(57)【要約】ＩＬ−２１とサルフェートを含有する組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−２１とサルフェートを含有し、アンモニウムイオンがもし存在するならばサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で存在する組成物。
【請求項２】
サルフェートが１ｍＭより高い濃度で存在する請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ｐＨが約１から約１０の間である請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２を含む請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２を含む請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１を含む請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
ＩＬ−２１の配列が配列番号２を含む請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１によって表される請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２によって表される請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２によって表される請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
ＩＬ−２１の配列が配列番号２によって表される請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
上記組成物が医薬組成物である請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
患者に投与される組成物が等張である請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
医薬組成物が等張である請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
塩化物を含有する請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
上記組成物がアンモニウムを含まない請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
上記組成物が銅を含まない請求項１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
ＩＬ−２１と硫酸イオンを含んで成る医薬組成物。
【請求項１９】
患者に投与される組成物が等張である請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
医薬組成物が等張である請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
アンモニウムイオンがもし存在するならばサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で存在する請求項１８から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
塩化物を含有する請求項１８から２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
上記組成物がアンモニウムを含まない請求項１８から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
上記組成物が銅を含まない請求項１８から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
１０ｍｇ/ｍｌのＬ−２１、１０ｍＭのＮａ２ＳＯ４を有し、ｐＨ５．３にヒスチジンで緩衝された組成物。
【請求項２６】
組成物が医薬組成物である請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２を含む請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項２８】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２を含む請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１を含む請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
ＩＬ−２１の配列が、配列番号２を含む請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項３１】
ＩＬ−２１の配列が、配列番号１によって表される請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項３２】
ＩＬ−２１の配列が、配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２によって表される請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項３３】
ＩＬ−２１の配列が、配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２によって表される請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項３４】
ＩＬ−２１の配列が、配列番号２によって表される請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項３５】
ＩＬ−２１を含む組成物を安定化させる方法であって、該組成物にサルフェートを添加することを含む方法。
【請求項３６】
溶液中の折り畳まれていないかまたは部分的に折り畳まれたＩＬ−２１を再度折り畳む方法であって、該溶液にサルフェートを添加することを含む方法。
【請求項３７】
ＩＬ−２１を精製する方法であって、ＩＬ−２１とサルフェートの溶液をクロマトグラフィ材料に接触させることを含む方法。
【請求項３８】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２を含む請求項３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２を含む請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１を含む請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＩＬ−２１の配列が配列番号２を含む請求項３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１によって表される請求項３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２によって表される請求項３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２によって表される請求項３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ＩＬ−２１の配列が配列番号２によって表される請求項３５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
