(57)【要約】式（Ｉ）                                    2008528564.tif 000014［式中：  Ｘは、直接の結合又は−Ｌ−ＮＲ−部（式中、Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、かつＬは、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ６−Ｃ１０アリール又は５乃至１０員ヘテロアリール部分を表す）を表し；  Ｒ１及びＲ２は、それらが結合するＮ原子と一緒に、５乃至１０員ヘテロ環状基、又は５乃至１０員ヘテロアリール基を形成するか、或いはＲ１は、水素、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルを表し、かつＲ２は、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキル又はＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルを表し；かつ  Ｒ３は、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ３−Ｃ６カルボシクリル、５乃至１０員ヘテロアリール、又は５乃至１０員ヘテロ環状部分を表す（前述のアリール、カルボシクリル、ヘテロアリール及びヘテロ環状基は、置換されていないか、又はハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、ヒドロキシ、チオール、−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ４チオアルキル、及びＣ１−Ｃ４アミノアルキル置換基から選ばれる、１、２又は３つの置換基で置換されている）］の化合物は、フラビウイルス科の複製の阻害に活性を有することが分かる。【選択図】なし
2008528564.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2008528564.tif 000011
［式中：
Ｘは、直接の結合又は−Ｌ−ＮＲ−部（式中、Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｌは、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ６−Ｃ１０アリール又は５乃至１０員ヘテロアリール部分を表す）を表し；
Ｒ１及びＲ２は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、５乃至１０員ヘテロ環状基若しくは５乃至１０員ヘテロアリール基を形成するか、又は、Ｒ１は、水素、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキル若しくはＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルを表し、かつ、Ｒ２は、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキル又はＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルを表し；かつ
Ｒ３は、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ３−Ｃ６カルボシクリル、５乃至１０員ヘテロアリール又は５乃至１０員ヘテロ環状部分を表し、
該アリール、カルボシクリル、ヘテロアリール及びヘテロ環状基は、置換されていないか、又は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、ヒドロキシ、チオール、−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ４チオアルキル及びＣ１−Ｃ４アミノアルキル置換基から選ばれる、１、２若しくは３つの置換基で置換されている］のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＸ部分における、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル及びヘテロ環状部分が、置換されていないか、又はハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル及びＣ１−Ｃ４ハロアルキル置換基から選ばれる、１又は２つの置換基で置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒが、Ｈである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｌが、フェニレン部分である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが、−Ｌ−ＮＲ−（式中、Ｌ及びＲは、前述の請求項のいずれかに定義した通り）である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、５乃至６員ヘテロアリール又はヘテロ環状基を表す、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１及びＲ２が、一緒に環状部分を形成しないとき、Ｒ１が、水素でありかつＲ２がフェニルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１及びＲ２が、一緒に環状部分を形成するとき、Ｒ１及びＲ２が、それらが結合しているＮ原子と一緒に、５乃至６員ヘテロ環状又は５乃至６員ヘテロアリール基を形成する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１及びＲ２が、それらが結合しているＮ原子と一緒に、飽和５乃至６員ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環が、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる、１又は２つのヘテロ原子を含む、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
式（Ｉ）の化合物が、Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミン、Ｎ＊４＊−（４−モルホリン−４−イル−フェニル）−Ｎ＊４＊−フェニル−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミン又は
Ｎ＊４＊，Ｎ＊４’＊−ビス−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−フェニル）−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミンである、前述の請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
