(57)【要約】  本発明のシステムは、溶液用の第一流路を規定する第一吸着性物質、第一流路とは区別されるサンプル用の第二流路を規定する第二吸着性物質、及び固定された抗原又は抗体又は他のリガンド結合物質、例えばアプタマー、核酸などを有する試験部位であって、１以上のリガンドを同定するための第一吸着性物質と第二吸着性物質の接合部に位置する、試験部位を含む。第一及び第二吸着性ストリップは試験部位で互いに接触する。試験セルは、妊娠、ＨＩＶ(異なるＨＩＶ抗原又はペプチド)、結核、プリオン、尿検査、薬剤検査、心臓病マーカー、癌マーカー、シャーガス病、クラミジア、航空内細菌(ＳＭ／ＬＣ)、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、アデノウイルス、ロタウイルス、Ａ群連鎖球菌、他の細菌又はウイルスなどを試験するために、及びさらにＣＰＶ、ＦＩＶ、ＦｅＬＶ、犬糸状虫などの獣医学適用に使用されうるが、これらの適用に限定されない。
2008533472.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体サンプル中のリガンドの存在を判定する試験装置であって、以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を有し、そして第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ；
ｂ)上記第一吸着性ストリップとは区別される第二吸着性ストリップであって、上記液体サンプルを受容する第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別される第二移動経路を規定する上記第二吸着性ストリップ；及び
ｃ)上記第一吸着性ストリップ及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は内に位置する試験部位であって、当該試験部位が固定されたリガンド結合メカニズムを有し、そして当該第一及び第二吸着性ストリップが互いに当該試験部位で接触する上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項２】
以下の：
ｄ)前記第一位置に隣接する第一開口部、前記第二位置に隣接する第二開口部、及び前記試験部位に隣接する窓であって、当該窓を通して上記試験部位を見ることができる窓を規定するハウジング
をさらに含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項３】
前記第一吸着性ストリップが、コンジュゲートを支持する、請求項１に記載の試験装置。
【請求項４】
前記リガンド-結合メカニズムが、前記リガンドに対する抗原又は抗体であり、そして前記コンジュゲートが、当該リガンドに対する抗原又は抗体、及び当該抗原又は抗体に結合されたマーカーを含む、請求項３に記載の試験装置。
【請求項５】
前記マーカーが、可視スペクトルにおいて見ることができる着色マーカーである、請求項４に記載の試験装置。
【請求項６】
前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１が対照部位を含み、そして当該ハウジングが当該対照部位を見るための窓を規定する、請求項２に記載の試験装置。
【請求項７】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップが「Ｔ」型に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項８】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップが「＋」型に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項９】
前記第一吸着性ストリップが第一孔サイズを有し、そして前記第二吸着性ストリップが第二孔サイズを有する、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１０】
前記第二孔サイズが前記第一孔サイズより大きい、請求項９に記載の試験装置。
【請求項１１】
前記第一孔サイズが３〜２０μｍであり、そして前記第二孔サイズが２０〜４０μｍである、請求項１０に記載の試験装置。
【請求項１２】
前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１が対照部位を含み、そして前記窓が当該対照部位を見ることを可能にする大きさにされるか、又は当該対照部位を見ることを可能にするように第二窓が当該ハウジングに提供される、請求項２に記載の試験装置。
【請求項１３】
前記溶液が緩衝液を含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１４】
前記溶液が、緩衝液、及び前記リガンドに対する抗原又は抗体と当該抗原又は抗体に結合されたマーカーを有するコンジュゲートのサブシステムを含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１５】
固定されたリガンド結合メカニズムを有する前記試験部位が、ＨＩＶ抗原又は抗体を有する、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１６】
固定されたリガンド結合メカニズムを有する前記試験部位が、妊娠、ＨＩＶ、結核(ＴＢ)、プリオン、尿検査／薬剤、クラミジア、心臓病マーカー、癌マーカー、シャーガス病、口腔内細菌(ＳＭ／ＬＣ)、Ａ型連鎖球菌、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、アデノウイルス／ロタウイルス、ＣＰＶ、ＦＩＶ、ＦｅＬＶ、及び犬糸状虫のうちの少なくとも１の試験用の抗原、抗体、アプタマー、核酸、又は酵素のうちの一つを有する、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１７】
前記第一吸着性ストリップが第一膜及び第一裏打ちを含み、そして前記第二吸着性ストリップが第二膜及び第二裏打ちを含み、そして当該第一膜が当該第二膜と接触するように、当該第一吸着性ストリップ及び当該第二吸着性ストリップが配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１８】
前記第一吸着性ストリップの上又は下に横たわっている第一粘着性裏打ちカードをさらに含む、請求項１７に記載の試験装置。
【請求項１９】
前記第二吸着性ストリップの上又は下に横たわっている第二粘着性裏打ちカードをさらに含む、請求項１８に記載の試験装置。
【請求項２０】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップは、前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップの両方をまとめる１の膜を含む、請求項１に記載の試験ストリップ。
【請求項２１】
前記試験装置が、前記液体サンプル中に複数の異なるリガンドの存在を判定するためのものであり、そして
前記試験部位が、上記複数の異なるリガンドのそれぞれに別々に結合するための複数の離して固定されたリガンド結合メカニズムを有する、
請求項１に記載の試験装置。
【請求項２２】
前記複数の離して固定されたリガンド結合メカニズムが、結核抗原及び少なくとも１のＨＩＶ抗原を含む、請求項２１に記載の試験装置。
【請求項２３】
前記複数の離して固定されたリガンド結合メカニズムが、ｐ２４抗体並びにＨＩＶ１及びＨＩＶ２抗原の少なくとも１を含む、請求項２１に記載の試験装置。
【請求項２４】
前記第一吸着性ストリップが、前記複数の異なるリガンドに対する抗原及び／又は抗体、並びに当該抗原及び／又は抗体に結合されたマーカーを含む複数の異なるコンジュゲートを支持する、請求項２１に記載の試験装置。
【請求項２５】
前記固定されたリガンド結合メカニズムが、それぞれ異なるＨＩＶ抗原又は抗体を含む少なくとも４個の線に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項２６】
前記異なるＨＩＶ抗原又は抗体が、少なくとも４個のｐ２４、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、及びｇｐ３６を含む、請求項２５に記載の試験装置。
【請求項２７】
前記試験部位の少なくとも一部が、目に見える着色色素で染色される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項２８】
液体サンプル中のリガンドの存在を判定する試験装置であって、以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を有し、そして第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ
ｂ)上記第一吸着性ストリップとは区別される第二吸着性ストリップであって、上記液体サンプルを受容するための第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別される第二移動経路を規定し、ここで当該第二移動経路が一時的な結合剤に結合された抗体のコンジュゲートを含み、上記リガンドが上記サンプル中に存在する場合に当該抗体が当該リガンドに結合するように選択される、上記第二吸着性ストリップ
ｃ)前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が固定された結合剤を有し、上記一時的な結合剤及び当該固定された結合剤は、互いに選択的によく結合する能力について選択されており、当該第一及び第二吸着性ストリップが互いに当該試験部位で接触する、上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項２９】
前記リガンドが前記サンプル内に存在する場合に、前記第一吸着性ストリップが、当該リガンドに結合するように選択された第二抗体に結合されたマーカーのコンジュゲートを支持する、請求項２８に記載の試験装置。
【請求項３０】
前記リガンドがｐ２４抗原であり、一時的な結合剤に結合された抗体の前記コンジュゲートがビオチンに結合されたｐ２４モノクローナル抗体であり、そして前記固定された結合剤がストレプトアビジンである、請求項２９に記載の試験装置。
【請求項３１】
前記リガンドがｐ２４抗原であり、一時的な結合剤に結合された抗体の前記コンジュゲートがビオチンに結合されたｐ２４モノクローナル抗体であり、前記固定された結合剤がストレプトアビジンであり、そして第二抗体に結合されたマーカーからなる前記コンジュゲートが、モノクローナル抗体とコンジュゲートした着色ラテックスである、請求項２９に記載の試験装置。
【請求項３２】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップが、非平行配置に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項３３】
液体サンプル中のリガンドの存在を判定する試験装置が、以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を有し、そして第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ
ｂ)第一吸着性ストリップとは区別される第二吸着性ストリップであって、液体サンプルを受容するための第二位置を有し、そして前記第一移動経路とは区別される第二移動経路を規定する、前記第二吸着性ストリップ；及び
ｃ)前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は中に配置される固定されたリガンド結合メカニズムを有し、当該試験部位で当該第一吸着性ストリップと第二吸着性ストリップが互いに直接接触する、上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項３４】
液体サンプル中のリガンドの存在を判定する試験装置であって、以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を規定し、そして第一移動経路を規定する物質の第一部分；
ｂ)液体サンプルを受容する第二位置を規定し、そして上記第一移動経路に対して非平行である第二移動経路を規定する物質の第二部分；及び
ｃ)物質の上記第一及び第二部分の少なくとも１の上又は中に位置する試験部分であって、当該試験部分が、物質の前記第一及び第二部分のうちの少なくとも１の上又は中に沈積される固定されたリガンド-結合メカニズムを有し、そして当該物質の第一及び第二部分が当該試験部位において互いに接触する、上記試験部分
を含む、前記試験装置。
【請求項３５】
前記第一及び第二移動経路が前記試験部位で交差する、請求項３４に記載の試験装置。
【請求項３６】
リガンドの存在についてサンプルを試験する方法であって、以下の：
ａ)  以下の：
溶液を受容する第一位置を有し、そして第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ、
液体サンプルを受容するための第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別される第二移動経路を規定する第二吸着性物質、及び
上記第一吸着性ストリップと前記第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が固定されたリガンド結合メカニズムを有し、そして上記第一及び第二吸着性ストリップが当該試験部位において互いに接触する、上記試験部位
を有する試験装置を取得し、
ｂ)上記サンプルを上記第二位置にアプライし；
ｃ)上記サンプルをアプライした後に、上記溶液を第一位置にアプライし；そして
ｄ)上記試験部位を検査して上記サンプル中における上記リガンドの有無の表示を判定する
を含む、前記方法。
【請求項３７】
前記試験装置が、前記第一位置に隣接する第一開口部、前記第二位置に隣接する第二開口部、及び前記試験部位に隣接する窓であって、当該窓を通して前記試験部位を見ることができる窓を規定するハウジングを有し、
前記サンプルをアプライすることが、上記第二開口部を通して上記第二位置に当該サンプルを加えることを含み、
前記溶液をアプライすることが、上記第一開口部を通して上記第一位置に溶液を加えることを含み、
前記検査が、上記窓を通した検査を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
リガンドの存在についてサンプルを試験する方法であって、以下の：
ａ)試験部位を有する試験装置に固定されたリガンド結合メカニズム及び目に見える溶解性指標を提供し；
ｂ)上記サンプルを上記試験装置にアプライし；
ｃ)容器試験部位を観察して、目に見える指標の消失を観察し；
ｄ)上記目に見える指標の消失後、溶液を上記試験装置にアプライし；そして
ｅ)当該溶液をアプライした後に、上記試験部位を検査して上記サンプル中の上記リガンドの有無の表示を判定すること
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広く免疫アッセイ装置及び使用方法に関する。より具体的に、本発明は、体液中のリガンドの検出用クロマトグラフィー迅速試験ストリップに関する。
【背景技術】
【０００２】
