(57)【要約】  本発明はＤＮＡ変更酵素をゲノムの所望の部位に輸送するビヒクルに関し、ＤＮＡ変更酵素は酵素の活動がゲノムの所望の部位に限定できる方法で所望の部位に特異な配列認識体に結合される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮＡ変更酵素をゲノムの所望の部位に輸送するビヒクルであって、
ＤＮＡ変更酵素は、ＤＮＡに結合された状態で酵素の機能が果たせる方法で、ゲノムの所望の部位に特異な配列認識体に結合された
ことを特徴とするビヒクル。  
【請求項２】
酵素はスペーサーによって配列認識体に結合されたことを特徴とする請求項１に記載のビヒクル。
【請求項３】
配列認識体はＤＮＡの小さい溝に介在する３重らせん形成ユニットまたはオリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項１または２に記載のビヒクル。
【請求項４】
配列認識体はゲノムの所望の部位に対して特異なＤＮＡまたはＰＮＡ構造を有することを特徴とする請求項３に記載のビヒクル。
【請求項５】
酵素は低いＫｍを有することを特徴とする請求項１ないし４のいずれか１項に記載のビヒクル。
【請求項６】
酵素は構造的スイッチを含むことを特徴とする請求項１ないし５のいずれか１項に記載のビヒクル。
【請求項７】
ビヒクルはＳＡＩＮＴ分子と、または複数のＳＡＩＮＴ分子の組合せ体と組み合わせられたことを特徴とする請求項１ないし６のいずれか１項に記載のビヒクル。
【請求項８】
ＳＡＩＮＴ分子は水素結合によってビヒクルに結合されたことを特徴とする請求項７に記載のビヒクル。
【請求項９】
ビヒクルを細胞に輸送するため、請求項１ないし６のいずれか１項に記載のビヒクルと組み合わせてＳＡＩＮＴ分子を使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＤＮＡ変更酵素をゲノムの所望の部位に輸送するビヒクルに関する。さらに本発明はＳＡＩＮＴ分子を含む発明のビヒクルの適用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌および代謝病は多くの場合、特異な遺伝子の好ましくない調節で引き起こされることが技術の現況から知られている。この種の病気に関する分子生物学的研究においてＤＮＡ変更酵素（制限酵素、メチラーゼ、デメチラーゼなど）が頻繁に使用される。これらの酵素はヒト、動物、植物、細菌およびビールスのゲノムにおいて特別のヌクレオチド配列を認識する特異性を有する特異な酵素である。この種の特異なヌクレオチド配列は１つのゲノム当たり通常は数回、ときには数千回も見出される。
【０００３】
上記の技術は非特許文献１で知られている。さらにこの技術は非特許文献２でも知られている。
【非特許文献１】Paul S. LovettおよびMichael G Bramucci著「バチルスプミルスプラスミドの非ランダム系配列の証拠：pPL５７６のEcoR1エンドヌクレアーゼ消化」、細菌学誌、１９７５年７月、１２３（１）巻３７７／３７９頁
【非特許文献２】ed. T. Maniatis著、ハンドブック「分子クローニング：研究室マニュアル」、Cold Spring Harbor発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明はゲノムの１つの部位に対して特異な酵素を生成するのが目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
特に本発明の目的はゲノムの所望の部位を正確に特定して選択できる可能性を提供することである。ゲノムの選択された部位（遺伝子の調節ヌクレオチド配列）が病の原因となる場合は、この遺伝子の調節ヌクレオチド配列を特異な酵素の標的にすることでこの遺伝子を停止する可能性を提供する。本発明は請求項１の特徴部に記載された手段によってこの機会を提供する。
【０００６】
また、有利な実施形態が従属請求項２〜８に記載される。
さらなる側面によると、前述したようにＳＡＩＮＴ分子と組み合わせてビヒクルを細胞に輸送するようにビヒクルを適用する方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
