(57)【要約】本発明は、癌を治療するための、ＩＬ−２組成物および抗血管形成性剤を用いた組合せ療法に関する。本発明はさらに、ＩＬ−２組成物または抗血管形成性組成物の投与に関連する毒性を緩和させ、有効性を増大させる方法を提供する。体内の免疫応答機構および疾患状態の基質を標的とする薬剤を利用した、従来の手法に対して耐性のある、またはそれによって十分に治療できない異常増殖に関連する障害に罹患している患者を治療するための新規方法および機構が必要である。本発明はそのような治療剤を提供し、さらに他の関連する利点を提供する。
2008530239.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者に治療有効量のアルデスロイキンと６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される抗血管形成性剤とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法。
【請求項２】
アルデスロイキンを抗血管形成性剤の前に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アルデスロイキンを抗血管形成性剤に次いで投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
アルデスロイキンを抗血管形成性剤と同時に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
アルデスロイキンを抗血管形成性剤とは別の組成物中で投与する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記患者に治療有効量のアルデスロイキンと抗血管形成性剤とを、投薬スケジュールに従って別々に投与することを含み、アルデスロイキンは１日１〜３回、約９〜約１３０ＭＩＵ／日の用量で、少なくとも連続して３日間の期間投与し、任意選択で少なくとも連続して３日間の休止期間が続く、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗血管形成性剤を２〜３週間毎に１〜６回投与する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
アルデスロイキンを静脈内投与し、前記休止期間が存在する、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
アルデスロイキンを皮下投与し、前記休止期間が存在しない、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
アルデスロイキンを１日１〜３回、約９〜３０ＭＩＵ／日の用量で投与する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
アルデスロイキンを１日３回、約３０〜１３０ＭＩＵ／日の用量で投与する、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
アルデスロイキンを連続して５日間の期間投与し、９日間の休止期間が続く、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記投薬スケジュールを少なくとも２クール繰り返す、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記投薬スケジュールを３クール繰り返す、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記投薬スケジュールを４クール繰り返す、請求項６に記載の方法。
【請求項１６】
アルデスロイキンを初日には３回、その後の日はそれぞれ１日１回投与する、請求項６に記載の方法。
【請求項１７】
前記癌が腎細胞癌、黒色腫または結腸癌である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記患者に、アセトアミノフェン、メペリジン、インドメタシン、ラニチジン、ニザチジン、ジアストップ、ロペラミド、ジフェンヒドラミン、またはフロセミドから選択された少なくとも１つの化合物を、アルデスロイキンの投与に次いで、またはそれと同時に投与することをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
患者において癌の寛解がもたらされる、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
患者において低血圧の減弱がもたらされる、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
患者において高血圧の減弱がもたらされる、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
患者において一酸化窒素合成酵素の減少がもたらされる、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
癌が血管形成の阻害および／または免疫賦活に対して感受性を有する、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗血管形成性剤がＮ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗血管形成性剤が１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素である、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
（ａ）治療有効量のアルデスロイキンと；（ｂ）６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される治療有効量の抗血管形成性剤と；（ｃ）製薬上許容される賦形剤とを含む組成物。
【請求項２７】
同時、逐次的または別々に使用するための（ａ）アルデスロイキンと、（ｂ）６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される抗血管形成性剤とを含む、癌に罹患している患者を治療するための医薬品の組合せを含むキット。
【請求項２８】
前記医薬品のそれぞれが別々にパッケージされている、請求項２６に記載のキット。
【請求項２９】
癌に罹患している患者を治療するための１つまたは複数の医薬品の製造における、アルデスロイキンと、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される抗血管形成性剤の使用。
【請求項３０】
アルデスロイキンが抗血管形成性剤の前に投与するために配合されている、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
アルデスロイキンが抗血管形成性剤に次いで投与するために配合されている、請求項２９に記載の使用。
【請求項３２】
アルデスロイキンが抗血管形成性剤と同時に投与するために配合されている、請求項２９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願は、米国仮特許出願第６０／６５４，３４１号（２００５年２月１８日出願）の米国特許法第１１９条（ｅ）の下の優先権を主張する。この出願は、本明細書によりその全体が参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、異常細胞増殖に関連する疾患の治療方法に関する。一部の実施形態では、癌の治療で使用するために組換えＩＬ−２を抗血管形成性剤と組み合わせる。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
毛細血管は人体のほぼすべての組織内に伸びており、組織に酸素および栄養を供給し、また、老廃物を除去する。典型的な条件下では、毛細血管の内側に沿って存在する内皮細胞は分裂せず、したがって、毛細血管は通常、ヒトの成人において数も大きさも増加しない。しかし、組織が損傷した場合、または月経周期の特定の期間中などの特定の条件下では、毛細血管は急速に増殖し始める。既存の血管から新しい毛細血管を形成するこのプロセスは、血管形成または血管新生として知られている。非特許文献１を参照されたい。創傷治癒中の血管形成は、成人の人生における病態生理学的な血管新生の例である。創傷治癒中、追加の毛細血管が酸素および栄養の供給を提供し、肉芽組織を促進し、老廃物の除去を援助する。治癒プロセスの終了後、毛細血管は通常、消失する。（非特許文献２）。
【０００４】
血管形成は、癌細胞の増殖においても重要な役割を果たす。癌細胞巣が一定の大きさ、すなわち直径およそ１〜２ｍｍに達すると、拡散では癌細胞に十分な酸素および栄養を供給するのに不十分であるので、癌細胞は、腫瘍がより大きく成長するために血液供給を発生させなければならないことが知られている。したがって、血管形成の阻害により、癌細胞の成長が停止されることが予測される。同定されている血管形成因子のうち、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）が最も強力かつ特異的であり、正常および病的な血管形成のどちらにおいても重要な制御因子であると同定されているが、表皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）などの他の因子も、血管形成および癌細胞の生存に関連づけられている。Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ、２００１年２月；２（２）：２８０〜６頁。
【０００５】
特異的な抗腫瘍免疫は免疫系中の複数の細胞種の活性化を含み、最も効率的なのは細胞溶解性Ｔリンパ球である。特異的な、抗腫瘍Ｔリンパ球に媒介される免疫応答を誘発させるには、目的の腫瘍抗原だけでなく、腫瘍細胞または抗原提示細胞のどちらかの表面上に存在する特異的なリガンドと標的Ｔリンパ球との共刺激性の相互作用の認識も必要である。この、２つ目の共刺激性シグナルは、特異的な細胞表面受容体に結合して様々なシグナル伝達経路を開始させ、その結果エフェクター機能の増強をもたらす、サイトカインまたは他のペプチド分子などの可溶性因子によっても提供され得る。
【０００６】
インターロイキン−２（ＩＬ−２）とは、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に存在する特異的な受容体に結合し、腫瘍細胞の溶解、サイトカインの分泌、および他のエフェクター機能のためにこれらを活性化させる、Ｔリンパ球由来のサイトカインである。ＣＤ４およびＣＤ８Ｔリンパ球はどちらもＩＬ−２の受容体を発現し、バイオロジックに曝された後、増加した細胞溶解性エフェクター機能およびサイトカイン合成機能を発生する。ＩＬ−２の機能的効果は、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）との結合によって媒介され、これは構造的には３つのサブユニット、すなわちα、β、および他のサイトカイン受容体と共有する共通のγ鎖から構成される（Ｃａｌｉｇｉｕｒｉら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１９９０年、１７１（５）：１５０９〜１５２６頁；Ｂａｚａｎ，  Ｊ．Ｆ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９２年、２５７（５０６８）：４１０〜４１３頁；Ｔｈｅｚｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、１９９６年、１７（１０）：４８１〜４８６頁）。ＩＬ−２受容体の活性化および続くシグナル伝達は、細胞上のＩＬ−２受容体型に依存する（Ｃａｌｉｇｉｕｒｉら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１９９０年、１７１（５）：１５０９〜１５２６頁；Ｖｏｓｓら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１９９２年、１７６（２）：５３１〜５４１頁；Ｅｘｐｉｎｏｚａら、Ｊ．  Ｌｅｕｋｏｃ．  Ｂｉｏｌ．、１９９５年、５７（１）：１３〜２９頁；Ｔｈｅｚｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、１９９６年、１７（１０）：４８１〜４８６頁）。Ｔ細胞は高親和性のＩＬ−２Ｒαβγを発現するが、一方で、ＮＫ細胞、単球、およびマクロファージは、主に中等の親和性の形態、ＩＬ−２Ｒβγを発現する（Ｃａｌｉｇｉｕｒｉら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１９９０年、１７１（５）：１５０９〜１５２６頁；Ｖｏｓｓら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１９９２年、１７６（２）：５３１〜５４１頁；Ｔｈｅｚｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、１９９６年、１７（１０）：４８１〜４８６頁；Ｎａｇｌｅｒら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１９９０年、１７１（５）：１５２７〜１５３３頁）。その機構の中心として、ＩＬ−２はＪＡＫ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ３）を活性化し、これがＩＬ−２Ｒβ上の主要なチロシンをリン酸化し、これはＳｈｃおよびＳｔａｔ５を含めた下流のシグナル伝達分子の結合部位として役割を果たし、その後、これは２つの異なる経路、すなわちＳｈｃ／Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＡＰＫおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴ５の活性化を触媒し、これが核へと移動して遺伝子制御転写因子のファミリーであるＳＴＡＴを直接制御する（Ｏ’Ｓｈｅａ，  Ｊ．Ｊ．、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９７年、７（１）：１〜１１頁）。ＳｈｃはＧｒｂ−２／Ｓｏｓ複合体を召集してＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＡＰＫ経路を活性化し、また、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路を活性化させるＧｒｂ−２／Ｇａｂ−２を召集する。これらのシグナル伝達タンパク質は一緒になって遺伝子転写因子を制御し、最終的には細胞の成長、分裂、分化および免疫活性を調節する。さらに、ＩＬ−２は分裂促進遺伝子を制御することによって抗アポトーシス作用も誘導し、これによりｂｃｌ−２、ｂｃｌ−ｘｌ、ｃ−ｍ���ｂの増加がもたらされ、これは、ｃｄｋ２、４、６の活性化およびｐ２７ｋｉｐ１の阻害によって細胞周期の調節に影響を与えるか、またはＳＯＣＳ（サイトカインシグナル伝達の抑制因子）によって負の制御が行われる（Ｓｍｉｔｈ，  Ｋ．Ａ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８８年、２４０（４８５６）：１１６９〜１１７６頁；Ｔｈｅｚｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ、１９９６年、１７（１０）：４８１〜４８６頁）。ＩＬ−２とＩＬ−２Ｒとの相互作用により、下流でのＭＡＰＫ、ＰＩ−３Ｋ、およびＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化が始動され、細胞の生存および増殖がもたらされることが報告されている（Ｍｉｙａｚａｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４年、２６６（５１８７）：１０４５〜１０４７頁；Ｂｅａｄｌｉｎｇら、Ｅｍｂｏ  Ｊ．、１９９６年、１５（８）：１９０２〜１９１３頁；Ｎａｋａｊｉｍａら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９７年、７（５）：６９１〜７０１頁；Ｍｏｒｉｇｇｌら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９９年、１１（２）：２２５〜２３０頁）。
【０００７】
様々なマウス腫瘍モデルにおける前臨床研究により、組換えヒトＩＬ−２は、腫瘍を保有する動物に１０〜１４日間の期間投与した場合に、腫瘍の負荷の退縮、長期の生存、および腫瘍の再成長に対する耐性の増加をもたらすことができることが実証された。これらの動物から得た脾臓リンパ球の分析により、抗腫瘍効果は、少なくとも部分的に、細胞溶解性のＴ細胞の機能の増強によるものであることが示された。この効果には、ＣＴＬによる腫瘍細胞の直接的な細胞溶解、およびやはりさらなる直接または間接的な抗腫瘍効果を有し得る他のＴリンパ球由来サイトカインの合成の増加の両方の活性化が含まれる。
【０００８】
転移性黒色腫および腎細胞癌（ＲＣＣ）は非常に難治の疾患であり、全身性化学療法のほとんどの種類に耐性があるので、より有効な治療を開発する相当な必要性が依然として存在する。最近の臨床データにより黒色腫および腎細胞癌における小分子受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤、特にＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８の開発が支援されている。ＢＡＹ４３−９００６およびＳＵ１１２４８はどちらも、腫瘍の成長、増殖および抗血管形成に関与している複数のキナーゼを阻害する。ＢＡＹ４３−９００６は、Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路のメンバーであるＲａｆ−１の強力な阻害剤であり（Ｒｉｃｈｌｙら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、４１（１２）：６２０〜６２１頁；Ｗｉｌｈｅｌｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００４年、６４（１９）：７０９９〜７１０９頁；Ａｗａｄａら、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ、２００５年、９２（１０）：１８５５〜１８６１頁）、ＷＴ  Ｂ−Ｒａｆおよび突然変異体Ｖ５９９Ｅ  Ｂ−Ｒａｆをどちらも阻害する。Ｒａｆに対するＢＡＹ４３−９００６の効果に加えて、その活性の大部分は、他のＲＴＫ、特にＶＥＧＦＲ（ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３）、ＰＤＧＦＲβ、および他の主要なキナーゼであるＦＬＴ−３、ならびにｃＫＩＴの阻害に媒介されていると考えられている（Ｗｉｌｈｅｌｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００４年、６４（１９）：７０９９〜７１０９頁）。初期の固形腫瘍の治験におけるＢＡＹ４３−９００６での応答により、１日１回または１日２回の投与は、ある程度の部分的応答を含めた疾患の安定化をもたらし得ることが確立されている。現在までに、第Ｉ相の研究により、ＢＡＹ４３−９００６は患者に一般に良好に耐用されることが示された。Ｂａｙ４３−９００６の最も一般的な毒性は、胃腸管作用（下痢、嘔気、腹部痙攣）または皮膚そう痒症もしくは発疹を含めた皮膚反応を含んでいた（Ｒｉｃｈｌｙら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．、２００３年、４１（１２）：６２０〜６２１頁；ＡｈｍａｄおよびＥｉｓｅｎ、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００４年、１０（１８パート２）：６３８８Ｓ〜９２Ｓ頁；Ａｗａｄａら、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ、２００５年、９２（１０）：１８５５〜１８６１頁；Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００５年、２３（５）：９６５〜９７２頁）。
【０００９】
対照的に、ＳＵ１１２４８は、ＶＥＧＦＲ−１〜３、ＰＤＧＦＲα、ｃＫＩＴ、ＦＬＴ３およびＰＤＧＦＲβの非常に強力な選択的ＲＴＫ阻害剤である（Ａｂｒａｍｓら、Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、２００３年、２（５）：４７１〜４７８頁；Ｍｅｎｄｅｌら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００３年、９（１）：３２７〜３３７頁；Ｏ’Ｆａｒｒｅｌｌら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００３年、９（１５）：５４６５〜５４７６頁）。ＳＵ１１２４８は、いくつかの進行固形腫瘍（ＲＣＣ、神経内分泌腫瘍、間質性腫瘍および腺癌）において抗腫瘍活性が示されている（Ｆａｉｖｒｅら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００６年、２４（１）：２３〜３５頁；Ｍｏｔｚｅｒら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００６年、２４（１）：１６〜２４頁）。また、ＳＵ１１２４８の臨床データは、この薬物が疲労、リンパ球減少症、好中球減少症、高リパーゼ血症を含めた管理可能な毒性を有し、一般に耐用されることも示している（Ｆａｉｖｒｅら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００６年、２４（１）：２３〜３５頁；Ｍｏｔｚｅｒら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００６年、２４（１）：１６〜２４頁）。
【００１０】
フォンヒッペル−リンダウ症候群において生じる明細胞腎癌の遺伝型の研究により、フォンヒッペル−リンダウ癌抑制遺伝子（ＶＨＬ）の同定がもたらされた。この遺伝子は、遺伝性の腎臓細胞癌腫（１つの突然変異が生殖系の突然変異である）および散発性の明細胞腎癌のほとんどの場合（両方の対立遺伝子が突然変異または欠失を獲得している）のどちらにおいても突然変異していた。Ｇｎａｒｒａ  ＪＲ、Ｄｕａｎ  ＤＲ、Ｗｅｎｇ  Ｙら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｖｏｎ  Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．」、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ．、１９９６年；１２４２（３）：２０１〜１０頁。これらの突然変異の１つの結果は、低酸素症誘導性因子に関与する機構による血管内皮成長因子の過剰産生である。Ｏ  Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｕｓ  ＡＬ、Ｃ  Ｊｉａｎｇら、「Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃａｂｌｅ  ｇｅｎｅｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｖｏｎ−Ｈｉｐｐｅｌ  Ｌｉｎｄｕ  ｐｒｏｔｅｉｎ．」、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．、１９９６年；９３：１０５９５〜１０５９９頁。したがって、それによる血管内皮成長因子の制御によって、フォンヒッペル−リンダウタンパク質は血管形成に密接に関連している。血管内皮成長因子は内皮細胞の成長を刺激し、言及したように、特に胚形成、排卵、創傷治癒、および腫瘍増殖において、血管形成の中心的な因子であると考えられている。Ｆｅｒｒａｒａ  Ｎ．、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．」、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．、１９９９年；７７：５２７〜５４３頁。
【００１１】
フォンヒッペル−リンダウ腫瘍抑制遺伝子中の突然変異により、血管内皮成長因子が腫瘍によって過剰産生されるので、この成長因子は明細胞腎臓癌の治療における良好な標的を表す。転移性明細胞腎臓癌に罹患している患者における、ヒト化モノクローナル抗体（ベバシズマブ）のランダム化された、二重盲検の、プラセボ比較の研究が、Ｙａｎｇらによって実施されている。「Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ，  ａｎ  ａｎｔｉ−ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，  ｆｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ．」、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００３年；３４９（５）：４２７〜３４頁。腫瘍進行までの時間は、プラセボ群の患者と比較して、キログラムあたりでベバシズマブを与えた患者（２週間毎に１０ｍｇ／ｋｇ）において２．５５倍延長された。生存はこの治験の主なエンドポイントではなかったので、疾患の進行時に患者はプラセボからベバシズマブ治療へと乗り換えることが可能であった。同上。血管形成の機構を標的とする腎臓癌の治療は、血管内皮成長因子によって媒介されるもの以外の経路によっても有効であり得る。一部の腫瘍の局所的な微小環境内には、血管形成を促進することができる他のタンパク質が存在する。したがって、腎細胞癌の生物学の理解によって方向づけられる、阻害剤の合理的な組合せを利用する抗血管形成性の治療の必要性が存在する。
【００１２】
組換えヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）は、間欠的な高用量のボーラスレジメンを与えた２５５人の患者における複数の多施設治験の結果に基づいて、ＦＤＡによって転移性腎臓癌の治療に認可されている。これらの治験では、目的の応答が患者の１５％で見られ、生存期間中央値は１６．３カ月であった（ＦｉｓｈｅｒおよびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ、２０００年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｓｃｉ  Ａｍ、６Ｓ１：Ｓ５５〜５７頁）。このレジメンに関連する顕著な毒性が原因で、様々な用量のｒＩＬ−２ならびに様々な投与経路を用いた一連の第Ｉ相および第ＩＩ相治験を試みた。単独の薬剤としてのｒＩＬ−２の有効性の最近の総説により、この一連の研究で治療した転移性ＲＣＣに罹患している１７００人を超える患者において、全体的な応答は１５％であることが示されている。完全な応答は患者の３〜５％で見られた。Ｂｕｋｏｗｓｋｉ  ＲＭ．、「Ｎａｔｕｒａｌ  ｈｉｓｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２．」、Ｃａｎｃｅｒ、１９９７年；８０（７）：１１９８〜２２０頁。これらの経路間で、速度に差異はないと考えられる。高用量ボーラスＩＶレジメンと低用量ボーラスＩＶレジメンと皮下の外来患者レジメンとのランダム化された比較により、群の間で生存期間中央値の差異は示されなかったが、低用量および外来患者レジメンは顕著に毒性が低かった。Ｙａｎｇ  ＪＣ、Ｓｈｅｒｒｙ  ＲＭ、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ  ＳＭら、「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ａｎｄ  ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ．」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２００３年；２１（１６）：３１２７〜３２頁。
【００１３】
直接的な免疫変調作用を有する以外に、ｒＩＬ−２は、活性ＮＫ細胞からの二次的なサイトカイン放出（ＩＦＮγ）を引き起こすことによって、腫瘍の増殖も予防し得る。Ｓａｒａｙａ  ＫＡ、Ｂａｌｋｗｉｌｌ  ＦＲ、「Ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｏｒｉｇｉｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、１９９３年；６７（３）：５１４〜２１頁。
【００１４】
明細胞腎臓癌患者の応答速度および結果は改善することができる。新規薬物の組合せを用いた臨床治験が必要である。ｒＩＬ２とベバシズマブなどの抗血管形成性剤との組合せは、転移性腎細胞癌に罹患している患者、および他の癌に罹患している患者に対してさらなる臨床上の利点となる可能性のある相乗効果を有し得る。
【００１５】
癌の退縮に対する優待の手法の別の利点は、これが、耐性突然変異による迂回をより困難にするプラットフォームを提供することである。ウイルスレプリコン中の特定の基質または癌細胞系中のキナーゼなど、治療の標的が非常に偏向的かつ特異的である場合（これは、宿主細胞を標的とすることを回避するために必要であり得る）、病状の単一の点突然変異により、薬物によって影響されなくなり、その結果、先の世代でより厳しい疾患の種類が生じ得る。
