(57)【要約】  本発明は、ヒト胸腺から単離された８４−アミノ酸ポリペプチドである新規な胸腺特異的ヒトタンパク質Ｔ１０１を提供する。完全Ｔ１０１ペプチドは、３３−アミノ酸シグナルペプチド及び５１−アミノ酸Ｔ１０１ペプチド配列を含有し、双方とも免疫刺激活性と阻害活性とを有する。修飾ペプチド類及び部分的Ｔ１０１ペプチド配列をも提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項２】
１個以上のアミノ酸残基が、非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく、付加されるか、削除されるか、又は置換されている配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項３】
少なくとも８個のアミノ酸残基を含む配列番号２からの部分的な連続配列を含む単離ポリペプチドであって、連続配列が、前記配列番号２における連続配列として含まれている単離ポリペプチド。
【請求項４】
配列番号４のＮ末端から始まる１３個のアミノ酸残基の連続配列を含む、請求項３に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
請求項１から４までのいずれか一項に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離タンパク質又はポリペプチド。
【請求項６】
ＡＡ１が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ５が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ７が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ８が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ９が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１０が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１３が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ１７が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１８が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１９が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２３が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ２４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２８が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３２が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４２が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ５０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ５１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択される、
アミノ酸ＡＡ１からＡＡ５１の配列を含む、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２から選択される配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項８】
３個までの残基が、保存的置換により、別のアミノ酸残基によって各々が置換されている配列番号２又は配列番号４の修飾配列を含む、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
修飾又は非修飾の配列番号４の３８位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記修飾が保存的置換によるものであり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン、プロリン及びグリシンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１０】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３８位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン、プロリン及びグリシンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１１】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン、プロリン及びグリシンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、
請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１２】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン、プロリン及びグリシンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、
請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１３】
以下のアミノ酸配列：
【化１】
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のうちの１つを含み、
式中
ｘ１は、Ｒ、Ｑ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｙ又はＷを表し；
ｘ２は、Ｖ、Ｍ、Ｉ又はＬを表し；
ｘ３は、Ｗ、Ｑ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｄ又はＥを表し；
ｘ４は、Ｗ、Ｒ、Ｆ、Ｙ、Ｈ又はＫを表し；
ｘ５は、Ｔ、Ｉ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ又はＭを表し；
ｘ６は、Ｐ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｖ又はＭを表す、
単離ポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載のアミノ酸配列を含む単離タンパク質又はポリペプチド。
【請求項１５】
１個以上のアミノ酸が、対応するＤアミノ酸により置換されている、請求項１から１４までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【請求項１６】
前記アミノ酸が、逆の順序である、請求項１から１５までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【請求項１７】
請求項１に記載の単離ポリペプチドをコードする配列を含む単離核酸分子。
【請求項１８】
１つ以上の核酸残基を、遺伝子コードの重複性により容認される別の核酸残基により置換している、配列番号１又は配列番号３の配列を含む単離核酸分子。
【請求項１９】
１個以上のヌクレオチドを、非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく、付加するか、削除するか、又は置換する配列番号１又は配列番号３のヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【請求項２０】
（ｉ）少なくとも８個のアミノ酸残基を含む配列番号２の部分的連続アミノ酸配列をコードするオリゴヌクレオチド；（ｉｉ）ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で配列番号１のヌクレオチド配列にハイブリダイズできるヌクレオチド配列；又は（ｉｉｉ）配列番号１に含まれるヌクレオチドの対応する連続配列に対して少なくとも７０％の同一度を有する少なくとも２４個の連続ヌクレオチドの配列を有するオリゴヌクレオチドである、少なくとも２４個のヌクレオチドのオリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
配列番号１に含まれる連続した３０個のヌクレオチド配列を含む、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項１７から２１までのいずれか一項に記載の配列を含む核酸ベクター。
【請求項２３】
請求項１から１６までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１から１６までのいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量を、必要とする対象に投与することを含む、疾患又は障害の治療方法。
【請求項２５】
前記疾患又は障害が、パーキンソン病、アルツハイマー病、炎症性又はアレルギー性状態、皮膚障害、ウイルス性疾患、癌疾患、自己免疫疾患、火傷、結核、ヘルペス、急性又は慢性Ｂ型肝炎、急性又は慢性Ｃ型肝炎、慢性胆汁うっ滞性肝炎、肝硬変、口内炎、及び男性不妊症から選択される、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な胸腺特異的タンパク質に関する。
【０００２】
先行技術
以下の先行技術は、本発明に対する背景技術の説明に係わっていると考えられる：
［１］Ｍａｕｒｅｒ，ＨＲ、Ｅｃｋｅｒｔ，Ｋ、Ｓｔａｎｇｅ，Ｒ：「乳癌患者からの白血球の抗腫瘍免疫毒性による治療効果（Ｅｉｎｆｌｕｓｓ  ｄｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｉｅ  ｍｉｔ  Ｔｈｙｍｏｊｅｃｔ  ａｕｆ  ｄｉｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌｅ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｚｉｔａｔ  ｄｅｒ  Ｌｅｕｋｏｚｙｔｅｎ  ｖｏｎ  Ｍａｍｍａ−Ｔｕｍｏｒｐａｔｉｅｎｔｉｎｎｅｎ）」、Ｐｅｒｓ．Ｍｉｔｔ．（１９９９）。
［２］Ｍｕｓｔａｃｃｈｉ，Ｇ、Ｐａｖｅｓ，Ｌ、Ｍｉｌａｎｉ，Ｓら：「転移結腸直腸癌処置のための高用量フォリン酸及びフルオウラシルプラス又はマイナスサイモスチムリン：多センター無作為臨床試験の結果（Ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｆｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｆｌｕｏｕｒａｃｉｌ  ｐｌｕｓ  ｏｒ  ｍｉｎｕｓ  ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｅｄ  ｔｒｉａｌ）」、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９４）１４：６１７〜６１９ページ。
