(57)【要約】本発明は、クオラムセンシング細菌のコミュニケーション及び毒性を調節するための組成物及び方法を提供する。様々な例示的な実施態様において、本発明は、天然に存在する及び天然に存在しないアシル−ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）類似体の合成類似体を含むクオラムセンシング化合物のコンビナトリアルライブラリーと、それら化合物の合成及び使用方法とを提供する。【選択図】図１
2008530013.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物。
【化１】
2008530013.tif 000055
（式中、ｎは１、２又は３であり、ここでｎ＝１の場合、置換アミノに結合した環Ｃは、キラル中心とすることができ、Ｒ1は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＣＯＲ2、−(ＣＨ2)aＣＨＯＨＲ2、−(ＣＨ2)aＲ6、−Ｏ−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ、−ＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)bＣＨ3、−Ｒ6ＨＣ＝ＣＨＲ7、−Ｒ6Ｃ＝ＣＲ7、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ2は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ3から選択され、Ｒ4は−Ｈ、−ＣＨ2−から選択され、Ｒ5は−Ｈであり、Ｒ6及びＲ7は、同一か又は異なり、且つ−Ｈ、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、ａ及びｂは、独立して０〜１５の整数である）
【請求項２】
下記式を有する、請求項１記載の化合物。
【化２】
2008530013.tif 000056
（式中、Ｒ1は、−ＣＨ2ＣＯＲ2、Ｃ6Ｈ13、
【化３】
2008530013.tif 000057
であり、
Ｒ2は、Ｃ5Ｈ11又は
【化４】
2008530013.tif 000058
である）
【請求項３】
下記式を有する、請求項１記載の化合物。
【化５】
2008530013.tif 000059
（式中、Ｒ1は、−ＣＨ2ＣＯＲ2、Ｃ6Ｈ13、
【化６】
2008530013.tif 000060
であり、
Ｒ2は、Ｃ5Ｈ11又は
【化７】
2008530013.tif 000061
である）
【請求項４】
【化８】
2008530013.tif 000062
から成る群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
天然のクオラムセンシング化合物のアンタゴニストとして作用する、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
天然のクオラムセンシング化合物のアゴニストとして作用する、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
下記式（Ｉ）の二種又はそれ以上の化合物のコンビナトリアルライブラリー。
【化９】
2008530013.tif 000063
（式中、ｎは１、２又は３であり、ここでｎ＝１の場合、置換アミノに結合した環Ｃは、キラル中心とすることができ、Ｒ1は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＣＯＲ2、−(ＣＨ2)aＣＨＯＨＲ2、−(ＣＨ2)aＲ6、−Ｏ−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ、−ＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)bＣＨ3、−Ｒ6ＨＣ＝ＣＨＲ7、−Ｒ6Ｃ＝ＣＲ7、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ2は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ3から選択され、Ｒ4は−Ｈ、−ＣＨ2−から選択され、Ｒ5は−Ｈであり、Ｒ6及びＲ7は、同一か又は異なり、且つ−Ｈ、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、ａ及びｂは、独立して０〜１５の整数である）
【請求項８】
【化１０】
2008530013.tif 000064
から成る群より選択される二種又はそれ以上の化合物を含む、請求項７記載のコンビナトリアルライブラリー。
【請求項９】
マイクロ波支援カルボジイミドカップリングを用いて、アミノポリスチレン樹脂にＮ−９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−メチオニンを負荷する工程、
熱アシストを介して９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−メチオニン基を除去する工程、
カルボン酸のマイクロ波支援カルボジイミドカップリングを使用する工程、及び
Ｌ−メチオニンを臭化シアンと反応させることにより、アシル−ホモセリンラクトン類似体を固体支持体から解放する工程
を含む、アシル−ホモセリンラクトン類似体を合成する方法。
【請求項１０】
ハロゲン誘導体化基材を用意する工程、
（ａ）前記ハロゲン誘導体化基材を酸とカップリングさせる工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得られた化合物のエポキシドを形成する工程、
（ｃ）前記工程（ｂ）の化合物のエポキシド環を開環する工程、
（ｄ）前記工程（ｃ）で得られた化合物を脱保護する工程、
（ｅ）前記工程（ｄ）で得られた化合物をアシル化する工程、
（ｆ）前記工程（ｅ）で得られた化合物を環化させる工程、及び
（ｇ）前記工程（ｆ）で得られた自己誘導物質類似体を前記基材から切断する工程
を含む、自己誘導物質アナログを合成する方法。
【請求項１１】
クオラムセンシング細菌を請求項１記載の化合物と接触させることを含む、クオラムセンシング細菌の毒性を低下させる方法。
【請求項１２】
前記クオラムセンシング細菌の毒性の低下が、生物膜の生成の阻害又は減少を含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が、
【化１１】
2008530013.tif 000065
から成る群より選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
細菌の生物膜汚染を受け易い表面の細菌汚染を低下させる方法であって、該表面を、合成クオラムセンシング化合物と接触させることを含む方法。
【請求項１５】
前記接触が、合成クオラムセンシング化合物を含有する溶液を、前記表面に噴霧、塗工、はけ塗り、塗布、又は該溶液で表面を処理することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記水溶液が、二種又はそれ以上のクオラムセンシング化合物から成る混合物を含有する、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも一種の請求項１記載の化合物を含有する組成物を用意する工程、及び細菌生物膜を該化合物と接触させる工程を含む、細菌生物膜を破壊する方法。
【請求項１８】
前記の接触させる工程が、少なくとも一種の自己誘導物質アナログを含有する組成物を、前記表面に噴霧、塗工、はけ塗り、塗布、又は該組成物で該表面を処理する工程を含む、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、請求項１７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、２００５年２月４日出願の米国特許仮出願第６０／５９３，６８１号、及び２００５年８月２３日出願の米国特許仮出願第６０／７１０，６２０号、並びに２００６年２月２日出願の米国特許本出願第１１／２７５，８９６号（これらは全て参照により本明細書に援用されるものとする）の優先権をその利益全てのために主張するものである。
【発明の分野】
【０００２】
本発明は包括的に、細菌内のクオラムセンシングを変更する分子及び方法に関する。
【発明の背景】
【０００３】
多数の微生物病原体が、世界中でヒト並びに動物及び作物植物に多大な損害を引き起こしている。複数の薬物耐性病原体株の継続的な出現は、抗菌処置に使用し得る新しい化合物の発見を余儀なくさせている。一般に、病原体の制御には２つの戦略が存在し、それらは、病原体を殺滅するか、又は宿主を損傷しないようその毒性を減弱させることである。
【０００４】
細菌の毒性を減弱させる戦略は、薬物耐性株に有利な選択圧を形成しないという利点を有する。毒性減弱効果を有するが、細胞殺滅効果を有さない抗菌化合物は、薬物耐性の発達の不足から、従来の抗生物質と比較して長い期間、有効性が持続することが期待される。しかしながら、この手法は、合理的な薬物設計のための特定の標的が不足していることが問題である。
【０００５】
多数の細菌は、クオラムセンシングと称される現象において、自己誘導物質リガンドを使用して、その集団密度を監視している。高い細胞密度では、細菌は、この化学的なシグナル伝達プロセス使用して、放浪的存在から多細胞のコミュニティーへ転換する。この生活スタイルの転換は、多数の病原菌がクオラムセンシングを使用して毒性経路を作動させ、無数の慢性感染症の基礎である生物膜と呼ばれる薬物耐性のコミュニティーを形成するため重大である。ヒトにおいて８０％を越える細菌感染は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる肺感染症に例示されるように、生物膜の形成に関与し、これは嚢胞性線維症患者における病的状態の主な原因である。生物膜を形成する病原体による感染症の処置には、米国だけで年に１０億ドルを越える費用がかかっている。
【０００６】
細胞密度に応答した遺伝子発現の制御は、最初に、海水中の発光細菌Ｖｉｂｒｉｏ  ｆｉｓｃｈｅｒｉ及びＶｉｂｒｉｏ  ｈａｒｕｅｙｉにて説明された。クオラムセンシング細菌は、自己誘導物質（「ＡＩ」）と称される特定のアシル−ホモセリンラクトン（「ＡＨＬ」又は「ＨＳＬ」）シグナル伝達分子を合成、放出、及び当該分子に応答して、遺伝子発現を細胞密度に応じて制御する。従来のクオラムセンシング経路は、少なくとも３つの構成要素を含み、それらは、膜結合受容体／転写因子；拡散性シグナル、自己誘導物質；及び標的遺伝子のプロモーター領域内の認識部位である。自己誘導物質は受容体に結合して、内部移行する受容体／ＡＩ複合体を発生させる。これにより、次に、受容体又は受容体／ＡＩ複合体は、標的遺伝子（１つ又は複数）のプロモーター領域に結合し、転写を変更して、遺伝子発現を下方調節又は上方調節する。殆どの場合、これはＡＩ発現の増大を含み、それによってカスケード効果が発生する。
【０００７】
近年、多数のグラム陰性菌が、１つ又は複数のクオラムセンシングシステムを使用することが明らかになってきた。クオラムセンシングシステムは、ヒト内に見出されず、また高いレベルの細菌毒性に重要であることから、抗菌剤の魅力ある標的である。細菌のクオラムセンシングシステムは、異なるアシル側鎖を有するＡＨＬ誘導体を含んで、細胞密度依存的に、各微生物の生命サイクルに独特な、非常に多様な生理学的プロセスを調節している。これらのプロセスには：群を為すこと(swarming)、運動(motility：運動性)、生物膜形成、接合、生体発光並びに／又は色素、抗生物質及び酵素の産生が含まれる。例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｎｉｏｓａのクオラムセンシング経路は、様々な細胞外酵素の発現、生物膜形成、及び細胞−細胞間隔に影響を与えている。他の細菌は、プロテアーゼ及びペクチナーゼの発現、線毛の発現、静止期への移行、遅滞期からの脱出、及び細胞分裂の開始により、クオラムセンシング刺激に反応する。
【０００８】
生物膜は、細菌がそれ自身をその内部に包埋する密な細胞外ポリマーマトリクスである。生物膜は、細菌に、当該細菌を宿主表面に付着させ、分泌された酵素及び他の因子を含んで、抗体及び細胞免疫応答を含む宿主の免疫応答からの細菌の回避を可能にする微環境を形成させる。そのような生物膜は、抗生物質も排除し得る。更に、生物膜は、除去及び殺菌剤に極めて耐性であり得る。嚢胞性線維症に罹患した個人に関しては、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる生物膜形成は、最終的には命に関わる。他の細菌も、生物膜を生成することにより、クオラムセンシングシグナルに応答する。生物膜は、歯垢に内在し、外科器具、食物加工機器、農業機器、並びに水処理及び発電用の機械及び機器上に見出される。
【０００９】
細菌のクオラムセンシングシステムは、それが引き起こす毒性要素により、病原菌の毒性の変更に使用するための新規な標的を提供する。現在迄に説明されている全てのアシル−ホモセリンラクトン・クオラムセンシングシステムは、Ｖ．ｈａｒｕｅｙｉのクオラムセンシングシステムを除き、Ｖ．ｆｉｓｃｈｅｒｉのｌｕｘＩに相同の遺伝子によりコードされるＡＩシンターゼを使用する。自己誘導物質に対する応答は、Ｖ．ｆｉｓｃｈｅｒｉのｌｕｘＲに相同の遺伝子によりコードされる転写活性化因子タンパク質により仲介される（Bassler及びSilverman、Two  Component  Signal  Transduction，Hoch他編，Am．Soc．Microbiol．Washington  D.C.，pp.431-435，1995にて）。したがって、ＡＨＬクオラムセンシングシステムは、広範な病原菌内に存在している。
【００１０】
グラム陰性菌は、クオラムセンシング経路を使用する、多数の関連する病原体を代表する。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに加えて、他のクオラムセンシング細菌には：Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ａ．ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎ、Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ、Ｅ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｎｉｔｒｏｓｏｍａｓ  ｅｕｒｏｐａｅａ、Ｏｂｅｓｕｍｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｔｅｗａｒｔｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ、Ｒｈｉｓｏｂｉｕｍ  ｅｔｌｉ、Ｒ．ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｌｉｇｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ、Ｖ．ｆｉｓｃｈｅｒｉ、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ、Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｙ．ｍｅｄｉｅｖａｌｉｓ、及びＹ．ｒｕｃｋｅｒｉが含まれる。上記に列挙した細菌に関する研究は、ＡＩが一般にＡＨＬ化合物であると共に、影響を受ける遺伝子、及びプロモーターの誘導から得られる表現型は、各細菌の特定の生命サイクルに従い異なることを示している。更に、クオラムセンシング刺激は、通常、複数の遺伝子の発現を変化させる。
【００１１】
影響を与える複数の遺伝子に加えて、数種の細菌は、クオラムセンシング応答の複数の段階を有する。これら細菌において、クオラムセンシングの異なる段階は、異なるリガンド／受容体対から誘導されることができ、同様に異なる表現型を伴う異なる遺伝子セットの発現をもたらす。例えば、Ｖ．ｈａｒｕｅｙｉは、独立した２つの密度感知システム（シグナル伝達システム１及び２）を有し、各々は、センサー−自己誘導物質の対から構成されている。シグナル伝達システム１は、センサー１、及びＮ４３−ヒドロキシブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトンである自己誘導物質１（ＡＩ−１）から構成されている（Bassler他，Mol．Microbiol．9：773-786，1993参照）。シグナル伝達システム２は、センサー２及び自己誘導物質２（ＡＩ−２）から構成されている（Bassler他，Mol．Microbiol．13：273-286，1994）。ＡＩ−２の構造は、未だ決定されず、またＡＩ−２の生合成に関与する遺伝子（１つ又は複数）も同定されていない。シグナル伝達システム１は、種内コミュニケーションに使用されることが提案されている、高度に特異的なシステムであり、シグナル伝達システム２は、種選択性が比較的低いように思われ、種間コミュニケーション用であることが仮定されている（Bassler他，J．Bacteriol．179：4043-4045，1997）。他の研究は、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅもまた、二段階のクオラムセンシング応答を有することを示している。第一段階では、微生物が例えば宿主の胃等の過酷な環境を通過したら生物膜から脱出できるように、生物膜の生成を制限する。第二段階では、細菌が生物膜を脱出して腸内で繁殖したら群れの形成を開始させ、細菌を宿主から離脱させて周期を再び開始させる。
【００１２】
クオラムセンシングリガンド及び表現型の多様性から、臨床医は、多様なクオラムセンシング応答を精査する多数のクオラムセンシング化合物を有することにより、それらの応答を変更する又は減弱させる方法を同定することができるであろう。更に、合成クオラムセンシング類似体（アナログ）を使用する場合、天然のリガンドから得られる以外のより多様な応答を同定し得る。加えて、クオラムセンシング化合物に至る合成経路の開発により、時間のかかる分子生物学的方法に依存しない、また、それ自体が天然のリガンドのバックボーンに基づかない、迅速でより効率的な類似体の生成方法が提供されるであろう。加えて、そのクオラムセンシング経路を介して病原菌を攻撃するこの戦略は、抗生物質に依存せずに細菌毒性を制御する方法を提供する。このことは、抗生物質耐性の誘導、及び付随する「多剤耐性菌」の産出を伴わない細菌感染の処置を可能にするであろう。
【００１３】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの最近の研究は、クオラムセンシングを担う１つ又は複数の遺伝子を欠いたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの毒性が、そのコロニー形成及び宿主内での拡大能力において減弱されていることを示している。同様に、数種の植物病原菌内のＡＨＬシンターゼの排除により、感染力は完全に損失された（Beck  von  Bodman，1998，Proc．Natl．Acad，Sci．USA  95:7687-7692；Whitehead他，2001，Microbiol．Rev．25:365-404）。ＡＨＬシンターゼを異所的に発現するように、また、誘導レベルのＡＨＬを生成するように操作された形質転換植物系は、宿主−微生物相互作用のバランスを、疾病耐性の方向へシフトさせた（Fray他，1999，Nat．Biotechnol．171:1017-1020；Mae他，2001，Mol．Plant  Microbe  Interact．14：1035-1042）。植物による内因性ＡＨＬ化合物の生成は、疾病耐性及び感受性の程度の変化の基礎であることが考えられる（Teplitski他，2000，Mol．Plant  -Microbe  Interact．13:637-648）。数種の海草が産生するハロゲン化フラノンは、海洋生物付着の抑制に顕著な効果を有することが知られている。数種のフラノンはまた、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅの毒性相に関連した遺伝子を発現する能力を排除することによって、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅに有効であることが示されている。
【００１４】
現在の認識によれば、ＡＨＬリガンド（ＡＩ）は、或るＡＨＬ濃度（及び関連する細胞密度）閾値において、その同種の受容体、ＬｕｘＲ型タンパク質に結合し、群の挙動に関与する標的遺伝子の転写を活性化する(Fuqua，C.、Greenberg，E．P.、Nat．Rev．Mol．Cell  Biol．2002，3，685-695)。非天然ＡＨＬを用いて、内因性ＡＨＬの、その受容体に対する結合を遮断することは、クオラムセンシング制御において魅力的な戦略である。
【００１５】
クオラムセンシング細菌は、その病原体としてのコストに加えて、健康管理以外の産業においても、有意な経済的影響を有する。例えば、農業においては、Ｒｈｉｓｏｂｉｕｍ、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ及びＳｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属の様々な種は、マメ科植物の窒素固定を補助する重要な植物共生体である一方、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属の種は、有意な食物腐敗に関与している。例えば発電、製紙、及び水処理等の他の産業では、例えばＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ等の、多数の種類の粘液形成細菌による生物付着を受け易い。
