(57)【要約】埋め込み型アクセス装置および装置を準備するための方法に関する。装置は、流体混合物（血液、懸濁液、製剤、エマルジョン、細胞懸濁液）をヒトまたは動物の身体に、または当該ヒトまたは動物の身体の中に、または当該ヒトまたは動物の身体から移入し、そして移送する際に使用する細胞接着、細胞移植および増殖に適した生物学的サブ構造物を備えた形状記憶基部構造物を備える。【特許請求の範囲】
【請求項１】
流体をヒトまたは動物の身体内にまたは当該ヒトまたは動物の身体から移入する際に使用するために、細胞接着、細胞移植および増殖に適したサブ構造物を備える形状記憶基部構造物を備えた埋め込み型アクセス装置であって、前記形状記憶基部構造物は、前記サブ構造物と一緒に、細胞を前記アクセス装置に且つこれの中に三次元固定し一体化するのを可能にすることを特徴とする埋め込み型アクセス装置。
【請求項２】
前記装置は、少なくとも３０μｍから大きくても１０ｍｍの範囲の開口を備えた基部構造物を有する、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記基部構造物は、大きくても３ｍｍの開口を有する、請求項１に記載の装置。
【請求項４】
前記基部構造物は、大きくても３００μｍの開口を有する、請求項１に記載の装置。
【請求項５】
前記基部構造物は、１〜３０μｍの範囲の開口を備えたサブ構造物の形成を可能にする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の装置。
【請求項６】
前記サブ構造物は、０．１〜５μｍの範囲のフィラメントを有し、前記フィラメントは、モノフィラメントまたはマルチフィラメントである、請求項５に記載の装置。
【請求項７】
前記サブ構造物は、生物学的ポリマーまたは合成ポリマーのサブ構造物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の装置。
【請求項８】
前記ポリマーサブ構造物は、フィブリン、血漿、多血小板血漿、コラーゲン、血清成分、高分子電解質、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、ポリグルコース、キトサン、アルギン酸塩、高分子電解質、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリグルコン酸、または、これらの混合物の少なくとも１つを備える、請求項７に記載の装置。
【請求項９】
前記形状記憶基部構造物は、形状記憶および／または弾性の材料を備える、請求項１〜８のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１０】
前記材料は、形状記憶金属合金材料、ステンレス鋼、ポリマー形状記憶材料、ポリグルコン酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびコラーゲンからなる群から選択される、請求項９に記載の装置。
【請求項１１】
前記基部構造物は、１０ｎｍ〜１０００μｍの範囲のフィラメントを有し、前記フィラメントは、モノフィラメントまたはマルチフィラメントである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１２】
前記基部構造物は、組まれる、織られる、発泡される、および／または、編まれる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１３】
前記装置は、針（４）を受け取るように適合されたレセプタ端（３）と前記針（４）の端を位置決めするように適合された位置決め端（５）とを有する略円錐形の本体部分（１）を備える、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１４】
前記レセプタ端（３）は、前記位置決め端（５）よりも広い、請求項１３に記載の装置。
【請求項１５】
前記装置は、前記レセプタ端（３）で多数の別々の穿刺点（６）から針（４）を受け取ることができ、前記レセプタ端（３）の各穿刺点（６）から前記本体部分（１）の前記位置決め端（５）へ針（４）をガイドすることができる、請求項１３または１４に記載の装置。
【請求項１６】
前記装置は、前記レセプタ端（３）で多数の別々の穿刺点（６）から針（４）を受け取ることができ、前記レセプタ端（３）の各別々の穿刺点（６）から各穿刺点（６）用の別々の位置決め端（５）へ、それぞれ針（４）をガイドすることができる、請求項１３に記載の装置。
【請求項１７】
