(57)【要約】  本発明は、少なくとも1つのグリコサミノグリカンを、腎臓疾患の治療の必要がある患者に投与することによる、腎臓疾患の治療方法に関する。具体的に、該腎臓疾患は巣状分節状糸球体硬化(FSGS)であり、該グリコサミノグリカンはスロデキシドである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
巣状分節状糸球体硬化症の症状又は合併症を予防、減少、又は解消する方法であって、少なくとも1つのグリコサミノグリカンを、その必要のあるヒト対象に、巣状分節状糸球体硬化症の1つ以上の症状又は合併症を抑制、減少、又は解消するのに有効な量で投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記グリコサミノグリカンがスロデキシド(sulodexide)、その医薬として許容し得る塩、水和物、又は包接物である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記グリコサミノグリカンがElmiron(登録商標)である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記組成物を、経口的、非経口的、経皮的、又は直腸的に投与する、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が、さらに、コルチコステロイド、免疫抑制剤；抗生物質；降圧剤又は利尿薬；コレステロール又はトリグリセリドを減少させるのに用いられる薬剤；及びビタミンDからなる群から選択された活性成分を含む、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項６】
前記降圧剤又は利尿薬がACE阻害剤である、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記コレステロール又はトリグリセリドを減少させるのに用いられる薬剤がスタチンである、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記投与が経口的である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項９】
投与される組成物の量が、1日当り約20 L.R.U.〜約100,000 L.R.U.の範囲である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１０】
投与されるスロデキシド、或いはその医薬として許容し得る塩、溶媒和物、水和物、又は包接物の量が、1日当り約20 L.R.U.〜約100,000 L.R.U.の範囲である、請求項２記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物を非経口投与し、かつ量が1日当り約20 L.R.U.〜約1,000 L.R.U.の範囲である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物を経口投与し、かつ量が1日当り約200 L.R.U.〜約10,000 L.R.U.の範囲である、請求項１，２又は３記載の方法。
【請求項１３】
直腸的に投与される組成物の量が1日当り約2000 L.R.U.〜100,000 L.R.U.である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物を非経口的に投与し、かつ量が約2 mg／日〜約100 mg／日の範囲である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物を経口的に投与し、かつ量が約20 mg／日〜約1000 mg／日の範囲である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物が、錠剤、カプセル剤、坐薬、液剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール噴霧剤、カシェ剤、粉剤、経皮パッチ剤、局所クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、又はジェル剤の形態である、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物が、1つ以上の賦形剤を含む、請求項１、２、又は３記載の方法。
【請求項１８】
前記グリコサミノグリカンが、ヘパリン；化学解重合又は酵素解重合により得られた低分子量へパリン；化学的に改質されたヘパリン；デルマタン硫酸；デルマタン硫酸の低分子量画分；ヒアルロン酸；コンドロイチン硫酸；ヘパラン硫酸；ケラタン硫酸；及びそれらの2つ以上の混合物からなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項１９】
巣状分節状糸球体硬化症の症状又は合併症を予防、減少、又は解消する方法であって、少なくとも1つのグリコサミノグリカンを、その必要のある哺乳動物に巣状分節状糸球体硬化症の1つ以上の症状又は合併症を抑制、減少、又は解消するのに有効な量で投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、35 U.S.C. §119(e)下で、2004年10月1日に出願された米国仮出願第60/615,472号、及び2004年10月26日に出願された米国仮出願第60/622,332号の利益を主張し、その各々の開示は、その全体が、引用により本明細書中に取り込まれるものとする。
この特許開示は、著作権保護に関する資料を包含する。著作権所持者は、米国特許商標庁の特許ファイル又は記録に記されているとおり、誰でも特許書類又は特許開示を複写することに対して異存はないが、そうでなければ、全ての著作権を留保する。
【０００２】
本明細書中に引用された全ての特許、特許出願、及び印刷物は、その全体が、引用により取り込まれるものとする。これらの印刷物の開示は、本明細書中に記載された発明の時点で当業者にとって知られている最新技術をより完全に記載するために、その全体が引用によりこの出願に取り込まれるものとする。
【０００３】
(1. 発明の分野)
本発明は、腎臓疾患の治療が必要である患者に、少なくとも1つ以上のグリコサミノグリカンを投与することによる、腎臓疾患の治療方法に関する。具体的には、該腎臓疾患は巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)であり、該グリコサミノグリカンはスロデキシドである。
【背景技術】
【０００４】
(2. 発明の背景)
巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)とは、糸球体のいくつかに瘢痕組織の形成を伴う腎臓疾患である。硬化性病変のその発症機序、及びそれらの進行性特性は議論されている。突発性巣状分節状糸球体硬化症に罹っているヒトが、当初、高糸球体ろ過速度、及び過剰ろ過の証拠を有することから、過剰ろ過及び毛細血管内糸球体圧の増加がこの疾患のメディエーターであり得ることが示唆される。
【０００５】
通常、巣状分節状糸球体硬化症の原因は知られていない。少数の場合は、逆流性腎症、感染、肥満、及び他の状態に由来する。糸球体のいくつかは瘢痕化する。それは、10,000人に約1人に影響を及ぼす。巣状分節状糸球体硬化症の主な結果はネフローゼ症候群である。ネフローゼ症候群の約10〜15％の症例を引き起こす。タンパク質が持続的に尿中に排出され、特に尿中アルブミンである。多くの場合、慢性腎不全に進行し得る。該障害は、部分的に免疫系に関連し得るが、コルチコステロイド又は免疫抑制剤への反応は一貫性がない。
