(57)【要約】  本発明は、a) Bcr-Abl、Flt-3、FAKおよびRAFキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤；およびb)少なくとも１個のJAKキナーゼ阻害剤を含む医薬的組合せ、ならびにそのような組合せを用いて増殖性疾患を処置または予防する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
a)Bcr-Abl、Flt-3、FAKおよびRAFキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤；および
b)少なくとも1個の、サブタイプ選択的またはサブタイプ非選択的JAKキナーゼ阻害剤を含む医薬的組合せ剤。
【請求項２】
Bcr-Abl、Flt-3、FAKおよびRAFキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤および少なくとも1個のJAK3キナーゼ阻害剤を、例えば、同時にまたは連続して、治療上有効量で該対象に共投与することを含む、それを必要とする対象において増殖性疾患を処置または予防する方法。
【請求項３】
請求項2に記載の方法において使用するための、請求項1に記載の医薬的組合せ剤。
【請求項４】
請求項2に記載の方法において使用するための医薬の製造において使用するための、請求項1に記載の医薬的組合せ剤。
【請求項５】
薬剤a)が、
N-{5-[4-(4-メチル-ピペラジノ-メチル)-ベンゾイルアミド]-2-メチル-フェニル}-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(4-メチル-1H-イミダゾール-1-イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-ヘキサヒドロ-10-メトキシ-9-メチル-1-オキソ-9,13-エポキシ-1H,9H-ジインドロ[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]ピロロ[3,4-j][1,7]ベンゾジアゾニン-11-イル]-N-メチルベンズアミド;
1-[4-(4-エチル-ピペラジニル-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-3-[4-(6-メチルアミノ-ピリミジン-4-イルオキシ-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-エチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4-イルメチル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6-イル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5-イル)-アミン;
2-[5-クロロ-2-(2-メトキシ-4-モルフォリン-4-イル-フェニルアミノ)-ピリミジン-4-イルアミノ]-N-メチル-ベンズアミド;および
N3-[4-(4-モルフォリン-4-イル-シクロヘキシル)-フェニル]-1-ピリジン-2-イル-1H-[1,2,4]トリアゾール-3,5-ジアミン;
およびその組合せから選択される、請求項1に記載の医薬的組合せ剤。
【請求項６】
薬剤b)が、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(またCP-690,550と呼ばれる)の、
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490);プロジギオシン25-C (PNU156804);
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);および
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリル、
およびその組合せから選択される、請求項1に記載の医薬的組合せ剤。
【請求項７】
薬剤a)が、
N-{5-[4-(4-メチル-ピペラジノ-メチル)-ベンゾイルアミド]-2-メチル-フェニル}-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(4-メチル-1H-イミダゾール-1-イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-ヘキサヒドロ-10-メトキシ-9-メチル-1-オキソ-9,13-エポキシ-1H,9H-ジインドロ[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]ピロロ[3,4-j][1,7]ベンゾジアゾニン-11-イル]-N-メチルベンズアミド;
1-[4-(4-エチル-ピペラジニル-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-3-[4-(6-メチルアミノ-ピリミジン-4-イルオキシ-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-エチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4-イルメチル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6-イル-イソキノリン-1-イル)-アミン;および
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5-イル)-アミン;
2-[5-クロロ-2-(2-メトキシ-4-モルフォリン-4-イル-フェニルアミノ)-ピリミジン-4-イルアミノ]-N-メチル-ベンズアミド;および
N3-[4-(4-モルフォリン-4-イル-シクロヘキシル)-フェニル]-1-ピリジン-2-イル-1H-[1,2,4]トリアゾール-3,5-ジアミン;
およびその組合せから選択される、請求項2に記載の方法。
【請求項８】
薬剤b)が、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(またCP-690,550と呼ばれる)の、
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490); プロジギオシン25-C (PNU156804);
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリル、
およびその組合せから選択される、請求項2に記載の方法。
【請求項９】
RAF阻害剤およびJAKキナーゼ阻害剤の組合せ剤を投与することを含む、ミエローマのための方法であり、ここで、RAF阻害剤が、
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4-イルメチル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6-イル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5-イル)-アミン;
およびそれらの組合せから選択され、JAKキナーゼ阻害剤が、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(または、CP-690,550と呼ばれる)の、
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490); プロジギオシン25-C (PNU156804)
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリル
、およびそれらの組合せから選択される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、JAKキナーゼ阻害剤の少なくとも1個の選択的または非選択的サブタイプ、およびBcr-Abl、Flt-3、RAFならびにFAKキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤を含む医薬的組合せ剤、および例えば、腫瘍、ミエローマ、白血病、乾癬、再狭窄、強皮症ならびに線維症のような、例えば、増殖性疾患におけるそのような組合せ剤の使用に関する。
【０００２】
増殖性疾患患者に対する多くの処置選択肢があるにもかかわらず、有効で安全な抗増殖剤の要求および組合せ治療におけるそれらの優先的使用のための要求は存在し続けている。
【発明の開示】
【０００３】
発明の要約
例えば、以下で定義する通り、JAK1、JAK2、JAK3またはTYK2のうち1個またはそれ以上を標的とする少なくとも1個のJAKキナーゼ阻害剤、およびBcr-Abl、Flt-3、RAFならびにFAKキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤を含む組合せ剤が、例えば、腫瘍、ミエローマ、白血病、乾癬、再狭窄、強皮症ならびに線維症のような増殖性疾患に対して有益な効果を示すことが、本発明により判明した。
【０００４】
発明の詳細な説明
Bcr-Ablは、無秩序なチロシンキナーゼ活性を有し、210-kdタンパク質をコードする融合遺伝子で、慢性骨髄性白血病(CML)のほとんどすべての患者、および急性リンパ芽球性白血病(ALL)のおよそ33%の患者の白血病細胞に存在している。Bcr-Abl阻害剤は、例えば、次のアッセイにおけるIC50値が <5 μM、好ましくは <1 μM、より好ましくは <0.1 μMである化合物である。
【０００５】
Bcr-Ablに対する活性試験：p210 Bcr-Abl発現ベクターpGDp210Bcr/Abl (32D-Bcr/Abl)をトランスフェクトしたマウス骨髄性前駆細胞株32Dcl3を、J. Griffinから入手した(Da-na Farber Cancer Institute、Boston、MA、USA)。細胞は、構成的に活性なAblキナーゼを有する融合Bcr-Ablタンパク質を発現し、増殖因子と無関係に増殖する。細胞を、RPMI 1640 (AMIMED)、10%ウシ胎児血清、2 mMグルタミン(Gibco) (“完全培地”)で膨張させ、作業用ストックを凍結培地(95% FCS、5% DMSO (SIGMA)でバイアルあたり2×106 細胞のアリコートを凍結することによって調製する。融解後、最大10-12代継代している間、実験に使用する。
【０００６】
細胞アッセイのために、化合物をDMSOに溶解し、10 μMの出発濃度をもたらすために完全培地で希釈し、その後、完全培地での連続した3倍希釈で調製する。96ウェル丸底組織培養プレートに、ウェルあたり50 μLの完全培地で、200'000 32D-Bcr/Abl細胞を播種する。連続した3倍希釈の試験化合物を、ウェルあたり50 μLで細胞にトリプリケートで添加する。未処理細胞をコントロールとして使用する。化合物を、細胞と共に37℃、5% CO2で90分間インキュベートし、その後、1300 rpmで組織培養プレートの遠心を行い(Beckmann GPR centrifuge)、そして、ペレット細胞を除去しないように気をつけながら、注意深く吸引することにより、上清を除去する。細胞を、150 μL溶解緩衝液(50 mM Tris/HCl、pH 7.4、150 mM 塩化ナトリウム、5 mM EDTA、1 mM EGTA、1% NP-40、2 mM オルトバナジン酸ナトリウム、1 mM PMSF、50 μg/mL アプロチニンおよび80 μg/mL ロイペプチン)の添加により溶解し、ELISAのためにすぐに使用するか、または、使用まで-20℃でプレート中に凍結保存する。
【０００７】
黒色ELISAプレート(Packard HTRF-96 black plates)を、Upstate からの、50 ng/ウェルのウサギポリクローナル抗-abl-SH3ドメイン抗体06-466(50 μL PBS中)を用いて、4℃で、一晩、プレコーする。0.05% Tween20 (PBST)および0.5% TopBlock (Juro)を含む、200 μL/ウェルPBSで、3回洗浄後、残余タンパク質結合サイトを、室温で、4時間、200 μL/ウェルPBST、3% TopBlockでブロックし、その後、4℃で、3-4 時間、未処理または化合物処理細胞の50 μLライセート(ウェルあたり、20 μg の総タンパク質)で、インキュベートする。3回洗浄後、ブロッキング緩衝液で0.2 μg/mL に希釈したアルカリホスファターゼ(Zymed)により標識した、50 μL/ウェルの抗-ホスホチロシン抗体PY20(AP)を添加し、4℃で、一晩、インキュベートする。すべてのインキュベーションステップで、プレートをプレートシーラー(Costar)で覆う。最後に、プレートを洗浄緩衝液でさらに3回、脱イオン水で1回洗浄し、その後、90 μL/ウェルのEmerald II 含有AP-基質 CDPStar RTUを添加する。プレートシーラーであるPackard TopSeal (商標)で密封後、プレートを、暗室中、室温で、45分間インキュベートし、蛍光を、Packard Top Count Microplate Scintillation Counter (Top Count)を用いて、カウント毎秒(CPS)を測定することにより定量する。
【０００８】
未処理32D-Bcr/Abl細胞を用いて取得したELISA-読み出し(CPS)と、アッセイ-バックグラウンド(すべての構成要素であるが、細胞ライセートはない)の読み出しの間の差異を計算し、そして、これらの細胞に存在している構成的リン酸化Bcr-Abl タンパク質を100%反映しているものとして取る。Bcr-Ablキナーゼ活性に対する化合物の活性を、Bcr-Ablリン酸化の減少%として示す。IC50およびIC90の値を、グラフ外挿により用量応答曲線から決定する。
【０００９】
適当なBcr-Abl阻害剤は、例えば、次のようなものを含む：
-米国特許第5521184号で開示した化合物で、例えば、式(I)：
【化１】
2008520612.tif 000002
［式中、
R1は、4-ピラジニル、1-メチル-1H-ピロリル、アミノ-またはアミノ-低級アルキル-置換フェニル(ここで、それぞれの場合のアミノ基は、遊離であるか、アルキル化またはアシル化されている)、5-員環炭素原子で結合した、1H-インドリルまたは1H-イミダゾリル、もしくは、環炭素原子に結合し、かつ非置換であるか、または窒素原子が酸素で置換されている、非置換または低級アルキル-置換ピリジルであり；
R2およびR3は、それぞれ他のものから独立して、水素または低級アルキルであり、基R4、R5、R6、R7およびR8の1個または2個が、それぞれ、ニトロ、フルオロ-置換低級アルコキシまたは式
-N(R9)-C(=X)-(Y)n-R10
〔式中、
R9は、水素または低級アルキルであり;
Xは、オキソ、チオ、イミノ、N-低級アルキル-イミノ、ヒドロキシイミノまたはO-低級アルキル-ヒドロキシイミノであり;
Yは、酵素またはNH基であり;
nは、0または1であり;そして
R10は、少なくとも5個の炭素原子を有する脂肪族基、または、芳香族性、芳香族性-脂肪族、シクロ脂肪族、シクロ脂肪族-脂肪族、ヘテロ環式またはヘテロ環式-脂肪族基であり;そして、残りの基R4、R5、R6、R7およびR8は、それぞれ他のものから独立して、水素、非置換であるか、または遊離もしくはアルキル化されたアミノ、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはモルホリニルによって置換されている低級アルキル、低級アルカノイル、トリフルオロメチル、遊離、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、遊離、アルキル化またはアシル化アミノまたは遊離またはエステル化カルボキシである〕
の基である］
のN-フェニル-2-ピリミジン-アミン誘導体、または少なくとも1個の塩形成基を有するそのような化合物の塩である。
【００１０】
式(I)の化合物の例は、
N-(3-ニトロ-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(4-クロロベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ベンゾイルアミド-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(2-ピリジル)カルボキサミド-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(3-ピリジル)カルボキサミド-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(4-ピリジル)カルボキサミド-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ペンタフルオロ-ベンゾイルアミド-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(2-カルボキシ-ベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-n-ヘキサノイルlアミド-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ニトロ-フェニル)-4-(2-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ニトロ-フェニル)-4-(4-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(2-メトキシ-ベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(4-フルオロ-ベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(4-シアノ-ベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(2-チエニルカルボキサミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-シクロヘキシルカルボキサミド-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(4-メチル-ベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[3-(4-クロロ-ベンゾイルアミド)-フェニル]-4-(4-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-{3-[4-(4-メチル-ピペラジノメチル)-ベンゾイルアミド]-フェニル}-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(5-ベンゾイルアミド-2-メチル-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-{5-[4-(4-メチル-ピペラジノ-メチル)-ベンゾイルアミド]-2-メチル-フェニル}-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[5-(4-メチル-ベンゾイルアミド)-2-メチル-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[5-(2-ナフトイルアミド)-2-メチル-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[5-(4-クロロ-ベンゾイルアミド)-2-メチル-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-[5-(2-メトキシ-ベンゾイルアミド)-2-メチル-フェニル]-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-トリフルオロメトキシ-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-[1,1,2,2-テトラフルオロ-エトキシ]-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ニトロ-5-メチル-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ニトロ-5-トリフルオロメチル-フェニル)-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ニトロ-フェニル)-4-(N-オキシド-3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