多くのタイプのリガンド-受容体アッセイは、例えば血液、尿、又は唾液などの体液中で、しばしば一般的にリガンドと呼ばれる様々な物質の存在を検出するために使用された。これらのアッセイは、抗原抗体反応に関し、放射性、酵素性、蛍光性、又は可視的観察可能なポリスチレン又は金属ゾルタグを含む合成コンジュゲートに関し、そして特別に設計された反応チャンバーに関する。これら全てのアッセイにおいて、選択されたリガンド又は抗原に特異的である受容体、例えば抗体、並びに、リガンド-受容体反応生成物の存在及びいくつかの場合には量を検出するための手段が存在する。定量的測定のために幾つかの試験が設計されるが、多くの場合、陽性/陰性の定性的表示のみが必要とされている。このような定性的アッセイの例として、血液型、多くのタイプの尿検査、妊娠検査、及びＡＩＤＳ検査が挙げられる。これらの検査では、凝集又は色の変化の存在などの観察指標が好ましい。
【０００３】
定性的アッセイであっても、しばしば試験液体中に目的のリガンドが低濃度でしか存在しないことがあるので、かなり感度が高くなくてはならない。特に、凝集並びにディップスティック及び変色検査などの他の迅速検出法では、偽陽性は面倒なことになることがある。これらの問題のため、いわゆる「サンドイッチ」アッセイ並びに金属ソル又は他のタイプの着色粒子を使用する他の感度の高い検出メカニズムが開発されてきた。
【０００４】
「サンドイッチ」アッセイでは、抗原などの標的検体は、標識抗体と、固体支持体に固定された抗体との間に挟まれる。結合された抗原-標識抗体の複合体の存在及び/又は量を観察することにより読まれる。「競合」免疫アッセイでは、固体表面上に結合された抗体は、未知量の抗原検体を含むサンプルと接触され、そして同じタイプの標識抗原と接触される。固体表面上に結合された標識抗原の量を測定して、サンプル中の抗原検体の量を間接的な測定を提供する。
【０００５】
これらの及び他のアッセイが、抗体及び抗原の両者を検出できるので、これらは一般的に免疫化学リガンド-受容体アッセイと、又は単に免疫アッセイと呼ばれる。
【０００６】
固相免疫アッセイ装置は、サンドイッチ又は競合タイプのいずれであっても、血液、尿、又は唾液などの生物学的液体サンプル中の検体の高感度検出を提供する。固相免疫アッセイ装置は、リガンド-受容体対の１のメンバー、通常、抗体、抗原、又はハプテンが結合される固体支持体、を包含する。固体支持体の共通する初期の形態は、ラジオイムノアッセイ及び酵素免疫アッセイの分野によく知られていたポリスチレンのプレート、チューブ、又はビーズであった。この１０年間で、ナイロン、ニトロセルロース、酢酸セルロース、グラスファイバー、及び他の多孔性ポリマーなどの多くの多孔性物質が固体支持体として使用されてきた。
【０００７】
抗原、ハプテン、又は抗体などの免疫化学成分の固相担体として多孔性物質を使用する多くの自己含有性免疫アッセイキットが記載されてきた。これらのキットは通常、ディップスティック、フロースルー、又は移動性の構造である。
【０００８】
ディップスティックアッセイのより一般的な形態では、家庭用妊娠及び排卵検出キットにより代表されるように、抗体などの免疫化学成分は固相に結合される。アッセイ装置は、インキュベートのために未知抗原検体を含むと疑われているサンプルに浸漬される。次に酵素標識抗体を、同時又はインキュベート時間の後に加えた。次に装置を洗浄し、そして酵素に対する基質を含む第二溶液に挿入する。酵素標識は、存在する場合、基質と相互作用して、固相上に沈澱として沈積するか、又は基質溶液における目に見える色の変化をもたらす着色生成物の形成を引き起こす。
【０００９】
フロースルータイプの免疫アッセイ装置は、ディップスティックアッセイに付随するインキュベート及び厄介な洗浄ステップの必要性を取り除くように設計された。Valkirsら、米国特許第4,632,901号は、多孔性膜又はフィルターに結合された(標的抗原検体に特異的である)抗体を含む装置であって、当該膜又はフィルターに液体サンプルが加えられる装置を開示する。液体が膜を通過すると、標的検体が抗体に結合する。サンプルの添加後に標識抗体を添加する。標識抗体の視覚検出は、サンプル中の標的抗原検体の存在を指し示す。
【００１０】
Koromら、EP-A 0 299 359は、調節デリバリーシステムとして機能する膜に標識抗体が取り込まれたフロースルー装置のバリエーションを開示する。
【００１１】
ディップスティック及びフロースルータイプの免疫アッセイ装置が複数回の添加及び洗浄ステップを必要とすることにより、最小限の訓練しかうけていない人及び家庭でのユーザーが誤ったアッセイ結果を得る可能性を高める。
【００１２】
移動型アッセイでは、膜に当該アッセイを行うために必要とされる試薬が染み込まれている。標識された検体が結合し、そしてアッセイの印が読まれる検体検出領域が提供される。例えば、Tomら、米国特許第4,366,241号及びZukら、米国特許第4,596,275号を参照のこと。しかしながら、検出領域への標識検体の通過を遮断する不所望の固体要素がサンプル中に存在するか又は形成されることにより、移動型アッセイの感度は頻繁に低下する。移動アッセイ装置が多すぎる液体サンプルで溢れさせた場合も、アッセイ感度が低下する。
【００１３】
移動アッセイ装置は、通常、着色されたラベルに結合された試薬(コンジュゲート)を、装置内に含み、それによりさらに物質を加えることなくアッセイ結果の視覚検出を可能にする。例えば、Bernsteinの米国特許第4,770,853号を参照のこと。そのようなラベルの中で、金ソル粒子、例えばLeuveringによる米国特許第4,313,734号の記載された金ソル粒子、Gribnauらによる米国特許第4,373,932号において記載される色素ソル粒子、Mayら、WO88/08534により記載される着色ラテックス、及びCambellら、米国特許第4,703,017号によるリポソーム内にカプセル化された色素が挙げられる。これらの着色ラベルは、適切な固定法の点で一般的に限られている。さらに、これらは、比較的多量のリガンド分子を必要とし、そして高価な試薬を含み、それにより価格が高くなる。こうして、信頼性が高いが、高価でない迅速検出装置についての必要性が残る。正確な結果を提供する一方少量のサンプルを使用することができる高感度のアッセイについての必要性が未だ残っている。
【発明の開示】
【００１４】
その結果、迅速検出免疫アッセイ装置を提供することは、本発明の目的である。
【００１５】
簡単に使用でき、そして正確な結果を提供する免疫アッセイ装置を提供することは、本発明の別の目的である。
【００１６】
コンジュゲートを運搬する緩衝溶液と同一の経路に沿って検体を移動することを必要としない免疫アッセイ装置を提供することは、本発明のさらなる目的である。
【００１７】
簡単な構造の迅速検出免疫アッセイ装置を提供することも本発明の目的である。
【００１８】
乾燥又は液体コンジュゲートシステムのいずれかを使用できる免疫アッセイ装置を提供することは本発明のさらなる目的である。
【００１９】
本発明の別の目的は、少ないサンプル体積を用いる一方、正確な結果を提供する高感度免疫アッセイ装置を提供することは本発明の別の目的である。
【００２０】
異なるタイプの体液について有用である高感度免疫アッセイ装置を提供することは本発明のさらなる目的である。
【００２１】
以下に詳細に記載される本目的に沿って、乾燥及び液体コンジュゲート免疫アッセイ装置システムの両方が提供される。本発明のシステムは、以下の：
(乾燥コンジュゲートシステムの場合)緩衝溶液又は(液体コンジュゲートシステムの場合)コンジュゲート溶液を受容するための第一位置を有する第一吸着性物質であって、ここで第一吸着性物質が第一水平流路を規定する第一吸着性物質、
サンプルを受容する第二位置を有する第二吸着性物質であって、ここで第二吸着性物質が第一流路とは区別される第二水平流路を規定する第二吸着性物質、並びに
第一及び第二吸着性物質の結合部で、試験領域に配置される固定された抗原又は抗体又は他のリガンド結合性分子、例えばアプタマー、核酸などを有する試験線又は試験部位を有する試験セル
を含む。本明細書の目的では、「流路」又は「移動経路」と併せて使用される場合、「区別される」という用語は、「試験領域を除いて流路で繋がっていない」を意味すると理解すべきである。
【００２２】
本発明の試験セルがハウジング内に提供される場合、当該ハウジングは、第一位置に隣接する第一開口部及び第二位置に隣接する第二開口部を与えられる。試験線上のハウジングに、観察窓が提供される。
【００２３】
本発明の好ましい実施態様では、第一吸着性物質及び第二吸着性物質は、互いに重なる分離された小片であり、そして試験線は、接合部で吸着性物質の１又は両方にプリントされる。或いは、好ましいことではないが、第一及び第二吸着性物質は、互いに一体化することができる。本発明のシステムは、好ましくは観察窓から見ることができる対照線又は部位を含む。
【００２４】
本発明の実施態様の１セットに従って、本発明の吸着性物質(及び当該物質が提供されるハウジング)は、Ｔ型に設計され、ここで緩衝液又は緩衝液コンジュゲート溶液を受容するための第一位置は前記Ｔの上の棒の１の末端付近に配置され、サンプルを受容する第二位置は、Ｔの幹の末端付近に配置され、そして吸着性物質は交差部で互いに重なっている。本発明の別のセットの実施態様では、本発明の吸着性物質(及び物質が提供されるハウジング)は、＋型にされる。ここで緩衝液又は緩衝液コンジュゲート溶液を受容する第一位置が１つ目の棒の末端付近に配置され、サンプルを受容する第二位置が第二の棒の１の末端の末端付近に配置され、そして吸着性物質が交差部で互いに重なる。もちろん、吸着性物質は、他の形に設計されても良く、そしてハウジングは、吸着性物質が配置される様式に関わらず、他の形、例えば長方形、正方形、不定形などの他の形を取ってもよい。
【００２５】
本発明の１の実施態様では、第一及び第二吸着性物質の物質、厚さ、及び長さは、試験部位に到達する液体サンプル及び液体緩衝液が試験部位に到達するタイミングを調節するように選択される。
【００２６】
本発明の乾燥コンジュゲート・システムでは、乾燥コンジュゲートは、第一開口部と試験部位との間で提供される。コンジュゲートは、緩衝液が第一開口部に加えられた場合に、吸着性物質が緩衝液をコンジュゲートに導き、次に当該コンジュゲートが緩衝液によって試験部位に運搬されるように、吸着性物質上又は中に保たれる。本発明の液体コンジュゲート・システムでは、緩衝液−コンジュゲート液体サブシステム（buffer-conjugate liquid subsystem)が準備され、そして第一開口部に適用される。次に吸着性物質は、緩衝液−コンジュゲートサブシステムを試験部位に導く。
【００２７】
本発明の１の方法に従って、
(乾燥コンジュゲートシステムの場合)緩衝溶液又は(液体コンジュゲートシステムの場合)コンジュゲート溶液を受容する第一位置を有する第一吸着性物質であって、ここで当該第一吸着性物質が第一水平流路を規定する第一吸着性物質、
サンプルを受容する第二位置を有する第二吸着性物質であって、ここで当該第二吸着性物質が、上記第一流路とは区別される第二水平流路を規定する第二吸着性物質、並びに
第一吸着性物質と第二吸着性物質との接合部における試験領域に配置された固定された抗原又は抗体、或いは他のリガンド結合性分子、例えばアプタマー、核酸などを有する試験線又は試験部位、
を有する試験セルを含むシステムが提供される。所望される場合、緩衝液又はコンジュゲート溶液を受容する第一開口部、サンプルを受容する第二開口部、そして試験線上に観察窓を有するハウジングが提供される。目的のサンプルは、第二開口部又は位置に提供される。所望される時間の後に、緩衝溶液などの液体を第一開口部又は位置に加える。吸着性物質がコンジュゲートを支持する場合(つまり、乾燥コンジュゲートシステムにおいて)、液体は好ましくは単に緩衝溶液である。吸着性物質がコンジュゲートを支持しない場合(つまり、液体コンジュゲートシステムにおいて)、液体は好ましくは緩衝液コンジュゲート液体サブシステムである。いずれの場合でも、コンジュゲートが試験部位(及び提供される場合対照部位)に移動することを許容する十分な時間の後に、試験部位(及び提供される場合対照部位)は、サンプルが陽性であるか否かを決定するために検査される。
【００２８】
本発明のシステムが、血液、尿、唾液、及び糞便などの様々なタイプのサンプルと併せて使用することができ、そして任意のリガンドの存在を試験するために使用することができるということが認められよう。血液、唾液、又は糞便が提供される場合、第二穴を通して加えられる前に、血液、唾液、又は糞便は緩衝液で希釈されてもよいし、又は混合されてもよい。或いは、ある場合では、穴を通してサンプルが加えられ、そして次に希釈剤が同じ穴を通して加えられてもよい。
【００２９】
本発明の試験セルは、細菌などの比較的大きな検体に対する従来のクロマトグラフィー免疫アッセイにおいて重大な問題であるサンプル中のコンジュゲートと検体との間の凝集／癒着問題を克服するので、従来技術より優れている。特に、従来のクロマトグラフィー免疫アッセイでは、細菌とコンジュゲート抗体との間の複合体は、試験線を移動させるのが困難であり、そして試験ストリップの底又はパッドに留まる傾向を有する。本発明においてコンジュゲートが単独で移動する一方、検体が試験部位への独自の経路を介して適用されるので、サンプルが試験部位に到達するまで検体とコンジュゲートとの間に複合体の結合が存在しない。結果として、本発明のシステムはかなり感度が高くそして特異性が高い。
【００３０】
本発明の更なる目的及び利点は、提供された図と一緒に詳細な説明を参照すれば当業者に明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
次に図１、１Ａ、及び１Ｂを検討すると、免疫アッセイ装置試験セル１０が提供され、そして以下の：第一及び第二穴２４、２６、及び窓２８を規定する上壁２１を有するＴ型ハウジング２０；並びにハウジング内で垂直流路及び水平流路を規定する第一及び第二吸着性又は吸水性物質３０、３２を含む。第一吸着性物質３０は少なくとも２、そして好ましくは３又は４の領域を含み、そして複数の物質から作成されてもよい。第一領域３１(フィルター領域と呼ばれることもある)は、第一穴２４に位置し、そしてＴの接合部に位置する第二領域３３(試験領域と呼ばれるこもともある)に伸張している。第一領域３１は、好ましくはフィルター３１ａ、パッド３１ｂを含む。ここで、当該パッド３１ｂには、着色マーカーを伴う所望される抗原又は抗体を有するコンジュゲート３９が沈積されそして固定されており、そして薄膜又は吸着性若しくは吸水性物質３０の第一部は、プラスチック製の裏打ちを有するニトロセルロース(図示無し)から作成される。第一領域３１は、緩衝溶液を受容するように適用されて、緩衝溶液がコンジュゲートに接触し、それによりコンジュゲートを移動させることを引き起こし、そしてコンジュゲートを運搬する緩衝溶液を第二領域３３に導く(wick)。第二(試験)領域３３は、薄膜３０の第二位置を含み、当該膜上に(試験セルが抗体又は抗原の存在について試験するように設計されるかに依存して)固定抗原又は抗体を有する試験線５０が、当該技術分野に周知な様に好ましくはプリントされている。試験線５０は、ハウジングに提供される透明なプラスチック製の窓２８を通して見ることができる。薄膜３０の第三部分を含むオプションの第三領域３５(対照領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に周知な様にコンジュゲート抗原(又は、幾つかの場合、コンジュゲート抗体に結合する抗体、又はさらにコンジュゲート抗体に結合する抗原)に対する抗体を典型的に含む対照線６０でプリントされてもよい。第三領域３５が提供される場合、窓２８は、対照線６０上まで伸張される。所望される場合、オプションの第四領域３７(リザーバー領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に周知な様に導入リザーバー(wicking reservoir)として提供されても良い。第四領域３７は、比較的厚い吸着ペーパー３１ｄを含む。好ましくは、薄く好ましくは透明なプラスチックフィルム又はカード３８Ａであって、吸着性物質を適所に維持する粘着性を有するものが、全ての領域の上に横たわっている。当該カード３８は、穴２４への液体のアクセスを遮らないように、穴２４において開口部を有するように切られてもよい。
