(57)【要約】  本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルの結晶形、及び少なくとも1種の結晶形を含む医薬組成物、更には増殖性疾患の治療におけるこの結晶形の使用法、及びそのような結晶形を得る方法を提供する。[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルを含む式(I)の化合物は、HER1、HER2及びHER4などの、増殖因子受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害するのに有用であり、これにより、これらは癌及び他の疾患の治療のための抗増殖剤として有用である。【選択図】図1
2008543777.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
N-2形を含む、化合物Iaの結晶形：
【化１】
2008543777.tif 000019
。
【請求項２】
本質的にN-2形からなる、請求項1記載の結晶形。
【請求項３】
前記N-2形が、実質的に純粋な形である、請求項2記載の結晶形。
【請求項４】
実質的に以下と同等の単位格子パラメータにより特徴づけられ：
格子寸法：a＝10.16Å
b＝10.46Å
c＝12.48Å
α＝96.4°
β＝103.3°
γ＝93.7°
空間群：P1
分子/単位格子：2
ここで、該結晶形の測定温度は約25℃である、請求項1記載の結晶形。
【請求項５】
温度約22℃で、7.3、8.6、12.0、17.8、19.3、20.1、及び25.6からなる群より選択される、4以上の2θ値(CuKαλ＝1.5418Å)を含む粉末X線回折パターンにより特徴付けられる、請求項1記載の結晶形。
【請求項６】
以下の1種以上により特徴付けられる、請求項1記載の結晶形：
a)以下と実質的に同等である単位格子パラメータ：
a＝10.16Å
b＝10.46Å
c＝12.48Å
α＝96.4°
β＝103.3°
γ＝93.7°
空間群：P1
分子/単位格子：2
ここで、該結晶形の測定温度は約25℃である；
b)温度約22℃で、7.3、8.6、12.0、17.8、19.3、20.1、及び25.6からなる群より選択される、4以上の2θ値(CuKαλ＝1.5418Å)を含む粉末X線回折パターン；並びに/又は
c)166℃〜174℃の範囲の融点。
【請求項７】
実質的に純粋な形の請求項1記載の結晶形及び医薬として許容し得る担体又は希釈剤を含有する、医薬組成物。
【請求項８】
治療的有効量の請求項1記載の結晶形を、それを必要とする温血動物へ投与することを含む、増殖性疾患の治療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(本発明の分野)
本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルの結晶形に関する。本発明は概して、少なくとも1種の結晶形を含有する医薬組成物、更には癌、並びにHER1、HER2、及びHER4のような増殖因子受容体を介して機能するシグナル伝達経路に関連している他の疾患のような、増殖性疾患の治療における、この結晶形の使用方法、並びにそのような結晶形を得る方法にも関する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
(本発明の概要)
本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのN-2結晶形を提供する。
【０００３】
第二の実施態様において、本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルの一水和物のH-1結晶形を提供する。
【０００４】
第三の実施態様において、本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルの塩酸塩のN-1結晶形を提供する。
【０００５】
第四の実施態様において、本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3 S)-3-モルホリニルメチルエステルのN-2、H-1、又はN-1結晶形の少なくとも1種；及び、医薬として許容し得る担体又は希釈剤を含有する医薬組成物を提供する。
【０００６】
第五の実施態様において、本発明は、ピロロトリアジン化合物[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのN-2、H-1、又はN-1結晶形の少なくとも1種の治療的有効量を、それを必要とする温血動物へ投与することを含む、増殖性疾患、例えば癌の治療法を提供する。
【０００７】
特定の形、例えば「N-1」などを特徴付けるために、本明細書において使用される名称は、類似した又は同じ物理的特徴及び化学的特徴を持つ他のいずれかの物質に関する限定と見なされるべきではなく、むしろこれらの指定は、同じく本明細書に示された特徴情報に従い解釈されるべきである単なる識別子であると理解されるべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
(発明の詳細な説明)
本発明は、化合物Iaの結晶形に関し、これは本明細書において説明されかつ特徴付けられている。
【０００９】
以下は、本明細書において使用される用語の定義である。本明細書において基又は用語に関して提供された冒頭の定義は、他に特定しない限りは、個別に、又は別の基の一部として、本明細書を通じ基又は用語に適用されるものである。
本明細書において使用される「多形体」は、同じ化学組成を有するが、分子及び/又は結晶を形成するイオンの空間的配置は異なる、結晶形を意味する。
【００１０】
本明細書において使用される「溶媒和物」は、結晶格子構造に組み込まれた1種又は複数の溶媒の分子を更に含む、分子及び/又はイオンの結晶形を意味する。溶媒和物中の溶媒分子は、規則的配置及び/又は無秩序な配置で存在することができる。溶媒和物は、化学量論的又は非化学量論的のいずれかの量の溶媒分子を含むことができる。例えば、非化学量論的な量の溶媒分子を伴う溶媒和物は、溶媒和物からの溶媒の部分的喪失から生じることができる。溶媒分子は、結晶格子構造内に1個よりも多い溶媒分子を含む、二量体又はオリゴマーとして生じることができる。
本明細書において使用される「非晶質」は、結晶でない分子及び/又はイオンの固体形を意味する。非晶質固形物は、鋭い極大値を伴う決定的なX線回折パターンを示さない。
【００１１】
本明細書において使用される「実質的に純粋」とは、結晶形に関して使用される場合、化合物の重量を基に、化合物の90重量％より大きい、90、91、92、93、94、95、96、97、98、及び99重量％よりも大きいを含み、かつ約100重量％と同等も含む純度を有する化合物を意味する。残りの物質は、化合物の他の形(複数)、及び/又は反応不純物及び/又はその調製から生じたプロセス不純物を含む。例えば化合物Iaの結晶形は、その時点で当該技術分野において公知でありかつ一般に許容された手段により測定された場合に、化合物Iaの結晶形の90重量％より大きい純度を有する点で、実質的に純粋であるとみなされ、ここで物質の残余の10重量％未満は、化合物Iaの他の形(複数)及び/又は反応不純物及び/又はプロセス不純物を含む。反応不純物及び/又はプロセス不純物の存在は、例えばクロマトグラフィー、核磁気共鳴スペクトル、質量分析、又は赤外スペクトルのような、当該技術分野において公知の分析技術により決定することができる。
本明細書において使用される単位格子パラメータ「分子/単位格子」は、単位格子内の化合物Iaの分子の数を意味する。
【００１２】
本発明は、少なくとも一部、化合物Iaの結晶形、その塩及び溶媒和物を提供する。化合物Iaは、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリンイルメチルエステルであり、かつ下記の構造を有する：
【化１】
2008543777.tif 000003
。
【００１３】
本発明のひとつの態様において、化合物Iaの結晶形が提供される。この結晶形は、純粋な結晶形であり、本明細書において「N-2」形と称され、これは化合物Iaを含む。
ひとつの実施態様において、該N-2結晶形は、以下と実質的に同等である単位格子パラメータにより特徴付けられ：
格子寸法：a＝10.16Å
b＝10.46Å
c＝12.48Å
α＝96.4°
β＝103.3°
γ＝93.7°
空間群：P1
分子/単位格子：2