ヒト又は動物の身体の治療に用いるための、請求項１〜１０のいずれか１項に定義した通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に定義した通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体を含む医薬組成物、又はその医薬上許容される塩、及び医薬上許容される担体若しくは希釈剤。
【請求項１３】
フラビウイルス科感染症の治療又は予防に用いるための薬剤の製造における、請求項１〜１０のいずれか１項に定義した通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩の使用。
【請求項１４】
フラビウイルス科感染症が、ペスチウイルス感染症である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
ペスチウイルス感染症が、牛ウイルス性下痢症ウイルス、豚コレラウイルス又はボーダー病ウイルスによる感染症である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
フラビウイルス科感染症が、フラビウイルス感染症である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１７】
フラビウイルス感染症が、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス又はダニ媒介性脳炎ウイルスによる感染症である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１８】
フラビウイルス科感染症が、ヘパシウイルス感染症である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１９】
ヘパシウイルス感染症が、Ｃ型肝炎ウイルスによる感染症である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
薬剤が、（ａ）インターフェロン若しくはその誘導体、及び／又は（ｂ）リバビリン若しくはその誘導体を更に含む、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
インターフェロン誘導体が、ＰＥＧ−インターフェロンであり、かつ／又はリバビリン誘導体が、ビラミジンである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
ヒト又は動物の身体の治療において、同時に、別々に又は順次に使用するための、
（ａ）請求項１〜１０のいずれか１項に定義した通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩；及び
（ｂ）請求項２０若しくは２１に定義した通りの、インターフェロン若しくはインターフェロン誘導体、及び／又は請求項２０若しくは２１に定義した通りの、リバビリン又はリバビリン誘導体；
を含む製品。
【請求項２３】
請求項１〜１０のいずれか１項に定義した通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩の有効量を、請求項１３〜１９のいずれか１項に定義した通りのフラビウイルス科感染症を患っているか、又は感染しやすい患者に投与する方法を含む、該患者の治療方法。
【請求項２４】
【化２】
2008528564.tif 000012
又は
【化３】
2008528564.tif 000013
である、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラビウイルス科感染症の治療又は予防に有用な、一連のキナゾリン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
フラビウイルス科のウイルスは、プラスセンス（positive-sense）ＲＮＡゲノムを含む、小さい、２０面体の、エンベロープを有したウイルスである。この科は、フラビウイルス、ペスチウイルス及びヘパシウイルスの３属から成る。
フラビウイルス科ウイルスの多くは、重要なヒト病原体である。実際、ヘパシウイルス属として、Ｃ型肝炎ウイルスが挙げられる。しかしながら、今までのところ、フラビウイルス科感染症に対する効果的かつ安全な治療法は存在しない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
ところで、意外にも、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体が、フラビウイルス科ウイルスの複製の阻害に活性を有し、その結果、フラビウイルス科感染症の治療又は予防に有効であることが発見された。本発明は、それ故、式（Ｉ）
【０００４】
【化１】
2008528564.tif 000003
【０００５】
［式中：
Ｘは、直接の結合（direct bond）又は−Ｌ−ＮＲ−部（式中、Rは、水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｌは、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ６−Ｃ１０アリール又は５乃至１０員ヘテロアリール部分を表す）を表し；
Ｒ１及びＲ２は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、５乃至１０員ヘテロ環状基若しくは５乃至１０員ヘテロアリール基を形成するか、又は、Ｒ１は、水素、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキル若しくはＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルを表し、かつ、Ｒ２は、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ４アルキル若しくはＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルを表し；かつ
Ｒ３は、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ３−Ｃ６カルボシクリル、５乃至１０員ヘテロアリール、又は５乃至１０員ヘテロ環状部分を表す
（前述の、アリール、カルボシクリル、ヘテロアリール及びヘテロ環状基は、置換されていないか、又は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、ヒドロキシ、チオール、−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ４チオアルキル及びＣ１−Ｃ４アミノアルキル置換基から選ばれる１、２若しくは３つの置換基で置換されている）］のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩を提供する。
【０００６】
典型的に、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ’）
【０００７】
【化２】
2008528564.tif 000004
【０００８】
［式中：
Ｘは、直接の結合又は−Ｌ−ＮＲ−部（式中、Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、かつ、Ｌは、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ６−Ｃ１０アリール又は５乃至１０員ヘテロアリール部分を表す）を表し；かつ