癌を治療する方法であって、請求項１から３４のいずれか一項に記載の組成物の治療上の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項４７】
上記癌が、腎細胞癌、結直腸癌、黒色腫および非ホジキンリンパ腫の中から選択される請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
癌治療のための医薬の調製におけるＩＬ−２１とサルフェートの使用。
【請求項４９】
上記癌が、腎細胞癌、結直腸癌、黒色腫および非ホジキンリンパ腫の中から選択される請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２を含む請求項４８または４９に記載の使用。
【請求項５１】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２を含む請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１を含む請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
ＩＬ−２１の配列が配列番号２を含む請求項４８または４９に記載の使用。
【請求項５４】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１によって表される請求項４８または４９に記載の使用。
【請求項５５】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２によって表される請求項４８または４９に記載の使用。
【請求項５６】
ＩＬ−２１の配列が配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２によって表される請求項４８または４９に記載の使用。
【請求項５７】
ＩＬ−２１の配列が配列番号２によって表される請求項４８または４９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、組成物、例えばＩＬ−２１とサルフェートを含む医薬組成物と、ＩＬ−２１を安定させる方法であって、該ペプチドを含む溶液にサルフェートを加えることを含む方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
ＩＬ−２１はＷＯ００/５３７６１において最初に開示された。そのプロペプチドは１６２のアミノ酸残基ペプチドであり、その配列は上記出願の配列番号２として開示される。便宜のために、該配列は、配列番号１として本出願において繰り返す。当初、成熟したペプチドは配列番号１のうちのアミノ酸番号３２から１６２から成るペプチドであると思われていたが、より最近のＷＯ０４/１１２７０３は、成熟したペプチドは、実際はアミノ酸番号３０から１６２であることを示唆する。
【０００３】
ＩＬ−２１はＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を起動させることができるサイトカインである。ＩＬ−２１およびその変異体と類似体は、さまざまな種類の癌を治療する効果的な治療として提案された（ＷＯ００/５３７６１およびＷＯ０３/１０３５８９）。
【０００４】
ペプチドは液体中において、通常は、長期間の安定を持たず、多くの研究は医薬組成物の必要条件である安定性を満たす医薬ペプチドの製剤を提供することに投資される。ペプチドを含む安定医薬組成物の供給は平凡なことではなく、ＩＬ−２１を含む安定した製剤を提供する方法を見つけることは難題のままである。本発明は、上記のような安定な製剤または代替となる特性または改良された特性を有する組成物を提供することを目的する。
【０００５】
ＷＯ０４/１１２７０３は、例えば、配列番号１の番号３０から１６２のアミノ酸が、高濃度硫酸アンモニウムで該ペプチドを沈殿させることを含む方法によって分離され得ることを開示する。
ＷＯ０４/０５５１６８は、Ｎ末端Ｍｅｔを付加した配列番号１のアミノ酸番号３０から１６２をコードしているポリヌクレオチドを含むベクターを形質移入した細胞が、硫酸アンモニウムを含む培地で発酵することを開示する。
ＷＯ２００４ＤＫ０００６８６（ＷＯ０５/３５５６５として発行）は、機能化ＰＥＧとＰＥＧ化ＩＬ−２１を提供する機能化ＰＥＧの間の反応の触媒として硫酸銅を使用すること開示する。
【０００６】
（発明の概要）
本発明の発明者は、驚くべきことに、硫酸イオン（ＳＯ４２−）の存在がＩＬ−２１の構造を安定化させ、ＩＬ−２１を含む組成物の安定性を増加することを発見した。したがって、一実施態様において、本発明は、特にＩＬ−２１と硫酸イオンを含む医薬組成物を提供し、アンモニウムイオン（ＮＨ４＋）がサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で該組成物中に存在する組成物を提供する。
【０００７】
一実施態様において、本発明は、特にＩＬ−２１と硫酸イオンを含む医薬組成物であって、アンモニウムイオン（ＮＨ４＋）がサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で該組成物中に存在する組成物を提供し、銅を含まない組成物を提供する。
一実施態様において、本発明はＩＬ−２１を含む組成物を安定化する方法であって、該組成物にサルフェートを加えることを含む方法を提供する。
一実施態様において、本発明はＩＬ−２１の折り畳みまたは再折り畳みの方法であって、折り畳まれていないまたは部分的に折り畳まれたＩＬ−２１にサルフェートを加えることを含む方法を提供する。
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１の精製の方法であって、ＩＬ−２１およびサルフェートを含む組成物にクロマトグラフィ材料を接触させることを含む方法を提供する。
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１を結晶化させる方法であって、ＩＬ−２１を含む組成物にサルフェートを加えることを含む方法を提供する。
一実施態様において、本発明は、治療法に関する方法であって、本発明の医薬品組成物の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。
一実施態様において、本発明は、医薬の調剤におけるＩＬ−２１とサルフェートの使用に関する。
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１と硫酸イオンを含む医薬組成物を提供する。
【０００８】
(定義)
本願明細書で使用する、化合物の「治療上の有効量」は、所与の疾患およびその合併症の臨床症状を治癒、緩和、または部分的に抑制するために十分な量を意味する。これを達成するために十分な量は、「治療上の有効量」として定義される。目的ごとの有効量は、患者の体重、性別、年齢および全身状態に加えて、例えば疾患または損傷の重症度に依存する。適切な投与量を決定することは、通常の実験を用いて、値のマトリックスを構築し、マトリックスの異なるポイントを試験することによって成し遂げることができると考えられ、これは全て熟練した医師または獣医の通常の技術の範囲内にあると考えられる。