容積：1277.5Å3 
密度(計算値)：1.379g/cm3
ここで、該結晶形の測定温度は約25℃である。
【００１４】
異なる実施態様において、N-2結晶形は、温度約22℃で、7.3、8.6、12.0、17.8、19.3、20.1、及び25.6からなる群より選択される2θ値を、4以上(CuKαλ＝1.5418Å)、好ましくは5以上含む、粉末X線回折パターンにより特徴付けられる。
別の本発明の態様において、化合物Iaの異なる結晶形が提供される。この結晶形は、化合物Ia及び水を含有する一水和物結晶であり、かつ本明細書において「H-1」形と称される。
【００１５】
ひとつの実施態様において、該H-1結晶形は、以下と実質的に同等である単位格子パラメータにより特徴付けられ：
格子寸法：a＝8.78Å
b＝10.78Å
c＝14.08Å
α＝99.6°
β＝95.8°
γ＝93.3°
空間群：P1
分子/単位格子：2
容積：1303.9Å3 
密度(計算値)：1.397g/cm3
ここで、該結晶形の測定温度は約25℃である。
【００１６】
異なる実施態様において、H-1結晶形は、温度約22℃で、6.5、10.2、11.4、15.5、18.3、22.9、25.8、及び28.4からなる群より選択される2θ値を、4以上(CuKαλ＝1.5418Å)、好ましくは5以上含む、粉末X線回折パターンにより特徴付けられる。
【００１７】
更に異なる本発明の態様において、化合物Iaの塩酸塩の結晶形が提供される。この結晶形は、塩酸及び化合物Iaの間で形成された塩であり、本明細書において「N-1」形と称される。
【００１８】
ひとつの実施態様において、該N-1結晶形は、以下と実質的に同等である単位格子パラメータにより特徴付けられる：
格子寸法：a＝5.32Å
b＝10.92Å
c＝22.95Å
α＝90.0°
β＝94.9°
γ＝90.0°
空間群：P21
分子/単位格子：2
容積：1327.6Å3 
密度(計算値)：1.418g/cm3
ここで、該結晶形の測定温度は約25℃である。
【００１９】
異なる実施態様において、該N-1結晶形は、温度約22℃で、3.9、9.0、11.3、14.2、16.8、25.3、及び26.9からなる群より選択される2θ値を、4以上(CuKαλ＝1.5418Å)、好ましくは5以上含む、粉末X線回折パターンにより特徴付けられる。
【００２０】
本発明のひとつの実施態様において、化合物Iaの結晶形、例えばN-1、N-2、又はH-1形は、実質的に純粋な形で提供される。この実質的に純粋な形の化合物Iaの結晶形は、例えば、賦形剤、担体、及び他の活性医薬成分の異なる分子構造の活性化学実体のひとつからなる群より選択される、1種以上の他の成分を任意に含有することができる医薬組成物において使用され得る。
【００２１】
好ましくはこの結晶形は、シミュレートされたPXRDパターンには存在しない余分なピークから生じる面積が、実験的に測定されたPXRDパターンの総ピーク面積の10％未満、好ましくは5％未満、より好ましくは2％未満により示されるような、実質的に純粋な相均一性を有する。最も好ましくは、シミュレートされたPXRDパターンでは存在しない余計なピークから生じる実験的に測定されたPXRDパターンの総ピーク面積の、1％未満の実質的に純粋な相均一性を有する結晶形である。
【００２２】
ひとつの実施態様において、本質的に化合物Iaの結晶形N-2からなる組成物が、提供される。この実施態様の組成物は、組成物中の化合物Iaの重量を基に、化合物Iaの結晶形N-2を少なくとも90重量％含有することができる。
異なる実施態様において、本質的に化合物Iaの結晶形H-1からなる組成物が提供される。この実施態様の組成物は、組成物中の化合物Iaの重量を基に、化合物Iaの結晶形H-1を少なくとも90重量％含有することができる。
更に異なる実施態様において、本質的に化合物Iaの結晶形N-1からなる組成物が提供される。この実施態様の組成物は、組成物中の化合物Iaの重量を基に、化合物Iaの結晶形N-1を少なくとも90重量％含有することができる。
【００２３】
(用途及び有用性)
化合物Iaのような式Iのピロロトリアジン化合物は、受容体HERファミリーの一員のタンパク質チロシンキナーゼ活性を阻害する。これらのインヒビターは、1又は複数のこれらの受容体のシグナル伝達に依存しているもののような、増殖性疾患の治療において有用であろう。そのような疾患は、乾癬、関節リウマチ、並びに肺、頭頸部、乳房、結腸、卵巣、及び前立腺の固形腫瘍を含む。この化合物は、式Iのピロロトリアジン化合物又はそれらの医薬として許容し得る塩もしくは水和物、及び医薬として許容し得る担体を含有する医薬組成物として投与することができる。ピロロトリアジン化合物は、哺乳類の過増殖性障害の治療に有用である。特に、本医薬組成物は、HER1(EGF受容体)及びHER2に関連しているそのような原発性及び再発性の固形腫瘍、特にそれらの増殖及び播種をHER1又はHER2に著しく依存しているそのような腫瘍、例えば膀胱、扁平上皮細胞、頭部、結腸直腸、食道、婦人科系(卵巣など)、膵臓、乳房、前立腺、外陰、皮膚、脳、尿生殖路、リンパ系(甲状腺など)、胃、喉頭及び肺の癌を含むものの増殖を阻害することが想定される。別の実施態様において、式Iのピロロトリアジン化合物は、非癌性障害、例えば乾癬及び関節リウマチなどの治療にも有用である。好ましい式Iのピロロトリアジン化合物は、式Iaのピロロトリアジン化合物である。より好ましくは、式Iaのピロロトリアジン化合物は、結晶形N-2で提供される。
【００２４】
従って本発明の更なる態様に従い、ヒトのような温血動物における抗増殖作用の作出において使用するための医薬品の製造における式Iaの化合物又はその医薬として許容し得る塩の使用が提供される。好ましくはこの医薬品は、式Iaの化合物の結晶形N-2、H-1、又はN-1(HCl塩)を含有する。より好ましくは、この医薬品は、式Iaの化合物のN-2結晶形を含有する。
【００２５】
HER1、HER2及びHER4キナーゼを阻害するそれらの能力によって、式Iのピロロトリアジン化合物は、乾癬及び癌を含む増殖性疾患の治療に使用することができる。HER1受容体キナーゼは、頭頚部癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、及び乳癌を含む、多くの固形腫瘍において発現されかつ活性化されることが示されている。同様に、HER2受容体キナーゼは、乳癌、卵巣癌、肺癌及び胃癌において過剰発現されることが示されている。豊富なHER2受容体をダウンレギュレーションするか又はHER1受容体によるシグナル伝達を阻害するモノクローナル抗体は、前臨床試験及び臨床試験において抗-腫瘍効能を示している。従ってHER1及びHER2キナーゼのインヒビターは、これら2種の受容体のいずれかからのシグナル伝達に依存する腫瘍の治療において効能を有することが想定される。加えてこれらの化合物は、HER受容体ヘテロ二量体のシグナル伝達に依存する腫瘍を阻害する効能を有するであろう。これらの化合物は、単剤として、又はタキソール、アドリアマイシン、及びシスプラチンのような他の化学療法薬との組合せ(同時又は逐次)のいずれかとして、効能を有することが想定される。HER1及びHER2シグナル伝達は、血管内皮増殖因子(VEGF)及びインターロイキン8(IL8)のような血管新生因子の発現を調節することが示されているので、これらの化合物は、腫瘍細胞増殖及び生存の阻害に加え、血管新生の阻害から生じる抗-腫瘍効能を有することが想定される。HER2受容体は、関節リウマチにおける滑膜細胞の過増殖に関与し、及びその炎症病態の血管新生成分に寄与することがあることが示されている。従って本発明において説明されたインヒビターは、関節リウマチの治療において効能があると想定される。これらの化合物のHER1を阻害する能力は、抗-血管新生薬としてのそれらの用途に更に加わる。本明細書に引用された以下の文書及び参考文献を参照のこと：Schlessinger J.の論文、「Cell signaling by receptor tyrosine kinase」Cell, 103(2):211-225 (2000)；Cobleigh, M. A.、Vogel, C.L.、Tripathy, D.、Robert, N. J.、Scholl, S.、Fehrenbacher, L.、Wolter, J. M.、Paton, V.、Shak, S.、Lieberman, G.及びSlamon, D. J.