Ｒ１及びＲ２が、同一若しくは異なって、それぞれが、Ｃ１−Ｃ４アルキル若しくはＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル基を表すか、又は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、５乃至１０員ヘテロ環状基を形成する
（前述の、アリール、ヘテロアリール及びヘテロ環状基は、置換されていないか、又はハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、ヒドロキシ、チオール、−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ４チオアルキル及びＣ１−Ｃ４アミノアルキル置換基から選ばれる１、２若しくは３つの置換基で置換されている）］の化合物である。
【０００９】
疑義を避けるため、Ｘが−Ｌ−ＮＲ−であるとき、ＮＲ部分は、キナゾリン環に結合しており、かつＬ部は、−ＮＲ１Ｒ２基に結合している。
【００１０】
本明細書中、Ｃ１−Ｃ４アルキル基又は部分は、１乃至４個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐鎖のアルキル基又は部分である。Ｃ１−Ｃ４アルキル基及び部分の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル及びｔ−ブチルが挙げられる。疑義を避けるため、２つのアルキル部分が存在するとき、アルキル部分は、同一若しくは異なっていてよい。
【００１１】
本明細書中、Ｃ１−Ｃ４アルキレン基又は部分は、直鎖又は分岐鎖のアルキレン基又は部分である。例としては、メチレン、エチレン及びｎ−プロピレン基及び部分が挙げられる。
【００１２】
典型的に、本明細書中、Ｃ６−Ｃ１０アリール基又は部分は、フェニル又はナフチルである。フェニルが好ましい。
【００１３】
本明細書中、ハロゲンは、典型的に、塩素、フッ素、臭素又はヨウ素であって、好ましくは、塩素、臭素又はフッ素である。
【００１４】
本明細書中、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基は、典型的に、酸素原子に結合したＣ１−Ｃ４アルキル基である。ハロアルキル又はハロアルコキシ基は、典型的に、１つ以上の前述のハロゲン原子で置換された、前述のアルキル又はアルコキシ基である。典型的に、これは、１、２又は３つの前述のハロゲン原子で置換されている。好ましいハロアルキル及びハロアルコキシ基としては、−ＣＸ３及び−ＯＣＸ３（式中、Ｘは、前述のハロゲン原子（例えば、塩素及びフッ素））のような、ペルハロアルキル及びペルハロアルコキシ基が挙げられる。特に、好ましいハロアルキル基は、−ＣＦ３及び−ＣＣｌ３である。特に、好ましいハロアルコキシ基は、−ＯＣＦ３及び−ＯＣＣｌ３である。
【００１５】
本明細書中でＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル基は、１つ以上のヒドロキシ基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基である。典型的に、これは、１、２又は３つのヒドロキシ基で置換されている。好ましくは、これは、ただ１つのヒドロキシ基で置換されている。好ましいヒドロキシアルキル基は、−ＣＨ２−ＯＨである。
【００１６】
本明細書中、Ｃ１−Ｃ４チオアルキル基は、１つ以上のチオ基（−ＳＨ）で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基である。典型的に、これは、１、２又は３つのチオ基で置換されている。好ましくは、ただ１つのチオ基で置換されている。
【００１７】
本明細書中、Ｃ１−Ｃ４アミノアルキル基は、１つ以上の−ＮＨ２基で置換されたＣ１−Ｃ４アルキル基である。典型的に、これは、１、２又は３つの−ＮＨ２基で置換されている。好ましくは、これは、ただ１つの−ＮＨ２基で置換されている。
【００１８】
本明細書中、５乃至１０員ヘテロアリール基又は部分は、少なくとも１つのヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ及びＮから選ばれる、１、２又は３つのヘテロ原子を含む、５又は６員環のような、５乃至１０員芳香環である。
典型的に、ヘテロアリール基又は部分は、単環である。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、フラニル、チエニル、ピラゾリジニル、ピロリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル及びピラゾリル基が挙げられる。フラニル、トリアゾリル、チエニル、ピリミジニル及びチアゾリル基が好ましい。トリアゾリル基が特に好ましい。
【００１９】
本明細書中、５乃至１０員ヘテロ環状基又は部分は、その炭素原子の１つ以上、例えば、１、２又は３つがＮ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）及びＳ（Ｏ）２から選ばれる部分で置き換えられた非芳香族の、飽和又は不飽和Ｃ５−Ｃ１０炭素環状環である。典型的に、これは、５乃至６員環である。典型的に、ヘテロ環状基又は部分は、単環である。
好ましくは、ヘテロ環状基又は部分は、その炭素原子の１つ又は２つがＮＨ、Ｏ及びＳから選ばれる部分で置き換えられた飽和のＣ５−Ｃ６シクロアルキル基である。
適当なヘテロ環状基及び部分としては、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、チオモルホリニル、Ｓ−オキソ−チオモルホリニル、Ｓ，Ｓ−ジオキソ−チオモルホリニル、モルホリニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、１，３−ジオキソラニル、１，４−ジオキソリル及びピラゾリニル基及び部分が挙げられる。モルホリノ、ピロリジニル及びピペラジニル基が好ましい。
【００２０】
本明細書中、Ｃ３−Ｃ６カルボシクリル基は、３乃至６つの炭素原子を有する、非芳香族の、飽和又は不飽和単環炭化水素環である。好ましくは、これは、３乃至６つの炭素原子を有する、飽和の炭化水素環（例、シクロアルキル基）である。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。これは、好ましくは、シクロペンチル又はシクロヘキシルである。
典型的に、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＸ部分における、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル及びヘテロ環状部分は、置換されていないか、或いはハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル及びＣ１−Ｃ４ハロアルキル置換基から選ばれる１又は２つの置換基で置換されている。より好ましくは、これらは、置換されていない。
典型的に、Ｒは、Ｈである。
典型的に、Ｌは、フェニレン部分である。より好ましくは、Ｌは、１，４−フェニレン部分である。
