(57)【要約】  心臓血管系疾患の治療に有用な医薬組成物を提供する。本組成物は、医薬品として許容できる担体と、心臓血管系疾患に関連する遺伝子の発現を変える、治療または予防に有効量のニトロキシド抗酸化剤と、を含む。心臓血管系疾患の治療または予防における本医薬組成物の使用方法も提供する。好ましい態様においては、ニトロキシド抗酸化剤はＴｅｍｐｏｌ（4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシル）であり、前記心臓血管系疾患は心筋梗塞である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
心臓血管系疾患に関連する１種以上のタンパク質の細胞内レベルを変える方法であって、
心臓血管系疾患に関連するタンパク質のレベルを変える必要のある個体を特定する工程と、
前記個体に、有効量のニトロキシド抗酸化剤を投与する工程と
を含む方法。
【請求項２】
前記ニトロキシド抗酸化剤が、4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質のレベルを上昇させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質が、肝細胞増殖因子またはアディポネクチンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質のレベルを低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質が、カスパーゼ３である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記心臓血管系疾患が動脈硬化症である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が２〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が５〜１２５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が７〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１０〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１５〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
タンパク質に関連する心臓血管系疾患の進行を抑制する方法であって、
前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患に罹患しているかあるいは前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患のリスクのある個体を特定する工程と、
前記個体に、前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患に関連する遺伝子の発現を変えるための有効量のニトロキシド抗酸化剤を投与する工程と
を含む方法。
【請求項１７】
前記遺伝子の発現を増大させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記遺伝子が肝細胞増殖因子またはアディポネクチンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記遺伝子の発現を低下させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記遺伝子がカスパーゼ３である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患が心筋梗塞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患が動脈硬化である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記ニトロキシド抗酸化剤が、4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が２〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２８】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が５〜１２５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が７〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１０〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３１】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１５〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３２】
心室リモデリングを軽減させるための有効量のニトロキシド抗酸化剤を急性心筋梗塞に罹患した患者に投与する工程を含む、急性心筋梗塞の治療方法。
【請求項３３】
前記ニトロキシド抗酸化剤が、心室リモデリングの軽減に関連する少なくとも１種のタンパク質の細胞内レベルを上昇させるための有効量で投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ニトロキシド抗酸化剤を、急性心筋梗塞の発症の２４時間以上後に投与する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１０〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１５〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記心室リモデリングの軽減に関連するタンパク質が肝細胞増殖因子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