の論文、「Multinational study of the efficacy and safety of humanized anti-HER2 monoclonal antibody in women who have HER2-overexpressing metastatic breast cancer that has progressed after chemotherapy for metastatic disease」、J. of Clin. Oncol, 17(9):2639-2648 (1999)；Baselga, J.、Pfister, D.、Cooper, M. R.、Cohen, R.、Burtness, B.、Bos, M.、D'Andrea, G.、Seidman, A.、Norton, L.、Gunnett, K.、Falcey, J.、Anderson, V.、Waksal, H.及びMendelsohn, J.の論文、「Phase I studies of anti-epidermal growth factor receptor chimeric antibody C225 alone and in combination with cisplatin」、J. Clin. Oncol., 18(4):904-914 (2000)；Satoh, K.、Kikuchi, S.、Sekimata, M.、Kabuyama, Y.、Homma, M. K.及びHomma Y.の論文、「Involvement of ErbB-2 in rheumatoid synovial cell growth」、Arthritis Rheum., 44(2):260-265 (2001)。
【００２６】
本明細書において先に定義された抗増殖性治療は、単独療法として適用されることができ、又は式Iのピロロトリアジン化合物に加え、1種以上の他の物質及び/又は治療を伴うことができる。このような併用療法は、治療の個々の成分の同時、逐次又は個別の投与により実現することができる。式Iのピロロトリアジン化合物は、放射線照射を含む、公知の抗癌及び細胞傷害性の物質及び治療との組合せにおいても有用であることができる。固定用量で処方される場合、そのような組合せ製品は、以下に説明された用量範囲内の式Iのピロロトリアジン化合物及びその承認された用量範囲内の他の医薬としての活性物質を、利用する。組合せ処方が適切でない場合は、式Iのピロロトリアジン化合物は、放射線照射を含む、公知の抗癌又は細胞傷害性の物質及び治療と逐次的に使用することができる。
【００２７】
腫瘍医学の分野において、個々の癌患者を治療するために異なる形の治療の組合せを使用することは、普通に行われる。腫瘍医学において、本明細書において先に定義された抗増殖治療に加えたこのような併用治療の他方の成分(複数)は、手術、放射線療法又は化学療法である。
前述のように、式Iのピロロトリアジン化合物は、それらの抗増殖作用のために興味深い。そのような化合物は、癌、乾癬及び関節リウマチを含む、広い範囲の病態において有用であると期待される。
【００２８】
より詳細には、式Iの化合物は、以下を含む(が、これらに限定されるものではない)様々な癌の治療において有用である：
−膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎癌、肝癌、小細胞肺癌を含む肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵癌、胃癌、頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、及び扁平上皮癌を含む皮膚癌を含む、癌腫；
−線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む、間葉起源の腫瘍；
−星状細胞腫、神経芽細胞種、神経膠腫及び神経鞘腫を含む、中枢神経及び末梢神経の腫瘍；並びに
−メラノーマ、精上皮腫、奇形癌、及び骨肉腫を含む、その他の腫瘍。
【００２９】
全般的な細胞増殖の調節におけるキナーゼの重要な役割のために、インヒビターは、可逆的細胞増殖抑制性物質として作用することができ、これは例えば、良性前立腺肥大、家族性腺腫性ポリポーシス、神経線維腫症、肺線維症、関節炎、乾癬、糸球体腎炎、血管形成術又は血管手術後の再狭窄、肥大性瘢痕形成及び炎症性腸疾患のような、異常な細胞増殖を特徴とするいずれかの疾患過程の治療において有用であることができる。 
【００３０】
式Iaのピロロトリアジン化合物を含む、式Iのピロロトリアジン化合物は、結腸、肺及び膵臓の腫瘍のような、チロシンキナーゼ活性の高い出現率(incidence)を有する腫瘍の治療において特に有用である。式Iのピロロトリアジン化合物を含有する組成物(又は組合せ)を投与することにより、哺乳類宿主における腫瘍の発達が軽減される。式Iのピロロトリアジン化合物は、HER1(EGF受容体)、HER2、又はHER4のような、増殖因子受容体を介して作動するシグナル伝達経路に関連し得る癌以外の疾患の治療においても有用であることができる。
【００３１】
活性成分を含有する本発明の医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、舐剤、水性又は油性懸濁剤、分散性散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬もしくは軟カプセル剤、又はシロップ剤もしくはエリキシル剤のような、経口使用に適した形であることができる。経口使用が意図された組成物は、医薬組成物製造の技術分野において公知のいずれかの方法に従い調製することができる。
【００３２】
本医薬組成物は、無菌の注射用水溶液の形であることができる。中でも使用することができる許容し得るビヒクル及び溶媒は、水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液である。
本発明の化合物がヒト対象へ投与される場合、1日量は通常、処方医により決定され、その用量は一般に、個々の患者の年齢、体重、性別及び反応に加え、患者の症状の重症度に応じて変動する。
【００３３】
このような組合せ製品は、固定用量として処方される場合、本発明の化合物を、先に説明された用量内で、及び他の医薬としての活性のある物質又は治療をその承認された用量範囲内で使用する。組合せ処方が不適切である場合は、式Iの化合物は、公知の抗癌剤又は細胞傷害性物質と逐次投与することもできる。本発明は、投与の順番は制限されず：式Iの化合物は、公知の抗癌剤又は細胞傷害性物質(複数)の投与の前又は後のいずれかで投与されてよい。
【００３４】
この化合物は、約0.05〜約200mg/kg/日、好ましくは100mg/kg/日未満の用量範囲で、単回投与量又は2〜4回の分割量で、投与することができる。
ひとつの実施態様において、結晶形N-2、H-1、又はN-1(HCl塩)を含む化合物Ia、及び医薬として許容し得る担体又は希釈剤を含有する医薬組成物が提供される。結晶形N-2が好ましい。N-2形を含有する医薬組成物は、許容し得る均一性及び/又は貯蔵安定性を伴う剤形の調製を可能にする化学及び/又は物理安定性の組合せを備えることができる。
【００３５】
(調製方法)
全ての温度は、特に記さない限りは、摂氏(℃)である。分取逆相(RP)HPLC精製は、緩衝液として0.1％TFAを含有する90％水性メタノールで溶離する、C18逆相(RP)カラムYMC S5 ODSカラム上で行われ、220nmでモニタリングされた。分析用HPLCのためには、TFAの代わりに0.2％リン酸が使用された。全ての合成された化合物は、少なくともプロトンNMR及びLC/MSにより特徴決定された。特に記さない限りは、反応の後処理時に、有機抽出物は、硫酸マグネシウム(MgSO4)上で乾燥された。
【００３６】
通常使用される試薬に関して、以下の略号が含まれる。Et2O；ジエチルエーテル、Na2SO4；硫酸ナトリウム、HCl；塩酸、NaOH；水酸化ナトリウム、NaCl；塩化ナトリウム、Pd/C；炭素に担持されたパラジウム、K2HPO4；リン酸一水素カリウム、K2CO3；炭酸カリウム、NaHCO3；炭酸水素ナトリウム、MgSO4；硫酸マグネシウム、LiOH；水酸化リチウム、TMSCl；トリメチルシリルクロリド、H2SO4；硫酸、RT；室温、TFA；トリフルオロ酢酸、DMF；ジメチルホルムアミド。他の略号は、h；時間、L；リットル、ml；ミリリットルである。
【００３７】
