(57)【要約】本発明は、特異的にインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、本明細書中ではＩＦＮ−ガンマとも呼ばれる）に対して指向性の完全ヒトモノクローナル抗体を提供する。具体的には、本発明は、ヒトインターフェロンγ（ｈＩＦＮγ）に結合し、それによって、ＩＦＮγとそのレセプターＩＦＮγ‐Ｒとの反応を調節し、および／またはＩＦＮγの生物学的活性を調節する、完全ヒト化抗体およびそのフラグメントに関する。本発明はまた、免疫関連障害の予防または処置における、および免疫関連障害に関連した症状の改善における、そのような抗ＩＦＮγ抗体の使用にも関する。
2008528569.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された完全ヒトモノクローナル抗ＩＦＮγ抗体またはそのフラグメントであって、ここで、該抗体は、以下：
（ａ）
【数１】
2008528569.tif 000056
のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；
（ｂ）
【数２】
2008528569.tif 000057
のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；および
（ｃ）
【数３】
2008528569.tif 000058
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域
を含み、ここで、該抗体は、ＩＦＮγに結合する、抗体。
【請求項２】
請求項１に記載の抗体であって、ここで、該抗体は、さらに以下：
（ｄ）
【数４】
2008528569.tif 000059
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；
（ｅ）
【数５】
2008528569.tif 000060
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２領域；および
（ｆ）
【数６】
2008528569.tif 000061
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む、抗体。
【請求項３】
請求項１に記載の抗体であって、ここで、該抗体は、ＩｇＧアイソトープである、抗体。
【請求項４】
請求項２に記載の抗体であって、ここで、該抗体は、ＳＹＡＭＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；ＤＧＳＳＧＷＹＶＰＨＷＦＤＰ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域；ＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２領域；およびＱＳＹＤＧＳＮＲＷＭ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む、抗体。
【請求項５】
請求項１に記載の抗体であって、ここで、該抗体は、ＮＩ−０５０１である、抗体。
【請求項６】
単離されたヒトモノクローナル抗体であって、ここで、該抗体は、配列番号２、１２、２０、２８、３６、４２、５１、５８、６３、６８、７５、８１、８８、９４または１０３からなる群から選択される重鎖可変アミノ酸配列を含み、ここで、該抗体は、ＩＦＮγに結合する、抗体。
【請求項７】
請求項６に記載の抗体であって、ここで、該抗体はさらに、配列番号７、１５、２３、３１、３８、４７、５４、６０、６６、７１、７８、８３、９１、９６または１０５からなる群から選択される軽鎖可変アミノ酸配列を含み、ここで、該抗体は、ＩＦＮγに結合する、抗体。
【請求項８】
請求項７に記載の抗体であって、ここで、該抗体は、ＳＹＡＭＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；ＤＧＳＳＧＷＹＶＰＨＷＦＤＰ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域；ＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２領域；およびＱＳＹＤＧＳＮＲＷＭ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む、抗体。
【請求項９】
請求項４に記載の抗体であって、ここで、該抗体は、ＩｇＧアイソトープである、抗体。
【請求項１０】
請求項１に記載の抗体およびキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
請求項４に記載の抗体およびキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
自己免疫疾患または炎症性障害の症状を軽減する方法であって、ここで、該方法は、その必要性のある被験体に、該被験体における自己免疫疾患または炎症性障害の症状を軽減するために十分な量の請求項１に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記被験体は、ヒトである、方法。
【請求項１４】
請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記抗体は、ＳＹＡＭＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；ＤＧＳＳＧＷＹＶＰＨＷＦＤＰ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域；ＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２領域；およびＱＳＹＤＧＳＮＲＷＭ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、ここで、前記抗体は、ＮＩ−０５０１である、方法。
【請求項１６】
請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記自己免疫疾患または炎症性障害は、クローン病、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性関節リウマチ、脈管炎、アトピー性皮膚炎および二次性進行性多発性硬化症からなる群から選択される、方法。
【請求項１７】
請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記抗体は、静脈内に投与される、方法。
【請求項１８】
請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記抗体は、以下：
（ａ）インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１から選択される１つ以上のサイトカインを認識する、抗サイトカイン；
（ｂ）ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１から選択される１つ以上のサイトカインを認識する、抗ケモカイン試薬；
（ｃ）ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＩＰ−１０、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦおよびフラクタルカインから選択されるケモカイン、
からなる群から選択される第二の因子と共に投与される、方法。
【請求項１９】
細胞上のＭＨＣクラスＩＩの発現を減少させる方法であって、該方法は、細胞を、請求項１に記載の抗体に、該細胞上のＭＨＣクラスＩＩの発現を減少させるために十分な量で接触させる工程を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、ここで、前記細胞は、ヒトメラノーマ細胞である、方法。
【請求項２１】
請求項１９に記載の方法であって、ここで、前記抗体は、ＳＹＡＭＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；ＤＧＳＳＧＷＹＶＰＨＷＦＤＰ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域；ＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；ＥＤＮＱＲＰＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２領域；およびＱＳＹＤＧＳＮＲＷＭ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む、方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、ここで、前記抗体は、ＮＩ−０５０１である、方法。
【請求項２３】
請求項１９に記載の方法であって、ここで、前記細胞は、以下：
（ａ）インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１から選択される１つ以上のサイトカインを認識する、抗サイトカイン；
（ｂ）ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１から選択される１つ以上のサイトカインを認識する、抗ケモカイン試薬；
（ｃ）ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＩＰ−１０、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦおよびフラクタルカインから選択されるケモカイン、
からなる群から選択される第二の因子と接触される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的に、完全ヒト抗インターフェロンγ抗体およびその使用のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ヒトインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、ＩＦＮ−ガンマ）は、活性化されたＴリンパ球およびナチュラルキラー細胞により産生されるリンフォカインである。ヒトインターフェロンガンマは、抗増殖活性、抗ウイルス活性および免疫調節活性を表し、免疫系のほとんどの始原細胞上の異種二量体レセプターである、ＩＦＮγ−Ｒに結合し、炎症をもたらす事象のカスケードを引き起こす。ＩＦＮγの抗ウイルス活性および免疫調節活性は、多くの臨床状態に有利な影響を有することが公知である。しかしながら、ＩＦＮγ活性が有害な影響を有することが公知である多くの臨床環境が、存在する。例えば、自己免疫疾患は、自己免疫患者由来の血液および疾患の組織における高レベルのＩＦＮγと関連する。ＩＦＮγ活性は、悪液質および敗血性ショックのような疾患状態とも関連している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従って、ＩＦＮγ活性を標的とする治療の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、特異的にインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、本明細書中ではＩＦＮ−ガンマとも呼ばれる）に対して指向性の完全ヒトモノクローナル抗体を提供する。典型的なモノクローナル抗体としては、本明細書中に記載されるＮＩ−０５０１；ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ａ６（本明細書中では「Ａ６」とも呼ばれる）；ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ｂ４（本明細書中では「Ｂ４」とも呼ばれる）；ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ１＿Ｂ９（本明細書中では「Ｂ９」とも呼ばれる）；ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｃ９（本明細書中では「Ｃ９」とも呼ばれる）；ＡＣ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｃ１０（本明細書中では「Ｃ１０」とも呼ばれる）；ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ７＿Ｄ３（本明細書中では「Ｄ３」とも呼ばれる）；ＡＤ１．２Ｒ２Ｐ２＿Ｄ６（本明細書中では「Ｄ６」とも呼ばれる）；ＡＣ１．２Ｒ２Ｐ２＿Ｄ８（本明細書中では「Ｄ８」とも呼ばれる）；ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｅ１（本明細書中では「Ｅ１」とも呼ばれる）；ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ５＿Ｆ８（本明細書中では「Ｆ８」とも呼ばれる）；ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｆ９（本明細書中では「Ｆ９」とも呼ばれる）；ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｇ７（本明細書中では「Ｇ７」とも呼ばれる）；ＡＤ１．１Ｒ３Ｐ３＿Ｇ９（本明細書中では「Ｇ９」とも呼ばれる）；ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｇ１０（本明細書中では「Ｇ１０」とも呼ばれる）が挙げられる。代替的に、上記モノクローナル抗体は、以下：
【０００５】
【数７】
2008528569.tif 000003
と同一のエピトープと結合する抗体である。上記抗体は、各々、本明細書中ではｈｕＩＦＮγ抗体と呼ばれる。
【０００６】
ｈｕＩＦＮγ抗体は、配列番号２、１２、２０、２８、３６、４２、５１、５８、６３、６８、７５、８１、８８、９４または１０３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７、１５、２３、３１、３８、４７、５４、６０、６６、７１、７８、８３、９１、９６または１０５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、３個の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）は、以下：
【０００７】
【数８】
2008528569.tif 000004
からなる群から選択される配列に、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含み；そして３個の軽鎖ＣＤＲは、以下
【０００８】
【数９】
2008528569.tif 000005
のアミノ酸配列からなる群から選択される配列に、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。上記抗体は、ＩＦＮγに結合する。
【０００９】
本発明のｈｕＩＦＮγ抗体は、ＳＹＡＭＳ（配列番号３）またはＳＮＡＭＳ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；
【００１０】
【数１０】
2008528569.tif 000006
のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；
【００１１】
【数１１】
2008528569.tif 000007
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域を含む。
【００１２】
上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、
【００１３】
【数１２】
2008528569.tif 000008
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；
【００１４】
【数１３】
2008528569.tif 000009
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；
ならびに
【００１５】
【数１４】
2008528569.tif 000010
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【００１６】
上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、例えば、ＳＹＡＭＳ（配列番号３）またはＳＮＡＭＳ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１領域；
【００１７】
【数１５】
2008528569.tif 000011
のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２領域；
【００１８】
【数１６】
2008528569.tif 000012
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３領域；
【００１９】
【数１７】
2008528569.tif 000013
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１領域；
【００２０】
【数１８】
2008528569.tif 000014
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２領域；
ならびに
【００２１】
【数１９】
2008528569.tif 000015
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【００２２】
ｈｕＩＦＮγ抗体の重鎖は、生殖細胞系Ｖ（可変）遺伝子（例えば、ＤＰ４７（ＩＧＨＶ３−２３）生殖細胞系遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ９９６６０）またはヒトＤＰ４７生殖細胞系遺伝子配列に相同の核酸配列）に由来する。ＤＰ４７（ＩＧＨＶ３−２３）生殖細胞系遺伝子の核酸配列は、例えば、以下：
【００２３】
【数２０】
2008528569.tif 000016
に示される核酸配列を含む。
【００２４】
ｈｕＩＦＮγ抗体の軽鎖は、Ｉｇλ軽鎖可変領域生殖細胞系遺伝子（例えば、ＩＧＬＶ６−５７またはＶ１−２２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｚ７３６７３）またはヒトＩＧＬＶ６−５７生殖細胞系遺伝子配列に相同の核酸配列）に由来する。ＩＧＬＶ６−５７生殖細胞系遺伝子の核酸配列は、例えば、以下：
【００２５】
【数２１】
2008528569.tif 000017
に示される核酸配列を含む。
【００２６】
別の局面では、本発明は、被験体にｈｕＩＦＮγ抗体を投与することにより、免疫関連障害の症状を処置、予防または軽減する方法を提供する。例えば、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、免疫関連障害（例えば、クローン病、全身性エリテマトーデス、乾癬、サルコイドーシス、慢性関節リウマチ、脈管炎、アトピー性皮膚炎、および二次性進行性多発性硬化症）に関連する症状を処置、予防または軽減するために用いられる。必要に応じて、上記被験体は、さらに、第二の因子（例えば、サイトカインおよび／またはケモカインを認識する抗サイトカイン因子または抗ケモカイン因子が挙げられるが、これらに限定されない）と共に投与される。上記サイトカインは、例えば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１）である。上記ケモカインは、例えば、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＩＰ−１０、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦおよびフラクタルカイン（ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅ）である。
【００２７】
上記被験体は、免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に罹患しているか、またはこの免疫関連障害を発症しやすい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
（詳細な説明）
本発明は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）に対して特異的な、完全ヒトモノクローナル抗体を提供する。上記抗体は、集合的に、本明細書中ではｈｕＩＦＮγ抗体と呼ばれる。
【００２９】
上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、例えば、ＩＦＮγの少なくとも一つの生物学的活性を調節する、ＩＦＮγアンタゴニストまたはＩＦＮγインヒビターである。ＩＦＮγの生物学的活性としては、例えば、ＩＦＮγレセプター（ＩＦＮγ−Ｒ）に結合すること、細胞表面上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩの発現を調節すること（例えば、減少させることまたは阻害すること）、および細胞増殖を調節すること（例えば、減少させるか、または阻害すること）が挙げられる。例えば、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、部分的または完全に、ＩＦＮγとそのＩＦＮγレセプター（ＩＦＮγ−Ｒ）との結合を遮断することにより、完全または部分的にＩＦＮγ活性を阻害する。上記ｈｕＩＦＮγ抗体の存在下でのＩＦＮγ活性のレベルが、本明細書中に記載されるｈｕＩＦＮγ抗体との結合の存在しない状態でのＩＦＮγ活性のレベルと比較して、少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）減少される場合、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、完全にＩＦＮγ活性を阻害すると考えられる。上記ｈｕＩＦＮγ抗体の存在下でのＩＦＮγ活性のレベルが、本明細書中に記載されるｈｕＩＦＮγ抗体との結合の存在しない状態でのＩＦＮγ活性のレベルと比較して、９５％未満（例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％または９０％）減少される場合、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、部分的にＩＦＮγ活性を阻害するとみなされる。
【００３０】
さらに、本発明のｈｕＩＦＮγ抗体は、細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害する（例えば、実施例４および５を参照のこと）。好ましくは、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、少なくとも０．０２ｎＭの濃度で、ヒトメラノーマ細胞株Ｍｅ６７．８におけるＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現の５０％より大きい阻害を示す。例えば、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、０．０２２ｎＭ〜０．０４４ｎＭの範囲の濃度で（例えば、０．０２２ｎＭ、０．０２８ｎＭまたは０．０４４ｎＭの濃度で）、上記Ｍｅ６７．８細胞株におけるＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現の５０％より大きい阻害を示す。
【００３１】
上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、被験体における（例えば、ヒト被験者における）免疫応答を調節する。好ましくは、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、被験体における獲得免疫応答を調節する。より好ましくは、上記ｈｕＩＦＮγ抗体は、細胞免疫応答または細胞媒介性免疫応答（Ｔｈ１型応答またはＴｈ１媒介性応答としても公知）を調節する。
【００３２】
例えば、本明細書中に記載されるｈｕＩＦＮγ抗体は、過度のＴｈ１媒介性免疫応答（例えば、自己免疫障害または炎症性障害（例えば、クローン病、全身性エリテマトーデス、乾癬、サルコイドーシス、慢性関節リウマチ、脈管炎、アトピー性皮膚炎、および二次性進行性多発性硬化症）と関連した過度のＴｈ１媒介性免疫応答）を調節する（例えば、減少させるか、阻害するか、または防ぐ）。本明細書中に用いられる、用語「過度の」Ｔｈ１媒介性免疫応答は、過度のＴｈ１免疫応答と関連した疾患または障害に罹患していない被験体におけるＴｈ１サイトカイン産生のレベルと比較した、被験体における上昇したレベルのＴｈ１サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＴＮＦ−アルファ（ＴＮＦα）およびＩＦＮγ）の存在を指す。Ｔｈ１媒介性免疫応答を過度の応答として分類するために、Ｔｈ１サイトカイン産生応答のレベルが、例えば、ＥＬＩＳＡまたは他のアッセイを用いて、分泌されるサイトカインのレベルを測定および分析することにより、評価される。
【００３３】
本明細書中に記載されるｈｕＩＦＮγ抗体は、ＩｇＧアイソタイプへのクラススイッチ（例えば、ＩＦＮγ誘導性クラススイッチ）を調節する（例えば、阻害するか、減少させるかまたは防ぐ）。これらのｈｕＩＦＮγ抗体は、Ｔｈ１介在性応答を調節し（例えば、阻害するか、防ぐか、または減少させ）、結果としてＩＦＮγ誘導性スイッチを減少させる。
【００３４】
本発明のｈｕＩＦＮγ抗体は、動物を、ＩＦＮγ（例えば、マウスＩＦＮγまたはヒトＩＦＮγ（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｘ１３２７４を参照のこと））または免疫原性フラグメント、その誘導体または改変体で免疫することにより、産生される。代替的に、上記動物は、ＩＦＮγをコードする核酸分子を含むベクターでトランスフェクションされた細胞で免疫される。その結果、ＩＦＮγが発現され、上記トランスフェクションされた細胞の表面に結合される。代替的に、上記抗体は、ＩＦＮγへの結合について、抗体配列または抗原結合ドメイン配列を含むライブラリーをスクリーニングすることにより得られる。このライブラリーは、例えば、バクテリオファージにおいて、バクテリオファージ被覆タンパク質に対するタンパク質融合物またはペプチド融合物として調製され、そしてコードするＤＮＡ配列は、ファージ粒子内に含まれる（すなわち、「ファージ表示型ライブラリー」）。上記バクテリオファージ被覆タンパク質は、構築されたファージ粒子の表面上に発現される。
