(57)【要約】本発明は、Ｓアデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）加水分解酵素を可逆的に阻害するための組成物および方法を提供する。本発明の化合物は、抗出血性ウイルス感染薬、免疫抑制剤、ホモシステイン低下薬、または抗新生物薬と併用され得る。本発明の組成物および方法は、出血性ウイルス感染、自己免疫疾患、自家移植片拒絶、新生物、高ホモシステイン不全症（ｈｙｐｅｒｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅｕｒｉａ）、循環器病、脳卒中、アルツハイマー病、または糖尿病の予防および処置に用いられ得る。
2008515994.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＡ）：
【化１】
2008515994.tif 000034
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］、
あるいは式（ＩＢ）：
【化２】
2008515994.tif 000035
［式中、Ｒ５は、シクロアルキル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、アセチル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｖは、酸素、窒素または硫黄であり；
そしてＷは、Ｈ１、Ｃ１−１０アルキル、アルケニル、ビニルアリール、またはヘテロアリールである］
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項３】
有効量の請求項２に記載の組成物、および該組成物を投与するための指示手段を含む、キット。
【請求項４】
哺乳動物のＳ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法であって、該方法は、このような可逆的阻害が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、式（Ｉ）：
【化３】
2008515994.tif 000036
［式中、Ｚは、炭素および窒素からなる群より選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量を投与し、それによって該哺乳動物におけるＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項５】
組み合わせであって、以下のａ）およびｂ）：
ａ）式（Ｉ）：
【化４】
2008515994.tif 000037
［式中、Ｚは、炭素および窒素からなる群より選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量；ならびに
ｂ）抗出血性のウイルス感染薬、免疫抑制剤、ホモシステイン低下薬、および抗新生物薬からなる群より選択される化合物の有効量
を含む、組み合わせ。
【請求項６】
哺乳動物におけるＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法であって、該方法は、このような可逆的阻害が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、以下のａ）およびｂ）：
ａ）式（Ｉ）：
【化５】
2008515994.tif 000038
［式中、Ｚは、炭素および窒素からなる群より選択され、
Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩の有効量；ならびに
ｂ）抗出血性のウイルス感染薬、免疫抑制剤、ホモシステイン低下薬、および抗新生物薬からなる群より選択される化合物の有効量
を含む、組み合わせの有効量を投与し、
それによって、該哺乳動物における該ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項７】
請求項５に記載の組み合わせの有効量、および該組み合わせを投与するための指示手段を含む、キット。
【請求項８】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン加水分解酵素（ＳＡＨ）活性を阻害し得る候補阻害剤化合物を同定するための方法であって、以下の工程：
ａ）ＳＡＨ結合ポケットのコンピュータモデルを構築する工程；
ｂ）以下の構造
【化６】
2008515994.tif 000039
［式中、Ｚは、炭素および窒素からなる群より選択される］
を有する複数の化合物をスクリーニングする工程；ならびに
ｃ）該結合ポケットに計算上結合する化合物を同定する工程
を包含する、方法。
【請求項９】
ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法であって、ＳＡＨ加水分解酵素を、有効量の請求項１に記載の化合物と接触させて、該ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法であって、ＳＡＨ加水分解酵素を、有効量の請求項５に記載の組み合わせと接触させて、該ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
ＩＬ−１２の産生および／または放出を可逆的に阻害するための方法であって、該方法は、ＩＬ−１２産生細胞をＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させて、該ＩＬ−１２産生細胞における該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
哺乳動物における遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を軽減するための方法であって、該方法は、このような軽減が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤の有効量を投与し、それによって該哺乳動物におけるＤＴＨ反応を軽減する工程を包含する、方法。
【請求項１３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤が（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
ＩＬ−１０の産生および／または放出を維持または増大させるための方法であって、該方法は、ＩＬ−１０産生細胞をＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させて、該ＩＬ−１０産生細胞における該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項１６】
前記ＩＬ−１０産生細胞が哺乳動物に含まれる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤が（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＬ−２またはＩＦＮ−γの産生および／あるいは放出を可逆的に阻害するための方法であって、該方法は、ＩＬ−２またはＩＦＮ−γ産生細胞をＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させて、該ＩＬ−２またはＩＦＮ−γ産生細胞における該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
前記ＩＬ−２またはＩＦＮ−γ産生細胞が哺乳動物に含まれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤が（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物またはその薬学的に受容可能な塩が、式（ＩＡ）
【化７】
2008515994.tif 000040
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］
で示される、請求項４に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物またはその薬学的に受容可能な塩が、式（ＩＢ）
【化８】
2008515994.tif 000041
［式中、Ｒ５は、シクロアルキル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、アセチル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｖは、酸素、窒素または硫黄であり；
そしてＷは、Ｈ１、Ｃ１−１０アルキル、アルケニル、ビニルアリール、またはヘテロアリールである］
で示される、請求項４に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物またはその薬学的に受容可能な塩が、
【化９】
2008515994.tif 000042
［式中、Ｗは、Ｈまたはメトキシである］
である、請求項４に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物が、炎症性腸疾患、多発性硬化症および自己免疫性神経炎からなる群より選択される疾患に罹患している疑いがある、請求項４に記載の方法。
【請求項２５】
前記哺乳動物が、炎症性腸疾患、多発性硬化症および自己免疫性神経炎からなる群より選択される疾患に罹患している疑いがある、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記哺乳動物が、炎症性腸疾患、多発性硬化症および自己免疫性神経炎からなる群より選択される疾患に罹患している疑いがある、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物が、炎症性腸疾患、多発性硬化症および自己免疫性神経炎からなる群より選択される疾患に罹患している疑いがある、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本願は、米国特許出願番号１０／４１０，８７９（２００３年４月９日出願、現在係属中）および米国特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１１２２９（２００４年４月９日出願、現在係属中）（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）の一部継続である、米国特許出願番号１０／９６４，２３６（２００４年１０月１３日出願、現在係属中）に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ＳＡＨ加水分解酵素は、多くのウイルスがウイルスタンパク質の効率的な翻訳のためにそのｍＲＮＡ上に５’−キャップメチル化構造を必要とするという観察に基づく、抗ウイルス薬設計のための魅力的な標的であった。非特許文献１；非特許文献２。ＳＡＨ加水分解酵素の阻害は、ウイルスｍＲＮＡのメチル化を含む、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）依存性メチル化反応の阻害を生じ、したがって、ウイルス複製を阻害する（スキーム１）。
【０００３】
【化１０】
2008515994.tif 000003
ＳＡＨ加水分解酵素の多数の阻害剤が、天然に存在する化合物および合成化合物から同定されている。最も強力な阻害剤は、時間依存的な様式でＳＡＨ加水分解酵素を不可逆的に不活化する不可逆的阻害剤である。不可逆的阻害剤は、その激しい細胞傷害作用により、狭い治療ウインドウを生じるのみであることが、研究により示されている（非特許文献３）。ＳＡＨ加水分解酵素は、非常に緩徐な代謝回転速度（マウス肝臓においてｔ１／２＝２４時間）を有する普遍的な細胞性酵素であるので、不可逆的阻害剤は、酵素活性の長期阻害を引き起こし得る。例えば、酵素活性の完全な回復のために最大７日間かかり得、このことが、望ましくない副作用を引き起こし得る。不可逆的阻害剤に関連する激しい細胞傷害性が、これらの阻害剤の臨床的に有用な薬物への開発を損なう主な要因であった。不可逆的阻害剤に関連する細胞傷害性のために、可逆的阻害剤が好ましい。
【０００４】
しかしながら、現時点では、インビボで試験した場合に、ＳＡＨ加水分解酵素に対して実質的な阻害活性を生じるのに十分に強力な、公知の可逆的なＳＡＨ加水分解酵素阻害剤は存在しない。例えば、ＳＡＨ加水分解酵素に対するＫｉ値が３．５μＭである可逆的阻害剤（Ｓ）−９−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アデニン（（Ｓ）−ＤＨＰＡ）は、阻害能力を欠く。（非特許文献４）。（ｓ）−ＤＨＰＡは、単離されたＡｄｏＨｃｙ加水分解酵素の可逆的阻害剤であることが報告されたが（非特許文献４）、（ｓ）−ＤＨＰＡはまた、細胞内ＡｄｏＨｃｙ加水分解酵素の不可逆的阻害剤であることも報告された（非特許文献５）。したがって、望ましくない細胞傷害作用を有することなく効力を発揮するＳＡＨ加水分解酵素阻害剤の必要性が残っている。
【非特許文献１】Ｙｕａｎら、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（１９９９）９：１１９７−１２０６
【非特許文献２】Ｙｕａｎら、Ａｄｖ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．，Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ（編），，ＪＡＩ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ（１９９６）第２巻，ｐｐ．４１−８８
【非特許文献３】ＷｏｌｆｅおよびＢｏｒｃｈａｒｄｔ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９１）３４：１５２１−１５３０
【非特許文献４】ＶｏｔｒｕｂａおよびＨｏｌｙ，Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８０）４５：３０３９
【非特許文献５】Ｓｃｈａｎｃｈｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９８４）２６：５５３−５５８
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の簡単な概要）
本発明は、ＳＡＨ加水分解酵素の新規な可逆的阻害剤を提供する。本発明の化合物は、ＳＡＨ加水分解酵素を阻害するこれらの化合物の能力に関連する生物学的活性を示す薬剤として有用である。
【０００６】
１つの実施形態において、本発明は、式（Ｉ）：
【０００７】
【化１１】
2008515994.tif 000004
［式中、Ｚは炭素または窒素であり、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、またはハロゲンであり；Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、またはヘテロアリールであり；Ｘは、酸素、窒素、または硫黄であり；そしてＹは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、またはヘテロアリールである］で示される化合物、およびその薬学的に受容可能な塩を提供する。特定の実施形態において、化合物は、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない。
【０００８】
１つの局面において、本発明は、式ＩＡ：
【０００９】
【化１２】
2008515994.tif 000005
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］、あるいは式（ＩＢ）：
【００１０】
【化１３】
2008515994.tif 000006
［式中、Ｒ５は、シクロアルキル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、アセチル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｖは、酸素、窒素または硫黄であり；
そしてＷは、Ｈ１、Ｃ１−１０アルキル、アルケニル、ビニルアリール、またはヘテロアリールである］で示される化合物を提供する。
【００１１】
式Ｉまたは式ＩＡの化合物は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が水素である置換基を有し得る。本発明の１つの局面において、Ｘは、酸素である。本発明の別の局面において、Ｙは、水素またはＣ１−１０アルキル基である。本発明のさらに別の局面において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素であり、Ｘは酸素であり、そしてＹは水素またはＣ１−１０アルキル基である。
【００１２】
本発明はまた、式Ｉ、式ＩＡまたは式ＩＢで示されるＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤、およびそれらの薬学的に受容可能な塩も提供する：
いくつかの実施形態において、該ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（ＩＩ）：
【００１３】
【化１４】
2008515994.tif 000007
で示される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（ＩＩＩ）：
【００１５】
【化１５】
2008515994.tif 000008
［式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素またはヒドロキシである；ただし、Ｒ１およびＲ２がともにヒドロキシであることはない］で示される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は水素であり、そしてＲ２はヒドロキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ１はヒドロキシであり、そしてＲ２は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、ともに水素である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、該ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（ＩＶ）：
【００１７】
【化１６】
2008515994.tif 000009
［式中、Ｒ１は、ＮＨ２、ＳＣＨ３、またはＣＨ２ＮＨ２である］
で示される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（Ｖ）：
【００１９】
【化１７】
2008515994.tif 000010
［式中、Ｒ１は、ＮＨ２またはＣＯＮＨ２である］
で示される。
【００２０】
なお別の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害は、式（ＶＩ）：
【００２１】
【化１８】
2008515994.tif 000011
［式中、Ｗは、Ｈまたはメトキシである］
で示される。
【００２２】
