(57)【要約】本発明は真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群の薬剤として有用PGC-1α蛋白のmRNAに対するアンチセンスDNAオリゴヌクレオチドの使用に関する。より詳しくは本発明は、望ましくは経腸又は非経口経路で投与されPGC-1α蛋白発現阻害能をもつ薬剤として用いられる、血中ブドウ糖レベルを低下させる化合物に関する。したがって本発明は、糖尿病及びインシュリン抵抗症患者において、血清ブドウ糖レベルの改善、血漿インシュリン濃度の上昇及びインシュリン抵抗性の減少を促進する薬学的化合物に関する。本発明は、動物モデルでの実験によると、ブドウ糖レベルをより効果的に調節し、糖尿病及び肥満状態に伴うその他の合併症に有利に作用する。このように、本発明が市場に現存する他の類似のものに対し有する主要な利点は血中ブドウ糖レベルを調節しその疾病に伴うその他の合併症に有利に作用するという効果があることである。
2008533178.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の修飾又は非修飾シーケンスに対応した、８０個の合成又は天然塩基又はこれらのうち少なくとも５塩基断片から成ることを特徴とするオリゴヌクレオチド：
シーケンスNo.1：5′- tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat -3′；
シーケンスNo.2：5′- tgctctgtgt cactgtggat tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa -3′；又は
シーケンスNo.3：5′- tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat ggagtgacat cgagtgtgct -3′。
【請求項２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１乃至第２０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２乃至第２１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３乃至第２２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４乃至第２３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５乃至第２４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第６乃至第２５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第７乃至第２６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第８乃至第２７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第９乃至第２８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１０乃至第２９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１１乃至第３０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１２乃至第３１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１３乃至第３２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１４乃至第３３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１５乃至第３４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１６乃至第３５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１７乃至第３６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１８乃至第３７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１９乃至第３８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２０乃至第３９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２１乃至第４０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２２乃至第４１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２３乃至第４２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２４乃至第４３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２５乃至第４４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２６乃至第４５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２７乃至第４６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２８乃至第４７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２９乃至第４８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３０乃至第４９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３１乃至第５０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３２乃至第５１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３３乃至第５２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３４乃至第５３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３５乃至第５４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３６乃至第５５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３７乃至第５６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３８乃至第５７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３９乃至第５８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４０乃至第５９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４１乃至第６０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４２乃至第６１