(57)【要約】  活性成分としてＰＤＥ３阻害薬を含有する局所投与用またはメソセラピーで使用するための医薬品組成物、およびセルライトの治療におけるそれらの使用が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルライトの治療で使用するための、活性成分としてＰＤＥ３阻害薬を含有する局所投与用の医薬品組成物。
【請求項２】
活性成分としてＰＤＥ３Ｂイソ型の阻害薬を含有する、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項３】
前記阻害薬が、アナグレリド、シロスタゾール、ピモベンダン、ミルリノン、アムリノン、オルプリノン、エノキシモン、シロスタミド、ベスナリノンおよびトレキンシンからなる群から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記阻害薬が、ミルリノン、シロスタミドまたはトレキンシンである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記阻害薬が、
ａ）６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン；
ｂ）３−｛２−［４−（４，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１−Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２，３−ジフルオロ−フェニルアミノ］−６−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルメチル｝−ベンゾニトリル；
ｃ）５−｛４−［２−（２，６−ジクロロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
ｄ）５−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
ｅ）５−｛４−［２−（３−ニトロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
ｆ）６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−２−フルオロ−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン
からなる群から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項６】
ゲル、スプレーゲル、クリーム、ノンオイルクリーム、オイル−ノンオイル製剤、軟膏または絆創膏の形態である、請求項１から５に記載の組成物。
【請求項７】
局所皮内注射またはメソセラピーに適した形態である、請求項１から５に記載の組成物。
【請求項８】
注射液の形態である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
活性成分の量が０．１〜３重量％である、請求項１から８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記量が１〜２重量％である、請求項６および９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記量が０．１〜１重量％である、請求項７から９に記載の組成物。
【請求項１２】
微小循環に対して活性な化合物、物質の混合物または抽出物をさらに含有する、請求項１から１１に記載の組成物。
【請求項１３】
アルニカ、イチョウ、パイナップル、ドンクアイ（トウキ）またはセンテラアジアティカの抽出物を含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化合物がサポニンまたはフラボンである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記化合物がエスシンである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
微小循環に対して活性な化合物、物質の混合物または抽出物が、０．１重量％と４重量％の間の範囲の濃度で存在する、請求項１２から１５に記載の組成物。
【請求項１７】
セルライトの局所治療またはメソセラピー治療のための医薬品組成物の調製のためのＰＤＥ３阻害薬の使用。
【請求項１８】
アナグレリド、シロスタゾール、ピモベンダン、ミルリノン、アムリノン、オルプリノン、エノキシモン、シロスタミド、ベスナリノンおよびトレキンシンからなる群から選択されるＰＤＥ３Ｂ阻害薬の請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
ａ）６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン；
ｂ）３−｛２−［４−（４，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１−Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２，３−ジフルオロ−フェニルアミノ］−６−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルメチル｝−ベンゾニトリル；
ｃ）５−｛４−［２−（２，６−ジクロロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
ｄ）５−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
ｅ）５−｛４−［２−（３−ニトロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