式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩの化合物は、β炭素でＳ配置を有し得るか、β炭素でＲ配置を有し得るか、またはラセミ混合物を含み得る。１つの実施形態において、これらの化合物は、生体媒体（例えば、血清）中の哺乳動物ＳＡＨ加水分解酵素に対するＫｉ値が１００ｎＭ未満である。他の実施形態において、これらの化合物は、生体媒体中の哺乳動物ＳＡＨ加水分解酵素に対するＫｉ値が約１ｎＭと約１００ｎＭの間である。これらの化合物は、好ましくは、生体媒体中のヒトＳＡＨ加水分解酵素に対して１００ｎＭ未満のＫｉ値か、または約１ｎＭと約１００ｎＭの間のＫｉ値を示す。
【００２３】
本発明はまた、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、ならびに薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む、薬学的組成物に関する。薬学的組成物は、経口、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、嚢内注射もしくは注入、皮下注射、または移植）、吸入スプレー、経鼻、膣内、直腸、舌下、あるいは局所投与経路によって投与され得る。これらの薬学的組成物は、各投与経路に適した適切な投薬単位処方物に処方され得る。
【００２４】
本発明は、特定の処方物または特定の投与様式に限定されることを意図するものではない。１つの実施形態において、組成物は、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、局所投与、または注射投与用に処方される。注射用投与の非限定的な例は、空洞内注射、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射および皮内注射である。本薬学的組成物は、１日当たり約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の投薬量で、経口投与用に処方され得る。本薬学的組成物はまた、１日当たり約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の投薬量で、注射投与用に処方され得る。
【００２５】
本発明の薬学的組成物は、固体または液体の剤形で処方され得る。例えば、本薬学的組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、および類似の化合物の形態で、固体として処方され得る。本薬学的組成物はまた、シロップ剤、注射混合物などの形態で、液体として処方され得る。
【００２６】
本発明はまた、有効量の本発明の組成物、および該組成物を投与するための指示手段を含む、キットを提供する。
【００２７】
さらに、本発明は、Ｓ−アデニル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法を提供する。１つの実施形態において、本発明は、哺乳動物におけるＳ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法を提供し、該方法は、このような可逆的阻害が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、式（Ｉ）：
【００２８】
【化１９】
2008515994.tif 000012
［式中、Ｚは、炭素および窒素からなる群より選択され、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そしてＹは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］
で示される有効量の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与し、それによって該哺乳動物におけるＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害する工程を包含する。特定の実施形態において、投与される化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体は、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない。
【００２９】
１つの局面において、本発明は、式ＩＡ
【００３０】
【化２０】
2008515994.tif 000013
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］、
あるいは式（ＩＢ）：
【００３１】
【化２１】
2008515994.tif 000014
［式中、Ｒ５は、シクロアルキル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、アセチル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｖは、酸素、窒素または硫黄であり；
そしてＷは、Ｈ１、Ｃ１−１０アルキル、アルケニル、ビニルアリール、またはヘテロアリールである］
で示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を用いて、ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法を提供する。
【００３２】
さらに別の局面において、本発明は、上記に規定されるような、式ＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を用いて、ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法を提供する。
【００３３】
好ましい実施形態において、哺乳動物は、出血性ウイルス感染、自己免疫疾患、自家移植片拒絶、新生物、高ホモシステイン不全症、循環器病、脳卒中、アルツハイマー病、糖尿病、炎症性腸疾患、多発性硬化症および自己免疫性神経炎からなる群より選択される疾患に罹患している疑いがある。しかしながら、本発明が特定の疾患の予防および処置に限定されることを意図するものではない。
【００３４】
出血性ウイルス感染を予防および処置するための方法を提供することは、本発明の目的である。１つの局面において、この方法は、哺乳動物における出血性ウイルス感染の処置において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物を投与する工程を包含する。特定の実施形態において、出血性ウイルス感染は、ブンヤウイルス科、フィロウイルス科、フラビウイルス科、およびアレナウイルス科のウイルスからなる群より選択されるウイルスによって引き起こされる。他の特定の実施形態において、フィロウイルス科のウイルスは、エボラウイルスである。
【００３５】
自己免疫疾患を予防および処置するための方法を提供することもまた、本発明の目的である。１つの局面において、この方法は、哺乳動物における自己免疫疾患の処置において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物を投与する工程を包含する。
【００３６】
同種移植拒絶を予防および処置するための方法を提供することもまた、本発明の目的である。１つの局面において、この方法は、哺乳動物における同種移植拒絶の処置において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物を投与する工程を包含する。
【００３７】
さらに、哺乳動物における血漿ホモシステインを低下させるための方法、あるいは高ホモシステイン不全症を予防または処置するための方法を提供することも、本発明の目的である。１つの局面において、この方法は、哺乳動物における血漿ホモシステインを低下させるために、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物を投与する工程を包含する。
【００３８】
また、新生物を予防または処置するための方法を提供することも、本発明の目的である。１つの局面において、この方法は、哺乳動物における新生物の処置において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物を投与する工程を包含する。新生物の非限定的な例は、副腎、肛門、聴神経、胆管、膀胱、骨、脳、胸、頬、中枢神経系、頚部、結腸、耳、子宮内膜、食道、眼、眼瞼、ファロピウス管、胃腸管、頭頸部、心臓、腎臓、喉頭、肝臓、肺、下顎骨、下顎関節頭、上顎骨、口、鼻咽頭、鼻、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、陰茎、耳介、脳下垂体、前立腺、直腸、網膜、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、胃、精巣、甲状腺、扁桃腺、尿道、子宮、膣、内耳神経、および外陰の新生物である。
【００３９】
本発明はまた、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物と、有効量の抗出血性のウイルス感染薬、免疫抑制剤、血漿ホモシステイン低下薬、および抗新生物薬とを含む組み合わせを提供する。この組み合わせは、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤をさらに含み得る。特定の実施形態において、この組み合わせは、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸を含まない。
【００４０】
特定の実施形態において、抗出血性のウイルス感染薬は、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、またはその組み合わせを阻害する。抗出血性のウイルス感染薬は、抗ウイルスワクチン、抗ウイルス抗体、ウイルスによって活性化された免疫細胞、またはウイルスによって活性化された免疫血清であり得る。
【００４１】
別の実施形態において、免疫抑制剤は、シクロスポリン、タクロリムス、副腎皮質ステロイド、アザチオプリン、ミコフェノレート、シクロホスファミド、メトトレキサート、クロラムブチル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ダクチノマイシン、抗胸腺細胞グロブリン、ムロモナブ−ＣＤ３モノクローナル抗体、ＲｈＯ（Ｄ）免疫グロブリン、メトキサレン、またはサリドマイドである。
【００４２】
他の特定の実施形態において、ホモシステイン低下薬は、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、または葉酸塩である。
【００４３】
なお別の実施形態において、抗新生物薬は、抗血管形成剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、天然物、プラチナ配位錯体、アントラセンジオン、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質の反応抑制薬、ホルモン、アンタゴニスト、癌遺伝子阻害剤、癌抑制遺伝子またはタンパク質、癌抑制遺伝子抗体、あるいは癌抑制遺伝子のアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【００４４】
本発明はまた、本発明の有効量の組み合わせ、およびこの組み合わせを投与するための指示手段を含むキットを提供する。
【００４５】
さらに、本発明は、哺乳動物におけるＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法を提供し、該方法は、このような可逆的阻害が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、以下：ａ）式（Ｉ）：
【００４６】
【化２２】
2008515994.tif 000015
［式中、Ｚは、炭素および窒素からなる群より選択され、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そしてＹは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］
で示される有効量の化合物またはその薬学的に受容可能な塩；ならびにｂ）抗出血性のウイルス感染薬、免疫抑制剤、ホモシステイン低下薬、および抗新生物薬からなる群より選択される有効量の化合物を含む、有効量の組み合わせを投与し、それによって該哺乳動物における該ＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害する工程を包含する。特定の実施形態において、この投与される組み合わせは、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない。
【００４７】
本発明はまた、哺乳動物におけるＳＡＨ加水分解酵素の活性を可逆的に阻害するための方法を提供し、該方法は、このような可逆的阻害が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、以下：ａ）上記に予め規定されたような、式ＩＡ、ＩＢ、およびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩を含む、有効量の組み合わせを投与する工程を包含する。
【００４８】
この組み合わせは、任意の他の薬学的組成物と併用されて、哺乳動物におけるＳＡＨ加水分解酵素活性を調節し得る。この組み合わせはまた、上記のように、出血性ウイルス感染、自己免疫疾患、自家移植片拒絶、新生物、および高ホモシステイン不全症、循環器病、脳卒中、アルツハイマー病、糖尿病、炎症性腸疾患、多発性硬化症または自己免疫性神経炎などの疾患の予防および処置にも用いられ得る。しかしながら、この組み合わせが、特定の疾患の予防および用途に限定されることを意図するものではない。
【００４９】
本発明はまた、ＩＬ−１２の産生および／または放出を可逆的に阻害するための方法を提供し、該方法は、ＩＬ−１２産生細胞をＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させて、該ＩＬ−１２産生細胞における該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程を包含する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２は、ＩＬ−１２Ｐ４０、ＩＬ−１２Ｐ３５、またはＩＬ−１２Ｐ７０である。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２産生細胞は、哺乳動物に含まれる。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、炎症性腸疾患、多発性硬化症および他の自己免疫疾患からなる群より選択される疾患に罹患している疑いがある。
【００５０】
本発明は、哺乳動物における遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を軽減するための方法を提供し、該方法は、このような軽減が必要であるかまたは望ましい哺乳動物に、ＳＡＨ加水分解酵素の有効量の可逆的阻害剤を投与することによって、該哺乳動物におけるＤＴＨ反応を軽減する工程を包含する。１つの実施形態において、哺乳動物はヒトである。別の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない。
【００５１】
本発明はまた、ＩＬ−１０の産生および／または放出を維持するかあるいは増加させるための方法を提供し、該方法は、ＩＬ−１０産生細胞を、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させることによって、該ＩＬ−１０産生細胞中の該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程を包含する。１つの実施形態において、ＩＬ−１０産生細胞は、哺乳動物に含まれる。別の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない。
【００５２】
本発明は、ＩＬ−２またはＩＦＮ−γの産生および／あるいは放出を可逆的に阻害するための方法をさらに提供し、該方法は、ＩＬ−２またはＩＦＮ−γ産生細胞を、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させることによって、該ＩＬ−２またはＩＦＮ−γ産生細胞中の該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程をさらに包含する。１つの実施形態において、ＩＬ−２またはＩＦＮ−γ産生細胞は、哺乳動物に含まれる。別の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸ではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５３】
（発明の詳細な説明）
開示内容を明確にするためであって、限定のためではなく、本発明の詳細な説明は以下の小節に分けられる。
【００５４】
Ａ．定義
他に規定しない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に引用される全ての特許、出願、公開された出願および他の刊行物は、その全体が、参考として援用される。この節に示される定義が、本明細書中に参考として援用される特許、出願、公開された出願および他の刊行物に示される定義に反するかまたは矛盾する場合、この節に示される定義が、本明細書中に参考として援用される定義より優先する。
【００５５】
本明細書中で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味する。
【００５６】
本明細書中で使用される場合、「組成物」とは、２つ以上の生成物または化合物の任意の混合物をいう。組成物は、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性、非水性、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、「組み合わせ」とは、２つのアイテム間かまたはより多くのアイテム間の任意の関連をいう。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「ホモシステイン」（Ｈｃｙ）とは、以下の分子式の化合物をいう：ＨＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ。生物学的には、Ｈｃｙは、メチオニンの脱メチル化によって生成され、メチオニンからのシステインの生合成における中間体である。用語「Ｈｃｙ」は、遊離Ｈｃｙ（還元型の）および結合Ｈｃｙ（酸化型の）を包含する。Ｈｃｙは、タンパク質、ペプチド、Ｈｃｙ自体または他のチオールと、ジスルフィド結合で結合体化し得る。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「ＳＡＨ加水分解酵素」とは、ＳＡＨのアデノシン（Ａｄｏ）およびＨｃｙへの加水分解を触媒する酵素をいう。この酵素は、遍在性の真核生物酵素であり、一部の原核生物にも見出される。ＳＡＨ加水分解酵素はまた、ＡｄｏおよびＨｃｙからのＳＡＨの生成も触媒する。ＳＡＨ加水分解酵素の補酵素は、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨである。ＳＡＨ加水分解酵素は、いくつかの触媒活性を有し得る。加水分解の方向において、第１の工程は、酵素結合ＮＡＤ＋（Ｅ−ＮＡＤ＋）によるＳＡＨの３’−ヒドロキシル基の酸化（３’−酸化活性）、その後のＬ−Ｈｃｙのβ−脱離を包含し、３’−ケト−４’，５’−ジデヒドロ−５’−デオキシ−Ａｄｏを生じる。この強固に結合した中間体の５’側の位置への水のＭｉｃｈａｅｌ付加（５’−加水分解活性）により、３’−ケト−Ａｄｏを生じ、これは次いで、酵素結合ＮＡＤＨ（Ｅ−ＮＡＤＨ）によってＡｄｏに還元される（３’−還元活性）。この用語は、活性を実質的に変化させない保存的アミノ酸置換を行ったＳＡＨ加水分解酵素を包含することが意図される。