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４３乃至第６２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４４乃至第６３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４５乃至第６４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４６乃至第６５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４７乃至第６６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４８乃至第６７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４９乃至第６８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５０乃至第６９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５１乃至第７０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５２乃至第７１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５３乃至第７２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５４乃至第７３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５５乃至第７４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５６乃至第７５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５７乃至第７６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５８乃至第７７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５９乃至第７８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第６０乃至第７９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第６１乃至第８０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２６乃至第４１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２７乃至第４２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２８乃至第４３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２９乃至第４４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３０乃至第４５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３１乃至第４６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３２乃至第４７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項７０】
請求項１記載のシーケンスNo.1、No.2及びNo.3のいずれかに含まれる、前記各塩基断片以外の５個乃至７９個の塩基断片であることを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項７１】
請求項１乃至７０のいずれかに記載の、修飾され又はされていない合成又は天然オリゴヌクレオチドであることを特徴とする、医薬品製造用の薬剤化合物。
【請求項７２】
経腸的又は非経口的経路で投与される医薬品製造に用いられることを特徴とする請求項７１記載の薬剤化合物。
【請求項７３】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチド又は請求項７１若しくは７２に係る化合物のいずれかの形態を取り、真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療に適用される医薬品製造に直接用いられることを特徴とする薬剤化合物の使用方法。
【請求項７４】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチド又は請求項７１若しくは７２に係る化合物のいずれかの薬学的有効量並びに治療目的投与に適用可能な担体、希釈剤、溶剤及び／又は賦形剤の薬学的有効量を備えた医薬品製造に用いられることを特徴とする薬剤組成物。
【請求項７５】
前記治療目的投与が具体的には真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療であることを特徴とする薬剤組成物。
【請求項７６】
前記製造された医薬品に含まれる前記薬学的有効量が１回投与量当たり約200nMol〜約2000nMolであることを特徴とする請求項７４記載の薬剤組成物。
【請求項７７】
経腸的又は非経口的経路で投与される医薬品製造に用いられることを特徴とする請求項７４記載の薬剤組成物。
【請求項７８】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチド又は請求項７１若しくは７２に係る化合物のいずれかの薬学的有効量並びに治療目的投与に適用可能な担体、希釈剤、溶剤及び／又は賦形剤の薬学的有効量を備えた、真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療に適用される医薬品製造に直接用いられることを特徴とする薬剤組成物の使用方法。
【請求項７９】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチドのいずれかに対応するシーケンスを有するとともに宿主細胞を請求項７１又は７２に記載の薬剤化合物産生細胞に形質転換可能な発現ベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群の治療薬物としてのオリゴヌクレオチドの使用に関する。
具体的には、本発明は、経腸経路又は非経口経路による、ペルオキシソーム増殖因子活性受容体αコアクチベーター１（PGC-1α）蛋白の発現を阻害する能力を有し、血中グルコースレベルの低下へと導く薬物として用いられる化合物に関する。本発明はそれゆえ、糖尿病やインシュリン抵抗症患者の血清ブドウ糖レベルの改善を促し、血漿インシュリン濃度を増加させ、インシュリン抵抗性を減少させる薬剤組成物に関する。本発明は社会的にも非常に重要であり、商業的観点からも製薬産業に対し非常に重要である。
【背景技術】
【０００２】
