端付近で切断された幾つかのＥＧＦタンパク質は、それらの生物学的活性を保持しており、一般的に、保持されている最後のペプチド残基を示す添え字で表わされる。従って、正常な５３ペプチドの最後の２つを欠いたＥＧＦは、一般的に、ＥＧＦ５１と表記される。アミノ酸欠失を有するタンパク質、例えば、Ｔｒｐ４９を欠いているタンパク質は、残りのアミノ酸の番号を変えることなく、一般的に、「ｄｅｌ」（または．ＤＥＬＴＡ．）という用語とその位置を示す添え字で表される。従って、Ｔｒｐ４９が欠失している場合には、生じるタンパク質は、ＥＧＦ−．ＤＥＬＴＡ．４９と表記される。鎖長を増大させる挿入は、一般的に、１個のアミノ酸を２個以上のアミノ酸で置き換える置換として指示され、例えば、ｒｈＥＧＦ−Ｌ／Ｇ１５は、天然のＬｅｕ１５の後にＧｌｙが挿入されていることを示す。最後に、他の修飾を伴うか伴わないかにかか��らず、Ｈｉｓ１６が別のアミノ酸で置換される場合、本発明のＥＧＦは、一般的に、総称してＥＧＦ−Ｘ１６と表される。例えば２００１年２月２０日に発行された米国特許第６，１９１，１０６号（Ｍｕｌｌｅｎｂａｃｈら）に記載されているように、ＥＧＦの突然変異タンパク質も、それらが不可欠なＥＧＦ活性を有していることを条件として、この定義の範囲内に収まる。
【００３５】
本明細書で使用する「Ｌ−アルギニン」は、準必須アミノ酸（２−アミノ−５−グアニジノ吉草酸）およびその塩、例えば哺乳動物への投与に適した酸付加塩を意味する。Ｌ−アルギニンの生物学的等価物は、Ｌ−アルギニンと同様に、ＮＯを生体内産生する酸化窒素シンターゼの基質である化合物、またはアルギニン−シトルリンサイクルを介してもしくは尿素サイクルの酵素を介してＬーシトルリンなどの酸化窒素シンターゼの基質に変換され得る化合物である。内因性Ｌ−アルギニン産生における律速酵素はアルギニンコハク酸シンターゼである。内因性Ｌ−アルギニン産生の主要部位は、Ｌ−シトルリンをＬ−アルギニンへ変換する腎臓である（Ｂｏｇｅｒ，Ｒ．Ｈ．ら、２００１年）。グルタミンは小腸でＬ−シトルリンへ変換され（Ｐｉｔａ，Ａ．Ｍ．ら、２００３年）、オルニチンα−ケトグルタラートはグルタミンの前駆体である（Ｄｕｍａｓ，Ｆ．ら、１９９８年）。生体内に投与されたときにＮＯ分子を供与することができる、典型的に小さな有機分子の化合物、「ＮＯ供与体」も投与され得る。そのような化合物は、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチル−ペニシラミン（ＳＮＡＰ）、３−モルホリノシドノニミン（ＳＩＮ−１）、ニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ）、４−フェニル−３−フロキサンカルボニトリル（ＰＦＣ）、グルセリル三硝酸エステル（ＧＴＮ）およびイソソルビドジニトラート（ＩＳＤＮ）を含むが、これらに限定するものではない（Ｆｅｅｌｉｓｃｈ，Ｍ．、１９９８年；Ｐａｃｈｅｒ，Ｐ．ら、２００３年；Ｚｅｌｌ，Ｒ．ら、２００３年）。ＮＯ産生は、生体外において、Ｇｒｉｅｓｓアッセイにより（Ｍａｒｉｏｎ，Ｒ．，Ｍ．ら、２００３年）、もしくは化学発光検出法により（Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｋ．ら、１９９３年；Ｋｏｊｉｍａ，Ｈ．ら、１９９８年）、または生体内において、マノメトリーおよび電子酸化窒素センサーを用いることにより（Ｓｎｙｇｇ，Ｊ．ら、２００３年；Ｌｅｖｉｎｅ，Ｄ．Ｚ．ら、２００１年）、測定することができる。ＮＯの生体外検出用の市販のアッセイは、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）から入手することができる。
【００３６】
短腸症候群の治療または予防
材料および方法
疾患の動物モデル
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２５０〜３００ｇ）を最初に７日間飼育して順応させ、手術前に４日間、１日に１回、擬似食をチューブ補給した。
【００３７】
実験計画
動物を以下の５つのグループに無作為に振り分けた：１）切除し、賦形剤（０．９％の無菌生理食塩水）を毎日チューブ補給する（ＳＢＳ）、２）切除し、アルギニン１．５ｍｍｏｌ／ｋｇ／日を毎日チューブ補給する（Ａｒｇ）、３）切除し、ＥＧＦ１００μｇ／ｋｇ／日を毎日チューブ補給する（ＥＧＦ）、４）切除し、ＥＧＦ１００μｇ／ｋｇ／日およびアルギニン１．５ｍｍｏｌ／ｋｇ／日を毎日チューブ補給する（ＥＧＦ−Ａｒｇ）、ならびに５）賦形剤を毎日チューブ補給する対照（Ｃｏｎ）。ＥＧＦ−Ａｒｇ治療は約１：１００，０００  モル：モルである。この研究で使用したＬ−アルギニンは、１７４．２の分子量を有する純粋なＬ−アルギニンではなく、２１０．７の分子量を有するアミノ酸の塩酸塩であった。一晩の絶食後、上述のように、ハロタン麻酔下において手術を実施し、２５ｃｍの残存小腸を確保した（Ｓｈａｍ，Ｊ．ら、２００２年）。簡単に説明すると、開腹術後、Ｔｒｅｉｔｚ靭帯から遠位方向に延びる２５ｃｍの空腸を計測し、腸をそのポイントで分け、遠位側の腸全体を右結腸動脈の直ぐ下にある上行結腸の中間部分まで取り除き、吻合術を実施した。動物は、１０日間、１ｃｃの賦形剤中における試験化合物を毎日午前９時〜１０時にチューブ補給された。本発明において使用したＥＧＦは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（商標）（Ｈｉｇｅｔａ−Ｓｈｏｙｕ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）から入手した組み換えヒトＥＧＦである。
【００３８】
測定
切除後、動物は、手術を終えた日の残りの時間、水を摂取することを許され、その後、手術後２日目にペアフィーディングを開始し、最大で２０ｇ／日まで自由にドライフードの摂取が許された。各動物ケージ内における動物および食物の重量を毎日計量し、摂取した食物の量を定量化した。動物は、１日当たり２０ｇの普通食が与えられた。各組の対照（切除および非切除）＋３種類の治療グループを５匹１組にした。あるグループの１匹の動物が食べた量が２０ｇ未満であった場合には、その後の日々、５匹の組全体が、その動物が食べた重量＋１０％を得た。各グループにおける動物の数は以下のとおりであった：アルギニングループ、ＥＧＦグループおよびＥＧＦ＋アルギニングループはｎ＝１０、ＳＢＳ（非治療）グループはｎ＝９、対照はｎ＝８。
【００３９】
動物は、１０日目の致死前に一晩絶食した。ＳＢＳを有するこれらの動物の間では死亡率が高かった（最終的に非治療ＳＢＳ動物グループはｎ＝３、ＡｒｇグループおよびＥＧＦ＋Ａｒｇグループはｎ＝６、ＥＧＦ治療グループはｎ＝７、対照はｎ＝８）。午前中に行われる通常の試験化合物の投薬後、すべての動物は、２ｍｌのＥｎｓｕｒｅ（商標）の経口的なチューブ補給と共に、ブロモデオキシウリジン（ＢＲＤＵ）（５０ｍｇ／ｋｇ）が腹腔内に注射された。ＢＲＤＵ注射の１時間後、動物はハロタンで麻酔をかけられ、腸が取り出され、洗浄された。腸の長さは、標準化された重量、ならびに測定された残存空腸の重量および直径を用いて決定された。２ｃｍの組織断片をＴｒｅｉｔｚ靭帯の下方２ｃｍの位置で採取し、組織学的評価およびＢＲＤＵ評価用に固定した。