【００３５】
本発明のｈｕＩＦＮγ抗体は、例えば、表１に示される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、表２に示される軽鎖ＣＤＲおよびそれらの組み合わせを含む。
【００３６】
（表１．ＩＦＮγに結合し、ＩＦＮγを中和する抗体クローン由来のＶＨ配列）
【００３７】
【表１】
2008528569.tif 000018
（表２．ＩＦＮγに結合し、ＩＦＮγを中和する抗体クローン由来のＶＬ配列）
【００３８】
【表２】
2008528569.tif 000019
典型的なｈｕＩＦＮγモノクローナル抗体は、本明細書中に記載されるＮＩ−０５０１抗体である。上記ＮＩ−０５０１抗体は、ＡＣ１．２Ｒ３．Ｐ２＿Ａ６抗体の復帰変異された型である。本明細書中で用いられる、用語「復帰変異された」は、その生殖細胞系配列における対応する位置に見出されるヌクレオチドまたはアミノ酸残基に戻るように、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基を突然変異させることを指す。上記ＮＩ−０５０１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号２）、および配列番号６に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号７）を含む（図１Ａ〜図１Ｄ）。
【００３９】
ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸が、図１Ｂおよび図１Ｄにおいて下線が引かれている（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ａ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４０】
【数２２】
2008528569.tif 000020
を有する。Ａ６抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４１】
【数２３】
2008528569.tif 000021
を有する。
【００４２】
別の典型的なｈｕＩＦＮγモノクローナル抗体は、本明細書中に記載されるＡＣ１．２Ｒ３．Ｐ２＿Ａ６抗体（「Ａ６」）である。Ａ６抗体は、配列番号１０２に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号１０３）、および配列番号１０４に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号１０５）を含む（図１Ｅ〜図１Ｈ）。ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらにより定義された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸が、図１Ｆおよび図１Ｈにおいて下線が引かれている（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら著、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら著、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ａ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４３】
【数２４】
2008528569.tif 000022
を有する。Ａ６抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４４】
【数２５】
2008528569.tif 000023
を有する。
【００４５】
ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ｂ４抗体（本明細書中で「Ｂ４」とも呼ばれる）は、配列番号１１に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号１２）、および配列番号１４に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号１５）を含む（図２Ａ〜図２Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義されたＣＤＲを含むアミノ酸が、図２Ｂおよび図２Ｄにおいて下線が引かれている。Ｂ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４６】
【数２６】
2008528569.tif 000024
を有する。Ｂ４抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４７】
【数２７】
2008528569.tif 000025
を有する。
【００４８】
ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ１＿Ｂ９抗体（本明細書中では「Ｂ９」とも呼ばれる）は、配列番号１９に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号２０）、および配列番号２２に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号２３）を含む（図３Ａ〜図３Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図３Ｂおよび図３Ｄに下線が引かれている。Ｂ９抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００４９】
【数２８】
2008528569.tif 000026
を有する。Ｂ９抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５０】
【数２９】
2008528569.tif 000027
を有する。
【００５１】
ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｃ９抗体（本明細書中では「Ｃ９」とも呼ばれる）は、配列番号２７に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号２８）、および配列番号３０に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号３１）を含む（図４Ａ〜図４Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図４Ｂおよび図４Ｄに下線が引かれている。Ｃ９抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５２】
【数３０】
2008528569.tif 000028
を有する。Ｃ９抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５３】
【数３１】
2008528569.tif 000029
を有する。
【００５４】
ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｃ１０抗体（本明細書中では「Ｃ１０」とも呼ばれる）は、配列番号３５に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号３６）、および配列番号３７に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号３８）を含む（図５Ａ〜図５Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図５Ｂおよび図５Ｄに下線が引かれている。Ｃ１０抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５５】
【数３２】
2008528569.tif 000030
を有する。Ｃ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５６】
【数３３】
2008528569.tif 000031
を有する。
【００５７】
ＡＤ１．２Ｒ３Ｐ７＿Ｄ３抗体（本明細書中では「Ｄ３」とも呼ばれる）は、配列番号４１に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号４２）、および配列番号４６に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号４７）を含む（図６Ａ〜図６Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図６Ｂおよび図６Ｄに下線が引かれている。Ｄ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５８】
【数３４】
2008528569.tif 000032
を有する。Ｄ３抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００５９】
【数３５】
2008528569.tif 000033
を有する。
【００６０】
ＡＤ１．２Ｒ２Ｐ２＿Ｄ６抗体（本明細書中では「Ｄ６」とも呼ばれる）は、配列番号５０に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号５１）、および配列番号５３に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号５４）を含む（図７Ａ〜図７Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図７Ｂおよび図７Ｄに下線が引かれる。Ｄ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００６１】
【数３６】
2008528569.tif 000034
を有する。Ｄ６抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００６２】
【数３７】
2008528569.tif 000035
を有する。
【００６３】
ＡＣ１．２Ｒ２Ｐ２＿Ｄ８抗体（本明細書中では「Ｄ８」とも呼ばれる）は、配列番号５７に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号５８）、および配列番号５９に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号６０）を含む（図８Ａ〜図８Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図８Ｂおよび図８Ｄに下線が引かれている。Ｄ８抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００６４】
【数３８】
2008528569.tif 000036
を有する。Ｄ８抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００６５】
【数３９】
2008528569.tif 000037
を有する。
【００６６】
ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｅ１抗体（本明細書中では「Ｅ１」とも呼ばれる）は、配列番号６２に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号６３）、および配列番号６５に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号６６）を含む（図９Ａ〜図９Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図９Ｂおよび図９Ｄに下線が引かれている。Ｅ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００６７】
【数４０】
2008528569.tif 000038
を有する。Ｅ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００６８】
【数４１】
2008528569.tif 000039
を有する。
【００６９】
ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ５＿Ｆ８抗体（本明細書中では「Ｆ８」とも呼ばれる）は、配列番号６７に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号６８）、および配列番号７０に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号７１）を含む（図１０Ａ〜図１０Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図１０Ｂおよび図１０Ｄに下線が引かれている。Ｆ８抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７０】
【数４２】
2008528569.tif 000040
を有する。Ｆ８抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７１】
【数４３】
2008528569.tif 000041
を有する。
【００７２】
ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｆ９抗体（本明細書中では「Ｆ９」とも呼ばれる）は、配列番号７４に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号７５）、および配列番号７７に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号７８）を含む（図１１Ａ〜図１１Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図１１Ｂおよび図１１Ｄに下線が引かれている。Ｆ９抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７３】
【数４４】
2008528569.tif 000042
を有する。Ｆ９抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７４】
【数４５】
2008528569.tif 000043
を有する。
【００７５】
ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｇ７抗体（本明細書中では「Ｇ７」とも呼ばれる）は、配列番号８０に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号８１）、および配列番号８２に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号８３）を含む（図１２Ａ〜図１２Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図１２Ｂおよび図１２Ｄに下線が引かれている。Ｇ７抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７６】
【数４６】
2008528569.tif 000044
を有する。Ｇ７抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７７】
【数４７】
2008528569.tif 000045
を有する。
【００７８】
ＡＤ１．１Ｒ３Ｐ３＿Ｇ９抗体（本明細書中では「Ｇ９」とも呼ばれる）は、配列番号８７に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号８８）、および配列番号９０に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号９１）を含む（図１３Ａ〜図１３Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図１３Ｂおよび図１３Ｄに下線が引かれている。Ｇ９抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００７９】
【数４８】
2008528569.tif 000046
を有する。Ｇ９抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００８０】
【数４９】
2008528569.tif 000047
を有する。
【００８１】
ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｇ１０抗体（本明細書中では「Ｇ１０」とも呼ばれる）は、配列番号９３に示される核酸配列によりコードされる重鎖可変領域（配列番号９４）、および配列番号９５に示される核酸配列によりコードされる軽鎖可変領域（配列番号９６）を含む（図１４Ａ〜図１４Ｄ）。Ｃｈｏｔｈｉａら著、１９８９およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔら著、１９９１により定義される通りのＣＤＲを含むアミノ酸は、図１４Ｂおよび図１４Ｄに下線が引かれている。Ｇ１０抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００８２】
【数５０】
2008528569.tif 000048
を有する。Ｇ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列：
【００８３】
【数５１】
2008528569.tif 000049
を有する。
【００８４】
本発明のｈｕＩＦＮγ抗体はまた、配列番号２、１２、２０、２８、３６、４２、５１、５８、６３、６８、７５、８１、８８、９４または１０３のアミノ酸配列（図１〜図１４）に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはより同一性の高い重鎖可変アミノ酸配列（図１〜図１４）および／あるいは配列番号７、１５、２３、３１、３８、４７、５４、６０、６６、７１、７８、８３、９１、９６または１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはより同一性の高い軽鎖可変アミノ酸配列を含む抗体も含む。
【００８５】
代替的に、上記モノクローナル抗体は、ＮＩ−０５０１、Ａ６、Ｂ４、Ｂ９、Ｃ９、Ｃ１０、Ｄ３、Ｄ６、Ｄ８、Ｅ１、Ｆ８、Ｆ９、Ｇ７、Ｇ９またはＧ１０と同一のエピトープに結合する抗体である。
【００８６】
そうでないと定義されない限り、本発明に関して用いられる、科学用語および専門用語は、当業者により通常理解される意味を有する。さらに、文脈によってそうでないと要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。一般的に、本明細書中に記載される、細胞培養および組織培養、分子生物学ならびにタンパク質化学およびオリゴヌクレオチド化学またはポリヌクレオチド化学ならびにハイブリダイゼーションに関して利用される命名、およびこれらの技術は、当該分野において周知の、通常用いられるものである。標準的な技術が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチドの合成、および組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）のために用いられる。酵素反応および精製技術は、製造元の仕様書に従って、または当該分野において通常達成されるようにまたは本明細書中に記載されるように行われる。上記の技術および手順は、一般的に、当該分野において周知の通常の方法に従って、ならびに、本明細書を通じて引用および議論される様々な一般的およびより特定の参考文献に記載される通り行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら著、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。本明細書中で記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学および薬化学は、当該分野において周知の、通常用いられるものである。標準的な技術が、化学合成、化学分析、薬の調製、処方および送達、ならびに患者の処置のために用いられる。
【００８７】
本発明の開示と一致して利用される場合、以下の用語は、そうでないと示されない限り、以下の意味を有することが理解される：
本明細書中で用いられる、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、特異的に抗原と結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子）を指す。そのような抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦａｂ発現ライブラリーが挙げられるが、これらに限定されない。「特異的に結合する」または「免疫反応する」によって、上記抗体がその所望される抗原の一つ以上の抗原決定基と反応し、他のポリペプチドとは反応（すなわち、結合）しないか、または他のペプチドとはより低いアフィニティ（Ｋｄ＞１０−６）でしか結合しないことが、意味される。
【００８８】
基本的な抗体構造単位は、四量体を含むことが公知である。各四量体は２対の同一のポリペプチド鎖から構成され、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識の役割を有する約１００個〜１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシル末端部分は、主としてエフェクター機能の役割を有する定常領域を規定する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεとして分類され、上記抗体のアイソトープを各々ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして定義する。軽鎖および重鎖内では、それらの可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により結合されており、重鎖はまた、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，第２版．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、上記抗体結合部位を形成する。
【００８９】
本明細書中で用いられる場合、用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、唯一の軽鎖遺伝子産物および唯一の重鎖遺伝子産物からなる、一分子種のみを含む抗体分子の集合を指す。特に、上記モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、上記集合の全分子において同一である。ＭＡｂは、このＭＡｂに対する唯一の結合アフィニティにより特徴付けられる抗原の特定のエピトープと免疫反応する能力を有する抗原結合部位を含む。
【００９０】
一般的に、ヒトから得られた抗体分子は、この分子において存在する重鎖の性質により互いに異なるクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤのうちのいずれかに関する。特定のクラスは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびその他）も有する。さらに、ヒトにおいて、軽鎖は、κ鎖またはλ鎖であり得る。
【００９１】
用語「抗原結合部位」または「結合部分」は、抗原結合に関わる免疫グロブリン分子の一部分に関する。上記抗原結合部位は、その重（「Ｈ」）鎖および軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基により形成される。上記重鎖および軽鎖のＶ領域内における３つの高度に異なる範囲は、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として公知のより保存された隣接配列の間に挿入される。この範囲は、「超可変領域」と呼ばれる。従って、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンにおける超可変領域の間および超可変領域に隣接して天然に見出されるアミノ酸配列をいう。抗体分子における軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間において互いに関連して配置され、抗原結合表面を形成する。上記抗原結合表面は、結合した抗原の三次元表面に相補的であり、各重鎖および軽鎖の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。各ドメインに対するアミノ酸の割当ては、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａら著，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）のカバット配列（Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ）の定義に従う。
【００９２】
本明細書中で用いられる場合、用語「エピトープ」は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖまたはＴ細胞レセプターに特異的に結合する能力を有する任意のタンパク質決定基を含む。用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞レセプターに特異的に結合する能力を有する任意のタンパク質決定基を含む。エピトープの決定基は、通常、分子（例えば、アミノ酸または糖側鎖）の化学的活性表面基からなり、通常、特異的な３つの三次元構造特性および特異的電荷特性を有する。抗体は、その解離定数が１μＭ以下；好ましくは１００ｎＭ以下、そして最も好ましくは１０ｎＭ以下の場合、特異的に抗原に結合するといわれる。
【００９３】