【００３２】
第二吸着性物質３２は、複数の物質から形成されてもよく、そして好ましくは２個領域６１、６３を含む。第一領域６１（フィルター領域と呼ばれることもある）は、フィルター又はパッド６２並びに薄膜又は吸着性若しくは吸水性の物質３２であって、裏打ち（図示せず）を伴うニトロセルロースから作成されるものの第一部分を含む。第一領域６１は、第二穴２６に位置し、そして第二領域６３に伸張する。第二領域６３は、第一吸着性物質３０の第二領域３３と接触する薄膜３２の第二部分を含む。図１Ａ及び図１Ｂに示される様に、第一吸着性物質３０は、第二吸着性物質３２の上に横たわっており、その結果膜は（膜と接触する裏打ちに対して、又は互いに）互いに接触しており、そして試験線５０は効果的に膜の間に位置する。こうして、試験線５０は、第一吸着性物質３０の第二領域３３に加えて、又はその代わりに第二吸着性物質３２の第二領域６３上にプリントすることができる。所望される場合、薄いプラスチックフィルム又はカード３８ｂであって、第二吸着性物質を適所に維持する粘着性を有するものが使用されてもよい。
【００３３】
裏打ちを有する標準型のニトロセルロース・ストリップが第一及び第二膜として使用される場合、異なる孔サイズを有する膜が望ましい。例えば、そして以下に詳細に記載するように、膜３１(コンジュゲートの移動用)は、３μの孔サイズを有し、そして膜３２(サンプル移動用)は、１５μの孔サイズを有する。膜３２に適用されたサンプルは、移動し、そしてサンプル膜３２に留まる傾向を有し、そしてコンジュゲート膜３１に移動する傾向を有さない。
【００３４】
図１の免疫アッセイは、好ましくは以下のように使用される。第一に、抗体(又は抗原)を含む可能性のあるサンプル(図示無し)は、第二開口部つまり穴２６に提供され、そして第二吸着性物質３２を通して、第一吸着性物質３０の第二領域３３と接触する第二領域６３に移動することを可能にする。場合により、サンプルを穴２６に提供した後に、好ましくは緩衝液などの液体の計測量を穴２６に加えて、サンプルの移動を助ける。それとは関係なく、第一吸着性物質の第二領域３３の上にプリントされるか又はその中に組み込まれた試験線５０にサンプルは到達する。サンプル中の抗体(又は抗原)が(存在するならば)試験線５０に固定された抗原(又は抗体)に結合する機会を与える所望の時間の後に、計量された好ましい液体、例えば緩衝液(図示無し)を第一開口部２４に加える。コンジュゲートが試験部位５０(及び提供される場合対照部位６０)に移動することを可能にするため、さらに十分な時間の後に、試験部位５０(及び提供される場合対照部位６０)は、サンプルが陽性であるか否かを決定するために窓２８を通して検査される。典型的に、試験部位及び対照部位６０の両方が着色線を示す場合、サンプル中に抗体(又は抗原)の存在を示す陽性試験が得られる。対照部位６０のみが着色線を示す場合、サンプル中に抗体(又は抗原)が存在しないことを示す陰性試験が得られる。
【００３５】
本発明の方法は、穴２６がサンプル(及び場合によりいくらかの緩衝液)を受容し、そして最初に使用され、そして穴２４が緩衝溶液を受容し、そして二番目に使用されるということを示すように番号付けられ及び/又は記入されたハウジングを提供することにより、円滑にされる。
【００３６】
免疫アッセイ１０が以下のように機能するということが当業者により認識されよう。試験線５０に膜の上に固定された抗原(又は抗体)が与えられるので、試験サンプルが当該抗原に対する抗体(又は上記抗体に対する抗原)を含むならば、当該抗体(又は抗原)は、試験線において上記抗原(又は抗体)に結合するであろう。その後、当該抗体に対する抗原(抗原に対する抗体)であって、着色されたマーカーに結合された抗原を含むコンジュゲート３９が、試験線へと移動させられる場合、試験サンプルが試験線５０に保持された抗体(又は抗原)を含むならば、コンジュゲートの抗原(又は抗体)は、当該抗体(又は抗原)へと結合し、そして着色されたマーカにより、着色線が試験部位５０に現れるであろう。試験サンプルが抗体(又は抗原)を含まない場合、コンジュゲートは試験部位５０に結合する抗体(抗原)を有しておらず、そして着色線が試験部位５０に現れないであろう。他方、対照線６０に抗体(又は抗原)が与えられているので、コンジュゲートの抗原(又は抗体)は、常に対照線６０の抗体(又は抗原)に結合し、それにより、コンジュゲートが対照部位６０に到達したならば対照部位６０に着色線が生じるであろう。こうして、十分な緩衝液が試験セルに提供されるならば、着色線は対照部位６０において常に生じ、それにより試験についての対照を提供する。
【００３７】
次に図２及び図２Ａについて検討すると、本発明の第二実施態様が理解される。図１、１Ａ、１Ｂ、２、及び２Ａにおいて、同じ番号が同様の要素について使用される。こうして、図２及び２Ａの第二実施態様と、図１、１Ａ、及び１Ｂの第一実施態様との間の主な違いは、試験セル１０ａの第二吸着性物質３２ａが(好ましくは、打ち抜きを介して）鍵の形をしているということであると認められよう。鍵型の配置では、領域６１ａは、第二狭小領域６３ａに収束しているような形にされる。結果として、領域６３ａは、試験線５０の位置でほぼ独占的に第一吸着物質３０の第二領域３３に接触している。当業者により、図２の免疫アッセイ試験セル１０ａが同じ様式で使用され、そして実質的に図１の試験セル１０と同じく機能するということが認められよう。
【００３８】
次に図３について検討すると、本発明の第三実施態様が理解される。図１、１Ａ、１Ｂ、及び３において、同じ番号が同様の要素について使用される。こうして、図３の第三実施態様の試験セル１０ｂと、図１、１Ａ、及び１Ｂの第一実施態様の試験セル１０との間の主な違いは、第一ニトロセルロース・ストリップ３０が第二ストリップに接触する場所(試験部位５０及び当該部位に隣接する狭い領域を除き)で、プラスチックなどの非孔性物質９９のかなり薄い層が第二ニトロセルロースストリップ３２上に横たわっている点である。結果として、ストリップ３０及び３２は互いに、試験線５０の位置でほぼ独占的に接触している。当業者により、図３の免疫アッセイ試験セル１０ｂが図１の試験セル１０と同じ様式で使用され、そして実質的に図１の試験セル１０と同じく機能するということが認められよう。
【００３９】
次に図４について検討すると、免疫アッセイ装置の第四実施態様が、試験セル１０'で示される(図１の試験セル１０に対して少し改変される)。ここで当該セル１０'は、第一及び第二穴２４'、２６'、及び窓２８'を規定する上部壁２１'を有するＴ型ハウジング２０'；及びハウジング内に垂直流路、水平流路を規定する第一及び第二吸着性又は吸水性物質３０'、３２'を含む。第一吸着性物質３０'は、少なくとも２、そして好ましくは３又は４の領域を含み、そして複数の物質から作成されてもよい。第一領域３１'(フィルター領域と呼ばれることがある)は、第一穴２４'に位置し、そして「Ｔ」の結合部に位置する第二領域３３'(試験領域と呼ばれることがある)に伸張する。第一領域３１'は、好ましくはフィルター、パッド、及び薄膜を含む。ここで、当該パッド上又は中には、着色マーカーが取り付けられた所望される抗体又は抗原を有するコンジュゲート３９'が沈積されており、そして当該薄膜は裏打ちを有する(第二及びオプションの第三及び第四領域に伸張する)ニトロセルロースから一般的に製造される。第一領域３１'は、緩衝溶液を受容するように適用されて、緩衝溶液をコンジュゲートに接触させ、それにより、コンジュゲートを可動化し、そしてコンジュゲートを運搬する緩衝溶液を第二領域３３'へと導入する。第二領域３３'に試験線５０'をプリントし、以下に記載される様に、第二吸着性物質３２'の下に配置される。オプションの第三領域３５'(対照領域と呼ばれることがある)には、当該コンジュゲート抗原に対する抗体(又は、幾つかの場合、コンジュゲート抗体に結合する抗体、又はコンジュゲート抗体に結合する抗原)を典型的に含む対照線６０'が与えられてもよい。第三領域３５'が提供される場合、窓２８'は対照線６０'上まで伸張される。所望される場合、任意の第四領域３７'(リザーバー領域と呼ばれることがある)は、当該技術分野に知られているように、導入リザーバーとして提供されてもよい。第四領域３７'は、比較的厚い吸収紙を含む。好ましくは、４個の領域全ての下には、吸着物質を適所に維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルムが存在する。
【００４０】
第二吸着性物質３２'は、複数の物質から作られてもよく、そして好ましくは２個の領域６１'、６３'を含む。第一領域６１'(フィルター領域と呼ばれる)は、第二穴２６'に位置し、そして、第一吸着性物質３０'の第二領域３３'と接触する第二領域６３'に伸張する。所望される場合、第二吸着性物質３２'の第二領域６３'は、当該技術分野に周知であるように、固定された抗原又は抗体(試験セルが、抗体又は抗原の存在について試験するように設計されるかに依存して)を有する試験線５０'をプリントされてもよい。第二領域６３'又は第二領域３３'、或いはその両方が試験線５０'に与えられるかに関わらず、試験線５０'は、ハウジング内に提供された透明なプラスチックの窓２８'を通して見られてもよい。図４の線により示される様に(図１と比較のこと)、第二吸着性物質３２'は、第一吸着性物質３０'の上に横たわっており、その結果、両方の物質の薄い膜が、少なくとも試験線の位置で互いに接触する。第二吸着性物質３２'は、裏打ちを有する標準的なニトロセルロース・ストリップが提供されるように、図１と同じ形であってもよい。或いは、物質３２'は、試験線５０'の位置でほぼ独占的に第一吸着物質と接触するように、図２と同じ形であってもよい。代わりとして、物質３２'は、図１と同じ形にされてもよく、そして薄い非多孔性物質は、当該物質３０'及び３２'が、試験線５０'の位置に互いにほぼ独占的に接触するように、図３と同様に提供することができる。
【００４１】
図４の免疫試験セル１０'が、同じ様式で使用されてもよく、そして実質的に図１の試験セル１０と同じく機能することを当業者により認められよう。
【００４２】
図５について検討すると、免疫アッセイ装置試験セル１０''が提供され、そして以下の：第一及び第二穴２４''、２６''、及び窓２８''を規定する上部壁２１''を有するＴ型ハウジング２０''；及びハウジング内に垂直流路を規定するＴ型吸着性又は吸水性物質３０''を含む。Ｔ型吸着性物質３０'は、少なくとも、そして好ましくは４又は５の領域を含み、そして複数の物質から作成されてもよい。第一領域３１''(フィルター領域と呼ばれることがある)は、第一穴２４''に位置し、そして「Ｔ」の接合部に位置する第二領域３３''(試験領域と呼ばれることがある)に伸張する。第一領域３１''は、好ましくはフィルター、パッド、及び薄膜を含む。ここで、当該パッド上又は内には、着色マーカーが取り付けられた所望される抗体又は抗原を有するコンジュゲート３９''が沈積され、そして固定されており、そして当該薄膜は、ニトロセルロース及びその裏打ちから一般的に製造される。第一領域３１''は、緩衝溶液を受容するように適用されて、緩衝溶液をコンジュゲートに接触させ、それにより、コンジュゲートを可動化し、そしてコンジュゲートを運搬する緩衝溶液を第二領域３３''へと導入する。第二(試験)領域３３'は、当業者に知られているように膜上に好ましくは固定された抗原又は抗体(試験セルが抗体又は抗原の存在について試験するように設計されているかに依存して)を有する試験線５０''でプリントされる。試験線５０''は、ハウジング内に提供される透明なプラスチックの窓２８''を通して見られる。第三領域６１(第一領域と呼ばれることもある)は、第二穴２６''に位置し、第一及び第二領域により規定されるストリップに垂直であり、そして第二領域３３''に伸びる。オプションの第四領域３５''(対照領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に知られている様に、通常コンジュゲート抗原に対する抗体(又は幾つかの場合、コンジュゲート抗体に結合する固体、又はコンジュゲート抗体に結合するさらなる抗体))を含む対照線６０''をプリントされてもよい。第四領域３５''が提供される場合、窓２８''は対照線６０''上に伸張する。所望される場合、オプションの第五領域３７''(リザーバー領域と呼ばれることがある)は、当該技術分野に知られているように、導入リザーバーとして提供されてもよい。第五領域３７''は、比較的厚い吸収紙を含む。好ましくは、領域全ての下に、吸着物質を適所に維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルムが横たわっている。
【００４３】
図５の実施態様は、試験領域で互いの上に横たわる２個の分離された物質のストリップを用いる代わりに、領域３１''、３３''、及び好ましくは３５''及び３７''を有する第一水平ストリップ並びに試験領域３３''で第一ストリップに接触する領域６１''を有する第二(一体型(integral))ストリップを規定する１つのＴ型膜が使用されると言う点でのみ図１〜４の実施態様と異なる。図５の実施態様は、水平流路が異なる孔サイズの物質で製造されることを可能にしない一方、第一領域及び第三領域が、第二(試験)領域を介することを除いて互いに流路で繋がっていないので、２個の区別される流路が維持される。
【００４４】
次に図６について検討すると、免疫アッセイ装置試験セル１１０が提供され、そして以下の：第一及び第二穴１２４、１２６、及び窓１２８を規定する上壁１２１を有する＋型ハウジング；及びハウジング内の垂直流路を規定する第一及び第二吸着性又は吸水性物質１３０、１３２を含む。第一吸着性物質１３０は、少なくとも２、そして好ましくは３又は４の領域を含み、そして複数の物質から製造されてもよい。第一領域１３１(フィルター領域と呼ばれることがある)は、第一穴１２４に位置し、そして＋の接合部に位置する第二領域１３３(試験領域と呼ばれることもある)に伸張する。第一領域１３１は、好ましくは、フィルター、着色マーカーを取り付けられた所望の抗原又は抗体を有するコンジュゲート１３９が沈積されそして固定されるパッド、及び一般的にニトロセルロースから製造される薄膜を含む。第一領域１３１は、緩衝溶液を受容するように適合されて、緩衝溶液をコンジュゲートに接触させ、それによりコンジュゲートを可動化し、そしてコンジュゲートを運搬する緩衝溶液を第二領域１３３へと導入する。第二(試験)領域１３３は、好ましくは当該技術分野に知られているように、（当該試験セルが抗体又は抗原の存在を試験する様に設計されるかに依存して）膜上に固定された抗原又は抗体を有する試験線１５０が好ましくはプリントされる。試験線１５０は、ハウジング内に提供された透明なプラスチックの窓１２８を通して観察されうる。オプションの第三領域１３５(対照領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に知られているようにコンジュゲート抗原（又は幾つかの場合、コンジュゲート抗体に結合する抗体、又はコンジュゲート抗体に結合する更なる抗原）に対する抗体を一般的に含む対照線１６０をプリントされてもよい。第三領域１３５が提供される場合、窓１２８は対照線１６０上まで伸張する。所望される場合、オプションの第四領域１３７(リザーバー領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に周知である導入リザーバーとして提供されてもよい。第四領域１３７は、比較的に厚い吸着紙を含む。好ましくは、(図１Ａに見られる様式の)上に横たわっている領域は、吸着性物質を適所に維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルムである。
