(57)【要約】  アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、及び／又はベツリン酸を使用して、哺乳類の肥満、糖尿病、高コレステロール、及び関連疾患、即ち高血糖症、脂質障害、高グリセリド血症、異脂肪血症、及びアテローム性動脈硬化症を含めた疾患を、治療するための方法について記述する。これらの治療に適用される組成物についても記述する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
肥満の治療を必要とする哺乳動物患者の肥満を制御するための方法であって、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項２】
糖尿病であり且つ糖尿病の処方薬で治療しているヒト患者の肥満を治療するための方法であって、前記処方薬と併せてアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む有効量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項３】
アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、果物、野菜、及び花から単離される請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
アントシアニンが、シアニジン−３−グリコシド、デルフィニジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項５】
アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離される請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
アントシアニジン、又はアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物を、単離し、精製する請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
自然源から得られ、前記自然源中に存在する糖及び酸を本質的に含まない請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項８】
糖尿病を制御するために、糖尿病の治療を必要とする哺乳動物患者の糖尿病を治療するための方法であって、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項９】
アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、果物、野菜、及び花から単離される請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アントシアニンが、シアニジン−３−グリコシド、デルフィンジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離される請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
組成物が、自然源から得られ、前記自然源中に存在する糖及び酸を本質的に含まない請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
糖尿病が１型である請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
糖尿病が２型である請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
高血糖症の治療を必要とする哺乳動物患者の高血糖症を治療し又は制御するための方法であって、アントシアニン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１６】
アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、果物、野菜、及び花から単離される請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アントシアニンが、シアニジン−３−グリコシド、デルフィニジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離される請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
アントシアニジン、アントシアニン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物を、単離し、精製する請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
組成物が、自然源から得られ、前記自然源中に存在する糖及び酸を本質的に含まない請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
疾患としての、肥満、糖尿病、又は高血糖症の治療に使用される組成物であって、
（ａ）ある期間にわたる前記疾患の治療のための、日用量単位のアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸、或いはこれらの混合物と、
（ｂ）医薬品担体と
を含む組成物。
【請求項２２】
アントシアニンが、シアニジン−３−グリコシド、デルフィニジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、果物、野菜、又は花から単離される請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸が、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離される請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
自然源から単離され、前記自然源中に存在する糖及び酸を本質的に含まない請求項２１に記載の組成物。
【請求項２６】
脂質障害、高脂血症、又は低ＨＤＬの治療を必要とする哺乳動物患者の、脂質障害、高脂血症、又は低ＨＤＬを治療し又は制御するための方法であって、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項２７】
高コレステロール血症の治療を必要とする哺乳動物患者の高コレステロール血症を治療し又は制御するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項２８】
高グリセリド血症の治療を必要とする哺乳動物患者の高グリセリド血症を治療し又は制御するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項２９】
異脂肪血症及び／又は低ＨＤＬコレステロールの治療を必要とする哺乳動物患者の、異脂肪血症及び／又は低ＨＤＬコレステロールを治療し又は制御するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項３０】
アテローム性動脈硬化症の治療を必要とする哺乳動物患者のアテローム性動脈硬化症を治療するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項３１】
化合物が、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）由来である請求項２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物を、単離し、精製する請求項２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
組成物が、自然源から得られ、前記自然源中に存在する糖及び酸を本質的に含まない請求項２６、２７、２８、又は２９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００４年７月２９日出願の、仮特許出願第６０／５９１，８０６号の優先権に依拠するものである。
【０００２】
本発明は、米国農務省資金提供（ＵＳＤＡ  Ｇｒａｎｔ）Ｎｏ．２００３−３５５０４−１３６１８に基づいて、資金提供された。米国政府は、本発明に対する確かな権利を有する。
【０００３】
本発明は、インスリン関連疾患、肥満、糖尿病、高血糖症、脂質障害、高脂血症、又は低ＨＤＬ、高コレステロール血症、高グリセリド血症、異脂肪血症、及びアテローム性動脈硬化症の治療に関する。本発明は特に、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、及びベツリン酸を使用する方法に関する。本発明は特に、生体内で細胞によるインスリン生成を増加させるための、ミズキ種（Ｃｏｒｎｕｓ  ｓｐｐ．）果実エキス、並びにチェリーやベリーなどのこれらの化合物を含有するその他の果実、又はこれらの混合物に関する。本発明は特に、関連疾患の治療において、生体内でのインスリン生成の増加をもたらすための方法に使用される組成物にも関する。本発明は特に、肥満を予防し、コレステロール及び体重を低下させるのに使用される組成物にも関する。
【背景技術】
【０００４】
インスリンの機能は、肝臓からのグルコールの排出を抑制することによって、又はグルコースの摂取及びその代謝を刺激することによって、正常な血糖値を維持することである（Ｒｏｓｓ，Ｓ．Ａ．；Ｇｕｌｖｅ，Ｅ．Ａ．；Ｗａｎｇ，Ｍ．糖尿病の化学及び生化学（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ．）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００４，１０４，１２５５〜１２８２）。インスリンの不十分な放出、又は標的組織でのインスリン動作の低下は、グルコース及び脂質の異常な代謝を引き起こす。この結果、糖尿病の顕著な特徴として血液中のグルコース濃度が高くなる（Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ，Ｌ．；Ｇｏｎｄｏｓ，Ｂ．２型糖尿病：新ミレニアムの流行病（Ｔｙｐｅ−２  ｄｉａｂｅｔｅｓ：Ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｍｉｃ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ．）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．１９９９，２９，３３〜４２）。２つのタイプの糖尿病、即ち１型（インスリン依存性糖尿病）と２型の糖尿病（非インスリン依存性糖尿病）がある。１型糖尿病は、インスリン不全をもたらす自己免疫破壊又はインスリンを分泌する膵臓β細胞の阻害によって生ずる。２型糖尿病はより一般的であり、β細胞が、遺伝的及び環境的要因によって確立されたインスリン抵抗性を克服すための十分な量のインスリンを分泌できないことによって生ずる（Ｈｅｎｑｕｉｎ，Ｊ．Ｃ．グルコースによるインスリン分泌の調節の誘発及び増幅経路（Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｂｙ  ｇｌｕｃｏｓｅ．）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２０００，４９，１７５１〜１７６０）。インスリン抵抗性は、インスリンが、骨格筋及び脂肪内でグルコースの輸送を不適切に刺激し、肝臓グルコール生成を不適切に抑制する障害である。末梢インスリン抵抗性を克服するのに十分な量のインスリンのβ細胞による分泌が妨げられる、関係あるメカニズムは、確立されたままである。
【０００５】
しかし、β細胞からのインスリン放出を直接刺激する経口血糖降下薬（例えば、参照により本明細書に援用されるＪｏｎｅｓらの米国特許第６，８５２，７３８号に例示されるような、スルホニル尿素ベースの薬物）は、末梢インスリン抵抗性を克服するために且つ血糖値を正常にするために、２型糖尿病患者の小島からのインスリン分泌を十分高めることができることが示されている。スルホニル尿素ベースの薬物使用の欠点の１つは、これらの薬物では正常な血糖値を制御できないことである（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ａ．Ｆ．Ｈ．経口血糖降下薬：スルホニル尿素及びメグリチナイド（Ｏｒａｌ  ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ：Ｓｕｌｆｏｎｙｌｕｒｅａｓ  ａｎｄ  ｍｅｇｌｉｔｉｎｉｄｅｓ）Ｂ．Ｊ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｄ．Ｍｕｌｌｅｒ−Ｗｉｅｌａｎｄ（編），２型糖尿病の教科書（Ｔｅｘｔ  ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｙｐｅ−２  Ｄｉａｂｅｔｅｓ）Ｍａｒｔｉｎ  Ｄｕｎｉｔｚ  Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ，２００３，ｐｐ．７７〜８５）。これらの薬物は、β細胞がインスリンを分泌し且つ体重増加を引き起こす能力にも悪影響を及ぼす（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ａ．Ｆ．Ｈ．経口血糖降下薬：スルホニル尿素及びメグリチナイド（Ｏｒａｌ  ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ：Ｓｕｌｆｏｎｙｌｕｒｅａｓ  ａｎｄ  ｍｅｇｌｉｔｉｎｉｄｅｓ）Ｂ．Ｊ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｄ．Ｍｕｌｌｅｒ−Ｗｉｅｌａｎｄ（編），２型糖尿病の教科書（Ｔｅｘｔ  ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｙｐｅ−２  Ｄｉａｂｅｔｅｓ）Ｍａｒｔｉｎ  Ｄｕｎｉｔｚ  Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ，２００３，ｐｐ．７７〜８５）。したがって、伝統的な処方薬治療の他に、膵臓β細胞によって血糖値を調節することができ又はインスリン生成を誘発することができるという食品成分の役割がある。
