(57)【要約】  本発明は、高温で焼成されたイカ骨及び紅藻類の破砕粉末を原料としたアルカリ性のミネラル活性水の製造方法及びこれを用いた骨粗鬆症の予防に効能を有する組成物及び健康食品に関するものである。本発明に係るミネラルが豊富なアルカリ性水溶液は、人間を含めた哺乳類の骨吸収及び骨粗鬆症のような骨疾患の予防及び改善に効能を有する活性水として使用することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）イカ骨及び紅藻類の中から選択されたいずれか１つ以上を洗浄した後、粉砕する段階と；
（２）粉砕物を加熱焼成して無機質ミネラルを製造する段階と；
（３）無機質ミネラルを室温に冷却した後、微細粉末化する段階と；
（４）微細粉末を水にイオン溶液化する段階と；
（５）微細粉末を沈殿させてフィルタリングすることによって、アルカリ性水溶液を得る段階と；を含むことを特徴とするエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項２】
前記無機質ミネラルの製造段階は、１０００℃〜２０００℃で加熱焼成することを特徴とする請求項１に記載のエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項３】
前記イオン溶液化は、８０℃〜１００℃で揚水機ポンプを使って、１０気圧以上の圧力で落差を利用して砕けるような方法で行うことを特徴とする請求項１に記載のエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項４】
前記イオン溶液化は、１時間以上続けて行うことを特徴とする請求項３に記載のエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項５】
前記５）段階における沈殿は、１５時間〜３５時間沈殿させてからフィルタリングすることを特徴とする請求項１に記載のエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項６】
請求項１乃至請求項５のいずれか一項により製造されることを特徴とするエナ活性ミネラルＡ活性水。
【請求項７】
エナ活性ミネラルＡ活性水は、骨粗鬆症の予防効果を有することを特徴とする請求項６に記載のミネラル活性水。
【請求項８】
（１）イカ骨及び紅藻類の中から選択されたいずれか１つ以上を洗浄した後粉砕する段階と；
（２）粉砕物を１０００℃〜２０００℃で加熱焼成して無機質ミネラルを製造する段階と；
（３）無機質ミネラルを室温に冷却した後、微細粉末化する段階と；
（４）微細粉末を８０℃〜１００℃の水に投入した後、揚水機ポンプを使って１０気圧以上の圧力で落差を利用して砕けるような方法でイオン溶液化する段階と、
（５）微細粉末を沈殿させてフィルタリングすることによってアルカリ性水溶液を得る段階と；を含むことを特徴とするエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項９】
イオン溶液化は、１時間以上続けることを特徴とする請求項８に記載のエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項１０】
前記段階５）における沈殿は、１５時間〜３５時間沈殿させてからフィルタリングすることを特徴とする請求項９に記載のエナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法。
【請求項１１】
請求項８乃至請求項１１のいずれか一項により製造される骨粗鬆症の予防効果を有することを特徴とするエナ活性ミネラルＡ活性水。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エナ活性ミネラルＡ活性水（ENA mineral A bioactive solution）の製造方法及びこれを応用した骨粗鬆症の予防及び改善に有用な活性水に関する。より詳細には、無機質を豊富に含むイカ骨または/及び紅藻類を主原料として製造したミネラル活性水の組成物及びこれを利用した健康食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
