(57)【要約】  本発明は、式Ｉの新規コロソリン酸類似体に関する。式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、前記類似体のそれぞれにおいて、以下に示す通りである：１．Ｒ1＝ＣＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ、またはＲ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ２．Ｒ1＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ３．Ｒ1＝ＣＯＣ５Ｈ４Ｎ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ４．Ｒ1＝ＣＯＣＨ２ＮＨ２・ＨＣｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ５．Ｒ1＝ＣＯＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２・ＨＣｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ６．Ｒ1＝ＣＯＣＨ：ＣＨＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３  ７．Ｒ1＆Ｒ２＝ＳＯ２、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ８．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２  ９．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣ６Ｈ５  １０．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２  １１．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＨ  １２．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨ  １３．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３  １４．Ｒ1＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３  １５．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３  １６．Ｒ1＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３  １７．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  １８．Ｒ1＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  １９．Ｒ1＆Ｒ２＝ＳＯ２、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ  ２０．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２  ２１．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２  ２２．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３  ２３．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＨ２ＯＨ  ２４．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＨＯ  ２５．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＯＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３  ２６．Ｒ1＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＆Ｒ５＝ＯＣＯ。これらの化合物は、優れた血糖降下活性および５−リポキシゲナーゼ抑制活性を示す。これらの化合物はまた腫瘍の成長も抑制する。既知の助剤と表題の化合物とを含む医薬組成物も本発明の範囲内である。 2008505886.tif 000009【選択図】なし
2008505886.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉで表される新規コロソリン酸類似体。
【化１】
2008505886.tif 000008
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、前記類似体のそれぞれにおいて、以下に示した通りである：
１．Ｒ１＝ＣＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨまたはＲ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
２．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
３．Ｒ１＝ＣＯＣ５Ｈ４Ｎ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
４．Ｒ１＝ＣＯＣＨ２ＮＨ２・ＨＣｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
５．Ｒ１＝ＣＯＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２・ＨＣｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
６．Ｒ１＝ＣＯＣＨ：ＣＨＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
７．Ｒ１＆Ｒ２＝ＳＯ２、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
８．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２
９．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣ６Ｈ５
１０．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２
１１．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＨ
１２．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨ
１３．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１４．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１５．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１６．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１７．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
１８．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
１９．Ｒ１＆Ｒ２＝ＳＯ２、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
２０．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２
２１．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２
２２．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
２３．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＨ２ＯＨ
２４．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＨＯ
２５．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＯＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３
２６．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＆Ｒ５＝ＯＣＯ］
【請求項２】
Ｒ２がＣＯＣＨ３であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＨであり、３−Ｏ−アセチルコロソリン酸（１）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項３】
Ｒ１がＣＯＣ５Ｈ４Ｎであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４がＨ、Ｒ５がＣＯＯＨであり、２−Ｏ−ニコチノイルコロソリン酸（３）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項４】
Ｒ１がＣＯＣＨ２ＮＨ２・ＨＣｌであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＨであり、２−Ｏ−グルシルコロソリン酸塩酸塩（４）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項５】
Ｒ１がＣＯＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２・ＨＣｌであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＨであり、２−Ｏ−アラニルコロソリン酸塩酸塩（５）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項６】
Ｒ１がＣＯＣＨ＝ＣＨＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＣＨ３であり、２−Ｏ−（３，４，５−トリメトキシシンナモイル）コロソリン酸メチル（６）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項７】
Ｒ１とＲ２が一緒にＳＯ２を形成し、Ｒ３、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＨであり、２α，３β−ジヒドロキシウルサ−１２−エン−２８−オイン酸２，３−環状硫酸エステル（７）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＮＨ２であり、コロソールアミド（８）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項９】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＮＨＰｈであり、Ｎ−フェニルコロソールアミド（９）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、Ｎ−（２−アミノエチル）コロソールアミド（１０）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＨであり、Ｎ−コロソリルピペラジン（１１）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）コロソールアミド（１２）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１３】