【０００６】
FSGSの現在の治療の目標は、ネフローゼ症候群及び慢性腎不全に付随する症状の制御である。治療は、慢性的で生涯にわたり得る。コルチコステロイド及び免疫抑制剤を処方し、該免疫応答を減少させることができる。降圧剤及び利尿薬を、高血圧及び浮腫などの症状を制御するのに役立てることができる。抗生物質は、感染を制御するのに必要とされ得る。この障害にも共通である、高レベルの血中コレステロール及びトリグリセリドの治療は、アテローム性動脈硬化の発症を減少させるために、推奨され得る。該高レベルは、脂肪の過剰摂取よりむしろ肝臓によるコレステロール及びトリグリセリドの過剰生産に由来すると考えられるので、コレステロール及び飽和脂肪の食事制限は限定的にしか有効でないことがある。コレステロール及びトリグリセリドを減少させる薬剤は、推奨され得る。高タンパク質の食事は、有効かどうか議論の余地がある。多くの患者において、食事中のタンパク質量を減少させることにより、尿中タンパクの減少がもたらされる。多くの場合において、通常、適度なタンパク質食(1日当りキログラム体重当り1グラムのタンパク質)が推奨される。腎不全が存在する場合には、低タンパク質食が好まれ得る。該食事におけるナトリウム及び／又は水分を制限し、膨潤を制御するのに役立てることができる。ネフローゼ症候群が慢性で、かつ治療に反応しない場合には、ビタミンDを代える必要があり得る。
末期腎不全が起こる場合は、腎不全を制御するために、透析又は腎臓移植が必要であり得る。
【０００７】
FSGS の病理学的徴候は独特である。巣状分節状糸球体硬化症における腎臓生検から、巣状かつ分節状の糸球体硬化症、ヒアリン及び脂質の沈着、また多くの場合、糸球体のボーマン嚢への癒着が示される。糸球体係蹄の残りは、外見は正常である；従って、"分節状"という用語である。該病変は皮髄境界部の近くで始まるか、或いは多く見られるとみなされている。
巣状分節状糸球体硬化症は原発性(突発性)、又は多くの下記のものなどの病因に対する二次的なものであり得る：単腎；腎臓摘除；鎌状赤血球症；病的肥満(睡眠時無呼吸の有無にかかわらず)；チアノーゼ型先天性心疾患；ヘロイン腎症；老化した腎臓である。
【０００８】
ヘパリンなどのグリコサミノグリカン("GAG")は、抗凝血治療及び抗血栓治療において日常的に用いられる。ヘパリンは、不均一グリコサミノグリカン化合物であり、その機能は、(アンチトロンビンIIIとXa因子のその相乗作用を介した)抗凝血剤としての役割だけでなく他の機能も含み得る。ヘパリンの機能又は活性の範囲は、内皮機能不全を改善することを対象にし、抗炎症作用、内皮細胞相互作用、サイトカイン相互作用、活性酸素代謝産物、及び腸の修復をもたらす。また、ヘパリンは、刺激された好中球によりROM産生を減少させ、かつスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)を内皮細胞に結合させる。動物実験に比べて、ヘパリンの抗炎症活性に関するヒトにおける研究は限られている(Korzenikの論文、Inflammatory Bowel Diseases 3:87-94 (1997))。
【０００９】
スロデキシドは、哺乳動物の腸粘膜から抽出された天然由来のグリコサミノグリカンであり、抗凝血活性を有する。スロデキシドは、ヘパリンのものより低い硫酸度を有する(Radhakrishnamurthyらの論文、Atherosclerosis 31:217-229 (1978))。薬学モデルにおいて、スロデキシドが強い凝血剤、抗血栓剤、かつ線溶促進剤であることが示されている(Callasらの論文、Semin. Thromb. Hemost. 19:49 (1993))。また、研究から、スロデキシド治療が、ヘパリンを用いたときより少ない出血を伴うことが示されている(Barbantiらの論文、Int. J. Clin. Lab. Res. 22:179 (1992)、Iacovielloらの論文、Thromb. Haemostas. 76:1002 (1996))。また、スロデキシドには、血液粘性を下げ、フィブリノーゲンレベルを下げ、かつ線溶促進活性を上昇させる能力などのさらなる利点がある(Harenbergの論文、Med. Res. Rev. 18:1-20 (1998))。さらに、研究から、筋肉内投与及び経口投与の後のスロデキシドの高い生体利用効率が示唆される。Id. スロデキシドの製造は、米国特許第3,936,351号に記載されており、それは、その全体が、引用により本明細書に取り込まれるものとする。
【００１０】
スロデキシドは、約80％の移動の速いヘパリン画分であるグリコサミノグリカン硫酸(IGGS)と、約20％のデルマタン硫酸から成る。該移動の速い要素は、バリウム-プロパンジアミン系におけるその電気泳動移動度により決定され、移動の遅い要素と共に、市販のヘパリンにおいて見出されている。IGGSは、約7 kDの低〜中分子量と、移動の遅いヘパリン画分や未分画ヘパリンより低い抗凝血活性を有する。ヘパリンと比べて、IGGSは同一の二量体要素を有するが、少ない量のイズロン酸-2-O-硫酸塩と異なる量のグルコサミン-アセチル化-グルクロン酸二量体を有する。
【００１１】
スロデキシドは、欧州では、VESSEL DUE F(登録商標)という商標下で販売されており、下記のものに処方されている；Harenbergの論文、Med. Res. Rev. 18:1-20 (1998)、及びCrepaldi らの論文、Atherosclerosis 81:233 (1990)による記載のとおり、末梢動脈閉塞性疾患(POAD)などの血栓症リスクを有する血管病理の治療、静脈下腿潰瘍及び間欠性跛行の治癒；Tramarinらの論文、Medical Praxis 8:1 (1987)による記載のとおり、心臓血管障害；Sozziの論文, Eur. Rev. Med. Pharmacol Sci. 6:295 (1984)による記載のとおり、脳血管障害；及びCospiteらの論文、Acta Therapeutica 18:149 (1992)による記載のとおり、下肢の静脈病理である。
【００１２】
Kanwayらの論文、Sem. Nephrol. 5:307 (1985)、及びGroggelらの論文、Kidney int. 33:517 (1988)により、腎細胞の完全性及び機能を助けるというグリコサミノグリカンの有望な役割の証拠が提示された。Canfieldらの論文、Lab. Invest. 39:505 (1978)により、糖尿病性腎症の状態における膜グリコサミノグリカンの減少が示された(Jensenの論文、Diabetes 46 (補巻 2):S98-S100 (1997)。この減少は、ヘパラン硫酸産生及び／又は硫酸化の減少により介在され得る(Raatsらの論文、Kidney Int. 57:385-400 (2000))。
米国特許第5,236,910号は、糖尿病性腎症及び糖尿病性神経障害の治療におけるグリコサミノグリカンの使用を開示する。米国特許第5,496,807号は、スロデキシドの投与による糖尿病性腎症の治療方法を開示する。 
【００１３】