結晶形は、例えば、好適な溶媒からの結晶化又は再結晶、昇華、融解物からの成長、別の相からの固相転換、超臨界液からの結晶化、及びジェット噴射を含む、様々な方法により調製することができる。溶媒混合物からの結晶形の結晶化又は再結晶に関する技術は、例えば、溶媒の蒸発、溶媒混合物の温度低下、分子及び/又は塩の超飽和された溶媒混合物の結晶種の播種、溶媒混合物の凍結乾燥、及び溶媒混合物へのアンチソルベント(対溶媒)の添加を含む。高処理量結晶化技術は、多形体を含む結晶形を調製するために使用することができる。
【００３８】
多形体を含む薬物の結晶、調製法、及び薬物結晶の特徴決定は、「薬物の固相化学(Solid-State Chemistry of Drugs)」、S. R. Byrn、R.R. Pfeiffer及びJ.G. Stowell, 第2版, SSCI, ウェストラファイエット、インディアナ州(1999)において考察されている。
【００３９】
溶媒を使用する結晶化技術に関して、1種又は複数の溶媒の選択は、典型的には、化合物の溶解度、結晶化技術、及び溶媒の蒸気圧のような、1種以上の要因によって決まる。溶媒の組合せを使用することができ、例えばこの化合物は、第一の溶媒に可溶化され、溶液をもたらし、引き続きアンチソルベントの添加により、この溶液中の化合物の溶解度を低下し、結晶の形成をもたらす。アンチソルベントは、その化合物が低い溶解度を持つ溶媒である。
【００４０】
結晶調製法のひとつにおいて、化合物は、好適な溶媒に懸濁及び/又は攪拌され、スラリーをもたらし、これは溶解を促進するために加熱されてよい。本明細書において使用される用語「スラリー」は、所定の温度で化合物及び溶媒の不均質な混合物をもたらすように、追加量の化合物も含有する、化合物の飽和溶液を意味する。
【００４１】
種晶は、結晶化を促進するために、結晶化混合物へ添加することができる。播種は、特定の多形体の成長を制御するため、又は結晶生成物の粒度分布を制御するために使用することができる。従って、必要とされる種晶の量の計算は、例えば、J. W. Mullin及びJ. Nyvltの論文(「Programmed Cooling of Batch Crystallizers」、Chemical Engineering Science, 1971,26, 369-377)に説明されたように、利用可能な種晶のサイズ及び平均生成物粒子の望ましいサイズによって決まる。一般に小型の種晶が、バッチにおける結晶の成長を効果的に制御するために必要とされる。小さいサイズの種晶は、大きい結晶の篩分け、摩砕、もしくは微粉化によるか、又は溶液の微小結晶化により、作製することができる。結晶の摩砕又は微粉化は、所望の結晶形からの結晶度のいかなる変化(すなわち、非晶質へ又は別の多形体への変化)も生じないことは注意しなければならない。
【００４２】
冷却された結晶化混合物は、真空下で濾過され、分離された固形物は、冷たい再結晶溶媒のような、好適な溶媒により洗浄され、窒素掃流下で乾燥され、所望の結晶形をもたらすことができる。分離された固形物は、固体核磁気共鳴(solid state NMR)、示差走査熱量測定、粉末X-線回折などの、好適な分光的技術又は分析的技術により分析し、生成物の好ましい結晶形の形成を確認することができる。得られる結晶形は、結晶化手順において当初使用される化合物の重量を基に、約70重量％よりも多い量の分離された収率、好ましくは90重量％よりも多い分離された収率で生成される。この生成物は、必要ならば生成物を塊でなく(delump)するために、同時摩砕又はメッシュスクリーンを通過させることができる。
【００４３】
結晶形は、化合物Iaを調製するための最終プロセスの反応媒体から直接調製することができる。これは、例えば最終プロセス工程において、それから化合物Iaは結晶化され得るような溶媒又は溶媒混合物を利用することにより、実現することができる。あるいは結晶形は、蒸留技術又は溶媒添加技術により得ることができる。この目的に好適な溶媒は、例えば、前述の無極性溶媒、並びにアルコールのようなプロトン性極性溶媒及びケトンのような非プロトン性極性溶媒を含む、極性溶媒を含む。
【００４４】
試料中の1種よりも多い結晶形及び/又は多形体の存在は、粉末X線回折(PXRD)又は固体核磁気共鳴分光法のような技術により決定することができる。例えば、実験的に測定されたPXRDパターンのシミュレートされたPXRDパターンとの比較における余分なピークの存在は、試料中の1種よりも多い結晶形及び/又は多形体の存在を示し得る。シミュレートされたPXRDは、単独の結晶X-線データから計算することができる。Smith, D.K.の著書「粉末X線回折パターンの計算のためのFORTRANプログラム(A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns)」、Lawrence Radiation Laboratory, リバーモア, カリフォルニア州, UCRL-7196 (1963年4月)を参照のこと。
【００４５】
本発明の化合物Iaの形は、その操作は当業者に周知である様々な技術を用い特徴付けることができる。この形は、固定された分析温度での単結晶形の単位格子測定値を基にしている、単結晶X-線回折を用い、特徴付け及び識別することができる。単位格子の詳細な説明は、Stout及びJensenの著書「X線構造決定：実践ガイド(X-Ray Structure Determination: A Practical Guide)」、Macmillan Co., ニューヨーク (1968)の第3章に提供されており、この著書は本明細書に参照として組込れている。あるいは、結晶格子内の空間関係における原子の独自の配列は、観察された分率(fractional)原子座標に従い特徴付けることができる。結晶構造の特徴決定の別の手段は、回折プロファイルが、純粋な粉末材料を表すシミュレートされたプロファイルと比較される粉末X線回折分析によるものであり、これらは両方とも同じ分析温度で試行され、一連の2θ値(通常4以上)として特徴付けられた対象の形についての測定値である。
【００４６】
固体核磁気共鳴(NMR)、示差走査熱量測定、サーモグラフィ及び結晶性又は非晶質形態の肉眼試験のような、この形を特徴付ける別の手段を使用することができる。これらのパラメータは、対象の形を特徴付けるために組合せて使用することもできる。
【００４７】
N-1、N-2、及びH-1結晶形は、標準の操作条件及び温度下で行われる、単結晶X線回折測定により特徴付けることができる。オングストローム(Å)でのおおよその単位格子寸法に加え、結晶格子容量、空間群、格子当たりの分子数、及び結晶密度は、例えば試料温度25℃で測定することができる。
【００４８】
各結晶形は、以下に説明された1種以上の試験法を用い、分析した。
【００４９】
(単結晶X-線測定)
実施例1-3の各々に関して単結晶X線データを収集した。この分析に関して、Bruker-Nonius CAD4連続回折計(Bruker Axs社, マジソン WI)；あるいは、CuKα照射(λ＝1.5418Å)を使用するBruker-Nonius Kappa CCD 2000システムを使用した。単位格子パラメータは、25高射角度(high-angle)反射の実験的回折計セットの最小二乗解析により得た。強度は、θ-2θ変数走査技術による、一定温度でのCuKα照射(λ＝1.5418Å)を用い測定し、ローレンツ偏光因子についてのみ補正した。バックグラウンドカウントを、走査時点の半分に関する走査の極値(extreme)で収集した。測定された強度データの指標付け及び処理は、Collect program suit、R. Hooft、Nonius B. V.(1998)の、HKL2000ソフトウェアパッケージにより行った。示された場合、結晶は、データ収集の間、Oxford低温システムの冷流れ中で冷却した。
【００５０】
これらの構造は、直説法により解明し(solved)、及びわずかに部分的に変更したSDPソフトウェアパッケージSDP、Structure Determination Package、Enraf-Nonius, ボヘミア, ニューヨーク州)、又は結晶写真パッケージMAXUS (maXus solution and refinement software suit：S. Mackay、CJ. Gilmore、C. Edwards、M. Tremayne、N. Stewart及びK. Shankland)のいずれかを用い、観察された反射を基に精密化した。maXusは、回折データからの結晶構造の解明及び精密化のためのコンピュータプログラムである。
【００５１】
(粉末X-線回折)