典型的に、Ｘは、直接の結合又は−Ｌ−ＮＲ−（式中、Ｌ及びＲは、上記に定義した通りである）である。好ましくは、Ｘは、−Ｌ−ＮＲ−である。
【００２１】
好ましくは、Ｒ１及びＲ２が一緒に環状部分を形成しないとき、Ｒ１は、水素である。好ましくは、Ｒ２は、Ｃ６乃至Ｃ１０アリール、より好ましくは、フェニルである。
好ましくは、Ｒ１及びＲ２が一緒に環状部分を形成するとき、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、５乃至６員ヘテロ環状又は５乃至６員ヘテロアリール基を形成する。ヘテロ環状基は、好ましくは飽和の５乃至６員ヘテロ環であって、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１又は２つのヘテロ原子を含む。
【００２２】
最も好ましくは、Ｒ１及びＲ２が一緒に環状部分を形成するとき、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、モルホリノ基又はトリアゾリル基を形成する。
【００２３】
好ましくは、Ｒ３は、５乃至６員のヘテロアリール又はヘテロ環状部分を表す。より好ましくは、Ｒ３は、モルホリノ又はトリアゾリル部分を表す。
【００２４】
本発明の好適化合物は、
Ｘが、直接の結合又は−Ｌ−ＮＲ−（式中、Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、かつＬが、フェニレン部分を表す）を表し；
Ｒ１及びＲ２が、それらが結合しているＮ原子と一緒に、５乃至６員のヘテロアリール又はヘテロ環状基を形成するか、或いは、Ｒ１は、水素を表し、かつＲ２が、フェニル基を表し；かつ
Ｒ３が、５乃至６員のヘテロアリール又はヘテロ環状部分を示す
（該フェニル、ヘテロ環状及びヘテロアリール部分は、置換されていないか、或いはハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル及びＣ１−Ｃ４ハロアルキル置換基から選ばれる１又は２つの置換基で置換されている）ものである。
【００２５】
典型的に、これら本発明の好適化合物において、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１又は２つのヘテロ原子を含む飽和の５乃至６員ヘテロ環状基を形成する。
【００２６】
典型的に、これら本発明の好適化合物において、Ｒ３は、モルホリノ又はトリアゾリル部分を表す。
【００２７】
更なる本発明の好適化合物は、
Ｘが、−Ｌ−ＮＲ−（式中、Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ４アルキルであり、かつ、Ｌが、フェニレン部分を表す）を表し；かつ
Ｒ１及びＲ２が、それらが結合しているＮ原子と一緒に、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる１又は２つのヘテロ原子を含む飽和の５乃至６員ヘテロ環を形成する
（該フェニレン部分及び該ヘテロ環は、置換されていないか、或いはハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル及びＣ１−Ｃ４ハロアルキル置換基から選ばれる、１又は２つの置換基によって置換されている）、式（Ｉ’）の化合物である。
【００２８】
式（Ｉ）の好適化合物は、
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルキナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルキナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（２−モルホリノエチル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（３−（ピロリジン−１−イル）プロピル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）キナゾリン−４−アミン
Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−モルホリノキナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミン
Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（ピペラジン−１−イル）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（４−モルホリノフェニル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（４−モルホリノフェニル）キナゾリン−４−アミン
６−（４−（２−（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチルアミノ）エチルアミノ）キナゾリン−６−イル）−Ｎ−（４−モルホリノフェニル）キナゾリン−４−アミン
Ｎ＊４＊−（４−モルホリン−４−イル−フェニル）−Ｎ＊４＊−フェニル−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミン
Ｎ＊４＊，Ｎ＊４’＊−ビス−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−フェニル）−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミンである
【００２９】
式（Ｉ）の特に好適な化合物は、
Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミンである。この化合物は、
【００３０】
【化３】
2008528564.tif 000005
【００３１】
の構造を有する。
【００３２】
１つ以上のキラル中心を含む式（Ｉ）の化合物は、鏡像異性的に又はジアステレオ異性的に純粋な形態で、或いは異性体の混合物の形態で用いられてよい。疑義を避けるため、式（Ｉ）の化合物は、必要に応じて、溶媒和物の形態で用いることができる。更に、疑義を避けるため、本発明の化合物は、任意の互変異性型でも用いられてよい。
【００３３】
本明細書中、医薬上許容される塩は、医薬上許容される、酸又は塩基との塩である。医薬上許容される酸としては、塩酸、硫酸、リン酸、二リン酸、臭化水素酸又は硝酸のような無機酸、及びクエン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸、安息香酸、酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸又はｐ−トルエンスルホン酸のような有機酸の両方が挙げられる。医薬上許容される塩基としては、アルカリ金属（例、ナトリウム又はカリウム）及びアルカリ土類金属（例、カルシウム又はマグネシウム）水酸化物、並びにアルキルアミン、アラルキルアミン及びヘテロ環状アミンのような有機塩基が挙げられる。好ましい塩は、塩酸塩である。特に好ましい塩は、四塩酸塩である。
【００３４】
本発明の化合物は、例えば、以下の反応スキームに従って調製できる。
【００３５】
【化４】
2008528564.tif 000006
【００３６】