N-(3-ベンゾイルアミド-5-メチル-フェニル)-4-(N-オキシド-3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００１１】
-さらなるBcr-Abl阻害化合物は、WO 04/005281で開示した化合物を含み、例えば、式(II)
【化２】
2008520612.tif 000003
［式中、
R1は、水素、低級アルキル、低級アルコキシ-低級アルキル、アシルオキシ-低級アルキル、カルボキシ-低級アルキル、低級アルコキシカルボニル-低級アルキルまたはフェニル-低級アルキルを示し;
R2は、水素、所望により1個またはそれ以上の同一または異なった基R3で置換されている低級アルキル、シクロアルキル、ベンゾシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または、0個、1個、2個、3個の環窒素原子および0個または1個の酸素原子および0個または1個の硫黄原子からなる、単環式もしくは二環式ヘテロアリール基(これらの基は、それぞれの場合非置換であるか、または一置換もしくは多置換されている)を示し;
R3は、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アシルオキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、N-一またはN,N-二置換カルバモイル、アミノ、一または二置換アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール基、または、0個、1個、2個、3個の環窒素原子および0個または1個の酸素原子および0個または1個の硫黄原子からなる、単環式もしくは二環式ヘテロアリール基(これらの基は、それぞれの場合非置換であるか、または一置換もしくは多置換されている)を示すか、または、
R1およびR2は、一緒になって、4個、5個または6個の炭素原子を有し、所望により、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、フェニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、一置換または二置換アミノ、オキソ、ピリジル、ピラジニルまたはピリミジニルにより一置換または二置換されているアルキレン;4個または5個の炭素原子を有するベンゾアルキレン;1個の酸素原子および3個または4個の炭素原子を有するオキサアルキレン;または、1個の窒素原子および3個または4個の炭素原子を有するアザアルキレン(ここで、窒素は、非置換であるか、または低級アルキル、フェニル-低級アルキル、低級アルコキシカルボニル-低級アルキル、カルボキシ-低級アルキル、カルバモイル-低級アルキル、N-一またはN,N-二置換カルバモイル-低級アルキル、シクロアルキル、低級アルコキシカルボニル、カルボキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジニル、ピリミジニルまたはピラジニルによって置換されている)を示し;そして
R4は、水素、低級アルキルまたはハロゲンを示す］
の化合物、および、N-オキシドまたはそのような化合物の薬学的に許容される塩を含む。
【００１２】
式(II)の化合物の例は、
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(4-モルホリニル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(2-メチル-1H-イミダゾール-1-イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(4-メチル-1H-イミダゾール-1-イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(5-メチル-1H-イミダゾール-1-イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[3-(4-メチル-1-ピペラジニル)-5-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[2-(1-ピロリジニル)-5-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
およびその薬学的に許容される塩を含む。
【００１３】
-さらなるBcr-Abl化合物は、2005年9月16日に出願したEP2005/009967に開示したもの、すなわち、式(III)
【化３】
2008520612.tif 000004
［式中、
R1は、H、ハロ、-C0-C7-O-R3、-C0-C7-NR4R5または-C(=O)-R6であり;
R2は、置換C3-C8-シクロアルキル、置換アリールまたは置換ヘテロシクリルであり;
R3は、Hまたは非置換もしくは置換低級アルキルであり;
R4およびR5は、独立して、H、非置換または置換低級アルキル;低級アルキル-カルボニル(ここで、低級アルキル部分は、所望により、置換および低級アルコキシ-カルボニルであり、ここで、低級アルキル部分は、所望により、置換されている)からなる群から選択され;
R6は、H、非置換または置換低級アルキル、低級アルコキシであり、ここで、低級アルキル部分は、所望により、置換または非置換、一-または二-置換アミノであり;
A、BおよびXは、独立して、=C(R7)-またはNから選択され;
E、GおよびTは、独立して、=C(R8)-またはNから選択され;
R7およびR8は、独立して、H、ハロおよび非置換または置換低級アルキルからなる群から選択され;
Yは、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-CH2-または-CH2-CH2-であり;
Zは、CHまたはNで、そして、Qは、C1-C4-アルキレンまたはC2-C4-アルケニレンであり、ここで、C1-C4-アルキレンまたはC2-C4-アルケニレンは、所望により、置換されていてもよく、ここで、該C1-C4-アルキレンまたはC2-C4-アルケニレン鎖の1個またはそれ以上の炭素原子は、所望により、独立して、窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子により置き換えてもよく;そして、点線によって特徴づけられるQとZの間の結合は、単結合である;ただしZがNならば、Qは非置換非分枝C1-C4-アルキレンではなく、または
ZがCで、Qが上記した通りであり(ここで、点線によって特徴づけられるQとZの間の結合は、二重結合である);そして
Wは、存在しないか、またはC1-C3-アルキレンである］
の化合物、またはその互変体、もしくはその塩を含む。
【００１４】
とりわけ好ましいのは、6-(6-アセチルアミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-ナフタレン-1-カルボン酸 [4 (4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-アミドである。
【００１５】
-さらなるBcr-Abl化合物は、2005年9月27日に出願したEP2005/010408および2004年6月10日に出願したUSSN 60/578491に開示したものを含む。
【００１６】
Flt-3阻害剤は、例えば、以下のアッセイで、IC50値が1-10000 nM、好ましくは、1-100 nMの範囲である化合物である。
【００１７】
Flt-3阻害剤は、次のように決定する:バキュロウイルスドナーベクターpFbacG01(GIBCO)を、ヒトFlt-3の細胞質内キナーゼドメインのアミノ酸563-993のアミノ酸領域を発現するリコンビナントバキュロウイルスを作製するために使用する。Flt-3の細胞質内ドメインのコード配列を、ヒトc-DNAライブラリー(Clontech)からPCRにより増幅する。増幅DNA断片およびpFbacG01ベクターを、BamH1およびHindIIIで消化することによりライゲーションのために適合させる。これらのDNA断片のライゲーションの結果が、バキュロウイルスドナープラスミドFlt-3(1.1)である。ウイルスの産生、Sf9細胞でのタンパク質の発現およびGST融合タンパク質の精製は、以下の通り行う：
【００１８】
ウイルスの産生：Flt-3キナーゼドメインを含むトランスファーベクター(pFbacG01-Flt-3)を、DH10Bac細胞株(GIBCO)にトランスフェクトし、トランスフェクトした細胞を選択的アガープレートに播種する。ウイルスゲノム中に融合配列の挿入がないコロニーは(細菌によって運搬される)、青色である。単一白色コロニーを採取し、ウイルスDNA(bac-mid)を、標準的なプラスミド精製手順によって細菌から単離する。その後、Sf9またはSf21細胞(American Type Culture Collection)を、Cellfectin試薬を用いてウイルスDNAと共に、フラスコ内でトランスフェクトする。
【００１９】
Sf9細胞での小規模タンパク質発現の決定：ウイルス含有培地をトランスフェクトした細胞培養から収集し、その力価を増大させるための感染に使用する。2ラウンドの感染後に取得したウイルス含有培地を、大規模タンパク質発現のために使用する。大規模タンパク質発現のために、100 cm2丸形組織培養プレートに5×107 細胞/プレートを播種し、ウイルス含有培地1 mL (およそ5 MOI)で感染させる。3日後、細胞をプレートから掻き取り、500 rpmで5分間遠心する。10-20個の100 cm2プレートからの細胞ペレットを、50 mLの氷冷溶解緩衝液(25 mM Tris-HCl、pH 7.5、2 mM EDTA、1% NP-40、1 mM DTT、1 mM PMSF)で再懸濁する。細胞を氷上で15分間撹拌し、その後、5000 rpmで20分間遠心する。
【００２０】
GST-タグ付きタンパク質の精製：遠心後の細胞ライセートを、2 mLのグルタチオン-セファロースカラム(Pharmacia)に載せ、10 mLの25 mM Tris-HCl、pH 7.5、2 mM EDTA、1 mM DTT、200 mM NaClで3回洗浄する。その後、GST-タグ付きタンパク質を、25 mM Tris-HCl、pH 7.5、10 mM 還元-グルタチオン、100 mM NaCl、1 mM DTT、10% グリセロールの10適用(それぞれ1 mL)により溶出し、-70℃で保存する。
【００２１】
酵素活性の測定：精製したGST-Flt-3を用いたチロシンタンパク質キナーゼアッセイを、200-1800 ngの酵素タンパク質(特異的活性に依存している)、20 mM Tris-HCl、pH 7.6、3 mM MnCl2、3 mM MgCl2、1 mM DTT、10 μM Na3VO4、3 μg/mL ポリ(Glu,Tyr) 4:1、1% DMSO、8.0 μM ATPおよび0.1 μCi [γ33P] ATP)を含む、最終用量30 μLで行う。活性は、ポリ(Glu,Tyr)基質への[γ33P] ATPからの33Pの取り込みを測定することによって、阻害剤の存在下または非存在下で解析する。アッセイ(30 μL)は、以下に記載する条件下で、96-ウェルプレート中、室温で、20分間行い、20 μLの125 mM EDTAの添加により終結させる。次に、40 μLの反応混合物を、先に、5分間メタノールに浸し、水で洗浄し、それから5分間、0.5% H3PO4に浸したImmobilon-PVDF膜(Millipore、Bedford、MA、USA)にトランスファーし、接続していない真空源を備えた真空マニホルドに載せる。すべての試料をスポット後、真空を接続し、それぞれのウェルを200 μL 0.5%のH3PO4で濯ぐ。膜を除去し、1.0% H3PO4を用いてシェーカーで4回、エタノールで1回洗浄する。膜を、室温で乾燥させ、Packard TopCount 96-ウェルフレームにのせ、10 μL/ウェルのMicroscint TM (Packard)を添加後にカウントする。IC50値を、4つの濃度(通常は、0.01、0.1、1および10 μM)で、それぞれデュプリケートでの化合物の阻害割合の直線回帰分析により計算する。タンパク質キナーゼ活性の1個の単位は、分あたり、タンパク質のmgあたり、37℃で、[γ33P] ATPから基質タンパク質へ遷移する、33P ATPの1 nmoleとして定義される。ここで、式(I)の化合物は、0.005から20 μM、好ましくは、0.01から10 μMの範囲のIC50値を示した。
【００２２】
適当なFlt-3阻害剤は、例えば、次のようなものを含む：
-WO 03/037347で開示した化合物で、例えば、式(IV)
【化４】
2008520612.tif 000005
または、式(V)
【化５】
2008520612.tif 000006
(ここで、(V)は、化合物(IV)の部分的水素化誘導体である)、または
【化６】
2008520612.tif 000007
または
【化７】
2008520612.tif 000008
または
【化８】
2008520612.tif 000009
または
【化９】
2008520612.tif 000010
【００２３】
［式中、
R1およびR2は、互いに独立して、非置換または置換アルキル、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、アミノ、一または二置換アミノ、シアノ、ニトロ、メルカプト、置換メルカプト、カルボキシ、エステル化カルボキシ、カルバモイル、N-一-またはN,N-二-置換 カルバモイル、スルホ、置換スルホニル、アミノスルホニルまたはN-一-またはN,N-二-置換アミノスルホニルであり;
nおよびmは、互いに独立して、0から4(4を含む)の数字であり;
n'およびm'は、互いに独立して、0から4(4を含む)の数字であり;
R3、R4、R8およびR10は、互いに独立して、水素、-O-、30個までの炭素原子を有するアシル、それぞれの場合に、29個までの炭素原子を有する脂肪族、炭素環式もしくは炭素環式-脂肪族基、それぞれの場合に、20個までの炭素原子を有し、かつそれぞれの場合に、9個までのヘテロ原子を有するヘテロ環式もしくはヘテロ環式-脂肪族基、30個までの炭素原子を有するアシルであり、ここで、R4はまた存在しなくてもよく、
または、R3が30個までの炭素原子を有するアシルであるなら、R4はアシルではなく;
R4が存在しないなら、pは0であり、または、R3およびR4が両方存在していて、それぞれの場合に上記した基の1つであるなら、pは1であり;
R5は、水素、それぞれの場合に、29個までの炭素原子までを有する脂肪族、炭素環式もしくは炭素環式-脂肪族基、またはそれぞれの場合に、20個までの炭素原子を有し、かつそれぞれの場合に、9個までのヘテロ原子を有するヘテロ環式もしくはヘテロ環式-脂肪族基、または、30個までの炭素原子を有するアシルであり;
R7、R6およびR9は、アシルまたは-(低級アルキル)-アシル、非置換または置換アルキル、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、アミノ、一-または二-置換アミノ、シアノ、ニトロ、メルカプト、置換メルカプト、カルボキシ、カルボニル、カルボニルジオキシ、エステル化カルボキシ、カルバモイル、N-一-またはN,N-二-置換カルバモイル、スルホ、置換スルホニル、アミノスルホニルまたはN-一-またはN,N-二-置換アミノスルホニルであり;
Xは、2個の水素原子、1個の水素原子とヒドロキシ、Oまたは水素と低級アルコキシを表し;
Zは、水素または低級アルキルを表し;
そして、波線により特徴づけられる2個の結合が、環Aでは存在せず、4個の水素原子により置換されており、そして、環Bの2個の波線は、それぞれ、各々の平行な結合と共に、二重結合を意味するか;または
波線により特徴づけられる2個の結合は、環Bでは存在せず、全4個の水素原子により置換されており、そして、環Aの2個の波線は、それぞれ、各々の平行な結合と共に、二重結合を意味するか;または
環Aおよび環Bの両方で、4個の波線結合の全部が存在せず、全8個の水素原子により置換されているかのいずれかである］;
のスタウロスポリン誘導体、または、もし、少なくとも1個の塩形成基が存在するなら、その塩を含む。
【００２４】
好ましくは、FLT-3阻害剤は、式(X)
【化１０】
2008520612.tif 000011
の、N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-ヘキサヒドロ-10-メトキシ-9-メチル-1-オキソ-9,13-エポキシ-1H,9H-ジインドロ[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]ピロロ[3,4 j][1,7]ベンゾジアゾニン-11-イル]-N-メチルベンズアミドである。
【００２５】
-さらなるFlt-3阻害化合物は、WO 03/099771で開示したものを含み、例えば、式(XI)
【化１１】
2008520612.tif 000012
［式中、