過去１０年間で肥満及び２型真性糖尿病の着実で広範な増加が世界のいくつかの地域で見られた（Kopelman PG, 2000,「医療問題としての肥満」 Nature  404:635-43; Flier JS, 2004,「肥満戦争：拡大する流行に直面する分子進化」 Cell 116:337-50; Stein CJ, Colditz GA, 2004,「肥満の流行」 J.Clin.Endocrinol.Metab. 89:2522-5）。食物摂取パターンの変化や運動不足の生活が遺伝的背景と相まってこれらの疾患の最も重要な発生要因であることが示されている。２型真性糖尿病と肥満は密接に関連している。ボディマス指数が1.0kg/m2増えると、糖尿病発症の相対的危険度が２倍になる（Kopelman PG, 2000,「医療問題としての肥満」 Nature  404:635-43）。ブラジルで２０００年に行われた疫学的見積では、人口の９％が真性糖尿病を発症し、１５％が肥満であると結論された（Kopelman PG, 2000,「医療問題としての肥満」 Nature  404:635-43）。同研究は、もしこれらの疾患の治療様式に重大な変化が起きなければ、２０２０年に糖尿病発症率は１５％に達し、肥満発症率は２５％を超えるだろうと予測した（Kopelman PG, 2000,「医療問題としての肥満」 Nature  404:635-43）。
【０００３】
体重維持はカロリー摂取とエネルギー消費との間の複雑な平衡に依存する。エネルギーバランスが正に傾けば、脂肪組織内のトリグリセロールの形で過剰カロリーの蓄積が進行し、その期間が長く保たれれば肥満の発症に至る（Schwartz MW, Kahn SE, 1999,「インシュリン抵抗症と肥満」Nature 402:860-1）。エネルギーの獲得が摂取した食物に専ら依存する限り、エネルギー消費は、特定個人の総エネルギー消費に貢献する一連の要因の合計の結果ということになる（Schwartz MW, Kahn SE, 1999,「インシュリン抵抗症と肥満」Nature 402:860-1; Schwartz MW, Woods SC, Porte D, Jr., Seeley RJ, Baskin DG, 2000,「食物摂取の中枢神経系による制御」Nature 404:661-71）。これらの要因には身体活動並びに義務的及び適応的という２つの形の熱産生が含まれている（Schwartz MW, Kahn SE, 1999,「インシュリン抵抗症と肥満」Nature 402:860-1; Schwartz MW, Woods SC, Porte D, Jr., Seeley RJ, Baskin DG, 2000,「食物摂取の中枢神経系による制御」Nature 404:661-71）。身体活動の増加に焦点が当てられた糖尿病の治療は満足のいく体重減少には至らないため、このことは、運動不足はそれ自体では、肥満の発症及びそれに続く真性糖尿病においては小さな役割しか果たしていないであろうことを示唆している。一方、熱産生不足はこれらの疾患の発症に重要な要因とみなされている（Schwartz MW, Kahn SE, 1999,「インシュリン抵抗症と肥満」Nature 402:860-1; Schwartz MW, Woods SC, Porte D, Jr., Seeley RJ, Baskin DG, 2000,「食物摂取の中枢神経系による制御」Nature 404:661-71）。
【０００４】
熱産生に関与する分子メカニズムは広範にわたる。これらはＡＴＰ消費によって熱放出を促進する、たとえば解糖及び糖新生サイクルのような代謝サイクルであったり、又は、Na+, K+依存ＡＴＰアーゼ活性であったりする。とはいえ、体の震えによる熱産生の間に起こることであるＡＴＰの加水分解を通じて熱は放出されるのである。しかし、そのような細胞機構と並行して、ミトコンドリア内での電子伝達系への干渉が、最も重要な熱産生及びエネルギー消費機構の一つとして特徴づけられている。Mitchellの化学浸透理論によると、ミトコンドリア内膜におけるチトクローム系を介した電子伝達で、ＡＴＰシンターゼを活性化させＡＴＰ合成に至るプロトン勾配が生じる。ミトコンドリアル・カップリングという用語は、エネルギー要求に対する酸化のリズムを適応させるに当たってのミトコンドリアの能力と正確に関連している。機能的観点からは、ＡＤＰの存在が呼吸リズムの亢進をもたらし（段階３）、ＡＤＰ不存在下（段階４）でこのリズムの消失に至るまでのペースとなる。段階３と段階４との関係（段階３／段階４）によりミトコンドリアル・カップリングの度合いが明らかになる。よって、ミトコンドリアル・アンカップリングは、プロトン勾配を消費し得るいかなる機構の結果としても生じ、それにより段階３／段階４関係の干渉へ至る。そのような消費はＡＴＰの産生を阻害して熱産生をもたらす（Argyropoulos G, Harper ME, 2002,「アンカップリング蛋白と熱産生制御」J.Appl.Physiol. 92:2187-98）。
【０００５】
ミトコンドリアル・アンカップリング蛋白（UCP's）はプロトン勾配を消費し、それにより段階３／段階４関係に干渉するという生理学的役割を成し遂げる。UCP'sの活動の結果、ＡＴＰシンターゼの活性化が阻害され熱が発生する。このファミリーの第１の蛋白（UCP-1）は、２０年前に、褐色脂肪組織から特定され、最初はサーモゲニンと命名されていた（Maia IG, Benedetti CE, Leite A, Turcinelli SR, Vercesi AE, Arruda P, 1998,「植物のアンカップリングミトコンドリア蛋白をコードするアラビドプシス遺伝子」FEBS Lett. 429:403-6; Bukowiecki LJ, 1984,「褐色脂肪組織における刺激−熱産生カップリング機構」Can.J.Biochem.Cell Biol. 62:623-30）。それは、副腎刺激で活性化される32kDaの蛋白として特徴づけられ、環状AMPの活性化を促進し、それによりトリグリセロールを遊離脂肪酸へ転換し、これら脂肪酸が今度はUCP-1を活性化してミトコンドリア呼吸のアンカップリングへと導く。UCP-1はまたその遺伝子転写を制御する機構を通じても制御され、交感神経の緊張もまたこの現象の重要な誘因である（Palou A, Pico C, Bonet ML, Oliver P, 1998,「アンカップリング蛋白サーモゲニン」Int.J.Biochem.Cell Biol. 30:7-11）。
【０００６】
１９９７年に、UCP'sファミリーに属する他の２つの蛋白が特定され、UCP-2及びUCP-3と命名された。前者はいくつかの組織で発現し、後者は骨格筋組織で優位に発現する。ついに近年、このファミリーに属する２つの新たな蛋白であるUCP-4及びUCP-5が特定されたが、相同性の度合いは最初の２つよりは低い（Argyropoulos G, Harper ME, 2002,「アンカップリング蛋白と熱産生制御」J.Appl.Physiol. 92:2187-98）。
違う実験の証拠によるとUCP'sがアンカップリング及び熱産生制御に関与することが示唆されている。前記の通り、UCP-1は、褐色脂肪細胞に発現し、分子機構の誘発を通じて遊離脂肪酸の産生を制御しかつUCPの活動を調節する交感神経刺激により制御され、この他に、同じ神経刺激がUCP-1蛋白発現を増加させる転写プログラムを活性化させる（Argyropoulos G, Harper ME, 2002,「アンカップリング蛋白と熱産生制御」J.Appl.Physiol. 92:2187-98）。同様の意味合いで、UCP-2の異所性発現あるいはUCP-3をトランスジェニックに過発現させたりすることでミトコンドリアル・アンカップリング依存性機構を通じた熱産生の増加に至る。よって、UCPファミリー蛋白がエネルギー消費及び熱産生の機構において中心的な役割を演ずることは依然として明らかである（Chan CB, MacDonald PE, Saleh MC, Johns DC, Marban E, Wheeler MB, 1999,「アンカップリング蛋白２の過発現がラット膵島からのブドウ糖刺激によるインシュリン分泌を阻害する」Diabetes 48:1482-6; Chan CB, De Leo D, Joseph JW, McQuaid TS, Ha XF, Xu F, Tsushima RG, Pennefather PS, Salapatek AM, Wheeler MB, 2001,「β細胞中のアンカップリング蛋白−２レベル増加はブドウ糖刺激によるインシュリン分泌低下に関与する：反応の機構」Diabetes 50:1302-10 ）。
