(57)【要約】本発明は、特に、活性成分（ＡＰ）のベクター化に有用な、生分解性ポリアミノ酸に基づく新規な物質に関する。本発明はさらに、これらのポリアミノ酸に基づく新規な医薬用、化粧品用、食品用、又は植物衛生用組成物に関する。本発明の目的は、ＡＰのベクター化に用いることができ、一方では、高いポリマー／ＡＰ比を実現することができ、他方では、この場合に要求される好ましくは全ての特徴、すなわち生体適合性、生分解性、多くの活性成分と容易に会合し、又は溶解する能力、これらの活性成分を生体内で放出する能力、を満足することの可能な新規なポリマー開始物質を提供することである。この目的は、本発明により解決されるが、本発明は、まず第１に、アスパラギン酸単位又はグルタミン酸単位を含み、８〜３０個の炭素原子を含む疎水性基を有する疎水性グラフト基を有し、これらの疎水性グラフト基の少なくとも１つは、少なくとも１つの負電荷、及び／又は、それぞれ少なくとも１つの負電荷を生成することができる１つ以上のイオン性基（互いに同一であっても異なっていてもよい）を有する直鎖状ポリアミノ酸に関連する。このポリマーは両親媒性であり、容易かつ安価に、活性成分のベクター化のための粒子に変換される。これらの粒子は、自ら安定な水性コロイド状懸濁液を形成する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパラギン酸単位及び／又はグルタミン酸単位を含み、それらのいくつかは、１つ以上の疎水性グラフト基（互いに同一であっても異なっていてもよい）を有するポリアミノ酸であって、
・前記疎水性グラフト基は、下記一般式（Ｉ）で表され、
（Ｉ）  −Ｘ−（ＧＨ）−Ｙ
式中：
・−Ｘ−は、ポリアミノ酸鎖と−ＧＨ−Ｙとの間の結合基を表し；
・−ＧＨ−は、疎水性基を表し；
・−Ｙは、少なくとも１つの負電荷を有する基、及び／又は、それぞれ少なくとも１つの負電荷を生成することができる１つ以上のイオン性基（互いに同一であっても異なっていてもよい）を表し、
・−ＧＨ−は、α−アミノ酸残基を有さない、
ことを特徴とするポリアミノ酸。
【請求項２】
−Ｘ−及び／又は−Ｙが、α−アミノ酸残基を有さないことを特徴とする請求項１記載のポリアミノ酸。
【請求項３】
少なくとも１つの疎水性基−ＧＨ−が、８〜３０個の炭素原子を含むことを特徴とする請求項１又は２記載のポリアミノ酸。
【請求項４】
少なくとも１つの負電荷を生じることができる−Ｙのイオン性基は、カルボキシル／カルボン酸基、スルホニル／スルホン酸基、硫酸／硫酸塩基、及びリン酸／リン酸塩基を含む群から選択されることを特徴とする請求項１から３のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項５】
少なくとも１つの疎水性基ＧＨは、下記の群：
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいてもよい、直鎖又は分岐鎖状のＣ８〜Ｃ３０アルキル基、
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいてもよい、Ｃ８〜Ｃ３０アルキルアリール基又はアリールアルキル基、
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいてもよい、Ｃ８〜Ｃ３０（多）環式基、
から選択されることを特徴とする請求項１から４のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項６】
主鎖がα−Ｌ−グルタミン酸塩及び／又はα−Ｌ−グルタミン酸塩単位、又はα−Ｌ−アスパラギン酸塩及び／又はα−Ｌ−アスパラギン酸塩単位を含むことを特徴とする請求項１から５のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項７】
下記一般式（ＩＩ）で表されることを特徴とする請求項１から６のいずれか記載のポリアミノ酸。
【化１】
2008508389.tif 000009
式中：
■Ｒ１は、Ｈ、直鎖状Ｃ２〜Ｃ１０アシル基、若しくは分岐鎖状Ｃ３〜Ｃ１０アシル基、又はピログルタミン酸塩であり；
■Ａは、独立して−ＣＨ２−（アスパラギン酸単位）又は−ＣＨ２−ＣＨ２−（グルタミン酸単位）であり；
■Ｂは：
・ＯＲ３（Ｒ３は下記のように定義される）、
・ＮＨＲ２基（式中、Ｒ２は、直鎖状Ｃ２〜Ｃ１０アルキル基、若しくは分岐鎖状Ｃ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基である）；又は、
・末端アミノ酸単位（窒素により結合し、カルボン酸基は、ＮＨＲ２及びＯＲ２で定義されるアミン又はアルコールにより適宜修飾されている）、
のいずれかであり；
■Ｒ３は、Ｈ、又は好ましくは下記を含む群から選択されるカチオン種であり；
・有利には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムを含むサブグループより選択される金属カチオン、
・有利には、下記を含むサブグループから選択される有機カチオン、
・アミンに基づく陽イオン、
・オリゴアミンに基づく陽イオン、
・ポリアミン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）に基づく陽イオン、及び
・有利には、リジン又はアルギニンに基づくカチオンを含む属から選択される１つ以上のアミノ酸に基づく陽イオン、及び、
・有利には、ポリリジン及びオリゴリジンを含むサブグループから選択されるカチオン性ポリアミノ酸、
■−Ｘ−は、−Ｏ−、−ＮＨ−、又は−Ｎ−アルキル−（Ｃ１〜Ｃ５）、（好ましくは天然の）アミノ酸、ジオール、ジアミン、アミノアルコール、又は１〜６個の炭素原子を含むヒドロキシ酸のいずれかから選択される結合基であり、
■−ＧＨ−は、８〜３０個の炭素原子を含む疎水性基であって：
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含んでいてもよい直鎖又は分岐鎖状Ｃ８〜Ｃ３０アルキル基、
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含んでいてもよいＣ８〜Ｃ３０アルキルアリール基又はアリールアルキル基、又は
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含んでいてもよいＣ８〜Ｃ３０（多）環式基；
■−Ｙは：
・カルボキシル基、スルホニル基、硫酸基、又はリン酸基からなる「アニオン化可能な」基（Ｒ３がＨである場合）、又は
・Ｙは、好ましくはカルボン酸塩基、スルホン酸塩基、硫酸塩基、又はリン酸塩基からなるアニオン性基（Ｒ３がＨ以外の基である場合）のいずれかであり；
■ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、０．５〜１００モル％の値をとり；
■ｎ＋ｍは、３０〜１０００、好ましくは３０〜５００の値をとる。
【請求項８】
式（Ｉ）の疎水性グラフト基−Ｘ−ＧＨ−Ｙの少なくとも１つが、下記の化学種からなる群から選択されるラジカルであることを特徴とする請求項１から７のいずれか記載のポリアミノ酸。
【化２】
2008508389.tif 000010
式中：
■ａは、７〜１９であり、
■ｂは、２〜４であり、
■Ｒ６は、Ｈ又はＯＨである。
【請求項９】
ポリアミノ酸は、式（ＩＩＩ）、−Ｘ’−ＧＨ’で表され、イオン化基又はイオン性基を有しておらず、−Ｘ’−及び−ＧＨ’−は、請求項１、２及び５〜８の少なくとも１項と同様に定義される少なくとも１つの疎水性グラフト基を有していることを特徴とする請求項１から８のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項１０】
