(57)【要約】  慢性腎疾患を含む腎疾患を治療又は予防するための、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体を含有する組成物が開示される。本発明はまた、治療有効量のＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体を含有する医薬組成物を患者に投与することによって、腎疾患を治療する方法に関する。本発明の組成物は、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体と、以下の作用物質：ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン（ＩＩ）受容体遮断薬（ＡＲＢ）及びアルドステロン遮断薬のうちの少なくとも１つの治療有効量を、レニン産生を阻害するために又はレニン−アンギオテンシン−アルドステロン系の活性化を阻害するために含有する。好ましい組成物は、パリカルシトールを、これらの他の作用物質のうちの少なくとも１つと共に含有する。そのような組み合わせは、ＡＣＥ阻害回避及びアルドステロン回避を避けることができ、続いてアンギオテンシン（ＩＩ）及びアルドステロン生成を増加することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＤ受容体活性化物質又はビタミンＤ類似体の治療有効量と、
場合により
アンギオテンシン変換酵素阻害薬、アンギオテンシン（ＩＩ）受容体（Ｉ）遮断薬及びアルドステロン遮断薬からなる群の少なくとも１つの構成要素の治療有効量とを含む、
慢性腎疾患を含む腎疾患を予防する、治療する、及びその進行を遅らせるための持続放出性医薬組成物。
【請求項２】
前記ビタミンＤ類似体が、カルシトリオール及びドキセルカルシフェロールからなる群から選択される、請求項１に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項４】
前記ビタミンＤ受容体活性化物質がパリカルシトールである、請求項１に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項５】
経皮パッチである、請求項１に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項６】
経口剤型である、請求項１に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項７】
皮下剤型である、請求項１に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項８】
注射剤型である、請求項１に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項９】
前記注射剤型が、皮下剤型及び貯蔵剤型からなる群の構成要素である、請求項８に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項１０】
埋め込み可能な剤型である、請求項７に記載の持続放出性医薬組成物。
【請求項１１】
ビタミンＤ受容体活性化物質又はビタミンＤ類似体の治療有効量、
および
アンギオテンシン変換酵素阻害薬、アンギオテンシン（ＩＩ）受容体（Ｉ）遮断薬及びアルドステロン遮断薬からなる群の任意の少なくとも１つの構成要素の治療有効量とを含む、
哺乳動物において、慢性腎疾患を含む腎疾患を治療する、予防する、又はその進行を遅らせるための医薬組成物。
【請求項１２】
前記ビタミンＤ類似体が、パリカルシトール、カルシトリオール及びドキセルカルシフェロールからなる群から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
経皮パッチである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
経口剤型である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
皮下剤型である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
注射剤型である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記注射剤型が、皮下剤型および貯蔵剤型からなる群の構成要素である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
埋め込み可能な剤型である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
哺乳動物において、慢性腎疾患を含む腎疾患を予防する、治療する、及びその進行を遅らせる方法であって、前記哺乳動物に請求項９記載の医薬組成物を投与する段階を含む方法。
