(57)【要約】  タンパク質源と、脂肪源と、炭水化物源とを含む第１成分と、プロバイオティク成分；酵母；酵素；抗体；免役グロブリン；サイトカイン；及びそれらの組み合わせから成る群から選択される生物学的製剤を含む第２成分と、を含むペットフード組成物は、ペットによる摂取の時点で生物学的製剤の有効量がペットフード組成物中に存在するように十分に安定なペットフード組成物を提供するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）タンパク質源と、脂肪源と、炭水化物源とを含む第１成分と、
（ｂ）第１成分とは物理的に異なる、０．２以下の水分活性を有する第２成分とを含むことを特徴とし、該第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分、酵母、酵素、抗体、免役グロブリン、サイトカイン、酸化防止剤、ミネラル、栄養補給食品、及びそれらの組み合わせから選択される生物学的製剤を含む、ペットフード組成物。
【請求項２】
前記第１成分が、添加繊維源をさらに含み、第２成分が、脂質成分、甘味剤成分、酸化防止剤成分、ミネラル成分、及びそれらの組み合わせから選択される成分を含む、請求項１に記載のペットフード組成物。
【請求項３】
前記第１成分が、少なくとも部分的に押し出されたものである、請求項１又は２に記載のペットフード組成物。
【請求項４】
前記生物学的製剤が、前記第２成分１グラム当たり少なくとも１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数、好ましくは前記第２成分１グラム当たり１０５〜１０１２ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項５】
前記プロバイオティク成分が、バチルス（Bacillus）、バクテロイデス（Bacteroides）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、腸球菌（Enterococcus）、ラクトバシラス（Lactobacillus）、及びロイコノストック（Leuconostoc）、並びにそれらの組み合わせから選択される属を含み、好ましくは前記プロバイオティク成分が、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項６】
前記第２成分が、プレバイオティクをさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項７】
前記第１成分と前記第２成分とが、少なくとも２：１の重量比で存在し、好ましくは前記第１成分と前記第２成分とが、少なくとも５：１の重量比で存在し、より好ましくは第１成分と第２成分とが、少なくとも１０：１の重量比で存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項８】
栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項９】
第１の収容デバイスと第２の収容デバイスとをさらに含んでなり、前記第１の収容デバイスが、前記第１成分の少なくとも一部分を含み、前記第２の収容デバイスが、前記第２成分の少なくとも一部分を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のペットフード組成物。
【請求項１０】
ペットにおける健康の増進のための薬剤を製造するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載のペットフード組成物の使用であって、前記健康の増進が、免疫系の疾病の処置、胃腸系の疾病の処置、皮膚又は毛の疾病の処置、ストレスの処置、胃腸の健康の増進、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される、使用。
【請求項１１】
前記健康の増進が、薬剤の経口投与を含んでなり、該経口投与が、１日１回〜１日４回、好ましくは少なくとも週１回、より好ましくは少なくとも月１回である、請求項１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２つの成分を含むペットフード組成物であって、第１成分は、タンパク質源と、脂肪源と、炭水化物源とを含み、第２成分は、プロバイオティク（probiotic）成分を含む、ペットフード組成物に関する。本発明は、好ましくは該哺乳動物は、ヒト及び／又はペットである、哺乳動物による摂取の時点で、プロバイオティク微生物がペットフード組成物中に存在するように、十分に安定なペットフード組成物を提供するのに特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティク微生物を含有するペットフード組成物は、当該技術分野において望ましい。そのような組成物を実現するために様々な商業的試みがなされてきたが、プロバイオティク微生物が、押出しなどの標準的な市販ペットフード製造手順の影響を受けやすいことに付随した問題があるのため、これらの試みの多くは、十分な有効濃度の生存プロバイオティク微生物を提供できていない。例えば、標準的なペットフードキブルをプロバイオティク微生物でコーティング又は充填する取り組みが提案されてきたが、実際には非実用的であると判明することが多い。標準的な市販ペットフードの製造に付随した問題を避けるために、他の製造業者らは、標準的なペットフード上に散布するプロバイオティク微生物粉末のジャーを提供することがある。しかし、これは、利便性及びコンプライアンスの問題を引き起こしている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、市場で成功を収め、さらにペットの飼い主の間で広く普及する、有効なペットフード組成物を実現させるために、この領域におけるさらなる発展が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、ペットによる摂取の時点で、生物学的製剤がペットフード組成物中に存在するように十分に安定であり得る、ペットフード組成物に関する。
ペットフード組成物は、
（ａ）タンパク質源と、脂肪源と、炭水化物源とを含む第１成分と、
（ｂ）約０．２以下の水分活性を有する第２成分とを含んでおり、該第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも約１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分、酵母、酵素、抗体、免役グロブリン、サイトカイン、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される生物学的製剤を含む。
【０００５】
本発明は、さらに、本明細書に記載される組成物の投与を含む、ペットに影響を与える疾病若しくは状態を緩和するための、予防的、治療的処置、又は非治療的処置の方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
例えば刊行物及び特許を含めた様々な文献が、本開示全体を通して列挙される。そのような文献は、すべて、関連部分において本明細書に参考として組み込まれる。所与のいかなる文献の引用も、それが本発明に関する先行技術であるとの承認として解釈されるべきではない。この文書における用語のいずれかの意味又は定義が、参考として組み込まれる文献における用語のいずれかの意味又は定義と対立する範囲については、本文書におけるその用語に与えられた意味又は定義を適用するものとする。
【０００７】
百分率及び比率は全て、特に指示がない限り、重量で計算される。百分率及び比率は全て、特に指示がない限り、組成物全体を基準にして計算される。
【０００８】
本発明で使用する様々な成分を包含する成分の商標名が本明細書で参照される。本発明者らは本明細書において、特定の商標名の物質により限定されることを意図していない。商標名により参照されているものと同等の物質（例えば、異なる名称又は参照番号で異なる供給源から得られるもの）は、本明細書の記載において置き換えられて使用されてもよい。
【０００９】
本発明の記載において、様々な実施形態又は個々の特徴が開示される。当業者には明らかであるが、これらの実施形態及び特徴のあらゆる組み合わせが可能であり、本発明の好ましい実施となり得る。
【００１０】
本明細書の組成物は、本明細書に記載されるようないかなる要素を含んでもよいし、いかなる要素から本質的に成ってもよいし、又はいかなる要素から成ってもよい。
【００１１】
本発明の様々な実施形態及び個々の特徴を説明し記載したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、他の様々な変更及び修正が可能である。これも明らかになるであろうが、先行する開示で教示された実施形態及び特徴のあらゆる組み合わせが可能であり、本発明の好ましい実施となり得る。
【００１２】
本明細書で使用するとき、用語「ペット」は、家畜を意味しており、それには、家畜のイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、フェレット、ウサギ、ブタなどが含まれるが、これらに限定されない。本明細書では家庭犬及び家庭猫が好ましい。
【００１３】
本明細書で使用するとき、用語「ペットフード組成物」とは、ペットによる摂取が意図される組成物を意味する。ペットフード組成物は、栄養的にバランスがとれていてもまたとれていなくてもよいサプリメント（例えば、トリート）の他に、毎日の食事に適した栄養的にバランスがとれた組成物を無制限に含んでよい。
【００１４】
本明細書で使用するとき、用語「生存プロバイオティク微生物」などは、生きている状態のプロバイオティク微生物を意味しており、本明細書の定義によれば、それには休眠状態にある該微生物及び胞子が含まれるが、これらに限定されない。
【００１５】
本発明の組成物
本発明は、哺乳動物による摂取の時点で生物学的製剤がペットフード組成物中に存在するように十分に安定であり、それによって該組成物の活性を維持できる、ペットフード組成物に関する。ペットフード組成物は、
（ａ）タンパク質源と、脂肪源と、炭水化物源とを含む第１成分と、
（ｂ）約０．２以下の水分活性を有する第２成分とを含んでおり、該第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも約１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分、酵母、酵素、抗体、免役グロブリン、サイトカイン、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される生物学的製剤を含む。
【００１６】
ペットフード組成物は、経口投与可能ないずれの形態であってもよい。ペットフード組成物は、当該技術分野では容易に理解され、例えば、ドライフード（例えば、少なくとも部分的に押し出されたキブル）、及び脆性の低いフード（例えば、セミモイストフード）、又はそれらの混合物がある。本発明の一実施形態では、ペットフード組成物は、ドライフード（第１成分）と、脆性の低いフード（第２成分、その中の脂質成分による）との混合物である。