【０００６】
報告では、特にポリフェノールに富む果物及び野菜の摂取が、２型糖尿病の発生率を低下させることを示している（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ａ．；Ｐｏｌａｎｓｋｙ，Ｍ．Ｍ．，お茶で強化されたインスリン活性（Ｔｅａ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００２，５０，７１８２〜７１８６；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ａ．；Ｂｒｏａｄｈｕｒｓｔ，Ｃ．Ｌ．；Ｐｏｌａｎｓｌｙ，Ｍ．Ｍ．；Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｗ．Ｆ．；Ｋｈａｎ，Ａ．；Ｆｌａｎａｇａｎ，Ｖ．Ｐ．；Ｓｃｈｏｅｎｅ，Ｎ．Ｗ．；Ｇｒａｖｅｓ，Ｄ．Ｊ．インスリン様生物活性を有するシナモンからのポリフェノールＡ型ポリマーの単離及び特徴付け（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ  Ｔｙｐｅ−Ａ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｉｎｎａｍｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００４，５２，６５〜７０；Ｌａｎｄｒａｕｌｔ，Ｎ．；Ｐｏｕｃｈｅｒｅｔ，Ｐ．；Ａｚａｙ，Ｊ．；Ｋｒｏｓｎｉａｋ、Ｍ．；Ｇａｓｃ，Ｆ．；Ｊｅｎｉｎ，Ｃ．；Ｃｒｏｓ，Ｇ．；Ｔｅｉｓｓｅｄｒｅ，Ｐ．糖尿病ラットにおけるポリフェノールに富むシャルドネ白ワインの作用（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  Ｃｈａｒｄｏｎｎａｙ  Ｗｈｉｔｅ  Ｗｉｎｅ  ｉｎ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒａｔｓ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００３，５１，３１１〜３１８）。また、食品中の抗酸化物は、グルコースによる酸化ストレスから膵臓β細胞を保護することも知られている。アントシアニンは、果物、野菜、及びワインやサイダー、お茶などの加工食品中に豊富に存在する。しかし、これが糖尿病を低減し又は予防する能力について、ほとんど知られていない。
【０００７】
また、アントシアニンは無毒性であり、抗酸化、抗炎症、及び抗癌活性を持つことが報告されている（Ｗａｎｇ，Ｈ．，Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．，Ｓｔｒａｓｂｕｒｇ，Ｇ．Ｍ．，Ｃｈａｎｇ，Ｙ．，Ｂｏｏｒｅｎ，Ａ．Ｍ．Ｇｒａｙ，Ｊ．Ｉ．，及びＤｅＷｉｔｔ，Ｄ．Ｌ．（１９９９）タルトチェリーからのアントシアニン及びそのアグリコン、シアニジンの、抗酸化及び抗炎症活性（Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｇｌｙｃｏｎ，ｃｙａｎｉｄｉｎ，ｆｒｏｍ  ｔａｒｔ  ｃｈｅｒｒｉｅｓ）Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．６２，２９４〜２９６；Ｔａｌｌ，Ｊ．Ｍ．，Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．，Ｚｈａｏ，Ｃ．，Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．，Ｍｅｙｅｒ，Ｒ．Ａ．，及びＲａｊａ，Ｓ．Ｎ．（２００４）タルトチェリーのアントシアニンは、ラットにおける炎症による痛みの振舞いを抑制する（Ｔａｒｔ  ｃｈｅｒｒｙ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐａｉｎ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｉｎ  ｒａｔ）Ｂｅｈａｖ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１５３，１８１〜１８８；Ｋａｎｇ，Ｓ．，Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．，Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．，及びＢｏｕｒｑｕｉｎ，Ｌ．Ｄ．（２００３）タルトチェリーのアントシアニンは、ＡｐｃＭｉｎマウスの腫瘍の発達を阻害し、ヒト結腸癌細胞の増殖を低下させる（Ｔａｒｔ  ｃｈｅｒｒｙ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｕｍｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ＡｐｃＭｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ）Ｃａｎｃ．Ｌｅｔｔ．１９４，１３〜１９；Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｖａｒｅｅｄ，Ｓ．Ｋ．，及びＮａｉｒ，Ｍ．Ｇ．（２００５）無毒性アントシアニジン、果物及び野菜の色素によるヒト腫瘍細胞の成長阻害（Ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｎｏｎｔｏｘｉｃ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ，ｔｈｅ  ｐｉｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｆｒｕｉｔｓ  ａｎｄ  ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ）Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．７６，１４６５〜１４７２）。
【０００８】
野菜、果物、及びハーブ中に存在する生物活性の天然産物は、癌や糖尿病、心臓血管疾患などのヒト変性障害の予防及び治療において、相当な関心を生じさせている。例えばナッツ、全粒穀物、果物、及び野菜は、ポリフェノールやテルペノイド、色素などの抗酸化物の豊富な源であり、これらの化合物は、いくつかの疾患状態の寛解に関連している。同様に、ニンニク、大豆、キャベツ、生姜、甘草、及びセリ科植物中に存在するフィトケミカルは、抗癌活性を有することで知られている（Ｒｕｉ，Ｈ．Ｌ．（２００４）癌予防におけるフィトケミカルの潜在的相乗効果：動作メカニズム（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ｏｆ  ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ）Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３４，３４７９Ｓ〜３４８５Ｓ）。また、お茶に存在するポリフェノールは、抗糖尿病性を有することも報告されている（Ｖａｎｅｓｓａ，Ｃ．及びＧａｒｙ，Ｗ．（２００４）生体内動物モデルにおける緑茶カテキンの健康への影響に関する検討（Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｅａｌｔｈ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ  ｃａｔｅｃｈｉｎｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ）Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３４，３４３１Ｓ〜３４４０Ｓ，Ｍａｒｙ  Ｅ．Ｗ．，Ｘｉａｏｈｕｉ，Ｌ．Ｗ．，Ｂｒｉａｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｒｏｂｅｒｔ  Ｋ．Ｈ．，Ｍａｓａｏ，Ｎ．，及びＤａｒｙｌ  Ｋ．Ｇ．（２００２）緑茶成分エピガロカテキンガレートは、肝臓グルコース生成を抑制する（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ，ａ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｔｅａ，ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，３４９３３〜３４９４０）。
【０００９】
脂肪が少なく抗酸化物が豊富な食品の摂取は、肥満及びインスリン抵抗性のリスクを低下させる（Ｂｌａｋｅｌｙ，Ｓ．；Ｈｅｒｂｅｒｔ，Ａ．；Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｍ．；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｇ．；Ｇｒｕｎｄｅｌ，Ｅ．；Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｋ．Ｒ．；Ｋｈａｃｈｉｋ，Ｆ．ルテインは、メスＺｕｃｋｅｒ肥満ラットの酸化ストレスの生物マーカーを変化させるために、α−トコフェロールよりもアスコルビン酸とより頻繁に相互に作用する（Ｌｕｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｏｒｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ  ｔｈａｎ  ｗｉｔｈ  α−ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ  ｔｏ  ａｌｔｅｒ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｆｅｍａｌｅ  Ｚｕｃｋｅｒ  ｏｂｅｓｅ  ｒａｔｓ）Ｊ．Ｎｕｔｒ．２００３，１３３，２８３８〜２８４４）。
【００１０】
アントシアニンは抗酸化ポリフェノールに属し、様々な食品及び飲料に存在する。アントシアニンの摂取は、アテローム性動脈硬化症や心臓血管疾患、癌、及び糖尿病などのいくつかの変性疾患のリスク低下に関係する（Ｊａｙａｐｒａｋａｓａｍ，Ｂ．；Ｓｔｒａｓｂｕｒｇ，Ｇ．Ａ．；Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．ウィタニア（Ｗｉｔｈａｎｉａ  ｓｏｍｎｉｆｅｒａ）からの強力な脂質過酸化阻害剤（Ｐｏｔｅｎｔ  ｌｉｐｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｆｒｏｍ  Ｗｉｔｈａｎｉａ  ｓｏｍｎｉｆｅｒａ）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００４，６０，３１０９〜３１２１）。これらの化合物は、周知のフリーラジカル捕捉剤であり、潜在的な化学予防剤であると報告されている（Ｄｕｔｈｉｅ，Ｇ．Ｇ．；Ｄｕｔｈｉｅ，Ｓ．Ｊ．；Ｋｙｌｅ，Ｊ．Ａ．Ｍ．癌及び心臓疾患における植物ポリフェノール：食事性抗酸化物としての意味合い（Ｐｌａｎｔ  ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｓ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）Ｎｕｔｒ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．２０００，１３，７９〜１０６）。例えば、血清の抗酸化物能力は、イチゴ、チェリー、及び赤ワインの摂取によって増加した（Ｋａｎｇ，Ｓ．Ｙ．；Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．；Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．；Ｂｏｕｒｑｕｉｎ，Ｌ．Ｄ．タルトチェリーのアントシアニンは、ＡｐｃＭｉｎマウスの腫瘍発達を阻害し、ヒト結腸癌細胞の増殖を低下させる（Ｔａｒｔ  ｃｈｅｒｒｙ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｕｍｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ＡｐｃＭｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ）Ｃａｎｃ．Ｌｅｔｔ．２００３，１９４，１３〜１９；Ｖａｎ  Ｖｅｌｄｅｎ，Ｄ．Ｐ．；Ｍａｎｓｖｅｌｔ，Ｅ．Ｐ．Ｇ．；Ｆｏｕｒｉｅ，Ｅ．；Ｒｏｓｓｏｕｗ，Ｍ．；Ｍａｒａｉｓ，Ａ．Ｄ．ヒト血液化学的性質に対するワインの心保護効果（Ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｗｉｎｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｌｏｏｄ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ａｎｎ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００２，９５７，３３７〜３４０；Ｗａｎｇ，Ｈ．；Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．；Ｓｔｒａｓｂｕｒｇ，Ｇ．Ｍ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．Ｃ．；Ｂｏｏｒｅｎ，Ａ．Ｍ．；Ｇｒａｙ，Ｉ．Ｊ．；ＤｅＷｉｔｔ，Ｄ．Ｌ．タルトチェリーからのアントシアニン及びそのアグリコン、シアニジンの、抗酸化物及び抗炎症活性（Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｇｌｙｃｏｎｅ，ｃｙａｎｉｄｉｎ，ｆｒｏｍ  ｔａｒｔ  ｃｈｅｒｒｉｅｓ）Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．１９９９，６２，２９４〜２９６）。最近の研究では、アントシアニン、シアニジン３−グルコシドが、高脂肪食により誘発されたマウスの肥満を低減させることを実証した（Ｅｓｐｉｎ，Ｊ．Ｃ．；Ｓｏｌｅｒ−Ｒｉｖａｓ，Ｃ．；Ｗｉｃｈｅｒｓ，Ｈ．Ｊ．；Ｇａｒｃｉａ−Ｖｉｇｕｅｒａ，Ｃ．アントシアニンをベースにした天然着色剤。食材に対する抗ラジカル活性の新たな源。（Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ−ｂａｓｅｄ  ｎａｔｕｒａｌ  ｃｏｌｏｒａｎｔｓ．Ａ  ｎｅｗ  ｓｏｕｒｃｅ  ｏｆ  ａｎｔｉｒａｄｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ．）Ｊ．Ａｇｒｉ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２０００，４８，１５８８〜１５９２）。したがって、食品中に存在する天然着色剤は、その安全性、栄養的価値、及び治療的価値が原因で、消費者を惹きつけている（Ｍｉｌｌｓｐａｕｇｈ，Ｃ．Ｆ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ；Ｄｏｖｅｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７４；ｐ．２８２）。アントシアニンは広く摂取されているので、これら化合物の追加の生物学的活性は、大きな関心を集めるものである。
【００１１】
いくつかの研究は、脂肪が豊富で繊維が少ない食物が肥満をもたらすことを示唆している。肥満は、脂質の代謝を変化させ、それがインスリン抵抗性に繋がる。肥満条件下では、脂肪組織が大量の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）を生成する。次いでＦＦＡは、グルコースの摂取、グリコーゲンの合成、及びグルコースの酸化を阻害し（Ｓａｌｔｉｅｌ，Ａ．Ｒ．及びＫａｈｎ，Ｃ．Ｒ．（２００１）インスリンのシグナル伝達と、グルコース及び脂質代謝の調節（Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｌｉｐｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）Ｎａｔｕｒｅ  ４１４，７９９〜８０６）、高血糖症及び２型糖尿病をもたらす。２型糖尿病は、益々一般的になりつつある障害であり、世界で約１億５千万人から３億人が罹患しており、次の２５年間で２倍になることが予測される（Ｋｉｎｇ，Ｈ．，Ａｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｅ．，及びＨｅｒｍａｎ，Ｗ．Ｈ．（１９９８）糖尿病の世界的負担、１９９５〜２０２５：罹患率、数値評価、及び予測（Ｇｌｏｂａｌ  ｂｕｒｄｅｎ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９５〜２０２５：ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  ｅｓｔｉｍａｔｅｓ，ａｎｄ  ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２１，１４１４〜１４３１）。最近、食物で誘発される体脂肪蓄積を予防するのに有利になり得る食品であって、糖尿病及び心臓疾患のリスクを低下させる可能性のある食品に、多くの関心が集まっている。
【００１２】
食物摂取の制御に関わるいくつかの生化学的プロセスがある。グルカゴン様ペプチド−１及び−２（ＧＬＰ−１＆−２）を内分泌細胞で合成し、栄養摂取に応答して血液中に放出した。ＧＬＰ−２は、粘膜上皮を広げることによって、栄養素の吸収を高める（Ａｈｒｅｎ，Ｂ．（１９９８）グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）：糖尿病治療で潜在的関心を集める消化管ホルモン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１（ＧＬＰ−１）：ａ  ｇｕｔ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ）ＢｉｏＥｓｓａｙｓ  ２０，６４２〜６５１、及びＤｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００２）グルカゴン様ペプチドの生物学的動作及び治療可能性（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｇｌｕｃａｇｏｎｓ  ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２２，５３１〜５４４）。ＧＬＰ−１は、主に消化管Ｌ細胞で発現し、これは、肝臓によるグルカゴンの分泌及び胃内容排出を阻害し、それによって食物摂取が阻害され、膵臓β細胞によるインスリンの生合成及び分泌が刺激される（Ａｈｒｅｎ，Ｂ．（１９９８）グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）：糖尿病治療で潜在的関心を集める消化管ホルモン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１（ＧＬＰ−１）：ａ  ｇｕｔ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ）ＢｉｏＥｓｓａｙｓ  ２０，６４２〜６５１、及びＤｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００２）グルカゴン様ペプチドの生物学的動作及び治療可能性（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｇｌｕｃａｇｏｎｓ  ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２２，５３１〜５４４）。膵臓β細胞の主な機能は、身体の正常な生理学的グルコース濃度を保持するために、栄養素、ホルモン、及び神経の刺激に応答して生物活性のインスリンを分泌することである（Ｒｏｈｉｔ，Ｎ．Ｋ．（２００４）膵島β細胞（Ｔｈｅ  ｉｓｌｅｔ  β−ｃｅｌｌ）Ｔｈｅ  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３６，３６５〜３７１）。高い血糖値に応答して膵臓β細胞の機能が徐々に低下することにより、インスリンの欠乏が引き起こされ、それが２型糖尿病に繋がる。インスリン抵抗性と、肝臓、筋肉、及び脂肪組織が生理学的用量のインスリンに応答できなくなることによっても、２型糖尿病が引き起こされる（Ｐｉｎｇｅｔ，Ｍ．，及びＢｏｕｌｌｕ−Ｓａｎｃｈｉｓ，Ｓ．（２００２）インスリン分泌異常の生理学的基礎（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ）Ｄｉａｂｅｔ．Ｍｅｔ．２８（補遺６），４Ｓ２１〜４Ｓ３２）。インスリンの欠乏症及び抵抗性は、高脂血症やアテローム性動脈硬化症、及び高血圧症などの健康問題に繋がり（Ｓａｌｔｉｅｌ，Ａ．Ｒ．及びＫａｈｎ，Ｃ．Ｒ．（２００１）インスリンのシグナル伝達と、グルコース及び脂質代謝の調節（Ｉｎ��ｕｌｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｌｉｐｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）Ｎａｔｕｒｅ  ４１４，７９９〜８０６）、しばしば不完全な糖質及び脂質の代謝に結び付けられる（Ｂｒｏｓｃｈｅ，Ｔ．（２００１）糖質又は脂質代謝が不完全な患者からの血清と、正常な代謝値を有する高齢被験者の血清の、プラスマロゲン濃度（Ｐｌａｓｍａｌｏｇｅｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｏｒ  ｌｉｐｉｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｉｎ  ｅｌｄｅｒｌｙ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｒｍａｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｖａｌｕｅｓ）Ａｒｃｈ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ  ３２，２８３〜２９４）。これらの対照系は、複雑な経路で相互に作用し、遺伝的、環境的、及び社会的要因による任意の変化によって、肥満及び糖尿病が引き起こされる（Ｒｏｓｓ，Ｓ．Ａ．Ｇｕｌｖｅ，Ｅ．Ａ．及びＷａｎｇ，Ｍ．（２００４）２型糖尿病の化学及び生化学（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０４，１２５５〜１２８２）。しかし、社会的及び環境的要因から生ずる合併症のいくつかは、運動及び適正な食事によって遅延させ又は予防することができる（Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ，Ｋ．Ｒ．，及びＢａｒｎａｒｄ，Ｒ．Ｊ．（２００５）慢性糖尿病に対する運動及び食事の影響（Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｘｅｒｃｉｓｅ  ａｎｄ  ｄｉｅｔ  ｏｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９８，３〜３０）。疫学的研究では、果物及び野菜が豊富な食事によって、癌、心臓血管疾患、糖尿病、白内障、及び炎症性疾患の罹患率が低下することが示された（Ｗｏｒｌｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｕｎｄ／Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７）食品、栄養、及び癌の予防：世界的展望（Ｆｏｏｄ，ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ：Ａ  ｇｌｏｂａｌ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ）１９９７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｗａｃｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ．；Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９５）栄養及びあなたの健康：アメリカ人に対する食事指針（Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｙｏｕｒ  Ｈｅａｌｔｈ：Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ａｍｅｒｉｃａｎｓ）１９９５，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ．；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（１９９６）健康なアメリカ成人に対する食事指針：栄養委員会からの保健専門家に対する声明（Ｄｉｅｔａｒｙ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｔｈｙ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ａｄｕｌｔｓ：Ａ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｔｈ  ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ��ｏｍｍｉｔｔｅｅ），Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９４，１７９５〜１８００；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９９６）食事、栄養、及び癌予防に関する指針：健康な食品の選択及び身体活動による癌のリスクの低減（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｄｉｅｔ，ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ：ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｆｏｏｄ  ｃｈｏｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．４６，３２５〜３４１；Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（１９９０）食事、栄養、及び慢性糖尿病の予防（Ｄｉｅｔ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）：Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ＷＨＯ  ｓｔｕｄｙ  ｇｒｏｕｐ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  ７９７，ＷＨＯ  Ｇｅｎｅｖａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；Ｗｉｌｌｅｔｔ，Ｗ．Ｃ．（１９９９）２０００年における栄養の目的（Ｇｏａｌｓ  ｆｏｒ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｙｅａｒ  ２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．４９，３３１〜３５２，及びＷｉｌｌｅｔｔ，Ｗ．Ｃ．（１９９８）栄養疫学（Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ）１９９８，Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ）。
