(57)【要約】  成長ホルモンをＰＥＧ化するための方法であって、第一の官能基をさらに含むアミン含有求核剤と成長ホルモンを、ＴＧａｓｅの存在下で反応させて、アミノ転移成長ホルモンを形成し、引き続いて、前記アミノ転移成長ホルモンを第二の官能基で官能化されたＰＥＧと反応させる方法であり、前記第一及び第二の官能基は反応して共有結合を形成するように選択される方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのグルタミン残基を含んでなるポリペプチドにＰＥＧを共有結合的に付加させる方法であって、一又は複数の工程において、式［Ｉ］
2008543297.tif 000141
〔上式中、ＰＰは、ポリペプチドに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表す〕
により表されるグルタミン残基含有ポリペプチドを、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000142
〔上式中、Ｄは、−Ｏ−もしくは一重結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒド、ケトン、あるいは、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基を表す〕
の窒素含有求核剤と、トランスグルタミナーゼの存在下で反応させ、式［ＩＩＩ］
2008543297.tif 000143
のアミノ転移ポリペプチドを形成する方法であって、
任意によって、Ｘが潜在的な基であれば、前記潜在的な基を−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換することを含み、
前記アミノ転移ポリペプチドは、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000144
〔上式中、
Ｘが、アルデヒド、ケトン、又は、さらなる反応でアルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基であれば、Ｙは−Ｏ−ＮＨ２を表すか；あるいは、
Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、又は、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２に変換され得る潜在的な基であれば、Ｙはアルデヒドもしくはケトンを表し；
かつ、Ｚは、
2008543297.tif 000145
2008543297.tif 000146
2008543297.tif 000147
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000148
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである）
の中から選択される部分を表す〕
の第二の化合物とさらに反応し、式［Ｖ］
2008543297.tif 000149
〔上式中、Ａはオキシム結合を表す〕
のＰＥＧ化ポリペプチド；あるいは、その任意の製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を形成する方法。
【請求項２】
Ｄが−Ｏ−を表す請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｄが一重結合を表す請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒが、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す請求項１ないし３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
ＲがＣ１−６アルキレンを表す請求項１ないし３の何れかに記載の方法。
【請求項６】
ＲがＣ１−３アルキレンを表す請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｒがメチレンもしくはプロピレンを表す請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｚが、
2008543297.tif 000150
2008543297.tif 000151
2008543297.tif 000152
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000153
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである〕
の中から選択される部分を表す請求項１ないし７の何れかに記載の方法。
【請求項９】
Ｙが−Ｏ−ＮＨ２を表し、Ｘが、アルデヒド、あるいは、さらに反応してアルデヒドを形成し得る潜在的な基を表す請求項１ないし８の何れかに記載の方法。
【請求項１０】
Ｙが−Ｏ−ＮＨ２を表し、Ｘが、ケトン、あるいは、さらに反応してケトンを形成し得る潜在的な基を表す請求項１ないし８の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
式［ＩＶ］
2008543297.tif 000154
の化合物が、
2008543297.tif 000155
2008543297.tif 000156
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す請求項９又は請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ｙがアルデヒドを表し、Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、あるいは、さらに反応して−Ｏ−ＮＨ２を形成し得る潜在的な基を表す請求項１ないし８の何れかに記載の方法。
【請求項１３】
式［ＩＶ］
2008543297.tif 000157
の化合物が、
2008543297.tif 000158
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｙがケトンを表し、Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、あるいは、さらに反応して−Ｏ−ＮＨ２を形成し得る潜在的な基を表す請求項１ないし８の何れかに記載の方法。
【請求項１５】
式［ＩＶ］
2008543297.tif 000159
の化合物が、
2008543297.tif 000160
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
式［ＩＩ］
2008543297.tif 000161
の化合物が、１，３−ジアミノ−２−プロパノールを表し、Ｙが−Ｏ−ＮＨ２を表す請求項１ないし８の何れかに記載の方法。
【請求項１７】
式［ＩＩ］
2008543297.tif 000162
の化合物が、１，３−ジアミノオキシプロパンを表し、Ｙがアルデヒドを表す請求項１ないし８の何れかに記載の方法。
【請求項１８】
成長ホルモンの薬理学的性質を改変するための方法であって、請求項１ないし１７の何れかに記載の方法により、前記成長ホルモンにＰＥＧを共有結合的に付加させることを含む方法。
【請求項１９】
ポリペプチドがグルタミン残基含有成長ホルモンであり、ＰＰが成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す請求項１ないし１８の何れかに記載の方法
【請求項２０】
前記グルタミン残基含有成長ホルモンがヒト成長ホルモンを表す請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記グルタミン残基含有成長ホルモンが
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨ、
ｂ）２０ｋＤａ  ｈＧＨ、
ｃ）配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されているｈＧＨ、
ｄ）配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されているｈＧＨ、
あるいは、
ｅ）配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基がそれぞれ削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されているｈＧＨであって、成長ホルモンの別の位置にはグルタミン残基が存在するｈＧＨ
を表す請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記成長ホルモンがｈＧＨを表す請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
式［Ｖ］
2008543297.tif 000163
〔上式中、ＰＰは、ポリペプチドに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000164
2008543297.tif 000165
2008543297.tif 000166
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物であって；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000167
ならば、ｍＰＥＧは１０ｋＤａ  ｍＰＥＧである化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物。
【請求項２４】
Ｄが−Ｏ−を表す請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｄが一重結合を表す請求項２３に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒが、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す請求項２３ないし２５の何れかに記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒが、Ｃ１−６アルキレンを表す請求項２３ないし２５の何れかに記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒが、Ｃ１−３アルキレンを表す請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒが、メチレンもしくはプロピレンを表す請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｚが、
2008543297.tif 000168
2008543297.tif 000169
2008543297.tif 000170
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000171
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである〕
の中から選択される部分を表す請求項２３ないし２９の何れかに記載の化合物。
【請求項３１】
ポリペプチドがグルタミン残基含有成長ホルモンであって、ＰＰは成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す請求項２３ないし３０の何れかに記載の化合物。
【請求項３２】
ＧＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨ中に存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
ＧＨが、２０ｋＤａ  ｈＧＨ中に存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す請求項３１に記載の化合物。
【請求項３４】
ＧＨが
ａ）配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基；もしくは
ｂ）配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基
の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置とは異なり、配列番号１の位置１４１に対応する位置とも異なる位置に存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が、それぞれ、削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表す請求項３１に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロプ−１−イルオキシ）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−分ｏブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イル）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イル）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε１４１／４０−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε４０−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
2008543297.tif 000172
2008543297.tif 000173
2008543297.tif 000174
2008543297.tif 000175
2008543297.tif 000176
2008543297.tif 000177
2008543297.tif 000178
から選択される請求項２３に記載の化合物。
【請求項３６】
式［ＶＩ］
2008543297.tif 000179
〔上式中、ＰＰは、前記ポリペプチドに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000180
2008543297.tif 000181
2008543297.tif 000182
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物であって；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000183
ならば、ｍＰＥＧは１０ｋＤａ  ｍＰＥＧである化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物。
【請求項３７】
Ｄが−Ｏ−を表す請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｄが一重結合を表す請求項３６に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｒが、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す請求項３６ないし３８の何れかに記載の化合物。
【請求項４０】
ＲがＣ１−６アルキレンを表す請求項３６ないし３８の何れかに記載の化合物。
【請求項４１】
ＲがＣ１−３アルキレンを表す請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒがメチレンもしくはプロピレンを表す請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｚが、
2008543297.tif 000184
2008543297.tif 000185
2008543297.tif 000186
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000187
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである〕
の中から選択される部分を表す請求項３６ないし４２の何れかに記載の化合物。
【請求項４４】
ポリペプチドがグルタミン残基含有成長ホルモンであって、ＰＰは成長ホルモンに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことで得られる成長ホルモン基を表す請求項３６ないし４３の何れかに記載の化合物。
【請求項４５】
ＧＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す請求項４４に記載の化合物。
【請求項４６】
ＧＨが、２０ｋＤａ  ｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す請求項４４に記載の化合物。
【請求項４７】
ＧＨが、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、及び、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置と異なる位置に存在するもう一つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、により得られる基であって、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、及び、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置と異なる位置に存在するもう一つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、により得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置と異なる位置でｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置に存在するグルタミン残基が、それぞれ、削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表す請求項４４に記載の化合物。
【請求項４８】
ＰＥＧ及び特にｍＰＥＧを含んでなる部分と共有結合的に付加されたヒト成長ホルモンであって、前記ＰＥＧを含む部分が、成長ホルモンのグルタミン４０の側鎖、グルタミン１４１の側鎖、もしくは、グルタミン４０及びグルタミン１４１の側鎖に付加されたヒト成長ホルモンであり、ただし、この時、それは、
Ｎε１４１−［２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルブタノイル）−アミノ−ブチルオキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ、
Ｎε１４１−［２−（１−（ヘキサデカノイル）ピペリジン−４−イル）エチルオキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（２，６−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシカルボニルアミノ）ヘキサノイルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、もしくは
Ｎε１４１（２−（４−（３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロパノイルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ
ではないヒト成長ホルモン。
【請求項４９】
請求項１ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られた化合物。
【請求項５０】
請求項１ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られる化合物。
【請求項５１】
請求項１９ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られた化合物。
【請求項５２】
請求項１９ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られる化合物。
【請求項５３】
治療における使用のための、請求項３１ないし３５の何れか、請求項４４ないし５２の何れか、請求項５１もしくは請求項５２に記載の化合物。
【請求項５４】
請求項３１ないし３５の何れか、請求項４４ないし５２の何れか、請求項５１もしくは請求項５２に記載の化合物を含む製薬学的組成物。
【請求項５５】
成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）：ターナー症候群；プラダーウィリー症候群（ＰＷＳ）；ヌーナン症候群；ダウン症；慢性腎臓病、若年性関節リウマチ；嚢胞性繊維症、ＨＡＡＲＴ治療を受けている子供のＨＩＶ感染（ＨＩＶ／ＨＡＬＳ小児）；短い在胎期間（ＳＧＡ）出生した低身長児；ＳＧＡ以外の超低出生時体重（ＶＬＢＷ）出生児の小人症；骨格形成異常；軟骨低形成症；軟骨形成不全；特発性小人症（ＩＳＳ）；成人のＧＨＤ；例えば脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手、中足及び指等の、長骨又はその内部の骨折；頭蓋骨、手の基部及び足の基部等の、海綿様骨又はその内部の骨折；例えば手、膝もしくは肩の、腱もしくは靱帯の手術後の患者；仮骨延長術を受けたかもしくは受けている患者；臀部もしくは円板の置換後、半月板修復後、脊椎の固定術後、又は、例えば、膝、臀部、肩、肘、手首もしくは顎における補綴の固定術後、の患者；例えばネイル、スクリュー及びプレートのような骨接合術材料が固定されている患者；骨折の変形癒合もしくは偽関節を有する患者；例えば脛骨もしくは第一趾からの骨切り術後の患者；移植片植え込み後の患者；外傷もしくは関節炎に起因する膝の関節軟骨変性；ターナー症候群を患っている患者の骨粗鬆症；男性における骨粗鬆症；慢性透析の成人患者（ＡＰＣＤ）；ＡＰＣＤにおける栄養不良関連循環器疾患；ＡＰＣＤにおける悪液質の回復；ＡＰＣＤにおける癌；ＡＰＣＤにおける慢性的閉塞性肺疾患；ＡＰＣＤにおけるＨＩＶ；ＡＰＣＤの高齢者；ＡＰＣＤにおける慢性的な肝臓病、ＡＰＣＤにおける疲労症候群；クローン病；肝機能障害；ＨＩＶ感染した男性；短腸症候群；中心性肥満；ＨＩＶ関連リポジストロフィー症候群（ＨＡＬＳ）；男性不妊；待機的大手術、アルコール／薬物解毒又は神経外傷後の患者；加齢；虚弱な高齢者；骨関節炎；外傷性損傷を受けた軟骨；勃起不全；繊維筋痛；記憶障害；鬱；外傷性脳損傷；外傷性脊髄損傷；くも膜下出血；超低出生体重；メタボリックシンドローム；グルココルチコイドミオパシー；又は、小児のグルココルチコイド療法による小人症；筋組織、神経組織もしくは傷の治癒の促進；障害を受けた組織への血流の促進もしくは改善；あるいは、損傷を受けた組織中の感染率の低下、の治療のための方法であって、必要とする患者に、請求項３１ないし３５の何れか、請求項４４ないし５２の何れか、請求項５１もしくは請求項５２に記載の化合物、あるいは、請求項５４に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を投与することを含む方法。
【請求項５６】
成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）：ターナー症候群；プラダーウィリー症候群（ＰＷＳ）；ヌーナン症候群；ダウン症；慢性腎臓病、若年性関節リウマチ；嚢胞性繊維症、ＨＡＡＲＴ治療を受けている子供のＨＩＶ感染（ＨＩＶ／ＨＡＬＳ小児）；短い在胎期間（ＳＧＡ）出生した低身長児；ＳＧＡ以外の超低出生時体重（ＶＬＢＷ）出生児の小人症；骨格形成異常；軟骨低形成症；軟骨形成不全；特発性小人症（ＩＳＳ）；成人のＧＨＤ；例えば脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手、中足及び指等の、長骨又はその内部の骨折；頭蓋骨、手の基部及び足の基部等の、海綿様骨又はその内部の骨折；例えば手、膝もしくは肩の、腱もしくは靱帯の手術後の患者；仮骨延長術を受けたかもしくは受けている患者；臀部もしくは円板の置換後、半月板修復後、脊椎の固定術後、又は、例えば、膝、臀部、肩、肘、手首もしくは顎における補綴の固定術後、の患者；例えばネイル、スクリュー及びプレートのような骨接合術材料が固定されている患者；骨折の変形癒合もしくは偽関節を有する患者；例えば脛骨もしくは第一趾からの骨切り術後の患者；移植片植え込み後の患者；外傷もしくは関節炎に起因する膝の関節軟骨変性；ターナー症候群を患っている患者の骨粗鬆症；男性における骨粗鬆症；慢性透析の成人患者（ＡＰＣＤ）；ＡＰＣＤにおける栄養不良関連循環器疾患；ＡＰＣＤにおける悪液質の回復；ＡＰＣＤにおける癌；ＡＰＣＤにおける慢性的閉塞性肺疾患；ＡＰＣＤにおけるＨＩＶ；ＡＰＣＤの高齢者；ＡＰＣＤにおける慢性的な肝臓病、ＡＰＣＤにおける疲労症候群；クローン病；肝機能障害；ＨＩＶ感染した男性；短腸症候群；中心性肥満；ＨＩＶ関連リポジストロフィー症候群（ＨＡＬＳ）；男性不妊；待機的大手術、アルコール／薬物解毒又は神経外傷後の患者；加齢；虚弱な高齢者；骨関節炎；外傷性損傷を受けた軟骨；勃起不全；繊維筋痛；記憶障害；鬱；外傷性脳損傷；外傷性脊髄損傷；くも膜下出血；超低出生体重；メタボリックシンドローム；グルココルチコイドミオパシー；又は、小児のグルココルチコイド療法による小人症；筋組織、神経組織もしくは傷の治癒の促進；障害を受けた組織への血流の促進もしくは改善；あるいは、損傷を受けた組織中の感染率の低下、の治療に用いられる医薬の製造のための、請求項３１ないし３５の何れか、請求項４４ないし５２の何れか、請求項５１もしくは請求項５２に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
〔発明の分野〕
本発明は、ペプチドの特定の部位に、ＰＥＧを選択的に付加することのできる連結点を導入するためにトランスグルタミナーゼを用いる、成長ホルモンの翻訳後コンジュゲートのための新規の方法に関する。前記のコンジュゲート化成長ホルモンは、特性が改変され、そのために治療的適用の上で有用であり得る。
【０００２】
〔発明の背景〕
ペプチドの性質を十分に改変するペプチドに対するコンジュゲート基によって、ペプチドの性質及び特性を改変することはよく知られている。そのようなコンジュゲートには、一般的に、ペプチド中のある官能基をコンジュゲート基中の別の官能基と反応させることが必要である。典型的には、例えば、Ｎ末端アミノ基もしくはリジンのε−アミノ基のようなアミノ基が、適切なアシル化試薬と組み合わせて用いられている。コンジュゲート反応を制御できること、すなわち、コンジュゲート化合物がどこに付加するかを制御し、どれだけ多くのコンジュゲート基が付加するかを制御することは、しばしば望まれるか、要求すらもされる。これは、しばしば、特異性と呼ばれる。
一般的なペプチドのコンジュゲーションは、長い間にわたって知られていることであり、米国特許第４１７９３３７号は、２０年以上前に、ポリエチレンもしくはポリプロピレングリコールとコンジュゲートしたペプチド、特に成長ホルモンを開示した。
【０００３】
ペプチドとそのペプチドにコンジュゲートされる部分との間に結合を形成する上で効果的な異なる種類の化学が開示されている。欧州特許第６０５９６３号は、オキシム付加（リンカー）を形成する水溶性ポリマーの、タンパク質上のアルデヒド基との接合を開示している。天然アミノ酸はアルデヒドを含まないため、コンジュゲート方法の最初の工程として、ヒドロキシル基が酸化されなければならない。国際公開第９６／４１８１３号は、コンジュゲート反応に有用なアミノ−オキシのオキシム形成基で官能化されたポリマーを開示している。国際公開第９８／０５３６３は、ペプチド及び水溶性ポリマーを含む化合物であって、Ｎ末端アミノ酸残基において、オキシム結合を介してその二つが共有結合される化合物を開示している。
さらに、ペプチドのより特異的なコンジュゲートを可能にする酵素の使用も知られている。欧州特許第２４３９２９号は、ペプチドのＣ末端に官能基、例えば、その後、細胞障害性基、他のペプチド、もしくは、蛍光団のようにペプチドの分析を容易にするために用いられるレポーター基、を付加することができるような官能基、を有する化合物を組み込むためのカルボキダーゼのような、タンパク質分解酵素の使用を開示している。しかし、この技法は、Ｃ末端アミノ酸残基の連結点を制限するものであり、それは、Ｃ末端残基がそのペプチドの活性に必須である場合、厳しい制限となるものである。
【０００４】