【０００７】
細胞エネルギー流調節における重要性のため、UCPファミリー蛋白はすぐにその活性を誘導するであろう薬学的機構の解明を目的とする研究の焦点となった。このような化合物は、うまく解明されれば、肥満及び類似疾患の治療への使用可能性がある。
UCP蛋白の機能的調節効果の評価を目的とした最初の実験的アプローチは、トランスジェニック及びノックアウト動物の育種を通じて行われた。UCP-1遺伝子の組み換えによりその発現を全くなくしてしまうと、体重あるいは食物摂取における重要な変化を促進することはなかったものの、寒冷暴露に対する感受性が亢進した（Melnyk A, Himms-Hagen J, 1998,「温度依存性食餌行動：レプチンの役割の欠如及び褐色脂肪細胞除去肥満マウスでの欠損」Am.J.Physiol. 274:R1131-5）。一方、UCP-1の異所性発現を骨格筋でトランスジェニック誘導するとその動物は食餌により誘導される肥満に対し抵抗性になる（Argyropoulos G, Harper ME, 2002,「アンカップリング蛋白と熱産生制御」J.Appl.Physiol. 92:2187-98）。この他に、血中グルコース及びインシュリンレベルがより低下することで、膵臓ホルモンに対する感受性がより増大していることが示唆された。最後に、コレステロールレベルもまたこれらのマウスでは低下した。加えて、UCP-2の遺伝子発現欠損動物は肥満にならなかったが、UCP-1ノックアウト動物ととは違って、低温暴露に対しては感受性ではなかった。一方、感染状態による追跡調査で、UCP-2ノックアウトマウスではフリーラジカルの産生が増加し、これによってより感染と戦いやすくなることがわかった。劣勢単一遺伝子欠損によりレプチンホルモン産生が抑制されて肥満及び真性糖尿病を発症するob/obマウスにおけるUCP-2発現欠損で、インシュリン産生増加及び血糖レベルの改善に至った（Chan CB, MacDonald PE, Saleh MC, Johns DC, Marban E, Wheeler MB, 1999,「アンカップリング蛋白２の過発現がラット膵島からのブドウ糖刺激によるインシュリン分泌を阻害する」Diabetes 48:1482-6; Chan CB, De Leo D, Joseph JW, McQuaid TS, Ha XF, Xu F, Tsushima RG, Pennefather PS, Salapatek AM, Wheeler MB, 2001,「β細胞中のアンカップリング蛋白−２レベル増加はブドウ糖刺激によるインシュリン分泌低下に関与する：反応の機構」Diabetes 50:1302-10; Chan CB, Saleh MC, Koshkin V, Wheeler MB, 2004,「アンカップリング蛋白２と膵島機能」Diabetes 53 Suppl.1:S136-42）。最後に、UCP-3ノックアウト動物は肥満を発症せず、熱産生の障害も見られなかった。しかし、そのような動物は活性酸素種をより多く産生した（Zhou M, Lin BZ, Coughlin S, Vallega G, Pilch PF, 2000,「骨格筋におけるUCP-3発現：運動、低酸素及びＡＭＰ活性化蛋白キナーゼの効果」Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab. 279:E622-9）。
【０００８】
興味深いことに、UCP-3の過発現動物では、脂肪組織量が少なく、ブドウ糖クリアランスに優れ、摂食亢進により痩せることとなった（Zhou M, Lin BZ, Coughlin S, Vallega G, Pilch PF, 2000,「骨格筋におけるUCP-3発現：運動、低酸素及びＡＭＰ活性化蛋白キナーゼの効果」Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab. 279:E622-9）。
UCP-2はUCPファミリーの蛋白でも膵島での発現が最も高いとの報告により、インシュリン分泌がその必要量に大して不十分な状態における治療ターゲットとしての潜在能力への関心が喚起された。膵島でのUCP-2発現を低下させたトランスジェニック動物は、より高い平常値及びインスリン刺激性の分泌を示す（Chan CB, MacDonald PE, Saleh MC, Johns DC, Marban E, Wheeler MB, 1999,「アンカップリング蛋白２の過発現がラット膵島からのブドウ糖刺激によるインシュリン分泌を阻害する」Diabetes 48:1482-6; Chan CB, De Leo D, Joseph JW, McQuaid TS, Ha XF, Xu F, Tsushima RG, Pennefather PS, Salapatek AM, Wheeler MB, 2001,「β細胞中のアンカップリング蛋白−２レベル増加はブドウ糖刺激によるインシュリン分泌低下に関与する：反応の機構」Diabetes 50:1302-10; Chan CB, Saleh MC, Koshkin V, Wheeler MB, 2004,「アンカップリング蛋白２と膵島機能」Diabetes 53 Suppl.1:S136-42）。この他に、糖尿病肥満マウスにおける糖尿状態の改善が、この蛋白の発現を低下させた場合よりも明らかであった。
【０００９】
UCP-2を含むUCP遺伝子の発現調節はあまり知られてはいないが、最近の研究で、ペルオキシソーム増殖因子活性受容体αコアクチベーター１（PGC-1α）と名付けられた蛋白が、この調節に重要な役割を果たすことが明らかとなった（De Souza CT, Gasparetti AL, Pereira-da-Silva M, Araujo EP, Carvalheira JB, Saad MJ, Boschero AC, Carneiro EM, Velloso LA, 2003,「ラット膵島におけるペルオキシソーム増殖因子活性受容体γコアクチベーター−１依存性アンカップリング蛋白−２発現：インシュリン分泌の神経調節の新規経路」Diabetologia 46:1522-31）。
PGC-1αは、酵母二段ハイブリッド系を通じて、最初は褐色脂肪組織及び骨格筋で記述された、795個のアミノ酸からなる蛋白である（Yoon JC, Puigserver P, Chen G, Donovan J, Wu Z, Rhee J, Adelmant G, Stafford J, Kahn CR, Granner DK, Newgard CB, Spiegelman BM, 2001,「転写コアクチベーターPGC-1を通じた肝糖新生の調節」Nature 413:131-8）。遺伝子転写コアクチベーターとして、PGC-1αは、PPARγ・PPARαのような転写因子や、核呼吸因子(NRF)や、CREB結合蛋白(CBP)や、肝細胞核因子α４(HNF-4α)や、フォークヘッド転写因子1(FOXO1)や、ステロイド受容体コアクチベーター１(SRC-1)や、筋細胞増強因子２(MEF-2)といった因子と生理学的に相互作用するいくつかの機能的ドメインを有する。