産業社会の高度化及び専門化が進むにつれ、伝統的なスローフードの食生活からファーストフードの食生活に変化し、生活環境のストレスや環境汚染因子のため、現代人に必須的なミネラルの供給が不足であり、現代人に必須に要求されるカルシウムが充分に供給されない現状である。
【０００３】
人間が必要とする無機質は極微量であるが、細胞成長及び体組織の維持に役立ち、身体活動を調節するなど、重要な役割を有する。特に、人体代謝起電において重要な役割を有するカルシウムは、骨粗鬆症の予防のために必須であるが、人間及び哺乳類において必要な適宜量が供給されておらず、また、摂取量は増加したものの、吸収率が低いことが問題となっている。
【０００４】
骨粗鬆症は、老年層、閉経期の女性及び男性もが必ず共通に経験する骨格系疾患であって、未だに初期診断及び予防が不十分である。骨粗鬆症は、主に、エストロゲン、成長ホルモン、男性ホルモンなどのホルモン欠乏によって発生し、甲状腺疾患などに続いて２次的に発生する場合もある。骨粗鬆症は、造骨細胞(osteoblast)による骨の生成量よりも、破骨細胞(osteoclast)による骨の破壊量が増加して、骨密度が減少する疾患であって、何ら症状もなく進行し、小さな衝撃にも骨が折れやすくなる。閉経期の女性では急速な骨密度の減少が起こり、それ以降は、女性でも男性でも徐々に骨密度の減少が進行することになる。このような骨粗鬆症では、血清中のカルシウム(Ca)、総アルカリフォスファターゼ(total alkaline phosphatase)の変化と、骨形成に関連するホルモン(estradiol、osteocalcin)及び骨吸収に関連するホルモン(parathyroid hormone)の濃度変化が発生する。また、骨吸収の指標として用いられるコラーゲン架橋剤である尿中のピリジノリン(pyridinoline)の排出が増加するようになる。
【０００５】
骨粗鬆症の治療のためには、ホルモン補充療法としてエストロゲン(estrogen)の投与が行なわれており、ホルモン補充療法を閉経周辺期や閉経初期に始めると最大の効果が得られることが報告されている(Stepan JJ、etc.、(２００３)Endocr Regul ３７(４)：２２５-２３８.；Chen L、etc.、(２０００) ２０(４)：２８３-２８６)。さらに、エストロゲン投与の禁忌症に適用される骨粗鬆症の治療薬剤としては、カルシウム、bisphosphonate、calcitonin、raloxifene、vitamin Dなどがある。
【０００６】
一方、カルシトニン(calcitonin)は、甲状腺のC-cellから生成されるホルモンであって、人体における生理作用は現在のところ不明確であるが、恐らく短期間の間カルシウム恒常性(homeostasis)の微細な調節に関与しているものと考えられており、薬理的用量で骨吸収の抑制効果を奏する。特に、カルシトニンは、骨ターンオーバー率が亢進(high turnover rate)された骨粗鬆症に対する効果が大きいことが報告されている。
【０００７】
このような骨粗鬆症の治療効果を有する治療剤としては、破骨細胞などの生成と活性を阻害する作用により骨の損傷を抑制したり、その速度を緩めるメカニズムを通じて効果を奏する「フォサマックス」と「エビスタ」が市販されており、「ポルテオ」という造骨細胞などの生成と活性を促進し、新たな骨の形成を助ける新系列の骨粗鬆症治療剤も利用されている。新しい化学薬剤としてラルロックシフェン(ralroxifene)は、選択的卵胞ホルモン受容体調節剤(SERM；selective estrogen receptor modulator)であって、骨と心血管系にはエストロゲン効能薬として作用し、反面、乳房と子宮にはエストロゲンきっ抗薬として作用する理想的な薬剤であるが、最近、薬物代謝時に発生する該薬剤の毒性が報告されている(Hirsimaki P、etc.、(２００２)Breast J.８(２)：９２-９６)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明の目的は、エナ活性ミネラルＡ活性水及びその製造方法を提供し、これを応用した骨粗鬆症の予防及び改善に有用な新しいミネラル活性水を提供することである。
【０００９】
