(57)【要約】【課題】  中枢神経系及び／または他の神経細胞のうち、完全にまたは部分的に損傷を受けた細胞、変性細胞の機能の回復及び／または維持することを目的とする。【解決手段】  S‐クレンブテロールを使用することによって、星状細胞の活性化と内因性の神経防護作用プロセスの開始を引き起こし、神経細胞の損傷または破壊を少なくし、場合によっては予防することを可能にする。【選択図】  図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
完全にまたは部分的に損傷を受けた中枢神経系細胞及び／または他の神経細胞の機能回復用及び／または機能維持用の薬剤を製造するための、S‐クレンブテロールの使用。
【請求項２】
前記S‐クレンブテロールが、１日当たり０．０１〜１００mgの用量で投与され、特に好ましくは、１日当たり０．０１〜５mgの用量で投与されることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
NMDAアンダゴニストと併用されることを特徴とする請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
アルツハイマー病、脳血管障害、パーキンソン病、ピック病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、レヴィー小体認知症、脳卒中、脳挫傷及び脳震盪のような脳損傷、脳及び脊髄の損傷、横断障害、脊椎被裂、亜急性及び慢性の耳鳴りの発生を伴う内耳疾患、聴力障害、メニエール病、聴覚の制約を伴う疾患、視力の減退を伴う疾患からなる群から選択された少なくとも一つの神経変性病に用いることを特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
中毒性脳症、糖尿病性脳症、肝性脳症、高血圧性脳症、例えば、酵素病、内因性障害、腎不全、尿毒性症脳炎、肝疾患、水／電解質または酸／塩基のバランス障害などと関連する代謝障害によって引き起こされる脳障害である代謝性脳症、小児ミオクローヌス脳症、ビリルビン脳症、熱傷後性脳症、重金属（鉛、水銀、アマルガム、タリウム、ビスマス、アルミニウム若しくはニッケルの化合物、これら化合物の混合物または前記金属の合金といった無機性、有機性重金属化合物）によって引き起こされる脳障害、アルコールによって引き起こされる中毒性脳症、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、進行性皮質下性脳症、及び外傷性脳症からなる群から選択された少なくとも一つの神経変性病に用いることを特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記S‐クレンブテロールが、神経変性病の予防に用いられることを特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記S‐クレンブテロールが、哺乳類の細胞及びヒトの細胞の成長、分化及び／または保護を促進するための培地用添加剤である請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は、神経変性病の治療に用いるＳ−クレンブテロールの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの脳は、一千億以上の神経細胞（以下、「ニューロン」ということもある）と一細胞あたり約一万の接続部（シナプス）を有する非常に複雑な器官である。脳は、人体への刺激、思考、感情、熟慮した行動、学習及び記憶について意識的及び無意識的処理をする中心器官である。ヒトの脳の最も重要な機能のうちの一つは、言語行動における情報処理機能である。さらに、脳は、非常に多くの臓器機能を制御する中心部でもあり、呼吸、心拍数及び体温調節を制御する中心部でもある。
【０００３】
多くの疾患が、神経細胞の損傷及び死、並びに／またはシナプスの減少と因果関係があり、脳の機能が制限されることにつながる。このような病理状態の例として、アルツハイマー病、脳血管障害、パーキンソン病、ピック病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、レヴィー小体認知症、脳卒中、及び脳挫傷や脳震盪のような脳損傷があり、さらに、脳及び脊髄の損傷、横断障害、脊椎被裂、例えば亜急性又は慢性の耳鳴りの発生といった内耳の疾患、聴力障害、メニエール病、聴覚の制約、視力の減退に関する疾患などがある。前記病理状態の神経保護療法は、臨床的にまだ確立されていない。上記病理の原因は解明されておらず、症状を治療しているのみである。
【０００４】
原因治療の目的は、神経細胞の死を防ぐことにある。
【０００５】
神経細胞を損傷から保護しまたは再生することが可能な治療法は、現在確立されていない。現在のところ、上記疾患に対する治療では、神経細胞への間接的損傷または２次的損傷を防ぐことが、重要な要素となっている。例えば、もし血管が閉塞していた場合には、脳血流量を増進させるかまたは血流量を回復させる。しかし、前記重大な病気の発症後、迅速に上記タイプの治療法を使用したとしても、その治療法が、たまたま功を奏するだけである。
