(57)【要約】      （修正有）【課題】分取可能なリサイクル回数を予測して特定される分取可能時間帯に分取処理を行う液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法の提供。【解決手段】データ処理装置が備えるモニタ画面にリサイクル１回目以上ｎ回目に得られるクロマトグラムが分離不十分なピークを有するチャートとして表示された際に、該チャートを基準チャートとしてピークの分布状態との関係で分取可能な程度にまでピークが分離されたクロマトグラムを得るべくシュミレーションを行うことでｎ回目以降の分取可能リサイクル回数とその溶出時間帯とを事前に予測し、該分取可能リサイクル回数と前記溶出時間帯との関係で定まる分取可能予測チャートとしてモニタ画面に表示し、予測された溶出時間帯に対応する実時間帯に試料中から目的成分を分取する。【選択図】図２
2015224895.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法において、
データ処理装置が備えるモニタ画面にリサイクル０回目以上ｎ回目に得られるクロマトグラムが分離不十分なピークを有するチャートとして表示された際に、該チャートを基準チャートとして前記ピークの分布状態との関係で分取可能な程度にまで前記ピークが分離されたクロマトグラムを得るべくシュミレーションを行うことで前記ｎ回目以降の分取可能リサイクル回数とその溶出時間帯とを事前に予測し、該分取可能リサイクル回数と前記溶出時間帯との関係で定まる分取可能予測チャートとして前記モニタ画面に表示し、予測された前記溶出時間帯に対応する実時間帯に試料中から目的成分を分取することを特徴とする液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法。
【請求項２】
前記シュミレーションは、前記モニタ画面に表示されたリサイクルｎ回目のチャートが分離不十分な初出のピークを有するものであるときにこれを基準チャートとし、該基準チャートとベースラインとで囲まれたピーク起点からピーク倒伏点に至るまでの面領域をシュミレーション範囲と定め、分離不十分な前記ピークに対し２次微分を行ってその頂点と変曲点とを求め、求めた頂点と変曲点とから単一ピークの数とガウス曲線を求めた後、各単一ピークを合わせた仮の式を作り、この式が実際の分離不十分な前記ピークに一致するように各係数を少しだけずらしてその際の分離不十分な前記ピークとの差が小さくなる方向の各係数のずれの割合を確認し、差が小さくなる方向へ各係数をそのずれの割合に応じてずらし、その差が限りなく０に近くなるまで、前記仮の式が実際の分離不十分な前記ピークに一致するように各係数を少しだけずらしてその際の不分離のピークとの差を確認しながら繰り返し行って最終的に各係数の値を求めることで、前記ｎ回目以降の分取可能リサイクル回数とその溶出時間帯との事前予測を可能とすべく行われる請求項１に記載の液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフィーにおいて試料中から目的成分を精製・分取する際の好適リサイクル回数を予測して分取可能時間帯を予め把握しておくことができる液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法に関する技術である。
【背景技術】
【０００２】
液体クロマトグラフには、試料中の微量成分を分析するための分析用のものと、試料中から目的成分を精製・分取するための分取用のもとがあり、これらのうち、分取用のものについては、例えば同一の分離カラムに繰り返し循環させるようにした特許文献１，２に示されているリサイクル分取用液体クロマトグラフもある。
【０００３】
