(57)【要約】非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）のようなＢ細胞リンパ腫を処置する方法が開示される。これらの方法では、化学療法剤、ＩＬ−２、及び場合により抗ＣＤ２０抗体の併用治療が使用される。一つの態様において、本発明は、Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、治療を必要とする被験体に、（ａ）１つ以上の化学療法剤、（ｂ）ＩＬ−２、及び場合により（ｃ）抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
2008530232.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、治療を必要とする被験体に、（ａ）化学療法剤、（ｂ）ＩＬ−２、及び場合により（ｃ）抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与することからなる、方法。
【請求項２】
前記化学療法剤が、（ａ）シクロホスファミド、（ｂ）ドキソルビシン、（ｃ）ビンクリスチン、（ｄ）プレドニゾン、及び（ｅ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の構成成分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化学療法剤がシクロホスファミドを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記化学療法剤がドキソルビシンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記化学療法剤がビンクリスチンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記化学療法剤がプレドニゾンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記化学療法剤が、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）モノクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体がリツキシマブである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列と少なくとも７０％配列が同一であるアミノ酸配列を含む組み換え的に産生されたＩＬ−２である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列と少なくとも８０％配列が同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列と少なくとも９０％配列が同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列が同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＩＬ−２が、ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｂ細胞リンパ腫が低悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｂ細胞リンパ腫が中悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｂ細胞リンパ腫が高悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩＬ−２及び抗ＣＤ２０抗体の多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＩＬ−２が週２回又は週３回の投与レジメンに従って投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＩＬ−２が皮下投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＣＤ２０抗体が週１回の投与レジメンに従って投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＣＤ２０抗体が静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法剤が静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学療法剤が経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記化学療法剤及び抗ＣＤ２０抗体の多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記化学療法剤がＣＨＯＰである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＩＬ−２及び抗ＣＤ２０抗体の多回治療有効用量が、前記化学療法剤及び抗ＣＤ２０抗体の投与後に投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記化学療法剤がＣＨＯＰである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＩＬ−２の多回治療有効用量が、前記化学療法剤の投与後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＩＬ−２の多回治療有効用量が、免疫再構成を実施するのに十分な時間にわたり前記被験体に投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記化学療法剤がＣＨＯＰである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記化学療法剤及びＩＬ−２の多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記化学療法剤がＣＨＯＰである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記化学療法剤、前記抗ＣＤ２０抗体及び前記該ＩＬ−２の多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記化学療法剤がＣＨＯＰである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を処置する方法であって、治療を必要とする被験体に、（ａ）ＣＨＯＰ、（ｂ）ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）、及び場合により（ｃ）リツキシマブの治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項３７】
アルデスロイキン及びリツキシマブの多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
アルデスロイキン及びＣＨＯＰの多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
アルデスロイキン、ＣＨＯＰ及びリツキシマブの多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記アルデスロイキンが週２回又は週３回の投与レジメンに従って投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記アルデスロイキンが皮下投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記リツキシマブが週１回の投与レジメンに従って投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＣＨＯＰが静脈内投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
前記アルデスロイキンの多回治療有効用量が、前記ＣＨＯＰの投与後に投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＣＨＯＰ及びリツキシマブの多回治療有効用量が前記被験体に投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
前記アルデスロイキン及びリツキシマブの多回治療有効用量が、前記ＣＨＯＰ及びリツキシマブの投与後に投与される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、治療を必要とする被験体に、（ａ）化学療法剤、（ｂ）ＩＬ−２、及び場合により（ｃ）抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与することを含む方法における、化学療法剤、ＩＬ−２、及び場合により抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項４８】
Ｂ細胞リンパ腫を処置する薬剤の製造における、化学療法剤、ＩＬ−２、及び場合により抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項４９】
低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を処置する薬剤の製造における、ＣＨＯＰ、ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）、及び場合によりリツキシマブの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００５年２月１５日に出願された仮出願第６０／６５３，２３３号、および２００５年４月１４日に出願された仮出願第６０／６７１，３７６号の利益を主張する。これらの出願は、参考としてその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、一般的にリンパ腫を処置する方法に関する。具体的には、本発明は、化学療法剤、ＩＬ−２、及び場合により抗ＣＤ２０抗体の併用治療を使用してＢ細胞リンパ腫を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）及びＴ細胞増殖及び機能の強力な刺激物質である（非特許文献１）。この天然のリンホカインは、単独で、又はリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）と組み合わせた時、多様な悪性腫瘍に対する抗腫瘍活性を有することが示されている（例えば、非特許文献２〜６を参照）。ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，  Ｃａｌｉｆ．から市販されているＩＬ−２製剤であるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を使用した、転移性黒色腫及び腎細胞癌の患者において最もよく記載されている。リンパ腫を含む他の疾患もＩＬ−２による治療に反応すると思われる（非特許文献７）。
【０００４】
モノクローナル抗体は、乳癌のような固形腫瘍の治療において、並びにＣＤ２０細胞表面抗原を発現するＢ細胞型リンパ腫の治療において、益々選択される方法になってきている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、ＣＤ２０に向けられているモノクローナル抗体が、アポトーシスによる細胞死をもたらすことを実証している（非特許文献８）。他の試験は、Ｂ細胞死が主に抗体依存性細胞傷害により仲介されることを報告する。
【０００５】
ＮＫ細胞を介して仲介されるＡＤＣＣによる抗ＣＤ２０抗体の抗腫瘍活性の可能な免疫学的な基礎のため、ＮＫ細胞機能を増強する単球、マクロファージ及び好中球と他のサイトカインとの組み合わせが検討されてきた。ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、γ−ＩＦＮ及びＩＬ−２のようなサイトカインは、明確なＮＫ機能であるＡＤＣＣの増強作用について試験されてきた。全てＡＤＣＣを増強するのに活性であると思われるが、それぞれの薬剤は、独自の特定の毒性に関わっている。例えば、非特許文献９および１０を参照されたい。ＩＬ−２とモノクローナル抗体リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．［米国カリフォルニア州サンディエゴ］）の併用治療についての進行中の試験は、これらの２つの治療剤による非ホジキンＢ細胞リンパ腫の患者における改善された臨床反応を示した（特許文献１；非特許文献１１）。
【０００６】
リツキシマブは、ネズミ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体から単離されたネズミ可変部領域を有するヒトＩｇＧ１及びκ定常部領域を含有するキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、ＩＤＥＣ−２Ｂ８である（非特許文献１２）。リツキシマブは、低悪性度及び高悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療に効果的であることが示されている（例えば、非特許文献１３〜２１を参照）。しかし、低悪性度ＮＨＬ患者の３０％から５０％が、このモノクローナル抗体に臨床反応を示さない（非特許文献２２および２３）。正確な作用機序は知られていないが、リツキシマブの抗リンパ腫効果は、部分的には補体仲介細胞毒性（ＣＭＣ）、抗体依存性細胞仲介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、細胞増殖の阻害、及び最後にアポトーシスの直接的な誘導に起因することを証拠は示している。
【０００７】
非ホジキンリンパ腫は、米国及び欧州の両方において発生率が増加しているリンパ性腫瘍の群を含む。低悪性度及び濾胞性リンパ腫は、一般的には全てのＮＨＬの４０％を占める。中悪性度及び高悪性度ＮＨＬ患者は、化学療法に良好に反応するが、低悪性度及び濾胞性リンパ腫は処置が難しく、患者は、現行の治療に難治性になるか又は再発後の治療に難治性になる可能性がある。殆どの患者は初期の化学療法に反応するが、疾患の経過によって、進行的に短期間の寛解となり、ＮＨＬにおける新規の治療戦略の必要性が強調される（非特許文献２４〜２６）。
【特許文献１】米国特許出願公開第２００３/０１８５７９６号明細書
【非特許文献１】Ｍｏｒｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９７６）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：１００７−１０１１
【非特許文献２】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  （１９８７）  ３１６：８８９−８９７
【非特許文献３】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  Ａｎｎ．  Ｓｕｒｇ．  （１９８８）  ２０８：１２１−１３５
【非特許文献４】Ｔｏｐａｌｉａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （１９８８）  ６：８３９−８５３
【非特許文献５】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  （１９８８）  ３１９：１６７６−１６８０
【非特許文献６】Ｗｅｂｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （１９９２）  １０：３３−４０
【非特許文献７】Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９９４）  ８３：２０２０−２０２２
【非特許文献８】Ｓｈａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９９８）  ９１：１６４４−１６５２
【非特許文献９】Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９８６）  ２３３：１３１８−１３２１；
【非特許文献１０】Ｇｏｌｌｏｂ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  （１９９８）  １０２：５６１−５７５
【非特許文献１１】Ｇｌｕｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２００４）  １０：２２５３−２２６４
【非特許文献１２】Ｒｅｆｆ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９９４）  ８３：４３５−４４５
【非特許文献１３】Ｍａｌｏｎｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９９４）  ８４：２４５７−２４６６
【非特許文献１４】ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （１９９８）  １６：２８２５−２８３３
【非特許文献１５】Ｍａｌｏｎｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９９７）  ９０：２１８８−２１９５
【非特許文献１６】Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （２０００）  ９５：３０５２−３０５６
【非特許文献１７】Ｃｏｌｏｍｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （２００１）  ９７：１０１−１０６
【非特許文献１８】Ｃｏｉｆｆｉｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９９８）  ９２：１９２７−１９３２）
【非特許文献１９】Ｆｏｒａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （２０００）  １８：３１７−３２４
【非特許文献２０】Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  （１９９７）  ２５：７０５−７０８
【非特許文献２１】Ｖｏｓｅ，  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （１９９９）  １０：５８ａ
【非特許文献２２】Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （２０００）  ９５：３０５２−３０５６
【非特許文献２３】Ｃｏｌｏｍｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （２００１）  ９７：１０１−１０６
【非特許文献２４】Ｃｏｉｆｆｉｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ８３  Ｓｕｐｐｌ．  １：Ｓ７３−４
【非特許文献２５】Ｗｉｎｔｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  （Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  Ｅｄｕｃ．  Ｐｒｏｇｒａｍ）：２０３−２２０
【非特許文献２６】Ｂｅｎｄａｎｄｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ａｎｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １５：７０３−１１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、ＮＨＬのようなＢ細胞リンパ腫における臨床反応の持続期間の改善及び全体的な腫瘍有効性についての追加的で革新的な戦略の必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、Ｂ細胞リンパ腫、特にＮＨＬを処置する安全で有効な方法を提供する。この方法は、１つ以上の化学療法剤、ＩＬ−２及び場合により抗ＣＤ２０抗体を使用することを含む併用治療を利用する。本明細書の実施例で示されているように、これらの治療レジメンは、腫瘍増殖を有意に阻害し、ＩＬ−２を伴わない、個別のＣＨＯＰ構成要素、リツキシマブ、及びＣＨＯＰとリツキシマブの使用よりも優れている。
【００１０】
一つの態様において、本発明は、Ｂ細胞リンパ腫を処置する方法であって、治療を必要とする被験体に、（ａ）１つ以上の化学療法剤、（ｂ）ＩＬ−２、及び場合により（ｃ）抗ＣＤ２０抗体又はその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
特定の実施形態において、化学療法剤は、（ａ）シクロホスファミド、（ｂ）ドキソルビシン、（ｃ）ビンクリスチン、（ｄ）プレドニゾン、及び（ｅ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンの組み合わせからなる群より選択される。一実施形態において、化学療法剤は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（ＣＨＯＰ）を含む。
【００１２】
特定の実施形態において、抗体は免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗体はリツキシマブである。
【００１３】
特定の実施形態において、ＩＬ−２は、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０５、最も好ましくは少なくとも約９５％同一である配列を有するアミノ酸配列を含む組み換え的に産生されたＩＬ−２である。一実施形態において、ＩＬ−２は、ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）である。
【００１４】
特定の実施形態において、ＩＬ−２及び抗ＣＤ２０抗体の多回治療有効用量が被験体に投与される。特定の実施形態において、化学療法剤及び抗ＣＤ２０抗体の多回治療有効用量が被験体に投与される。特定の実施形態において、ＩＬ−２及び抗ＣＤ２０抗体の多回治療有効用量は、化学療法剤及び抗ＣＤ２０抗体の投与後に投与される。特定の実施形態において、化学療法剤及びＩＬ−２の多回治療有効用量が被験体に投与される。特定の実施形態において、ＩＬ−２の多回治療有効用量は、化学療法剤の投与後に投与される。特定の実施形態において、ＩＬ−２の多回治療有効用量は、免疫再構成（ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）を実施するのに十分な時間被験体に投与される。特定の実施形態において、化学療法剤、抗ＣＤ２０抗体及びＩＬ−２の多回治療有効用量が被験体に投与される。
【００１５】
特定の実施形態において、ＩＬ−２は、週２回又は週３回の投与レジメンに従って投与される。特定の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、週１回の投与レジメンに従って投与される。ＩＬ−２を皮下投与することができ、抗ＣＤ２０抗体を腹膜内又は静脈内投与することができ、化学治療剤を静脈内又は経口投与することができる。
【００１６】
特定の実施形態において、本発明は、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を処置する方法を提供する。一実施形態において、方法は、治療を必要とする被験体に、（ａ）ＣＨＯＰ、（ｂ）ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２（アルデスロイキン）、及び場合により（ｃ）リツキシマブの治療有効量を投与することを含む。アルデスロイキン、ＣＨＯＰ及び／又はリツキシマブの多回治療有効用量を前記被験体に投与することができる。特定の実施形態において、アルデスロイキンは、週２回又は週３回の投与レジメンに従って投与される。一実施形態において、リツキシマブは、週１回の投与レジメンに従って投与される。アルデスロイキンを皮下投与することができ、リツキシマブを腹膜内又は静脈内投与することができ、ＣＨＯＰを静脈内又は経口投与することができる。
【００１７】