Ｒ１とＲ２がＣＯＣＨ３であり、Ｒ３とＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＣＨ３であり、ジアセチルコロソリン酸メチル（１４）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１４】
Ｒ１とＲ２がＨであり、Ｒ３とＲ４が一緒にＯを形成し、Ｒ５がＣＯＯＣＨ３であり、１１−ケトコロソリン酸メチル（１５）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１５】
Ｒ１とＲ２がＣＯＣＨ３であり、Ｒ３とＲ４が一緒にＯを形成し、Ｒ５がＣＯＯＣＨ３であり、ジアセチル−１１−ケトコロソリン酸メチル（１６）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１６】
Ｒ１とＲ２がＨであり、Ｒ３とＲ４が一緒にＯを形成し、Ｒ５がＣＯＯＨであり、１１−ケトコロソリン酸（１７）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１７】
Ｒ１とＲ２がＣＯＣＨ３であり、Ｒ３とＲ４が一緒にＯを形成し、Ｒ５がＣＯＯＨであり、ジアセチル−１１−ケトコロソリン酸（１８）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１８】
Ｒ１とＲ２が一緒にＳＯ２を形成し、Ｒ３とＲ４が一緒にＯを形成し、Ｒ５がＣＯＯＨであり、２α，３β−ジヒドロキシウルサ−１２−エン−１１−オン−２８−オイン酸２，３−環状硫酸エステル（１９）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項１９】
Ｒ１とＲ２がＨであり、Ｒ３とＲ４が一緒にＯを形成し、Ｒ５がＣＯＮＨ２であり、１１−ケトコロソールアミド（２０）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項２０】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３がＨであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ５がＣＯＮＨ２であり、１１−ヒドロキシコロソールアミド（２１）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項２１】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３がＨであり、Ｒ４がＯＨであり、Ｒ５がＣＯＯＣＨ３であり、１１−ヒドロキシコロソール酸メチル（２２）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項２２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＨＯであり、コロソリナール（２４）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項２３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５がＣＯＯＣＯＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３であり、トリ−Ｏ−メチル没食子酸コロソリル（２５）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項２４】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３がＨであり、Ｒ４とＲ５が一緒にＯＣＯを形成し、２α，３β−ジヒドロキシウルサ−１２−エン−１１，２８−オリド（２６）である、請求項１に記載の式Ｉのコロソリン酸類似体。
【請求項２５】
式Ｉのコロソリン酸の製造方法であって、
ラジャーストロエミア（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ）種の葉を水、アルコール、または極性有機溶媒で抽出するステップと、
前記抽出物を純度約９５％までクロマトグラフィーで精製するステップと、
既知の方法で、前記コロソリン酸に新しい官能基を導入することにより、前記コロソリン酸を新規類似体に変換するステップと、
を含む方法。
【請求項２６】
少なくとも１種の請求項１〜２４に記載のコロソリン酸類似体と、医薬上許容される担体と、を含む医薬組成物。
【請求項２７】
前記担体が水性または非水性担体である、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
１種または複数種の式Iのコロソリン酸類似体を投与するステップを含む、糖尿病、炎症性疾患、および腫瘍性疾患の治療法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の名称］
本発明は、抗糖尿病性および抗炎症性を有するコロソリン酸の新規構造類似体に関する。これらの化合物は、強力な低血糖性、５−リポキシゲナーゼ抑制および抗腫瘍活性を示すことが見出されている。
【０００２】
［技術分野］
糖尿病は、代謝の障害として認識されている。すなわち、消化によって分解された食物を利用する身体の自然な能力が失われてしまう。身体は、食物からの主要な代謝産物であるグルコースを、エネルギーおよび細胞の成長に利用する。グルコースは、血流を通って身体全体に分散し、インスリンと呼ばれるホルモンの助けで細胞に入る。インスリンは、胃の下にある大きな腺である、膵臓で作られる。糖尿病の人々においては、膵臓が、グルコースを細胞に移動させるのに十分なインスリンを生成しないか、あるいは多量に生成されているのに細胞がインスリンに反応しない（Reaven, G. M., Role of insulin resistance in human disease;Diabetes, 1998, 37, 1595-1607）。この機能障害の結果、グルコースが血流中に蓄積し、燃料として使用されることなく身体から排出される。
【０００３】
糖尿病を治療しないと、心臓病、腎不全、失明、神経損傷、および切断などの非常に重篤な慢性疾患を引き起こす恐れがある（Porte, D. et al., Science, 1996, 27, 699-700）。多くの専門家は、糖尿病、循環器病、および肥満症のすべてが、Ｘ症候群としても知られているインスリン耐性と呼ばれる症状によって結びつけられた共通因子を有することを確信している（Bagchi,D., Syndrome X, The Diabetes, CVD and Obesity link, Health Products Business,June 2001, 62.）。しかし、適切な管理によって、こうした疾患のリスクを著しく低減させることができる。管理計画は、糖尿病の型、インスリン依存糖尿病（ＩＤＤＭ）またはインスリン非依存糖尿病（ＮＩＤＤＭ）によって決まる。
［背景技術］
【０００４】
現在、糖尿病管理用に多くの薬剤が市販されている。これらは様々な種類の構造に属するものである。例えば、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、α-グルコシダーゼ抑制剤、およびビグアナイドなどが、現在市販されている薬剤の種類に含まれる。アメリカ糖尿病協会によれば、糖尿病は、世界人口の６％に達すると推定されており、最近の研究によれば、糖尿病患者は２０２５年までに３億人に達する可能性があることが指摘されている。２００２年には抗糖尿病剤の世界の売上高が１００億米ドルに達した。経口的抗糖尿病剤がこれらの売上高の６３％であり、グルコファージ（メトホルミン）が第１位の製品であった。世界中の糖尿病患者数の上昇により、糖尿病薬の市場は２００６年までに２００億ドルを超える可能性がある。天然物の領域においては、少数の生薬がこの恐ろしい脅威に対して有効であることが分かっている。例えば、コロハ（Trigonellafoenumgraecum）、ギムネマ（Gymnema sylvestre）、ムラサキフトモモ／ジャンボラン（Syzygium cumini）、ツルレイシ／カレラ(Karela)（Momordicacharantia）、およびバナバ（Lagerstroemia speciosa）は、血糖降下活性を示すことが知られている生薬の一部である。天然抗糖尿病剤による治療は、伝統的な医学において長く使用されてきた歴史から、ならびに現在の生薬治療における使用からもその安全性が立証されているために、最近は人気を得ている。バナバ、ラジャーストロエミア  スペキオサ(Lagerstroemiaspeciosa) Ｌは、ここ数年、有機インスリンとして世界的に注目されている。これは、フィリピン、ならびにマレーシア、中国南部、および熱帯オーストラリアに分布している。コロソリン酸、すなわちコロソリン酸（２α−ヒドロキシウルソール酸、CAS No. 4547-24-4）は、バナバの抽出物から単離されたトリテルペノイド化合物であり、抗糖尿病活性をもたらすものであることが見出された。バナバは、長年、フィリピンおよびその他の東アジア諸国において、糖尿病の治療、ならびに低血圧および腎機能改善の維持に対して認知されてきた。治験により、コロソリン酸の血圧降下効果が確認された（Judy,W.V. et al., J. Ethnopharmacol., 2003, 87(1), 115-7）。オリッサから西ベンガルまでの東海岸に沿って生えているラジャーストロエミアのインド種（Lagerstroemiaparviflora, Lagerstroemia indica, Lagerstroemia speciosa, etc）も、コロソリン酸を産生する。Matsuyamaの米国特許第６４８５７６０号明細書（２００２年）は、ラジャーストロエミア抽出物の血糖低下効果を記載している。
【０００５】
【化１】
2008505886.tif 000003
【０００６】
現在、非ステロイド、植物系の抗炎症性剤の需要が著しく急増している。５−リポキシゲナーゼは、炎症、アレルギーおよび閉塞の過程の重要な媒介物であるロイコトリエンおよび５（Ｓ）−ＨＥＴＥをアラキドン酸から生合成するための鍵酵素である。５−リポキシゲナーゼは、抑制剤を確認するための標的酵素であり、喘息、関節炎、潰瘍性大腸炎などの消化器疾患、ならびにショックおよび虚血などの循環障害を含めた、様々な炎症および過敏性のヒト疾患に対処できる可能性を有する。世界中の科学者は、最近１０年間、植物由来の５−リポキシゲナーゼ抑制剤を確認することに多くの努力を注ぎ込んできた。インドフランキンセンス(frankincense)として知られているボスウェリア(Boswellia)種からのガム樹脂は、インドの伝統的なアーユルベーダ医学において抗炎症性剤として使用されてきた。抗炎症作用の原因は、ボスウェリア樹脂から単離されるトリテルペン酸の一つ（Padhy,R.S., et al, Indian J. Chem., 1978, 16B, 176-178）である、ボスウェリア酸に帰すると考えられている（Safayhi,H., et al., Planta Medica, 1997, 63, 487-493およびJ. Pharmacol. Exp. Ther., 1992,261, 1143-46、両誌とも米国で発行されている）。新規抗炎症剤の探索中に、本発明者らは、我々が知る限りでは初めて、コロソリン酸が５−ＬＯＸの抑制剤としての可能性があることを見出した。その抑制活性は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（Acetyl ketoboswellic acid：ＡＫＢＡ）と同等であることが分かった。
【０００７】
