(57)【要約】  本発明はＡβ結合ポリペプチド、例えばＡβ抗体の安定性を維持するための製剤を提供する。例示的な製剤には、マンニトールのような張度調整剤および緩衝剤またはヒスチジンのようなアミノ酸を含む。他の例示的な製剤には副産物、例えば高分子量ポリペプチド凝集物、低分子量ポリペプチド分解フラグメントおよびそれらの混合物の形成を抑制するために十分な量の酸化防止剤を含む。本発明の製剤は場合によりマンニトールのような張度調整剤、および緩衝剤またはヒスチジンのようなアミノ酸を含んでなってもよい。製剤は幾つかの異なる投与経路に適している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのＡβ結合ポリペプチド、製剤を投与に適するようにするために十分な量で存在する少なくとも１つの張度調整剤、および生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量の少なくとも１つの緩衝剤を含んでなる安定化された製剤。
【請求項２】
さらに少なくとも１つの酸化防止剤を含んでなる請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
少なくとも１つの酸化防止剤がメチオニンである請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
少なくとも１つの張度調整剤がマンニトールである請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
少なくとも１つの張度調整剤がＮａＣｌである請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
少なくとも１つの緩衝剤がヒスチジンである請求項１に記載の製剤。
【請求項７】
少なくとも１つの緩衝剤がコハク酸塩である請求項１に記載の製剤。
【請求項８】
少なくとも１つの緩衝剤がリン酸ナトリウムである請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
さらに少なくとも１つの安定化剤を含んでなる請求項１に記載の製剤。
【請求項１０】
少なくとも１つの安定化剤がポリソルベート８０である請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
少なくとも１つのＡβ結合ポリペプチドが、抗Ａβ抗体、抗Ａβ抗体Ｆｖフラグメント、抗Ａβ抗体Ｆａｂフラグメント、抗Ａβ抗体Ｆａｂ’（２）フラグメント、抗Ａβ抗体Ｆｄフラグメント、単鎖抗Ａβ抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗Ａβ抗体フラグメント（Ｄａｂ）、抗Ａβ抗体に由来する少なくとも１つの抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなるベータ−プリーツシートポリペプチド、および抗Ａβ抗体に由来する少なくとも１つの抗体ＣＤＲを含んでなる非球状ポリペプチドからなる群から選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
少なくとも１つのＡβ結合ポリペプチドが抗Ａβ抗体である、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
抗Ａβ抗体がＡβの１−７、１−５、３−７、３−６、１３−２８、１５−２４、１６−２４、１６−２１、１９−２２、３３−４０および３３−４２からなる群から選択される残基内のエピトープに特異的に結合する、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
抗Ａβ抗体が残基１−７内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
抗Ａβ抗体が残基１−５内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項１６】
抗Ａβ抗体が残基３−６内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項１７】
抗Ａβ抗体が残基３−７内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項１８】
抗Ａβ抗体が残基１３−２８内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項１９】
抗Ａβ抗体が残基１６−２４内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項２０】
抗Ａβ抗体が残基１６−２１内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項２１】
抗Ａβ抗体が残基１９−２２内のエピトープに特異的に結合する請求項１３に記載の製剤。
【請求項２２】
抗Ａβ抗体がヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される、請求項１２に記載の製剤。
【請求項２３】
さらに安定化剤および酸化防止剤を含んでなる請求項２２に記載の製剤。
【請求項２４】
安定化剤がポリソルベート８０であり、酸化防止剤がメチオニンであり、張度調整剤がマンニトール、ソルビトールまたはＮａＣｌであり、そして緩衝剤がヒスチジンである、請求項２３に記載の製剤。
【請求項２５】
製剤が凍結乾燥製剤である請求項２２に記載の製剤。
【請求項２６】
製剤が液体製剤である請求項２２に記載の製剤。
【請求項２７】
抗体がヒトＩｇＧ１のアイソタイプである請求項２２に記載の製剤。
【請求項２８】
抗体がヒトＩｇＧ４のアイソタイプである請求項２２に記載の製剤。
【請求項２９】
抗Ａβ抗体が約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１２に記載の製剤。
【請求項３０】
抗Ａβ抗体が約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１２に記載の製剤。
【請求項３１】
抗Ａβ抗体が約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する請求項１２に記載の製剤。
【請求項３２】
少なくとも１つの張度調整剤が、濃度約１重量／容量％〜約１０重量／容量％のＤ−マンニトールである請求項２３に記載の製剤。
【請求項３３】
Ｄ−マンニトールの濃度が約２重量／容量％〜約６重量／容量％である請求項３２に記載の製剤。
【請求項３４】
少なくとも１つの緩衝剤が濃度約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭのヒスチジンである、請求項２３に記載の製剤。
【請求項３５】
製剤が約５．５〜約６．５のｐＨを有する請求項２３に記載の製剤。
【請求項３６】
抗Ａβ抗体がヒト化３Ｄ６抗体である、請求項２２に記載の製剤。
【請求項３７】
抗Ａβ抗体がヒト化１２Ａ１１抗体である、請求項２２に記載の製剤。
【請求項３８】
抗Ａβ抗体がヒト化２６６抗体である、請求項２２に記載の製剤。
【請求項３９】
抗Ａβ抗体がヒト化１５Ｃ１１抗体である、請求項２２に記載の製剤。
【請求項４０】
少なくとも約１２カ月間、凍結より高い温度から約１０℃までの温度で安定であり、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有する製剤であって：
ｉ．濃度約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つのＡβ抗体；
ｉｉ．濃度約４重量／容量％のマンニトール、または濃度約１５０ｍＭのＮａＣｌ；
ｉｉｉ．約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンまたはコハク酸塩；および
ｉｖ．１０ｍＭのメチオニン
を含んでなる上記製剤。
【請求項４１】
製剤が少なくとも約２４カ月間、約２℃〜８℃の温度で安定であり、そして濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４２】
製剤が約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約４重量／容量％のマンニトール、および約．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４３】
製剤が約６．０〜約６．２のｐＨを有し、そして約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体、約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトールおよび約．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４４】
製剤が約６．０〜約６．２のｐＨを有し、そして約３０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体、約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトールおよび約．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４５】
Ａβ抗体がヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される、請求項４０に記載の製剤。  
【請求項４６】
製剤が約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトール、およびヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体からなる群から選択される約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４７】
製剤が約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約１５０ｍＭのＮａＣｌ、およびヒト化１２Ｂ４抗体およびヒト化１２Ａ１１抗体からなる群から選択される約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４８】
製剤が約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトール、およびヒト化２６６抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含んでなる、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４９】
少なくとも２４カ月間、約２℃〜８℃の温度で安定であり、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有し、約２ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌのヒト化３Ｄ６抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含んでなる製剤。
【請求項５０】
さらに約４重量／容量％のマンニトールを含んでなる請求項４９に記載の製剤。
【請求項５１】
さらに濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる請求項４９に記載の製剤。
【請求項５２】
約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる請求項５１に記載の製剤。
【請求項５３】
ヒト化３Ｄ６抗体が約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項４９に記載の製剤。
【請求項５４】
少なくとも約２４カ月間、約２℃〜約８℃の温度で安定であり、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有し、約２ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌのヒト化３Ｄ６抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、および約４重量／容量％のマンニトールおよび約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる製剤。
【請求項５５】
少なくとも約２４カ月間、約２℃〜約８℃の温度で安定であり、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有し、約２ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヒト化２６６抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含んでなる製剤。
【請求項５６】
さらに約４重量／容量％のマンニトールを含んでなる請求項５５に記載の製剤。
【請求項５７】
さらに濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる請求項５５に記載の製剤。
【請求項５８】
少なくとも約２４カ月間、約２℃〜約８℃の温度で安定であり、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有し、約２ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヒト化１２Ａ１１抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含んでなる製剤。
【請求項５９】
さらに約１５０ｍＭのＮａＣｌを含んでなる請求項５８に記載の製剤。
【請求項６０】
さらに濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる請求項５８に記載の製剤。
【請求項６１】
少なくとも約２４カ月間、約２℃〜約８℃の温度で安定であり、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有し、約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのヒト化１２Ａ１１抗体、約５ｍＭのヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４重量／容量％のマンニトールおよび約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる製剤。
【請求項６２】
約−５０℃から約−８０℃で解凍した時に安定であり、約４０〜約６０ｍｇ／ｍｌの抗Ａβ抗体、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌのヒスチジン、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜２．０ｍｇ／ｍｌのメチオニン、および約０．０５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含んでなり、ここで製剤が約６．０のｐＨを有する製剤。
【請求項６３】
マンニトールが排除されている請求項６２に記載の製剤。
【請求項６４】
Ａβ抗体がヒト化３Ｄ６抗体である請求項６３に記載の製剤。
【請求項６５】
Ａβ抗体がヒト化２６６抗体である請求項６３に記載の製剤。
【請求項６６】
約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトールを含んでなり、そして約６のｐＨを有する製剤。
【請求項６７】
約３０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約６％のマンニトールを含んでなり、そして約６．２のｐＨを有する製剤。
【請求項６８】
約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含んでなり、そして約６のｐＨを有する製剤。
【請求項６９】
約１０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約１０％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含んでなり、そして約６．５のｐＨを有する製剤。
【請求項７０】
約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含んでなり、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有する製剤。
【請求項７１】
約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約０．００５％のポリソルベート８０を含んでなり、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有する製剤。
【請求項７２】
ａ．約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇの抗Ａβ抗体
ｂ．約４％のマンニトールまたは約１５０ｍＭのＮａＣｌ
ｃ．約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンまたはコハク酸塩；および
ｄ．約１０ｍＭのメチオニン
を含んでなる製剤を含んでなる製薬学的単位剤形。
【請求項７３】
約０．００１％〜約０．１％のポリソルベート８０を含んでなる、請求項７２に記載の製薬学的単位剤形。
【請求項７４】
約４０ｍｇ〜約６０ｍｇの抗Ａβ抗体を含んでなる、請求項７３に記載の製薬学的単位剤形。
【請求項７５】
約６０ｍｇ〜約８０ｍｇの抗Ａβ抗体を含んでなる、請求項７３に記載の製薬学的単位剤形。
【請求項７６】
約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇの抗Ａβ抗体を含んでなる、請求項７３に記載の製薬学的単位剤形。
【請求項７７】
約１２０ｍｇ〜約１６０ｍｇの抗Ａβ抗体を含んでなる、請求項７３に記載の製薬学的単位剤形。
【請求項７８】
約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇの抗Ａβ抗体を含んでなる、請求項７３に記載の製薬学的単位剤形。
【請求項７９】
ａ．  ｉ．約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇのヒト化抗Ａβ抗体、
ｉｉ．約４％のマンニトールまたは約１５０ｍＭのＮａＣｌ
ｉｉｉ．約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジン、および
ｉｖ．約１０ｍＭのメチオニン  
を含んでなる製剤を含んでなるガラスバイアル；および
ｂ．約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を達成するために必要な適切な容量を使用するための使用説明書を含んでなる使用のためのラベル
を含んでなる治療用品。
【請求項８０】
用量が約．５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇである請求項７９に記載の治療用品。
【請求項８１】
用量が約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇである請求項７９に記載の治療用品。
【請求項８２】
抗Ａβ抗体濃度が約１０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌである請求項７９に記載の治療用品。
【請求項８３】
抗Ａβ抗体濃度が約２０ｍｇ／ｍｌである請求項７９に記載の治療用品。
【請求項８４】
さらに約０．００５％のポリソルベート８０を含んでなる請求項７９に記載の治療用品。
【請求項８５】
使用が皮下投与である請求項７９に記載の治療用品。
【請求項８６】
使用が静脈内投与である請求項７９に記載の治療用品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、「抗Ａベータ抗体製剤」という表題の特許文献１（２００５年１月２８日出願）の利益を主張する。上記出願の全内容は、引用により本明細書に編入する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
アルツハイマー病（“ＡＤ”）は、アミロイド斑の発生、神経細線維もつれ、および有意な神経損失を特徴とする神経変性障害である。β−アミロイドタンパク質（Ａβペプチドとも呼ばれる）は老人斑の主要な成分であるが、アルツハイマー病の病因と結び付けられてきた（非特許文献１；非特許文献２）。β−アミロイドは培養したニューロンに対して直接的に毒性であり（非特許文献３）、そして種々のメディエーターを介して間接的に毒性の両方である（非特許文献４；非特許文献５）。さらにＰＤＡＰＰマウスおよびラットモデルを含むインビボのモデルは、β−アミロイドを学習欠損、改変された認知機能、および長期の海馬相乗作用（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）の阻害と結び付けた（非特許文献６：非特許文献７）。したがって興味の大部分は、潜在的に疾患の重篤度を下げるか、または疾患自体を排除するためにβ−アミロイドのレベルを改変する治療に集中した。
【０００３】
ＰＤＡＰＰマウスおよびラットの実験モデルにおいて成功した実験に対応して、最近生まれた１つのＡＤ処置法は、β−アミロイドに特異的な抗体のような免疫グロブリンを提供するための（治療用免疫グロブリンが個体に投与される受動免疫感作の場合のような）、あるいは免疫グロブリンを生成するための（個体の免疫系が投与した抗原に対する免疫グロブリンを生産するために活性化される能動免疫感作の）いずれかの個体の免疫感作である。これらの抗体は次いで、β−アミロイドの凝集を防止することにより（非特許文献８）、または小膠細胞が斑を貪食し、そして除去することを刺激することにより（非特許文献９）、斑の負荷量を減らすことに役立つ。さらに例として、ヒト化抗ＡβペプチドＩｇＧ１モノクローナル抗体（ヒト化３Ｄ６抗体）は、ヒトＡβペプチドに選択的に結合することにより効果的にＡＤを処置できる。
【０００４】
生物学的活性を維持するために、タンパク質、そして特に抗体について、製剤はタンパク質のアミノ酸の少なくともコア配列の立体配置的完全性を無欠に維持にしなければならないと同時に、タンパク質の多くの官能基を分解から保護しなければならない。タンパク質の分解経路には化学的な不安定性（すなわち、新たな化学的物体を生じる結合の形成または開裂によりタンパク質の修飾が関与する任意のプロセス）、または物理的不安定性（すなわちより高次のタンパク質構造における変化）が関与し得る。化学的不安定性は、脱アミド化、ラセミ化、加水分解、酸化、ベータ脱離またはジスルフィド交換から生じ得る。物理的不安定性は、例えば変性、凝集、沈殿または吸着から生じ得る。タンパク質製剤の安定性の一般的総説は、例えば非特許文献１０を参照にされたい。さらに担体のポリペプチドが製剤に含まれない場合、安定性が維持されることが望ましい。
【０００５】
タンパク質の不安定性の発生の可能性が広く考えられるが、特定のタンパク質に関する特定の不安定性を予想することは不可能である。これらの不安定性のいずれも、低下した活性、増大した毒性および／または増大した免疫原性を有するポリペプチド副産物または誘導体の形成を潜在的に生じる可能性がある。実際に、ポリペプチド沈殿は血栓、剤形の非均一性、および免疫反応を導く恐れがある。このようにポリペプチドの任意の製薬学的製剤の安全性および効力は、その安定性に直接的に関連している。
