(57)【要約】  本発明は、式１を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩を包含する。本発明の化合物はＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体アゴニストであり、よって白血球移動を調節し、二次リンパ組織中のリンパ球を隔離し、血管完全性を強化することにより免疫抑制活性、抗炎症活性及び止血活性を有する。本発明はまた、前記化合物を含む医薬組成物及び治療または予防方法に関する。2008517915.tif 000031
2008517915.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2008517915.tif 000023
（式中、
ｎは０、１または２であり；
ｍは０、１または２であり、ただしｍが０のときにはＡは式Ｉに示すアゼチジン（ｎ＝０）、ピロリジン（ｎ＝１）またはピペリジン（ｎ＝２）基に直接結合し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して−Ｈ、−Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ペルフルオロアルキル、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ１−８アルコキシ及び−ＯＣＦ３からなる群から選択され；  Ｒ５及びＲ６は独立して−Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４ペルフルオロアルキルから選択され；
Ｒ７はフェニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル及びチエニルからなる群から選択され、各々は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、フェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ２−６アシルオキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、前記したフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ１−６アシルオキシは各々場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ８及びＲ９は独立してＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル及びＣ１−６アルキニルからなる群から選択され、各々は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、或いは
Ｒ８及びＲ９はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合により１〜２個の酸素原子を含有する３〜８原子の飽和単環式環を形成し、前記した環は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｘ、Ｙ及びＺは形成される環が芳香族ヘテロ環であるように独立して−Ｃ＝、−ＣＨ−、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｒｌ０）−及び−Ｓ−からなる群から選択され；
Ｒ１０はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル及びＣ１−６アルキニルからなる群から選択され、各々は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ａは−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ１１、−ＰＯ（Ｒ１１）ＯＨ、
【化２】
2008517915.tif 000024
からなる群から選択され；
Ｒ１１はＣ１−４アルキル、フェニル、−ＣＨ２ＯＨ及びＣＨ（ＯＨ）−フェニルからなる群から選択され；
各Ｒ１２は独立して−Ｈ及び−ＣＨ３からなる群から選択される。）
で表される化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項２】
Ａが−ＣＯ２Ｈである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎが１である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｍが１である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
形成される環が１，２，４−オキサジアゾールであるようにＸは−Ｎ＝であり、Ｙは−Ｎ＝であり、Ｚは−Ｏ−である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ７が場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＯ２、フェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ２−６アシルオキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているフェニルであり、前記したフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ１−６アシルオキシは各々場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式Ｉａ：
【化３】
2008517915.tif 000025
（式中、
ｐは０、１または２であり；
Ｒａはフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ及びＣ３−６シクロアルコキシからなる群から選択され、前記したフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ及びＣ３−６シクロアルコキシは各々場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ及び−ＯＨからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒｂは−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＣＨ３−、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、エチニル、−ＮＯ２及び−ＮＨ２からなる群から選択される。）
で表される請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項８】
ｐが０または１であり、Ｒｂが−Ｆ、−Ｃｌ及び−ＣＦ３からなる群から選択される請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
ＲａがＣ３−５アルキル、シクロペンチル、シクロヘキシル、Ｃ２−４アルコキシ、シクロペンチルオキシ及びシクロヘキシルオキシからなる群から選択され、各々は場合により１〜３個のフルオロ基で置換されていてもよい請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
下表：
【表１】
2008517915.tif 000026
2008517915.tif 000027
2008517915.tif 000028
2008517915.tif 000029
2008517915.tif 000030
から選択される化合物またはその医薬的に許容され得る塩の、立体異性体の混合物、または他の立体異性体を含まない実質的に純粋な形態の単一立体異性体。
【請求項１１】
免疫調節異常の治療を要する哺乳動物患者に対して免疫調節異常を治療するのに有効な量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む前記患者における免疫調節異常の治療方法。
【請求項１２】
免疫調節異常が全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、１型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性天疱瘡、サルコイドーシス、乾せん、自己免疫性筋炎、ウェジナー肉芽腫症、魚鱗せん、グレーブス眼病及び喘息からなる群から選択される自己免疫性または慢性炎症性疾患である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
免疫調節異常が骨髄または臓器移植片拒絶、または移植片対宿主病である請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
免疫調節異常が、臓器または組織の移植；移植により生ずる移植片対宿主病；自己免疫性疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱や感染後糸球体腎炎を含めた感染後自己免疫性疾患、感染性及び異常増殖性皮膚疾患、乾せん、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔せん、天疱瘡、水疱性天疱瘡、表皮水泡症、じんま疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、エリテマトーデス、ざ瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮変性症、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼病、ホークト−小柳−原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、粉塵喘息、慢性または難治性喘息、遅発性喘息及び気道反応亢進、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸結腸炎、熱傷を伴う腸病巣、セリアック病、直腸炎、好酸球増加性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン−バレー症候群、メニエル病、多発神経炎、多発性神経炎、単神経炎、神経根障害症、甲状腺亢進症、バセドウ病、真正赤血球系無形成、再生不能性貧血、再生不良性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球生成欠如、骨粗しょう症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗せん、光線アレルギー過敏症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症症候群、結節性多発性動脈炎、心筋症、強皮症、ウェジナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪症、好酸球増加性筋膜炎、歯肉，歯周組織，歯槽骨，セメント質の病巣、糸球体腎炎、脱毛を抑えるか毛根を発生させ及び／または発毛及び育毛を促進させることによる男性型脱毛症または老人性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症及びセザリー症候群、アジソン病、保存，移植または虚血性疾患時に生ずる臓器の虚血−再灌流損傷、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺酸素または薬物に起因する中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、シデローシス、色素性網膜炎、老人性黄斑変性、硝子体瘢痕、角膜アルカリ火傷、多形性紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎及びセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染，老化，発癌，癌の転移及び高山病に起因する疾患、ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素，ウイルス肝炎，ショックまたは無酸素症に起因する壊死、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ／非Ｂ肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発型肝不全、慢性肝不全の急性憎悪、化学療法影響の増大、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性認知症、外傷及び慢性細菌感染からなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
免疫調節異常が
１）多発性硬化症、
２）関節リウマチ、
３）全身性エリテマトーデス、
４）乾せん、
５）移植された臓器または組織の拒絶、
６）炎症性腸疾患、
７）リンパ器官の悪性疾患
８）急性及び慢性のリンパ球性白血病及びリンパ腫、及び
９）インスリン依存性及びインスリン非依存性糖尿病
からなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
免疫抑制を要する哺乳動物患者に対して免疫抑制有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む前記患者における免疫系の抑制方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
【請求項１８】
呼吸器疾患または状態の治療を要する哺乳動物患者に対してその治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む前記患者における呼吸器疾患または状態の治療方法。
【請求項１９】
呼吸器疾患または状態が喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、新生児呼吸窮迫症候群、咳、好酸球性肉芽腫、呼吸器合胞体ウイルス細気管支炎、気管支拡張症、特発性肺線維症、急性肺損傷及び器質化肺炎を伴う細気管支炎からなる群から選択される請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
血管完全性に関連する疾患または状態の治療を要する患者に対してその治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を投与することを含み、前記した疾患または状態は血管浮腫、血管炎、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸結腸炎、火傷を伴う腸病巣、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症症候群、保存，移植または虚血性疾患時に起こる臓器の虚血−再灌流損傷、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺酸素または薬物に起因する中毒症、敗血症、膵炎、ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、毒素，ウイルス性肝炎，ショックまたは無酸素症に起因する壊死、老人性認知症及び外傷からなる群から選択される前記患者における血管完全性に関連する疾患または状態の治療方法。
【請求項２１】
脳または肺浮腫を伴う疾患または状態の治療を要する患者に対してその治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む前記患者における脳または肺浮腫を伴う疾患または状態の治療方法。
【請求項２２】
疾患または状態がショック、敗血症、急性呼吸窮迫症候群及び脳浮腫からなる群から選択される請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体アゴニストであり、よって白血球の移動を調節し、二次リンパ組織中のリンパ球を隔離し、血管完全性を強化することにより免疫抑制活性、抗炎症活性及び止血活性を有する。本発明はまた、前記化合物を含む医薬組成物及び治療または予防方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫抑制剤及び抗炎症剤が全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症及び他の疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性天疱瘡、サルコイドーシス、乾せん、自己免疫性筋炎、ウェジナー肉芽腫症、魚鱗せん、グレーブス眼病、アトピー性皮膚炎及び喘息、慢性肺疾患、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群及び敗血症）を含めた各種の自己免疫性及び慢性炎症性疾患において有用であることが判明している。免疫抑制剤及び抗炎症剤は癌、リンパ腫及び白血病の治療のための化学療法レジメンの一部としても有用であることも分かっている。
【０００３】
上記した状態のそれぞれの基本的病因はかなり異なり得るが、共通して免疫系の活性化及び各種の自己抗体、自己反応性リンパ球の出現及び／または先天性免疫に関与する細胞の活性化が見られる。自己反応性は、正常な免疫系が機能するホメオスタティックコンテトロールの損失に一部起因し得る。また、骨髄または臓器移植後、宿主リンパ球は異種組織抗原を認識し、移植片拒絶をもたらす抗体、サイトカイン及び細胞毒性リンパ球を含めた細胞及び体液応答が生じ始める。
【０００４】
自己免疫または拒絶プロセスの１つの最終結果は、炎症細胞及び該細胞が放出するメディエーターにより引き起こされる高い血管透過性及び組織破壊である。ＮＳＡＩＤのような抗炎症剤は主にメディエーターの作用または分泌を阻止することにより作用するが、病気の免疫学的基礎を修飾しない。一方、シクロホスファミドのような細胞毒性剤は、正常応答及び自己免疫応答の両方を止める非特異的方法で作用する。実際、非特異的免疫抑制剤で治療した患者は自己免疫性疾患と同じくらい感染のために死ぬ可能性が高い。
【０００５】
シクロスポリンＡは移植した臓器の拒絶を防止するために使用されている薬物である。ＦＫ−５０６は臓器移植、特に肝移植の拒絶を防止するために認可されている別の薬物である。シクロスポリンＡ及びＦＫ−５０６は、身体の免疫系が多くの天然保護物質類を代謝して移植片の異種タンパク質を拒絶することを抑えることにより作用する。シクロスポリンＡは重度の乾せんを治療するために認可されており、アトピー性皮膚炎の治療のためにヨーロッパ規制庁により認可されている。
【０００６】
シクロスポリンＡ及びＦＫ−５０６は移植片拒絶を遅遅または抑制させるのに有効であるが、これらは腎毒性、神経毒性及び胃腸不快感を含めた幾つかの望ましくない副作用を引き起こすことが公知である。従って、これらの副作用のない免疫抑制剤は依然として開発の余地があり、非常に望ましい。
【０００７】
免疫抑制化合物ＦＴＹ７２０は現在治験中のリンパ球隔離剤である。ＦＴＹ７２０は哺乳動物においてスフィンゴシン１−ホスフェート受容体の強力なアゴニストである化合物に代謝される。スフィンゴシン１−ホスフェート受容体のアゴニズムはリンパ球トラフィッキングをモジュレートし、リンパ欠乏なしにリンパ節及びパイエル斑中のリンパ球（Ｔ細胞及びＢ細胞）の分離を誘発し、脾臓構築を破壊し、よってＴ細胞依存性抗体応答を干渉する。Ｓ１Ｐ受容体アゴニストは、内皮完全性を強化し、免疫系の活性化の結果起こる血管損傷を抑制することにより抗炎症性をも有する。免疫抑制及び抗炎症は、臓器移植後の拒絶を防止するために、自己免疫性疾患の治療及び血管完全性が基本的に欠陥している状態（例えば、肺損傷、急性呼吸窮迫症候群及び敗血症）の治療において望ましい。Ａ．Ｂ．Ｊ．Ｇｒｏｅｎｅｖｅｌｄ，Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍ．，３９：２４７−２５６（２００３）参照。
【０００８】
スフィンゴシン１−ホスフェートは、造血細胞により分泌され、保存され、活性化血小板から放出される生理活性なスフィンゴ脂質代謝物である。Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｔ．Ｏｈｍｏｒｉ，Ｇ．Ｒｉｌｅ，Ｆ．Ｋａｚａｍａ，Ｈ．Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｓａｎｏ，Ｋ．Ｓａｔｏｈ，Ｓ．Ｋｕｍｅ，Ｇ．Ｔｉｇｙｉ，Ｙ．Ｉｇａｒａｓｈｉ及びＹ．Ｏｚａｋｉ，Ｂｌｏｏｄ，９６：３４３１−８（２０００）。スフィンゴシン１−ホスフェートは、細胞増殖、分化、生存及び運動性を調節するためにＧタンパク質結合性受容体のファミリーに対してアゴニストとして作用する。Ｎ．Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｉ．Ｉｓｈｉｉ，Ｊ．Ｊ．Ａ．Ｃｏｎｔｏｓ，Ｊ．Ａ．Ｗｅｉｎｅｒ及びＪ．Ｃｈｕｎ，“Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４１：５０７−３４（２００１）；Ｔ．Ｈｌａ，Ｍ．Ｊ．Ｌｅｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｊ．Ｈ．Ｐａｉｋ及びＭ．Ｊ．Ｋｌｕｋ，“Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎｓ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９４：１８７５−１８７８（２００１）；Ｓ．Ｓｐｉｅｇｅｌ及びＳ．Ｍｉｌｓｔｉｅｎ，“Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１４８４：１０７−１６（２０００）；Ｓ．Ｐｙｎｅ及びＮ．Ｐｙｎｅ，“Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｐｈａｒｍ．＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８８：１１５−１３１（２０００）。５つのスフィンゴシン１−ホスフェート受容体（Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４及びＳ１Ｐ５；内皮分化遺伝子Ｅｄｇ１、Ｅｄｇ５、Ｅｄｇ３、Ｅｄｇ６、Ｅｄｇ８としても公知）が同定され、これらは細胞及び組織に広く分布しており、ヒト及びげっ歯類において十分に保存されている（表参照）。Ｓ１Ｐ受容体へ結合するとＧｑ−、Ｇｉ／ｏ、Ｇ１２−、Ｇ１３−及びＲｈｏ−依存性経路を介して信号が伝達される。Ｓ１Ｐ１及びＳ１Ｐ３のリガンド誘導活性化が血管形成、化学走性、及びＲａｃ−及びＲｈｏ−を介する接着結合アセンブリを促進することが判明している。Ｍ．Ｊ．Ｌｅｅ，Ｓ．Ｔｈａｎｇａｄａ，Ｋ．Ｐ．Ｃｌａｆｆｅｙ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｃ．Ｈ．Ｌｉｕ，Ｍ．Ｋｌｕｋ，Ｍ．Ｖｏｌｐｉ，Ｒ．Ｉ．Ｓｈａ’ａｆｉ及びＴ．Ｈｌａ，Ｃｅｌｌ，９９：３０１−１２（１９９９）参照。Ｓ１Ｐは、表層アクチン細胞骨格構造を構築し、Ｓ１Ｐ受容体、主にＳ１Ｐ１を介して細胞：細胞結合及び細胞：細胞外マトリックス相互作用を強化することにより内皮バリアー完全性を強化し（Ｊ．Ｇ．Ｎ．Ｇａｒｃｉａ，Ｆ．Ｌｉｕ，Ａ．Ｄ．Ｖｅｒｉｎ，Ａ．Ｂｉｒｕｋｏｖａ，Ｍ．Ａ．Ｄｅｃｈｅｒｔ，Ｗ．Ｔ．Ｇｅｒｔｈｏｆｆｅｒ，Ｊ．Ｒ．Ｂａｍｂｕｒｇ，Ｄ．Ｅｎｇｌｉｓｈ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０８：６８９−７０１（２００１）参��）、ＦＴＹ７２０を含めたＳ１Ｐ受容体アゴニストはマウスにおいてＶＥＧＦにより誘発される血管透過性を阻害し得る。Ｔ．Ｓａｎｃｈｅｚ，Ｔ．Ｅｓｔｒａｄａ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｊ．Ｈ．Ｐａｉｋ，Ｍ．Ｔ．Ｗｕ，Ｋ．Ｖｅｎｋａｔａｒａｍａｎ，Ｖ．Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，Ｋ．Ｃｌａｆｆｅｙ及びＴ．Ｈｌａ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：４７２８１−４７２９０（２００３）参照。
【０００９】
動物にスフィンゴシン１−ホスフェートを投与すると、末梢血リンパ球の二次リンパ組織中への全身隔離が誘発され、それにより治療上有用な免疫抑制が生ずる。Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，Ｒ．Ｈａｊｄｕ，Ｊ．Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ，Ｅ．Ｑｕａｃｋｅｎｂｕｓｈ，Ｊ．Ｘｉｅ，Ｊ．Ｍｉｌｌｉｇａｎ，Ｒ．Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｇ．Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｄ．Ｃａｒｄ，Ｃ．Ｋｅｏｈａｎｅ，Ｍ．Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ，Ｊ．Ｈａｌｅ，Ｃ．Ｌ．Ｌｙｎｃｈ，Ｋ．Ｒｕｐｐｒｅｃｈｔ，Ｗ．Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｈ．Ｒｏｓｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９６：３４６−３４９（２００２）参照、しかしながら、スフィンゴシン１−ホスフェートは心血管及び気管支収縮作用をも有し、このため治療薬としての有用性が制限される。スフィンゴシン１−ホスフェートを静脈内投与するとラットにおいて心拍数、心室収縮及び血圧が低下する。Ａ．Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｎ．Ｎ．Ａｙｅ，Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．Ｏｚａｋｉ及びＫ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８２：３３８−３４２（２０００）参照。スフィンゴシン１−ホスフェートは、ヒト気道平滑筋細胞では喘息での気管支収縮、気道炎症及びリモデリングを促進する収縮、細胞増殖及びサイトカイン産生を調節する。Ａ．Ｊ．Ａｍｍｉｔ，Ａ．Ｔ．Ｈａｓｔｉｅ，Ｌ．Ｃ．Ｅｄｓａｌｌ，Ｒ．Ｋ．Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｙ．Ａｍｒａｎｉ，Ｖ．Ｐ．Ｋｒｙｍｓｋａｙａ，Ｓ．Ａ．Ｋａｎｅ，Ｓ．Ｐ．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｒ．Ｂ．Ｐｅｎｎ，Ｓ．Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｒ．Ａ．Ｐａｎｅｔｔｉｅｒｉ  Ｊｒ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，１５：１２１２−１２１４（２００１）参照。スフィンゴシン１−ホスフェートの望ましくない作用は、すべてのＳ１Ｐ受容体に対する非選択的で強力なアゴニスト活性に関係している。
【００１０】
本発明は、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ受容体よりも選択性を有するＳ１Ｐ１／Ｅｄｇｌ受容体のアゴニストである化合物を包含する。Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体選択的アゴニストは従来の治療よりも有利であり、リンパ球隔離及び血管完全性物質の治療枠を広げ、高用量により十分に耐性であり、よって単独治療としての効果が改善される。
【００１１】
免疫抑制剤及び抗炎症剤は主に骨髄、臓器及び移植片拒絶の治療において使用されているが、前記化合物の他の使用には関節炎（特に、関節リウマチ）、インスリン依存性及びインスリン非依存性糖尿病、多発性硬化症、乾せん、炎症性腸疾患、クローン病、エリテマトーデス、喘息、アレルギー、慢性肺疾患、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、敗血症等の治療が含まれる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
よって、本発明は、従来の化合物よりもより安全且つより有効である免疫抑制剤及び血管完全性化合物の提供に焦点が向けられている。これらの目的及び他の目的は本明細書中の記載から当業者に自明である。
【００１３】
【表２】