オレアナン(olenane)およびウルサントリテルペノイド(ursanetriterpenoids)も、その抗増殖性作用で最近目立つ存在になっている。５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）は、発がんプロセスにおいて重要なロイコトリエンおよびエイコサノイドの形成に至る代謝経路における第１の酵素なので、５−ＬＯＸの抑制剤は、様々な癌株の成長およびアポトーシスに非常に大きな影響を及ぼす可能性がある（YongS. Park, et al, Planta Medica, 2002, 68, 397-401）。ボスウェリア酸は、例えば、いくつかの白血病細胞株をinvitroで抑制し、メラノーマの成長を抑制するとともにそのアポトーシスを誘起した（Hostanska, K., et. al., AnticancerRes., 2002, 22(5), 2853-62）。アセチルボスウェリア酸は、独特な種類のヒトトポイソメラーゼＩおよびＩＩαの二重抑制剤であることが分かった（Syrovets,T. et. a1., Mol. Pharmacol., 2000, 58(1), 71-81）。いくつかのオレアナン(oleanane)およびウルサントリテルペノイドは、マクロファージにおける一酸化窒素産生の強力な抑制剤であることが分かった。このことは、これらの癌化学的予防活性と関連づけることができる（Honda,T. et. al., J. Med. Chem., 2000, 43, 1866-77）。コロソリン酸の全体構造はＡＫＢＡおよび他のウルサン誘導体と非常に類似しており、したがってコロソリン酸は抗癌剤として有望である可能性がある。
［発明の目的］
【０００８】
本発明は、構造−活性関係の研究によりコロソリン酸の新規類似体の製造を目的とした。主要な目的は、水溶性が上昇し、血糖降下活性が増大した類似体を作ることであった。新規類似体を作るために使うことができる官能基は、カルボキシル基、三置換二重結合、および隣接したジオールである。水酸基は、天然の酸およびアミノ酸などの成分との結合に有用であった。これは、水溶性を改良するだけでなく、輸送プロセスにおいて親化合物に対する生物学的認識を高めることも推定される。
【０００９】
酸官能基は、アミド結合を介して極性の高いアミン部分を結合させるのに利用された。この同じ基は、アルコールまたはハロゲン化物との反応によってエステル化合物を作るのにも利用することができる。低級アルキルエステルをＬＡＨ（水素化アルミニウムリチウム）で還元して、構造２３に示したように、追加のアルコール基を導入することができる。三酸化クロムなどのアリル酸化に適した酸化剤を利用して、１１−ケトコロソリン酸化合物を生成することができる。しかし、ＮＢＳ（Ｎ−ブロモスクシンイミド）を使用したアリル酸化では、ラクトン２６が生成した。アシル化剤の量を制限することによりアシル化変換を制御して、モノアシル化化合物またはジアシル化化合物を生成することができる。アミノ酸単位を結合させる一般的な戦略は、ＤＣＣ（１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＭＡＰ［４−（ジメチルアミノ）−ピリジン］を用いて、ＢＯＣ（ｔ−ブトキシカルボニル）で保護されたグリシンおよびアラニンなどのアミノ酸をコロソリン酸に結合させた後、ＨＣｌ／ジオキサンを用いてＢＯＣ基を脱保護し、それぞれコロソリン酸のグリシンおよびアラニン誘導体を生成させることであった。
［発明の概要］
【００１０】
本発明は、一般式Ｉを有する新規コロソリン酸構造類似体に関する。
【００１１】
【化２】
2008505886.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、前記類似体のそれぞれにおいて、以下に示す通りである。
１．Ｒ１＝ＣＯＣＨ３、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨまたはＲ１＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
２．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
３．Ｒ１＝ＣＯＣ５Ｈ４Ｎ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
４．Ｒ１＝ＣＯＣＨ２ＮＨ２・ＨＣｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
５．Ｒ１＝ＣＯＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２・ＨＣｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
６．Ｒ１＝ＣＯＣＨ：ＣＨＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
７．Ｒ１＆Ｒ２＝ＳＯ２、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
８．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２
９．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣ６Ｈ５
１０．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２
１１．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＮＨ
１２．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨ
１３．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１４．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１５．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１６．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
１７．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
１８．Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＯＣＨ３、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
１９．Ｒ１＆Ｒ２＝ＳＯ２、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＯＨ
２０．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＆Ｒ４＝Ｏ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２
２１．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒ５＝ＣＯＮＨ２
２２．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＯＨ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＨ３
２３．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＨ２ＯＨ
２４．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＨＯ
２５．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝ＣＯＯＣＯＣ６Ｈ２（ＯＣＨ３）３
２６．Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＆Ｒ５＝ＯＣＯ］
［発明の簡単な開示］
【００１２】
本出願人により、上記置換基を有するコロソリン酸類似体の同定ならびにその強力な抗糖尿病性および抗炎症性作用の確証が達成された。
【００１３】
本研究において使用されたコロソリン酸（純度＞９５％）は、ラジャーストロエミア  スペキオサの葉から、溶媒抽出、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィー、および結晶化を用いて得られた。
【００１４】
本発明の別の態様は、医薬上許容される担体（例えば、水性または非水性担体）中に上記化合物を含む医薬組成物である。
【００１５】
本発明のさらに別の態様は、治療に有効な量（例えば、治療に有効な量、進行を遅らせるのに有効な量など）の上記化合物を、それを必要とするヒトまたは動物の被検者に投与するステップを含む糖尿病の治療方法である。
【００１６】
本明細書において使用する「化合物」の医薬組成物には、前記化合物の医薬上許容される塩が含まれる。医薬上許容される塩とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒性を持たない塩である。こうした塩の例は、（ａ）式Ｉで表されるアミン化合物と、金属水酸化物、ＮＨ４ＯＨ、アルキルアミン、医薬上有用なアミン化合物などとから形成される塩基付加塩、（ｂ）式Ｉで表されるアミン化合物と、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などとから形成される酸付加塩である。
【００１７】
本発明の活性化合物は、本明細書に記載の方法またはその変法によって製造することができるが、これは当分野の技術者には明らかなことである。本明細書に記載の式Ｉの化合物を製造するのに有用な中間体も、こうした中間体および活性化合物を製造するのに有用な方法も、本発明の一態様である。
［好ましい実施形態の説明］
【００１８】
以下の非限定的な実施例において、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１９】
実施例１
２−Ｏ−アセチルコロソリン酸および３−Ｏ−アセチルコロソリン酸（１）：コロソリン酸（５００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）のピリジン（０．７５ｍＬ、９．７ｍｍｏｌ）氷冷溶液に無水酢酸（０．１ｍＬ）をゆっくり加え、２時間連続して撹拌した。混合物をクラッシュアイスに注ぎ、激しく撹拌した。固体を濾過し、水洗し、乾燥し、溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１０％）混合物を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、白色固体（２２０ｍｇ）を得た；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４３４、２９２７、２８６３、１７２２、１６９５、１４５６、１２５６、１０３０ｃｍ−１；これは、３−Ｏ−アセチル誘導体および２−Ｏ−アセチル誘導体の１：２．７の比の混合物である。以下のＮＭＲデータは主生成物（２−Ｏ−アセチル誘導体）に対応する；
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 0.78 (3H, s, CH3), 0.84 (3H, d, J= 6.0Hz, CH3), 0.86 (6H, s, 2 x CH3), 0.95 (3H, d, J= 4.8 Hz,CH3), 1.06 (3H, s, CH3), 1.08 (3H, s, CH3),2.06 (3H, s, -COCH3), 2.20 (1H, d, J=11.3 Hz, H-18), 3.20 (1H, d,J=10.0 Hz, H-3), 4.92-4.98 (1H, m, H-2), 5.24 (1H, br s, H-12).
また、以下のＮＭＲデータは副生成物（３−Ｏ−アセチル誘導体）に対応する；
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ2.14 (s, -COCH3), 3.78-3.82 (m, H-2),4.50 (d, J=10.0 Hz, H-3), 5.24 (br s, H-12); LCMS （陰イオンモード）: m/z 513 (M-H)-. 
３−Ｏ−アセチルコロソリン酸: IR (KBr): 3442, 2933, 2869,1729, 1696, 1629, 1456, 1374, 1253, 1038 cm-1; LCMS （陰イオンモード）: m/z 513 (M-H)-.
