(57)【要約】【解決手段】  本発明は、ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体、及びピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物を有する薬学的組成物、及び心血管及び他の疾患のリスクを軽減するために前記薬学的組成物を使用する方法を提供する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的組成物であって、
（ａ）ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体と、
（ｂ）ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物と、
（ｃ）薬学的に許容可能な担体と
を有する薬学的組成物。
【請求項２】
請求項１記載の薬学的組成物において、前記フィブリン酸誘導体は、ベザフィブラート（ｂｅｚａｆｉｂｒａｔｅ）、クロフィブラート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、シプロフィブラート（ｃｉｐｒｏｆｉｂｒａｔｅ）、フェノフィブラート、及びゲムフィブロジル、及びそれらの混合物から成る群から選択されるものである。
【請求項３】
請求項１記載の薬学的組成物において、前記ニコチン酸誘導体は、ナイアシン、ニセリトロール、アシピモキシ（ａｃｉｐｉｍｏｘ）、及びアシフランから成る群から選択されるものである。
【請求項４】
請求項１記載の薬学的組成物において、前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、ピリドキサール、ピリドキサール−５’−リン酸、ピリドキサミン、ピリドキサールの３−アシル化類似体、ピリドキサール−４，５−アミナール（ａｍｉｎａｌ）の３−アシル化類似体、ピリドキシンリン酸類似体、及びそれらの混合物から成る群から選択されるものである。
【請求項５】
請求項１記載の薬学的組成物において、前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、ピリドキサール−５’−リン酸である。
【請求項６】
請求項１記載の薬学的組成物において、前記ニコチン酸誘導体は、ナイアシンである。
【請求項７】
請求項１記載の薬学的組成物において、前記フィブリン酸誘導体は、フェノフィブラートである。
【請求項８】
請求項４記載の薬学的組成物において、前記ピリドキサールの３−アシル化類似体は、
【化１】
2008505127.tif 000007
であり、ここにおいて、
Ｒ１は、アルキル、アルケニルであり、アルキルは窒素、酸素、或いは硫黄によって中断されていても良く、更に末端炭素が非置換であるか或いはヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニルで置換されていても良く、或いは、
Ｒ１は、ジアルキルカルバモイルオキシ、アルコキシ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、アルカノイルオキシアリール、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニル、ジアルキルカルバモイルオキシであるか、或いは、
Ｒ１は、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、又はアラルキルであり、アリールはアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、又はアルカノイルオキシによって置換されていても良いものである。
【請求項９】
請求項４記載の薬学的組成物において、前記ピリドキサール−４，５−アミナールの３−アシル化類似体は、
【化２】
2008505127.tif 000008
であり、ここにおいて、
Ｒ１は、アルキル、アルケニルであり、アルキルは窒素、酸素或いは硫黄によって中断されていても良く、更に末端炭素が非置換であるか或いはヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニルで置換されていても良く、或いは、
Ｒ１は、ジアルキルカルバモイルオキシ、アルコキシ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、アルカノイルオキシアリール、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニル、ジアルキルカルバモイルオキシであるか、或いは、
Ｒ１は、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、或いはアラルキルであり、アリールはアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、或いはアルカノイルオキシによって置換されていても良いものであり、
Ｒ２は、第二級アミノ基である。
【請求項１０】
請求項４記載の薬学的組成物において、前記ピリドキシンリン酸類似体は、以下の化学式（ａ）であって、
【化３】
2008505127.tif 000009
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ６であり、Ｒ６は水素、アルキル、或いはアリールであるか、或いは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合しているものであり、
Ｒ３は水素であり、Ｒ４はヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、或いはアリールアミノであるか、或いは、
Ｒ３及びＲ４はハロであり、
Ｒ５は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、又は−ＣＯ２Ｒ７であり、Ｒ７は水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルである、化学式（ａ）と、
以下の化学式（ｂ）であって、
【化４】
2008505127.tif 000010
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ５であり、Ｒ５は水素、アルキル、或いはアリールであるか、或いは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合しているものであり、
Ｒ３は、水素、アルキル、アリール、アラルキルであり、
Ｒ４は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、又は−ＣＯ２Ｒ６であり、Ｒ６は、水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルであり、
ｎは１〜６である、化学式（ｂ）と、
以下の化学式（ｃ）であって、
【化５】
2008505127.tif 000011
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は水素、アルキル、又はアリールであるか、或いは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合しているものであり、
Ｒ３は水素であり、Ｒ４はヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、或いはアルカノイルオキシであるか、或いは、
Ｒ３及びＲ４は、共に結合して＝Ｏを形成していてもよく、
Ｒ５及びＲ６は水素であるか、或いは、
Ｒ５及びＲ６はハロであり、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いは−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルである、化学式（ｃ）と
から成る群から選択されるものである。
【請求項１１】
患者における心血管疾患を治療する若しくは予防する方法であって、
請求項１〜１０記載のいずれか１つの薬学的組成物の治療上有効な量を投与する工程を有する方法。
【請求項１２】
請求項１１記載の方法において、前記患者は、肝毒性を起こしやすいものである。
【請求項１３】
請求項１１記載の方法において、
前記心血管疾患は、うっ血性心不全、心筋虚血、不整脈、心筋梗塞、虚血性発作、出血性発作、冠動脈疾患、高血圧症（高血圧）、アテローム性動脈硬化（動脈の目詰まり）、動脈瘤、末梢血管疾患（ＰＡＤ）、血栓静脈炎（静脈炎）、心裏打ちの疾患、心筋の疾患、心臓炎、うっ血性心不全、心内膜炎、虚血性心疾患、心臓弁膜症（心臓血管の弁の機能不全）、動脈硬化（動脈の硬化）、急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、川崎病、高コレステロール、及び心臓移植から成る群から選択されるものである。
