(57)【要約】  インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＭＵ−１）活性を、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」）のアンタゴニストを使用して阻害するための方法および組成物が開示される。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、自己免疫障害または炎症性障害（これらには、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、移植／移植片拒絶、乾癬、喘息、線維化および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）が含まれる）を処置、改善または防止するためにインビボで免疫抑制を誘導するように使用することができる。
2008508885.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物対象における自己免疫障害または炎症性障害を処置、改善または防止する方法であって、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、抗ＩＬ−２１抗体、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合性フラグメント、抗ＩＬ−２１抗体の抗原結合性フラグメント、および、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントからなる群より選択されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、障害を処置、改善または防止するために十分な量で対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
関節炎障害、アトピー性障害、呼吸器障害、皮膚炎症性障害、腸炎症性障害、線維化障害、全身性エリテマトーデス、移植／移植片拒絶、および、移植／移植片拒絶に関連する障害からなる群より選択される障害を哺乳動物対象において処置、改善または防止する方法であって、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、抗ＩＬ−２１抗体、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合性フラグメント、抗ＩＬ−２１抗体の抗原結合性フラグメント、および、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントからなる群より選択されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、障害を処置、改善または防止するために十分な量で対象に投与することを含む方法。
【請求項３】
抗ＩＬ−２１Ｒ抗体が、配列番号２に示される配列に対して少なくとも９０％同一性であるアミノ酸配列から構成されるＩＬ−２１Ｒに結合することができ、かつ、ＩＬ−２１ＲがＩＬ−２１と結合することができる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
関節炎障害が、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎からなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
関節炎障害が関節リウマチである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
呼吸器障害が喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
線維化障害が、体内器官の繊維化、皮膚の繊維化性障害、眼の繊維化状態、全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、レイノー症候群、糸球体腎炎および鼻ポリポーシスからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
腸炎症性障害が、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎およびクローン病からなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
皮膚炎症性障害が乾癬である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
アトピー性障害が、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性胃腸炎からなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
アトピー性障害がアレルギー性喘息である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
移植／移植片拒絶に関連する障害が移植片対宿主病である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
障害が移植／移植片拒絶である、請求項３に記載の方法。
【請求項１４】
障害が全身性エリテマトーデスである、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物対象がヒトである、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントがＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインおよびＦｃ免疫グロブリンフラグメントから構成される、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインが配列番号２のおよそアミノ酸１〜２３５を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントが、配列番号２９に示される配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から構成される、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが抗ＩＬ−２１Ｒ抗体またはその抗原結合性フラグメントである、請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合性フラグメントである、請求項２に記載の方法。
【請求項２１】
ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン（この場合、ＩＬ−２１Ｒは、配列番号２に示される配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する）と、Ｆｃ免疫グロブリンフラグメントとから構成され、かつ、ＩＬ−２１と結合することができる融合タンパク質。
【請求項２２】
配列番号２９に示される配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から構成される、請求項２１に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
請求項２１に記載される融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を有するベクター。
【請求項２４】
請求項２３に記載されるベクターを含む組換え宿主細胞。
【請求項２５】
（ａ）請求項２４に記載される組換え宿主細胞を、融合タンパク質が発現されるような条件のもとで培養すること；および
（ｂ）融合タンパク質を回収すること
を含む、融合タンパク質の製造方法。
【請求項２６】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストおよび医薬的に許容され得るキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、抗ＩＬ−２１抗体、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合性フラグメント、抗ＩＬ−２１抗体の抗原結合性フラグメント、および、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントからなる群より選択される、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントが、ＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインと、Ｆｃ免疫グロブリンフラグメントとから構成される、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
臓器、組織、細胞または細胞群を哺乳動物対象に移植／グラフト化する方法であって、
（ａ）抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、抗ＩＬ−２１抗体、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合性フラグメント、抗ＩＬ−２１抗体の抗原結合性フラグメント、および、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントからなる群より選択されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、移植／移植片拒絶の危険性を低下させるために十分な量で対象に投与する工程；および
（ｂ）臓器、組織、細胞または細胞群を対象に移植／グラフト化する工程
を含み、移植／グラフト化工程（ｂ）が投与工程（ａ）の前または期間中または後のいずれかで行われる、方法。
【請求項３０】
移植／グラフト化された臓器、組織、細胞または細胞群が、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵臓、骨髄、軟骨、角膜、ニューロン組織、および、それらの細胞からなる群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳動物の移植／移植片レシピエントにおける移植／移植片拒絶を処置、防止または改善する方法であって、
（ａ）移植／移植片レシピエントにおける移植／移植片拒絶の症状を検出すること；および
（ｂ）抗ＩＬ−２１Ｒ抗体、抗ＩＬ−２１抗体、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合性フラグメント、抗ＩＬ−２１抗体の抗原結合性フラグメント、および、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメントからなる群より選択されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを移植／移植片レシピエントに投与すること
を含む方法。
【請求項３２】
移植／移植片拒絶の症状が、炎症、低下した臓器機能、生検における拒絶の徴候、および、繊維化からなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６０／５９９，０８６号（２００４年８月５日出願）および米国仮特許出願第６０／６３９，１７６号（２００４年１２月２３日出願）の利益を主張する（これらはともに、その全体が参照して本明細書中に組み込まれる）。
【０００２】
本発明は、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＭＵ−１）活性を、ＩＬ−２１受容体アンタゴニストを使用して中和し、低下させ、かつ／または阻害するための方法および組成物に関連する。本明細書中に開示される方法および組成物は免疫治療剤として有用である。
【背景技術】
【０００３】
ヒトＩＬ−２１は、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１５に対する配列相同性を示すサイトカインである(Parrish-Novak et al. (2000)、Nature、408:57-63)。インターロイキンサイトカイン間の低い配列相同性にもかかわらず、様々なサイトカインがともに共通して、このファミリーに代表的な「４へリックスバンドル（four-helix-bundle）」構造に折り畳まれる。ほとんどのサイトカインがクラスＩまたはクラスＩＩのいずれかのサイトカイン受容体と結合する。クラスＩＩのサイトカイン受容体には、ＩＬ−１０およびインターフェロンに対する受容体が含まれ、これに対して、クラスＩのサイトカイン受容体には、ＩＬ−２〜ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５、ならびに、造血系増殖因子、レプチンおよび成長ホルモンに対する受容体が含まれる(Cosman(1993)、Cytokine、5:95-106)。
【０００４】
ヒトＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）は、リンパ系組織において、特に、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞によって発現されるクラスＩのサイトカイン受容体である（Parrish-Novak et al. (2000）、supra）。ヒトインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）およびその受容体（ＩＬ−２１Ｒ）をコードするヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、国際特許出願公開ＷＯ００／５３７６１；国際特許出願公開ＷＯ０１／８５７９２；Parrish-Novak et al. (2000)、supra; 及びOzaki et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、97:11439-44に記載されている。ＩＬ−２１ＲはＩＬ−２受容体のβ鎖およびＩＬ−４受容体のα鎖に対して最大の配列相同性を有する(Ozaki et al. (2000)、supra)。リガンドと結合したとき、ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５に対する受容体がともに有する共通したガンマサイトカイン受容体鎖（γｃ）と会合する（Ozaki et al. (2000）、supra；Asao et al. (2001）、J. Immunol.、167:1-5）。ＩＬ−２１Ｒの広範囲にわたるリンパ系分布は、ＩＬ−２１が免疫調節において一定の役割を果たしているかもしれないことを示唆する。実際、インビトロ研究では、ＩＬ−２１が、Ｂ細胞、ＣＤ４+ならびにＣＤ８+のＴ細胞、およびＮＫ細胞の機能を顕著に調節することが示されている（Parrish-Novak et al. (2000）、supra；Kasaian et al. (2002）、Immunity、16:559-69）。それにもかかわらず、インビボでのＩＬ−２１の調節作用を裏付ける証拠は限られている。
【発明の開示】
【０００５】
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）およびＩＬ−２１受容体（これはまた、本明細書中では「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」として示される）の活性、および／または、それらとの間での相互作用を、例えば、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト（これはまた、本明細書中では「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト」または「アンタゴニスト」または「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路アンタゴニスト」として示される）を使用して妨害するための方法および組成物が開示される。
【０００６】
例えば、本出願人は、ＩＬ−２１アンタゴニスト（例えば、Ｆｃ免疫グロブリン領域に融合されたＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインを含む融合タンパク質）を使用することによってＩＬ−２１Ｒ活性を低下させることにより、炎症症状が、炎症性障害および／または自己免疫障害（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、移植／移植片拒絶、移植片対宿主病、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）（糸球体腎炎の形態を含む）および乾癬など）を無理なく予測するいくつかの異なる動物モデルにおいて改善されることを示している（実施例７〜１４）。ＩＬ−２１ＲのｍＲＮＡの発現がコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウスの足においてアップレギュレーションされている（実施例８）。さらに、ＩＬ−２１Ｒ欠損マウスは症状の軽減を喘息モデルにおいて示した（実施例１２）。従って、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性のアンタゴニストを、例えば、炎症性障害または自己免疫障害を処置または防止するためにインビボで免疫抑制を誘導するように使用することができる。このようなアンタゴニストはまた、免疫細胞に関連した障害（例えば、成熟Ｔ細胞（例えば、成熟ＣＤ８+Ｔ細胞または成熟ＣＤ４+Ｔ細胞）、成熟ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核芽球の１つまたは複数の異常な活性に関連する障害）を処置または防止するために使用することができる。
【０００７】
従って、１つの態様において、本発明は、対象における炎症性障害または自己免疫障害を処置し（例えば、治療し、抑制し、遅延させ）、改善し（例えば、軽減し、緩和し、減少させ、低下させ）、および／または、防止する（例えば、その発症を防止するか、あるいは、その反復または再発を防止する）方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、障害を処置、改善または防止するために十分な量で、あるいは、免疫細胞の活性および／または細胞数を阻害または低下させるために十分な量で対象に投与することを含む。
【０００８】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、単独で、または、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの組合せで、または、本明細書中に記載されるような他の治療療法との組合せで対象に投与することができる。好ましくは、対象は、炎症性障害または自己免疫障害に罹患しているか、あるいは、炎症性障害または自己免疫障害の危険性がある哺乳動物（例えば、ヒト）である。例えば、本発明の方法は、炎症性障害または自己免疫障害を対象において処置または防止するために使用することができる。そのような障害の例には、移植／移植片拒絶；糖尿病（例えば、Ｉ型）；多発性硬化症；関節炎障害（例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎（好ましくは、ＲＡ））；重症筋無力症；脈管炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糸球体腎炎；自己免疫甲状腺炎；皮膚の炎症性障害（例えば、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、強皮症または乾癬）；エリテマトーデス；線維症または線維化障害（例えば、肺線維症または肝臓線維症）；呼吸器障害（例えば、喘息またはＣＯＰＤ）；アトピー性障害（例えば、アレルギーを含む）；または腸の炎症性障害（例えば、ＩＢＤ、例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）が含まれるが、これらに限定されない。
【０００９】
エリテマトーデス、皮膚の炎症性障害（例えば、乾癬）、腸の炎症性障害（例えば、ＩＢＤ、クローン病、潰瘍性大腸炎）、移植／移植片拒絶、喘息、アトピー性障害または関節リウマチから選ばれる障害を、本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを使用して処置することが好ましい。
【００１０】
１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、例えば、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ（好ましくは、哺乳動物（例えば、ヒト）のＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ）（本明細書中では「ＩＬ−２１アンタゴニスト」および「ＩＲ−２１Ｒアンタゴニスト」としてそれぞれ示される）と相互作用し、かつ、１つまたは複数のＩＬ−２１活性および／またはＩＬ−２１Ｒ活性を低下または阻害する。好ましいアンタゴニストは、高い親和性で、例えば、少なくとも約１０7Ｍ-1（好ましくは約１０8Ｍ-1、より好ましくは約１０9Ｍ-1〜１０10Ｍ-1またはそれよりも強い）の親和性定数でＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに結合する。
【００１１】
例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−２１を中和することによってＩＬ−２１Ｒの活性を低下および／または阻害することができる。１つの実施形態において、アンタゴニストは、ＩＬ−２１Ｒ以外のフラグメント（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域）に融合されたＩＬ−２１Ｒのフラグメントを含む融合タンパク質であり得る。他の実施形態において、アンタゴニストは、抗ＩＬ−２１Ｒ抗体または抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合性フラグメント、ＩＬ−２１受容体の可溶性形態、ペプチドまたは小分子阻害剤である。
【００１２】
１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは抗ＩＬ−２１Ｒ抗体または抗ＩＬ−２１抗体またはその抗原結合性フラグメントである；例えば、抗体は、ＩＬ−２１（例えば、ヒトＩＬ−２１）またはＩＬ−２１受容体（例えば、ヒトＩＬ−２１受容体ポリペプチド）に結合するモノクローナル抗体または単一特異性抗体、あるいは、その抗原結合性フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖフラグメント）である。好ましくは、抗体は、ヒトＩＬ−２１ポリペプチドまたはヒトＩＬ−２１受容体ポリペプチドに対するヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体またはインビトロ作製抗体である。好ましくは、抗体は中和抗体である。
【００１３】
他の実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストには、ＩＬ−２１ポリペプチドの全長またはＩＬ−２１ポリペプチドのフラグメント、例えば、ＩＬ−２１ポリペプチドの阻害性のＩＬ−２１受容体結合ドメイン、例えば、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド（例えば、配列番号１９として示されるアミノ酸配列を有する本明細書中に記載されるヒトＩＬ−２１ポリペプチド）、もしくは、配列番号１９に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％もしくはそれ以上である配列、または、配列番号１８として示される対応するヌクレオチド配列、もしくは、配列番号１８に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％もしくはそれ以上である配列によってコードされるもの、の阻害性のＩＬ−２１受容体結合ドメインが含まれる。あるいは、アンタゴニストには、全長（配列番号２のおよそアミノ酸１〜５３８またはアミノ酸２０〜５３８に由来するか、あるいは、配列番号１０のおよそアミノ酸１〜５２９またはアミノ酸２０〜５２９に由来する）、または、ＩＬ−２１受容体ポリペプチドのフラグメント、例えば、ＩＬ−２１受容体ポリペプチドのＩＬ−２１結合ドメイン、例えば、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメント（例えば、マウスＩＬ−２１ＲまたはヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含むＩＬ−２１Ｒのフラグメント、例えば、配列番号２（ヒト）のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、または、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、あるいは、配列番号１もしくは配列番号９の対応するヌクレオチド、または、配列番号１もしくは配列番号９に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％もしくはそれ以上である配列によってコードされるフラグメント）が含まれる。
【００１４】
１つの実施形態において、アンタゴニストは、上記のＩＬ−２１ポリペプチドもしくはＩＬ−２１受容体ポリペプチドまたはそれらのフラグメントを含み、かつ、例えば、第２の成分、例えば、ポリペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖、ＧＳＴポリペプチド配列、Ｌｅｘ−Ａポリペプチド配列またはＭＢＰポリペプチド配列）に融合された融合タンパク質である。好ましい実施形態において、融合タンパク質は少なくとも、ＩＬ−２１と結合することができるＩＬ−２１Ｒポリペプチドのフラグメント、例えば、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメント（例えば、マウスＩＬ−２１ＲまたはヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含むＩＬ−２１Ｒのフラグメント、例えば、配列番号２（ヒト）のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、または、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、あるいは、配列番号１もしくは配列番号９の対応するヌクレオチド、または、配列番号１もしくは配列番号９に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％もしくはそれ以上である配列によってコードされるフラグメント）、および、融合されて、例えば、第２の成分、例えば、ポリペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖、Ｆｃフラグメント、様々なイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む）の重鎖定常領域）を含む。例えば、融合タンパク質は、ヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン、例えば、配列番号２のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するドメイン、および、例えば、融合されて、ヒト免疫グロブリンＦｃ鎖（例えば、ヒトＩｇＧ、例えば、ヒトＩｇＧ１、例えば、天然に存在するＩｇＧ１、または、ヒトＩｇＧ１の変異化形態）を含むことができる。１つの実施形態において、ヒトＦｃ配列は、Ｆｃ受容体との結合を低下させるために、天然に存在する配列から１個または複数個のアミノ酸が変異しており、例えば、配列番号２８の残基２５４および残基２５７において変異している。他の実施形態において、融合タンパク質は、マウスＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン、例えば、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５に由来するドメイン、および、例えば、融合されて、マウス免疫グロブリンＦｃ鎖（例えば、マウスＩｇＧ、例えば、マウスＩｇＧ２ａ、または、マウスＩｇＧ２ａの変異化形態）を含むことができる。
【００１５】
融合タンパク質はさらに、第１の成分（例えば、ＩＬ−２１Ｒフラグメント）を第２の成分（例えば、免疫グロブリンフラグメント）につなぐリンカー配列を含むことができる。他の実施形態において、さらなるアミノ酸配列を、発現、立体的柔軟性、検出および／または単離もしくは精製を容易にするために、融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加することができる。
【００１６】
本発明の方法において使用することができるアンタゴニスト性融合タンパク質の例が図７〜図１５に示される。１つの実施形態において、融合タンパク質は、例えば、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７または配列番号３９から選ばれるアミノ酸配列、あるいは、それらに対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列を含む。他の実施形態において、融合タンパク質は、例えば、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６または配列番号３８から選ばれるヌクレオチド配列、あるいは、それらに対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。好ましい融合タンパク質は、配列番号２５または配列番号２９として示されるアミノ酸配列（それぞれ、図８Ａ〜図８Ｃおよび図１０Ａ〜図１０Ｃ）、あるいは、配列番号２５または配列番号２９に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列を有する。他の実施形態において、融合タンパク質は、例えば、配列番号２４または配列番号２８から選ばれるヌクレオチド配列（それぞれ、図８Ａ〜図８Ｃおよび図１０Ａ〜図１０Ｃ）、あるいは、配列番号２４または配列番号２８に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。最も好ましくは、融合タンパク質は、配列番号２９として示されるアミノ酸配列を有するか、あるいは、配列番号２８として示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列（図１０Ａ〜図１０Ｃ）を有する。
【００１７】
本明細書中に記載されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載される融合タンパク質）は誘導体化することができ、または、別の機能的な分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、Ｆａｂ’フラグメント）に連結することができる。例えば、融合タンパク質または抗体または抗原結合性部分を、１つまたは複数の他の分子的実体に、例えば、特に、抗体（例えば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤などに（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合または他の方法によって）機能的に連結することができる。
【００１８】
１つの実施形態において、本明細書中に記載されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、その医薬組成物）は併用治療において投与される。すなわち、本明細書中に記載されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、その医薬組成物）は、炎症性障害または自己免疫障害を処置するために、例えば、関節炎障害（ＲＡ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎を含む）；ＳＬＥ；糸球体腎炎；皮膚の炎症性障害（例えば、乾癬）；呼吸器障害（例えば、喘息、ＣＯＰＤ）；アトピー性障害；線維化障害（例えば、肺線維症または肝臓線維症）；腸の炎症性障害（例えば、ＩＢＤ、例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）；または移植／移植片拒絶の１つまたは複数から選ばれる障害を処置するために有用である他の薬剤（例えば、治療剤）と組み合わされる。例えば、併用治療では、本明細書中に記載されるように、１つまたは複数のさらなる治療剤（例えば、１つまたは複数のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または、細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤など）と同時配合および／または同時投与される１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２１抗体または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体あるいはその抗原結合性フラグメント；ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質；可溶性のＩＬ−２１Ｒ受容体、ペプチド阻害剤または小分子阻害剤）を含むことができる。
【００１９】
１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと同時投与および／または同時配合することができる好ましいさらなる治療剤の例には、下記の１つまたは複数が含まれるが、それらに限定されない：ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦに結合するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体、あるいは、それらの抗原結合性フラグメント）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５またはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤａのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ｐ５５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤）；ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞枯渇化剤およびＢ細胞枯渇化剤（例えば、抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体）；小分子阻害剤、例えば、メトトレキサートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ、例えば、ＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２阻害剤およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２阻害剤、Ｍｋ−２阻害剤およびＮＦｉｂ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチン阻害剤またはＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば、小分子阻害剤、それらに対する抗体、例えば、Ｐ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体β（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニスト。１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと同時投与および／または同時配合することができる最も好ましいさらなる治療剤には、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはそれらの誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤａのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；メトトレキサート、レフルノミド、または、シロリムス（ラパマイシン）もしくはそのアナログ（例えば、ＣＣＩ−７７９）の１つまたは複数が含まれる。
【００２０】
別の態様において、免疫細胞の活性（例えば、成熟Ｔ細胞（例えば、成熟したＣＤ８+、ＣＤ４+、リンパ節Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞）、成熟ＮＫ細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、マクロファージおよび巨核芽球）、または、細胞の集団（例えば、混合または実質的に精製された免疫細胞集団）の１つまたは複数の活性）を低下させるための方法が提供される。この方法は、免疫細胞を、免疫細胞の活性を低下させるために十分な量でのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載されるようなアンタゴニスト）と接触させることを含む。
【００２１】