【非特許文献１】Ｆｏｌｋｍａｎ、Ｊ．、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ、２７５、１５０〜１５４頁、（１９９６年）
【非特許文献２】Ｌｙｍｂｏｕｓｓａｋｉ，Ａ．、「Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｅｍｂｒｙｏｓ，Ａｄｕｌｔｓ，ａｎｄ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｅｌｓｉｎｋｉ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ／Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ｈａａｒｔｍａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、（１９９９年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
体内の免疫応答機構および疾患状態の基質を標的とする薬剤を利用した、従来の手法に対して耐性のある、またはそれによって十分に治療できない異常増殖に関連する障害に罹患している患者を治療するための新規方法および機構が必要である。本発明はそのような治療剤を提供し、さらに他の関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
（発明の簡潔な要旨）
本発明は、小分子受容体チロシンキナーゼ阻害剤およびｒＩＬ−２を用いた、重複しない毒性を有する独特の組合せ療法に部分的に基づいている。黒色腫およびＲＣＣは一般にｒＩＬ−２などの免疫療法に対して応答性を有することを考慮して、ｒＩＬ−２と潜在的な受容体チロシンキナーゼ阻害剤との合理的な組合せを、個々の薬剤の薬理学に基づいて本明細書中で評価した。本発明は、これらの薬剤の毒性プロフィールに基づいて、潜在的な薬物相互作用を回避するための臨床的に適用可能な薬物スケジュールを提供する。有害な薬物動態学／薬力学的相互作用および有害な薬理学的相互作用の潜在性も解明した。Ｔ細胞に対するｒＩＬ−２とＢＡＹ４３−９００６などの小分子受容体チロシンキナーゼ阻害剤との効果、ならびにＩＬ−２に媒介されるシグナル伝達経路（ＭＡＰＫおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴ５）に対する影響について記載する。
【００１８】
したがって、本発明は、従来の治療への応答が乏しい癌細胞系に対する、組換えＩＬ−２（ｒＩＬ−２、アルデスロイキンとしても知られる）などのＩＬ−２化合物の抗腫瘍の有効性の指標を拡大し、長期の生存および腫瘍の再負荷に対する免疫の増加をもたらす。さらに、ｒＩＬ−２の免疫賦活作用は、それと同時に投与するために抗血管形成性組成物の投与によって引き起こされる既存の副作用を緩和させることを目的とする。ｒＩＬ−２などのＩＬ−２化合物と少なくとも１つの抗血管形成性剤との組合せを用いた、異常細胞増殖、特に腎細胞癌に罹患している対象の治療方法を提供する。さらに、ｒＩＬ−２などのＩＬ−２化合物と小分子との組合せを用いた、異常細胞増殖、特に腎細胞癌に罹患している対象の治療方法も提供する。本発明の好ましい小分子を表１〜５に示す。特に好ましい分子は、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（ＳＵ１１２４８としても知られる）および１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素（Ｂａｙ４３−９００６としても知られる）である。
【００１９】
アルデスロイキンおよび抗血管形成性剤は、一緒に投与するか、または個別の薬剤組成物として別々に投与し得る。別々に投与する場合、アルデスロイキンは、抗血管形成性剤の前に、それと同時に、またはそれに次いで投与することができる。アルデスロイキンと、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、および１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素などの抗血管形成性剤とを同時に投与するための、１日１回、週１回、および月１回の投薬スケジュール（またはその繰返し）を含む特定のレジメンを提供する。
【００２０】
一実施形態では、抗血管形成性剤、好ましくは６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、および１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素のうちの１つを、ＶＥＧＦを阻害する能力を有するモノクローナル抗体などの抗血管形成性タンパク質と同時に投与する。より詳細な実施形態では、本発明の抗血管形成性タンパク質はベバシズマブまたはＶＥＧＦ−Ｔｒａｐである。別のより詳細な実施形態では、タンパク質はセツキシマブなどのＥＧＦ阻害剤である。
【００２１】
別の実施形態では、アルデスロイキンと抗血管形成性剤（または複数の抗血管形成剤）とを本明細書中に記載の様式で一緒に投与することにより、抗血管形成性剤の有効性が増強され、その結果、阻害剤単独で観察されるものに対して改善された陽性の／相乗的な治療反応がもたらされる。
【００２２】
他の実施形態は、容器と、治療有効量のアルデスロイキンと、治療有効量の抗血管形成性剤および／または小分子、好ましくは６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、もしくは１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素などの表１〜５に記載の化合物とを含む、癌に罹患している患者を治療するための、市販に適した治療パッケージを提供する。
【００２３】
さらなる実施形態では、キットを提供する。キットは、同時、逐次的または別々に使用するための、（ａ）アルデスロイキンと、（ｂ）６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される抗血管形成性剤とを含む、癌に罹患している患者を治療するための医薬品の組合せを含む。
【００２４】
本明細書中に記載の組合せの製造方法は、本発明の範囲内にあるように提供かつ企図され、また、本発明の方法で用いるための医薬品の製造法における組合せの使用も同様である。
【００２５】
本発明のさらなる実施形態には、発明を実施するための最良の形態に記載のものが含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（発明の詳細な説明）
検出アッセイを利用して、数種の癌が抗血管形成／ＶＥＧＦ阻害剤およびサイトカイン投与またはｒＩＬ−２を用いた調節に感受性を有すると特徴づけられている。そのような癌には、例えば、ＣＭＬ、ＡＭＬ、乳房、胃、子宮内膜、唾液腺、副腎、非小細胞肺、膵臓、腎臓、直腸、皮膚、黒色腫、多発性骨髄腫、脳／ＣＮＳ、子宮頸部、鼻咽頭、悪性中皮腫、下咽頭、消化管カルチノイド、腹膜、網、腸間膜、胆嚢、精巣、食道、肺、甲状腺、卵巣、腹膜、前立腺、頭頸部、膀胱、結腸、結腸直腸、リンパ腫、および膠芽細胞腫が含まれる。本明細書中に記載の方法は、このような癌の任意のものの治療に有用である。
【００２７】
本明細書中に記載した様式でのアルデスロイキンと少なくとも１つの抗血管形成性剤との組合せを用いた治療は、不変の増殖細胞がＶＥＧＦなどの血管化に高度に依存している癌の治療に関して、有益な生理的応答を引き起こす。
【００２８】
本発明の一実施形態は、低血圧を減弱させるために治療有効量の抗血管形成性剤を患者に同時に投与することを含む、アルデスロイキンの投与から低血圧に罹患している癌患者の治療方法を提供する。
【００２９】
その別のより詳細な実施形態は、患者における癌の寛解を含む。
【００３０】
本発明の別の実施形態は、高血圧を減弱させるために治療有効量のアルデスロイキンを患者に同時に投与することを含む、抗血管形成性剤の投与から高血圧に罹患している癌患者の治療方法を提供する。
【００３１】
その別のより詳細な実施形態は、患者における癌の寛解を含む。特定の実施形態では、癌は、血管形成の阻害および／または免疫賦活に対して感受性を有する。
【００３２】
前述の実施形態のいずれかのより詳細な実施形態では、前記抗血管形成性剤は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される。
【００３３】
本発明の別の実施形態は、前記患者にアルデスロイキンおよび６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択された化合物を投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００３４】
本発明の別の実施形態は、最初に抗血管形成性剤を、患者に低酸素症を誘発させることができる用量で投与し、次いでアルデスロイキンを投与することを含む、癌患者においてアルデスロイキンの有効性を増大させる方法を提供する。
【００３５】
別の実施形態は、アルデスロイキンを患者に投与することによって一酸化窒素合成酵素を減少させることを含む、癌患者において抗血管形成性剤の有効性を増大させる方法を提供する。別の実施形態は、アルデスロイキンを患者に投与することによって一酸化窒素合成酵素が減少する、アルデスロイキンを患者に投与することを含む、癌患者において抗血管形成性剤有効性を増大させる方法を提供する。
【００３６】
そのより詳細な実施形態では、前記抗血管形成剤は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される。
【００３７】
本発明の別の実施形態は、前記患者に治療有効量のアルデスロイキンを最初に投与するステップと、次いで６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されるものなどの抗血管形成性剤を投与するステップとを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、前記患者に６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素などの治療有効量の抗血管形成性剤を最初に投与するステップと、次いでアルデスロイキンを投与するステップとを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００３９】
本発明の別の実施形態は、前記患者に治療有効量の抗血管形成性剤およびアルデスロイキンを投薬スケジュールに従って別々に投与することを含み、アルデスロイキンは１日１〜３回、約９〜約１３０ＭＩＵ／日の用量で、少なくとも連続して３日間の期間投与し、任意選択で少なくとも連続して３日間の休止期間が続く、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００４０】
そのより詳細な実施形態では、前記抗血管形成性剤を２〜３週間毎に１〜６回投与する。
【００４１】
そのより詳細な実施形態では、前記抗血管形成性剤はＶＥＧＦ阻害剤である。
【００４２】
そのより詳細な実施形態では、抗血管形成性剤は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される。
【００４３】
そのより詳細な実施形態では、アルデスロイキンを静脈内投与し、前記休止期間が存在する。
【００４４】
そのより詳細な実施形態では、アルデスロイキンを皮下投与し、前記休止期間が存在しない。
【００４５】
そのより詳細な実施形態では、アルデスロイキンを１日３回、約３０〜１００ＭＩＵ／日の用量で投与する。
【００４６】
そのより詳細な実施形態では、アルデスロイキンを連続して５日間の期間投与し、９日間の休止期間が続く。
【００４７】
より詳細な実施形態では、前記投薬スケジュールを少なくとも２クール繰り返す。さらにより詳細な実施形態では、それぞれのクールは、２〜５日間の治療、続いて９〜１５日間の休止期間からなる。
【００４８】
その別のより詳細な実施形態では、アルデスロイキンを初日には３回、その後の日はそれぞれ１日１回投与する。
【００４９】
そのより詳細な実施形態では、前記投薬スケジュールを少なくとも２クール、または３クール、または４クール、または５クール、または６クール、または７クール、または８クール、または９クール、または１０クール繰り返す。
【００５０】
前述の実施形態のいずれかのより詳細な実施形態では、癌は結腸癌、腎細胞癌または悪性黒色腫である。
【００５１】
前述の実施形態のいずれかのより詳細な実施形態では、アルデスロイキンを投与する際に、アセトアミノフェン、メペリジン、インドメタシン、ラニチジン、ニザチジン、ジアストップ、ロペラミド、ジフェンヒドラミン、またはフロセミドから選択された少なくとも１つの化合物も前記患者に投与する。
【００５２】
前述の実施形態のいずれかの好ましい実施形態では、前記抗血管形成剤は６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素である。
【００５３】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと：
【００５４】
【化１】
2008530239.tif 000003
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００５５】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと：
【００５６】
【化２】
2008530239.tif 000004
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００５７】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと：
【００５８】
【化３】
2008530239.tif 000005
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００５９】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと：
【００６０】
【化４】
2008530239.tif 000006
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００６１】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと：
【００６２】
【化５】
2008530239.tif 000007
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００６３】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと式Ｉの化合物：
【００６４】
【化６】
2008530239.tif 000008
［式中、
Ｒ１は、アルキル、−アリール（Ｒｉ）ｐ、もしくはヘテロシクリルであり；
Ｒ２は、Ｈもしくはアルキルであるか；または
Ｒ１およびＲ２は、一緒に結合してＲ１−２を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ４は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｒｅ、−ＮＲａＲｂ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、または−ヘテロシクリル−Ｒｆであり；
Ｒ５は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｒｅ、−ＮＲａＲｂ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ６は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ７は、Ｈ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、アリール、ヘテロシクリル、もしくはアルコキシであるか；または
ＲａおよびＲｂは、一緒に結合してＲ１−２を形成し；
それぞれのＲｃは、独立してＨ、アルキル、アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）アリール、−ＣＨＯ、アリール、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲｄは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、または−ＮＲａＲｂであり；
それぞれのＲｅは、独立してＨまたはアルキルであり；
Ｒｆは、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑＮＲａＲｈ、アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−（ＣＨ２）ｑＣＨ３であり
それぞれのＲｇは、独立してＨ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、アリール、ヘテロシクリル、または−ＮＲａＲｂであり；
Ｒｈは、Ｈ、または−（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）ｎＲｄであり；
それぞれのＲｉは、独立してＨ、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、または−Ｏ（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇであり；
それぞれのｎは、独立して０、１、または２であり；
それぞれのｐは、独立して０、１、２、または３であり；
それぞれのｑは、独立して０、１、または２であり；
Ｒ１−２は、以下に示す一般構造を有し：
【００６５】
【化７】
2008530239.tif 000009
［式中、
それぞれのＲ８は、独立してＨ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄであり；
それぞれのＲ９は、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであるか、またはＸがＯ、Ｓ、もしくは存在しない場合は存在せず；
それぞれのＸは、独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＣＨであるか、または存在せず、したがって共有結合を形成し；
それぞれのｍは、独立して０、１、または２である］］；または
その互変異性体、製薬上許容されるその塩、もしくは互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００６６】
そのより詳細な実施形態では、前記化合物は：
【００６７】
【化８】
2008530239.tif 000010
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩である。
【００６８】
そのより詳細な実施形態では、前記化合物は：
【００６９】
【化９】
2008530239.tif 000011
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩である。
【００７０】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと式ＩＩの化合物：
【００７１】
【化１０】
2008530239.tif 000012
［式中、
Ｒ１１は、アルキル、アリールまたはヘテロシクリルであり；
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立してＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、アリール、ヘテロシクリル、またはアルコキシであり；
それぞれのＲｚは、独立してＨ、アルキル、アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、アリール、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲｄは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、または−ＮＲａＲｂであり；
それぞれのｎは、独立して０、１、または２であり；
それぞれのｑは、独立して０、１、または２である］；または
その互変異性体、製薬上許容されるその塩、もしくは互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００７２】
そのより詳細な実施形態では、Ｒ１１はＲ１１ａである：
【００７３】
【化１１】
2008530239.tif 000013
［式中、
Ｒ１６、Ｒ１７およびＲ１８は、それぞれ独立してＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルである］。
【００７４】
そのより詳細な実施形態では、前記化合物は：
【００７５】
【化１２】
2008530239.tif 000014
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩である。
【００７６】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと式ＩＩＩの化合物：
【００７７】
【化１３】
2008530239.tif 000015
［式中、
点線は、追加の結合の任意選択の配置を表し；
Ｒ２０は、Ｈまたは＝Ｏであり；
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、およびＲ２４は、それぞれ独立してＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ２５は、Ｈ、アルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｒｚであり；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立してＨ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄであり；
Ｒ２８は、Ｈ、−ＣＨ３、またはハロゲンであり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、アリール、ヘテロシクリル、またはアルコキシであり；  それぞれのＲｚは、独立してＨ、アルキル、アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、アリール、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲｄは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、または−ＮＲａＲｂであり；
それぞれのｎは、独立して０、１、または２であり；
それぞれのｑは、独立して０、１、または２である］；または
その互変異性体、製薬上許容されるその塩、もしくは互変異性体の製薬上許容される塩とを投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００７８】
そのより詳細な実施形態では、前記化合物は：
【００７９】
【化１４】
2008530239.tif 000016
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩である。
【００８０】
そのより詳細な実施形態では、前記化合物は：
【００８１】
【化１５】
2008530239.tif 000017
、その互変異性体、製薬上許容されるその塩、または互変異性体の製薬上許容される塩である。
【００８２】
本発明の別の実施形態は、キノリノン、好ましくは、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤を患者に投与することを含む、アルデスロイキンを癌患者に投与することに関連する毒性を減少させる方法を提供する。
【００８３】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンを患者に投与することを含む、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤を癌患者に投与することに関連する毒性を減少させる方法を提供する。
【００８４】
本発明の別の実施形態は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤を前記患者に投与することを含む、癌に罹患している患者においてＩＬ−２耐性を減少させる方法を提供する。
【００８５】
本発明の別の実施形態は、前記患者に治療有効量のアルデスロイキンを最初に投与するステップと、次いで６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤を投与するステップとを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００８６】
本発明の別の実施形態は、前記患者に、治療有効量の、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤とアルデスロイキンとを、投薬スケジュールに従って別々に投与することを含み、アルデスロイキンは１日１〜３回、約９〜約１３０ＭＩＵ／日の用量で、少なくとも連続して３日間の期間投与し、任意選択で少なくとも連続して３日間の休止期間が続く、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。より具体的には、用量は約３０〜約１００ＭＩＵ／日である。より具体的には、用量は約３０〜約６０ＭＩＵ／日である。より具体的には、用量は約３０〜約４０ＭＩＵ／日である。より具体的には、用量は約１７〜約３０ＭＩＵ／日である。より具体的には、用量は約９〜約３０ＭＩＵ／日である。
【００８７】
より詳細な実施形態では、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい前記抗血管形成性剤は、２〜３週間毎に１〜９回投与する。より詳細な実施形態では、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい前記抗血管形成性剤はＶＥＧＦ阻害剤である。
【００８８】
別の実施形態では、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤は、ベバシズマブ、またはセツキシマブ、またはＶＥＧＦ−Ｔｒａｐと共にも投与する。より具体的には、前記ベバシズマブは、１〜１２ｍｇ／ｋｇ、１２〜１６日毎に１回の用量で投与する。
【００８９】
別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の７２時間以内に抗血管形成性剤を投与する。ここで、「以内」とは、「抗血管形成性剤をｒＩＬ−２の投与の７２時間前または７２時間後に投与する」などのように、前または後を示すことを意味する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の１４日以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の７日以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の６日以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の５日以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の４日以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の４８時間以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の３６時間以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の２４時間以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の１２時間以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の６時間以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、ｒＩＬ−２の投与の１時間以内に抗血管形成性剤を投与する。別の実施形態では、抗血管形成性剤をｒＩＬ−２の投与と同時に投与する。別の実施形態では、抗血管形成性剤をｒＩＬ−２と組み合わせて投与する。そのより詳細な実施形態では、抗血管形成性剤は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択される。
【００９０】
本発明の別の実施形態は、アルデスロイキンと、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤とを同時に投与することを含む、癌に罹患している患者の治療方法を提供する。
【００９１】
本発明の別の実施形態は、容器と、治療有効量のアルデスロイキンと、治療有効量の、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤とを含む、癌に罹患している患者を治療するための、市販に適した治療パッケージを提供する。その治療パッケージであり、前記患者は腎細胞癌に罹患している。患者が、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤を用いた治療の前に、アルデスロイキンを用いた治療を受けることを指示する文書をさらに含む、その治療パッケージ。