【請求項１４】
請求項１１記載の方法において、前記ニコチン酸誘導体の用量は、０．１〜５０００ｍｇ／日の間である。
【請求項１５】
請求項１１記載の方法において、前記ニコチン酸誘導体の用量は、１００〜３０００ｍｇ／日の間である。
【請求項１６】
請求項１１記載の方法において、前記ニコチン酸誘導体の用量は、１００、２５０、５００、１０００、及び３０００ｍｇ／日から成る群から選択されるものである。
【請求項１７】
請求項１１記載の方法において、前記フィブリン酸誘導体の用量は、０．１〜１０００ｍｇ／日である。
【請求項１８】
請求項１１記載の方法において、前記フィブリン酸誘導体の用量は、１００、２００、４００、及び６００ｍｇ／日から成る群から選択されるものである。
【請求項１９】
請求項１１記載の方法において、前記フィブリン酸誘導体はベザフィブラートであり、前記用量は４００〜６００ｍｇ／日の間である。
【請求項２０】
請求項１１記載の方法において、前記フィブリン酸誘導体はシプロフィブラートであり、前記用量は２００ｍｇ／日である。
【請求項２１】
請求項１１記載の方法において、前記フィブリン酸誘導体はゲムフィブロジルであり、前記用量は４００〜６００ｍｇ／日の間である。
【請求項２２】
請求項１１記載の方法において、前記フィブリン酸誘導体はフェノフィブラートであり、前記用量は４０〜２００ｍｇ／日の間である。
【請求項２３】
請求項１１記載の方法において、前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の用量は、１日当たり０．１〜５０ｍｇ／ｋｇの間である。
【請求項２４】
請求項１１記載の方法において、前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の用量は、１日当たり１〜１５ｍｇ／ｋｇの間である。
【請求項２５】
糖尿病を治療する若しくは予防する方法であって、
請求項１〜１０記載のいずれか１つの薬学的組成物の治療上有効な用量を投与する工程を有する方法。
【請求項２６】
患者における高コレステロール血症を治療する若しくは予防する方法であって、
（ａ）ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体、及び（ｂ）ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の治療上有効な用量を投与する工程を有するものであり、
前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、ピリドキサール−５’−リン酸、ピリドキサールの３−アシル化類似体、ピリドキサール−４，５−アミナール（ａｍｉｎａｌ）の３−アシル化類似体、ピリドキシンリン酸類似体、及びそれらの混合物から成る群から選択されるものである、方法。
【請求項２７】
請求項２６記載の方法において、前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、ピリドキサール−５’−リン酸である。
【請求項２８】
請求項２６記載の方法において、前記ピリドキサールの３−アシル化類似体は、
【化６】
2008505127.tif 000012
であり、ここにおいて、
Ｒ１は、アルキル、アルケニルであり、アルキルは窒素、酸素、又は硫黄によって中断されていても良く、或いは末端炭素が非置換であるか又はヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニルで置換されていても良く、或いは、
Ｒ１は、ジアルキルカルバモイルオキシ、アルコキシ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、アルカノイルオキシアリール、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニル、ジアルキルカルバモイルオキシであるか、或いは、
Ｒ１は、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、又はアラルキルであり、アリールはアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、又はアルカノイルオキシによって置換されていても良いものである。
【請求項２９】
請求項２６記載の方法において、前記ピリドキサール−４，５−アミナールの３−アシル化類似体は、
【化７】
2008505127.tif 000013
であり、ここにおいて、
Ｒ１は、アルキル、アルケニルであり、アルキルは窒素、酸素或いは硫黄によって中断されていても良く、又は末端炭素が非置換であるか又はヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニルで置換されていても良く、或いは、
Ｒ１は、ジアルキルカルバモイルオキシ、アルコキシ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、アルカノイルオキシアリール、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニル、ジアルキルカルバモイルオキシであるか、或いは、
Ｒ１は、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、又はアラルキルであり、アリールはアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、或いはアルカノイルオキシによって置換されていても良く、
Ｒ２は、第二級アミノ基である。
【請求項３０】
請求項２６記載の薬学的組成物において、前記ピリドキシンリン酸類似体は、以下の化学式（ａ）であって、
【化８】
2008505127.tif 000014
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ６であり、Ｒ６は水素、アルキル、又はアリールであるか、或いは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合しているものであり、
Ｒ３は水素であり、更にＲ４はヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、又はアリールアミノであるか、或いは、
Ｒ３及びＲ４はハロであり、更に
Ｒ５は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いはＣＯ２Ｒ７であり、Ｒ７は水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルである、化学式（ａ）と、
以下の化学式（ｂ）であって、
【化９】
2008505127.tif 000015
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ５であり、Ｒ５は水素、アルキル、又はアリールであるか、或いは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合しているものであり、
Ｒ３は、水素、アルキル、アリール、アラルキルであり、
Ｒ４は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いは−ＣＯ２Ｒ６であり、Ｒ６は、水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルであり、
ｎは１〜６である、化学式（ｂ）と、
以下の化学式（ｃ）であって、
【化１０】
2008505127.tif 000016
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は水素、アルキル、或いはアリールであるか、或いは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合しているものであり、
Ｒ３は水素であり、更にＲ４はヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、或いはアルカノイルオキシであるか、或いは、
Ｒ３及びＲ４は、共に結合して＝Ｏを形成していても良く、
Ｒ５及びＲ６は水素であるか、或いは、
Ｒ５及びＲ６はハロであり、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いは−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルである、化学式（ｃ）と
から成る群から選択されるものである。
【請求項３１】
ニコチン酸誘導体投与の副作用を減少するためのピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の使用。