ｆ）６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−２−フルオロ−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン
からなる群から選択されるＰＤＥ３Ｂ阻害薬の請求項１７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性成分としてＰＤＥ３阻害薬を、抗セルライト活性を有する他の物質と場合によっては一緒に含有するセルライトの局所治療またはメソセラピー治療のための医薬品製剤に関する。
【０００２】
（発明の背景）
セルライト、または「エディマタス−ファイブロスクレロティックパニキュロパシー(Edematous Fibrosclerotic Panniculopathy）」は、真皮の下に位置する組織である主として脂肪の性質を有する皮下組織に影響する障害である。セルライトは、殆どもっぱら女性に影響を与え、思春期後の女性人口のほぼ８０〜８５％が経験する。皮下脂肪組織は、女性の体重の２５％に相当し、ａ）物理的および機械的保護を提供すること；ｂ）脂質代謝で必要な脂質およびタンパク質を放出すること；およびｃ）内分泌作用およびパラ分泌作用を行うことの３つの基本的機能を果たす。
【０００３】
統計的に、この欠点は大多数の白人女性に影響を与える。この問題は他の人種の女性では頻度がはるかに少ない。この障害の影響を最も受けやすい女性は、「地中海沿岸の」女性であり、一般にそれは彼女たちのホルモンの供給において、エストロゲンがより豊富であるためである。
【０００４】
細身の女性でさえ大腿部により際立った脂肪の蓄積を示す傾向がある。
【０００５】
いくつかの要因が不利に干渉し、脂肪の塊の微小循環に影響する局部的な変化を引き起こす。やがてこれが、組織血管系の解剖学的および機能的崩壊を引き起こし、それによって皮下組織およびその直上層すなわち皮膚に影響を及ぼす問題が発生する。
【０００６】
セルライトは、脂肪組織の微小循環の退化により引き起こされ、その結果その最も重要な代謝機能に変化が生じる。
【０００７】
この組織退化の眼に見える結果は、脂肪細胞の容積の増大、体液貯留および細胞間隙中の体液停滞である。
【０００８】
セルライトは、遺伝的（家族性の素因）、体質的、ホルモンおよび血管の原因と思われ、殆ど身体を動かさない生活スタイル、ストレス、肝臓疾患、貧しい食生活、腸の障害または際立った体液貯留により特徴付けられる障害によりしばしば悪化する。
【０００９】
ホルモンの不均衡（卵巣、下垂体および甲状腺ホルモンに影響を与える）がセルライトの原因であり、エストロゲンの作用および微小循環に対するそれらの影響により、女性は、特に卵巣ホルモンの活性が頂点にある思春期、妊娠および更年期前の期間はこの状態になりやすい。
【００１０】
したがって、セルライトに対する感受性は、遺伝的であるより主としてホルモンによるものである。
【００１１】
皮下結合組織の構造特性には、皮膚のセルライトに特徴的な脂肪組織の不規則な突き出しを女性に生じさせる傾向のある明らかな性的二形性が存在する。女性における男性の皮下脂肪組織と比較した抗脂肪分解活性（α2−アドレナリン依存性受容体）の優勢は、大腿部の脂肪沈着を増大させ、その結果セルライトが現れると示唆されてきた(Rosenbaum et al．，Plastic and Reconstructive Surgery,101(7)：1934−1939,1998）。
【００１２】
さらに、臀部、腰部または大腿部領域の皮下脂肪組織を起源とする含脂肪細胞のカテコールアミンに対する脂肪分解反応は、内臓脂肪組織のそれよりも低く(Lafontan and Berlan, TIPS, 24：276−283, 2003）、そのことがこれらの領域に脂肪組織が蓄積する傾向の原因となる。
【００１３】
現時点でセルライトは通常下記によって治療される：
−物理療法
エレクトロリポリーシス(electrolipolysis)およびより最近のレーザー療法、イオン泳動、超音波療法ならびにオゾン療法などがマッサージ技術に加えて現在広く用いられているが、これらどの技術でも根本的な問題は解決しない。
【００１４】
−食物栄養補助剤
代謝作用を増し、血行を良くし、細胞傷害を防ぎ、脂肪吸収を減らすことを唱える幾多の食物栄養補助剤（無機塩類特にカリウム、ビタミン類、「脂肪燃焼剤」または利尿効果のある植物抽出物、腸調節剤およびバイオフラボノイド）が市販されているが、セルライトの治療に対するこれらの食物栄養補助剤の効能を裏付ける根拠のある臨床試験は知られていない。
【００１５】
−薬理活性製品
European J. of Dermatology 10(8)596−603, 2000に発表された研究によれば、分析された３２個のセルライト製品中の最も一般的な活性成分は、１４個の医薬品中に存在するカフェインである。
【００１６】
幅広く使用されるその他の化合物は次のものである：
ａ）アミノフィリン。ｃＡＭＰおよび脂肪分解を増すその能力が理由であり、その抗セルライト作用についての有利および不利両方の研究結果が公表されている。
ｂ）レボチロキシン。甲状腺ホルモンが代謝を増大させる能力を利用する。レボチロキシンの投与量が多いと全身的吸収が起こり、その結果としての心臓刺激作用および甲状腺との干渉の影響が懸念され、これは甲状腺機能亢進性患者において特に有害である。
ｃ）エスシン(Escin)。血管保護性ヘパリノイドの能力による。
【００１７】
−メソセラピー
この技術は、全身経路によって通常は投与される薬物の局所的皮内注射を含む。それによって少量の製品を直接セルライトの部位に注射することが可能となり、したがって、この技術は、全身的ではなく、それほど浸潤性でもない。経皮レベルでの薬物の吸収は低いので、長期間の治療効果がメソセラピーによって得られる。メソセラピーに現在使用されているセルライト治療用の化合物は、補酵素Ａ、ホスファチジルコリン、アミノフィリン、エスシンおよびホエモパシー製品である。