この出願の第2項又は任意の他の項における、任意の参考文献の引用又は同定は、そのような参考文献が、本発明に対する先行技術として利用可能であるという了解と解釈されるものではない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
(3. 発明の要約）
本発明は、巣状分節状糸球体硬化症("FSGS")の症状又は合併症を予防、減少、又は解消する方法を対象にする。該方法は、少なくとも1つのグリコサミノグリカンを、その必要のある対象に、FSGSの1つ以上の症状又は合併症を抑制、減少、又は解消するのに有効な量で投与することを含む。
【００１５】
また、本発明は、巣状分節状糸球体硬化症("FSGS")の症状又は合併症を予防、減少、又は解消する方法を対象にする。該方法は、Elmiron(登録商標) (ALZA社、Mountain View、CA)を、その必要のある対象に、FSGSの1つ以上の症状又は合併症を抑制、減少、又は解消するのに有効な量で投与することを含む。Elmiron(登録商標)は、ペントサン多硫酸ナトリウムである。 
さらに、本発明は、FSGSの症状又は合併症の予防用、減少用、又は解消用薬剤の製造のための、少なくとも1つのグリコサミノグリカンの使用を対象にする。
【００１６】
さらに、本発明は、FSGSの症状又は合併症の予防用、減少用、又は解消用医薬組成物を対象にし、該組成物は、活性成分として少なくとも1つのグリコサミノグリカンを、医薬として許容し得る担体と共に含む。
【００１７】
本発明の実施態様において、該対象は哺乳動物であり、好ましくはヒトである。好ましい実施態様において、該対象は糖尿病ではない。また別の好ましい実施態様において、該対象は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)に感染していない。本発明のより好ましい実施態様において、該対象は糖尿病ではなく、かつHIVに感染していない。
【００１８】
好ましい実施態様において、グリコサミノグリカンはスロデキシドである。この好ましい実施態様の態様において、スロデキシドを10〜lOOO mg／日、好ましくは、50〜500 mg／日、さらに好ましくは100〜400 mg／日の量で投与する。
投与の形態は、経口的、粘膜的、非経口的、又は経皮的であり得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（5. 発明の詳細な説明）
本発明は、巣状分節状糸球体硬化症("FSGS")の症状又は合併症の予防方法、減少方法、又は解消方法を含む。該方法は、少なくとも1つのグリコサミノグリカンの有効量を、その必要のある患者に投与することによる。好ましい実施態様において、該グリコサミノグリカンはスロデキシドである。
【００２０】
グリコサミノグリカン(GAG)の例は、治療分野において許容し得るものであり、ヘパリン及びその医薬として許容し得る塩；化学解重合又は酵素解重合により得られた低分子量へパリン；例として、O及び／又はNの硫酸化又脱硫酸化を介して、化学的に改質されたヘパリン；デルマタン硫酸及びその低分子量画分；ヒアルロン酸；コンドロイチン硫酸；ヘパラン硫酸；及びケラタン硫酸及びその低分子量画分などがある。また、該グリコサミノグリカンは、先の2つ以上の組合せ又は混合物を含む。
【００２１】
本発明の文脈における"スロデキシド"という用語は、約60％〜約90％までのイズロニルグリコサミノグリカン硫酸と約10％〜約40％の間のデルマタン硫酸を含む組成物のことをいう。本発明の文脈におけるこの用語は、スロデキシドの医薬として許容し得る塩、溶媒和物、水和物、又は包接物のこともいう。
【００２２】
好ましくは、スロデキシドは、約80％の移動の速いヘパリン画分であるグリコサミノグリカン硫酸(IGGS)と、20％のデルマタン硫酸から成る。該移動の速い要素は、バリウム-プロパンジアミン系におけるその電気泳動移動度により決定され、移動の遅い要素と共に、市販のヘパリンにおいて見い出されている。IGGSは、約7 kDの低〜中分子量と、移動の遅いヘパリン画分や未分画ヘパリンより低い抗凝血活性を有する。ヘパリンと比べて、IGGSは同一の二量体要素を有するが、少ない量のイズロン酸-2-O-硫酸塩と異なる量のグルコサミンN-アセチル化-グルクロン酸二量体を有する。
【００２３】
グリコサミノグリカンと化学的に関連しているElmiron(登録商標)(ALZA社、Mountain View、カルフォルニア州)の使用も、本発明の範囲内である。従って、また、本発明は、FSGSの症状又は合併症の予防方法、減少方法、又は解消方法を対象にする。該方法は、有効量のElmiron(登録商標)を、その必要のある患者に投与することによる。
【００２４】
本発明の文脈における"FSGSに症状又は合併症の予防、減少、又は解消"という用語は、下記のものの少なくとも1つのことをいう：アルブミン尿又はタンパク尿の減少；血清クレアチニンの上昇の速度、又は糸球体ろ過率(GFR)の降下を遅らせること；血清クレアチニンの降下、又はGFRの上昇；線維化、炎症などのFSGSに特徴的な組織学的な腎臓異常の出現を遅らせること；そのような異常の退行；腎代償療法に必要が見られる末期腎不全の発症までの期間を遅らせること；コルチコステロイド及び免疫抑制剤、抗生物質、降圧剤及び利尿薬(ACE阻害剤)、コレステロール及びトリグリセリドを減少させるのに用いられる薬剤(スタチン)、及びビタミンDなど、該対象を治療するのに用いられる1つ以上の薬剤の除外又は削減である。
【００２５】
"巣状分節状糸球体硬化症"という先の用語は、突発性FSGSと二次性FSGSの両方のことをいい、特に明記されない(NOS)FSGS、肺門部、細胞性、先端、及び崩壊性のその変異型などがある。 
具体的に、この用語は、HIV関連腎症(HIVAN)を除く、特に明記されない(NOS)FSGS、肺門部、細胞性、先端、及び崩壊性のその変異型のことをいう。最も好ましくは、この用語は、特に明記されない(NOS)FSGS、肺門部、細胞性、及び先端のことをいう。
【００２６】
本発明に従って、該投与方法は、経口的、粘膜的、非経口的、筋肉内的、又は経皮的であり得る。該活性成分の投与量は、投与の形態、患者の年齢、体重、及び患者の全身状態だけでなく、該疾患の重症度に依存してかなり異なり得て、標準的な臨床技術により決定できる。さらに、任意に動物試験を使用し、最適な投与量範囲の同定に役立てることができる。使用されるべき正確な用量は、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。
【００２７】
好ましくは、該医薬組成物は、経口投与に許容し得る形態である。錠剤及びカプセル剤は、それらの投与の簡便性のために好ましく、固体医薬賦形剤が使用される最も有利な経口投与量単位形態を示す。所望されるならば、錠剤を、標準的な水性又は非水性技術によりコーティングすることができる。
好ましくは、本発明の方法において用いられる該経口組成物を、1日当り1〜4回の単一又は分割投与量で投与できる。
【００２８】
好ましくは、活性成分の治療上又は予防上効果的な量は、投与の種類により、毎日約20 L.R.U.(リポタンパク質リパーゼ放出ユニット)〜100,000 L.R.U.の範囲である。経口投与に関しては、該活性成分の治療上効果的な量は、非経口投与用のものより数倍大きいことがある。経口投与される活性成分の量は、静脈内投与用又は皮下投与用のものより約5〜約10倍大きい範囲であり得る。好ましくは、本発明において毎日用いられた医薬組成物の量は、非経口投与に関しては約20 L.R.U.〜約1,000 L.R.U.、経口投与に関しては約200 L.R.U.〜約10,000 L.R.U.、また直腸投与に関しては約2,000 L.R.U.〜約100,000 L.R.U.の範囲である。該医薬組成物は、スロデキシドの任意の市販の形態、例えば、イタリアでWassermann, SpA社から市販されているVESSEL DUE F(登録商標)を含むことができる。
