(57)【要約】本発明は、ウイルスに感染した患者におけるウイルス量を相乗的に減少させる方法を提供する。この方法は、ある量のチオホスホノギ酸およびある量のヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターを相乗的組み合わせで経口同時投与することを含む。一つの実施形態において、本発明は、患者に、ある量のチオホスホノギ酸およびある量のヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターを経口同時投与することを含む方法を提供する。この方法では、同時投与される量はウイルス量を相乗的に低下させるのに十分であり、チオホスホノギ酸は１日あたり２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で経口投与される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者に、ある量のチオホスホノギ酸およびある量のヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターを経口同時投与することを含み、ここで同時投与される量はウイルス量を相乗的に低下させるのに十分であり、チオホスホノギ酸は１日あたり２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で経口投与される、ウイルスに感染した患者におけるウイルス量を減少させる方法。
【請求項２】
チオホスホノギ酸の投薬量が１日あたり１５ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
チオホスホノギ酸の投薬量が１日あたり２０ｍｇ／ｋｇ〜３５ｍｇ／ｋｇの投薬量範囲で投与される。請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの投薬量が、ヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターがチオホスホノギ酸なしで投与される場合と比較して少なくとも１０倍減少している、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターが、ジドブジン、ジダノシン、スタブジン、ラミブジン、アバカビルおよびエムトリシタビンからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターがジドブジンである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターがテノホビルである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ウイルスがレトロウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ウイルスがヘルペスウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが、組み合わされた製剤中で同時に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが、組み合わされた製剤錠剤中で同時に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ウイルスに感染した患者におけるウイルス量を低下させるための経口薬剤であって、該薬剤は、ある量のチオホスホノギ酸およびある量のヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターを含む組み合わされた製剤であり、
該チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、ウイルス量を相乗的に低下させるのに十分な量で存在し、
該薬剤は、組み合わされた製剤あたり１５０ｍｇ〜７５０ｍｇの間のチオホスホノギ酸を含む、経口薬剤。
【請求項１４】
ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターがジドブジンである、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１５】
チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターがカプセル剤中にある、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１６】
チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが錠剤中にある、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１７】
チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが液体中にある、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１８】
ウイルスがレトロウイルスである、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１９】
レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、請求項１８に記載の薬剤。
【請求項２０】
ウイルスがヘルペスウイルスである、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項２１】
ウイルス感染の治療的および／または予防的処置のための薬剤の製造における、チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの使用であって、該チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが、ウイルス量を相乗的に低下させるのに十分な量で存在し、薬剤が組み合わされた製剤あたり１５０ｍｇ〜７５０ｍｇの間のチオホスホノギ酸を含む、使用。
【請求項２２】
ウイルス感染を治療または予防するための使用準備済みの薬物形態の抗ウイルス剤の調製における、チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの使用であって、該チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが、ウイルス量を相乗的に低下させるのに十分な量で存在し、そして使用準備済みの薬物形態が形態あたり５００ｍｇ未満のチオホスホノギ酸を含む、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００５年３月７日に出願された米国仮特許出願第６０／６５９，１３６号（この内容全体は、本明細書において参考として援用される。）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター（ＮｓＲＴＩ）およびヌクレオチド逆転写酵素インヒビター（ＮｔＲＴＩ）を含むＮＲＴＩは、現在、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）および肝炎ウイルス（ＨＢＶ、ＨＣＶ）の感染を含むウイルス感染に対する治療において投与されている。残念なことに、このクラスの薬剤に対して、ウイルス耐性がしばしば発生する。非特許文献１を参照のこと。さらに、ＮＲＴＩの種々の副作用は患者に有害であり、患者の服薬遵守を妨げ、このクラスの薬剤の有効性を減少させることがある。例えば、非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４を参照のこと。
【０００３】
チオホスホノギ酸（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｎｏｆｏｒｍｉｃ  ａｃｉｄ）（「チオビル（Ｔｈｉｏｖｉｒ）ＴＭ」）は、毒性および低い生体適合性のために用法の限られている、高度に有効な広域性抗ウイルス薬である、ホスカレットの硫黄含有経口補充である。本明細書中の譲受人によって開発中のチオホスホノギ酸（チオビルＴＭ）の経口形態は、それを魅力的な臨床候補にする、向上した有効性および生体適合性を提供する。
【０００４】
チオホスホノギ酸を、ジドブジン（ＡＺＴ）等の他の抗ウイルス化合物と組み合わせることが示唆されている。特許文献１（第２１段落）を参照のこと。しかしながら、チオホスホノギ酸を１つ以上のＮＲＴＩと組み合わせることによって達成される相乗的抗ウイルス効果は、これらの活性作用物質の一方または両方の効果的投薬量を減少させることが可能であろうが、認識されていない。ウイルス耐性を予防または遅延させることによって、ならびに患者におけるウイルス量を減少させる効能を依然として維持しながら投薬量を減少させて毒性および望ましくない副作用を減少させることによって、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩの有効性を向上させる必要性がある。
【０００５】
本発明は、この必要性および他の必要性を扱う。
【特許文献１】米国特許第５，１８３，８１２号明細書
【非特許文献１】ＤａａｒおよびＲｉｃｈｍａｎ、ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ、（２００５年）２１：３４３〜５７
【非特許文献２】Ｒａｉｎｅｓら、Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｎｕｒｓｅｓ  ＡＩＤＳ  Ｃａｒｅ（２００５年）１６：３５
【非特許文献３】Ｃｈｅｒｒｙら、Ｓｅｘ  Ｈｅａｌｔｈ（２００５年）２：１
【非特許文献４】Ａｂｒｅｓｃｉａら、Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．（２００５年）１１：３６９７
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、それを必要とする個体への、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩの組み合わせの同時送達のための方法および組成物を提供し、ここで活性作用物質は、それらの組み合わされた抗ウイルス活性が相乗的であるような割合および量で送達される。
【０００７】
したがって、第一の態様において、本発明は、ウイルスに感染した患者におけるウイルス量またはウイルス価を減少させる方法を提供し、この方法は、ある量のチオホスホノギ酸およびある量の１つ以上のヌクレオシドもしくはヌクレオチド逆転写酵素インヒビター、またはそれらの混合物を患者に経口同時投与することを含み、ここで同時投与される量は、ウイルス量またはウイルス価を相乗的に低下させるのに十分であり、チオホスホノギ酸は、１日あたり２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で経口投与される。
【０００８】