上記に描き表したように、中間体Ａは、適当なアニリンの二量化によって、又はアミジンの二量化を経て調製することができる。後者の経路が好ましい。上記の反応スキームにおけるＸは、典型的にヨウ素又は臭素である。二量化は、例えば、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ、Ｋ３ＰＯ４及び４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロランを用いてもたらすことができる。中間体Ａを、化学量論を下回る量の置換アニリンと反応させ、中間体Ｂを製造することができる。中間体Ｂを、式Ｒ１Ｒ２Ｎ−Ｘ−Ｈの求核性アミンと反応させて、本発明の非対称のキナゾリニル−キナゾリンを得ることができる。
【００３７】
中間体Ｂは、以下に示したように、ヨウ化キナゾリン（Ｃ）と、適用なキナゾリン又はキナゾリン前駆体との、遷移金属に媒介されたカップリングによっても調製することができる
【００３８】
【化５】
2008528564.tif 000007
【００３９】
（上記の反応スキームにおいてＭは、Ｂ（ＯＲ）２又はＳｎＲ３であり得る）。
【００４０】
中間体Ｂは、以下に示したように、ヨウ化アミノベンゾニトリル（Ｄ）と適当なキナゾリン又はキナゾリン前駆体との、遷移金属に媒介されたカップリングによっても調製することができる。
【００４１】
【化６】
2008528564.tif 000008
【００４２】
上記のスキームにおいてＰは、生じるビフェニル生成物においてアニリンの窒素を区別するための、適当な保護基（例、Ｎ−ｔｅｒｔブトキシカルボニル）である。
【００４３】
化合物Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミンは、以下の反応によって調製することができる。
【００４４】
【化７】
2008528564.tif 000009
【００４５】
本発明の化合物は、標準的な方法によって、特に適当な酸又は塩基との反応によって、塩にすることができる。
【００４６】
上記に描き表した中間体Ａ及びＢは、新規であると考えられ、それ故本発明の一部を形成する。
【００４７】
上記の反応スキームの出発物質は、既知化合物であるか、又は既知の方法に類似の方法により調製することができる。
【００４８】
本発明の化合物は、治療的に有用である。本発明は、従って、ヒト又は動物の身体の治療に用いるための、上記に定義の通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩を提供する。上記に定義の通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体を含む医薬組成物、又はその医薬上許容される塩、及び医薬上許容される担体又は希釈剤をも提供する。
【００４９】
前述の医薬組成物は、典型的に、最大で本発明の化合物を８５重量％含む。より典型的に、最大で本発明の化合物を５０重量％含む。好ましい医薬組成物は、無菌であって、発熱物質が含まれない。更に、本発明により提供される医薬組成物は、典型的に、実質上純粋な光学異性体である本発明の化合物を含む。
上記に説明のように、本発明の化合物は、フラビウイルス科感染症に対して活性を有する。本発明は、それ故、フラビウイルス科感染症の治療又は予防に用いるための薬剤の製造における、上記に定義の通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩の使用を提供する。フラビウイルス科感染症を患っているか、又はかかりやすい患者の治療のための方法をも提供し、該方法は、前述の患者に、有効量の式（Ｉ）のキナゾリン誘導体又はその医薬上許容される塩を投与することを含む。
【００５０】
フラビウイルス科は、３つの属を含む。これらは、ヘパシウイルス、フラビウイルス及びペスチウイルスである。本発明の化合物は、ヘパシウイルス感染症、フラビウイルス感染症又はペスチウイルス感染症の治療又は予防に活性を有する。
【００５１】
本発明の化合物で治療することができる典型的なペスチウイルス感染症としては、牛ウイルス性下痢症ウイルス、豚コレラウイルス及びボーダー病ウイルスが挙げられる。
【００５２】
本発明の化合物で治療することができる典型的なフラビウイルス科感染症としては、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス及びダニ媒介性脳炎ウイルスが挙げられる。
【００５３】
本発明の化合物で治療することができる典型的なヘパシウイルス感染症としては、Ｃ型肝炎ウイルスが挙げられる。
【００５４】
本発明の化合物は、特にＣ型肝炎に対して活性を有する。典型的に、前述のフラビウイルスは、それ故Ｃ型肝炎ウイルスである。
【００５５】
本発明の化合物は、様々な製剤で投与されてよい。従って、それらを、経口で、例えば、錠剤、トローチ（troches）、薬用キャンデー（lozenges）、水性若しくは油性懸濁液、分散粉末（dispersible powders）又は顆粒として、投与することができる。本発明の化合物は、非経口で（皮下に、静脈内に、筋肉内に、胸骨内に、経皮に又は輸液方法によって）も投与されてよい。化合物は、坐薬として投与されてもよい。
【００５６】
本発明の化合物は、医薬上許容される担体又は希釈剤と一緒に投与するために、典型的に、製剤される。例えば、固体経口製剤は、活性化合物と一緒に、希釈剤、（例、ラクトース、デキストロース、サッカロース、セルロース、コーンスターチ又はポテトスターチ）；滑沢剤（例、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウム塩、及び／又はポリエチレングリコール）；結合剤（例、デンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はポリビニルピロリドン）；離型剤（disaggregating agents）（例、デンプン、アルギン酸、アルギン酸塩又はデンプングリコール酸ナトリウム）；発泡性混合物；染料；甘味剤；湿潤剤、（例、レシチン、ポリソルベート、ラウリルスルフェート）；並びに、一般に、製剤処方に用いられる無毒性でかつ薬理的に不活性の物質を含んでもよい。そのような医薬調合物は、既知の方法、例えば、混合、顆粒化、錠剤化、糖衣化、又はフイルムコーティング工程によって製造されてよい。
経口投与用の液分散は、シロップ、エマルジョン及び懸濁液であってよい。シロップは、担体として、例えば、サッカロース、又はグリセリン及び／若しくはマンニトール及び／若しくはソルビトールと共にサッカロースを含んでよい。
【００５７】
懸濁液及びエマルジョンは、担体として、例えば、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はポリビニルアルコールを含んでよい。筋肉内注射に用いる懸濁液又は溶液は、活性化合物と一緒に、医薬上許容される担体、例、無菌水、オリーブオイル、オレイン酸エチル、グリコール、例、プロピレングリコール、及び、必要に応じて、適切量の塩酸リドカインを含んでよい。
【００５８】
注射又は輸液用の溶液は、担体として、例えば、無菌水を含んでよく、又は好ましくは無菌の等張生理食塩水溶液の形態であってよい。
【００５９】