【００１７】
組成物の第１成分と第２成分とは、物理的に相異なる成分である（例えば、第１成分と第２成分とは、米国特許第６，２５４，９１０号の２つの質感をもつ（dual texture）成分の「より軟らかい脂質系部分」及び「シェル又はより硬いマトリックス材料部分」のように互いに関連していない）。一実施形態では、押出プロセスによって必要とされる比較的厳しい条件を避けるなどのために、第２成分は押し出されない。ペットフード組成物は、第１成分と第２成分との様々な異なる体裁のいずれかとして提供されてよい。例えば、ペットフード組成物は、第１成分と第２成分との混合物として提供されてもよく、例えば、第１成分は、複数の（少なくとも部分的に押し出された）キブルとして提供されてよく、一方で、第２成分は、複数のペレットとして提供されてよく、その際、組成物は、キブルとペレットとの不均質な混合物として提供される。
【００１８】
他の例として、給餌の時点で、第１成分と第２成分とをいずれかの望ましい方式で組み合わせることのできる、別個に包装された成分として提供することができる。例えば、ペットフード組成物は、第１収容デバイスと第２収容デバイスとを含んでなることができ、その際、第１収容デバイスは、第１成分の少なくとも一部分を含み、第２収容デバイスは、第２成分の少なくとも一部分を含み、例えば、第１収容デバイスは、バッグであってよく、それに対して第２収容デバイスは、キャニスタであってよい。消費者の利便性のために、第１成分の少なくとも一部分を収容するバッグは、第２成分の少なくとも一部分を収容するキャニスタもまた収容してよい。他の様々な体裁のいずれも、当業者には十分に理解される。
【００１９】
ペットフード組成物、又はそれらの成分は、栄養的にバランスのとれたものであっても、栄養的にバランスのとれたものでなくてもよい。本明細書で使用するとき、ペットフード組成物又はそれらの成分に関する用語「栄養的にバランスのとれた」とは、水がさらに必要であることを除いて、該組成物又は成分が、ペットの栄養学分野の第一人者の推奨に基づいた適正な量及び割合で、生命を維持するために既知の必須栄養素を有することを意味する。
【００２０】
第１成分
本発明のペットフード組成物の第１成分は、タンパク質源と、脂肪源と、炭水化物源とを含む。第１成分の例としては、キブルなど、従来のペットフード組成物が挙げられる。第１成分自体は、栄養的にバランスのとれたものであっても、栄養的にバランスのとれたものでなくてもよい。一実施形態では、第１成分は、栄養的にバランスのとれたものである。
【００２１】
一実施形態では、第１成分は、乾物基準で、該第１成分の約２０重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、又は約２２重量％〜約４０重量％の粗タンパク質を含んでよい。粗タンパク質材料は、タンパク質含量が少なくとも約１５重量％のいずれかの材料を含んでいてよく、その非限定的な例としては、大豆、綿実及び落花生などの植物性タンパク質、カゼイン、アルブミン、及び肉組織などの動物性タンパク質が挙げられる。本明細書で有用な肉組織の非限定例としては、新鮮な肉、及び魚粉、家禽粉、肉粉、骨粉などの乾燥又は精製穀粉が挙げられる。他の種類の好適な粗タンパク質源としては、小麦グルテン若しくはトウモロコシグルテン、並びに酵母のような微生物源から抽出されたタンパク質が挙げられる。
【００２２】
第１成分は、脂肪源を含む。一実施形態では、第１成分は、乾物基準で、該第１成分の約５重量％〜約３５重量％の脂肪、好ましくは約１０重量％〜約３０重量％の脂肪を含んでよい。脂肪源は、以下で脂質成分に関して概説されるものを含め、広く知られている。
【００２３】
米、トウモロコシ、ミロ、サトウモロコシ、大麦、アルファルファ、小麦などのグレイン又は穀物が、例示的な炭水化物源である。これらの炭水化物源及びそれらの典型的な濃度は、伝統的なペットフード組成物において広く知られている。
【００２４】
本発明のペットフード組成物の第１成分の調製に適したプロセスは、少なくとも部分押出しであるが、焙焼（baking）及び他の好適なプロセスを使用してもよい。押し出される際、乾燥されたペットフードは、通常、キブルの形態で提供される。欧州特許第０，８５０，５６９号にプロセスが記載されている。
【００２５】
第２成分
本発明のペットフード組成物中に存在する第２成分は、約０．２以下の水分活性を有する。第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも約１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分、酵母、酵素、抗体、免役グロブリン、サイトカイン、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される生物学的製剤を含む。
【００２６】
本明細書では、そのような低い水分活性が本発明の成功のために重要であることが見出される。例えば、理論によって制限されないが、、低い水分活性は、存在し得るプロバイオティク微生物の一部又はすべての休眠の維持を可能にすることができる、或いは生物学的製剤の完全性を保たせる。より高い水分活性を有する、プロバイオティク微生物を含有する特定の市販ペットフードは、安定ではない場合があり、すなわち、そのような微生物のほとんどすべてが、委託販売の時点で生存可能ではないことがある。プロバイオティク微生物を含有する市販のペットフードの一例が、ブルー・バッファロー社（The Blue Buffalo Company）から市販されるＢＬＵＥ（成犬用のための「ライフ・ビッツ（life bits）」を含有するものとして広告されている）である。他の生物学的製剤は、ペットフードマトリックスではあまり知られていない場合がある。
【００２７】
第２成分は、約０．２以下、又は約０．１以下の水分活性を有する。例えば、第２成分は、約０．５〜約０．１５の水分活性を有することができる。本明細書で使用するとき、用語「水分活性」（ａｗ）は、一般に、化学反応に関与するために利用可能な遊離水の量を指す。水分活性は、当業者に既知の方法を使用して決定することができる。本明細書では、水分活性は、ノバシーナ（NovaSina）ＴＨ２００水分活性メーターを用いて２５℃で決定される。簡単にいえば、このメーターは較正塩を用いて較正される。測定すべきサンプルをメーター内で温度平衡状態とし、次いで平衡に達した後の（通常は１０〜２０分）相対湿度パーセント（ＲＨ％）を１００で割ったものとして水分活性を決定する。
【００２８】
第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも約１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分、酵母、酵素、抗体、免役グロブリン、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される生物学的製剤を含む。
【００２９】
第２成分は、プロバイオティク成分を含んでよい。プロバイオティク成分は、ペットが消費するのに適しており、ペットの胃腸管内の微生物バランスを改善するのに有効であり、又ペットに対する別の利益としては、疾病若しくは状態の緩和や予防など（本発明の利益については、以下の方法の項でさらに詳細に説明する）のための、１以上の細菌性プロバイオティク微生物を含む。当該技術分野において既知の様々なプロバイオティク微生物が、本発明での使用に適している。例えば、ＷＯ０３／０７５６７６（ソシエ・デ・プロデュイ・ネスレ（Societe Des Produits Nestle）、２００３年９月１８日公開）を参照のこと。
【００３０】
本発明の一実施形態では、プロバイオティク成分は、バチルス（Bacillus）、バクテロイデス（Bacteroides）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、腸球菌（Enterococcus）（例えば、エンテロコッカス・ヘシュウム（Enterococcus faecium）ＤＳＭ１０６６３）、ラクトバシラス（Lactobacillus）、及びロイコノストック（Leuconostoc）属の細菌、並びにそれらの組み合わせから成る群から選択される。本発明の他の実施形態においてプロバイオティクは、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属の細菌、ラクトバシラス（Lactobacillus）属の細菌、及びそれらの組み合わせから選択される。
【００３１】
バチルス（Bacillus）属のものは、胞子を形成してもよい。一実施形態では、プロバイオティク成分は、胞子を形成しない。
【００３２】
本明細書で使用するのに好適な乳酸菌の非限定例としては、ストレプトコッカス・ラクティス（Streptococcus lactis）、ストレプトコッカス・クレモリス（Streptococcus cremoris）、ストレプトコッカス・ジアセチラクチス（Streptococcus diacetylactis）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）、ラクトバシラス・ブルガリカス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）（例えば、ラクトバシラス・アシドフィルス菌株ＤＳＭ１３２４１）、ラクトバシラス へルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバシラス・ビフィズス（Lactobacillus bifidus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・ラクティス（Lactobacillus lactis）、ラクトバシラス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ラムノーサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシラス・デルブルキ（Lactobacillus delbruekii）、ラクトバシラス・サーモフィルス（Lactobacillus thermophilus）、ラクトバシラス・フェルメンティ（Lactobacillus fermentii）、ラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）、ラクトバシラス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）、ビフィドバクテリア・シュードロンガム（Bifidobacterium pseudolongum）、及びペディオコッカス・セレビシエ（Pediococcus cerevisiae）の菌株、又はそれらの混合物、好ましくはラクトバシラス・サリバリウス、ビフィドバクテリウム・インファンティス、又はそれらの混合物が挙げられる。
【００３３】