【００６０】
本明細書中で使用される場合、本発明の化合物の「薬学的に受容可能な塩」または「薬学的に受容可能な誘導体」との用語は、当業者に容易に調製され得る任意の塩、エステルまたは誘導体を包含する。本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩としては、例えば、薬学的に受容可能な無機および有機の酸および塩基から誘導されるものが挙げられる。適切な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、アンモニウム塩およびＮ（Ｃ１−４アルキル）４＋塩が挙げられるが、これらに限定されない。適切な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸が挙げられるが、これらに限定されない。それ自体では薬学的に受容可能でない他の酸（シュウ酸など）は、本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な酸性塩を得る際に中間体として有用な塩の調製に用いられ得る。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、「生物活性」とは、化合物のインビボ活性、または化合物、組成物、もしくは他の混合物のインビボ投与の結果として生じる生理反応をいう。従って、生物活性は、このような化合物、組成物および混合物の治療効果ならびに薬学的活性を包含する。生物学的活性は、このような活性を試験するかまたは用いるように設計されたインビトロ系で認められ得る。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「血漿」とは、流体（血液の非細胞部分）をいい、凝血後に得られる血清とは区別される。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「血清」とは、フィブリン凝塊および血球の除去後に得られる血液の流体部分をいい、循環血液中の血漿とは区別される。
【００６４】
本明細書中で使用される場合、「流体」とは、流動し得る任意の組成物をいう。従って、流体は、半固体、ペースト、溶液、水性混合物、ゲル、ローション、クリームの形態の組成物、および他のこのような組成物を包含する。
【００６５】
本明細書中で使用される場合、任意の保護基、アミノ酸および他の化合物の略語は、他に指示がない限り、その一般的用法、認められた略語、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによるものである（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７２６（１９７２）を参照のこと）。
【００６６】
本明細書中で使用される場合、「疾患または障害」とは、特定可能な症状によって特徴付け可能な、生物における病理学的状態をいう。
【００６７】
本明細書中で使用される場合、用語「治療剤」とは、当業者に公知の任意の従来の薬物または薬物療法をいい、ワクチンが挙げられるが、これに限定されない。
【００６８】
本明細書中で使用される場合、「ワクチン」とは、能動的免疫予防を意図される任意の組成物をいう。ワクチンは、疾患を処置するか、疾患の発症を予防するか、または疾患の重症度を軽減するために、事前にかまたは感染後のいずれかに治療的に用いられ得る。例示的なワクチンとしては、病原性株の死滅させた微生物の調製物、弱毒化（改変または変異）株の生きた微生物の調製物、あるいは微生物、真菌、植物、原生動物、または後生動物の派生物もしくは生成物が挙げられるが、これらに限定されない。この用語はまた、タンパク質／ペプチドおよびヌクレオチドを主成分とするワクチンを包含する。
【００６９】
本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」とは、疾患に関連する症状を寛解させるか、または何らかの様式で軽減するのに十分な量をいう。このような量は、単回投薬として、またはレジメンに従って投与され得る。反復投与は、症状の所望の寛解を達成するのに必要な場合がある。
【００７０】
本明細書中で使用される場合、用語「投与」または化合物を「投与すること」とは、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを被験体に与える任意の適切な方法をいう。
【００７１】
本明細書中で使用される場合、用語「処置」とは、状態、障害または疾患の症状が寛解されるか、あるいは有利に変更される、任意の様式をいう。処置はまた、本明細書における組成物の任意の医薬用途も包含する。特定の障害の症状の寛解とは、組成物の投与に起因し得るかまたは関連し得る、症状の任意の軽減（永久であるか一時的であるかにかかわらず）をいう。
【００７２】
本明細書中で使用される場合、用語「置換」とは、化合物中の水素原子を置換基で置換することをいう。
【００７３】
本明細書中で使用される場合、用語「アルキル」は、１つ以上の置換基で置換されていてもよいアルキル基を含む、直鎖または分岐鎖アルキル基を包含する。例えば、アルキル基は、ヒドロキシ、ハロゲン、アリール、アルコキシ、アシル、または当該分野で公知の他の置換基で置換されていてもよい。アルキル基のより多くの炭素原子の１つもまた、１つ以上のヘテロ原子で置換されていてもよい。
【００７４】
本明細書中で使用される場合、用語「Ｋｉ」とは、ＩＣＥなどの標的酵素の活性の阻害における化合物の有効性の数値尺度をいう。Ｋｉの値が低いほど、高い有効性を示している。Ｋｉ値は、実験的に決定された速度データを、標準酵素反応速度式に当てはめることによって求められる（Ｓｅｇｅｌ，Ｅｎｚｙｍｅ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９７５）。
【００７５】
本明細書中で使用される場合、「抗悪性腫瘍薬処置」とは、新生物、腫瘍または癌を、その症状を軽減または寛解することによって処置するように設計された、任意の処置をいう。新生物、腫瘍または癌の発生を予防するか、あるいはこれらの重症度を軽減する処置も、企図される。
【００７６】
本明細書中で使用される場合、「新生物（新生物形成）」とは、異常な新生物をいい、従って腫瘍と同じものを意味し、これは良性であっても悪性であってもよい。過形成とは異なり、新生物の増殖は、本来の刺激がない状態においても持続する。
【００７７】
本明細書中で使用される場合、「抗新生物薬（抗悪性腫瘍薬、抗腫瘍剤または抗癌剤と交換可能に用いられる）」とは、抗新生物処置に用いられる任意の薬剤をいう。これらとしては、単独かまたは他の化合物と組み合わせて用いられる場合に、新生物、腫瘍または癌と関連する臨床症状もしくは診断マーカーを、緩和するか、軽減するか、寛解するか、予防するか、緩解状態にするかまたは緩解状態を維持し得る、任意の薬剤が挙げられる。本発明と組み合わせて用いられ得る抗新生物薬としては、抗血管形成剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、特定の天然物、プラチナ配位錯体、アントラセンジオン、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、特定のホルモンおよびアンタゴニスト、抗癌性多糖類、ならびに漢方薬草抽出物のような特定の薬草抽出物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
本明細書中で使用される場合、「癌抑制遺伝子」（癌抑制遺伝子または癌感受性遺伝子とも呼ばれる）とは、細胞周期を通常負に制御し、かつ、細胞が急速な分裂へと進み得る前に変異させられるかまたは不活化されなければならない産物をコードする遺伝子をいう。例示的な癌抑制遺伝子としては、ｐ１６、ｐ２１、ｐ５３、ＲＢ（網膜芽細胞腫）、ＷＴ−１（Ｗｉｌｍの腫瘍）、ＤＣＣ（結腸癌で欠失している）、ＮＦ−１（神経線維肉腫）およびＡＰＣ（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｐｉｓ  ｃｏｌｉ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
本明細書中で使用される場合、「癌遺伝子」とは、動物細胞の正常な遺伝子（原癌遺伝子）の変異型および／または過剰発現型をいい、優性で細胞を正常な成長抑制から解放し得る。従って、癌遺伝子は、単独で、または他の変更と連携して、細胞を腫瘍細胞に変える。例示的な癌遺伝子としては、ａｂｌ、ｅｒｂＡ、ｅｒｂＢ、ｅｔｓ、ｆｅｓ（ｆｐｓ）、ｆｇｒ、ｆｍｓ、ｆｏｓ、ｈｓｔ、ｉｎｔ１、ｉｎｔ２、ｊｕｎ、ｈｉｔ、Ｂ−ｌｙｍ、ｍａｓ、ｍｅｔ、ｍｉｌ（ｒａｆ）、ｍｏｓ、ｍｙｂ、ｍｙｃ、Ｎ−ｍｙｃ、ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）、ｒａｌ（ｍｉｌ）、Ｈａ−ｒａｓ、Ｋｉ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ｒｅｌ、ｒｏｓ、ｓｉｓ、ｓｒｃ、ｓｋｉ、ｔｒｋおよびｙｅｓが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、「アンチセンスポリヌクレオチド」とは、ｍＲＮＡに相補的なヌクレオチド塩基の合成配列または二本鎖ＤＮＡのセンス鎖をいう。適切な条件下でのセンスポリヌクレオチドおよびアンチセンスポリヌクレオチドの混合により、これらの２つの分子の結合（すなわち、ハイブリダイゼーション）が生じる。これらのポリヌクレオチドがｍＲＮＡに結合（ハイブリダイズ）する場合、タンパク質合成（翻訳）の阻害が起こる。これらのポリヌクレオチドが二本鎖ＤＮＡに結合する場合、ＲＮＡ合成（転写）の阻害が起こる。結果として生じた翻訳および／または転写の阻害により、センス鎖によってコードされるタンパク質の合成の阻害が生じる。
【００８１】
本明細書中で使用される場合、「抗体」は、軽鎖および重鎖の可変領域で構成される抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）を包含する。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト化抗体」とは、ヒトに投与されても免疫応答を引き起こさないように、アミノ酸の「ヒト」配列を含むように改変されている抗体をいう。このような抗体を調製するための方法は公知である。例えば、モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、非可変領域のアミノ酸組成がヒト抗体に基づいている抗体を発現するように、組換えＤＮＡ技術によって改変される。コンピュータプログラムは、このような領域を同定するように設計されている。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、「抗出血性ウイルス剤」または「抗ウイルス性出血剤」とは、出血性ウイルス感染の処置に用いられる任意の薬剤をいう。これらの薬剤としては、単独かまたは他の化合物と組み合わせて、ウイルス性出血疾患もしくは障害に関連する臨床症状または診断マーカーを緩和し得るか、軽減し得るか、寛解し得るか、予防し得るか、あるいは緩解状態を維持し得る、任意の薬剤を包含する。抗ウイルス性出血剤の非限定的な例としては、インターロイキン−１（ＩＬ−１）阻害剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）阻害剤、抗ウイルスワクチン、抗ウイルス抗体、ウイルスによって活性化された免疫細胞、およびウイルスによって活性化された免疫血清が挙げられる。
【００８４】
本明細書中で使用される場合、「抗出血性ウイルス処置」とは、症状を軽減するかまたは寛解させることによって、出血性ウイルス感染を処置するように設計される任意の処置をいう。感染を予防するかまたはその重症度を軽減する処置もまた企図される。
【００８５】
本明細書中で使用される場合、「ＩＬ−１阻害剤」は、ＩＬ−１の産生、翻訳後修飾、成熟、または放出を阻止するかもしくは減少させる任意の物質、あるいはＩＬ−１とＩＬ−１レセプターの間の相互作用の効力に干渉するかもしくはこれを減少させる任意の物質を包含する。好ましくは、ＩＬ−１阻害剤は、抗ＩＬ−１抗体、抗ＩＬ−１レセプター抗体、ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト、ＩＬ−１産生阻害剤、ＩＬ−１レセプター産生阻害剤、またはＩＬ−１放出阻害剤である。
【００８６】
本明細書中で使用される場合、「腫瘍壊死因子」（「ＴＮＦ」）とは、主要組織適合性複合体内にコードされる炎症誘発性サイトカインの群をいう。ＴＮＦファミリーメンバーとしては、ＴＮＦαおよびＴＮＦＲ（それぞれ、カケクチンおよびリンホトキシンとしても公知である）が挙げられる。ＴＮＡαおよびＴＮＦＲをコードする相補的なｃＤＮＡクローンが単離されている。従って、「ＴＮＦ」という用語は、ＴＮＦαおよびＴＮＦを含む、ＴＮＦ遺伝子ファミリーによってコードされるすべてのタンパク質、あるいは任意の他の供給源から得られるかまたは合成的に調製された相当する分子を包含する。活性を実質的に変化させない保存的アミノ酸置換を行ったＴＮＦを包含することが意図される。
【００８７】
本明細書中で使用される場合、「ＴＮＦ阻害剤」は、ＴＮＦの産生、翻訳後修飾、成熟、または放出を阻止するかもしくは減少させる任意の物質、あるいはＴＮＦとＴＮＦレセプターの間の相互作用の効力に干渉するかもしくはこれを減少させる任意の物質を包含する。好ましくは、ＴＮＦ阻害剤は、抗ＴＮＦ抗体、抗ＴＮＦレセプター抗体、ＴＮＦレセプターアンタゴニスト、ＴＮＦ産生阻害剤、ＴＮＦレセプター産生阻害剤、またはＴＮＦ放出阻害剤である。
【００８８】
Ｂ．Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン加水分解酵素の可逆的阻害剤
作用機序に基づく細胞傷害性を最小にするための１つのアプローチは、ＳＡＨ加水分解酵素阻害剤が可逆的な阻害活性を示すように、該阻害剤の薬物動態プロファイルを最適化することである。薬物動態プロファイルは、ＫＯｆｆ値を最適化することによって最適化され得る。例えば、ＫＯｆｆ値は、これらの値が所望の治療効果を生じるのに十分に小さいが、次の投与前に酵素活性の適切な回復を可能にするのに十分に大きいように、最適化される。
【００８９】
一般に、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、酵素に非共有結合的に結合し、かつ、酵素から容易に遊離される。例えば、酵素に結合した可逆的阻害剤は、簡単な透析または緩衝液の交換もしくはｐＨの変更によって取り除かれ得る。可逆的阻害剤としては、拮抗阻害剤、非拮抗阻害剤、不拮抗阻害剤、および混合型の阻害剤が挙げられる。
【００９０】
拮抗阻害剤は、単に遊離の酵素に結合して、酵素が基質に結合するのを阻止する阻害剤である。通常、拮抗阻害剤は、基質と構造が類似しており、活性部位への基質の接近を妨害するように、活性部位に結合する（すなわち、酵素は、インヒビターを遊離してからでなければ基質に結合できない）。基質および阻害剤の両方が、同じ部位に結合するために競合する。反応速度論に対する拮抗阻害剤の影響は、酵素の最大速度（Ｖｍａｘ）に影響を及ぼすことなく、ミカエリス定数（Ｋｍ）を増加させることである。拮抗阻害剤の存在下での見かけのＫｍ（Ｋｍ，ａｐｐ）は、Ｋｍ（１＋［Ｉ］／Ｋｉ）であり、式中、［Ｉ］は阻害剤の濃度であり、そしてＫｉは阻害剤の解離定数である。
【００９１】
非拮抗阻害剤は、酵素が反応を触媒するのを阻止するが、基質が結合するのを妨害しない阻害剤である。基質および阻害剤の両方とも、同時に酵素に結合し得る（すなわち、阻害剤および基質は、同じ部位に結合するために拮抗しない）が、触媒反応は、阻害剤が結合していない場合にのみ生じる。非拮抗阻害剤は、遊離の酵素および酵素−基質複合体に、同じ親和性で結合する。非拮抗阻害剤の反応速度論に対する影響は、Ｋｍに影響を及ぼすことなくＶｍａｘを減少させることである。非拮抗阻害剤の存在下での見かけのＶｍａｘ（Ｖｍａｘ，ａｐｐ）は、Ｖｍａｘ／（１＋［Ｉ］／Ｋｉ）であり、式中、［Ｉ］は阻害剤の濃度であり、そしてＫｉは阻害剤の解離定数である。
【００９２】
不拮抗阻害剤は、単に酵素−基質複合体に結合して、該複合体を不活化する阻害剤である。反応速度論に対する不拮抗阻害剤の影響は、ＶｍａｘおよびＫｍの両方を減少させることである。不拮抗阻害剤の存在下での見かけのＫｍ（Ｋｍ，ａｐｐ）は、Ｋｍ（１＋［Ｉ］／Ｋｉｂ）であり、式中、［Ｉ］は阻害剤の濃度であり、そしてＫｉｂは酵素−基質複合体に対する阻害剤の解離定数である。不拮抗阻害剤の存在下での見かけのＶｍａｘ（Ｖｍａｘ，ａｐｐ）は、Ｖｍａｘ／（１＋［Ｉ］／Ｋｉｂ）であり、式中、［Ｉ］は阻害剤の濃度であり、そしてＫｉｂは酵素−基質複合体に対する阻害剤の解離定数である。
【００９３】
混合型の阻害剤は、遊離の酵素および酵素−基質複合体の両方に結合する阻害剤であり、触媒反応を阻害する。混合型の阻害剤には、活性を完全には無効にせず、単に反応速度を顕著に減少させるだけの阻害剤も含まれる。混合阻害剤の存在下での見かけのＫｍ（Ｋｍ，ａｐｐ）は、Ｋｍ（１＋［Ｉ］／Ｋｉａ）であり、式中、［Ｉ］は阻害剤の濃度であり、そしてＫｉａは遊離の酵素に対する阻害剤の解離定数である。混合阻害剤の存在下での見かけのＶｍａｘ（Ｖｍａｘ，ａｐｐ）は、Ｖｍａｘ／（１＋［Ｉ］／Ｋｉｂ）であり、式中、［Ｉ］は阻害剤の濃度であり、そしてＫｉｂは酵素−基質複合体に対する阻害剤の解離定数である。
【００９４】
酵素（例えば、ＳＡＨ加水分解酵素）に対する阻害剤のタイプを決定するための方法は、当該分野で公知である。例えば、酵素反応速度論実験を用いて阻害剤が結合する機序および部位を試験し、阻害剤のタイプを決定し得る。ＫｍおよびＶｍａｘは、阻害剤の非存在下で、および２種以上の濃度の阻害剤の存在下で決定され得る。次いで、収集したデータは、阻害剤のタイプを決定するために、見かけのＫｍまたはＶｍａｘの変化（すなわち、阻害剤濃度の関数としてのパラメータの変化）について分析され得る。
【００９５】
強固に結合した阻害剤および作用機序に基づく阻害剤はまた、酵素と阻害剤の間に共有結合が形成されないにもかかわらず、時間依存的阻害パターンを示し得る。これらのタイプの阻害剤によって不活化される酵素は、通常は永久に無効にされ、かつその活性は、例えば、０．５〜５時間のような一定時間のゲル濾過または透析によって、容易に回復することができない。これらのタイプの時間依存的阻害剤は、不可逆的阻害剤とみなされ、本発明において記載される可逆的阻害剤から除外される。
【００９６】
ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤としてのエリタデニン誘導体
本発明は、可逆的かつ強力なＳ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン組成物の新規阻害剤に関する。例えば、本発明は、Ｋｉ値が１００ｎＭ未満の化合物を提供する。１つの実施形態において、本発明は、４（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸、その誘導体、およびその薬学的に受容可能な塩、ならびにこのような化合物を用いてＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害するための方法を提供する。