【００１３】
最近は、毒性が低く且つ副作用がより少ないと考えられることから、一般に安全であると見なされる（ＧＲＡＳ）植物、果物、及び野菜から得られた天然の血糖降下化合物に対する関心が高まっている。食品中に存在するこれらの生物活性化合物は、遺伝子発現及び細胞現象を変化させることができ（Ｍｉｌｎｅｒ，Ｊ．Ａ．（２００４）生物活性食品成分の分子標的（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｆｏｏｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３４，２４９２Ｓ〜２４９８Ｓ）、その結果、タンパク質及びその機能が変化する。いくつかの研究では、果物及び野菜に存在するフィトケミカルが、有害な健康リスクを改善するのに有益であることを示唆しているが、その事例的な保護効果は十分理解されていない。
【００１４】
サンシュユ（Ｃｏｒｎｕｓ  ｆｒｕｉｔｓ）は、「八味丸」などの、抗糖尿病の伝統的漢方薬に使用される（Ｙａｍａｈａｒａ，Ｊ．；Ｍｉｂｕ，Ｈ．；Ｓａｗａｄａ，Ｔ．；Ｆｕｊｉｍｕｒａ，Ｈ．；Ｔａｋｉｎｏ，Ｓ．；Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，Ｍ．；Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｉ．粗製薬物の生物学的に活性な因子。ストレプトゾトシンによって誘発される実験的糖尿病での、サンシュユの抗糖尿病因子。（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｃｒｕｄｅ  ｄｒｕｇｓ．Ａｎｔｉ−ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｃｏｒｎｉ  ｆｒｕｃｔｕｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ．）薬学雑誌１９８１，１０１，８６〜９０）。本発明者らは、最近、ミズキ（Ｃｏｒｎｕｓ  ｓｐｐ．）果実中のアントシアニンの定量化について報告した（Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．；Ｓｃｈｕｔｚｋｉ，Ｒ．；Ｃｈａｎｄｒａ，Ａ．；Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．ミズキ種のアントシアニンの特徴付け、定量化、及び生物活性（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｉｎ  Ｃｏｒｎｕｓ  Ｓｐｅｃｉｅｓ）Ｊ．Ａｇｒｉ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００２，５０，２５１９〜２５２３）。
【００１５】
ミズキ種の果実は、アントシアニンの豊富な供給源である。西洋及び東洋のコーネリアンチェリー（Ｃｏｒｎｅｌｉａｎ  ｃｈｅｒｒｙ）としても知られるコルヌスマスＬ．（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ  Ｌ．）の果実は、欧州では飲料の調製に使用されている（Ｋｉｍ，Ｄ．Ｋ．；Ｋｗａｋ，Ｊ．Ｈ．コルヌスオフィシナリス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）からのフラン誘導体（Ａ  Ｆｕｒａｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｆｒｏｍ  Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９９８，２１，７８７〜７８９）。伝統的な医薬では、コルヌスオフィシナリス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の果実は、その鎮痛及び利尿活性で知られている（Ｙａｍａｈａｒａ，Ｊ．；Ｍｉｂｕ，Ｈ．；Ｓａｗａｄａ，Ｔ．；Ｆｕｊｉｍｕｒａ，Ｈ．；Ｔａｋｉｎｏ，Ｓ．；Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，Ｍ．；Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｉ．粗製薬物の生物学的に活性な因子。ストレプトゾトシンによって誘発される実験的糖尿病での、サンシュユの抗糖尿病因子。（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｃｒｕｄｅ  ｄｒｕｇｓ．Ａｎｔｉ−ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｃｏｒｎｉ  ｆｒｕｃｔｕｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ．）薬学雑誌１９８１，１０１，８６〜９０）。サンシュユは、アジアの国々では、いくつかの抗糖尿病生薬の主成分の１つでもある（Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．；Ｓｃｈｕｔｚｋｉ，Ｒ．；Ｃｈａｎｄｒａ，Ａ．；Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．ミズキ種のアントシアニンの特徴付け、定量化、及び生物活性（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｉｎ  Ｃｏｒｎｕｓ  Ｓｐｅｃｉｅｓ）Ｊ．Ａｇｒｉ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００２，５０，２５１９〜２５２３）。Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）及びＣ．オフィシナリス（Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）に関するより早期の調査では、どちらも高レベルのアントシアニンを含有することが明らかにされた（Ｂｅｃｋｗｉｔｈ，Ａ．Ｇ．；Ｚｈａｎｇ，Ｙ．；Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．；Ｃａｍｅｒｏｎ，Ａ．Ｃ．；Ｎａｉｒ，Ｍ．Ｇ．ペニセツムセタセウムＣｖｓ．ルブラム及びレッドライディングフット（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ  ｓｅｔａｃｅｕｍ  Ｃｖｓ．Ｒｕｂｒｕｍ  ａｎｄ  Ｒｅｄ  Ｒｉｄｉｎｇ  Ｈｏｏｄ）における光量とアントシアニン生成の関係（Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｌｉｇｈｔ  Ｑｕａｎｔｉｔｙ  ａｎｄ  Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ  ｓｅｔａｃｅｕｍ  Ｃｖｓ．Ｒｕｂｒｕｍ  ａｎｄ  Ｒｅｄ  Ｒｉｄｉｎｇ  Ｈｏｏｄ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００４，５２，４５６〜４６１）。
【００１６】
Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）植物は、タルトチェリー（Ｐ．ｃｅｒａｓｕｓ）に類似した果実を付ける。これは、ミズキ科（Ｃｏｒｎａｃｅａｅ）に属し、欧州及び西アジアを原産とする落葉樹である（Ｍｉｌｌｓｐａｕｇｈ，Ｃ．Ｆ．アメリカ薬用植物（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ）；Ｄｏｖｅｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７４；ｐ２８２）。この種の果実は、いくつかの調合物を作製するためにトルコで使用されてきた。より早期の研究では、コルヌスオフィシナリス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）のアルコール抽出物が、非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）ラットでのＧＬＵＴ  ４  ｍＲＮＡ発現、グルコース輸送体を増加させることを実証した（Ｑｉａｎ，Ｄ．，及びＺｈｕ，Ｑ．（２００１）ハルコガネバナ（Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｓｉｅｂ．ｅｔ  Ｚｕｃｃ）のアルコール抽出物が、２型（非インスリン依存性）糖尿病ラットの骨格筋でのＧＬＵＴ４発現に及ぼす影響（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｏｆ  Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｓｉｅｂ．ｅｔ  Ｚｕｃｃ  ｏｎ  ＧＬＵＴ４  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ  ｉｎ  ｔｙｐｅ  ２（ｎｏｎ−ｉｎｓｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｒａｔｓ）Ｚｈｏｎｇｇｕｏ  Ｚｈｏｎｇｙａｏ  Ｚａｚｈｉ  ２６，８５９〜８６２）。サンシュユは、同様に漢方医学で周知であり、中国ではこの種の果実を使用して、糖尿病を治療する。しかし、抗糖尿病活性を担う活性化合物は、特徴付けられていない。ミシガンで生育したいくつかのミズキ種からの果実に関する、より早期の研究では、Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）が、高濃度のアントシアニンを含有することが明らかにされた（Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．；Ｓｃｈｕｔｚｋｉ，Ｒ．；Ｃｈａｎｄｒａ，Ａ．；及びＮａｉｒ，Ｍ．Ｇ．（２００２）ミズキ種のアントシアニンの特徴付け、定量化、及び生物活性（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｉｎ  Ｃｏｒｎｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．２００２，５０，２５１９〜２５２３）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、インスリン生成、高コレステロール、及び体重に関連した障害の治療に有用な、組成物及び方法を提供することである。詳細には、本発明の目的は、生体内でインスリン生成を増加させるための方法及び組成物を提供することである。他の目的は、下記の記述及び図面から明らかにされよう。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、肥満の治療を必要とする哺乳動物患者の肥満を制御するための方法であって、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法に関する。本発明は特に、ミズキ（Ｃｏｒｎｕｓ）並びに果実中に天然に存在する酸及び糖を実質的に含まないその他の果実からのサプリメントに関する。
【００１９】
本発明は、糖尿病であり且つ糖尿病の処方薬で治療しているヒト患者の肥満を治療するための方法であって、処方薬と併せてアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む有効量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。この組成物は、サプリメント又は医薬品製剤であることが好ましい。
【００２０】
アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、果実、野菜、及び花から単離することが好ましい。アントシアニンは、シアニジン−３−グリコシド、デルフィンジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択することが好ましい。「グリコシド」は、炭水化物分子（糖）を含有する任意の化合物であり、特に、植物中に存在して加水分解により糖及び非糖成分（アグリコン）に変換可能であり、具体的には、含有される糖にちなんでグルコシド（グルコース）、ペントシド（ペントース）、フルクトシド（フルクトース）などと呼ばれるような任意の天然産物である。アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離することが好ましい。アントシアニジン、或いはアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物は、単離され精製されることが好ましい。
【００２１】