【００１８】
含脂肪細胞は、その大きさを容易に修正する細胞であり、脂質生成でその容積は増大し、脂肪分解でその容積は減少する。
【００１９】
脂質生成はＬＰＬ（リポタンパク質リパーゼ）により引き起こされる。毛細血管に隣接する含脂肪細胞が、ＬＰＬを合成して放出し、それが超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）中にキロミクロン単位で存在するトリグリセリド（ＴＧ）を加水分解する。グリセロールと脂肪酸が放出され、含脂肪細胞によって捕捉され、エステル化されてトリグリセリドとなる。
【００２０】
脂肪分解は、ホルモン感受性リパーゼ（ＨＳＬ）によって引き起こされる。ＨＳＬは、含脂肪細胞中に存在するＴＧを加水分解して遊離の脂肪酸とグリセロールにする。活性酵素は、ｃＡＭＰ依存性タンパク質リン酸化酵素Ａによりリン酸化される。
【００２１】
ｃＡＭＰ合成は、次の２つの対立する酵素システムに依存する。
ｄ）ＡＴＰをｃＡＭＰに変換するアデニル酸シクラーゼ。これは、α2アドレナリン受容体により負に、βアドレナリン受容体により正に調節される。
ｅ）ｃＡＭＰをＨＳＬに対して不活性なＡＭＰに崩壊するホスホジエステラーゼ。この活性は、カフェイン、テオフィリンおよびアミノフィリンによって阻害される。
【００２２】
さらに、含脂肪細胞は、多数の因子、例えば、レプチン（満腹因子）、血管新生因子（アンジオテンシノーゲン）、プロスタグランジンＰＧＥ2（抗脂肪分解特性）およびＰＧＩ2（細胞分化）、リゾホスファチジン酸（細胞増殖）、およびステロイドなどを分泌する。
【００２３】
治療方針
セルライト治療に対する薬理学的ベースの開発は、多数の段階を経てきた。８０年代には、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）のキサンチン（カフェイン）による阻害が用いられた。９０年代には、排出活性および抗水腫活性を有する植物抽出物（フラボノイドおよびサポノシド(saponoside））により静脈リンパ性不全を改善することを探求することにより問題は対処された。より最近は、結合組織を細胞外基質および分解酵素の構成物質で再構築する試みがなされている。
【００２４】
しかし、最も有望な治療アプローチは、含脂肪細胞代謝および脂肪分解を増すように設計されたものと思われる。
【００２５】
脂肪分解は、ａ）β−アドレナリン受容体の刺激、ｂ）アデノシンまたはα2−アドレナリン受容体の阻害、ｃ）ホスホジエステラーゼの阻害によって引き起こすことができる。
【００２６】
β−アドレナリン刺激物質（イソプレナリン）、α2−アドレナリン拮抗薬（ヨヒンビン）およびホスホジエステラーゼ阻害薬（アミノフィリン）の局所適用の効果が一連の臨床試験により評価されている。その結果は、局部脂肪の減少がダイエットまたは運動をすることなく薬理学的に得られることを示している(Greenway et al., Obes res, 3：561S−568S,1995）。
【００２７】
β−アドレナリン受容体の刺激は、脂肪細胞中のｃＡＭＰ濃度を増し、それによって脂肪分解を刺激する。ｃＡＭＰを増加させる別の方法は、酵素ホスホジエステラーゼを阻害することによってその劣化を防止することである。
【００２８】
最も一般的なＰＤＥ阻害物質（カフェイン、テオフィリンおよびアミノフィリン）は、特異性が低く、局所吸収能が低いために満足できるものではない。ＰＤＥ３、そして特にＰＤＥ３Ｂは、ヒトの含脂肪細胞中に存在する。したがって、脂肪組織に限定された効果を得るためにはこれらの酵素の亜型を選択的に阻害することが必要であると思われる。
【００２９】
この主題に関して出願されている特許：
ＥＰ６９２２５０は、微小循環を改善するためのフラボン類の使用について、ＧＢ１５８８５０１、ＦＲ２７９７７６５、ＥＰ１２６１３１０およびＥＰ１２５９２２１は、リパーゼを活性化するためのキサンチンの美容のための使用に関する。
【００３０】
上で与えられた情報から、セルライトの治療に対して脂肪分解活性は必須であるが十分ではないことは明らかである。しばしばキサンチンなどのホスホジエステラーゼ阻害薬を使用する今日まで採用されてきた治療が十分に満足のいくものであることは証明されておらず、したがって、皮下脂肪の多元的な形態的変化に対する新たな有効な治療法の必要性が強く感じられる。
【００３１】
肥満症の治療に有用な可能性のある選択的ＰＤＥ３Ｂ阻害物質としてのアリールジヒドロピリダゾンおよびアリールジメチルピラゾロンの群が、Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry Letters, (2003), 13,3983−3987に記載されている。
【００３２】
本発明の説明
ＰＤＥ３（ホスホジエステラーゼ−３）阻害薬、特にヒト脂肪組織中に主として発現するＰＤＥ３Ｂイソ型の阻害薬が、セルライトに対して有効であることが見出された。
【００３３】
したがって、本発明は、セルライトの局所治療またはメソセラピー的治療のための医薬品組成物を調製するためのＰＤＥ３、好ましくはＰＤＥ３Ｂ阻害薬の使用を提供する。
【００３４】
ＰＤＥ３阻害薬では、化合物のアナグレリド、シロスタゾール、ピモベンダン、ミルリノン、アムリノン、オルプリノン、エノキシモン、シロスタミド、ベスナリノン、トレキンシンおよびそれらの医薬として許容できる塩が好ましい。ミルリノン、トレキンシンおよびシロスタミドが特に好ましい。
【００３５】
本発明による好ましいＰＤＥ３阻害薬のさらなる群は、Bioorganic＆Medicinal Chemistry Letters, (2003), 13, 3983−3987に記載されている化合物、特に化合物：