【００９２】
別の実施形態は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤とアルデスロイキンとを含む薬剤組成物を提供する。
【００９３】
明細胞腎細胞癌（ＲＣＣ）は、血管化、特にＶＥＧＦの発現の増加に関連している。ＶＥＧＦは、腫瘍血管形成（腫瘍への新しい血管の形成）および確立された腫瘍血管の維持において重要な役割を果たすタンパク質である。これは、血管上の特異的な受容体に結合して既存の血管への伸長を刺激する。すべてではないが、ＲＣＣａの一部の例では血清ＶＥＧＦレベルが上昇している。
【００９４】
ＶＥＧＦの増加がＩＬ−２への耐性と相関しているという証拠が存在する（Ｌｉｓｓｏｎｉら、ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００１年；２１：７７７〜９頁）。Ｔ細胞および樹状細胞に対するＶＥＧＦの免疫抑制作用（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈら、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．、２００２年；７２：２８５〜９６頁）は、ＶＥＧＦに誘発されたＩＬ−２への耐性の治療の機構を表している可能性がある。
【００９５】
さらに、ＶＥＧＦは血管透過性を増加させ、抗ＶＥＧＦを用いた治療が一部の患者において血圧上昇をもたらしたことが注記されている。したがって、本発明の組合せを、ＲＣＣａなどの癌に罹患している患者などに投与した場合、抗ＶＥＧＦ（例えば高血圧）およびｒＩＬ−２（例えば低血圧）の主要な毒性の一部が相互に相殺され、全体的に改善された治療指数がもたらされる可能性がある。
【００９６】
アルデスロイキンおよびベバシズマブまたはセツキシマブなどの本発明のさらなる組合せにより、薬剤を単独で投与した場合に比べて、より高い割合および／またはより良好な応答の耐久性が得られる。
【００９７】
本明細書中に開示した特定のアルデスロイキン投薬レジメンは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の間欠的な刺激、およびｒＩＬ−２投薬への長期的曝露と関連づけることができるｒＩＬ−２に関連する副作用の危険性の低下を提供する。注目すべきは、典型的にｒＩＬ−２の投薬に関連している低血圧が本発明の抗血管形成性組成物の投与によりオフセットされることであり、これは、本発明の抗血管形成性組成物が一般に高血圧に関連しているからである。さらに、典型的にＶＥＧＦ阻害剤に関連している低酸素症はｒＩＬ−２治療の有効性に対する感度が増加し、同時に対症的な利点ももたらされる。
【００９８】
本発明の別の実施形態は、癌を治療するための医薬品の製造におけるアルデスロイキンの使用を提供し、前記医薬品は、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、もしくは１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤と別々、同時、または逐次的に使用するためのものである。そのより詳細な実施形態では、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい前記抗血管形成性剤は乳酸塩である。別の実施形態では、前記癌は腎細胞癌である。
【００９９】
本発明の別の実施形態は、癌を治療するための医薬品の製造における、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、または１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素から選択されることが好ましい抗血管形成性剤の使用を提供し、前記医薬品は、アルデスロイキンと別々、同時、または逐次的に使用するためのものである。
【０１００】
本発明の組成物によって調節（阻害など）される、血管形成に関連する好ましい分子には、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、アンジオゲニン、アンジオトロピン、表皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来内皮細胞成長因子、トランスフォーミング成長因子ａ（ＴＧＦ−ａ）、トランスフォーミング成長因子ｂ（ＴＧＦ−ｂ）、または一酸化窒素が含まれる。また、本発明の組成物によるトロンボスポンジン、アンジオスタチン、およびエンドスタチンの調節（増強など）も、本発明に企図される。
ｒＩＬ−２と同時投与するための一般的な組成物：
キナゾリン
式Ｉの化合物は以下の構造を有する：
【０１０１】
【化１６】
2008530239.tif 000018
［式中、
Ｒ１は、アルキル、−アリール（Ｒｉ）ｐ、もしくはヘテロシクリルであり；
Ｒ２は、Ｈもしくはアルキルであるか；または
Ｒ１およびＲ２は、一緒に結合してＲ１−２を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ４は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｒｅ、−ＮＲａＲｂ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、または−ヘテロシクリル−Ｒｆであり；
Ｒ５は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｒｅ、−ＮＲａＲｂ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ６は、Ｈ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ７は、Ｈ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、アリール、ヘテロシクリル、もしくはアルコキシであるか；または
ＲａおよびＲｂは、一緒に結合してＲ１−２を形成し；
それぞれのＲｃは、独立してＨ、アルキル、アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）アリール、−ＣＨＯ、アリール、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲｄは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、または−ＮＲａＲｂであり；
それぞれのＲｅは、独立してＨまたはアルキルであり；
Ｒｆは、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−（ＣＨ２）ｑＮＲａＲｈ、アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−（ＣＨ２）ｑＣＨ３であり、
それぞれのＲｇは、独立してＨ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、アリール、ヘテロシクリル、または−ＮＲａＲｂであり；
Ｒｈは、Ｈ、または−（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）ｎＲｄであり；
それぞれのＲｉは、独立してＨ、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、または−Ｏ（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇであり；
それぞれのｎは、独立して０、１、または２であり；
それぞれのｐは、独立して０、１、２、または３であり；
それぞれのｑは、独立して０、１、または２であり；
Ｒ１−２は、以下に示す一般構造を有し：
【０１０２】
【化１７】
2008530239.tif 000019
［式中、
それぞれのＲ８は、独立してＨ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄであり；
それぞれのＲ９は、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであるか、またはＸがＯ、Ｓ、もしくは存在しない場合は存在せず；
それぞれのＸは、独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＣＨであるか、または存在せず、したがって共有結合を形成し；
それぞれのｍは、独立して０、１、または２である］］。
【０１０３】
本発明のより詳細な実施形態では、Ｒ２はＨである。さらにより詳細な実施形態では、Ｒ１は−アリール（Ｒｉ）ｐである。Ｒ１が−アリール（Ｒｉ）ｐであるさらなる実施形態では、Ｒ１中のアリールはフェニルであり、Ｒ１中のｐは２であり、Ｒ１中のどちらのＲｉ基もハロである。
【０１０４】
Ｒ１が−アリール（Ｒｉ）ｐであるさらなる実施形態では、Ｒ１中のアリールはフェニルであり、Ｒ１中のｐは１であり、Ｒ１中のＲｉ基はアルキニル、好ましくはエチニルである。
【０１０５】
Ｒ１が−アリール（Ｒｉ）ｐであるさらなる実施形態では、Ｒ１中のアリールはフェニルであり、Ｒ１中のｐは２であり、Ｒ１中の一方のＲｉ基はハロであり、Ｒ１中の他方のＲｉ基は−Ｏ（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇである。そのより詳細な実施形態では、Ｒ１中のｑは１であり、Ｒ１中のＲｇはハロフェニルである。
【０１０６】
Ｒ１が−アリール（Ｒｉ）ｐであるさらなる実施形態では、Ｒ１中のｐは１であり、Ｒ１中のＲｉはアルキニルである。
【０１０７】
本発明の別のより詳細な実施形態を提供し、Ｒ１およびＲ２は、一緒に結合してＲ１−２を形成する：
【０１０８】
【化１８】
2008530239.tif 000020
［式中、Ｒ８はＨであり、ＸはＮであり、Ｒ９は−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｂである］。そのより詳細な実施形態では、Ｒ９中のＲｂは−フェニル−Ｏ−ＣＨ２（ＣＨ３）２である。
【０１０９】
本発明のより詳細な実施形態では、Ｒ３およびＲ６はＨである。
【０１１０】
本発明のより詳細な実施形態では、Ｒ４は−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇである。そのより詳細な実施形態では、Ｒ４中のｑは１であり、ＲｇはＨである。
【０１１１】
Ｒ４が−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇである別の実施形態では、Ｒ４中のＲｇはヘテロシクリルである。
【０１１２】
本発明のより詳細な実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｒｅである。そのより詳細な実施形態では、Ｒ４およびＲ５のどちらの中のｑも２であり、Ｒ４およびＲ５のどちらの中のＲｅもメチルである。
【０１１３】
本発明のより詳細な実施形態では、Ｒ４は−ヘテロシクリル−Ｒｆであり、Ｒ５はＨである。そのより詳細な実施形態では、Ｒ４中の前記ヘテロシクリルはフラニルである。さらにより詳細な実施形態では、Ｒ４中のＲｆは−（ＣＨ２）ｑＮＨＲｈである。さらに、Ｒｈは−（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＣＨ３である。
【０１１４】
本発明のより詳細な実施形態では、Ｒ５は−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｒｇである。その別の実施形態では、Ｒ５中のＲｇはヘテロシクリルである。
【０１１５】
Ｒ７がＨである別の実施形態を提供する。
【０１１６】
Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７がすべてＨである別の実施形態を提供する。
インドリノン
式ＩＩの化合物は以下の構造を有する：
【０１１７】
【化１９】
2008530239.tif 000021
［式中、
Ｒ１１は、アルキル、アリールまたはヘテロシクリルであり；
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立してＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、アリール、ヘテロシクリル、またはアルコキシであり；
それぞれのＲｚは、独立してＨ、アルキル、アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、アリール、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲｄは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、または−ＮＲａＲｂであり；
それぞれのｎは、独立して０、１、または２であり；
それぞれのｑは、独立して０、１、または２である］。
【０１１８】
より詳細な実施形態では、Ｒ１１はヘテロシクリルである。さらにより詳細な実施形態では、Ｒ１１はＲ１１ａである：
【０１１９】
【化２０】
2008530239.tif 000022
［式中、
Ｒ１６、Ｒ１７およびＲ１８は、それぞれ独立してＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルである］。Ｒ１がＲ１ａであるさらに別のより詳細な実施形態では、Ｒ７は−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−Ｎ（Ｈ）（２−ｒ）（アルキル）ｒであり、ｐは０、１、２、３、４、または５であり、ｒは０、１、または２である。Ｒ１１がＲ１１ａであるさらに別のより詳細な実施形態では、Ｒ１３はＦである。Ｒ１１がＲ１１ａであるさらに別のより詳細な実施形態では、Ｒ１７は−（ＣＨ２）ｔＣＯＯＨであり、ｔは１、２、３、または４である。Ｒ１１がＲ１１ａであるさらに別のより詳細な実施形態では、Ｒ６およびＲ８はどちらもメチルである。Ｒ１１がＲ１１ａであるさらに別のより詳細な実施形態では、Ｒ１７はＨである。
【０１２０】
本発明の別のより詳細な実施形態では、Ｒ１１はアリールである。さらにより詳細には、Ｒ１１は、置換されたまたは未置換のフェニルである。別の実施形態では、Ｒ１３はヨウ化物である。
イソインドリノン
式ＩＩＩの化合物は以下の構造を有する：
【０１２１】
【化２１】
2008530239.tif 000023
［式中、
点線は、追加の結合の任意選択の配置を表し；
Ｒ２０は、Ｈまたは＝Ｏであり；
Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、およびＲ２４は、それぞれ独立してＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄ、またはヘテロシクリルであり；
Ｒ２５は、Ｈ、アルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｒｚであり；
Ｒ２６およびＲ２７は、それぞれ独立してＨ、−ＯＨ、ハロゲン、アルキル、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲｄであり；
Ｒ２８は、Ｈ、−ＣＨ３、またはハロゲンであり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立してＨ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、アリール、ヘテロシクリル、またはアルコキシであり；
それぞれのＲｚは、独立してＨ、アルキル、アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、アリール、またはヘテロシクリルであり；
それぞれのＲｄは、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、または−ＮＲａＲｂであり；
それぞれのｎは、独立して０、１、または２であり；
それぞれのｑは、独立して０、１、または２である］。
定義：
ＡＵＣ      曲線下面積
ＣＲ        完全応答
ＤＬＴ      用量規制毒性
ＩＬ        インターロイキン
ＩＬ−２    インターロイキン−２
ＩＵ        国際単位
ＩＶ        静脈内（投与様式として）
ＬＡＫ      リンホカイン活性化キラー
ＭＴＤ      最大耐用量
ＭＩＵ      百万国際単位
ＮＫ        ナチュラルキラー
ＰＫ        薬物動態学
ＰＲ        部分応答
ＲＣＣ      腎細胞癌
ＲＣＣａ    明細胞腎細胞癌
ｒＩＬ−２  組換えインターロイキン−２
ＲＴＫ      受容体チロシンキナーゼ
ＴＮＦ      腫瘍壊死因子
ＶＥＧＦ    血管内皮成長因子
一般に、水素またはＨなどの特定の元素の言及には、その元素のすべての同位体が含まれることを意味する。例えば、Ｒ基が、水素またはＨが含まれると定義されている場合は、これには重水素およびトリチウムも含まれる。
【０１２２】
「抗血管形成性剤」とは、系において血管形成を抑制することが示されている、または示されることとなる任意の小分子、より具体的には１，１００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する任意の化合物を意味する。本発明の組成物によって調節（阻害など）される、血管形成に関連する好ましい分子には、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、アンジオゲニン、アンジオトロピン、表皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来内皮細胞成長因子、トランスフォーミング成長因子ａ（ＴＧＦ−ａ）、トランスフォーミング成長因子ｂ（ＴＧＦ−ｂ）、または一酸化窒素が含まれる。また、本発明の組成物によるトロンボスポンジン、アンジオスタチン、およびエンドスタチンの調節（増強など）も、本発明に企図される。本発明の好ましい抗血管形成性組成物には、６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（３−エチニルフェニル）キナゾリン−４−アミン、６−（３−モルホリノプロポキシ）−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシキナゾリン−４−アミン、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジエチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、Ｎ−（４−クロロフェニル）−４−（（ピリジン−４−イル）メチル）フタラジン−１−アミン、および１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素が含まれる。
【０１２３】
用語「有効量」とは、所望の生物学的効果の実現に必要または十分な量である。例えば、腎細胞癌を治療するための化合物の有効量とは、腎細胞において腫瘍増殖の退縮を引き起こすために必要な量であり得る。有効量は、例えば治療する状態、対象の重量および疾患の重篤度に応じて変化し得る。当業者は、必要以上の実験を行わずに、経験的に有効量を容易に決定することができる。
【０１２４】
本明細書中で使用する「治療の有効量」とは、病状などの状態の進行を緩和、寛解、安定化、逆転、減速または遅延させるために十分な量をいう。
【０１２５】
「対象」または「患者」とは、イヌ、ネコ、ポケットペット、マーモセット、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ゾウ、キリン、ニワトリ、ライオン、サル、フクロウ、ラット、リス、スレンダーロリス、およびマウスを含めたヒトまたは脊椎動物を説明することを意味する。
【０１２６】
「ポケットペット」とは、例えば、ハムスター、チンチラ、フェレット、ラット、モルモット、スナネズミ、ウサギおよびフクロモモンガなどの、ゆったりとしたコートポケットに入ることができる脊椎動物の群をいう。
【０１２７】
本明細書中で使用する用語「製薬上許容されるエステル」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解するエステルをいい、人体内で容易に分解して親化合物またはその塩を残すものが含まれる。適切なエステル基には、例えば、それぞれのアルキルまたはアルケニル部分が有利には６個以下の炭素原子を有する、製薬上許容される脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン二酸に由来するものが含まれる。具体的なエステルの代表的な例には、それだけには限定されないが、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、アクリル酸エステルおよびエチルコハク酸エステルが含まれる。
【０１２８】
本発明の化合物は、無機または有機酸に由来する「製薬上許容される塩」などのように、塩の形態で用いることができる。これらの塩には、それだけには限定されないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、ショウノウ塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩（２−ｎａｐｔｈａｌｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩が含まれる。また、塩基性の窒素含有基は、メチル、エチル、プロピル、ならびに塩化ブチル、臭化ブチル、およびヨウ化ブチルなどの低級ハロゲン化アルキル；ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルスルフェートなどの硫酸ジアルキル、デシル、ラウリル、ミリスチルならびに塩化ステアリル、臭化ステアリルおよびヨウ化ステアリルなどの長鎖ハロゲン化物、または臭化ベンジルおよび臭化フェネチルなどのハロゲン化アルキル等の薬剤を用いて四級化することができる。それにより、水もしくは油に溶解または分散可能な生成物が得られる。
【０１２９】
本明細書中で使用する用語「製薬上許容されるプロドラッグ」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー性応答などを有し、妥当な利益／リスク比で釣り合いがとれており、その意図された使用に有効である、ヒトおよび下等動物の組織と接触させて用いることに適した本発明の化合物のプロドラッグ、ならびに、可能な場合は本発明の化合物の双性イオン形態をいう。用語「プロドラッグ」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば血液中での加水分解によって迅速に変換されて上記式の親化合物を与える化合物をいう。徹底的な議論は、Ｔ．  ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．  Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ第１４巻、ならびにＥｄｗａｒｄ  Ｂ．  Ｒｏｃｈｅ編、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年に記載されている。例えば米国特許第６，２８４，７７２号に記載のプロドラッグを用い得る。
【０１３０】
「ハロ」、「ハロゲン化物」、または「ハロゲン」への言及は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ原子をいう。
【０１３１】
語句「アルキル」とは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなどの置換されたおよび未置換のアルキル（ａｌｋｙ）基をいう。この語句には、直鎖状アルキル基の分枝鎖状の異性体も含まれ、それだけには限定されないが、例として提供する−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）などが含まれる。この語句には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルなどの環状アルキル基、ならびに上記定義の直鎖状および分枝鎖のアルキル基で置換されたそのような環も含まれる。この語句には、それだけには限定されないが、アダマンチルノルボルニル、およびビシクロ［２．２．２］オクチルなどの多環状アルキル基、ならびに上記定義の直鎖状および分枝鎖のアルキル基で置換されたそのような環も含まれる。語句「アルキル」には、それだけには限定されないが、炭素または水素との１つもしくは複数の結合が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩなど、ハロゲン化物中のハロゲン原子；ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、およびエステル基などの基中の酸素原子；チオール基、アルキルおよびアリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基、ならびにスルホキシド基などの基中の硫黄原子；アミン、アミド、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミンなどの基中の窒素原子；トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、およびトリアリールシリル基などの基中のケイ素原子；様々な他の基中の他の異種原子などの水素でも炭素でもない原子との結合によって置き換えられている基も含まれる。アルキル基は、１〜２０個の炭素原子および５個もの上述の追加の異種原子を有するものに限定される。より好ましいアルキル基は、１〜５個の炭素原子および２個もの異種原子を有する。
【０１３２】
語句「アリール」とは、異種原子を含まない、置換されたおよび未置換のアリール基をいう。したがって、この語句には、それだけには限定されないが、例として、フェニル、ビフェニル、アントラセニル、ナフテニルなどの基が含まれる。アリール基には、芳香族炭素の１つが上述の炭素でも水素でもない原子（アルキルの定義中）に結合しているものも含まれ、また、アリール基の１つまたは複数の芳香族炭素が、本明細書中で定義した置換されたかつ／もしくは未置換のアルキル、アルケニル、またはアルキニル基に結合しているアリール基も含まれる。これには、アリール基の２つの炭素原子がアルキル、アルケニル、またはアルキニル基の２つの原子に結合して、融合環系（例えばジヒドロナフチルまたはテトラヒドロナフチル）を定義する結合配置も含まれる。したがって、語句「アリール」には、それだけには限定されないが、とりわけ、トリルおよびヒドロキシフェニルが含まれる。
【０１３３】
語句「アルケニル」とは、上記定義のようにアルキル基に関して記載したものなどの直鎖状および分枝鎖ならびに環状の基をいうが、ただし２つの炭素原子間に少なくとも１つの二重結合が存在する。例には、それだけには限定されないが、とりわけ、ビニル、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、およびヘキサジエニルが含まれる。また、炭素でも水素でもない原子が、別の炭素に二重結合した炭素と結合している基、および炭素でも水素でもない原子のうちの１つが、別の炭素との二重結合に関与していない炭素と結合している基も含まれる。アルケニル基は、２〜１５個の炭素原子および４個もの上述の追加の異種原子を有するものに限定される。より好ましいアルケニル基は、２〜５個の炭素原子および２個もの異種原子を有する。
【０１３４】
語句「アルコキシ」とは、式−Ｏ−アルキルの置換されたまたは未置換のアルコキシ基をいい、結合点はオキシ基であり、アルキル基は上記定義のとおりである。アルコキシ基は、１〜２０個の炭素原子、および５個もの酸素原子を含めた追加の異種原子を有するものに限定される。より好ましいアルコキシ基は、１〜５個の炭素原子、および２個もの酸素原子を含めた異種原子を有する。
【０１３５】
語句「アルキニル」とは、上記定義のようにアルキル基に関して記載したものなどの直鎖状および分枝鎖の基をいうが、ただし２つの炭素原子間に少なくとも１つの三重結合が存在する。例には、それだけには限定されないが、とりわけ、−Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｈ２）Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、および−Ｃ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）が含まれる。また、炭素でも水素でもない原子が、別の炭素に三重結合した炭素原子と結合しているアルキニル基、および炭素でも水素でもない原子が、別の炭素との三重結合に関与していない炭素に結合しているアルキニル基も含まれる。アルキニル基は、２〜１５個の炭素原子および４個もの上述の追加の異種原子を有するものに限定される。より好ましいアルキニル基は、２〜５個の炭素原子および２個もの異種原子を有する。
【０１３６】