本明細書中で用いられる場合、用語「免疫学的結合」および「免疫学的結合特性」は、免疫グロブリン分子と抗原との間に生じる型の非共有結合性相互作用に関する。この抗原に対して、上記免疫グロブリンは特異的である。免疫学的結合相互作用の強度またはアフィニティはこの相互作用の解離定数（Ｋｄ）によって表現され得、ここで、より小さいＫｄはより強いアフィニティを表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合性は、当該分野において周知の方法により定量される。そのような一方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度を測定することを含み、ここで、それらの速度は、上記複合体相手の濃度、上記相互作用のアフィニティ、両方向において等しくその速度に影響する幾何学的パラメータに依存する。従って、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）は、濃度ならびに結合および解離の実測速度の計算により決定され得る（Ｎａｔｕｒｅ  ３６１：１８６−８７（１９９３）を参照のこと）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ比はアフィニティと関係しない全てのパラメータの消去を可能にし、解離定数Ｋｄと等しい（一般的に、Ｄａｖｉｅｓら著（１９９０）  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５９：４３９−４７３を参照のこと）。アッセイ（例えば、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に公知の類似のアッセイ）により測定されるように、平衡結合定数（Ｋｄ）が１μＭ以下、好ましくは１００ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下、および最も好ましくは１００ｐＭ〜約１ｐＭである場合、本発明の抗体は、特異的にＩＦＮγエピトープに結合するといわれる。
【００９４】
当業者は、ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体（例えば、ＮＩ−０５０１、Ａ６、Ｂ４、Ｂ９、Ｃ９、Ｃ１０、Ｄ３、Ｄ６、Ｄ８、Ｅ１、Ｆ８、Ｆ９、Ｇ７、Ｇ９またはＧ１０）と同じ特異性を有するかどうかを、後者がＩＦＮγ抗原ポリペプチドに対して結合することを前者が防ぐか否かを確かめることにより、過度の実験をすることなく決定することが可能であることを認識している。本発明のヒトモノクローナル抗体による結合の減少により示されるように、試験されるヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体と競合する場合、そのときは、この二つのモノクローナル抗体は、同一または密接に関連するエピトープに結合する。ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための別の方法は、本発明のヒトモノクローナル抗体を、通常はこの抗体に反応性であるＩＦＮγ抗原ポリペプチドと共に予めインキュベートし、次いで、試験されるヒトモノクローナル抗体を添加し、試験されるヒトモノクローナル抗体がＩＦＮγ抗原ポリペプチドに結合する能力について阻害されるかどうかを決定する。試験されるヒトモノクローナル抗体が阻害される場合、そのときは、おそらく、このヒトモノクローナル抗体は、本発明のモノクローナル抗体と同一または機能的に均等なエピトープ特異性を有する。
【００９５】
当該分野において公知の様々な手順は、タンパク質（例えば、ＩＦＮγタンパク質）に対して、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、相同体もしくはオルソログに対して指向性のモノクローナル抗体の産生のために用いられる（例えば、本明細書中に参考として援用されている、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ，およびＬａｎｅ  Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）。完全ヒト抗体は、そのＣＤＲを含む軽鎖と重鎖との両者の全配列がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。そのような抗体は、本明細書中では「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載される手順を用いて調製される。ヒトモノクローナル抗体はまた、ヒトモノクローナル抗体を産生するためにトリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら著，１９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２）；およびＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら著，１９８５  Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）を用いて調製され得る。ヒトモノクローナル抗体は、利用され得、ヒトハイブリドーマを用いることにより（Ｃｏｔｅら著，１９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）またはインビトロでヒトＢ細胞をエプスタイン−バーウイルスで形質変換することにより（Ｃｏｌｅら著，１９８５  Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）産生され得る。
【００９６】
抗体は、周知の技術（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧを用いたアフィニティクロマトグラフィー）により精製される。上記アフィニティクロマトグラフィーは、主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供する。結果的にまたは代替的に、調べられる免疫グロブリンの標的である特異抗原またはそのエピトープは、カラム上で固定化され得、免疫アフィニティクロマトグラフィーにより免疫特異的抗体を精製する。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（Ａｐｒｉｌ  １７，２０００），ｐｐ．２５−２８により出版された、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ）により議論される。
【００９７】
例えば、免疫関連疾患を処置するという点で抗体の有効性を高めることを目的として、本発明の抗体をエフェクター機能について改変することが望ましい。例えば、システイン残基がＦｃ領域に導入され得、それによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。このように生成されたホモ二量体抗体は、内在化能力を改良し、そして／または補体媒介性細胞殺傷および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増加させ得る（Ｃａｒｏｎら著，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと）。代替的に、二重のＦｃ領域を有する抗体が設計され得、それによって補体溶解能およびＡＤＣＣ能を高め得る（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら著，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと）。
【００９８】
本発明はまた、ＦｖｈｕＩＦＮγフラグメント、ＦａｂｈｕＩＦＮγフラグメント、Ｆａｂ’ｈｕＩＦＮγフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２ｈｕＩＦＮγフラグメント、単鎖ｈｕＩＦＮγ抗体、二重特異性ｈｕＩＦＮγ抗体およびヘテロ結合体ｈｕＩＦＮγ抗体も含む。
【００９９】
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する抗体である。本件では、結合特異性のうちの一つは、ＩＦＮγに対してである。第二結合標的は、任意の他の抗原であり、好都合には、細胞表面タンパク質またはレセプターまたはレセプターサブユニットである。
【０１００】
二重特異性抗体を作製する方法は、当該分野において公知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン鎖／軽鎖対の共発現に基づく。ここで、上記２つの重鎖は、異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ,３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の無原則な分類に起因して、これらのクアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ）は、１０個の異なる抗体分子の可能性のある混合物を生じる。上記１０個の異なる抗体分子のうちの１つのみが、正確な二重特異性構造を有する。上記正確な分子の精製は、通常アフィニティクロマトグラフィー工程により達成される。同様の手順は、１９９３年５月１３日に発行されたＷＯ  ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら著，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０１０１】
望ましい結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。上記融合は、好ましくは、少なくともヒンジ部分、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとである。上記融合物の少なくも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含む、第一重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物と、所望される場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡとは、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に共トランスフェクションされる。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら著，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０１０２】
ＷＯ  ９６／２７０１１に記載される別のアプローチによると、抗体分子対の間のインターフェースは、組換え細胞培養物から作られるヘテロ二量体のパーセンテージを最大にするように設計され得る。好ましいインターフェースは、少なくとも抗体定常ドメインのＣＨ３領域の部分を含む。この方法では、第一抗体分子のインターフェース由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖は、大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。上記大きい側鎖と同一または類似のサイズの代償の「空洞」が、大きいアミノ酸側鎖を小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置換することにより、第二抗体分子のインターフェース上に作製される。このことは、所望されていない最終産物（例えば、ホモ二量体）に対するヘテロ二量体の収量を増加させる機構を提供する。
【０１０３】
二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成する技術は、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎら著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、無傷の抗体がタンパク分解により分割されてＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じる手順を記載する。これらのフラグメントは、ジチオールキレーター（ｃｈｅｌａｔｏｒ）である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、ビシナルジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防ぐ。生成されたＦａｂ’フラグメントは、次いで、チオニトロベンゾアート（ｔｈｉｏｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏａｔｅ）（ＴＮＢ）誘導体に変換される。Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体のうちの１つは、次いで、メルカプトエタノールアミンを用いた還元によりＦａｂ’−チオールへ再変換され、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて、上記二重特異性抗体を形成する。生成された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための因子として用いられ得る。
【０１０４】
さらに、Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接的に作られ得、化学的に連結されて二重特異性抗体を形成する。Ｓｈａｌａｂｙら著，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体（Ｆａｂ’）２分子の生成を記載する。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、インビトロでの指向性の化学的連結を受け、上記二重特異性抗体を形成する。このように形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２レセプター過剰発現細胞および正常ヒトＴ細胞に結合することができ、そしてヒト乳腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を引き起こすことができた。
【０１０５】
組換え細胞培養物から直接的に二重特異性抗体フラグメントを作製および単離するための様々な技術も、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて生成されている（Ｋｏｓｔｅｌｎｙら著，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２））。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合により、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモ二量体は、そのヒンジ領域で還元されて単量体を形成し、次いで、再酸化されて抗体へテロ二量体を形成した。この方法はまた、抗体ホモ二量体の生成のためにも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら著，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）により記載される「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替的機構を提供している。上記フラグメントは、リンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。上記リンカーは、同一鎖の２つのドメインの間で１対になることを許容しないほど、非常に短い。従って、一方のフラグメントのＶＨドメインおよびＶＬドメインは、他方のフラグメントの相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと１対になることを強制され、その結果、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）の使用により二重特異性抗体を作製するための別の戦略も、報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら著，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０１０６】
二価より多い抗体が、意図される。例えば、三重特異性抗体が、調製され得る（Ｔｕｔｔら著，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１））。
【０１０７】
典型的な二重特異性抗体は、２つの異なるエピトープに結合し得る。ここで、上記エピトープの少なくとも１つは、本発明のタンパク質抗原に由来する。代替的に、特定抗原を発現する細胞に細胞防御機構を集中させる目的で、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、リンパ球における誘発因子（例えば、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２、ＩＦＮγ、ＣＤ２８またはＢ７）またはＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃレセプター（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＩＦＮγ２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと組み合わされ得る。二重特性抗体はまた、特定抗原を発現する細胞に細胞傷害性因子を指向させるために用いられ得る。これらの抗体は、抗原結合アーム、および細胞傷害性因子または放射性核種キレーター（例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡまたはＴＥＴＡ）に結合するアームを有する。目的の別の二重特異性抗体は、本明細書中に記載されるタンパク質抗原に結合し、さらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０１０８】
ヘテロ結合抗体も、本発明の範囲内にある。ヘテロ結合抗体は、２つの共有結合により結合された抗体から構成される。そのような抗体は、例えば、所望されていない細胞に対して免疫系細胞を標的とするために（米国特許第４,６７６,９８０号）、およびＨＩＶ感染の処置のために（ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；欧州特許第０３０８９号）提案されている。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いることにより、またはチオエステル結合を形成することにより構築され得る。この目的のための適切な試薬の例としては、イミノチオレート（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｔｅ）およびメチル−４−メルカプトブチルイミダート（ｍｅｔｈｙｌ−４−ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）および例えば、米国特許第４,６７６,９８０号に開示されているものが挙げられる。
【０１０９】
本発明はまた、細胞傷害性因子（例えば、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素学的に活性な毒素、またはそのフラグメント））または放射活性同位体（すなわち、放射性結合物）に結合した抗体を含む免疫結合物に関する。
【０１１０】
用いられ得る、酵素学的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サーシン（ａｌｐｈａ−ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、カーシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトジェリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテシン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられる。多様な放射性核種は、放射結合型抗体の生成のために入手可能である。例として、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが挙げられる。
【０１１１】
上記抗体と細胞傷害性因子との結合体は、多様な二官能性タンパク質連結試薬（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミダート  ＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベラート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアナート（例えば、トリエン  ２，６−ジイソシアナート（ｔｏｌｙｅｎｅ  ２，６−ｄｉｉｓｏｃｙａｎａｔｅ））およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載される通り調製され得る。炭素−１４−標識１−イソチオシアナートベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＰＴＡ）は、上記抗体に対する放射性核種の結合のための典型的なキレート化試薬である（ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと）。
【０１１２】
当業者は、多くの種類の可能な部分が、結果として生じる抗体に、または本発明の他の分子に結合され得ることを、認識している（例えば、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ」，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅおよびＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（編集），Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照のこと、この全容は本明細書中に参考として援用されている）。
【０１１３】
上記抗体および上記他の部分がそれら各々の活性を維持する限り、これらの２つの分子を結合させる任意の化学反応により、結合は達成される。この結合は、任意の化学的機構（例えば、共有結合、アフィニティ結合、インターカレーション、配位結合および錯体形成）を含み得る。しかしながら、好ましい結合は、共有結合である。共有結合は、存在する側鎖の直接縮合かまたは外部の架橋分子の組み入れのいずれかにより達成される。多くの二価連結試薬または多価連結試薬は、タンパク質分子（例えば、本発明の抗体）を他の分子に連結させる点において有用である。例えば、代表的な連結試薬は、有機化合物（例えば、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミン）を含み得る。この列挙は、当該分野において公知の連結試薬の様々な種類を網羅することを意図されておらず、むしろ、より一般的な連結試薬の例を示している（ＫｉｌｌｅｎおよびＬｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５−２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎら著，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６２：１８５−２１６（１９８２）；およびＶｉｔｅｔｔａら著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。好ましいリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド  エステル）の使用を説明する、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓら著，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４４：２０１−２０８（１９８４）を参照のこと）。オリゴペプチドリンカーを介して、抗体に連結したハロゲン化アセチルヒドラジドの使用を説明する、米国特許第５,０３０,７１９号も参照のこと。特に好ましいリンカーとしては、以下：（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）−トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．,カタログ番号２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６[３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド]ヘキサノアート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．,カタログ番号２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６[３−（２−ピリジルジチオ）−プロピアンアミド]ヘキサノアート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．,カタログ番号２１６５−Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣに結合したスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．,カタログ番号２４５１０）が挙げられる。
【０１１４】
上記のリンカーは、異なる属性を有する構成要素を含み、従って、異なる物理化学的性質を有する結合物をもたらす。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホ−ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳ−エステル含有リンカーは、スルホ−ＮＨＳエステルよりも溶解性が低い。さらに、リンカーＳＭＰＴは、立体的に障害されたジスルフィド結合を含み、増加された安定性を有する結合物を形成し得る。ジスルフィド連結物は、一般に他の結合物よりも安定性が低い。これは、ジスルフィド結合は、インビトロで開裂され、より利用可能性の低い結合物を生じるからである。スルホ−ＮＨＳは、特に、カルボイミド結合体の安定性を高め得る。カルボイミド結合体（例えば、ＥＤＣ）は、スルホ−ＮＨＳと結合して用いられる場合、カルボイミド連結反応のみよりも加水分解に抵抗性の強いエステルを形成する。