１）６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−５−メチル−４,５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン（化合物８ａ）
２）３−｛２−［４−（４,４−ジメチル−５−オキソ−４,５−ジヒドロ−１−Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２,３−ジフルオロ−フェニルアミノ］−６−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルメチル｝−ベンゾニトリル（化合物１８ｎ）
３）５−｛４−［２−（２,６−ジクロロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４,４−ジメチル−２,４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン（化合物１８ｈ）
４）５−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−４,４−ジメチル−２,４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン（化合物１８ａ）
５）５−｛４−［２−（３−ニトロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４,４−ジメチル−２,４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン（化合物１８ｆ）
６）６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−２−フルオロ−フェニル］−５−メチル−４,５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン（化合物１４ｌ）
である。
【００３６】
本明細書で使用される用語「局所的」とは、局所適用および局所作用を策定または含むことを意味する。局所的組成物は、好ましくは、クリーム、ノンオイルクリーム、軟膏、オイル−ノンオイル製剤、ゲル、スプレーゲルおよびパッチの形態である。メソセラピーでの用途に対しては、組成物は局所皮内注射に適した形態、好ましくは注射液の形態であるべきである。
【００３７】
活性成分は、局所形態については全体の組成物重量を基準として０．１〜３％、好ましくは１〜２％、メソセラピーで使用するための注射可能な形態については０．１〜１重量％の範囲の濃度で存在する。本発明による組成物は、ＰＤＥ３阻害薬に加えて、微小循環に対して活性な化合物、化合物の混合物または抽出物、好ましくは、サポニンまたはフラボンあるいはそれらを含有する抽出物を含有することができる。最も好ましいのは、イチョウ、アルニカ、アナナス、ドンクアイ（トウキ）、センテラアジアティカの抽出物、およびサポニンエスシンである。
【００３８】
微小循環に対して活性な化合物、抽出物または物質の混合物は、０．１〜４％の濃度で組成物中に含まれる。
【００３９】
本発明による組成物は、医薬として許容できる賦形剤、例えば補助剤、特に水またはアルコール（エタノール）、ビタミン類特にトコフェロール、デクスパンテノールまたはパルミチン酸レチナール、増粘剤、防腐剤、保護コロイド、保湿剤、香料、電解質、ゲル化剤、皮膚浸透性を増す薬剤、ポリマーまたはコポリマー、乳化剤、エマルジョン安定化剤などのおよびその他の医薬として許容できる賦形剤をさらに含むことができる。
【００４０】
好ましい防腐剤は、アレルゲン性の低い物質、例えばエチルアルコールまたはベンジルアルコールである。
【００４１】
局所製剤は、オレイン酸不飽和誘導体、例えば１０トランス−１２シスリノール酸を含むことができる。
【００４２】
特に適当なゲル化剤は、カルボマー、より好ましくは、カルボマー９４０、ポリアクリルアミドイソパラフィン−ラウレス−７、キサンタンガム、カラギーニン、アカシアガム、グアールガム、寒天ゲル、アルギン酸塩およびメチルヒドロキシセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、ポリアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、コロイダルシリカである。尿素およびパンテノールは、本発明による保湿剤の例である。
【００４３】
本発明の医薬品組成物の調製のための技術は、当業者には知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ＸＶＩＩＩ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．に記載されている。
【００４４】
上記のＰＤＥ３阻害薬を含む医薬品組成物は、ヒト、好ましくは女性におけるセルライトの局所治療のために都合良く使用される。
【００４５】
以下の実施例により、本発明をより詳細に説明する。
実施例
実施例１．ノンオイルクリーム（重量％）
活性成分
アムリノン                            １
エスシン                              ２
賦形剤
モノステアリン酸グリセリル            ８
マクロゴールセトステアリルエーテル    ２．５
流動ワセリン                          ２
白色ワセリン                          ２
ミリスチン酸イソプロピル              ４
ミリスチルアルコール                  ３
ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル        ０．３
精製水                                １００ｇまでの十分量。
【００４６】
実施例１．２
活性成分：
−ミルリノン                          １