［３］Ｓｃｈｕｌｏｆ，ＲＳ、Ｌｏｙｄ，ＭＪ、Ｃｌｅａｒｙ，ＰＡら：「肺癌患者における合成チモシン−アルファ１の免疫回復性を評価するための無作為臨床試験（Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｈｙｍｏｓｉｎ−ａｌｐｈａ  １  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）」、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｓｐ  Ｍｏｄｉｆ（１９８５）４：１４７〜１５８ページ。
［４］Ａｚｉｚｉ  Ａ、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＨＪ、Ｓｈｏｈａｍ  Ｊ：「胸腺因子サイモスチムリンによる悪性黒色腫患者に関する術後アジュバント処置（Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ａｄｊｕｖａｎｔｅ  Ｂｅｈａｎｄｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｅｎ  ｍｉｔ  ｍａｌｉｇｎｅｍ  Ｍｅｌａｎｏｍ  ｄｕｒｃｈ  ｄｅｎ  Ｔｈｙｍｕｓｆａｋｔｏｒ  Ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ）」、Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｈ／Ｄｒｇ  Ｒｅｓ（１９８４）３４（ＩＩ）：１０４３〜１０４６ページ。
［５］Ｍａｓｓｉｍｏ  Ｆ、Ｇｏｂｂｉ  Ｐ、Ｍｏｒｅｔｔｉ  Ｇ、Ａｖａｎｚｉｎｉ  Ｐ、イタリアリンパ腫試験グループ：「侵襲的非ホジキンリンパ腫患者における併用療法によるサイモスチムリンの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ  ｗｉｔｈ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｎｏｎ−Ｈｏｇｋｉｎｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）」、Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（ＣＣＴ）（１９９５）１８（１）：８〜１４ページ。
［６］Ｐｅｒｅｔｔｉ  Ｐ、Ｔｏｎｅｌｌｉ  Ｆ、Ｍａｚｚｅｉ  Ｔ、Ｆｉｃａｒｉ  Ｆ、腹部外科手術における抗菌予防に関するイタリア試験グループ、Ｊ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９３）５（１）：３７〜４２ページ。
［７］Ｇｏｎｅｌｌｉ  Ｓ、Ｐｅｔｒｉｏｌｉ  Ｒ、Ｃｅｐｏｌｌａｒｏ  Ｃ、Ｐａｌｍｊｅｒｉ  Ｒ、Ａｑｕｉｎｏ  Ａ、Ｇｅｎｎａｒｉ  Ｃ：「骨転移乳癌患者における化学療法と関連するサイモスチムリン（Ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ  ｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ    ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）」、Ｃｌｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｖｅｓｔ（１９９５）９（２）：７９〜８７ページ。
［８］Ｉａｆｆａｉｏｌｉ  ＲＶ、Ｆｒａｓｃｉ  Ｇ、Ｔｏｒｔｏｒａ  Ｇ、Ｃｉａｒｄｉｅｌｌｏ  Ｆ、Ｎｕｚｚｏ  Ｆ、Ｓｃａｌａ  Ｓ、Ｐａｃｅｌｌｉ  Ｒ、Ｂｉａｎｃｏ  ＡＲ；「乳癌に対するアジュバント化学療法時の感染症及び骨髄毒性の発生率に及ぼす胸腺抽出物サイモスチムリンの効果（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｙｍｉｃ  ｅｘｔｒａｃｔ  Ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）」、Ｔｈｙｍｕｓ（１９８８）１２：６９〜７５ページ、Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｎｉｃ  Ｐｕｂｋｉｓｈｅｒｓ。
【０００３】
これらの刊行物は、括弧内の上記リストからそれらのメンバーを示すことによって下記の本文において引用されている。
【背景技術】
【０００４】
現在、多くの生体応答調整物質（ＢＲＭ）が確認されている。例としてはインターロイキン類及びサイトカイン類が挙げられる。胸腺もまた、総合的免疫調節において重要な役割を演じている。胸腺は、免疫系の中枢部であると言えよう。胸腺は、癌並びに慢性感染細胞に対する免疫系且つ生体防御機構の発達及び機能において重要な機能を有すると考えられている。
【０００５】
胸腺組織は、前駆細胞から種々のＴ細胞：すなわち、他のリンパ球の分化を助けるヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔリンパ球；キラー細胞（ＮＫ細胞）；細胞毒性細胞；及びサプレッサー（細胞毒性）（ＣＤ８＋）Ｔリンパ球（１〜３）、への選択された転換を担っている。血流、腸管組織及び末梢組織へ放出されたリンパ球は、それらの表面上の十分に規定された抗原又は活性化マーカーを特徴とする。それらの活性は胸腺外である。
【０００６】
胸腺と活動的な骨髄との間の相互作用は微妙である。胸腺の機能低下とコロニー刺激因子（ＣＳＦ）の産生低下との間には直接的且つ正の相関がある。したがって、ＣＳＦの産生が不十分である場合に、胸腺ペプチドの治療適用は、有益となり得る。
【０００７】
慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）、ＨＩＶ、慢性Ｃ型肝炎（ＣＨＣ）及びマラリアは、現在、何の治療もされずに数千万人が患っている慢性疾患である。免疫の細胞分枝は、これらの慢性ウイルス、真菌、酵母、及び寄生虫感染に対して、並びに新生物及び加齢症状に対する覚醒を担っている。胸腺抽出物は、幾つかのこれらの状態を含み種々の方法で臨床的に使用されている。胸腺抽出物は、それら自体で、また、他の治療剤と組合わせて経口及び注射剤として使用されている。該抽出物は、気道及び皮膚に関与する重症且つ慢性アレルギーの処置、並びに重症の急性且つ慢性感染性疾患において使用されている。該抽出物はまた、術後感染症を減じ、化学療法及び放射線の損傷を減少させることが示されており、また、新生物の治療に関する主流療法に対する補助剤としても使用されている。これら状態の全ては、ウシからの胸腺抽出物により治療が成功している。
【０００８】
悪性黒色腫患者の無作為試験において、胸腺ペプチドは、腫瘍フリー期間を増加させ、生存時間をより長くし、生活の質を増加させた（４）。中間グレード及び高グレード非ホジキンリンパ腫における別の無作為試験において、患者は、標準的な化学療法に加え、胸腺ペプチドによって治療を受けた。治療を受けた患者は、胸腺ペプチドに対して非常に良好な耐容性を示し、胸腺ペプチドを投与されなかった患者よりも有意に高い完全応答率を有した（５）。結腸直腸手術を受けている患者のさらなる無作為試験において、セフォテタンに加えて胸腺ペプチドを投与された患者は、腹部膿瘍率及び上気道感染率を低下させるのに有意により良好であることを示した（６）。進行型乳癌女性で実施された無作為試験により、化学療法措置に加えて胸腺ペプチドを投与された女性は、この化学療法に対して有意により良好な耐容性であり、二次感染率を減じたことが文書化された（７、８）。
【０００９】
上記の知見に従って、骨髄機能を増強し、標準的化学療法の骨髄抑制に対して患者を保護するために；放射線療法及び化学療法後の骨髄回復を助けるために；標準的化学療法及び手術処置により引き起こされる免疫抑制による二次感染を防止するために；抗癌療法に対する完全及び部分的応答率を増加させるために；リンパ球機能及び生体防御機構を改善するために、胸腺ペプチドを使用できると考えられる。
【００１０】
免疫系は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞などの多くの異なる細胞からなる。これらの種々の細胞の起源は様々である。未熟Ｔ細胞は、骨髄に起源をもち、後に胸腺に移動する。胸腺において、成熟Ｔ細胞の産生及び免疫応答を制御する種々のペプチドの分泌をもたらす種々の処置が行われる。Ｔ細胞は、幾つかのサブグループ、例えば、Ｔヘルパー細胞、Ｔ細胞毒性細胞、Ｔ記憶細胞及びＴ調節細胞に分けることができる。各サブセットは、免疫応答時にそれ自身の機能を有する。これらのサブグループは、それらの膜上に提示された種々の抗原を特徴とする。例えば、Ｔヘルパー細胞は、それらの膜上にＣＤ４抗原を呈し、一方、Ｔ細胞毒性細胞は、それらの膜上にＣＤ８抗原を呈する。
【００１１】
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、調節的役割を果たし、末梢自己寛容性に関連すると考えられている。胸腺由来調節Ｔ細胞の存在は、生存３日目に胸腺切除術後のマウスにおける自己免疫疾患の発症により初めて示唆された。これらの障害は、出生後、後期に末梢に現れる、ＩＬ−２Ｒアルファ（ＣＤ２５）を構成的に発現する末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞の喪失によることが判明した。生理的に産生されたＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞は、広範囲の自己免疫障害及び炎症性障害、例えば、大腸炎を抑制する。
【００１２】
多数の研究にもかかわらず、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞が、それらの調節機能を働かせる機構は不明瞭である。幾つかの研究において、インビボ調節は、ＩＬ−１０及びＴＧＦ−βなどの抑制サイトカイン類並びにＣＴＬＡ−４などの細胞表面分子の産生に依存することが示されている。インビボ試験において、抑制作用は、サイトカインにより媒介されるのではなくて、むしろ細胞接触により媒介されることが示されている。
【００１３】
ＣＤ８＋Ｔ細胞は、実験的自己免疫脳脊髄炎を防ぐために、また、経口寛容性に寄与するために、インビボにおいて必須であることが報告されている。インビトロで調節ＣＤ８＋ＣＤ２８Ｔ細胞を作出し、同種ＡＰＣ類による多数ラウンドの刺激により増加させることができるが、この集団がインビボで存在するかどうかは知られていない。また、新たな試験により、ＣＤ２５を構成的に発現し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞と極めて類似した特性を有するＣＤ８＋細胞の新調節集団が明らかにされた。
【００１４】
これらの細胞は、ＩＬ−１０、Ｆｏｘｐ３、及びＣＴＬＡ−４を産生し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋と同様の効率で、抗ＣＤ３刺激に対するＣＤ２５−Ｔ細胞応答は細胞接触を介して阻害する。
【００１５】
細胞のこれら２つの亜集団、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋及びＣＤ８＋ＣＤ２５＋は、免疫応答の調節に関与すると考えられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
ヒト胸腺から組織特異的タンパク質を提供することが、本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