【０１１５】
本明細書中で用いられる場合、用語「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源のポリヌクレオチドまたはそれらの複数の組み合わせを意味する。そして、その起源に起因して、上記「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）この「単離されたポリヌクレオチド」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てまたは一部分と結合しないか、（２）この「単離されたポリヌクレオチド」が天然に結合しないポリヌクレオチドと作動可能に結合されているか、または（３）より大きな配列の一部分として天然には存在しない。
【０１１６】
本明細書中で指される場合、用語「単離されたタンパク質」は、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡもしくは合成起源のタンパク質またはそれらの複数の組み合わせを意味する。そして、その起源または誘導過程の供給源に起因して、上記「単離されたタンパク質」は、（１）天然に見出されるタンパク質と結合しないか、（２）同一の供給源由来の他のタンパク質を含まない（例えば、海のタンパク質を含まない）か、（３）異種由来の細胞により発現されるか、または（４）天然に存在しない。
【０１１７】
用語「ポリペプチド」は、本明細書中では一般用語として用いられ、天然のタンパク質、フラグメントまたはポリペプチド配列のアナログを指す。故に、天然のタンパク質フラグメント、およびアナログは、ポリペプチド類の種である。本発明に従った好ましいポリペプチドは、図１Ｂ、２Ｂ、３Ｂおよび４Ｂにより表されるヒト重鎖免疫グロブリン分子ならびに図１Ｄ、２Ｄ、３Ｄおよび４Ｄにより表されるヒト軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに軽鎖免疫グロブリン分子（例えば、κ軽鎖免疫グロブリン分子）と重鎖免疫グロブリン分子を含む結合物とを組み合わせたものにより形成される抗体分子（およびその逆）、ならびにそのフラグメントおよびアナログを含む。
【０１１８】
本明細書中で用いられる場合、対象に対して適用される用語「天然に存在する」は、対象が天然に見出され得るという事実を指す。例えば、天然に供給源から単離され得、かつ、人間によって実験室でまたは別のやり方で意図的に改変されていない、（ウイルスを含む）生物体において存在するポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０１１９】
本明細書中で用いられる場合、用語「作動可能に連結される」は、構成要素がそれらの意図される様式で機能することを許容する関係で表されるような構成要素の位置を指す。コーディング配列に「作動可能に連結される」制御配列は、上記コーディング配列の発現が、上記制御配列に適合性のある条件下で達成されるようにライゲーションされる。
【０１２０】
本明細書中で用いられる、用語「制御配列」は、コーディング配列の発現およびプロセシングに影響を与えるのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。ここで、上記コーディング配列に、上記制御配列がライゲーションされる。そのような制御配列の性質は、原核生物における宿主生物（そのような制御配列は、一般的に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含む）、真核生物における宿主生物（そのような制御配列は、一般的に、プロモーターおよび転写終結配列を含む）に依存して異なる。用語「制御配列」は、その存在が発現およびプロセシングに必須である全ての構成要素を最小限含むことを意図され、また、付加的な構成要素を含み得る。上記付加的な構成要素の存在（例えば、リーダー配列および融合パートナー配列）は、有利である。本明細書中で言及される、用語「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチド（リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかあるいはヌクレオチドのいずれかの型の改変された形態）のポリマー性ボロン（Ｂｏｒｏｎ）を意味する。この用語は、ＤＮＡの１本鎖形態および２本鎖形態を含む。
【０１２１】
本明細書中で言及される、用語オリゴヌクレオチドは、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在するオリゴヌクレオチド連結および天然に存在しないオリゴヌクレオチド連結により一緒に連結される改変型ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般的に２００個以下の長さの塩基を含むポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基長であり、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０〜４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは２本鎖（例えば、遺伝子変異体の構築における使用のため）であり得るが、オリゴヌクレオチドは、通常１本鎖（例えば、プローブ用）である。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
【０１２２】
本明細書中で言及される、用語「天然に存在するヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書中で指される、用語「改変型ヌクレオチド」は、改変型または置換型の糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書中で指される、用語「オリゴヌクレオチド連結物」は、オリゴヌクレオチド連結物（例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレルロアート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｒｌｏａｔｅ）、ホスホロジセレノアート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオアート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホラニラダート（ｐｈｏｓｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホロンミダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｎｍｉｄａｔｅ）を含む。例えば、Ｌａｐｌａｎｃｈｅら著，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃら著，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎら著，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎら著，Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎら著，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ,Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃら著，米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照のこと。オリゴヌクレオチドは、所望される場合、検出のための標識を含み得る。
【０１２３】
本明細書中で指される、用語「選択的にハイブリダイズする」は、検出可能かつ特異的に結合することを意味する。本発明に従ったポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびそのフラグメントは、非特異的な核酸に対する検出可能な結合の評価可能な量を最小化するハイブリダイゼーション条件および洗浄条件の下で、選択的に核酸鎖にハイブリダイズする。高ストリンジェンシー条件は、当該分野において公知の、かつ、本明細書中で議論される選択的ハイブリダイゼーション条件を達成するために用いられ得る。一般的に、本発明のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびフラグメントと関心のある核酸配列との間の核酸配列相同性は、少なくとも８０％であり、より典型的に、好ましくは、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％および１００％という増加する相同性を有する。２つのアミノ酸配列は、それらの配列間の部分的同一性または完全同一性が存在する場合、相同である。例えば、８５％相同性は、２つの配列が最大マッチングのために整列される場合、８５％のアミノ酸が同一であることを意味する。（マッチングされる２つの配列のうちのいずれかにおける）ギャップは、５以下のマッチングギャップ長まで増加することが許容され、２以下がより好ましい。代替的におよび好ましくは、２つのタンパク質配列（または上記タンパク質配列由来の少なくとも３０アミノ酸長のポリペプチド配列）が、プログラムＡＬＩＧＮを用いて、変異データマトリックスおよび６以上のギャップペナルティで、（標準的偏差単位として）５より大きいアライメントスコアを有する場合、これらのタンパク質配列は相同である。上記相同であるは、この用語が本明細書中で用いられる通りである。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１−１１０（第５巻，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））および第５巻に対する補遺，ｐｐ．１−１０を参照のこと。上記２つの配列またはその一部分は、それらのアミノ酸が上記ＡＬＩＧＮプログラムを用いて最適に整列されて５０％以上同一である場合、より好ましく相同である。用語「対応する」は、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部分に対して相同である（すなわち、同一である、狭義ではなく進化的に関係している）こと、あるいはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列に対して同一であることを意味するために、本明細書中で用いられる。対照と比較してして、用語「に相補的である」は、相補的配列が参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部分と相同であることを意味するために、本明細書中で用いられる。例えば、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応し、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に相補的である。
【０１２４】
以下の用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間の配列関係を説明するために用いられる：「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」および「実質的同一性」。「参照配列」は、配列比較の基準として用いられる規定配列である。参照配列は、大きい配列のサブセット（例えば、配列表に与えられた全長ｃＤＮＡ配列または遺伝子配列のフラグメントとして）であっても、完全ｃＤＮＡ配列または完全遺伝子配列を含んでもよい。一般的に、参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチド長または６アミノ酸長であり、しばしば少なくとも２４ヌクレオチド長または８アミノ酸長であり、および、しばしば少なくとも４８ヌクレオチド長または１６アミノ酸長である。２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、各々、（１）その２分子間で類似の配列（すなわち、完全ポリヌクレオチド配列または完全アミノ酸配列の一部分）を含み得、（２）さらに、上記２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間で異なった配列を含み得るので、２（または２より多い）分子間での配列比較は、典型的に、上記２分子の配列を「比較ウィンドウ」にわたって比較することにより行われ得、配列類似性の局所領域を同定および比較する。本明細書中で用いられる、「比較ウィンドウ」は、少なくとも１８個の連続したヌクレオチド位置または６個のアミノ酸の概念上のフラグメントを指す。ここで、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８個の連続したヌクレオチドまたは６個のアミノ酸配列の参照配列と比較され得、ここで、上記比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチド配列の部分は、上記２つの配列の最適なアライメントのために、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセント以下の付加、欠失、置換など（すなわち、ギャップ）を含み得る。比較ウィンドウを整列させるための最適な配列のアライメントは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４（１９８８）の類似方法の調査により、これらのアルゴリズムのコンピュータ化した実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０，（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．），ＧｅｎｅｗｏｒｋｓまたはＭａｃ  Ｖｅｃｔｏｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｐａｃｋａｇｅにおけるＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，およびＴＦＡＳＴＡ）により、または様々な方法により生み出される調査および最良のアライメント（すなわち、上記比較ウィンドウにわたる最も高い相同性のパーセンテージを生じる）により選択される。
【０１２５】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が上記比較ウィンドウにわたり同一である（すなわち、１ヌクレオチドごとまたは１残基ごとの基準において）ことを意味する。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、上記比較ウィンドウにわたり２つの最適に整列された配列を比較し、その同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵもしくはＩ）または残基が両者の配列に存在する位置の数を決定して、マッチングされた位置の数を得て、上記マッチングされた位置の数を上記比較ウィンドウにおける位置の全数で除算し、そして、その結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを生じることにより算出される。本明細書中で用いられる、用語「実質的同一性」は、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の性質を示す。ここで、上記ポリヌクレオチドまたはアミノ酸は、少なくとも１８個のヌクレオチド（６個のアミノ酸）位置の比較ウィンドウにわたり、しばしば少なくとも２４〜４８個のヌクレオチド（８〜１６個のアミノ酸）位置のウィンドウにわたり、参照配列と比較して、少なくとも８５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５パーセントの配列同一性、より通常には少なくとも９９パーセントの配列同一性を有する配列を含む。ここで、配列同一性のパーセンテージは、上記比較ウィンドウにわたり、上記参照配列と、上記参照配列の全２０パーセント以下の欠失または付加を含み得る配列とを比較することにより算出される。上記参照配列は、より大きい配列のサブセットであり得る。
【０１２６】
本明細書中に用いられる通り、２０個の慣習的なアミノ酸およびそれらの略語は、通常の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版，Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編集，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ  Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照のこと。上記２０個の通常のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、非天然アミノ酸（例えば、α−，α−二置換型アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非従来型アミノ酸は、本発明のポリペプチドの適切な構成成分であり得る。非従来型アミノ酸の例としては、以下：４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、および他の類似アミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書中で用いられるポリペプチド表記では、標準的な使用法および慣習と一致して、その左側方向はアミノ末端方向であり、その右側方向はカルボキシル末端方向である。
【０１２７】
同様に、そうでないと特定されない限り、１本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は５’末端であり、２本鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向は５’方向と呼ばれる。発生期ＲＮＡ転写産物の５’から３’付加の方向は、上記ＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖の転写方向配列領域と呼ばれる。そして、上記ＲＮＡ転写産物の５’から５’末端の方向は、「上流配列」、上記ＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖の配列領域と呼ばれる。そして、上記ＲＮＡ転写産物の３’から３’末端の方向は、「下流領域」と呼ばれる。
【０１２８】
ポリペプチドに用いられる、用語「実質的同一性」は、２つのペプチド配列が（例えば、デフォルトギャップの重みを用いて、プログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴにより）最適に整列される場合、これらの配列が少なくとも８０パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０パーセントの配列同一性、より好ましくは少なくとも９５パーセントの配列同一性、および最も好ましくは９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。
【０１２９】
好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
【０１３０】
保存的アミノ酸置換は、類似の側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸のグループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸のグループは、セリンおよびスレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸のグループは、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸のグループは、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ酸のグループは、リジン、アルギニンおよびヒスチジンであり；硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のグループは、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換のグループは、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。
【０１３１】
本明細書中で議論される場合、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列における小さなバリエーションは、上記アミノ酸配列におけるバリエーションが少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、および最も好ましくは９９％維持される場合に限り、本発明により含まれていると意図される。特に、保存的アミノ酸置換が意図される。保存的置換は、側鎖に関連性のあるアミノ酸のファリミー内で起こる置換である。遺伝的にコードされるアミノ酸は、一般的に以下のファリミーに分類される：（１）酸性アミノ酸はアスパラギン酸、グルタミン酸である；（２）塩基性アミノ酸はリジン、アルギニン、ヒスチジンである；（３）非極性アミノ酸はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンである、および（４）非電荷性極性アミノ酸はグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリンおよびスレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファリミーとしては、以下が挙げられる：（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーである、セリンおよびスレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーである、アスパラギンおよびグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーである、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（ｉｖ）芳香族ファミリーである、フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン。例えば、特に、置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を含まない場合、ロイシンに対するイソロイシンまたはバリンでの単離された置換、アスパラギン酸に対するグルタミン酸での単離された置換、スレオニンに対するセリンでの単離された置換、または同様のアミノ酸に対する構造的に関連したアミノ酸での置換が、生じた分子の結合または性質に大きな影響を有しないことを予期することは、合理的である。アミノ酸置換が機能的ペプチドを生じるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることにより、容易に決定され得る。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたはアナログは、当業者により、容易に調製され得る。フラグメントまたはアナログの好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近に存在する。構造ドメインおよび機能ドメインは、ヌクレオチド配列データおよび／またはアミノ酸配列データと、公共配列データベースまたは民間の配列データベースとの比較により、同定され得る。好ましくは、コンピュータ化された比較方法は、公知の構造および／または機能を有する他のタンパク質において存在する配列モチーフまたは予測されたタンパク質コンフォメーションドメインを同定するために用いられる。フォールディングして公知の三次元構造となるタンパク質配列を同定する方法は、公知である（Ｂｏｗｉｅら著，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１））。従って、上記の例は、当業者が���本発明に従った構造ドメインおよび機能ドメインを規定するために用いられ得る配列モチーフおよび構造的コンフォメーションを認識していることを示す。
【０１３２】
好ましいアミノ酸置換は、以下である：（１）タンパク質分解に対する感受性を減少させるもの、（２）酸化に対する感受性を減少させるもの、（３）タンパク質複合体を形成するための結合アフィニティを変えるもの、（４）結合アフィニティを変えるもの、および（４）そのようなアナログの他の生理化学的性質または機能的性質を与えるかまたは改変するもの。アナログは、天然に存在するペプチド配列を除く配列の様々なムテインを含み得る。例えば、単一アミノ酸置換または複数アミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）が、天然に存在する配列において（好ましくは、分子間接触を形成するドメインの外側のポリペプチドの部分において）作製され得る。保存的アミノ酸置換は、実質的に、親配列の構造的性質を変化させない（例えば、置換アミノ酸は、親配列において存在するへリックスを破壊するか、または親配列を特徴付ける他の型の二次構造を妨害する傾向がない）。技術的に認識されているポリペプチド二次構造および四次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ編集，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；ならびにＴｈｏｒｎｔｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。
【０１３３】