2008517915.tif 000003
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、式Ｉ：
【００１５】
【化４】
2008517915.tif 000004
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩を包含する。この化合物はＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体アゴニストであり、よって白血球移動を調節し、二次リンパ組織中のリンパ球を隔離し、血管完全性を強化することにより免疫抑制活性、抗炎症活性及び止血活性を有する。本発明は前記化合物を含む医薬組成物及び治療または予防方法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、式Ｉ：
【００１７】
【化５】
2008517915.tif 000005
（式中、
ｎは０、１または２であり；
ｍは０、１または２であり、ただしｍが０のときにはＡは式Ｉに示すアゼチジン（ｎ＝０）、ピロリジン（ｎ＝１）またはピペリジン（ｎ＝２）基に直接結合し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立して−Ｈ、−Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ペルフルオロアルキル、−Ｃｌ、−Ｂｒ、Ｃ１−８アルコキシ及び−ＯＣＦ３からなる群から選択され；  Ｒ５及びＲ６は独立して−Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４ペルフルオロアルキルから選択され；
Ｒ７はフェニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリジジニル及びチエニルからなる群から選択され、各々は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、フェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ２−６アシルオキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、前記したフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ１−６アシルオキシは各々場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ８及びＲ９は独立してＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル及びＣ１−６アルキニルからなる群から選択され、各々は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、或いは
Ｒ８及びＲ９はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合により１〜２個の酸素原子を含有する３〜８原子の飽和単環式環を形成し、前記した環は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｘ、Ｙ及びＺは形成される環が芳香族ヘテロ環であるように独立して−Ｃ＝、−ＣＨ−、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｒｌ０）−及び−Ｓ−からなる群から選択され；
Ｒ１０はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル及びＣ１−６アルキニルからなる群から選択され、各々は場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ａは−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ１１、−ＰＯ（Ｒ１１）ＯＨ、
【００１８】
【化６】
2008517915.tif 000006
からなる群から選択され；
Ｒ１１はＣ１−４アルキル、フェニル、−ＣＨ２ＯＨ及びＣＨ（ＯＨ）−フェニルからなる群から選択され；
各Ｒ１２は独立して−Ｈ及び−ＣＨ３からなる群から選択される。）
で表される化合物またはその医薬的に許容され得る塩を包含する。
【００１９】
本発明の実施態様は、Ａが−ＣＯ２Ｈである、式Ｉを有する化合物を包含する。
【００２０】
本発明の別の実施態様は、ｎが１である、式Ｉを有する化合物を包含する。
【００２１】
本発明の別の実施態様は、ｍは１である、式Ｉを有する化合物を包含する。
【００２２】
本発明の別の実施態様は、形成される環が１，２，４−オキサジアゾールであるようにＸは−Ｎ＝であり、Ｙは−Ｎ＝であり、Ｚは−Ｏ−である、式Ｉを有する化合物を包含する。
【００２３】
本発明の別の実施態様は、Ｒ７が場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＲ７Ｒ８、−ＮＯ２、フェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ及びＣ２−６アシルオキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているフェニルであり、前記したフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ３−６シクロアルコキシ、Ｃｌ−６アルキルチオ及びＣ１−６アシルオキシは各々場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ及びＣ１−５アルコキシからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい、式Ｉを有する化合物を包含する。
【００２４】
本発明の別の実施態様は、式Ｉａ：
【００２５】
【化７】
2008517915.tif 000007
（式中、
ｐは０、１または２であり；
Ｒａはフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ及びＣ３−６シクロアルコキシからなる群から選択され、前記したフェニル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ及びＣ３−６シクロアルコキシは各々場合により−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ及び−ＯＨからなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒｂは−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＣＨ３−、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、エチニル、−ＮＯ２及び−ＮＨ２からなる群から独立して選択される。）
で表される化合物またはその医薬的に許容され得る塩を包含する。
【００２６】
本発明の別の実施態様は、ｐが０または１であり、Ｒｂが−Ｆ、−Ｃｌ及び−ＣＦ３からなる群から選択される、式Ｉａを有する化合物を包含する。
【００２７】
本発明の別の実施態様は、ＲａがＣ３−５アルキル、シクロペンチル、シクロヘキシル、Ｃ２−４アルコキシ、シクロペンチルオキシ及びシクロヘキシルオキシからなる群から選択され、各々は場合により１〜３個のフルオロ基で置換されていてもよい、式Ｉａを有する化合物を包含する。
【００２８】
本発明は、更に下記実施例に例示されている。
【００２９】
本発明はまた、免疫調節異常の治療を要する哺乳動物患者に対してその治療に有効な量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における免疫調節異常の治療方法をも包含する。
【００３０】
この実施態様には、免疫調節異常が全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性天疱瘡、サルコイドーシス、乾せん、自己免疫性筋炎、ウェジナー肉芽腫症、魚鱗せん、グレーブス眼病及び喘息からなる群から選択される自己免疫性または慢性炎症性疾患である上記方法が包含される。
【００３１】
この実施態様には、免疫調節異常が骨髄または臓器移植片拒絶、または移植片対宿主病である上記方法も包含される。
【００３２】
この実施態様には、免疫調節異常が臓器または組織の移植；移植により生ずる移植片対宿主病；自己免疫性疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎，リウマチ熱や感染後糸球体腎炎を含めた感染後自己免疫性疾患、炎症性及び異常増殖性皮膚疾患、乾せん、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔せん、天疱瘡、水疱性天疱瘡、表皮水泡症、じんま疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、エリテマトーデス、ざ瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮変性症、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼病、ホークト−小柳−原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、粉塵喘息、慢性または難治性喘息、遅発性喘息及び気道反応亢進、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管障害、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸結腸炎、熱傷を伴う腸病巣、セリアック病、直腸炎、好酸球増加性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン−バレー症候群、メニエル病、多発神経炎、多発性神経炎、単神経炎、神経根障害症、甲状腺亢進症、バセドウ病、真正赤血球系無形成、再生不良性貧血、再生不良性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球生成欠如、骨粗しょう症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗せん、光線アレルギー過敏症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症症候群、結節性多発性動脈炎、心筋症、強皮症、ウェジナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪症、好酸球増加性筋膜炎、歯肉，歯周組織，歯槽骨，セメント質の病巣、糸球体腎炎、脱毛を抑えるか毛根を発生させ及び／または発毛及び育毛を促進させることによる男性型脱毛症または老人性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症及びセザリー症候群、アジソン病、保存，移植または虚血性疾患時に生ずる臓器の虚血−再灌流損傷、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺酸素または薬物に起因する中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、シデローシス、色素性網膜炎、老人性黄斑変性、硝子体瘢痕、角膜アルカリ火傷、多形性紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎及びセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染，老化，発癌，癌の転移及び高山病に起因する疾患、ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素，ウイルス肝炎，ショックまたは無酸素症に起因する壊死、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ／非Ｂ肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発型肝不全、慢性肝不全の急性憎悪(acute-on-chronic liver failure)、化学療法影響の増強、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性認知症、外傷及び慢性細菌感染からなる群から選択される上記方法も包含される。
【００３３】
この実施態様には、免疫調節異常が
１）多発性硬化症、
２）関節リウマチ、
３）全身性エリテマトーデス、
４）乾せん、
５）移植された臓器または組織の拒絶、
６）炎症性腸疾患、
７）リンパ器官の悪性疾患
８）急性及び慢性のリンパ球性白血病及びリンパ腫、及び
９）インスリン依存性及びインスリン非依存性糖尿病
からなる群から選択される上記方法も包含される。
【００３４】
本発明はまた、免疫抑制を要する哺乳動物患者に対して免疫抑制有効量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における免疫系の抑制方法をも包含する。
【００３５】
本発明はまた、式Ｉを有する化合物を医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物を包含する。
【００３６】
本発明はまた、呼吸器疾患または状態の治療を要する哺乳動物患者に対してその治療に有効な量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における呼吸器疾患または状態の治療方法をも包含する。この実施態様には、呼吸器疾患または状態が喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、新生児呼吸窮迫症候群、咳、好酸球性肉芽腫、呼吸器合胞体ウイルス細気管支炎、気管支拡張症、特発性肺線維症、急性肺損傷及び器質化肺炎を伴う細気管支炎からなる群から選択される上記方法が包含される。
【００３７】
本発明はまた、血管完全性に関連する疾患または状態の治療を要する患者に対してその治療に有効な量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における血管完全性に関連する疾患または状態の治療方法を包含し、前記した疾患または状態が血管浮腫、血管炎、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸結腸炎、火傷を伴う腸病巣、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症症候群、保存，移植または虚血性疾患時に起こる虚血−再灌流損傷、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺酸素または薬物に起因する中毒症、敗血症、膵炎、ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、毒素，ウイルス性肝炎，ショックまたは無酸素症に起因する壊死、老人性認知症及び外傷からなる群から選択される。
【００３８】
本発明はまた、脳または肺浮腫を伴う疾患または状態の治療を要する患者に対してその治療に有効な量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における脳または肺浮腫を伴う疾患または状態の治療方法をも包含する。この実施態様には、ショック、敗血症、急性呼吸窮迫症候群及び脳浮腫からなる群から選択される疾患または状態が包含される。
【００３９】
また、この実施態様には、患者が呼吸器疾患または状態をも有している上記方法が包含される。
【００４０】
また、この実施態様には、患者が心血管疾患または状態をも患っている上記方法が包含される。
【００４１】
本発明は、別段の記載がない限り以下の定義を用いて記載する。
【００４２】
本明細書の式中に窒素原子が現れているとき、窒素原子の原子価を満足するのに十分な水素原子または置換基が存在していると理解される。
【００４３】
用語「ハロゲン」または「ハロ」はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含む。
【００４４】
用語「アルキル」は、指定数の炭素原子を有する直鎖状または分岐状構造及びその組合せを意味する。よって、Ｃ１−６アルキルの例にはメチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｓ−及びｔ−ブチル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、１，１−ジメチルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが含まれる。
【００４５】
用語「アルケニル」は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有し、水素が追加の炭素−炭素二重結合で置換されていてもよい指定数の炭素原子を有する直鎖状または分岐状構造及びその組合せを意味する。Ｃ２−６アルケニルの例にはエテニル、プロペニル、１−メチルエテニル、ブテニル等が含まれる。
【００４６】
用語「アルキニル」は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する指定数の炭素原子を有する直鎖状または分岐状構造及びその組合せを意味する。Ｃ３−６アルキニルの例にはプロペニル、１−メチルエテニル、ブテニル等が含まれる。
【００４７】
用語「アルコキシ」は、直鎖状、分岐状または環状の配置の指定数の炭素原子を有するアルコキシ基を意味する。Ｃ１−６アルコキシの例にはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ等が含まれる。
【００４８】
用語「アルキルチオ」は、直鎖状、分岐状または環状の配置の指定数の炭素原子を有するアルキルチオ基を意味する。Ｃ１−６アルキルチオの例にはメチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ等が含まれる。
【００４９】
用語「シクロアルキル」は、指定数の炭素原子を有し、場合により直鎖状または分岐状構造と組み合わさった単環式、二環式または三環式構造を意味する。シクロアルキル基の例にはシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロドデシルメチル、２−エチル−ｌ−ビシクロ［４．４．０］デシル、シクロブチルメチル、シクロプロピルメチル等が含まれる。
【００５０】
用語「シクロアルコキシ」は、酸素原子を介して分子に結合している上に定義したシクロアルキル（シクロアルキル−Ｏ）を意味し、この例にはシクロペンチルオキシ、シクロプロピルメチルオキシ等が含まれる。
【００５１】
用語「アシル」は、有機酸からヒドロキシ基を除去することにより誘導され、一般式Ｒ−Ｃ（Ｏ）−（式中、Ｒは、カルボニル炭素原子を合わせて指定数の炭素原子を有する直鎖状または分岐状アルキル鎖である。）を有する有機基を意味する。Ｃ２−４アシルの例にはアセチル、プロピオニル及びブチリルが含まれる。用語「アシルオキシ」は、酸素原子（アシル−Ｏ）を介して分子に結合している上に定義したアシルを意味し、この例にはアセチルオキシ等が含まれる。
【００５２】
フレーズ「Ｒ８及びＲ９はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合により１〜２個の酸素原子を含有する３〜８原子の飽和単環式環を形成し得る」は、例えばピロリジン、ピペリジン、モルホリン、アゼチジン等を意味する。
【００５３】
用語「ペルルオロアルキル」は、すべての水素原子がフッ素原子で置換されている以外上に定義したアルキルを意味する。
【００５４】
本明細書では、以下の略号は指定の意味を有する：
Ｍｅ      ＝メチル；
Ｅｔ      ＝エチル；
ｎ−Ｐｒ  ＝直鎖状プロピル；
ｉ−Ｐｒ  ＝イソプロピル；
ｎ−Ｂｕ  ＝直鎖状ブチル；
ｉ−Ｂｕ  ＝イソブチル；
ｓ−Ｂｕ  ＝第２級ブチル；
ｔ−Ｂｕ  ＝第３級ブチル；
ｃ−Ｐｒ  ＝シクロプロピル；
ｃ−Ｂｕ  ＝シクロブチル；
ｃ−Ｐｅｎ＝シクロペンチル；
ｃ−Ｈｅｘ＝シクロヘキシル。
【００５５】
用語「治療する」は、疾患または状態の兆候及び症状を呈している患者を緩和するために患者を治療すること及び疾患または状態の発症または進行を予防するために無症候患者を予防的に治療することを包含する。用語「治療有効量」は、研究者、獣医師、医者または他の臨床家が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出す薬物または薬剤の量を意味すると意図される。この用語には、研究者、獣医師、医者または他の臨床家が求めている組織、系、動物またはヒトにおいて予防しようとする生物学的または医学的事象の発生のリスクを抑えるまたは減らす薬物の量も包含する。
【００５６】
本明細書中に記載されている発明は医薬的に許容され得る塩及び水和物を含む。医薬的に許容され得る塩には金属（無機）塩及び有機塩が含まれる。医薬的に許容され得る塩はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，ｐ．１４１８（１９９５）にリストされている。適当な塩形態が物理的及び化学的安定性、流動性、吸湿性及び溶解性に基づいて選択されることは当業者に公知である。当業者は理解しているように、医薬的に許容され得る塩には無機酸の塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩及び硝酸塩）または有機酸の塩（例えば、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩）が含まれるが、これらに限定されない。同様に医薬的に許容され得るカチオンにはナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウム及びアンモニウム（特に、第二級アミンを有するアンモニウム塩）が含まれるが、これらに限定されない。上記した理由で本発明の好ましい塩にはカリウム、ナトリウム、カルシウム及びアンモニウム塩が含まれる。また、式Ｉを有する化合物の結晶形、水和物及び溶媒和物も本発明の範囲に含まれる。
【００５７】
本明細書では、「医薬的に許容され得る水和物」は、水和物を形成すべく１つ以上の水分子で結晶化された本発明化合物を意味する。
【００５８】
式Ｉを有する化合物は１つ以上の不斉中心を含み得、よってラセメート及びラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物及び個別のジアステレオマーとして存在し得る。本発明は、式Ｉを有する化合物のすべての異性体形態を包含すると意味する。
【００５９】
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはオレフィン二重結合を含み、別段の記載がない限りＥ及びＺ幾何異性体の両方を含むと意味する。
【００６０】
本明細書中に記載されている化合物の幾つかは互変異性体と称される水素の異なる結合ポイントを有して存在し得る。その例はケト−エノール互変異性体として公知のケトンとそのエノール形態であり得る。個々の互変異性体及びその混合物も式Ｉを有する化合物に包含される。
【００６１】
式Ｉを有する化合物は、例えば適当な溶媒（例えば、メタノール、酢酸エチルまたはその混合物）からの分別結晶化によりエナンチオマーのジアステレオマー対に分離され得る。こうして得たエナンチマー対は慣用の手段、例えば光学活性な酸を分解剤として用いることにより個々の立体異性体に分離され得る。
【００６２】
或いは、一般式Ｉを有する化合物のエナンチオマーは、公知の立体配置を有する光学的に純粋な出発物質または試薬を用いて立体特異的合成により得られ得る。
【００６３】
本発明は、実質的に純粋な形態または立体異性体混合物の形態の１つ以上の立体異性体の形態の式Ｉの範囲内の化合物も含まれる。
【００６４】
本発明化合物は、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１アゴニスト活性を有するので自己免疫性及び慢性炎症性疾患の治療または予防のために有用な免疫調節剤である。本発明化合物は骨髄、臓器または移植片拒絶、自己免疫性及び慢性炎症性疾患、例えば全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性天疱瘡、サルコイドーシス、乾せん、自己免疫性筋炎、ウェジナー肉芽腫症、魚鱗せん、グレーブス眼病及び喘息のような免疫抑制が望ましい場合において免疫系を抑制するために使用される。本発明化合物は血管完全性を強化するためにも有用である。
【００６５】
特に、本発明化合物は、臓器または組織の移植；移植により生ずる移植片対宿主病；自己免疫性疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎，リウマチ熱や感染後糸球体腎炎を含めた感染後自己免疫性疾患、炎症性及び異常増殖性皮膚疾患、乾せん、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔せん、天疱瘡、水疱性天疱瘡、表皮水泡症、じんま疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、エリテマトーデス、ざ瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮変性症、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼病、ホークト−小柳−原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、粉塵喘息、慢性または難治性喘息、遅発性喘息及び気道反応亢進、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管障害、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性小腸結腸炎、熱傷を伴う腸病巣、セリアック病、直腸炎、好酸球増加性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン−バレー症候群、メニエル病、多発神経炎、多発性神経炎、単神経炎、神経根障害症、甲状腺亢進症、バセドウ病、真正赤血球系無形成、再生不良性貧血、再生不良性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球生成欠如、骨粗しょう症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗せん、光線アレルギー過敏症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症症候群、結節性多発性動脈炎、心筋症、強皮症、ウェジナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪症、好酸球増加性筋膜炎、歯肉，歯周組織，歯槽骨，セメント質の病巣、糸球体腎炎、脱毛を抑えるか毛根を発生させ及び／または発毛及び育毛を促進させることによる男性型脱毛症または老人性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症及びセザリー症候群、アジソン病、保存，移植または虚血性疾患時に生ずる臓器の虚血−再灌流損傷、エンドトキシンショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺酸素または薬物に起因する中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、シデローシス、色素性網膜炎、老人性黄斑変性、硝子体瘢痕、角膜アルカリ火傷、多形性紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎及びセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、環境汚染，老化，発癌，癌の転移及び高山病に起因する疾患、ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素，ウイルス肝炎，ショックまたは無酸素症に起因する壊死、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ／非Ｂ肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発型肝不全、慢性肝不全の急性憎悪、化学療法影響の増強、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性認知症、外傷及び慢性細菌感染からなる群から選択される疾患または障害を治療または予防するためにも有用である。