【０００９】
「治療」および「治療する」なる用語は、本願明細書において、疾患または障害のような状態と戦う目的のための患者の治療および看護を意味する。 上記用語は、症状または合併症を軽減するための疾患、障害または病状の進行を遅延させるための、症状および合併症を緩和または軽減するための、および／または疾患、障害または病状を治癒または除外するための、加えて病状を予防するための活性化合物の投与のような、患者が患っている病状の治療の完全な範囲を含むことを意図する。ここで、予防は、疾患、病状または合併症と戦うための患者の治療および看護として理解され、症状または合併症の兆候を予防するための活性化合物の投与を含む。治療される患者は、好ましくは哺乳類、特に人間であるが、またイヌ、ネコ、ウシ、ヒツジおよびブタなどの動物を含んでもよい。それでもなお、治療上の療法と予防ための（予防的）療法は、本発明の別々の態様を意味すると認識されなければならない。
【００１０】
（本発明の説明）
本出願において、ＩＬ−２１は、
ａ)  配列番号１において定義される配列を有するペプチド；
ｂ)  配列番号１のアミノ酸番号３２から１６２によって定義される配列を有するペプチド；
ｃ)  配列番号１のアミノ酸番号３０から１６０によって定義される配列を有するペプチド；または
ｄ) ａ)、ｂ)およびｃ)のいかなる変異体
を指すことを目的とする。
【００１１】
変異体は、他の天然または非天然アミノ酸を有するＩＬ−２１配列の一つ以上のアミノ酸残基を置換することによって； および／または、一つ以上の天然または非天然アミノ酸をＩＬ−２１配列に付加することによって；および／または、ＩＬ−２１配列から一つ以上のアミノ酸残基を削除することによって得られる化合物であると理解され、これらのステップのいずれかの後に、一つ以上のアミノ酸残基の更なる誘導体化が、任意に続いてもよい。 特に、上記置換は1つのアミノ酸残基を同じグループの他のアミノ酸残基によって、すなわち類似の特性を有する別のアミノ酸によって置換されるという意味で保守的である。アミノ酸は、便宜上、それらの特性に基づいて以下のグループに分けることができる：塩基性アミノ酸（例えばアルギニンおよびリジン）、酸性アミノ酸（例えばグルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（例えばグルタミン、システイン、ヒスチジンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（例えばロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（例えばフェニルアラニン、トリプトファン、チロシン）および小アミノ酸（例えばグリシン、アラニン、セリンおよびトレオニン）。
【００１２】
一実施態様において、上記変異体はａ)、ｂ) または ｃ)との相同性が、少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％である。特に、上記変異体は、本願明細書のアッセイ１で測定するａ)、ｂ) または ｃ)の活性の、少なくとも２０％、例えば少なくとも４０％、例えば少なくとも６０％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％を有する。
【００１３】
当該分野で公知である「相同性」なる用語は、配列を比較することによって決まる、２つ以上のペプチド配列間の相関性を指す。当該分野において、「相同性」はまた、２つ以上のアミノ酸残基の文字列間の合致の数によって決まるような、ペプチドの間の配列相関性の程度を意味する。「相同性」は、特定の数理モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって明らかになる、（あるならば）より小さいギャップを含む２つ以上の配列間のアライメントの同一合致のパーセントを測定する。関連するタンパク質の相同性は、周知の方法によって直ちに算出することができる。上記方法は、以下の文献に記載されているものを含むが、これに限定されるものではない：Computational Molecular Biology, Lesk, A. M.編, オックスフォード大学出版, ニューヨーク, 1988年； Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W.編, アカデミック出版, ニューヨーク, 1993年； Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M.および Griffin, H. G.編, Humana Press, ニュージャージ, 1994年； Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G.著, アカデミック出版, 1987年； Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. および Devereux, J.編, M. Stockton Press, ニューヨーク 1991年； および Carillo等, SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988)。
【００１４】
相同性を測定する好適な方法は、試される配列間で最大の合致があるように設計されている。相同性を測定する方法は、公的に利用できるコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の相同性を決定する好適なコンピュータプログラムの方法には、ＧＣＧプログラム・パッケージ（ＧＡＰを含む）(Devereux等, Nucl. Acid. Res., 12:387 (1984)； Genetics Computer Group, ウィスコンシン大学, マディソン、ウィスコンシン), ＢＬＡＳＴＰ, ＢＬＡＳＴＮ, および ＦＡＳＴＡ (Altschul等, J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990))がある。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、バイオテクノロジー情報国立センター全国（NCBI）および他の提供源から公的に入手可能である(BLAST Manual, Altschul等 NCB/NLM/NIH ベセズダ、マリーランド、20894； Altschul等, 上掲)。周知のスミス・ウォーターマンのアルゴリズムもまた、相同性を決定するために用いてもよい。
【００１５】
例えば、コンピュータアルゴリズムのＧＡＰ（遺伝学コンピューターグループ、ウィスコンシン大学、マディソン、ウィスコンシン）を用いて、配列相同性のパーセントを計られる２つのタンパク質を、個々のアミノ酸が最適に合致するように（アルゴリズムによって定義される「合致する幅」）整列させる。ギャップ導入ペナルティー（平均的なダイアゴナルの３乗で計算される；該「平均的なダイアゴナル」は使用する比較マトリックスのダイアゴナルの平均である；該「ダイアゴナル」は特定の比較マトリックスによって、完全アミノ酸合致ごとに割り当てられるスコアまたは数である）とギャップ拡張ペナルティー（通常ギャップ導入ペナルティーの１０分の１である）と一緒に、ＰＡＭ２５０およびＢＬＯＳＵＭ６２のような比較マトリックスがアルゴリズムと同時に使用される。標準の比較マトリックス（ＰＡＭ２５比較マトリックスに関してはDayhoff等, Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3 (1978)；ＢＬＯＳＵＭ ６２比較マトリックスに関しては Henikoff等, Proc. Natl. Acad. Sci USA, 89:10915-10919 (1992)を参照）もまた、該アルゴリズムによって使用される。