トランスグルタミナーゼは、以前に、ペプチドの性質を改変するために用いられている。食品産業及び特に乳産業において、多くの技法が、例えばトランスグルタミナーゼを用いてペプチドを交差結合するために使用可能である。他の文献は、生理的に活性なペプチドの性質を改変するためのトランスグルタミナーゼの使用を開示している。欧州特許第７８５２７６号及びSato, Adv. Drug Delivery Rev. 54, 487−504 (2002)は、トランスグルタミナーゼの存在下での、少なくとも一つのＧｌｎとアミノ−官能性ＰＥＧもしくは類似リガンドとを含むペプチド間の直接的な反応を開示し、Wada, Biotech. Lett. 23, 1367−1372 (2001)は、トランスグルタミナーゼを用いた、β−ラクトグロブリンの脂肪酸との直接的なコンジュゲートを開示している。国際公開第２００５／０７０４６８号として公開されている国際特許出願は、コンジュゲート基を付加できるハンドルを組み込むためのトランスグルタミナーゼの使用を開示している。
本発明の目的は、特定の位置、高い特異性で、成長ホルモンをＰＥＧとコンジュゲートすることができる方法を提供することである。この方法で得られたコンジュゲートは、改良されたもしくは従来とは異なる特性、例えば、特に治療において適切な薬理学的特性、を有する。
【０００５】
〔発明の要旨〕
ある態様では、本発明は、成長ホルモンにＰＥＧ部分を共有結合的に付加させる方法であって、一又は複数の工程において、式［Ｉａ］
2008543297.tif 000002
〔上式中、ＧＨは、成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す〕
により表されるグルタミン残基含有成長ホルモンを、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000003
〔上式中、Ｄは、−Ｏ−もしくは一重結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒド、ケトン、あるいは、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基を表す〕
の窒素含有求核剤と、トランスグルタミナーゼの存在下で反応させ、式［ＩＩＩａ］
2008543297.tif 000004
のアミノ転移成長ホルモンを形成する方法であって、
任意によって、Ｘが潜在的な基であれば、前記潜在的な基を−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換することを含み、
前記アミノ転移成長ホルモンは、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000005
〔上式中、
Ｘが、アルデヒド、ケトン、又は、さらなる反応でアルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基であれば、Ｙは、−Ｏ−ＮＨ２を表すか；あるいは、
Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、又は、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２に変換され得る潜在的な基であれば、Ｙは、アルデヒドもしくはケトンを表し；
かつ、Ｚは、
2008543297.tif 000006
2008543297.tif 000007
2008543297.tif 000008
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000009
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである）
の中から選択される部分を表す〕
の第二の化合物とさらに反応し、式［Ｖａ］
2008543297.tif 000010
〔上式中、Ａはオキシム結合を表す〕
のＰＥＧ化成長ホルモンを形成する方法に関する。
【０００６】
ある実施態様では、本発明により、式［Ｖ］もしくは［Ｖａ］の化合物、及び、その任意の製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物が提供される。
ある実施態様では、本発明により、配列番号１中の位置４０及び／又は１４１に相当する位置がＰＥＧ化されたｈＧＨが提供される。
さらなる実施態様では、本発明により、式［Ｖ］もしくは［Ｖａ］の化合物を含む組成物、及び、特に式［Ｖａ］の化合物を含む製薬学的組成物が提供される。
ある実施態様では、本発明により、式［Ｖａ］の化合物の治療における使用が提供される。
ある実施態様では、本発明により、血漿成長ホルモンレベルの増加から利益を得る病気を治療する方法であって、治療的有効量の式［Ｖａ］の化合物を投与することを含む方法が提供される
ある実施態様では、本発明により、血漿成長ホルモンレベルの増加から利益を得る病気の治療のための医薬の製造における、式［Ｖａ］の化合物の使用が提供される。
ある実施態様では、本発明により、成長ホルモンの薬理学的性質を改良もしくは改変するための方法であって、本発明の方法によって前記成長ホルモンをＰＥＧ化することを含む方法が提供される。
【０００７】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、ｈＧＨのＮ末端及び特にＣ末端におけるＰＥＧ化が、その二つの末端の間の特定のアミノ酸のＰＥＧ化、すなわち鎖中ＰＥＧ化よりも、非常に大きな活性の減少を引き起こすという観察結果に基づくものである。特に、配列番号１の配列を有するｈＧＨの位置４０及び／又は１４１に相当する位置でのＰＥＧ化により、活性の大部分が保たれたＰＥＧ化ｈＧＨが生じる。位置４０及び１４１は双方ともグルタミンであり、その上、配列番号１の配列を有するｈＧＨは、さらに１１のグルタミン残基、すなわち、位置２２、２９、４６、４９、６８、６９、８４、９１、１２２、１３７及び１８１でのグルタミン残基を含んでなる。しかしながら、驚くべきことに、トランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）、及び、特にＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒａｅｎａｅもしくはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｙｄｉｃｕｓ由来のＴＧａｓｅの使用により、位置４０及び１４１での選択的なＰＥＧ化が可能であり、かつ、残りの１１グルタミン残基は、グルタミンがトランスグルタミナーゼの基質であるにも関わらず、そのままであることが明らかとなった。
本発明の方法は、一又は複数のグルタミン残基を含んでなる任意のポリペプチド、例えば治療上の関心の持たれるポリペプチド、の鎖中ＰＥＧ化にも有用であり得る。これは、一より多くのグルタミン残基を含んでなり、部位特異的ＰＥＧ化が望まれるポリペプチドのｐｅｇ化において、特に有用であるが、本方法は、グルタミン残基を含んでなる任意のポリペプチドをグルタミン転移することに用いられてもよい。
【０００８】
したがって、本発明によると、少なくとも一つのグルタミン残基を含んでなるポリペプチドにＰＥＧを共有結合的に付加させる方法であって、一又は複数の工程において、式［Ｉ］
2008543297.tif 000011
〔上式中、ＰＰは、該ポリペプチドに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表す〕
により表されるグルタミン残基含有ポリペプチドを、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000012
〔上式中、Ｄは、−Ｏ−もしくは一重結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒド、ケトン、あるいは、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基を表す〕
の窒素含有求核剤と、トランスグルタミナーゼの存在下で反応させ、式［ＩＩＩ］
2008543297.tif 000013
のアミノ転移ポリペプチドを形成する方法であって、
任意によって、Ｘが潜在的な基であれば、前記潜在的な基を−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換することを含み、
前記アミノ転移ポリペプチドは、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000014
〔上式中、
Ｘが、アルデヒド、ケトン、又は、さらなる反応でアルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基であれば、Ｙは、−Ｏ−ＮＨ２を表すか；あるいは、
Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、又は、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２に変換され得る潜在的な基であれば、Ｙは、アルデヒドもしくはケトンを表し；
かつ、Ｚは、
2008543297.tif 000015
2008543297.tif 000016
2008543297.tif 000017
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000018
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである）
の中から選択される部分を表す〕
の第二の化合物とさらに反応し、式［Ｖ］
2008543297.tif 000019
〔上式中、Ａはオキシム結合を表す〕
のＰＥＧ化ポリペプチド；あるいは、その任意の製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を形成する方法が提供される。
【０００９】
ここで用いられるポリペプチドという用語は、任意の適するポリペプチドを含み、他に述べられているか、あるいは文脈と矛盾しない限り、ペプチド及びタンパク質という用語の同意語として用いられ得る。ここでのポリペプチドという用語は、一般に、任意の適切なサイズの適切なポリペプチド及び組成物（タンパク質分子中のアミノ酸数及び関連する鎖の数に関して）について言及するものとして理解されるべきである。さらに、ここで述べる本発明の方法及び組成物という文脈におけるポリペプチドは、他に述べられているか、あるいは文脈と矛盾しない限り、非天然発生及び／又は非Ｌ−アミノ酸残基を含んでもよい。本ポリペプチドは、誘導体化されてもよい。誘導体化ポリペプチドは、一般に、一又は複数のアミノ酸残基が、化学的に装飾されるか（例えば、アルキル化、アシル化、エステル形成もしくはアミド形成によって）、又は、一又は複数の非アミノ酸有機及び／又は無機原子もしくは分子置換基ポリペプチドと結合したポリペプチドについて言及するものとして理解されるべきであり、同様に、あるいはその代わりに、他に述べられているか、あるいは文脈と矛盾しない限り、非必須、非天然発生及び／又は非Ｌ−アミノ酸残基を含み得る。そのようなアミノ酸残基の非限定的な例には、例えば、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、β−アラニン、β−アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−ピメリン酸、２，４−ジアミノ酪酸、デスモシン、２，２′−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、６−Ｎ−メチルリジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン及びスタチンハロゲン化アミノ酸が含まれる。治療的に有用で、そのポリペプチドを用いた治療が、例えば保持時間の増加から利益を得るポリペプチドは、本発明の方法での使用に特に適している。
【００１０】
ある実施態様では、そのポリペプチドは、グルタミン残基含有成長ホルモンであって、ＰＰは成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２  を除くことで得られる成長ホルモン基を表す。
したがって、本発明によると、成長ホルモンにＰＥＧを共有結合的に付加させる方法であって、一又は複数の工程において、式［Ｉａ］
2008543297.tif 000020
〔上式中、ＧＨは、成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す〕
により表されるグルタミン残基含有成長ホルモンを、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000021
〔上式中、Ｄは、−Ｏ−もしくは一重結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒド、ケトン、あるいは、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基を表す〕
の窒素含有求核剤と、トランスグルタミナーゼの存在下で反応させ、式［ＩＩＩａ］
2008543297.tif 000022
のアミノ転移成長ホルモンを形成する方法であって、
任意によって、Ｘが潜在的な基であれば、前記潜在的な基を−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換することを含み、
前記アミノ転移成長ホルモンは、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000023
〔上式中、
Ｙは、−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンを表し；
かつ、Ｚは、
2008543297.tif 000024
2008543297.tif 000025
2008543297.tif 000026
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000027
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである）
の中から選択される部分を表す〕
の第二の化合物とさらに反応し、式［Ｖａ］
2008543297.tif 000028
〔上式中、Ａはオキシム結合を表す〕
のＰＥＧ化成長ホルモン；あるいは、その任意の製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を形成する方法が提供される。
【００１１】
本文脈において、「成長ホルモン（ＧＨ）」は、ここでのアッセイＩにより測定されるような成長ホルモン活性を示すタンパク質を示すことを意図するものである。前記アッセイにおいて、ｈＧＨの活性の２０％より高い活性、例えば４０％より高い、例えば６０％より高い、例えば８０％より高い活性、を示すタンパク質は、成長ホルモンとして定義される。
本文脈において、「アミノ転移」という用語及び関連する用語は、グルタミンの側鎖の窒素が別の化合物の窒素、特に別の窒素含有求核剤由来の窒素、と交換される反応を示すことを意図するものである。
【００１２】
「基」もしくは「ビラジカル（基）」は、それぞれ一又は二の不対電子を有する分子断片を示すことを意図するものである。そのような断片は、形式上、均一な結合開裂、すなわち、元の結合を形成する一又は二の電子を含む二つの断片がそれぞれ生じる結合開裂によって、一（例えば、水素）又は二の原子又は原子団（例えば、ヒドロキシル団）を除くことにより生じ得る。ここで用いられるように、「ｈＧＨ（１４１）」は、ｈＧＨ中のグルタミン（１４１）からＣＯＮＨ２基を形式上除いて形成される基を意味し、「ｈＧＨ（４０）」は、ｈＧＨ中のグルタミン（４０）からＣＯＮＨ２基を形式上除いて形成される基を意味し、そして、「ｈＧＨ（４０，１４１）」は、ｈＧＨ中のグルタミン（４０）及びグルタミン（１４１）からＣＯＮＨ２基を形式上除いて形成される基を意味する。「ｈＧＨ（４０／１４１）」は、ｈＧＨ中のグルタミン（４０）及び／又はグルタミン（１４１）からＣＯＮＨ２基を形式上除いて形成される基を意味し、ｈＧＨ（４０）、ｈＧＨ（１４１）及びｈＧＨ（４０，１４１）のうちの二以上の混合物を含む。
【００１３】
「アルキレン」という用語は、飽和、直鎖状、分岐状及び／又は環状の炭化水素のビラジカル（基）を示すことを意図するものである。さらに炭素原子数で特定されない限り、その用語は、２から６（双方が含まれる）の炭素原子、例えば２から５（双方が含まれる）、例えば２から４（双方が含まれる）、例えば２から３（双方が含まれる）の炭素原子、を有する炭化水素を示すことを意図するものである。具体的な例には、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン及びヘキシレンが含まれる。
ヘテロアルキレンという用語は、一又は複数のメチレン基が−Ｏ−で置換された、上記のようなアルキレンを示すことを意図するものである。具体的な例には、ポリエチレングリコールのジラジカル（基）が含まれる。
【００１４】
「ＰＥＧ」又は「Ｐｅｇ」という単語は、以下の構造
2008543297.tif 000029
〔上式中、ｎは１より大きい整数であり、その分子量は約１００と約１００００００Ｄａの間である〕
の、様々な（多分散な）もしくは単一（単一分散な）の分子量分布からなるジラジカル（基）を意味する。
「ｍＰＥＧ」又は「ｍＰｅｇ」という単語は、以下の構造
2008543297.tif 000030
〔上式中、ｍは１より大きい整数である〕
の、様々なもしくは単一の分子量分布からなるジラジカル（基）を意味する。したがって、ｍが９０のｍＰＥＧは３９９１Ｄａ、すなわち約４ｋＤａの分子量を有する。同様に、２０ｋＤａの平均的な分子量のｍＰＥＧは４５４の平均ｍを有する。ｍＰＥＧを製造する方法によっては、これらの分子は、しばしば分子量の分布を有する。この分布は、多分散指数により記述される。
【００１５】
ここで用いられる「多分散指数」という用語は、高分子化学の分野で知られるように（例えば、“Polymer Synthesis and Characterization”, J.A. Nairn, University of Utah, 2003を参照のこと）、重量平均分子量と数平均分子量の比を意味する。多分散指数は、１以上の数であり、ゲル浸透クロマトグラフィーのデータから推定され得る。多分散指数が１の時、生成物は単一の分子量分布からなり、つまり、単一の分子量を有する化合物からなっている。多分散指数が１より大きい時、それはそのポリマー（高分子）の多分散性の指標、つまり、異なる分子量のポリマーの分布の広さである。
式、化合物名もしくは分子構造における、例えば「ｍＰＥＧ２００００」もしくは「ｍＰＥＧ（２０ｋ）」の使用は、ｍＰＥＧが様々な分子量分布からなり、約２０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧ残基を示す。
多分散指数は、典型的には、ＰＥＧもしくはｍＰＥＧの分子量と共に増加する。２０ｋＤａのＰＥＧ、及び、特に２０ｋＤａのｍＰＥＧについて述べると、それは、１．０６未満の多分散指数、例えば１．０５未満、例えば１．０４未満、例えば１．０３未満、例えば１．０２と１．０３の間の多分散指数、を有する化合物（もしくは実際は、化合物の混合物）を示すことを意図するものである。３０ｋＤａのＰＥＧ、及び、特に３０ｋＤａのｍＰＥＧについて述べると、それは、１．０６未満の多分散指数、例えば１．０５未満、例えば１．０４未満、例えば１．０３未満、例えば１．０２と１．０３の間の多分散指数、を有する化合物（もしくは実際は、化合物の混合物）を示すことを意図するものである。４０ｋＤａのＰＥＧ、及び、特に４０ｋＤａのｍＰＥＧについて述べると、それは、１．０６未満の多分散指数、例えば１．０５未満、例えば１．０４未満、例えば１．０３未満、例えば１．０２と１．０３の間の多分散指数、を有する化合物（もしくは実際は、化合物の混合物）を示すことを意図するものである。
【００１６】
「ＰＥＧ化ＧＨ」もしくは「ＰＥＧ化ｈＧＨ」は、ＰＥＧに共有結合的に付加されたＧＨもしくはｈＧＨを示す、すなわち、ＧＨもしくはｈＧＨとＰＥＧとを含んでなるコンジュゲートであって、前記ＧＨもしくはｈＧＨとＰＥＧとが互いに共有結合的に結合したコンジュゲートを示す、ことを意図するものである。前記付加はリンカーを介したものであってもよい。
名詞としての「コンジュゲート」という用語は、修飾されたペプチド、すなわち、前記ペプチドの性質を改変するためにそのペプチドと結合した部分を有するペプチド、を示すことを意図するものである。動詞としては、その用語は、前記ペプチドの性質を改変するためにペプチドにある部分を結合させる方法を示すことを意図するものである。
「オキシム結合」という用語は、構造−Ｏ−Ｎ＝の化学的基礎構造を示すことを意図するものである。ここで用いられる構造式において、式中Ａにより表されるオキシム結合は、何れかの方向に位置してもよく、すなわち、−Ｏ−Ｎ＝もしくは＝Ｎ−Ｏ−の何れかである。ある実施態様においては、与えられた構造式におけるオキシム結合の方向は、−Ｏ−Ｎ＝である。別の態様では、与えられた構造式におけるオキシム結合の方向は、＝Ｎ−Ｏ−である。
【００１７】
本文脈において、「製薬学的に許容される塩」という用語は、患者に対し有害ではない塩を示すことを意図するものである。そのような塩には、製薬学的に許容される酸付加塩、製薬学的に許容される金属塩、アンモニウム塩及びアルキル化アンモニウム塩が含まれる。酸付加塩には、無機酸塩並びに有機酸が含まれる。適切な無機酸塩の代表例には、塩酸塩、臭素酸塩、ヨウ素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩及びその他が含まれる。適切な有機酸塩の代表例には、蟻酸塩、酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、桂皮酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、シュウ酸塩、ピクリン酸塩、ピルビン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、パモン酸塩、ビスメチレンサリチル酸塩、エタンジスルホン酸塩、グルコン酸塩、シトラコン酸塩、アスパラギン酸塩、ステアリン酸塩、パルミチン酸塩、ＥＤＴＡ塩、グリコール酸塩、ｐ−アミノ安息香酸塩、グルタミン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びその他が含まれる。製薬学的に許容される無機もしくは有機酸付加塩のさらなる例には、出典明示によりここに援用されるJ. Pharm. Sci. 1977, 66, 2に記載された製薬学的に許容される塩が含まれる。金属塩の例には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩及びその他が含まれる。アンモニウム塩及びアルキル化アンモニウム塩には、アンモニウム塩、メチルアンモニウム塩、ジメチルアンモニウム塩、トリメチルアンモニウム塩、エチルアンモニウム塩、ヒドロキシエチルアンモニウム塩、ジエチルアンモニウム塩、ブチルアンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩及びその他が含まれる。
【００１８】
ここで用いられる「プロドラッグ」という用語は、治療的活性を有さないか、必ずしも有するとは限らないが、投与されると、体内で起こる反応により治療的に活性な化合物へと変換される化合物を示すことを意図するものである。典型的なそのような反応は、加水分解、例えばエステラーゼや酸化によるものである。プロドラッグの例には、生分解性アミド及び生分解性エステルが含まれ、ａ）そのようなプロドラッグにおける生分解性官能基が本発明に係る化合物に含まれている型の化合物、及び、ｂ）ある官能基において生物学的に酸化もしくは還元され、本発明に係る原薬を生じ得る化合物も含まれる。これらの官能基の例には、１，４−ジヒドロピリジン、Ｎ−アルキルカルボニル−１，４−ジヒドロピリジン、１，４−シクロヘキサジエン、ｔｅｒｔ−ブチル及びその他が含まれる。
ここで用いられるように、「生分解性アミド」という用語は、ａ）親基質の生物学的活性を阻害しないが、その基質に、例えば、作用の持続、作用の発現及びその他のようなｉｎ  ｖｉｖｏでの有利な性質を与える、あるいは、ｂ）生物学的に不活性であるが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて対象により容易に生物学的に活性な主成分に変換される、原薬（この場合には（ｉｎ  ｃａｓｕ）、本発明に係る化合物）のアミドである。その利点は、例えば、溶解性の増加、あるいは、生分解性アミドが経口的に消化管から吸収され、血漿中で本発明に係る化合物へと変換されることである。そのような数多くの例が当技術分野では知られており、一例として、低級アルキルアミド、α−アミノ酸アミド、アルコキシアシルアミド及びアルキルアミノアルキルカルボニルアミドが含まれる。
【００１９】
ここで用いられるように、「生分解性エステル」という用語は、ａ）親基質の生物学的活性を阻害しないが、その基質に、例えば、作用の持続、作用の発現及びその他のようなｉｎ  ｖｉｖｏでの有利な性質を与える、あるいは、ｂ）生物学的に不活性であるが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて対象により容易に生物学的に活性な主成分に変換される、原薬（この場合には（ｉｎ  ｃａｓｕ）、本発明に係る化合物）のエステルである。その利点は、例えば、溶解性の増加、あるいは、生分解性アミドが経口的に消化管から吸収され、血漿中で本発明に係る化合物へと変換されることである。そのような数多くの例が当技術分野では知られており、一例として、Ｃ１−Ｃ４アルキルエステル、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシアルキルエステル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシアシルオキシアルキルエステル、アルコキシアシルオキシエステル、アルキルアシルアミノアルキルエステル及びコリンエステル類が含まれる。
【００２０】
トランスグルタミナーゼ（Ｅ．Ｃ．２．３．２．１３）は、タンパク質−グルタミン−γ−グルタミルトランスフェラーゼとしても知られ、一般的な反応
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を触媒する。Ｑ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２（アミン受容体）は、グルタミン残基含有ペプチドを表してもよく、Ｑ’−ＮＨ２（アミン供与体）は、アミン含有求核剤を表してもよい。あるいは、Ｑ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２及びＱ’−ＮＨ２は、それぞれアミン受容体及びリジン含有ペプチドを表してもよい。しかしながら、本発明においては、Ｑ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２は、グルタミン残基含有成長ホルモンを表し、Ｑ’−ＮＨ２は、上記のようなアミン含有求核剤をあらわす。
【００２１】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける一般的なアミン供与体は、ペプチドに結合したリジンであり、その結果、上述の反応によると、ペプチドのクロスボンディング（交差結合）が生じる。凝固因子の第ＸＩＩＩ因子は、傷害時の血液凝固に影響するトランスグルタミナーゼである。相違するトランスグルタミナーゼは、例えば、基質となるタンパク質に対して、グルタミン残基（もしくはＧｌｎ）周辺にどのアミノ酸残基が要求されるかにおいて、互いに異なり、すなわち、異なるトランスグルタミナーゼは、どのアミノ酸残基がＧｌｎ残基に隣接するかに応じて、異なるＧｌｎ含有ペプチドを基質とするであろう。装飾される成長ホルモンが一つより多いＧｌｎ残基を含む場合に、この特徴を利用することができる。存在するＧｌｎ残基の幾つかにおいてのみ選択的に成長ホルモンをコンジュゲートすることが望まれる場合、関係するＧｌｎ残基のみを基質として受容するトランスグルタミナーゼを選択することで、選択性を達成することができる。あるいは、Ｇｌｎ付近の一又は複数のアミノ酸残基を改変することもでき、例えば、遺伝子工学によって、前記Ｇｌｎ残基に対するトランスグルタミナーゼの活性を調整してもよい。もちろん、グルタミン残基は、成長ホルモンから削除されるか、あるいは、他のアミノ酸に置換されて、より少ないか又は一つしかコンジュゲート用グルタミン残基を有しない成長ホルモンを得ることもできる。
【００２２】
ある化合物が原理上ある酵素の基質になるかどうかは、例えば、時間、温度等の反応条件に依存すると考えられる。十分な時間があれば、通常は基質とみなされない多くの化合物が、実際に基質となる。上述のように、あるトランスグルタミナーゼに対して、あるＧｌｎ残基は基質であり得るが、他はそうではない、という時、それは、所望される選択性が達成される程度において、「他はそうではない」ことを示すことを意図するものである。もし、コンジュゲートされないままでいることが望まれる一又は複数のＧｌｎ残基が、実際、延長された時間の間トランスグルタミナーゼと接触した時にトランスグルタミナーゼの基質となるとしても、適切な時間の後にトランスグルタミナーゼを除去するか不活性化することにより、選択性は達成され得る。