別の態様において、本発明は、ＩＬ−２１ポリペプチドと結合することができるＩＬ−２１Ｒポリペプチドのフラグメント、例えば、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメント（例えば、マウスＩＬ−２１ＲまたはヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含むＩＬ−２１Ｒのフラグメント、例えば、配列番号２（ヒト）のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、または、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、あるいは、配列番号１もしくは配列番号９の対応するヌクレオチド、または、配列番号１もしくは配列番号９に対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％もしくはそれ以上である配列によってコードされるフラグメント）、および、例えば、融合されて、第２の成分、例えば、ポリペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖、Ｆｃフラグメント、様々なイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む）の重鎖定常領域）を含む融合タンパク質を特徴とする。例えば、融合タンパク質は、ヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン、例えば、配列番号２のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するドメイン、および、例えば、融合されて、ヒト免疫グロブリンＦｃ鎖（例えば、ヒトＩｇＧ、例えば、ヒトＩｇＧ１、または、ヒトＩｇＧ１の変異化形態）を含むことができる。１つの実施形態において、ヒトＦｃ配列は、Ｆｃ受容体との結合を低下させるために、野生型配列から１個または複数個のアミノ酸が変異しており、例えば、配列番号２８の残基２５４および残基２５７において変異している。他の実施形態において、融合タンパク質は、マウスＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメイン、例えば、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３６に由来するドメイン、および、例えば、融合されて、マウス免疫グロブリンＦｃ鎖（例えば、マウスＩｇＧ、例えば、マウスＩｇＧ２ａ、または、マウスＩｇＧ２ａの変異化形態）を含むことができる。融合タンパク質はさらに、ＩＬ−２１Ｒフラグメントを第２の成分につなぐリンカー配列を含むことができる。他の実施形態において、さらなるアミノ酸配列を、発現、検出および／または単離もしくは精製を容易にするために、融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加することができる。
【００２２】
本発明はまた、本明細書中に記載される融合タンパク質をコードする核酸配列を特徴とする。
【００２３】
別の態様において、本発明は、本発明の核酸を含有する宿主細胞およびベクターを特徴とする。好ましくは、宿主細胞は、真核生物細胞（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞または酵母細胞）、あるいは、原核生物細胞（例えば、大腸菌）である。例えば、哺乳動物細胞は培養細胞または細胞株が可能である。例示的な哺乳動物細胞には、リンパ球細胞株（例えば、ＮＳＯ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞、および、トランスジェニック動物に由来する細胞（例えば、乳房上皮細胞）が含まれる。例えば、本明細書中に記載される融合タンパク質をコードする核酸をトランスジェニック動物において発現させることができる。１つの実施形態において、核酸は組織特異的プロモーター（例えば、乳房特異的プロモーター）の制御下に置かれ、抗体がトランスジェニック動物において産生される。例えば、融合タンパク質がトランスジェニック動物（例えば、遺伝子組換えされたウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたは齧歯類）の乳汁に分泌される。
【００２４】
別の態様において、本発明は、融合タンパク質（例えば、本明細書中に記載されるような融合タンパク質）を作製するための方法を提供する。この方法は、（ａ）本発明の宿主細胞の培養物を好適な培養培地において成長させること、および（ｂ）融合タンパク質を培養物から精製することを含む。これらの方法に従って作製されたタンパク質もまた提供される。
【００２５】
別の態様において、本発明は、医薬的に許容され得るキャリアと、本明細書中に記載されるようなＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの少なくとも１つ（例えば、本明細書中に記載される融合タンパク質）とを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。１つの実施形態において、組成物（例えば、医薬組成物）は２つ以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの組合せを含む。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと、薬物、例えば、治療剤（例えば、本明細書中に記載されるような１つまたは複数のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または、細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤など）または抗原（例えば、抗原性ペプチドおよび／または抗原提示細胞）との組合せもまた本発明の範囲内である。
【００２６】
１つの実施形態において、医薬組成物は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと、少なくとも１つのさらなる治療剤とを、医薬的に許容され得るキャリアにおいて含む。１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを有する組成物（例えば、医薬組成物）において同時配合することができる好ましいさらなる治療剤の例には、下記の１つまたは複数が含まれるが、それらに限定されない：ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦに結合するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体、あるいは、それらの抗原結合性フラグメント）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはそれらの誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤａのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ｐ５５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤）；ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞枯渇化剤およびＢ細枯渇化剤（例えば、抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体）；小分子阻害剤（例えば、メトトレキサートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ、例えば、ＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２阻害剤およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２阻害剤、Ｍｋ−２阻害剤およびＮＦκｂ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチン阻害剤またはＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば、小分子阻害剤、それらに対する抗体、例えば、Ｐ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体β（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニスト。１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと同時投与および／または同時配合することができる最も好ましいさらなる治療剤には、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５もしくはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはそれらの誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤａのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；メトトレキサート、レフルノミド、または、シロリムス（ラパマイシン）もしくはそのアナログ（例えば、ＣＣＩ−７７９）の１つまたは複数が含まれる。
【００２７】
別の態様において、本発明は、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）におけるアトピー性障害を処置、改善または防止するための方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、障害を処置、改善または防止するために十分な量で、あるいは、免疫細胞の活性および／または細胞数を阻害または低下させるために十分な量で対象に投与することを含む。１つの実施形態において、アトピー性障害はアレルギー性喘息である。別の実施形態において、アトピー性障害は、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、アレルギー性鼻炎またはアレルギー性胃腸炎である。１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、別の治療剤（例えば、サイトカイン阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、酵素阻害剤、ロイコトリエンアンタゴニスト、気管支拡張剤、β２−アドレナリン作動性受容体アゴニスト、抗ムスカリン剤またはマスト細胞安定化剤）との組合せで投与することができる。アトピー性障害を処置、改善または防止するためにＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで投与することができる好ましい治療剤の例には、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇化剤、Ｂ細胞枯渇化剤、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤおよびｐ３８阻害剤が含まれる。
【００２８】
別の態様において、本発明は、対象における自己免疫障害を処置、改善または防止するための方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、障害を処置、改善または防止するために十分な量で、あるいは、免疫細胞の活性および／または細胞数を阻害または低下させるために十分な量で対象に投与することを含む。１つの実施形態において、自己免疫障害は狼瘡（例えば、ＳＬＥ）である。１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、別の治療剤（例えば、サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤）との組合せで投与することができる。自己免疫障害を処置、改善または防止するためにＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで投与することができる好ましい治療剤の例には、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇化剤、Ｂ細胞枯渇化剤、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、メトトレキサート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤおよびｐ３８阻害剤が含まれる。
【００２９】
別の態様において、本発明は、対象における線維化障害を処置、改善または防止するための方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、障害を処置、改善または防止するために十分な量で、あるいは、免疫細胞の活性および／または細胞数を阻害または低下させるために十分な量で対象に投与することを含む。例えば、対象は、体内器官の線維化（例えば、肝臓線維症、腎臓線維症または肺線維症）、皮膚線維化性障害、または、眼の線維化状態を有し得るか、あるいは、体内器官の線維化（例えば、肝臓線維症、腎臓線維症または肺線維症）、皮膚線維化性障害、または、眼の線維化状態についての危険性を有し得る。
【００３０】
別の態様において、本発明は、臓器、組織または細胞を対象に移植またはグラフト化する方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、移植またはグラフト化の前、移植またはグラフト化の期間中、あるいは、移植またはグラフト化の後で対象に投与することを含む。移植またはグラフト化された臓器および組織には、例えば、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵臓、骨髄、軟骨、角膜、ニューロン組織、および、それらの細胞が含まれ得るが、これらに限定されない。１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、別の治療剤（例えば、サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害性薬剤および細胞増殖抑制剤）との組合せで投与される。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで投与することができる好ましい治療剤の例には、例えば、ラパマイシン、シクロスポリン、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体および抗ＣＤ１５４抗体が含まれる。
【００３１】
別の態様において、本発明は、移植／移植片拒絶の症状、または、移植／移植片拒絶に関連する障害（例えば、線維化または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ））について、移植／移植片レシピエントを評価および処置する方法を特徴とする。この方法は、移植／移植片拒絶の症状を有する対象を特定すること、および、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、例えば、移植拒絶の症状を処置または改善するために十分な量で投与することを含む。移植／移植片拒絶の症状には、炎症、低下した臓器機能、異常な生検、および、線維化が含まれる。別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを投与することによって、移植／移植片拒絶、または、移植／移植片拒絶に関連する障害を防止する方法（例えば、移植／移植片拒絶、または、移植／移植片拒絶に関連する障害の危険性を低下させる方法）を提供する。
【００３２】
別の態様において、本発明は、移植／移植片拒絶、または、移植／移植片拒絶に関連する障害を対象において処置、改善または防止するための方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、拒絶を処置または改善または防止するために（例えば、拒絶の危険性を低下させるために）十分な量で、あるいは、免疫細胞の活性および／または細胞数を阻害または低下させるために十分な量で対象に投与することを含む。移植された臓器または組織には、例えば、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵臓または骨髄が含まれ得る。１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、別の治療剤（例えば、サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤）との組合せで投与することができる。移植／移植片拒絶を処置、改善または防止するためにＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで投与することができる好ましい治療剤の例には、例えば、ラパマイシン、シクロスポリン、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体および抗ＣＤ１５４抗体が含まれる。
【００３３】
下記の用語群は本明細書中では交換可能に使用される：「ＭＵ−１」および「ＩＬ−２１Ｒ」、ならびに、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質。
【００３４】
別途定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または同等な様々な方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が下記に記載される。本明細書中で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参照して組み込まれる。矛盾する場合、定義を含めて、本明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【００３５】
本発明の他の特徴および利点が下記の詳細な説明および請求項から明らかになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＭＵ−１）の活性を、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」）のアンタゴニストを使用して阻害するための方法および組成物が開示される。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、炎症性障害または自己免疫障害（例えば、成熟Ｔ細胞（例えば、成熟ＣＤ８+Ｔ細胞、成熟ＣＤ４+Ｔ細胞）、成熟ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核芽球の１つまたは複数の異常な活性に関連する障害、これらには、移植／移植片拒絶、乾癬および自己免疫障害（例えば、関節リウマチおよびＩＢＤなど）が含まれる）を処置または防止するためにインビボで免疫抑制を誘導するように使用することができる。
【００３７】
１つの実施形態において、本出願人は、Ｆｃ免疫グロブリン領域に融合されたＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含む中和する融合タンパク質を使用することによるＩＬ−２１Ｒ活性の低下により、炎症症状がコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）動物モデル（実施例７）において改善され、同様に、ＩＢＤについての動物モデル（実施例９および実施例１１）、移植片拒絶についての動物モデル（実施例１０）、乾癬についての動物モデル（実施例１１）、および、狼瘡についての動物モデル（実施例１３）において改善されることを示している。ＩＬ−２１ＲのｍＲＮＡの発現がＣＩＡマウスの足においてアップレギュレーションされる（実施例８）。ＩＬ−２１Ｒ欠損マウスは抗原誘導による気道炎症の低下を示す（実施例１２）。従って、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒの活性を中和するＩＬ−２１Ｒ結合性因子は、例えば、炎症性障害または自己免疫障害（例えば、糸球体腎炎、移植／移植片拒絶、乾癬、アトピー性障害、喘息、自己免疫障害（例えば、関節リウマチおよびＳＬＥなど）およびＩＢＤ（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）を処置または防止するためにインビボで免疫抑制を誘導するように使用することができる。
【００３８】
本発明がより容易に理解され得るために、いくつかの用語が最初に定義される。さらなる定義が詳細な説明の至るところに示される。
【００３９】
本明細書中で使用される用語「ＭＵ−１」、用語「ＭＵ−１タンパク質」、「インターロイキン−２１受容体」または用語「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＮＩＬＲとしてもまた知られているクラスＩのサイトカインファミリー受容体を示す（国際特許出願公開ＷＯ０１／８５７９２；Parrish-Novak et al. (2000）、Nature、408:57-63；Ozaki et al. (2000）、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、97:11439-444）。ＭＵ−１は、ＩＬ−２受容体およびＩＬ−１５受容体の共通するβ鎖に対して、また、ＩＬ−４αに対して相同的である(Ozaki et al. (2000)、supra)。リガンドと結合したとき、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１は、共通するγサイトカイン受容体鎖（γｃ）と相互作用し（Asao et al. (2001）、J. Immunol.、167:1-5）、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３のリン酸化（Asao et al. (2001））またはＳＴＡＴ５のリン酸化（Ozaki et al. (2000））を誘導することができる。ＭＵ−１は広範囲のリンパ系組織分布を示す。用語「ＭＵ−１」は、例えば、ＩＬ−２１（好ましくは、哺乳動物ＩＬ−２１、例えば、マウスＩＬ−２１またはヒトＩＬ−２１）と相互作用することができ（例えば、ＩＬ−２１（好ましくは、哺乳動物ＩＬ−２１、例えば、マウスＩＬ−２１またはヒトＩＬ−２１）に結合することができ）、かつ、下記の特徴の１つを有することができる受容体（好ましくは、哺乳動物起源、例えば、マウス起源またはヒト起源）を示す：（ｉ）天然に存在する哺乳動物ＭＵ−１ポリペプチドＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のアミノ酸配列またはそのフラグメント、例えば、配列番号２（ヒト）または配列番号１０（マウス）として示されるアミノ酸配列、あるいは、そのフラグメント；（ｉｉ）配列番号２（ヒト）または配列番号１０（マウス）として示されるアミノ酸配列に対して実質的に相同的（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％または９９％相同的）であるアミノ酸配列、あるいは、そのフラグメント；（ｉｉｉ）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ヌクレオチド配列またはそのフラグメント（例えば、配列番号１（ヒト）または配列番号９（マウス）またはそのフラグメント）によってコードされるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１（ヒト）または配列番号９（マウス）として示されるヌクレオチド配列またはそのフラグメントに対して実質的に相同的（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％または９９％相同的）であるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；（ｖ）天然に存在するＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ヌクレオチド配列またはそのフラグメント（例えば、配列番号１（ヒト）または配列番号９（マウス）またはそのフラグメント）に対して縮重しているヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；または（ｖｉ）前記ヌクレオチド配列の１つにストリンジェントな条件（例えば、非常にストリンジェントな条件）のもとでハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列。
【００４０】
ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１は哺乳動物起源であり、好ましくは、ヒト起源である。ヒトＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のヌクレオチド配列および予測されるアミノ酸配列が配列番号１および配列番号２にそれぞれ示される。ヒトＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号２、図２Ｂ）の分析により、下記の構造的特徴が明らかにされた：リーダー配列（配列番号２のおよそアミノ酸１〜１９（図２Ｂ））；ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号２のおよそアミノ酸２１３〜２１７）；膜貫通ドメイン（配列番号２のおよそアミノ酸２３６〜２５２（図２Ｂ））；配列番号２のおよそアミノ酸１〜２３５の細胞外ドメイン；および配列番号２のおよそアミノ酸２５３〜５３８の細胞内ドメイン。成熟型のヒトＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１は配列番号２のアミノ酸２０〜５３８の配列を有すると考えられる。
【００４１】
ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のｃＤＮＡを、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに１９９８年３月１０日にアクセション番号ＡＴＣＣ  ９８６８７として寄託した。
【００４２】
全長でないＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１タンパク質の任意の形態を、ＩＬ−２１ポリペプチドに結合する能力を保持するならば、本発明の方法および組成物において使用することができる。全長でないＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１タンパク質（例えば、可溶性ＩＬ−２１Ｒ）を、全長のＭＵ−１タンパク質をコードするポリヌクレオチドの対応するフラグメントを宿主細胞において発現させることによって作製することができる。これらの対応するポリヌクレオチドフラグメントもまた本発明の一部である。上記に記載されるような改変されたポリヌクレオチドは、適切な所望される欠失変異体の構築、部位特異的変異誘発法、または、適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応をはじめとする標準的な分子生物学的技術によって作製することができる。
【００４３】
本明細書中で使用される「可溶性のＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチド」は、自身を膜内に固定することができないＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドである。そのような可溶性ポリペプチドには、例えば、ポリペプチドを固定するためのその膜貫通ドメインの十分な部分を有しないＭＵ−１ポリペプチドまたはＩＬ−２１Ｒポリペプチド、あるいは、膜貫通ドメインが機能を有しないように改変されるＭＵ−１ポリペプチドまたはＩＬ−２１Ｒポリペプチドが含まれ、例えば、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメント（例えば、マウスＩＬ−２１ＲまたはヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含むＩＬ−２１Ｒのフラグメントには、配列番号２（ヒト）のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するアミノ酸配列、または、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３６に由来するアミノ酸配列が含まれる）が含まれる。可溶性のＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドはさらに、例えば、第２の成分、例えば、ポリペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖、ＧＳＴポリペプチド配列、Ｌｅｘ−Ａポリペプチド配列またはＭＢＰポリペプチド配列）を含むことができ、例えば、そのような第２の成分に融合され得る。例えば、融合タンパク質は少なくとも、ＩＬ−２１と結合することができるＩＬ−２１Ｒポリペプチドのフラグメント、例えば、ＩＬ−２１Ｒの可溶性フラグメント（例えば、マウスＩＬ−２１ＲまたはヒトＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含むＩＬ−２１Ｒのフラグメント、例えば、配列番号２（ヒト）のおよそアミノ酸１〜２３５、アミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３５、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント、または、配列番号１０（マウス）のおよそアミノ酸１〜２３６、アミノ酸２０〜２３６に由来するフラグメント）を、第２の成分（例えば、ポリペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖、Ｆｃフラグメント、様々なイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む）の重鎖定常領域）に融合されて含むことができる。
【００４４】
用語「インターロイキン−２１」または用語「ＩＬ−２１」は、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１５に対する配列相同性を示すサイトカインを示す(Parrish-Novak et al. (2000)、Nature、408:57-63)。インターロイキンサイトカイン間の低い配列相同性にもかかわらず、様々なサイトカインはともに共通して、このファミリーに代表的な「４へリックスバンドル」構造に折り畳まれる。ＩＬ−２１は、活性化されたＣＤ４+Ｔ細胞において主に発現し、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞に対する作用を有することが報告されている(Parrish-Novak et al. (2000)、supra;Kasaian et al. (2002)、supra)。ＩＬ−２１はＩＬ−２１Ｒ（これはまた、本明細書中ではＭＵ−１およびＮＩＬＲとして示される）に結合する。ＩＬ−２１と結合したとき、ＩＬ−２１Ｒの活性化はＳＴＡＴ５またはＳＴＡＴ３のシグナル伝達をもたらす(Ozaki et al. (2000)、supra)。用語「ＩＬ−２１」または用語「ＩＬ−２１ポリペプチド」は、例えば、ＩＬ−２１Ｒ（好ましくは、哺乳動物ＩＬ−２１のもの、例えば、マウスＩＬ−２１またはヒトＩＬ−２１のもの）と相互作用することができ、例えば、ＩＬ−２１Ｒ（好ましくは、哺乳動物ＩＬ−２１のもの、例えば、マウスＩＬ−２１のものまたはヒトＩＬ−２１のもの）に結合することができ）、かつ、下記の特徴の１つを有することができるタンパク質（好ましくは、哺乳動物起源、例えば、マウス起源またはヒト起源）を示す：（ｉ）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−２１のアミノ酸配列またはそのフラグメント、例えば、配列番号１９（ヒト）として示されるアミノ酸配列、または、そのフラグメント；（ｉｉ）配列番号１９（ヒト）として示されるアミノ酸配列に対して実質的に相同的（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％または９９％相同的）であるアミノ酸配列、または、そのフラグメント；（ｉｉｉ）天然に存在する哺乳動物ＩＬ−２１ヌクレオチド配列またはそのフラグメント（例えば、配列番号１８（ヒト）またはそのフラグメント）によってコードされるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１８（ヒト）として示されるヌクレオチド配列またはそのフラグメントに対して実質的に相同的（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％または９９％相同的）であるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；（ｖ）天然に存在するＩＬ−２１Ｒヌクレオチド配列またはそのフラグメントに対して縮重しているヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列（例えば、配列番号１９（ヒト）またはそのフラグメント）；または（ｖｉ）前記ヌクレオチド配列の１つにストリンジェントな条件（例えば、非常にストリンジェントな条件）のもとでハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列。
【００４５】
ＭＵ−１ポリペプチドまたはＩＬ−２１Ｒポリペプチド「の生物学的活性」の表現は、対応する成熟ＭＵ−１タンパク質の生物学的活性の１つまたは複数を示し、生物学的活性には、（１）ＩＬ−２１ポリペプチド（例えば、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド）と相互作用すること、例えば、ＩＬ−２１ポリペプチド（例えば、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド）に結合すること；（２）シグナル伝達分子（例えば、γｃ、ＪＡＫ１）と会合すること；（３）ｓｔａｔタンパク質（例えば、ＳＴＡＴ５および／またはＳＴＡＴ３）のリン酸化および／または活性化を刺激すること；および／または（４）免疫細胞（例えば、Ｔ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核芽球）の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌および／または生存を調節（例えば、刺激または低下）することが含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、本発明の方法において有用な「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト」は、ＩＬ−２１／ＭＵ−１ポリペプチドの１つまたは複数の生物学的活性を低下させるか、または阻害するか、または、そうでない場合には弱める薬剤を示す。１つの好ましい実施形態において、そのようなアンタゴニストはＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドと相互作用する（例えば、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドに結合する）。別の好ましい実施形態において、そのようなアンタゴニストはＩＬ−２１ポリペプチドと相互作用する（例えば、ＩＬ−２１ポリペプチドに結合する）。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを使用するアンタゴニスト作用は、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドおよび／またはＩＬ−２１ポリペプチドの生物学的活性の完全な除去を必ずしも示す必要はない。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの「治療効果的な量」は、対象（例えば、ヒト患者）への単回投薬または多回投薬を行ったとき、障害を治療すること、または、障害の重篤度を軽減すること、または、障害の１つもしくは複数の症状を改善または防止することにおいて、あるいは、そのような処置がない場合に予想されるよりも長く対象の生存を延ばすことにおいて効果的である薬剤の量を意味する。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの「予防効果的な量」は、対象（例えば、ヒト患者）への単回投薬または多回投薬を行ったとき、障害（例えば、本明細書中に記載されるような障害）の発症または再発を防止するか、あるいは、その発症または再発の発生を遅延させることにおいて効果的であるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの量を示す。
【００４９】
用語「誘導する」、用語「阻害する」、用語「強化する」、用語「上昇させる」、用語「増大させる」または用語「低下させる」などは、例えば、２つの状態の間での量的な差を意味し、２つの状態の間での少なくとも統計学的に有意な差を示す。
【００５０】
本発明に関連して用語「組合せで」は、薬剤が、同時または連続のいずれかであっても、実質的に同時に与えられることを意味する。連続で与えられるならば、第２の化合物の投与を開始したときにおいて、２つの化合物のうちの最初の化合物が、好ましくは、処置部位において、または、対象において効果的な濃度で依然として検出可能である。
【００５１】
本明細書中で使用される「融合タンパク質」は、２つ以上の機能的に結合した（例えば、連結された）成分（例えば、タンパク質成分）を含有するタンパク質を示す。好ましくは、これらの成分は共有結合的に結合する。成分は直接的に結合することができ、あるいは、スペーサーまたはリンカーを介してつなぐことができる。
【００５２】