主題の発明のこれらの及び他の実施形態は、本明細書の開示を考慮することによって当業者は容易に思いつくであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、特に指示のない限り、当該技術分野の範囲内に含まれる薬学、化学、生化学、組み換えＤＮＡ技術及び免疫学の従来の方法を使用する。そのような技術は、文献のおいて十分に説明されている。例えば、Ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  （Ｂ．  Ｔｅｉｃｈｅｒ  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）；  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌｓ．  Ｉ−ＩＶ  （Ｄ．  Ｍ．  Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．  Ｃ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  ｅｄｓ．，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；  Ａ．  Ｌ．  Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｉｎｃ．，  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）；  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９８９）；  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （Ｓ．  Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｎ．  Ｋａｐｌａｎ  ｅｄｓ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．）を参照されたい。
【００１９】
上に記載されているか以下に記載されているかかかわらず、本明細書において引用される全ての出版物、特許及び特許出願は、全体が参考して本明細書に組み入れられる。
【００２０】
（Ｉ．定義）
本発明を記載するに当たり、以下の用語を用い、下記に示されるように定義されることを意図する。
【００２１】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈から明白に示される場合を除いて、複数対象を含むことに留意しなければならない。従って、例えば「化学療法剤」という言及には、そのような薬剤の２つ以上の混合物が含まれる。
【００２２】
本明細書で使用される「ＩＬ−２」という用語は、正常な末梢血リンパ球により産生されるリンホカインから誘導されるタンパク質であり、低濃度で体内に存在する。ＩＬ−２は、最初にＭｏｒｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９７６）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：１００７−１００８により記載され、刺激を受けたＴリンパ球の増殖を誘導するその能力のため、初めはＴ細胞増殖因子と呼ばれた。これは、１３，０００〜１７，０００の範囲の分子量が報告されているタンパク質であり（Ｇｉｌｌｉｓ  ａｎｄ  Ｗａｔｓｏｎ  （１９８０）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １５９：１７０９）、６〜８．５の範囲の等電点を有する。全長ＩＬ−２タンパク質及び生物学的に活性なそのフラグメントの両方が、この定義に包含される。この用語には、ＩＬ−２の発現後修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化等も含まれる。更に、本発明の目的において、用語「ＩＬ−２」は、タンパク質が、化学療法剤及び場合により抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて使用される時に生物学的活性、即ち抗腫瘍活性を維持する限り、未変性配列に対して欠失、付加及び置換（一般的に保守的な性質である）のような修飾を含むタンパク質を意味する。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発として意図的であることができるか、又はＰＣＲ増幅に起因するタンパク質又は錯誤を生じる宿主の突然変異のような偶然であることができる。
【００２３】
本明細書で使用される「誘導される」という用語は、分子の元の供給源を明らかにするが、例えば化学合成又は組み換え法でありうる、分子を製造する方法を限定することを意味しない。
【００２４】
「変異体」、「類似体」及び「突然変異タンパク質」という用語は、所望の活性を保持する基準分子の生物学的に活性な誘導体を意味する。例えば、ＩＬ−２の変異体、類似体又は突然変異タンパク質は、化学療法剤及び場合により抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて使用される時、抗腫瘍活性のような生物学的活性を有する。一般的に、「変異体」及び「類似体」という用語は、修飾が生物学的活性を破壊せず、かつ下記で定義されるように基準分子に「実質的に相同性」である限り、未変性分子に対して、１つ以上のアミノ酸付加、置換（一般的に保守的な性質である）及び／又は欠失のある未変性ポリペプチド配列及び構造を有する化合物を意味する。一般的に、そのような類似体のアミノ酸配列は、基準配列に対して高度な配列相同性を有し、例えば、２本の配列が整列する場合、５０％を越える、一般的に６０％〜７０％を越える、とりわけ、８０％〜８５％を越える、更には少なくとも９０〜９５％以上のアミノ酸配列の相同性である。多くの場合、類似体は、同じ数のアミノ酸を含むが、本明細書で説明される置換を含む。「突然変異タンパク質」という用語は、国際公開第９１／０４２８２号で記載されているもののような、１つ以上のペプチド模倣物（「ペプトイド」）を有するペプチドを意味する。好ましくは、類似体又は突然変異タンパク質は、未変性分子と少なくとも同じ生物学的活性を有する。ペプチド類似体及び突然変異タンパク質を作製する方法は、当業界で既知であり、下記で更に記載される。
【００２５】
この用語は、基準分子に対して行われた意図的な突然変異も包含する。特に好ましい類似体は、保守的な性質の置換、即ち側鎖に関連するアミノ酸ファミリー内で起こる置換を含む。具体的には、アミノ酸は、一般的に４つのファミリー：（１）酸性−アスパルギン酸及びグルタミン酸；（２）塩基性−リシン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；及び（４）不変極性−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンに分けられる。フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンは、時々、芳香族アミノ酸として分類される。例えば、イソロイシン又はバリンによるロイシンの単独交換、グルタミン酸によるアスパルギン酸の単独交換、セリンによるトレオニンの単独交換、又は構造的に関連するアミノ鎖によるアミノ酸の同様の保守的交換は、生物学的な活性に対して主な影響を与えないことが合理的に予測される。例えば、目的のタンパク質は、分子の所望の機能が無傷のままである限り、約５〜１０までの保守的又は非保守的アミノ酸置換、更には約１５〜２５、５０又は７５までの保守的又は非保守的アミノ酸置換、又は５〜７５の間の任意の整数で含むことができる。当業者は、変化に耐えることができる目的分子の領域を容易に決定することができる。
【００２６】
「誘導体」とは、未変性ポリペプチドの所望の生物学的活性が保持される限り、グリコシル化、リン酸化、ポリマー結合（例えばポリエチレングルコール）又は外来部分の他の添加のような、目的の未変性ポリペプチド、未変性ポリペプチドのフラグメント、又はそれぞれの類似体のあらゆる適切な修飾が意図される。ポリペプチドフラグメント、類似体及び誘導体を作製する方法は、当業界で一般的に入手可能である。
【００２７】
「フラグメント」とは、無傷の全長配列及び構造の一部分のみから構成される分子が意図される。フラグメントは、未変性ポリペプチドのＣ末端欠失、Ｎ末端欠失、及び／又は内部欠失を含むことができる。特定のタンパク質の活性フラグメントは、当該のフラグメントが本明細書で定義されている抗腫瘍活性のような生物学的活性を保持するのであれば、一般的に、全長分子の少なくとも約５〜１０個の隣接アミノ酸残基、好ましくは全長分子の少なくとも約１５〜２５個の隣接アミノ酸残基、最も好ましくは全長分子の少なくとも約２０〜５０個以上の隣接アミノ酸残基、又は５個のアミノ酸から全長配列の間の任意の整数を含む。
【００２８】
「実質的に精製される」は、一般的に、物質が、それが存在する試料を過半数の率で構成するような、物質（化合物、ポリヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド組成物）の単離を意味する。一般的には、試料において、実質的に精製された成分は、試料の５０％、好ましくは８０％〜８５％、より好ましくは９０〜９５％を構成する。目的のポリヌクレオチド及びポリペプチドを精製する技術は当業界で公知であり、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー及び密度に応じた沈降を含む。
【００２９】
「単離される」とは、ポリペプチドを参照する場合、示された分子が、分子が天然に見出されるか又は同じ型の他の生物学的巨大分子の実質的な不在下で存在する生物体全体から、分離及び区別されていることを意味する。ポリヌクレオチドに関する「単離される」という用語は、天然では通常関連している配列の全部又は一部が欠けている核酸分子、又は天然に存在するが、それに関連する非相同性配列を有する配列、又は染色体から分離している分子である。
【００３０】
「相同性」は、２つのポリヌクレオチド又は２つのポリペプチド部分の間の同一性の率を意味する。２つの核酸又は２つのポリペプチド配列は、配列が、分子の定義された長さに対して少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、最も好ましくは少なくとも約９５％〜９８％の配列同一性を示す場合、互いに「実質的に相同性」である。本明細書で使用される「実質的に相同性」とは、特定の配列に完全な同一性を示す配列も意味する。
【００３１】
一般的に、「同一性」は、正確にヌクレオチド対ヌクレオチド、又はアミノ酸対アミノ酸に対応するそれぞれ２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列を意味する。同一率は、配列を整列し、２つの整列した配列の間のマッチの正確な数を数え、基準配列の長さで割り、結果に１００を掛けて、２個の分子の間の配列情報（基準配列及び基準配列との同一率が不明の配列）を直接比較することによって決定できる。ペプチド分析用のＳｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：４８２−４８９，  １９８１の局所相同性アルゴリズムを適用するＡＬＩＧＮ，  Ｄａｙｈｏｆｆ，  Ｍ．  Ｏ．  ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｍ．  Ｏ．  Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｄ．，  ５  Ｓｕｐｐｌ．  ３：３５３−３５８，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃのような容易に入手可能なコンピュータープログラムを使用して、この分析に役立てることができる。ヌクレオチド配列同一性を決定するプログラムは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８から入手可能（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ．から入手可能）な、例えばＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＧＡＰプログラムであり、これらもＳｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムに依っている。これらのプログラムは、製造会社により推奨され、かつ上記で参照したＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅに記載されているデフォルトパラメータによって、容易に利用される。例えば、基準配列に対する特定のヌクレオチド配列の同一率は、デフォルトスコアリング表及び６個のヌクレオチドポジションのギャップペナルティーによるＳｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性アルゴリズムを使用して決定できる。
【００３２】
本発明の文脈における同一率を確立する別の方法は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈが著作権を持ちＪｏｈｎ  Ｆ．  Ｃｏｌｌｉｎｓ及びＳｈａｎｅ  Ｓ．  Ｓｔｕｒｒｏｋにより開発され、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．（米国カリフォルニア州マウンテンビュー）により販売されている、ＭＰＳＲＣＨパッケージプログラムを使用することである。このパッケージ一式において、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用することができ、デフォルトパラメータがスコアリング表で使用される（例えば、ギャップ開放ペナルティーは１２であり、ギャップ伸長ペナルティーは１であり、ギャップは６である）。生成されたデータから、「マッチ」値は、「配列同一性」を反映する。配列間の同一率又は類似性を計算するのに適切な他のプログラムは、一般的に当業界で既知であり、例えば、別の整合プログラムは、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴである。例えば、次のパラメータ：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；エクスペクト＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；デスクリプション＝５０配列；ソート＝ＨＩＧＨ  ＳＣＯＲＥ；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  翻訳＋Ｓｗｉｓｓタンパク質＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用する、ＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰを使用することができる。これらのプログラムの詳細は容易に入手可能である。
【００３３】
或いは、相同性は、相同領域の間で安定した二重鎖を形成し、続いて一本鎖の特定のヌクレアーゼにより消化し、消化されたフラグメントのサイズを決定する条件下で、ポリヌクレオチドのハイブリダイゼーションにより決定することができる。実質的に相同性のＤＮＡ配列を、例えば、特定のシステムで定義された厳密条件下でのサザンハイブリダイゼーション実験で同定することができる。適切なハイブリダイゼーション条件を定義することは当該技術分野の範囲内に含まれる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  ｅｔ  ａｌ．，前掲；  ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，前掲；  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，前掲を参照されたい。
【００３４】
核酸分子を記載するために本明細書で使用される「組み換え」という用語は、その起源又は操作によって、天然では関連するポリヌクレオチドの全て又は一部と関連しない、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成又は合成由来のポリヌクレオチドを意味する。タンパク質又はポリペプチドに関連して本明細書で使用される「組み換え」という用語は、組み換えポリヌクレオチドの発現により産生したポリペプチドを意味する。一般的に、目的の遺伝子は、下記で更に記載されるように、クローンされ、次に形質転換生物体で発現される。宿主生物体は、発現条件下で外来遺伝子を発現して、タンパク質を産生する。
【００３５】
「抗体」は、抗原に存在する目的のエピトープに特異的に結合する分子を意図する。「特異的に結合する」とは、抗体と例えば抗体が反応する試験基質との間で起こりうる非特異性結合と異なり、抗体がエピトープを認識し、「鍵と鍵穴」型の相互作用で相互作用して、抗原と抗体の間に錯体を形成することを意味する。本明細書で使用される「抗体」という用語には、ポリクローナル及びモノクローナル調製物から得られる抗体、並びに以下の抗体が含まれる：ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  （１９９１）  ３４９：２９３−２９９；及び米国特許第４，８１６，５６７号を参照）；Ｆ（ａｂ′）２及びＦ（ａｂ）フラグメント；Ｆｖ分子（非共有結合性ヘテロ二量体、例えば、Ｉｎｂａｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （１９７２）  ６９：２６５９−２６６２；及びＥｈｒｌｉｃｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  （１９８０）  １９：４０９１−４０９６を参照）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （１９８８）  ８５：５８７９−５８８３を参照）；二量体及び三量体抗体フラグメント作成物；ミノボディー（例えば、Ｐａｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  （１９９２）  ３１：１５７９−１５８４；  Ｃｕｍｂｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （１９９２）  １４９Ｂ：  １２０−１２６を参照）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  （１９８８）  ３３２：３２３−３２７；  Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９８８）  ２３９：１５３４−１５３６；及び英国特許公報第２，２７６，１６９号、１９９４年９月２４日発行を参照）；並びにそのような分子から得られた任意の機能性フラグメントであって、そのようなフラグメントは親抗体分子の免疫結合特性を保持する。
【００３６】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、同質の抗体集団を有する抗体組成物を意味する。この用語は、抗体の種又は供給源に関して限定せず、またそれが作られる方法により限定されることも意図しない。この用語は、免疫グロブリン全体、並びにＦａｂ、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖのようなフラグメン及び他のフラグメント、並びに、親モノクローナル抗体分子の免疫結合特性を示すキメラ及びヒト化同質抗体集団を包含する。
【００３７】
本明細書で使用される「抗癌抗体」という用語は、癌細胞、特に、目的の特定癌細胞にある特定の細胞表面抗原を標的にするように設計されている抗体を包含する。好ましくは、抗癌抗体は、性質がモノクローナルであり、好ましくはＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【００３８】
本明細書で使用される「抗ＣＤ２０抗体」という用語は、ポリクローナル抗ＣＤ２０抗体、モノクローナル抗ＣＤ２０抗体、ヒト抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体、異種抗ＣＤ２０抗体を含む、ＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原を特異的に認識するあらゆる抗体及びＣＤ２０Ｂ細胞表面抗原を特異的に認識するこれらの抗ＣＤ２０抗体のフラグメントを包含する。
【００３９】
「ＣＤ２０表面抗原」とは、初期プレＢ細胞発生の間に発現し、成熟したＢ細胞の間は持続するが、形質細胞段階で失われる、３３〜３７ｋＤの内在性膜リンタンパク質を意図する。ＣＤ２０は正常なＢ細胞に発現するが、この表面抗原は、通常、新生Ｂ細胞に非常に高レベルで発現する。約９０％を越えるＢ細胞リンパ腫及び慢性リンパ性白血病及び約５０％のプレＢ細胞急性リンパ性白血病がこの表面抗原を発現する。
【００４０】
「抗腫瘍活性」とは、細胞増殖の率の低減、従って現存する腫瘍若しくは治療中に発生する腫瘍の増殖率の低下を意図する、及び／又は現存する新生（腫瘍）細胞若しくは新たに形成された新生細胞の破壊、従って治療の際の腫瘍の全体的な大きさの減少を意図する。そのような活性は、ヒトＢ細胞リンパ腫のＮａｍａｌｗａ及びＤａｕｄｉ異種移植モデルのような、受け入れられている動物モデルを使用して評価できる。例えば、これらの動物モデルの記載は、Ｈｕｄｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  （１９９８）  １２：２０２９−２０３３を参照されたい。
【００４１】
「非ホジキンＢ細胞リンパ腫」又は「ＮＨＬ」とは、異常な制御不能なＢ細胞増殖に関連する任意の非ホジキン系リンパ腫を意図する。本発明の目的において、そのようなリンパ腫は、Ｂ細胞リンパ種が低悪性度、中悪性度及び高悪性度に分類されている、Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームに従って参照される（例えば、”Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，”  Ｃａｎｃｅｒ  ４９（１９８２）：２１１２−２１３５を参照）。低悪性度Ｂ細胞リンパ腫には、小リンパ球性、濾胞性小分割細胞型及び濾胞性混合小分割細胞型リンパ腫が含まれ、中悪性度リンパ腫には、濾胞性大細胞型、びまん性小分割細胞型、びまん性小細胞大細胞混合型及びびまん性大細胞型リンパ腫が含まれ、高悪性度リンパ腫には、大細胞型免疫芽球型、リンパ芽型及びバーキット及び非バーキット型の小型非分割細胞リンパ腫が含まれる。
【００４２】
ＩＬ−２若しくはその変異体又は抗ＣＤ２０抗体の「治療有効用量又は量」とは、化学療法剤と組み合わせて投与される場合、本明細書で記載されているＩＬ−２及び抗ＣＤ２０抗体が、抗腫瘍活性のような肯定的な治療反応をもたらす量が意図される。
【００４３】
（ＩＩ．本発明を実施する形態）
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の処方又は処理パラメータに限定されず、それらは当然のことながら変わることができることを理解するべきである。又、本明細書で使用される用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的のためのみであり、制限することを意図しない。
【００４４】
本明細書に記載されるものに類似する又はそれらと同等の多数の方法及び材料を本発明の実施において使用することができるが、好ましい材料及び方法が本明細書に記載されている。
【００４５】
本発明は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）のようなＢ細胞リンパ腫を、安全かつ効果的に腫を処置新規の治療方法論の発見に基づいている。この方法は、化学療法剤、ＩＬ−２、及び場合により抗ＣＤ２０抗体の送達を利用する。これらの方法を使用して、本明細書の発明は、全体的な腫瘍効果、並びに反応の持続力が増強されることを見出した。特に、実施例で詳述されているように、Ｂ細胞リンパ腫の科学的に許容される動物モデルを使用して、本明細書において発明者等は、ＩＬ−２及び化学療法剤ＣＨＯＰ、ＩＬ−２及びＣＨＯＰの個別の構成要素、ＩＬ−２、ＣＨＯＰ及びリツキシマブ、並びにＩＬ−２及びＣＨＯＰの個別の構成要素及びリツキシマブの併用治療が、対照治療と比較して腫瘍増殖を有意に阻害したことを示した。更に、薬剤ＩＬ−２及びリツキシマブ単独の使用に比べて、腫瘍の進行時間（ＴＴＰ）が遅延された。特筆すべきは、ＩＬ−２をＣＨＯＰ／リツキシマブレジメンに加えると、有意な腫瘍退縮が誘導され、ＴＴＰが増加し、結果は、ＣＨＯＰとリツキシマブの単独の使用よりも優れていた。