最近の研究で、PGC-1αが、肝及び筋でのブドウ糖取り込み及びインシュリン作用の調整に関係していることが分かった（Yoon JC, Puigserver P, Chen G, Donovan J, Wu Z, Rhee J, Adelmant G, Stafford J, Kahn CR, Granner DK, Newgard CB, Spiegelman BM, 2001,「転写コアクチベーターPGC-1を通じた肝糖新生の調節」Nature 413:131-8; Oliveira RL, Ueno M, de Souza CT, Pereira-da-Silva M, Gasparetti AL, Bezzera RM, Alberici LC, Vercesi AE, Saad MJ, Velloso LA, 2004,「寒冷誘因性PGC-1α発現がインシュリン受容体／Akt非依存性かつAMPK依存性経路を通じて筋のブドウ糖取り込みを調節する」Am.J.Physiol.Endocriol.Metab. 287:E686-95）。この他に、２つの臨床研究でPGC-1α遺伝子の突然変異がインシュリン抵抗症及び糖尿病に関連する可能性があることが判明した（Ek J, Andersen G, Urhammer SA, Gaede PH, Drivsholm T, Borch-Johnsen K, Hansen T, Pedersen O, 2001,「ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベーター−１(PGC-1)の突然変異解析及び特定されたアミノ酸多形性のII型真性糖尿病への関連性」Diabetologia 44:2220-6; Hara K, Tobe K, Okada T, Kadowaki H, Akanuma Y, Ito C, Kimura S, Kadowaki T, 2002,「PGC-1遺伝子の遺伝的多様性がインシュリン抵抗症及び２型糖尿病の発症しやすさの要因となり得る」Diabetologia 45:740-3）。
【００１０】
最近の研究で、主にインシュリン抵抗性の人では、周辺のインシュリン要求の増大に応えるにあたってβ−膵臓細胞の欠損のみで２型真性糖尿病の発症へ至るであろうことが判明した。よって、臨床的に要求量が増大する状況でインシュリン産生に連続的に適応する薬学的機構は真性糖尿病の治療に有用であろう（Moller DE, 2001,「２型糖尿病及びメタボリック症候群の新規な薬剤ターゲット」Nature 414:821-7）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
UCP蛋白及び特にUCP-2の、代謝性疾患における治療ターゲットとしての可能性によって、特にそのインシュリン分泌の調節における関与に関して、UCP-2発現を調節し得る化合物を調査、そしてブドウ糖ホメオスタシス及びインシュリン分泌へのその効果を評価することは興味深いことであろう。
真性糖尿病及び類似の状態は、世界中に最も高い頻度で蔓延しているひとつの疾患群を構成している。
よって、効果的な治療法はほとんどなく、またこれら疾患の不適切なコントロールの結果感染者の余命を著しく短縮するという被害が生じることを念頭に置いて、新規な治療方法の開発が重要であり、商業的にも製薬産業にとって大きな関心事である。より具体的には、UCP発現の重要な核酸制御物質としての、PGC-1αメッセンジャーRNAに対するアンチセンスDNAオリゴヌクレオチドの開発は、真性糖尿病及び関連疾患の治療に使用される可能性を秘めている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、PGC-1α蛋白のメッセンジャーRNAに対するアンチセンスDNAオリゴヌクレオチドに関するものである。この化合物は、ワトソン−クリックモデルに従った塩基のペアリングを通じてそれ自身を対応するシーケンスに結合させ、そしてこの機構を通じてメッセンジャーRNAの蛋白への翻訳を阻害するという性質を有する。真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群の治療用薬剤として使用される。
より具体的には、この化合物は、糖尿病及びインシュリン抵抗症患者において、血清中ブドウ糖レベルの改善、血漿中インシュリン濃度の上昇及びインシュリン抵抗性の減少を促進する。この化合物は、真性糖尿病、インシュリン抵抗症又はメタボリック症候群患者に、経口的あるいは非経口的に、一日に体重1kg当たり5乃至10nmolの用量で投与されることが望ましい。
【００１３】
さらに、より具体的には、本発明は、２型真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群の治療用に経腸的又は非経口的に投与される薬剤として使用される、シーケンスNo.1、No.2及びNo.3に係る被修飾DNAオリゴヌクレオチドに関する。
シーケンスNo.1
5′- tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat -3′
シーケンスNo.2
5′- tgctctgtgt cactgtggat tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa -3′
シーケンスNo.3
5′- tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat ggagtgacat cgagtgtgct -3′。
【００１４】
真性糖尿病及び類似疾患の治療に用いられる古典的治療法は少なく、また、真性糖尿病の多くの二次合併症へと至り、生活の質を低下させ死亡率が高くなっているような多くの患者にとって思うような制御を促進することはないということを考慮すると、本発明はこれらの問題の解決法と映るかもしれない。より具体的には、本発明は、動物モデルで行われた実験によると、ブドウ糖レベルのより効果的な制御法へと導き、糖尿病及び肥満状態に伴う他の合併症に有利に作用する。
このように、本発明の、現に市場に存在する類似物に対する有利な点のうち主なものは、血中グルコースレベルを制御する点における有効性及びこの疾患に伴う他の合併症に有利に作用するという事実である。
【００１５】
本発明は、２型真性糖尿病、インシュリン抵抗性及びメタボリック症候群の治療用の経腸的又は非経口的投与薬剤として使用される、シーケンスNo.1、No.2及びNo.3に係るDNAオリゴヌクレオチドに関する。
シーケンスNo.1
5′- tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat -3′
シーケンスNo.2
5′- tgctctgtgt cactgtggat tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa -3′
シーケンスNo.3
5′- tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat ggagtgacat cgagtgtgct -3′。
【００１６】
実施例１：肥満症及び糖尿病マウスへのアンチセンスオリゴヌクレオチドPGC-1α投与の効果
・使用した動物モデルの特徴づけ：
最初に、これらの実験に用いられる動物モデルを特徴づけた。２つの別系統ではあるが、一定の遺伝的同一性を有するマウス、すなわちSW/Uni及びCBA/Uniマウスを使用した。両系統は互いに関連があり、また、高脂質食を給餌した際に糖尿病及び肥満症を発症する素因を有するとして以前に記述されたAKRマウス（Rossmeisi M, Rim JS, Koza RA, Kozak LP, 2003「食餌誘因性糖尿病感受性マウス系統の２型糖尿病関連因子における多様性」Diabetes 52:1958-66）とも関連がある。齧歯類用の標準食を給餌した場合、SW/Uni及びCBA/Uniマウスは肥満症も糖尿病も発症しない（図１）。しかし、高脂質食を給餌した場合、CBA/Uniマウスは肥満症になるのに対し、SW/Uniは血清ブドウ糖基準値レベルが16.0nmol/lを示し（図１）、肥満症及び糖尿病になる。