【請求項３２】
請求項３１記載の使用において、前記ニコチン酸誘導体はナイアシンである。
【請求項３３】
請求項３１記載の使用において、前記副作用は、ホモシステインレベルの上昇、及びトロンボキサンＡ２レベルの上昇から成る群から選択されるものである。
【請求項３４】
請求項３１記載の使用において、前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、ピリドキサール−５’−リン酸である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮出願番号第６０／５８４，２１４号に対して優先権を主張しており、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれるものである。
【０００２】
技術分野
本発明は全体として、ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体を用いた併用療法、及びその使用に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
２０００年の米国心臓協会によると、３９．４％の死因は心血管疾患に起因するものであった。進行性心疾患及び間接的発作のリスクは、血中コレステロール値が上昇するにつれて徐々に増加する。上昇した血中コレステロールレベルは、進行性糖尿病のリスクの増加にも関連する。望ましい血中レベルは２００ｍｇ／ｄＬである。許容可能な境界線レベルは２００〜２３９ｍｇ／ｄＬの範囲であり、ハイリスクは２４０ｍｇ／ｄＬ以上である。これによると、１億２３０万人のアメリカ人が高コレステロール値であるという推測されている。
【０００４】
高コレステロール血症は、内因性及び外因性血管作動性薬剤に対する様々な血管の反応性に影響を及ぼすと知られている。特に興味深いのは、例えば５−ヒドロキシトリプタミン及びノルアドレナリンなどの血管収縮剤に対する反応性の増加、及び例えばアセチルコリン及び一酸化窒素などの血管拡張剤に対する反応性の減少である。これは動脈硬化の進行を伴い、高血圧症、発作及び冠動脈疾患などの多くの心血管関連疾患の進行に重要な役割を果たしている。
【０００５】
現在、高コレステロール血症は、スタチン、フィブラート或いはナイアシンなどの脂質低下剤で第一に治療される。これらの薬剤が脂質レベルの低下に効果的である一方、これらの薬剤の単独及び他の薬剤との併用での使用は、重篤な副作用、及び最も著しくは、肝臓における薬剤の代謝に関与する肝性チトクロムＰ４５０酵素の阻害を含む薬剤−薬剤反応が原因で制限されている。
【０００６】
対照的に、脂質低下特性を有するビタミンＢ６は、副作用もない安定した薬剤である（Ｂｒａｔｔｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｙｒｏｘｉｄｉｎｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ  ＩＩＩ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ８０  ｙｅａｒ  ｏｌｄ  ｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｌｏｗ  ｐｌａｓｍａ  ｐｙｒｉｄｏｘａｌ  ５−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ，１９９０，５０：８７３）。いくつかのビタミンＢ６誘導体も脂質低下特性を有する。例えば、米国特許第６，０６６，６５９号明細書では、高脂血症及び動脈硬化の治療に対するビタミンＢ６（ピリドキシン）、ピリドキサール及びピリドキサミン誘導体の使用が開示されている。ドイツ特許第ＤＥ２４６１７４２Ｃ２号では、高脂血症の治療に対するピリドキサール、ピリドキソール及びピリドキサミン−５’リン酸エステルの使用が開示されている。ピリドキサール−５’−リン酸グルタミン酸マグネシウムの補充も、脂質レベルを減少することが示された（Ｋｈａｙｙａｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｐｙｒｉｄｏｘａｌ  ５−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｏｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，Ｄｒｕｇｓ  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｒｅｓ．１９９８，２４：２９−４０）。
【０００７】
脂質低下特性に加えて、ビタミンＢ６、及びピリドキサール−５’−リン酸などのその代謝産物は、心血管或いは関連疾患、例えば心筋虚血及び虚血再灌流障害、心筋梗塞、心肥大、高血圧症、うっ血性心不全、心筋梗塞に続く心不全、動脈硬化を含む血管疾患、及び凝固カスケードが活性化されている血栓状態及びプロトロンビン状態に起因する疾患などの治療において有用である。
【０００８】
以前の開示では、コレステロール低下剤とのビタミンＢ６（ピロキシジン）の選択的使用を教示しており、ここではビタミンＢ６の含有はホモシステインレベルの減少を対象としていた。例えば、米国特許第６，５７６，２５６号明細書では、心血管リスクが高い患者を、レニン−アンジオテンシンシステムの阻害剤、アスピリン及び任意にビタミンＢ６（ピリドキシン）と共にＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤を使用することによって治療する方法を開示している。米国特許出願第２００３００４９３１４号では、心血管リスクが高い患者を治療するための、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ＡＣＥ阻害剤、アスピリン、及び任意にビタミンＢ６の組み合わせを有する処方を開示している。米国特許出願第２００３００６８３９９号では、心血管リスクが上昇した患者を治療するための、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、レニン−アンジオテンシンシステムの阻害剤、アスピリン及び任意にビタミンＢ６の組み合わせを有する経口投与可能な薬学的投薬形態が開示されている。米国特許第６，６６９，９５５号明細書では、心血管現象のリスクを軽減するための、フィブリン酸誘導体、レニン−アンジオテンシンシステムの阻害剤、アスピリン及び任意にビタミンＢ６の組み合わせを有する経口投与可能な薬学的投薬形態が開示されている。しかしながら、別の種類の脂質低下剤、及び特にナイアシン或いはフィブラートとの組み合わせで、脂質低下剤としてピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物を使用した併用療法は現在ない。
【０００９】
他の薬剤との組み合わせ、その結果として付加的な治療上利益の可能性を有するニコチン酸誘導体（例えばナイアシン）或いはフィブリン酸誘導体（フィブラート）の使用は、肝毒性のため制限されていた。高コレステロール血症、及び心血管疾患及び糖尿病などの関連障害を治療及び予防するための、有害な薬物反応を誘導せず、薬剤誘導性肝毒性を起こしやすい人に適した併用療法は現在ない。従って、現在の治療法の制限を打開する、ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体に関連した新しい薬学的組成物及び治療の方法に対するニーズがある。
【発明の開示】
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、（ａ）ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体；（ｂ）ピリドキサール−５’−リン酸、或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物；及び（ｃ）薬学的に許容可能な担体を有する薬学的組成物を提供する。
【００１１】
本発明の１実施形態において、前記フィブリン酸誘導体は、ベザフィブラート、クロフィブラート、シプロフィブラート、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、及びそれらの混合物から成る群から選択される。
【００１２】
本発明の別の実施形態において、前記ニコチン酸誘導体は、ナイアシン、ニセリトロール、アシピモキシ（ａｃｉｐｉｍｏｘ）、及びアシフランから成る群から選択される。
【００１３】
本発明の別の実施形態において、前記ピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、ピリドキサール、ピリドキサール−５’−リン酸、ピリドキサミン、ピリドキサールの３−アシル化類似体、ピリドキサール−４，５−アミナール（ａｍｉｎａｌ）の３−アシル化類似体、ピリドキシンリン酸類似体、及びそれらの混合物から成る群から選択される。