【００４６】
本発明の方法は、Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）システムに従って分類される、Ｂ細胞リンパ腫の治療的処置に有用である。そのようなＢ細胞リンパ腫には、Ｂ−リンパ芽球性白血病／リンパ腫のような前駆体Ｂ細胞新生物；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、赤血球無色症様リンパ腫／免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）（びまん性小細胞型、びまん性小細胞大細胞混合型及びびまん性大細胞型リンパ腫を含む）、周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（節外型、結節型及び脾型を含む）、毛様細胞白血病、形質細胞腫／骨髄腫、縦隔原発（胸腺）サブタイプのびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫及びバーキット様高悪性度Ｂ細胞リンパ腫を含む末梢Ｂ細胞新生物として分類されるリンパ腫、並びに分類不能な低悪性度又は高悪性度Ｂ細胞リンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。
【００４７】
本発明の方法は、現存のリンパ腫又は固形腫瘍を対象とするが、この方法は、治療の間に生じる更なる腫瘍の成長を防止するのに有用でありうることが認識される。本発明の方法は、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫を有する被験体、特に標準的化学療法の後で再発した被験体の治療において特に有用である。低悪性度Ｂ細胞リンパ腫は、中及び高悪性度Ｂ細胞リンパ腫よりも無痛性であり、再発／寛解の過程により特徴付けられる従って、これらのリンパ腫の治療は、本発明の方法を使用して改善され、再発の症例はその数及び重篤度が低減されうる。
【００４８】
本発明を更に理解するために、より詳細な考察が、化学療法剤、抗ＣＤ２０抗体、ＩＬ−２、並びにこれらの物質を送達する様式に関して下記に提示される。
【００４９】
（ＩＬ−２）
前述の通り、本発明の方法は、ＩＬ−２を、化学療法剤及び場合により抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて投与することを含む。本発明の方法に使用されるＩＬ−２は、未変性であることができるか又は組み換え技術により得ることができ、例えばマウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ及びヒトのような哺乳類供給源を含むあらゆる供給源からであることができる。多数の腫のＩＬ−２配列は、当業界で公知であり、以下が含まれるが、これらに限定されない：ヒトＩＬ−２（ホモサピエンス；前駆体配列、ジェンバンク受入番号ＡＡＨ６６２５４；ジェンバンク受入番号ＡＡＨ６６２５４の残基２１−１５３により表される成熟配列）；アカゲザルＩＬ−２（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔｏ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ５１４９８；ジェンバンク受入番号Ｐ５１４９８配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；オリーブヒヒＩＬ−２（Ｐａｐｉｏ  ａｎｕｂｉｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ８６５Ｙ１；ジェンバンク受入番号Ｑ８６５Ｙ１配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；ハイイロマンガベーＩＬ−２（Ｃｅｒｃｏｃｅｂｕｓ  ｔｏｒｑｕａｔｕｓ  ａｔｙｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ４６６４９；ジェンバンク受入番号Ｐ４６６４９配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；カニクイザルＩＬ−２（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ２９６１５；ジェンバンク受入番号Ｑ２９６１５配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；コモンテナガザルＩＬ−２（Ｈｙｌｏｂａｔｅｓ  ｌａｒ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号ＩＣＧＩ２；ジェンバンク受入番号ＩＣＧＩ２配列の残基２１−１５３により表される成熟配列）；コモンリスザルＩＬ−２（Ｓａｉｍｉｒｉ  ｓｃｉｕｒｅｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ８ＭＫＨ２；ジェンバンク受入番号Ｑ８ＭＫＨ２配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；ウシＩＬ−２（Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ０５０１６；ジェンバンク受入番号Ｐ０５０１６配列の残基２１−１５５により表される成熟配列；ジェンバンク受入番号ＮＰ−８５１３４０で報告される変異体の前駆体配列も参照されたい；ジェンバンク受入番号ＮＰ−８５１３４０配列の残基２４−１５８により表される成熟配列）；スイギュウＩＬ−２（Ｂｕｂａｌｕｓ  ｂｕｂａｌｉｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ９５  ＫＰ３；ジェンバンク受入番号Ｑ９５  ＫＰ３配列の残基２１−１５５により表される成熟配列）；ウマＩＬ−２（Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ３７９９７；ジェンバンク受入番号Ｐ３７９９７配列の残基２１−１４９により表される成熟配列）；ヤギＩＬ−２（Ｃａｐｒａ  ｈｉｒｃｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ３６８３５；ジェンバンク受入番号Ｐ３６８３５配列の残基２１−１５５により表される成熟配列）；ヒツジＩＬ−２（Ｏｖｉｓ  ａｒｉｅｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ１９１１４；ジェンバンク受入番号Ｐ１９１１４配列の残基２１−１５５により表される成熟配列）；ブタＩＬ−２（Ｓｕｓ  ｓｃｒｏｆａ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ２６８９１；ジェンバンク受入番号Ｐ２６８９１の残基２１−１５４により表される成熟配列）；アカシカＩＬ−２（Ｃｅｒｖｕｓ  ｅｌａｐｈｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ５１７４７；ジェンバンク受入番号Ｐ５１７４７配列の残基２１−１６２により表される成熟配列）；イヌＩＬ−２（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ２９４１６；ジェンバンク受入番号Ｑ２９４１６配列の残基２１−１５５により表される成熟配列）；ネコＩＬ−２（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ０７８８５；ジェンバンク受入番号Ｑ０７８８５配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；ウサギＩＬ−２（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｏ７７６２０；ジェンバンク受入番号Ｏ７７６２０配列の残基２１−１５３により表される成熟配列）；シャチＩＬ−２（Ｏｒｃｉｎｕｓ  ｏｒｃａ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号０９７５１３；ジェンバンク受入番号０９７５１３配列の残基２１−１５２により表される成熟配列）；キタゾウアザラシＩＬ−２（Ｍｉｒｏｕｎｇａ  ａｎｇｕｓｔｉｒｏｓｔｒｉｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｏ６２６４１；ジェンバンク受入番号Ｏ６２６４１配列の残基２１−１５４により表される成熟配列）；ハツカネズミＩＬ−２（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０３２３９２；ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０３２３９２配列の残基２１−１６９により表される成熟配列）；セイヨウノネズミＩＬ−２（Ｍｕｓ  ｓｐｒｅｔｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ０８８６７；ジェンバンク受入番号Ｑ０８８６７配列の残基２１−１６６により表される成熟配列）；ノルウェーラットＩＬ−２（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｐ１７１０８；ジェンバンク受入番号Ｐ１７１０８の残基２１−１５５により表される成熟配列）；モンゴルアレチネズミＩＬ−２（Ｍｅｒｉｏｎｅｓ  ｕｎｇｕｉｃｕｌａｔｕｓ；前駆体配列、ジェンバンク受入番号Ｑ０８０８１；ジェンバンク受入番号Ｑ０８０８１の残基２１−１５５により表される成熟配列）；これら前記ジェンバンク受入番号で開示された変異体ＩＬ−２ポリペプチドの何れか（ジェンバンクが報告するそれぞれは、その全体が参考して本明細書に組み入れられる）。ＩＬ−２の任意の供給源を本発明を実施するために利用できるが、好ましくはＩＬ−２は、特に治療を受ける被験体がヒトである場合、ヒト供給源から誘導される。一部の実施形態において、本発明の方法で使用されるＩＬ−２は、組み換え的に産生され、例えば、微生物宿主から得られるものが含まれるが、これらに限定されない組み換えヒトＩＬ−２タンパク質である。
【００５０】
本発明の方法に有用な組成物は、任意の腫からのＩＬ−２の変異体を含む、ＩＬ−２の生物学的に活性な変異体を含むことができる。そのような変異体は、変異体ポリペプチドを含む医薬組成物が、被験体に投与された時に未変性ポリペプチドを含む医薬組成物と同じ治療効果を有するように、未変性ポリペプチドの所望の生物学的活性を保持するべきである。即ち、変異体ポリペプチドは、未変性ポリペプチドで観察されるのと同様の方法で、医薬組成物において治療活性成分として役割を果たす。変異体ポリペプチドが所望の生物学的活性を有するか、従って医薬組成物において治療活性成分として役割を果たすかを決定する方法は、当業界で入手可能である。生物学的活性は、本発明で記載されるアッセイを含む、未変性ポリペプチド又はタンパク質の活性を測定するように特に設計されたアッセイを使用して測定することができる。加えて、生物学的に活性な未変性ポリペプチドに対して生じた抗体を、変異体ポリペプチドへ結合する能力について試験することができ、有効な結合は、ポリペプチドが未変遷ポリペプチドと同様の立体配座を有することを示す。
【００５１】
未変性又は天然ＩＬ−２の適切な生物学的活性変異体は、上記で定義された、ポリペプチドのフラグメント、類似体及び誘導体であることができる。
【００５２】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列変異体は、目的の未変性ポリペプチドをコードするクローンＤＮＡ配列における突然変異により調製することができる。突然変異誘発及びヌクレオチド配列変更の方法は、当業界で公知である。例えば、Ｗａｌｋｅｒ  ａｎｄ  Ｇａａｓｔｒａ，  ｅｄｓ．  （１９８３）  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；  Ｋｕｎｋｅｌ  （１９８５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；  Ｋｕｎｋｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８７）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １５４：３６７−３８２；  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，  Ｎ．Ｙ．）；米国特許第４，８７３，１９２号、及びそれに引用されている参考文献を参照されたい（これらは参考して本明細書に組み入れられる）。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換の指針を、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  （Ｎａｔｌ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｒｅｓ．  Ｆｏｕｎｄ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．）におけるＤａｙｈｏｆｆらのモデル（１９７８）で見出すことができる（参考して本明細書に組み入れられる）。１つのアミノ酸を同様の特性を有する別のものと交換するような保守的置換を参照されたいができる。保守的置換の例には、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ及びＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが含まれるが、これらに限定されない。
【００５３】
残基置換、欠失又は挿入を介して変更できるＩＬ−２タンパク質の領域についての指針は、当業界で見出すことができる。例えば、Ｂａｚａｎ  （１９９２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：４１０−４１２；  ＭｃＫａｙ  （１９９２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：４１２；  Ｔｈｅｚｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６）  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ  １７：４８１−４８６；  Ｂｕｃｈｌｉ  ａｎｄ  Ｃｉａｒｄｅｌｌｉ  （１９９３）  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ３０７：４１１−４１５；  Ｃｏｌｌｉｎｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：７７０９−７７１３；  Ｋｕｚｉｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５０：５７３１；  Ｅｃｋｅｎｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ９：４８８−４９８において考察されている構造／機能の関係、及び／又は結合試験を参照されたい（これらの内容はその全体が参考して本明細書に組み入れられる）。
【００５４】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの変異体を作成するに際し、修飾は、変異体が所望の活性を有し続けるように実施される。当然のことながら、変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡで実施されるあらゆる突然変異は、読み取り枠を外れた配列で行ってはならず、好ましくは、二次ｍＲＮＡ構造を産生できる相補領域を生じない。欧州特許出願公報第７５，４４４号を参照されたい。
【００５５】
ＩＬ−２の生物学的に活性な変異体は、一般的に、比較の基礎として役立つ未変性ヒトＩＬ−２のような基準ＩＬ−２ポリペプチド分子のアミノ酸配列と、少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％〜９５％以上、最も好ましくは少なくとも約９８％、９９％以上のアミノ酸配列の同一性を有する。配列同一率は、ギャップ開放ペナルティーの１２及びギャップ伸長ペナルティーの２、ＢＬＯＳＵＭマトリックスの６２でアフィニティーギャップ検索を使用する、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  （１９８１）  ２：４８２−４８９で教示される。変異体は、例えば、僅か１〜１５個のアミノ酸残基、６〜１０個のように僅か１〜１０個のアミノ酸残基、僅か５個、僅か４、３、２、更には１個のアミノ酸残基が異なる。
【００５６】
２つのアミノ酸配列の最適な整列に関して、変異体アミノ酸配列の隣接セグメントは、基準アミノ酸配列に対して、同じ数のアミノ酸、付加アミノ酸残基又は欠失アミノ酸残基を有することができる。基準アミノ酸配列との比較に使用される隣接セグメントは、少なくとも２０個の隣接アミノ酸残基を含み、３０、４０、５０個又はそれ以上のアミノ酸残基であることができる。保守的残基置換又はギャップに関連する配列同一性の修正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを参照）。目的の未変性ＩＬ−２ポリペプチドの生物学的に活性な変異体は、僅か１〜１５個のアミノ酸残基、６〜１０個のように僅か１〜１０個、僅か５個、僅か４、３、２、更には１個のアミノ酸残基が未変性ポリペプチドと異なりうる。
【００５７】
ＩＬ−２活性を有するポリペプチドの正確な化学構造は、多数の要因によって左右される。イオン化可能なアミノ基及びカルボキシル基が分子に存在すると、特定のポリペプチドを、酸性若しくは塩基性の塩、又は中性形態で得ることができる。適切な環境条件に置かれた時に生物学的活性を保持するそのような調製物は、全て、本明細書で使用されるＩＬ−２活性を有するポリペプチドの定義に含まれる。更に、ポリペプチドの一次アミノ酸配列を、糖部分を使用する誘導体化（グリコシル化）により、又は脂質、リン酸、アセチル基等のような他の補足分子により増強することができる。糖類による結合によって増強することもできる。そのような増強の特定の態様は、産生宿主の翻訳後プロセス系によって達成され、そのような修飾をｉｎ  ｖｉｔｒｏで導入することができる。何れにしても、そのような修飾は、ポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限り、本明細書で使用されるＩＬ−２ポリペプチドの定義に含まれる。そのような修飾は、様々なアッセイにおいて、ポリペプチドの活性を増強するか又は減少することによって、活性に定量的に又は定性的に影響を与えうることが予測される。更に、鎖における個別のアミノ酸残基を、酸化、還元、又は他の誘導体化により修飾することができ、ポリペプチドを開裂して、活性を保持するフラグメントを得ることができる。そのような活性を破壊しない変更は、本明細書で使用される目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義からそのポリペプチド配列を排除しない。
【００５８】
当該技術は、ポリペプチド変異体の調製及び使用に関して実質的な指針を提供する。ＩＬ−２変異体を調製するに際し、当業者は、未変性タンパク質ヌクレオチド又はアミノ酸配列へのどの修飾が、本発明の方法で使用される医薬組成物の治療活性成分としての使用に好適である変異体をもたらすかを容易に決定することができる。
【００５９】
本発明の方法で使用されるＩＬ−２又はその変異体は、任意の供給源からであることができるが、好ましくは組み換え的に産生される。「組み換えＩＬ−２」又は「組み換えＩＬ−２変異体」とは、未変性配列ＩＬ−２に匹敵する生物学的活性を有し、例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８３）  Ｎａｔｕｒｅ  ３０２：３０５−３１０  ａｎｄ  Ｄｅｖｏｓ  （１９８３）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１：４３０７−４３２３により記載されている組み換えＤＮＡ技術により調製されたインターロイキン−２若しくはその変異体、又はＷａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８４）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：１４３１−１４３３により記載されている変異的に変更されたＩＬ−２が意図される。一般的に、本明細書で記載されているように、ＩＬ−２をコードする遺伝子がクローンされ、次に形質転換生物体、好ましくは微生物、最も好ましくは大腸菌で発現される。宿主生物体は、発現条件下で外来遺伝子を発現して、ＩＬ−２を産生する。合成組み換えＩＬ−２を、酵母菌又はヒトの細胞のような真核生物で作ることもできる。細胞からＩＬ−２を増殖、採取、分裂又は抽出するプロセスは、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号、同第４，７３８，９２７号、同第４，６５６，１３２号、同第４，５６９，７９０、同第４，７４８，２３４号、同第４，５３０，７８７号、同第４，５７２，７９８号、同第４，７４８，２３４号及び同第４，９３１，５４３で実質的に記載されており、その全体が参考して本明細書に組み入れられる。
【００６０】
変異体ＩＬ−２タンパク質の例は、欧州特許（ＥＰ）公報第１３６，４８９号を参照されたい（これは、天然のＩＬ−２のアミノ酸配列における以下の１つ以上の変更を開示する：Ａｓｎ２６〜Ｇｌｎ２６；Ｔｒｐ１２１〜Ｐｈｅ１２１；Ｃｙｓ５８〜Ｓｅｒ５８又はＡｌａ５８、Ｃｙｓ１０５〜Ｓｅｒ１０５又はＡｌａ１０５；Ｃｙｓ１２５〜Ｓｅｒ１２５又はＡｌａ１２５；Ａｒｇ１２０以下の全ての残基の欠失；及びそのＭｅｔ−１形態）；並びにベルギー特許番号８９３，０１６号及び共有米国特許第４，５１８，５８４号に対応する、欧州特許出願第８３３０６２２１．９号、１９８３年１０月１３日出願に記載された組み換えＩＬ−２突然変異タンパク質（公報番号ＥＰ１０９，７４８で１９８４年５月３０日に発行された）を参照されたい（これは、未変性ヒトＩＬ−２に従って番号付けした位置１２５でシステインが欠失しているか又は中性アミノ酸に代えられている組み換えヒトＩＬ−２突然変異タンパク質；アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２；及びｄｅｓ−アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２を開示する）。又、米国特許第４，７５２，５８５号を参照されたい（これは、以下の変異体ＩＬ−２タンパク質を開示する：ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ＩＬ−２，  ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２���ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ＩＬ−２，  ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｖａｌ  １０４  ＩＬ−２，  ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｖａｌ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ＩＬ−２，  ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２、ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｖａｌ１０４  ＩＬ−２、及びｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｖａｌ０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２）、並びに米国特許第４，９３１，５４３号を参照されたい（これは、本明細書で使用されるＩＬ−２突然変異タンパク質ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトＩＬ−２、また他のＩＬ−２突然変異タンパク質を開示する）。