【００１７】
次に、両系統の肝臓及び脂肪組織におけるPGC-1α発現に対する高脂質食の効果を調べた。このような特徴づけのために、異なる週齢で様々な期間の間標準食及び高脂質食を与えられたマウスから両組織の断片を得た。これらの断片から得られた蛋白抽出物は抗PGC-1α抗体特異的なイムノブロット実験に用いた。ブロットで得られたバンドはデジタルデンシトメトリー定量化し互いに比較した。図２に示すように、加齢は高脂質食の消費と同様に、両組織におけるPGC-1α発現の有意な増加という効果を及ぼす。しかし、統計解析で明らかなように、SW/Uni系統マウスは、CBA/UniマウスよりもPGC-1α発現が多いことが示された。
【００１８】
実施例２：SW/UniマウスへのアンチセンスオリゴヌクレオチドPGC-1α投与の効果
高脂質食を投与したときに肥満症と真性糖尿病を同時に発症するSW/Uni系統マウスが実験用の動物モデルとして選ばれた。アンチセンスオリゴヌクレオチドPGC-1α（PGC-1α/AS）の効果を特徴づけるためにまず最初に、その化合物が実験動物の肝臓及び脂肪組織での標的蛋白発現を阻害する可能性を評価するためにイムノブロット法を使用した。図３ａは、高脂質食を給餌したSW/UniマウスにPGC-1α/ASを非経口的に４日間投与すると肝臓及び脂肪組織での標的蛋白発現に用量依存的な効果を及ぼすということを示す。このような効果は特異的であって、同組織での構造蛋白（アクチン及びビメンチン）の発現には干渉しない（図３ｂ）。
【００１９】
次に、高脂質食を給餌したSW/Uniマウスの代謝及びホルモンパラメータによって１日１回1.0nmolのPGC-1α/ASを投与した際のPGC-1α発現の阻害効果。図３c-fに示すように、その化合物が、投与１６日後に血清ブドウ糖基準値レベルの完全な回復を促進した。このような効果は血漿インシュリン基準値レベルの有意な増加により完遂された。また、食物摂取量の変化なしで体重減少の傾向があった。
その化合物のインシュリン分泌及びin vivo作用を評価するために、高脂質食を給餌したSW/UniマウスにPGC-1α/AS（1.0nmol/日）、センス対照オリゴヌクレオチド又は担体を投与し、ブドウ糖耐性試験及びインシュリン耐性試験にて、並びにオイグリセミック高インシュリン血クランプにて評価した。図４に示すように、PGC-1α/AS投与でブドウ糖耐性試験でのブドウ糖レベルの低下及びインシュリンレベルの増加（図４ａ及びｂ ）、インシュリン耐性試験でのブドウ糖減衰率の増加（図４ｃ）、並びにオイグリセミック高インシュリン血クランプでのブドウ糖消費率の増加（図４ｄ）が促進された。
【００２０】
最後に、分子発現並びにインシュリン作用に重要な役割を持つ２つの蛋白、インシュリン受容体(IR)及びAktシグナルトランスデューサー蛋白の活性化に対するPGC-1α/AS投与の効果を評価した。そのために、SW/UniマウスにPGC-1α/AS又は対照センスオリゴヌクレオチド又は担体を投与し、肝臓及び脂肪組織から得た組織片をイムノブロット及び免疫沈降実験並びにIR及びAkt実験に供した。図５に示すように、PGC-1α/AS投与で肝臓及び脂肪組織のIR発現増加、及び脂肪組織でのAkt発現増加が促進された。その投与はまた、両組織でのインシュリン誘因性のIRチロシンリン酸化の増加及び両組織でのインシュリン誘因性のAktセリンリン酸化の増加をももたらした。このように、PGC-1α/AS投与を通じてなされたPGC-1αの阻害はインシュリン作用、とりわけ標的組織でのこのホルモンの活性の分子機構に重要な効果を及ぼす。
【００２１】
本発明の上記の記載は説明及び記述の目的で提示されたものである。これの他に、上記記載は発明をここで開示した形態に限定するよう意図されたものではない。それゆえ、上記記載及び関連技術の能力又は知識をもって適合可能なバリエーション及び改変は、本発明の範囲内に含まれるものである。
上記態様は、発明の実施の可能な方法をよりよく説明するとともに、当業者にこのような、又はそれとは異なる態様で、本発明の特定の用途又は使用において必要な改変を加えて発明を使用できるようにすることを意図するものである。また上記態様は、本発明が添付の請求の範囲に記載されたすべてのその改変及びバリエーションを含むものであることを意図するものである。
【００２２】
以下は本明細書の理解及び図示のために添付された図面を説明するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、SW/Uni系及びCBA/Uni系マウスにおいて、高脂質食(F)の効果を、齧歯類用通常餌(C)と対比して、体重の変化(a)、ブドウ糖血清レベル基準値(b)及びインシュリン血漿レベル基準値(c)で示すものである。結果は６検体の平均±標準誤差で示す。*:p<0.05。
【図２】図２は、齧歯類用通常餌又は高脂質食を与えたSW/Uni系及びCBA/Uni系マウスのPGC-1αの肝臓及び脂肪組織(WAT)での発現をイムノブロット(IB)解析で示すものである。４週齢マウスを無作為に選びグループにして標準餌又は高脂質食が与えられ、第０週の時点から４週ごとに、各グループの４頭を肝臓及び脂肪組織蛋白抽出サンプル採取に用いた。そしてこれらのサンプルを抗PGC-1α抗体を用いたイムノブロット実験に供した。すべての実験でn=4であった。結果は平均±標準誤差で示す。
【図３】図３は、(a)PGC-1α／ASの投与量増加が、SW/Uniマウスの肝臓及び脂肪細胞(WAT)におけるPGC-1α発現に及ぼす影響をイムノブロット(IB)解析で示すものである。(b)では、PGC-1α／AS(AS)の１日投与量1.0nmolを、担体のみ投与(C)の動物又は対照のセンスオリゴヌクレオチド投与(S)の動物と比較したものである。この実験で、PGC-1αの発現並びにアクチン（肝臓）及びビメンチン（脂肪組織）の構造蛋白が評価された。PGC-1α／AS（▲）の効果は、血清ブドウ糖レベルの平常値(c)、血漿インシュリンレベルの平常値(d)、体重(e)及び食餌摂取量(f)でも、担体投与群（■）又は対照のセンスオリゴヌクレオチド投与群（●）との比較で確認した。結果は、n=4（a及びb）又はn=6（c乃至f）の平均±標準誤差で示す。*:Cに対してp<0.05。
【図４】図４は、PGC-1α／AS投与SW/Uniでの代謝効果を示すものである。マウスには、１日当たり1.0nmolのPGC-1α／AS（▲、AS）又は対照のセンス（●、S）又は担体（■、C）を投与し、ブドウ糖耐性試験(a及びb)、インシュリン耐性試験(c)又はオイグリセミック高インシュリン血クランプ(d)で評価した。結果はn=6の平均±標準誤差で示す。*:p<0.05。
【図５】図５は、SW/UniマウスでのPGC-1α／AS投与の効果を、IR及びAKT表示（各グラフ上方に示すブロット）で示すものであり、また、分子活性化はIRではチロシンリン酸化の判定により、又は、Aktでは肝臓及び脂肪組織のセリンで、それぞれ測定した。結果はn=6の平均±標準誤差で示す。*:p<0.05。
【図１】
2008533178.tif 000003
【図２】
2008533178.tif 000004
【図３】
2008533178.tif 000005
【図４】
2008533178.tif 000006
【図５】