【００４５】
第二吸着性物質１３２は、複数の物質から製造されてもよく、そして好ましくは少なくとも３個の領域１６１、１６３、１６５を含む。第一領域１６１(フィルター領域と呼ばれることもある)は、第二穴１２６に位置し、そして第一吸着性物質１３０の第二領域１３３と接触する第二領域１６３に伸張する。所望される場合、吸着性物質１３２は、物質１３０の第二領域１３３の代わりに又は当該領域に加えて、第二領域１６３に試験線１５０をプリントされてもよい。図６に点線により示唆されるように、第一吸着性物質１３０は、(図１の実施態様と同様に)第二吸着性物質１３２の上に横たわっている。或いは、第二吸着性物質１３２は、（図４の実施態様の同様に）第一吸着性物質１３０の上に横たわるように作成され、この場合、使用される粘着性フィルム及び他の要素は、正しく配置されるべきである。所望される場合、オプションの第三領域１６５(リザーバー領域とよばれることもある)は、導入リザーバーとして提供されうる。第四領域１３７は、比較的厚い吸着紙を含む。所望される場合、第二吸着性物質を適所に維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルムが、適所に第二吸着物質を有する薄いプラスチックフィルムが利用されてもよい。
【００４６】
図７では、本発明の第七実施態様が見られる。図１、１Ａ、１Ｂ、及び７では、同じ番号が同様の要素に使用される。こうして、図７の第七実施態様と、図１、１Ａ、及び１Ｂの第一実施態様との間の主な違いは、２個の試験線５０Ａ及び５０Ｂが第一吸着性物質３０の領域３３及び／又は第二吸着性物質３２の領域６３上にプリントされるということであると認識されよう。２個の試験線５０Ａ及び５０Ｂは、好ましくは異なる固定抗原又は抗体を含む。例えば、当該線の内の一つ(例えば線５０Ａ)は、ＨＩＶ１ペプチド及び／又はｇｐ４１／ｇｐ１２０などの組換え抗原を含むことができ、一方他の線(例えば線５０Ｂ)が、ＨＩＶ２ペプチド及び／又はｇｐ３６などの組換え抗原を含むことができる。別の実施例と同様に、これらの線の内の１つは、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、又はＨＩＶ１／２ペプチド及び／又は組換え抗原を含むことができる一方、もう一方の線は結核菌抗原を含む。以下に記載されるように、線が、１のコンジュゲート(例えばタンパク質Ａ)に結合しようとしない固定された抗体又は抗原を含む場合、着色マーカーを取り付けられた所望される抗原又は抗体を有する複数の異なるコンジュゲートを使用することが望ましいであろう。図７の免疫アッセイ試験セル１０ｃが同じ様式で用いられ、そして、サンプル中の被験第一抗体(又は抗原)の存在を示す陽性試験が、試験線５０Ａ及び対照部位６０が着色線を示すときに得られ；サンプル中の被験第二抗体(又は抗原)の存在を示す陽性試験が、試験線５０Ｂ及び対照部位６０が着色線を示す場合に得られ；そしてサンプル中の被験第一及び第二抗体(又は抗原)の両方の存在を示す陽性試験が、試験線５０Ａ及び５０Ｂ並びに対照線６０が着色線を示す場合に得られるという点を除いて、図１の試験セル１０と実質的に同じく機能しうるということが当業者により認められよう。サンプル中に抗体(又は抗原)が存在しないことを示す「陰性」試験は、対照部位６０のみが着色線を示し、(そして試験線５０Ａ及び５０Ｂのいずれもが着色線を示さない)場合に得られる。不適切な試験は、対照部位が着色線を示さない場合に得られる。
【００４７】
図８では、本発明の第八実施態様が理解される。図１、１Ａ、１Ｂ及び８では、同じ番号が同様の要素について使用される。こうして、図８の第八実施態様と、図１、１Ａ、及び１Ｂの第一実施態様との間の主要な違いは、３個の試験線５０Ａ、５０Ｂ、５０Ｃが第一吸着性物質の領域３３及び／又は第二吸着性物質３２の領域６３上にプリントされ、そして２個の異なるラテックスコンジュゲート３９Ａ、３９Ｂが使用されるということが認められよう。３個の試験線５０Ａ、５０Ｂ、及び５０Ｃが、好ましくは異なる固定抗原又は抗体を含む。例えば、線の一つ(例えば、線５０Ａ)は、ｐ２４モノクローナル抗体を含み、第二線(例えば、線５０Ｂ)は、ＨＩＶ１ペプチド及び／又はｇｐ４１／ｇｐ１２０などの組換え抗原を含むことができる一方、第三の線(例えば、５０Ｃ)は、ＨＩＶ２ペプチド及び／又はｇｐ３６などの組換え抗原を含むことができる。この場合、２個のコンジュゲート３９Ａ、３９Ｂが提供され、ここでコンジュゲート３９Ａは、存在する場合ＨＩＶ１及びＨＩＶ２抗体に結合するが、ｐ２４抗原には結合しないタンパク質Ａとコンジュゲートするラテックスである。そしてここで、コンジュゲート３９Ｂは、存在する場合サンプル中のｐ２４抗原に結合するが、ＨＩＶ１及びＨＩＶ２ペプチド及び／又は組換え抗原には結合しないｐ２４モノクローナルにコンジュゲートするラテックスである。図８に示されるように、コンジュゲート３９Ａ及び３９Ｂは移動経路の異なる位置に配置される(例えば、１のパッドの２個の部分、又は２個の接続されたパッド)。しかしながら、コンジュゲート３９Ａ及び３９Ｂは、混合物と同じ位置に適用されうるということが認められよう。図８の免疫アッセイ試験セル１０ｄが、同じ様式で使用されてもよく、そしてＨＩＶについての「陽性」試験が、１以上の線５０Ａ、５０Ｂ、５０Ｃでの、及び対照線６０での色が見えることにより示唆され、「陰性」試験が、対照線６０にのみ色が見えることにより示唆され、そして「不適切な」試験は、着色が対照線６０に存在しない場合に示唆されると言うことを除いて、図１の試験セル１０と実質的に同じく機能することが当業者により理解されよう。
【００４８】
本発明の第九実施態様は図９に見られる。図１、１Ａ、１Ｂ、及び９では、同じ番号が同様の要素に使用される。こうして、図９の第実施態様と図１、１Ａ、及び１Ｂの第一実施態様との間の主な違いは、第二吸着性物質３２'''が、フィルター又はパッド６２'''であって、その上に一時的な結合剤(interim binding agent)(マーカーを伴わない)に結合された抗体のコンジュゲート３９'''を有するものを有する第一領域６１'''(フィルター領域と呼ばれることがある)を含み、そして試験領域が固定された結合剤の試験線５０を有するという点であることは明らかであろう。一時的な結合剤及び固定された結合剤は、互いに極めて強く選択的に結合する能力について選択される。こうして、例えば、一時的な結合剤はビオチンであってもよく、そして固定された結合剤はストレプトアビジンであってもよい。サンプル移動経路におけるコンジュゲート３９'''は、その結果ビオチンに結合するｐ２４モノクローナル抗体などの抗体であってもよい。同様に、緩衝液移動経路におけるコンジュゲート３９は、好ましくは目的の抗原に結合する抗体(例えば、モノクローナル抗体)とコンジュゲートするラテックスマーカーである。
【００４９】
ｐ２４ウイルスを検出するために配置される図９の試験セル１０ｅに関して、最初にサンプルは、第二吸着物質３２'''に加えられる。サンプルがｐ２４モノクローナル抗体-ビオチンコンジュゲート３９'''に到達した際に、サンプル中に存在する場合ｐ２４抗原(ウイルス)は、ｐ２４モノクローナル抗体-ビオチンコンジュゲートと結合し、そしてストリップ３２'''の試験領域６３'''に移動し、ここで当該ビオチンはストリップ３２'''及び／又はストリップ３１上に配置された試験線５０においてストレプトアビジンにより捕捉されるであろう。こうして、試験線５０は、ビオチンに結合されたストレプトアビジンの複合体を有し、当該ビオチンはｐ２４モノクローナル抗体に結合しており、当該抗体は次にｐ２４抗原に結合している。次に緩衝液を第一吸着性物質３１に加える。緩衝液は、ラテックスマーカー-モノクローナル抗体コンジュゲート３９を試験領域３３に運搬し、ここでコンジュゲート３９のモノクローナル抗体は、既に存在する複合体に保持されるｐ２４抗原に結合し、それにより当該マーカーのため生じる着色線を提示する。抗原がサンプル中に存在しない場合、ビオチン-ｐ２４モノクローナル抗体コンジュゲート３９''は、それでもストレプトアビジンに結合し、ストレプトアビジン、ビオチン、及びｐ２４モノクローナル抗体の複合体を当該試験線に残す。しかしながら、ラテックスマーカーモノクローナル抗体コンジュゲート３９が試験領域に達する場合、モノクローナル抗体は、結合する抗原を有さないであろう。こうして、マーカーコンジュゲート３９は、試験線５０に保持されることはなく、そして陰性試験が表されるであろう。
【００５０】
図９のシステムが、かなり高感度の試験をもたらす一次的な結合剤(例えば、ビオチン)と固定された結合剤(例えば、ストレプトアビジン)との高い親和性のため、従来の側方流動システムを超える大きな利点を提供するということが当業者により認められよう。
【００５１】
次に図１０について検討すると、免疫試験キット２００が提供され、そしてランセット２０１、緩衝液パック２０２、ループ２０３、アルコールワイプ２０４、絆創膏２０５、及び試験装置又は試験セル２１０を含む。試験セル２１０は、他の実施態様の試験セルと類似しているが、ハウジングの代わりに提供される厚紙の裏打ち(cardboard backing)２１５、及び吸着性物質の様々な部分の上に提供されるペーパーカバー２１７ａ、２１７ｂ、２１７ｃなどの一定の例外を有した。矢印は、吸着性物質から取り除くためにペーパーカバー２１７ａ、２１７ｂを引く方向を示すために提供される。より具体的に、試験セル２１０は、垂直水平流路を規定する第一及び第二吸着性又は吸水性物質２３０、２３２を含む。第一吸着性物質２３０は、少なくとも２個、そして好ましくは３又は４個の領域を含み、そして複数の物質から製造されてもよい。第一領域２３１(フィルター領域と呼ばれることもある)は、第一吸着性物質の１の末端に配置され、そしてＴの接合部に位置する第二領域２３３(試験領域とよばれることもある)に伸張する。第一領域２３１には、好ましくはフィルター、所望の抗原又は抗体を有するコンジュゲート２３９が配置され、そして固定されるパッド、並びにプラスチック裏打ち(図示無し)を有するニトロセルロースから典型的に製造される吸着性又は吸水性物質２３０又は薄膜の第一部分を含む。第一領域２３１は、緩衝溶液を受容するように適合させて、緩衝溶液がコンジュゲートと接触することを引き起こし、それによりコンジュゲートを可動化し、そしてコンジュゲートを運搬する緩衝溶液を第二領域２３３に導入する。少なくとも第一領域の部分は、典型的にペーパーカバー２１７ａによりカバーされる。第二(試験)領域２３３は、当該技術分野に周知な様に、膜上に固定された抗原又は抗体(例えば、ＨＩＶ１/２検出用のｇｐ４１/ｇｐ１２０及びｇｐ３６ペプチド)を有する１以上の試験線２５０(１つだけ示される)を好ましくはプリントされる薄膜２３０の第二部分を含む。試験線２５０の吸着性物質は、透明なプラスチックカバー(図示無し)によりカバーされていてもカバーされていなくともよい。薄膜２３０の第三部分を含むオプションの第三領域２３５(対照領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に知られているように、一般的にコンジュゲート抗原に対する抗体(又は、幾つかの場合、コンジュゲート抗体に結合する抗体、又はさらにコンジュゲート抗体に結合する抗原)を含む対照線２６０をプリントされてもよい。第三領域は、同様に、透明なプラスチックカバーによりカバーされてもカバーされていなくてもよい。所望の場合、オプションの第四領域２３７(リザーバー領域と呼ばれることもある)は、当該技術分野に周知のように導入リザーバーとして提供されてもよい。第四領域２３７は、比較的厚い吸収紙を含み、そしてカバー２１７ｂによりカバーされてもよい。好ましくは、下に横たわる領域２３１、２３５、及び２３７は、吸着性物質を適所に維持する薄い粘着性のストリップ(図示なし)である。粘着性ストリップは、厚紙２１５の上に貼られる。
【００５２】
第二吸着性物質２３２は、複数の物質から作られてもよいし、そして好ましくは２個の領域２６１、２６３を含む。第一領域２６１（フィルター領域とも呼ばれることがある）は、フィルター又はパッド２６２、並びに裏打ち層を有するニトロセルロース（図示せず）から一般的に作成される吸着性若しくは吸水性物質２３２又は薄膜の第一部分を含む。第一領域２６１は、第二領域２６２へと伸張している。第一領域の少なくとも１の部分は、典型的にペーパーカバー２１７ｃによりカバーされている。第二領域２６３は第一吸着性物質２３０の第二領域２３３と接触する薄膜２３２の第二部分を含む。第二吸着性物質２３２は、第一吸着性物質２３０の下に横たわっており、その結果当該膜は、互いに接触し、そしてその結果試験線２５０は効果的に膜の間に配置される。こうして、試験線２５０は、第一吸着性物質２３０の第二領域２３３の代わりに又は加えて、第二吸着性物質２３２の第二領域２６３上にプリントされうる。好ましくは、横たわっている領域２６１及び２６３が、第二吸着性物質を適所に維持する薄い吸着性ストリップ（図示せず）である。粘着性ストリップは厚紙２１５の上に置かれる。
【００５３】
図１０の試験装置２１０は、前に記載された実施態様の構成のいずれかを想定するように改変することができる。
【００５４】
使用者は、キットの要素全てを含むブリスターパック(図示無し)を開け、(提供される場合)試験装置２１０からペーパーカバーを取り外し、アルコール・ワイプ・パッケージを開口し、そしてアルコールワイプ２０４で使用者の指を拭き取り、ランセットを取り、そして血液を得るために拭き取られた使用者の指に突き指すことにより、図１０の試験キットを使用した。次に好ましくは、ループ２０３を使用することにより、使用者は一滴の血液(例えば、５μｌ)を回収し、そして当該血液滴を第二吸着物質２３２の領域２６１の非カバー部分に配置する。次に使用者は絆創膏のパッケージを開け、そして絆創膏２０５を突き刺された指に貼った。使用者は次に、緩衝液パック２０２を開け、そして１滴の緩衝液(例えば３０μｌ)を領域２６１の血液と同じ位置に絞り出した。血液が試験領域２６３へと移動する所望の時間を待った後に、使用者は、２滴の緩衝液(例えば６０μｌ)を第一吸着性物質２３０の第一領域２３１に加える。緩衝液を領域２３１に加えた後に所望の時間(例えば７分)を待った後に、試験線２５０及び対照線２６０を観察する。陽性試験は、試験線と対照線の両方で呈色が観察されることにより示される。陰性試験は、対照線で呈色され、そして試験線２５０で呈色されないことにより示される。対照線２６０で呈色がなければ、試験結果は不適切なものである。
【００５５】
本発明の他の実施態様では、試験セル内に着色マーカーを取り付けられた所望の抗原又は抗体を有する乾燥コンジュゲートの沈積を提供する代わりに、試験セルは、乾燥コンジュゲートを全く含まない。むしろ、(湿潤)緩衝液-コンジュゲート・サブシステムが利用され、そしてコンジュゲートパッド(３１ｂ-図１Ａ)は必要とされず、その結果、薄いニトロセルロースストリップ又は他の吸着性物質が直接フィルターに結合されてもよい(３１ａ-図１Ａ)。こうしてサンプルがハウジング内の第二穴に入れられ、そして当該試験部位に移動を許容された後に、緩衝液-コンジュゲート・サブシステムは、ハウジング内の第一穴に入れられ、そして同様に試験部位に移動することを許容する。