【００２３】
有用なトランスグルタミナーゼの例には、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｍ由来のもの（出典明示によりここに援用される米国特許第５１５６９５６号に全て開示されている）、及び、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ由来のもの（出典明示によりここに援用される米国特許第５２５２４６９号に開示されている）、及び、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌａｄａｋａｎｕｍ由来のもの（出典明示によりここに援用される特願２００３−１９９５６９）、のような微生物トランスグルタミナーゼが含まれる。以前の属であるＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍの一員は、現在はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属（Kaempfer, J. Gen. Microbiol. 137, 1831-1892 (1991)）に含まれることに注意すべきである。他の有用な微生物トランスグルタミナーゼは、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（出典明示によりここに援用される米国特許第５７３１１８３号に開示されている）から単離されたもの、及び、種々のＭｙｘｏｍｙｃｅｔｅｓから単離されたものである。有用な微生物トランスグルタミナーゼの他の例は、双方とも出典明示によりここに援用される国際公開第９６／０６９３１号（例えば、Ｂａｃｉｌｕｓ  ｌｙｄｉｃｕｓ由来のトランスグルタミナーゼ）及び国際公開第９６／２２３６６号に開示されるものである。有用な非微生物トランスグルタミナーゼには、テンジクネズミ（guinea-pig）肝臓トランスグルタミナーゼ、及び、カレイＰａｇｒｕｓ  ｍａｊｏｒ（出典明示によりここに援用される欧州特許第０５５５６４９号に開示される）及び日本のカキＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａ  ｇｉｇａｓ（出典明示によりここに援用される米国特許第５７３６３５６号に開示される）のような種々の海洋性資源由来のトランスグルタミナーゼが含まれる。
【００２４】
ある実施態様では、ＰＥＧ化されるグルタミン残基含有成長ホルモンは、ヒトソマトトロピンとしても知られるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）である。例えば、公的なデータベースＳｗｉｓｓＰｒｏｔ上で開示されているように、ｈＧＨには異なる変異体が存在している。それは、２６アミノ酸のシグナルペプチド及び１９１アミノ酸の成熟ペプチドを含んでなる。
ある実施態様では、ｈＧＨは、ここで配列番号１に示すアミノ酸配列を有する（２２Ｋ−ｈＧＨとしても知られる）。
【００２５】
ある実施態様では、ｈＧＨは、J.Clin.Endocrin.Metabol. 89, 1562-1571 (2004)及びEndocrine J., 47, S49-S52 (2000)に記載されるような２０ｋＤａ  ｈＧＨ（もしくは、２０Ｋ−ｈＧＨ）である。２０ｋＤａ  ｈＧＨは、２０ｋＤａの分子量を有するｈＧＨ（２０Ｋ−ｈＧＨ）であり、スプライシング変異体（エキソン３の選択的スプライシング）として下垂体前葉により分泌され、循環血漿ｈＧＨの約５−１０％を占めると報告されている（Baumann, Endocr. Rev. 12, 424-449 (1991)）。２０Ｋ−ｈＧＨは、２２Ｋ−ｈＧＨに比べて１５アミノ酸を欠失している（残基３２−４６）。２２Ｋ−ｈＧＨは、現在、ｈＧＨの代償及び薬物療法において、認可され、用いられているが、２０Ｋ−ｈＧＨはこれらの療法において用いられたことはない。２０Ｋ−ｈＧＨは、下垂体摘出ラット及びドワーフ（dwarf）ラットにおける成長促進について、完全なアゴニストであり、したがって、２２Ｋ−ｈＧＨと同様に強力であった（Wadaら, Mol. Cellu. Endocr. 113, 99-107 (1997), Ishikawa et al., Growth Horm. IGF Res. 10, 199-206 (2000)）。さらに、ヒト骨芽細胞における２０Ｋ−ｈＧＨの骨代謝作用もまた、２２Ｋ−ｈＧＨのそれと同等に強力であった。組換え２０Ｋ−ｈＧＨ、２２Ｋ−ｈＧＨ及び対照群を用いた３群２４時間注入研究（ラット）では、２０ｋ−ｈＧＨは、対照に比べ、正常血糖クランプにおけるグルコース注入率（ＧＩＲ）において顕著な作用を有さなかった。対照的に、２２Ｋ−ｈＧＨは、２０Ｋ−ｈＧＨ及び対照群の双方と比較して顕著にＧＩＲを低下させた（Takahashiら, Growth Horm. IGF Res. 11, 110-116 (2001)）。このように、ピークの無い（安定した）２０Ｋ−ｈＧＨ血漿プロフィールは、２２ｋ−ｈＧＨよりも、糖尿病誘発性が少なく、インスリンアンタゴニスト作用を減少させたもののようである。さらに、通常のラットにおいては、２０Ｋ−ｈＧＨは、２２Ｋ−ｈＧＨよりも、尿貯留（浮腫）を引き起こす可能性が低いことが示された（Satozawa etら, Growth Horm. IGF Res. 10, 187-192 (2000)）。長時間作用型の成長ホルモン産物は、注入を用いて得られるものと近い血漿プロフィールを有するであろう。したがって、２０Ｋ−ｈＧＨの誘導体を用いることは、２２ｋ−ｈＧＨ誘導体と類似の望まれる薬理性を提供するものかもしれないが、ただし、それはより改善された副作用プロフィールを有する。さらに、２０Ｋ−ｈＧＨは、２２Ｋ−ｈＧＨに比べて、ヒトにおける本来の血漿半減期が３０％長いため、長時間作用型の成長ホルモン産物を提供する可能性が高いかもしれない。クリアランスの減少は、レセプター媒介性クリアランスの低下によるものであると信じられている（Leungら, Am. J. Physiol Endocr. Metab. 283, 836-843 (2002)）。さらに、低濃度（０．１ｎＭ）では、２０Ｋ−ＧＨは、２２Ｋ−ｈＧＨより約３倍効率的にＩＧＦ−１の発現を誘導することが示された（Yoshizatoら, Endocr. J. 47, 37-40 (2000)）−それは、再度、長時間作用型の成長ホルモン産物にとってより良いプロフィールを指し示すものである。
【００２６】
ある実施態様では、ＰＥＧ化される成長ホルモンは、ｈＧＨの変異体であって、変異体は、ｈＧＨ配列中の一又は複数のアミノ酸残基を別の天然もしくは非天然アミノ酸と置換すること；及び／又は、ｈＧＨ配列に一又は複数の天然もしくは非天然アミノ酸を付加すること；及び／又は、ｈＧＨ配列から一又は複数のアミノ酸残基を削除すること、により得られる化合物であるとして理解され、任意によって、これらのステップのうちのどれかに引き続き、一又は複数のアミノ酸残基のさらなる誘導体化、例えば、ＰＥＧ化によりジ−もしくはマルチ（多）−ＰＥＧ化成長ホルモンを生じさせること、が行われてもよい。特に、そのような置換は、あるアミノ酸残基を同じグループの別のアミノ酸残基、すなわち、類似した性質を有する別のアミノ酸残基で置換するという意味において、保存的である。アミノ酸は、その性質に基づいて、便利に次のグループに分けられ得る：塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン及びリジン）、酸性アミノ酸（例えば、グルタミン酸及びアスパラギン酸）、極性アミノ酸（例えば、グルタミン、ヒスチジン、システイン及びアスパラギン）、疎水性アミノ酸（例えば、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン及びバリン）、芳香族性アミノ酸（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン）及び小アミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、セリン及びスレオニン）。
【００２７】
ある実施態様では、ｈＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除もしくは別のアミノ酸と置換されたｈＧＨである。ある実施態様では、ｈＧＨは、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除もしくは別のアミノ酸と置換されたｈＧＨである。ある実施態様では、ｈＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基、及び、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基、がそれぞれ削除もしくは別のアミノ酸と置換されたｈＧＨであって、グルタミン残基が成長ホルモンの別の位置には存在するｈＧＨである。さらなる実施態様では、前記の別のアミノ酸は、アスパラギンである。
ある実施態様では、ＰＥＧ化されるグルタミン残基含有成長ホルモンは、少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％、のｈＧＨとの同一性を有する。ある実施態様では、前記ｈＧＨとの同一性は、少なくとも２０％、例えば少なくとも４０％、例えば少なくとも６０％、例えば少なくとも８０％、の、ここでのアッセイＩで測定されるようなｈＧＨの成長ホルモン活性と連動する。
【００２８】
当技術分野で知られる「同一性」という用語は、配列を比較することにより決定されるような、二以上のタンパク質の配列間の関係性について言及するものである。当技術分野において、「同一性」はまた、二以上のアミノ酸残基の鎖間の一致（マッチ）数により決定されるような、タンパク質間の配列相関性の度合いも意味する。「同一性」とは、（もしあれば）特定の数学的モデルもしくはコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップ配列（整列）を用いて、二以上の配列のうちのより小さなものの間の一致（マッチ）パーセンテージを測定するものである。関係するタンパク質の同一性は、既知の方法により容易に計算可能である。そのような方法には、これに限られるものではないが、Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988；Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993；Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M. and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987；Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991；及びCarillo et al., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988)に記載されたものが含まれる。
【００２９】
同一性を決定する好ましい方法は、試験される配列間の最大一致（マッチ）を与えるように設計される。同一性を決定する方法は、公に利用可能なコンピュータープログラムに記述される。二配列間の同一性を決定する好ましいコンピュータープログラム法には、ＧＡＰ（Devereux et al., Nucl.Acid. Res., 12:387 (1984)；Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Altschul et al., J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990)）を含む、ＧＣＧプログラムパッケージが含まれる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）及び他の源（BLAST Manual, Altschulら NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894；Altschulら、上記を参照）から公に利用可能である。よく知られたＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一性を決定するのに用いられ得る。
【００３０】
例えば、パーセント配列同一性を決定する二つのタンパク質は、コンピューターアルゴリズムＧＡＰ（Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.）を用いて、それぞれのアミノ酸の最適なマッチングのために整列される（アルゴリズムによって決定される「一致したスパン（matched span）」）。ギャップオープニングペナルティー（gap opening penalty）（平均ダイアゴナル（average diagonal）の３倍として計算され；「平均ダイアゴナル（average diagonal）」は、用いられる比較行列（comparison matrix）のダイアゴナルの平均であり；「ダイアゴナル（diagonal）」は、特定の比較行列により、それぞれの完全なアミノ酸一致に割り当てられるスコアまたは数である）およびギャップエクステンションペナルティー（gap extension penalty）（これは、通常ギャップオープニングペナルティーの１／１０である）、並びに、例えばＰＡＭ２５０またはＢＬＯＳＵＭ６２のような比較行列、がアルゴリズムとともに用いられる。標準比較行列（ＰＡＭ２５０比較行列ついては、Dayhoffら, Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3 (1978)；ＢＬＯＳＵＭ６２比較行列については、Henikoffら, Proc.Natl.Acad.Sci USA, 89:10915-10919, 1992）もまたアルゴリズムにより用いられる。
タンパク質配列比較の好ましいパラメーターは、以下のものを含む：アルゴリズム：Needlemanら, J. Mol. Biol, 48:443-453 (1970)；比較行列（Comparison Matrix）：Henikoffら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:10915-10919 (1992)からのＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップペナルティー（Gap Penalty）：１２、ギャップレングスペナルティー（Gap Length Penalty）：４、スレショールドオブシミラリティー（Threshould of Similarity）：０。
ＧＡＰプログラムは、上記パラメーターを用いて有用である。前述のパラメーターは、ＧＡＰアルゴリズムを用いるタンパク質比較のデフォルトパラメーター（末端ギャップに対してペナルティー無しで）である。
【００３１】
上に論じたＰＥＧ化される成長ホルモンは、少なくとも一つのグルタミン残基を含んでなるものでなければならないと理解されるべきである。ここで用いられる「グルタミン残基」という用語には、アミノ転移に適するグルタミン残基アナログも含まれる。適するグルタミン残基アナログには、これに限定されるものではないが、部分的なフッ化、アルキル化もしくは重水素化のされたグルタミン残基アナログ、又は、グルタミン残基のホモログ、すなわち、グルタミンのＣ−Ｃ、Ｃ−ＨもしくはＣ−Ｎ結合への一、二もしくはそれ以上のメチレン基（−ＣＨ２−）の形式的挿入から生じる化合物、が含まれる。
成長ホルモンは、標準的なタンパク質合成方法によって得てもよく、あるいは、成長ホルモンは関心のある成長ホルモンをコードするＤＮＡを適切な宿主細胞にトランスフェクトすることにより得てもよい。これは、当業者の能力の範囲内である。本発明に係る方法の使用により得られるｐｅｇ化成長ホルモンも、望まれるならば、ＰＥＧ化以外の手段で誘導化されてもよい。そのような付加的な誘導体化は、本発明の方法の工程の使用の前、途中もしくは後に行うことができる。そのような付加的な誘導体化の時期の決定は、当業者の技術の範囲内である。成長ホルモンはまた、本発明に係る方法を用いてｐｅｇ化される場所に加えて、一又は複数のさらなる位置において、ｐｅｇ化されてもよい。
【００３２】
ある実施態様では、Ｄは、−Ｏ−を表す。別の実施態様では、Ｄは一重結合を表す。
リンカーＲにより、求核剤のアミンと、成長ホルモンに組み込まれる官能基もしくは潜在的な官能基との適切な間隔が与えられる。ある実施態様では、Ｒは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す。ある実施態様では、ＲはＣ１−６アルキレンを表す。ある実施態様では、ＲはＣ１−３アルキレンを表す。ある実施態様では、Ｒはメチレン、エチレンもしくはプロピレンを表す。ある実施態様では、Ｒはメチレンもしくはプロピレンを表す。
【００３３】
ある実施態様では、Ｚは、
2008543297.tif 000032
2008543297.tif 000033
2008543297.tif 000034
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す〕
を表す。
【００３４】
Ｘに含まれる官能基は、Ｙ−Ｚとの反応の前に活性化されるという意味において潜在的であり得ると理解されるべきである。一例として、Ｘは、適切な試薬との反応でアルデヒドもしくはケトンへと変換される部分を含んでなる。そのような部分の例には、
2008543297.tif 000035
〔上式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、アリールもしくはヘテロアリールを表す〕
が含まれる。具体的な例には、メチル、エチル及びプロピルが含まれる。前記部分は、任意によって例えば銅、銀もしくは水銀塩のような触媒の存在下で、例えば、過酸化物のような、適切な試薬を用いた酸化、あるいは、水性酸を用いた加水分解によって、アルデヒドもしくはケトンへと変換され得る。
【００３５】
本文脈では、「アリール」という用語は、同素環芳香環基、もしくは、少なくとも環の一つが芳香族である縮合同素環系基を示すことを意図するものである。典型的なアリール基には、フェニル、ビフェニリル、ナフチル、テトラリニル及びその他が含まれる。
ここで用いられる、単独もしくは組み合わせでの「ヘテロアリール」という用語は、例えば５から７の環原子を有する芳香環基あるいは例えば７から１８の環原子を有する縮合芳香環系基であって、少なくとも一つの環が芳香族であり、かつ、窒素、酸素もしくは硫黄ヘテロ原子から選択される一又は複数のヘテロ原子を環原子として含む基であり、Ｎ−オキシド及び硫黄−モノオキシド及び硫黄−ジオキシドが許容されるヘテロ芳香族性置換である基について言及するものである。例には、フラニル、チエニル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリミジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル及びインダゾリル及びその他が含まれる。
【００３６】
Ｘ及びＹはまた、互いに反応し合い、オキシムを形成することができるという意味において、相補的でなければならないと理解されるべきである。これは、Ｘがアルデヒドもしくはケトン（あるいは活性化されてそれらになり得るもの）であれば、Ｙはアミノキシでなくてはならないことを意味する。Ｘがアミノキシであれば、Ｙはアルデヒドもしくはケトンでなくてはならない。Ｙがアルデヒドもしくはケトンであれば、Ｘはアミノキシでなくてはならない。Ｙがアミノキシであれば、Ｘはアルデヒドもしくはケトン（あるいは活性化されてそれらになり得るもの）でなくてはならない。
式［ＩＩ］の化合物の具体的な例には、１，３−ジアミノオキシプロパン及び１，３−ジアミノ−２−プロパノールが含まれる。後者の化合物が用いられる場合、潜在的なアルデヒド基は、例えば、過酸化物により、酸化されてアルデヒドへと変換されなければならない。
【００３７】
ある実施態様では、Ｙは−Ｏ−ＮＨ２を表し、Ｘは、アルデヒド、あるいは、さらに反応してアルデヒドを形成し得る潜在的な基を表す。ある実施態様では、Ｙは−Ｏ−ＮＨ２を表し、Ｘは、ケトン、あるいは、さらに反応してケトンを形成し得る潜在的な基を表す。ある実施態様では、式［ＩＩ］の化合物
2008543297.tif 000036
は、１，３−ジアミノ−２−プロパノールを表し、Ｙは−Ｏ−ＮＨ２を表す。
【００３８】
さらなる実施態様では、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000037
の化合物は、
2008543297.tif 000038
2008543297.tif 000039
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す。
【００３９】
ある実施態様では、Ｙはアルデヒドを表し、Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、あるいは、さらに反応して−Ｏ−ＮＨ２を形成し得る潜在的な基を表す。さらなる実施態様では、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000040
の化合物は、１，３−ジアミノオキシプロパンを表し、Ｙはアルデヒドを表す。
【００４０】
さらなる実施態様では、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000041
の化合物は、
2008543297.tif 000042
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す。
【００４１】
ある実施態様では、Ｙはケトンを表し、Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、あるいは、さらに反応して−Ｏ−ＮＨ２を形成し得る潜在的な基を表す。さらなる実施態様では、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000043
の化合物は、１，３−ジアミノオキシプロパンを表し、Ｙはケトンを表す。
【００４２】
さらなる実施態様では、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000044
の化合物は、
2008543297.tif 000045
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す。
【００４３】
式［ＩＶ］の化合物は、例えば、ＳｈｅａｒｗａｔｅｒもしくはＮＯＦといった会社から、商業的に利用可能であるか、あるいは、商業的に利用可能な化合物から簡単な化学修飾で容易に得られ得る。
式Ｖの化合物は、親成長ホルモンとも呼ばれる対応するコンジュゲートされていない成長ホルモンに比べて、改善されたもしくは取って代わる薬理学的性質を有し得る。したがって、ある態様では、本発明は、成長ホルモンの薬理学的特性を改変するための方法であって、本発明の方法によって前記成長ホルモンにＰＥＧを付加することを含む方法に関する。そのような薬理学的性質の例には、有効ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期、免疫原性、腎臓ろ過、プロテアーゼ保護及びアルブミン結合性が含まれる。
【００４４】
「有効ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期」という用語は、通常の意味、すなわち、成長ホルモンもしくはコンジュゲートされた成長ホルモンの生物学的活性の５０％が体内／標的臓器になお存在する時間、あるいは、成長ホルモンもしくはコンジュゲートされた成長ホルモンの活性が初期値の５０％である時間、の意味で用いられる。有効ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を測定することの代わりとして、「ｉｎ  ｖｉｖｏ血漿半減期」、すなわち、成長ホルモンもしくはコンジュゲートされた成長ホルモンの５０％が、消えてなくなる前に血漿あるいは血流中を循環する時間、が測定されてもよい。血漿半減期の測定は、しばしば、有効半減期を測定することよりも簡単なことであり、血漿半減期の長さは、大抵、有効ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の長さの良い指標である。血漿半減期の代わりとなる用語には、血清半減期、循環半減期（circulating half-life）、循環半減期（circulatory half-life）、血清クリアランス、血漿クリアランス及びクリアランス半減期が含まれる。
【００４５】
有効ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期もしくは血漿半減期に関して用いられる「増加した」という用語は、成長ホルモンコンジュゲートの該当する半減期が、親成長ホルモンのそれに対して統計的に有意に増加していることを示すものとして用いられる。例えば、該当する半減期は、少なくとも約２５％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約１００％、１５０％、２００％、２５０％もしくは５００％、増加し得る。ある実施態様では、本発明の化合物は、親ＧＨの半減期に対して、少なくとも約５時間、より好ましくは少なくとも約２４時間、より好ましくは少なくとも約７２時間、最も好ましくは少なくとも約７日間の半減期の増加を示す。
【００４６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ血漿半減期の測定は、文献に記載されるような数多くの方法で実行することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ血漿半減期の増加は、クリアランス（ＣＬ）の減少もしくは平均滞留時間（ＭＲＴ）の増加として定量化されてもよい。ＣＬが適切なアッセイで測定されて、親成長ホルモンのＣＬの７０％未満、例えば５０％未満、例えば２０％未満、例えば１０％未満、まで減少している本発明のコンジュゲート成長ホルモンは、増加したｉｎ  ｖｉｖｏ血漿半減期を有するといわれる。ＭＲＴが、適切なアッセイで測定されて、親成長ホルモンのＭＲＴの１３０％より大きい、例えば１５０％より大きい、例えば２００％より大きい、例えば５００％より大きい、状態まで増加している本発明のコンジュゲート成長ホルモンは、増加したｉｎ  ｖｉｖｏ血漿半減期を有するといわれる。クリアランス及び平均滞留時間は適切な試験動物を用いた標準的な薬力学的研究で評価することができる。あるタンパク質について適切な試験動物を選ぶことは、当業者の能力の範囲内である。もちろん、ヒトでの試験は、最終的な試験を表す。適切な動物には、通常の、Sprague-Dawley雄ラット、マウス及びカニクイザルが含まれる。典型的には、マウス及びラットは単回の皮下ボーラス投与で注入されるが、サルは単回の皮下ボーラス投与もしくは単回の静脈内（ｉｖ）投与で注入されてもよい。注入量は、試験動物に依存する。続いて、血液試料が、ＣＬ及びＭＲＴの評価に適切な１から５日間の期間にわたり採取される。血液試料は、ＥＬＩＳＡ技法によって簡便に分析される。
【００４７】
化合物の「免疫原性」という用語は、ヒトに投与された時の、体液性、細胞性もしくはその双方の、有害な免疫反応を引き起こす化合物の能力を称するものである。任意のヒトの亜母集団において、投与された特定のタンパク質へ感受性を示す個体は存在し得る。免疫源性は、感受性個体における成長ホルモン抗体及び／又は成長ホルモン反応性Ｔ細胞の存在を、当分野で既知の通常の方法を用いて定量化することにより、測定され得る。ある実施態様では、本発明のコンジュゲートＧＨは、親ＧＨの感受性個体に対する免疫原性と比べて、その個体における免疫原性の少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約２５％、より好ましくは少なくとも約４０％、最も好ましくは少なくとも約５０％の減少を示す。別の態様では、免疫原性とは、例えば臨床治験における患者集団中の典型的な反応のような、類似した対象集団中での典型的な反応について言及するものであってもよい。
【００４８】
ここで用いられる「プロテアーゼ保護」もしくは「プロテアーゼ保護化」という単語は、本発明のコンジュゲート成長ホルモンが、親成長ホルモンよりも、血漿ペプチダーゼもしくはプロテアーゼに対して耐性が高いことを示すことを意図するものである。血漿中に存在するプロテアーゼ及びペプチダーゼ酵素は、循環しているタンパク質、例えば成長ホルモンのような循環しているペプチドホルモン、の分解に関与することが知られている。