【００９７】
可逆的阻害剤である、４（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸は、エリタデニンのβ炭素でのデオキシル修飾（ｄｅｏｘｙｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）により合成される。エリタデニンは、天然に存在する化合物であり、ＳＡＨ加水分解酵素の強力な不可逆的阻害剤である。エリタデニンのβ炭素でのデオキシル修飾により、阻害能力を保持しつつ、可逆的阻害剤である化合物を生じる。４（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸の誘導体は、当業者に公知の従来の合成方法を用いて合成され得る。（例えば、Ｙｕａｎら、Ａｄｖ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．２：４１−８８（１９９６）；Ｈｏｌｙら、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．５０：２４５−２７９（１９８５）を参照のこと）。
【００９８】
４（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸誘導体の例としては、塩基修飾誘導体、および側鎖置換誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。塩基修飾誘導体は、アデニル環塩基（ａｄｅｎｙｌ  ｒｉｎｇ  ｂａｓｅ）にて修飾された４（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸の誘導体である。アデニル環は、アミノ基にて、種々の修飾基で修飾され得る。アデニル環はまた、アデニル環のＣ２位およびＣ８位にて、種々の置換基で修飾され得る。
【００９９】
１つの実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、下記式（Ｉ）で示されるもの、およびその薬学的に受容可能な塩である：
【０１００】
【化２３】
2008515994.tif 000016
［式中、Ｚは炭素または窒素であり、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、またはハロゲンであり；Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、またはヘテロアリールであり；Ｘは、酸素、窒素、または硫黄であり；そしてＹは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、またはヘテロアリールである］。
【０１０１】
１つの局面において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式ＩＡ
【０１０２】
【化２４】
2008515994.tif 000017
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］、
あるいは式（ＩＢ）：
【０１０３】
【化２５】
2008515994.tif 000018
［式中、Ｒ５は、シクロアルキル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、アセチル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｖは、酸素、窒素または硫黄であり；
そしてＷは、Ｈ１、Ｃ１−１０アルキル、アルケニル、ビニルアリール、またはヘテロアリールである］
で示される。
【０１０４】
種々のＲ基が、他の置換基で置換されていてもよい。これらの置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボン酸、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、チオール、アミノ、アシル、カルボキシレート、アリール、カルバメート、カルボキサミド、スルホンアミド、複素環基、または当該分野で公知の任意の適切な置換基であり得る。特定の実施形態において、各Ｒ基は、水素、またはメチルのような低級直鎖アルキルである。別の実施形態において、アルキルまたはアルコキシ基の中の１つ以上の炭素原子は、１つ以上のヘテロ原子で置換され得る。
【０１０５】
アミノ基はまた、２回または３回置換されて、２級または３級アミンを形成し得る。置換基の非限定的な例としては、アルキルまたは置換されていてもよいアルキル基；アルケンまたは置換されていてもよいアルケニル基；シクロアルキルまたは置換されていてもよいシクロアルキル基；アリール、複素環；アラルキル（例えば、フェニルＣ１−４アルキル）；フェニル、ピリジン、フェニルメチル、フェネチル、ピリジニルメチル、ピリジニルエチルのようなヘテロアルキル；および他の置換基が挙げられる。複素環基は、１〜４個のヘテロ原子を含む５または６員環であってもよい。
【０１０６】
アミノ基は、置換されていてもよいＣ２−４アルカノイル（例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリルなど）；Ｃ１−４アルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニルなど）；カルボニルまたはスルホニル置換された芳香族環または複素環（例えば、ベンゼンスルホニル、ベンゾイル、ピリジンスルホニル、ピリジンカルボニルなど）で置換され得る。
【０１０７】
ＣＯ−Ｘ−Ｙ基は、置換されていてもよいカルボキシレート基であり得る。置換されていてもよいカルボキシレート基の例としては、置換されていてもよいアルキル（例えば、Ｃ１−１０アルキル）；置換されていてもよいシクロアルキル（例えば、Ｃ３−７シクロアルキル）；置換されていてもよいアルケニル（例えば、Ｃ２−１０アルケニル）；置換されていてもよいシクロアルケニル（例えば、Ｃ３−７シクロアルケニル）；置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル、ナフチル、ベンジルなどのＣ１−４アリール）；および他の適切な置換基が挙げられるが、これらに限定されない。メトキシメチル、メトキシエチル、および関連する基のような基もまた、包含される。
【０１０８】
新規のＳＡＨ加水分解酵素阻害剤の構造に基づく薬物設計
本発明の化合物を最初の鋳型分子として用いた、構造に基づく薬物設計を提供することもまた、本発明の目的である。最近、ＳＡＨ加水分解酵素のＸ線構造は、酵素の「開」および「閉」状態の両方について入手可能になっている。当業者は、構造に基づく設計を用いて、ＳＡＨ加水分解酵素阻害剤をスクリーニングするための新規の化合物を設計し得る。候補化合物の設計または選択は、ＳＡＨ加水分解酵素の結合ポケットを満たす種々の部分の選択から開始し得る。（例えば、米国特許第５，７５６，４６６号；Ｋｌｅｂｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７８：６９−２８１（２０００）；およびＭａｉｇｎａｎら、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１：１６１−１７４（２００１）を参照のこと）。
【０１０９】
個々の結合ポケットを満たす部分を選択するための方法は、多数存在する。これらとしては、活性部位の物理的モデルまたはコンピュータモデルの外観検査、および選択された部分のモデルを種々の結合ポケットに手動でドッキングすることが挙げられる。当該分野で周知かつ入手可能なモデリングソフトウェアが用いられ得る。これらとしては、ＱＵＡＮＴＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，１９９２）；ＳＹＢＹＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｒｉｐｏｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，１９９２）；ＡＭＢＥＲ（Ｗｅｉｎｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６：７６５−７８４（１９８４））；ＣＨＡＲＭＭ（Ｂｒｏｏｋｓら、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｃｈｅｍ．４：１８７−２１７（１９８３））が挙げられるが、これらに限定されない。モデリング工程に続いて、ＣＨＡＲＭＭおよびＡＭＢＥＲのような標準分子力学力場を用いたエネルギー最小化が行なわれ得る。さらに、本発明の結合部分を選択するプロセスを補助する、より専門化したコンピュータプログラムが多数存在する。これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
１．ＧＲＩＤ（Ｇｏｏｄｆｏｒｄ、「Ａ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｅｎｅｒｇｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｆａｖｏｒａｂｌｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅｓ  ｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２８：８４９−８５７（１９８５））。ＧＲＩＤは、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫから入手可能である。
【０１１０】
２．ＭＣＳＳ（Ｍｉｒａｎｋｅｒら、「Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ  Ｍａｐｓ  ｏｆ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅｓ：Ａ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｐｙ  Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｍｅｔｈｏｄ」，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ」１１：２９−３４（１９９１））。ＭＣＳＳは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．から入手可能である。
【０１１１】
３．ＡＵＴＯＤＯＣＫ（Ｇｏｏｄｓｅｌｌら、「Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｄｏｃｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｂｙ  Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  Ａｎｎｅａｌｉｎｇ」，ＰＲＯＴＥＩＮＳ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：１９５−２０２（１９９０））。ＡＵＴＯＤＯＣＫは、Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．から入手可能である。
【０１１２】
４．ＤＯＣＫ（Ｋｕｎｔｚら、「Ａ  Ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ−Ｌｉｇａｎｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６１：２６９−２８８（１９８２））。ＤＯＣＫは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から入手可能である。
【０１１３】
一旦、適切な結合部分が選択されると、これらの結合部分は、単一の阻害剤に構築され得る。この構築は、種々の部分を中心骨格に結合することによって達成され得る。この構築プロセスは、例えば、外観検査に続いて、ＱＵＡＮＴＡまたはＳＹＢＹＬのようなソフトウェアを同じく用いた手動モデル構成によってなされ得る。多数の他のプログラムも、種々の部分を結合するための選択方法を補助するために用いられ得る。これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
１．ＣＡＶＥＡＴ（Ｂａｒｔｌｅｔｔら、「ＣＡＶＥＡＴ：Ａ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｔｏ  Ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ，Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｐｕｂ．，Ｒｏｙａｌ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７８：１８２−１９６（１９８９））。ＣＡＶＥＡＴは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，Ｃａｌｉｆ．から入手可能である。
【０１１４】
２．ＭＡＣＣＳ−３Ｄなどの３Ｄデータベースシステム（ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ，Ｃａｌｉｆ．）。この領域は、最近、Ｍａｒｔｉｎによって概説された（Ｍａｒｔｉｎ，「３Ｄ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｅａｒｃｈｉｎｇ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：２１４５−２１５４（１９９２））。
【０１１５】
３．ＨＯＯＫ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．から入手可能）。
【０１１６】
上記の阻害剤化合物のコンピュータ補助によるモデリングに加えて、本発明の阻害剤は、活性のない部位または公知の阻害剤の一部を必要に応じて含むもののいずれかを用いて、デノボで構築され得る。このような方法は、当該分野で周知である。これらとしては、例えば、以下が挙げられる：
１．ＬＵＤＩ（Ｂｏｈｍ，「Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ＬＵＤＩ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ａｉｄ．Ｍｏｌｅｃ．Ｄｅｓｉｇｎ  ６：６１−７８（１９９２））。ＬＵＤＩは、Ｂｉｏｓｙｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．から入手可能である。
【０１１７】
２．ＬＥＧＥＮＤ（Ｎｉｓｈｉｂａｔａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４７：８９８５（１９９１））。ＬＥＧＥＮＤは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．から入手可能である。
【０１１８】
３．ＬｅａｐＦｒｏｇ（Ｔｒｉｐｏｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．から入手可能）。
【０１１９】
薬物のモデリングに一般に使用される多数の技術が用いられ得る（例えば、Ｃｏｈｅｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：８８３−８９４（１９９０）を参照のこと）。同様に、化学技術文献中の多数の例が、特定の薬物設計プロジェクトに適用され得る。（概説について、Ｎａｖｉａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃ．Ｂｉｏｌ．２：２０２−２１０（１９９１）を参照のこと）。本発明の工程の新規の組み合わせを用いると、当業者は、時間のかかる高価な実験を有利に回避して、特定の化合物の酵素阻害活性を決定し得る。この方法はまた、ＳＡＨ加水分解酵素阻害剤、ならびにＳＡＨ加水分解酵素媒介性の疾患に対する治療および予防剤の合理的設計を容易にするのにも有用である。従って、本発明は、このような阻害剤、およびこのような阻害剤を同定または選択するための方法に関する。
【０１２０】
種々の従来の技術を用いて、各々の上記の評価、およびＳＡＨ加水分解酵素阻害活性について候補化合物をスクリーニングするのに必要な評価を行い得る。一般に、これらの技術は、所定の部分の位置および結合近似、結合した阻害剤の占有空間、所定の化合物の結合の変形エネルギーおよび静電的相互作用エネルギーを決定する工程を包含する。上記の評価に有用な従来の技術の例としては、量子力学、分子力学、分子動力学、モンテカルロサンプリング、系統的探索およびディスタンスジオメトリー法（Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ａｎｎ．Ｒｅｆ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２７：１９３（１９８７））が挙げられるが、これらに限定されない。これらの方法を実行するのに用いられる特殊なコンピュータソフトウェアが開発されている。このような用途のために設計されたプログラムの例としては、以下が挙げられる：Ｇａｕｓｓｉａｎ  ９２（Ｇａｕｓｓｉａｎ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐａ．）；ＡＭＢＥＲ；ＱＵＡＮＴＡ／ＣＨＡＲＭＭ；およびＩｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ／Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（Ｂｉｏｓｙｓｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）。これらのプログラムは、例えば、Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｉｎｄｉｇｏ２ワークステーションまたはＩＢＭ  ＲＩＳＣ／６０００ワークステーションモデル５５０を用いて実行され得る。他のハードウェアシステムおよびソフトウェアパッケージが公知であり、かつ、当業者に明らかな適用性を有する。
【０１２１】
本発明に従って、様々なクラスの活性なＳＡＨ加水分解酵素阻害剤が、ＳＡＨ加水分解酵素活性部位の種々の結合ポケットと、類似の方法で相互作用し得る。これらの重要な基の空間的配置は、しばしばファルマコフォアと呼ばれる。ファルマコフォアの概念は、文献に十分に記載されている（Ｍａｙｅｒら、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ａｉｄｅｄ  Ｍｏｌｅｃ．Ｄｅｓｉｇｎ  １：３−１６（１９８７）；Ｈｏｐｆｉｎｇｅｒら，Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，ＪｏｈｎｓｏｎおよびＭａｇｇｉｏｒａ（編），Ｗｉｌｅｙ（１９９０）を参照のこと）。
【０１２２】