前記装置は、使用していないときには、前記装置を通って流体が流れるのを防止するように作用する開閉機構をさらに備える、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１８】
前記開閉機構は、針（４）が前記本体部分位置決め端（５）内に導入され、そして前記本体部分位置決め端（５）にかかるときに、開くように適合されている、請求項１７に記載の装置。
【請求項１９】
前記開閉機構は、弁である、請求項１７に記載の装置。
【請求項２０】
前記装置は、前記位置決め端（５）で移植片（８）へ接続される、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の装置。
【請求項２１】
前記装置は、前記位置決め端（５）でステント（９）へ接続される、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の装置。
【請求項２２】
前記装置は、前記位置決め端（５）でパーマネントカテーテル（１０）に接続される、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の装置。
【請求項２３】
先の請求項のいずれか１項に記載の埋め込み型アクセス装置を準備するための方法であって、
１〜３０μｍの範囲の開口を備えたサブ構造物を準備するために、サブ構造物を基部物質に接着させることによって前記装置を準備することと、その後、
前記準備された装置でおよびこれの中で、組織細胞、結合組織細胞、正常なヒト皮膚線維芽細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞、および／または、幹細胞の培養を、開始することと、
の各ステップを特徴とする方法。
【請求項２４】
前記サブ構造物は、フィブリン、血漿、多血小板血漿、コラーゲン、血清成分、高分子電解質、高分子電解質、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、ポリグルコース、キトサン、アルギン酸塩、高分子電解質、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリグルコン酸、または、これらの混合物の直接接着を備える、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記基部構造物は生物由来物質で処理され、前記サブ構造物の結合および形成を高める、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記生物由来物質は、血漿または多血小板血漿（ＰＲＰ）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
幹細胞またはこれの派生浮遊物または成長因子を、前記サブ構造物を準備するときに、または、組織細胞、結合組織細胞、正常なヒト皮膚線維芽細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞および／または幹細胞の培養を開始するときのいずれかで、加える、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、埋め込み型アクセス装置およびこれを準備するための方法に関する。より詳細には、器官および脈管系に経皮的アクセスを形成するための埋め込み型医療機器に関する。
【背景技術】
【０００２】
先行技術内に、数種類の異なる経皮的血管アクセスシステムが開示されており、そのうちのいくつかは、国際公開公報第０１／０３２１４１号、国際公開公報第９７／０４７３３８号、国際公開公報第００／４０２８２号、国際公開公報第９９／０２０３３８号、国際公開公報第９８／３１２７２号、国際公開公報第９８／５１３６８号、国際公開公報第９９／３４８５２号、米国特許第４，３２１，９１４号および米国特許第４，５４３，０８８号に開示されている。しかし、これらの多くは、相反する重要な結果で臨床診療に入っている。上がっている主要な問題は、この状況、すなわち、感染、バイオフィルム、日常的に使うには高い繰り返し使用後の装置故障がある。
【０００３】