【００１６】
それにも関わらず、ＡＨＬ類似体の発見の速度は遅く、その理由は、現在までに合成されたＡＨＬの大部分が、低収率且つ低純度で生成され、その場限りにスクリーニングされているためである（Eberhard，A.、Schineller，J．B.、Methods  Enzymol．2000，305，301-315；Reverchon，S.、Chantegrel，B.、Deshayes，C、Doutheau，A.、Cotte-Pattat，N.、Bioorg．Med.Chem．Lett．2002，12，1153-1157；Zhu，J.、Beaber，J．W.、More，M．I.、Fuqua，C、Eberhard，A.、Winans，S．C.、J．Bacteriol．1998，180，5398-5405）。現在、細菌のクオラムセンシングシステムを標的として、細菌の毒性を低下させ、殺菌性抗生物質に対する感受性を増大させる抗菌化合物は存在しない。したがって、ＡＨＬ類似体の生成のための新しい合成手法、及びクオラムセンシングに対するＡＨＬリガンド構造の効果の体系的な評価が必要である。加えて、非天然ＡＨＬ類似体は、毒性及び病原性を増大させずに、クオラム経路を刺激する能力に有意な利益を提供し得る。
【発明の概要】
【００１７】
本明細書に開示する発明は、自己誘導物質類似体である、新たに同定された新規な化合物を提供する。加えて、本明細書に開示する新規な化合物は、様々なクオラムセンシング経路において、アンタゴニスト又はアゴニストのいずれかとして作用し得る。様々な実施態様において、本発明は、天然及び非天然ＡＨＬ類似体の両方を含む自己誘導物質の類似体を生成する新規な合成方法も提供する。本明細書に記載するように生成した様々なＡＨＬ類似体は、クオラムセンシング細菌の感染性及び病原性の変更及び／又は調節に使用されて、抗生物質に依存したり、若しくは抗生物質に加えられることなく、細菌感染又は細菌発生の処置を可能にし得る。
【００１８】
様々な例示的な実施態様において、本発明の新規なクオラムセンシングＡＨＬ類似体を開示する。これらの例示的な実施態様では、本明細書に開示した新規なクオラムセンシング類似体は、ＡＨＬアゴニスト及びアンタゴニストの両方である。
【００１９】
様々な他の例示的な実施態様において、本明細書に開示されるＡＨＬ類似体は、高純度で、且つ優れた収率で合成されることができる。
【００２０】
様々な例示的な実施態様において、本発明は、下記式（Ｉ）の化合物を提供する。
【化１２】
2008530013.tif 000003
（式中、ｎは１、２又は３であり、ここでｎ＝１の場合、置換アミノに結合した環Ｃは、キラル中心とすることができ、Ｒ1は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＣＯＲ2、−(ＣＨ2)aＣＨＯＨＲ2、−(ＣＨ2)aＲ6、−Ｏ−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ、−ＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)bＣＨ3、−Ｒ6ＨＣ＝ＣＨＲ7、−Ｒ6Ｃ＝ＣＲ7、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ2は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ3から選択され、Ｒ4は−Ｈ、−ＣＨ2−から選択され、Ｒ5は−Ｈであり、Ｒ6及びＲ7は、同一か又は異なり、且つ−Ｈ、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、ａ及びｂは、独立して０〜１５の整数である）
【００２１】
好ましい所定の実施態様において、化合物は、表１の化合物から選択される。
【００２２】
【表１−１】
2008530013.tif 000004
【００２３】
【表１−２】
2008530013.tif 000005
【００２４】
【表１−３】
2008530013.tif 000006
【００２５】
他の好ましい実施態様では、本発明は自己誘導物質類似体のコンビナトリアルライブラリー（組み合わせライブラリー）を提供する。所定の実施態様では、本発明は、下記式（Ｉ）の二種又はそれ以上の化合物のコンビナトリアルライブラリーを提供する。
【化１３】
2008530013.tif 000007
（式中、ｎは１、２又は３であり、ここでｎ＝１の場合、置換アミノに結合した環Ｃは、キラル中心とすることができ、Ｒ1は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＣＯＲ2、−(ＣＨ2)aＣＨＯＨＲ2、−(ＣＨ2)aＲ6、−Ｏ−(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ、−ＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)aＣＨ3、−(ＣＨ2)aＨＣ＝ＣＨ(ＣＨ2)bＣＨ3、−Ｒ6ＨＣ＝ＣＨＲ7、−Ｒ6Ｃ＝ＣＲ7、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ2は−Ｈ、−(ＣＨ2)aＣＨ3、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、Ｒ3は−Ｈ、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ3から選択され、Ｒ4は−Ｈ、−ＣＨ2−から選択され、Ｒ5は−Ｈであり、Ｒ6及びＲ7は、同一か又は異なり、且つ−Ｈ、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換のＣ3〜Ｃ8アリール、置換及び非置換の３〜８員の複素環から選択され、ここでヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ又はＮの少なくとも一つであり、ａ及びｂは、独立して０〜１５の整数である）
【００２６】
所定の実施態様では、前記化合物は下記式を有する。
【化１４】
2008530013.tif 000008
（式中、Ｒ1は、−ＣＨ2ＣＯＲ2、Ｃ6Ｈ13、
【化１５】
2008530013.tif 000009
であり、
Ｒ2は、Ｃ5Ｈ11又は
【化１６】
2008530013.tif 000010
である。）
【００２７】
他の実施態様では、前記化合物は下記式を有する。
【化１７】
2008530013.tif 000011
（式中、Ｒ1は、−ＣＨ2ＣＯＲ2、又は
【化１８】
2008530013.tif 000012
であり、
Ｒ2は、Ｃ5Ｈ11又は
【化１９】
2008530013.tif 000013
である）
【００２８】
様々な例示的な実施態様において、本発明は、スキームＩ〜ＩＩＩに記載するような固相合成である、ＡＨＬ類似体を合成する方法を個別に提供する。
【００２９】
別のいくつかの例示的な実施態様において、本発明は、高純度及び高収率で生成されるＡＨＬ類似体の効率的な合成方法を提供する。様々な例示的な実施態様において、本明細書に記載する方法で合成されるＡＨＬ類似体は、短時間にて合成される。
【００３０】
本発明は、天然に存在する及び天然に存在しないＡＨＬ類似体の両方を合成する方法を、個別に提供する。別の様々な例示的な実施態様において、本発明は、ＡＨＬリガンドライブラリーの効率的な合成方法を提供する。様々な例示的な実施態様において、ＡＨＬ類似体ライブラリーは、コンビナトリアルライブラリーである。更に別の例示的な実施態様において、本明細書に開示する方法で生成したＡＨＬ類似体は、アゴニスト及びアンタゴニストの両方を個別に含み得る。
【００３１】
本発明は、ＡＨＬ類似体の効率的なスクリーニング方法を個別に提供する。様々な例示的な実施態様において、本明細書に記載するスクリーニング方法は、レポーター遺伝子アッセイ及び生物膜生成アッセイを含む。
【００３２】
本発明は、細菌のクオラムセンシング経路を操作する及び混乱させる(perturbation)組成物及び方法を個別に提供する。様々な例示的な実施態様において、本明細書に記載するＡＨＬ類似体は、生物膜形成を阻害する天然のＡＨＬリガンドと競合し得る。様々な他の例示的な実施態様において、ＡＨＬは、生物膜生成を時期尚早に刺激する。
【００３３】
様々な例示的な実施態様において、本発明は、クオラムセンシング経路を妨害する、また、クオラムセンシング細菌による生物膜、毒性因子及び／又は酵素の生成を低下させる及び／又は阻害することによる、クオラムセンシング細菌の毒性を阻害する及び／又は減弱させる方法を提供する。
【００３４】
様々な他の例示的な実施態様において、本発明は、農業において、細菌の増殖及び感染力の阻害／調節及び／又は促進に使用する化合物及び方法を提供する。
【００３５】
更に別の例示的な実施態様において、本発明は、生物付着が経済的に影響を与える、例えば製紙、水処理及び発電等において、化合物及び当該化合物を使用する方法を個別に提供する。
【００３６】
本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。しかしながら、当業者には、この詳細な説明から、本発明の趣旨及び範囲内で様々な変更及び改良が明らかとなるため、詳細な説明及び特定の実施例は、本発明の例示的な実施態様を示すと共に、例示として提供されていることを理解するべきである。
【好ましい実施態様の説明】
【００３７】
多数の細菌の表現型の形質は、クオラムセンシングにより検出される細菌密度に応じて変更される。これらの表現型は、病原菌内で重要な健康上の影響を有し、それらは毒性、カルバペネム抗生物質産生、生物膜形成、酵素合成及び二次代謝産物合成を含む。これらシグナル伝達経路の変更又は妨害は、クオラムセンシング細菌の生命サイクルを変化させる可能性があり、それによりそれらの毒性を変化させる。他のクオラムセンシング細菌も、例えば農業、水処理及び発電等の産業にて重要な経済的影響を有している。
【００３８】
クオラムセンシングシステムは、自己誘導物質及びその受容体の双方のレベルにおいて操作し得る。研究により、生物膜形成及び他の毒性因子の発現の両方が、受容体、及びＡＩの変異導入又は削除により阻害されたことが示されている。したがって、非天然ＡＩ、又はＡＨＬ類似体の合成により、微生物の毒性を除去する又は減弱させる類似した能力が達成され得る。更に、それら合成類似体を生成する効率的な方法により、天然に存在するＡＨＬに変異導入する、時間のかかる分子生物学手段を使用することなく、自己誘導物質のライブラリーを創り上げる機会が提供される。このような方法は、そのライブラリーを創り上げるより迅速で効率的な方法を提供するのみならず、それ自体が自然モデルに基づいたＡＨＬ類似体の生成も可能にする。更に、天然に存在しないＡＨＬ類似体の使用により、クオラムセンシング経路を減弱させるように当該経路を刺激し、異なる親和性により結合し、プロモーターに結合すると受容体に立体障害をもたらして、それにより異なる表現型応答を引き出す化合物が提供され得る。
【００３９】
一般に、クオラムセンシングに至る少なくとも３つの構成要素が存在し、それらは：（１）受容体／転写因子；（２）拡散性シグナル、自己誘導物質（ＡＩ）；及び（３）標的遺伝子のプロモーター領域内の認識部位である。クオラムセンシングの一般的なモデルは、膜結合活性化因子又は転写因子（ＬｕｘＲ）、遺伝子のプロモーター領域内のｌｕｘボックスと称されるシス作用逆方向反復、及びＡＩ、Ｎ−アシル−ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）を必要とする。Ｖ．ｆｉｓｃｈｅｒｉでは、ｌｕｘ遺伝子は、生物発光を担い、低いレベルで転写される。少量のＡＨＬが細胞外に拡散し、その環境内に集まる。高い細胞密度において、ＡＨＬは蓄積して、細胞膜上に存在する受容体／活性化因子に結合する。これは、内部移行する複合体を形成して、活性化因子／転写因子をｌｕｘボックスに結合させ、ＡＩの産生を増大及び増幅させ、結果としてカスケード効果の発生、及びＡＩの転写の増大をもたらす。
【００４０】
クオラムセンシングシステムを変更する又は混乱させる能力は、細菌の生命サイクル中の代謝経路に影響を与え、それによりクオラムセンシング細菌の病原性に影響を与える新たな機会を提示する。ＡＨＬリガンドのライブラリーを蓄積することにより、天然に存在するリガンド及び非天然ＡＨＬリガンドの結合親和性を探索し得る。これら化合物の活用に用いる様々な戦略は、クオラムセンシング経路を刺激せずに、天然のリガンドの結合を阻害するＡＨＬ類似体を使用すること、クオラムセンシング経路を誘導する内部移行を時期尚早に開始させるリガンドを利用すること、及び、内部移行を開始させるが、受容体のプロモーターに対する結合を阻害するリガンドを使用することを含む。
【００４１】
クオラムセンシング細菌の病原性は、例えば生物膜等、毒性因子によるクオラムセンシングシグナルに応答する微生物の能力を、阻害する又は低下させることにより、減弱させ又は排除し得る。毒性因子は、疑わしい細菌の発生に、合成ＡＨＬ類似体を添加することにより阻害し得る。様々な例示的な実施態様において、類似体は、水溶液にて投与し得る。生物膜形成を防止することにより、抗体、免疫応答細胞、及び抗生物質が細菌に接近することができ、それにより宿主の感染に対抗する能力を増大させることができる。他の戦略は、細菌が排他的な生物膜を形成するのに十分密となる前に、生物膜マトリクスの生成を開始させ、細菌が接近可能である間に、より有効な免疫応答を宿主に準備させることを含む。加えて、天然のリガンドと比較してより高い又は低い親和性で受容体に結合する合成リガンドの同定は、標的プロモーターに対する受容体の結合を阻害する機会を提示する。
【００４２】
例示的な一実施態様において、本発明は、天然に存在するＡＨＬリガンド、及び本明細書に記載する方法により合成した非天然ＡＨＬ類似体を含む、クオラムセンシング化合物を提供し、それらは：
【化２０】
2008530013.tif 000014
を含む。
【００４３】
これらの化合物は、一般に、スキームＩ（図１Ａ）に示すように合成される。
【００４４】
【化２１】
2008530013.tif 000015
【００４５】
式中、ａ＝ＤＩＣ、ＨＯＢＴ、ＣＨＣ１3／ＤＭＦ、マイクロ波５０℃（２×１０分）；ｂ＝ＤＭＦ、マイクロ波１５０℃、７分；ｃ＝ＣＮＢｒ、ＴＦＡ、ＣＨＣ１3／Ｈ2Ｏ、マイクロ波６０℃、３０分である。
【００４６】
別の例示的な実施態様において、本明細書に開示する化合物は：
【化２２】
2008530013.tif 000016
を含む。
【００４７】
このような化合物は、一般に、スキームＩＩ（図１Ｂ）に示すように合成される。
【００４８】
【化２３】
2008530013.tif 000017
【００４９】
好ましい実施態様において、スキームＩＩに示した方法は、ハロゲン誘導体化基材、好ましくは塩化物誘導体化基材を用意する工程と、酸とカップリングする工程と、エポキシ化する工程と、エポキシド開環する工程と、脱保護する工程と、アシル化する工程と、環化する工程と、基材から切断する工程とを含む。
【００５０】
また別の例示的な実施態様において、本明細書に開示するクオラムセンシング化合物は：
【化２４】
2008530013.tif 000018
を含む。
【００５１】
これらの化合物は、一般に、スキームＩＩＩ（図１Ｃ）に示す方法により合成される。
【００５２】
【化２５】
2008530013.tif 000019
【００５３】
様々な例示的な実施態様において、本明細書に記載する本発明は、上記に示したクオラムセンシング化合物と微生物を接触させる工程を含む、微生物集団密度を調節する方法を提供する。接触させることは、多数の方法で行われ得る。
【００５４】
本明細書に定義するように、「接触させる」は、本発明で使用するクオラムセンシング化合物が、試験管、フラスコ、組織培地、チップ、アレイ、プレート、マイクロプレート、キャピラリー、又は同様物内で、受容体を含むサンプル内に導入され、クオラムセンシング化合物が受容体に結合し得るのに十分な温度及び時間でインキュベートされることを意味する。サンプルをクオラムセンシング化合物、又は他の特定の結合成分と接触させる方法は、当業者に既知であり、行うべきアッセイプロトコールの種類に応じて選択され得る。インキュベーション方法もまた、標準であり、当業者に既知である。
【００５５】
別の一実施態様において、用語「接触させる」は、本発明で使用するクオラムセンシング化合物が、処置を受けている対象内に導入され、当該化合物がｉｎ  ｖｉｖｏで接触されることを意味する。
【００５６】
本明細書に使用される用語「処置する」は、予防的処置、及び疾患の弛張熱の処置を含む。本明細書に使用される用語「低下させる」、「抑制する」及び「阻害する」は、それらが通常理解されている、軽減する又は低下させるという意味を有する。
【００５７】
本発明はまた、微生物内の毒性を低下させる方法を提供し、当該方法は、上記に示したクオラムセンシング化合物と上記微生物を接触させる工程を含む。
【００５８】
更に、別の一実施態様において、本発明は、微生物内で生物膜形成を調節する方法を提供し、当該方法は、本開示に示すクオラムセンシング化合物と上記微生物を接触させる工程を含む。本発明はまた、対象において微生物疾病に対する微生物疾病耐性又は感受性を調節する方法を提供し、当該方法は、クオラムセンシング化合物と上記微生物を接触させる工程を含む。
【００５９】
所定の実施態様において、本発明は、本発明に有用な化合物を患者又は対象に投与することを包含する。「患者」又は「対象」は、本明細書では等価に使用され、植物又は動物を指す。詳細には、動物は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。対象は、（１）クオラムセンシング化合物の投与により回復若しくは処置し得る病原体を有するか、又は（２）クオラムセンシング化合物の投与により予防し得る病原体に感受性があるかのいずれかである。
【００６０】
本発明は、クオラムセンシング化合物を合成する方法も提供し、当該方法は、スキームＩ〜ＩＩＩのいずれかに示す工程を含む。
【００６１】
上記に示した化合物、又はスキームＩ〜ＩＩＩに示した合成工程を用いて形成された化合物は、工業的用途も有している。例えば、例えば製紙、発電及び水処理等の生物付着が生じる工業では、生物膜に供される器具及び／又は機械を、クオラムセンシングアンタゴニストで処理して、生物膜の形成を防止し得る。このような処理は、高感度の機械、部品又は機器に、クオラムセンシング化合物を噴霧若しくは塗工するか、又は洗浄工程若しくは排水工程にて、クオラムセンシング化合物の有効な濃度を維持することを含み得る。
【００６２】
細菌が影響を与える作物は、有益な種、例えばＲｈｉｓｏｂｉｕｍ属のもの、及び他の関連した農学的に重要な細菌、例えばＳｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉｉ及びＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍを含む。有害なクオラムセンシング細菌、例えばＥｒｗｉｎｉａ種は、ニンジン、ジャガイモ、リンゴ、ナシ及びトウモロコシを含む作物の軟腐病の原因である。更に他の作物病原体は、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ（トマト及びタバコ）；Ｘａｎｏｔｈｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐａｔｈｏｖａｒｓ（コショウ及びトマト）；並びにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐａｔｈｏｖａｒｓ（トマト、シロイヌナズナ、マメ科植物）である。
【００６３】
本発明のいくつかの例示的な実施態様によれば、例えば根粒菌等の有益な細菌は、土壌、肥料又は同様物を処理し、また、有効量のクオラムセンシング化合物を作物に適用するか、又は土壌内に耕すことによって、作物との共生関係を形成するよう促され得る。同様に、有害な細菌は、土壌を処理し、又は噴霧剤として適用することによって、成長中の作物にクオラムセンシングアンタゴニストを適用して、作物植物への攻撃が阻害され得る。作物は、収穫中又は供給中にも、クオラムセンシング化合物を適用することによって処理され得る。同様の方法は、エチレングリコールで処理することによる果実の成熟の促進に使用される。
【００６４】
更に、いくつかの例示的な実施態様では、構成要素、外科器具、機械、食作物又は同様物を、二種以上のクオラムセンシング化合物で処理することが望ましい場合があることを理解すべきである。例えば、状況により様々な病原体が増殖し得る場合、その領域を疑わしい各細菌に対して最適化合物が使用されるように、クオラムセンシング化合物のカクテル又は混合物で処理することが望ましいであろう。いくつかの実施態様において、そのようなクオラムセンシング化合物は、全て阻害性であり得る。他の実施態様において、数種のクオラムセンシング化合物は阻害性とすることができ、数種は刺激性とすることができる。例えば、農業において、化合物は、肥料が窒素固定菌の増殖を促進する一方、様々な腐敗菌の増殖を阻害するものであれば、土壌に適用され得る。いくつかの実施態様において、クオラムセンシング化合物は、予防的に適用され得る。
【００６５】
したがって、包括的に記載する本発明は、例示を目的として挙げられていると共に本発明を限定することを意図しない以下の実施例を参照にして、より容易に理解されるであろう。
【００６６】
実験的背景
本発明に従った方法の様々な例示的な実施態様を、以下の例示的な実施例に記載する。これらの実施例において、アラビア数字（例、１、２、３等）で識別される特定の生成物は、続く記載及びスキームＩ（図１Ａ）に示す合成経路でそのように識別された特定の構造を指す。本発明は、ＡＨＬアゴニスト及びアンタゴニストの両方を含むＡＩ類似体を合成し、それにより組み合わせＡＨＬライブラリーを形成する方法を記載する。加えて、本発明は、新規なクオラムセンシング化合物をスクリーニングし、それらの受容体／活性化因子と相互作用する及び／又は当該因子に結合する能力をアッセイする方法を提供する。
