(57)【要約】  本発明は、活性成分として、２０−７０重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸エステルおよび4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸エステルを含む海水魚油濃縮物中の、２０−８５重量％のω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステル、さらに、ｌ−リジンまたはその塩、場合によって、亜鉛塩、セレンまたはセレン化合物、および添加剤および担体成分を含む、新規な抗ウイルス性および免疫刺激性の医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分として、２０−７０重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸エステルおよび4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸エステルを含む海水魚油濃縮物中の、２０−８５重量％のω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステル、さらに、ｌ−リジンまたはその塩、場合によって、１から１０重量％、好ましくは２から６重量％の亜鉛塩、０．０５から０．３０重量％、好ましくは０．１から０．２重量％の、しかし７５μｇ以下の、セレンまたはセレン化合物、およびいくつかの添加剤または担体成分を含むことを特徴とする、抗ウイルス性および免疫刺激性の医薬組成物。
【請求項２】
活性成分として、好ましくは３０から７０重量％、より好ましくは４０から６０重量％、最も好ましくは５５から６０重量％の、魚油濃縮物を含むω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステルを含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物であって、２０から７０重量％、好ましくは２５から４５重量％、より好ましくは３０から４０重量％、最も好ましくは３１から３５重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸、および２０から７０重量％、好ましくは２５から４５重量％、より好ましくは３０から４０重量％、最も好ましくは３１から３５重量％の4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸が存在する、医薬組成物。
【請求項３】
１級、２級または３級アルコールでエステル化されたω−３−ポリ不飽和脂肪酸、好ましくは、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸エチルエステルまたはω−３−ポリ不飽和脂肪酸グリセロールエステル、およびｌ−リジン塩としてｌ−リジン塩酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩およびシュウ酸塩、好ましくは塩酸塩を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の製造物。
【請求項４】
亜鉛塩として亜鉛グルコネートまたは亜鉛ラクテートを含むことを特徴とする、請求項１から３に記載の製造物。
【請求項５】
セレン化合物として、天然セレン化合物または天然酵母に組み込まれたセレン化合物を含むことを特徴とする、請求項１から４に記載の製造物。
【請求項６】
医薬としての使用のための請求項１から５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ウイルス感染の治療用医薬組成物の製造のための、２０−７０重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸エステルおよび4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸エステルを含む海水魚油濃縮物中の、２０−８５重量％のω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステル、さらに、ｌ−リジンまたはその塩、場合によっては、１から１０重量％、好ましくは２から６重量％の亜鉛塩、および０．０５から０．３０重量％、好ましくは０．１から０．２重量％の、しかし７５μｇ以下の、セレンまたはセレン化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗ウイルス性および免疫刺激性の医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ω−３−ポリ不飽和脂肪酸、その中でも5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸（以下ＥＰＡ）および4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸（以下ＤＨＡ）が、抗ウイルス作用を示すことは知られている。最初のインビトロ実験（例えば、Antimicrobial Agents and Chemotherapy 12, 523 (1977)参照）は、インビボ動物実験（例えば、米国特許第4513008号参照）および臨床データ（例えば、J. of Immumology 134, 1914 (1985)またはClin. Exp. Immunol. 65, 473 (1986)参照）により確認されてきた。