本発明は、エナ活性ミネラルＡ活性水の製造方法及びこれを応用した骨粗鬆症の予防及び改善に有用な組成物に関する。より詳細には、無機質を豊富に含むイカ骨または/及び紅藻類を主原料として製造したエナミネラルＡ活性水の組成物及びこれを利用した健康食品に関するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、天然食用海藻類である海苔、テングサ、オゴノリ、ウミゾウメン、ウシケノリ、ムカデノリ、スギノリ、イギス及び紅藻緑末、イカ骨を主成分として精製し、天然ミネラルを普及するアルカリ水溶液を製造する。
【００１１】
本発明は、
（１）イカ骨及び紅藻類を洗浄した後、粉砕する段階と；
（２）粉砕物を加熱焼成して無機質ミネラルを製造する段階と；
（３）無機質ミネラルを室温に冷却した後、微細粉末化する段階と；
（４）微細粉末を水にイオン溶液化する段階と；
（５）微細粉末を沈殿させてフィルタリングすることによってアルカリ性水溶液を得る段階とを含む。
【００１２】
前記紅藻類は、１００％植物性食用海藻であって、葉緑素の他に紅藻素を含有して紅色、紫色を呈する植物群を称する。体は大概多細胞でひも状や葉状を有し、大部分が海産であって、海苔、テングサ、フノリなどが含まれる。さらに、イカ骨は烏賊骨とも称し、イカの中心部にある白色の骨を乾燥させて使用する。
【００１３】
本発明による前記紅藻類とイカ骨を利用した無機質ミネラルの製造方法は、綺麗に洗浄して乾燥させ、１０００〜２０００℃で１時間加熱焼成することが好ましく、焼成を行なうことで細菌や不純物が完全に燃焼されて除去されると、無機質であるミネラルだけが残るようになるが、これを室温で完全に冷却させた後、粉砕機を利用して微細粉末化する。
【００１４】
次に、焼成されたイカ骨、焼成された紅藻類を用いて微細粉末化されたミネラルを水に溶解する。
【００１５】
前記焼成されたミネラルを溶解した水をイオン溶液化するためには、８０〜１００℃で揚水機ポンプを使用して、１０気圧以上の圧力による落差を利用して砕けるような方法で１時間以上続けて行うことが好ましい。揚水機のポンプ圧力は、最小１０k以上である時に效果的である。このようにしてイオン化されたイオン溶液は、沈殿させてから濾過するが、１５時間〜３５時間そのまま放置し、ミネラルスラッジが下に自然に沈殿すると、上清液である清い液のみを沈殿フィルタを使って濾過することによって、アルカリ性を呈するミネラル活性水を製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。なお、特に断わりがない限り、％は重量％を意味する。
【実施例１】
【００１７】
エナ活性ミネラルＡ活性水の製造
綺麗に洗浄して乾燥させたイカ骨と紅藻類をそれぞれ粉碎して粉末に製造した後、１１００℃で１時間加熱焼成する。焼成されたイカ骨と紅藻類を室温に完全に冷却させた後、粉砕機を利用して微細な粉末に製造した。前記紅藻類は、海苔、テングサ、オゴノリ、ウミゾウメン、ウシケノリ、ムカデノリ、スギノリ、イギス及び紅藻緑末を同一量で混合して使用した。
【００１８】
水５００リットルに焼成されたイカ骨の微細粉末を１．５ｋｇ、焼成された紅藻類の微細粉末を４ｋｇを投入し、攪拌して溶解させた。この溶液を９０℃で揚水機ポンプを利用して１０気圧の圧力で落差を発生させ、粒子が砕けるような方法で２時間粉砕してイオン溶液を製造し、イオン溶液を２４時間放置した後、反応器内の上層の清い液を沈殿フィルタを利用して濾過し、ミネラル活性水を製造した。
【００１９】
製造された活性水の成分を分析した結果を表１に示す。
【表１】
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【００２０】
表１から明らかなように、本発明によるイオン溶液はpHが１２．８５のアルカリ溶液であり、特に、カルシウム成分の含量が高く、人体に有益ないろいろな金属イオンを多量含んでいることが分かる。
【実施例２】
【００２１】
イカ骨を綺麗に洗浄してから乾燥し、粉砕した後、実施例１と同様に行なって製造し、焼成されたイカ骨の微細粉末５．５ｋｇを水５００リットルに溶解させた以外は、実施例１と同様に実施してミネラル活性水を製造した。その結果を表２に示す。
【表２】
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【００２２】