【００１４】
本発明は、（ａ）ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体、（ｂ）ピリドキサール−５’−リン酸、或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物、及び（ｃ）薬学的に許容可能な担体を有する薬学的組成物を有する薬学的組成物の有効な用量を投与する工程を有する、心血管疾患のリスクにさらされている患者を治療する方法も提供する。
【００１５】
１実施形態において、前記方法は肝毒性に影響を受けやすい患者を治療するためのものである。
【００１６】
心血管疾患は、うっ血性心不全、心筋虚血、不整脈、心筋梗塞、虚血性発作、出血性発作、冠動脈疾患、高血圧症（高血圧）、アテローム性動脈硬化（動脈の目詰まり）、動脈瘤、末梢血管疾患（ＰＡＤ）、血栓静脈炎（静脈炎）、心裏打ちの疾患、心筋の疾患、心臓炎、うっ血性心不全、心内膜炎、虚血性心疾患、心臓弁膜症（心臓血管の弁の機能不全）、動脈硬化（動脈の硬化）、急性冠状動脈症候群（ＡＣＳ）、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、川崎病、及び心臓移植から成る群から選択される。
【００１７】
本発明は、（ａ）ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体、（ｂ）ピリドキサール−５’−リン酸、或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物、及び（ｃ）薬学的に許容可能な担体を有する薬学的組成物を有する薬学的組成物の有効な用量を投与する工程を有する、糖尿病のリスクにさらされている患者を治療するための方法も提供する。
【００１８】
前記ニコチン酸誘導体の用量は、０．１〜５０００ｍｇ／日の間である。前記用量は、１００〜３０００ｍｇ／日の間である。前記用量は、１００、２５０、５００、１０００、或いは３０００ｍｇ／日である。
【００１９】
前記フィブリン酸誘導体の用量は、０．１〜５０００ｍｇ／日の間である。前記用量は、４３〜２００ｍｇ／日の間である。前記用量は、１６０〜２００ｍｇ／日の間である。前記用量は、１００、２００、４００、或いは６００ｍｇ／日である。
【００２０】
前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の用量は、０．１〜５０ｍｇ／日の間である。前記ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の用量は、１〜１５ｍｇ／日の間である。
【００２１】
本発明はさらに、（ａ）ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体、及び（ｂ）ピリドキサール−５’−リン酸、或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物であって、前記ピリドキサール−５’−リン酸関連化合物はピリドキサール−５’−リン酸、ピリドキサールの３−アシル化類似体、ピリドキサール−４，５−アミナールの３−アシル化類似体、ピリドキシンリン酸類似体、及びそれらの混合物からなる群から選択されるものである、の治療上有効な用量を投与する工程を有する、患者における高コレステロール血症を治療する或いは予防する方法を提供する。
【００２２】
本発明はさらに、ニコチン酸誘導体投与の副作用を軽減するような、ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物の使用を提供する。前記ニコチン酸誘導体はナイアシンであり、前記副作用は、ホモシステインレベルの上昇及び／若しくはトロンボキサンＡ２レベルの上昇である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルの上昇と進行性心血管疾患に対するリスクとの間の偶然な関連性はよく確証されている。上昇したＬＤＬレベルを減少することは、一過性虚血発作を含む心血管現象の発生率を軽減し、死亡率を軽減するように見られた。さらに最近、ＬＤＬレベルの上昇は進行性糖尿病に対するリスクの上昇と相関した。
【００２４】
ナイアシンは、心疾患のリスクを低減するために使用されていた。作用のメカニズムはまだ明らかではないが、ナイアシンは肝臓にＨＤＬレベルの増加を誘導し、ＬＤＬ及びトリグリセリドレベルの低下を誘導した。ナイアシンに対する用量反応性は直線状である。しかしながら、高用量のナイアシンは、肝毒性、及び動脈硬化症の発生の要因である高ホモシステイン血症と関連していた（Ｂａｓｕ  ａｎｄ  Ｍａｎｎ，Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｂ−６  ｎｏｒｍａｌｉｚｅｓ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｅｄ  ｓｕｌｆｕｒ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｔａｔｕｓ  ｏｆ  ｒａｔｓ  ｆｅｄ  ｄｉｅｔｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｎｉａｃｉｎ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｎｉａｃｉｎ’ｓ  ｈｙｐｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ，Ｊ  Ｎｕｔｒ．１９９７  Ｊａｎ；１２７（１）：１１７−２１）。ナイアシンの使用は、心筋梗塞、狭心症及び大脳虚血を含む特定の心血管疾患に関連しており、血小板／血管壁相互作用にも関わるトロンボキサンＡ２の増加とも関連していた。
【００２５】
本発明者らは、ナイアシン、及びＰ５Ｐ或いは特定のＰ５Ｐ関連化合物の併用は、実質的に肝毒性の発生がないことと相乗的に、心血管疾患及び糖尿病のリスクを低減するということを発見した。本発明者らは、ナイアシン、及びＰ５Ｐ或いはＰ５Ｐ関連化合物の脂質低下特性は同時投与の場合に相乗作用を与えることを発見した。本発明者らはさらに、Ｐ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物は、ナイアシンの脂質低下性作用を変えることなく、ホモシステイン及びトロンボキサンＡ２レベルにおけるナイアシン仲介性増加を寛解することができることも発見した。
【００２６】
フィブリン酸誘導体としても知られているフィブラートは、心疾患のリスクを低減するためにも使用された。フィブリン酸誘導体は、脂肪組織におけるリポタンパク質リバーゼ活性を増加し、それによりＶＬＤＬの異化作用を増加する。フィブリン酸誘導体はさらに、トリグリセリドレベルを減少し、ＬＤＬレベルをやや減少し、ＨＤＬレベルを増加する。フィブリン酸誘導体は、消化管及び肝胆嚢異常増殖のリスクの増加に関連している。フィブリン酸誘導体は、ホモシステインレベルを実質的に増加し、それによって薬剤の心保護的な保護効果を相殺することも知られている。ビタミンＢ６（ピロキシジン）との併用でのフィブリン酸誘導体の使用は以前、Ｄｉｅｒｋｅｓらによって報告された（Ｖｉｔａｍｉｎ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｍａｒｋｅｄｌｙ  ｒｅｄｕｃｅ  ｔｈｅ  ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．２００１  Ｓｅｐ；１５８（１）：１６１−４）。Ｄｉｅｒｋｅｓらは、フェノフィブラート及びプラセボで患者を治療するとホモシステインレベルが４４％増加した一方、フェノフィブラート、ビタミンＢ６、Ｂ１２及び葉酸のみを投与した患者はホモシステインレベルが１３％しか増加しなかったことを示した。
【００２７】
本発明者らは、Ｐ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物は、フィブラート誘導性高ホモシステイン血症を軽減する場合はビタミンＢ６より効果的であることを発見した。本発明者らは、フィブリン酸誘導体及びＰ５Ｐ、Ｐ５Ｐ関連化合物の脂質低下特性は、実質的に肝毒性の発生がないことと相乗的であることも発見した。
【００２８】
ＰＬＡ２は、冠動脈心疾患に対する強力で独立したリスク要因であると指摘されており（Ｃａｍｅｊｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２  ｉｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００１，８９：２９８：３０４  ａｔ  ２９８）、炎症性バイオマーカーであるとも考えられている。ＰＬＡ２は、非エステル化脂肪酸及びリゾリン脂質を形成するリポタンパク質及び細胞膜に存在するグリセロアシルリン脂質におけるｓｎ−２エステル結合の加水分解を触媒する。