Gは、存在しないか、低級アルキレンまたはC3-C5-シクロアルキレンであり;そして
Zは、式(XIa)
【化１２】
2008520612.tif 000013
の基であるか、または
Gは、存在せず;そして
Zは、式(XIb)
【化１３】
2008520612.tif 000014
の基であり、
Aは、CH、NまたはN→OおよびA'は、NまたはN→Oであるが、ただし、AおよびA'の1個だけがN→Oであることができ;
nは、1または2であり;
mは、0、1または2であり;
pは、0、2または3であり;
rは、0から5であり;
pが、0なら、Xは、NRであり、ここで、Rは、水素または有機部分であるか、または、pが、2または3なら、Xは、(CH2)pおよび点(中断された)線で描写した結合(それらが結合している原子を含む)と共に環を形成する窒素であるか、または
Xは、CHKであり、ここで、Kは、低級アルキルまたは水素であり、そしてpはゼロであるが、ただし、pがゼロなら、点線で描写した結合が存在せず;
Y1は、O、SまたはCH2であり;
Y2は、O、SまたはNHであるが、ただし、(Y1)n-(Y2)m が、O-O、S-S、NH-O、NH-SまたはS-O基を含まず;
R1、R2、R3およびR5のそれぞれは、他から独立して、水素または無機もしくは有機部分であるか、またはそれらの任意の2個は、共に、酸素原子によって結合した低級アルキレン-ジオキシ架橋を形成し、そして、これらの部分の残りの1個は、水素または無機もしくは有機部分であり;
R4は(存在すれば、すなわち、rが、ゼロでないなら)、無機または有機部分である］
のジアリールウレア誘導体、またはその互変体;もしくは、その薬学的に許容される塩を含む。
【００２６】
式(XI)の化合物の例は、
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-エチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-(4-(4-ヒドロキシフェニルアミノ)-ピリミジン-6-イル)-オキシフェニル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)-ウレア;
N-(4-(2-メチル-ピリジン-4-イル)-オキシフェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-n-プロピル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-メチル-フェニル)-ウレア;
N-メチル-N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-エチル-フェニル)-ウレア;
N-メチル-N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-メチル-N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-n-プロピル-フェニル)-ウレア;
N-メチル-N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-メチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(4-ブロモ-3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)-N'-(3-メトキシ-5-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イルメチル-フェニル)-N'-(4-n-プロピル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イルメチル-フェニル)-N'-(4-エチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イルメチル-フェニル)-N'-(4-メチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イルメチル-フェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)アセチル-(4-エチル-フェニル)-アミド;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)アセチル-(4-メチル-フェニル)-アミド;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシ-フェニル)アセチル-(4-n-プロピル-フェニル)-アミド;
5-(4-ピリジル-オキシ)-N-(3-トリフルオロメチル-フェニル)アミノ-カルボニル-2,3-ジヒドロインドール;
5-(4-ピリジル-オキシ)-N-(3-トリフルオロメチル-フェニル)アミノ-カルボニル-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン;
N-(4-(4-クロロピリミジン-6-イル)-オキシフェニル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(4-フェニル-3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
【００２７】
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(4-(ピペリジン-1-イル)-3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(4-(モルホリノ)-3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(3,4,5-トリメトキシ-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(3-メトキシ-4-フェニル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(3-メトキシ-4,5-(エチレン-1,2-ジオキシ)-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(3-メトキシ-4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(3-メトキシ-4-ピペリジン-1-イル-フェニル)-ウレア;
N-(4-ピリジン-4-イル-オキシフェニル)-N'-(4-ピペリジン-1-イル-フェニル)-ウレア;
N-(4-[2-(4-ヒドロキシフェニル)-アミノ-ピリミジン-4-イル]-オキシフェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-[4-(4-スルファモイルフェニル)-アミノ-ピリミジン-6-イル]-オキシフェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-[4-(4-カルバモイルフェニル)-アミノ-ピリミジン-6-イル]-オキシフェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-[4-(4-(N-2-ヒドロキシエチルカルバモイル)-フェニル)-アミノ-ピリミジン-6-イル]-オキシフェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-[4-(4-ヒドロキシフェニル)-アミノ-ピリミジン-6-イル]-オキシフェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-4-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)-フェニル)-ウレア;
N-(4-(N-オキシド-ピリジン-4-イル)-オキシフェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-(2-メトキシピリジン-5-イル)-オキシフェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-(4-(2-ピリドン-5-イル)-オキシフェニル)-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-[4-{(2-アセチルアミノ)-ピリジン-4-イル}-オキシ]-フェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-[4-(ピリジン-4-イル-オキシ)-2-クロロ-フェニル]-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
N-[4-(ピリジン-4-イル-オキシ)-2-メチル-フェニル]-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;および
N-(4-[4-(2-アミノエトキシフェニル)-アミノ-ピリミジン-6-イル]-オキシフェニル-N'-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-ウレア;
、またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００２８】
最も好ましくは、
1-[4-(4-エチル-ピペラジニル-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-3-[4-(6-メチルアミノ-ピリミジン-4-イルオキシ-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-エチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;および
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
、およびその薬学的に許容される塩を含む。
【００２９】
-さらにFlt-3阻害化合物は、WO 04/046120で開示したものを含み、例えば、式(XII)
【化１４】
2008520612.tif 000015
［式中、
R1は、水素またはY-R'であり、ここで、Yは、所望により、置換C1-C6-アルキリデン鎖であり、ここで、2メチレン単位までは、所望によりおよび独立して、O-、-S-、-NR-、-OCO-、-COO-または-CO-により置換されており;存在するそれぞれのRは、独立して、水素、または、所望により、置換C1-C6-脂肪族基であり；そして、存在するそれぞれのR'は、独立して、水素、C1-C6-脂肪族基、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-3個のヘテロ原子を有する3-から8-員飽和、部分不飽和または完全不飽和単環式環、または、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-5個のヘテロ原子を有する、8-から12-員飽和、部分不飽和または完全不飽和二環式環系から独立して選択される所望により置換されている基であるか、またはRとR'、存在する2個のR、もしくは、存在する2個のR'は、それらが結合する原子と一緒になって、所望により、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-4個のヘテロ原子を有する置換3-から12-員飽和または部分的不飽和もしくは完全不飽和単環式環または二環式環を形成し;
【００３０】
R2は、-(T)nAr1または-(T)nCy1であり、
ここで、
Tは、所望により、置換C1-C4-アルキリデン鎖であり、ここで、Tの1メチレン単位は、所望により、-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO2-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO2-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO2NR-、-SO-、-SO2-、-PO-、-PO2-または-POR-で置換されており;
nは、0または1であり;
Ar1は、所望により、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-5個のヘテロ原子を有する5-から6-員単環式または8-から12-員二環式環から選択される置換アリール基であり;そして
Cy1は、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-3個のヘテロ原子を有する3-から7-員飽和または部分的不飽和単環式環、または窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-5個のヘテロ原子を有する8-から12-員飽和または部分的不飽和二環式環から選択される所望により置換された基であり、または
【００３１】
R1およびR2は、窒素と共に、所望により、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-3個のヘテロ原子を有する置換5-から8-員単環式または8-から12-員二環式飽和、部分的不飽和もしくは完全不飽和環を形成し、ここで、Ar1、Cy1またはR1とR2が一緒に形成する任意の環は、それぞれ、独立して、所望により、x個の独立して存在するQ-RXで置換されており、
ここで、
xは、0-5であり;
Qは、結合またはC1-C6-アルキリデン鎖であり、ここで、Qの2メチレン単位までは、所望により、-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO2-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO2-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO2NR-、-SO-、-SO2-、-PO-、-PO2-または-POR-で置換されており;そして
存在するそれぞれのRXは、独立して、R'、ハロゲン、NO2、CN、OR'、SR'、N(R')2、NR'COR'、NR'CONR'2、NR'CO2R'、COR'、CO2R'、OCOR'、CON(R')2、OCON(R')2、SOR'、SO2R'、SO2N(R')2、NR'SO2R'、NR'SO2N(R')2、COCOR'またはCOCH2COR'であり;
R3は、環の1または2位で窒素原子に結合し、そして(L)mAr2または(L)mCy2であり、
ここで、
Lは、所望により、置換C1-C4-アルキリデン鎖であり、ここで、Lの1メチレン単位は、所望により、-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO2-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO2-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO2NR-、-SO-、-SO2-、-PO-、-PO2-または-POR-で置換されており;
mは、0または1であり;
Ar2は、所望により、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-5個のヘテロ原子を有する5-から6-員単環式または8-から12-員二環式環から選択される置換アリール基であり;そして
Cy2は、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-3個のヘテロ原子を有する3-から7-員飽和または部分的不飽和単環式環から選択される置換基であるか、または窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-5個のヘテロ原子を有する8-から12-員飽和または部分的不飽和二環式環から選択される所望により置換された基であり、ここで、Ar2およびCy2は、それぞれ、独立して、所望により、y個存在するZ-RYで置換されており、
ここで、
yは、0-5であり;
Zは、結合またはC1-C6-アルキリデン鎖であり、ここで、Zの2メチレン単位までは、所望により、-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO2-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO2-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO2NR-、-SO-、-SO2-、-PO-、-PO2-または-POR-で置換されており;そして
存在するそれぞれのRYは、独立して、R'、ハロゲン、NO2、CN、OR'、SR'、N(R')2、NR'COR'、NR'CONR'2、NR'CO2R'、COR'、CO2R'、OCOR'、CON(R')2、OCON(R')2、SOR'、SO2R'、SO2N(R')2、NR'SO2R'、NR'SO2N(R')2、COCOR'またはCOCH2COR'であり;
R4は、水素またはC1-C6-アルキルであるが、ただし、R5が水素であるとき、R4もまた水素であり;
R5は、水素であり、または
R3およびR5は、窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-3個のヘテロ原子を有する5-から7-員飽和または部分的不飽和もしくは完全不飽和単環式環、または窒素、酸素または硫黄から独立して選択される、0-3個のヘテロ原子を有する8-から10-員飽和または部分的不飽和もしくは完全不飽和二環式環系から選択される、所望により置換された基を共に形成し;そして
ここで、R3とR5が一緒になって形成した任意の環は、所望により、W-RWから選択される5個の置換基まで置換され、
ここで、
Wは、結合またはC1-C6-アルキリデン鎖であり、ここで、Wの2メチレン単位までは、所望によりおよび独立して、-NR-、-S-、-O-、-CS-、-CO2-、-OCO-、-CO-、-COCO-、-CONR-、-NRCO-、-NRCO2-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CONRNR-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR-、-NRSO2NR-、-SO-、-SO2-、-PO-、-PO2-または-POR-で置換し;そして
存在するそれぞれのRWは、独立して、R'、ハロゲン、NO2、CN、OR'、SR'、N(R')2、NR'COR'、NR'CONR'2、NR'CO2R'、COR'、CO2R'、OCOR'、CON(R')2、OCON(R')2、SOR'、SO2R'、SO2N(R')2、NR'SO2R'、NR'SO2N(R')2、COCOR'またはCOCH2COR'である;