【００１６】
タンパク質配列比較の好ましいパラメータは、以下を含む；アルゴリズム: Needleman等, J. Mol. Biol, 48:443-453 (1970)； 比較マトリックス:  Henikoff等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:10915-10919 (1992)のＢＬＯＳＵＭ ６２； ギャップペナルティー：１２, ギャップ長ペナルティー：４, 類似性の閾値：０。
【００１７】
ＧＡＰプログラムは、上記パラメータを使用できる。上述したパラメータは、ＧＡＰアルゴリズムを使用しているペプチド比較のデフォルト・パラメータである（末端のギャップにペナルティーをかけない）。
【００１８】
一実施態様において、変異体は最高５つのアミノ酸（例えば１、２、３、４または５）を上記配列ａ)、ｂ)およびｃ)のいずれかに、特にＮ末端に加えることによって得られる。特に言及することは、ｃ)（すなわち配列番号１のアミノ酸３０から１６２）のＮ末端にＭｅｔ付加を有する配列番号２である。
【００１９】
本発明は、例えばＷＯ０５/０３５５６５にて説明するように、例えばＰＥＧまたは脂肪親和性置換基の共有結合によって更に誘導体化された、上記に述べたＩＬ−２１変異体を含んでなる本発明の組成物を含む。
【００２０】
一実施態様において、本発明の組成物は、アンモニウムをサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で含む。アンモニウムが酸であるので、その量は溶液のｐＨに依存する；高いｐＨで、アンモニウムはアンモニア（ＮＨ３）として存在する。本出願において、アンモニウムの量は、アンモニアおよびアンモニウムの総量として算出されると理解される。これと同様に、サルフェートの量はｐＨ依存性である。低いｐＨで、サルフェートは、プロトン化型ＨＳＯ４−で存在する。本出願において、サルフェートの量がサルフェートおよびそのプロトン化型の総量として算出されると理解される。
【００２１】
本発明の一実施態様において、本発明の組成物はアンモニウムを含まない。これは、本発明の組成物が痕跡量レベルより多い銅を含まないことを意味すると理解される。
【００２２】
本発明において使用する硫酸イオンは、原則としていかなる硫酸塩由来であってもよい。特定の領域または産業には、もちろん、上記塩が満たすべき特別な必要条件があるであろう。例えば、製薬産業は、硫酸塩が製薬的に許容可能な塩であることが必要である。製薬的に許容可能な硫酸塩は、金属塩類、例えば硫酸リチウム、硫酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸カルシウム、硫酸カリウム、および硫酸マグネシウムを含み、アルキル化アンモニウム塩類、例えば硫酸メチルアンモニウム、硫酸ジメチルアンモニウム、硫酸トリメチルアンモニウム、硫酸エチルアンモニウム、硫酸トリエチルアンモニウム、硫酸ヒドロキシエチルアンモニウム、硫酸ジエチルアンモニウム、硫酸ブチルアンモニウム、および硫酸テトラメチルアンモニウムを含む。上述の塩類のいくつかは、結晶水の異なる量を含む１つ以上の形態で存在する。これらの形態のいずれも本発明において使用してもよく、および特に言及するのは硫酸ナトリウムを含むものである。
【００２３】
一実施態様において、本発明の組成物は銅を含まない。これは本発明の組成物が、痕跡量レベルより多い銅を含まないことを意味すると理解される。
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１とサルフェートを含む医薬組成物を提供する。
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１とサルフェートを含む医薬組成物を提供するものであって、アンモニアがサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で存在する提供である。
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１とサルフェートを含む医薬組成物を提供するものであって、アンモニアがサルフェートのモル量の２倍に満たないモル量で存在する提供であって、更に該組成物が銅を含まない提供である。ＩＬ−２１とサルフェートの他に、上記医薬組成物がまた、当該分野で知られている他の賦形剤、例えばバッファー、保存料、等張薬品、キレート剤、スタビライザー、組成物の保管の間のタンパク質による凝集体形成を減少させるのに十分なアミノ酸塩基、界面活性剤、湿潤剤、乳化剤、酸化防止剤、増量剤、金属イオン、油性の賦形薬、タンパク質（例えばヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質）、および両性イオンを含んでもよい。これらの賦形剤の使用は、当業者によく知られており、例えばレミントン： The Science and Practice of Pharmacy, 第２０版, ２０００年に記載されている。
【００２４】
一実施態様において、本発明の医薬組成物は、アンモニウムを含まない。これは本発明の組成物が痕跡量レベルより多い銅を含まないことを意味すると理解される。
本発明の医薬組成物は、以下のようないくつかの投与形態において投与されてもよい：液剤、サスペンション、エマルジョン、ミクロエマルジョン、多層乳剤、フォーム、膏薬、ペースト、絆創膏、軟膏、錠剤、コート錠剤、リンス、カプセル（例えば、ハードゼラチンカプセルおよびソフトゼラチンカプセル）、坐薬、直腸投与カプセル、ドロップ、ゲル類、スプレー、パウダー（例えば凍結乾燥された粉）、エアゾール、吸入薬、点眼液、眼軟膏、眼用リンス、膣座薬、膣リング、膣軟膏、注射溶液、例えば生体内で転換する溶液（例えば、生体内ゲル化、生体内硬化、生体内結晶化）、注入溶液およびインプラント。
【００２５】
本発明の医薬組成物は、いくつかの投与経路によって、例えば、治療を必要としている患者の舌に、舌下に、バッカル剤で、口に、経口的に、胃および腸に、鼻に、肺に（例えば、細気管支および肺胞またはそれらの組合せ）、表皮に、真皮に、経皮的に、膣に、直腸に、眼に（例えば、結膜）、または非経口的に投与することができる。非経口投与は、注射器、任意にペンのような注射器によって、皮下注射、筋肉内注射、腹膜内注射、静脈内注射によって行ってもよい。あるいは、非経口投与は、注入ポンプによって行ってもよい。更なるオプションは、本発明の組成物は、鼻または肺スプレーの形態での投与のための溶液または懸濁液の状態であってもよい。また更なるオプションとして、本発明の医薬組成物はまた、経皮投与、例えば針なしの注射、パッチ、任意にイオン注入のパッチによって、または経粘膜（例えばバッカル）投与に適用することができる。
【００２６】
