(57)【要約】ボディマス組成を変える能力、および／またはＡＣＥ阻害活性を有する１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを被験者に投与することを含む、全脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変えることによるボディマス分布の変更法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのヒドロキシル基と、ボディマス組成を変化させる能力とを有する１つ以上の有効量の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを被験者に投与することを含むことを特徴とする、脂肪の全体的な割合を減少および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによるボディマス分布を変化させる方法。
【請求項２】
少なくとも１つのヒドロキシル基と、ボディマス組成を変化させる能力とを有する化合物がフラボノイド、ポリフェノール、ミルク蛋白質、糖蜜抽出物、高フラボノイド糖およびそれらの混合物でなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ポリフェノールがワイン、ココア、サトウキビ、サトウダイコン、糖蜜、糖蜜抽出物、サトウキビおよびサトウダイコン廃棄物およびそれらの混合物起源であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
有効量が摂取した全食物の１〜２重量％である請求項２に記載の方法。
【請求項５】
ヒトに対する有効量が２〜２０ｇ／日であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
悪液質に罹患したヒトの脂肪質量に対する無脂肪質量の比率の増加が少なくとも１〜２％であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
少なくとも１つのヒドロキシル基と、ボディマス組成を変化させる能力とを有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とをを含む治療用調合物を被験者に投与することを含むことを特徴とする、脂肪の全体的な割合を減少および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによるボディマス分布を変化させる方法。
【請求項８】
治療用調合物が機能性食品の形であることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
機能性食品がチョコレート製品、糖製品およびそれらの混合物でなる群より選ばれることを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも１つのヒドロキシル基と、ボディマス組成を変化させる能力とを有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む治療用調合物を含むことを特徴とする、脂肪の全体的な割合を減少、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによるボディマス分布を変化させるために使用する治療用調合物。
【請求項１１】
治療用調合物が機能性食品ことを特徴とする請求項１０に記載の治療用調合物。
【請求項１２】
機能性食品がチョコレート製品、糖製品およびそれらの混合物でなる群より選ばれることを特徴とする請求項１１に記載の治療用調合物。
【請求項１３】
脂肪の全体的な割合を減少および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによるボディマス分布を変化させる医薬の製造における、少なくとも１つのヒドロキシル基と、ボディマス組成を変化させる能力とを有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体と、適当な担体との併用。
【請求項１４】
ＡＣＥ阻害活性を有する１つ以上の有効量の化合物または生理学的に許容し得る誘導体またはそれらのプロドラッグを被験者に投与することを含むことを特徴とする、脂肪の全体的な割合を減少および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによるボディマス分布を変化させる方法。
【請求項１５】
ＡＣＥ阻害性を有する化合物がフラボノイド、ポリフェノール、ミルク蛋白質、ココア、ココア製品、ココア抽出物、ブドウ抽出物、糖蜜抽出物、高フラボノイド糖およびそれらの混合物でなる群より選ばれることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ポリフェノールがワイン、ココア、サトウキビ、サトウダイコン、およびサトウキビおよびサトウダイコン廃棄物およびそれらの混合物でなる群起源であることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
有効量が全摂取食物の１〜２重量％であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
ヒトに対する有効量が２〜２０ｇ／日であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
悪液質に罹患したヒトの脂肪質量に対する無脂肪質量の比率が少なくとも１〜２％であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ＡＣＥ阻害活性を有する１つ以上の有効量の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む治療用配合物を被験者に投与することを含むことを特徴とする、全体の脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することにより、ボディマスの分布を変える方法。
【請求項２１】
治療用配合物が機能性食品の形であることを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
機能性食品がチョコレート製品、糖製品およびそれらの混合物でなる群より選ばれることを特徴とする請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＡＣＥ阻害活性を有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む治療用調合物を被験者に投与することを含むことを特徴とする、脂肪の全体的な割合を減少、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによるボディマス分布を変化させるために使用する治療用調合物。
【請求項２４】
治療用調合物が機能性食品であることを特徴とする請求項２３に記載の治療用調合物。
【請求項２５】
機能性食品がチョコレート製品、糖製品およびそれらの混合物でなる群より選ばれることを特徴とする請求項２４に記載の治療用調合物。
【請求項２６】
脂肪の全体的な割合を減少、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによりボディマスを変化させるための医薬の製造において、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体との併用。
【請求項２７】
有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを投与することを含むことを特徴とする、脂肪の全体的な割合を減少、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の割合を増加することによりボディマスを変化させる方法。
【請求項２８】
ポリフェノールがココア、サトウキビ、サトウダイコン、サトウキビおよびサトウダイコン廃棄物、糖蜜、ブドウ、ワイン、果実、野菜、ハーブ、スパイス、ビーンズ、豆類、穀物、ナッツ、脂肪種子、植物油、茶、コーヒー、ビール、リンゴ酒、種子、緑茶およびそれらの混合物起源または由来であることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
１つ以上のポリフェノールが高い抗酸化剤活性を有することを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
有効量が全摂取食料の１〜２重量％であることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
ヒトに対する有効量が２〜２０ｇ／日であることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得る誘導体またはそれらのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む治療用配合物を被験者に投与することを特徴とする方法。
【請求項３３】
有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそれらのプロドラッグと、許容し得る担体とを含むことを特徴とする、全脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変化させるために使用する治療用調合物。
【請求項３４】
全脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変化させるための医薬の製造において、有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそれらのプロドラッグと、適当な担体との併用。
【請求項３５】
有効量の糖蜜またはその抽出物を被験者に投与することを含むことを特徴とする、全脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変化させる方法。
【請求項３６】
糖蜜またはその抽出物が高い抗酸化剤活性を有することを特徴とする請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
有効量が全食料摂取の１〜２重量％であることを特徴とする請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
ヒトに対する有効量が２〜２０ｇ／日であることを特徴とする請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
悪液質に罹患したヒトの脂肪質量に対する無脂肪質量の比率の増加が少なくとも１〜２％であることを特徴とする請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
有効量の糖蜜またはその抽出物と、許容し得る担体とを被験者に投与すること含むことを特徴とする方法。
【請求項４１】
有効量の糖蜜またはのそ抽出物と、許容し得る担体とを含むことを特徴とする、全脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変化させるために使用する治療用配合物。
【請求項４２】