本発明の様々なクラスのＳＡＨ加水分解酵素阻害剤はまた、結合に必要な特異的相互作用が得られ得るように、必要な部分が活性部位に配置されることを可能にする、様々な骨格またはコア構造を用い得る。これらの化合物は、ファルマコフォア（すなわち、ＳＡＨ加水分解酵素の活性部位の形状および性質に対する構造的同一性）にマッチする能力に関して最善に定義される。種々の骨格が、例えば、Ｋｌｅｂｅ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７８：２６９−２８１（２０００）；Ｍａｉｇｎａｎら、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１：１６１−１７４（２００１）；およびＢｅｍｉｓらに対する米国特許第５，７５６，４６６号）に記載されている。
【０１２３】
阻害されるＳ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン加水分解酵素
本発明の化合物は、任意のＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害するのに用いられ得る。本発明は、任意の特定のＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害することに限定されることを意図するものではない。
【０１２４】
１つの実施形態において、本発明の化合物は、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号のヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされるＳＡＨ加水分解酵素を、可逆的に阻害するのに用いられ得る：ＡＦ１２９８７１（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｉｒｓｕｔｕｍ）；ＡＱ００３７５３（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）；ＡＦ１０５２９５（Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ  ｆｕｎｄｙｅｎｓｅ）；ＡＡ９５５４０２（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＡ９００２２９（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＡ８７４９１４（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＡ６９５６７９（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ卵巣）；ＡＡ８０３９４２（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ卵巣；ＡＩ１８７６５５（Ｍａｎｄｕｃａ  ｓｅｘｔａ雄触角）；Ｕ４０８７２（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）；ＡＪ００７８３５（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）；ＡＦ０８０５４６（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ）；ＡＩ０６９７９６（Ｔ．ｃｒｕｚｉ  ｅｐｉｍａｓｔｉｇｏｔｅ）；Ｚ９７０５９（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）；ＡＦ０５９５８１（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）；Ｕ８２７６１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡ７５４４３０（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）；Ｄ４９８０４（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ）；Ｄ４５２０４（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ）；Ｘ９５６３６（Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）；Ｔ１８２７７（Ｚｅａ  ｍａｙｓ胚乳）；Ｒ７５２５９（マウス脳）；Ｚ２６８８１（Ｃ．ｒｏｓｅｕｓ）；Ｘ１２５２３（Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）；Ｘ６４３９１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｆｒａｄｉａｅ）；Ｗ２１７７２（トウモロコシの葉）；ＡＨ００３４４３（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９６３（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９６２（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９６１（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９６０（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９５９（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９３７（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８８（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８７（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８６（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８５（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８４（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８３（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８２（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８１（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９８０（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９７９（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９７８（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９７７（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９７６（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ１４９７５（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｌ３２８３６（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；Ｌ３５５５９（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）；Ｚ１９７７９（ヒト胎児副腎組織��；Ｌ２３８３６（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）；Ｍ１５１８５（ラット）；Ｌ１１８７２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）；Ｍ１９９３７（粘菌（Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）；Ｍ８０６３０（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）。
【０１２５】
別の実施形態において、本発明の化合物は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ６１８３１−６１８３２のヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされるＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害するのに用いられ得る（Ｃｏｕｌｔｅｒ−ＫａｒｉｓおよびＨｅｒｓｈｆｉｅｌｄ，Ａｎｎ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．，５３（２）：１６９−１７５（１９８９）も参照のこと）。本発明の化合物はまた、米国特許第５，８５４，０２３号に示されるヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を含む核酸によってコードされるＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害するのにも用いられ得る。
【０１２６】
Ｃ．治療剤としての用途
４（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸、その誘導体、および薬学的に受容可能な塩を用いたＳＡＨ加水分解酵素の可逆的な阻害により、その治療効果を保持しつつ、細胞傷害性を顕著に低下させる。本発明の化合物は、その効力および可逆性のため、他の不可逆的阻害剤に付随する強い毒性のない治療剤として用いられ得る。本発明の化合物は、ＳＡＨ加水分解酵素を阻害する能力に関連する生物学的活性を示す薬剤として有用である。ＳＡＨ加水分解酵素に対する阻害効果は、阻害剤の存在下または非存在下におけるＳＡＨ加水分解の初速度の比を用いるか、あるいは当業者に公知の任意の方法を用いて評価され得る。本発明は、出血性ウイルス感染、自己免疫疾患、自家移植片拒絶、新生物、高ホモシステイン不全症、循環器病、脳卒中、アルツハイマー病、および糖尿病などの疾患の予防および処置のための組成物ならびに方法を提供する。しかしながら、本発明は、特定の疾患の予防および処置に限定されることを意図するものではない。
【０１２７】
１．出血熱ウイルス
本発明は、ウイルス性出血熱の処置のための組成物および方法を提供する。本発明の可逆的阻害剤は、出血熱を引き起こす全てのタイプのウイルス（トガウイルス、アレナウイルス、ナイロウイルス、およびハンタウイルスが挙げられるが、これらに限定されない）に対する広域スペクトラムの抗ウイルス剤として機能し得る。広域スペクトラムの抗ウイルス薬は、狭域スペクトラムの薬剤より優れた多くの利点を与える。ウイルスの病原体の臨床診断に伴う困難のために、診断結果から特定の抗ウイルス剤の選択に到達するのが遅すぎる場合が多い。速効作用は、患者の状態が悪化するのを防ぐために、特に、患者が臨床症状を示すや否やウイルス化学療法を開始しなければならない急性感染症において、しばしば必要である。
【０１２８】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）加水分解酵素の阻害剤は、エボラウイルス感染の処置に有効であると報告されている。本発明の化合物はまた、他の出血性疾患（例えば、ＷＯ００／６４４７９に記載される出血性疾患）に対して用いられ得る。阻害の機構は、本発明の方法を実施するのに必要ではないが、本発明の化合物がウイルス複製を阻害する作用機構は、ウイルスのメチル化の阻害に基づき得る。
【０１２９】
２．自己免疫疾患および免疫抑制に関連する疾患
本発明は、自己免疫疾患を予防および処置するための組成物ならびに方法を企図する。ある人が自己免疫疾患を有する場合、免疫系が、その人自身の体の細胞、組織、および器官を誤って攻撃する。集団として、自己免疫疾患には、何百万人ものアメリカ人が罹患している。ほとんどの自己免疫疾患は、男性よりも女性にしばしば好発する。自己免疫疾患の例は、国立保健研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）、「Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ」（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｉａｉｄ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ／ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ．ｈｔｍ．）から見出され得る。
【０１３０】
ＳＡＨ加水分解酵素活性を調節する化合物はまた、免疫抑制に関連する疾患の処置に用いられ得る。免疫抑制は、化学療法、放射線治療、創傷治癒の促進、熱傷処置の強化、またはコルチコステロイド治療などの他の薬物治療、あるいは自己免疫疾患および移植片／移植拒絶の処置に用いられる薬物の組み合わせに起因し得る。免疫抑制はまた、レセプター機能の先天性欠損、感染症、寄生虫症、または他の原因にも起因し得る。
【０１３１】
３．新生物および癌
本発明はまた、副腎、肛門、聴神経、胆管、膀胱、骨、脳、胸、頬（ｂｒｕｃｃａｌ）、中枢神経系、頚部、結腸、耳、子宮内膜、食道、眼、眼瞼、ファロピウス管、胃腸管、頭部、首、心臓、腎臓、喉頭、肝臓、肺、下顎骨、下顎関節頭、上顎骨、口、鼻咽腔、鼻、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、陰茎、耳介、脳下垂体、前立腺、直腸、網膜、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、胃、精巣、甲状腺、扁桃腺、尿道、子宮、膣、内耳神経、外陰に関連する新生物、および他の器官に関連する新生物が挙げられるが、これらに限定されない新生物を予防および処置するための組成物ならびに方法も企図する。特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、非小細胞肺癌、肺癌、乳癌、および前立腺癌の処置に有用である。本発明は、癌（固形腫瘍、リンパ腫、転移性腫瘍、膠芽細胞腫瘍、および他の癌腫瘍に関連する癌が挙げられるが、これらに限定されない）を予防および処置するための組成物ならびに方法をさらに企図する。
【０１３２】
４．高いホモシステインレベルに関連する疾患
さらに、本発明の化合物は、高レベルのホモシステインに関連する疾患の予防および処置のための血漿ホモシステイン低下薬として用いられ得ることが企図される。高いホモシステインレベル（すなわち、高ホモシステイン血症）に関連していることが見出されている疾患としては、循環器病、脳卒中、アルツハイマー病および糖尿病が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、高ホモシステイン血症と冠状動脈性心臓病（ＣＨＤ）、末梢血管疾患、脳卒中、および静脈血栓症との間の関係が、種々の研究で示されている。
【０１３３】
高ホモシステインレベルによる脳卒中のリスクの増大はまた、アルツハイマー病を発症する可能性を増加させる。アルツハイマー型の痴呆を有する人々が、血中に高レベルのホモシステインを有することも、最近の研究で示されている。（Ｓｅｌｈｕｂら、「Ｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ａｓ  ａ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．４６：４７６−４８３（２００２））。高いホモシステインはまた、糖尿病、狼瘡、および他の慢性疾患における合併症とも関連している。
【０１３４】
５．ＩＬ−１２産生および／または放出の可逆的阻害
本発明は、ＩＬ−１２（ＩＬ−１２Ｐ７０、ＩＬ−１２Ｐ３５およびＩＬ−１２Ｐ４０が挙げられる）の産生および／または放出を可逆的に阻害するための組成物ならびに方法を提供し、この方法は、ＩＬ−１２産生細胞をＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤と接触させて、該ＩＬ−１２産生細胞中の該ＳＡＨ加水分解酵素を可逆的に阻害する工程を包含する。ＩＬ−１２Ｐ７０（時には「ＩＬ−１２Ｐ７５」と呼ばれる、Ａｂｄｉ，Ｓｃａｎｄ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５６：１−１１（２００２）を参照のこと）は、ｐ３５およびｐ４０サブユニットで構成されているヘテロ二量体のサイトカインである。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２産生細胞は、哺乳動物（例えば、ヒト）に含まれる。これらの方法は、このような可逆的阻害が必要であるかまたは望ましい疾患の処置に用いられ得る。このような疾患としては、炎症性腸疾患、多発性硬化症および他の自己免疫疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３５】
ＳＡＨ加水分解酵素の任意の可逆的阻害剤は、例えば、本明細書中に記載される可逆的阻害剤（例えば、Ｂ項に記載される阻害剤）が用いられ得る。ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤はまた、Ｙｕａｎら、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ  ９：１１９７−１２０６（１９９９）、ならびに米国特許第５，１３７，８７６号、および同第６，５４１，４８２号にも記載される。これらの可逆的阻害剤は、例えば、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とともに処方されて、薬学的組成物中に含まれ得る。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、下記式（Ｉ）で示されるもの、および／またはその薬学的に受容可能な塩である：
【０１３７】
【化２６】
2008515994.tif 000019
［式中、Ｚは炭素または窒素であり、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、またはハロゲンであり；Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、またはヘテロアリールであり；Ｘは、酸素、窒素、または硫黄であり；そしてＹは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、またはヘテロアリールである］。特定の実施形態において、投与される組み合わせは、（４−アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸を含まない。
【０１３８】
他の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式ＩＡ
【０１３９】
【化２７】
2008515994.tif 000020
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なって、水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノ、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンからなる群より選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｘは、酸素、窒素、および硫黄からなる群より選択され；そして