ＩＬ−２１とサルフェートを含む本発明の医薬組成物において、ＩＬ−２１は、総量中に５００ｍｇ/ｍｌまで存在してもよい。特に、ＩＬ−２１は、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ/ｍｌの濃度またはそれらまでの濃度で存在してもよい。ＩＬ−２１は、１ｍＭより高い濃度で、例えば５ｍＭより高い濃度、例えば７ｍＭより高い濃度、例えば１０ｍＭより高い濃度、例えば２０ｍＭより高い濃度で安定化する。実際、５００ｍＭまで、例えば１５０ｍＭまで、７５ｍＭ、例えば５０ｍＭまでのサルフェートが存在してもよい。サルフェート濃度の上限は、選択される硫酸塩の溶解性によって述べられる。本発明の多くの適用において、等張か、等張に近い医薬組成物を有することが望ましい。一実施態様において、医薬組成物は、２０％等張から１２０％等張である。
【００２７】
一実施態様において、サルフェート濃度は、約１から１００ｍＭである。一実施態様において、サルフェート濃度は、約２０から１００ｍＭである。更なる実施態様において、サルフェート濃度は以下を含む群から選択される：約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭおよび約１００ｍＭ。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、例えば非等張でもよくて、投与の前に、例えば希釈によって、等張にしてもよい。これにより濃縮した医薬組成物の販売が可能であり、その後、投与の前に例えば医師または患者が等張にしてもよい。
【００２９】
本発明の一実施態様において、塩化物が本発明の組成物に加えられる。特に、１５０ｍＭまでの塩化物を加えてもよい。
本発明の医薬組成物のｐＨは、好ましくは２と８の間、特に言及するのは、４と６の間、例えば５．３のｐＨを有する医薬品組成物である。
【００３０】
本発明の発明の例は、１０ｍｇ/ｍｌの配列番号２によって定義されるペプチド、１０ｍＭのＮａ２ＳＯ４を含み、ｐＨ５．３にヒスチジンで緩衝される。
【００３１】
医薬組成物の安定性上の特定の賦形剤の影響は、試験組成物（本発明の組成物）および対照組成物（サルフェートを含まない同じ組成物）を準備することによって典型的に評価される。 その２種類の組成物は、制御された状況下に保管される。例えば、４０℃で２週間、２５℃で２ヶ月間、５℃で６ヶ月間である。保管後、その２種類の組成物中の興味のあるペプチドの残余活性を適切な分析法で測定する。ＩＬ−２１を含む組成物の場合は、本願明細書の実施例１１に記載されている凝集体分析法を用いることができる。ＩＬ−２１の量/活性または製品の劣化を測定する別の分析も適用することができる。
【００３２】
本発明の一実施態様は、折り畳まれていないまたは部分的に折り畳まれていないＩＬ−２１からＩＬ−２１の折り畳みまたは再折り畳みを促進するためのサルフェートの使用に関する。特に、硫酸イオンの添加によって、折り畳みの速度を上げまたは正しい折りたたみを確実にすることができる。ＩＬ−２１が特定の微生物の発酵によって産生される場合、ペプチドを正しく折り畳むことが可能ではないので、ペプチドは折り畳まれていないまたは部分的に折り畳まれていないペプチドを含む封入体において発現させることができる。上記封入体の分解後、正しく折り畳まれたペプチドを、硫酸イオンの添加を含んでいる方法で得てもよい。
【００３３】
硫酸イオンの存在により、ＩＬ−２１はよりコンパクトでより安定した構造になる。 これはＩＬ−２１のクロマトグラフィ精製で利用することができ、ペプチドのクロマトグラフィ溶離プロフィールを変化させ、特により鋭くてより明確な溶出ピークを与える。サルフェート添加の有益な効果は、異なる種類のクロマトグラフィ、例えばイオン交換クロマトグラフィ（陽イオン交換クロマトグラフィおよび陰イオン交換クロマトグラフィ）および疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィで見られる。より簡単でより安価な更に下流の処理が可能であるより少ない体積に、溶出ペプチドを集められるので、より鋭い溶出ピークは、近い溶出ピークの分離を所望する状況において、また一般の場合でも有利である。本発明によれば、サルフェートは、少なくとも約３ｍＭで、例えば少なくとも約７ｍＭ、例えば少なくとも約１０ｍＭで存在する。実際は、適用された硫酸塩の可溶性だけがサルフェート濃度の上限を決めると予期される。特に言及することは、サルフェートの供給源としての硫酸ナトリウムを含むものである。
【００３４】
本発明のクロマトグラフィ方法のｐＨは１から１０であってもよく、例えば２から９、例えば３から８、例えば４から７、例えば５から６である。
多数の異なるクロマトグラフィ材料が従来技術において公知であり、例は陰イオン交換クロマトグラフィ材料、陽イオン交換クロマトグラフィ材料、疎水的相互作用材料およびサイズ排除クロマトグラフィ材料を含む。
【００３５】
より明確な構造は、結晶化させるのがより容易であり、従って、本発明はまた、ＩＬ−２１の結晶化を改良するためのサルフェートの使用を提供する。この出願において、「改良する」は結晶化速度の増加であり、または例えばＸ線回析研究のためにより適している結晶の提供である。
【００３６】
ＩＬ−２１は、多種の癌または新生物形成疾患または障害の治療に提案されている。一実施態様において、本発明は癌を治療する方法であって、ＩＬ−２１およぶサルフェートを含む本発明の組成物の治療上の有効量の投与を含む方法に関する。特に言及するのは、転移性悪性黒色腫、腎臓細胞癌、卵巣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵癌、膀胱癌、食道癌、子宮頸癌、子宮体癌、リンパ腫および白血病である。
【００３７】
本発明のより特異的な態様において、「腫瘍性疾患」、「癌」なる用語は、腫瘍性細胞の増殖の全形態を指すと理解され、嚢胞性および固形腫瘍、骨および軟部組織腫瘍の両方を含み、良性および悪性腫瘍を含み、肛門組織、胆管、膀胱、血液細胞、骨、骨（続発性）、腸（結腸及び直腸）、脳、脳（続発性）、胸部、胸部（続発性）、カルチノイド、頸部、児童癌、目、消化道（食道）、頭部及び首、カポジ肉腫、腎臓、喉頭、白血病（急性リンパ芽球性）、白血病（急性骨髄性）、白血病（慢性リンパ球性）、白血病（慢性骨髄性）、白血病（他の）、肝臓、肝臓（続発性）、肺、肺（続発性）、リンパ節（続発性）、リンパ腫（ホジキン病）、リンパ腫（非ホジキン病）、黒色腫、中皮腫、ミエローマ、卵巣、膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、軟部組織肉腫、胃、精巣、甲状腺、未知の原発腫瘍、膣、外陰部、子宮の腫瘍を含む。
【００３８】
軟部組織腫瘍は、良性シュワン細胞腫モノソミー、繊維腫瘍、脂肪芽細胞腫、脂肪腫、子宮平滑筋腫、明細胞肉腫、皮幹線維肉腫、ユーイング肉腫、外部骸骨の粘液様軟骨肉腫、粘液様脂肪肉腫、脂肪肉腫、よく分化した歯槽横紋筋肉腫、滑膜肉腫を含む。
【００３９】
特異的な骨腫瘍は、非骨化性線維腫、単房性骨嚢胞、内軟骨腫、動脈瘤性骨嚢胞、骨芽細胞腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、骨化性線維腫およびエナメル上皮腫、巨細胞腫、線維性骨異形成症、ユーイング肉腫、好酸性肉芽腫、骨肉腫、軟骨腫、軟骨肉腫、悪性線維性組織球腫、および転移性癌を含む。
【００４０】
白血病は、骨髄によって産生される白血球癌を指す。以下は、白血病の４つの主なタイプを含むが、これに限定されるものではない；急性リンパ芽球（ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性（ＡＭＬ）、慢性リンパ球（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ）。