賦形剤：
セトステアリルアルコール              ４．５
モノステアリン酸グリセリル            ８．０
流動ワセリン                          ２
白色ワセリン                          ２
ジメチコーン                          ０．３０
ミリスチン酸イソプロピル              １
ミリスチルアルコール                  ３
精油                                  十分量
精製水                                １００ｇまでの十分量。
【００４７】
実施例１．３
活性成分：
トレキンシン                          ２
賦形剤：
オレイン酸                            ５．０
ステアリン酸マクロゴール４０          ９．０
セトステアリルアルコール              ６．０
ブチルヒドロキシアニソール            ０．０２
トロメタモール                        ０．１
ジメチコーン                          ０．３
カルボポール９８０                    ０．３
プロピレングリコール                  ２０．０
亜硫酸ナトリウム                      ０．１
精油                                  十分量
精製水                                １００ｇまでの十分量。
【００４８】
実施例２．ヒドロアルコールゲル（重量％）
活性成分：
ミルリノン                            ２
賦形剤：
カルボマー                            １．５
エチルアルコール９６°ＥＰ            ４０ｍｌ
精油                                  十分量
トリエタノールアミン                  ｐＨ調整に十分な量
精製水                                １００ｇまでの十分量。
【００４９】
実施例３．脂肪親和性クリーム（重量％）
活性成分：
アムリノン                                      １
賦形剤：
ジイソステアリン酸ポリグリセリル−３            ４
オレイン酸グリセリル                            ２
蜜蝋                                            ７
ジカプリルエーテル                              １０
ヘキシルデカノール／ラウリン酸ヘキシルデシル    １０
グリセリン８５％                                ５
硫酸マグネシウム  ７Ｈ２Ｏ                      １
ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル                  ０．１
精油                                            十分量
精製水                                          １００ｇまでの十分量。
【００５０】
実施例４．ノンオイルクリーム（重量％）
活性成分：
３−｛２−［４−（４，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１−Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２，３−ジフルオロ−フェニルアミノ］−６−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルメチル｝−ベンゾニトリル      １
賦形剤：
オレイン酸                                ５．０
ステアリン酸マクロゴール４０              ９．０
セトステアリルアルコール                  ６．０
ブチルヒドロキシアニソール                ０．０２
トロメタモール                            ０．１
ジメチコーン                              ０．３
カルボポール９８０                        ０．３
プロピレングリコール                      ２０．０
亜硫酸ナトリウム                          ０．１
精製水                                    １００ｇまでの十分量。
【００５１】
以下の活性成分を実施例４に従ってノンオイルクリームとして配合することができる：
６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン；
５−｛４−［２−（２，６−ジクロロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
５−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
５−｛４−［２−（３−ニトロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；
６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−２−フルオロ−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン。