ＰＣＲを用いて、１６の異なる組織の２０才の女性ヒトｃＤＮＡライブラリーをスクリーンし、ヒト胸腺に特異的なｃＤＮＡを同定した。ｃＤＮＡによりコードされたペプチドを、Ｔ１０１と命名した。ヒト、マウス及びラットＥＳＴバンクをスクリーンしたが、いずれの既知遺伝子に対してもＴ１０１のｃＤＮＡの類似性は見られなかった。同様の結果が、タンパク質及び全ゲノムＤＮＡバンクで得られた。このｃＤＮＡ及び対応するアミノ酸配列は、以前に記載されていない新規な配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
ｃＤＮＡによりコードされたペプチドは、８４アミノ酸長であり、そのＮ末端上に３３個のアミノ酸のシグナルペプチドを含む（図１を参照）。Ｔ１０１のｃＤＮＡ配列（配列番号１）及びアミノ酸配列（配列番号２）は以下のとおりである：
【化１】
2008517998.tif 000003
【００１９】
したがって、配列番号１の核酸分子及び配列番号２のペプチドが、本発明により提供される。配列番号２のポリペプチドは、本明細書において「完全Ｔ１０１ペプチド」と称される。
【００２０】
完全Ｔ１０１ペプチドはまた、３３個のアミノ酸シグナル配列を含む。したがって、本発明は、以下の配列（配列番号４）からなる、前記シグナルペプチドのない完全Ｔ１０１ペプチドの配列を含むペプチドも提供する：
【化２】
2008517998.tif 000004
【００２１】
シグナル配列（配列番号４）が欠けているＴ１０１ペプチドは、本明細書において「Ｔ１０１ペプチド」と称される。
【００２２】
また、Ｔ１０１ペプチドをコードする配列を含む核酸分子は、本発明により提供される。これは、以下の配列（配列番号３）を含む：
【化３】
2008517998.tif 000005
【００２３】
本発明はまた、配列番号１又は配列番号３の核酸分子及び配列番号２又は配列番号４の修飾ペプチドを提供し、それぞれ１個以上のヌクレオチド又はアミノ酸残基は、非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく、付加されるか、削除されるか、又は置換される。
【００２４】
本明細書に用いられる用語の「ペプチド」は、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質を意味する。ペプチドは、合成的に、遺伝子工学法、宿主細胞における発現により、又は任意の他の好適な手段により得ることができる。
【００２５】
ペプチド分子に関する用語の「生物学的特性」とは、限定はしないが、下記の実施例に報告されている生物学的活性など、完全Ｔ１０１ペプチド或いはＴ１０１ペプチドにより働き得る少なくとも１つのインビトロ又はインビボ効果を働かせるペプチド能力を称す。核酸分子に関する用語の「生物学的特性」とは、特に：（ｉ）配列番号１又は配列番号３と異なる配列を有するが、遺伝子コードの重複性のために、それぞれ完全Ｔ１０１ペプチド或いはＴ１０１ペプチドをコードする核酸分子；及び（ｉｉ）完全Ｔ１０１ペプチド或いはＴ１０１ペプチドとは異なる配列を有するアミノ酸分子をコードするが、それぞれ完全Ｔ１０１ペプチド或いはＴ１０１ペプチドと同様の生物学的特性を有する核酸分子、などの完全Ｔ１０１ペプチド或いはＴ１０１ペプチドと同様の生物学的特性を有するペプチドをコードする性質を称す。
【００２６】
用語の「非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく」とは、修飾分子が、非修飾分子と質的に同様の生物活性を保持することを意味する。修飾ペプチドに関して、これは、とりわけ下記に明示されるように、その診断的及び治療的有用性並びに下記の実施例に報告されているインビトロ及びインビボ活性など、配列番号２又は配列番号４のペプチドの１つ以上の生物学的特性を保持することを意味する。ペプチドが、非修飾分子と質的に同様の生物学的活性を保持しているかどうかを判定するために、修飾ペプチドが、平行してアッセイされる対応する非修飾ペプチド（すなわち、完全Ｔ１０１ペプチド或いはＴ１０１ペプチドのもの）と比較する、例えば、インビトロ、インビボ又は臨床試験など、１つ以上のアッセイを実施でき；若しくは、修飾ペプチドをアッセイする実験により、別に実施された実験から知られている非修飾ペプチドと同様の生物学的効果を有するかどうかを調べる。このような実験は、例えば、下記の実施例に記載されている様式で実施できる。修飾核酸分子に関して、用語の「非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく」とは、任意の上記の特性の修飾ペプチドをコードする性質を意味する。
【００２７】
修飾ペプチドは、Ｔ１０１ペプチドに含まれる少なくとも８、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０又は少なくとも４５個のアミノ酸残基の対応する配列に同一性度を有する８、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０又は少なくとも４５個のアミノ酸残基の連続配列を含むペプチドであり得、同一性度は、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、特に少なくとも９５％である。
【００２８】
本発明は、少なくとも８個のアミノ酸残基を含む完全Ｔ１０１ペプチドから部分的連続配列を含むペプチドをさらに提供し、連続配列が、前記完全Ｔ１０１ペプチド中の連続配列として含まれる。このようなペプチドは、本明細書において「部分的Ｔ１０１ペプチド」と称される。一実施形態において、本発明は、以下のとおりＴ１０１ペプチド（アミノ酸番号３９から５１）のＮ−終末末端から始まって１３個のアミノ酸残基の連続配列を含む部分的Ｔ１０１ペプチドを提供する：
【化４】
2008517998.tif 000006
【００２９】
本発明は、完全Ｔ１０１ペプチド、Ｔ１０１ペプチド、修飾ペプチド又は部分的Ｔ１０１ペプチドのアミノ酸配列を含むタンパク質又はポリペプチド（このようなタンパク質又はポリペプチドは、本明細書において「タンパク質を含むＴ１０１」と称する）をさらに提供する。タンパク質を含むＴ１０１は、例えば、完全Ｔ１０１ペプチド、Ｔ１０１ペプチド、修飾ペプチド又は部分的Ｔ１０１ペプチドを含む融合タンパク質であり得；それは、タンパク質又は別のペプチド若しくはポリペプチドと完全Ｔ１０１ペプチド、Ｔ１０１ペプチド、修飾ペプチド又は部分的Ｔ１０１ペプチドとの複合体などであり得る。
【００３０】
本発明はまた、（ｉ）配列番号１に含まれる連続する２４個の核酸配列を含み得る少なくとも８個のアミノ酸残基を含むＴ１０１ペプチドから部分的連続配列をコードするオリゴヌクレオチド；（ｉｉ）ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で配列番号１のヌクレオチド配列にハイブリダイズできるヌクレオチド配列；（ｉｉｉ）少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、特に少なくとも９５％の配列番号１に含まれるヌクレオチドの対応する連続配列に対する同一度で少なくとも２４個の連続ヌクレオチドの配列を有するオリゴヌクレオチド、である少なくとも２４個のヌクレオチドのオリゴヌクレオチドを提供する。
【００３１】
本発明はまた、核酸分子、例えば、任意の前述の核酸分子を含む転移ベクター又は発現ベクターを提供する。
【００３２】
本発明の別の態様において、以下のとおり追加の部分的Ｔ１０１ペプチド類を提供する：
【化５】
2008517998.tif 000007
【００３３】
配列番号６は、Ｔ１０１ペプチドの６から２８個までのアミノ酸からなり；配列番号７は、Ｔ１０１ペプチドの２９から５１個までのアミノ酸からなり；配列番号８は、Ｔ１０１ペプチドの４４から５１個までのアミノ酸からなり；配列番号９は、Ｔ１０１ペプチドの３６から４８個までのアミノ酸からなり；配列番号１０は、Ｔ１０１ペプチドの３６から５１個までのアミノ酸からなり；配列番号１１は、Ｔ１０１ペプチドの３９から４３個までのアミノ酸からなる。
【００３４】
本発明はまた、上記に定義された任意のペプチドから誘導された修飾ペプチド類、例えば、１個以上のアミノ酸が、保存的置換による別のアミノ酸によって置換される修飾ペプチド類を提供する。本明細書に用いられる「保存的置換」とは、１つのクラスのアミノ酸の同じクラスのアミノ酸による置換を称し、１つのクラスは、共通の物理化学的性質のアミノ酸側鎖及び天然に見られる同種のタンパク質において高頻度置換により定義される。６つの一般的なクラスのアミノ酸側鎖が分類されており、以下のクラスが挙げられる：クラスＩ（Ｃｙｓ）；クラスＩＩ（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ）；クラスＩＩＩ（Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ）；クラスＩＶ（Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）；クラスＶ（Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ）；及びクラスＶＩ（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）。例えば、ＡｓｐのＡｓｎ、Ｇｌｎ、又はＧｌｕなどの別のクラスＩＩＩ残基への置換が保存的置換である。
【００３５】
一実施形態において、１つだけの置換が、アミノ酸配列において成される。別の実施形態において、２つの置換が成される。さらなる実施形態において、３つの置換が成される。最大置換数は、非置換配列におけるアミノ酸のうち少なくとも７０％、望ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％を残すアミノ酸数を超えてはならない。好ましい一実施形態によれば、その他により置換されるアミノ酸残基が３個まで、時には６個までを含む置換が、保存的置換である。
【００３６】
さらなる実施形態において、１個以上のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、好ましくは対応するＤ−アミノ酸により置換できる。
【００３７】
なおさらなる実施形態において、上記配列の逆順序の配列もまた、本発明に含まれる。
【００３８】
したがって、本発明はまた、１つ以上の保存的置換により修飾される、配列番号２の完全Ｔ１０１ペプチド又は好ましくは配列番号４のＴ１０１ペプチド或いはそれらの部分的Ｔ１０１配列を提供する。
【００３９】
したがって、少なくとも１０、又は１５、又は２０、又は２５、又は３０、又は３５、又は４０個のアミノ酸残基或いは配列：ＡＡ１、−ＡＡ２−．．．−ＡＡ５１を有するＴ１０１ペプチドの全配列などのペプチドを提供し、式中：