全脂肪の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することにより体脂肪分布を変化させるための医薬の製造において、有効量の糖蜜またはその抽出物と、適当な担体との併用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は治療用調合剤とボディマス分布変更法に関する。より詳しくは本発明はボディマスを変える方法に使用するフラボノイド、ポリフェノール、ポリペプチド、ロイシンおよび他の分枝鎖アミノ酸、および乳製品生活性物質を含む治療用調合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
文書、行動または知識項目が言及される、または議論される本明細書において、この参照文献または議論が文書、行動または知識項目またはその任意の組み合わせが優先日付、入手し得る出版物、公知、一般的常識であることを承認するものでなく、また本明細書が関与するいかなる問題を解決する試みにも関係することが知られていものではない。
無脂肪ボディマスの増加
体が相当量の無脂肪ボディマスを失う症候として悪液質（体の虚弱化および消耗）を伴ういくつかの疾患がある。この様な疾患の例には糖尿病、癌、アルツハイマー病、神経性過食症および拒食症が含まれる。
【０００３】
従って、脂肪組織の増加を最小にして、理想的には割合を減らして無脂肪ボディマスの割合の増加を可能にする治療が必要である。
ポリフェノール
ポリフェノール（複数のフェノール性水酸基を有する化合物）は、ワイン、ブドウ、ココアおよびサトウキビを含む様々な食物源に見出される植物化学物質に分類される。ポリフェノール（またはフェノール類）はすべて、共通の基本的化学成分、すなわちフェノール性環構造を有する。アントシアニンおよびカテキン等のいくつかの小分類中に同定されたポリフェノールは少なくとも８０００種ある。天然ポリフェノールはフェノール酸等の単純な分子から、タンニン等の高度に重合した化合物の範囲に及ぶ。ポリフェノールの抱合型は最も一般的であり、様々な糖分子、有機酸および脂質（脂肪）がフェノール性環構造に結合している。抱合化学構造の差が、異なる化学分類および化合物の作用方式と健康における性質の違いの原因である。
【０００４】
ポリフェノールは以下を含むいくつかの健康上の利点を有すると考えられる：
・  抗酸化剤活性
・  癌予防性
・  心臓病および高血圧保護
・  抗菌／抗ウイルス活性
・  抗炎症活性
・  眼科的性質および
・  血管保護および強化
ポリフェノールは多くの果実、野菜および花の鮮やかな色の色素（ピンクから深紅色、紫および青にわたる）の素であり、植物を疾病および紫外光線から保護し、発芽まで種子が傷つくことを防止する助けになる。
【０００５】
規則的な果実および野菜の摂取と疾患の予防に対する疫学的データは明瞭であるが、残念ながら、単離したフェノール性抗酸化剤を含む補助食品は疾患の予防に関して十分に研究されてこなかった。緑茶、ＨＣＡ（ヒドロキシクエン酸）およびイヌリンは、これらの製品がグルコース吸収を遅らせる、および／またはインスリンを食欲を制御するように規制するという仮定に基づき、体重減少の利点を主張している。しかし、これはヒトによる制御された臨床実験でさらに証明される必要がある（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄ  Ｕｐｄａｔｅ  ０１，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｅｘｃｅｌｌｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄｓ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａ，  ２００６年６月）。
サトウキビ
アントシアニンは分子に結合した糖ユニットを有するフラビリウム塩であり、主として６種のアントシアニジン−ペラゴニジン、シアニジン、デルフィニジン、ペオニジン、ペチュニジンおよびマルビジン−から誘導される。これらの化合物はＢ環中のヒドロキシル基の位置と数で異なるが、それらは全て３位に糖ユニットを有し水溶性である。ペチュニジングループを除いて、全てのアントシアニンクラスの代表例はサトウキビ中に存在する。
全てのアントシアニンに共通の基本構造は以下の通りである：
【０００６】
【化１】
2008542307.tif 000002
【０００７】
茶
水に次いで、茶は世界中で最も広く消費される飲料の１つである。約３００万メートルトンの乾燥茶が毎年生産され、その２０％は緑茶、２％はウーロン茶、残りは紅茶である（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｔｅａ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ２００２）。紅茶、ウーロン茶および緑茶は茶の木（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ；ツバキ科の仲間）の葉から製造される。様々な種類の茶が葉の酸化度を変えて製造される。緑茶は新鮮な収穫された葉を高温で蒸気処理して製造され、酸化酵素を不活性化している。これは緑茶中に存在する高いポリフェノール含有量を保存する。紅茶の葉は最も酸化されており、ウーロン茶の葉の酸化は緑茶と紅茶の中間である。
【０００８】
茶中のポリフェノールの主成分はフラボノール、具体的にはカテキンである。これらの小さい分子は紅茶およびウーロン茶を製造する酸化プロセス中に相互に反応して、テアフラビンおよびテアルビジンと呼ばれるより大きい、非常に色彩のある化合物を生成する。
【０００９】
茶から抽出されたポリフェノールの潜在的な薬学的利益を追究するの多くの研究が最近行われている。茶から一般的に抽出される最も強力な化学保護剤は（−）エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）である。ポリフェノールの血中コレステロール濃度に対する効果の研究で注目された、代謝を増加し脂肪を燃焼する能力から、緑茶ポリフェノールが体重減少を助けることも主張されている。茶ポリフェノールから製造された医薬は、中国で腎炎、慢性肝炎および白血病の治療の一部となっている。他の国でも、緑茶栄養補助剤が販売されている。
【００１０】
全てのカテキンに共通の基本構造は以下の通りである：
【００１１】
【化２】
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【００１２】
ココア
テオブロマカカオはポリフェノールを含むフラボノイドの豊かな資源である。ヒトによるダークチョコレートの摂取についてのある研究は、フラボノイドに富んだチョコレートが内皮機能を改善し、血漿中のエピカテキン濃縮を増加することを示している。しかしながら、その研究は酸化ストレス尺度、脂質プロフィル、血圧、体重またはボディマス指数になんらの変化も見出さなかった［Ｅｎｇｌｅｒら、「フラボノイドに富んだダークチョコレートは健常成人における内皮機能を改善し血漿エピカテキン濃度を増加する（Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ−ｒｉｃｈ  Ｄａｒｋ  Ｃｈｏｃｏｌａｔｅ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  Ｐｌａｓｍａ  Ｅｐｉｃｈａｔｅｃｈｉｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ａｄｕｌｔ）」、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｎｕｔｒ  ２００４；  ２３（３）：１９７−２０４］。
【００１３】
ダークチョコレートの摂取に関する他の研究も、血漿の抗酸化能または血清脂質の酸化感受性になんらの変化も見出さなかった。その研究は、チョコレート脂肪酸がＬＤＬの脂肪酸組成を変化させ、それを酸化損傷に対してより抵抗性にする一方、ココアポリフェノールがＨＤＬコレステロールの濃度を増加し得ることを見出した［Ｍｕｒｓｕら、「ダークチョコレート摂取は健常な人におけるＨＤＬコレステロール濃度を増加し、チョコレート脂肪酸は脂質の過酸化を阻害し得る（Ｄａｒｋ  ｃｈｏｃｏｌａｔｅ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｈｄｌ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈｏｃｏｌａｔｅ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｍａｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｌｉｐｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｈｕｍａｎｓ）」，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ，  ２００４，  Ｎｏｖ  １；  ３７（９），  １３５１−９］。
ＡＣＥ阻害剤
ＡＣＥは体の主な内分泌系の１つであるレニン−アンギオテンシン−アルドステロン系の重要な部分である。ＡＣＥはアンギオテンシンＩ（ＡＮＧ−Ｉ）を切断し、血圧、体内ナトリウムおよび体液恒常性を調節し、その機能を細胞受容体ＡＴ−１およびＡＴ−２を経て媒介する強力な血管収縮アンギオテンシンＩＩ（ＡＧＮ−ＩＩ）とする。ＡＣＥ阻害剤は血圧低下効果と左心室機能不全と糖尿病性神経障害の治療とに有用であることが示されている。
【００１４】
ＡＮＧ−ＩＩの様々な役割の研究は複数ある：
・ 器官形成（Ｏｌｉｖｅｒｉｏ  ＭＩ，  Ｍａｄｓｅｎ  Ｋ．，  Ｂｅｓｔ  ＣＦ，    Ｉｔｏ  Ｍ．，  Ｍａｅｄａ  Ｎ，  Ｓｍｉｔｈｉｅｓ  Ｏ，  Ｃｏｆｆｍａｎ  ＴＭ  ，  「アンギオテンシンＩＩに対するＡＴ１Ａ受容体を欠くマウスにおける腎臓の成長  と発達（Ｒｅｎａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｉｃ  ｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ＡＴ１Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ    ＩＩ）」，  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １９９８；  ２７４：  Ｆ４３−Ｆ５０）  
・ プレ脂肪細胞の形成
・ ヒトプレ脂肪細胞がＡＴ−１受容体サブタイプに対する高い親和性を表す（Ｃｒａｎ  ｄａｌｌ  ＤＬ，  Ａｒｍｅｌｌｉｎｏ  ＤＣ，  Ｂｕｓｌｅｒ  ＤＥ，  ＭｃＨｅｎ  ｄｒｙ−Ｒｉｎｄｅ  Ｂ，  Ｋｒａｌ  ＪＧ，  「ヒトプレ脂肪細胞中のアンギオテン  シンＩＩ受容体：細胞周期調節における役割（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ  ｒｅｃ  ｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｅａｄｉｐｏｓｉｔｅ：  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｃ  ｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  １  ９９９；  １４０：１５４−１５８）