【００６６】
本発明化合物は、アルツハイマー病の治療または予防にも有用である。
【００６７】
臓器または組織の移植に対する耐性または移植拒絶の予防または治療を要する哺乳動物患者に対して治療有効量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における臓器または組織の移植に対する耐性または移植拒絶の予防または治療方法も本発明に包含される。
【００６８】
免疫系の抑制を要する哺乳動物患者に対して免疫抑制量の式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記患者における免疫系の抑制方法も別の実施態様である。
【００６９】
特に、本明細書中に記載されている方法は、骨髄または臓器移植片拒絶の治療または予防を要する哺乳動物患者に対して骨髄または臓器移植片拒絶を治療または予防するのに有効な量の式Ｉを有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩または水和物を投与することを含む前記患者における骨髄または臓器移植片拒絶の治療または予防方法を包含する。
【００７０】
本発明化合物は、呼吸器疾患または状態、例えば喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、新生児呼吸窮迫症候群、咳、好酸球性肉芽腫、呼吸器合胞体ウイルス細気管支炎、気管支拡張症、特発性肺線維症、急性肺損傷及び器質化肺炎を伴う細気管支炎の治療のためにも有用である。
【００７１】
更に、本発明化合物は、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体よりも選択性を有するＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の選択的アゴニストである。Ｅｄｇ１選択的アゴニストは現在の治療よりも有利であり、リンパ球分離剤の治療枠を広げて、高用量でより耐性であり、よって単独治療としての効果が高められる。
【００７２】
本発明は、医薬的に許容され得る担体及び式Ｉを有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩または水和物を含む医薬組成物も含む。組成物の好ましい実施態様は、第２免疫抑制剤も配合されているものである。第２免疫抑制剤の例にはアザチオプリン、ブレキナルナトリウム、デオキシスペルグアリン、ミザリビン、ミコフェノール酸モルホリノエステル、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ラパマイシン、ＦＴＹ７２０及びＩＳＡｔｘ２４７（Ｉｓｏｔｅｃｈｎｉｋａ）が含まれるが、これらに限定されない。式Ｉを有する化合物と上記したものの１つ以上を含めた第２免疫抑制剤を同時投与する方法も本発明の範囲に包含される。
【００７３】
本発明化合物、その塩及び水和物は骨髄移植片、異種臓器移植片及び／または関連する苦痛、疾患及び病気の予防を含めた自己免疫性疾患の治療において有用である。
【００７４】
本発明化合物は、活性成分化合物を温血動物の身体の作用部位と接触させる手段により投与され得る。例えば、投与は経口、経皮を含めた局所、眼内、口腔内、鼻内、吸入、膣内、直腸内、槽内及び非経口であり得る。本明細書中で使用される用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内注射または注入、胸骨内及び腹腔内を含めた投与モードを指す。
【００７５】
本発明化合物は、個々の治療薬としてまたは治療薬の組合せで薬剤に関連して使用するために利用可能な便利な手段により投与され得る。本発明化合物は単独で投与してもよいが、通常選択した投与ルート及び標準の医薬プラクティスに基づいて選択した医薬用担体と一緒に投与される。
【００７６】
投与される用量は、レシピエントの年齢、健康及び体重；病気の程度；場合により行われる併用治療の種類；治療の頻度；及び所望する効果の種類に依存する。通常、活性成分化合物の１日用量は約０．１〜２０００ｍｇである。通常、所望の結果を得るためには１〜１００ｍｇ／日を１回または複数回で服用することが有効である。これらの用量は、自己免疫性疾患の治療、異種臓器移植片の拒絶の予防及び／または関連する苦痛、疾患及び病気のために有効な量である。
【００７７】
活性成分は固体剤形（例えば、カプセル剤、錠剤、トローチ剤、糖衣錠剤、顆粒剤及び散剤）または液体剤形（例えば、エリキシル剤、シロップ剤、乳濁液剤、分散液剤及び懸濁液剤）で経口投与され得る。活性成分を滅菌液体剤形（例えば、分散液剤、懸濁液剤または溶液剤）で非経口投与してもよい。活性成分を投与するために使用可能な他の剤形は、局所投与のための軟膏剤、クリーム剤、液滴剤、経皮パッチまたは散剤；眼科投与のための眼科溶液または懸濁液製剤、すなわち点眼剤；吸入または鼻内投与のためのエアゾールスプレーまたは粉末組成物；または直腸内または膣内投与のためのクリーム剤、軟膏剤、スプレー剤または座剤である。
【００７８】
ゼラチンカプセル剤は、活性成分及び粉末状担体（例えば、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等）を含む。圧縮錠剤を作成するために類似の希釈剤を使用してもよい。錠剤及びカプセル剤は、薬物を数時間にわたり連続放出させるための徐放性製品として製造され得る。不快な味を隠したり、錠剤を大気から保護するために圧縮錠に糖衣またはフィルムコーティングを被せてもよく、或いは胃腸管での選択的崩壊のために腸溶コーティングを被せてもよい。
【００７９】
経口投与用液体剤形は、患者がより喜んで服用するために着色剤及び着香剤を含有させてもよい。
【００８０】
通常、水、適当な油、食塩液、水性デキストロース（グルコース）及び関連糖溶液及びグリコール（例：プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）が非経口溶液のための適当な担体である。非経口投与用溶液が活性成分の水溶性塩、適当な溶解化剤、及び所要により緩衝物質を含むことが好ましい。単独または組み合わせた酸化防止剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウムまたはアスコルビン酸）が適当な安定化剤である。クエン酸及びその塩、ＥＤＴＡナトリウムも使用される。加えて、非経口溶液は保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、メチル−またはプロピルパラベン、及びクロロブタノール）を含有し得る。
【００８１】
適当な医薬用担体は、この分野の標準教書であるＡ．ＯｓｏｌのＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。
【００８２】
吸入による投与のために、本発明化合物は有利には圧縮パックまたはネブライザーからエアゾールスプレーの形態でデリバリーされ得る。本発明化合物は製剤化され得る粉末としてもデリバリーされ得、粉末組成物は通気粉末吸入デバイスを用いて吸入され得る。吸入用の好ましいデリバリーシステムは、式Ｉを有する化合物を適当な噴射剤（例えば、フルオロカーボンまたはハイドロカーボン）中に含む懸濁液または溶液として製剤化され得る定量噴霧式吸入（ＭＤＩ）エアゾールである。
【００８３】
眼内投与のためには、眼科製剤は、式Ｉを有する化合物が眼の角膜及び内部領域に浸透するのに十分な時間該化合物が眼表面に接触し続けるように適当な重量％の該化合物が適当な眼科用ビヒクル中に含まれる溶液または懸濁液として処方され得る。
【００８４】
本発明化合物を投与するための有用な医薬剤形を以下に説明する。
【００８５】
（カプセル剤）
多数の単位カプセル剤は、標準の２ピース硬ゼラチンカプセルの各々に１００ｍｇの粉末状活性成分、１５０ｍｇのラクトース、５０ｍｇのセルロース及び６ｍｇのステアリン酸マグネシウムを充填することにより作成される。
【００８６】
（軟ゼラチンカプセル剤）
活性成分を消化可能な油（例えば、大豆油、綿実油またはオリーブ油）中に含む混合物を調製し、容積移送式ポンプを用いてゼラチンに注入して、１００ｍｇの活性成分を含有する軟ゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄し、乾燥する。
【００８７】
（錠剤）
単位用量が１００ｍｇの活性成分、０．２ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素、５ｍｇのステアリン酸マグネシウム、２７５ｍｇの結晶セルロース、１１ｍｇのデンプン及び９８．８ｍｇのラクトースを含有するように複数個の錠剤を慣用の手順により作成する。口に合うようにまたは吸収を遅らすために適当なコーティングを被せてもよい。
【００８８】
（注射剤）
注射投与に適した非経口組成物は、１．５重量％の活性成分を１０容量％のプロピレングリコール中で撹拌することにより作成される。注射用蒸留水で所定容量とし、滅菌する。
【００８９】
（懸濁液剤）
各５ｍＬが１００ｍｇの微細活性成分、１００ｍｇのナトリウムカルボキシメチルセルロース、５ｍｇの安息香酸ナトリウム、１．０ｇのソルビトール溶液（米国薬局方）及び０．０２５ｍＬのバニリンを含有するように経口用水性懸濁液を作成する。
【００９０】
本発明化合物を段階的にまたは別の治療薬と一緒に投与するときには通常同一の剤形が使用され得る。薬物を物理的組合せで投与するときには、剤形及び投与ルートは併用薬物の相容性に依存して選択されなければならない。よって、用語「同時投与」は２つ以上の物質の同時または順次投与、或いは２つの活性成分の一定用量組合せ物としての投与を含むと理解される。
【００９１】
合成方法
本発明化合物を製造するための幾つかの方法を下記スキーム及び実施例に記載する。出発物質及び中間体は公知方法により、または他の方法で示されるように製造される。
【００９２】
スキーム１は、本発明において一般構造１−１１を有する（５−（１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニルピロリジン−３−イル）酢酸化合物を製造するための便利な方法を示す。適切に置換されたアニソール１−１を無水トリフリック酸（Ｂｕｌｌ．Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０：１２５３−１２５４（１９９９））または五酸化リン及びメタンスルホン酸（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３０：７０５７−７０６０（１９８９））の存在下高温でピログルタミン酸１−２で処理して、ラクタム１−３を得る。１−３の５−メトキシ基の１−４のニトリル基への変換は、３ステップシーケンス：１）１−３を適当な溶媒（例えば、ジクロロメタンまたはジクロロエタン）中で強ルイス酸（例えば、ＴＭＳＩ、ＡｌＣ１３、ＢＣｌ３またはＢＢｒ３）を用いて脱メチル化してフェノールを得るステップ；２）適当な溶媒（例えば、ジクロロメタン、ジクロロエタン、Ｎ−メチルピロリジノンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中適当な塩基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピリジンまたはルチジン）の存在下で無水トリフルオロメタンスルホン酸、２−（Ｎ，Ｎ−ビス（トリフルオロメチルスルホニル）アミノ）−５−クロロピリジンまたはＮ−フェニル−ビス（トリフルオロメタンスルホンイミド）を用いてトリフルオロメタンスルホン酸エステル（すなわち、トリフレート）を形成するステップ；及び３）トリフレートを室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン、Ｎ−メチルピロリジノンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中適当なリガンド（例えば、トリフェニルホスフィンまたは１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）を用いてシアン化亜鉛またはシアン化銅及びパラジウム（０）触媒で処理するステップ；で実施され得る。１−５を得るためのアリル基の導入は、２ステップシーケンス：１）１−４のラクタムを適当な保護基（Ｐ）（例えば、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃまたはトリフルオロアセチル）で保護するステップ；及び２）生じたＮ−保護ラクタムを強塩基（例えば、リチウムＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドまたは水素化ナトリウム）で処理した後アリル求電子試薬を添加するステップ；で実施され得る。トランス付加物及びシス付加物の混合物が得られ得、これら２つの立体異性体は当業者に公知の方法、例えばシリカゲルクロマトグラフィー、ＨＰＬＣまたは結晶化を用いて容易に分離され得る。ヨウ化アリル及びリチウムＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミドを使用したときにはトランス付加物が主に形成され得る。シス付加物は、反応混合物から単離するかまたはトランス付加物を上記強塩基を用いてエピマー化することにより容易に得ることができる。１−５のオレフィンの１−６のエステルへの変換は、２ステップシーケンス：１）１−５のオレフィンを文献（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９２年）発行，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐ．１１８１−１１８３のＪ．Ｍａｒｃｈ，“Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｆ  Ｄｏｕｂｌｅ  Ｂ��ｎｄｓ  ａｎｄ  Ａｒｏｍａｔｉｃ  Ｒｉｎｇｓ”参照）で考察されている当業者に公知の方法を用いてカルボン酸に酸化開裂するステップ；及び２）生じたカルボン酸を強酸（例えば、Ｈ２ＳＯ４またはＨＣｌ）の存在下で（トリメチルシリル）ジアゾメタン、ジアゾメタン、またはＭｅＯＨまたはＥｔＯＨのいずれかを用いてエステル化して１−６を得るステップ；で実施され得る。保護基Ｐの除去はＰの化学的種類に応じて実施され得る。例えば、ＰがＢｏｃ基ならば、１−６を強プロトン性酸（例えば、トリフルオロ酢酸または塩酸）を用いて加水分解するとラクタム１−７が得られる。ニトリル１−７を室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ）中適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸水素ナトリウム）の存在下でヒドロキシルアミン塩酸塩で処理すると、アミドキシム１−８が得られる。このアミドキシム１−８を適当な塩基及び溶媒の存在下で活性化カルボン酸で処理すると、一般構造１−９を有するＮ−アシルオキシアミジンが得られる。この反応においてカルボン酸は溶媒（例えば、１，２−ジクロロエタン、トルエン、キシレン、ＴＨＦ、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリジノン）中（所要により）適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸水素ナトリウム）の存在下で試薬（例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＥＤＣ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、１，１’−カルボニルジイミダゾールまたはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド）を用いてアシル化するために活性化され得る。或いは、酸クロリド、酸無水物、アシルイミダゾールまたはペンタフルオロフェニルカルボン酸エステルを上記した塩基及び溶媒の存在下で使用しても１−９が得られる。中間体１−９は当業者に公知の方法、例えばシリカゲルクロマトグラフィー、ＨＰＬＣまたは結晶化により単離され得、その後のステップで適当な溶媒（例えば、１，２−ジクロロエタン、トルエン、キシレン、ＴＨＦ、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリジノン）中で加温することにより環化／脱水すると、構造１−１０を有する１，２，４−オキサジアゾールが得られる。１−９の１−１０への変換には適当な塩基（例えば、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはテトラブチルアンモニウムフロリド）の添加が必要なことがある。１−８から１−１０への変換を連続プロセスとして実施し得るようにＮ−アシルオキシアミジン１−９を単離しないことがより便利であったり望ましいことがある。１，２，４−オキサジアゾールを製造するための他の方法は潜在的に本発明に適切であり、当業者に公知であり、文献（Ｋ．Ｔ．Ｐｏｔｔｓ編，Ｐｅｒｇａｒｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９８４年）発行，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第６巻，ｐ．３６６−９１のＬ．Ｂ．Ｃｌａｐｐ，“１，２，３−  ａｎｄ  １，２，４−Ｏｘａｄｉａｚｏｌｅｓ”参照）で考察されて���る。最終化合物１−１１は、１−１０から３ステップシーケンス：１）１−１０のラクタムを適当な溶媒（例えば、ジクロロロメタンまたはジクロロエタン）中トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート、メタンスルホニルフロリドまたは硫酸ジメチルを用いてイミノエーテルに変換するステップ；２）イミノエーテルを（所要により）４〜５のｐＨ範囲で適当な溶媒（例えば、メチル、エチルまたはイソプロピルアルコール）中適当な還元剤（例えば、シアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナトリウム）を用いて還元するステップ；及び３）カルボン酸エステルを−ＣＯ２Ａの化学構造に応じてカルボン酸に加水分解する（すなわち、−ＣＯ２Ａ→−ＣＯ２Ｈ）ステップ；で得られ得る。この代表例には、Ａが−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３ならば、室温以上の温度で適当な補助溶媒（例えば、メタノール、エタノール、ジオキサンまたはＴＨＦ）の存在下で水性水酸化リチウム、ナトリウムまたはカリウムで処理して１−１１を得ることが含まれるが、これに限定されない。
【００９３】
【化８】
2008517915.tif 000008
【００９４】
スキーム２は、アミドキシム中間体、例えば、２−２、２−４及び２−６を製造するための３つの代替方法を記載する。これらの中間体は、スキーム１における中間体１−８と同様にしてカルボン酸または活性化カルボン酸と縮合させてスキーム１中の１−１０のような１，２，４−オキサジアゾール中間体を形成するために使用され得る。この中間体をその後スキーム１に記載されているのと同様の適切な官能基変換にかけると、本明細書に記載されている一般構造１−１１を有する化合物が得られ得る。１−５の保護基Ｐの除去は、Ｐの化学的種類に応じて塩基性または酸性条件下で実施され得る（スキーム２−１）。例えば、ＰがＢｏｃ基ならば、１−５を強プロトン性酸（例えば、トリフルオロ酢酸または塩酸）を用いて加水分解するとラクタム２−１が得られる。その後、ラクタム２−１を室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ）中適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸水素ナトリウム）の存在下でヒドロキシルアミン塩酸塩で処理すると、アミドキシム２−２が得られる。その後、アミドキシム２−２（及びこのスキームに挙げられている他のアミドキシム）を１−８から１−１１へ変換するために記載されているスキーム１の手順と同様の適切な手順の組合せを用いて本明細書中に記載されている化合物に変換する。一方、ラクタム２−１は、３ステップシーケンス（スキーム２−２）：１）２−１のラクタムを適当な溶媒（例えば、ジクロロメタンまたはジクロロエタン）中でトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート、メタンスルホニルフロリドまたは硫酸ジメチルを用いてイミノエーテルに変換するステップ；２）イミノエーテルを（所要により）４〜５のｐＨ範囲で適当な溶媒（例えば、メタノール、エタノールまたはイソプロピルアルコール）中適当な還元剤（例えば、シアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナトリウム）を用いて還元するステップ；及び３）生じたピロリジンを適当な保護基（Ｐ’）（例えば、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃまたはトリフルオロアセチル）で保護するステップ；で保護ピロリジンにも変換され得る。次いで、ピロリジン２−３を室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ）中適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸水素ナトリウム）の存在下でヒドロキシルアミン塩酸塩で処理すると、アミドキシム２−４が得られる。また、Ｎ−保護ラクタム１−６は、４ステップシーケンス（スキーム２−３）：１）Ｐの化学的種類に応じて、１−６の保護基Ｐを上記したように塩基性または酸性条件下で除去するステップ（スキーム２−１）；２）生じたラクタムを適当な溶媒（例えば、ジクロロロメタンまたはジクロロエタン）中トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート、メタンスルホニルフロリドまたは硫酸ジメチルを用いてイミノエーテルに変換するステップ；３）イミノエーテルを（所要により）４〜５のｐＨ範囲で適当な溶媒（例えば、メタノール、エタノールまたはイソプロピルアルコール）中適当な還元剤（例えば、シアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナトリウム）を用いて還元するステップ；及び４）生じたピロリジンを適当な保護基（Ｐ’）（例えば、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃまたはトリフルオロアセチル）で保護するステップ；でＮ−保護ピロリジン２−５に変換され得る。最後に、ピロリジン２−５を室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ）中適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸水素ナトリウム）の存在下でヒドロキシルアミン塩酸塩で処理すると、アミドキシム２−６が得られる。
【００９５】
【化９】
2008517915.tif 000009
【００９６】
スキーム３は、スキーム１における１−３に類似の５−アリール−ピロリジノンまたは６−アリール−ピペリドンを合成するため２つの代替方法を概説する。まず、適切に置換されたアニソール１−１を適当な溶媒（例えば、ジクロロメタンまたはジクロロエタン）中適当なルイス酸（例えば、三塩化アルミニウム、塩化第二鉄、塩化亜鉛または三フッ化ホウ素）の存在下で無水コハク酸または無水グルタル酸を用いてアシル化すると、ケトカルボン酸が得られる。これをその後０℃以上の温度で適当な酸（例えば、テトラフルオロボロン酸、塩酸または濃Ｈ２ＳＯ４）の存在下でメタノールで処理すると、メチルエステル３−２が得られる（スキーム３−１）。ケトン３−２を室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、メタノール、エタノールまたはイソプロピルアルコール）中適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムまたは酢酸ナトリウム）の存在下でヒドロキシルアミン塩酸塩で処理すると、ケトキシム３−３が得られる。ケトキシム３−３を適当な溶媒（例えば、メタノール、エタノールまたは酢酸）中（所要により）プロトン性酸（例えば、塩酸または酢酸）の存在下で適当な触媒（例えば、炭素担持パラジウム、炭素担持水酸化パラジウム、酸化白金（ＩＶ）またはラネーニッケル）上で水素化すると、アミンが得られる。このアミンをその後室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、ＴＨＦ、エーテル、ピリジンまたはトルエン）中適当な塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、ルチジン、炭酸カリウムまたは炭酸ナトリウム）で処理すると、１−３に類似のピロリジノンアナログまたはピペリドンが得られる。或いは、適切に置換されたハロゲン化フェニルマグネシウムを５−エトキシ−２−ピロリジノン（Ｏｒｇ．Ｐｒｅｐ．Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．，２５：２５５−２５８（１９９３））または６−エトキシ−２−ピペリドン（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，７：６１５−６２２（１９７０））と反応させると、それぞれ１−３に類似のピロリジノンまたはピペリドンが得られる。グリニャール試薬３−４は、当業者に公知であり、文献（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９２年）発行，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｎｉｓｔｒｙ，ｐ．６２２−６２５のＪ．Ｍａｒｃｈ，“Ａｌｉｐｈａｔｉｃ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ”及びＰ．Ｋｎｏｃｈｅｌら，“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｍａｉｎ−Ｇｒｏｕｐ  Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，７４：１１−１７（２００２）参照）に考察されている方法を用いて製造され得る。Ｒ１〜Ｒ４及びＲ１２は反応条件に適合する官能基であり、後者は当業者に公知の方法を用いてその後のオキサジアゾールの合成のためにアミドキシムに容易に変換され得る。
【００９７】
【化１０】
2008517915.tif 000010
【００９８】
スキーム４は、ピロリジノンまたはピペリドン環に酢酸官能基を導入するための３つの代替方法を示す。まず、適切に置換されている５−アリール−ピロリジノンまたは６−アリール−ピペリドン４−１を低温で適当な溶媒（例えば、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ＴＨＦ、エーテルまたはトルエン）中強塩基（例えば、リチウムＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドまたは水素化ナトリウム）で処理した後、２−ハロ酢酸アルキルまたは２−トリフルオロスルホニルオキシ酢酸アルキル（ここで、アルキル基はメチル、エチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり得、ハライドはクロリド、ブロミドまたはヨードであり得る）を添加すると、４−２が得られる（スキーム４−１）。ラクタム４−２の本明細書中に記載されている化合物への変換は、当業者に公知であり、スキーム１に記載されている方法と同様の方法を用いて実施され得る。或いは、ピロリジノンまたはピペリドン４−１を低温で適当な溶媒（例えば、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ＴＨＦ、エーテルまたはトルエン）中上記強塩基で処理した後、クロロギ酸アルキル（ここで、アルキル基はメチル、エチルまたはイソプロピルであり得る）を添加すると、４−３が得られる。ピロリジノンまたはピペリドン４−３のピロリジンまたはピペリジン４−４への変換は、３ステップシーケンス（スキーム４−２）：１）４−３のラクタムを適当な溶媒（例えば、ジクロロメタンまたはジクロロエタン）中トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート、メタンスルホニルフロリドまたは硫酸ジメチルを用いてイミノエーテルに変換するステップ；２）イミノエーテルを（所要により）４〜５のｐＨ範囲で適当な溶媒（例えば、メタノール、エタノールまたはイソプロピルアルコール）中適当な還元剤（例えば、シアノホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化ナトリウム）を用いて還元するステップ；及び３）生じたピロリジンを適当な保護基（Ｐ’）（例えば、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃまたはトリフルオロアセチル）で保護するステップ；で実施され得る。４−４のエステルの還元は、低温で適当な溶媒（例えば、ジクロロメタン、ジクロロエタン、トルエン、ＴＨＦまたはエーテル）中適当な還元剤（例えば、水素化アルミニウムリチウム、水素化ジイソブチルアルミニウムまたはトリエチルホウ水素化リチウム）を用いて実施され得る。４−５のヒドロキシ基のシアニド４−６への変換は、２ステップシーケンス：１）ヒドロキシ基を当業者に公知の方法を用いて適当な離脱基（例えば、メシレート、トシレート、トリフレート、ブロミドまたはヨージド）に変換するステップ；及び２）生じた離脱基を室温以上の温度で適当な溶媒（例えば、メチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはアセトン）中シアン化ナトリウム、シアン化カリウムまたはシアン化テトラブチルアンモニウムを用いて置換するステップ；で実施され得る。４−６のシアニド基の加水分解は、高温で適当な補助溶媒（例えば、メタノール、エタノールまたはイソプロピルアルコール）中水性水酸化リチウム、ナトリウムまたはカリウムを用いて実施され得る。最後に、ピロリジノンまたはピペリドン４−１を適当な溶媒（例えば、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ＴＨＦ、エーテルまたはトルエン）中上記した強塩基で処理した後、アルデヒドまたはケトンを添加し、その後適当なプロトン性酸（例えば、塩酸）を添加すると、４−８が得られる（スキーム４−３）。ヒドロキシ基は当業者に公知であるスキーム１及びスキーム４に概説した方法を用いて容易にカルボン酸に変換され得る。