【００６７】
これら課題に対処するために、天然及び非天然ＡＨＬの両方に至る固相合成経路（スキーム１）を開発した。固相方法は、液相方法と比較して改善された生成物純度を与え、またコンビナトリアルライブラリー構成を可能にすることから選択した（Ley，S．V.；Baxendale，I．R．Nat．Rev，Drug，Discov，2002，1，573-586）。今日迄、ＡＨＬ類似体を体系的に評価する組み合わせ方法の使用は、基本的に開拓されていない。固相合成及びライブラリー合成の両方の効率を更に高めるため、経路全体にマイクロ波（マイクロ波）支援反応を組み込んだ（Blackwell，H．E．Org．Biomol．Chem．2003，1，1251-1255；Kappe，C．O．Angew，Chem．Int．Ed．2004，43，6250-6284）。開発した４工程合成手法（スキームＩ）は、最初に、マイクロ波支援カルボジイミドカップリング（ＤＩＣ）を用いて（マイクロ波支援反応は、例えば、Milestone，Inc．Shelton，CTから入手可能な市販のマイクロ波反応器内で実施した）、アミノポリスチレン樹脂（１）にＮ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニン（２）を負荷することを含む。次に、Ｆｍｏｃ基を熱除去し、続いて、確立した手順により、様々なカルボン酸（４）又は保護β−ケト酸（５）と第二のマイクロ波支援ＤＩＣカップリングを行って（Rathke，M．W.；Nowak，M．A．Synth．Commun．1985，15，1039-1049）、アクリル化樹脂６を生成する。最後に、マイクロ波支援、タンデム環化−切断工程において臭化シアン（ＣＮＢｒ）とＬ−メチオニンとの古典的反応を用いて、ＡＨＬ７及びＡＨＬ８を固体支持体から解放する（Ko，D．H.；Kim，D．J.；Lyu，C．S.；Min，I．K.；Moon，H.-s．Tetrahedron  Lett．1998，39，297-300  (b)Kappel，J．C.；Barany，G．J．Comb．Chem．2005，7，78-84、及びその中の参考文献）。
【００６８】
天然及び非天然ＡＨＬに至るマイクロ波支援固相合成経路
ＡＨＬに至る固相経路は、グラム陰性菌からの約１５の既知の天然ＡＨＬ、及びその構造類似体へのアクセスを最初に提供するものであるため重要である。またこの経路は、生物学的研究用に十分な純度及び量で化合物を供給する。本発明者等は、試験として、６０分の合計反応時間で、主要な天然ＡＨＬ（７ａ〜７ｆ、８ａ〜８ｅ）を、良好な収率及び卓越した純度で合成した（表２）。ＡＨＬ８ｂ、Ｎ−３−オキソ−オクタノイルＬ−ホモセリンラクトン、（ＯＯＨＬ）及び８ｄ、Ｎ−３−オキソ−ドデカノイルＬ−ホモセリンラクトン、（ＯＤＨＬ）は、各々、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを用いた生物学的研究のために、重要な対照分子として必要とされた（実施例３８〜４２）。この手法を用いて到達可能な高い純度及び短縮された反応時間は、ＡＨＬ合成におけるマイクロ波支援固相化学反応の価値を強調する。表２に、スキームＩ（図ＩＡ）に示した経路により合成した、天然に存在するＡＨＬ、その天然源である生物、純度及び収率百分率を列挙する。
【００６９】
【表２】
2008530013.tif 000020
【００７０】
試験化合物（７ｇ〜７ｑ、８ｆ〜８ｈ）として使用した非天然ＡＨＬのライブラリーのパラレル合成に、スキームＩの固相経路を使用した。A．tumefaciens．Zhang，R．G.；Pappas，T.；Brace，J．L.；Miller，P．C.；Oulmassov，T.；Molyneaux，J．M.；Anderson，J．C.；Bashkin，J．K.；Winans，S．C.；Joachimiak，A．Nature  2002，417，971-974からのＴｒａＲの最近のＸ線構造にて明らかとなったように、ＡＨＬ生成物のアシル置換基及び立体化学を選択して、ＬｕｘＲ型タンパク質のＡＨＬ結合部位に存在する立体構造及び官能基を幅広くプローブした。この合成経路は堅固であることが確認され、非天然ＡＨＬを良好な収率（約７０％）及び高純度（＞９３％）で供給した（表３）。
【００７１】
【表３】
2008530013.tif 000021
【００７２】
合成工程：一般的な実験的情報
1Ｈ  ＮＭＲ及び13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ−３００分光器上にて、重水素化溶媒中で、各々３００ＭＨｚ及び７５Ｈｚで記録した。テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部基準（０．０ｐｐｍ）として用いて、化学シフトを１００万分の一（ｐｐｍ、δ）で報告する。カップリングは、ヘルツで報告する。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）ＭＳは、２個のポンプ（ＬＣ−１０ＡＤｖｐ）、コントローラ（ＳＣＬ−１０Ａｖｐ）、自動注入装置（ＳＩＬ−１０ＡＤｖｐ）、ＵＶダイオードアレイ検出器（ＳＰＤ−Ｍ１０Ａｖｐ）、及び単一の四重極分析計を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣＭＳ−２０１０システム（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＤ）を使用して得た。Pike  Technologies製の単一反射ＭＩＲａｃｌｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ  ＡＴＲユニットを装備したＢｒｕｋｅｒ  Ｔｅｎｓｏｒ  ２７分光器を用いて、ＦＴ−ＩＲ及び全反射型赤外吸収（ＡＴＲ）−ＩＲスペクトルを記録した。ＡＴＲ−ＩＲ測定のために、スペクトル領域２００００〜６５０ｃｍ-1のＺｎＳｅ結晶を使用した。ＨＰ−８４５２ＵＶ可視分光器を使用して、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウエアを作動させながらＵＶスペクトルを記録した。ＱＰ−５０００質量分析計を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＧＣ−１７Ａシステム（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＤ）を使用して、ＧＣ−ＭＳスペクトルを得た。Ｒｅｓｔｅｋ  ＲＴＸ−５  ｃｒｏｓｓｂｏｎｄ  ９５％ポリシロキサンＧＣカラムを、以下の一般的ＧＣ傾斜と伴に使用した：注入温度３００℃；最初の炉温度１００℃；保持３分；３００℃へ２０°Ｃ／分で傾斜(ramp)；全稼働時間１５〜３０分において保持２〜１５分。光学回転（［α］24D）は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ２４１デジタル偏光計上で、２５℃にて測定した。
【００７３】
全試薬を商業源（Alfa-Aesar，Ward  Hill，MA;Aldrich，Milwaukee，WI；Acros  Organics，Geel，Belgium；and  Sigma，St．Louis  MO）から購入し、更に精製することなく使用した。溶媒は、商業源（Aldrich及びJ.T．Baker，Phillipsburg，NJ）から購入し、ジクロロメタン（ＣＨ2Ｃｌ2）を除き、そのまま使用した。ジクロロメタンは、使用直前に水素化カルシウムで希釈した。全固相合成は、アミノメチルポリスチレン樹脂を使用して行った（NovaBiochem，Merck，KGaA，Darmstadt，DE）１００〜２００メッシュ；負荷１．１〜１．２ｍｍｏｌ／ｇ）。
【００７４】
マイクロ波機器：Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ（Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＣＴ）又はＣＥＭ（Ｍａｔｈｅｗｓ，ＮＣ）のいずれかの商業的マイクロ波反応器を用いて、固相反応を実施した。Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ  ＭｉｃｒｏＳＹＮＴＨ  Ｌａｂｓｔａｔｉｏｎは、連続電源（最大１０００Ｗ）を備えたマルチモードマイクロ波合成反応器である。この機器を、Ｅｔｈｏｓ  ＭｉｃｒｏＳＹＮＴＨ  Ｌａｂ  ＴｅｒｍｉｎａｌＰＣ作動ＥａｓｙＷａｖｅ反応監視ソフトウエアと接続した。この反応器システムを使用して、ワット（電力）制御又は温度制御のいずれかを用いて、反応物にマイクロ波を照射した。マイクロ波反応器は、反応容器の内部温度を直接監視することを可能にする光ファイバー温度センサと、キャビティ内の任意の反応容器の表面温度を監視する（反応器キャビティの側壁に取り付けた）赤外線センサとを備える。このシステムはまた、キャビティ内に回転板を有し、反応中の（マグネットスターラーバーを使用した）撹拌の機能を有する。
【００７５】
ＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒは、３００Ｗ（最大）電源を備えた単一モードマイクロ波合成反応器である。このシステムは、付随するＥｘｐｌｏｒｅｒ自動化合成ワークステーションモジュールを有し、該モジュールは、各々６個のサンプルを保持する４個のオートサンプラーラックを伴う。この機器は、Ｄｅｌｌ  Ｉｎｓｐｉｒｏｎ  ＰＣ作動ＣｈｅｍＤｒｉｖｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ反応監視ソフトウエアと接続されている。このシステムを使用して、ワット、圧力、又温度制御を用いて、反応物にマイクロ波を照射し得る。ＣＥＭマイクロ波反応器は、反応容器の下方に位置する赤外線温度センサを備えて、温度を制御する。このシステムはまた、反応中の（マグネットスターラーバーを使用した）撹拌の機能を有する。
【００７６】
本明細書に報告した全マイクロ波支援反応は、温度制御を用いてマイクロ波照射を監視及び制御して実施した。
【００７７】
固相ライブラリー合成技術
Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅマイクロ波反応器内の１００ｍＬ丸底フラスコ、又はＣＥＭマイクロ波反応器内の１０ｍＬガラス製ＣＥＭマイクロ波容器（部品番号９０８０３５）のいずれか内で、固相反応を実施した。合成工程間で、固相樹脂を、Ｖａｃ−Ｍａｎ真空マニフォルド（Ｐｒｏｍｅｇａ，部品番号：Ａ７２３１）上で、２０μｍフリット（Ａｌｌｔｅｃｈ，部品番号：２１１４０８）を備えた８ｍＬポリプロピレンサンプルリザーバ（Ａｌｌｔｅｃｈ，部品番号：２１０２０８）を使用して、標準的なポリプロピレンＮａｌｇｅｎｅスカートボトル(squirt  bottle)内に保管した溶媒で洗浄した。合成中、使い捨てポリプロピレンピペットチップを備えたＢｒｉｎｋｍａｎ  Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆピペットマン（可変の溶媒供給用に目盛りを付けた）を使用して、液体試薬を分配した。
【００７８】
１，３−ジオキソラン保護β−ケト酸の合成
この試験で使用した１，３−ジオキソラン保護β−ケト酸構成単位（５）は、Barnick及びRathke（Barnick，J.W．F．K.；van  der  Baan，J．L.；Bickelhaupt，F．Synthesis  1979，79，787-788；Rathke，M．W.；Nowak，M．A．Synth．Commun．1985，15，1039-1049）により報告された方法の変更を用いて調製した。代表的な合成を以下の実施例１〜３に概略し、スキームＩＶ〜ＶＩに示す。
【実施例１】
【００７９】
３−オキソオクタン酸（１０ｂ）の合成（スキームＩＶ）。
撹拌したビス−トリメチルシリルマロネート（２１．６ｇ、７１．５ｍｍｏｌ）の１００ｍＬの無水ジエチルエーテル溶液を−７８℃に冷却した。この溶液に、ｎ−ブチルリチウム（エーテル中１．６Ｍ、４４．７ｍＬ、７１．５ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、温度を−６０℃未満に維持した。添加が完了した後、反応物を−１０℃迄暖め、その時点で塩化ヘキサノイル（５ｍＬ、３５．７５ｍｍｏｌ）を迅速に加え、３０分撹拌した。次に、１５０ｍＬの冷５％重炭酸ナトリウム水溶液を加え、得られた溶液を３０分激しく撹拌した。水層を分離し、冷４Ｎ硫酸でｐＨ＝２迄酸性化した。次に、水層を２×５０ｍＬのジエチルエーテルで抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空下で濃縮して、白色固体を得た。この固体は、必要であれば、ヘキサンからの再結晶化により更に精製し得た。４．９ｇ、収率８７％。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝３．４９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．５９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、１．６４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３４（ｍ，４Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2）、０．９２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ＝２０４．４、１８２．８、８７．９、４８．１、４３．４、３１．３、２３．５、１４．１ｐｐｍ。
【００８０】
【化２６】
2008530013.tif 000022
【実施例２】
【００８１】
３−オキソオクタン酸メチル（１１ｂ）の合成（スキームＶ）
撹拌した１０ｂ（５．５ｇ、３５ｍｍｏｌ）の１５０ｍＬのベンゼン及びメタノール４：１混合物中の溶液に、ジエチルエーテル（２Ｍ、２１ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）中のＴＭＳＣＨＮ2を１０分間かけて加えた。反応物を３０分撹拌した後、反応混合物を真空濃縮して、１１ｂを黄色油状物として得た。この材料を、続く工程（スキームＩＶ）で、更に精製することなく使用した；６．１ｇ、収率９５％。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝３．７３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）３．４４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、１．６４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３６（ｍ，４Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ＝２０２．９、１６７．９、１２８．５、５２．７、４９．２、４３．２、３１．３、２３．３、１４．０ｐｐｍ。
【００８２】
【化２７】
2008530013.tif 000023
【実施例３】
【００８３】
３，３−エチレンジオキソオクタン酸（５ｂ）の合成（スキームＶＩ）
撹拌した３−オキソオクタン酸メチル（１１ｂ）（５．６ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）の１２５ｍＬのベンゼン溶液に、エチレングリコール（２０．２ｇ、３２５ｍｍｏｌ）及びｐＴｓＯＨ（０．６１７ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコに冷却器及びＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを装備して、２４時間加熱還流した。反応混合物を真空濃縮し、１００ｍＬのジエチルエーテル中で希釈した。有機層を２×２５ｍＬの１０％ＮａＯＨ水溶液で洗浄した後、２×２５ｍＬの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空濃縮して、透明な油状物を得た。この油状物を、１Ｎ  ＮａＯＨ（１５０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（７５ｍＬ）で６時間処理して鹸化した。塩基性溶液を真空濃縮し、氷浴内で冷却し、冷濃ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化した。酸性化溶液を２×７５ｍＬのジエチルエーテルで抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空濃縮して、３，３−エチレンジオキソオクタン酸５ｂを、透明油状物として得た；３．３ｇ、収率５０％。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝４．０６〜３．９５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ）、２．７０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、１．８３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、１．４２〜１．１８（ｍ，６Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，(ＣＨ2)3）、０．９４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．３、１０９．５、６５．３、３７．８、３２．０、２２．７、１４．１ｐｐｍ。
【００８４】
【化２８】
2008530013.tif 000024
【実施例４】
【００８５】
天然及び非天然アシル化ホモセリンラクトン類似体の合成
代表的なｎ−Ｆｍｏｃ−メチオニン樹脂負荷プロトコール（スキームＶＩＩ）
アミノメチルポリスチレン樹脂（１、５．２ｇ、６ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬ丸底フラスコ内にて４０ｍＬのＣＨＣｌ3中で、室温で１０分間、予め膨張させた。別個のフラスコ内で、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニン（２、６．７ｇ、１８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ（２．８ｇ、２１ｍｍｏｌ））、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ、３．８ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）の活性化溶液を、５０ｍＬのＤＭＦ中で調製した。この活性化溶液を室温で１０分間撹拌した後、膨張した樹脂に加えた。反応フラスコにスターラーバーを装備し、Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ光ファイバー温度プローブを（保護シース内で）挿入できるよう穿孔されているゴム隔壁で封入した。反応フラスコを、Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ  Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ  Ｌａｂｓｔａｔｉｏｎ内に配置して、５０℃で１０分間照射した（最大６００Ｗで５０℃まで３分傾斜、最大６００Ｗにて５０℃で１０分間保持）。次に、樹脂を濾過して、各２５０ｍＬのＤＭＦ、水、ＥｔＯＨ、及びＣＨ2Ｃｌ2で洗浄し、真空乾燥した。このカップリング工程を１回繰り返して、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニン樹脂を、ＵＶ吸収で定量して０．８〜０．９ｍｍｏｌ／ｇ負荷で得た。
【００８６】
【化２９】
2008530013.tif 000025
【実施例５】
【００８７】
代表的なＵＶ  Ｆｍｏｃ定量プロトコール
約２０ｍｇのＮ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニン負荷樹脂を、３ｍＬの４％１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液に浸し、室温で３０分撹拌した。その後，溶液１００μＬを除去し、ＤＭＦ中で３．０ｍＬに希釈した。この溶液の１．０ｍＬアリコートを回収して、石英キュベット内でＵＶ吸収を２９６ｎｍにて読み取り（ε296＝９５００Ｍ-1ｃｍ-1）；標準的な方法に従って、負荷を算出した。
【実施例６】
【００８８】
代表的なマイクロ波支援Ｆｍｏｃ−脱保護プロトコール
約３００ｍｇのＮ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニン負荷樹脂を、４ｍＬのＤＭＦと共に１０ｍＬのＣＥＭマイクロ波バイアル内に配置し、ＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ内にて１５０℃で６分間照射した（最大ワット量３００Ｗ）。ＵＶ  Ｆｍｏｃ定量を、上述したように実施した。
【実施例７】
【００８９】
代替的な室温Ｆｍｏｃ脱保護プロトコール