・ 白色脂肪細胞組織がアンギオテンシノーゲン生産の重要な部位であることが報告され  ている（Ｃａｓｓｉｓ  ＬＡ，  Ｓａｙｅ  Ｊ，  Ｐｅａｃｈ  ＭＪ，  「ラットのア  ンギオテンシンメッセンジャーＲＮＡの部位と発達（Ｌｏｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅ  ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒａｔ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ    ＲＮＡ）」、１９８８；Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  １１：５９１−５９６）
・ 脂肪細胞形成の刺激または脂肪細胞の形成（Ｄａｒｉｍｏｎｔ  Ｃ，  Ｖａｓｓａｕ  ｘ  Ｇ，  Ａｌｉｈａｕｄ  Ｇ，
Ｎｅｇｒｅｌ  Ｒ，  「プレ脂肪細胞の分化：アンギオテンシンＩＩによる脂肪細胞の  刺激に対するプロスタサイクリンのパラクリン性役割（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏ  ｎ  ｏｆ  ｐｒｅａｄｉｐｏｓｉｔｅ  ｃｅｌｌｓ：  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｒｏｌｅ    ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｕｐｏｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄ  ｉｐｏｓｅ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ）」、Ｅｎｄｏｃｒｉ  ｎｏｌｏｇｙ  １９９４；  １３５：２０３０−２０３６；Ｓａｉｎｔ−Ｍａｒｃ  Ｐ  ，  Ｋｏｚａｋ  ＬＰ，  Ａｉｈａｕｄ  Ｇ，  Ｄａｒｉｍｏｎｔ  Ｃ，  Ｎｅｇｒｅ  ｌ  Ｒ，「白色胃脂肪細胞組織の栄養因子としてのアンギオテンシン−ＩＩ：脂肪細胞  形成の刺激（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ  ａｓ  ａ  ｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏ  ｒ  ｏｆ  ｗｈｉｔｅ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ：  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ    ｏｆ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｃｅｌｌ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ  ｇｙ  ２００１；  １４２：４８７−４９２）
・ プレ脂肪細胞およびヒト脂肪細胞における脂肪生成の増加およびトリグリセリド蓄積  （Ｊｏｎｅｓ  ＢＨ，  Ｓｔａｎｄｒｉｄｇｅ  ＭＫ，  Ｍｏｕｓｔａｉｄ  Ｎ．「ア  ンギオテンシン−ＩＩが３Ｔ３−Ｌ１およびヒト脂肪細胞における脂肪生成を増加する  （Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｌｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉ  ｎ  ３ｔ３−ｌ１  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｃｅｌｌｓ）」、Ｅｎｄｏ  ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９７；  １３８：１５１２−１５１９）
・ ＡＣＥ阻害剤（ロサルタン）で処理したラットは脂肪細胞のサイズの減少を示す（Ｚ  ｏｒａｄ  Ｓ，  Ｆｉｃｋｏｖａ  Ｍ，  Ｚｌｅｚｎａ  Ｂ，  Ｍａｃｈｏ  Ｌ，  Ｋ  ｒａｌ  ＪＧ  「脂肪細胞組織代謝と細胞充実性の調節におけるアンギオテンシン−Ｉ  Ｉおよびその受容体の役割（Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ    ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｉｐ  ｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒｉｔｙ）」  、Ｇｅｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  １９５５；  １４：３８３−３９１  ）
全体として、これらの研究はＡＮＧ−ＩＩが脂肪細胞組織の発達に重要な役割を果たすことを示している。
【００１５】
複数の研究により、ＡＣＥ阻害剤が体重増加を減少するのに有用であることも示されている。
・ 双方の遺伝子型で食物摂取は同様であっても、アンギオテンシン欠乏マウスでは正常  野生型マウスより体重増加が少ない（Ｍｅｓｓｉｅｒａ  Ｆ，  Ｓｅｙｄｏｕｘ  Ｊ，    Ｇｅｌｏｅｎ  Ａ，  Ｑｕｉｇｎａｒｄ＿Ｂｏｕｌａｎｇｅ  Ａ，  Ｔｕｒｂａｎ    Ｓ，  Ｓａｉｎｔ−Ｍａｒｃ  Ｐ，  Ｆｕｋａｍｉｚｕ  Ａ，  Ｎｅｇｒｅｌ  Ｒ，    Ａｉｌｈａｕｄ  ＧおよびＴｅｂｏｕｌ  Ｍ  「アンギオテンシン欠乏マウスは脂肪細  胞組織の発達の変化と歩行活性の増加を伴う食餌誘発体重増加の欠落を示す（Ａｎｇｉ  ｏｔｅｎｓｉｎ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｅｘｈｉｂｉｔ  ｉｍｐａｉｒｍｅ  ｎｔ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｗｅｉｇｈｔ  ｇａｉｎ  ｗｉｔｈ  ａｌｔ  ｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａ  ｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」、Ｅｎｄ  ｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２００１；  １４２（１２）：５２２０−５２２５））
・ げっ歯類の過食はＡＮＧ−ＩＩ生産の増加をもたらし、継続的なＡＮＧ−ＩＩの注入  は体重の用量依存性減少を示す結果となる（Ｃａｓｓｉｓ  ＬＡ，  Ｍａｒｓｈａｌｌ    ＤＥ，  Ｆｅｔｔｉｎｇｅｒ  ＭＪ，  Ｒｏｓｅｎｂｌｕｔｈ  Ｂ，  Ｌｏｄｄｅｒ    ＲＡ「体重のアンギオテンシン−ＩＩによる調節への寄与機構（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｓ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇ  ｔｏ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｉｉ  ｒｅｇｕｌａ  ｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）」Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｅｎ  ｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  １９９８；  ２７４：Ｅ８６７−Ｅ８７６）
・ 肥満高血圧性被検者では脂肪細胞中のＡＮＧ−ＩＩが増加し、インスリン抵抗性の発  症における重要な要因であると思われる。これはプレ脂肪細胞の漸増の阻害により悪化  し、その結果脂肪が肝臓および骨格筋に再分布する。このため、ＡＣＥ阻害は２型糖尿  病の発症を遅らせ、代謝症候群における脂肪細胞組織レニン−アンギオテンシン受容体  系の病態生理学上の役割を有する可能性とがある（Ｅｎｇｅｌｉ  Ｓ，  Ｓｃｈｌｉｎ  ｇ  Ｐ，  Ｇｏｒｚｅｌｎｉａｋ  Ｋ，  Ｂｏｓｃｈｍａｎｎ  Ｍ，  Ｊａｎｋｅ  Ｊ  ，  Ａｉｌｈａｕｄ  Ｇ，  Ｔｅｂｏｕｌ  Ｍ，  Ｍａｓｓｉｅｒａ  Ｆ，  Ｓｈａｒ  ｍａ  ＡＭ，「脂肪細胞組織レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系：代謝症候  群における役割（Ｔｈｅ  ａｄｉｐｏｓｅ−ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｎｎｉｎ−ａｎｇｉｏ  ｔｅｎｓｉｎ−ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ：  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｍｅｔａ  ｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」、Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒ  ｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００３  ；  ３５：８０７−８２５）
しかしながら、これらの研究のいずれもボディマス組成を変える方法、例えば脂肪質量を減少し無脂肪筋肉の質量を増加する方法を明らかにしなかった。無脂肪ボディマスの増加は必ずしも体重減少と関連しない。従って、依然として悪液質に罹患した被検者を助けるこの様な方法が必要とされる。
乳製品生理化成物質、ロイシン、ＡＣＥ阻害ペプチドおよび他の分枝鎖アミノ酸
ミルク生理活性物質、ロイシンおよび他の分枝鎖アミノ酸は天然のアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤である。ＡＣＥ阻害ペプチドはチーズ熟成中の乳酸菌によるミルク蛋白質の酵素分解により放出される。それらはまた、発酵中のミルクおよびホエーから単離し得る（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ＲＪ，  Ｍｕｒｒａｙ  ＢＡ、「生物活性ペプチドおよび乳酸発酵（Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｌａｃｔｉｃ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄａｉｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