本発明の化合物は、既知の抗ウイルス剤と併用されてもよい。この点から好ましい既知の抗ウイルス剤は、インターフェロン及びリバビリン、並びにそれらの誘導体であって、これらは、Ｃ型肝炎の治療のために知られている(Clinical Microbiology Reviews, Jan. 2000, 67-82)。前述の薬剤は、それ故、典型的に更にインターフェロン又はその誘導体並びに／或いはリバビリン又はその誘導体を含む。
【００６０】
更に、本発明は、：
（ａ）上記に定義の通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩；
（ｂ）インターフェロン又はその誘導体並びに／或いはリバビリン又はその誘導体；及び
（ｃ）医薬上許容される担体又は希釈剤
を含む医薬組成物を提供する。
また、ヒト又は動物の身体の治療に、別々に、同時に又は順次に用いるための、
（ａ）上記に定義の通りの、式（Ｉ）のキナゾリン誘導体、又はその医薬上許容される塩；及び
（ｂ）インターフェロン又はその誘導体並びに／或いはリバビリン又はその誘導体を含む製品も提供する。
【００６１】
好ましいインターフェロン誘導体は、ＰＥＧ−インターフェロンである。好ましいリバビリン誘導体は、ビラミジン（viramidine）である。
本発明の化合物の治療的な有効量が、患者に投与される。典型的な投与量は、具体的な化合物の活性、治療される被検体の、年齢、体重及び状態、疾患のタイプ及び重篤性、並びに投与の頻度及び経路によって、体重ｋｇ当たり約０．０１乃至１００ｍｇである。好ましくは、日々の用量水準は、体重ｋｇ当たり０．０５乃至１６ｍｇ、より好ましくは、体重ｋｇ当たり０．０５乃至１．２５ｍｇである。
【００６２】
以下の実施例は、本発明を説明する。しかしながら、それらは決して本発明を制限するものではない。この点において、実施例の項において用いた特定のアッセイは、抗ウイルス活性の表示を提供するためのみに設計されたものであるとの理解は重要である。そのような活性を決定するために多くのアッセイが利用できるが、いずれか１つの特定の個々のアッセイにおける否定的結果も、それ故、限定的なものではない。
【実施例】
【００６３】
全ての温度は、℃である。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、ｕｖ２５４インディケーター（ポリグラム（Ｐｏｌｙｇｒａｍ））を備えたＳｉ  ６０Ｇでコートしたプラスチックプレートで行った。全てのＮＭＲスペクトルは、特に言及しなければｄ６−ＤＭＳＯ中、２５０ＭＨｚで得た。
【００６４】
ＬＣ−ＭＳ条件
試料は、同時陽−陰イオン検出でエレクトロスプレーを用いて、ＭｉｃｒｏＭａｓｓ  ＺＭＤで測定した。
カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ，３０ｘ４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ，  ４μｍ．
グラディエント：４．０分かけて９５：５から５：９５  ｖ／ｖの  Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ギ酸、３分維持し、０．２分かけて９５：５  ｖ／ｖの  Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ギ酸に戻して、３分間にわたり９５：５  ｖ／ｖの  Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ギ酸で持続する。
検出：ＰＤＡ  ２５０−３４０ｎｍ．
流速：１．５ｍｌ／分
【００６５】
実施例１：Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミン
【００６６】
ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ（５：１，１２ｍｌ）中の、６−ヨード−Ｎ−（４−モルホリノフェニル）キナゾリン−４−アミン（１当量，１．００４ｇ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（０．５当量，２９５ｍｇ）、ジクロロジフェニルホスフィニルフェロセンパラジウム（ＩＩ）（１０％，２００ｍｇ）及び粉末リン酸カリウム（３当量，１．４８ｇ）の混合物を、８０℃で、１．５時間加熱した。冷却した反応混合物を、水で希釈し、緑色ｐｐｔを濾過で分離して粗生成物（１．４６ｇ）を得た。
この物質の一部（５１７ｍｇ）を、２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（２．１１ｍｌ，〜５当量）中で超音波処理及び加熱し、ＭｅＣＮ（２１ｍｌ）を加えながら攪拌して、溶解させた。攪拌を内部の黒い（ｄａｒｋ）残渣が固体に変化するまで続けた。濾過及び真空での乾燥により、淡褐色固体（２５３ｍｇ，８３％  ４ＨＣｌとしての回収）として表題化合物を得た。
LC-MS rt 2.41 m/z 611
1H NMR (DMSO)  d    11.80 (1H, brS), 9.71 (1H, s), 8.71 (1H, s), 8.52 (1H, d) 7.81 (1H, d), 7.57 (2H, d), 6.90 (2H, d), 4.29 ( br s), 3.57 (4H, m), 2.98 (4H, m)
1H NMR (DMSO + K2CO3)  d    10.55 (1H, brS), 9.69 (1H, s), 8.66(1H, s), 8.58 (1H, d) 8.0 (2H, d), 7.12 (2H, d), 3.89 (4H, m), 3.24 (4H, m)
13C NMR (DMSO) d  159.1, 151.0, 147.7, 138.1, 137.05, 134.1, 130.2, 125.8, 123.2, 120.25, 116.5, 114.2, 65.84, 49.82
【００６７】
Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミンの他の合成
【００６８】
Ｎ’−（２−シアノ−４−ヨード−フェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン：
【００６９】
２−アミノ−５−ヨード−ベンゾニトリル（５ｇ，２０．５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ−ＤＭＡ（２０ｍｌ）中で２時間加熱還流した。冷却し、真空中で乾燥するまで濃縮して、残渣を、シリカ（２０ｇ，ＳｉＯ２）を通して濾過し、ジクロロメタンで溶出して、褐色油状物（６．１５ｇ，１００％）を得た。
1H NMR (CDCl3) d 7.71 ( 1H, d), 7.58 ( 1H, dd), 7.505 ( 1H, s), 6.64 (1H, d), 3.01 (6H, s)
LC-MS rt 3.46 m/z 299 MH+
【００７０】
Ｎ’−［３，３’−ジシアノ−４’−（ジメチルアミノ−メチレンアミノ）−ビフェニル−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン：
【００７１】