【００４０】
統計解析
結果は、平均値±ＳＥＭとして報告されている。統計解析は、Ｔｕｋｅｙポストテストを用いる分散分析（ＡＮＯＶＡ）により実施された。Ｐ＜０．０５を有意と考えた。
【００４１】
結果
外科手術は、切除されたグループにおいて、有意な体重減少および死亡率を伴う重度のＳＢＳをもたらした。この理由から、動物の体重は、実験グループにおける有意な死亡率よりも前の手術後５日目まで徹底的に分析した。図１に示されているように、体重減少を元の体重に対する百分率として表わし、それらのデータポイントをプロットして各成長曲線の傾きを求め、比較した。体重減少は、対照グループに比べ、すべての治療グループおよび非治療ＳＢＳグループにおいて有意に大きかった（ｐ＜０．００１）。更に、体重減少は、非治療ＳＢＳグループに比べ、ＥＧＦ−アルギニンの組み合わせを投与された動物において有意に小さかった（ｐ＜０．０５）。体重減少は、治療グループの間、または非治療ＳＢＳ動物とＥＧＦまたはアルギニン単独による治療を受けた動物との間で相違がなかった。ＥＧＦまたはアルギニン単独での治療は統計学的に有意な効果を与えかったが、ＥＧＦとアルギニンとの両方の組み合わせを用いた治療は、統計学的に有意に小さい体重減少をもたらした。従って、ＥＧＦとアルギニンとを組み合わせた治療法で治療された動物は、ＥＧＦまたはアルギニン単独による治療を受けた動物よりも体重が増えた。
【００４２】
腸の幅が（腸の直径の測定値として）図２に示される。腸の幅は、対照の動物に比べ、ＥＧＦ−アルギニンを組み合わせて治療された動物において有意に増大した（ｐ＜０．０５）。腸の幅は、他のどのグループ間においても相違がなかった。従って、ＥＧＦまたはアルギニン単独による治療は、腸の幅に統計学的に有意な効果を与えなかったが、ＥＧＦとアルギニンを組み合わせた治療は統計学的により大きな腸の幅となった。腸の長さが同じ場合での腸の幅の増大は、腸の吸収表面積全体の増大となる。
【００４３】
図３は、致死後の動物における総体的な腸のパラメータに対する様々な治療法の効果を示している。長さ当たりの腸の湿重量は、すべての治療グループにおける腸重量の有意な増大により、対照グループに比べて、すべての治療グループおよび非治療ＳＢＳグループにおいて有意に増大した（ｐ＜０．０１）。腸の長さは、どのグループ間においても相違がなかった。非治療ＳＢＳグループ、ならびにＥＧＦグループおよびアルギニングループに比べて、ＥＧＦ−アルギニンを組み合わせたグループにおいて腸の湿重量が増大する傾向があったが、この傾向は、統計学的な有意性に達しなかった。統計学的に有意な結果を実現しなかったが、ＥＧＦおよびアルギニンによる治療には、ＥＧＦ治療およびアルギニン治療の両方を上回る傾向が存在した。
【００４４】
図４は、対照、ＳＢＳ、アルギニン、ＥＧＦおよびＥＧＦ−アルギニン治療動物から得られた空腸組織における絨毛の長さおよび陰窩の深さを示す。絨毛の長さは、対照グループに比べて、ＥＧＦ治療動物において有意に増大した（ｐ＜０．０５）。絨毛の長さは他のどのグループ間においても相違がなかった。陰窩の深さは、対照に比べ、ＥＧＦ（ｐ＜０．０５）、ＥＧＦ−アルギニンおよび非治療ＳＢＳ（ｐ＜０．０１）において有意に増大した。陰窩の深さは、アルギニン治療動物と対照との間、またはいずれの切除グループの間でも相違がなかった。
【００４５】
結論
ＥＧＦ−アルギニンを組み合わせた投与は、ＥＧＦまたはアルギニンを単独で投与するよりも、ＳＢＳを治療する上で有意に効果的であった。ＥＧＦ−アルギニンの組み合わせ治療は、ＥＧＦまたはアルギニンを単独で与えた場合と比べて、切除された試験動物における体重増加および腸の吸収表面積の増大をもたらした。体重増加は、この条件の第１の評価項目であり、治療の臨床的有益性を示す。腸の吸収表面積の増大は第２の評価項目であり、第１の評価項目を達成するために必要である。この研究は、このような条件の第１および第２両方の評価項目における有意な改善を実証している。
【００４６】
単独のＥＧＦおよびアルギニンは、体重減少に対していくらか保護をもたらすことが示されたが、組み合わせ治療のみが、非治療ＳＢＳ対照動物に比べて統計学的に有意であった。更に、組み合わせ治療のみが、腸の吸収表面積を改善した。従って、本発明は、ＥＧＦおよびアルギニンを組み合わせて短腸症候群を治療する実現可能性を立証している。組み合わせが、ＳＢＳを罹患している患者の体重を増加させ、且つ、腸の吸収表面積を増大させることにより、実際に機能することを明らかに示す。本発明に先立って、ＳＢＳを治療するためにアルギニンを単独で用いた研究は、幾つかの研究の有利性を示したが、他の研究が不利であったと示した点において相反的である。これに加え、他の研究は、グルカゴン様ペプチドＩＩ、ボンベシン、インスリン様成長因子１  オクトレオチド（商標）、天然の抱合胆汁酸、低脂肪食およびグルタミンが、有利なおよび／または不利な効果を有し得ることを示している。しかし、本発明は、ＥＧＦとアルギニンとの組み合わせが、ＥＧＦまたはアルギニンを単独で投与した場合よりも、ＳＢＳの治療においてより効果的であることを明確に立証する。
【００４７】
短腸症候群を治療または予防するための薬剤組成物
短腸症候群の治療または予防は、ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニンまたはＬ−アルギニンの生物学的等価物とを含む。ＳＢＳは、手術後に被検体が吸収不良を起こすにつれて発症する。従って、手術後に吸収を促進することが予防に役立つと予想される。
【００４８】
ＥＧＦ受容体アゴニストとＬ−アルギニンとの相対的な量は、モル基準で好都合に決定される。Ｌ−アルギニンの生物学的等価物は、モル基準で、酸化窒素シンターゼの基質としてＬ−アルギニンよりも多量のＮＯを産生できる場合、その生物学的等価物が産生できるＮＯの量のモル当量基準で決定される。同様に、ＮＯ供与体により放出されるＮＯの量は、モル当量基準で決定される。従って、ＳＢＳを治療または予防する方法は、ＥＧＦ受容体アゴニストを患者の腸管へ送達し、患者の腸管内におけるＮＯの生体内産生を高めることにより提供される。これは、酸化窒素シンターゼの基質の投与またはＮＯ供与体の投与を含んでもよい。
【００４９】