２００６；５９（２）：１１８−１２５）。ＡＣＥ阻害乳製品ペプチドは５２０μｍを超えるＩＣ50値を有し、十分な量が発行ミルクおよび発酵乳製品の抽出物から配送されると思われる。乳製品を用いる体重減少が提案されているが（Ｚｅｍｅｌ  ＭＢら「糖尿病被検者における全体的および臓器脂肪減少の乳製品による促進（Ｄａｉｒｙ  ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｔａｌ  ａｎｄ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｆａｔ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｂｅｓｅ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ）」、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｏｂｅｓ．  Ｒｅｌａｔ．  Ｍｅｔａｂ．  Ｄｉｓｏｒｄ．  ２００５；  ２９（４）：３９１−７）、体重減少管理における役割は最近疑問視されている（Ｇｕｎｔｈｅｒ  ＣＷら、「乳製品が１年の実施で若い女性における体重または脂肪質量の変化をもたらさない（Ｄａｉｒｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｄｏ  ｎｏｔ  ｌｅａｄ  ｔｏ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ  ｏｒ  ｆａｔ  ｍａｎｎ  ｉｎ  ｙｏｕｎｇ  ｗｏｍｅｎ  ｉｎ  ａ  １−ｙ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．２００５；８１：７５１−７５６）。
肥満
無脂肪ボディマスの割合を増加する方法は、肥満に悩む被検者の治療にも有用である。
【００１６】
誰でも体の中に脂肪組織が必要である。体脂肪が多すぎる場合、その結果は肥満である。世界保健機構によれば、成人の３億人以上が肥満であり、１１億人以上が体重過剰である。体重過剰および肥満のアメリカ人の数は１９６０年以来増加し続け、この傾向は減速していない。米国の成人の半分以上（６４．５パーセント）が体重過剰であり、ほぼ３分の１（３０．５パーセント）が肥満である。毎年、米国では肥満による過剰死亡が３０万人以上であり、肥満に関するアメリカの成人の健康管理費用は約１千億ドルに達する。これは喫煙に次ぐ２番目に予防できる死亡である。
【００１７】
肥満は高血圧、糖尿病（２型）、心臓病、卒中、胆嚢炎および乳癌、前立腺癌および結腸癌等の病状を発症する危険性を増加する。肥満の傾向は、高カロリーと組み合わさった身体運動の欠如、低コスト食品等の我々の環境で促進される。もしそれを維持できれば、わずか１０％の体重減少でも健康を改善し得る。
【００１８】
肥満であることと体重過剰であることとは同じ条件ではない。バスルームの体重計により体重の目安が得られ、体重変化を追跡する助けになるが、体重過剰または肥満である場合、または肥満および関連する健康状態を発症する危険がある場合、体重計は最良の方法ではない。
【００１９】
肥満であるかどうかを決めるためには、ボディマス指数（ＢＭＩ）とウエスト周りの長さが必要である。ＢＭＩが健康な体重であることを示しても、健康な範囲以上のウエストサイズであることがある。
【００２０】
● ＢＭＩは身長と体重の双方に基づく数である。この数値は、ある人が体重過剰であ    る度合いを判断する助けになり、一般の人に対して全体脂肪の合理的な評価を与える    。ＢＭＩは体重そのものより心臓病および２型糖尿病等の健康状態とより良く相関す    る。ＢＭＩは完璧ではない。運動選手等のある人達は高いＢＭＩが測定されるが、脂    肪より筋肉が多い。ＢＭＩの「線引き」は、健康な体重、体重過剰、肥満または極度    の肥満であるかどうかを判断する助けにする数字である。ＢＭＩが健康／体重表とは    異なることに注意することが重要である。
【００２１】
●  １８．５〜２４．９＝健康な体重
●  ２５〜２９．９＝体重過剰
●  ３０〜３４．９＝肥満（クラス１）
●  ３５〜３９．９＝肥満（クラス２）
●  ４０以上＝過度の肥満（クラス３）
●  ウエスト周りの測定が、特に腹部脂肪に関係する危険度を決めるために用いら    れる。
【００２２】
●  男性：４０インチ以上
●  女性：３５インチ以上
ウエスト測定値が上記以上であり、ＢＭＩが２５〜３４．９の間であれば、タイプ２糖尿病、高血圧および心臓血管病を発症する危険度が高い。
肥満の原因
遺伝性、環境および行動を含み、肥満をもたらす多くの因子がある。
【００２３】
● 遺伝子：個人によっては体重を増加し脂肪を蓄積する遺伝的傾向がある。この傾向    のある誰もが肥満になるわけではないが、遺伝的素質のない人でも肥満になることが    ある。いくつかの遺伝子が肥満に寄与すると同定され、研究者達は新しい治療の開発    を導き得るヒトにおける遺伝標的を同定するためのヒト肥満遺伝子マップを作成しつ    つある。
【００２４】
● 環境：健康な体重を増進する環境とは、栄養食物の合理的な分量の摂取と規則的な    身体活動を勧める環境である。健康な環境は肥満を阻止・治療し体重減少を維持する    ために全ての個人で重要である。環境における危険度の高い状態を認識し、意識的に    避けることは、体重制御の努力の助けになる。
【００２５】
● 行動：生涯にわたる健康な体重管理を行うことには、規則的な身体活動と栄養に気    をつけた食事が含まれる。体重減少と維持のための具体的な行動戦略には食餌療法と    運動パターンを日記に記録し追跡すること、低カロリー食を摂取すること、脂肪から    のカロリーを制限すること、運動により日常的にカロリーを消費すること、定期的に    体重をモニターすること、現実的なゴールを設定すること、および社会的支援ネット    ワークを広げることが含まれる。
【００２６】
上記の知識にも係わらず、世界における肥満した人の数は増加しつつある。従って、ボディマス分布を変える方法が必要になる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
驚くべきことに、全体的なボディマス分布を変える程に、ある化合物が体の食物処理を変更することが発見された。具体的には、これらの化合物を加えない同じ食物の消費と比較して、これらの化合物を食物に添加すると無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加する結果となる。言い換えれば、これらの化合物は消費された食物から作られる脂肪の量を減らすことができる。これらのボディマス変更化合物にはポリフェノールとミルク生物活性化合物が含まれる。
【００２８】
フラボノイドとポリフェノールがＡＣＥ阻害活性を有することも見出されている。理論に縛られるつもりはないが、ＡＣＥ阻害活性がこれらの化合物のボディマス組成を変える能力と関連していると考えられる。しかしながら、これらの化合物のボディマス組成を変える能力が、抗酸化性（すなわちポリフェノール）および／またはカルシウム取り込み効果（すなわちミルク蛋白質）とも関連していることは認められている。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
本発明の第１の態様では、少なくとも１つのヒドロキシル基を有し、ボディマス組成を変化する能力を有する、有効量の１つまたは複数の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを被検者に投与することを含む、全体の脂肪の比率を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによるボディマスの分布を変える方法が提供される
本発明の第１の態様はまた、少なくとも１つのヒドロキシル基を有し、ボディマス組成を変化する能力を有する、有効量の１つまたは複数の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグ、および許容し得る担体を含む治療用調合物を被検者に投与することを含む方法を提供する。
本発明の第１の態様はまた、少なくとも１つのヒドロキシル基を有し、ボディマス組成を変化する能力を有する、有効量の１つ以上の化合物、またはその生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む、脂肪の全体的な割合を減少する、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する割合を増加するために使用するボディマスの分布を変える治療用調合物を提供する。
【００３０】
本発明の第１の態様はまた、脂肪の全体的な割合を減少する、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加することによりボディマスの分布を変えるための薬剤の製造において、有効量の少なくとも１つのヒドロキシル基を有し、ボディマス組成を変化する能力を有する１つまたは複数の化合物、または生理学的に許容し得るアナログ、誘導体またはそのプロドラッグと、適当な担体との併用を提供する。
【００３１】
本明細書において、用語「少なくとも１つのヒドロキシル基を有し、ボディマス組成を変化する能力を有する化合物」とは、脂質の割合を減少、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加することによりボディマス組成を変化させる、ヒドロキシル基を含む任意の化合物を指す。その化合物は動物または植物由来の天然起源であるか、合成で製造される。動物起源の一例はペプチドを含む蛇毒である。植物起源の例は緑茶、ワイン、ココア、サトウキビ、サトウダイコン、サトウキビおよびサトウダイコン廃棄物、糖蜜およびＭａｇｎｏｌｉａ  ｌｉｌｉｆｌｏｒａおよびＭａｇｎｏｌｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ等の生薬由来のポリフェノールである。この様な化合物の他の例には（ｉ）アントシアニン、カテキン、ポリフェノール、カルコン、フラボノール、フラボン等のフラボノイド、および（ｉｉ）ポリペプチド、ロイシンおよび他の分枝鎖アミノ酸、およびホエーの抽出物等の乳製品生理活性物質が含まれる。少なくとも１つのヒドロキシル基を有し、ボディマス組成を変化する能力を有する化合物がフラボノイド、ポリフェノール、ミルク蛋白質、ＡＣＥ阻害ペプチド、糖蜜、糖蜜抽出物、高フェノール糖およびその混合物でなる群より選ばれることが好ましい。
【００３２】
本発明の第２の態様では、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを被検者に投与することを含む、脂肪の全体の割合を減少する、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加することによる、ボディマスの分布を変える方法が提供される。
【００３３】
本発明の第２の態様はまた、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグ、および許容し得る担体を被検者に投与することを含む、治療用調合物を被検者に投与することを含む方法を提供する。
【００３４】
本発明の第２の態様はまた、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを含む、脂肪の全体の割合を減少する、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加することにより、ボディマスの分布を変えるために使用する治療用調合物を提供する。
【００３５】
本発明の第２の態様はまた、脂肪の全体の割合を減少する、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加することによりボディマスの分布を変えるための薬剤の製造において、ＡＣＥ阻害活性を有する有効量の１つ以上の化合物、または生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体との併用を提供する。