本明細書中で用いられる場合、用語「ポリペプチドフラグメント」は、アミノ末端欠失および／またはカルボキシル末端欠失を有するポリペプチドを指すが、ここで、残存するアミノ酸配列は、天然に存在する推論される配列における（例えば、全長ｃＤＮＡ配列由来の）対応する位置と同一である。フラグメントは、典型的に、少なくとも５、６、８または１０アミノ酸長、好ましくは少なくとも１４アミノ酸長、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸長、通常少なくとも５０アミノ酸長、およびなお一層より好ましくは少なくとも７０アミノ酸長である。本明細書中で用いられる、用語「アナログ」は、推論されるアミノ酸配列の一部分に対する実質的同一性を有する少なくとも２５個のアミノ酸フラグメントからなり、かつ、以下の特性の少なくとも１つを有するポリペプチドを指す：（１）適切な結合条件下における、ＩＦＮγに対する特異的結合、（２）適切なＩＦＮγ結合を遮断する能力、または（３）インビトロまたはインビボでＩＦＮγ発現細胞の増殖を阻害する能力。典型的に、ポリペプチドアナログは、天然に存在する配列について保存的アミノ酸置換（または付加または欠失）を含む。アナログは、典型的に、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長またはそれ以上のアミノ酸長であり、しばしば全長の天然に存在するポリペプチドと同じ長さであり得る。
【０１３４】
ペプチドアナログは一般的に、製薬産業において、テンプレートペプチドの性質と類似の性質を有する非ペプチド性薬剤として用いられる。これらの型の非ペプチド性化合物は、「ペプチドの模倣物」または「ペプチド模倣物」と称される（Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６），Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）；およびＥｖａｎｓら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７））。そのような化合物はしばしば、コンピュータ化された分子モデリングの助けを借りて開発される。構造的に治療上有用なペプチドと類似するペプチド模倣物は、均等な治療効果または予防効果を生じるために用いられ得る。一般的に、ペプチド模倣物は、模範ペプチド（すなわち、生物化学的性質または薬理学的活性を有するポリペプチド）（例えば、ヒト抗体）に対して構造的に類似するが、当該分野において周知の方法により、以下からなる群から選択される結合により必要に応じて置換される１つ以上のペプチド結合を有する：−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−および−ＣＨ２ＳＯ−。コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸に対する、同一の型のＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりに、Ｄ−リジン）での置換は、より安定なペプチドを生じるために用いられ得る。さらに、コンセンサス配列または実質的同一のコンセンサス配列の改変を含む不自然なペプチドは、当該分野において公知の方法により（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））；例えば、上記ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成する能力を有する内在的システイン残基を添加することにより、生成され得る。
【０１３５】
用語「因子」は、本明細書中では、化合物、化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的材料から作製される抽出物を示すために用いられる。
【０１３６】
本明細書で用いられる、用語「標識」または「標識された」は、検出可能なマーカーの取込み（例えば、放射標識されたアミノ酸の取込み、または標識されたアビジン（例えば、光学的方法または熱量計の方法により検出され得る蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）により検出され得るビオチン化部分のポリペプチドに対する結合による）を指す。一定の状況では、上記標識またはマーカーは、治療的であり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法は、当該分野において公知であり、用いられ得る。ポリペプチドに対する標識の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識物（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識物（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光体、ビオチン化基、二次レポーターにより認識される予め方向付けられたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態では、標識は、様々な長さのスペーサーアームにより連結され、潜在的な立体障害を減少させる。本明細書中で用いられる、用語「薬剤または薬物」は、適切に患者に投与される場合に望ましい治療効果を誘導する能力を有する化学化合物または化学組成物を指す。
【０１３７】
本明細書中の他の化学用語は、当該分野における通常の使用法に従って、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））により例示される通り、用いられる。
【０１３８】
用語「抗新生物因子」は、本明細書中では、ヒトにおける新生物（特に、悪性（癌性）病変（例えば、癌、肉腫、リンパ腫または白血病））の発症または進行を阻害する機能的性質を有する因子を指すために用いられる。転移の阻害はしばしば、抗新生物因子の性質である。
【０１３９】
本明細書中で用いられる場合、用語「実質的に純粋な」は、対象種が存在する優勢種（すなわち、モル基準で、任意の他の個々の種よりも組成物において豊富である）であり、好ましくは、実質的に精製された画分が、組成物であって、ここで、上記対象種が少なくとも存在する全高分子種のうちの約５０パーセント（モル基準で）を含む組成物であることを意味する。
【０１４０】
一般的に、実質的に純粋な組成物は、この組成物において存在する全高分子種のうちの約８０％より多く、より好ましくは約８５％、９０％、９５％および９９％よりも多く含む。最も好ましくは、上記対象種は、本質的均質まで精製される（汚染物質種は、上記組成物において、通常の検出方法により検出され得ない）。ここで、上記組成物は、本質的には単一の高分子種からなる。
【０１４１】
用語患者は、ヒト被験体および獣医学の被験体を含む。用語被験体は、ヒトおよび他の動物を含む。
【０１４２】
（ヒト抗体および抗体のヒト化）
ｈｕＩＦＮγ抗体は、例えば、下記の実施例の手順を用いて生成される。ＩｇＧｈｕＩＦＮγ抗体は、例えば、ｓｃＦｖクローンをＩｇＧフォーマットに変えることにより生成される（例えば、実施例６を参照のこと）。代替的に、そのようなｈｕＩＦＮγ抗体は、例えば、ヒト配列のみを含む抗体を用いたファージディスプレイ法を用いて開発される。そのようなアプローチは、当該分野において周知である（例えば、本明細書によって参考として援用されている、ＷＯ９２／０１０４７および米国特許第６，５２１，４０４号）。このアプローチでは、無作為の軽鎖と重鎖との対を有するファージのコンビナトリアルライブラリーが、ＩＦＮγの天然供給源または組換え型供給源またはそのフラグメントを用いてスクリーニングされる。
【０１４３】
ｈｕＩＦＮγ抗体は、プロセスのうちの少なくとも１つの工程がトランスジェニック非ヒト動物をヒトＩＦＮγタンパク質で免疫することを含むプロセスにより、生成される。この異種非ヒト動物のいくつかの内因性の重鎖遺伝子座および／またはκ軽鎖遺伝子座は、無能力にされており、免疫グロブリンをコードする遺伝子を抗原に応答して生成するために必要な再構成の能力がない。さらに、少なくとも１つのヒト重鎖遺伝子座および少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座は、安定的に上記動物にトランスフェクションされている。従って、投与される抗原に応答して、上記ヒト遺伝子座は再構成して、この抗原に免疫学的に特異なヒト可変領域をコードする遺伝子を提供する。それ故に、免疫により、異種マウスは、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を生じる。
【０１４４】
異種非ヒト動物を生じするための様々な技術が、当該分野において周知である。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および米国特許第６，１５０，５８４号を参照のこと。一戦略により、上記外因性の（ヒト）重鎖免疫グロブリン遺伝子および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、宿主生殖細胞系列（例えば、精子または卵母細胞）に導入され、別の工程では、その対応する宿主遺伝子は、相同組換えを用いた不活性化により機能しない状態にされる。ヒトの重鎖免疫グロブリン遺伝子および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、適切な真核細胞生物体または原核細胞生物体において再構築され、その生じたＤＮＡフラグメントは、適切な宿主（例えば、受精したマウスの卵母細胞または胚性幹細胞の前核）に導入される。上記内因性宿主免疫グロブリン座の不活性化は、上記宿主細胞（特に、胚性幹細胞または受精したマウスの卵母細胞）における相同組換えによる適切な遺伝子座の標的された破壊によって達成される。上記標的された破壊は、その標的遺伝子座における損傷もしくは欠失の導入、または上記遺伝子座への挿入（例えば、選択可能なマーカーの挿入）を伴う上記標的遺伝子座内の欠失を含み得る。胚性幹細胞の場合、その改変された胚性幹細胞に部分的に由来し、かつ、その遺伝的改変を生殖細胞系列全体に伝えるキメラ動物が、生成される。不活性化された外因性遺伝子座を有する系統に至るまでの宿主と導入されたヒト免疫グロブリン遺伝子座との交配は、抗体産生が純粋に外因性である（例えば、ヒト）動物を生じる。
【０１４５】
代替的な戦略では、少なくとも、ヒトの重鎖免疫グロブリン遺伝子座および軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の部分が、胚性幹細胞において直接的にその対応する内因性免疫グロブリン遺伝子座を相同組換えにより置換するために用いられる。このことは、上記内因性免疫グロブリンについて同時に起こる不活性化および置換を生じる。この次に、上記胚性幹細胞由来の細胞が生殖細胞系列に寄与し得る、キメラ動物の生成が起こる。
【０１４６】
例えば、ヒト抗ＩＦＮγ抗体を発現するＢ細胞クローンは、上記異種非ヒト動物から除去され、当該分野において公知の様々な方法に従って不死化される。そのようなＢ細胞は、上記動物の血液またはリンパ球様組織（脾臓、扁桃、リンパ節および骨髄が挙げられるがこれらに限定されない）に由来し得る。結果として生じる不死化されたＢ細胞は、大量の臨床的に適用可能な量のｈｕＩＦＮγ抗体を生じるように、インビトロで増幅され、培養され得る。代替的に、上記抗体を直接的に得るか、または単鎖Ｆｖ分子から構成されるその個々の鎖を得ることを目的として、１つ以上のヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子が、異なる細胞型（哺乳類細胞培養系を含むがこれらに限定されない）において回復され、発現され得る。
【０１４７】
さらに、上記異種非ヒト動物により産生される完全ヒト抗ＩＦＮγ抗体のセット全体は、最適な特徴を有する１つのそのようなクローンを同定する目的でスクリーニングされ得る。そのような特徴としては、例えば、ヒトＩＦＮγタンパク質に対する結合アフィニティ、その反応の安定性、および完全ヒト抗ＩＦＮγ抗体のアイソトープが挙げられる。次いで、上記望ましい特徴を有するセット全体に由来するクローンは、望ましい可変領域をコードするヌクレオチド配列の供給源として、さらに、代替的細胞系における、通常の組換え技術またはトランスジェニック技術を用いた、上記特徴を有する抗体を生成するための操作のために用いられる。
【０１４８】
この一般的戦略は、１９９４年に発表された第一のＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統と関連して明らかにされた。Ｇｒｅｅｎら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）を参照のこと。このアプローチは、さらに以下に議論され詳述されている：米国特許出願第０７／４６６，００８号（１９９０年１月１２日出願），同第０７／６１０，５１５号（１９９０年１１月８日出願），同第０７／９１９，２９７号（１９９２年７月２４日出願），同第０７／９２２，６４９号（１９９２年７月３０日出願），同第０８／０３１，８０１号（１９９３年３月１５日出願），同第０８／１１２，８４８号（１９９３年８月２７日出願），同第０８／２３４，１４５号（１９９４年４月２８日出願），同０８／３７６，２７９号（１９９５年１月２０日出願），同第０８／４３０，９３８号（１９９５年４月２７日出願），同第０８／４６４，５８４号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４６４，５８２号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４６３，１９１号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４６２，８３７号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４８６，８５３号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４８６，８５７号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４８６，８５９号（１９９５年６月５日出願），同第０８／４６２，５１３号（１９９５年６月５日出願），同第０８／７２４，７５２号（１９９６年１０月２日出願），および同第０８／７５９，６２０号（１９９６年１２月３日出願）ならびに米国特許第６，１６２，９６３号，同第６，１５０，５８４号，同第６，１１４，５９８号，同第６，０７５，１８１号，および同第５，９３９，５９８号ならびに日本国特許第３  ０６８  １８０号（Ｂ２），同第３  ０６８  ５０６号（Ｂ２），および同第３  ０６８  ５０７号（Ｂ２）。Ｍｅｎｄｅｚら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．：１８８：４８３−４９５（１９９８）も参照のこと。欧州特許第０４６３  １５１号（Ｂｌ）（１９９６年６月１２日特許付与公開（ｇｒａｎｔ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ）），国際特許出願ＷＯ  ９４／０２６０２（１９９４年２月３日公開）,同出願ＷＯ  ９６／３４０９６（１９９６年１０月３１日公開），ＷＯ  ９８／２４８９３（１９９８年６月１１日公開），ＷＯ  ００／７６３１０（２０００年１２月２１日公開）。
【０１４９】
代替的なアプローチでは、他の者は、「ミニローカス（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）」アプローチを利用している。上記ミニローカスアプローチでは、外因性Ｉｇ遺伝子座は、Ｉｇ遺伝子座由来のフラグメント（個々の遺伝子）の含有物全体により擬態される。従って、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、ｍｕ定常領域、および第二定常領域（好ましくは、γ定常領域）が形成されて、動物への挿入のための構築物となる。このアプローチは、以下に説明されている：米国特許第５，５４５，８０７号（Ｓｕｒａｎｉら）ならびに米国特許第５，５４５，８０６号，同第５，６２５，８２５号，同第５，６２５，１２６号，同第５，６３３，４２５号，同第５，６６１，０１６号，同第５，７７０，４２９号，同第５，７８９，６５０号，同第５，８１４，３１８号，同第５，８７７，３９７号，同第５，８７４，２９９号，および同第６，２５５，４５８号（各々Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙ），米国特許第５，５９１，６６９号および同第６，０２３，０１０号（ＫｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔおよびＢｅｒｎｓ），米国特許第５，６１２，２０５号，同第５，７２１，３６７号，および同第５，７８９，２１５号（Ｂｅｒｎｓら）ならびに米国特許第５，６４３，７６３号（Ｃｈｏｉ  ａｎｄ  Ｄｕｎｎ），ならびにＧｅｎＰｈａｒｍの国際米国特許出願第０７／５７４，７４８号（１９９０年８月２９日出願），同第０７／５７５，９６２号（１９９０年８月３１日出願），同第０７／８１０，２７９号（１９９１年１２月１７日出願），同第０７／８５３，４０８号（１９９２年３月１８日出願），同第０７／９０４，０６８号（１９９２年６月２３日出願），同第０７／９９０，８６０号（１９９２年１２月１６日出願），同第０８／０５３，１３１号（１９９３年４月２６日出願），同第０８／０９６，７６２号（１９９３年７月２２日出願），同第０８／１５５，３０１号（１９９３年１１月１８日出願），同第０８１１６１，７３９号（１９９３年１２月３日出願），同第０８／１６５，６９９号（１９９３年１２月１０日出願），同第０８／２０９，７４１号（１９９４年３月９日出願）。欧州特許第０  ５４６  ０７３号（Ｂ１），国際特許出願ＷＯ  ９２／０３９１８，ＷＯ  ９２／２２６４５，ＷＯ  ９２／２２６４７，ＷＯ  ９２／２２６７０，ＷＯ  ９３／１２２２７，ＷＯ  ９４／００５６９，ＷＯ  ９４／２５５８５，ＷＯ  ９６／１４４３６，ＷＯ  ９７／１３８５２，およびＷＯ  ９８／２４８８４ならびに米国特許第５，９８１，１７５号も参照のこと。さらに、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２），Ｃｈｅｎら（１９９３），Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３），Ｃｈｏｉら（１９９３），Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４），Ｔａｙｌｏｒら（１９９４），およびＴｕａｉｌｌｏｎら（１９９５），Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６）を参照のこと。
【０１５０】
上記ミニローカスアプローチの利点は、Ｉｇ座部分を含む構築物が生成され、動物に導入され得る急速性である。しかしながら、相応に、上記ミニローカスアプローチの顕著な欠点は、理論上、不十分な多様性が、少数のＶ遺伝子、Ｄ遺伝子およびＪ遺伝子の含有物全体に導入されることである。実際、この公表された研究結果は、この懸念を支持するようである。上記ミニローカスアプローチの使用により生じた動物の、Ｂ細胞の発達および抗体産生は、発育を妨げられるようである。従って、本発明を取り巻く研究は、より大きい多様性を達成することを目的とし、動物の免疫レパートリーを再構築しようと努力して、持続的にＩｇ座の大部分の導入に向けられている。
【０１５１】
マウス由来のヒト抗体の生成も、明らかにされている。上記マウスでは、ミクロ細胞融合により、染色体の大部分または染色体全体が導入されている。欧州特許出願第７７３  ２８８号および同第８４３  ９６１号を参照のこと。
【０１５２】
ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答のために、産業界は、キメラ抗体またはそうでなければヒト化抗体を調製している。キメラ抗体はヒト定常領域および免疫可変領域を有するが、一定のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答は、特にこの抗体の慢性的利用または複数回投与利用において観察される。従って、ＨＡＭＡ応答またはＨＡＣＡ応答の懸念および／または影響を低下させることを目的として、ＩＦＮγに対する完全ヒト抗体を提供することが望ましい。
【０１５３】
減少された免疫原性を有する抗体の生成も、適切なライブラリーを用いたヒト化技術およびディスプレイ技術により達成される。マウス抗体または他の種由来の抗体が、当該分野において周知の技術を用いてヒト化および霊長類化され得る。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：４３  ４６（１９９３）およびＷｒｉｇｈｔら，Ｃｒｉｔ，Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２）を参照のこと。目的の抗体は、組換えＤＮＡ技術により、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメインおよび／またはフレームワークドメインを対応するヒト配列で置換するように作製され得る（ＷＯ  ９２１０２１９０ならびに米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７９２号、同第５，７１４，３５０号および同第５，７７７，０８５号を参照のこと）。また、キメラ免疫グロブリン遺伝子の構築のためのＩｇｃＤＮＡの使用は、当該分野において公知である（Ｌｉｕら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．  ８４：３４３９（１９８７）およびＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１（１９８７））。ｍＲＮＡは、上記抗体を産生するハイブリドーマまたは他の細胞から単離される。目的のｃＤＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応により特異的プライマーを用いて複製され得る（米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号）。代替的に、ライブラリーは、目的の配列を単離するために作製され、スクリーニングされる。次いで、上記抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列は、ヒト定常領域配列に融合される。ヒト定常領域遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔら（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎ．Ｉ．Ｈ．出版番号９１−３２４２に見出され得る。ヒトＣ領域遺伝子は、公知のクローンから容易に入手可能である。アイソトープの選択は、望ましいエフェクター機能（例えば、補体結合、または抗体依存的細胞性細胞障害における活性）により導かれる。好ましいアイソトープは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域であるκまたはλのうちのいずれかが、用いられ得る。次いで、キメラのヒト化抗体が、通常の方法により発現される。
【０１５４】
抗体フラグメント（Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２）は、無傷のタンパク質の切断により（例えば、プロテアーゼまたは化学的開裂により）調製され得る。代替的には、短縮型遺伝子が設計される。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの部分をコードするキメラ遺伝子は、Ｈ鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域、次いで翻訳終止コドンをコードするＤＮＡ配列を含み、短縮型分子を生じる。
【０１５５】
Ｈ領域およびＬ領域、Ｊ領域のコンセンサス配列は、プライマーとしての使用のためのオリゴヌクレオチドを設計するために用いられ、結果として起こるヒトＣ領域フラグメントに対するＶ領域フラグメントの結合を目的として、Ｊ領域に有用な制限酵素部位を導入し得る。Ｃ領域ｃＤＮＡは、部位指向性変異誘導により改変され、ヒト配列における類似の位置に制限酵素部位を配置し得る。
【０１５６】
発現ベクターとしては、プラスミド、レトロウイルス、ＹＡＣ、ＥＢＶ由来のエピソームなどが挙げられる。簡便なベクターは、任意のＶＨ配列またはＶＬ−３１配列が容易に挿入および発現され得るように作製された適切な制限部位を有する、機能的に完全なヒトＣＨ免疫グロブリン配列またはヒトＣＬ免疫グロブリン配列をコードするベクターである。そのようなベクターでは、スプライシングは通常、挿入されたＪ領域におけるスプライシングドナー部位とヒトＣ領域の前にあるスプライスアクセプター部位との間、またヒトＣＨエキソン内に存在するスプライス領域で起こる。ポリアデニル化および翻訳終結は、コーディング配列下流の天然の染色体部位で起こる。生じたキメラ抗体は、任意の強いプロモーター（レトロウイルスＬＴＲ（例えば、ＳＶ−４０初期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．３：２８０（１９８３）），ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．７９：６７７７（１９８２）），およびモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら，Ｃｅｌｌ  ４１：８８５（１９８５））が挙げられる）に連結され得る。また、高く評価されているので、天然のＩｇプロモーターなども用いられ得る。
【０１５７】
さらに、ヒト抗体または他の種由来の抗体は、ディスプレイ型技術（ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイが挙げられるが、これらに限定されない）および他の技術により、当該分野において周知の技術を用いて生成され得、そして、生じた分子は、次のような技術が当該分野において周知であるので、さらなる成熟化（例えば、アフィニティ成熟）を受け得る（前出のＷｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｈａｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｔｈａｕ  ＰＥＡＳ  ＵＳＡ  ９４：４９３７−４９４２（１９９７）（リボソームディスプレイ），Ｐａｒｍｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  ７３：３０５−３１８（１９８８）（ファージディスプレイ），Ｓｃｏｔｔ  ＴＩＢ５  １７：２４１−２４５（１９９２），Ｃｗｉｒｌａら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８７：６３７８−６３８２（１９９０），Ｒｕｓｓｅｌら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１：１０８１−１０８５（１９９３），Ｈｏｇａｎｂｏｏｍら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３０：４３−６８（１９９２），Ｃｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ＴＩＢＴＥＣＨ；１０：８０−８Ａ（１９９２），および米国特許第５，７３３，７４３号）。ディスプレイ技術がヒトでない抗体を生成するために利用される場合、そのような抗体は、上記の通りヒト化され得る。