本発明は、糖尿病を制御するために、糖尿病の治療を必要とする哺乳動物患者の糖尿病を治療するための方法であって、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。
【００２２】
アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、果実、野菜、及び花から単離することが好ましい。アントシアニンは、シアニジン−３−グリコシド、デルフィニジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択することが好ましい。アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離することが好ましい。しかしアントシアニンは、チェリーやベリーなどの果実から得ることができる。
【００２３】
本発明は、高血糖症の治療を必要とする哺乳動物患者の高血糖症を治療し又は制御するための方法であって、アントシアニン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、特にサプリメントとして投与するステップを含む方法にも関する。
【００２４】
アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、果実、野菜、及び花から単離することが好ましい。アントシアニンは、シアニジン−３−グリコシド、デルフィニジン−３−グリコシド、ペラルゴニジン−３−グリコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択することが好ましい。アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離することが好ましい。アントシアニジン、アントシアニン、ウルソール酸、ベツリン酸、及びこれらの混合物は、単離され精製されることが好ましい。
【００２５】
本発明は、疾患として、肥満、糖尿病、又は高血糖症の治療に使用される組成物であって、ある期間にわたる前記疾患の治療のための日用量単位のアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸、或いはこれらの混合物と、医薬品担体とを含む組成物にも関する。
【００２６】
アントシアニンは、シアニジン−３−グルコシド、デルフィニジン−３−グルコシド、ペラルゴニジン−３−グルコシド、及びこれらの混合物からなる群から選択することが最も好ましい。アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、果実、野菜、又は花から単離することが好ましい。アントシアニン、ウルソール酸、又はベツリン酸は、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）から単離することが好ましい。
【００２７】
本発明は、脂質障害、高脂血症、又は低ＨＤＬを治療する必要のある哺乳動物患者の、脂質障害、高脂血症、又は低ＨＤＬを治療し又は制御するための方法であって、アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる化合物を含む治療上有効な量の組成物を、特にサプリメントとして、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。
【００２８】
本発明は、高コレステロール血症の治療を必要とする哺乳動物患者の、高コレステロール血症を治療し又は制御するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる化合物を含む治療上有効な量の組成物を、特にサプリメントとして、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。
【００２９】
本発明は、高グリセリド血症の治療を必要とする哺乳動物患者の、高グリセリド血症を治療し又は制御するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、特にサプリメントとして、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。
【００３０】
本発明は、異脂肪血症及び／又は低ＨＤＬコレステロールの治療を必要とする哺乳動物患者の、異脂肪血症及び／又は低ＨＤＬコレステロールを治療し又は制御するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、特にサプリメントとして、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。
【００３１】
本発明は、アテローム性動脈硬化症の治療を必要とする哺乳動物患者のアテローム性動脈硬化症を治療するための方法であって、単離されたアントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物からなる群から選択された化合物を含む治療上有効な量の組成物を、特にサプリメントとして、前記患者に投与するステップを含む方法にも関する。
【００３２】
化合物は、コルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）であることが最も好ましい。アントシアニン、アントシアニジン、ウルソール酸、ベツリン酸、又はこれらの混合物は、この果実又はその他の果実から単離され精製されることが好ましい。
【００３３】
治療上活性な本発明の化合物の代謝産物は、特許請求の範囲に記載される親化合物の範囲内である。患者に投与されるとき又は患者に投与された後に、特許請求の範囲に記載される化合物に変換される化合物であるプロドラッグも、特許請求の範囲に記載される活性化合物の範囲内にある。
【００３４】
投与及び用量範囲
哺乳類、特にヒトに、有効用量の本発明の化合物を提供するために、任意の適切な投与経路を用いることができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、肺、鼻などを用いることができる。剤形には、錠剤、トローチ、分散体、懸濁体、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルなどが含まれる。化合物は、経口投与することが好ましい。
【００３５】
用いられる有効投薬量の活性成分は、用いられる特定の化合物、投与形態、治療される状態、及び治療される状態の重症度に応じて変えることができる。そのような投薬量は、当業者が容易に確認することができる。
【００３６】
肥満、糖尿病、及び／又は高血糖症、或いはその他の疾患を治療し又は予防する場合、本発明の化合物を、動物の体重の１ｋｇ当たり約０．１ｍｇから約１００ｍｇの日用量で投与したときに、好ましくはこの用量を１日１回与えるものとして、又はこの用量を１日２回から６回に分けて与えるものとして、或いは徐放性剤形として投与したときに、一般に満足のいく結果が得られる。ほとんどの大型哺乳類では、全日用量が約１．０ｍｇから約１０００ｍｇであり、好ましくは約１ｍｇから約５０ｍｇである。７０ｋｇの成人の場合、全日用量は、一般に約７ｍｇから約３５０ｍｇになる。この投薬計画は、最適な治療応答が得られるように調節することができる。
【００３７】
本発明の別の態様は、医薬品組成物、及び医薬品として許容される担体を提供する。本発明の医薬品組成物は、特許請求の範囲に記載された化合物、又は医薬品として許容される塩、又はそのプロドラッグを活性成分として、並びに医薬品として許容される担体、及び任意選択でその他の治療成分を含む。「医薬品として許容される塩」という用語は、無機塩基又は酸と有機塩基又は酸を含めた医薬品として許容される無毒性の塩基又は酸から調製された塩を指す。
【００３８】
組成物には、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内、及び静脈内を含む）、眼球（眼）、肺（鼻又は頬側吸入）、又は鼻投与に適した組成物が含まれるが、任意の所与の場合に最も適切な経路は、治療される状態の性質及び重症度に、また活性成分の性質に左右されることになる。これらは、単回剤形で都合良く与えることができ、薬学分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。
【００３９】
実用の際には、従来の医薬品配合技法に従い、これらの化合物を、均質混合物の活性成分として、医薬品担体と組み合わせることができる。担体は、投与、例えば経口又は非経口（静脈内を含む）に望まれる製剤の形に応じて、広く様々な形をとることができる。経口剤形用組成物の調製では、例えば懸濁体やエリキシル、及び溶液などの経口液体製剤の場合、例えば水やグリコール、油、アルコール、香料、保存剤、着色剤などの通常の医薬品媒体のいずれかを用いることができ、或いは、例えば粉末や、硬質及び軟質カプセル、錠剤などの経口固体製剤の場合には、デンプンや糖、微結晶質セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体を用いることができ、液体製剤よりも固体経口製剤が好ましい。
【００４０】
このような投与形態のため、固体医薬品担体が明らかに用いられる錠剤及びカプセルが、最も有利な経口単位剤形になる。望みに応じて、錠剤を、標準的な水性又は非水性技法によりコーティングすることができる。そのような組成物及び製剤は、活性化合物を少なくとも０．１％含有すべきである。これらの組成物中の活性化合物のパーセンテージは、当然ながら変えることができ、単位重量の約２％から約６０％の間であることが好都合である。そのような治療上有用な組成物中の、活性化合物の量は、有効投薬量が得られるような量である。活性化合物は、例えば液滴又はスプレーのように、鼻腔内投与することもできる。
【００４１】
錠剤、丸薬、カプセルなどは、トラガカントゴム、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチやジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；及びマルトデキストリンやラクトース、又はサッカリンなどの甘味剤を含有してもよい。単位剤形がカプセルである場合は、上述のタイプの材料の他に、脂肪油などの液体担体を含有することができる。
【００４２】
様々なその他の材料を、コーティングとして、又は剤形の物理的形態を変化させるために含めることができる。例えば錠剤は、シェラック、糖、又はこの両方でコーティングすることができる。シロップ又はエリキシルは、活性成分の他に、甘味剤としてスクロースを、保存剤としてメチル及びプロピルパラベンを、またチェリーやオレンジ風味の香料を含有することができる。
【００４３】
化合物は、非経口投与することもできる。これら活性化合物の溶液又は懸濁液は、ヒドロキシル−プロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中で調製することができる。分散液は、油中において、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物中で調製することもできる。貯蔵及び使用の通常の条件下、これらの製剤は、微生物の成長を妨げるために保存剤を含有する。
【００４４】
注射可能な使用に適した医薬品形態には、滅菌水溶液又は分散液と、滅菌注射液又は分散液の即時製剤用の滅菌粉末が含まれる。全ての場合において、この形態は滅菌状態になければならず、注射針から容易に出て行く程度に流動的でなければならない。この形態は、製造及び貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌や真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、これらの適切な混合物、及び植物油を含有する溶媒又は分散媒体にすることができる。
【００４５】
化合物は、疾患又は状態の治療、予防、抑制、又は寛解に役立てることもできるその他の薬物と併せて使用することができる。そのようなその他の薬物は、化合物と同時に又は逐次に、ある経路によって且つそれに一般に使用される量で、投与することができる。化合物を、１種又は複数のその他の薬物と同時に使用する場合、そのようなその他の薬物及び化合物を含有する単位剤形の医薬品組成物が好ましい。しかし併用療法には、式Ｉの化合物と、１種又は複数のその他の薬物とを、異なる重複スケジュールで投与する療法も含まれる。１種又は複数のその他の活性成分と併せて使用する場合、本発明の化合物及びその他の活性成分は、それぞれを単独で使用する場合よりも、低い用量で使用できるとも考えられる。したがって本発明の医薬品組成物は、化合物の他に１種又は複数のその他の活性成分を含有するものを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
本発明は、アントシアニン、シアニジン−３−グルコシド、デルフィニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−ガラクトシド、及びペラルゴニジン−３−ガラクトシダーゼ；アントシアンジン、シアニジン、デルフィニジン、ペラルゴニジン、マルビジン、及びペツニジンが、生体外でげっ歯類膵臓β細胞（ＩＮＳ−１  ８１３／３２）を刺激できるかどうかについて開示し、実証している。化合物を、４及び１０ｍＭのグルコース濃度の存在下で試験した。シアニジン−３−グルコシド及びデルフィニジン−３−グルコシドは、４及び１０ｍＭのグルコース濃度で試験がなされたアントシアニン及びアントシアニジンの中で、最も有効なインスリン分泌促進物質であった。ペラルゴニジン−３−ガラクトシドは、主要アントシアニン及びそのアグリコン、ペラルゴニジンの１種であり、４ｍＭのグルコース濃度でインスリン分泌に１．４倍の増加を引き起こした。試験がなされた残りのアントシアニン及びアントシアニジンは、４及び１０ｍＭのグルコース濃度でインスリンに対してごく僅かな効果を発揮した。
【実施例】
【００４７】
インスリン刺激の例