【０００３】
ｌ−リジンが、インビトロ条件下で、ヒト細胞において単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）の複製を阻害することもまた知られてきた（例えば、J. Vact. 87, 609 (1964)参照）。しかしながら、臨床研究では、ｌ−リジンは、ＨＳＶ感染において、不十分な治療効果しか発揮しないことが確立されてきている（Dermatologica, 156, 257 (1978)参照）。
【０００４】
文献においては、ＨＳＶの複製は、他のウイルス感染と同様に免疫不全を伴うことが、一般に受け入れられている。ＥＰＡおよびＤＨＡ、そして、それらの誘導体が、プロスタグランジン系を阻害することにより免疫系に作用することも知られている。これは、これらの薬剤が、年齢および／または有害な環境効果により惹起される、免疫不全、ある種の自己免疫過程および腫瘍発生を阻害および／または修正する能力があることを意味する（J. of Immunology 134, 1914 (1985)またはImmunology 46, 819 (1982)またはEur J. Clin. Nutr. 56 Suppl. 3, 14-19 (2002)）。
【０００５】
興味深い発見は、ＨＵ特許199775号に開示されており、それによれば、少なくとも２つの二重結合を有するＣ１８から２４の脂肪酸の、アミノ酸（好ましくは、ｌ−リジン、ｌ−チロシン、ｌ−ヒスチジン、ｌ−アラニンまたはｌ−オルニチン）の塩は、抗ウイルス性組成物における活性成分として好適である。この情報は、インビトロ実験における、かかる組成物のウイルス増殖阻害作用によって支持された。最も重要な結果は、ポリ不飽和脂肪酸のチロシン塩によって報告された。この発明の不利な点は、塩形成がしばしばのりのような生成物となり、精製および特徴付けが難しいことであった（例えば、引用された特許明細書の実施例１０−１４を参照）。比較的容易に結晶化する塩でさえ、決定されない融点を有した。したがって、言及した特許明細書によって開示される方法で得られた生成物は、しばしば、純粋でないことおよび活性成分の不確かな質を示す、多様な着色を示した。
【０００６】
上記方法の不利な点を排除することは、ＨＵ特許209,973号の執筆者により試みられた。この方法において、脂肪酸のアミノ酸塩の代わりに、ｌ−リジン、ｌ−チロシンまたはそれらの誘導体が、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸またはそれらの塩と、モル比１：４−４：１で混合された。このように得られ、活性成分として提供される混合物は、変換されて−薬剤製造の標準的な手法を用いて−医薬組成物にされる。これらの組成物は、記載されているように、免疫刺激作用を示したが、欠点として、２つの最も有効な組成物（ｌ−チロシン−脂肪酸およびｌ−リジン１水和物−脂肪酸混合物）でさえ、抗酸化剤によって安定化される必要がある。安定化剤の使用にもかかわらず、我々の実験で示されているように、上記特許の明細書にしたがって製造された混合物は、十分な安定性を有する医薬組成物のための成分としては不適であることが証明された。
【０００７】
臨床サンプルから単離されたＨＳＶウイルスが、亜鉛塩とのインビトロ処置によりある程度不活性とされ得ることを示すデータが存在する。不活性化の度合いは、ＨＳＶの種、亜鉛塩の濃度および処置の期間に依存する（Max Arens and Sharon Travis: J. of Clinical Microbiology, 38, 1758-1762 (2000)）。
【０００８】
セレンは、酵素グルタチオンペルオキシダーゼの活性化、およびそれによる酸化ストレス状態における重要な役割とは別に、セレンタンパク質の形態で、ウイルス複製に作用することができる。セレンの導入で、ＨＩＶウイルスのインビトロ阻害が、慢性的に感染されたＴ−リンパ球で示された（Hori et al.: AIDS Res. Human Retroviruses 13,:1325-32 (1997)）。本発明の目的は、増強された作用を有する医薬組成物の製造であり、それは、従前の方法が有する、ラージスケールの技術、組成物および安定性に関する全ての問題を有しないだけでなく、有益な付加的利益を提供する。
【発明の開示】
【０００９】
本発明は、上記目的が、もし、遊離ω−３−ポリ不飽和脂肪酸−つまり、ＥＰＡおよびＤＨＡ−の代わりに、それらのエステルが使用されれば、実現され得ること、さらには、これらのエステルの効果が、ｌ−リジンまたはその塩の添加により、場合によっては、亜鉛塩またはセレンまたはセレン化合物の添加により、相乗的に増強されることの認識に基づいている。予想外に、この方法で得られる組み合わせは、既知の組成物に比較して、より毒性が低く、効果が増強されており、換言すれば、上記に開示される発明に基づき製造される組み合わせの治療係数は、いずれの既知の同様の組成物よりも、より好適である。
【００１０】
したがって、本発明は、活性成分として、２０−８５重量％のω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステル、特に、5,8,11,14,17-エイコサペンタエン酸（eicozapentaenic acid）および4,7,10,13,16,19-ドコサヘキサエン酸（docozahexaenic acid）のエステルを含む20-70重量％の魚油濃縮物、ｌ−リジンまたはその塩、場合により亜鉛塩、セレンまたはセレン化合物、並びに添加剤および担体を含む、新規な抗ウイルス性で、そして免疫刺激性の医薬組成物に関する。