別の態様において、本発明は、ＮＲＴＩに対するウイルスの耐性を予防または遅延させる方法を提供し、この方法は、ある量のチオホスホノギ酸およびある量の１つ以上のヌクレオシドもしくはヌクレオチド逆転写酵素インヒビター、またはそれらの混合物を、患者に経口同時投与することを含み、ここで同時投与される量は、ウイルス量またはウイルス価を相乗的に低下させるのに十分であり、チオホスホノギ酸は、１日あたり２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で経口投与される。
【０００９】
チオホスホノギ酸は、本方法に従って、および本組成物中で、ＮＲＴＩなしでチオホスホノギ酸が投与される場合の投薬量と比較して約１０倍〜１００倍の間小さい投薬量で、効果的に投与することができる。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸は、ＮＲＴＩなしでチオホスホノギ酸が投与される場合の投薬量と比較して２００倍、または３００倍小さい投薬量で、本発明に従って投与される。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸は、１日あたり２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で投与される。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸は、１日あたり１５ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇ〜３５ｍｇ／ｋｇの間の投薬量範囲で投与される。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸は、１日あたり約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。
【００１０】
チオホスホノギ酸とともに同時投与される場合、ＮＲＴＩは、チオホスホノギ酸なしでＮＲＴＩが投与される場合の投薬量と比較して約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍小さい投薬量で、効果的に投与することができる。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターが同時投与される。ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターは、例えば、ジドブジン、ジダノシン（ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ）、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、アバカビル（ａｂａｃａｖｉｒ）、エムトリシタビン（ｅｍｔｒｉｃｉｔａｂｉｎｅ）、ザルシタビン、デキセルブシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ＡＶＸ７５４、ＢＣＨ−１８９、ホスファジド、ラシビール、ＳＰ１０９３Ｖ、スタンピジン、またはそれらの混合物であってもよい。いくつかの実施形態において、ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターは、ジドブジンである。
【００１２】
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターが同時投与される。いくつかの実施形態において、ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、テノホビル、アデホビル、またはそれらの混合物である。
【００１３】
いくつかの実施形態において、ウイルスはレトロウイルスである。レトロウイルスは、レンチウイルスであってもよい。レンチウイルスは、例えば、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＢＩＶ（ウシ免疫不全ウイルス）、ＣＡＥＶ（ヤギ関節炎脳炎ウイルス）、ＥＩＡＶ（ウマ伝染性貧血ウイルス）、ＦＩＶ（ネコ免疫不全ウイルス）、ＧＬＶ（ヤギ白質脳炎ウイルス）、ＪＤＶ（ジェブラナ）、ＭＶＶ（マエディ／ビスナウイルス）、ＰＰＶ（進行性肺炎ウイルス）、ＳＩＶ（サル免疫不全ウイルス）であってもよい。いくつかの実施形態において、レンチウイルスはＴ細胞リンパ球向性ウイルス、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である。ＨＩＶは、１型（ＨＩＶ−１）または２型（ＨＩＶ−２）であってもよい。ＨＩＶは、例えばＨＩＶ−１：ＡＲＶ−２／ＳＦ−２、ＨＩＶ−１：ＢＲＵ（ＬＡＩ）、ＨＩＶ−１：ＣＡＭ１、ＨＩＶ−１：ＥＬＩ、ＨＩＶ−１：ＨＸＢ２、ＨＩＶ−１：ＩＩＩＢ，ＨＩＶ−１：ＭＡＬ、ＨＩＶ−１：ＭＮ、ＨＩＶ−１：ＮＤＫ、ＨＩＶ−１：ＰＶ２２、ＨＩＶ−１：ＲＦ、ＨＩＶ−１：Ｕ４５５、ＨＩＶ−１：Ｚ２を含む、任意のＨＩＶクレード（例えばＡ〜Ｇ）、菌株またはバリアント由来であってもよい。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ウイルスはヘルペスウイルスである。ヘルペスウイルスは、アルファヘルペスウイルス（Ａｌｐｈａｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、例えば、シンプレックスウイルス（Ｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）（例えば、ヒトヘルペスウイルス１）またはバリセロウイルス（Ｖａｒｉｃｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）（例えば、ヒトヘルペスウイルス３または水痘帯状疱疹ウイルス１（ＶＳＶ１））であってもよい。ヘルペスウイルスは、ベータヘルペスウイルス（Ｂｅｔａｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、例えばサイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）（例えば、ヒトヘルペスウイルス５）またはロゼオロウイルス（Ｒｏｓｅｏｌｏｖｉｒｕｓ）（例えば、ヒトヘルペスウイルス６）であってもよい。いくつかの実施形態において、ヘルペスウイルスは、ガンマヘルペスウイルス（Ｇａｍｍａｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、例えば、リンホクリプトウイルス（Ｌｙｍｐｈｏｃｒｙｐｔｏｖｉｒｕｓ）（例えば、ヒトヘルペスウイルス４またはエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ））またはラジノウイルス（Ｒｈａｄｉｎｏｖｉｒｕｓ）（例えば、アテリン（Ａｔｅｌｉｎｅ）ヘルペスウイル２）である。
【００１５】
適当な場合、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩは、同時に、または連続的に同時投与することができる。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩは、組み合わされた製剤中で同時に投与される。
【００１６】
チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩは、独立して、経口または非経口投与することができる。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩの少なくとも１つが経口投与される。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩの少なくとも１つが非経口、例えば静脈内投与される。経口製剤は、固体（例えば、錠剤、カプセル剤、散剤）または液体（例えばシロップ剤）であってもよい。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、組み合わせた経口製剤中で同時に投与される。
【００１７】
本発明はさらに、ウイルスに感染した患者におけるウイルス量またはウイルス価を減少させるための経口薬剤を提供し、ここで薬剤は、ある量のチオホスホノギ酸およびある量のＮＲＴＩを含む、組み合わされた製剤であり、ここでチオホスホノギ酸およびＮＲＴＩは、ウイルス量またはウイルス価を相乗的に低下させるのに十分な量で存在し、薬剤は、組み合わされた製剤あたり、１５０ｍｇ〜７５０ｍｇの間のチオホスホノギ酸を含む。
【００１８】
本発明はさらに、ウイルス感染の治療的および／または予防的処置のための薬剤の製造におけるチオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの使用を提供し、ここでチオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、ウイルス量またはウイルス価を相乗的に低下させるのに十分な量で存在し、薬剤は、組み合わされた製剤あたり、１５０ｍｇ〜７５０ｍｇの間のチオホスホノギ酸を含む。
【００１９】
本発明はさらに、ウイルス感染を治療または予防するための使用準備済みの薬物形態の抗ウイルス剤の調製におけるチオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの使用を提供し、ここでチオホスホノギ酸およびヌクレオシドまたはヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、ウイルス量またはウイルス価を相乗的に低下させるのに十分な量で存在し、使用準備済みの薬物形態は、形態あたり１５０ｍｇ〜７５０ｍｇの間のチオホスホノギ酸を含む。
【００２０】
組成物および使用のための好ましい実施形態は、上述されたものと同じである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
１．導入
チオホスホノギ酸（ＴＰＦＡ）は、広域性抗ウイルス治療用ホスカルネット（ホスホノギ酸、ＰＦＡ）の硫黄類似体である。ホスカルネットは、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター（ＮＮＲＴＩ）であり、ＮＮＲＴＩ薬物の中で特有の作用の様式を有するピロリン酸類似体である。ホスカルネットは、ピロリン酸酵素結合部位に対する競合的結合によって、ウイルスＤＮＡポリメラーゼによるピロリン酸交換を阻害する。ホスカルネット、およびチオビルＴＭ等のその類似体は、ウイルスＤＮＡポリメラーゼによって触媒されるＤＮＡ鎖伸長を阻害し、ＨＩＶを含む、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルス両方のウイルス複製の阻害につながる。
【００２２】
インビトロ抗ＨＩＶ効能研究から、チオビルＴＭがホスカルネットにおよそ等しい抗ウイルス活性を有することが示される。さらに、チオビルＴＭは、いくつかの複雑なＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩ耐性株に対して抗ウイルス活性を有する。調査した全てのＨＩＶ−１バリアントは、チオビルＴＭおよびホスカルネットに感受性があった。ほとんどの場合、ＨＩＶ−１バリアントは、野生型ウイルスと比較して、チオビルＴＭに過感受性であった。