【００３２】
ただし:
a)R3が、非置換フェニルであり、そしてR1が、水素であるならば、R2は:
i)非置換フェニル;
ii)非置換ピリジル;
iii)o-OMeで置換されたベンジル;
iv)-(C=S)NH(C=O)フェニル;
v)
【化１５】
2008520612.tif 000016
または
vi)-(C=S)NH-ナフチルまたは-(C=O)NH-ナフチルではなく、または
b)R3が、置換または非置換フェニルであるならば、R2は、パラ位で、オキサゾール、チアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、テトラゾール、トリアゾール、ジアゾールまたはピロールで置換されたフェニルではなく;
c)R3が、フェニル、ピリジル、ピリミジンジオンまたはシクロヘキシルであり、そしてR1が、水素であるならば、R2は、パラ位で1個の存在するOMeおよびパラ位で1個の存在するオキサゾールで同時に置換したフェニルではなく、
d)R3が、4-Clフェニルまたは3,4-Cl-フェニルであるならば、R2は、p-Clフェニルではなく;
e)R3が、非置換ピリミジニルであるならば、R2は、非置換フェニル、p-OMe置換フェニル、p-OEt置換フェニルまたはo-OMe置換フェニルではなく、もしくはR3が4-Meピリミジニルまたは4,6-ジメチルピリミジニルであるとき、R2は非置換フェニルではなく;
f)式(XII)
【化１６】
2008520612.tif 000017
の化合物は除外され；
g)R2が、3-ピリジニルであり、そしてR1が、水素であるならば、R3は、トリメトキシベンゾイルではなく;
h)R3が、所望により置換されているフェニルであり、そしてR1が水素であるならば、R2は、-(C=S)NH(C=O)フェニル、-(C=O)NHフェニル、-(C=S)NHフェニルまたは-(C=O)CH2(C=O)-フェニルではなく;
i)R1が、水素であり、そしてR2が、非置換ベンジルであるならば、R3は、所望により置換されているフェニルで置換されたチアジアゾールではなく;
j)R1が、水素であり、R2が、ピリジルであり、そしてR3が、ピリジルであるならば、R2は、1個またはそれ以上のCF3、Me、OMe、BrまたはClで置換されておらず;
k)R1が、水素であり、そしてR2が、ピリジルであるならば、R3は、非置換ピリジル、非置換キノリン、非置換フェニルまたは非置換イソキノリンではなく;
l)R1が、水素であり、そして、R2が、非置換キノリンであるならば、R3は、非置換ピリジルまたは非置換キノリンではなく;
m)R1が、水素であり、そして、R2が、非置換イソキノリンまたは非置換ナフチルであるならば、R3は、非置換ピリジルではなく;
n)一般構造
【化１７】
2008520612.tif 000018
［式中、
R1、R2およびR3は、上記で定義の通りであり;そして
MおよびKは、OまたはH2であるが、ただし、KおよびMが異なっており、AおよびBはそれぞれ、-CH2-、-NH-、-N-アルキル-、N-アラルキル-、-NCORa、-NCONHRbまたは-NCSNHRbであり、
ここで、
Raは、低級アルキルまたはアラルキルであり;そして
Rbは、非置換か、または1個もしくはそれ以上のアルキルおよび/またはハロアルキル置換基で置換されているいずれでもよい直鎖または分枝鎖アルキル、アラルキルまたはアリールである];
を有する化合物は、式(XII)の化合物から除外され;
【００３３】
o)一般構造
【化１８】
2008520612.tif 000019
［式中、
R1、R2およびR3は、上記で定義の通りであり;そして
rおよびsは、それぞれ独立して、0、1、2、3または4であるが、ただしsおよびrの合計が少なくとも1である］
を有する化合物は、式(XII)の化合物から除外され;
【００３４】
p)以下の化合物の任意の1個またはそれ以上、もしくはすべては、式(XII)の化合物から除外され；
【化１９】
2008520612.tif 000020
【化２０】
2008520612.tif 000021
【化２１】
2008520612.tif 000022
【化２２】
2008520612.tif 000023
【化２３】
2008520612.tif 000024
ここで、R2は、NH(CH)(Ph)C=O(Ph)であり;
【００３５】
【化２４】
2008520612.tif 000025
ここで、R2は、非置換フェニルまたはOMe、ClもしくはMeで置換したフェニルであり;
【化２５】
2008520612.tif 000026
R2は、非置換フェニルまたはOMe、Cl、MeもしくはOMeで置換したフェニルであり、またはR2は、非置換ベンジルであり;
【化２６】
2008520612.tif 000027
ここで、R2は、所望により、置換アラルキルであり;そして
RcおよびRdは、それぞれ独立して、Me、水素、CH2ClまたはClであり;
【化２７】
2008520612.tif 000028
【化２８】
2008520612.tif 000029
【化２９】
2008520612.tif 000030
ここで、Reは、所望により、置換フェニルであり;
【化３０】
2008520612.tif 000031
ここで、R2は、所望により、Me、OMe、BrまたはClで置換したフェニルである;または
【００３６】
q)R1が、水素であり;そして
R2が、フェニルまたは、所望により置換されているフェニルであり;そして
mが、1であるならば、
Lは、-CO-、-COCH2-または-COCH=CH-ではない］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００３７】
とりわけ好ましいのは、構造が
【化３１】
2008520612.tif 000032
である化合物N3-[4-(4-モルフォリン-4-イル-シクロヘキシル)-フェニル]-1ピリジン-2-イル-1H-[1,2,4]トリアゾール-3,5-ジアミンである。
【００３８】
RAFキナーゼは、セリン/スレオニンキナーゼであり、細胞外環境から核に増殖シグナルを伝える増殖因子経路の1つである、MAPキナーゼシグナル経路で機能している。
【００３９】
RAF阻害剤は、例えば、以下のアッセイで、野生型C-Rafを、0.05 mmol/Lから4.0 mmol/L以上のIC50値で阻害し、および/または変異型B-Raf(V599E)を、0.08 mmol/Lから4.0 mmol/L以上のIC50値で阻害する化合物である。
【００４０】
RAFキナーゼに対する活性のための試験：ヒト配列の活性化B-Raf、C-RafおよびV599E B-Raf タンパク質を、バキュロウイルス発現系を用いて、昆虫細胞から精製する。Raf阻害剤を、IκB-αでコートし、Superblockでブロックした、96ウェルマイクロプレートで試験する。IκB-αのセリン36のリン酸化を、リン酸化IκB-α特異的抗体(Cell Signaling #9246)、二次抗体抱合抗マウスIgGアルカリホスファターゼ(Pierce #31320)、およびアルカリホスファターゼの基質である、ATTOPHOS(Promega、#S101)を用いて検出する。
【００４１】
適当なRAF阻害剤は、例えば、次のようなものを含む：
-WO 00/09495で開示した化合物で、例えば、式(XIII)
【化３２】
2008520612.tif 000033
［式中、
rは、0から2であり;
nは、0から2であり;
mは、0から4であり;
A、B、DおよびEのそれぞれは、他から独立して、NまたはCHであるが、ただしそれらの基の2個以下がNであり;
Gは、低級アルキレン、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-NH-、オキサ(-O-)、チア(-S-)またはイミノ(-NH-)であり、もしくは、アシルオキシまたはヒドロキシによって置換した、低級アルキレンであり;
Qは、低級アルキル、とりわけメチルであり;
Rは、Hまたは低級アルキルであり;
Xは、イミノ、オキサまたはチアであり;
Yは、低級アルキルまたは、とりわけ、アリール、ヘテロアリールまたは非置換もしくは置換シクロアルキルであり;そして
Zは、アミノ、一-または二-置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、N-一-またはN,N-二-置換カルバモイル、アミドイノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル-低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル-低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル-低級アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニルであり、そしてここで、1個以上の基Zが存在しているなら(m *2)、置換基Zは同一であるか、または異なっており;
そして、ここで波線によって示した結合は、単結合または二重結合である］
の化合物、または、上述した化合物のN-オキシド(ここで、1個またはそれ以上のN原子が、酸素原子を有する);もしくはそれらの塩を含む。
【００４２】
とりわけ、好ましくは、(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4-イルメチル-イソキノリン-1-イル)-アミンである。
【００４３】
-さらなるRAF阻害剤は、WO 05/028444で開示した化合物を含み、例えば、式(XIV)
【化３３】
2008520612.tif 000034
［式中、
rは、0から2であり;
nは、0から2であり;
mは、0から4であり;
Jは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルであり、
ここで、
アリールは、6-14個の炭素原子からなる芳香族基、例えば、フェニル、ナフチル、フルオレニルおよびフェナントレニルであり;
ヘテロアリールは、その中で、1個、2個または3個の原子は、独立して、N、SおよびOから選択される4-14個、とりわけ5-7個の環原子からなる芳香族基、例えば、フリル、ピラニル、ピリジル、1,2-、1,3-および1,4-ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、オキサゾリル、キナゾリル、イミダゾリル、ピロリル、イソオキサゾリル イソチアゾリル、インドリル、イソインドリニル、キノリル、イソキノリル、プリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、フタラジニル、イソベンゾフラニル、クロメニル(chromenyl)、プリニル、チアントレニル(thianthrenyl)、キサンテニル(xanthenyl)、アクリジニル(acridinyl)、カルバゾリルおよびフェナジニルであり;
シクロアルキルは、3-8個、好ましくは、5-6個の環原子からなる飽和環状基、例えば、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルであり;そして
ヘテロシクロアルキルは、その中で、1個、2個または3個の原子は、独立して、N、SおよびOから選択される3-8個、好ましくは、5-6個の環原子からなる飽和環状基、例えば、ピペリジル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、ピロリジニルおよびピラゾリジニルであり;
【００４４】
Qは、ハロゲン、非置換または置換低級アルキル、-OR2、-SR2、-NR2、-NRS(O)2N(R)2、-NRS(O)2R、-S(O)R2、-S(O)2R2、-OCOR2、-C(O)R2、-CO2R2、-NR-COR2、-CON(R2)2、-S(O)2N(R2)2、シアノ、トリ-メチルシラニル、非置換または置換アリール、非置換または置換ヘテロアリール(例えば、置換または非置換イミダゾリル、および置換または非置換ピリジニル)、非置換または置換シクロアルキル、非置換または置換ヘテロシクロアルキル(例えば、置換または非置換ピペリジニル、置換または非置換ピペラゾリル、置換または非置換テトラヒドロピラニル、および置換または非置換アゼチジニル)、-C1-C4-アルキル-アリール、-C1-C4-アルキル-ヘテロアリール、-C1-C4-アルキル-ヘテロシクリル、アミノ、一-または二置換アミノからなる群から選択された、1個または2個の炭素原子上の置換基であり;
【００４５】
Rは、Hまたは低級アルキルであり;
R2は、非置換または置換アルキル、非置換または置換シクロアルキル、フェニル、-C1-C4-アルキル-アリール、-C1-C4-アルキル-ヘテロアリールまたは-C1-C4-アルキル-ヘテロシクロアルキルであり;
Xは、Y、-N(R)-、オキサ、チオ、スルホン、スルホキシド、スルホンアミド、アミドまたはウレイレン、好ましくは、-NH-であり;
Yは、H、低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換シクロアルキルもしくは置換または非置換ヘテロシクロアルキルであり;そして
Zは、アミノ、一-または二-置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、N-一-またはN,N-二-置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル-低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル-低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル-低級 アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニルであり、そしてここで、1個を超える基Zが存在するなら(m ≧2)、置換基Zは同一であるか、または異なる］
の化合物、もしくは、N-オキシドの上述した化合物(ここで、1個またはそれ以上のN原子が、酸素原子を有する);またはそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【００４６】
最も好ましい化合物は、[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6-イル-イソキノリン-1-イル)-アミン;および[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5-イル)-アミンから選択される。
【００４７】
焦点接着キナーゼ(FAK)は、インテグリン仲介外内シグナルカスケードのキー酵素である(D. Schlaepfer et al.、Prog Biophys Mol Biol、Vol. 71、pp. 435-478 (1999))。細胞と細胞外マトリクス(ECM)タンパク質間の相互作用を、細胞表面レセプターであるインテグリンを介して、成長、生存および移動のために重要な細胞内シグナルとして伝達する。FAKは、これらのインテグリン仲介アウトサイドーイン・シグナルカスケードで重要な役割を果たしている。シグナル伝達カスケードの引き金は、Y397の自己リン酸化である。リン酸化Y397は、SrcファミリーチロシンキナーゼのためのSH2ドッキングサイトである。結合したc-Srcキナーゼは、FAKの他のチロシン残基をリン酸化する。その中で、リン酸化Y925が、Grb2スモールアダプタータンパク質のSH2サイトのための結合サイトになる。このGrb2のFAKへの直接的結合が、例えば、Ras-ERK2/MAPキナーゼカスケードのような下流の標的を活性化するキーステップの1つである。
【００４８】
本発明の化合物は、実施例に記載する通り、FAKアッセイ系で活性があり、1-100 nMの範囲内で阻害 IC50値を示す。1-5 nMの範囲内でIC50値を示す化合物が、特に活性である。
【００４９】
FAK阻害を、以下の通り決定する:すべてのステップを96ウェル黒色マイクロタイタープレートで行う。精製した組み換えヘキサヒスチジン-タグ付きヒトFAKキナーゼドメインを、希釈緩衝液(水中、50 mM HEPES、pH 7.5、0.01% BSA、0.05% Tween-20)で、94 ng/mL (2.5 nM)の濃度に希釈する。反応混合物を、10 μL 5×キナーゼ緩衝液(水中、250 mM HEPES、pH 7.5、50 μM Na3VO4、5 mM DTT、10 mM MgCl2、50 mM MnCl2、0.05% BSA、0.25% Tween-20)、20 μLの水、5 μLの4 μMビオチン化ペプチド基質(Biot-Y397)(水溶液)、5 μLの試験化合物(DMSO溶液)および5 μLの組み換え酵素溶液を混合し、室温で30分間インキュベートすることにより調製する。酵素反応を、5 μLの5 μM ATP(水中)の添加により開始し、混合物を37℃で3時間インキュベートする。反応を、200 μLの検出混合物(希釈緩衝液中、1 nM Eu-PT66、2.5 μg/mL SA-(SL)APC、6.25 mM EDTA)の添加により終結させ、ユーロピウムからアロフィコシアニンまでのFRETシグナルを、室温で30分間インキュベーション後、ARVOsx+L (Perkin Elmer)により測定する。試験化合物による退色効果を相殺するために、665 nm対615 nmの蛍光強度の比率を、データ解析のためのFRETシグナルとして使用する。結果は、酵素活性の阻害割合として示す。DMSOおよび0.5 M EDTAを、それぞれ、0%および100%阻害のコントロールとして使用する。IC50値を、OriginPro 6.1 program (OriginLab)を用いて、非線形曲線あてはめ解析(non-linear curve fit analysis)により決定する。Biot-Y397ペプチド(ビオチン-SETDDYAEIIDアンモニウム塩)を、ヒトのS392からD402にわたる領域と同じアミノ酸配列(GenBank Accession Number L13616)を有するように設計し、標準的な方法によって調製する。
【００５０】
精製組み換えヘキサヒスチジン-タグ付きヒトFAKキナーゼドメインは、以下の方法で取得する:完全長ヒトFAK cDNAを、5' PCR プライマー(ATGGCAGCTGCTTACCTTGAC)および3' PCR プライマー(TCAGTGTGGTCTCGTCTGCCC)を用いて、ヒト胎盤 Marathon-Ready(商標) cDNA (Clontech、No. 7411-1)からPCR増幅によって単離し、pGEM-Tベクター(Promega、No. A3600)中にサブクローン化する。AccIIIで消化後、精製したDNA断片をクレノウ断片で処理する。cDNA断片をBamHIで処理し、BamHIとStu Iで予め切断したpFastBacHTb プラスミド(Invitrogen Japan K.K.、Tokyo)中にクローン化する。生じたプラスミドhFAK KD (M384-G706)/pFastBacHTbは、その構造を確かめるためにシークエンスする。生じたDNAは、N末端にヘキサヒスチジンタグ、スペーサー領域およびrTEVプロテアーゼ開裂サイトを含み、29から351の位置にFAK (Met384-Gly706)のキナーゼドメインを含む、364アミノ酸タンパク質をコードしている。