【０００６】
非特許文献１には、神経防護作用の前臨床モデルに、ラセミ化合物のクレンブテロールの効果が記載されている。この作用のメカニズムには、β−レセプターが介在していると考えられる。
【０００７】
特許文献１には、一般式Ｉ
【０００８】
【化１】
2008528536.tif 000002
【０００９】
（式中、Rは、３又は４個の炭素原子を有する分枝アルキル基またはその酸付加塩）で表される化合物のラセミ混合物が開示されている。Rがｔ‐ブチル基のとき、この化合物は、INNクレンブテロールとして知られている。上記開示されている化合物は、特にぜんそくの治療薬に使用されている。
【００１０】
特許文献２には、特許文献１に開示された化合物の光学活性対掌体が、アドレナリン作動性β‐レセプターに対する阻害効果を有することが記載されている。それによれば、式Ｉのｄ‐S‐化合物は、β１‐レセプターを選択する作用があり、式Ｉのｌ‐（‐）‐化合物は、β２‐レセプターを選択する作用がある。クレンブテロールの両異性体の生物活性は、これまでのところ、同化特性のみが示されている。非特許文献２では、骨格筋とタンパク質の合成における同化促進作用を試験している。骨格筋に関しては、両エナンチオマー（鏡像異性体）間の効果に顕著な差異はなかった。どちらのエナンチオマーにも、骨量について測定できるような効果はなかった。従って、同化促進作用は、異なるメカニズムにて行われていると考えられる。
【００１１】
しかし、特許文献２における、おのおのの光学活性エナンチオマーのβ‐レセプターを介した活性に関する見解は、その後の研究により誤っていることが証明された。非特許文献３によれば、バルデックとウィドマークが、β‐アドレナリン受容体アゴニストまたはアンダゴニストとして、（‐）‐異性体が薬理学的に活性な形態である一方で、光学的対掌体は程度の差はあるものの活性がないことを見出した。特許文献２の記載とは対照的に、彼らは、非選択的β1‐アンタゴニスト活性を見出した。特許文献２の結果は、証明されなかった。
【００１２】
特許文献３では、サルブタモールやサルメテロールなどのβ2‐アゴニストでは、R‐異性体はβ‐アゴニスト活性があるのに対し、S‐異性体にはレセプターへの親和性がないことが開示されている。
【００１３】
ブラムグリアとロビオは、ラットの子宮を用いて、クレンブテロール異性体による弛緩薬反応をテストした。その結果、（‐）‐異性体のみが効果を示し、S‐異性体は効果を示さないことを見出した（非特許文献４）。
【００１４】
非特許文献５によると、マーチンその他は、異なる精神薬理学テストにて、活性は（‐）‐エナンチオマーにのみ基づいている一方で、S‐クレンブテロールには、CNS効果が見られなかった。
【特許文献１】米国特許第3,536,712号明細書
【特許文献２】独国特許第22 12 660号明細書
【特許文献３】国際公開9916 430号パンフレット
【非特許文献１】ジュンカー他著、「Eur J  薬理学」、４４６、２００２年、ｐ２５‐３６．
【非特許文献２】「キラリティ」、１２巻、６３７‐６４８、２０００年．
【非特許文献３】「公式記録  毒物学上の薬理学」、１９８５年、５６、２２１‐２２７．
【非特許文献４】「薬理学研究」、イタリア薬理学協会官報、４３（２）、ｐ１５１‐４／２００１０２．
【非特許文献５】「薬理学ヨーロッパジャーナル」、１１７、１９８５年、１２７‐１２９．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
上記引用文献から、科学者は、クレンブテロール異性体のうち（‐）‐エナンチオマー（R‐立体配置）のみが、精神薬理学的に活性を示すという考えを有している。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
驚いたことに、神経変性病においてクレンブテロール又はその異性体を投与すると、S‐エナンチオマーのみ活性を有することを見出した。
【００１７】
従って、本発明では、中枢神経系及び／または他の神経細胞のうち、完全にまたは部分的に損傷を受けた細胞の機能の回復及び／または維持をする薬剤の製造のために、S‐クレンブテロールを使用する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によると、S‐クレンブテロールを使用すると、脳卒中のような緊急状態でも、すぐに神経細胞を修復させ、続いて、少なくとも一部分に麻痺の生じた患者の回復を促進させる効能を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明では、「損傷を受けた細胞」とは、細胞が外部要因若しくは体内的要因で損傷するか、または細胞が細胞内で起こる作用にて変性するという意味で一部若しくは全体が破壊されて、それが身体機能の障害に結びついていることを意味する。「細胞の損傷」という用語は、個々の細胞または細胞種類の損傷、及び一連の神経細胞または神経細胞路の損傷の両方を含む。