材料及び方法
化学物質。ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及びＲＰＭＩ−１６４０培地をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｄ，ＮＹ）から得た。使用した全ての有機溶媒は、ＡＣＳ試薬級であった。ＨＥＰＥＳ、ペニシリン−ストレプトマイシン、グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエタノール、トリプシン−ＥＤＴＡ、ＢＳＡ（ウシ、アルブミン；ＲＩＡ級）、フォリン−シオカルト試薬、、及び緩衝液の調製に使用される化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓｅ，ＭＯ）から購入した。アッセイで使用されるアントシアニン、シアニジン、デルフィニジン、ペラルゴニジン、マルビジン、及びペツニジンは、Ｃｈｒｏｍａｄｅｘ（Ｌａｇｕｎａ  Ｈｉｌｌｓ，ＣＡ）から購入した。
【００４８】
アントシアニン。デルフィニジン−３−グルコシドを、Ｃ．オフィシナリス（Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の果実から精製した。シアニジン−３−ガラクトシド及びペラルゴニジン−３−ガラクトシドは、Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）の果実から単離した。本発明の研究で使用される純粋なシアニジン−３−グルコシドは、本発明者らが−２０℃で貯蔵したものから得た。
【００４９】
アントシアニンの単離及び精製。サンシュユを水（ｐＨ＝３）とブレンドし、濾過した。濾液を、カラム内のＸＡＤ−１６ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ樹脂に通し、吸着されたアントシアニンを含むこの樹脂を、水で繰り返し洗浄した。次いでＸＡＤ−１６樹脂を酸性ＭｅＯＨ（ｐＨ＝５）で溶離し、得られた溶液を減圧下で濃縮して、粗製アントシアニン画分を得た。この画分を、勾配条件下、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（ｐＨ＝３）を使用してＭＰＬＣカラム（Ｃ１８）により精製した。アントシアニンをＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（６５：３５、ｖ／ｖ）溶媒系で溶離した。化合物の純度を、勾配条件下でＣａｐｃｅｌｌ  Ｃ１８分析カラムを使用して、ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）によりチェックした。使用した溶媒は、Ａ：ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ（９９．９：０．１；ｖ／ｖ）及びＢ：Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＮ：ＣＨ３ＣＯＯＨ：ＴＦＡ（５０．４：４８．５：１．０：０．１；ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）であった。勾配は、０．８ｍｌ／分の流量で、２６分で２０％Ｂから６０％Ｂに、３０分で２０％Ｂになった。ピークを、ＰＤＡを使用して５２０ｎｍで検出した。
【００５０】
インスリン分泌研究。ＩＮＳ−１  ８３２／１３細胞（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｎｅｗｇａｒｄ博士、Ｄｕｋｅ大学、ＮＣから善意で提供された）を、１１．１ｍＭグルコースを含有し且つ１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ストレプトマイシン、４ｍＭグルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、及び５０μＭ２−メルカプトエタノールで補われたＲＰＭＩ１６４０培地において、３７℃の５％ＣＯ２／空気中で日常的に培養した。細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡの脱離の後に、毎週植え次いだ。静的分泌研究では、細胞を、１ウェル当たり０．６４×１０６細胞の密度で２４ウェルプレート上に蒔き、２４時間成長させた。次いでこれらの細胞を、４ｍＭグルコース及び上述のサプリメントを含有するＲＰＭＩ−１６４０で、さらに２４時間培養した。次いで細胞を、４ｍＭグルコース及び０．１％ＢＳＡを含有するクレブスリンガー重炭酸緩衝液（ＫＲＢＢ）中で３０分間、２回インキュベートした。細胞を、ＫＲＢＢで素早く洗浄し、４又は１０ｍＭグルコースを含有するＫＲＢＢ中で、指示されるアントシアニン又はアントシアニジンと共に又は無しで、６０分間インキュベートした。次いでインスリン放出を定量するために、培地を除去した。次いで細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、１Ｍ  ＮａＯＨに溶解した。次いで細胞タンパク質濃度を、ローリーアッセイにより決定した。アントシアニン及びアントシアニジンをＤＭＳＯに溶解して、所望の濃度を得た。ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％であった。細胞によって培地に分泌されたインスリンは、ラジオイムノアッセイにより定量し、総細胞タンパク質量に対して規格化した。
【００５１】
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）。ＲＩＡ用のキットを、ＬＩＮＣＯ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．（Ｓｔ  Ｃｈａｒｌｅｓ，ＭＯ）から購入し、このアッセイを、製造業者の指示に従い実施した。簡単に言うと、インスリン標準物質０．１〜１０ｎｇ（１００μｌ）を、１２×７５ｍｍの試験管に添加した。同様に、インスリン分泌研究からのサンプル（２５μｌ）も、試験管に添加した。この試験管に、一定分量（７５μｌ）のアッセイ緩衝液を添加した。次いで１２５Ｉで標識したインスリン（１００μｌ）を、各試験管に添加した。１００μＬの抗ラットインスリン抗体の一定分量を試験管に添加し、混合し、４℃で２４時間インキュベートし、さらに１ｍｌの一定分量の沈殿試薬と共に、４℃で２０分間インキュベートして、抗体に結合したインスリンを沈殿させた。次いで試験管を遠心分離にかけ、γ計数器を使用して放射能を測定した。
【００５２】
ローリータンパク質アッセイ。アッセイウェル内のタンパク質の量を、ローリー法によって決定した。ローリーアッセイ溶液は、ローリー溶液、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（１％）、及び酒石酸ナトリム（１％）を一緒にすることによって調製した。簡単に言うと、タンパク質サンプル（１００μｌ）とローリー混合物（１ｍＬ）とを試験管（１２×７５）内で混合した。フォリン−シオカルト試薬（１００μｌ）をこれらの試験管に添加し、混合し、室温で３０分間インキュベートした。得られる溶液の光学密度を、ＵＶ分光光度計を使用して７００ｎｍで読み取った。
【００５３】
サンシュユの調査では、サンシュユ中の主な生物活性成分がシアニジン、デルフィニジン、及びペラルゴニジングリコシドであることが示された。したがって、抗糖尿病製剤でのサンシュユの事例的使用を実証するために、膵臓β細胞を使用したこれらアントシアニン及びそのアグリコンのインスリン分泌能力が、注目を集めた。ペツニジン、マルビジン、及びペオニジンアグリコンは、その他の果実で豊富であるので、このアッセイに含まれた。
【００５４】
アントシアニンは水溶性化合物である。Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）果実の水性抽出物は、糖、バイオフラボノイド、及びアントシアニンを含有し、したがってＸＡＤ−１６樹脂により分画された。樹脂から溶離された、結果的に得られるアントシアニン画分を、ＭＰＬＣにより精製して、純粋なアントシアニンを得た。ＩＮＳ−１  ８３２／１３細胞によるグルコース誘発性のインスリン生成を、４、１０、及び１６ｍＭのグルコース濃度で決定し、インスリン分泌は、グルコース濃度１０ｍＭで誘導期に達したことが見出された（データは図示せず）。４ｍＭレベルのグルコース濃度は、ヒトの正常なグルコース濃度を表している。１０ｍＭのグルコースでの、細胞によるタンパク質１ｍｇ当たりのインスリン分泌は、４ｍＭのグルコース濃度でのインスリン分泌と比べた場合に３倍高かった。
【００５５】
アントシアニン及びアントシアニジンを、細胞成長培地中で、４及び１０ｍＭのグルコース負荷で試験した。アントシアニン及びアントシアニジンは、最初に５０μｇ／ｍＬの濃度でアッセイにかけた。アントシアニン、シアニジン３−グルコシドは、タンパク質９ｎｇ／ｍｇによって、グルコース４ｍＭでインスリン分泌の増加を示したのに対し（１．３倍）、１０ｍＭのグルコース濃度では、１．４３倍（１１９ｎｇ／ｍｇタンパク質）だけインスリン分泌を高めた（図２Ａ）。デルフィニジン−３−グルコシドは、試験がなされた最も活性なアントシアニンであり、４ｍＭのグルコース濃度でインスリン分泌の１．８倍の増加（４９ｎｇ／ｍｇタンパク質）を示した。しかし１０ｍＭのグルコースでは、インスリン生成が、わずか１．４倍（１１３ｎｇ）の増加（図２Ａ）であることが示された。このアッセイにおいて、４及び１０ｍＭのグルコース濃度で細胞により分泌されたインスリンは、それぞれタンパク質１ｍｇ当たりインスリンが２７及び８３ｎｇであった。アントシアニン、シアニジン−３−ガラクトシド、及びペラルゴニジン−３−ガラクトシドは、４ｍＭのグルコース濃度でインスリン分泌を増加させなかった。しかしシアニジン−３−ガラクトシドは、１０ｍＭのグルコース濃度で、１７ｎｇ／ｍｇタンパク質のインスリン増加（１．２倍）を示した（図３）。ペラルゴニジン−３−ガラクトシダーゼは、サンプルに限りがあるので１回だけ試験をした。
【００５６】
アントシアニン、シアニジン−３−グルコシドについて、５、１０、５０、１００、及び２５０μｇ／ｍＬ濃度での用量依存性インスリン分泌の評価をした。このアッセイで使用されるグルコース濃度は、ヒトの正常なグルコース濃度を表す４ｍＭレベルであった。この濃度で、未処理の細胞は、３３ｎｇインスリン／ｍｇタンパク質を分泌した。シアニジン−３−グルコシドで処理した細胞によって分泌されたインスリンは、５μｇ／ｍＬで、タンパク質１ｍｇ当たりインスリン４６ｎｇであった。しかし、化合物１の濃度が１０、５０、１００、及び２５０μｇ／ｍＬでは、インスリン分泌に有意な差はなかった。用量依存性アッセイを実施するための、デルフィニジン−３−グルコシドの十分な供給はなかった。
【００５７】
アントシアニジンを、５０μｇ／ｍＬ濃度でアッセイにかけた。シアニジン−３−グルコシドのアグリコン、シアニジンは、グルコース４ｍＭでインスリン分泌を１．５倍（２９ｎｇ／ｍｇタンパク質）高めたのに対し、グルコース１０ｍＭでは、８８ｎｇ／ｍｇタンパク質を分泌した（図２Ｂ）。このアッセイの組において、４及び１０ｍＭのグルコースでは、未処理の細胞が、それぞれ１９及び８３ｎｇインスリン／ｍｇタンパク質を分泌した。アグリコンデルフィニジンは、４ｍＭのグルコース濃度で６ｎｇ／ｍｇタンパク質だけインスリン分泌の増加を示したが、これは有意なものではなかった。デルフィニジンは、１０ｍＭのグルコースでは、グルコース誘導性のインスリン分泌を示さなかった（図２Ｂ）。ペラルゴニジンは、最も活性なアントシアニンであり、４及び１０ｍＭのグルコースでそれぞれ４９（１．４倍）及び９１（１．２倍）ｎｇインスリン／ｍｇタンパク質を分泌した（図３）。アグリコン、ペツニジンは、４ｍＭのグルコース濃度で４ｎｇインスリン／ｍｇタンパク質だけ分泌を増加させた。しかしマルビジンは、未処理の細胞についてはインスリン分泌の増加を示さなかった。
【００５８】
結果は、アントシアニンとアントシアニジンの両方が、インスリン分泌促進物質であることを示唆した。これらの中で、デルフィニジン−３−グルコシドが最も強力であり、未処理の細胞に比べ、４及び１０ｍＭのグルコース濃度でインスリン分泌を著しく誘発させた。シアニジン−３−グリコシドは、より低いグルコース濃度ではデルフィニジン−３−グルコシドよりも活性が低かったが、より高いグルコース濃度では、より活性であった。ガラクトシドの中でもペラルゴニジン−３−ガラクトシドは、研究された４及び１０ｍＭのグルコース濃度でインスリン分泌を誘発しなかったのに対し、シアニジン−３−ガラクトシドは、インスリン分泌の著しい増加を示した。研究されたアントシアニンがインスリンを分泌する能力は、その増大順に、デルフィニジン−３−グルコシド＞シアニジン−３−グルコシド＞ペラルゴニジン−３−ガラクトシドであった。これは、アントシアニンのＢ環のヒドロキシル基の数が、インスリンを分泌するその能力に重要な役割を演ずることを示した。試験をしたアントシアニンの中で、ペラルゴニジンは、４ｍＭのグルコースのときに最も活性であった。その他のアグリコンは、研究された４又は１０ｍＭのグルコース濃度で著しいインスリンの分泌を可能にしなかった。
【００５９】
結果は、果物及び野菜から単離され精製されたアントシアニン及びアントシアニジンが、糖尿病の治療に有用であることを示唆している。
【００６０】
肥満の治療の実施例
Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）果実からのアントシアニン（図９）、ウルソール酸、及びベツリン酸を精製し、高脂肪の食餌の摂取からもたらされる肥満及びインスリン抵抗性を予防する薬剤として、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊトランスジェニックマウスを使用することによりその効力を評価した。マウスには、最初に４週間にわたって高脂肪の食事を与え、次いで続く８週間は、試験化合物を含有する高脂肪の食餌に切り替えた。グルコース負荷試験（ＧＴＴ）では、高脂肪の食餌の対照マウスがインスリン抵抗性を持ち、アントシアニン及びウルソール酸で治療したマウスはインスリン抵抗性を克服したことが明らかになった。治療期間中の、高脂肪の食餌（６０％  ｋｃａｌ）を与えた対照マウスの平均体重増加は、９．７６±０．５５ｇであるのに対し、アントシアニン、ベツリン酸、及びウルソール酸で治療したマウスは、それぞれ７．４１±０．９３ｇ、７．７３±０．４４ｇ、及び８．７８±０．９６ｇであった。アントシアニン及びベツリン酸で治療したマウスのコレステロール値は、対照動物よりも著しく低下した。アントシアニン及びベツリン酸で治療した動物の血漿インスリン濃度は、それぞれ５６７±３２．３６及び４６０．８６±９３．６８ｎｇ／ｍＬであるのに対し、ウルソール酸で治療した動物は、対照動物に比べて５２．２５±８．８４ｎｇ／ｍＬのインスリンを示した。この生体内研究では、アントシアニンが優れたインスリン分泌促進物質であり、総コレステロールを低下させることに加えて、肥満及びインスリン抵抗性の予防に有益となり得ることが確認された。
【００６１】
実験手順
アントシアニンの精製：シアニジンガラクトシド、ペラルゴニジンガラクトシド、及びデルフィニジンガラクトシドを、既に開示したように、Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）果実からのアントシアニンの純粋な混合物として単離した。簡単に言うと、種子を分離し、得られた果肉を水（ｐＨ＝３）と混合し、濾過した。得られた濾液をＸＡＤ−１６  ＡＭＢＥＲＬＩＴＥ樹脂に吸着させ、水で繰り返し洗浄して、糖及びその他の有機酸を除去した。次いで吸着されたアントシアニンを、酸性ＭｅＯＨ（ｐＨ＝３）で溶離した。このように得られたアントシアニン混合物を、勾配条件下でＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（ｐＨ＝３）を使用する中圧液体クロマトグラフィ（ＭＰＬＣ）カラム（Ｃ１８シリカ）により精製した。溶媒系ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（６５：３５、ｖ／ｖ）で溶離した画分を収集し、真空中で蒸発乾燥した。アントシアニンの純度は、Ｃａｐｃｅｌｌ  Ｃ１８分析カラムを使用してＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）により確認し、５２０ｎｍ（ＰＤＡ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）で検出した。
【００６２】
ベツリン酸の単離：Ｃ．ｍａｓ（Ｃ．マス）果実（５ｋｇ）からの種子（７００ｇ）を分離し、凍結乾燥し、ｎ−ヘキサン（３×１Ｌ）、酢酸エチル（３×１Ｌ）、及びメタノール（３×１Ｌ）で続けて抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物（３．０ｇ）を、ｎ−ヘキサン及びＥｔＯＡｃを移動相として用いて勾配条件下でシリカゲルＭＰＬＣにより精製した。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７：３）溶離から収集された画分を蒸発乾燥し、ＭｅＯＨからの結晶化によってベツリン酸（２．５ｇ）が得られた。
【００６３】
ウルソール酸の単離：凍結乾燥した果肉及び皮を、ｎ−ヘキサン（３×１Ｌ）、ＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）、及びＭｅＯＨ（３×１Ｌ）で続けて抽出した。ＥｔＯＡｃ（３．５ｇ）抽出物を、ｎ−ヘキサン及びＥｔＯＡｃ勾配を使用したカラムクロマトグラフィにより精製した。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７：３）溶離液を真空中で蒸発乾燥し、ＭｅＯＨから得られた残留物の結晶化によって、ウルソール酸（２．２ｇ）が得られた。ウルソール酸とベツリン酸の両方を、１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル実験によって特徴付けた（Ｗｅｒｎｅｒ，Ｓ．，Ｎｅｂｏｊｓａ，Ｓ．，Ｒｏｂｅｒｔ，Ｗ．，Ｒｏｂｅｒｔ，Ｓ．，及びＯｌａｆ，Ｋ．（２００３）オレアノール酸、１８α−オレアノール酸、ウルソール酸、及びこれらの１１−オキソ誘導体の、１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲ共鳴の完全帰属（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｓ  ｏｆ  １Ｈ  ａｎｄ  １３Ｃ  ＮＭＲ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅｓ  ｏｆ  ｏｌｅａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ，１８α−ｏｌｅａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ，ｕｒｓｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  １１−ｏｘｏ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）  Ｍａｇ．Ｒｅｓ．Ｃｈｅｍ．４１、６３６〜６３８）。
【００６４】
動物及び食餌：４週齢のオスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ，ＵＳＡ）から購入した。これらのマウスを個々に、制御温度下（７０°Ｆ）で且つ１２時間の明暗サイクルで収容した。マウス（ｎ＝４０）は、５日間にわたり、水及び実験室用の精製されていない食餌を自由に摂ることができた。順化後、研究のために、マウスを無作為にグループ１〜５（ｎ＝８）に分けた。実験は、ミシガン州立大学（Ｅａｓｔ  Ｌａｎｓｉｎｇ，ＭＩ）の大学実験動物資源局（ＵＬＡＲ）の倫理指針に従って実施した。１０％ｋｃａｌ（普通）及び６０％ｋｃａｌ（高脂肪）の食餌はＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）から購入した。食餌の組成を表１に示す。
表１．普通食（１０５ｋｃａｌ）及び高脂肪食（６０％ｋｃａｌ）の組成
【表１】
2008508284.tif 000002
【００６５】
対照は、グループ１及び２であり、研究の全体を通してこれらに普通食（１０％ｋｃａｌ）及び高脂肪食（６０％ｋｃａｌ）をそれぞれ与えた。食物は、純粋なアントシアニン混合物１ｇ、即ち高脂肪の食餌１ｋｇ当たりベツリン酸及びウルソール酸をそれぞれ５００ｍｇ混合することによって、各治療ごとに別々に調製した。治療グループ３〜５には、最初に４週間にわたって高脂肪の食餌を与え、次いでアントシアニン、ベツリン酸、又はウルソール酸を含有する食餌に切り替えた。食物は、脂肪又は化合物の酸化を避けるために、３日おきに交換した。各動物ごとの、毎日の食物摂取量（図１）及び毎週の体重を、研究の全体を通して決定した（図２Ａ〜Ｃ）。
【００６６】
血清、肝臓、及び脂肪組織の収集。食餌の供給は、１２週間後に停止した。次いで動物に、イソフルランを使用して麻酔をかけ、屠殺し、心臓穿刺によって血液をヘパリン化チューブに収集した。血漿を、４℃で１０分間、１６００×ｇでの遠心分離によって分離し、すぐに凍結して、使用まで−２０℃で貯蔵した。肝臓及び精巣上体の白色脂肪組織（ＷＡＴ）を、解剖学的標識に従って収集し、計量し、すぐに液体窒素中で凍結させた。四肢の筋肉も収集し、液体窒素中で凍結させた。膵臓を収集し、最適切断温度（Ｏ．Ｃ．Ｔ）で貯蔵し（Ｓａｋｕｒａ  Ｆｉｎｅｔｅｋ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）、液体窒素中で凍結させた。次いで全ての組織を液体窒素から移し、分析まで−８０℃で貯蔵した。
【００６７】
グルコース負荷試験（ＧＴＴ）。グルコース負荷試験は、補充の６週間後に、各グループ（ｎ＝５）からの５匹の動物に対して行った。血糖値を、試験片（Ｆｒｅｅ  Ｓｔｙｌｅ，ＴｈｅｒａＳｅｎｓｅ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）を使用して、Ｆｒｅｅ  Ｓｔｙｌｅ  Ｆｌａｓｈ（ＴｈｅｒａＳｅｎｓｅ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）手持ち式グルコメータにより時間０（分）で測定した。ＧＴＴでは、体重１ｋｇ当たりグルコース２ｇを含有する滅菌溶液を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。尾静脈血を収集し、グルコース濃度を５、１０、１５、３０、６０、及び９０分でそれぞれ測定した。血糖値を、時間に対してプロットした（図３）。
【００６８】
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）。血漿インスリン濃度を、ＬＩＮＣＯ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．（Ｓｔ  Ｃｈａｒｌｅｓ，ＭＯ）から購入したラットインスリンＲＩＡキットで測定した。インスリン標準物質（１００μｌの一定分量）を、１２×７５ｍｍの試験管にピペット分注した。０．１〜１０ｎｇ／ｍＬに及ぶ、合計で１０種のインスリン濃度を使用して、標準曲線を決定した。血漿サンプル（一定分量１〜２５μｌ）を試験管に添加し、アッセイ緩衝液を添加して、全サンプル体積を１００μｌにした。１２５Ｉで標識したインスリン及び抗ラットインスリン抗体（それぞれ１００μＬ）を試験管に添加し、混合し、４℃でインキュベートした。２４時間後、沈殿試薬（１ｍＬ）を添加し、再び４℃で２０分間インキュベートして、抗体に結合したインスリンを沈殿させた。次いで試験管を、２０分間３０００ｇで遠心分離にかけ、デカントし、γ計数器を使用して放射能を測定した。
【００６９】
血漿コレステロールの決定：総血漿コレステロールを、総コレステロールに関して確立された標準的な分析プロトコルに従って、ミシガン州立大学獣医学部、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎｉｍａｌ  ＨｅａｌｔｈのＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにより分析した。
【００７０】
結果及び考察
セイヨウサンシュユとしても知られるコルヌスマス（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ）果実は、タルトチェリー（Ｐ．ｃｅｒａｓｕｓ）に類似している。この植物のフィトケミカル試験は、主要なアントシアニンとして、ペラルゴニジンガラクトシド、シアニジンガラクトシド、及びデルフィニジンガラクトシドを（Ｓｅｅｒａｍ，Ｎ．Ｐ．，Ｓｃｈｕｔｚｋｉ，Ｒ．，Ｃｈａｎｄｒａ，Ａ．，及びＮａｉｒ，Ｍ．Ｇ．（２００２）ミズキ（Ｃｏｒｎｕｓ）種のアントシアニンの特徴付け、定量化、及び生物活性（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ  ｉｎ  Ｃｏｒｎｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．５０，２５１９〜２５２３）、またウルソール酸やベツリン酸などのトリテルペノイドをもたらした。トランスジェニックモデルマウスは、代謝及び内分泌障害を研究するためのモデルとして定期的に用いる。使用したＣ５７ＢＬ／６Ｊモデルマウスは、レプチン受容体変異にとって同種接合であり、過食症、肥満、高インスリン血症、及び高血糖症を発症する（Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｄ．（１９７８）肥満及び糖尿病：マウスにおいて糖尿病−肥満症候群を引き起こす２つの変異遺伝子（Ｏｂｅｓｅ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｔｗｏ  ｍｕｔａｎｔ  ｇｅｎｅｓ  ｃａｕｓｉｎｇ  ｄｉａｂｅｔｅｓ−ｏｂｅｓｉｔｙｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ）Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  １４，１４１〜１４８）。したがって、マウスには、Ｃ．マス（Ｃ．ｍａｓ）から精製されたアントシアニン、ベツリン酸、及びウルソール酸を与えて、食餌誘導性の肥満及びインスリン抵抗性を予防する際のその効力を評価した。動物には、高脂肪の食餌を４週間与え、その後に８週間、高脂肪の食餌に組み込んだ化合物での治療を行った。対照グループの動物には、普通食又は高脂肪食のいずれかを与えた。
【００７１】
体重及び食物摂取量。グループ１の動物に関する食物摂取量は、最初の３週間が約４．５ｇであり、次いで１日当たり約３．５ｇに減少し（図１）、実験が終わるまで安定したままであった。グループ２の動物に関する食物摂取量は、実験全体を通して安定しており、１日当たり約２．８ｇであった（図１）。この結果から、試験化合物は、動物の食物摂取量に影響を及ぼさなかったことが明らかである。グループ３〜５の動物による食物摂取量も、実験全体を通して約２．８ｇであった（図１）。
【００７２】
グループ１（普通食）及び２（高脂肪食）の動物の体重は著しく異なっており、その平均体重はそれぞれ３１．５ｇ及び３６．９１ｇであった。化合物１（グループ３）、２（グループ４）、及び３（グループ５）で処理した高脂肪の食餌の動物は、それぞれ３４．１９ｇ、３３．５４ｇ、及び３４．８９ｇの重さであった（図２Ａ〜図２Ｃ）。グループ１及び２の動物に関する実験期間（１２週間）中の全体重増加は、それぞれ１３．９４ｇ及び１８．９８ｇであった。同様に、グループ３、４、及び５の動物は、それぞれ体重が１５．９１ｇ、１５．１６ｇ、及び１７．４５ｇ増加した。治療期間中の、これらの動物により得られた体重増加は、それぞれ７．４１ｇ、７．７３ｇ、及び８．７８グラムであるのに対し、グループ１及び２の対照は、体重増加がそれぞれ６．６３ｇ及び９．７６ｇであることを示した。