【請求項２０】
前記投与段階が連続的である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記投与段階が経皮パッチを使用して実施される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記投与段階が経口剤型を使用して実施される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記投与段階が注射剤型を使用して実施される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記投与段階が皮下剤型を使用して実施される、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腎疾患の治療、予防及び進行の遅延のための、ビタミンＤ受容体活性化物質（ＶＤＲＡ）又はビタミンＤ類似体、好ましくはパリカルシトールの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の蔓延が驚くべき速度で増加している。２０００年には、末期腎疾患は、米国内で９０，０００人を超す国民において発症した。透析治療を受けている、又は移植を必要とする現在の患者数は、３８０，０００人であり、２０１０年には患者が６５１，０００人になると推定されている。ＥＳＲＤの患者の治療には、米国において既に年間１８０億ドル超が費やされ、医療システムにとって大きな負担である。２００３年に発表された新しいデータは、１９５０万人の米国の成人が慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有し、１３６０万人が、米国腎臓財団の腎臓病予後改善対策（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ）（ＮＫＦ  Ｋ／ＤＯＱＩ）で定義された２〜５期のＣＫＤを有することを報告した。慢性腎疾患の有害な転帰は、多くの場合早期発見及び治療を通して予防又は遅延することができる。腎線維症の進行の病因は、相加的なものである２つの機序：糸球体硬化症及び尿細管間質性線維症（ＴＩＦ）によって生じる。血流力学、免疫又は代謝系からの糸球体への傷害は、体の炎症及び血流力学適応プロセスを介して、腎臓の内皮、上皮又はメサンギウム細胞を損傷する可能性がある。その結果、メサンギウム細胞が増殖し、糸球体線維症（糸球体硬化症）をもたらす。この線維症の機序は、タンパク尿症を引き起こし、サイトカイン及びＴＧＦ−βを増加し、ネフロンの損失をもたらす。糸球体硬化症は糸球体濾過量（ＧＦＲ）を低下させる。
【０００３】
ヒトにおいて、ＧＦＲが下がると、最初の疾患が不活性になった後でさえも腎の機能及び質量が低減する。生き残ったネフロンは、排泄要求を満たすためにそれらの構造及び機能を適合させることによって代償しようと試み、糸球体過剰濾過及び肥大症をもたらす。糸球体毛細血管性高血圧は、多くの場合、アンギオテンシン依存性機序によって維持される。アンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）は、進行性の腎損傷に関連する糸球体の血流力学変化の中心的な仲介物質として出現する。この糸球体血流力学的適合は、糸球体に更に損傷を与え、糸球体硬化症及びネフロンの損失を悪化させる。
【０００４】
アンギオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）及び／又はアンギオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）＋／−アルドステロン遮断は、高血圧（ＨＴＮ）、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、糖尿病性腎障害（ＤＮ）を治療し、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の進行を遅らせる現行のレジメンである。これらのＣＫＤに対する効果は、ＢＰの制御及びＨＴＮの治療に対する効果と無関係である。大多数の場合、これらの治療は、ＣＫＤの進行を遅らせたが、ＥＳＲＤへの衰退を阻止しなかった。
【０００５】
ＡＣＥＩ及び／又はＡＲＢの長期使用に対する重要な制限は、これらがレニンの蓄積及び下流タンパク質の増加をもたらす場合があり、これは、ＡＣＥ阻害経路の回避をもたらし、続いてＡＩＩ及びアルドステロン生成の増加をもたらす場合があることである。アルドステロン回避を避けるために、ＡＣＥＩ及び／又はＡＲＢに加えてアルドステロンを遮断することは、臓器の損傷の予防に相加的な利益があるが、レニン濃度は一部の患者において依然として高いままである。加えて、不完全な阻止は、ＡＣＥＩ及びＡＲＢが主に糸球体の病理を対象にしており、ＴＩＦに対して効果が弱いという事実によって説明される。