本明細書中で使用される用語「抗体」は、少なくとも１つ（好ましくは、２つ）の重鎖（Ｈ鎖）可変領域（これは本明細書中ではＶＨと略記される）と、少なくとも１つ（好ましくは、２つ）の軽鎖（Ｌ鎖）可変領域（これは本明細書中ではＶＬと略記される）とを含むタンパク質を示す。ＶＨ領域およびＶＬ領域はさらに、より保存されている領域（これは「フレームワーク」（ＦＲ）と呼ばれる）が間に存在する超可変性の領域（これは「相補性決定領域」と呼ばれる）（「ＣＤＲ」）に分けることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は正確に明らかにされている（例えば、Kabata et al. (1991)、Sequences of Proteins of Immunological Interest(Fifth Edition)、米国保健社会福祉省(U.S. Department of Health and Human Services)、NIH Publication No. 91-3242; and Chothia et al. (1987)、J. Mol. Biol.、196:901-17を参照のこと。これらは参照して本明細書中に組み込まれる）。それぞれのＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、これらはアミノ末端からカルボキシ末端に向かって下記の順序で配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００５３】
抗体はさらに重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含むことができ、それにより、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖をそれぞれ形成する。１つの実施形態において、抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖からなる四量体であり、この場合、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖は、例えば、ジスルフィド結合によって相互につながれている。重鎖定常領域は３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ）から構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合性ドメインを含有する。抗体の定常領域は、典型的には、抗体が宿主の組織または因子（これには、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体システムの最初の補体（Ｃ１ｑ）が含まれる）に結合することを媒介する。
【００５４】
本明細書中で使用される用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１個または複数個のポリペプチドからなるタンパク質を示す。認められているヒト免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、εおよびμの定常領域遺伝子、ならびに、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。全長の免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ＫＤａまたは２１４個のアミノ酸）は、ＮＨ2末端における可変領域遺伝子（約１１０個のアミノ酸）と、ＣＯＯＨ末端におけるκまたはλの定常領域遺伝子とによってコードされる。全長の免疫グロブリン「重鎖」（約５０ＫＤａまたは４４６個のアミノ酸）は同様に、可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸）と、上記の定常領域遺伝子の１つ（例えば、γ（これは約３３０個のアミノ酸をコードする））とによってコードされる。
【００５５】
本明細書中で使用される「イソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を示す。
【００５６】
抗体の「抗原結合性フラグメント」（または単に「抗体の一部分」または「フラグメント」）の用語は、本明細書中で使用される場合、抗原（例えば、ＣＤ３）に特異的に結合する能力を保持する、全長型抗体の１つまたは複数のフラグメントを示す。抗体の「抗原結合性フラグメント」の用語に包含される結合性フラグメントの例には、次のものが含まれる：（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）2フラグメント（ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の一方だけのアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ｄＡｂフラグメント（Ward et al. (1989）、Nature、341:544-546）、これはＶＨドメインからなる；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）は別個の遺伝子によってコードされるが、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）は、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対形成して、一価の分子（これは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている）を形成する一本のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによって組換え方法を使用してつなぐことができる（例えば、Bird et al. (1988）、Science、242:423-26； 及び Huston et al. (1988）、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、85:5879-83を参照のこと）。そのような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合性フラグメント」の用語に包含されることが意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている通常の技術を使用して得られ、または、フラグメントは、無傷の抗体がスクリーニングされるのと同じ様式で有用性についてスクリーニングされる。
【００５７】
本明細書中に開示される配列に対して類似または相同的な配列（例えば、配列同一性が少なくとも約８５％である配列）もまた本出願の一部である。いくつかの実施形態において、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上であり得る。あるいは、核酸セグメントが鎖の相補鎖に対して選択的なハイブリダイゼーション条件（例えば、非常にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）のもとでハイブリダイゼーションするとき、実質的な同一性が存在する。核酸は、完全な細胞に、細胞溶解物に、あるいは、部分精製または実質的に精製された形態で存在し得る。
【００５８】
２つの配列の間での「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は本明細書中では交換可能に使用される）の計算は下記のように行われる。配列が最適な比較目的のためにアラインメントされる（例えば、ギャップを最適なアラインメントのために第１および第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に導入することができ、かつ、相同的でない配列を比較目的のために無視することができる）。好ましい実施形態において、比較目的のためにアラインメントされた参照配列の長さは参照配列の長さの少なくとも３０％であり、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらに一層より好ましくは少なくとも６０％、さらに一層より好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。その後、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列における位置が、第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められるとき、分子はその位置において同一である（本明細書中で使用されるように、アミノ酸または核酸の「同一性」はアミノ酸または核酸の「相同性」と等しい）。２つの配列の間でのパーセント同一性は、ギャップの数を考慮に入れて、配列がともに有する同一位置の数と、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある各ギャップの長さとの関数である。
【００５９】
２つの配列の間での配列の比較およびパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列の間でのパーセント同一性が、ＢＬＯＳＵＭ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびに、１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ加重、および、１、２、３、４、５または６の長さ加重を使用する、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）におけるＧＡＰプログラムに組み入れられている、ＮｅｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ（（1970）J. Mol. Biol.、48:444-53）のアルゴリズムを使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列の間でのパーセント同一性が、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、ならびに、４０、５０、６０、７０または８０のギャップ加重、および、１、２、３、４、５または６の長さ加重を使用する、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能）におけるＧＡＰプログラムを使用して決定される。特に好ましい１組のパラメーター（および、実施者が、どのようなパラメーターを、分子が本発明の配列同一範囲内または配列相同性範囲内にあるかどうかを明らかにするために適用しなければならないかについて分からない場合に使用されるはずである１組のパラメーター）は、１２のギャップペナルティー、４のギャップ伸張ペナルティー、および、５のフレームシフトギャップペナルティーを有するＢＬＯＳＵＭ６２スコア化行列である。２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列の間でのパーセント同一性はまた、ＰＡＭ１２０加重残基表、１２のギャップ長さペナルティー、および、４のギャップペナルティーを使用する、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み入れられているＭｅｙｅｒｓとＭｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ、４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定することができる。
【００６０】
本明細書中で使用される用語「ストリンジェントな条件のもとでハイブリダイゼーションする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄のための条件を記載する。様々なストリンジェントな条件が当業者には知られており、Current Protocols in Molecular Biology（John Wiley & Sons、N.Y.（1989）、6.3.1-6.3.6）に見出され得る。水性および非水性の方法がそのような参考文献に記載されており、いずれも使用することができる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい一例が、６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）における約４５℃でのハイブリダイゼーション、それに続く、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳにおける５０℃での１回またはそれ以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の一例が、６Ｘ  ＳＳＣにおける約４５℃でのハイブリダイゼーション、それに続く、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳにおける５５℃での１回またはそれ以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらなる一例が、６Ｘ  ＳＳＣにおける約４５℃でのハイブリダイゼーション、それに続く、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳにおける６０℃での１回またはそれ以上の洗浄である。好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、６Ｘ  ＳＳＣにおける約４５℃でのハイブリダイゼーション、それに続く、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳにおける６５℃での１回またはそれ以上の洗浄である。特に好ましい非常にストリンジェントな条件（および、実施者が、どのような条件を、分子が本発明のハイブリダイゼーション範囲内にあるかどうかを明らかにするために適用しなければならないかについて分からない場合に使用されるはずである条件）は、６５℃での０．５Ｍリン酸ナトリウムかつ７％  ＳＤＳ、それに続く、０．２Ｘ  ＳＳＣかつ１％  ＳＤＳにおける６５℃での１回またはそれ以上の洗浄である。本発明の単離されたポリヌクレオチドは、開示されたポリヌクレオチドをコードする配列に対して同一または類似する配列を有する核酸を同定および単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用することができる。核酸を同定および単離するためのハイブリダイゼーション方法には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、サザンハイブリダイゼーション、インシトゥーハイブリダイゼーションおよびノーザンハイブリダイゼーションが含まれ、そのような様々なハイブリダイゼーション方法が当業者には広く知られている。ハイブリダイゼーション条件およびハイブリダイゼーション反応に関するさらなる開示が本明細書中に提供される。
【００６１】
ハイブリダイゼーション反応を種々のストリンジェンシーの条件のもとで行うことができる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーには、任意の２つの核酸分子が互いにハイブリダイゼーションする困難さが含まれる。好ましくは、それぞれのハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドは、低下したストリンジェンシー条件のもとで、より好ましくは、ストリンジェントな条件のもとで、最も好ましくは、非常にストリンジェントな条件のもとで、その対応するポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションする。ストリンジェンシー条件の様々な例が下記の表１に示される：非常にストリンジェントな条件は、例えば、条件Ａ〜条件Ｆと少なくとも同じくらいストリンジェントである；ストリンジェントな条件は、例えば、条件Ｇ〜条件Ｌと少なくとも同じくらいストリンジェントである；低下したストリンジェンシー条件は、例えば、条件Ｍ〜条件Ｒと少なくとも同じくらいストリンジェントである。
【００６２】
【表１】
2008508885.tif 000003
【００６３】
1ハブリッドの長さは、ハイブリダイゼーションしているポリヌクレオチドのハイブリダイゼーションした領域について予想される長さである。ポリヌクレオチドを未知配列の標的ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションさせるとき、ハイブリッドの長さは、ハイブリダイゼーションしているポリヌクレオチドの長さであることが仮定される。既知配列のポリヌクレオチドがハイブリダイゼーションするとき、ハイブリッドの長さは、ポリヌクレオチドの配列をアラインメントし、最適な配列相補性の領域を特定することによって決定することができる。
2ＳＳＰＥ（１ｘＳＳＰＥは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＨ2ＰＯ4および１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ  ７．４）である）を、ハイブリダイゼーション緩衝液および洗浄緩衝液においてＳＳＣ（１ｘＳＳＣは０．１５Ｍ  ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）の代わりに使用することができる；洗浄が、ハイブリダイゼーションが完了した後、１５分間行われる。
ＴB*  −  ＴR*：長さが５０塩基対未満であることが予想されるハイブリッドについてのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔm）よりも５℃〜１０℃低くなければならなず、この場合、Ｔmは下記の式に従って決定される。長さが１８塩基対未満であるハイブリッドについては、Ｔm（℃）＝２（Ａ塩基＋Ｔ塩基の数）＋４（Ｇ塩基＋Ｃ塩基の数）。長さが１８塩基対〜４９塩基対のハイブリッドについては、Ｔm（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ10Ｎａ+）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）であり、式中、Ｎはハイブリッドにおける塩基数であり、Ｎａ+はハイブリダイゼーション緩衝液におけるナトリウムイオンの濃度である（１Ｘ  ＳＳＣについてはＮａ+＝０．１６５Ｍ）。
ポリヌクレオチドのハイブリダイゼーションについてのストリンジェンシー条件のさらなる例が、Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, chs 9 & 11 (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,NY (1989), and, Ausubel et al, eds, Current Protocols in Molecular Biology, sects 2.10 & 6.3-6.4(John Wiley & Sons, Inc.(1995)に提供される(これらは参照して本明細書中に組み込まれる）。
【００６４】
本発明の単離されたポリヌクレオチドは、開示されたポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体をコードする配列を有するＤＮＡを同定および単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用することができる。対立遺伝子変異体は、開示されたポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと同一であるか、または、開示されたポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドに対する著しい類似性を有するポリペプチドをコードする、開示されたポリヌクレオチドの天然に存在する代わりの形態である。好ましくは、対立遺伝子変異体は、開示されたポリヌクレオチドとの少なくとも９０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは、少なくとも９９％の同一性）を有する。
【００６５】
本発明の単離されたポリヌクレオチドはまた、開示されたポリヌクレオチドと相同的なポリペプチドをコードする配列を有するＤＮＡを同定および単離するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用することができる。このようなホモログは、開示されたポリペプチドおよびポリヌクレオチドの生物種とは異なる生物種から単離されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドであるか、または、同じ生物種において単離され、しかし、開示されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドに対する著しい配列類似性を有するポリヌクレオチドおよびポリペプチドである。好ましくは、ポリヌクレオチドホモログは、開示されたポリヌクレオチドとの少なくとも５０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは、少なくとも９０％の同一性）を有し、これに対して、ポリペプチドホモログは、開示されたポリペプチドとの少なくとも３０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも４５％の同一性、最も好ましくは、少なくとも６０％の同一性）を有する。好ましくは、開示されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドのホモログは、哺乳動物種から単離されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドである。
【００６６】
本発明の単離されたポリヌクレオチドはまた、本発明のポリペプチドを発現する細胞および組織、ならびに、本発明のポリペプチドが発現される条件を特定するためのハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとして使用することができる。
【００６７】
本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、その機能に対する実質的な影響を有しないさらなる保存的アミノ酸置換または非必須アミノ酸置換を有する場合がある。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有するアミノ酸残基により置換される置換である。類似する側鎖を有するアミノ酸残基の様々なファミリーがこの分野では定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電の極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および、芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
【００６８】
本明細書中で使用される用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクターが導入されている細胞を示すことが意図される。そのような用語は、問題としている特定の細胞だけでなく、そのような細胞の子孫もまた示すことが意図されることを理解しなければならない。特定の改変が、変異または環境的影響のいずれかのために後の世代において生じることがあるので、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合があり、しかし、本明細書中で使用される用語「宿主細胞」の範囲に依然として含まれる。
【００６９】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト
１つの実施形態において、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドまたはその活性なフラグメントは第２の成分に融合することができ、例えば、免疫グロブリンまたはそのフラグメント（例えば、そのＦＣ結合性フラグメント）に融合することができる。例えば、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１の可溶性形態を、免疫グロブリンのＦＣ部分に「リンカー」配列を介して融合することができる。他の融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ、ＬＥＸ−ＡまたはＭＢＰとの融合タンパク質など）もまた使用することができる。
【００７０】
融合タンパク質はさらに、ＩＬ−２１フラグメントまたはＩＬ−２１Ｒフラグメントを第２の成分につなぐリンカー配列を含む場合がある。例えば、融合タンパク質はペプチドリンカーを含むことができ、例えば、長さが約４アミノ酸〜２０アミノ酸（より好ましくは、５アミノ酸〜１０アミノ酸）のペプチドリンカーを含むことができる。１つの実施形態においてペプチドリンカーは長さが８アミノ酸である。ペプチドリンカーにおけるそれぞれのアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、ＴｈｒおよびＡｌａからなる群より選択される。１つの実施形態において、ペプチドリンカーはＧｌｙ−Ｓｅｒエレメントを含む。他の実施形態において、融合タンパク質はペプチドリンカーを含み、かつ、ペプチドリンカーは、式（Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）Y（式中、Ｙは、１、２、３、４、５、６、７または８である）を有する配列を含む。
【００７１】
他の実施形態において、さらなるアミノ酸配列を、発現、検出および／または単離もしくは精製を容易にするために、融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加することができる。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ融合タンパク質を１つまたは複数のさらなる成分（例えば、ＧＳＴ、Ｈｉｓ6、タグ、ＦＬＡＧタグ）に連結することができる。例えば、融合タンパク質はさらに、融合タンパク質の配列がＧＳＴ（すなわち、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合されるＧＳＴ融合タンパク質に連結することができる。そのような融合タンパク質はＭＵ−１融合タンパク質の精製を容易にすることができる。
【００７２】
別の実施形態において、融合タンパク質は異種のシグナル配列（すなわち、ＭＵ−１の核酸によってコードされるポリペプチドに存在しないポリペプチド配列）をそのＮ末端に含む。例えば、生来的なＭＵ−１シグナル配列を除き、別のタンパク質に由来するシグナル配列により置き換えることができる。いくつかの宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）では、ＭＵ−１の発現および／または分泌を異種のシグナル配列の使用によって増大させることができる。
【００７３】
本発明のキメラタンパク質または融合タンパク質は標準的な組換えＤＮＡ技術によって産生させることができる。例えば、種々のポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントが、従来の技術に従って、例えば、連結のための平滑末端化または付着末端化された末端、適切な末端をもたらすための制限酵素消化、適切な付着末端の充填、望ましくない連結を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および、酵素連結を用いることによって読み枠を合わせて連結される。別の実施形態では、融合遺伝子を、自動化されたＤＮＡ合成機を含む従来の技術によって合成することができる。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を、キメラな遺伝子配列を生じさせるために続けてアニーリングおよび再増幅することができる２つの連続する遺伝子フラグメントの間での相補的な突出端を生じさせるアンカープライマーを使用して行うことができる（例えば、Ausubel et al. (eds.）、Current Protocols in Molecular Biology（John Woley & Sons、1992）を参照のこと）。さらに、融合成分（例えば、免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする多くの発現ベクターが市販されている。ＭＵ−１をコードする核酸を、融合成分が免疫グロブリンタンパク質に読み枠を合わせて連結されるようにそのような発現ベクターにクローン化することができる。いくつかの実施形態において、ＭＵ−１融合ポリペプチドはオリゴマー（例えば、二量体または三量体など）として存在する。第１のポリペプチド、および／または、第１のポリペプチドをコードする核酸を、この分野で知られている方法を使用して構築することができる。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ＭＵ−１ポリペプチド成分が、ＩＬ−２１に対するＭＵ−１ポリペプチドのより大きな親和性結合（非変異の配列と比較して）をもたらす変異を天然に存在するＭＵ−１配列（野生型）において有する変異ＭＵ−１ポリペプチドとして提供される。
【００７５】
いくつかの実施形態において、ＭＵ−１ポリペプチド成分が、タンパク質分解に対してより抵抗性（非変異の配列と比較して）のＭＵ−１配列をもたらす変異を天然に存在するＭＵ−１配列（野生型）において有する変異ＭＵ−１ポリペプチドとして提供される。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドは全長のＭＵ−１ポリペプチドを含む。あるいは、第１のポリペプチドは全長でないＭＵ−１ポリペプチドを含む。
【００７６】
融合タンパク質に含めることができるシグナルペプチドはＭＰＬＬＬＬＬＬＬＬＰＳＰＬＨＰ（配列番号２１）である。所望されるならば、１個または複数個のアミノ酸をさらに、ＭＵ−１成分を含む第１のポリペプチド成分と、第２のポリペプチド成分との間に挿入することができる。
【００７７】
第２のポリペプチドは好ましくは可溶性である。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドは、連結されたポリペプチドの半減期（例えば、血清半減期）を高める。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドは、融合ポリペプチドと第２のＭＵ−１ポリペプチドとの会合を容易にする配列を含む。好ましい実施形態において、第２のポリペプチドは少なくとも免疫グロブリンポリペプチドの領域を含む。様々な免疫グロブリン融合ポリペプチドがこの分野では知られており、例えば、米国特許第５，５１６，９６４号；同第５，２２５，５３８号、同第５，４２８，１３０号、同第５，５１４，５８２号、同第５，７１４，１４７号および同第５，４５５，１６５号に記載される。
【００７８】
いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドは全長の免疫グロブリンポリペプチドを含む。あるいは、第２のポリペプチドは、全長でない免疫グロブリンポリペプチド（例えば、重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ2、ＦｖまたはＦｃ）を含む。好ましくは、第２のポリペプチドは免疫グロブリンポリペプチドの重鎖を含む。より好ましくは、第２のポリペプチドは免疫グロブリンポリペプチドのＦｃ領域を含む。
【００７９】
本発明の別の態様において、第２のポリペプチドは、野生型免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域のエフェクター機能より少ないエフェクター機能を有する。Ｆｃのエフェクター機能には、例えば、Ｆｃ受容体との結合、補体の固定化、および、Ｔ細胞枯渇化活性が含まれる（例えば、米国特許第６，１３６，３１０号を参照のこと）。Ｔ細胞枯渇化活性、Ｆｃのエフェクター機能、および、抗体の安定性をアッセイするための様々な方法がこの分野では知られている。１つの実施形態において、第２のポリペプチドは、Ｆｃ受容体に対する親和性が低いか、または、全くない。代わりの実施形態において、第２のポリペプチドは、補体タンパク質Ｃ１ｑに対する親和性が低いか、または、全くない。
【００８０】
好ましい第２のポリペプチド配列は配列番号１７のアミノ酸配列を含む。この配列はＦｃ領域を含む。下線部のアミノ酸は、野生型免疫グロブリン配列の対応する位置において見出されるアミノ酸とは異なる：
【００８１】
【表２】
2008508885.tif 000004
【００８２】
本発明の方法において使用することができるアンタゴニスト性融合タンパク質の例が図７〜図１５に示される。１つの実施形態において、融合タンパク質は、例えば、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７または配列番号３９から選ばれるアミノ酸配列、あるいは、それらに対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列を含む。他の実施形態において、融合タンパク質は、例えば、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６または配列番号３８から選ばれるヌクレオチド配列、あるいは、それらに対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。好ましい融合タンパク質は、配列番号２５または配列番号２９として示されるアミノ酸配列（それぞれ、図８Ａ〜図８Ｃおよび図１０Ａ〜図１０Ｃ）、あるいは、それらに対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列を有する。他の実施形態において、融合タンパク質は、例えば、配列番号２４または配列番号２８から選ばれるヌクレオチド配列（それぞれ、図８Ａ〜図８Ｃおよび図１０Ａ〜図１０Ｃ）、あるいは、それらに対する同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上である配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。最も好ましくは、融合タンパク質は、配列番号２９として示されるアミノ酸配列を有するか、または、配列番号２８として示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を有する（図１０Ａ〜図１０Ｃ）。
【００８３】
他の実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ（好ましくは、哺乳動物（例えば、ヒトまたはマウス）のＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ）に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。
【００８４】
本発明のＭＵ−１タンパク質はまた、ＭＵ−１タンパク質と特異的に反応し、かつ、リガンドが受容体に結合することを阻害し得るポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得るように動物を免疫化するために使用することができる。そのような抗体は、完全なＭＵ−１を免疫原として使用して得ることができ、または、ＭＵ−１のフラグメントを使用することによって得ることができる。ＭＵ−１のより小さいフラグメントもまた、動物を免疫化するために使用することができる。ペプチド免疫原はさらに、システイン残基をカルボキシル末端に含有することができ、ハプテン（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）など）にコンンジュゲート化することができる。さらなるペプチド免疫原を、チロシン残基を硫酸化チロシン残基により置換することによって作製することができる。そのようなペプチドを合成するための様々な方法がこの分野では広く知られている。
【００８５】
ＭＵ−１タンパク質に結合する中和抗体または非中和抗体（好ましくは、モノクローナル抗体）もまた、上記で記載された状態の処置において有用であり得る。これらの中和モノクローナル抗体は、リガンドがＭＵ−１受容体鎖に結合することを阻止することができる。
【００８６】
本発明はさらに、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒと特異的に反応する抗体を含む組成物を提供する。
【００８７】
ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに向けられたヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、マウス系ではなく、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスを使用して作製することができる。目的とする抗原により免疫化されたこのようなトランスジェニックマウスから得られる脾臓細胞が、ヒトタンパク質に由来するエピトープについての特異的な親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを作製するために使用される（例えば、Ｗｏｏｄ et al、国際特許出願公開ＷＯ９１／００９０６；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ et al、国際特許出願公開ＷＯ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇ et al、国際特許出願公開ＷＯ９２／０３９１８；Ｋａｙ et al、国際特許出願公開ＷＯ９２／０３９１７；Lonberg et al. (1994)、Nature、368:856-59;Green et al. (1994)、Nat. Genet.、7:13-21;Morrison et al. (1994)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、81:6851-55;Bruggeman et al. (1993)、Year Immunol.、7:33-40;Tuaillon et al. (1993)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、90:3720-24;Bruggeman et al. (1991)、Eur. J. Immunol.、21:1323-1326を参照のこと）。
【００８８】