【００９９】
【化１１】
2008517915.tif 000011
【０１００】
最後に、スキーム５は、容易に酢酸に変換され得る官能基を有する２−アリール−４−ピロリジンを製造するための２つのヘテロ［２＋３］付加環化方法を示す。６，６−ジメチル−４，８−ジオキサ−ｌ−メチレンスピロ［２，５］オクタン５−１を（所要により）密封反応管において高温で適当な溶媒（例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ベンゼン、トルエンまたはキシレン）中適切に置換されたベンズアルドヒド−Ｏ−メチルオキシム５−２と反応させると、ケテンアセタール５−３が得られ得る（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６３：１６９４−１７０３（１９９８））。ケテンアセタール５−３の加水分解は、適当な溶媒（例えば、ＴＨＦまたはアセトニトリル）中適当な水性プロトン性酸（例えば、酢酸または塩酸）の存在下で実施され得る。ピロリジン５−４は、当業者に公知の方法を用いて本明細書中に記載されている化合物に変換され得る。一方、Ｎ−トシルイミン５−５を高温で適当な溶媒（例えば、ＴＨＦまたはジオキサン）中適当なリガンド（例えば、トリフェニルホスフィンまたはトリイソプロピルホスファイト）を用いてパラジウム（０）触媒の存在下で（（トリメチルシリル）メチル）アリル酢酸５−６と反応させ得る（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１５：６６３６−６６４５（１９９３））。ピロリジン５−７は当業者に公知の方法を用いて本明細書に記載されている化合物に変換され得る。
【０１０１】
【化１２】
2008517915.tif 000012
【０１０２】
代表的実施例
本発明化合物を以下に例示する。
【０１０３】
一般的方法
湿気または空気に対して感受性の反応は、窒素またはアルゴン下無水の溶媒及び試薬を用いて実施した。反応の進行は、ＬＣ−ＭＳまたはＥ．ＭｅｒｃｋプレコーティングしたＴＬＣプレート（シリカゲル６０Ｆ−２５４，層厚さ０．２５ｍｍ）を用いて実施した分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により調べた。溶液の濃縮は減圧下回転蒸発器を用いて実施した。フラッシュクロマトグラフィーは、指定のサイズの予充填したカートリッジ中のシリカゲル（３２〜６３ｍＭ，６０Å孔径）、Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー装置（Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．）を用いて実施した。別段の記載がない限り、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはＣＤＣ１３溶液中５００ＭＨｚ分光計を用いて取得した。化学シフトはｐｐｍで記録した。テトラメチルシラン（ＴＭＳ）をＣＤ３Ｃｌ溶液中内部標準として使用し、残留ＣＨ３ＯＨピークまたはＴＭＳをＣＤ３ＯＤ溶液中内部標準として使用した。カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で報告した。略号：酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、ジエチルエーテル（エーテルまたはＥｔ２Ｏ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、飽和水性（ｓａｔ’ｄ）、室温（ｒｔ）、時間（ｈまたはｈｒ）、分（ｍｉｎ）。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、ＡＤＶ７３１０２０  １００×２０ｍｍカラムを用い、２３分間で１０：９０→９５：５（ｖ／ｖ）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋（ｖ）０．０５％  ＴＦＡに勾配させ、その後７分間は９５：５（ｖ／ｖ）ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．０５％  ＴＦＡに保持し、１０ｍＬ／分、２５４ｎｍで実施した。
【０１０４】
（アミドキシム中間体の製造）
アミドキシム１
トランス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
ステップＡ：５−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシフェニル）−２−ピロリジノン
５−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ピロリジノン（１．４７ｇ，８．３０ミリモル）及びＮ−フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド（４．４５ｇ，１２．４５ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液にＤＩＥＡ（２．８９ｍＬ，１６．６ミリモル）を添加し、混合物をｒｔで一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ブライン（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３×５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液としてＥｔＯＡｃを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、２．４５ｇ（９６％）の標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．９０−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．５１（ｍ，２Ｈ），２．５７−２．６５（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｔ，Ｊ＝７．１，１Ｈ），６．９２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．２７−７．３０（ｍ，２Ｈ），７．３８−７．４２（ｍ，２Ｈ）。
【０１０５】
ステップＢ：５−（４−シアノフェニル）−２−ピロリジノン
５−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシフェニル）−２−ピロリジノン（２．４５ｇ，８．２２ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（４７５ｍｇ，０．４１ミリモル）及びシアン化亜鉛（１．４５ｇ，１２．３ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液に窒素を３回流した後、８０℃で撹拌した。３時間後、混合物をｒｔまで冷却し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、セライトケーキを介して濾過した。固体をＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を合わせ、濃縮した。溶離液として９：１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ＣＨ３ＯＨを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、２．６８ｇ（１００％）の標記化合物（微量のＤＭＦを含有）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．９０−１．９７（ｍ，１Ｈ），２．４３−２．５１（ｍ，２Ｈ），２．６０−２．６７（ｍ，１Ｈ），４．８５（ｔ，Ｊ＝７．２，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．８，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）。
【０１０６】
ステップＣ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−ピロリジノン
上記ニトリル（２．６８ｇ，８．２２ミリモル）及びジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３．５９ｇ，１６．４ミリモル）をＣＨ２Ｃ１２（２０ｍＬ）中に含む溶液に４−（ジメチルアミノ）ピリジン（５０ｍｇ，０．４１ミリモル）を添加した。混合物をｒｔで一晩撹拌した後、濃縮した。溶離液として９：１１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、１．１６ｇ（７４％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．３０（ｓ，９Ｈ），１．８２−１．５９（ｍ，１Ｈ），２．４８−２．６９（ｍ，３Ｈ），５．１９（ｄｄ，Ｊ＝４．２，８．３，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１０７】
ステップＤ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン
リチウムジイソプロピルアミド（２．８０ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液を新しく調製し、これを−７８℃でＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−ピロリジノン（７６３ｍｇ，２．６７ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液に滴下した。−７８℃で１時間撹拌した後、ヨウ化アリル（４８８μＬ，５．３３ミリモル）を添加した。混合物を−７８℃で１時間撹拌した後、ｓａｔ’ｄ  ＮＨ４Ｃ１溶液（５．０ｍＬ）でクエンチした。混合物をブライン（２０ｍＬ）とＣＨ２Ｃ１２（２０ｍＬ）の混合物に注ぎ、水性層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：４（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、７４５ｍｇ（８６％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．３５（ｓ，９Ｈ），１．９９−２．０５（ｍ，１Ｈ），２．２１−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．６３−２．７６（ｍ，２Ｈ），５．０６−５．１１（ｍ，２Ｈ），５．１７−５．２０（ｍ，１Ｈ），５．６８−５．７７（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ）。
【０１０８】
ステップＥ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン（２５２ｍｇ，０．７７ミリモル）及び過ヨウ素酸ナトリウム（７４４ｍｇ，３．４８ミリモル）を２：２：３（ｖ／ｖ／ｖ）ＣＣ１４／ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏの混合溶媒（１４．０ｍＬ）中に含む溶液に塩化ルテニウム（１ＩＩ）水和物（３．５ｍｇ，０．０２ミリモル）を添加した。混合物をｒｔで１時間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に分配した。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃ１２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、粗な酸を無色シロップとして得た。これを更に精製せずに次ステップに使用した。
【０１０９】
ステップＦ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
上記した粗な酸を７：２（ｖ／ｖ）ベンゼン／ＣＨ３ＯＨの混合溶媒（１８ｍＬ）中に含む溶液に（トリメチルシリル）ジアゾメタン（ヘキサン中２．０Ｍ，５８０μＬ，１．１６ミリモル）を添加した。３０分後、反応混合物を濃縮した。溶離液として９：１１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、２６１ｍｇ（２ステップで９４％）の標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．３６（ｓ，９Ｈ），２．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝１．１，８．７，１３．０，１Ｈ），２．２９−２．３６（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１７．２，１Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１７．１，１Ｈ），３．０２−３．０６（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）。
【０１１０】
ステップＧ：トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
上記メチルエステル（２６１ｍｇ，０．７３ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２中２０％  ＴＦＡの溶液（１０ｍＬ）をｒｔで１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に溶解し、ｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ×２）及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として４：１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、１６７ｍｇ（８９％）の標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．２５−２．３１（ｍ，１Ｈ），２．４２−２．５４（ｍ，２Ｈ），２．８２−２．９２（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），４．８４（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１１１】
ステップＨ：トランス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル｝フェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
生じたラクタム（１６７ｍｇ，０．６５ミリモル）及び炭酸水素ナトリウム（２７２ｍｇ，３．２４ミリモル）をＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中に含む溶液にヒドロキシルアミン塩酸塩（４５ｍｇ，０．６５ミリモル）を添加した。混合物を５時間還流した後ｒｔまで冷却した。沈殿を０．２μフィルターを介して濾別し、ＣＨ３ＯＨ（１００ｍＬ）で十分洗浄した。濾液を濃縮して、所望のアミドキシムを白色固体として得た。これを更に精製することなく使用した。
【０１１２】
アミドキシム２
シス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
ステップＡ：シス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン
リチウムジイソプロピルアミド（０．７５ミリモル）をＴＨＦ（５ｍＬ）中に含む溶液を新しく調製し、これを−７８℃でトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン（２２３ｍｇ，０．６８ミリモル）をＴＨＦ（５ｍＬ）中に含む溶液に滴下した。−７８℃で１時間撹拌した後、ｓａｔ’ｄ  ＮＨ４Ｃ１溶液（５．０ｍＬ）を添加することにより反応物をクエンチした。混合物をｒｔまで加温し、ブライン（２０ｍＬ）とＣＨ２Ｃ１２（２０ｍＬ）の混合物に注いだ。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：３（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、１０３ｍｇ（４６％）の標記化合物及び１２０ｍｇ（５４％）の出発物質を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２４（ｓ，９Ｈ），１．５０−１．５７（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．２８（ｍ，１Ｈ），２．５６−２．７７（ｍ，３Ｈ），４．９４−５．０７（ｍ，３Ｈ），５．７１−５．７８（ｍ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１１３】
ステップＢ：シス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンの代わりにシス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＥに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗な酸を更に精製せずに次ステップに使用した。
【０１１４】
ステップＣ：シス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸の代わりにシス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸を用い、アミドキシム１のステップＦに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２４（ｓ，９Ｈ），１．６２−１．６９（ｍ，１Ｈ），２．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１７．２，１Ｈ），２．６９−２．７６（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝３．９，１７．４，１Ｈ），２．９８−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝７．５，９．５，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ）。
【０１１５】
ステップＤ：シス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにシス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルを用い、アミドキシム１のステップＧに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．６７−１．７４（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１７．１，１Ｈ），２．８０−２．９８（ｍ，３Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），４．７５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，９．３，１Ｈ），６．５１（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１１６】
ステップＥ：シス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
シス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルを用い、アミドキシム１のステップＨに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗なアミドキシムを更に精製せずに使用した。
【０１１７】
アミドキシム３
トランス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジン
ステップＡ：トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジンを用い、アミドキシム１のステップＧに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．０５−２．１２（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．３８−２．４４（ｍ，１Ｈ），２．５４−２．６４（ｍ，２Ｈ），４．７７（ｄｄ，Ｊ＝４．３，８．６，１Ｈ），５．０８−５．１４（ｍ，２Ｈ），５．７４−５．８０（ｍ，１Ｈ），６．５５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１１８】
ステップＢ：トランス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジンを用い、アミドキシム１のステップＨに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗なアミドキシムを更に精製せずに使用した。
【０１１９】
アミドキシム４
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
ステップＡ：トランス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−ピロリジン酢酸メチル
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル（アミドキシム１のステップＥ参照）（１９６ｍｇ，０．７６ミリモル）及びトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（１３５ｍｇ，０．９１ミリモル）をＣＨ２Ｃ１２（１０ｍＬ）中に含む溶液をｒｔで一晩撹拌した。混合物をｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、水性層をＣＨ２Ｃ１２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、所望のメトキシイミン（２０７ｍｇ，１００％）を無色シロップとして得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．１５−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．３３−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｄｄ，Ｊ＝９．５，１６．２，１Ｈ），２．７５（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１６．２，１Ｈ），３．２２−３．２８（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，８．３，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１２０】
ステップＢ：トランス−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
メトキシイミン（２０７ｍｇ，０．７６ミリモル）及び少量のブロモクレゾールグリーンをＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中に含む溶液にシアノホウ水素化ナトリウム溶液（ＴＨＦ中１．０Ｍ，７．６ｍＬ，７．６ミリモル）を添加した。色を黄色に保つために反応混合物にＨＣｌを１，４−ジオキサン（２．０Ｍ）中に含む溶液を添加し、生じた混合物をｒｔで４時間撹拌した。ｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３及びＣＨ２Ｃ１２に注ぎ、水性層を更にＣＨ２Ｃ１２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、粗なアミン（１５８ｍｇ，８５％）を得た。これを更に精製せずに次ステップで使用した。
【０１２１】
ステップＣ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
生じたアミン（１５８ｍｇ，０．６５ミリモル）及び触媒量の４−ジメチルアミノピリジンをＣＨ２Ｃ１２（１０ｍＬ）中に含む溶液にジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１７０ｍｇ，０．７８ミリモル）を添加した。混合物をｒｔで３時間撹拌した。混合物を濃縮した。溶離液として３：７（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、２０８ｍｇ（９３％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２０−１．４５（ｍ，９Ｈ），１．９９−２．１４（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．６３（ｍ，３Ｈ），３．１７−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．８６−３．８８（ｍ，１Ｈ），４．８７−４．８９（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．０，２Ｈ）。
【０１２２】
ステップＤ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）ピロリジン酢酸メチル
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチルを用い、アミドキシム１のステップＨに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗なアミドキシムを更に精製せずに使用した。
【０１２３】
アミドキシム５
シス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
ステップＡ：シス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−ピロリジン酢酸メチル
