(57)【要約】  本発明は、トリインフルエンザの治療のための方法およびインターフェロン組成物の使用を提供する。トリインフルエンザウイルスＨ５Ｎ１のヒトへの伝播は、病原性が極めて高いことが明らかとなっている。本発明は、ヒトのトリインフルエンザ感染に対する広域型の最初の防御手段を与える治療方法を提供する。本発明の方法は、さらに拡張して、抗原ドリフトに起因するトリインフルエンザウイルス（これは、病原性が極めて高くヒト間で伝播可能な、トリインフルエンザベースのウイルスを生じる可能性がある。）の治療に適用することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ型インフルエンザウイルスのヒト感染の治療および／または予防のための方法であって、
前記ウイルスが、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニン成分を有し、
当該方法が、
Ｉ型インターフェロンを含有する組成物を提供するステップと、
前記組成物の治療上有効な量を、治療を必要とする個体に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
Ａ型インフルエンザウイルスの亜型が、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｉ型インターフェロンがインターフェロンアルファサブタイプである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｉ型インターフェロンがインターフェロンベータである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
インターフェロンがグリコシル化されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
インターフェロンが天然由来である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
インターフェロンが、少なくとも２種のインターフェロンアルファサブタイプからなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
インターフェロンが、インターフェロンアルファサブタイプアルファ１、アルファ２、アルファ８、アルファ１０、アルファ１４およびアルファ２１の混合物を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
インターフェロンアルファサブタイプが、前記混合物中に、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で存在する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ヘマグルチニン亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の存在によって定義されるＡ型インフルエンザ亜型のヒト感染の治療または予防における、Ｉ型インターフェロン組成物の使用。
【請求項１１】
Ａ型インフルエンザ亜型が、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
Ａ型インフルエンザ亜型が、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニンを、任意のノイラミニダーゼ亜型とともに含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
インターフェロン組成物が、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含んでもよい、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
インターフェロン組成物が、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
Ａ型トリインフルエンザウイルスの感染の治療または予防のための薬剤の調製における、Ｉ型インターフェロンの使用。
【請求項１６】
Ａ型トリインフルエンザウイルスが、ヘマグルチニン亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の存在によって定義される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
Ａ型インフルエンザウイルスが、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
Ａ型インフルエンザウイルスが、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニン成分を、任意のノイラミニダーゼ亜型とともに含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
インターフェロン組成物が、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含んでもよい、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
インターフェロン組成物が、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
少なくともインターフェロンアルファサブタイプ１、２、８、１０、１４および２１を含有し、ヒトにおけるトリインフルエンザ感染の治療に用いるインターフェロン組成物。
【請求項２２】
インターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する、請求項２１に記載のインターフェロン組成物。
【請求項２３】
トリインフルエンザ感染の治療のための医薬組成物であって、インターフェロンを、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とともに含有する医薬組成物。
【請求項２４】
サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含んでもよい、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
インターフェロン組成物が、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
トリインフルエンザのヒト感染を予防または治療する方法であって、
Ｉ型インターフェロンを含有する組成物を提供するステップと、
前記組成物の治療上有効な量を、治療を必要とする個体に投与するステップと、
適切な第２の抗ウイルス化合物の治療上有効な量をさらに投与するステップと、
を含む方法。
【請求項２７】
インターフェロンが、少なくとも２種のインターフェロンアルファサブタイプからなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
インターフェロンが、インターフェロンアルファサブタイプアルファ１、アルファ２、アルファ８、アルファ１０、アルファ１４およびアルファ２１の混合物を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
インターフェロンアルファサブタイプが、前記混合物中に、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で存在する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
第２の抗ウイルス化合物が、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、オセルタミビル（タミフル（商標））およびザナミビル、からなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
Ａ型インフルエンザ亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の感染の治療または予防のための混合薬剤の調製における、インターフェロンおよび抗ウイルス化合物の使用。
【請求項３２】
Ａ型インフルエンザ亜型が、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
第２の抗ウイルス化合物が、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、オセルタミビル（タミフル（商標））およびザナミビル、からなる群より選択される、請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
インターフェロンが、少なくとも２種のインターフェロンアルファサブタイプからなる、請求項３１に記載の使用。
【請求項３５】
インターフェロンが、アルファサブタイプアルファ１、アルファ２、アルファ８、アルファ１０、アルファ１４およびアルファ２１の混合物を含む、請求項３１に記載の使用。
【請求項３６】
インターフェロンアルファサブタイプが、前記混合物中に、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で存在する、請求項３１に記載の使用。
【請求項３７】
ヒトおよびトリインフルエンザ亜型の天然の遺伝子再集合から生じたＡ型インフルエンザ亜型、のヒト感染の予防および治療のための薬剤の調製における、インターフェロンアルファ組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、ヒトにおけるトリオルトミクソウイルス感染、より具体的には、オルトミクソウイルス科のＡ型インフルエンザウイルスの感染、さらに具体的には、Ａ型インフルエンザウイルスのＨ５（Ｈ５Ｎ１を含む）、Ｈ７およびＨ９亜型（一般に、「トリインフルエンザ（ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）」または「鳥インフルエンザ（ｂｉｒｄ  ｆｌｕ）」と呼ばれる。）の感染、の治療において使用される組成物を提供する。
【発明の背景】
【０００２】