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ技術の分野の当業者に知られている他の方法によって作製することができる。代わりの方法が「組換え抗体ディスプレー」法と呼ばれており、特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを同定および単離するために開発されており、モノクローナル抗体を産生させるために利用することができる。この方法はこの分野で広く知られている。動物を免疫原により免疫化した後、得られたＢ細胞プールの抗体レパートリーがクローン化される。オリゴマープライマーの混合物およびＰＣＲを使用することによって免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得るための様々な方法が、一般に知られている。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマー、ならびに、保存された３’定常領域プライマーに対するプライマーを、数多くのマウス抗体に由来する重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅のために使用することができる(Larrick et al. (1991)、Biotechniques、11:152-56)。類似する戦略もまた、ヒトの重鎖可変領域および軽鎖可変領域をヒト抗体から増幅するために使用することができる(Larrick et al. (1991)、Methods: Companion to Methods in Enzymology、2:106-10)。
【００８９】
キメラ抗体（キメラな免疫グロブリン鎖を含む）を、この分野で知られている組換えＤＮＡ技術によって産生させることができる。例えば、マウス（または他の生物種）のモノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子が、マウスＦｃをコードする領域を除くために制限酵素で消化され、そして、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の同等部分が代わりに使用される（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ et al.、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａ et al.、欧州特許出願１８４，１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ、欧州特許出願１７１，４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ et al.、欧州特許出願１７３，４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ et al.、国際特許出願公開ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙ et al.、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙ et al.、欧州特許出願１２５，０２３；Better et al. (1988)、Science、240:1041-43;Liu et al. (1987)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、84:3439-43;Liu et al. (1987)、J. Immunol.、139:3521-26;Sun et al. (1987)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、84:214-18;Nishimura et al. (1987)、Canc. Res.、47:999-1005;Wood et al. (1985)、Nature、314:446-49;Shaw et al. (1988)、J. Natl. Cancer Inst.、80:1553-59を参照のこと）。
【００９０】
抗体鎖または免疫グロブリン鎖は、この分野で知られている方法によってヒト化することができる。ヒト化抗体（ヒト化免疫グロブリン鎖を含む）は、抗原結合に直接には関与しないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域に由来する同等の配列で置換することによって作製することができる。ヒト化抗体を作製するための様々な一般的な方法が、Morrison(1985)、Science、229:1202-07;Oi et al. (1986)、BioTechniques、4:214；ならびにＱｕｅｅｎ et al.、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号および同第５，６９３，７６２号（これらのすべての内容が本明細書により参照して組み込まれる）によって提供される。これらの方法では、重鎖または軽鎖の少なくとも１つに由来する免疫グロブリンＦｖ可変領域のすべてまたは一部をコードする核酸配列を単離、操作および発現することが含まれる。そのような核酸の供給源は当業者には広く知られており、例えば、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから得ることができる。その後、ヒト化抗体をコードする組換えＤＮＡまたはそのフラグメントを適切な発現ベクターにクローン化することができる。
【００９１】
ヒト化またはＣＤＲグラフト化された抗体分子または免疫グロブリンを、免疫グロブリン鎖の１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲまたはすべてのＣＤＲを置き換えることができるＣＤＲグラフト化またはＣＤＲ置換によって産生することができる（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Jones et al. (1986)、Nature、321:552-25;Verhoeyan et al. (1988)、Science、239:1534;Beidler et al. (1988)、J. Immunol.、141:4053-60；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。これらのすべての内容が本明細書により参照して組み込まれる）。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用することができるＣＤＲグラフト化方法を記載する（英国特許出願ＧＢ２１８８６３８Ａ（１９８７年３月２６日出願）；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号、これらの内容は本明細書により参照して組み込まれる）。特定のヒト抗体のＣＤＲのすべてを非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分と置き換えることができ、または、複数のＣＤＲの一部のみを非ヒトＣＤＲと置き換えることができる。必要なのは、ヒト化抗体が所定の抗原に結合するために要求される数のＣＤＲを置き換えることだけである。
【００９２】
例えば、抗体の他の部分（例えば、定常領域）を欠失、付加または置換することによって改変されているモノクローナル抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体もまた本発明の範囲内である。例えば、抗体は、（ｉ）定常領域を欠失することによって；（ｉｉ）定常領域を別の定常領域（例えば、抗体の半減期、安定性または親和性を増大させるために意図された定常領域、あるいは、別の生物種または抗体クラスに由来する定常領域）で置換することによって；または（ｉｉｉ）定常領域における１個または複数個のアミノ酸を、例えば、とりわけ、グリコシル化部位の数、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）との結合、補体の固定化を変化させるために改変することによって改変することができる。
【００９３】
抗体の定常領域を変化させるための様々な方法がこの分野では知られている。変化した機能（例えば、エフェクターリガンド（例えば、細胞上のＦｃＲなど）または補体のＣ１成分に対する変化した親和性）を有する抗体を、抗体の定常部分における少なくとも１個のアミノ酸残基を異なる残基で置換することによって作製することができる（例えば、Ｅ．Ｐ．  ３８８，１５１  Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号を参照のこと。これらのすべての内容が本明細書により参照して組み込まれる）。マウスまたは他の生物種の免疫グロブリンに適用された場合、これらの機能を低下または排除する類似するタイプの変化が記載され得る。
【００９４】
例えば、指定された残基を、適切な機能性をその側鎖において有する残基で置換することによって、あるいは、電荷を有する官能基（例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸など）、または、おそらくは芳香族の非極性残基（例えば、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなど）を導入することによってＦｃＲ（例えば、ＦｃガンマＲ１）についての抗体（例えば、ＩｇＧ、例えば、ヒトＩｇＧなど）のＦｃ領域の親和性、または、Ｃ１ｑとの結合のためのＦｃ領域の親和性を変化させることが可能である（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照のこと）。
【００９５】
ＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列が公開により知られている。例えば、ヒトＩＬ−２１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列がＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセション番号Ｘ＿０１１０８２で入手可能である。ヒトＩＬ−２１の開示されたヌクレオチド配列を下記に示す：
【００９６】
【表３】
2008508885.tif 000005
【００９７】
開示されたヒトＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列を下記に示す：
【００９８】
【表４】
2008508885.tif 000006
【００９９】
本発明はまた、非常にストリンジェントな条件（例えば、６５℃での０．１Ｘ  ＳＳＣ）のもとで、配列番号１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６または配列番号３８に示されるヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションする核酸を包含する。ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１融合タンパク質をコードし、しかし、遺伝暗号の縮重性によって、配列番号１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６または配列番号３８に示されるヌクレオチド配列とは異なる単離されたポリヌクレオチドもまた本発明によって包含される。点変異によって、または、誘導された改変によって引き起こされる、配列番号１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６または配列番号３８に示されるようなヌクレオチド配列における変異もまた本発明に含まれる。
【０１００】
本発明の単離されたポリヌクレオチドは、ＭＵ−１タンパク質を組換えにより産生させるために、発現制御配列（例えば、Kaufmann et al. (1991)、Nucleic Acids Res.、19:4485-90に開示されるｐＭＴ２発現ベクターまたはｐＥＤ発現ベクターなど）に機能的に連結することができる。多くの好適な発現制御配列がこの分野では知られている。組換えタンパク質を発現させる一般的な方法もまた知られており、Kaufman(1990)、Methods in Enzymology、185:537-66に例示される。本明細書中で定義される「機能的に連結された（される）」は、連結されたポリヌクレオチド／発現制御配列により形質転換（トランスフェクション）されている宿主細胞によってＭＵ−１タンパク質が発現されるような方法で、本発明の単離されたポリヌクレオチドと、発現制御配列との間での共有結合性の結合を形成するように酵素的または化学的に連結された（される）ことを意味する。
【０１０１】
本明細書中で使用される用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を示すことが意図される。１つのタイプのベクターが「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントを連結することができる環状の二本鎖ＤＮＡループを示す。別のタイプのベクターが、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムの中に連結することができるウイルスベクターである。ある種のベクターは、ベクターが導入される宿主細胞における自律的複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター、および、エピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入したときに宿主細胞のゲノムに組み込ませることができ、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製する。さらに、ある種のベクターは、ベクターが機能的に連結されている遺伝子の発現を行わせることができる。そのようなベクターは本明細書中では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）として示される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態である。プラスミドがベクターの最も一般的に使用されている形態であるので、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」が交換可能に使用されることがある。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たす発現ベクターのそのような他の形体（例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルス）など）を包含することが意図される。
【０１０２】
用語「調節配列」は、抗体鎖の遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を包含することが意図される。そのような調節配列が、例えば、Goeddel(1990)、Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185(Academic Press、San Diego、CA)に記載される。調節配列の選択をはじめとする発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望されるタンパク質の発現レベルなどのような要因に依存し得ることが当業者によって理解される。哺乳動物宿主細胞での発現のための好ましい調節配列には、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を行わせるウイルスエレメント、例えば、ＦＦ−１ａプロモーター由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーならびにＢＧＨポリＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルスの主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ならびに、ポリオーマが含まれる。ウイルス調節エレメントのさらなる記載およびその配列については、例えば、米国特許第５，１６８，０６２号、同第４，５１０，２４５号、同第４，９６８，６１５号を参照のこと。
【０１０３】
本発明の組換え発現ベクターは、さらなる配列（例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）、および、選択マーカー遺伝子など）を有することができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、同第５，１７９，０１７号を参照のこと）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、薬物（例えば、Ｇ４１８、ヒグロマイシンまたはメトトレキサートなど）に対する抵抗性を、ベクターが導入されている宿主細胞に付与する。好ましい選択マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅とともにｄｈｆｒ-の宿主細胞における使用のために）、および、ｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のために）が含まれる。
【０１０４】
数多くのタイプの細胞が、ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質を発現させるための好適な宿主細胞として作用し得る。機能的なＭＵ−１タンパク質を発現させることができる任意の細胞タイプを使用することができる。好適な哺乳動物宿主細胞には、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換された霊長類細胞株、正常な二倍体細胞、初代組織のインビトロ培養に由来する細胞系統、初代外植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＨａＫ細胞、Ｒａｔ２細胞、ＢａＦ３細胞、３２Ｄ細胞、ＦＤＣＰ−１細胞、ＰＣ１２細胞、Ｍ１ｘ細胞またはＣ２Ｃ１２細胞が含まれる。
【０１０５】
ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質はまた、本発明の単離されたポリヌクレオチドを１つまたは複数の昆虫発現ベクターにおける好適な制御配列に機能的に連結し、かつ、昆虫発現システムを用いることによって産生することができる。バキュロウイルス／昆虫細胞発現システムのための材料および方法が、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）からキット形態（例えば、ＭＡＸＢＡＣ（登録商標）キット）で市販されており、そのような方法は、Summers and Smith、Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555(1987)（これは参照して本明細書中に組み込まれる）に記載されるようにこの分野では広く知られている。ＭＵ−１タンパク質の可溶性形態もまた、上記で記載されたように、適切な単離されたポリヌクレオチドを使用して昆虫細胞において作成させることができる。
【０１０６】
あるいは、ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質を下等真核生物（例えば、酵母など）または原核生物（例えば、細菌など）において産生させることができる。好適な酵母株には、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属の菌株、Ｃａｎｄｉｄａ属、または、異種のタンパク質を発現させることができる任意の他の酵母株が含まれる。好適な細菌株には、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または、異種のタンパク質を発現させることができる任意の細菌株が含まれる。
【０１０７】
細菌における発現は、組換えタンパク質を取り込む封入体の形成をもたらす場合がある。従って、組換えタンパク質のリフォールディングが、活性体またはより活性なものを産生させるために要求される場合がある。正しく折り畳まれた異種タンパク質を細菌封入体から得るためのいくつかの方法がこの分野では知られている。これらの方法では一般に、タンパク質を封入体から可溶化し、その後、カオトロピック剤を使用してタンパク質を完全に変性することが伴う。システイン残基がタンパク質の一次アミノ酸配列に存在するとき、ジスルフィド結合の正しい形成を可能にする環境（レドックス系）においてリフォールディングを達成することが多くの場合には必要である。リフォールディングの一般的な方法が、Kohno(1990)、Meth. Enzym.、185、187-95に開示される；欧州特許０４３３２２５および米国特許第５，３９９，６７７号は他の適切な方法を記載する。
【０１０８】
ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質はまた、トランスジェニック動物の産物として発現させることができ、例えば、ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含有する体細胞または生殖細胞によって特徴づけられる遺伝子組み換えされたウシ、ヤギ、ブタまたはヒツジの乳汁の成分として発現させることができる。
【０１０９】
ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質は、形質転換された宿主細胞を、所望のタンパク質を発現させるために必要な培養条件のもとで成長させることによって調製することができる。得られる発現タンパク質は、その後、培養培地または細胞抽出物から精製することができる。ＭＵ−１タンパク質またはその融合タンパク質の可溶性形態を培養培地から精製することができる。本発明のＭＵ−１タンパク質の膜結合形態を、総膜画分を発現細胞から調製し、非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００など）を用いて膜を抽出することによって精製することができる。
【０１１０】
ＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１融合タンパク質は、当業者に知られている方法を使用して精製することができる。例えば、本発明のＭＵ−１タンパク質は、市販のタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡＭＩＣＯＮ（登録商標）限外ろ過ユニットまたはＰＥＬＬＩＣＯＮ（登録商標）限外ろ過ユニット（Millipore、Billerica、MA））を使用して濃縮することができる。濃縮工程の後、濃縮液を精製マトリックス（例えば、ゲルろ過媒体など）に加えることができる。あるいは、アニオン交換樹脂を用いることができる（例えば、ペンダント状のジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックスまたは基質）。マトリックスは、タンパク質精製において一般に用いられているアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースまたは他のタイプが可能である。あるいは、カチオン交換工程を用いることができる。好適なカチオン交換体には、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスが含まれる。スルホプロピル基が好ましい（例えば、Ｓ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）カラム）。培養上清からのＭＵ−１タンパク質または融合タンパク質の精製ではまた、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）またはＣｉｂａｃｒｏｎブルー３ＧＡ  ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）のような親和性樹脂でのカラム工程；フェニルエーテル、ブチルエーテルまたはプロピルエーテルのような樹脂を使用する疎水性相互作用クロマトグラフィーによるカラム工程；あるいは、免疫アフィニティークロマトグラフィーによるカラム工程を１回または複数回含むことができる。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体（例えば、ペンダント状のメチル基または他の脂肪族基を有するシリカゲル）を用いる１回または複数回の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程を、ＭＵ−１タンパク質をさらに精製するために用いることができる。ＭＵ−１タンパク質に対する抗体を含むアフィニティーカラムもまた、既知の方法に従って精製において使用することができる。前記精製工程の一部またはすべてはまた、様々な組合せで、または、他の既知の方法とともに、実質的に精製されている単離された組換えタンパク質を提供するために用いることができる。好ましくは、単離されたＭＵ−１タンパク質は、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように精製される。
【０１１１】
本発明のＭＵ−１タンパク質またはＭＵ−１融合タンパク質はまた、ＭＵ−１に結合することができる因子についてスクリーニングするために使用することができる。所望の結合性タンパク質（固定化されていても、または、固定化されていなくても）を使用する結合アッセイがこの分野では知られており、本発明のＭＵ−１タンパク質を使用してこの目的のために使用することができる。純化細胞に基づくスクリーニングアッセイまたは精製タンパク質に基づく（無細胞）スクリーニングアッセイを、そのような因子を同定するために使用することができる。例えば、ＭＵ−１タンパク質を精製形態でキャリアに固定化することができ、精製されたＭＵ−１タンパク質に対する結合性リガンドまたは潜在的なリガンドを測定することができる。
【０１１２】
医薬組成物
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、医薬的に許容され得るキャリアと組み合わされたとき、医薬組成物として使用することができる。そのような組成物は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストおよびキャリアに加えて、この分野で広く知られている様々な希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤および他の物質を含有することができる。用語「医薬的に許容され得る」は、有効成分の生物学的活性の有効性を妨害しない非毒性の物質を意味する。キャリアの特徴は投与経路に依存する。
【０１１３】
本発明の医薬組成物は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが、他の医薬的に許容され得るキャリアに加えて、両親媒性薬剤（例えば、水溶液において存在するミセル、不溶性単層、液晶またはラメラ層として凝集形態で存在する脂質など）と組み合わされるリポソームの形態にすることができる。リポソーム配合のための好適な脂質には、限定されないが、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニンおよび胆汁酸などが含まれる。そのようなリポソーム配合物の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号、同第４，８３７，０２８号および同第４，７３７，３２３号（これらのすべてが参照して本明細書中に組み込まれる）に開示されるように、この技術分野での技術レベルの範囲内である。
【０１１４】
本明細書中で使用される用語「治療効果的な量」は、意味のある患者利益（例えば、そのような状態の改善、そのような状態の治癒、または、そのような状態の治癒速度の増大）を示すために十分である、医薬組成物または方法のそれぞれの有効成分の総量を意味する。単独で投与された個々の有効成分に適用されるときには、この用語はその成分単独を示す。組合せに適用されるときには、この用語は、組合せで、または連続で、または同時に投与されようとも、治療効果をもたらす有効成分の組合せ量を示す。
【０１１５】
本発明の処置方法または使用方法を実施する際には、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの治療効果的な量が対象（例えば、哺乳動物（例えば、ヒト））に投与される。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、本明細書中においてより詳しく記載されるように、単独または他の治療剤との組合せでのいずれかかであっても、本発明の方法に従って投与することができる。１つまたは複数の薬剤と同時投与されるとき、ＩＬ−２１アンタゴニストおよび／またはＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、第２の薬剤と同時または連続でのいずれかで投与することができる。連続して投与されるならば、担当医により、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを他の薬剤との組合せで投与する適切な順序が決定される。
【０１１６】
本発明の医薬組成物において使用されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの投与、または、本発明の方法を実施するためのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの投与を様々な通常的な方法（例えば、経口摂取、吸入、あるいは、皮膚注入、皮下注射または静脈内注射など）で行うことができる。患者への静脈内投与が好ましい。
【０１１７】
治療効果的な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１ＲアゴニストまたはＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが経口投与されるとき、そのような結合性因子は、錠剤、カプセル、粉末剤、溶液またはエリキシル剤の形態である。錠剤形態で投与されるとき、本発明の医薬組成物はさらに、固体のキャリア（例えば、ゼラチンまたは補助剤など）を含有することができる。錠剤、カプセルおよび粉末剤は約５％〜９５％の結合性因子を含有し、好ましくは、約２５％〜９０％の結合性因子を含有する。液体形態で投与されるとき、液体のキャリア（例えば、水、石油、動物起源または植物起源のオイル（例えば、ピーナッツ油、鉱油、ダイズ油またはゴマ油など）、あるいは、合成油など）を加えることができる。液体形態の医薬組成物はさらに、生理的食塩水溶液、デキストロース溶液または他の糖類溶液、あるいは、グリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）を含有することができる。液体形態で投与されるとき、医薬組成物は約０．５重量％〜９０重量％の結合性因子を含有し、好ましくは、約１％〜５０重量％の結合性因子を含有する。
【０１１８】
治療効果的な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが、静脈内注射、皮膚注入または皮下注射により投与されるとき、結合性因子は、パイロジェンを含有しない非経口的に許容され得る水溶液の形態である。そのような非経口的に許容され得るタンパク質溶液の調製は、ｐＨ、等張性および安定性などを十分に考慮して、この技術分野での技術の範囲内である。静脈内注射、皮膚注入または皮下注射のための好ましい医薬組成物は、結合性因子に加えて、等張性ビヒクル（例えば、この分野で知られているような塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウムの注射液、乳酸加リンゲル注射液または他のビヒクルなど）を含有するはずである。本発明の医薬組成物はまた、当業者に知られている安定化剤、保存剤、緩衝剤、酸化防止剤または他の添加剤を含有することができる。
【０１１９】
本発明の医薬組成物におけるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの量は、処置されている状態の性質および重篤度、ならびに、患者が受けたことがある以前の処置の性質に依存する。最終的には、担当医により、それぞれの個々の患者を処置するための結合性因子の量が決定される。最初に、担当医は低い用量の結合性因子を投与し、患者の治療的応答を観察する。より大きな用量の結合性因子を、最適な治療効果が患者について得られるまで投与することができ、そして、その時点で、投薬量は一般にさらには増大しない。本発明の方法を実施するために使用される様々な医薬組成物は約０．１μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを含有すべきであることが意図される。
【０１２０】
本発明の医薬組成物を使用する静脈内治療の継続期間は、処置されている疾患の重篤度、ならびに、それぞれの個々の患者の状態および潜在的な特異体質的応答に依存して変化する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの各適用の継続期間は１２時間〜２４時間の連続した静脈内投与の範囲であることが意図される。最終的には、担当医により、本発明の医薬組成物を使用する静脈内治療の適切な継続期間が決定される。
【０１２１】
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質は、本明細書中において特定される使用または生物学的活性（本明細書中に示されるアッセイに関連した活性を含む）の１つまたは複数を示すことが予想される。本発明のタンパク質について記載される使用または活性は、そのようなタンパク質の投与または使用によって、あるいは、（例えば、ＤＮＡを導入するために好適な遺伝子治療またはベクターなどでは）そのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与または使用によって提供され得る。
【０１２２】
免疫細胞の活性を低下させるためのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの使用
さらに別の態様において、本発明は、免疫細胞（例えば、成熟Ｔ細胞（例えば、成熟ＣＤ８+Ｔ細胞、成熟ＣＤ４+Ｔ細胞）、成熟ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核芽球）またはその集団の活性を、免疫細胞または集団の活性を阻害するために十分な量でＴ細胞の集団をＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと接触させることによって阻害するための方法を特徴とする。ＩＬ−２１および／またはＩＬ−２１Ｒのアンタゴニスト（例えば、本明細書中に記載されるような融合タンパク質または中和抗体）もまた、免疫応答の阻害が所望される対象に投与することができる。このような状態または障害には、例えば、自己免疫障害（例えば、関節炎障害、ＲＡ、ＩＢＤ）、ＳＬＥ、喘息、糸球体腎炎、乾癬、または、移植片／臓器移植（およびそれに関連した拒絶）が含まれる。
【０１２３】
本出願人は、Ｆｃ免疫グロブリン領域に融合されたＩＬ−２１Ｒの細胞外ドメインを含む中和する融合タンパク質を使用することによるＩＬ−２１Ｒ活性の低下により、炎症症状がコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）動物モデル（実施例７）において改善され、同様に、クローン病、潰瘍性大腸炎およびＩＢＤについての動物モデル（実施例９および実施例１１）、移植片拒絶についての動物モデル（実施例１０）、乾癬についての動物モデル（実施例１１）、および、狼瘡についての動物モデル（実施例１３）において改善されることを示している。ＩＬ−２１ＲのｍＲＮＡの発現がＣＩＡマウスの足においてアップレギュレーションされる（実施例８）。ＩＬ−２１Ｒ欠損マウスは抗原誘導による気道炎症の低下を示す（実施例１２）。従って、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒの活性を中和するＩＬ−２１Ｒ結合性因子は、例えば、自己免疫障害（例えば、関節炎障害、ＲＡ、ＩＢＤ）、ＳＬＥ、糸球体腎炎、喘息、乾癬または移植片／臓器移植を含む、免疫細胞に関連する病理を処置または防止するためにインビボで免疫抑制を誘導するように使用することができる。
【０１２４】
ＩＬ−２１ＲのＤＮＡはまた、クローン病についての染色体遺伝子座に位置づけられており、従って、クローン病および他の炎症性腸疾患を処置するためのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの使用についてのさらなる裏付けを提供する。
【０１２５】
本発明の方法はまた、免疫細胞の活性（例えば、増殖、分化、生存）を調節（例えば、阻害）するために使用することができ、従って、様々な免疫障害を処置または防止するために使用することができる。処置または防止することができる障害の非限定的な例には、移植拒絶、自己免疫疾患（例えば、糖尿病、関節炎（ＲＡ、若年性ＲＡ、変形性関節症（ＯＡ）、乾癬性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、ＳＬＥ、糸球体腎炎、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、乾癬および関連した皮膚障害（例えば、ＵＶ損傷に関連する状態（例えば、光による老化）、アトピー性皮膚炎、皮膚型Ｔ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉腫）、アレルギー性および刺激性の接触性皮膚炎、扁平苔癬、円形脱毛症、白斑、眼の瘢痕性類天疱瘡、ならびに、じんま疹など）、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、潰瘍大腸炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、内因性喘息、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺線維症、皮膚エリテマトーデス、強皮症、薬物発疹、自己免疫ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、肝炎、スティーヴンズ−ジョンソン症候群、特発性スプルー、グレーヴズ病、類肉腫症、肝臓線維症、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、移植片対宿主病およびアレルギー（例えば、アトピー性アレルギーなど）が含まれるが、これらに限定されない。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを使用して処置することができる好ましい障害には、関節炎障害（例えば、ＲＡ、若年性ＲＡ、ＯＡ、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎（好ましくは、関節リウマチ））、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、狼瘡（ＳＬＥ）、ＩＢＤ（クローン病、潰瘍性大腸炎）、喘息、脈管炎、アレルギー、強皮症、糸球体腎炎および乾癬が含まれる。
