(57)【要約】  本発明は、Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン、４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジンまたはその薬学的に許容される塩を含む、骨折治療用組成物を開示する。本発明の組成物は、仮骨の体積を有意に減少させ、仮骨の骨密度及び骨強度を有意に増加させ、仮骨組織内の結合組織及び軟骨組織の含量を有意に減少させ、骨組織の含量を有意に増加させることにより、骨折の際に形成された仮骨の消失及び仮骨の骨化を促進させる。したがって、本発明の組成物は、骨折に対する治癒促進剤として有用に使用することができる。
2008505068.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表されるベンズアミジン化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、骨折治療用薬学的組成物。
【化１】
2008505068.tif 000012
（式中、Ｒは水素またはヒドロキシ基である。）
【請求項２】
前記塩がメタンスルホン酸塩または塩酸塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
下記化学式１で表されるベンズアミジン化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を骨折の患者に投与し、骨折を治療する方法。
【化２】
2008505068.tif 000013
（式中、Ｒは水素またはヒドロキシ基である。）
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、骨折治療用薬学的組成物に係り、さらに詳しくは、Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン、４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジンまたはその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物に関する。
【０００２】
〔背景技術〕
骨折とは、骨、骨端板または関節面の連続性が非正常的に切れた状態で、骨の割れをいう。骨折を誘発する原因としては、交通事故などの外傷や、産業場で起こる安全事故、骨粗鬆症、骨癌、代謝異常症などの病気による骨の変化、スポーツまたは荷重による反復的な骨に対するストレスなどがある。また、骨折状態は、骨折線（骨切断によって発生した骨端に沿った線）によって、亀裂骨折、若木(greenstick)骨折、横骨折、斜骨折、分節性骨折、粉砕骨折、剥離骨折、圧迫骨折、陥没骨折などに分類される。
【０００３】
骨折が起こると、血管の損傷によって部分的出血と血餅が形成され、骨折された隣接部位にある骨基質は破壊され、骨細胞も亡くなる。したがって、骨折治癒過程中に血餅、損傷した骨細胞及び骨基質は、マクロファージによって除去され、骨折部位の周囲にある骨膜(perilsteum)と骨内膜(endosteum)の骨原生細胞(osteoprogenitor cell)は、活発に増殖して骨折の周辺に細胞組織(cellular tissue)を形成し、これらは骨折された部位に入る。骨折された部位の結合組織では、小さい軟骨片から軟骨内骨化過程が起こるか、膜性骨発生過程(intramembranous ossification)によって幼若骨(immature bone)が形成される。したがって、骨折部位には軟骨組織、膜性骨発生過程及び軟骨内骨化過程が同時に観察される。このような方式によって不規則に形成された幼若骨の支柱(trabecular)が骨折された骨の両端を一時的に結合させて仮骨を形成する。骨折部位に形成された仮骨の一次骨組織(woven bone)は、治癒が進むにつれて益々吸収されて層板骨(lamellar bone)で代替されながら元の骨構造に戻っていく。
【０００４】
一般に、骨折治療過程は、炎症期、修復期及びリモデリング期に大別される。
【０００５】
炎症期は、骨周辺の組織が損傷し、骨折間隙に血腫が満たされて骨折部位に炎症が発生する。
【０００６】
修復期は、骨折間隙内から血腫が除去されて肉芽(granulation)組織になり、軟仮骨(soft callus)が形成され、骨形成メカニズムによって硬仮骨に漸次置換される過程（軟骨内骨化）、及び骨膜に存在する骨形成細胞によって新しい骨が形成される過程（繊維性／膜内骨化）の２過程が並行される。
【０００７】
リモデリング期は、形成された新しい骨が骨吸収及び骨形成の繰り返しによって長期間にわたって伸張される一方、骨変形が矯正され、骨欠陥部位が補強される。
【０００８】
リモデリング期の場合は、形成される新しい骨が一定程度の強度を持つため、日常生活がより少なく制限されるが、修復期の場合は、長い期間がかかり、患者の日常生活が大きく制限される。したがって、修復期の期間を短縮するのが臨床的に重要であり、骨折治療剤はこのような複雑な過程を促進させて完全な骨への再生を促進させることが重要である。
【０００９】