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−メチオニン負荷樹脂を、適当な大きさの容器内に配置して、２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液と共に３０分撹拌した。溶液を排出し、工程を繰り返した。ＵＶ  Ｆｍｏｃ定量を、上述したように実施した。
【実施例８】
【００９０】
ＡＨＬ（７ａ〜７ｒ）の代表的な合成（スキームＶＩＩＩ）
スターラーバーを装備した１０ｍＬのＣＥＭマイクロ波バイアル内で、メチオニン樹脂３（３００ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）を１．５ｍＬのＣＨＣｌ3中で、室温で５分、予め膨張させた。カルボン酸４（１．０３ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（１．５ｍｍｏｌ）の活性化溶液を、別個のバイアル内で２ｍＬのＤＭＦ中で調製し、５分間撹拌した。活性化溶液を膨張した樹脂に加え、反応混合物に５０℃で１０分間マイクロ波を照射した（傾斜時間３０秒、５０℃で１０分保持、最大ワット量３００Ｗ）。次に、樹脂を濾過し、各５０ｍＬのＤＭＦ、Ｈ2Ｏ、ＥｔＯＨ、及びＣＨ2Ｃｌ2で２回洗浄し、真空乾燥した。最良の収率を得るために、この工程を再度繰り返した。化合物を切断するために、樹脂を１．５Ｍ  ＣΝＢｒのＣＨＣｌ3溶液と、１％ＴＦＡ水溶液との５：２溶液７ｍＬで処理し、６０℃で３０分間マイクロ波を照射した（傾斜時間６０秒、６０℃で３０分保持、最大ワット量３００Ｗ）。ＡＨＬ生成物を５ｍＬのＣＨＣｌ3で樹脂から溶離させ、水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空濃縮して、ＡＨＬを白色粉末として得た。７ａ〜７ｑの純度及び収率を、表２及び表３に記載する。
【００９１】
【化３０】
2008530013.tif 000026
【実施例９】
【００９２】
３−オキソＡＨＬ（８ａ〜８ｈ）の代表的な合成（スキームＩＸ）
１０ｍＬのＣＥＭマイクロ波バイアル内で、メチオニン樹脂３（３００ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）を１．５ｍＬのＣＨＣｌ3中で、室温で５分間予め膨張させた。３，３−エチレンジオキソカルボン酸５（１．０３ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（１．５ｍｍｏｌ）の活性化溶液を、別個のバイアル内で２ｍＬのＤＭＦ中で調製し、５分間撹拌した。活性化溶液を膨張した樹脂に加え、反応混合物に５０℃で１０分間マイクロ波を照射した（傾斜時間３０秒、５０℃で１０分保持、最大ワット量３００Ｗ）。次に、樹脂を濾過し、各５０ｍＬのＤＭＦ、Ｈ2Ｏ、ＥｔＯＨ、及びＣＨ2Ｃｌ2で２回洗浄し、真空乾燥した。最良の収率を得るために、この工程を再度繰り返した。化合物を切断するために、樹脂を１．５Ｍ  ＣΝＢｒのＣＨＣｌ3溶液と、１％ＴＦＡ水溶液との５：２溶液７ｍＬで処理し、６０℃で３０分間マイクロ波を照射した（傾斜時間６０秒、６０℃で３０分保持、最大ワット量３００Ｗ）。ＡＨＬを５ｍＬのＣＨＣｌ3で樹脂から溶離させ、水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空濃縮した。この材料を５ｍＬの５０％ＴＦＡ／ＣＨ2Ｃ１2中で３０分間撹拌して、β−ケト脱保護を行った。溶液を水（２×５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空濃縮して、３−オキソＡＨＬ生成物を白色粉末として得た。８ａ〜８ｈの純度及び収率を、表２及び表３に記載する。
【００９３】
【化３１】
2008530013.tif 000027
【実施例１０】
【００９４】
代替的な室温マイクロ波切断プロトコール
化合物を切断するために、樹脂を、１．５Ｍ  ＣＮＢｒのＣＨＣｌ3溶液と、５０％ＴＦＡ水溶液との５：２溶液７ｍＬ中にて、室温で２４時間撹拌した。ＡＨＬ生成物を５ｍＬのＣＨＣｌ3で樹脂から溶離させ、水で洗浄し（３×１０ｍＬ）、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、真空濃縮して、３−オキソＡＨＬを白色粉末として得た。
【００９５】
図２〜図２７は、表２及び表３に列挙した合成ＡＨＬ類似体の化合物の同定及び純度の確認に使用したＧＣ−ＭＳ及び／又はＮＭＲスペクトル（上述したとおり）を示す。スキームＩの全合成経路を用いて化合物７ａ〜７ｒ及び８ａ〜８ｈの各々を合成し、天然に存在するＡＨＬ及び非天然ＡＨＬの両方を提供した。
【実施例１１】
【００９６】
Ｎ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ａ）
【化３２】
2008530013.tif 000028
【００９７】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ａ）を合成した。図２Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図２Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ＝５．９７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５１（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．９３（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．２９（ｈ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、０．９９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．７、１７４．２、６６．３、４９．５、３８．２、２９．９、１９．１、１３．９；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝１７１、実測値［Ｍ＋］＝１７１；［αD］＝＋１４．８（ｃ＝３．４ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３０２０、２４０１、１７８１、１５１５、１４２５、１２１６、９２９、７５７、６７０。
【実施例１２】
【００９８】
Ｎ−ヘキサノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｂ）
【化３３】
2008530013.tif 000029
【００９９】
実施例７に記載した方法により、Ｎ−ヘキサノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｂ）を合成した。図３Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図３Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．２２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５１（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８９（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、２．２０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．７１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３４（ｍ，４Ｈ，(ＣＨ2)2）、０．９３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．９、１７４．１、６６．４、４９．４、３６．４、３１．６、３０．８、２５．４、２２．６、１４．１；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝１９９、実測値［Ｍ＋］＝１９９；［αD］＝＋１５．９（ｃ＝３．４ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８９、３６２０、３４２６、３０２０、２９６３、２４０１、１７８１、１６７５、１５１０、１３８１、１２１６、１０２０、９２９、７５７、６６９。
【実施例１３】
【０１００】
Ｎ−オクタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｃ）
【化３４】
2008530013.tif 000030
【０１０１】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−オクタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｃ）を合成した。図４Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図４Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．４４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８５（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、２．２２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３０（ｍ，８Ｈ，(ＣＨ2)4）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．５、１７３．７、６５．９、４８．９、３５．９、３１．４、３０．１、２９．０、２８．８、２５．２、２２．４、１３．８；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２２７、実測値［Ｍ＋］＝２２７；［αD］＝＋１５．９（ｃ＝３．４ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３６１９、３４２７、３０２０、２９３０、２８５８、２４０１、１７８０、１６７３、１５１１、１４２３、１３８１、１２１６、１０１９、９２９、７７２、６６９。
【実施例１４】
【０１０２】
Ｎ−デカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｄ）
【化３５】
2008530013.tif 000031
【０１０３】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−デカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｄ）を合成した。図５Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図５Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．１６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５１（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．９０（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３０（ｍ，１２Ｈ，(ＣＨ2)6）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．７、１７３．９、６６．２、４９．３、３６．３、３１．９、３０．７、２９．５、２９．４、２９．３、２５．５、２２．７、１４．２；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２５５、実測値［Ｍ＋］＝２５５；［αD］＝＋１５．５（ｃ＝２．９ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３６２０、３４２７、３０２０、２９２８、２８５７、２４０１、１７８０、１６７３、１５１１、１４２３、１３８１、１２１６、１０１９、９２９、７７２、６６９。
【実施例１５】
【０１０４】
Ｎ−ドデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｅ）
【化３６】
2008530013.tif 000032
【０１０５】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−ドデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｅ）を合成した。図６Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図６Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．２２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８６（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３０（ｍ，１８Ｈ(ＣＨ2)9）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７６．１、１７４．３、６６．６、４９．７、３６．７、３２．４、３１．０、３０．１、２９．９、２９．７、２９．６、２５．９、２３．２、１４．６；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２８３、実測値［Ｍ＋］＝２８３；［αD］＝＋１５．１（ｃ＝３．５ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３６２１、３４２６、３０２０、２９２８、２８５６、２４０１、１７８０、１６７３、１５１１、１３８１、１２１６、１０１９、９２９、７６０、６６９。
【実施例１６】
【０１０６】
Ｎ−ヘキサデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｆ）
【化３７】
2008530013.tif 000033
【０１０７】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−ヘキサデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｆ）を合成した。図７Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図７Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）ｄ＝６．０３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．９２（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ2）、２．２０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ2）、１．３１（ｍ，２４Ｈ，(ＣＨ2)12）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）ｄ＝１７５．８、１７４．０、６６．４、４９．６、３６．５、３２．２、３１．０、３０．０、２９．７、２９．６、２９．５、２５．７、２３．０、１４．４；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝３３９、実測値［Ｍ＋］＝３３９；［αD］＝＋１４．９（ｃ＝２．４ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３６２１、３４２６、３０２０、２９２８、２８５５、２４０１、１７８１、１６７５、１５１３、１４２４、１３８１、１２１６。
【実施例１７】
【０１０８】
Ｎ−ヘプタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｇ）
【化３８】
2008530013.tif 000034
【０１０９】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−ヘプタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｇ）を合成した。図８Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図８Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．２８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８７（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ2）、２．２０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，ＣＨ2）１．３８（ｍ，６Ｈ，(ＣＨ2)3）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．５、１７３．６、６５．９、４９．０、３６．０、３１．３、３０．３、２８．７、２５．２、２２．３、１３．８；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２１３、実測値［Ｍ＋］＝２１３；［αD］＝＋１２．６（ｃ＝１．９ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８５、３６２１、３４２７、３０２０、２９３１、２４０１、１７８０、１６７４、１５１０、１４２３、１３８１、１２１６。
【実施例１８】
【０１１０】
Ｎ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｈ）
【化３９】
2008530013.tif 000035
【０１１１】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｈ）を合成した。図９Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図９Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝８．０８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−ｉｎｄｏｌｅ）、７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、７．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、７．２０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、７．１２（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、６．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、６．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，ＮＨ）、４．５４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．２６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、２．７６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１０（ｍ，３Ｈ，ＣＨ2＋ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１２２．２、１２１．９、１１９．５、１１９．１、１１５．６、１１１．３、６６．２、４９．４、３５．７、３０．７、２５．８、２４．６；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２８６、実測値［Ｍ＋］＝２８６；［αD］＝＋１４．２（ｃ＝２．６ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３６２０、３４８０、３４２６、３０２０、２９７７、２４０１、２３６２、２２５４、１７８０、１６７４、１６０３、１５１４、１２１７。
【実施例１９】
【０１１２】
Ｎ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｉ）
【化４０】
2008530013.tif 000036
【０１１３】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｉ）を合成した。図１０Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図１０Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．９９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、７．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．４Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、７．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−Ａｒ）、７．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，ＣＨ−Ａｒ）、５．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＮＨ）、４．５５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４６（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．２９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８５（ｍ，３Ｈ）、２．３２（ｍ，２Ｈ）、２．１７（ｍ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１２２．２、１２１．８、１１９．５、１１１．３、６６．３、４９．４、３５．７、３０．７、２５．８、２４．６；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２８６、実測値［Ｍ＋］＝２８６；［αD］＝−１１．６（ｃ＝１．９５ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３５９、２９２１、２６９２、２３５８、１７７１、１６４８、１５５８、１２２０、１０１９。