前記疎水性基ＧＨ’が、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロール、及びコレステロールを含む群から選択される基の誘導体であることを特徴とする請求項１から９のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項１１】
分子量が２０００〜２００，０００ｇ／モル、好ましくは５０００〜５０，０００ｇ／モルであることを特徴とする請求項１から１０のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項１２】
グルタミン酸及び／又はアスパラギン酸単位に結合したポリアルキレングリコール（好ましくはポリエチレングリコール）型の少なくとも１つのグラフト基を有することを特徴とする請求項１から１１のいずれか記載のポリアミノ酸。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか記載のポリアミノ酸を含む医薬用、化粧品用、食品用、又は植物衛生用組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つの活性成分を含むことを特徴とする請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
前記活性成分が、共有化学結合以外の１つ以上の結合を介して、前記ポリアミノ酸と会合していることを特徴とする請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
前記活性成分が、タンパク質、糖タンパク質、１つ以上のポリアルキレングリコール鎖に結合したタンパク質、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又はペプチドであることを特徴とする請求項１４又は１５記載の組成物。
【請求項１７】
前記活性成分が、低分子量の疎水性、親水性、又は両親媒性の有機分子であることを特徴とする請求項１４又は１５記載の組成物。
【請求項１８】
経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、大脳内、又は口腔内の経路により投与可能であることを特徴とする請求項１３から１７のいずれか記載の組成物。
【請求項１９】
ゲル、溶液、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、微粒子、粉末、又はフィルムの形態であることを特徴とする請求項１３から１８のいずれか記載の組成物。
【請求項２０】
水相中のポリアミノ酸のナノ粒子及び／又は微粒子及び／又はミセルのコロイド状の懸濁液であることを特徴とする請求項１３から１９のいずれか記載の組成物。
【請求項２１】
生体適合性の溶媒中に溶解した溶液の形態であり、皮下又は筋肉内の経路により、あるいは腫瘍内部に注射可能であることを特徴とする請求項１３から２０のいずれか記載の組成物。
【請求項２２】
注射部位で沈殿を形成することが可能であることを特徴とする請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
特に、経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、及び大脳内投与のための薬剤であって、これらの薬剤の活性成分が、特に、タンパク質、糖タンパク、１つ以上のポリアルキレングリコールに結合したタンパク質、ペプチド、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、及び低分子量の疎水性、親水性、又は両親媒性の有機分子である薬剤；
・及び／又は食品；
・及び／又は化粧品若しくは植物衛生用品、
を調製する方法であって、請求項１から１２のいずれか記載のポリアミノ酸、及び／又は請求項１３から２２のいずれか記載の組成物を使用する工程を本質的に含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に、１つ以上の活性成分（Ａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ：ＡＰ）のベクター化（ｖｅｃｔｏｒｉｚａｔｉｏｎ）に有用な、生分解性ポリアミノ酸に基づく新規な物質に関する。
本発明はさらに、これらのポリアミノ酸に基づく新規な医薬用、化粧品用、食品用、又は植物衛生用組成物に関する。これらの組成物は、ＡＰのベクター化を可能にするタイプのものであってよく、好ましくは、エマルジョン、ミセル、粒子、ゲル、インプラント、又はフィルムの形態を取ることができる。
前記ＡＰは、有利には、動物又はヒトに対して、経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、大脳内、口腔、又は他の経路で投与することができる生理活性化合物である。
本発明に関連するＡＰは、より具体的には、タンパク質、糖タンパク、ペプチド、多糖、リポ多糖、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチド、及び有機分子であるが、これらに制限されない。しかし、それらは、化粧品、又は除草剤、殺虫剤、殺菌剤等の植物衛生用品であってもよい。
【背景技術】
【０００２】
活性成分、特に薬理活性成分のベクター化の分野において、多くの場合に：
・それらが作用部位に到達するまで、劣化（加水分解、当該部位への沈着、酵素による消化等）から保護され、
・及び／又は、一定期間に亘って治療レベルを維持できるように放出速度を制御し、
・及び／又は、それらを（保護した状態で）作用部位まで輸送する必要がある。
【０００３】
こうした目的のために、数種類のポリマーについて検討がなされ、そのうち幾つかは市販されている。言及できる例としては、ポリ乳酸、ポリ乳酸−グリコール酸、ポリオキシエチレン−オキシプロピレン、ポリアミノ酸、又は多糖等のタイプのポリマーが挙げられる。これらのポリマーは、塊状インプラント（ｍａｓｓ  ｉｍｐｌａｎｔ）、微粒子、ナノ粒子、ベシクル、ミセル、又はゲル等の製造のための出発物質の構成成分である。これらのポリマーは、上記のシステムの製造に好適である必要があるという事実に加え、生体適合性を有し、無毒であり、非免疫原性であり、安価でなければならず、体内から容易に除去され、及び／又は生分解性でなければならない。最後の点に関しては、生体内での生分解生成物が無毒であることがさらに重要である。
【０００４】
会合性ポリマーの開発において他の重要な点は、水溶性である。大量のポリマーを溶解することが可能であれば、所望の放出プロファイルが得られるようにポリマー／活性成分の比を調整することができる。
【０００５】
以下、種々の特許公報、特許出願公開公報、又は科学論文を参照して、ＡＰのベクター化システムの製造における出発物質として用いられているポリマーに関する従来技術を説明する。
【０００６】
米国特許第４，６５２，４４１号明細書には、ホルモンＬＨ−ＲＨ（黄体形成ホルモン放出ホルモン）を封入したポリ乳酸マイクロカプセルが記載されている。マイクロカプセルは、水／油／水型のエマルジョンを調製することにより製造され、ホルモン、及びホルモンを固定化する物質（ゼラチン）を含む内部水層、油性のポリ乳酸層、及び外部水層（ポリビニルアルコール）を有している。ＡＰは、皮下注射後２週間以上の期間に亘って放出され得る。
【０００７】
米国特許第６，１５３，１９３号明細書には、両親媒性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ミセルに基づく、アドリアマイシン等の抗癌剤をベクター化するための組成物が記載されている。
【０００８】
Ａｋｉｙｏｓｈｉら（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １９９８，５４，３１３−３２０）は、コレステロールのグラフト基により疎水化され、水中でナノ粒子を形成するプルランについて記載している。これらのナノ粒子は、インスリンと可逆的に錯形成することができ、安定なコロイド状の懸濁液を形成する。