【００２３】
チオビルＴＭ＋ＮｓＲＴＩまたはＮｔＲＴＩ薬物の併用療法を調査する効能研究から、相乗的抗ウイルス活性が示される。したがって、チオビルＴＭをヌクレオシドおよびヌクレオチド逆転写酵素インヒビターと組み合わせる、適した投薬計画を可能にして、チオビルＴＭの投薬量を減少させることができる。例えば、ジドブジン（ＡＺＴ）と組み合わせたチオビルＴＭは、強力な相乗的活性を生じるが、ホスカルネットおよびジドブジンの組み合わせは、緩やかな相乗的〜拮抗する性質しか示さない。
【００２４】
チオビルＴＭの耐性プロフィールは、ホスカルネットのように、ＮＮＲＴＩの中で特有であり、この薬物クラスの作用の独特の作用の機序を反映している。インビトロでチオビルＴＭに対する耐性について選択されたウイルスは、ＡＺＴに対して過感受性を示す。したがって、チオビルＴＭは、ＡＺＴ耐性患者において、ＡＺＴの使用を再び可能にすることができる。さらに、チオビルＴＭおよびＡＺＴの両方に対して同時耐性のウイルスについて選択する全ての試みは、成功しなかった。このことから、チオビルＴＭおよびＡＺＴの耐性プロフィールが相互排他的であることが示唆される（すなわち、これらは、互いの競合的インヒビターである）。同時に、このデータから、チオビルＴＭおよびＡＺＴでの併用療法に対する有利な支持が提供される。
【００２５】
２．定義
用語「レトロウイルス」は、それらの遺伝物質をＲＮＡの形態で有し、逆転写酵素を使用してそれらのＲＮＡを宿主細胞中でＤＮＡに翻訳するレトロウイルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）科（分類コード６１）の、エンベロープを有するウイルスのクラスをいう（Ｃｏｆｆｉｎら、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ、（１９９７年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓも参照）。レトロウイルスの属としては、アルファレトロウイルス（Ａｌｐｈａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、ベータレトロウイルス（Ｂｅｔａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、ガンマレトロウイルス（Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、デルタレトロウイルス（Ｄｅｌｔａｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、イプシロンレトロウイルス（Ｅｐｓｉｌｏｎｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、およびレンチウイルスが挙げられる。ウイルス分類学は、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＩＣＴＶｄｂ／ＩＣＴＶｄＢでインターネット上に記載されている。
【００２６】
用語「ヘルペスウイルス」は、ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）科（ウイルス分類コード３１）内の、エンベロープを有するＤＮＡウイルスをいう。
【００２７】
用語「ウイルス量」または「ウイルス価」は、互換可能に、感染している個体由来の体液の試料（例えば、血液、血清、血漿、唾液、尿）中のウイルス粒子の数をいう。
【００２８】
用語「相乗的」または「相乗効果」は、互換可能に、２つ以上の作用物質の、それらの組み合わされた効果がそれらの個々の効果の合計よりも大きい、相互作用をいう。相乗的薬物相互作用は、半有効原理を用いて測定することができ（ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４年）Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ  ２２：２７頁およびＳｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、ＣｈｏｕおよびＲｉｄｅｏｕｔ編、１９９６年、Ａｃａｄｅｍｉｃ、６１〜１０２頁参照）、コンピュータプログラムＣａｌｃｕｓｙｎを用いた組み合わせ指数によって定量的に測定することができる（ＣｈｏｕおよびＨａｙｂａｌｌ、１９９６年、Ｂｉｏｓｏｆｔ、マサチューセッツ州ケンブリッジ）。また、ＲｅｙｎｏｌｄｓおよびＭａｕｒｅｒ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１１０巻中の第１４章、Ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ、第１巻：Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｓｓａｙｓ、Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ編、２００５年、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓも参照のこと。組み合わせ指数（ＣＩ）は、以下のように相乗効果、合計および拮抗作用を定量する。ＣＩ＜１（相乗効果）、ＣＩ＝１（合計）、ＣＩ＞１（拮抗作用）。０．７〜０．９のＣＩ値は、中等度〜わずかな相乗効果を示す。０３〜０．７のＣＩ値は、相乗効果を示す。０．１〜０．３のＣＩ値は、強力な相乗効果を示す。０．１未満のＣＩ値は、非常に強力な相乗効果を示す。
【００２９】
語句「ウイルス量またはウイルス価を相乗的に低下させるのに十分」は、２つ以上の活性作用物質の、それらの組み合わされた効果が、個々の活性作用物質の合計よりも大きくウイルス価またはウイルス量を低下させる量および割合をいう。ウイルス量に対する相乗効果は、本明細書中に記載される試験を含む当該分野で公知の試験（例えば、ＭＡＧＩアッセイ、ｐ２４アッセイ）を用いて、インビトロまたはインビボで測定される。相乗的に稼働してウイルス量を低下させるのに十分な２つ以上の活性作用物質の量および割合は、投与される量によって、または体液（例えば、血液、血清、血漿、唾液、尿）中の活性作用物質の濃度によって、測定することができる。
【００３０】
用語「チオホスホノギ酸」または「ＴＰＦＡ」または「チオビルＴＭ」は、互換可能に、以下の化学式（ＨＯ）２Ｐ（Ｓ）ＣＯＯＨ
【００３１】
【化１】
2008533040.tif 000003
を有するホスホノギ酸のチオ類似体をいう。
【００３２】
用語「ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター」または「ＮｓＲＴＩ」は、ウイルス逆転写酵素またはポリメラーゼ酵素を阻害し、したがってウイルスが宿主細胞に感染する能力を阻害する、ヌクレオシドの化学的類似体である薬物のクラスのメンバーをいう。ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターは、リボヌクレオシドまたはデオキシリボヌクレオシドの化学的類似体であってもよい。
【００３３】
用語「ヌクレオチド逆転写酵素インヒビター」または「ＮｔＲＴＩ」は、ウイルス逆転写酵素またはポリメラーゼ酵素を阻害し、したがってウイルスが宿主細胞に感染する能力を阻害する、ヌクレオチド（ヌクレオシド５’−一リン酸）の化学的類似体である薬物のクラスのメンバーをいう。ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドの化学的類似体であってもよい。
【００３４】
用語「非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター」または「ＮＮＲＴＩ」は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドの化学的類似体でない、ウイルス逆転写酵素またはポリメラーゼ酵素をアロステリック阻害する、薬物のクラスをいう。ＮＮＲＴＩは、ＮＲＴＩの結合部位、すなわち酵素の活性部位と別個の部位で、逆転写酵素またはポリメラーゼに結合する。
【００３５】
用語「同時投与する」は、個体の血液中の、２つの活性作用物質の同時存在をいう。同時投与される活性作用物質は、同時に、または連続的に、送達することができる。
【００３６】
３．組成物
本発明は、有効量のチオホスホノギ酸および有効量の１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの混合物を、活性作用物質の量および割合によって個体におけるウイルス量が相乗的に低下するように含む、医薬組成物を提供する。
【００３７】
ｉ．活性作用物質
１．チオホスホノギ酸
本明細書中で使用される場合、チオホスホノギ酸（ＴＰＦＡ）または「チオビルＴＭ」は、以下の化学式
【００３８】
【化２】
2008533040.tif 000004
を有する活性作用物質をいう。
【００３９】
チオビルを含む、チオホスフェート、およびそれらの合成のための方法は、例えば、米国特許第５，０７２，０３２号、第５，１８３，８１２号、第６，１４７，２４４号および第６，２８４，９０９号に開示されており、その全内容は、全ての目的のために、参照によって本明細書中に援用される。チオホスホノギ酸はまた、商業的サービス提供業者、例えばＮａｔｌａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｒｐ．、ノースカロライナ州モリスビル、Ｃｕｓｔｏｍ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｉｎｃ．、フロリダ州デルレイビーチ、Ｄ  Ｐｈａｒｍ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ニュージャージー州プリンストンおよびＣｈｅｍｓｈｏｐ、オランダ、ウェールトを通して、合成することができる。
【００４０】
２．ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター
任意のヌクレオシド逆転写酵素インヒビター（ＮｓＲＴＩ）、またはそれらの混合物が、本方法および組成物において使用を提供する。例示されるＮｓＲＴＩとしては、限定することなく、ジドブジン（ＡＺＴ）、ジダノシン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、ザルシタビン、デキセルブシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ＡＶＸ７５４、ＢＣＨ−１８９、ホスファジド、ラシビール、ＳＰ１０９３Ｖ、スタンピジン、ホスホノビル、およびそれらの組み合わせが挙げられる。当業者は、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミンおよびウリジンの他の類似物がＮｓＲＴＩとして機能することを認識しよう。さらなる有益なＮｓＲＴＩは、例えば、米国特許第６，５１４，９７９号、第６，５０３，８９０号、第６，９９５，２８３号、ならびに米国特許公開第２００４／０２３５８６９号および第２００４／０１２７４３６号に開示されており、その開示は、全ての目的のために、それらの全体が参照によって本明細書中に援用される。