【００２０】
実施例２
２，３−ジ−Ｏ−アセチルコロソリン酸（２）：コロソリン酸（８００ｍｇ）のピリジン（５ｍＬ）溶液に無水酢酸（５ｍＬ）を加え、室温で１６時間保持した。反応混合物を実施例１に記載の条件下で後処理し、二酢酸エステル２（６５０ｍｇ、６９％）を得た。融点２３６〜２４０℃；
IR (KBr): 3448, 2944, 2873, 1743, 1698,1455, 1371, 1250, 1038, 962 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ0.77 (3H, s, CH3), 0.85 (3H, d, J= 6.3 Hz, CH3), 0.90(6H, s, 2 x CH3), 0.95 (3H, d, J= 5.9 Hz, CH3), 1.07 (6H,s, 2 x CH3), 1.97 (3H, s, -COCH3), 2.05 (3H, s, -COCH3),2.19 (1H, d, J=11.2 Hz, H-18), 4.75 (1H, d, J=10.3 Hz, H-3), 5.07-5.13 (1H, m,H-2), 5.24 (1H, br s, H-12); LCMS （陰イオンモード）: m/z 555(M-H)-.
【００２１】
実施例３
２−Ｏ−ニコチノイルコロソリン酸（３）：コロソリン酸（２５０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、ニコチン酸（２００ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（触媒）のアセトニトリル（５０ｍＬ）中混合物に、ＤＣＣ（４００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。固体を濾別し、溶媒を蒸発させた。溶離液としてクロロホルム−メタノール（２０％）を用いて、残渣をシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにかけ、２−Ｏ−ニコチノイルコロソリン酸（３３ｍｇ、１１％）を得た。これをクロロホルム−ヘキサンから結晶化させた。融点２１２〜２１６℃；
IR (KBr): 3434, 2928, 2871, 1722, 1594,1456, 1288, 1132, 955 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ0.81 (3H, s, CH3), 0.84 (3H, d, J= 6.3 Hz, CH3), 0.92(3H, s, CH3), 0.95 (3H, d, J=6.3 Hz, CH3), 1.11 (6H, s, 2x CH3), 1.12 (3H, s, CH3), 3.39 (1H, d, J= 9.9 Hz, H-3),5.24-5.27 (1H, br s, H-12), 7.37-7.41 (1H, m, Ar-H), 8.29 (1H, d, J=7.7 Hz,Ar-H), 8.78 (1H, d, J=3.5 Hz, Ar-H), 9.22 (1H, s, Ar- H); LCMS （陰イオンモード）: m/z 576 (M-H)'.
【００２２】
実施例４
０℃で、２−Ｏ−グルシルコロソリン酸塩酸塩（４）：０℃で、コロソリン酸（２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＢＯＣ保護グリシン（８２ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（３０ｍｇ）の乾燥ジオキサン（２ｍＬ）中混合物を、激しく撹拌しながらＤＣＣ（１３０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）で処理した。３時間後、反応混合物を実施例３に記載のように後処理し、２−Ｏ−（Ｎ−ＢＯＣ−グリシル）コロソリン酸（２００ｍｇ）を得た。
【００２３】
２−（Ｎ−ＢＯＣ−グリシル）コロソリン酸（２００ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、２ｍＬのジオキサン中１Ｎ  ＨＣｌでゆっくり処理した。３０分後、室温でさらに２時間撹拌を続けた。反応混合物をヘキサン（５ｍＬ）で希釈し、析出した固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、乾燥して、２−Ｏ−グルシルコロソリン酸塩酸塩（１９０ｍｇ）の白色粉末を得た。融点２６８〜２７２℃；
IR (KBr): 3432, 2979, 2926, 2859, 1749,1690, 1461, 1243, 1050 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ0.82-1.14 (7 x CH3), 2.2 (1H, brd, J= 10.0 Hz), 3.80 (1H, brm,H-3), 3.88 (2H, s, OCOCH2NH3Cl), 4.66 (1H, d, J=9.9Hz, H-2), 5.24 (1H, m, H-12); LCMS （陽イオンモード）: m/z 530 (M-Cl)+.
【００２４】
実施例５
２−Ｏ−アラニルコロソリン酸塩酸塩（５）：０℃で、コロソリン酸（５００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、ＢＯＣ保護アラニン（２４０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（７５ｍｇ）の乾燥ジオキサン（２ｍＬ）中混合物を、実施例４に記載の条件下、ＤＣＣ（３２７ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）で処理し、２−Ｏ−（Ｎ−ＢＯＣ−アラニル）コロソリン酸（３２０ｍｇ）を得た。これを実施例４のようにして脱保護して、２−Ｏ−アラニルコロソリン酸塩酸塩（２５０ｍｇ）を白色粉末として得た。融点２３４〜２３８℃；
IR (KBr): 3433, 2928, 2859, 1740, 1692,1621, 1459, 1369, 1245, 1107, 1041 cm-1; 1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ0.57-1.35 (24H, m, 8 x CH3), 4.68-4.76 (1H, brs, -CH-N), 4.88-5.05 (1H, br s, H-3), 5.08-5.20 (1H, br s, H-12), 8.10-8.60(3H, br s, NH3+); LCMS （陽イオンモード）: m/z 544 (M-Cl)+.
【００２５】
実施例６
２−Ｏ−（３，４，５−トリメトキシシンナモイル）コロソリン酸メチル（６）：コロソリン酸メチル（１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリメトキシケイ皮酸（７３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍＬ）中混合物を氷水浴で冷却し、ＤＣＣ（８５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液０．５ｍＬをゆっくり加えた。この混合物を外界温度まで上昇させ、撹拌を続けた。２時間後、実施例４に記載の条件下で後処理し、２−Ｏ−（３，４，５−トリメトキシシンナモイル）コロソリン酸メチル（９０ｍｇ、６２％）を得た。融点１９８〜２０６℃；
IR （ニート）: 3460, 2927, 2854, 1717, 1632,1583, 1457, 1263, 1098, 1024, 805 cm-1; LCMS （陽イオンモード）: m/z 729(M+Na)+.
【００２６】
実施例７
２α，３β−ジヒドロキシウルサ−１２−エン−２８−オイン酸２，３−環状硫酸エステル（７）：コロソリン酸（２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）とピリジン（０．３４ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）中混合物に塩化チオニル（４０μＬ、４．２ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を０．２Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）に注いだ。白色の析出物を濾過し、水洗し、真空乾燥した。この亜硫酸エステル（１００ｍｇ）をアセトニトリル（１ｍＬ）、水（０．８ｍＬ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）に溶解し、三塩化ルテニウム一水和物（１００μｇ）のアセトニトリル（１ｍＬ）溶液で処理し、引き続きＮａＩＯ４（３００ｍｇ）で処理した。撹拌を３６時間続けた。混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させた。ヘキサン−酢酸エチル（２０％）を溶離液として用いて、残渣（９０ｍｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、環状硫酸エステル誘導体７（４０ｍｇ）を得た。融点１８２〜１８６℃；
IR （ニート）: 3431, 2926, 2871, 1693, 1459,1386, 1211, 995, 959 cm-1. LCMS （陰イオンモード）:m/z 533 (M-H)-.