【００３６】
本明細書では、用語「ＡＣＥ阻害活性を有する化合物」とはＡＣＥ阻害性を有し、脂肪の割合を減少する、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加することによりボディマス組成を変化する能力を有する任意の化合物を指す。その化合物は動物または植物等の天然起源であっても、合成で製造されてもよい。動物起源の例はペプチドを含む蛇毒である。植物起源の例はココア、サトウキビ、サトウダイコン、サトウキビおよびサトウダイコン廃棄物、糖蜜、ブドウ、ワイン、果物（ベリー類、石果、梨果、熱帯果実、ジュース）、野菜（球根、根、塊茎、葉、幹）、ハーブ、スパイス、ビーンズ、豆類、穀物（オオムギ、ソバ、コーン、キビ、カラスムギ、コメ、ライムギ、モロコシ、コムギ）、ナッツ（アーモンド、ビンロウジ、カシュー、ハシバミ、ピーナッツ、ペカン、クルミ）、脂肪種子、植物油、ビール、リンゴ酒、種子、緑茶、Ｍａｇｎｏｌｉａ  ｌｉｌｉｆｌｏｓａおよびＭａｎｇｏｌｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ等の生薬およびそれらの混合物由来のポリフェノールである。この様な化合物の他の例には（ｉ）アントシアニン、カテキン、ポリフェノール、カルコン、フラボノール、フラボン等のフラボノイド、および（ｉｉ）ポリペプチド、ロイシンおよび他の分枝鎖アミノ酸およびホエー抽出物等の乳製品生物活性物質が含まれる。ＡＣＥ阻害性を有する化合物がフラボノイド、ポリフェノー利、ミルク蛋白質、ココア、ココア製品、ココア抽出物、ブドウ抽出物、糖蜜、糖蜜抽出物、高フェノール糖およびそれらの混合物でなる群より選ばれることが好ましい。
【００３７】
本発明の第３の態様では、有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグを被検者に投与することを含む、脂肪の全体の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによるボディマス分布を変える方法が提供される。
本発明の第３の態様はまた、有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む治療用調合物を被検者に投与することを含む方法を提供する。
【００３８】
本発明の第３の態様はまた、有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体とを含む治療用調合物を被検者に投与することを含む、脂肪の全体の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変えるために使用する治療用調合物を提供する。
【００３９】
本発明の第３の態様はまた、脂肪の全体の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによるボディマス分布を変えるための薬剤の製造において、有効量の１つ以上のポリフェノールまたは生理学的に許容し得る誘導体またはそのプロドラッグと、許容し得る担体との併用を提供する。
【００４０】
本明細書で、用語「ポリフェノール」はココア、サトウキビ、サトウダイコン、サトウキビおよびサトウダイコン廃棄物、糖蜜、ブドウ、ワイン、果物（ベリー類、石果、梨果、熱帯果実、ジュース）、野菜（球根、根、塊茎、葉、幹）、ハーブ、スパイス、ビーンズ、豆類、穀物（オオムギ、ソバ、コーン、キビ、カラスムギ、コメ、ライムギ、モロコシ、コムギ）、ナッツ（アーモンド、ビンロウジ、カシュー、ハシバミ、ピーナッツ、ペカン、クルミ）、脂肪種子、植物油、茶、コーヒー、ビール、リンゴ酒、種子、緑茶、Ｍａｇｎｏｌｉａ  ｌｉｌｉｆｌｏｓａおよびＭａｎｇｏｌｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ等の生薬およびそれらの混合物起源の、またはそれらに由来する任意のポリフェノールを指す。ポリフェノールが糖蜜、糖蜜抽出物、高フェノール糖およびそれらの混合物起源であることが好ましい。ポリフェノールが高い抗酸化剤活性を有することが好ましい。
【００４１】
第４の態様では、被検者に有効量の糖蜜またはその抽出物を投与することを含む、脂肪の全体の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによるボディマス分布を変える方法を提供する。
本発明の第４の態様はまた、有効量の糖蜜またはその抽出物と、許容し得る担体とを含む治療用調合物を被検者に投与することを含む方法を提供する。
本発明の第４の態様はまた、有効量の糖蜜またはその抽出物と、許容し得る担体とを含む、脂肪の全体の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することにより、ボディマス分布を変化するために使用する治療用調合物を提供する。
【００４２】
本発明の第４の態様はまた、脂肪の全体の割合を減少する、および／または脂肪質量に対する無脂肪質量の比率を増加することによりボディマス分布を変えるための薬剤の製造における、有効量の糖蜜またはその抽出物と、適当な担体との併用を提供する。
【００４３】
本明細書で用いる用語「有効量」は、無脂肪質量の増加または脂肪質量の減少によるボディマス分布の変化に十分な量を指す。被検者の無脂肪質量の量が増加するか、または被検者の脂肪質量の量が減少する場合、無脂肪質量の脂肪質量に対する比率が増加する。無脂肪質量の脂肪質量に対する比率の変化が、必然的に全体重の変化に関与することに注意。動物に対する有効量の例は、食餌の１〜２％である。ヒトが一日当たり１０００ｇの食物を消費し、ポリフェノールの通常の消費が１ｇ／日であるとすると、有効量は２〜２０ｍｇ／日、より好ましくは２〜１０ｇ／日であると思われる。
【００４４】
ある化合物の脂肪の割合を減少する能力、および／または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率を増加する能力を、実施例中で議論されるマウス実験を用いて試験できる。対照と比較して統計的に有意の変化が得られた場合、その化合物を本発明で使用することができる。マウス実験の典型的な結果は、脂肪の割合の８〜１２％の減少、または無脂肪質量の脂肪質量に対する比率の４〜７％の増加である。悪液質に罹患したヒトでは、無脂肪質量の脂肪質量に対する比率の少なくとも１〜２％の増加が理想的である。
【００４５】
用語「治療用調合物」は腸内または腹腔内調合物、機能性食品、栄養補助剤、機能性食物およびハーブ調合物を含む広い用語である。適当な調合物の例には錠剤、粉末、咀嚼性錠剤、カプセル、経口懸濁物、懸濁物、エマルジョンまたは液体、子供用調合物、腸内投与剤、機能性食品、座薬、経鼻スプレー、飲料および食品が含まれる。担体はデンプンまたはポリマー結合剤、甘味剤、着色剤、乳化剤および被覆等の任意の適当な賦形剤を含み得る。担体は、好ましくは砂糖またはチョコレート等の食品製品または食品成分である。
【００４６】
治療用調合物は被検者への投与に適した任意の形でよい。治療用調合物を局所、経口または他の投与経路で投与し得る。
【００４７】
本明細書で用いる用語「被検者」は動物である。本明細書に記載の調合物および方法で恩恵を受け得る動物のタイプに制限はない。好ましくは被検者は哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。「動物」はウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ロバ等の家畜、ニワトリ、アヒル、シチメンチョウおよびガチョウ等の家禽、ネコ、イヌ等の家庭動物も含む。ヒトであるかヒト以外の動物であるかに係わらず、被検者は個体、動物、患者、宿主または受容者も指す。本発明の調合物と方法はヒト用医薬、化粧品および審美産業、様々な薬剤の他、一般動物、家畜および野生動物学に応用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
（実施例）
本発明の様々な実施態様を以下の非限定実施例を参照して説明する。
実施例１
本実施例では、本発明の方法で使用し得るフェノール性粉末のフェノール含有量と抗酸化剤活性とを比較する。
（方法）
３種のフェノール性粉末、すなわちＩＦＴ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、Ｈａｎｓｅｎブドウ抽出物ＨＷ６５−１０フェノール性粉末およびＶｉｎｌｉｆｅ（商標）ブドウ種子抽出粉末のフェノール含有量および抗酸化剤活性を比較した。粉末を５ｍｇ／ｍｌの濃度で８０％メタノールに溶解した。個々の分析の適した濃度にするにはさらに水で希釈しなければならなかった。これらの分析の結果を表１（下記）に示す。
（結果）
表１の結果から、粉末の相対的な抗酸化剤効率を比較することができる。表２は３種の粉末の非活性、すなわちフェノール単位あたりの抗酸化剤単位を示す。
「表」
2008542307.tif 000004
【００４９】
（考察）
これらの結果は、糖蜜粉末のフェノール含有量と抗酸化剤比活性がそれ以外の２種の粉末より低いことを示している。これは恐らく、様々な粉末間のフェノールプロフィルの差によるものと思われる。ＨＰＬＣ分析では、強力な抗酸化剤である没食子酸等の単純なフェノール酸の含有量が糖蜜では低いことを示唆している。これらの化合物はＸＡＤ１６樹脂に結合するには疎水性が不十分であると思われる。しかしながら、異なった抽出法によりこの様なより小さい親水性化合物を抽出することが可能であると思われ、それらが本発明に記載の方法で用いられる糖蜜抽出物に含有され得る。
実施例２
本実施例では未補強チョコレートと比較してフェノール補強チョコレートの抗酸化能を調べた。
（方法）
対照ミルクチョコレートの６片の抗酸化剤能（約１００ｇのブロックの各列から１片）と、フェノール強化ミルクチョコレートの１２片（交互に第１および第３、第２および第４の各列から２片）を分析のために選んだ。ミルクチョコレートはＣｏｏｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ．から提供された。重さ１．７〜２ｇの各試料を正確に秤量し、５０ｍＬチューブに入れた。２０ｍＬのヘプタンを加えてチョコレートを脱脂した。試料を遠心分離し、ヘプタンを静かに流し出した。試量をドラフト内に開放して放置しヘプタンの痕跡を除いた。２×２０ｍＬ分の８０％メタノールを用いて抗酸化剤を抽出したが、最初は２時間の抽出、２回目は終夜抽出した。第１および第２抽出液を一緒にし、水で５倍希釈後にＡＢＴＳ法を用いて二重分析した。
（結果）
「表」
2008542307.tif 000005
【００５０】
（考察）
対照チョコレートの抗酸化剤能はグラムあたり１．５８７±０．０３９ｍｇカテキン当量（平均値±標準偏差）であった。フェノール強化チョコレートの抗酸化剤能はグラムあたり１．９６１±０．１４２ｍｇカテキン当量（平均値±標準偏差）であった。これは対照チョコレートと比べて２１．２％の増加である。従って、チョコレートマトリックス中に有効量のポリフェノールを添加し、本発明に記載の方法に使用するに適した調合物を製造することが可能である。
実施例３
本実施例では、砂糖精製プロセスの異なった工程における様々なサトウキビ製品の抽出物のポリフェノール含有量を調べた。最初に得られる絞汁、最終絞汁、シロップ、糖蜜、低ポル糖、ミルマッド、茎頂部および泡のカテキン当量評価を行った。
（結果）
「表」
2008542307.tif 000006
【００５１】