表２から明らかなように、カルシウムの濃度が非常に高く、人体に有益ないろいろな金属イオンを含有し、ｐＨが１２．２のアルカリであることが分かる。
【実施例３】
【００２３】
前記実施例１で製造されたアルカリミネラル活性水を用いて動物実験を行った。
【００２４】
実験用動物は、Wistar系の特定病原体不在(SPF)のラットを（株）オリエントから供給を受けて使用した。Wistarラットの飼育は、温度２２±３℃、相対湿度５０±１０％、照明時間１２時間(０８：００点灯〜２０：００消灯)として設定された自動温湿度調節装置が設置されたポリカーボネート製の飼育箱(２４０Ｗ×３９０Ｌ×１７５Ｈｍｍ)に５匹ずつ収容し、馴化及び飼育した。飼料は、実験動物用固形飼料(PMI Nutrition International、５０５ North ４th Street Richmond、In ４７３７４、USA)を放射線照射(１３．２ｋｇｙ)滅菌処理して自由に摂取させ、水は上水道の水をウォータボトルを使用して自由に摂取させた。
【００２５】
実施例１で製造されたミネラル活性水２４Ｌを冷蔵保管しながら、実験的に誘導した骨粗鬆症モデル動物に対して、各々０．５％、５％及び１０％の濃度で１２週間飲用水として供給した後、血清中の骨粗鬆症の診断指標の変化と、大腿骨の組織病理学的検査による骨粗鬆症の予防効果に関する実験を行った。
【００２６】
対照実験としては、一般的に飲用する上水道(Tap water)を使用した。
【００２７】
Wistarラットの中から体重が２００ｇ〜２３０ｇ程度の雌を選別し、それぞれのグループとして２４匹ずつ使用した。各個体別にポリカーボネート飼育箱に収容した。ラットをRompun(０．０４ｃｃ/１００ｇ)とketamine(０．１４ｃｃ/１００ｇ)で麻酔させた後、腹部を除毛して消毒液で徹底的に消毒し、卵巣摘出術を行った。
【００２８】
メスを利用して腹部の正中線に沿って長さ１ｃｍ程度に切開した後、子宮靭帯(ligamentum uteri)を牽引して両側の卵巣が露出するようにし、子宮間膜(mesometrium)と卵巣(ovary)との間を結紮して、両側の卵巣を完全に摘出した。筋肉と皮膚をそれぞれ縫合し、手術部位を徹底的に消毒して感染を予防した。手術１日後に体重を量ってグループの分離を行った。４つのグループに分離し、全試験期間にわたって飲水に含まれた試験物質を自由に摂取させ、試験物質を投与した。４週、８週及び１２週後に動物を屠殺した。
【表３】
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【００２９】
次に、動物実験の結果について説明する。
【００３０】
ラットの体重変化の観察
雌ラットに卵巣摘出術によって誘導した骨粗鬆症モデル動物に対し、全試験期間にわたって１週に１回の体重を測定することによって体重の変化を観察し、さらに、動物の一般症状を観察した。その結果を図２及び図３に示した。卵巣摘出後の全試験グループにおいて体重の増加が観察されたが、賦形剤対照群と比較して、試験物質であるミネラル活性水を０．５％、５％及び１０％濃度で投与した投与群では、統計学的に有意性のある体重変化は観測されず、動物の一般症状の観察においても、全試験期間に通じて何ら異常症状は観察されなかった。
【００３１】
血清指標に及ぼす影響の観察
実験的に雌ラットに卵巣摘出術を行なって誘導された骨粗鬆症モデル動物において、period killingで屠殺された動物に対して、骨粗鬆症の血清指標として用いられるエストラジオール(estradiol)、オステオカルシン(osteocalcin)、カルシウム(calcium)、リン(phosphorus)、アルカリフォスファターゼ(alkaline phosphatase)の濃度を観察することによって試験物質の効能を検査した。血液試料を遠心分離(３０００ｇ、１５分)を行って血清を分離した後、エストラジオール(estradiol)とオステオカルシン(osteocalcin)は、放射線免疫測定法(radioimmunoassay)(Bayer、USA)で測定し、カルシウム(calcium)は、OCPC End point(Bayer、USA)法で測定し、さらに、リンの濃度は、市販しているキット(Bio System S.A.、Buenos Aires Argentina)を用いてリンモリブデン酸塩(phosphomolybdate complex)が形成されることを分光光度法で測定した。血清総アルカリフォスファターゼ(serum total alkaline phosphatase)の活性は、Coloric metric assay(Bayer、Germany)法で測定した。各成分について図４乃至図８に示した。