【０００６】
したがって生物学的ポリペプチド、例えばＡβ結合ポリペプチドの保存および送達時の安定性および生物学的活性を維持するたけでなく、治療的投与の種々の経路にも適する製剤の必要性が存続している。
【参考文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許仮出願第６０／６４８，６３１号明細書
【非特許文献１】Ｓｅｌｋｏｅ，Ｃｅｌｌ  ５８：６１１−６１２，１９８９
【非特許文献２】Ｈａｒｄｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０：１５４−１５９，１９９７
【非特許文献３】Ｌｏｒｅｎｚｏ  ａｎｄ  Ｙａｎｋｎｅｒ，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７７：８９−９５，１９９６
【非特許文献４】Ｋｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３３：３１５−３２０，１９９０
【非特許文献５】Ｍａｔｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  １２：３７６−３８９，１９９２
【非特許文献６】Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：９７５−９８５，２０００
【非特許文献７】Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４１６：５３５−５３９，２００２
【非特許文献８】Ｓｏｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ９４：４１０９−４１１２，１９９７
【非特許文献９】Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６：９１６−９１９，２０００
【非特許文献１０】Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６：９０３−９１８，１９８９
【発明の開示】
【０００８】
発明の要約
本発明は、取り込まれた生物学的に活性なタンパク質、例えばＡβ抗体またはそのフラグメントまたは部分のような特にＡβ結合タンパク質またはポリペプチドの安定性を提供し、そして生物学的活性を維持するために設計された製剤を提供する。本発明はさらに例えば望ましくないポリペプチド副産物の形成に耐性である安定化された液体ポリペプチド製剤のようなポリペプチド製剤を提供する。
【０００９】
ポリペプチドが例えば保存中に凝集物または分解フラグメントのような副産物を形成し、生物活性が損失する可能性がある場合、これにより単位用量あたりの分子の治療活性が危険にさらされる恐れがあるので、治療的用途の抗原結合ポリペプチドの完全性は特に重要である。さらに特殊化された機能に、特定の生物学的兆候における送達および使用に（例えば神経変性的状態の処置；ここでポリペプチドは血液脳関門（ＢＢＢ）を通過し、そして標的となる抗原に結合しなければならない）、意図される治療用ポリペプチドを安定化することが早急に望まれている。
【００１０】
１つの観点では、本発明は少なくとも１つのＡβ結合ポリペプチド、少なくとも１つの張度調整（ここで張度調整剤は製剤を投与に適するようにするために十分な量で存在する）、および生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量の少なくとも１つの緩衝剤を含む安定化された製剤を提供する。製剤は凍結乾燥または液体製剤であることができる。幾つかの製剤は、例えばメチオニンのような例えばアミノ酸酸化防止剤のような少なくとも１つの酸化防止剤を含む。幾つかの態様では、張度調整剤がマンニトールまたはＮａＣｌである。幾つかの態様では、少なくとも１つの緩衝剤がコハク酸塩、リン酸ナトリウムまたはヒスチジンのようなアミノ酸である。また好適な製剤は、例えばポリソルベート８０のような少なくとも１つの安定化剤も含む。幾つかの製剤では、安定化剤がポリソルベート８０であり、酸化防止剤がメチオニンであり、張度調整剤がマンニトール、ソルビトールまたはＮａＣｌであり、そして緩衝剤がヒスチジンである。幾つかの製剤では、少なくとも１つのＡβ結合ポリペプチドが抗Ａβ抗体、抗Ａβ抗体Ｆｖフラグメント、抗Ａβ抗体Ｆａｂフラグメント、抗Ａβ抗体Ｆａｂ’（２）フラグメント、抗Ａβ抗体Ｆｄフラグメント、単鎖抗Ａβ抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗Ａβ抗体フラグメント（Ｄａｂ）、抗Ａβ抗体に由来する少なくとも１つの抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むベータ−プリーツシートポリペプチド、および抗Ａβ抗体に由来する少なくとも１つの抗体ＣＤＲを含む非球状ポリペプチドからなる群から選択される。幾つかの製剤では、少なくとも１つのＡβ結合ポリペプチドが抗Ａβ抗体であり、例えばＡβの残基１−７、１−５、３−７、３−６、１３−２８、１５−２４、１６−２４、１６−２１、１９−２２、３３−４０、３３−４２内のエピトープに特異的に結合する抗Ａβ抗体、またはそのＦａｂ、Ｆａｂ’（２）またはＦｖフラグメントである。例えば抗Ａβ抗体は、Ａβの残基１−７、１−５、３−７または３−６内のようなＡβの残基１−１０内のエピトープに特異的に結合する。他の例示的抗Ａβ抗体は、例えばＡβの残基１６−２１または１９−２２のようなＡβの残基１３−２８内のエピトープに特異的に結合する。さらに別の例示的抗Ａβ抗体は、例えばＡβの３３−４０または３３−４２のようなＡβのＣ末端エピトープに特異的に結合する。好適な抗Ａβ抗体にはヒト化抗Ａβ抗体、例えばヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体またはヒト化１５Ｃ１１抗体を含む。
【００１１】
幾つかの態様では、抗Ａβ抗体はＡβの１−７および１３−２８内の残基を含む不連続エピトープに結合する。幾つかのそのような製剤では、抗体は二重特異的抗体または国際公開第０３／０７０７６０号パンフレットに記載されているプロセスにより作成された抗体である。そのような幾つかの製剤では、エピトープが不連続エピトープである。好適な製剤では、抗Ａβ抗体は、ヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体またはヒト化１５Ｃ１１抗体である。
【００１２】
抗体のアイソタイプは、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４または任意の他の製薬学的に許容され得るアイソタイプであることができる。好適な製剤では、アイソタイプはヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４である。幾つかの態様では、抗Ａβ抗体の濃度は約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌまたは約１ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌである。
【００１３】
幾つかの製剤では、少なくとも１つの張度調整剤がＤ−マンニトールであり、そして約１重量／容量％〜約１０重量／容量％、約２重量／容量％〜約６重量／容量％、または好ましくは約４重量／容量％の濃度で存在する。幾つかの製剤では、少なくとも１つの緩衝剤がヒスチジンであり、そして約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、好ましくは約５ｍＭ〜約１０ｍＭの濃度で存在する。別の製剤では、少なくとも１つの緩衝剤はコハク酸塩であり、そして約１０ｍＭのような０．１ｍＭ〜約２５ｍＭの濃度で存在する。幾つか製剤では、酸化防止剤がメチオニンであり、そして約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、または好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する。好適な製剤では、安定化剤がポリソルベート８０であり、そして約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％、約０．００５重量／容量％〜約０．０１重量／容量％、または約０．００５重量／容量％の濃度で存在する。製剤は約５〜７、約５．５〜６．５、約６．０〜約６．５、約６．２、約６．０，または約５．５、好ましくは約６．０のｐＨを有することができる。
【００１４】
好適な製剤は約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そしてＡβの１−７、１−５、３−７、３−６、１３−２８、１５−２４、１６−２４、１６−２１、１９−２２、３３−４０および３３−４２からなる群から選択される残基内のエピトープに特異的に結合する抗Ａβ抗体を含み、例えば濃度約２重量／容量％〜約６％のＤ−マンニトール、例えば濃度約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ、濃度約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭのメチオニン、および安定剤を含む。好ましくは安定化剤は濃度約０．００１％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０である。
【００１５】
製剤は、安定性を提供し、そして包含されたポリペプチドの生物学的活性を維持するために設計された安定化液体ポリペプチド剤であることができる。製剤は治療に活性なＡβ−結合ポリペプチドおよび酸化防止剤を、製剤の貯蔵中にポリペプチドの副産物の形成が減少するために十分な量で含む。
【００１６】
幾つかの液体ポリペプチド製剤は、高分子量のポリペプチド凝集物、低分子量のポリペプチド分解産物、またはそれらの混合物のような望ましくない副産物の形成に対して安定化されている。
【００１７】
治療用の抗原結合ポリペプチドが抗体である製剤では、最少にされるべき典型的な高分子量凝集物は、例えば抗体：抗体複合体、抗体：抗体フラグメント複合体、抗体フラグメント：抗体フラグメント複合体、またはそれらの混合物である。一般に高分子量複合体または副産物は、抗原結合ポリペプチドのモノマーよりも大きい分子量、例えばＩｇＧ抗体の場合、約１５０ｋＤより大きい分子量を有する。そのような抗体製剤では、典型的な低分子量ポリペプチド分解産物、例えば抗体軽鎖、抗体重鎖、抗体軽鎖および重鎖複合体、またはそれらの混合物から成る複合体は最少にされるべきである。一般に低分子量複合体または副産物は、抗原結合ポリペプチドのモノマーよりも小さい分子量、例えばＩｇＧ抗体の場合、約１５０ｋＤ未満の分子量を有する。
【００１８】
抗Ａβ抗体の好適な安定化製剤には、望ましくない副産物の生成を抑えるために十分な量の酸化防止剤としてメチオニン、例えば製剤を投与に適するようにするために十分な量の張度調整剤、および生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量のアミノ酸、例えばその誘導体を含む。
【００１９】
幾つかの製剤は凍結時に安定である。製剤は非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外に、好ましくは静脈内または皮下投与に適し得る。幾つかの製剤は個体の脳または脊髄液（ｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ）に標的化された送達に適し得る。製剤は実質的に保存剤を含まない状態であることができる。幾つかの製剤は少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、または少なくとも３０カ月間、安定である。幾つかの製剤は約−８０℃から約４０℃、約０℃〜約２５℃、約０℃〜約１０℃、好ましくは−約８０℃から−５０℃、または約２℃〜約８℃で安定である。
【００２０】
幾つかの製剤は、少なくとも１２カ月間、凍結より高い温度から約１０℃までの温度で安定であり、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有する。そのような製剤は、濃度約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つのＡβ抗体、濃度約４重量／容量％のマンニトール、または濃度約１５０ｍＭのＮａＣｌ、濃度約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンまたはコハク酸塩、および１０ｍＭのメチオニンを含む。１つのそのような製剤は、約６．０のｐＨ、約１ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約４重量／容量％のマンニトールを有する。他の製剤は約２℃〜８℃の温度で少なくとも約２４時間安定であり、そして濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０を含む。そのような製剤の幾つかは約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトール、および約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌまたは約５ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含む。他のそのような製剤は、好ましくは約６．０〜約６．２のｐＨで、約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトール、約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０、および約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌまたは約３０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含む。
【００２１】
そのような製剤中の抗Ａβ抗体は、好ましくはヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体またはヒト化１５Ｃ１１抗体である。１つのそのような製剤は、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトール、およびヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体およびヒト化１２Ａ１１抗体からなる群から選択される約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含む。別のそのような製剤は、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約１５０ｍＭのＮａＣｌおよびヒト化１２Ｂ４抗体およびヒト化１２Ａ１１抗体からなる群から選択される約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含む。さらに別のそのような製剤は、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約１０ｍＭのヒスチジン、約４重量／容量％のマンニトール、およびヒト化２６６抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ抗体を含む。
【００２２】
好適な製剤は、約２℃〜約８℃の温度で少なくとも約２４カ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有し、そして約２ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌのヒト化３Ｄ６抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含む。好ましくは製剤はさらに約４重量／容量％のマンニトールを含む。製剤は好ましくは、濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０、より好ましくは約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含む。そのような製剤では、ヒト化３Ｄ６抗体は約２０ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在することができる。
【００２３】
別の製剤は、約２℃〜約８℃の温度で少なくとも約２４カ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有し、そして約２ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌのヒト化３Ｄ６抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約４重量／容量％のマンニトールおよび約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含む。幾つかのそのような製剤では、ヒト化３Ｄ６抗体の濃度は、約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００２４】
別の好適な製剤は、約２℃〜約８℃の温度で少なくとも約２４カ月間安定であり、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約２ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヒト化２６６抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含む。幾つかのそのような製剤は、さらに約４重量／容量％のマンニトールを含む。そのような製剤の幾つかは濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０、例えば約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含む。幾つかのそのような製剤では、ヒト化２６６抗体は、濃度約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、または約２０ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌで存在する。
【００２５】
さらに別の製剤は、約２℃〜約８℃の温度で少なくとも約２４カ月間安定であり、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのヒト化２６６抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約４重量／容量％のマンニトールおよび約０．００５重量／容量％のポリソルベートを含む。
【００２６】
別の好適な製剤は、約２℃〜約８℃の温度で少なくとも約２４カ月間安定であり、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約２ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヒト化１２Ａ１１抗体、約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含む。そのような製剤の幾つかは、約１５０ｍＭのＮａＣｌを含む。そのような製剤は、濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベート８０、例えば約０．００５重量／容量％のようなポリソルベート８０を含む。そのような製剤では、ヒト化１２Ａ１１抗体は、濃度約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌ、または約２０ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌで存在する。
【００２７】
さらに別の製剤は、約２℃〜約８℃の温度で少なくとも約２４カ月間安定であり、約６．０〜約６．５のｐＨを有し、そして約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのヒト化１２Ａ１１抗体、約５ｍＭヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４重量／容量％のマンニトールおよび約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含む。
【００２８】
また本発明は、−約５０℃から−８０℃で解凍した時に安定であり、約６．０のｐＨを有し、そして約４０〜約６０ｍｇ／ｍｌの抗Ａβ抗体、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌのヒスチジン、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜２．０ｍｇ／ｍｌのメチオニン、および約０．０５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む製剤を提供する。好ましくはマンニトールは排除される。好ましくはＡβ抗体はヒト化３Ｄ６抗体またはヒト化２６６抗体である。
【００２９】
また本発明は、抗Ａβ抗体、マンニトールおよびヒスチジンを含む液体製剤を提供する。そのような製剤の幾つかは、抗Ａβ抗体が約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌで存在する。好ましくはマンニトールは製剤の等張性を維持するために十分な量で存在する。好ましくはヒスチジンは生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量で存在する。１つのそのような製剤には、約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトールを含み、そして約６のｐＨを有する。別のそのような製剤は、約３０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約６％のマンニトールを含み、そして約６．２のｐＨを有する。さらに別のそのような製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約６のｐＨを有する。別のそのような製剤には、約１０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約１０％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約６．５のｐＨを有する。
【００３０】
さらに別のそのような製剤には、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有する。さらに別のそのような製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約６．０〜約６．５のｐＨを有する。
【００３１】
また本発明は、約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトールを含み、そして約６のｐＨを有する静脈内投与に適する製剤を提供する。好ましくはそのような製剤には、約０．００５％のポリソルベート８０を含む。
【００３２】