【００６１】
又、位置１０４のメチオニンが保守的アミノ酸により代えられている組み換えＩＬ−２突然変異タンパク質を開示する、欧州特許公報第２００，２８０号（１９８６年１２月１０日発行）を参照されたい。例には、以下の突然変異タンパク質が含まれる：ｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｇｌｕ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ａｌａ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ｓｅｒ１２５  ＩＬ−２；ｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ＩＬ−２；及びｄｅｓ−ａｌａ１  ｄｅｓ−ｐｒｏ２  ｄｅｓ−ｔｈｒ３  ｄｅｓ−ｓｅｒ４  ｄｅｓ−ｓｅｒ５  ｄｅｓ−ｓｅｒ６  ｇｌｕ１０４  ａｌａ１２５  ＩＬ−２。又、未変性分子で見出されるＮ末端アミノ酸としてメチオニンの代わりにアラニンを担持する非グリコシル化ヒトＩＬ−２変異体；プロリンがＮ末端アミノ酸であるように最初のメチオニンが欠失している非グリコシル化ヒトＩＬ−２；及びＮ末端メチオニンとプロリンアミノ酸の間にアラニンが挿入されている非グリコシル化ヒトＩＬ−２を開示する、欧州特許公報第１１８，６１７号及び米国特許第５，７００，９１３号を参照されたい。
【００６２】
他のＩＬ−２突然変異タンパク質には、ＮＫ細胞の存在下でＴ細胞受容体を発現する細胞により発現された高親和性ＩＬ−２受容体に選択的活性を有し、ＩＬ−２毒性が低減していると報告されている、国際公開第９９／６０１２８号に開示されている突然変異タンパク質（ヒスチジン若しくはイソロイシンによる位置２０でのアスパラギン酸の置換、アルギニン、グリシン若しくはイソロイシンによる位置８８でのアスパラギン酸の置換、又はロイシン若しくはグルタミン酸による位置１２６でのグルタミン酸の置換）；未変性ＩＬ−２と比較した時に、高親和性ＩＬ−２受容体に対して低減した結合を示すが、ＬＡＫ細胞を刺激する能力を維持している、米国特許第５，２２９，１０９号に開示されている突然変異タンパク質（アラニンによる位置３８でのアルギニンの置換、又はリシンによる位置４２でのフェニルアラニンの置換）；血管漏出症候群を低減すると言われている、国際公開第００／５８４５６号に開示されている突然変異タンパク質（Ｄがアスパラギン酸であり、（ｘ）が、ロイシン、イソロイシン、グリシン又はバリンであり、そして（ｙ）が、バリン、ロイシン又はセリンである、未変性ＩＬ−２の天然（ｘ）Ｄ（ｙ）配列の変更又は欠失）；ＮＫ細胞を刺激し、ＬＡＫ細胞の誘発を刺激すると報告されている、国際公開第００／０４０４８号に開示されているＩＬ−２  ｐ１−３０ペプチド（ＩＬ−２のａ−ヘリックスＡ全体を含有し、ＩＬ−２受容体のｂ鎖と相互作用する、ＩＬ−２の最初の３０個のアミノ酸に対応する）；並びに血管出血を誘発することができないが、ＬＡＫ細胞を生成する能力を維持していることが報告されている、これも国際公開公報第００／０４０４８号に開示されているＩＬ−２  ｐ１−３０ペプチドの突然変異タンパク質形態（リシンによる位置２０でのアスパラギン酸の置換）が含まれる。加えて、ＩＬ−２をポリエチレングリコールで修飾して、強化された可溶性及び変更された薬学動態プロフィールをもたらすことができる（米国特許第４，７６６，１０６号を参照）。
【００６３】
毒性の低減が予測されるＩＬ−２突然変異タンパク質の追加の例は、米国仮出願第６０／５５０，８６８号、２００４年３月５日出願に開示されており、これはその全体が参考して本明細書に組み入れられる。これらの突然変異タンパク質は、成熟ヒトＩＬ−２配列の位置１２５でセリンがシステインで置換されている成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列を含み、突然変異タンパク質が、比較アッセイ条件下でｄｅｓ−アラニル−１、Ｃ１２５ＳヒトＩＬ−２又はＣ１２５ＳヒトＩＬ−２の同様の量と比較して、次の、１）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を維持又は増強する、及び２）ＮＫ細胞による炎症誘発性サイトカイン産生のレベルの減少を誘導する機能性を有するように成熟ヒトＩＬ−２配列内に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、追加の置換は、Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ及びＱ１２６Ｖからなる群より選択され、ここでアミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと関連している。他の実施形態において、これらの突然変異タンパク質は、成熟ヒトＩＬ−２配列の位置１２５でアラニンがシステインで置換されている成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列を含み、突然変異タンパク質が同じ機能性を有するように成熟ヒトＩＬ−２配列内に少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、追加の置換は、Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ及びＱ１２６Ｖからなる群より選択され、ここでアミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと関連している。代替的な実施形態において、これらの突然変異タンパク質は、突然変異タンパク質が同じ機能性を有するように成熟ヒトＩＬ−２配列内に少なくとも１つの追加アミノ酸置換を有する成熟ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、追加の置換は、Ｔ７Ａ、Ｔ７Ｄ、Ｔ７Ｒ、Ｋ８Ｌ、Ｋ９Ａ、Ｋ９Ｄ、Ｋ９Ｒ、Ｋ９Ｓ、Ｋ９Ｖ、Ｋ９Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｔ１０Ｎ、Ｑ１１Ａ、Ｑ１１Ｒ、Ｑ１１Ｔ、Ｅ１５Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｅ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｄ２０Ｅ、Ｉ２４Ｌ、Ｋ３２Ａ、Ｋ３２Ｗ、Ｎ３３Ｅ、Ｐ３４Ｅ、Ｐ３４Ｒ、Ｐ３４Ｓ、Ｐ３４Ｔ、Ｐ３４Ｖ、Ｋ３５Ｄ、Ｋ３５Ｉ、Ｋ３５Ｌ、Ｋ３５Ｍ、Ｋ３５Ｎ、Ｋ３５Ｐ、Ｋ３５Ｑ、Ｋ３５Ｔ、Ｌ３６Ａ、Ｌ３６Ｄ、Ｌ３６Ｅ、Ｌ３６Ｆ、Ｌ３６Ｇ、Ｌ３６Ｈ、Ｌ３６Ｉ、Ｌ３６Ｋ、Ｌ３６Ｍ、Ｌ３６Ｎ、Ｌ３６Ｐ、Ｌ３６Ｒ、Ｌ３６Ｓ、Ｌ３６Ｗ、Ｌ３６Ｙ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｇ、Ｒ３８Ｎ、Ｒ３８Ｐ、Ｒ３８Ｓ、Ｌ４０Ｄ、Ｌ４０Ｇ、Ｌ４０Ｎ、Ｌ４０Ｓ、Ｔ４１Ｅ、Ｔ４１Ｇ、Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｒ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｖ、Ｋ４３Ｈ、Ｆ４４Ｋ、Ｍ４６Ｉ、Ｅ６１Ｋ、Ｅ６１Ｍ、Ｅ６１Ｒ、Ｅ６２Ｔ、Ｅ６２Ｙ、Ｋ６４Ｄ、Ｋ６４Ｅ、Ｋ６４Ｇ、Ｋ６４Ｌ、Ｋ６４Ｑ、Ｋ６４Ｒ、Ｐ６５Ｄ、Ｐ６５Ｅ、Ｐ６５Ｆ、Ｐ６５Ｇ、Ｐ６５Ｈ、Ｐ６５Ｉ、Ｐ６５Ｋ、Ｐ６５Ｌ、Ｐ６５Ｎ、Ｐ６５Ｑ、Ｐ６５Ｒ、Ｐ６５Ｓ、Ｐ６５Ｔ、Ｐ６５Ｖ、Ｐ６５Ｗ、Ｐ６５Ｙ、Ｌ６６Ａ、Ｌ６６Ｆ、Ｅ６７Ａ、Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｔ、Ｆ７８Ｓ、Ｆ７８Ｗ、Ｈ７９Ｆ、Ｈ７９Ｍ、Ｈ７９Ｎ、Ｈ７９Ｐ、Ｈ７９Ｑ、Ｈ７９Ｓ、Ｈ７９Ｖ、Ｌ８０Ｅ、Ｌ８０Ｆ、Ｌ８０Ｇ、Ｌ８０Ｋ、Ｌ８０Ｎ、Ｌ８０Ｒ、Ｌ８０Ｔ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｗ、Ｌ８０Ｙ、Ｒ８１Ｅ、Ｒ８１Ｋ、Ｒ８１Ｌ、Ｒ８１Ｍ、Ｒ８１Ｎ、Ｒ８１Ｐ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ｒ、Ｓ８７Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｈ、Ｎ８８Ｔ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｎ、Ｖ９１Ｑ、Ｖ９１Ｗ、Ｌ９４Ａ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９４Ｔ、Ｌ９４Ｖ、Ｌ９４Ｙ、Ｅ９５Ｄ、Ｅ９５Ｇ、Ｅ９５Ｍ、Ｔ１０２Ｓ、Ｔ１０２Ｖ、Ｍ１０４Ｇ、Ｅ１０６Ｋ、Ｙ１０７Ｈ、Ｙ１０７Ｋ、Ｙ１０７Ｌ、Ｙ１０７Ｑ、Ｙ１０７Ｒ、Ｙ１０７Ｔ、Ｅ１１６Ｇ、Ｎ１１９Ｑ、Ｔ１２３Ｓ、Ｔ１２３Ｃ、Ｑ１２６Ｉ及びＱ１２６Ｖからなる群より選択され、ここでアミノ酸残基の位置は、成熟ヒトＩＬ−２アミノ酸配列の番号付けと関連している。米国仮出願第６０／５５０，８６８号に開示されている追加の突然変異タンパク質には、成熟ヒトＩＬ−２配列の位置１の初めのアラニン残基が欠失していることを除いて、前記で定義された突然変異タンパク質が含まれる。
【００６４】
本明細書で使用される時、ＩＬ−２という用語は、投与頻度を低減するか又はＩＬ−２耐性を改善するために、第２のタンパク質に融合しているか又はポリプロリン若しくは水溶性ポリマーに共有結合しているＩＬ−２を含む、ＩＬ−２融合物又は複合体を含むことが意図される。例えば、ＩＬ−２（又は本明細書で定義されるその変異体）は、当業界で既知の方法を使用して、ヒトアルブミン又はアルブミンフラグメントに融合することができる（国際公開第０１／７９２５８号を参照）。或いは、ＩＬ−２を、当業界で既知の方法を使用して、ポリプロリン又はポリエチレングルコールホモポリマー及びポリオキシエチレン化ポリオールに共有結合することができ、ここで、ホモポリマーは、非置換であるか又は一端がアルキル基で置換されており、ポリオールは非置換である（例えば、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号及び同第４，８９４，２２６号を参照）。
【００６５】
ＩＬ−２を治療活性成分として含むあらゆる医薬組成物を、本発明の方法で使用することができる。そのような医薬組成物は当該記述で既知であり、米国特許第４，７４５，１８０号、同第４，７６６，１０６号、同第４，８１６，４４０号、同第４，８９４，２２６号、同第４，９３１，５４４号及び同第５，０７８，９９７に開示されているものが含まれるが、これらに限定されない（参考して本明細書に組み入れられる）。従って、ＩＬ−２又はその変異体を含む、当業界で既知の液体、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物を、続いて本発明の方法に従って被験体に投与するために、水性又は非水性の溶液又は懸濁液として調製することができる。これらの組成物は、それぞれ、治療上又は予防上活性な成分としてＩＬ−２又はその変異体を含む。「治療上又は予防上活性な成分」とは、医薬組成物が被験体に投与される場合、ＩＬ−２又はその変異体が、被験体の疾患又は状態の治療又は予防に関して所望の治療又は予防反応をもたらすために、組成物の中に特に組み込まれていることが意図される。好ましくは、医薬組成物は、適切な安定剤、増量剤、またはその両方を、調製及び保存の間にタンパク質の安定性及び生物学的活性が失われることに関する問題を最小限にするために含む。
【００６６】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の方法に有用なＩＬ−２含有医薬組成物は、安定化した単量体ＩＬ−２又はその変異体を含む組成物、多量体ＩＬ−２Ｉ又はその変異体を含む組成物、及び安定化した凍結乾燥又は噴霧乾燥ＩＬ−２又はその変異体を含む組成物である。
【００６７】
安定化した単量体ＩＬ−２又はその変異体を含む医薬組成物は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ００／２７１５６号、２０００年１０月３日出願に開示されており、この開示は参考して本明細書に組み入れられる。「単量体」ＩＬ−２とは、タンパク質分子が、本明細書で記載されている医薬組成物中で凝集形態ではなく実質的にそのモノマー形態で存在していることを意図する。従って、ＩＬ−２の共有又は疎水性オリゴマー又は凝集物が存在しない。簡潔には、液体組成物中のＩＬ−２又はその変異体は、保存の間にＩＬ−２又はその変異体の凝集形成を減少するのに十分な量のアミノ酸塩基で配合される。アミノ酸塩基は、任意の所定のアミノ酸がその遊離塩基形態又はその塩形態の何れかで存在する、アミノ酸又はアミノ酸の組み合わせである。好ましいアミノ酸は、アルギニン、リシン、アスパラギン酸及びグルタミン酸からなる群より選択される。これらの組成物は、ＩＬ−２又はその変異の安定性のために許容される範囲内に液体組成物のｐＨを維持するために、緩衝剤を更に含み、緩衝剤は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態の酸、又は酸とその塩形態の混合物である。好ましくは、酸は、コハク酸、クエン酸、リン酸及びグルタミン酸からなる群より選択される。そのような組成物は、本明細書において、安定化された単量体ＩＬ−２医薬組成物と呼ばれる。
【００６８】
これらの組成物中のアミノ酸塩基は、液体医薬組成物の保存の間の凝集形成に対してＩＬ−２又はその変異体を安定化する役割を果たし、同時に、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態の酸、又は酸とその塩形態の混合物の緩衝剤としての使用は、ほぼ等張であるオスモル濃度を有する液体組成物をもたらす。この液体医薬組成物は、ポリペプチドの安定性を更に増加するために、他の安定剤、より詳細には、メチオニン、ポリソルベート８０のような非イオン性界面活性剤、及びＥＤＴＡを追加的に組み込むことができる。そのような液体組成物は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態の酸、又は酸とその塩形態の混合物と組み合わせたアミノ酸塩基の添加が、これらの２つの成分の組み合わせが不在で配合された液体医薬組成物に対して、増加した保存安定性を有する組成物をもたらすので、安定化していると言われる。
【００６９】
安定化した単量体ＩＬ−２又はその変異体を含むこれらの液体医薬組成物は、水性液体形態で使用できるか、又は後で本発明の方法に従って被験体に投与するのに適切な液体形態若しくは他の形態に再構成する凍結状態で若しくは乾燥形態で後の使用のために保存することができる。「乾燥形態」とは、液体医薬組成物又は製剤が、フリーズドライ（即ち、凍結乾燥；例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｐｏｌｌｉ  （１９８４）  Ｊ．  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ３８：４８−５９を参照）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ  （１９９１）  ｉｎ  Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  （５ｔｈ  ｅｄ；  Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，  Ｅｓｓｅｚ，  Ｕ．Ｋ．），  ｐｐ．  ４９１−６７６；  Ｂｒｏａｄｈｅａｄ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９２）  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．  Ｉｎｄ．  Ｐｈａｒｍ．  １８：１１６９−１２０６；及びＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １１：１２−２０を参照）又は空気乾燥（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｃｒｏｗｅ  （１９８８）  Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２５：４５９−４７０；  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｒ  （１９９１）  Ｂｉｏｐｈａｒｍ．  ４：４７−５３）により乾燥されることが意図される。
【００７０】
ＩＬ−２をその非凝集単量体状態で含むＩＬ−２製剤の他の例には、Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｆａｕｌｄｓ  （１９９３）  Ｄｒｕｇｓ  ４６（３）：４４６−５１４に記載されるものが含まれる。これらの製剤には、組み換えＩＬ−２突然変異タンパク質テセロイキン（メチオニン残基がアミノ末端に付加されている非グリコシル化ヒトＩＬ−２）が、等張生理食塩水で再構成される凍結乾燥粉末の０．２５％ヒト血清アルブミンで配合されている組み換えＩＬ−２生成物、並びに０．１〜１．０ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２突然変異タンパク質が酸と組み合わされるように配合されている組み換えＩＬ−２突然変異タンパク質バイオロイキン（メチオニン残基がアミノ末端に付加されているヒトＩＬ−２であり、ヒトＩＬ−２配列の位置１２５でシステイン残基がアラニンで置換されている）が含まれ、ここで製剤は、３．０〜４．０のｐＨを有し、有利には緩衝剤を有さず、１０００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満（有利には５００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満）の伝導性を有する。ＥＰ  ３７３，６７９；  Ｘｈａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．  Ｒｅｓ．  １３（４）：６４３−６４４；及びＰｒｅｓｔｒｅｌｓｋｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．  Ｒｅｓ．  １２（９）：１２５０−１２５８を参照されたい。
【００７１】
多量体ＩＬ−２又はその変異体を含む医薬組成物の例は、共有米国特許第４，６０４，３７７号に開示されており、その開示は参考して本明細書に組み入れられる。「多量体」とは、タンパク質分子が、分子１０〜５０個の平均分子集合を有する小凝集形態で医薬組成物に存在することが意図される。これらの多量体は、粗に結合した、物理的に関連するＩＬ−２分子として存在する。これらの組成物の凍結乾燥形態は、商標名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ［米国カリフォルニア州エメリービル］）で市販されている。この参考文献で開示される凍結乾燥製剤は、選択的に酸化され微生物的に産生される組み換えＩＬ−２を含み、組み換えＩＬ−２は、嵩を提供し、水中の組み換えＩＬ−２の可溶性を確実するのに十分なドデシル硫酸ナトリウムの量を提供するように、水溶性担体と混合される。これらの組成物は、非経口投与用の水性注入のために再構成するのに適しており、ヒトの患者で安定しており、耐性が良好である。再構成される時、ＩＬ−２又はその変異体は、その多量体状態を保持する。そのような多量体ＩＬ−２又はその変異体を含む凍結乾燥又は液体組成物は、本発明の方法に包含される。そのような組成物は、本明細書において、多量体ＩＬ−２医薬組成物と呼ばれる。
【００７２】
本発明の方法は、ＩＬ−２又はその変異体を含み、本発明の方法に従って投与される液体又は他の適切な形態に再構成されうる、安定化された凍結乾燥又は噴霧乾燥医薬組成物を使用することもできる。そのような医薬組成物は、同時係属米国出願第０９／７２４，８１０号、２０００年１１月２８日出願及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ００／３５４５２、２０００年１２月２７日出願に開示されており、その全体が参考して本明細書に組み入れられる。これらの組成物は、少なくとも１つの増量剤、乾燥処理の際にタンパク質を安定化するのに十分な量の少なくとも１つの薬剤、又はその両方を更に含むことができる。「安定化される」とは、組成物の固体又は乾燥粉末形態を得るために凍結乾燥又は噴霧乾燥された後で、ＩＬ−２又はその変異体がその単量体又は多量体形態、並びに品質、純度及び効力の他の主要な特性を保持することが意図される。これらの組成物において、増量剤として使用するのに好ましい担体材料には、グリシン、マンニトール、アラニン、バリン又はこれらの任意の組み合わせ、最も好ましくはグリシンが含まれる。増量剤は、使用される薬剤に応じて、０％〜約１０％（ｗ／ｖ）の範囲で製剤に存在する。安定剤として使用するのに好ましい担体材料には、任意の糖若しくは糖アルコール、又は任意のアミノ酸が含まれる。好ましい糖には、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコース、ラクトース、デキストロース、又はこれらの任意の組み合わせ、好ましくはスクロースが含まれる。安定剤が糖である場合、約０％〜約９．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．５％〜約５．０％、より好ましくは約１．０％〜約３．０％の範囲、最も好ましくは約１．０％で存在する。安定剤がアミノ酸である場合、約０％〜約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．３％〜約０．７％の範囲、最も好ましくは約０．５％で存在する。これらの安定化された凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物は、場合により、メチオニン、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）若しくは二ナトリウムＥＤＴＡのようなその塩のうちの１つ、又はＩＬ−２又はその変異体をメチオニン酸化から保護する他のキレート剤を含むことができる。この方法でこれらの薬剤を使用することは、同時係属米国仮出願第６０／１５７，６９６号に記載されており、参考して本明細書に組み入れられる。安定化された凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物は、配合過程の際又は組成物の乾燥形態の再構成の後のような液体相で使用される時に、医薬組成物のｐＨを許容される範囲、好ましくは約ｐＨ４．０〜約ｐＨ８．５に維持する緩衝剤を使用して配合することができる。緩衝剤は、これらが乾燥過程で適合性があり、処理中及び保存した時にタンパク質の品質、純度、効力及び安定性に影響を与えないように選択される。
【００７３】
前記の安定化された単量体、多量体、及び安定化された凍結乾燥又は噴霧乾燥ＩＬ−２医薬組成物は、本発明の方法における使用に適切な組成物を表す。しかし、ＩＬ−２又はその変異体を含むあらゆる医薬組成物が、治療上活性な成分として本発明の方法に包含される。
【００７４】
（化学療法剤）