【０００９】
米国特許第４，３５１，３３７号明細書には、活性成分の放出制御のためのインプラント又は微粒子として用いることができるロイシン及びグルタミン酸塩に基づく両親媒性アミノ酸共重合体が記載されている。活性成分は、ポリマーの分解速度に応じて非常に長期間に亘って放出され得る。
【００１０】
米国特許第４，８８８，３９８号明細書には、ポリグルタミン酸塩又はポリアスパラギン酸塩、及び適宜ポリロイシンに基づき、アルコキシカルボニルメチル型のペンダント基がポリアミノ酸鎖中にランダムに位置するポリマーが記載されている。メトキシカルボニルメチル基等の側鎖官能基がグラフト化したこれらのポリアミノ酸は、ＡＰを含む長期放出型生分解性インプラントとして用いることができる。
【００１１】
米国特許第５，９０４，９３６号明細書は、ポリロイシン−ポリグルタミン酸塩ブロックポリマーから得られ、安定なコロイド状懸濁液を生成し、生理活性タンパク質を変性させることなく自発的に会合することができるナノ粒子が記載されている。生理活性タンパク質は、生体内で制御された形で放出され得る。
【００１２】
米国特許第５，４４９，５１３号明細書には、ポリオキシエチレンブロック、及び、例えば、ポリ（Ｌ−アスパラギン酸β−ベンジル）等のポリアミノ酸ブロックを有する両親媒性ブロック共重合体が記載されている。これらのポリオキシエチレン−ポリアスパラギン酸ベンジルポリマーは、アドリアマイシン又はインドメタシン等の疎水性の活性分子をカプセル化することができるミセルを形成する。
【００１３】
国際公開第９９／６１５１２号パンフレットには、疎水性基（ポリリジン又はポリオルニチンに結合したパルミチン酸）及び親水性基（ポリオキシエチレン）で官能基化したポリリジン及びポリオルニチンが記載されている。コレステロールの存在下で、これらのポリマー、例えば、ポリオキシエチレン及びパルミトイル鎖でグラフト化されたポリリジンは、ドキソルビシン又はＤＮＡをカプセル化することができるベシクルを形成する。これらのポリリジンに基づくポリマーは、生理的溶液中でカチオン性を示す。
【００１４】
本出願人に付与された米国特許第６，６３０，１７１号明細書には、安定なコロイド状懸濁液を生成し、生理活性タンパク質を変性させることなく自発的に会合することができるポリ（グルタミン酸ナトリウム）−ポリ（グルタミン酸メチル、エチル、ヘキサデシル、又はドデシル）ブロック又はランダム共重合体が記載されている。生理活性タンパク質は、長期間に亘って制御された形で放出され得る。これらの、両親媒性の直鎖アミノ酸共重合体は、疎水性のアルキル側鎖により修飾されている。これらのアルキル基は、エステル基を介する共有結合によりポリマー上にグラフト化されている。
【００１５】
同じ分野において、本出願人は、関連するデザインを有するポリグルタミン酸塩に基づくポリマーについて、いくつかの特許公開公報に記載している。
【００１６】
国際公開第０３／１０４３０３号パンフレットには、α−トコフェロールで官能基化したアニオン性ポリアミノ酸が記載されている。国際公開第０４／０１３２０６号パンフレットには、疎水性基を有し、これらの基が、２つのアミド基を有するスペーサーを介して、より詳細には、リジン又はオルニチン型のスペーサーを介してポリマーに結合していることを特徴とするアニオン性ポリアミノ酸について記載されている。
【００１７】
未公開の特許出願ＰＣＴ／ＦＲ０３／０３４５８号明細書には、ロイシン及び／又はイソロイシン及び／又はバリン及び／又はフェニルアラニンに基づく少なくとも１つのオリゴアミノ酸で官能基化されたポリアミノ酸が記載されている。
【００１８】
国際公開第８７／０３８９１号パンフレット（米国特許第４，８９２，７３３号明細書）には、ポリアミノ酸鎖に、オリゴペプチド型のスペーサを介して結合した、マロン酸、コハク酸、又はグルタル酸型の二塩基酸基を有するポリグルタミン酸塩又はポリアスパラギン酸塩について記載されている。二塩基酸基が結合しているため、カルシウムカチオンの固定化、又は活性成分と反応することができる活性な酸無水物の形成が可能になる。これらのポリマーは、特に生体内での活性成分の徐放のためのインプラントとして用いることができる。
【特許文献１】米国特許第４，６５２，４４１号明細書
【特許文献２】米国特許第６，１５３，１９３号明細書
【特許文献３】米国特許第４，３５１，３３７号明細書
【特許文献４】米国特許第４，８８８，３９８号明細書
【特許文献５】米国特許第５，９０４，９３６号明細書
【特許文献６】米国特許第５，４４９，５１３号明細書
【特許文献７】国際公開第９９／６１５１２号パンフレット
【特許文献８】米国特許第６，６３０，１７１号明細書
【特許文献９】国際公開第０３／１０４３０３号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第０４／０１３２０６号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第８７／０３８９１号パンフレット
【特許文献１２】米国特許第４，８９２，７３３号明細書
【非特許文献１】Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １９９８，５４，３１３−３２０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
このように、従来技術において、医薬活性成分のベクター化について開発及び提案された非常に多くの技術的解決策があるが、全ての要求に応えることは困難であり、未だ満足できる状況にはない。より具体的には、活性成分をベクター化するための粒子を製造するのに用いられる生分解性材料に対する、満足されていない要求を特定することは可能であり、そのような材料は、活性成分と可逆的に会合するのに好適なベクター化ナノ粒子又は微粒子の安定な水系懸濁液を形成することができる必要があり、所望の改善点の１つが、できるだけ高いポリマー／活性成分比を有していることである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
前記課題に鑑み、本発明の主な目的の１つは、下記の特許公報又は特許出願公報、米国特許第６，６３０，１７１号明細書、国際公開第０３／１０４３０３号パンフレット、国際公開第０４／０１３２０６号パンフレット、及びＰＣＴ／ＦＲ０３／０３４５８号明細書（未公開）に記載されたものに対して、特に、治療用のタンパク質等の活性成分の製剤化（可逆的な会合）という点において改善された、動物体内の生理的ｐＨ（例えば、７．４程度）でアニオン性の新規な両親媒性直鎖ポリアミノ酸を提供することである。
【００２１】
本発明の他の主な目的は、これらのポリマーがＡＰのベクター化に用いることができ、仕様書中の全ての又は一部の仕様、すなわち、具体的には下記の仕様を最適に満たす点にある。
■下記の能力：
○水系コロイド性懸濁液を容易かつ安価に形成し、
○多くの活性成分と容易に会合し、
○これらの活性成分を生体内で放出する
■生体適合性
■生分解性
【００２２】
本目的及び他の目的は本発明により達成される。本発明はまず第１に、アニオン性のアスパラギン酸単位及び／又はグルタミン酸単位を含み、かつ、全部又は一部がアニオン基又は「アニオン性」基である疎水性のグラフト基を有する、両親媒性の直鎖又は分岐鎖状ポリアミノ酸に関する。
【００２３】
ポリＡｓｐ型及び／又はポリＧｌｕ型の生分解性ポリアミノ酸を、賢明かつ有利な方法により、負電荷を有する疎水性グラフト基及び／又は「アニオン化可能な」疎水性グラフト基と結合させるというアイディアは、本出願人によるものである。
【００２４】
換言すると、本発明は、アスパラギン酸単位及び／又はグルタミン酸単位を含み、それらのいくつかは、１つ以上の疎水性グラフト基（互いに同一であっても異なっていてもよい）を有するポリアミノ酸であって、
・前記疎水性グラフト基は、下記一般式（Ｉ）で表され、
（Ｉ）  −Ｘ−（ＧＨ）−Ｙ