一般に鳥インフルエンザとして知られているインフルエンザ型であるトリインフルエンザＨ５Ｎ１は、１９６１年に南アフリカで鳥類から最初に単離された。野鳥がこのウイルスの自然宿主であり、このウイルスは世界中の鳥類の間で蔓延している。トリインフルエンザＨ５Ｎ１は伝播性が強く、家禽にとって致死的になることもある。Ｈ５Ｎ１は、鳥に感染することが知られているインフルエンザウイルスの１５の亜型の１つであるが、トリインフルエンザの特定の亜型が、種間障壁を「飛び越え」て、ヒトに感染を引き起こした前例がある。つい最近、Ａ型トリインフルエンザウイルスＨ５（Ｈ５Ｎ１）、Ｈ７およびＨ９亜型がヒトにおける感染を引き起こすことが分かった。
【０００３】
２００３年１月以降、世界のいくつかの国で、Ｈ５Ｎ１の大発生がトリおよびヒトの感染の発生を引き起こした。このＨ５Ｎ１亜型の感染は、タイおよびベトナムで最初に検出され、２００３年１２月３０日から２００４年３月１７日までに、トリインフルエンザＨ５Ｎ１が確認されたヒト症例のうち、１２例がタイで、そして２３例がベトナムで報告され、死者が全部で２３名に至った。さらに２００４年１月以降、ベトナム、タイ、カンボジア、中国、インドネシア、ならびに最近ではトルコおよびイラクで１６１名のヒトがＨ５Ｎ１に感染した。これらの患者のうちの８６名は死亡した（出典：ＷＨＯ）。
【０００４】
ヒトの感染は、アジア諸国の養鶏場での壊滅的な流行と時を同じくして発生し、報告された死亡率は１００％に達した。今では、Ｈ５Ｎ１インフルエンザウイルスが、アジアの家禽の風土病であり、根絶することができそうにないことが認められている（Ｍｏｓｃｏｎａ、２００４；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｃｓｒ／ｄｉｓｅａｓｅ／ｉｎｆｌｕｅｎｚａ／Ｈ５Ｎ１−９ｒｅｄｕｉｔ．ｐｄｆに概説）。つい最近、Ｈ５Ｎ１インフルエンザが、東南アジアからロシア（シベリア）、カザフスタン、ルーマニアおよびトルコを経由して蔓延したことが認められた。
【０００５】
動物を相互に近づけて、また、ヒトの近傍で飼うという慣習が、異種間感染の原因であったことは明らかである。大発生を制御するためには、多数のニワトリを処分して、ウイルスの供給源を除去する必要がある。ヒトへの伝播が認められた場合、ウイルスの伝播は、主としてトリからヒトへのものであり、ヒトからヒトへの伝播は極めて稀にしか報告されていない（Ｓｈｏｒｔｒｉｄｇｅら、１９９８）。
【０００６】
ウイルスの遺伝子再集合および伝播：
インフルエンザウイルスはオルトミクソウイルスであり、Ａ、ＢおよびＣの３つの型に分類される。Ａ型およびＢ型のインフルエンザウイルス粒子は、８つの直鎖状の分節に分かれたマイナス鎖の一本鎖ＲＮＡのゲノムを有する。２種の異なるインフルエンザウイルスが１つの宿主に同時に感染すると、親ウイルスの各々に由来するゲノム分節の新たな組合せを有する「再集合体」子孫ウイルスの発生が起こることがある（ＢａｉｇｅｎｔおよびＭｃＣａｕｌｅｙ、２００３に概説）。
【０００７】
Ａ型インフルエンザウイルスが、最近の４回の重篤なヒト呼吸器疾患の世界的流行の原因であった。Ａ型インフルエンザウイルスは、ウイルスの表面タンパク質であるヘマグルチニン（ＨＡまたはＨ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡまたはＮ）によって、亜型に分けることができる。１４のＨ亜型および９つのＮ亜型が知られている。トリでは全てのＨ亜型が見つかっているが、ヒトでの蔓延が報告されているのは、３つのＨ亜型（Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）ならびに２つのＮ亜型（Ｎ１およびＮ２）のみである（ＢａｉｇｅｎｔおよびＭｃＣａｕｌｅｙ、２００３に概説）。
【０００８】
ヒトでの季節的なインフルエンザの流行は、「抗原ドリフト」と呼ばれるプロセスにおける、ヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼタンパク質の抗原部位でのアミノ酸の変化と関連している。主な世界的大流行は、新規のヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼ遺伝子が、動物由来のインフルエンザウイルスから、再集合により、現在出回っているヒトウイルスの遺伝的背景に導入されたこと（「抗原シフト」と呼ばれる。）と関連している。
【０００９】
１９９７年の大発生時に、香港の農場および家禽市場のガチョウ、アヒルおよびニワトリから得られたＨ５Ｎ１分離株を、ヒト分離株と比較し、ガチョウ、ブタ、ラットおよびマウスで複製されることが確認された（Ｓｈｏｒｔｒｉｄｇｅら、１９９８）。動物から動物へ伝播は、マウスまたはブタに関しては認められなかった。ブタはトリ、ヒトおよびブタのインフルエンザ型を受容するので、抗原シフトを生じてウイルスにヒトインフルエンザ型遺伝子を獲得させ、ヒトからヒトへの伝播を可能にする潜在的な「混合容器」は、ブタであると長い間考えられてきた（ＢａｉｇｅｎｔおよびＭｃＣａｕｌｅｙ、２００３）。しかし、最近の大発生は、一部のトリインフルエンザウイルスが、混合容器としてのブタの中間体なしにヒトに直接感染する可能性があることを明確に示した（Ｓｕａｒｅｚら、１９９８）。
【００１０】
Ｈ５Ｎ１は急速に変異し、他の動物種に感染しているインフルエンザウイルスから遺伝子を獲得する性向を有することが確認されている。ヒトで重篤な疾患を引き起こすＨ５Ｎ１の能力は、今や幾度も確認されている。さらに実験室での研究では、このウイルスからの分離株が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで高い病原性を有することが確認されている。感染で死ななかったトリは口から、また、糞便中に、少なくとも１０日間ウイルスを排出し、これによって、生きた家禽の市場および農場における、また、渡り鳥によるさらなる伝播が促進される。
【００１１】
新たなインフルエンザウイルスが出現して、世界中に急速に蔓延した１９１８〜１９１９年のインフルエンザの世界的流行で、２年間に約４０００万〜５０００万人が死亡した（Ｔａｕｂｅｎｂｅｒｇｅｒら、２０００）。したがって、ヒトでのＨ５Ｎ１および他のトリインフルエンザウイルス感染の散発的な大発生に対してだけでなく、世界的流行の事態が生じた場合に使用する、信頼性の高い予防的および／または治療的処置法を確立することが重要であることは明白である。
【００１２】
ヒト宿主へのＨ５Ｎ１インフルエンザウイルス感染の伝播：
Ｈ５Ｎ１が種間障壁を越えてヒトに感染を引き起こす方法または理由については十分には判明していない。Ａ型インフルエンザウイルスの天然の宿主は、チドリ目およびカモ目の自由生活水鳥なので（Ｅａｓｔｅｒｄａｙら、１９９７；Ｋａｗａｏｋａら、１９８８；Ｓｌｅｍｏｎｓら、１９７４）、家禽（ニワトリ、ガチョウ、シチメンチョウ）の感染は、異種間の飛越えが既に生じたことを示している（Ｓｕａｒｅｚら、１９９８）。
【００１３】
種間障壁を越える際のＨ５Ｎ１の病原性が高いことは明らかである。Ｈ５Ｎ１ウイルスには２つの型があり、１つはニワトリで低い病原性を示し、もう１つは、「高病原性トリインフルエンザ」として知られている病原性の高い型である。この型が種間障壁を飛び越える能力を有し、ヒトで認められる高死亡率を伴う重篤な疾患を引き起こすことについては、膨大な証拠がある。
【００１４】
ヒトへのＨ５Ｎ１トリインフルエンザウイルスの直接的な感染は、ヒトでの世界的大流行へ進行する高い潜在的リスクをもたらす。ヒトでの度重なる増殖の機会は、このウイルスがヒトによく適応することを可能にし、効率的なヒトからヒトへの伝播を可能にするおそれがある（Ｓｕａｒｅｚら、１９９８）。実際、１宿主がトリインフルエンザウイルスおよびヒトインフルエンザウイルスの両方に同時感染すると、遺伝子再集合を生じ、トリウイルスの高病原性、ヒトインフルエンザウイルスと同程度のヒトからヒトへの伝播性、さらにはナイーブなヒト集団がそれまで見たことのないウイルス因子、を有するインフルエンザウイルスの出現をもたらす可能性がある。
【００１５】
現在の治療法：
現在、Ｈ５Ｎ１に対するヒト用ワクチンは存在しない。ＷＨＯによると、Ｈ５Ｎ１の２００３年型に対する開発中のワクチンは、２００４年のベトナムのＨ５Ｎ１株に対しては防御的でなく、初期の研究では、この株が（抗原シフトにより）著しく変異していることが示唆されている。ヒトからヒトへの伝播性の株が出現するまでワクチン開発は可能でなく、大規模投与の準備が整うには何カ月もかかるであろう。
【００１６】
ワクチン接種を通じて世界的流行を阻止することが、インフルエンザを制御する、信頼性のある手段でないことは明らかである。これは、主として、株が検出されてからワクチン製剤が必要となるまでの期間が短いことによる（Ｈｉｌｌｅｍａｎ、２００２）。したがって、安全かつ有効な抗ウイルス療法の形態の、広域型のインフルエンザ感染制御手段の開発は強く求められている。
【００１７】
現在、ヒトのインフルエンザウイルス感染の予防および治療用に２種類の薬剤、Ｍ２イオンチャネル遮断剤およびノイラミニダーゼ阻害剤、が市販されている。
【００１８】
アマンタジンおよびリマンタジンは、ウイルスＭ２タンパク質のイオンチャネル活性を遮断することによって機能し（Ｈｉｌｌｅｍａｎ、２００２；Ｌｕｄｗｉｇら、２００３）、これは主として、ウイルスが複製ライフサイクルの初期に入っている間に必要である。いずれの治療薬も、Ａ型インフルエンザを治療する際に極めて有効であるが、中枢神経系、肝臓および腎臓に重大な副作用を引き起こす。感受性のインフルエンザ株は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで急速に耐性を獲得する（Ｆｌｅｍｉｎｇ、２００１）。ベトナムのＨ５Ｎ１ウイルス分離株の最初の分析では、ウイルスはＭ２阻害剤に耐性であった（ＵＲＬ  ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｃｓｒ／ｄｉｓｅａｓｅ／ａｖｉａｎ＿ｉｎｆｌｕｅｎｚａ／ａｖｉａｎ＿ｆａｑｓ／ｅｎ／ｐｒｉｎｔ．ｈｔｍｌで利用可）。Ｍ２阻害剤耐性インフルエンザウイルスは、最大３０％までの患者で生じ、これらのウイルスは病原性かつ伝播性である（Ｍｏｓｃｏｎａ、２００４）。
【００１９】