ＳＡＩＮＴ分子はすでに知られており、例えば輸送ビヒクルとして示され、ＥＰ特許（公告番号ＥＰ−０７５５９２４−Ｂ１）およびアメリカ特許（特許番号ＵＳ−５，８５３，６９４）に詳しく記載されている。
【０００８】
好ましい実施形態によると、酵素はスペーサー分子によって配列認識体に結合される。それによって、ビヒクルがゲノムに結合されたとき、酵素活性が抑制されない結果として、配列認識体と酵素の間に空間のある分離が生じる。これにより、酵素は普通に使用される仕方でその機能を果たすことができる。
【０００９】
ゲノムの好ましい部位に対して所望の特異性を得るために、ＤＮＡの小さい溝に介在する望ましい３重らせん形成ユニットまたはオリゴヌクレオチドが使用される。この種類の配列認識体はゲノムの所望の部位にのみ適合する構造を有する。その結果、特異性は非常に強くなり、これらの配列認識体が既知の構造に基づいて合成されたとき、これらはゲノムの１つの部位のみに唯一のものになる。この技術は当分野の専門家には一般に知られており、その詳細はF.Sanger et al著、「ファージｆ１ＤＮＡの配列を決定するため合成オリゴヌクレオチドで準備されたＤＮＡポリマラーゼＩの使用」、Proc.Nat.Acad.Sci.USA vol.70,no.4,１２０９−１２１３頁、１９７３年４月に記載されている。さらにこの技術は前述の非特許文献２に記載されている。
【００１０】
したがって、配列認識体はゲノムの所望の部位に特異なＤＮＡまたはＰＮＡ構造を有するのが好ましい。このような構造は比較的容易に合成できる。
別の好ましい実施形態によると、所望の酵素は低いＫｍをもつことが好ましい。このやり方で、酵素はＤＮＡに結合される場合のみ活性を発揮する。酵素がＤＮＡに固定されない場合は、酵素は活性を発揮することができない。好ましい実施形態によると、酵素はいわゆる「構造的スイッチ」を含むのが好ましい。このような構造的スイッチによって、ＤＮＡの所望の部位に結合されない場合、酵素は活性を発揮しないようになる。結合されない場合の不適切に折られたタンパク質の構造がその原因である。
【００１１】
ビヒクルを細胞まで良好に輸送することを可能にするために、ビヒクルはＳＡＩＮＴ分子と、または複数のＳＡＩＮＴ分子の組合せ体と組み合わせることが好ましい。選択的に追加の化合物をここに存在させてもよい。
【００１２】
ＳＡＩＮＴ分子は水素結合によって相互作用するのが特に好ましい。ＳＡＩＮＴ分子は配列認識体と配列認識体に共有結合された酵素と封入する。ＳＡＩＮＴ分子はこのようにビヒクル（複合体）には固定されないが、水素結合によって相互作用をする。複合体が細胞膜と融合した後で細胞含有物に接触すると、この水素結合は緩んでくる。
【００１３】
２１量体（２１ユニットの鎖を意味する）オリゴヌクレオチドに基づくＤＮＡ配列、ＰＮＡまたは別の要素はヒトのゲノムに特異なものである。２１量体は一度だけ現れる。注目されることは、４から２１パワーはヒトのゲノムのサイズよりも大きい。ＴＦＯがつながるとすぐに、酵素はＤＮＡのまわりに折り重なりその機能を果たす。しかし、オリゴヌクレオチドはＤＮＡに結合した状態のままであるので、確実に酵素はその機能を一度だけ果たすことができる。細胞が分裂する瞬間に、ＤＮＡはこれらの異常なタンパク質から「クリーンにされ」、酵素は通常のルートを通して除去され分解される。
【００１４】
発明の本質は以上述べたとおりである。以上の記載と特許請求の範囲に基づいて当分野の専門家は本発明の範囲内にある限り実施形態をさらに展開できる。
【手続補正書】
【提出日】平成18年3月31日(2006.3.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮＡ変更酵素／分子を細胞核に輸送するビヒクルであって、
ＤＮＡ変更酵素／ハイブリッド型分子はＳＡＩＮＴ分子と、または複数のＳＡＩＮＴ分子の組合せ体と組み合わせられた
ことを特徴とするビヒクル。  
【請求項２】
ＤＮＡ変更酵素／ハイブリッド型分子は水素結合によってビヒクルに結合されたことを特徴とする請求項１に記載のビヒクル。
【請求項３】
酵素を細胞および細胞核に輸送するため、請求項１または２に記載のＤＮＡ変更酵素／ハイブリッド型分子と組み合わせてＳＡＩＮＴ分子を使用する方法。
【国際調査報告】
2008517903.tif 000002
2008517903.tif 000003
2008517903.tif 000004