粉末X線回折(PXRD)データは、Bruker GADDS(General Area Detector Diffraction System)手動χプラットフォーム角度計を用いて得た。粉末試料を、直径1mm未満の薄壁ガラスキャピラリーに入れ；キャピラリーを、データ収集の間回転させた。試料-検出器の距離は、17cmであった。CuKα(λ＝1.5418Å)で照射した。データは、少なくとも300秒の試料曝露時間で、3＜2θ＜35°について収集した。
【００５２】
誘導された原子パラメータ(座標及び温度因子)は、散乱領域全体の(full matrix)最小二乗法により精密化した。精密化において最小化された関数は、ΣW(｜FO｜-｜FC｜)2であった。Rは、Σ｜｜F｜-｜F｜｜/Σ｜F0｜と定義され、一方Rw＝[Σw(｜FO｜-｜Fc｜)2/Σw｜Fo｜2]1/2であり、ここでwは、観察された強度の誤差を基にした適当な加重関数である。差の分布図を、精密化の全ての段階において試験した。水素原子は、等方性温度因子により理想的位置で導入されたが、水素パラメータは変動しなかった。
【００５３】
(融点)
結晶の融点は、ホットステージ付き顕微鏡により決定した。結晶は、ガラススライド上に配置し、カバースリップをかぶせ、顕微鏡(Linkham Scientific Instruments社, Tadworth, 英国)に搭載されたLinkham LTS350ホットステージ上で加熱した。加熱速度は、周囲温度から300℃までの温度範囲について、10℃/分に制御した。結晶は、相転移の根拠、複屈折の変化、不透明度、融解、及び/又は分解について肉眼で観察した。
【００５４】
(示差走査熱量測定)
示差走査熱量測定(DSC)は、TA Instruments(商標)モデルQ1000を用い、各結晶形について行った。各分析のために、DSCセル/試料チャンバーを、超高純度窒素ガスの100ml/分で掃流した。この装置は、高純度インジウムにより検量した。加熱速度は、温度範囲25〜300℃において10℃/分であった。試料重量により標準化された熱流量は、測定された試料温度に対しプロットし、データは、ワット/グラム("W/g")の単位で報告した。このプロットは、下落を示す吸熱型ピークにより作製した。融解吸熱ピーク(融点)は、外挿された開始温度について評価した。
【実施例】
【００５５】
下記の非限定的実施例は、本発明を例証する。
(実施例1)
【化２】
2008543777.tif 000004
[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステル(Ia)
【００５６】
A. 2-ベンジルアミノ-3-ヒドロキシ-プロピオン酸及び2-ジベンジルアミノ-3-ヒドロキシ-プロピオン酸の調製
【化３】
2008543777.tif 000005
【００５７】
反応容器に、固形L-セリンメチルエステル塩酸塩(1.000当量)を入れた。メタノール(2.85容量)を添加し、攪拌を開始した。トリエチルアミン(1当量)を10分間かけて添加し、その間温度を約14℃〜約18℃に維持した。全ての固形物が溶解するまで、攪拌を継続した。この混合物を、10℃に冷却し、ベンズアルデヒド(0.99当量)を、15分かけて添加しながら、温度を約11℃〜約15℃に維持した。反応液を、30分間、約8℃〜約12℃に維持した。固形水素化ホウ素ナトリウム(水素化物の4当量)を、2時間かけて添加し、その間温度を約10℃〜約20℃に維持した。反応液は、30分間約14℃〜約16℃で維持し、その後HPLCにより分析した。
【００５８】
分別フラスコに、メタノール(1.15容量)及び水(1.72容量)を入れた。水を溶媒とする50重量/重量％水酸化ナトリウム(3.04当量)を添加し、得られた溶液を、15℃に冷却した。シッフ塩基を、内部温度を16〜22℃に維持しながら1時間かけてこの混合液へ移した。この反応液を、20℃で30分間維持し、メチルエステルの消費についてHPLCにより分析した。水(1.72容量)を添加し、引き続き水を溶媒とする12.2M濃HCl(2.67当量)を添加し、その間温度を15〜25℃に維持し、pHを9.5に調節した。この混合物を濾過し、フィルター-ケーキを、2部分の水(各0.58容量)で2回洗浄した。これらの洗浄液を分液ロート内の濾液と一緒にした。一緒にした水性部分を、酢酸エチル(各5.75容量)で2回洗浄した。この材料を、分液ロートからフラスコへ移した。この混合物を、25℃から15℃に冷却し、水を溶媒とする12.2M濃HCl(0.89当量)を、混合物のpHが6.5となるまで添加し、この間温度は17〜22℃に維持した。この混合物を、5℃で15〜25時間維持し、その後固形物を濾過ロートで収集した。フィルターケーキを、2部分の水(各1.43容量)及び2部分のヘプタン(各1.43容量)で洗浄した。湿った固形物を、乾燥トレーに移し、45℃で21時間乾燥し、収率は61％であった。
【００５９】
B. 4-ベンジル-5-オキソ-モルホリン-3-カルボン酸の調製
【化４】
2008543777.tif 000006
【００６０】
反応器へ、N-ベンジル-L-セリン(1.0当量)及びTHF(6.1容量)を投入した。得られる溶液を、0±5℃に冷却し、水を溶媒とする炭酸カリウム(3.0当量)の予備冷却した溶液(6.1容量) (0〜5℃)を添加した。次にクロロアセチルクロリド(1.4当量)を、添加ロートにより添加し、その間温度は5℃以下に維持した。この二相の反応混合物を、約30分間0±5℃で熟成した。熟成後、この混合物を、HPLC分析のために試料採取した。残存するN-ベンジル-L-セリンの面積率が＞6％である場合、追加のクロロアセチルクロリドを添加した。一旦反応の完了規格(completeness specification)が合致したならば、内部温度を5〜10℃に維持しながら、pHが常に＞13.5となるまで、50重量％水酸化ナトリウムを添加した。HPLC分析が＜1面積％の(合計した)中間体を示した時点で、反応は完了したと見なした。この混合物を、25℃に温め、ヘプタン(2.03容量)を添加した。この混合物を、迅速に10分間攪拌し、その後これらの相を分離させた。上側有機相を廃棄し、リッチな水相を再度ヘプタン(3.04容量)処理した。10分間迅速に攪拌した後、これらの相を沈降させ、上側有機相を廃棄した。リッチな水性部分を、-5〜0℃に冷却し、バッチ温度を＜10℃に維持しながら、pH＜2となるまで37重量％塩酸を添加した。得られたスラリーを、最低4時間は-10〜0℃に維持した。スラリーを、ワットマン#1濾紙又は同等物上で濾過し、予め冷却した(3〜7℃)水(2x4.57容量)で洗浄した。湿潤ケーキを、真空下40〜45℃で乾燥した。乾燥後、4-ベンジル-5-オキソ-モルホリン-3-カルボン酸1.475kg(84.9％、未補正)を得た。HPLC保持時間：1.82分(YMC S5 ODSカラム4.6x50mm, 0.2％リン酸含有する10-90％水性メタノールで4分間, 4mL/分, 220nmでモニタリング)；キラルHPLC保持時間：7.94分、エナンチオマー過剰率(e.e.) 100％, (Chiralcel OJ-R, 150x4.6mm, 5μM, 溶離液：MeOH：0.2％ aq. H3PO4 [50:50], 流量1mL/分, 210nm)
【００６１】
C. [R-(4-ベンジル-モルホリン-3-イル)]-メタノール塩酸塩の調製
【化５】
2008543777.tif 000007
【００６２】
無水THF中の4-ベンジル-5-オキソ-モルホリン-3-カルボン酸(1当量)の攪拌混合物(16容量)へ、窒素下で、トリエチルアミン(1.19当量)を添加した。この混合物へ、ホウ素-メチルスルフィド錯体(7.45当量)を、反応混合物の温度が10℃以下に維持されるような速度で添加した。添加には1時間かけた。この反応混合物を、窒素下で5.5時間穏やかに還流(65℃)した。この混合物を冷却し、MeOH(1.39容量)をゆっくり添加した(内部温度は、添加の間は、25℃未満に維持し、添加には1時間かけた)。この得られた混合物に、水(4.18容量)を添加し、この混合物を、室温で一晩攪拌した。混合物を、真空で濃縮し、2N水酸化ナトリウム水溶液(4.59当量)及び水(1.74容量)で希釈した。この混合物を、酢酸エチル(2x7容量)で抽出した。一緒にした酢酸エチル抽出物を、20％塩化ナトリウム水溶液(4.18容量)で洗浄した。次に酢酸エチル抽出物を真空で濃縮し、粗油状物を得た。この油状物を、酢酸エチル(10.2容量)及びメタノール(0.52容量)で希釈した。この溶液へ、溶液のpHが酸性となるまで、トリメチルシリルクロリド(352mL, 0.61容量)を滴下した。トリメチルシリルクロリド添加時のバッチ温度を、20℃未満に維持した。添加が終わって、この混合物を0℃で2時間維持し、沈殿を濾過により収集し、[R-(4-ベンジル-モルホリン-3-イル)]-メタノール塩酸塩(547g)を収率92％で白色固形物として得た。HPLC：試料調製：1mL苛性液中20μLで15分間；AP＝98％, 6.19分(YMC Pack ODS-A, 3μm カラム6.0x150mm, 0.2％リン酸を含有する10-90％水性アセトニトリルで20分間かけて, 2mL/分, 220nm及び254mnでモニタリング)