心臓血管系疾患に関連する１種以上のタンパク質の細胞内レベルを変えるための医薬の調製における、ニトロキシド抗酸化剤の使用。
【請求項４２】
タンパク質に関連する心臓血管系疾患の進行を抑制するための医薬の調製における、ニトロキシド抗酸化剤の使用。
【請求項４３】
急性心筋梗塞を治療するための医薬の調製における、ニトロキシド抗酸化剤の使用。
【請求項４４】
心室リモデリングを軽減させるための医薬の調製における、ニトロキシド抗酸化剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心臓血管系疾患を治療または予防するために有用な医薬組成物、および心臓血管系疾患の治療又は予防におけるこれらの組成物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
心臓血管系疾患は、先進工業国においてよく見られる；例えば、約110万人の急性心筋梗塞（ＡＭＩ）が毎年米国内で発症する。ＡＭＩの一般的な原因は、冠状動脈のアテローム動脈硬化である。ＡＭＩは、心筋虚血の結果として心筋障害を引き起こす。この虚血は、細胞死の原因となるアポトーシス機序のトリガーになりうる。
【０００３】
ＡＭＩは、約30％の死亡率を示す；これらの死亡の半分以上は、患者が病院に到着する前に起こる。最初の入院で生き延びた患者のうち、25名に1名は、ＡＭＩに罹患した後の最初の年に死亡する。高齢の患者はさらに悪く、ＡＭＩの1年以内に30％が死亡する。
【０００４】
初期にＡＭＩを切り抜けた患者のこの死亡率が高い原因の一部は、初期の現象の後に続いて起こることが多い心室機能障害である。これは、「心室リモデリング」と呼ばれ、左室の膨張が含まれる。左室の膨張は、最初は、梗塞領域が細く伸長した梗塞部分の膨張から、引き続いて、心筋（心筋細胞および間質細胞を含む）の構築的再構成の結果としての非梗塞部分の伸長から起こる。大きなＡＭＩの場合、この進行性の膨張は、血行動態障害、より頻繁な心不全への進行、および不良な予後をもたらすことが多い。
【０００５】
動脈硬化からＡＭＩへの進行を避ける方法、およびＡＭＩのこれらの重篤な結果を避ける方法を開発することが望まれる。
【特許文献１】米国特許第5,352,442号明細書
【特許文献２】米国特許第5,462,946号明細書
【非特許文献１】Liら、Circulation 107:2499-506 (2003)
【非特許文献２】Hattoriら、Diabetalogia 48 (2005) 1066-1074
【非特許文献３】Condorelliら、PNAS 98:17 (2001) 9977-9982
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
遺伝子治療は、心臓血管系疾患の治療、特にＡＭＩの治療のための可能性ある代替法を提供する。この目的のため、心臓血管系疾患に関連する遺伝子を同定し、これらの遺伝子の発現パターンを変更する方法を開発して、この疾患の発症を予防しあるいは一旦この疾患が発症した場合にはその影響を軽減することが望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
心臓血管系疾患を予防および治療するために有用な医薬組成物を提供する。本組成物は、医薬品として許容できる担体と、心臓血管系疾患に関連する遺伝子の発現パターンを変更する、治療または予防に有効な量の薬剤とを含む。心臓血管系疾患関連タンパク質の細胞内レベルを変えるための、この医薬組成物の使用方法も提供する。好ましい態様では、前記薬剤はニトロキシド抗酸化剤、例えば、Ｔｅｍｐｏｌ（4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシル）等である。Ｔｅｍｐｏｌなどのニトロキシド抗酸化剤の使用は、急性蘇生術の場合の虚血性細胞障害（例えば、心筋梗塞等）のための治療法として提唱されてきた。しかし、初期の虚血状態が解決された後に、心室リモデリングを軽減することによる、心臓血管系疾患の長期的な影響を改善するための治療法としてのＴｅｍｐｏｌの使用は提言されていなかった。
【０００８】
［発明の詳細な説明］
上述したように、心臓血管系疾患を予防および治療するために有用な組成物および方法を開示する。好ましい態様では、心臓血管系疾患に関連する遺伝子を下方制御するために用いる薬剤は、ニトロキシド抗酸化剤である。Ｔｅｍｐｏｌは、化学式4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルによって特徴づけられる、抗酸化特性を有する安定なニトロキシドラジカルである。本出願人は、Ｔｅｍｐｏｌが、心臓血管系疾患の発症または進行に関連するタンパク質をコードする遺伝子の発現を変える新規な特性を有することも見出した（以下の表１および２を参照されたい）。従来の治療法は、一般に、このような心臓血管系疾患関連遺伝子の発現パターンを変えることに焦点を当てていない。
【０００９】
したがって、Ｔｅｍｐｏｌは、心臓血管系疾患関連遺伝子の発現を変えることによって、関連するタンパク質の上流のソースに作用する。
【００１０】
その他のニトロキシド化合物の使用も企図する。特定の態様によれば、本ニトロキシド化合物は下記式から選択することができる。  
【００１１】
【化１】
2008528704.tif 000002
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【００１２】
【化２】
2008528704.tif 000003
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【００１３】
【化３】
2008528704.tif 000004
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）  
【００１４】
【化４】
2008528704.tif 000005
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）  
【００１５】
適切なニトロキシド化合物はまた、Proctorの米国特許第5,352,442号明細書、およびMitchellらの米国特許第5,462,946号明細書にあり、これら両者は、参照によりその全体が本願に援用される。  