ＡＡ１は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ５は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ６は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ７は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ８は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ９は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１０は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１１は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１２は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１３は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１４は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１５は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１６は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ１７は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１８は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１９は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２０は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２１は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２２は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２３は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ２４は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２５は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２６は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２７は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２８は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２９は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３０は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３１は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３２は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３３は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３４は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３５は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３６は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３７は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３８は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４２は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４３は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４４は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４５は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４６は、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４７は、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４８は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４９は、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ５０は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ５１は、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択される。
【００４０】
以下の部分配列（Ｔ１０１ペプチドに基づくアミノ酸番号付け）など、完全Ｔ１０１ペプチド、Ｔ１０１ペプチド又は部分的Ｔ１０１ペプチドに基づく修飾ペプチド類もまた提供する：
【００４１】
ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２；式中、ＡＡ３８及びＡＡ３９は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはトリプトファンであり；ＡＡ４０は、クラスＩＩアミノ酸、好ましくはトレオニンであり；ＡＡ４１及びＡＡ４２は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンである。
【００４２】
ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３；式中、ＡＡ３８及びＡＡ３９は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはトリプトファンであり；ＡＡ４０は、クラスＩＩアミノ酸、好ましくはトレオニンであり；ＡＡ４１及びＡＡ４２は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンであり；ＡＡ４３は、クラスＶアミノ酸、好ましくはロイシンである。
【００４３】
Ａｌａ−Ｖａｌ−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２；式中、ＡＡ３８及びＡＡ３９は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはトリプトファンであり；ＡＡ４０は、クラスＩＩアミノ酸、好ましくはトレオニンであり；ＡＡ４１及びＡＡ４２は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンである。
【００４４】
Ａｌａ−Ｖａｌ−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３；式中、ＡＡ３８及びＡＡ３９は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはトリプトファンであり；ＡＡ４０は、クラスＩＩアミノ酸、好ましくはトレオニンであり；ＡＡ４１及びＡＡ４２は、クラスＶＩアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンであり；ＡＡ４３は、クラスＶアミノ酸、好ましくはロイシンである。
【００４５】
配列番号４（アミノ酸番号２４から４７）の２４アミノ酸の部分配列：
【化６】
2008517998.tif 000008
は、他の哺乳動物種から以下の配列：
イヌ：
【化７】
2008517998.tif 000009
ラット：
【化８】
2008517998.tif 000010
に密接に対応する。
【００４６】
配列番号１２から１４を比較すると、３種の以下のコンセンサス配列は：
【化９】
2008517998.tif 000011
に出現する（大文字に示される）。
【００４７】
したがって本発明はまた、前記コンセンサス配列を含むペプチドを提供する。このようなペプチド（本明細書において「コンセンサスペプチド」と称される）は、以下の式：
【化１０】
2008517998.tif 000012
の１つを有し、
式中：
ｘ１は、Ｒ、Ｑ又はＦ、或いは保存的置換の結果、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｙ又はＷを表し；
ｘ２は、Ｖ又はＭ、或いは保存的置換の結果、Ｉ又はＬを表し；
ｘ３は、Ｗ又はＱ、或いは保存的置換の結果、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｄ又はＥを表し；
ｘ４は、Ｗ又はＲ、或いは保存的置換の結果、Ｆ、Ｙ、Ｈ又はＫを表し；
ｘ５は、Ｔ又はＩ、或いは保存的置換の結果、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ又はＭを表し；
ｘ６は、Ｐ、Ｌ又はＳ、或いは保存的置換の結果、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｖ又はＭを表す。
【００４８】
前記コンセンサスペプチドのアミノ酸配列を含むタンパク質又はポリペプチドもまた提供する。本発明はさらに、前記コンセンサスペプチド類又は前記コンセンサスペプチドのアミノ酸配列を含むタンパク質若しくはポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する。
【００４９】
Ｔ１０１は、水溶液に可溶性である。この因子及び下記の生物学的特性、ペプチドホルモンの組織特異性及び物理的特性を、細胞免疫応答を誘導するため、また、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、癌及びマラリアなどの種々の他の臨床状態に対する治療剤として有用なＴ１０１ペプチド、完全Ｔ１０１ペプチド、部分的Ｔ１０１ペプチド又はそれらの任意の修飾ペプチドに対して付与する。
【００５０】
また、下記の実施例にさらに示されるように、それらから誘導されたＴ１０１ペプチド及び種々の修飾ペプチドは、免疫系を調節できることが判明している。この調節は、免疫系の活性（例えば、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の増殖増加により示されるように）並びに免疫系の抑制（例えば、ＩＬ−１０産生の増加及びＰＢＬの減少により示されるように）の双方により発現される。したがって、Ｔ１０１は、免疫活性化活性及び免疫抑制活性の双方を有する。理論に拘束されず、又それにより本発明の範囲を限定することなく、免疫系に対するＴ１０１の効果タイプは、濃度依存であり得る。
【００５１】
本発明はまた、Ｔ１０１ペプチド、完全Ｔ１０１ペプチド、部分的Ｔ１０１ペプチド、修飾ペプチド又はタンパク質を含むＴ１０１の使用或いは上記の任意の核酸分子を使用する治療方法、診断方法及び医薬組成物を含む。Ｔ１０１ペプチドの診断及び治療適用の可能性としては、以下のものが挙げられる：
１．Ｔ１０１は、種々の生物からの毒素の皮下注射後の免疫適格性の欠如に関する診断手段として役立ち得る。
２．血液中のＴ１０１のレベル試験は、高低の胸腺機能に関する指標として役立つことができ、また、免疫系の活性レベルに関する指標として役立ち得る。
３．Ｔ１０１のレベルは、自己免疫疾患の指標として役立つことができる。
４．Ｔ１０１は、免疫系の刺激物質として役立ち得る。例えば、Ｔ１０１は、細菌、寄生虫及びウイルス性毒素に対する免疫適格性の欠如を治療するために使用できる。
５．Ｔ１０１は、感染症の再発を減少させるための治療的手段として利用できる。例えば、気道において、Ｔ１０１は、感染症の再発を減少させるはずである。