【００４１】
ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターは、逆転写酵素（ＲＴ）の酵素活性を阻害するその機能によって測定することができる。逆転写酵素の阻害の測定のためのアッセイは当該分野で周知である。例えば、あるアッセイにおいて、逆転写酵素活性は、候補ＲＴインヒビターの存在下または非存在下でイオン交換ろ紙ディスクに吸着させた放射性標識核酸生成物の形成をモニタリングすることによって測定される。（例えば、Ｃａｎａｒｄら、（１９９９年）２７４：３５７６８頁、Ｍｅｙｅｒら、（２０００年）ＥＭＢＯ  Ｊ  １９：３５２０頁、Ｓｅｌｍｉら、（２００１年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：１３９６５頁、およびＤｅｖａｌら、（２００４年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：２５４８９頁参照）。
【００４２】
３．ヌクレオチド逆転写酵素インヒビター
任意のヌクレオチド逆転写酵素インヒビター（ＮｔＲＴＩ）、またはその混合物が、本方法および組成物において使用を提供する。例示的なＮｔＲＴＩとしては、限定することなく、テノホビル、アデホビル、およびそれらの組み合わせが挙げられる。当業者は、アデノシン５’−一リン酸（ＡＭＰ）、グアノシン５’−一リン酸（ＧＭＰ）、シチジン５’−一リン酸（ＣＭＰ）、チミン５’−一リン酸（ｄＴＭＰ）およびウリジン５’−一リン酸（ＵＭＰ）の他の類似物がＮｔＲＴＩとして機能することを認識しよう。さらに、上述のＮｓＲＴＩは、ヌクレオチド形態であってもよい。さらなる有益なＮｔＲＴＩは、例えば、米国特許公開第２００４／０１２７４３６号に開示されており、その開示は、全ての目的のために、それらの全体が参照によって本明細書中に援用される。
【００４３】
ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、例えば上述のアッセイを用いて、逆転写酵素（ＲＴ）の酵素活性を阻害するその機能によって測定することができる。
【００４４】
４．他の活性作用物質
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせを、ウイルス感染に対する治療において使用されるさらなる有効成分とともに投与することができる。例えば、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、プロテアーゼインヒビターとともに、または１つ以上のさらなるＮＮＲＴＩとともに、ＨＩＶの治療における高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）の一部として同時投与することができる。
【００４５】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、ジドブジン（ＡＺＴ）、ジダノシン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、ザルシタビン、デキセルブシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ＡＶＸ７５４、ＢＣＨ−１８９、ホスファジド、ラシビール、ＳＰ１０９３Ｖ、スタンピジン、ホスホノビル、イドクスウリジンからなる群より選択される１つ以上のヌクレオシド逆転写酵素インヒビターを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、テノホビルおよびアデホビルからなる群より選択される１つ以上のヌクレオチド逆転写酵素インヒビターを含む。
【００４６】
本発明のチオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、治療的投与のための種々の製剤に組み込むことができる。より具体的には、本明細書中の組み合わせは、適当な薬学的に許容され得る担体または希釈剤との製剤化によって、ともに、または別々に、医薬組成物に製剤化することができ、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、糖衣錠、ゲル、スラリー、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤およびエーロゾル等の固体、半固体、液体または気体の形態の調製物に製剤化することができる。このように、チオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせの投与は、経口、口内、非経口、静脈内、皮内（例えば、皮下、筋肉内）、局所、経皮等の投与を含む、種々の方法によって達成することができる。さらに、化合物は、例えばデポーまたは徐放性製剤において、全身的よりむしろ局所的様式で投与することができる。好ましい実施形態において、本発明は、経口送達（例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、液体、シロップ剤等）のための、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターから構成される医薬組成物を提供する。
【００４７】
本発明における使用のための適した製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版および第２１版、前出に見ることができる。本明細書中に記載される医薬組成物は、当業者に公知の様式で、すなわち従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製生産、すりつぶし、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスによって、製造することができる。以下の方法および賦形剤は単なる例示であって、決して限定しない。
【００４８】
ある好ましい実施形態において、チオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、徐放性、制御放出、持続放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）、持続放出（ｔｉｍｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）または遅延放出製剤における送達のために、例えば治療剤を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスにおいて、調製される。種々の型の徐放性物質が確立されており、当業者に周知である。現在の持続放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）製剤としては、フィルムコート錠、多粒子またはペレットシステム、親水性または親油性物質を用いたマトリックス技術、および増孔賦形剤を用いたワックスベースの錠剤が挙げられる（例えば、Ｈｕａｎｇら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２９：７９頁（２００３年）、Ｐｅａｒｎｃｈｏｂら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２９：９２５頁（２００３年）、Ｍａｇｇｉら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．５５：９９頁（２００３年）、Ｋｈａｎｖｉｌｋａｒら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．２２８：６０１頁（２００２年）、およびＳｃｈｍｉｄｔら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２１６：９頁（２００１年）参照）。徐放性送達系は、それらの設計によって、数時間または数日間にわたって、例えば４、６、８、１０、１２、１６、２０、２４時間またはそれより長くにわたって、化合物を放出することができる。例えば、徐放性製剤は、天然に存在するポリマーまたは合成ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の高分子ビニルピロリドン；カルボキシビニル親水性ポリマー；メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース等の疎水性および／または親水性ハイドロコロイド；ならびにカルボキシポリメチレンを用いて、調製することができる。
【００４９】
徐放性および持続放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）製剤はまた、二酸化チタン、二酸化ケイ素、酸化亜鉛、および粘土等の無機物等の天然の成分を用いて調製することができる（参照によって本明細書中に援用される米国特許第６，６３８，５２１号参照）。本発明のチオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせの送達において使用することができる、例示される持続放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）製剤としては、そのそれぞれが参照によって本明細書中に援用される、米国特許第６，６３５，６８０号、第６，６２４，２００号、第６，６１３，３６１号、第６，６１３，３５８号、第６，５９６，３０８号、第６，５８９，５６３号、第６，５６２，３７５号、第６，５４８，０８４号、第６，５４１，０２０号、第６，５３７，５７９号、第６，５２８，０８０号および第６，５２４，６２１号に記載されているものが挙げられる。特に興味深い制御放出製剤としては、そのそれぞれが参照によって本明細書中に援用される、米国特許第６，６０７，７５１号、第６，５９９，５２９号、第６，６５９，４６３号、第６，５６５，８８３号、第６，４８２，４４０号、第６，４０３，５９７号、第６，３１９，９１９号、第６，１５０，３５４号、第６，０８０，７３６号、第５，６７２，３５６号、第５，４７２，７０４号、第５，４４５，８２９号、第５，３１２，８１７号および第５，２９６，４８３号に記載されているものが挙げられる。当業者は、他の適用可能な徐放性製剤を容易に認識しよう。
【００５０】
経口投与のために、チオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、当業者周知の薬学的に許容され得る担体と組み合わせることによって、容易に製剤化することができる。かかる担体によって、化合物は、治療される患者による経口摂取のための、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、乳濁液、親油性および親水性懸濁液、液体、ゲル、シロップ剤、スラリー、懸濁液等として製剤化できるようになる。経口使用のための医薬調製物は、化合物を固体賦形剤と混合すること、得られた混合物を場合により粉砕すること、および適した助剤を加えた後、顆粒の混合物を処理して、所望により、錠剤または糖衣錠の核を得ることによって、得ることができる。適した賦形剤は、具体的には、乳糖、ショ糖、マンニトール、またはソルビトールを含む糖；例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース調製物、ならびに／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の、充填剤である。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、もしくはアルギン酸ナトリウム等のその塩等の、崩壊剤を加えてもよい。