【００２９】
ＰＬＡ２は、心血管疾患に対するリスクを増加するいくつかの過程において役割を果たしている。ＰＬＡ２は、循環性リポタンパク質を修飾し、心血管疾患に対するリスクの上昇に関連したＬＤＬ粒子の形成を誘導することができる（Ｃａｍｅｊｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，ａｔ  ｐ．２９８）。動脈壁において、ＰＬＡ２はマトリックス結合性リポタンパク質の凝集及び融合を誘導することができ、さらにマトリックスプロテオグリカンへの結合強度を増加することができる。ＰＬＡ２は、血管収縮及び血小板接着を促進する、シクロキシゲナーゼによってトロンボキサンへ変換されるアラキドン酸の細胞膜からの放出を触媒する。アラキドン酸は、さらなる心血管疾患リスク要因である炎症を仲介する、シクロキシゲナーゼによってプロスタグランジンへも変換される。プロスタグランジン及び他の炎症性介在物質は、コレステロール恒常性及び凝固を含む複数の過程に影響を与える。
【００３０】
ビタミンＢ６代謝産物であるＰ５Ｐは、ＰＬＡ２活性化を介したアラキドン酸放出の阻害に関連していた（Ｋｒｉｎｓｈｎａｍｕｒｔｈｉ  ａｎｄ  Ｋａｋｋａｒ，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｙｒｉｄｏｘａｌ  ５’ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＰＡＬＰ）  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，  ｄｅｎｓｅ  ｇｒａｎｕｌｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  Ｂ２  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ−ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｓｃｈｉｆｆ  ｂａｓｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．１９８２，４８：１３６）。従って、Ｐ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物は、リポタンパク質レベルに加えてＰＬＡ２レベルを制御することによって心保護利益を提供する。
【００３１】
本発明者らは、ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体との併用で、コレステロール及びＰＬＡ２を軽減するための活性物質としてピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物を初めて使用した。本発明者らは、Ｐ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物の脂質低下及びＰＬＡ２阻害特性は、ビタミンＢ６及び以前に開示された他のビタミンＢ６誘導体（米国特許第６，０６６，６５９号明細書及びドイツ特許第ＤＥ２４６１７４２Ｃ２号明細書を参照のこと）のものに比べて有意であった。Ｐ５Ｐはピロキシジンと比較してｉｎ  ｖｉｖｏで４０倍強力であった。本発明者らは、ニコチン酸誘導体及びフィブリン酸誘導体との併用でのＰ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物の心血管保護効果は、それらが併用で投与された場合に相乗作用を与えることも発見した。本発明者らはさらに、Ｐ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物、及びニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体は、同時投与した場合、不利に反応しないことを発見した。Ｐ５Ｐ及びＰ５Ｐ関連化合物は肝臓ＣＹＰ酵素を阻害せず、肝臓トランスアミナーゼを増加しない。従って、本発明の薬学的化合物は、非肝毒性である。
【００３２】
これらの発見の観点において、本発明は、高コレステロール血症を治療する或いは予防する、心血管疾患及び糖尿病のリスクを低減するための薬学的組成物及びその使用を提供する。本発明の薬学的組成物は、心血管疾患のリスクを低減する場合に現在利用可能な併用療法よりも有効である。前記薬学的組成物は、リポタンパク質、ホモシステイン、血管収縮、血小板凝集及び炎症を含む複数のリスク要因を寛解させる。さらに、前記薬学的組成物は、肝毒性を誘導しない。本発明の薬学的組成物は、ニコチン酸誘導体或いはフィブリン酸誘導体と；ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連、若しくはそれらの薬学的に許容可能な塩と；薬学的に許容可能な担体とから成るものである。
【００３３】
使用され得るフィブリン酸誘導体の例としては、これに限定されるものではないが、ベザフィブラート、クロフィブラート、フェノフィブラート（Ｔｒｉｃｏｒ（商標））、或いはゲムフィブロジル（Ｌｏｐｏｉｄ（商標））を含む。好ましくは、前記フィブリン酸誘導体はフェノフィブラートである。
【００３４】
使用され得るニコチン酸誘導体の例としては、これに限定されるものではないが、ナイアシン、ニセリトロール、アシピモキシ（ａｃｉｐｉｍｏｘ）、及びアシフランを含む。好ましくは、前記ニコチン酸誘導体はナイアシンである。
【００３５】
使用され得るピリドキサール−５’−リン酸関連化合物は、これに限定されるものではないが、ピリドキサール−５’−リン酸（Ｐ５Ｐ）、ピリドキサール、及びピリドキサミンを含む。使用され得る他のＰ５Ｐ関連化合物は、ピリドキサールの３−アシル化類似体、ピリドキサール−４，５−アミナールの３’アシル化類似体、及びピリドキシンホスホネート類似体を含み、これは米国特許第６，５８５，４１４号明細書及び米国特許出願第２００３０１１４４２４号に開示されており、これらはこの参照により本明細書に組み込まれる。好ましくは、ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物はＰ５Ｐである。
【００３６】
前記ピリドキサールの３−アシル化類似体は、
【００３７】
【化１１】
2008505127.tif 000002
【００３８】
を含み、ここにおいて、
Ｒ１は、アルキル、アルケニルであり、アルキルは窒素、酸素或いは硫黄によって中断されていても良く、更に末端炭素が非置換或いはヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニルで置換されていても良く、若しくは、
Ｒ１は、ジアルキルカルバモイルオキシ、アルコキシ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、アルカノイルオキシアリール、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニル、ジアルキルカルバモイルオキシであるか、若しくは、
Ｒ１は、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、或いはアラルキルであり、アリールはアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、或いはアルカノイルオキシによって置換されていても良い。
【００３９】
前記ピリドキサール−４，５−アミナールの３−アシル化類似体は、
【００４０】
【化１２】
2008505127.tif 000003
【００４１】
を含み、ここにおいて、
Ｒ１は、アルキル、アルケニルであり、アルキルは窒素、酸素或いは硫黄によって中断されていても良く、更に末端炭素が非置換或いはヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニルで置換されていても良く、若しくは、
Ｒ１は、ジアルキルカルバモイルオキシ、アルコキシ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、アルカノイルオキシアリール、アルコキシアルカノイル、アルコキシカルボニル、ジアルキルカルバモイルオキシであるか、若しくは、
Ｒ１は、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、或いはアラルキルであり、アリールはアルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、或いはアルカノイルオキシによって置換されていても良く、
Ｒ２は、第二級アミノ基である。
【００４２】
前記ピリドキシンリン酸塩類似体は、以下の化学式（ａ）であって、
【００４３】
【化１３】