Ｙは、水素、Ｃ１−１０アルキル基、アルケニル、ビニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択される］、
あるいは式（ＩＢ）：
【０１４０】
【化２８】
2008515994.tif 000021
［式中、Ｒ５は、シクロアルキル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ６は、アセチル、アルケニルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ７およびＲ８は、同じかまたは異なって、水素、アルキル、アセチル、アルケニル、アリール、およびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｖは、酸素、窒素または硫黄であり；
そしてＷは、Ｈ１、Ｃ１−１０アルキル、アルケニル、ビニルアリール、またはヘテロアリールである］
で示される。
【０１４１】
他の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（ＩＩ）：
【０１４２】
【化２９】
2008515994.tif 000022
で示される。
【０１４３】
他の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（ＩＩＩ）：
【０１４４】
【化３０】
2008515994.tif 000023
［式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素またはヒドロキシである；ただし、Ｒ１およびＲ２がともにヒドロキシであることはない］で示される。いくつかの実施形態において、Ｒ１は水素であり、そしてＲ２はヒドロキシである。いくつかの実施形態において、Ｒ１はヒドロキシであり、そしてＲ２は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、ともに水素である。
【０１４５】
他の実施形態において、該ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（ＩＶ）：
【０１４６】
【化３１】
2008515994.tif 000024
［式中、Ｒ１は、ＮＨ２、ＳＣＨ３、またはＣＨ２ＮＨ２である］で示される。
【０１４７】
他の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤は、式（Ｖ）：
【０１４８】
【化３２】
2008515994.tif 000025
［式中、Ｒ１は、ＮＨ２またはＣＯＮＨ２である］
で示される。
【０１４９】
なお別の実施形態において、ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害は、式（ＶＩ）：
【０１５０】
【化３３】
2008515994.tif 000026
［式中、Ｗは、Ｈまたはメトキシである］
で示される。
【０１５１】
Ｄ．薬学的組成物
本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物（例えば、本明細書中に記載されるような、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢまたはＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される化合物）、およびその薬学的に受容可能な塩のいずれかを、単独かあるいは任意の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルと組み合わせて含む。本発明での使用に用いられ得る受容可能な組成物およびそれらの投与方法としては、米国特許第５，７３６，１５４号；同第６，１９７，８０１号；同第５，７４１，５１１号；同第５，８８６，０３９号；同第５，９４１，８６８号；同第６，２５８，３７４号および同第５，６８６，１０２号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的組成物において用いられ得る薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルの例としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
処方、投薬量および投与経路は、当該分野で公知の方法に従って決定され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編者）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９７年４月；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂａｎｇａ，１９９９；ならびにＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＨｏｖｇａａｒｄおよびＦｒｋｊｒ（編），Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｉｎｃ．，２０００；Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｗｕ−ＰｏｎｇおよびＲｏｊａｎａｓａｋｕｌ（編），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９を参照のこと）。ＳＡＨ加水分解酵素の調節を必要とする状態の処置または予防において、適切な投薬レベルは、一般に、１日に体重１ｋｇ当たり約０．０１〜５００ｍｇである。好ましくは、投薬レベルは、１日に約０．１〜約２５０ｍｇ／ｋｇである。より好ましい実施形態において、投薬レベルは、１日に約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲である。適切な投薬量は、単回または複数回投与で投与され得る。任意の特定の被験体に対する特定の用量レベルおよび投薬の頻度は変動し得、そして種々の因子（例えば、用いられる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全身的な健康状態、性別、食餌、投与の様式および時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、ならびに治療を受ける患者）に依存することが理解される。
【０１５３】
本発明の薬学的組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーにより、局所的に、直腸内に、経鼻的に、口腔内に、経膣的に、埋め込みリザーバーを介して、または任意の適切な投与形態で投与され得る。本明細書中で使用される場合、用語「非経口」は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内および頭蓋内の注射または注入技術を包含する。任意の所定の場合における最も適切な経路は、処置される状態の性質および重症度、ならびに用いられるＳＡＨ加水分解酵素阻害剤の性質に依存する。
【０１５４】
薬学的組成物は、滅菌注射用調製物の形態（例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液として）であり得る。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０）、および懸濁剤を用いて、当該分野で公知の技術に従って処方され得る。滅菌注射用調製物はまた、無毒の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。例えば、薬学的組成物は、１，３−ブタンジオール中の溶液であってもよい。本発明の組成物中に用いられ得る受容可能なビヒクルおよび溶媒の他の例としては、マンニトール、水、リンガー溶液および生理食塩液が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として慣習的に用いられている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含めた、任意の無菌性の不揮発性油が用いられ得る。脂肪酸（例えば、オレイン酸）およびそのグリセリド誘導体は、特にポリオキシエチル化型の、天然の薬学的に受容可能な油（例えば、オリーブ油またはヒマシ油）と同様に、注射剤の調製に有用である。これらの油剤または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含み得る。
【０１５５】
本発明の薬学的組成物は、任意の経口的に受容可能な剤形（カプセル剤、錠剤、ならびに水性懸濁液および溶液が挙げられるが、これらに限定されない）で、経口的に投与され得る。経口用途のための錠剤の場合、一般に使用されるキャリアとしては、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）も添加され得る。カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。水性懸濁液が経口的に投与される場合、活性成分は、乳化剤および懸濁剤と組み合わせられる。所望であれば、ある種の甘味剤、香料添加剤、および着色剤が添加され得る。
【０１５６】
本発明の薬学的組成物はまた、直腸投与のための坐薬の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、本発明の化合物を適切な非刺激性の賦形剤と混合することによって、調製され得る。特定の実施形態において、賦形剤は、室温で固体であるが、直腸温では液体である。従って、この賦形剤は、直腸内で融解して、活性成分を放出する。このような材料としては、カカオバター、蜜蝋およびポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５７】
本発明の薬学的組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与されてもよい。このような組成物は、製剤処方の技術分野で周知の技術に従って調製される。例えば、このような組成物は、ベンジルアルコールまたは他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティーを向上させるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／あるいは当該分野で公知の他の可溶化剤または分散剤を用いて、生理食塩水中の溶液として調製され得る。
【０１５８】
本発明の薬学的組成物はまた、局所的に投与されてもよい。皮膚への局所適用のために、薬学的組成物は、キャリア中に懸濁または溶解された活性成分を含む、適切な軟膏と共に処方され得る。本発明の化合物の局所投与のためのキャリアとしては、ミネラルオイル、鉱油、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、薬学的組成物は、キャリア中に懸濁または溶解された活性化合物を含む、適切なローションまたはクリームと共に処方され得る。適切なキャリアとしては、ミネラルオイル、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セタリルアルコール（ｃｅｔａｒｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的組成物はまた、直腸坐薬処方によるかまたは適切な浣腸処方で、下部腸管に局所的に適用されてもよい。局所的経皮パッチもまた、本発明に包含される。
【０１５９】
他の実施形態において、本発明は、医薬としての使用および／または医薬の製造のための使用のいずれかに関連して、本明細書中に記載される方法のいずれかで用いるための本明細書中に記載されるＳＡＨの可逆的阻害剤を含む組成物を提供する。
【０１６０】
本発明はまた、本発明の治療レジメンを実行するためのキットを提供する。このようなキットは、治療有効量のＳＡＨ加水分解酵素可逆的阻害剤（例えば、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＩ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される可逆的阻害剤）を、単独かまたは他の薬剤と組み合わせて、薬学的に受容可能な形態で含む。好ましい製薬形態は、滅菌生理食塩水、デキストロース溶液、緩衝溶液、または他の薬学的に受容可能な滅菌流体と組み合わせて阻害剤を含む。あるいは、組成物は、凍結乾燥または乾燥されていてもよい。この場合、キットは、注射用の溶液を形成するために、薬学的に受容可能な溶液（好ましくは滅菌したもの）をさらに含み得る。別の実施形態において、キットは、組成物を注射するための針またはシリンジ（好ましくは、滅菌形態でパッケージ化されたもの）をさらに含み得る。他の実施形態において、キットは、被験体に組成物を投与するための指示手段をさらに含み得る。この指示手段は、書面挿入物、録音テープ、視聴覚テープ、または被験体への組成物の投与を指示する任意の他の手段であり得る。
【０１６１】
関連する局面において、本発明は、上記のキットの内容を含む製品を提供する。例えば、本発明は、有効量のＳＡＨ加水分解酵素可逆的阻害剤（単独かまたは他の薬剤と組み合わせて）、および本明細書中に記載される疾患を処置するための使用を示す指示書を含む製品を提供する。
【０１６２】
Ｅ．ＳＡＨ加水分解酵素活性を可逆的に阻害するための組み合わせ
本発明はまた、ＳＡＨ加水分解酵素活性を可逆的に阻害するための組み合わせおよびキットを提供する。１つの実施形態において、本発明は、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＨ〜ＶＩのいずれか１つの式で示される有効量の化合物、ならびに有効量の抗出血性のウイルス感染薬、免疫抑制剤、血漿ホモシステイン低下薬、または抗新生物薬を含む、組み合わせを提供する。この組み合わせは、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤をさらに含み得る。さらに別の局面において、本発明は、有効量の記載されるような組み合わせ、および該組み合わせを被験体に投与するための指示手段を含む、キットを提供する。
【０１６３】
ウイルス性の出血性疾患に関連する臨床症状または診断マーカーを軽減するかまたは寛解させ得る任意の薬剤は、本発明の組み合わせに用いられ得る。抗ウイルス治療剤としては、抗ウイルスワクチン、抗ウイルス抗生物質、ウイルスによって活性化された免疫細胞およびウイルスによって活性化された免疫血清が挙げられるが、これらに限定されない。ＷＯ００／６４４７９は、本発明の組み合わせに用いられ得る、抗ウイルス治療剤の例を記載する。好ましい実施形態は、ブンヤウイルス科、フィロウイルス科、フラビウイルス科、またはアレナウイルス科ウイルスの感染によって引き起こされるウイルス性の出血性疾患に対する生物活性を示す、抗ウイルス治療剤である。
【０１６４】
身体の免疫系が疾患と戦う能力を抑制する任意の薬剤は、本発明の組み合わせに用いられ得る。免疫抑制剤の非限定的な例は、シクロスポリン、プレドニシロン（ｐｒｅｄｎｉｓｉｌｏｎｅ）、アザチオプリン、タクロリムス、副腎皮質ステロイド、ミコフェノレート、シクロホスファミド、メトトレキサート、クロラムブチル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ダクチノマイシン、抗胸腺細胞グロブリン、ムロモナブ−ＣＤ３モノクローナル抗体、ＲｈＯ（Ｄ）免疫グロブリン、メトキサレン、およびサリドマイドである（Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、（第９版）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  １９９６、１２９４−１３０４頁を参照のこと）。免疫抑制剤は、薬物の組み合わせとして服用され得る。例えば、大抵の人は、薬物の組み合わせ（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、およびプレドニシロンの組み合わせ）を移植後に開始する。長い期間にわたって、各薬物の用量および服用される薬物の数は、拒絶のリスクが低下するにつれて減少され得る。
【０１６５】
ホモシステインレベルを低下させる任意の薬剤は、本発明の組み合わせに用いられ得る。葉酸は、有効なホモシステイン低下薬であることが知られている。他のホモシステイン低下薬としては、ベタイン、トリメチルグリシン、シアノコバラミン、および他のビタミンＢ群が挙げられるが、これらに限定されない。この組み合わせはまた、ホモシステインを低下させるのに用いられる任意の総合ビタミンおよびミネラル補充剤も含み得る。本発明の組み合わせに用いられ得る総合ビタミンおよびミネラル補充剤の例としては、米国特許第６，３６１，８００号；同第６，３５３，００３号；同第６，３２３，１８８号；同第６，２７４，１７０号；同第６，２１０，６８６号；同第６，２０３，８１８号；および同第５，６６８，１７３号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６６】
任意の抗新生物薬が、本発明の組み合わせに用いられ得る。本発明の組成物および方法に用いられ得る抗新生物薬の例は、米国特許出願第２００２／０４４９１９号に記載される。１つの実施形態において、用いられる抗新生物薬は、抗血管形成剤である。抗血管形成剤は、基底膜分解の阻害剤、細胞遊走の阻害剤、内皮細胞増殖の阻害剤、ならびに３次元組織化および効力の確立の阻害剤であり得る。このような抗血管形成剤の例は、ＡｕｅｒｂａｃｈおよびＡｕｅｒｂａｃｈ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，６３：２６５−３１１（１９９４）；Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ，１５：５−１３（１９９７）；Ｊ．Ｎａｔ’ｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔ．，８８：７８６−７８８（１９９６）；ならびに米国特許第５，５９３，９９０号；同第５，６２９，３２７号および同第５，７１２，２９１号に示される。別の実施形態において、用いられる抗新生物薬は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、天然物、プラチナ配位錯体、アントラセンジオン、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモン、およびアンタゴニストである。
【０１６７】
他の抗新生物薬としては、シチジン、アラビノシルアデニン（ａｒａＣ）、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート（ＭＴＸ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などのフッ化ピリミジン、ヒドロキシ尿素、６−メルカプトプリン、ビンクリスチン（ＶＣＲ）、ＶＰ−１６およびビンブラスチン（ＶＬＢ）などの植物アルカロイド、アルキル化剤、シスプラチン、ナイトロジェンマスタード、トリスアミン、プロカルバジン、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、またはＬ−アスパラギナーゼなどの酵素が挙げられるが、これらに限定されない。抗新生物薬はまた、癌抑制遺伝子抗体または抗癌遺伝子アンチセンスオリゴヌクレオチドのような癌遺伝子阻害剤であり得る。別の実施形態において、抗悪性腫瘍薬は、抗細胞マトリックス抗体または抗細胞マトリックスアンチセンスオリゴヌクレオチドのような細胞マトリックス阻害剤である。例えば、カベオリン−１、デコリン、カドヘリン、カテニン、インテグリン、および他の細胞マトリックスまたは細胞マトリックス遺伝子に対する抗体ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチドが用いられ得る。