【００７３】
グルコース負荷試験。グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を、グルコース溶液（２ｇ／ｋｇ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により実施した。グルコースを注射した動物の血糖値は、５、１０、１５、３０、６０、及び９０分間隔で尾静脈から血液を引き出すことにより決定した。これらのグループの中で、０時間での血糖値は、ほとんど同一であった。低脂肪及び高脂肪の対照グループ（１及び２）の初期グルコース濃度は、それぞれ１３３．８±１５．３７ｍｇ／ｄＬ及び１１９．８±７．２４ｍｇ／ｄＬであった（図３）。化合物１０〜１３で治療した動物で決定された血糖値は、それぞれ１２３．４±４．６５ｍｇ／ｄＬ、１２３．４±６．０ｍｇ／ｄＬ、及び１１３．５±１５．５．１６ｍｇ／ｄＬであった。血糖濃度は、ウルソール酸で治療した動物を除き、全てのグループにおいて、グルコース注射後３０分で最大に達した。またグルコース吸収は、このグループでは遅く、血糖濃度は６０分で最大に達した。グルコース負荷の９０分後、普通食及び高脂肪食を与えた動物の血糖値は、それぞれ１９０±６．３１ｍｇ／ｄＬ及び３６３±１９．７６ｍｇ／ｄＬであった。同様に、グループ３〜５の動物の血糖値は、それぞれ２２１±３１．５、３１７．８±２１．９、及び２２７±２２．９８２であった。
【００７４】
血漿インスリン濃度：血漿インスリンを、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用して測定した（Ｑｉａｎ，Ｄ．，Ｚｈｕ，Ｙ．，及びＺｈｕ，Ｑ．（２００１）ハルコガネバナ（Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｓｉｅｂ．ｅｔ  Ｚｕｃｃ）のアルコール抽出物が、２型（非インスリン依存性）糖尿病ラットの骨格筋でのＧＬＵＴ４発現に及ぼす影響（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｏｆ  Ｃｏｒｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｓｉｅｂ．ｅｔ  Ｚｕｃｃ  ｏｎ  ＧＬＵＴ４  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ  ｉｎ  ｔｙｐｅ  ２（ｎｏｎ−ｉｎｓｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｒａｔｓ）Ｚｈｏｎｇｇｕｏ  Ｚｈｏｎｇｙａｏ  Ｚａｚｈｉ  ２６，８５９〜８６２）。対照動物、グループ１及び２に関して測定したインスリン濃度は、それぞれ０．４７±０．１４ｎｇ／ｍＬ及び０．４１±０．１ｎｇ／ｍＬであるのに対し（図４）、アントシアニン、ベツリン酸、及びウルソール酸で治療した動物は、それぞれ５６７．９８±３２．３６ｎｇ／ｍＬ、４６０±９３．６８ｎｇ／ｍＬ、及び５２．２５±８．８４ｎｇ／ｍＬのインスリンを示した。
【００７５】
空腹時血糖：普通食及び高脂肪食の対照の、空腹時血糖を測定して、高脂肪の食餌を摂取した動物が糖尿病であるか否か決定した。動物に、食物を６時間与えず、尾静脈から収集した血液からグルコース濃度を決定した。普通食（ｎ＝８）及び高脂肪食（ｎ＝８）の動物のグルコース濃度は、それぞれ１２６．６±４．６ｍｇ／ｄＬ及び１２５±５．１９ｍｇ／ｄＬであった。
【００７６】
血漿コレステロール：普通食及び高脂肪食の対照の血漿コレステロール濃度は、それぞれ１２０．５±１０．６１ｍｇ／ｄＬ及び１５６．４±８．２６ｍｇ／ｄＬであった。アントシアニン及びベツリン酸で治療した動物のコレステロールは、それぞれ１３４．２±１５．５ｍｇ／ｄＬ及び１２６．５±１４．０１ｍｇ／ｄＬであった（図５）。
【００７７】
高脂肪食のみの動物及び試験化合物を含有する高脂肪食の動物の食物摂取量は、研究の全体を通して変化しなかった。普通食の対照動物が、高脂肪食の動物よりも多くの食物を摂取したことに注目することは興味深い。高脂肪食の対照及び治療グループによるカロリー摂取量が、１日当たり約１４．５６ｋｃａｌであるのに対し、普通食の対照は、１日当たり１３．３ｋｃａｌを摂取した。
【００７８】
アントシアニンを含有する食餌が与えられた動物は、高脂肪食の対照に比べて体重が著しく減少することを示した。アントシアニン及びベツリン酸を与えた動物で観察される体重減少は、それぞれ２４％及び２１％であった（図５Ａ及び５Ｂ）。しかし、ウルソール酸を与えた動物で観察された体重減少は、高脂肪食の対照に比べて有意なものではなかった。アントシアニン及びベツリン酸で治療した動物の血漿は、高脂肪食の対照に比べて総コレステロールが著しく減少することを示した（図５）。ウルソール酸で治療した動物からの血漿は、総コレステロールアッセイを終了させるのに十分ではなかった。グループ２〜５の動物の食物摂取量は、研究の全体を通して類似しており、したがってアントシアニンを与えた動物で観察される体重減少は、アントシアニンを肥満の予防に利用できる可能性があることを示唆していた。
【００７９】
グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を全ての動物に対して実施して、インスリン抵抗性を決定した（図６）。ウルソール酸が、治療した動物の体重を著しく減少させなかったとしても、このグループの全ての動物は、普通食を与えた対照グループ動物に類似したグルコース濃度を補正した。アントシアニンによる治療は、血糖濃度が３０分で最大に達すること以外、ＧＴＴアッセイでのウルソール酸による治療の場合と同様の効果を示した。ウルソール酸で治療した動物の血糖値（グループ５）は６０分で最大に達し、ウルソール酸がグルコース吸収を遅らせることができることを示している。したがってウルソール酸は、グルコースの吸収を遅らせることができるので、２型糖尿病患者に摂取される有用な生成物になり得る。９０分で、アントシアニン及びウルソール酸で治療した動物の血糖値は、低脂肪食が与えられた対照グループと同様になった。しかし、ベツリン酸で治療した動物はＧＴＴに応答せず、その結果は、高脂肪食が与えられた対照グループと同様であった。高脂肪食を与えた動物の場合、血糖濃度は３０分で最大に達し、９０分まで安定なままであったが、これは、これらの動物がインスリン抵抗性であることを示している。
【００８０】
図９の化合物１０〜１５で治療した動物の血漿インスリン濃度は、普通食及び高脂肪食を与えた対照動物（図４）よりも著しく高かった。アントシアニンで治療した動物のインスリン分泌の増加は、数々の治療の中で最も大きかった。アントシアニンで治療した動物によるインスリン分泌は、ウルソール酸で治療した動物に比べて１０倍以上であった（図７）。結論として、Ｃ．ｍａｓ（Ｃ．マス）果実から単離したアントシアニンは、高脂肪食の動物の体重減少に関し、研究がなされた３種の化合物のうち最良のものであった。また、低血糖症を引き起こすことなく、膨大な量のインスリン分泌も誘発させた。
【００８１】
アントシアニン及びアントシアニジンの分離及び生成のための方法は、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第６，１９４，４６９号；同第６，４２３，３６５号；同第６，６２３，７４３号；同第６，６７６，９７８号；及び同第６，６５６，９１４号と、２００２年２月２７日出願の米国特許出願第１０／０８４，５７５号に記載されている。
【００８２】
前述の内容は、本発明の単なる例示であり、本発明は、本明細書に添付する特許請求の範囲によってのみ限定されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】アントシアニン１〜４及びアントシアニジン５〜９の構造を示す図である。
【図２Ａ】化合物１及び２によるタンパク質１ｍｇ当たりの分泌されたインスリンの量を示すグラフである。アッセイウェルでの最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％であった。示される結果は、３回又は５回の独立した実験の平均であり、各サンプルについて重複してアッセイを行った。化合物１、２によるインスリン分泌は、ｔ検定を使用してＬＳＤにより決定されるように、＊（９５％又はｐ≦０．０５）で著しかった。
【図２Ｂ】４ｍＭ及び１０ｍＭのグルコースの存在下、化合物５及び６によるタンパク質１ｍｇ当たりの分泌されたインスリンの量を示すグラフである。アッセイウェルでの最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％であった。示される結果は、３回又は５回の独立した実験の平均であり、各サンプルについて重複してアッセイを行った。化合物５、６によるインスリン分泌は、ｔ検定を使用してＬＳＤにより決定されるように、＊＊（９９％又はｐ≦０．０１）で著しかった。
【図３】４ｍＭ及び１０ｍＭのグルコース濃度で、化合物３、７〜９により分泌されたインスリンを示すグラフである。分泌されたインスリンの量を、ｍｇタンパク質に対して規格化した。アッセイウェルでの最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％であった。示される結果は、３回の独立した実験の平均であり、各サンプルについて重複してアッセイを行った。化合物３、７〜９によるインスリン分泌は、ｔ検定を使用してＬＳＤにより決定されるように、＊（９５％又はｐ≦０．０５）で著しかった。
【図４】肥満に関する１２週間の研究での、動物の食物摂取量（単位ｇ）を示すグラフである。値は、平均±ＳＥＭ、ｎ＝８である。食物摂取量を毎日測定し、毎週平均を出した。高脂肪（ＨＦ、６０％ｋｃａｌ  脂肪）対照グループと治療グループとの間には、有意な差はなかった。治療グループは、高脂肪の食餌を４週間摂り、その後に試験化合物、高脂肪の食餌のアントシアニン（１．０ｇ／ｋｇ）、ベツリン酸及びウルソール酸（それぞれ０．５ｇ／ｋｇ）と混合した食餌に切り替えた。普通食は、１０％ｋｃａｌを含有していた。
【図５Ａ】１２週間食餌を与える間の、肥満研究中のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの体重変化を示すグラフである。普通食及び高脂肪食の対照は、実験中のこれらの食餌において、それぞれ１０％及び６０％ｋｃａｌを摂った。アントシアニン、ベツリン酸、及びウルソール酸を別々に、それぞれ食物１ｋｇ当たり１．０、０．５、及び０．５ｇで高脂肪の食餌に混合した。化合物で治療したグループには、最初に高脂肪の食餌（６０％ｋｃａｌ）を４週間与え、次いで適切な治療薬を含有する食餌に切り替えた。データは、平均±ＳＥＭ、ｎ＝８を表す。
【図５Ｂ】１２週間食餌を与える間の、肥満研究中のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの体重変化を示すグラフである。普通食及び高脂肪食の対照は、実験中のこれらの食餌において、それぞれ１０％及び６０％ｋｃａｌを摂った。アントシアニン、ベツリン酸、及びウルソール酸を別々に、それぞれ食物１ｋｇ当たり１．０、０．５、及び０．５ｇで高脂肪の食餌に混合した。化合物で治療したグループには、最初に高脂肪の食餌（６０％ｋｃａｌ）を４週間与え、次いで適切な治療薬を含有する食餌に切り替えた。データは、平均±ＳＥＭ、ｎ＝８を表す。
【図５Ｃ】１２週間食餌を与える間の、肥満研究中のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの体重変化を示すグラフである。普通食及び高脂肪食の対照は、実験中のこれらの食餌において、それぞれ１０％及び６０％ｋｃａｌを摂った。アントシアニン、ベツリン酸、及びウルソール酸を別々に、それぞれ食物１ｋｇ当たり１．０、０．５、及び０．５ｇで高脂肪の食餌に混合した。化合物で治療したグループには、最初に高脂肪の食餌（６０％ｋｃａｌ）を４週間与え、次いで適切な治療薬を含有する食餌に切り替えた。データは、平均±ＳＥＭ、ｎ＝８を表す。
【図６】グルコース負荷後の９０分にわたる、肥満研究におけるグルコース負荷試験の結果を示すグラフである。試験は、食餌を与えた第１１週目に実施した。グルコースの水溶液（２ｇ／ｋｇ体重）を腹腔内投与し、血糖値を、０、５、１５、３０、６０、及び９０分のときに測定した。血液を尾静脈から採取した。垂直な棒は、各データポイントｎ＝５でのＳ．Ｅ．である。
【図７】食餌実験の終わりに決定された、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの血漿インスリン濃度を示すグラフである。低及び高脂肪の食餌の対照グループに関して決定された血漿インスリン濃度は、それぞれ０．４７±０．１４及び０．４１±０．１ｎｇ／ｍＬであった。血漿中のインスリンの定量化は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により実施した。各サンプルについて二重にアッセイを行い、値は、ｎ＝８の場合の平均±ＳＥＭを表す。
【図８】食餌研究の終わりに採取された血漿における、マウスの血漿コレステロール濃度を示すグラフであり、単位をｍｇ／ｄＬで表す。ウルソール酸で治療した動物のコレステロール濃度に関しては、血漿サンプルの量が不十分であるので試験をしなかった。これらの値は、ｎ＝４又は５の場合の平均±ＳＥＭを表す。
【図９】１０から１２種のコルヌスマスＬ（Ｃｏｒｎｕｓ  ｍａｓ  Ｌ．）から単離された化合物である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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