「表」
2008542307.tif 000007
【００５２】
この分析から、糖蜜およびミルマッドからの抽出物は相当量のポリフェノールを含み、従って本発明に記載の方法に使用するに適した調合物中に添加し得ることが分かった。
実施例４
本実施例は、本発明に記載の方法に使用するための調合物に使用し得るポリフェノールを含有する糖製品の製造を示す。
【００５３】
図１のフローチャートは、こりフェノールに富んだサトウキビ糖蜜を製造するために用いるプロセスを示す。サトウキビ糖蜜の抽出は特許出願Ｎｏ．２００５／１１７６０８により詳細に議論される。
【００５４】
全体で９９％のスクロース、グルコースおよびフラクトース（グルコースとフラクトースの量は０．５％を超えない）、および１％の有機酸、無機物、ポリフェノール、抗酸化剤およびポリサッカライドの混合物を含む高ポルスクロースベースを調製した。この混合物は以下の組成を有する：
・ グラムあたり６００〜２１００μｇトランスアコニット酸、蓚酸、シスアコニット酸  、クエン酸、燐酸、グルコン酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、蟻酸および酢酸の混合物  であり、混合物の殆どはグラムあたり２００〜６００μｇの範囲のトランスアコニット  酸である
・ カルシウムとマグネシウムとカリウムの比率が５０：１５：３５である、グラムあた  り１５０〜６００μｇの無機物
・ ポリフェノールグラムあたり０．２〜０．５ｍｇカテキン当量
・ 抗酸化剤活性がグラムあたり０．４〜１．２マイクロモルの範囲である抗酸化剤、お  よび
・ グラムあたり２０〜６０μｇのポリサッカライド。
【００５５】
高ポルスクロースベースと上記で得られたポリフェノールに富んだ抽出物とを組み合わせて、ポリフェノールに富んだ甘味剤を調製した。
【００５６】
Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＥＳ／ＭＳで電子スプレーマススペクトロメトリー（ＥＳ／ＭＳ）を行った。試料をメタノール／水（８０：２０）に溶解し、２０μＬループに注入し、メタノール／水（８０：２０）で溶出した。コーン電圧４０ｋＶ、質量範囲５０〜７００Ｄａで負イオンモードでＭＳ分析を行った。糖生成物は相当量のポリフェノールを含み、本発明に記載の方法で使用するに適した調合物中に添加可能であった。
実施例５
本実施例では、本発明に記載の方法に使用し得るポリフェノールを含む市販チョコレートの製造を示す。
（干しブドウへの浸透）
浸透混合物：以下の混合物（２５リットル）が、１０００ｋｇのチョコレートに対して十分である１２５ｋｇの干しブドウに浸透するに十分であった。
【００５７】
２０リットルのワイン、例えばＳｈｉｒａｚ、ＭｅｒｌｏｔまたはＰｉｎｏｔ  Ｎｏｉｒ
５リットルのブドウ皮／種子抽出物
１２５ｍＬの香味料
上記混合物を大きい容器中でよく混ぜ、ブドウ皮／種子抽出物と香味料とがワインと確実によく混ざり、ブレンドされるようにゆっくり攪拌する。
【００５８】
香味料は、完成したチョコレートに必要な特質とプロフィルによって、任意の天然または合成香味料でよい。香味料はアルコール、モノサッカライド、ポリサッカライド、ポリデキストロース、ポリデキストリン、デキストリン、ポリオール、デンプン、プロピレングリコール、植物油、トリグリセリドまたは他の適当なベース／キャリアを有し得る。
【００５９】
非アルコール浸透混合物も、必要あればワイン等を非アルコール、脱アルコール等に置き換えて利用できる。さらに、非アルコールまたは脱アルコール香味料を浸透混合物に添加し、チョコレート中の干しブドウの味と多様性を改善することができる。
【００６０】
干しブドウ中への浸透：干しブドウと浸透混合物とを容器中で合せ、容器を回転して内容物をよく混合する。続いて容器を規則的に２４時間回転する。余分な液体を濾過して絞り、浸透干しブドウを乾燥棚上に広げ、空気を干しブドウ上に終夜流して温室（４０℃）に放置する。
（ブドウ種子粉末と香味料とを含むチョコレートの調製）
「表」
2008542307.tif 000008
【００６１】
正しい順序でコンチェに添加し、チョコレートの平均粒径が２０μ以下（１８〜２０μの範囲）になるまで４０℃で１２〜１６時間練り合わせる。次にＳｈｉｒａｚ、ＰｉｎｏｔまたはＭｅｒｌｏｔのいずれかの様にチョコレートに香味を加える。チョコレートはココアバターに対するミルク脂肪の比率０．１３を有する。
【００６２】
健康増進のため通常より多い量のポリフェノールを添加する場合、香味を増強するばかりでなく苦味を減少する役割もある一定範囲の香味料を加えることにより、チョコレート中の真の単一品種ワイン香味を増加することができる。香料化学の当業者は良い味、口当たりおよび他の官能性を改善するためにどの様な香味料混合物を使用し得るかを知っていると考えられる。
【００６３】
種子粉末の調製（０．５メートルトンのチョコレート用）：Ｖｉｎｌｉｆｅ（Ｔａｒａｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）ブドウ種子粉末２．２５ｋｇを秤量し、５ｋｇの溶融（４５℃）ココアバターに加える。攪拌しながらゆっくり添加し、粉末がココアバター中に均一の分散したことを確認する。混合中に空気の取り込みを避けるが、粉末がココアバター中によく分散したことを確認する。
【００６４】
チョコレートへ種子粉末の添加：保持タンク中で４０〜４５℃に保持された０．５メートルトン（５００ｋｇ）のワイン香味チョコレートに、分散種子粉末を含む５ｋｇのココアバターを添加する。ゆっくり添加し、タンク中で５分間、または均一に分散するまで混合する。
（浸干しブドウのチョコレートへの添加）
濾過し液切りした干しブドウ（約５．５〜５．８ｋｇ）を４０ｋｇの香味を付け調節したチョコレートと混合した。干しブドウの均一な分布を保証するため、混合物をよく混ぜなければならない。
【００６５】
次に干しブドウ／チョコレート混合物を型抜きし冷却する。
【００６６】
ココアバター中に分散したワインおよび水溶性ポリフェノールが浸透した乾燥干しブドウまたは果実を用いることにより、一般的に困難なチョコレート等の食物中への添加の問題を解決することができる。ワイン香味を用いて味をさらに改善し、本発明に記載の方法に使用するポリフェノールおよび抗酸化剤含有量、およびＡＣＥ阻害活性が増強された独特の味の製品を製造できる。
実施例６
本実施例では、糖ポリフェノールまたは実施例４の糖蜜抽出物を試験し、マウスのボディマス分布に対する効果を測定した。
（方法）
本実施例では疾患のない６週齢雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウス（ｎ＝６５）を使用した。マウスをＡｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｃａｎｎｉｎｇ  Ｖａｌｅ、ＷＡ、Ａｕｓｔｒａｌｉａから購入した。
動物舎に到着の数日後に、マウスを通常の固形飼料（脂肪３％）から高脂肪高炭水化物飼料（脂肪２１％、蛋白質２０％、炭水化物４９％、セルロース５％、ビタミンおよび無機物５％）に移行した。飼料はＳｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｆｏｏｄ、Ｇｌｅｎ  Ｆｏｒｒｅｓｔ、ＷＡ、Ａｕｓｔｒａｌｉａで特別に調合した。  全てのマウスをグループあたり２匹、１２：１２の明暗サイクル、１９〜２１℃で飼育した。
【００６７】
３グループのマウス（グループあたりｎ＝１３匹）を（１）１％ポリフェノール含有粉末、（２）２％ポリフェノール含有粉末、（３）糖蜜、（４）１％スクロース（対照）を含む高脂肪高炭水化物飼料で飼育した。本実施例で用いた飼料は９８〜９９％基本飼料プラス１〜２％の上記添加物を組み合わせて製造した。マウスにその飼料を９週間与えた。
【００６８】
９週間の期間中、食物と水の摂取量および体重を毎週測定した。９週目にマウスの体組成を２重エネルギーＸ線吸光光度分析法（ＤＥＸＡ）で測定した。
２重エネルギーＸ線吸光光度分析法（ＤＥＸＡ）：マウスの体全体の組成を、小動物用に最適化したソフトウエアパッケージを備えたＤＥＸＡ（Ｎｏｒｌａｎｄ  ＸＲ−３６）を用いて評価した。軽い麻酔（ＫｅｔａｍｉｌおよびＲｏｍｐｕｎ）下にマウスを走査した。体脂肪％、骨中無機物含有量（ＢＭＣ）、骨中無機物密度（ＢＭＤ）および無脂肪質量等の情報を提供する体全体の走査モードを使用した。マウスは腹臥位で、走査テーブル中央に長軸に平行に置いた。
（結果と考察）
共に１および２％（ＰＰ１％、ＰＰ２％）高脂肪飼料に添加されたフェノール粉末と糖蜜とは、体脂肪を減少し（グラム−図４参照、体重の％−図５参照）無脂肪質量を増加した（図３参照）。体重と骨中無機物含有量は顕著には変化しなかった（図２および６）。制限食による干渉の９週後にＤＥＸＡを行った。ＤＥＸＡ体重（無脂肪組織、骨および脂肪組織の和）は、体重計で測定した体重との関連が高かった（ｒ＝０．９８）。
【００６９】
図２〜７で、一元配置の分散分析による統計的解析とそれに続く対照に対するフィッシャーＬＳＤポストホック試験で*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１、***ｐ＜０．００１が得られた。
【００７０】
食物と水の摂取の間で差はなかった（図示せず）。数値は糖蜜が体脂肪を減少することを示さなかった：脂肪％、平均値（ＳＥＭ）；対照＝３６．９（２．３）、糖蜜＝３０．２（１．７）、ＰＰ１％＝２６．３（１．６）、ＰＰ２％＝２５．０（２．８）
（結論）
無脂肪筋肉質量を有意に増加し、脂肪の割合を有意に減少することにより、ポリフェノール粉末が体組成を変化することを結果は示した。平均して１１．９％の減少と、無脂肪筋肉質量の６％の増加は、肥満、糖尿および悪液質に罹患した対象の予後を有意に改善すると思われる。
実施例７
本実施例では、実施例６で使用された実施例４の糖蜜抽出物を、抗酸化剤能（ＯＲＡＣ）とα−グルコシダーゼおよびα−アミダーゼ活性について試験した。
（材料と方法）
試料の調製：試料をすり潰し、約５０ｍｇを５ｍＬのメタノールに溶解した。試料を渦流攪拌し、３０分間超音波処理し、５分間遠心分離した（１９００  ＲＣＦ）。上澄みを集め、乾固した。試料を１０ｍｇ／ｍＬでメタノールに再溶解した。
【００７１】
糖蜜粉末試料は直接水可溶であった。ＯＲＡＣ分析前に糖蜜粉末を１ｍｇ／ｍＬの濃度で燐酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した。糖蜜粉末試料を上記と同様に抽出し、比較ＯＲＡＣデータとした。α−アミラーゼおよびα−グルコシダーゼ分析の前に糖蜜粉末を、水に溶解した。
【００７２】
酸素ラディカル吸光度（ＯＲＡＣ）分析：本実験で用いたＯＲＡＣ分析では、３７℃で２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）２塩酸（ＡＡＰＨ）により誘発されたパーオキシラディカルに対する試験試料中の抗酸化剤の除去活性を測定した。蛍光プローブとしてフルオレセインを使用した。試料に対する親水性ＯＲＡＣ値を測定した。
【００７３】
ＡＷＡ（アセトン：水：酢酸７０：２９．５：０．５）による逐次希釈で、初期スクリーンからの概略抗酸化剤能によって試料に対して適切な濃度から出発し、抽出物／試料をＯＲＡＣ手順を用いて４重に分析した。正の対照として緑茶抽出物を用い、試料調製毎に抽出物を準備した。
【００７４】