【００５１】
経口使用することができる医薬調製物としては、ゼラチンでできた押し込み型のカプセル剤、ならびにゼラチン、およびグリセロールまたはソルビトール等の可塑剤でできた軟らかい密閉カプセル剤が挙げられる。押し込み型のカプセル剤は、乳糖等の充填剤、デンプン等の結合剤、および／または滑石もしくはステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、ならびに場合により安定剤との混合物中に、有効成分を含んでもよい。軟カプセル剤において、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール等の、適した液体中に溶解または浮遊していてもよい。また、安定剤を加えてもよい。経口投与のための全ての製剤は、かかる投与に適した投薬量であるべきである。
【００５２】
糖衣錠の核に、適したコーティングが供給される。この目的のために、場合によりアラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適した有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい、濃縮糖溶液を使用することができる。同定のため、または異なる組み合わせの活性化合物用量を特徴付けるために、染料または色素を錠剤または糖衣錠コーティングに加えてもよい。
【００５３】
化合物は、注射による、例えばボーラス注射または持続注入による非経口投与のために、製剤化することができる。注射のために、チオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせを、それらを植物性または他の同様の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコール等の水性または非水溶媒中：および所望により、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤および保存薬等の従来の添加剤とともに、溶解すること、懸濁すること、または乳化することによって、調製物に製剤化することができる。好ましくは、本発明の組み合わせは、水溶液中、好ましくはハンクス液、リンガー液、または生理学的食塩水バッファー等の生理学的に適合性のあるバッファー中で、製剤化することができる。注射のための製剤は、単位投薬形態で、例えばアンプル中または複数用量容器中で、加えられた保存薬とともに、提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中で、懸濁液、溶液または乳濁液の形態をとることができ、懸濁剤、安定剤および／または分散剤等の製剤化剤を含むことができる。
【００５４】
非経口投与のための医薬製剤としては、水溶性形態での活性化合物の水溶液が挙げられる。また、活性化合物の懸濁液を、適当な油性注射懸濁液として調製することができる。適した親油性溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油等の脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン等の、懸濁液の粘度を増大させる物質を含んでもよい。場合により、懸濁液はまた、適した安定剤または化合物の可溶性を増大させる作用物質を含んで、高度に濃縮された溶液の調製を可能にすることができる。あるいは、有効成分は、使用の前の、適したビヒクル、例えば無菌パイロジェンフリー水での構成のために、粉末形態であってもよい。
【００５５】
局所投与のために、作用物質は、軟膏、クリーム、軟膏剤、散剤およびゲルに製剤化される。
【００５６】
全身的投与はまた、経粘膜または経皮手段によることができる。経粘膜または経皮投与のために、浸透される障壁に適した浸透剤が製剤中で使用される。ある実施形態において、経皮送達剤は、例えば、ＤＭＳＯ、尿素、１−メチル−２−ピロリドン、オレイン酸、またはテルペン（例えば、ｌ−メントール、ｄ−リモネン、ＲＳ−（＋／−）−β−シトロネロール、ゲラニオール）であってもよい。さらなる経皮浸透増強剤は、例えば、Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ、ＳｍｉｔｈおよびＭａｉｂａｃｈ編、第２版、２００５年、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。経皮送達系としては、例えば、貼付剤を挙げることができる。経粘膜投与のために、浸透される障壁に適した浸透剤が製剤中で使用される。かかる浸透剤は、一般に、当該分野で公知である。本発明において使用を提供することができる、例示される経皮送達製剤としては、そのそれぞれが参照によって本明細書中に援用される、米国特許第６，５８９，５４９号、第６，５４４，５４８号、第６，５１７，８６４号、第６，５１２，０１０号、第６，４６５，００６号、第６，３７９，６９６号、第６，３１２，７１７号および第６，３１０，１７７号に記載されているものが挙げられる。
【００５７】
口内投与のために、組成物は、従来の様式によって製剤化される錠剤またはロゼンジの形態をとってもよい。
【００５８】
これまでに記載されている製剤に加えて、本発明のチオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせはまた、デポー調製物としても製剤化することができる。かかる長時間作用性製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）によって、または筋肉内注射によって、投与することができる。したがって、例えば、化合物は、適したポリマー物質または疎水性物質（例えば許容され得る油中の乳濁液として）もしくはイオン交換樹脂とともに、または難溶性の誘導体として、例えば難溶性の塩として、製剤化することができる。
【００５９】
医薬組成物はまた、適した固体またはゲル相担体または賦形剤を含んでもよい。かかる担体または賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコール等のポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
本発明における使用に適した医薬組成物としては、治療有効量で有効成分が含まれる、組成物が挙げられる。投与される組成物の量は、勿論、治療される被験体、被験体の体重、苦痛の重症度、投与の様式および処方する医師の判断による。有効量の決定は、特に本明細書中に提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、チオホスホノギ酸およびヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせの、効果的または有効な量は、まず低用量の一方または両方の活性作用物質を投与すること、および、次いで減少したウイルス価の所望の効果が、毒性の副作用が最小限またはなしで、治療される被験体において観察されるまで、投与される用量または投薬量を漸増的に増大させることによって決定される。本発明の組み合わせの投与のための適当な用量および投薬スケジュールを決定するための適用可能な方法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｌｉｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第１１版、前出、ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版および第２１版、前出に記載されている。
【００６１】
投薬量および間隔は、個々に調節して、治療効果を維持するのに十分な活性化合物の血漿レベルを提供することができる。好ましくは、単一の日用量を投与することによって、治療上有効な血清レベルが達成されるが、効果的な複数回の日用量スケジュールが本発明に含まれる。局所投与または選択的取り込みの場合、薬物の有効な局所濃度は血漿濃度と関連がないことがある。当業者は、過度な実験なしに、治療上有効な局所投薬量を最適化することができよう。
【００６２】
４．方法
ａ．チオホスホノギ酸ならびにヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの同時投与
本方法は、チオホスホノギ酸（ＴＰＦＡ）および１つ以上のヌクレオチド／ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター（ＮｔＲＴＩおよび／またはＮｓＲＴＩ）の同時投与に関する。チオホスホノギ酸ならびにＮｔＲＴＩおよび／またはＮｓＲＴＩは、チオホスホノギ酸ならびにＮｔＲＴＩおよび／またはＮｓＲＴＩの両方が血液中に存在する限りは、同時または連続的に送達することができる。
【００６３】
ｉ．投与の経路
上述のように、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターを、任意の適した投与の経路によって、独立して同時投与することができる。有効成分は、必要に応じて、同じまたは異なる投与の経路によって投与することができる。いくつかの実施形態において、有効成分の少なくとも１つが経口投与される。いくつかの実施形態において、有効成分の組み合わせが同時に経口投与される。いくつかの実施形態において、有効成分の少なくとも１つが非経口、例えば静脈内、筋肉内、皮下、局所、膣内、経直腸、鼻腔内、くも膜下腔内、眼内投与される。
【００６４】
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせを、被験体、例えばヒト患者、家畜（例えば、ネコまたはイヌ）、農業用動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、またはヤギ）に、治療有効量、例えば相乗的にウイルス量またはウイルス価の所望の減少を遂げるのに有効な用量で、それらの薬学的に許容され得る塩の形態、または化合物が適した担体もしくは賦形剤と混合されている医薬組成物の形態で、独立して、またはともに、投与することができる。
【００６５】
ｉｉ．投薬
上述のように、当業者は、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの適当な用量が、限定することなく、選択される投与の経路、患者の年齢、体重および予後、疾患の進行等を含む、いくつかの要因によることを認識しよう。チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの投薬および製剤化のための一般的な考察は、独立して、または組み合わせて、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｇｏｏｄｍａｎら編、第１１版、２００５年、ＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版および第２１版、ＧａｎｎａｒｏおよびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ編、Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００３年および２００５年）に見ることができる。