非限定例としては、ＰＣＴ国際公開特許ＷＯ００／４２１６８に開示されているような、切除され洗浄されたヒトの胃腸管から単離されたビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）の菌株が好ましい。例えば、１９９９年１月１３日に英国工業海洋細菌収集機関（ＮＣＩＭＢ：National Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd）において寄託され、受入番号ＮＣＩＭＢ４１００３が与えられたと記載されている、ＵＣＣ３５６２４と指定されたビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）菌株を使用してよい。切除され洗浄されたイヌ科動物又はネコ科動物の胃腸管から単離された菌株が、特に有用な場合がある。
【００３４】
別の非限定例としては、ＰＣＴ国際公開特許ＷＯ９８／３５０１４に記載されているような、切除され洗浄されたヒトの胃腸管から単離されたラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）の菌株が好ましい。１９９６年１１月２７日に英国工業海洋細菌収集機関（ＮＣＩＭＢ：National Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd）において寄託され、受入番号ＮＣＩＭＢ４０８３０及び４０８２９がそれぞれ与えられたと記載されている、ＵＣＣ１及びＵＣＣ１１８と指定されたラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）菌株がより好ましい。
【００３５】
第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも約１０５のコロニー形成単位（ＣＦＵ）、又は第２成分１グラム当たり少なくとも約１０６ＣＦＵ、又は第２成分１グラム当たり少なくとも約１０８ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有する。例えば、第２成分は、該第２成分１グラム当たり最大約１０１２ＣＦＵまで、又は第２成分１グラム当たり最大約１０１０ＣＦＵまで、又は第２成分１グラム当たり最大約１０９ＣＦＵまでの生存プロバイオティク微生物数を有してよい。ＣＦＵによって定義される計数は、以下で提供される方法を使用して決定される。有利には、本明細書で提供される組成物は、少なくとも約３ヶ月、或いは少なくとも約６ヶ月、或いは約３ヶ月〜約２４ヶ月、或いは約６ヶ月〜約１８ヶ月の貯蔵寿命を有する第２成分を含む。本明細書で使用するとき、用語「貯蔵寿命」は、第２成分のプロバイオティク微生物の約１％以上、或いは約５％以上、或いは約１０％以上、或いは約２５％以上、或いは約５０％以上、或いは約７５％以上が、周囲環境条件に曝された後の参照された期間において生存可能であるという、第２成分の特性を指す。
【００３６】
第２成分は、酵母を含んでよい。任意の様々な酵素が使用でき、また当該技術分野において周知であり、それらは酵母菌属（例えば、酵母（時として「ベーカーの酵母」と呼ばれる）及びキャンディダ・ユティリス（又、トルロプシス・ユティリスと呼ばれてもよい））のようなものである。本明細書で使用するとき、酵母としては、ミネラル強化酵母など、該酵母がその上で培養された環境培地から取り込まれる１以上の成分を取り込んだものが挙げられるが、これらに限定されない。様々な発酵プロセスが、当該技術分野において周知である。
【００３７】
第２成分は、１以上の酵素を含んでよい。例えば、加熱又は他の過酷な処理条件下では、酵素は、変性し、それによって生物活性を失うことがある。酵素としては、特に、消化酵素又は他の治療用酵素など、ペットにおいて有益な生物活性を有するものが挙げられる。非限定例としては、プロテアーゼ、コラゲナーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、リゾチーム、カンジダーゼ（candidases）、ラクターゼ、キナーゼ、インベルターゼ、ガラクトシダーゼ、ペクチナーゼ、リボヌクレアーゼ（デオキシリボヌクレアーゼを含める）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３８】
第２成分は、１以上の抗体を含んでよい。ウイルス、病原菌、又は寄生生物などに対する抗体が、本明細書で使用するのに好ましい。非限定例としては、ネコ鼻気管炎、ネコ汎白血球減少症、ネコカリシウイルス、ネコ肺炎、ネコ白血病、イヌジステンパー、イヌパルボウイルス、コロナウイルス、ボレリア・ブルグドルフェリ（ライム病）、トキソプラズマ・ゴンディ、大腸菌、カンピロバクター、サルモネラ、クロストリジウム（clostridia）、バクテロイド（bacteriodes）、ジアルジア、条虫、回虫、球虫（coccidian）、クリプトスポリジウム、及びそれらの組み合わせ、に対する抗体が挙げられる。
【００３９】
第２成分は、１以上の免役グロブリンを含んでよい。非限定例としては、免役グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免役グロブリンＭ（ＩｇＭ）、免役グロブリンＧ（ＩｇＧ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００４０】
第２成分は、１以上のサイトカインを含んでよい。非限定例としては、トランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、インターロイキン−４、インターロイキン−１０、インターロイキン−１２、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【００４１】
他の例として、第２成分は、該第２成分の少なくとも約０．００１重量％、或いは少なくとも約０．０１重量％、或いは少なくとも約０．１重量％、或いは少なくとも約０．５重量％、或いは少なくとも約１重量％の生物学的製剤を含んでよい。他の例として、第２成分は、該第２成分の約９９重量％以下、或いは約７５重量％以下、或いは約５０重量％以下、或いは約２５重量％以下、或いは約１０重量％以下、或いは約５重量％以下の生物学的製剤を含んでよい。
【００４２】
第２成分は、また、プレバイオティクも含んでよい。「プレバイオティク」には、ペットの腸内細菌相によって発酵される、したがって病原菌を犠牲にしてペットの胃腸管内で乳酸菌の増殖及び発達を促進する物質又は化合物が含まれる。この発酵の結果は、結腸での脂肪酸、特に短鎖脂肪酸の放出である。これは、結腸においてｐＨ値を低下させる効果を有する。好適なプレバイオティクの非限定例としては、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、又はデンプンのオリゴ誘導体として一般に知られている、イヌリン及びその加水分解生成物のようなオリゴ糖が挙げられる。プレバイオティクは、いずれか好適な形態で提供されてよい。例えば、プレバイオティクは、繊維を含有する植物材料の形態で提供されてよい。好適な植物材料としては、アスパラガス、アーティチョーク、玉ねぎ、小麦、若しくはチコリー、又はこれらの植物材料の残渣が挙げられる。別法として、プレバイオティク繊維は、イヌリン抽出物として提供されてもよく、例えば、チコリーからの抽出物が好適である。好適なイヌリン抽出物は、ベルギー、ティールモン（Tirlemont）３３００、オラフティ社（Orafti SA）から商標「ラフティリン（Raftiline）」として得ることができる。例えば、イヌリンは、約９０〜約９４重量％のイヌリンと、最高約４重量％までのグルコース及びフルクトースと、約４〜９重量％のスクロースとを含有する細かい白色粉末であるラフティリン（Raftiline）（ｇ）ＳＴの形態で提供されてよい。或いは、繊維は、ベルギー、ティルルモン（Tirlemont）３３００、オラフティ社（Orafti SA）から商標「ラフティローズ（Raftilose）」として得られるようなフラクトオリゴ糖の形態であってもよい。例えば、イヌリンは、ラフティローズ（Raftilose）（ｇ）Ｐ９５の形態で提供されてよい。ほかの方法では、フラクトオリゴ糖は、イヌリンを加水分解することによって、又は酵素法によって、あるいは微生物を用いることによって得られてもよい。
【００４３】
本明細書の一実施形態において第２成分は、コーティングされた成分、すなわち、コアと、少なくとも部分的に該コアを取り囲むコーティングとを含む成分である。そのような一実施形態においてコアは、プロバイオティク成分の少なくとも一部分を含んでおり、コーティングは、様々な典型的コーティング材料のいずれかを含む。例えば、コーティングは、脂質成分又は甘味剤成分（いずれも便宜のために以下で説明する）を含んでよい。例えば、コーティングには、標準的なキャンディー及び他の類似物質上のコーティングと同様である、スクロースを含む甘味剤成分が含まれる。
【００４４】
本発明のペットフード組成物は、第１成分と第２成分との両方を含む。本発明の一実施形態では、第１成分と第２成分とは、少なくとも約２：１、又は少なくとも約５：１、又は少なくとも約１０：１の重量比で存在してよい。本発明の他の実施形態において第１成分と第２成分とは、約２：１〜約５０：１、又は約５：１〜約２５：１、又は約１０：１〜約２０：１の重量比で存在してよい。他の実施形態において第１成分は、複数の分離塊（例えば、少なくとも部分的に押し出されたキブル）として提供され、第２成分は、複数の分離塊（例えば、半固体の塊）として提供される。この実施形態において、第１成分の分離塊の群と、第２成分の分離塊の群とは、少なくとも約２：１、又は少なくとも約５：１、又は少なくとも約１０：１の比で存在してよい。本発明の他の実施形態において、第１成分の分離塊の群と、第２成分の分離塊の群とは、約２：１〜約５０：１、又は約５：１〜約２５：１、又は約１０：１〜約２０：１の比で存在してもよい。
【００４５】
その他の任意成分
第１成分及び第２成分のための必須成分に加えて、第１成分は、第２成分について記載したうちのいずれかなど、任意の成分を含有してもよく、同様に、第２成分は、第１成分について記載したうちのいずれかなど、任意の成分を含有してもよい。それにもかかわらず、第１成分と第２成分とは、組成が相異なる。
【００４６】
ペットフード組成物は、ペットフード組成物に適した他の１以上の成分を含んでよい。そのような任意の成分は、第１成分中に存在してもよく、第２成分中に存在してもよく、又は本明細書で明確に記載していないさらに別個の成分中に存在してもよい。例示的な（非限定的な）任意の成分については、以下のように記載される：
一実施形態では、組成物は、プロバイオティク成分の安定性の向上に有用な場合のある脂質成分を含んでよい；第１成分は、脂肪源を必要とするが、脂質成分はまた、有利には第２成分中にも提供されてよい。脂質成分は、本明細書では例えば蝋、脂肪、脂肪酸、及び脂質を包含するものと定義される、脂肪源を含むいずれの成分であってもよい。蝋、脂肪、脂肪酸、又は脂質の具体例は、しばしば、当該技術分野において一般的な命名法によれば交換可能な場合があり、例えば、脂質は、また、しばしば脂肪として特徴付けられることもある。本明細書の発明者らは、命名法のいずれか特定の表記だけに制限されることを意図しておらず、蝋、脂肪、脂肪酸、脂質などとしての特定の材料の分類は、便宜上なされるものにすぎない。
【００４７】