糖蜜粉末試料を燐酸緩衝液（ｐＨ７．４）に直接溶解し分析したが、この場合ＡＷＡの代わりに燐酸緩衝液（ｐＨ７．４）を用いた。緑茶メタノール抽出物を正の対照として用い、燐酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した。
【００７５】
ビタミンＥの水溶性アナログであるＴｒｏｌｏｘ（トロロックス）を参照標準試料としてし使用した。ＡＷＡ中で１００、５０、２５および１２．５μＭに調製したトロロックスから標準曲線を作成した。
【００７６】
簡単に言えば、２０μＬの試料／標準／対照／ブランク（ＡＷＡ）、１０μＬのフルオレセイン（６．０×１０-7Ｍ）および１７０μＬのＡＡＰＨ（２０ｍＭ）を各ウエルに加えた。負荷直後に、プレートを３７℃に予熱したプレートリーダーに移し、１分間隔で蛍光を３５回測定した。蛍光の読取値を溶媒のブランクウエルと対比した。トロロックス濃度と蛍光減衰曲線下の実質面積間の回帰式を用いてＯＲＡＣ値を計算し、試料ｇあたりのマイクロモルトロロックス当量（ＴＥ）として表した。
グルコース代謝酵素阻害分析
α−グルコシダーゼ：本分析前に糖蜜粉末試料を水に溶解した。フコイダン（Ｆｕｃｏｉｄａｎ）を正の対照として用い、水に溶解した。
【００７７】
グルコシダーゼ酵素を０．７ｍｇ／Ｌの濃度で酢酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ４．５）に溶解した。これにより最終濃度が０．２Ｕ／ｍＬとなった。９６ウエルプレートの各ウエルに５０μＬの酵素を添加した。酵素の代わりに酢酸緩衝液を入れた対応するウエルセットも作成した。試料／対照を３重に各ウエルに加え（５μＬ）、次いで基質４−ニトロフェニル−α−Ｄ−グルコピラノシドを加えた（最終濃度２ｍＭ）。プレートに蓋をし、振盪して３７℃で３０分間インキュベーションした。０．２ＭＮａ2ＣＯ3（１００μＬ／ウエル）を加えて反応を停止した。Ｖｉｃｔｏｒ2プレートリーダーを用いて吸光度を４０５ｎｍで測定した。
【００７８】
試料、基質および緩衝液を含むウエルの吸光度をグルコシダーゼ酵素を含む対応するウエルの吸光度から差し引き、試料による阻害パーセントを溶媒対照に対比して計算した。
【００７９】
α−アミラーゼ：糖蜜粉末試料を水に溶解した。正の対照としてアカルボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ）を用いた。アカルボース錠剤を砕き、５０％エタノール水溶液に溶解した（５６ｍｇ／ｍＬ）。溶液を超音波処理し、２０００ＲＣＦで１０分間遠心分離した。上澄を集め、４℃で保存した。
【００８０】
試料１のα−アミラーゼ活性に対する効果を測定するため、Ｅｎｚｃｈｅｋ  Ｕｌｔｒａ  Ａｍｙｌａｓｅ分析キットを用いた（分子プローブＥ３３６５１）。簡単に言えば、貯蔵液を水で１：１０に希釈してａ１×反応緩衝液（キットから供給）を調製した。１００μＬの５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）、次いで９００μＬの１×反応緩衝液を加え、次いで１×反応緩衝液で２０倍希釈することにより、凍結乾燥デンプン基質（ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＦＬコンジュゲートコーン由来のＤＱ（商標）デンプン）を調製した。ブタα−アミラーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａ３１７６）を０．５ｍｇ／ｍＬで蒸留水に溶解してアミラーゼ保存液を調製した。アミラーゼ保存液を１×反応緩衝液で希釈して１２５Ｕ／ｍＬの濃度とした。
【００８１】
９６ウエルプレートフォーマットを用いて分析を行った。各ウエルに１００μＬのアミラーゼ酵素溶液を加え、次いで試料と対照とを加えた（５μＬ／ウエル）。次いで基質溶液（９５μＬ／ウエル）を加え、Ｖｉｃｔｏｒプレートリーダーを用いて蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３０ｎｍ）を測定した。
（結果と考察）
各製品の収率を表６に示す。
「表」
2008542307.tif 000009
【００８２】
抗酸化剤能：メタノール抽出物を製造して調整した試料の抗酸化剤能を表７に示す。糖蜜粉末試料は最大の抗酸化剤能を示し、抽出物を作成した場合、ＯＲＡＣ値は５０２０μモルＴＥ／試料で、緩衝液中に直接溶解した場合、４３９５μモルＴＥ／試料であった（表８）。これらの値は対応する緑茶の値よりかなり高かった。
「表」
2008542307.tif 000010
【００８３】
（グルコース代謝酵素阻害分析）
α−グルコシダーゼの阻害：フコイダン対照と比較して、糖蜜粉末試料１のα−グルコシダーゼの阻害は限定的であった（表９）。糖蜜粉末試料が高いバックグラウンド吸光度を示すので、それをグルコシダーゼ酵素を含む対応するウエルの測定値から差し引いてもこの分析からのデータは問題である。阻害が相対的に低いバックグラウンド吸光度を有する溶媒対照と対比して測定されるので、この可能性はα−グルコシダーゼ活性を過剰に見積もることになる。
「表」
2008542307.tif 000011
【００８４】
（α−アミラーゼの阻害）
対照であるアカルボースと比較して試料１はα−アミラーゼ活性を阻害しなかった（表１０）。試料１がα−アミラーゼ活性を十分に阻害しないため、ＩＣ50値をこのデータから計算することはできなかった。試料をより高い濃度で試験できればＩＣ50を計算できたと思われるが、この様な濃度の生物学的関連性は疑問である。
「表」
2008542307.tif 000012
【００８５】
（結論）
本実施例は、糖蜜抽出物が強力な抗酸化剤であるという抗酸化剤能の他の測定法により実施例１および４を明白に支持する。糖蜜粉末の相対的力価は以下の通りである：
ブドウ種子抽出物＞ブドウ抽出物＞糖蜜粉末＞緑茶
緑茶、ＨＣＡ（ヒドロキシクエン酸）およびイヌリン等の製品は、この様な製品の摂取がグルコース吸収を遅らせる、および／またはインスリンの食欲制御を調節するという仮説に基づき体重減少の恩恵を主張している。グルコース吸収はグルコシダーゼとアミラーゼによって制御されている。糖蜜抽出物は弱いグルコシダーゼ活性を有し、従って体組成変化は他の作用機序によるものと考えられる。その機構にはＡＣＥ阻害が含まれるという可能性が高い。
実施例８
本実施例は茶から抽出されたポリフェノールのボディマス分布に対する効果を検討する。
（方法）
動物と処置：雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝４８）を３週齢でＡｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｃａｎｎｉｎｇ  Ｖａｌｅ、ＷＡ）から購入した。ラットを１週間Ｐｕｒｉｎａラット固形飼料と水に順応させた。４週齢から全ての動物に半合成高脂質飼料（脂肪１５％、表６）（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｆｏｏｄ、Ｇｌｅｎ  Ｆｏｒｅｓｔ、ＷＡ）を与え、４種の液体試料のうちの１つを投与した：緑茶、紅茶、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）または水。茶と茶抽出物は液体摂取の１００％で与えた。ラットを高脂質飼料と茶試料で２９週まで飼育した。食物と液体の摂取を毎日測定し、体重を毎週記録した。
「表」
2008542307.tif 000013
【００８６】
緑茶および紅茶：緑茶および紅茶ティーバッグ（Ｄｉｌｍａｈ天然緑茶（商標）およびＤｉｌｍａｈ紅茶（商標））を地元小売商から購入した。１０個のティーバッグ（茶葉約２ｇ／バッグ）を蓋付き容器中で３分間、１リットルの沸騰水道水に浸した。次に抽出した茶からティーバッグを除き、冷たい水道水で茶試料を容積２リットルにした。これによりティーバッグ１つにつき約２００ｍｌの水となった。茶試料を２日おきに新しく調製した。
【００８７】
エピガロカテキン没食子酸塩：エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ（９８％）、Ｓａｐｐｈｉｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＶＩＣ）を飲料水に溶解し、１ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与した。ＥＧＣＧ試料は毎日新しく調製した。
グルコース耐性試験：液体を自由に取らせてラットを終夜絶食させた。翌日の朝、ラットを拘束し、尾を局所麻酔薬（キシロカイン）中に１分間浸した。尾の先端から小さな断片を切り取り、少量の血が出るまで尾を付け根から先端へマッサージした。血液試料を集め（Ｈｅｍｏｃｕｅミクロキュベット）、断食基礎血糖試料を採取した（Ｈｅｍｏｃｕｅ  Ｇｌｕｃｏｓｔａｔ血糖アナライザー）。次に矯正給餌により経口グルコース負荷（４０％グルコース、ボーラス投与、２ｇ／体重ｋｇ）を与え、３０分間隔で２時間、血糖値を測定した。
【００８８】
２重エネルギーＸ線吸光光度分析法（ＤＥＸＡ）：Ｈｏｌｏｇｉｃ  ＱＤＲ−４０００／Ｗ吸光度光度計を用いて２重エネルギーＸ線吸光光度分析法により体内消費を測定した。ラットを軽く麻酔し（Ｎｅｍｂｕｔａｌ、Ｉ．Ｐ、４０ｍｇ／ｋｇ）、走査プラットホーム上に仰臥させた。尾を定位置にテープで止め、全身走査を行った。脂肪、無脂肪および全質量を測定すると同時に、脂肪比率パーセントおよび骨中無機物含有量を測定した。ＤＥＸＡで測定した全質量はラットを秤量した質量との相関が高かった。
【００８９】
統計的解析：グルコース耐性試験の結果を二元配置の分散分析（反復測定）を用いて比較し、ＤＥＸＡと血漿インスリンとの結果を比較するために一元配置の分散分析を用いた。２つの解析の後にＬＳＤ検定を行った。ｐ＜０．０５の場合に有意の差とした。全ての結果は平均値±ＳＥＭで表される。
（結果と考察）
図８〜１６は得られた結果を示す：
・ 処置の結果として血糖値の変化は観測されなかった。
・ 全ての処置でラットの体重は同様であった。ポリフェノールは全体重を変化させなか  った。
・ １１および１８週で、緑茶および紅茶処置に対する脂肪質量の割合は水処置の対照よ  り有意に低かった。１８週でＥＧＣＧに対する脂肪質量の割合の結果も有意に異なって  いた。１８週で、脂肪質量のグラム数は水処置のものより有意に低かった。水対照と同  じ食餌である場合、ポリフェノールによって脂肪の生成がより少なくなった。
・ １１および１８週で、緑茶およびＥＧＣＧ処置に対する無脂肪質量のグラム数は水対  照のものより有意に高かった。ポリフェノールによって無脂肪質量の生成がより多くな  った。緑茶と紅茶との間のポリフェノール含有量の差が、水対照と比較して紅茶が無脂  肪質量を有意に変化させなかったという事実に対する理由であると思われる。
実施例９
本実施例では、脂肪質量減少の表現型を示すかどうかを決定するため、アンギオテンシン変換酵素ノックアウト（ＡＣＥ−／−）マウスの評価を行った。
（材料と方法）