あるタンパク質の、例えばジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）よる分解に対する耐性は、以下の分解アッセイにより測定される：一定分量のタンパク質（５ｎｍｏｌ）を、５ｍＵの酵素活性に相当する１μＬの精製ペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に、１００μＬの０．１ＭトリエチルアミンＨＣｌ、ｐＨ７．４のバッファー中で１０−１８０分間、３７℃でインキュベートする。５μＬの１０％トリフルオロ酢酸の添加により酵素反応を終結させ、タンパク質分解生成物をＨＰＬＣ分析を用いて分離し、定量化する。この分析を行う方法の一つは：混合物をＶｙｄａｃ  Ｃ１８ワイドポアー（３０ｎｍ孔、５μｍ粒子）２５０ｘ４．６ｍｍカラムにアプライし、Siegel etら, Regul. Pept. 79, 93-102 (1999)及びMentleinら Eur. J. Biochem. 214, 829-35 (1993)に従い、０．１％トリフルオロ酢酸中のアセトニトリルの線形の段階的な勾配（０％アセトニトリルで３分間、０−２４％アセトニトリルで１７分間、２４−４８％アセトニトリルで１分間）を用い、１ｍｌ／分の流速で溶出させる。タンパク質とそれらの分解生成物は、２２０ｎｍ（ペプチド結合）及び２８０ｎｍ（芳香族アミノ酸）におけるそれらの吸光でモニターすることができ、標準状態のそれらに関するピーク面積の積分により定量化される。ジペプチジルペプチダーゼＩＶによるタンパク質の加水分解速度は、１０％未満のペプチドが加水分解される培養時間において測定される。他の血漿プロテアーゼもしくはペプチダーゼに対する耐性は、類似の方法で測定され得る。ある態様では、成長ホルモンコンジュゲートの加水分解速度は、親成長ホルモンの７０％未満であり、例えば４０％未満、例えば１０％未満、である。
【００４９】
哺乳類種の循環血中に最も豊富なタンパク質は血清アルブミンであり、それは通常１００ｍＬの全血当たり約３から４．５グラムの濃度で存在する。血清アルブミンは、循環系において幾つかの重要な機能を有する約７００００ダルトンの血液タンパク質である。それは、血中にある様々な有機分子の輸送体として、例えば脂肪酸及びビリルビンのような様々な代謝物の主要な輸送体として、及び、その豊富な量により、循環血の浸透圧の制御体として、機能する。血清アルブミンは、一週間より長い半減期を有し、あるタンパク質の血漿半減期を増加させるある試みは、血清アルブミンに結合する基をそのタンパク質にコンジュゲートすることである。アルブミン結合性は、出典明示によりここに援用されるJ. Med. Chem, 43, 1986-1992 ( 2000)に記載されるように測定することができる。
【００５０】
ある実施態様では、本発明は式［Ｖ］
2008543297.tif 000046
〔上式中、ＰＰは、ポリペプチドに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000047
2008543297.tif 000048
2008543297.tif 000049
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物に関する。
ある実施態様では、ポリペプチドは、グルタミン残基含有成長ホルモンであって、ＰＰは成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２  を除くことで得られる成長ホルモン基を表す。
【００５１】
ある実施態様では、本発明は、ＰＥＧ及び特にｍＰＥＧを含んでなる一又は複数の部分と共有結合的に付加された成長ホルモン、例えばｈＧＨ、であって、前記ＰＥＧを含む部分が成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖に付加された成長ホルモンに関する。ある実施態様では、本発明は、ＰＥＧ及び特にｍＰＥＧを含んでなる一又は複数の部分と共有結合的に付加された成長ホルモン、例えばｈＧＨであって、前記ＰＥＧを含んでなる部分が配列番号１の位置４０、位置１４１、もしくは、位置４０及び１４１に対応する位置において、グルタミン残基の側鎖に付加されており、ただし、この時、それは、
Ｎε１４１−［２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルブタノイル）−アミノ−ブチルオキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ、
Ｎε１４１−［２−（１−（ヘキサデカノイル）ピペリジン−４−イル）エチルオキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（２，６−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシカルボニルアミノ）ヘキサノイルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎε１４１（２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、もしくは、
Ｎε１４１（２−（４−（３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロパノイルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ
ではない、成長ホルモンに関する。
【００５２】
ある実施態様では、本発明は、式［Ｖａ］
2008543297.tif 000050
〔上式中、ＧＨは、成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000051
2008543297.tif 000052
2008543297.tif 000053
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物に関し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000054
であれば、ｍＰＥＧは１０ｋＤａ  ｍＰＥＧである。
【００５３】
ある実施態様では、Ｄは−Ｏ−を表す。
ある実施態様では、Ｄは一重結合を表す。
ある実施態様では、Ｒは、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す。
ある実施態様では、ＲはＣ１−６アルキレンを表す。さらなる実施態様では、ＲはＣ１−３アルキレンを表す。さらなる実施態様では、Ｒは、メチレン、エチレンもしくはプロピレンを表す。さらなる実施態様では、Ｒは、メチレンもしくはプロピレンを表す。
【００５４】
ある実施態様では、Ｚは、
2008543297.tif 000055
2008543297.tif 000056
2008543297.tif 000057
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
を表す。
【００５５】
ある実施態様では、ＧＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す。
ある実施態様では、ＧＨは、２０ｋＤａ  ｈＧＨに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す。
ある実施態様では、ＧＨは、ｈＧＨのグルタミン４０の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す。特に、前記ｈＧＨは、さらに、グルタミン１４１を削除すること、もしくは、グルタミン１４１を別のアミノ酸、特にアスパラギンで置換すること、によりさらに修飾されてもよい。
ある実施態様では、ＧＨは、ｈＧＨのグルタミン１４１の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す。特に、前記ｈＧＨは、さらに、グルタミン４０を削除すること、もしくは、グルタミン４０を別のアミノ酸、特にアスパラギンで置換すること、により修飾されてもよい。
ある実施態様では、ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置とは異なり、配列番号１の位置１４１に対応する位置とも異なる位置に存在するグルタミン残基を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基がそれぞれ、削除されているか、あるいは、別のアミノ酸、特にアスパラギンで置換されている基を表す。
【００５６】
式［Ｖａ］の化合物の具体的な例には、
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロプ−１−イルオキシ）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イル）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イル）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε１４１／４０−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
2008543297.tif 000058
2008543297.tif 000059
2008543297.tif 000060
2008543297.tif 000061
2008543297.tif 000062
2008543297.tif 000063
2008543297.tif 000064
が含まれる。
【００５７】
上記図表示のうちの幾つかは、同様にもしくはその代わりに、
Ｎδ１４１−（２−（Ｏ−（２−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−（Ｏ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）プロピル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ４０−（２−（Ｏ−（２−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ４０−（２−（Ｏ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）プロピル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−Ｏ−（２−オキソ−２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）エチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、
Ｎδ４０−（２−Ｏ−（２−オキソ−２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）エチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−Ｏ−（４−（５−（３−（オメガ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルオキシ）ポリオキシエチレニルオキシ）プロピルアミノ）−１，５−ジオキソペンチルアミノ）ブチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−（Ｏ−（２−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ
Ｎδ１４１−（２−（Ｏ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）プロピル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ
Ｎδ４０−（２−（Ｏ−（２−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ
Ｎδ４０−（２−（Ｏ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）プロピル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ
Ｎδ１４１−（２−Ｏ−（２−オキソ−２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）エチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ
Ｎδ４０−（２−Ｏ−（２−オキソ−２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）エチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−Ｏ−（４−（５−（３−（オメガ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルオキシ）ポリオキシエチレニルオキシ）プロピルアミノ）−１，５−ジオキソペンチルアミノ）ブチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−（Ｏ−（２−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−（Ｏ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）プロピル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ４０−（２−（Ｏ−（２−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ４０−（２−（Ｏ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）プロピル）オキシミノ）エチル）ｈＧＨ、
Ｎδ１４１−（２−Ｏ−（２−オキソ−２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）エチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、
Ｎδ４０−（２−Ｏ−（２−オキソ−２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）エチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ、及び
Ｎδ１４１−（２−Ｏ−（４−（５−（３−（オメガ−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルオキシ）ポリオキシエチレニルオキシ）プロピルアミノ）−１，５−ジオキソペンチルアミノ）ブチル）オキシミノエチル）ｈＧＨ
のように表されてもよい。
【００５８】
ある実施態様では、本発明は、式［ＶＩ］
2008543297.tif 000065
〔上式中、ＰＰは、前記ポリペプチドに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000066
2008543297.tif 000067
2008543297.tif 000068
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物に関する。
ある態様では、ポリペプチドはグルタミン残基含有成長ホルモンであり、ＰＰは、成長ホルモンに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す。
【００５９】
ある実施態様では、本発明は、式［ＶＩａ］
2008543297.tif 000069
〔上式中、ＧＨは、前記成長ホルモンに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000070
2008543297.tif 000071
2008543297.tif 000072
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物に関する。
【００６０】
ある実施態様では、Ｄは−Ｏ−を表す。
ある実施態様では、Ｄは一重結合を表す。
ある実施態様では、Ｒは、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す。
ある実施態様では、ＲはＣ１−６アルキレンを表す。さらなる実施態様では、ＲはＣ１−３アルキレンを表す。さらなる実施態様では、Ｒは、メチレン、エチレンもしくはプロピレンを表す。さらなる実施態様では、Ｒは、メチレンもしくはプロピレンを表す。
【００６１】
ある実施態様では、Ｚは、
2008543297.tif 000073
2008543297.tif 000074
2008543297.tif 000075
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
を表す。
【００６２】
ある実施態様では、式［ＶＩａ］中のＧＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す。
ある実施態様では、式［ＶＩａ］中のＧＨは、２０ｋＤａ  ｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す。
ある実施態様では、式［ＶＩａ］中のＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表すか；
あるいは、
配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、及び、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置とは異なる位置に存在するもう一つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されるか、もしくは、別のアミノ酸で置換されている基を表すか；
あるいは、
配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、及び、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置とは異なる位置に存在するもう一つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されるか、もしくは、別のアミノ酸で置換されている基を表すか；
あるいは、
配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置とは異なる位置でｈＧＨに存在する二つのグルタミンの側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置に存在する任意のグルタミン残基がそれぞれ、削除されているか、あるいは、別のアミノ酸で置換されている基を表す。
【００６３】
追加的なもしくは代替的な態様では、本発明により、ここに記載される方法及び化合物であって、「ｍＰＥＧ」のそれぞれの例が式
2008543297.tif 000076
〔上式中、ｍは１より大きい整数である。それぞれのＲ１は、これに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル及びブチルを含む分岐状もしくは（Ｃ３−１０については）非分岐状の任意の適するＣ１−１０アルキル基であり得る〕
のアルコキシ−ＰＥＧもしくは「ａＰＥＧ」化合物で置き換えられた方法及び化合物が提供される。
本発明によると、本発明に係る方法の使用により得られた化合物もまた提供される。
本発明によると、本発明に係る方法の使用により得られる化合物もまた提供される。
【００６４】
本発明の化合物は成長ホルモン活性を示し、循環成長ホルモンの量の増加から利益を得る病気や状態の治療に用いられ得る。特に、本発明によると、成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）：ターナー症候群；プラダーウィリー症候群（ＰＷＳ）；ヌーナン症候群；ダウン症；慢性腎臓病、若年性関節リウマチ；嚢胞性繊維症、ＨＡＡＲＴ治療を受けている子供のＨＩＶ感染（ＨＩＶ／ＨＡＬＳ小児）；短い在胎期間（ＳＧＡ）出生した低身長児；ＳＧＡ以外の超低出生時体重（ＶＬＢＷ）出生児の小人症；骨格形成異常；軟骨低形成症；軟骨形成不全；特発性小人症（ＩＳＳ）；成人のＧＨＤ；例えば脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手、中足及び指等の、長骨又はその内部の骨折；頭蓋骨、手の基部及び足の基部等の、海綿様骨又はその内部の骨折；例えば手、膝もしくは肩の、腱もしくは靱帯の手術後の患者；仮骨延長術を受けたかもしくは受けている患者；臀部もしくは円板の置換後、半月板修復後、脊椎の固定術後、又は、例えば、膝、臀部、肩、肘、手首もしくは顎における補綴の固定術後、の患者；例えばネイル、スクリュー及びプレートのような骨接合術材料が固定されている患者；骨折の変形癒合もしくは偽関節を有する患者；例えば脛骨もしくは第一趾からの骨切り術後の患者；移植片植え込み後の患者；外傷もしくは関節炎に起因する膝の関節軟骨変性；ターナー症候群を患っている患者の骨粗鬆症；男性における骨粗鬆症；慢性透析の成人患者（ＡＰＣＤ）；ＡＰＣＤにおける栄養不良関連循環器疾患；ＡＰＣＤにおける悪液質の回復；ＡＰＣＤにおける癌；ＡＰＣＤにおける慢性的閉塞性肺疾患；ＡＰＣＤにおけるＨＩＶ；ＡＰＣＤの高齢者；ＡＰＣＤにおける慢性的な肝臓病、ＡＰＣＤにおける疲労症候群；クローン病；肝機能障害；ＨＩＶ感染した男性；短腸症候群；中心性肥満；ＨＩＶ関連リポジストロフィー症候群（ＨＡＬＳ）；男性不妊；待機的大手術、アルコール／薬物解毒又は神経外傷後の患者；加齢；虚弱な高齢者；骨関節炎；外傷性損傷を受けた軟骨；勃起不全；繊維筋痛；記憶障害；鬱；外傷性脳損傷；外傷性脊髄損傷；くも膜下出血；超低出生体重；メタボリックシンドローム；グルココルチコイドミオパシー；又は、小児のグルココルチコイド療法による小人症、の治療のための方法であって、必要とする患者に、本発明に係る化合物の治療的有効量を投与することを含む方法が提供される。特に、前記化合物は、式［Ｖａ］もしくは式［ＶＩａ］の化合物である。
【００６５】
ここで用いられる「治療」及び「治療する」という用語は、例えば病気もしくは疾患のような状態を治すという目的での、患者の管理及び世話を意味する。その用語は、患者が苦しんでいるある状態の治療の全機能を含むことを意図するものであり、例えば、症状もしくは合併症を緩和するため、病気、疾患もしくは状態の進行を遅らせるため、症状もしくは合併症を緩和もしくは軽減するため、及び／又は、病気、疾患もしくは状態を治癒もしくは除くため、ならびに、状態を予防するための化合物の投与であって、その予防とは、病気、状態もしくは異常を治すための患者の管理及び世話として理解され、症状もしくは合併症の発病を予防するための活性化合物の投与を含むことを意図するものである。治療する患者は、好ましくは哺乳類、特にヒトであるが、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ及びブタのような動物も含まれてもよい。しかし、治療法と予防法は、本発明の別々の態様を表すものとみなされるべきである。
ここで用いられる「治療的な有効量」とは、ある病気及びその合併症の臨床的徴候を、治癒、緩和もしくは部分的に阻むのに十分な量を意味する。これを達成するのに十分な量は、「治療的な有効量」として定義される。それぞれの目的についての有効量は、例えば、病気もしくは傷の重篤度ならびに対象の体重、性別、年齢及び一般的な状態に依存するであろう。適切な投与量の決定は、値のマトリクスを作成し、マトリックス中の異なる点について試験することにより、型どおりの実験を用いて達成され得るものであり、それは経験のある医師もしくは獣医の通常の技術の範囲内である。
【００６６】
したがって、本発明によると、治療における使用のための本発明に係る化合物が提供される。
ある態様では、本発明によると、筋肉組織、神経組織もしくは傷の治癒の促進；障害を受けた組織への血流の促進もしくは改善；あるいは、損傷を受けた組織中の感染率の低下、のための方法であって、必要とする患者への、本発明に係る化合物の治療的な有効量の有効量の投与を含む方法が提供される。特に、前記化合物は、式［Ｖａ］もしくは式［ＶＩａ］の化合物である。
ある実施態様では、本発明は、本発明に係る化合物の、例えば上述されるような、血漿成長ホルモンレベルの増加から利益を得る病気の製造のための使用に関する。特に、前記化合物は、式［Ｖａ］もしくは式［ＶＩａ］の化合物である。
【００６７】
典型的な非経口投与量は、投与当たり１０−９ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。典型的な投与量は、投与当たり約０．００００００１から約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。正確な投与量は、例えば、適応症、医薬、投与の頻度及び様式、治療される対象者の性別、年齢及び一般的状態、治療される病気又は疾患の性質及び重篤度、治療の所望される効果及び当業者には明らかな他の要因に依存するであろう。
典型的な投薬頻度は、毎日２回、毎日１回、隔日、毎週２回、毎週１回もしくはさらに長い投与間隔である。本発明の化合物の半減期は、対応する非コンジュゲート成長ホルモンに比べて長いため、例えば毎週２回、毎週１回もしくはさらに長い投与間隔のような、長い投与間隔での投薬計画が、本発明の特別な実施態様となる。
多くの病気が、治療上、同時に投与されるかもしくは連続的に投与されるかのどちらかで、一つより多くの医薬を用いて治療される。したがって、上述の病気のうちの一つの治療のための治療方法において、前記病気の治療に通常使用される一又は複数の他の治療的に活性な化合物と組合せて、本発明の化合物を用いることは、本発明の範囲内である。同様に、前記病気のための医薬の製造において、上述した病気のうちの一つの治療に通常用いられる他の治療的に活性な化合物と組合せて、本発明の化合物を用いることもまた、本発明の範囲にある。
【００６８】
〔製薬学的組成物〕
もう一つの目的は、例えば１０−１０ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌのような、１０−１５ｍｇ／ｍｌから２００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する本発明の化合物を含有する製薬学的組成物であって、２．０から１０．０のｐＨを有する組成物を提供することである。組成物はバッファー系、保存料、等張剤、キレート剤、安定剤及び界面活性剤をさらに含んでもよい。本発明のある実施態様では、製薬学的組成物は、水性組成物、すなわち水を含んでなる組成物である。このような組成物は典型的には溶液又は懸濁液である。本発明のさらなる実施態様では、医薬組成物は水溶液である。「水性組成物」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む組成物として定義される。同様に、「水溶液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液として定義される。
別の実施態様では、製薬学的組成物は凍結乾燥組成物であって、医師もしくは患者が使用前に溶媒及び／又は希釈剤を添加する組成物である。
別の実施態様では、製薬学的組成物は、事前の溶解なしに使える状態にある乾燥組成物（例えば凍結乾燥又はスプレードライ）である。
【００６９】
本発明のさらなる態様では、本発明は、本発明の化合物の水溶液及びバッファーを含む製薬学的組成物であって、前記化合物は０．１−１００ｍｇ／ｍｌもしくはそれ以上の濃度で存在し、約２．０から約１０．０のｐＨを有する製薬学的組成物に関する。
本発明の別の実施態様では、組成物のｐＨは、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９及び１０．０からなるリストから選択される。
本発明のさらなる実施態様では、バッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸もしくはそれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定のバッファーのそれぞれ一つずつが、本発明の代替的な実施態様を構成する。
【００７０】
本発明のさらなる実施態様では、組成物は製薬学的にに許容される保存料をさらに含む。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、フェノール、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ブチル、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール及びチオメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミドウレア、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、ベンゼトニウムクロリド、クロルフェネシン（３ｐ−クロルフェノキシプロパン−１，２−ジオール）もしくはそれらの混合物からなる群から選択される。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定の保存料のうちのそれぞれ一つずつが本発明の代替的な実施態様を構成する。製薬学的組成物中における保存料の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, 2000が参照される。