本発明は、例えば抗体の液体製薬学的製剤中の抗原結合ポリペプチドの安定性を上げる方法を提供し、ここでポリペプチドはそうしなければ保存中に液体製剤に副産物の形成を現す。したがって方法は製剤中に酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類似体を、副産物の形成の量を減らすために十分な量で包含することを含んでなる。
【００３３】
また本発明は、約−５０℃から約−８０℃の温度で保存され、続いて約２℃〜約８℃の温度で保存されるヒト化抗Ａβ抗体製剤を安定性を維持する方法を提供し、この方法は（ｉ）約４０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌのヒト化抗Ａβ抗体、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍＬのＬ−ヒスチジン、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌのメチオニンおよび約０．０５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を合わせ；（ｉｉ）ｐＨを約６．０に調整し；（ｉｉｉ）低温容器で濾過し、そして凍結し；（ｉｖ）解凍し；（ｖ）マンニトールまたはＮａＣｌおよび希釈剤を、約４％マンニトールまたは約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのヒト化抗Ａβ抗体；約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジン；約１０ｍＭのメチオニンおよび約０．００５％のポリソルベート８０の最終濃度を生じるために十分な量で加え；（ｖｉ）濾過し；（ｖｉｉ）ガラス容器に移し、そして密閉し；そして（ｖｉｉｉ）約２℃〜約８℃の温度で保存することを含んでなる。
【００３４】
また本発明は、本明細書および使用説明書に記載する製剤を含有する容器を含むキットを提供する。
【００３５】
また本発明は、約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇの抗Ａβ抗体、約４％のマンニトール、または約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンまたはコハク酸塩、および約１０ｍＭのメチオニンの製剤を含む製薬学的単位剤形を提供する。そのような製薬学的単位剤形の幾つかは、約０．００１％〜約０．１％のポリソルベート８０を含む。そのような製薬学的単位剤形の幾つかは、約４０ｍｇ〜約６０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約８０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１６０ｍｇ、または約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇの抗Ａβ抗体を含む。そのような製剤の幾つかは、患者に投与する前に、約２℃〜約８℃の温度でガラス容器中に維持することができる。
【００３６】
さらに本発明は、約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇのヒト化抗Ａβ抗体、約４％のマンニトールまたは約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンおよび約１０ｍＭのメチオニンを含む製剤を含むガラスバイアルを含む治療用製品を提供する。そのような治療用製品の幾つかは、さらに患者において約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を達成するために必要な適切な容量を使用するための使用説明書を含む使用のためのラベルを含む。典型的にはバイアルは１ｍＬ、２ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２５ｍＬまたは５０ｍＬバイアルである。そのような治療用製品の幾つかの用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇである。幾つかのそのような治療用製品では、抗Ａβ抗体濃度が約１０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約２０ｍｇ／ｍｌである。治療用製品は好ましくは約０．００５％のポリソルベート８０を含む。幾つかのそのような治療用製品の製剤は、皮下投与または静脈内投与用である。
【００３７】
また本発明は、本明細書に記載するような製薬学的単位剤形を静脈内または皮下投与することを含む、Ａβ沈着を特徴とする疾患を予防的または治療的に処置する方法を提供する。
【００３８】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明白である。
【００３９】
発明の詳細な説明
明細書および特許請求の範囲の明確な理解を提供するために、以下の定義をこれから都合よく提供する。
【００４０】
本明細書で使用する用語「アミロイド形成性疾患」には、不溶性のアミロイド原線維の
形成または沈着に伴う（またはそれに引き起こされる）任意の疾患を含む。例となるアミロイド形成性疾患には限定するわけではないが全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発生糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭骨痴呆、およびプリオン関連伝播性海綿状脳障害（ヒトにおけるクールーおよびクロイツフェルト−ヤコブ病、およびそれぞれヒツジおよびウシにおけるスクラピーおよびＢＳＥ）がある。様々なアミロイド形成性疾患が沈着した原線維のポリペプチド成分の性質により定められ、または特徴付けられる。例えばアルツハイマー病の個体または患者では、β−アミロイドタンパク質（例えば野生型、バリアントまたは短縮化β−アミロイドタンパク質）がアミロイド沈着のポリペプチド成分を特徴付けている。したがってアルツハイマー病は、例えば個体もしくは患者の脳において「Ａβの沈着を特徴とする疾患」または「Ａβの沈着に伴う疾患」の一例である。
【００４１】
用語「β−アミロイドタンパク質」、「β−アミロイドペプチド」、「β−アミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド」は、本明細書では互換的に使用する。
【００４２】
用語「Ａβ結合ポリペプチド」には、Ａβペプチド（１つもしくは複数）に、または該Ａβペプチド内のエピトープ（１もしくは複数）に特異的に結合することができるポリペプチドを含む。典型的にはＡβ結合ポリペプチドは、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様ドメインの少なくとも１つの機能的部分、例えばポリペプチドに特徴的な特異的結合特性を付与する１もしくは複数の可変性領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる受容体を含んでなる。好適な抗原結合ポリペプチドには、抗体、例えばＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を含む。
【００４３】
用語「抗体」とは免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子（抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）の免疫学的に活性な部分を指し、モノクローナル抗体（完全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、キメラ抗体、ＣＤＲ−移植抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体および単鎖抗体（ｓｃＦｖｓ）を含む。本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、標的とする抗原の特定のエピトープ、例えばＡβのエピトープ（１つもしくは複数）を認識し、そして結合することができる唯一の種類の抗原結合部位を含む抗体分子の群を指す。このようにモノクローナル抗体組成物は、典型的にはそれが免疫反応する特定の標的抗原に対して単一の結合特異性および親和性を示す。用語「単鎖抗体」とは、重鎖および軽鎖からなる２つのポリペプチド鎖構造を有するタンパク質を指し、該鎖は例えば抗原に特異的に結合する能力を有する鎖間ペプチドリンカーにより安定化される。標的とする抗原に特異的な単鎖抗体を生産する技術は、例えば米国特許第４，９４６，７７８号明細書に記載されている。用語「抗体フラグメント」には、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、および単一ドメイン抗体フラグメント（ＤＡｂｓ）を含む。免疫グロブリンの免疫学的に活性な部分には、例えばＦ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２フラグメントがある。Ｆａｂフラグメントの構築に関する方法は、例えばＨｕｓｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５  １２８１に記載されている。他の抗体フラグメントは当該技術分野で知られている技術により生産することができ、それらには限定するわけではないが：（ｉ）抗体分子のペプシン消化により生産されるＦ（ａｂ’）２フラグメント：（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより生成されるＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）抗体分子をパパインおよび還元剤で処理することにより生成するＦａｂ’フラグメント、および（ｉｖ）Ｆｖフラグメントを含む。また種々のフラグメントは、技術的に知られている組換え工学技術により生産することもできる。非ヒト抗体は、例えば米国特許第５，２２５，５３９号明細書に記載されている技術により「ヒト化」され得る。１つの方法では、非ヒトＣＤＲがヒト抗体またはコンセンサス抗体の枠組み配列に挿入される。さらに親和性または免疫原性をモジュレートするための変化を抗体の枠組みに導入することができる。
【００４４】
用語「ドメイン」とは、免疫グロブリンのフォールディング（ｆｏｌｄ）を含んでなる重鎖または軽鎖ポリペプチドの球状領域を指す。免疫グロブリンのフォールディングは、β−プリーツシートの２次構造を含んでなり、そして１つのジスルフィド結合を含む。ドメインはさらに本明細書では、「定常」ドメインの場合には種々のクラスのメンバーのドメイン内に配列の変化を比較的欠くか、または「可変」ドメインの場合には種々のクラスのメンバーのドメイン内に有意な変化があるかに基づき「定常」または「可変」と称する。抗体またはポリペプチドの「ドメイン」はしばしば当該技術分野において互換的に抗体またはポリペプチド「領域」を指す。抗体軽鎖の「定常」ドメインは、「軽鎖定常領域」、「軽鎖定常ドメイン」、「ＣＬ」領域または「ＣＬ」ドメインと互換的に称する。抗体重鎖の「定常」ドメインは、「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「ＣＨ」領域または「ＣＨ」ドメインと互換的に称する。抗体軽鎖の「可変」ドメインは、「軽鎖可変領域」、「軽鎖可変ドメイン」、「ＶＬ」領域または「ＶＬ」ドメインと互換的に称する。抗体重鎖の「可変」ドメインは、「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「ＶＨ」領域または「ＶＨ」ドメインと互換的に称する。
【００４５】
また用語「領域」は、抗体鎖または抗体鎖ドメインの一部（ｐａｒｔ）もしくは部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）（本明細書で定義するように、例えば重鎖または軽鎖の一部もしくは部分、または定常もしくは可変ドメインの一部もしくは部分）、ならびに該鎖もしくはドメインのより明確な一部もしくは部分を指すことができる。例えば軽鎖および重鎖または軽鎖および重鎖可変ドメインには、本明細書で定義するように、「枠組み領域」または「ＦＲ」間に散在する「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」を含む。
【００４６】
用語「抗Ａβ抗体」には、Ａβペプチドのエピトープ（１つもしくは複数）に結合することができる抗体（およびそのフラグメント）を含む。抗Ａβ抗体には、例えば米国特許公開第２００３０１６５４９６Ａ１号、同第２００４００８７７７７Ａ１明細書、国際公開第０２／４６２３７Ａ３号、同第０４／０８０４１９Ａ２号パンフレットに記載されているそれら抗体を含む。他の抗Ａβ抗体は、例えば国際公開第０３／０７７８５８Ａ２号および同第０４／１０８８９５Ａ２号パンフレット（その両方とも「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題）、国際公開第０３／０１６４６６Ａ２号パンフレット（「抗−Ａβ抗体」という表題）、国際公開第０１６２８０１Ａ２号パンフレット（「アミロイドベータペプチドを封鎖するヒト化抗体」という表題）、および国際公開第０２／０８８３０６Ａ２号パンフレット（「ヒト化抗体」という表題）、および国際公開第０３／０７０７６０Ａ２号パンフレット（「抗Ａβ抗体およびそれらの使用」という表題）に記載されている。
【００４７】
用語「フラグメント」は、無欠または完全な抗体または抗体鎖よりも少ないアミノ酸残基を含んでなる抗体または抗体鎖の一部または部分を指す。フラグメントは、無欠または完全な抗体または抗体鎖の化学的または酵素的処理を介して得ることができる。またフラグメントは、組換え的手段により得ることもできる。例示のフラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃおよび／またはＦｖフラグメントを含む。用語「抗原結合フラグメント」とは、抗原に結合するか、または無欠な抗体（これからそれらは特異的抗原結合のために誘導化された）と競合する免疫グロブリンまたは抗体のポリペプチドフラグメントを指す。
【００４８】
用語「立体配座（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」とは、例えば抗体、抗体鎖、それらのドメインまたは領域のようなタンパク質もしくはポリペプチドの３次構造を指す。例えば「軽（または重）鎖の立体配座」という句は、軽（または重）鎖可変領域の３次構造を指し、そして「抗体の立体配座」または「抗体フラグメントの立体配座」という句は、抗体
またはそのフラグメントの３次構造を指す。
【００４９】
抗体の「特異的結合」という用語は、抗体が特定の抗原またはエピトープに対して測定できる（ａｐｐｒｅｃｉａｂｌｅ）の親和性を現し、そして一般に有意な交差反応性を現さないことを意味する。例示的態様では、抗体は交差反応性を現さない（例えば、非−Ａβペプチドと、またはＡβ上の遠隔もしくは遠位エピトープと交差反応しない）。「測定できる」または好適な結合には、少なくとも１０−６、１０−７、１０−８、１０−９Ｍまたは１０−１０Ｍの親和性での結合を含む。１０−７Ｍより大きい、好ましくは１０−８Ｍより大きい親和性がより一層好ましい。本明細書に説明するそれらの中間値も本発明の範囲内にあることを意図し、そして好適な結合親和性は、親和性の範囲として例えば１０−６〜１０−１０Ｍ、好ましくは１０−７〜１０−１０Ｍ、より好ましくは１０−８〜１０−１０Ｍと示すことができる。「有意な交差反応性を現さない」抗体は、望ましくない実体（例えば望ましくないタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド）に測定できるように結合しないものである。例えばＡβに特異的に結合する抗体はＡβに測定できるほどに結合するが、非−Ａβタンパク質またはペプチド（例えば斑に含まれる非−Ａβタンパク質またはペプチド）とは有意に反応しない。特定のエピトープに特異的な抗体は、例えば同じタンパク質またはペプチド上の遠隔もしくは異なるエピトープとは有意に交差反応しない。特異的結合はそのような結合を測定するために技術的に認識されている手段に従い測定することができる。好ましくは特異的結合はスキャッチャード分析および／または競合結合アッセイに従い測定される。
【００５０】
結合フラグメントは組換えＤＮＡ技法により、または無欠な免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分解により生産される。結合フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、Ｆｖ、単鎖および単鎖抗体を含む。「二重特異性」または「二官能性」免疫グロブリンまたは抗体以外、免疫グロブリンまたは抗体は各々、同一である結合部位を有すると理解されている。「二重特異性」または「二官能性抗体」は、２つの異なる重／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工的なハイブリッド抗体である。「二重特異性抗体」は、融合またはハイブリドーマまたはＦａｂ’フラグメントの連結を含む様々な方法により生産することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照にされたい。
【００５１】
「抗原」は、抗体が特異的に結合する抗原決定基を含有する分子（例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物または低分子）である。
【００５２】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合フラグメント）が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは連続するアミノ酸、またはタンパク質の３次元フォールディングにより並列する非連続アミノ酸の両方から結成され得る。連続するアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒への暴露に保持され、一方、３次元フォールディングにより形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒での処置で失われる。エピトープは典型的には少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を独自の空間的立体配座中に含む。エピトープの空間的立体配座の測定法には、例えばｘ−線結晶学および２次元核磁気共鳴法がある。例えばＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編集（１９９６）を参照にされたい。
【００５３】
用語「安定化製剤」または「安定化された液体ポリペプチド製剤」には、保存で中のポリペプチドが本質的にその物理的および化学的同一性および完全性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ
）を保持する製剤を含む。タンパク質の安定性を測定する種々の分析技法が当該技術分野では利用可能であり、そして本明細書に記載されている（ペプチドおよびタンパク質薬剤送達（Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）、２４７−３０１、Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  編集、マルセルデッカー社（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、ニューヨーク、ニューヨーク州、Ｐｕｂｓ．（１９９１）、およびＪｏｎｅｓ，Ａ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）を見直されたい）。安定性は選択した温度で選択した期間、測定することができる。迅速な試験については、製剤は、より高い、または「加速された（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ）」温度、例えば４０℃で２週間から１カ月以上維持されることができ、この時点で安定性が測定される。例示的態様では、製剤は成分のポリペプチドの副産物、例えば高分子量凝集産物、低分子量分解物または断片化産物またはそれらの混合物の形成を制御しがたい。用語「安定性」は、抗体のような分子種がその元の化学的同一性、例えば１次、２次、および／または３次構造を保持する時間の長さを指す。
【００５４】
用語「副産物」とは、所定の製剤中の治療用ポリペプチドの比率を下げる、または減少する望ましくない生成物を指す。典型的な副産物には治療用ポリペプチドの凝集物、治療用ポリペプチドのフラグメント（例えば、脱アミド化または加水分解によるポリペプチドの分解により生成される）、または次いで凝集するそれらの混合物を含む。
【００５５】
用語「高分子量ポリペプチド凝集物」には治療用ポリペプチド、治療用ポリペプチドのフラグメントの凝集物（例えばポリペプチドの分解により、例えば加水分解により生成される）、または次いで凝集するそれらの混合物を含む。典型的には高分子量凝集物は、治療用モノマーポリペプチドよりも大きい分子量を有する複合体である。抗体の場合、例えばそのように凝集するＩｇＧ抗体は、約１５０ｋＤより大きい。しかし他の治療用ポリペプチド、例えばそのように凝集する典型的には２５ｋＤの分子量を有する単鎖抗体は、約２５ｋＤより大きい分子量を有する。
【００５６】
用語「低分子量ポリペプチド分解産物」には、例えば脱アミド化または加水分解によりもたらされる治療用ポリペプチドのフラグメントを含む。典型的には低分子量分解産物は、治療用モノマーポリペプチドよりも小さい分子量を有する複合体である。抗体の場合、例えばそのような分解産物のＩｇＧ抗体は約１５０ｋＤよりも小さい。しかし他の治療用ポリペプチドの場合、例えばそのように凝集する典型的には約２５ｋＤの分子量を有する単鎖抗体は約２５ｋＤよりも小さい分子量を有する。
【００５７】
用語「投与経路」には、例えば非経口、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外のような、治療用ポリペプチドを送達するための技術的に認識されている投与経路を含む。神経変性疾患の処置のための治療用ポリペプチドの投与には、静脈内、硬膜外または頭蓋内の経路が望ましいかもしれない。
【００５８】
本明細書で使用する用語「処置」は、疾患、疾患の症状または疾患への素因を治癒し、治し、緩和し、遅らせ、和らげ、改変し、軽減し、回復させ、改善し、または影響を及ぼす目的で、患者への治療薬の適用または投与、あるいは疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有する患者から単離された組織または細胞株への治療薬の適用または投与と定める。  用語「有効な用量」または「有効な投薬用量」とは、所望する効果を達成するか、または少なくとも部分的に達成するために十分な量と定義される。用語「治療に有効な用量」は、すでに疾患に罹患している患者における疾患またはその合併症を治癒するか、または少なくとも部分的に止めるために十分な量と定義される。この使用に有効な量は感染の重篤度および患者自身の免疫系の全般的状態に依存する。
【００５９】
用語「患者」には、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動
物個体を含む。
【００６０】