【００５６】
本発明のさらなる実施態様では、ハウジングの上部に提供される観察窓の代わりに、窓はハウジングの底に提供される。
【００５７】
本発明の実施態様が、多くの異なる物質を用いて実現されうるということは、当業者により認められよう。例えば、かなり薄い、不活性フィルム、ストリップ、シート、又は膜を典型的に含む吸着性物質は、ニトロセルロース、フィルターペーパー、シリカから製造されてもよいし、又は例えば、微小孔又は微小顆粒、織布、不織布、又はその組合せから製造されてもよい。適切な物質の多くのタイプ及びそれらの組合わせは、Ｇｏｒｄｏｎらに対する米国特許第4,960,691号及びＺｕｋらに対する米国特許第4,956,275号において記載される。当該文献は両方ともその全てを本明細書に援用する。ニトロセルロース又は他の吸着性物質は、以前に記載される様に薄い非孔性の不活性プラスチック製の裏打ちを伴って提供されよう。
【００５８】
こうして、本発明の更なる実施態様では、物質、第一及び第二吸着性物質の厚さ及び長さは、液体サンプル及び液体緩衝液(又は緩衝液-コンジュゲートサブシステム)が試験部位に達するタイミングを調節するために選択される。サンプル/検体及び緩衝液又は緩衝液コンジュゲートサブシステムの別々の移動経路を提供することにより、物質は、システムの感受性を高めるために選ばれてもよい。
【００５９】
同様の文脈で、吸着性物質が、多くの様式のいずれかの形であってもよく、そして当該技術分野に知られているように多くの寸法のうちのいずれかを取ることができることが認められよう。こうして迅速な導入を促進するために、吸着性物質は、鍵型にすることができ、ここでストリップは、緩衝溶液を受容する第一穴、並びに試験部位及び対照部位で狭い幅を有し、そしてリザーバー領域で広い幅を有する。このような配置は、Charltonらに対する米国特許第5,979,921号に示される。当該文献はその全てを本明細書に援用される。いずれの場合でも、一般的に、試験ストリップは、幅よりは長さの点で実質的に大きく、そして厚さよりは幅の点で実質的に大きい。実際、本発明の少なくとも一定の実施態様では、試験領域でのストリップは、紙ほどの薄さ(例えば、１ｍｍの厚さ)であるべきであり、そして試験及び対照線が容易に試験ストリップを通して観察することができるように、実質的に半透明であるべきである。
【００６０】
さらに、ハウジング及び吸水性物質は、開放側方流動プラットホーム(open lateral flow platform)に一体化することができる。ここで、射出成形ポリマー（injection molded polymer)に微小支柱（micro pillar)を提供し、微小支柱は、支柱の間で高さ、直径、形状、及び/又は距離を変えることにより溢流を正確に制御することを可能にする。このようなプラットホームは、本質的に、ハウジングと吸着性導入物質に同じ物質を使用しており、そしてUppsalaのAmic AB、Swedenにより販売される。例えば、www.amic.se.を参照のこと。射出成形ポリマーは、一般的に透明でありうるので、ハウジング全体は、試験及び対照線/部位が観察される窓と考えられてもよい。
【００６１】
構築された試験のタイプに依存して(例えば、妊娠、ＨＩＶ、結核(ＴＢ)、プリオン、尿分析/薬剤、心臓マーカー、癌マーカー、シャーガス、クラミジア、口腔内細菌(ＳＭ/ＬＣ)、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、アデノウイルス、ロタウイルス、Ａ群連鎖球菌、他の細菌又はウイルスなど、及びさらにＣＰＶ、ＦＩＶ、ＦｅＬＶ、及び犬糸状虫などの獣医学適用)、目的の抗体(又は抗原)は異なり、そしてその結果試験ストリップにおいて使用される抗原(又は抗体)は、それに応じてあつらえる必要がある。同様に、コンジュゲートの抗原又は抗体は、それに応じてあつらえられる必要がある。幾つかの場合(例えばＨＩＶ)、コンジュゲートと同一の抗原が、試験ストリップ中に使用されてもよい。なぜならＨＩＶ抗体の結合部位は、試験部位で当該ＨＩＶ抗原と結合し、そして、別のケースでは異なる抗原が必要とされる一方、それでもなお抗原-コンジュゲートに結合するための更なる結合部位を提供するからである。同様に、構築された試験のタイプに依存して対照部位が提供される場合、当該試験タイプに従ってあつらえられる必要がある。こうして、例えば、ＨＩＶ抗体検出試験では、試験領域において同定されるリガンドがＨＩＶ１及び/又はＨＩＶ２抗体である場合、試験領域における抗原は、ＨＩＶ１(例えば、ｇｐ４１/ｇｐ１２０)とＨＩＶ２(ｇｐ３６)ペプチド及び/又は組換え抗原の混合物でありうる。コンジュゲートは、タンパク質Ａ、タンパク質Ａ/Ｇ、抗ヒトＩｇＧ/ＩｇＭ、ペプチド、又は組換え抗原にコンジュゲートされた着色ラテックス又は金コロイドでありうる。
【００６２】
コンジュゲートのマーカーが、金属ゾルの様々なタイプ、着色ラテックス、様々な酵素のいずれかを含む多くの形態をとるということが、当業者により認められよう。本発明の好ましい実施態様が、裸眼で容易に見ることができる検出シグナルを提供する一方、本発明が紫外線放射又は蛍光顕微鏡などの他の技術により検出できる他のマーカーを包含するということが認められよう。こうして、本発明の試験セルを利用するシステムであって、蛍光顕微鏡又はデジタルなどの自動化リーダーにより読み取られるシステムが提供される。
【００６３】
本発明は、アッセイの特異性を損なうことなく、改善された感受性を提供する。この感受性の改善についての主な理由は、区別された移動経路のために試験領域へのサンプルの移動が改善されること、そしてコンジュゲートされたマーカーと試験領域の複合体との反応前に、試験領域の結合部位に検体を効果的に結合できることである。例えば、ＨＩＶ試験の場合、第二吸着性ストリップに適用された血液血清サンプル中のＨＩＶ特異的抗体は、試験領域に移動し、そしてＨＩＶ試験線に結合する。体内の他の免疫グロブリン(ＩｇＧ)は、試験領域に固定されたＨＩＶ抗原に結合しない。緩衝溶液を第一吸着性ストリップに加えて、ラテックス又は金とコンジュゲートされたタンパク質Ａを試験領域へと移動させる場合、当該タンパク質Ａコンジュゲートは、試験線においてＨＩＶペプチドにより既に捕捉されるＨＩＶ抗体のＦＣ部分に結合するであろう。タンパク質ＡとＨＩＶ抗体のＦＣ部分との間の結合はかなり強力であるので、検出するために少量のＨＩＶ抗体しか必要としない。これは、試験線に移動する前に血液サンプル中の全てのヒトＩｇＧ(ＨＩＶ抗体を含む)がタンパク質Ａに結合する従来の側方流動ＨＩＶ試験システムとは対照的である。なぜなら、タンパク質Ａは非特異的に全てのＩｇＧに結合してしまうからである。こうして、タンパク質Ａ、ＩｇＧ、金/ラテックス複合体の全部が、ＨＩＶ抗原を含む試験線に移動するであろう。次にＨＩＶ抗体、タンパク質Ａ、金/ラテックスコンジュゲートのみがＨＩＶ抗原に結合するであろう。しかしながら、サンプル中に大量の関係ないＩｇＧが存在し、そして少量のＨＩＶ抗体しか存在しないため、十分な量のＨＩＶ抗体がタンパク質Ａに結合せず、そして呈色線が目に見えないという危険性がある。
【００６４】
本発明の増大された感受性は、標準迅速試験ＴＢ免疫アッセイ(ＴＢ Ｓｔａｔ-ＰａｋＩＩ)に対して、図１０に実質的に示される本発明のＴＢ免疫アッセイ(New Generation)により試験された。１６のサンプルを作成し、2個のサンプルを各々８個の異なるレベルの抗体で作成した(３２Ｕ/ｍｌ、８Ｕ/ｍｌ、２Ｕ/ｍｌ、１Ｕ/ｍｌ、１/２Ｕ/ｍｌ、１/４Ｕ/ｍｌ、１/８Ｕ/ｍｌ、及び対照である０Ｕ/ｍｌ)。比較試験の結果は、図１１に見られ、本発明の免疫アッセイは、標準的な従来技術の試験に比較して少なくとも８倍の感度の増加を示した(つまり、本発明の免疫アッセイでは１/４Ｕ/ｍｌで陽性結果が検出され、そして従来技術の免疫アッセイでは、２Ｕ/ｍｌで不確かな結果が検出された)。さらに、陰性サンプルの２０の試験は、偽陽性の結果を示さなかった。
【００６５】
本発明の増大された感受性は、図１０に実質的に示される様に、本発明のＨＩＶ１及びＨＩＶ２免疫アッセイ(ＮＧ ＨＩＶ試験)を、標準タイプの迅速試験ＨＩＶ免疫アッセイ(ＨＩＶ Ｓｔａｔ-Ｐａｋ)に対して比較することにより試験された。サンプルは、異なる希釈レベルで作成された(ＨＩＶ-１について、１：６４、１：１２８、１：２５６、１：５１２、１：１０２４、１：２０４８、１：４０９６、１：８１９２、及びＨＩＶ-２について、１：４、１：８、１：１６、１：３２、１：６４、１：１２８、１：２５６、１：５１２、１：１０２４、１：２０４８)。比較試験の結果は図１２に示され、本発明の免疫アッセイは、標準的な従来技術の試験に比べて、感度の点でおよそ約４倍増加することを示す(つまり、ＨＩＶ１について最も感度の高い陽性結果は、本発明の免疫アッセイでは１：４０９６希釈で検出され、そして最も感度の高い陽性結果は、従来技術の免疫アッセイについて１：１０２４希釈で検出され；そしてＨＩＶ２について最も感度の高い陽性結果は、本発明の免疫アッセイでは１：５１２希釈で、そして最も感度の高い陽性結果は、従来技術の免疫アッセイでは１：１２８希釈で検出される)。さらに、ＮＧ ＨＩＶ試験の１２０の陰性サンプルの試験により、偽陽性の割合が割合が１％未満であることが示された。
【００６６】
本発明の免疫アッセイ試験ストリップ装置が、従来技術の装置に比較してアッセイ時間の減少を提供することができると信じられている。特に、血液、糞便、又は唾液が、慣用のクロマトグラフィーストリップ試験においてかなりゆっくり移動することが知られている。しかしながら、本発明の免疫アッセイ試験ストリップ装置では、分離した移動経路がサンプルに提供されるので、使用される吸着性物質は、コンジュゲートの移動に関して迅速な移動を許容するために本発明の試験に関して特別に選択されてもよく、そしてその結果、アッセイ時間は従来技術に比較してかなり早くできる。例えば、第一吸着性物質３０、３０'、３０''、１３０、２３０は、比較的小さい孔(非限定的に例示すると、２０μｍ未満、そしてより好ましくは３〜１５μｍ)を有する膜から作成されてもよく、一方第二吸着性物質３２、３２'、３２''、１３２、２３２は、比較的大きい孔(非限定的に例示すると２０μｍより大きい、そしてより好ましくは２５〜４０μｍ)を有する物質から作成されてもよい。この様式では、検体を伴うサンプルは、その経路をより容易に移動することができ、一方同時に高感度の試験ストリップ線が比較的小さい孔の第一吸着性物質上に提供される。さらに、以前に記載される様に、第一吸収性物質の孔サイズよりも大きい孔サイズを第二吸着性物質に提供することにより、第二吸収性物質から第一吸収性物質への移動がかなり限定される。
【００６７】
比較的小さい孔を有する吸着性ストリップ(膜)の例は、Advanced Microdevice of Ambala、Indiaから販売されるＭＤＩ-０８(８μｍ)、ＭＤＩ-１０(１０μｍ)、ＭＤＩ-１５(１５μｍ)、及びWhatman, Inc., Floral Park, New Jerseyにより販売されるＳＰ(３μｍ)、ＥＰ(５μｍ)、及びＲＰ(８μｍ)を含む。比較的大きな孔を有する吸着性ストリップの例は、Schleicher & Bioscience, Inc. Keene, New Hamphshireから販売されるＰ４０(３０μｍ)である。
【００６８】
さらに、サンプルの不存在下でコンジュゲートされた粒子が移動することは、より均一かつ一貫した移動を与え、バックグランドを少なくする改善をもたらす。
【００６９】
本発明の免疫アッセイ試験ストリップ装置の別の利点は、従来のクロマトグラフィー免疫アッセイにおいて大きな検体(例えば細菌)についての大きな問題であった、マーカーコンジュゲートとサンプル中の検体との間の凝集/集合問題を克服するということである。従来技術では、細菌とコンジュゲート抗体との間の巨大複合体は、試験線の移動について困難性を有する。結果として、複合体は、ストリップの底又はパッドに留まる傾向を有する。本発明では、サンプル中の細菌は、(ろ過した後に)試験部位に直接適用され、そしてその場所に固定される。一方、マーカーコンジュゲートはサンプルを伴わずに試験部位へと自由に移動する。マーカーコンジュゲートが試験部位に到達した場合、試験部位に固定された抗体により既に捕捉された細菌は、コンジュゲートに結合する。こうして、本発明のシステムは、かなり感度が高く、そして特異的である。
【００７０】
本発明のさらに別の利点は、試験領域において分離した線としてプリントされる場合、高い感度で、かつ交差反応性のため生じる特異性、又は複数の検体の感度を損なうことなく、複数の感染性疾患についての試験を提供する能力である。特に、従来の側方流動アッセイでは、サンプルとコンジュゲートは一緒に移動する。複数の試験線が従来技術の装置において提供される場合、各線は検体を保持し、又は検体と交差反応して、それに続く線において可視結果が弱くなってしまっていた。対象的に、本発明では、幾つかの検体を含むサンプルは、コンジュゲートを伴わずに試験領域を移動し、そして数個の線に同時に到達する。こうして、検体は、等しく数個の線に結合でき、その結果同レベルの感度が維持できる。次に、コンジュゲートは、別々の移動経路に導入され、そしてすでに線に固定された複合体に結合することができる。例えば、患者サンプルにおいて、ＨＩＶ及びＴＢ抗体の同時検出では、ＨＩＶ抗原及びＴＢ抗原は、試験領域の分離線として固定され、そしてサンプルは試験領域に移動しそして結合するための１のストリップを提供する。緩衝液を次に他のストリップに加えて、タンパク質Ａ-金又はラテックスが移動し、そしてＨＩＶ抗原-抗体複合体及びＴＢ抗原抗体複合体に結合することを可能にする。当該試験が高感度であるため、ＴＢは存在すれば検出されるであろう。ＨＩＶ及びＴＢに共感染した患者では、ＴＢについての抗体タイターは低くなりがちであるので、このことは重要である。
【００７１】
本発明の別の態様では、試験が複数の感染性疾患(例えばＨＩＶ及びＴＢ)について提供される場合、異なる着色ラテックス粒子は、コンジュゲート・パッド又は緩衝溶液中に提供される異なる抗原又は抗体にコンジュゲートするために使用することができる。結果として、異なる色の線が試験領域に現れ、１の色(例えば赤色)は第一疾患(例えばＨＩＶ)に対応し、そして第二の色(例えば青色)は大に疾患(例えばＴＢ)に対応する。
【００７２】
当業者により認められるように、サンプルを１の吸着性ストリップに提供してから、もう一方の吸着性ストリップに緩衝液を提供するまでの待ち時間は、サンプルの粘度並びにサンプルを受容する吸着性ストリップの様々な特性、例えば孔サイズ及びストリップ長に依存して変化しうる。こうして、典型的に、説明書が試験装置に含まれて、サンプル(及びオプションの緩衝溶液)をストリップに加えた後に所定の時間(例えば、５分間)待って、緩衝溶液をもう一方のストリップに加えることを使用者に指示する。事象の最大割合に関して最大結果を得るために、実際に必要とされる時間よりも実質的に長い待ち時間が選択される。こうして、本発明の別の態様では、待ち時間を減らすために、可視的食品色素又は他の水溶性色素が、本発明の上に記載された実施態様のいずれかの試験部位に提供される。サンプル及びオプションの緩衝液が試験装置に提供される場合、サンプルが試験部位に移動する際に、試験部位の色素は希釈され、そして裸眼では見えなくなり、それにより、当該試験の効率に影響を与えることなく緩衝液を正確に他のストリップに加えるための可視的な指標を提供する。
【００７３】