【０１２６】
別の実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、単独で、または、本明細書中に記載されるような他の治療剤（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト）との組合せで、多発性骨髄腫および関連したＢリンパ球性悪性腫瘍を処置するために使用することができる（Brenne et al. (2002）、Blood、99(10):3756-62）。
【０１２７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを使用した場合、免疫応答を数多くの方法で調節することが可能である。ダウンレギュレーションは、既に進行している免疫応答を阻害または遮断する形態であってもよく、あるいは、免疫応答の誘導を妨げることを伴う場合がある。活性化されたＴ細胞の機能を、Ｔ細胞の応答を抑制することによって、または、Ｔ細胞における特異的な寛容性を誘導することによって、または、両者によって阻害することができる。Ｔ細胞応答の免疫抑制は一般には、抑制剤へのＴ細胞の継続的な暴露を必要とする能動的な抗原非特異的なプロセスである。Ｔ細胞における非応答性またはアネルギーを誘導することを伴う寛容性は、寛容性が一般には抗原特異的であり、かつ、寛容化因子への暴露が中断された後も持続するという点で、免疫抑制とは区別可能である。操作的には、寛容性は、寛容化因子の非存在下で特定の抗原に再暴露したときのＴ細胞応答の欠如によって明らかにすることができる。
【０１２８】
免疫機能を、例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを使用してダウンレギュレーションまたは防止することは、組織移植、皮膚移植および臓器移植の状況において有用であり、また、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）において有用である。例えば、Ｔ細胞の機能を阻害することにより、組織移植において組織の破壊を低下させることができる。典型的には、組織移植体において、移植体の拒絶は、Ｔ細胞による異物としてのその認識によって開始され、その後、移植体を破壊する免疫反応が続く。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、移植前、移植期間中または移植後に、単独で、または、他の免疫エフェクターの相互作用を阻害または遮断する分子との組合せで投与することは、免疫応答を低下させるために役立ち得る。
【０１２９】
臓器移植拒絶またはＧＶＨＤを防止することにおけるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの効力は、ヒトにおける効力または投薬を予測する動物モデルを使用して評価することができる。使用することができる適切な系の例には、ラットにおける同種心臓移植片、および、マウスにおける異種膵臓小島細胞移植片が含まれ、これらはともに、Lenschow et al. (1992)、Science、257:789-92、及び、 Turka et al. (1992)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、89:11102-05に記載されるように、インビボでのＣＴＬＡ４−Ｉｇ融合タンパク質の免疫抑制効果を調べるために使用されている。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストはまた、他の動物モデルにおいて、例えば、血管新生化心臓同種移植片および全層皮膚同種移植片についてのマウスモデルにおいて評価することができる。モデルは、完全なＭＨＣミスマッチを有する組織の拒絶を調べることができ、また、ＩＬ−２１遮断をドナー特異的なリンパ球輸血と組み合わせることができる。加えて、ＧＶＨＤのマウスモデル（例えば、Paul ed. Fundamental Immunology、Raven Press、New York(1989)、pp. 846-47を参照のこと）を、ＧＶＨＤまたはＳＬＥの発症に対するインビボでのIL-21/IL-21Rアンタゴニストの効果を明らかにするために使用することができる。臓器移植拒絶またはＧＶＨＤを防止することにおけるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの効力はまた、他の治療剤（例えば、免疫抑制剤、例えば、ラパマイシン、シクロスポリンまたはＣＴＬＡ４Ｉｇなど）との組合せで評価することができる。
【０１３０】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストはまた、自己免疫疾患を処置するために治療的に有用であり得る。多くの自己免疫障害は、自己の組織に対する反応性を有し、かつ、疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進させるＴ細胞の不適切な活性化の結果である。自己反応性Ｔ細胞の活性化を防止することにより、疾患症状が軽減または排除され得る。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの投与は、単独または他の薬剤（例えば、本明細書中に記載されるような薬剤）との組合せであっても、Ｔ細胞の活性化を阻害し、かつ、疾患プロセスに関与し得る自己抗体またはＴ細胞由来サイトカインの産生を妨げるために使用することができる。加えて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、単独または他の薬剤（例えば、本明細書中に記載されるような薬剤）との組合せであっても、自己反応性Ｔ細胞の抗原特異的な寛容性を増大させ、かつ、疾患からの長期間の緩和をもたらす。自己免疫障害を防止または緩和することにおけるこれらの薬剤の効力は、ヒト免疫疾患の数多くの十分に特徴づけられている動物モデルを使用して明らかにすることができる。例には、マウスの実験的自己免疫脳炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮＺＢハイブリッドマウスでの全身性エリテマトーデス、マウスの自己免疫コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットでの糖尿病、ならびに、マウスの実験的重症筋無力症が含まれる（例えば、Paul ed. Fundamental Immunology、Raven Press、New York(1989)、pp. 840-56を参照のこと）。
【０１３１】
１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、その医薬組成物）が併用治療において投与される：すなわち、病理学的な状態または障害（例えば、免疫障害および炎症性障害など）を処置するために有用な他の薬剤（例えば、治療剤）と組み合わされる。本明細書での用語「組合せで」は、薬剤が、同時または連続的のいずれかであって、実質的に同時に与えられることを意味する。連続的に与えられるならば、第２の化合物の投与を開始するときにおいて、２つの化合物のうちの最初の化合物が、好ましくは、処置部位または対象において効果的な濃度で依然として検出可能である。
【０１３２】
例えば、併用治療では、本明細書中においてより詳しく記載されるように、１つまたは複数のさらなる治療剤（例えば、１つまたは複数のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または、細胞障害剤または細胞増殖抑制剤）との同時配合および／または同時投与が行われる１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１受容体に対する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体あるいはそれらの抗原結合性フラグメント）、ＩＬ−２１融合タンパク質、可溶性のＩＬ−２１受容体、ペプチド阻害剤または小分子阻害剤）を含むことができる。さらに、本明細書中に記載される１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、本明細書中に記載される治療剤の２つ以上との組合せで使用することができる。そのような併用治療では、投与された治療剤のより低い投薬量を都合良く利用することができ、従って、様々な単独治療に伴って起こり得る毒性または合併症を回避することができる。さらに、本明細書中に開示される治療剤は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ受容体経路とは異なる経路に対して作用し、従って、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの効果を増強し、および／または、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの効果と相乗作用することが予想される。
【０１３３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで使用することができる好ましい治療剤には、自己免疫応答およびその後の炎症性応答における種々の段階で妨害するそのような薬剤がある。１つの実施形態において、本明細書中に記載される１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、１つまたは複数のさらなる薬剤、例えば、他のサイトカインアンタゴニストまたは増殖因子アンタゴニスト（例えば、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、リガンド融合体）、あるいは、他の標的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、他のサイトカインまたは増殖因子、それらの受容体、あるいは、他の細胞表面分子に結合する抗体）、および、抗炎症性サイトカインまたはそのアゴニストなどと同時配合および／または同時投与することができる。本明細書中に記載されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せでで使用することができる薬剤の非限定的な例には、１つまたは複数のインターロイキン（ＩＬ）またはその受容体のアンタゴニスト、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８およびＩＬ−２２のアンタゴニスト；サイトカインまたは増殖因子またはそれらの受容体のアンタゴニスト、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦのアンタゴニストなどが含まれるが、これらに限定されない。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストはまた、例えば、細胞表面分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０など）またはそれらのリガンド（ＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）またはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１(Yusuf-Makagiansar et al. (2002)、Med. Res. Rev.、22(2):146〜67)を含む)の阻害剤（例えば、それらに対する抗体）と組み合わせることができる。本明細書中に記載されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで使用することができる好ましいアンタゴニストには、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８およびＩＬ−２２のアンタゴニストが含まれる。
【０１３４】
そのような薬剤の例には、ＩＬ−１２アンタゴニスト、例えば、ＩＬ−１２（好ましくは、ヒトＩＬ−１２）に結合するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体（またはそれらの抗原結合性フラグメント）など、例えば、国際特許出願公開ＷＯ００／５６７７２（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦ）に開示される抗体；ＩＬ−１２受容体阻害剤、例えば、ヒトＩＬ−１２受容体に対する抗体；およびＩＬ−１２受容体（例えば、ヒトＩＬ−１２受容体）の可溶性フラグメントが含まれる。ＩＬ−６アンタゴニストの例には、ＩＬ−６またはその受容体に対する抗体（またはその抗原結合性フラグメント）（例えば、ヒトＩＬ−６またはその受容体に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体）、ＩＬ−６受容体の可溶性フラグメント、および、ＩＬ−６結合性タンパク質が含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例には、ＩＬ−１５またはその受容体に対する抗体（またはその抗原結合性フラグメント）（例えば、ＩＬ−１５またはその受容体に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体）、ＩＬ−１５受容体の可溶性フラグメント、および、ＩＬ−１５結合性タンパク質が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例には、ヒトＩＬ−１８に対する抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体）（またはそれらの抗原結合性フラグメント）、ＩＬ−１８受容体の可溶性フラグメント、および、ＩＬ−１８結合性タンパク質(IL-18BP、Mallat et al. (2001)、Circ. Res.、89:e41-45)が含まれる。ＩＬ−１アンタゴニストの例には、インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０など）、ＩＬ−１アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ（商標）、Ａｍｇｅｎ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）および抗ＩＬ−１受容体抗体（またはその抗原結合性フラグメント）が含まれる。
【０１３５】
ＴＮＦアンタゴニストの例には、下記が含まれる：ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦα）に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体（またはそれらの抗原結合性フラグメント）、例えば、Ｄ２Ｅ７（ヒトＴＮＦα抗体、米国特許第６，２５８，５６２号；ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）など；抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例えば、ＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５またはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標）；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えば、Arthritis & Rheumatism(1994)、Vol. 37、S295;J. Invest. Med.(1996)、Vol. 44、235A)、ｐ５５  ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））；酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えば、α−スルホニルヒドロキサム酸誘導体（国際特許出願公開ＷＯ０１／５５１１２）およびＮ−ヒドロキシホルムアミド系ＴＡＣＥ阻害剤（ＧＷ３３３３、ＧＷ００５またはＧＷ０２２）；およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性のＴＮＦ結合性タンパク質；例えば、Arthritis & Rheumatism(1996)、Vol. 39、No. 9(supplement)、S284;Amer. J. Physiol.-Heart and Circulatory Physiology(1995)、Vol. 268、pp. 37-42を参照のこと)。好ましいTNFアンタゴニストは、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント（例えば、ｐ５５またはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧおよびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤である。
【０１３６】
他の実施形態において、本明細書中に記載されるＩＬ−２１アンタゴニスト／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは下記の１つまたは複数との組合せで投与することができる：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば、可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）、および／または、ＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２アンタゴニスト、例えば、ＤＡＢ  ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ  ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ；例えば、Arthritis & Rheumatism(1993)、Vol. 36、1223を参照のこと）、および／または、ＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば、抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ；Protein Design Labs、Cancer Res.(1990)Mar 1、50(5):1495-502）。さらに別の組合せには、非枯渇性の抗ＣＤ４阻害剤（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ  ２１０３９６（非枯渇性の霊長類化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ））との組合せでのＩＬ−２１アンタゴニストが含まれる。さらに他の好ましい組合せには、共刺激性経路のＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニスト（抗体、可溶性受容体またはアンタゴニスト性リガンドを含む）；ならびに、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症性サイトカイン、例えば、ＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０  ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３およびＴＧＦならびにそのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）が含まれる。
【０１３７】
他の実施形態において、１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、１つまたは複数の抗炎症性薬物、免疫抑制剤、または代謝阻害剤もしくは酵素阻害剤と同時配合および／または同時投与することができる。本明細書中に記載されるＩＬ−２１アンタゴニストとの組合せで使用することができる薬物または阻害剤の非限定的な例には、下記の１つまたは複数が含まれるが、それらに限定されない：非ステロイド系抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）、例えば、イブプロフェン、テニダプ（例えば、Arthritis & Rheumatism(1996)、Vol. 39、No. 9(supplement)、S280を参照のこと)、ナプロキセン（例えば、Neuro Report(1996)、Vol. 7、pp.1209-1213を参照のこと）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナクおよびインドメタシン；スルファサラジン（例えば、Arthritis & Rheumatism(1996)、Vol. 39、No. 9(supplement)、S281を参照のこと）；コルチコステロイド、例えば、プレドニゾロンなど；サイトカイン抑制性の抗炎症性薬物（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害剤、例えば、プリン生合成の阻害剤、葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサート（Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）；およびピリミジン生合成の阻害剤、例えば、ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えば、レフルノミド（例えば、Arthritis & Rheumatism(1996)、Vol. 39、No. 9(supplement)、S131;Inflammation Research(1996)、Vol. 45、pp. 103-107を参照のこと）。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで使用される好ましい治療剤には、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えば、レフルノミド）および葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサート）が含まれる。
【０１３８】
さらなる阻害剤の例には、下記の１つまたは複数が含まれる：コルチコステロイド（経口剤、吸入剤および局所注入剤）；免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤、例えば、シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば、可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステルラパマイシン誘導体、例えば、ＣＣＩ−７７９(Elit(2002)、Current Opinion Investig. Drugs、3(8):1249-53;Huang et al. (2002)、Current Opinion Investig. Drugs、3(2):295-304)；前炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−１など）によるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫキナーゼ阻害剤、ＮＩＫキナーゼ阻害剤、ＩＫＫキナーゼ阻害剤、ｐ３８キナーゼ阻害剤またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブおよびその変化体、ＭＫ−９６６、例えば、Arthritis & Rheumatism(1996)、Vol. 39、No. 9(supplement)、S81を参照のこと)；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、Ｒ９７３４０１（ＩＶ型ホスホジエステラーゼの阻害剤；例えば、Arthritis & Rheumatism(1996)、Vol. 39、No. 9(supplement)、S282を参照のこと）；ホスホリパーゼ阻害剤、例えば、細胞質ゾルホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤（例えば、トリフルオロメチルケトンアナログ（米国特許第６，３５０，８９２号））；血管内皮細胞増殖因子または血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤、例えば、ＶＥＧＦ阻害剤および／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤；ならびに、血管形成の阻害剤。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで使用される好ましい治療剤には、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤、例えば、シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば、可溶性ラパマイシン誘導体（例えば、エステルラパマイシン誘導体、例えば、ＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブおよびその変化体；およびホスホリパーゼ阻害剤、例えば、細胞質ゾルホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤（例えば、トリフルオロメチルケトンアナログ）が含まれる。
【０１３９】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと組み合わせることができる治療剤のさらなる例には、下記の１つまたは複数が含まれる：６−メルカプトプリン類（６−ＭＰ）；アザチオプリンスルファサラジン；メサラジン；オルサラジンクロロキン／ヒドロキシクロロキン；ペニシラミン；オーロチオマラート（筋肉内剤および経口剤）；アザチオプリン；コルヒチン；β−２アドレナリン作動性アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）；キサンチン類（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリカート；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノラートモフェチル；アデノシンアゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；およびアドレナリン作動剤。
【０１４０】
特定の免疫障害を処置または防止するための、他の治療剤との組合せでの本明細書中に開示されるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの使用が、本明細書中において、さらに詳しく議論される。
【０１４１】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、関節炎障害（例えば、ＲＡ、炎症性関節炎、若年性ＲＡ、ＯＡおよび乾癬性関節炎）を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、下記の１つまたは複数が含まれる：本明細書中に記載されるようなＩＬ−１２アンタゴニスト、ＮＳＡＩＤ；ＣＳＡＩＤ；本明細書中に記載されるようなＴＮＦ（例えば、ＴＮＦα）アンタゴニスト；本明細書中に記載されるような非枯渇性のＣＤ４抗体；本明細書中に記載されるようなＩＬ−２アンタゴニスト；抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦα）またはそのアゴニスト；本明細書中に記載されるようなＩＬ−１アンタゴニストまたはＩＬ−１受容体アンタゴニスト；本明細書中に記載されるようなホスホジエステラーゼ阻害剤；本明細書中に記載されるようなＣＯＸ−２阻害剤；Ｉｌｏｐｒｏｓｔ（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S82を参照のこと）；メトトレキサート；サリドマイド（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S282を参照のこと）およびサリドマイド関連薬物（例えば、Ｃｅｌｇｅｎ）；レフルノミド；プラスミノーゲン活性化の阻害剤、例えば、トラネキサム酸（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S284を参照のこと）；サイトカイン阻害剤、例えば、Ｔ−６１４（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S282を参照のこと）；プロスタグランジンＥ１（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S282を参照のこと）；アザチオプリン（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S281を参照のこと）；インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）の阻害剤；ｚａｐ−７０阻害剤および／またはｌｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはｌｃｋの阻害剤）；血管内皮細胞増殖因子または血管内皮細胞増殖因子受容体の本明細書中に記載されるような阻害剤；血管形成の本明細書中に記載されるような阻害剤；コルチコステロイド系抗炎症性薬物（例えば、ＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦ変換酵素阻害剤；インターロイキン−１１（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S296を参照のこと）；ＩＬ−１３（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S308を参照のこと）；ＩＬ−１７阻害剤（例えば、Arthritis & Rheumatism（1996）、Vol. 39、No. 9（supplement）、S120を参照のこと)；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロラムブシル；シクロホスファミド；シクロスポリン；全身リンパ系放射線照射；抗胸腺細胞グロブリン；ＣＤ５毒素；経口投与されるペプチドおよびコラーゲン；ロベンザリト二ナトリウム；サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）のＨＰ２２８およびＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオアートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．）；可溶性の補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリスルファート；ミノサイクリン；抗ＩＬ−２１Ｒ抗体；海産物脂質および植物脂質（魚類および植物種子の脂肪酸；例えば、DeLuca et al. (1995、Rheum. Dis. Clin. North Am.、21:759-777を参照のこと)；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；静注用免疫グロブリン；ジロイトン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；およびアザリビン。好ましい組合せには、メトトレキサートまたはレフルノミド、および、軽度または重症の関節リウマチの患者では、シクロスポリンとの組合せでの１つまたは複数のＩＬ−２１アンタゴニストが含まれる。
【０１４２】
関節炎障害を処置するためにＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで使用される阻害剤の好ましい例には、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦに結合するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはインビトロ作製抗体、あるいは、それらの抗原結合性フラグメント）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５またはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ  （７５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ｐ５５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２のアンタゴニスト；Ｔ細胞枯渇化剤およびＢ細胞枯渇化剤（例えば、抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体）；小分子阻害剤、例えば、メトトレキサートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ、ＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２阻害剤およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２阻害剤、Ｍｋ−２阻害剤およびＮＦκｂ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチン阻害剤またはＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば、小分子阻害剤、それらに対する抗体、例えば、Ｐ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体β（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニストが含まれる。１つまたは複数のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと同時投与および／または同時配合することができる最も好ましいさらなる治療剤には、下記の１つまたは複数が含まれる：ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５またはｐ７５のヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ  （７５  ｋＤａ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））；メトトレキサート、レフルノミド、あるいは、シロリムス（ラパマイシン）またはそのアナログ（例えば、ＣＣＩ−７７９）。
【０１４３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、多発硬化症を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、下記が含まれる：インターフェロン、例えば、インターフェロン−α１ａ（例えば、ＡＶＯＮＥＸ（商標）；Ｂｉｏｇｅｎ）およびインターフェロン−１ｂ（（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（商標）；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；コポリマー１（Ｃｏｐ−Ｉ；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（商標）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静注用免疫グロブリン；クラブリビン；本明細書中に記載されるようなＴＮＦアンタゴニスト；コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；およびチザニジン。ＩＬ−２１との組合せで使用することができるさらなるアンタゴニストには、他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）に対する抗体、あるいは、他のヒトサイトカインまたは増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）のアンタゴニストが含まれる。本明細書中に記載されるようなＩＬ−２１アンタゴニストは、細胞表面分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０）またはそれらのリガンドに対する抗体と組み合わせることができる。ＩＬ−２１アンタゴニストはまた、様々な薬剤と組み合わせることができ、例えば、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えば、イブプロフェン）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロンなど）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動剤、本明細書中に記載されるような前炎症性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤、ＩＬ−１ｂ変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤など）、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン類、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、本明細書中に記載されるような可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体、ならびに、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ）などと組み合わせることができる。