2008505127.tif 000004
【００４４】
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ６であり、Ｒ６は水素、アルキル、或いはアリールである、若しくは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位で酸素と共有結合し、
Ｒ３は水素であり、Ｒ４はヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、或いはアリールアミノである、若しくは、
Ｒ３及びＲ４はハロであり、
Ｒ５は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いはＣＯ２Ｒ７であり、Ｒ７は水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルである、化学式（ａ）と、
以下の化学式（ｂ）であって、
【００４５】
【化１４】
2008505127.tif 000005
【００４６】
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ５であり、Ｒ５は水素、アルキル、或いはアリールである、若しくは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位の酸素と共有結合し、
Ｒ３は、水素、アルキル、アリール、アラルキルであり、
Ｒ４は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いは−ＣＯ２Ｒ６であり、Ｒ６は、水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルであり、
ｎは１〜６である、化学式（ｂ）と、
以下の化学式（ｃ）であって、
【００４７】
【化１５】
2008505127.tif 000006
【００４８】
ここにおいて、
Ｒ１は、水素或いはアルキルであり、
Ｒ２は、−ＣＨＯ−、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は水素、アルキル、或いはアリールである、若しくは、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｏアルキルであり、アルキルはＲ１の代わりに３位で酸素と共有結合し、
Ｒ３は水素であり、Ｒ４はヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、或いはアルカノイルオキシであるか、若しくは、
Ｒ３及びＲ４は、共に結合して＝Ｏを形成していても良く、
Ｒ５及びＲ６は水素である、若しくは、
Ｒ５及びＲ６はハロであり、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、或いは−ＣＯ２Ｒ８であり、Ｒ８は水素、アルキル、アリール、或いはアラルキルである、化学式（ｃ）と
を含む。
【００４９】
本発明は、特定の投薬形態、担体、或いはそれと同等のものに限定されるものではなく、変更することが可能であることが理解される。また、本明細書で使用された専門用語は特定の実施形態のみを説明することを目的としており、限定することを意図するものではないことも理解される。
【００５０】
本明細書に記載されたいくつかの化合物は１若しくはそれ以上の不斉中心を含み、これは鏡像異性体、ジアステレオマー（ｄｉｓａｓｔｅｒｉｏｍｅｒ）、及び（Ｒ）或いは（Ｓ）として絶対立体化学の点から定義される他の立体異性形態を生じる。本発明は、そのような可能なジアステレオマー及び鏡像異性体、さらにはそれらのラセミ体及び任意の純粋形態の全てを含むことが意図されている。光学的に活性な（Ｒ）及び（Ｓ）異性体は、キラルシントン（出発原料）或いはキラル試薬を用いて調合されるか、或いは従来技術を用いて分離される。本明細書に記載された前記化合物がオレフィン二重結合或いは幾何学対称の他中心を含む場合で、他に同定されていない限り、前記化合物はＥ及びＡ幾何学異性体の両方を含むことが意図されている。同様に、全ての互変異性形態も含まれることが意図されている。
【００５１】
本明細書及び添付された請求項において使用されたように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈で明らかに他を指示しない限り、複数形を含む。従って、例えば「活性因子」或いは「薬理学的な活性因子」という用語は、単一の活性因子、さらには組み合わせで２若しくはそれ以上の異なる活性因子を含み、「担体」という用語は、単一の担体やそれと同等物と同様に、２若しくはそれ以上の担体の混合物を含む。
【００５２】
「薬学的に許容可能な担体」或いは「薬学的に許容可能な塩」の記述にあるような「薬学的に許容可能」とは、本明細書では、生物学的或いは別に望ましくない物質ではないことを意味しており、すなわち前記物質は、あらゆる望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、或いは前記組成物の他の成分と有害な様式で相互作用することなく、あらゆる患者に投与される薬学的組成物に取り込まれるものである。
【００５３】
本明細書で使用される「担体」或いは「媒体」は、薬剤投与に適した通常の薬学的に許容可能な担体物質を意味し、非毒性であり、薬学的組成物或いはドラッグデリバリーシステムの他の化合物と有害な様式で相互作用しない本分野では既知のあらゆる物質を含む。
【００５４】
薬剤或いは薬理学的活性因子の「有効な」量或いは「薬学的有効量」とは、非毒性であるが望ましい効果を提供する薬剤或いは因子の十分な量を意味する。本発明の併用療法において、前記併用の１成分の「有効量」は、前記併用の他の成分と組み合わせて使用された場合、望ましい効果を提供するのに有効である前記化合物の量である。「有効な」量は、個人の年齢及び全身状態、特定の活性因子或いは薬剤、及びそれらと同等のものに依存して対象毎によって変わるものである。従って、正確な「有効量」を特定することは必ずしも可能なことではない。しかしながら、個々の場合における適切な「有効な」量は、日常的な実験法を用いて本分野の当業者によって決定することが可能である。
【００５５】
本明細書で使用される「心血管疾患のリスクを低減する」及び「心血管疾患のリスクを低減すること」という用語は、心血管現象の発生の増加に関連した、潜在的な原因或いはバイオマーカーの減少或いは消失を意味している。
【００５６】
本明細書で使用される「心血管疾患」とは、心臓の血管のあらゆる疾患を意味している。心血管疾患の例としては、うっ血性心不全、心筋虚血、不整脈、心筋梗塞、虚血性発作、出血性発作、冠動脈疾患、高血圧症（高血圧）、アテローム性動脈硬化（動脈の詰まり）、動脈瘤、末梢血管疾患（ＰＡＤ）、血栓静脈炎（静脈炎症）、心臓裏打ちの疾患、心筋の疾患、心臓炎、うっ血性心不全、心内膜炎、虚血性心疾患、心臓弁膜症（弁或いは心臓の血管における弁の機能不全）、動脈硬化症（動脈の硬化）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、高コレステロール症、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、川崎病、及び心臓移植を含む。
【００５７】
本明細書で使用される「糖尿病のリスクを低減する」及び「糖尿病のリスクを低減すること」という用語は、進行性インスリン耐性、前糖尿病及び糖尿病の発生の増加に関連した、潜在的な原因或いはバイオマーカーの減少或いは消失を意味している。
【００５８】
本明細書で使用される「ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物」は、あらゆるビタミンＢ６前駆体、代謝産物、誘導体、或いはそれらの類似体を意味しているが、（１）ビタミンＢ６（ピロキシジン）；（２）ドイツ特許第ＤＥ２４６１７４２Ｃ２に開示されたピリドキサール、ピリドキソール及びピリドキサミンの５’リン酸エステル；及び（３）米国特許第６，０６６，６５９号明細書に開示されたピリドキシン、ピリドキサール、及びピリドキサミン誘導体は除く。
【００５９】
本明細書で使用される「肝毒性」は、あらゆる薬剤誘導性肝臓損傷を含む。
【００６０】
本発明の薬学的組成物は、例えば通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、粉末化、乳化、封入、取り込み、或いは凍結乾燥過程などの方法によって、それ自体は既知である様式で製造される。
【００６１】
従って、本発明に従った使用に対する薬学的組成物は、薬学的に使用され得る前記活性化合物の調合への処理を促進する賦形剤及び補助剤を有する、１若しくはそれ以上の生理学的に許容可能な担体を用いた通常の様式で処方される。適切な処方は選択された投与経路に依存する。
【００６２】