【００６６】
チオホスホノギ酸は、１日あたり約２ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量で投与することができるが、用量は、投与の経路によって、より多いか、または少なくてもよい。例えば、用量は、ＴＰＦＡが静脈内投与される場合、より少なくてもよい。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸は、１日あたり約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇの量で投与される。いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸は、１日あたり約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０ｍｇ／ｋｇ、または１日あたり２〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲内の任意の整数の量で、投与される。
【００６７】
１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、ＦＤＡによって推奨されているものに従った用量で投与することができるが、用量はより少なくてもよい。ヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの推奨される用量は、例えば、ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｏｂ／ｄｅｆａｕｌｔ．ｈｔｍでインターネット上で利用可能なＦＤＡオレンジブックに見ることができる。例えば、推奨されるヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターのための推奨される経口用量を下記の表に示す。ヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの錠剤またはカプセル剤は、必要に応じて、１日あたり１、２、３、４または５回投与することができる。
【００６８】
【化３】
2008533040.tif 000005
いくつかの実施形態において、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの少なくとも１つが、個々の活性作用物質の治療量以下の用量で投与される。治療量以下の用量は、本明細書中に記載されるアッセイの１つを用いてインビボまたはインビトロで測定した場合に抗ウイルス効果を生じるのに十分な、個々の活性作用物質の量をいう。治療量以下の用量はまた、推奨される活性作用物質の最小の基準用量の８０％以下の投与量をいう。基準用量は、例えばＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ、前出中、およびＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、２００６年、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ中で、当業者にとって利用可能である。理論に拘束されることなく、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせの相乗的抗ウイルス効果によって、治療量以下の用量の、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの少なくとも１つの投与を可能にすることができる。治療量以下の用量のチオホスホノギ酸またはヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの投与は、個々には有意な抗ウイルス効果を生じない。しかしながら、治療量以下の用量の、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターと組み合わせた少なくとも１つの活性作用物質の投与によって、より低い副作用のリスクで、抗ウイルス効果を生じることができる。
【００６９】
チオホスホノギ酸および／または１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの投薬量はまた、減量指数（ＤＲＩ）に関して表すことができる。減量指数は、同じ効果レベルを達成するのに必要な単一の作用物質の濃度と比較した、相乗的組み合わせで投与された場合に各薬物について可能な、倍数減量の測定である。チオホスホノギ酸と１つ以上のＮＲＴＩとの間の相乗的抗ウイルス効果によって、少なくとも約１０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、またはそれより大きい、チオホスホノギ酸についてのＤＲＩが提供される。チオホスホノギ酸と１つ以上のＮＲＴＩとの間の相乗的抗ウイルス効果によって、少なくとも約２、５、１０、２０、５０、１００、またはそれより大きい、１つ以上のＮＲＴＩについてのＤＲＩが提供される。
【００７０】
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、有効成分のモル比によって相乗的抗ウイルス効果が可能になる量で投与される。チオホスホノギ酸は、１つ以上のＮｓＲＴＩ／ＮｔＲＴＩに対して等モル比で（１：１モル比）投与することができる。チオホスホノギ酸は、１つ以上のＮｓＲＴＩ／ＮｔＲＴＩに対して、１０倍（１０：１）もしくは１００倍（１００：１）大きいモル比で、または約１：１〜約１００：１（ＴＰＦＡ：ＮＲＴＩ）、例えば１：１、５：１、１０：１、２０：１、５０：１、１００：１の任意のモル比で、投与することができる。
【００７１】
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、例えばＭＡＧＩアッセイ、ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭアッセイまたはｐ２４抗原捕捉アッセイにおいて測定される組み合わせ指数値（ＣＩ）が１．０未満である量で投与される。好ましくは、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、組み合わせ指数値が約０．９未満である量で投与される。より好ましくは、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせは、組み合わせ指数値が約０．６未満である量で投与される。
【００７２】
ｉｉｉ．スケジューリング
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、同時に、または独立して、必要に応じて、２４時間の間に１、２、３、４またはそれより多くの回投与することができる。ある実施形態において、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、同時に投与される。ある実施形態において、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、１日１回、例えば徐放性または遅延放出製剤中で、同時に投与される。ある実施形態において、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターは、１日複数回、例えば１日２、３、または４回、同時に投与される。
【００７３】
５．相乗的活性についてのアッセイ
以下のアッセイを用いて、チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせの相乗的抗ウイルス活性を測定することができる。
【００７４】
ａ．インビトロ
ウイルス価を相乗的に減少させるチオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせの量および割合を、インビトロアッセイを用いて測定することができる。
【００７５】
ｉ．ＭＡＧＩアッセイ
抗ウイルス活性を、ガラクトシダーゼ指標の多核活性化（ＭＡＧＩ）アッセイを用いて定量的に測定することができる。ＫｉｍｐｔｏｎおよびＥｍｅｒｍａｎ（１９９２年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．６６：２２３２頁を参照のこと。ウイルス転写要素（例えば、ＨＩＶ−１  ＬＴＲおよびＨＩＶ−１  Ｔａｔ）の制御下で核に局在化するよう修飾された標的細胞表面ウイルス受容体（例えばＣＤ４、ケモカイン受容体）およびβ−ガラクトシダーゼタンパク質を発現するレポーター構築物で安定してトランスフェクトされている標的細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えばＨｅＬａ細胞）。修飾されたβ−ガラクトシダーゼタンパク質の発現を稼働させるために、感染しているウイルスは、ウイルス転写要素（例えば、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ）を生成しなければならない。感染して、修飾されたβ−ガラクトシダーゼタンパク質の発現が誘導されている標的細胞の核は、青色に染まり、これは光学顕微鏡（例えば１００×倍率）を用いて容易に可視化することができる。ＭＡＧＩアッセイは、通常、感染の開始後２日目または３日目に読み取られる。青色の細胞の数は、接種材料中の感染性ウイルス粒子の数を示す。青色の核は、光学顕微鏡を用いて計数することができる。次いで、％阻害対ｌｏｇ１０薬物濃度のプロットから、５０％抑制濃度（ＩＣ５０）が決定される。
【００７６】
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオチド／ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターの相乗的抗ウイルス効果は、半有効原理（ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ、１９８４年、前出、ＣｈｏｕおよびＲｉｄｅｏｕｔ、１９９６年、前出、ならびにＲｅｙｎｏｌｄｓおよびＭａｕｒｅｒ、前出参照）を用いて測定することができ、組み合わせ指数（ＣＩ）によって定量的に測定することができる。１．０未満の組み合わせ指数値は、活性作用物質の間の相乗作用を示す。組み合わせ指数値は、以下のようにさらに等級分けすることができる。
【００７７】
【化４】
2008533040.tif 000006
ｉｉ．ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭアッセイ
抗ウイルス活性はまた、ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭアッセイを用いて定量的に測定することができる。ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭアッセイは、核酸増幅を使用して、血漿からＨＩＶプロテアーゼおよび逆転写酵素核酸配列を導く。患者由来の配列をウイルスベクターに組み込んで、耐性試験ベクター（ＲＴＶ）を構築する。ウイルスベクターはまた、ＨＩＶエンベロープ遺伝子の欠失した部分内に挿入された、指標またはレポーター遺伝子（例えば、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ等）を含む。レポーター遺伝子は、ＲＴＶ中で強力なプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）の制御下にある。
【００７８】
ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭアッセイは、ＲＴＶ核酸配列を宿主細胞に導入すること、トランスフェクションの後ウイルス粒子を収集すること、およびウイルス粒子を使用して標的細胞を感染させることによって行われる。薬物感受性は、薬物の存在下で生成されたレポーター遺伝子活性と薬物の非存在下で生成されたレポーター遺伝子活性を比較することによって測定される。薬物の存在は、１つ以上の異なる濃度、例えば、いくつかの滴定された濃度であってもよい。
【００７９】
レポーター遺伝子活性によって測定されるウイルス複製のパーセント阻害を患者ウイルス（ＲＴＶ中）および薬物感受性標準ウイルスについての薬物のｌｏｇ１０濃度に対してプロットすることによって、データが分析される。得られた薬物感受性曲線を用いて、５０％（ＩＣ５０）によって、ウイルス複製を阻害するのに必要な薬物の濃度を計算する。薬物感受性標準ウイルスの曲線と比較してより高い薬物濃度への、患者阻害曲線の変化は、減少した薬物感受性として解釈される。薬物感受性標準ウイルスの曲線と比較してより低い薬物濃度への、患者阻害曲線の変化は、増大した薬物感受性として解釈される。ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭは、商業的サービス提供業者、例えばＭｏｎｏｇｒａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サウスサンフランシスコによって行うことができる。
【００８０】
１つ以上の活性作用物質の相乗作用は、上述のような組み合わせ指数値を用いて計算することができる。
【００８１】
ｉｉｉ．ｐ２４検出アッセイ
ウイルス価の減少はまた、ウイルスカプシドタンパク質（例えば、ＨＩＶ−１  ｐ２４）に特異的な抗体でのＥＬＩＳＡ捕捉アッセイを用いて測定することができる。ＨＩＶ−１  ｐ２４を測定するためのＥＬＩＳＡキットは、例えば、Ｚｅｐｔｏｍｅｔｒｉｘ、ニューヨーク州バッファロー、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ウェルズリー、およびＡａｌｔｏ  Ｂｉｏ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ、アイルランド、ダブリンから市販されている。
【００８２】
ｂ．インビボ
チオホスホノギ酸および１つ以上のヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素インヒビターの組み合わせによる相乗的ウイルス量減少はまた、インビボで測定することができる。ウイルス価は、患者由来の試料（例えば、血液、血清、血漿）から検出することができ、参照試料、例えばより早い時点で同じ患者から採取された試料と比較することができる。
【００８３】
本明細書中に記載される実施例および実施形態が例示目的のためだけであって、それらに照らして種々の変更または変化が当業者に示唆され、本願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが、理解される。本明細書中で引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、全ての目的のために、それらの全体が参照によって本明細書中に援用される。
【実施例】
【００８４】
以下の実施例は、特許請求される発明を制限するためでなく、説明するために提供される。
【００８５】
材料および方法
本明細書中に提供される実施例において、以下の材料および方法を用いた。
【００８６】
細胞系およびウイルス
１０％ウシ胎仔血清および５ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭ培地中で、ＭＡＧＩ細胞を維持した。１０％ウシ胎仔を含むＲＰＭＩ  １６４０培地中で、Ｈ９細胞を維持した。ＮＩＨ、ＮＩＡＩＤ、Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  ＡＩＤＳ、ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｒｏｇｒａｍを通して、ＨＩＶ−１ＩＩＩＢおよびＨＩＶ−１ＬＡＩを得た。ＨＩＶ−１ＬＡＩは、元々、Ｊｅａｎ−Ｍａｒｉｅ  Ｂｅｃｈｅｔ博士およびＬｕｃ  Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ博士、ＭＲＣ  ＡＩＤＳ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｐｒｏｇｒａｍｍｅの厚意によって寄贈された。ＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ／Ｈ９は、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｇａｌｌｏ博士から受け取った。ＨＩＶ−１ＩＩＩＢ、ＨＩＶ−１ＨＸＢ２、およびＨＩＶ−１ＬＡＩウイルスストックは、急性感染Ｈ９細胞から調製した。
【００８７】
薬物
チオホスホノギ酸（チオビルＴＭ）を、ｄｅＣＯＤＥ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ（イリノイ州レモント）で生成した。ホスカルネットを、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｃｈ（ミズーリ州セントルイス）から得た。アジドチミジン（「ＡＺＴ」）またはジドブジン（「レトロビル（Ｒｅｔｒｏｖｉｒ）」）静脈内注入を、Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｃｏｍｅ（ノースカロライナ州リサーチ・トライアングル・パーク）から得た。ＮＩＨ、ＮＩＡＩＤ、ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍを通じて、ネビラピンを得た：ネビラピン。
【００８８】
ＩＣ５０測定
ＭＡＧＩアッセイまたはＰｈｅｎｏｓｅｎｓｅＴＭアッセイのいずれかを用いて、野生型および抗ウイルス薬物耐性ＨＩＶを、抗ウイルス薬物に対する感受性について試験した。次いで、５０％抑制濃度、ＩＣ５０を、パーセント阻害対ｌｏｇ１０薬物濃度のプロットから決定する。
【００８９】
ＭＡＧＩアッセイ
ＭＡＧＩ細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含むＤＭＥＭ中、１２ウェルプレートのウェルあたりおよそ５×１０４個の細胞で播種し、５％ＣＯ２中、３７℃で一晩インキュベートした。種々の濃度で薬物を加え、およそ３０〜６０分間インキュベートした。４μｇ／ｍｌのポリブレンまたは６０μｇ／ｍｌのデキストランのいずれかの存在下で、ＨＩＶ−１  ＨＸＢ２またはＨＩＶ−１ＩＩＩＢのいずれかで細胞を感染させた。感染を４８時間継続させ、０．０５％グルタルアルデヒドを用いて細胞を固定した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、４ｍＭフェロシアン化カリウム、４ｍＭフェリシアン化カリウム、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２および０．８ｍｇ／ｍｌ  Ｘ−ｇａｌで染色した。１００×倍率で、顕微鏡下で青色の核を計数した。
【００９０】
Ｈ９感染およびｐ２４抗原捕捉アッセイ
ＲＰＭＩ＋１０％ウシ胎仔血清中、４μｇ／ｍｌのポリブレンおよび示される濃度の薬物で３０分間Ｈ９  Ｔ細胞を前処理した後、３７℃、５％ＣＯ２で２時間、感染効率（ＭＯＩ）０．１でウイルスの吸着を行った。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、新鮮な培地＋薬物に再懸濁した。３７℃、５％ＣＯ２でのインキュベーションを４〜６日間継続し、細胞を１２００ｒｐｍで遠心分離した。上清を除去し、ｐ２４を定量的抗原捕捉キット（Ｚｅｐｔｏｍｅｔｒｉｘ、ニューヨーク州バッファロー）によって検出した。
【００９１】
ＰｈｅｎｏｓｅｎｓｅＴＭアッセイ
全てのＰｈｅｎｏｓｅｎｓｅＴＭアッセイは、記載されているように（Ｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓら、（２０００年）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ４４：９２０頁）、Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃ，Ｉｎｃで行った。簡潔に述べると、野生型ＨＩＶ−１からエンベロープ遺伝子を欠失させ、ルシフェラーゼレポーターを強力なＣＭＶプロモーターの制御下に挿入する。組み換えウイルスＤＮＡ、および両種指向性マウス白血病ウイルス由来のエンベロープタンパク質を発現するベクターでの生成細胞のコトランスフェクションによって、ウイルスストックを生成する。偽型ウイルス粒子は複製欠損であり、１回の感染しか経ない。標的細胞でのルシフェラーゼ遺伝子の発現は、単回の感染に依存する。
【００９２】
薬物耐性バリアントの選択
薬物耐性バリアントを選択するために、１×１０６個のＨ９細胞を、３つの濃度のＡＺＴ（０．５、１および２μＭ）、ネビラピン（０．５、１および２μＭ）、ホスカルネット（２５および５０μＭ）およびチオビルＴＭ（２５および５０μＭ）で２時間前処理した後、ＨＩＶＩＩＩＢまたはＨＩＶＬＡＩの０．１のＭＯＩでの感染を行った。感染の７日後に細胞変性効果および少なくとも１００倍のｐ２４レベルの増大を示した、最も高いレベルの薬物を有した培養物を採取し、上清を使用して新鮮なＨ９細胞を２倍の薬物濃度で感染させた。増大する薬物濃度でウイルスを継代し、ＩＣ５０の増大についてモニタリングした。プライマー８８１フォワード
【００９３】
【化５】
2008533040.tif 000007
およびＴ７配列を含む９２９Ｔ７リバース
【００９４】
【化６】
2008533040.tif 000008
を用いて、耐性ウイルスに感染したＨ９細胞から逆転写酵素遺伝子をＰＣＲ増幅した。ユニバーサルＴ７プライマーを用いて、精製したＰＣＲ産物から逆転写酵素遺伝子を配列決定し、薬物なしで継代したウイルスおよび公開されている配列と比較した。
【００９５】