先行技術の欠点は、明らかに、感染のリスク、主に移植片のまわりのポケット感染のリスクが高まることに関連している。穿刺が繰り返されるため、皮膚の一体性が消散し、バクテリアが、人工的な装置と囲繞する皮膚との間の空間に侵入することができる。炎症過程が開始した場合には、線維症反応が高まり、したがって、移植片のまわりに線維性被膜が形成される。バクテリアは、経時的に、線維性被膜と移植された装置の表面との間の中間段階を満たし、バイオフィルムが展開しており、これが最終的に、繰り返し発生する深刻な感染症を招く。これは、抗生物質または消毒流体を直接注入することによって治療することができるだけである。基本的に、人々は、主要な創部ケアのために加えられるものとして洗浄技術を使用しており、例えば、抗生物質または例えばタウロリジンを含む流体を加えることによる。感染のハイリスクおよびバクテリアの沈着のため、装置内の凝固のリスクもまた上昇している。これらの装置に依存している患者は、激しい感染合併症、例えば、長期入院または患者の死亡さえ招くこともある敗血症にかかる大きなリスクにさらされている。加えて、通常、このようなアクセス装置は、血液アクセス用の血管代替物すなわち新しいアクセス構造物用の血管部位が使い果たされており且つ救命体外治療用に必要な血液アクセスを得るためにポートシステムの形成が究極的な解決法である患者に使用される。問題が発生する場合には、経皮的血管アクセスシステムを除去しなければならないという大きなリスクがあり、これは、さらなる体外治療をより困難にするかまたは不可能にさえする。
【０００４】
したがって、これらのシステムの主な問題は、（ｉ）これらの装置を配置する手順が困難であり、抗生物質および消毒剤のアクセス、コミッタント(committant)および予防的な使用または大手術の見直しを頻繁に必要とし、（ｉｉ）感染が容易に発生し、特に、装置のまわりにポケット感染が容易に発生し、（ｉｉｉ）一貫性のないケア衛生があり、（ｉｖ）比較的複雑な接続手順を必要とすることである。最新式の装置には、ルーチンの且つ医学上容認可能なアクセスを可能にする重要な生物学的プロセスが欠けていることは明らかである。これらの感染症は洗浄または抗生物質によって治療可能であるが、これは、消毒が繰り返されることによって、皮膚の糜爛、損なわれた創傷治癒、外傷治療、および、皮膚損傷を引き起こし、感染、不良治癒、その後の皮膚の糜爛等の悪循環に入る。
【特許文献１】国際公開公報第０１／０３２１４１号
【特許文献２】国際公開公報第９７／０４７３３８号
【特許文献３】国際公開公報第００／４０２８２号
【特許文献４】国際公開公報第９９／０２０３３８号
【特許文献５】国際公開公報第９８／３１２７２号
【特許文献６】国際公開公報第９８／５１３６８号
【特許文献７】国際公開公報第９９／３４８５２号
【特許文献８】米国特許第４，３２１，９１４号
【特許文献９】米国特許第４，５４３，０８８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の１つの目的は、皮膚の一体性を保存し、それによってポケット感染の主たる問題を回避し、これによって、明確且つ有利なレベルで悪循環を断ち切る装置を提供することである。本発明は、埋め込み型アクセス装置に関する。本発明にしたがって、装置は、細胞接着、細胞移植および増殖に適したサブ構造物を備えた形状記憶基部構造物を備え、この装置は、流体をヒトまたは動物の身体内にまたは当該ヒトまたは動物の身体から移入するために使用することができる。本発明にしたがって、形状記憶基部構造物は、サブ構造物と一緒に、細胞をアクセス装置に且つこれの中に三次元固定し一体化するのを可能にする。サブ構造物は、加速したかまたは通常の創傷治癒プロセスをサポートするように設計されている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一実施形態において、上記装置は、少なくとも３０μｍから大きくても１０ｍｍの範囲の開口を備えた基部構造物を有する。別の実施形態において、上記開口は、大きくても３ｍｍであり、さらに別の実施形態では、大きくても３００μｍである。
【０００７】
別の実施形態において、上記基部構造物は、１〜３０μｍの範囲の開口を備えたサブ構造物の形成を可能にし、一実施形態では、上記サブ構造物は、０．１〜５μｍの範囲のフィラメントを有し、フィラメントは、モノフィラメントまたはマルチフィラメントである。
【０００８】
さらなる実施形態において、上記サブ構造物は、生物学的ポリマーまたは合成ポリマーのサブ構造物であり、上記ポリマーサブ構造物は、フィブリン、血漿、多血小板血漿、コラーゲン、血清成分、高分子電解質、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、ポリグルコース、キトサン、アルギン酸塩、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリグルコン酸、または、これらの混合物の少なくとも１つを備える。（例えば、血漿または多血小板血漿から形成されたフィブリンネット、または、前駆物質成分から形成されたフィブリンネット）