【００５１】
ドナープラスミドを、MaxEfficacy DH10Bac 大腸菌細胞を用いて、バキュロウイルスゲノム中に輸送する。バクミド(Bacmid)DNAを、Bac-to-Bac(登録商標) Baculovirus Expression system (Invitrogen)に記載された単純なアルカリ溶解プロトコールにより調製する。Sf9昆虫細胞を、ベンダー(CellFECTIN(登録商標)、Invitrogen)によって提供されたプロトコールに基づいてトランスフェクションする。それぞれのライセートでのFAKの発現は、抗-ヒトFAKモノクローナル抗体(Transduction Laboratoriesからのクローン#77)を用いた、SDS-PAGEやウエスタンブロッティングにより解析する。
【００５２】
最も高い発現を示しているウイルスクローンを、さらに、Sf9細胞へ感染させることによって増幅する。ExpresSF+(登録商標)細胞(Protein Sciences Corp.、Meriden、CT、USA)での発現は、ほとんど分解物なく、高いレベルのタンパク質を与える。細胞ライセートを、硫酸ニッケルで荷電し、50 mM HEPES pH 7.5、0.5 M NaClおよび10 mM イミダゾールで平衡化した、HiTrap(商標)Chelating Sepharose HP (Amersham Biosciences)のカラムに載せる。捕捉タンパク質を、HEPES緩衝液/NaCl中、イミダゾールの量を増やしながら溶出し、50 mM HEPES pH 7.5、10% グリセロールおよび1 mM DTTでの透析により、さらに精製する。
【００５３】
-適当なFAK阻害剤は、WO 04/080980で開示した式(XV)
【化３４】
2008520612.tif 000035
［式中、
R0、R1、R2およびR3のそれぞれは、独立して、水素、C1-C8-アルキル、C2-C8-アルケニル、C2-C8アルキニル、C3-C8-シクロアルキル、C3-C8-シクロアルキル-C1-C8-アルキル、C5-C10-アリール-C1-C8-アルキル、ヒドロキシ-C1-C8-アルキル、C1-C8-アルコキシ-C1-C8-アルキル、アミノ-C1-C8-アルキル、ハロ-C1-C8-アルキル、非置換または置換C5-C10-アリール、N、OおよびSから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子からなる非置換または置換の5-もしくは6員ヘテロシクリル、ヒドロキシ、C1-C8-アルコキシ、ヒドロキシ-C1-C8-アルコキシ、C1-C8-アルコキシ-C1-C8-アルコキシ、ハロ-C1-C8-アルコキシ、非置換または置換C5-C10-アリール-C1-C8-アルコキシ、非置換または置換ヘテロシクリルオキシ、または非置換もしくは置換ヘテロシクリル-C1-C8-アルコキシ、非置換または置換アミノ、C1-C8-アルキルチオ、C1-C8-アルキルスルフィニル、C1-C8-アルキルスルホニル、C5-C10-アリールスルホニル、ハロゲン、カルボキシ、C1-C8-アルコキシカルボニル、非置換または置換カルバモイル、非置換または置換スルファモイル、シアノまたはニトロであるか、または
R0とR1、R1とR2および/またはR2とR3は、それらが結合している炭素原子と共に、N、OおよびSから選択される0個、1個、2個または3個ヘテロ原子を含む、5-または6-員炭素環式もしくはヘテロ環式環を形成し;
R4は、水素またはC1-C8-アルキルであり;
R5およびR6のそれぞれは、独立して、水素、C1-C8-アルキル、C1-C8-アルコキシ-C1-C8-アルキル、ハロ-C1-C8-アルキル、C1-C8-アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、C1-C8-アルコキシカルボニル、非置換または置換カルバモイル、シアノもしくはニトロであり;そして
R7、R8、R9およびR10のそれぞれは、独立して、C1-C8-アルキル、C2-C8-アルケニル、C2-C8-アルキニル、C3-C8-シクロアルキル、C3-C8-シクロアルキル-C1-C8-アルキル、C5-C10-アリール-C1-C8-アルキル、ヒドロキシ-C1-C8-アルキル、C1-C8-アルコキシ-C1-C8-アルキル、アミノ-C1-C8-アルキル、ハロ-C1-C8-アルキル、非置換または置換C5-C10-アリール、N、OおよびSから選択される1個、2個または3個のヘテロ原子を含む、非置換または置換5-または6-員ヘテロシクリル、ヒドロキシ、C1-C8-アルコキシ、ヒドロキシ-C1-C8-アルコキシ、C1-C8-アルコキシ-C1-C8-アルコキシ、ハロ-C1-C8-アルコキシ、非置換または置換C5-C10-アリール-C1-C8-アルコキシ、非置換または置換ヘテロシクリルオキシ、または非置換または置換ヘテロシクリル-C1-C8-アルコキシ、非置換または置換アミノ、C1-C8-アルキルチオ、C1-C8-アルキルスルフィニル、C1-C8-アルキルスルホニル、C5-C10-アリールスルホニル、ハロゲン、カルボキシ、C1-C8-アルコキシカルボニル、非置換または置換カルバモイル、非置換または置換スルファモイル、シアノもしくはニトロであり、ここで、R7、R8およびR9は、それぞれ他から独立して、また水素であることができるか、または
R7とR8、R8とR9および/またはR9とR10は、それらが結合した炭素原子と共に、N、OおよびSから選択される0個、1個、2個または3個のヘテロ原子を含む、5-または6-員炭素環式もしくはヘテロ環式環を形成し;
Aは、CまたはNである]
の化合物、および、その塩を含む。
【００５４】
式(XV)の具体例は、
2-[5-ブロモ-2-(2-メトキシ-5-モルフォリン-4-イル-フェニルアミノ)-ピリミジン-4-イルアミノ]-N-メチル-ベンゼンスルホンアミド;
2-[5-クロロ-2-(2-メトキシ-4-モルフォリン-4-イル-フェニルアミノ)-ピリミジン-4-イルアミノ]-N-メチル-ベンズアミド;
N2-(4-[1,4']ビピペリジニル-1'-イル-2-メトキシ-フェニル)-5-クロロ-N4-[2-(プロパン-1-スルホニル)-フェニル]-ピリミジン-2,4-ジアミン;および
2-{5-クロロ-2-[2-メトキシ-4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-ピリミジン-4-イルアミノ}-N-イソプロピル-ベンゼンスルホンアミド;
、またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００５５】
さらなるFAK阻害剤は、WO 04/056786(ファイザー)、WO 03/024967(アベンティス)、およびWO 00/053595(アストラゼネカ)ならびにWO 01/014402で開示している。
【００５６】
ヤヌス(Janus)キナーゼであるJAK1、JAK2、JAK3およびTYK2は、ケモカイン(例えば、CCR2、CCR5、CCR7、CXCR4)、インターフェロンおよびサイトカイン(例えば、GM-CSF、エリスロポエチン、プロラクチンおよびインターロイキン(IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-13、など)のための複数の膜貫通受容体と結合する、細胞質内タンパク質チロシンキナーゼである。これらの受容体に結合するリガンドは、受容体シグナルの細胞内伝達における必須の事象である、結合したJAKメンバーの活性化を引き起こす。JAK活性化は、転写因子ファミリーシグナルトランスデューサーおよび転写のアクチベーター(STAT)を含む、複数の下流の標的のリン酸化を引き起こす。JAK活性は、特に、造血コンパートメント内の、複数の過程を制御する。JAK2の標的の破壊により、赤血球の産生ができない致命的欠陥を胚にもたらし、このことは、エリスロポエチン増殖因子受容体からのシグナルを仲介するのにJAK2が重要であることを強調する。胸部のプロラクチンシグナルにおけるJAK2のさらなる役割が、また示されている。JAKファミリーメンバーはまた、リンパ球および他の免疫調節細胞の発達および恒常性を調節することによって炎症および免疫応答を制御するのに重要である。TおよびB細胞で主に発現している酵素であるJAK3は、特にT細胞の発達および免疫応答を開始する能力において重要な役割を果たしている。JAK3シグナルの破壊は、マウスとヒトの両方で、重症複合免疫不全症候群(SCID)と関連している。
【００５７】
JAK3キナーゼ阻害剤は、例えば、以下のアッセイで、<5 μM、好ましくは、<1 μM、より好ましくは、<0.1 μMのIC50値を有する化合物である:
【００５８】
CTL/LおよびHT-2細胞を用いたインターロイキン-2 (IL-2)依存性増殖アッセイ:IL-2依存性マウスT細胞株CTL/LおよびHT-2を、10% 胎児クローン I (HyClone)、50 μM 2-メルカプトエタノール (31350-010)、50 μg/mL ゲンタマイシン (Gibco 15750-037)、1 mM ピルビン酸ナトリウム (Gibco 11360-039)、非必須アミノ酸 (Gibco 11140-035; 100x)および250 U/mLマウスIL-2 (Genzyme standardにしたがって、50'000 U/mLマウスIL-2を含むX63-Ag8をトランスフェクションした細胞の上清)を補った、RPMI 1640 (Gibco 52400-025)で培養する。培養を週に2回、1:40で分割する。
【００５９】
細胞を使用する前に、マウスIL-2なしの培養培地で2回洗浄する。増殖アッセイは、50 U/mLマウスIL-2中に適当な希釈の試験化合物を含む培養培地で、平底96ウェル組織培養プレートにより、4000 CTL/L 細胞/ウェルまたは2500 HT-2 細胞/ウェルで行う。CTL/L培養を37℃で24時間インキュベートし、HT-2培養を48時間インキュベートする。1 μCi 3H-チミジンの添加後、さらに一晩インキュベートした細胞を繊維フィルターで収集し、放射活性をカウントする。
【００６０】
ヒト末梢血単核細胞のインターロイキン-2依存性増殖:ヒト末梢血単核細胞を、未知のHLA型の軟膜(Blutspendezentrum、Kantonsspital、Basel、Switzerland)からフィコール(Ficoll)上に単離する。細胞を、使用するまで液体窒素中、クリオチューブ(cryotubes) (Nunc)に、2×107 細胞/mL (90% FCS、10% DMSO)で保つ。
【００６１】
細胞を、湿潤CO2 (7%)インキュベーター、コースターフラスコ中、Na-ピルビン酸 (1 mM; Gibco)、MEM非必須アミノ酸およびビタミン(Gibco)、2-メルカプトエタノール (50 μM)、L-グルタミン (2 mM)、ゲンタマイシンおよびペニシリン/ストレプトマイシン (100 μg/mL; Gibco)、バクトアスパラギン (20 μg/mL; Difco)、ヒトインスリン(5 μg/mL; Sigma)、ヒトトランスフェリン(40 μg/mL; Sigma)、選択ウシ胎児血清 (10%、Hyclone Laboratories、Logan、UT)および100 μg/mL フィトヘマグルチニン(phytohemaggluti-nine)を補ったRPMI 1640 (Gibco、Pacely、England)を含む培養培地中、7×105 細胞/mLの濃度で、37℃で4日間インキュベートする。細胞を10% FCSを含むRPMI 1640培地で2回洗浄し、2時間インキュベートする。遠心後、細胞を、インターロイキン-2 (Chiron 200 U/mL)を含む上述した培養培地(フィトヘマグルチニンなしで)に取り込み、適当な濃度の試験化合物の存在下、5×104 細胞/0.2 mLの濃度で、平底96ウェル組織培養プレート (Costar #3596)にトリプリケートで分配し、そして37℃で72時間インキュベートする。3H-チミジン (1 μCi/0.2 mL)を培養の最後の16時間加えた。その後、細胞を収集し、シンチレーションカウンターでカウントする。
【００６２】
-適当なJAKキナーゼ阻害剤は、例えば、米国特許第2003/0073719A1号で開示したような化合物、例えば、式(XVI)
【化３５】
2008520612.tif 000036
［式中、
R2およびR3のそれぞれは、独立して、水素、アミノ、ハロゲン、OH、ニトロ、カルボキシ、C2-C6-アルケニル、C2-C6-アルキニル、CF3、トリフルオロメトキシ、C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ、C3-C6-シクロアルキルからなる群から選択され(ここで、アルキル、アルコキシまたはシクロアルキル基は、所望により、ハロゲン、OH、カルボキシ、アミノ、C1-C6-アルキルチオ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、C5-C9-ヘテロアリール、C2-C9-ヘテロシクロアルキル、C3-C9-シクロアルキルまたはC6-C10-アリールから選択される1個から3個の基によって置換されている)、または
R2およびR3のそれぞれは、独立して、C3-C10-シクロアルキル、C3-C10-シクロアルコキシ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、C6-C10-アリールアミノ、C1-C6-アルキルチオ、C6-C10-アリールチオ、C1-C6-アルキルスルフィニル、C6-C10-アリールスルフィニル、C1-C6-アルキルスルホニル、C6-C10-アリールスルホニル、C1-C6-アシル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-、C1-C6-アルキルアミノ-CO-、C5-C9-ヘテロアリール、C2-C9-ヘテロシクロアルキルまたはC6-C10-アリールである(ここで、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびアリール基は、所望により、1個から3個のハロゲン、C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキル-CO-NH-、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-、C1-C6-アルキル-CO-NH-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-C1-C6-アルコキシ、カルボキシ、カルボキシ-C1-C6-アルキル、カルボキシ-C1-C6-アルコキシ、ベンジルオキシカルボニル-C1-C6-アルコキシ、C1-C6-アルコキシカルボニル-C1-C6-アルコキシ、C6-C10-アリール、アミノ、アミノ-C1-C6-アルキル、C2-C7-アルコキシカルボニルアミノ、C6-C10-アリール-C2-C7-アルコキシカルボニルアミノ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、C1-C6-アルキルアミノ-C1-C6-アルキル、(C1-C6-アルキル)2アミノ-C1-C6-アルキル、ヒドロキシ、C1-C6-アルコキシ、カルボキシ、カルボキシ-C1-C6-アルキル、C2-C7-アルコキシカルボニル、C2-C7-アルコキシカルボニル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-、C1-C6-アルキル-CO-NH-、シアノ、C5-C9-ヘテロ-シクロアルキル、アミノ-CO-NH-、C1-C6-アルキルアミノ-CO-NH-、(C1-C6-アルキル)2アミノ-CO-NH-、C6-C10-アリールアミノ-CO-NH-、C5-C9-ヘテロアリールアミノ-CO-NH-、C1-C6-アルキルアミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、(C1-C6-アルキル)2アミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C6-C10-アリールアミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C5-C9-ヘテロアリールアミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルスルホニル、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ-C1-C6-アルキル、C6-C10-アリールスルホニル、C6-C10-アリールスルホニルアミノ、C6-C10-アリールスルホニルアミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ--C1-C6-アルキル、C5-C9-ヘテロアリールまたはC2-C9-ヘテロシクロアルキルによって置換されている)］
の化合物を含む。
【００６３】
(XVI)の化合物の例は、例えば、
メチル-[(3R,4R)-4-メチル-1-(プロパン-1-スルホニル)-ピペリジン-3-イル]-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミン;
(3R,4R)-)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2-,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-カルボン酸メチルエステル;
3,3,3-トリフルオロ-1-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-プロパン-1-オン;
(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-カルボン酸ジメチルアミド;
{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-カルボニル}-アミノ)-酢酸エチルエステル;
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリル;
3,3,3-トリフルオロ-1-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(5-メチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-プロパン-1-オン;