本発明の治療は、適切な経路による投与を必要とする。生物学的に利用可能な物質を腸の上皮細胞の自由な腔側へ投与するためには、経口経路による投与が最も好適であろう。そのようなものとして、これら２つの物質の投与単位が、容易な開封ならびに食事療法用品などの製薬上許容される溶液への送達および混合に適した容器に入れて提供される。従って、適切な量の本発明の成分は、ミルクまたは他の食物に直接添加される粉末または顆粒形態で提供することができる。完全非経口栄養（ＴＰＮ）を必要とする被検体は、別の調合物として、またはＴＰＮ組成物の成分としてこれらの成分を受容する利益を得ることができる。あるいは、これらの成分は、患者がすぐに消化するのに適した溶液形態で、または適切な溶液で希釈して提供され得る。先行する溶液は経口胃内チューブを介して患者に投与され得る。
【００５０】
適切な食事療法用品の例は、水、生理食塩水、緩衝液、経口再水和溶液、特殊調製乳および搾乳した母乳、他の適切な担体、またはそれらの組み合わせを含む。経口投与に適したあらゆる溶液が使用されてもよい。膵臓プロテアーゼによる酵素分解からＥＧＦを保護し（Ｐｌａｙｆｏｒｄら、１９９３年）、バイスタンダー（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）タンパク質（即ち、不活性タンパク質「フィラー（ｆｉｌｌｅｒ）」）として作用する添加剤が加えられてもよい。例えば、カゼイン（乳タンパク質）がこの目的で実験的に使用されている（Ｐｌａｙｆｏｒｄら、１９９３年）。他の手法は、ＥＧＦの構造および活性を保存するために、プロテアーゼ阻害剤と投与することを含み得る。
【００５１】
あるいは、本発明の治療は、経口的に、経腸的に、非経口的に、静脈内注射により、皮下的に、経鼻的に、または浣腸により投与されてもよい。例えば、最初にＳＢＳを治療するとき、治療の最初の期間において、一部の患者は経口投与治療を受けることができないので、この期間の間、静脈内経路を選択することが可能である。組成物は、スプレー、溶液、懸濁、コロイド、濃縮液、粉末、顆粒、錠剤、圧縮錠剤、カプセル剤（コーティングされたもしくはコーティングされていない錠剤またはカプセル剤を含む）、坐薬などとして製剤化できる。徐放性または放出制御製剤も含まれる。
【００５２】
製剤は、必要な場合には、粘度調整剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、香料、安定剤、着色剤、保存剤などの添加剤を含んでもよい。
【００５３】
投与単位は、１回の投与、即ち、患者の１回の摂取における投与に適した用量である。従って、例えばＬ−アルギニンの塩酸塩として投与されるＬ−アルギニンの投与単位は、約２０ｍｇ／ｋｇ／日（０．０９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約２０００ｍｇ／ｋｇ／日（９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、またはより好適には約１００ｍｇ／ｋｇ／日（０．４５ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日（４．５ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、またはより好適には約２００ｍｇ／ｋｇ／日（０．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）のＬ−アルギニン、またはより好適には約２５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．２ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日（１．９ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、より好適には約３００ｍｇ／ｋｇ／日（１．４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約３５０ｍｇ／ｋｇ／日（１．６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、および約０．２μｇ／ｋｇ／日（０．０３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約２ｍｇ／ｋｇ／日（０．３２μｍｏｌ／ｋｇ／日）、またはより好適には約１μｇ／ｋｇ／日（０．１６ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約１ｍｇ／ｋｇ／日（０．１６ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）、またはより好適には約２μｇ／ｋｇ／日（０．３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）〜約０．２ｍｇ／ｋｇ／日（３２ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）のＥＧＦ受容体アゴニストを含む。本明細書において、「μｇ」はマイクログラムを意味し、「μｍｏｌ」はマイクロモルを意味する、等々。典型的には、Ｌ−アルギニン−ＥＧＦ受容体アゴニストの比は、約１：４５４００００００のＥＧＦ受容体アゴニスト（ｍｏｌ）／Ｌ−アルギニン（ｍｏｌ）〜約１：１のＥＧＦ受容体アゴニスト（ｍｏｌ）／Ｌ−アルギニン（ｍｏｌ）、より好ましくは１：４５４０００００のＥＧＦ受容体アゴニスト（ｍｏｌ）／Ｌ−アルギニン（ｍｏｌ）〜約１：４５００のＥＧＦ受容体アゴニスト（ｍｏｌ）／Ｌ−アルギニン（ｍｏｌ）、より好ましくは１：４５４００００のＥＧＦ受容体アゴニスト（ｍｏｌ）／Ｌ−アルギニン（ｍｏｌ）〜約１：４５０００のＥＧＦ受容体アゴニスト（ｍｏｌ）／Ｌ−アルギニン（ｍｏｌ）であろう。治療は、おそらく少なくとも１日に１回、１日当たり３または４回、更には持続的に投与されると考えられる。間欠投与は、例えばボーラス注入、本明細書の別の箇所で説明する経口製剤などのいずれかの適当な経路によって、皮下的に、または持続的な静脈内点滴によって投与することができる。より持続的な投与は、更に典型的には、静脈内点滴または制御放出インプラントによるであろう。
【００５４】
本発明の治療は、ＳＢＳを発症するリスクがある人を予防的に治療するためにも使用できる。そのようなリスクがある人には、小腸主要部の外科的切除を受けたばかりの患者も含まるであろう。そのような治療は、手術後できるだけ速やかに、おそらく手術終了後に開始してもよい。切除後、腸は、通常３〜４日後に機能し始める。従って、経口治療は手術後４〜６日で始めることが可能である。手術後の速やかな治療が必要とされる場合、治療法は静脈内に投与され、おそらく、続いて腸の機能が再開すると、経口治療が行われる。従って、治療は、第１の治療期間と、それに続く第２の治療期間とを含むであろう。
【００５５】
一般的に言えば、ＥＧＦは、合成プロセスにより調製され、通常のバイオテクノロジーまたは化学的な技術により製造される。勿論、ＥＧＦは、天然源から得てもよい。
【００５６】