【００４１】
さらに、ＩＬ−２１は様々な非転移性の癌、加えて転移段階の癌、例えば限定的（発生した器官に限定的）である「段階１」； 局所的である「段階２」；広範囲である「段階３」；および、広く癌が散在している「段階４」の治療に使用できる。
【００４２】
ＩＬ−２１は、また、ウィルス感染、例えばＢ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ＲＳウィルス、 エプスタインバールウィルス、インフルエンザウィルス、サイトメガロウィルス、ヘルペスウィルスおよび重症急性呼吸器症候群の治療に関連づけられている。
【００４３】
一実施態様において、本発明は、ＩＬ−２１とサルフェートの使用、および癌の治療のための医薬の製造に関する。特に言及することは、上記リストの癌である。
【００４４】
本願明細書において引用される出版物、特許出願、特許を含む全ての文献は、他の場所で特定に文献が出典明示により別個に援用されているかにかかわらず、本願明細書にあたかも各文献が個々に特定に出典明示により援用されたかのように参照文献として組み込まれ、この全体がここに完全に（法律に準じる範囲で）効力を有する。
「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」および本発明が記載されている文章中の類似した指示語の使用は、本願明細書中に指示しない限りまたは前後関係から明確に否定されない限り、単数形および複数形の両方をカバーすると解釈されるべきものである。例えば、「化合物（the compound)」は、特に明記しない限り、本発明または特に記載されている態様のさまざまな「化合物（compounds)」を指すものとして理解されるべきものである。
特に明記しない限り、本願明細書において提供される全ての明確な値は、対応する近似値を代表する（例えば、特定の要因または測定に関して提供される全ての明確な模範的な値は、必要に応じて適切に「約」で修飾することで、対応する近似の測定値を提供することを考慮してもよい）。
【００４５】
特に明記しない限りまたは前後関係によって明らかに否定されない限り、１つまたは複数の要素を参照する「成る」,「有する」,「包含する」または「含む」のような用語を使用するいかなる本願明細書の態様または本発明の態様の記載は、特定の１つまたは複数の要素「から成る」、「から基本的に成る」、または「を実質的に含む」本発明の類似の態様または態様に対するサポートを提供するものである。（例えば、特に明記しない限りまたは明らかに前後関係によって否定されない限り、特定要素を含む本願明細書において記載される組成物はまた、その要素を含む組成物を記載するものと理解されなければならない。）
【００４６】
（アッセイ１）
ＩＬ−２１活性はマウスのＢａｆ３細胞を使用する細胞バイオアッセイにおいて分析されてもよく、ヒトＩＬ−２１とＳｔａｔ結合ルシフェラーゼリポータコンストラクトを発現するためにしっかりと形質移入する。Ｂａｆ３細胞は、活性型ＩＬ−２１受容体複合体のｇｃコンポーネントを内因的に発現する。Ｂａｆ/ｈＩＬ−２１Ｒリポーター細胞系は、刺激前に１８時間、ＩＬ−３無しの培地で飢餓状態に置いた。投与量-応答曲線は、ＩＣ５０濃度を算出するためにＩＬ−２１タンパク質の濃度の範囲を使用して得てもよい。Ｂａｆ３細胞は、Palacios R, Nature. 309(5964), 126-31 (1984)に記載されており、理化学研究所バイオ資源センターの細胞バンクから入手可能である(http://www2.brc.riken.jp/lab/cell/detail.cgi?cell_no=RCB0805)。
【実施例】
【００４７】
以下の実施例では、「ＩＬ−２１」は、配列番号２によって特定されるペプチドである。
実施例１
ＡＮＳ蛍光
ＡＮＳ（１-アニリノナフタレン-８-スルホン酸）はたんぱく質の疎水性部位に結合する。より強い蛍光強度は、より多くのＡＮＳ分子がタンパク質に結びつくことを表す。 これはつまり構造化が弱い分子を示す。なぜなら構造化が弱いタンパク質がより多くの疎水性部位を露出させるためである。より弱い蛍光強度は、ＡＮＳが結合ができる疎水性部位の露出が少ない、よりコンパクトなタンパク質構造を表す。 
全サンプルは、０．０５ｍｇ/ｍｌ（３．２μＭ）のＩＬ−２１、１０ｍＭのバッファー（バッファーおよびｐＨは図中に示す）、および５０ｍＭのＮａ２ＳＯ４（示す場合）を含む。１６μＭのＡＮＳは、測定直前に添加した。
【００４８】
ＡＮＳ蛍光スペクトルは、恒温装置セルを備えたを備えているバリアンＣａｒｙエクリプス蛍光分光光度計（バリアンＣａｒｙシングルセルペルティエアクセサリー）で記録した。蛍光分光光度計設定およびパフォーマンスは、以下の通りである：
サンプルは、３９０ｎｍで励起させる。励起および発光スリットは５ｎｍに設定した。フォト増加性（photomultiplicator）（ＰＭＴ）および温度は、それぞれ「高い」および２０℃に設定した。 
蛍光スペクトルは、４００から７００ｎｍの間で集める。３スペクトルを集めて、各サンプルごとに平均する。
蛍光最大波長（λmax）は、ブランク補正後に発光スペクトルの第一次導関数の計算により評価した。
【００４９】
図１のデータは、異なるｐＨと異なるバッファーにおけるＩＬ−２１のＡＮＳスペクトルを示す。データは、ｐＨが増加するにつれて、ＩＬ−２１がよりコンパクトな構造をとることを明確に示す。特に、サルフェートの添加はＩＬ−２１構造のコンパクト性を有意に増加させる。従って、サルフェートがＩＬ−２１の構造を安定化させると結論する。
【００５０】
実施例２
遠紫外領域円偏光二色（Ｆａｒ−ＵＶ ＣＤ）
タンパク質の遠紫外領域円偏光二色スペクトルはペプチド結合の非対称性を反映し、それは同様にタンパク質の二次構造を反映する。主にα−ヘリックスの高次構造を有するタンパク質の遠紫外領域スペクトルは、２０８と２２２ｎｍにおける２つの別個の極少値によって、１９０から１９５ｎｍの範囲の正のピークによって、１７２ｎｍより上の負から正の範囲のクロスオーバーによって特徴付けられる。ＩＬ−２１の二次構造上のサルフェートの効果は、異なるｐＨで調査した。
【００５１】
スペクトルは、温度制御器を付けた日本分光社（ＪＡＳＣＯ）ＰＴＣ−４２３８の分光旋光計で記録した。示される走査は、４秒の応答時間と２０ｎｍ/分のスキャン速度による０．１ｎｍ間隔での収集データで得られた３スペクトルの平均を意味する。スペクトルはブランクを修正し、１８０から２５０ｎｍまで得られた。タンパク質濃度は１０ｍｇ/ｍｌであった。
【００５２】
図２は、サルフェートを含むまたは含まないリン酸バッファー、ｐＨ２．０におけるＩＬ−２１のスペクトルを示す。 ｐＨ２、サルフェートなしで、ＩＬ−２１は、α−ヘリックスとランダムコイルの間の均衡状態で存在する。 しかしながら、サルフェート添加は、明らかにα−ヘリックス構造に好都合である。図３および４は特にｐＨ５．３、またｐＨ６．０において、サルフェート添加が１０９から１９５ｎｍのピークを増やすことを示し、これはα−ヘリックス構造の量の増加を示す。図２から４のデータは図５および６にも示されており、図５はサルフェートなしのｐＨ２から６のＩＬ−２１の遠紫外領域偏光二色ペクトルを示し、一方で図６はサルフェートありの同じｐＨのＩＬ−２１の遠紫外領域偏光二色ペクトルを示す。図５および６の比較において、サルフェート添加が幅広いｐＨ範囲にわたってＩＬ−２１の二次構造を均一にすることは明らかである。