例えば、脂質成分は、カカオバター成分である脂肪を含んでよく、該カカオバター成分は、本明細書で定義されるように、カカオバター、カカオバター増量剤（cocoa butter extender）、カカオバター代替物（cocoa butter replacer）、若しくはカカオバター代用物（cocoa butter substitute）のうちの１以上を含む。所与の脂肪は、カカオバター増量剤（cocoa butter extender）、カカオバター代替物（cocoa butter replacer）、若しくはカカオバター代用物（cocoa butter substitute）のうちの１つとして分類することができ、又は、時には、カカオバター増量剤、カカオバター代替物、及びカカオバター代用物のうちの２つ以上として分類することができる。使用される場合、カカオバター増量剤（cocoa butter extender）、カカオバター代替物（cocoa butter replacer）、及びカカオバター代用物（cocoa butter substitute）は、それぞれ、言及された部類内の特定の１つの脂肪、又はそのような脂肪のいずれかの混合物であってよい。
【００４８】
カカオバターは、当該技術分野において一般的に知られており、一般に、チョコレートを調製するために使用されるカカオ豆由来の脂肪を指すことがある。カカオ豆は、カカオの木（例えば、テオブロマ・カカオ（Theobroma cacao））のさやから得ることができる。
【００４９】
カカオバター成分は、追加的に、又は代替的に、カカオバター増量剤（cocoa butter extender）を含んでもよい。これらの増量剤（extenders）は、やはり当該技術分野において一般的に知られており、また一般に、カカオバターに類似した固体脂指数（ＳＦＩ：solid fat index）特性を有する他の脂肪を指すことがある。カカオバター増量剤（cocoa butter extender）は、Ｃ１６若しくはＣ１８脂肪酸を含有する脂肪、又はそれらの組み合わせを含んでよい。分別且つ／又は部分硬化された形態を含め、パーム油、シア油、イリッペバター、綿実油、及び大豆油が、カカオバター増量剤（cocoa butter extender）の非限定例である。
【００５０】
カカオバター成分は、追加的に、又は代替的に、カカオバター代替物（cocoa butter replacer）を含んでもよい。これらの代替物（replacers）は、やはり当該技術分野において一般的に知られており、また一般に、カカオバターに類似した溶融特性又は他の特性若しくは構造を有する、非ラウリン脂（例えば、Ｃ１６又はＣ１８）を主体とする脂肪を指すことがある。これらには、パーム油、綿実油、大豆油、及び菜種油などの植物油が挙げられ、それらの分別物及び／又は部分硬化形態がそれに含まれる。一例は、ＡＳＴＲＡＬ（登録商標）Ｒ（部分硬化植物油（大豆油及び綿実油）、テネシー州コルドバ（Cordova）のハムコ・オイル・プロダクツ（Humko Oil Products）から市販）である。
【００５１】
カカオバター成分は、追加的に、又は代替的に、カカオバター代用物（cocoa butter substitute）を含んでもよい。これらの代用物（substitutes）は、やはり当該技術分野において一般的に知られており、また一般にカカオバターに類似した溶融特性又は他の特性若しくは構造を有する、ただしラウリン脂（Ｃ１２）を主体とする、硬い脂肪を指すことがある。そのようなカカオバター代用物（cocoa butter substitute）は、カカオバターよりも高い融点を有する傾向にある場合があるので、これらの代用物が、組成物に熱抵抗性を付与するのに興味深いものとなっている。これらには、パーム核油及びココヤシ油などの植物油が挙げられ、それらの分別物及び／又は部分硬化形態がそれに含まれる。
【００５２】
一実施形態では、カカオバター成分は、大豆油、綿実油、ココヤシ油、菜種油、パーム核油、以上の分別物、及び以上の部分硬化形態から成る群から選択される少なくとも１つの脂質を含む。
【００５３】
代替的に、又は追加的に、脂質成分は、動物由来脂肪成分を含んでもよい。当該技術分野では一般的に知られているように、動物由来脂肪成分は、動物から得られる脂肪を含む。非限定例としては、牛肉、家禽肉、豚肉、及び子羊肉（例えば、ラード及びタロー）が挙げられる。また、乳脂肪、分別乳脂肪、及びバター脂肪を含めた乳製品の脂肪も、例となる場合がある。
【００５４】
一実施形態では、脂質成分は、約５：９５〜約９５：５、又は約５：９５〜約２５：７５、又は約５：９５〜約５０：５０の重量比でカカオバター成分と動物由来脂肪成分との組み合わせを含んでよい。本明細書の他の実施形態では、脂質成分は、カカオバター成分と動物由来脂肪成分とを約２０：８０〜約４５：５５、又は約２５：７５〜約４０：６０の重量比で含む。
【００５５】
代替的に、又は追加的に、脂質成分は、脂肪酸を含んでもよい。例示的な供給源としては、ω−３又はω−６脂肪酸が挙げられる。
【００５６】
ω−３脂肪酸は、好ましくは、メンハーデン（ニシンのような魚）を含めた海の（魚の）供給源から得られ、したがってそのような供給源由来であってよい。ω−３脂肪酸源の非限定例としては、テキサス州ヒューストン（Houston）のオメガ・プロテイン社（Omega Protein, Inc.）から市販されているＯＭＥＧＡＰＵＲＥなど、ドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）又はエイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）が挙げられる。脂肪酸のすべての形態もまた本明細書において考慮される。例えば、ＤＨＡは多くの場合トリグリセリドとして提供される。そのため、特定の脂肪酸（例えば、「ＤＨＡ」）が言及される場合には、こうした脂肪酸は、脂肪酸の自由な形態並びにその他の形態、例えば天然起源のトリグリセリド又は他の形態を包含する。用語、ＤＨＡ、ＥＰＡ、又はその他の特定の用語は便宜上使用されるが、このように称される物質のすべての形態を包含することが当該技術分野において一般的に理解される。
【００５７】
ω−６脂肪酸を本明細書で使用してもよい。当該技術分野においてよく理解されるように、ω−６脂肪酸は、鎖のω（末端）炭素原子から数えた時に、脂肪酸の鎖の第６炭素原子と第７炭素原子との間に位置付けられる二重結合を有するような脂肪酸物質である。
【００５８】
好適な脂肪酸の他の例としては、オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、及びラウリン酸を挙げることができ、それらの好適な塩がそれに含まれる。好適な脂肪酸のさらに他の例としては、パルミチン酸セチル、酢酸、乳酸、若しくはクエン酸モノ−及びジ−グリセリド脂肪酸、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、並びにモノ−、ジ−、及びトリグリセリド（それらのいくつかは、また、脂肪としても特徴付けられる場合がある）など、エステル又はそれらの他の誘導体が挙げられる。
【００５９】
脂質成分は、ω−３脂肪酸とω−６脂肪酸との混合物を、多くの場合これらの成分を含有する様々な材料の使用を通じて、含んでよい。本明細書に用いるのに好ましい組成物は、１以上の特定のω−３脂肪酸又はω−６脂肪酸が強化されていてもよい。
【００６０】
代替的に、又は追加的に、組成物は、蝋を含んでもよい。例えば、例示的な蝋としては、パラフィン蝋、蜜蝋（例えば、白色若しくは黄色）、カルナバ蝋、キャンデリラ蝋、マイクロクリスタリンワックス、コメヌカ蝋、セチルエステル蝋、及び乳化蝋が挙げられる。
【００６１】
代替的に、又は追加的に、組成物は、セラック若しくはキチンなどの多糖類を含んでもよい。
【００６２】
他の様々な脂質源のいずれかを、追加的に、又は代替的に、本明細書の脂質成分の一部若しくはすべてとして使用してもよい。
【００６３】
ペットフード組成物は、プロバイオティク成分の安定性のために有用な場合のある、甘味剤成分を含んでよい。甘味剤成分は、本明細書で定義されるように、単糖類、二糖類、複合糖質、又はそれらのいずれかの混合物である。
【００６４】
一実施形態では、本明細書のペットフード組成物は、単糖類を含む。一実施形態では、第２成分は、単糖類を含む。本明細書で使用される単糖類は、一般式ＣｎＨ２ｎＯｎで、式中ｎが３以上の整数であるものである。使用できる単糖類の非限定例としては、ソルビトール、マンニトール、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リブロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、ソルボース、及びそれらのいずれかの混合物が挙げられる。一実施形態では、単糖類としては、ソルビトール、マンニトール、グルコース、マンノース、フルクトース、及びそれらのいずれかの混合物を挙げることができる。他の実施形態では、単糖類は、ソルビトールである。
【００６５】
一実施形態では、本明細書のペットフード組成物は、二糖類を含む。一実施形態では、第２成分は、二糖類を含む。本明細書で使用される二糖類は、一般式ＣｎＨ２ｎ−２Ｏｎ−１のものであり、その際、該二糖類は、グリコシド結合によって連結された２つの単糖類単位を有する。そのような式において、ｎは、３以上の整数である。本明細書で使用できる二糖類の非限定例としては、スクロース、マルトース、ラクチトール、マルチトール、マルツロース、ラクトース、及びそれらのいずれかの混合物が挙げられる。他の実施形態では、単糖類は、スクロースである。
【００６６】
一実施形態では、本明細書のペットフード組成物は、複合糖質を含む。一実施形態では、第２成分は、複合糖質を含む。本明細書で使用される複合糖質は、（例えば）オリゴ糖及び／又は多糖類などの、オリゴ糖、多糖類、及び／又は炭水化物誘導体である。本明細書で使用するとき、用語「オリゴ糖」は、３〜９個の単糖類単位を有する消化可能な線状分子を意味しており、その際該単位は、グリコシド結合によって共有結合的に連結されている。多糖類は、直鎖又は分枝状であってよい。好ましくは、多糖類は、９〜約２０個の単糖類の単位を有する。また、多価アルコール（例えば、グリセロール）などの炭水化物誘導体を、本明細書で複合糖質として使用してよい。
【００６７】
複合糖質の非限定例としては、ラフィノース、スタキオース、マルトトリオース、マルトテトラオース、グリコーゲン、アミロース、アミロペクチン、ポリデキストロース、及びマルトデキストリンが挙げられる。
【００６８】
一実施形態では、複合糖質は、マルトデキストリンである。マルトデキストリンは、数個のグルコース単位の長さである複合糖質分子の形態である。理論に限定されるものではないが、マルトデキストリンが消化管内で加水分解されてグルコースになるので、それらマルトデキストリンを拡張グルコース源として使用することができる。マルトデキストリンは、トウモロコシデンプンの制御加水分解によって製造される、スプレー乾燥された炭水化物成分であってよい。
【００６９】
甘味剤成分が使用される、プロバイオティク成分の安定性に特に有利な場合のある一実施形態では、甘味剤成分は、約８０℃〜約１４０℃、又は約９０℃〜約１２０℃の融点を有する単糖類、二糖類、又は複合糖質を含む。非限定例としては、ソルビトール又はキシリトールなどの単糖類が挙げられる。