1-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]ピペリジン-1-イル}-ブト-3-イン-1-オン;
1-{(3R,4R)-3-[(5-クロロ-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-メチル-アミノ]-4-メチル-ピペリジン-1-イル}-プロパン-1-オン;
1-{(3R,4R)-3-[(5-フルオロ-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-メチル-アミノ]-4-メチル-ピペリジン-1-イル}-プロパン-1-オン;
(3R,4R)-N-シアノ-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-N'-プロピル-ピペリジン-1-カルボキシアミジン;または
(3R,4R)-N-シアノ-4,N',N'-トリメチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-カルボキシアミジン
を含む。
【００６４】
-さらなるJAK阻害剤は、WO 02/092571で開示した化合物、例えば、式(XVII)
【化３６】
2008520612.tif 000037
［式中、
Xは、NR3またはOであり;
nは、0または1であり;
Ar1は、フェニル、テトラヒドロナフテニル、インドリル、ピラゾリル、ジヒドロインデニル、1オキソ-2,3-ジヒドロインデニルまたはインダゾリルから選択され、そのそれぞれは、所望により、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、C1-C8-アルコキシ、CO2R8、CONR9R10、C1-C8-アルキル-O-C1-C8-アルキル、C1-C8-アルキル-NR8-C1-C8-アルキル、C1-C8-アルキル-CONR8-C1-C8-アルキル、C1-C8-アルキル-CONR9R10、NR8CO-C1-C8-アルキル、C1-C8-チオアルキル、C1-C8-アルキル(それ自身、所望により、１個またはそれ以上のOHまたはシアノもしくはフッ素により置換されている)またはC1-C8-アルコキシから選択される１個またはそれ以上の基によって置換されていてよく;
R基は、独立して、水素またはC1-C8-アルキルであり;
R1およびR2は、独立して、H、ハロゲン、ニトロ、シアノ、C1-C8-アルキル、C1-C8-アルコキシ、OH、アリール、Y(CR112)pNR4R5、Y(CR112)pCONR4R5Y(CR112)pCO2R6、Y(CR112)pOR6またはY(CR112)pR6から選択されるか、または
R1およびR2は、-OCHO-または-OCH2CH2O-として、共に結合しており;
それぞれR11は、独立して、H、C1-C8-アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであり;
pは、0、1、2、3、4または5であり;
R3は、HまたはC1-C8-アルキルであり;
Yは、酸素であり、CH2またはNR7R3は、水素またはC1-C8-アルキルであり;
R4およびR5のそれぞれは、独立して、H、C1-C8-アルキルであり、または
R4およびR5は、それらが結合している窒素原子と共に、所望により、さらにO、SまたはNR6を含む、4-から7員飽和もしくは芳香族性ヘテロ環式環系を形成し、または
R4およびR5の1個は、HまたはC1-C8-アルキルであり、他は、所望により、さらにO、SまたはN原子を含む、5-または6-員ヘテロ環式環系であり;
R6は、H、C1-C8-アルキル、フェニルまたはベンジルであり;
R7は、HまたはC1-C8-アルキルであり;
R8は、HまたはC1-C8-アルキルであり;
R9およびR10のそれぞれは、独立して、水素またはC1-C8-アルキルである］
の化合物、および、その薬学的に許容される塩を含む。
【００６５】
-JAK阻害剤のさらなる例は、米国特許第2002/0055514A1号で開示した化合物、例えば、式(XVIII)
【化３７】
2008520612.tif 000038
［式中、
Xは、NH、NR11、S、OCH2またはR11CHであり、ここで、R11は、H、C1-C4-アルキルまたはC1-C4-アルカノイルであり;
R1-R8のそれぞれは、独立して、H、ハロゲン、OH、メルカプト、アミノ、ニトロ、C1-C4-アルキル、C1-C4-アルコキシまたはC1-C4-アルキルチオであり、ここで、R1-R5のうち2個は、それらが結合しているフェニル環と共に、所望により、融合環、例えば、ナフチルまたはテトラヒドロナフチル環を形成し得;そして、さらにここで、R1-R5の2個の隣接した基により形成される環を、所望により、1個、2個、3個または4個のハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、ニトロ、C1-C4-アルキル、C1-C4-アルコキシもしくはC1-C4-アルキルチオにより置換してよいが、ただし、少なくとも1個のR2-R5が、OHであり;そして
R9およびR10のそれぞれは、独立して、H、ハロゲン、C1-C4-アルキル、C1-C4-アルコキシまたはC1-C4-アルカノイルであるか、または
R9およびR10は、共に、メチレンジオキシである］
の化合物、または、その薬学的に許容される塩(ただし、少なくとも1個のR2-R5が、OHである)を含む。
【００６６】
-さらなるJAK阻害剤は、WO 04/052359で開示した化合物、例えば、式(XIX)
【化３８】
2008520612.tif 000039
［式中、
nは、1、2、3、4または5であり;
R1は、H、CH3またはCH2N(CH3)2であり;そして
R3は、CH2N(CH3)2である。］
の化合物を含む。
【００６７】
式(XVI)-(XIX)の化合物は、遊離または塩形で存在し得る。式(XVI)-(XIX)の化合物の薬学的に許容される塩の例は、塩酸塩のような無機酸塩;酢酸またはクエン酸のような有機酸塩;または、適当な場合には、ナトリウムまたはカリウムのような金属塩;トリエチルアミンのようなアミン塩;およびリシンのような二塩基アミノ酸塩を含む。
【００６８】
-さらなるJAK阻害剤は、WO 03/048162で開示した化合物、例えば、3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリルモノクエン酸塩の非結晶および結晶形を含む。
【００６９】
-さらなるJAK阻害剤は、WO 01/42246およびWO 02/096909で開示した化合物、例えば、式(XX)
【化３９】
2008520612.tif 000040
［式中、
R1は、式(XXI)
【化４０】
2008520612.tif 000041
の基であり、
ここで、
yは、0、1または2であり;
R4は、水素、C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルスルホニル、C2-C6-アルケニル、C2-C6-アルキニルからなる群から選択され、ここで、アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、所望により、重水素、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、C1-C4-アルコキシ、C1-C6-アシルオキシ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、シアノ、ニトロ、C2-C6-アルケニル、C2-C6-アルキニルまたはC1-C6-アシルアミノにより置換されているか、もしくは
R4は、C3-C10-シクロアルキルであり、ここで、シクロアルキル基は、所望により、重水素、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、C1-C6-アシルオキシ、C1-C6-アシルアミノ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、シアノ、シアノ-C1-C6-アルキル、トリフルオロメチル-C1-C6-アルキル、ニトロ、ニトロ-C1-C6-アルキルまたはC1-C6-アシルアミノにより置換されており;
R5は、C2-C9-ヘテロシクロアルキルであり、ここで、ヘテロシクロアルキル基は、1から5個のカルボキシ、シアノ、アミノ、重水素、ヒドロキシ、C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ、ハロ、C1-C6-アシル、C1-C6-アルキルアミノ、アミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH、C1-C6-アルキルアミノ-CO-、C2-C6-アルケニル、C2-C6-アルキニル、C1-C6-アルキルアミノ、アミノ-C1-C6-アルキル、ヒドロキシ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アシルオキシ-C1-C6-アルキル、ニトロ、シアノ-C1-C6-アルキル、ハロ-C1-C6-アルキル、ニトロ-C1-C6-アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメチル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アシルアミノ、C1-C6-アシルアミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-C1-C6-アシルアミノ、アミノ-C1-C6-アシル、アミノ-C1-C6-アシル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルアミノ-C1-C6-アシル、(C1-C6-アルキル)2アミノ-C1-C6-アシル、R15R16N-CO-O-、R15R16N-CO-C1-C6-アルキル-、C1-C6-アルキル-S(O)m、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m-C1-C6-アルキル、R15S(O)m R16N、R15S(O)mR16N-C1-C6-アルキルで置換されていなければならず、
ここで、
mは、0、1または2であり;そして
【００７０】
R15およびR16は、それぞれ、独立して、水素またはC1-C6-アルキルもしくは式(XXII)
【化４１】
2008520612.tif 000042
の基から選択され、
ここで、
aは、0、1、2、3または4であり;
b、c、e、fおよびgは、それぞれ、独立して、0または1であり;
dは、0、1、2または3であり;
Xは、S(O)nであり、ここで、nは、0、1または2、酸素、カルボニルもしくは-C(=N-シアノ)-であり;
Yは、S(O)nであり、ここで、nは、0、1または2もしくはカルボニルであり;
Zは、カルボニル、C(O)O-、C(O)NR-またはS(O)nであり、ここで、nは、0、1または2であり;
R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、それぞれ、独立して、水素またはC1-C6-アルキルからなる群から選択され、所望により、重水素、ヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメチル、C1-C6-アシルオキシ、C1-C6-アシルアミノ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、シアノ、シアノ-C1-C6-アルキル、トリフルオロメチル-C1-C6-アルキル-、ニトロ、ニトロ-C1-C6-アルキルまたはC1-C6-アシルアミノにより置換されており;
R12は、カルボキシ、シアノ、アミノ、オキソ、重水素、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、C1-C6-アルキル、トリフルオロメチル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ、ハロ、C1-C6-アシル、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、アミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH、C1-C6-アルキルアミノ-CO-、C2-C6-アルケニル、C2-C6-アルキニル、C1-C6-アルキルアミノ、ヒドロキシ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アシルオキシ-C1-C6-アルキル、ニトロ、シアノ-C1-C6-アルキル、ハロ-C1-C6-アルキル、ニトロ-C1-C6-アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメチル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アシルアミノ、C1-C6-アシルアミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-C1-C6-アシルアミノ、アミノ-C1-C6-アシル、アミノ-C1-C6-アシル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルアミノ-C1-C6-アシル、(C1-C6-アルキル)2アミノ-C1-C6-アシル、R15R16N-CO-O-、R15R16N-CO-C1-C6-アルキル-、R15C(O)NH、R15OC(O)NH、R15NHC(O)NH、C1-C6-アルキル-S(O)m、C1-C6-アルキル-S(O)m-C1-C6-アルキル、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m-C1-C6-アルキル、R15S(O)mR16N、R15S(O)mR16N-C1-C6-アルキルであり、
ここで、
mは、0、1または2であり;そして
R15およびR16は、それぞれ、独立して、水素またはC1-C6-アルキルから選択され;
R2およびR3は、それぞれ、独立して、水素、重水素、アミノ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、カルボキシ、C2-C6-アルケニル、C2-C6-アルキニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ、C3-C10-シクロアルキルから選択され、ここで、アルキル、アルコキシまたはシクロアルキル基は、所望により、ハロ、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ-C1-C6-アルキルチオ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、C5-C9-ヘテロアリール、C2-C9-ヘテロシクロアルキル、C3-C9-シクロアルキルまたはC6-C10-アリールから選択される1から3個の基によって置換されているか、または
R2およびR3は、それぞれ、独立して、C3-C10-シクロアルキル、C3-C10-シクロアルコキシ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、C6-C10-アリールアミノ、C1-C6-アルキルチオ、C6-C10-アリールチオ、C1-C6-アルキルスルフィニル、C6-C10-アリールスルフィニル、C1-C6-アルキルスルホニル、C6-C10-アリールスルホニル、C1-C6-アシル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-、C1-C6-アルキルアミノ-CO-、C5-C9-ヘテロアリール、C2-C9-ヘテロシクロアルキルまたはC6-C10-アリールであり、ここで、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびアリール基は、所望により、1から3個のハロ、C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキル-CO-NH-、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-、C1-C6-アルキル-CO-NH-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-C1-C6-アルコキシ、カルボキシ、カルボキシ-C1-C6-アルキル、カルボキシ-C1-C6-アルコキシ、ベンジルオキシカルボニル-C1-C6-アルコキシ、C1-C6-アルコキシカルボニル-C1-C6-アルコキシ、C6-C10-アリール、アミノ、アミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシカルボニルアミノ、C6-C10-アリール-C1-C6-アルコキシカルボニルアミノ、C1-C6-アルキルアミノ、(C1-C6-アルキル)2アミノ、C1-C6-アルキルアミノ-C1-C6-アルキル、(C1-C6-アルキル)2アミノ-C1-C6-アルキル、ヒドロキシ、C1-C6-アルコキシ、カルボキシ、カルボキシ-C1-C6-アルキル、C1-C6 アルコキシカルボニル、C1-C6-アルコキシカルボニル-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルコキシ-CO-NH-、C1-C6-アルキル-CO-NH-、シアノ、C5-C9-ヘテロシクロアルキル、アミノ-CO-NH-、C1-C6-アルキルアミノ-CO-NH-、(C1-C6-アルキル)2アミノ-CO-NH-、C6-C10-アリールアミノ-CO-NH-、C5 C9-ヘテロアリールアミノ-CO-NH-、C1-C6-アルキルアミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、(C1-C6-アルキル)2アミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C6-C10-アリールアミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C5-C9-ヘテロアリールアミノ-CO-NH-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルスルホニル、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ-C1-C6-アルキル、C6-C10-アリールスルホニル、C6-C10-アリールスルホニルアミノ、C6-C10-アリールスルホニルアミノ-C1-C6-アルキル、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ、C1-C6-アルキルスルホニルアミノ-C1-C6-アルキル、C5-C9-ヘテロアリールまたはC2-C9-ヘテロシクロアルキルにより置換されいる］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００７１】