（実施例１：ＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩ耐性ウイルスに対するチオビルＴＭの活性）
ＰｈｅｎｏｓｅｎｓｅＴＭレポーターシステム（Ｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓ、前出）を用いて、一般的なＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩ薬物に耐性のあるウイルスに対するチオビルＴＭの活性を評価した。ＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩに変化する耐性を付与する多重変異を有する１０のウイルスのパネルを試験した（図１）。また、２つの野生型ウイルスがウイルスのパネルに含まれた。各ウイルスを、チオビルＴＭ、ホスカルネット、２つのＮＲＴＩ（スタブジンおよびジドブジン）、および２つのＮＮＲＴＩ（エファビレンツおよびネビラピン）に対して試験した。
【００９６】
チオビルＴＭおよびホスカルネットは、野生型ウイルスに対して同様のＩＣ５０値を示した（図２）。変異ウイルスのＩＣ５０値を野生型ウイルスＩＣ５０値と比較して、耐性または感受性の倍数変化を決定した。臨床カットオフ値（図２、薄灰色で強調された値）を、耐性患者において治療の失敗の可能性が有意に増大するレベルとして定義する。バリアントウイルスのおよそ半分が試験したＮＲＴＩに耐性があり、ほとんど全てが試験したＮＮＲＴＩに耐性がある。ほとんどの耐性ウイルスは、ＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩの両方で臨床カットオフより上である。対照的に、全てのウイルスはホスカルネットおよびチオビルＴＭの両方に感受性があり、大部分が過感受性であった（図２、暗灰色で強調された値）。データは、チオビルＴＭがＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩの両方に耐性のあるウイルスに対して有効であるという結論と矛盾しない。
【００９７】
（実施例２：チオビルＴＭおよびジドブジン（ＡＺＴ）によるＨＩＶの相乗的阻害−ＭＡＧＩアッセイ）
以前の研究から、１：３００〜１：３０００の範囲の比で、ホスカルネットとジドブジンとの間のわずか〜中等度の相乗効果が示されている（Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら、（２０００年）Ａｎｔｉｖｉｒ  Ｃｈｅｍ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  １１：２１３頁）。本発明者らは、ＭＡＧＩアッセイ（ＫｌｉｍｐｔｏｎおよびＥｍｅｒｍａｎ、前出）によって、チオビルＴＭまたはホスカルネットおよびジドブジンの組み合わせを調査した。半有効原理（ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４年）Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ  ２２：２７頁）を使用して、薬物相互作用を測定した。組み合わせ指数（ＣＩ）によって、以下のように、相乗効果、合計および拮抗作用を定量する。ＣＩ＜１（相乗効果）、ＣＩ＝１（合計）、ＣＩ＞１（拮抗作用）。ジドブジンとのチオビルＴＭまたはホスカルネットの用量効果関係は半有効プロットでは平行ではないので、効果の排他性は確立することができず、相互排他的（すなわち、競合的インヒビター）および相互非排他的（すなわち、非競合的インヒビター）想定の両方のデータが示される。
【００９８】
平均組み合わせ指数は、１：１の比で混合されたジドブジン＋チオビルＴＭでおよそ０．５５であり、強力な相乗作用が示される（表１）。対照的に、ジドブジン＋ホスカルネット指数は、およそ１．５の平均組み合わせ指数で、わずかに相乗的〜拮抗する範囲でしかない。ジドブジンとチオビルＴＭとの間の強力な相乗効果は、減少した薬物投薬量でも、抗ウイルス効能が増大することができ、チオビルＴＭをＮＲＴＩと組み合わせた、適した薬物投与計画が可能であることを含意する。
【００９９】
【表１】
2008533040.tif 000009
（実施例３：チオビルＴＭおよびジドブジン（ＡＺＴ）によるＨＩＶの相乗的阻害−ｐ２４アッセイ）
固定比率の薬物の存在下でのＨ９  Ｔ細胞の感染およびｐ２４アッセイによる分析によって、チオビルＴＭとジドブジンとの間の相乗効果をさらに調査した（表２）。ＭＡＧＩアッセイと同様に、組み合わせ指数は、１：１および１：１０の比でジドブジンと組み合わせたチオビルＴＭの強力な相乗効果を示す。チオビルＴＭと対照的に、ホスカルネットおよびジドブジンの組み合わせは、１：１の比で拮抗作用、１：１０の比で相乗効果を生じる。データは、ジドブジンとの併用療法において、チオビルＴＭがホスカルネットより低い有効量を有するという結論と矛盾しない。
【０１００】
【表２】
2008533040.tif 000010
（実施例４：チオビルＴＭおよびテノホビルによるＨＩＶの相乗的阻害−ｐ２４アッセイ）
テノホビルは、併用ＨＩＶ療法においてＮＲＴＩの補充または補完として広く使用されている、ヌクレオチド逆転写酵素インヒビター（ＮｔＲＴＩ）の非環式ホスホン酸類似体である。チオビルとテノホビルとの間の相乗効果を、ｐ２４アッセイによって調査した。チオビルは、テノホビルと１：１の比で相乗効果を示した。対照的に、ホスカルネットは、同じ比でテノホビルと組み合わせた場合、拮抗する性質に対する添加剤を示した（表３）。データは、テノホビルとの併用療法において、チオビルがホスカルネットより低い有効量を有するという結論と矛盾しない。
【０１０１】
【表３】
2008533040.tif 000011
（実施例５−チオビルに対する野生型ＨＩＶの耐性プロフィール）
上昇する濃度の薬物の存在下で、Ｈ９細胞でのＨＩＶＬＡＩのインビトロ継代によって、チオビルＴＭおよびホスカルネット耐性ウイルスを選択した。ＭＡＧＩアッセイを用いたＩＣ５０測定によって、表現型変化について耐性ウイルスを評価した。さらに、ウイルスＤＮＡを配列決定して、遺伝子型の変化を決定した（表４）。２つの独立した１３〜１５回の選択を行った。
【０１０２】
【表４】
2008533040.tif 000012
チオビルＴＭに４．８倍および８５倍の耐性を示す２つの耐性ウイルスを選択した。チオビルＴＭに耐性のあるウイルスはまた、ホスカルネットに対して同様な耐性を示し、交差耐性が示された。さらに、ホスカルネット耐性について選択されたウイルスは、チオビルＴＭに対して同様な耐性を有し、ここでも交差耐性が示された。以前のデータと矛盾せず、チオビルＴＭおよびホスカルネット選択ウイルスの両方は、ネビラピンに対して感受性があり、ジドブジンに対して過感受性であった。ＡＺＴおよびチオビルＴＭ、またはＡＺＴおよびホスカルネットの組み合わせでの野生型またはＡＺＴ耐性ＨＩＶ−１株の長期のインビトロ選択は、同時耐性ウイルス生じることができず、チオビルＴＭおよびＡＺＴ耐性プロフィールが相互排他的であることが示唆された。
【０１０３】
チオビルＴＭおよびホスカルネット耐性ウイルスの両方は、選択１についてＬ２１４ＦおよびＲ１７２Ｋ変化を含んだ。さらなる変異、Ｑ１７４Ｒが、チオビルＴＭ耐性ウイルスにのみ存在した。選択２については、チオビルＴＭおよびホスカルネットの両方がＬ２１４ＦおよびＭ１８４Ｉ変異を含んだ。Ｌ２１４ＦおよびＭ１８４Ｉは、以前にホスカルネットおよびホスカルネットプロドラッグ耐性と関連付けられている（Ｈａｍｍｏｎｄら、（２００１年）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ４５：１６２１頁）。Ｒ１７２ＫおよびＱ１７４Ｒは、これまでにホスカルネットまたは任意のホスカルネット誘導体に対する耐性と関連付けられていない、新規の変異である。結果は、チオビルＴＭ耐性プロフィールがホスカルネットと同様であるという結論と矛盾しない。チオビルＴＭおよびホスカルネット耐性ウイルスの変異プロフィールは、ジドブジン耐性表現型の抑制と矛盾しない。
【０１０４】
結論として、実施例から、チオホスホノギ酸およびＮＲＴＩの組み合わせの相乗的活性が示され、一方または両方の活性作用物質の、減少した投薬量が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】図１は、ＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩ耐性ＨＩＶ−１のパネルを示す。ＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩ感受性を、実施例に記載されているように、ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭレポーターアッセイによって試験した。薬物感受性の倍数変化範囲を表す数は、以下の通りである。１：＞２．５倍、２：２．５〜１０倍、３：１０〜５０倍、および４：＞５０倍。右側のパネル：ＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩに耐性を付与する各バリアントウイルスにおける特異的変異。
【図２】図２は、図１のＮＲＴＩおよびＮＮＲＴＩ耐性ＨＩＶ−１ウイルスのパネルがホスカルネットおよびチオビルＴＭに対して感受性があることを示す。左側のパネル：図１のものと同一。右側のパネル：スタブジン、ジドブジン、エファビレンツ、ホスカルネット、ネビラピンおよびチオビルＴＭに対する、耐性ウイルスの感受性。ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅＴＭレポーターアッセイによって、ＩＣ５０を測定した。ＩＣ５０患者／ＩＣ５０参照によって、倍数変化（ＦＣ）を測定した。参照ＩＣ５０は、野生型標準ウイルスのものである。Ｓ／Ｒは、ウイルスが薬物に対して感受性（Ｓ）であると考えられるか耐性（Ｒ）であると考えられるかを示す。失敗の可能性が有意に増大するレベルである臨床カットオフを薄灰色で、過感受性を暗灰色で強調する。
【図１】
2008533040.tif 000013
【図２】
2008533040.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成20年1月8日(2008.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
【化５】
2008533040.tif 000015
およびＴ７配列を含む９２９Ｔ７リバース
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
【化６】
2008533040.tif 000016
を用いて、耐性ウイルスに感染したＨ９細胞から逆転写酵素遺伝子をＰＣＲ増幅した。ユニバーサルＴ７プライマーを用いて、精製したＰＣＲ産物から逆転写酵素遺伝子を配列決定し、薬物なしで継代したウイルスおよび公開されている配列と比較した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008533040000001.app
【国際調査報告】
2008533040.tif 000017
2008533040.tif 000018