【００２０】
神経細胞には、中枢神経系の細胞に加えて、脊髄細胞及び体内に存在するその他全ての神経細胞が含まれる。
【００２１】
本発明に係るS‐クレンブテロールは、調合薬として通常の用量で投与され、１日当たり０．０１〜１００mgの用量が好ましく、１日当たり０．０１〜５mgの用量が特に好ましい。
【００２２】
S‐クレンブテロールは、それだけでまたは薬学的に許容可能な酸付加塩で使用することができる。酸付加塩としては、塩化水素塩、臭化水素塩、硫酸塩、過塩素酸塩、スルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩などが挙げられ、塩化水素塩が好ましく、アンモニアまたはテトラメチルアンモニアの塩化水素塩が特に好ましい。
【００２３】
本発明のさらなる実施形態では、β‐アドレナリンアゴニストをNMDAアンダゴニストと併用して、上記作用を補助またはさらに促進させる。
【００２４】
アダマンタン誘導体のようなNMDAアンダゴニストは、CNS疾患の治療にも頻繁に使用される公知の化合物である。従って、例えば、アマンタジン（１‐アダマンタンアミン）のドーパミン作動性の効果は公知である。メマンチンは、中程度のアルツハイマー病に対する低刺激の治療に使用される。
【００２５】
欧州特許出願第３９２０５９号明細書には、脳虚血の予防及び治療にアダマンタン誘導体を使用することが記載されている。この刊行物によると、アダマンタン誘導体を使用することで、脳虚血により脳細胞が破壊されることが、保護するように予防される。つまり、アダマンタン誘導体は、脳神経細胞のNMDAレセプターチャンネルに対するアンタゴニストとして働く。
【００２６】
一般式ＩＩ
【００２７】
【化２】
2008528536.tif 000003
【００２８】
（式中、R1及びR2は、同一または相違しており、水素、直鎖若しくは分枝C1‐C6アルキル基または窒素原子を有する５若しくは６員環の複素環基。
R3及びR4は、同一または相違しており、水素、直鎖若しくは分枝C1‐C6アルキル基、C5‐C6シクロアルキル基またはビニル基。
R5は、水素または直鎖若しくは分枝C1‐C6アルキル基。）
で表されるアダマンタン誘導体を使用するのが好ましい。
【００２９】
一般式ＩＩのアダマンタン誘導体は、一般式ＩＩで表された化合物の形態またはその薬学的に許容可能な塩の形態で使用される。薬学的に許容可能な塩は、塩化水素塩、臭化水素塩、硫酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩のような酸付加塩であることが好ましく、塩化水素塩が特に好ましい。一般式ＩＩで表される化合物は、R1 、R2及びR4は、ともに水素であり、R3及びR5は、メチル基またはエチル基であることが好ましい。特に好ましくは、R1 、R2及びR4が水素であり、R3及びR5がメチル基である一般式ＩＩの化合物か、またはその塩化水素塩である。この化合物は、INNメマンチンとして知られている。
【００３０】
本発明で使用されるS‐クレンブテロール、治療に悪影響を与えずまたは治療に有効な常用されている製剤原料及び通常の原料が、薬学的に通常の投薬形態にて、調合薬中に含まれている。薬学的に通例の投薬形態としては、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、坐薬などが挙げられる。また、リポゾーム、ナノゾーム（nanosome）及び持続放出性製剤のような特殊な形態で使用することも可能である。これらは、経口投与、非経口投与、静脈内投与、吸入剤、経鼻投与、直腸投与、脳室内投与、耳または目への投与、皮膚塗布、動脈内投与、腹腔内投与、筋内投与、インプラントなどのような通常の方法にて投薬できる。投薬形態を適当に選択することにより、最速の手段にて本発明に係る製剤原料が損傷細胞に到達する。
【００３１】
本発明で使用するS‐クレンブテロールは、神経変性病治療用薬剤の製造に特に適している。例えば、アルツハイマー病、脳血管障害、パーキンソン病、ピック病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、レヴィー小体認知症、脳卒中、及び脳挫傷や脳震盪のような脳損傷があり、さらに、脳及び脊髄の損傷、横断障害、脊椎被裂、例えば亜急性又は慢性の耳鳴りといった耳鳴りの発生を伴う内耳の疾患、聴力障害、メニエール病、聴覚の制約を伴う疾患、視力の減退を伴う疾患などがあるが、これらに限定はされない。
【００３２】