オセルタミビルおよびザナミビルは、ノイラミニダーゼの作用を遮断し、新たに形成されたウイルスの感染細胞からの放出、および宿主内での蔓延を阻止する（Ｈｉｌｌｅｍａｎ、２００２；Ｌｕｄｗｉｇら、２０００）。いずれの薬剤も、臨床研究において、非トリ由来インフルエンザウイルスを有効に阻害した（Ｄｒｅｉｔｌｅｉｎら、２００１）が、ノイラミニダーゼ阻害剤の選択圧からの回避が、細胞培養物および患者で認められている（Ｇｕｂａｒｅｖａら、１９９８；Ｇｕｂａｒｅｖａら、２００２）。
【００２０】
リン酸オセルタミビル（Ｒｏｃｈｅ社製タミフル（Ｔａｍｉｆｌｕ））は、ヒトのＨ５Ｎ１トリインフルエンザの治療薬として提案されている、現在唯一の抗ウイルス治療薬である。
【００２１】
現在の抗ウイルス治療の多くは、ウイルスの構成要素を標的とすることに向けられ、そのため、ウイルスの代償的な回避機構の影響を受けやすい（Ｌｕｄｗｉｇら、２００３）。例えば、トリインフルエンザウイルス（Ａ／ｔｅｒｎ／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／Ｇ７０Ｃ／７５）由来のノイラミニダーゼ遺伝子を含む、遺伝子操作したインフルエンザウイルス（ＮＷＳ／Ｇ７０Ｃ）を用いた研究では、Ｒｏｃｈｅのタミフルの主成分であるエチルエステルプロドラッグリン酸オセルタミビルの活性化合物、オセルタミビルカルボン酸塩（ＧＳ４０７１）（ＭｃＫｉｍｍ−Ｂｒｅｓｃｈｋｉｎら、１９９８）を含む、試験した全てのノイラミニダーゼ阻害剤に対する耐性を獲得することが明らかとなった。
【００２２】
これまでのところ、オセルタミビル耐性インフルエンザウイルスは伝播性または病原性が低いが、出現する耐性ウイルスが高頻度であることは、伝播性の強い耐性ウイルスの出現が時間の問題にすぎないことを示し、世界的流行の事態におけるオセルタミビルの広範な使用について懸念が生じている（Ｍｏｓｃｏｎａ、２００４）。最近の報告（ｄｅ  Ｊｏｎｇら、２００５  ＮＥＪＭ  ３５３  ２６６７〜７２）では、タミフルで治療した２人のベトナム人患者が、この薬剤に耐性であり、トリインフルエンザで死亡したことが示唆されている。このことは、治療法として別の選択肢が必要であることを再び示している。
【００２３】
抗ウイルス応答を増強するか、あるいは宿主細胞内でプロウイルスの活性を阻害することによって、宿主を操作してウイルスの複製を妨害することを目的とする治療薬は、代償的な様式で変異するウイルス自体に対する選択圧を伴わずにインフルエンザを制御する可能性が大きく、望ましい。ウイルスと宿主を同時に標的にして、ウイルスが耐性を獲得する機会を最小化する併用療法の可能性も特に魅力的である。
【００２４】
リバビリン（Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）（商標）は、プリンヌクレオシドアナログをベースとする広域型の抗ウイルス剤であり、Ｃ型肝炎に対する標準的な治療法である。
【００２５】
リバビリンは、ウイルスＲＮＡゲノムの致死的突然変異を誘発することにより、種々のＲＮＡウイルスに対して活性を有することが知られており（Ｃｒｏｔｔｙら、２０００、Ｔａｍら、２００１）、動物のコロナウイルスに対して抗ウイルス活性を示すことが知られている（ＷｅｉｓｓおよびＯｏｓｔｒｏｍ−Ｒａｍ、１９８９、Ｓｉｄｗｅｌｌら、１９８７）。リバビリンは多数のウイルスに対して顕著な抗ウイルス活性を有するにもかかわらず、インフルエンザ感染に対する薬剤としては認められていない。さらにリバビリンに関連するかなりの毒性が、薬剤としてのその有用性を制限している。
【００２６】
インターフェロンの抗ウイルス効果：
インターフェロン（ＩＦＮ）として知られているタンパク質のファミリーは、免疫系の多面的エフェクターであることに加えて、強力な抗ウイルス応答を誘発することができる（Ｓｔｅｗａｒｔ、１９７９を参照されたい）。インターフェロンは、Ｉ型インターフェロンおよびＩＩ型インターフェロンの２つのグループに分類できる。Ｉ型インターフェロンは、インターフェロンアルファおよびインターフェロンベータからなるが、ＩＩ型のグループは、インターフェロンガンマからなる。Ｉ型インターフェロンは、ウイルス感染に直接応答して生成される。
【００２７】
インターフェロンアルファは、少なくとも１３のサブタイプを発現する、構造的に関連した遺伝子の大きなファミリーによって表されるが、インターフェロンベータは、単一の遺伝子によってコードされている（Ｄｉａｚら、１９９６）。インターフェロンのいずれのタイプも、標的細胞において「抗ウイルス」状態を促進し、これにより、細胞およびウイルスのプロセスを阻害する酵素の合成を介して、ウイルスの複製を阻害することができる。Ｉ型インターフェロンはまた、標的細胞の成長を阻害するか遅らせるように作用し、標的細胞がアポトーシスを受けやすくする。これは、ウイルス拡散の程度を制限する効果を有する。Ｉ型インターフェロンは、免疫調節物質または「生体応答修飾物質」であり、これは免疫応答を促進するように作用する。ＩＦＮアルファおよびＩＦＮベータは、作用において多くの広範な相似性を示すにもかかわらず、ＩＦＮアルファおよびベータがその効果を及ぼす様式には著しい差異が認められる。両者の抗ウイルス活性の範囲の相違を説明するのは、これらの拡張された機能である。
【００２８】
インターフェロン応答は、極めて有効な抗ウイルス機構であり、この応答の有効性は、ウイルスに圧力を加えて、インターフェロンの抗ウイルス効果を回避する手段を進化させる。インターフェロンアルファの抗ウイルス応答は、ウイルス特異的な応答ではなく、極めて広範なウイルス感染に対抗するために利用されることになる可能性を有する。実際、インターフェロンアルファは、ウイルス感染に対する「最初の防御手段」であり、インターフェロンアルファの発現は、感染に対する極めて早い段階の応答として生じ、大部分の他の先天性の免疫応答サイトカインに先行して、感染に対する「プライミング」状態を誘導する（Ｂｉｒｏｎ、１９９８）。インターフェロンアルファはまた、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦアルファ）等の他の早期応答サイトカインとの相乗効果を示すが、このことは、インターフェロンアルファは、感染後に抗原提示細胞（ＡＰＣ）により産生される最初の、かつ最も重要なサイトカインであるという、多くの研究者たちの提言を導いた（Ｂｉｒｏｎ、１９９８）。
【００２９】
インフルエンザに対する可能な治療薬としてのインターフェロンアルファ：
Ａ型インフルエンザ流行の発生期間に実施した、上気道ウイルス感染に及ぼすヒトインターフェロンアルファの予防的効果に関する二重盲検対照試験では、インフルエンザウイルス感染に帰することができる臨床症状は、インターフェロン治療群において対照群よりも軽度であったことが確認された（Ｉｓｏｍｕｒａら、１９８２）。しかし、Ａ型インフルエンザウイルスの感染後、２つの群の血清学的応答に有意な差異は存在しなかった。ヒト白血球由来のインターフェロンは、上気道疾患に対する予防的効果を示し、自覚症状軽減および体温低下が報告された（Ｉｍａｎｉｓｈｉら、１９８０）。対照的に、Ｈ３Ｎ２インフルエンザの発生と一致する期間中の、急性上気道感染の予防に関する組換え型インターフェロンアルファ２Ａの効果からは、症状の寛解におけるインターフェロンアルファの使用の臨床上の利点が示されなかった（Ｔａｎｎｏｃｋら、１９８８）。
【００３０】
インフルエンザ患者は、宿主中でインターフェロンおよび他のサイトカインを分泌する（Ｈａｙｄｅｎら、１９９８）。インフルエンザウイルスが、Ｉ型インターフェロン発現のｄｓＲＮＡ誘導を阻害し、また、ある程度はインターフェロンへの応答を阻害する機構を備えているにもかかわらず、分泌は起こる（Ｋｒｕｇら、２００３に概説）。非構造タンパク質−１（ＮＳ１）の主要なｉｎ  ｖｉｖｏ機能は、抗ウイルスＩ型インターフェロン系と拮抗することにあるように思われる。ＮＳ１は、ｄｓＲＮＡに結合して隔離することによってこの拮抗を実現するようであり、このｄｓＲＮＡへの結合および隔離がなければ、インターフェロン制御因子−３（ＩＲＦ３）、ＮＦ−κＢ、Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼおよびそのＡＰ−１転写因子基質、ならびにｄｓＲＮＡ依存性キナーゼ、ＰＫＲ、を始めとする抗ウイルス応答の構成要素を活性化するであろう（ＢａｉｇｅｎｔおよびＨｃＣａｕｌｅｙ、２００３に概説）。これらは全て、主としてＩ型ＩＦＮ発現の誘導の際に行われるが、ＰＫＲは、インターフェロンアルファに対する抗ウイルス性および抗増殖性応答の際にも活性である（Ｇｏｏｄｂｏｕｒｎら、２０００）。ＮＳ１のこの機能にもかかわらず、大半のインフルエンザウイルスは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＩＦＮアルファ処理に対する感受性を保持する（ＢａｉｇｅｎｔおよびＭｃＣａｕｌｅｙ、２００３に概説）。ＩＦＮ誘導性のＭｘタンパク質は、抗インフルエンザウイルス活性を有している。したがって、ＮＳ１の主要な役割は、ＩＦＮアルファに対する応答よりも、むしろＩ型ＩＦＮの誘導を阻止することにあるように思われる。
【００３１】
対照的に、１９９７年の香港での大発生の際のトリインフルエンザＨ５Ｎ１型ウイルス分離株は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて、ブタの組換え型ブタＩＦＮアルファにより誘導される抗ウイルス作用に耐性であることが明らかにされたが、他方、他のインフルエンザ亜型は感受性であったことが判明した（Ｓｅｏら、２００２；Ｓｅｏら、２００４）。Ｈ５Ｎ１  ＮＳ１遺伝子を含む組換え型Ｈ１Ｎ１型インフルエンザウイルス粒子の作製により、ＮＳ１が、この耐性を獲得するのに不可欠であること、ＮＳ１の９２番目の残基のグルタミン酸を有する必要があること、および、この残基が、宿主細胞中での分解に耐性を与える可能性があること、が確認された。このことは、Ｈ５Ｎ１インフルエンザウイルスの並外れた性質を明らかにしている。
【００３２】
Ｈ５Ｎ１  ＮＳ１遺伝子を有する遺伝子操作したインフルエンザウイルスに感染したマウスの肺組織の抽出物中で、インターロイキン１アルファ、１ベータおよび６、インターフェロンガンマ、ならびにケモカインＣＸＣＬ１のレベルが高いことが見出され（Ｌｉｐａｔｏｖら、２００５）、これが、Ｈ５Ｎ１インフルエンザの高い病原性と関連づけられた。Ｈ５Ｎ１／１９９７感染で死亡した２人のヒトにおいて、異常に高レベルの炎症誘発性のサイトカイン、インターフェロンベータおよびＴＮＦ−アルファが見出された（ＴＮＦ−アルファは注目されるべきである）（Ｃｈｅｕｎｇら、２００２）。最終の検視報告書には、高濃度のインターロイキン６、ＴＮＦ−アルファおよびインターフェロンガンマを伴う反応性の血球貪食症候群が記載されていた（Ｔｏら、２００１）。