該医薬組成物の好ましい固体剤形は、錠剤又はカプセル剤であり、コーティングされているか、コーティングされていないかのいずれかである。該経口医薬組成物を1日1〜4回までの単回又は分割投与量で投与することができ、好ましくは、1日当り50ミリグラム("mg")(500 L.R.U.)〜1日当り1000 mg (10,000 L.R.U.)の範囲であり、例えば、50 mg／日、100 mg／日、150 mg／日、200 mg／日、300 mg／日、400 mg／日、500 mg／日などである。好ましくは、該医薬組成物を直腸投与する場合、該投与量は、経口投与で用いられるものより約10倍高く、すなわち、約500mg〜約10グラムとすべきである。医薬組成物の他の固体剤形は、コーティングされているかコーティングされていない、錠剤又はカプセル剤であり、好ましい剤形は、1日当り約10 mg〜1日当り約1,000 mgの範囲であり、好ましくは1日当り約50 mg〜約500 mg、さらに好ましくは1日当り約100 mg〜約400 mgである。好ましくは、1日当り400 mgを投与する。
【００２９】
本発明の方法は、スロデキシド、又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物、水和物、又は包接物などのグリコサミノグリカンの使用を含み、1つ以上のさらなる活性成分と組合せて投与できる。本発明の方法は、2つ以上の活性成分の同時投与又は連続投与を含む。該投与が連続的である場合、個別の投与を、大体少なくとも2分以上、時間間隔を空けることができる。また、該活性成分の作用又は効果の時間的間隔を、体内への該活性成分の各々の放出速度の差を引き起こすように、各活性成分に少なくとも1つの異なる担体、賦形剤、又は固体剤コーティングを用いることにより達成できる。代わりとして、該活性成分の少なくとも1つを放出制御製剤で投与できるか、或いは該成分の各々をその各々が独自の放出速度を有する異なる放出制御製剤で投与できる。
【００３０】
(医薬剤形)
経口投与に適した本発明の方法において用いられる医薬剤形は、カプセル剤、カシェ剤、弾力のある軟ゼラチンカプセル剤、錠剤、カプレット剤、又はエアゾールスプレー剤などの個別の医薬単位剤形、粉剤又は顆粒剤などの各々に所定量の該活性成分を含有するもの、又は水性液体、非水性液体、水中油乳剤、又は油中水液体乳剤における液剤又は懸濁剤として提示できる。通常、水中油乳剤などの剤形は、アニオン性リン酸エステル又はラウリル硫酸などの界面活性剤を含むが、カチオン性又は非イオン性の界面活性剤などの他の種類の界面活性剤を、本発明の組成物に用いることができる。一般に、「Remingtonの製薬科学」第18版、Mack Publishing、Easton、ペンシルバニア州(1990)を参照されたい。
【００３１】
経口投与に適した本発明の医薬組成物を、当技術分野でよく知られている従来の方法を用いることにより、弾力のある軟ゼラチンカプセル単位剤形の医薬組成物として製剤できる。Ebertの論文、Pharm. Tech. 1(5):44-50 (1977)などを参照されたい。腸内溶解性胃耐性フィルムによりコーティングされて、かつグリコサミノグリカン、増粘剤、及び界面活性剤からなる凍結乾燥物を含む、カプセル剤又は錠剤の形態の医薬組成物は、以前に米国特許第5,252,339号に記載されており、それは、その全体が、引用により本明細書中に取り込まれるものとする。
【００３２】
弾力のある軟ゼラチンカプセル剤は、ゼラチンがグリセリン、ソルビトール、又は類似のポリオールなどの可塑剤の添加により可塑化されている硬ゼラチンカプセル剤の殻よりいくらか厚い、柔らかい球状ゼラチン殻を有する。用いられたゼラチンの種類、及び可塑剤及び水の量を変えることにより、該カプセル殻の硬さを変えることができる。該軟ゼラチン殻は、菌類の成長を防ぐために、メチル及びプロピルパラベン、及びソルビン酸などの保存料を含有できる。該活性成分を、植物油又は鉱物油などの液体媒体又は担体、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコールなどのグリコール、トリグリセリド、ポリソルベートなどの界面活性剤、又はそれらの組み合わせの中に、溶解又は懸濁できる。
【００３３】
本発明の典型的な経口剤形を、従来の医薬配合技術に従って、該活性成分を少なくとも1つの賦形剤を有する緊密な混合物中に混合することにより製造する。賦形剤は、投与に所望される製剤の形態により、幅広い種類の形態をとり得る。例えば、経口液体剤形又はエアゾール剤形における使用に適した賦形剤には、水、グリコール、油、アルコール、着香料、保存料、及び着色料があるが、それらに限定されない。経口固体剤形(粉剤、錠剤、カプセル剤、及びカプレット剤など)における使用に適した賦形剤には、澱粉、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、及び崩壊剤があるが、それらに限定されない。
【００３４】
錠剤及びカプセル剤は、それらの投与の簡便さのため、最も有利な経口単位剤形になり、その場合には固体賦形剤を使用する。所望されるならば、錠剤を、標準的な水性又は非水性技術によりコーティングすることができる。そのような剤形を任意の製薬方法により製造できる。一般に、該活性成分を液体担体、細かく分割した固体担体、又は両方と均一かつ緊密に混合し、その後、必要であれば、該生成物を所望の提示に成形することにより、医薬組成物及び剤形を製造する。
【００３５】
例として、錠剤を、圧縮又は成形により製造できる。任意に賦形剤と混合された粉剤又は顆粒剤などの自由流動形態の活性物質を、適切な機械において圧縮することにより、圧縮錠剤を製造できる。不活性液体希釈剤で湿らされた粉末化合物を、適切な機械において成形することにより、成形錠剤を作成できる。
【００３６】
本発明の経口剤形において用いることができる賦形剤の例には、結合剤、充填剤、崩壊剤、及び滑沢剤があるが、それらに限定されない。医薬組成物及び剤形における使用に適した結合剤は、コーン澱粉、ジャガイモ澱粉、又は他の澱粉、ゼラチン、アカシアなどの天然及び合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギン酸塩、粉末トラガカント、グアーガム、セルロース及びその誘導体(エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウムなど)、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、予めゼラチン化された澱粉、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(2208番、2906番、2910番など)、微結晶性セルロース、及びそれらの混合物があるが、それらに限定されない。
【００３７】