本発明の併用療法は、少なくとも１つの化学療法剤の投与又はレジメンの投与を更に含む。「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学化合物又は化合物の組み合わせである。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ及びウレドーパのようなアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド及びトリメチローロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメルアミン；クロラムブチル、クロマファジン、コロホスフアミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビエヒン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードのようなナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホステムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンのようなニトロソ尿素；アクラシノミシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモイニシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダンビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クェラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンのような抗生物質；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のような抗代謝剤；デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキセートのような葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵのようなピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンのようなアンドロゲン；アミノグルテチミド、マイトテイン、トリロスタンのような抗副腎皮質剤；フロリン酸のような葉酸補充物．；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキス酸；デホファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルホミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ポドフィリニック酸；２−エチルヒドラジド；  プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキサン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン、２，２′，２″−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノム���チン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬＯ，  Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ［米国ニュージャージー州プリンストン］）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＷ，  Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ［フランス  アントニー］）；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンのような白金類似体；ビンブラスチ；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；マイトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロミチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。
【００７５】
他の有用な化学治療剤には、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（フェアストン）を含む抗エストロゲン剤のような腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロイド及びゴセレリンのような抗アンドロゲン、並びに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。
【００７６】
特に有用なものは、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾンの組み合わせ）として知られている化学療法レジメン、並びにＣＨＯＰの構成成分の単独での又は種々の組み合わせでの使用、例えばＣＯ、ＣＨ、ＣＰ、ＣＯＰ、ＣＨＯ、ＣＨＰ、ＨＯ、ＨＰ、ＨＯＰ、ＯＰ等；ＣＨＯＰ及びブレオマイシン（ＣＨＯＰ−ＢＬＥＯ）；シクロホスファミド及びフルダラビン；シクロホスファミド、マイトキサントロン、プレドニゾン及びビンクリスチン；シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン及びビンクリスチン（ＣＡＶＤ）；ＣＡＶ；シクロホスファミド、ドキソルビシン及びプレドニゾン；シクロホスファミド、マイトキサントロン、プレドニゾン及びビンクリスチン（ＣＮＯＰ）；シクロホスファミド、メトトレキサート、ロイコボリン及びシタラビン（ＣＯＭＬＡ）；シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン及びプレドニゾン；シクロホスファミド、プレドニゾン、プロカルバジン及びビンクリスチン（ＣＯＰＰ）；シクロホスファミド、プレドニゾン及びビンクリスチン（ＣＯＰ及びＣＶＰ−１）；シクロホスファミド及びマイトキサントロン；エトポシド；マイトキサントロ、イホスファミド及びエトポシド（ＭＩＶ）；シタラビン；メチルプレドニゾロン及びシスプラチン（ＥＳＨＡＰ）；メチルプレドニゾロン、シタラビン及びシスプラチン（ＥＳＡＰ）；メトトレキサート、ロイコボリン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン及びプレドニゾン（ＭＡＣＯＰ−Ｂ）；メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン及びデキサメタゾン（ｍ−ＢＡＣＯＤ）；プレドニゾン、シクロホスファミド、エトポシド、シタラビン、ブレオマイシン、ビンクリスチン、メトトレキサート及びロイコボリン（ＰＲＯＭＡＣＥ−ＣＹＴＡＢＯＭ）；エトポシド、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン及びブレオマイシン（ＶＡＣＯＰ−Ｂ）；フルダラビン及びマイトキサントロン；シスプラチン、シタラビン及びエトポシド；デサメタソン、フルダラビン及びマイトキサントロン；クロラムブチル及びプレドニゾン；ブスルファン及びフルダラビン；ＩＣＥ；ＤＶＰ；ＡＴＲＡ；イダルビシン、ヘルツァー化学療法レジーム；ＬａＬａ化学療法レジーム；  ＡＢＶＤ；ＣＥＯＰ；２−ＣｄＡ；ＦＬＡＧ及びＩＤＡ（続くＧ−ＣＳＦ治療を伴うか又は伴わない）；ＶＡＤ；Ｍ及びＰ；Ｃ−毎週；ＡＢＣＭ；ＭＯＰＰ；シスプラチン、シタラビン及びデキサメタゾン（ＤＨＡＰ）、並びに追加の既知の化学療法レジメンである。非ホジキンリンパ腫の患者の治療に好ましい化学療法レジメンは、ＣＨＯＰである。
【００７７】
（抗ＣＤ２０抗体）
上述の通り、抗ＣＤ２０抗体をＩＬ−２療法及び化学療法剤と組み合わせて投与することができる。特に有用なものは、ＩｇＧ１／ＦｃγＲ仲介ＡＤＣＣを介した細胞障害性作用を仲介する抗体である。そのような抗体には、Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）（新生Ｂ細胞のＣＤ２０抗原を標的にし、非ホジキンＢ細胞リンパ腫及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含むＢ細胞リンパ腫の治療に有効である）、並びにＡＤＣＣ活性を増加するように操作されたものを含むＨｕ−ＭＡＸ−ＣＤ２０、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５のような他の抗ＣＤ２０抗体が含まれるが、これらに限定されない。また有用なものは、Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）と組み合わせて使用した強力な結合剤（チウキセタン）により放射性同位体（イットリウム９０）に結合したネズミモノクローナル抗体（イブリツモマブ）を含む放射線免疫療法剤であるＺｅｖａｌｉｎである。Ｚｅｖａｌｉｎ治療レジメンは、インジウム１１１放射線同位体に結合したＺｅｖａｌｉｎ抗体の注入の前に、Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）を注入し、その後、７〜９日後に、イットリウム９０放射線同位体に結合したＺｅｖａｌｉｎの注入の前に、第２のＲｉｔｕｘａｎ（商標）を注入する（０．４ｍＣｉ／ｋｇ体重の用量）ことを含む。トシツモマブ（抗ＣＤ２０）及びイオジンＩ−１３１トシツモマブを使用するＢＥＸＸＡＲ放射線免疫療法レジメンを、主題の方法で使用することもできる。
【００７８】
本明細書で使用される時、用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ポリクローナル抗ＣＤ２０抗体、モノクローナル抗ＣＤ２０抗体、ヒト抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体、異種抗ＣＤ２０抗体を含む、ＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原を特異的に認識するあらゆる抗体及びＣＤ２０Ｂ細胞表面抗原を特異的に認識するこれらの抗ＣＤ２０抗体のフラグメントを包含する。好ましくは、抗体は性質がモノクローナルである。「モノクローナル抗体」とは、実質的に同質の抗体の集団から得られる抗体が意図され、即ち集団に含まれる個別の抗体が、微量で存在する場合がある天然の突然変異の可能性を除いて同一であることが意図される。モノクローナル抗体は、高度に特異的であって、単一の抗原部位、即ち、本発明におけるＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原に向けられる。更に、異なる決定因子（エピトープ）に向けられる異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体は、それぞれ、抗原上の単一の決定因子へ向けられる。修飾語「モノクローナル」は、抗体の性質が、抗体の実質的に同質の集団から得られることを示し、任意の特定の方法により抗体を産生する必要性があると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５で最初に記載されたハイブリドーマ法により作製することができるか、又は組み換えＤＮＡ法により作製することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７で記載された技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離することができる。
【００７９】
ネズミ由来の抗ＣＤ２０抗体は、本発明の方法での使用に適している。そのようなネズミ抗ＣＤ２０抗体の例には、Ｂ１抗体（米国特許第６，０１６，５４２号に記載されている）；１Ｆ５抗体（Ｐｒｅｓｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ７：１０２７を参照）；ＮＫＩ−Ｂ２０及びＢＣＡ−Ｂ２０抗ＣＤ２０抗体（Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：８４０−８４６に記載されている）；ＩＤＥＣ−２Ｂ８（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａｌｉｆ．から販売されている）；２Ｈ７抗体（Ｃｌａｒｋ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２：１７６６−１７７０で記載されている）；並びにＣｌａｒｋ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）前掲及びＳｔａｓｈｅｎｋｏ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２５：１６７８−１６８５に記載されている他のものが含まれるが、これらに限定されない。
【００８０】
本明細書で使用される時、用語「抗ＣＤ２０抗体」は、キメラ抗ＣＤ２０抗体を包含する。「キメラ抗体」とは、最も好ましくは組み換えデオキシリボ核酸技術を使用して誘導され、ヒト（免疫学的に「関連する」腫、例えばチンパンジー）と非ヒト成分の両方を含む抗体が意図される。従って、キメラ抗体の定常部領域は、最も好ましくは、天然ヒト抗体の定常部領域と実質的に同一であり、キメラ抗体の可変部領域は、最も好ましくは、非ヒト供給源から誘導され、ＣＤ２０細胞表面抗原に所望の抗原特異性を有する。非ヒト供給源は、ヒトＣＨ２０細胞表面抗原又はヒトＣＤ２０細胞表面抗原を含む物質に対して抗体を生成することに使用できる、任意の脊椎動物供給源であることができる。そのような非ヒト供給源には、齧歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウス等；例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照）及びヒト以外の霊長類（例えば、オナガザル類、類人猿等；例えば米国特許第５，７５０，１０５号及び同第５，７５６，０９６号を参照）が含まれるが、これらに限定されない。最も好ましくは、非ヒト成分（可変部領域）は、ネズミ供給源から誘導される。本明細書で使用される時、キメラ抗ＣＤ２０抗体を参照して使用する場合、語句「免疫学的に活性」は、ヒトＣ１ｑに結合しヒトＢリンパ球細胞株の補体依存性溶解（「ＣＤＣ」）を仲介し、かつヒト標的細胞を抗体依存性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）によって溶解するキメラ抗体を意味する。キメラ抗体ＣＤ２０抗体の例には、リツキシマブの名称（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；  ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．［米国カリフォルニア州サンディエゴ］）で市販されており、米国特許第５，７３６，１３７号、同第５，７７６，４５６号及び同第５，８４３，４３９号（これらの特許は全てその全体が参考して本明細書に組み入れられる）で記載されているＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；米国特許第５，７５０，１０５号に記載されているキメラ抗体；米国特許第５，５００，３６２号、同第５，６７７，１８０号、同第５，７２１，１０８号及び同第５，８４３，６８５号に記載されているもの（これらの特許は全てその全体が参考して本明細書に組み入れられる）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８１】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、本明細書で使用される時、抗ＣＤ２０抗体という用語によっても包含される。「ヒト化」とは、非ヒト免疫グロブリン配列から誘導される最小限の配列を含有する抗ＣＤ２０抗体の形態が意図される。大部分の場合は、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエントの抗体）であり、レシピエントの超可変部領域からの残基は、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような非ヒト腫（ドナー抗体）の超可変部領域からの残基で代えられている。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，８５９，２０５号を参照されたい。幾つかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基で代えられている（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号を参照）。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体で見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は抗体性能を更に改良する（例えば、所望の親和性を得るようにする）。一般に、ヒト化抗体は、実質的に全ての、少なくとも１つの、一般的に２つの可変部ドメインを含み、これは、全ての又は実質的に全ての超可変部領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全ての又は実質的に全てのフレームワーク領域がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、場合により、一般的にヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常部領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含む。更なる詳細は、ｏｎｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；及びＰｒｅｓｔａ  （１９９２）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２：５９３−５９６を参照すること。
【００８２】
また抗ＣＤ２０抗体という用語に包含されるものは、非ヒト哺乳類宿主から、より詳細には、不活性化内在性免疫グロブリン（Ｉｇ）座により特徴付けられるトランスジェニックマウスから産生された異種又は修飾抗ＣＤ２０抗体である。そのようなトランスジェニック動物において、宿主免疫グロブリンの軽及び重サブユニットの発現に適応性のある内在性遺伝子は、非機能性になり、類似のヒト免疫グロブリン座により置換される。これらのトランスジェニックマウスは、宿主免疫グロブリンの軽及び重サブユニットの実質的な不在下でヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，９３９，５９８号を参照されたい。
【００８３】
抗ＣＤ２０抗体のフラグメントは、これらが全長抗体の所望の親和性を保持する限り、本発明の方法での使用に適切である。従って、抗ＣＤ２０抗体のフラグメントは、ＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原へ結合する能力を保持する。抗体のフラグメントは、全長抗体の一部を、一般にその抗体結合領域又は可変部領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２及びＦｖフラグメント及び単鎖抗体分子が含まれるが、これらに限定されない。「単鎖Ｆｖ」又は「ｓＦｖ」抗体フラグメントとは、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含むフラグメントが意図され、これらのドメインは、単ポリペプチド鎖に存在する。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号、同第５，４５５，０３０号、同第５，８５６，４５６を参照されたい。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨ及びＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーを更に含み、それは、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成できるようにする。ｓＦｖを検討するには、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  （１９９４）  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｖｏｌ．  １１３，  ｅｄ．  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），  ｐｐ．  ２６９−３１５を参照すること。
【００８４】
抗体又は抗体フラグメントは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４  （１９９０）で記載されている技術を使用して生成された、抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７は、ファージライブラリーを使用した、ネズミ及びヒト抗体それぞれの単離を記載する。後の出版物は、鎖混合（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）、並びに非常に大規模のファージライブラリーを構築する戦略として組み合わせ感染及びｉｎ  ｖｉｖｏ組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｎｕｃｌｅｉｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２１：２２６５−２２６６）による高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生を記載する。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替案である。
【００８５】
ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「ドナー」残基と呼ばれ、一般的に「ドナー」可変部ドメインから採られる。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列を齧歯類ＣＤＲ配列により置換し、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同試験者の方法に従って実質的に実施することができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，８５９，２０５号を参照されたい。従って、そのような「ヒト化」抗体は、実質的に無傷とはいえないヒト可変部領域が非ヒト腫の対応する配列により置換されている抗体を含むことができる。実際には、ヒト化抗体は一般的に、幾つかのＣＤＲ残基及びおそらく幾つかのフレームワーク残基が齧歯類抗体の類似部位の残基により置換されているヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，８５９，２０５号を参照されたい。又、ヒト化抗体及び所定の抗原への改善された親和性を有するヒト化抗体を産生する技術が開示されている、米国特許第６，１８０，３７０号及び国際公開第０１／２７１６０を参照すること。
【００８６】
多様な技術が抗体フラグメントの産生のために開発されてきた。伝統的には、これらのフラグメントは、無傷の抗体のタンパク質分解性の消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７  （１９９２）  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照）。しかし、これらのフラグメントは、現在、組み換え宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、抗体フラグメントは、上記で考察された抗体ファージライブラリーから単離することができる。或いは、Ｆａｂ′−ＳＨフラグメントは、大腸菌から直接回収することができ、化学的にカップリングしてＦ（ａｂ′）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別の手法によると、Ｆ（ａｂ′）２フラグメントは、組み換え宿主細胞培養から直接単離することができる。抗体フラグメントの産生の他の技術は、当業者には明白である。
【００８７】