【００５２】
実施例５．メソセラピー用の注射液（５ｍｌバイアル）（量はｍｇ／ｍｌで表す）
活性成分：
ミルリノン                          ５
賦形剤：
メタ重亜硫酸ナトリウム、乳酸        ０．２〜０．５
精製水                              ５ｍｌまでの十分量。
【００５３】
実施例６：効能試験
セルライトは、脂肪生成が重要な役割を演ずる多元的な病因を含む問題である。したがって脂肪分解活性のインビトロ測定は、可能性のある抗セルライト薬物の最初の選別においては必須の要素であるが、最終候補を確認するには全く不十分である。したがって、脂肪分解活性のインビトロ試験は、インビボで効能を評価する試験と関連付けなければならない。
【００５４】
インビトロ試験
・含脂肪細胞トリグリセリドの脂肪分解により生成した細胞外グリセロールの測定
インビトロ脂肪分解試験を、ヒト含脂肪細胞に対して行った。そのヒト含脂肪細胞は、それらの前駆体の前脂肪細胞（Promocell）の初代培養から分化を誘発させることにより得た。実際の含脂肪細胞の分化は、グリセロール−３−リン酸脱水素酵素（成熟した含脂肪細胞中には発現するが前脂肪細胞中には発現しない酵素）および細胞内レベルで蓄積した脂肪をオイルレッドＯ（シグマ社）でアッセイすることにより達成した。
【００５５】
ＰＤＥ３阻害薬は、さまざまな濃度で含脂肪細胞と１５分間プレインキュベートし、脂肪分解の弱い刺激（イソプレナリン１μＭで得られる最大反応の２５％）を誘発することができる１０ｎＭのイソプレナリンを次に加えた。４時間後、培地を除去し、各ウェルに蓄積した細胞内脂肪の量をオイルレッドＯにより測定した。
【００５６】
脂肪分解活性は、トリグリセリドの加水分解後の細胞外媒体中に放出されたグリセロールを測定することにより評価した。
【００５７】
この試験において、本発明による選択的ＰＤＥ３Ｂ阻害薬を含むＰＤＥ３阻害薬を含む製剤は、非選択性ＰＤＥ阻害薬（カフェイン、テオフィリン）を含有する類似の製剤と同程度以上の効果があることを証明した。
【００５８】
【表１】
2008523127.tif 000002
【００５９】
・含脂肪細胞中のｃＡＭＰ生成の測定
ｃＡＭＰは、細胞内のメッセンジャーであり、そのレベルは、その合成（アデニル酸シクラーゼ活性）および崩壊（ホスホジエステラーゼ活性）に依存する。含脂肪細胞を、生理食塩水に移し、そこに脂肪分解剤（アデニル酸シクラーゼ活性剤）、抗脂肪分解剤（ホスホジエステラーゼ活性剤）およびＰＤＥ３阻害薬を加える。適当な培養時間の後、処理を中断し、細胞中に形成されたｃＡＭＰを抽出する。細胞抽出物を凍結乾燥させた後、取出し、特定の市販の比色分析の酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（Amersham社、Cayman社）により分析する。ｃＡＭＰレベルは、供給業者の指示に従って測定する。この試験で本発明によるＰＤＥ３拮抗薬を含む製剤は、非選択性ＰＤＥ阻害薬（カフェイン、アミノフィリン）を含有する類似の製剤を超える効果があることを証明した。
【００６０】
インビボ試験
大腿部の上部外側に明らかなセルライトを示す１０人の健康な大人の女性を診察した。
【００６１】
各患者は、効能および安全性の評価について自分自身を対照として役割を果たした。活性成分（１％ミルリノン）を含有するクリームを、一方の大腿部の外側部分に広げ、ベースクリーム（活性成分なし）を他方の大腿部の同じ領域に無作為的やり方で広げた。
【００６２】
ほぼ２〜３ｃｍのクリームを、吸収するまで２〜３分間すり込む処置を、２ヶ月間毎日、日に２回繰り返した。
【００６３】
試験中、患者は、運動プログラムには従わず、食事制限は何も受けなかった。
【００６４】
各大腿部の周囲（太さ）を、膝と大転子の間の３分の２のところで治療が終了するまで定期的に測定した。薬理学的に治療した大腿部の治療を受けていない大腿部と比較した周囲の減少は、２．９±０．７ｃｍで、１．３〜４．７ｃｍの範囲であった。
【００６５】
観察期間の終点における血中のＰＤＥ３の測定により、化合物の存在は検出されなかった。
【手続補正書】
【提出日】平成18年9月12日(2006.9.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルライトの局所治療またはメソセラピー治療のために医薬品組成物を調製するための、
アナグレリド、シロスタゾール、ピモベンダン、ミルリノン、アムリノン、オルプリノン、エノキシモン、シロスタミド、ベスナリノン、トレキンシン、６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン；３−｛２−［４−（４，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１−Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２，３−ジフルオロ−フェニルアミノ］−６−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルメチル｝−ベンゾニトリル；５−｛４−［２−（２，６−ジクロロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；５−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；５−｛４−［２−（３−ニトロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−２−フルオロ−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン、からなる群から選択されるＰＤＥ３阻害薬の使用。
【請求項２】