微結晶性セルロースの適切な形態には、AVICEL(登録商標) PH-101、AVICEL(登録商標) PH-103、AVICEL(登録商標) RC-581、AVICEL(登録商標) PH-105として販売されている材料(FMC社、American Viscose部門、Avicel販売、Marcus Hook、ペンシルバニア州から入手できる)、及びそれらの混合物があるが、それらに限定されない。具体的な結合剤は、AVICEL(登録商標) RC-581として販売されている、微結晶性セルロースとカルボキシメチルセルロースナトリウムの混合物である。適切な無水又は低水分の、賦形剤又は添加剤には、AVICEL(登録商標）PH-103及びStarch 1500 LMがある。
【００３８】
本明細書中に開示された医薬組成物及び剤形における使用に適した充填剤の例には、滑石、炭酸カルシウム(顆粒又は粉末など)、微結晶性セルロース、粉末セルロース、デキストレート、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、澱粉、予めゼラチン化された澱粉、及びそれらの混合物があるが、それらに限定されない。通常、本発明の医薬組成物における結合剤又は充填剤は、該医薬組成物又は剤形の約50〜約99重量パーセントで存在する。
また、医薬安定剤を用い、本発明の組成物を安定させることができる。許容し得る安定剤には、L-システイン塩酸塩、グリシン塩酸塩、リンゴ酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、クエン酸、酒石酸、及びL-システイン二塩酸塩があるが、それらに限定されない。
【００３９】
崩壊剤を本発明の組成物に用いて、水性環境に晒されたときに崩壊する錠剤を提供する。過剰な崩壊剤を含有する錠剤は、保管中に崩壊し得るが、過少に含有する錠剤は、所望の速度又は所望の条件下で崩壊できないことがある。従って、活性成分の放出後に有害に多すぎも少なすぎもしない十分な量を用いて、本発明の固体経口剤形を形成すべきである。用いられる崩壊剤の量は、調剤の種類に基づき異なり、当業者には容易に認識できる。典型的な医薬組成物は、約0.5〜約15重量パーセントの崩壊剤、好ましくは約1〜約5重量パーセントの崩壊剤を含む。
【００４０】
本発明の医薬組成物及び剤形において用いることができる崩壊剤には、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモ又はタピオカ澱粉、他の澱粉、予めゼラチン化された澱粉、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ガム、及びそれらの混合物があるが、それらに限定されない。
【００４１】
本発明の医薬組成物及び剤形において用いることができる滑沢剤には、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油、軽油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、滑石、水素化植物油(ピーナツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油など)、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、及びそれらの混合物があるが、それらに限定されない。さらなる滑沢剤には、例えば、サイロイドシリカゲル(メリーランド州BaltimoreのW.R. Grace社により製造されているAEROSIL 200)、合成シリカの凝固エアゾール(テキサス州PlanoのDegussa社により市販されている)、CAB-O-SIL(マサチューセッツ州BostonのCabot社により販売されている発熱性二酸化ケイ素製品)、及びそれらの混合物がある。滑沢剤を仮にも用いるならば、通常、それらが組み込まれる医薬組成物又は剤形の約1重量パーセント未満の量で用いる。
【００４２】
先に提示された一般的な剤形に加えて、本発明の化合物を、米国特許第3,845,770号；第3,916,899号；第3,536,809号；第3,598,123号；及び第4,008,719号、第5,674,533号、第5,059,595号、第5,591,767号、第 5,120,548号、第5,073,543号、第5,639,476号、第5,354,556号、及び第5,733,566号に記載されているものなどの当業者によく知られている放出制御方法又は送達デバイスにより、投与することもできる。
【００４３】
例えば、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧系、多層コーティング、微粒子、リポソーム、ミクロスフェアなど、又は所望の放出プロファイルを様々な割合で提供するためにそれらの組合せを使用する、これらの医薬組成物を用いて、その中の1つ以上の活性成分の緩徐放出又は制御放出を提供できる。本明細書中に記載されたものを含む当業者に知られている適切な制御放出製剤を、本発明の医薬組成物との使用に容易に選択できる。従って、本発明は、制御放出のために適合されている錠剤、カプセル剤、ジェルキャップ剤、カプレット剤などの経口投与に適した単回剤形を含む。
【００４４】
本発明の活性成分を、当業者によく知られている制御放出方法又は送達デバイスにより投与できる。例としては、限定はされないが、米国特許第3,845,770号；第3,916,899号；第3,536,809号；第3,598,123号；及び第4,008,719号、第5,674,533号；第5,059,595号；第5,591,767号；第 5,120,548号；第5,073,543号；第5,639,476号；第5,354,556号；及び第5,733,566号に記載されているものがあり、それらの各々は、引用により本明細書中に取り込まれるものとする。例えば、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧系、多層コーティング、微粒子、リポソーム、ミクロスフェアなど、又は所望の放出プロファイルを様々な割合で提供するためにそれらの組合せを使用する、そのような剤形を用いて、1つ以上の活性成分の緩徐放出又は制御放出を提供できる。本明細書中に記載されたものを含む当業者に知られている適切な制御放出製剤を、本発明の活性成分との使用に容易に選択できる。従って、本発明は、限定はされないが、制御放出のために適合されている錠剤、カプセル剤、ジェルキャップ剤、及びカプレット剤などの経口投与に適した単回剤形を含む。
【００４５】
全ての制御放出医薬製品は、薬剤治療を、それらの非制御対応物により達成されたものより改善するという共通の目標を有する。理想的には、医療における任意に設計された制御製剤の使用は、最小限の時間で該状態を治療又は制御するのに使用される最小限の薬剤を特徴とする。制御放出製剤の利点には、薬剤活性の延長、投与頻度の減少、及び患者の順守の上昇がある。該薬剤は、体内でこの一定のレベルの薬剤を維持するために、体内から代謝及び排出される薬剤の量を置換し得る速度で該剤形から放出されるべきである。さらに、制御放出製剤を用いて、作用の開始時間、又は該薬剤の血中レベルなどの他の特性に影響を及ぼすことができ、従って、副作用(悪影響など)の発生に影響を及ぼすことができる。活性成分の制御放出を、限定はされないが、ｐH、温度、酵素、水、或いは他の生理的状態又は化合物により刺激促進できる。さらに、本発明方法に用いられる2つ以上の活性成分の放出、従って効果の時間間隔を空けることが所望される場合、(a)少なくとも1つの該活性成分の制御放出製剤；又は(b)各活性成分の個別放出のための、異なる放出係数を有する2つ以上の制御放出製剤を用いることができる。