【００７１】
本発明のさらなる実施態様では、組成物は等張剤をさらに含む。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は、塩（例えば塩化ナトリウム）、糖又は糖アルコール、アミノ酸（例えば、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン）、アルジトール（例えば、グリセロール（グリセリン）、１，２−プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３−プロパンジオール、１，３−ブタンジオール）  ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）もしくはそれらの混合物からなる群から選択される。例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン及びカルボキシメチルセルロース−Ｎａを含む、単−、二−もしくは多糖類、又は、水溶性グルカンのような任意の糖を用いてもよい。ある実施態様では、糖添加剤はスクロースである。糖アルコールは少なくとも一つの−ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素として定義され、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール及びアラビトールを含む。ある実施態様では、糖アルコール添加剤はマンニトールである。上述の糖類もしくは糖アルコールは、個別にもしくは組合せて用いられ得る。糖もしくは糖アルコールが液体製剤中で可溶性であり、本発明の方法を用いて得られる安定化効果に悪影響を及ぼさない限り、用いられる量に定められた限度は無い。ある実施態様では、糖及び糖アルコール濃度は、約１ｍｇ／ｍｌと約１５０ｍｇ／ｍｌの間である。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は、１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は、１ｍｇ／ｍｌから７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は、８ｍｇ／ｍｌから２４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は、２５ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定の等張剤のそれぞれ一つずつは、本発明の代替的な実施態様を構成する。製薬学的組成物中における等張剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, 2000が参照される。
【００７２】
本発明のさらなる実施態様では、組成物は、キレート剤をさらに含む。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸及びアスパラギン酸の塩、及び、それらの混合物から選択される。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は、０．１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は、２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定のキレート剤のそれぞれ一つずつは、本発明の代替的な実施態様を構成する。製薬学的組成物中におけるキレート剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, 2000が参照される。
本発明のさらなる実施態様では、組成物は安定化剤をさらに含む。製薬学的組成物中における安定化剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, 2000が参照される。
【００７３】
より具体的には、本発明の組成物は、その治療的に活性な成分が液体製薬学的組成物中での保存中に凝集体形成を示し得るタンパク質を含む安定化液体製薬学的組成物である。「凝集体形成」とは、可溶性のままであり得るオリゴマー、もしくは、溶液から沈殿する大きな目に見える凝集体、の形成を生じるタンパク質分子間の物理的相互作用を意図するものである。「保存中」とは、一旦調製された液体製薬学的組成物もしくは組成物がすぐに対象に投与されないことを意図するものである。むしろ調製後に、液体形態、凍結状態、又は、液体形態もしくは対象への投与に適する他の形態に後に再構成するための乾燥形態、の何れかで、保存のために包装される。「乾燥形態」とは、液体製薬学的組成物もしくは組成物が、フリーズドライ（すなわち凍結乾燥；例えば、Williams及びPolli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59を参照のこと）、スプレードライ（Masters (1991) Spray-Drying Handbook (第5版; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp.491-676；Broadheadら, (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206；及び、Mumenthalerら, (1994) Pharm. Res. 11:12-20を参照のこと）、もしくは、エアードライ（Carpenter及びCrowe (1988) Cryobiology 25:459-470；及び、Roser (1991) Biopharm. 4:47-53）の何れかにより乾燥されることを意図するものである。液体製薬学的組成物の保存中のタンパク質による凝集体形成は、そのタンパク質の生物学的な活性に悪影響を及ぼし、製薬学的組成物の治療効果の損失となり得るものである。さらに、そのタンパク質含有製薬学的組成物を注入系を用いて投与する時、凝集体形成は、例えば、チューブ、膜もしくはポンプの閉塞のような、他の問題の原因となり得る。
【００７４】
本発明の製薬学的組成物は、組成物の保存中のタンパク質による凝集体形成を減少させるのに十分な量のアミノ酸塩基をさらに含んでもよい。「アミノ酸塩基」とは、任意のあるアミノ酸がその遊離塩基形態もしくはその塩形態のどちらかで存在する、アミノ酸もしくはアミノ酸の組合せのことである。アミノ酸の組合せが用いられる場合、アミノ酸の全てがその遊離塩基形態で存在し得るか、全てがその塩形態で存在し得るか、もしくは、あるものがその遊離塩基形態で存在し得る一方、他のものはその塩形態で存在する。ある実施態様では、本発明の組成物を調製する際に用いるアミノ酸は、例えば、アルギニン、リジン、アスパラギン酸及びグルタミン酸のような、荷電性側鎖を有するものである。特定のアミノ酸もしくは有機塩基が、その遊離塩基形態もしくはその塩形態の何れかで存在する限り、特定のアミノ酸（メチオニン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン及びそれらの混合物）の任意の立体異性体（すなわち、ＬもしくはＤ異性体、又は、それらの混合体）、もしくは、これら立体異性体の組合せ、もしくは、グリシン、もしくは、これに限定されるものではないが例えばイミダゾールのような有機塩基、が、本発明の製薬学的組成物中に存在し得る。ある実施態様では、アミノ酸のＬ立体異性体が用いられる。ある実施態様では、Ｌ立体異性体が用いられる。本発明の組成物はまた、これらのアミノ酸のアナログと共に製剤化されてもよい。「アミノ酸アナログ」とは、本発明の液体製薬学的組成物の保存中のタンパク質による凝集体形成を減少させるという所望の効果をもたらす天然発生アミノ酸の誘導体を意図するものである。適切なアルギニンアナログには、例えば、アミノグアニジン、オルニチン及びＮ−モノエチル  Ｌ−アルギニンが含まれ、適切なメチオニンアナログには、エチオニン及びブチオニンが含まれ、適切なシステインアナログにはＳ−メチル−Ｌ  システインが含まれる。他のアミノ酸と同様に、アミノ酸アナログは、その遊離の塩基形態もしくは塩形態で組成物中に導入される。本発明のさらなる実施態様では、アミノ酸又はアミノ酸アナログは、タンパク質の凝集を防止もしくは遅延させるのに十分な濃度で用いられる。
【００７５】
本発明のさらなる実施態様では、治療剤として作用するタンパク質が、酸化を受けやすい少なくとも一つのメチオニン残基を含んでなるタンパク質である時、メチオニン（又は、他の硫黄性アミノ酸もしくはアミノ酸アナログ）を添加して、メチオニン残基がメチオニンスルホキシドへと酸化するのを阻害してもよい。「阻害する」とは、メチオニン酸化種の経時的な最小の蓄積のことを意図するものである。メチオニンの酸化を阻害することは、タンパク質をその正しい分子形態にさらに保持することになる。メチオニンの任意の立体異性体（ＬもしくはＤ異性体）もしくはその任意の組合せを用いることができる。添加する量は、メチオニンスルホキシドの量が規制機関に受け入れられるようにメチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量であるべきである。典型的には、これは、組成物がわずか約１０％から約３０％のメチオニンスルホキシドを含むことを意味する。一般的に、これは、メチオニン残基に対して加えられるメチオニンの比率が、例えば１０：１から約１００：１のような、約１：１から約１０００：１の範囲であるようにメチオニンを添加することにより達成することができる。
【００７６】
本発明のさらなる実施態様では、組成物は高分子量ポリマーもしくは低分子化合物の群から選択される安定化剤をさらに含む。本発明のさらなる実施態様では、安定化剤は、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシ／ヒドロキシセルロースもしくはその誘導体（例えば、ＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬ、ＨＰＣ−Ｌ及びＨＰＭＣ）、シクロデキストリン、例えば、モノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２−メチルチオエタノールのような硫黄−含有物質、及び、異なる塩（例えば、塩化ナトリウム）から選択される。これらの特定の安定化剤のそれぞれ一つずつは、本発明の代替的な実施態様を構成する。
製薬学的組成物はまた、その中の治療的に活性なタンパク質の安定性をさらに向上させる付加的な安定化剤を含んでもよい。本発明にとって特に関心のある安定化剤には、これに限定されるものではないが、メチオニンの酸化からタンパク質を保護するメチオニン及びＥＤＴＡ、及び、凍結融解もしくは機械的剪断と関連する凝集からタンパク質を保護する非イオン性界面活性剤が含まれる。
【００７７】
本発明のさらなる実施態様では、組成物は界面活性剤をさらに含む。本発明のさらなる実施態様では、界面活性剤は、洗浄剤、エトキシル化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロックポリマー（例えばプルロニック（Pluronic）（登録商標）Ｆ６８、ポロキサマー１８８及び４０７、トリトン（Triton）Ｘ-１００のようなポロキサマー類）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、例えばアルキル化及びアルコキシル化誘導体のようなポリオキシエチレン及びポリエチレン誘導体（トゥイーン（Tween）類、例えばＴｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−４０、Ｔｗｅｅｎ−８０及びＢｒｉｊ−３５）、モノグリセリド又はそのエトキシル化誘導体、ジグリセリド又はそのポリオキシエチレン誘導体、アルコール、グリセロール、レクチン類及びリン脂質（例えばホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ジホスファチジルグリセロール及びスフィンゴミエリン）、リン脂質誘導体（例えばジパルミトイルホスファチジン酸）及びリゾリン脂質誘導体（例えばパルミトイルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン及びエタノールアミン、コリン、セリンもしくはスレオニンの１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェートエステル類）並びにリゾホスファチジル及びホスファチジルコリン類のアルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、アルコキシ（アルキルエーテル）誘導体、例えばリゾホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及び極性頭部基、つまり、コリン類、エタノールアミン類、ホスファチジン酸、セリン類、スレオニン類、グリセロール、イノシトール、及び正荷電ＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リゾホスファチジルセリン及びリゾホスファチジルスレオニンの修飾体、及びグリセロリン脂質（例えばセファリン類）、グリセロ糖脂質（例えばガラクトピラノシド）、スフィンゴ糖脂質（例えばセラミド類、ガングリオシド類）、ドデシルホスホコリン、ニワトリ卵白リゾレシチン、フシジン酸誘導体（例えばタウロ−ジヒドロフシジン酸ナトリウム等）、長鎖脂肪酸及びそのＣ６−Ｃ１２塩（例えばオレイン酸及びカプリル酸）、アシルカルニチン類及び誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンのＮα−アシル化誘導体、又はリジン又はアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジンと中性又は酸性アミノ酸との任意の組合せを含むジペプチドのＮα−アシル化誘導体、中性アミノ酸と二つの荷電アミノ酸との任意の組合せを含むトリペプチドのＮα−アシル化誘導体、ＤＳＳ（ドキュセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号［５７７−１１−７］）、ドキュセートカルシウム、ＣＡＳ登録番号［１２８−４９−４］）、ドキュセートカリウム、ＣＡＳ登録番号［７４９１−０９−０］）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム）、カプリル酸ナトリウム、コール酸又はその誘導体、胆汁酸及びその塩及びグリシンもしくはタウリンコンジュゲート、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコ���ル酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホナート、アニオン性（アルキル−アリール−スルホナート）一価界面活性剤、両性イオン性界面活性剤（例えばＮ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホナート類、３−コールアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホナート、カチオン性界面活性剤（第４級アンモニウム塩基）（例えば臭化セチル−トリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム）、非イオン性界面活性剤（例えばドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド）、エチレンジアミンへプロピレンオキシド及びエチレンオキシドを連続付加して誘導される四官能性ブロックコポリマーであるポロキサミン類（例えばテトロニックス（Tetronic's））から選択することができ、あるいは界面活性剤はイミダゾリン誘導体もしくはその混合物の群から選択され得る。これらの特定の界面活性剤のそれぞれ一つは、本発明の代替的な実施態様を構成する。
製薬学的組成物中における界面活性剤の使用は当業者によく知られている。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, 2000が参照される。
【００７８】
他の成分が本発明の製薬学的組成物中に存在してもよい。そのような付加的な成分には、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、張度調節剤、キレート剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンもしくはタンパク質）及び双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン、ヒスチジンのようなアミノ酸）が含まれ得る。当然のことながら、そのような付加的な成分は、本発明の製薬学的組成物の全体の安定性に悪影響を及ぼすべきではない。
本発明の化合物を含む製薬学的組成物は、そのような治療を必要とする患者の幾つかの部位、例えば、局所的部位、例えば皮膚及び粘膜部位、吸収をバイパスする部位、例えば、動脈、静脈、心臓への投与、及び、吸収に関与する部位、例えば、皮膚、皮下、筋肉又は腹部へ投与され得る。
本発明に係る製薬学的組成物の投与は、幾つかの投与経路、例えば、舌、舌下、頬、口、経口、胃及び腸、鼻、肺、例えば細気管支及び肺胞もしくはそれらの組み合わせを介して、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼、例えば結膜を介して、尿管、及び、非経口を介して、そのような治療を必要とする患者に投与され得る。
【００７９】
本発明の組成物は、幾つかの投薬形態、例えば、溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、多相エマルション、フォーム、膏薬、ペースト、プラスター、軟膏、錠剤、コート錠剤、リンス、カプセル、例えば硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、坐薬、直腸用カプセル、ドロップ、ゲル、スプレー、パウダー、エアゾール、吸入剤、点眼剤、眼軟膏、眼用リンス、膣用ペッサリー、膣用リング、膣用軟膏、注射液、インサイツ形質転換溶液、例えばインサイツゲル化、インサイツ硬化、インサイツ沈殿化、インサイツ結晶化のもの、輸液、及び、移植片として投与され得る。
本発明の組成物は、ＧＨコンジュゲートの安定性をさらに高め、生物学的利用能を増加させ、溶解性を増加させ、副作用を低減させ、当業者によく知られている時間療法を達成し、そして、患者のコンプライアンスを高めるか、もしくは、それらの任意の組合せのために、例えば、共有結合性、疎水性及び静電気的相互作用を介して、薬剤担体、薬剤送達系及び先端的薬剤送達系に、さらに配合されるか、もしくは、付加され得る。担体、薬剤送達系及び先端的薬剤送達系の例には、これに限定されるものではないが、ポリマー、例えばセルロース及び誘導体、多糖類、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体、ポリ（ビニルアルコール）、アクリラート及びメタクリラートポリマー類、ポリ乳酸及びポリグリコール酸及びそれらのブロックコポリマー、ポリエチレングリコール類、担体タンパク質、例えばアルブミン、ゲル、例えばサーモゲル化系、例えば当業者によく知られているブロックコポリマー系、ミセル、リポソーム、ミクロスフィア、ナノ粒子、液晶及びそれらの分散体、脂質−水系における相挙動の分野での当業者によく知られているＬ２相とその分散体（dispersion）、ポリマーミセル、多相エマルション、自己乳化剤、自己マイクロ乳化剤、シクロデキストリン及びその誘導体、及び、デンドリマーが含まれる。
【００８０】
本発明の組成物は、例えば、全てが当業者によく知られた装置である定量吸入器、乾燥パウダー吸入器及びネブライザーを用いた、式［Ｖａ］もしくは式［ＶＩａ］の化合物の肺投与のための固形物、半固形物、粉末及び溶液の配合において有用である。
本発明の組成物は、制御された、徐放性の、持続性の、遅延性の及び遅効性の、放出薬物送達系の配合において特に有用である。より具体的には、これに限定されるものではないが、組成物は、当業者によく知られている非経口用の制御放出及び徐放系（双方の系は投与数を何倍も低下させる）の配合において有用である。さらにより好ましくは、制御放出及び徐放系は皮下投与される。本発明の範囲を限定するものではないが、有用な制御放出系及び組成物の例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマーミセル、ミクロスフィア、ナノ粒子である。
本発明の組成物に有用な制御放出系の製造方法には、これに限定されるものではないが、結晶化、凝縮、共結晶化、沈殿、共沈殿、乳化、分散、高圧ホモジナイズ、カプセル化、スプレードライ、マイクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、ミクロスフィアを製造するための溶媒蒸発、押出及び超臨界流体プロセスが含まれる。一般的には、Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L.編 Marcel Dekker, New York, 2000)及びDrug and the Pharmaceutical Sciences vol.99: Protein Composition and Delivery (MacNally, E.J.編 Marcel Dekker, New York, 2000)が参照される。
非経口投与は、シリンジ、場合によってはペン状シリンジによる皮下、筋肉内、腹膜内もしくは静脈内注射によって実施され得る。あるいは、非経口投与は、輸液ポンプにより実施することができる。さらなる選択肢は、鼻用もしくは肺用スプレーの形態で本発明の化合物を投与するための溶液もしくは懸濁液であり得る組成物である。さらなる選択肢としては、本発明の化合物を含む製薬学的組成物を、例えば針のない注射、もしくは、イオン導入パッチであってもよいパッチからの経皮投与用、又は、例えば頬などの、経粘膜投与用に適合させることもできる。
【００８１】
「安定化（された）組成物」という用語は、向上した物理的安定性、向上した化学的安定性もしくは向上した物理的及び化学的安定性を有する組成物について言及するものである。
ここで用いられるタンパク質組成物の「物理的安定性」という用語は、熱機械的ストレスへのタンパク質の暴露、及び／又は、例えば疎水性表面及び界面のような、不安定化している界面及び表面、との相互作用の結果としての、生物学的に不活性な及び／又は不溶性の凝集体を形成するタンパク質の傾向について言及するものである。タンパク質水性組成物の物理的安定性は、適切な容器（例えばカートリッジもしくはバイアル）中に満たした組成物を機械的／物理的ストレス（例えば攪拌）に様々な時間の間、異なった温度で暴露した後に、視覚的な検査及び／又は濁度の測定をすることにより評価される。組成物の視覚的な検査は、暗い背景中において鋭く集光された光下で実施される。組成物の濁度は、濁りの度合いを、例えば０から３の尺度（濁りを示さない組成物が視覚スコア０に相当し、昼光で可視できる濁りを示す組成物は視覚スコア３に相当する）でランク付けする視覚スコアにより特徴付けされる。組成物は、昼光下で可視できる濁りを示す時に、タンパク質凝集に関して物理的に不安定であると分類される。あるいは、組成物の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定により評価することができる。タンパク質水性組成物の物理的安定性は、タンパク質の立体構造状態の分光学的な薬剤もしくはプローブを使用することによっても、評価することができる。プローブは好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に優先的に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子性分光学的プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴはアミロイド線維の検出に広く用いられている蛍光染料である。線維及びおそらくは他のタンパク質の立体構造の存在下においても、チオフラビンＴは、線維タンパク質形態に結合する時、約４５０ｎｍで新たな励起極大と、約４８２ｎｍで増強された発光とを生じる。未結合のチオフラビンＴは本質的にはその波長で非蛍光である。
【００８２】
天然から非天然状態までのタンパク質構造における変化のプローブとして、他の小分子を使用することができる。例えば、タンパク質の露出した疎水性パッチに優先的に結合する「疎水性パッチ」プローブがあげられる。疎水性パッチは、一般には、その天然状態のタンパク質の三次構造内に埋められているが、タンパク質がアンフォールドされるかもしくは変性し始めると、露出するようになる。これらの小分子の分光学的プローブの例には、例えば、アントラセン、アクリジン、フェナントロリンもしくはその他のような、芳香族性、疎水性染料が含まれる。他の分光学的プローブは、金属−アミノ酸錯体、例えば、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン及びバリンもしくはその他のような疎水性アミノ酸のコバルト金属錯体、である。
【００８３】
ここで用いられるタンパク質組成物の「化学的安定性」という用語は、天然タンパク質構造と比較して、潜在的に低い生物学的効力及び／又は潜在的に高い免疫原性を有する化学的変性産物の形成に至るタンパク質構造中の化学共有結合変化を意味する。天然タンパク質の種類と性質及びタンパク質がさらされる環境に応じて、様々な化学的変性産物が形成されうる。大抵の場合、化学的な変性の防止は完全には避けることができないことであり、当業者にはよく知られているように、タンパク質組成物の保存及び使用中に、化学的変性産物の量の増加がしばしば観察される。大部分のタンパク質は、グルタミニルもしくはアスパラギニル残基の側鎖アミド基が加水分解されて遊離のカルボン酸を形成するプロセスである脱アミド化を受ける傾向がある。他の変性経路は、二以上のタンパク質分子が、アミド基転移及び／又はジスルフィド相互作用を通して互いに共有結合し、共有結合した二量体、オリゴマー及び多量体変性産物の形成に至る高分子量変換産物の形成に関するものである（Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T. J. & Manning M. C., Plenum Press, New York 1992）。（例えばメチオニン残基の）酸化は、化学的変性の他の変形例として挙げることができる。タンパク質組成物の化学的安定性は、異なった環境条件への暴露（変性産物の形成はしばしば例えば温度上昇により加速され得る）後に、様々な時点において化学的変性産物の量を測定することにより評価することができる。それぞれ個別の変性産物の量は、しばしば、様々なクロマトグラフィー法（例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ−ＨＰＬＣ)を用いて、分子サイズ及び／又は電荷に応じて変性産物を分離することにより決定される。
【００８４】
それ故に、以上に概説したように、「安定化された組成物」とは、向上した物理的安定性、向上した化学的安定性、もしくは向上した物理的及び化学的安定性を有する組成物について言及するものである。一般に、組成物は、有効期限に達するまで（推奨される使用及び保存条件に従っての）使用中及び保存中に安定でなければならない。
本発明のある実施態様では、本発明の化合物を含む製薬学的組成物は、６週間を越える使用期間、もしくは、３年を越える保存期間の間、安定している。
本発明の別の実施態様では、本発明の化合物を含む製薬学的組成物は、４週間を越える使用期間、もしくは、３年を越える保存期間の間、安定している。
本発明のさらなる実施態様では、本発明の化合物を含む製薬学的組成物は、４週間を越える使用期間、もしくは、２年を越える保存期間の間、安定している。
本発明のさらなる実施態様では、本発明の化合物を含む製薬学的組成物は、２週間を越える使用期間、もしくは、２年を越える保存期間の間、安定している。
【００８５】
以下は実施態様の番号付きリストであり、本発明を限定するものと解されるべきではない：
実施態様１．
少なくとも一つのグルタミン残基を含んでなるポリペプチドにＰＥＧを共有結合的に付加させる方法であって、一又は複数の工程において、式［Ｉ］
2008543297.tif 000077
〔上式中、ＰＰは、ポリペプチドに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表す〕
により表されるグルタミン残基含有ポリペプチドを、式［ＩＩ］
2008543297.tif 000078