【０１５８】
これらの技術を用いて、抗体は、ＩＦＮγ発現細胞、ＩＦＮγそれ自身、ＩＦＮγ形態、そのエプトープまたはペプチド、および、それに対する発現ライブラリー（例えば、米国特許第５，７０３，０５７号を参照のこと）に対して生成され得る。上記発現ライブラリーはその後、上記の通り、上記の活性についてスクリーニングされ得る。
【０１５９】
（他の治療薬の設計および生成）
本発明に従って、およびＩＦＮγについて本明細書中で生成および特徴付けされる抗体の活性に基づいて、抗体部分を超えた他の治療モダリティ（ｍｏｄａｌｉｔｙ）の設計が、促進される。そのようなモダリティとしては、進歩した抗体治療薬（例えば、二重特異性抗体、免疫毒素および放射標治療薬）、ペプチド治療薬の生成、遺伝子治療（特に、イントラボディ）、アンチセンス治療薬および低分子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６０】
例えば、二重特異性抗体に関して、以下を含む二重特異性抗体が、生成され得る：（ｉ）１つはＩＦＮγに対する特異性を有し、もう１つは一緒に結合される第二の分子に対する特異性を有する２つの抗体、（ｉｉ）ＩＦＮγに対して特異的な１つの鎖と、第二の分子に対して特異的な第二の鎖を有する単一抗体、または（ｉｉｉ）ＩＦＮγと他の分子に対する特異性を有する単鎖抗体。そのような二重特異性抗体は、周知の（例えば、（ｉ）および（ｉｉ）についての）技術を用いて生成される。例えば、Ｆａｎｇｅｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２−８１（１９９４）および前出のＷｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓを参照のこと、ならびに（ｉｉｉ）について、例えば、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）７：５１−５２（１９９２）を参照のこと。
【０１６１】
免疫毒素について、抗体は、当該分野において周知の技術を利用して免疫毒素として作用するように改変され得る。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：２５２（１９９３）を参照のこと。米国特許第５，１９４，５９４号も参照のこと。放射標識抗体の調製について、そのような改変された抗体はまた、当該分野において周知の技術を利用して、容易に調製され得る。例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら，ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ６５５−６８６（第２版，Ｃｈａｆｈｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ編集，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ（１９９６）)を参照のこと。米国特許第４，６８１，５８１号，同第４，７３５，２１０号，同第５，１０１，８２７号，同第５，１０２，９９０号（米国再発行特許３５，５００），同第５，６４８，４７１号，および同第５，６９７，９０２号も参照のこと。免疫毒素および放射標識分子の各々は、ＩＦＮγ発現細胞（特に、本発明の抗体が有効である細胞）を殺傷する見込みがある。
【０１６２】
治療ペプチドの生成について、ＩＦＮγおよびそれに対する抗体（例えば、本発明の抗体またはペプチドライブラリーのスクリーニング）に関する構造の情報の利用により、ＩＦＮγに対して指向性の治療ペプチドが生成され得る。ペプチド治療薬の設計およびスクリーニングは、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２−４２１（１９９２），Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８２：５１３１−５１３５（１９８５），Ｐｉｎａｌｌａら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：９０１−９０５（１９９２），Ｂｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｌｉｔｚｉ−Ｄａｖｉｓ，ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：５１０−５１３（１９９２）で議論されている。免疫毒素および放射標識分子も調製され得、抗体について上記で議論されているようにペプチド部分について同様の様式で調製され得る。ＩＦＮγ分子（または形態（例えば、スプライスバリアントまたは代替形態））が疾患プロセスにおいて機能的に活性であることを想定して、遺伝子およびそれに対するアンチセンス治療薬を通常の技術により設計することも、可能である。そのようなモダリティは、ＩＦＮγの機能を調節するために利用され得る。それと共に、本発明の抗体は、それに関する機能的アッセイの設計および使用を容易にする。アンチセンス治療薬の設計および戦略は、国際特許出願ＷＯ  ９４／２９４４４で詳しく議論されている。遺伝子治療の設計および戦略は、周知である。しかしながら、特に、遺伝子治療技術（イントラボディを含む）の使用は、特に有利であると証明される。例えば、Ｃｈｅｎら，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：５９５−６０１（１９９４）およびＭａｒａｓｃｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ４：１１−１５（１９９７）を参照のこと。遺伝子治療薬に関する一般的設計および考察はまた、国際特許出願ＷＯ  ９７／３８１３７で議論されている。
【０１６３】
ＩＦＮγ分子の構造および本発明に従った他の分子（例えば、本発明の抗体および他のもの）との相互作用から収集される知識は、合理的にさらなる治療モダリティを設計するために利用され得る。この点で、合理的な薬物設計技術（例えば、Ｘ線結晶学、コンピュータ支援された（または補助された）分子モデリング（ＣＡＭＭ）、定量的構造活性相関または定性的構造活性相関（ＱＳＡＲ）および類似技術は、薬物発見作業に焦点を当てるために利用され得る。合理的な設計は、ＩＦＮγの活性を改変または調節するために用いられ得る分子またはその特異的形態と反応し得る、タンパク質または合成構造物の予測を可能にする。そのような構造物は、化学的に合成される得るか、または生物学的システムにおいて発現され得る。このアプローチは、Ｃａｐｓｅｙら，Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８））に総説されている。さらに、コンビナトリアルライブラリーが設計され得、合成され得、スクリーニングプログラム（例えば、ハイスループットスクリーニング作業）において用いられ得る。
【０１６４】
（治療上の投与および処方物）
本発明に従った治療的実体の投与が、適切なキャリア、賦形剤および他の因子と共に投与されることが、認識される。上記他の因子は、改良された転移、送達、耐性などを提供するための処方物として組み込まれる。多数の適切な処方物が、全ての製薬化学者に公知の処方書中に見出され得る：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５）），特にその中のＢｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒにより第８７章）。これらの処方物としては、例えば、散剤、パスタ、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有小胞（例えば、ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ）、ＤＮＡ結合体、無水吸収性ペースト、水中油型エマルジョンおよび油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカルボワックスを含む半固体混合物が挙げられる。上記処方物における活性構成成分が上記処方物により不活性化されず、上記処方物が投与経路に対して生理的に適合であり、耐性であるという条件で、任意の上記混合物は、本発明に従った処置および治療において適切であり得る。Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．”Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００），Ｗａｎｇ  Ｗ．”Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ”Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９（８）：９６７−７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌら，”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８）および製薬化学者に周知の処方物、賦形剤およびキャリアに関係するさらなる情報のための本明細書中での引用文献も参照のこと。
【０１６５】
本発明のｈｕＩＦＮγ抗体を含む、本発明の治療処方物は、免疫関連性障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に関連する症状を処置または軽減するために用いられる。
【０１６６】
例えば、クローン病（ＣＤ）に罹患している被験体にｈｕＩＦＮγ抗体を投与することは、この疾患を引き起こす免疫細胞で直接的に作用し、その結果、免疫系の最小の抑制での急速な介入を提供し得る。全身性エリテマトーデスに罹患している被験体にｈｕＩＦＮγ抗体を投与することは、この疾患の原因である免疫細胞を改変する機会を提供する別の医学的指示である。乾癬に罹患している被験体に完全ヒトタンパク質であるｈｕＩＦＮγ抗体を投与することは、望ましくない副作用（例えば、肝損傷）がよく報告されている強度の治療薬（例えば、メトトレキサート）で患者を処置する必要性を防止する。慢性関節リウマチに罹患している被験体にｈｕＩＦＮγ抗体を投与することは、疾患誘導性のＴｈ１媒介性応答の上流の産生および機能を調節する機会を提供する別の医学的指示である。
【０１６７】
自己免疫疾患としては、例えば、後天性免疫不全症候群（自己免疫成分を有するウイルス性疾患である、ＡＩＤＳ）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルー疱疹状皮膚炎；慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷血球凝集素病、クレスト（ｃｒｅｓｔ）症候群、クローン病、ドゴー病、若年性皮膚筋炎、円板状エリテマトーデス、本態性混合クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グレーブス病、ギヤン−バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スティル病）、若年性慢性関節リウマチ、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多発内分泌腺症候群、リウマチ性多筋症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、慢性関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても公知）、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑およびヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０１６８】
炎症性障害としては、例えば、慢性炎症性障害および急性炎症性障害が挙げられる。炎症性障害の例としては、アルツハイマー病、喘息、アトピー、アレルギー、アテローム硬化症、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、対宿主性移植片病、溶血性貧血、変形性関節症、敗血症、卒中、組織および器官の移植、脈管炎、糖尿病性網膜症および人工呼吸器誘導性肺損傷が挙げられる。
【０１６９】
ｈｕＩＦＮγ抗体は、被験体における（例えば、ヒト被験体における）免疫応答を調節する。例えば、本明細書中に記載されるｈｕＩＦＮγ抗体は、過度のＴｈ１媒介性免疫応答（例えば、自己免疫障害または炎症性障害（例えば、クローン病、全身性エリテマトーデス、乾癬、サルコイドーシス、慢性関節リウマチ、脈管炎、アトピー性皮膚炎および二次性進行性多発硬化症）に関連した過度のＴｈ１媒介性免疫応答）を調節する（例えば、減少させるが、阻害するか、または防ぐ）。過度のＴｈ１媒介性免疫応答では、Ｔｈ１サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＴＮＦ−アルファ（ＴＮＦα）およびＩＦＮγ）は、被験体において、過度のＴｈ１免疫応答と関連した疾患または障害に罹患していない被験体におけるＴｈ１サイトカイン産生のレベルより高いレベルで提示される。Ｔｈ１媒介性免疫応答を過度のＴｈ１免疫応答として分類するために、Ｔｈ１サイトカイン産生応答のレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡまたは他のアッセイを用いて分泌されるサイトカインを測定および解析することにより、評価される。
【０１７０】
本明細書中に記載されるｈｕＩＦＮγ抗体はまた、ＩｇＧアイソトープへのクラススイッチ（例えば、ＩＦＮγ誘導性クラススイッチ）を調節する（例えば、阻害するか、減少させるか、または防ぐ）ためにも用いられる。これらのｈｕＩＦＮγ抗体は、Ｔｈ１媒介性応答を調節し（例えば、阻害し、減少させ、または防ぎ）、結果的にＩＦＮγ誘導性クラススイッチングを減少させる。
【０１７１】
一実施形態では、免疫関連障害を処置するために用いられるｈｕＩＦＮγ抗体組成物は、任意の様々な抗サイトカイン因子または抗ケモカイン因子と組み合わせて投与される。適切な抗サイトカイン試薬または抗ケモカイン試薬は、例えば、サイトカイン（例えば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７およびＩＬ−３１）および／またはケモカイン（例えば、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＩＰ−１０、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦおよびフラクタルカイン）を認識する。
【０１７２】
本発明はまた、免疫関連障害と関連した症状を処置または軽減する方法も提供する。例えば、本発明の組成物は、本明細書中に記載される任意の自己免疫疾患および炎症性障害の症状を処置または軽減するために用いられる。免疫関連障害と関連した症状としては、例えば、炎症、発熱、食欲減少、体重減少、腹部症状（例えば、腹痛、下痢または便秘）、関節痛または疼痛（関節痛）、疲労、発疹、貧血、寒冷に対する過敏性（レイノー現象）、筋肉脆弱、筋肉疲労、皮膚または組織状態の変化、息切れまたは他の異常な呼吸型、胸痛または胸筋の狭窄、異常な心拍数（例えば、上昇された心拍数または低下された心拍数）、光感受性、ぼやけた視覚または別の異常な視覚、および減退した器官機能が挙げられる。
【０１７３】
ｈｕＩＦＮγ抗体の治療組成物は、免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に罹患している被験体に投与される。自己免疫疾患または炎症性障害に罹患している被験体は、当該分野において公知の方法により同定される。例えば、自己免疫疾患（例えば、クローン病、狼瘡または乾癬）に罹患している被験体は、任意の様々な臨床的検査および／または検査室検査（例えば、物理的検査、放射線医学的検査、ならびに免疫状態を評価するための血液、尿および便の解析）を用いて同定される。例えば、狼瘡に罹患している患者は、例えば、細胞核に対する自己抗体が血液中に存在するかどうかを決定するための抗核抗体試験（ＡＮＡ）を用いて、同定される。クローン病に罹患している患者は、例えば、小腸および大腸を各々評価するために、上部胃腸（ＧＩ）経路および／または結腸の観察を用いて、同定される。慢性関節リウマチに罹患している患者は、例えば、血液検査および／またはＸ線画像化評価または他の画像化評価を用いて、同定される。乾癬に罹患している患者は、例えば、その疾患に冒された皮膚パッチから得られた組織の顕微鏡検査を用いて、同定される。
【０１７４】
任意の様々な検査室的結果または臨床的結果が達成される場合の、免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に罹患している患者に対してｈｕＩＦＮγ抗体の投与。例えば、免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に罹患している患者に対するｈｕＩＦＮγ抗体の投与は、この障害に関連した１つ以上の症状が軽減されるか、減少されるか、阻害されるか、またはさらに（すなわち、悪化した状態へ）進行しない場合に、成功したとみなされる。免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に罹患している患者に対するｈｕＩＦＮγ抗体の投与は、この障害（例えば、自己免疫障害）が寛解に入るか、またはさらに（すなわち、悪化した状態へ）進行しない場合に、成功したとみなされる。
【０１７５】
（診断処方物および予防処方物）
本発明の完全ヒト抗ＩＦＮγＭＡｂは、診断処方物および予防処方物において用いられる。一実施形態では、本発明のｈｕＩＦＮγＭＡｂは、１つの上記自己免疫疾患を発症する危険に瀕する患者に投与される。１つ以上の上記自己免疫疾患にかかりやすい素質は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカーまたは生物化学的マーカーを用いて決定され得る。
【０１７６】
本発明の別の実施形態では、ｈｕＩＦＮγ抗体は、１つ以上の上記自己免疫疾患について診断されるヒト個体に投与される。診断では、ｈｕＩＦＮγ抗体は、自己免疫の効力を和らげるか、または逆転させるために投与される。
【０１７７】
本発明の抗体はまた、患者試料中のＩＦＮγの検出に有用であり、従って、診断薬として有用である。例えば、本発明のｈｕＩＦＮγ抗体は、患者試料中のＩＦＮγレベルを検出するために、インビトロアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）において用いられる。
【０１７８】
一実施形態では、本発明のｈｕＩＦＮγ抗体は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル）に固定化される。上記固定化された抗体は、検査試料中に存在し得るＩＦＮγに対する捕捉抗体として働く。上記固定化された抗体を患者試料と接触させる前に、上記固体支持体は洗浄され、分析物の非特異的吸着を防ぐためにブロッキング試薬（例えば、ミンクタンパク質またはアルブミン）で処理される。
【０１７９】
次いで、上記ウェルは、上記抗原を含み得る検査試料、または標準量の上記抗原を含む溶液で処理される。そのような試料は、例えば、病状を示すとみなされる循環抗原レベルを有し得る被験体由来の血清試料である。上記検査試料または標準試料を洗い流した後、上記固体支持体は、検出可能に標識される二次抗体で処理される。上記標識二次抗体は、検出抗体として働く。検出可能な標識のレベルが測定され、上記検査試料におけるＩＦＮγ抗原の濃度は、上記標準試料から作成された標準曲線との比較により決定される。
【０１８０】
インビトロの診断アッセイにおいて、本発明のｈｕＩＦＮγ抗体を用いて得られた結果に基づくと、被験体における疾患（例えば、自己免疫障害または炎症性障害）をＩＦＮγ抗原の発現レベルに基づいて段階づけることが可能であることは、高く評価される。所定の疾患について、血液試料は、この疾患の進行の様々な段階および／またはこの疾患の治療的処置における様々な時点であると診断される被験体から得られる。進行または治療の各段階について統計学的に有意な結果を提供する試料の集団を用いて、各段階の特徴であるとみなされ得る抗原の濃度範囲が、設計される。
【０１８１】
本明細書中に引用されている全ての出版物および特許文書は、各々のそのような出版物または文書が具体的に、かつ個々に本明細書中に参考として援用されていることが示されているように、本明細書中に参考として援用されている。出版物および特許文書の引用は、どれもが直接関係のある先行技術であるという承認として意図されてもいないし、その同一の内容または日付に関する任意の承認をなしてもいない。本発明は文書での説明により表されているが、当業者は、本発明が様々な実施形態において実行され得、上記の説明および下記の実施例が例示の目的であって、添付の特許請求の限定でないことを認識している。
【実施例】
【０１８２】
以下の実施例（行った実験および達成した結果を含む）は、説明の目的のみのために提供されており、本発明において制限すると解釈されるべきではない。
【０１８３】
（実施例１：ヒトインターフェロンγのクローニング、発現および精製）
（クローニング）
ヒトインターフェロンγ（ｈＩＦＮγ、ｈｕＩＦＮγ）の成熟配列に対応する配列をヒトｃＤＮＡからポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により特異的オリゴヌクレオチドを用いて複製した。この複製産物をゲル精製し、ｐＥＴ４１ｃ発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）にクローニングした。上記ベクターをさらに改変し、ｈＩＦＮγのＣ末端にＡｖｉｔａｇＴＭ（Ａｖｉｄｉｔｙ，Ｄｅｎｖｅｒ  ＣＯ）および８ヒスチジンタグを導入した。これらの改変は、インビボでの上記タンパク質のビオチン化およびＩＭＡＣ（固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィ）による精製を可能にする。
【０１８４】
（発現）
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１細胞を、ｐＥＴ４１ｃ−ｈＩＦＮγベクターおよびｐＡＣＹＣ１８４−ＢｉｒＡベクターで共に形質転換した。これらのベクターは、インビボでのＡｖｉｔａｇＴＭ配列のビオチン化に必要なＢｉｒＡ酵素をコードする。カナマイシン（Ｋａｎａｍｙｃｉｎ）（５０μｇ／ｍｌ）およびクロラムフェニコール（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）（１０μｇ／ｍｌ）耐性のシングルコロニーを選択し、ＬＢ（Ｋａｎ  ５０μｇ／ｍｌ／Ｃｍ  １０μｇ／ｍｌ）に開始培養物を播種し、３７℃で一晩増殖させた。
【０１８５】
翌日、この培養物を用いて、５０μＭのビオチンを補ったＬＢ（Ｋａｎ  ５０μｇ／ｍｌ／Ｃｍ  １０μｇ／ｍｌ）の４００ｍｌ培養物を播種した。０．６のＯＤ６００に達するまで、この培養物を３７℃で振とうして（２４０ｒｐｍ）増殖させた。０．６というＯＤ６００に達した時点で、イソプロピル‐β‐Ｄ‐チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を終濃度１ｍＭになるように添加し、上記培養物をさらに３時間、同じ条件下でインキュベートした。細胞を４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、そのペレットを−２０℃で凍らせた。これらの条件下では、本質的に全てのｈＩＦＮγは、不溶性であり、封入体中に見出された。
【０１８６】
（精製）
細菌性ペレットを解凍し、８μｌのＢｅｎｚｏｎａｚｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ）を含む８ｍｌのＢｕｇｂｕｓｔｅｒ試薬中に再懸濁し、室温で３０分間インキュベートした。この溶液を３０分間、１５，０００ｇで４℃で遠心分離した。上記封入体を含むペレットを７ｍｌの可溶化緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣＬ  ｐＨ７．４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、５ｍＭのβ‐メルカプトエタノール、６Ｍのグアニジン‐ＨＣｌ）中に再懸濁した。この再懸濁した物質を４℃で３０分間１５，０００ｇで遠心した。
【０１８７】
２つの５ｍｌのＨｉ  Ｔｒａｐ  Ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を、製造元の説明書に従って一緒に連結した。これらの２つのカラムは、ＮｉＳＯ４を充填し、かつ、可溶化緩衝液で平衡化されている。上記遠心分離工程後の上澄みを０．４５μｍの膜上で濾過し、上記カラム上にプラスチック製ポンプの助けにより１ｍｌ／分で充填した。次いで、カラム上でのタンパク質のリフォールディングおよび溶出のため、上記カラムをＡＫＴＡプライムクロマトグラフィーシステムの上に置いた。固定化したタンパク質を、３５ｍｌの可溶化緩衝液で１ｍｌ／分で洗浄した。増加する濃度のリフォールディング緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣＬ  ｐＨ７．４、３００ｍＭのＮａＣｌ）を有する、可溶化緩衝液の線形グラジエントを、１ｍｌ／分で、１００％のリフォールディング緩衝液に達するまで１時間適用した。次いで、上記カラムをさらに２５ｍｌのリフォールディング緩衝液で洗浄した。次いで、上記リフォールディングさせたタンパク質を上記カラムから溶出緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、３００ｍＭのＮａＣｌ、４００ｍＭのイミダゾール）で溶出した。タンパク質含有分画をプールし、ＰＢＳで平衡化したＰＤ１０  ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で脱塩した。次いで、脱塩したタンパク質を等分し、−８０℃で保管した。
【０１８８】
（実施例２：細胞表面上でインターフェロンγを発現する細胞）