別の実施形態において、サブ構造物用の上記ポリマー材料は、典型的な結合組織成分例えばラミニン、デコリン等と混合することができる。
【０００９】
一実施形態において、上記形状記憶基部構造物は、形状記憶および／または弾性の材料を備える。この材料は、形状記憶材料、例えば、形状記憶金属合金材料、ステンレス鋼、ポリマー形状記憶材料、ポリグルコン酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびコラーゲンからなる群から選択される。
【００１０】
さらに、上記基部構造物は、１０〜１０００μｍの範囲のフィラメントを有し、これらのフィラメントは、モノフィラメントまたはマルチフィラメントである。さらなる実施形態において、上記基部構造物は、組まれる、織られる、発泡され、そして／または編まれる。
【００１１】
一実施形態において、上記装置は、針を受け取るように適合されたレセプタ端と上記針の端を位置決めするように適合された位置決め端とを有する略円錐形の本体部分を備える。さらなる実施形態において、上記レセプタ端は、上記位置決め端よりも広い。
【００１２】
一実施形態において、上記装置は、レセプタ端で多数の別々の穿刺点から針を受け取ることができ、レセプタ端の各穿刺点から本体部分の位置決め端へ針をガイドすることができる。
【００１３】
別の実施形態において、上記装置は、さらに、レセプタ端で多数の別々の穿刺点から針を受け取ることができ、レセプタ端の各別々の穿刺点から各穿刺点用の別々の位置決め端へ、それぞれ針をガイドすることができる。
【００１４】
一実施形態において、上記装置は、使用していないときには、装置を通って流体が流れるのを防止するように作用する開閉機構をさらに備える。
【００１５】
さらなる実施形態において、上記開閉機構は、針が上記本体部分位置決め端内に導入され、そして上記本体部分位置決め端（５）にかかるときに、開くように適合されている。一実施形態において、上記開閉機構は、弁として作用している。
【００１６】
一実施形態において、上記装置は、位置決め端で（血管または人工の）移植片へ接続される。
【００１７】
別の実施形態において、上記装置は、位置決め端で血管ステント構造物へ接続される。
【００１８】
さらに別の実施形態において、上記装置は、位置決め端でパーマネントカテーテルチューブ（単／複）に接続される。
【００１９】
本発明は、さらに、上記実施形態のいずれにしたがった埋め込み型アクセス装置を準備するための方法に関する。本発明にしたがって、方法は、ａ）１〜３０μｍの範囲の開口を備えたサブ構造物を準備するために、サブ構造物を基部構造物に接着させることによって装置を準備することと、その後、ｂ）準備された装置で、および当該装置の中で、組織細胞、結合組織細胞、正常なヒト皮膚線維芽細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞、および／または、幹細胞の培養（且つ、適切な混合培養）を、開始することと、の各ステップを包含する。この方法の一実施形態において、上記サブ構造物は、フィブリン、血漿、多血小板血漿、コラーゲン、血清成分、高分子電解質、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、ポリグルコース、キトサン、アルギン酸塩、高分子電解質、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリグルコン酸、または、これらの混合物の三次元ネットワークとして直接接着を備える。これによって、三次元のおよび機能的なネットワーク構造物が構造され、組織細胞生物学および必要な生体力学的特性を可能にする。
【００２０】
別の実施形態において、方法は、さらに、装置を準備する前に、基部構造物が生物由来物質で処理され、サブ構造物の結合および形成を高めることを備える。一実施形態において、上記生物由来物質は、血漿または多血小板血漿（ＰＲＰ）である。
【００２１】
さらに別の実施形態において、方法は、さらに、幹細胞およびこれの派生浮遊物または成長因子を、上記サブ構造物を準備するときに、または、組織細胞、結合組織細胞、正常なヒト皮膚線維芽細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞および／または幹細胞の培養を開始するときのいずれかで、加えるステップを備える。一実施形態において、幹細胞は、間充織幹細胞および／または血管前駆細胞である。
【００２２】