骨折治療を促進する成分としては、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、変形成長因子（ＴＧＦ）などのペプチド型の生理学的活性成分がある(Proc. Natl. Acad. Sci., USA, vol. 87, pp. 2220-2224 (1989))。また、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤を用いて細胞内環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の水準を増加させることにより、骨の質量を向上させる可能性が研究された。例えば、一般的なＰＤＥ阻害剤であるペントキシピリン、または選択的なＰＤＥ４阻害剤であるロリプラムを毎日皮下注射によって投与したマウスから、脊椎及び大腿骨の骨無機質密度の増加及び皮質骨(cortical bone)の過多形成が観察されることが報告された(Bone, vol. 27., 6th edition, pp. 811-817 (2000))。
【００１０】
このように骨組織の形成と骨折の治癒は、久しい前から関心の対象となってきた。また、骨折治癒過程を究明するために、遺伝的要因、成長期による影響、血液供給による影響、固定方法による影響、骨移植有無、その他の治癒促進因子投与などのいろんな観点から研究が盛んに行われてきた(Kawamura, M and Urist MR., Clin. Orthop., 236, 240-248, 1988)。
【００１１】
一方、骨折の治療には相当な期間がかかり、人口高齢化に伴ない、病的骨折の一つである骨粗鬆症患者の骨折が著しく増加しており、現在、骨粗鬆症治療剤として用いられているカルシウムとエストロゲン、カルシトニン、活性型ビタミンＤ、ビスホスフォネート製剤などを骨折の治療に使用して骨折治療効果を期待したが、骨密度減少を抑制して骨折の危険を低めることができるだけであり、骨折部位の接合及び骨の形成を図ることはできない。骨粗鬆症の発生メカニズムは、遺伝的または体質的要因により骨の陰性平衡状態が持続して繊細な骨基質を持つ状態、骨質が正常速度で吸収されるが骨の形成は不振な状態、及び骨が正常速度で形成されるが骨の吸収は増加した状態から説明できる。このように骨粗鬆症と骨折は、全く異なる発生メカニズムを持つ。よって、骨粗鬆症治療剤によって骨折を治療することができるとは類推されない。
【００１２】
前述したような骨粗鬆症と骨折のメカニズムの差異により、骨の再吸収(bone resorption)を抑制して骨粗鬆症治療効果を示す薬剤は、骨形成(bone formation)を抑制し、むしろ骨折の治療を遅延させるおそれがある。例えばビスホスフォネート製剤であるインカドロン酸二ナトリウム(incadronate disodium)を長期間連続して投与した場合、ラットの大腿骨(femur)の骨折治癒を遅延させたという報告があり(Li C et al., J. Bone Miner Res. 2001 Mar; 16(3):429-36)、インカドロン酸を前処理した場合には、骨折１６週後に骨折の治癒に影響を及ぼさないが、継続的なインカドロン酸による治療は、仮骨は増加させるが、骨折治癒の際にリモデリング過程を遅延させるという報告もある(Li J et al., J. Bone Miner Res. 1999 Jun; 14(6):969-79)。
【００１３】
また、骨粗鬆症と深い関連があるものと知られている骨生成バイオマーカーであるｂＦＧＦなどは、骨折治癒とは何の関連もないと報告されている(Xu et al., Chin. J. Traumatol. 6, 160-166, 2003)。
【００１４】
したがって、一般的な骨折発生の際に正常状態への治癒を効果的に促進するために骨粗鬆症治療剤を使用するには前記のような理由によって限界があって、骨粗鬆症と関係なく固有の骨折治癒効果を持つ薬剤の開発が切実に要求されている。
【００１５】
そこで、本発明者らは、骨折に対する効果的な治療剤を開発するために研究した結果、骨粗鬆症治療剤（韓国特許公開公報第１０−２００３−８６５４号）として発明したＮ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン及び４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジンが、骨粗鬆症と骨折の発生メカニズムが全く異なるにも拘わらず、骨折の際に形成される仮骨の骨密度及び骨強度を増加させ、仮骨内の軟骨及び結合組織の骨化を促進して骨折治癒の促進に卓越な効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
〔発明の開示〕
本発明は、従来の技術の上述した問題点に鑑みてなされたもので、その目的は、Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン、４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジンまたはその薬学的に許容される塩を含む、骨折治療用薬学的組成物を提供することにある。
【００１７】
また、本発明の他の目的は、前記組成物を投与して骨折を治療する方法を提供することにある。
【００１８】
〔発明を実施するための最良の様態〕
本発明は、下記化学式１で表されるベンズアミジン化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、骨折治療用薬学的組成物を提供する。
【００１９】
【化１】
2008505068.tif 000003
（式中、Ｒは水素またはヒドロキシ基である。）
【００２０】