【０００６】
最近、腎臓への代謝、免疫又は血流力学的な障害によって、ＴＩＦの重症度が糸球体硬化症よりも腎機能に高度に相関することが示されている。腎臓ＴＩＦは、以下の主要かつ新規に理解された段階を含む：１）Ｅカドヘリンの下方調節による管状上皮細胞の付着の損失及び細胞の統合性の損失；２）新規α平滑筋アクチン発現及び付着を失ったこれらの上皮細胞のアクチン再構築を介した管状上皮細胞の分化転換；３）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）活性の増加による尿細管基底膜の破損；及び４）移動し、間質に侵入し、筋線維芽細胞になり、線維症を引き起こす分化転換された管状細胞。ＴＩＦをもたらす経路における早い段階での中断は、有利な治療である可能性がある。しかし、市場にはそのような薬剤がない。
【０００７】
ビタミンＤ血清濃度の減少は、ＧＦＲ及び腎線維症の減少と相関することが示されている。Ｅ．  Ｉｓｈｉｍｕｒａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｒｕｍ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  １，  ２５  Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ，  ２４，２５  ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ，  ２５−ｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ｉｎ  ｎｏｎｄｉａｌｙｚｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ，  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｖｏｌ．  ５５（１９９９）  ｐ．  １０１９−１０２７。しかし、疾患の経過におけるビタミンＤの役割は、たとえあったとしても、それ自体今までに十分に理解されていない。研究者等は、ＶＤＲＡが腎臓に対して保護効果を持つかどうかを研究してきた。最近の５つの研究は、ＶＤＲＡが糸球体の損傷及び糸球体硬化症を予防できることを確認した。この研究は、ビタミンＤがメサンギウム増殖及び炎症を抑制し、それによって、糸球体線維症を改善することを主張している。
【０００８】
炎症及び増殖に対する効果を超えて、発明者たちは、ＡＣＥ回避および続くメサンギウム増殖及び糸球体硬化症を予防又は低減する、レニン分泌の阻害によって、より重要には、管状上皮の筋線維芽細胞分化転換を遮断して管状間質性線維症を予防することによって、ＶＤＲＡが慢性腎疾患の進行を遅らせることができると考える。
【０００９】
最近の文献は、内因性ＶＤＲＡ（カルシトリオール）がレニン遺伝子発現を下方調節できることを開示している。例えば、Ｙ．  Ｌｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  １，２５−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ３  ｉｓ  ａ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  Ｊｕｌｙ，  ２００２（参照により本明細書に組み込まれる）を参照すること。本発明によると、ＶＤＲＡによるレニンの下方調節は、ＡＣＥ回避を防止することができる、又は低減することができ、これは、糸球体硬化症の予防において、ＡＣＥＩ、ＡＲＢ及び／又はアルドステロン遮断薬による治療に相加的な又は相乗的な効果を持つ。
【００１０】
ＲＡＡＳを介して糸球体硬化症の病因を標的にする他に、ＶＤＲＡは、管状細胞の統合性を保つためにＥカドヘリン発現を増加することができ、上皮の筋線維芽細胞分化転換を防ぐためにα平滑筋アクチン発現を減少することができ、尿細管基底膜の破損及び細胞の移動を防ぐためにＭＭＰ活性を低下することができるであろう。これらの効果をまとめると、結果的に管状上皮の筋線維芽細胞分化転換の遮断及びＴＩＦの予防をもたらす。
【００１１】
図１で示すように、糸球体線維症経路及び管状間質性線維症経路は、レニン−アンギオテンシン（ＩＩ）−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）に対する効果を介してつながっている。発明者等は、ＶＤＲＡが糸球体および管状間質性の線維症の両方を予防するとの仮説をたてる。特にＤＶＲＡは、以下のいずれかに関する治療作用によって有用であることができる：１）炎症過程の減少；２）メサンギウム増殖の減少；３）レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系の抑制、特にレニン産生の抑制；４）糸球体過剰濾過及び肥大の減少；５）糸球体毛細血管の圧力及びＧＦＲ単独の低下；６）タンパク尿の減少；７）異常サイトカイン活性の逆転；８）ＴＧＦ−β活性の低下；９）Ｅカドヘリンの増加；１０）上皮の筋線維芽細胞分化転換を防ぐためのα平滑筋アクチン発現の減少；１１）マトリックスメタロプロテアーゼ活性の低下；１２）ＰＡＩ−１発現の阻害及び１３）ＡＣＥ阻害及びＡＲＢ治療からの回避に起因するレニン、アンギオテンシンＩＩ及びアルドステロン形成の増加の防止。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