試験部位に可視的色素を与えた試験装置では、使用者は、試験部位で色が消えた後に緩衝溶液を加えるように指示される。こうして、本発明の１の方法に従って、液体サンプル中のリガンドの存在を測定する試験装置に、固定されたリガンド結合メカニズム及び目に見える可溶性指標を与えた。サンプルを試験装置にアプライし、そして試験部位を観察して、可視指標が消失することを観察する。その後、溶液(緩衝液)を試験装置に適用する。ある程度の時間の経過後に試験部位を検査して、サンプル中にリガンドが存在するか又は存在しないかの表示を判定する。
【００７４】
図１３Ａ-１３Ｇは、試験部位において可視的色素を利用する本発明に記載されるＨＩＶ１／２試験カセット製品の合成写真／指示図である。試験製品は、以前に記載された実施態様のいずれかに従って実質的に構築され、そして４個の開口部又は窓を有するプラスチック製カセットハウジングを提供する。４個の開口部の内の最初の一つは、Ｓ+Ｂと記されており、そして試験サンプル+緩衝液を受容するように提供される。４個の開口部の２番目には、Ｂと記されてれており、そして追加緩衝液を受容するように提供される。４個の開口部のうち３番目には、１、２、３、４、及び５の数字が記されており、そして５個の異なるＨＩＶ抗原又はペプチドに対応する試験線が提供される(好ましくは、それぞれｐ２４、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、及びｇｐ３６)。Ｃと記された４番目の開口部に対照線が提供される。第三の開口部において現れる試験線に目に見える様に色素(例えば青色)が提供される。第四の開口部において現れる対照線にも目に見えるように色素（例えば、緑色）が提供される。
【００７５】
図１３Ａにおいて示される装置は、好ましくは約１０μｌの血清又は血液をＳ＋Ｂと記されたサンプルウェルに加えることにより使用される。次に、図１３Ｂに示される様に、好ましくは約３０μｌの緩衝液を同じサンプルウェルに加える。試験領域へのサンプルの移動(典型的には、緩衝液の助けを伴う)は、試験線及び対照線において色素が消失することをもたらす。線から色素が消失することは、サンプルが試験領域に到達したことを確証する。その時点で、図１３Ｃに示される様に、好ましくは約９０μｌの緩衝液をＢと記された開口部に加えて、コンジュゲートマーカーを試験領域へと移動させた。一定の時間後に結果を読み取ることができる。結果の４個の例は、図１３Ｄ-１３Ｇに見られる。図１３Ｄにおいて、対照線Ｃのみが観察され、それによりＨＩＶ１及びＨＩＶ２抗体についてサンプルが陰性であるという適正な結果を示す。図１３Ｅでは、対照線及び線１、２、３、及び４が観察され、それにより、４個の異なるＨＩＶ１型の抗体に陽性であったが、ＨＩＶ２型抗体に対して陰性であったという適正な結果を指し示す。図１３Ｆでは、対照線及び線５が観察され、それによりサンプルがＨＩＶ２型抗体について陽性であったが、４の異なるＨＩＶ１型抗体について陰性であったという適正な結果を示す。図１３Ｇでは、対照線及び全ての線１〜５が観察されて、それによりサンプルが４個の異なるＨＩＶ１型抗体について及びＨＩＶ２型抗体について陽性であったという適正な結果を示す。対照線Ｃが観察されない場合、試験結果は適正であるとは解釈されない。図１５Ａ〜１５Ｄを参照することにより理解されるように、サンプルが４種全ての異なるＨＩＶ１型抗体を含む必要がなく、１つは含む必要があるので、線１〜４における１、２、又は３本の線のみが陽性結果を示すということが起こりうるということも知られている。
【００７６】
図１４Ａ-１４Ｇは、本発明に記載されるＨＩＶ１／２ディップスティック試験製品の合成写真／指示図である。図１４Ａ-１４Ｇは、窓を伴うプラスチック製のカセットを含む代わりに、図１４Ａ-１４Ｇの試験製品は、厚紙上のディップスティック製品であるという点を除いて、上で記載される図１３Ａ-１３Ｇに完全に一致する。
【００７７】
図１５Ａ-１５Ｇは、試験部位で目に見える色素を使用する本発明に記載されるＨＩＶ１／２確認／試験カセット製品の合成写真／指示図である。図１３Ａ-１３Ｇの製品の４個の窓を備える代わりに、図１５Ａ-１５Ｇの製品に５個の開口部又は窓を備えるプラスチック・カセット・ハウジングが提供されるという点を除いて、確認／試験製品は、実質的に図１３Ａ-１３Ｇの製品と同じであり、そして以前に記載された実施態様のいずれかに従って実質的に構築される。５個の開口部のうちの第一の開口部は、Ｓ＋Ｂと記されており、そして試験サンプル＋緩衝液を受容するように提供される。５個の開口部のうちの２番目はＢと記されており、そして追加緩衝液を受容するように提供されている。５個の開口部の内の３番目はＴと記されており、そして４番目の窓に含まれるＨＩＶ抗原又はペプチドの全てを有する試験線に相当する。５個の開口部のうちの４番目には、１、２、３、４、及び５という数字が記されており、そして５個の異なるＨＩＶ抗原又はペプチドに対応する試験線が提供される(好ましくは、それぞれｐ２４、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、及びｇｐ３６)。Ｃと記される５番目の開口部には対照線が提供されている。２番目及び３番目の開口部に現れる試験線には、目で見ることができるように色素(例えば青色)が与えられている。４番目の開口部に現れる対照線にも、目で見ることができるように色素(例えば緑色)が与えられている。
【００７８】
図１５Ａ-１５Ｇのスクリーニング／確認試験製品は、図１３Ａ-１３Ｇの製品と同じ様式で使用される。当該製品との間の違いは、３番目の窓Ｔが、デジタルであるスクリーニング結果、つまり、ＨＩＶ抗体を含むサンプルに対して、含む又は含まないという結果を提供する点である。特に、試験線Ｔは、試験線１〜５上に提供される抗原又はペプチドの全ての組合わせを含むので、他の試験線１〜５のいずれかが確認されるかに注目すべきであろう。試験線１〜５は、得られた結果についての詳細、つまり、どのＨＩＶ１抗体(１つ又は複数)が検出されるか、そしてＨＩＶ２抗体が検出されるか、を提供する。
【００７９】
図１６Ａ-１６Ｅは、本発明のＨＩＶ１／２ディップスティックについて得られた実際の試験結果の写真である。図１６Ａで観察されるように、対照線及び１の線(ＧＰ３６)が観察され、サンプルがＨＩＶ２型抗体について陽性である適正な試験であることを示唆する。図１６Ｂは、観察可能な対照並びに第一及び第五試験線を示し、ｐ２４抗原に結合するＨＩＶ１抗体、及びＨＩＶ２型抗体(ｇｐ３６抗原に結合する)についてサンプルが陽性であり、そして他のＨＩＶ１抗体について陰性である適正な試験であることを示唆する。図１６Ｃは、観察可能な対照及び第二試験線を示し、サンプルがｇｐ４１抗原に結合するＨＩＶ１抗体について陽性であり、そして他のＨＩＶ１抗体及びＨＩＶ２型抗体について陰性である適正な試験であることを示唆する。図１６Ｄは、観察可能な対照並びに第一、第二、及び第四試験線を示し、サンプルがｇｐ２４、ｇｐ４１、及びｇｐ１６０抗原に結合するＨＩＶ１抗体について陽性であり、そして他のＨＩＶ１抗体及びＨＩＶ２型抗体について陰性である適正な試験であることを示唆する。図１６Ｅは、観察可能な対照及び第一〜第四試験線を示し、サンプルが試験された全てのＨＩＶ１抗体とＨＩＶ２抗体に対して陽性である適正な試験であることを示唆する。
【実施例】
【００８０】
実施例１-ＨＩＶ試験
サンプル及び緩衝液を受容するストリップ１の製造：
サンプルの回収及び輸送のための試験ストリップは以下のように調製された。２０〜３０μｍの孔サイズのニトロセルロース膜(５×２５ｍｍ)(Whatman Inc., USA)をプラスチックカード上に積層した。セルロース紙(S&S、Germany)のサンプルパッドをＰＢＳ、８.４及びＮＰ４０で処理し、そしてニトロセルロース膜に取り付けた。複数の試験ストリップ１を製造するために同じ方法を使用した。
【００８１】
緩衝液のみを受容し、そしてコンジュゲート領域並びに試験及び対照線を備えるストリップ２の製造：
ＨＩＶ１及びＨＩＶ２に対する抗体の検出用の試験ストリップは、以下のように製造される。合成ＨＩＶ１ペプチドｇｐ４１、ｇｐ１２０、及び合成ＨＩＶ２ペプチドｇｐ３６はビオチン化され、そして次にアビジン(Zymed, Inc. USA)と混合される。このカクテルを０.２μｍのフィルターによりろ過し、そしてＩＳＯ-Ｆｌｏｗプリンター(Imagine Technology, Inc. USA)を用いて０.２５〜０.５０ｍｇ／ｍｌの濃度で１０〜１５μｍ孔サイズのニトロセルロース膜(MDI Ltd.,Ambella, India)に固定して、試験線として使用した。タンパク質Ａ(Zymed Inc., USA)の濃度０.２５ｍｇ／ｍｌを同じ様式で固定して、対照線として使用した。３７℃で１時間膜を乾燥した。膜の裏打ち(G&L, Inc. USA)に膜を積層した。コンジュゲートパッドを、多孔性ポリエステルマトリクス(Alstrom, Inc. USA)を用いて調製した。パッドは、約４０ｎｍ及びＯＤ６０の紫色の金コロイド粒子を結合されたタンパク質Ａであって、コンジュゲート緩衝液(５０ｍＭＰＢＳ、スクロース、ＢＳＡ、ＶＰＡ、Ｔｗｅｅｎ２０)に懸濁されたタンパク質Ａをスプレーされ、そして３７℃で１時間乾燥された。試験ストリップ(７.２×６２ｍｍ)を、金コンジュゲートパッド、サンプルパッド(S&S Inc., Germany)及びシンクパッド(S&S Inc., Germany)を積層カードに取り付けられたニトロセルロース膜に取り付けることにより調製した。同じ方法を複数の試験ストリップを作成するために使用した。
【００８２】
カセット中のストリップ１とストリップ２の組み立て：
ストリップ２(７.２×６２ｍｍ)を、その積層カードを底に接触させ、そしてコンジュゲートパッド、サンプルパッド、試験及び対照線を上向きにしてカセットの底部分に配置した。次に、ストリップ１をカセットの底部分に配置した。試験部位においてストリップ１のニトロセルロース膜がストリップ２に接触するようにストリップ１を配置した。サンプル及び緩衝液用の分離された開口部を有し、かつ試験及び対照部位にまたがる窓を有するカセットの上部分は、次にカセットの底部分上に配置された。複数の組立品(以下に、化学生物ＤＰＰ(二経路プラットホーム)ＨＩＶ１／２組立品と呼ばれる)を作成するために同じ方法を用いた。
【００８３】
試験方法：
５μｌの血清／血液をサンプルの開口部を通して加え、そして１滴(４０〜５０μｌ)の緩衝液(ＰＢＳ、ｐＨ８.５〜９.５、鳥血清、ＥＤＴＡ、Ｔｗｅｅｎ２０)をすぐに同じ開口部を通して加えた。サンプルが試験領域に達し、そして着色線(性質対照)が消失するまで１〜２分待った後に、３又は４滴(およそ１３０〜１５０μｌ)の同じ緩衝液を、緩衝液開口部を通して加えた。１５分後、試験結果を読んだ。２個のピンク色の線(試験及び対照)が出現することは陽性結果を示す。一本のバンドの出現(対照)は、陰性結果を示した。バンドが出現しないことは、不適切な結果であることを示唆する。
【００８４】
試験結果：
ＢＢＩ Inc., USAから販売される市販の混合ＨＩＶ１及びＨＩＶ２パフォーマンスパネル(Mixed HIV1 and HIV2 performance panel)(ＰＲＺ-２０４)を、上記の様に製造されそして組み立てられた組立品において試験して、以下の結果を得た。
【表１】
2008533472.tif 000003
【００８５】
全てのサンプルは、Ｃｈｅｍｂｉｏ ＤＰＰ ＨＩＶ１／２及びＥＬＩＡ１／２ Ａｂｂｏｔｔ試験により正確に検出された。サンプル番号１５は、ＡＳＴＰＨＬＤ／ＣＤＣ判定(ＭＭＷＲ 第三８巻、Ｓ-７、1989)を用いて判断すると、両方のウエスタンブロット試験で不定であったが、Ｃｈｅｍｂｉｏ ＤＰＰ ＨＩＶ1／２ 及びＥＬＩＡ 1／２ Ａｂｂｏｔｔ試験で陽性であった。
【００８６】
実施例２-結核菌(ＴＢ)
実施例１と同様の試験装置を、ストリップ２のみを改変することによりＴＢに対する抗体の検出用に製造した。ストリップ２を、ＨＩＶペプチドの代わりにＴＢ組換え抗原(Ｆ１０、Ｅ６、Ｐ１０、１４、１６)の混合物を１.０ｍｇ／ｍｌの濃度で取得し、そしてＴＢ組換え抗原を膜上の試験線において０.５μｌ／ｃｍで固定して、第一試験線(Ｔ１)を与えることにより改変した。０.０５ｍｇ／ｍｌの濃度のＴＢ抗原リポアラビンマンナン(ＬＡＭ)からなり、そして０.５μｌ／ｃｍで固定された第二試験線(Ｔ２)は、同様に試験領域に固定された。ＰＢＳ７.４で希釈されたタンパク質Ａ(濃度０.２５ｍｇ／ｍｌ)を同様に対照線として固定した。約４０ｎｍである紫色のコロイド金粒子をコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＭ(Sigma, USA)及びタンパク質Ａ／Ｇ(Pierce, USA)をコンジュゲートパッドにアプライした。
【００８７】
試験方法：
ＴＢ試験用の試験方法は、サンプル体積が１０μｌの血清であると言うことを除き実施例１と同じである。
【００８８】
試験結果：
全体で３００の市販のＴＢサンプル(Zeptometrix, Inc, USA)を、ＤＰＰ ＴＢ試験で評価した。全ての陽性サンプルは、培養陽性結果を有したが、サンプルの幾つかは、塗沫陰性であり、そしてＨＩＶ共感染されていた。７５％の全体の感度及び９０％の特異性がそれぞれ、固有のサンプルで達成された。
【００８９】
実施例３-ＨＩＶ確認ディップスティック
ＨＩＶ１及びＨＩＶ２抗体の検出用の確認試験ストリップの形態の試験装置は、実施例１に提供された。しかしながら、ストリップ１及びストリップ２は任意のプラスチックハウジングを伴わない積層カード上に接着剤(G&L Inc, USA)を用いて取り付けた(つまり、ディップスティック)。５個の異なるＨＩＶ１抗原(ｐ２４、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０)及びＨＩＶ２(ｇｐ３６)を、試験領域の５個の異なる線として固定した(０.２５〜０.５０ｍｇ／ｍｌ)。これらの抗原は組換え、合成ペプチド及び天然抗原であった。０.２５ｍｇ／ｍｌの濃度にＰＢＳ７.４で希釈されたタンパク質Ａを対照線として固定した。約４０ｎｍの紫色コロイド金粒子をコンジュゲートされたタンパク質Ａ(Ｚｙｍｅｄ,ＵＳＡ)を、コンジュゲートパッドにスプレーし、そして検出システムとして用いた。
【００９０】
方法：
試験方法は、１０μｌの血清のサンプル体積が使用されることを除いて、実施例１と同じであった。
【００９１】
結果：
市販のＨＩＶパネルサンプル(BBI Inc, USA, Zeptometrix Inc, USA、及びTeragenix Inc USA)をこのアッセイで評価した。結果により、ＤＰＰ ＨＩＶ確認試験が、正確にＨＩＶ１及びＨＩＶ２サンプルを検出し、そしてウエスタンブロット及びＥＩＡと１００％の相関性を有したということが示された。
【００９２】
実施例４-ＨＩＶ試験
ストリップ１が各試験について長くされて、その結果ストリップ１及びストリップ２がＴ字を形成する代わりに、それらが＋の配置を形成するという点で異なる実質的に実施例１の試験装置に同一である試験装置が製造された。結果は実施例１と同じであった。
【００９３】
実施例５-ＨＩＶ試験
試験及び対照線が、ストリップ２の代わりにストリップ１に適用されることを除いて実施例１と実質的に同じである試験装置が製造された。結果は実施例１と同じであった。
【００９４】
実施例６-ＨＩＶ試験
試験領域においてＰ２４ＨＩＶ抗原に対するポリクローナル抗対が試験線上に固定され、そしてＰ２４ＨＩＶ抗原に対するモノクローナル抗体がコロイド金にコンジュゲートされたことを除いて実施例１と同じ試験装置が製造された。結果は、血清サンプル中のピコグラムレベルのｐ２４抗原が検出できることを示した。
【００９５】
実施例７-レプトスピラ細菌