LC/MS：M+H＝208；キラルHPLC：RT＝8.38分間, e.e. 100％, (Chiralcel OD-RH, 150x4.6mm, 溶離液：アセトニトリル：MeOH：20mM 炭酸水素アンモニウム, pH7.8 (15:15:70), 流量1mL/分, 210nM)
【００６３】
D. 3-((R)-ヒドロキシメチル)-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステルの調製
【化６】
2008543777.tif 000008
【００６４】
[R-(4-ベンジル-モルホリン-3-イル)]-メタノール塩酸塩(1当量)、水性K3PO4 (4.6当量)、及びEtOAcの混合物を、ふたつの透明な相が得られるまで攪拌した。EtOAc層を分離し、水層を新鮮なEtOAcで抽出した。一緒にしたEtOAc層を、20重量％Pd(OH)2/C(50％水湿分, 投入重量を基に0.10当量)を含むフラスコに投入した。二炭酸ジ-tert-ブチル(1.2moles)を添加した。この混合物を、15psiで4時間水素化した。HPLCにより完了が認められた後、混合物をセライトを通して濾過し、その溶媒をシクロヘキサンと交換した。生成物を、シクロヘキサン(7-10容量)から晶出し、標題化合物を白色固形物(収率82％)として得た。
【００６５】
1H NMR (CDCl3) δ 1.45 (s, 9H), 3.17 (m, 1H), 3.47 (dt, 1H, J＝3.1, 11.4Hz), 3.56 (dd, 1H, J＝3.5, 11.9Hz), 3.7-4.0 (m, 6H)；13C NMR (CDCl3) δ 28.21, 40.01, 52.09, 59.59, 65.97, 66.49, 80.23, 155.30； MS: 218 (M+H)+；C10H19NO4の分析 計算値：C, 55.28； H, 8.81； N, 6.44. 実測値：C, 55.45； H, 8.87； N, 6.34； Pd＜5ppm；HPLC保持時間：5.28分間(YMC Pack ODS-A, 3μm, 4.6x50mmカラム, 10分間の勾配, 2.5mL/分)；100％ee [キラルHPLC保持時間：13.6分(Chiralcel OD-RH, 5μm, 4.6x150mmカラム, 20分間 wasocratic法, 1mL/分)]。
【００６６】
E. 5-ニトロ-1-(3-フルオロベンジル)インダゾール(16)の調製
【化７】
2008543777.tif 000009
【００６７】
5-ニトロインダゾール(1当量)、炭酸セシウム(1.1当量)及びDMF(5容量)を、容器へ投入した。この混合物を、70〜80℃で加熱し、3-フルオロ臭化ベンジルを75分かけて添加した。この反応の完了(ニトロインダゾール対総異性体＜2AP)について、HPLCによりアッセイし、その後20℃に冷却した。これらの塩を濾過し、ケーキを、DMF(2.7容量)で洗浄した。生成物を、水(1.35〜1.45容量)を15〜21℃で投入することにより晶出した。結晶スラリーを4時間維持し、結晶を濾過し、2:1 DMF:水混合物(2.1容量)、水(2容量)、最後に3:1冷ACN:水混合物(1.5容量)で洗浄した。湿潤ケーキを、45℃未満でLOD＜1％に乾燥し、収率は約49％であった。
【００６８】
1H NMR (CDCl3) δ 5.64 (s, 2H), 6.87 (d, 1H, J＝9.4Hz), 6.95 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.42 (d,1H, J＝9.2Hz), 8.23 (d of d, 1H, J＝10Hz及び2Hz), 8.26 (s, 1H), 8.72 (d,1H, J＝2Hz)；MS: 272 (M+H)+；HPLC保持時間：6.99分(YMC ODS-A 3 μm, 4.6x50mmカラム, 10分間の勾配, 2.5mL/分)。
【００６９】
F. 1-(3-フルオロ-ベンジル)-1H-インダゾール-5-イルアミン(化合物C)の調製
【化８】
2008543777.tif 000010
【００７０】
ベンジルニトロインダゾール(1当量)を、水素化容器に投入し、THF(8容量)を添加し、15psi、30〜40℃で水素化を行った。反応混合物を、〜1時間静置し(HPLCでs.m.＜3％)、25℃に冷却し、触媒を濾過し、混合物をTHF(0.9容量)で洗浄した。この混合物を、別の容器に移し、再度THF(0.4容量)ですすぎ、大気下で所望の容量(5.5容量)に希釈し、47〜60℃でヘプタンを1時間かけて添加した(15容量)。スラリーを1.5時間かけて18〜23℃に冷却した。スラリーを1時間静置し、濾過し、THF/ヘプタン(1:4, 10.4容量)で洗浄し、45℃未満の炉で乾燥し(LOD＜1％)、収率は84％であった。融点＝130℃. HPLC保持時間：9.09分。
【００７１】
G. 4-[1-(3-フルオロ-ベンジル)-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-カルボン酸エチルエステル(19)の調製
【化９】
2008543777.tif 000011
【００７２】
3-首フラスコに、5-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-カルボン酸エチルエステル(1.00当量)及び無水トルエン(15容量)を投入した。POCl3 (1.2当量)を一気に添加し、引き続きDIEA(1.1当量)をゆっくり温度30℃未満を維持する速度で添加した。得られた懸濁液を、111℃で24時間加熱し、80℃で均質となり始めた。この反応は、2M MeNH2/THF(10μL反応混合物, 200μLアセトニトリル中20μL MeNH2/THF)で反応停止した後、HPLCによりモニタリングした。完了時に、反応液を-2℃に冷却し、H2O(15.6容量)中K2HPO4溶液(3.98当量)を添加し、その間温度は10℃未満に維持した。この溶液を、-22℃で20分間攪拌した。得られた明懸濁液を、セライトパッドを通して濾過し、層を分離した。有機層を、H2O中23.5重量％K2HPO4(2.94容量)で、引き続き水(2.47容量)で洗浄した。この溶液を濾過し、温度範囲22℃〜58℃で加熱することにより濃縮し；トルエン対4-クロロ-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-カルボン酸エチルエステルのHPLC比は、26〜36％であった。この溶液を、58℃から40〜50℃に冷却した。得られた懸濁液に、1-(3-フルオロ-ベンジル)-1H-インダゾール-5-イルアミン(0.988当量)及びDIEA (1.1当量)を添加した。この反応液を、70〜80℃に加熱し、この温度で、HPLCにより反応が完了するまで静置した。その後、55℃に冷却し、イソプロピルアルコール(15.5容量)を添加した。混合物を、55℃から22℃に1.8〜2.2時間かけて冷却し、濾過した。フィルターケーキを、冷イソプロピルアルコール(2x5.5容量)で洗浄し、真空下、50℃未満で乾燥し、生成物をクリーム色の結晶性固形物として、収率84％で得た。
【００７３】
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.39 (t, 3H, J＝7.15Hz), 2.93 (s, 3H), 4.35 (q, 2H, J＝7.15Hz), 5.59 (s, 2H), 6.86 (d, 1H, J＝9.34 H), 6.97 (m, 2H), 7.26 (ddd, 1H, J＝6.04, 8.24, 14.29Hz), 7.35 (d, 1H, J＝8.80Hz), 7.42 (brs, 1H), 7.49 (dd, 1H, J＝1.65, 8.80Hz), 7.91 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.09 (s, 1H)；MS: 445 (M+H)+；HPLC保持時間：3.847分(YMC S5 ODS 4.6x50mmカラム, 4分間の勾配, 3mL/分)。