本明細書で使用する用語「単位剤形（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）」（または単位剤形：ｕｎｉｔ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ）は、処置する患者への単位投薬用量として適切な物理的に分かれた単位を指し、各単位は必要な製薬学的担体、希釈剤または賦形剤と一緒に所望の治療的効果を生じるために算出された予め定めた量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、活性化合物の独自な特性、および達成されるべき特定の治療効果、および患者を処置するための活性化合物のような製剤技術（ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ）の分野に固有の限界により決められ、そして直接依存する。
【００６１】
本発明の製剤中の有効成分（例えばＡβポリペプチド）の実際の投薬用量レベルは、患者に毒性となることなく、特定の患者、組成物および投与様式に応答して所望する治療的応答を達成するために効果的な有効成分の量が得られるように変動させることができる。選択した投薬用量レベルは、使用する本発明の特定の組成物の活性を含む種々の薬物動態学的因子、投薬経路、投与時期、使用する特定の化合物の排出速度、処置期間、使用する特定の組成物と組み合わせる他の薬剤、化合物および／または物質、処置する患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態および病歴および医学分野で周知の因子等に依存する。
【００６２】
本明細書で使用する用語「希釈剤」は、本明細書に記載する例示の、または適切な濃度（１もしくは複数）に改変または達成するために適する溶液を指す。
【００６３】
概論
本発明は、Ａβ結合ポリペプチド、特に抗Ａβ抗体、ならびにその部分および／またはフラグメントに関する製剤を提供する。特定の観点では、本発明は治療的使用のための安定化された液体ポリペプチド製剤を提供する。特に本発明は、アミロイド形成性疾患および／または障害の処置に使用するためのＡβ結合ポリペプチド、例えば抗体およびその抗原結合フラグメントの安定化を提供する。特に本発明は活性な治療用ポリペプチドが長期間にわたり安定であり、そして種々の投与経路を介して投与できるように安定化された製剤を提供する。これはアミロイド形成性疾患および／または障害の処置における使用が予定されているそれらＡβ結合ポリペプチド（例えば抗体）には特に重要である。他の観点では、本発明は例えば凍結、凍結乾燥、熱および／または再構成のような種々のストレスに安定な独自の安定な抗体製剤を提供する。さらに本発明の例示的な製剤は、長期にわたる抗体の安定性、生物学的活性、純度および品質（例えば、製剤が保存される１年以上の間）を、たとえ望ましくない温度でも維持することができる。さらに本発明の例示的製剤は、個体または患者、例えばアミロイド形成性疾患または障害を有するか、または有することが予測されるヒトへの投与に適する（例えば個体または患者への静脈内投与）。
【００６４】
製剤
１つの観点において、本発明はＡβ結合ポリペプチド、張度調整剤（ここで張度調整剤は安定化された製剤を静脈内注入に適するようにするために十分な量で存在する）、およびアミノ酸またはその誘導体（ここでアミノ酸またはその誘導体は生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量で存在する）を含む安定化された製剤を提供する。１例の態様では、本発明は抗Ａβ抗体、マンニトールおよびヒスチジンを含む安定化された製剤を提供する。
【００６５】
１つの態様では、本発明はＡβ結合ポリペプチド、張度調整剤（ここで張度調整剤は製剤を静脈内注入に適するようにするために十分な量で存在する）、およびアミノ酸またはその誘導体（ここでアミノ酸またはその誘導体は生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量で存在する）を含む安定化された製剤を提供する。１例の態様では、張度調整剤
がマンニトールである。別の例示的態様では、アミノ酸がヒスチジンである。
【００６６】
別の観点では、本発明はＡβ結合ポリペプチドを含む安定化された製剤を提供する。本発明の製剤中での安定化に適するＡβ結合ポリペプチドには、抗体およびそのフラグメント、そして特にアミロイド形成性疾患または障害に関与する治療的標的に結合することができる抗体を含む。したがって治療用ポリペプチドは本発明に従い安定化されて、副産物、典型的には高分子量凝集物、低分子量の分解フラグメント、またはそれらの混合物の形成を、そのような副産物の形成を抑制するために十分な量の酸化防止剤を加えることにより回避する。酸化防止剤には、以下に検討するように望ましくない副産物の所望する抑制を得るために十分な濃度で、メチオニンおよびその類似体を含む。場合により本発明の安定化されたポリペプチド製剤は、さらに張度調整剤（ここで張度調整剤は安定化された製剤を幾つかの異なる投与経路、例えば静脈内注入に適するようにするために十分な量で存在する）、およびアミノ酸またはその誘導体（ここでアミノ酸またはその誘導体は生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量で存在する）を含んでなる。１例の態様では、本発明は抗Ａβ抗体、メチオニン、マンニトールおよびヒスチジンを含む安定化された製剤を提供する。
【００６７】
１つの態様では、本発明は治療的に活性なＡβ結合ポリペプチド（ここでポリペプチドは保存中に副産物を形成することができ）および酸化防止剤（ここで酸化防止剤は製剤の保存中に副産物の形成を減らすために十分な量で存在する）を含む安定化された液体製剤を提供する。例示的態様では、酸化防止剤はメチオニンまたはその類似体である。
【００６８】
本発明の幾つかの態様では、Ａβ結合ポリペプチドは抗体、抗体Ｆｖフラグメント、抗体Ｆａｂフラグメント、抗体Ｆａｂ’（２）フラグメント、抗体Ｆｄフラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体フラグメント（Ｄａｂ）、少なくとも１つの抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むベータ−プリーツシートポリペプチド、および少なくとも１つの抗体の相補性決定領域を含む非球状ポリペプチドからなる群から選択される。本発明の例示的態様では、Ａβ結合ポリペプチドは約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌで存在する。別の例示的態様では、本発明の製剤は約３０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合ポリペプチドを含む。さらに別の例示的態様では、本発明の製剤は約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合ポリペプチドを含む。さらなる例示的態様では、本発明の製剤は約１７ｍｇ／ｍｌのＡβ結合ポリペプチドを含む。
【００６９】
本発明の例示的態様では、Ａβ結合ポリペプチドは抗Ａβ抗体である。本発明の幾つかの態様では、抗Ａβ抗体は、ヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される。本発明の例示的態様では、抗Ａβ抗体が１−７、１−５、３−７、３−６、１３−２８、１６−２１、１９−２２、３３−４０および３３−４２からなる群から選択されるＡβアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。本発明の幾つかの態様では、抗Ａβ抗体がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群から選択されるサブタイプである。本発明の特定の態様では、抗Ａβ抗体はヒトＩｇＧ１サブタイプである。
【００７０】
Ａβポリペプチドは、高分子量のポリペプチド凝集物、低分子量のポリペプチド分解産物、およびそれらの組み合わせから選択される副産物を形成することができるかもしれない。高分子量の凝集物には抗体：抗体複合体、抗体：抗体フラグメント複合体、抗体フラグメント：抗体フラグメント複合体、およびそれらの組み合わせを含むことができる。低分子量のポリペプチド分解産物には、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗体軽鎖および重鎖複合体、抗体フラグメントおよびそれらの組み合わせを含むことができる。
【００７１】
本発明の１つの態様において、本発明の液体製剤はＡβ結合ポリペプチド、マンニトールおよびヒスチジンを含む。本発明の１例の態様では、Ａβ結合ポリペプチドは抗Ａβ抗体である。本発明の幾つかの例示的態様では、抗Ａβ抗体はヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される。本発明の他の例示的態様では、抗Ａβ抗体が１−７、１−５、３−７、３−６、１３−２８、１６−２１、１９−２２、３３−４０および３３−４２からなる群から選択されるＡβアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。本発明の幾つかの態様では、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群から選択されるサブタイプである。本発明の特定の態様では、抗体はＩｇＧ１サブタイプである。
【００７２】
本発明の例示的態様では、抗Ａβ抗体が約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌで存在する。本発明の別の例示的態様では、抗Ａβ抗体が約２０ｍｇ／ｍｌで存在する。
【００７３】
本発明の幾つかの態様では、本発明の製剤はマンニトールを製剤の等張性を維持するために十分な量で含む。本発明の例示的態様では、マンニトールが約２重量／容量％〜約１０重量／容量％で存在する。本発明の別の例示的態様では、マンニトールは約４重量／容量％で存在する。さらに他の例示的態様ではマンニトールが約６重量／容量％で存在する。さらに例示的態様では、マンニトールは約１０重量／容量％で存在する。
【００７４】
本発明の幾つかの態様では、本発明の製剤はヒスチジンを生理学的に適切なｐＨを維持するために十分な量で含む。本発明の例示的態様では、ヒスチジンが約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭで存在する。他の例示的態様では、ヒスチジンが約１０ｍＭで存在する。
【００７５】
本発明の１つの態様では、本発明の製剤は約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭのコハク酸塩を含む。本発明の例示的態様では、コハク酸塩は約１０ｍＭで存在する。
【００７６】
本発明の幾つかの態様では、本発明の製剤はさらに酸化防止剤を含む。例示的態様では、酸化防止剤はメチオニンまたはその類似体である。本発明の１つの態様において、メチオニンまたは類似体は約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭで存在する。別の態様では、メチオニンまたは類似体は約１０ｍＭで存在する。
【００７７】
本発明の幾つかの態様では、製剤はさらに安定化剤を含む。本発明の例示的態様では、安定剤はポリソルベート８０である。幾つかの態様では、ポリソルベート８０は約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％で存在する。別の態様では、ポリソルベート８０は約０．００５重量／容量％で存在する。本発明のさらに別の態様では、ポリソルベート８０は約０．０１重量／容量％で存在する。
【００７８】
本発明の幾つかの態様では、製剤は約５〜約７のｐＨを有する。本発明の例示的態様では、製剤は約５．５のｐＨを有する。別の例示的態様では、製剤は約６．０のｐＨを有する。さらに別の例示的態様では、製剤は約６．２のｐＨを有する。さらなる別の例示的態様では、製剤は約６．５のｐＨを有する。
【００７９】
幾つかの態様では、製剤は凍結に対して安定である。本発明の別の態様では、製剤は静脈内投与に適する。本発明の例示的態様では、製剤は筋肉内または皮下投与に適する。例示的態様では、製剤は個体の脳への送達に適している。
【００８０】
本発明の幾つかの態様では、製剤は個体の脊髄液への送達に適している。別の態様では、製剤は保存剤を実質的に含まない。
【００８１】
本発明の幾つかの態様では、製剤は少なくとも約１２カ月間、安定である。幾つかの態様では、製剤は少なくとも約１８カ月間、安定である。本発明の幾つかの態様では、製剤は少なくとも約２４カ月間、安定である。本発明の幾つかの態様では、製剤は少なくとも約３０カ月間、安定である。
【００８２】
本発明の例示的態様では、製剤は約−８０℃〜４０℃で安定である。幾つかの例示的態様では、製剤は約０℃〜約２５℃で安定である。好ましくは製剤は約２℃〜約８℃で安定である。
【００８３】
本発明の特定の態様では、静脈内投与に適する製剤には約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％をマンニトールを含み、そして約６のｐＨを有する。別の特定の態様では、静脈内投与に適する製剤には約３０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニンおよび約６％をマンニトールを含み、そして約６．２のｐＨを有する。静脈内投与に適する好適な製剤には、約２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニンおよび約４％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約６のｐＨを有する。本発明のさらなる例示的態様では、静脈内投与に適する製剤には、約１０ｍｇ／ｍＬの抗Ａβ抗体、約１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約１０％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約６．５のｐＨを有する。
【００８４】
本発明による前記製剤の幾つかの態様では、抗Ａβ抗体はヒト化３Ｄ６抗体、ヒト化１０Ｄ５抗体、ヒト化１２Ｂ４抗体、ヒト化２６６抗体、ヒト化１２Ａ１１抗体およびヒト化１５Ｃ１１抗体からなる群から選択される。例示的態様では、抗Ａβ抗体はＡβの１−７、１−５、３−７、３−６、１３−２８、１６−２１、１９−２２、３３−４０および３３−４２からなる群から選択されるアミノ酸残基内のエピトープに結合する。幾つかの製剤では、抗Ａβ抗体はＡβの１−７内１３−２８内の残基を含む不連続エピトープに結合する。そのような幾つかの製剤では、抗体は二重特異性抗体または国際公開第０３／０７０７６０号パンフレットに記載されたプロセスにより作成された抗体である。そのような製剤の幾つかは、エピトープが不連続エピトープである。
【００８５】
本発明の別の観点において、製薬学的単位剤形には、患者への剤形の投与を介して患者の疾患を処置するための任意の前記態様の有効量の製剤を含む。例示的態様では、製薬学的単位剤形は本発明の製剤を含有する容器である。例示的態様では、容器は約１ｍｇ〜約２０００ｍｇのＡβ結合ポリペプチドを含有するバイアルである。別の例示的態様では、バイアルは約５０ｍｇ〜約１５００ｍｇのＡβ結合ポリペプチドを含む。さらなる態様では、バイアルは約５ｍｇ〜約５０ｍｇのＡβ結合ポリペプチドを含む。
【００８６】
例示的態様では、バイアルは約２〜約１００ｍｌの容量を有する。さらに他の態様では、バイアルは約２ｍｌ〜約１０ｍｌの容量を有する。
【００８７】
幾つかの態様では、本発明による製薬学的単位剤形は患者への静脈内注入に適している。
【００８８】
また本明細書には、本明細書に記載するような製薬学的単位剤形、および使用説明書を含むキットを記載する。本発明の１つの態様では、製薬学的剤形を含む容器は使用のためのラベルを付した容器である。例示的態様では、容器には予防的使用のためのラベルが付けられている。別の例示的態様では、容器には治療的使用のためのラベルが付けられている。
【００８９】
本発明は、液体の製薬学的製剤中のＡβ結合ポリペプチドの安定性を上げる方法を提供し、ここでポリペプチドは保存中に液体製剤中に副産物の形成を現し、この方法は製剤に酸化防止剤をポリペプチドの副産物の形成を下げるために十分な量で包含することを含む。例示的態様では、Ａβ結合ポリペプチド成分は、抗体、抗体Ｆｖフラグメント、抗体Ｆａｂフラグメント、抗体Ｆａｂ’（２）フラグメント、抗体Ｆｄフラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体フラグメント（Ｄａｂ）、少なくとも１つの抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むベータ−プリーツシートポリペプチド、および少なくとも１つの抗体の相補性決定領域を含む非球状ポリペプチドからなる群から選択される。１つの態様では、副産物は高分子量ポリペプチド凝集物、低分子量ポリペプチド分解産物、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。別の態様では、酸化防止剤はメチオニンおよびその類似体からなる群から選択される。
【００９０】
幾つかの態様では、本発明の前記態様による製剤の調製法には、製剤の賦形剤を合わせることを含む。例示的態様では、前記態様による製剤の調製法はＡβ結合ポリペプチドを１もしくは複数の希釈剤と合わせることを含み、ここで１もしくは複数の希釈剤には製剤の賦形剤を含む。
【００９１】
例示的態様では、製薬学的単位剤形を調製する方法には、適切な容器中で前記態様の製剤を合わせることを含む。別の例示的態様では、前記態様の製剤の調製法には、Ａβ結合ポリペプチドおよび製剤の少なくとも一部の賦形剤を含む溶液を、残りの賦形剤を含む希釈剤と合わせることを含む。
【００９２】
本発明の安定化された製剤に使用するためのポリペプチド
本明細書に記載するように本発明に従い配合されるポリペプチドは、当該技術分野で十分に確立された技術を使用して調製され、そして例えば合成法（組換え技術およびペプチド合成またはこれらの技術の組み合わせ）を含み、またはポリペプチドの内的供給源から単離することができる。本発明の特定の態様では、ポリペプチドの選択は抗原結合ポリペプチド、より好ましくは抗体、そして特に抗Ａβ抗体である。抗原結合ポリペプチド、そして特に抗体を生産するための技術を以下に記載する。
【００９３】
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、適切な個体を免疫原で免疫感作することにより調製することができる。免疫感作した個体の抗体力価は、固定化された標的抗原を使用した酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いるような標準的技術により、経時的に監視することができる。所望により、標的抗原に対する抗体分子を哺乳動物から単離することができ（例えば、血液から）、そしてさらにプロテインＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ  クロマトグラフィーのような周知な技術によりさらに精製して抗体、例えばＩｇＧ画分を得ることができる。免疫感作から適切な時期に、例えば抗−抗原抗体力価が最高な時、抗体生産細胞を個体から得、そして最初にＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５−４９７（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７：５３９−４６；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：４９８０−８３；Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７６：２９２７−３１；およびＹｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２９：２６９−７５）も参照にされたい）に記載されたハイブリドーマ技術のような標準的技術により、モノクローナル抗体を調製するために使用することができる。キメラポリクローナル抗体の調製に関しては、Ｂｕｅｃｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第６，４２０，１１３号明細書を参照にされたい。
【００９４】
モノクローナル抗体
リンパ球と不死化細胞株とを融合するために使用される任意の多くの周知なプロトコー
ルを、モノクローナル抗体を生成する目的に応用することができる（例えばＧ．Ｇａｌｆｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ  ２６６：５５０５２；Ｇｅｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．，同上；Ｌｅｒｎｅｒ，Ｙａｌｅ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．同上；Ｋｅｎｎｅｔｈ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，同上を参照にされたい）。さらに当業者は有用となるそのような方法の多くの変更が存在することを認識している。典型的には不死化細胞株（例えばミエローマ細胞株）をリンパ球と同じ哺乳動物種から誘導する。例えばマウスハイブリドーマは、本発明の免疫原性調製物で免疫感作したマウスからのリンパ球と不死化マウス細胞株とを融合することにより作成することができる。好適な不死化細胞株は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含有する培養基（“ＨＡＴ”培地）に感受性のマウスのミエローマ細胞株である。任意の数のミエローマ細胞株、例えばＰ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４ミエローマ株が標準的技術に従い融合パートナーとして使用できる。これらのミエローマ株はＡＴＣＣから入手することができる。典型的にはＨＡＴ−感受性マウスミエローマ細胞をマウスの脾細胞と、ポリエチレングリコール（“ＰＥＧ”）を使用して融合することができる。融合から生じたハイブリドーマ細胞はＨＡＴ培地を使用して選択され、この培地は非融合および非生産的に融合されたミエローマ細胞を殺す（非融合脾細胞は形質転換されていないので数日後に死亡する）。本発明のモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞は、標的抗原、例えばＡβに結合する抗体について、標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用してハイブリドーマ培養上清をスクリーニングすることにより検出される。
【００９５】
組換え抗体
モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを調製することに代えて、モノクローナル抗体は組換えコンビナトリアル（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ）イムノグロブリンライブラリー（例えば抗体ファージディスプレイライブラリー）を、標的抗原でスクリーニングすることにより同定し、そして単離し、これにより標的抗原に結合する免疫グロブリンライブラリーのメンバーを単離することができる。ファージディスプレイを生成およびスクリーニングするためのキットは市販されている（例えばファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）組換えファージ抗体系（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｓｙｓｔｅｍ）、カタログＮｏ．２７−９４００−０１；およびストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット（Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｋｉｔ）、カタログＮｏ．２４０６１２）。さらに抗体ディスプレイライブラリーの生成およびスクリーニングに使用するための特に分析できる方法および試薬の例は、例えばＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，２２３，４０９号明細書；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９２／１８６１９パンフレット；Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９１／１７２７１号パンフレット；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９２／２０７９１号パンフレット；Ｍａｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９２／１５６７９号パンフレット；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９３／０１２８８号パンフレット；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９２／０９６９０号パンフレット；Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第９０／０２８０９号パンフレット；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４に見いだすことができる。
【００９６】
キメラおよびヒト化抗体
さらに、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して作成することができるヒトおよび非ヒト部分の両方を含んでなるキメラおよびヒト化モノクローナル抗体のような組換え抗体は、本発明の範囲内にある。
【００９７】
用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」とは、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（すなわち「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）とは、実質的にヒトの免疫グロブリンまたは抗体に由来する可変枠組み領域、および実質的に非ヒトの免疫グロブリンまたは抗体に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、より好ましくは３つのＣＤＲ）を含む可変領域を有し、そしてさらに定常領域（例えば軽鎖の場合は少なくとも１つの定常領域またはその部分、そして重鎖の場合は３つの定常領域）を含む免疫グロブリンまたは抗体鎖（それぞれ軽鎖または重鎖）を指す。用語「ヒト化可変領域」（例えば「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体に由来する可変枠組み領域、および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を指す。
【００９８】
「ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的にヒト」という句は、比較目的でヒト免疫グロブリンまたは抗体のアミノ酸配列を並べた時、領域がヒトの枠組みまたは定常領域配列と少なくとも８０〜９０％、９０〜９５％または９５％〜９９％の同一性（すなわち局所的な配列同一性）を共有することを意味し、例えば保存的置換、コンセンサス配列の置換、生殖細胞系列の置換（ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、復帰突然変異等を可能とする。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系列の置換、復帰突然変異等の導入は、しばしばヒト化抗体または鎖の「至適化」と称される。「非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的に非ヒト」という句は、非ヒト生物、例えば非ヒト哺乳動物と免疫グロブリンまたは抗体配列が少なくとも８０〜９５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有することを意味する。
【００９９】
したがって、ヒト化免疫グロブリンまたは抗体の、あるいはヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖の（ＣＤＲは除く）すべての領域または残基は、１もしくは複数の自然なヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。用語「対応する領域」または「対応する残基」は、第１および第２の配列が比較目的で最適に並べられた時、第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基と、同じ（すなわち均等）位置を占める第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基を指す。
【０１００】
用語「有意な同一性」とは、２つのポリペプチド配列がデフォルトギャップ加重を使用したＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによるように最適に並べられた時、少なくとも５０〜６０％の配列同一性、好ましくは少なくとも６０〜７０％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも７０〜８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８０〜９０％の配列同一性、そしてさらに一層好ましくは９０〜９５％の同一性、そしてさらにより一層好ましくは少なくとも９５％以上の配列同一性（例えば９９％以上の配列同一性
）を共有することを意味する。用語「実質的な同一性」とは、２つのポリペプチド配列がデフォルトギャップ加重を使用したＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによるように最適に並べられた時、少なくとも８０〜９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５％の配列同一性、そしてより好ましくは少なくとも９５％以上の同一性（例えば９９％以上の配列同一性）を共有することを意味する。配列を比較するために、典型的には１つの配列を参照配列として作用させ、これと試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する時、試験および参照配列はコンピューターに入力され、必要ならばサブ配列の座標が設計され、そして配列のアルゴリズムプログラムのパラメーターを設計する。次いで配列比較アルゴリズムが参照配列に対する試験配列（１つもしくは複数）の配列同一性の割合を、設計したプログラムパラメーターに基づき算出する。
【０１０１】
比較のための配列の最適なアルゴリズムは、例えばＳｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ，２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性配列アルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の同一性の方法に関する調査により、これらのアルゴリズムのコンピューターによる実行により（ウィスコンシン  ジェネティック  ソフトウェア  パッケージのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ、ウィスコンシン州マジソン、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．ジェネティックス  コンピューターグループ）、または視覚による検査（例えば一般的にＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，分子生物学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ））により行うことができる。配列同一性および配列類似性の割合を測定するために適するアルゴリズムの一例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これはＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センターを通して公的に利用可能である（国立衛生研究所のＮＣＢＩインターネットサーバーを通して公的にアクセス可能である）。典型的にはデフォルトプログラムのパラメーターを使用して配列の比較を行うことができるが、カスタマイズされたパラメーターも使用することができる。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして３のワード長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）（Ｗ）、１０期待値（Ｅ）およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９８９）を参照にされたい）。
【０１０２】
好ましくは同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。保存的または非保存的としてアミノ酸置換を分類する目的に、アミノ酸を以下のように分類する：グループＩ（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性の疎水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖の方向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換には、同じ種類（ｃｌａｓｓ）のアミノ酸間の置換が関与する。非保存的置換にこれらの種類の１つのメンバーをこれらの別の種類のメンバーと交換すること指定する（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ）。
【０１０３】
好ましくはヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、対応する非ヒト化抗体の３、４または５の因子内の親和性で抗原に結合する。例えば非ヒト化抗体が１０−９Ｍの結合親和性を有するならば、ヒト化抗体は少なくとも３×１０−８Ｍ、４×１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍまたは１０−９Ｍの結合親和性を有する。免疫グロブリンまたは抗体鎖の結合特性を説明する場合、鎖は「抗原（例えばＡβ）結合を支配する」その能力に基づき説明することができる。鎖が無欠の免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合フラグメント）に
、特異的な結合特性または結合親和性を付与する場合、鎖は「抗原結合を支配する」と言う。突然変異（例えば復帰突然変異）が、該突然変異を欠いている等価な鎖を含んでなる抗体（またはその抗原結合フラグメント）の結合親和性と比べて、該鎖を含んでなる無欠な免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合フラグメント）の結合親和性に、少なくとも１次元の規模による影響を与える場合（例えば減少）、突然変異（例えば復帰突然変異）は、重鎖または軽鎖が抗原の結合を支配する能力に実質的に影響を及ぼすと言う。突然変異が該突然変異を欠く等価な鎖を含んでなる抗体（またはその抗原結合フラグメント）のわずか２、３または４の因子までしか、該突然変異を含有する無欠の免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合フラグメント）の結合親和性に影響を及ぼさない場合（例えば、減少）、突然変異は「抗原結合を支配する鎖の能力に実質的に影響しない」。
【０１０４】
用語「キメラ免疫グロブリン」または抗体は、可変領域が第１の種に由来し、そして定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、例えば遺伝子工学により異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから構築することができる。用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」は、上記定義のキメラ免疫グロブリンまたは抗体を包含することを意図するだけではない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体はそれらの構造がキメラであるが（すなわち１より多くのタンパク質種に由来する領域）、それらは本明細書に定義するキメラ免疫グロブリンまたは抗体には見い出されないさらなる特徴（すなわち供与体のＣＤＲ残基および受容体の枠組残基を含んでなる可変領域）を含む。
【０１０５】
そのようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当該技術分野で知られている組換えＤＮＡ技法により、例えばＲｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号パンフレット；Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１８４，１８７号明細書；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，欧州特許出願第１７１，４９６号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第１７３，４９４号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ国際公開第８６／０１５３３号パンフレット；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．欧州特許出願第１２５，０２３号明細書；Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕ  ｅｔ
ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎ  ｅｔ
ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｂｉｏ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｗｉｎｔｅｒ  Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  ５，２２５，５３９；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０に記載されている方法を使用して生産することができる。
【０１０６】
トランスジェニック動物およびファージディスプレイからのヒト抗体
あるいは現在、内因性の免疫グロブリン生産の不存在下で、免疫感作でヒト抗体の完全なレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を作出することが可能である。例えばキメラおよび生殖細胞系列の突然変異マウスの抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性の抗体生産の完全な抑制をもたらすことが記載された。そのような生殖細胞系列の突然変異マウス中のヒト生殖細胞系列の免疫
グロブリン遺伝子アレイの転移は、抗原の対抗（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）でヒト抗体の生産をもたらす。例えば米国特許第６，１５０，５８４号；同第６，１１４，５９８号；および同第５，７７０，４２９号明細書を参照にされたい。
【０１０７】
完全なヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから誘導することもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１））。またキメラポリクローナル抗体も、ファージディスプレイライブラリーから得ることができる（Ｂｕｅｃｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第６，４２０，１１３号明細書）。
【０１０８】
二重特異性抗体、抗体融合ポリペプチド、および単鎖抗体
二重特異性抗体（ＢｓＡｂｓ）は、少なくとも２つの異なるエピトープに関する結合特異性を有する抗体である。そのような抗体は完全長の抗体または抗体フラグメントから誘導することができる（例えばＦ（ａｂ）’２二重特異性抗体）。二重特異性抗体の作成法は、当該技術分野では知られている。完全長の二重特異性抗体のこれまでの生産は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づき、ここで２つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の無作為な寄せ集めにより、これらのハイブリドーマ（クワドローマ）は、異なる抗体分子の潜在的混合物を生産する（国際公開第９３／０８８２９号パンフレットおよびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９（１９９１）を参照にされたい）。
【０１０９】
また二重特異性抗体は、架橋結合化または「ヘテロ結合体」抗体も含む。例えば、ヘテロ結合体の１つの抗体をアビジンにカップリングし、もう１つをビオチンまたは他のペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）にカップリングする。ヘテロ結合体抗体は、任意の好都合の架橋結合法を使用して作成することができる。適切な架橋結合剤は当該技術分野では周知であり、そして米国特許第４，６７６，９８０号明細書に多くの架橋法と共に記載されている。
【０１１０】
さらに別の態様では、抗体を反応性の、検出可能な、または機能的部分、例えばイムノトキシンのようなペイロードに化学的または遺伝的に融合して、抗体融合ポリペプチドを生産することができる。そのようなペイロードには、例えばイムノトキシン、化学療法剤および放射性同位体があり、それらのすべてが当該技術分野では周知である。
【０１１１】
また単鎖抗体も、本発明に従い安定化に適している。フラグメントは、リンカーで軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含んでなり、これは各可変領域が互いに干渉し、そしてＶＬおよびＶＨ領域が誘導された元の抗体の抗原結合ポケットを再度作成できるようにする。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照にされたい。
【０１１２】
任意の前記ポリペプチド分子は、単独または組み合わせて、本発明の安定化された製剤としての調製に適する。
【０１１３】
抗Ａβ抗体
一般に、本発明の製剤にはアミロイド形成性疾患、特にアルツハイマー病をＡβペプチドを標的とすることにより処置するための種々の抗体を含む。
【０１１４】
用語「Ａβ抗体」、「抗Ａβ抗体」および「抗Ａβ」とは、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、Ａβタンパク質またはその両方の１もしくは複数のエピトープまたは
抗原決定基に結合する抗体を指すために本明細書では互換的に使用する。例示的なエピトープまたは抗原決定基はＡＰＰ内に見いだすことができるが、好ましくはＡＰＰのＡβペプチド内に見いだされる。ＡＰＰの多くのアイソフォーム、例えばＡＰＰ６９５、ＡＰＰ７５１およびＡＰＰ７７０が存在する。ＡＰＰ内のアミノ酸は、ＡＰＰ７７０アイソフォームの配列に従い番号が割り当てられている（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｐ０５０６７）。現在、ヒトに存在することが知られているＡＰＰの特異的アイソタイプの例は、Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２５：７３３−７３６により記載された６９５個のアミノ酸のポリペプチド（これを「正常」ＡＰＰと命名する）；Ｐｏｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２５−５２７（１９８８）およびＴａｎｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２８−５３０により記載された７５１個のアミノ酸のポリペプチド；およびＫｉｔａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５３０−５３２により記載された７７０個のアミノ酸のポリペプチドである。ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｓｉｔｕの種々の分泌酵素によるＡＰＰのタンパク質溶解プロセッシングの結果として、Ａβは「短形」の４０個のアミノ酸長、および４２〜４３個のアミノ酸長の範囲の「長形」の両方で見いだされる。短形、Ａβ４０はＡＰＰの残基６７２〜７１１からなる。長形、例えばＡβ４２またはＡβ４３は、それぞれ残基６７２〜７１３または６７２〜７１４からなる。ＡＰＰの疎水性ドメイン部分は、Ａβのカルボキシ末端に見いだされ、そして特に長形の場合にＡβが凝集する原因となり得る。Ａβペプチドは正常な個体もしくはアミロイド形成性障害に罹患している個体の両方を含め、ヒトおよび他の動物の体液、例えば脳脊髄液中に、または精製形で見いだすことができる。
【０１１５】