腎疾患の進行の両方の経路を遮断する本発明の多剤手法が有利である。したがって本発明は、ＶＤＲＡ又はビタミンＤ類似体と、ＡＣＥ阻害薬及び／又はアンギオテンシン受容体遮断薬及び／又はアルドステロン阻害薬との有利な組み合わせを対象とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、慢性腎疾患を含む腎疾患を予防する、治療する、及びその進行を遅らせるための方法、並びにそれに有用な医薬組成物を対象とする。一つの実施例によると、本発明は、腎疾患を予防する、治療する、及びその進行を遅らせるためのＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体含有組成物に関する。
【００１４】
本発明の別の態様によると、ビタミンＤ類似体は、ドキセルカルシフェロール又はアルファカルシドールであることができる。
【００１５】
本発明の特に好ましい組成物は、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体および以下の作用物質：アンギオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）又はアンギオテンシンＩＩ受容体１（ＡＲＢ）遮断薬又はアルドステロン遮断薬のうちの１つ以上を含む。
【００１６】
本発明の他の態様によると、医薬組成物は、持続性（又は連続性）送達系によって投与できる。本発明は、経口、注射及び経皮を含む他の投与様式も考慮するが、これらに限定されない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、一般に、慢性腎疾患を含む腎疾患を治療又は予防するための、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体を含有する組成物に関する。本発明はまた、治療有効量のＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体を含有する医薬組成物を患者に投与することによって、腎疾患を治療する方法に関する。
【００１８】
本発明のＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体含有組成物の治療有効量の投与による腎疾患の患者の治療は、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体が、腎臓の生化学的な経路において以下の点のいずれか一つ又は全てにおいて作用することができるので、有利でありうる：
細胞の炎症の減少；
メサンギウム増殖の減少；
レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系の活性化の低下；
過剰濾過及び肥大の減少；
糸球体毛細血管の圧力及び糸球体濾過率単独の低下；
タンパク尿の減少；
異常サイトカイン活性の逆転；
ＴＧＦ−βレベルの低下；
Ｅカドヘリンの増加、α平滑筋アクチンの減少、ＭＭＰの減少；
ＰＡＩ−１の減少。
【００１９】
対照的に、ＡＣＥＩの投与に基づく（すなわち、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体なしの）従来の治療は、例えば、アンギオテンシン（ＩＩ）のみを低減し、これらの他の効果を欠いている。ＡＣＥＩの投与は、有害な転帰のために長期治療には魅力的ではない場合がある。
【００２０】
本発明の幾つかの態様によると、本発明の組成物は、ＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体と、以下の作用物質：ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン（ＩＩ）受容体遮断薬（ＡＲＢ）及びアルドステロン遮断薬のうちの少なくとも１つの治療有効量を、レニン産生を阻害するために、又はレニン−アンギオテンシン−アルドステロン系の活性を阻害するために含有する。好ましい組成物は、パリカルシトールを、これらの他の作用物質のうちの少なくとも１つと共に含有する。このような組み合わせは、ＡＣＥ阻害回避及びアルドステロン回避を避けることができ、続いてアンギオテンシン（ＩＩ）及びアルドステロン生成を増加することができる。