試験領域において、４個の組換えｌｉｊ抗原(Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ)を混合し、そして試験線と同じ様に固定したと言う点を除いて、実質的に実施例１と同じである試験装置が製造された。コンジュゲートでは、タンパク質Ａ／Ｇ(Pierce, USA)及び抗ヒトＩｇＭ(Sigma、USA)は、約４０ｎｍの紫色のコロイド金粒子とコンジュゲートし、コンジュゲートパッドにアプライした。ブラジル及びタイから得た３００を超える固有のサンプルでは、急性期サンプルでは約７０％、そして回復期サンプルでは約９０％の全体感度が得られ、そして特異性は約９５％であった。
【００９６】
免疫アッセイの幾つかの実施態様、及びその使用方法が記載された。一方、本発明の特定の実施態様が記載される一方、本発明は、その範囲は当該技術が許容するのと同じ程度に広いこと、そして明細書が同様に読まれることが意図されるので、本発明がそれらに限定されることを意図しない。こうして、明細書が抗原抗体反応を用いたリガンド結合を記載する一方、他のリガンド結合メカニズム、例えばアプタマー結合、核酸結合、酵素結合などが使用されてもよい。また、試験セルが、１のリガンドを試験するための１の線を有し、２個のリガンドを試験するための２個の線、３個のリガンドを試験するための３個の線、及び５個のリガンドを試験するための５個の試験線を有するように記載される一方、異なる数の線が異なる数のリガンドを試験するために利用されてもよいということが認められよう。このような場合、１のハウジングは、サンプルについての１の穴を用いて使用されてもよく、或いは、所望される場合複数の穴を利用することもできる。複数の穴が使用される場合、複数のストリップが提供される１以上のサンプルについて使用されてもよい。好ましくは、複数のストリップは、コンジュゲートの移動経路を提供する１のストリップと接触する(例えば、上又は下に横たわる)。サンプル移動に適用される２個の隣接するストリップ上に位置するか、又は当該ストリップに導く１の穴を提供することが可能であってもよい。さらに、試験セルが、サンプル及び緩衝溶液、又は緩衝液-コンジュゲート・サブシステムを受容するためにハウジングの上壁に穴を有するように記載された一方、１又は両方の穴がハウジングの末端の壁又は横壁に提供されてもよいということが認められよう。同様に、吸着性物質が、好ましくは薄いプラスチック製の裏打ちを含む様に記載された一方、プラスチック製の裏打ちは特定の位置にのみ提供することができるか、又は全く提供されないと言うことが認められよう。部分的な裏打ちのみが提供されるか、又は裏打ちが提供されない場合、試験及び対照部位は、吸着性物質のいずれか又は両側に位置することができる。さらに、試験ストリップ及び対照ストリップが長方形の形で示される一方(つまり、線)、試験及び対照部位が円、四角、卵型、破線などの異なる形にすることができるということが認められよう。実際、試験部位及び対照部位は、互いに違うように配置することができる。また、本発明は、T型ハウジングを使用し、そして互いに垂直である吸着性物質を使用するように記載される一方、ハウジングが異なる形(例えば、長方形、ピストル型)を取ることができるということが認められよう。さらに、所望される場合、吸着性物質は、検体／サンプル及び緩衝液コンジュゲートサブシステムについて提供される区別される移動経路が提供される限り、互いに垂直である必要はない。こうして、例えば、Ｙ型配置を提供することができる。実際、例えばサンプル領域と吸着性物質が試験線及び対照線並びにリザーバー上に位置し、そしてハウジングの壁により離され、そして試験及び対照線がもう一方のハウジング上の窓から見ることができる、長方形配置を提供することも可能である。
【００９７】
当業者は、ハウジングが、各試験線について離れた窓を含めるために更なる方法で改変されてもよいと言うことが認められよう。また、コンジュゲートの移動経路、及び場合によりサンプルの移動経路に加えられる緩衝溶液の使用と合わせて記載される一方、１以上の緩衝液が、実施される試験(１つ又は複数)に依存して適宜、移動経路に加えられることが選択されてもよいということが認められよう。こうして、リン酸緩衝液又はＴＲＩＳ(トリスヒドロキシメチルアミノメタン)緩衝液などの緩衝液がしばしば使用される。しかしながら、本発明は、水を含む任意の希釈剤を使用することを包含することを意図する。さらに、希釈剤は、必要に応じて、サンプルを吸着性物質に加える前に加えられ、そしてサンプルと混合されてもよいか、又はサンプルは、最初に沈積され、そしてその後に希釈剤が加えられてもよい。同様に、コンジュゲートが移動することを引き起こすことができる任意の希釈剤が使用されてもよく、そして液体コンジュゲートシステムにおいてコンジュゲートと予め混合されてもよく、又は乾燥コンジュゲートシステムにおいて移動経路を移動できてもよい。その結果、当該技術分野により、さらに別の改変が、特許請求される本質と範囲から逸脱することなく、本発明に提供されうるということが当業者により認められよう。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、本発明の第一実施態様の上面概略図である。  図１Ａは、図１の線１Ａ-１Ａにそった断面図である。  図１Ｂは、図１の線１Ｂ-１Ｂにそった断面図である。
【図２】図２は、本発明の第二実施態様の上面概略図である。  図２Ａは、図２の線２Ａ-２Ａにそった断面図である。
【図３】図３は、本発明の第三実施態様の断面図である。
【図４】図４は、本発明の第四実施態様の上面概略図である。
【図５】図５は、本発明の第五実施態様の上面概略図である。
【図６】図６は、本発明の第六実施態様の上面概略図である。
【図７】図７は、本発明の第七実施態様の上面概略図である。
【図８】図８は、本発明の第八実施態様の上面概略図である。
【図９】図９は、本発明の第九実施態様の上面概略図である。
【図１０】図１０は、ハウジングを用いない本発明の実施の上面概略図である。
【図１１】図１１は、典型的な従来技術のＴＢ試験装置に対する本発明の試験装置の感度の比較を示す表である。
【図１２】図１２は、２つの表と１のキー(key)を含む。当該表は、典型的な従来技術のＨＩＶ１試験及びＨＩＶ２試験装置に比較した本発明の試験装置の感度の比較を示す。
【図１３Ａ−Ｂ】図１３Ａ-１３Ｇは、本発明に記載されるＨＩＶ１/２試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１３Ａ-１３Ｃは、試験製品の使用方法を示し、そして図１３Ｄ-１３Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１３Ｃ】図１３Ａ-１３Ｇは、本発明に記載されるＨＩＶ１/２試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１３Ａ-１３Ｃは、試験製品の使用方法を示し、そして図１３Ｄ-１３Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１３Ｄ−Ｅ】図１３Ａ-１３Ｇは、本発明に記載されるＨＩＶ１/２試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１３Ａ-１３Ｃは、試験製品の使用方法を示し、そして図１３Ｄ-１３Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１３Ｆ−Ｇ】図１３Ａ-１３Ｇは、本発明に記載されるＨＩＶ１/２試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１３Ａ-１３Ｃは、試験製品の使用方法を示し、そして図１３Ｄ-１３Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１４Ａ−Ｂ】図１４Ａ-１４Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２ディップスティック試験製品の合成写真/指示図であり、図１４Ａ-１４Ｃは試験製品の使用方法を示し、そして図１４Ｄ-１４Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１４Ｃ】図１４Ａ-１４Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２ディップスティック試験製品の合成写真/指示図であり、図１４Ａ-１４Ｃは試験製品の使用方法を示し、そして図１４Ｄ-１４Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１４Ｄ−Ｅ】図１４Ａ-１４Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２ディップスティック試験製品の合成写真/指示図であり、図１４Ａ-１４Ｃは試験製品の使用方法を示し、そして図１４Ｄ-１４Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１４Ｆ−Ｇ】図１４Ａ-１４Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２ディップスティック試験製品の合成写真/指示図であり、図１４Ａ-１４Ｃは試験製品の使用方法を示し、そして図１４Ｄ-１４Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１５Ａ−Ｂ】図１５Ａ-１５Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２スクリーニング/確認試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１５Ａ-１５Ｃはスクリーニング/試験製品の使用方法を示し、そして図１５Ｄ-１５Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１５Ｃ】図１５Ａ-１５Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２スクリーニング/確認試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１５Ａ-１５Ｃはスクリーニング/試験製品の使用方法を示し、そして図１５Ｄ-１５Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１５Ｄ−Ｅ】図１５Ａ-１５Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２スクリーニング/確認試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１５Ａ-１５Ｃはスクリーニング/試験製品の使用方法を示し、そして図１５Ｄ-１５Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１５Ｆ−Ｇ】図１５Ａ-１５Ｇは、本発明に記載されたＨＩＶ１/２スクリーニング/確認試験カセット製品の合成写真/指示図であり、図１５Ａ-１５Ｃはスクリーニング/試験製品の使用方法を示し、そして図１５Ｄ-１５Ｇは生じうる様々な結果を示す。
【図１６Ａ−Ｂ】図１６Ａ-Ｅは、本発明の実際のＨＩＶ１/２ディップスティックで得られる試験結果の写真である。
【図１６Ｃ−Ｅ】図１６Ａ-Ｅは、本発明の実際のＨＩＶ１/２ディップスティックで得られる試験結果の写真である。
【図１】
2008533472.tif 000004
【図１Ａ】
2008533472.tif 000005
【図１Ｂ】
2008533472.tif 000006
【図２】
2008533472.tif 000007
【図２Ａ】
2008533472.tif 000008
【図３】
2008533472.tif 000009
【図４】
2008533472.tif 000010
【図５】
2008533472.tif 000011
【図６】
2008533472.tif 000012
【図７】
2008533472.tif 000013
【図８】
2008533472.tif 000014
【図９】
2008533472.tif 000015
【図１０】
2008533472.tif 000016
【図１１】
2008533472.tif 000017
【図１２】
2008533472.tif 000018
【図１３Ａ−Ｂ】
2008533472.tif 000019
【図１３Ｃ】
2008533472.tif 000020
【図１３Ｄ−Ｅ】
2008533472.tif 000021
【図１３Ｆ−Ｇ】
2008533472.tif 000022
【図１４Ａ−Ｂ】
2008533472.tif 000023
【図１４Ｃ】
2008533472.tif 000024
【図１４Ｄ−Ｅ】
2008533472.tif 000025
【図１４Ｆ−Ｇ】
2008533472.tif 000026
【図１５Ａ−Ｂ】
2008533472.tif 000027
【図１５Ｃ】
2008533472.tif 000028
【図１５Ｄ−Ｅ】
2008533472.tif 000029
【図１５Ｆ−Ｇ】
2008533472.tif 000030
【図１６Ａ】
2008533472.tif 000031
【図１６Ｂ】
2008533472.tif 000032
【図１６Ｃ】
2008533472.tif 000033
【図１６Ｄ】
2008533472.tif 000034
【図１６Ｅ】
2008533472.tif 000035
【手続補正書】
【提出日】平成19年1月11日(2007.1.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶液と使用するため、及びマーカーを有するコンジュゲートと使用するための試験装置であって、液体サンプル中のリガンドの存在を判定することを目的とし、当該試験装置が以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を有し、そして当該溶液及び当該コンジュゲート用の第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ；
ｂ)上記第一吸着性ストリップとは区別される第二吸着性ストリップであって、上記液体サンプルを受容する第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別される当該サンプル用の第二移動経路を規定する上記第二吸着性ストリップ；及び
ｃ)上記第一吸着性ストリップ及び／又は第二吸着性ストリップの上又は内に位置する試験部位であって、当該試験部位が固定されたリガンド結合メカニズムを有し、そして当該第一及び第二吸着性ストリップが互いに当該試験部位で接触し、そして上記液体サンプルを上記第二位置に適用することが、当該液体サンプルが試験部位へと横方向に流れるための時間を必要とし、そして適用した際に当該試験部位を即座に濡れさせないように、当該第二移動経路が第二位置から少なくとも当該試験部位へと横方向に伸張している、上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項２】
以下の：
ｄ)前記第一位置に隣接する第一開口部、前記第二位置に隣接する第二開口部、及び前記試験部位に隣接する窓であって、当該窓を通して上記試験部位を見ることができる窓を規定するハウジング
をさらに含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項３】
前記コンジュゲートをさらに含み、ここで、前記第一吸着性ストリップが当該コンジュゲートを支持する、請求項１に記載の試験装置。