【００４６】
非経口剤形を、限定はされないが、皮下、静脈内(ボーラス注入を含む)、筋肉内、動脈内などの様々な経路で、患者に投与できる。それらの投与は、通常、患者の異物に対する生来の防御を擦り抜けるので、非経口剤形は、好ましくは、無菌であるか、或いは患者に投与する前に滅菌できるものものである。非経口剤形の例には、すぐに注射できる液剤、医薬として許容し得る注射用担体中にすぐに溶解又は懸濁できる乾燥品、すぐに注射できる懸濁剤、及び乳剤があるが、それらに限定されない。
【００４７】
本発明の非経口剤形を提供するのに用いることができる適切な媒体は、当業者によく知られている。例としては、USP注射用水；限定はされないが、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖及び塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンガー注射液などの水性媒体；限定はされないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールなどの水混和性媒体；限定はされないが、コーン油、綿実油、ピーナツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルなどの非水性媒体があるが、それらに限定されない。
また、本明細書中に開示された1つ以上の活性成分の、溶解度を上昇させる化合物を、本発明の非経口剤形に組み込むことができる。
【００４８】
本発明の経皮剤形、局所剤形、及び粘膜剤形には、点眼剤、スプレー剤、エアゾール剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、ジェル剤、液剤、乳剤、懸濁剤、浣腸剤、坐剤、又は当業者に知られている他の剤形があるが、それらに限定されない。「Remingtonの製薬科学」第16版及び第18版、Mack Publishing、Easton、ペンシルバニア州(1980及び1990)；及び「医薬剤形入門」第4版、Lea & Febiger、Philadelphia (1985)などを参照されたい。さらに、経皮剤形には、"貯留型"又は"マトリックス型"パッチ剤があり、それらを皮膚に適用し、かつ一定の期間着用し、所望の量の活性成分の浸透を可能にすることができる。
【００４９】
この発明に含まれる経皮剤形、局所剤形、及び粘膜剤形を提供するのに用いることができる適切な賦形剤(担体又は希釈剤など)及び他の材料は、医薬技術分野における当業者にとってよく知られており、所定の医薬組成物又は剤形を投与する具体的な組織によって決まる。その事実を考慮すると、典型的な賦形剤には、限定はされないが、水、アセトン、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタン-1,3-ジオール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、鉱物油、及びそれらの混合物があり、無毒でかつ医薬として許容し得るローション剤、チンキ剤、クリーム剤、乳剤、ジェル剤、又は軟膏剤を形成する。また、所望されるならば、保湿剤又は湿潤剤を、医薬組成物及び剤形に加えることができる。そのような付加成分の例は、当業者によく知られている。「Remingtonの製薬科学」第16版及び第18版、Mack Publishing、Easton、ペンシルバニア州(1980及び1990)などを参照されたい。
【００５０】
治療されるべき具体的な組織により、本発明の活性成分での治療の前か、治療と同時か、又は治療の後に、付加成分を用いることができる。例えば、浸透促進剤を用いて、該活性成分を該組織に送達するのを助けることができる。適切な浸透促進剤には、アセトン；エタノール、オレイル、及びテトラヒドロフリルなどの様々なアルコール類；ジメチルスルホキシドなどのアルキルスルホキシド類；ジメチルアセトアミド；ジメチルホルムアミド；ポリエチレングリコール；ポリビニルピロリドンなどのピロリドン類；Kollidon等級(Povidone、Polyvidone)；尿素；及びTween 80(ポリソルベート80)及びSpan 60 (モノステアリン酸ソルビタン)などの様々な水溶性又は水不溶性糖エステル類があるが、それらに限定されない。
【００５１】
また、特に大腸の組織に関して、医薬組成物又は剤形、或いは該医薬組成物又は剤形を適用する組織のpHを調整し、1つ以上の活性成分の送達を改善できる。同様に、溶媒担体の極性、そのイオン強度、又は張性を調整し、送達を改善できる。また、ステアリン酸塩などの化合物を医薬組成物又は剤形に加え、1つ以上の活性成分の親水性又は親油性を、送達を改善するように有利に変えることができる。この点において、ステアリン酸塩は、該製剤の脂質媒体、乳化剤又は界面活性剤、及び送達促進剤又は浸透促進剤として役立つことができる。該活性成分の様々な塩、水和物、又は溶媒和物を用いて、該結果として得られる組成物の特性をさらに調整できる。
【００５２】
該医薬組成物を、薬学の分野でよく知られている任意の方法により製造できるが、全ての方法は、1つ以上の活性成分を該担体と随伴させる工程を含む。一般に、該組成物を、該活性成分を液体担体、細かく分割した固体担体、又は両方と均一かつ緊密に混合し、その後、必要であれば、該生成物を所望の提示に成形することにより製造する。経口固体製剤は、経口液体製剤より好ましい。好ましい一経口固体製剤は錠剤であるが、最も好ましい経口固体製剤はカプセル剤である。
【００５３】
本発明の無水医薬組成物及び剤形を、無水又は低水分含有成分、及び低水分又は低湿度状態を用いて製造できる。製造、包装、及び／又は保管中に、水分及び／又は湿気とかなり接触することが予想される場合、乳糖と少なくとも1つの活性成分を含む医薬組成物及び剤形は、好ましくは無水である。
【００５４】
無水医薬組成物を製造し、かつその無水特性を維持するように保管するべきである。従って、無水組成物を、好ましくは、水に晒されることを防ぐことが知られている材料を用いて包装し、それらを適切な処方キットに含むことができる。適切な包装の例には、密閉ホイル、プラスチック、単位用量容器 (バイアルなど)、ブリスターパック、及びストリップ包装などがあるが、それらに限定されない。
【００５５】
さらに、本発明は、活性成分が分解する速度を減少させる1つ以上の化合物を含む医薬組成品及び剤形を含む。そのような化合物を、本明細書中では"安定剤"といい、アスコルビン酸などの抗酸化剤、pH緩衝剤、又は塩緩衝剤があるが、それらに限定されない。
賦形剤の量及び種類のように、剤形における活性成分の量及び具体的な種類は、限定はされないが、それを患者に投与すべき経路などの因子により異なり得る。他の因子には、該患者の全身状態、年齢、及び体重だけでなく、該疾患の重症度がある。
【００５６】
(同時投与)
また、本発明の治療方法は、スロデキシドなどの少なくとも1つのグリコサミノグリカン(GAG)の投与と共に、FSGSの治療に治療上効果的な別の薬剤の同時投与を含むことができる。さらに、該方法は、該対象を冒している別の疾患の治療用の別の治療薬剤の同時投与も含むことができる。該GAG及び／又はElmiron(登録商標)(ALZA社、Mountain View、カルフォルニア州)と同時投与できる薬剤の例には、コルチコステロイド及び免疫抑制剤；抗生物質；降圧剤及び利尿薬(ACE阻害剤など)；コレステロール及びトリグリセリドを減少させるのに用いられる薬剤(スタチン)；及びビタミンDがある。