【００７４】
H. 4-[1-(3-フルオロ-ベンジル)-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-カルボン酸(20)の調製
【化１０】
2008543777.tif 000012
【００７５】
機械式攪拌機を装着したフラスコに、4-[1-(3-フルオロ-ベンジル)-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-カルボン酸エチルエステル(19)(1当量)、THF(4容量)及びMeOH(2.5容量)を投入した。懸濁液を、5℃に冷却し、50％NaOH(5.3当量)溶液を、温度を15℃未満に維持しながらゆっくり添加した。得られた溶液を、60℃で4時間温め、その後25℃に冷却した。THF(7容量)を、反応液に投入し、濃HCl(9.95当量)を、pH3まで、温度を35℃未満に維持しながらゆっくり添加した。得られたスラリーを、周囲温度で一晩攪拌し、その後濾過した。フィルターケーキを、H2O(3x5容量)で洗浄し、フィルター上で1時間乾燥した。フィルターケーキを、ヘプタン(1x1容量)で洗浄し、真空下50℃で乾燥し、生成物を収率88％で帯黄白色固形物として得た。
【００７６】
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.86 (s, 3H), 5.71 (s, 2H), 7.04 (m, 2H), 7.10 (dd, 1H, J＝1.65, 8.80Hz), 7.17 (d, 1H, J＝7.70Hz), 7.25 (t, 1H, J＝7.70Hz), 7.37 (dd, (1H, J＝7.70, 13.74Hz), 7.57 (dd, 1H, J＝1.65, 8.80Hz), 7.73 (d, 1H, J＝8.80Hz), 7.87 (s, 1H), 8.05 (d, 1H, J＝8.35Hz), 8.16 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 12.47 (s, 1H)；MS: 417 (M+H)+；HPLC保持時間：3.350分(YMC S5 ODS 4.6x50mm カラム, 4分間の勾配, 3mL/分)。
【００７７】
I. 3-[[[[[5-エチル-4-[[(1-(3-フルオロフェニル)メチル)-1H-インダゾール-5-イル]アミノ]ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]アミノ]カルボニル]オキシ]メチル]-4-モルホリンカルボン酸, (3S)-1,1-ジメチルエチルエステル(21)の調製
【化１１】
2008543777.tif 000013
【００７８】
フラスコに、4-[1-(3-フルオロ-ベンジル)-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-カルボン酸(20)(1当量)及びトルエン(15容量)を投入した。残留水を、共沸蒸留により除去し、上清を水含量について分析した(KF：＜200ppm水)。次にフラスコに、3-ヒドロキシメチル-モルホリン-4-カルボン酸tert-ブチルエステル(1.05当量)を約77℃で投入した。トリエチルアミン(1.2当量)及びジフェニルホスホリルアジド(1.2当量)を、77〜85℃で添加した。HPLCにより反応の完了が認められるまで、〜87℃で加熱した。反応液を25℃に冷却し、THF(15容量)で希釈し、10％K2CO3 (10容量)、飽和NaCl(10容量)及び水(10容量)で各々洗浄した。生成物リッチな有機層を、仕上げ濾過し、ポット温度が＞100℃となるまで、大気圧で蒸留した。最終の容量を、(必要ならば)トルエンを添加し、15容量に調節した。混合物を80℃に冷却し、水(1当量)を添加し、生成物を晶出した。スラリーを1時間かけて25℃に冷却し、17時間静置した。固形物を濾過により収集し、フィルターケーキをトルエン(2x2容量)ですすいだ。固形物を、一晩風乾し、その後真空下で50℃で乾燥し、生成物を収率82％で得た。
【００７９】
1H NMR (DMSO) δ 1.38 (s, 9H), 2.53 (m, 3H), 3.35-4.34 (m, 10H), 5.71 (s, 2H), 7.03-7.37 (m, 4H), 7.57 (d of d, 1H, J＝9Hz及び1.7Hz), 7.70 (d, 1H, J＝9Hz), 7.82 (s, 1H), 8.08 (d, 1H, J＝1Hz), 8.15 (s, 1H), 8.58 (s, 1H)； MS: 631 (M+H)+；HPLC保持時間：5.01分(YMC ODS-A3μm, 4.6x50mmカラム, 10分間の勾配, 2.5mL/分)。
【００８０】
J. [4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステル(Ia)の調製
【化１２】
2008543777.tif 000014
【００８１】
フラスコに、3-[[[[[5-エチル-4-[[(1-(3-フルオロフェニル)メチル)-1H-インダゾール-5-イル]アミノ]ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]アミノ]カルボニル]オキシ]メチル]-4-モルホリンカルボン酸, (3S)-1,1-ジメチルエチルエステル(21)(1当量)、水7容量、メタノール1容量及び濃HCl溶液(5.0当量)を投入した。スラリーを70℃に加熱し、この温度で、HPLCにより完了が認められるまで静置した。完了後、熱い反応混合物へ水(3容量)を投入し、このことは混合物を45〜55℃に冷却した。混合物を濾過し、濾液を酢酸エチル(2x6容量)で抽出した。酢酸エチル(10容量)、メタノール(2〜3容量)及びBHA(2.7重量％)を、分離した水相へ投入した。50％NaOH溶液を用い、この混合物のpHをpH9〜13に調節した。これらの相を分離した。生成物リッチな有機層を収集し、水(10容量)をこの混合物へ55〜60℃で15〜30分で添加した。水の添加後、混合物を55〜6O℃で30分間放置し、その後19〜25℃に1時間かけて冷却した。生成物を、濾過し、酢酸エチル(2x3容量)で洗浄した。フィルターケーキを、酢酸エチル(15容量)で再スラリー化し、及びBHA(2.7重量％)を添加した。得られたスラリーを、大気圧で蒸留し、水分を除去した。混合物の容量を、バッチ温度を74〜78℃に維持しながら、8〜10容量に調節した。この混合物を、19〜25℃に1時間かけて冷却した。固形物を濾過により収集し、フィルターケーキを、酢酸エチル(2.2容量)で洗浄した。固形物を真空下で45℃で乾燥し、結晶性固形物(N-2形)の収率77％とした(HPLC AP 99.2)。
【００８２】
1H NMR (DMSO) δ 2.51 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 3.10-4.04 (m, 10H), 4.35 (m, 2H), 5.71 (s, 2H), 7.03-7.13 (m, 3H), 7.37 (m, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.83 (s, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 9.87 (s, 1H)；MS: 531 (M+H)+；HPLC保持時間：4.55分(YMC ODS-A3μm, 4.6x50mmカラム, 10分間の勾配, 2.5mL/分)。
【００８３】
(実施例2)
化合物Iaの一水和物結晶H-1形の調製
【化１３】
2008543777.tif 000015