【００２１】
適したＡＣＥ阻害薬、ＡＲＢ及びアルドステロン遮断薬は、市販されている。適したＡＣＥ阻害薬には、カプトプリル（Ｍｙｌａｎから商標ＣＡＰＯＴＥＮとして市販されている）、エナラプリル（Ｍｅｒｃｋから商標ＶＡＳＯＴＥＣとして市販されている）、フォシナプリル（ｆｏｓｉｎａｐｒｉｌ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂから商標ＭＯＮＯＰＲＩＬとして市販されている）、ベンザプリル（ｂｅｎｚａｐｒｉｌ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから商標ＬＯＴＥＮＳＩＮとして市販されている）、モエキシプリル（Ｓｃｈｗａｒｚ  Ｐｈａｒｍａから商標ＵＮＩＶＡＳＣとして市販されている）、ペリンドプリル（Ｓｏｌｖａｙから商標ＡＣＥＯＮとして市販されている）、キナプリル（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓから商標ＡＣＣＵＰＲＩＬとして市販されている）、ラミプリル（Ｍｏｎａｒｃｈから商標ＡＬＴＡＣＥとして市販されている）、トランドラプリル（ノースシカゴ、イリノイ州、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから商標ＭＡＶＩＫとして市販されている）、リシノプリル（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａから商標ＰＲＴＮＩＶＩＬ及びＺＥＳＴＲＩＬとして市販されている）が含まれるが、これらに限定されない。適したアンギオテンシン受容体遮断薬には、ロサルタン（ＭｅｒｃｋからＣＯＺＡＡＲとして市販されている）、イルベサルタン（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  及び  ＳａｎｏｆｉからＡＶＡＰＲＯとして市販されている）、カルデサルタン（Ａｓｔｒａ  ＺｅｎｅｃａからＡＴＡＣＡＮＤとして市販されている）、エプロサルタン（カナダ、Ｂｉｏｖａｉｌ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからＴＥＶＥＴＥＮとして市販されている）、テルミサルタン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＩｎｇｅｌｈｅｉｍからＭＩＣＡＲＤＩＳとして市販されている）及びバルサルタン（ＮｏｖａｒｔｉｓからＤＩＯＶＡＮとして市販されている）が含まれるが、これらに限定されない。
【００２２】
適したアルドステロン遮断薬には、エプレレノン（Ｐｈａｒｍａｃｉａから商標ＩＮＳＰＲＡとして市販されている）、スピロノラクトン（商標Ａｌｄａｃｔｏｎｅ、Ａｄｕｌｔｍｉｎ、Ａｌｄｏｐｕｒ、Ａｌｄｏｓｐｉｒｏｎｅ、Ａｌｍａｔｏｌ、Ｂｅｒｌａｃｔｏｎｅ、Ｄｉａｔｅｎｓｅｃ、Ｄｉｒａｍ、Ｅｓｅｋｏｎ、Ｈｙｐａｚｏｎ、Ｉｄｒｏｌａｔｔｏｎｅ、Ｍｅｒａｂｉｓ、Ｎｏｖｏｓｐｉｒｏｔｏｎ、Ｏｓｉｒｅｎ、Ｏｓｙｒｏｌ、Ｐｉｒｏｌａｃｔｏｎ、Ｒｅｓａｃｔｏｎ、Ｓｉｎｃｏｍｅｎ、Ｓｐｉｒａｃｔｉｎ、Ｓｐｉｒｏｃｔａｎ、Ｓｐｉｒｏｌａｃｔｏｎ、Ｓｐｉｒｏｌａｎｇ、Ｓｐｉｒｏｎｅｘ、Ｓｐｉｒｏｔｏｎｅ、Ｔｅｖａｓｐｉｒｏｎｅ、Ｖｅｒｏｓｐｉｒｏｎ、Ｘｅｎａｌｏｎ  Ｌａｃｔａｂｓ、Ｙｏｕｌａｃｔｏｎｅとして市販されている）が含まれるが、これらに限定されない。
【００２３】
追加の成分、例えば、生理学的に許容される担体、溶媒、結合剤、酸化防止剤、着色剤、基質を必要又は所望に応じて使用することができる。
【００２４】
腎疾患の患者のための本発明の好ましい治療又は予防的レジメンは、本発明の治療上有効なＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体含有組成物を、持続的又は連続的送達を実施するのに十分な時間投与する。本明細書で使用されるように、「治療有効用量」は、感受性のある患者において腎疾患の進行を予防するため又は退行を引き起こすために十分であるか、或いは腎疾患により引き起こされる症状を緩和することができる用量である。
【００２５】
代表的な用量レジメンは、１日当たりカルシトリオールの０．５マイクログラムの又は週に３回の少なくとも約１マイクログラムのカルシトリオールの当量を提供する。パリカルシトールでは、適した用量レジメンは、毎日約４マイクログラムのパリカルシトール又は週に３回の少なくとも約４マイクログラムのパリカルシトールの当量を提供する。他のＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体、例えばドキセルカルシフェロールに適した用量レジメンは、投与されるＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体の治療有効性に基づいて当業者によって直接決定される。