本発明にしたがった装置は、パーマネント装置として皮下に埋め込まれるべきものである。他のポートシステムと比較して、本発明にしたがった移植片は、完全に且つ生物学的に適合して結合組織内に一体化され、細胞は、アクセス装置を組織物質で満たさせるためにアクセス装置全体内で生長する。これを達成するために、アクセス装置は、移植前に、自家結合組織細胞か（間充織）幹細胞または両方が播種される。自家皮膚細胞か（間充織）幹細胞の一体化のため、生体適合性および組織機能性に関する様々な改良が実行され、例えば、免疫反応のリスクを劇的に減少することができ、移植片より上の異なる皮膚および組織層における皮膚の機能的混乱を防止することができる。これは、皮膚の自然な保護機能、すなわち、抗菌性バリア機能の機械的特性または分泌が、再制定されてもよい。
【００２３】
定義
形状記憶という用語は、物理的理由によってか、または他の種類の理由によってかのいずれかで、幾何学的再配向後に、再配向力が除去されたか作動されなくなったときに、元々の形状を回復する材料から作られることを意味すると意図されている。それに応じて、これは、再配向力の除去後に元々の形状を回復する弾性材料でありえ、且つ、例えば温度変化のため広くなったり縮んだりする形状記憶合金材料でありえ、または、これらの組み合わせでありえる。
【００２４】
生物学的ポリマーサブ構造物という用語は、組織細胞、結合組織細胞、正常なヒト皮膚線維芽細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞および／または幹細胞の接着に適したサブ構造物を形成することができる生物学的ポリマー材料を意味すると意図されている。生物学的ポリマー材料の例として、フィブリン、血漿、多血小板血漿、コラーゲン、血清成分、高分子電解質、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、ポリグルコース、キトサン、アルギン酸塩、または、これらの混合物が挙げられる。
【００２５】
合成ポリマーサブ構造物という用語は、組織細胞、結合組織細胞、正常なヒト皮膚線維芽細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞および／または幹細胞の接着に適したサブ構造物を形成することができる合成ポリマー材料を意味すると意図されている。合成ポリマー材料の例として、高分子電解質、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびポリグルコン酸が挙げられる。
【００２６】
基部構造物およびサブ構造物の両方は、生体分解性の、または、生体安定性の、または、生体不活性のポリマーから作ることができる。
【００２７】
血漿という用語は、遠心分離または濾過によって細胞血液成分から分離された、すなわち、全血から全細胞部分を除去した、血漿タンパク部分を意味すると意図されている。
【００２８】
多血小板血漿（ＰＲＰ）という用語は、遠心分離または濾過によって白血球および赤血球の部分から分離された血小板をさらに含む血漿タンパク部分を意味すると意図されている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明にしたがったアクセス装置は、ヒトまたは動物の身体内にまたは当該ヒトまたは動物の身体から流体を移入する際にまたは体内に流体を移送する際に使用されるために、細胞接着、細胞移植および増殖に適切なサブ構造物を備えた形状記憶基部構造物から構成されている。
【００３０】
形状記憶構造物または弾性構造物を備えた基部構造物は、穿刺プロセス後に、すなわち針の除去の後に、皮膚構造が自動的に当初の構造に戻るという固有の機構を可能にする。これによって、皮膚機能および創傷治癒が高められ、針除去後の出血が減少し、血管アクセスシステムを治療的に加えることまたは必要性に関しては、バクテリアの侵入および線維性瘢痕組織形成のリスクの減少を達成することができる。さらに、形状記憶基部材料によって皮膚がサポートされ、これは、日常生活および添加中の操作および動きに対する組織の抵抗を高める。
【００３１】
基部構造物の材料は、形状記憶材料、弾性形状記憶材料または弾性材料でありえる。これは、針を中に導入するのを可能にしなければならないが、もっとも重要なことは、基部材料が、針の除去後にアクセス装置の幾何学的形状を回復するために、駆動力または能力を有するという特徴を有することである。幾何学的形状を回復するためのこの駆動力または能力によって、基部構造物は、組織治癒および血管再生フェーズにおける再建中に、すなわち、穿刺中に形成された開口、チャネルを閉鎖する間に、組織の機械的一体性を引き継ぐ。
【００３２】