1Lのフラスコに、3-[[[[[5-エチル-4-[[(1-(3-フルオロフェニル)メチル)-1H-インダゾール-5-イル]アミノ]ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]アミノ]カルボニル]オキシ]メチル]-4-モルホリンカルボン酸, (3S)-1,1-ジメチルエチルエステル(39.8g, 63.2mmol)及びメタノール(300mL)を投入した。懸濁液に、濃HCl(26mL, 316mmol)を15分かけて添加した(最高温度は30℃に達した)。得られた溶液を、55℃で2時間攪拌した。反応液を25℃に冷却し、DM水(600mL)で希釈した。得られた溶液を、#5濾紙を通して濾過し、細かい粒子を除去した。この溶液を、2Lの分液ロートに移した。酢酸エチル(500mL)を添加し、ロートの内容物を5分間攪拌した。これらの相を分離させた。生成物リッチな下側層を収集し、先に説明したように追加の酢酸エチル(300mL)で洗浄した。生成物リッチな下側層を、2Lのフラスコに投入した。酢酸エチル(300mL)を添加し、攪拌した(pH＝1.3)。50％NaOH溶液(〜25mL)を使用し、混合物のpHを、pH〜10に調節した。混合物を2Lの分液ロートに移した。これらの相を、分離した。生成物リッチな有機層を収集した。水層を、酢酸エチル(300mL)で抽出した。一緒にした生成物リッチな有機抽出物を、MgSO4で乾燥した。MgSO4を、濾過により除去した。濾液を真空で濃縮し、黄褐色固形物とし、収量31.8gの化合物Iaを得た。
元素分析：
計算値％：％C, 59.17； ％H, 5.32； ％N, 20.45。
実測値％：％C, 58.94； ％H, 5.31； ％N, 20.07。
KF含水量：3.18％ (0.97moles)。
【００８４】
化合物Ia一水和物結晶H-1形の調製(別法)
フラスコに、3-[[[[[5-エチル-4-[[(1-(3-フルオロフェニル)メチル)-1H-インダゾール-5-イル]アミノ]ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]アミノ]カルボニル]オキシ]メチル]-4-モルホリンカルボン酸, (3S)-1,1-ジメチルエチルエステル(1当量)、水7容量、メタノール1容量、及び濃HCl溶液(5.0当量)を添加した。スラリーを70℃に加熱し、この温度で、HPLCにより反応が完了したことが認められるまで静置した。完了後、水(3容量)を、熱い反応混合物へ投入し、このことは混合物45〜55℃に冷却した。混合物を濾過し、濾液を、酢酸エチル(2x6容量)で抽出した。酢酸エチル(10容量)及びBHA(2.7重量％)を、分離した水相へ投入した。25％NaOH溶液を用い、混合物のpHを、pH9〜13に調節した。この混合物を、19〜25℃で2時間維持した。結晶化した生成物を混合物から濾過し、水(4容量)及び酢酸エチル(4容量)で逐次洗浄した。湿潤ケーキの風乾後、一水和物を、白色結晶性固形物(HPLC 99.2AP)として得た。
【００８５】
(実施例3)
化合物IbのN-1結晶形の調製
【化１４】
2008543777.tif 000016
化合物Ibは、化合物Iaの塩酸塩である。
【００８６】
5Lのフラスコに、3-[[[[[5-エチル-4-[[(1-(3-フルオロフェニル)メチル)-1H-インダゾール-5-イル]アミノ]ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]アミノ]カルボニル]オキシ]メチル]-4-モルホリンカルボン酸, (3S)-1,1-ジメチルエチルエステル(330 g, 0.51 mol)及びメタノール(2.5L)を投入した。懸濁液に、濃HCl(170mL, 2.04mol)を15分かけて添加した(最高温度は30℃に達した)。得られた溶液を、55℃で2時間攪拌した。反応液を25℃に冷却し、DM水(5L)で希釈した。得られた溶液を、#5濾紙を通して濾過し、細かい粒子を除去した。この溶液を、10Lの容器に移した。酢酸エチル(5L)を添加し、5分間攪拌した。これらの相を分離させた。生成物リッチな下側層を、収集し、先に説明したように、追加の酢酸エチル(2L)で洗浄した。生成物リッチな下側層を、10L反応器に戻した。酢酸エチル(2.5L)を添加し、攪拌した(pH＝1.3)。50％NaOH溶液(約190mL)を使用し、混合物のpHを、pH9.5〜10に調節した。これらの相を、分離した。生成物リッチな有機層を収集した。水層を、酢酸エチル(2.5L)で抽出した。一緒にした生成物リッチな有機抽出物を、濾過した(#5濾紙を通して)。濾液を、真空で濃縮し固形物とした。水を固形物からデカントした。固形物を、10L反応器に、酢酸エチル(2L)及びメタノール(2L)を用いて移した。得られた懸濁液を、50℃に加熱し、均質な溶液を得た。濃HCl(41mL, 0.49mol)を、15分かけてゆっくり添加した。固形物を溶液から晶出し、スラリーを形成した。スラリーを25℃で1時間冷却した。固形物を濾過により収集し、フィルターケーキを、1:1酢酸エチル:メタノール(1x500mL)及び酢酸エチル(1x500mL)ですすいだ。結晶性固形物を、1時間風乾し、その後真空下で45℃で乾燥し、収量204gの化合物Ibを得、これは化合物Iaの塩酸塩である。(HPLC AP 99.6)。 1H NMR (DMSO) δ 2.51 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 3.10-4.04 (m, 10H), 4.35 (m, 2H), 5.71 (s, 2H), 7.03-7.13 (m, 3H), 7.37 (m, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.83 (s, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 9.87 (s, 1H)；MS: 531 (M+H)+；HPLC保持時間：4.55分(YMC ODS-A3μm, 4.6x50mmカラム, 10分間の勾配, 2.5mL/分)。
【００８７】
(実施例4)
[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステル(Ia)の結晶形
実施例1から3で調製した結晶形を、X-線及び他の技術により特徴付けた。単位格子パラメータは、表2に一覧としている。単位格子パラメータは、単結晶X線結晶解析から得た。
【表２】
2008543777.tif 000017
【００８８】
【表３】
2008543777.tif 000018
【００８９】
図5は、化合物Iaの一水和物形(H-1)からの熱重量分析による損失重量を示している。H-1形は、温度115℃での約3.4重量％の脱水による損失重量を示した。水和物H-1形からの水の理論的損失重量は、3.5重量％である。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】図1は、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのN-2結晶形の測定及びシミュレートされた粉末X線回折パターン(CuKαλ＝1.5418Å、T＝22℃)を示す。
【図２】図2は、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのH-1結晶形の測定及びシミュレートされた粉末X線回折パターン(CuKαλ＝1.5418Å、T＝22℃)を示す。
【図３】図3は、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのHCl塩のN-1結晶形の測定及びシミュレートされた粉末X線回折パターン(CuKαλ＝1.5418Å、T＝22℃)を示す。
【図４】図4は、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのN-2結晶形の示差熱量測定サーモグラム(DSC)を示す。
【図５】図5は、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルのH-1結晶形の示差熱量測定サーモグラム及び熱重量(TGA)を示す。
【図６】図6は、[4-[[1-(3-フルオロフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-イルアミノ]-5-メチル-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル]-カルバミン酸, (3S)-3-モルホリニルメチルエステルHCl塩のN-1結晶形の示差熱量測定サーモグラムを示す。
【図１】
2008543777.tif 000020
【図２】
2008543777.tif 000021
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2008543777.tif 000027
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