〔上式中、Ｄは、−Ｏ−もしくは一重結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ｘは、−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒド、ケトン、あるいは、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基を表す〕
の窒素含有求核剤と、トランスグルタミナーゼの存在下で反応させ、式［ＩＩＩ］
2008543297.tif 000079
のアミノ転移ポリペプチドを形成する方法であって、
任意によって、Ｘが潜在的な基であれば、前記潜在的な基を−Ｏ−ＮＨ２、アルデヒドもしくはケトンに変換することを含み、
前記アミノ転移ポリペプチドは、式［ＩＶ］
2008543297.tif 000080
〔上式中、
Ｘが、アルデヒド、ケトン、又は、さらなる反応でアルデヒドもしくはケトンに変換され得る潜在的な基であれば、Ｙは−Ｏ−ＮＨ２を表すか；あるいは、
Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、又は、さらなる反応で−Ｏ−ＮＨ２に変換され得る潜在的な基であれば、Ｙはアルデヒドもしくはケトンを表し；
かつ、Ｚは、
2008543297.tif 000081
2008543297.tif 000082
2008543297.tif 000083
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000084
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである）
の中から選択される部分を表す〕
の第二の化合物とさらに反応し、式［Ｖ］
2008543297.tif 000085
〔上式中、Ａはオキシム結合を表す〕
のＰＥＧ化ポリペプチド；あるいは、その任意の製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物を形成する方法。
【００８６】
実施態様２．
Ｄが−Ｏ−を表す実施態様１に記載の方法。
実施態様３．
Ｄが一重結合を表す実施態様１に記載の方法。
実施態様４．
Ｒが、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す実施態様１ないし３の何れかに記載の方法。
実施態様５．
ＲがＣ１−６アルキレンを表す実施態様１ないし３の何れかに記載の方法。
実施態様６．
ＲがＣ１−３アルキレンを表す実施態様５に記載の方法。
実施態様７．
Ｒがメチレンもしくはプロピレンを表す実施態様６に記載の方法。
【００８７】
実施態様８．
Ｚが、
2008543297.tif 000086
2008543297.tif 000087
2008543297.tif 000088
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000089
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである〕
の中から選択される部分を表す実施態様１ないし７の何れかに記載の方法。
【００８８】
実施態様９．
Ｙが−Ｏ−ＮＨ２を表し、Ｘが、アルデヒド、あるいは、さらに反応してアルデヒドを形成し得る潜在的な基を表す実施態様１ないし８の何れかに記載の方法。
実施態様１０．
Ｙが−Ｏ−ＮＨ２を表し、Ｘが、ケトン、あるいは、さらに反応してケトンを形成し得る潜在的な基を表す実施態様１ないし８の何れかに記載の方法。
【００８９】
実施態様１１．
式［ＩＶ］
2008543297.tif 000090
の化合物が、
2008543297.tif 000091
2008543297.tif 000092
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す実施態様９又は実施態様１０に記載の方法。
【００９０】
実施態様１２．
Ｙがアルデヒドを表し、Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、あるいは、さらに反応して−Ｏ−ＮＨ２を形成し得る潜在的な基を表す実施態様１ないし８の何れかに記載の方法。
実施態様１３．
式［ＩＶ］
2008543297.tif 000093
の化合物が、
2008543297.tif 000094
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す実施態様１２に記載の方法。
【００９１】
実施態様１４．
Ｙがケトンを表し、Ｘが、−Ｏ−ＮＨ２、あるいは、さらに反応して−Ｏ−ＮＨ２を形成し得る潜在的な基を表す実施態様１ないし８の何れかに記載の方法。
実施態様１５．
式［ＩＶ］
2008543297.tif 000095
の化合物が、
2008543297.tif 000096
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは、１０ｋＤａ、２０ｋＤａもしくは３０ｋＤａの分子量を有するｍＰＥＧを意味し、ＰＥＧは、２ｋＤａと５ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを意味する〕
から選択される化合物を表す実施態様１４に記載の方法。
【００９２】
実施態様１６．
式［ＩＩ］
2008543297.tif 000097
の化合物が、１，３−ジアミノ−２−プロパノールを表し、Ｙが−Ｏ−ＮＨ２を表す実施態様１ないし８の何れかに記載の方法。
【００９３】
実施態様１７．
式［ＩＩ］
2008543297.tif 000098
の化合物が、１，３−ジアミノオキシプロパンを表し、Ｙがアルデヒドを表す実施態様１ないし８の何れかに記載の方法。
【００９４】
実施態様１８．
成長ホルモンの薬理学的性質を改変するための方法であって、実施態様１ないし１７の何れかに記載の方法により、前記成長ホルモンにＰＥＧを共有結合的に付加させることを含む方法。
実施態様１９．
ポリペプチドがグルタミン残基含有成長ホルモンであり、ＰＰが成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す実施態様１ないし１８の何れかに記載の方法
実施態様２０．
前記グルタミン残基含有成長ホルモンがヒト成長ホルモンを表す実施態様１９に記載の方法。
【００９５】
実施態様２１．
前記グルタミン残基含有成長ホルモンが
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨ、
ｂ）２０ｋＤａ  ｈＧＨ、
ｃ）配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されているｈＧＨ、
ｄ）配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されているｈＧＨ、
あるいは、
ｅ）配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基がそれぞれ削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されているｈＧＨであって、成長ホルモンの別の位置にはグルタミン残基が存在するｈＧＨ
を表す実施態様２０に記載の方法。
実施態様２２．
前記成長ホルモンがｈＧＨを表す実施態様２１に記載の方法。
【００９６】
実施態様２３．
式［Ｖ］
2008543297.tif 000099
〔上式中、ＰＰは、ポリペプチドに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000100
2008543297.tif 000101
2008543297.tif 000102
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000103
ならば、ｍＰＥＧは１０ｋＤａ  ｍＰＥＧである。
【００９７】
実施態様２４．
Ｄが−Ｏ−を表す実施態様２３に記載の化合物。
実施態様２５．
Ｄが一重結合を表す実施態様２３に記載の化合物。
実施態様２６．
Ｒが、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す実施態様２３ないし２５の何れかに記載の化合物。
実施態様２７．
Ｒが、Ｃ１−６アルキレンを表す実施態様２３ないし２５の何れかに記載の化合物。
実施態様２８．
Ｒが、Ｃ１−３アルキレンを表す実施態様２７に記載の化合物。
実施態様２９．
Ｒが、メチレンもしくはプロピレンを表す実施態様２８に記載の化合物。
【００９８】
実施態様３０．
Ｚが、
2008543297.tif 000104
2008543297.tif 000105
2008543297.tif 000106
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000107
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである〕
の中から選択される部分を表す実施態様２３ないし２９の何れかに記載の化合物。
【００９９】
実施態様３１．
ポリペプチドがグルタミン残基含有成長ホルモンであって、ＰＰは成長ホルモンに存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる成長ホルモン基を表す実施態様２３ないし３０の何れかに記載の化合物。
実施態様３２．
ＧＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨ中に存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す実施態様３１に記載の化合物。
実施態様３３．
ＧＨが、２０ｋＤａ  ｈＧＨ中に存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す実施態様３１に記載の化合物。
【０１００】
実施態様３４．
ＧＨが
ａ）配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基；もしくは
ｂ）配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基
の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置とは異なり、配列番号１の位置１４１に対応する位置とも異なる位置に存在するグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が、それぞれ、削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表す実施態様３１に記載の化合物。
【０１０１】
実施態様３５．
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）−オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロプ−１−イルオキシ）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１／４０−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−ｍｉｎｏブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イル）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ１４１−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（１０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリル｝−アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピオニル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（４−｛５−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ−５−オキソペンタノイル｝アミノブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロプ−１−イルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリデン｝−アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（Ｏ−（２−（３−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロピルオキシ）プロピルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イルオキシ）プロピリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−３−（｛４−｛（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）プロプ−１−イル）ＰＥＧイルオキシ｝ブチリデン｝アミノキシ）プロピルオキシｈＧＨ；
Ｎδ４０−２−（（４−（４−（（２，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イル）プロピル）ＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシミノ）エチルｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε１４１／４０−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε１４１／４０−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ  ；
Ｎε４０−［２−（２−（２，３−（ｍＰＥＧ（２０Ｋ）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４０Ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨ；
Ｎε４０−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（３０Ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ；
2008543297.tif 000108
2008543297.tif 000109
2008543297.tif 000110
2008543297.tif 000111
2008543297.tif 000112
2008543297.tif 000113
2008543297.tif 000114
から選択される実施態様２３に記載の化合物。
【０１０２】
実施態様３６．
式［ＶＩ］
2008543297.tif 000115
〔上式中、ＰＰは、前記ポリペプチドに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られるポリペプチド基を表し；
Ｄは、−Ｏ−もしくは結合を表し；
Ｒは、Ｃ１−６アルキレン、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくはＣ５−１５ヘテロアルキレンを表し；
Ａはオキシム結合を表し；
Ｚは、
2008543297.tif 000116
2008543297.tif 000117
2008543297.tif 000118
（上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示す）
の中から選択される部分を表す〕
に記載の化合物、その製薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは溶媒和物；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000119
ならば、ｍＰＥＧは１０ｋＤａ  ｍＰＥＧである。
【０１０３】
実施態様３７．
Ｄが−Ｏ−を表す実施態様３６に記載の化合物。
実施態様３８．
Ｄが一重結合を表す実施態様３６に記載の化合物。
実施態様３９．
Ｒが、−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−もしくは−（ＣＨ２）４−ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−を表す実施態様３６ないし３８の何れかに記載の化合物。
実施態様４０．
ＲがＣ１−６アルキレンを表す実施態様３６ないし３８の何れかに記載の化合物。
実施態様４１．
ＲがＣ１−３アルキレンを表す実施態様４０に記載の化合物。
実施態様４２．
Ｒがメチレンもしくはプロピレンを表す実施態様４１に記載の化合物。
【０１０４】
実施態様４３．
Ｚが、
2008543297.tif 000120
2008543297.tif 000121
2008543297.tif 000122
〔上式中、特に指示されなければ、ｍＰＥＧは５ｋＤａと４０ｋＤａの間の分子量を有するｍＰＥＧを示し、ＰＥＧは分子量１ｋＤａと１０ｋＤａの間の分子量を有するＰＥＧを示し；
ただし、Ｚが
2008543297.tif 000123
であれば、ＰＥＧは１０ｋＤａ  ＰＥＧである〕
の中から選択される部分を表す実施態様３６ないし４２の何れかに記載の化合物。
【０１０５】
実施態様４４．
ポリペプチドがグルタミン残基含有成長ホルモンであって、ＰＰは成長ホルモンに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことで得られる成長ホルモン基を表す実施態様３６ないし４３の何れかに記載の化合物。
実施態様４５．
ＧＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す実施態様４４に記載の化合物。
実施態様４６．
ＧＨが、２０ｋＤａ  ｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表す実施態様４４に記載の化合物。
【０１０６】
実施態様４７．
ＧＨが、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖及び配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、及び、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置と異なる位置に存在するもう一つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、により得られる基であって、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置１４１に対応する位置のグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、及び、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置と異なる位置に存在するもう一つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くこと、により得られる基であって、配列番号１の位置４０に対応する位置のグルタミン残基が削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表すか、
あるいは、
ＧＨは、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置と異なる位置でｈＧＨに存在する二つのグルタミン残基の側鎖から−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を除くことにより得られる基であって、配列番号１の位置４０及び１４１に対応する位置に存在するグルタミン残基が、それぞれ、削除されているか、もしくは、別のアミノ酸に置換されている基を表す実施態様４４に記載の化合物。
【０１０７】
実施態様４８．
ＰＥＧ及び特にｍＰＥＧを含んでなる部分と共有結合的に付加されたヒト成長ホルモンであって、前記ＰＥＧを含む部分が、成長ホルモンのグルタミン４０の側鎖、グルタミン１４１の側鎖、もしくは、グルタミン４０及びグルタミン１４１の側鎖に付加されたヒト成長ホルモンであり、ただし、この時、それは、
Ｎε１４１−［２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルブタノイル）−アミノ−ブチルオキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ，
Ｎε１４１−［２−（１−（ヘキサデカノイル）ピペリジン−４−イル）エチルオキシイミノ）−エチル］ｈＧＨ，
Ｎε１４１（２−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルアミノカルボニルオキシ）プロプ−２−イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ，
Ｎε１４１（２−（４−（２，６−ビス（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシカルボニルアミノ）ヘキサノイルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ，
Ｎε１４１（２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ，
Ｎε１４１（２−（４−（４−（ｍＰＥＧ（２０ｋ）イルオキシ）ブチリルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ、ｏｒ
Ｎε１４１（２−（４−（３−（ｍＰＥＧ（３０ｋ）イルオキシ）プロパノイルアミノ）ブチルオキシイミノ）エチル）ｈＧＨ
ではないヒト成長ホルモン。
【０１０８】
実施態様４９．
実施態様１ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られた化合物。
実施態様５０．
実施態様１ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られる化合物。
実施態様５１．
実施態様１９ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られた化合物。
実施態様５２．
実施態様１９ないし２２の何れかに記載の方法の使用により得られる化合物。
実施態様５３．
治療における使用のための、実施態様３１ないし３５の何れか、実施態様４４ないし５２の何れか、実施態様５１もしくは実施態様５２に記載の化合物。
実施態様５４．
実施態様３１ないし３５の何れか、実施態様４４ないし５２の何れか、実施態様５１もしくは実施態様５２に記載の化合物を含む製薬学的組成物。
【０１０９】
実施態様５５．
成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）：ターナー症候群；プラダーウィリー症候群（ＰＷＳ）；ヌーナン症候群；ダウン症；慢性腎臓病、若年性関節リウマチ；嚢胞性繊維症、ＨＡＡＲＴ治療を受けている子供のＨＩＶ感染（ＨＩＶ／ＨＡＬＳ小児）；短い在胎期間（ＳＧＡ）出生した低身長児；ＳＧＡ以外の超低出生時体重（ＶＬＢＷ）出生児の小人症；骨格形成異常；軟骨低形成症；軟骨形成不全；特発性小人症（ＩＳＳ）；成人のＧＨＤ；例えば脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手、中足及び指等の、長骨又はその内部の骨折；頭蓋骨、手の基部及び足の基部等の、海綿様骨又はその内部の骨折；例えば手、膝もしくは肩の、腱もしくは靱帯の手術後の患者；仮骨延長術を受けたかもしくは受けている患者；臀部もしくは円板の置換後、半月板修復後、脊椎の固定術後、又は、例えば、膝、臀部、肩、肘、手首もしくは顎における補綴の固定術後、の患者；例えばネイル、スクリュー及びプレートのような骨接合術材料が固定されている患者；骨折の変形癒合もしくは偽関節を有する患者；例えば脛骨もしくは第一趾からの骨切り術後の患者；移植片植え込み後の患者；外傷もしくは関節炎に起因する膝の関節軟骨変性；ターナー症候群を患っている患者の骨粗鬆症；男性における骨粗鬆症；慢性透析の成人患者（ＡＰＣＤ）；ＡＰＣＤにおける栄養不良関連循環器疾患；ＡＰＣＤにおける悪液質の回復；ＡＰＣＤにおける癌；ＡＰＣＤにおける慢性的閉塞性肺疾患；ＡＰＣＤにおけるＨＩＶ；ＡＰＣＤの高齢者；ＡＰＣＤにおける慢性的な肝臓病、ＡＰＣＤにおける疲労症候群；クローン病；肝機能障害；ＨＩＶ感染した男性；短腸症候群；中心性肥満；ＨＩＶ関連リポジストロフィー症候群（ＨＡＬＳ）；男性不妊；待機的大手術、アルコール／薬物解毒又は神経外傷後の患者；加齢；虚弱な高齢者；骨関節炎；外傷性損傷を受けた軟骨；勃起不全；繊維筋痛；記憶障害；鬱；外傷性脳損傷；外傷性脊髄損傷；くも膜下出血；超低出生体重；メタボリックシンドローム；グルココルチコイドミオパシー；又は、小児のグルココルチコイド療法による小人症；筋組織、神経組織もしくは傷の治癒の促進；障害を受けた組織への血流の促進もしくは改善；あるいは、損傷を受けた組織中の感染率の低下、の治療のための方法であって、必要とする患者に、実施態様３１ないし３５の何れか、実施態様４４ないし５２の何れか、実施態様５１もしくは実施態様５２に記載の化合物、あるいは、実施態様５４に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を投与することを含む方法。
【０１１０】
実施態様５６．
成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）：ターナー症候群；プラダーウィリー症候群（ＰＷＳ）；ヌーナン症候群；ダウン症；慢性腎臓病、若年性関節リウマチ；嚢胞性繊維症、ＨＡＡＲＴ治療を受けている子供のＨＩＶ感染（ＨＩＶ／ＨＡＬＳ小児）；短い在胎期間（ＳＧＡ）出生した低身長児；ＳＧＡ以外の超低出生時体重（ＶＬＢＷ）出生児の小人症；骨格形成異常；軟骨低形成症；軟骨形成不全；特発性小人症（ＩＳＳ）；成人のＧＨＤ；例えば脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手、中足及び指等の、長骨又はその内部の骨折；頭蓋骨、手の基部及び足の基部等の、海綿様骨又はその内部の骨折；例えば手、膝もしくは肩の、腱もしくは靱帯の手術後の患者；仮骨延長術を受けたかもしくは受けている患者；臀部もしくは円板の置換後、半月板修復後、脊椎の固定術後、又は、例えば、膝、臀部、肩、肘、手首もしくは顎における補綴の固定術後、の患者；例えばネイル、スクリュー及びプレートのような骨接合術材料が固定されている患者；骨折の変形癒合もしくは偽関節を有する患者；例えば脛骨もしくは第一趾からの骨切り術後の患者；移植片植え込み後の患者；外傷もしくは関節炎に起因する膝の関節軟骨変性；ターナー症候群を患っている患者の骨粗鬆症；男性における骨粗鬆症；慢性透析の成人患者（ＡＰＣＤ）；ＡＰＣＤにおける栄養不良関連循環器疾患；ＡＰＣＤにおける悪液質の回復；ＡＰＣＤにおける癌；ＡＰＣＤにおける慢性的閉塞性肺疾患；ＡＰＣＤにおけるＨＩＶ；ＡＰＣＤの高齢者；ＡＰＣＤにおける慢性的な肝臓病、ＡＰＣＤにおける疲労症候群；クローン病；肝機能障害；ＨＩＶ感染した男性；短腸症候群；中心性肥満；ＨＩＶ関連リポジストロフィー症候群（ＨＡＬＳ）；男性不妊；待機的大手術、アルコール／薬物解毒又は神経外傷後の患者；加齢；虚弱な高齢者；骨関節炎；外傷性損傷を受けた軟骨；勃起不全；繊維筋痛；記憶障害；鬱；外傷性脳損傷；外傷性脊髄損傷；くも膜下出血；超低出生体重；メタボリックシンドローム；グルココルチコイドミオパシー；又は、小児のグルココルチコイド療法による小人症；筋組織、神経組織もしくは傷の治癒の促進；障害を受けた組織への血流の促進もしくは改善；あるいは、損傷を受けた組織中の感染率の低下、の治療に用いられる医薬の製造のための、実施態様３１ないし３５の何れか、実施態様４４ないし５２の何れか、実施態様５１もしくは実施態様５２に記載の化合物の使用。
【０１１１】
ここに引用される刊行物、特許出願及び特許を含む全ての文献は、本明細書の他の箇所で特定の文献が個別に援用されているかどうかにかかわらず、あたかも各文献が個別かつ具体的に出典明示により援用され、その全体がここに記載されているかのごとく、出典明示によりここにその全体が同じ程度に援用される。
全ての標題及び副題は便宜上のためだけにここに用いられるものであり、決して本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
特にここに指示されるかもしくは明らかに文脈に矛盾しない限り、全ての可能な変形例における上述の構成の任意の組み合わせは本発明に含まれる。
【０１１２】
本発明で記述する文脈における「a」及び「and」及び「the」及び類似の指示語の使用は、特に指示されるか、もしくは、明らかに文脈に矛盾しない限り、単数形と複数形の双方をカバーするものと解釈される。例えば、「本化合物（the compound）」という表現は、特に指示されない限り、本発明の種々の「化合物」もしくは特定の記載された態様を意味するものと理解される。