【実施例２０】
【０１１４】
Ｎ−Ｂｏｃ−（４−アミノメチル）−Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｊ）
【化４１】
2008530013.tif 000037
【０１１５】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−Ｂｏｃ−（４−アミノメチル）−Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｊ）を合成した。図１１は、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．７８（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．３５（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．０２（ｄ，１Ｈ，ＮＨ）、４．９８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４０（ｍ，３Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，ＣＨ2＋ＣＨ−ｌａｃ）、３．００（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．３５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．４７（ｓ，９Ｈ，ＢｏｃＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１３１．７、１２７．３、６６．１、４９．６、３０．４、２８．２；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝３３４、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝３５７；［αD］＝＋２１．６（ｃ＝２．７ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６２１、３４５３、３０２０、２４０１、１７８０、１６９２、１５２７、１２１６。
【実施例２１】
【０１１６】
Ｎ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｋ）
【化４２】
2008530013.tif 000038
【０１１７】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｋ）を合成した。図１２Ａは、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルである（挿入図は、化学構造を示す）。図１２Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．０１（ｄ，１Ｈ，ＮＨ）、５．８１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ビニル）、５．６９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ビニル）、４．５７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．１５（ｍ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，ＣＨ）、２．９１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝Ｉ．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）２．３９−２．０９（ｍ，６Ｈ）、１．５２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．６、１７３．０、１３３．７、１３２．１、６６．３、４９．５、４２．６、４２．６、４２．４、３２．１、３０．９、２９．８、２９．７；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２０９、実測値［Ｍ＋］＝２０９；［αD］＝＋１０．８（ｃ＝２．６ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３１１、２９２３、２８５１、１７７５、１６４３、１５４６、１１７３、１０１６。
【実施例２２】
【０１１８】
Ｎ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｌ）
【化４３】
2008530013.tif 000039
【０１１９】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｌ）を合成した。図１３Ａは、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルである（挿入図は、化学構造を示す）。図１３Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．０７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、５．８１〜５．７０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ビニル）、５．６９〜５．６６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ビニル）、４．６０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．１５〜３．１０（ｍ，１Ｈ）、２．９１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）２．４０−２．０８（ｍ，６Ｈ）、１．５４〜１．４３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７３．０、０３３．８、１３３．７、１３２．１、１３２．０、６６．３、４９．５、４２．６、４２．６、４２．４、３２．０、３０．８、２９．７；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２０９、実測値［Ｍ＋］＝２０９；［αD］＝−１２．９（ｃ＝２．７ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３１０、２９２３、２８５１、２３８５、１７７５、１６４３、１５４６、１１７３、１０１６。
【実施例２３】
【０１２０】
Ｎ−Ｂｏｃ−アミノカプラノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｍ）
【化４４】
2008530013.tif 000040
【０１２１】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−Ｂｏｃ−アミノカプラノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｍ）を合成した。図１４は、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝６．５０（ｄ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ｌａｃ、ＮＨ）、４．４９（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．１１（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ2）、２．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６９（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）、１．５２（ｍ，１２Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．８、１７３．７、１５６．２、６６．２、４９．２、４０．５、３６．０、３１．１、３０．３、２９．９，２８．６、２６．４、２５．１、１６．５；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝３１４、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝３３７；［αD］＝＋５．７（ｃ＝２．１ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３４５５、３０２０、２４０１、１７８１、１６９３、１５１１、１２１６。
【実施例２４】
【０１２２】
Ｎ−モノエチルフマロイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｎ）
【化４５】
2008530013.tif 000041
【０１２３】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−モノエチルフマロイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｎ）を合成した。図１５Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図１５Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．０（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．８７（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、４．７２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５４（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．２９（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ2）、２．９１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．３１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、１．３４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．２、１６５．５、１６４．４、１３５．１、１３１．８、６６．４、６１．６、４９．７、３０．４、２８．５、１４．３；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２２７、実測値［Ｍ＋］＝２２７；［αD］＝＋４．７（ｃ＝２．８ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３１６、２９２３、１７７８、１７１２、１６４５、１５４９、１１６６。
【実施例２５】
【０１２４】
Ｎ−（４−ブロモフェニルアセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｏ）
【化４６】
2008530013.tif 000042
【０１２５】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（４−ブロモフェニルアセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｏ）を合成した。図１６Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図１６Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．４９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．７，ＣＨ−Ａｒ）、７．１７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．７，ＣＨ−Ａｒ）、６．０２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．５８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４５（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．５９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８７（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１３２．８、１３１．９、１３０．９、６５．８、４９．２、３０．１；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２９７、実測値［Ｍ＋］＝２９７；［αD］＝＋３．８（ｃ＝２．５５ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３４１９、３０２０、２４０１、１７８２、１６７２、１２１６。
【実施例２６】
【０１２６】
Ｎ−（トランス−シナモイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｐ）
【化４７】
2008530013.tif 000043
【０１２７】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（トランス−シナモイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｐ）を合成した。図１７Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図１７Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．６６（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．４８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．３６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＮＨ）、６．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，Ｈ−ビニル）、４．７８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．９２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．３２（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７６．０、１６６．６、１４２．６、１３４．６、１３０．２、１２９．１、１２８．２、１１９．５、６６．５、４９．７、３０．７；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２３１、実測値［Ｍ＋］＝２３１；［αD］＝＋３０．２（ｃ＝２．４５ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３１２、２９２３、１７７４、１６４４、１５４７、１１７３、１０１６。
【実施例２７】
【０１２８】
Ｎ−（４−フェニルブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｑ）
【化４８】
2008530013.tif 000044
【０１２９】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（４−フェニルブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｑ）を合成した。図１８Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図１８Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．３１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．２１（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，ＮＨ）、４．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．６８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、２．３６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．０４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．７、１７３．５、１６７．７、１４１．５、１２８．７、１２８．６、１２６．２、１１５．０、６６．３、４９．４、３５．５、３５．３、
３０．７、２７．０；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２４７、実測値［Ｍ＋］＝２４７；［αD］＝＋２７．９（ｃ＝６．７ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３１４、２９３５、２３５８、２３３１、１７７１、１６５２、１４４７、１１７３。
【実施例２８】
【０１３０】
Ｎ−（４−フェニルブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｒ）
【化４９】
2008530013.tif 000045
【０１３１】
実施例８に記載した方法により、Ｎ−（４−フェニルブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｒ）を合成した。図１９Ａに、合成の純度を評価するＧＣ−ＭＳスペクトルを示す（挿入図は、化学構造を示す）。図１９Ｂは、ΝＭＲスペクトルであり、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．３１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、７．２１（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ）、６．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，ＮＨ）、４．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．８６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）、２．３６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，ＣＨ2）、２．１８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．０４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ2）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．６、１７３．５、１６７．６、１６３．９、１４１．５、１２８．７、１２８．６、１２６．２、１１５．１、１１５．０、６６．３、５９．４、４９．４、３５．５、３５．３、３０．７、２７．０；ＧＣ−ＭＳ：期待値ｍ／ｚ＝２４７、実測値［Ｍ＋］＝２４７；［αD］＝−２４．１（ｃ＝４．０ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３０９、２９６６、２６８５、２３５５９、２３３８、１７７２、１６６９、１５３９、１５５６、１２２１、１２０１。
【実施例２９】
【０１３２】
Ｎ−（３−オキソ−ヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ａ）
【化５０】
2008530013.tif 000046