式中：
・−Ｘ−は、ポリアミノ酸鎖と−ＧＨ−Ｙとの間の結合基を表し；
・−ＧＨ−は、疎水性基を表し；
・−Ｙは、少なくとも１つの負電荷を有する基、及び／又は、それぞれ少なくとも１つの負電荷を生成することができる１つ以上のイオン性基（互いに同一であっても異なっていてもよい）を表し、
・−ＧＨ−は、α−アミノ酸残基を有さない、
ことを特徴とするポリアミノ酸に関する。
【００２５】
有利には、−Ｙは、マロン酸、コハク酸、又はグルタル酸型の二塩基酸基を有していなくてもよい。
【００２６】
このポリアミノ酸は、アスパラギン酸単位及び／又はグルタミン酸単位の少なくとも一部を有する主鎖（分子骨格）を有する。実際には、ポリアミノ酸は、本質的にこれらのアスパラギン酸及び／又はグルタミン酸のモノマー単位から形成される。
【００２７】
Ａｓｐ又はＧｌｕ単位は、１つ又は２つ（実際には１つだけ）の、アニオン性又は「アニオン化可能な」疎水性グラフト基によってグラフト化されていてもよい。
【００２８】
これらの新規な両親媒性ポリＧｌｕ及び／又はポリＡｓｐポリマーは、特にタンパク質のベクター化に適していることが実証されている。驚くべきことに、これらの新規なポリマーは、従来の同様なポリマーよりも、水溶液中にはるかに高い濃度で溶解し得ることが見出された。この性質は、必要ならば、高いポリマー／活性成分比を有する製剤を製造することができるという点で非常に貴重である。
【００２９】
本発明において定義されているように：
・「ポリアミノ酸（ｐｏｌｙａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」という用語は、一方では、１種類の「アミノ酸」単位（例えば、Ｇｌｕ（グルタミン酸若しくはグルタミン酸塩）単位又はＡｓｐ（アスパラギン酸若しくはアスパラギン酸塩）単位）を有するＰＡＡ、又はアミノ酸共重合体（Ｇｌｕ及びＡｓｐアミノ酸単位を、ランダム、傾斜、又はブロック型の集積度で含む）を包含し、他方では、２〜２０個の「アミノ酸」単位を含むオリゴアミノ酸、及び２０個を上回る「アミノ酸」単位を含むポリアミノ酸を包含し、
・「アミノ酸単位（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｕｎｉｔ）」という用語は、置換基が何であるかに関わりなく、それらが上記アミノ酸の性質を改変しない限り、あるアミノ酸の骨格を形成する単量体、又は非単量体の単位に関連する。
【００３０】
これらのポリマーは、流動性、会合、及び／又は、１つ以上の活性成分のカプセル化に関して、類似の化合物と比べて驚くべき性質を有している。
【００３１】
本発明及び本明細書の全体を通して定義されているように、１つ以上の活性成分とポリアミノ酸との関係を定性的に表すために用いられる「会合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）」又は「会合する（ａｓｓｏｃｉａｔｅ）」という用語は、具体的には、（１つ又は複数の）活性成分が、例えば、イオン結合及び／又は疎水性相互作用等の弱い結合により、（１つ又は複数の）ポリアミノ酸と結合し、及び／又はポリアミノ酸によりカプセル化されていることを表す。
【００３２】
本発明のポリアミノ酸が有する他の顕著な利点は、酵素の存在下で容易に分解し、無毒な異化生成物／代謝生成物（アミノ酸）を生じることである。
【００３３】
疎水性基ＧＨをポリアミノ酸の主鎖に結合させることができる疎水性グラフト基（Ｉ）、−Ｘ−ＧＨ−Ｙの結合基−Ｘ−は、スペーサでもあり得る。結合基−Ｘ−は、例えば、少なくとも１つの直接結合、及び／又は少なくとも１つのアミド結合、及び／又は少なくとも１つのエステル結合を含んでいてもよい。例えば、−Ｘ−は、ポリアミノ酸を構成するモノマー単位とは異なる「アミノ酸」単位、アミノアルコール誘導体、ジオール誘導体、及びヒドロキシ酸誘導体からなる群に属するタイプの単位であってもよい。
【００３４】
疎水性グラフト基（Ｉ）、−Ｘ−ＧＨ−Ｙは、種々の態様、例えば、：
ａ）まず、グラフト基−Ｘ−をポリアミノ酸鎖上にグラフトさせ、あるいは、ポリアミノ酸鎖のペンダント反応性基をスペーサ−Ｘ−として用い、次いで、−ＧＨ−をポリアミノ酸鎖の−Ｘ−上に固定し、最後に、−ＹをＧＨに固定する。
ｂ）又は、まず、グラフト基−Ｘ−をポリアミノ酸鎖上にグラフトさせ、あるいは、ポリアミノ酸鎖のペンダント反応性基をスペーサ−Ｘ−として用い、次いで、ブロック−ＧＨ−Ｙを予め結合させ、あるいは、既存のブロック−ＧＨ−Ｙを用い、その後、該−ＧＨ−Ｙをポリアミノ酸鎖の−Ｘ−上にグラフトさせる。
ｃ）又は、ブロック−Ｘ−ＧＨ−Ｙを予め結合させ、その後、ポリアミノ酸鎖上にグラフトさせ、あるいは、ブロック−Ｘ−ＧＨを予め結合させ、又は既存のブロック−Ｘ−ＧＨを用い、その後、該−Ｘ−ＧＨをポリアミノ酸鎖上にグラフトさせ、最後に、−ＹをＧＨに固定する。
という態様でポリアミノ酸鎖にグラフトすることができる。
【００３５】
実際には方法ｂ）、すなわち、ポリアミノ酸鎖のペンダント反応性基をスペーサ−Ｘ−として用い、次いで、既存のブロック−ＧＨ−Ｙを用い、その後、該−ＧＨ−Ｙをポリアミノ酸鎖の−Ｘ−上にグラフトさせる方法が好ましい。
【００３６】
ＧＨのグラフト化については、本発明のポリアミノ酸を得るための方法の説明において、以下詳細に説明される。
【００３７】
通常、−ＧＨ−Ｙ又は−ＧＨの前駆体は、例えば、アルコール及びアミンからなる群から選択され、これらの化合物は、当業者によって容易に官能基化されうる。
【００３８】
本発明の好ましい変形例によると、ポリアミノ酸は、−Ｘ−及び／又は−Ｙが１つ以上のα−アミノ酸残基を有さないことを特徴とする。特に好ましくは、−Ｘ−、−ＧＨ−、及び−Ｙは、α−アミノ酸残基を有さない。
【００３９】
１つの好ましい特徴によると、疎水性グラフト基の疎水性基ＧＨは、８〜３０個の炭素原子を有する。
【００４０】
好ましくは、少なくとも１つの負電荷を生じることができる−Ｙのイオン性基は、カルボキシル／カルボン酸基、スルホニル／スルホン酸基、硫酸／硫酸塩基、及びリン酸／リン酸塩基を含む群から選択される。
【００４１】
特に好ましくは、ＧＨの疎水性基は、下記の群：
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいてもよい、直鎖又は分岐鎖状のＣ８〜Ｃ３０アルキル基、
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいてもよい、Ｃ８〜Ｃ３０アルキルアリール基又はアリールアルキル基、
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいてもよい、Ｃ８〜Ｃ３０（多）環式基、
から選択される。
【００４２】
本発明のポリアミノ酸は、好ましくは、α−Ｌ−グルタミン酸塩及び／又はα−Ｌ−グルタミン酸塩単位、又はα−Ｌ−アスパラギン酸塩及び／又はα−Ｌ−アスパラギン酸塩単位を含むポリアミノ酸のうちの１つである。
【００４３】
より詳細には、本発明のポリアミノ酸は、例えば、α−Ｌ−グルタミン酸塩及び／又はα−Ｌ−グルタミン酸塩単位、又はα−Ｌ−アスパラギン酸塩及び／又はα−Ｌ−アスパラギン酸塩単位を含むホモオリゴマー又はホモポリマーである。
【００４４】
特に好ましくは、本発明のポリアミノ酸は、下記一般式（ＩＩ）で表される。
【化１】
2008508389.tif 000002
式中：
■Ｒ１は、Ｈ、直鎖状Ｃ２〜Ｃ１０アシル基、若しくは分岐鎖状Ｃ３〜Ｃ１０アシル基、又はピログルタミン酸塩であり；
■Ａは、独立して−ＣＨ２−（アスパラギン酸単位）又は−ＣＨ２−ＣＨ２−（グルタミン酸単位）であり；
■Ｂは：
・ＯＲ３（Ｒ３は下記のように定義される）、
・ＮＨＲ２基（式中、Ｒ２は、直鎖状Ｃ２〜Ｃ１０アルキル基、若しくは分岐鎖状Ｃ３〜Ｃ１０アルキル基、又はベンジル基である）；又は、
・末端アミノ酸単位（窒素により結合し、カルボン酸基は、ＮＨＲ２及びＯＲ２で定義されるアミン又はアルコールにより適宜修飾されている）、