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにシス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル（アミドキシム２のステップＣ参照）を用い、アミドキシム４のステップＡに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．５１−１．５８（ｍ，１Ｈ），２．４１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，１６．６，１Ｈ），２．７９（ｄｄ，Ｊ＝４．５，１６．６，１Ｈ），２．８３−２．９０（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．３４（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝８．２，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１２４】
ステップＢ：シス−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
トランス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−ピロリジン酢酸メチルの代わりにシス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−ピロリジン酢酸メチルを用い、アミドキシム４のステップＢに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。
【０１２５】
ステップＣ：シス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
トランス−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチルの代わりにシス−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチルを用い、アミドキシム４のステップＣに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ８  １．１２−１．５１（ｍ，１０Ｈ），２．３５−２．６４（ｍ，４Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝９．９，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），４．０２−４．０８（ｍ，１Ｈ），４．７２−４．８１（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．１，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１２６】
ステップＤ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにシス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチルを用い、アミドキシム１のステップＨに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗なアミドキシムを更に精製せずに使用した。
【０１２７】
アミドキシム６
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジン
ステップＡ：トランス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン（アミドキシム１のステップＣ参照）を用い、アミドキシム４のステップＡに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗な生成物を更に精製せずに次ステップに使用した。
【０１２８】
ステップＢ：トランス−２−（４−シアノフェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−２−（４−シアノフェニル）−２−Ｈ−３，４−ジヒドロ−５−メトキシ−４−（２−プロペニル）−ピロリジンを用い、アミドキシム４のステップＢに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。
【０１２９】
ステップＣ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−シアノフェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−２−（４−シアノフェニル）−４−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−２−（４−シアノフェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジンを用い、アミドキシム４のステップＣに記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２０−１．４６（ｍ，９Ｈ），１．８９−２．２８（ｍ，５Ｈ），３．１４−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．７１−３．８１（ｍ，１Ｈ），５．００−５．０７（ｍ，３Ｈ），５．６８−５．７７（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．０，２Ｈ）。
【０１３０】
ステップＤ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）フェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−シアノフェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジンを用い、アミドキシム１のステップＨに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗なアミドキシムを更に精製せずに使用した。
【０１３１】
アミドキシム７
トランス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）−３−メチル−フェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジン
ステップＡ：５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−２−ピロリジノン
２−ピロリジノン−５−カルボン酸（２．０ｇ，１５．５ミリモル）及び２−メチルアニソール（２．１ｍＬ，１７．０ミリモル）を五酸化リン（１．０ｇ，３．５２ミリモル）とメタンスルホン酸（６．７ｍＬ）の混合物に添加した。混合物を１００℃で２時間加熱し、ｒｔまで冷却し、Ｈ２ＯとＣＨ２Ｃ１２の混合物に注いだ。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として４：１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、１．７８ｇ（５６％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．８８−１．９７（ｍ，１Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．３５−２．５４（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），４．６６（ｔ，Ｊ＝７．１，１Ｈ），６．５３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．６，１Ｈ），７．０５−７．０９（ｍ，２Ｈ）。
【０１３２】
ステップＢ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−２−ピロリジノン
５−（４−シアノフェニル）−２−ピロリジノンの代わりに５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＣに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２９（ｓ，９Ｈ），１．８４−１．９０（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．３９−２．５３（ｍ，２Ｈ），２．６４−２．７１（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），５．０７（ｄｄ，Ｊ＝３．６，８．３，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ），６．９８−７．００（ｍ，２Ｈ）。
【０１３３】
ステップＣ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジン
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンの代わりにＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＤに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．３４（ｓ，９Ｈ），２．００−２．０４（ｍ，１Ｈ），２．１２−２．２４（ｍ，５Ｈ），２．６３−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．７４−２．８１（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），５．０３−５．１０（ｍ，３Ｈ），５．６９−５．７７（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．３，１Ｈ），６．９４−６．９７（ｍ，２Ｈ）。
【０１３４】
ステップＤ：トランス−５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＥに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．０７−２．１３（ｍ，１Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．２２−２．３３（ｍ，２Ｈ），２．５５−２．６０（ｍ，１Ｈ），２．６２−２．６６（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），４．６１−４．６３（ｍ，１Ｈ），５．０６−５．１４（ｍ，２Ｈ），５．７７−５．８２（ｍ，１Ｈ），５．９９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），７．０３−７．０６（ｍ，２Ｈ）。
【０１３５】
ステップＥ：トランス−５−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン
−７８℃でトランス−５−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン（１．１３ｇ，４．６１ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（１０．０ｍＬ）中に含む溶液に三臭化ホウ素（１０．１ｍＬ，ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍ，１０．１ミリモル）を滴下した。混合物を−７８℃で３０分間攪拌した後、０℃で１時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）により反応物をクエンチした。混合物をエチルエーテルとＥｔＯＡｃの混合物（１：１，５０．０ｍＬ）に注ぎ、２．０Ｎ  ＮａＯＨ（３×３０ｍＬ）で抽出した。水性層を合わせ、５．０Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、９４０ｍｇ（８８％）の粗な標記化合物を明褐色固体として得た。これを更に精製せずに次ステップのために使用した。
【０１３６】
ステップＦ：トランス−５−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン
５−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ピロリジノンの代わりにトランス−５−（４−ヒドロキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＡに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．０８−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．３４−２．４０（ｍ，４Ｈ），２．５５−２．６６（ｍ，２Ｈ），４．６８−４．７１（ｍ，１Ｈ），５．０８−５．１５（ｍ，２Ｈ），５．７５−５．８３（ｍ，１Ｈ），６．３３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．５，１Ｈ），７．２１−７．２４（ｍ，２Ｈ）。
【０１３７】
ステップＧ：トランス−５−（４−シアノ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノン
５−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシフェニル）−２−ピロリジノンの代わりにトランス−５−（４−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＢに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．０６−２．１１（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．３６−２．４２（ｍ，１Ｈ），２．５５−２．６４（ｍ，５Ｈ），４．７１−４．７３（ｍ，１Ｈ），５．０８−５．１４（ｍ，２Ｈ），５．７４−５．８０（ｍ，１Ｈ），６．４１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），７．２３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．８，１Ｈ）。
【０１３８】
ステップＨ：トランス−５−（４−（アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル）−３−メチル−フェニル）−２−オキソ−３−（２−プロペニル）−ピロリジン
トランス−５−（４−シアノフェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチルの代わりにトランス−５−（４−シアノ−３−メチル−フェニル）−３−（２−プロペニル）−２−ピロリジノンを用い、アミドキシム１のステップＨに記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。粗なアミドキシムを更に精製せずに使用した。
【０１３９】
（カルボン酸中間体の製造）
カルボン酸１
４−（４−フルオロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸
ステップＡ：（Ｅ／Ｚ）−（２−（４−フルオロフェニル）−３−クロロ−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタナール
オキシ塩化リン（６．８ｍＬ，７４ミリモル）を０℃でＤＭＦ（２５ｍＬ）に添加した。生じた混合物をｒｔまで加温し、１時間撹拌した。１，１，１−トリフルオロメチル−３−（４−フルオロフェニル）−２−プロパノン（５．１ｇ，２４．８ミリモル）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液を添加し、生じた混合物を７０℃で２０時間撹拌した。反応混合物をｒｔまで冷却し、氷（１００ｇ）に注ぎ、酢酸ナトリウム（６．０ｇ）を添加した。混合物を周囲温度で１時間撹拌した後、エーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：１９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、４．０ｇ（６４％）の標記化合物を得た。
【０１４０】
ステップＢ：（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸エチル
０℃でメルカプト酢酸エチル（２．１ｍＬ，１９．１ミリモル）及び水素化ナトリウム（４８２ｍｇ，１９．１ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中に含む懸濁液に（Ｅ／Ｚ）−（２−（４−フルオロフェニル）−３−クロロ−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタナール（４．０ｇ，１５．９ミリモル）を添加した。ｒｔで一晩撹拌した後、反応物をｓａｔ’ｄ  ＮＨ４Ｃ１（５０ｍＬ）でクエンチした。混合物をエーテル（２５０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）に分配した、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：１９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、４．４ｇ（８６％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．３９（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ），４．３９（ｑ，Ｊ＝７．２，２Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８．７，２Ｈ），７．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．３，８．５，２Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝１．４，１Ｈ）。
【０１４１】
ステップＣ：４−（４−フルオロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸
（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸エチル（９４８ｍｇ，３．０ミリモル）をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中に含む溶液に水酸化ナトリウム（３５８ｍｇ，８．９ミリモル）を添加した。３時間撹拌した後、溶媒を除去し、残渣を希ＨＣｌ（１００ｍＬ，ｐＨ＝３）と１：１（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ：エーテルの混合物（２００ｍＬ）に分配した。水性層を分離し、更にエーテル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ７．１４（ｔ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），７．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．３，８．５，２Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝１．４，１Ｈ），１０．６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）。
【０１４２】
カルボン酸２
３−フルオロ−４−イソブチル安息香酸
ステップＡ：３−フルオロ−４−イソブチル安息香酸メチル
４−ブロモ−３−フルオロ安息香酸メチル（３２２ｍｇ，１．３８ミリモル）及び臭化イソブチル亜鉛（４．１ｍＬ，ＴＨＦ中０．５Ｍ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液にビス（トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（１４ｍｇ，０．０３ミリモル）を添加した。混合物に窒素を３回流した後、ｒｔで一晩撹拌した、１．０Ｎ  ＨＣｌ溶液（５．０ｍＬ）を添加することにより反応物をクエンチし、Ｅｔ２Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：９９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、２４３ｍｇ（８４％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．９２（ｄ，Ｊ＝６．６，６Ｈ），１．９３（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｄ，Ｊ＝６．１，１２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝７．６，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１０．２，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．８，１Ｈ）。
【０１４３】
ステップＢ：３−フルオロ−４−イソブチル安息香酸
３−フルオロ−４−イソブチル安息香酸メチル（２４３ｍｇ，１．１６ミリモル）をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中に含む溶液に水酸化ナトリウム（２．３ｍＬ，５．０Ｎ）を添加した。混合物をｒｔで１時間撹拌した後、濃縮した。残渣を希ＨＣｌ（１０ｍＬ）及びＥｔ２Ｏ（１０ｍＬ）の混合物に分配した。水性層を分離し、更にＥｔ２Ｏ（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、２１２ｍｇ（９３％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．９３（ｄ，Ｊ＝６．６，６Ｈ），１．９５（ｍ，ＩＨ），２．５８（ｄ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．４，１０．１，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．９，１Ｈ），１１．２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）。
【０１４４】
カルボン酸３
３−フルオロ−４−（３−メチルブチル）安息香酸
ステップＡにおいて臭化イソブチル亜鉛の代わりに臭化３−メチルブチル亜鉛を用い、カルボン酸２について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．９５（ｄ，Ｊ＝６．４，６Ｈ），１．５１（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｍ，１Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝７．６，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．３，１０．２，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝１．４，７．８，１Ｈ）。
【０１４５】
カルボン酸４
４−（（Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）安息香酸
ステップＡ：（３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノン
４−ブロモフェニルボロン酸（７．２ｇ，３５．８ミリモル）、アセチルアセトナトビス（エチレン）ロジウム（Ｉ）（１８６ｍｇ，０．７２ミリモル）及び（Ｒ）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）（４４６ｍｇ，０．７１ミリモル）をジオキサン（６０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６ｍＬ）中に含む混合物に窒素下で２−シクロペンテン−ｌ−オン（１．０ｍＬ，１１．９ミリモル）を添加した。５．５時間還流した後、反応物を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と１Ｎ  ＮａＨＣ０３（３００ｍＬ）に分配した。相を分離した後、有機層をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を溶離液として９：１（ｖ／ｖ）ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて４０Ｍ  Ｂｉｏｔａｇｅカラムで精製して、１．９０ｇの標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．９７（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．３７（ｍ，２Ｈ），２．４３−２．５２（ｍ，２Ｈ），２．６９（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）。
【０１４６】
ステップＢ：（Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）−１，１−ジフルオロシクロペンタン
［ビス（２−メトキシエチル）アミノ］硫黄トリフロリド（２．１ｍＬ，１１．４ミリモル）及び三フッ化ホウ素エーテレート（０．１０ｍＬ，０．７ミリモル）をトルエン（７ｍＬ）中に含む混合物を０℃で時々撹拌しながら１．３時間放置した。（ステップＡからの）（Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノン（１．９ｇ，７．９ミリモル）をトルエン（１３ｍＬ）中に含む溶液を添加した。反応物を５５℃で２日間撹拌した。冷却した後、混合物を０℃で２Ｎ  ＮａＯＨ（２５０ｍＬ）及びＥｔ２Ｏ（２５０ｍＬ）に添加した。３０分間撹拌した後、相を分離した。有機層を１Ｎ  ＮａＯＨ（２５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を溶離液として４９：１（ｖ／ｖ）ヘキサン／Ｅｔ２Ｏを用いて４０Ｍ  Ｂｉｏｔａｇｅカラムで精製して、１．４７ｇの標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．８５（ｍ，１Ｈ），２．０９−２．２６（ｍ，３Ｈ），２．３５（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｍ，１Ｈ），３．３０（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１４７】
ステップＣ：４−（（Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）安息香酸
−７８℃で（ステップＢからの）（Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）−１，１−ジフルオロシクロペンタン（１．０ｇ，３．８ミリモル）をＴＨＦ（１５ｍＬ）中に含む溶液をヘキサン中２．５Ｍ  ＢｕＬｉ（１．６ｍＬ，４．０ミリモル）で処理した。１５分間撹拌した後、反応混合物をドライアイスをＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）中に含む懸濁液に添加した。混合物をｒｔまで加温した。反応混合物を１Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）で抽出した。相を分離した後、水性層を濃ＨＣｌでｐＨ１〜２に酸性化した。水性相をＣＨ２Ｃ１２（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥し、濃縮して、０．６７ｇの標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．８７（ｍ，１Ｈ），２．１３−２．３７（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１４８】
カルボン酸５
４−（（Ｓ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）安息香酸
ステップＡにおいて（Ｒ）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）の代わりに（Ｓ）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）を用い、カルボン酸４の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．８７（ｍ，１Ｈ），２．１３−２．３７（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１４９】