Ｎ’−（２−シアノ−４−ヨード−フェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（１．５ｇ，５ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（１５ｍｌ）中のビス（ピナコレート）ジボロン（７６２ｍｇ，０．６当量）及び水（３ｍｌ，発熱注意）中のリン酸カリウム（３．２ｇ，３当量）を攪拌しながら混合した。ジクロロ（ジフェニルホスフィニルフェロセニル）パラジウム（ＩＩ）．ＤＣＭ（２０４ｍｇ，  ５ｍｏｌ％）を加え、混合物を８０°で終夜加熱した。冷却した反応混合物を、水（１００ｍｌ）及びＤＣＭ（１５０ｍｌ）で分液した。有機層を分離し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）及び濃縮乾燥前に、水で２回洗浄した。ジエチルエーテルで粉砕し、褐色結晶性固体（５３０ｍｇ，６２％）を得た。
1H NMR (DMSO) d8.045 ( 1H, s), 7.98(1H, d), 7.86 ( 1H, dd), 7.24 ( 1H, d) 3.1 ( 3H, S) 3.02 ( 3H, s) 
LC-MS rt 2.12 M/z 345
【００７２】
Ｎ−（４−モルホリノフェニル）−６−（４−（４−モルホリノフェニルアミノ）キナゾリン−６−イル）キナゾリン−４−アミン．塩酸塩．
【００７３】
Ｎ’−［３，３’−ジシアノ−４’−（ジメチルアミノ−メチレンアミノ）−ビフェニル−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（３５ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）及び４−モルホリノアニリン（３６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を酢酸（２５０ｕＬ）中で合わせ、８５oで９０分間加熱した。混合物を１０％ＮａＯＨ水溶液で希釈し、固体を濾過して分離し、水で洗浄した。固体を、続いて２Ｍ  ＨＣｌ（１ｍｌ）中でスラリー化し、赤色溶液を得て、アセトンの添加で明るい着色固体として表題化合物の塩酸塩を沈殿させた。濾過、更なるアセトン洗浄及び真空中の乾燥により、赤褐色固体（５８ｍｇ，７７％）として表題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ及び１Ｈ  ＮＭＲは、前に記載の通り。
【００７４】
実施例２：Ｎ＊４＊−（４−モルホリン−４−イル−フェニル）−Ｎ＊４＊−フェニル−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミン
【００７５】
Ｎ’−（２−シアノ−４−ヨード−フェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン
【００７６】
ＤＭＦ−ＤＭＡ（１０ｍｌ）中の２−アミノ−５−ヨード−ベンゾニトリル（５ｇ）を１１０°で２時間加熱した。冷却した反応混合物を、水（１００ｍｌ）で希釈して、酢酸エチル（３ｘ１００ｍｌ）へ抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して粘性の褐色油状物（ほぼ定量的）を得て、更に精製することなく用いた。
1H NMR (CDCl3) d 7.77 (1H, m), 7.65 (1H, dm, J8.85Hz), 7.57 (1H, s), 6.70 ( 1H, d, J8.85Hz), 3.012 (6H, s)
LC-MS rt   3.46   m/z 299.78
【００７７】
３−シアノ−４−（ジメチルアミノ−メチレンアミノ）−フェニルボロン酸
【００７８】
Ｎ’−（２−シアノ−４−ヨード−フェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（１０．９ｇ，３６．４ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２５０ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルボレート（２当量，１６．８ｍｌ）を加えた。混合物を−７８°に冷却して、ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ，３当量，６９ｍｌ）を滴下した。得られた暗い黄色溶液を更に２時間−７８°で攪拌して、その後室温に昇温した。２Ｍ  ＨＣｌをｐＨが６に達するまで加え、続いて真空中で濃縮してＴＨＦを除いた。得られた固体物質を濾過し分離して、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、真空中で終夜乾燥後、オフホワイト固体（７．６ｇ，９５％）として生成物を得た。
1H NMR (D2O) d  8.40 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.04 (1H, d), 7.48 (1H, d), 3.40 (3H, s), 3.28 (3H, s) 
LC-MS rt  0.4  m/z 217.96 ES+
【００７９】
Ｎ’−｛２−シアノ−４−［４−（４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ）−キナゾリン−６−イル］−フェニル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン
【００８０】
３−シアノ−４−（ジメチルアミノ−メチレンアミノ）−フェニルボロン酸（１８４ｍｇ，１．０５当量）及び（６−ヨード−キナゾリン−４−イル）−（４−モルホリン−４−イル−フェニル）−アミン（３４４ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）の混合物を、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（５ｍｏｌ％，４５ｍｇ）と共に、イソプロパノール（３．５ｍｌ）及び飽和重炭酸ナトリウム（１．７５ｍｌ）中で、１００°で２時間加熱し、続いて冷却して、濾過した。得られた固体をイソプロパノール（４ｘ１ｍｌ）続いてＴＢＭＥ（２ｘ１ｍｌ）で洗浄し、真空で乾燥して、表題化合物を黄色固体（３１８ｍｇ，８３％）として得た。
1H NMR (DMSO) d 9.83 (1H, s), 8.79 (1H, s), 8.49 (1H, s), 8.21-8.0 ( 4H, m), 7.77 (1H, d) 7.64 (2H, d), 7.34 (1H, d) , 7.0 (2H, d), 3.76 (4H, m) 3.11 ( 7H,m), 3.03 ( 3H, s) 
13C NMR (DMSO) d 158.225, 155.349, 155.080, 154.796, 149.236, 148.185, 136.008, 132.521, 132.418, 131.419, 131.336, 131.086, 128.581, 124.510, 124.111, 119.884, 119.643, 119.057, 115.886, 115.425, 106.991, 66.483, 49.168, 40.229, 34.443
LC-MS rt   2.35       m/z 478
【００８１】
Ｎ＊４＊−（４−モルホリン−４−イル−フェニル）−Ｎ＊４’＊−フェニル−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミン三塩酸塩