のいずれかであり；
■Ｒ３は、Ｈ、又は好ましくは下記を含む群から選択されるカチオン種であり；
・有利には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムを含むサブグループより選択される金属カチオン、
・有利には、下記を含むサブグループから選択される有機カチオン、
・アミンに基づく陽イオン、
・オリゴアミンに基づく陽イオン、
・ポリアミン（ポリエチレンイミンが特に好ましい）に基づく陽イオン、及び
・有利には、リジン又はアルギニンに基づくカチオンを含む属から選択される１つ以上のアミノ酸に基づく陽イオン、及び、
・有利には、ポリリジン及びオリゴリジンを含むサブグループから選択されるカチオン性ポリアミノ酸、
■−Ｘ−は、−Ｏ−、−ＮＨ−、又は−Ｎ−アルキル−（Ｃ１〜Ｃ５）、（好ましくは天然の）アミノ酸、ジオール、ジアミン、アミノアルコール、又は１〜６個の炭素原子を含むヒドロキシ酸のいずれかから選択される結合基であり、
■−ＧＨ−は、８〜３０個の炭素原子を含む疎水性基であって：
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含んでいてもよい直鎖又は分岐鎖状Ｃ８〜Ｃ３０アルキル基、
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含んでいてもよいＣ８〜Ｃ３０アルキルアリール基又はアリールアルキル基、又は
・適宜少なくとも１つの不飽和結合及び／又は少なくとも１つのヘテロ原子（好ましくはＯ及び／又はＮ及び／又はＳ）を含んでいてもよいＣ８〜Ｃ３０（多）環式基；
■−Ｙは：
・カルボキシル基、スルホニル基、硫酸基、又はリン酸基からなる「アニオン化可能な」基（Ｒ３がＨである場合）、又は
・Ｙは、好ましくはカルボン酸塩基、スルホン酸塩基、硫酸塩基、又はリン酸塩基からなるアニオン性基（Ｒ３がＨ以外の基である場合）のいずれかであり；
■ｎ／（ｎ＋ｍ）は、モルグラフト化率として定義され、０．５〜１００モル％の値をとり；
■ｎ＋ｍは、３０〜１０００、好ましくは３０〜５００の値をとる。
【００４５】
実際には、式（Ｉ）の疎水性グラフト基−Ｘ−ＧＨ−Ｙの少なくとも１つは、例えば、下記の化学種からなる群から選択される。
【化２】
2008508389.tif 000003
これらの構造中：
ａは、７〜１９であり、
ｂは、２〜４であり、
Ｒ６は、Ｈ又はＯＨである。
【００４６】
本発明の変形例において、本発明に関するポリアミノ酸は、負電荷を有する疎水性基Ｙ又はイオン化してアニオンを生成し得る基Ｙ以外に、少なくとも１つの非イオン性の疎水性グラフト基とも結合している。具体的には、ポリアミノ酸は、式（ＩＩＩ）、−Ｘ’−ＧＨ’で表され、イオン化基又はイオン性基を有しておらず、−Ｘ’−及び−ＧＨ’が、上述の−Ｘ−及び−ＧＨ−と同様に定義される少なくとも１つの疎水性グラフト基と結合していてもよい。
【００４７】
イオン化基又はイオン性基でない基ＧＨ’は、例えば、オクタノール、ドデカノール、テトラデカノール、ヘキサデカノール、オクタデカノール、オレイルアルコール、トコフェロール、及びコレステロールを含む群から選択される基から誘導されるものであってもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
本発明の第１の実施の形態において、ポリアミノ酸の主鎖は、α−Ｌ−グルタミン酸塩又はα−Ｌ−グルタミン酸のホモポリマーである。
【００４９】
本発明の第２の実施の形態において、ポリアミノ酸の主鎖は、α−Ｌ−アスパラギン酸塩又はα−Ｌ−アスパラギン酸のホモポリマーである。
【００５０】
本発明の第３の実施の形態において、ポリアミノ酸の主鎖は、α−Ｌ−アスパラギン酸塩／α−Ｌ−グルタミン酸塩又はα−Ｌ−アスパラギン酸／α−Ｌ−グルタミン酸の共重合体である。
【００５１】
有利には、ポリアミノ酸主鎖のアスパラギン酸及び／又はグルタミン酸単位の分布は、得られるポリマーが、ランダム、ブロック型、又はマルチブロック型のいずれかとなるような分布である。
【００５２】
他の方法で定義すると、本発明のポリアミノ酸は、２０００〜２００，０００ｇ／モル、好ましくは５０００〜５０，０００ｇ／モルの分子量を有する。
【００５３】
本発明の疎水性単位を有するポリアミノ酸のモルグラフト化率は、２〜１００％、好ましくは５〜５０％であることがさらに好ましい。
【００５４】
幾つかの変形例において、本発明のポリアミノ酸は、直鎖状又は分岐鎖状である。
【００５５】
他の変形例において、本発明のポリアミノ酸は、グルタミン酸及び／又はアスパラギン酸単位に結合したポリエチレングリコール型のグラフト基を少なくとも１つ有していてもよい。
【００５６】
勿論、本発明には上で定義したポリアミノ酸の混合物も含まれる。
【００５７】
注目すべきことに、本発明のポリアミノ酸は、疎水性基の性質やポリアミノ酸の重合度に応じていくつかの方法で用いることができる。本発明により想定される、活性成分をカプセル化するためのポリマーの生成方法は、当業者に公知である。詳細については、例えば、下記の、個々の適切ないくつかの参考文献を参照することができる：
「Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，  Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ  ａｎｄ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；第１巻、Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」  Ｒ．Ａｒｓｈａｄｙ編、Ｃｉｔｕｓ  Ｂｏｏｋｓ  １９９９．ＩＳＢＮ：０−９５３２１８７−１−６．
「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ」  Ｊ．  Ｓｅｎｉｏｒ及びＭ．  Ｒａｄｏｍｓｋｙ編．Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ  ２０００．ＩＳＢＮ：１−５７４９１−１０１−５．
「Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．１９９４．ＩＳＢＮ：０−８２４７−９２１４−９．
「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」Ｄ．Ｌ．Ｗｉｓｅ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．２０００．ＩＳＢＮ：０−８２４７−０３６９−３．
【００５８】
これらのポリアミノ酸は、ポリマーの長さ（重合度）及び疎水性基の性質に応じて、ｐＨ７．４の水中（例えばリン酸緩衝溶液）に分散し、コロイド状の溶液若しくは懸濁液、又は、ポリマーの濃度に応じて、構造化された若しくは構造化されていないゲルを生成するという点において非常に有用である。さらに、ポリアミノ酸（微粒子状であるか否かに関わりなく）は、タンパク質、ペプチド、又は小分子等の活性成分をカプセル化し、あるいはこれらの活性成分と容易に会合する。好ましい形成法は、本出願人による米国特許第６，６３０，１７１号明細書に記載されたものであり、ポリマーを水中に分散し、活性成分（ＡＰ）の存在下で、溶液をインキュベートすることを要旨とする。本発明のポリアミノ酸からなるベクター化された粒子のコロイド溶液は、０．２μｍのフィルタを透過することができ、その後患者に直接注射することができる。
【００５９】
親水性／疎水性比が減少すると、ポリマーはＡＰと会合、あるいはＡＰをカプセル化することができる微粒子を形成することができる。これに関連して、微粒子は、ＡＰとポリマーとを適当な有機溶媒中に同時に溶解し、混合物を水中で沈殿させることにより形成することができる。粒子は、その後、濾過により回収することができ、経口投与のために（ゼラチンカプセルとして、圧縮錠及び／又はコーティング錠として、あるいは油中に分散させて）、あるいは水中に再分散して非経口投与のために用いることができる。