好適には、本発明の要素の組み合わせは、単一の混合物として供給され、一緒に投与されるであろうが、それらを別々の区画に分けたキットとして提供して、投与のために混合する、または別々に投与することもできる。両方とも、腸の上皮細胞の腔側で生物学的に利用可能であってよい。
【００５７】
水と共に送達するように、液体との混合に調製されるときには、投与単位は、そこに溶解促進剤を組み入れてもよい。
【００５８】
腸に達するまで溶解しない、コーティングされた組成物を使用することにより、与薬の有効性が高められることがよくある。Ｇｅｎｎａｒｏ編集の「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、第１９版、１９９５年）を参照されたい。本活性物質の製薬上許容される塩（例えば、Ｌ−アルギニンの酸付加塩）は、合成有機化学の分野における熟練者にとって既知の報告された標準的な手順（Ｍａｒｃｈ，Ｊ．、１９９２年）を用いて調製することができる。また、適切な製薬上許容される担体、例えば希釈剤、賦形剤などのペプチドをベースとした薬剤とともに通常使用されている担体などを含めることも望ましいであろう。
【００５９】
勿論、本製品は、密封された無菌のパッケージに入った状態で提供されるであろう。典型的には、ＥＧＦまたは同等のポリペプチドは、凍結乾燥材料として提供される。
【００６０】
［参考文献］
Ａｖｉｓｓａｒ，Ｎ．Ｅ．，Ｈ．Ｔ．Ｗａｎｇ，Ｊ．−Ｎ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｐ．Ｉａｎｎｏｌｉ，ａｎｄ  Ｈ．Ｃ．Ｓａｘ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｂｒｕｓｈ  ｂｏｒｄｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｆｔｅｒ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．  Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．４５：１１４５−１１５２，２０００．
Ｂｏｇｅｒ，Ｒ．Ｈ．ａｎｄ  Ｓ．Ｍ．Ｂｏｄｅ−Ｂｏｇｅｒ．  Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ．  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４１：７９−９９，２００１．
Ｂｏｏｎｓｔｒａ，Ｊ．，Ｐ．Ｒｉｊｋｅｎ，Ｂ．Ｈｕｍｂｅｌ，Ｆ．Ｃｒｅｍｅｒｓ，Ａ．Ｖｅｒｋｌｅｉｊ，ａｎｄ  Ｐ．Ｖａｎ  Ｂｅｒｇｅｎ  ｅｎ  Ｈｅｎｅｇｏｕｗｅｎ．  Ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．１９：４１３−４３０，１９９５．
Ｂｕｃｈｍａｎ，Ａ．Ｌ．，Ａ．Ａ．Ｍｏｕｋａｒｚｅｌ，Ｍ．Ｅ．Ａｍｅｎｔ， Ｃ．Ｅｃｋｅｒｔ，Ｓ．Ｂｈｕｔａ，Ｊ．Ｍｅｓｔｅｃｋｙ，ａｎｄ  Ｄ．Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｏｔａｌ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｏｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．２６：１４５７，１９９４．
Ｃａｍｌｉ，Ａ．，Ｂａｒｌａｓ，Ｍ．，Ｙａｇｍｕｒｌｕ，Ａ．  Ｄｏｅｓ  Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ？  ＡＮＺ  Ｊ．Ｓｕｒｇ．７５：７３−５，２００５．
Ｃｈａｅｔ，Ｍ．Ｓ．，Ｇ．Ａｒｙａ，Ｍ．Ｍ．Ｚｉｅｇｌｅｒ，ａｎｄ  Ｂ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．  Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．２９：１０３５−１０３９，１９９４．
Ｃｈｅｎ，Ｋ．，Ｒ．Ｎｅｚｕ，Ｋ．Ｓａｎｄｏ，Ｓ．Ｍ．Ｈａｑｕｅ，Ｙ．Ｉｉｂｏｓｈｉ，Ａ．Ｍａｓｕｎａｒｉ，Ｈ．Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｓ．Ｋａｍａｔａ，Ｙ．Ｔａｋａｇｉ，ａｎｄ  Ａ．Ｏｋａｄａ．  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ−ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅａｄ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｏｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｆｔｅｒ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．  Ｓｕｒｇ．Ｔｏｄａｙ  ２６：６１８−６２３，１９９６．
Ｄｅｊｏｎｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｃ．Ｆ．Ｗｅｌｔｅｒｓ，Ｎ．Ｅ．Ｄｅｕｔｚ，Ｅ．Ｈｅｉｎｍａｎ，ａｎｄ  Ｐ．Ｂ．Ｓｏｅｔｅｒｓ．  Ｒｅｎａｌ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔａｂｌｏｉｓｍ  ｉｎ  ｆａｓｔｅｄ  ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂａｃｕｔｅ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．９５：４０９−４１８，１９９８．
Ｄｕｍａｓ，Ｆ．，Ｊ．Ｐ．Ｄｅ  Ｂａｎｄｔ，Ｖ．Ｃｏｌｏｍｂ，Ｊ．Ｌｅ  Ｂｏｕｃｈｅｒ，Ｃ．Ｃｏｕｄｒａｙ−Ｌｕｃａｓ，Ｓ．Ｌａｖｉｅ，Ｎ．Ｂｒｏｕｓｓｅ，Ｃ．Ｒｉｃｏｕｒ，Ｌ．Ｃｙｎｏｂｅｒ，ａｎｄ  Ｏ．Ｇｏｕｌｅｔ．  Ｅｎｔｅｒａｌ  ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ  ａｌｐｈａ−ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒａｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ ｒａｔｓ．  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ４７：１３６６−１３７１，１９９８．