従って、サルフェートのＩＬ−２１組成物への添加が、幅広いｐＨ領域にわたってＩＬ−２１の構造のα−ヘリックス含有量を増やすと結論される。
【００５３】
実施例３
近紫外領域円偏光性二色（ＣＤ）。
近紫外領域円偏光性二色スペクトルはたんぱく質の三次構造を反映する。より高い近紫外領域円偏光性二色スペクトルの振幅は、タンパク質の三次構造のより多い量である。ＩＬ−２１の近紫外領域スペクトルは、サルフェート添加の有無の様々なバッファーでｐＨ２から６において得られた。
【００５４】
スペクトルは、温度制御器を付けた日本分光社（ＪＡＳＣＯ）ＰＴＣ−４２３８の分光旋光計で記録した。示される走査は、４秒の応答時間と２０ｎｍ/分のスキャン速度による０．１ｎｍ間隔での収集データで得られた３スペクトルの平均を意味する。スペクトルはブランクを修正し、２５０から３５０ｎｍまで得られた。図１２に示す実験を除いて、タンパク質濃度は１０ｍｇ/ｍｌであった。図１２に示す実験のタンパク質濃度は、２ｍｇ/ｍｌであった。
【００５５】
図７は、５０ｍＭサルフェート添加が有るおよび無しのリン酸バッファー、ｐＨ２．０におけるＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトルを示す。この図は、サルフェート添加がＩＬ−２１の三次構造の量を増やすことを明確に示す。
【００５６】
図８Ａは、５０ｍＭサルフェート添加が有るおよび無しのｐＨ５．３（ヒスチジンバッファー）における１０ｍｇ/ｍｌのＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトルを示す。この図は、サルフェート添加がＩＬ−２１の三次構造の量を増やすことを明確に示す。図８Ｂは、５０ｍＭサルフェート添加が有るおよび無し、ｐＨ５．３（酢酸バッファー）における１０ｍｇ/ｍｌのＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトルを示す。この図は、サルフェート添加がＩＬ−２１の三次構造の量を増やすことを明確に示す。図８Ａと８Ｂで表されるバッファーから独立したデータからサルフェートの添加がＩＬ−２１の三次構造の量を増加させることは明白である。
【００５７】
図９は、５０ｍＭサルフェート添加が有るおよび無しのｐＨ６．０（リン酸バッファー）における１０ｍｇ/ｍｌのＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトルを示す。この図は、このｐＨにおいてＩＬ−２１の三次構造の量が、少ないけれども有意に増加していることを示す。
【００５８】
図１２は、５０ｍＭサルフェート添加が有るおよび無しの様々なバッファーのｐＨ２．０における２ｍｇ/ｍｌのＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトルを示す。 サルフェートを含んでいるバッファーの円偏光二色スペクトルは、円偏光二色が弱い負からより強い正へ変化する他のスペクトルとは劇的に異なる。
【００５９】
実施例４
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
示差走査熱量測定は、タンパク質のアンフォールディングまたは融解温度を測定する。幅広いピークはよりゆるい構造を表すが、明確な狭いピークはタンパク質のコンパクトで規定された構造および構造上のコンパクト性を表す。
毛細管ＤＳＣは、マイクロキャル社ＶＰ−ＤＳＣ 熱量計によって行ったサンプルは、スキャン速度３℃/分を使用して、１０から１１０℃までスキャンした。サンプルは、対照としてそれぞれのバッファーと共に走らせた。バッファー-バッファー対象曲線は、最終的なサンプル特異的データを得るために、サンプルのスキャンから減算した。サンプルは、１０ｍｇ/ｍｌのＩＬ−２１（ｐＨ５．３の１０ｍＭヒスチジン）および（示す時には）５０ｍＭのＮａ２ＳＯ４を含む。
【００６０】
図１０に示すデータは、ＩＬ−２１へのサルフェート添加がＤＳＣスキャンのピークの形に現れることを示す。これは、サルフェートがＩＬ−２１の構造上のコンパクト性を増加したことを示す。
【００６１】
実施例５
１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１（１０ｍｇ/ｍｌ）の可溶性製剤の調製
ＩＬ−２１原液［２．４％（ｗ/ｖ）］は、ヒスチジンの原液［１．５２％（ｗ/ｖ）］と合わせた。溶液のｐＨは塩酸および水酸化ナトリウムで５．３に合わせ、製剤は最終体積まで水で希釈した。製剤は、０．２２μｍフィルターを使用して濾過により殺菌し、殺菌したバイアルに無菌的に充填した。
【００６２】
実施例６
異なる硫酸ナトリウム量（３、１０、５０および１５０ｍＭ）、１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１（１０ｍｇ/ｍｌ）の可溶性製剤の調製
ＩＬ−２１原液［２．４％（ｗ/ｖ）］は、ヒスチジンの原液［１．５２％（ｗ/ｖ）］と合わせた。硫酸ナトリウム原液［１０．６％（ｗ/ｖ）］を加えた。溶液のｐＨは塩酸および水酸化ナトリウムで５．３に合わせ、製剤は最終体積まで水で希釈した。製剤は、０．２２μmフィルターを使用して濾過により殺菌し、殺菌したバイアルに無菌的に充填した。
上記手順を、硫酸ナトリウム原液の異なった量で、４回繰り返した。
【００６３】
実施例７
マンニトール［４．７％（ｗ/ｖ）］と１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１（１０ｍｇ/ｍｌ）の可溶性製剤の調製
ＩＬ−２１原液［２．４％（ｗ/ｖ）］は、マンニトール原液［２３．６％（ｗ/ｖ）］およびヒスチジンの原液［１．５２％（ｗ/ｖ）］と合わせた。溶液のｐＨは塩酸および水酸化ナトリウムで５．３に合わせ、製剤は最終体積まで水で希釈した。 
製剤は、０．２２μｍフィルターを使用して濾過により殺菌し、殺菌したバイアルに無菌的に充填した。
【００６４】
実施例８
異なる硫酸ナトリウム量（３、１０、５０および１５０ｍＭ）、マンニトール［４．７％（ｗ/ｖ）］と１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１（１０ｍｇ/ｍｌ）の可溶性製剤の調製
ＩＬ−２１原液［２．４％（ｗ/ｖ）］は、マンニトール原液［２３．６％（ｗ/ｖ）］およびヒスチジンの原液［１．５２％（ｗ/ｖ）］と合わせた。硫酸ナトリウム原液［１０．６％（ｗ/ｖ）］を加えた。溶液のｐＨは塩酸および水酸化ナトリウムで５．３に合わせ、製剤は最終体積まで水で希釈した。製剤は、０．２２μｍフィルターを使用して濾過により殺菌し、殺菌したバイアルに無菌的に充填した。
上記手順を、硫酸ナトリウム原液の異なった量で、４回繰り返した。
【００６５】
実施例９
異なる塩化ナトリウム量（５０および１５０ｍＭ）、５０ｍＭ硫酸ナトリウム、１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１（１０ｍｇ/ｍｌ）の可溶性製剤の調製
ＩＬ−２１原液［２．４％（ｗ/ｖ）］は、ヒスチジンの原液［１．５２％（ｗ/ｖ）］および塩化ナトリウム原液［４．３８％（ｗ/ｖ）］と合わせた。硫酸ナトリウム原液［１０．６％（ｗ/ｖ）］を加えた。溶液のｐＨは塩酸および水酸化ナトリウムで５．３に合わせ、製剤は最終体積まで水で希釈した。製剤は、０．２２μｍフィルターを使用して濾過により殺菌し、殺菌したバイアルに無菌的に充填した。