カルボン酸６
４−（（Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロヘキシル）安息香酸
ステップＡにおいて２−シクロペンテン−ｌ−オンの代わりに２−シクロヘキセン−ｌ−オンを用い、カルボン酸４の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．４７（ｍ，１Ｈ），１．６６−１．９６（ｍ，５Ｈ），２．１９（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１５０】
カルボン酸７
４−（（Ｓ）−３，３−ジフルオロシクロヘキシル）安息香酸
（Ｒ）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）の代わりに（Ｓ）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）を用い、カルボン酸６の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．４７（ｍ，１Ｈ），１．６６  −１．９６（ｍ，５Ｈ），２．１９（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１５１】
カルボン酸８
４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−フルオロシクロペンチル）安息香酸
ステップＡ：（３Ｓ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノール
−７８℃で（３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノン（１．１４ｇ，４．７７ミリモル，カルボン酸４のステップＡ）をＣＨ２Ｃ１２（１０ｍＬ）中に含む溶液に水素化ジイソブチルアルミニウム（７．２ｍＬ，ＣＨ２Ｃ１２中１．０Ｍ）を添加した。混合物を−７８℃で１時間撹拌した後、ｓａｔ’ｄ  ロシェル塩水溶液（５．０ｍＬ）を添加した。混合物を希ＨＣｌ溶液に注ぎ、ＣＨ２Ｃ１２（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、１．１６ｇ（１００％）の標記化合物を１：１比のジアステレオマー混合物として得た。これはクロマトグラフィーにより分離できない。
【０１５２】
ステップＢ：酢酸（１Ｒ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンチル及び（１Ｓ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノール
（３Ｓ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノール（１．０１ｇ，４．１９ミリモル）及びブタ膵リパーゼ（ＰＰＬ，１．０ｇ，Ｓｉｇｍａ）を１：１（ｖ／ｖ）酢酸ビニル／ヘキサン（２０．０ｍＬ）中に含む懸濁液をｒｔで一晩撹拌した。酵素をセライトケーキを介して濾過し、ＥｔＯＡｃ及びヘキサンで洗浄した。濾液を濃縮した。Ｂｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、溶離液として１：１９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いると５３６ｍｇ（４５％）の酢酸（１Ｒ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンチル：１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．５９（ｍ，１Ｈ），１．７７−１．８９（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ），２．１２−２．２９（ｍ，３Ｈ），３．２５（ｍ，１Ｈ），５．３０（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）、溶離液として１：３（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いると５０３ｍｇ（５０％）の（１Ｓ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノール：１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．６１（ｍ，２Ｈ），１．７７−１．９４（ｍ，３Ｈ），２．０４（ｍ，１Ｈ），２．４５（ｍ，１Ｈ），３．０１（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）を得た。
【０１５３】
ステップＣ：１−ブロモ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−フルオロシクロペンチル）ベンゼン
−７８℃で（１Ｓ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノール（５０３ｍｇ，２．０９ミリモル）をＣＨ２Ｃ１２（１０ｍＬ）中に含む溶液に（ビス（２−メトキシエチル）アミノ）硫黄トリフロリド（Ｄｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ，４６２μＬ，２．５０ミリモル）を添加した。混合物を一晩かけてｒｔまで徐々に加温した後、ｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）に注いだ。水性層をＣＨ２Ｃ１２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液としてヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、３８３ｍｇ（７６％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．５３−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．３９（ｍ，４Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），５．１９−５．３２（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１５４】
ステップＤ：４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−フルオロシクロペンチル）安息香酸
ステップＤにおいて１−ブロモ−４−（（１Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）ベンゼンの代わりに１−ブロモ−４−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−フルオロシクロペンチル）ベンゼンを用い、カルボン酸４について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．６５−１．８７（ｍ，２Ｈ），１．９９−２．４６（ｍ，４Ｈ），３．４７（ｍ，１Ｈ），５．２３−５．３６（ｍ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１５５】
カルボン酸９
４−（（１Ｒ，３Ｓ）−３−フルオロシクロペンチル）安息香酸
ステップＡ：（１Ｒ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノール
酢酸（１Ｒ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンチル（カルボン酸８のステップＢ，５３６ｍｇ，１．９ミリモル）をＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）中に含む溶液に水酸化ナトリウム（１．９ｍＬ，５．０Ｎ）を添加した。ｒｔで３０分間撹拌した後、溶媒を除去し、残渣をｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）に分配した。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として７：３（ｖ／ｖ）ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、４４５ｍｇ（９７％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．４９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１．５６−１．８１（ｍ，２Ｈ），２．０５−２．２７（ｍ，４Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１５６】
ステップＢ：４−（（１Ｒ，３Ｓ）−３−フルオロシクロペンチル）安息香酸
ステップＣにおいて（１Ｓ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノールの代わりに（１Ｒ，３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノールを用い、カルボン酸８について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。
【０１５７】
カルボン酸１０
３−フルオロ−４−シクロペンチル安息香酸
３−フルオロ−４−ブロモ安息香酸ベンジル（０．４５ｇ，１．４５ミリモル）を０．５Ｍ  臭化シクロペンチル亜鉛のＴＨＦ溶液（４．４ｍＬ）中に含む溶液をビス（トリ−ｔ−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（〜５ｍｇ）で処理し、生じた混合物をｒｔで２４時間撹拌した。反応混合物を直接溶離液として１：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジで精製した。生じた固体（０．２７ｇ，０．９１ミリモル）及び１０％  Ｐｄ／ＣをＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に含む混合物を１気圧のＨ２下で３時間撹拌した。反応物を濾過し、濃縮した。ＨＰＬＣ  Ｂにより精製して、標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．５８−１．９０（ｍ，６Ｈ），２．０５−２．１４（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．７，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１０．５，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０，１Ｈ）。
【０１５８】
カルボン酸１１
２−フルオロ−４−シクロペンチル安息香酸
３−フルオロ−４−ブロモ安息香酸ベンジルの代わりに２−フルオロ−４−ブロモ安息香酸ベンジルを用い、カルボン酸１０について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．５７−１．８５（ｍ，６Ｈ），２．０７−２．１３（ｍ，２Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），７．０３（ｄｄ，Ｊ＝１．１，１２．４，１Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝１．４，８．２，１Ｈ），７．９４（ｔ，Ｊ＝８．０，１Ｈ）。
【０１５９】
カルボン酸１２
３−トリフルオロメチル−４−（（（１Ｓ）−１−メチルプロピル）オキシ）安息香酸
ステップＡ：３−トリフルオロメチル−４−（２−（Ｓ）−ブトキシ）ベンゾニトリル
−１０℃で４−フルオロ−３−トリフルオロメチルベンゾニトリル（１．１ｇ，５．９ミリモル）及び（Ｓ）−（＋）−２−ブタノール（４８５ｍｇ，６．５ミリモル）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に含む溶液を水素化ナトリウム（２３５ｍｇ，５．９ミリモル）で処理した。生じた混合物を低温で２時間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチした。クエンチした溶液をＥｔ２Ｏ（３０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として４：１（ｖ／ｖ）ヘキサン／酢酸エチルを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、５５０ｍｇの標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６，３Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．２，３Ｈ），１．５８−１．８３（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｓｅｐｔｅｔ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．７，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．７，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ）。
【０１６０】
ステップＢ：３−トリフルオロメチル−４−（２−（Ｓ）−ブトキシ）安息香酸
（ステップＡからの）３−トリフルオロメチル−４−（２−（Ｓ）−メチルプロピルオキシ）ベンゾニトリル（５５０ｍｇ，２．２ミリモル）をエタノール（５ｍＬ）中に含む溶液を５．０Ｎ  ＮａＯＨ（１．５ｍＬ）で処理し、８０℃に３時間加熱した。次いで、反応物を濃縮し、２Ｎ  ＨＣｌで処理し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出し、乾燥し、濃縮して、６００ｍｇの標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．９９（ｔ，Ｊ＝７．３，３Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝５．９，３Ｈ），１．７３−１．８３（ｍ，２Ｈ），４．５４（ｓｅｐｔｅｔ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．９，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝８．９，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ）。
【０１６１】
カルボン酸１３
３−クロロ−４−イソプロポキシ安息香酸
ステップＡ：３−クロロ−４−イソプロポキシ安息香酸メチル
０℃で３−クロロ−４−ヒドロキシ安息香酸メチル（１．４２ｇ，７．６３ミリモル）、２−プロパノール（５８５μＬ，７．６３ミリモル）及びトリフェニルホスフィン（３．０ｇ，１１．４５ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中に含む溶液にアゾジカルボン酸ジイソプロピル（２．２５ｍＬ，１１．４５ミリモル）を添加した。混合物をｒｔまで加温し、１６時間撹拌した。溶媒を除去した。溶離液として１：１９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、１．７７ｇ（１００％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．４１（ｄ，Ｊ＝６．２，６Ｈ），４．６３−４．７０（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．７，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．６，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝２．０，１Ｈ）。
【０１６２】
ステップＢ：３−クロロ−４−イソプロポキシ安息香酸
ステップＢにおいて３−フルオロ−４−イソブチル安息香酸メチルの代わりに３−シアノ−４−イソプロポキシ安息香酸メチルを用い、カルボン酸２について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．４３（ｄ，Ｊ＝５．９，６Ｈ），４．６６−４．７３（ｍ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．９，１Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝２．１，８．７，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝２．０，１Ｈ），１１．７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）。
【０１６３】
カルボン酸１４〜１５
ステップＡにおいて２−プロパノールの代わりに適切なアルコールを用い、カルボン酸１３について記載した手順と同様の手順を用いて以下のカルボン酸中間体を製造した。
【０１６４】
【表３】
2008517915.tif 000013
2008517915.tif 000014
【０１６５】
カルボン酸１６
４−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）安息香酸
ステップＡ：トリフルオロメタンスルホン酸１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル
−７８℃でリチウムＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミド（３０．６ミリモル）をＴＨＦ（３０ｍＬ）中に含む溶液に１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−オン（４．０６ｇ，２６．０ミリモル）をＴＨＦ（１５ｍＬ）中に含む溶液を滴下した。生じた混合物を−７８℃で２５分間撹拌した後、２−（Ｎ，Ｎ−ビス（トリフルオロメチルスルホニル）アミノ）−５−クロロピリジン（１２．０ｇ，３０．５ミリモル）をＴＨＦ（１５ｍＬ）中に含む溶液を滴下した。−７８℃で２．５時間撹拌した後、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）を添加することにより反応物をクエンチした。混合物をＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）と１Ｎ  ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）に分配した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、４．６２ｇ（６１％）の標記化合物を得た。
【０１６６】
ステップＢ：４−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）安息香酸
４−カルボキシフェニルボロン酸（０．６９ｇ，３．５３ミリモル）及びトリフルオロメタンスルホン酸１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル（１．０２ｇ，３．５３ミリモル）をＤＭＦ（１４ｍＬ）中に含む溶液に２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（７ｍＬ）、トリフェニルホスフィン（１５９ｍｇ，０．６１ミリモル）及びトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（６８ｍｇ，７４．２マイクロマル）を添加した。８０℃で３時間撹拌し、次いでｒｔで１６時間撹拌した後、混合物を濃縮し、Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ）とＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）に分配した。水性層を分離し、濃ＨＣｌを用いてｐＨ〜２−３に酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）から再結晶して、３５３ｍｇ（３８％）の標記化合物を得た。
【０１６７】
ステップＣ：４−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）安息香酸メチル
４−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）安息香酸（５７２ｍｇ，２．２０ミリモル）、ヨードメタン（１４０μＬ，２．２４ミリモル）及び炭酸セシウム（７１０ｍｇ，２．１７ミリモル）をＤＭＦ（６ｍＬ）中に含む混合物をｒｔで１６時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として３：１７（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、３９９ｍｇ（７２％）の標記化合物を得た。
【０１６８】
ステップＤ：４−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］−デカ−８−イル）安息香酸メチル
４−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）安息香酸メチル（５１４ｍｇ，１．８７ミリモル）及び１０％  Ｐｄ／Ｃ（１２７ｍｇ）を１：２（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ＣＨ３ＯＨ（１５ｍＬ）中に含む混合物をパール振とう機を用いて４５ＰｓｉのＨ２下で６．５時間振とうした。結晶をセライトケーキを介して濾過し、多量のＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮して、４８０ｍｇの標記化合物を得た。
【０１６９】
ステップＥ：４−（４−オキソシクロヘキシル）安息香酸メチル
４−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル）安息香酸メチル（４８０ｍｇ，１．７３ミリモル）をＴＨＦ（８ｍＬ）中に含む溶液に１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（４ｍＬ）を添加した。混合物をｒｔで２１時間撹拌し、濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）と１Ｎ  ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）に分配した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。溶離液として１：９（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、３４３ｍｇ（８５％）の標記化合物を得た。
【０１７０】
ステップＦ：４−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）安息香酸メチル
ステップＢにおいて（３Ｒ）−３−（４−ブロモフェニル）シクロペンタノンの代わりに４−（４−オキソシクロヘキシル）安息香酸メチルを用い、カルボン酸４について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。
【０１７１】
ステップＧ：４−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）安息香酸
ステップＣにおいて（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸エチルの代わりに４−（４，４−ジフルオロシクロヘキシル）安息香酸メチルを用い、カルボン酸１について記載した手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．８２（ｍ，２Ｈ），１．９４（ｍ，４Ｈ），２．１６（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｍ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【実施例】
【０１７２】
（製造例）
実施例１
トランス−２−（４−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
ステップＡ：トランス−５−（４−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−２−オキソ−３−ピロリジン酢酸メチル
アミドキシム１、４−（２−メチルプロピル）安息香酸（１２７ｍｇ，０．７１ミリモル）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１４９ｍｇ，０．７８ミリモル）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（４４ｍｇ，０．３２ミリモル）をアセトニトリル（１０ｍＬ）中に含む溶液をｒｔで１時間撹拌した。混合物を濃縮し、溶離液としてＥｔＯＡｃを用いてＢｉｏｌａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、エステル中間体を得た。
【０１７３】
上記エステルをキシレン（１０ｍＬ）中に含む溶液を２時間還流した後、濃縮した。溶離液として３：２（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、６３ｍｇ（３ステップで２２％）の標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．９４（ｄ，Ｊ＝６．７，６Ｈ），１．９２−１．９７（ｍ，１Ｈ），２．３３−２．５９（ｍ，５Ｈ），２．８９（ｄｄ，Ｊ＝４．０，１６．９，１Ｈ），２．９７−３．００（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｄｄ，Ｊ＝３．０，８．７，１Ｈ），６．０８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１７４】
ステップＢ：トランス−２−（４−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
上記ラクタム（６３ｍｇ，０．１５ミリモル）及びトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（２６ｍｇ，０．１７ミリモル）をＣＨ２Ｃ１２（１０ｍＬ）中に含む溶液をｒｔで一晩撹拌した。次いで、反応混合物をｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄した。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃ１２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、イミノエーテルを得た。これを更に精製せずに次ステップに使用した。
【０１７５】
生じたイミノエーテル及び少量のブロモクレゾールグリーンをＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中に含む溶液にシアノホウ水素化ナトリウム溶液（ＴＨＦ中１．０Ｍ，７２７μＬ，０．７３ミリモル）を添加した。色を黄色に保つために（ｐＨ〜３−４）反応混合物にＨＣｌを１，４−ジオキサン中に含む溶液（２．０Ｍ）を添加し、生じた反応混合物をｒｔで４時間撹拌した。次いで、混合物をｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃ１２（２０ｍＬ）に注ぎ、水性層を更にＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、粗なアミン（７０ｍｇ）を得た。
【０１７６】