Ｄｕｎｎ，Ｊ．Ｃ．，Ｃ．Ｐ．Ｐａｒｕｎｇｏ，Ｅ．Ｗ．Ｆｏｎｋａｌｓｒｕｄ， Ｄ．Ｗ．ＭｃＦａｄｄｅｎ，ａｎｄ  Ｓ．Ｗ．Ａｓｈｌｅｙ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．  Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．６７：９０−９３，１９９７．
Ｅｒｗｉｎ，Ｃ．Ｒ．，Ｍ．Ａ．Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｃ．Ｅ．Ｓｈｉｎ，Ｒ．Ａ．Ｆａｌｃｏｎｅ，Ｊｒ．，Ｌ．Ｅ．Ｓｔｅｒｎ，ａｎｄ  Ｂ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ．  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＥＧＦ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ：Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２７７：Ｇ５３３−Ｇ５４０，１９９９．
Ｆｅｅｌｉｓｃｈ，Ｍ．  Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｄｏｎｏｒｓ  ｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ．  Ｎａｕｎｙｎ  Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５８：１１３−１２２，１９９８．
Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｓ．１９９５  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９ｔｈ  Ｅｄ．
Ｇｏｏｄｌａｄ，Ｒ．Ａ．，Ａ．Ｐ．Ｓａｖａｇｅ，Ｗ．Ｌｅｎｔｏｎ，Ｍ．  Ａ．Ｇｈａｔｅｉ，Ｈ．Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｓ．Ｒ．Ｂｌｏｏｍ，ａｎｄ  Ｎ．Ａ．  Ｗｒｉｇｈｔ．  Ｄｏｅｓ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  ｔｏ  ｕｒｏｇａｓｔｒｏｎｅ−ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．  Ｃｌｉ．Ｓｃｉ．７５：１２１−１２６，１９８８．
Ｈａｒｄｉｎ，Ｊ．Ａ．，Ｂ．Ｃｈｕｎｇ，Ｅ．Ｖ．Ｏ’Ｌｏｕｇｈｌｉｎ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｇａｌｌ．  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｎ  ｂｒｕｓｈ  ｂｏｒｄｅｒ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｓｔａｌ  ｒｅｍｎａｎｔ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｇｕｔ  ４４：２６−３２，１９９９．
Ｈｅｂｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｔ．Ｋａｔｏ，Ｈ．Ｙｏｓｈｉｎｏ，Ｍ．Ｍｉｚｕｎｏ，ａｎｄ  Ｋ．Ｋｏｙａｍａ．  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｒａｔｓ．  Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｓｕｒｇ．３２：１１４９−１１５３，１９９７．
Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｍ．Ａ．，Ｃ．Ｒ．Ｅｒｗｉｎ，ａｎｄ  Ｂ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ．  Ａ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ＥＧＦ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｗａｖｅｄ−２  ｍｉｃｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ．  Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．６９：７６−８０，１９９７．
Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｍ．Ａ．，Ｃ．Ｅ．Ｓｈｉｎ，Ｊ．Ｗ．Ｆｏｘ，Ｃ．Ｒ．  Ｅｒｗｉｎ，ａｎｄ  Ｂ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ．  Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｓ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  ｂｙ  ｓｉａｌｏａｄｅｎｅｃｔｏｍｙ：Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｓｕｒｇｅｉｙ  １２４：８４８−８５４，１９９８．
Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｐ．Ｅ．，Ｌ．Ｇ．Ｊｅｎｓｅｎ，Ｂ．Ｓ．Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｓ．Ｓ．Ｐｏｕｌｓｅｎ，ａｎｄ  Ｅ．Ｎｅｘｏ．  Ｐｉｇ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｈｉｇｈｌｙ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ａｍｏｎｇ  ｓｐｅｃｉｅｓ．  Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．５８：２８７−２９７，１９９８．
Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｔ．Ｎａｇａｎｏ，Ｈ．Ｈａｙａｋａｗａ，Ｙ．Ｈｉｒａｔａ，ａｎｄ  Ｍ．Ｈｉｒｏｂｅ．  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａ  ｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｏｒｇａｎ  ｂｙ  ａ  ｌｕｍｉｎｏｌ−Ｈ２Ｏ２  ｓｙｓｔｅｍ．  Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．６５：１７９４−１７９９，１９９３．