【００３３】
トリインフルエンザＨ５Ｎ１の治療薬としてのマルチサブタイプＩＦＮアルファ：
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏのブタモデルで実施した前述の研究で、用いたＩ型ＩＦＮは、大腸菌発現系で産生された組換え型ＩＮＦアルファであった。ＩＦＮアルファ２サブタイプのみで構成されている組換え型ＩＦＮは、現在、抗ウイルス薬および腫瘍適応薬の市場を支配している。２種の主要な市販の組換え型アルファＩＦＮ製剤は、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＰｌｏｕｇｈのＩｎｔｒｏｎ  Ａ（商標）（ＩＦＮ−アルファ２ｂ）、およびＲｏｃｈｅのＲｏｆｅｒｏｎ（商標）（ＩＦＮ−アルファ２ａ）である。アルファ２サブタイプのこれらの２種の対立遺伝子変異体は、１つのアミノ酸残基のみが異なっている。これらのインターフェロン製剤のＰＥＧ化バージョンが、現在臨床で使用されており、非ＰＥＧ化バージョンと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏで薬物動態の改善を示すことが報告されている。
【００３４】
これらの単一サブタイプの組換え型製剤とは対照的に、異なるサブタイプの混合物、いわゆるマルチサブタイプ組成物からなるアルファＩＦＮ調製物がいくつか存在する。これらのマルチサブタイプＩＦＮアルファ製剤は、ウイルスの刺激に応答してヒト白血球により産生される（このように産生される製剤の例として、Ｍｕｌｔｉｆｅｒｏｎ（商標）：Ｖｉｒａｇｅｎ、もしくはＡｌｆｅｒｏｎ−Ｎ：Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｘが挙げられる）か、あるいはバーキットリンパ腫患者から培養されたヒトリンパ芽球様細胞で産生される（例えばＳｕｍｉｆｅｒｏｎ：Ｓｕｍｉｔｏｍｏ）。
【００３５】
組換え型ＩＦＮアルファとマルチサブタイプのＩＦＮアルファとの間には多くの差異が存在する。最も明らかな差異は、それぞれが備えているＩＦＮアルファサブタイプの数である。マルチサブタイプのＩＦＮアルファは、ＩＦＮアルファの多くのサブタイプを含んでいる。マルチサブタイプのＩＦＮアルファの製造過程でヒト細胞により産生される組換え型インターフェロンアルファ２はグリコシル化されているが、組換え型は、細菌系で産生されるため、グリコシル化されていない。グリコシル化は、タンパク質産物の多くの機能において、例えば半減期、生物活性および免疫原性に関して主要な役割を果たしている。したがって、治療的または予防的治療薬を開発する場合、グリコシル化が、投与後の体内での持続時間、治療上適切な用量での活性、および製剤そのものに対する許容性、に影響を及ぼす可能性があるので、製剤のグリコシル化は重要な考慮事項である。
【００３６】
ＩＦＮアルファの種々のサブタイプの重要性については多くの議論がある。異なるサブタイプは、ｉｎ  ｖｉｖｏで異なる役割を有することが示唆されている。哺乳動物細胞を用いた研究では、実際に、ＩＦＮアルファの種々のサブタイプの抗ウイルス活性の間に差異が存在することが示されている（Ｗｅｃｋら、１９８１）。組換えＤＮＡ技術により産生された高度に精製されたサブタイプの効力を検討する研究では、相対的な抗ウイルス効果に関して、サブタイプ間のごく限られた相違が示されたにすぎないようであるが（ＡｌｌａｎおよびＦａｎｔｅｓ、１９８０；Ｇｏｅｄｄｅｌら、１９８１）、他方、ヒト軟膜を用いて産生したサブタイプの「天然」混合物を精製して得たサブタイプに関する研究では、ヒト細胞株でのサブタイプの抗ウイルス効果に関して、異なるサブタイプ間の明白かつ有意な相違が示されている（Ｆｏｓｔｅｒら、１９９６；Ｆｉｓｈら、１９８３）。Ｆｏｓｔｅｒ（１９９６）らは、白血球由来のＩＦＮアルファ８サブタイプが、試験した全てのサブタイプの中で最も強い抗ウイルス効果を有することを示した。著者らは、このサブタイプの翻訳後修飾が、サブタイプの活性の決定に重要な役割を果たす可能性があると仮定した。人工のサブタイプ混合物が、白血球由来混合物と同様の強い抗ウイルス効果を有しないという事実は、細胞により天然に産生される異なるサブタイプが、相互に相乗効果を生み出す様式（未だ理解されていない。）で作用することを示唆している。
【００３７】
ＩＦＮアルファは、免疫エフェクター機能の増強を介して、広範な病原体に対する細胞変性効果を生じることが明らかとなっている、強力な抗ウイルス防御機構を提供することが分かる。マルチサブタイプのＩＦＮアルファは、そのようなウイルスを治療または予防する薬剤として用いる場合、ある種の利点を与える性質を有する。
【００３８】
Ａ型インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１亜型に感染したヒトに対する、十分に有効な治療的または予防的治療薬は現在存在しない。Ａ型インフルエンザ（Ｈ５Ｎ１）、他のＨ５型、ならびにＨ７、Ｈ９等の他の亜型、へのヒト感染に関連づけられる潜在的な重症度および死亡率は、有効な治療薬に対する需要の存在を示している。さらに、ヒトからヒトへ伝播可能な形態へのウイルスの遺伝子再集合の可能性は、このような再集合したウイルス変異体の同定後に広範に実施可能な特定の療法の必要性を明確にしている。
【発明の概要】
【００３９】
本発明者らは、驚くべきことに、インターフェロン、特にマルチプルサブタイプ天然ヒトアルファインターフェロン製剤が、トリインフルエンザ由来のＡ型インフルエンザウイルスのヒト感染の治療および予防のために意外にも有効であることを示した。
【００４０】
本発明の第１の態様によれば、
Ａ型インフルエンザのヒト感染の治療または予防のための方法であって、
ウイルスが、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニン成分を有し、
当該方法が、
Ｉ型インターフェロンを含有する組成物を提供するステップと、
治療を必要とする個体に前記組成物の治療上有効な量を投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法が提供される。
【００４１】
特定の実施形態において、Ａ型インフルエンザウイルスの亜型は、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型とさらに定義することができる。
【００４２】
さらに特定の実施形態において、インターフェロンは、任意の適切なＩ型インターフェロン、例えばインターフェロンアルファまたはインターフェロンベータであってもよく、好ましくはインターフェロンアルファである。インターフェロンがインターフェロンアルファである場合、本発明のインターフェロン組成物は、単一のサブタイプからなるものであってもよく、あるいはさらなる実施形態において、インターフェロンアルファの複数のサブタイプからなるものであってもよい。
【００４３】
インターフェロンはグリコシル化されていることが好ましく、したがって、インターフェロンの組換え型が用いられる場合、組換え型の産生系は、グリコシル化を可能にするものであることが好ましい。
【００４４】
しかし、最も好ましくは、インターフェロンは天然由来のものである。一実施形態では、天然由来インターフェロンを、ウイルス刺激後に白血球から採取する。例えば、インターフェロンを、バーキットリンパ腫患者から培養されたヒトリンパ芽球様細胞で産生してもよい。
【００４５】
一実施形態では、本発明に使用するのに好ましいインターフェロン組成物として、少なくとも２種のインターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）サブタイプを含有するマルチサブタイプ組成物が挙げられる。特に、マルチサブタイプインターフェロンアルファ組成物は、サブタイプ：アルファ１、アルファ２、アルファ８、アルファ１０、アルファ１４およびアルファ２１、の混合物を含有することが好ましい。種々のさらなる実施形態では、インターフェロン組成物は、他のインターフェロンアルファサブタイプ：インターフェロンαｎ１、インターフェロンαｎ３またはインターフェロンβ１ａもしくはｂ、を含有することができる。
【００４６】
本発明の他の好ましい実施形態において、インターフェロン組成物は、マルチフェロン（Ｍｕｌｔｉｆｅｒｏｎ）（商標）の商品名で、Ｖｉｒａｇｅｎ社またはそのいずれかの子会社から市販されているマルチサブタイプの天然由来インターフェロンアルファ製剤である。マルチフェロン（商標）は、ヒト白血球細胞由来の高度に精製された天然マルチサブタイプヒトアルファインターフェロン製剤である。マルチフェロン（商標）は、ＰＣＴ国際公開第００／３９１６３号パンフレットまたは国際公開第９０／１５８１７号パンフレットの教示に従って生産することができる。マルチフェロン（商標）組成物は、インターフェロンアルファサブタイプアルファ１、アルファ２、アルファ８、アルファ１０、アルファ１４およびアルファ２１を含有する。マルチフェロン（商標）は、インターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００４７】
したがって、本発明のこの態様のさらなる実施形態は、少なくともインターフェロンアルファのサブタイプ１、２、８、１０、１４および２１を含有するインターフェロン組成物を提供する。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００４８】
本発明の第２の態様によれば、ヘマグルチニン亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の存在によって定義されるＡ型インフルエンザ亜型のヒト感染の治療または予防における、Ｉ型インターフェロン組成物の使用が提供される。
【００４９】
さらなる実施形態において、Ａ型インフルエンザ亜型は、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型である。
【００５０】
さらに他の実施形態において、Ａ型インフルエンザ亜型は、任意のノイラミニダーゼ亜型とともに、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニンを含むことができる。