2008533178.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成18年12月18日(2006.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の修飾又は非修飾シーケンスに対応した、８０個の合成又は天然塩基又はこれらのうち少なくとも５塩基断片から成り、真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群の治療に適用される薬物の製造に用いられることを特徴とするオリゴヌクレオチド：
シーケンスNo.1：5′- tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat -3′；
シーケンスNo.2：5′- tgctctgtgt cactgtggat tggagttgaa aaagcttgac tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa -3′；又は
シーケンスNo.3：5′- tggcgtcatt caggagctgg atggcgtggg acatgtgcaa ccaggactct gagtctgtat ggagtgacat cgagtgtgct -3′。
【請求項２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１乃至第２０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２乃至第２１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３乃至第２２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４乃至第２３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５乃至第２４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第６乃至第２５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第７乃至第２６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第８乃至第２７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第９乃至第２８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１０乃至第２９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１１乃至第３０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１２乃至第３１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１３乃至第３２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１４乃至第３３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１５乃至第３４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１６乃至第３５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１７乃至第３６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１８乃至第３７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第１９乃至第３８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２０乃至第３９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２１乃至第４０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２２乃至第４１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２３乃至第４２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２４乃至第４３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２５乃至第４４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２６乃至第４５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２７乃至第４６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２８乃至第４７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２９乃至第４８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３０乃至第４９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３１乃至第５０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３２乃至第５１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３３乃至第５２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３４乃至第５３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３５乃至第５４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３６乃至第５５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３７乃至第５６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項３９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３８乃至第５７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３９乃至第５８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４０乃至第５９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４１乃至第６０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４２乃至第６１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４３乃至第６２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４４乃至第６３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４５乃至第６４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４６乃至第６５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