ミルリノン、シロスタミドまたはトレキンシンの請求項１の使用。
【請求項３】
前記局所医薬品組成物が、ゲル、スプレーゲル、クリーム、ノンオイルクリーム、オイル−ノンオイル製剤、軟膏または絆創膏の形態である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記局所医薬品組成物が、局所皮内注射またはメソセラピーに適した形態である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項５】
前記組成物が注射液の形態である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記ＰＤＥ３またはＰＤＥ３Ｂ阻害薬の量が０．１〜３重量％である、請求項１から５に記載の使用。
【請求項７】
前記量が１〜２重量％である、請求項３および６に記載の使用。
【請求項８】
前記量が０．１〜１重量％である、請求項４および６に記載の使用。
【請求項９】
前記局所医薬品組成物が、さらに微小循環に対して活性な化合物、物質の混合物または抽出物を含む、請求項１から８に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物がさらにアルニカ、イチョウ、パイナップル、ドンクアイ（トウキ）またはセンテラアジアティカの抽出物を含む、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記化合物がサポニンまたはフラボンである、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
前記化合物がエスシンである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
微小循環に対して活性な化合物、物質の混合物または抽出物が、０．１重量％と４重量％の間の範囲の濃度で存在する、請求項９から１２に記載の使用。
【請求項１４】
活性成分として、アナグレリド、シロスタゾール、ピモベンダン、ミルリノン、アムリノン、オルプリノン、エノキシモン、シロスタミド、ベスナリノン、トレキンシン、６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン；３−｛２−［４−（４，４−ジメチル−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−１−Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２，３−ジフルオロ−フェニルアミノ］−６−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルメチル｝−ベンゾニトリル；５−｛４−［２−（２，６−ジクロロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；５−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−フェニル］−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；５−｛４−［２−（３−ニトロ−ベンジル）−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−４，４−ジメチル−２，４−ジヒドロ−ピラゾール−３−オン；６−［４−（２−ベンジル−３−オキソ−シクロヘキサ−１−エニルアミノ）−２−フルオロ−フェニル］−５−メチル−４，５−ジヒドロ−２−Ｈ−ピリダジン−３−オン、からなる群から選択されるＰＤＥ３Ｂ阻害薬を含む、
局所医薬品組成物または、局所皮内注射またはメソセラピーに適した組成物をセルライトの治療を必要としている対象に投与することを含む、セルライトの治療のための方法。
【請求項１５】
前記ＰＤＥ３Ｂ阻害薬が、ミルリノン、シロスタミドまたはトレキンシンからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記局所組成物が、ゲル、スプレーゲル、クリーム、ノンオイルクリーム、オイル−ノンオイル製剤、軟膏または絆創膏の形態である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記局所医薬品組成物が、１〜２重量％の量のＰＤＥ３Ｂ阻害薬を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
局所皮内注射またはメソセラピーに適した前記組成物が、０．１〜１重量％の量のＰＤＥ３Ｂ阻害薬を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記局所医薬品組成物が、さらに微小循環に対して活性な化合物、物質の混合物または抽出物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、アルニカ、イチョウ、パイナップル、ドンクアイ（トウキ）またはセンテラアジアティカの抽出物を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物がサポニンまたはフラボンである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物がエスシンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
微小循環に対して活性な化合物、物質の混合物または抽出物が、０．１重量％と４重量％の間の範囲の濃度で存在する、請求項１９に記載の方法。
【国際調査報告】
2008523127.tif 000003
2008523127.tif 000004
2008523127.tif 000005
2008523127.tif 000006
2008523127.tif 000007