【００５１】
インターフェロン組成物は、本発明の第１の態様に関連して定義したように、任意の適切なインターフェロンであってもよい。具体的には、インターフェロン組成物は、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含有することができる。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００５２】
本発明の第３の態様によれば、Ａ型トリインフルエンザウイルスの感染の治療または予防のための薬剤の調製における、インターフェロンの使用が提供される。
【００５３】
一実施形態において、Ａ型トリインフルエンザウイルスは、ヘマグルチニン亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の存在によって定義することができる。
【００５４】
さらなる実施形態において、Ａ型インフルエンザウイルスは、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型のＡ型インフルエンザウイルスである。
【００５５】
さらに他の実施形態において、Ａ型インフルエンザウイルスは、任意のノイラミニダーゼ亜型とともに、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニンを含むことができる。
【００５６】
インターフェロン組成物は、本発明の第１の態様に関連して定義したように、任意の適切なインターフェロンであってもよい。具体的には、インターフェロン組成物は、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含有することができる。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００５７】
本発明のさらに別の態様によれば、少なくともインターフェロンアルファサブタイプ１、２、８、１０、１４および２１を含有し、ヒトにおけるトリインフルエンザ感染の治療に用いるインターフェロン組成物が提供される。
【００５８】
１つの好ましい実施形態では、インターフェロン組成物は、インターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００５９】
本発明のさらに別の態様によれば、トリインフルエンザ感染の治療のための医薬組成物であって、インターフェロンを、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とともに含有する医薬組成物が提供される。
【００６０】
本発明者らは、本発明のインターフェロン組成物を、第２の抗ウイルス組成物とともに投与することができることも確認した。これは、特に高い病原性を有するウイルス感染に関して有用である併用療法を提供する。
【００６１】
したがって、本発明のさらに別の態様は、
トリインフルエンザのヒト感染を予防または治療する方法であって、
Ｉ型インターフェロンを含有する組成物を提供するステップと、
前記組成物の治療上有効な量を、治療を必要とする個体に投与するステップと、
適切な第２の抗ウイルス化合物の治療上有効な量をさらに投与するステップと、
を含む方法を提供する。
【００６２】
一実施形態では、インターフェロン組成物とともに抗ウイルス化合物が投与されるが、さらなる実施形態では、インターフェロン組成物を投与する前または後に第２の抗ウイルス化合物を投与することができる。
【００６３】
一実施形態において、Ａ型トリインフルエンザウイルスは、ヘマグルチニン亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の存在によって定義することができる。
【００６４】
さらなる実施形態において、Ａ型インフルエンザウイルスは、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型のＡ型インフルエンザウイルスである。
【００６５】
さらに他の実施形態において、Ａ型インフルエンザウイルスは、任意のノイラミニダーゼ亜型とともに、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９亜型のヘマグルチニンを含むことができる。
【００６６】
インターフェロン組成物は、本発明の第１の態様に関連して定義したように、任意の適切なインターフェロンであってもよい。具体的には、インターフェロン組成物は、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含有することができる。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００６７】
好ましい実施態様において、第２の抗ウイルス化合物は、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、オセルタミビル（タミフル（商標））またはザナミビル、からなる群より選択することができる。
【００６８】
本発明のさらに別の態様によれば、Ａ型インフルエンザ亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９の感染の治療または予防のための混合薬剤の調製における、インターフェロンおよび抗ウイルス化合物の使用が提供される。
【００６９】
一実施形態において、Ａ型インフルエンザ亜型は、Ｈ５Ｎ１、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３またはＨ７Ｎ７型である。
【００７０】
好ましい実施形態において、第２の抗ウイルス化合物は、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、オセルタミビル（タミフル（商標））またはザナミビル、からなる群より選択することができる。
【００７１】
インターフェロン組成物は、本発明の第１の態様に関連して定義したように、任意の適切なインターフェロンであってもよい。具体的には、インターフェロン組成物は、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含有することができる。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００７２】
さらに別のトリインフルエンザ株の遺伝子再集合：
トリインフルエンザウイルスには、３つの代表的な亜型、Ｈ５、Ｈ７およびＨ９が存在する。これらの３つのウイルス亜型の各々を、９つのノイラミニダーゼ表面タンパク質の任意の１つと組み合わせることができる可能性があり、したがって、各亜型について９つまでの異なる型、例えばＨ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２からＨ７Ｎ９までの異なる型が存在する可能性がある。
【００７３】
したがって、本発明のさらに別の態様では、前記の亜型の各々およびいずれかが、既知のノイラミニダーゼ表面タンパク質のいずれか１つと組み合わされて、トリインフルエンザウイルスの特定の型が形成される場合の、Ａ型インフルエンザ亜型Ｈ５、Ｈ７またはＨ９のヒト感染の予防または治療のための薬剤の調製における、Ｉ型インターフェロン組成物の使用を提供する。
【００７４】
本明細書で定義されているように、用語「Ｉ型インターフェロン」は、インターフェロンアルファおよびインターフェロンベータの全てのサブタイプを含む。インターフェロンベータは、２種のサブタイプ、１ａおよび１ｂを提供する。
【００７５】
一実施形態において、インターフェロンアルファ組成物は、マルチサブタイプインターフェロンアルファ調製物である。
【００７６】
インターフェロン組成物は、本発明の第１の態様に関連して定義したように、任意の適切なインターフェロンであってもよい。具体的には、インターフェロン組成物は、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含有することができる。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００７７】
遺伝子再集合および新たなインフルエンザ亜型の形成：
Ａ型インフルエンザウイルスは、アヒル、ニワトリ、ブタ、クジラ、ウマおよびアザラシを始めとする多くの異なる動物で見出される。しかし、Ａ型インフルエンザの全ての亜型の宿主であるトリを除き、Ａ型インフルエンザウイルスの特定の亜型は、特定の種に特異的である。
【００７８】
１つの種で通常見られるＡ型インフルエンザウイルスが、クロスオーバーして、別の種で疾病を引き起こすことがある。例えば、Ｈ５Ｎ１トリインフルエンザは、ヒト集団における鳥インフルエンザの最近の大発生を引き起こした原因であり、他方、Ｈ７Ｎ７、Ｈ９Ｎ２およびＨ７Ｎ２亜型も、種間障壁を越えた伝播、およびその結果生じたヒトでの感染と関係していた。
【００７９】
トリインフルエンザウイルスは、２つの主要な方法で、すなわち、（ｉ）感染したトリから、またはトリインフルエンザウイルスで汚染された物質から直接的に、また、（ｉｉ）ブタ等の中間宿主を介して、ヒトに伝播する可能性がある。
【００８０】
インフルエンザウイルスは、８つの分かれた遺伝子分節を有する。２つの異なる種由来のウイルスが同じ人または同じ動物に感染する場合、分節化したゲノムは、異なる種由来のウイルスと混じり合って、新たなＡ型インフルエンザウイルスを生み出すことを可能にする。例えば、ブタがヒトインフルエンザウイルスおよびトリインフルエンザウイルスに同時に感染した場合、ウイルスは遺伝子再集合して、大部分はヒトウイルス由来の遺伝子だが、トリウイルス由来のヘマグルチニンおよび／またはノイラミニダーゼを有する新たなウイルスを産生する可能性がある。次いで、その結果生じたこの新たなウイルスは、ヒトに感染可能であり、ヒトからヒトへ伝播する可能性があるが、このウイルスは、ヒトに感染するインフルエンザウイルスで以前には見られなかった表面タンパク質（ヘマグルチニンおよび／またはノイラミニダーゼ）を有するであろう。
【００８１】
Ａ型インフルエンザウイルスにおけるこのタイプの大きな変異は、抗原シフトとして知られている。大部分の人々がほとんどまたは全く免疫防御を有していない新たなＡ型インフルエンザ亜型がヒトに感染するとき、抗原シフトが生じる。この新たなウイルスが人々に疾病を引き起こし、ヒトからヒトへ容易に伝播することができる場合、インフルエンザの世界的流行が生じる。