６．Ｔ１０１は、アレルギー性及び炎症性応答を減少させるための治療的手段として利用できる。例えば、Ｔ１０１は、喘息の発生又はその症状を減少させるために使用できる。
７．Ｔ１０１は、結核、ヘルペス、急性又は慢性Ｂ型肝炎、急性又は慢性Ｃ型肝炎、慢性胆汁うっ滞性肝炎、肝硬変、口内炎などのウイルス性疾患を治療するために使用できる。
８．Ｔ１０１は、ＡＩＤＳ及び複合型免疫欠損などの免疫欠損疾患を治療するための治療的手段として利用できる。
９．Ｔ１０１は、アトピー性湿疹及び乾癬などの皮膚疾患を治療するための治療的手段として利用できる。
１０．Ｔ１０１は、幾つかの他の疾患を治療するために使用できる。例えば、Ｔ１０１は、ＢＤＩ、重症筋無力症、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、リウマチ様関節炎、全身性狼蒼、強皮症、慢性自己免疫溶血性貧血、大腸炎及びクローン病などの自己免疫病状を治療するための免疫系のサプレッサーとして役立ち得る。
１１．Ｔ１０１は、肺癌、喉頭癌、頭部及び頚部癌並びに乳癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、乳癌、肝癌、黒色腫などの癌疾患を治療するために免疫系の刺激物質として役立ち得る。
１２．Ｔ１０１は、術後及び移植後の感染症の発生を減少させるために使用できる。Ｔ１０１は、移植片拒絶を抑制するために移植後に使用できる。
１３．Ｔ１０１は、高齢又は若年の人、或いは易感染性免疫系を有する人の免疫応答を強化できる。
１４．Ｔ１０１は、火傷後の皮膚感染を治療するために利用できる。
１５．Ｔ１０１は、男性不妊症を治療するための治療的手段として使用できる。
１６．Ｔ１０１は、心活動を改善できる。
１７．Ｔ１０１は、胸腺細胞を確認する方法に使用できる。Ｔ１０１はまた、胸腺及びその代謝状態のマーカーとして役立ち得る。例えば、Ｔ１０１は、胸腺の代謝状態を測定するためにＥＬＩＳＡアッセイ又は他のアッセイに使用できる。
１８．Ｔ１０１は、種々のＷＢＣ亜集団を種々の組織から分離するために、蛍光染料をＷＢＣの特異的亜集団に展開させる手段として役立ち得る。
１９．Ｔ１０１は、種々の免疫反応の一般的な刺激物質又は阻害剤として役立つことができ、また、心臓及び肺臓などの臓器に直接又は間接的に影響を及ぼし得る。
２０．Ｔ１０１は、記憶、神経系の再生、鎮痛などの神経機能、及びパーキンソン病並びにアルツハイマー病などの神経病理学を調節できる。
２１．Ｔ１０１は、免疫系から特定の細胞を確認するため、また、それらを細胞療法に使用するためのプローブとして役立ち得る。
【００５２】
上記の診断及び治療適用に関して、完全Ｔ１０１ペプチド、部分的Ｔ１０１ペプチド、タンパク質を含むＴ１０１又はそれらの修飾ペプチドもまた使用できる。
【００５３】
本発明を理解し、それを実際に実施する方法を見るために、本発明に従って実施された実験結果を、以下の添付図面を参照にして記載する。
【実施例】
【００５４】
（実施例１）
完全Ｔ１０１ペプチドのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列を図１に示している。このアミノ酸配列は、膜貫通トポロジー及びシグナルペプチド配列の予測のためにフォービウス（Ｐｈｏｂｉｕｓ）シグナルペプチド予測手段（ｗｗｗ．ｐｈｏｂｉｕｓ．ｃｇｂ．ｋｉ．ｓｅで入手）による分析に供された。
【００５５】
フォービウスは、疎水性膜貫通シグナルペプチドドメインである完全Ｔ１０１ペプチドの３３個のアミノ酸配列及びＣ末端配列を予測した。シグナルペプチドは、図１において正規のフォント文字により示されている。
【００５６】
また、従来の生命情報手段を用いて、配列番号４の２４のアミノ酸部分配列
【化１１】
2008517998.tif 000013
は、他の哺乳動物種から以下の配列：
イヌ：
【化１２】
2008517998.tif 000014
ラット：
【化１３】
2008517998.tif 000015
に密接に対応することが判明した。
【００５７】
配列番号１２から１４を比較すると、これらのペプチドにおいて以下のコンセンサスアミノ酸残基は：
【化１４】
2008517998.tif 000016
に出現する（大文字に示されるコンセンサスアミノ酸）。
【００５８】
（実施例２）
１６の異なる組織からなるｃＤＮＡライブラリーを、Ｔ１０１のスクリーンに使用した。Ｃｌｏｎｔｅｃｈから購入したライブラリーは、白血球、精巣、大腸、前立腺、小腸、胸腺、卵巣、脾臓、肝臓、腎臓、脳、肺臓、膵臓、骨格、胎盤、心臓を含んだ。
【００５９】
ｃＤＮＡライブラリーは、Ｔ１０１に関する特異的なオリゴを用いてＰＣＲによりスクリーンされた。オリゴの配列は、Ｔ１０１の配列から推論された。
【００６０】
ＰＣＲ実験において、ｃＤＮＡライブラリーの各々から３マイクロリットル、５マイクロリットルの特定オリゴ（全部）、２０マイクロリットルのレディーミックス（Ｒｅａｄｙｍｉｘ）Ｔａｑポリメラーゼ及び１７マイクロリットルのＤＤＷを用いた。
【００６１】
以下のＰＣＲ法を用いた：
−９５℃で１分
−以下の３０サイクル：
９５℃で１分；
５２℃で１分；
７２℃で１分。
−このサイクルを終了後、サンプルを７２℃で１０分間維持した。  
【００６２】
使用されたオリゴの配列は：
（ｉ）ＯＬＩＧＯ番号５−標識１は：Ｈ１０（１８０）Ｅ１Ｐ
【化１５】
2008517998.tif 000017
であり
（ｉｉ）ＯＬＩＧＯ番号６−標識１は：Ｈ１０（１８０）Ｅ１Ｃ
【化１６】
2008517998.tif 000018
である。
【００６３】
ＰＣＲの結果を図２に示す。図２に示されたアガロースゲルは、１２カラムを含有し、サンプルの２つの配列により実施した：第１の配列は、ゲルの上部で開始し、第２の配列は、ゲルの中央で開始する（ゲルの両側の線の配置により示される）。第１の配列のカラム内のサンプルは以下のとおりであった：１及び１２．分子量マーカー（ゲルの右側に示された分子量）；２．成長ホルモン；３．白血球；４．精巣；５．大腸；６．前立腺；７．小腸；８．胸腺；９．卵巣；１０．脾臓；１１．肝臓。第２の配列のカラム内のサンプルは以下のとおりであった：１．分子量マーカー；２．腎臓；３．脳；４．肺臓；５．膵臓；６．骨格筋；７．胎盤；８．心臓。
【００６４】
Ｔ１０１の特定の配列は、胸腺組織にのみに見られ、試験された他のいずれの組織にも見られないことが、ゲルから見ることができる。陽性対照として本明細書に使用される成長ホルモンは、Ｔ１０１に関して陽性であることも判明した。
【００６５】
（実施例３）
Ｔ１０１ペプチドを、マウス脾細胞又は胸腺細胞（２種のマウス株：ＣＤＩ及びＢａｌｂ／Ｃを用いた）並びにヒトの末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の増殖を活性化する能力について試験した。増殖活性は、５−ブロモ２’−デオキシ−ウリジン（ＢｒｄＵ）のこれらの細胞への取込みにより測定した。
【００６６】
方法
マウス脾細胞又は胸腺細胞は、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの脾臓又は胸腺から単離した。それらを、１０７細胞／ウェルの濃度を用いて９６ウェルプレート内で平板培養した。ＲＰＭＩ  １６４０培地＋１０％ＦＣＳ及びＰｅｎ／Ｓｔｒを用いた。この細胞を、Ｔ１０１ペプチドの種々の濃度（０．１又は０．０１μｇ／ウェル）又は生理食塩水（対照）で処理し、４８時間後、それらをＢｒｄＵで６時間標識し、それらの核へのＢｒｄＵの取込みを試験した。
【００６７】
ヒトＰＢＬは、志願者から採血された血液からＦｉｃｏｌｅ勾配で単離し、再度ＲＰＭＩ  １６４０＋１０％ＦＣＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒを用いて９６ウェルプレート内で平板培養した。
【００６８】
この細胞を、ペプチドの種々の濃度又は生理食塩水（上記のとおり）で処理し、４８時間後、ＢｒｄＵで６時間標識し、それらの核へのＢｒｄＵの取込みを試験した。
【００６９】
結果
ヒトＰＢＬ及びＢａｌｂ／ｃ胸腺細胞の双方において、それぞれ図３及び図４に示されるように、Ｔ１０１は、ＢｒｄＵ取込みを増加でき、Ｔ１０１は、それらの増殖率を増加させるために細胞を誘導することができたことを示す。
【００７０】
（実施例４）
次の実験において、Ｔ１０１ペプチドの幾つかの欠失変異体を構築し、合成した。これらの変異体を、ヒトＰＢＬにおける増殖を刺激する能力に関して試験した。右側カラムは、未処理細胞の増殖を超える増殖増加倍数を示している。
【００７１】
表１：ヒトＰＢＬにおける増殖刺激
【表１】
2008517998.tif 000019
【００７２】
以下の結論は、上記結果に基づいて到達できる：
１．変異体番号１は、Ｔ１０１ペプチドの１３個のＮ末端アミノ酸からなり、活性が高かった。この配列（又はその一部）は、測定される増殖刺激活性に関して必須であることが明らかである。
２．変異体番号２は、変異体番号１に対して２３個のアミノ酸上流からなり、比較的活性が低かった。このＴ１０１ペプチドの一部が、この生物学的活性にとって重要性が低い。
３．変異体番号３は、Ｔ１０１ペプチドの２３個のＮ末端アミノ酸からなり、変異体番号２と対照的に極めて活性であった。したがって、Ｔ１０１ペプチドの幾つかの部分は、刺激活性に関して他のものよりも重要であることが見ることができる。
４．変異体番号４は、Ｔ１０１ペプチドの８個のＮ末端アミノ酸からなり、殆ど活性はなかった。これは、変異体番号１の５個のＣ末端アミノ酸がその活性にとって重要であることを示している。
５．変異体番号５は、変異体番号１のものと部分的に重なる１３個のアミノ酸からなる。これは、Ｔ１０１ペプチドと同様の活性があったが、変異体番号１の活性よりも低かった。
６．変異体番号６は、逆順序で変異体番号５のアミノ酸配列からなる。驚くべきことに、これは、変異体番号５と同様の活性を有した。
【００７３】
したがって、Ｔ１０１アミノ酸配列の全てが、増殖刺激活性にとって必要でないことを見ることができる。
【００７４】
（実施例５）
ビオチン化Ｔ１０１ペプチドを合成し、ヒトＰＢＬへの結合を、蛍光顕微鏡を用いて測定した。
【００７５】
方法
種々の濃度でのビオチン化Ｔ１０１ペプチドを、１０６細胞／チューブ（ヒトＰＢＬ）に加えた。対照はまた、Ｔ１０１ペプチドなしで調製した。次のステップにおいて、飽和濃度の蛍光抗ビオチン抗体を加え、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。次いで細胞を蛍光顕微鏡下で観察した。
【００７６】
結果
図５に示された結果は、抗ビオチン抗体が、ビオチン化Ｔ１０１で処理された細胞に結合したことを示している。ビオチン化Ｔ１０１ペプチドの濃度増加は、蛍光増加を生じることが判明した（ＦＡＣＳからの結果は示していない）。ビオチン化Ｔ１０１ペプチドが最初に抗体に結合してから、この結合体を細胞と共にインキュベートすると、蛍光は検出されなかった。対照細胞は蛍光がなかった（結果は図には示していない）。
【００７７】
大抵の場合において、ビオチン化Ｔ１０１ペプチドで標識された細胞は、一緒に凝集されていることが見られた。
【００７８】
本実験は、Ｔ１０１がヒトＰＢＬに結合できるという直接の証拠を提供する。該抗体は細胞に貫入できなく、Ｔ１０１で標識されない細胞が抗ビオチン抗体により標識されないことから、結論として、Ｔ１０１の外部結合の細胞のみが標識されるということである。
【００７９】
同様の結果がマウス脾細胞で得られた。
【００８０】
（実施例６）
リンパ球の亜集団が、Ｔ１０１ペプチドに結合することを見るために、マウス脾臓細胞又は胸腺細胞を用いてＦＡＣＳ分析を実施した。この分析に関して、以下の幾つかの抗体を用いた：（１）抗マウスＣＤ３、（２）抗マウスＣＤ４、（３）抗マウスＣＤ８及び（４）抗マウスＣＤ２５。