【０１４４】
ＩＬ−２１アンタゴニストが組み合わされ得る、多発性硬化症のための治療剤の好ましい例には、インターフェロン−ｂ（例えば、ＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ）；コパキソン、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体、ＩＬ−１２アンタゴニストが含まれる。
【０１４５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、炎症性腸疾患（クローン病；潰瘍性大腸炎）を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、下記が含まれる：ブデノシド；上皮増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチラート類；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニルイミダゾール化合物；本明細書中に記載されるようなＴＮＦアンタゴニスト；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦｂの各サイトカインまたはそのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１１；プレドニゾロン、デキサメタゾンまたはブデノシドのグルクロニドコンジュゲート化プロドラッグまたはデキストランコンジュゲート化プロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオアートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．）；可溶性の補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．）；徐放性メサラジン；メトトレキサート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカイン。
【０１４６】
１つの実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、免疫応答（例えば、移植拒絶、移植片対宿主病、または、他の免疫応答関連障害）を調節することに関与する他の標的に向けられた１つまたは複数の抗体との組合せで使用することができる。本発明のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、免疫応答を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、下記が含まれる：細胞表面分子またはそのリガンドに対する抗体（これには、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体−ａ）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）（これらに限定されない）に対する抗体が含まれる）。さらに別の実施形態において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、コルチコステロイド；シロリムス（ラパマイシン）およびそのアナログ（例えば、ＣＣＩ−７７９）；シクロスポリンＡ；ＦＫ５０６；ＦＴＹ７２０；アザチオプリン；シクロホスファミド；メトトレキサート；抗ＩＬ−２Ｒ抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ）；ｃＡ２（キメラな抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＣＤ３抗体（例えば、ｍｕｒｏｍｏｎａｂ−ＣＤ３）；コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（商標）；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）；デオキシスペルグアリン；およびミコフェノラートモフェチルとの組合せで使用することができる。
【０１４７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、乾癬および他の皮膚状態を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、下記の１つまたは複数が含まれる：ＣＤ２相互作用またはＬＦＡ−３相互作用の阻害剤（例えば、可溶性のＣＤ２ポリペプチドまたはＬＦＡポリペプチド（例えば、Ｆｃ融合体など）、あるいは、ＣＤ２またはＬＦＡ−３に対する抗体）、シクロスポリンＡ、プレドニゾン、ＦＫ５０６、メトトレキサート、ＰＵＶＡ、ＵＶ光、ステロイド、レチノイド、インターフェロンまたはナイトロジェンマスタード。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストとの組合せで使用することができる好ましい薬剤の例には、シクロスポリンＡおよびメトトレキサートが含まれる。
【０１４８】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、喘息を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、本明細書中に記載されるように、下記の１つまたは複数が含まれる：吸入気管支拡張剤、例えば、ピルブテロール、ビトルテロール、メタプロテレノール；β２−アドレナリン受容体アゴニスト、例えば、アルブテロール、テルブタリン、サルメテロール、ホルモテロール；抗ムスカリン剤、例えば、イプラトロピウム、オキシトロピウム；全身性コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン；吸入コルチコステロイド、例えば、フルチカゾン、ブデソニド、ベクロメタゾン、モメタゾン；ロイコトリエンアンタゴニスト、例えば、モンテルカストナトリウム、ザフィルルカスト；マスト細胞安定化剤、例えば、クロモリンナトリウム、ネドクロミル；オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（商標）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；またはＣＯＸ−２阻害剤。
【０１４９】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストが組み合わされ得る、狼瘡（例えば、ＳＬＥ）を処置または防止するための薬剤の非限定的な例には、下記の１つまたは複数が含まれる：ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−６抗体または抗ＩＬ−６Ｒ抗体；ＮＳＡＩＤ；コルチコステロイド、例えば、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン；アザチオプリン、シクロホスファミド、ヒドロキシクロロキンまたはクロロキン。
【０１５０】
従って、本発明の別の態様は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと、他の治療剤化合物との併用投与を行うためのキットに関連する。１つの実施形態において、キットは、医薬用キャリアに配合された１つまたは複数の結合性因子と、１つまたは複数の別個の医薬調製物に適するように配合された少なくとも１つの薬剤（例えば、治療剤）とを含む。
【０１５１】
例示的障害
関節リウマチは、関節における痛み、腫れ、硬直および機能喪失を引き起こす自己免疫炎症性疾患である。関節リウマチは対称的なパターンで現れることが多い。この疾患は、手関節、および、手に最も近い指の関節を冒し得る。この疾患はまた、関節のほかに、身体の他の部分も冒し得る。加えて、関節リウマチを有する人々は、疲労、時々の発熱、および、全身的倦怠を有する場合がある。関節リウマチを診断するための陽性因子には、「リウマチ因子」血中抗体およびシトルリン抗体が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、関節リウマチ、あるいは、関節リウマチの１つまたは複数の症状を処置、防止または緩和することにおいて有用であり得る。
【０１５２】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、様々な身体組織に対する炎症および損傷をもたらす自己免疫障害である。ＳＬＥは、自身のＤＮＡに向けられた自己抗体によって媒介され得る。狼瘡は、関節、皮膚、腎臓、心臓、肺、血管および脳をはじめとする身体の多くの部分を冒し得る。様々な症状が現れ得るが、最も一般的な症状のいくつかには、極度の疲労、痛みまたは腫れた関節（関節炎）、説明できない発熱、皮膚の発疹、および、腎臓の問題（例えば、糸球体腎炎）が含まれる。狼瘡の例示的な症状には、痛みまたは腫れのある関節、説明できない発熱、および、極度の疲労が含まれる。特徴的な赤い皮膚発疹が鼻および頬の全体に現れる場合がある。発疹はまた、顔および耳、上腕、肩、胸ならびに手にも生じる場合がある。狼瘡の他の症状には、胸の痛み、脱毛、貧血、口内炎、ならびに、寒さおよびストレスから生じる蒼白または紫色の指およびつま先が含まれる。一部の人々はまた、頭痛、めまい、うつ病、錯乱または発作を経験する。ＳＬＥ診断のための陽性因子には、循環している抗核抗体、抗ＤＮＡ抗体および抗Ｓｍ抗体が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、ＳＬＥ、あるいは、ＳＬＥの１つまたは複数の症状を処置、改善（緩和）または防止することにおいて有用であり得る。
【０１５３】
硬直性脊椎炎は、脊椎を冒すだけでなく、骨および関節の周りの腱および靱帯が炎症し、痛みおよび硬直をもたらすように、股関節、肩および膝もまた冒すことがある自己免疫障害である。硬直性脊椎炎は後期思春期または初期青年期の人々を冒す傾向がある。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、硬直性脊椎炎、あるいは、その１つまたは複数の症状を処置、防止または緩和することにおいて有用であり得る。
【０１５４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、腸における炎症を引き起こす疾患についての一般的な名称である。炎症性腸疾患の２つの例がクローン病および潰瘍性大腸炎である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、炎症性腸疾患、あるいは、炎症性腸疾患の１つまたは複数の症状を処置、防止または緩和することにおいて有用であり得る。
【０１５５】
クローン病は小腸における炎症を引き起こす。クローン病は、通常的には小腸の下部部分（回腸）に生じるが、しかし、口から肛門までの消化管の任意の部分を冒し得る。炎症は罹患器官の内膜内に深く広がることがあり、痛みをもたらし、また、腸をしばしば空にし、下痢をもたらす。クローン病の最も一般的な症状は、腹痛（下部右側領域であることが多い）および下痢である。直腸出血、体重減少および発熱もまた生じる場合がある。出血は重篤かつ持続的である場合があり、貧血をもたらす。腸の直接的な映像化は、炎症の程度を明らかにするために有用である場合がある。
【０１５６】
潰瘍性大腸炎は、大腸の内膜における炎症およびただれ（潰瘍と呼ばれる）を引き超す疾患である。炎症は通常、直腸、および、結腸の下部部分に生じるが、しかし、結腸全体を冒す場合がある。潰瘍性大腸炎は、回腸末端と呼ばれる末端部を除いて、小腸を冒すことは希である。炎症は回腸をしばしば空にし、下痢を引き起こす。潰瘍が、炎症により、結腸の内側を覆う細胞が死んだところに形成される；潰瘍は出血し、膿を生じさせる。潰瘍性大腸炎の最も一般的な症状は腹痛および出血性下痢である。患者はまた、疲労、体重減少、食欲喪失、直腸出血、ならびに、体液および栄養分の喪失を経験する場合がある。患者の約半数は症状が軽症である。他の患者は、頻繁な発熱、出血性下痢、悪心、および、重篤な腹部痙攣を経験する。潰瘍性大腸炎はまた、さまざまな問題（例えば、関節炎、眼の炎症、肝臓疾患（肝炎、肝硬変および原発性硬化性胆管炎）、骨粗鬆症、皮膚発疹および貧血など）を引き起こす場合がある。潰瘍性大腸炎の診断は、典型的には、血便の特定、および、結腸の直接的な映像化に依存する。
【０１５７】
乾癬は、鱗屑および炎症の慢性的な皮膚疾患である。乾癬は、皮膚細胞が皮膚の表面の下方のその起源から迅速に現れ、かつ、その細胞が成熟する機会を有する前に表面に積み重なるときに生じる。通常、この移動（これはまた回転とも呼ばれる）は約１ヶ月を要するが、乾癬では、ほんの数日で生じることがある。その典型的な形態において、乾癬は、銀色の鱗片で覆われた密集する炎症した皮膚領域をもたらす。このような領域は、プラークと呼ばれることがあり、通常の場合には痒いか、または、ヒリヒリ感じる。このような領域は、肘、膝、脚の他の部分、頭皮、下部背中、顔、手のひら、および、足の裏に生じることが多く、しかし、身体表面のどこでも皮膚に生じ得る。乾癬の診断は主にこれらの特徴的な症状に基づいている。皮膚生検は診断において有用であり得る。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、乾癬、あるいは、乾癬の１つまたは複数の症状を処置、防止または緩和することにおいて有用であり得る。乾癬性関節炎が乾癬（鱗屑性皮膚障害）患者の一部において生じる。乾癬性関節炎は、多くの場合、指および足指の末端での関節を冒し、指の爪および足指の爪の変形が付随する。脊椎が関与するならば、背中の痛みが生じる場合がある。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、乾癬、あるいは、乾癬または乾癬性関節炎の１つまたは複数の症状を処置、防止または緩和することにおいて有用であり得る。
【０１５８】
腎糸球体疾患には、増殖性障害および非増殖性障害の両方が含まれる。糸球体腎炎は、腎糸球体内の炎症および細胞増殖を伴って現れる障害である（例えば、Hricik et al. (1998）、New Eng. J. Med.、339:888-99を参照のこと）。非増殖性および硬化性の腎糸球体症には、膜性腎糸球体症、糖尿病性腎糸球体症、巣状分節性腎糸球体硬化症、菲薄基底膜疾患、アミロイドーシス、軽鎖腎症、ＨＩＶ腎症、アルポート症候群、薬物誘導による腎糸球体症、および、微小変化群が含まれる。炎症を伴う腎糸球体疾患は、主として、自己免疫から生じる抗体媒介による腎糸球体の傷害のために生じる。体液性免疫の活性化により、腎糸球体細胞表面（例えば、基底膜）に対する抗体の産生がもたらされ得るし、循環している抗原−抗体複合体が腎糸球体内に堆積する。これが糸球体腎炎の病理の一因であると報告されている。従って、腎糸球体傷害および糸球体腎炎は、より大きな全身的自己免疫障害（例えば、ＳＬＥ、肝炎および線維化障害など）から生じることが多い。糸球体腎炎はまた、ＩｇＡ腎症、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、感染（例えば、細菌、ウイルス、原虫によって引き起こされる）、脈管炎、クリオグロブリン血症、遺伝性腎炎、肉芽腫症（例えば、ヴェーゲナー肉芽腫症、微視的多発性血管炎（microscopic polyangitis）およびチャーグ−ストラウス症候群）、腎糸球体基底膜疾患、グッドパスチャー症候群、腎炎症候群（例えば、糖尿病、狼瘡（例えば、ＳＬＥ）、アミロイドーシス、薬物使用、ガンおよび感染とともに生じるような腎炎症候群）、リポジストロフィー、鎌状赤血球疾患、補体不全、膜増殖性糸球体腎炎、狼瘡腎炎および狼瘡膜性腎症に関連する場合がある。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、糸球体腎炎、あるいは、糸球体腎炎および腎糸球体疾患の１つまたは複数の症状を処置、改善または防止することにおいて有用であり得る。
【０１５９】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、例えば、臓器、組織または細胞（例えば、心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓または骨髄）の移植前または移植期間中または移植後において、組織／移植片拒絶、または、拒絶に関連する症状を防止または処置するために使用することができる。移植／移植片拒絶は、宿主生物の免疫系が、移植された組織（例えば、同系組織、同種組織または異種組織）における非自己抗原に対する免疫応答を生じさせるときに生じる。拒絶は、例えば、抗体またはリンパ球または両者によって媒介され得るし、また、例えば、超急性拒絶（例えば、移植後早期の期間中）、急性拒絶および慢性的拒絶（一般には、移植片機能の進行性の低下を引き起こすゆっくり発症するプロセス）を含めて、様々な異なる方法で現れ得る。拒絶は、炎症が付随することが多く、移植された組織または臓器の損傷および／または機能不全（例えば、血管障害、線維化、または、臓器機能の喪失）を生じさせ得る。拒絶期間中、宿主は、全身的な不快、移植の領域での痛みまたは腫れ、および／または、発熱を経験する場合がある。臓器および組織の移植体は、例えば、拒絶の徴候について生検試料を調べることによって、または、臓器機能を評価することによって、拒絶についてモニターすることができる。拒絶の組織病理学的徴候には、例えば、ＨＬＡクラスＩＩ抗原の増大した発現（例えば、腎臓移植後における尿細管細胞において）が含まれる。肝臓機能を、例えば、ビリルビンおよび肝臓酵素（例えば、アルカリホスファターゼ）の血清中レベルを測定することによって評価することができる。腎臓機能を、例えば、血清中のクレアチンレベルを測定することによって評価することができる。
【０１６０】
変形性関節症（ＯＡ）は、関節における軟骨の破壊によって特徴づけられる。これは軟骨下の骨を一緒にこすれさせ、これにより、痛み、腫れ、および、関節の運動喪失を引き起こす。時間ととともに、関節はその正常な形状を失う場合があり、また、骨棘突起または骨棘が関節の縁で成長する場合がある。加えて、骨または軟骨の小片がはがれ、関節空間の内部に漂い、これにより、より大きな痛みおよび損傷を引き起こす。ＯＡを有する人々は、典型的には、関節の痛みおよび制限された動きを有する。いくつかの他の形態の関節炎とは異なり、ＯＡは関節のみを冒すだけであり、体内器官は冒さない。ＯＡの診断のための陽性因子には、Ｘ線によって認められるような軟骨の喪失が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、ＯＡ、あるいは、ＯＡの１つまたは複数の症状を処置、防止または緩和することにおいて有用であり得る。
【０１６１】
呼吸器障害
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストは、喘息（例えば、アレルギー性喘息および非アレルギー性喘息）；気管支炎（例えば、慢性気管支炎）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（例えば、気腫、例えば、タバコ誘導による気腫）；気道炎症、好酸球増加症、線維化および過度な粘液産生を伴う状態（例えば、嚢胞性線維症、肺線維症およびアレルギー性鼻炎）（これらに限定されない）をはじめとする呼吸器障害を処置するために使用することができる。
【０１６２】
喘息を処置または防止するための方法では、外因性喘息（これはまた、アレルギー性喘息またはアトピー性喘息として知られている）、内因性喘息（これはまた、非アレルギー性喘息または非アトピー性喘息として知られている）、または、両者の組合せ（これは混合型喘息と呼ばれている）のための方法が含まれる。外因性喘息またはアレルギー性喘息には、例えば、アレルゲン（例えば、花粉、胞子、草または雑草、ペットの鱗屑、ダスト、ダニなど）によって引き起こされるか、または、そのようなアレルゲンに関連する発生が含まれる。アレルゲンおよび他の刺激物質が年間を通して様々な時点で現れるので、これらのタイプの発生はまた季節性喘息とも呼ばれる。外因性喘息の群にはまた、気管支喘息およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症が含まれる。
【０１６３】
本発明の方法によって処置または緩和され得る喘息には、感染性因子（例えば、ウイルス（例えば、風邪および流感ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス、ライノウイルスおよびインフルエンザウイルス）によって引き起こされる喘息が含まれる。ＲＳＶ、ライノウイルスおよびインフルエンザウイルスの感染が小児では一般的であり、ウイルス感染が乳幼児および若年小児における気道の病気の主要な原因の１つである。ウイルス性気管支炎の小児は慢性的な喘鳴および喘息を発症し得るが、これらは、本発明の方法を使用して処置することができる。運動および／または冷気によって一部の喘息患者において生じ得る喘息状態もまた含まれる。本発明の方法は、煙暴露（例えば、タバコ誘導および工場の煙）、ならびに、産業的および職業的な暴露（例えば、煤煙など）；オゾン；有害ガス；二酸化イオウ；亜酸化窒素；塗料、プラスチック、ポリウレタン、ニスなどに由来する蒸気（イソシアナートを含む）；木材ダスト、植物ダストまたは他の有機ダスト；その他に関連する喘息について有用である。本発明の方法はまた、食品添加物、保存剤または薬理学的薬剤に関連する喘息発生についても有用である。無症状喘息または咳喘息として示されるタイプの喘息を処置、阻害または緩和するための方法もまた含まれる。
【０１６４】
本明細書中に開示される方法はまた、気管支収縮を刺激し得る、胃食道逆流（ＧＥＲＤ）に関連する喘息の処置および緩和のために有用である。ＧＥＲＤは、保持された体分泌液、抑制された咳、ならびに、寝室におけるアレルゲンおよび刺激物質に対する暴露と並んで、夜間喘息または夜間性喘息と総称されている喘息状態の一因になり得る。ＧＥＲＤに関連する喘息を処置、阻害または緩和する方法では、医薬的に効果的な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストを、ＧＥＲＤを処置するための薬剤の医薬的に効果的な量との組合せで本明細書中に記載されるように使用することができる。このような薬剤には、プロトンポンプ阻害剤、例えば、ＰＲＯＴＯＮＩＸ（登録商標）の商品名の遅延放出パントプラゾールナトリウム錠剤、ＰＲＩＬＯＳＥＣ（登録商標）の商品名のオメプラゾール遅延放出カプセル、ＡＣＩＰＨＥＸ（登録商標）の商品名のレベプラゾールナトリウム遅延放出錠剤、または、ＰＲＥＶＡＣＩＤ（登録商標）の商品名の遅延放出ランソプラゾールカプセルが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６５】
アトピー性障害およびその症状
「アトピー性」は、アレルギー反応を発症する遺伝的傾向が多くの場合には存在する一群の疾患を示す。アトピー性障害の例には、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎および枯草熱が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路アンタゴニストを、アトピー性障害、あるいは、その症状の１つまたは複数を改善するために投与することができる。
【０１６６】
アレルギー性鼻炎（枯草熱）の症状には、痒い鼻、粘液分泌の鼻、くしゃみ性の鼻、または、鼻詰まり、および、痒い眼が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路アンタゴニストを、これらの症状の１つまたは複数を改善するために投与することができる。
【０１６７】
アトピー性皮膚炎は、皮膚を冒す慢性的疾患である。アトピー性皮膚炎に関する情報を、例えば、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ０３−４２７２から入手可能である。アトピー性皮膚炎では、皮膚は極めて痒くなり、赤色、腫れ、亀裂、透明な流体の滲出、ならびに、最終的には、痂皮化および落屑をもたらし得る。多くの場合において、疾患が悪化する期間（これは憎悪またはフレアと呼ばれる）が存在し、その後、皮膚が完全に改善または治る期間（これは寛解と呼ばれる）が存在する。アトピー性皮膚炎は「湿疹」と呼ばれることが多い（この用語は、皮膚の数タイプの炎症についての一般的な用語である）。アトピー性皮膚炎は多くのタイプの湿疹の中で最も一般的なものである。アトピー性皮膚炎の例には、次のものが含まれる：アレルギー性の接触湿疹または接触皮膚炎（これは、例えば、皮膚が異物（例えば、ウルシ、または、クリームおよびローションにおけるある種の保存剤など）と接触した場合における赤色の痒みをともなう滲出反応として時々現れる）；接触性湿疹（例えば、皮膚がアレルゲンまたは刺激物質（例えば、酸、洗浄剤または化学物質）と接触した場合における、赤色、痒みおよび灼熱感を含む局所的な反応）；異汗性湿疹（例えば、痒く、ヒリヒリする透明で、深い水疱によって特徴づけられる、手のひらおよび足の裏における皮膚の炎症）；神経皮膚炎（例えば、かいたときに、強く刺激される局所的な痒み（例えば、昆虫咬傷など）によって引き起こされる、頭部、下部脚、手首または前腕における皮膚のうろこ状領域）；貨幣状湿疹（例えば、痂皮化、落屑および極めて痒くなり得る、炎症した皮膚のコイン形状領域（腕、背中、臀部および下部脚において最も一般的である）として現れる）；脂漏性湿疹（例えば、頭皮、顔、および、時々ではあるが、身体の他の部分における黄色がかった油性のうろこ状領域として現れる）。さらなる具体的な症状には、うっ滞性皮膚炎、アトピー性プリーツ（例えば、Ｄｅｎｎｉｅ−Ｍｏｒｇａｎ皺襞）、口唇炎、ハイパーリニア（hyperlinear）掌、色素沈着過多なまぶた；炎症または枯草熱、魚鱗癬、毛孔性角化症、苔癬、丘疹およびじんま疹から生じる、色がより濃くなっているまぶたが含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路アンタゴニストを、これらの症状の１つまたは複数を改善するために投与することができる。
【０１６８】
線維化障害
コラーゲンの産生は非常に調節されたプロセスではあるが、その乱れは組織線維化の発達をもたらし得る。線維性物質の異常な蓄積は究極的には臓器不全をもたらし得る(Border et al. (1994)、New Engl. J. Med.、331:1286-92)。いずれかの臓器に対する傷害は、常同的な生理学的応答（血小板誘導によるうっ血）、それに続く、炎症性細胞および活性化された線維芽細胞の流入をもたらし得る。これらの細胞タイプに由来するサイトカインにより、新しい細胞外マトリックスおよび血管（肉芽組織）の形成が促進される。肉芽組織の生成は、プロテアーゼ阻害剤および細胞外マトリックスタンパク質の発現がアップレギュレーションされ、かつ、プロテアーゼの発現が低下し、それらにより、細胞外マトリクスの蓄積をもたらす入念に協奏されたプログラムである。
【０１６９】
線維化状態の発達は、誘導的または自然発症的のいずれかであっても、少なくとも部分的には、線維芽細胞の活性が刺激されることによって引き起こされる。傷害を受けた臓器への炎症性細胞および活性化された線維芽細胞の流入は、主にコラーゲンを含有する間質マトリックスと相互作用するこれらの細胞タイプの能力に依存する。線維性組織の増殖に関連する疾患の多くは、例えば、皮膚疾患（例えば、強皮症など）を含めて、慢性的であり、かつ、多くの場合には衰弱性である。肺線維症を含めて、一部の疾患は、ひとつには、この疾患に対する現在利用可能な処置は著しい副作用を有しており、また、線維化の進行を遅延または停止させることにおいて一般には有効でないという事実のために、致死的であり得る(Nagler et al. (1996)、Am. J. Respir. Crit. Care Med.、154:1082-86)。
【０１７０】
線維化障害には、線維化によって特徴づけられる障害、たとえば、体内器官の線維化、皮膚の線維化性障害、および、眼の線維化状態が含まれる。体内器官（例えば、肝臓、肺、腎臓、心臓血管、胃腸管）の線維化が、肺線維症、骨髄線維症、肝硬変、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、腎臓間質性線維症、シクロスポリンを受けている患者における腎臓線維症、および、ＨＩＶ関連腎症などの障害において生じる。
【０１７１】
皮膚の線維化性障害には、例えば、強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、家族性皮膚コラゲノーマ、および、コラーゲンタイプの結合組織母斑が含まれる。眼の線維化状態には、糖尿病網膜症、手術後痕形成（例えば、緑内障ろ過手術後および斜視手術後）および増殖性硝子体網膜症が含まれる。
【０１７２】
本発明の方法によって処置することができるさらなる線維化状態には、関節リウマチ、長期間にわたる関節痛および悪化した関節に関連する疾患、全身性硬化症（進行性全身性硬化症を含む）、多発性筋炎、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、限局性強皮症（局在化された強皮症）、レイノー症候群および鼻ポリポーシスが含まれる。
【０１７３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路アンタゴニストを、線維化障害を処置または防止するために、あるいは、これらの障害の症状の１つまたは複数を改善するために投与することができる。
【０１７４】
サイトカイン産生および細胞増殖／分化の調節剤としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの活性を測定するための方法
サイトカイン産生および細胞増殖／分化の調節剤としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストの活性を、細胞株（３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（ｐｒｅＢ  Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅおよびＣＭＫ（これらに限定されない）を含む）についての数多くの日常的な因子依存的細胞増殖アッセイのいずれか１つを使用して調べることができる。
【０１７５】
Ｔ細胞または胸腺細胞の増殖についてのアッセイには、限定されないが、下記に記載されるアッセイが含まれる：Current Protocols in Immunology、Ed by. J. E. Coligan、A. M. Kruisbeek、D. H. Margulies、E. M. Shevach、W Strober、pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience(Chapter 3、In vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19;Chapter 7、Immunologic studies in Humans);Takai et al. (1986)、J. Immunol.、137:3494-500;Bertagnolli et al. (1990)、J. Immunol.、145:1706-12;Bertagnolli et al. (1991)、Cellular Immunology、133:327-41;Bertagnolli et al. (1992)、J. Immunol.、149:3778-83;Bowman et al. (1994)、J. Immunol.、152:1756-61。脾臓細胞、リンパ節細胞または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖についてのアッセイには、限定されないが、下記に記載されるアッセイが含まれる：ポリクローナルＴ細胞の刺激(Polyclonal T cell stimulation)、Kruisbeek, A. M. and Shevach, E. M.、Current Protocols in Immunology、J. E. e.a. Coligan eds. Vol 1、pp. 3.12.1-3.12.14、John Wiley and Sons、Toronto、1994；および、マウスおよびヒトのインターフェロンガンマの測定(Measurement of mouse and human Interferon gamma)、Schreiber, R. D.、Current Protocols in Immunology、J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1、pp. 6.8.1-6.8.8、John Wiley and Sons、Toronto、1994。
【０１７６】
造血系細胞およびリンパ球生成細胞の増殖および分化についてのアッセイには、限定されないが、下記に記載されるアッセイが含まれる：ヒトおよびマウスのインターロイキン２およびインターロイキン４の測定(Measurement of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4)、Bottomly, K.、Davis, L. S. and Lipsky, P. E、Current Protocols in Immunology、J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1、pp. 6.3.1-6.3.12、John Wiley and Sons、Toronto、1991;deVries et al. (1991)、J. Exp. Med.、173:1205-11;Moreau et al. (1988)、Nature、336:690-92;Greenberger et al. (1983)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、80:2931-38；マウスおよびヒトのインターロイキン６の測定(Measurement of mouse and human Interleukin 6)、Nordan, R.、Current Protocols in Immunology、J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1、pp. 6.6.1-6.6.5、John Wiley and Sons、Toronto、1991;Smith et al. (1986)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、83:1857-61；ヒトインターロイキン１１の測定(Measurement of human Interleukin 11)、Bennett, F.、Giannotti, J.、Clark, S. C. and Turner, K. J.、Current Protocols in Immunology、J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1、pp. 6.15.1、John Wiley and Sons、Toronto、1991；マウスおよびヒトのインターロイキン９の測定(Measurement of mouse and human Interleukin 9)、Ciarletta, A.、Giannotti, J.、Clark, S. C. and Turner, K. J.、Current Protocols in Immunology、J. E.e.a. Coligan eds. Vol 1、pp. 6.13.1、John Wiley and Sons、Toronto、1991。
【０１７７】
抗原に対するＴ細胞クローンの応答についてのアッセイ（これは、増殖およびサイトカイン産生を測定することによって、なかでも、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用ならびに直接的なＴ細胞効果に影響を及ぼすタンパク質を特定する）には、限定されないが、下記に記載されるアッセイが含まれる：Current Protocols in Immunology、Ed by. J. E. Coligan、A. M. Kruisbeek、D. H. Margulies、E. M. Shevach、W Strober、pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience(Chapter 3、In vitro assays for Mouse Lymphocyte Function;Chapter 6、Cytokines and their cellular receptors;Chapter 7、Immunologic studies in Humans);Weinberger et al. (1980)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、77:6091-95;Weinberger et al. (1981)、Eur. J. Immun.、11:405-11;Takai et al. (1986)、J. Immunol.、137:3494-500;Takai et al. (1988)、J. Immunol.、140:508-12。
【実施例】
【０１７８】
本発明を下記の非限定的な実施例においてさらに例示する。
【０１７９】
実施例１：マウスＭＵ−１のｃＤＮＡの単離および特徴づけ
ＭＵ−１受容体のマウスホモログの部分フラグメントを、ヒト配列に由来するオリゴヌクレオチドを使用するＰＣＲによって単離した。ｃＤＮＡを、１７日齢のマウスの胸腺から単離されたＲＮＡ、および、２Ｄ６  Ｔ細胞株から単離されたＲＮＡから調製した。約３００ヌクレオチドのＤＮＡフラグメントを、図１におけるヒトｃＤＮＡ配列（配列番号１に対応する）の領域５８４〜６０３および領域８７６〜８９６にそれぞれ対応する下記のオリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲによってｃＤＮＡから増幅した：