４７乃至第６６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項４９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４８乃至第６７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第４９乃至第６８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５０乃至第６９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５１乃至第７０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５２乃至第７１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５３乃至第７２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５４乃至第７３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５５乃至第７４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５６乃至第７５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５７乃至第７６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項５９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５８乃至第７７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６０】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第５９乃至第７８塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６１】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第６０乃至第７９塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６２】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第６１乃至第８０塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６３】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２６乃至第４１塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６４】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２７乃至第４２塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６５】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２８乃至第４３塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６６】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第２９乃至第４４塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６７】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３０乃至第４５塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６８】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３１乃至第４６塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項６９】
請求項１記載のいずれかのシーケンスの第３２乃至第４７塩基を包含することを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項７０】
請求項１記載のシーケンスNo.1、No.2及びNo.3のいずれかに含まれる、前記各塩基断片以外の５個乃至７９個の塩基断片であることを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【請求項７１】
請求項１乃至７０のいずれかに記載の、修飾され又はされていない合成又は天然オリゴヌクレオチドであることを特徴とする、真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群の治療に適用される薬物の製造に用いられる薬剤化合物。
【請求項７２】
経腸的又は非経口的経路で投与される医薬品製造に用いられることを特徴とする請求項７１記載の薬剤化合物。
【請求項７３】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチド又は請求項７１若しくは７２に係る化合物のいずれかの形態を取り、真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療に適用される医薬品製造に直接用いられることを特徴とする薬剤化合物の使用方法。
【請求項７４】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチド又は請求項７１若しくは７２に係る化合物のいずれかの薬学的有効量並びに治療目的投与に適用可能な担体、希釈剤、溶剤及び／又は賦形剤の薬学的有効量を備えた医薬品製造に用いられることを特徴とする薬剤組成物。
【請求項７５】
前記治療目的投与が具体的には真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療であることを特徴とする請求項７４記載の薬剤組成物。
【請求項７６】
前記製造された医薬品に含まれる前記薬学的有効量が１回投与量当たり約200nMol〜約2000nMolであることを特徴とする請求項７４又は７５記載の薬剤組成物。
【請求項７７】
経腸的又は非経口的経路で投与される医薬品製造に用いられることを特徴とする請求項７４乃至７６のいずれかに記載の薬剤組成物。
【請求項７８】
請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチド又は請求項７１若しくは７２に係る化合物のいずれかの薬学的有効量並びに治療目的投与に適用可能な担体、希釈剤、溶剤及び／又は賦形剤の薬学的有効量を備えた、真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療に適用される医薬品製造に直接用いられることを特徴とする薬剤組成物の使用方法。
【請求項７９】
真性糖尿病、インシュリン抵抗症及びメタボリック症候群治療に適用される医薬品製造に直接用いられ、請求項１乃至７０のいずれかに係るオリゴヌクレオチドのいずれかに対応するシーケンスを有するとともに宿主細胞を請求項７１又は７２に記載の薬剤化合物産生細胞に形質転換可能な発現ベクター。
【国際調査報告】
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