【００１６】
ニトロキシド化合物の限定されないリストには以下が含まれる：
2-エチル-2,5,5-トリメチル-3-オキサゾリジン-1-オキシル（ＯＸＡＮＯ）、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシル（ＴＥＭＰＯ）、4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシル（ＴＥＭＰＯＬ）、4-アミノ-2,2,6,6-テトラメチル-1-ピペリジニルオキシ（Ｔｅｍｐａｍｉｎｅ）、3-アミノメチル-ＰＲＯＸＹＬ、3-シアノ-ＰＲＯＸＹＬ、3-カルバモイル-ＰＲＯＸＹＬ、3-カルボキシ-ＰＲＯＸＹＬ、および4-オキソ-ＴＥＭＰＯ。ＴＥＭＰＯはまた、典型的には４位で置換されていてもよく、例えば、4-アミノ、4-(2-ブロモアセトアミド)、4-(エトキシフルオロホスホニルオキシ)、4-ヒドロキシ、4-(2-ヨードアセトアミド)、4-イソチオシアネート、4-マレイミド、4-(4-ニトロベンゾイルオキシル)、4-ホスホノオキシなどで置換されていてもよい。  
【００１７】
［試験プロトコル］
遺伝子発現に対するＴｅｍｐｏｌの作用を評価するために、Ｔｅｍｐｏｌを生後１４ヶ月〜３１ヶ月まで食餌１ｇ当たり５ｍｇの用量で実験用マウスに投与した。Ｔｅｍｐｏｌを添加せずに同じ食餌を与えたマウスをネガティブコントロールとして用いた。３１ヶ月の年齢のとき、実験用マウスを犠牲にし、その心臓を手術で取り出した。心臓組織中の遺伝子の幅広いスペクトルの発現を、チップベースのマイクロアレイ技術を用いて評価した。このようなチップは当技術分野では周知であり、遺伝子発現を評価するために広く用いられている。試験結果は、心臓血管系疾患に関連する遺伝子である肝細胞増殖因子が、３倍より多い発現増加を示した。この遺伝子を表１に示す。  
【表１】
2008528704.tif 000006
【００１８】
さらなる遺伝子発現研究において、Ｔｅｍｐｏｌを、食餌１ｋｇ当たり５ｇの用量で、実験用マウスに１２ヶ月〜１５ヶ月まで投与した。Ｔｅｍｐｏｌを添加せずに同じ食餌を与えたマウスをネガティブコントロールとして用いた。１５ヶ月の年齢で、実験用マウスの脂肪組織をとった。脂肪組織中の広範囲のスペクトルの遺伝子の発現を、チップベースのマイクロアレイ技術を用いて評価した。特にこの場合、１２９６０遺伝子を含むＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＭＯＥ４３０Ａ２．０アレイを用いた。このようなチップは当技術分野で周知であり、遺伝子発現を評価するために広く用いられている。脂肪組織についての試験結果は、心臓血管系疾患に関連する遺伝子カスパーゼ３およびアディポネクチンが、発現の変化を示したことを示している。これらの遺伝子を表２に示す。
【表２】
2008528704.tif 000007
【００１９】
表１及び２に記載した遺伝子についての短い概要を以下に提示する。
【００２０】
［肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）］
ＨＧＦは、組織再生、血管形成、およびアポトーシスに関与している。近年の研究では、マウスに、心筋梗塞を誘発させた後３日経過後にヒトＨＧＦをコードするアデノウイルスを筋肉注射で与える一方、対照群では、ＬａｃＡ遺伝子を用いている（Liら、Circulation 107:2499-506 (2003).）。ヒトＨＧＦ遺伝子を入れられたこのマウスは、持続的に高い血漿ＨＧＦを示し、さらに、治療後4週間後に、左室リモデリングの改善および心機能異常の減少も観察された。左室リモデリングの改善および心機能異常の減少は、より小さい左室の空洞および心臓／体重重量比、より大きい短縮率および左室の±ｄＰ／ｄｔ、ならびにより低い左室の拡張終期圧によって示された。処置されたマウスの心筋梗塞に隣接した心筋細胞も大幅に肥大し、心筋細胞と血管との両方の密度が増大したことに起因して梗塞壁が厚かった。
【００２１】
表１に示したように、実験用マウスの心臓組織中のＨＧＦの発現は、Ｔｅｍｐｏｌで処置した動物で３．２倍増大した。  
【００２２】
［アディポネクチン（ＡＤＩＰＯＱ）］
ＡＤＩＰＯＱは、エネルギー代謝および内皮活性化を制御する、脂肪細胞由来のペプチドである。ＡＤＩＰＯＱレベルは、心臓血管系疾患を有する患者において低下していることが示されている。例えば、近年の研究により、動脈硬化症の典型的な障害（下肢に血液を供給する動脈に動脈閉塞が発生する障害）である閉塞性動脈硬化を有する患者集団の血漿アディポネクチンが、対照患者より有意に低レベルであることが示された（Kawanoら、Metabolism Clinical and Experimental 54 (2005) 653-656）。冠動脈疾患を有する患者についてのさらなる研究は、この疾患を有する患者のアディポネクチンレベルが、対照患者と比較して有意に低いことを示した；この研究は、血漿アディポネクチンレベルが6.3μｇ／ｍｌ上昇するごとに冠動脈疾患のリスクが63％低減することを見出した（Costacouら、Diabetologia 48 (2005) 41-48）。別の最近の研究は、実験用マウスに注入されたアンジオテンシンＩＩが、血管内皮障害および循環アディポネクチンの低下を引き起こすことを見出した。このアンジオテンシンＩＩの血管内皮に対する悪影響が、Ｔｅｍｐｏｌの導入によって改善されることが見出され、この作用が酸化窒素の生物活性の修復に帰せられると考えられた（Hattoriら、Diabetalogia 48 (2005) 1066-1074.）。しかし、Ｔｅｍｐｏｌの導入の作用の一部がアディポネクチン遺伝子の上方調節に起因していたという可能性がある。
【００２３】
表２に示したように、実験用マウスの脂肪細胞中のアディポネクチンの発現は、Ｔｅｍｐｏｌで処置した動物で１．２２倍増大した。  
【００２４】
［カスパーゼ３］