特に指示されない限り、ここでの数値範囲の列挙は、単にその範囲内に収まるそれぞれ別個の数値を個別に言及する簡便な方法としての役割を果たすことを意図するものであり、それぞれ別個の値は、あたかも個別にここに引用されているかのごとく、本明細書に組み込まれる。
特に指示されない限り、ここで提供される全ての正確な値は、対応する近似値の代表である（例えば、特定の因子もしくは測定に関して提供される全ての正確な例示値は、適切な場合には「約」により修飾される、対応する近似測定値もまた提供するものとみなすことができる）。
【０１１３】
特に指示されるか、もしくは、明らかに文脈に矛盾しない限り、ここに記載された全ての方法は任意の適切な順序で実行することができる。
任意の及び全ての例の使用、もしくは、ここに提供される例示的な言葉（例えば、“例えば”）は、単に本発明をより良く啓発することを意図するものであり、特に指示されない限り、本発明の範囲の限定を有するものではない。本明細書中の何れの言葉も、その旨が明確に述べられていない限り、何れかの構成が本発明の実行に必要不可欠であることを示すものとして解釈されるべきではない。
ここでの特許文書の引用と援用は、単に便宜上のために行われるものであり、そのような特許文書の有効性、特許性及び／又は権利行使可能性の如何なる見解も反映するものではない。
【０１１４】
要素もしくは要素群に関して、例えば、「含んでなる」、「有する」、「含む」もしくは「含有する」のような用語を使用する、任意の態様又は本発明の態様のここでの記載は、特に指示されるか、もしくは、明らかに文脈に矛盾しない限り、その特定の要素もしくは要素群「からなる」、「から本質的になる」もしくは「本質的に含む」本発明の態様もしくは類似態様に対してサポートを提供することを意図するものである（例えば、ここに記載の特定の成分を含有する組成物は、特に指示されるか、もしくは、明らかに文脈に矛盾しない限り、その成分からなる組成物もまた同様に記述するものであるとして理解されるべきである）。本発明のそのような態様に関して基本的かつ新規の性質がここで提供される。
この発明には、適用される法律により許可される最大限度の、ここに提示される態様もしくは請求項に記載される対象の全ての変形例及び同等例が含まれる。
【実施例】
【０１１５】
本実施例で用いられたＴＧａｓｅは、米国特許第５１５６９５６号に記載のＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒａｅｎａｅもしくは国際公開第９６０６９３１号Ａ１に記載のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  Ｌｙｄｉｃｕｓ由来の微生物トランスグルタミナーゼである。
【０１１６】
〔分析方法：〕
〔Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ質量分析〕
分子量は、Ａｕｔｏｆｌｅｘ  Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ装置（Ｂｒｕｋｅｒ）を用いて決定した。試料は、サンドイッチ法に従って調製した。マトリックス１は、１ｍｌアセトン中１０ｍｇのアルファ−シアノ−４−ヒドロキシ−桂皮酸の溶液であった。マトリックス２は、１ｍｌの５０％アセトニトリル−水中１０ｍｇのアルファ−シアノ−４−ヒドロキシ−桂皮酸の溶液であった。試料は、ターゲット上で、順番に、１μＬのマトリックス１をアプライし、空気乾燥させ、１μｌの３％トリフルオロ酢酸をアプライし、１μｌ試料をアプライし、１μｌのマトリックス２をアプライし、空気乾燥させ、ターゲットプレートに水を流して洗浄し、最後に空気乾燥させることにより、調製した。スペクトルは２０％のレーザー出力及び装置と共に提供されている３−２０ｋＤａ範囲用の標準法を用いて取得した。
〔タンパク質の定量〕
タンパク質濃度は、ＵＶ分光計を用いて２８０ｎｍの吸光を測定することにより推定した。１モルモル吸光係数１６１６７０／Ｍ／ｃｍを用いた。総量は、体積及び濃度から計算した。
【０１１７】
〔ＳＤＳ  ｐａｇｅ〕
ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動は、ＮｕＰＡＧＥ４％−１２％ビス−Ｔｒｉｓゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＮＰ０３２１ＢＯＸ）を用いて行った。ゲルは、銀染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＬＣ６１００）もしくはクーマシー染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＬＣ６０６５）し、関係するＰＥＧについても、M. M. Kurfurst, Anal.Biochem. 200(2), 244-248 (1992)に記載のように、ヨウ化バリウムを用いて染色した。
〔ＲＰ−ＨＰＬＣ〕
システムＡ：Ｌ−７４００ＵＶ検出器、Ｌ−７２００自動試料採取装置及びＬ−７１００ポンプからなるＭｅｒｃｋ−日立システム。Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−３００  ４．６ｍｍｘ５０ｍｍ  ５μｍ  Ｃ−１８シリカカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、検出は２１４ｎｍのＵＶにより行った。カラムは、０．１％トリフルオロ酢酸／Ｈ２Ｏで平衡化し、０．１％トリフルオロ酢酸／Ｈ２Ｏに対する０から９０％のアセトニトリル勾配で、常温で１０分間、１ｍｌ／分の流速で溶出した。
【０１１８】
〔ＣＥ（キャピラリー電気泳動）分析〕
キャピラリー電気泳動は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ３ＤＣＥシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。データ取得及び信号処理は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ３ＤＣＥ  ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎを用いて行った。キャピラリーは、６４．５ｃｍ（５６．０ｃｍ有効長）５０μｍ、すなわち、Ａｇｉｌｅｎｔの“Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｌｉｇｈｔ  Ｐａｔｈ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ”であった。ＵＶ検出は、２００ｎｍ（１６ｎｍ帯域幅、対照３８０ｎｍ及び５０ｎｍ帯域幅）で行った。泳動用電解液は、５０ｍＭリン酸バッファーｐＨ７（方法Ａ）もしくは５０ｍＭリン酸バッファーｐＨ２．５（方法Ｂ）であった。キャピラリーは、０．１ＭのＮａＯＨで３分間、その後、ミリＱ水で２分間、電解液で３分間処理して調整した。それぞれの泳動後、キャピラリーは、ミリＱ水で２分間、その後、リン酸で２分間、ミリＱ水で２分間洗い流した。水力学的注入は、５０ｍｂａｒ、４．０秒間で行った。電圧は、＋２５ｋＶであった。キャピラリーの温度は、３０Ｃであり、泳動時間は、１０．５分（方法Ａ）もしくは２０分（方法Ｂ）であった。
【０１１９】
実施例１及び２は、潜在的なアルデヒドを用いたアミノ転移を用いたｈＧＨのＰＥＧ化−国際公開第２００５０７０４６８号も参照のこと−の説明例を提供することを意図するものである。
2008543297.tif 000124
Ｉ．   ｈＧＨ、ヒト成長ホルモン
ＩＩ． Ｎε４０／Ｎε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノ−プロピル）ｈＧＨ
ＩＩＩ．Ｎε４０／Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ
ＩＶ． Ｎε４０／Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧイルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨ
【０１２０】
〔実施例１〕
Ｎε１４１−［２−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨの調製
2008543297.tif 000125
（ａ）  Ｎε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）を得るためのｈＧＨ（Ｉ．）のアミノ転移
ｈＧＨ（Ｉ．）（２００ｍｇ）をリン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．０、１４ｍｌ）に溶解した。
この溶液を、リン酸バッファー（５０ｍＭ、１ｍｌ、ｐＨ８．０、１，３−ジアミノプロパン−２−オールの溶解後に希塩酸を用いてｐＨ調製した）中に溶解した１，３−ジアミノプロパン−２−オール  （４ｍｍｏｌ、３７８ｍｇ）と混合した。
最後に、リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．０、１ｍｌ）中にＴＧａｓｅ（１８ｍｇ〜４０Ｕ）を溶解した溶液を加え、リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加えて体積を２０ｍｌに調整し、１，３−ジアミノプロパン−２−オールの濃度を０．２Ｍにした。合わせた混合液は、３７℃で４時間インキュベートした。
温度を室温まで下げ、Ｎ−エチルマレイミドを１ｍＭの終濃度となるように加えた。
さらに１時間後、混合液は１０倍体積のｔｒｉｓバッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．５）で希釈した。
生じた混合液のＣＥ分析によると、ｈＧＨ及びＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）に対応する二つのメジャーなピークと、Ｎε４０−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）及びＮε４０，Ｎε１４１  −ビス（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨに対応する二つのマイナーなピークが示された。最後の二成分は、以下の精製の間に取り除かれ、回収することはできなかった。
【０１２１】
（ｂ）  Ｎε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）のイオン交換クロマトグラフィー
（ａ）の結果生じた溶液を、予めバッファーＡ（５０ｍＭ  ｔｒｉｓ、ｐＨ８．５）で平衡化したＭｏｎｏＱ１０／１００ＧＬカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５１６７−０１）にアプライした。その後、バッファーＡ中０％から１００％の勾配のバッファーＢ（５０ｍＭ  ｔｒｉｓ、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．５）を用いて、２．５ｍｌ／分の流速で６３分間溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集め、選ばれた画分についてＭａｌｄｉ−Ｔｏｆ分析を行った。Ｍａｌｄｉ−Ｔｏｆ質量分析により期待されるｍｗを与える最大のピークに対応する画分がプールされた。このプールは、ｈＧＨ（Ｉ．）及びＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノ−プロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）を、ＣＥ（方法Ａ）により判明した６０：４０の比率で含む。国際出願国際公開第２００５ＤＫ００００２８に記載されたペプチドマッピング実験によると、以前に、（ａ）と（ｂ）を組み合わせた手順によりＧｌｎ−１４１の選択的誘導体化が起こることが示されている。
【０１２２】
（ｃ）  Ｎ−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノキシ）ブチル）フタルイミドの合成
2008543297.tif 000126
Ｎ−（４−ブロモブチル）フタルイミド（１８．９ｇ、６７．０ｍｍｏｌ）、ＭｅＣＮ（１４ｍｌ）及びＮ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミン（１２．７ｇ、９５．４ｍｍｏｌ）の攪拌した混合液に、ＤＢＵ（１５．０ｍｌ、１０１ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。生じた混合液を５０℃で２４時間攪拌した。水（３００ｍｌ）及び１２Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍｌ）を加え、生成物をＡｃＯＥｔで３回抽出した。合わせた抽出液を、飽和食塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮した。生じたオイル（２８ｇ）をクロマトグラフィー（１４０ｇ  ＳｉＯ２、ヘプタン／ＡｃＯＥｔを用いた勾配溶出）で精製した。１７．９ｇ（８０％）の標題の化合物をオイルとして得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．５０（ｍ、２Ｈ）、１．６７（ｍ、２Ｈ）、３．５８（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ）、３．６８（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ）、７．８５（ｍ、４Ｈ）、９．９０（ｓ、１Ｈ）。
【０１２３】
（ｄ）４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノキシ）ブチルアミンの合成。
2008543297.tif 000127
（ａ）で得られたＮ−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノキシ）ブチル）フタルイミド（８．３５ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍｌ）溶液に、ヒドラジン水和物（２０ｍｌ）を加え、混合液を８０℃で３８時間攪拌した。混合液を濃縮し、残留物をＥｔＯＨ及びＰｈＭｅと共にコエバポレートした。残留物にＥｔＯＨ（５０ｍｌ）を加え、沈殿したフタルヒドラジドを濾過し、ＥｔＯＨ（５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、５．０８ｇのオイルを得た。このオイルを、Ｋ２ＣＯ３（１０ｇ）水（２０ｍｌ）溶液と混合し、生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。乾燥（ＭｇＳＯ４）及び濃縮により、２．２８ｇ（４５％）の標題の化合物がオイルとして得られ、さらなる精製なしで用いられた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３８（ｍ、２Ｈ）、１．３９（ｓ、９Ｈ）、１．５１（ｍ、２Ｈ）、２．５１（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ）、３．６６（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ）。
【０１２４】
（ｅ）  Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）ヒドロキシル−アミンの合成。
2008543297.tif 000128
（ｍＰｅｇ（２００００）−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−ＣＨ２）２ＣＨ−Ｏ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−ＯＳｕ  （Ｎｅｋｔａｒ、２Ｚ３Ｙ０Ｔ０１、２．０ｇ、５０μｍｏｌ）を、４−（Ｂｏｃ−アミノキシ）ブチルアミン（１８７ｍｇ、９１５μｍｏｌ）のＤＣＭ（１２ｍｌ）溶液と混合した。室温で４３時間攪拌した後、攪拌したＥｔ２Ｏ（２００ｍｌ）に混合液を滴下して加えた。濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。生成物をＤＣＭ（１０ｍｌ）に再溶解し、もう一度Ｅｔ２Ｏ（２００ｍｌ）から沈殿させた。この沈殿化を３回繰り返した。生成物をＤＣＭ（１００ｍｌ）に溶解し、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５（１１ｇ；ＤＣＭにより洗浄）で５分間処理した。濾過及び濃縮後、生成物は上述のようにＥｔ２Ｏから沈殿させた。濾過及び減圧下での乾燥により、１．９８ｇの標題の化合物を固体として得た。
【０１２５】
（ｆ）  Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）アミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）−ヒドロキシルアミンの合成
2008543297.tif 000129
前反応の生成物（１．０ｇ）をＤＣＭに溶解し、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５（８．０ｇ；ＤＣＭにより洗浄）を加えた。１０分間の攪拌の後、混合液を濾過し、濾液を濃縮した。ＤＣＭ（２５ｍｌ）及びＴＦＡ（２５ｍｌ）を残留物に加えた。室温に０．５時間置いた後、混合液を濃縮し、残留物をＤＣＭ及びトルエンの混合液で２回コエバポレートし、減圧下一晩乾燥させた。残留物を、水（１５ｍｌ）に溶解し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて水で２回洗浄した。その後、溶液に２−メチルピリジンを加えｐＨ６に中和した。この溶液を直接、オキシム化に用いた。
【０１２６】
（ｇ）  Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ（ＩＩＩ．）を得るためのＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）の酸化
５３．８ｍｇの（Ｉ．）及び（ＩＩ．）を含む（ｂ）２由来のプールされた画分のバッファーを、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、１５ｍＭトリエタノールアミン／１３７ｍＭ３−（メチルチオ）−１−プロパノールｐＨ８．５（１Ｎ塩酸で調製）バッファーに４回交換した。その後、溶液を５．４ｍｌに濃縮した。これに、０．５４ｍｌの２５ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウム水溶液を加え、混合液を暗所で室温３０分間インキュベートした。
その後、溶液を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、１５ｍＭトリエタノールアミンバッファーｐＨ８．５で３回洗浄した。その後、氷上で冷却し、１．６２ｍｌの氷冷Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加えた。
【０１２７】
（ｈ）  Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）オキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨを得るための、Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）オキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）ヒドロキシルアミンとのＮε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ（ＩＩＩ．）のオキシム化
（ｇ）の結果生じた混合液を、（ｆ）のＰＥＧ溶液に、緩やかな混合の下でゆっくりと加え、反応を室温で７２時間進行させた。
【０１２８】
（ｉ）  Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）オキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨのイオン交換クロマトグラフィー
（ｈ）の結果生じた溶液を、予めバッファーＡ（１０ｍＭ  ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０）で平衡化したＭｏｎｏＱ１０／１００ＧＬカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５１６７−０１）にアプライした。
その後、バッファーＡ中０％から１００％の勾配のバッファーＢ（５０ｍＭ  ｔｒｉｓ、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．５）を用いて、２．０ｍｌ／分の流速で７９分間溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集めた。所望のピークに対応する画分がプールされ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて１０ｍｌに濃縮された。
【０１２９】
（ｊ）  Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（１，３−ビス（ｍＰＥＧ（２００００）オキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨのサイズ排除クロマトグラフィー
（ｉ）の結果生じた溶液を、予めバッファーＣ（５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム、ｐＨ８．０）で平衡化したＨｉＬｏａｄ２６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−１０７１−０１）にアプライした。その後、０．５ｍｌ／分の流速のバッファーＣで９５６分間溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集め、以前の試験に従ってプールした。
ＳＤＳ  ｐａｇｅによると、１２０ｋＤａより大きな見かけの分子量を有する単一のバンドが示された。
【０１３０】
〔実施例２〕
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３００００）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨの調製
2008543297.tif 000130
（ａ）  Ｎε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）を得るためのｈＧＨ（Ｉ．）のアミノ転移
ｈＧＨ（Ｉ．）（２００ｍｇ）をリン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．０、１４ｍｌ）に溶解した。
この溶液を、リン酸バッファー（５０ｍＭ、１ｍｌ、ｐＨ８．０、１，３−ジアミノプロパン−２−オールの溶解後に希塩酸を用いてｐＨ調製した）中に溶解した１，３−ジアミノプロパン−２−オール  （３７８ｍｇ）と混合した。
最後に、リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．０、０．５ｍｌ）中にＴＧａｓｅ（１８ｍｇ〜４０Ｕ）を溶解した溶液を加え、リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．０）を加えて体積を２０ｍｌに調整し、１，３−ジアミノプロパン−２−オールの濃度を０．２Ｍにした。合わせた混合液は、３７℃で４時間インキュベートした。
温度を室温まで下げ、Ｎ−エチルマレイミドを１ｍＭの終濃度となるように加えた。
さらに１時間後、混合液は１０倍体積のｔｒｉｓバッファー（５０ｍＭ、ｐＨ８．５）で希釈した。
生じた混合液のＣＥ分析によると、ｈＧＨ及びＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）に対応する二つのメジャーなピークと、Ｎε４０−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）及びＮε４０，Ｎε１４１  −ビス（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨに対応する二つのマイナーなピークが示された。最後の二成分は、以下の精製の間に取り除かれ、回収することはできなかった。
【０１３１】
（ｂ）  Ｎε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノ−プロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）のイオン交換クロマトグラフィー
（ａ）の結果生じた溶液を、予めバッファーＡ（５０ｍＭ  ｔｒｉｓ、ｐＨ８．５）で平衡化したＭｏｎｏＱ１０／１００ＧＬカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５１６７−０１）にアプライした。その後、２ｍｌ／分の流速で、段階的な勾配を用いて溶出した：
ステップ１：バッファーＡ中０％から６０％のバッファーＢ（５０ｍＭ  ｔｒｉｓ、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．５）で１２分間。
ステップ２：バッファーＡ中６０％から６４％のバッファーＢで８間。
ステップ３：バッファーＡ中６４％のバッファーＢで１６分間。
ステップ４：バッファーＡ中６４％から６７％のバッファーＢで１６分間。
ステップ５：バッファーＡ中６７％のバッファーＢで１６分。
ステップ６：バッファーＡ中６７％から１００％のバッファーＢで１２分間。
２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集め、最大のピークに対応する画分がプールされた。このプールは、ｈＧＨ（Ｉ．）及びＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノ−プロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）を、ＣＥ（方法Ａ）により判明した５８：４２の比率で含む。国際出願国際公開２００５ＤＫ００００２８号に記載されたペプチドマッピング実験によると、以前に、（ａ）と（ｂ）を組み合わせた手順によりＧｌｎ−１４１の選択的誘導体化が起こることが示されている。
【０１３２】
（ｃ）  Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３００００）オキシ）ブチリルアミノ）ブチル）ヒドロキシルアミンの合成。
2008543297.tif 000131
４−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノキシ）ブチルアミン（０．４３ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍｌ）溶液と混合した。室温で４３時間攪拌した後、攪拌したＥｔ２Ｏ（２００ｍｌ）に、ｍＰｅｇ（３００００）−Ｏ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−ＯＳｕ（Ｎｅｋｔａｒ、２Ｍ４５０Ｒ０１、ＭＷ３０ｋＤａ、５．０ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混合液を室温で５日間攪拌し、減圧下濃縮し、残留物を真空乾燥した。ｉＰｒＯＨ（４ｘ８０ｍｌ）からの再結晶と、それに続くＤＣＭとのコエバポレーション、及び、減圧下での乾燥により、４．１４ｇのＢｏｃ保護アルコキシルアミンが得られた。
前反応の生成物（０．６５ｇ）をＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解し、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５（６．０ｇ；ＤＣＭにより洗浄）を加えた。１０分間の攪拌の後、混合液を濾過し、濾液を濃縮した。ＤＣＭ（２０ｍｌ）及びＴＦＡ（２０ｍｌ）を残留物に加えた。室温に０．５時間置いた後、混合液を濃縮し、残留物をＤＣＭ及びトルエンの混合液で２回コエバポレートし、減圧下一晩乾燥させた。残留物を、水（１５ｍｌ）に溶解し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて水で２回洗浄した。その後、溶液に２−メチルピリジンを加えｐＨ６に中和した。この溶液を直接、オキシム化に用いた。
【０１３３】