【００５７】
(キット)
本発明の活性成分を、患者に、同時に又は同一投与経路により投与してもしなくてもよい。従って、本発明の方法は、 医師により用いられる場合に、患者への適切な量の活性成分の投与を簡単にできるキットを含む。
【００５８】
本発明の典型的なキットは、スロデキシド、又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物、水和物、又は包接物などのグリコサミノグリカンの単位剤形、及び少なくとも1つ以上のさらなる活性成分の単位剤形を含む。限定はされないが、Elmiron(登録商標)(ALZA社、Mountain View、カルフォルニア州)を含む、グリコサミノグリカンと同時に用いることができるさらなる活性成分の例には、コルチコステロイド及び免疫抑制剤；抗生物質；降圧剤及び利尿薬(ACE阻害剤など)；コレステロール及びトリグリセリドを減少させるのに用いられる薬剤(スタチン)；及びビタミンDがある。
【００５９】
また、本発明は、巣状分節状糸球体硬化症の症状又は合併症を予防、減少、又は解消する方法を提供する。該方法は、その必要のある対象に、少なくとも1つグリコサミノグリカンを含む第一の医薬組成物、及び1つ以上のさらなる活性成分を含む第二の医薬組成物を投与することを含み、全ての活性成分を、
巣状分節状糸球体硬化症の1つ以上の症状又は合併症を抑制、減少、又は解消するのに有効な量で投与する。一態様において、第一の医薬組成物と第二の医薬組成物の投与を、少なくとも約2分間時間間隔を空ける。
本発明のキットは、さらに、該活性成分を投与するのに用いるデバイスを含むことができる。そのようなデバイスの例には、注射器、点滴袋、パッチ、吸入器、浣腸器、及び坐薬製剤投与用ディスペンサーがあるが、それらに限定されない。
【００６０】
本発明のキットは、さらに、1つ以上の活性成分を投与するのに用いることができる医薬として許容し得る媒体を含むことができる。例えば、活性成分を非経口投与用に再構成しなければならない固形剤形で提供する場合、該キットは、該活性成分を溶解し経口投与に適切である微粒子フリー溶液を形成できる適切な媒体の密閉容器を含むことができる。医薬として許容し得る媒体の例には、USP注射用水；限定はされないが、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖及び塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンガー注射液などの水性媒体；限定はされないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールなどの水混和性媒体；限定はされないが、コーン油、綿実油、ピーナツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルなどの非水性媒体があるが、それらに限定されない。
【００６１】
(腎機能の評価)
本発明方法の有効性を評価するために、該患者の腎機能の経時的測定を測定できる。腎機能の定量的評価、及び腎機能障害のパラメータは当技術分野においてよく知られており、例えば、Leveyの論文、1993、「腎疾患の進行を予防する治療の有効性を評価すること」Am J Kidney Dis. 22(1):207-214中に見い出すことができる。
【００６２】
腎機能／機能不全を決定する測定法の例には、血清クレアチニンレベル；クレアチニン除去速度；24時間尿タンパク質分泌；糸球体ろ過速度(GFR)；尿中アルブミンクレアチニン比(ACR)；アルブミン排出速度(AER)；及び腎臓生検がある。
下記の一連の実施例を例証として提示し、本発明の範囲を限定するものでない。
【実施例】
【００６３】
(6. 実施例)
(実施例I)
ピューロマイシンアミノヌクレオシド(PAN)は、ラットに急性ネフローゼ症候群を引き起こす糸球体上皮細胞毒素であり、7日目にタンパク尿が頂点に達し、2〜6ヶ月目にそれに続く糸球体硬化症が起こる。
【００６４】
ラットに、0日目にPANを投与し、下記の処理を行う：コントロール(活性成分なし)、1〜14日目まで毎日スロデキシド、又は7〜14日目まで毎日スロデキシドである。各群は、4匹のラットを包含する。
【００６５】
7日目及び14日目に、タンパク質の測定用に24時間尿を回収する。スロデキシド治療を14日目に止め、該ラットを4ヶ月目に処分する。
【００６６】
形態計測技術を用いて、糸球体硬化症及び間質性線維症用評価を含む、病理学的評価を行う。
【００６７】
(実施例II)
巣状分節状糸球体(FSGS)のアドリアマイシンモデルにおけるスロデキシドの効果を、下記に記載のとおり研究している。 
【００６８】
BALB／cマウスに、0日目に、単回9.5 mg／kg投与量のアドリアマイシン(ADR)又は媒体(V)を静脈内注射で与えた。マウスに、-1日目〜48日目まで6日／週、毎日皮下注射することにより、生理食塩水媒体(V)又はスロデキシド(15 mg／kg、S)を
与えた。評価には、HPLCによる血清クレアチニンの測定、ELISAによる尿中アルブミン／クレアチニン比(A／C)の測定(mg／mgで表す)、及び巣状又は広範囲糸球体硬化症を示す糸球体の数の計数(パーセントで表す)を含んだ。該結果を表１に記載する。
【表１】
2008515807.tif 000002
【００６９】
ポジティブコントロール(ADR/V)に比べて、スロデキシドは、14日目にタンパク尿を減少させたが、(タンパク尿が通常に戻ってくる)48日目には減少させず、48日目には糸球体硬化症をほぼ予防した。これらの発見から、スロデキシドがタンパク尿を減少させ、腎線維症の進行を遅らせることが示唆される。
【００７０】
(実施例III)
下記の実施例から、スロデキシドが、タンパク尿及び実験的巣状分節状糸球体硬化症の糸球体瘢痕化を減少させることが示される。
スロデキシドは、経口投与可能なグリコサミノグリカンであり、ラット静脈血栓症モデルにおいて抗血栓効果及び線溶効果を有する(Barbantiらの論文、Int. J. Clin. Lab Res. 22(3):179-184 (1992))。糖尿病性腎症患者における最近の無作為化比較試験から、1型及び2型糖尿病患者、微量タンパク尿及び顕性タンパク尿患者、及びアンジオテンシン変換酵素阻害剤投与を受けている患者及びこれらの薬剤投与を受けていない患者において、スロデキシドがタンパク尿を50％減少させることが示された(Gambaroらの論文、J. Am. Soc. Nephrol. 13:1615-1625 (2002))。それは、血栓症リスクを有する血管病理学用に、ヨーロッパでは1982年から販売されている。現在、糖尿病性腎症及び巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)における、さらなる比較試験が計画されている。
【００７１】
スロデキシドが、マウスにおけるアドリアマイシンにより引き起こされた巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)の実験モデルにおいて、タンパク尿、糸球体硬化症、及び間質性線維症を減少させるのかどうかを決定するために；かつ腎予防の機構を調べるため、及び腎臓におけるTGFb-1、TGF、及びFGF2などの親繊維化サイトカイニンの発現を測定するために、下記の実験プロトコルを考案した。巣状分節状糸球体硬化症(FSGS)のモデルとして、マウスにおけるアドリアマイシン腎症を選択した(Wangらの論文、Kidney Int. 5 8(4): 1797-1804 (2000))。このモデルにおいて、アドリアマイシン投与後48日目に、広範な巣状糸球体硬化症及び間質性線維症が生じる。