図６は、特許文献１における図１をその引出し符号を変えて示す再掲図である。同図によれば、リサイクル分取用液体クロマトグラフ５１の全体は、移動相としての溶媒Ｓを貯溜させた溶媒タンク５２と、該溶媒タンク５２から流下する溶媒Ｓの流路に介在させた三方弁５３と、該三方弁５３を経て流入する溶媒Ｓを下流へと圧送すべく流路中に介在配置された送液ポンプ５４と、該送液ポンプ５４を介して圧送される溶媒Ｓ中に試料を注入するインジェクター５５と、試料注入後の移動相を流下させるプレカラム５７とメインカラム５８とからなる分離カラム５６と、該分離カラム５６を経た移動相中の試料成分を検出する例えば示差屈折率検出計などの検出計５９と、該検出計５９により検出されたデータの記録とその処理とを行うモニタ画面付きのデータ処理装置６０と、検出計５９を経て流下する移動相を導入して送液ポンプ５４方向とフラクションコレクター６２方向と手動側分取容器６３方向との３方向への流路切換えを可能に配置されるリサイクルボックス６１とを少なくとも備えている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】実用新案登録第３１７６５１１号公報
【特許文献２】特開２０１１−８９７７８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、上記特許文献１，２の開示技術を含む従来から行われているリサイクル分取手法による場合は、分取に適する分離状態のチャートが得られるに至るまでリサイクルを繰り返し行う必要があることから、いつ訪れるか判然としない分取に好適なリサイクル回数に到達するまで、モニタ画面上のチャートを注視しながら長時間にわたり緊張して待機していなければなければならないという不都合があった。
【０００６】
また、従来から行われているリサイクル分取手法による場合には、過去に取得された分取データによりリサイクル回数、分取時間が決まっている同一の試料については連続分取を自動化することができるものの、過去データのない初めての混合試料については目的成分の溶出時間が予測できず、したがって連続分取を自動化することができない不具合もあった。
【０００７】
本発明は、従来手法にみられた上記課題に鑑み、チャートがリサイクル何回目に分取に好適な分離状態となるかを予知することで、分取可能時間帯を予め把握しておいて該時間帯に分取処理を行うことができ、かつ、その自動化も可能な液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、上記目的を達成すべくなされたものであり、その構成上の特徴は、液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法において、データ処理装置が備えるモニタ画面にリサイクル０回目以上ｎ回目に得られるクロマトグラムが分離不十分なピークを有するチャートとして表示された際に、該チャートを基準チャートとして前記ピークの分布状態との関係で分取可能な程度にまで前記ピークが分離されたクロマトグラムを得るべくシュミレーションを行うことで前記ｎ回目以降の分取可能リサイクル回数とその溶出時間帯とを事前に予測し、該分取可能リサイクル回数と前記溶出時間帯との関係で定まる分取可能予測チャートとして前記モニタ画面に表示し、予測された前記溶出時間帯に対応する実時間帯に試料中から目的成分を分取することにある。
【０００９】
本発明において分取可能な程度にまでピークが分離されたクロマトグラムを得るための前記シュミレーションは、前記シュミレーションは、前記モニタ画面に表示されたリサイクルｎ回目のチャートが分離不十分な初出のピークを有するものであるときにこれを基準チャートとし、該基準チャートとベースラインとで囲まれたピーク起点からピーク倒伏点に至るまでの面領域をシュミレーション範囲と定め、分離不十分な前記ピークに対し２次微分を行ってその頂点と変曲点とを求め、求めた頂点と変曲点とから単一ピークの数とガウス曲線を求めた後、各単一ピークを合わせた仮の式を作り、この式が実際の分離不十分な前記ピークに一致するように各係数を少しだけずらしてその際の分離不十分な前記ピークとの差が小さくなる方向の各係数のずれの割合を確認し、差が小さくなる方向へ各係数をそのずれの割合に応じてずらし、その差が限りなく０に近くなるまで、前記仮の式が実際の分離不十分な前記ピークに一致するように各係数を少しだけずらしてその際の不分離のピークとの差を確認しながら繰り返し行って最終的に各係数の値を求めることで、前記ｎ回目以降の分取可能リサイクル回数とその溶出時間帯との事前予測を可能とすべく行うのが望ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、分取可能なリサイクル回数を事前に予測してその溶出時間帯を把握しておき、その時間帯に待機して目的成分を分取することができるので、モニタ画面に表示される実チャートを注視しながらいつ分取に適する実チャートが表示されるのかを長時間にわたり緊張して目視しながら待機しなければならない煩雑さを解消することができる。
【００１１】
また、このように分取可能なリサイクル回数を事前に予測できることから、異なる試料から目的成分を分取する場合であってもデータ処理装置側に予め分取に必要なデータを入力しておくことにより分取処理の自動化を図ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明方法が適用される装置構成例を示す説明図。
【図２】リサイクル０回目からリサイクル３回目までのチャートとリサイクルバルブとフラクションバルブとの関係を示す説明図であり、（ａ）はリサイクル０回目を、（ｂ）はリサイクル１回目を、（ｃ）はリサイクル２回目を、（ｄ）はリサイクル３回目をそれぞれ示す。
【図３】３点を通る直線と係数との関係を示すグラフ図。
【図４】黒点で示される実測値と単一ピーク２個を合わせた式の曲線との関係を示すグラフ図。
【図５】リサイクル１回目でシュミレーションを行う場合を例にその処理手順を示す説明図であり、（ａ）はリサイクル１回目の実チャートとこれを基準としてピーク頂点と半値幅とが決定される状態を、（ｂ）は決定されたピーク頂点と半値幅とから得られる単一仮想ピークを足し合わせて得られる変形後のピークをリサイクル１回目の実チャートに重ね合わせた状態を、（ｃ）は単一仮想ピークをさらにわずかに変形させた際の変形後のピークの状態を、（ｄ）は図２（ｂ）におけるシュミレーション範囲ａとの関係でのシュミレーション結果をそれぞれ示す。
【図６】特許文献１における図１の再掲図。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
図１は、本発明方法が適用される液体クロマトグラフの構成例を模式的に示す説明図である。同図によれば、液体クロマトグラフ１１の全体は、移動相としての溶媒Ｓを貯溜させた溶媒タンク１２と、該溶媒タンク１２から流下する溶媒Ｓの流路に介在させた三方バルブ１３と、該三方バルブ１３を経て流入する溶媒Ｓを下流へと圧送すべく流路中に介在配置された送液ポンプ１４と、該送液ポンプ１４を介して圧送される溶媒Ｓ中に試料を注入する試料導入装置１５と、試料注入後の移動相を流下させる分離カラム１６と、該分離カラム１６を経た移動相中の試料成分を検出する例えば示差屈折率検出器などの検出器１７と、該検出器１７により検出されたデータの記録とその処理とを行う例えばパーソナルコンピュータなどのような出力手段であるモニタ画面１９と入力手段であるキーボード２０とを備えるデータ処理装置１８と、検出器１７とデータ処理装置１８との間に介在配置される制御ボックス２１と、検出器１７を経て流下する移動相を導入して送液ポンプ１４方向への送液路Ｌ２とフラクションコレクタ２４方向への送液路Ｌ３との２方向への流路切換えを可能に配置されるリサイクルバルブ２２と、該リサイクルバルブ２２とフラクションコレクタ２４との間に介在させて移動相をフラクションコレクタ２４方向への送液路Ｌ３と廃液タン２５方向への送液路Ｌ４との２方向への流路切換えを可能とするフラクションバル２３とを少なくとも備えている。
【００１４】
この場合、制御ボックス２１は、データ処理装置１８からの制御信号に基づいてリサイクルバルブ２２やフラクションバルブ２３を含む流路切り替えバルブを開閉制御するための電子回路等で構成されている。
【００１５】
また、データ処理装置１８は、他の出力手段として記録紙上にクロマトグラム４１をチャートとして出力するためのチャートレコーダー（図示せず）を備えている。