【００３２】
１）カルシウム(calcium)
図４に示されているように、全試験期間にわたって試験物質であるミネラル活性水の０．５％、５％及び１０％濃度の投与群において、賦形剤対照群と比較して、統計学的に有意性のある血清カルシウムの濃度変化は観察されなかった。ミネラル活性水の投与は、血中カルシウムの濃度には何ら影響を与えない物質と判断される。
【００３３】
２）リン(phosphorus)
図５に示されているように、全試験期間にわたって試験物質であるミネラル活性水の０．５％、５％及び１０％濃度の投与群において、賦形剤対照群と比較して、統計学的に有意性のある血清リンの濃度変化は観察されなかった。ミネラル活性水の投与は、血中リンの濃度には何ら影響を与えない物質と判断される。
【００３４】
３）エストラジオール(Estradiol)
図６に示されているように、試験物質であるミネラル活性水の０．５％、５％及び１０％濃度の投与群において、賦形剤対照群と比較して、試験物質の投与後１２週目に、５％と１０％の投与群で統計学的に有意性(ｐ＜０.０５)のある血清（estradiol）濃度の増加が観察された。このように上昇した血中エストラジオールは、天然成分の試験物質から来由したものと判断され、卵巣摘出術によりホルモン欠乏に誘導された骨粗鬆症のモデル動物に対して骨吸収が発生するのを予防すると判断される。
【００３５】
４）オステオカルシン(Osteocalcin)
図７に示されているように、試験物質であるミネラル活性水の濃度０．５％、５％及び１０％の投与群において、賦形剤対照群と比較して、試験物質の投与後１２週目に、５％(ｐ＜０.０５)と１０％(ｐ＜０.００１)の投与群で統計学的に有意性のある血清オステオカルシン濃度の減少が観察された。４週目と８週目にも、賦形剤対照群と比較してミネラル活性水の投与群において血清オステオカルシンの濃度が低い傾向が観察された。骨形成の指標であるオステオカルシンに対し、ミネラル活性水は初期には大きな影響を与えないが、長期間にわたった試験物質の投与がオステオカルシン濃度を低くすることで、骨形成を本来の水準に減少させると判断される。
【００３６】
５）アルカリフォスファターゼ(Alkaline phosphatase)
図８に示されているように、全試験期間にわたって試験物質であるミネラル活性水の濃度０．５％、５％及び１０％の投与群において、賦形剤対照群と比較して統計学的に有意性のある血清アルカリフォスファターゼ濃度の変化は観察されなかった。
【００３７】
血清ピリジノリン(pyridinoline)に及ぼす影響の観察
骨粗鬆症は、骨のコラーゲン(collagen)の減少によってtype Ｉ collagen crosslinking moleculeであるピリジノリン(PYD)が循環血液と尿に遊離される。このような骨の特異表示因子であるPYDを測定することによって骨粗鬆症の進行を観察することができる。PYDの測定において、従来のHPLCや免疫学的な分析法(immunoassay)による尿に遊離されたPYDの測定方法は、感度と特異性が低いという短所を有するが、本実験では、血清中のPYDをELISA(enzyme-linked immunoassay)方法を採用し、尿中で測定するよりも４０倍低い濃度のPYDまで測定することにより、初期骨粗鬆症の診断に有効な血清学的指標として利用した。その結果を図９に示す。
【００３８】
試験物質であるミネラル活性水の骨吸収時に血清中に遊離されるtype Ｉ collagen crosslinking moleculeであるピリジノリン(PYD)に及ぼす影響を観察した結果を示した表９によれば、試験物質を投与した後４週目と１２週目には、１０％濃度の試験物質の投与群で賦形剤対照群と比較して統計学的に有意性(ｐ＜０．０１)のある血清PYD濃度の減少が観察されており、試験物質を投与した後８週目には、５％と１０％濃度の試験物質投与群で血清PYD濃度の有意性(ｐ＜０.０５)のある減少が観察された。