語句「ヘテロシクリル」とは、芳香族および非芳香族の環状化合物をどちらもいい、それだけには限定されないが、その１つまたは複数がそれだけには限定されないがＮ、Ｏ、およびＳなどの異種原子である３つ以上の環員を含む、キヌクリジルなどの単環、二環、ならびに多環状の環状化合物が含まれる。ヘテロシクリル基の例には、それだけには限定されないが：それだけには限定されないがピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ジヒドロピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル（例えば４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、１Ｈ−１，２，３−トリアゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリルなど）、テトラゾリル、（例えば１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈテトラゾリルなど）などの１〜４個の窒素原子を含む不飽和３〜８員環；それだけには限定されないがピロリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニルなどの１〜４個の窒素原子を含む飽和３〜８員環；それだけには限定されないがインドリル、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリルなどの１〜４個の窒素原子を含む縮合不飽和複素環式基；それだけには限定されないがフラニルなどの１〜２個の酸素原子を含む不飽和３〜８員環；それだけには限定されないがオキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル（例えば１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリルなど）などの１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含む不飽和３〜８員環；それだけには限定されないがモルホリニルなどの１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含む飽和３〜８員環；例えば、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル（例えば２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジニルなど）などの１〜２個の酸素原子および１〜３個の窒素原子を含む不飽和縮合複素環式基；それだけには限定されないがチアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル（例えば１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリルなど）などの１〜３個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含む不飽和３〜８員環；それだけには限定されないがチアゾロジニルなどの１〜２個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含む飽和３〜８員環；それだけには限定されないがチエニル、ジヒドロジチイニル、ジヒドロジチオニル、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピランなどの１〜２個の硫黄原子を含む飽和および不飽和３〜８員環；それだけには限定されないがベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアジニル（例えば２Ｈ−１，４−ベンゾチアジニルなど）、ジヒドロベンゾチアジニル（例えば２Ｈ−３，４−ジヒドロベンゾチアジニルなど）などの１〜２個の硫黄原子および１〜３個の窒素原子を含む不飽和縮合複素環、ベンゾジオキソリル（例えば１，３−ベンゾジオキソイルなど）などの１〜２個の酸素原子を含む不飽和縮合複素環；それだけには限定されないがジヒドロオキサチイニルなどの１個の酸素原子および１〜２個の硫黄原子を含む不飽和３〜８員環；１，４−オキサチアンなどの１〜２個の酸素原子および１〜２個の硫黄原子を含む飽和３〜８員環；ベンゾチエニル、ベンゾジチイニルなどの１〜２個の硫黄原子を含む不飽和縮合環；ならびにベンゾオキサチイニルなどの１個の酸素原子および１〜２個の酸素原子を含む不飽和縮合複素環が含まれる。ヘテロシクリル基には、環中の１つまたは複数のＳ原子が１個または２個の酸素原子に二重結合している上述の基も含まれる（スルホキシドおよびスルホン）。例えば、ヘテロシクリル基には、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオフェンオキシド、およびテトラヒドロチオフェン１，１−ジオキシドが含まれる。好ましいヘテロシクリル基は、５〜６個の環員を含む。より好ましいヘテロシクリル基には、チオモルホリンのＳ原子が１つまたは複数のＯ原子、ピロール、ホモピペラジン、オキサゾリジン−２−オン、ピロリジン−２−オン、オキサゾール、キヌクリジン、チアゾール、イソオキサゾール、フラン、およびテトラヒドロフランに結合している、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、イミダゾール、ピラゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、テトラゾール、チオモルホリン、チオモルホリンが含まれる。また「ヘテロシクリル」とは、環員の１つが、置換されたアルキル基および置換されたアリール基に関して記載したものなどの水素でない原子に結合している、上記定義の基もいう。例には、それだけには限定されないが、とりわけ、２−メチルベンズイミダゾリル、５−メチルベンズイミダゾリル、５−クロロベンズチアゾリル、１−メチルピペラジニル、および２−クロロピリジルが含まれる。ヘテロシクリル基は、２〜１５個の炭素原子および６個もの上述の追加の異種原子を有するものに限定される。より好ましいヘテロシクリル基は、３〜５個の炭素原子および２個もの異種原子を有する。
【０１３７】
フェニルなどの未定義ではあるが当分野で周知の基に適用した場合、用語「置換された」とは、任意選択の付属物に関してアルキルの定義で記載したものと同じ意味を持つ。
【０１３８】
本発明内では、本明細書中に記載の化合物が互変異性の現象を示す場合があり、本明細書中の式の図は可能な互変異性体の１つだけしか表せないことを理解されたい。本発明は、抗血管形成活性を有する任意の互変異性体を包含し、式の図中で用いたいずれか１つの互変異性体だけに限定されないことを理解されたい。
【０１３９】
本発明の特定の化合物および実施形態は、溶媒和型、例えば水和物型などの非溶媒和型で存在することができることを理解されたい。本発明は、抗血管形成活性を有するそのような溶媒和型すべてを包含することを理解されたい。
【０１４０】
また、本発明には、上記開示したものと構造的に同一であるが、１つまたは複数の原子が自然に通常見つかる原子質量または質量数とは異なった原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられている、同位体的標識した化合物も含まれる。本発明の化合物中に取り込ませることができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌが含まれる。前述の同位体および／または他の原子の他の同位体を含む、本発明の化合物、そのプロドラッグ、ならびに前記化合物および前記プロドラッグの製薬上許容される塩は、本発明の範囲内にある。本発明の特定の同位体的標識した化合物、例えば３Ｈおよび１４Ｃなどの放射性同位体を取り込ませた化合物は、薬物および／または基質の組織分布アッセイに有用である。トリチウム、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃ標識した同位体は、調製の容易さおよび検出の能力から、特に好ましい。さらに、重水素、すなわち２Ｈなどのより重い同位体での置換により、より良好な代謝安定性、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増加または必要用量の低下から生じる特定の治療上の利点が得られる場合があり、したがって、これは一部の状況では好ましい場合がある。本発明の同位体的標識した化合物およびそのプロドラッグは、一般に、既知または参考文献の手順を実施することによって、および容易に入手可能な同位体的標識された試薬で同位体的標識されていない試薬を置き換えることによって調製することができる。
【０１４１】
「ＩＬ−２」または「インターロイキン−２」への言及は、正常な末梢血リンパ球によって産生され、低濃度で体内に存在するリンパ球を示す。ＩＬ−２は、Ｍｏｒｇａｎら、（１９７６年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９３：１００７〜１００８頁によって最初に記載されており、刺激したＴリンパ球の増殖を誘導するその能力から、もともとはＴ細胞成長因子と呼ばれていた。これは、分子量が１３，０００〜１７，０００の範囲と報告されているタンパク質であり（ＧｉｌｌｉｓおよびＷａｔｓｏｎ、（１９８０年）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１５９：１７０９頁）、６〜８．５の範囲の等電点を有する。本発明の目的のために、用語「ＩＬ−２」とは、例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、ポケットペット、およびヒトなどの哺乳動物源を含めた任意のＩＬ−２源を包含することを意図し、ネイティブであっても、微生物宿主によって産生された組換えＩＬ−２ポリペプチドなど組換え技術によって得てもよい。ＩＬ−２は、ネイティブポリペプチド配列のものであっても、改変体ＩＬ−２ポリペプチドが本明細書中に定義する目的のＩＬ−２生物活性を保持している限りは本明細書中に以下に記載するようにネイティブＩＬ−２ポリペプチドの改変体であることもできる。好ましくは、ＩＬ−２ポリペプチドまたはその改変体はヒト源に由来し、微生物宿主によって産生させた組換えヒトＩＬ−２ポリペプチドなどの組換えによって産生したヒトＩＬ−２、および目的のＩＬ−２生物活性を保持しているその改変体が含まれる。治療上活性のある成分としてＩＬ−２を含む任意の薬剤組成物を用いて本発明を実施することができる。
【０１４２】
抗癌剤：
本発明の組成物は、他の抗癌剤と併せて投与し得る。具体的には、組成物は、組合せ治療として一緒に配合するか、または別々に投与する。本発明で用いる抗癌剤には、それだけには限定されないが、以下に記載の１つまたは複数が含まれる：
Ａ．キナーゼ阻害剤
本発明の組成物と併せて抗癌剤として用いるためのキナーゼ阻害剤には、小分子キナゾリンなどの表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）キナーゼの阻害剤、例えば、ゲフィチニブ（米国特許ＵＳ５４５７１０５号、米国特許ＵＳ５６１６５８２号、および米国特許ＵＳ５７７０５９９号）、ＺＤ−６４７４（国際公開公報ＷＯ０１／３２６５１号）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）、米国特許ＵＳ５，７４７，４９８号および国際公開公報ＷＯ９６／３０３４７号）、およびラパチニブ（米国特許ＵＳ６，７２７，２５６号および国際公開公報ＷＯ０２／０２５５２号）；ＳＵ−１１２４８（国際公開公報ＷＯ０１／６０８１４号）、ＳＵ５４１６（米国特許ＵＳ５，８８３，１１３号および国際公開公報ＷＯ９９／６１４２２号）、ＳＵ６６６８（米国特許ＵＳ５，８８３，１１３号および国際公開公報ＷＯ９９／６１４２２号）、ＣＨＩＲ−２５８（米国特許ＵＳ６，６０５，６１７号および米国特許ＵＳ６，７７４，２３７号）、バタラニブまたはＰＴＫ−７８７（米国特許ＵＳ６，２５８，８１２号）、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（国際公開公報ＷＯ０２／５７４２３号）、Ｂ４３−ゲニステイン（国際公開公報ＷＯ−０９６０６１１６号）、フェンレチニド（レチノイン酸ｐ−ヒドロキシフェニルアミン）（米国特許ＵＳ４，３２３，５８１号）、ＩＭ−８６２（国際公開公報ＷＯ０２／６２８２６号）、ベバシズマブまたはＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（国際公開公報ＷＯ９４／１０２０２号）、ＫＲＮ−９５１、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、ＡＧ−１３７３６およびＡＧ−１３９２５、ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン、ＺＫ−３０４７０９、Ｖｅｇｌｉｎ（登録商標）、ＶＭＤＡ−３６０１、ＥＧ−００４、ＣＥＰ−７０１（米国特許ＵＳ５，６２１，１００号）、Ｃａｎｄ５（国際公開公報ＷＯ０４／０９７６９号）を含めた血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）キナーゼ阻害剤；ペルツズマブ（国際公開公報ＷＯ０１／００２４５号）、トラスツズマブ、およびリツキシマブなどのＥｒｂ２チロシンキナーゼ阻害剤；ＲＸ−０２０１などのＡＫＴプロテインキナーゼ阻害剤；ＬＹ−３１７６１５（国際公開公報ＷＯ９５／１７１８２号）、およびペリフォシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）（米国特許ＵＳ２００３１７１３０３号）などのプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤；ＳＦ−１１２６ならびにＰＩ−１０３、ＰＩ−５０９、ＰＩ−５１６およびＰＩ−５４０（ＰＩｒａｍｅｄが生産）を含めたホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤；ソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６）、ＡＲＱ−３５０ＲＰ、ＬＥｒａｆＡＯＮ、ＢＭＳ−３５４８２５  ＡＭＧ−５４８、および国際公開公報ＷＯ０３／８２２７２号に開示の他の化合物を含めたＲａｆ／Ｍａｐ／ＭＥＫ／Ｒａｓキナーゼ阻害剤；線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）キナーゼ阻害剤；ＣＹＣ−２０２またはロスコビチン（国際公開公報ＷＯ９７／２０８４２号および国際公開公報ＷＯ９９／０２１６２号）を含めた細胞依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤；ＣＨＩＲ−２５８、３Ｇ３ｍＡｂ、ＡＧ−１３７３６、ＳＵ−１１２４８およびＳＵ６６６８などの血小板���来成長因子受容体（ＰＧＦＲ）キナーゼ阻害剤；ならびにＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤およびＳＴＩ−５７１またはＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標）などの融合タンパク質が含まれる。
【０１４３】
Ｂ．抗エストロゲン
本発明の組成物と併せて抗癌治療で用いるためのエストロゲン標的化剤には、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェンを含めた選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）；Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）またはアナストロゾールを含めたアロマターゼ阻害剤；Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）またはフルベストラントを含めたエストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）が含まれる。
【０１４４】
Ｃ．抗アンドロゲン
本発明の組成物と併せて抗癌治療で用いるためのアンドロゲン標的化剤には、フルタマイド、ビカルタミド、フィナステリド、アミノグルテタミド、ケトコナゾール、およびコルチコステロイドが含まれる。
【０１４５】
Ｄ．他の阻害剤
本発明の組成物と併せて抗癌剤として用いるための他の阻害剤には、チピファルニブまたはＲ−１１５７７７（米国特許ＵＳ２００３１３４８４６号および国際公開公報ＷＯ９７／２１７０１号）、ＢＭＳ−２１４６６２、ＡＺＤ−３４０９、およびＦＴＩ−２７７を含めたタンパク質ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；メルバロンおよびジフロモテカン（ＢＮ−８０９１５）を含めたトポイソメラーゼ阻害剤；ＳＢ−７４３９２１およびＭＫＩ−８３３を含めた有糸分裂性キネシン紡錐体タンパク質（ＫＳＰ）阻害剤；ボルテゾミブまたはＶｅｌｃａｄｅ（登録商標）（米国特許ＵＳ５，７８０，４５４号）、ＸＬ−７８４などのプロテアーゼモジュレーター；ならびに非ステロイド性抗炎症薬Ｉ（ＮＳＡＩＤ）を含めたシクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）阻害剤が含まれる。
【０１４６】
Ｅ．癌化学療法薬
本発明の組成物と併せて抗癌剤として用いるための具体的な癌化学療法剤には、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射剤（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射剤（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射剤（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、米国特許ＵＳ２００４０７３０４４号）、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタマイド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン（ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、ミロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロサン２０とカルムスチン移植片（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、塩酸トポテカン注射剤（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が含まれる。
【０１４７】
Ｆ．アルキル化剤
抗癌治療のために本発明の組成物と併せて用いるためのアルキル化剤には、ＶＮＰ−４０１０１Ｍまたはクロレチジン（ｃｌｏｒｅｔｉｚｉｎｅ）、オキサリプラチン（米国特許ＵＳ４，１６９，８４６号、国際公開公報ＷＯ０３／２４９７８号および国際公開公報ＷＯ０３／０４５０５号）、グルフォスファミド、マフォスファミド、エトポフォス（米国特許ＵＳ５，０４１，４２４号）、プレドニムスチン；トレオスルファン；ブスルファン；イロフルベン（アシルフルベン）；ペンクロメジン；ピラゾロアクリジン（ＰＤ−１１５９３４）；Ｏ６−ベンジルグアニン；デシタビン（５−アザ−２−デオキシシチジン）；ブロスタリシン（ｂｒｏｓｔａｌｌｉｃｉｎ）；マイトマイシンＣ（ＭｉｔｏＥｘｔｒａ）；ＴＬＫ−２８６（Ｔｅｌｃｙｔａ（登録商標））；テモゾマイド；トラベクテジン（米国特許ＵＳ５，４７８，９３２号）；ＡＰ−５２８０（シスプラチンの白金酸塩配合物）；ポルフィロマイシン；およびクレアラジド（ｃｌｅａｒａｚｉｄｅ）（メクロレタミン）が含まれる。
【０１４８】
Ｇ．キレート化剤
抗癌治療のために本発明の組成物と併せて用いるためのキレート化剤には、テトラチオモリブデン酸塩（国際公開公報ＷＯ０１／６０８１４号）；ＲＰ−６９７；キメラＴ８４．６６（ｃＴ８４．６６）；ガドフォスベセット（ｇａｄｏｆｏｓｖｅｓｅｔ）（Ｖａｓｏｖｉｓｔ（登録商標））；デフェロキサミン；および任意選択で電気穿孔（ＥＰＴ）と組み合わせたブレオマイシンが含まれる。
【０１４９】
Ｈ．生物学的応答調節剤
抗癌治療のために本発明の組成物と併せて用いるための免疫変調剤などの生物学的応答調節剤には、ＵＣＮ−０１、ＣＥＰ−７０１およびミドスタウリンを含めたスタウロスプリンならびにその大環状類似体（国際公開公報ＷＯ０２／３０９４１号、国際公開公報ＷＯ９７／０７０８１号、国際公開公報ＷＯ８９／０７１０５号、米国特許ＵＳ５，６２１，１００号、国際公開公報ＷＯ９３／０７１５３号、国際公開公報ＷＯ０１／０４１２５号、国際公開公報ＷＯ０２／３０９４１号、国際公開公報ＷＯ９３／０８８０９号、国際公開公報ＷＯ９４／０６７９９号、国際公開公報ＷＯ００／２７４２２号、国際公開公報ＷＯ９６／１３５０６号および国際公開公報ＷＯ８８／０７０４５号参照）；スクワラミン（国際公開公報ＷＯ０１／７９２５５号）；ＤＡ−９６０１（国際公開公報ＷＯ９８／０４５４１号および米国特許ＵＳ６，０２５，３８７号）；アレムツズマブ；インターフェロン（例えばＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｂなど）；インターロイキン、特にＩＬ−２またはアルデスロイキンおよびＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ならびに、ネイティブなヒト配列の７０％を超えるアミノ酸配列を有する、活性のあるその生物学的改変体；アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；ＳＵ１０１またはレフルノミド（国際公開公報ＷＯ０４／０６８３４号および米国特許ＵＳ６，３３１，５５５号）；レシキモドおよびイミキモドなどのイミダゾキノリン（米国特許ＵＳ４，６８９，３３８号、第５，３８９，６４０号、第５，２６８，３７６号、第４，９２９，６２４号、第５，２６６，５７５号、第５，３５２，７８４号、第５，４９４，９１６号、第５，４８２，９３６号、第５，３４６，９０５号、第５，３９５，９３７号、第５，２３８，９４４号、および第５，５２５，６１２号）；ならびにベンザゾール、アントラキノン、チオセミカルバゾン、およびトリプタントリンを含めたＳＭＩＰ（国際公開公報ＷＯ０４／８７１５３号、国際公開公報ＷＯ０４／６４７５９号、および国際公開公報ＷＯ０４／６０３０８号）が含まれる。
【０１５０】
Ｉ．癌ワクチン：
本発明の組成物と併せて用いるための抗癌ワクチンには、Ａｖｉｃｉｎｅ（登録商標）（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２６、１９７４年、２２６９〜７０頁）；オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ（登録商標））；Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ（登録商標）（ＳＴｎ−ＫＬＨ）；黒色腫ワクチン；Ｒａｓタンパク質中の５つの突然変異に向けられているＧＩ−４０００シリーズ（ＧＩ−４０１４、ＧＩ−４０１５、およびＧＩ−４０１６）；ＧｌｉｏＶａｘ−１；ＭｅｌａＶａｘ；Ａｄｖｅｘｉｎ（登録商標）またはＩＮＧＮ−２０１（国際公開公報ＷＯ９５／１２６６０号）；ＨＰＶ−１６Ｅ７をコードしているＳｉｇ／Ｅ７／ＬＡＭＰ−１；ＭＡＧＥ−３ワクチンまたはＭ３ＴＫ（国際公開公報ＷＯ９４／０５３０４号）；ＨＥＲ−２ＶＡＸ；腫瘍に特異的なＴ細胞を刺激するＡＣＴＩＶＥ；ＧＭ−ＣＳＦ癌ワクチン；およびリステリアモノサイトジェネスに基づいたワクチンが含まれる。
【０１５１】
Ｊ．アンチセンス治療：
本発明の組成物と併せて用いるための抗癌剤には、ＡＥＧ−３５１５６（ＧＥＭ−６４０）；ＡＰ−１２００９およびＡＰ−１１０１４（ＴＧＦ−β２に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド）；ＡＶＩ−４１２６；ＡＶＩ−４５５７；ＡＶＩ−４４７２；オブリマーセン（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））；ＪＦＳ２；アプリノカルセン（ａｐｒｉｎｏｃａｒｓｅｎ）（国際公開公報ＷＯ９７／２９７８０号）；ＧＴＩ−２０４０（Ｒ２リボヌクレオチドレダクターゼｍＲＮＡアンチセンスオリゴ）（国際公開公報ＷＯ９８／０５７６９号）；ＧＴＩ−２５０１（国際公開公報ＷＯ９８／０５７６９号）；リポソームにカプセル封入したｃ−Ｒａｆアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＬＥｒａｆＡＯＮ）（国際公開公報ＷＯ９８／４３０９５号）；およびＳｉｒｎａ−０２７（ＲＮＡｉに基づいた治療的標的化のＶＥＧＦＲ−１ｍＲＮＡ）などのアンチセンス組成物も含まれる。
【０１５２】
Ｋ．ＩＬ−２：
１つの好ましいＩＬ−２化合物は「アルデスロイキン」または「Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）」であり、これはカリフォルニア州ＥｍｅｒｙｖｉｌｌｅのＣｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造される。この配合物中のＩＬ−２は組換えによって産生し、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２突然変異タンパク質は、最初のアラニン残基が排除され、位置１２５のシステイン残基がセリン残基によって置き換えられていることでネイティブヒトＩＬ−２アミノ酸配列と異なる（ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２と呼ばれる）。このＩＬ−２突然変異タンパク質は、大腸菌中で発現させ、次いで米国特許第４，９３１，５４３号に記載のようにダイアフィルトレーションおよび陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製することができる。
【０１５３】
アルデスロイキンをネイティブ（ジャーカット）ＩＬ−２とｉｎ  ｖｉｔｒｏで比較した。有意な差異は見られず、マウス内におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞溶解性細胞の誘導およびＩＶ投与後の血清半減期はアルデスロイキンとネイティブ（ジャーカット）ＩＬ−２とで同等であった。しかし、アルデスロイキンによって包含されるＩＬ−２の形態には有益な特質があり、したがって、「アルデスロイキン」への参照にはその組成物だけが包含され、ＩＬ−２タンパク質のすべての可能な形態は包含されない。
【０１５４】
セタス（Ｃｅｔｕｓ）のリンパ球増殖バイオアッセイが開発された１９８３年には、利用可能な公式のＩＬ−２基準の調製は存在しなかった。この調製のために、１セタス単位は、ＩＬ−２依存性マウスＴ細胞が２４時間のインキュベーション後にその最大レベルの５０％でトリチウム標識したチミジンを取り込むことを誘導した、１ｍＬ中のＩＬ−２の量と定義された。ＩＬ−２を含む生成物は、１ｍｇあたり３×１０６セタス単位の特異的活性を指定された。１９８８年に、英国にある生物学的標準のＷＨＯ研究所である国立生物学的製剤研究所（ＮＩＢＳＣ）が、ＩＬ−２の国際標準を確立した。１９８８年にはまた、セタスのリンパ球増殖バイオアッセイのアッセイ手順も変更された。新しいバイオアッセイ手順で、セタスの研究所内標準をＩＬ−２国際標準に対して較正した。以下の補正係数が確立された：
国際単位＝セタス単位×６
アルデスロイキンの量は、１８×１０６国際単位（１８ＭＩＵ）の公称特異的活性を有する１ｍｇのアルデスロイキンに基づいた質量単位を用いて指定する。プロトコルには国際単位が組み入れられている。
【０１５５】
本発明の方法で有用な薬剤組成物は、ＩＬ−２の生物活性のある改変体を含み得る。そのような改変体は、対象に投与した場合に改変体ポリペプチドを含む薬剤組成物がネイティブポリペプチドを含む薬剤組成物と同じ治療効果を有するように、ネイティブポリペプチドの所望の生物活性を保持しているべきである。すなわち、改変体ポリペプチドは、ネイティブポリペプチドにおいて実測された様式と類似の様式で、薬剤組成物中において治療上活性のある成分として役割を果たす。当分野には、改変体ポリペプチドが所望の生物活性を保持しており、したがって薬剤組成物中で治療上活性のある成分として役割を果たすかどうかを決定する方法が存在する。生物活性は、本発明中に記載したアッセイを含めた、ネイティブポリペプチドまたはタンパク質の活性を測定するために特に設計されたアッセイを用いて測定することができる。さらに、生物活性のあるネイティブポリペプチドに対して産生させた抗体を、改変体ポリペプチドに結合するその能力について試験することができる。ここで、有効な結合は、ポリペプチドがネイティブポリペプチドに類似したコンホメーションを有することの指標である。
【０１５６】
本発明の目的のために、目的のＩＬ−２生物活性とは、ＩＬ−２がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化および／または拡大して、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）活性および抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力である。したがって、本発明の方法で用いるためのＩＬ−２改変体（例えばヒトＩＬ−２の突然変異タンパク質）はＮＫ細胞を活性化および／または拡大して、ＬＡＫ活性およびＡＤＣＣを媒介する。ＩＬ−２によるＮＫ細胞の活性化または拡大ならびに１ＡＣまたはＡＤＣＣ活性の媒介を決定するためのアッセイは、当分野で周知である。
【０１５７】