【００１６】
次に、上記構成からなる液体クロマトグラフ１１に適用して実施される本発明方法（液体クロマトグラフィーにおけるリサイクル分取方法）を、リサイクル１回目に分離不十分なピーク３５がモニタ画面１９に表示される場合を例として図１〜図５を参酌しながら以下に説明する。
【００１７】
まず、リサイクル０回目に得られるクロマトグラム３１は、データ処理装置１８が備えるモニタ画面１９に分取に適しない未分離なピーク３３で構成される例えばリサイクル０回目のチャート３２として図２（ａ）に例示されているように表示されるため、単一のピークなのか否かを確認することができない。
【００１８】
このため、検出器１７を流下した移動相は、リサイクルバルブ２２を送液路Ｌ２側に開とすることで三方バルブ１３を経て再び送液路Ｌ１と流れ込む１回目のリサイクルが行われ、モニタ画面１９にその際に得られるクロマトグラム３１が図２（ｂ）に示されているように分離不十分なピーク３５で構成されるリサイクル１回目の実チャート３４として表示される。なお、図２（ａ）中に負方向に遅れて出現する不要なピーク成分は、リサイクルバルブ２２とフラクションバルブ２３とを送液路Ｌ４側に開とすることで廃液タンク２５へと排出される。
【００１９】
かくして、分離不十分なリサイクル１回目の実チャート３４がモニタ画面１９に表示された際には、該チャート３４を基準チャートとしてピーク３５の分布状態との関係で分取可能な程度にまでそのピークが分離された図２（ｄ）に示すピーク４１で構成されるリサイクル３回目の実チャート４０に対応させたリサイクル３回目の予測チャート４０’として図２（ｂ）に示すように予測表示させるために必要な所定のシュミレーションが行われる。
【００２０】
つまり、上記シュミレーションを行うことで、モニタ画面１９には、分取可能リサイクル回数であるリサイクル３回目との関係で定まる分取可能予測チャートがリサイクルｎ回目、図示例ではリサイクル１回目以降の分取可能リサイクル回数がリサイクル３回目の予測チャート４０’として予測表示される結果、分取可能リサイクル回数を事前に知ることができることになる。
【００２１】
したがって、目的成分を実際に分取する際は、リサイクル３回目の実チャート４０に示される分取可能時間帯を事前に知った上で、その時間帯に合わせて待機しながらリサイクルバルブ２２とフラクションバルブ２３とを送液路Ｌ３側に開とすることで、フラクションコレクタ２４に目的成分を分取することができることになる。
【００２２】
ここで、上記したシュミレーションについての具体的なプロセスをさらに詳しく説明すれば、液体クロマトグラフィーにより得られるクロマトグラム３１は、モニタ画面１９にリサイクル０回目の実チャート３２として表示される。すなわち、図１に示す液体クロマトグラフ１１の試料導入装置１５を介して送液路Ｌ１中に導入された試料は、検出器１７を経ることでクロマトグラム３１が検出され、該クロマトグラム３１に対応させたリサイクル０回目の実チャート３４として例えば図２（ａ）に示すようにモニタ画面１９に表示される。
【００２３】
この場合、モニタ画面１９に表示されるリサイクル０回目の実チャート３２は、ピーク３３が分離されずに重なり合っているために単一ピークがいくつ存在しているのかが分からず、したがって、この段階では分取に適する状態にあるクロマトグラム３１とはなっていない。
【００２４】
そこで、移動相は、リサイクルバルブ２２と三方バルブ１３とを経由させることで送液路Ｌ２から送液路Ｌ１側へと環流され、再び分離カラム１６と検出器１７とを経ることで、リサイクル０回目の実チャート３２におけるリテンションタイムとの関係でその２倍の間隔をおいた位置（図では右側位置）に図２（ｂ）に示すようにリサイクル１回目の実チャート３４がモニタ画面１９に時系列で表示されることになる。
【００２５】
図２（ｂ）におけるリサイクル１回目の実チャート３４は、リサイクル０回目の実チャート３２とは異なり、例えば２つのピーク頂点３５ａ，３５ｂを有する分離不十分なピーク３５としてモニタ画面１９に表示されており、該ピーク３５が立ち上がるピーク起点Ｐ１から倒れ込むピーク倒伏点Ｐ２に至るまでの間が後述するシュミレーション範囲ａとして定められることになる。