【００２６】
ＡＣＥＩ、ＡＲＢ及びアルドステロン阻害薬は、異なる効能を有し、ＶＤＲＡ／ビタミンＤの作用と異なり、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）経路の異なるタンパク質を介して体に作用するので、本発明の組成物は、従来の用量レジメンに従って投与されるＡＣＥＩ、ＡＲＢ又はアルドステロン阻害薬を組み込むことができ、このことは当業者にとって周知であり、容易に入手可能である。
【００２７】
本発明はまた、選択されたＶＤＲＡ／ビタミンＤ類似体、並びにＡＣＥＩ及び／又はＡＲＢ及び／又はアルドステロン遮断薬を含有する、連続的又は持続的薬剤送達形態を考慮する。適した送達形態には、経口投与用の錠剤若しくはカプセル剤、注射、局所投与用の経皮パッチ（例えば、送達される薬剤は、支持体又は裏打ち基質、例えばエチルセルロースに付着されている、又は吸収されているポリマーマトリックスと混合される）、貯蔵剤型（例えば、所望の生体活性化合物を含有する注射用ミクロスフェア）及び埋め込みが含まれるが、これらに限定されない。これらの薬剤送達形態を作製する技術は当業者にとって周知である。
【実施例１】
【００２８】
レニン発現を抑制するパリカルシトールの活性
近年、インビトロ及びインビボ試験において、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤがレニンの生合成の負の調節因子として機能することが見出されている。カルシトリオールは、レニン遺伝子発現を阻害することができ、それは、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）を調節する新規のレニン阻害薬としてのビタミンＤ及びビタミンＤ類似体の使用を探求する、分子基盤を提供する。
【００２９】
インビトロ細胞培養系を使用して、レニン遺伝子発現を抑制するパリカルシトールの活性を以前に発表された技術を使って試験した（１，２５−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ３  ｉｓ  ａ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ，  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，  Ｊｕｌｙ  ２００２）。図１に示したように、ノーザンブロット分析により、Ａｓ４．１−ｈＶＤＲ細胞のパリカルシトール処置はレニンｍＲＮＡ発現を用量依存的に阻害する。事実、そのレニン阻害活性は、カルシトリオールよりも僅かに強力であるように思われる（図１Ａ及びＢ）。この阻害効果は、レニン遺伝子転写を抑制するパリカルシトールの活性を試験する、レニンプロモーター−ルシフェラーゼレポーターアッセイにより確認される。これらのアッセイにおいて、パリカルシトールは、レニン遺伝子プロモーターの活性を抑制するのに少なくともカルシトリオールと同じ効力であると思われる（図２）。
【実施例２】
【００３０】
ＰＡＩ−１に対するＶＤＲ活性化物質の効果
ヒト冠状動脈平滑筋細胞の初代培養中のＰＡＩ−１に対するパリカルシトール及びカルシトリオールの効果を調査した。（図４を参照すること。）ＰＡＩ−１（プラスミノゲン活性化物質阻害薬１型）は、冠状動脈性心疾患の危険マーカーの１つであり、動脈硬化プラーク（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｐｌａｇｕｅ）で増強され、マクロファージと共局在化する。ヒト冠状動脈平滑筋細胞を、示された濃度のパリカルシトール又はカルシトリオールと共に、３７℃で２４時間インキュベートした。試料はＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料緩衝液で可溶化し、各試料のタンパク質含有量をＢｉｏ−Ｒａｄ色素結合タンパク質アッセイで測定した。試料を、４〜１２％のゲルを使用するＳＤＳ−ＰＡＧＥで溶解し、タンパク質をウエスタンブロットのためにＰＶＤＦ膜に電気泳動的に移動した。
【００３１】
膜をＰＢＳ−Ｔ中の５％脱脂粉乳により２５℃で１時間ブロットし、次にＰＢＳ−Ｔ中のマウス抗ＰＡＩ−１モノクローナル抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。膜をＰＢＳ−Ｔで洗浄し、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識抗ウサギ抗体と共に２５℃で１時間インキュベートした。次に膜を検出試薬（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＷｅｓｔＰｉｃｏ）と共にインキュベートした。紙をＫｏｄａｋ  ＢｉｏＭａｘフィルムに暴露することによって、特異的結合を視覚化した。