ネイティブまたは天然に存在するＩＬ−２の適切な生物活性のある改変体は、そのポリペプチドの断片、類似体、および誘導体であることができる。「断片」とは、インタクトなポリペプチド配列および構造の一部分のみからなるポリペプチドを意図し、ネイティブポリペプチドのＣ末端欠失またはＮ末端欠失であることができる。「類似体」とは、ネイティブポリペプチドまたはネイティブポリペプチドの断片のどちらかの類似体を意図し、類似体は、１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を有するネイティブポリペプチドの配列および構造を有する。本明細書中に記載のものなどの「突然変異タンパク質」、および１つまたは複数のペプトイド（ペプチド模倣体）を有するペプチドも、用語「類似体」に包含される（国際公開公報ＷＯ９１／０４２８２号参照）。「誘導体」とは、ネイティブポリペプチドの所望の生物活性が保持されている限り、目的のネイティブポリペプチド、ネイティブポリペプチドの断片、またはそのそれぞれの類似体の任意の適切な修飾、例えばグリコシル化、リン酸化、ポリマーコンジュゲート形成（例えばポリエチレングリコールと）、または他の外来部分の付加を意図する。ポリペプチドの断片、類似体、および誘導体の作製方法は、一般に当分野で利用可能である。
【０１５８】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列改変体は、目的のネイティブポリペプチドをコードしているクローニングしたＤＮＡ配列中の突然変異によって調製することができる。突然変異誘発およびヌクレオチド配列変更の方法は当分野で周知である。例えば、本明細書中に参考として組み込まれている、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編、（１９８３年）、「Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ、（１９８５年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８２：４８８〜４９２頁；Ｋｕｎｋｅｌら、（１９８７年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５４：３６７〜３８２頁；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９年）、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびそれらに引用されている文献を参照されたい。目的のポリペプチドの生物活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換の指導は、本明細書中に参考として組み込まれているＤａｙｈｏｆｆら、（１９７８年）、「Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  （Ｎａｔｌ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｒｅｓ．  Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．）のモデル中に見つけることができる。１つのアミノ酸を類似の特性を有する別のアミノ酸で交換するなどの保存的置換が好ましい場合がある。保存的置換の例には、それだけには限定されないが、Ｇｌｙ：Ａｌａ、Ｖａｌ：Ｉｌｅ：Ｌｅｕ、Ａｓｐ：Ｇｌｕ、Ｌｙｓ：Ａｒｇ、Ａｓｎ：Ｇｌｎ、およびＰｈｅ：Ｔｒｐ：Ｔｙｒが含まれる。
【０１５９】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの改変体を構築するにあたって、改変体が所望の活性を保有し続けるように修飾を行う。改変体ポリペプチドをコードしているＤＮＡ中に行う任意の突然変異は、配列を読み枠の外に配置してはならず、また、二次ｍＲＮＡ構造を生じる可能性のある相補的領域をもたらさないことが好ましい。
【０１６０】
ＩＬ−２の生物活性のある改変体は、一般に、比較の基準として役割を果たす基準ポリペプチド分子のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは約９０％〜９５％以上、最も好ましくは約９８％以上のアミノ酸配列同一性を有する。したがって、ＩＬ−２基準分子がヒトＩＬ−２である場合、その生物活性のある改変体は、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは約９０％〜９５％以上、最も好ましくは約９８％以上の配列同一性を有する。目的のネイティブポリペプチドの生物活性のある改変体は、わずか１〜１５個のアミノ酸、わずか１〜１０個、例えば６〜１０個、わずか５個、わずか４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ酸残基がネイティブポリペプチドと異なり得る。「配列同一性」とは、改変体のアミノ酸配列指定した連続的なセグメントのアラインメントを行い、基準分子のアミノ酸配列と比較した場合に、改変体ポリペプチドと基準として役割を果たすポリペプチド分子との中に同じアミノ酸残基が見つかることを意図する。２つのアミノ酸配列間の％配列同一性は、同一のアミノ酸残基が両配列中に出現する位置の数を決定して、一致した位置の数を得ること、一致した位置の数を、基準分子との比較を行っているセグメント中の位置の合計数で割り算すること、および結果を１００で掛け算して％配列同一性を得ることによって計算する。
【０１６１】
したがって、任意の２つの配列間の％同一性の決定は、数学アルゴリズムを用いて達成することができる。好ましくは、ＩＬ−２の天然に存在する改変体および天然に存在しない改変体は、基準分子、例えばネイティブヒトＩＬ−２のアミノ酸配列、または基準ＩＬ−２分子のより短い部分に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％または９５％同一であるアミノ酸配列を有する。より好ましくは、分子は９６％、９７％、９８％または９９％同一である。％配列同一性は、ギャップオープンペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２を用いて、アフィンギャップ検索を用いたスミス−ウォーターマン相同性検索アルゴリズムを使用して決定する。スミス−ウォーターマン相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．（１９８１年）２：４８２〜４８９頁に教示されている。改変体は、例えば、わずか１〜１０個のアミノ酸残基、例えば６〜１０個、わずか５個、わずか４個、３個、２個、またはさらには１個のアミノ補助残基だけが異なり得る。
【０１６２】
２つのアミノ酸配列の最適なアラインメントに関して、改変体アミノ酸配列の連続的なセグメントは、基準アミノ酸配列と比較して付加されたアミノ酸残基または欠失したアミノ酸残基を有し得る。基準アミノ酸配列との比較に用いる連続的なセグメントには少なくとも２０個の連続的なアミノ酸残基が含まれ、３０個、４０個、５０個以上のアミノ酸残基であり得る。保存的残基置換またはギャップに関連する配列同一性の補正を行うことができる（スミス−ウォーターマン相同性検索アルゴリズム参照）。
【０１６３】
ＩＬ−２活性を有するポリペプチドの正確な化学構造はいくつかの要素に依存する。イオン化可能なアミノ基およびカルボキシル基が分子中に存在するので、特定のポリペプチドは、酸性もしくは塩基性の塩として、または中性の形態で得られ得る。適切な環境条件下に置いた場合にその生物活性を保持している、このような調製物すべてが、本明細書中で用いるＩＬ−２活性を有するポリペプチドの定義に含まれる。
【０１６４】
さらに、ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分（グリコシル化）または脂質、リン酸、アセチル基などの他の補足分子を用いた誘導体化によって、増強させ得る。また、糖類とのコンジュゲート形成によって増強させてもよい。このような増強の特定の態様は、産生宿主の翻訳後プロセッシング系によって達成される。他のこのような修飾はｉｎ  ｖｉｔｒｏで導入し得る。いずれにしても、ポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限りは、そのような修飾が本明細書中で用いるＩＬ−２ポリペプチドの定義に含まれる。そのような修飾は、様々なアッセイにおいて、ポリペプチドの活性を増強または減少させることによって活性に定量的もしくは定性的な影響を与えることが予測される。さらに、鎖中の個々のアミノ酸残基を酸化、還元、または他の誘導体化によって修飾してもよく、ポリペプチドを切断して活性を保持している断片を得てもよい。
【０１６５】
活性を破壊しないそのような変更は、本明細書中で用いる目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義からポリペプチド配列を外さない。
【０１６６】
当分野では、ポリペプチド改変体の調製および使用に関して相当な指導が提供されている。ＩＬ−２改変体の調製にあたって、当業者は、ネイティブタンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列にどのような修飾を行えば、本発明の方法で用いる薬剤組成物の治療上活性のある成分として使用するために適した改変体がもたらされるのかを容易に決定することができる。
【０１６７】
本発明の方法で用いるためのＩＬ−２またはその改変体は任意の源に由来し得るが、組換えＩＬ−２であることが好ましい。「組換えＩＬ−２」とは、ネイティブ配列のＩＬ−２に匹敵する生物活性を有しており、例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、（１９８３年）、Ｎａｔｕｒｅ、３０２：３０５〜３１０頁およびＤｅｖｏｓ、（１９８３年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１：４３０７〜４３２３頁に記載の組換えＤＮＡ技術によって調製したインターロイキン−２、またはＷａｎｇら、（１９８４年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２４：１４３１〜１４３３頁に記載の突然変異によって変更したＩＬ−２を意図する。一般に、ＩＬ−２をコードしている遺伝子をクローニングし、次いで、本明細書中に記載のように、形質転換させた生物、好ましくは微生物、最も好ましくは大腸菌中で発現させる。宿主生物は、発現条件下で外来遺伝子を発現してＩＬ−２を産生する。合成組換えＩＬ−２は酵母などの真核生物またはヒト細胞中で産生することもできる。ＩＬ−２を細胞から増殖、収集、破壊、または抽出する方法は、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；第４，７３８，９２７号；第４，６５６，１３２号；第４，５６９，７９０号；第４，７４８，２３４号；第４，５３０，７８７号；第４，５７２，７９８号；第４，７４８，２３４号；および第４，９３１，５４３号に実質的に記載されている。
【０１６８】
改変体ＩＬ−２タンパク質の例には、欧州特許（ＥＰ）公報ＥＰ１３６，４８９号（これは、天然に存在するＩＬ−２のアミノ酸配列中において以下の変更のうちの１つまたは複数を開示している：Ａｓｎ２６からＧｌｎ２６；Ｔｒｐ１２１からＰｈｅ１２１；Ｃｙｓ５８からＳｅｒ５８またはＡｌａ５８、Ｃｙｓ１０５からＳｅｒ１０５またはＡｌａ１０５；Ｃｙｓ１２５からＳｅｒ１２５またはＡｌａ１２５；Ａｒｇ１２０に続くすべての残基の欠失；およびそのＭｅｔ−１形態）；ならびにベルギー特許第８９３，０１６号に等しく、米国特許第４，５１８，５８４号と共同所有されている、１９８３年１０月１３日出願の欧州特許出願第８３３０６２２１．９号（１９８４年５月３０日に公報ＥＰ１０９，７４８号のもとで公開）に記載の組換えＩＬ−２突然変異タンパク質（これは、位置１２５［ネイティブヒトＩＬ−２に従って番号付けした］のシステインが欠失しているか、中性アミノ酸によって置き換えられている、組換えヒトＩＬ−２突然変異タンパク質；アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２；およびｄｅｓアラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２を開示している）を参照されたい。米国特許第４，７５２，５８５号（これは、以下の改変体ＩＬ−２タンパク質を開示している：ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、１０  ｄｅｓ−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ａｉａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  １５  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ���  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ２０  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ  ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ２５  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ  ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ  ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、およびｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２）ならびに米国特許第４，９３１，５４３号（これは、ＩＬ−２突然変異タンパク質ｄｅｓ−アラニル−１、本明細書中の例で用いるセリン３０  １２５  ヒトＩＬ−２、および他のＩＬ−２突然変異タンパク質も開示している）も参照されたい。
【０１６９】
また、位置１０４のメチオニンが保存的アミノ酸によって置き換えられている組換えＩＬ−２突然変異タンパク質を開示している、欧州特許公報ＥＰ２００，２８０号（１０、１９８６年１２月１０日公開）も参照されたい。
【０１７０】
例には、以下の突然変異タンパク質が含まれる：ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ＩＬ−２；ｄｅｓ−  ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ  ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ＩＬ−２；およびｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２。また、Ｎ末端アミノ酸としてネイティブＩＬ−２のメチオニンの代わりにアラニンを有する、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２改変体；プロリンがＮ末端アミノ酸であるように最初のメチオニンが欠失した、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２；およびＮ末端のメチオニンおよびプロリンアミノ酸の間にアラニンが挿入された、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２を開示している、欧州特許公報ＥＰ１１８，６１７号および米国特許第５，７００，９１３号も参照されたい。
【０１７１】
他のＩＬ−２突然変異タンパク質には、Ｔ細胞受容体を発現する細胞によって発現される高親和性ＩＬ−２受容体に対してＮＫ細胞よりも優先的に選択的活性を有し、ＩＬ−２毒性が減少していることが報告されている、国際公開公報ＷＯ９９／６０１２８号に開示されているもの（位置２０のアスパラギン酸をヒスチジンもしくはイソロイシンで置換、位置８８のアスパラギンをアルギニン、グリシン、もしくはイソロイシンで置換、または位置１２６のグルタミンをロイシンもしくはグルタミン酸で置換）；ネイティブＩＬ−２と比較して高親和性ＩＬ−２受容体との結合が減少していることが示されている一方でＬＡＫ細胞を刺激する能力を維持している、米国特許第５，２２９，１０９号に開示されている突然変異タンパク質（位置３８のアルギニンをアラニンで置換、もしくは位置４２のフェニルアラニンをリシンで置換）；血液漏出症候群を軽減させると主張されている、国際公開公報ＷＯ００／５８４５６号に開示されている突然変異タンパク質（ネイティブＩＬ−２中の天然に存在する（ｘ）Ｄ（ｙ）配列の変更または欠失；Ｄはアスパラギン酸であり、（ｘ）はロイシン、イソロイシン、グリシン、またはバリンであり、（ｙ）はバリン、ロイシンまたはセリンである）；ＮＫ細胞およびＬＡＫ細胞の誘導を刺激することが報告されている、国際公開公報ＷＯ００／０４０４８号に開示されているＩＬ−２ｐｌ−３０ペプチド（ＩＬ−２のａ−らせんＡ全体を含み、ＩＬ−２受容体のｂ鎖と相互作用する、ＩＬ−２の最初の３０個のアミノ酸に対応）；および血管からの出血を誘導することはできないが、依然としてＬＡＫ細胞を生じることができることが報告されている、やはり国際公開公報ＷＯ００／０４０４８号に開示されているＩＬ−２ｐｌ−３０ペプチドの突然変異体（位置２０のアスパラギン酸をリシンで置換）。さらに、ポリエチレングリコールを用いてＩＬ−２を修飾して、溶解度の増加および薬物動態学的プロフィールの変更を提供することができる（米国特許第４，７６６，１０６号参照）。
【０１７２】
本明細書中で用いる用語「ＩＬ−２」には、投薬頻度を減少するため、またはＩＬ−２の許容性を改善するために、第２のタンパク質と融合したＩＬ−２またはポリプロリンまたは水溶性ポリマーと共有結合によってコンジュゲート形成したＩＬ−２を含む、ＩＬ−２融合体またはコンジュゲートが含まれることも意図する。例えば、ＩＬ−２（または本明細書中で定義したその改変体）を、当分野で知られている方法を用いてヒトアルブミンまたはアルブミン断片と融合させることができる（国際公開公報ＷＯ０１／７９２５８号参照）。あるいは、当分野で知られている方法を用いて、ＩＬ−２を、ポリプロリンまたはポリエチレングリコールホモポリマーおよびポリオキシエチル化したポリオールと共有結合によってコンジュゲート形成させることができ、ホモポリマーは未置換であるか、または一方の末端がアルキル基で置換されており、ポプリオールは未置換である（例えば、米国特許第４，７６６，１０６号、第５，２０６，３４４号、および第４，８９４，２２６号参照）。治療上活性のある成分としてＩＬ−２を含む任意の薬剤組成物を本発明の方法で用いることができる。そのような薬剤組成物は当分野で知られており、それだけには限定されないが、米国特許第４，７４５，１８０号；第４，７６６，１０６号；第４，８１６，４４０号；第４，８９４，２２６号；第４，９３１，５４４号；および第５，０７８，９９７号に開示されているものが含まれる。したがって、ＩＬ−２または当分野で知られているその改変体を含む液体組成物、凍結乾燥組成物、または噴霧乾燥組成物を、水性もしくは非水性の溶液または懸濁液として調製し、次いで、本発明の方法に従って対象に投与し得る。これらの組成物のそれぞれが、ＩＬ−２またはその改変体を治療上または予防上活性のある成分として含む。「治療上または予防上活性のある成分」とは、薬剤組成物を対象に投与した場合に、その対象における疾患もしくは状態の治療、予防、または診断に関して、所望の治療的または予防的応答をもたらすために、ＩＬ−２またはその改変体が組成物中に明確に組み込まれていることを意図する。好ましくは、調製および保管中におけるタンパク質安定性および生物活性の損失に関連する問題を最小限にするために、薬剤組成物は適切な安定化剤、充填剤、または両方を含む。本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法でＩＬ−２を含む薬剤組成物は、安定化した単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、多量体ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、および安定化した凍結乾燥もしくは噴霧乾燥ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物である。
【０１７３】
安定化した単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む薬剤組成物は、「Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．」という題名の国際公開公報ＷＯ０１／２４８１４号に開示されている。「単量体」ＩＬ−２とは、タンパク質分子が、本明細書中に記載の薬剤組成物中で、凝集した形態ではなくその実質的に単量体の形態で存在することを意図する。したがって、ＩＬ−２共有結合性または疎水性のオリゴマーもしくは凝集体は存在しない。手短に述べると、これらの液体組成物中のＩＬ−２は、保存中におけるＩＬ−２の凝集体形成を減少させるために十分な量のアミノ酸塩基を用いて配合する。アミノ酸塩基とは、任意の所与のアミノ酸がその遊離塩基形態またはその塩の形態で存在する、アミノ酸またはアミノ酸の組合せである。好ましいアミノ酸は、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群から選択される。これらの組成物は、液体組成物のファイをＩＬ−２の安定性に許容される範囲内に維持するための緩衝剤をさらに含み、緩衝剤は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態にある酸、または酸とその塩フォンドとの混合物である。好ましくは、酸はコハク酸、クエン酸、リン酸、およびグルタミン酸からなる群から選択される。
【０１７４】
このような組成物は、本明細書中で安定化した単量体ＩＬ−２薬剤組成物と呼ぶ。これらの組成物中のアミノ酸塩基は、液体薬剤組成物の保存中にＩＬ−２を凝集体形成に対して安定化させる役割を果たす一方で、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態にある酸、または酸とその塩形態との混合物を緩衝剤として用いることにより、ほぼ等張のモル浸透圧を有する液体組成物がもたらされる。液体薬剤組成物には、ポリペプチド安定性をさらに増加させるために、他の安定化剤、より詳細にはメチオニン、ポリソルベート８０などの非イオン性界面活性剤、およびＥＤＴＡをさらに取り込ませてもよい。そのような液体薬剤組成物は安定化していると言われている、その塩フォンドを実質的に含まない酸、その塩フォンにある酸、または酸とその塩形態との混合物と組み合わせたアミノ酸塩基を加えることにより、これら２つの成分の組合せを存在させずに配合した液体薬剤組成物と比較して保存安定性が増加した組成物がもたらされれる。安定化した単量体ＩＬ−２を含むこれらの液体薬剤組成物は、水性液体形態で用いるか、または後に使用するために凍結状態で保存するか、または本発明の方法に従って液体フォンドもしくは対象への投与に適した他の形態に後に再構成するための乾燥形態のいずれかであってよい。「乾燥形態」とは、液体薬剤組成物または配合物を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）（すなわち凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）；例えば、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＰｏｌｌｉ、（１９８４年）、Ｊ．  Ｐａｒｅｎｔａｌ  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．、３８：４８  ５９頁参照）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ、（１９９１年）、「Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、（第Ｓ版；Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ、Ｅｓｓｅｚ、Ｕ．Ｋ．）、４９１〜６７６頁；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら、（１９９２年）、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．  Ｉｎｄ．  Ｐｈａｒｍ．、１８：１１６９〜１２０６頁；およびＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒら、（１９９４年）、Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．、１１：１２〜２０頁参照、または空気乾燥（ＣａｒｐｅｎｔｅｒおよびＣｒｏｗｅ、（１９８８年）、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ、２５：４５９〜４７０頁；ならびにＲｏｓｅｒ（１９９１年）、Ｂｉｏｐｈａｒｍ．、４：４７〜５３頁）によって乾燥させることを意図する。
【０１７５】
その凝集していない単量体状態にあるＩＬ−２を含むＩＬ−２配合物の他の例には、ＷｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎおよびＦａｕｌｄｓ、（１９９３年）、Ｄｒｕｇｓ、４６（３）：４４６〜５１４頁に記載のものが含まれる。これらの配合物には、等張生理食塩水で再構成する、凍結乾燥粉末中で０．２５％のヒト血清アルブミンを用いて配合した、組換えＩＬ−２突然変異タンパク質テセロイキン（アミノ末端にメチオニン残基を付加した、グリコシル化されていないヒトＩＬ−２）、および、配合物が３．０〜４．０のｐＨを有し、１０有利に緩衝剤は存在せず、伝導率が１０００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満（有利には５００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満）である、０．１〜１．０ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２突然変異タンパク質が酸と合わせられるように配合した、組換えＩＬ−２突然変異タンパク質バイオロイキン（アミノ末端にメチオニン残基を付加し、ヒトＩＬ−２配列の位置１２５のシステイン残基をアラニンで置換したヒトＩＬ−２）などの組換えＩＬ−２製品が含まれる。欧州特許公報ＥＰ３７３，６７９号；Ｘｈａｎｇら、（１９９６年）、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．  Ｒｅｓ．、１３（４）：６４３〜６４４頁、およびＰｒｅｓｔｒｅｌｓｋｉら、（１９９５年）、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．  Ｒｅｓ．、１２（９）：１２５０〜１２５８頁を参照されたい。
【０１７６】
多量体ＩＬ−２を含む薬剤組成物の例は、一般的に米国特許第４，６０４，３７７号に開示されている。「多量体」とは、タンパク質分子が、平均の分子会合が１０〜５０個の分子である微小凝集した形態で薬剤組成物中に存在することを意図する。これらの多量体は、緩く結合した、物理的に会合したＩＬ−２分子として存在する。これらの組成物の凍結乾燥形態は、商標名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ）の下で市販されている。この参考文献中に開示されている凍結乾燥した配合物は、選択的に酸化した、微生物によって産生させた組換えＩＬ−２を含み、組換えＩＬ−２は、マンニトールなどのかさを与える溶性担体、および組換えＩＬ−２が水に溶解することを確実にするために十分な量のドデシル硫酸ナトリウムと混合されている。
【０１７７】
これらの組成物は非経口投与するための水性注射剤での再構成に適しており、ヒト患者において安定しており、かつ良好に耐用されている。再構成した際、ＩＬ−２はその多量体状態を保つ。多量体ＩＬ−２を含むこのような凍結乾燥組成物または液体組成物は、本発明の方法によって包含されている。このような組成物は、本明細書中で多量体ＩＬ−２薬剤組成物と呼ぶ。
【０１７８】
本発明の方法は、ＩＬ−２を含む安定化した凍結乾燥薬剤組成物または噴霧乾燥薬剤組成物を用いてもよく、これは、液体または本発明の方法に従って投与するための他の適切な形態へと再構成し得る。そのような薬剤組成物は、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｅｌ  ｖｅｆｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒ１ｅｕｋ１Ｔｚ−２．」という題名の国際公開公報ＷＯ０１／４９２７４号に開示されている。これらの組成物は、少なくとも１つの充填剤、乾燥工程中にタンパク質を安定化させるために十分な量の少なくとも１つの薬剤、または両方をさらに含み得る。「安定化した」とは、ＩＬ−２タンパク質またはその改変体が、組成物の固体もしくは乾燥粉末形態を得るための凍結乾燥または噴霧乾燥後に、その単量体または多量体の形態ならびに品質、純度、および効力の他のその主要な特性を保持していることを意図する。これらの組成物中では、充填剤として用いるための好ましい担体物質には、グリシン、マンニトール、アラニン、バリン、またはそれらの任意の組合せ、最も好ましくはグリシンが含まれる。充填剤は、用いる薬剤に応じて０％〜約１０％（ｗ／ｖ）の範囲で配合物中に存在する。安定化剤として用いるための好ましい担体物質には、任意の糖もしくは糖アルコールまたは任意のアミノ酸が含まれる。好ましい糖には、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコース、ラクトース、デキストロースまたはそれらの任意の組合せ、好ましくはスクロースが含まれる。安定化剤が糖である場合、これは約０％〜約９．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．５％〜約５．０％、より好ましくは約１．０％〜約３．０％、最も好ましくは約１．０％の範囲で存在する。安定化剤がアミノ酸である場合、これは約０％〜約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．３％〜約０．７％、最も好ましくは約０．５％の範囲で存在する。これらの安定化した凍結乾燥組成物または噴霧乾燥組成物は、任意選択でメチオニン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）もしくはＥＤＴＡ二ナトリウムなどのその塩のうちの１つ、またはＩＬ−２またはその改変体をメチオニン酸化から保護する他のキレート化剤を含み得る。このような薬剤をこの様式で用いることは、本明細書中に参考として組み込まれている米国出願第０９／６７７，６４３号に記載されている。安定化した凍結乾燥組成物または噴霧乾燥組成物は、配合工程中または組成物の乾燥形態の再構成後などの液相中で薬剤組成物のｐＨを許容される範囲内、好ましくは約ｐＨ４．０〜約ｐＨ８．５に維持する緩衝剤を用いて配合し得る。緩衝剤は、乾燥工程と適合性があり、加工および保存中にタンパク質の品質、純度、効力、および安定性に影響を与えないように選択する。