【００２６】
図３（ａ）〜（ｄ）は、図２（ｂ）に示すシュミレーション範囲ａに位置する分離不十分なピーク３５からなるリサイクル１回目の実チャート３４を基準チャートとした場合におけるシュミレーションのプロセス例を示す説明図である。
【００２７】
すなわち、リサイクル１回目のクロマトグラム３１は、図２（ｂ）および図３（ａ）に示されているように、例えば２つのピーク頂点３５ａ，３５ｂを有する分離不十分なピーク３５からなるリサイクル１回目の実チャート３４としてモニタ画面１９に表示される。
【００２８】
そして、ここでは、２つのピーク頂点３５ａ，３５ｂを有するピーク３５のベースラインＢＬとリテンションタイムとが求められる。ここでベースラインＢＬを求めるのは、２つのピーク頂点３５ａ，３５ｂの高さ（ベースラインＢＬから各ピーク頂点３５ａ，３５ｂまでの垂線の長さ）や形を正確に求めなければピーク波形の近似曲線が得られないからである。また、リテンションタイムを求めるのは、試料導入装置１５を構成している図示しないインジェクションを介して試料を導入した後、各ピーク頂点３５ａ，３５ｂを検出計１７が確認するに至るまでの時間がリテンションタイム（リサイクルする際の同一試料についてのリテンションタイムは等間隔）であることから、予め求めてあるリテンションタイムを２倍した後の時間が次の回、つまりリサイクル２回目のピーク３９が出現の位置となることに由来する。
【００２９】
図２（ａ）に示すベースラインＢＬは、ピーク３５のピーク起点Ｐ１とピーク倒伏点Ｐ２とをまず求め、両者間に直線を描くことで得ることができる。この場合におけるピーク起点Ｐ１とピーク倒伏点Ｐ２とは、波形データからノイズ成分を除去し、２次微分を求めて変曲点の極大極小値から確認することができる。そして、描かれた直線は、その前後のベースラインと高さや傾きがほぼ等しいと判断されれば、今回のベースラインＢＬとして採用されることになる。ベースラインＢＬを決定する上で必要な高さや傾きの範囲は、ピーク３５のない位置におけるベース変動を基準とし、ある一定の許容範囲内にあるものについて自動的に決められることになる。
【００３０】
この場合、目的とするピーク３５が分離不十分な状態にある図２（ｂ）に示すリサイクル１回目の実チャート３４とベースラインＢＬとで囲まれた面領域がシュミレーション範囲ａとして設定されることになる。
【００３１】
シュミレーションを行う際の基準チャートとなるリサイクル１回目の実チャート３４は、図３（ａ）に詳しく示されているように、シュミレーション範囲ａ内にあるそれぞれのピーク頂点３５ａ，３５ｂの高さａ１，ａ２と、それぞれの高さａ１，ａ２の半分の位置にある各半値幅１σ，２σとが決定される。
【００３２】
しかる後、一方のピーク頂点３５ａとその半値幅１σとから得られて破線で示されるガウス曲線からなる一方の単一仮想ピーク３６と、他方のピーク頂点３５ｂとその半値幅２σとから得られて破線で示されるガウス曲線からなる他方の単一仮想ピーク３７とは、図２（ｂ）および図３（ａ）に示されているようにリサイクル１回目の実チャート３４に重ね合わされる。また、図３（ａ）における‘時間ｍ１は、リサイクル１回目の実チャート３４における一方のピーク頂点３５ａまでのリテンションタイムを、‘時間ｍ２は、リサイクル１回目の実チャート３４における他方のピーク頂点３５ｂまでのリテンションタイムをそれぞれ示す。
【００３３】
しかも、この場合、破線で示される一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７とは、データ処理装置１８にプログラムとして与えられる所定のシュミレーション手法により図３（ｂ），（ｃ）に示されているように少しだけ変形させる。すなわち、本発明では、単一ピークをガウス曲線と仮定し、不分離のピークに含まれる各単一ピークの同位置における高さの合計が一致するようにガウス曲線の係数をまず求める。そして、不分離のピークの微分方程式からピークの頂点３５ａと１σとの位置を求めることにより、単一ピークの位置、高さ、幅をある程度把握し、これらのデータから不分離のピークの仮の式を作成する。この場合、一つのガウス曲線は、係数が３個あるので、仮の式にｎ個のピークが含まれるとすると３×ｎ個の係数を求める必要があることになる。ガウス曲線は、非線形であるため、係数は非線形最小自乗法を求めるために例えばニュートン・シンプソン法が用いられる。