更に、前記の何れかの抗ＣＤ２０抗体を、本発明の方法で使用する前に、結合することができる。そのような結合抗体は、当業界で入手可能である。従って、抗ＣＤ２０抗体を、間接標識化又は直接標識化の手法を使用して標識付けすることができる。「間接標識化」又は「間接標識化手法」とは、キレート剤を抗体に共有的に結合し、少なくとも１つの放射性核種をキレート剤に挿入するすることが意図される。例えば、Ｓｒｉｖａｇｔａｖａ  ａｎｄ  Ｍｅａｓｅ  （１９９１）  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏ．  １８：  ５８９−６０３に記載されているキレート剤及び放射性核種を参照されたい。或いは、抗ＣＤ２０抗体を、「直接標識化」又は「直接標識化手法」を使用して標識付けすることができ、放射性核種は、抗体に（一般的にアミノ酸塩基を介して）直接共有的に結合している。好ましい放射性核種は、Ｓｒｉｖａｇｔａｖａ  ａｎｄ  Ｍｅａｓｅ  （１９９１）前掲に提供されている。間接標識化手法が特に好ましい。例えば、米国特許第６，０１５，５４２号に記載されている抗ＣＤ２０抗体の標識化形態も参照されたい。
【００８８】
抗ＣＤ２０抗体は一般的に、薬学的に許容される緩衝剤、例えば、滅菌生理食塩水、滅菌緩衝水、ポリピレングリコール、前記の組み合わせ等の中で標準技術により提供される。非経口投与剤を調製する方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （１８ｔｈ  ｅｄ．；  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．：  Ｅａｔｏｎ，  Ｐａ．，  １９９０）に記載されている例えば、本発明の方法での使用に適切な安定化された抗体医薬製剤を記載する国際公開第９８／５６４１８号も参照されたい。この公報は、４０ｍｇ／ｍＬのリツキシマブ、２５ｍＭの酢酸、１５０ｍＭのトレハロース、０．９％ベンジルアルコール、０．０２％ポリソルベート２０をｐＨ５．０で含み、２〜８℃で２年間保存される最低保存寿命を有する液体多回用量製剤を記載する。別の目的の抗ＣＤ２０製剤は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム中の１０ｍｇ／ｍＬのリツキシマブ、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０及び注入用滅菌水、ｐＨ６．５を含む。皮下投与に適合した凍結乾燥製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。そのような凍結乾燥製剤を、適切な稀釈剤で再構成して高タンパク質濃度にすることができ、再構成された製剤を、本明細書において治療される哺乳動物へ皮下投与することができる。
【００８９】
（投与）
化学療法剤、ＩＬ−２又はその変異体、及び場合により抗ＣＤ２０抗体の少なくとも１つの治療有効用量が投与される。それぞれの薬剤の「治療有効用量又は量」とは、他の薬剤と組み合わせて投与された場合、Ｂ細胞リンパ腫、特にＮＨＬの個人における治療に対する肯定的な治療反応をもたらす量が意図される。特に興味深いものは、本明細書で定義されているように、抗腫瘍効果を提供するこれらの薬剤の量である。「肯定的な治療反応」とは、本発明の併用治療を受けている個人が、個人が治療を受けているＢ細胞リンパ腫の１つ以上の症状に改善を示すことが意図される。
【００９０】
従って、例えば、「肯定的な治療反応」は、併用治療に関連する疾患の改善、及び／又は併用治療に関連する疾患の１つ以上の症状の改善である。従って、例えば、肯定的な治療反応は、疾患における以下の改善の１つ以上を意味する：（１）腫瘍サイズの低減；（２）癌細胞の数の低減；（３）腫瘍増殖の阻害（即ち、ある程度遅らせる、好ましくは止めること）；（４）周囲の臓器への癌細胞の浸潤の阻害（即ち、ある程度遅らせる、好ましくは止めること）；（５）腫瘍転移の阻害（即ち、ある程度遅らせる、好ましくは止めること）；及び（６）癌に関連する１つ以上の症状のある程度の軽減。そのような治療反応を、改善の程度によって更に特徴付けすることができる。従って、例えば、改善は完全寛解と特徴付けることができる。「完全寛解」とは、試験の開始時には陽性であった全ての初期異常又は部位で繰り返された身体検査、実験室、核及びＸ線試験（即ち、ＣＴ（コンピュータ断層撮影法）及び／又はＭＲＩ（磁気共鳴画像法））、並びに他の非侵襲性手順により確認された全ての測定可能又は評価可能な疾患の全ての症状及び徴候の消滅の考証である。或いは、疾患の改善は、部分寛解と分類することができる。「部分寛解」とは、治療前測定値（評価可能な反応を有する患者のみ、部分反応には適用されない）と比較した時、全ての測定可能な病巣の生成物の垂直直径の合計の５０％を越える低減が意図される。
【００９１】
特定の実施形態において、化学療法剤、ＩＬ−２又はそのフラグメント、及び場合により抗ＣＤ２０抗体のそれぞれの多回治療有効用量が、治療活性レジメンを使用して投与される。ＩＬ−２を１日投与レジメンに従って又は断続的に投与することができる。「断続的」投与とは、治療有効用量を、例えば１日おき、２日おき、３日おき等で投与できることが意図される。例えば、幾つかの実施形態において、ＩＬ−２は、週に２回又は週に３回で、１、２、３、４、５、６、７、８．．．１０．．．１５週間等の長期間投与される。抗ＣＤ２０抗体は、断続的に、例えば、毎週１回又は毎週２回の周期を繰り返して投与される。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、週に１回又は２回で、１、２、３又は４週間のような長期間投与される。「週に２回」又は「１週間につき２回」とは、該当の薬剤の２つの治療有効用量が、投与の最初の週の第１日から初めて、７日間の間に、投与の間に最低７２時間おき、投与の間に最大９６時間おいて、被験者に投与されることが意図される。「週に３回」又は「１週間につき３回」とは、３つの治療有効用量が、７日間の間に、投与の間に最低４２時間おき、投与の間に最大７２時間おいて、被験者に投与されることが意図される本発明の目的のため、この種類の投与を「断続的」療法と呼ぶ。本発明の方法によると、被験者は、断続的療法（即ち、治療有効用量の週２回又は週３回の投与）を、所望の治療反応が得られるまで１つ以上の１週間サイクルで受けることができる。この薬剤を、本明細書で以下で示される任意の許容される投与経路で投与することができる。
【００９２】
ＩＬ−２又その変異体を、化学療法剤及び／又は抗ＣＤ２０抗体の前に、同時に、又は後で、投与することができる。例えば、ＣＨＯＰのような化学療法剤及び抗ＣＤ２０抗体による初期治療を実施し、続いてＩＬ−２及び抗ＣＤ２０抗体による１つ以上の治療を実施することができる。化学療法剤及び／又は抗ＣＤ２０抗体と同時に提供される場合、ＩＬ−２又はその変異体を、同じ又は異なる組成物で提供することができる。従って、３つの薬剤又は３つの薬剤のうちの２つを同時治療により個別に提示することができる。「同時治療」とは、物質の組み合わせの治療効果が治療を受けている被験者で生じるように、ヒト被験者に投与することが意図される。例えば、同時治療は、ＩＬ−２又はその変異体含む医薬組成物の治療有効用量の少なくとも１つの投与により達成することができ、ＣＨＯＰのような化学療法剤を少なくとも１つの治療用量で投与することができる。同様に少なくとも１つの抗ＣＤ２０応対又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物の少なくとも１つの治療有効用量を、特定の用量レジメンに従って投与することができる。別個の医薬組成物の投与は、これらの物質の組み合わせの治療効果が治療を受けている被験者に生じる限り、同じ時（即ち、同時に）又は異なる時（即ち、同じ日に又は異なる日に何れかの順番で連続して）であることができる。
【００９３】
本発明の他の実施形態において、ＩＬ−２又はその変異体のような薬剤を含む医薬組成物は、持続性放出製剤であるか、又は持続性放出装置を使用して投与される製剤である。そのような装置は当業界で公知であり、例えば、経皮パッチ、及び連続的に定常様式で多様な用量で薬剤送達を提供して、非持続性放出医薬組成物で持続性放出の効果を達成できる植え込み型ミニポンプが含まれる。
【００９４】
化学療法剤、抗ＣＤ２０抗体及びＩＬ−２又はその変異体を含む医薬組成物を、当業界で既知の任意の医学的に許容される方法に従って同じ又は異なる投与経路を使用して投与することができる。適切な投与経路には、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）のような非経口投与、又は注入、経口（ｐ．ｏ．）及び肺、鼻、局所、経皮、並びに坐剤が含まれる。組成物が肺送達により投与される場合、治療有効用量は、血流中のＩＬ−２又はその変異体のような薬剤の溶解度レベルが、非経口、例えばｓ．ｃ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｍ．又はｉ．ｖ．投与される治療有効用量で得られるものと同等であるように調整される。本発明の幾つかの実施形態において、ＩＬ−２又はその変異体を含む医薬組成物は、ｉ．ｍ．又はｓ．ｃ．注入により投与され、特に癌治療プロトコールで使用される治療剤が投与される領域に局所的にｉ．ｍ．又はｓ．ｃ．注入により投与される。同様に、抗ＣＤ２０抗体を、ｉ．ｖ．、ｉ．ｍ．、ｉ．ｐ．又はｓ．ｃ．注入により投与することができる。特に好ましい実施形態において、化学療法剤は、例えば静脈内投与される。静脈内投与される場合、化学療法剤又は抗ＣＤ２０抗体を含む医薬組成物を、約０．５〜約１０時間、例えば約２〜約８時間、例えば、約４〜約６時間又は約６時間のように約３〜約７時間かけて注入により投与することができる。幾つかの実施形態において、注入は、投与される薬剤に応じて、約０．５〜約２．５時間かけて、約０．５〜約２．０時間かけて、約０．５〜約１．５時間かけて、又は約１．５時間かけて実施される。
【００９５】
一つの特定の実施形態において、化学療法剤は静脈内注入により１回投与され、ＩＬ−２又はその変異体、及び場合により抗ＣＤ２０抗体は、化学療法剤として同じ日に最初の用量で投与される。次に、ＩＬ−２及び場合により抗ＣＤ２０抗体を使用する後続の断続的療法が実施される。或いは、患者は、化学療法剤及び場合により抗ＣＤ２０抗体を投与する前に、２〜３回の量のような１〜５回又はそれ以上の用量を送達することによって、ＩＬ−２又はその変異体で前治療を受けることができる。
【００９６】
投与される種々の組成物のそれぞれの量に影響を与える要因には、投与様式、投与頻度（即ち、毎日の投与、又は週に２回若しくは３回のような断続的投与）、使用される特定の化学療法レジメン、治療を受ける特定の疾患、疾患の重篤度、病歴、個人が別の治療剤で同時治療を受けているか、並びに治療を受けている個人の年齢、身長、体重、健康及び身体状態が含まれるが、これらに限定されない。一般に、治療を受けている被験者の体重が増加するほど、この薬剤の高い投与量が好ましくなる。
【００９７】
例えば、Ｇｌｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２００４）  １０：２２５３−２２６４；同時係属米国特許公開第２００３０１８５７９６号及び同時係属米国特許出願第６０／４９１，３７１号に開示されている治療プロトコールを参照すること（この内容はその全体が参考して本明細書に組み入れられる）。投与されるＩＬ−２（未変性配列、又は本明細書で開示された突然変異タンパク質のようなＩＬ−２生物学的活性を保持するその変異体）の量は、約０．１〜約１５ｍｌＵ／ｍ２の範囲であることができる。例えば、Ｂ細胞リンパ腫及びＣＬＬのＩＬ−２及びリツキシマブ治療に推奨される用量は、Ｇｌｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２００４）  １０：２２５３−２２６４；同時係属米国特許公開第２００３０１８５７９６号及び同時係属米国特許出願第６０／４９１，３７１号を参照されたい。抗体では、患者に投与される用量は、典型的には患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者に投与される用量は、患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは患者の体重の１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。例えば、ヒト被験者に投与する抗ＣＤ２０抗体の用量は、１００ｍｇ／ｍ２〜７５０ｍｇ／ｍ２、一般に２００ｍｇ／ｍ２〜５００ｍｇ／ｍ２、より好ましくは３００ｍｇ／ｍ２〜４００ｍｇ／ｍ２、例えば、３００．．．３１０．．．３２０．．．３３０．．．３４０．．．３５０．．．３６０．．．３７０．．．３７５．．．３８０．．．３９０．．．４００等、又は、ｉ．ｖ．注入で送達される、前記の範囲の何れかの整数であることができる。Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （Ｊａｎｕａｒｙ  ２００５）を参照すること。
【００９８】
一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫反応に起因して、他の腫の抗体よりもヒトの体内で長い半減期を有する。従って、ヒト抗体のより低い投与量及びより少ない投与頻度が多くの場合で可能である。更に、本発明の抗体の用量及び頻度を、例えば脂質化のような修飾により抗体の取り込み及び組織浸透を増強することによって低減できる。
【００９９】
本発明での使用に適切な用量及び化学療法組成物が当業界で既知である。例えば、ＣＨＯＰ及びその個別の構成成分を、Ｍｏｈａｍｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２０００）  ６：４９５０；  ＭｃＫｅｌｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  （１９７６）  ３８：１４８４−１４９３；  Ａｒｍｉｔａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  （１９８４）  ２：８９８−９０２；  Ｓｋｅｅｌ，  Ｒ．  Ｔ．，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｌｉｔｔｌｅ，  Ｂｒｏｗｎ  ＆  Ｃｏ．，  １９９１：３４３；及び米国特許第６，６４５，９８３号、同第６，４５５，０４３号、同第６，５９３，３４２号（その全体が参考して本明細書に組み入れられる）に記載されているように投与することができる。投与の典型的な経路は、ｉ．ｐ．、ｉ．ｖ．又はｐ．ｏである。レジメンは、上記で記載されているように毎日（ｑｄ）、１日おき（ｑ２ｄ）等であることができ、例えば８日間の１日用量（ｑｄ×８）、ｑ４ｄ×３（第１、５、９日等に３回の用量を与える）である。ＣＨＯＰの典型的な用量は以下である：シクロホスファミドは、２００ｍｇ／ｋｇまでをｉ．ｖ．又はｉ．ｐ．で単回用量、又は２０ｍｇ／ｋｇをｉ．ｖ．又はｉ．ｐ．でｑｄ×８；ドキソルビシンは、６ｍｇ／ｋｇまでをｉ．ｖ．又はｉ．ｐ．で単回用量又はｑｄ４×３；ビンクリスチンは、０．２〜０．５ｍｇ／ｋｇをｉ．ｖ．又はｉ．ｐ．で単回用量又はｑｄ×８；プレドニゾンは、１０ｍｇ／ｋｇ／日までを単一剤でｐ．ｏ．。ヒトに有用な別のレジメンは以下である：シクロホスファミド（ＣＴＸ）は７５０ｍｇ／ｍ２をｉ．ｖ．でＤ１、ドキソルビシン（ＤＯＸ）は５０ｍｇ／ｍ２をｉ．ｖ．でＤ１、ビンクリスチン（ＶＣＲ）は１．４ｍｇ／ｍ２をｉ．ｖ．でＤ１及びプレドニゾン（Ｐｒｅｄ）は１日当たり１００ｍｇをｐ．ｏ．でＤ１〜５、の２３日サイクル。
【０１００】
ＣＨＯＰ−ＢＬＥＯでは、典型的なレジメンは、ＣＴＸを７５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＤＯＸを５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＶＣＲを２ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、５、Ｐｒｅｄを１日当たり１００ｍｇのｐ．ｏ．でＤ１〜５、ブレオマイシン（ＢＬＥＯ）を１日当たり１５単位のｉ．ｖ．でＤ１〜５、の１４又は２１日のサイクルである（例えばＲｏｄｒｉｇｕｅｚｅｔ  ａｌ．，  ＢＬＯＯＤ  （１９７７）  ４９：３２５−３３３を参照）。
【０１０１】
ＣＯＭＬＡでは、典型的なレジメンは、ＣＴＸを１５００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＶＣＲを１．４ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、８、１５、メトトレキサート（ＭＴＸ）を１２０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ２２、２９、３６、４３、５０、５７、６４、７１、ロイコボリン（Ｌｅｕ）を２５ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ２３、３０、３７、４４、５１、５８、６５、７２、ＭＴＸの２４時間後に開始してｑ６ｈ×４の用量、シタラビン（ＡＲＡ−Ｃ）を３００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ２２、２９、３６、４３、５０、５７、６４、７１の９１日サイクルである（例えば、Ｇａｙｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｌｏｌ．  （１９８５）  ３：１５９６−１６０４を参照）。
【０１０２】
ＣＯＰでは、典型的なレジメンは、ＣＴＸを４００〜８００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＶＣＲを２ｍｇのｉ．ｖ．でＤ１、Ｐｒｅｄを１日当たり６０ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ１〜５、続いて用量を４０、２０、１０ｍｇ／日に漸減する、の１４日サイクルである（例えばＬｕｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  （１９７１）  ２８：３０６−３１７を参照）。
【０１０３】
ＣＶＰ−１では、典型的なレジメンは、ＣＴＸを４００ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ１〜５、ＶＣＲを１．４ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、Ｐｒｅｄを１日当たり１００ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ１〜５、の２１日サイクルである（例えば、Ｂａｇｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．  （１９７２）  ７６：２２７−２３４を参照）。
【０１０４】
ＤＨＡＰでは、典型的なレジメンは、シスプラチン（ＣＤＤＰ）を１００ｍｇ／ｍ２の２４時間かけたｃ．ｉ．ｖ．でＤ１、ＡＲＡ−Ｃを２ｍｇ／ｍ２の３時間かけたｉ．ｖ．でＤ２、デキサメタゾン（ＤＥＸ）を１日当たり４０ｍｇのｐ．ｏ．又はｉ．ｖ．でＤ１〜４を４日間、の３〜４週間サイクルである（例えば、Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  （１９８８）  ７１：１１７−１２２を参照）。
【０１０５】
ＥＳＡＰでは、典型的なレジメンは、メチルプレドニゾロン（ＳＯＬ）を１日当たり５００ｍｇのｉ．ｖ．でＤ１〜４、エトポシド（ＶＰ−１６）を１日当たり４０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１〜４、ＡＲＡ−Ｃを２ｍｇ／ｍ２の２時間かけたｉ．ｖ．でＤ５、ＣＤＤＰの完了後、ＣＤＤＰを１日当たり２５ｍｇ／ｍ２×４のｃ．ｉ．ｖ．でＤ１〜４（総容量１００ｍｇ）、の許容されるサイクルである（例えば、Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ａｓｃｏ．  （１９８９）  ８：２５６を参照）。
【０１０６】
ＭＡＣＯＰ−Ｂでは、典型的なレジメンは、ＭＴＸを４００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で２、６及び１０週間、Ｌｅｕを１５ｍｇのｐ．ｏ．で、ＭＴＸの２４時間後から出発してｑ６ｈｒ×６の用量、ＤＯＸを５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で１、３、５、７、９、１１週間、ＣＴＸを３５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で１、３、５、７、９、１１週間、ＶＣＲを１．４ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で２、４、６、８、１０、１２週間、ＢＬＥＯを１０単位／ｍ２のｉ．ｖ．で４、８、１２週間、Ｐｒｅｄを、最後の１５日間に漸減する、１日当たり７５ｍｇのｐ．ｏ．である（例えば、Ｃｏｎｎｏｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．  Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｌａｒｇｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （１９８６）：３７−４３を参照）。
【０１０７】
ＭＩＶでは、典型的なレジメンは、マイトキサントロン（ＤＨＡＤ）を１０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、イホスファミド（ＩＦＦ）を、ＭＥＳＮＡと共に、１日当たり１５００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１〜３、ＶＰ−１６を、１日当たり１５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１〜３、の２１日サイクルである（例えば、Ｈｅｒｂｒｅｃｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ａｓｃｏ．  （１９９１）  １０：２７８を参照）。
【０１０８】
ｍ−ＢＡＣＯＤでは、典型的なレジメンは、ＭＴＸを２００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ８、１５、Ｌｅｕを１０ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ９、１６、ＭＴＸの２４時間後に開始するｑ６ｈ×８の用量、ＤＯＸを４５ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＣＴＸを６００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＶＣＲを１ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＤＥＸを１日当たり６ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ１〜５、の３週間サイクルである（例えば、Ｓｈｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．  （１９８６）  １０４：７５７−７６５を参照）。
【０１０９】
ＰＲＯＭＡＣＥ−ＣＹＴＡＢＯＭでは、典型的なレジメンは、Ｐｒｅｄを１日当たり６０ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でＤ１〜１４、ＤＯＸを２５ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＣＴＸを６５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＶＰ−１６を１２０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１、ＡＲＡ−Ｃを３００ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ８、ＢＬＥＯを５単位／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ８、ＶＣＲを１．４ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ８、ＭＴＸを１２０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ８、Ｌｅｕを２５ｍｇのｐ．ｏ．でＤ９、ＭＴＸの２４時間後に開始するｑ６ｈ×４用量、の２１日サイクルであり、次のサイクルはＤ２２に始まる（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ａｓｃｏ  （１９８４）：２４２  Ａｂｓｔｒａｃｔを参照）。