【０１７９】
既に記載した安定化した単量体、多量体、および安定化した凍結乾燥ＩＬ−２薬剤組成物または噴霧乾燥ＩＬ−２薬剤組成物は、本発明の方法で用いるための適切な組成物を表す。しかし、ＩＬ−２化合物を治療上活性のある成分として含む任意の薬剤組成物が本発明の方法によって包含されている。
【０１８０】
また、本明細書中では、少なくとも１つの本発明組合せ組成物および添付の使用説明書を含むキットまたはパッケージも提供する。例えば、それぞれの薬物自体を個別または別々の剤形として投与する場合、キットは、それぞれの薬物を使用説明書と共に含む。投与の指示に沿って考慮した場合に、パッケージがそれぞれの薬物成分の投与様式を明確に示している限りは、薬物成分を投与に適した任意の様式でパッケージし得る。あるいは、組合せの薬物成分のそれぞれを、単独組成物などの単独投与可能な剤形として合わせてもよい。
【０１８１】
例えば、ｒＩＬ−２および抗血管形成性剤を含む例示的なキットでは、キットは日毎などの任意の適切な期間で整理されていてもよい。例として、１日目には、代表的なキットはｒＩＬ−２および抗血管形成性剤のそれぞれの単位用量を含み得る。それぞれの薬物を１日２回投与する場合は、キットは、１日目に対応して、ｒＩＬ−２および抗血管形成性剤のそれぞれの２列の単位剤形ならびに投与時期の指示を含み得る。あるいは、薬物の１つまたは複数の、投与する薬物の時期または量が組合せの他の薬物種と比較して異なる場合、それをパッケージおよび指示に反映させる。例えば、ｒＩＬ−２を１日２回投与し、抗血管形成性剤は１日１回だけ摂取する場合は、例示的な１日目のパッケージは、ｒＩＬ−２の単位剤形が「１日目、用量１」に対応し、それと共に抗血管形成性剤の剤形が「１日目、用量２」に対応してもよい。
【０１８２】
上述に従った様々な実施形態が容易に想像され得るが、当然、治療に用いる具体的な薬物の組合せ、その対応する剤形、推奨される用量、意図する患者集団などに依存するであろう。パッケージは、医薬品のパッケージに一般的に用いられる任意の形態であってよく、様々な色、包装材、不正開封防止パッケージ、ブリスターパック、乾燥剤など、いくつかの特徴のうち任意のものを利用し得る。
【実施例】
【０１８３】
以下は、本発明を実施するための具体的な実施形態の例である。例は例示目的としてのみ提供し、いかなる様式でも本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１８４】
用いた数字（例えば量、温度など）に関して精度を保証する努力はなされているが、ある程度の実験誤差および偏差が当然許容されるべきである。
【０１８５】
（実施例１）
ｒＩＬ−２と同時投与するための組成物
Ａ．化合物
表１：キナゾリンの例
【０１８６】
【表１】
2008530239.tif 000024
【０１８７】
【表２】
2008530239.tif 000025
【０１８８】
【表３】
2008530239.tif 000026
【０１８９】
【表４】
2008530239.tif 000027
【０１９０】
【表５】
2008530239.tif 000028
Ｂ．合成
キナゾリン
スキーム１：
【０１９１】
【化２２】
2008530239.tif 000029
スキーム１は、無数の置換キナゾリン化合物を合成するためのモジュール方法を記載している。ＡＧへの言及は、例えばハロゲン化物、トリフレート、またはケトンなどの活性化基を示し、４個ものＡＧ基が存在し得る。第３ステップに示す４−クロロの位置はベンジル環状の位置５〜８よりも活性があるため、ＮＨＲＲ’を用いた置換は、位置５〜８のいずれかのＡＧの同時置換があまり多く起こらずに進行し得る。次いで、最終ステップにおけるＡＧ基のＲ’’による置換は、弱〜中等度の塩基の存在下で進行し得る。あるいは、所望の生成物を得るためにＡＧ基（または複数のＡＧ基）を修飾してもよく、例えば、ＮＯ２基をＥｔＯＨおよびＨ２Ｏ中のＦｅおよびＡｃＯＨで還元してアミノ置換基を得て、さらにそれを、例えばパラホルムアルデヒドを用いた還元性アミノ化によって置換し得る。
【０１９２】
当業者には明らかなように、極めて多くの官能化２−アミノベンズアミド出発物質が市販されているか、または既知の手順によって容易に合成される。続いて、出発物質中のＡＧ基は、例えばアルコキシ基または置換アルキル基など、（Ｒ’’のように）最終生成物中で望ましい置換基であり得る。さらに、いくつかの官能化２−ニトロベンズアミド出発物質が入手可能であり、これらはＥｔＯＨ中のＨ２／Ｐｄ／Ｃなどの還元剤の存在下で容易に２−アミノベンズアミド出発物質へと変換される。
【０１９３】
本発明のキナゾリンを作製する代替方法は、国際公開公報ＷＯ０４／２４７０３号、国際公開公報ＷＯ０１／３２６５１号、米国特許ＵＳ５，４５７，１０５号、米国特許ＵＳ５，６１６，５８２号、米国特許ＵＳ５，７７０，５９９号、国際公開公報ＷＯ０２／１６３５１号、米国特許ＵＳ６，７２７，２５６号、国際公開公報ＷＯ０２／０２５５２号、米国特許ＵＳ５，７４７，４９８号、および国際公開公報ＷＯ９６／３０３４７号に記載されている。
【０１９４】
インドリノン
スキーム２ａ：
【０１９５】
【化２３】
2008530239.tif 000030
スキーム２ａはワンポット手順として行い、ステップａの試薬はＨ２Ｏ中のＮＨ４ＯＨ、ＣｕＣｌである。次いで、ステップｂでＨＣｌ水溶液を加える。Ｒ２〜Ｒ５は本明細書中で定義したとおりである。
【０１９６】
スキーム２ｂ：
【０１９７】
【化２４】
2008530239.tif 000031
スキーム２ｂでは、試薬をＥｔＯＨ中、ピペリジン（ａ）の存在下で攪拌して最終生成物を得る。当業者には明らかなように、具体的な出発物質の反応性に応じて、反応を加熱して収率を増大させ得る。
【０１９８】
スキーム２ｃ：
【０１９９】
【化２５】
2008530239.tif 000032
スキーム２ｃでは、試薬をＥｔＯＨ中、ＮａＯＢｕ−ｔ（ａ）の存在下で還流させて最終生成物を得る。スキーム２に示すＲ９は、本明細書中で定義したとおりＨ、−ＯＨ、−ＣＮ、アルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルコキシ、または−ＮＲａＲｂである。Ｒ９での置換を可能にするために上記構造で式ＩＩを置き換え得ることが企図され、他の置換基は本明細書中で定義したとおりである。
【０２００】
スキーム２ｄ（化合物６の合成）：
【０２０１】
【化２６】
2008530239.tif 000033
フタラジン
化合物１０と同様の置換フタラジンの調製を以下のとおり、米国特許ＵＳ６，２５８，８１２号から描写したように説明し、これには本発明の化合物の合成に役立ち得る他の反応スキームも含まれる。
【０２０２】
スキーム３ａ：
二塩酸１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン
１５．２２ｇ（５９．５２ｍｍｏｌ）の１−クロロ−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン（調製には、１９５９年７月２３日公開のドイツ特許公報第１０６１７８８号参照）、７．７３ｇ（６０．５９ｍｍｏｌ）の４−クロロアニリンおよび２００ｍｌの１−ブタノールの混合物を、２時間、過熱還流した。その後、混合物をゆっくりと５℃まで冷却した際に得られた結晶を濾取し、１−ブタノールおよびエーテルで洗浄した。フィルターの残渣を約２００ｍｌの熱メタノールに溶かし、溶液を０．７５ｇの活性炭で処理し、Ｈｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌで濾過し、７ｍｌの３Ｎのメタノール性ＨＣｌを用いて濾液のｐＨを約２．５まで調節した。濾液を最初の体積の約半分まで蒸発させ、わずかな濁りが生じるまでエーテルを加えた。その後の冷却により、結晶の沈殿がもたらされた。結晶を濾取し、メタノール／エーテル（１：２）の混合物およびエーテルで洗浄し、８時間、１１０℃、ＨＶ下で乾燥させ、７２時間、２０℃および室温で平衡化した。このようにして、含水量８．６％の表題化合物を得た。融点＞２７０℃；
【０２０３】
【数１】
2008530239.tif 000034
スキーム３ｂ：塩酸１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン
０．９７２ｇ（３．８ｍｍｏｌ）の１−クロロ−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン、０．６５６ｇ（４ｍｍｏｌ）の塩酸４−クロロアニリン（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ，  Ｉｎｃ．、米国オハイオ州Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ）および２０ｍｌのエタノールの混合物を、２時間、加熱還流した。反応混合物を氷浴中で冷却し、濾過し、結晶を少量のエタノールおよびエーテルで洗浄した。ＨＶ下、１１０℃で８時間、および１５０℃で１０時間乾燥させたのち、ＨＣｌの熱除去の結果、表題化合物を得た。融点＞２７０℃。
【０２０４】
【数２】
2008530239.tif 000035
スキーム３ｃ：
塩酸１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン
１．２８ｇ（５ｍｍｏｌ）の１−クロロ−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン、０．６７ｇ（５．２５ｍｍｏｌ）の４−クロロアニリンおよび１５ｍｌの１−ブタノールの混合物を、窒素雰囲気下で攪拌しながら０．５時間、１００Ｃで加熱した。その後、混合物を室温まで冷却し、濾過し、濾液を１−ブタノールおよびエーテルで洗浄した。精製には、結晶を４０ｍｌの熱メタノールに溶かし、溶液を活性炭で処理し、Ｈｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌで濾過し、濾液を最初の体積の約半分まで蒸発させて、結晶沈殿物の形成がもたらされた。０℃まで冷却し、濾過し、フィルターの残渣をエーテルで洗浄し、ＨＶ下、１３０℃で８時間乾燥させたのち、表題化合物を得た。融点＞２７０℃；
【０２０５】
【数３】
2008530239.tif 000036
（実施例２）
ｒＩＬ−２の調製
アルデスロイキン、ｒＩＬ−２（ＮＳＣ３７７３３６４）（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、Ｃｈｉｒｏｎ）の調製：
ヒトジャーカット細胞系からのメッセンジャーＲＮＡを用いて二本鎖ｃＤＮＡを作製し、これをｐＢＲ３２２プラスミド内にハイブリダイズさせた。短いＩＬ−２塩基配列に対応する３２Ｐ標識したオリゴヌクレオチドプローブを用いてＩＬ−２遺伝子を含むクローンを同定した。遺伝子を、好都合の制限部位を有するｐＢＲ３２２プラスミドの領域内に挿入した。適切なプロモーターおよびリボソーム結合部位をＩＬ−２遺伝子の前に挿入することで、生じた発現クローンは改変された組換えｒＩＬ−２をコードする。クローニングしたＩＬ−２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発を用いて、位置１２５でのセリンからシステインへの保存的置換を行った。生じた分子は、そのｉｎ  ｖｉｔｒｏ生物活性がネイティブＩＬ−２と区別不可能であった。アルデスロイキン遺伝子を保有する大腸菌の産生株を発酵槽内で増殖させた。培養物を収集し、アルデスロイキンを抽出した。アルデスロイキンを精製するために一連のクロマトグラフィーステップを行った。配合された生成物をｐＨ７．２〜７．８に調節した。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の分子量は約１５，６００ダルトンである。アミノ酸組成およびＮ末端配列決定による分析により、アルデスロイキンが予測されたタンパク質配列を有することが確認された。
【０２０６】
再構成および希釈の手順：
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は、１．３ｍｇのタンパク質を含む５ｃｃのバイアル中の凍結乾燥ケークとして存在する。注射用のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）のバイアルは、１．２ｍＬの滅菌注射用水、ＵＳＰで再構成する。希釈剤は、過剰な発泡を回避するためにバイアルの側面に向け、振盪を回避しながら、内容物が完全に溶解するまで穏やかに回転させる。再構成後、各ｍＬは１．１ｍｇ（１８百万ＩＵ）のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を含む。再構成したＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は直接の静脈内注射に適しているか、必要に応じて、０．１％のヒトアルブミン、ＵＳＰを含む５％のデキストロース注射剤、ＵＳＰを用いて、５０ｍＬ〜５００ｍＬの体積に希釈し得る。希釈する場合は、ヒトアルブミン、ＵＳＰを５％のデキストロース注射剤、ＵＳＰに加えたのちに、再構成したＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を加える。
【０２０７】
（実施例３）
単独薬剤ｒＩＬ−２組成物を用いた治療対ｒＩＬ−２組成物および抗血管形成性剤を用いた組合せ治療
高用量ｒＩＬ−２の結果を表６に要約した。
【０２０８】
【表６】
2008530239.tif 000037
いくつかの要素が抗血管形成性組成物を用いた組合せ療法の起動力を生じさせている。高用量ｒＩＬ−２に関連する顕著な罹患率により、患者の注意深い選択が必要となり、治療から利益を得る可能性のある潜在的な患者の数が劇的に減少した。残念ながら、最も高いＲＣＣの発生率を有する患者で随伴疾患が最も頻繁に見つかっている。患者の注意深い監視および不定期の医療的集中治療の必要性により、単独薬剤高用量ｒＩＬ−２の投与が高価となり、その使用が大きな医療センターに限定されている。その実務上の効果は、利用可能性が患者の招集に限定されてしまうことである。
【０２０９】
表７に示すように、より低い用量のｒＩＬ−２を厳しく評価した。
【０２１０】
【表７】
2008530239.tif 000038
最も一般的に利用されている皮下レジメンは、Ｂｕｔｅｒらによって公開されている。Ｂｕｔｅｒでは、１日１回、１週間に５日間、６週間の間、ｒＩＬ−２を与えた。最初の５日間サイクルの間、１８×１０６ＩＵ（ＭＩＵ）を１日１回与えた。その後のサイクルでは、最初の２日間より後の用量を９ＭＩＵに減らした。応答速度および生存データはｒＩＬ−２の高用量ＩＶボーラス投与について公開されたものと類似であり得る。Ｂｕｔｅｒ／Ｓｌｅｉｊｆｅｒレジメンは、最近、前向きのランダム化治験において高用量ｒＩＬ−２と比較されている。９６人の患者を高用量ＩＶ  ｒＩＬ−２にランダム化し、９２人の患者をＳＱ  ｒＩＬ−２（Ｂｕｔｅｒ  ／Ｓｌｅｉｊｆｅｒ用量スケジュール）にランダム化した。以前の高用量ｒＩＬ−２に対する応答は２０％であり、ＳＱ  ｒＩＬ−２に対する応答は１０％であった。しかし、全体的な生存は高用量と差異がなかった（ｐ＝０．３４）。したがって、有効性およびより低い用量レジメンに対する患者の全体的な応答性を増大させるために、抗血管形成組成物と組み合わせるための触媒が存在する。
【０２１１】
表８に示すように、アルデスロイキンと抗血管形成性剤との組合せのレジメンを厳しく評価した。
【０２１２】
【表８】
2008530239.tif 000039
・１用量の抗血管形成性剤（用量レベルに従った平面化用量に等価）を−７日目に与える。
・抗血管形成性剤を１日目に再度与え、その後、８週間の治療サイクルで２週間毎に連続的に与える。
【０２１３】
ｒＩＬ−２を用いた治療を連続して６週間続け（１〜４２日、各週の月曜日から金曜日）、続いて２週間の休止期間をもたせた結果、８週間の治療サイクルとなった。
（実施例４）
ｒＩＬ−２と小分子受容体チロシンキナーゼ阻害剤ＢＡＹ４３−９００６およびＳＵ１１２４８とを用いた組合せ療法
Ａ．材料および方法
薬物
組換えヒトインターロイキン−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、アルデスロイキン／ｒＩＬ−２）；１８ＭＩＵ／ｍｌ、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ）を、投与前に滅菌注射用水で再構成し、５％のデキストロースで配合した。ビンクリスチン（硫酸ビンクリスチン）はＭａｙｎｅ  Ｐｈａｒｍａ  Ｌｔｄ（豪州Ｍｕｌｇｒａｖｅ）のものであった。ＣＨＩＲ−２５８は、４−アミノ−５−フルオロ−３−［５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］キノリン−２（１Ｈ）−オン（Ｃｈｉｒｏｎ）である。公開されている手順および特許に従って、ＢＡＹ４３−９００６（ソラファニブ／Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））（Ｒｉｅｄｌら、Ｐｒｏｃ．  Ａｍ．  Ａｓｓｏｃ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００１年、４２（アブストラクト４９５６）；Ｌｏｗｉｎｇｅｒら、Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．、２００２年、８（２５）：２２６９〜２２７８頁；国際公開公報ＷＯ９９３２４５５号）およびＳＵ１１２４８（スニチニブ／Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））（Ｓｕｎら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２００３年、４６（７）：１１１６〜１１１９頁；国際公開公報ＷＯ０１６０８１４号）を所内で合成および精製した。ＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８（２０ｍＭ）のストック溶液をＤＭＳＯ中で調製し、使用前はアリコートを−２０℃で保存した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイには、すべての薬物を最適培地に希釈した。ｉｎ  ｖｉｖｏ投与には、ＢＡＹ４３−９００６は１００％のＰＥＧ４００ビヒクル中で配合したが、ＳＵ１１２４８投薬溶液は５ｍＭのクエン酸緩衝液中で調製した。すべての他の化学薬品は研究用グレードであった。
【０２１４】
細胞系
すべてのマウス細胞系、すなわちＣＴＬＬ−２（ＩＬ−２依存性Ｔ細胞系）、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫、ＣＴ２６結腸、および腎癌ＲＥＮＣＡは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（メリーランド州Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）から得た。ＣＴＬＬ−２は、１０％のＦＢＳ（ウシ胎児血清、Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、メリーランド州Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）、２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５ｎＭのｒＩＬ−２、２ｍＭのβ−メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ１６４０で増殖させた。ＲＥＮＣＡ細胞は、１０％のＦＢＳ、２％の１００×ビタミン、１％の２００ｍＭのグルタミン（ｇｌｕｔｍｉｎｅ）、１％の１００ｍＭのＮａＰｙ、１％の非必須アミノ酸を含むＥＭＥＭを含む培地中で培養した。ＣＴ２６細胞の増殖には、培地は、ＥＭＥＭ、１０％のＦＢＳ、２％のビタミン類、１％の２００ｍＭのグルタミン、１％の１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１％の非必須アミノ酸を含んでいた。Ｂ１６−Ｆ１０細胞は、１０％のＦＢＳ、１％の非必須アミノ酸、１％の１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２％のビタミン類；２ｍＭの１−グルタミン；２％の炭酸水素ナトリウムを含むＲＰＭＩ１６４０中で増殖させた。Ｙａｃ−１細胞（ＡＴＣＣ）は、ＲＰＭＩ＋１０％のＦＢＳ中で培養し、対数期の増殖であることを確実にするためにアッセイの１〜２日前に継代培養した。細胞は、加湿雰囲気下、３７℃、５％のＣＯ２中で、懸濁液または接着培養物として維持した。細胞は生存度＞９８％（トリパンブルー染色を用いて評価）の対数増殖期で用い（６〜８継代を超えない）、マイコプラズマなしで決定した。
【０２１５】
ｉｎ  ｖｉｖｏの有効性研究
雌のＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ６マウス（４〜６週齢、１８〜２２ｇ）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ（マサチューセッツ州Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ）から得て、研究の開始前に病原体の存在しない囲いの中で１週間気候馴化させた。動物には滅菌したげっ歯類用飼料および水を自由に与え、１２時間の明／暗サイクルを用いて、滅菌したフィルター蓋付きケージ内で飼育した。すべての実験は国際実験動物管理公認協会の指針下であった。
【０２１６】
腫瘍の移植には、Ｂ１６−Ｆ１０（２×１０６）、ＣＴ２６（２×１０６）またはＲＥＮＣＡ（１×１０６）細胞を収集し、３回洗浄し、ＰＢＳに再懸濁させた。マウスの側腹部の毛を剃り、マウスの右側腹部内に皮下移植（ｓ．ｃ．）した（０．２ｍｌ）。Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍モデルにはＣ５７ＢＬ６マウスを用いたが、ＣＴ２６およびＲＥＮＣＡ腫瘍はＢＡＬＢ／ｃマウスに移植した。具体的な研究設計で概要を示したとおり、治療は、腫瘍の平均の大きさが５０〜２５０ｍｍ３まで確立された後に開始した（０日目）。マウスを治療コホート（典型的には１０匹のマウス／群）へとランダム化した。０〜６もしくは７〜１３日目または０〜４、７〜１１日目に、ｒＩＬ−２を１日１回皮下投与した（０．２〜３ｍｇ／ｋｇ／日）。ＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８（１〜１００ｍｇ／ｋｇ）は、０日目または７日目に開始して、経口胃管栄養法によって液剤として１日１回投与した（５〜１２日間）。個別の研究において概要を示した、選択した用量におけるすべての単剤療法および薬物の組合せは、良好に耐用された。
【０２１７】
腫瘍の阻害および応答の評価
腫瘍の体積および体重を週に２〜３回評価した。式：１／２（長さ（ｍｍ）×［幅（ｍｍ）］２）を用いて、カリパーによる腫瘍の測定値を平均腫瘍体積（ｍｍ３）に変換した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、［１−（治療群の平均腫瘍体積／対照群の平均腫瘍体積）×１００］として計算した。応答は、治療開始時におけるそれぞれの動物の腫瘍体積と比較して、完全応答（ＣＲ、測定可能な腫瘍なし）、または部分応答（ＰＲ、５０〜９９％の腫瘍体積減少）のどちらかとして定義した。腫瘍増殖遅延解析は、［（治療群が平均腫瘍体積１０００ｍｍ３に達するまでの日数）−（対照群が平均腫瘍体積１０００ｍｍ３に達するまでの日数）］として計算した。
【０２１８】
相乗効果とは、組合せ療法の予測された％腫瘍増殖阻害の比（％Ｔ／Ｃ予測＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２）を組合せ治療の実測された％Ｔ／Ｃ（％Ｔ／Ｃ実測）で割り算した値＞１の場合に定義した。相加効果は％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＝１である場合に定義し、拮抗は％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＜１の場合に定義した（Ｙｏｋｏｙａｍａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２０００年、６０（８０）：２１９０〜２１９６頁）。
【０２１９】
薬物動態学
薬物の薬物動態学の評価には、マウスを単一の皮下用量のｒＩＬ−２（６ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｌ）またはＢＡＹ４３−９００６（２０ｍｇ／ｋｇ、経口、０．２ｍｌ）で治療し、薬物投与後の様々な時間に血液を採取した。ＢＡＹ４３−９００６およびｒＩＬ−２の血漿レベルはＨＰＬＣまたはＥＬＩＳＡバイオアッセイを用いて決定した。
【０２２０】
ウエスタンブロット解析
示した条件下での薬物のインキュベーション後、細胞を収集し、氷冷ＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、インディアナ州Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）およびホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ、モンタナ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を含むＲＩＰＡ緩衝液（１×リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２中の１％のＮｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０、０．５％のデオキシコール酸ナトリウム、０．１％のドデシル硫酸ナトリウム）で溶解した。溶解物のタンパク質含有量はＢＣＡアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、カリフォルニア州Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）を用いて決定した。ウエスタンブロット解析には、６０μｇのタンパク質の電気泳動を行い、ｐＥＲＫに対するマウス抗体（１：１０００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、マサチューセッツ州Ｂｅｖｅｒｌｙ）を用いてｐＥＲＫ検出を行い、４℃で終夜インキュベーションを行った。ｐＳＴＡＴ５抗体（１：１０００、Ｕｐｓｔａｔｅ）およびｐＡＫＴ（１：１０００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）の検出は、適切な抗ホスホチロシン抗体で２時間、室温でプロービングを行うことによって、同量のタンパク質を用いて行った。その後、膜を１時間、室温で１：５０００の西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートした抗ウサギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ペンシルバニア州Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ）と共にインキュベーションを行った。等価の負荷を検証するために、ブロットを条片にし、抗ＥＲＫ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、抗ＳＴＡＴ５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、および抗ＡＫＴ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）抗体で再度プロービングを行って、合計のＥＲＫ、ＳＴＡＴ５およびＡＫＴタンパク質をそれぞれ測定した。タンパク質は高感度化学発光（ＥＣＬ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、英国Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ）を用いて検出し、Ｋｏｄａｋ製フィルムに曝露したのちに可視化した。バンドの強度を定量するために走査デンシトメトリーを行った。ｐＥＲＫ、ｐＳＴＡＴ５またはｐＡＫＴの量を合計ＥＲＫ、ＳＴＡＴ５またはＡＫＴタンパク質レベルに対して正規化し、ビヒクルまたは未処置の対照と比較した。