【００３４】
この場合、図４に示すように直線のような線形であれば、最小自乗法により係数が簡単に求めることができることになる。例えば３点を通過する直線を求める場合は、図４に示すように直線の係数ａ，ｂを求めることになる。ここで各点から直線までの距離が最小になるようにするのが最小自乗法であり、次式（数１）のように距離の自乗を微分し、最小値０を求めることにより係数が確定する。
【００３５】
【数１】
2015224895.tif 000003
【００３６】
本発明においては、各点が不分離な実際のピーク３５のデータであることから、直線が各ガウス曲線を足し合わせた式となる。次式（数２）は、ガウス曲線の式であり、係数はａ，ｍ，σになり、不分離なピークを２次微分することで、頂点が判明する。
【００３７】
【数２】
2015224895.tif 000004
【００３８】
判明した頂点の数から単一ピークの数も判明し、図３（ａ）に示されているように、その際の頂点（例えば３５ａ，３５ｂ）のｙ軸方向での高さはａに、頂点（例えば３５ａ，３５ｂ）のｘ軸方向での位置はほぼｍに等しくなる。また、ガウス曲線の変曲点は、σの位置と一致するので、その位置（σ）が判明する。これにより求めた一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７とからなる各単一ピーク（ガウス曲線）は、図３（ａ）に示すように不分離なピーク（リサイクル１回目の実ピーク３５）に重ねることができるものの、各点の高さが各単一ピークの高さの合計となることから、図３（ｂ）に太い破線として示されているように未だ正確には一致させることができない。
【００３９】
図５において実線で示されている曲線は、一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７との２つを合わせた次式（数３）から導かれる曲線（変形後のピーク４５’）であり、該曲線に沿って散在する各点が実測値である。
【００４０】
【数３】
2015224895.tif 000005
【００４１】
この場合、曲線（変形後のピーク４５’）の係数６個（ｘ１，ｙ１，ｘｎ，ｙｎ，ｘｍ，ｙｍ）については、最小自乗法を用いて計算して求めることになるが、式が非線形であるため簡単には求めることができない。このため、例えばニュートン・シンプソン法などを用いることになる。ここでは、先述した直線の係数を求めるのと同様に、まず、係数は２次微分で用いた値を使い、各係数をわずかにずらした上で、２乗してずらした数値で割る。
【００４２】
ここで、Ｕを各点を差し引いて２乗する値であるとすると、次式（数４）によりＵを求めることができる。
【００４３】
【数４】
2015224895.tif 000006
【００４４】
したがって、ａ１，ｍ２をΔａ１，Δｍ２ずらしたとすると、次式（数５）が成立する。
【００４５】
【数５】
2015224895.tif 000007
【００４６】
ここでは、Ｚが０になる変曲点を、ａ１，ｍ１，σ１，ａ２，ｍ２，σ２に対し行って０となる値を探す。つまり、ａ１，ｍ１，σ１，ａ２，ｍ２，σ２をわずかにずらし、単一ピークの重ね合わせである一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７とを重ね合わせた変形後のピーク３５’が不分離なピーク３５に一致する方向を探す。このとき、１回目の計算では、ａ１，ａ２を大きく下に、σ１，ｍ１，σ２，ｍ２は数値がほとんど変わらない結果がでる。
【００４７】