【０１３３】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−ヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ａ）を合成した。図２０は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．８５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．５２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８２（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．５６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）、０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０４．７、１７３．１、１６４．９、６４．２、４７．４、４６．３、４４．０、２８．１、１５．１、１１．８；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２１３、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝２３６；［αD］＝＋１２．２（ｃ＝２．７ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３２８６、３９６６、１７８３、１７１８、１６４６、１５４５、１１７１。
【実施例３０】
【０１３４】
Ｎ−（３−オキソ−オクタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｂ）
【化５１】
2008530013.tif 000047
【０１３５】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−オクタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｂ）を合成した。図２１は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．９５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．５２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８１（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．５７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）、２．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）、１．４３（ｍ，４Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，(ＣＨ2)4）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０６．７、１７５．０、１６６．７、６６．３、６６．１、４９．３、４８．４、４４．０、３１．３、３０．０、２３．２、２２．６、１４．１；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２４１、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝２６４；［αD］＝＋１６．９（ｃ＝２．７ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３０２０、２４０１、１７８３、１７１２、１６７４、１５２７、１２１６。
【実施例３１】
【０１３６】
Ｎ−（３−オキソ−デカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｃ）
【化５２】
2008530013.tif 000048
【０１３７】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−デカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｃ）を合成した。図２２は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９，ＮＨ）、４．６５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．７９（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、２．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、１．２８（ｍ，８Ｈ，(ＣＨ2)4）、０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０６．７、１７５．１、１６６．６、６６．３、６６．１、４９．２、４８．４、４４．１、３１．８、２９．９、２９．２、２９．１、２３．６、２２．８、１４．２；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２６９、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝２９２；［αD］＝＋１６．７（ｃ＝３．４ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３２９５、２９２３、２８５１、１７７５、１７１６、１６４５、１５４７、１１７６。
【実施例３２】
【０１３８】
Ｎ−（３−オキソ−ドデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｄ）
【化５３】
2008530013.tif 000049
【０１３９】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−ドデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｄ）を合成した。図２３は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＮＨ）、４．６５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、２．２９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、１．２６（ｍ，１２Ｈ，(ＣＨ2)6）、０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０６．７、１７５．１、１７４．１、１６６．７、６６．３、６６．１、４９．４、４９．２、４８．９、４８．４、４４．１、３６．４、３２．０、３０．７、２９．９、２９．６、２９．５、２９．５、２９．４、２９．２、２５．７；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２９７、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝３２０；［αD］＝＋１１．８（ｃ＝３．６ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３２９５、２９２２、２８５１、１７７５、１７１６、１６４４、１５４７、１１７１、１０１６。
【実施例３３】
【０１４０】
Ｎ−（３−オキソ−テトラデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｅ）
【化５４】
2008530013.tif 000050
【０１４１】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−テトラデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｅ）を合成した。図２４は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＮＨ）、４．６６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５６（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．５０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ2）、２．２８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、１．２６（ｍ，１２Ｈ，(ＣＨ2)6）、０．８９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝１７５．０、１６６．７、６６．３、６６．０、４９．５、３６．１、３２．１、３０．７、２９．８、２９．６、２９．５、２９．５、２９．４、２９．２、２５．７；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝３２５、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝３４８；［αD］＝＋１４．０（ｃ＝２．５ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３９２１、３３１５、２８５２、１７７７、１７１６、１６４５、１５４８、１１７４、１０１４。
【実施例３４】
【０１４２】
Ｎ−（３−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｆ）
【化５５】
2008530013.tif 000051
【０１４３】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｆ）を合成した。図２５は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．６６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６４（ｍ，３Ｈ，ＣＨ−Ａｒ）、７．２０（ｄ，２Ｈ，ＣＨ−Ａｒ）、４．６０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．２８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．８０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、３．５３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．７０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０４．０、１７５．１、１６７．０、１３２．９、１２９．８、１２９．６、１２９．２、１２７．８、６６．２、５０．８、４９．３、４７．６、２９．７；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２６１、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝２８４；［αD］＝＋１４．６（ｃ＝３．４ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３３５、３０５４、２９１６、１１７６、１７７２、１６６３、１５３８、１１７９、１０２２。
【実施例３５】
【０１４４】
Ｎ−（３−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（８ｇ）
【化５６】
2008530013.tif 000052
【０１４５】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（８ｇ）を合成した。図２６は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．７０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６９（ｍ，３Ｈ，ＣＨ−Ａｒ）、７．２１（ｄ，２Ｈ，ＣＨ−Ａｒ）、４．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．４９（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．８０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、３．５３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．７４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．２３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０４．１、１７４．９、１６７．１、１３２．７、１２９．７、１２９．６、１２９．２、１２８．８、１２７．８、６６．２、５０．９、４９．４、４７．３、２９．８；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２６１、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝２８４；［αD］＝−６．２（ｃ＝１．５ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３３３５、３０５４、２９１６、１１７６、１７７２、１６６３、１５３８、１１７９、１０２２。
【実施例３６】
【０１４６】
Ｎ−（３−オキソ−オクタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（８ｈ）
【化５７】
2008530013.tif 000053
【０１４７】
実施例９に記載した方法により、Ｎ−（３−オキソ−オクタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（８ｈ）を合成した。図２７は、ΝＭＲスペクトルであり（挿入図は、化学構造を示す）、ここで：1Ｈ  ΝＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝７．９５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、４．６７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．５３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、４．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、３．５２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８１（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、２．５７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）、２．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＣＨ−ｌａｃ）、１．６４（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ2）、１．４３（ｍ，４Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，(ＣＨ2)4）、０．９１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ3）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）δ＝２０６．７、１７５．０、１６６．７、６６．３、６６．１、４９．３、４８．４、４４．０、３１．３、３０．０、２３．２、２２．６、１４．１；ＭＳ（ＥＳＩ）：期待値ｍ／ｚ＝２４１、実測値［Ｍ＋Ｎａ］＝２６４；［αD］＝−１９．６（ｃ＝２．７ｍｇ／ｍＬ；ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ｃｍ-1）：３６８４、３０２０、２４０１、１７８３、１７１２、１６７４、１５２７、１２１６。
【実施例３７】
【０１４８】
ＡＨＬ  Ｍｏｓｈｅｒアミドの評価
スキームＩを介して合成したＡＨＬのエナンチオ純度を、ＡＨＬ  Ｍｏｓｈｅｒアミド誘導体の特徴付けにより評価した。この固相経路を用いて、Ｌ−及びＤ−メチオニンの両方を負荷した樹脂（３）から出発して、Ｒ−Ｍｏｓｈｅｒアミドジアステレオマーを合成した。ジアステレオマーの1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）スペクトルの分析は、ＡＨＬの光学純度(de)が９５％（ａ、ａ’、ｂ、ｂ’は、ＮＭＲスペクトルの各ピークの統合に基づく部分収率であり、１００（ａ−ａ’）又は１００（ｂ−ｂ’）から算出するように）を超えることを示した。図２８Ａ及び図２８Ｂに、各々、Ｄ及びＬホモセリンエナンチオマーの1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１４９】
生物学的スクリーニング
化合物の取り扱い及び試薬：合成化合物のストック溶液（１０ｍＭ及び１００ｍＭ）を酢酸エチル又はＣＨＣｌ3のいずれかで調製し、密封したバイアル内に−２０℃で保管した。アッセイに使用する前に、溶液を室温にした。溶媒耐性ポリプロピレン（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒカタログ番号３７９０）又はポリスチレン（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒカタログ番号３９９７）９６−ウェルプレートを適宜使用した。全生物学的試薬は、Fisherから購入し、封入された指示書に従って使用した。１．０ｇ／Ｌ  ＮＨ4Ｃｌ、０．３ｇ／Ｌ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．１５ｇ／Ｌ  ＫＣｌ、０．０１ｇ／Ｌ  ＣａＣｌ2、２．５ｍｇ／Ｌ  ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、５．０ｇ／Ｌグルコース、１．０ｇ／Ｌ  ＮａＨ2ＰＯ4、及び３．０ｇ／Ｌ  Ｋ2ＨＰＯ4を含有するＡＢ最小培地（ｐＨ＝６．８）を調製した。生物膜アッセイに使用したＭ９培地は、記載されているように調製した（De  Kievit，T．R.、Gillis，R.、Marx，S.、Brown，C.、Iglewski，B．H.、Appl．Environ．Microbiol．2001，67，1865-1873）。Ｍｉｌｌｅｒ吸収アッセイ用の緩衝液及び溶液を、記載されているように調製した(Miller，J．H.、Experiments  in  Molecular  Genetics；Cold  Spring，1972)。
【０１５０】
対照化合物：化合物７ｇ(Zhu，J.、Beaber，J．W.、More，M．I.、Fuqua，C.、Eberhard，A.、Winans，S．C．J．Bacteriol．1998，180，5398-5405)及び８ｈ(Reverchon，S.、Chantegrel，B.、Deshayes，C.、Doutheau，A.、Cotte-Pattat，N．Bioorg．Med，Chem．Lett．2002，12，1153-1157)を、上述した固相方法に従って調製した。以下のように修正した液相手順を用いて、化合物９を合成した(Smith，K．M.、Bu，Y.、Suga，H.、Chem．Biol．2003，10，563-571)：β−ケト酸５ｄ（４８３ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）及び２−アミノフェノール（２０４ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解し、その後１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、４５６ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、２２８ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、５００μＬ、２．８７ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣが完了を示すまで、反応混合物を室温で撹拌した（１２時間）。反応混合物を３０ｍＬのジエチルエーテルで希釈して、３０ｍＬの１０％クエン酸で２回、３０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ3で２回、及び１５ｍＬの飽和ＮａＣｌで１回洗浄した。エーテル層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を真空除去した。得られた固体を直ちに９５％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏに供して（３０分）、ケタールを脱保護した。反応混合物（３×１５ｍＬ）をＣＨＣｌ3で抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、ＣＨＣｌ3を真空除去して、黄褐色固体を得た。フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、９を白色固体として得た。２２８ｍｇ、４０％総収率。使用に要するときまで、化合物７ｇ、８ｈ、及び９を−２０℃で保管した。
【０１５１】