【００１１】
本発明による生成物は、その好適な実施態様の１つにおいて、ｌ−リジン塩、ｌ−リジン塩酸塩と、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸を、１級、２級または３級アルコール類で形成されるエステル形態で、好ましくはエチルまたはグリセロールエステル類として、含む。
【００１２】
魚油濃縮物を含むω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステルの量は、好ましくは、３０から７０重量％、より好ましくは４０から６０重量％、最も好ましくは５５から６０重量％であり、ここで、特に、２０から７０重量％、好ましくは２５から４５重量％、より好ましくは３０から４０重量％、最も好ましくは３１から３５重量％の5,8,11,14,17-エイコサペンタエン酸および２０から７０重量％、好ましくは２５から４５重量％、より好ましくは３０から４０重量％、最も好ましくは３１から３５重量％の4,7,10,13,16,19-ドコサヘキサエン酸が提供される。
【００１３】
リジン塩としては、リジン塩酸塩のみでなく、医薬的に許容可能なリジン塩の全てが言及され得る。限定的でない例は、リジンフマル酸塩、マレイン酸塩およびシュウ酸塩である。リジン塩の量は、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステルの等モル量の１／４から４倍量の範囲であり得る。
【００１４】
亜鉛塩の濃度は、１から１０重量％、好ましくは２から６重量％である。
【００１５】
本発明の他の実施態様において、組成物は、亜鉛塩として亜鉛グルコネートまたは亜鉛ラクテートを、セレン化合物として１またはそれ以上の天然酵母に組み込まれた天然のセレン化合物を含む。
【００１６】
本発明で記載される組成物の成分として適用されるω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステルは、主として北海の魚から得られる油に見出すことができる。かかる魚油から、既知の方法により（例えばJ. Am. Chem. Soc, 59, 117 (1982)参照）、その２０−７０％が5,8,11,14,17-エイコサペンタエン酸および4,7,10,13,16,19-ドコサヘキサエン酸である、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステルを５０−６５重量％含む魚油濃縮物が製造され得る。
【００１７】
本発明に記載される組成物の他の必須成分は、ｌ−リジンまたはいくつかのｌ−リジン塩、好ましくは酢酸または塩酸塩である（例えば、米国薬局方27-NF22、追補２参照）。
【００１８】
組成物の第三成分は、亜鉛塩、好ましくは亜鉛グルコネートまたは亜鉛ラクテートである（例えば、米国薬局方27-NF22、追補２参照）。
【００１９】
本発明に記載される組成物の、更なるしかしながら任意の成分は、セレン化合物であり、天然酵母に組み込まれているセレン化合物またはいかなる他のセレン化合物であり得る。セレンの濃度は、０．０５から０．３０重量％であり、好ましくは０．１から０．２重量％であるが、７５μｇより多くない。
【００２０】
上記に記載された活性成分は、医薬組成物の製剤において一般に知られている方法を用いて製剤化されることができ、周知の、好ましくは、ソフトゼラチンカプセルに入った製剤化された組成物を得るために、医薬組成物の製剤において一般に知られている方法を用いて製剤化されることができる。添加剤および／または補助物質として、好ましくは、シリカゲル、グリセロール、色素および他の物質を用いることができる。
【００２１】
本発明に記載される組成物の抗ウイルスおよび免疫刺激効果は、以下のように確認される。
【００２２】
Ａ．試験物質および試験方法の記載
Ｉ．試験物質の組成物のコード
ＳＩＮ−Ｅ１：ω−３−ポリ不飽和脂肪酸のｌ−リジン１水和物の塩（ハンガリー特許209,973号の実施例１参照）
ＳＩＮ−Ｅ２：ω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステル＋ｌ−リジンＨＣｌ（本明細書の実施例３参照）
ＳＩＮ−Ｅ３：ω−３−ポリ不飽和脂肪酸エステル＋ｌ−リジンＨＣｌ＋カルシウムグルコネート（本明細書の実施例１参照）
【００２３】
ＩＩ．試験方法
１．サル初代培養腎臓細胞での毒性試験
サル初代培養腎臓細胞を試験物質ＳＩＮ−Ｅ１、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３のあらゆる希釈（１：３、１：１０、１：３０、１：１００）で処理した。３時間のインキュベーションの後、結果として生ずる組織における物質の毒性作用を調べた（Arens, M. and Travis, S.: J. of Clinical Microbiology, 38, 1758-1762 (2000)参照）。
【００２４】
２．試験物質の抗ウイルス作用の検討
サル２次培養腎臓細胞のＳＩＮ−Ｅ１、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３で前処理したウイルスによる感染の検討。