【００３２】
図４は、抗ＰＡＩ−１抗体を使用するウエスタンブロットによる結果を示す。これらの研究から２つの観察結果に留意することができる：（１）増殖の１００％阻害は、いずれの試験化合物の１μMにおいてさえ達成しなかった。共焦点顕微鏡使用試験は、これらの薬剤が細胞質から核へのＶＤＲの転置を誘導するのに強力であるが、２時間の暴露の後でさえも全ての細胞がＶＤＲＡに反応するのではないことを確認し、これが＜１００％阻害を説明する可能性がある。（２）パリカルシトールは臨床研究においてカルシトリオールよりも効力が弱いことが知られているが、このアッセイでは、カルシトリオールと同様の効力を示している。２４（ＯＨ）ＡＳＥの発現に対する薬剤の効果を調べることにより、パリカルシトールは、２４（ＯＨ）ＡＳＥの発現を刺激するのにカルシトリオールよりも効力が弱いことが見出され、このことが、このアッセイにおけるパリカルシトールのより高い効力を部分的に説明する可能性がある。
【００３３】
これらの結果は、パリカルシトール及びカルシトリオールが、ヒト冠状動脈平滑筋細胞中のＰＡＩ濃度を低下するのに等しく効力があることを示す。パリカルシトールは、通常、臨床現場ではカルシトリオールの約４倍多く投与され、このことが、平滑筋細胞の機能を調節するのに４倍高い効力があると解釈される可能性がある。
【００３４】
線維性腎疾患において、ＰＡＩ−１が増加し、糸球体硬化症の領域に局在化する。逆に言えば、アンギオテンシン又はアルドステロンの阻害がＰＡＩ−１を減少し、腎瘢痕化も減少する。これらの結果は、パリカルシトールがＰＡＩ−１濃度を低下できることを示し、糸球体硬化症の減衰におけるパリカルシトールの潜在的な役割を示唆している。
【実施例３】
【００３５】
ＣＫＤの齧歯類モデルにおける腎症に対するＶＤＲ活性化物質の単独の、及びＡＣＥＩと組み合わせた効果
ＣＶＤ及びＣＫＤの認められているモデルである、一側性腎摘出後のＡｐｏＥ  ＫＯマウスを使用して、腎疾患を治療する及びその進行を遅らせるパリカルシトール及びトランドラプリルの効果を試験した。動物は、パリカルシトール（３０mg／１００ｇ体重）を毎日、又はパリカルシトール（３０mg／１００ｇ体重）＋トランドラプリル（１mg／kg）を１２週間の皮下投与を受けた。タンパク尿又はアルブミン尿は、腎機能の進行性消失の確立された危険因子である。尿タンパク排出は腎臓障害と相関するので、１２週間の処置期間の終了時に、マウスを、ＥＬＩＳＡアッセイによる尿アルブミン及びクレアチニン排出の４８時間測定のために、代謝ケージの中に置いた。尿アルブミン排出は、アルブミンmg／クレアチニンmgとして表わす。
【００３６】
図５は、尿クレアチニン排出との比率で表わしている、尿アルブミン排出の結果を提供する。これらの結果は、パリカルシトールが尿アルブミン排出を低減すること、及びパリカルシトールとトランドラプリルの組み合わせが尿アルブミン排出を更に減少することを示す。パリカルシトール処置に関連するアルブミン尿の観察された低減、及び尿アルブミン排出に対するＲＡＡＳ阻害の相乗効果は、パリカルシトール及びＲＡＡＳ阻害薬と組み合わせたパリカルシトールの潜在的な腎臓保護利益を支持する。
【実施例４】
【００３７】
パリカルシトールカプセル剤、第３世代合成ビタミンＤ類似体、及び選択的ビタミン受容体活性化物質（ＳＶＤＲＡ）を、ＳＨＰＴを持つ３及び４期のＣＫＤの患者で３つの無作為二重盲検プラセボ対照多施設試験により評価した。２つの試験は、１週間に３回投与（ＴＩＷ）したが、１日おきよりも頻繁ではなく、１つの試験は、１日１回投与レジメン（ＱＤ）により実施した。これらの３つの試験のデータを組み合わせて、以下の安全パラメーターで分析した：
・カルシウム及びリン代謝、腎機能パラメーター及び有害事象プロフィール
・ディップスティックタンパク尿の変化
方法：
・１〜４週間の前処置／ウオッシュアウト相及び２４週間の処置相の無作為二重盲検プラセボ対照多施設試験
・患者をパリカルシトール又はプラセボの１：１に無作為化した。
・主な参加基準：
□年齢≧１８歳
□ｅＧＦＲ（ＭＤＲＤ製剤）１５〜６０mL／分／１．７３ｍ２のＣＫＤ患者
□最後の２つのｉＰＴＨ値の平均≧１５０pg／mL、全ての値≧１２０pg／mL
□（Ｎｉｃｈｏｌｓ第１世代無傷ＰＴＨアッセイにより測定されたｉＰＴＨ）
□２回連続血清カルシウム値８．０〜１０．０mg／dL及び２回連続血清リン値≦５．２mg／dL
□スポット尿のカルシウムとクレアチニンの比率＜０．２
□維持カルシトニン、ビスホスホネート、又はカルシウム若しくは骨代謝に影響を与えることがある薬剤を摂取していない。
□最近６か月以内に＞１４日間グルココルチコイドを摂取していない。
【００３８】
リン吸着剤の併用使用
□参加に先立つ４週間の間に同一の品質で安定した用量のリン吸着剤。