Ｋｏｊｉｍａ，Ｈ．，Ｎ．Ｎａｋａｔｓｕｂｏ，Ｋ．Ｋｉｋｕｃｈｉ，Ｓ．Ｋａｗａｈａｒａ，Ｙ．Ｋｉｒｉｎｏ，Ｈ．Ｎａｇｏｓｈｉ，Ｙ．Ｈｉｒａｔａ，ａｎｄ  Ｔ．Ｎａｇａｎｏ．  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｎｏｖｅｌ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ：ｄｉａｍｉｎｏｆｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎｓ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７０：２４４６−２４５３，１９９８．
Ｌｅｎｆｅｒｉｎｋ，Ａ．Ｅ．，Ｅ．Ｊ．Ｖａｎ  Ｚｏｅｌｅｎ，Ｍ．Ｊ．Ｖａｎ  Ｖｕｇｔ，Ｓ．Ｇｒｏｔｈｅ，Ｗ．ｖａｎ  Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ，Ｍ．  Ｌ．Ｖａｎ  ｄｅ  Ｐｏｌｌ，ａｎｄ  Ｍ．Ｄ．Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ−ＭｃＣｏｕｒｔ．  Ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＥｒｂＢ−１  ｂｙ  ＥＧＦ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔｓ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７５：２６７４８−２６７５３，２０００．
Ｌｅｖｉｎｅ，Ｄ．Ｚ．，Ｍ．Ｉａｃｏｖｉｔｔｉ，Ｋ．Ｄ．Ｂｕｒｎｓ，ａｎｄ  Ｘ．Ｚｈａｎｇ．  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｋｉｄｎｅｙ  ｔｕｂｕｌａｒ  ｆｌｕｉｄ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  ＡｍＪ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８１：Ｆ１８９−Ｆ１９４，２００１．
Ｍａｒｃｈ，Ｊ．  “Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ”，４ｔｈ  Ｅｄ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ．１９９２．
Ｍａｒｉｏｎ，Ｒ．，Ｍ．Ｃｏｅｆｆｉｅｒ，Ａ．Ｌｅｐｌｉｎｇａｒｄ，Ｌ．Ｆａｖｅｎｎｅｃ，Ｐ．Ｄｕｃｒｏｔｔｅ，ａｎｄ  Ｐ．Ｄｅｃｈｅｌｏｔｔｅ．  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＮＯ−ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｍＲＮＡ  ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｅｌｌｓ：ｌａｃｋ  ｏｆ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ．  Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．２２：５２３−５２８，２００３．
Ｍｕｌｌｅｎｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，１９１，１０６  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０，２００１．
Ｎｅｘｏ，Ｅ．ａｎｄ  Ｈ．Ｆ．Ｈａｎｓｅｎ．  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｒｏｍ  ｍａｎ，ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ８４３：１０１−１０６，１９８５．
Ｏ’Ｌｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｖ．，Ｍ．  Ｗｉｎｔｅｒ，Ａ．Ｓｈｕｎ，Ｊ．    Ａ．  Ｈａｒｄｉｎ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｇａｌｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｊｅｊｕｎａｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ：ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０７：８７−９３，１９９４．
Ｏｚｔｕｒｋ，Ｈ．，Ａ．Ｉ．Ｄｏｋｕｃｕ，Ｙ．Ｙａｇｍｕｒ，ａｎｄＩ．    Ｓａｒｉ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ  Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ−ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ．  Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．Ｉｎｔ．１８：３３２−３３６，２００２．
Ｐａｃｈｅｒ，Ｐ．，Ｊ．Ｇ．Ｍａｂｌｅｙ，Ｌ．Ｌｉａｕｄｅｔ，Ｏ．Ｖ．Ｅｖｇｅｎｏｖ，Ｇ．Ｊ．Ｓｏｕｔｈａｎ，Ｇ．Ｅ．Ａｂｄｅｌｋａｒｉｍ，  Ｃ．Ｓｚａｂｏ，ａｎｄ  Ａ．Ｌ．Ｓａｌｚｍａｎ．  Ｔｏｐｉｃａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｄｏｎｏｒ，  ｌｉｎｅａｒ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ−ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｅ  ａｄｄｕｃｔ（ＤＳｌ），ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｅｌｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｖａｇｉｎａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ  ｉｎ  ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ  ｒａｔｓ．  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｐｏｔ．Ｒｅｓ．１５：４６１−４６４，２００３．