【００８２】
遺伝子再集合の過程が、トリインフルエンザとヒトインフルエンザとに感染したヒトにおいて起こる可能性もある。ウイルスの遺伝子再集合は、トリウイルス由来のヘマグルチニンと、ヒトウイルス由来の他の遺伝子と、を有する新たなウイルスを生み出す可能性がある。理論的には、ヒトインフルエンザウイルスと再集合した、ヒトがほとんどまたは全く免疫を有しないヘマグルチニンを有するＡ型インフルエンザウイルスは、持続的なヒトからヒトへの伝播を引き起こし、世界的流行をもたらすインフルエンザを生じる可能性が大きい。
【００８３】
ヒトにおけるＡ型インフルエンザウイルスの感染は、一般に、Ｎ１またはＮ２ノイラミニダーゼ亜型のいずれか１つと組み合わせられる、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３ヘマグルチニン亜型を含む亜型によって引き起こされる。
【００８４】
トリに由来し、主としてトリに伝播するが、種間障壁を越えてヒトに感染を引き起こすＡ型インフルエンザウイルスが、ヘマグルチニン亜型Ｈ５、Ｈ７およびＨ９を有するＡ型インフルエンザウイルスについて認められた。これらの型、例えばＨ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３およびＨ９Ｎ２は、トリＨおよびＮ亜型を含む。
【００８５】
トリＡ型インフルエンザウイルスおよびヒトＡ型インフルエンザウイルスの両方に同時感染した宿主中でのウイルスの遺伝子再集合により、「ヒトに適応した」Ａ型インフルエンザウイルス由来のＨまたはＮ成分が、トリインフルエンザウイルスと再集合しているウイルスを生じる可能性がある。
【００８６】
本発明のインターフェロン組成物は、抗原ドリフトおよび抗原シフトの両方から生じたトリインフルエンザ変異体に対して有効であることから、本発明のインターフェロン組成物が、ウイルスゲノムに対してどのような抗原シフト変異が生じるかとは関係なく、Ａ型インフルエンザウイルスの新たな株に対して効力があるであろうことを、本発明者らは確認した。
【００８７】
したがって、本発明のさらなる態様では、インフルエンザ変異体の天然の遺伝子再集合から生じたＡ型インフルエンザ亜型、のヒト感染の予防または治療のための薬剤の調製における、Ｉ型インターフェロン組成物の使用が提供される。
【００８８】
特に、本発明のこの態様は、ヒトインフルエンザウイルスとトリインフルエンザウイルスとの天然の遺伝子再集合により新たなインフルエンザウイルス変異体が形成された結果生じたインフルエンザ亜型、の予防および治療のための薬剤の調製における、Ｉ型インターフェロン組成物の使用に拡張される。
【００８９】
一実施形態において、遺伝子再集合から生じたインフルエンザウイルスは、トリヘマグルチニン亜型および「ヒトに適応した」ノイラミニダーゼ亜型、あるいは「ヒトに適応した」ヘマグルチニン亜型およびトリノイラミニダーゼ亜型、を含むことができる。１つの特定の実施形態において、ウイルス亜型は、ノイラミニダーゼ亜型がトリＡ型インフルエンザウイルスに由来し、ヘマグルチニン成分が、「ヒトに適応した」Ａ型インフルエンザウイルスに由来するＨ５Ｎ１であってもよい。
【００９０】
このインターフェロン組成物は、本発明の第１の態様に関連して定義したように、任意の適切なインターフェロンであってもよい。具体的には、インターフェロン組成物は、サブタイプ１、２、８、１０、１４および２１のインターフェロンアルファを含有することができる。さらに特定の実施形態では、少なくとも１つの別のインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物に添加することができる。同様に、少なくとも１つのインターフェロンアルファサブタイプを、この組成物から除去することができる。さらに他の特定の実施形態では、インターフェロン組成物は、複数のインターフェロンアルファサブタイプを、アルファ１：３７±９重量％；アルファ２＋アルファ２１：３０±７重量％；アルファ８＋アルファ１０：２２±６重量％；およびアルファ１４：１１±３重量％、の割合で含有する。
【００９１】
本発明のさらなる１つの態様によれば、インフルエンザ変異体の天然の遺伝子再集合から生じたＡ型インフルエンザ亜型のヒト感染を治療または予防する方法であって、インターフェロンの治療上有効な量を、治療を必要とする個体に投与するステップを含む方法が提供される。
【００９２】
用語「治療」は、本明細書において、ヒトまたはヒト以外の動物に利益を与える任意のレジメンを指すのに使用される。治療は、既存の状態に関するものであってもよいし、また、予防的なもの（予防治療）であってもよい。治療は、治癒的、緩和的または予防的効果を含むことができる。
【００９３】
投与：
本発明のインターフェロン、および本発明で使用されるインターフェロンは、単独で投与されてもよいが、意図される投与経路に依存して選択される適切な医薬用賦形剤、希釈剤または担体を一般に含有する医薬組成物として投与されるのが好ましい。
【００９４】
本発明のインターフェロン、および本発明で使用されるインターフェロンは、治療を必要とする患者に、任意の適切な経路を介して投与することができる。この正確な用量は、投与されるインターフェロンの特性を含む多数の要因に依存する。
【００９５】
好ましい投与経路は、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄こう内および硬膜外を含む）、または経口もしくは経鼻吸入による投与である。さらに別の投与経路としては、経口、直腸、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、膣、および非経口投与（これらに限定されるものではない。）が挙げられる。
【００９６】
好ましい実施態様において、組成物は、注射可能組成物として送達可能なものであり、経口投与されるか、または経口もしくは経鼻吸入によりエアゾールとして肺に投与される。
【００９７】
経口または経鼻吸入経路による投与の場合、インターフェロン組成物は、好ましくは適切な医薬製剤であり、吸入器またはネビュライザー装置を含む機械的構造物（これらに限定されるものではない。）を用いて送達されてもよい。さらに、経口または経鼻吸入経路が用いられる場合、ＳＰＡＧ（小型粒状エアロゾル発生器）による投与を用いてもよい。
【００９８】
静脈内注射の場合、活性成分は発熱物質を含まない、適切なｐＨ、等張性および安定性を有する、非経口的に許容可能な水溶液の形態である。当業者は、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液等の等張性のビヒクルを用いて、適切な溶液を調製することができる。必要に応じて、防腐剤、安定剤、緩衝液、抗酸化物および／または他の添加物が含有されてもよい。
【００９９】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末または液体形態のいずれであってもよい。錠剤は、ゼラチン、アジュバント等の固体の担体を含んでもよい。液体医薬組成物は、一般に、水、石油、動物もしくは植物油、鉱物油または合成油、等の液状担体を含有する。生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他の糖類溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のグリコール、が含有されてもよい。前記組成物は、微粒子、リポソーム、他のミクロ微粒子送達系、あるいは血液を含む特定の組織に留置した持続的放出製剤形態により投与されてもよい。
【０１００】
本発明により使用することができる上記の技術およびプロトコル、ならびに他の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  ＷｉｌｌｉａｍｓとＷｉｌｋｉｎｓ；第２０版（２０００年１２月１５日）ＩＳＢＮ  ０−９１２７３４−０４−３およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．ら、第７版  ＩＳＢＮ  ０−６８３３０５−７２−７に見出すことができ、その開示は全て、参照されることによって本明細書の一部をなす。
【０１０１】
医薬組成物：
上記のように、本発明は、ヒトにおけるインフルエンザウイルスＡ、Ｈ５、Ｈ７およびＨ９亜型（一般に、「トリインフルエンザ」または「鳥インフルエンザ」と呼ばれる。）の治療のための医薬組成物に拡張され、当該組成物は少なくとも１つインターフェロンを含有する。本発明の医薬組成物、および本発明で使用される医薬組成物は、活性成分（すなわち１つまたは複数のインターフェロン）に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、または当業者に周知の他の物質を含有してもよい。このような物質は無毒性のものであり、活性成分の有効性を妨害するものであってはならない。担体または他の物質の特性は、例えば非経口または経口もしくは経鼻吸入であってもよい投与経路に依存する。
【０１０２】
前記製剤は、液体、例えばｐＨ６．８〜７．６の非リン酸塩緩衝液を含む生理的食塩水、または凍結乾燥した、すなわち凍結して乾燥した粉末であってもよい。
【０１０３】
用量：
前記組成物／インターフェロンは、個体に対する有益性を示すのに十分な、「治療上有効な量」で個体に投与されるのが好ましい。投与される実際の量ならびに投与の速度および時間推移は、治療対象疾患の性質および重症度に依存する。治療薬の処方、例えば用量の決定等は、最終的には主治医および他の医師の責任と裁量の範囲内であり、通常は、治療対象疾患、個々の患者の状態、送達部位、投与方法、および医師が知る他の要因を考慮する。
【０１０４】
至適用量は、多数のパラメータ、例えば、年齢、性別、体重、治療する状態の重症度、投与される活性成分、および投与経路、を含むパラメータに基づいて、医師が決定することができる。
【０１０５】
例えば、一実施形態において、適切な用量は、週３回１００万〜１０００万ＩＵ、例えば３００万〜５００万ＩＵであり、また、毎日５０万〜１０００万ＩＵ、例えば２００万〜８００万ＩＵ、または４００万〜６００万ＩＵである。
【０１０６】
本発明の組成物は、トリインフルエンザ感染の治療に有効な化合物の同定において、さらに別の有用性を有する。
【０１０７】