【０２２１】
薬物治療後のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの細胞免疫表現型決定
示した治療後の様々な時間に血液試料を採取した。全血（１００μｌ）をＦＡＣＳ／ＴｒｕＣｏｕｎｔチューブ（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）に移し、氷上に保った。試料を０．５μｇのマウスＦｃ遮断剤（抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２；ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）で処理し、氷上で２０分間インキュベーションを行った。以下に示すフロウロクロムとコンジュゲートした抗体を試料に加え、氷上で２０分間、光から保護してインキュベーションを行った。血液試料に２ｍｌの１×ＦＡＣＳ溶解溶液（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）を加えながらボルテックス攪拌を行い、次いで室温で１０分間インキュベーションを行い、その後、１２５０ｒｐｍで遠心分離した。すべての試料を２回洗浄し、ＰＢＳおよび２％のＦＢＳに懸濁させ、ＢＤ  ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒでの試料の獲得、および続くＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏソフトウェアによる解析まで４℃で保存した。細胞の絶対数をＴｒｕＣｏｕｎｔビーズ参照に対して決定した。ＦＳＣおよびＳＳＣ特徴、ならびに合計リンパ球のマーカー（ＣＤ４５、ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）に基づいて細胞の集団を同定し、ゲート制御した。Ｔ細胞リンパ球集団はＣＤ３染色に基づいて同定し、部分集団はＣＤ４またはＣＤ８染色に基づいて同定した（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）。個々の細胞集団は、適切にゲート制御された事象によって同定した。
【０２２２】
組織病理学および免疫組織化学
マウス腫瘍を１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、その後、７０％のエタノールに移し、次いでＥｘｃｅｌｓｉｏｒ組織プロセッサー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ペンシルバニア州Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ）を用いてパラフィン包埋用に加工した。組織切片（４μｍ）はロータリーミクロトーム（ＲＭ２１２５、Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツＮｕｓｓｌｏｃｈ）で切断した。ヘマトキシリン（Ｈｅｍｏｔｏｘｙｌｉｎ）およびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色した切片を調製した。その後、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＴ自動スライド染色システム（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、アリゾナ州Ｔｕｃｓｏｎ）を用いて免疫染色を行った。マウスＴ細胞はウサギ抗ＣＤ３抗体（１：６０希釈、Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｄｅｎ  Ａ／Ｓ、デンマークＧｌｏｓｔｒｕｐ）を用いて検出し、単球／マクロファージはＦ４／８０（Ｓｅｒｏｔｅｃ）を用いて検出した。細胞増殖には、マウス腫瘍を、モノクローナルラット抗マウス抗体（１：１５希釈、ＤＡＫＯ）を用いてＫｉ−６７用に染色した。熱誘導性のエピトープの回収は、ＣＣ１（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。その後、試料を適切な二次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇＧビオチン標識抗体、１：１００希釈、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共にインキュベーションを行った。西洋ワサビペルオキシダーゼ標識したストレプトアビジンビオチン系および３−３’−ジアミノベンジジン色素原（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、抗体の局在化決定を行った。組織形態学の可視化を増強するために、ヌクレアファースト赤を用いて切片の対比染色を行った。Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍には、Ｈ＆Ｅ組織中にメラニン堆積が観察されたので、ＮＢＴ／ＢＣＩＰ染色の代替方法であるＶｅｎｔａｎａ  Ｂｌｕｅｍａｐキットを用い、これにより腫瘍中のＴ細胞の可視化が助けられた。
【０２２３】
ＣＴＬＬ−２  Ｔ細胞増殖アッセイ
ＣＴＬＬ−２  Ｔ細胞を３７℃で２時間、ＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）を用いてまたは用いずにプレインキュベーションを行った。その後、細胞を洗浄し、９６ウェルマイクロタイタープレートに、５，０００個の細胞／ウェルで、ｒｈＩＬ−２の段階希釈液（１ｐＭ〜１００ｎＭ）を含む培養培地中に植えた。インキュベーション期間（３７℃で７２時間）の終わりに、細胞増殖試薬ＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、インディアナ州Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）を用いたテトラゾリウム色素アッセイによって細胞生存度を決定した。
【０２２４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートに植え（ＣＴＬＬ−２：５０００個の細胞／ウェル；ＲＥＮＣＡ：１５００個／ウェル；Ｂ１６−Ｆ１０：１０００個／ウェル；ＭＶ４；１１：５０００個／ウェル）、ＢＡＹ４３−９００６／ＳＵ１１２４８またはビンクリスチンの段階希釈液で処置した。ＣＴＬＬ−２はＩＬ−２依存性細胞系であるので、これらの細胞では、細胞毒性アッセイは５ｎＭのｒＩＬ−２を含む培地中で実施した。インキュベーション期間（３７℃で７２時間）の終わりに、テトラゾリウム色素（ＷＳＴ−１）アッセイまたは化学発光（ＢｒｄＵ）アッセイ（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、インディアナ州Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）のどちらかによって細胞生存度を決定した。ＥＣ５０値は、未処置の対照細胞に対して処置した細胞の吸光度が５０％減少するために必要な濃度と定義した。
【０２２５】
ｅｘ  ｖｉｖｏ脾細胞の細胞毒性アッセイ
脾細胞を薬物処置したＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝３〜５／群）から無菌状態下で得て、冷ＰＢＳ中でホモジナイズした。７０μｍのナイロン製細胞濾過器を通したのち、細胞を４℃で手短に遠心分離した。ＲＢＣ溶解緩衝液を用いて赤血球を溶解した（Ｓｉｇｍａ、モンタナ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）。細胞を洗浄し、様々なＥ：Ｔ比（１００：１、５０：１、２５：１、１２／５：１、６．２５：１、３：１）で５１Ｃｒ標識Ｙａｃ−１標的細胞と共に植え、４時間の細胞毒性アッセイを行った。Ｗａｌｌａｃプレートリーダーを用いてデータを得て、１分間あたりの計数（ｃｐｍ）として表した。定量は％特異的溶解として表し、％特異的溶解＝１００×（（平均実験放出−平均自発放出）／（平均最大放出−平均自発放出））として計算した。自発放出は標識した標的細胞を含みエフェクター細胞を含まないウェルから決定し、最大放出は１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中に標識した標的細胞を含むウェルから決定した。
【０２２６】
統計的解析
一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて複数の比較を行い、様々な処置手段を比較するための事後試験はスチューデント−ニューマンクールズ試験（ＳｉｇｍａＳｔａｔ）を用いて行った。差異はｐ＜０．０５であり、統計的に有意とみなされた。
【０２２７】
Ｂ．Ｔ細胞および腫瘍細胞シグナル伝達経路に対するｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究。
【０２２８】
ｒＩＬ−２はＣＴＬＬ−２細胞においてＪＡＫ／ＳＴＡＴおよびＭＡＰＫシグナル伝達をｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化する
Ｔ細胞におけるＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒシグナル伝達経路の発症、経時変化および持続時間を解明するために、ＣＴＬＬ−２細胞（１×１０７個の細胞）を、様々な濃度のｒＩＬ−２（１ｐＭ〜１００ｎＭ）で２時間処置する前に２４時間血清飢餓させ、ウエスタンブロット解析を用いて主要なシグナル伝達経路、すなわちＭＡＰＫ、ＳＴＡＴ５、ＡＫＴを評価した。血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞は、２つの主要なＩＬ−２Ｒ複合体、すなわち高親和性（ＩＬ−２ＲαβγのＫＤ＝１０−１１Ｍ）受容体および中等の親和性（ＩＬ−２βγのＫＤ＝１０−９Ｍ）受容体の相互作用を描写するために、広範囲な濃度のｒＩＬ−２（１ｐＭ〜１００ｎＭ）を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで処置した。一部の実験では、細胞を遊離抗ＩＬ−２α抗体（＞１０００倍過剰；１０ｎＭ）に曝し、ｒＩＬ−２を加える前に１時間インキュベーションを行った。ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒ活性化の経時変化を評価するために、血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞を１０ｎＭのｒＩＬ−２で活性化させ、ＩＬ−２シグナル伝達を１０分間から４８時間までの様々な時間に検査した。ＥＲＫ１／２、ＳＴＡＴ５およびＡＫＴのＩＬ−２Ｒ下流リン酸化は、ウエスタンブロット解析を用いてｒＩＬ−２処置した細胞で評価した。ｐＥＲＫ、ｐＳＴＡＴ５またはｐＡＫＴの相対レベルを、それぞれＥＲＫ、ＳＴＡＴ５またはＡＫＴの合計タンパク質レベルと比較した。
【０２２９】
ｐＥＲＫ１／２の活性化がＣＴＬＬ−２細胞をｒＩＬ−２に曝した後に観察された。ホスホＥＲＫは１ｐＭ、２時間でわずかに活性化されたが、最大の活性化は≧１００ｐＭの濃度で見られた。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ５経路は１ｐＭの濃度で最大に活性化され、ｒＩＬ−２の濃度を増加することでｐＳＴＡＴ５のレベルは変化しなかった（１００ｎＭまで）。ＣＴＬＬ−２中の基底ｐＡＫＴ経路は、血清飢餓させた条件下においてＴ細胞中で活性化されていると考えられる。さらに、ｐＡＫＴレベルは、試験したｒＩＬ−２濃度（１ｐＭ〜１００ｎＭ；リン酸化部位４８３に対するｐＡＫＴ抗体を用いた）で大部分は変化がなかった。
【０２３０】
ＩＬ−２Ｒαに対する遮断抗体を用いて、ＩＬ−２シグナル経路がＩＬ−２Ｒとの結合によって特異的に媒介されていることを確認した。ＣＴＬＬ−２細胞中のｐＳＴＡＴ５レベルをウエスタンブロットによって分析した。ＣＴＬＬ細胞を血清飢餓させ、ｒＩＬ−２（０．１ｐＭ〜１０ｎＭ）で処置する前に過剰の遊離抗ＩＬ−２Ｒα抗体（１０ｎＭ、＞１０００倍）で１時間処置した。遮断ＩＬ−２Ｒα抗体が存在しない場合は、ｐＳＴＡＴ５は１ｐＭでｒＩＬ−２処置の後に活性化されたが、ＩＬ−２Ｒα阻害が存在する場合は、ｐＳＴＡＴ５シグナル伝達は抑制され（＞９５％の阻害）、これにより、ＳＴＡＴ５シグナル伝達にＩＬ−２Ｒαが必要なことが確認された。興味深いことに、ｐＳＴＡＴ５レベルはＣＴＬＬ−２細胞でｒＩＬ−２の増加濃縮に伴って（≧１０ｐＭ）修復されており、これは、低親和性ＩＬ−２Ｒβγ鎖（ＫＤ＝１０−９Ｍ）に結合することによってｒＩＬ−２が抗ＩＬ−２Ｒα抗体を競合的に置き換えるかつ／またはｐＳＴＡＴ５シグナル伝達を活性化させることを示唆している。
【０２３１】
ｐＳＴＡＴ５のｒＩＬ−２活性化はＣＴＬＬ−２細胞中で迅速かつ持続的である
ＣＴＬＬ−２細胞におけるＩＬ−２Ｒシグナル伝達応答の発症時間および持続時間を評価するために、血清飢餓させた細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏでｒＩＬ−２（１０ｎＭ）を用いて処置し、ウエスタンブロット分析を用いてＥＲＫ１／２、ＳＴＡＴ５およびＡＫＴのリン酸化に対する効果を評価した。ＳＴＡＴ５のリン酸化は、ｒＩＬ−２をＣＴＬＬ−２細胞に加えた分単位（＜１０分間）以内に活性化され、ｐＳＴＡＴ５応答の持続時間は４８時間まで維持された。ｒＩＬ−２によるＭＡＰＫ経路（ｐＥＲＫ）経路の活性化はわずかに遅延されたと考えられ、１時間までには活性化された。ｐＥＲＫの強度は、血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞をＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍｌ）＋イオノマイシン（０．４μｇ／ｍｌ）で１５分間刺激することによって得られた最大応答よりも低かった。さらに、ｐＥＲＫレベルは２４時間まで持続し、４８時間までにバックグラウンドレベルに戻った。ｐＡＫＴに対する識別可能な効果は観察されず、これにより、ＰＩ−３Ｋ／ＡＫＴ経路によるシグナル伝達がＣＴＬＬ−２細胞中で連続的に活性であることが確認された。
【０２３２】
ＢＡＹ４３−９００６処置はＣＴＬＬ−２細胞においてｐＥＲＫを阻害するがｐＳＴＡＴ５を阻害しない
ＢＡＹ−４３−９００６はＲａｆ−１の強力な阻害剤であり、ＢＲＡＦの野生型および突然変異体も阻害する。さらに、ＢＡＹ−４３−９００６は複数のキナーゼ、特にＶＥＧＦ２、３；ＰＤＧＦＲβ；ＦＬＴ３およびｃＫＩＴ（Ｗｉｌｈｅｌｍ，  ＳＭら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００４年；およびＣｈｉｒｏｎのキナーゼプロファイリングデータ）を阻害し、Ｔ細胞の機能的応答に関与している２つのキナーゼであるＬｃｋおよびＦｙｎをある程度まで阻害する。ＢＡＹ４３−９００６の阻害性のキナーゼプロフィール、およびＭＡＰＫシグナル伝達／Ｔ細胞シグナル伝達に対する潜在的な影響を考慮すると、ＢＡＹ４３−９００６はＴ細胞においてＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒシグナル伝達を潜在的に妨害できると考えられていた。したがって、ＩＬ−２シグナル伝達に対するＢＡＹ４３−９００６の潜在的な相互作用をＣＴＬＬ−２、Ｂ１６−Ｆ１０、またはＲＥＮＣＡ細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価した。
【０２３３】
ＣＴＬＬ−２、Ｂ１６−Ｆ１０またはＲＥＮＣＡモデル細胞に対するＢＡＹ４３−９００６の効果を検査するために、血清飢餓させた細胞を様々な濃度のＢＡＹ４３−９００６（０．０１〜２０μＭ）で処置した。適切な対照として、細胞をＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびイオノマイシン（０．４μｇ／ｍｌ）で１５分間刺激した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣＴＬＬ−２細胞中でのｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の同時処置ならびに逐次処置の効果を検査するために、血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞をｒＩＬ−２（１０ｎＭ）で２時間、ＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）を存在させてまたは存在させずに処置した。逐次処置には、ＢＡＹ４３−９００６を２時間処置した。その後、細胞を洗浄し、次いでｒＩＬ−２で処置し、逆も同様である。ＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）の阻害効果も、ＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍｌ）およびイオノマイシン（０．４μｇ／ｍｌ）を用いた１５分間の刺激を行ってまたは行わずに検査した。
【０２３４】
様々な細胞種においてＭＡＰＫ経路の阻害に必要なＢＡＹ４３−９００６の濃度は非常に可変的であるので、様々な濃度のＢＡＹ４３−９００６（０〜２０μＭの範囲）の効果を、血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞で２時間、ＰＭＡ＋イオノマイシン刺激を用いてまたは用いずに評価した。インキュベーション期間の終わりに、処置したＣＴＬＬ−２細胞を溶解し、ｐＥＲＫレベルを決定するためにタンパク質溶解物をウエスタンブロット解析に供した。ＢＡＹ４３−９００６は、マウスＣＴＬＬ−２細胞およびヒトジャーカットＴ細胞系において濃度≧１μＭでｐＥＲＫを相当阻害した。細胞におけるｐＳＴＡＴ５およびｐＡＫＴレベルは、ＣＴＬＬ−２細胞に対するＢＡＹ４３−９００６処置の効果によって変化せず、これは、Ｔ細胞におけるＪＡＫ／ＳＴＡＴ５経路およびＰＩ−３Ｋ／ＡＫＴが大部分影響を受けなかったことを示している。
【０２３５】
ｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６を合わせることの治療の基盤をｉｎ  ｖｉｔｒｏで調査するために、Ｔ細胞に対するｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の効果ならびにＣＴＬＬ−２細胞における２つのＩＬ−２に媒介されるシグナル伝達経路（ＭＡＰＫおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴ５）の影響の研究を行った。２つの薬物の同時のレジメンまたは逐次的なレジメンを用いた、ＩＬ−２に媒介されるＴ細胞シグナル伝達効果を、ＣＴＬＬ−２細胞で調査した。血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞をＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）で２時間処置し、その後、ビヒクル、ｒＩＬ−２（１０ｎＭ）またはＰＭＡ＋イオノマイシンのいずれかで処置した。あるいは、ｒＩＬ−２（１０ｎＭ、２時間）の処置、次いでＢＡＹ４３−９００６（３μＭ、２時間）も調査した。薬物の曝露および／またはＰＭＡ＋イオノマイシンの刺激ののち、細胞溶解液のｐＥＲＫおよびｐＳＴＡＴ５のウエスタンブロット解析を行った（以前に記載のとおり）。ＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）処置によりｐＥＲＫレベルが阻害された一方で、ｒＩＬ−２は血清飢餓させたＣＴＬＬ−２細胞においてｐＥＲＫレベルを活性化させ（ベースラインｐＥＲＫレベルに対して）、これにより、ＭＡＰＫ経路に対する２つの薬物の相反する効果が確認された。ＢＡＹ４３−９００６の組合せ（同時および逐次的な薬物曝露）を用いたすべての処置は、ＣＴＬＬ−２細胞においてｐＥＲＫを相当阻害した。試験したすべての組合せ処置において、ＳＴＡＴ５経路またはＡＫＴ経路に対して効果は観察されなかった（方法に概要を示したとおり）。
【０２３６】
高濃度でのＢＡＹ４３−９００６は腫瘍細胞系においてｐＥＲＫレベルを阻害する
マウス腫瘍細胞系、すなわちＢ１６−Ｆ１０黒色腫、ＣＴ２６結腸およびＲＣＣ  ＲＥＮＣＡモデルに対するＢＡＹ４３−９００６処置の効果を決定した。マウス細胞系は、免疫適合性のあるモデル（Ｔ／ＮＫ／単球／マクロファージに適合性のあるマウス）におけるｉｎ  ｖｉｖｏのｒＩＬ−２治療に対するその応答性に基づいて選択し、ここでは、ｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の合わせた治療の効果が調査できた。血清飢餓させたＢ１６−Ｆ１０黒色腫およびＲＥＮＣＡ細胞を０〜２０μＭの範囲の濃度のＢＡＹ４３−９００６に曝した。薬物曝露の後の細胞溶解液におけるホスホＥＲＫレベルをウエスタンブロット解析によって決定した。ＢＡＹ４３−９００６は、≧５μＭもの非常に高い濃度で試験したどちらの細胞系においても（Ｂ１６−Ｆ１０およびＲＥＮＣＡ）ｐＥＲＫレベルを阻害し、２０μＭではｐＥＲＫのほぼ完全な消滅が見られた。
【０２３７】
Ｃ．ＩＬ−２に媒介される細胞増殖に対するＢＡＹ４３−９００６のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果
ＢＡＹ４３−９００６によるｐＥＲＫ阻害がＣＴＬＬ−２細胞におけるＩＬ−２に媒介される増殖応答に影響を与えたかどうかを検査するために、ＣＴＬＬ−２細胞（５０００個の細胞／ウェル）を、ｐＥＲＫを阻害する濃度のＢＡＹ４３−９００６（３μＭ、２時間）でプレインキュベーションを行うことによって、増殖アッセイを実施した。細胞をＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）と２時間のインキュベーションしたのち、細胞を９６ウェルプレートに植え、様々な濃度のｒＩＬ−２（０〜１００ｎＭ）に７２時間曝した。未処置の細胞には、ｒＩＬ−２（同濃度）とのインキュベーションの前に偽処置を与えた。ＢＡＹ４３−９００６で処置したおよび処置していないＣＴＬＬ−２細胞の増殖応答は、ＷＳＴ−１アッセイを用いて評価した。ＢＡＹ４３−９００６（３μＭ）との細胞のプレインキュベーションにより、ＣＴＬＬ−２細胞系においてｐＥＲＫシグナル伝達が阻害されたが、ＩＬ−２誘導性の増殖応答には影響が与えられなかった。
【０２３８】
Ｄ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣＴＬＬ−２および腫瘍細胞に対するＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８の抗増殖活性
これらの細胞種のそれぞれ（ＣＴＬＬ−２、Ｂ１６−Ｆ１０、ＲＥＮＣＡ、ＣＴ２６）におけるＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８のｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞毒性活性を評価するために、細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートに植え、ＢＡＹ４３−９００６の段階希釈液（０〜５０μＭ）を用いて３７℃で７２時間処置した。ＣＴＬＬ−２細胞系は増殖をＩＬ−２に依存しているので、これらの細胞に対する細胞毒性を５ｎＭのｒＩＬ−２を含む培地中で実施した。７２時間のインキュベーション期間の終わりに、テトラゾリウム色素（ＷＳＴ−１）アッセイまたは化学発光（ＢｒｄＵ）アッセイのどちらかによって細胞生存度を決定した。対照として、ＭＶ４；１１（ヒトＦＬＴ３  ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞系）をＢＡＹ４３−９００６（０〜５０μＭ）で処置したか、Ｂ１６−Ｆ１０細胞をビンクリスチン（０〜１μＭ）で処置して、薬剤の細胞毒性およびアッセイの妥当性を確認した。薬物の阻害性濃度はＥＣ５０値として表し、これは、未処置／ビヒクル対照に対する薬物で処置した細胞の吸光度として測定した増殖応答が５０％減少するために必要な濃度と定義した。
【０２３９】
ＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８の相対的なＥＣ５０を表９に示す。
【０２４０】
【表９】
2008530239.tif 000040
細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートに植え（ＣＴＬＬ−２：５０００個の細胞／ウェル；ＲＥＮＣＡ：１５００個／ウェル；Ｂ１６−Ｆ１０：１０００個／ウェル；ＣＴ２６：１０００個の細胞／ウェル；ＭＶ４；１１：５０００個／ウェル）、ＢＡＹ４３−９００６、ＳＵ１１２４８またはビンクリスチンの段階希釈液で処置した。ＣＴＬＬ−２はＩＬ−２依存性細胞系であるので、細胞毒性アッセイは５ｎＭのｒＩＬ−２を含む培地中で実施した。インキュベーション期間（３７℃で７２時間）の終わりに、テトラゾリウム色素（ＷＳＴ−１）アッセイのどちらかによって細胞生存度を決定した。
【０２４１】
ａＥＣ５０＝未処置／ビヒクル対照に対する薬物で処置した細胞の吸光度として測定した増殖応答が５０％減少するために必要な濃度。
【０２４２】
ｂＭＶ４；１１とは、ＦＬＴ３内部タンデム重複（ＩＴＤ）を発現するヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞系である。ＢＡＹ４３−９００６（強力なＦＬＴ３キナーゼ阻害剤；ＩＣ５０＝５８ｎＭ）は、ＭＶ４；１１細胞に対する強力なｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗増殖活性を実証している。
【０２４３】
ｄ細胞生存度は、細胞のＡＴＰ含有量を測定したＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（商標）アッセイを用いて評価した。
【０２４４】
一般に、ＣＴＬＬ−２細胞および様々な細胞系（Ｂ１６−Ｆ１０、ＲＥＮＣＡ、ＣＴ２６）の増殖を阻害するためには、抗有糸分裂剤ビンクリスチンと比べて、比較的高い濃度のＢＡＹ４３−９００６（またはＳＵ１１２４８）が必要であった（相対的なＥＣ５０によって定義；表９参照）。ＲＥＮＣＡ細胞に対するＢＡＹ４３−９００６の効果の細胞毒性も、ＢｒｄＵアッセイを用いて検査して、ＤＮＡ合成に対する効果を評価した（ミトコンドリアテトラゾリウム色素アッセイを用いた抗増殖活性に対して）。ＢｒｄＵ方法を用いて得た、ＲＥＮＣＡ細胞に対するＢＡＹ４３−９００６（〜５μＭ）のＥＣ５０は、ＷＳＴ−１アッセイで観察されたものと類似していた。ＲＥＮＣＡ腫瘍細胞を濃度（０〜１μＭ）で一定範囲のｒＩＬ−２に曝した場合に、直接的な増殖応答（または細胞毒性）は観察されず、これにより、ｒＩＬ−２の機構が免疫エフェクター細胞成分の活性化に依存していることが確認された。
【０２４５】
Ｅ．ｉｎ  ｖｉｖｏの有効性研究
マウスにおけるｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の薬物動態学
公開されているＢＡＹ４３−９００６（４００ｍｇの用量）の第Ｉ相の報告では、１０〜２０μＭの高いＣｍａｘおよび約２４時間の長い薬物半減期が患者において達成された（Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２００５年、２３（５）：９６５〜９７２頁）。血漿薬物曝露がｉｎ  ｖｉｖｏでＴ細胞の生存度および増殖応答に影響を与え得るかどうかを決定するために、マウスにおけるｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の単一用量の薬物動態学を測定した。
【０２４６】
マウスにおける３０ｍｇ／ｋｇのＢＡＹ４３−９００６の単一経口量により、ｔｍａｘ２時間で約５５００〜８０００ｎｇ／ｍｌ（〜１０μＭ）のＣｍａｘが達成された。ＢＡＹ４３−９００６の血漿排出速度は比較的遅く、その結果、半減期は約４時間であった。対照的に、６ｍｇ／ｋｇの皮下投与の後のｒＩＬ−２のＰＫプロフィールにより、ｔｍａｘ約３０分間で約５５０〜８５０ｎｇ／ｍｌのＣｍａｘが実証された。≧５０ｎｇ／ｍｌの曝露を４時間行った場合のマウスにおけるｒＩＬ−２のｔ１／２は約１時間であった。興味深いことに、単一用量およびそれぞれの投与経路後のどちらの治療でも、（ｔｍａｘで）重複しないＣｍａｘが示され、ＰＫからの発見によって支持されるように、同時治療および逐次治療のどちらも実現可能であり得ることが回避された。ＢＡＹ４３−９００６は血液中で大部分がタンパク質に結合している可能性を考慮すると、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴ細胞生存度に対するこれらの薬物の曝露の影響は、依然として取り組まなければならない。
【０２４７】
ｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の治療はｅｘ  ｖｉｖｏで免疫エフェクター機能を低下させる
１つまたは複数のＴリンパ性キナーゼ（Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｓｙｋ、Ｂｔｋ、Ｓｒｃ、Ｔｃｋ２、ＭＡＰＫ、ＪＡＫ）の阻害はＴ細胞の拡大および免疫エフェクター機能を抑制し得るので、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴ細胞の増殖応答および機能的応答に対するｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の効果を調査した。