【００７０】
甘味剤成分が使用される場合、例として、本明細書のペットフード組成物は、該組成物の少なくとも約０．００１重量％、又は少なくとも約０．１重量％、又は少なくとも約１重量％、又は少なくとも約５重量％、又は少なくとも約１０重量％、又は少なくとも約２０重量％の甘味剤成分を含んでよい。他の例として、本明細書のペットフード組成物は、該組成物の約９９重量％以下、又は約９０重量％以下、又は約９５重量％以下、又は約７５重量％以下、又は約５０重量％以下の甘味剤成分を含んでよい。
【００７１】
ペットフード組成物は、乾燥乳清若しくは他の乳製品副産物などの成分を含んでよい。
【００７２】
ペットフード組成物は、繊維を含んでよい。特定の実施形態では、組成物は、添加繊維源（すなわち、例えばタンパク質源、脂肪源、又は炭水化物源中にもともと存在する繊維に対して追加的な繊維）を含んでよい。
【００７３】
添加繊維源は、発酵性繊維を含んでよい。発酵性繊維は、当該技術分野において周知である。発酵性繊維は、動物中に存在する腸内細菌がそれを発酵させて短鎖脂肪酸又はその他の代謝成分を生成できるいかなる繊維供給源であってもよい。こうした発酵性繊維の非限定例には、ビートパルプ（甜菜から）、アラビアゴム、タルハガム（gum talha）、オオバコ、コメヌカ、イナゴマメガム、シトラスパルプ、ペクチン、フラクトオリゴ糖、マンナンオリゴフルクトース（mannanoligofructose）、大豆繊維、アラビノガラクタン、ガラクトオリゴ糖、アラビノキシラン、及びこれらの混合物が挙げられる。
【００７４】
一般に、発酵性繊維は哺乳動物により消化されないが、ビフィドバクテリウム属のような腸内細菌種によって代謝されることができる。しかしながら、すべての腸内細菌が発酵性繊維を代謝できるわけではない。特に、サルモネラ属、大腸菌、及びクロストリジウム属のような細菌は、こうした繊維をいずれかの意味のある程度にまで処理することができない。この優先的な消化性は、発酵性繊維に一部類として当てはまり、ペットの小腸内の全体的な細菌相を改善するために使用することができる。発酵性繊維は、ラクトバシラス及びビフィドバクテリウム属のような「良い」細菌にのみ食物を与えるので、サルモネラ属、大腸菌、及びクロストリジウム属のような有害な細菌の量は、食物供給源の減少のために低下する場合がある。そのため、有益な細菌種のための好ましい食物供給源を提供することにより、発酵性繊維が補われた餌は「悪い」細菌の量を減らす一方で「良い」腸内細菌を増加させることが可能である。
【００７５】
ビートパルプ及びフラクトオリゴ糖、特に短鎖オリゴフラクトースは、本明細書に使用するのに特に好ましい発酵性繊維である。例として、フラクトオリゴ糖（fructooliogosaccharides）は、バナナ、大麦、ニンニク、ハチミツ、タマネギ、ライ麦、ブラウンシュガー、トマト、アスパラガス、アーティチョーク、小麦、ヤーコン、又はチコリーを含む、様々な果物又は野菜に見出せる天然起源の化合物である。フラクトオリゴ糖は、例えば長鎖オリゴフラクトース（例えば、イヌリン）として、又は短鎖オリゴフラクトースとして、チコリーの根で提供されることができる。本明細書で特に有用なのは、１−ケストース（ＧＦ２と略される）、ニストース（ＧＦ３）、及び１Ｆ−β−フラクトフラノシルニストース（ＧＦ４）の内の少なくとも１つを含むフラクトオリゴ糖である。フラクトオリゴ糖は、本明細書で記載されるもののような植物から抽出できるが、それらはまた、フルクトース単位（類）とスクロースのフルクトース単位とのＢ−（２−１）−グリコシド結合によって、１、２、又は３個のフルクトース単位をスクロース分子に加えることにより人工的に形成することができる。例として、フラクトオリゴ糖は、ゴールデン・テクノロジーズ・カンパニー社（Golden Technologies Company, Incorporated）から商標ニュートラフローラ（NUTRAFLORA）（これは、１−ケストース、ニストース、及び１Ｆ−β−フラクトフラノシルニストースを含む短鎖オリゴフラクトースである）として市販されている。別の例として、短鎖フラクトオリゴ糖及びイヌリンの混合物は、プレバイオ１（PREBIO1）又は市販のラフティロース（RAFTILOSE）及びラフティライン（RAFTILINE）の混合物であり得る。
【００７６】
フラクトオリゴ糖は、短鎖オリゴフラクトースであってもよく、これは当業者に周知である。本明細書で特に有用なのは、１−ケストース（ＧＦ２と略される）、ニストース（ＧＦ３）、及び１Ｆ−β−フラクトフラノシルニストース（ＧＦ４）を含む短鎖オリゴフラクトースである。好ましい実施形態では、短鎖オリゴフラクトースは、短鎖オリゴフラクトースの約２５重量％〜約４５重量％の１−ケストース、約２５重量％〜約４５重量％のニストース、及び約１重量％〜約２０重量％の１Ｆ−β−フラクトフラノシルニストース、あるいは短鎖オリゴフラクトースの約３０重量％〜約４０重量％の１−ケストース、約５０重量％〜約６０重量％のニストース、及び約５重量％〜約１５重量％の１Ｆ−β−フラクトフラノシルニストースを含む。例として、短鎖オリゴフラクトースは、ゴールデン・テクノロジーズ・カンパニー社（Golden Technologies Company, Incorporated）から商標ニュートラフローラ（NUTRAFLORA）（これは、すべて短鎖オリゴフラクトースの重量で約３５重量％の１−ケストース、５５重量％のニストース、及び１０重量％の１Ｆ−β−フラクトフラノシルニストースを含む短鎖オリゴフラクトースである）として市販されている。
【００７７】
本明細書の実施形態では、発酵性繊維は、特定の有機物消失百分率を示してもよい。この任意の実施形態では、発酵性繊維は、大腸菌によりインビトロで２４時間にわたって発酵される時、約１５％〜約６０％の有機物消失（ＯＭＤ）を有してもよい。即ち、初めに存在した総有機物の約１５％〜約５０％は、大腸菌により発酵され及び変換される。繊維の有機物消失は、あるいは約２０％〜約５０％、あるいは約３０％〜約４０％である。
【００７８】
したがって、インビトロＯＭＤ百分率は次のように計算されてもよい：
（１−（（ＯＭ残留物−ＯＭブランク）／初めのＯＭ））×１００
ここで、ＯＭ残留物は２４時間の発酵の後に回収された有機物であり、ＯＭブランクは対応するブランク管（即ち、培地及び希釈された糞便を含有するが、基質は含有しない管）中で回収された有機物であり、及び初めのＯＭは発酵前に管の中に設置された有機物である。手順のさらなる詳細は、サンボルド（Sunvold）ら、動物科学雑誌（J. Anim. Sci.）、第７３巻、１０９９〜１１０９ページ（１９９５）に見出される。
【００７９】
本明細書の一実施形態では、組成物は、該組成物の少なくとも約０．２５重量％の総発酵性繊維を含んでよい。「総発酵性繊維」とは、言及された濃度が、組成物中に存在する各発酵性繊維の相対量を加えることにより決定されることを意味する。例えば、組成物が、組成物の１重量％のフラクトオリゴ糖及び０．５重量％のビートパルプを含み、その他の発酵性繊維を含まない場合、組成物は、組成物の１．５重量％の総発酵性繊維を含む。或いは本組成物は、ペットフード組成物の少なくとも約０．５重量％の総発酵性繊維、少なくとも約１重量％の総発酵性繊維、少なくとも約２重量％の総発酵性繊維、或いは約１重量％〜約２０重量％の総発酵性繊維、或いは約１重量％〜約１０重量％の総発酵性繊維、或いは約２重量％〜約１０重量％の総発酵性繊維、或いは約３重量％〜約８重量％の総発酵性繊維を含んでもよい。
【００８０】
本明細書の一実施形態では、組成物は、栄養補給食品を含んでよい。本明細書で使用するとき、栄養補給食品は、健康上の利益をもたらす食料品（強化食品又は栄養補助食品（dietary supplement）として）を意味する。
【００８１】
本明細書の組成物は、ペットフードの製造に通常付随するプロセス条件に敏感な様々な成分のいずれかを含んでよい。例えば、そのような敏感な成分の完全性を（完全に又は部分的に）保つことができる。敏感な成分の非限定例としては、標準的な市販のペットフード中に含まれるときに標準的な押出プロセスの間に約１０％を超える損失（重量で）、或いは約２０％を超える損失、或いは約５０％を超える損失を示す成分が挙げられる。押出プロセスは、当該技術分野において周知である。敏感な成分に含まれるもの、又は敏感な成分の代替例は、ビタミン、例えば、ビタミンＡ（β−カロチン及びリコピンなど、その諸形態を含める）、ビタミンＣ（その諸形態を含める）、ビタミンＥ（その諸形態を含める）、ビタミンＤ（その諸形態を含める）、フェノール、カロチノイド、アルカロイド、キサントン、ポリフェノール、β−カロチン、有機イオウ、クルクミン、ケムフェロール、アスタキサンチン、γ−グルタミルシステイン、カテキン、プテロスチルベン、カンタキサンチン、システインスルホキシド、エラグ酸、ケルセチン、ツナキサンチン、イソチオシアネート、バイカリン、トコフェロール、ミリセチン、ゼアキサンチン、フラボノイド、レスベラトロル、アントシアニン、ビキシン、イソフラボノイド、ビンポセチン、フラボノール、ルテイン、Ｃｏ−Ｑ１０、プロアントシアニジン、リコピン、リポ酸などの酸化防止剤が挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００８２】
本発明の組成物中に存在可能なさらなる材料としては、炭酸カルシウム、カルシウム、ホウ素、セレン、塩化カルシウム、塩化物、フマル酸第一鉄、酢酸亜鉛、塩化コリン、クロム、グルコン酸第一鉄、硫酸亜鉛、クロム、トリピコリネート（Tripicolinate）、コバルト、酸化マグネシウム、グルコン酸亜鉛、リン酸二カルシウム、銅、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、ヨウ素、炭酸マグネシウム、リン酸一ナトリウム、鉄、ピコリン酸クロム、塩化カリウム、マグネシウム、クエン酸カルシウム、クエン酸カリウム、マンガン、乳酸カルシウム、ソルビン酸カリウム、リン、グルコン酸カルシウム、重硫酸ナトリウム、カリウム、塩化クロム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、ナトリウム、ニコチン酸クロム、リン酸三カルシウム、亜鉛、クエン酸クロムなどのミネラル、これらのミネラルのいずれかを含有する酵母などが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００８３】
本発明の使用方法