-さらなるJAK阻害剤は、CytopicのWO 02/060492で開示した化合物、例えば、式(XXIII)
【化４２】
2008520612.tif 000043
［式中、
Xは、炭素または窒素であり;
R1は、C1-C10-アリル、C2-C10-アルケニル、C2-C10-アルキニル、C2-C10-アリルアリール、アリールまたはヘテロシクリルであるか、または
Nを有するR1は、置換または非置換ヘテロシクリルを形成でき、ここで、アリル、アルケニル、アルキニル、アリルアリール、アリール、およびヘテロシクリルは、所望により、ハロ、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルキルアミド、アリールアミド、ヒドロキシアリルアミド、ニトリロ、アミノアルキルアミド、ニトリロアリール、アルコキシ(特に、メトキシ)、ヘテロ環式アルキルからなる群から選択される1個から3個のメンバーで置換されており(ここで、ヘテロ環は5-から7員環であり、ヘテロ原子はO、NまたはSである);
R2は、C1-C10-アリル、C2-C10-アルケニル、C2-C10-アルキニル、C2-C10-アリルアリール、アリール、ハロ、OH、または6-から7-員ヘテロシクリルから選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリルアリール、アリールおよびヘテロシクリルは、所望により、ハロ、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルキルアミド、アリールアミド、ヒドロキシアルキルアミド、ニトリロ、アミノアルキルアミド、ニトリロアリール、アルコキシ(特に、メトキシ)、ヘテロ環式アルキルからなる群から選択される1個から3個のメンバーで置換されている(ここで、ヘテロ環は、5-から7-員環であり、そして、ヘテロ原子は、O、NまたはSである)］
の化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、結晶形またはジアステレオマーを含む。
【００７２】
-さらなるJAK阻害剤は、また、cytopicのWO 02/060492で開示した化合物、例えば、式(XXIV)
【化４３】
2008520612.tif 000044
［式中、
R6は、C1-C10-アリル、C2-C10-アルケニル、C2-C10-アルキニル、C2-C10-アリルアリール、アリールまたはヘテロシクリルであり;そして
R7は、C1-C10-アリル、C2-C10-アルケニル、C2-C10-アルキニル、C2-C10-アリルアリール、アリール、ハロ、OHまたはヘテロシクリルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリール、アリールおよびヘテロシクリルは、所望により、ハロ、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルキルアミド、アリールアミド、ヒドロキシアルキルアミド、ニトリロ、アミノアルキルアミド、ニトリロアリール、アルコキシ(特に、メトキシ)、ヘテロ環式アルキルからなる群から選択される1個から3個のメンバーで置換されている(ここで、ヘテロ環は、5-から7-員環であり、そして、ヘテロ原子は、O、NまたはSである)］
の化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、結晶形またはジアステレオマーを含む。
【００７３】
好ましくは、JAKキナーゼ阻害剤は、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(またCP-690,550と呼ばれる)の、例えば、N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490);プロジギオシン25-C (PNU156804);
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);および
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリルを含む。
【００７４】
上記で特許出願を引用しているそれぞれの場合には、化合物に関する主題は、ここで引用により本出願の一部とする。同様に、存在するとき、その中に記載されている、その薬学的に許容される塩、相当するラセミ化合物、ジアステレオ異性体、エナンチオマー、互変体、および相当する結晶修飾、例えば、溶媒和物、水和物および多形体を含む。本発明の組合せ剤で活性成分として使用する化合物を、それぞれ、引用文献に記載した通り、製造し、投与できる。また、上述の通りの2個を超える活性成分を別々に含む組合せ剤も本発明の範囲内であり、すなわち、本発明の範囲内の医薬的組合せは、3個またはそれ以上の活性成分を含み得る。
【００７５】
本発明の特定の発見にしたがって、以下のものが提供される:
1.  a)Bcr-Abl、Flt-3、RAFおよびFAKキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤；および
b)少なくとも1個のJAKキナーゼ阻害剤を含む医薬的組合せ剤。
2.  上述した通りの、例えば、Bcr-Abl、Flt-3、RAFおよびFAKキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤および少なくとも1個のJAK3キナーゼ阻害剤を、例えば、同時にまたは連続して、治療上有効量で該対象に共投与することを含む、それを必要とする対象において増殖性疾患を処置または予防する方法。
【００７６】
増殖性疾患の例は、例えば、腫瘍、乾癬、再狭窄、強皮症および線維症を含む。
【００７７】
3.  例えば、上記2)で定義した方法で使用するための、上記1)で定義の医薬的組合せ剤。
【００７８】
4.  上記2)で定義した方法で使用するための医薬の製造における使用のための、上記1)で定義の医薬的組合せ剤。
【００７９】
上記で特定した方法における本発明の組合せ剤の利用は、例えば、後述する方法にしたがって、動物試験法および臨床で、証明され得る。
【００８０】
A.  併用処置
適当な臨床試験は、例えば、増殖性疾患を有する患者での非盲検、用量増加試験である。そのような試験は、特に本発明の活性成分の組合せ剤が相乗効果を示すことを証明する。乾癬または多発性硬化症に対する有益な効果は、当業者にそれ自体既知のこれらの試験の結果を通して、直接決定できる。そのような試験は、特に、活性成分を用いた単剤療法および本発明の組合せ剤の効果を比較するのに適当である。好ましくは、薬剤(a)の用量を最大許容用量に到達するまで増量し、そして、薬剤(b)を固定した用量で投与する。あるいは、薬剤(a)を固定した用量で投与し、薬剤(b)の用量を増量する。それぞれの患者は、毎日または断続的に、薬剤(a)を投与される。処置の有効性は、例えば、12、18または24週後の6週ごとの症状スコアを評価することにより、そのような試験で決定することができる。
【００８１】
本発明の医薬的組合せの投与は、例えば、症状を緩和したり、進行を遅らせたり、または阻害したりすることに関して、有益な効果、例えば、治療上の相乗効果を生じるだけでなく、また、さらに驚くべき有益な効果、例えば、本発明の組合せで使用した医薬活性成分の1個だけを適用する単剤療法と比較して、副作用の軽減、改善した生活の質または減少した死亡率を生じる。
【００８２】
さらなる有益性は、本発明の組合せの活性成分を低い用量で使用することができ、例えば、用量がしばしば少ないだけではなく、また少ない頻度で適用され、それにより、副作用の発生または重症度を減らし得る。このことは、処置される患者の願望および必要性と一致する。
【００８３】
本明細書で使用する“共投与”または“併用投与”なる用語は、単独の患者への選択した治療剤の投与を含むことを意味し、そして、薬剤が、必ずしも、同じ投与経路で同時に投与するとは限らない、処置計画を含むことを意図する。
【００８４】
本発明の1つの目的は、増殖性疾患のターゲティングまたは予防に、一緒になって治療上有効である量で本発明の組合せを含む、医薬組成物を提供することである。この組成物で、薬剤(a)および薬剤(b)は、共に、順々にまたは1つの組合せ単位用量形もしくは2つの別々の単位用量形で投与し得る。単位用量形は、また、固定した組合せ剤であり得る。
【００８５】
本発明の薬剤(a)および薬剤(b)の別々の投与、または固定した組合せ剤、すなわち、少なくとも2個のパートナー(a)および(b)を含む、単独のガレヌス組成物での投与のための医薬組成物はそれ自体既知の方法で製造し得、そしてヒトを含むほ乳類(温血動物)への、経腸、例えば、経口または直腸、および非経腸投与のために適当であり、例えば、治療上有効量の上述の少なくとも1個の薬学的に活性な組合せパートナーを単独で、または、とりわけ、経腸または非経腸適用のために適当な、1個またはそれ以上の、薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む。
【００８６】
適当な医薬組成物は、例えば、活性成分を、約0.1%から約99.9%、好ましくは、約1%から約60%含む。経腸または非経腸投与のための組合せ治療の医薬製剤は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセルまたは座薬のような単位用量形、もしくはアンプルである。別に指示がなければ、これらは、例えば、慣用的な混合、造粒、糖衣、溶解または凍結乾燥過程による、それ自体既知の方法で製造される。必要な有効量は、複数の用量単位の投与により到達できるので、それぞれの投与形の個々の用量に含まれる組合せパートナーの単位量が、それ自身、有効量を構成することを必要としないことは、認識される。
【００８７】
特に、本発明の組合せの組合せパートナーのそれぞれの治療上有効量を、同時にまたは連続して、および任意の順序で投与し得、成分を、別々または固定した組合せとして投与し得る。例えば、本発明にしたがった増殖性疾患を予防または処置する方法は、次のものを含み得る：一緒になって治療上有効量で、好ましくは、相乗的に有効量で、例えば、本明細書で記載した量に相当する毎日または断続した投与量での、(i)遊離または薬学的に許容される塩形での第1の薬剤(a)の投与;および(ii)遊離または薬学的に許容される塩形での薬剤(b)の同時のまたは任意の順序で連続した別々の投与。本発明の組合せの個々の組合せパートナーを、治療経過の間、異なった時間に別々に、または、同時に、分割したまたは単独の組合せ形で投与してよい。さらに、また、投与するなる用語は、例えば、インビボで組合せパートナーに変換するような、組合せパートナーのプロドラッグの使用を包含する。したがって、本発明は、同時のまたは交互の処置に関する、すべてのそのような投与計画を含むものとして理解すべきであり、“投与すること”なる用語は、それにしたがって解釈すべきである。
【００８８】
本発明の組合せで使用する組合せパートナーのそれぞれの有効用量は、特定の化合物または使用する医薬組成物、投与方法、処置される状態、処置される状態の重症度に依存して変わり得る。よって、本発明の組合せの投与計画は、投与経路および患者の腎臓および肝臓の機能を含む様々な要因にしたがって選択される。通常の技術を有する臨床医または内科医は、状態の進行を緩和し、逆転し、または停止するために必要な単独の活性成分の有効量を、容易に決定し、処方することができる。毒性がなく効果を生み出す活性成分の濃度を達成する最適精度は、標的サイトで利用できる活性成分のキネティクスに基づいた投与計画を必要とする。
【００８９】
薬剤(a)または(b)の1日投与量は、もちろん、様々な要因、例えば、選択した化合物、処置する特定の状態および望むべき効果に依存して変わる。しかしながら、一般に、満足のいく結果は、単回投与または分割投与として、1日あたり約0.03-5 mg/kg、特に1日あたり0.1-5 mg/kg、例えば、1日あたり0.1-2.5 mg/kgオーダーの1日投与率での薬剤(a)の投与で達成される。薬剤(a)および(b)は、任意の慣用的な経路で、特に、経腸的、例えば、経口で、例えば、錠剤、カプセル、飲料溶液の形態で、または非経腸的に、例えば、注射用溶液もしくは懸濁液の形態で投与し得る。経口投与のための適当な単位用量形は、したがって、1個またはそれ以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に、約0.02-50 mg、通常0.1-30 mgの活性成分、例えば、薬剤(a)または(b)を含む。
【００９０】
薬剤(b)は、0.5-1000 mgの1日用量範囲で、ヒトに投与し得る。経口投与のための適当な単位投与形は、したがって、1個またはそれ以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に、約0.1-500 mg活性成分を含む。
【００９１】
本発明の医薬的組合せ剤の投与は、例えば、血液幹細胞の上方調節された増殖を阻害し、または、CMLまたはAMLのような白血病の進行、もしくは腫瘍の成長を遅らせることに関して、有益な効果、例えば、治療上の相乗効果を生じるだけでなく、また、さらに驚くべき有益な効果、例えば、本発明の組合せで使用した医薬活性成分の1個だけを適用する単剤療法と比較して、副作用の軽減、改善した生活の質または減少した死亡率を生じる。
【００９２】
さらなる有益性は、本発明の組合せの活性成分を低い用量で使用することができ、例えば、用量がしばしば少ないだけではなく、また少ない頻度で適用され、それにより、副作用の発生または重症度を減らし得る。このことは、処置される患者の願望および必要性と一致している。
【００９３】
白血病の処置のために白血病細胞の増殖を阻害する本発明の組合せの利用は、例えば、以下のような、Bcr-Abl-トランスフェクション32D細胞を用いた増殖試験で証明できる。
【００９４】
Bcr-Abl-トランスフェクション32D細胞(32D pGD p210 Bcr-Abl; Bazzoni et al., J Clin Invest, Vol. 98, No. 2, pp. 521-528 (1996))を、RPMI 1640 (BioConcept, Allschwil, Switzerland; Cat. No. 1-41F01)、10% ウシ胎児血清、2 mM グルタミンで培養する。ウェルあたり50 μLで10000細胞を、平底96ウェル組織培養プレートに播種する。完全培地のみ(コントロールのために)または化合物の連続した3倍希釈を、最終用量100 μLで、トリプリケートで加え、細胞を37℃、5% CO2で、65-72時間インキュベートする。細胞増殖試薬WST-1 (Roche Diagnostics GmbH; Cat. No. 1 664 807) を、ウェルあたり10 μL 添加し、その後、37℃で2時間インキュベートする。生細胞の量に依存した発色を、440 nmで測定する。それぞれの化合物の効果を、コントロール細胞(100%)で取得した値(OD440)の阻害割合として計算し、化合物濃度に対してプロットする。IC50を、グラフ外挿による用量応答曲線から計算する。
【００９５】
32D-Bcr-Abl細胞の成長を阻害する化合物は、さらに、Bcr-Ablキナーゼに対する化合物の特異性を証明し、化合物毒性を除外するために、IL-3依存性32D野生型細胞で試験できる。
【００９６】
発明の組合せでBcr-Ablトランスフェクション32D細胞を用いた増殖試験は、以下の変更と共に、上述した通りに行われる。2個の組合せパートナーを、固定した割合で混ぜる。この混合物または組合せパートナーだけの3倍連続希釈を、上述した通り、96ウェル組織培養プレートに播種した細胞に加える。本発明の組合せ剤の32D-Bcr-Abl増殖への効果を、用量効果分析器ソフトウェアーであるCalcuSyn(単独および複数の薬剤のための)を用いて評価し、単独組合せパートナーの効果と比較する(Cambridge、Biosoftにより配布)。
【００９７】
好ましくは、JAK阻害剤が、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(またCP-690,550と呼ばれる)の
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490);プロジギオシン25-C (PNU156804);
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);および
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリル、および、その組合せからなる群から選択される、組合せ剤である。
【００９８】
他の好ましい態様では、Bcr-Abl、Flt-3およびRAFキナーゼ阻害剤は、N-{5-[4-(4-メチル-ピペラジノ-メチル)-ベンゾイルアミド]-2-メチル-フェニル}-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(4-メチル-1H-イミダゾール-1-イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-ヘキサヒドロ-10-メトキシ-9-メチル-1-オキソ-9,13-エポキシ-1H,9H-ジインドロ[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]ピロロ[3,4-j][1,7]ベンゾジアゾニン-11-イル]-N-メチルベンズアミド;
1-[4-(4-エチル-ピペラジニル-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-3-[4-(6-メチルアミノ-ピリミジン-4-イルオキシ-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-エチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4-イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4-イルメチル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6-イル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5-イル)-アミン;
2-[5-クロロ-2-(2-メトキシ-4-モルフォリン-4-イル-フェニルアミノ)-ピリミジン-4-イルアミノ]-N-メチル-ベンズアミド;
N3-[4-(4-モルフォリン-4-イル-シクロヘキシル)-フェニル]-1-ピリジン-2-イル-1H-[1,2,4]トリアゾール-3,5-ジアミン;および、その組合せから選択される。