【請求項４】
前記リガンド-結合メカニズムが、前記リガンドに対する抗原又は抗体であり、そして前記コンジュゲートが、当該リガンドに対する抗原又は抗体、及び当該抗原又は抗体に結合されたマーカーを含む、請求項３に記載の試験装置。
【請求項５】
前記マーカーが、可視スペクトルにおいて見ることができる着色マーカーである、請求項４に記載の試験装置。
【請求項６】
前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの１又は両方が対照部位を含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項７】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップが「Ｔ」型に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項８】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップが「＋」型に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項９】
前記第一吸着性ストリップが第一孔サイズを有し、そして前記第二吸着性ストリップが第二孔サイズを有する、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１０】
前記第二孔サイズが前記第一孔サイズより大きい、請求項９に記載の試験装置。
【請求項１１】
前記第一孔サイズが３〜２０μｍであり、そして前記第二孔サイズが２０〜４０μｍである、請求項１０に記載の試験装置。
【請求項１２】
前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの１又は両方が対照部位を含み、そして前記窓が当該対照部位を見ることを可能にする大きさにされるか、又は当該対照部位を見ることを可能にするように第二窓が当該ハウジングに提供される、請求項２に記載の試験装置。
【請求項１３】
前記溶液をさらに含み、ここで当該溶液が緩衝液を含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１４】
前記溶液をさらに含み、ここで当該溶液が、緩衝液、及び前記リガンドに対する抗原又は抗体と当該抗原又は抗体に結合されたマーカーを有するコンジュゲートのサブシステムを含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１５】
前記固定されたリガンド結合メカニズムが、ＨＩＶ抗原又は抗体を含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１６】
前記固定されたリガンド結合メカニズムが、妊娠、ＨＩＶ、結核(ＴＢ)、プリオン、尿検査／薬剤、クラミジア、心臓病マーカー、癌マーカー、シャーガス病、口腔内細菌(ＳＭ／ＬＣ)、Ａ型連鎖球菌、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、アデノウイルス／ロタウイルス、ＣＰＶ、ＦＩＶ、ＦｅＬＶ、及び犬糸状虫のうちの少なくとも１の試験用の抗原、抗体、アプタマー、核酸、又は酵素を含む、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１７】
前記第一吸着性ストリップが第一膜及び第一裏打ちを含み、そして前記第二吸着性ストリップが第二膜及び第二裏打ちを含み、そして当該第一膜が当該第二膜と接触するように、当該第一吸着性ストリップ及び当該第二吸着性ストリップが配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項１８】
前記第一吸着性ストリップの上又は下に横たわっている第一粘着性裏打ちカードをさらに含む、請求項１７に記載の試験装置。
【請求項１９】
前記第二吸着性ストリップの上又は下に横たわっている第二粘着性裏打ちカードをさらに含む、請求項１８に記載の試験装置。
【請求項２０】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップは、前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップの両方をまとめる１の膜を含む、請求項１に記載の試験ストリップ。
【請求項２１】
前記試験装置が、前記液体サンプル中に複数の異なるリガンドの存在を判定するためのものであり、そして
前記試験部位が、上記複数の異なるリガンドのそれぞれに別々に結合するための複数の離して固定されたリガンド結合メカニズムを有する、
請求項１に記載の試験装置。
【請求項２２】
前記複数の離して固定されたリガンド結合メカニズムが、結核抗原及び少なくとも１のＨＩＶ抗原を含む、請求項２１に記載の試験装置。
【請求項２３】
前記複数の離して固定されたリガンド結合メカニズムが、ｐ２４抗体並びにＨＩＶ１及びＨＩＶ２抗原の少なくとも１を含む、請求項２１に記載の試験装置。
【請求項２４】
前記第一吸着性ストリップが、前記複数の異なるリガンドに対する抗原及び／又は抗体、並びに当該抗原及び／又は抗体に結合されたマーカーを含む複数の異なるコンジュゲートを支持する、請求項２１に記載の試験装置。
【請求項２５】
前記固定されたリガンド結合メカニズムが、それぞれ異なるＨＩＶ抗原又は抗体を含む少なくとも４個の線に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項２６】
前記異なるＨＩＶ抗原又は抗体が、少なくとも４個のｐ２４、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、及びｇｐ３６を含む、請求項２５に記載の試験装置。
【請求項２７】
前記試験部位の少なくとも一部が、目に見える着色色素で染色される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項２８】
マーカーを有するコンジュゲートと用いるための試験装置であって、液体サンプル中のリガンドの存在を判定することを目的とし、以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を有し、そして当該溶液とマーカーを有する上記コンジュゲート用の第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ；
ｂ)上記第一吸着性ストリップとは区別される第二吸着性ストリップであって、上記液体サンプルを受容するための第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別される当該サンプル用の第二移動経路を規定し、ここで当該第二移動経路が一時的な結合剤に結合された抗体のコンジュゲートを含み、上記リガンドが上記サンプル中に存在する場合に当該抗体が当該リガンドに結合するように選択される、上記第二吸着性ストリップ；及び
ｃ)前記第一吸着性ストリップ及び／又は前記第二吸着性ストリップの上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が固定された結合剤を有し、上記一時的な結合剤及び当該固定された結合剤は、互いに選択的によく結合する能力について選択されており、当該第一及び第二吸着性ストリップが互いに当該試験部位で接触し、そして上記液体サンプルを上記第二位置に適用することが、当該液体サンプルが試験部位へと横方向に流れるための時間を必要とし、そして適用した際に当該試験部位を即座に濡れさせないように、当該第二移動経路が第二位置から少なくとも当該試験部位へと横方向に伸張している、上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項２９】
前記リガンドが前記サンプル内に存在する場合に、前記第一吸着性ストリップが、当該リガンドに結合するように選択された第二抗体に結合されたマーカーのコンジュゲートを支持する、請求項２８に記載の試験装置。
【請求項３０】
前記リガンドがｐ２４抗原であり、一時的な結合剤に結合された抗体の前記コンジュゲートがビオチンに結合されたｐ２４モノクローナル抗体であり、そして前記固定された結合剤がストレプトアビジンである、請求項２９に記載の試験装置。
【請求項３１】
前記リガンドがｐ２４抗原であり、一時的な結合剤に結合された抗体の前記コンジュゲートがビオチンに結合されたｐ２４モノクローナル抗体であり、前記固定された結合剤がストレプトアビジンであり、そして第二抗体に結合されたマーカーの前記コンジュゲートが、モノクローナル抗体とコンジュゲートした着色ラテックスである、請求項２９に記載の試験装置。
【請求項３２】
前記第一吸着性ストリップ及び前記第二吸着性ストリップが、非平行配置に配置される、請求項１に記載の試験装置。
【請求項３３】
溶液と用いるため、そしてマーカーを有するコンジュゲートと用いるための試験装置であって、液体サンプル中のリガンドの存在を判定することを目的とし、当該試験装置が以下の：
ａ)第一長さ及び第一幅を有し、ここで当該第一長さは当該第一幅より実質的に大きく、溶液を受容するための第一位置を有し、そして当該溶液及び上記コンジュゲート用の第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ；
ｂ)第二長さ及び第二幅を有し、ここで当該第二長さは当該第二幅より実質的に大きく、第一吸着性ストリップとは区別される第二吸着性ストリップであって、液体サンプルを受容するための第二位置を有し、そして前記第一移動経路とは区別される当該サンプル用の第二移動経路を規定する、前記第二吸着性ストリップ；及び
ｃ)前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が前記第一及び第二吸着性ストリップのうちの少なくとも１の上又は中に配置される固定されたリガンド結合メカニズムを有し、当該試験部位で当該第一吸着性ストリップと第二吸着性ストリップが互いに直接接触し、そして上記液体サンプルを上記第二位置に適用することが、当該液体サンプルが試験部位へと横方向に流れるための時間を必要とし、そして適用した際に当該試験部位を即座に濡れさせないように、当該第二移動経路が第二位置から少なくとも当該試験部位へと横方向に伸張している、上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項３４】
溶液と用いるため及びマーカーを有するコンジュゲートと用いるための試験装置であって、液体サンプル中のリガンドの存在を判定することを目的とし、ここで当該試験装置が以下の：
ａ)溶液を受容するための第一位置を規定し、そして当該溶液及び上記コンジュゲート用の第一移動経路を規定する物質の第一部分；
ｂ)液体サンプルを受容する第二位置を規定し、そして上記第一移動経路に対して非平行である当該サンプル用の第二移動経路を規定する物質の第二部分；及び
ｃ)物質の上記第一及び／又は第二部分の上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が、物質の前記第一及び／又は第二部分の上又は中に沈積される固定されたリガンド-結合メカニズムを有し、そして当該物質の第一及び第二部分が当該試験部位において互いに接触し、そして上記液体サンプルを上記第二位置に適用することが、当該液体サンプルが試験部位へと横方向に流れるための時間を必要とし、そして適用した際に当該試験部位を即座に濡れさせないように、当該第二移動経路が第二位置から少なくとも当該試験部位へと横方向に伸張している、上記試験部位
を含む、前記試験装置。
【請求項３５】
前記第一及び第二移動経路が前記試験部位で交差する、請求項３４に記載の試験装置。
【請求項３６】
リガンドの存在についてサンプルを試験する方法であって、以下の：
ａ)  以下の：
溶液を受容する第一位置を有し、そして当該溶液用及びマーカーを有するコンジュゲート用の第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ、
液体サンプルを受容するための第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別される当該サンプル用の第二移動経路を規定する第二吸着性物質、及び
上記第一吸着性ストリップ及び／又は前記第二吸着性ストリップの上又は中に位置する試験部位であって、当該試験部位が固定されたリガンド結合メカニズムを有し、そして上記第一及び第二吸着性ストリップが当該試験部位において互いに接触し、そして上記液体サンプルを上記第二位置に適用することが、当該液体サンプルが試験部位へと横方向に流れるための時間を必要とし、そして適用した際に当該試験部位を即座に濡れさせないように、当該第二移動経路が第二位置から少なくとも当該試験部位へと横方向に伸張している、上記試験部位
を有する試験装置を取得し、
ｂ)上記サンプルを上記第二位置にアプライし；
ｃ)上記サンプルをアプライした後に、上記溶液を第一位置にアプライし；そして
ｄ)上記試験部位を検査して上記サンプル中における上記リガンドの有無の表示を判定する
を含む、前記方法。
【請求項３７】
前記試験装置が、前記第一位置に隣接する第一開口部、前記第二位置に隣接する第二開口部、及び前記試験部位に隣接する窓であって、当該窓を通して前記試験部位を見ることができる窓を規定するハウジングを有し、
前記サンプルをアプライすることが、上記第二開口部を通して上記第二位置に当該サンプルを加えることを含み、
前記溶液をアプライすることが、上記第一開口部を通して上記第一位置に溶液を加えることを含み、
前記検査が、上記窓を通した検査を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
リガンドの存在についてサンプルを試験する方法であって、以下の：
ａ)試験部位を有する試験装置に固定されたリガンド結合メカニズム及び目に見える溶解性指標を提供し；
ｂ)上記サンプルを上記試験装置にアプライし；
ｃ)上記試験部位を観察して、上記目に見える指標の消失を観察し；
ｄ)上記目に見える指標の消失後、溶液を上記試験装置にアプライし；そして
ｅ)当該溶液をアプライした後に、上記試験部位を検査して上記サンプル中の上記リガンドの有無の表示を判定すること
を含む、前記方法。
【請求項３９】
前記検査が、前記試験部位を検査して、マーカーを有するコンジュゲートが当該試験部位に捕捉されるかを判定することを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記試験装置が、以下の：
溶液を受容するための第一位置を有し、そして当該溶液用の及びマーカーを有するコンジュゲート用の第一移動経路を規定する第一吸着性ストリップ、
サンプルを受容するための第二位置を有し、そして上記第一移動経路とは区別されるサンプル用の第二移動経路を規定する第二吸着性物質
を有し、ここで当該試験部位が上記第一吸着性ストリップ及び／又は第二吸着性ストリップの上又は中に位置し、そして当該第一及び第二吸着性ストリップが互いに当該試験部位で接触している、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記液体サンプルを前記第二位置に適用することが、当該液体サンプルが試験部位へと横方向に流れるための時間を必要とし、そして適用した際に当該試験部位を即座に濡れさせないように、当該第二移動経路が第二位置から少なくとも当該試験部位へと横方向に伸張している、請求項４０に記載の方法。
【国際調査報告】
2008533472.tif 000036
2008533472.tif 000037