化学式１のベンズアミジン化合物は、薬学的に許容される、当分野における通常の塩の形で使用することができ、薬学的に許容される遊離酸(free acid)によって形成された酸付加塩が好ましい。遊離酸としては、無機酸と有機酸を使用することができる。無機酸としては、塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸などを使用することができ、有機酸としては、クエン酸、酢酸、乳酸、錫酸、フマル酸、蟻酸、プロピオン酸、シュウ酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、マレイン酸、ベンゾ酸、グルコン酸、グリコール酸、コハク酸、４−モルホリンエタンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−ニトロベンゼンスルホン酸、ヒドロキシ−Ｏ−スルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、またはアスパラギン酸などを使用することができる。
【００２１】
本発明の化学式１のベンズアミジン化合物は、公知の方法によって製造することができる(Lee, Sung-Eun, Synthesis and Biological Activity of Natural Products and Designed New Hybrid Compounds for the Treatment of LTB4 Related Disease, Busan National University, a thesis for a Ph. D degree, 1999. 8)。
【００２２】
本発明において、用語「骨折」とは、骨の連続性が完全または不完全に消失した状態であって、解剖学的な部位（骨端、骨幹端、骨幹部、関節内、近位部、幹部、遠位部など）、骨折の程度（完全、不完全など）、骨折の方向（横状、斜状、螺旋状、縦状など）、開放創の有無（開放性、閉鎖性）、骨切片の数（単純、線状、分節、粉砕など）、骨折の安定性（安定性、不安定性）、骨切片の転位有無などを基準として分類される多様な骨の物理的損傷をいう。
【００２３】
本発明の化学式１のベンズアミジン化合物は、無処置対照群に比べて仮骨の体積を有意に減少させ、仮骨の骨密度及び骨強度は有意に増加させ、投与用量が多ければ多いほど、仮骨の体積はさらに多く減少させ、仮骨の骨密度及び骨強度はさらに多く増加させる（ｐ＜０．０１またはｐ＜０．０５）。
【００２４】
また、化学式１のベンズアミン化合物は、無処置対照群に比べて仮骨組織内の結合組織及び軟骨組織の含量を有意に減少させ、骨組織含量は有意に増加させ、投与用量が多ければ多いほど、仮骨組織内の結合組織及び軟骨組織の含量はさらに多く減少させ、骨組織の含量はさらに多く増加させる（ｐ＜０．０１またはｐ＜０．０５）。
【００２５】
また、骨折誘発初期の場合、化学式１のベンズアミジン化合物は、無処置対照群に比べて仮骨組織内の破骨細胞の数を有意に増加させ、投与用量が多ければ多いほど、仮骨組織内破骨細胞の数はさらに多く増加させる（ｐ＜０．０１）。
【００２６】
また、骨折後期の場合、化学式１のベンズアミジン化合物は、無処置対照群に比べて仮骨組織内の破骨細胞の数を有意に減少させる（ｐ＜０．０１）。これはね既に骨化がある程度進んだことを示す。
【００２７】
したがって、本発明の化学式１のベンズアミジン化合物は、骨折の際に形成された仮骨の消失及び仮骨の骨化を促進させ、骨折の初期には仮骨内細胞成分(cellular component)の増加を促進させ、骨折の後期には骨折の際に形成された仮骨の骨化を促進させることにより、骨折治癒促進剤として有用に使用できる。
【００２８】
本発明の組成物は、前記化学式１のベンズアミジン化合物またはその薬学的に許容される塩に追加して同一または類似の機能を示す有効成分を１種以上含有することができる。
【００２９】
本発明の組成物は、投与のために前記有効成分の他に、さらに薬学的に許容される担体を１種以上含むことができる。薬学的に許容される担体は、食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール及びこれらの配合物などを使用することができ、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など他の通常の添加剤を添加することができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び潤滑剤を付加的に添加して水溶液、懸濁液、乳濁液などの注射用剤形、丸薬、カプセル、顆粒または錠剤に製剤化することができる。ひいては、当分野の適正方法またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（最近版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ）に開示されている方法を用いて、各疾患に応じてまたは成分に応じて好ましく製剤化することができる。
【００３０】
本発明の組成物は、目的の方法に応じて経口投与または非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用）することができ、その投与量が患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率及び疾患の重症度などによって異なる。化学式１のベンズアミジン化合物は、１日投与量が約１０〜１，０００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは５０〜５００ｍｇ／ｋｇであり、１日１回〜数回に分けて投与することがさらに好ましい。