種々の希釈のウイルスを試験物質とともに、それらが１：１の比で混合され、０．５％の希釈に対応するように、１時間インキュベーションした（表１参照）。その後、その前処理したウイルスをサル２次培養腎臓細胞に感染させた。第７日目に、処理していないウイルスと試験物質ＳＩＮ−Ｅ１、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３で前処理したウイルスの両方に対して、顕微鏡で検討することにより、単純ヘルペスウイルスのサル腎臓細胞に対する細胞変性作用を測定した。この試験の目的は、細胞に対する試験物質の直接的な抗ウイルス効果を測定することである（Lawetz, C, Liuzzi, M. : Antiviral Res. 39 (1), 35-46 (1998)参照）。
【００２５】
３．試験物質ＳＩＮ−Ｅ１、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３のウイルス不活性化効果に対する血清タンパク質の作用の検討
項目２で記載した実験で完全な不活性化を示す希釈および次に高い希釈を用いて、実験を１０％子牛血清含む維持培養培地および血清無しのブランクと共に繰り返し、第７日目に、実験を項目２に記載のように評価した。
【００２６】
４．評価
細胞を、倒立顕微鏡を用いて、毒性試験の場合、３時間インキュベーションの後に、そして、抗ウイルス効果の試験の場合、７日後に調べた。形態の変化、細胞壁の空洞、分離並びに損傷を記録した。
【００２７】
Ｂ．薬効試験
１．組織培養における試験物質の毒性検討
組織：サル２次培養腎臓細胞、細胞数は５Ｘ１０６である。
−２倍の連続希釈系列を、３試験物質全てから調製し、該組織に供し、その後３７℃で３時間インキュベーションした。
−ブランクは該組織のみを含んだ。
−３時間後、物質を除去し、１００μｌの２％子牛血清を含むパーカー（Parker）の培地を全てのプレートに添加し、そして形態変化を顕微鏡により記録した。
−３時間後の試験に基づいて、物質ＳＩＮ−Ｅ１は１：３２７６８の希釈で毒性が無く、一方、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３は１：２０４８の希釈で毒性がないことが示された。
−翌日、顕微鏡による試験を繰り返し、同じ結果を得た。
−その後、ＳＩＮ−Ｅ１については１：３２７６８希釈を「濃縮」と呼び、一方、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３については、それは１：２０４８希釈であった（記録された結果を表１に示す）。
【００２８】
【表１】
2008521877.tif 000002
【００２９】
試験の評価：
実施された毒性試験は、明らかに、物質ＳＩＮ−Ｅ１が、物質ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３より、少なくとも１桁毒性が強いことを示した。試験物質ＳＩＮ−１については、標準溶液の１：３２７６８の最終希釈で毒性が消失し、一方、物質ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３については、すでに１：２０４８の最終希釈で消失したことが明らかである。以下の試験の過程において、上記最終希釈を基礎とした。
【００３０】
２．試験物質の抗ウイルス作用の試験
−組織：サル２次培養腎臓細胞、細胞数：５Ｘ１０６
−ウイルスから１０−１−１０−８の希釈を調製し、そして、その感染力価を測定した。表２では、負の対数／０．１ｍｌの感染力価を入れた。
−１：３２７６８の希釈を試験物質ＳＩＮ−Ｅ１から調製し、それぞれ、１：２０４８の希釈を試験物質ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３から調製した。これらの希釈を、「濃縮」と呼んだ。
−試験を１：３、１：１０、１：３０および１：１００の希釈の「濃縮」希釈液で実施した。
−ウイルスおよび試験物質の希釈液を１：１の比で混合した。
−これをその後１時間インキュベーションした。
−その後、組織上の培地を除去し、ウイルスおよび試験物質の希釈液から１００μｌを適当な列に供した。
−続いて、１ｈ、３７℃でインキュベーションした。
−物質を取り除き、２％子牛血清を含むパーカーの培地１００μｌをそれに添加した。
物質を３７℃で維持し、７日に渡って顕微鏡で評価し、処理してないウイルスと比較した。
結果を表２で示す。
【００３１】
【表２】
2008521877.tif 000003
【００３２】
結果の評価
実施された試験は、１：３（１．５ｍｇ／ｍｌ）および１：１０（０．５ｍｇ／ｍｌ）の希釈において、３試験物質全てが、完全にウイルス増殖を阻害したことを示した。１時間以内の部分的不活性化は、ＳＩＮ−Ｅ１およびＳＩＮ−Ｅ２については、１：３０（０．１５ｍｇ／ｍｌ）の希釈でさえ認められ、ＳＩＮ−Ｅ３については、この希釈でさえ完全な阻害が認められ、それはＳＩＮ−Ｅ２および対照の両方に比較して有意であった。ＳＩＮ−Ｅ３については、部分的不活性化が１：１００（０．０５ｍｇ／ｍｌ）の希釈で見出されたが、この結果は、統計的に有意ではない。
【００３３】
３．ＳＩＮ−Ｅ１、ＳＩＮ−Ｅ２およびＳＩＮ−Ｅ３のウイルス不活性化作用における血清タンパク質の作用の検討
実験を項目２で記載したように実施した。
【００３４】
【表３】
2008521877.tif 000004
【００３５】
【表４】
2008521877.tif 000005
【００３６】