本組成物の使用が、経口消費後において動物、好ましくはペットに利益をもたらし得る。この利益は、一般に、動物の全体的な健康を維持し、改善する。症状を治療的に緩和する際、又は予防による疾病の防止、又は全体的な健康改善に利益となる、動物の健康及び生理機能の非限定的な要素としては、免疫系の処置、胃腸系の処置、皮膚又は毛の処置、ストレスの処置、及びそれらの組み合わせが挙げられる。非限定例としては、炎症性疾患、免疫不全症、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、癌（特に胃腸及び免疫系の癌）、外耳炎、下痢性疾患、抗生物質起因性の下痢、虫垂炎、自己免疫疾患、多発性硬化症、アルツハイマー病、アミロイド症、リウマチ様関節炎、関節炎、関節可動性（joint mobility）、股関節異形成、真性糖尿病、インスリン耐性、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、歯周病、泌尿生殖器疾患、突発性膀胱炎、間質性膀胱炎、外科手術による外傷、外科手術によって誘発される転移性疾患、敗血症、体重減少、体重増加、過度の脂肪組織蓄積、拒食症、発熱の抑制（fever control）、悪液質、創傷治癒、潰瘍、腸バリア感染症、アレルギー、喘息、呼吸器疾患、循環器疾患、冠状動脈性心疾患、貧血、血液凝固系の疾患、腎疾患、中枢神経系の疾患、肝疾患、虚血、栄養障害、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸に関与する疾患の処置又は予防、骨粗鬆症、内分泌疾患、及び表皮疾患が挙げられる。好ましいのは、下痢の処置又は予防を含めた胃腸管の処置；免疫系の調節、好ましくは自己免疫疾患及び炎症の処置又は予防；皮膚及び／又は毛系の健康の維持又は改善、好ましくはアトピー性皮膚疾患の処置又は予防、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸に関与する疾患の処置又は予防、精神的認識及び活動レベルを含めた加齢効果の改善又は軽減；並びに感染時及び感染後の体重減少の予防である。
【００８４】
免役調節
以上で開示した疾患の処置は、当業者に既知の技術を使用して判断することができる。例えば、自己免疫疾患及び炎症を含めた炎症性疾患は、リンパ球幼若化現象、ナチュラルキラー細胞活性、ワクチンに対する抗体反応、遅延型過敏症、及びこれらの組み合わせなど、インビボ免疫機能試験を使用して検出且つ監視することができる。このような方法について本明細書で簡単に説明するが、これらの方法はまた、当業者に周知である。
【００８５】
１．リンパ球幼若化現象：このアッセイは、様々なマイトジェンに対する、試験動物及び対照動物の新鮮な全血から単離されたリンパ球のインビトロ増殖反応を評価し、総合的なＴ細胞及びＢ細胞の機能の指標となる。簡潔に言えば、当業者に既知のフィコール・ハイパーク密度遠心分離法（Ficoll-Hypaque density centrifugation methods）によって、全血から末梢血単核球（ＰＢＭＣ：peripheral blood mononucleocytes）を単離する。単離したＰＢＭＣを、ＨＥＰＥＳ、Ｌ−グルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０細胞培地で２回洗浄する。洗浄した細胞を、ＲＰＭＩ１６４０中に再懸濁させ、カウントし、細胞密度を適切に調節する。２×１０５個の細胞を、１０％ウシ胎児血清（シグマ（Sigma））を用い、３７℃・５％ＣＯ２で７２時間にわたりトリプリケート（triplicate）で様々なマイトジェンの一連の濃度（０．１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬ）に曝す：その例を幾つか挙げれば、ポークウィードマイトジェン（ギブコ（Gibco））、フィトヘマグルチニン（ギブコ（Gibco））、及びコンカナバリンＡ（シグマ（Sigma））がある。５４時間経過後に、細胞を１μＣｉ３Ｈ−チミジンでパルスし、細胞を集め、７２時間後にトップカウントＮＸＴ（TopCount NXT）でシンチレーションカウントを読み取る。
【００８６】
２．ナチュラルキラー細胞活性：米国特許第６，３１０，０９０号に記載されているように、このアッセイは、試験動物及び対照動物の新鮮な全血から単離されたナチュラルキラー細胞のインビトロ・エフェクター活性を評価する。ナチュラルキラー細胞は、哺乳動物の先天性免疫機能の成分である。ＮＫ細胞の細胞毒性活性を評価する際の標的細胞として、イヌ科動物の甲状腺癌細胞を使用する。この細胞株は、既に、イヌ科動物のＮＫ細胞によって死滅しやすいことが示されている。標的細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンが添加された２０ｍＬ最小必須培地（ＭＥＭ；ミズーリ州セントルイスのシグマ・ケミカル社（Sigma Chem. Co.））の入ったＴ７５フラスコ内で培養する。コンフルエントになったら、標的細胞をトリプシン処理して３回洗浄し、完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０＋１０％ＦＣＳ＋１００Ｕ／ｍＬペニシリン＋１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）中に細胞数５×１０５個／ｍＬまで再懸濁させる。トリプリケート（triplicate）で、標的細胞の１００μＬアリコートをピペットで９６−ウェルＵ底プレート（マサチューセッツ州ケンブリッジ（Cambridge）のコスター（Costar））内に移し、８時間インキュベートして細胞接着させる。次いで、フィコール・ハイパーク（Ficoll-Hypaque）分離によって（前述のように）単離されたリンパ球（エフェクター細胞；１００μＬ）を、エフェクター／標的細胞（Ｅ：Ｔ）比１０：１を提供するように標的細胞に追加する。３７℃で１０時間のインキュベーション後、５μｇの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を含有する基材２０μＬを加える。混合物を３７℃で４時間インキュベートし、その後、代謝されていないＭＴＴを吸入によって除去する。２００μＬの９５％エタノールを加えることによってホルマザン結晶を溶解させる。マイクロプレートリーダーを使用して５７０ｎｍで光学密度を測定する。ＮＫ細胞特異的溶解の百分率を次のように計算する：
【数１】
2008535521.tif 000002
特異的細胞毒性（％）＝１００×｛１−［（標的細胞及びエフェクター細胞のＯＤ
−エフェクター細胞のＯＤ）／（標的細胞のＯＤ）］｝
【００８７】
３．ワクチンに対する抗体反応：少なくとも１２週間プロバイオティク餌又は対照餌を与えた後、被験体にワクチンのアレイ（最大５まで）を与える。ワクチンは、新規ワクチンと余剰ワクチンの混合物であってよい。使用してよいワクチンアレイの非限定例としては、フォートダッジアニマルヘルス（Fort Dodge Animal Health）によって調製されたワクチンの混合物が挙げられる。本明細書に用いるのに好適なワクチンの非限定例としては、イヌジステンパー、アデノウイルス、コロナウイルス、パラインフルエンザ、及びパルボウイルスが挙げられる。被験体のワクチン歴が、使用すべきワクチンを決定することになる。所与のワクチンに対する特異的抗体を、血液中で３週間にわたって測定し、対照餌群及びプロバイオティク餌群における反応の長さ及び強度を比較する。
【００８８】
４．遅延型過敏症：これは、免疫系の状態を評価するインビボの非侵襲方法である。この試験は、多クローン性マイトジェンであるフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ：Phytohemmaglutinin）と、ヒツジ赤血球、多価ワクチン、ヒスタミン（１００μＬの０．０２７５ｇ／Ｌリン酸ヒスタミン；グリア（Greer）、ノースカロライナ州ルノワール（Lenoir））、又はＰＢＳ（１００μＬの８．５ｇ／Ｌリン酸緩衝生理食塩水；シグマ（Sigma））とを組み合わせた、皮内注射を含む。注射後０、２４、４８、及び７２時間の時間間隔でキャリパーを使用した皮下脂肪の厚さとして、抗原に対する免疫反応を記録する。皮下脂肪の厚さの増加は、本発明の細菌による処置によって減少するはずの過敏性反応が大きいことを示す。
【００８９】
本発明の組成物の効果を決定するさらなる方法は、米国特許第６，１３３，３２３号及び同第６，３１０，０９０号に記載されている。
【００９０】
身体組成
加齢効果の改善は、体脂肪量、除脂肪量、及び骨塩量を含め、身体組成を測定する二重Ｘ線吸収（absorptometry）測定法又はコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを使用して判定することができる。同様に、この方法を使用して、感染後の被験体における体重減少又は骨密度のような解剖学的変化を判定することができる。
【００９１】
ストレスの軽減
本発明はまた、ペットの気分改善又はうつ状態の軽減を含む、ストレスレベルの低減など、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸の過活動に付随した疾患を軽減する方法において使用することができる。エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、コルチゾール、及びＣ反応性タンパク質を含めた血中ストレスホルモンの濃度を測定して、ストレスレベル及びそれらの軽減又は維持を判定することができる。これらのホルモンは、認識されているストレスのバイオマーカーであり、当業者に既知の技術を使用して容易に測定することができる。さらに、副腎肥大がＨＰＡ軸の活性増大の結果であるので、ＣＴ画像化による副腎サイズの直接測定も使用することができる。ＨＰＡ軸活性の生化学的及び生理学的測定は、哺乳動物の気分又はストレスレベルを確認するための行動評価に付随して行うこともできる。
【００９２】
皮膚及び毛（coat）の健康
さらに、皮膚のアトピー性疾患を含めたペットの皮膚又は毛系の健康の維持又は改善、皮膚のバリア機能の改善、又は皮膚の微生物生態系の最適化は、訓練を受けた２人の人間によって実施される皮膚及び毛評価を用いて判断することができる。このような評価の際に調査される基準の例としては、次が挙げられる：
ａ）脱毛指数：脱毛指数は、標準化されたブラッシングセッションの間に生じた毛を回収することによって各被験体に割り当てられる。毛を保管して計量し、対照と被験体とを比較する。
ｂ）主観的皮膚／毛測定：訓練された官能試験員が、脱毛、光沢、フケ、均一性、柔軟性及び密度を測定することによって皮膚及び毛状態を主観的に測定する。
ｃ）皮膚機能測定：皮膚のバリア機能を、アセトン浸漬したガーゼで皮膚表面を拭くことによって測定してもよい。この手法は、単一の細胞層及び関連した角質層の脂質画分を除去することによって皮膚バリアを効果的に破壊する。当業者に既知の方法を使用して、経表皮水分損失（ＴＥＷＬ：transepidermal water loss）の増加及び被術部位の赤色度を測定することによって、バリアの破壊を定量化する。前述のカメラ及び照明システムを使用して、発赤（紅斑）スコアを得る。破壊の直前及び直後、並びに５時間及び２４時間エンドポイントにおいて、ＴＥＷＬの読み値及び発赤スコアを獲得して、皮膚の保護及び治癒特性を評価する。
【００９３】
胃腸の健康
ペットの腸の健康を改善するため、又は下痢及び炎症性腸疾患を含む腸の疾病を処置若しくは予防するための本発明の使用は、大便スコアを使用して判断することができる。大便スコアは、以下の指針に従って毎日記録することができ、本発明による細菌の給餌前及び給餌後に対照群と試験群とを比較する。
【００９４】
スコア：５  極めて乾燥している