【００３１】
本発明の組成物は、骨折を含んだ骨の物理的損傷の予防及び治療のために、単独で、または手術、ホルモン治療、薬物治療及び生物学的反応調節剤を用いる方法と併用して使用することができる。
【００３２】
以下、本発明の理解を助けるために好適な実施例を提示する。ところが、下記実施例は本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、本発明の内容を限定するものではない。
【００３３】
実施例：肋骨骨折を誘発させたラットモデルにおける骨折治癒促進効果
化学式１のベンズアミジン化合物が肋骨骨折の治癒に及ぼす影響を調べるために、人為的に肋骨骨折を誘発させたラットで評価した。前記ベンズアミジン化合物は、ラットの肋骨骨折を誘発させた２日後から１、２、３及び４週間投与し、体重及び増体量の変化、形成された仮骨の体積、骨密度、骨強度、及び組織学的変化を観察した。
【００３４】
１．実験動物及び仕様管理
８０匹のＳ．Ｄ．ラット（１０週齢、ＢｉｏＧｅｎｏｍｉｃｓ、韓国）を１２日間実験室の環境に順化させた後、本実験に使用した。実験動物は、２匹または３匹ずつラット用プラスチック箱に収容し、温度（２０〜２５℃）と湿度（３０〜３５％）が調節された実験動物飼育質で飼育した。また、明暗周期は１２時間の間隔で調節し、飼料と水道水を自由に供給した。
【００３５】
２．試料の準備及び投与
Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン１０ｍｇ及び５０ｍｇを無菌蒸留水５ｍＬに完全に溶かして溶液状態の試料を実験動物に投与した。前記ベンズアミジン化合物を手術２日後から毎日１回１、２、３及び４週間それぞれ実験動物体重ｋｇ当たり１０ｍｇ及び５０ｍｇずつ経口投与した。
【００３６】
３．肋骨骨折の誘発
全実験動物は、塩酸ケタミン(ketamine)と塩酸キシラジン(xylazine)で麻酔した後、８番目及び９番目の肋骨を手術用ハサミを用いて横に切断して骨折を誘発させた。骨折の誘発後、骨折部位がお互い整合するように組み立てた後、一般的な皮膚縫合によって創腔を閉鎖させた。
【００３７】
４．体重及び増体量の変化
全実験動物の体重を手術１日前、手術日、投与日、投与７、１４、２１及び２８日後にそれぞれ測定した。飼料摂取による個体別差異を減らすために、体重測定の前に、全実験動物は１８時間以上絶食させた。また、実験動物の個体差異による体重変化を最小化するために、それぞれ手術日から投与後７、１４、２１及び２８日間の体重増加量である増体量を計算した。
【００３８】
その結果は表１に示した。
【００３９】
【表１】
2008505068.tif 000004
【００４０】
表１に示すように、全実験群から有意性のある増体量の変化が観察されないため、実験物質の投与または実験動物の個体差異による誤りは殆どないことが分かる。
【００４１】
５．仮骨の体積
全実験動物は、最終犠牲日に骨折を誘発させた８及び９番目の肋骨に形成された仮骨を周囲組織とよく分離して摘出し、摘出された肋骨に形成された仮骨の長径と短径をｍｍ単位で測定した。測定された仮骨の長径と短径から、下記数式１を用いて仮骨の体積を測定した。
【００４２】
数式１
仮骨の体積＝１／２（ａ×ｂ２）
ａ：仮骨の長径、ｂ：仮骨の短径
その結果は表２に示した。
【００４３】
【表２】
2008505068.tif 000005
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
【００４４】
表２に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨の体積は、無処置対照群に比べて有意に減少し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く減少した（ｐ＜０．０１）。
【００４５】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨の消失を促進させることが分かる。
【００４６】
６．組織検査及び分析
骨折を誘発させた後に摘出した８番目の肋骨を１０％中性ホルマリンに固定し、その後、脱灰液（２．２４％蟻酸と０．５Ｎ水酸化ナトリウムからなる溶液）を用いて脱灰を行った。この際、脱灰液は、毎日１回ずつ５日間交換した。脱灰を完了した後、パラフィン包埋を行い、３〜４μｍの組織切片を製作した後、ヘマトシリン−エオシン(Hematoxylin-eosin)またはマーソントリクローム(Masson's trichrome)染色を行い、光学顕微鏡を用いて観察した。その結果は図１に示した。
【００４７】
図１に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨部位内の骨組織は、無処置対照群に比べて全投与期間で増加し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く増加することを観察した。
【００４８】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨において骨形成を促進させることが分かる。
【００４９】
前記の方法で製作された肋骨組織標本を用いて、仮骨組織内に存在する結合組織、軟骨及び骨組織の量を自動映像分析装置(Analysis Image processing system)（ＳＩＳ Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて％単位で測定した。