【００２７】
実施例８
コロソールアミド(corosolamide)（８）：ジアセトキシコロソリン酸（３００ｍｇ）と塩化チオニル（２ｍＬ）の混合物を１時間還流し、減圧下に過剰の試薬を除去して酸塩化物を得た。この粗酸塩化物をＴＨＦ（１ｍＬ）に混ぜ、これを、濃アンモニア溶液（５ｍＬ）を撹拌しながら氷水温度において５分間で滴下し、同じ温度で２時間撹拌を続けた。反応混合物を氷冷水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を希Ｈ２ＳＯ４、水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を濾過し、溶媒を蒸発させてジアセチルコロソールアミド（３００ｍｇ）を得た。ジアセチルコロソールアミド（３００ｍｇ）とメタノール性水酸化カリウム（４％、２５ｍＬ）の溶液を１時間還流した。減圧下で溶媒を蒸発させ、氷冷水で希釈し、希Ｈ２ＳＯ４で酸性にした。この溶液を酢酸エチルで抽出し、有機層を水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発後に得られた残渣を、クロロホルム−メタノール（１０％）を溶離液として用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけコロソールアミド（２００ｍｇ、６７％）を得た。これをクロロホルム−ヘキサンから再結晶した。融点２０８〜２１０℃；
IR (KBr): 3495, 2927, 2870, 1671, 1602,1457, 1376, 1049, 959 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ0.83 (3H, s, CH3), 0.86 (3H, s, CH3), 0.87 (3H, d, J=6.7 Hz, CH3), 0.96 (3H, br s, CH3), 1.00 (3H, s, CH3),1.04 (3H, s, CH3), 1.11 (3H, s, CH3), 3.00 (1H, d, J= 9.4Hz, H-3), 3.67-3.73 (1H, m, H-2), 5.32 (1H, br s, H-12), 5.85 (2H, br s, CONH2);LCMS （陰イオンモード）: m/z 470 (M-H)-.
【００２８】
実施例９
Ｎ−フェニルコロソールアミド（９）：ＴＨＦ（１０ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）中、実施例８に記載の条件下で、塩化ジアセチルコロソリル（１００ｍｇ）とアニリン（１ｍＬ)とを反応させてＮ−フェニルコロソールアミドを得た。これをクロロホルム−メタノールから結晶化させた（６０ｍｇ、６１％）。融点１６８〜１７４℃；
IR (KBr): 3408, 2927, 2868, 1652, 1599,1529, 1502, 1442, 1312, 1235, 1048 cm-1; 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ0.70 (3H, s, CH3), 0.80 (3H, s, CH3),0.93-1.02 (12H, m, ２個のメチルシングレットと２個のメチルダブレットとが重なる), 1.14 (3H, s, CH3),3.00 (1H, d, J= 7.76 Hz, H-3), 3.6-3.7 (1H, br s, H-2), 5.45-5.50 (1H, br s,H-12), 7.07 (1H, br s, Ar-H), 7.28 (1H, br s, Ar-H), 7.44 (2H, br s, Ar-H),7.67 (1H, br s, Ar-H); LCMS （陽イオンモード）: m/z 548 (M+H)+.
【００２９】
実施例１０
Ｎ−（２−アミノエチル）コロソールアミド（１０）：ＴＨＦ（１０ｍＬ）中で塩化ジアセチルコロソリル（２００ｍｇ）とエチレンジアミン（１．０ｇ）とを反応させ、実施例８に記載の条件下で後処理して、Ｎ−（２−アミノエチル）コロソールアミドを得た（１１０ｍｇ、６０％）。融点１１８〜１２０℃；
IR (KBr): 3403, 2926, 1633, 1527, 1454,1383, 1048 cm-1; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ0.69(3H, s, CH3), 0.72 (3H, s, CH3), 0.84 (3H, d, J= 6.0 Hz,CH3), 0.92-0.94 (9H, 2 br s, ２個のメチルシングレットと１個のメチルダブレット), 0.99 (2H, d,J=7.2 Hz, -NCO-CH2-), 1.05 (3H, s, CH3), 2.17 (1H, d, J=11.2Hz, H-18), 2.57 (2H, q, J=7.0 Hz, NH2-CH2), 2.70 (2H, t,J=6.7 Hz, NH2-CH2), 2.75 (1H, d, J= 9.2 Hz, H-3), 4.3-4.4(1H, m, H-2), 5.23 (1H, br s, H-12); LCMS （陽イオンモード）: m/z 515 (M+H)+.
【００３０】
実施例１１
Ｎ−（コロソリル）ピペラジン（１１）：ＴＨＦ（１０ｍＬ）とトリエチルアミン（２ｍＬ）中で塩化ジアセチルコロソリル（１００ｍｇ）とピペラジン（２００ｍｇ)とを反応させ、実施例８に記載の条件下で後処理して、Ｎ−（コロソリル）ピペラジンを得た。これをクロロホルム−ヘキサンから結晶化させた（５０ｍｇ、５２％）。融点２２６〜２３０℃；
IR (KBr): 3434, 2924, 2868, 1628, 1455,1226, 1049 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ0.76(3H, s, CH3), 0.83 (3H, s, CH3), 0.87 (3H, d, J= 6.3 Hz,CH3), 0.94 (3H, d, J=6.2 Hz, CH3), 0.99 (3H, s, CH3),1.03 (3H, s, CH3), 1.08 (3H, s, CH3), 2.44 (1H, d, J=8.6Hz, H-18), 2.83 (4H, s, N-CH2), 3.00 (1H, d, J= 9.5 Hz, H-3), 3.58(4H, d, J=3.4 Hz, N-CH2), 3.66-3.72 (1H, m, H-2), 5.23 (1H, br s,H-12); LCMS （陽イオンモード）: m/z 541 (M+H)+.
【００３１】
実施例１２
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）コロソールアミド（１２）：ＴＨＦ（１０ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）中、実施例８に記載の条件下で、塩化ジアセチルコロソリル（１００ｍｇ）と２−アミノエタノール（１ｍＬ)とを反応させて、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）コロソールアミドを得た。これをクロロホルム−ヘキサンから結晶化させて１２を得た（４３ｍｇ、４７％）。融点１５２〜１５８℃；
IR (KBr): 3408, 2963, 2926, 2856, 1632,1529, 1455, 1262, 1094, 1026, 802 cm-1; 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ0.81 (3H, s, CH3), 0.83 (3H, s, CH3),0.87 (3H, d, J= 6.2 Hz, CH3), 0.96 (3H, br s, CH3), 1.00(3H, s, CH3), 1.04 (3H, s, CH3), 1.11 (3H, s, CH3),2.98 (1H, br s), 3.00 (1H, d, J= 9.3 Hz, H-3), 3.21-3.26 (1H, m), 3.44-3.49 (1H,m, H-2), 3.68 (3H, br s, N-CH2CH2-), 5.34 (1H, s, H-12),6.34 (1H, br s); LCMS （陰イオンモード）: m/z 514 (M-H)-.