カスパーゼ３は、タンパク質分解酵素のシステイン−アスパラギン酸（カスパーゼ）ファミリーのメンバーである。カスパーゼは、タンパク質分解プロセシングおよび二量体化を受けて活性酵素を形成する不活性なプロ酵素として存在し、逐次的な態様で活性化され、多くの構造タンパクおよび制御タンパクの切断によるアポトーシス死の遂行段階において中心的な役割を果たす。プロアポトーシスのタンパク質分解酵素は、階層的カスケードで構成されている：すなわち、頂点または開始カスパーゼ８および９が、エフェクターカスパーゼ３、６および７を開裂し、活性化させる。カスパーゼ３は、初期の遂行カスパーゼであることがわかっている。心臓のカスパーゼ３が過剰に発現するように操作されたマウスは、虚血再かん流傷害を受けた場合に死亡に対する感受性が高いことがわかっている：カスパーゼ３が過剰に発現しているマウスの45％および30％しか、それぞれ血液再かん流の2時間後および24時間後に生存していなかったのに対し、対照マウスは90％および70％が生存した（Condorelliら、PNAS 98:17 (2001) 9977-9982）。カスパーゼ３が過剰に発現しているマウスは梗塞面積も増加していた。
【００２５】
表３に示したように、実験用マウスの脂肪組織中のカスパーゼ３の発現は、Ｔｅｍｐｏｌで処置した動物で１．４７倍低下した。  
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
［好ましい実施形態：心臓血管系疾患の予防および治療プロトコル］
上述したように、Ｔｅｍｐｏｌは心臓血管系疾患に関連する遺伝子の発現を変える作用を有する。これらの遺伝子の発現が変えられるため、Ｔｅｍｐｏｌの投与は、心臓血管系疾患の改善につながる遺伝子産物の濃度を変更することによる有利な作用を有するであろう。特に、Ｔｅｍｐｏｌは、少なくともＨＧＦ濃度およびＡＤＩＰＯＱ濃度を上昇させる有利な作用を有し、それによって、心室リモデリングおよび心臓血管系疾患の発症のリスクの程度を軽減し、さらに、カスパーゼ３の濃度を低減させる有用な作用を有し、それによって、虚血再かん流傷害を受けた後のアポトーシスの程度を軽減するであろう。したがって、本発明の好ましい態様では、Ｔｅｍｐｏｌが、心臓血管系疾患の発症を予防するために、心臓血管系疾患の症状を全く示していない哺乳動物ホスト、例えばヒト、に投与される。特に好ましい患者は、心臓血管系疾患の素因があるかまたはリスクがある患者であり、例えば、心臓血管系疾患の家族歴がある患者または心臓血管系疾患に関連する遺伝子マーカーもしくは血清マーカーを有する患者、または、心臓血管系疾患が可能性のある副作用である医療処置を受けることが予定されている患者である。あるいは、Ｔｅｍｐｏｌは、患者の心臓血管系疾患からの回復を改善するために、心臓血管系疾患を示している患者、例えばＡＭＩ後の患者に（虚血の一次治療が行われた後に）投与することができる。この目的のために、Ｔｅｍｐｏｌ、その非毒性塩、その酸付加塩、またはその水和物を、通常は経口または非経口の投与によって、全身的にまたは局所的に投与することができる。
【００２７】
投与すべき用量は、例えば、年齢、体重、症状、所望する治療効果、投与経路、および治療の期間に応じて決定される。ヒトの成人では、一回に一人当たりの用量は、一般に経口投与で約0.01〜約1000ｍｇであり、一日当たり最高で数回までである。経口投与で意図される特定量の具体例には、約0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.10, 0.15, 0.20, 0.25, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440
, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 505, 510, 515, 520, 525, 530, 535, 540, 545, 550, 555, 560, 565, 570, 575, 580, 585, 590, 595, 600, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895, 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995, 1000 またはそれより多いｍｇ量が含まれる。一回当たり一人当たりの用量は、一般に非経口投与（好ましくは静脈内投与）で約0.01〜約300ｍｇ／ｋｇであり、一日あたり最高で数回までである。意図される特定量の具体例には、約0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.10, 0.15,0.20, 0.25, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205
, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300またはそれより多いｍｇ／ｋｇが含まれる。連続的静脈内投与も、約0.01ｍｇ／Ｌ〜約100ｍｇ／Ｌの標的濃度を達成するために、一日当たり１〜２４時間で意図される。この経路を介して意図される特定量の具体例には、約0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.10, 0.15, 0.20, 0.25, 0.30, 0.35, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60, 0.65, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13.5, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 またはそれより多いｍｇ／Ｌ量が含まれる。しかし、用いるべき用量は、様々な条件に左右され、上で特定した範囲よりも少ないかまたは多い用量が使用される場合があり得る。  
【００２８】
Ｔｅｍｐｏｌは、例えば、経口投与のための固形組成物、液体組成物、またはその他の組成物、非経口投与のための注入剤、塗布薬、または座剤などの形態で投与されうる。  
【００２９】