【００９９】
B.  処置される疾患
“増殖性疾患”なる用語は、限定するものではないが、腫瘍、乾癬、再狭窄、強皮症および線維症を含む。
【０１００】
血液の悪性腫瘍なる用語は、特に白血病、とりわけBcr-Abl、c-KitまたはFlt-3を発現している白血病のことを言い、限定するものではないが、慢性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病(ALL)、特にフィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病(Ph+ALL)、およびSTI57I-耐性白血病を含む。
【０１０１】
“固形腫瘍疾患”なる用語は、特に、卵巣癌、乳癌、大腸および一般の胃腸管の癌、頸癌、肺癌、例えば、小細胞肺癌ならびに非小細胞肺癌、頭部および頸部癌、膀胱癌、前立腺癌またはカポジ肉腫を意味する。
【０１０２】
よって、記載のプロテインキナーゼ活性、とりわけ上記および下記のチロシンプロテインキナーゼ活性を阻害する本発明の組合せ剤は、プロテインキナーゼ依存性疾患の処置に使用できる。プロテインキナーゼ依存性疾患は、とりわけ増殖性疾患であり、好ましくは良性またはとりわけ悪性腫瘍(例えば、腎臓、肝臓、副腎、膀胱、乳、胃、卵巣、大腸、直腸、前立腺、膵臓、肺、膣または甲状腺、肉腫、神経膠芽腫の癌腫、および頸部および頭部の多くの腫瘍、ならびに白血病)である。それらは、腫瘍の緩解をもたらすこと、および、腫瘍転移の形成および転移(また微小転移)の成長を予防することができる。さらにそれらは、上皮過増殖(例えば、乾癬)、前立腺過形成、および新生組織形成、とりわけ上皮性形質、例えば、乳腺癌腫の処置に使用できる。それは、また、いくらかまたはとりわけ個々のチロシンプロテインキナーゼが関与している範囲内で、免疫系の疾患の処置に本発明の組合せを使用でき、さらには、また、本発明の組合せを、少なくとも1個のチロシンプロテインキナーゼ、とりわけ特記したものから選択されるキナーゼが関与している中枢もしくは末梢神経系の疾患の処置に使用できる。
【０１０３】
Flt-3(FMD-様チロシンキナーゼ)は、とりわけ造血前駆細胞およびリンパならびに脊髄系の前駆細胞で発現している。Flt-3遺伝子の異常な発現は、AML(急性骨髄性白血病)、血球系骨髄異形成を有するAML(AML/TMDS)、ALL、CML(慢性骨髄性白血病)および骨髄異形成症候群(MDS)を含む、成人および子供の両方の白血病で証明されており、よって、式(I)の化合物で処置するのに好ましい疾患である。Flt-3の活性化突然変異は、AML患者のおよそ25-30%で発見されている。よって、ヒト白血病におけるFlt-3の役割に関する証拠が蓄積してきており、Flt-3阻害剤のような本発明の組合せが、とりわけ、このタイプの疾患の治療に使用できる(Tse et al.、Leukemia、Vol. 15、No. 7、pp. 1001-1010 (2001); Tomoki et al.、Cancer Chemother Pharmacol、Vol. 48、Suppl. 1、pp. S27-S30 (2001); Birkenkamp et al.、Leukemia、Vol. 15、No. 12、pp. 1923-1921 (2001); Kelly et al.、Neoplasia、Vol. 99、No. 1、pp. 310-318 (2002)を参照)。
【０１０４】
CMLでは、造血幹細胞(HSC)の相互均衡染色体転座が、Bcr-Ablハイブリッド遺伝子を産生する。後者は、発癌性Bcr-Abl融合タンパク質をコードしている。ABLは厳密に制御されたプロテインチロシンキナーゼであり、細胞増殖、接着およびアポトーシスの制御において基本的な役割を果たしているが、Bcr-Abl融合遺伝子は構成的活性化キナーゼをコードしており、HSCを形質転換し、その結果、無秩序なクローン増殖、骨髄間質への減少した接着能力および突然変異誘発刺激に対する減少したアポトーシス応答を示す表現型を産生し、それにより、進行的により悪性度の高い形質転換を蓄積することができるようになる。結果として生じた顆粒球は、成熟したリンパ球に発達できずに血液循環に放出され、成熟した細胞の欠如および感染への増加した感受性という結果になる。キナーゼが増殖および抗アポトーシス経路(例えば、P-3キナーゼおよびSTAT5)を活性化するのを妨害する、Bcr-AblのATP-競合的阻害剤が、記載されていて、その結果、Bcr-Abl表現型を示す細胞が死に、それによって、CMLに対する有効な治療を提供する。よって、Bcr-Abl阻害剤として使用する本発明の組合せ剤は、とりわけ、その過剰発現、特に、例えば、CMLまたはALLのような白血病に関連する疾患の治療のために適当である。
【０１０５】
本発明の組合せのRAFキナーゼ阻害特性により、それらは、異常なMAPキナーゼシグナル経路により特徴づけられる増殖性疾患、特にRAFキナーゼの過剰発現またはRAFキナーゼの活性化突然変異、例えば、突然変異B-RAFを有するメラノーマ(とりわけ、ここでは、突然変異B-RAFはV599E突然変異である)により特徴づけられる多くの癌の処置のための治療剤として役立つものになる。本発明はまた、異常なMAPキナーゼシグナル経路、特にB-RAFが突然変異していて、例えば、突然変異B-RAFを有する良性母斑(Nevi moles)によって特徴づけられる他の状態を、本発明の組合せで処置する方法を提供する。
【０１０６】
一般に、MAPキナーゼシグナル経路を介する過度のシグナルによって特徴づけられる疾患は、増殖性疾患、特に増加したRAFキナーゼ活性、例えば、野生型BまたはC-RAFキナーゼを過剰発現したもの、もしくは、突然変異B-RAFキナーゼのような活性化突然変異RAFキナーゼを発現したもの、によって特徴づけられる癌である。ここで突然変異RAFキナーゼが検出される癌は、黒色腫、結腸直腸癌、卵巣癌、神経膠腫、腺癌、肉腫、乳癌および肝臓癌を含む。突然変異B-RAFキナーゼは、とりわけ、多くのメラノーマで見られる。
【０１０７】
本発明にしたがって疾患組織の試料を、例えば、生検または切除の結果として患者から採取し、組織が、例えば、突然変異B-RAFキナーゼのような突然変異RAFキナーゼを産生するか、または野生型RAFキナーゼ(例えば、野生型BまたはC-RAFキナーゼ)を過剰発現するか否かを決定するために試験する。試験が、突然変異RAFキナーゼを産生するか、またはRAFキナーゼが疾患組織で過剰産生されることを示しているならば、患者は、本明細書で記載したRAF阻害剤の有効なRAF阻害用量を投与することによって処置される。
【０１０８】
さらに本発明にしたがって、メラノーマの処置のための医薬の製造に関する本明細書に記載した本発明の組合せの使用があり、これは、(a)メラノーマ組織が突然変異RAFキナーゼを発現しているか、または野生型RAFキナーゼを過剰発現しているか否かを決定するために、患者のメラノーマ組織を試験すること；および(b)メラノーマ組織が、野生型RAFキナーゼを過剰発現しているか、または活性化突然変異B-RAFキナーゼを発現していることが分かれば、本発明の組合せの有効なRAFキナーゼ阻害量で患者を処置することを含む。
【０１０９】
しかしながら、もしそのカスケードの他のキナーゼが、その経路の過度のシグナルの原因であるなら、RAFキナーゼ阻害化合物を用いてMAPキナーゼシグナル経路を下方制御することもまた可能である。よって、本発明はさらに、原因がRAFキナーゼの活性化突然変異または過剰発現ではないMAPキナーゼシグナル経路の過度のシグナルによって特徴づけられる疾患の処置に関する。
【０１１０】
本発明の組合せは、第一に、血管の成長を阻害し、よって例えば、無秩序な血管形成、とりわけ眼球血管新生によって引き起こされる疾患、とりわけ網膜症、例えば、糖尿病網膜症または加齢性黄斑変性、乾癬、血管腫、例えば、血管腫、メサンギウム細胞増殖性障害、例えば、慢性または急性腎臓疾患、例えば、糖尿病性腎症、悪性腎硬化、血栓性微小血管症症候群または移植拒絶、もしくは、とりわけ炎症性腎臓疾患、例えば、糸球体腎炎、とりわけメサンギウム増殖性糸球体腎炎、溶血尿毒症症候群、糖尿病性腎症、高血圧性腎硬化、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫性疾患、糖尿病、子宮内膜症、慢性喘息、および、とりわけ新生物疾患(固形腫瘍、しかし、また白血病および他の血液悪性腫瘍)、例えば、とりわけ乳癌、大腸癌、肺癌(とりわけ、小細胞肺癌)、前立腺癌またはカポジ肉腫に関連した多くの疾患に対して有効である。本発明の組合せは、腫瘍の成長を阻害し、そして、とりわけ腫瘍の転移拡散および微小転移の成長を予防するのに適している。
【０１１１】
内在性FAKシグナルの阻害の結果、運動性が減少し、いくつかの場合には細胞死を誘導する。他方で、外来性の発現によってFAKシグナルを高めることは、細胞の運動性を増加させ、ECMからの細胞生存シグナルを伝える。さらに、FAKは、浸潤性および転移性上皮、間葉系、甲状腺および前立腺癌で過剰発現している。よって、FAKの阻害剤は、抗腫瘍成長および転移のための薬剤になり得る。よって、その化合物は、例えば、新生物疾患、特に、乳腫瘍、腸癌(大腸および直腸)、胃癌ならびに卵巣および前立腺癌、非小細胞性肺癌、小細胞肺癌、肝臓癌、黒色腫、膀胱腫瘍および頭部ならびに頸部癌によって影響を受ける、脊椎動物およびより特に、ほ乳類を予防および/または処置することが示されている。
【０１１２】
本発明は、ミエローマ、とりわけ慣用的な化学療法に耐性のあるミエローマを処置する方法に関する。本明細書中で使用する“ミエローマ”なる用語は、骨髄で見られる正常なタイプの細胞からなる腫瘍に関する。本明細書中で使用する“多発性ミエローマ”なる用語は、骨痛、病的骨折、高カルシウム血症および正色素性正球性貧血を生じる、広範な溶骨性病変と関連した、多発性骨髄腫瘍座およびMコンポーネント(モノクローナル免疫グロブリン断片)の分泌により特徴づけられる、血漿細胞の播種性悪性腫瘍を意味する。多発性骨髄腫は、慣用的な高用量化学療法の使用では治癒できない。本発明は、ミエローマ、とりわけ慣用的な化学療法に耐性があるミエローマを処置する方法に関する。
【０１１３】
本発明の好ましい態様は、とりわけ多発性骨髄腫の処置に関するRAF阻害剤およびJAKキナーゼ阻害剤の組合せである。とりわけ最も好ましいのは、ミエローマ、とりわけ多発性骨髄腫の処置のために、
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4-イルメチル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6-イル-イソキノリン-1-イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1-イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5-イル)-アミン;
、およびその組合せから選択されるRAF阻害剤と、
遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩形(または、CP-690,550と呼ばれる)の、
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490); プロジギオシン25-C (PNU156804);
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);および
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-イル)-アミノ]-ピペリジン-1-イル}-3-オキソ-プロピオニトリル
から選択されるJAKキナーゼ阻害剤の組合せ剤である。
【手続補正書】
【提出日】平成18年8月25日(2006.8.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a)Bcr-Abl、Flt-3、FAKおよびRAFキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤；および、
b)少なくとも1個の、サブタイプ選択的またはサブタイプ非選択的JAKキナーゼ阻害剤を含む医薬的組合せ剤の使用であって、それらを必要とする対象で増殖性疾患を処置または治療するための医薬の製造のための使用。
【請求項２】
a)Bcr-Abl、Flt-3、FAKおよびRAFキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも1個の薬剤；および、
b)JAKキナーゼ阻害剤の少なくとも1個の選択的または非選択的サブタイプを含む医薬的組合せ剤の使用であって、それらを必要とする対象で増殖性疾患を処置または治療するための使用。
【請求項３】
薬剤a)が、N-{5-[4-(4-メチル-ピペラジノ-メチル)-ベンゾイルアミド-2-メチル-フェニル}-4-(3-ピリジル)-2-ピリミジン-アミン;
4-メチル-3-[[4-(3-ピリジニル)-2-ピリミジニル]アミノ]-N-[5-(4-メチル-1H-イミダゾール-1−イル)-3-(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミド;
N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-ヘキサヒドロ-10-メトキシ-9-メチル-1-オキソ-9,13-エポキシ-1H,9H-ジインドロ[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]ピロロ[3,4-j][1,7]ベンゾジアゾニン-11−イル]-N-メチルベンズアミド;
1-[4-(4-エチル-ピペラジニル-1−イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-3-[4-(6-メチルアミノ-ピリミジン-4−イルオキシ-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4−イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-エチル-ピペラジン-1−イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
1-[4-(2-アミノ-ピリミジン-4−イルオキシ)-フェニル]-3-[4-(4-メチル-ピペラジン-1−イルメチル)-3-トリフルオロメチル-フェニル]-ウレア;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4−イルメチル-イソキノリン-1−イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1−イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6−イル-イソキノリン-1−イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1−イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5−イル)-アミン;
2-[5-クロロ-2-(2-メトキシ-4-モルフォリン-4−イル-フェニルアミノ)-ピリミジン-4−イルアミノ]-N-メチル-ベンズアミド;および
N3-[4-(4-モルフォリン-4−イル-シクロヘキシル)-フェニル]-1-ピリジン-2−イル-1H-[1,2,4]トリアゾール-3,5-ジアミン;
ならびにそれらの組合せから選択される、請求項1または2に記載の使用。
【請求項４】
薬剤b)が、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(または、CP-690,550と呼ばれる)の、
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-]N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490); プロジギオシン25-C (PNU156804);
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);および
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4−イル)-アミノ]-ピペリジン-1−イル}-3-オキソ-プロピオニトリル
ならびにそれらの組合せから選択される、請求項1または2に記載の使用。
【請求項５】
ミエローマを処置するための医薬の製造のための、RAF阻害剤が、
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-ピリジン-4−イルメチル-イソキノリン-1−イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1−イル-4-(tert-ブチル-フェニル)-アミン;
(4-tert-ブチル-フェニル)-(4-キナゾリン-6−イル-イソキノリン-1−イル)-アミン;
[4,7']ビイソキノリニル-1−イル-(2-tert-ブチル-ピリミジン-5−イル)-アミン;
およびそれらの組合せから選択され、JAKキナーゼ阻害剤が、遊離形または塩形、例えば、モノクエン酸塩(または、CP-690,550と呼ばれる)の、
N-ベンジル-3,4-ジヒドロキシ-ベンジリデン-シアノアセトアミド α-シアノ-(3,4-ジヒドロキシ)-] N-ベンジルシンナムアミド (Tyrphostin AG 490); プロジギオシン25-C (PNU156804)
[4-(4'-ヒドロキシフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P131);
[4-(3'-ブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P154);
[4-(3',5'-ジブロモ-4'-ヒドロキシルフェニル)-アミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン] (WHI-P97);
3-{(3R,4R)-4-メチル-3-[メチル-(7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4−イル)-アミノ]-ピペリジン-1−イル}-3-オキソ-プロピオニトリル
およびそれらの組合せから選択される、RAF阻害剤およびJAKキナーゼ阻害剤の組合せ剤の使用。
【国際調査報告】
2008520612.tif 000045
2008520612.tif 000046
2008520612.tif 000047
2008520612.tif 000048
2008520612.tif 000049
2008520612.tif 000050
2008520612.tif 000051
2008520612.tif 000052