【００３９】
骨及びその他の臓器に及ぼす影響の観察
実験的に誘導された骨粗鬆症モデル動物の大腿骨を組織病理学的に観察するために、period killingで屠殺したそれぞれの動物から大腿骨を摘出し、ギ酸(formic acid)を利用した脱灰工程と、１０％の中性ホルマリンを利用した組織固定工程によって作製された組織標本に対する骨粗鬆症の進行に伴う大腿骨のコラーゲンの変化を観察するために、コラーゲンに対する特殊な染色であるアザン染色(Azan staining)を行ない、骨粗鬆症の指標となる海綿骨組織(trabecular bone)の面積をイメージ分析(image analysis)プログラム(Visus image analysis、Foresthill Products、Foresthill、CA)を利用して分析し、ヘマトキシリンエオジン染色(hematoxylin-eosin staining)を行なって骨吸収に関連する細胞である破骨細胞の数を確認した。
【００４０】
一方、試験物質に対する長期間の露出に伴う各臓器の影響を観察するために、肺、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、腎臓、甲状腺、副腎などの実質臓器を動物を屠殺した時に大腿骨とともに摘出した後、１０％の中性ホルマリンによる固定工程を行ない、一般的な組織処理工程としてヘマトキシリンエオジン染色を行なって観察した。その結果を図１０乃至図１６に示した。
【００４１】
１）海綿骨組織(Trabecular bone)の面積
組織中のコラーゲンに対する特殊染色であるアザン染色を行ない、卵巣摘出を行なった後、試験物質であるミネラル活性水の骨コラーゲンに及ぼす影響を観察した。図１０及び図１１に示されているように、卵巣摘出術により賦形剤対照群では、ホルモン欠乏のため骨粗鬆症が進み、骨コラーゲンの量が減少し、試験期間の経過に伴って次第に海綿骨組織の面積が減少することが観察された。卵巣摘出後４週間の試験物質の投与群では、統計学的に有意性のある変化が観察されなかったが、賦形剤対照群と比較して試験物質を０．５％、５％及び１０％の濃度で投与したグループでは、骨コラーゲンの形成の指標となる海綿骨組織の面積がやや高い傾向を示すことが観察された。試験物質投与してから８週後には、全試験グループにおいて、４週と比較して、骨コラーゲンが減少したことが観察されたが、８週グループとの比較では、５％(ｐ＜０．０５)と１０％(ｐ＜０．００１)投与グループにおいて、賦形剤対照群と比較して統計学的に有意性のある海綿骨組織面積の増加が観察された。一方、１２週投与群では、４週及び８週投与群と比較して、賦形剤対照群と０．５％濃度の試験物質供給群では骨コラーゲンの量が減少したことが観察されており、１２週グループでは８週グループと同様に、５％(ｐ＜０．０１)と１０％(ｐ＜０．０１)濃度の試験物質投与群では、海綿骨組織面積の有意性のある増加が観察された。
【００４２】
２）破骨細胞(Osteoclast)数の変化
骨吸収の指標として用いられる細胞である破骨細胞数の変化を観察した結果は図１２乃至図１５に示されており、全試験期間を通じて統計学的に有意性のある変化が観察された。卵巣摘出を行なった後、４週間試験物質としてミネラル活性水を投与し、大腿骨の骨幹(diaphysis)部分の破骨細胞数の変化を観察した結果、１０％濃度の試験物質投与群では統計学的に有意性(ｐ＜０.０１)のある減少が観察されており、８週間投与してから観察した結果、全濃度の試験物質投与群において、賦形剤対照群と比較したところ、有意性のある破骨細胞の減少が観察された。一方、１２週投与群では、対照群の場合、破骨細胞の数が８週と同様のレベルで高くなっているのに対し、試験物質投与群では、全濃度の試験物質投与群において、破骨細胞の数が賦形剤対照群と比較して有意な減少(ｐ＜０.０１)が観察された。
【００４３】
３）実質臓器に及ぼす影響の観察
試験物質であるミネラル活性水の骨に及ぼす影響のみならず、長期間飲み水として供給することによって実質臓器に及ぼす影響を観察した結果、肺、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、腎臓、副腎、甲状腺に対して賦形剤対照群と比較して、何ら影響を与えないことが分かった。これを図１６に示した。