経口投与のための固体組成物には、圧縮錠、丸薬、カプセル、散剤、および顆粒が含まれる。カプセルには、ハードカプセルおよびソフトカプセルが含まれる。そのような固体組成物において、Ｔｅｍｐｅｌを、賦形剤（例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶性セルロース、澱粉）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはマグネシウムメタシリケートアルミネート）、崩壊剤（例えば、セルロースカルシウムグリコレート）、潤滑剤（例えば、マグネシウムステアレート）、安定化剤、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸）、またはその他のものと混合することができる。所望する場合は、本薬剤は、コーティング剤（例えば、糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート）で被覆されているか、あるいは２種以上のフィルムで被覆されていてもよい。さらに、被覆には、ゼラチンなどの吸収性物質のカプセル内へ閉じ込めることも含まれる。  
【００３０】
経口投与のための液体組成物には、医薬品として許容できる溶液、懸濁液、エマルション、シロップ、およびエリキシル剤が含まれる。このような組成物において、Ｔｅｍｐｏｌを、一般的に用いられる希釈剤（例えば、精製水、エタノール、またはこれらの混合物）中に溶解し、懸濁し、または乳化することができる。さらに、このような液体組成物は、湿潤剤もしくは懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、香味剤、着香料、保存料、緩衝剤などを含んでもよい。  
【００３１】
非経口投与のための注入剤には、溶液、懸濁液、エマルション、および溶解もしくは懸濁される固体、が含まれる。注入剤において、Ｔｅｍｐｏｌを、溶媒中に溶解し、懸濁し、および乳化することができる。溶媒は、例えば、注入のための蒸留水、生理食塩水、植物油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノールなどのアルコール、またはこれらの混合物である。さらに、注入剤は、安定化剤、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはPOLYSORBATE 80（登録商標））、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存料なども含むことができる。これらは最終工程で滅菌され、あるいは無菌法によって製造および調製される。これらは、滅菌固体組成物の形態（例えば、凍結乾燥組成物）で製造されてもよく、これらは、使用直前に、注入のための滅菌蒸溜水またはいくつかの他の溶媒中に溶解されるかあるいは滅菌されてもよい。  
【００３２】
非経口投与のための他の組成物には、Ｔｅｍｐｏｌを含有し、当分野で公知の方法で投与される、外用液体、軟膏、塗布剤、吸入剤、スプレー剤、直腸投与用座剤、および膣投与用ペッサリーが含まれる。  
【００３３】
スプレー組成物は、希釈剤以外の追加の物質を含むことができる。例えば、安定化剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム）、等張緩衝液（例えば、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、またはクエン酸）である。このようなスプレー組成物の調製については、例えば、米国特許第2,868,691号明細書又は同3,095,355号明細書に記載された方法を用いることができる。手短に言えば、本医薬の有効な分配のために有用な小さなエアロゾル粒子径は、噴射剤組成物中に分散された微粒子形態の薬剤を含む自己噴射性組成物を用いることによって得られる。微細に分割された薬物粒子の有効な分散液は、微細化された薬物粒子上にコーティングとして存在する、ごく少量の懸濁化剤の使用で達成されうる。エアロゾル容器からスプレーされた後、エアロゾル粒子から噴射剤が蒸発して、懸濁化剤の薄い膜でコーティングされた微細に分割された薬物粒子が残る。微細化された形態では、平均粒径は約5ミクロン未満である。この噴射剤組成物は、懸濁化剤として、オレイルアルコールなどの脂肪アルコールを用いることができる。懸濁化剤の最小量は、全組成物の約0.1〜0.2重量％である。懸濁化剤の量は、10ミクロン未満、好ましくは5ミクロン未満の上限の粒子径限度を維持するために、全組成物の約4重量％未満であることが好ましい。用いることができる噴射剤には、ハイドロフルオロアルカン噴射剤およびクロルフルオロカーボン噴射剤が含まれる。乾燥粉末吸入剤も用いることができる。  
【実施例】
【００３４】
［実施例１］
心筋梗塞後３日経過後の７０ｋｇの患者に、一日当たり１５００ｍｇ用量のＴｅｍｐｏｌを１８０日間投与する。これは単一用量で投与してもよく、あるいは２４時間にわたっていくつかのより少ない用量で投与してもよい。例えば、８時間間隔で３回の５００ｍｇ用量である。処置の後、血漿中の肝細胞増殖因子およびアディポネクチンのタンパク質レベルが増加し、カスパーゼ３のタンパク質レベルが低下する。
【００３５】
［実施例２］
心筋梗塞のリスクがある７０ｋｇの患者に、一日当たり１５００ｍｇ用量のＴｅｍｐｏｌを１８０日間投与する。これは単一用量で投与してもよく、あるいは２４時間にわたっていくつかのより少ない用量で投与してもよい。例えば、８時間間隔で３回の５００ｍｇ用量である。処置の後、血漿中の肝細胞増殖因子およびアディポネクチンのタンパク質レベルが増加し、カスパーゼ３のタンパク質レベルが低下する。
【手続補正書】
【提出日】平成18年12月18日(2006.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
心筋梗塞に起因する心臓血管系疾患に関連する１種以上のタンパク質の細胞内レベルを変える方法であって、
心臓血管系疾患に関連するタンパク質のレベルを変える必要のある個体を特定する工程と、
前記個体に、有効量のニトロキシド抗酸化剤を投与する工程と
を含み、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化１】
2008528704.tif 000008
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化２】