注射の場合、本発明の薬剤は水溶液において処方され、好ましくはハンクス液、リンガー液或いは生理食塩水などの生理学的に互換性のある緩衝液において処方される。
【００６３】
経口投与の場合、前記化合物は、前記活性化合物と当技術分野で周知の薬学的に許容可能な担体との組み合わせによって容易に処方され得る。そのような担体は、治療される患者による経口摂取用に本発明の化合物を錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、及びそれらと同等物として処方することを可能にする。経口使用に対する薬学的な調合は、固体賦形剤によって得ることができ、錠剤或いは糖衣錠コアを得ることが好ましい場合、適切な補助剤を添加した後、任意に結果生じた混合物を粉砕する、及び顆粒の混合物を処理することによって得ることができる。適切な賦形剤は特に、ラクトース、スクロース、マンニトール或いはソルビトールを含む糖、或いはトウモロコシスターチ、小麦スターチ、米スターチ、ポテトスターチ、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／若しくはポリビニルピロリドンなどのセルロース調合などの賦形剤である。必要に応じて、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天、若しくはアルギン酸、或いはアルギン酸ナトリウムなどのそれらの塩などの分解因子が添加され得る。
【００６４】
好ましくは、本発明の薬学的組成物は経口的に投与される。好ましい経口投薬形態は、各活性因子の治療上有効なユニット用量を含み、前記単位用量は１日１回の経口投与に適している。あらゆる活性因子の治療上有効な単位用量は、本分野の当業者、及び本明細書の開示の観点において明らかな多くの要因に依存するであろう。特にこれらの要因は、投与される化合物の独自性、処方、仕様される投与経路、患者の性別、年齢及び体重、及び治療される状態の重症度、及び消化管、肝胆嚢システム及び腎臓システムに影響を及ぼす合併症の存在、を含む。投薬及び毒性を決定する方法は、通常は動物から始め、動物に有意な毒性が観察されなかった場合はヒトで行うような研究をしている当業者によく知られている。前記投与の妥当性は、ＬＤＬレベル、ＨＤＬレベル、総コレステロールレベル、トリグリセリドレベル、及びホモシステインレベルをモニターすることによって評価され得る。治療の少なくとも２〜４週間後に供給された用量によってＬＤＬリポタンパク質及びホモシステインレベルが正常或いは容認可能レベルまで低下しない場合、前記用量は増加され得る。
【００６５】
ニコチン酸誘導体に対する治療上有効なユニット投薬量は、１００ｍｇ〜５０００ｍｇ／日の間である。好ましくは、前記ユニット投薬量は、２５０ｍｇ〜３０００ｍｇ／日の間である。一般的に前記ユニット投薬量は、１００、２５０、５００、１０００、或いは３０００ｍｇ／日である。
【００６６】
フィブリン酸誘導体に対する治療上有効なユニット投薬量は、１００ｍｇ〜１０００ｍｇ／日の間である。特定のフィブリン酸誘導体に対する適切な投薬量の範囲は、本分野において既知である。一般的に前記ユニット投薬量は、１００、２００、４００、或いは６００ｍｇ／日である。使用されたフィブリン酸誘導体がベザフィブラートである場合、好ましいユニット投薬量は４００ｍｇ／日である。使用されたフィブリン酸誘導体がゲムフィブロジルである場合、好ましいユニット投薬量は６００ｍｇ／日である。使用されたフィブリン酸誘導体がフェノフィブラートである場合、好ましいユニット投薬量は２００ｍｇ／日である。
【００６７】
ピリドキサール−５’−リン酸或いはピリドキサール−５’−リン酸関連化合物に対する好ましい治療上有効なユニット投薬量は、１日に０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の間である。より好ましくは、前記ユニット投薬量は、１日に１〜１５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。実施形態において、前記用量は、１０ｍｇ／ｋｇ／日、或いは２５０ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、或いは７５０ｍｇ／日である。
【００６８】
本発明は実例的に実施形態を参照することで記載されているが、本発明はこれら実施形態のみに限定されるものではなく、様々な変更及び修飾は本分野の当業者によってその点になされることが理解される。全てのそのような変更及び修飾は、添付された請求項によって範囲に含まれることが意図されている。
【実施例１】
【００６９】
ＣＹＰ活性に対するＰ５Ｐの影響
肝臓チトクロム酵素の活性に対するＰ５Ｐの阻害効果はｉｎ  ｖｉｔｒｏで検討した。ＣＹＰ阻害アッセイは、昆虫細胞から調整されたミクロソーム（Ｓｕｐｅｒｓｏｍｅｓ（登録商標）、Ｇｅｎｔｅｓｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｂｕｒｎ，マサチューセッツ州）を使用し、それぞれは、バキュロウイルス発現ベクターを用いて対応するヒトＣＹＰ  ｃＤＮＡから発現された個々のＣＹＰサブタイプ（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、或いはＣＹＰ３Ａ４）を発現している。前記ミクロソームは、追加ｃＤＮＡ−発現ヒト還元酵素及び／若しくはチトクロムｂ５も取り込み、これらの酵素がＣＹＰの活性を刺激する場合、反応毎に必要とされる酵素の量の低減を可能にするものである（Ｇｅｎｔｅｓｔ  Ｃｏｒｐ．）。このアッセイは蛍光検出を介して、特異的ＣＹＰ基質とのミクロソームのインキュベーション後に蛍光代謝産物の形成をモニターした。２つのＣＹＰ基質（７−ベンジルオキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＢＦＣ）及び７−ベンジルオキシクマリン（ＢＱ））は、この酵素は複合体阻害動態を示すと示されているので、ＣＹＰ３Ａ４に対してテストした。反応（０．２ｍＬ）は、ＮＡＤＰＨ再生システム［ＮＡＤＰ＋、グルコース−６−リン酸（Ｇ６Ｐ）、グルコース−６−リン酸ジヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤＨ）］及びＭｇＣｌ２の存在下、３７℃で９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて行った。各酵素に対するピリドキサール−５’−リン酸による代謝産物形成の阻害は、ピリドキサール−５’−リン酸の非存在下（０μＭ）及び存在下（０．０１６９〜３７．０μＭ）でテストした。酵素選択性阻害も、ポジティブ対照に対して各アッセイにおいて８つの濃度でテストした。全ての判定は２つ組で行った。ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４以外の全ＣＹＰサブタイプアッセイに使用した試薬溶液は、ＭＢＤＩによって調合された。ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４に対しては、Ｇｅｎｔｅｓｔ  Ｃｏｒｐ．（ＣＹＰ２Ｃ１９・ＣＥＣ：カタログ番号ＨＴＳ−４０００、ロット番号１、及びＣＹＰ３Ａ４／ＢＦＣ：カタログ番号ＨＴＳ−１０００、ロット番号１）から購入した完全試薬キットを前記アッセイを実行するために使用した。
【００７０】
実験設計
全酵素に対するアッセイは、以下の方法で実行した：ＮＡＤＰＨ再生システム、適切なバッファー溶液及び媒体、阻害剤（ポジティブ対照）溶液或いはテスト化合物（ピリドキサール−５’−リン酸）溶液は９６ウェルマイクロタイタープレートへ分配した。８つの阻害剤及びテスト化合物濃度は、３倍段階希釈を用いてテストした。後者の混合物の０．１ｍＬ／ウェルを含む前記マイクロタイタープレートは、インキュベーターにおいて３７℃で予熱した。バッファー、ミクロソーム、及び基質の溶液は別々に調整し、タンパク質を分散させるためにボルテックス混合した。ミクロソーム／基質溶液（０．１ｍＬ）を予熱ＮＡＤＰＨ再生システム、バッファー及び阻害剤溶液を含むマイクロタイタープレートのウェルへ添加することで反応を開始した。特定のインキュベーション時間の後、０．０７５ｍＬのストップ溶液（以下参照）を添加することによって前記反応を停止した。さらにブランク（バックグラウンドノイズ）サンプルも、ミクロソーム／基質混合物をＮＡＤＰＨ再生システムへ添加する前にストップ溶液を添加することによってアッセイした。形成された代謝産物の量は、各代謝産物の検出に対して最適化されている励起及び発光フィルターを用いる蛍光プレートリーダーにおける蛍光検出によって定量した。
【００７１】
ＣＹＰ阻害アッセイを実行する前に、前記アッセイで測定された代謝産物の蛍光に対するピリドキサール−５’−リン酸の効果を評価した。
【００７２】