基部構造物に、サブ構造物が形成されるべきである。このサブ構造物は、基本的に２つの機能を提供し、すなわち、１）ネットワークにおける開口の間の距離を調整し、且つ、２）固定、細胞サポート、および、細胞の侵入、および、複数の偽足形成を可能にし、本発明にしたがったアクセス装置に且つこれの中に細胞の三次元（３Ｄ）固定または一体化を得る。
【００３３】
それに応じて、本発明にしたがったアクセス装置は、基部構造物と、アクセス装置を組織材料で満たさせるために全アクセス装置内に細胞を生長させることができるサブ構造物と、を有する。このようにして、穿刺は針で行われ、針は、アクセス装置内の組織を通って血液アクセス用の位置決め端へガイドされ、針の除去後に、形状記憶基部構造物は、皮膚組織が元々の幾何学的形状を回復するのを助け、それによって、穿刺中に組織に形成されたチャネルを閉鎖する。
【００３４】
本発明にしたがったアクセス装置は、永久的な装置として皮下に埋め込まれるべきである。装置（１）は、好ましくは、皮下組織層に埋め込まれ、脈管系（２）に入るように配列される。例えば、図３および４を参照のこと。上記に述べられたように、上記装置（１）は、針（４）を受け取るように適合されたレセプタ端（３）と上記針（４）の端を位置決めするように適合された位置決め端（５）とを備えた本体部分を有する。
【００３５】
本発明にしたがったアクセス装置の一実施形態において、レセプタ端（３）は、多数の別々の穿刺点（６）から針（４）を受け取るように適合されている。追加の実施形態でさえ、これは、複数のアパーチャ（６）を含むエントリー部材（１１）を有することによって提供され、各アパーチャ（６）は、上にかぶさっている皮膚を通って進んだ針（４）を受け取るように適合されている。一実施形態において、このエントリー部材は、複数のアパーチャ（６）を有するシート（１１）である。
【００３６】
上記位置決め端（５）は、異なるやり方で脈管系（２）に入るように配列されることができる。一実施形態において、装置の位置決め端（５）は、ある種の固定メッシュ（７）と一体化され、これは、移植片（８）の外側表面に固定される。図４参照。別の実施形態において、位置決め端（５）は、脈管系（２）でステント（９）の形態である固定メッシュと一体化されている。図５参照。本発明にしたがった装置におけるガイドされた通路は、このような固定メッシュと組み合わされて、移植片または血管を穿刺するために針が常に正しい道を見出すことを保証する。本発明にしたがった別のアクセス装置において、アクセス装置の位置決め端（５）には、パーマネントカテーテル（１０）が接続される。図６および図３（左）参照。当然ながら、本発明にしたがったアクセス装置、パーマネントカテーテル、ステントおよび移植片と、他の組み合わせを行うこともできる。
【００３７】
本発明にしたがったアクセス装置の開閉機構は、もっとも簡単なバージョンでは、穿刺力がアクセスを開け、次いで、力が消失するときに、すなわち、穿刺針が除去されるときに、アクセスを閉じるものでありえ、次いで、弁を含むこともできる。
【００３８】
穿刺は、曲がることができる特別な針で行うことができ、それによって、脈管系へ畝を付けるチューブまたは煙道型の接続上で、脈管系へのアクセスが達成される。一実施形態において、穿刺針は、鈍い端を有し、問題なく、ガイドされた通路を見出すかこれを通り、アクセスシステムの骨格構造には損傷を与えず、皮膚細胞および小さな血管には多すぎる傷害／ストレスを生じさせない。下記に、試験方法および結果があり、本発明にしたがったアクセス装置で使用することができるアクセス材料上の細胞接着および生長の接着および増殖を実証し評価しており、これらの試験の結果は図１および図２に示されている。
【００３９】
試験方法および結果
接着および増殖の実証および評価
アラマーブルー（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ）（商標）試験の記載
アラマーブルー（商標）は、増殖および細胞毒性のインジケータとして使用することができる。アラマーブルー（商標）の添加は、試験方法の範囲へ異なるパラメータを調整する必要がある。これらのパラメータは、アラマーブルー（商標）濃度、細胞濃度およびインキュベーションの時間である。測定方法の定義のために、数回の実験が行われ、アラマーブルー（商標）の減少の時間的経過／動力学が評価された。
【００４０】
細胞集団の異なる実験および顕微鏡的制御のため、アラマーブルー（商標）による増殖試験方法の実行は、細胞濃度およびインキュベーション期間およびアラマーブルー（商標）濃度に関して、下記のように特定された。
【表１】
2008543486.tif 000002
【００４１】
ＭＴＴ試験の記載