【０１１０】
ＶＡＣＯＰ−Ｂでは、典型的なレジメンは、ＶＰ−１６を５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．でＤ１及び１日当たり１００ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．で３、７、１０週間でＤ２、３、ＤＯＸを５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で１、３、５、７、９、１１週間、ＣＴＸを３５０ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で１、５、９週間、ＶＣＲを１．２ｍｇ／ｍ２のｉ．ｖ．で２、４、６、８、１０、１２週間、Ｐｒｅｄを４５ｍｇ／ｍ２のｐ．ｏ．でｑＤ×１週間、次にｑＯＤ×１１週間、ＢＬＥＯを１０単位／ｍ２のｉ．ｖ．で２、４、６、８、１０、１２週間である（例えば、Ｃｏｎｎｏｒｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ａｓｃｏ．  （１９９０）  ９：２５４を参照）。
【０１１１】
当業者は、これらの及び他のレジメンのために他の適切な化学療法用量を容易に決定することができる。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｎａｄｌｅｒ，  ”Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ”  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｖｏｌ．  ２，  Ｐａｒｔ  ６，  Ｈｏｌｌａｎｄ  ＆  Ｆｒｅｉ  （ｅｄｓ．）を参照すること。
【０１１２】
前記の用量レジメンに従って治療を受けている被験者が部分寛解を示すか又は長期の寛解の後で再発を示す場合、後に続く同時治療の過程が疾患の完全な寛解を達成するために必要である場合がある。従って、最初の治療期間からの空白時間の後、被験者は、抗ＣＤ２０抗体投与及び／又は化学療法剤の投与と組み合わせたＩＬ−２治療を含む、１つ以上の追加の治療期間を受けることができる。そのような治療期間の間の空白期間は、本明細書において中断期間と呼ばれる。中断期間の長さは、これらの治療剤による同時治療の前治療の期間で達成された腫瘍反応（即ち、完全寛解対部分寛解）により左右されることが理解される。
【実施例】
【０１１３】
（ＩＩＩ．実験）
下記は本発明を実施する特定の実施形態の例である。実施例は、説明目的のためのみで提供され、本発明の範囲をいかようにも限定することを意図しない。
【０１１４】
使用された数字（例えば、量、温度等）に関して正確性を確実にする努力がなされたが、いくらかの実験誤差及び偏差は当然のことながら許容されるべきである。
【０１１５】
（材料及び方法）
（Ａ．ＩＬ−２）
使用したＩＬ−２製剤は、商標名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）でＣｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，  Ｃａｌｉｆ．により製造された。この製剤中のＩＬ−２は、アルデスロイキンと呼ばれる、組み換え的に産生された、非グリコシル化ヒトＩＬ−２突然変異タンパク質であり、未変性ヒトＩＬ−２アミノ酸配列と、最初のアラニン残基が排除され、位置１２５のシステイン残基がセリン残基に代えられている点が異なっている（ｄｅｓ−アラニル−１、セリン−１２５ヒトインターロイキン−２と呼ばれる）。このＩＬ−２突然変異タンパク質は、米国特許第４，９３１，５４３号で記載されているように、大腸菌で発現し、次にダイアフィルトレーション及びカチオン交換クロマトグラフィーにより精製される。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）として販売されているＩＬ−２製剤は、１．３ｍｇのタンパク質（２２ＭＩＵ）を含有するバイアル中の滅菌で白色からオフホワイト色の防腐剤無含有凍結乾燥粉末として供給される。
【０１１６】
（Ｂ．抗ＣＤ２０抗体）
使用した抗ＣＤ２０抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ；ＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；  ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．米国カリフォルニア州サンディエゴ）（「Ｒ」）であった。
【０１１７】
（Ｃ．ＣＨＯＰ）
使用されたＣＨＯＰの構成成分（シクロホスファミド、Ｃ；ドキソルビシン、Ｈ；ビンクリスチン、Ｏ；及びプレドニゾン、Ｐ）は以下であった：  
シトキサン（Ｃ、シクロホスファミド）
注入用粉末−静脈内−凍結乾燥５００ｍｇ
凍結乾燥シトキサン、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ．  
ドキソルビシン（Ｈ）
溶液−静脈内−２ｍｇ／ｍｌ
アドリアマイシン、Ｂｅｄｆｏｒｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
ビンクリスチン（Ｏ）
溶液−静脈内−１ｍｇ／ｍｌ
硫酸ビンクリスチン、ＳＩＣＯＲ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．
プレドニゾン（Ｐ）
溶液−経口−５ｍｇ／５ｍｌ
プレドニゾン、Ｒｏｘａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．
（Ｄ．細胞株）
ヒトＢ細胞ＨＮＨＬ  Ｄａｕｄｉ細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （Ｍａｎａｓｓａｓ，  Ｖａ．）から得た。細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ，  Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  Ｍｄ．）で補充したＲＰＭＩ中で培養した。細胞を、懸濁培養として増殖させ、３７℃及び５％ＣＯ２の加湿雰囲気で維持した。細胞を、９８％を越える生存度（トリパンブルー排除を使用して評価した）の指数増殖期で使用し、マイコプラズマを含有しないことを確定した。
【０１１８】
（Ｅ．マウス）
無胸腺ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４〜６週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．（米国マサチューセッツ州ウィルミントン）から得て、試験を開始する１週間前に順化させた。マウスは、滅菌齧歯類用固形飼料及び水を自由に入手し、１２時間の明／暗サイクルで滅菌フィルタートップケージに収容された。全てのｉｎ  ｖｉｖｏ試験は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ及びＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って実施した。
【０１１９】
（Ｆ．腫瘍阻害及び反応のｉｎ  ｖｉｖｏ効能試験及び評価）
継代接種され、クローン誘導されたＤａｕｄｉ細胞（５×１０６細胞／マウス）を５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により総容量０．１ｍｌに再構成し、照射（３Ｇｙ）ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右側腹部に皮下移植した。処置は、平均腫瘍容積が１５０〜３００ｍｍ３になった時に始めた。マウスは、一般的に１群当たり１０匹を無作為に割り当てた。ＣＨＯＰを与えた群では、この処置は、第１日の４０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドのｉ．ｖ．；３．３ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンのｉ．ｖ．；０．５ｍｇ／ｋｇのビンクリスチン；及び０．２ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンのｐ．ｏ．の１〜５日から構成された（Ｍｏｈａｍｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ２：１３６１−８）。腫瘍容積はカリパスを使用して測定する。腫瘍のカリパス測定を、式：１／２（長さ（ｍｍ）×〔幅（ｍｍ）〕２）を使用して、腫瘍容量に（ｍｍ３）に変換した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を、〔１−（処置群の平均腫瘍容量／対照群の平均腫瘍容量）×１００〕により計算した。反応を、完全寛解（ＣＲ、測定可能な腫瘍なし）、部分寛解（ＰＲ、処置開始時でのそれぞれの動物の腫瘍容量と比較して５０〜９９％の腫瘍容量の低減）、微小寛解（ＭＲ、第１日の初期腫瘍容量の２５〜５０％の最大腫瘍阻害）、安定疾患（ＳＤ、腫瘍増殖が初期腫瘍容量の＋／−２５％である）として定義した。腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）分析は、〔（処置群が平均腫瘍容量１０００ｍｍ３に達した日数）−（対照群が平均腫瘍容量１０００ｍｍ３に達した日数）〕により計算した。条件生存率は、腫瘍容量が１０００ｍｍ３に達していない各群におけるマウスの率である。
【０１２０】
（Ｇ．統計分析）
多重比較を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して実施し、異なる治療方法を比較する事後試験を、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ  Ｋｅｕｌｓ試験（ＳｉｇｍａＳｔａｔ）を使用して行った。それぞれの動物の腫瘍増殖遅延（１０００ｍｍ３になる時間）を、条件生存の終点として使用し、処置間の有意性を、ログランクテスト（Ｐｒｉｓｍ）を使用して分析した。試験の終了時の剖検で目に見える腫瘍を有さないマウスを、この分析では仕切と考慮した。差はｐ＜０．０５で統計的に有意であると考慮した。各治療で予測される阻害％の比率（Ｔ／Ｃ処置１の％×Ｔ／Ｃ処置２の％）を、併用処置群で観察されたＴ／Ｃの％で割ったものが＞１であった場合、相乗反応が定義された（Ｙｏｋｏｙａｍａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２０００）  ６０：２１９０−２１９６）。
【０１２１】
（実施例１）
（ヒトＢ細胞リンパ腫を処置する多様なＩＬ−２／ＣＨＯＰ／リツキシマブレジメンの評価）
ＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））、リツキシマブ及びＣＨＯＰの組み合わせの投与を、ヒトＢ細胞リンパ腫のＤａｕｄｉ異種移植モデルで以下のように評価した。例えば、Ｄａｕｄｉ異種移植モデルの記載は、Ｈｕｄｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  （１９９８）  １２：２０２９−２０３３を参照されたい。Ｄａｕｄｉ／ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスモデルは、高レベルのＣＤ２０を発現し、攻撃性の低い／低悪性度疾患プロフィールに関連する。更に、ＮＫ細胞は、ＩＬ−２のようなサイトカインによる活性化の不在下では、Ｄａｕｄｉ腫瘍細胞を溶解できない。Ｄａｍｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （１９８７）  １３８：１７７９−１７８５を参照されたい。
【０１２２】
１２０匹の無胸腺ヌードＢＡＬＢ／ｃマウスを、ＤａｕｄｉヒトＢ細胞株を接種するために、１週間順化させた。Ｄａｕｄｉ細胞（５×１０６細胞／マウス）を、照射した若年ヌードマウス（３Ｇｙで約３．２分間）に、５０％マトリゲルにより用量０．１ｍｌでｓ．ｃ．移植（右側腹部）し、腫瘍容量が１１０ｍｍ３に達するまで皮下腫瘍を増殖させた。これを試験日１とした。
【０１２３】
ＣＨＯＰ及びリツキシマブ投与を、既知の臨床用量レジメン（Ｍｏｈａｍｍａｄ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２０００）  ６：４９５０を参照）に合わせ、腫瘍が確立した時（１５０〜２００ｍｍ３）に処置を開始した。処置群は、ＣＨＯＰ単独（Ｃ、４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；Ｈ、３．３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；Ｏ、０．５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．、全て第８日に投与された、及びＰ、０．２ｍｇ／ｋｇ、第８〜１２日）、又は第８日から始まる４週間サイクルのリツキシマブ（登録商標）単独（１０ｍｇ／ｋｇ、１週間に１回、ｉ．ｐ．）、又は４週間サイクルのリツキシマブと組み合わせたＣＨＯＰの何れかで構成された。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）処置（１ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、１週間に３回）は、同時に（第８日）又は１週間後（第１５日）から始めて合計４週間であった。表１及び図１Ａ〜１Ｃを参照されたい。腫瘍容量及び体重は、１週間につき２回測定した。臨床観察を記録した。
【０１２４】
【表１】
2008530232.tif 000003
結果は、図１〜１３及び表２及び３で示されている。特に、Ｄａｕｄｉ異種移植モデルにおいて、単剤ＩＬ−２、ＣＨＯＰ、リツキシマブ（登録商標）、並びに併用治療のＩＬ−２／リツキシマブ、ＣＨＯＰ／リツキシマブ、及びＩＬ−２／リツキシマブは試験された用量レジメンで、ビヒクル治療と比較して腫瘍増殖を有意に阻害した（ｐ＜０．００１、ＡＮＯＶＡ、第２９日）（図１〜４、表２及び３）。ＩＬ−２／リツキシマブは、単一の試験薬ＩＬ−２、リツキシマブと比較して、腫瘍増殖を有意に阻害し、腫瘍容量が１０００ｍｍ３に達するまでの時間を遅延した（腫瘍増殖遅延、ＴＧＤ）（ｐ＜０．０１、ログランク、ＴＧＤ及びｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ、第２９日）（図４、表３；ＩＬ−２／群３対ＩＬ−２及びリツキシマブ／群６）。ＩＬ−２及びリツキシマブ併用治療は、腫瘍進行の時間の遅延及び評価可能な反応数に関して、ＣＨＯＰ単独と比較して有意に改善された効能を実証した（ＩＬ−２／Ｒ＝６ＣＲ；ＣＨＯＰ＝１ＣＲ）。
【０１２５】
更に、ＩＬ−２／Ｒの組み合わせは、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）について及び１０００ｍｍ３になるＴＧＤ分析について、ＣＨＯＰ／Ｒ治療と比較して同等の効能を実証した（Ｐ＝０．２７４、ログランク、１０００ｍｍ３になるＴＧＤ、及びＰ＝０．５７９、ＡＮＯＶＡ、第２９日）（図５及び６）。
【０１２６】
ＣＨＯＰ／Ｒは、腫瘍増殖を有意に阻害し（腫瘍増殖阻害９９％、ＴＧＩ；５／１０ＣＲ）、Ｒ（６３％ＴＧＩ、１ＣＲ）又はＣＨＯＰ（７７％ＴＧＩ、１ＣＲ）単独よりも優れていた（図７及び８）。注目すべきは、ＩＬ−２のＣＨＯＰ／Ｒへの追加（Ｄ８又はＤ１５の何れかで開始される、実験設計を参照）は、それぞれ７／１０及び９／１０のＣＲで実質的に腫瘍退縮を誘導し、ＣＨＯＰ／Ｒよりも優れていた（ｐ＜０．０５）（図９〜１２）。更に、ＣＨＯＰ／ＲにＩＬ−２を追加することにより、ＣＨＯＰ／Ｒ単独（９０日間）に比べて、進行までの時間が有意に長くなった（＞１６４日間）（図９〜１２）。試験薬の全ての用量の耐性は良好であった（図１３）。まとめると、ＩＬ−２／Ｒが後に続くＣＨＯＰ／Ｒは、安全で、効果的であり、ＣＨＯＰ又はＣＨＯＰ／Ｒ単独の使用と比較して、進行の時間を遅延する利益を加えることが予測される。これらの所見は、化学療法剤と他の抗体との組み合わせに適用することが期待される、及び／又は他の免疫促進性サイトカイン／薬剤を介して媒介される。
【０１２７】
【表２】
2008530232.tif 000004
１ＡＮＯＶＡ／ＳＴｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｕｅｌ試験
２ＢＡＲ＝快活、敏感、反応性
【０１２８】
【表３】
2008530232.tif 000005
（実施例２）
（ＩＬ−２、ＣＨＯＰ及びＣＨＯＰ構成成分を使用する併用治療）
ＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））とＣＨＯＰとを使用する、並びにＩＬ−２と個別のＣＨＯＰ構成成分（シクロホスファミド、Ｃ；ドキソルビシン、Ｈ；ビンクリスチン、Ｏ；及びプレドニゾン、Ｐ）のそれぞれとを使用する併用治療を、上記で記載したヒトＢ細胞リンパ腫のＤａｕｄｉ異種移植モデルで評価した。
【０１２９】
無胸腺ヌードＢＡＬＢ／ｃマウス（１０匹のマウス／群）を順化させ、上述の通り、照射したマウスにＤａｕｄｉ細胞を移植した。処置は、腫瘍がおよそ１４０ｍｍ３になった時に始めた。これを試験第１日とした。
【０１３０】
ＣＨＯＰ投与は、既知の臨床投与レジメンに合わせた（Ｍｏｈａｍｍａｄ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２０００）  ６：４９５０を参照）。処置群は以下であった：
シクロホスファミド（Ｃ、シトキサン）、４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．、第１日；
ドキソルビシン（Ｈ、アドリアマイシン）、３．３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．、第１日；
ビンクリスチン（Ｏ）、０．５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．、第１日；
プレドニゾン（Ｐ）、０．２ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、第１〜５日；
ＣＨＯＰ（Ｃ、４０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；Ｈ、３．３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；Ｏ、０．５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．及びＰ、０．２ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、全て第１日に投与された）
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（ＩＬ−２）、１ｍｇ／ｋｇ；ｓ．ｃ．、１週間に３回を４週間、合計１２用量；
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（ＩＬ−２）＋個別の化学療法剤（第１日から初めて個別に投与される）；
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（ＩＬ−２）＋ＣＨＯＰ（第１日から初めた単剤と同様の投与レジメン）。
【０１３１】
単剤ＩＬ−２、化学療法剤、又はシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン若しくはプレドニゾンの何れかとの組み合わせは、試験した用量で全て耐性が良好であった。単剤ＩＬ−２は、このモデルにおいて僅かな腫瘍増殖阻害を示した（ビヒクルに対して１４％、ｐ＝０．３７）。ＩＬ−２＋シクロホスファミド（図１４及び表４）、及びＩＬ−２＋ビンクリスチン（図１６及び表６）によって、腫瘍増殖阻害、反応及び増殖遅延分析に基づいて、相加効果よりも大きい効果が観察された。
【０１３２】
ＩＬ−２＋ドキソルビシン（図１５及び表５）、及びＩＬ−２＋プレドニゾン（図１７及び表７）の組み合わせは、相加反応を実証した。ＩＬ−２＋プレドニゾンは、単剤Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）又はプレドニゾンと比較して、それぞれ２１％及び２４％の阻害を示した。ＩＬ−２＋プレドニゾンの結果は、使用された投与スケジュールによりプレドニゾンのような免疫抑制剤を組み合わせることは、効能を抑止しない可能性があることを示す。
【０１３３】
最後に、ＩＬ−２＋個別のＣＨＯＰ構成成分は効果的であるが、ＩＬ−２＋ＣＨＯＰの組み合わせは、腫瘍増殖阻害の程度、反応及び増殖遅延分析に基づいて、単剤単独と比較して優れた効能を実証した（図１８及び表８）。
【０１３４】
【表４】
2008530232.tif 000006
【０１３５】
【表５】
2008530232.tif 000007
表９には、１つ又は２つの独立試験の追加データを示す。
【０１３６】
【表６】
2008530232.tif 000008
（実施例３）
（治療後の血液及び脾臓における細胞集団の分析）
相乗効果に基づく機序を解明するために、ＣＨＯＰ−Ｒ／ＩＬ−２治療後の主要な免疫効果細胞集団の薬力学的反応を調べた。処置は、腫瘍がおよそ３００ｍｍ３になった時に始めた。これを試験日１とした。Ｄａｕｄｉ腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、第１日にＣＨＯＰ又はＣＨＯＰ−Ｒで処置した。ＩＬ−２／Ｒ治療による免疫再構築を第８日に開始した。血液及び脾臓を、１群当たり５匹のマウスの指定された治療後の様々な時間に収集した。全血（１００μｌ）を、ＦＡＣＳ／ＴｒｕＣｏｕｎｔ管（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）に移し、氷上で保持した。単離した脾細胞調整物を５×１０６／ｍｌの濃度で懸濁し、１試料当たり５×１０５の細胞を９６ウエルプレート中の抗体で以下のように処置及び染色した。試料を０．５μｇのマウスＦｃブロック（抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２、ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）で処理し、氷上で２０分間インキュベートした。下記で示されている蛍光色素結合抗体を試料に加え、光を遮って、氷上で２０分間インキュベートした。血液試料を、２ｍｌの１×ＦＡＣＳ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）を加えながら撹拌し、続いて室温で１０分間インキュベートし、次に１２５０ｒｐｍで遠心分離した。全ての試料を２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳに懸濁し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒによる試料取得、続くＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏソフトウェアによる分析の前に、４℃で保存した。細胞の絶対数を、ＴｒｕＣｏｕｎｔビーズ基準に対して決定した。総リンパ球（ＣＤ４５、ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、単球（Ｆ４／８０；ＣａｌＴａｇ；米国カリフォルニア州バーリンゲーム）及びＮＫ細胞（ＤＸ５、ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）を、対応する抗体で同定した。リンパ球をＢ細胞（ＣＤ１９）及びＴ細胞（ＣＤ４、ＣＤ８）のために追加的に染色した。活性化単球では、ＭＨＣクラスＩＩ強度（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）を染色により検出した。ＣＨＯＰ、ＩＬ−２及びリツキシマブ処置は、上記で記載された通りであった。