粗なアミン（２３ｍｇ，０．０５ミリモル）をＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）中に含む溶液に水酸化ナトリウム（５．０Ｎ，１１０μＬ）を添加し、室温で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をＨＰＬＣで精製して、実施例１（９．７ｍｇ，４４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  ０．８８（ｓ，６Ｈ），１．８６−１．９１（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．２９（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．６４（ｍ，５Ｈ），２．９３−２．９９（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１１．８，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１１．８，１Ｈ），４．８５（ｔ，Ｊ＝８．６，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）。
【０１７７】
実施例２
シス−２−（４−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
ステップＡにおいてアミドキシム１の代わりにアミドキシム２を用い、実施例１に記載の手順と同様の手順を用いて実施例２を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．３８（ｓ，９Ｈ），２．０７（ｑ，Ｊ＝１２．３，２３．８，１Ｈ），２．６１−２．７４（ｍ，３Ｈ），２．８９−３．００（ｍ，１Ｈ），３．２３−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．７２−３．７６（ｍ，１Ｈ），４．７９−４．８３（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）。
【０１７８】
実施例３
トランス−１−メチル−２−（４−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
トランス−２−（４−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル（実施例１のステップＢ，１８ｍｇ，０．０４ミリモル）、ヨードメタン（３μＬ，０．０５ミリモル）及び炭酸カリウム（３０ｍｇ，０．２１ミリモル）をＤＭＦ（２．０ｍＬ）中に含む混合物を１００℃で１時間撹拌した。ｒｔまで冷却した後、反応混合物をセライトケーキを介して濾過し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で洗浄した。濾液をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、粗なアミンを得た。
【０１７９】
上記した粗なアミンをＥｔＯＨ（４．０ｍＬ）中に含む溶液にＮａＯＨ（８６μＬの５．０Ｎ  ＮａＯＨ，０．４３ミリモル）を添加した。ｒｔで１６時間撹拌した後、反応混合物を濃縮した。溶離液として３：１７（ｖ／ｖ）ＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃ１２＋１．０％  ＮＨ４ＯＨを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、８．０ｍｇ（２ステップで４４％）の標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ０．８８（ｄ，Ｊ＝６．７，６Ｈ），１．８８（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｍ，１Ｈ），２．５２−２．６１（ｍ，５Ｈ），２．６９（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｄｄ，Ｊ＝６．９，１０．８，１Ｈ），４．４３（ｔ，Ｊ＝９．１，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）。
【０１８０】
実施例４
トランス−２−（４−（５−（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
ステップＡ：トランス−３−アリル−５−（４−（５−（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）ピロリジン−２−オン
ステップＡにおいてアミドキシム１の代わりにアミドキシム３、４−（２−メチルプロピル）安息香酸の代わりに４−（４−フルオロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸を用い、実施例１に記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  ２．１６（ｍ，１Ｈ），２．２８（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，１Ｈ），２．６３（ｍ，２Ｈ），４．７９（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｍ，２Ｈ），５．８０（ｍ，１Ｈ），６．０１（ｓ，１Ｈ），７．１７（ｔ，Ｊ＝８．７，２Ｈ），７．４４（ｍ，４Ｈ），７．８８（ｍ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ）。
【０１８１】
ステップＢ：トランス−２−（４−（５−（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
トランス−３−アリル−５−（４−（５−（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）ピロリジン−２−オン（１０３ｍｇ，０．２０ミリモル）及び過ヨウ素酸ナトリウム（１９３ｍｇ，０．９０ミリモル）を２：２：３（ｖ／ｖ／ｖ）ＣＣ１４／ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏの混合溶媒（７．０ｍＬ）中に含む溶液に塩化ルテニウム（ＩＩＩ）水和物（１ｍｇ，４．４マイクロモル）を添加した。混合物をｒｔで１時間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に分配した。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃ１２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮すると、粗な酸が無色シロップとして生じた。
【０１８２】
粗な酸を７：２（ｖ／ｖ）ベンゼン／ＣＨ３ＯＨの混合溶媒（９ｍＬ）中に含む溶液に（トリメチルシリル）ジアゾメタン（ヘキサン中２．０Ｍ，４８μＬ，０．１０ミリモル）を添加した。３０分後、反応混合物を濃縮した。溶離液として３：２（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてＢｉｏｔａｇｅ  ４０＋Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにかけて、２０．０ｍｇ（２ステップで１８％）の標記化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ２．３６（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．５８（ｍ，２Ｈ），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝４．０，７．０，１Ｈ），２．９８（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｄｄ，Ｊ＝２．９，９．０，１Ｈ），５．８９（ｓ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ），７．４２−７．４７（ｍ，４Ｈ），７．８９（ｍ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１８３】
ステップＣ：トランス−２−（４−（５−（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
トランス−２−（４−（５−（４−（４−フルオロフェニル）−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル（２０ｍｇ，０．０４ミリモル）及びトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（６．５ｍｇ，０．０４ミリモル）をＣＨ２Ｃ１２（５ｍＬ）中に含む溶液をｒｔで一晩撹拌した。混合物をｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で洗浄し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、イミノエーテルを得た。これを更に精製せずに次ステップに使用した。
【０１８４】
上記イミノエーテル及び少量のブロモクレゾールグリーンをＣＨ３ＯＨ（１０ｍＬ）中に含む溶液にシアノホウ水素化ナトリウム溶液（ＴＨＦ中１．０Ｍ，３６７μＬ，０．３７ミリモル）を添加した。混合物の色を黄色に保つために反応混合物にＨＣｌを１，４−ジオキサン中に含む溶液（２．０Ｍ）を添加した。生じた混合物をｒｔで４時間撹拌した。ｓａｔ’ｄ  ＮａＨＣＯ３及びＣＨ２Ｃｌ２に注ぎ、水性層を更にＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、粗なアミンを得た。これを更に精製せずに次ステップに使用した。
【０１８５】
上記アミンをＥｔＯＨ（４．０ｍＬ）中に含む溶液に水酸化ナトリウム（５．０Ｎ，９４μＬ）を添加し、ｒｔで一晩撹拌した。反応混合物を直接ＨＰＬＣで精製して、標記化合物（１１ｍｇ，３ステップで５８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  ２．２６（ｍ，１Ｈ），２．４９（ｍ，１Ｈ），２．６１（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１１．８，１Ｈ），４．８５（ｔ，Ｊ＝８．６，１Ｈ），７．１６−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．４６−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ），８．００（ｍ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１８６】
実施例５
トランス−２−（４−（５−（４−シクロペンチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
ステップＡ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（５−（４−シクロペンチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル
ステップＡにおいてアミドキシム１の代わりにアミドキシム４、４−（２−メチルプロピル）安息香酸の代わりに４−シクロペンチル安息香酸を用い、実施例１に記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２１（ｓ，９Ｈ），１．４７−１．８７（ｍ，６Ｈ），２．０５−２．１５（ｍ，３Ｈ），２．４１−２．４８（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｍ，１Ｈ），３．０６−３．３１（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｍ，１Ｈ），４．９１（ｍ，１Ｈ），５．０７（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），８．１２（ｍ，４Ｈ）。
【０１８７】
ステップＢ：トランス−２−（４−（５−（４−シクロペンチルフェニル）−ｌ，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（５−（４−シクロペンチルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチル（４．４ｍｇ，８．３マイクロモル）をＣＨ２Ｃ１２中２０％  ＴＦＡ（２．５ｍＬ）中に含む溶液をｒｔで１時間撹拌した後、濃縮した。残渣をＥｔＯＨ（５．０ｍＬ）中に再溶解し、水酸化ナトリウム（１８９μＬ，５．０Ｎ，０．９５ミリモル）を添加した。ｒｔで１時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残渣をＨＰＬＣで精製して、３．５ｍｇ（１００％）の標記化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．６０（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｍ，２Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ），２．０６（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｍ，１Ｈ），２．５８（ｍ，２Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１１．９，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１１．８，１Ｈ），４．８４（ｔ，Ｊ＝８．６，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．２，２Ｈ）。
【０１８８】
実施例６〜１９
ステップＡにおいて４−（２−メチルプロピル）安息香酸の代わりに適切なカルボン酸を用い、実施例５に記載の手順と同様の手順を用いて下記実施例を製造した。実施例５のステップＡの生成物である実施例９及び１０の前駆体を無勾配８５：１５（ｖ／ｖ）ヘプタン／ＥｔＯＨ（流速：８．０ｍＬ／分）を用いてＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ  ２０×２５０ｍｍカラムで、２５４ｎｍのＵＶ波長で３０分間かけて分離した。この分離条件で実施例９の前駆体の保持時間は実施例１０のものよりも短かった。
【０１８９】
【表４】
2008517915.tif 000015
2008517915.tif 000016
2008517915.tif 000017
【０１９０】
実施例２０〜２７
ステップＡにおいてアミドキシ４の代わりにアミドキシム５、４−シクロペンチル安息香酸の代わりに適切なカルボン酸を用い、実施例５に記載の手順と同様の手順を用いて下記実施例を製造した。
【０１９１】
【表５】
2008517915.tif 000018
2008517915.tif 000019
【０１９２】
実施例２８
トランス−２−（４−（５−（４−シクロヘキシルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
ステップＡ：トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（５−（４−シクロヘキシルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−（２−プロペニル）−ピロリジン
ステップＡにおいてアミドキシム１の代わりにアミドキシム６、４−（２−メチルプロピル）安息香酸の代わりに４−シクロヘキシル安息香酸を用い、実施例１に記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．１３−１．５８（ｍ，１５Ｈ），１．７７−１．９６（ｍ，７Ｈ），２．０５−２．６３（ｍ，３Ｈ），３．２５（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｍ，１Ｈ），４．９１−５．０７（ｍ，３Ｈ），５．７４（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），８．１２（ｍ，４Ｈ）。
【０１９３】
ステップＢ：トランス−２−（４−（５−（４−シクロヘキシルフェニル）−ｌ，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−ピロリジン酢酸
トランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（５−（４−シクロヘキシルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）フェニル）−４−（２−プロペニル）ピロリジン（１２ｍｇ，０．０２ミリモル）及び過ヨウ素酸ナトリウム（２３ｍｇ，０．１１ミリモル）を２：２：３（ｖ／ｖ／ｖ）ＣＣ１４／ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏの混合溶媒（７．０ｍＬ）中に含む溶液に塩化ルテニウム（ＩｌＩ）水和物（０．１ｍｇ，０．５マイクロモル）を添加した。混合物をｒｔで１時間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に分配した。水性層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮すると、粗な酸が無色シロップとして生じた。
【０１９４】
上記した粗な酸をＣＨ２Ｃｌ２中２０％  トリフルオロ酢酸（２．５ｍＬ）中に含む溶液をｒｔで３０分間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をＨＰＬＣで精製した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．２６（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｍ，４Ｈ），１．７４（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｍ，４Ｈ），２．２５（ｍ，１Ｈ），２．５５（ｍ，４Ｈ），２．９５（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１１．８，１Ｈ），３．６９（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１２．３，１Ｈ），４．８３（ｍ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．３，２Ｈ）。
【０１９５】
実施例２９〜３２
ステップＡにおいて４−シクロヘキシル安息香酸の代わりに適切なカルボン酸を用い、実施例１８に記載の手順と同様の手順を用いて下記実施例を製造した。
【０１９６】
【表６】
2008517915.tif 000020
2008517915.tif 000021
【０１９７】
実施例３３
トランス−２−（４−（５−（４−（（１Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）−３−メチル−フェニル）−４−ピロリジン酢酸
ステップＡにおいてアミドキシム３の代わりにアミドキシム７、４−（４−フルオロフェニル）−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸の代わりに４−（（１Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）安息香酸を用い、実施例４に記載の手順と同様の手順を用いて標記化合物を製造した。１Ｈ  ＮＭＲ  δ  １．８７（ｍ，１Ｈ），２．２５（ｍ，５Ｈ），２．４６（ｍ，３Ｈ），２．６１（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１０．８，１Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１２．０，１Ｈ），４．８１（ｍ，１Ｈ），７．４０−７．５０（ｍ，４Ｈ），８．１０−８．１２（ｍ，３Ｈ）。
【０１９８】
実施例３４〜３５
本実施例は実施例３３のジアステレオマーであった。実施例３３の前駆体であるトランス−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−（４−（５−（４−（（Ｒ）−３，３−ジフルオロシクロペンチル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾル−３−イル）−３−メチル−フェニル）−４−ピロリジン酢酸メチルを無勾配５０：５０（ｖ／ｖ）ヘプタン／ＥｔＯＨ（流速：７．０ｍＬ／分）を用いてＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍカラムで、２５４ｎｍのＵＶ波長で５０分間かけて分離した。この分離条件下で実施例３４の保持時間は実施例３５のものよりも短かった。
【０１９９】
【表７】
2008517915.tif 000022
【０２００】
生物学的活性
本発明化合物のＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６またはＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８活性は以下のアッセイを用いて評価され得る。
【０２０１】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体へのリガンド結合アッセイ
３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェートは、γ３３Ｐ−ＡＴＰ及びスフィンゴシンから５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ  メルカプトエタノール、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５ｍＭ  ＫＦ、２ｍＭ  セミカルバジド、１ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍ  Ｍスフィンゴシン、０．１％  トリトンＸ−１１４及び１ｍＣｉ  γ３３Ｐ−ＡＴＰ（ＮＥＮ；比活性３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物中でスフィンゴシンキナーゼ活性を有する粗な酵母抽出物を用いて酵素的に合成した。反応産物をブタノールで抽出し、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェートをＨＰＬＣにより精製した。
【０２０２】
ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞を無酵素解離溶液（ニュージャージー州ラバレッテに所在のＳｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｍｅｄｉａ）を用いて収集した。細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−Ｎａ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２及び０．５％  脂肪酸非含有ＢＳＡを含有する結合アッセイ緩衝液中に懸濁させた。３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェートを結合アッセイ緩衝液中で０．１ｎＭ  スフィンゴシン−１−ホスフェートで音波処理した。１００μ１のリガンド混合物を９６ウェルの微量測定皿中の１００μｌの細胞（１×１０６細胞／ｍｌ）に添加した。結合を優しく混合しながら室温で６０分間実施した。次いで、細胞をＰａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅユニバーサル・ハーベスターを用いてＧＦ−Ｂフィルタープレート上に集めた。フィルタープレートを３０分間乾燥した後、４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０を各ウェルに添加し、結合をＷａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーション・カウンターを用いて測定した。非特異的結合は、０．５μＭ  冷スフィンゴシン−１−ホスフェートの存在下で残存する放射能の量として定義された。
【０２０３】
或いは、リガンド結合アッセイは、Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から作成した膜を用いて実施した。細胞を無酵素解離溶液を用いて収集し、冷ＰＢＳで１回洗浄した。Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａポリトロン（設定５、１０秒間）を用いて氷冷２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ中でホモジナイズすることにより細胞を破壊した。ホモジネートを４℃で４８，０００×ｇで１５分間遠心し、ペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ中に懸濁させた。２回目の遠心をした後、最終ペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＮａＣ１、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２中に懸濁させた。リガンド結合アッセイは０．５〜２μｇの膜タンパク質を用いて上記したように実施した。
【０２０４】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体のアゴニスト及びアンタゴニストは、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェート結合アッセイで同定され得る。ＤＭＳＯ、メタノールまたは他の溶媒で希釈した化合物を微量測定皿において３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェートを含有するプローブ及び結合アッセイ緩衝液と混合した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から作成した膜を添加し、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェートへの結合を記載されているように実施した。異なる濃度の化合物の存在下での結合量の測定及び非線形回帰ソフトウェア、例えばＭＲＬＣａｌｃ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）またはＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて受容体に対する化合物の親和性を調べた。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体に対する化合物の選択性は、それぞれの受容体（Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６、Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８）をトランスフェクトした細胞から作成した膜を用いて化合物の存在下での３３Ｐ−スフィンゴシン−１−ホスフェート結合レベルを測定することにより調べた。
【０２０５】
３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイ
Ｇタンパク質へのＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体の機能カップリングを３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで測定した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体へのリガンド結合アッセイに記載されているように作成した膜（１〜１０μｇの膜タンパク質）を９６ウェルの微量測定皿において２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５μＭ  ＧＤＰ、０．１％  脂肪酸非含有ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａのカタログ番号Ａ８８０６）、異なる濃度のスフィンゴシン−１−ホスフェート及び１２５ｐＭ  ３５Ｓ−ＧＴＰγＳ（ＮＥＮ；比活性１２５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有する２００μｌ容量でインキュベートした。結合を優しく混合しながら室温で１時間実施し、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅユニバーサル・ハーベスターを用いてＧＦ／Ｂフィルタープレート上に膜を収集することにより停止させた。フィルタープレートを３０分間乾燥した後、４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０を各ウェルに添加し、結合をＷａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンターを用いて測定した。