【００８１】
方法
１０６脾細胞を、ビオチン化Ｔ１０１ペプチド及びＰＥ−ストレプトアビジン並びにＦＩＴＣ抗マウスＣＤ２５で標識した。各抗体に関して、そのイソタイプ抗体を対照として用いた。
【００８２】
結果
ＦＡＣＳ分析からの結果を図６に示している（Ｙ軸は、標識細胞のパーセンテージを示す）。以下の結論に達することができる：
（１）ビオチン化Ｔ１０１ペプチドの添加により、大型の蛍光細胞の出現を生じるが、一方、対照実験においては、このような細胞が検出されなかった（結果は示していない）。
（２）全てのＣＤ２５＋細胞はまた、ビオチン化ペプチドで標識された。
（３）ＣＤ３＋細胞、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞の一部は、ビオチン化ペプチドで標識された（結果は示していない）。
【００８３】
Ｔ１０１は、ＣＤ２５＋細胞、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞に結合する。ＣＤ２５＋細胞はまた、恐らくＣＤ４＋及びＣＤ８＋である。したがって、Ｔ１０１は、免疫応答を調節する細胞に結合する。
【００８４】
（実施例７）
本実験の目的は、Ｔ１０１ペプチドが、どのようにマウスにおける免疫応答に影響を及ぼすか、また、Ｔ１０１ペプチドが、種々の細胞タイプのレベル及び種々の亜集団間の比率の双方で、免疫系の成分のいずれかに影響を及ぼすことができるかどうかを調べることであった。
【００８５】
方法
５０マイクログラム／ＫｇのＴ１０１ペプチド又は生理食塩水を、７週齢から８週齢のメスＢａｌｂ／Ｃマウス（１群当り１０匹のマウス）に注入した（１日２回、８日間）。ＣＤＣ分析は血液からなり、白血球（ＷＢＣ）の種々の亜集団（単球（ＭＯＮＯ）、リンパ球（ＬＹＭ）及び総ＷＢＣ（ＷＢＣ））のパーセンテージを分析した。血小板及びＲＢＣを対照として用いた。
【００８６】
結果
図７に示されるように、７週齢から８週齢のＢａｌｂ／Ｃメスマウスにおいて、生理食塩水注入と比較して、Ｔ１０１ペプチドによる注入後、総ＷＢＣにおいて約３０％の増加があった。ＷＢＣの亜集団を試験した場合、生理食塩水注入対照群と比較すると実験群においてリンパ球及び単球が約３０％増加した。
【００８７】
対照として、血小板及び赤血球（ＲＢＣ）のレベルもまた調べた。生理食塩水とＴ１０１ペプチド注入との間の差は、図８に示すように５％未満であることが判明した（血小板に関する結果は示していない）。
【００８８】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋集団を見ると、Ｔ１０１処置マウスと生理食塩水処置マウスとの間に有意差を示さなかった（結果は示していない）。
【００８９】
本実験は、３〜４週齢のＢａｌｂ／Ｃメス（１群が７匹のマウス）で反復した。マウスに７２マイクログラム／Ｋｇを１日２回注入した。この結果は図９に例示している。
【００９０】
本実験において、上記とは異なるように、Ｔ１０１ペプチドは、種々の細胞型のレベルで発現されるように免疫系の何らかの抑制を誘導した。抑制の大きさは、凡そ３０％であった。
【００９１】
（実施例８）
脾臓リンパ球における種々の亜集団の細胞レベルは、Ｔ１０１により１日１回注入された（７２マイクログラム／Ｋｇ体重）Ｂａｌｂ／Ｃの３週齢から４週齢のメスマウスで調べた。この結果は、図１０に要約している。
【００９２】
図１０に示すように、Ｔ１０１は、マウスの脾臓においてＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞の双方のレベルを減少させた。胸腺細胞において、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞のレベルに差異はなかった（結果は示していない）。マウスのリンパ節において、ＣＤ４＋細胞のレベルにおいて３５〜５０％の範囲の減少が見られたが、ＣＤ８＋細胞には変化がなかった（結果は示していない）。
【００９３】
（実施例９）
ＩＬ−１０は、免疫系を抑制できるインターロイキンである（ＴＨ２インターロイキン）。ＩＬ−１０のレベルを、各群が３匹のマウスの以下の３群でアッセイした：（１）マウスの１群には、Ｔ１０１を１日２回注入した（アッセイ番号３）；（２）別の群には、同じ濃度のＴ１０１を１日１回注入した（アッセイ番号２）；（３）第３群のマウスには、１日おきに１回注入した（アッセイ番号１）。全て注入された用量は、同じであった（７２マイクログラム／Ｋｇ体重）。生理食塩水を注入されたマウスは、対照（Ｃｏｎ）とした。この結果は図１１に示す。
【００９４】
示されるように、ＩＬ−１０のレベルは、Ｔ１０１ペプチドのこれらマウスへの注入後、全ての群において増加した。最良の注入措置は、１日おきの１回であった。
【００９５】
これらの結果は、自己免疫疾患の処置における免疫サプレッサーとしてのＴ１０１の使用を支持している。
【００９６】
（実施例１０）
成体Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて、Ｔ１０１のより低い濃度を用いると、免疫細胞レベルにおいて何らかの増加が見られた。本実験は、この増加が癌の免疫療法に適用できるかどうかを試験する目的を有した。
【００９７】
方法
８週齢のＢａｌｂ／Ｃマウスに、乳癌ＥＭＴ６／ＣＴＸ細胞を注入し、腫瘍サイズが４ｍｍ２に達したら、マウスにＴ１０１ペプチド（５０マイクログラム／Ｋｇ）を１日２回、８日間注入した。腫瘍サイズは、１日おきに並びに実験結果時に測定した。
【００９８】
結果
１４日目の腫瘍サイズに関する結果は、図１２に要約している。Ｔ１０１ペプチドで処置したマウスにおいて、注入前の元の腫瘍サイズと比較して、腫瘍サイズの増加倍数は４．３であった。生理食塩水で処置したマウスにおいて、腫瘍サイズの増加倍数は、６．７であった。したがって、Ｔ１０１は、腫瘍増殖を有意に減少できた。
【００９９】
腫瘍増殖率を図１３に示している。Ｔ１０１は、腫瘍増殖率を有意に減少させ得ることを見ることができる。
【０１００】
これらの腫瘍の病理学的試験により、Ｔ１０１処置マウスの何匹かにおいて、対照と比較して腫瘍中のリンパ球数及び好中球数の有意な増加があることが明らかとなった（結果は示していない）。
【０１０１】
これらの結果は、Ｔ１０１が癌治療のために治療的に使用し得ることを示している。
【０１０２】
（実施例１１）
自己免疫疾患を治療するＴ１０１の能力を試験するために、大腸炎／クローン病に関するマウスモデルを用いた。
【０１０３】
８週齢のメスＢａｌｂ／ｃマウスに、飲料水中のＤＳＳ（硫酸デキストラン）（５％）を１４日間与えた。この期間中、下記に従ってマウスに、生理食塩水又はＴ１０１を含有する生理食塩水を注入した。糞中の血液、体重、及び糞の一貫性を追跡した。実験の終了時にマウスを殺処理し、大腸を摘出し、その長さを測定した。
【０１０４】
マウスを、１群当り３匹の４群に分けた：
第１群−対照−通常の飲料水（ＤＳＳのない）を与え、処置をしなかった。
第２群−ＤＳＳ−５％ＤＳＳを含有した飲料水を与え、生理食塩水を注入した。
第３群−ＤＳＳ＋ＢＴＬ１−５％ＤＳＳを含有した飲料水を与え、Ｔ１０１を３日毎に１回（５２マイクログラム／ＫｇのＴ１０１の用量で）注入した。
第４群−ＤＳＳ＋ＢＴＬ２−５％ＤＳＳを含有した飲料水を与え、Ｔ１０１を３日毎に１回（１３マイクログラム／ＫｇのＴ１０１の用量で）注入した。
【０１０５】
この結果を、図１４と図１５に要約する。ＤＳＳ及び生理食塩水のみを受けたマウスと比較して、Ｔ１０１ペプチドは、これらの動物における疾患症状を減少させる上で著しい効果があることを見ることができる。
【０１０６】
これらの結果により、Ｔ１０１ペプチドは、大腸炎／クローン病などの自己免疫疾患の治療における免疫サプレッサーとして役立ち得ることを示している。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】Ｔ１０１  ｃＤＮＡの完全配列及びコード化完全Ｔ１０１ペプチドを示す図である。「完全」Ｔ１０１ペプチドは、シグナルペプチド（正規のフォント文字により示された）及びＴ１０１ペプチド（ボールドフォント文字により示された）からなる。シグナルペプチドをコードするｃＤＮＡを同様に示す。
【図２】Ｔ１０１ペプチドを示すＰＣＲゲルの写真である。このゲルは、１２のカラムを含有し、サンプルの２つの配列により実施され：１つの配列は、ゲルの上部で開始し、他の配列は、ゲルの中央で開始する（ゲルの両側の線で示される）。
【図３】Ｔ１０１ペプチドとでインキュベートしたヒトＰＢＬにおいて、対照と比較したＢｒｄＵの取込みを示すグラフである。Ｙ軸は、４５０ｎｍでの光学密度を示し−より高いＯＤは、より高いＢｒｄＵの取込みを意味する。
【図４】Ｔ１０１ペプチドとでインキュベートしたＢａｌｂ／ｃ胸腺細胞において、対照と比較したＢｒｄＵの取込みを示すグラフである。Ｙ軸は、４５０ｎｍでの光学密度を示し−より高いＯＤは、より高いＢｒｄＵの取込みを意味する。
【図５】ビオチン化Ｔ１０１ペプチドとのインキュベーション後のリンパ球の蛍光マイクログラフである。
【図６】ＣＤ２５抗原を介してマウス脾細胞のｂＴ１０１及び／又はＣＤ２５による標識を含む実験結果を示す棒グラフである。Ｙ軸は、標識細胞の％を示す。
【図７】Ｔ１０１ペプチドを含有する生理食塩水（Ｔ１０１）又は生理食塩水単独（生理食塩水）の双方における細胞のインキュベーション後、種々のヒト白血球集団−単球（ＭＯＮＯ）、リンパ球（Ｌｙｍ）及び総白血球集団（ＷＢＣ）−の１マイクロリットル当りの細胞数を示す棒グラフである。単球数は、１つのグラフでの全ての結果を含ませるために１０００で割った。
【図８】Ｔ１０１ペプチドを含有する生理食塩水（Ｔ１０１）又は生理食塩水単独（生理食塩水）の両方における細胞のインキュベーション後、ヒト赤血球の１マイクロリットル当りの細胞数を示す棒グラフである。
【図９】Ｔ１０１又は生理食塩水（対照）のいずれかで動物を処置した後、種々のＢａｌｂ／血液細胞集団：単球（ＭＯＮＯ）、リンパ球（Ｌｙｍ）、好中球（Ｎｅｕｔ）、赤血球（ＲＢＣ）及び総白血球集団（ＷＢＣ）、の細胞数を示す棒グラフである。
【図１０】Ｔ１０１含有生理食塩水又は生理食塩水単独による動物の注入後、Ｂａｌｂ／Ｃ脾臓リンパ球におけるＣＤ４及びＣＤ８細胞の細胞数を示す棒グラフである。Ｙ軸は、ＷＢＣの％を示す。
【図１１】１日おきの生理食塩水注入対照と比較して、生理食塩水中のＴ１０１により注入されたマウスにおけるＩＬ−１０レベルを示す棒グラフである。１実験群は、１日おきに１回（アッセイ番号１）、第２群は、１日１回（アッセイ番号２）、第３群は、１日２回（アッセイ番号３）、Ｔ１０１ペプチド注入を受けた。
【図１２】乳癌で誘導され、Ｔ１０１ペプチドを有する生理食塩水又は生理食塩水単独の双方で処置されたＢａｌｂ／Ｃマウスの腫瘍サイズの増加倍数を示す棒グラフである。
【図１３】図１２に示された腫瘍の増殖率（％）を示すグラフである。
【図１４】飲料水を介してＤＳＳを受け、引き続き処置したマウスの結腸の長さを示す棒グラフである。４群の動物を試験した：１群は、ＤＳＳを受けず、処置をせず（対照）；第２群は、飲料水中のＤＳＳを受け、生理食塩水（ＤＳＳ）で処置し；残りの２群は、飲料水中のＤＳＳを受け、５２マイクログラム／ｍｌ及び１３マイクログラム／ｍｌ（それぞれＤＳＳ＋ＢＴＬ１及びＤＳＳ＋ＢＴＬ２）を含んだ生理食塩水の注入で処置した。
【図１５】実験の終了時のＤＳＳを受けた図１４のマウスの体重（終了）対開始時の体重（開始）を示す棒グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年7月17日(2006.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項２】