【０２４８】
これらの実験では、ＲＥＮＣＡ腫瘍を保有するＢＡＬＢ／ｃマウスを、ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ／日、皮下、６〜１０日目）、ＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、６〜１０日目）または同時もしくは逐次的に（ｒＩＬ−２、１ｍｇ／ｋｇ／日、皮下、１〜５日目＋ＢＡＹ４３−９００６、３０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、６〜１０日目；もしくはＢＡＹ４３−９００６、３０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、１〜５日目＋ｒＩＬ−２、１ｍｇ／ｋｇ／日、皮下、６〜１０日目）のどちらかで投与するｒＩＬ−２とＢＡＹ４３−９００６との組合せで治療した。その後、治療したマウスから単離した脾細胞を、様々なエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比におけるＹａｃ−１標的細胞に対するｅｘ  ｖｉｖｏ死滅アッセイに供し、５１Ｃｒ標識したＹａｃ−１細胞の％特異的溶解を決定した。ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ）で治療したマウスでは、ビヒクル処置と比較して、脾細胞に媒介されるＹａｃ−１標的の死滅が有意に増加した（ｒＩＬ−２で２３％対ビヒクル処置で０％）。ＢＡＹ４３−９００６治療で観察された特異的死滅効果（１％）は無視でき、ビヒクル処置と差異がなかった。ｒｆおよびＢＡＹ４３−９００６を用いたすべての治療では、脾細胞に媒介される溶解活性の低下が得られた（同時治療＝１６％；逐次治療≦９％対ｒＩＬ−２単独治療＝２３％）。
【０２４９】
循環免疫エフェクター細胞集団に対するｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６治療の効果
腫瘍を保有するＢＡＬＢ／ｃマウスの循環リンパ球および単球集団に対する、ｒＩＬ−２および／またはＢＡＹ−４３−９００６の治療の薬力学的効果を検査した。これらの研究では、単独薬剤またはｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の治療の組合せ（前述のように同時もしくは逐次治療）ののちに、血液を採取した。ＴｒｕＣｏｕｎｔ（商標）チューブおよび適切な免疫染色を用いて、全血中でリンパ球およびＴ細胞部分集団（ＣＤ４＋またはＣＤ８＋）の絶対数を定量した。
【０２５０】
ｒＩＬ−２治療により、腫瘍を有するマウスにおいて循環リンパ球および単球の絶対数（ＣＤ４５＋細胞：２３８７個の細胞／μｌ対ビヒクルで１５７５個の細胞／μｌ）、ならびにＴ細胞の絶対数（１５５０個の細胞／μｌ対ビヒクルで６６４個の細胞／μｌ）が減少した。ビヒクル処置と比較して、ｒＩＬ−２治療でＣＤ４：ＣＤ８細胞比の有意な増加が観察され（５：３；ｒＩＬ−２：ビヒクル、すなわち１．７倍）、これは拡大するＴ細胞数におけるｒＩＬ−２の作用機構の指標である。ｒＩＬ−２治療後の非Ｔ細胞および単球細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３−）の相対数は、ビヒクル処置に類似していた（８３７個の細胞／μｌ対ビヒクルで９１１個の細胞／μｌ）。
【０２５１】
対照的に、ｒＩＬ−２と合わせた単独薬剤のＢＡＹ４３−９００６またはＢＡＹ４３−９００６は、影響が小さかったか、またはリンパ球および単球の絶対数を増加させ（２４１７〜３５７７個の範囲の細胞／μｌ対ビヒクルで２３８７個の細胞／μｌ）、また、非Ｔ細胞および単球集団も増加させた（１２４１〜１５６３個の細胞／μｌ対ビヒクルで８３７個の細胞／μｌ）。Ｔ細胞の合計数に対するＢＡＹ４３−９００６治療の効果は、ビヒクル処置に類似していた（１８２７個の細胞／μｌ対ビヒクルで１５５０個の細胞／μｌ）。ｒＩＬ−２（２０８１個のＴ細胞／μｌ対ビヒクルで１５５０個の細胞／μｌ）で開始した際にｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の逐次的なレジメンで観察された、わずかに増加した合計Ｔ細胞数（ＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団をどちらも含む）。ｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６を同時または連続的に、例えばＢＡＹ４３−９００６、次いでｒＩＬ−２を与えた場合、合計Ｔ細胞の数は、ビヒクル処置と比較してわずかに減少した（約１１７０〜１２４４個のＴ細胞／μｌ対ビヒクルで１５５０個の細胞／μｌ）。個々のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団において類似の傾向が観察された。
【０２５２】
さらに、ｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８治療（以前に記載）を用いた治療後の腫瘍の組織学を決定した。Ｔ細胞の薬力学をｉｎ  ｖｉｖｏで検査するために、腫瘍に浸潤するＴ細胞をマウス抗ＣＤ３抗体で検出した。薬物治療後の腫瘍における抗増殖作用はＫｉ６７染色を用いて評価した。ｒＩＬ−２治療では、ビヒクル処置と比較して、ＲＥＮＣＡ腫瘍（およびＢ１６−Ｆ１０腫瘍）の両方を浸潤するＴ細胞数の増加が見られた。一般に、ＲＥＮＣＡモデルにおいて、Ｂａｙｅｒ４３−９００６治療群でより少ないＴ細胞が検出された。ある程度のＴ細胞がすべての治療群で検出されたので、Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍における浸潤するＴ細胞に対するｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８の治療の効果は不確かであった。壊死の増加を示した腫瘍（腫瘍阻害）は、一般に腫瘍細胞間に分散したＴ細胞数がより多いことが示された。総合すると、データは、ｒＩＬ−２が循環中のＴ細胞を活性化して腫瘍を含めた血管外部位へと細胞を輸送すること、およびＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８の治療がＴ細胞増殖応答および輸送を部分的に抑制し得ることを示唆している。
【０２５３】
ｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６の治療はＩＬ−２−応答性マウス腫瘍モデルの有効性を増強する
ｒＩＬ−２とＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８のどちらかとの薬物相互作用を検査した（図１〜１０および表１０〜１２参照）。組合せ治療は、３つの実験的なＴ細胞に適合性のあるマウスＩＬ−２−応答性腫瘍モデルで評価した（Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫、ＣＴ２６結腸、ＲＣＣ  ＲＥＮＣＡモデル）（図１〜１０）。これらの研究では、腫瘍の大きさが５０〜２２５ｍｍ３まで確立された後にマウスをランダム化し、ＢＡＹ４３−９００６もしくはＳＵ１１２４８の１日１回の経口投薬またはｒＩＬ−２の１日１回の皮下投与ののち（方法で示したとおり）、腫瘍の増殖をカリパーによる測定によって監視した。ｒＩＬ−２、ＢＡＹ４３−９００６およびＳＵ１１２４８の単独薬剤の有効性および許容性は、一定範囲の用量および治療スケジュールで調査した（図１）。すべてのモデルでｒＩＬ−２は強力な有効性を示し、有効な用量での腫瘍阻害は、一般に４０〜６０％の範囲内であった（対ビヒクル処置）（図１）。ＢＡＹ４３−９００６の最小有効用量は≧３０ｍｇ／ｋｇ／日であった（対ビヒクル処置）。ＳＵ１１２４８は、一般に≧４０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で有効であったが、Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍モデルは例外的であった（図１）。
【０２５４】
単独薬剤の有効性および許容性に基づいて、次いでｒＩＬ−２を、ＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８と、許容され、かつ体重に対する有害効果も任意の有害な臨床症状も示さない用量で合わせた。逐次治療および同時治療スケジュールをどちらもＢ１６−Ｆ１０およびＣＴ２６腫瘍モデルで検査した（図２〜８、表１０および１１）。Ｂ１６−Ｆ１０およびＣＴ２６腫瘍モデルでは、ｒＩＬ−２とＢＡＹ４３−９００６またはｒＩＬ−２とＳＵ１２２４８を用いて調査したほぼすべての組合せ療法（同時または逐次的なレジメン）で、単独治療またはビヒクル処置と比較して抗腫瘍活性が増強された（図２〜５）。様々な組合せ療法の組合せ薬物相互作用の要約を表１０および１１に要約する。
【０２５５】
【表１０】
2008530239.tif 000041
【０２５６】
【表１１】
2008530239.tif 000042
ａｎ＝各研究で１０匹のＣ５７ＢＬ６マウス／群。Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍を有するマウスは、腫瘍の平均の大きさが〜５０ｍｍ３まで確立された後に治療した。
【０２５７】
ｂＴ／Ｃ実測（Ｏ）＝％Ｔ／Ｃ
ｃＴ／Ｃ予測（Ｅ）＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２
ｄ相乗効果は、組合せ療法の予測された％腫瘍増殖阻害（％Ｔ／Ｃ予測＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２）を組合せ治療の実測された％Ｔ／Ｃ（％Ｔ／Ｃ実測）で割り算した比が＞１であった場合に定義した。
【０２５８】
ｅ薬物相互作用は、％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＝１であった場合に相加的と定義し、％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＜１であった場合に拮抗と定義した。
【０２５９】
Ｎ／Ａ、適用せず
【０２６０】
【表１２】
2008530239.tif 000043
【０２６１】
【表１３】
2008530239.tif 000044
ａｎ＝各研究で１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウス／群。ＣＴ２６腫瘍を保有するマウスは、腫瘍の平均の大きさが〜２２５ｍｍ３まで確立された後に治療した。
【０２６２】
ｂＴ／Ｃ実測（Ｏ）＝％Ｔ／Ｃ
ｃＴ／Ｃ予測（Ｅ）＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２
ｄ相乗効果は、組合せ療法の予測された％腫瘍増殖阻害（％Ｔ／Ｃ予測＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２）を組合せ治療の実測された％Ｔ／Ｃ（％Ｔ／Ｃ実測）で割り算した比が＞１であった場合に定義した。
【０２６３】
ｅ薬物相互作用は、％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＝１であった場合に相加的と定義し、％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＜１であった場合に拮抗と定義した。
【０２６４】
Ｎ／Ａ、適用せず
ＢＡＹ４３−９００６（４０ｍｇ／ｋｇ／日、経口、１〜７日目）をｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ／日、皮下、８〜１３日目）の前に投与した、ＣＴ２６モデルの１件の例でのみ、組合せ治療の効果が最適でなかった。
【０２６５】
ＲＥＮＣＡモデルでは同時のスケジュールのみを評価し（図９〜１０；表１２）、ｒＩＬ−２とＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８のどちらかとの組合せでは、単独薬剤の治療と比較してより大きな腫瘍阻害が示された。
【０２６６】
【表１４】
2008530239.tif 000045
ａｎ＝各研究で１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウス／群。ＲＥＮＣＡモデルの腫瘍を有するマウスは、腫瘍の平均の大きさが〜５０〜７０ｍｍ３まで確立された後に治療した。ＲＥＮＣＡ腫瘍モデルは重篤な悪液質（動物のるいそう）を示し、薬剤の逐次的な投与が不可能となり、評価が不可能であったので、同時レジメンを示した。
【０２６７】
ｂＴ／Ｃ実測（Ｏ）＝％Ｔ／Ｃ
ｃＴ／Ｃ予測（Ｅ）＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２
ｄ相乗効果は、組合せ療法の予測された％腫瘍増殖阻害（％Ｔ／Ｃ予測＝％Ｔ／Ｃ治療１×％Ｔ／Ｃ治療２）を組合せ治療の実測された％Ｔ／Ｃ（％Ｔ／Ｃ実測）で割り算した比が＞１であった場合に定義した。
【０２６８】
ｅ薬物相互作用は、％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＝１であった場合に相加的と定義し、％Ｔ／Ｃ予測／％Ｔ／Ｃ実測＜１であった場合に拮抗と定義した。
【０２６９】
Ｎ／Ａ、適用せず
ＲＥＮＣＡモデルにおける逐次治療は、モデルの短い持続時間およびマウス悪液質（動物のるいそう／体重減少）が原因で実現可能でなかった。総合すると、データにより、前臨床モデルにおいてｒＩＬ−２をＢＡＹ４３−９００６およびＳＵ１１２４８などの標的化小分子の治療と合わせた場合に活性が増強されることが示され、これは、このような治療戦略を診療室に移すことができることを示している。
【０２７０】
本発明を、本発明を実施する本発明の好ましい様式を含めた具体的な例に関して記載したが、当業者は、上述の系および技術には本発明の精神および範囲内にある数々の変形および置換えが存在することを、理解されよう。
【０２７１】
参考としての組込み
上述の特許、特許出願および雑誌論文のすべての内容は、本明細書中に完全に説明した場合と同様に、参考として組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０２７２】
【図１】図１は、ＩＬ−２−応答性のＴ細胞に適合性のあるマウス腫瘍モデルにおける、ｒＩＬ−２、ＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８の単独薬剤の活性を示す。Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫（２×１０６）、ＣＴ２６結腸（２×１０６）またはＲＥＮＣＡ腎癌（１×１０６）の細胞を、雌のＣ５７ＢＬ６またはＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部内に皮下移植した。治療は、腫瘍の平均の大きさが５０〜２２５ｍｍ３まで確立された後に、方法に概要を示したとおりに開始した。マウスを治療コホートへとランダム化した（１０匹のマウス／群）。ｒＩＬ−２を１日１回皮下投与した（０．２〜３ｍｇ／ｋｇ／日）。ＢＡＹ４３−９００６またはＳＵ１１２４８（１〜１００ｍｇ／ｋｇ）を溶液として、経口胃管栄養法によって１日１回投与した。図１は、Ｂ１６−Ｆ１０、ＣＴ２６およびＲＥＮＣＡ腫瘍モデルにおける、単独薬剤の１０〜１４日の平均腫瘍増殖阻害（［１−（治療群の平均腫瘍体積／ビヒクル群の平均腫瘍体積）×１００］として計算した）を例示する。データは複数の独立した研究から編集し、それぞれの研究は１０匹のマウス／群で行った。＊は、統計的有意性対ビヒクル処置を表す（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。
【図２】図２は、Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫モデルにおけるｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６での同時治療の有効性を示す。Ｂ１６−Ｆ１０細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＣ５７ＢＬ６マウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜５０ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始し、ビヒクル、０〜６日目（◆）、ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（△）もしくはＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（×）または合わせたｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（■）のいずれかを用いた。図２は、平均腫瘍体積（ｍｍ３±ＳＥ）対ランダム化後の日数（ｎ＝１０匹のマウス／群）を例示する。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫モデルにおけるｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６での逐次治療の有効性を示す。Ｂ１６−Ｆ１０細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＣ５７ＢＬ６マウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜５０ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始した。図３Ａは、ｒＩＬ−２を最初に投与し、次いでＢＡＹ４３−９００６を投与する逐次的なレジメンからの結果を示す。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◆）０〜６、７〜１３日目；ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（△）もしくはＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（×）または合わせたｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（●）。図３Ｂは、ＢＡＹ４３−９００６を最初に投与し、次いでｒＩＬ−２を投与する逐次的なレジメンからの結果を示す。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◆）０〜６、７〜１３日目；ＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（×）；ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、７〜１３日目）（□）または合わせたＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）＋ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、７〜１３日目）（▲）。グラフは、平均腫瘍体積（ｍｍ３±ＳＥ）対ランダム化後の日数（ｎ＝１０匹のマウス／群）を示す。
【図４】図４は、Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫モデルにおけるｒＩＬ−２およびＳＵ１１２４８での同時治療の有効性を示す。Ｂ１６−Ｆ１０細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＣ５７ＢＬ６マウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜５０ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始し、ビヒクル、０〜６日目（◇）、ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（□）もしくはＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（○）または合わせたｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（▲）のいずれかを用いた。図４は、平均腫瘍体積（ｍｍ３±ＳＥ）対ランダム化後の日数（ｎ＝１０匹のマウス／群）を例示する。
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫モデルにおけるｒＩＬ−２およびＳＵ１１２４８での逐次治療の有効性を示す。Ｂ１６−Ｆ１０細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＣ５７ＢＬ６マウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜５０ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始した。図５Ａは、ｒＩＬ−２を最初に投与し、次いでＳＵ１１２４８を投与する逐次的なレジメンからの結果を示す。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◇）０〜６、７〜１３日目；ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（□）もしくはＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（×）または合わせたｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（●）。図５Ｂは、ＳＵ１１２４８を最初に投与し、次いでｒＩＬ−２を投与する逐次的なレジメンからの結果を示す。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◇）０〜６、７〜１３日目；ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（○）；ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、７〜１３日目）（△）または合わせたＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）＋ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、７〜１３日目）（■）。グラフは、平均腫瘍体積（ｍｍ３±ＳＥ）対ランダム化後の日数（ｎ＝１０匹のマウス／群）を示す。
【図６】図６は、ＣＴ２６マウス結腸腺癌モデルにおけるｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６での逐次治療の有効性を示す。ＣＴ２６細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜２２５ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始した。パネルは、ｒＩＬ−２を最初に投与し、次いでＢＡＹ４３−９００６を投与する逐次的なレジメンを例示する：ビヒクル（◆）０〜６、７〜１３日目；ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（□）もしくはＢＡＹ４３−９００６（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（△）または合わせたｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＢＡＹ４３−９００６（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（●）。
【図７】図７は、ＣＴ２６マウス結腸腺癌モデルにおけるｒＩＬ−２およびＳＵ１１２４８での同時治療の有効性を示す。ＣＴ２６細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜２２５ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始した。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◆）０〜６日目；ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（□）もしくはＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（○）または合わせたｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（●）。
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、ＣＴ２６マウス結腸腺癌モデルにおけるｒＩＬ−２およびＳＵ１１２４８での逐次治療の有効性を示す。ＣＴ２６細胞（２×１０６個の細胞）を、雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜２２５ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始した。パネルは以下を例示する：図８Ａは、ｒＩＬ−２を最初に投与し、次いでＳＵ１１２４８を投与する逐次的なレジメンからの結果を示す：ビヒクル（◆）０〜６、７〜１３日目；ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（□）もしくはＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（○）または合わせたｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、７〜１３日目）（■）。図８Ｂは、ＳＵ１１２４８を最初に投与し、次いでｒＩＬ−２を投与する逐次的なレジメンからの結果を示す。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◆）０〜６、７〜１３日目；ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（○）；ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、７〜１３日目）（□）または合わせたＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）＋ｒＩＬ−２（３．３ｍｇ／ｋｇ、皮下、７〜１３日目）（▲）。グラフは、平均腫瘍体積（ｍｍ３±ＳＥ）対ランダム化後の日数（ｎ＝１０匹のマウス／群）を示す。
【図９】図９は、マウスＲＣＣ  ＲＥＮＣＡ腫瘍モデルにおけるｒＩＬ−２およびＢＡＹ４３−９００６での同時治療の有効性を示す。ＲＥＮＣＡ細胞（１×１０６個の細胞）を、雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜５０ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始し、ビヒクル、０〜８日目（◆）、ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜４、７〜１１日目）（△）もしくはＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜８日目）（×）または合わせたｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜４、７〜１１日目）＋ＢＡＹ４３−９００６（３０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜８日目（■）のいずれかを用いた。図９は、平均腫瘍体積（ｍｍ３±ＳＥ）対ランダム化後の日数（ｎ＝１０匹のマウス／群）を例示する。
【図１０】図１０は、マウスＲＣＣ  ＲＥＮＣＡ腫瘍モデルの治療における、ｒＩＬ−２およびＳＵ１１２４８での同時治療の有効性を示す。ＲＥＮＣＡ細胞（１×１０６個の細胞）を、雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部内に皮下移植した。腫瘍が〜５０ｍｍ３となった後にマウスを群へとランダム化し、０日目に治療を開始した。パネルは以下を例示する：ビヒクル（◆）０〜６日目；ｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）（■）もしくはＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（×）または合わせたｒＩＬ−２（１ｍｇ／ｋｇ、皮下、０〜６日目）＋ＳＵ１１２４８（４０ｍｇ／ｋｇ、経口、０〜６日目）（▲）。
【図１】
2008530239.tif 000046
【図２】
2008530239.tif 000047
【図３】
2008530239.tif 000048
【図４】
2008530239.tif 000049
【図５】
2008530239.tif 000050
【図６】
2008530239.tif 000051
【図７】
2008530239.tif 000052
【図８】
2008530239.tif 000053
【図９】
2008530239.tif 000054
【図１０】
2008530239.tif 000055
【国際調査報告】
2008530239.tif 000056
2008530239.tif 000057