本発明のさらに別の態様によれば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｈ５、Ｈ７およびＨ９亜型（一般に、「トリインフルエンザ」または「鳥インフルエンザ」と呼ばれる。）のヒトでの治療における組成物の有効性を決定するためのアッセイ法であって、前記組成物がインターフェロンであるアッセイ法が提供される。
【０１０８】
本発明のさらにもう１つの態様では、Ａ型インフルエンザウイルス亜型Ｈ５、Ｈ７およびＨ９（一般に、「トリインフルエンザ」または「鳥インフルエンザ」と呼ばれる。）のヒトでの治療における候補物質の有効性を決定するためのアッセイ法であって、候補物質の存在下、ウイルス感染細胞をインキュベートするステップと、前記細胞に対する前記ウイルスの細胞変性効果の阻害の程度を決定するステップと、を含むアッセイ法が提供される。
【０１０９】
本発明のこの態様の好ましい実施形態において、前記方法は、前記候補物質を用いて得られた阻害の程度と、インターフェロンまたはインターフェロンベースの製剤とともにインキュベートすることによって得られる阻害の程度と、を比較するステップをさらに含む。
【０１１０】
本発明のアッセイ法に用いる好ましいアッセイとしては、細胞変性エンドポイントアッセイ（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ  ａｓｓａｙ）およびプラーク減少アッセイ（ｐｌａｑｕｅ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）が挙げられる。
【０１１１】
文脈上異なる意味に解すべき場合でない限り、本発明の各態様・実施形態の好ましい特徴は、他の態様についても準用する。
【０１１２】
特に断らない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、本発明の分野における当業者が通常理解する意味を有するものとする。
【０１１３】
本明細書を通じて、文脈上異なる意味に解すべき場合でない限り、「含む」、「含有する」、「包含する」等の語（「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」もしくは「ｉｎｃｌｕｄｅ」、または「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」等の変化形）が、記載された要素または要素群の含有を意味するが、いかなる他の要素または要素群も排除するものでないことは理解されるであろう。
【発明の詳細な説明】
【０１１４】
本発明を、下記実施例および図面を参照して説明する。ただし、下記実施例は、例示のために提供されるものであり、本発明を限定するものとして解釈されることは意図されていない。
【実施例】
【０１１５】
〔実施例１：ヒト細胞におけるマルチサブタイプインターフェロンの抗ウイルス効果〕
インターフェロンの標的は、ウイルス自体よりもむしろ感染細胞であるので、インターフェロンは種特異的であることが広く知られている。
【０１１６】
細胞変性エンドポイントアッセイ：
抗ウイルス処理の効果を、各処理を４回ずつ行って検査する。簡単に説明すると、各処理の１０倍段階希釈液１００マイクロリットルを、９６ウェルプレート中で１００マイクロリットルの細胞とともにインキュベートして、ウェル当たり最終細胞数が２００００の細胞を得た。５％ＣＯ２中、３７℃のインキュベーションを、インターフェロン調製物については一晩、リバビリン（商標）については１時間行った。次いで、濃度１００００ｐｆｕ／ウェルのウイルス１０マイクロリットルを、各試験ウェルに加えた。その後、細胞変性効果に関してプレートを毎日観察しながら、プレートを５％ＣＯ２中、３７℃で３日間インキュベートした。エンドポイントは、４つの全ての装置において細胞変性効果を５０％阻害した希釈濃度である。
【０１１７】
細胞毒性を決定するために、各処理の１０倍段階希釈液１００マイクロリットルを、９６ウェルプレート中で１００マイクロリットルの細胞とともに、ウイルス添加なしでインキュベートして、ウェル当たり最終細胞数が２００００の細胞を得た。次いで、プレートを５％ＣＯ２中、３７℃で３日間インキュベートし、倒立顕微鏡を用いて毒性効果を観察した。
【０１１８】
ウイルス添加前に、マルチフェロン（商標）をヒト肺上皮細胞（細胞株Ａ５４９）に加えた。次いで、ヒト脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）をＡ５４９細胞に感染させ、ＥＭＣＶの細胞変性に及ぼすマルチフェロン（商標）の効果を、ヒトＡ５４９細胞に関して５０％の細胞変性効果（ＣＰＥ）を得るのに必要なインターフェロン濃度を評価することによって決定した。
【０１１９】
図１に示す結果は、様々なウイルス力価で、ヒト細胞において５０％の細胞変性効果を得るのに必要なマルチフェロン（商標）の濃度を示す。予想どおり、ウイルス濃度が高いほど、高い有効マルチフェロン（商標）濃度が必要とされる。
【０１２０】
図２では、マルチフェロン（商標）が、ＥＭＣＶ感染に起因する細胞変性効果を用量依存的に阻害することが認められる。
【０１２１】
これらの結果は、マルチフェロン（商標）が、ＥＭＣＶ感染細胞において細胞変性効果を用量依存的に阻害することに成功したことを示している。
【０１２２】
〔実施例２：抗ウイルス（抗−インフルエンザ）および毒性アッセイ〕
材料および方法：
マディン  ダービー（Ｍａｄｉｎ  Ｄａｒｂｙ）ウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞を用いて、Ｈ５Ｎ１トリインフルエンザウイルス（Ｈ５Ｎ１；Ａ／ＶＮ／１２０３／０４株）に対する化合物の効力を試験した。抗ウイルス性の評価アッセイでは、各々７つの半対数（ｈａｌｆ−ｌｏｇ）濃度で化合物の効果を検討した。組換え型ヒトインターフェロンアルファ２ａおよび組換え型ヒトインターフェロンベータ１ａ（ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ／Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）ならびにリバビリン（商標）（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ）を、陽性対照化合物として各実験に取り入れた。マルチフェロンおよび対照は、Ｈ５Ｎ１に関して３組および２組の毒性ウェルで２回アッセイした。
【０１２３】
サブコンフルエントな状態のＭＤＢＫ細胞培養物を、細胞数（細胞毒性）または抗ウイルス活性（ＣＰＥ）の分析のために９６ウェルプレートに播種し、その翌日に、該当するウェルに薬剤を添加した。１００  ５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）のＨ５Ｎ１、または培地、を該当するウェルに添加し、ウイルスが最大のＣＰＥを誘発した７２時間後に細胞を処理した。Ｈ５Ｎ１のＣＰＥレベルを２５％（ＩＣ２５）、５０％（ＩＣ５０）および９０％（ＩＣ９０）減少させる有効薬剤濃度を、片対数カーブフィッティングを用いる回帰分析によって算出した。Ｈ５Ｎ１レベルは、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を用いて、相対発光量（ＲＬＵ）で評価した。細胞数を５０％（ＴＣ５０）および９０％（ＴＣ９０）減少させる薬剤の毒性濃度を、同様にして算出した。５０％（ＳＩ５０）および９０％（ＳＩ９０）における選択（治療）指数（ＳＩ＝ＴＣ／ＩＣ）を算出した。
【０１２４】
細胞毒性測定のための、細胞生存率に関するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）染色：
アッセイ終了時に、細胞生存率および薬剤の細胞毒性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＣ（登録商標）発光細胞生存アッセイ試薬（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  ｒｅａｇｅｎｔ）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を製造業者の説明書に従って用いて評価した。この試薬は、代謝的に活性な細胞の指標であるＡＴＰの定量化に基づいて培養物中の生存細胞の数を決定するホモジニアスな方法である。ホモジニアスなアッセイ操作には、アッセイ培地で培養された細胞に直接、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ）を添加することが含まれる。ホモジニアスな「添加−混合−測定」形式は、細胞溶解、およびＡＴＰの存在量に比例する「光を放つタイプ」の発光シグナル（半減期は一般に５時間よりも長い。）の生成を引き起こす。ＡＴＰの量は培養物中に存在する細胞数に正比例し、読み取りはＲＬＵで行う。細胞数を５０％（ＴＣ５０）および９０％（ＴＣ９０）減少させる薬剤の毒性濃度を、片対数カーブフィッティングを用いる回帰分析によりスプレッドシートで算出した。
【０１２５】
５０％（ＳＩ５０）および９０％（ＳＩ９０）における選択（治療）指数（ＳＩ＝ＴＣ／ＩＣ）を算出した。
【０１２６】
マルチフェロン（商標）を、１００００ＩＵ／ｍｌから０．１ＩＵ／ｍｌまでの濃度範囲を用いて、抗Ｈ５Ｎｌ活性に関して試験した。図３には、１００００ＩＵ／ｍｌから１０ＩＵ／ｍｌまでの濃度範囲のマルチフェロンによる処理後の結果の詳細が記載されている。この実験では、使用したマルチフェロン（商標）の最低濃度、１０ＩＵ／ｍｌで、細胞の１００％がＨ５Ｎ１感染から保護された（図３の実線）が、このことは、マルチフェロンがｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞をＨ５Ｎ１感染から保護するのに極めて有効であることを示している。対照的に、１２．１１ＩＵ／ｍｌのインターフェロンベータ１ａでは、細胞の５０％しかＨ５Ｎ１感染から保護されなかった（グラフは示さず。結果の概要を下記表１に示す）。
【０１２７】
【表１】
2008528673.tif 000002
【０１２８】
図３（破線）は、マルチフェロン（商標）が、１００００ＩＵ／ｍｌまでの試験した全ての濃度で毒性でなかったことを示している。対照的に、図４（破線）は、リバビリン（商標）が、細胞の８０％をＨ５Ｎ１感染から保護する濃度を超える濃度では毒性を有していたこと、すなわちリバビリン（商標）を用いて細胞を完全に保護することは可能でなかったこと、を示している。