2008528704.tif 000009
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化３】
2008528704.tif 000010
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化４】
2008528704.tif 000011
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、方法。
【請求項２】
前記ニトロキシド抗酸化剤が、4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質のレベルを上昇させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質が、肝細胞増殖因子またはアディポネクチンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質のレベルを低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記心臓血管系疾患に関連するタンパク質が、カスパーゼ３である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記心臓血管系疾患が、心室リモデリングおよび心臓組織のアポトーシスからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が２〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が５〜１２５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が７〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１０〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１５〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
心筋梗塞に起因し且つタンパク質に関連する心臓血管系疾患の進行を抑制する方法であって、
前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患に罹患しているかあるいは前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患のリスクのある個体を特定する工程と、
前記個体に、前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患に関連する遺伝子の発現を変えるための有効量のニトロキシド抗酸化剤を投与する工程と
を含み、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化５】
2008528704.tif 000012
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化６】
2008528704.tif 000013
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化７】
2008528704.tif 000014
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化８】
2008528704.tif 000015
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、方法。
【請求項１７】
前記遺伝子の発現を増大させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記遺伝子が肝細胞増殖因子またはアディポネクチンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記遺伝子の発現を低下させる、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記遺伝子がカスパーゼ３である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患が心室リモデリングである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記タンパク質に関連する心臓血管系疾患が心臓組織のアポトーシスである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記ニトロキシド抗酸化剤が、4-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が２〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２８】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が５〜１２５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が７〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１０〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３１】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１５〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３２】
心室リモデリングを軽減させるための有効量のニトロキシド抗酸化剤を急性心筋梗塞に罹患した患者に投与する工程を含み、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化９】
2008528704.tif 000016
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化１０】
2008528704.tif 000017