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＡＴＣＣから入手可能）を、ｃ−ｍｙｃタグを付けたＩＧＮγｃＤＮＡを用いて安定的にトランスフェクションした。ｃＤＮＡを、ネオマイシン耐性遺伝子を含むｐＣＤＮＡ３．１プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）にサブクローニングした。形質転換体を、この抗生物質を用いて選択し、連続する細胞ソーティングをフローサイトメトリにより抗６×Ｈｉｓ抗体（Ｓｉｇｍａ）を用いて達成した。ヒトＩＦＮγの表面発現をフローサイトメトリーによって抗ＩＦＮγｍＡｂ（ｃｌｏｎｅ  Ｂ２７，Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ  ＮＪ）を用いて確認した。
【０１８９】
（実施例３：ヒトｓｃＦｖライブラリーのスクリーニング）
ヒトｓｃＦｖライブラリーの構築および処理のための一般的な手順は、本明細書によって参考として全体が援用されている、Ｖａｕｇｈａｎら著（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９６，１４：３０９−３１４）に記載される。ヒトｓｃＦｖのライブラリーを、以下の手順に従ってＩＦＮγに対してスクリーニングした。
【０１９０】
（液相選択）
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から得たｓｃＦｖファージライブラリー（１０１２Ｐｆｕ）のアリコートを、３％（ｗ／ｖ）のスキムミルクを含むＰＢＳを用いて１時間室温で回転混合機上でブロッキングした。次いで、ブロッキングしたファージを、ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ  Ｍ−２８０）において１時間室温で回転混合機上で非選択化（ｄｅｓｅｌｅｃｔ）した。次いで、非選択化したファージを、インビボでビオチン化されたｈＩＦＮγ（１００ｎＭ）と共に２時間室温で回転混合機上でインキュベートした。ビーズを磁気スタンドを用いて捕捉した後、ＰＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で４回およびＰＢＳで３回洗浄した。次いで、１０ｍｌの指数関数的に増殖するＴＧ１細胞に、ビーズを直接的に添加し、１時間３７℃で緩やかに振とう（１００ｒｐｍ）してインキュベートした。感染したＴＧ１のアリコートを、選択アウトプットである力価となるまで連続希釈した。残りの感染したＴＧ１を３０００ｒｐｍで１５分間スピンし、０．５ｍｌの２×ＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２％のグルコースを含む２×ＴＹ培地）中に再懸濁し、２×ＴＹＡＧ寒天培地バイオアッセイプレート上に播種した。一晩の３０℃でのインキュベーションの後、１０ｍｌの２×ＴＹＡＧを上記プレートに添加し、上記細胞を表面から剥離し、そして、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。終濃度１７％のグリセロールを得るように、５０％のグリセロールを含む２×ＴＹＡＧを上記細胞懸濁液に添加した。上記選択ラウンドのアリコートを−８０℃で保持した。
【０１９１】
（細胞表面選択）
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から得たｓｃＦｖファージライブラリー（１０１２Ｐｆｕ）のアリコートを、３％（ｗ／ｖ）のスキムミルクを含むＰＢＳを用いて１時間室温で回転混合機上でブロッキングした。次いで、ブロッキングしたファージを、１時間３７℃／５％ＣＯ２で、空のｐＤｉｓｐｌａｙベクターでトランスフェクションしたＣＨＯ細胞（Ｔ７５フラスコ内で８０％のコンフルエンス）上で非選択化（ｄｅｓｅｌｅｃｔ）した。なお、上記ＣＨＯ細胞を、予め、２％（ｗ／ｖ）のスキムミルクを含むＰＢＳでブロッキングした。次いで、非選択化したファージを、ＣＨＯ−ｐＤｉｓｐｌａｙ−ｈＩＦＮγ細胞と共に１時間室温で穏やかな振とうでインキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで１０回洗浄した。１０ｍｌの指数関数的に増殖するＴＧ１を上記Ｔ７５フラスコに直接的に添加し、１時間３７℃で緩やかに振とうしてインキュベートすることにより、結合したファージを溶出した。感染したＴＧ１のアリコートを、選択アウトプットである力価となるまで連続希釈した。感染したＴＧ１を３０００ｒｐｍで１５分間スピンし、０．５ｍｌの２×ＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２％のグルコースを含む２×ＴＹ培地）中に再懸濁し、２×ＴＹＡＧ寒天培地バイオアッセイプレート上に播種した。一晩の３０℃でのインキュベーションの後、１０ｍｌの２×ＴＹＡＧを上記プレートに添加し、上記細胞を表面から剥離し、そして、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。終濃度１７％のグリセロールを得るように、５０％のグリセロールを含む２×ＴＹＡＧを上記細胞懸濁液に添加した。上記選択ラウンドのアリコートを−８０℃で維持した。
【０１９２】
（ファージの救出）
上述の選択ラウンドから得た細胞懸濁液のうちの１００μｌを、２０ｍｌの２×ＴＹＡＧに添加し、０．３〜０．５のＯＤ６００に達するまで３７℃で攪拌（２４０ｒｐｍ）して増殖させた。次いで、上記培養物を、３．３×１０１０ＭＫ１３Ｋ０７ヘルパーファージを用いて過剰感染させ、１時間３７℃で（１５０ｒｐｍ）インキュベートした。次いで、上記細胞を２０００ｒｐｍで１０分間遠心し、その培地を除去し、そのペレットを２０ｍｌの２×ＴＹ−ＡＫ（１００μｇ／ｍｌアンピシリン；５０μｇ／ｍｌカナマイシン）中に再懸濁することにより、上記培地を交換した。上記培養物を一晩３０℃で（２４０ｒｐｍ）増殖させた。
【０１９３】
（ＥＬＩＳＡ用のモノクローナルファージの救出）
シングルクローンを、１ウェルにつき１５０μｌの２×ＴＹＡＧ培地（２％グルコース）を含むマイクロタイタープレートに採取し、３７℃で（１００〜２００ｒｐｍ）５〜６時間増殖させた。感染多重度（ＭＯＩ）１０（すなわち、上記培養物における各細胞につき１０個のファージ）を得るように、Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージを各ウェルに添加し、３７℃で（１００ｒｐｍ）１時間インキュベートした。増殖の後、プレートを３，２００ｒｐｍで１０分間遠心した。上澄みを注意深く除去し、細胞を１５０μｌの２×ＴＹＡＫ培地中に再懸濁し、一晩３０℃で（１２０ｒｐｍ）増殖させた。ＥＬＩＳＡ用に、上記ファージを、１５０μｌの５％スキムミルク粉末を含む２×濃度のＰＢＳを添加し、その後、１時間室温でインキュベートすることにより、ブロッキングした。次いで、上記プレートを１０分間３０００ｒｐｍで遠心し、ファージを含む上澄みをＥＬＩＳＡに用いた。
【０１９４】
（ファージＥＬＩＳＡ）
ＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ，ＮＵＮＣ）を、一晩ＰＢＳ中にて２μｇ／ｍｌのｈＩＦＮγで被覆した。対照プレートを、２μｇ／ｍｌのＢＳＡで被覆した。次いで、プレートを３％スキムミルク／ＰＢＳを用いて室温で１時間ブロッキングした。上記予めブロッキングしたファージの上澄みを移す前に、次いで、プレートをＰＢＳ  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄し、１時間室温でインキュベートした。次いで、プレートをＰＢＳ  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄した。各ウェルに（ＨＲＰ）結合型抗Ｍ１３抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ，１：１０，０００で希釈される）を含む３％スキムミルク／ＰＢＳ  ５０μｌ。室温での１時間のインキュベーションの後、上記プレートを、ＰＢＳ  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で５回洗浄した。次いで、５０μｌのＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）および５０μｌの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を添加することにより、上記ＥＬＩＳＡを現わして、その反応を止めた。吸収強度を、４５０ｎｍで読んだ。
【０１９５】
（ファージクローンの配列決定）
シングルクローンを、１ウェルにつき１５０μｌの２×ＴＹＡＧ培地（２％グルコース）を含むマイクロタイタープレート内に置き、３０℃で（１２０ｒｐｍ）一晩増殖させた。翌日、５μｌの培養物を、４５μｌのｄＨ２Ｏを含む別のプレートに移し、混合した。次いで、上記プレートを−２０℃で凍らせた。解凍後、この懸濁液のうちの１μｌをＰＣＲ複製用に用いた。このＰＣＲ複製では、標準的なＰＣＲプロトコールを用いて、ｐＣＡＮＴＡＢ６に特異的なプライマー：ｍｙｃｓｅｑ，５’−ＣＴＣＴＴＣＴＧＡＧＡＴＧＡＧＴＴＴＴＴＧ−３’（配列番号１００）およびｇｅｎｅ３ｌｅａｄｅｒ，５’−ＴＴＡＴＴＡＴＴＣＧＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＡＧＴＴＧＴＴＣＣＴ−３’（配列番号１０１）を用いた。
【０１９６】
上記ＰＣＲ反応物を、９６ウェルフォーマットにおいてＭｏｎｔａｇｅ  ＰＣＲμ９６  ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて精製した。５μｌの精製したＤＮＡについて、上記ｍｙｃｓｅｑプライマーおよび上記ｇｅｎｅ３ｌｅａｄｅｒプライマーを用いて配列決定した。
【０１９７】
（機能性試験のためのＳｃＦｖペリプラズムの調製）
１ウェルにつき０．９ｍｌの２×ＴＹＡＧ培地（０．１％グルコース）を含む深ウェルマイクロタイタープレート（ｄｅｅｐ  ｗｅｌｌ  ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  ｐｌａｔｅ）に、個々のクローンを接種し、３７℃で５〜６時間（２５０ｒｐｍ）増殖させた。次いで、終濃度０．０２ｍＭのＩＰＴＧを与えるように、１ウェルにつき１００μｌの、２×ＴＹＡＧ培地中０．２ｍＭ  ＩＰＴＧを添加した。次いで、プレートを一晩３０℃で、２５０ｐｒｍで振とうしながらインキュベートした。上記深ウェルプレートを２，５００ｒｐｍで１０分間遠心し、その上澄みを注意深く除去した。上記プレートを、１５０μｌのＴＥＳ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８），１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８），２０％スクロース，Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｒｏｃｈｅを補充した）中に再懸濁した。１５０μｌの希釈したＴＥＳ緩衝液（１：５  ＴＥＳ：水の希釈）の添加および氷上での３０分間のインキュベーションにより、低張性ショックを生じさせた。次いで、プレートを４０００ｒｐｍで１０分間遠心し、細胞および破片を除去した。その上澄みを注意深く別のマイクロタイタープレートに移し、機能性アッセイまたはＥＬＩＳＡにおける即時の試験のために氷上で保持した。
【０１９８】
（大規模のｓｃＦｖ精製）
１ｍｌの２×ＴＹＡＧの開始培地に、新たにストリークした２×ＴＹＡＧ寒天プレート由来のシングルコロニーを接種し、振とうしながら（２４０ｒｐｍ）３７℃で５時間インキュベートした。この培養物のうちの０．９ｍｌを用いて、４００ｍｌの同じ培地に接種し、一晩３０℃で活発な振とうをしながら（３００ｒｐｍ）増殖させた。
【０１９９】
翌日、この培養物を、４００μｌの１Ｍ  ＩＰＴＧを添加することにより誘導し、インキュベーションをさらに３時間続けた。５，０００ｒｐｍで１０分間４℃での遠心分離により、上記細胞を回収した。ペレットにした細胞を、上記の通りプロテアーゼインヒビターを補充した１０ｍｌの氷冷ＴＥＳ緩衝液中に再懸濁した。１５ｍｌの１：５希釈したＴＥＳ緩衝液を添加することおよび１時間の氷上でのインキュベーションにより、浸透圧ショックを達成した。細胞を１０，０００ｒｐｍで２０分間４℃で遠心分離し、細胞破片を回収した。その上澄みを注意深く新しいチューブに移した。終濃度１０ｍＭまでイミダゾールを添加した。ＰＢＳ中で平衡化した１ｍｌのＮｉ−ＮＴＡ（Ｑｉａｇｅｎ）を各チューブに添加し、回転混合機上で４℃で（２０ｒｐｍ）１時間インキュベートした。
【０２００】
上記チューブを２，０００ｒｐｍで５分間遠心し、その上澄みを注意深く除去した。ペレットにした樹脂を１０ｍｌの冷たい（４℃）洗浄緩衝液１（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０まで）中に再懸濁した。上記懸濁液をｐｏｌｙｐｒｅｐ  ｃｏｌｕｍｎ（Ｂｉｏｒａｄ）に添加した。８ｍｌの冷やした洗浄緩衝液２（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０まで）を用いて、上記カラムを重量フローにより洗浄した。上記ｓｃＦｖを上記カラムから２ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０まで）で溶出した。画分を２８０ｎｍでの吸収により解析し、ＰＢＳで平衡化したＰＤ１０  ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）上での緩衝液交換の前に、タンパク質を含む画分をプールした。ＰＢＳ中の上記ｓｃＦｖをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより解析し、２８０ｎｍでの吸収により定量した。これらの精製したｓｃＦｖを等分し、−２０℃および４℃で保管した。
【０２０１】
（実施例４：インターフェロンγに誘導されたレポーター遺伝子発現に対するｓｃＦｖ抽出物の阻害）
様々なｈｕＩＦＮγ抗体のペリプラズム性ｓｃＦｖ抽出物を上記の通り生成した。細胞に基づくハイスループットスクリーニングアッセイを、ＩＦＮγ活性の単鎖可変性フラグメント（ｓｃＦｖ）ブロッカーの同定のために用いた。ＩＦＮγ誘導性ＧＢＰ１プロモーターに由来するレポーター遺伝子（ホタルルシフェラーゼ）をヒトメラノーマ細胞株Ｍｅ６７．８にトランスフェクションした。ｓｃＦｖとＩＦＮγとの両者を、上記細胞培養物に付随して添加した。６時間のインキュベーション期間の後、上記ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。ホタルルシフェラーゼの誘導を阻害することを見出したｓｃＦｖを、さらなる確認のために保持した。
【０２０２】
いくつかのｓｃＦｖ抽出物は、ＩＦＮγに誘導されるレポーター遺伝子を用量依存的様式で阻害した（図１５）。図１５に示される各ｓｃＦｖクローンについて、様々な濃度（２．７ｎＭ、０．６８ｎＭ、０．１７ｎＭ、０．０４３ｎＭおよび０．０１１ｎＭ）を、各クローン名の上の欄（左から右へ下降する濃度）により示されるように試験した。これらの様々な濃度での各ｓｃＦｖ抽出物により表される阻害パーセンテージを、下の表３に示す。
【０２０３】
（表３：ペリプラズム性ｓｃＦｖ抽出物による、ＩＦＮγに誘導されるレポーター遺伝子に対する阻害パーセンテージ）
【０２０４】
【表３】
2008528569.tif 000050
（実施例５：インターフェロンγに誘導されるＭＨＣクラスＩＩの発現に対する、ｓｃＦＶの阻害）
ＩＦＮγに誘導されるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を遮断する能力を有する、完全ヒトＩｇＧ抗体またはそのフラグメントを同定するために、フローサイトメトリーアッセイを実行した。Ｍｅ６７．８細胞のプレーティングの後、様々な濃度の完全ヒト抗ＩＦＮγモノクローナル抗体候補の存在下で、５ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＦＮγを培養物に添加した。４８時間の培養後、細胞を蛍光標識抗ヒトＭＨＣクラスＩＩ抗体（ＨＬＡ−ＤＲ）で染色し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）を用いて解析した。このようにして、各候補抗体についてのＩＣ５０（ここで、ＩＦＮγに誘導されるＭＨＣクラスＩＩの発現のうちの５０％が阻害される、すなわち、５０％阻害濃度）を測定する。
【０２０５】
精製した完全ヒトｓｃＦｖを、実施例１に上記の通り生成した。メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩにおけるｓｃＦｖの影響を、上記の細胞に基づくフローサイトメトリアッセイを用いて評価した。これらのｓｃＦｖは、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害した（図１６、パネル１〜１２）。これらのｓｃＦｖクローンがメラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣ  ＩＩの発現を阻害する能力を、本明細書中で１６Ｃ３と呼ばれるマウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂと比較した。ｓｃＦｖクローン（−）およびマウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３（‐‐‐）を図１６に表す。
【０２０６】
（実施例６：ｓｃＦｖのＩｇＧフォーマットへの再フォーマット）
精製した完全ヒトｓｃＦｖを、実施例１に上記の通り生成した。選択したｓｃＦｖのＶＨ配列およびＶＬ配列を、５’末端にリーダー配列およびＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位を導入する特異的オリゴヌクレオチドを用いて複製した。上記重鎖配列および上記軽鎖配列の３’末端各々に、ＡｐａＩサイトまたはＡｖｒＩＩサイトを導入した。この複製したＶＨ配列をＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｐａＩで切断し、ｐＣｏｎ＿ｇａｍｍａ１発現ベクター（ＬＯＮＺＡ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）にクローニングした。この複製したＶＬ配列をＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｖｒＩＩで切断し、ｐＣｏｎ＿ｌａｍｂｄａ２発現ベクター（ＬＯＮＺＡ）にクローニングした。哺乳類細胞へのトランスフェクションの前に、この構築物を配列決定により確かめた。
【０２０７】
それらの適切な発現ベクターにおけるＶＨｃＤＮＡ配列およびＶＬｃＤＮＡ配列を、Ｆｕｇｅｎｅ６トランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて、哺乳類細胞にトランスフェクションした。簡単に言うと、Ｐｅａｋ細胞を、６ウェルプレート内で１ウェル当たり６×１０５個の細胞の濃度でウシ胎児血清を含む２ｍｌの培養培地中にて培養した。上記候補ＶＨ配列および上記候補ＶＬ配列をコードする発現ベクターを、Ｆｕｇｅｎｅ６トランスフェクション試薬を用いて、製造元の説明書に従って、上記細胞に共トランスフェクションした。トランスフェクション１日後に上記培養培地を吸引し、３ｍｌの新しい血清を含まない培地を細胞に添加し、３日間３７℃で培養した。３日間の培養期間の後、その上澄みを、プロテインＧカラム上で精製するＩｇＧのために回収した。
【０２０８】
完全に再フォーマットしたＩｇＧを、トランスフェクションした細胞由来の血清を含まない上澄みから、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ  ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ  ｃｏｌｕｍｎ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて、製造元の説明書に従って精製した。簡単に言うと、トランスフェクションした細胞由来の上澄みを一晩４℃でＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（Ｇ）ＩｇＧ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ）と共にインキュベートした。次いで、試料をＰｒｏｔｅｉｎ  Ｇ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂ  ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ  ｃｏｌｕｍｎに通し、その後、溶出緩衝液を用いて上記ＩｇＧを精製した。次いで、上記溶出したＩｇＧ画分をＰＢＳに対して透析し、上記ＩｇＧ含量を２８０ｎｍでの吸収により定量した。精度およびＩｇＧ完全性をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確かめた。
【０２０９】
（実施例７：再フォーマットしたｓｃＦｖによる、インターフェロンγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現の阻害）
上記の通り、ｓｃＦｖをＩｇＧフォーマットに再フォーマットした。メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現におけるＩｇＧクローンの影響を、実施例２に記載の、細胞に基づくフローサイトメトリーアッセイを用いて評価した。図１７、パネル１〜７に示される通り、これらのＩｇＧクローンは、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性のＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害した。これらのＩｇＧクローンがメラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性のＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害する能力を、マウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３およびＲ  ａｎｄ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  マウス抗ヒトＩＦＮγ抗体  ＭＡＢ２８５と比較した。完全ＩｇＧクローン（−ｘ−）、マウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３（−▲−）、およびＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）マウス抗ヒトＩＦＮγ  ＭＡＢ２８５（−●−）を表す。
【０２１０】
これらのＩｇＧクローンについてのＩＣ５０値を、以下の表４に示す。
【０２１１】
（表４．完全ヒト抗ＩＦＮγモノクローナル抗体のＩＣ５０解析）
【０２１２】
【表４】
2008528569.tif 000051
（実施例８：ｈｕＩＦＮγ抗体クローンの生殖細胞系配列への復帰変異）
本明細書中に記載される研究では、Ａ６クローンの核酸配列およびアミノ酸配列におけるヌクレオチドおよびアミノ酸残基を変異させた結果、これらは、生殖細胞系配列において見出されるヌクレオチドまたはアミノ酸残基に対応した。このプロセスを、本明細書中では「復帰変異」と呼ぶ。
【０２１３】
Ａ６重鎖：抗体Ａ６の免疫グロブリン重可変性遺伝子は、ヒト生殖細胞系ＤＰ−４７またはＩＧＨＶ３−２３と１００％の相同性を有した（ＧｅｎｅＢａｎｋ登録番号Ｍ９９６６０）。Ａ６の免疫グロブリン重結合（ＩＧＨＪ）領域を、６個のヒト機能性ＩＧＨＪ領域と比較した。Ａ６のＩＧＨＪ領域をＩＧＨＪ２（以下の表５Ａ）と同定したが、ＩＧＨＪ５−０２（以下の表５Ｂ）との全域の相同性を有した。従って、ＩＧＨＪ５−０２配列に（しかし、ＣＤＲ３の外側の配列対してのみに）対応させるように、Ａ６の元のＩＧＨＪ領域を変異させた。変異させたヌクレオチドおよびアミノ酸残基を表５Ａおよび表５Ｂ中の囲みに示し、ＣＤＲ領域に下線を引く。
【０２１４】
（表５Ａ：Ａ６とヒト機能性ＩＧＨＪ２遺伝子との間の比較）
【０２１５】
【表５−１】
2008528569.tif 000052
（表５Ｂ：Ａ６とヒト機能性ＩＧＨＪ５−０２遺伝子との間の比較）
【０２１６】
【表５−２】
2008528569.tif 000053
Ａ６軽鎖：抗体Ａ６の免疫グロブリンλ可変遺伝子（ＶＬ）は、ＩＧＬＶ６−５７およびＶ１−２２サブグループに属する（Ｇｅｎｅｂａｎｋ登録番号Ｚ７３６７３）。Ａ６−ＶＬは、ＩＧＬＶ６−５７と比較して７個の変異（ＣＤＲにおいて３個およびフレームワークにおいて４個（以下の表６））を有する。変異させたヌクレオチドおよびアミノ酸残基を表６中の囲みに示し、ＣＤＲ領域に下線を引く。
【０２１７】
フレームワークにおける４個の変異は、以下：Ｋａｂａｔ位置４３でのフレームワーク２においてＳｅｒからＡｌａ；Ｋｏｂａｔ位置７２でのフレームワーク３におけるＳｅｒからＴｈｒ；各々、Ｋｏｂａｔ位置７９および８０でのフレームワーク３におけるＬｙｓからＧｌｕ、およびＴｈｒからＡｌａである。上記フレームワーク領域における４個の変異を、初めに個々に置換した。その後、これらは、全て一緒にその対応するヒト生殖細胞系残基に復帰させた。対応するヒト生殖細胞系アミノ酸に復帰するこれらの４個の変異は、全くＮＩ−０５０１抗体の結合アフィニティを変化させなかった。上記ＮＩ−０５０１抗体は、本明細書中では、Ａ６抗体と比較してその標的に対する「復帰変異されたＡ６」とも呼ばれる。ＣＤＲ１（ＡｌａからＶａｌに）およびＣＤＲ２（ＧｌｎからＡｒｇに）における、Ａ６  ＶＬ配列から対応する生殖細胞系残基への変異を実施し、これらの変異は、Ａ６抗体と比較して、ＮＩ−０５０１抗体（復帰変異されたＡ６）のｈｕＩＦＮγに対する全域のアフィニティを改変しないことを示した。
【０２１８】
（表６：Ａ６とヒト機能性ＩＧＨＶ６−５７遺伝子との間の比較）
【０２１９】
【表６】
2008528569.tif 000054
ＮＩ−０５０１の重鎖および軽鎖の完全配列は、図１Ａ〜図１Ｄに示される。復帰突然変異して、ＮＩ−０５０１抗体を生じたヌクレオチドおよびアミノ酸残基（すなわち、元のＡ６配列から置換したそれらのヌクレオチドおよびアミノ酸残基に、図１Ａおよび図１Ｃにおいて下線を引き、イタリックにする。
【０２２０】
（実施例９：ｈｕＩＦＮγ抗体のアフィニティおよび結合動態）
ＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮ抗体のアフィニティおよび結合動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって特徴付けた。２００ＲＵのＮＩ−０５０１を、Ｃ１  ＢｉｏｃｏｒｅチップのＥＤＣ／ＮＨＳ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙにより固定化した。２００ｎＭと１ｎＭとの間の濃度でＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中にｈＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を通すことにより、結合を測定した。流速は１００μｌ／分であり、温度を２５℃に設定した。このデータを１：１ラングミュアモデルにフィッティングさせ、Ｋｏｎ値、Ｋｏｆｆ値およびＫＤ値を決定した（図１８）。
【０２２１】
（実施例１０：ｈｕＩＦＮγ抗体の活性）
ＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体の活性を、クローンＡ６により産生された抗体（すなわち、Ａ６  ｈｕＩＦＮγ抗体）の活性と比較した。この研究では、各ｈｕＩＦＮγ抗体がヒトメラノーマ細胞株Ｍｅ６７．８上で組換えヒトＩＦＮγ（ｒｈｕＩＦＮγ）誘導性ＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを阻害する能力を評価した。簡単に言うと、Ｍｅ６７．８メラノーマ細胞をｒｈｕＩＦＮγと共に、ＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体またはＡ６  ｈｕＩＦＮγ抗体の存在下で４８〜７２時間インキュベートした。実施例５に記載の通り、ＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを測定した。この二つの抗体は、同様の活性を表した。このことは、ＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体における復帰変異が、この抗体の活性を改変させなかったことを示す（図１９）。
【０２２２】
次いで、ＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体の活性を天然のＩＦＮγについて試験した。この研究では、ヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を１μｇ／ｍｌのマイトジェンＰＨＡで４８時間活性化させ、上澄みをＥＬＩＳＡにより天然のＩＦＮγの存在に対して試験した。次いで、この上澄みを用いて、Ｍｅ６７．８細胞上のＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを刺激した。ＮＩ−０５０１は、天然のヒトＩＦＮγにより誘導されるＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを中和することが能力があった（図２０）。
【０２２３】
（実施例１１：ｈｕＩＦＮγ抗体の交差反応性）
結合アッセイ：サンドイッチＥＬＩＳＡ形式アッセイを用いて、ＮＩ−０５０１をそのＩＦＮγに結合する能力に対して試験した。簡単に言うと、図２１に示した各グラフのタイトルに記載した種由来のＩＦＮγを、予め被覆したＮＩ−０５０１（−▲−）または対照抗種ＩＦＮγｍＡｂ（−■−）で捕捉した。各種のＩＦＮγを、このアッセイにおいて、ＩＦＮγに特異的なポリクローナル抗体を用いて検出した。図２１で見られるように、ラットＩＦＮγに対するＮＩ−０５０１の結合は、対照抗体と同様であるが、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）を除く他の種ついては同様でない。
【０２２４】
ＩＦＮγ活性の中和：抗体ＮＩ−０５０１を、異なる数種由来の組換えＩＦＮγタンパク質を中和するかまたは阻害する能力について試験した。簡単に言うと、試験する様々な種に由来する組換えＩＦＮγを、Ｍｅ６７．８細胞と共に、ＮＩ−０５０１の存在下または非存在下で４８〜７２時間培養した。実施例５に記載の通り、ＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを測定した。カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）ＩＦＮγに対する交差反応性およびカニクイザルＩＦＮγの中和を、ヒトメラノーマ細胞株Ｍｅ６７．８上のＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを阻害することにより実証した（図２１）。ＮＩ−０５０１は、カニクイザル由来のＩＦＮγを阻害する能力があったが、他の試験した種由来のＩＦＮγを中和することができなかった。このことは、これらの種が有する抗体には交差反応性がないことを実証する（表７）。
【０２２５】
（表７：ＮＩ−０５０１の交差反応性）
【０２２６】
【表７】
2008528569.tif 000055
さらに、カニクイザルＰＢＭＣを１μｇ／ｍｌのマイトジェンＰＨＡで４８時間活性化させ、上澄みをＥＬＩＳＡにより天然のＩＦＮγの存在に対して試験した。次いで、この上澄みを用いて、Ｍｅ６７．８細胞上のＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを刺激した。ＮＩ−０５０１は、天然のヒトＩＦＮγにより誘導されるＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを中和する能力があった（図２２）。
【０２２７】
（実施例１２：ｈｕＩＦＮγ抗体の生物学的活性）
本明細書中に記載する研究を、カニクイザルへの投与におけるＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体の生物学的活性を試験するように設計した。ＮＩ−０５０１を、本明細書中に記載する安全性および薬物動態（ＰＫ）研究のために選択した。その理由は、上記の通り、このｈｕＩＦＮγ抗体がカニクイザル由来のＩＦＮγと交差反応することを見出したからである。多様な静脈内注入後の臨床的な有害効果を評価するため、サルに以下の用量を注入する：３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇおよび２００ｍｇ／ｋｇ。
【０２２８】
破壊したＩＦＮγ遺伝子を有するマウスでは、ＫＬＨ免疫に応答して、減少したレベルのＩｇＧ２ａおよび増加したレベルのＩｇＧ１を観察した。このことは、ＩＦＮγと上記ＩｇＧ応答との間の相関を実証する。１３週間の主要な毒性学研究の間、サルを不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のＫＬＨで免疫する。プラシーボで共に処置したサルにおける、ＫＬＨ／ＩＦＡに対する典型的な免疫応答は、血清中に検出可能ＫＬＨ特異的なＩｇＭ応答およびＩｇＧ応答を誘導する。これらの研究を、ＩＦＡ中のＫＬＨで免疫した、ＮＩ−０５０１処置したサルにおいて、ＩＮＦγの中和がＫＬＨ特異的なＩｇＧ力価を変化させるかどうかを評価するように設計する。
【０２２９】
（実施例１３：ｈｕＩＦＮγ抗体を用いた、ＩＦＮγ活性の調節）
ケモカインＩＰ−１０の産生は、いくつかの異なる細胞株におけるＩＦＮγによりアップレギュレートされる。この観察に基づいて、全血アッセイを開発した。この全血アッセイでは、複数のドナー由来の全血試料を、設定した濃度のＩＦＮγおよび異なる濃度のＮＩ−０５０１と共に混合した。インキュベーションの後、ＩＰ−１０のレベルを、ＥＬＩＳＡにより、ＩＰ−１０の産生を遮断する抗ＩＦＮγ抗体の効力を評価するための手段として測定した（図２３）。
【０２３０】
（他の実施形態）
本発明はその詳細な説明と関連して記載されているが、上述の記載は、例を挙げて説明することを意図されており、添付の特許請求の範囲の範囲により規定される、本発明の範囲を制限することを意図されていない。他の局面、利点および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０２３１】
【図１−１】図１は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＮＩ−０５０１およびＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ａ６の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図１Ａは、ＮＩ−０５０１の重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１Ｂは、図１Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、図１Ｂにおいて下線が引かれている。図１Ｃは、ＮＩ−０５０１の軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１Ｄは、図１Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１−２】図１Ｅは、ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ａ６の重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１Ｆは、図１Ｅに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１Ｆにおいて下線が引かれている。図１Ｇは、ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ａ６の軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１Ｈは、図１Ｇに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１Ｈにおいて下線が引かれている。
【図２】図２は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ２＿Ｂ４の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図２Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図２Ｂは、図２Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図２Ｂにおいて下線が引かれている。図２Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図２Ｄは、図２Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図２Ｄにおいて下線が引かれている。
【図３】図３は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ１＿Ｂ９の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図３Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図３Ｂは、図３Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図３Ｂにおいて下線が引かれている。図３Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図３Ｄは、図３Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図３Ｄにおいて下線が引かれている。
【図４】図４は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｃ９の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図４Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図４Ｂは、図４Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図４Ｂにおいて下線が引かれている。図４Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図４Ｄは、図４Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図４Ｄにおいて下線が引かれている。
【図５】図５は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＣ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｃ１０の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図５Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図５Ｂは、図５Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図５Ｂにおいて下線が引かれている。図５Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図５Ｄは、図５Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図５Ｄにおいて下線が引かれている。
【図６】図６は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＣ１．２Ｒ３Ｐ７＿Ｄ３の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図６Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図６Ｂは、図６Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図６Ｂにおいて下線が引かれている。図６Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図６Ｄは、図６Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図６Ｄにおいて下線が引かれている。
【図７】図７は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．２Ｒ２Ｐ２＿Ｄ６の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図７Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図７Ｂは、図７Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図７Ｂにおいて下線が引かれている。図７Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図７Ｄは、図７Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図７Ｄにおいて下線が引かれている。
【図８】図８は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＣ１．２Ｒ２Ｐ２＿Ｄ８の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図８Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図８Ｂは、図８Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図８Ｂにおいて下線が引かれている。図８Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図８Ｄは、図８Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図８Ｄにおいて下線が引かれている。
【図９】図９は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｅ１の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図９Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図９Ｂは、図９Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図９Ｂにおいて下線が引かれている。図９Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図９Ｄは、図９Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図９Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１０】図１０は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ５＿Ｆ８の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図１０Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１０Ｂは、図１０Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１０Ｂにおいて下線が引かれている。図１０Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１０Ｄは、図１０Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１０Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１１】図１１は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｆ９の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図１１Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１１Ｂは、図１１Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１１Ｂにおいて下線が引かれている。図１１Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１１Ｄは、図１１Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１１Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１２】図１２は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．４Ｒ４Ｐ２＿Ｇ７の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図１２Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１２Ｂは、図１２Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１２Ｂにおいて下線が引かれている。図１２Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１２Ｄは、図１２Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１２Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１３】図１３は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．１Ｒ３Ｐ３＿Ｇ９の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図１３Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１３Ｂは、図１３Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１３Ｂにおいて下線が引かれている。図１３Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１３Ｄは、図１３Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１３Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１４】図１４は、ｈｕＩＦＮγ抗体ＡＤ１．３Ｒ３Ｐ６＿Ｇ１０の可変軽鎖領域および可変重鎖領域についての、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の一連の表記である。図１４Ａは、重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１４Ｂは、図１４Ａに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１４Ｂにおいて下線が引かれている。図１４Ｃは、軽鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を表し、図１４Ｄは、図１４Ｃに示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を表す。これらのＣＤＲは、図１４Ｄにおいて下線が引かれている。
【図１５】図１５は、ペリプラズム性ｓｃＦｖ抽出物を用いて、ＩＦＮγ誘導性レポーター遺伝子発現の阻害を表すグラフである。定量されたｓｃＦｖ抽出物は、用量依存的様式で、上記ＩＦＮγ誘導性レポーター遺伝子の発現を阻害した。各ｓｃＦｖクローンについて、様々な濃度（２．７ｎＭ、０．６８ｎＭ、０．１７ｎＭ、０．０４３ｎＭおよび０．０１１ｎＭ）が、各クローン名の上の欄に示されるように試験された（左から右へ下降する濃度、上述の表３も参照のこと）。
【図１６−１】図１６、パネル１〜１２は、ｓｃＦｖ抽出物を用いて、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現の阻害を表す、一連のグラフである。精製された完全ヒトｓｃＦｖは、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害した。ｓｃＦｖクローン（−）およびマウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３（‐‐‐）が表される。
【図１６−２】図１６、パネル１〜１２は、ｓｃＦｖ抽出物を用いて、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現の阻害を表す、一連のグラフである。精製された完全ヒトｓｃＦｖは、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害した。ｓｃＦｖクローン（−）およびマウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３（‐‐‐）が表される。
【図１７−１】図１７、パネル１〜７は、ｓｃＦｖ抽出物を用いて、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現の阻害を表す、一連のグラフである。上記ｓｃＦｖ抽出物は、完全ヒトＩｇＧ骨格に基づいて再フォーマットされた。精製された完全ＩｇＧｍＡｂは、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害した。完全ＩｇＧクローン（−ｘ−）、マウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３（−▲−）、およびＲ  ａｎｄ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）マウス抗ヒトＩＦＮγ  ＭＡＢ２８５（−●−）が表される。
【図１７−２】図１７、パネル１〜７は、ｓｃＦｖ抽出物を用いて、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩ発現の阻害を表す、一連のグラフである。上記ｓｃＦｖ抽出物は、完全ヒトＩｇＧ骨格に基づいて再フォーマットされた。精製された完全ＩｇＧｍＡｂは、メラノーマ細胞上のＩＦＮγ誘導性ＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害した。完全ＩｇＧクローン（−ｘ−）、マウス抗ヒトＩＦＮγｍＡｂ  １６Ｃ３（−▲−）、およびＲ  ａｎｄ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）マウス抗ヒトＩＦＮγ  ＭＡＢ２８５（−●−）が表される。
【図１８】図１８は、ヒトＩＦＮγに対するＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体のアフィニティを表すグラフである。
【図１９】図１９は、Ａ６クローンおよびＮＩ−０５０１クローン（本明細書中では「生殖細胞系に復帰変異されたＡ６」または「復帰変異されたＡ６」とも呼ばれる）により産生される抗体の活性を比較するグラフである。
【図２０】図２０は、天然のヒトＩＦＮγに対するＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体の活性を表すグラフである。
【図２１】図２１Ａ〜図２１Ｆは、ＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体と、様々な種由来の組換えＩＦＮγとの結合を表す一連のグラフである。
【図２２】図２２は、天然のカニクイザルＩＦＮγにより誘導されるＭＨＣクラスＩＩのアップレギュレーションを中和するＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体の能力を表すグラフである。
【図２３】図２３は、全血におけるＩＦＮγ誘導性ＩＰ−１０産生を遮断するＮＩ−０５０１  ｈｕＩＦＮγ抗体の能力を表すグラフである。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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