【００４４】
得られた資料に対しては多重比較検定法を行なった。平均値に対してはBattlett検定によってhomogeneityを検査し、均質性のある場合に、賦形剤対照群と投与群との間に差異が存在するかどうかを検査するために、多重比較法であるDunnett'st-testを実施した。Battlett検定の結果、均質性が認められない場合は、順位化したデータを利用した非母数的方法であるKruskal-Wallis's H testを実施し、ｐ＜０．０５の場合は、Dunnett's testを利用して群間の有意差を調査した。このような分析は、統計プログラムであるGraphPad InStat(version３．０５、GraphPad Software Inc.)を利用して行なった。検定の危険率は５％及び１％とした。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明に係るミネラル活性水を長期間投与する場合、血清中のエストラジオールの濃度増加と、オステオカルシンの濃度を減少させる作用を有し、大腿骨に対しては、海綿骨組織の面積を増加させ、破骨細胞の数を減少させる作用を有することから骨粗鬆症の予防効果があり、かつ、その他の臓器には何ら毒性がないという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】イオン溶液化を行なうための製造装置を示した図。
【図２】全体試験期間における各グループの動物の平均体重の変化を比較したグラフ。
【図３】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した時に測定された各グループの平均体重の変化を示したグラフ。
【図４】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が血清中のカルシウム濃度の変化に与える効果を比較した図。
【図５】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が血清中のリンの濃度変化に与える効果を比較した図。
【図６】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が血清中のエストラジオールの濃度変化に与える効果を比較した図。
【図７】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が血清中のオステオカルシンの濃度変化に与える効果を比較した図。
【図８】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が血清中のアルカリフォスファターゼの濃度変化に与える効果を比較した図。
【図９】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が骨吸収時に血清中に遊離されるピリジノリンの濃度変化に与える効果を比較した図。
【図１０】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が海面骨組織の面積の変化に与える効果を比較した図。
【図１１】卵巣摘出後に試験物質であるミネラル活性水を投与し、４週、８週及び１２週後に、コラーゲンに対する特殊染色法であるアザン染色を施し、骨コラーゲンの指標となる海面骨組織の面積を観察した図。
【図１２】卵巣摘出後に試験物質を投与し、４週、８週及び１２週後に動物を剖検した後、ミネラル活性水が骨吸収時に増加する破骨細胞数の変化に与える効果を比較した図。
【図１３】卵巣摘出後に試験物質であるミネラル活性水を投与し、４週後に、骨吸収時に増加する破骨細胞の活性程度を観察した図。
【図１４】卵巣摘出後に試験物質であるミネラル活性水を投与し、８週後に、骨吸収時に増加する破骨細胞の活性程度を観察した図。
【図１５】卵巣摘出後に試験物質であるミネラル活性水を投与し、１２週後に、骨吸収時に増加する破骨細胞の活性程度を観察した図。
【図１６】ミネラル活性水の投与が卵巣摘出を実施した動物の実質臓器に及ぼす影響を示した図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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