ＡＧＣＡＴＣＡＡＧＣＣＧＧＣＴＣＣＣＣＣ  （５ｐ）（配列番号１１）
ＣＴＣＣＡＴＴＣＡＣＴＣＣＡＧＧＴＣＣＣ  （３ｐ）（配列番号１２）
増幅を、９４℃で１分間、５０℃で１分間および７２℃で１分間の３０サイクルにわたって、１．５ｍＭの塩化マグネシウムを含有する１Ｘ  Ｔａｑ緩衝液においてＴａｑポリメラーゼを使用して行った。このフラグメントのＤＮＡ配列を決定し、２つのオリゴヌクレオチドが、下記の配列を有するこのフラグメントの内部部分から得られた：
ＴＴＧＡＡＣＧＴＧＡＣＴＧＲＧＧＣＣＴＴ  （５Ｐ）（配列番号１３）
ＴＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡ  （３Ｐ）（配列番号１４）
【０１８０】
これらのオリゴヌクレオチドを使用して、最初のＰＣＲ産物の２６２ヌクレオチドの内部フラグメント（図１におけるマウスｃＤＮＡ配列（配列番号９）のヌクレオチド７８１〜１０４３に対応する）を、２Ｄ６  Ｔ細胞株から単離されたｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのハイブリダイゼーションプローブとして使用するために増幅した。フィルターとして、標準的な５Ｘ  ＳＳＣハイブリダイゼーション条件を使用して６５℃でハイブリダイゼーションし、ＳＳＣにおいて６５℃で洗浄した。４２６，０００個のクローンのスクリーニングにおいてプローブにハイブリダイゼーションした２０個のクローンを単離した。ＤＮＡ配列を２つの独立したクローンから決定した。クローン＃６の全長配列がヒトＭＵ−１の全長のマウスホモログ（配列番号９）であることが確認された。
【０１８１】
マウスＭＵ−１の全長ヌクレオチド配列を図１に示す（これは配列番号９に対応する）。このヌクレオチド配列は、予測されるリーダー配列をヌクレオチド４０７〜４６４に有し、コード配列をヌクレオチド４０７〜１９９３に有し、終結コドンをヌクレオチド１９９４〜１９９６に有する。ヌクレオチド１〜４０６は５’非翻訳領域に対応し、ヌクレオチド１９９７〜２６２８は３’非翻訳領域に対応する（配列番号９）。
【０１８２】
マウスＭＵ−１の予測されるタンパク質配列を図２に示す（これは配列番号１０に対応する）。このマウスＭＵ−１タンパク質は、ＳＰＳｃａｎ（スコア＝１０．１）によって決定された予測されるリーダー配列（配列番号１０のアミノ酸１〜１９に対応する）、および、予測される膜貫通ドメイン（配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３に対応する）を含有する。予測されるシグナル伝達モチーフには、図２Ｂにおける下記の領域が含まれる：Ｂｏｘ１：配列番号１０のアミノ酸２６５〜２７４；Ｂｏｘ２：配列番号１０のアミノ酸３１０〜３２４；配列番号１０の２８１位、３１９位、３６１位、３６８位、３９７位および５１０位における６個のチロシン残基。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位には、ＳＴＡＴ５：ＥＤＤＧＹＰＡ（配列番号２０）、ＳＴＡＴ３：ＹＬＱＲが含まれる。
【０１８３】
実施例２：ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１の比較
ＧＡＰアルゴリズムを使用して、ヒトＭＵ−１およびマウスＭＵ−１のアミノ酸配列を比較した。ヒトＭＵ−１を、ＧｅｎＢａｎｋデータベースを検索するためのヒトＩＬ−５受容体の７０アミノ酸の領域（配列番号３）、ならびに、ＰＣＲ用プライマー（配列番号４および配列番号５）およびハイブリダイゼーションオリゴヌクレオチド（配列番号６および配列番号７）を使用してクローン化した。マウスおよびヒトの予測されるタンパク質配列の比較を図４に示す。これらのアミノ酸は、ＧＡＰアルゴリズムを使用したとき、同一性が６５．２６７％であった。アラインメントを、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換行列(Henikoff and Henikoff(1992)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、89:10915-19)によって作製した。ギャップパラメーター＝ギャップ加重：８、平均マッチ＝２．９１２、長さ加重＝２、平均ミスマッチ＝−２．００３；パーセント類似性＝６９．４６６。
【０１８４】
ヒトおよびマウスのｃＤＮＡヌクレオチド配列の比較を図３に示す。これらのＤＮＡ配列は、ＧＡＰアルゴリズムを使用してアラインメントされたとき、同一性が６６．１１６％である。ギャップパラメーター＝ギャップ加重：５０、平均マッチ＝１０．０００、長さ加重＝３、平均ミスマッチ＝０．０００；パーセント類似性＝６６．１９８。
【０１８５】
ヒトＭＵ−１タンパク質およびマウスＭＵ−１タンパク質はともにＩ型サイトカイン受容体スーパーファミリーのメンバーである。マウスＭＵ−１およびヒトＭＵ−１の両方の配列を評価することにより、潜在的なＢｏｘ−１およびＢｏｘ−２のシグナル伝達モチーフの存在が明らかにされた。６個のチロシン残基が細胞質ドメインに存在し、これらもまた、ＭＵ−１のシグナル伝達機能において重要であり得る。ＭＵ−１の配列をこのファミリーの他のメンバーと比較することにより、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ３のための潜在的なドッキング部位の存在が示唆された。
【０１８６】
実施例３：ヒトＭＵ−１によって使用されるＳＴＡＴシグナル伝達経路の決定
ＢＡＦ−３細胞を、ヒトＥＰＯ受容体の細胞外ドメインおよびＭＵ−１受容体の細胞内ドメインからなるキメラなサイトカイン受容体を発現するように操作した。ｈｕＥＰＯＲＪＭＵ−１（ｃｙｔｏ）キメラ受容体を発現するＢＡＦ−３細胞を、ヒト可溶性ＥＰＯに対する応答で増殖させた。これらの細胞を、どのＳＴＡＴ分子がＥＰＯのシグナル伝達に応答してリン酸化されるかを明らかにするために分析した。簡単に記載すると、コントロールの未改変の親ＢＡＦ−３細胞、および、ＥＰＯＲ／ＭＵキメラＢＡＦ−３細胞をＩＬ−３含有の成長培地から休止させ、ＩＬ−３またはＥＰＯのいずれかで、０分間、１５分間、３０分間および６０分間、再び刺激した。細胞をペレット化し、リン酸化されたチロシンを保護するためにオルトバナジン酸塩を含有する氷冷した溶解緩衝液に再懸濁した。等量の細胞溶解物をウエスタン分析のためにＳＤＳ−ＰＡＧＥによって電気泳動し、ニトロセルロースメンブランにブロットした。二連のブロットを、ＳＴＡＴ分子の各形態について特異的な抗体を使用することによって、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ６のリン酸化形態および非リン酸化形態について染色した。ＨＥＬＡ細胞（非活性化細胞、および、α−インターフェロンにより活性化された細胞）を陽性コントロールとして使用した。
【０１８７】
これらの結果は、これらの特定の条件のもとでは、ＭＵ−１を介するシグナル伝達が、調べられたすべての時点（Ｔ＝０、Ｔ＝１５’、Ｔ＝３０’、Ｔ＝６０’）でＳＴＡＴ５のリン酸化をもたらしたことを示していた。ＩＬ−３によるコントロールまたはキメラＢＡＦ−３細胞の処置は、ＳＴＡＴ１またはＳＴＡＴ５のリン酸化ではなく、ＳＴＡＴ３のリン酸化をもたらした。
【０１８８】
実施例４：マウスＭＵ−１およびヒトＭＵ−１の組織発現
実施例４．１：ノーザン分析
様々な組織に由来するポリＡ＋  ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）のノーザンブロットを製造者によって推奨されるように行った。マウスのブロットについては、図１および配列番号９のヌクレオチド７８１〜１０４３に対応する２６２ヌクレオチドのフラグメントをハイブリダイゼーションのために使用した。
【０１８９】
マウスＭＵ−１の１種類だけの転写物が、成体マウスの脾臓、肺および心臓の組織において検出された。ヒト組織において認められたより大きな転写物はマウス組織では認められなかった。
【０１９０】
ヒトＭＵ−１の２つの転写物が、成人のリンパ系組織、ＰＢＬ、胸腺、脾臓およびリンパ節において、また、胎児の肺において検出された。
【０１９１】
実施例４．２：インシトゥーハイブリダイゼーション
インシトゥーハイブリダイゼーション研究が（Lyons et al. (1990)、J. Cell. Biol.、111:2427〜36の方法に従って)Ｐｈｙｌｏｇｅｎｃｙ  Ｉｎｃ．（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ）によって行われた。簡単に記載すると、連続した５ミクロン〜７ミクロンのパラフィン切片を脱パラフィン化し、固定処理し、プロテイナーゼＫで消化し、トリエタノールアミンにより処理し、脱水した。ｃＲＮＡを、アンチセンスプローブおよびセンスプローブを作製するために線状化ｃＤＮＡテンプレートから調製した。ｃＲＮＡ転写物を製造者（Ａｍｂｉｏｎ）の条件に従って合成し、35Ｓ−ＵＴＰにより標識した。切片を一晩ハイブリダイゼーションし、ストリンジェントな条件のもとで洗浄し、ＲＮａｓｅ  Ａにより処理し、核トラック（ｔｒａｃｋ）エマルションに浸し、２週間〜３週間感光した。手順のバックグラウンドレベルを示すために、コントロールの切片をセンスプローブとハイブリダイゼーションさせた。マウスプローブは、ヌクレオチド８６０〜１０６４（配列番号９）に対応する１８６ｂｐのフラグメントからなった。ヒトプローブは、ヒトＭＵ−１  ＤＮＡから作製された２３ｂｐのＰＣＲ産物であった。
【０１９２】
マウスのＭＵ−１発現が胚中心における成体小腸のリンパ節において認められた。特殊化したリンパ節およびパイエル板もまたマウスＭＵ−１の発現を示した。
【０１９３】
ヒトＭＵ−１の発現が皮質におけるリンパ節の胚中心において検出された。マクロファージを含有する髄質はヒトＭＵ−１について陰性であった。ヒト脾臓では、ヒトＭＵ−１の発現が、赤色脾髄ではなく、白色脾髄の領域において検出された。
【０１９４】
実施例５：細胞および細胞株におけるヒトＭＵ−１の発現
ＲＮａｓｅ保護分析を、休止および活性化されたヒトＴ細胞およびＢ細胞株（ＲａｊｉおよびＲＰＭＩ８８６６）ならびにＴ細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）に対して行った。ヒトＴ細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８により活性化した。細胞株をホルボールエステルおよびイオノマイシンによって活性化した。ＭＵ−１リボプローブを産生するプラスミドを、２３ｂｐのＰＣＲ産物（ＰＣＲを、５’プライマーのＣＡＣＡＡＡＧＣＴＴＣＡＧＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＴＡＣＡＧＧＡＡＣＣＧＧＧＧＡ（配列番号１５）および３’プライマーのＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＴＴＴＡＡＣＴＣＣＴＣＴＧＡＣＴＧＧＧＴＣＴＧＡＡＡＧＡＴ（配列番号１６）を使用することによって行った）をｐＧＥＭ３ｚｆ（−）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）ベクターのＢａｍＨＩ部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位に挿入することによって構築した。リボプローブを作製するために、リボプローブ産生プラスミドをＨｉｎｄＩＩＩで線状化した。得られたＤＮＡをフェノール／クロロホルム抽出し、エタノールを用いて沈殿させた。Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを使用して、リボプローブを販売者（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって提案されるプロトコルに従って作製した。ＲＮａｓｅ保護アッセイを、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎのＲＩＢＯＱＵＡＮＴ（商標）マルチプローブリボヌクレアーゼ保護アッセイシステムを使用することによって行った。２．０μｇの総ＲＮＡが各ＲＰＡ反応液に含まれ、ＲＮａｓｅ消化後、保護されたリボプローブをＱＵＩＣＫＰＯＩＮＴ（商標）迅速核酸分離システム（Ｎｏｖｅｘ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）で泳動した。ゲルを販売者の提案に従って乾燥し、感光させた。
【０１９５】
ヒトＭＵ−１のＲＮＡが、刺激されていない集団と比較したとき、抗ＣＤ３＋  抗ＣＤ２８刺激のヒト精製ＣＤ３＋細胞ではアップレギュレーションされている。ＭＵ−１はまた、Ｔｈ１およびＴｈ２に傾斜しているＴ細胞集団では再刺激時にアップレギュレーションされる。Ｂ細胞株のＲＰＭＩ８８６６およびＲａｊｉはＭＵ−１を構成的に発現し、一方、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株はＭＵ−１を発現しない。
【０１９６】
実施例６：既知のサイトカインに対するヒトＭＵ−１の結合
ＭＵ−１に対するリガンドを特定するために、ヒトＩｇ融合タンパク質およびマウスＩｇ融合タンパク質の両方を構築し、Ｂｉａｃｏｒｅチップに固定化した。様々な細胞培養馴化培地、ならびに、一連の既知のサイトカインを、ＭＵ−１に対する結合について評価した。一部のサイトカインはまた、ＭＵ−１が第２の受容体鎖をリガンド結合のために要求しているかもしれないという可能性を検討するために、ファミリー内の他の受容体鎖との組合せでも調べた。下記のサイトカインが調べられ、ＭＵ−１との結合について陰性であることが見出された：ｍ１Ｌ−２、ｈＩＬ−２、ｈＩＬ−１５、ｍＩＬ−７、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−７、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−７Ｒ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−７ｇ、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−２、ＴＳＬＰ＋ＩＬ−２＋ＩＬ−２Ｒｂｅｔａ、ＩＬ２−Ｒｂｅｔａ、ＩＬ−２Ｒｇａｍｍａ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−２＋ＩＬ−２Ｒｂｅｔａ、ＩＬ−２＋ＩＬ−２Ｒｇａｍｍａ、ＩＬ−１５＋ＩＬ−２Ｒｂｅｔａ、ＩＬ−１５＋ＩＬ−２Ｒｇａｍｍａ、ＩＬ−７＋ＩＬ−２Ｒｇａｍｍａ、ＩＬ−２＋ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−１５＋ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−７＋ＩＬ−７Ｒ。既知の受容体を同様に固定化し、ＭＵＦｃとの結合について調べたが、結果は陰性であった。ＩＬ−１５はＩＬ−２Ｒｂに結合するが、ＩＬ−２ＲｇまたはＭＵＦｃには結合しない。
【０１９７】
実施例７：ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性の阻害はコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウスにおいて症状の重篤度を改善する
本実施例は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質（マウスＩＬ−２１ＲＦｃタンパク質または「ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ」）または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体）がＣＩＡマウスモデルにおいて症状を改善することを示す。
【０１９８】
オスのＤＢＡ／１（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）マウスをすべての実験のために使用した。関節炎をウシのＩＩ型コラーゲン（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ、Ｒｅｄｍｏｎｄ、ＷＡ）の使用によって誘導した。ウシのＩＩ型コラーゲン（Chondrex）を０．１Ｍ酢酸に溶解し、１ｍｇ／ｍｌのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｈ３７ＲＡ株）を含有する等体積の完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ）に乳化した。１００μｇのウシコラーゲンを０日目に尾の基部に皮下注射した。２１日目に、マウスに、等体積の不完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ）と混合されている０．１Ｍ酢酸に１００μｇのウシコラーゲンを含有する溶液を尾の基部に皮下注射した。未処理（ｎａｉｖｅ）マウスには、コラーゲンを除いた注射液の同じセットを与えた。投薬プロトコルが図１６に概略的に示される。ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃをＤＢＡマウスに予防的または治療的に投与した。治療的療法では、疾患がマウスにおいて２日間連続して認められたならば、処置を開始した。
【０１９９】
マウスを疾患の進行について週に少なくとも３回モニターした。個々の肢に、下記の指標に基づく臨床スコアを割り当てた：０＝正常、腫れがない；１＝腫れた１本〜２本の指が付随する視認可能な紅斑、または、足首における軽度の腫れ；２＝顕著な紅斑、これは軽度〜中程度の足の腫れおよび／または２本の腫れた指によって特徴づけられる；３＝足全体の広範囲の腫れ、すなわち、足関節または手関節に広がる；４＝腫れの消散、足の硬直；肢の使用が困難、または、関節の固縮。従って、任意の所与のマウスについてのすべての肢スコアの合計は１６の最大全身スコアをもたらした。
【０２００】
様々な疾患段階で、動物を安楽死させ、組織を集め、足を組織学のためには１０％ホルマリンにおいて固定処理し、または、インシトゥーハイブリダイゼーションのためには、４％パラホルムアルデヒド（ｐＨ７．４７）において固定処理し、２０％  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）において脱灰し、パラフィンに包埋した。光学顕微鏡を使用して、足を、関節炎の強さおよび程度を特徴づけるために５段階のスコア化法（０〜４）でスコア化した。炎症性浸潤物を、炎症に関係づけられる他の変化（例えば、パンヌス形成、滑膜の線維化、関節軟骨の侵食、および／または、軟骨下骨破壊）に加えてスコア化のために使用した。組織学悪性度を、個々の足の読み取りを使用して決定した：ＮＡＤ＝０または異常は何も認められない；１＝軽微〜軽度；２＝軽度〜中程度；３＝重度；および４＝顕著。
【０２０１】
症状の重篤度における軽減が、コラーゲン追加投与の前日から開始して１日おきに腹腔内（ＩＰ）投与されたｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ（１００μｇまたは２００μｇ）を使用するＣＩＡマウスの予防的処置の後で認められた（データは示していない）。
【０２０２】
処置後の日数の関数として半治療的ＣＩＡマウスに対するｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ（２００μｇ／マウス、３回／週）の効果が図１７に示される。マウスＩｇ（２００μｇ／マウス、３回／週）をコントロールとして使用した。重篤度スコアの減少が処置後７日目から始まることが示される。
【０２０３】
これらの実験は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ融合タンパク質）をＣＩＡマウスに予防的または半治療的のいずれかで投与することにより、関節炎症状が著しく改善されたことを明らかにしている。
【０２０４】
実施例８：ＩＬ−２１Ｒ転写物のインシトゥーハイブリダイゼーション
ＣＩＡマウスの関節炎足におけるＩＬ−２１ＲのｍＲＮＡの発現を明らかにした。アンチセンスマウスＩＬ−２１Ｒリボプローブを使用した（図１８Ａ）；センスプローブを陰性コントロールとして使用した（図１８Ｂ）。ジゴキシゲニン標識のプローブを、製造者によって記載されるように、ＤＩＧ  ＲＮＡ標識化ミックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）の使用により調製した。ＩＬ−２１受容体ｍＲＮＡの発現が、マクロファージ、好中球、線維芽細胞、リンパ球の部分集団、滑膜細胞および上皮において検出された（図１８Ａ）。低下した染色が、コントロールの足において、または、センスプローブにより見られた（図１８Ｂ）。ｍＩＬ−２１Ｒ  ｍＲＮＡ陽性の細胞は好中球（Ｎ）およびマクロファージ（Ｍ）であった。インシトゥーハイブリダイゼーションにより、関節炎マウスの足におけるＩＬ−２１Ｒの高まった発現が示される。
【０２０５】
実施例９：ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性の阻害はＨＬＡ−Ｂ２７ラットモデルにおいてＩＢＤ様症状を改善する
本実施例は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質（マウスＩＬ−２１ＲＦｃタンパク質または「ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ」）または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体）がＨＬＡ−Ｂ２７ラットモデルにおいてＩＢＤ様症状を改善することを示す。
【０２０６】
マウスＩＬ−２１受容体−Ｆｃ融合ポリペプチド（ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ）を本明細書中に記載されるように作製し、ＨＬＡ−Ｂ２７ラットモデルにおいて腸の炎症を緩和するその能力について評価した。このモデルにおいて観測される腸の炎症は、いくつかの臨床的、組織学的および免疫学的な特徴をヒトでのＩＢＤと共有するので、ＨＬＡ−Ｂ２７ラットモデルは、ＩＢＤの治療法を評価するために広範囲に使用されている（例えば、Elson et al. (1995)、Gastroenterology、109:1344-67;Blanchard et al. (2001)、European Cytokine Network、12:111-18;Kim et al. (1999)、Arch. Pharm. Res.、22:354-60に総説される）。例えば、ＨＬＡ−Ｂ２７ラットはヒト主要組織適合性複合体Ｉ対立遺伝子Ｂ２７およびＢ２ミクログロブリン遺伝子の産物を過剰発現する。そのような遺伝子産物は慢性的な炎症性疾患（例えば、ＩＢＤなど）の発症に関連する。
【０２０７】
本研究で利用されるラットは、持続した下痢の臨床的徴候によって明らかであるように胃腸管（ＧＩ）の慢性的炎症を発症させた。便に、下記の指標に基づく臨床スコア（０〜３）を割り当てた：０＝便ペレットが形成され、正常；１＝柔らかいが、便ペレットが形成される；２＝ゆるい、便ペレットの形成がない；および３＝水様下痢（図１９を参照のこと）。ラットを１８日間モニターし、その間、便を疾患の進行について評価した。３の臨床スコアは、持続した下痢を示す（ＩｇＧコントロールとして示される）。ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃを、１８日の期間にわたって、群あたり５匹のＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラットに投与した（６ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ、週に３回）。別の一群には６ｍｇ／ｍｌのｍＥｎｂｒｅｌ（可溶性のＴＮＦ受容体Ｆｃ融合物）（陽性コントロール）を与えた。等しい数のマウスからなる第３の群にはＩｇＧを同じ様式および投薬量でコントロールとして投与した。
【０２０８】
臨床スコアの著しい減少が、ＩｇＧコントロールと比較して、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃおよびｍＥｎｂｒｅｌにより処置された群において検出された（図１９および図２０を参照のこと）。ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃの投与は、ＩＢＤ様症状を改善することにおいてｍＥｎｂｒｅｌに類似する効力を示した。この研究から得られる結果は、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃの投与により、コントロールのＩｇＧが投与されたラットに対して、腸の炎症がＨＬＡ−Ｂ２７ラットモデルではｍＥｎｂｒｅｌと類似する効力で減少することを明らかにしている（図１９および図２０を参照のこと）。
【０２０９】
改善された便スコアに関して表される症状の緩和が組織学的分析によって確認された。ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたラットは、潰瘍形成、炎症、病変部深さおよび線維化に関して、コントロール（ＩｇＧ）により処置されたラットよりも著しく低い疾患重篤度スコアを記録した（図２１を参照のこと）。組織学的分析では、示されたように０〜２または０〜３の臨床スコアが割り当てられたが、この場合、より高いスコアはラットＩＢＤモデルにおける増大した重篤度を示す。腸における炎症の著しい減少が、コントロールに対して、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃおよびｍＥｎｂｒｅｌにより処置された群で調べられたすべてのカテゴリーにおいて検出された。ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃは、疾患重篤度の組織学的徴候を改善することにおいてｍＥｎｂｒｅｌと類似する効力を示した。上記で示された結果をヒトに拡張することを裏付けるために、図１９（右側パネル）には、正常なヒト腸のリンパ球およびリンパ節におけるＭＵ−１  ｍＲＮＡのインシトゥーハイブリダイゼーションが示され、これは、疾患に関連した器官におけるＭＵ−１のｍＲＮＡの発現を示している。
【０２１０】
実施例１０：ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性の阻害はマウスにおいて同種皮膚移植片の拒絶を遅らせる
本実施例は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質（マウスＩＬ−２１ＲＦｃタンパク質または「ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ」）または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体）がマウスにおいて同種皮膚移植片の拒絶を遅らせ、従って、移植組織片の生存を延ばすことを示す。
【０２１１】
ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃの投与は、レトロウイルスにより形質導入されたＴ細胞が注入されたマウスにおいて同種皮膚移植片の拒絶を遅らせることが示された。図２２は、養子移入後の日数に対する移植片の生存率を示すグラフを示す。このモデルでは、ヌードマウスは検出可能なＴ細胞を有しないので、治癒した同種皮膚移植片を示す。コントロールのＧＦＰまたはＩＬ−２１を分泌するようにレトロウイルスにより操作されている活性化されたＢ６  Ｔ細胞がヌードマウスに注入されたとき、移植片が拒絶された（図２２を参照のこと）。Ｔ細胞が、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ（これにより、これらの細胞によって作製されたＩＬ−２１が中和されることが予想される）を分泌するように操作された場合、移植片は、図２２に示されるようにより長期間にわたって生存した（このことは、ＧＦＰおよびＩＬ−２１のコントロールと比較して、ＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃによって示される）。１０匹のマウスをＧＦＰおよびＭｕＩＬ−２１ＲＦｃのためにそれぞれ使用し、１５匹のマウスをＩＬ−２１コントロールのために使用した。これらの結果は、移植片の生存を延長させることにおけるＩＬ−２１Ｒアンタゴニストについての役割を明らかにしている。
【０２１２】
実施例１１：ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性の阻害はＣＤ４５ＲＢhi養子移入モデルにおいて疾患症状を軽減する
本実施例は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質（マウスＩＬ−２１ＲＦｃタンパク質または「ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ」）または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体）が乾癬および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のマウスモデルにおいて症状を改善することを示す。
【０２１３】
重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスへのＣＤ４５ＲＢhi  ＣＤ４+未感作Ｔ細胞の移入は、ケージ飼育条件に依存して、大腸炎、および／または、乾癬に類似する皮膚病変をもたらす。ＢＡＬＢｃ  ＣＤ４５ＲＢhi  ＣＤ４+Ｔ細胞（未感作集団）を、最初にＣＤ４+Ｔ細胞についてカラムでのネガティブ選択によって脾臓細胞から分取し、その後、高いＣＤ４５発現について選択するフローサイトメトリーによってさらに分取した。この集団の４ｘ１０5個の細胞をメスのＣ．Ｂ−１７  ＳＣＩＤマウスに移入し、マウスを乾癬およびＩＢＤの臨床的徴候について数週間にわたってスコア化した。静的なケージ条件のもとで飼育されたマウスが炎症性腸疾患を発症し、空気流の変化を伴う通常の条件のもとで飼育されたマウスはまた乾癬を発症する。マウスを１〜６のスケールで乾癬についてスコア化した：１＝軽度、中程度の紅斑（通常、まぶたおよび耳）、身体の２％未満；２＝軽度の鱗屑および中程度〜重度の紅斑（通常、耳および顔）、身体の２％〜１０％；３＝重度の紅斑および鱗屑（耳、顔および体躯）、身体の１０％〜２０％；４＝身体の２０％〜４０％にわたる非常に重度の紅斑；５＝身体中（身体の４０％〜６０％）にわたる非常に重度の紅斑；６＝身体中（身体の６０％〜１００％）にわたる非常に重度の紅斑。マウスを体重減少および便スコア（０＝正常；１＝軟便；２＝下痢；３＝血液および粘膜を含有する下痢）によってＩＢＤについてスコア化した。
【０２１４】
ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃを使用する処置は、乾癬様症状を改善することにおいて効果的であった。皮膚の炎症を発症したマウスでは、ＣＤ４５ＲＢhi細胞移入後８週間で開始した２００μｇのｍｕＩＬ−２１ＲＦｃを用いた腹腔内注射（週に３回）による処置は、抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ  Ｉｇにより処置されたコントロールマウスと比較したとき、低下した紅斑、鱗屑および脱毛をもたらした（図２３）。２００μｇのｍｕＩＬ−２１ＲＦｃを細胞移入時に週に３回用いたＣＤ４５ＲＢhiレシピエントマウスの処置は、コントロールと比較して、実験経過中、乾癬の遅れた発症、および、あまり重症でない臨床的疾患をもたらした（図３５）。実験の結果が図３６にまとめられる。
【０２１５】
ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃを使用する処置はまた、炎症性の腸症状を改善することにおいて効果的であった。２００μｇまたは４００μｇのｍｕＩＬ−２１ＲＦｃを細胞移入時に週に３回用いたＣＤ４５ＲＢhiレシピエントマウスの処置は、Ｉｇコントロールにより処置されたマウスと比較したとき、体重減少（図３７）および便スコア（図３８）によって測定されるような大腸炎の臨床徴候の著しい軽減をもたらした。結果が図３９にまとめられる。コントロール処置のＣＤ４５ＲＢhiレシピエントに由来する結腸の顕微鏡評価では、ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたマウスではほぼ完全に抑制された重度の肥厚化および腫れが示された。微視的には、コントロール処置マウスはまた、ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ処置マウスと比較したとき、より大きな程度の上皮過形成および白血球浸潤を粘膜固有層／粘膜下組織に示した。加えて、血清サイトカインをコントロール処置マウスおよびｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ処置マウスから測定した。測定されたいくつかのサイトカインのなかで、ガンマ型インターフェロン（ＩＦＮ−γ）のみが血清において検出可能であった。２００μｇまたは４００μｇの用量でのｍｕＩＬ−２１ＲＦｃによる処置は、Ｉｇコントロール処置マウスと比較したとき、ＩＦＮ−γの著しく低下した血清レベルをもたらした（図４０）。ＩＦＮ−γは、ＩＢＤにおけるＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト効力についてのバイオマーカーとして使用することができる。
【０２１６】
ＣＤ４５ＲＢhi（未感作）サブセットおよびＣＤ４５ＲＢlo（記憶）サブセットを、ＩＬ−２１に対するそれらの応答について増殖アッセイによって調べた。ＩＢＤ移入モデルにおいて、未感作細胞のみが疾患を引き起こし、疾患が記憶集団の添加によって抑制され得る。このアッセイでは、純化された集団がプレート結合の抗ＣＤ３により刺激され、ＩＬ−２１に対する応答での3Ｈ−チミジン取り込みについて調べられた。未感作集団は、記憶集団と比較して、ＩＬ−２１に対する著しく増大した応答を示した（図４１）。このことは、ＩＬ−２１がインビボでのこの集団の拡大のための重要なサイトカインであることを示唆する。
【０２１７】
培養中の活性化されたＣＤ４+  ＣＤ４５ＲＢhi細胞へのＩＬ−２１の添加は多数のサイトカインの分泌を誘導した。抗ＣＤ３刺激のＣＤ４５ＲＢhi  ＣＤ４+Ｔ細胞を、１００ユニット／ｍｌのＩＬ−２、あるいは、１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌまたは１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１により処置した。ＩＬ−２１に対する応答において、ＣＤ４５ＲＢhi細胞は、増大したレベルのＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦαを分泌した（図４２）。５０μｇ／ｍｌまたは１００μｇ／ｍｌのｍｕＩＬ−２１ＲＦｃの添加による内因性ＩＬ−２１の遮断は、Ｉｇコントロールにより処置された培養物と比較して、これらの培養物では低下したレベルのサイトカインをもたらした（図４３）。
【０２１８】
まとめると、これらの結果は、ＩＬ−２１がこのモデルでの炎症応答における強力な潜在的作用因子であること、および、ＩＬ−２１ＲアンタゴニストがＴｈ１媒介の疾患（例えば、クローン病および乾癬など）において治療的に有益であり得ることを示している。
【０２１９】
実施例１２：ＩＬ−２１Ｒを有しないマウスは抗原誘導による気道炎症の軽減を示す
本実施例は、ＩＬ−２１受容体を有しないトランスジェニックノックアウトマウス（ＩＬ−２１Ｒ−／−）が抗原誘導による気道炎症および気道過剰応答性に対する著しく低下した応答を有することを示す。
【０２２０】
ＩＬ−２１Ｒ−／−および野生型（ＷＴ＋／＋）のＣ５７ＢＬ／６マウス（８週齢〜１２週齢）を、２．２５ｍｇのミョウバン（Ａｌｕｍ  Ｉｎｊｅｃｔ；Ｐｉｅｒｃｅ）に乳化された２０μｇのＯＶＡの腹腔内注射によって０日目および１４日目に免疫化した。２６日目、２７日目および２８日目に、気道をＰＢＳにおける５％のＯＶＡのエアロゾルにより３０分間攻撃した。最後のＯＶＡ攻撃の４８時間後、動物を、エアロゾル化されたメタコリンに対する肺の抵抗および動的コンプライアンスの変化について評価した。ＯＶＡ感作およびＯＶＡ攻撃は、ＯＶＡ感作されたＰＢＳ攻撃のＷＴ＋／＋マウスと比較して、ＷＴ＋／＋マウスでは、メタコリンのエアロゾル化後の気道過剰応答性の著しい増大をもたらした（図２４）。しかしながら、ＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃のＷＴ＋／＋マウスと比較したとき、全用量範囲にわたって、ＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスでのエアロゾル化メタコリンに対する気道過剰応答性における違いはなかった（図２４）。
【０２２１】
その後、肺の炎症、サイトカインレベル、ならびに、総ＩｇＥ力価および抗ＯＶＡ  ＩｇＥ力価の分析のために、動物を屠殺し、血液および気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を集めた。ＢＡＬＦを３回の０．７ｍｌのＰＢＳによる気管支肺胞洗浄によって集めた。総ＢＡＬＦ細胞数が、ＩＬ−２１Ｒ−／−動物におけるＰＢＳ攻撃のコントロールの３倍の増大とは対照的に、ＰＢＳ攻撃のコントロールと比較して、ＷＴ＋／＋マウスではＯＶＡ攻撃後、約３６倍増大した（図２５Ａ）。さらに、ＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスのＢＡＬＦにおける総細胞数は、ＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃のＷＴ＋／＋動物において観測された総細胞数よりも著しく少なかった。ＯＶＡ感作／ＰＢＳ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスおよびＷＴ＋／＋マウスでのＢＡＬＦ総細胞数における違いはなかった（図２５Ａ）。同じように感作され、しかし、ＰＢＳにより攻撃されたコントロールと比較して、ＯＶＡ攻撃はＷＴ＋／＋マウスおよびＩＬ−２１Ｒ−／−マウスの両方においてＢＡＬＦ好酸球の著しい増大をもたらした。ＢＡＬＦ好酸球の絶対数は、ＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃のＷＴ＋／＋動物において観測される絶対数と比較して、ＩＬ−２１Ｒ−／−動物では著しく低くなっていた（図２５Ｂ）。ＩＬ−２１Ｒの欠失はまた、ＯＶＡ攻撃後、ＢＡＬＦのリンパ球（図２５Ｃ）および好中球（図２５Ｄ）の数の増大を著しく弱めていた。