用語「β−アミロイドタンパク質」、「β−アミロイドペプチド」、「β−アミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド」は、本明細書では互換的に使用する。Ａβペプチド（例えばＡβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３）は、ＡＰＰの３９〜４３アミノ酸の〜４ｋＤａの内部フラグメントである。例えばＡβ４０はＡＰＰの残基６７２〜７１１からなり、そしてＡβ４２はＡＰＰの残基６７２〜７１３からなる。ＡβペプチドはＡＰＰのセクレターゼ開裂から生じるペプチド、および開裂産物と同じか、または本質的に同じ配列を有する合成ペプチドを含む。Ａβペプチドは様々な起源、例えば組織、細胞株または体液（例えば血清または脳脊髄液）に由来することができる。例えばＡβは、例えばＷａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｎａｔｕｒｅ  ４１６，ｐｐ５３５−５３９に記載されているようなＡＰＰ７１７Ｖ→Ｆで安定にトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のようなＡＰＰ発現細胞に由来することができる。Ａβ調製は、以前に記載された方法（例えばＪｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１５５０を参照にされたい）を使用して、組織供給源から誘導することができる。あるいはＡβペプチドは当該技術分野で周知である方法を使用して合成することができる。例えば、Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，合成ペプチド：ユーザーガイド（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅ：Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｇｕｉｄｅ）、Ｇｒａｎｔ，Ｗ．Ｈ．編集、フリーマン＆社（Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ）、ニューヨーク、ニューヨーク州、１９９２、ｐ７７）を参照にされたい。このようにペプチドは固相合成の自動化メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）技術を使用して、側鎖が保護されたアミノ酸を使用するｔ−ＢｏｃまたはＦ−ｍｏｃ化学のいずれかにより保護されたα−アミノ基を使用して、例えばアプライドバイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のペプチド合成器Ｍｏｄｅｌ４３０Ａまたは４３１で合成することができる。より長いペプチド抗原は、周知の組換えＤＮＡ技術を使用して合成することができる。例えばペプチドまたは融合ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、合成または分子的にクローン化され、そして適切な宿主細胞によるトランスフェクションおよび非相同的発現のための適切な発現ベクターに挿入される。またはＡβペプチドはまた、正常な遺伝子のＡβ領域の突然変異から生じる関連するＡβ配列も指す。
【０１１６】
Ａβ抗体が結合するエピトープまたは抗原決定基の例は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）内に見いだすことができるが、好ましくはＡＰＰのＡβペプチド内にある。Ａβ内のエピトープまたは抗原決定基の例は、ＡβのＮ−末端、中央領域またはＣ−末端内に位置する。「Ｎ−末端エピトープ」は、ＡβペプチドのＮ−末端内、またはそれを含んで位置するエピトープまたは抗原決定基である。Ｎ−末端エピトープの例には、Ａβのアミノ酸１〜１０または１〜１２、好ましくはＡβ４２の残基１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、２〜６、２〜７、３〜６または３〜７に由来する。他の例示的Ｎ−末端エピトープは、Ａβの残基１〜３から始まり、そして残基７〜１１で終わる。Ｎ−末端エピトープのさらなる例には、Ａβの残基２〜４、５、６、７または８、Ａβの残基３〜５、６、７、８または９、あるいはＡβ４２の残基４〜７、８、９または１０を含む。「中央エピトープ」は、Ａβペプチドの中央または真ん中部分に位置する残基を含んでなるエピトープまたは抗原決定基である。中央のエピトープの例には、Ａβのアミノ酸１３〜２８内の残基、好ましくはＡβの残基１４〜２７、１５〜２６、１６〜２５、１７〜２４、１８〜２３または１９〜２２に由来するものを含む。他の例示的な中央エピトープには、Ａβのアミノ酸１６〜２４、１６〜２３、１６〜２２、１６〜２１、１８〜２１、１９〜２１、１９〜２２、１９〜２３または１９〜２４内の残基を含む。「Ｃ−末端」エピトープまたは抗原決定基は、ＡβペプチドのＣ−末端内またはそれを含んで位置し、そしてＡβのアミノ酸３３〜４０、３３〜４１または３３〜４２内の残基を含む。「Ｃ−末端エピトープ」は、ＡβペプチドのＣ−末端内に位置する残基を含んでなるエピトープまたは抗原性決定基である（例えば、Ａβのアミノ酸約３０〜４０または３０〜４２内）。さらなる例示的Ｃ−末端エピトープまたは抗原決定基にはＡβの残基３３〜４０または３３〜４２がある。
【０１１７】
抗体がＡβ３〜７のような特定残基中のエピトープに結合すると言う場合、これは特定残基（すなわちこの例ではＡβ３〜７）を含有するポリペプチドに特異的に結合する抗体を意味する。そのような抗体はＡβ３〜７内の各残基と必ずしも接触しない。さらにＡβ３〜７内のそれぞれ１つのアミノ酸の置換もしくは欠失が、必ずしも結合親和性に有意な影響を及ぼさない。種々の態様では、Ａβ抗体は末端特異的である。本明細書で使用するように、用語「末端特異的」とは、ＡβペプチドのＮ−末端またはＣ−末端残基に特異的に結合するが、その残基を含んでなるより長いＡβ種中、またはＡＰＰ中に存在する場合、同じ残基を認識しない抗体を指す。種々の態様では、Ａβ抗体は「Ｃ末端特異的」である。本明細書で使用するように、用語「Ｃ−末端特異的」とは、Ａβペプチドの遊離Ｃ−末端を特異的に認識する抗体を意味する。Ｃ−末端特異的Ａβ抗体の例には：残基４０で終わるＡβペプチドを認識するが、残基４１、４２および／または４３で終わるＡβペプチドを認識しないもの；残基４２で終わるＡβペプチドを認識するが、残基４０、４１および／または４３で終わるＡβペプチドを認識しないものなどを含む。
【０１１８】
１つの態様では、Ａβ抗体は３Ｄ６抗体もしくはそのバリアント、または１０Ｄ５抗体もしくはそのバリアントでよく、その両方が米国特許公開第２００３０１６５４９６Ａ１号、同第２００４００８７７７７Ａ１号明細書、国際公開第０２／４６２３７Ａ３号および同第０４／０８０４１９Ａ２号パンフレットに記載されている。３Ｄ６および１０Ｄ５抗体も、例えば国際公開第０２／０８８３０６Ａ２号および同第０２／０８８３０７Ａ２号パンフレットに見いだすことができる。さらなる３Ｄ６抗体は、米国特許出願第１１／３０３，４７８号明細書、および国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５６１４号パンフレットに記載されている。３Ｄ６は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基１〜５に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。比較のために、１０Ｄ５は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基３〜６に特異的に結合するｍＡｂである。３Ｄ６モノクローナル抗体（ＲＢ９６  ３Ｄ６．３２．２．４）を生産する細胞株を、２００３年４月８日に米国、２０１０８  バー
ジニア州、マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そして寄託番号ＰＴＡ−５１３０を得た。１０Ｄ５モノクローナル抗体（ＲＢ４４  １０Ｄ５．１９．２１）を生産する細胞株を、２００３年４月８日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そして寄託番号ＰＴＡ−５１２９を得た。
【０１１９】
例示的なバリアント３Ｄ６抗体は、例えば配列番号３または配列番号５に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化軽鎖；および配列番号４または配列番号６に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化重鎖を有するものである。他の例示的バリアント３Ｄ６抗体は、例えば配列番号７に説明するヒト化軽鎖アミノ酸配列、および配列番号８に説明するヒト化重鎖アミノ酸配列を有するものである。
【０１２０】
例示的なバリアント１０Ｄ５抗体は、例えば配列番号９または配列番号１１に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化軽鎖、および配列番号１０または配列番号１２に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化重鎖を有するものである。他の例示的バリアント１０Ｄ５抗体は、例えば配列番号１３に説明するヒト化軽鎖アミノ酸配列、および配列番号１４に説明するヒト化重鎖アミノ酸配列を有するものである。そのようなバリアントはさらに国際公開第０２／０８８３０６Ａ２号パンフレットに記載されている。
【０１２１】
別の態様では、抗体は米国特許出願第２００４００８２７６２Ａ１号明細書および国際公開第０３／０７７８５８Ａ２号パンフレットに記載されているような１２Ｂ４抗体またはそのバリアントであり得る。１２Ｂ４はヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基３〜７に特異的に結合するｍＡｂである。
【０１２２】
例示的なバリアント１２Ｂ４抗体は、例えば配列番号１５または配列番号１７に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化軽鎖（または軽鎖）、および配列番号１６、配列番号１８または配列番号１９に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化重鎖を有するものである。
【０１２３】
さらに別の態様では、抗体は米国特許公開第２００５０１１８６５１Ａ１号明細書、米国特許出願第１１／３０３，４７８号明細書、国際公開第０４／１０８８９５Ａ２号パンフレット、および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５６１４号パンフレットに記載されている１２Ａ１１抗体もしくはそのバリアントであり得る。１２Ａ１１は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基３〜７に特異的に結合するｍＡｂである。１２Ａ１１モノクローナル抗体を生産する細胞株を、２００５年１２月１２日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そして寄託番号 を得た。
【０１２４】
例示的なバリアント１２Ａ１１抗体は、例えば配列番号２０に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化軽鎖、および配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０または配列番号４１に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化重鎖を有するものである。
【０１２５】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第１１／３０４，９８６号明細書、および「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号パンフレットに記載されている６Ｃ６抗体もしくはそのバリアントであり得る。６Ｃ６は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基３〜７に特異的に結合するｍＡｂである。抗体６Ｃ６を生産する細胞株を、２００５年１１月１日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そして寄託番号ＰＴＡ−７２００を得た。
【０１２６】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第１１／３０４，９８６号明細書、および「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号パンフレットに記載されている２Ｈ３抗体である。２Ｈ３は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基２〜７に特異的に結合するｍＡｂである。
【０１２７】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第 号明細書に記載されている３Ａ３抗体であり得る。３Ａ３は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＮ−末端エピトープ、特に残基３〜７に特異的に結合するｍＡｂである。
【０１２８】
ＡＴＣＣ寄託番号 および をそれぞれ有する抗体２Ｈ３および３Ａ３を生産する細胞株を、２００５年１２月１２日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託した。
【０１２９】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第１１／３０４，９８６号明細書、および「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号パンフレットに記載されている１５Ｃ１１抗体もしくはそのバリアントであり得る。１５Ｃ１１は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置する中央エピトープ、特に残基１９〜２２に特異的に結合するｍＡｂである。１５Ｃ１１モノクローナル抗体を生産する細胞株を、２００５年１２月１２日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そして寄託番号 を得た。
【０１３０】
さらに別の態様では、抗体は米国特許公開第２００５０２４９７２５Ａ１号明細書、および国際公開第０１／６２８０１Ａ２号パンフレットに記載されている２６６抗体であることができる。２６６は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置する中央エピトープ、特に残基１６〜２４に特異的に結合するｍＡｂである。２６６モノクローナル抗体を生産する細胞株を、２００４年７月２０日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そして寄託番号ＰＴＡ−６１２３を得た。
【０１３１】
例示的なバリアント２６６抗体は、例えば配列番号４２または配列番号４４に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化軽鎖、および配列番号４３または配列番号４５に説明する可変領域のアミノ酸配列を含んでなるヒト化重鎖を有するものである。他の例示的バリアント２６６抗体は、例えば配列番号４６に説明するヒト化軽鎖アミノ酸配列、および配列番号４７に説明するヒト化重鎖アミノ酸配列を有するものである。そのようなバリアント抗体は、米国特許公開第２００５０２４９７２５Ａ１号明細書および国際公開第０１／６２８０１Ａ２号パンフレットにさらに説明されている。
【０１３２】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第１１／３０４，９８６号明細書、および「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号パンフレットに記載されている２Ｂ１抗体もしくはそのバリアントであり得る。２Ｂ１は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置する中央エピトープ、特に残基１９〜２３に特異的に結合するｍＡｂである。
【０１３３】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第１１／３０４，９８６号明細書、および「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号パンフレットに記載されている１Ｃ２抗体もしくはそのバリアントであることができる。１Ｃ２は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置する中央エピトープ、特に残基１６〜２３に特異的に結合するｍＡｂである。
【０１３４】
さらに別の態様では、抗体は米国特許出願第１１／３０４，９８６号明細書、および「ベータアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という表題の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／４５５１５号パンフレットに記載されている９Ｇ８抗体もしくはそのバリアントであることができる。９Ｇ８は、ヒトβ−アミロイドペプチドに位置する中央エピトープ、特に残基１６〜２１に特異的に結合するｍＡｂである。
【０１３５】
抗体抗体２Ｂ１、１Ｃ２および９Ｇ８を生産する細胞株を、２００５年１１月１日にＡＴＣＣに、ブダペスト条約の合意の下に寄託し、そしてそれぞれ寄託番号ＰＴＡ−７２０２、ＰＴＡ−７１９９およびＰＴＡ−７２０１を得た。
【０１３６】
本発明で使用するためのヒトβ−アミロイドペプチドに位置するＣ−末端エピトープに特異的に結合する抗体には、限定するわけではないが「βＡ４ペプチドに特異的なモノクローナル抗体３６９．２Ｂ」という表題の米国特許第５，７８６，１８０号明細書に記載された３６９．２Ｂを含む。本発明に使用するための抗体のさらなる説明は、例えばＢｕｓｓｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６５（３）：９８７−９５（２００４））、Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  １００（４）：２０２３−８（２００３））、Ｋａｊｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２２）：１８７４８−５６（２００１））、Ｇａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９２０：２７４−８４（２０００））、Ｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６（８）：９１６−９（２０００））、および「抗−Ａベータ抗体を投与することを含んでなる、アルツハイマー病、ダウン症候群、大脳アミロイド脈管障害または軽度の認知障害を有する個体の認知の迅速な改善の実施」という表題の国際出願第０３０１５６９１Ａ２号パンフレットに見い出すことができる。本発明に使用するための抗体フラグメントのさらなる説明は、例えばＢａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ポスターセッションＰ４で提示された要旨Ｐ４−３９６，Ｓ５８７頁：治療薬および治療法−治療法、アミロイドに基づく（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ−Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ、Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂａｓｅｄ））およびＺａｍｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ポスターセッションＰ４で提示された要旨Ｐ４−４２０、Ｓ５９３頁：治療薬および治療法−治療法、アミロイドに基づく）に見いだすことができる。
【０１３７】
本発明に使用する抗体は、組換え的に、または合成的に生産することができる。例えば抗体は例えばＣＨＯ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞、ＮＳ０細胞、ＶＥＲＯ細胞、ニワトリ胚繊維芽細胞またはＢＨＫ細胞を使用して組換え細胞培養法により生産することができる。さらにＡβペプチドに結合する主要な機能的特性を保持するわずかな修飾を有する抗体が本発明により企図される。特定の態様では、抗体はＡβペプチドに選択的に結合するヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体である。より具体的には、ヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体は、ＮＨ２−末端エピトープ、例えば脳の斑の沈着（例えばアルツハイマー病に罹患している患者の）に見いだされるヒトβ−アミロイド１−４０または１−４２ペプチドに位置するアミノ酸残基１−５に特異的に結合するように設計される。
【０１３８】
図１は例示的なヒト化抗Ａβペプチド抗体の予想される構造の概略的表示を提供する。対応する発現ベクターのＤＮＡ配列から予想されるｈ３Ｄ６ｖ２軽鎖および重鎖の完全なアミノ酸配列は、図２（ここで残基は残基番号１として、軽鎖および重鎖のＮＨ２−末端から始まる番号を付ける）、および配列番号１および配列番号２にそれぞれ示す。重鎖ＤＮＡ配列によりコードされる最後のアミノ酸残基、Ｌｙｓ４４９は、ｈ３Ｄ６ｖ２から分
泌された成熟したものには観察されず、そしていかなる理論にも拘束されることを望まないが、恐らくＣＨＯの細胞性プロテアーゼにより細胞内プロセッシング中に除去されたのだろう。したがってｈ３Ｄ６ｖ２重鎖のＣＯＯＨ−末端は、場合によりＧｌｙ４４８である。ＣＯＯＨ−末端のリシンプロセッシングは、組換え体および血漿に由来する抗体で観察され、そしてそれらの機能に影響を与えないと思われる（Ｈａｒｒｉｓ（１９９５）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．７０５：１２９−１３４）。精製されたｈ３Ｄ６ｖ２はＮ−結合グリカンを重鎖のＦｃ部分に付加することにより翻訳後に修飾され、これは１つのＮ−グリコシル化コンセンサス部位を含むことが知られている。Ｎ−グリコシル化部位は、哺乳動物のＩｇＧタンパク質の類似のＮ−グリコシル化部位で共通に観察される３つの主要な複合二分岐型中性オリゴ糖構造を表す。
【０１３９】
別の例示的なヒト化抗Ａβペプチド抗体は、図２に説明する配列を有するが、軽鎖の１位にＤ→Ｙの置換を有するヒト化３Ｄ６変更体１（ｈｕ３Ｄ６ｖ１）である。
【０１４０】
本発明の様々な態様において、抗Ａβ抗体（例えばヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、またはより高い、例えば約１００ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約５００ｍｇ／ｍｌまで、または約１０００ｍｇ／ｍｌ以上で存在する。好ましくは抗Ａβ抗体は、約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。様々な態様において、抗Ａβ抗体は、約１、２、５、１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５または３０ｍｇ／ｍｌで存在する。特定の態様では、抗体（例えばヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は、約１７ｍｇ／ｍｌで存在する。別の特定の態様では、抗体（例えばヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は、約２０ｍｇ／ｍｌで存在する。さらに別の特定の態様では、抗体（例えばヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体）は、約３０ｍｇ／ｍｌで存在する。上記の引用した濃度の中間範囲、例えば約１２ｍｇ／ｍｌ〜約１７ｍｇ／ｍｌは、本発明の一部とする。例えば上限および／または下限として上に引用した値の任意の組み合わせを使用した値の範囲を含むものとする。
【０１４１】
賦形剤
様々な態様において、本発明は限定するわけではないがバッファー、酸化防止剤、張度調整剤および安定化剤を含む種々の賦形剤を含むことができる製剤を提供する。さらに製剤はｐＨ調整（例えばＨＣｌ）および希釈剤（例えば水）用のさらなる作用物質を含むことができる。他の態様では、種々の形態のヒスチジンをｐＨ調整に使用することができる。一部では、賦形剤は抗体の安定性および生物学的活性（例えばタンパク質の正しい立体配座を維持することにより）を維持するため、かつ／またはｐＨを維持するために役立つ。