【００６０】
１つの変形例において、ポリマーを、Ｎ−メチルピロリドン等の生体適合性溶媒、又はミグリオール（商標）等の適当な油脂に溶解し、筋肉内、又は皮下経路により、あるいは腫瘍内に注射する。溶媒又は油脂が拡散することにより、ポリマーは注射した部位に沈殿するため、持続性薬剤を形成する。これらの持続性薬剤は、拡散、及び／又は浸食、及び／又はポリマーの加水分解若しくは酵素分解により、確実に放出制御される。
【００６１】
微粒子状であることが好ましいという事実とは無関係に、本発明のポリアミノ酸は、中性又はイオン化された状態で、それ自身単独で、あるいは、液体、固体、又はゲル状の組成物として、あるいは、水又は有機溶媒に溶解して、より一般的に用いることができる。
【００６２】
ポリアミノ酸に基づくポリマーが、ｐＨ及び組成に応じて、中性型又はイオン化型のいずれかの形態をとる基を有することは理解されるべきである。水溶液中において、カウンターカチオンは、ナトリウム、カルシウム、若しくはマグネシウム等の金属カチオン、又はトリエタノールアミン、トリス（ヒドロキシエチル）アミノメタン等の有機カチオン、又はポリエチレンイミン等のポリアミンであってもよい。
【００６３】
本発明のポリマーは、例えば、当業者に公知の方法により得られる。ランダムポリアミノ酸は、−ＧＨ又は−ＧＨ−Ｙにより形成され、例えば、少なくとも１つのアミノ酸を含む結合基−Ｘ−によって予め官能基化された疎水性グラフト基を、通常のカップリング反応によって直接ポリマー上にグラフトさせることによって得ることができる。結合基−Ｘ−は、予めポリアミノ酸の主鎖に結合させておくこともできる。ブロック又はポリブロックポリアミノ酸は、対応するアミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）の逐次重合によって得ることができる。
【００６４】
例えば、ホモポリグルタミン酸又はホモポリアスパラギン酸ポリアミノ酸、又は、ブロック、マルチブロック、ランダム、若しくは直鎖状グルタミン酸／アスパラギン酸共重合体は、通常の方法により得ることができる。
【００６５】
α型のポリアミノ酸を得るための最も一般的な手法は、アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）の重合に基づく手法であり、例えば、文献「Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ」１９７６，１５，１８６９、及びＨ．Ｒ．Ｋｒｉｃｈｅｌｄｏｒｆによる「Ａｌｐｈａ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  Ｎ−ｃａｒｂｏｘｙ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９８７）というタイトルの書籍に記載されていることが指摘される。ＮＣＡ誘導体は、好ましくはＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｍｅ、ＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｅｔ、又はＮＣＡ−Ｇｌｕ−Ｏ−Ｂｚ誘導体（Ｍｅ＝メチル、Ｅｔ＝エチル、Ｂｚ＝ベンジル）である。ポリマーを適当な条件下で加水分解すると、酸型のポリマーが得られる。これらの方法は、本出願人による仏国特許出願公開第２，８０１，２２６号公報に記載の方法に基づいている。本発明で用いることができる多くのポリマー、例えば、様々な分子量の、ポリ（α−Ｌ−アスパラギン酸）、ポリ（α−Ｌ−グルタミン酸）、ポリ（α−Ｄ−グルタミン酸）、及びポリ（γ−Ｌ−グルタミン酸）型のポリマーが市販されている。α−β型のポリアスパラギン酸は、アスパラギン酸を縮合（スクシンイミドを生成する）した後、塩基性条件下で加水分解することにより得られる（Ｔｏｍｉｄａ他、Ｐｏｌｙｍｅｒ  １９９７，３８，４７３３−３６参照）。
【００６６】
非限定的な説明のために示した方法により、ＧＨを有する疎水性グラフト基のポリマーのカルボン酸基（結合基−Ｘ−）とのカップリングは、カップリング剤としてカルボジイミド、及び必要に応じて４−ジメチルアミノピリジンの存在下で、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチル−ピロリドン（ＮＭＰ）、又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の適当な溶媒中でポリアミノ酸と反応させることにより、容易に行うことができる。カルボジイミドは、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド又はジイソプロピルカルボジイミドである。グラフト化率は、構成成分と反応物との化学量論、又は反応時間によって化学的に制御することができる。アミノ酸（スペーサ）で官能基化された疎水性グラフト基は、通常のペプチドのカップリング法により、又は酸触媒存在下で直接縮合することにより得られる。これらの手法は当業者に周知である。
【００６７】
本発明の他の特徴によると、本発明は、少なくとも１つの上述のポリアミノ酸、及び適宜少なくとも１つの活性成分、特に医薬品の活性成分、化粧品の活性成分、食品の活性成分、又は植物衛生品の活性成分等を含む、医薬組成物、化粧品組成物、食品組成物、又は植物衛生組成物に関する。
【００６８】
本発明の１つの有益な条件によると、活性成分は、共有結合以外の１つ以上の結合によりポリアミノ酸と会合している。
【００６９】
１つ以上のＡＰと、本発明のグラフト化ポリアミノ酸とを会合させる手法については、具体的には米国特許第６，６３０，１７１号明細書に記載されている。その手法は、少なくとも１つの活性成分を、粒子を含む溶媒中に導入して、１つ以上の活性成分ＡＰを担持した、あるいは有効成分ＡＰと会合したコロイド状懸濁液を生成することを特徴とする。導入は、次のような方法により行われ、結果としてＡＰが粒子に捕捉される。
・ＡＰを水溶液に導入し、次いでポリマーを、コロイド状懸濁液又は単離物（凍結乾燥粉末又は沈殿）のいずれかの形態で加える；あるいは、
・溶液中、又は純粋若しくは予め処方された状態のいずれかの状態にあるＡＰを、乾燥したベクター化粒子（ＶＰ）を水等の適当な溶媒中に分散させることにより、すぐに使用するために適宜調製されたコロイド状懸濁液に加える。
【００７０】
好ましくは、活性成分は、タンパク質、糖タンパク質、１つ以上のポリアルキレングリコール鎖（好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）：「ＰＥＧ修飾タンパク質」）に結合したタンパク質、多糖、リポ糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又はペプチドである。
【００７１】
一変形例において、活性成分は、「低分子量」の疎水性、親水性、又は両親媒性の有機分子である。
【００７２】
本明細書において定義されるように、「低分子量」の分子は、具体的には、低分子量の非タンパク質分子である。
【００７３】
以下は、ナノ粒子又は微粒子の形態であるか否かによらず、本発明によるポリアミノ酸と結合可能なＡＰの例として挙げることができる。
●インスリン、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エリスロポイエチン、又はサイトカイン等のタンパク質；
●ロイプロリド、又はシクロスポリン等のペプチド；
●アントラサイクリン、タキソイド、又はカンプトテシン属に属するもの等の低分子；及び
●これらの混合物。
【００７４】