【００３２】
実施例１３
コロソリン酸メチル（１３）：コロソリン酸（２．０ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（１ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４．５ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）、およびアセトン（６０ｍＬ）の混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後、固体を濾別し、溶媒を減圧下で蒸発した。溶離液としてクロロホルム−メタノール（１０％）を用いて、残渣をシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにかけ、コロソリン酸メチル（１．７ｇ、８３％）を得た。これをクロロホルム−ヘキサンから再結晶した。融点２０８〜２１０℃；
IR (KBr): 3432, 2946, 2872, 1728, 1455,1230, 1197, 1049 cm-1;  1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ0.75 (3H, s, CH3), 0.83 (3H, s, CH3), 0.85 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3), 0.94 (3H, d, J= 5.7 Hz, CH3), 0.99 (3H, s,CH3), 1.03 (3H, s, CH3), 1.08 (3H, s, CH3),2.23 (1H, d, J=11.0 Hz, H-18), 3.0 (1H, d, J= 8.4 Hz, H-3), 3.60 (3H, s, -COOCH3),3.62-3.71 (1H, m, H-2), 5.25 (1H, t, J= 3.4 Hz, H-12); LCMS （陰イオンモード）: m/z 485 (M-H)-.
【００３３】
実施例１４
ジアセチルコロソリン酸メチル（１４）：実施例１３に記載の条件下で、ジアセチルコロソリン酸（５００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、ヨードメタン（０．２５ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．０ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、およびアセトン（２５ｍＬ）と反応させてジアセチルコロソリン酸メチルを得た（０．４ｇ、７８％）。これを水性メタノールから結晶化させて１４を得た。融点１３８〜１４０℃；
IR (KBr): 2943, 1742, 1243, 1036, 964 cm-1;1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ0.75 (3H, s), 0.85 (3H, d, J=6.4Hz), 0.90 (3H, s), 0.91 (3H, s), 0.94 (3H, d, J=5.9 Hz), 1.07 (6H, s), 1.97(3H, s), 2.05 (3H, s), 2.23 (1H, d, J=11.4 Hz, H-18), 3.60 (3H, s), 4.75 (1H,d, J=10.3 Hz, H-3), 5.07-5.14 (1H, m, H-2), 5.23-5.24 (1H, m. H-12); LCMS （陽イオンモード）:594 (M+l)+.
【００３４】
実施例１５
１１−ケトコロソリン酸メチル（１５）：ピリジン（０．５ｍＬ）および無水酢酸（０．５ｍＬ）を用いて、実施例２に記載の条件下でコロソリン酸メチル（４００ｍｇ）をアセチル化し、ジアセチルコロソリン酸メチル（４５０ｍｇ）を得た。これを１，４−ジオキサン（１６ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（４７２ｍｇ）、水（１．６ｍＬ）、および炭酸カルシウム（４７２ｍｇ）で処理した。反応混合物を３時間激しく撹拌した後、濾過した。母液を冷水中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣（３６０ｍｇ）をメタノール（２ｍＬ）と混ぜ、８Ｎ  ＫＯＨ溶液（１ｍＬ）を加え、６５℃で１時間撹拌した後、氷冷水中に注ぎ、２Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（２５％）を用いて、残渣（３４０ｍｇ）をシリカゲルカラムで精製し、１１−ケトコロソリン酸メチル（２４０ｍｇ）を得た。融点１０１〜１０５℃；
IR （ニート）: 3416, 2926, 2858, 1728, 1659,1457, 1388, 1201, 1048 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ0.84 (3H, s, CH3), 0.87 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3), 0.91(3H, s, CH3), 0.97 (3H, d, J=6.3 Hz, CH3), 1.05 (3H, s,CH3), 1.19 (3H, s, CH3), 1.30 (3H, s, CH3),2.35 (1H, s), 2.42 (1H, d, J=10.9 Hz), 3.02 (1H, d, J=9.5 Hz), 3.16 (1H, dd,J=12.6 & 4.3 Hz), 3.61 (3H, s, CH3), 3.77 (1H, m, H-2), 5.61 (1H,s, H-12); LCMS （陽イオンモード）: m/z 501 (M+H)+.
【００３５】
実施例１６
ジアセチル−１１−ケトコロソリン酸メチル（１６）：ジアセチルコロソリン酸メチル（５００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）溶液と、水（２ｍＬ）中のＮ−ブロモスクシンイミド（０．７５ｇ、４．２ｍｍｏｌ）および炭酸カルシウム（０．７５ｇ、７．５ｍｍｏｌ）とを、実施例１５に記載の条件で反応させ、ジアセチル−１１−ケトコロソリン酸メチル（３００ｍｇ、５９％）を得た。これを水性メタノールから結晶化させて１６を得た。融点２６４〜２６６℃；
IR (KBr): 2952, 1734, 1660, 1241, 1038, 985cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ0.86 (3H, d,J=6.4 Hz), 0.89 (3H, s), 0.91 (3H, s), 0.93 (3H, s), 0.97 (3H, d, J=6.3 Hz),1.25 (3H, s), 1.29 (3H, s), 1.95 (3H, s), 2.04 (3H, s), 3.18 (1H, dd, J=12.8,4.6 Hz, H-18), 3.60 (3H, s), 4.72 (1H, d, J=10.3 Hz, H-3), 5.20-5.26 (1H, m,H-2). 5.61 (1H, s, H-12); LCMS （陽イオンモード）: m/z 608 (M+H)+.
【００３６】
実施例１７
１１−ケトコロソリン酸（１７）：コロソリン酸（４００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．４ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）、および無水酢酸（１．５ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）の混合物を室温で６時間撹拌した。この反応混合物を冷却し、酢酸（１．５ｍＬ）と無水酢酸（２ｍＬ）で希釈した後、三酸化クロム（２５４ｍｇ）を加えて５時間撹拌した。反応混合物を氷冷水中に注ぎ、析出した固体を濾過し、水洗した。この固体をメタノール（４ｍＬ）と混ぜ、８Ｎ  ＫＯＨ（２ｍＬ）で処理し、室温で１４時間撹拌した後、混合物をセライトで濾過した。母液を氷水中に注ぎ、酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３０％）を用いて残渣（３９０ｍｇ）をシリカゲルカラムで精製し、１１−ケトコロソリン酸（６０ｍｇ）を得た。融点２３８〜２４２℃；
IR （ニート）: 3417, 2927, 2857, 1692, 1659,1460, 1386, 1051, 974 cm-1; LCMS （陰イオンモード）:m/z 485 (M-H)-.
【００３７】
実施例１８
ジアセチル−１１−ケトコロソリン酸（１８）：ジアセチルコロソリン酸（５００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）のジクロロエタン（２ｍＬ）、酢酸（２ｍＬ）、および水（１ｍＬ）溶液を、三酸化クロム（１．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）、酢酸（２ｍＬ）および水（２ｍＬ）の溶液と、実施例１７に記載の条件下で反応させて、ジアセチル−１１−ケトコロソリン酸（２００ｍｇ、３９％）を得た。これをクロロホルム−ヘキサンから結晶化させて１８を得た。融点３１８〜３２０℃；
IR (KBr): 3184, 2975, 1742, 1641, 1253,1036 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ0.86 (3H,d, J=6.4 Hz), 0.90 (3H, s), 0.91 (6H, s), 0.98 (3H, d, J=6.2 Hz), 1.26 (3H, s),1.30 (3H, s), 1.95 (3H, s, -OCOCH3), 2.05 (3H, s, -OCOCH3),3.18 (1H, dd, J=12.7, 3.2 Hz, H-18), 4.72 (1H, d, J=10.3 Hz, H-3), 5.19-5.26 (1H,m, H-2), 5.61 (1H, s, H-12); LCMS （陰イオンモード）: 569 (M-H)-.