【０１４２】
緩衝剤
本発明の種々の観点では、製剤には緩衝剤（バッファー）を含む。バッファーは生理学的に適切なｐＨを維持するために役立つ。さらに、バッファーは製剤の等張性および化学的安定性を強化するためにも役立つことができる。一般に、製剤は生理学的に適切なｐＨを有するべきである。本発明の様々な態様において、製剤は約５〜約７、約５．５〜約６．５、好ましくは約６．０〜約６．５のｐＨを有する。特定の態様では、製剤は約６のｐＨを有する。上記に引用したｐＨレベルの中間の範囲、例えば約ｐＨ５．２〜約ｐＨ６．３、好ましくは６．０またはｐＨ６．２も本発明の一部であることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の任意の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。ｐＨは当該技術分野で知られている技術により必要に応じて調整することができる。例えばＨＣｌはｐＨを所望するレベルに調整するために必要に応じて加えることができ、あるいは異なる形のヒスチジンを使用してｐＨを所望するレベルに調整することができる。
【０１４３】
バッファーには限定するわけではいがコハク酸塩（ナトリウム塩またはリン酸塩）、ヒスチジン、リン酸塩（ナトリウムまたはカリウム）、Ｔｒｉｓ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、クエン酸塩、他の有機酸およびその混合物を含む。好適な態様では、バッファーはヒスチジン（例えばＬ−ヒスチジン）である。別の特定の態様では、バッファーはコハク酸塩である。別の態様では、製剤には製剤を生理学に適するｐＨに維持するために十分な量で存在するヒスチジンのようなアミノ酸を含む。ヒスチジンは生理学的ｐＨ範囲で緩衝能を有するアミノ酸の例である。ヒスチジンはそのイミダゾール基から広がるその緩衝能を引き出す。１つの例示的態様では、バッファーはＬ−ヒスチジン（塩基）（例えばＣ６Ｈ９Ｎ３Ｏ２、ＦＷ：１５５．１５）である。別の態様では、バッファーはＬ−ヒスチジン一塩化一水和物（例えばＣ６Ｈ９Ｎ３Ｏ２．ＨＣｌ．Ｈ２Ｏ、ＦＷ：２０９．６３）である。別の例示的態様では、バッファーはＬ−ヒスチジン（塩基）とＬ−ヒスチジン一塩化一水和物との混合物である。
【０１４４】
１つの態様では、バッファー（例えばＬ−ヒスチジンまたはコハク酸塩）の濃度は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、好ましくは約５ｍＭ〜約１０ｍＭで存在する。様々な態様で、バッファーは約６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭまたは１５ｍＭで存在することができる。特定の態様では、バッファーは約１０ｍＭで存在する。上に引用した濃度の中間の範囲、例えば約１２ｍＭ〜約１７ｍＭも、本発明の一部となることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の任意の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。特定の態様では、バッファーは生理学的に適するｐＨを維持するために十分な量で存在する。
【０１４５】
張度調整剤
本発明の様々な観点において、製剤には張度調整剤を含む。一部では、張度調整剤は製剤の等張性の維持、そしてタンパク質レベルの維持に貢献する。一部では張度調整剤は製剤中に存在する治療に活性なポリペプチドのレベル、割合または比率を保存するために貢献する。本明細書で使用する用語「張度（ｔｏｎｉｃｉｔｙ）」とは、流体環境または溶液中の生物学的成分の挙動を指す。等張性溶液は、血漿と同じ浸透圧を有するので、そして個体の血漿の浸透圧を変化させることなく個体に静脈内注入することができる。実際に本発明の１つの態様では、張度調整剤は製剤を静脈内注入に適するようにするために十分な量で存在する。しばしば張度調整剤は充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）としても役立つ。張度調整剤はそれ自体、タンパク質が凍結および剪断のような種々のストレスを克服できるようにすることができる。
【０１４６】
張度調整剤には限定するわけではないが、ＣａＣｌ２、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ラクトース、ソルビトール、シュクロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチル澱粉、グリセリンおよびそれらの混合物を含む。好適な態様では、張度調整剤はマンニトールである（例えば、Ｄ−マンニトール、例えばＣ６Ｈ１４Ｏ６、ＦＷ：１８２．１７）。
【０１４７】
１つの態様では、張度調整剤は約２％〜約６重量／容量％、または約３％〜約５重量／容量％で存在する。別の態様では、張度調整剤は約３．５％〜約４．５重量／容量％で存在する。別の態様では、張度調整剤は約２０ｍｇ／ｍｌ〜約６０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、または約３５ｍｇ／ｍｌ〜約４５ｍｇ／ｍｌで存在する。好ましくは張度調整剤は約４重量／容量％または約４０重量／容量％で存在する。別の態様
では張度調整剤は、約６重量／容量％で存在する。さらに別の態様では、張度調整剤は、約１０重量／容量％で存在する。
【０１４８】
上に引用した濃度の中間の範囲、例えば約３．２％〜約４．３重量／容量％、または約３２〜約４３ｍｇ／ｍｌも本発明の一部となることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。張度調整剤は、製剤の張度を維持するために十分な量で存在すべきである。
【０１４９】
酸化防止剤
本発明の種々の観点では、製剤には製剤を一部保存するために（例えば酸化を防止することにより）酸化防止剤を含む。
【０１５０】
酸化防止剤には限定するわけではないが、ＧＬＡ（ガンマ−リノレン酸）−リポ酸、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）−リポ酸、ＧＬＡ−トコフェロール、ジ−ＧＬＡ−３，３’−チオジプロピオン酸、そして一般には例えば化学的に連結することができる天然または合成の酸化防止剤を含むＧＬＡ、ＤＧＬＡ（ジホモ−ガンマ−リノレン酸）、ＡＡ（アラキドン酸）、ＳＡ（サリチル酸）、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）またはＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）がある。これらにはフェノール性酸化防止剤（例えば、オイゲノール、カルノシン酸、カフェイン酸、ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシアニソール）、没食子酸、トコフェロール、トコトリエノールおよびフラベノイド酸化防止剤（ミリセチンおよびフィセチン）、ポリエン（例えば、レチン酸）、不飽和ステロール（例えばΔ５−アベノステロール）、有機硫黄化合物（例えば、アリシン、テルペン（例えば、ゲラニオール、アビエチン酸）、およびアミノ酸酸化防止剤（例えばメチオニン、システイン、カルノシン）を含む。１つの態様では、酸化防止剤はアスコルビン酸である。好ましくは酸化防止剤はメチオニン、またはその類似体、例えばセレノメチオニン、ヒドロキシメチルブタン酸、エチオニンまたはトリフルオロメチオニンである。
【０１５１】
１つの態様では、酸化防止剤（例えばＬ−メチオニンのようなメチオニン、例えばＣＨ３ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＦＷ＝１４９．２１）は、約０．１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭで存在する。様々な態様において、酸化防止剤は約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭまたは１５ｍＭで存在することができる。好ましくは酸化防止剤は約１０ｍＭで存在する。別の特定の態様では、酸化防止剤は約１５ｍＭで存在する。上に引用した濃度の中間の範囲、例えば約１２ｍＭ〜約１７ｍＭも、本発明の一部となることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の任意の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。特定の態様では、酸化防止剤は酸化を一部防ぐことにより製剤を保存するために十分な量で存在すべきである。
【０１５２】
安定化剤
本発明の様々な観点において、製剤には表面活性剤としても知られる安定化剤を含む。安定化剤は製剤中で生物学的分子および／または一般の製薬学的賦形剤と相互作用し、そして安定化する特異的な化学化合物である。特定の態様では、安定化剤は低温保存と関連して使用され得る。安定化剤は一般に、安定化剤がなければタンパク質の凝集を生じるを空気／溶液界面が誘導するストレス、および溶液／界面が誘導するストレスからタンパク質を保護する。
【０１５３】
安定化剤には前提するわけではないが、グリセリン、ポリソルベート８０のようなポリソルベート、ジカルボン酸、蓚酸、コハク酸、アジピン酸、フマル酸、フタル酸およびそれらの混合物を含むことができる。好適な態様では、安定化剤はポリソルベート８０であ
る。
【０１５４】
１つの態様では、安定化剤（例えばポリソルベート８０）の濃度は、約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％、約０．００１重量／容量％〜約０．００９重量／容量％、または約０．００３重量／容量％〜約０．００７重量／容量％である。好ましくは安定化剤の濃度は、約０．００５重量／容量％である。別の特定の態様では、安定化剤は約０．０１重量／容量％で存在する。上に引用した濃度の中間の範囲、例えば約０．００２重量／容量％〜約０．００６重量／容量％も、本発明の一部となることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。安定化剤はＡβ結合ポリペプチド（例えば、抗Ａβ抗体）を安定化するために十分な量で存在すべきである。
【０１５５】
レミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編集（１９８０）に記載されているもののような他の製薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定化剤は、それらが製剤の所望の特性に悪影響を及ぼさない限り製剤に含めることができる。特定の態様では、製剤は実質的に保存剤を含まないが、別の態様では、保存剤を必要に応じて加えてもよい。例えば氷晶防止剤またはリオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含むことができ、例えば製剤は凍結乾燥されるべきである。
【０１５６】
本発明の様々な観点において、製剤は場合により幾つかの、またはすべて種類の上記賦形剤を含む。１つの観点では、本発明の製剤はＡβ結合ポリペプチド（例えば抗Ａβ抗体）、マンニトールおよびヒスチジンを含む。特定の態様では、製剤はメチオニンのような酸化防止剤および／またはポリソルベート８０のような安定化剤を含むことができる。特定の態様では、製剤は約６のｐＨを有する。別の観点では、製剤はＡβ結合ポリペプチド（例えば抗Ａβ抗体）、マンニトール、ヒスチジンおよびメチオニンを含む。さらに別の観点では、製剤はＡβ結合ポリペプチド（例えば抗Ａβ抗体）、マンニトール、ヒスチジン、メチオニンおよびポリソルベート８０を含む。本発明の特定の観点では、製剤は約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合ポリペプチド（例えば抗Ａβ抗体）、約１０ｍＭのヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトールを含み、そして約６のｐＨを有する。本発明の別の観点では、製剤は約２０ｍｇ／ｍｌのＡβ結合ポリペプチド（例えば抗Ａβ抗体）、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、４重量／容量％のマンニトール、約０．００５重量／容量％のポリソルベート８０を含み、そして約６のｐＨを有する。好適な製剤には約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌのヒト化３Ｄ６抗体、約１０ｍＭのヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４重量／容量％のマンニトール、約０．００５％のポリソルベート８０を含み、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有する。別の好適な製剤には、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヒト化２６６抗体、約１０ｍＭのヒスチジンもしくはコハク酸塩、約１０ｍＭのメチオニン、約４重量／容量％のマンニトールもしくはソルビトールを含み、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有する。さらに別の好適な製剤は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌのヒト化１２Ａ１１抗体、約５ｍＭのヒスチジン、約１０ｍＭのメチオニン、約４％のマンニトールもしくは１５０ｍＭのＮａＣｌを含み、そして約５．５〜約６．５のｐＨを有する。別の製剤は凍結より約１０℃上の温度で少なくとも約１２カ月間安定であり、約５．５〜約６．５のｐＨを有し、そして濃度約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗Ａβ抗体、濃度約４重量／容量％のマンニトールもしくは濃度約１５０ｍＭのＮａＣｌ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭのヒスチジンもしくはコハク酸塩、および約１０ｍＭのメチオニンを含む。また好ましくは製剤は濃度約０．００１重量／容量％〜約０．０１重量／容量％のポリソルベートを含む。
【０１５７】
本発明の例示的態様では、しばしばバルク製剤（ｂｕｌｋ  ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ）として有用なＡβ結合ポリペプチド（例えば抗Ａβ抗体）の濃縮調製物を提供する。さらに本発明の例示的態様は、凍結、凍結乾燥および／または再構成に対して安定である。さらに本発明の例示的態様は、長期間にわたり安定である。例えば本発明の製剤は少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０カ月間、安定である。特定の態様では、本発明の製剤は少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、または少なくとも約３０カ月間、安定である。
【０１５８】
本発明に従い、製剤は約−８０℃〜約４０℃、約０℃〜約２５℃、約０℃〜約１５℃、または約０℃〜約１０℃、好ましくは約２℃〜約８℃の温度で保存することができる。種々の態様において、製剤は約０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃または１０℃で保存することができる。特に好適な態様では、製剤は約５℃で保存される。一般に製剤はこれらの範囲で安定であり、そして生物学的活性を保持する。上に引用した温度の中間の範囲、例えば約２℃〜約１７℃も、本発明の一部となることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。
【０１５９】
本発明の製剤は様々な技術により送達するために適している。特定の態様では、製剤は静脈内または筋肉内のような非経口的に投与される。さらに製剤を脳（例えば抗体が血液脳関門をわたることができるように）または脊髄液への送達を標的とすることができる。特定の態様では、製剤は静脈内に投与される。
【０１６０】
本発明の製剤の有効な用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトか動物か、投与される他の薬剤、および処置は予防的か、または治療的かといった事柄を含め、多くの因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も処置することができる。処置の投薬用量は、安全性および効力を至適化するために滴定する必要がある。
【０１６１】
抗体を用いた受動免疫感作には、例示の投薬用量は約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（宿主の体重）である。幾つかの例示的態様では、投薬用量は約０．５、０．６、０．７、０．７５、０．８、０．９、１．０、１．２、１．２５、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．７５、１．８、１．９または２．０ｍｇ／ｋｇであることができる。受動免疫感作の他の例示的投薬用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇである。幾つかの例示的態様では、投薬用量は約５、１０、１５または２０ｍｇ／ｋｇである。個体はそのような用量を毎日、選んだ日（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｄａｙｓ）、毎週または経験的分析により決定される他のスケジュールに従い投与され得る。例示的処置は長期間、例えば少なくとも６カ月間、多回投薬用量での投与を必要とする。さらなる例示的処置法には、２週間に１回、または１カ月に１回、または３〜６カ月に１回の投与を要する。例示的な投薬用量スケジュールには、連続して毎日の１〜１０ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇを１日おきに、または毎週６０ｍｇ／ｋｇを含む。幾つかの方法では、異なる結合特異性を持つ２以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、この場合、投与される各抗体の投薬用量が示した範囲内にある。
【０１６２】
抗体は通常、多回投与される。１回の投与間隔は、１週間、１カ月または１年であることができる。間隔は患者のＡβに対する抗体の血中レベルを測定することにより示されるように不規則であることもできる。幾つかの方法では、投薬用量は１〜１０００μｇ／ｍｌ、および方法によっては２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するために調整される。あるいは抗体は徐放性製剤として投与することもでき、この場合、より少ない頻度が要求される。投薬用量および頻度は患者中の抗体の半減期に依存して変動する。一般
に、ヒト抗体は最長の半減期を示し、これにヒト化抗体、キメラ抗体、そして非ヒト抗体が続く。
【０１６３】
投与の投薬用量および頻度は、処置が予防的であるか、治療的であるかに依存して変動し得る。予防的応用では、本抗体またはそのカクテルを含有する製剤は未だ疾患状態になっていない患者に投与されて、患者の抵抗を強化する。そのような量は、「予防的に有効な用量」と定義する。この使用では、正確な量はここでも患者の健康状態および全身免疫に依存するが、一般的な範囲は用量あたり０．１〜２５ｍｇ、特に用量あたり０．５〜２．５ｍｇである。比較的低い投薬用量が比較的稀な間隔で長期間投与される。患者の中には彼らの余生に処置を受け続ける者もいる。
【０１６４】
幾つかの治療的応用では、比較的高い投薬用量（例えば用量あたり約０．５または１〜約２００ｍｇ／ｋｇの抗体（例えば、０．５、１、１．５、２、５、１０、２０、２５、５０または１００ｍｇ／ｋｇ）、５〜２５ｍｇ／ｋｇの投薬用量がより一般的に使用される）が、比較的短い間隔で、疾患の進行が遅れ（ｒｅｄｕｃｅｄ）、または停止するまで必要とされることがあり、そして好ましくは患者が疾患症状の部分的または完全な改善を示すまで使用される。その後、患者には予防的処方が投与され得る。
【０１６５】
投与の容易さおよび投薬用量の均一性のために、本発明の製剤を単位剤形で提供することが特に有利である。本発明の製剤は、カプセル、アンプル、凍結乾燥形または多回投与容器で提示することができる。用語「容器」は、例えば保存のために物体または液体が配置または入れられる例えばホルダー、レセプタクルまたはベッセルのようなものを指す。単位剤形は、沈殿防止剤、安定化剤および／または分散剤のような配合剤と一緒に有効成分の懸濁液、溶液または乳液を含む本明細書に記載の任意の製剤を含んでなることができる。例示的態様では、製薬学的単位剤形は患者に例えば静脈内注入により投与する前に、適切な希釈剤、例えば滅菌した発熱物質を含まない水または塩溶液と共に静脈内点滴バック（例えば５０ｍｌ、１００ｍｌまたは２５０ｍｌまたは５００ｍｌの点滴バック）に加えることができる。製薬学的単位剤形の中には、特に凍結乾燥状態は、静脈内点滴バックに加える前に適切な希釈剤での再構成が必要となり得るものもある。例示的態様では、製薬学的単位剤形は本明細書に記載する製剤を含有する容器である。例えば容器は１０ｍＬのガラス、Ｉ型、チュービングバイアルである。一般に容器は滅菌性および製剤の安定性を維持しなければならない。例えばバイアルはセラムストッパーで密閉することができる。さらに様々な態様において、容器は約１００ｍｇの製剤または有効成分の引き抜きを可能とするように設計されるべきである（例えばシリンジ使用に）。あるいは容器は大量の製剤または有効成分、例えば約１０ｍｇ〜約５０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、そして約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約４０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約８０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１６０ｍｇ、またはその間の範囲または間隔、例えば約１００ｍｇ〜約２００ｍｇに適しているかもしれない。上に引用した量の中間の範囲、例えば約２５ｍｇ〜約１９５ｍｇも、本発明の一部となることを意図する。例えば上限および／または下限として上で引用した値の組み合わせを使用する値の範囲を含むことを意図している。特定の態様では、製剤はしばしば液体の単位剤形として供給される。
【０１６６】
別の観点では、本発明は製薬学的単位剤形（例えば本明細書に開示する製剤を含む容器）、および使用説明書を含むキットを提供する。したがって容器およびキットは、多回使用のために十分な製剤を提供するように設計することができる。多くの態様において、キットはさらに希釈剤を含むことができる。希釈剤には賦形剤を別個に、または合わせて含むことができる。例えば希釈剤にはマンニトールのような張度調整剤、ヒスチジンのような緩衝剤、ポリソルベート８０のような安定化剤およびメチオニンのような酸化防止剤および／またはそれらの組み合わせを含むことができる。希釈剤は他の賦形剤、例えば当業者が必要と考えるリオプロテクタントを含むことができる。
【０１６７】
本発明のさらに有用な態様は、「発明の要約」という表題の本出願の章に説明されている。
【０１６８】
本発明を以下の実施例でさらに具体的に説明するが、これは限定と解釈されるべきではない。本明細書中で引用したすべての技術文献、特許および公開された特許出願、ならびに図の内容は、引用により本明細書に編入する。
【実施例】