一実施の形態においては、本発明の組成物は、ゲル、溶液、懸濁液、エマルジョン、ミセル、ナノ粒子、微粒子、インプラント、粉末、又はフィルムの形態である。
【００７５】
特に好ましい形態の１つでは、活性成分の担持の有無に関わりなく、組成物は、水相中のポリアミノ酸のナノ粒子及び／又は微粒子及び／又はミセルの安定なコロイド状の懸濁液である。
【００７６】
他の実施の形態において、本発明の組成物は、生体適合性の溶媒中に溶解した溶液の形態であり、皮下又は筋肉内の経路により、あるいは腫瘍内部に注射可能である。
【００７７】
他の実施の形態において、組成物は、ｐＨ及び／又は浸透圧の調節、及び／又は安定性の向上（酸化防止剤）、及び／又は抗菌物質としての添加剤を適宜含んでいる。これらの添加剤は当業者に周知である（「Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」というタイトルの書籍（Ｐ．Ｋ．  Ｇｕｐｔａ他、Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｄｅｎｖｅｒ、Ｃｏｌｏｒａｄｏ  １９９９）を参照）。
【００７８】
本発明の組成物が医薬組成物である場合には、経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、大脳内、又は口腔内の経路により投与可能である
【００７９】
組成物を、生体適合性溶媒に溶解させた溶液の形態で、皮下若しくは筋肉内の経路により、あるいは腫瘍中に投与するように構成することも可能である。
【００８０】
他の変形例に係る本発明の組成物は、注射部位に沈殿を形成することができるように製剤される。
【００８１】
本発明はさらに、本発明のポリアミノ酸及び有効成分を含み、
・特に、経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、及び大脳内投与のための薬剤であって、これらの薬剤の活性成分が、具体的には、タンパク質、糖タンパク、１つ以上のポリアルキレングリコール｛例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で、この場合には「ＰＥＧ修飾」タンパク質という用語が用いられる｝に結合したタンパク質、ペプチド、多糖、リポ化糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、及び低分子量の疎水性、親水性、又は両親媒性の有機分子である薬剤；
・及び／又は食品；
・及び／又は化粧品若しくは植物衛生用品、
の調製に使用することができる組成物に関する。
【００８２】
本発明のさらに異なる特徴によると、本発明は、特に、経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、及び大脳内投与のための薬剤で、これらの薬剤の活性成分が、具体的には、タンパク質、糖タンパク、１つ以上のポリアルキレングリコール｛例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で、この場合には「ＰＥＧ修飾」タンパク質という用語が用いられる｝に結合したタンパク質、ペプチド、多糖、リポ化糖、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、及び低分子量の疎水性、親水性、又は両親媒性の有機分子である薬剤；
・及び／又は食品；
・及び／又は化粧品若しくは植物衛生用品、
を調製する方法であって、以上に定義される少なくとも１つのポリアミノ酸及び／又は以上に開示される組成物を使用する工程を本質的に含むことを特徴とする方法に関する。
【００８３】
本発明はさらに、本明細書に開示されるように、前記組成物を本質的に経口、非経口、経鼻、膣内、眼球、皮下、血管内、筋肉内、皮内、腹膜内、大脳内、又は口腔の経路によって投与する工程を含む治療方法に関する。
【００８４】
本発明の特定の変形例において、前記治療方法は、本質的に、上述の組成物を生体適合性溶媒中の溶液の形態で投与する工程、及びその後これを皮下若しくは筋肉内の経路により、又は腫瘍中に、好ましくは注射部位に沈殿を生成させるような方法で注射する工程を含む。
【００８５】
本発明は、下記の実施例によってよりよく理解され、その利点及び変形例がより明確になるであろう。この実施例では、ポリアミノ酸の合成、及びそのＡＰベクター化系（安定な水性コロイド状懸濁液）への変換について記載し、これらの系がタンパク質と会合して医薬組成物を形成する能力を示す。
【実施例】
【００８６】
＜実施例１＞ポリマーｐＧｌｕＬＣの合成
リトコール酸から誘導された疎水性基ＧＨでグラフト化されたポリグルタミン酸（反応性を有する側鎖のカルボキシル基が結合基−Ｘ−として作用する）の合成
【００８７】
１／ＧＨの前駆体の構造
【化３】
2008508389.tif 000004
【００８８】
（工程１：酸のグラフト化）
グルタミン酸メチルのＮ−カルボキシ無水物誘導体：ＮＣＡＧｌｕＯＭｅを含むモノマーの重合により、α−Ｌ−ポリグルタミン酸（ポリエチレンオキシド標準試料に対して、約１２，０００ｇ／ｍｏｌの分子量当量を有する）を得る。この重合の後に、仏国特許出願公開第２，８０１，２２６号公報に記載の方法により加水分解を行う。
【００８９】
５００ｍｌの反応器中、窒素気流下で、５ｇのｐＧｌｕＯＨを、９０ｍｌのＤＭＦに８０℃で溶解する。溶液を８０℃で１８時間撹拌後、１５℃に冷却する。０．６ｇのジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）を加えた後、反応混合物を３０分間撹拌し、１．７５ｇのリトコール酸（ＬＣ）を５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液、及び０．１４２ｇの４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を３ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液を順次加える。反応混合物を１．５℃で１８時間撹拌し、５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを加えた後、反応混合物を、４００ｍｌの酸性化した塩化ナトリウム水溶液（６０ｇのＮａＣｌ、ｐＨ＝２、ＨＣｌ）及び２００ｍｌのジイソプロピルエーテル中に滴下することにより、ポリマーを沈殿させる。ガラスフィルター上で濾過した後、得られた固体を０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液、次いで水／酢酸エチル混合物で洗浄する。真空オーブンで乾燥後、５ｇの白色固体が得られる。
ＴＦＡ−ｄ中で１Ｈ  ＮＭＲにより測定されたグラフト化率は７．２％である。Ｍｎ（ＮＭＰ中７０℃でＧＰＣにより決定）は、ＰＭＭＡ当量で３４，８００ｇ／ｍｏｌである。
【００９０】
（工程２：中和）
工程１で得られたポリマー２ｇを２００ｍｌの脱塩水中に懸濁させる。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、固体が完全に溶解するまで、ｐＨ９を超えないように注意しながら滴下する。中和後、０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液を用いてｐＨを７．４に調整する。Ｍｎ（水溶液中ＧＰＣにより決定）は、ＰＯＥ当量で１６，６００ｇ／ｍｏｌである。
【００９１】
＜実施例２＞ｐＧｌｕＨＬＡの合成
１２−ヒドロキシラウリン酸から誘導された疎水性基ＧＨでグラフト化されたポリグルタミン酸（反応性を有する側鎖のカルボキシル基が結合基−Ｘ−として作用する）の合成
【００９２】
１／ＧＨの前駆体の構造
【化４】
2008508389.tif 000005
【００９３】
（工程１：酸のグラフト化）