機器の使用：Ｗａｌｌａｃ  Ｍａｎａｇｅｒ  ｖ１．０３ソフトウエアを使用したＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ  ２１００  ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）(PerkinElmer，Wellsley，MA)マルチラベルプレートリーダーを用いて、吸収及び蛍光アッセイの結果を得た。６００ｎｍのフィルターを使用して、細菌細胞密度を読み取った。Ｍｉｌｌｅｒ型吸収アッセイに４２０ｎｍ及び５５０ｎｍのフィルターを使用した（Griffith，K．L.、Wolf，R．E.、Jr．Biochem．Biophys．Res．Commun．2002，290，397-402）。蛍光アッセイにおいて、励起用に４８５ｎｍのフィルター、発光用に５３５ｎｍのフィルターを使用して、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の生成を評価した。Ｌａｓｅｒｓｈａｒｐ  ｖ３．２ソフトウエアを使用したＢｉｏ−Ｒａｄ  ＭＲＣ−１０２４レーザー走査型共焦点顕微鏡を用いて、生物膜を可視化した。Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ａｓｓｉｓｔａｎｔ  ｖ４．０２ソフトウエア（nephrology.iupui.edu/imaging/software.htmから公に入手可能）を使用して、生物膜可視化データを操作した。
【実施例３８】
【０１５２】
合成ＡＨＬライブラリーのスクリーニング
上述したスキーマで構成されたＡＨＬライブラリーを、クオラムセンシングの拮抗作用に関して、二種の細菌のレポーター株内でスクリーニングした：１）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ−ＪＰ２（ｐｌａｓＩ−ＬＶＡｇｆｐ）、（De  Kievit，T．R.、Gillis，R.、Marx，S.、Brown，C.、Iglewski，B.H.、Appl．Environ．Microbiol．2001，67，1865-1873）及び２）Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ  ＷＣＦ４７（ｐＣＦ３７２）。これら２種の株の試験は、２つの理由から価値を有する：１）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの直接的な臨床的関連性、及び２）Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ内のＴｒａＲに関する生化学的及び構造的データの広範な群。これらレポーター株の両方は、天然のＡＨＬシンターゼを欠くが、活性化ＬｕｘＲ型受容体を保持する（各々、ＬａｓＲ及びＴｒａＲタンパク質）；外因性リガンドは受容体活性化を要求し、これは蛍光（ＬａｓＲについては緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ））又は吸収（ＴｒａＲについてはβ−ガラクトシダーゼ活性を介して）測定により測定し得る。
【０１５３】
拮抗作用スクリーニングは、一連の新規のクオラムセンシング阻害剤を明らかにした。図２９に示すこれらの実験において、天然のＡＨＬリガンド（８ｂ又は８ｄ）の存在下、非天然ＡＨＬで株を処理し、吸収又蛍光シグナルの低下は、非天然ＡＨＬがＬｕｘＲ型タンパク質活性に拮抗し得ることを示した。３種の化合物（７ｈ、７ｋ及び７ｏ）は、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ内でＴｒａＲに対して有意な活性を示し、対照として試験した以前に報告したＬｕｘＲ型タンパク質アンタゴニストと比較して、１〜２桁活性が高かった（１０μＭにて、７ｇ、８ｆ、及び９、図２９ａ及び図２９ｃ）。印象的なことに、ブロモ−フェニルＡＨＬ７ｏは、等モル濃度の８ｂ（１００ｎＭ）の５０％阻害を示した。興味深いことに、同一の３種のリガンドは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（図２９ｄ）内でＬａｓＲに対するアンタゴニストとしても同定された。ここでインドールＡＨＬ７ｈ及びブロモ−フェニルＡＨＬ７ｏは、３種の対照（４００μＭにて）の２倍の活性を有し、インドールＡＨＬ７ｈは、天然のリガンド８ｄと１２．５：１の比で、５０％阻害を示した。特に、３種の全リガンドは、巨大な疎水性アシル基を含んでいる。この構造的類似性は、それらの交差活性と合わせて、リガンドがＴｒａＲ及びＬａｓＲ受容体と同様に相互作用し得ることを示唆している；これらの相互作用を特徴付ける努力が、現在行われている。
【０１５４】
更に、リガンド７ｈ、７ｋ及び７ｏの交差反応性は、ＡＨＬコンビナトリアルライブラリーを構成するように示された方法が、ＡＨＬ様リガンド−受容体を有する全細菌のスクリーニングに使用するための合成リガンドを形成するに十分であることを示した。更に、天然に存在するリガンドと比較した非天然リガンドの作動作用(agonism)／拮抗作用(antagonism)の効果を測定するレポーター遺伝子アッセイを用いて、合成リガンドの特徴付けを行った。
【０１５５】
作動作用／拮抗作用効果の検討
表２に同定された合成類似体に関する作動作用／拮抗作用試験を、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａモデルの両方で実施した。図３０及び図３１に示したこれら実験の結果は、レポーターアッセイスクリーニングの能力のみならず、クオラムセンシング細菌の属全体の異なる宿主における各リガンドの交差反応性も示している。更に、図３２及び図３３に示した拮抗作用アッセイは、ＡＨＬ類似体の濃度範囲全体における有効性を示し、合成リガンドの濃度を変更すると、中間応答を生じることができ、高濃度では事実上シグナルが存在しなくなることを示す。
【実施例３９】
【０１５６】
Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓレポーター遺伝子アッセイ
最終濃度１００ｎＭを与える適量の濃縮ＡＨＬストック溶液を、空の培養管に加え、溶媒を蒸発させた。Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ  ＷＣＦ４７（ｐＣＦ３７２）の一晩培養物を、４００μｇ／ｍＬオクトピン及び５０μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含有する新鮮なＡＢ最小培地中で、ＯＤ600（光学密度）０．１に希釈した。ＡＨＬを含有する管に、希釈した培地１ｍＬ部を加えた。回転振盪インキュベータ（２００ｒｐｍ）内で、管を２８℃にて１２〜１６時間増殖させた。
【０１５７】
次に、培地を、Ｍｉｌｌｅｒアッセイ法に従って、β−ガラクトシダーゼ活性に関してアッセイした。簡単に言えば、各管からの細菌の１００μＬアリコートを、ポリスチレン９６−ウェルプレートのウェルに加え、各ウェルのＯＤ600を記録した。次に、各ウェルからの５０ｍＬアリコートを、２００μＬのＺ緩衝液、８μＬのＣＨＣｌ3及び４μＬの０．１％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液（ＳＤＳ）を含有する溶媒耐性９６−ウェルプレートに移動した。この懸濁液を、反復ピペット操作により混合し、その後ＣＨＣｌ3を沈降させた。各ウェルからの１００μＬのアリコートを、未使用のポリスチレン９６−ウェルプレートに移して、２０μＬの基質、ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（リン酸緩衝液中のＯＮＰＧ、４μｇ／ｍＬ）、を０時間で加えた。適切な黄色の発色後（約１５〜３５分）、５０μＬの１Ｍ  Ｎａ2ＣＯ3を加えて、反応を終了させた。プレートリーダーを用いて、各ウェルにつき４２０ｎｍ及び５５０ｎｍにおける吸収を測定し、標準的な方法に従って、Ｍｉｌｌｅｒ単位を算出した。
【０１５８】
使用したＡＨＬ類似体の濃度が１０4ｎＭであり、ＯＯＨＬ（８ｂ）ストック溶液を、その濃度が１００ｎＭとなるように各管に加えた以外は、拮抗作用アッセイに関して同様の方法を使用した（図３０）。次に、１０4ｎＭにて良好な阻害活性を示した化合物を、１００ｎＭのＯＨＨＬ（８ｂ）に対して、１０4ｎＭ〜１ｎＭの濃度範囲で試験した（図３２に示す）。全アッセイは、３回実施した。
【０１５９】
図３０に、ＡＨＬ誘導体７ｈ〜７ｒ及び８ｆ〜８ｈに関するＡ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓレポーター遺伝子スクリーニングデータの結果を示す。対照化合物７ｇ、８ｆ、及び９に関するデータを示す。レポーター株：ＷＣＦ４７（ｐＣＦ３７２）、Ｍｉｌｌｅｒ単位は、発色基質としてのＯＮＰＧを伴う相対的なβ−ガラクトシダーゼ活性を報告する。作動作用アッセイにおける化合物濃度：１００ｎＭ。拮抗作用アッセイにおける化合物濃度：１００ｎＭ天然リガンド８ｂ（ＯＯＨＬ）に対して１０4ｎＭ。誤差バーは、３回の反復スクリーニングから算出して、±１Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。
【０１６０】
図３１に、ある濃度範囲で、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓレポーター株内でのＡＨＬ誘導体７ｋ及び７ｏに関する拮抗作用スクリーニングデータを示す。レポーター株：ＷＣＦ４７（ｐＣＦ３７２）。Ｍｉｌｌｅｒ単位は、発色基質としてのＯＮＰＧを伴う相対的なβ−ガラクトシダーゼ活性を報告する。化合物は、１００ｎＭ天然リガンド８ｂ（ＯＯＨＬ）に対して様々な濃度でスクリーニングした。図３１Ａ〜図３１Ｆは、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓレポーター株内での、ＡＨＬ誘導体７ｈ（図３１Ａ）、７ｋ（図３１Ｂ）及び７ｏ（図３１Ｃ）並びに対照化合物７ｇ（図３１Ｄ）、８ｆ（図３１Ｅ）及び９（図３１Ｆ）に関する、用量応答拮抗作用スクリーニングデータの結果のグラフ表示である。レポーター株：ＷＣＦ４７（ｐＣＦ３７２）。Ｍｉｌｌｅｒ単位は、発色基質としてのＯＮＰＧを伴う相対的なβ−ガラクトシダーゼ活性を報告する。化合物は、１００ｎＭ天然リガンド８ｂ（ＯＯＨＬ）に対して様々な濃度でスクリーニングした。誤差バーは、少なくとも３回の反復スクリーニングから算出して、±１Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。
【実施例４０】
【０１６１】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａレポーター遺伝子アッセイ
最終濃度１μＭを与える適量の濃縮ストック溶液を、ポリプロピレン９６−ウェルプレートに加え、溶媒を蒸発させた。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ−ＪＰ２（ｐｌａｓＩ−ＬＶＡｇｆｐ）の一晩培養物を、２００μｇ／ｍＬカルベニシリンを含有する新鮮なＬＢ培地中で、ＯＤ600０．１に希釈した。２００μＬの希釈培地をプレートの各ウェルに加え、回転振盪インキュベータ（２００ｒｐｍ）内で、３７℃で６時間インキュベートした。培地をポリスチレン９６−ウェルプレートに移して、プレートリーダーを使用してＧＦＰ発現を測定し、この値を細胞密度に正規化した。使用したＡＨＬ類似体の濃度が４００μＭであり、ＯＤＨＬ（８ｄ）ストック溶液を、その濃度が１μＭとなるように、各ウェルに加えたこと以外は、図３２に示した拮抗作用アッセイに同様の方法を使用した。次に、４００μＭにて良好な阻害活性を示した化合物を、１μＭのＯＤＨＬ（８ｄ）に対して、４００μＭ〜４ｎＭの濃度範囲で試験した（図３３に示す）。全アッセイは、３回実施した。
【０１６２】
図３２に、ＡＨＬ誘導体７ｈ〜７ｒ及び８ｆ〜８ｈに関するＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａレポーター遺伝子スクリーニングデータを示す。対照化合物７ｇ、８ｆ、及び９に関するデータを示す。レポーター株：ＰＡＯ−ＪＰ２（ｐｌａｓＩ−ＬＶＡｇｆｐ）。蛍光は、対照（８ｄ、ＯＤＨＬ）に対する百分率として報告する。作動作用アッセイにおける化合物濃度：１μＭ。拮抗作用アッセイにおける化合物濃度：１μＭ天然リガンド８ｄ（ＯＤＨＬ）に対して４００μＭ。誤差バーは、３回の反復スクリーニングから算出して、±１Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。
【０１６３】
図３３Ａ〜図３３Ｆは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａレポーター株内での、ＡＨＬ誘導体７ｈ（図３３Ａ）、７ｋ（図３３Ｂ）及び７ｏ（図３３Ｃ）並びに対照化合物７ｇ（図３３Ｄ）、８ｆ（図３３Ｅ）及び９（図３３１Ｆ）に関する、用量応答拮抗作用スクリーニングデータの結果のグラフ表示である。レポーター株：ＰＡＯ−ＪＰ２（ｐｌａｓＩ−ＬＶＡｇｆｐ）。蛍光は、天然リガンド８ｄ（ＯＤＨＬ）に対する百分率として報告する。化合物は、１μＭ天然リガンド８ｄ（ＯＤＨＬ）に対して様々な濃度でスクリーニングした。誤差バーは、少なくとも３回の反復スクリーニングから算出して、±１Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。
【０１６４】
図３１Ａ〜図３１Ｆ及び図３３Ａ〜図３３Ｆに示したデータを、Ｓ字形用量応答曲線に適合して、ＩＣ50値を算出した。これらを下記表４に示す。
【０１６５】
【表４】
2008530013.tif 000054
【０１６６】
Ａ．ｔｕｍａｆａｃｉｅｎｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの両方におけるスクリーニング法の結果は、これら方法で合成したＡＨＬ類似体のアゴニスト／アンタゴニストの効果のスクリーニング及び測定における、レポーター構築物の有効性を示している。更に、様々なＡＨＬ類似体の交差反応性は、それらのＡ．ｔｕｍａｆａｃｉｅｎｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｓｏａレポーター株の両方との相互作用能力により示される。
【実施例４１】
【０１６７】
生物膜形成の妨害
生物膜形成は、大部分はＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ内のＬａｓＲの制御下にあるため、本発明者等は、アンタゴニスト７ｈ及び７ｏがＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ生物膜形成を妨害し得ると仮定した。Iglewski及び共同研究者により報告された標準的な手順に従って、アッセイを実施した。
【０１６８】
可視化を容易にするためにＧＦＰを構成的に産生するＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡＯ１（ｐＬＶＡｇｆｐ））株を使用して、標準的な静的(static)生物膜アッセイを実施した。生物膜を、リガンドの非存在下で（図３４Ａ）、及び５０μＭ合成リガンド７ｈ（図３４Ｂ）又は７ｏ（図３４Ｃ）の存在下で、４８時間成長させ、走査型レーザー共焦点顕微鏡法を用いて可視化した。処理した生物膜は、未処理対照と比較して蛍光が、有意に減少したように思われた。この未処理対照は、以前に、生物膜が細胞密度を低下させ、組織化を弱めたことを確立するのに使用されている。これらデータは、非天然クオラムセンシング化合物７ｈ及び７ｏの両方が、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの生物膜形成を強く阻害することを示す。
【実施例４２】
【０１６９】
生物膜形成の妨害
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１（ｐＴｄＫ−ＧＦＰ）を使用して、標準的な静的生物膜アッセイを実施した。簡単に言えば、一晩培養物を、２００μｇ／ｍＬカルベニシリンを含有する新鮮なＭ９培地中で、ＯＤ600０．１に希釈した。この希釈培地を、５０μＭアンタゴニストを含有する管に加えた。生物膜を、リガンドの非存在下で（図３５Ａ）；合成リガンド７ｈの存在下で（図３５Ｂ）；及び合成リガンド７ｏの存在下で（図３５Ｃ）（両方とも５０μＭ）、４８時間成長させ、走査型レーザー共焦点顕微鏡法を用いて可視化した。各管に滅菌したガラス製カバースリップを加え、培養物を、振盪せずに３７℃で４８時間インキュベートした。カバースリップを除去し、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、走査型レーザー共焦点顕微鏡法を用いて検査した。トップダウン(top-down)のＺの連続を、約１００μｍの距離で収集した。図３５〜図３７の画像は、別々の日に実施したいくつかの実験の代表例である。
【実施例４３】
【０１７０】
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ生物膜の用量依存的破壊のアッセイ：化合物７ｏ
上述した方法を用いたが、未処理（図３６Ａ）；５０μＭ  ７ｏ（図３６Ｂ）；２５μＭ  ７ｏ（図３６Ｃ）；及び１２．５μＭ  ７ｏ（図３６Ｄ）を含む処理群を使用して、合成クオラムセンシング化合物７ｏの用量依存的関係性を研究した。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡＯ１（ｐＬＶＡｇｆｐ））のコンポジットスタックした操作型共焦点レーザー顕微鏡写真は、生物膜の用量依存的破壊を明らかに示している。
【実施例４４】
【０１７１】
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ生物膜の用量依存的破壊のアッセイ：化合物７ｈ
上述した方法を用いたが、未処理（図３７Ａ）；５０μＭ  ７ｈ（図３７Ｂ）；２５μＭ  ７ｈ（図３７Ｃ）；及び１２．５μＭ  ７ｈ（図３７Ｄ）を含む処理群を使用して、合成クオラムセンシング化合物７ｈの用量依存的関係性を研究した。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡＯ１（ｐＬＶＡｇｆｐ））のコンポジットスタックした操作型共焦点レーザー顕微鏡写真は、生物膜の用量依存的破壊を明らかに示している。
【０１７２】
これらの発見の重要性は、細菌の生物膜形成の阻害剤が殆ど知られていないという事実により強調される。更に、図３６Ａ〜図３６Ｄ及び図３７Ａ〜図３７Ｄに示した効果は、これらの化合物に用量依存的効果があることを示している。これは、中間応答が獲得可能であり、作用メカニズムは、広範なクオラムセンシング細菌の属全体にて分析した各化合物に関して同様であり得ることを示す。
【０１７３】
本明細書に記載したようなクオラムセンシング化合物は、健康管理、及び細菌汚染が蔓延している他の産業において、直接的な影響を与えることが予期される。可溶な拡散性クオラムセンシング化合物が環境に導入又接触した際の生物膜形成を阻害する能力は、外科器具並びに食物及び水資源の細菌汚染に関連する臨床及び公衆衛生に直接的な意味を有する。更に、本明細書に記載した小さいコンビナトリアルライブラリーからの強力な阻害剤の発見は、更なるクオラムセンシング小分子調節因子を発見するための、焦点を絞った組み合わせ方法の潜在的な有用性を強調する。
【０１７４】
概略すれば、本発明は、天然及び非天然ＡＨＬの両方に高純度でアクセスする、ＡＨＬ自己誘導物質を含むクオラムセンシング化合物に至る堅固な合成経路を提供する。本明細書で開示した合成経路は、細菌のクオラムセンシングの強力な阻害剤である非天然ＡＨＬの組み合わせの同定に使用されてきた。更に、開示した方法により開発された化合物は、アゴニスト及びアンタゴニストの両方の同定を可能にし、それらの迅速な特徴付け及びスクリーニングの方法を提供する。これらの化合物は、クオラムセンシングを介した細胞間コミュニケーションの阻害と、それら細胞間のクオラムセンシングシステムを介した誤ったコミュニケーションの形成との両方に使用することができる。病原体及び有害な細菌のクオラムセンシングの操作により、研究、健康管理、農業、食品加工及び他の産業にそれを使用して、シグナル伝達を阻害し、それにより致死遺伝子の転写を阻害すること、又はその遺伝子の転写を時期尚早に誘導して、それにより関連する発病を回避することのいずれかが可能になる。簡単に言えば、本明細書に記載した化合物及び方法は、細菌の増殖、毒性及び病原性を制御する強力な新規のツールを示す。
【図面の簡単な説明】
【０１７５】
【図１Ａ】ＡＨＬの合成的生成のためのスキームＩを示す概略図である。式中、ａ＝ＤＩＣ、ＨＯＢＴ、ＣＨＣ１3／ＤＭＦ、マイクロ波５０℃（２×１０分）；ｂ＝ＤＭＦ、マイクロ波１５０℃（７分）；ｃ＝ＣＮＢｒ、ＴＦＡ、ＣＨＣ１3／Ｈ2Ｏ、マイクロ波６０℃（３０分）である。
【図１Ｂ】クオラムセンシング化合物の合成的生成のためのスキームＩＩを示す概略図である。
【図１Ｃ】クオラムセンシング化合物の合成的生成のためのスキームＩＩＩを示す概略図である。
【図２Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ａ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図２Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ブタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ａ）のＮＭＲスペクトルを示す図である。
【０１７６】