上記手順を、硫酸ナトリウム原液の異なった量で、２回繰り返した。
【００６６】
実施例１０
異なる塩化ナトリウム量（５０および１５０ｍＭ）、５０ｍＭ硫酸ナトリウム、１０ｍＭヒスチジン、マンニトール［４．７％（ｗ/ｖ）］、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１（１０ｍｇ/ｍｌ）の可溶性製剤の調製
ＩＬ−２１原液［２．４％（ｗ/ｖ）］は、マンニトール原液［２３．６％（ｗ/ｖ）］、ヒスチジンの原液［１．５２％（ｗ/ｖ）］および塩化ナトリウム原液［４．３８％（ｗ/ｖ）］と合わせた。硫酸ナトリウム原液［１０．６％（ｗ/ｖ）］を加えた。溶液のｐＨは塩酸および水酸化ナトリウムで５．３に合わせ、製剤は最終体積まで水で希釈した。製剤は、０．２２μｍフィルターを使用して濾過により殺菌し、殺菌したバイアルに無菌的に充填した。
上記手順を、硫酸ナトリウム原液の異なった量で、２回繰り返した。
【００６７】
実施例１１
貯蔵安定性
実施例５から１１の製剤を含むバイアルは、以下の異なった温度に置いた：３７℃、２５℃、１５℃、５℃および−２０℃。解析のためにサンプルは異なる時点で取り出した。ＩＬ−２１製剤の「凝集体」（共有結合ダイマーおよび他の高分子量不純物を含む）の含量は、ＴＳＫカラムのサイズ排除ＨＰＬＣで測定した。凝集体のパーセンテージは、含まれる体積の範囲内の総面積に対する、ＩＬ−２１の主要ピーク前に溶出しているピークの総面積に基づく。
実施例５の製剤（すなわち、サルフェートとマンニトールなしのＩＬ−２１製剤）を対照として用いて正規化した３７℃に１ヶ月間貯蔵したサンプルの結果を表１にまとめる。データは、図１１においても図示する。
【００６８】
表１  実施例５から１０に記載されている３７℃で一ヶ月間後のＩＬ−２１製剤の正規化した凝集体形成。実施例５の対照例を１００とする。
2008542430.tif 000002
【００６９】
表１の（または図１１に図解した）データは、サルフェートがＩＬ−２１の貯蔵安定性に正の影響を与えることを示す。データは、この正の効果がサルフェート濃度に依存することもまた示す。さらに、データは、塩化物が貯蔵安定性に正の効果を与え、またこの効果が塩化物濃度に依存することを示す。最後に、データは、更なる安定化の効果がサルフェートと塩化物の両方をＩＬ−２１化合物に加えることによって成し遂げられることを示す。このように、実施例１から４において開示される生物物理学的な実験によって示されるＩＬ−２１の構造におけるサルフェートの効果がＩＬ−２１組成物の安定性の増加に反映されることが確認される。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】異なるｐＨでＩＬ−２１に結合する１-アニリノナフタレン-８-スルホン酸（ＡＮＳ）。全サンプルは、０．０５ｍｇ/ｍｌ（３．２μＭ）のＩＬ−２１、１０ｍＭバッファー（バッファーおよびｐＨは図中に示す）、および５０ｍＭのＮａ２ＳＯ４（示す場合）を含む。１６μＭ ＡＮＳは、測定直前に加えた。
【図２】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まないリン酸バッファー、ｐＨ２．０におけるＩＬ−２１の遠紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図３Ａ】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まないヒスチジンバッファー、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１の遠紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図３Ｂ】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まない酢酸バッファー、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１の遠紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図４】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まないリン酸バッファー、ｐＨ６．０におけるＩＬ−２１の遠紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図５】５０ｍＭサルフェート添加のないｐＨ２．０から６．０におけるＩＬ−２１の遠紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度は１０ｍｇ/ｍｌである。
【図６】５０ｍＭサルフェート添加のあるｐＨ２．０から６．０におけるＩＬ−２１の遠紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度は１０ｍｇ/ｍｌである。
【図７】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まないリン酸バッファー、ｐＨ２．０におけるＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図８Ａ】５０ｍＭサルフェートを含むまたは含まないヒスチジンバッファー、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図８Ｂ】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まない酢酸バッファー、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図９】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まないリン酸バッファー、ｐＨ６．０におけるＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度１０ｍｇ/ｍｌ。
【図１０】５０ｍＭサルフェートを含むかまたは含まないヒスチジンバッファー、ｐＨ５．３におけるＩＬ−２１のキャピラリー示差走査熱量法。
【図１１】表１のデータのプロット図。
【図１２】５０ｍＭのリン酸バッファー、リン酸バッファー、ギ酸バッファー、ｐＨ２．０におけるＩＬ−２１の近紫外領域円偏光二色スペクトル。タンパク質濃度２ｍｇ/ｍｌ。
【図１】
2008542430.tif 000003
【図２】
2008542430.tif 000004
【図３】
2008542430.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2008542430.tif 000009
【図８】
2008542430.tif 000010
【図９】
2008542430.tif 000011
【図１０】
2008542430.tif 000012
【図１１】
2008542430.tif 000013
【図１２】
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【配列表】
2008542430000001.xml
【国際調査報告】
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