この大便は硬く表面にくっつかない。大便は、押すと転がる。大便を拾い上げたときに、くぼみができない。大便は、完全な単一体ではなく、個別の大便の集団として排泄されることが多い。大便は、収集後に元の形状を維持している。
【００９５】
スコア：４  硬い（理想的な大便）
この大便は、硬く、形が良く、また円筒状である。この大便は、拾い上げたときに容易にはバラバラにならない。この大便は、表面及び手袋に残留物を残すことがある。この大便は、単一体として排泄されることが多い。大便は、収集後に元の形状を維持している。
【００９６】
スコア：３  柔らかい、形状を有する
この大便は柔らかいが、明確な形状がある。この大便は、容易にバラバラになり、表面及び手袋に確実に残留物を残す。大便は、収集後に元の形状を失うことが多い。この大便は、しばしば別のスコアと共に存在するが、大便試料を丸ごと含むことができる。
【００９７】
スコア：２  柔らかい、形状がない
この大便は柔らかく、円筒形状を有さない。「２」にしばしば関連した形状は、「牛肉パティ（cow patty）」形である。この大便は、収集されると元の形状を失い、表面及び手袋に確実に残留物を残す。この大便スコアは、しばしば別のスコアと共に存在するが、大便試料を丸ごと含むことができる。この大便試料は、数インチの面積に広げることができる。
【００９８】
スコア：１  液体
この大便スコアは常に液体を象徴し、粒子状物質が存在しても又は存在しなくてもよい。この大便は、完全な単一体ではなく、集合体（groups of piles）として排泄されることが多い。この大便試料と共に粘液が存在することが多い。この大便試料は、収集が非常に困難であり、常に表面及び手袋に残留物が残る。この大便試料は、数インチの面積に広げることができる。
【００９９】
またさらに、血便、大便中の異物、又は大便中の粘液を含め、他の観察結果も記録される。
【０１００】
本発明の使用方法を使用して、臭いの原因となる糞便及び尿中の化合物の生成を低減することによって糞便及び／又はリターボックスの臭いを低減することができる。臭いの原因となる化合物の非限定例としては、アンモニア、インドール、フェノール、アミン、分枝鎖脂肪酸、及び揮発性のイオウ含有化合物が挙げられる。例えば、糞便のアンモニア濃度は、次の方法を使用して動物を本発明で処理した後に測定することができる：新鮮な糞便試料（そのままで５．０ｇ）を量り取り、４０ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌの入ったプラスチックバイアル瓶に入れる。試料は、試料採取期間の終わりまで４℃で保管する。次いで、試料をＮＨ３Ｎ及びラクテートの分析用に調製する。そのような調製物の上清を、ＮＨ３Ｎ及びラクテートの比色分析的分析に使用する。さらに、知覚される糞便の臭いを、次のように人間によって採点することができる：糞便試料を収集したら、訓練を受けた人員によってそれらの臭いを採点する。糞便臭スコアは、やはり１〜５のスケールに基づいており、１は悪臭が最も弱く、５は最も強い。
【０１０１】
さらに、ペットにおける胃腸感染症の処置は、ペットの腸の微生物生態系を改善することを含んでよい。ペットの微生物生態系の改善は、好ましくはペットの糞便中の病原菌濃度を低減することを含む。ペットの糞便中に存在する病原菌の濃度は、当業者に既知の標準的な平板計数法を使用して数えることができる。より好ましくは、病原菌は、クロストリジウム（Clostridia）、エシェリキア（Escherichia）、サルモネラ（Salmonella）、バクテロイデス（Bacteroides）、カンピロバクター（Campylobacter）、及びこれらの混合物から成る群から選択される。好適な病原菌株の非限定例としては、ウェルシュ菌（C. perfringens）、クロストリジウム・ディフィシレ（C. difficile）、大腸菌（Eschericia coli）、サルモネラ・ティフィムリウム（Salmonella typhimurium）、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０１０２】
尿路の健康
本発明の方法は、動物、好ましくはペットの尿路の予防的又は治療的処置を含むこともできる。尿路の処置の非限定例としては、尿路感染症の処置又は予防、尿路結石を含む腎疾患の処置又は予防、膀胱感染症の処置又は予防などが挙げられる。理論に束縛されるものではないが、本発明は、インビトロで実証されるように、本発明がシュウ酸含有、スツルバイト含有、又は尿酸塩含有結晶を分解できることの結果として、これらの病気を予防する際に有用であると考えられている。シュウ酸は、腎臓、膀胱、及び他の尿路結石、並びに感染症を引き起こす、不溶性沈殿物を形成する虞のある、尿代謝の副産物である。腸内のシュウ酸を分解し、したがって尿路でのシュウ酸の沈殿及び蓄積を潜在的に妨げることによって、本発明は、尿路の感染症及び他の病気を処置及び予防することができる。シュウ酸の分解は、ベーリンガー・マンハイム／Ｒ−バイオファーム（Boehringer Mannheim/R-Biopharm）から市販されているシュウ酸試験キット・カタログ番号７５５６９９を使用してインビトロで判断すること、また高速液体クロマトグラフィー（Chromotography）によって尿試料中で判断することができる。
【０１０３】
栄養素消化
本発明は、繊維、脂肪、タンパク質、ビタミン、及びミネラルの消化若しくは吸収（まとめて「栄養素消化」と呼ぶ）を改善することを含む、ペットの健康を改善又は維持する方法において使用することができる。繊維消化の改善は、前記プロバイオティク細菌並びに有益な内在性微生物相の増殖を促進し、それがある種の潜在的病原菌の抑制に役立つので望ましい。さらに、ヒトにおける結腸の発酵に起因した毒性代謝産物及び有害酵素の量の減少が文書化されている（トモマツ（Tomomatsu）、「オリゴ糖の健康効果（Health effects of oligosaccharides）」（１９９４）、食品技術（Food Technol）、第４８巻、６１〜６５ページ）。繊維消化は、希釈糞便試料を用いて接種する代わりに各実験が関心のある細菌株の純粋培養を使用した点が異なるが、ビッカーズ（Vickers）ら、「イヌ結腸微生物相による選択されたフラクトオリゴ糖及び他の繊維基材の発酵の比較（Comparison of fermentation of selected fructooligosaccharides and other fiber substrates by canine colonic microflora）」（２００１）アメリカ獣医学研究雑誌（Am. J. Vet. Res.）、第６１巻、第４号、６０９〜６１５ページに記載の方法を使用して決定することができる。
【０１０４】
関節の健康
さらに、本発明を使用して、ペットにおける関節疾患を処置又は予防し、それによってこれらの動物の活動及び生活の質を高めることができる。関節疾患の例としては、可動性の低下、変形性関節症、リウマチ様関節炎、股関節、肘関節、及び膝関節形成不全、脊椎症、及び外傷後の関節の炎症が挙げられる。例えば、ある程度の跛行のあるイヌに、合計９０日間にわたって本組成物を給餌し、０日、３０日、６０日、及び９０日の時点で、獣医が体重、身体状態スコア、皮膚及び毛評価、並びに整形外科的評価について検査する。整形外科的評価には、跛行の程度、体重負荷、抱えている体重負荷に対する抵抗力、後肢の伸展、並びにイヌが歩く能力及び速足で駆ける能力に対する視覚的影響が含まれる。また、関節角度及び可動域を、手作業によるゴニオメトリック測定によって決定することができる。さらに、フォースプレート分析を使用して、関節の健康を判定することができる。所有者は、動物の全体的な生活の質及び知覚される関節の健康を評価するために、０日、３０日、６０日、及び９０日の時点で質問表のすべてに記入する。
【０１０５】
一実施形態では、方法は、ペットへの本明細書に記載の組成物の直接的な経口投与に関する。この方法で使用される組成物の様々な実施形態について、諸形態若しくは組成、及びその中に含有される様々な成分の濃度を含んで、本明細書で詳細に説明する。
【０１０６】
本発明のプロセスに関して本明細書で使用するとき、用語「経口投与する」「経口投与」などは、ペットが本明細書に記載の１以上の組成物を摂取すること、若しくは摂取するように仕向けられること、又は該ペットの所有者がペットに１以上の組成物を与えるように指示されることを意味する。所有者が与えるように指示される場合、そのような指示は、組成物の使用が、胃腸管の処置若しくは本明細書に記載の他の使用方法など、本明細書に記載されている利益の１以上を提供できる、又は提供することになることを、所有者に教える又は知らせるものであってよい。指示は、追加的に又は代替的に、組成物が生きたプロバイオティク培養物を含有するというものであってもよい（任意で、存在する若しくは保証される生きたプロバイオティク培養物の濃度に関する指示を含む）。例えば、こうした指示は、口頭指示（例えば、獣医、他の保健専門家、専門販売員若しくは組織、及び／又はラジオ若しくはテレビ媒体（すなわち、広告）からの口頭指導を通じて、或いは書面での指示（例えば、獣医若しくは他の保健専門家からの書面での指示（例えば、手書きメモ）、専門販売員若しくは組織からの書面での指示（例えば、広告用チラシ、パンフレット、若しくは他の教育用品を通じて）、文字媒体からの書面での指示（例えば、インターネット、電子メール、若しくは他のコンピュータ関連媒体）、及び／又は組成物に付随する収容手段からの書面での指示（例えば、組成物を収容する包装上に存在するラベル）を通じてであってもよい。
【０１０７】
組成物は、様々な頻度又は持続時間に従って投与されてよい。例えば組成物は、通常、少なくとも週１回、又は少なくとも週３回、又は１日１回〜１日約４回、或いは１日１回〜１日約３回、或いは１日１回〜１日約２回、或いは適宜投与される。本明細書の利益を達成するために、少なくとも約１週間、或いは少なくとも約２週間、或いは少なくとも約３週間、或いは少なくとも約４週間、或いは少なくとも約６週間、或いは少なくとも約８週間、又は期間無制限に組成物が投与されることが好ましい。
【０１０８】
分析方法
本明細書の第２成分は、該第２成分１グラム当たり少なくとも約１０５ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有するプロバイオティク成分を含む。生存プロバイオティク微生物数は、以下の方法にしたがって数えられる：
試料の調製
滅菌ストマックバッグ（マサチューセッツ州ウェイマス（Weymouth）のインターサイエンス・ラボラトリーズ（Interscience Laboratories Inc.）から市販）内に、測定用の試料（第２成分）を無菌的に量り入れ、重量を記録する。室温のバターフィールドのリン酸緩衝希釈水（Butterfield’s Phosphate Buffered Dilution Water）（細菌学的分析マニュアル（Bacteriological Analytical Manual）、第８版）を、１：１０希釈まで加える（すなわち、試料の重量が３グラムの場合、はかりが３０グラムを示すまで緩衝剤を加える）ことによって、試料を希釈する。試料を約２０〜３０分間にわたって軟らかくし、平らにし、また試料を破壊して小片にし、次いでＭＩＮＩＭＩＸストマッカー（マサチューセッツ州ウェイマス（Weymouth）のインターサイエンス・ラボラトリーズ（Interscience Laboratories Inc.）から市販）内にスピード９で２分間入れる。