１個以上のアミノ酸残基が、非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく、付加されるか、削除されるか、又は置換される配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含み、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸の少なくとも７０％が非置換のままである単離ポリペプチド。
【請求項３】
少なくとも８個のアミノ酸残基を含む配列番号２からの部分的な連続配列を含む単離ポリペプチドであって、連続配列が、前記配列番号２における連続配列として含まれている単離ポリペプチド。
【請求項４】
配列番号４のＮ末端から始まる１３個のアミノ酸残基の連続配列を含む、請求項３に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
請求項１から４までのいずれか一項に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離タンパク質又はポリペプチド。
【請求項６】
ＡＡ１が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ５が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ７が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ８が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ９が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１０が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１３が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ１７が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１８が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１９が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２３が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ２４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２８が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３２が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４２が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ５０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ５１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択される、
アミノ酸ＡＡ１からＡＡ５１の配列を含む、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２から選択される配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項８】
３個までの残基が、保存的置換により、別のアミノ酸残基によって各々が置換されている配列番号２又は配列番号４の修飾配列を含む、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
修飾又は非修飾の配列番号４の３８位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記修飾が保存的置換によるものであり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１０】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３８位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１１】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、
請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１２】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、
請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１３】
以下のアミノ酸配列：
【化１】
2008517998.tif 000036
のうちの１つを含み、
式中
ｘ１は、Ｒ、Ｑ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｙ又はＷを表し；
ｘ２は、Ｖ、Ｍ、Ｉ又はＬを表し；
ｘ３は、Ｗ、Ｑ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｄ又はＥを表し；
ｘ４は、Ｗ、Ｒ、Ｆ、Ｙ、Ｈ又はＫを表し；
ｘ５は、Ｔ、Ｉ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ又はＭを表し；
ｘ６は、Ｐ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｖ又はＭを表す、
単離ポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載のアミノ酸配列を含む単離タンパク質又はポリペプチド。
【請求項１５】
前記アミノ酸が、逆の順序である、請求項１から１５までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【請求項１６】
請求項１に記載の単離ポリペプチドをコードする配列を含む単離核酸酸分子。
【請求項１８】
請求項１から１６までのいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量を、必要とする対象に投与することを含む、疾患又は障害の治療方法。
【請求項１９】
前記疾患又は障害が、パーキンソン病、アルツハイマー病、炎症性又はアレルギー性状態、皮膚障害、ウイルス性疾患、癌疾患、自己免疫疾患、火傷、結核、ヘルペス、急性又は慢性Ｂ型肝炎、急性又は慢性Ｃ型肝炎、慢性胆汁うっ滞性肝炎、肝硬変、口内炎、及び男性不妊症から選択される、請求項１８に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】平成18年12月10日(2006.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項２】
１個以上のアミノ酸残基が、非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく、付加されるか、削除されるか、又は置換される配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含み、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸の少なくとも７０％が非置換のままである単離ポリペプチド。
【請求項３】
少なくとも８個のアミノ酸残基を含む配列番号２からの部分的な連続配列を含む単離ポリペプチドであって、連続配列が、前記配列番号２における連続配列として含まれている単離ポリペプチド。
【請求項４】
配列番号４のＮ末端から始まる１３個のアミノ酸残基の連続配列を含む、請求項３に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
請求項１から４までのいずれか一項に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離タンパク質又はポリペプチド。
【請求項６】
ＡＡ１が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ５が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ７が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ８が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ９が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１０が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１３が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ１７が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１８が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１９が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２３が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ２４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２８が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３２が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４２が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ５０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ５１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択される、
アミノ酸ＡＡ１からＡＡ５１の配列を含む、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１２から選択される配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項８】
３個までの残基が、保存的置換により、別のアミノ酸残基によって各々が置換されている配列番号２又は配列番号４の修飾配列を含む、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
修飾又は非修飾の配列番号４の３８位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記修飾が保存的置換によるものであり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１０】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３８位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１１】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、