【０１６８】
特定の実施形態において、組み合わせは、腫瘍内治療および遺伝子治療の併用のための癌抑制遺伝子をさらに含む。遺伝子は、遺伝子送達系の成分として、裸のＤＮＡ、複合ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの他の混合物の形態で用いられ得る。別の実施形態において、癌抑制遺伝子は、ウイルスベクター中に含まれる。遺伝子治療に適している任意のウイルスベクターが、組み合わせて用いられ得る。例えば、アデノウイルスベクター（米国特許第５，８６９，３０５号）、シミアンウイルスベクター（米国特許第５，９６２，２７４号）、条件付き複製可能型ヒト免疫不全ウイルスベクター（米国特許第５，８８８，７６７号）、レトロウイルス、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルスアンプリコンベクターおよびワクシニアウイルスベクターが用いられ得る。さらに、遺伝子は、リポソーム（ここでは、脂質が、凝固時の酸化からＤＮＡまたは他の生体材料を保護する）のような非ウイルスベクター系で送達され得る。
【実施例】
【０１６９】
Ｆ．実施例
実施例１
ＳＡＨ加水分解酵素の可逆的阻害剤の合成
特に断りのない限り、１Ｈ（Ｍｅ４Ｓｉ）ＮＭＲスペクトルを、４００ＭＨｚでＣＤＣｌ３中、１００．６ＭＨｚで１３Ｃ（Ｍｅ４Ｓｉ）中の溶液を用いて決定した。質量スペクトル（ＭＳ）を、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）技術によって得た。試薬等級の薬品を使用した。ＴＨＦ以外の溶媒は、アルゴン雰囲気下、ＣａＨ２で還流し、そしてＣａＨ２から蒸留することによって乾燥させ、ＴＨＦは、ベンゾフェノンおよびカリウムから蒸留した。ＴＬＣは、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３（１：９）およびＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９５：５）を展開系として用いてＭｅｒｃｋ  ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０−Ｆ２５４上で行い、生成物を２５４ｎｍ光で検出した。Ｍｅｒｃｋ  ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０（２３０−４００メッシュ）を、カラムクロマトグラフィーに用いた。
【０１７０】
元素分析は、Ｇａｌｂｒａｉｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮで決定した。化合物を単離するためのスペクトルデータは、報告されたデータと一致した。（Ｈｏｌｙ，Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．４３，３４４４−３４６４（１９７８）；Ｈｏｌｙら、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．５０：２６２−２７９（１９８５）；日本特許第６９−５０７８１号；Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ．１９７２：５１４８１１）。この合成を、スキーム２に概略的に示す。
【０１７１】
９−（３，４−Ｏ−イソプロピリデン−３，４−ジヒドロキシブチル）アデニン（ｌ）
【０１７２】
【化３４】
2008515994.tif 000027
９−（３，４−ジヒドロキシブチル）アデニン（２）
ＣＦ３ＣＯＯＨ／Ｈ２Ｏ（９：１）（５ｍｌ）中の１（１１０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液を、約０℃で２０分間攪拌した。揮発物を蒸発させ、トルエン（３×）およびＥｔＯＨ（２×）と同時蒸発させて、ＥｔＯＨからの結晶化後に報告されたスペクトルデータを示す２（７３ｍｇ、７８％）を得た。
【０１７３】
９−（４−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−３，４−ジヒドロキシブチル）アデニン（３）
ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（１８６ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（１６８ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（８ｍＬ）中の２（２５０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。混合物を周囲温度で５時間攪拌し、次いで、この反応混合物をＥｔＯＡｃ／ＮＨ４Ｃｌ／Ｈ２Ｏの間で分配した。水層を隣の部分のＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を洗浄し（ブライン）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させ、そして残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ；９７：３）に付して、３（２３４ｍｇ、６２％）を得た：
【０１７４】
【化３５】
2008515994.tif 000028
９−［４−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−３，４−ジヒドロキシブチル］アデニン（４）
エチルビニルエーテル（２１４ｍｇ、０．２８ｍＬ、２．９６ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（１５ｍｇ、ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の３（２５０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、この混合物を周囲温度にてＮ２下で、出発物質がＴＬＣで検出されなくなるまで（通常５〜６日間）攪拌した。次いで、反応混合物を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ；９７：３）により、４（１６０ｍｇ、５３％）をジアステレオ異性体の約１：１混合物として得た：
【０１７５】
【化３６】
2008515994.tif 000029
９−［３−Ｏ−（１−エトキシエチル）−３，４−ジヒドロキシブチル］アデニン（５）−手順Ａ
ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（０．８８ｍＬ、１Ｍ）を、無水ＴＨＦ（６ｍＬ）中の４（１８０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、この混合物を周囲温度で２０分間攪拌した。揮発物を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ；７８：１２）に付して、５（１２０ｍｇ、９２％）をジアステレオ異性体の約１：１混合物として得た：
【０１７６】
【化３７】
2008515994.tif 000030
４−（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシ酪酸メチル（６）−手順Ｂ
ＣＨ３ＣＮ／ＣＣｌ４／Ｈ２Ｏ（１：１：１．５；１．５ｍＬ）中の５（９０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＮａＨＣＯ３（１６１ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、ＮａＩＯ４（３５３ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）およびＲｕＣｌ３（微量）を添加した。この混合物を、出発物質がＴＬＣで検出されなくなるまで、周囲温度で４８時間攪拌した。次いで、水（５ｍＬ）およびＣＨＣｌ３（４ｍＬ）を添加し、これらの２つの相を分離し、そして水相をＣＨＣｌ３（３ｍＬ）で洗浄した。水層をｐＨが約４になるまでＨＣｌで酸性化し、Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×２（Ｈ＋）のカラムにアプライした。カラムを２００ｍＬの水で洗浄し、次いで、生成物を２．５％ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏで溶出した。合わせたＵＶ吸収性のアンモニア溶出物を蒸発させ、そしてＭｅＯＨ（２×）と同時蒸発させた。残渣をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解し、ジエチルエーテル中のＣＨ２Ｎ２の溶液を、ジアゾメタンの黄色が数分間維持されるまで添加した。この溶液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ；９５：５）に付して、６（ＤＺ２００２）（３１ｍｇ、４１％）を報告されたものと同一のデータを示す白色固体として得た。副産物６’の生成を回避するために、反応混合物中に所望の量のＮａＨＣＯ３を維持することが重要である。
【０１７７】
４−（アデニン−９−イル）−２−ヒドロキシブタン酸（７）−手順Ｃ
ＮａＯＨ／Ｈ２Ｏ（１ｍＬ、０．１Ｍ）を、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中の６（１０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を、出発物質がＴＬＣで検出されなくなるまで、周囲温度で６時間攪拌した。次いで、反応混合物を、ｐＨが約４になるまでＨＣｌで酸性化し、Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×２（Ｈ＋）のカラムにアプライした。カラムを水（１００ｍＬ）で洗浄し、次いで、生成物を２．５％ＮＨ４ＯＨで溶出した。合わせたＵＶ吸収性のアンモニア溶出物を蒸発させて、７を、報告されたデータを示すアンモニウム塩（７．６ｍｇ、７５％）として得た。
【０１７８】
９−（３，４−Ｏ−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−３，４−ジヒドロキシブチル）アデニン（８）
ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（５９３ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（５３４ｍｇ、７．８５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（８ｍＬ）中の２（３５０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加し、この混合物を周囲温度で一晩攪拌した。次いで、反応混合物をＥｔＯＡｃ／ＮＨ４Ｃｌ／Ｈ２Ｏの間で分配した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を洗浄し（ブライン）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３→３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）により、８（６１０ｍｇ、８６％）を得た：
【０１７９】
【化３８】
2008515994.tif 000031
９−（３−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−３，４−ジヒドロキシブチル）アデニン（９）
化合物８（４００ｍｇ、０．８８７ｍｍｏｌ）を、ＣＨ３ＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ（１３：７：３；８ｍＬ）の溶液に添加し、この混合物を、化合物２のより極性の高いスポットがＴＬＣ上に出現し始めるまで、周囲温度で攪拌した。次いで、反応混合物を分配し（ＥｔＯＡｃ／／ＮａＨＣＯ３／Ｈ２Ｏ）、そして水層を隣の部分のＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を洗浄し（ＮａＨＣＯ３、ブライン）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィーに付して（ＣＨＣｌ３→４％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）、回収した８（１４０ｍｇ、３５％）および９（１５５ｍｇ、５２％）を得た：
【０１８０】
【化３９】
2008515994.tif 000032
３−（アデニン−９−イル）プロピオン酸メチル（６’）
９（５０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）を手順Ｂ（カラムクロマトグラフィー：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ  ９７：３）によって処理することにより、報告されたデータを示す６’（９ｍｇ、２７％）を得た。
【０１８１】
３−（アデニン−９−イル）プロピオン酸（７’）
６’（１０ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を手順Ｃ（カラムクロマトグラフィー：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ  ９７：３）によって処理することにより、報告されたデータを示す６’（７．３ｍｇ、７８％）を得た。
【０１８２】
スキーム２
【０１８３】
【化４０】
2008515994.tif 000033
ａ（ａ）ＣＦ３ＣＯＯＨ／Ｈ２Ｏ；（ｂ）ＴＢＤＭＳＣｌ／イミダゾール／ＤＭＦ；（ｃ）エチルビニルエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２／（ｐ）ＣＨ３Ｃ６Ｈ４ＳＯ３Ｈ−Ｃ５Ｈ１０Ｎ；（ｄ）ＴＢＡＦ／ＴＨＦ；（ｅ）（ｉ）ＮａＩＯ４／ＮａＨＣＯ３／ＲｕＣｌ３／ＣＨ３ＣＮ／ＣＣｌ４／Ｈ２Ｏ、（ｉｉ）ＣＨ２Ｎ２ＭｅＯＨ；（ｆ）ＣＨ３ＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ；（ｇ）ＮａＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ。
【０１８４】
実施例２
ＤＺ２００２は免疫抑制作用を媒介する
材料および方法
試薬
ＡｄｏＨｃｙ加水分解酵素阻害剤ＤＺ２００２（スキーム２中の化合物６）は、Ｄｉａｚｙｍｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓで合成された。Ｃｏｎ  Ａ（Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ  Ａ）、ＬＰＳ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ０５５：Ｂ５）およびＳａｃ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｃｏｗａｎ  ｓｔｒａｉｎ１）は、Ｐａｎｓｏｒｂｉｎ（登録商標）ｃｅｌｌｓ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｉｎｃ．（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ．，ＣＡ９２０３９，ＵＳＡ）から入手した。ＲＰＭＩ１６４０およびウシ胎仔血清（ＦＢＳ）は、ＧＩＢＣＯから入手した。精製ラット抗マウスＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＦＮ−γおよびビオチン標識抗マウスＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＦＮ−γ、ＦＩＴＣ−抗マウス−ＣＤ１１ｂ（Ｍａｃ−１）、Ｐｈｙｃｏｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）−抗マウスＩ−Ａｄ、ＰＥ−抗ヒト−ＣＤ１４、ＰＥ−抗ヒト−ＡＢＣ、ＰＥ−抗ヒト−ＤＲ、ＰＥ−抗ヒト−ＣＤ８０およびＰＥ−抗ヒト−ＣＤ８６は、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品であった。チオグリコレート（ＴＧ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能である。
【０１８５】
動物
近交系ＢＡＬＢ／Ｃマウス（６〜８週齢）を、認可番号９９−００３で、中国科学院上海実験動物センター（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）により提供された。これらのマウスを、室温２４±２℃、１２時間の明／暗サイクルで、特定病原体感染防止（ＳＰＦ）条件に収容し、滅菌飼料および水を自由に与えた。
【０１８６】
細胞
Ｂａｌｂ／ｃマウスから脾臓を無菌的に切除し、プールし、そしてＰＢＳ中の単細胞懸濁液を調製した。赤血球を、トリス緩衝化塩化アンモニウム（０．１５５Ｍ  ＮＨ４ＣＬ、０．０１６５Ｍトリス、ＰＨ７．２）で処理することによって溶解した。単核細胞をＰＢＳで洗浄し、そしてベンジルペニシリン１０００００Ｕ・Ｌ−１およびストレプトマイシン１００ｍｇ・Ｌ−１を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地中に再懸濁した。細胞の生存度および濃度を、トリパンブルー排除により決定した。
【０１８７】
腹腔滲出細胞を、０．５ｍｌの３％ＴＧの腹膜腔内注射によってＢＡＬＢ／Ｃマウスに誘導した。４日後に、腹膜滲出細胞を滅菌洗浄によって収集した。
【０１８８】
ＴＨＰ−１（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）は、ヒト単球性白血病である。ＴＨＰ−１細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中の懸濁培養で維持した。培養を、空気中５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃で維持し、５〜６日ごとに１／１０希釈で継代培養した。
【０１８９】
脾臓リンパ球への［３Ｈ］−チミジン取込み
マウス脾臓リンパ球を、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０中で、インビトロで培養した。細胞を、種々の濃度のＤＺ２００２の存在下または非存在下で、５μｇ／ｍｌのＣｏｎ  Ａまたは１０μｇ／ｍｌのＬＰＳとともに、３７℃で４８時間、加湿ＣＯ２インキュベーター中、１×１０５細胞／２００μｌ／ウェルにて９６ウェルプレート中でインキュベートした。４０時間のインキュベーションの後、細胞を０．５μＣｉ／ウェルの［３Ｈ］−チミジンでパルスし、さらに８時間培養した。次いで、細胞をガラス繊維フィルター上に収集し、取り込まれた放射能をＢｅｔａ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｏｒ（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてカウントした。