【０１０９】
試料の希釈
ストマッキングが完了したら、混合された試料１ミリリットルを、バターフィールドのリン酸緩衝希釈水（Butterfield’s Phosphate Buffered Dilution Water）の入った９ミリリットル希釈管内に移す（−２希釈液を作る）。−２希釈液から１ミリリットルを異なる９ミリリットル希釈管内に移すことによって、試料を連続して希釈する（−３希釈液を作る）。この工程を、プレーティングに望ましい希釈が達成されるまで繰り返す。次の希釈を実施する前に、各管をボルテックス処理する。
【０１１０】
試料のプレーティング
試料を、デュプリケート（duplicate）で、ディフコ・ラクトバシラスＭＲＳ寒天（Difco Lactobacilli MRS Agar）（デーマン、ロゴサ、シャープ寒天（DeMan, Rogosa and Sharpe Agar））上で、−６希釈、−７希釈、及び−８希釈でプレーティングする。−８希釈液をプレーティングするには、−７希釈管から０．１ミリリットルを室温ＭＲＳプレート上に移す。適切な希釈を繰り返し、プレーティングの直前に管をボルテックス処理する。滅菌スプレッダを使用して、試料をプレートの表面全体に均一に広げる。プレートを７リットル嫌気ジャー（ミツビシ（Mitsubishi））内に位置決めし、ひっくり返す。嫌気度指示剤（オクソイド（Oxoid））をジャーの内側に置く。３つのアネロパック（AnaeroPack）（ミツビシ（Mitsubishi））袋を入手し、開き、その際に片側の区画に１つの袋、他方の側の区画に２つの袋とする。ジャーの上に蓋を置き、良好なシールを保証する。嫌気ジャーを、３７℃±２℃で４８時間のインキュベーション期間にわたってインキュベータ内に置く。
【０１１１】
プロバイオティク微生物の計数
４８時間のインキュベート後、プレートをインキュベータから取り出し、コロニーを拡大するためにケベック・コロニー・カウンター（Quebec Colony Counter）を使用して細菌コロニーを手作業でカウントする。プレートは、コロニー数２５〜２５０個の範囲で計数される。生のカウント（プレート上でカウントされるコロニーの数）が完了したら、希釈を考慮する。したがって、生のカウントに希釈の逆数を乗じて、試料１グラム当たりのＣＦＵを得る。
【実施例】
【０１１２】
以下の諸実施例は、本発明を例示するために提供するものであり、いかなる形でも本発明の範囲を制限しようとするものではない。諸実施例について、プロバイオティク成分を使用して例示するが、該成分を、酵母、酵素、抗体、免役グロブリン、サイトカイン、及びそれらの組み合わせのいずれか１以上で置き換える又は補うことができる。
【０１１３】
（実施例１）
第１成分と第２成分とを含む栄養的にバランスのとれたペットフード組成物を、以下にしたがって調製する：
第１成分は、複数のキブルを含んでおり、各キブルが、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である。例えば、第１成分は、米国オハイオ州デートン（Dayton）のアイムス社（The Iams Company）から得られる、成犬に適したキブルであってよい。
【０１１４】
第２成分は、以下の個々の成分を指示される量で含む：
【表１】
2008535521.tif 000003
【０１１５】
第２成分を次のように調製する：約７５％（重量で）のカカオバターを約１時間にわたって１００℃に加熱し、次いで４０℃に冷却する。約５０％（重量で）のビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）を、相対湿度１０％でグローブボックス内のカカオバターに加える。カルチャーテック０６４（Culturetech 064）（８２℃オーブン内で一晩加熱）、パーム核油（１２１℃）、乳酸粉末（８２℃オーブン内で一晩加熱）、及び乳白色コーティング（約６０℃で一晩スピン乾燥）を、温度３５℃で約３０分間〜１時間混合して、白色コーティング混合物を得る。残りのカカオバター及びビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）を粉砕して直径約１〜２ｍｍの小片にし、白色コーティング混合物に分散させる。最終混合物を１５℃まで冷却して固結させ、ペットフード組成物に適した小片で提供する。使用前には、第２成分を、窒素で洗浄されたアルミニウム箔バッグ内で保管する。
【０１１６】
第１成分と第２成分とを、重量比約１０：１で、それぞれ複数のキブルと複数の小片との混合物として提供する。ペットによる消費の時点で、第２成分は、該第２成分１グラム当たり約６×１０９ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有する。
【０１１７】
（実施例２）
第１成分と第２成分とを含む栄養的にバランスのとれたペットフード組成物を、以下にしたがって調製する：
第１成分は、複数のキブルを含んでおり、各キブルが、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である。例えば、第１成分は、米国オハイオ州デートン（Dayton）のアイムス社（The Iams Company）から得られる、成犬に適したキブルであってよい。
【０１１８】
第２成分は、以下の個々の成分を指示される量で含む：
【表２】
2008535521.tif 000004
【０１１９】
第２成分を次のように調製する：約７５％（重量で）の乳脂肪を約１時間にわたって１００℃に加熱し、次いで４０℃に冷却する。約５０％（重量で）のビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）を、相対湿度１０％でグローブボックス内の乳脂肪に加える。カルチャーテック０６４（Culturetech 064）（８２℃オーブン内で一晩加熱）、パーム核油（１２１℃）、乳酸粉末（８２℃オーブン内で一晩加熱）、及び乳白色コーティング（約６０℃で一晩スピン乾燥）を、温度３５℃で約３０分間〜１時間混合して、白色コーティング混合物を得る。残りの乳脂肪及びビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）を粉砕して直径約１〜２ｍｍの小片にし、白色コーティング混合物に分散させる。最終混合物を１５℃まで冷却して固結させ、ペットフード組成物に適した小片で提供する。使用前には、第２成分を、窒素で洗浄されたアルミニウム箔バッグ内で保管する。
【０１２０】
第１成分と第２成分とを、重量比約７：１で提供する。第１成分は、「生きている活性なプロバイオティクス菌」が組成物中に含有されるという情報（任意で、組成物中又は組成物の一部分中の生きた培養物の濃度に関する状態を含む）でラベル付けされた大きいキャニスタ内に収められ；第２成分は、より小さいキャニスタ内に収められ、小さい方の充填済みキャニスタが、委託販売前には大きい方の充填済みキャニスタ内に置かれる。ペットによる消費の時点で、消費者は、小さい方の充填済みキャニスタを取り出し、大きい充填済みキャニスタから得られる第１成分の所望量又は推奨される量でボウルを満たし、小さい方の充填済みキャニスタから得られる第２成分の所望量又は推奨される量を追加する。ペットによる消費の時点で、第２成分は、該第２成分１グラム当たり約４×１０９ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有する。
【０１２１】
（実施例３）
第１成分と第２成分とを含む栄養的にバランスのとれたペットフード組成物を、以下にしたがって調製する：
第１成分は、複数のキブルを含んでおり、各キブルが、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である。例えば、第１成分は、米国オハイオ州デートン（Dayton）のアイムス社（The Iams Company）から得られる、成犬に適したキブルであってよい。
【０１２２】
第２成分は、以下の個々の成分を指示される量で含む：
【表３】
2008535521.tif 000005
【０１２３】
カカオバターを１時間にわたって温度１００℃に加熱し、次いで４０℃に冷却する。プロバイオティク微生物を、相対湿度１０％でグローブボックス内のカカオバターに加える。ソルビトールを２０４℃に加熱し、次いで相対湿度１２％で４９℃に冷却する。ソルビトールを、カカオバターとプロバイオティク微生物との混合物と混合して、均一に分布した材料を得る。この材料を、望ましい形状及びサイズの複数のモールド内に注ぎ込み、さらに冷却させる。第１成分と第２成分とを、重量比約７：１で提供する。第１成分は、大きいキャニスタ内に収められ、第２成分の（モールドからの）分離した小片は、ブリスターパック内に収められ、充填済みブリスターパックが、委託販売の時点で大きいキャニスタと物理的に結び付けられる。ペットによる消費の時点で、消費者は、大きい充填済みキャニスタから得られる第１成分の所望量又は推奨される量でボウルを満たし、充填済みブリスターパックから得られる第２成分の所望量又は推奨される量を追加する。ペットによる消費の時点で、第２成分は、該第２成分１グラム当たり約８×１０７ＣＦＵの生存プロバイオティク微生物数を有する。
【０１２４】
（実施例４）
第１成分と第２成分とを含む栄養的にバランスのとれたペットフード組成物を、以下にしたがって調製する：
第１成分は、複数のキブルを含んでおり、各キブルが、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である。例えば、第１成分は、米国オハイオ州デートン（Dayton）のアイムス社（The Iams Company）から得られる、成犬に適したキブルであってよい。
【０１２５】
第２成分は、以下の個々の成分を指示される量で含む：
【表４】
2008535521.tif 000006
【０１２６】
第２成分を次のように調製する：約７５％（重量で）のカカオバターを約１時間にわたって１００℃に加熱し、次いで４０℃に冷却する。約５０％（重量で）のビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）を、相対湿度１０％でグローブボックス内のカカオバターに加える。ソルビトールを２０４℃に加熱し、次いで相対湿度１２％で４９℃に冷却する。カカオバターとビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）との混合物、クエン酸、ラズベリーフレーバー、及び食品着色料を、ソルビトールと混合して、均一に分布した材料を得る。この材料を、望ましい形状及びサイズの複数のモールド内に注ぎ込み、さらに冷却させる。使用前には、第２成分を、窒素で洗浄されたアルミニウム箔バッグ内で保管する。
【０１２７】
第１成分と第２成分とを、重量比約１０：１で、それぞれ複数のキブルと複数の小片との混合物として提供する。
【国際調査報告】
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2008535521.tif 000009