【００５０】
その結果は表３〜表５に示した。
【００５１】
また、仮骨、特に骨折面において軟骨内骨化が始まる２００μｍ２内に存在する破骨細胞の数を、自動映像分析装置を用いて測定した。
【００５２】
その結果は、表６に示した。
【００５３】
【表３】
2008505068.tif 000006
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
＊＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０５）
【００５４】
表３に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨組織内の結合組織の含量は、無処置対照群に比べて有意に減少し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く減少した（ｐ＜０．０１またはｐ＜０．０５）。
【００５５】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨内で結合組織の骨組織への代替、すなわち骨化を促進させることが分かる。
【００５６】
【表４】
2008505068.tif 000007
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
【００５７】
表４に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨組織内の軟骨組織の含量は、無処置対照群に比べて有意に減少し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く減少した（ｐ＜０．０１）。
【００５８】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨内で軟骨組織の骨組織への代替、すなわち軟骨内骨化を促進させることが分かる。
【００５９】
【表５】
2008505068.tif 000008
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
＊＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０５）
【００６０】
表５に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨組織内の骨組織の含量は、無処置対照群に比べて有意に増加し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く増加した（ｐ＜０．０１またはｐ＜０．０５）。
【００６１】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨の骨化を促進させることが分かる。
【００６２】
【表６】
2008505068.tif 000009
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
【００６３】
表６に示すように、骨折誘発初期の場合、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨組織内の破骨細胞の数は、無処置対照群に比べて有意に増加し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く増加した（ｐ＜０．０１）。したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折初期仮骨内細胞成分の増加を促進させることが分かる。
【００６４】
また、骨折後期の場合、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨組織内破骨細胞の数は、無処置対照群に比べて有意に減少した（ｐ＜０．０１）。これは、既に骨化がある程度進んだことを示す。
【００６５】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は、骨折の際に形成された仮骨の骨化を非常に効果的に促進させることにより、骨折治癒促進剤として有用に使用することができる。
【００６６】
７．仮骨骨密度の測定
骨折を誘発させた後に摘出した９番目の肋骨で仮骨が形成された部位の骨密度を二重エネルギーＸ線吸光分析法(dual-energy x-ray absorptiometry)（ＤＥＸＡ、ＰＸＩｍｕｓ；Ｌｕｎａｒ Ｍｅｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いてｍｇ／ｃｍ２の単位で測定した。
【００６７】
その結果は表７に示した。
【００６８】
【表７】
2008505068.tif 000010
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
＊＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０５）
【００６９】
表７に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨骨密度は、無処置対照群に比べて有意に増加し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く増加した（ｐ＜０．０１またはｐ＜０．０５）。