【０２０６】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のアゴニスト及びアンタゴニストを３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて区別し得る。ＤＭＳＯ、メタノールまたは他の溶媒で希釈した化合物を０．０１ｎＭ〜１０μＭの最終アッセイ濃度を与えるように微量測定皿に添加した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞から作成した膜を添加し、３５Ｓ−ＧＴＰγＳへの結合は記載されているように実施した。天然リガンドまたは他の公知アゴニストの非存在下でアッセイしたとき、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合が内因性レベル以上に刺激する化合物はアゴニストと見なされ、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合の内因性レベルを抑制する化合物は逆アゴニストと見なされた。アンタゴニストは、最大下レベルの天然リガンドまたは公知のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体アゴニストの存在下で３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで検出され、このレベルで化合物は３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合レベルを低下させた。異なる濃度の化合物の存在下での結合量の測定値を用いてＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のアゴニスト、逆アゴニストまたはアンタゴニストとしての化合物の力価を測定した。アゴニストを評価するために、基礎に対する刺激％は化合物の存在下での結合をリガンド非存在下での結合で割った値に１００を掛けて計算した。用量応答曲線は非線形回帰カーブフィッティングプログラムＭＲＬＣａｌｃ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いてプロットし、ＥＣ５０値はそれ自体の最大刺激の５０％を与えるのに必要なアゴニストの濃度と定義した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体に対する化合物の選択性は、化合物の存在下での３５Ｓ−ＧＴＰγＳレベルをそれぞれの受容体をトランスフェクトした細胞から作成した膜を用いて測定することにより調べた。
【０２０７】
細胞内カルシウムフラックスアッセイ
Ｇタンパク質関連細胞内カルシウム動員に対するＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体の機能カップリングはＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングリーダープレート，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて測定した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞を収集し、アッセイ緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％  ＢＳＡ及び７１０μｇ／ｍｌ  プロベニシド（Ｓｉｇｍａ）を含有するハンクス平衡塩類溶液（ＢＲＬ））で１回洗浄した。細胞を５００ｎＭ  カルシウム感受性染料Ｆｌｕｏ−４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を含有する同一緩衝液中３７℃、５％  ＣＯ２で１時間標識した。細胞を緩衝液で２回洗浄した後、９６ウェルのポリリシン被覆黒色微量測定皿において１．５×１０５／ウェル（９０μｌ）で平板培養した。９６ウェルのリガンドプレートは、最終試験濃度の２倍の濃度を与えるようにスフィンゴシン−１−ホスフェートまたは他のアゴニストを２００μｌのアッセイ緩衝液で希釈することにより作成した。リガンドプレート及び細胞プレートを分析のためにＦＬＩＰＲ機器に挿入した。プレートを３７℃で平衡化した。等容量のリガンドを細胞プレートに移すことによりアッセイを開始し、カルシウムフラックスを３分間隔で記録した。細胞応答を面積（和）または最大ピーク高（最大）として定量した。アゴニストは、化合物を適当な溶媒で希釈することにより天然リガンドの非存在下で評価し、Ｆｌｕｏ−４標識細胞に移した。アンタゴニストは、Ｆｌｕｏ−４標識細胞を異なる濃度の化合物で１５分間予備処理した後天然リガンドまたは他のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体アゴニストを添加することによりカルシウムフラックスを開始することにより評価した。
【０２０８】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞の作成
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６またはＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８をクローン化するために各種手順が使用され得る。これらの方法には
（１）ＲＡＣＥ  ＰＣＲクローニング技術（Ｆｒｏｈｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：８９９８−９００２（１９８８））。完全長ｃＤＮＡ配列を作成するために５’及び／または３’ＲＡＣＥが実施され得る；
（２）Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ  ｃＤＮＡを直接機能発現させた後、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリーを適切な発現ベクター系において構築する；
（３）バクテリオファージまたはプラスミドシャトルベクターにおいて構築したＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリーをＳ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質のアミノ酸配列から設計した標識縮重オリゴヌクレオチドプローブを用いてスクリーニングする；
（４）バクテリオファージまたはプラスミドシャトルベクターにおいて構築したＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリーをＳ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質をコード化する部分ｃＤＮＡを用いてスクリーニングする。この部分ｃＤＮＡは、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質に関連する他のタンパク質について公知のアミノ酸配列から縮重オリゴヌクレオチドプライマーを設計することによりＳ１Ｐ／Ｅｄｇ  ＤＮＡ断片を特異的ＰＣＲ増幅させることにより得られる；
（５）バクテリオファージまたはプラスミドシャトルベクターにおいて構築したＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリーを哺乳動物Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇタンパク質に相同な部分ｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを用いてスクリーニングする。この手法は、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ  ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅のために遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いることを含み得る；または
（６）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇをコード化するヌクレオチド配列の完全長バージョンを単離すべく多数のタイプのｃＤＮＡ及び／またはゲノムライブラリーの１つをスクリーニングするためのプローブとして使用するためにコード領域の一部を作成し、単離するために完全長ｃＤＮＡが公知のＲＡＣＥ技術により作成され得るかまたはコード領域の一部が同一の公知ＲＡＣＥ技術により作成され得るように鋳型としてＳ１Ｐ／Ｅｄｇヌクレオチド配列を用いて５’及び３’遺伝子特異的オリゴヌクレオチドを設計する；が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０９】
当業者に自明のように、他のタイプのライブラリー及び他の細胞型または種型から構築したライブラリーはＳ１Ｐ／Ｅｄｇコード化ＤＮＡまたはＳ１Ｐ／Ｅｄｇ同族体を単離するために有用であり得る。他のタイプのライブラリーには他の細胞に由来するｃＤＮＡライブラリーが含まれるが、これらに限定されない。
【０２１０】
当業者に自明のように、適当なｃＤＮＡライブラリーはＳ１Ｐ／Ｅｄｇ活性を有する細胞または細胞株から作成され得る。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇをコード化するｃＤＮＡを単離するためのｃＤＮＡライブラリーを作成する際に使用するための細胞または細胞株の選択は、その目的のために利用可能な公知のアッセイを用いて細胞結合Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ活性をまず測定することによりなされ得る。
【０２１１】
ｃＤＮＡライブラリーの作成は当業界で公知の標準技術により実施され得る。公知のｃＤＮＡライブラリー構築技術は、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ニューヨークのコールドスプリングハーバーに所在のＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８９年）出版に見つけることができる。相補的ＤＮＡライブラリーは多数の市販ソースからも入手可能であり、そのソースにはＣｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．及びＳｔｒａｔａｇｅｎｅが含まれるが、これらに限定されない。
【０２１２】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ様タンパク質をコード化するＤＮＡを含む発現ベクターは、組換え宿主細胞においてＳ１Ｐ／Ｅｄｇを発現するために使用され得る。組換え宿主細胞はＳ１Ｐ／Ｅｄｇまたは生物学的均等物を産生するのに適した条件下で培養され得る。発現ベクターにはクローニングベクター、修飾クローニングベクター、特別に設計されたプラスミドまたはウイルスが含まれるが、これらに限定されない。市販されている哺乳動物発現ベクターが組換えＳ１Ｐ／Ｅｄｇ発現のために適当であり得る。
【０２１３】
組換え宿主細胞は原核または真核であり得、この中には細菌（例えば、大腸菌）、真菌細胞（例えば、酵母）、哺乳動物細胞（その非限定例にはウシ、ブタ、サル及びげっ歯類起源の細胞株が含まれる）、及び昆虫細胞（その非限定例にはショウジョウバエ及びカイコ由来細胞株が含まれる）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１４】
各種Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のヌクレオチド配列は業界で公知である。例えば、以下を参照されたい。
【０２１５】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇｌヒト
参照により全文が取り込まれるＴ．Ｈｌａ及びＴ．Ｍａｃｉａｇ，“Ａｎ  ａｂｕｎｄａｎｔ  ｔｒａｓｓｃｒｉｐｔ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ｔｏ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：９３０８−９３１３（１９９０）；
参照により全文が取り込まれる１９９１年１０月１７日付で公開された国際特許出願公開第９１／１５５８３号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる１９９９年９月１６日付で公開された国際特許出願公開第９９／４６２７７号パンフレット。
【０２１６】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇｌマウス
参照により全文が取り込まれる２０００年１０月１２日付で公開された国際特許出願公開第００／５９５２９号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２００１年１１月２７日付で付与された米国特許第６，３２３，３３３号明細書。
【０２１７】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１ラット
参照により全文が取り込まれるＤ．Ｃ．Ｌａｄｏ，Ｃ．Ｓ．Ｂｒｏｗｅ，Ａ．Ａ．Ｇａｓｋｉｎ，Ｊ．Ｍ．Ｂｏｒｄｅｎ及びＡ．Ｊ．ＭａｃＬｅｎｎａｎ，“Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｅｄｇ−１  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ：ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ”，Ｇｅｎｅ，１４９：３３１−３３６（１９９４）；
参照により全文が取り込まれる１９９６年１２月１７日付で付与された米国特許第５，５８５，４７６号明細書；
参照により全文が取り込まれる１９９９年１月５日付で付与された米国特許第５，８５６，４４３号明細書。
【０２１８】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３ヒト
参照により全文が取り込まれるＳ．Ａｎ，Ｔ．Ｂｌｅｕ，Ｗ．Ｈｕａｎｇ，Ｏ．Ｇ．Ｈａｌｌｍａｒｋ，Ｓ．Ｒ．Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｊ．Ｇｏｅｔｚｌ，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡｓ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｔｗｏ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｌｙｓｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ”，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，４１７：２７９−２８２（１９９７）；
参照により全文が取り込まれる１９９９年１１月２５日付で公開された国際特許出願公開第９９／６００１９号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２０００年１０月１０日付で付与された米国特許第６，１３０，０６７号明細書。
【０２１９】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３マウス
参照により全文が取り込まれる２００１年２月１５日付で公開された国際特許出願公開第０１／１１０２２号パンフレット。
【０２２０】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３ラット
参照により全文が取り込まれる２００１年４月１９日付で公開された国際特許出願公開第０１／２７１３７号パンフレット。
【０２２１】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５ヒト
参照により全文が取り込まれるＳ．Ａｎ，Ｙ．Ｚｈｅｎｇ，Ｔ．Ｂｌｅｕ，“Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，  ｓｕｒｖｉｖａｌ，  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｅｖｅｎｔｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  Ｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｅｄｇ３  ａｎｄ  Ｅｄｇ５”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：２８８−２９６（２０００）；
参照により全文が取り込まれる１９９９年７月１５日付で公開された国際特許出願公開第９９／３５２５９号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる１９９９年１０月２８日付で公開された国際特許出願公開第９９／５４３５１号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２０００年９月２８日付で公開された国際特許出願公開第００／５６１３５号パンフレット；
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄ５マウス
参照により全文が取り込まれる２０００年１０月１２日付で公開された国際特許出願公開第００／６００５６号パンフレット。
【０２２２】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５ラット
参照により全文が取り込まれるＨ．Ｏｋａｚａｋｉ，Ｎ．Ｉｓｈｉｚａｋａ，Ｔ．Ｓａｋｕｒａｉ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｋ．Ｇｏｔｏ，Ｍ．Ｋｕｍａｄａ，Ｙ．Ｔａｋｕｗａ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９０：１１０４−１１０９（１９９３）；
参照により全文が取り込まれるＡ．Ｊ．ＭａｃＬｅｎｎａｎ，Ｃ．Ｓ．Ｂｒｏｗｅ，Ａ．Ａ．Ｇａｓｋｉｍ，Ｄ．Ｃ．Ｌａｄｏ，Ｇ．Ｓｈａｗ，“Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，５：２０１−２０９（１９９４）；
参照により全文が取り込まれる１９９６年１２月１７日付で付与された米国特許第５，５８５，４７６号明細書；
参照により全文が取り込まれる１９９９年１月５日付で付与された米国特許第５，８５６，４４３号明細書。
【０２２３】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６ヒト
参照により全文が取り込まれるＭ．Ｈ．Ｇｒａｔｅｒ，Ｇ．Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ，Ｍ．Ｌｉｐｐ，“ＥＤＧ６，ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ，ｉｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ”，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，５３：１６４−１６９（１９９８）；
参照により全文が取り込まれる１９９８年１０月２９日付で公開された国際特許出願公開第９８／４８０１６号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる１９９９年６月１５日付で付与された米国特許第５，９１２，１４４号明細書明細書；
参照により全文が取り込まれる１９９８年１１月１２日付で公開された国際特許出願公開第９８／５０５４９号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２０００年５月９日付で付与された  米国特許第６，０６０，２７２号明細書；
参照により全文が取り込まれる１９９９年７月１５日付で公開された国際特許出願公開第９９／３５１０６号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２０００年３月２３日付で公開された国際特許出願公開第００／１５７８４号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２０００年３月１６日付で公開された国際特許出願公開第００／１４２３３号パンフレット。
【０２２４】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６マウス
参照により全文が取り込まれる２０００年３月２３日付で公開された国際特許出願公開第００／１５７８４号パンフレット。
【０２２５】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８ヒト
参照により全文が取り込まれるＤ．Ｓ．Ｉｍ，Ｊ．Ｃｌｅｍｅｎｓ，Ｔ．Ｌ．Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｓ１Ｐ５（Ｅｄｇ−８）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４０：１４０５３−１４０６０（２００１）；
参照により全文が取り込まれる２０００年３月２日付で公開された国際特許出願公開第００／１１１６６号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２０００年６月２日付で公開された国際特許出願公開第００／３１２５８号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２００１年１月１８日付で公開された国際特許出願公開第０１／０４１３９号パンフレット；
参照により全文が取り込まれる２００１年４月１１日付で公開された欧州特許出願公開第１０９０９２５号明細書。
【０２２６】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８ラット
参照により全文が取り込まれるＤ．Ｓ．Ｉｍ，Ｃ．Ｅ．Ｈｅｉｓｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｂ．Ｆ．Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｇ．Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｒ．Ｐ．Ｈｅａｖｅｎｓ，Ｍ．Ｒ．Ｒｉｇｂｙ，Ｔ．Ｈｌａ，Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，Ｇ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，Ｓ．Ｒ．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｅｄｇ−８”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：１４２８１−１４２８６（２０００）；
参照により全文が取り込まれる２００１年１月２５日付で公開された国際特許出願公開第０１／０５８２９号パンフレット。
【０２２７】
心血管作用の測定
本発明化合物の心血管パラメーターに対する作用は以下の手順により評価され得る。
【０２２８】
雄成体ラット（体重約３５０ｇ）に、それぞれ動脈圧測定及び静脈内化合物投与のために大腿動脈カテーテル及び静脈カテーテルを取り付けた。動物をネンブタール（５５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）で麻酔した。血圧及び心拍数をＧｏｕｌｄ  Ｐｏ−Ｎｅ−Ｍａｈデーター獲得システムを用いて記録した。心拍数は動脈パルス波から導いた。順応期間後、ベースライン測定値を得（約２０分間）、データを平均化した。化合物を静脈内投与（約５秒間ボーラス注射するかまたは１５分間かけて注入する）し、化合物を投与してから６０分間データを１分毎に記録した。データは、心拍数または平均動脈圧のピーク変化として計算するかまたは心拍数または血圧の経時的変化については曲線下面積として計算した。データを平均値±ＳＥＭとして表す。ベースライン値に対する統計比較のために片側スチューデント対比ｔ検定を使用し、ｐ＜０．０５で有意と見なされる。
【０２２９】
ラット心血管系に対するＳ１Ｐ作用は、参照により全文が取り込まれるＡ．Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｎ．Ｎ．Ａｙｅ，Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．Ｏｚａｋｉ，Ｋ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ａ  ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ，ｏｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ”，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８２：３３８−３４２（２０００）に記載されている。
【０２３０】
マウス急性毒性の測定
１匹のマウスに非毒性ビヒクル中に溶解した試験化合物０．１ｍｌを尾静脈から静脈内投与し、毒性の兆候について観察する。重症の兆候には死、発作、麻痺または意識不明が含まれ得る。軽度の兆候も記録し、その中には運動失調、呼吸困難、いらだち、または正常に比べた少ない活動が含まれ得る。兆候を記録したら、投与溶液を同一ビヒクルで希釈する。希釈した用量を第２マウスに同様に投与し、兆候について同様に観察する。兆候が生じなくなる用量までプロセスを繰り返す。これは、推定非影響レベル(estimated no-effect level)と見なされる。追加マウスにこの用量を投与して、兆候の不在を確認する。
【０２３１】
リンパ球減少の評価
マウス急性毒性の測定について記載したように化合物を投与し、投与から３時間目にマウスのリンパ球減少を以下のように評価する。ＣＯ２によりマウスを意識不明とした後、開胸し、直接心穿刺することにより０．５ｍｌの血液を採取し、血液を直ちにＥＤＴＡで安定化し、マウス百分率を求めるために校正した臨床血液自己分析装置（Ｈ２０００，カリフォルニア州カルバーシティーに所在のＣＡＲＥＳＩＤＥ）を用いて血液を調べた。試験治療によるリンパ球の減少は、３匹のマウス対３匹のビヒクル処置マウスの血液パラメーターを比較することにより確認する。この評価に使用した用量は、上記した希釈法の改変を用いて許容性により決定する。この目的で、影響なしが望ましく、軽度の影響は許容され得、重度の中毒量は軽度の影響しか生じないレベルまで連続希釈する。
【０２３２】
実施例のインビトロ活性
本明細書中に記載されている実施例は、上記したアッセイで測定してＳ１ＰＲ３／Ｅｄｇ３受容体よりもＳ１Ｐ１／ｄｇｌ受容体の強力で選択的なアゴニストとしての活性で立証されるように免疫調節剤として有用である。特に、本明細書中に記載されている実施例は、上記した３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで評価してＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体のＥＣ５０に対するＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体のＥＣ５０の比で測定してＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体よりも１００倍以上のＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の選択性を有し、上記した３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで評価して５０ｎＭ未満というＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体に対する結合のＥＣ５０を有する。
【国際調査報告】
2008517915.tif 000032