【図３Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ヘキサノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｂ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図３Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ヘキサノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｂ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図４Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−オクタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｃ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図４Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−オクタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｃ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図５Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−デカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｄ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図５Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−デカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｄ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【０１７７】
【図６Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ドデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｅ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図６Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ドデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｅ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図７Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ヘキサデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｆ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図７Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ヘキサデカノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｆ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図８Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ヘプタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｇ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図８Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−ヘプタノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｇ）のＮＭＲスペクトルを示す図である。
【０１７８】
【図９Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｈ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図９Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｈ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１０Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｉ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１０Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（インドール−３−ブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｉ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１１】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−Ｂｏｃ−（４−アミノメチル）−Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｊ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【０１７９】
【図１２Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｋ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１２Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｋ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１３Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｌ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１３Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（２−シクロペンテン−１−アセタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｌ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【０１８０】
【図１４】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−Ｂｏｃ−アミノカプラノイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｍ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１５Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−モノエチルフマロイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｎ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１５Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−モノエチルフマロイル−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｎ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１６Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（４−ブロモフェニルアセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｏ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１６Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（４−ブロモフェニルアセタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｏ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【０１８１】
【図１７Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（トランス−シナモイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｐ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１７Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（トランス−シナモイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｐ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１８Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（４−フェニルブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｑ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１８Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（４−フェニルブタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（７ｑ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図１９Ａ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（４−フェニルブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｒ）のＧＣ−ＭＳスペクトルを示す図である。
【図１９Ｂ】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（４−フェニルブタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（７ｒ）のＮＭＲスペクトルを示す図である。
【０１８２】
【図２０】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−ヘキサノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ａ）のＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２１】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−オクタノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｂ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図２２】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−デカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｃ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図２３】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−ドデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｄ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図２４】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−テトラデカノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｅ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図２５】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−Ｌ−ホモセリンラクトン（８ｆ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図２６】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（８ｇ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【図２７】図１Ａに示したスキームにより生成したＮ−（３−オキソ−オクタノイル）−Ｄ−ホモセリンラクトン（８ｈ）のΝＭＲスペクトルを示す図である。
【０１８３】
【図２８】図１Ａに示したスキームにより生成したＲ−ＭｏｓｈｅｒアミドＡＨＬ誘導体のΝＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）を示す図である。
【図２９】図２９Ａ〜２９Ｄは、（図２９Ａ）本発明の方法により同定したクオラムセンシングアンタゴニスト、（図２９Ｂ）既知のクオラムセンシングアンタゴニストに関する拮抗作用スクリーニングの結果、並びに（図２９Ｃ）Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ及び（図２９Ｄ）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａレポーター株内での両方の化合物のセットのクオラムセンシング拮抗活性を示す図である。
【０１８４】
【図３０】ＡＨＬ誘導体７ｈ〜７ｒ及び８ｆ〜８ｈを使用した、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓレポーター遺伝子スクリーニングの結果を示すグラフである。
【図３１】図３１Ａ〜３１Ｆは、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓレポーター株内での、ＡＨＬ誘導体７ｈ（図３１Ａ）、７ｋ（図３１Ｂ）及び７ｏ（図３１Ｃ）、並びに対照化合物７ｇ（図３１Ｄ）、８ｆ（図３１Ｅ）及び９（図３１Ｆ）に関する、用量応答拮抗作用スクリーニングデータの結果を示すグラフである。レポーター株：ＷＣＦ４７（ｐＣＦ３７２）。Ｍｉｌｌｅｒ単位は、発色基質としてのＯＮＰＧを伴う相対的なβ−ガラクトシダーゼ活性を示す。化合物は、１００ｎＭの天然リガンド８ｂ（ＯＯＨＬ）に対して様々な濃度でスクリーニングした。誤差バーは、少なくとも３回の反復スクリーニングから算出して、±１Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。
【０１８５】
【図３２】ＡＨＬ誘導体７ｈ〜７ｒ及び８ｆ〜８ｈを用いた、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａレポーター遺伝子スクリーニングの結果を示すグラフである。
【図３３】図３３Ａ〜３３Ｆは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａレポーター株内での、ＡＨＬ誘導体７ｈ（図３３Ａ）、７ｋ（図３３Ｂ）及び７ｏ（図３３Ｃ）、並びに対照化合物７ｇ（図３３Ｄ）、８ｆ（図３３Ｅ）及び９（図３３Ｆ）に関する、用量応答拮抗作用スクリーニングデータの結果を示すグラフである。レポーター株：ＰＡＯ−ＪＰ２（ｐｌａｓＩ−ＬＶＡｇｆｐ）。蛍光は、天然リガンド８ｄ（ＯＤＨＬ）に対する百分率として示す。化合物は、１μＭの天然リガンド８ｄ（ＯＤＨＬ）に対して様々な濃度でスクリーニングした。誤差バーは、少なくとも３回の反復スクリーニングから算出して、±１Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。
【０１８６】
【図３４】図３４Ａ〜Ｃは、合成リガンド（５０μＭ）の存在下で、ガラススライド上で４８時間成長させた後の、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ生物膜のコンポジット３Ｄ顕微鏡写真を示す図である；（図３４Ａ）未処理、（図３４Ｂ）化合物７ｈ、及び（図３４Ｃ）化合物７ｏ。
【図３５】図３５Ａ〜３５Ｄは、合成リガンド（５０μＭ）の存在下で、ガラススライド上で４８時間成長させた後の、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡＯ１（ｐＬＶＡｇｆｐ））生物膜のコンポジットスタックした走査型レーザー共焦点顕微鏡写真を示す図である。スケールバー＝５０μｍ。図３５Ａ：未処理。図３５Ｂ：化合物７ｈ。図３５Ｃ：化合物７ｏ。
【図３６】図３６Ａ〜３６Ｄは、ＡＨＬリガンド７ｏの存在下で、ガラススライド上で４８時間成長させた後の、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡＯ１（ｐＬＶＡｇｆｐ））生物膜のコンポジットスタックした走査型レーザー共焦点顕微鏡写真を示す図である。スケールバー＝１０μｍ。図３６Ａ：未処理。図３６Ｂ：５０μＭ化合物７ｏ。図３６Ｃ：２５μＭ化合物７ｏ。図３６Ｄ：１２．５μＭ化合物７ｏ。
【図３７】図３７Ａ〜３７Ｄは、ＡＨＬリガンド７ｈの存在下で、ガラススライド上で４８時間成長させた後の、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡＯ１（ｐＬＶＡｇｆｐ））生物膜のコンポジットスタックした走査型レーザー共焦点顕微鏡写真を示す図である。スケールバー＝１０μｍ。図３７Ａ：５０μＭ化合物７ｈ。図３７Ｂ：２５μＭ化合物７ｈ。図３７Ｃ：１２．５μＭ化合物７ｈ。
【図１Ａ】
2008530013.tif 000066
【図１Ｂ】
2008530013.tif 000067
【図１Ｃ】
2008530013.tif 000068
【図２Ａ】
2008530013.tif 000069
【図２Ｂ】
2008530013.tif 000070
【図３Ａ】
2008530013.tif 000071
【図３Ｂ】
2008530013.tif 000072
【図４Ａ】
2008530013.tif 000073
【図４Ｂ】
2008530013.tif 000074
【図５Ａ】
2008530013.tif 000075
【図５Ｂ】
2008530013.tif 000076
【図６Ａ】
2008530013.tif 000077
【図６Ｂ】
2008530013.tif 000078
【図７Ａ】
2008530013.tif 000079
【図７Ｂ】
2008530013.tif 000080
【図８Ａ】
2008530013.tif 000081
【図８Ｂ】
2008530013.tif 000082
【図９Ａ】
2008530013.tif 000083
【図９Ｂ】
2008530013.tif 000084
【図１０Ａ】
2008530013.tif 000085
【図１０Ｂ】
2008530013.tif 000086
【図１１】
2008530013.tif 000087
【図１２Ａ】
2008530013.tif 000088
【図１２Ｂ】
2008530013.tif 000089
【図１３Ａ】
2008530013.tif 000090
【図１３Ｂ】
2008530013.tif 000091
【図１４】
2008530013.tif 000092
【図１５Ａ】
2008530013.tif 000093
【図１５Ｂ】
2008530013.tif 000094
【図１６Ａ】
2008530013.tif 000095
【図１６Ｂ】
2008530013.tif 000096
【図１７Ａ】
2008530013.tif 000097
【図１７Ｂ】
2008530013.tif 000098
【図１８Ａ】
2008530013.tif 000099
【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３１Ｄ】
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【図３１Ｅ】
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【図３１Ｆ】
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【図３２】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３３Ｄ】
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【図３３Ｅ】
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【図３３Ｆ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３６Ｄ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３７Ｄ】
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【国際調査報告】
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