本発明のさらなる実施態様では、脳障害によって一部または完全に損傷を受けた中枢神経系の細胞及び／または他の神経細胞の機能を、回復及び／または維持するのに使用される。脳障害は、可変性の神経的症状及び／または精神的症状を有する、脳における病理学的非炎症性変化のうちのひとつである。本発明にて治療できる脳障害の例としては、中毒性脳症、糖尿病性脳症、肝性脳症、高血圧性脳症、例えば、酵素病、内因性障害、腎不全、尿毒性症脳炎、肝疾患、水／電解質または酸／塩基のバランス障害などと関連する代謝障害によって引き起こされる脳障害である代謝性脳症、小児ミオクローヌス脳症（myoclonic infantile encephalopathy）（キンスボーン症候群（kinsboorne syndrome））、ビリルビン脳症、熱傷後性脳症（postcombustional encephalopathy）、重金属（例えば、鉛、水銀、アマルガム、タリウム、ビスマス、アルミニウム若しくはニッケルの化合物、これら化合物の混合物または前記金属の合金といった無機性、有機性重金属化合物）によって引き起こされる脳障害、アルコールによって引き起こされる中毒性脳症、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、進行性皮質下性脳症、外傷性脳症などがあるが、これらに限定されない。
【００３３】
本発明のさらなる実施態様では、Ｓ‐クレンブテロールを、上記疾患を防ぐのに使用する。
【００３４】
本発明のさらなる実施態様では、本発明のＳ‐クレンブテロールを、哺乳類の細胞及びヒトの細胞の成長、分化及び／または保護を促進するための培地用添加剤として使用する。
【実施例１】
【００３５】
実施例
神経細胞。海馬神経とグリア細胞の混合初代培養を、ブレインリサーチ（Braion  Research）1717（1996）44−54に記載されている新生のフィッシャー３４４ラットから調製した。実験は、培養物中にて１０日後に行った。グルタミン酸に曝す（５００μmol／L、１時間）前に、NMDAアンタゴニストメマンチン（メルツ社製、ドイツ国）とクレンブテロールを1〜5時間加えた。興奮毒性細胞死を誘導するために、培地（馴化培地）を回収して、グルタミン酸含有培地を添加した。次に、１時間後に再度馴化培地と交換した。クレンブテロールエナンチオマーは、グルタミン酸に曝されている間及び曝された後も培地中に存在していた。アポトーシスの誘導のために、ニューロンを、スタウロスポリン（STS、２００ｎmol／L、シグマ）に１８時間曝した。トリパンブルー色素排除試験またはDNA結合蛍光色素であるヘキスト33258（ブレインリサーチ  1717（1996）44−54及びストローク  2004、３５：1197‐1202）で着色し、細胞の生死を判定した。
【００３６】
星状細胞の培養。星状細胞の初代培養を、上記ブレインリサーチ（クルムセ（Culmsee）他、1999ｂ）に記載されている出生１日後フィッシャー３４４ラットの大脳皮質から調製した。つまり、安定状態にて脳を取り出して、ペニシリン‐ストレプトマイシン含有ダルベッコ最小必須培地（DMEM）（Gibco BRL）中で大脳皮質を分離し解剖した。得られた組織をステンレススチールメッシュで分離した。得られた細胞懸濁液を２００×ｇにて５分間遠心分離した。得られた沈殿物を培地中にて再度懸濁して、細胞を培養瓶（１７５cm2、コーニング社製）上に播き、細胞密集となるまで、ウシ胎仔血清及びペニシリン‐ストレプトマイシン含有DMEM中で培養した。星状細胞単層上に成育した乏突起膠細胞と小グリア細胞を、振とうと冷PBSを用いた洗浄とにより除去した。密集的星状細胞を一度継代して、培地中にさらに１０日間おいた後、実験に使用した。
【００３７】
培養ニューロンにおけるクレンブテロールエナンチオマーの防護効果。
培養したニューロンを、アポトーシスを誘導するSTS（２００ｎM）または壊死の形態学的状態を有する興奮毒性細胞死を誘導するグルタミン酸（５００μM）に曝した。アポトーシスまたは興奮毒性のストレスを与える前に、クレンブテロールエナンチオマーを、１０μMの濃度にて５時間培地に加えた。STSに１８時間曝した後、海馬ニューロンの細胞死した細胞核の割合を測定した結果、STS‐処理済コントロールと比較して、S‐クレンブテロールエナンチオマーがSTS‐誘導神経細胞死を十分弱めたことが明らかになった（図１参照）。R‐クレンブテロールについては、STS‐誘導アポトーシスに影響を与えなかった。これらの培養物は、STS‐処理済コントロールと比較して細胞死した細胞核の割合が近い値を示した。さらに、このようなクレンブテロールエナンチオマー間における防護効果の相違が、グルタミン酸により誘導された細胞壊死にも現れるかどうか研究した。グルタミン酸（５００μM）に１時間曝した後、トリパンブルーで染色された培養液の割合を測定した結果、S‐クレンブテロール（１０μM）は、興奮毒性損傷から神経細胞を保護していた（図２参照）。S‐エナンチオマーは、コントロールに対してトリパンブルーに陽性の神経細胞を減少させていた。一方、R‐エナンチオマーについては、細胞壊死への防護効果を全く示さなかった。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】細胞死した細胞核の割合の測定結果を示した図である。
【図２】トリパンブルーで染色された細胞の割合の測定結果を示した図である。
【図１】
2008528536.tif 000004
【図２】
2008528536.tif 000005
【国際調査報告】
2008528536.tif 000006
2008528536.tif 000007
2008528536.tif 000008