【０１９０】
脾臓リンパ球のＭＴＴアッセイ
細胞傷害性をＭＴＴアッセイで評価した。マウス脾臓リンパ球を、種々の濃度のＤＺ２００２の存在下または非存在下で、３７℃で４８時間、加湿ＣＯ２インキュベーター中、９×１０４細胞／１８０μｌ／ウェルにて９６ウェルプレート中でインキュベートした。培養終了前に１５μｌの５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴを４時間パルスし（合計１９０μｌ）、次いで、８０μｌの溶媒（１０％ＳＤＳ、５０％Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＰＨ７．２）を添加した。７時間インキュベートし、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−ｒａｄ  Ｍｏｄｅｌ  ５５０  Ｊａｐａｎ）でＯＤ５９０を読み取る。
【０１９１】
サイトカイン産生
マウスの脾臓単核球（５×１０６）を、種々の濃度のＤＺ２００２の存在下または非存在下、Ｓａｃ（１：１００００）、ＣｏｎＡ（５ｕｇ／ｍｌ）またはＬＰＳ（１０ｕｇ／ｍｌ）の存在下で、２４ウェルプレート中、２ｍｌ／ウェルの容量で培養した。２４時間後、無細胞の上清を収集し、−２０℃で凍結した。ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１０およびＴＮＦ−αの濃度を、マウスのサイトカインに特異的なＥＬＩＳＡで決定した。
【０１９２】
マウスの腹腔滲出細胞（６．２５×１０５）を、２４ウェルプレート中、１ｍｌ／ウェルの容量で２時間培養した。接着細胞を氷冷ＲＰＭＩ１６４０で洗浄し、そして接着細胞を、種々の濃度のＤＺ２００２の存在下または非存在下、ＩＦＮ−γ（２．５ｎｇ／ｍｌ）およびＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）の存在下で、２ｍｌ／ウェルの容量で培養した。２４時間後、無細胞の上清を収集し、−２０℃で凍結した。ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１０およびＴＮＦ−αの濃度を、ＥＬＩＳＡで決定した。
【０１９３】
ＴＨＰ−１細胞（６×１０５）を、１．２％の存在下および種々の濃度のＤＺ２００２の存在下または非存在下で、２４ウェルプレート中、２ｍｌ／ウェルの容量で培養した。２４時間後にＩＦＮ−γ（５００Ｕ／ｍｌ）を添加し、さらに１６時間後にＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）を添加した。無細胞の上清を２４時間後に収集し、−２０℃で凍結した。ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１０およびＴＮＦ−αの濃度を、ＥＬＩＳＡで決定した。
【０１９４】
ヒツジ赤血球の定量的溶血（ＱＨＳ）アッセイ
雌性Ｂａｂｌ／ｃマウスを、４日目に０．２ｍｌの１６．７％のＳＲＢＣを腹腔内注射することによって免疫した。ビヒクル、デキサメタゾンおよびＤＺ２００２を、１〜７日目の７日間連続して、腹腔内注射によって各群（ｎ＝６）に投与した。８日目に、マウスを屠殺して、２×１０６細胞／ｍｌの脾臓細胞の混合懸濁液を作製した。１ｍｌの細胞懸濁液を、１ｍｌの０．５％ＳＲＢＣおよび１ｍｌのモルモット補体の１：１０希釈物とともに、３７℃で１時間インキュベートし、次いで、遠心分離し（３分、３０００ｇ）、そして一部改変したＳｉｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，２１（１−２）：１５９−６５．（１９７８）に従って、４１３ｎｍで上清の溶血を決定した。各群を３連で行った。
【０１９５】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）増殖アッセイ
Ｂａｌｂ／ｃマウス脾臓細胞を１０７細胞／ｍｌの懸濁液に調製し、５０μｇ／ｍｌのマイトマイシンとともに２時間培養した。次いで、細胞を洗浄し、新鮮なＣ５７／Ｂ６マウス脾細胞とともに、等しく最終濃度１．０×１０細胞／ｍｌで、種々の濃度のＤＺ２００２の存在下または非存在下で培養した。４８時間インキュベーションの後、細胞を０．５μＣｉ／ウェルの［３Ｈ］−チミジンでパルスし、さらに２４時間培養した。次いで、細胞をガラス繊維フィルター上に収集し、取り込まれた放射能をＢｅｔａ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｏｒ（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてカウントした。
【０１９６】
ＤＮＦＢ誘導性の遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答
雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを、０日目および１日目に各後足に、２０μｌのアセトン−オリーブ油（４：１）中に溶解された０．６％ＤＮＦＢで感作した。７日目にマウスを、一部改変したＰｈａｎｕｐｈａｋ（１９７４）に従う方法で、左耳の両側に１０μｌの０．５％ＤＮＦＢで攻撃した。ビヒクル、ＣｓＡ、およびＤＺ２００２（１、３、１０ｍｇ／ｋｇ）を、攻撃の１時間前および１２時間後、２４時間後に、腹腔内注射によって各群（ｎ＝１０）に投与した。耳介腫脹を、攻撃の３０時間後に特定の８ｍｍパンチで作製した左右の耳パッチの重量差として表した。
【０１９７】
フローサイトメトリー
マウスの腹腔滲出細胞またはＴＨＰ−１細胞を、冷ＰＢＳ（０．１％ＮａＮ３、１％ＦＢＳを含む染色緩衝液（ＰＨ７．２））中で洗浄した。細胞を、冷染色緩衝液中に２．０×１０７／ｍｌで最懸濁した。最適濃度の各蛍光色素標識抗体を、５０μＬの細胞に添加した。Ｆｃレセプターを、１０μＬ正常マウス血清を用いてブロックした。細胞を暗所で４℃にて３０分間インキュベートし、２．０ｍＬの染色緩衝液で２回洗浄し、そして０．５ｍＬのＰＢＳ（ＰＨ７．２）中に再懸濁した。細胞を４℃で暗所に保存し、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。データをＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（商標）ソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて分析した。
【０１９８】
統計分析
結果をｘ±ｓとして表し、独立両側ｔ検定を行って、０．０５未満のＰ値を有意であるとみなした。各実験を少なくとも３回繰り返した。
【０１９９】
結果
ＡｄｏＨｃｙ加水分解酵素阻害剤による脾臓リンパ球への［３Ｈ］−チミジン取込みの阻害
培養の４８時間後、ＤＺ２００２（０．１〜１０μｍｏｌ・Ｌ−１）は、ＣｏｎＡによって誘導されるリンパ球増殖に対して影響を及ぼさない。ＤＺ２００２（１０μｍｏｌ・Ｌ−１）は、ＬＰＳによって誘導されるリンパ球増殖を阻害した。
【０２００】
Ｓａｃ刺激マウス脾細胞からのＩＬ−１０、ＩＬ−１２Ｐ４０およびＩＬ−１２Ｐ７０産生に対するＤＺ２００２の影響
Ｓａｃ刺激は、休止脾細胞と比較して、マウス脾細胞からのＩＬ−１０、ＩＬ−１２Ｐ４０およびＩＦＮ−γ産生の著しい増加を誘導した。ＤＺ２００２（μｍｏｌ・Ｌ−１）は、ＩＬ−１２Ｐ４０、ＩＬ／−１２Ｐ７０およびＴＮＦ−αの放出を用量依存的に阻害した（データは示さず）。
【０２０１】
ヒツジ赤血球の定量的溶血（ＱＨＳ）アッセイに対するＤＺ２００２の影響
ＳＲＢＣの定量的溶血は、抗原刺激に対する応答における一次抗体産生のモデルである。図３に示すように、５ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンのＱＨＳ阻害が３８．１％であるのと比較して、ＤＺ２００２の連続７日間の腹腔内注射により、０．０８ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇの用量で、それぞれＱＨＳを２４．５％および１８．４％阻害した（ビヒクルコントロール群と比較してすべての実験群についてｐ＜０．０５）（図１）。
【０２０２】
ＤＺ２００２は混合リンパ球反応におけるＴ細胞増殖を抑制する
マイトマイシン処理Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ−２ｄ）脾臓細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）脾臓細胞増殖に対する同種刺激因子として適用した。ＤＺ２００２は、それぞれ０．１、１および１０μｍｏｌ／Ｌの用量で３日間培養して、ＭＬＲに対する強力な抑制（４０．２％、３６．９％および４２．３％）を示した。（図２）。
【０２０３】
ＤＺ２００２は、脾臓細胞において細胞傷害性を有さない
２日間の培養において、０．１〜１０μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２は、脾臓細胞に対する細胞傷害性を示さなかった。ＤＺ２００２とともにインキュベートした細胞のＯＤ値は、コントロールのＯＤ値と差異がなかった。（図３）。
【０２０４】
ＤＺ２００２は、エタノール消費によって誘導されるマウスＤＴＨ応答の抑制を逆転させた
各群につき９匹のマウスを準備した。マウスを、０日目および１日目に各後足に、無水アセトン／オリーブ油（４：１）中の０．５％ＤＮＦＢ溶液（２０μｌ）で感作した。初回感作の５日後に、マウスを、軽いメトファン（Ｍｅｔｏｆａｎｅ）麻酔下で左耳の両側に０．２％ＤＮＦＢ（１０μｌ）で攻撃した。右耳をビヒクル単独で処理した。ＤＮＦＢ攻撃の１時間前に、ＤＺ２００２をマウスに経口投与した。耳介腫脹度を、イヤーパンチャーおよび重量（ｍｇ）を測定するために分析天秤を用いて、攻撃の２４時間後に測定した。結果を、左右の耳の重量差として表した。耳介腫脹の測定後に、各群の４匹のマウスから脾臓を取り出し、分析まで凍結した。
【０２０５】
常在腹膜細胞およびＴＧ誘導性腹膜細胞におけるＭＨＣ−ＩＩの発現に対するＤＺ２００２の影響
腹腔マクロファージによるＭＨＣ−ＩＩ発現を、培地単独かまたは１００Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−γとともに４８時間インキュベーションした後に評価した。０．１および１μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２の存在下でＩＦＮ−γとともにインキュベートした細胞は、常在腹膜細胞のＭＨＣ−ＩＩ発現のレベルを高め、そして１０μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２は、ＭＨＣ−ＩＩ発現のレベルを低下させる。（データは示さず）。ＴＧ誘導性の腹膜細胞におけるように、１および１０μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２は、培地単独でインキュベートする場合、Ｍａｃ−１＋パーセントを低下させる。そして、ＩＦＮ−γとともにインキュベートした細胞のＭＨＣ−ＩＩ発現のレベルは、０．１〜１０μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２の存在下で用量依存的に低下した。（データは示さず）。
【０２０６】
ＴＧ誘導性の腹膜細胞からのＩＬ−１０、ＩＬ−１２Ｐ４０およびＴＮＦ−α産生に対するＤＺ２００２の影響
腹腔マクロファージによって産生されたサイトカインを、２５Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−γおよび１μｇ／ｍｌのＬＰＳとともに２４時間インキュベーションした後に評価した。常在腹膜細胞は、ＩＦＮ−γおよびＬＰＳとともにインキュベートすると、一部のＩＬ−１０を除く低レベルのサイトカインを産生する（データは示さず）。ＴＧ誘導性の腹腔マクロファージについては、ＤＺ２００２は、０．１〜１０μｍｏｌ／Ｌの用量でＩＬ−１２Ｐ４０およびＴＮＦ−αの放出を阻害したが、ＩＬ−１０産生に対して影響を及ぼさない（図５）。
【０２０７】
ＤＺ２００２は、ＴＨＰ−１細胞におけるＭＨＣ−ＩＩ、ＣＤ８０およびＣＤ８６の発現を阻害する
ＴＨＰ−１細胞によるＭＨＣ−ＩＩ、ＣＤ８０およびＣＤ８６発現は、培地単独かまたは１００Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−γとともに４８時間インキュベーションした後に評価した。１０μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２の存在下でＩＦＮ−γとともにインキュベートした細胞は、ＴＨＰ−１細胞のＭＨＣ−ＩＩ発現のレベルを穏やかに低下させ、そして０．１〜１０μｍｏｌ／ＬのＤＺ２００２は、用量依存的な方法でＣＤ８０およびＣＤ８６発現のレベルを低下させる。（図６Ａ−Ｃ）。
【０２０８】
ＴＨＰ−１細胞からのＩＬ−１０、ＩＬ−１２Ｐ４０およびＴＮＦ−α産生に対するＤＺ２００２の影響
ＴＨＰ−１細胞によって産生されたサイトカインを、５００Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−γおよび１μｇ／ｍｌのＬＰＳとともに２４時間インキュベーションした後に評価した。図７に示すように、ＤＺ２００２は、０．１〜１０μｍｏｌ／Ｌの用量で、ＩＬ−１２Ｐ４０およびＴＮＦ−αの放出を阻害した。
【０２０９】
実施例３
ＤＺ２００２は、遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を軽減した
図８に示すように、ＤＺ２００２は、遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を用量依存的な様式で有意に軽減した。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、０日目および１日目にＤＮＦＢ（ジフルオロニトロベンゼン）に初回感作させ、次いで９日目にＤＮＦＢで再度攻撃した。ＤＺ２００２を、９日目の攻撃の１時間前または２４時間後に、ｉ．ｐ．（腹腔内）投与した。耳介腫脹を、攻撃の４０時間後に特定の８ｍｍパンチによって決定した。データを平均±ＳＤとして表す。
【０２１０】
実施例４
ＤＺ２００２は、ＭＢＰで刺激した脾細胞からのＩＬ−１０産生を維持または増大させた
図９に示すように、ＤＺ２００２は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で刺激した脾細胞からのＩＬ−１０産生を維持または増大させた。ＳＪＬ／Ｊマウスを０日目にＭＢＰで免疫し、次いで２日目に百日咳毒素を投与した。ＤＺ２００２をマウス腹腔内に１４日目から開始して毎日投与した。脾細胞を２１日目に採取し、そしてＭＢＰとともに培養した。培養上清をＩＬ−１０についてＥＬＩＳＡで分析した。データを平均±ＳＤとして表す。
【０２１１】
実施例５
ＤＺ２００２は、ＭＢＰで刺激した脾細胞からのＩＬ−２産生を阻害した
図１０に示すように、ＤＺ２００２は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で刺激した脾細胞からのＩＬ−２産生を阻害した。ＳＪＬ／Ｊマウスを０日目にＭＢＰで免疫し、次いで２日目に百日咳毒素を投与した。ＤＺ２００２をマウス腹腔内に１４日目から開始して毎日投与した。脾細胞を２１日目に採取し、そしてＭＢＰとともに培養した。培養上清をＩＬ−２についてＥＬＩＳＡで分析した。データを平均±ＳＤとして表す。
【０２１２】
実施例６
ＤＺ２００２は、ＭＢＰで刺激した脾細胞からのＩＦＮ−γ産生を阻害した
図１１に示すように、ＤＺ２００２は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で刺激した脾細胞からのＩＦＮ−γ産生を阻害した。ＳＪＬ／Ｊマウスを０日目にＭＢＰで免疫し、次いで２日目に百日咳毒素を投与した。ＤＺ２００２をマウス腹腔内に１４日目から開始して毎日投与した。脾細胞を２１日目に採取し、そしてＭＢＰとともに培養した。培養上清をＩＦＮ−γについてＥＬＩＳＡで分析した。データを平均±ＳＤとして表す。
【０２１３】
上記の実施例は、単に例示の目的で挙げられるものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。上記の実施例に対する多様な変形が可能である。上記の実施例に対する改変および変形が当業者に明らかであるので、本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０２１４】
【図１】図１は、ヒツジ赤血球の定量的溶血（ＱＨＳ）アッセイに対するＤＺ２００２の影響を示す。データは、平均値±ＳＤとして表した。＊＊：コントロールと比較してＰ＜０．０１。
【図２】図２は、ＤＺ２００２が、混合リンパ球反応においてＴ細胞増殖を抑制することを示す。データは、平均値±ＳＤとして表した。＊＊＊：コントロールと比較してＰ＜０．００１。
【図３】図３は、ＤＺ２００２が、脾臓細胞において細胞傷害性を有さないことを示す。
【図４】図４は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＤＴＨ耳介腫脹に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図５】図５は、ＴＧ誘導性腹膜細胞からのＴＮＦ−α産生に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図６Ａ】図６Ａは、ＴＨＰ−１細胞におけるＭＨＣ−ＩＩの発現に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＴＨＰ−１細胞におけるＣＤ８０の発現に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ＴＨＰ−１細胞におけるＣＤ８６の発現に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、ＴＨＰ−１細胞からのＩＬ−１２Ｐ４０およびＩＬ−１２Ｐ７０産生に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図８】図８は、遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図９】図９は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で刺激した脾細胞からのＩＬ−１０産生に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図１０】図１０は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で刺激した脾細胞からのＩＬ−２産生に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図１１】図１１は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で刺激した脾細胞からのＩＦＮ−γ産生に対するＤＺ２００２の影響を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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