【００３８】
実施例１９
２α，３β−ジヒドロキシウルサ−１２−エン−１１−オン−２８−オイン酸  ２，３−環状硫酸エステル（１９）：コロソリン酸−２，３−亜硫酸エステル（１．１ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（７ｍＬ）、およびアセトニトリル（４ｍＬ）の混合物に、塩化ルテニウム（２ｍｇ）のアセトニトリル（２ｍＬ）溶液を加え、さらに過ヨウ素酸ナトリウム（１．５ｇ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌した後、追加量（０．５ｇ）の過ヨウ素酸ナトリウムを加えて２時間撹拌し、その後この反応混合物を実施例７に記載の条件下で後処理して２，３−環状硫酸エステル誘導体１９（６００ｍｇ）を得た。融点２１０〜２１６℃；
IR （ニート）: 3429, 2924, 2856, 1705, 1658,1618, 1380, 1206 cm-1; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ0.82 (3H, d, J=6.3 Hz, CH3), 0.90 (3H, s, CH3), 0.94(3H, s, CH3), 0.95 (3H, d, J=6.4 Hz, CH3), 1.07 (3H, s,CH3), 1.20 (3H, s, CH3), 1.31 (3H, s, CH3),3.20 (1H, dd, J=11.6 & 4.2 Hz, H-18), 4.63 (1H, d, J= 10.4 Hz, H-3),5.20-5.30 (1H, m, H-2), 5.44 (1H, s, H-12); LCMS （陰イオンモード）: m/z 547 (M-H)-.
【００３９】
実施例２０
１１−ケトコロソールアミド（２０）：塩化ジアセチル−１１−ケトコロソリル（１１−ケト酸１５０ｍｇと塩化チオニル２ｍＬから調製）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解させた。この溶液を、氷冷温度において５分間かけて、攪拌されている濃アンモニア溶液（５ｍＬ）に滴下し、得られた溶液を同じ温度で２時間撹拌した。反応混合物を実施例８に記載の方法で後処理し、１１−ケトコロソールアミド（４０ｍｇ、３１％）を得た。融点２２０〜２２２℃；
IR (KBr): 3427, 2970, 2930, 2871, 1659,1459, 1384, 1200, 1048, 971 cm-1; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ0.72 (3H, s, CH3), 0.82 (3H, d, J= 6.3 Hz, CH3), 0.89(3H, s, CH3), 0.93 (3H, s, CH3), 0.95 (3H, d, J=6.3 Hz,CH3), 1.08 (3H, s, CH3), 1.27 (3H, s, CH3),2.32 (1H, s), 2.36 (1H, d, J=11.1 Hz, H-18), 2.75 (1H, dd, J=12.7 & 4.2Hz), 2.86 (1H, dd, J=12.7 & 4.2 Hz), 3.48 (1H, br s, H-2), 4.23 (1H, d,J=3.8 Hz), 4.34 (1H, d, J=3.8 Hz), 5.47 (1H, s, H-12), 6.83 (1H, s, OH), 6.97 (1H,s, OH); LCMS （陽イオンモード）: m/z 486 (M+H)+.
【００４０】
実施例２１
１１−ヒドロキシコロソールアミド（２１）：１１−ケトコロソールアミド（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍＬ）溶液を氷冷（１０〜１５℃）し、磁気撹拌しながら、これに水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、５．２６ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液をゆっくり室温にして、１４時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を氷冷水中に注ぎ、希ＨＣｌで酸性にした。この溶液を酢酸エチルで抽出し、有機層を水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶離液としてクロロホルム−メタノール（９５：５）を用いて、溶媒蒸発後に得られた残渣をシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにかけ、１１−ヒドロキシコロソールアミド（２０ｍｇ、４０％）を得た。これをクロロホルム−メタノールから結晶化させた。融点１９６〜１９８℃；
IR (KBr): 3432, 2929, 1659, 1600, 1383,1048, 968 cm-1; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ0.73(3H, s, CH3), 0.77 (3H, s, CH3), 0.90-0.94 (9H, m, ２個のメチルダブレットとメチルシングレット),1.02 (3H, s, CH3), 1.11 (3H, s, CH3), 2.11 (1H, d, J=10.7Hz, H-18), 2.42-2.46 (1H, m), 2.73 (1H, dd, J=9.1 & 3.7 Hz, H-3), 3.42 (1H,m, H-2), 4.01- 4.03 (2H, m, H-11 & 11-OH), 4.15 (1H, br s, NH2),4.28 (1H, br s, NH2), 5.17 (1H, s, H-12), 6.68 (1H, s, OH), 6.73 (1H,s, OH); LCMS （陰イオンモード）: m/z 486 (M-H)-.
【００４１】
実施例２２
１１−ヒドロキシコロソール酸メチル（２２）：１１−ケトコロソール酸メチル（３６０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）のエタノール（４０ｍＬ）溶液を氷冷（１０〜１５℃）し、磁気撹拌しながら、これに水素化ホウ素ナトリウム（１．０ｇ、２６ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液をゆっくり室温にして、１４時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を実施例２１に記載のように後処理して１１−ヒドロキシコロソール酸メチル（３２ｍｇ）を得た。融点１４８〜１５２℃；
IR （ニート）: 3416, 2927, 2872, 1719, 1648,1455, 1388, 1220, 1146, 1047, 999, 960, 770 cm-1; 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ0.86 (6H, s, 2 x CH3), 0.95 (3H, d, J=6.0 Hz, CH3), 1.01-1.03 (12H, ３個のメチルシングレットとメチルダブレット), 2.31 (1H, d,J=11.3 Hz, H-18), 2.44 (1H, dd, J=12.0 & 4.2 Hz), 3.02 (1H, d, J=9.3 Hz,H-3), 3.80-3.83 (1H, m, H-2), 4.39 (1H, m, H-11), 5.35 (1H, d, J=3.8 Hz, H-12);LCMS （陰イオンモード）: m/z 501 (M-H)-.
【００４２】
実施例２３
コロソリノール（２３）：水素化アルミニウムリチウム（９７ｍｇ）のＴＨＦ（３ｍＬ）分散液を氷冷し、これにコロソリン酸メチル（５００ｍｇ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液をゆっくり加え、２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（３ｍＬ）で希釈し、氷水中に注いだ。この混合物を２Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させた。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（８０：２０）を用いて、残渣（４００ｍｇ）をシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにかけ、コロソリノール（２２０ｍｇ）を得た。融点１４０〜１４６℃；
IR （ニート）: 3392, 2926, 2867, 1619, 1456,1388, 1047, 1024, 760 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ0.81 (3H, d, J=5.4Hz, CH3), 0.84 (3H, s, CH3), 0.94 (3H,d, J=5.3 Hz, CH3), 0.99 (3H, s, CH3), 1.03 (3H, s, CH3),1.04 (3H, s, CH3), 1.11 (3H, s, CH3), 2.03 (1H, dd,J=12.3 & 4.5 Hz), 3.01 (1H, d, J=9.6 Hz), 3.19 (1H, d, J=11.0 Hz), 3.53 (1H,d, J=11.0 Hz), 3.70 (1H, m, H-2), 5.15 (1H, t, J=3.4 Hz, H-12); LCMS （陰イオンモード）: m/z 457 (M-H)-.