【０１３７】
図１９は、ＣＨＯＰ単独の結果を示す。血液細胞数算定を、第４日に実施した。図１９で示されているように、ＣＨＯＰ治療は、血液中の単球及びリンパ球集団を激減させた。
【０１３８】
図２０は、ＩＬ−２、ＩＬ−２＋リツキシマブ、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ、及びＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２の結果を示す。細胞は第１５日に測定された。図で示されているように、脾臓での活性化単球の減少の増大が、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２による処置の後で生じた。
【０１３９】
図２１は、ＩＬ−２、ＩＬ−２＋リツキシマブ、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ、及びＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２の結果を示す。全血からのＮＫ細胞を第１５日に数えた。図で示されているように、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２による処置の後で、血液ＮＫ細胞数が増加した。
【０１４０】
図２２は、ＩＬ−２、ＩＬ−２＋リツキシマブ、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ、及びＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２の結果を示す。全血からの活性化単球を第１５日に数えた。図で示されているように、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２による処置の後で、活性化単球数が増加した。
【０１４１】
（実施例４）
（治療後のＤａｕｄｉ腫瘍の組織学的及び免疫組織化学的分析）
薬剤処置の薬力学も、Ｄａｕｄｉ腫瘍への免疫効果細胞の細胞輸送をｉｎ  ｖｉｖｏで測定することによって調べた。ＣＨＯＰ、ＩＬ−２及びリツキシマブの多様な組み合わせで処置された動物からのＤａｕｄｉ腫瘍の組織学的及び免疫組織化学的分析を実施した。特に、無胸腺ヌードＢＡＬＢ／ｃマウス（１０匹のマウス／群）を順化させ、照射し、上述の通り、マウスにＤａｕｄｉ細胞を移植した。処置は、腫瘍がおよそ３００ｍｍ３になった時に始めた。これを試験日１とした。ＣＨＯＰ、ＩＬ−２及びリツキシマブ処置を、以下のように投与した：ＣＨＯＰ：第１日；リツキシマブ：第１日及び第８日；ＩＬ−２：第８、１０及び１２日。腫瘍を切除し、１０％中性緩衝ホルマリンで固定し、７０％エタノールへ移し、続いてＥｘｃｅｌｓｉｏｒ組織プロセッサ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ［米国ペンシルバニア州ピッツバーグ］）を使用して、パラフィン包埋処理をした。組織切片（４μｍ）をロータリーミクロトーム（ＲＭ２２３５，  Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ［ドイツ  ヌスロッホ］）で切断した。ヘモトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した切片を調製した。免疫組織化学的染色を、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＴ自動スライド染色システム（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ［米国アリゾナ州トゥーソン］）を使用して実施した。使用した主な抗体は、単球及びマクロファージの検出用にはＦ４／８０（Ｓｅｒｏｔｅｃ）、ＮＫ細胞には抗パーフォリン抗体（１：８００稀釈、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．［米国ニュージャージー州フランダース］）、アポトーシスには開裂カスパーゼ３（Ａｂ−２、１：１０稀釈、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ［米国マサチューセッツ州ボストン］）、細胞増殖率にはＫｉ−６７（Ｋ−２、未希釈、Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、及びアイソタイプ対照にはウサギＩｇＧ１（ＣｈｒｏｍＰｕｒｅ，  Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．［米国ペンシルバニア州ウェストグローブ］）であった。熱誘導エピトープ修復を、ＣＣ１（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して実施した。次に試料を適切な第２の抗体（ウサギ抗マウスＩｇＧ１ビオチン化抗体、１：１００稀釈、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；又はヤギ抗ウサギＩｇＧビオチン化抗体、１：１００稀釈、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共にインキュベートした。３−３′−ジアミノベンジジン色原体を有するホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンビオチン系（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、位置確認に使用した。切片をヘマトキシリンで対比染色して、組織形態学の視覚化を増強した。
【０１４２】
Ｈ＆Ｅ分析は、密に充填された腫瘍細胞を示し、ビヒクル処置群では退化した細胞はほとんどなく、ＣＨＯＰ及びＣＨＯＰ−Ｒ群では僅かに多い数を示した（図２３ａ〜ｃ）。ＣＨＯＰ−Ｒ／ＩＬ−２腫瘍は、腫瘍領域の＞５０％で変質組織、浸潤単核細胞、及び線維性間質組織を示した（図２３ｄ）。活性化免疫効果細胞、おそらくはＮＫ／ＬＡＫ細胞を、パーフォリン染色により同定した（Ｔ細胞は、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスでは不在である）。極めて僅かなＮＫ細胞が、ビヒクル、ＣＨＯＰ、又はＣＨＯＰ−Ｒ処置腫瘍にまばらにしか分布しておらず（図２３ｅ〜ｇ）、僅かに多い数のＮＫ細胞がＣＨＯＰ−Ｒ／ＩＬ−２処置群で検出された（図２３ｈ）。マクロファージを、Ｆ４／８０免疫染色を使用して腫瘍中に検出した。散在的なＮＫ細胞浸潤と際だって対照的に、増加した数のマクロファージが、リツキシマブ、ＩＬ−２＋Ｒ、ＣＨＯＰ−Ｒ及びＣＨＯＰ−Ｒ＋ＩＬ−２で処置された腫瘍に沈着していることが見出され、ほとんどの場合では、主に、腫瘍周囲及び／又は退化した細胞領域に隣接して表れた（図２３ｉ〜ｌ）。
【０１４３】
ＣＨＯＰ−Ｒ／ＩＬ−２治療に反応するＤａｕｄｉ腫瘍の機序を検討するため、腫瘍切片をアポトーシス及び増殖細胞のマーカーで染色した（図２４ａ〜ｈ）。腫瘍細胞死を、アポトーシスのマーカーとして開裂カスパーゼ３免疫染色により評価した（図２４ａ〜ｄ）。開裂カスパーゼ３陽性細胞の数は全ての薬剤処置群で僅かに増加しているが、ＩＬ−２／ＣＨＯＰ−Ｒ治療による広い壊死領域を考慮すると、ＩＬ−２／ＣＨＯＰ−Ｒ処置により検出されたアポトーシス細胞の数は、生存組織の領域において他の処置よりもかなり多かった。加えて、腫瘍細胞増殖のマーカーとしてのＫｉ６７による切片の染色は、ＩＬ−２／ＣＨＯＰ−Ｒ治療による抗腫瘍効果が、１５日までの強力で急速な初期反応を伴って、増強されたことが確認された（図２４ｅ〜ｈ）。Ｋｉ６７レベルの減少も、ＩＬ−２／Ｒ（図示なし）及びＣＨＯＰ−Ｒ処置群で証明されたが、ＩＬ−２／ＣＨＯＰ−Ｒ処置群ほど顕著ではなかった（図２４ｈ）。
【０１４４】
まとめると、上記で詳述されたＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２の投与は、Ｄａｕｄｉ腫瘍でアポトーシスを誘導し、増殖活性を減少した。ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２の機序は、組織学的及びＩＨＣ終点と良好に相関することが見出され、Ｄａｕｄｉ腫瘍に対する抗増殖活性及びアポトーシス活性が増加したことを示した。
【０１４５】
（実施例５）
（併用治療による処置群における相乗活性の評価）
これらの薬剤及びこれらの薬剤の組み合わせについての幾つかの試験を、Ｄａｕｄｉリンパ腫腫瘍モデルで実施した。次にこれらの多重実験からのデータを、更なる分析のために一緒にプールした（表１０）。ｉｎ  ｖｉｖｏ薬剤相乗効果を、多剤効果分析を使用して併用処置の反応指数から評価した。
【０１４６】
【表７】
2008530232.tif 000009
ａｎ＝それぞれの試験においてマウス１０匹／群。処置が複数の独立試験で試験される場合は、データをまとめた。これらの試験において、処置は、腫瘍が１００〜２５０ｍｍ３になった時に開始した。
ｂ相乗効果は、併用治療の予測される腫瘍増殖阻害％（％Ｔ／Ｃｅｘｐ＝％Ｔ／Ｃ処置１×％Ｔ／Ｃ処置２）を併用治療の観察された％Ｔ／Ｃ（％Ｔ／Ｃｏｂｓ）で割った率が＞１であった時に定義した。相加効果は、％Ｔ／Ｃｅｘｐ／％Ｔ／Ｃｏｂｓ＝１であった時、拮抗作用は、Ｔ／Ｃｅｘｐ／％Ｔ／Ｃｏｂｓ＜１であった時に定義した。
【０１４７】
ＢＡＬＢ／ｃヌードＤａｕｄｉモデルにおいて、単剤シクロホスファミド、ドキソルビシン及びプレドニゾンは、僅かな腫瘍増殖阻害（＜１５％）を生じ、ビヒクル処置と統計的に異なっていなかった（表１０）。ビンクリスチンは、このＤａｕｄｉモデルにおいて有効であり、５０％の腫瘍増殖阻害を誘発した（Ｐ＝０．００２）。化学療法剤がＣＨＯＰ組み合わせとして投与される場合、統計的に有意な腫瘍増殖阻害（７８％、Ｐ＜０．００１）及び腫瘍反応（４ＰＲ、１ＣＲ；反応率１７％）が観察された（表１０）。ＩＬ−２単独治療は、１ｍｇ／ｋｇをｓ．ｃ．で１週間に３回投与した場合、耐性は良好であり、１４％の腫瘍増殖阻害を生じた（Ｐ＞０．０５）。ＩＬ−２とシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン又はプレドニゾンの何れかとの組み合わせを評価した。これらの組み合わせレジメンは、全てそれぞれの単独の薬剤と比較した時、相加的である腫瘍増殖阻害作用をもたらした。相乗効果を示すものは観察されなかった。ＣＨＯＰレジメンと組み合わせたＩＬ−２は、単剤と比較した時、増大した腫瘍増殖阻害を実証し、薬剤の増強作用を示した（併用治療％Ｔ／Ｃｅｘｐｅｃｔｅｄ／％Ｔ／Ｃｏｂｓｅｒｖｅｄが約３）（表１０）。
【０１４８】
ＩＬ−２とリツキシマブの併用処置は、単剤と比較した時に相乗活性を示した。ＣＨＯＰ＋リツキサン併用治療へのＩＬ−２の追加を、ＩＬ−２がＣＨＯＰ−Ｒの抗腫瘍活性を増強するかを決定するために評価した（図２５）。特筆すべきは、ＣＨＯＰ−Ｒ治療へのＩＬ−２の追加は、１９／２０匹のマウスで治癒的であり、完全寛解の証拠が第３６日までに観察され、薬剤処置の開始後少なくとも１６０日まで持続した（表１０、図２６Ａ）。完全寛解は、実験が終了した時、第１６０日に、腫瘍移植部位の残留ヒトＤａｕｄｉ細胞に対する抗ヒトミトコンドリア抗体による免疫組織化学的染色を使用して確認した。１０００ｍｍ３の腫瘍容量になる時間により定義される生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｒ分析は、全ての単剤又は二重処置群と比較して統計的に有意であった。全ての処置レジメンの耐性は良好であり、薬剤関連有害事象又は有意な体重減少はなかった。
【０１４９】
これらの実施例のデータは、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおけるヒト低悪性度ＣＤ２０＋Ｂ細胞リンパ腫のＤａｕｄｉ異種移植モデルにおいて、ＩＬ−２が、ＣＨＯＰ−Ｒと組み合わせて又はＣＨＯＰ−Ｒ処置に続く維持治療としてリツキシマブと組み合わせて投与された時、全体的な腫瘍効果及び反応の持続期間を増強することを示す。最も特筆すべき知見は、ＩＬ−２／ＣＨＯＰ−Ｒ治療が、繰り返される全ての二重組み合わせ、特に現行の標準的な薬剤であるＣＨＯＰ及びリツキシマブと比較して、効能に有意な改善を伴って、処置マウスの９５％で治癒的であることであった。これらのデータも薬剤相加性の分析により支持され、ＩＬ−２の追加は、ＣＨＯＰ−Ｒ治療に相乗的に有益であることを示した。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１Ａ】示された処置レジメンの後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）を示す。
【図１Ｂ】示された処置レジメンの後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）を示す。
【図１Ｃ】示された処置レジメンの後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）を示す。
【図１Ｄ】示された処置レジメンの後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）を示す。
【図２Ａ】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける多様な処置レジメンの腫瘍進行（条件生存率）の時間を示す。
【図２Ｂ】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける多様な処置レジメンの腫瘍進行（条件生存率）の時間を示す。
【図２Ｃ】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける多様な処置レジメンの腫瘍進行（条件生存率）の時間を示す。
【図３】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）に対するＩＬ−２＋リツキシマブ対リツキシマブ又はＩＬ−２又はＣＨＯＰ処置の効果を示す。
【図４】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける条件生存率に対するＩＬ−２＋リツキシマブ対リツキシマブ又はＩＬ−２又はＣＨＯＰ処置の効果を示す。
【図５】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）に対するＩＬ−２＋リツキシマブ対ＣＨＯＰ＋リツキシマブ処置の効果を示す。
【図６】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける条件生存率に対するＩＬ−２＋リツキシマブ対ＣＨＯＰ＋リツキシマブ処置の効果を示す。
【図７】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）に対するＣＨＯＰ＋リツキシマブ対リツキシマブ又はＣＨＯＰ処置の効果を示す。
【図８】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける条件生存率に対するＣＨＯＰ＋リツキシマブ対リツキシマブ又はＣＨＯＰ処置の効果を示す。
【図９】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）に対するＣＨＯＰ＋リツキシマブ（８日）＋ＩＬ−２（第１５日）対ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２＋リツキシマブ（第８日）又はＣＨＯＰ＋リツキシマブ又はＩＬ−２＋リツキシマブ処置の効果を示す。
【図１０】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける条件生存率に対するＣＨＯＰ／リツキシマブ＋ＩＬ−２／リツキシマブ対ＣＨＯＰ／ＩＬ−２／リツキシマブ又はＣＨＯＰ／リツキシマブ又はＩＬ−２／リツキシマブ処置の効果を示す。
【図１１】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均腫瘍容量（ｍｍ３）に対する多様な処置レジメンの併用治療の前のＩＬ−２による前処置の効果を示す。
【図１２】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける条件生存率に対する多様な処置レジメンの併用治療の前のＩＬ−２による前処置の効果を示す。
【図１３】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける平均体重に対する多様な処置レジメンの効果を示す。
【図１４】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおけるＩＬ−２（週に３回）とシクロホスファミド（Ｃ）（第１日）の併用治療の効果を示す。
【図１５】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおけるＩＬ−２（週に３回）とドキソルビシン（Ｈ）（第１日）の併用治療の効果を示す。
【図１６】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおけるＩＬ−２（週に３回）とビンクリスチン（Ｏ）（第１日）の併用治療の効果を示す。
【図１７】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおけるＩＬ−２（週に３回）とプレドニゾン（Ｐ）（ｑｄ×５）の併用治療の効果を示す。
【図１８】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおけるＩＬ−２（週に３回）とＣＨＯＰの併用治療の効果を示す。
【図１９】ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける単球及びリンパ球集団に対するＣＨＯＰ治療の効果を示す（腫瘍はおよそ３００ｍｍ３）。ＣＨＯＰを第１日に投与し、細胞数算定を第４日に行った。
【図２０】示された処置レジメンの１５日後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルの陽性脾細胞の率を示す。
【図２１】示された処置レジメンの１５日後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける全血のＮＫ細胞の数（絶対計数）を示す。
【図２２】示された処置レジメンの１５日後の、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）モデルにおける全血の活性化単球の数（絶対計数）を示す。
【図２３】ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２治療が、腫瘍に輸送される免疫効果細胞の増加を誘導することを示す。ｓ．ｃ．Ｄａｕｄｉ腫瘍（３００ｍｍ３）を有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（６〜８週齢）を、第１日に、ビヒクル（５％デキストロース）によるか、又は単独で投与されるか若しくはリツキシマブ（第１、８、１５日に１０ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせて投与されるＣＨＯＰにより処置した。処置群は、ＣＨＯＰ−Ｒ、続いてビヒクル（５％デキストロース）又はＩＬ−２（第８、１０、１２、１５日に１ｍｇ／ｋｇ）、又は組み合わせたＩＬ−２／Ｒも含んだ。処置後の第１５日に、腫瘍を収集し、組織学及び免疫組織化学を評価した。ＮＫ及び単球の腫瘍への細胞輸送：パネル：Ｈ＆Ｅ染色（ａ〜ｄ）；パーフォリンで免疫染色（ｅ〜ｈ）；Ｆ４／８０（ｉ〜ｌ）。全ての倍率は４００×、代表的なデータ、ｎ＝１群当たり３〜４匹のマウス。
【図２４】ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２治療が、アポトーシス及びｉｎ  ｖｉｖｏで強力な抗増殖腫瘍反応の増加を誘導することを示す。ｓ．ｃ．Ｄａｕｄｉ腫瘍（３００ｍｍ３）を有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（６〜８週齢）を、第１日に、ビヒクル（５％デキストロース）によるか、又は単独で投与されるか若しくはリツキシマブ（第１、８、１５日に１０ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせて投与されるＣＨＯＰにより処置した。処置群は、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ、続いてビヒクル（５％デキストロース）又はＩＬ−２（第８、１０、１２、１５日に１ｍｇ／ｋｇ）、又は組み合わせたＩＬ−２及びリツキシマブも含んだ。処置後の第１５日に、腫瘍を収集し、免疫組織化学を評価した。腫瘍細胞アポトーシス及び増殖を、開裂カスパーゼ３（ａ〜ｄ）及びＫｉ−６７（ｅ〜ｈ）をそれぞれ使用して検出した。全ての倍率は４００×、代表的なデータ、ｎ＝１群当たり３〜４匹のマウス。
【図２５】全ての治療剤の概略的な投与スケジュールを示す。
【図２６Ａ】ＣＨＯＰ及びＩＬ−２及びリツキシマブによる併用治療は、ヒトＤａｕｄｉリンパ腫異種移植モデルにおいて相乗効果があることを示す。図２６Ａは、ビヒクル（黒塗りの菱形）、ＣＨＯＰ（黒塗りの四角）、ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２（白抜きの四角）、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ（白抜きの三角形）、ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２＋リツキシマブ（黒塗りの円）で処置された群の腫瘍増殖曲線を示す。ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２対ＣＨＯＰ＋リツキシマブ；ｐ＜０．０５。図２６Ｂは、条件生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線を示す。条件生存は、それぞれの腫瘍が１０００ｍｍ３の腫瘍容量に達する時間として計算した。ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２対ＣＨＯＰ＋リツキシマブ；ｐ＝０．０００２。処置群：ビヒクル（黒塗りの菱形）；リツキシマブ（白抜きの三角形）；ＣＨＯＰ（黒塗りの四角）；ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２（白抜きの四角）：ＣＨＯＰ＋リツキシマブ（黒塗りの三角形）；ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２（黒塗りの円）。
【図２６Ｂ】ＣＨＯＰ及びＩＬ−２及びリツキシマブによる併用治療は、ヒトＤａｕｄｉリンパ腫異種移植モデルにおいて相乗効果があることを示す。図２６Ａは、ビヒクル（黒塗りの菱形）、ＣＨＯＰ（黒塗りの四角）、ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２（白抜きの四角）、ＣＨＯＰ＋リツキシマブ（白抜きの三角形）、ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２＋リツキシマブ（黒塗りの円）で処置された群の腫瘍増殖曲線を示す。ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２対ＣＨＯＰ＋リツキシマブ；ｐ＜０．０５。図２６Ｂは、条件生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線を示す。条件生存は、それぞれの腫瘍が１０００ｍｍ３の腫瘍容量に達する時間として計算した。ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２対ＣＨＯＰ＋リツキシマブ；ｐ＝０．０００２。処置群：ビヒクル（黒塗りの菱形）；リツキシマブ（白抜きの三角形）；ＣＨＯＰ（黒塗りの四角）；ＣＨＯＰ＋ＩＬ−２（白抜きの四角）：ＣＨＯＰ＋リツキシマブ（黒塗りの三角形）；ＣＨＯＰ＋リツキシマブ＋ＩＬ−２（黒塗りの円）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【国際調査報告】
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