【０１６９】
一般に、本発明の実施には特に示さない限り、化学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、免疫学（特に例えば抗体技術）、およびポリペプチド調製の標準的技術の通例の技術を使用する。例えばＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，モレキュラークローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ）：コールドスプリングハーバーラボラトリー出版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）（１９８９）；抗体工学プロトコール（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），５１０，Ｐａｕｌ，Ｓ．ヒューマナ出版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒ）（１９９６）：抗体工学：実践的取り組み（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｓｅｒｉｅｓ，１６９），ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ編集、イリル出版（Ｉｒｌ  Ｐｒ）（１９９６）；抗体：ア  ラボラトリーマニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｌ．出版、Ｐｕｂ．（１９９９）；および分子生物学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，編集、ジョン  ウォリー＆サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）（１９９２）を参照にされたい。
【０１７０】
実施例Ｉ．ヒト化抗Ａベータ抗体のクローニングおよび発現
本発明の方法による製剤用の例示的抗体は、３Ｄ６である。３Ｄ６ｍＡｂはＡβのＮ−末端に特異的であり、そしてアミロイド斑の食作用を媒介する（例えば食作用を誘導する）ことが示された。３Ｄ６は分泌されたＡＰＰまたは完全長のＡＰＰを認識しないが、アミノ末端にアスパラギン酸を持つＡβ種のみを検出する。したがって３Ｄ６は末端特異的抗体である。抗体３Ｄ６を生産するＲＢ９６  ３Ｄ６．３２．２．４と命名された細胞株は、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５１３０を有し、２００３年４月８日に寄託された。３Ｄ６抗体のクローニング、特性決定およびヒト化は、米国特許公開第２００３０１６５４９６Ａ１号明細書に記載されている。簡単に説明すると、抗Ａβペプチドマウスモノクローナル抗体（ｍ３Ｄ６と命名）のヒト化は、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によりｍ３Ｄ６軽鎖および重鎖可変領域（ＶＬおよびＶＨ）のＤＮＡ配列を単離することにより行った。決定されたｍ３Ｄ６のＶＬおよびＶＨのＤＮＡ配列に基づき、相同的なヒトの枠組み領域を同定した。ヒト化抗体がＡβペプチド抗原と相互反応する能力を保持していることを確認するために、重要なマウスＶＬおよびＶＨの枠組み残基はヒト化３Ｄ６配列に保持されて、ヒトカッパ軽鎖およびＩｇＧ１重鎖配列の内容に定常ドメイン領域（ＣＤＲ）の全体的構造を保存した。この方法により同定されたヒト化３Ｄ６ＶＬおよびＶＨ配列をコードするＤＮＡ配列は（５’シグナルペプチド配列および３’イントロンスプライス−ドナー配列を含む）は、合成した重複しているＤＮＡオリゴヌクレオチドをアニーリングし、続いてＤＮＡポリメラーゼのフィルイン反応により生成した。各ヒト化可変領域配列の完全性は、ＤＮＡシークエンシングにより確認した。図１はｈ３Ｄ６ｖ２と命名された例示的なヒト化抗Ａβペプチド３Ｄ６抗体の予想される構造の概略を提示する。図２はｈ３Ｄ６ｖ２軽鎖および重鎖の完全なアミノ酸配列を同定する。
【０１７１】
ヒト化３Ｄ６抗体は、抗Ａβ抗体の軽鎖および重鎖遺伝子をコードする発現プラスミドでチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞系統をトランスフェクションすることにより発現させた。抗体を発現しているＣＨＯ細胞は、標準的なメトトレキセートに基づく薬剤選択／遺伝子増幅手順を使用して単離した。所望の生産性および成長表現型を現すクローンのＣＨＯ細胞株を選択し、そして動物またはヒトに由来する成分を含まない化学的に定められた培地を使用して抗体を発現する細胞株を樹立した。
【０１７２】
実施例ＩＩ．ヒト化抗Ａβ抗体薬剤物質の製造
ポリペプチドの製造工程は、抗Ａβ抗体を安定に発現しているクローン細胞のスターターカルチャーを解凍することから始めた。細胞は、動物またはヒトに由来するタンパク質を含まない化学的に定められた培地を使用して培養した。次いでカルチャーを拡大し、そしてバイオリアクターに種を接種するために使用し、これを次いで多生産用バイオリアクターサイクルを接種するために使用した。生産用バイオリアクターはフィード−バッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）様式で操作した。生産サイクルの終わりに、条件付けした培地回収物は、さらに下流の処置のための調製で、マイクロ濾過により透明化した。
【０１７３】
精製工程は標準的なクロマトグラフィー段階、続いて濾過からなった。精製された抗体を限外濾過により濃縮し、そして製剤バッファーが存在しないポリソルベート８０にダイヤフィルトレーションした（ｄｉａｆｉｌｔｅｒｅｄ）。場合によりポリソルベート８０（植物由来）を限外濾過／膜分離滞留プールに加え、続いて細菌保持濾過（ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）を行う。薬物は−８０℃で凍結して保存し、そして本明細書に記載する安定化された液体製剤を含む薬剤製品へのさらなる製造のために保持する。
【０１７４】
実施例ＩＩＩ．抗体製剤および偽薬の調製
抗体薬剤生成物の２つのバッチを製造した。最初のバッチは薬物を、ｍＬあたり２０ｍｇの抗Ａβ抗体活性物質、１０ｍＭのヒスチジン、１０ｍＭのメチオニン、４％のマンニトール、０．００５％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０を含有する動物およびヒトのタンパク質を含まない製剤物質に調合することにより製造した。薬剤生成物は、１００ｍｇの抗Ａβ抗体の活性物質／バイアルで無菌的にバイアルに充填した。仕上げた薬剤生成物のバイアルには保存剤を含まず、そして単回使用のみを意図するものであった。
【０１７５】
薬剤生成物の第２バッチは、ポリソルベート８０を含まない製剤バッファーを使用して同様の方法により製造した。
【０１７６】
実施例ＩＶ．ポリソルベート８０を含む、および含まない製剤の安定性の分析
製剤の安定性、そして特に物理化学的完全性（凝集、脱アミド化、加水分解および／またはジスルフィド結合の再配置のような）は、当該技術分野で周知な以下の方法に従い評価した：外観；ｐＨ；タンパク質濃度（Ａ２８０）；ＥＬＩＳＡ、一部は生物活性試験として；凝集試験の一部として、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）；凝集、および一般に安定性の試験の一部としてサイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）；脱アミド化、および一般に安定性の試験の一部としてカチオン交換高性能液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）；およびペプチドマッピング。これらの方法では、様々な温度で試験条件下のタンパク質の回収および完全性を評価した。
【０１７７】
製剤の外観分析は、様々な時点での製剤の品質を測定するために行った。分析は透明度、色および粒子の存在に関する視覚調査に基づき行った。例えばオパールのような光彩を放つ程度は、参照懸濁液により分析した。本発明によるポリソルベート８０有り、または無しで作成した製剤の外観分析は、両製剤がそれぞれ−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で保存された時、以下の時点；初期、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月で許容され得ることを示した。
【０１７８】
ｐＨ分析は、約５．５〜約６．５の許容され得る範囲内で製剤のｐＨの管理を決定するために行った。本発明に従いポリソルベート８０を含むか、または含まずに作成した製剤のｐＨ分析は、両製剤がそれぞれ−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で保存された時、以下の時点；初期、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月で許容され得ることを示した。一般にｐＨは５．８未満または６．２より高い範囲には決してならない。
【０１７９】
Ａ２８０アッセイによるタンパク質濃度分析は、約１７ｍｇ／ｍｌ〜約２３ｍｇ／ｍｌの許容され得る範囲内の製剤のタンパク質濃度の管理を測定するために行った。本発明に従いポリソルベート８０を含むか、または含まずに作成した製剤のタンパク質濃度の分析は、両製剤がそれぞれ−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で保存された時、以下の時点；初期、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月で一般に許容され得ることを示した。５℃、２５℃および４０℃で３カ月保存した時、ポリソルベート８０を含まない製剤について、タンパク質濃度が２３ｍｇ／ｍｌよりわずかに上の範囲を除き、その他のタンパク質濃度は許容され得る範囲内に留まった。したがってタンパク質濃度の分析では、たとえ加速された条件下でも特にポリソルベート８０を含む製剤に関して、タンパク質の検出しうる損失は起こらなかったことが示された。さらにタンパク質濃度は一般に初期の時点に続いて有意な時間または温度依存的変化を示すことができなかった。
【０１８０】
生物学的活性の維持を、一部、ＥＬＩＳＡ技術によりアッセイした。生物学的活性は、許容され得る活性が＞２５００ＢＵ／ｍｇまたは５０％（すなわち５０００ＢＵ／ｍｇは１００％に等しいと考える）である結合単位（ＢＵ）／ｍｇと分析された。本発明に従いポリソルベート８０を含むか、または含まずに作成した製剤のＥＬＩＳＡ分析は、両製剤がそれぞれ−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で保存された時、以下の時点；初期、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月で一般に許容され得ることを示した。４０℃で保存した時、両製剤に関する生物学的活性の範囲が１２カ月の時点で５０％よりもわずかに下の範囲である場合を除き、それ以外は生物学的活性が許容範囲内に留まった。
【０１８１】
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、一般に凝集、純度および安定性の試験として行われた。ＳＥＣ−ＨＰＬＣは、リン酸二塩基姓ナトリウムバッファーを用いた移動相クロマトグラフィーを使用した条件下で行い、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析が高分子量生成物および低分子量生成物に比べて＞９０％ＩｇＧモノマーを同定すれば、製剤は許容し得ることを示した。本発明に従いポリソルベート８０有り、または無しで作成した製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、両製剤がそれぞれ−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で保存された時、以下の時点；初期、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月で一般に許容され得ることを示した。両製剤について、９０％未満の範囲のモノマーの割合を除いて、４０℃で保存した時、各時点、および６カ月後に（分析が両製剤について、各時点で少なくとも１０％より多い低分子量生成物を同定した場合）、モノマーの割合はそれではなく許容され得る範囲である。ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は一般に、ポリソルベートを含むか、または含まないサンプル中の高分子量および低分子量プロファイルは経時的に異なるが、抗体のモノマー形態は製剤を５℃で保存した時でも、例えば１２カ月の時点で一般に一定のままであったことを示す。
【０１８２】
ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析は、アミノ化および一般的な安定性の試験として行った。ＣＥＸ−ＨＰＬＣは、ＮａＣｌバッファーを用いた移動相クロマトグラフィーを使用する条件下
で行い、優勢なピークの溶出プロファイルおよび保持時間を作成し、これらが参照標準プロファイルに匹敵するか、または匹敵しないかを分析する。本発明に従いポリソルベート８０を用いて、または用いずに作成した製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析は、両製剤がそれぞれ−８０℃、５℃、２５℃および４０℃で保存された時、以下の時点；初期、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、９カ月および１２カ月で一般に許容され得ることを示した。両製剤を４０℃で各時点、および３カ月間保存した後に比較できない優勢ピークの溶出プロファイルおよび保持時間を除いて、その他の優勢ピークは参照ピークに匹敵する。
【０１８３】
一般に５℃で保存したポリソルベート８０を含む製剤の分析は、以下の特に重要な結論を可能にする：１）オパール様の光彩、ｐＨ、ＥＬＩＳＡ、ＣＥＸ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析はすべて９カ月間にわたり製剤中に最少の変化を示した；２）５℃で保存した製剤は、９カ月間にわたり加速サンプルよりも参照サンプルに似ているようだった；３）ペプチドマッピングは５℃で変化する；そして４）５℃でデータが傾くＳＥＣ−ＨＰＬＣは、少なくとも１７．２カ月の安定性を予想し（図６を参照にされたい）、しかしカラム、装置およびバッファーの変動姓を除くと、データは３０カ月以上の安定性の予想を可能とした（図７を参照にされたい）。さらに２５℃で保存したポリソルベート８０を含む加速サンプルは、９カ月目のすべての仕様に合格した（図４）。
【０１８４】
さらに５℃でポリソルベート８０を含まない製剤の分析は、以下の特に重要な結論を可能とする：１）オパール様の光彩、ｐＨおよびＥＬＩＳＡ分析は、すべて９カ月間にわたり製剤中に最少の変化を示した：２）ＣＥＸ−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果は、９カ月目に参照サンプルまたは−８０℃の対照に匹敵する知見を示した；３）ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は９カ月間にわたりわずかな変化を示したが、加速温度でさらに顕著となった；および４）データが傾くＳＥＣ−ＨＰＬＣは、たとえアッセイの変動性に問題があっても、少なくとも１８カ月間の安定性を予想した（図８を参照にされたい）。
【０１８５】
図３〜５は、本発明に従い作成し、そして５℃、２５℃および４０℃でそれぞれ保存した製剤（ＰＳ８０を含むか、または含まない）に関する使用期限のグラフ表示である。一般に図３〜５は、より高温での本発明の製剤の保存が予想される使用期限を短くする。特に図３は、製剤を５℃で保存した時、製剤が少なくとも１８カ月間の予想される使用期限を有することを示す。図４は室温（２５℃）での製剤の保存が予想される使用期限を約１２カ月に下げる恐れがあることを示す。図５はさらに製剤を４０℃で保存することが、予想される使用期限を約４カ月に下げる恐れがあることを示す。
【０１８６】
実施例Ｖ．酸化防止剤としてのメチオニンの使用に及ぼす安定性試験
メチオニンが抗体製剤中の抗体の安定性の維持に及ぼす効果を測定するために実験を行った。ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、４種の抗体サンプルについて様々な温度で６カ月間にわたり行った（抗−ＣＤ２２ＩｇＧ４抗体）；６．０のｐＨで２０ｍＭコハク酸塩を含む抗体製剤；２０ｍＭのコハク酸塩および１０ｍＭのメチオニンを含む抗体製剤；２０ｍＭのコハク酸塩および０．０１％ＰＳ８０を含む抗体製剤；および２０ｍＭのコハク酸塩、１０ｍＭのメチオニンおよび０．０１％ＰＳ８０を含む抗体製剤。一般に結果はメチオニンが望ましくは高分子量（ＨＭＷ）形成を下げることを示す。さらにメチオニンは温度依存的なＨＭＷのパーセントの上昇を下げる（図１０を参照にされたい）。
【０１８７】
さらにｐＨ安定性試験（ｐＨ５．８、６．０および６．２）を、６週間にわたり様々な温度（５℃および４０℃）で、以下の４種の抗体（抗−Ｂ７．２ＩｇＧ２抗体）サンプルについて行った：（１）抗体、１０ｍＭのヒスチジンおよび１５０ｍＭのＮａＣｌを含有するサンプル；（２）抗体、１０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．０１％ＰＳ８０を含有するサンプル；（３）抗体、１０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび１０ｍＭメチオニンを含むサンプル；および（４）抗体、１０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭメチオニンおよび０．０１％ＰＳ８０を含有するサンプル。ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析を行った。結果はメチオニンが示したｐＨ範囲、例えば約ｐＨ５．８〜約ｐＨ６．２にわたり温度依存的な副産物形成（例えばＨＭＷ副産物）の割合を下げることを示した（図１１を参照にされたい）。図１１に示すように、メチオニンを含有するサンプルは、４０℃で６週間維持した時、少量の凝集を示し、これは５℃で６週間維持したサンプルの凝集と同様であった。
【０１８８】
実施例ＶＩ．示差走査熱量計によるＩｇＧ１抗体の賦形剤分析
タンパク質薬剤製剤の主要な目的は、タンパク質をその自然な、生物学的に活性な状態に安定化することである。典型的にはこれは基剤中の種々の賦形剤をスクリーニングし、そしてそれらの分子の分子量および活性に及ぼす効果を監視することにより行うことができる。これらのパラメーターは安定性の指標である。安定性の他の測定は、様々な生物物理学的技術を使用して監視され得る熱変性である。一般にレベルが上がったタンパク質安定性は、高温融解、変性または分解温度に寄与した。したがって代表的なＩｇＧ１モノクローナル抗体の熱的性質は種々の賦形剤の存在下で、ＶＰ−毛細管示差走査熱量計（Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ）を使用して監視した。具体的には見かけのＴｍｓを、種々の賦形剤を含有する１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）を含有する製剤について測定した。数種の賦形剤が熱的安定性の上昇または減少を提供することが示された。レベルが上がったタンパク質安定性は高い融解温度に寄与するので、対照のＴｍ２／Ｔｍ３値に比べて上昇したＴｍ２またはＴｍ３を与えるサンプル中の賦形剤が、特に望ましい賦形剤と見なした（以下の表１を参照にされたい）。
【０１８９】
したがって、グルコース（４％および１０％の濃度で配合された）、シュクロース（４％および１０％の濃度で配合された）、ソルビトール（４％および１０％の濃度で配合された）、およびマンニトール（４％および１０％の濃度で配合された）は、液体ペプチド製剤、特に抗体ＩｇＧ製剤に特に良好な役割を果たした。
【０１９０】
【表１】
2008528612.tif 000002
【０１９１】
等価物
当業者は日常的な実験を使用するだけで、本明細書に記載する本発明の具体的態様の多くの等価物を認識し、または確認することができる。そのような等価物は、添付する特許請求の範囲に包含されることを意図する。
【図面の簡単な説明】
【０１９２】
【図１】ＩｇＧ抗体の予想される構造および鎖内および鎖間ジスルフィド結合、グリコシル化部位（六辺形記号）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、枠組み領域（陰付）および定常領域のおよその位置の概略図を示す。
【図２】ヒト化３Ｄ６変更体２（ｈｕ３Ｄ６．ｖ２）抗Ａβ抗体軽鎖および重鎖、それぞれ配列番号１および２の完全なアミノ酸配列を示す。軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、それぞれ残基２４〜３９、５５〜６１および９４〜１０２位（上パネル）である。重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、それぞれ残基４０〜４４、５０〜６５および９９〜１０８位（下パネル）である。予想される分子内ジスルフィド結合は、関与するシステイン残基の連結により具体的に説明される。分子間ジスルフィド結合を形成すると予想されるシステインには下線を付し、そして結合性を示した。抗体重鎖のＮ結合グリコシル化コンセンサス部位は、残基２９９−３０１位のイタリック体で示される（下パネル）。予想される重鎖Ｃ−末端リシンは括弧内に示す。
【図３】本発明に従い作成し、そして５℃で保存した抗体製剤（ポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含むか、または含まない）に関する使用期限の予想をグラフ的に示す。
【図４】本発明に従い作成し、そして２５℃で保存した抗体製剤（ＰＳ８０を含むか、または含まない）に関する使用期限の予想をグラフ的に示す。
【図５】本発明に従い作成し、そして４０℃で保存した抗体製剤（ＰＳ８０を含むか、または含まない）に関する使用期限の予想をグラフ的に示す。
【図６】本発明に従い作成し、そして５℃で保存したＰＳ８０を含む製剤の分解予想をグラフ的に示す。
【図７】本発明に従い作成し、５℃で保存し、そしてアッセイの変動性を最小にするために再処理したＰＳ８０を含む製剤のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分子をグラフ的に表示する。
【図８】本発明に従い作成し、そして５℃で保存したＰＳ８０を含まない製剤の分解予想をグラフ的に示す。
【図９】ＰＳ８０の存在は、安定化されたポリペプチド製剤中に見いだされる副産物を、モノマーの抗体プロファイルを変化させずに、高分子量種から低分子量種へシフトさせることを表す。
【図１０】ＩｇＧ４を含んでなるポリペプチド製剤中の望ましくない副産物、特に高分子量ポリペプチド凝集物の形成の、遊離メチオニンのような酸化防止剤の添加による抑制をグラフ的に表す。
【図１１】ＩｇＧ２を含んでなるポリペプチド製剤中の望ましくない副産物、特に高分子量ポリペプチド凝集物の形成の、遊離メチオニンのような酸化防止剤の添加による抑制をグラフ的に表す。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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