また、上記の式（数５）においては、Δには小さな値を設定し、Ｚがどれだけ０に近くなるかにより、ａ１，Δｍ２の値を決定する。このとき、Ｚが０から大きく離れる場合は、Δａ１，Δｍ２の値がマイナスになる。この計算では、上記の式（数５）をもう一度微分、つまり２次微分することでどの係数の変化が、Ｚがより０になるかの割合に寄与するかが分かることになる。つまり、ここでは、各係数を少しずらしながらどちらの係数を大きくずらすと真のピーク（基準チャートであるリサイクル１回目のピーク３５）に一致するのかを調べる作業を繰り返すことになる。
【００４８】
このような処理は、全ての係数に対し行うことになるため、行列式を用いて微分を行うことになる。このようにして微分で方向（係数に対するずれの割合）が求まり、係数の値をずれの割合に応じて変更する。これを繰り返しながらＺが０に近くなるまで計算を行う。実際は、ずれの割合をそのまま次の係数に使用すると発振を起こして究極値が決まらない場合があるため、ずれの割合に幾分重みを付けている。つまり、ここでは、各係数を少しずらしてどちらの係数を大きくずらすと真のピーク値に一致するかを調べ、これを繰り返すことで行われることになる。
【００４９】
かくして、変形後のピーク３５’の頂点の高さは、図３（ｃ）に示すように不分離なピーク３５の高さに一致させることができるものの、単一ピーク、つまり、一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７との高さを不分離なピーク３５の高さに一致させることはできない。そこで、２回目、３回目の計算を繰り返すことで、σ１，ｍ１，σ２，ｍ２の数値も少しずつ変わり、最終的には、図３（ｄ）に示すように変形後のピーク３５’の波形を不分離なピーク３５の波形と一致させることができることになる。なお、テーリングの波形もこのような方法で計算することにより求めることができる。この場合、波形の計算回数は、５０回程度行うことで略一致させることができる。なお、、図３に示す波形は、一例であり、その形によりａ１，σ１，ｍ１，ａ２，σ２，ｍ２のいずれもその方向は様々となる。
【００５０】
以上を総括すると、上記シュミレーション手法は、まず、不分離のピークに対し２次微分を行ってその頂点と変曲点とを求め、求めた頂点と変曲点とから単一ピークの数とガウス曲線を求める。しかる後、各単一ピークを合わせた仮の式を作り、この式が実際の不分離なピークに一致するように各係数を少しだけずらしてその際の不分離のピークとの差を確認し、差が小さくなる方向の各係数のずれの割合を確認することで行われる。かくして、差が小さくなる方向へ各係数をそのずれの割合に応じてずらし、その差が限りなく０に近くなるまで、前記仮の式が実際の不分離なピークに一致するように各係数を少しだけずらしてその際の不分離のピークとの差を確認する処理を繰り返しおこなって、最終的に各係数の値を求めることができることになる。
【００５１】
図３（ｄ）は、このようにして所定のシュミレーションが行われた後のモニタ画面１９への表示例として、実線で示されている実際のリサイクル１回目の分離不十分なピーク３５に変形後のピーク３５’および該ピーク３５’を構成する一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７とを重ね書きした状態を示す図であり、これが図２（ｂ）にシュミレーション範囲ａとして示されるリサイクル１回目のチャート４４である。
【００５２】
すなわち、リサイクル１回目の実チャート３４がモニタ画面１９に表示される際には、図２（ｂ）および図３（ｄ）に示されているように実際のリサイクル１回目の分離不十分なピーク３５と変形後のピーク３５’とが、該ピーク３５’を構成する一方の単一仮想ピーク３６と他方の単一仮想ピーク３７とともに重ね書きされるほか、リサイクル２回目の予測チャート３８’およびリサイクル３回目の予測チャート４０’も例えば破線や色を異にした表示パターンのもとで図２（ｂ）に示すようにモニタ画面１９に表示されることになる。
【００５３】