【００４３】
実施例２４
コロソリナール（２４）：デス・マーチン・ペルヨージナン(Dess-MartinPeriodinane)（２３ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液を冷却し、コロソリノール（２０ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液をゆっくり加え、得られた溶液を室温にして、２時間撹拌を続けた。得られた混合物をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ（９０ｍｇ）を溶解させたＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５ｍＬ）の氷冷混合物に注いだ。得られた複数の層を分離し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。得られた溶液を濾過し、蒸発させて、無色の油としてコロソリナール（１５ｍｇ）を得た。
IR（ニート）:3433, 2925, 2855, 1721, 1451, 1387,1094cm-1; LCMS（陰イオンモード）:m/z455(M-H)-.
【００４４】
実施例２５
トリ−Ｏ−メチル没食子酸コロソリル（２５）：トリ−Ｏ−メチル没食子酸（２００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）とＳＯＣｌ２（０．５ｍＬ）の混合物を０．５時間還流した。過剰の試薬を高真空下に除去し、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中の残渣を、コロソリン酸（２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３０ｍｇ）のジオキサン（５ｍＬ）中混合物に加えた。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した後、氷冷水中に注いだ。混合物を酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出し、有機層を０．１Ｎ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（８５：１５）を用いて、溶媒蒸発後に得られた残渣をシリカゲルカラムのクロマトグラフィーにかけ、トリ−Ｏ−メチル没食子酸コロソリルを白色固体（７５ｍｇ）として得た。融点１５８〜１６２℃；
IR (KBr): 3439, 2930, 2853, 1793, 1728,1627, 1584, 1460, 1336, 1233, 1129, 1019 cm-1; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ0.83 (3H, s, CH3), 0.89 (3H, s, CH3),0.99 (3H, s, CH3), 1.04 (3H, s, CH3), 1.13 (3H, s, CH3),1.25 (3H, s, CH3), 2.35 (1H, s), 2.30 (1H, d, J=11.0 Hz), 3.00 (1H,d, J=9.3 Hz), 3.70 (1H, brm), 3.90 (9H, s, 3 x CH3), 5.37 (1H, s,H-12), 7.28 (2H, s, Ar-H); LCMS （陽イオンモード）: m/z 689 (M+Na)+.
【００４５】
実施例２６
２α，３β−ジヒドロキシウルサ−１２−エン−１１，２８−オリド（２６）：コロソリン酸（２００ｍｇ）のジオキサン（６ｍＬ）および水（０．６ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（１８８ｍｇ）およびＣａＣＯ３を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。この混合物を氷水（３０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、水（３０ｍＬ）で洗浄し、その後食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を蒸発し、溶離液としてヘキサンと酢酸エチルの混合物を用いて、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、半固体（６０ｍｇ）としてラクトン２６を得た；
IR （ニート）: 3339, 2925, 2854, 1763, 14651261, 1021 cm-1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ0.75-1.25(7 x CH3), 3.02 (1H, br s), 3.75 (1H, brm), 5.56 (1H, brd, J=8.2Hz), 5.98 (1H, brd, J=8.2 Hz); LCMS （陰イオンモード）: m/z 469(M-H)-.
【００４６】
血糖降下活性：ウィスター系アルビノラットに試験物質を投与することにより、スクロースに誘発される血清グルコース濃度（ＳＧＬ）の上昇の抑制によって、血糖降下活性を試験した。その手順では、ラットを自由給水で絶食にし、体重を測定し、それぞれ６匹の群にランダムに分けた。処置の前に、エーテルで軽く麻痺させた状態で、ヘパリンを塗布したガラスキャピラリーを用いて、すべての動物の眼窩空洞神経叢から血液試料を採取した。ＧＯＤ／ＰＯＤ酵素法を用いて血液試料の血清グルコース濃度を検定した。５００ｎｍにおける光学濃度を測定し、ＳＧＬ＝（試験ＯＤ／標準ＯＤ）×１００としてＳＧＬを計算し、結果をｍｇ／ｄＬで表した。すべての群に、対応する試験物質、標準物質、媒体（５％アラビアゴム）を経口投与した。３０分後、胃管を用いて、すべての動物に２０ｍＬ／ｋｇの２０％スクロース溶液を経口投与した。処置から１時間後、軽いエーテル麻酔下で血液試料を再度採取し、初期血清グルコース評価に用いた上記の同じ方法で血清グルコース濃度を検定した。ｔ検定を用いてデータを統計的に処理し、対照群および投与群の血清グルコース濃度の平均上昇を比較することによって抑制率を計算した。
【００４７】
５−リポキシゲナーゼ活性：比色法を用いて、コロソリン酸類似体の５−リポキシゲナーゼ抑制能をスクリーニングした。アッセイ混合物は、全量０．５ｍＬ中に、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）、５−リポキシゲナーゼ、ジメチルスルホキシド中の様々な濃度の試験物質およびリノレイン酸を含んでいた。この反応混合物を５分間インキュベーションした後、０．５ｍＬのキシレノールオレンジ第二鉄試薬を加えた。その２分後、分光光度計を用いて、５８５ｎｍにおけるＯＤを測定した。試験物質と共に、対照についても、試験物質溶液の代りに媒体を用いたことを除き同様の方法で実施した。試験溶液の吸光度と対照の吸光度を比較することによって抑制率を計算した。
【００４８】
ブラインシュリンプ(Brine shrimp)の致死性：４８時間一定の通気下で、無菌の人工海水（海塩３８ｇ／Ｌを用いて調製し、１Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨ８．５に調整した）を満たした円錐形容器（１Ｌ）内で、ブラインシュリンプの卵を用いてブラインシュリンプ（Artemiasalina）ノープリウスをふ化させた。ふ化した後、ノープリウス１０個をピペットで採取し、ブライン溶液４．５ｍＬを含むそれぞれのバイアルに入れ、様々な濃度の薬剤溶液を加え、ブライン溶液を用いて容積を５ｍＬにし、白熱電球光下３７℃で２４時間保持し、生存している幼生の数を数えた。それぞれの試験は、６個のチューブを含む各セットにおいて様々な濃度の試験物質を用いて、対照（媒体を投与）と共に行った。結果の平均値を報告する。試験チューブおよび対照チューブにおける死亡した幼生の平均値を比較することにより致死性を求めた。濃度（μｇ）と致死性のグラフからＬＣ５０値を得た。正の対照としてポドフィロトキシンを用いた。
【００４９】
本発明のコロソリン酸類似体は、コロソリン酸より優れた血糖降下活性を示すことが分かった（表１：血糖降下活性は血清グルコース濃度の抑制率値で表されている。抑制率値が高いほど、活性が高い）。
【００５０】
本発明のコロソリン酸類似体は、優れた５−リポキシゲナーゼ活性を示すことが分かった（表２：５−リポキシゲナーゼ活性は、１００μＭおよび２５０μＭにおける抑制率で表されている。抑制率値が高いほど、活性が高い）。
【００５１】
本発明のコロソリン酸類似体は、有意のブラインシュリンプ致死性を示すことが分かった（表３：ブラインシュリンプの致死性はμＭ濃度のＬＣ５０で表されている。ＬＣ５０値が低いほど、活性が高い）。
【００５２】
【表１】
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【００５３】
【表２】
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【００５４】
【表３】
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【国際調査報告】
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