試験の評価
試験化合物のヘルペスウイルスに対する不活化活性は、タンパク質の存在によって影響されない、なぜなら、血清不含培地において（表４参照）および１０％子牛血清含有培地の両方において（表３参照）、それは明らかである。
【００３７】
要約すれば、血清タンパク質の影響の試験により、カプシドを有するウイルスの感染が、多様な不飽和脂肪酸組成物により、ウイルスの表面構造の崩壊のために、妨げられ、または完全に取り除かれることを特許請求する文献（例えば、米国特許4,513,008番号、発明者 E. Recivi等参照）における従前のデータに比較して、本特許に保護される組成物は、有意な付加的活性を有することが示された。他の文献のデータ（例えば、Vollenbroich, D. et al.: Biologicals. Sept.; 25 (3): 289-97 (1997)参照）によれば、供された不飽和脂肪酸のウイルス不活性化活性は、わずかな量の血清タンパク質によって打ち消され、したがって、治療には役に立たなかった。対照的に、我々の実験では、初代サル腎臓組織において、我々の組成物のヘルペスウイルス不活性化作用は、１０％の子牛血清の存在下でさえ阻害されなかった。
【００３８】
本発明により特許請求される新規な医薬組成物の利益は、以下のように纏めることができる：
−従来技術と対照的に、本発明は、長期の保管で安定な医薬組成物を製造し、期間中のω−３−ポリ不飽和脂肪酸の参加を有効に防止する利益を有する、
−本発明で特定される方法の適用は、他の、および／または新しい抗ウイルス剤を含む付加的な組み合わせの、簡単で経済的な製造を供給する、
−ω−３−ポリ不飽和脂肪酸のエステル類、およびそれらを含む組成物の毒性は、親であるω−３−ポリ不飽和脂肪酸類またはそれらを含む組成物の毒性よりも低いことが示された、
−本発明により製造される組み合わせは、さらに、同時により有効なウイルス複製の阻害を提供する、生物学的により万能で、より融通が利く抗ウイルス治療を可能にする、
−本発明に記載される方法は、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸の塩基成分との塩の製造、そして記述した困難により被る費用に伴う技術的問題を排除する。
【００３９】
本発明により製造される組成物は、以下の実施例で説明される：
【実施例】
【００４０】
実施例１
カプセル形態の製造（表におけるコードＳＩＮ−Ｅ３）
３５重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸エチルエステル（ＥＰＡエチルエステル）および２５重量％の4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸エチルエステル（ＤＨＡエチルエステル）を含む、濃縮された海水魚油由来のω−３−ポリ不飽和脂肪酸のエステルの混合物（３６２ｇ）を、室温で、ｌ−リジン塩酸塩（２０３ｇ）および亜鉛グルコネート（３０ｇ）と混合する。このようにして、均一な混合物を得、その後、コロイドのシリカゲル（２５ｇ）およびレシチン（１ｇ）を補足する。更なる均一化の後、物質を、既知の方法を用いて１０００のソフトゼラチンカプセルに充填する。
【００４１】
実施例２
カプセル形態の製造
組成物が、３２．８重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸エチル（ＥＰＡエチルエステル）および２２．２重量％の4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸エチルエステル（ＤＨＡエチルエステル）からなるω−３−ポリ不飽和脂肪酸エチルエステル（３６２ｇ）の混合物、および実施例１で特定される活性成分および添加剤を含むが、天然酵母に組み込まれたセレン（１ｇ）が補足されているという相違はあるが、全ての点において、実施例１で記載された方法に従う。
【００４２】
実施例３
カプセル形態の製造（表におけるＳＩＮ−Ｅ２）
３５重量％の5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸エチル（ＥＰＡエチルエステル）および２５重量％の4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸エチルエステル（ＤＨＡエチルエステル）を含む、濃縮された海水魚油由来のω−３−ポリ不飽和脂肪酸のエステルの混合物（３６２ｇ）を、室温で、ｌ−リジン塩酸塩（２０３ｇ）と混合する。このようにして、均一な混合物を得、その後、コロイドのシリカゲル（２５ｇ）およびレシチン（１ｇ）を補足する。更なる均一化の後、物質を、既知の方法を用いて１０００のソフトゼラチンカプセルに充填する。
【００４３】
実施例４
カプセル形態の製造
ω−３−ポリ不飽和脂肪酸エチルエステルの混合物の代わりに、5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸のトリグリセリドエステル（ＥＰＡトリグリセリドエステル）および4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸のトリグリセリドエステル（ＤＨＡトリグリセリドエステル）の混合物を用いる以外は、全ての点において、実施例１で記載された方法に従う。
【国際調査報告】
2008521877.tif 000006
2008521877.tif 000007
2008521877.tif 000008