したがって、リサイクル１回目の実チャート３４を図２（ｂ）に示すようにモニタ画面１９に表示する際には、図２（ｄ）に示すリサイクル２回目の実チャート３８とリサイクル３回目の実チャート４０とを、未だ十分には分離されていない２回目の予測チャート３８’と十分に分離されたリサイクル３回目の予測チャート４０’として予測表示することができる結果、十分に分離された仮想ピーク４１’として示されるリサイクル３回目の予測チャート４０’の仮想ピーク頂点４１ａ’，４１ｂ’を基準にして分取できることを事前に知ることができることになる。なお、図２（ｃ）に示されているリサイクル２回目の実チャート３８は、リサイクル２回目の実際のクロマトグラム４１に基づいて、図２（ｄ）に示されているリサイクル３回目の実チャート４０は、リサイクル３回目の実際のクロマトグラム４１に基づいて、それぞれがピーク頂点３９ａ，３９ｂを有するピーク３９およびピーク頂点４１ａ，４１ｂを有するピーク４１として時系列的にモニタ画面１９に表示されることになる。
【００５４】
本発明方法は、このようにして構成されているので、分取可能なリサイクル回数を事前に予測してその時間帯に待機することで目的成分を分取することができる結果、モニタ画面１９に表示されるチャートを注視しながらいつ分取に適するチャートが表示されるのかを長時間にわたり緊張して目視しながら待機しなければならない煩雑さを解消することができる。
【００５５】
また、このように分取可能なリサイクル回数を事前に予測できることから、異なる試料から目的成分を分取する場合であってもデータ処理装置１８側に予め分取に必要なデータを入力しておくことにより分取処理の自動化を図ることができる。
【００５６】
なお、分取を可能とする予測処理は、データ処理装置１８を介してピークの検出等行うため、その稼働中に検出器１７の感度やチャートスピードを変更しても、スタート時点に遡ってその変更内容が反映されることから、時系列性を付与することができる。また、データ処理装置１８が備えるモニタ画面１９には、稼働中の記録を取りながら、並行して過去のチャートも同時に表示することができるので、データの比較も円滑に行うことができる。
【００５７】
以上は、リサイクル１回目で図２（ｂ）のような分離不十分なピーク３５がモニタ画面１９に表示される場合を例に本発明を説明しているが、リサイクル０回目やリサイクル２回目以降に図２（ｂ）のリサイクル１回目の実チャート３８に相当する分離不十分なピークがモニタ画面１９に表示されることもあり、その場合は、これを基準チャートとして所定のシュミレーションが行われることになる。
【符号の説明】
【００５８】
１１  液体クロマトグラフ
１２  溶媒タンク
１３  三方バルブ
１４  送液ポンプ
１５  試料導入装置
１６  分離カラム
１７  検出器
１８  データ処理装置
１９  モニタ画面
２０  入力手段
２１  制御ボックス
２２  リサイクルバルブ
２３  フラクションバルブ
２４  フラクションコレクタ
２５  廃液タンク
３１  クロマトグラム
３２  リサイクル０回目の実チャート
３３  ピーク
３３ａ  ピーク頂点
３４  リサイクル１回目の実チャート（基準チャート）
３５  ピーク
３５’変形後のピーク
３５ａ，３５ｂ  ピーク頂点
３６  一方の単一仮想ピーク
３７  他方の単一仮想ピーク
３８  リサイクル２回目の実チャート
３８’リサイクル２回目の予測チャート
３９  ピーク
３９ａ，３９ｂ  ピーク頂点
４０  リサイクル３回目の実チャート
４０’リサイクル３回目の予測チャート
４１  ピーク
４１’仮想ピーク
４１ａ，４１ｂ  ピーク頂点
４１ａ’，４１ｂ’  仮想ピーク頂点
ＢＬ  ベースライン
Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３，Ｌ４    送液路
Ｐ１  ピーク起立点
Ｐ２  ピーク倒伏点
Ｓ  溶媒
【図１】
2015224895.tif 000008
【図２】
2015224895.tif 000009
【図３】
2015224895.tif 000010
【図４】
2015224895.tif 000011
【図５】
2015224895.tif 000012
【図６】
2015224895.tif 000013