請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１２】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、
請求項１から３までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１３】
以下のアミノ酸配列：
【化１】
2008517998.tif 000037
のうちの１つを含み、
式中
ｘ１は、Ｒ、Ｑ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｙ又はＷを表し；
ｘ２は、Ｖ、Ｍ、Ｉ又はＬを表し；
ｘ３は、Ｗ、Ｑ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｄ又はＥを表し；
ｘ４は、Ｗ、Ｒ、Ｆ、Ｙ、Ｈ又はＫを表し；
ｘ５は、Ｔ、Ｉ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ又はＭを表し；
ｘ６は、Ｐ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｖ又はＭを表す、
単離ポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１３に記載のアミノ酸配列を含む単離タンパク質又はポリペプチド。
【請求項１５】
前記アミノ酸が、逆の順序である、請求項１から１４までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【請求項１６】
請求項１から１５までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１から１５までのいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量を、必要とする対象に投与することを含む、疾患又は障害の治療方法。
【請求項１８】
前記疾患又は障害が、パーキンソン病、アルツハイマー病、炎症性又はアレルギー性状態、皮膚障害、ウイルス性疾患、癌疾患、自己免疫疾患、火傷、結核、ヘルペス、急性又は慢性Ｂ型肝炎、急性又は慢性Ｃ型肝炎、慢性胆汁うっ滞性肝炎、肝硬変、口内炎、及び男性不妊症から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
１個以上のアミノ酸が、対応するＤアミノ酸により置換されている、請求項１から１５までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【手続補正書】
【提出日】平成19年6月27日(2007.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド；
（ｂ）１個以上のアミノ酸残基が、非修飾分子と比較して修飾分子の生物学的特性に著しい影響を及ぼすことなく、付加されるか、削除されるか、又は置換される配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含み、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸の少なくとも７０％が、非置換のままである単離ポリペプチド；
（ｃ）少なくとも８個のアミノ酸残基を含む配列番号２からの部分的な連続配列を含み、連続配列が、前記配列番号２における連続配列として含まれる単離ポリペプチド；及び
（ｄ）配列番号４のＮ末端から始まって１３個のアミノ酸残基の連続配列を含む単離ポリペプチド
からなる群から選択される単離ポリペプチド。
【請求項２】
ＡＡ１が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ５が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ７が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ８が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ９が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１０が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１３が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ１６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ１７が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ１８が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ１９が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２２が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２３が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ２４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２６が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ２７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ２８が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ２９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３１が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ３２が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３５が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ３６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ３７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４２が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４４が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４５が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４６が、セリン、トレオニン、アラニン、グリシン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４７が、ロイシン、イソロイシン、バリン及びメチオニンから選択され；
ＡＡ４８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４９が、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸及びアスパラギンから選択され；
ＡＡ５０が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択され；
ＡＡ５１が、リシン、アルギニン及びヒスチジンから選択される、
アミノ酸ＡＡ１からＡＡ５１の配列を含む、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１２から選択される配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項４】
３個までの残基が、保存的置換により、別のアミノ酸残基によって各々が置換されている配列番号２又は配列番号４の修飾配列を含む、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
修飾又は非修飾の配列番号４の３８位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記修飾が保存的置換によるものであり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３８位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４２位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択される、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項８】
他のアミノ酸残基により置換されているか、又は非置換である配列番号４の３６位から４３位までの残基であるアミノ酸残基ＡＡ３６−ＡＡ３７−ＡＡ３８−ＡＡ３９−ＡＡ４０−ＡＡ４１−ＡＡ４２−ＡＡ４３を含み、前記置換が保存的置換であり、
ＡＡ３６が、アラニンであり；
ＡＡ３９が、バリンであり；
ＡＡ３８が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ３９が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択され；
ＡＡ４０が、トレオニン、セリン、アラニン及びプロリンから選択され；
ＡＡ４１が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４２が、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンから選択され；
ＡＡ４３が、ロイシン、バリン、イソロイシン、及びメチオニンから選択される、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
以下のアミノ酸配列：
【化１】
2008517998.tif 000038
のうちの１つを含み、
式中
ｘ１は、Ｒ、Ｑ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｙ又はＷを表し；
ｘ２は、Ｖ、Ｍ、Ｉ又はＬを表し；
ｘ３は、Ｗ、Ｑ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｄ又はＥを表し；
ｘ４は、Ｗ、Ｒ、Ｆ、Ｙ、Ｈ又はＫを表し；
ｘ５は、Ｔ、Ｉ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ又はＭを表し；
ｘ６は、Ｐ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｖ又はＭを表す、
単離ポリペプチド。
【請求項１０】
前記アミノ酸が、逆の順序である、請求項１から９までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【請求項１１】
１個以上のアミノ酸が、対応するＤアミノ酸により置換されている、請求項１から１０までのいずれか一項に記載のポリペプチド配列。
【請求項１２】
請求項１から１１までのいずれか一項に記載の単離ポリペプチドを含む医薬組成物。
【国際調査報告】
2008517998.tif 000039
2008517998.tif 000040
2008517998.tif 000041
2008517998.tif 000042