【００７０】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨において骨密度の増加を促進させることが分かる。
【００７１】
８．仮骨骨強度の測定
骨折を誘発させた後に摘出した９番目の肋骨で仮骨が形成された骨折面部位の骨強度を、骨強度測定装置（Ｉｎｓｔｒｏｎ ６０２２；Ｉｎｓｔｒｏｎ、ＵＳＡ；ｓｐｅｅｄ ２０ｍｍ／ｍｉｎ）を用いて３点曲げ(three-point bending)法で測定した。
【００７２】
その結果は表８に示した。
【００７３】
【表８】
2008505068.tif 000011
＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０１）
＊＊：対照群と比較して有意性がある（ｐ＜０．０５）
【００７４】
表８に示すように、化学式１のベンズアミジン化合物投与群における仮骨骨強度は、無処置対照群に比べて有意に増加し、投与用量が多ければ多いほどさらに多く増加した（ｐ＜０．０１またはｐ＜０．０５）。
【００７５】
したがって、化学式１のベンズアミジン化合物は骨折の際に形成された仮骨において骨強度の増加を促進させることが分かる。
【００７６】
９．統計処理
全ての数値は、平均±標準偏差で表示し、対照群と比較してＳＰＳＳ（Ｒｅｌｅａｓｅ ６．１．３．、ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）を用いてＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ法で有意性を検証した。
【００７７】
また、同様に、Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジンのメタンスルホ酸塩及び塩酸塩、４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン並びにそのメタンスルホン酸塩及び塩酸塩も、前述と類似の骨折治癒効果を示した。
【００７８】
製剤例：
１．散剤の製造
化学式１のベンズアミジン化合物    ２ｇ
乳糖                              ０．５ｇ
マンニトール                      ０．５ｇ
前記の成分を混合し、気密嚢に充填して散剤を製造した。
【００７９】
２．錠剤の製造
化学式１のベンズアミジン化合物    １００ｍｇ
コーンスターチ                    ５０ｍｇ
未結晶セルロース                  ５０ｍｇ
乳糖                              １００ｍｇ
ポビドン                          １５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して錠剤を製造した。
【００８０】
３．カプセル剤の製造
化学式１のベンズアミジン化合物    １００ｍｇ
コーンスターチ                    ５０ｍｇ
未結晶セルロース                  ５０ｍｇ
乳糖                              １００ｍｇ
ポビドン                          １５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００８１】
４．軟質カプセルの製造
化学式１のベンズアミジン化合物    １００ｍｇ
大豆油                            ４００ｍｇ
レシチン                          ２０ｍｇ
ゼラチン                          ２００ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の軟質カプセル剤の製造方法によって製造した。
【００８２】
５．注射液剤の製造
化学式１のベンズアミジン化合物    １０μｇ／ｍＬ
薄い塩酸ＢＰ                      ｐＨ３．５になるまで
注射用塩化ナトリウムＢＰ          最大１ｍＬ
適当な容積の注射用塩化ナトリウムＢＰ中に化学式１のベンズアミジン化合物を溶解させ、生成された溶液のｐＨを薄い塩酸ＢＰを用いてｐＨ３．５に調節し、注射用塩化ナトリウムＢＰを用いて容積を調節し、十分に混合した。溶液を、透明ガラスからなる５ｍＬのＩ型アンプル内に充填させ、ガラスを溶解させることにより空気の上部格子の下に封入させ、１２０℃で１５分以上オートクレーブさせて殺菌して注射液剤を製造した。
【００８３】
〔産業上の利用可能性〕
本発明の組成物は、仮骨の体積を有意に減少させ、仮骨の骨密度及び骨強度を有意に増加させ、仮骨組織内の結合組織及び軟骨組織の含量を有意に減少させ、骨組織の含量を有意に増加させることにより、骨折の際に形成された仮骨の消失及び仮骨の骨化を促進させる。したがって、本発明の組成物は、骨折に対する治癒促進剤として有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１は、骨折を誘発させた後に摘出した８番目の肋骨の組織切片を、マッソン・トリクローム(Masson's trichrome)染色を施して光学顕微鏡で観察した図である。
【図１】
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【国際調査報告】
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