Ｐａｓｃａｌｌ，Ｊ．Ｃ，Ｄ．Ｓ．Ｃ．Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ｍ．Ｄｏｅｌ，Ｊ．  Ｍ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ，Ｍ．Ｈｕｎｔｅｒ，Ｔ．Ｆａｌｌｏｎ，Ｍ．Ｅｄｗａｒｄｓ，ａｎｄ  Ｋ．Ｄ．Ｂｒｏｗｎ．  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｐｉｇ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．６：６３−７０，１９９１．
Ｐｉｔａ，Ａ．Ｍ．，Ｙ．Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．Ａ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｂｕｓｔｏｓ，Ｎ．Ｖｉｒｇｉｌｉ，Ｅ．Ｒｉｕｄｏｒ，Ｊ．Ｓｏｌｅｒ，  ａｎｄ  Ｍ．Ｆａｒｒｉｏｌ．  Ｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａ−ｃｙｃｌｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，  ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｌｅｖｅｌｓ，  ａｎｄ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｏｒｏｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｍａｎａｇｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｏｒａｌ  ｄｉｅｔ．  Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．２２：９３−９８，２００３．
Ｐｉｔａ，Ａ．Ｍ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｂｕｓｔｏｓ，Ａ．，Ｒｏｄｅｓ，Ｍ．，Ａｒｒａｎｚ，Ｊ．Ａ．，Ｆｉｓａｃ，Ｃ，Ｖｉｒｇｉｌｉ，Ｎ．，Ｓｏｌｅｒ，Ｊ．，Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．  Ｏｒｏｔｉｃ  ａｃｉｄｕｒｉａ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａ  ｃｙｃｌｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，  ｅｖｏｋｅｄ  ｂｙ  ａｎ  ａｒｇｉｎｉｎｅ−ｆｒｅｅ  ｄｉｅｔ．  Ｊ  Ｐａｒｅｎｔｅｒ  Ｅｎｔｅｒａｌ  Ｎｕｔｒ．２８：３１５−２３，２００４．
Ｐｌａｙｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  １９９３．Ｌａｎｃｅｔ．３４１：８４３−８．
Ｓｈａｍ，Ｊ．，Ｇ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｊ．Ｂ．Ｍｅｄｄｉｎｇｓ，ａｎｄ  Ｄ．    Ｌ．Ｓｉｇａｌｅｔ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｊ．  Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．３７：７６５−７６９，２００２．
Ｓｈｉｎ，Ｃ．Ｅ．，Ｍ．Ａ．Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｒ．Ａ．Ｆａｌｃｏｎｅ，Ｊｒ．，Ｊ．Ｗ．Ｆｏｘ，Ｋ．Ｒ．Ｄｕａｎｅ，Ｃ．Ｒ．Ｅｒｗｉｎ，ａｎｄ  Ｂ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｕｇｍｅｎｔｓ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ：Ｏｐｔｉｍａｌ  ｄｏｓａｇｅ，ｒｏｕｔｅ，  ａｎｄ  ｔｉｍｉｎｇ  ｏｆ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．  Ｊ．  Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．７７：１１−１６，１９９８．
Ｓｉｇａｌｅｔ，Ｄ．Ｌ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ｇ．Ｒ．，Ｂｕｔｚｎｅｒ，Ｊ．Ｄ．，Ｂｕｒｅｔ，Ａ．，Ｍｅｄｄｉｎｇｓ，Ｊ．Ｂ．  Ａ  ｐｉｌｏｔ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．４０：７６３−８，２００５．
Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｊ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｌ．Ｍｏｒｉｔｚ，Ｍ．Ｊ．Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｐ．Ｓ．Ｒｕｄｌａｎｄ，Ｊ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｃ．  Ｊ．Ｌｌｏｙｄ，Ｂ．Ｇｒｅｇｏ，Ａ．Ｗ．Ｂｕｒｇｅｓｓ，  ａｎｄ  Ｅ．Ｃ．  Ｎｉｃｅ．  Ｒａｔ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ．  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５３：６２９−６３７，１９８５．
Ｓｎｙｇｇ，Ｊ．，Ａ．Ａｎｅｍａｎ，Ａ．Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ，ａｎｄ  Ｌ．  Ｆａｎｄｒｉｋｓ．  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｏｕｔｐｕｔ  ｄｕｒｉｎｇ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．  Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．３１：２１９８−２２０４，２００３．
Ｓｔｅｒｎ，Ｌ．Ｅ．，Ｒ．Ａ．Ｆａｌｃｏｎｅ，Ｊｒ．，Ｆ．Ｈｕａｎｇ，Ｃ．Ｊ．Ｋｅｍｐ，Ｃ．Ｒ．Ｅｒｗｉｎ，ａｎｄ  Ｂ．Ｗ．Ｗａｒｎｅｒ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｔｅｒｓ  ｔｈｅ  ｂａｘ：ｂｃｌ−ｗ  ｒａｔｉｏ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．  Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．９１：３８−４２，２０００．
Ｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．Ａ．ａｎｄ  Ｖ．Ｗ．Ｆａｚｉｏ．  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１５：３２６−３３０，１９９９．
Ｓｕｋｈｏｔｏｉｋ，Ｉ．，Ａ．Ｌｅｒｎｅｒ，Ｅ．Ｓａｂｏ，Ｍ．Ｍ．Ｋｒａｕｓｚ，Ｌ．Ｓｉｐｌｏｖｉｃｈ，Ａ．Ｇ．Ｃｏｒａｎ，Ｊ．Ｍｏｇｉｌｎｅｒ，  ａｎｄ  Ｅ．Ｓｈｉｌｏｎｉ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｎｔｅｒａｌ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．４８：１３４６−１３５１，２００３．
Ｓｕｋｈｏｔｎｉｋ，Ｉ．，Ｍｏｇｉｌｎｅｒ，Ｊ．Ｇ．，Ｌｅｒｎｅｒ，Ａ．，Ｃｏｒａｎ，Ａ．Ｇ．，Ｌｕｒｉｅ，Ｍ．，Ｍｉｓｅｌｅｖｉｃｈ，Ｉ．，Ｓｈｉｌｏｎｉ，Ｅ．  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ．  Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．Ｉｎｔ．２１：４６０−５，２００５．
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｊ．  Ｐａｒｅｎｔ．Ｅｎｔｅｒ．Ｎｕｔｒ．２３：Ｓ１１３−Ｓ１１６，１９９９．
Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．，Ｅ．Ｙａｍａｄａ，Ｔ．Ｙｏｓｈｉｄａ，ａｎｄ  Ｈ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ．  Ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｂｅｃｏｍｅｓ  ａｎ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｔ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３２６６７−３２６７１，１９９４．
Ｗａｒｎｅｒ，Ｂ．Ｗ．，Ｗ．Ｅ．Ｖａｎｄｅｒ  ＫｏＩｋ，Ｇ．Ｃａｎ，Ｍ．  Ａ．Ｈｅｌｍｒａｔｈ，Ｃ．Ｅ．Ｓｈｉｎ，ａｎｄ  Ｃ．Ｒ．Ｅｒｗｉｎ．  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．７０：１７１−１７７，１９９７．
Ｗａｓａ，Ｍ．，Ｙ．Ｔａｋａｇｉ，Ｋ．Ｓａｎｄｏ，Ｔ．Ｈａｒａｄａ，ａｎｄ  Ａ．Ｏｋａｄａ．  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  ＥｕｒＪ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．９：２０７−２０９，１９９９．
Ｗａｓａ，Ｍ．，Ｙ．Ｔａｋａｇｉ，Ｋ．Ｓａｎｄｏ，Ｔ．Ｈａｒａｄａ，ａｎｄ  Ａ．Ｏｋａｄａ．  Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ａｎｄ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｅｎｔｅｒ．Ｎｕｔｒ．  ２３：Ｓｌ１０−Ｓｌ１２，１９９９．
Ｗｅｌｔｅｒｓ，Ｃ．Ｆ．，Ｃ．Ｈ．Ｄｅｊｏｎｇ，Ｎ．Ｅ．Ｄｅｕｔｚ，ａｎｄ  Ｅ．Ｈｅｉｎｍａｎ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．  Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．８５：２５９−２６６，１９９９．
Ｚｅｌｌ，Ｒ．，Ｒ．Ｍａｒｋｇｒａｆ，Ｍ．Ｓｃｈｍｉｄｔｋｅ，Ｍ．Ｇｏｒｌａｃｈ，Ａ．Ｓｔｅｌｚｎｅｒ，Ａ．Ｈｅｎｋｅ，Ｈ．Ｈ．Ｓｉｇｕｓｃｈ，ａｎｄ  Ｂ．Ｇｌｕｃｋ．  Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｄｏｎｏｒｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ  Ｂ３  ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ２Ａ  ａｂｄ  ３Ｃ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，ｖｉｒｕｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ  ｓｉｇｎｓ  ｏｆ  ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ  ｉｎ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍｉｃｅ．  Ｍｅｄ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３．
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】図１は、５つの試験グループのラットについて、動物の元の体重に対する百分率として表わされる体重減少を示すグラフである。
【図２】図２は、非治療（ＳＢＳ）、アルギニンで治療した（ａｒｇ）、ＥＧＦで治療した（ＥＧＦ）、ＥＧＦおよびアルギニンで治療した（ＥＧＦ−アルギニン）、ならびにＳＢＳを有していない（対照）ＳＢＳ動物の剖検時における腸の幅を示す棒グラフである。
【図３】図３ａ、３ｂおよび３ｃは、剖検時における全体的な腸の形態を示す棒グラフであり、それぞれ、腸の長さ、腸の湿重量および腸の湿重量／長さを表す。
【図４】図４ａおよび４ｂは、対照、ＳＢＳ、ａｒｇ治療、ＥＧＦ治療およびＥＧＦ−ａｒｇ治療動物における空腸組織の絨毛の長さおよび陰窩の深さを表す棒グラフである。
【図１】
2008543790.tif 000003
【図２】
2008543790.tif 000004
【図３】
2008543790.tif 000005
【図４】
2008543790.tif 000006
【配列表】
2008543790000001.app
【国際調査報告】
2008543790.tif 000007
2008543790.tif 000008
2008543790.tif 000009
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