（ｄ）  Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ（ＩＩＩ．）を得るためのＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ．）の酸化
７８．１４ｍｇの（Ｉ．）及び（ＩＩ．）を含む（ｂ）由来のプールされた画分のバッファーを、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、１５ｍＭトリエタノールアミン／１３７ｍＭ  ３−（メチルチオ）−１−プロパノールｐＨ８．５（１Ｎ塩酸で調製）バッファーに４回交換した。最後に、溶液を３．３ｍｌに濃縮した。これに、０．３３ｍｌの２５ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウム水溶液を加え、混合液を暗所で室温３０分間インキュベートした。
その後、溶液を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、１５ｍＭトリエタノールアミンバッファーｐＨ８．５で３回洗浄した。その後、氷上で冷却し、１．０ｍｌの氷冷Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加えた。
【０１３４】
（ｅ）  Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３００００）オキシ）ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）エチル］ｈＧＨを得るための、Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ（ＩＩＩ．）のＯ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３００００）オキシ）ブチリルアミノ）ブチル）−ヒドロキシルアミンとのオキシム化
（ｄ）の結果生じた混合液を、（ｃ）のＰＥＧ溶液に、緩やかな混合の下でゆっくりと加え、反応を室温で１４４時間進行させた。
【０１３５】
（ｆ）  Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３００００）オキシ）−ブチリルアミノ）ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨのイオン交換クロマトグラフィー
（ｅ）の結果生じた溶液を、予めバッファーＡ（１０ｍＭ  ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０）で平衡化したＭｏｎｏＱ１０／１００ＧＬカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５１６７−０１）にアプライした。
その後、バッファーＡ中０％から１００％の勾配のバッファーＢ（１０ｍＭ  ｔｒｉｓ、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．５）を用いて、１．５ｍｌ／分の流速で１０７分間溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集めた。所望のピークに対応する画分がプールされ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５限外濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて１０ｍｌに濃縮された。
【０１３６】
（ｇ）  Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（４−（４−（ｍＰＥＧ（３００００）オキシ）ブチリルアミノ）−ブチル）オキシイミノ）−エチル］ｈＧＨのサイズ排除クロマトグラフィー
（ｆ）の結果生じた濃縮溶液を、予めバッファーＣ（５０ｍＭ炭酸水素アンモニウム、ｐＨ８．０）で平衡化したＨｉＬｏａｄ２６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−１０７１−０１）にアプライした。その後、０．５ｍｌ／分の流速のバッファーＣで９５６分間溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集め、以前の試験に従ってプールした。
ＳＤＳ  ｐａｇｅによると、約１１７ｋＤａの見かけの分子量を有する単一のバンドが示された。
【０１３７】
〔実施例３〕
Ｎε１４１−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰｅｇ（２００００）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ（ＶＩＩ．）の調製
2008543297.tif 000132
実施例３における、ジアミノキシ化合物を用いたアミノ転移を用いたｈＧＨとｍＰＥＧとのコンジュゲート化のスキーム。
2008543297.tif 000133
【０１３８】
（ａ）  Ｎε１４１−（３−（アミノキシ）プロポキシ）ｈＧＨ（Ｖ．）を得るためのｈＧＨ（Ｉ．）のアミノ転移
以下の溶液を調製した。
１）  １００ｍｇのｈＧＨ（Ｉ．）をＮａ−リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ６．０）約９ｍｌに溶解した。その後、ｐＨを６に調製し、Ｎａ−リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ６．０）を用いて、体積を１０ｍｌに調製した。
２）  ２．００ｇの１，３−ビスアミノキシプロパン．２ＨＣｌ（A. Shirayev, P. K. Thoo lin及びI. K. Moiseev, Synthesis, 38-40 (1997）をＮａ−リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ６．０）約５ｍｌに溶解し、その後、１と同様にｐＨ及び体積を調整した。
３）３０ｍｇのＴｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖａ  ＷＭ（味の素、０．３ｍｇ酵素）をＮａ−リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ６．０）約９ｍｌに溶解し、その後、１と同様にｐＨ及び体積を調整した。
溶液１＋２＋３を混合し、０．４５μｍの膜を通して濾過し、２．５時間の間、２２℃で反応させた。この時点で、ＣＥ（方法Ｂ）及びＭａｌｄｉ−ｔｏｆ質量分析によると、約５０％のｈＧＨの変換が観察され、約７０％の生成物が所望のｈＧＨ誘導体（Ｖ．）であった。３０ｍｌの２ｍＭ  Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）水溶液を反応混合液に加えた。ｐＨを８．０に調製し、限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ１５（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）１００００Ｄａカットオフ膜、３６００ＲＣＦ、室温、１／１０に体積を減少）により、ＮＥＭ２ｍＭ水溶液とリン酸バッファー５０ｍＭ、ｐＨ８．０との１：１混合液を用い、限外濾過により、溶液をバッファー交換した。
【０１３９】
（ｂ）  Ｎε１４１−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰｅｇ（２００００）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ（ＶＩＩ．）を得るための、Ｎε１４１−（３−（アミノキシ）プロポキシ）ｈＧＨ（Ｖ．）の４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰｅｇ（２００００）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）−エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブタナール（ＶＩ．）とのオキシム化
（ａ）での最後の洗浄後、ｐＨを６．０に調製した。１０ｍｌバッファー中の１８０ｍｇのｍＰＥＧ２−ＢｕｔｙｒＡＬＤ−４０Ｋ（ＶＩ．、Ｎｅｋｔａｒ  ０８３Ｙ０Ｔ０１）を加えた。反応は３時間以内に終結した。ＲＰ−ＨＰＬＣ（システムＡ）及びＳＤＳ−ｐａｇｅによると、ｈＧＨ−誘導体ＶからＰＥＧ化ｈＧＨ（ＶＩＩ．）への約１００％の変換が観察された。反応バッファーを、上述のように、１０ｍＭ  ｔｒｉｓバッファーｐＨ８．５を用い、限外濾過により３回交換した。
【０１４０】
（ｃ）  Ｎε１４１−（３−（（４−（２−（２−（２−（２−（４−（１，３−ビス（ｍＰｅｇ（２００００）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシ）ｈＧＨ（ＶＩＩ．）のイオン交換クロマトグラフィー
粗生成物を、１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５（バッファーＡ）及び１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５  ＋２００ｍＭ  ＮａＣｌ（バッファーＢ）をそれぞれ初期及び溶出バッファーとして用いたＭｏｎｏＱ１０／１００陰イオン交換カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
０％から１００％のＢの勾配を用い、２．０ｍｌ／分の流速で８０分間溶出した。所望の生成物（ＶＩＩ．）を含む約２４％バッファーＢ画分に溶出した生成物（ＶＩＩ．）を集め、プールし、５０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３バッファーｐＨ８．０で６回バッファー交換し、最後に凍結乾燥した。
純粋な生成物（ＶＩＩ．）が２つの副生成物とともに得られた：約２０％の異性体、位置Ｇｌｎ−４０でＰＥＧ化されたｈＧＨ、及び、約１０％の二量体、位置Ｇｌｎ−４０及びＧｌｎ−１４１の双方でＰＥＧ化されたｈＧＨ。これらの生成物は、陰イオン交換カラムクロマトグラフィーにより分離可能であった。生成物の同定は、ペプチドマッピング実験及びＳＤＳ−ｐａｇｅにより行った。
【０１４１】
〔実施例４〕
Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−ビス（ｍＰｅｇ（２００００）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨの調製
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（ａ）、（ｂ）  Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ
Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ（２５２ｍｇ）は実施例１で述べたようにして調製した。
（ｃ）  Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−（ｍＰｅｇ（２００００）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨを得るための、Ｎε１４１−（２−オキソエチル）ｈＧＨ（ＩＩＩ．）のＯ−（２−（２，３−（ｍＰｅｇ（２００００）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチル）ヒドロキシルアミン（Ｓｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＧＬ２−４００  ＣＡ、ＮＯＦ  Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）とのオキシム化
アミノキシ−ＰＥＧ誘導体（４５２ｍｇ  Ｓｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＧＬ２−４００  ＣＡ、ＮＯＦ  Ｃｏｒｐ．）を５．５ｍｌバッファー（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、０．３Ｍ、ｐＨ６．５）に溶解した。その後、酸化で得られた濃縮プールを１．２５ｍｌの氷冷ＮＭＰで希釈し、ＰＥＧ試薬の溶液にゆっくりと加えた。混合液を２日間ゆるやかに攪拌した。
【０１４２】
（ｄ）  Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−（ｍＰｅｇ（２００００）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨのイオン交換クロマトグラフィー
（ｃ）の結果生じた反応混合液を、脱塩カラム（ＨｉＰｒｅｐ２６／１０  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５０８７−０１）を用いて、２０ｍＭトリエタノールアミンバッファーｐＨ８．５にバッファー交換し、そのタンパク質を、予めバッファーＡ（２０ｍＭ  ｔｒエタノールアミン、ｐＨ８．５）で平衡化したイオン交換カラム（ＨｉＬｏａｄ２６／１０Ｑ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ、Ａｍｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にアプライした。その後、バッファーＡ中０％から１００％の勾配のバッファーＢ（２０ｍＭトリエタノールアミン、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．５）を用いて、５ｍｌ／分の流速で１０カラム体積分の間、溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集めた。所望のピークに対応する画分がプールされた。
【０１４３】
（ｅ）  Ｎε１４１−［２−（２−（２，３−（ｍＰｅｇ（２００００）イルオキシ）プロピルオキシカルボニルアミノ）エチルオキシミノ）エチル］ｈＧＨのサイズ排除クロマトグラフィー
（ｄ）のプールを、限外濾過により１５ｍｌに濃縮し、そのタンパク質を、脱塩カラム（ＨｉＰｒｅｐ２６／１０  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５０８７−０１）を用いて、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウムｐＨ８．０へとバッファー交換した。その後、そのタンパク質を、予め５０ｍＭ炭酸水素アンモニウムｐＨ８．０で平衡化されたサイズ排除カラム（ＨｉＬｏａｄ２６／１０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−１０７１−０１）にアプライした。その後、１．０ｍｌ／分の流速で溶出した。２８０ｎｍのＵＶ吸光に基づいて画分を集めた。
【０１４４】
〔実施例５〕
Ｎε１４１−［２−（Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４００００）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）オキシミノ）エチル］ｈＧＨの調製
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（ａ）  アミノ転移
ｈＧＨ（Ｉ）（１００ｍｇ）を１，３−ジアミノプロパン−２−オールでアミノ転移し、実施例１（ａ）及び（ｂ）と類似の手順を用いて、生成物を精製した。ＵＶ分光光度法及びＣＥ分析によると、精製から生じたプールは、３０ｍｇのタンパク質を含み、２０ｍｇがＮε１４１−（２−ヒドロキシ−３−アミノプロピル）ｈＧＨ（ＩＩ）であった。
【０１４５】
（ｂ）  Ｏ−（２−（２−（ｍＰＥＧ（４００００ｋ）イルオキシ）エチルアミノ）−２−オキソエチル）ヒドロキシルアミンの調製
2008543297.tif 000136
ジイソプロピルエチルアミン（０．０３４ｍｌ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（１０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルカルボジイミド（０．０１６ｍｌ、０．１ｍｍｏｌ）を、ビス−Ｂｏｃ−アミノキシ酢酸（０．３０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液に加えた。混合液を１５分間攪拌し、最低限の量のＤＣＭに溶解したｍＰｅｇ（４００００）−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２（Ｐｒｏｄｕｃｔ００８−０２８、Ｃｈｉｒｏｔｅｃｈ  Ｌｔｄ．  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ、ＭＷ４０ｋＤａ、１．０ｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混合液を室温で６時間攪拌し、生成物を沈殿させ、ジエチルエーテルで洗浄した。沈殿を、０．５ｍｌＤＭＦと１ｍｌＤＣＭの混合液に再溶解し、沈殿させ、ジエチルエーテルで洗浄した。これをもう一度繰り返し、乾燥させた後、７７０ｍｇの沈殿を単離した。
２００ｍｇの乾燥沈殿を５ｍｌのＤＣＭに最溶解し、５ｍＬのＴＦＡを加えた。３０分後、混合液をロータリーエバポレーターで濃縮し、１０ｍｌのエタノールで２回ストリップした。残留オイルを０．５ｍｌのＤＭＦと２ｍｌのＤＣＭとの混合液に再溶解し、沈殿させ、ジエチルエーテルで洗浄した。これをもう一回繰り返し、沈殿したＰＥＧ誘導体を乾燥し、１ｍｌのバッファー（０．３Ｍ  ＭＥＳ、ｐＨ６．５）に溶解した。
【０１４６】
（ａ）で得られたアミノ転移生成物をバッファー（２０ｍＭトリエタノールアミン、ｐＨ８．５）に溶解し、３−（メチルチオ）−１−プロパノール（６８３ｍＭ溶液１ｍｌ）を加えた。過ヨウ素酸ナトリウム  （５ｍｇ、１０当量）を加え、混合液を３０分間反応させ、その後、メチオニン水溶液（１６８ｍＭ）で３回洗浄し、限外濾過器（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて４．５ｍｌに濃縮した。その後、０．５ｍｌの氷冷Ｎ−メチル−ピロリドンを加え、ＰＥＧ誘導体の溶液へと加え、混合液を一晩反応させた。
反応混合液のバッファーを、予め平衡化した脱塩カラム（ＨｉＰｒｅｐ２６／１０  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５０８７−０１）で交換し、バッファー（ｔｒｉｓ  １０ｍＭ、ｐＨ８．５）で溶出し、プールを、１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５で予め平衡化されたイオン交換カラム（ＨｉＬｏａｄ２６／１０ＱＳｅｐｈａｒｏｓｅ、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−１０６６−０１）にアプライし、１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐｈ８．５中の０．２Ｍ  ＮａＣｌの勾配を用い、４ｍｌ／分で１０カラム体積分の間溶出させた。ＲＰ−ＨＰＬＣによって、ｐｅｇ化したｈＧＨを含む画分が集められ、予め平衡した脱塩カラム（ＨｉＰｒｅｐ２６／１０  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５０８７−０１）でバッファー交換され、バッファー（炭酸アンモニウム５０ｍＭ、ｐＨ８．５）で溶出された。プールは、凍結乾燥された。標的化合物の収量は、３．２５ｍｇであった。
【０１４７】
〔実施例６〕
Ｎε１４１−［２−（３−（４−（（１，３−ビス（ｍＰｅｇ（３００００）イルアミノカルボニルオキシ）−２−プロピルオキシ）ブチリデン）アミノキシ）プロピルオキシイミノ）エチル］ｈＧＨ（ＶＩＩ．）の調製
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【０１４８】
ｈＧＨ（１００ｍｇ）を、バッファー（７ｍｌ、リン酸二水素ナトリウム１２５ｍＭ、ｐＨ６．０）に溶解した。１，３−ビス−アミノキシプロパン．２ＨＣｌ（１２５ｍＭのｐＨ６．０に調製したリン酸二水素ナトリウム溶液５．０ｍｌ中に２．０ｇ）を加え、最後にＴＧａｓｅ（Ａｃｔｉｖａ  ＷＭ、味の素、１２５ｍＭのｐＨ６．０のリン酸二水素ナトリウム溶液２ｍｌ中に３０ｍｇ）を加え、リン酸二水素ナトリウムバッファー（１２５ｍＭ、ｐＨ６．０）で体積を３０ｍｌに調整した。
３７℃で４時間の後、ＮＥＭ（１００ｕｌ、１００ｍＭ  ＮＥＭ）を加えることにより反応を終結させた。さらに３７℃で１時間後、過剰なビス−アミノキシプロパンを取り除き、予め平衡化した脱塩カラム（ＨｉＰｒｅｐ２６／１０  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５０８７−０１）でバッファー交換し、バッファー（ｔｒｉｓ１０ｍＭ、ｐＨ８．５）で溶出した。
６０ｋＤａの２−ａｒｍ  ＰＥＧアルデヒドの溶液（Ｎｅｋｔａｒ、０８３Ｙ０Ｖ０１  ＭＰＥＧ２−ＢＵＴＹＲＡＬＤ−６０Ｋ、１０ｍｌ水中に８００ｍｇ）を、タンパク質を含むプール（８２ｍｇのタンパク質を含む３２ｍｌ）に滴下して加えた。室温で一晩インキュベーションした後、４分して脱塩カラム（ＨｉＰｒｅｐ２６／１０  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７−５０８７−０１）で１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５に交換した。タンパク質を含むプールを合わせたものを、３分して、１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５で平衡化したＭｏｎｏＱ１０／１００ＧＬカラムにアプライし、１０ｍＭ  ｔｒｉｓ  ｐｈ８．５中の０．２Ｍ  ＮａＣｌの勾配を用いて、４ｍｌ／分の流速で、２０カラム体積分の間、溶出させた。標的化合物を含む画分を集め、バッファー交換し、上述のように再びクロマトグラフィーした。最後に、標的化合物を含む画分をプールし、そのプールを、予め平衡化したＨｉＬｏａｄ２６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ＰＧゲル濾過カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７１０７１−０１）にアプライし、５０ｍＭの炭酸アンモニウムで溶出させた。標的化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥させた。３５．７４ｍｇの所望の生成物が得られた。
【０１４９】
〔薬理学的方法〕
〔アッセイ（Ｉ）  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ成長ホルモン活性を測定するＢＡＦ  ｈＧＨ−Ｒアッセイ〕
ＢＡＦｈＧＨ−Ｒアッセイは、ＢＡＦ−３細胞を、増殖及び生存に関して成長ホルモン依存的に改変したｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖アッセイである。ＢＡＦ−３は、不死化げっ歯類骨髄由来前Ｂ細胞株である。元来、ＢＡＦ−３細胞は、増殖及び生存に関して、ＩＬ−３依存的である。一つのＩＬ−３分子が二つのＩＬ−３受容体に結合して二量体化させる時、ＩＬ−３シグナルが開始される。これは、ＪＡＫ−２／ＳＴＡＴシグナル経路の活性化、及び、それによる増殖及び生存に重要な遺伝子の転写の制御につながる。ＧＨ受容体（ＧＨ−Ｒ）は、ＩＬ−３と同じ受容体スーパーファミリー（サイトカイン／ヘマトポエチン受容体スーパーファミリー）に属し、同じＪＡＫ／ＳＴＡＴ細胞内シグナル経路を共有する。それ故に、ＢＡＦ−３細胞株にヒトＧＨ−Ｒを遺伝子導入した後には、細胞株はＧＨ−依存性細胞株へと変化した。その細胞株は、ヒトＧＨもしくは試験化合物の濃度を増しながら加えることにより、投与量関連性の、増殖刺激を示した。
ＢＡＦｈＧＨ−Ｒアッセイは、３７℃５％ＣＯ２で２４時間の間、ｈＧＨに関して細胞を飢餓状態にすること（ｈＧＨなしの培養培地）で開始される。細胞は遠心分離されて培地は取り除かれ、飢餓培地に再懸濁される。２０．０００細胞／ウェルでマイクロプレート（９６穴ＮＵＮＣ  ＴＣマイクロウェル９６Ｆ  ＳＩ蓋付きＮＵＮＣＬＯＮ  Ｄカタログ番号１６７００８）にまかれる。ヒトＧＨもしくは試験化合物が細胞に加えられ、プレートは３７℃５％ＣＯ２で６８時間培養される。
【０１５０】
細胞の代謝活性は、ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅカタログ番号Ｄａｌ  １０２５）で測定される。ＡｌａｍａｒＢｌｕｅは還元指示薬であり、細胞の代謝に固有の反応により還元され、それ故に、生細胞数の間接的な指標となる。ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）はそれぞれのウェルに加えられ、細胞はさらに４時間インキュベートされる。吸光は、５４４ｎＭの励起フィルター及び５９０ｎＭの発光フィルターを用いた蛍光プレートリーダーで測定される。
試料の吸光度は、ＧＨ／試験化合物の濃度の関数としてプロットされる。用量反応曲線から、ＥＣ５０値（最大反応の半分を引き起こすＧＨ／試験化合物の量）により表される力価を計算することができる。さらに、試験化合物の相対的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性は、ＥＣ５０（化合物）／ＥＣ５０（ｈＧＨ）として定義される比の値により記述することができる。１より大きな比の値は、試験化合物がヒトＧＨに比べて弱いことを示す。
【０１５１】
表１は、実施例に記載された化合物についての結果を示す。
〔表１〕
〔実施例に記載された種々のｈＧＨ化合物のＢＡＦ  ｈＧＨ−Ｒアッセイにおける相対的ｉｎ  ｖｉｔｒｏ効力。値は平均±ＳＤ。〕
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【０１５２】
〔薬力学〕
実施例の化合物の薬力学を、静脈内（ｉ．ｖ．）及び皮下（ｓ．ｃ．）単回投与後の雄のSpraque Dawleyラットで調べた。
試験化合物を、グリシン２０ｍｇ／ｍｌ、マンニトール２ｍｇ／ｍｌ、ＮａＨＣＯ３２．５ｍｇ／ｍｌからなり、ｐＨ８．２に調製された希釈バッファー中、１ｍｇ／ｍｌの終濃度に希釈した。
試験化合物を、２５０ｇの重さの雄のSpraque Dawleyラットで研究した。試験化合物を、２５Ｇの針を用いた単回注入の、尾静脈へのｉ．ｖ．もしくは首へのｓ．ｃ．の何れか一方で、１ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与した。
【０１５３】
それぞれの試験化合物について、表２に示される以下のスケジュールに従って、血液採取が実行された。
〔表２〕
〔それぞれの試験化合物に対する血液採取スケジュール。〕
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【０１５４】
それぞれの採取時に、２５Ｇの針を用いて０．２５ｍｌの血液を尾静脈から抜き取った。血液は、ＥＤＴＡコートされた試験チューブに試料として移され、１２００ｘＧ、４℃で１０分間の遠心分離をするまで氷上に保存された。血清は、ミクロチューブに移され、分析まで−２０℃で保存された。
試験化合物の濃度は、テンジクネズミの抗ｈＧＨポリクローナル抗体をキャッチャーとして用い、ビオチン化したｈＧＨ結合タンパク質（ヒトＧＨ受容体の可溶性部）をディテクターとして用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより測定した。アッセイの検出限界は、０．２ｎＭであった。
【０１５５】
非コンパートメント型の薬力学的解析が、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｉｎｃ．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて、それぞれの試験化合物の平均濃度−時間プロフィールに関して行われた。最終的半減期（ｔ１／２）及び平均残留時間（ＭＲＴ）の薬力学的パラメーター推定値は、表３に示される。
〔表３〕
〔単回ｉ．ｖ．及びｓ．ｃ．投与後のSpraque Dawleyラットにおける、実施例のｈＧＨ化合物の半減期（ｔ１／２）及び平均残留時間（ＭＲＴ）。〕
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【０１５６】
〔配列表の簡単な説明〕
配列番号１は、２２Ｋ−ｈＧＨとしても知られるヒト成長ホルモンのアミノ酸配列である。
【配列表】
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【国際調査報告】
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