【００７２】
20〜25 gの8週齢BALB/c雄マウスに、0日目に単回投与として、9.5 mg／kgアドリアマイシンを静脈投与した。スロデキシド(15 mg／kg)を、-1日目から5 mg／kgの皮下注射により、6日／週投与した。14日目と48日目に、血液を後方眼窩出血により採取し、かつ24時間尿試料を採取した。研究日程の概略図として図1を参照されたい。マウスを48日目に処分し、腎臓組織を亜鉛ホルマリンで固定し、パラフィン中に包埋し、過ヨウ素酸シッフ及びマッソントリクロームで染色した。また、組織をRNAlater(Qiagen、Valencia、カルフォルニア州)中に、4℃で一晩浸し、次の日にRNAlaterのない新しい試料管に移し、-80℃で保存した。RNAをRneasy Mini Kit(Qiagen、Valencia、カルフォルニア州)を用いて腎臓から抽出し、DNase(Qiagen、Valencia、カルフォルニア州)で処理し、RT-PCR用ファーストストランドcDNA合成キット(Roche)で逆転写した。血清クレアチニン及び尿中クレアチニンをHPLC により測定し(Yuenらの論文、Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 286(6):F1116-1119 (2004))、尿中アルブミンをAlbuwellM (Exocell社、Philadelphia、ペンシルバニア州)を用いてELISAにより測定した。
【００７３】
14日目と48日目におけるクレアチニンの血清レベル、尿中クレアチニンレベルに対する尿中タンパクレベルの比を群間で比較した(図２)。分節状糸球体硬化症及び広域糸球体硬化症の割合を、該試料中の全ての糸球体の数を数えることにより算出し、間質性線維症の面積を、ImageJ(NIH)でスライド当り10個の200倍拡大の取り込まれた画像を分析することにより評価した(図3〜5)。定量PCRを、ABI Prism 7900を用いて、TaqMan遺伝子発現測定法(Applied Biosystems、Foster City、カルフォルニア州)により行った。ネガティブコントロールは、逆転写酵素なしで水とRNAを包含した。下記のプライマーセットをABI(Foster City、カルフォルニア州)から購入した：TGF-bl(MmO1178820_ml)、CTGF(MmO0515790_gl)、及びFGF2(MmO0433287_ml)である。18S rRNAプライマー対及びVIC標識プローブを内在性コントロールとして用いた。相対的な倍変化をDDCt法により算出した。統計検定はANOVA(パラメトリックなデータ)又はクラスカル-ウォリス検定(ノンパラメトリックなデータ)によるものであった。
【００７４】
BALB/c雄マウスに、0日目に、単回9.5 mg／kgの投与量のアドリアマイシン(ADR)又は媒体(V)を静脈内注射で与えた。マウスに、-1日目〜48日目まで6日／週、毎日皮下注射することにより、生理食塩水媒体(V)又はスロデキシド(15 mg／kg、S)を与えた。評価には、HPLCによる血清及び尿中クレアチニンの測定、ELISAによる尿中アルブミンの測定(アルブミン／クレアチニン比(A／C)、mg／mgとして表す)、及び巣状又は広域糸球体硬化を示す糸球体の計数(パーセントで表す)を含んだ。データは平均±SEで表す。ポジティブコントロール(ADR/V)に比べて、スロデキシドは、14日目にタンパク尿を減少させたが、(タンパク尿が通常に戻ってくる)48日目には減少させず、48日目には糸球体硬化症をほぼ予防した。図２〜５を参照されたい。
【００７５】
図２〜６中のデータにより示されるとおり、FSGSのマウスモデルにおいて、スロデキシドを用いた予防的治療は、14日目にタンパク尿を減少させる傾向を示し、48日目には糸球体硬化症及び間質性線維症を減少させ、かつTGFbl、CTGF、及びFGF2をコードする腎臓mRNAの発現には影響を及ぼさなかった。従って、スロデキシドがタンパク尿を減少させ、実験的FSGSにおける糸球体硬化症及び間質性線維症を遅らせたことから、スロデキシドを用いた治療が、糸球体疾患患者における進行性機能低下を遅らせる治療であることが示される。
【００７６】
（7. 引用された参考文献）
当業者には明らかなとおり、本発明の精神及び範囲から離れることなく、この発明の多くの改良及び変更を行うことができる。本明細書中に記載された具体的な実施態様は、例として提示されているだけで、本発明は、添付請求項の用語、及びそのような請求項が付与するものに同等物の全範囲にのみ限定されるべきである。そのような改良は、該添付請求項の範囲内であるとする。
【００７７】
個々の印刷物又は特許又は特許出願が、具体的かつ個別に示されて、全ての目的のためにその全体が引用により取り込まれるものとするのと同程度に、本明細書中に引用された全ての参考文献、特許、及び特許でないものは、その全体が全ての目的で、引用により本明細書中に取り込まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
(4. 図面の簡単な説明)
【図１】図１は、巣状分節状糸球体硬化症の実験マウスモデルにおいてスロデキシド投与の効果を決定する、下記の実施例IIIで用いられた研究予定の概略図である。
【図２】図２は、アドリアマイシン処理マウスそのまま(Adr／V)、14日目と48日目にスロデキシドを与えられたアドリアマイシン処理マウス(Ard／Sul)、生理食塩水を与えられたコントロールマウス(V／V)、及び14日目と48日目にスロデキシドを与えられたコントロールマウス(V／Sul)における、尿中アルブミン／クレアチニン比を示す図である。
【００７９】
【図３】図３は、スロデキシド投与有り(ADR/S)又は無し(ADR/V)のアドリアマイシン処理マウスの、48日目における腎臓組織のPAS染色組織像を示す。
【００８０】
【図４】図４は、スロデキシド投与有り(ADR/S)又は無し(ADR/V)のアドリアマイシン処理マウスの、48日目における腎臓組織のマッソントリクローム染色を示す。
【００８１】
【図５】図５は、アドリアマイシン処理マウスそのまま(Adr／V)、スロデキシドを与えられたアドリアマイシン処理マウス(Ard／Sul)、生理食塩水を与えられたコントロールマウス(V／V)、及びスロデキシドを与えたコントロールマウス(V／Sul)における、48日目の腎臓における組織学的変化を要約している図である。
【００８２】
【図６】図６は、アドリアマイシン処理マウスそのまま(Adr／V)、14日目と48日目にスロデキシドを与えられたアドリアマイシン処理マウス(Ard／Sul)、生理食塩水を与えられたコントロールマウス(V／V)、及び14日目と48日目にスロデキシドを与えられたコントロールマウス(V／Sul)における、48日目の腎臓組織におけるTFG-β1、CTGF、及びFGF-2のmRNA発現レベルの変化を要約している図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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