マウス：雄および雌の異型接合ＡＣＥノックアウトマウス（＋／−）をＰｉｅｒｒｅ  Ｍｅｎｅｓｏｎ研究室（Ｉｎｓｅｒｎ、Ｕ３６７、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）から購入した。マウスを動物舎中でＣ５７ＢＬ／６Ｊ基礎飼料で飼育した。異型（ＡＣＥ＋／−）マウスを交配し、野生型（ＡＣＥ＋／＋）および同型接合ＡＣＥゼロ子孫（ＡＣＥ−／−）を生産した。ＡＣＥ（−／−）およびＡＣＥ（＋／＋）子孫の遺伝子型を決めるため、２重ラベルＴａｑｍａｎ（商標）プローブ法（Ａｐｐｌｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を取り込むリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を用いた。マウスを傾斜グリル蓋付きの個別プラスチックケージ（Ｗｉｒｅｔａｉｎｅｒｓ、Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）中に入れた。食餌（Ｂａｒａｓｔｏｃ、Ｍｏｕｓｅ  Ｂｒｅｅｄｅｒキューブ、Ｂａｒａｓｔｏｃ  Ｓｔｏｃｋｆｅｅｄｓ、Ａｕｔｒａｌｉａ）を傾斜部上で任意に取ることができ、水道水にも自由に接近できた。マウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。１２月齢であり、同じ飼育籠の条件に保った年齢の一致する雄ＡＣＥ（＋／＋）および雌ＡＣＥ（−／−）ペアを研究のために選んだ。摂取した食物と水の量を１週間、毎日モニターした。
【００９０】
磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）技術による脂肪組織分布のインビボ可視化：局部体脂肪分布を磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）で可視化した。水平４．７ＴＯｘｆｏｒｄ磁石を備えたＢｒｕｋｅｒ  ＢＩＯＳＰＥＣ４７／３０スキャナーで映像を得た。プロトン密度強調軸方向映像を以下のパラメーターで得た：スライス数２０；スライス厚み１ｍｍ；視野（ＦＯＶ）６ｃｍ；マトリックス２５６×２５６；繰り返し時間（ＴＲ）８１５ｍｓ；エコー時間（ＴＥ）１７．９ｍｓ。マウスを誘導チャンバー中に置き、医薬グレード空気中の濃度５％、ついで濃度２％に減少したのイソフルラン（Ａｂｂｏｔｔ  Ａｕｓｔｒａｌｉａｓｉａ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ、Ｓｙｄｎｅｙ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に曝して、麻酔した。
【００９１】
２重エネルギーＸ線分光吸光度法による体組成分析（ＤＥＸＡ）：ＡＣＥ（−／−）およびＡＣＥ（＋／＋）マウスの体全体の組成の評価を、小動物用に最適化したソフトウエアパッケージ（バージョン３．０７）を備えたＤＥＸＡ（Ｈｏｌｏｇｉｃ  ＱＤＲ４５００、Ｈｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｃ．  ＵＳＡ）を用いて行った。ケタミン（Ａｐｅｘ  Ｌａｂ．の１００ｍｇ／ｍＬのＫｅｔａｐｌｅｘ０．７５ｍＬ）およびキシラジン（Ｂａｙｅｒの２０ｍｇ／ｍＬのＲｕｍｐｕｎ０．２５ｍＬ）の混合物で軽い麻酔（０．０２ｍｌ／体重ｇ）を行い、伏臥位でマウスを走査した。
【００９２】
血液分析：実験の最後に、上記のケタミンとキシラジンの混合物を腹腔注射する麻酔下で心臓から放血してマウスを殺した。ヘパリン被覆注射器で血液を集め、毛細管に試料を吸入後直ちにヘマトクリットを測定し、その後ミクロ遠心器（ＨＥＲＭＬＥ  Ｚ２３３Ｍ−２、Ｍｅｄｏｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）中で、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。続いて血漿を冷却遠心器（Ｓｏｒｖａｌ−ＲＴ７）中で３，０００ｒｐｍ、１５分間遠心して分離し、生化学分析が終了するまで−８０℃で保存した。血漿トリグリセリド、全コレステロールおよび血糖値を市販キット（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｎｃ．、Ｆｕｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ、ＵＳＡ）に記載の手順に従って分光光度法で測定した。ＡＣＥ（−／−）およびＡＣＥ（＋／＋）マウス（ｎ＝６）で、血漿レプチンを前記の様に測定した。
【００９３】
体芯温度（直腸温度）の測定：デュアルチャネルＦｌｕｋｅ５２（Ｊｏｈｎ  Ｆｌｕｋｅ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ）電子温度計に接続したＫ型熱電対で温度を測定した。直腸温度を測定するため、熱電対（先端をシリコンで被覆）を各マウスの肛門括約筋中に２ｃｍ挿入した。熱電対の先端と接続ワイヤーを局所麻酔剤および潤滑剤として５％ｗ／ｖリドカインゲル（キシロカイン、Ａｓｔｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）で被覆した。温度測定を４日連続で同時刻に行い、これらの４回の実験の平均値を採用した。
【００９４】
走行ホイール上の自発身体活動：グリル蓋を有する個々のプラスチックケージに固定した速度計（走行ホイール径で補正したＳｉｇｍａ  Ｓｐｏｒｔ  ＢＣ７００）を備えた走行ホイールで、マウスが１４日間の間いつでも自由に走れるようにしておいた。走行距離（ｋｍ）および速度（ｋｍ／ｈ）を毎日、１０日間測定した。マウスに食餌と水を自由に与えた。
【００９５】
糞塊脂肪含有量の分析：糞をマウスケージから１週間採集し、分析まで冷凍庫（−２０℃）中に保存した。クロロホルム：メタノール２：１溶液を用いて５ｇの糞から脂質を抽出した。室温で２４時間抽出後に全脂質含有量を重量分析で求めた。資質抽出残渣につき糞の乾燥重量を測定した。脂肪の重量を糞の残渣の重量に加えて、糞の全乾燥重量を求めた。
【００９６】
統計解析：全てのデータは平均値±ＳＥＭで報告される。２つのグループの差をスチューデントｔ検定（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ、Ｓｔａｔｓｏｆｔ、ＵＳＡ）で解析した。
（結果）
「表」
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【００９７】
数値は平均値±ＳＥＭで表される。***ｐ＜０．００１（ＡＣＥ−／−対ＡＣＥ＋／＋）
体重、体脂肪、食餌及び水の摂取：ＡＣＥ（＋／＋）マウスと比較して、ＡＣＥ（−／−）マウスは１４〜１６％体重が少なく（ｐ＜０．０１；図１７Ａ）；体脂肪が５０〜５５％少なかった（ｐ＜０．００１；図１７Ｂ）。ＡＣＥ（−／−）マウスはＡＣＥ（＋／＋）マウスと比較して無脂肪ボディマスの比率が顕著に増加していた（図１７Ｃ）。
【００９８】
食餌の摂取は同程度であったが（図１８Ａ）、ＡＣＥ（−／−）マウスの水の摂取はＡＣＥ（＋／＋）マウスの２倍以上であった（ｐ＜０．００１；図１８Ｂ）。ＡＣＥ（−／−）マウスの血中レプチンレベルはＡＣＥ（＋／＋）マウスより低い傾向であり（１．５±０．３対８．１±２．８ｎｍｏｌ／Ｌ；Ｆ（１，４）ｄｆ＝５．６０、ｐ＜０．０７、グループあたりｎ＝３）、体脂肪と相関していた（ｒ＝０．８５、ｐ＜０．０５）。
骨：骨無機物含有比率（２．２±０．０６対２．１±０．０５、グループあたりｎ＝７）または骨中無機物密度（０．０７６±０．００２対０．０７８±０．００１ｇ／ｃｍ2、グループあたりｎ＝７）のいずれも、ＡＣＥ（−／−）マウスとＡＣＥ（＋／＋）マウスとの間で有意差は見られなかった。
【００９９】
ＭＲＩによる局部脂肪質量の可視化：プロトン密度強調ＭＲＩ像で明るく白い領域は脂肪である。一連の軸方向のイメージを目で比較すると、ＡＣＥ（＋／＋）マウスと比較して、ＡＣＥ（−／−）マウスで脂肪組織が顕著に減少していることが示された（図１９）。この効果は、矢印で示す腹部脂肪質量で最も顕著である。
【０１００】
体芯温度、自発身体運動レベルおよび脂肪排出：体芯温度（図２０Ａ）、自発運動（平均走行距離、図２０Ｂ；速度、図２０Ｃ）または糞中の脂肪の割合（図２０Ｄ）ではＡＣＥ（−／−）マウスとＡＣＥ（−／−）マウスとの間で有意差は見られなかった。
【０１０１】
ヘマトクリットおよび血漿組成：ＡＣＥ（＋／＋）マウスと比較してＡＣＥ（−／−）マウスではヘマトクリットが低かった（ｐ＜０．００１）。血漿グルコース、トリグリセリド（ＴＧ）またはコレステロールレベルに差はなかった（表１２）。
結論
ＡＣＥ欠乏動物モデルと様々なポリフェノール源（茶、糖蜜および糖蜜抽出物）を用いて同じ生理学的変化を与えると、その結果はＡＣＥ阻害機構を経てポリフェノールが作用する影響を支持している。
【０１０２】
明細書とクレームで用いた用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」および用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」の他の複数の形式は、クレーム対象である本発明からいかなる変形または追加を除外するよう制限するものではない。
【０１０３】
本発明に対する修正および改良は当業者に容易に自明のことであると思われる。この様な修正と改善も、本発明の範囲内であることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
本発明の様々な実施態様／態様を以下の図面を参照して説明し、（アステリスクは有意な差を強調するものである）。
【図１】実施例４で用いる抽出法を示す。
【図２】実施例６の骨中無機物含有量の結果を示す。
【図３】実施例６の徐脂肪体重の結果を示す。
【図４】実施例６の脂肪質量の結果を示す。
【図５】実施例６の脂肪の割合の結果を示す。
【図６】実施例６のＤＥＸＡの結果による全体重を示す。
【図７】実施例６の全体重の結果を示す。
【図８】実施例８のグルコース負荷時点の体重を示す。
【図９】実施例８のＤＥＸＡ分析時の体重を示す。
【図１０】実施例８のＤＥＸＡ分析時の脂肪質量の割合を示す。
【図１１】実施例８のＤＥＸＡ分析時の脂肪質量（グラム）を示す。
【図１２】実施例８のＤＥＸＡ分析時の無脂肪質量（グラム）を示す。
【図１３】実施例８の血糖の結果を示す。
【図１４】実施例８の食物摂取の結果を示す。
【図１５】実施例８の液体摂取の結果を示す。
【図１６】実施例８の肝臓脂肪酸化の結果を示す。
【図１７】ＡＣＥ＋／−マウス（白抜きバー）およびＡＣＥ−／−マウス（黒塗りバー）における体重（Ａ）、体脂肪の比率（Ｂ）および無脂肪質量の比率（Ｃ）を示す。数値は平均値±ＳＥＭ（グループあたりｎ＝７）、*ｐ＜０．０５；**ｐ＜０．０１；***ｐ＜０．００１
【図１８】ＡＣＥ＋／＋マウス（白抜きバー）およびＡＣＥ−／−マウス（黒塗りバー）における食物摂取（Ａ）及び水摂取（Ｂ）を示す。数値は平均値±ＳＥＭ（グループあたりｎ＝７）、***ｐ＜０．００１
【図１９】ＡＣＥ＋／＋マウス（Ａ）およびＡＣＥ−／−マウス（Ｂ）の体全体のプロトン密度強調軸方向ＭＲＩ像を示す。明るく白い領域は脂肪を示す。画像の各シリーズは１匹の動物から得られたデータを示す。白矢印の先端は男性様脂肪を示す。
【図２０】直腸温度（Ａ）、自発走行ホイール活性（ＡＣＥ＋／＋マウス（白抜きバー）およびＡＣＥ−／−マウス（塗つぶしバー）における一日あたり走行距離（Ｂ）、速度（Ｃ）、および糞中の脂肪の割合（Ｄ））。数値は平均値±ＳＥＭ（直腸温度および自発走行ホイール活性測定ではグループあたりｎ＝５；糞脂肪分析ではＡＣＥ（−／−）：ｎ＝６、ＡＣＥ（＋／＋）：ｎ＝７）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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