【０１２９】
図５には、マルチフェロン（商標）の濃度範囲を１００ＩＵ／ｍｌから０．１ＩＵ／ｍｌまで減少させて、マルチフェロン（商標）に関するＩＣ５０濃度を決定した反復研究の結果の詳細が記載されている。リバビリン（商標）、インターフェロンベータ１ａおよびインターフェロンアルファ２ａをこの研究に取り入れた。
【０１３０】
結果の概要を表２に示す。
【表２】
2008528673.tif 000003
【０１３１】
マルチフェロン（商標）は、Ｈ５Ｎ１感染からの細胞の保護に関して、インターフェロンベータ１ａよりも＞１７倍強力であり、インターフェロンアルファ２ａよりも＞５１倍強力であることが示された（グラフは示さず。結果の概要を下記表３にも示す）。
【０１３２】
表３には、ｖとインターフェロンアルファ２ａおよびインターフェロンベータ１ａとの、ＩＣ５０濃度（ＩＵ／ｍｌおよびｐｇ／ｍｌ）の比較の詳細が記載されている。ここでは、試験した製品の比活性の差異が考慮されているが、ＩＣ５０濃度（ｐｇ／ｍｌ）を比較すると、マルチフェロン（商標）が、インターフェロンアルファ２ａまたはインターフェロンベータ１ａのいずれよりも＞２０倍強力であることが示されている。
【０１３３】
【表３】
2008528673.tif 000004
【０１３４】
表３のコラム４から得たデータは、図６にグラフ化されている。図６は、Ｈ５Ｎ１トリインフルエンザウイルスからの、マルチフェロン（商標）、インターフェロンアルファ２ａおよびインターフェロンベータ１ａによるＭＤＢＫ細胞の保護に関する、ＩＣ５０濃度（ｐｇ／ｍｌ）の比較を示す。
【０１３５】
要旨：
マルチサブタイプのインターフェロンアルファがトリインフルエンザに対する強力な治療法または予防療法を提供することは驚くべきことである。本発明は、トリインフルエンザＨ５Ｎ１およびそれから生じる可能性のある全ての再集合体または変異体の感染から保護することができる、広域型の最初の重要な防御手段となる治療用製剤を提供する。白血球から得られるマルチサブタイプの天然インターフェロンアルファは、中和抗体を生じる傾向がないか極めて少なく、そのため、ヒトの治療に使用された場合、組換え型インターフェロンアルファ２製剤よりも高い応答率を与える。組換え型インターフェロンアルファ２製剤に対する抗インターフェロン抗体が産生される患者に関しては、天然のアルファインターフェロンを用いて治療を続けることが有益であることが判明した（Ｍｉｌｅｌｌａら、１９９５）。
【０１３６】
本明細書中で参照された全ての文献は、参照されることによって本明細書の一部をなす。本発明の範囲を逸脱することなく、本明細書に記載の本発明の実施形態に対する種々の修飾および変更が可能であることは、当業者に明らかであろう。特定の好適な実施形態との関係で本発明を説明してきたが、特許請求の範囲に記載の本発明は、そのような特定の実施形態に不当に制限されるべきでないことが理解されるべきである。実際、本明細書に記載の本発明の実施形態に対する種々の改変は、当業者に自明である限り、本発明の範囲に包含されるものとする。
【０１３７】
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Ｇｕｂａｒｅｖａ，Ｌ．Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．５３：４７−６１．
Ｈａｙｄｅｎ，Ｆ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１：６４３−６４９．
Ｈｉｌｌｅｍａｎ，Ｍ．Ｒ．（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ．２０：３０６８−３０８７．
Ｉｍａｎｉｓｈｉ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．１：１６９−１７８．
Ｉｓｏｍｕｒａ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｂｉｋｅｎ  Ｊ．２５：１３１−１３７．
Ｋａｗａｏｋａ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．１６３：２４７−２５０．
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Ｋｒｕｇ，Ｒ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．３０９：１８１−１８９．
Ｌｉｐａｔｏｖ，Ａ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８６：１１２１−１１３０．
Ｌｕｄｗｉｇ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．９：４６−５２．
ＭｃＫｉｍｍ−Ｂｒｅｓｃｈｋｉｎ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２（３）：２４５６−２４６２．
Ｍｉｌｅｌｌａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｊｕｌ；４２（３）：２０１−４．
Ｍｏｓｃｏｎａ，Ａ．（２００４）Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ．３６４：７３３−７３４．
Ｒｏｆｆｉ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２１（３）：６４５−９．
Ｓｅｏ，Ｓ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．８：９５０−９５４．
Ｓｅｏ，Ｓ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）．Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．１０３：１０７−１１３．
Ｓｈｏｒｔｒｉｄｇｅ，Ｋ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２５２：３３１−３４２．
Ｓｌｅｍｏｎｓ，Ｒ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７４）．Ａｖｉａｎ  Ｄｉｓ．１８：１１９−１２４．
Ｓｕａｒｅｚ，Ｄ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：６６７８−６６８８．
Ｔａｎｎｏｃｋ，Ｇ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．１０１：６１１−６２１．
Ｔａｕｂｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｊ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２７４：２４１−２４５．
Ｔｏ，Ｋ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．６３：２４２−２４６．
Ｗｅｃｋ，Ｐ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．５７  ２３３−２３７．
Ｖｏｎ  Ｗｕｓｓｏｗ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ    ７８：３８−４３．
Ｖｏｎ  Ｗｕｓｓｏｗ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．１４（４）：２１７−９．
Ｗｅｉｌａｎｄ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２７：３１９−３２４．
【図面の簡単な説明】
【０１３８】
【図１】マルチプルサブタイプ天然ヒトアルファインターフェロン製剤であるマルチフェロン（商標）の、Ａ５４９細胞におけるヒト脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）の細胞変性に対する効果を示す図である。ここでは、ＥＭＣウイルスに曝露されたヒトＡ５４９細胞に関して、５０％の細胞変性効果（ＣＰＥ）を得るのに必要なマルチフェロン（商標）の濃度が、ＥＭＣウイルスの様々な濃度に対して示されている。
【図２】マルチフェロン（商標）の濃度上昇が、ＥＭＣＶで感染した細胞の生存に及ぼす効果を示す図である。
【図３】１００  ＴＣＩＤ５０のＨ５Ｎ１トリインフルエンザウイルス（Ａ／ＶＮ／１２０３／０４）に感染したＭＤＢＫ細胞のマルチフェロン（１０〜１００００ＩＵ／ｍｌ）処理に関する、細胞毒性（破線）および抗ウイルス（実線）プロファイルを示す図である。
【図４】１００  ＴＣＩＤ５０のＨ５Ｎ１トリインフルエンザウイルス（Ａ／ＶＮ／１２０３／０４）に感染したＭＤＢＫ細胞のリバビリン（０．１〜１００μｇ／ｍｌ）処理に関する、細胞毒性（破線）および抗ウイルス（実線）プロファイルを示す図である。
【図５】１００  ＴＣＩＤ５０のＨ５Ｎ１トリインフルエンザウイルス（Ａ／ＶＮ／１２０３／０４）に感染したＭＤＢＫ細胞のマルチフェロン（０．１〜１００ＩＵ／ｍｌ）処理を行った反復実験に関する、細胞毒性（破線）および抗ウイルス（実線）プロファイルを示す図である。
【図６】マルチフェロン（商標）、インターフェロンアルファ２ａおよびインターフェロンベータ１ａによる、ＭＤＢＫ細胞のＨ５Ｎ１トリインフルエンザウイルスからの保護に関する、ＩＣ５０濃度（ｐｇ／ｍｌ）の比較を示す図である。
【図１】
2008528673.tif 000005
【図２】
2008528673.tif 000006
【図３】
2008528673.tif 000007
【図４】
2008528673.tif 000008
【図５】
2008528673.tif 000009
【図６】
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【国際調査報告】
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2008528673.tif 000012
2008528673.tif 000013