【０２２２】
ＢＡＬＦにおけるＩＬ−５、ＩＬ−１３およびＴＮＦαのレベルが、ＰＢＳ攻撃のコントロールと比較して、ＯＶＡ感作／攻撃のＷＴ＋／＋マウスでは著しく増大した（図２６および図２７）。対照的に、ＯＶＡによる感作および攻撃では、ＰＢＳ攻撃のコントロールと比較したとき、ＩＬ−２１Ｒ−／−マウスのＢＡＬＦにおけるこれらのサイトカインのレベルの非常に穏やかな増大が誘導され、また、レベルは、ＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃のＷＴ＋／＋動物において観測されたレベルよりも著しく低かった（図２６および図２７）。ＢＡＬＦにおけるＴＮＦαおよびＩＬ−５のレベルを、サイトメトリービーズアレイキット（Ｍｏｕｓｅ  Ｔｈ１／Ｔｈ２  Ｃｙｔｉｏｋｉｎｅ  ＣＢＡ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して定量した。ＢＡＬＦにおけるＩＬ−１３のレベルをＥＬＩＳＡによって定量した。
【０２２３】
図２８Ａ〜図２８Ｂに示されるように、ＩＬ−２１Ｒ−／−におけるＯＶＡ感作／ＯＶＡ攻撃後の血清中の総ＩｇＥレベルおよび抗ＯＶＡ  ＩｇＥレベルは、同じように処置されたＷＴ＋／＋マウスと比較して、はるかに低かった。しかしながら、総ＩｇＥレベルおよびＯＶＡ特異的ＩｇＥレベルをＰＢＳ攻撃後と比較したとき、ＩＬ−２１Ｒ−／−マウスおよびＷＴ＋／＋マウスにおける著しい違いはなかった。
【０２２４】
これらの結果は、ＩＬ−２１媒介による応答の阻害により、治療的価値がアレルギーおよび喘息の処置において提供され得ることを示唆する。
【０２２５】
実施例１３：ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性の阻害はＭＲＬ−ＦＡＳlpr狼瘡モデルにおいて症状の重篤度を改善する。
本実施例は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−２１Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質（マウスＩＬ−２１ＲＦｃタンパク質または「ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃ」）または抗ＩＬ−２１Ｒ抗体）がＭＲＬ−Ｆａｓlprマウスモデルにおいて全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）様症状を改善することを示す。
【０２２６】
オスのＭＲＬ−Ｆａｓlprマウスをすべての実験のために使用した。このマウスは、ＤＮＡ自己抗体、多数の組織の破壊、および、免疫複合体による糸球体腎炎をはじめとする、ヒトＳＬＥに類似する多数の症状をもたらす。４００μｇのＭｕＩＬ−２１ＲＦｃまたはイソタイプコントロールを、１０週齢のときから初めて、週に３回、腹腔内注射し、マウスを疾患の進行について毎週分析した。１５週で、マウスをさらなる分析のために屠殺した。各処置群は１０匹のマウスを含有した。
【０２２７】
ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ処置は、ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、ＭＲＬ−Ｆａｓlprマウスにおける、循環しているｄｓＤＮＡ自己抗体のレベル（図２９）、および、血清中の総ＩｇＧのレベル（図３０）を著しく低下させた。簡単に記載すると、抗ｄｓＤＮＡ自己抗体の測定のために、ｄｓＤＮＡをタイタープレートに被覆し、血清抗体を加え、抗体を、抗マウス二次抗体を使用して検出した。総ＩｇＧの測定のために、血清をタイタープレートに付着させ、その後、抗マウス二次抗体を使用して検出した。
【０２２８】
ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃによる処置はまた、ＭＲＬ−Ｆａｓlprマウスの腎臓におけるＩｇＧ沈着物の蓄積を低下させた。１５週でマウスを屠殺し、凍結した腎臓切片（５μｍ）をヤギ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣにより染色した。蛍光強度を０〜３のスケールでスコア化した。図３１は、処置マウスおよびコントロールマウスから得られた腎臓切片において測定された総蛍光強度を示す。
【０２２９】
これらの結果は、ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストによる治療的処置により、狼瘡様症状が改善され得ることを示す。
【０２３０】
実施例１４：狼瘡およびＧＶＨＤの動物モデル：Ｂ６  ｂｍ１２脾臓細胞が植え付けられたＩＬ−２１Ｒ欠損マウスの腎臓における自己抗体形成およびＩｇＧ沈着の非存在
実験を、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の慢性的な移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）モデルにおけるＩＬ−２１Ｒノックアウト（ＫＯ）マウスの応答を調べるために行った(Chen et al. (1998)、J. Immunol.、161:5880-85)。このモデルはＳＬＥおよびＧＶＨＤの両方の代表的な側面を含む。
【０２３１】
使用された動物は、Ｂ６．Ｃ−Ｈ２＜ｂｍ１２＞／ＫｈＥＧ（ｂｍ１２）、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ（脾臓細胞）；ＩＬ−２１Ｒ−２  ＫＯマウス、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ（ＣＲＬ）；Ｃ５７／Ｂ６野生型（ＷＴ）マウス、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ；およびＣ５７／Ｂ６野生型マウス、Ｔａｃｏｎｉｃ（ＴＡＣ）（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）であった。
【０２３２】
適切なドナーマウスをＣＯ2暴露により疾患誘導の当日に屠殺した。脾臓を取り出し、覆った。赤血球を、脾臓あたり１ｍｌの溶解溶液で０．１６Ｍ  ＮＨ4Ｃｌ：０．１７Ｍ  ＴｒｉｓＣｌ（９：１）を使用して、合計で５分間、時々混合しながら溶解した。細胞懸濁物を、トリパンブルーを使用して計数し、無菌のリン酸塩緩衝化生理的食塩水を使用して２ｘ１０8細胞／ｍｌの最終濃度に調節した。その後、適切な細胞懸濁物の０．５ｍｌを（下記の表２に示されるように）適切なレシピエントマウスに腹腔内注射した。その後、レシピエントマウスを尿タンパク質および体重増加／減少について毎週モニターした。２週間毎に、それぞれのマウスは後方の眼窩洞により採血され、血清をさらなる分析のために貯蔵した。ＥＬＩＳＡアッセイを、二本鎖ＤＮＡに対する自己抗体の検出のために、（Zouali and Stollar(1986)、J. Immunol. Methods、90:105-10に記載されるように）それぞれの時点で集められたすべての血清について行った。
【０２３３】
疾患誘導後１２週で、各群からの動物の半数を安楽死させ、脾臓および両方の腎臓を採取した。左側の腎臓を１０％非緩衝化ホルマリンに保存し（そのまま）、Ｈ＆Ｅにより染色した。染色についてのスコア化を、チェン(Chen)ら（上掲）の方法に従って行った。スコアパラメーターには、血管周囲のリンパ球浸潤、間質のリンパ球浸潤、細胞過多、および、基底膜肥厚化が含まれた。右側の腎臓を長さ方向に切断し、各半分を包埋し、組織ブロックカセットにおいて側面を切り落とした。その後、右側の腎臓を、免疫沈着物（具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＭおよびＣ３）の存在について免疫組織化学的技術を使用して分析した。
【０２３４】
【表５】
2008508885.tif 000007
【０２３５】
これらの実験からの結果が図４４に示される。抗ｄｓＤＮＡ自己抗体がどの時点でもＩＬ−２１Ｒノックアウトマウスのどれにも検出されなかった（図４４Ａ）。加えて、図４４Ｂは、疾患誘導後２０週で、ＩｇＧ沈着が、ＧＶＨＤマウスと比較したとき、ＩＬ−２１Ｒ欠損マウスの腎臓において観測されないことを示す。従って、ＩＬ−２１Ｒ欠損マウスはＧＶＨＤ−ＳＬＥモデルでは自己抗体を生じさせず、また、ＩｇＧ沈着物を腎臓において形成しない。従って、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストによる個体の処置はＳＬＥおよびＧＶＨＤの両方に対する効果的な処置を提供し得る。
【０２３６】
本出願明細書を通して引用されるすべての参考文献、係属中の特許出願（米国特許出願第６０／５９９，０８６号（２００４年８月５日出願）および同第６０／６３９，１７６号（２００４年１２月２３日出願）を含む）、公開された特許出願（米国特許出願第２００３／０１０８５４９号（２００２年１０月４日出願）を含む）および公開された特許の内容は本明細書により参照して組み込まれる。
【０２３７】
均等物
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識するか、または、日常的に過ぎない実験を使用して確認することができる。そのような均等物は、請求項によって包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０２３８】
【図１】図１は、マウスＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１の全長のｃＤＮＡ配列を示す。このヌクレオチド配列は配列番号９のヌクレオチド１〜２６２８に対応する。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｂは、マウスＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１およびヒトＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のアミノ酸配列を示す。図２ＡはマウスＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）を示す。予測されるリーダー配列が１０．１のスコアでアミノ酸１〜１９（ＳＰＳｃａｎによって予測された）に存在する（太字）。予測される膜貫通ドメインが配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３（下線部）に存在する。予測されるシグナル伝達モチーフは下記の領域を含む：Ｂｏｘ１：アミノ酸２６５〜２７４およびＢｏｘ２：アミノ酸３１０〜３２４（太字かつ下線部）；６個のチロシンが、配列番号１０のアミノ酸位置２８１、３１９、３６１、３６８、３９７および５１０に存在する。ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号８）がアミノ酸残基２１４〜アミノ酸残基２１８（大きい太字）に存在する。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位は配列番号１０のアミノ酸３９３〜３９８およびアミノ酸５１０〜５１３を含む。図２ＢはヒトＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号２に対応する）を示す。予測されるシグナル配列（配列番号２のおよそアミノ酸１〜１９）；ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号２のおよそアミノ酸２１３〜２１７）；および膜貫通ドメイン（配列番号２のおよそアミノ酸２３６〜２５２、２３６〜２５３、２３６〜２５４（下線部））の存在位置が示される。潜在的なＪＡＫ結合部位、シグナル伝達モチーフおよびＳＴＡＴドッキング部位もまた示される。これらの部位のおおよその存在位置が四角で囲まれる。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｂは、マウスＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１およびヒトＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のアミノ酸配列を示す。図２ＡはマウスＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号１０のアミノ酸１〜５２９に対応する）を示す。予測されるリーダー配列が１０．１のスコアでアミノ酸１〜１９（ＳＰＳｃａｎによって予測された）に存在する（太字）。予測される膜貫通ドメインが配列番号１０のアミノ酸２３７〜２５３（下線部）に存在する。予測されるシグナル伝達モチーフは下記の領域を含む：Ｂｏｘ１：アミノ酸２６５〜２７４およびＢｏｘ２：アミノ酸３１０〜３２４（太字かつ下線部）；６個のチロシンが、配列番号１０のアミノ酸位置２８１、３１９、３６１、３６８、３９７および５１０に存在する。ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号８）がアミノ酸残基２１４〜アミノ酸残基２１８（大きい太字）に存在する。潜在的なＳＴＡＴドッキング部位は配列番号１０のアミノ酸３９３〜３９８およびアミノ酸５１０〜５１３を含む。図２ＢはヒトＭＵ−１のアミノ酸配列（配列番号２に対応する）を示す。予測されるシグナル配列（配列番号２のおよそアミノ酸１〜１９）；ＷＳＸＷＳモチーフ（配列番号２のおよそアミノ酸２１３〜２１７）；および膜貫通ドメイン（配列番号２のおよそアミノ酸２３６〜２５２、２３６〜２５３、２３６〜２５４（下線部））の存在位置が示される。潜在的なＪＡＫ結合部位、シグナル伝達モチーフおよびＳＴＡＴドッキング部位もまた示される。これらの部位のおおよその存在位置が四角で囲まれる。
【図３】図３は、ヒトおよびマウスのＭＵ−１のｃＤＮＡ配列（配列番号１の核酸１〜２６６５および配列番号９の核酸１〜２６２８にそれぞれ対応する）のＧＡＰ比較を示す。ＨｕＭＵ−１＝ヒトＭＵ−１、ｍｕｒＭＵ−１＝マウスＭＵ−１。ギャップパラメーター：ギャップ加重＝５０、平均マッチ＝１０．０００、長さ加重＝３、平均ミスマッチ＝０．０００、パーセント同一性＝６６．１１６。
【図４】図４は、ヒトＭＵ−１タンパク質（配列番号２のアミノ酸に対応する）およびマウスＭＵ−１タンパク質（配列番号１０のアミノ酸に対応する）のＧＡＰ比較を示す。アラインメントをＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換行列（Henikoff and Henikoff(1992)、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.、89:10915-19）によって作製した。ギャップパラメーター：ギャップ加重＝８、平均マッチ＝２．９１２、長さ加重＝２、平均ミスマッチ＝−２．００３、パーセント同一性＝６５．２６７。
【図５】図５は、ヒトＭＵ−１のアミノ酸（配列番号２に対応する）、マウスＭＵ−１のアミノ酸（配列番号１０に対応する）およびヒトＩＬ２β鎖のアミノ酸（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセション番号Ｍ２６０６２）の多重配列アラインメントを示す。リーダードメインおよび膜貫通ドメインには下線が引かれる。保存されたサイトカイン受容体モジュールモチーフが太字によって示される。潜在的なシグナル伝達領域が下線付きの太字によって示される。
【図６】図６は、ＭＵ−１を介したシグナル伝達を示す。ＭＵ−１はクローンＥ７  ＥＰＯ−ＭＵ−１キメラにおいてＳＴＡＴ５をリン酸化する。実施例３に指定される条件のもとでは、ＭＵ−１を介したシグナル伝達は、調べられたすべての時点でＳＴＡＴ５のリン酸化をもたらす。コントロールまたはキメラＢＡＦ−３細胞のＩＬ−３による処理では、ＳＴＡＴ１またはＳＴＡＴ５のリン酸化ではなく、ＳＴＡＴ３のリン酸化がもたらされた。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｂは、ミツバチのリーダー配列およびＨｉｓ６タグ（配列番号２３のアミノ酸１〜４４）にアミノ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒモノマー（配列番号２のアミノ酸２０〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２２および配列番号２３としてそれぞれ示される。
【図７Ｂ】図７Ａ〜７Ｂは、ミツバチのリーダー配列およびＨｉｓ６タグ（配列番号２３のアミノ酸１〜４４）にアミノ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒモノマー（配列番号２のアミノ酸２０〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２２および配列番号２３としてそれぞれ示される。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ配列（配列番号２５のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）にリンカー（配列番号２５のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２４および配列番号２５としてそれぞれ示される。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ配列（配列番号２５のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）にリンカー（配列番号２５のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２４および配列番号２５としてそれぞれ示される。
【図８Ｃ】図８Ａ〜８Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ配列（配列番号２５のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）にリンカー（配列番号２５のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２４および配列番号２５としてそれぞれ示される。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ配列（配列番号２７のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）およびＨｉｓ6配列タグ（配列番号２７のアミノ酸４６８〜４９２に対応する）にリンカー（配列番号２７のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２６および配列番号２７としてそれぞれ示される。
【図９Ｂ】図９Ａ〜９Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ配列（配列番号２７のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）およびＨｉｓ6配列タグ（配列番号２７のアミノ酸４６８〜４９２に対応する）にリンカー（配列番号２７のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２６および配列番号２７としてそれぞれ示される。
【図９Ｃ】図９Ａ〜９Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ配列（配列番号２７のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）およびＨｉｓ6配列タグ（配列番号２７のアミノ酸４６８〜４９２に対応する）にリンカー（配列番号２７のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２６および配列番号２７としてそれぞれ示される。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ変異配列（配列番号２９のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）にリンカー（配列番号２９のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヒトＦｃ配列は、Ｆｃ受容体との結合を低下させるために、野生型配列から残基２５４および残基２５７において変異している。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２８および配列番号２９としてそれぞれ示される。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ変異配列（配列番号２９のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）にリンカー（配列番号２９のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヒトＦｃ配列は、Ｆｃ受容体との結合を低下させるために、野生型配列から残基２５４および残基２５７において変異している。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２８および配列番号２９としてそれぞれ示される。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）Ｆｃ変異配列（配列番号２９のアミノ酸２４４〜４６７に対応する）にリンカー（配列番号２９のアミノ酸２３６〜２４３）を介してＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヒトＦｃ配列は、Ｆｃ受容体との結合を低下させるために、野生型配列から残基２５４および残基２５７において変異している。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号２８および配列番号２９としてそれぞれ示される。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜１１Ｂは、ロドプシン配列タグにＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号３０および配列番号３１としてそれぞれ示される。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜１１Ｂは、ロドプシン配列タグにＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号３０および配列番号３１としてそれぞれ示される。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜１２Ｃは、ＥＫ切断部位および変異ＩｇＧ１  Ｆｃ領域（配列番号３３のアミノ酸２３６〜４７０に対応する）にＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号３２および配列番号３３としてそれぞれ示される。
【図１２Ｂ】図１２Ａ〜１２Ｃは、ＥＫ切断部位および変異ＩｇＧ１  Ｆｃ領域（配列番号３３のアミノ酸２３６〜４７０に対応する）にＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号３２および配列番号３３としてそれぞれ示される。
【図１２Ｃ】図１２Ａ〜１２Ｃは、ＥＫ切断部位および変異ＩｇＧ１  Ｆｃ領域（配列番号３３のアミノ酸２３６〜４７０に対応する）にＣ末端で融合されたヒトＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸１〜２３５に対応する）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が配列番号３２および配列番号３３としてそれぞれ示される。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜１３Ｂは、マウス免疫グロブリンＧ２ａ（ＩｇＧ２ａ）にＣ末端で融合されたマウスＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド（ゲノム）配列およびアミノ酸配列が配列番号３４および配列番号３５としてそれぞれ示される。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｂは、マウス免疫グロブリンＧ２ａ（ＩｇＧ２ａ）にＣ末端で融合されたマウスＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド（ゲノム）配列およびアミノ酸配列が配列番号３４および配列番号３５としてそれぞれ示される。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜１４Ｂは、Ｆｌａｇ配列タグおよびＨｉｓ6配列タグにＣ末端で融合されたマウスＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド（ゲノム）配列およびアミノ酸配列が配列番号３６および配列番号３７としてそれぞれ示される。
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｂは、Ｆｌａｇ配列タグおよびＨｉｓ6配列タグにＣ末端で融合されたマウスＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド（ゲノム）配列およびアミノ酸配列が配列番号３６および配列番号３７としてそれぞれ示される。
【図１５Ａ】図１５Ａ〜１５Ｂは、Ｆｌａｇ配列タグおよびＨｉｓ6配列タグにＣ末端で融合された（ミツバチリーダー）マウスＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド（ゲノム）配列およびアミノ酸配列が配列番号３８および配列番号３９としてそれぞれ示される。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜１５Ｂは、Ｆｌａｇ配列タグおよびＨｉｓ6配列タグにＣ末端で融合された（ミツバチリーダー）マウスＩＬ−２１Ｒ細胞外ドメインのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列のアラインメントを示す。ヌクレオチド（ゲノム）配列およびアミノ酸配列が配列番号３８および配列番号３９としてそれぞれ示される。
【図１６】図１６は、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルを使用する実験についての予防的処置、治療的処置および半治療的処置をまとめた予定表である。
【図１７】図１７は、半治療的ＣＩＡマウスに対するＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ（２００μｇ／マウス、３回／週）の影響を処置後日数の関数として示すグラフである。マウスＩｇ（２００μｇ／マウス、３回／週）をコントロールとして使用した。
【図１８】図１８Ａ〜図１８Ｂは、陰性コントロール（パネルＢ）と比較して、ＣＩＡマウス（パネルＡ）の関節炎足におけるＩＬ−２１ＲのｍＲＮＡの増大した発現を示す写真である。
【図１９】図１９は、ＩｇＧコントロールと比較して、ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃおよびｍＥｎｂｒｅｌにより処置されたラットにおけるＩＢＤ様症状の臨床スコアの顕著な減少を示す線グラフを示す。図１９の左パネルは、正常なヒト腸のリンパ球およびリンパ節におけるＭＵ−１  ｍＲＮＡのインシトゥー（in situ）ハイブリダイゼーションを示す写真である。
【図２０】図２０は、ＩｇＧコントロールと比較して、ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃおよびｍＥｎｂｒｅｌにより処置されたラットにおけるＩＢＤ様症状の臨床スコアの顕著な減少を示す線グラフを示す。
【図２１】図２１は、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ投与後のラットＩＢＤモデルにおける疾患重篤度の組織学的スコア化の減少をまとめた表である。
【図２２】図２２は、ＩＬ−２１、ｍｕＩＬ−２１ＲＦｃまたはコントロール（ＧＦＰ）を発現するレトロウイルス形質導入Ｔ細胞が注射されたマウスにおける養子移入後の日数に対する移植片生存率を示す線グラフである。
【図２３】図２３は、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ投与後のＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ養子移入モデルでの乾癬病変部における臨床スコアの改善を示す線グラフである。図２３の左側はＭｕＩＬ−２１ＲＦｃによる処置の前後におけるマウスの写真を示す。
【図２４】図２４は、リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）またはＯＶＡのいずれかにより攻撃されたオバルブミン（ＯＶＡ）感作マウスの気道過剰応答レベル（ＡＨＲ）を示す線グラフである。マウスに、連続的に増大する用量のメタコリンを投与した。Ｐｅｎｈ（増強ポーズ）変化はＡＨＲの指標である。
【図２５】図２５Ａ〜２５Ｄは、ＰＢＳまたはＯＶＡのいずれかにより攻撃されたＯＶＡ感作マウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）における細胞数を示す棒グラフである。図２５ＡはＢＡＬＦ細胞総数を示す。図２５ＢはＢＡＬＦにおける好酸球数を示す。図２５ＣはＢＡＬＦにおけるリンパ球数を示す。図２５ＤはＢＡＬＦにおける好中球数を示す。白棒はＰＢＳ攻撃のＷＴマウスを示す。黒塗り棒はＯＶＡ攻撃のＷＴマウスを示す。灰色棒はＰＢＳ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示す。斜線付き棒はＯＶＡ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示す。*は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって決定されたとき、ｐ＜０．０５であることを示す。
【図２６】図２６は、ＯＶＡにより攻撃されたＯＶＡ感作マウスのＢＡＬＦにおけるサイトカインのレベルを示すグラフである。図２６は、ＴＮＦαおよびＩＬ−５のレベルを示す。白棒はＰＢＳ攻撃のＷＴマウスを示し、黒塗り棒はＯＶＡ攻撃のＷＴマウスを示し、灰色棒はＰＢＳ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示し、斜線付き棒はＯＶＡ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示す。*は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって決定されたとき、ｐ＜０．０５であることを示す。
【図２７】図２７は、ＯＶＡにより攻撃されたＯＶＡ感作マウスのＢＡＬＦにおけるサイトカインのレベルを示すグラフである。図２７は、ＩＬ−１３のレベルを示す。白棒はＰＢＳ攻撃のＷＴマウスを示し、黒塗り棒はＯＶＡ攻撃のＷＴマウスを示し、灰色棒はＰＢＳ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示し、斜線付き棒はＯＶＡ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示す。*は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって決定されたとき、ｐ＜０．０５であることを示す。
【図２８】図２８Ａ〜２８Ｂは、ＯＶＡまたはＰＢＳにより攻撃されたＯＶＡ感作マウスの血清ＩｇＥレベルを示す棒グラフである。図２８Ａは総血清ＩｇＥレベルを示す。図２８Ｂは抗ＯＶＡ特異的ＩｇＥレベルを示す。白棒はＰＢＳ攻撃のＷＴマウスを示し、黒塗り棒はＯＶＡ攻撃のＷＴマウスを示し、灰色棒はＰＢＳ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示し、斜線付き棒はＯＶＡ攻撃のＩＬ−２１Ｒ−／−マウスを示す。*は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって決定されたとき、ｐ＜０．０５であることを示す。
【図２９】図２９Ａ〜２９Ｄは、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃまたはコントロールによる処置の後でのＭＲＬ−Ｆａｓlprマウスにおける循環しているｄｓＤＮＡ自己抗体のレベルを示すグラフである。図２９ＡはＩｇＧ１のレベルを示す。図２９ＢはＩｇＧ２ａのレベルを示す。図２９ＣはＩｇＧ２ｂのレベルを示す。図２９ＤはＩｇＧ３のレベルを示す。*は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって決定されたとき、ｐ＜０．０５であることを示す。
【図３０】図３０Ａ〜３０Ｄは、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃまたはコントロールによる処置の後でのＭＲＬ−Ｆａｓlprマウスにおける循環している総ＩｇＧを示すグラフである。図３０ＡはＩｇＧ１のレベルを示す。図３０ＢはＩｇＧ２ａのレベルを示す。図３０ＣはＩｇＧ２ｂのレベルを示す。図３０ＤはＩｇＧ３のレベルを示す。*は、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって決定されたとき、ｐ＜０．０５であることを示す。
【図３１】図３１は、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣにより染色されたマウス腎臓切片における蛍光レベルを示すグラフである。
【図３２】図３２は、免疫応答に対するＩＬ−２１の例示的影響を示す概略図である。
【図３３】図３３は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ経路を阻害するための例示的な戦略を示す概略図である。
【図３４】図３４は、例示的な可溶性ＩＬ−２１ＲＦｃ受容体融合タンパク質を示す概略図である。
【図３５】図３５は、Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ（「Ｅｔｅｎｅｌｌａ」）により刺激されたマウスのＭｕＩＬ−２１ＲＦｃ処置群およびコントロール処置群の平均乾癬スコアを示す線グラフである。
【図３６】図３６は、コントロール処置マウスと比較される、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたＥ．ｔｅｎｅｌｌａ刺激マウスにおける乾癬の症状の発症遅延および軽減をまとめた表である。
【図３７】図３７は、コントロール処置マウスと比較される、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたＥ．ｔｅｎｅｌｌａ刺激マウスにおける体重減少の減少を示す線グラフである。体重指数は、初期体重に対する測定された体重の比率として定義される。
【図３８】図３８Ａは、コントロール処置マウスと比較される、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたＥ．ｔｅｎｅｌｌａ刺激マウスにおける平均便スコアの減少を示す線グラフである。図３８Ｂは、移入後７７日目における各処置群の個々のＥ．ｔｅｎｅｌｌａ刺激マウスの便スコアを示すグラフである。
【図３９】図３９は、図３８Ａに示されるデータをまとめた表である。
【図４０】図４０Ａは、コントロール処置マウスと比較される、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたＥ．ｔｅｎｅｌｌａ刺激マウスにおける血清ＩＦＮ−γレベルを示すグラフである。図４０Ｂは、コントロール処置マウスと比較される、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃにより処置されたＥ．ｔｅｎｅｌｌａ刺激マウスについての便スコアを示すグラフである。
【図４１】図４１は、ＩＬ−２１による処置の後における活性化されたＣＤ４５ＲＢhi細胞およびＣＤ４５ＲＢlo細胞への3Ｈ−チミジン取り込みを示す線グラフである。
【図４２Ａ】図４２Ａ〜Ｂは、ＩＬ−２１処置後の活性化されたＣＤ４５ＲＢhi細胞によるサイトカイン分泌の増大を示す棒グラフである。
【図４２Ｂ】図４２Ａ〜Ｂは、ＩＬ−２１処置後の活性化されたＣＤ４５ＲＢhi細胞によるサイトカイン分泌の増大を示す棒グラフである。
【図４３】図４３は、ＭｕＩＬ−２１ＲＦｃによる処置の後での活性化されたＣＤ４５ＲＢhi細胞によるサイトカイン分泌の減少を示す棒グラフである。
【図４４Ａ】図４４Ａ〜Ｂは、ＳＬＥのＧＶＨＤモデルにおいて、Ｂ６ｂｍ１２脾臓細胞が植え付けられたＩＬ−２１Ｒノックアウトマウスは抗ｄｓＤＮＡ自己抗体を作製しないこと（Ａ）、および、ＩｇＧ堆積がこれらのマウスの腎臓において観測されないこと（Ｂ）を示す棒グラフ（Ａ）および散布図（Ｂ）である。
【図４４Ｂ】図４４Ａ〜Ｂは、ＳＬＥのＧＶＨＤモデルにおいて、Ｂ６ｂｍ１２脾臓細胞が植え付けられたＩＬ−２１Ｒノックアウトマウスは抗ｄｓＤＮＡ自己抗体を作製しないこと（Ａ）、および、ＩｇＧ堆積がこれらのマウスの腎臓において観測されないこと（Ｂ）を示す棒グラフ（Ａ）および散布図（Ｂ）である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４３】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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