【００８２】
Ｎ’−｛２−シアノ−４−［４−（４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ）−キナゾリン−６−イル］−フェニル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（３００ｍｇ）を、酢酸（２ｍｌ）中、１２５°で２時間、アニリン（２５０ｕＬ）で処理した。冷却した反応混合物を２Ｎ  ＮａＯＨで中和して、得られた緑色沈殿物を濾過で分離した。続いて、これを２Ｎ  ＨＣｌ中に取り、濃縮して乾燥させた。１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＨで静置して橙色固体を沈殿させ、アセトン及びエーテルで洗浄して、表題化合物を赤色固体（１７０ｍｇ）として得た。
1H NMR (DMSO) d 12.56 (1H, s), 12.42 (1H, s), 10.38 (2H, m), 9.40 (2H, d), 9.214 ( 2H, m), 8.50 (2H, m), 8.36 (2H, d), 8.24 (2H, d), 7.85-7.73 (4H, m), 7.52 (2H, d), 4.25 (4H, m), 3.65 (4H, m)
LC-MS rt 2.52  m/z 526
【００８３】
実施例３：Ｎ＊４＊，Ｎ＊４’＊−ビス−（４−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−フェニル）−［６，６’］ビキナゾリニル−４，４’−ジアミン
【００８４】
Ｎ’−［３，３’−ジシアノ−４’−（ジメチルアミノ−メチレンアミノ）−ビフェニル−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（１００ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）及び４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アニリン（９３ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を酢酸（５００ｕＬ）中で合わせ１２５oで９０分間加熱した。固体を濾過により分離し水で洗浄して、続いて炭酸カリウム水溶液でスラリー化した。固体を濾過し水で洗浄し、真空中で乾燥して、クリーム色固体（９０ｍｇ，５４％）として表題化合物を得た。
1H NMR (DMSO) d 11.95 (1H, s), 10.2 (1H, s), 9.28 ( 1H, s), 9.03 ( 1H, s) 8.69 (1H, S), 8.47 (1H, d) 8.25 (1H, s), 7.9-8.1 ( 4H, m)
LC-MS rt 2.43 m/z 573 ES-  575 ES+
【００８５】
活性例
【００８６】
使用細胞：
蛍ルシフェラーゼ−ユビキチン−ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ融合タンパク質、及び細胞培養適応変異を有するＥＭＣＶ−ＩＲＥＳ駆動ＨＣＶポリタンパク質を含むＨＣＶレプリコン細胞Ｈｕｈ  ９Ｂ（レブリコン（ＲｅＢｌｉｋｏｎ））。
【００８７】
細胞培養条件：
細胞を、５％ＣＯ２環境中で３７℃にて培養し、週に２回、分けて、１日目に２×１０６細胞／フラスコ及び３日後に１×１０６で播いた。いくらかの０．２５ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８を、培養培地（２５ｍｌ当たり１２５ｕｌ）に加えたが、アッセイ培地には加えなかった。
培養培地は、１×非必須アミノ酸、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、ＦＣＳ（１０％，５０ｍｌ）及び１ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号  １０１３１−０２７）及び１０％ウシ胎仔血清を補充した、４５００ｇ／ｌ  グルコース及びグルタマックス（ｇｌｕｔａｍａｘ）を含むＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ  ６１９６５−０２６）からなった。
【００８８】
アッセイ手順：
細胞のフラスコをトリプシン処理し、細胞カウントを行った。細胞を１００，０００細胞／ｍｌに希釈し、ＩＣ５０を試験する７つの化合物全てに対して、このうち１００μｌを、１つの不透明白色９６ウェルプレート（レプリコンアッセイ用）及び１つの平底透明プレート（毒性アッセイ用）に播くのに用いた。ウェルＧ１２及びＨ１２は、透明プレートにおいてブランクとして空きにした。プレートを、続いて、３７℃で、５％ＣＯ２環境で、２４時間培養した。
翌日、透明丸底プレートで、所望の終濃度の２倍に、化合物の希釈を培地中で行う。全ての希釈を、最終ＤＭＳＯ濃度１％とする。
一旦、希釈プレートを作り、コントロール及び化合物を、複製プレートにおいて１００μｌ／ウェルで、アッセイプレート（細胞を含む）に移した。
【００８９】
例外：白色（レプリコン）プレートにおいて、ウェルＡ１及びＡ２には、化合物を加えず、それらの代わりに１００μｌの１％ＤＭＳＯを加えた。透明（Ｔｏｘ）プレートにおいて、ウェルＥ１２及びＦ１２には、ＤＭＳＯコントロールが含まれるだけであった。プレートを、続いて、３７℃で５％ＣＯ２で、７２時間培養した。
培養時間の終わりに、白色プレートの細胞を、２００μｌ／ウェルの温かい（３７℃）ＰＢＳでの洗浄により集め、２０μｌの細胞培養溶解バッファー（Ｐｒｏｍｅｇａ）で溶解した。室温での５分の培養後、ルシフェリン溶液をルシフェラーゼアッセイバッファー（ＬＡＲＢに１０ｍｌのＬＡＲＢあたり２００μｌで加えた。マイクロプレートルミノメーター(Lmax, Molecular Devices)のＭインジェクターには、４×３００ l インジェクションの用意がなされた。プレートを、ルミノメーターに挿入し、１００μｌのルシフェラーゼアッセイ試薬を、ルミノメーターのインジェクターによって加えた。シグナルは、１秒の遅延後４秒の測定のプログラムを用いて測定した。未処理の細胞コントロール値と比べてレプリコンレベルを５０％下げるために必要とされる薬剤濃度、ＩＣ５０は、ルシフェラーゼ活性の減弱の割合対、薬剤濃度のプロットから計算することができる。
【００９０】
透明プレートを、室温で1時間、５０％エタノール中の０．５％メチレンブルー１００μｌで染色して、続いて、一ウェル当たり１００μｌの１％ラウロイルサルコシン中において、吸収されたメチレンブルーを溶媒和した。プレートの吸光度を、マイクロプレート分光光度計(Molecular Devices)で測定し、化合物のそれぞれの濃度についての吸光度をDMSOコントロールとの相対的比で表した。ＤＭＳＯコントロールと比べて全細胞面積を５０％減らすのに必要な薬剤濃度、ＴＤ５０は、６２０ｎｍでの吸光度対、薬剤濃度のプロットにより計算することができる。
【００９１】
【表１】
2008528564.tif 000010
【国際調査報告】
2008528564.tif 000015
2008528564.tif 000016
2008528564.tif 000017