□患者は試験の全体を通して同一の品質で安定した用量のリン吸着剤の投与を受けた。
【００３９】
治験薬投与：
初期用量：ＴＩＷレジメンにおいて２又は４mcg、ＱＤレジメンにおいて１又は２mcg
用量増分：ＴＩＷレジメンにおいて２mcg、ＱＤレジメンにおいて１mcg
用量は４週間毎に増量し、用量は、２週間毎又はそれより早く減量した。
【００４０】
結果
患者の人口統計
全体として、３つの試験にわたって患者２２０人（パリカルシトールカプセル剤１０７人及びプラセボ１１３人）が１：１無作為化試験に参加した。患者の人口統計を表１に表わす。
【００４１】
【表１】
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【００４２】
【表２】
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【００４３】
リン吸着剤の使用
大多数の患者は、試験の間にいずれのリン吸着剤も摂取していなかった。ベースラインでは、パリカルシトールとプラセボの患者のそれぞれ２１％と２４％しか、カルシウム系リン吸着剤及び／又はカルシウムサプリメントを摂取しておらず、各治療群の２人の患者がセベラマーを摂取していた。パリカルシトール患者の８３％及びプラセボ患者の９０％を、試験の全体を通して同じ種類及び用量のリン吸着剤を投与した。ベースラインでリン吸着剤及び／又はカルシウムサプリメントを摂取していなかった患者のうち、パリカルシトール群の１６％及びプラセボ群の１１％が、治療期間の間にそのような薬剤治療を始めた。
【００４４】
【表３】
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【００４５】
ディップスティックタンパク尿の変化
自動半定量的ディップスティック試験により測定されるタンパク尿の変化を、３及び４期のＣＤＫの患者１９５人で評価した。彼らのうち、パリカルシトール患者の４３．６％（４１／９４）及びプラセボ患者の４８．５％（４９／１０１）が糖尿病であった。ディップスティックタンパク尿分析の処置を受けた患者の内訳を表４に表わす。
【００４６】
【表４】
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【００４７】
タンパク尿に関する治療群間の差を、ベースラインから最終診察分析での変化で調べた。ベースラインでタンパク尿のあった患者のうち、プラセボ患者の２５％（１５／６１）と比べて、パリカルシトール治療患者の５１％（２９／５７）がタンパク尿の低減を経験した（ｐ＝０．００４）。ベースラインからタンパク尿が増加した可能性のある患者のうち、プラセボ患者の２９％（２３／７７）と比べて、パリカルシトール治療患者の２４％（１８／７６）が、増加を経験した（ｐ＝０．４６６）（図５）。
【００４８】
図６は、ＡＣＥＩ又はＡＲＢを受けている患者のＲＡＡＳ系を阻害する効果に対するパリカルシトールの相加的な効果を調べる。分析は、ＡＣＥＩ／ＡＲＢ治療を受け、かつベースラインでタンパク尿のあった患者のうち、プラセボ患者の２７％（１１／４１）に対してパリカルシトール患者の５２％（２２／４２）にタンパク尿の減少があった（ｐ＝０．０２５）ことを明らかにした。
【００４９】
これらのデータは、ディップスティックタンパク尿の低減に対するパリカルシトールの有益な効果を示唆しており、これは、ＰＴＨ制御と無関係であり、糖尿病に限定されず、ＡＣＥｉ／ＡＲＢ治療と相乗的である。
【００５０】
パリカルシトール治療に関するディップスティックタンパク尿の低減は、腎臓保護及びＣＫＤ進行の遅延に対するパリカルシトールの潜在的に有益な効果を示唆している。この観察された利益は、パリカルシトールの潜在的な腎臓保護の役割を支持し、この試験において、糖尿病に限定されず、ＡＣＥＩ／ＡＲＢ治療と相乗的であった。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】Ａｓ４．１−ｈＶＤＲ細胞のパリカルシトール処置が、レニンｍＲＮＡ発現を用量依存的に阻害することを実証するノーザンブロットを示す。
【図２】レニン遺伝子転写を抑制するパリカルシトールの活性を試験するのに使用される、レニンプロモーター−ルシフェラーゼアッセイの結果を示す。
【図３】ヒト冠状動脈平滑筋細胞の一次培養中のＰＡＩ−１に対するパリカルシトール及びカルシトリオールの効果を示す。
【図４】ＡｐｏＥノックアウトマウスにおける尿タンパク排出を示す。
【図５】ベースラインから最終診察までのディップスティックタンパク尿の変化を示す。
【図６】ＡＣＥ／ＡＲＢの使用者におけるベースラインから最終診察までのディップスティックタンパク尿の減少を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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