ＭＴＴ試験は、着色不溶性ホルマザン塩の形成に基づいた急速且つ感度がよい比色分析である。生成されたホルマザンの量は、細胞数に正比例し、したがって、これを使用して細胞の生存能力および増殖を測定することができる。アッセイは、ミトコンドリアデヒドロゲナーゼ酵素の能力に基づいており、還元反応によって黄色の水溶性テトラゾリウム塩（ＭＴＴ）を紫色の不溶性ホルマザン生成物に転換する。これは、測光分析を可能にする。
【００４２】
まず、評価するために線維芽細胞の異なる細胞濃度および異なるインキュベーション期間が試験され、その範囲内で表面の細胞の定着を決定することができる。
【００４３】
比色分析測定の結果は、表２に挙げられている。
【００４４】
ＭＴＴによるＮＨＤＦの増殖の証拠、ＭＴＴは、２４時間後、４８時間後および７２時間後に加えられた。
【表２】
2008543486.tif 000003
【００４５】
測定された値は、光学濃度が、上昇する細胞濃度とともに増加していることを示している。線維芽細胞の細胞サイクルは、約２０〜２４時間であり、最適条件下の細胞は、分割されていなければならない。２４時間および４８時間のインキュベーション期間の間で、測定された値の有意な変化はない。７２時間のインキュベーション期間の後で、細胞は、数および増殖シグナルが増加した。理由は、細胞が、播種後に通常の細胞サイクルへ適応する前に、適合期間が必要であるからである。ＭＴＴによるさらなる増殖試験用に、４０００〜６０００細胞／１００μｌの間の細胞濃度が播種される。その範囲内で、はっきりした信号になり、これは、ＯＤ（光学濃度）コースの直線区域内である。
【００４６】
ニチノール（商標）における線維芽細胞の生長（実験からの結果）
機械特性および高い生体適合性のため、ニチノール（商標）は、本発明にしたがったアクセス装置の基部構造物用の第１の試験のための第１の選択であった。材料生体適合性のさらなる特性のために、細胞接着および増殖に関する試験が行われた。さらに、２つの機能要素、すなわち機械弾性および超弾性を組み合わせる必要であるが、依然として組織環境における十分且つ機能的な一体化が達成されなければならない。下記の実験は、問題への可能な解決法を示す。
【００４７】
材料は、異なるヒト血漿成分がコーティングされ、細胞接着および増殖に対するこれらのコーティングの影響に関する情報を得る。コーティングの１つの可能性は、創傷治癒プロセスをシミュレートするためにフィブリンネットを基部構造物にもたらすことである。フィブリンの形成は、ヒト多血小板血漿（ＰＲＰ）における凝固の活性化を通して刺激される。これは、動的プロセスの間中続行し、温度、凝固、時間、カルシウムの存在および血漿の血小板濃度に関して、最適化されなければならない。試験されたコーティングの実行は、下記に記載されている。
【００４８】
多血小板血漿（ＰＲＰ）：
ＰＲＰの血小板数は、１０００００血小板の総数へ血漿で稀釈された。ニチノール（商標）試料は、３７°Ｃ／７％ＣＯ2で１時間の間、調整されたＰＲＰ内でインキュベートされる。
【００４９】
血漿：
ニチノール（商標）試料は、３７°Ｃ／７％ＣＯ2で１時間の間、血漿内でインキュベートされる。
【００５０】
フィブリンネットコーティング：
１０００００の血小板数を備えた調整されたＰＲＰが、ニチノール（商標）試料に加えられ、３７°Ｃ／７％ＣＯ2で３０分の間、インキュベートされた。次いで、塩化カルシウムを加えることによって、凝固が開始した。凝固プロセスが開始した４〜１０分後に、三次元フィブリン構造物の形成が発生し、次いで、異なるレベルでクエン酸ナトリウムで停止した。
【００５１】
血清コーティング：
血清は、凝固因子を含まない。したがって、ヒトの全血はチューブで移入され、これは、殺菌ガラス玉を含む。凝固のイニシエータとして知られるガラス玉は、血液に大きな表面を提供し、これは、凝固手順を開始する。全血を備えたチューブは、室温で１時間、氷上で１時間インキュベートされた。遠心分離後に、表面に浮かんだものすなわち血清は、保管のためにまたはコーティング用に直接使用するために、新しいチューブ内に移入された。
【００５２】
コラーゲンコーティング：
コラーゲンは、酸性溶液内で可溶性であるだけであり、中性ｐＨ値で重合される。コラーゲン溶液は、ニチノール（商標）試料に加えられ、水酸化ナトリウムで中和され、３７°Ｃ／７％ＣＯ2で１時間の間、インキュベートされた。
【００５３】