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化１１】
2008528704.tif 000018
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化１２】
2008528704.tif 000019
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、急性心筋梗塞の治療方法。
【請求項３３】
前記ニトロキシド抗酸化剤が、心室リモデリングの軽減に関連する少なくとも１種のタンパク質の細胞内レベルを上昇させるための有効量で投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ニトロキシド抗酸化剤を、急性心筋梗塞の発症の２４時間以上後に投与する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が０．１〜２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１０〜７５ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
ニトロキシド抗酸化剤の前記有効量が１５〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記心室リモデリングの軽減に関連するタンパク質が肝細胞増殖因子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
心筋梗塞に起因する心臓血管系疾患に関連する１種以上のタンパク質の細胞内レベルを変えるための医薬の調製におけるニトロキシド抗酸化剤の使用であって、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化１３】
2008528704.tif 000020
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化１４】
2008528704.tif 000021
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化１５】
2008528704.tif 000022
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化１６】
2008528704.tif 000023
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、使用。
【請求項４２】
心筋梗塞に起因し且つタンパク質に関連する心臓血管系疾患の進行を抑制するための医薬の調製におけるニトロキシド抗酸化剤の使用であって、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化１７】
2008528704.tif 000024
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化１８】
2008528704.tif 000025
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化１９】
2008528704.tif 000026
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化２０】
2008528704.tif 000027
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、使用。
【請求項４３】
急性心筋梗塞を治療するための医薬の調製におけるニトロキシド抗酸化剤の使用であって、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化２１】
2008528704.tif 000028
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化２２】
2008528704.tif 000029
（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化２３】
2008528704.tif 000030
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化２４】
2008528704.tif 000031
（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、使用。
【請求項４４】
心室リモデリングを軽減させるための医薬の調製におけるニトロキシド抗酸化剤の使用であって、
前記ニトロキシド抗酸化剤が下記式：
【化２５】
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（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ、ＣＮ、およびＣＨ２ＮＨ２から選択される。）  
【化２６】
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（式中、Ｘは、Ｏ・及びＯＨから選択され、Ｒ１は、ＣＨ３およびスピロシクロヘキシルから選択され、Ｒ２はＣ２Ｈ５およびスピロシクロヘキシルから選択される。）  
【化２７】
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（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、ＲはＣＯＮＨから選択される。）、および  
【化２８】
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（式中、ＸはＯ・及びＯＨから選択され、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ２から選択される。）
を有する化合物からなる群から選択される、使用。
【国際調査報告】
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