５００ｍｌの反応器中、窒素気流下で、１０ｇのｐＧｌｕＯＨ（実施例１と同一の物）を、１８０ｍｌのＤＭＦに８０℃で溶解する。溶液をこの温度で１８時間撹拌する。反応混合物を１５℃に冷却し、３．９１ｇのＤＩＰＣを加えた後、反応混合物を３０分間撹拌する。５．８７ｇのＨＬＡを１５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液、及び０．５７ｇのＤＭＡＰを１５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液を順次加える。反応混合物を１．５℃で６時間撹拌し、９ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを加えた後、反応混合物を、１ｌのｐＨ２に酸性化した水（ＨＣｌ）に滴下することにより、ポリマーを沈殿させる。生成した白色固体をガラスフィルター上で濾過した後、０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液、水、酢酸エチル、及び最後はジイソプロピルエーテルで順次洗浄する。真空オーブンで乾燥後、１２．６ｇの白色固体が得られる。
ＴＦＡ−ｄ中で１Ｈ  ＮＭＲにより測定されたグラフト化率は２７．４％である。Ｍｎ（ＮＭＰ中７０℃でＧＰＣにより決定）は、ＰＭＭＡ当量で３８，０００ｇ／ｍｏｌである。
【００９４】
（工程２：中和）
工程１で得られたポリマー４ｇを２００ｍｌの脱塩水中に懸濁させる。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、固体が完全に溶解するまで、ｐＨ８を超えないように注意しながら滴下する。中和後、０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液を用いてｐＨを７．４に調整する。Ｍｎ（水溶液中ＧＰＣにより決定）は、ＰＯＥ当量で１８，６００ｇ／ｍｏｌである。
【００９５】
＜実施例３＞ポリマーｐＧｌｕＨＬＡ−Ｔの合成
１２−ヒドロキシラウリン酸（ＨＬＡ）から誘導された疎水性基ＧＨ及びα−トコフェロール（Ｔ）から誘導された疎水性基ＧＨ’でグラフト化されたポリグルタミン酸（反応性を有する側鎖のカルボキシル基が結合基−Ｘ−として作用する）の合成
【００９６】
１／ＧＨの前駆体の構造
【化５】
2008508389.tif 000006
【００９７】
（工程１：（Ｄ，Ｌ−α−トコフェロール合成品による）酸の第１のグラフト化）
５００ｍｌの反応器中、窒素気流下で、５ｇのｐＧｌｕＯＨ（実施例１と同一の物）及び４７ｍｇのＤＭＡＰを、９０ｍｌのＤＭＦに８０℃で溶解し、溶液をこの温度で１８時間撹拌する。反応混合物を１５℃に冷却し、１．６７ｇのＤ，Ｌ−α−トコフェロールを５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液、９４０ｍｇのＤＭＡＰを５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液、及び７８０ｍｇのＤＩＰＣを順次加える。反応混合物を１５℃で３時間３０分撹拌し、５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを加えた後、反応混合物を、４００ｍｌの酸性化した塩化ナトリウム水溶液（６０ｇのＮａＣｌ、ｐＨ＝２、ＨＣｌ）及び２００ｍｌのジイソプロピルエーテル中に滴下することにより、ポリマーを沈殿させる。生成した白色固体をガラスフィルター上で濾過した後、３００ｍｌの水と２００ｍｌのジイソプロピルエーテルとの混合物で３回、次いで３００ｍｌのジイソプロピルエーテルで２回洗浄する。真空オーブンで乾燥後、５．１ｇの白色固体が得られる。
ＴＦＡ−ｄ中で１Ｈ  ＮＭＲにより測定されたグラフト化率は９．５％である。Ｍｎ（ＮＭＰ中７０℃でＧＰＣにより決定）は、ＰＭＭＡ当量で３９，１００ｇ／ｍｏｌである。
【００９８】
（工程２：（ＨＬＡによる）酸の第２のグラフト化）
５００ｍｌの反応器中、窒素気流下で、工程１で得られたポリマー５ｇを、９０ｍｌのＤＭＦに８０℃で溶解する。溶液をこの温度で１８時間撹拌する。反応混合物を１５℃に冷却し、１．９５ｇのＤＩＰＣを加えた後、反応混合物を３０分間撹拌する。３．３５ｇのＨＬＡを５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液、及び２８０ｍｇのＤＭＡＰを５ｍｌのＤＭＦに溶解した溶液を順次加える。反応混合物を１５℃で２時間撹拌し、５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを加えた後、反応混合物を、６００ｍｌのｐＨ２に酸性化した水（ＨＣｌ）に滴下することにより、ポリマーを沈殿させる。生成した白色固体をガラスフィルター上で濾過した後、１００ｍＬのＤＭＦに再溶解し、反応混合物を６００ｍｌのｐＨ２に酸性化した水（ＨＣｌ）に滴下することにより、再沈殿させる。生成した白色固体をガラスフィルターで濾過し、０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液、水、及び最後にジイソプロピルエーテルで順次洗浄する。真空オーブンで乾燥後、５．６ｇの白色固体が得られる。
ＴＦＡ−ｄ中で１Ｈ  ＮＭＲにより測定されたグラフト化率は３５％である。Ｍｎ（ＮＭＰ中７０℃でＧＰＣにより決定）は、ＰＭＭＡ当量で４３，０００ｇ／ｍｏｌである。
【００９９】
（工程３：中和）
工程２で得られたポリマー２ｇを２００ｍｌの脱塩水中に懸濁させる。懸濁液を激しく撹拌し、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を、固体が完全に溶解するまで、ｐＨ８を超えないように注意しながら滴下する。中和後、０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液を用いてｐＨを７．４に調整する。Ｍｎ（水溶液中ＧＰＣにより決定）は、ＰＯＥ当量で１２，９００ｇ／ｍｏｌである。
【０１００】
＜実施例４＞溶解性及び粘度に関する検討
性質を比較し、本発明の特徴を示すために、同一の方法により、同様の構造を有する３種類のポリマーを合成した。これらのポリマーは、（イオン性の電荷を有しない）下記のグラフト基を有している：
Ｃ１：コレステロール（ＣＨＯＬ）
Ｃ２：ｎ−ドデカノール（ＯＣ１２）
Ｃ３：α−トコフェロール（Ｔ）
【０１０１】
ポリマーの粘度を、濃度の関数として、ＰＨ７．４、及び重量オスモル濃度３００ｍＯｓｍｏｌで測定する。限界凝集濃度Ｃη（ｇ／ｌ）、すなわち、この濃度を上回ると粘度が急速に増大する濃度を測定する。結果並びに本発明のポリマー及び従来技術に関する比較化合物の特徴を、下記の表に示す。
【０１０２】
【表１】
2008508389.tif 000007
【０１０３】
＜実施例５＞インスリンとの会合の検討
１ミリリットル当たり所定量のポリマー及び２００ＩＵのインスリン（７．４ｍｇ）を含むｐＨ７．４の水溶液を調製する。前記溶液を室温にて２時間インキュベートし、限外濾過（１００ｋＤａにてカットオフ、１８℃、１００００Ｇの下で１５分間）によって遊離のインスリンを結合インスリンから分離する。濾液から回収される遊離のインスリンを、ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）により定量し、結合インスリンの量を減算する。結果を以下の表２に示す。
【０１０４】
【表２】
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【０１０５】
この結果は、本発明のポリマーが、インスリンと強く会合して、１００ｋＤａ以上のサイズを有するコロイド状の懸濁液を生成し、インスリンの会合率が非常に高いことを示している。これらのポリマーは会合能を有しているため、ベクター化剤として好適である。
【国際調査報告】
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