接着および増殖試験方法用に、コーティングされたニチノール（商標）およびコーティングされていないニチノール（商標）のメッシュが試験装置に、例えばチューブまたはマルチウェルプレートに移入された。すべてのニチノール（商標）試料は、コーティングされる前に、洗浄され、蒸気消毒された。ニチノール試料を備えた試験装置内に、細胞濃度の線維芽細胞が与えられた。高増殖速度用の陽性対照(positive control)として、組織培養プレートの繊維芽細胞が使用された。
【００５４】
非毒性代謝プローブとしてアラマーブルー（商標）を含むインジケータ溶液が、ニチノール（商標）試料に線維芽細胞をもたらした後、例えば２４時間および４８時間で、検査試料にもたらされ、さらに２４時間インキュベートされた。
【００５５】
図１には、基板上の接着線維芽細胞の数を、ニチノール（商標）材料上にヒト血漿化合物をコーティングすることによって、有意に増加することができることが示されている。これは、アラマーブルー（商標）のより高い減少速度によって示されている。最良の結果は、フィブリンコーティングを備えたニチノール（商標）プレートで決定された。
【００５６】
図２には、ニチノール（商標）メッシュにおけるＮＨＤＦの増殖が示されている。増殖の１５日後に、ニチノール（商標）メッシュ上の細胞用に高い減少速度がある。これは、ＮＨＤＦ細胞を導入する前に装置にサブ構造物が存在するときに、装置に正常なヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）、すなわち正常なヒトの皮膚細胞を、増殖／一体化することが可能であることを意味する。
【００５７】
しかし、１５日のインキュベーション期間後に、アラマーブルー（商標）の減少速度は、ニチノール（商標）プレートに関してニチノール（商標）メッシュとほぼ同一である（コーティングのないメッシュを除く）。これは、三次元ニチノール（商標）装置上でヒト皮膚細胞を増殖／一体化することが可能であること、そしてサブ構造物が異なる調製法によって展開できることを意味する。
【００５８】
装置のコーティングは、移植装置に線維芽細胞の高い増殖速度を得るために非常に重要であり、これが、ヒトの身体内にアクセス装置の全体的一体化を達成するために非常に重要であることも明らかである。
【００５９】
ニチノール（商標）メッシュにおける線維芽細胞生長の識別および視覚化
ニチノール（商標）メッシュ上に線維芽細胞の生長をよりはっきり識別し視覚化するために且つ試料から三次元レイアウトを得るために、共焦点レーザ走査顕微鏡（ＣＬＳＭ）を実行する前に、蛍光顕微鏡下で特定の免疫染色法が実行され、評価された。
【００６０】
図７は、ニチノール（商標）メッシュ上の細胞が、フィブリンコーティングされたニチノール（商標）メッシュ上でよく増殖することを示している（ニチノール黒、線維芽細胞グレー）。
【００６１】
本明細書に記載された現在好ましい実施形態に対する様々な変更および修正は、当業者には明らかであることを理解すべきである。このような変更および修正は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく且つその付随する利点を減少することなく、行うことができる。したがって、このような変更および修正は、添付の特許請求の範囲によってカバーされることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】代謝活性として測定された異なってコーティングされたニチノールプレート上の接着された正常なヒト皮膚線維芽細胞の数を示す。
【図２】代謝活性として測定された異なってコーティングされた且つコーティングされていないニチノール（商標）メッシュにおける正常なヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）の接着を示す。
【図３】２つの異なる技術で皮下組織に埋め込まれた本発明にしたがったアクセス装置を示す。
【図４】移植片の外側表面に一体化され固定された本発明にしたがったアクセス装置の一実施形態を示す。
【図５】血管のステントに一体化され固定された本発明にしたがったアクセス装置の一実施形態を示す。
【図６】パーマネントカテーテルを備えた本発明にしたがったアクセス装置の一実施形態を示し、これは、血管に直接入る。
【図７】共焦点レーザ走査顕微鏡によって分析されたフィブリンコーティングされたニチノール（商標）メッシュにおけるニチノール（商標）メッシュ増殖ウェル上の細胞を示す（ニチノール黒、繊維芽細胞グレー）。この図はまた、開示された構造物の細胞一体化生体機能三次元構造物も描いている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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