代謝産物の蛍光（１濃度、２つ組）は、ピリドキサール−５’−リン酸の非存在下（０μＭ）及び存在下（０．４７５〜１０００μＭ）で測定した。前記濃度と測定された代謝産物は：１μＭ  ３−シアノ−７−ヒドロキシクマリン（ＣＨＣ）、２．５μＭ  ７−ヒドロキシクマリン（７−ＨＣ）、２．５μＭ  ７−ヒドロキシ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＨＦＣ）、０．１μＭ  フルオレッセイン、１０μＭ  ３−［２−（Ｎ１Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン（ＡＨＭＣ）及び１０μＭ  キノリノールであった。使用した代謝産物の濃度は、ＣＹＰ阻害アッセイで形成される予想最大濃度（すなわち、阻害剤の非存在下におけるＣＹＰサブタイプとの基質のインキュベーション後に測定された代謝産物の濃度）に基づいていた。ＣＨＣは、ＣＹＰ１Ａ２及びＣＹＰ２Ｃ１９アッセイにおいて測定された蛍光代謝産物であった。７−ＨＣはＣＹＰ２Ａ６アッセイで測定された蛍光代謝産物であり、ＨＦＣはＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４（基質としてＢＦＣ）アッセイで測定された蛍光代謝産物であり、フルオレッセインはＣＹＰ２Ｃ８アッセイで測定された代謝産物であった。ＡＨＭＣはＣＹＰ２Ｄ６アッセイで測定された代謝産物であり、キノリノールはＣＹＰ３Ａ４（基質としてＢＱ）アッセイで測定された。
【００７３】
ピリドキサール−５’−リン酸溶液
ピリドキサール−５’−リン酸一水和物（Ｐ５Ｐ、ロット番号．００００１４４８）は粉末で供給された。全ピリドキサール−５’−リン酸溶液の濃度は、力価因子０．９０１９で補正した無水分子量（２４７．１５ｇ／モル）に基づいていた。
【００７４】
代謝産物蛍光に対するピリドキサール−５’−リン酸の効果を決定するために、濃度５０μＭのピリドキサール−５’−リン酸のストック溶液は、蒸留水で新鮮に調合した。ピリドキサール−５’−リン酸は水溶液において酸性であるので、前記溶液のｐＨは１Ｎ  ＮａＯＨで７．０に調節した。ピリドキサール−５’−リン酸の溶液を、５０倍から１０００μＭへの希釈から開始し、その後３３３、１１１、３７．０、１２．３、４．１２ｍ１．３７及び０．４５７μＭへ３倍段階希釈で前記マイクロタイタープレートのウェルへ添加した。
【００７５】
ＣＹＰサブタイプ阻害アッセイに対して、５０ｍＭの濃度でのピリドキサール−５’−リン酸のストック溶液は、蒸留水において新鮮に調整した（ｐＨは１Ｎ  ＮａＯＨで７．０に調節した）。ピリドキサール−５’−リン酸の溶液は、蒸留水で１１１μＭへ希釈し、次に３倍から３７．０μＭへの希釈から開始し、その後１２．４、４．１２、１．３７、０．４５７、０．１５２、０．０５０８、及び０．０１６９μＭへ３倍段階希釈で前記マイクロタイタープレートのウェルへ添加した。
【００７６】
データ解析
各化合物の存在下及び非存在下（媒体対照）における２つ組蛍光シグナルの平均値を計算し、バックグラウンドノイズで補正した。パーセント阻害は、前記化合物の非存在及び存在下における補正蛍光シグナルの差異として、化合物の非存在下における補正蛍光シグナルで割り、１００％を掛けることで計算した。必要に応じて、代謝産物形成を５０％阻害する（ＩＣ５０）前記阻害剤或いはピリドキサール−５’−リン酸の濃度は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン３．００、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いて、％阻害対（ＶＳ）対数濃度データの非直線性回帰分析（シグモイド状用量依存性曲線）によって計算した。
【００７７】
結果
ＣＹＰ阻害アッセイにおいて測定された様々な代謝産物の蛍光に対するピリドキサール−５’−リン酸の影響を決定した。図１から明らかなように、ピリドキサール−５’−リン酸は、３７μＭ以上の濃度で前記アッセイにおいて測定された６つの代謝産物のうち５つ（ＣＨＣ、７−ＨＣ、７−ＨＦＣ、ＡＨＭＣ、及びキノリノール）の蛍光を有意にクエンチ（減少）した。図１（ａ）〜１（ｆ）は、ピリドキサール−５’−リン酸濃度の機能としてＣＹＰ阻害アッセイにおいて測定された代謝産物（ＣＨＣ、７−ＨＣ、ＨＦＣ、フルオレッセイン、ＡＨＭＣ、及びキノリノール）の蛍光における減少を図示している。ピリドキサール−５’−リン酸（１０００μＭまで）は、ＣＹＰ２Ｃ８控訴によるジベンジルフルオレッセインの代謝に続いて測定される代謝産物であるフルオレッセインの蛍光に影響を及ぼさなかった。ＣＹＰ触媒活性に対するピリドキサール−５’−リン酸の阻害効果は、０．０１６９〜３７μＭの濃度範囲でテストした。
【００７８】
既知の阻害剤及びピリドキサール−５’−リン酸とＣＹＰサブタイプ（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１及びＣＹＰ３Ａ４）のそれぞれとのインキュベーションの結果は、図２〜１１にグラフを用いて記載した。
【００７９】
図２（ａ）及び２（ｂ）は、Ｆｕｒａｆｙｌｌｉｎｅ（フラフィリン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ１Ａ２（ＣＥＣからＣＨＣへの代謝）の触媒活性の阻害を示したものである。
【００８０】
図３（ａ）及び３（ｂ）は、それぞれＴｒａｎｙｌｃｙｐｒｏｍｉｎｅ（トラニルシプロミン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ａ６（クマリンから７−ＣＨの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８１】
図４（ａ）及び４（ｂ）は、それぞれＴｒａｎｙｌｃｙｐｒｏｍｉｎｅ（トラニルシプロミン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｂ６（ＥＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８２】
図５（ａ）及び５（ｂ）は、それぞれケルセチン及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｃ８（ＤＢＦからフルオレッセインの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８３】
図６（ａ）及び６（ｂ）は、それぞれＳｕｌｆａｐｈｅｎａｚｏｌｅ（スルファフェノゾール）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｃ９（ＭＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８４】
図７（ａ）及び７（ｂ）は、それぞれＴｒａｎｙｌｃｙｐｒｏｍｉｎｅ（トラニルシプロミン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｃ１９（ＣＥＣからＣＨＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８５】
図８（ａ）及び８（ｂ）は、それぞれキニジン及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｄ６（ＡＭＭＣからＡＨＭＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８６】
図９（ａ）及び９（ｂ）は、それぞれジエチルジチオカルバミン酸（ＤＤＴＣ）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｅ１（ＭＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８７】
図１０（ａ）及び１０（ｂ）は、それぞれＫｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ（ケトコナゾール）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ３Ａ４（ＢＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８８】
図１１（ａ）及び１１（ｂ）は、それぞれＫｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ（ケトコナゾール）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ３Ａ４（ＢＱからキノリノールの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【００８９】
図１２は、各ＣＹＰサブタイプの既知の阻害剤に対して、及びピリドキサール−５’−リン酸に対して推定されたＩＣ５０値をまとめたものである。
【００９０】
様々なＣＹＰ阻害剤に対する観察されたＩＣ５０値は、アッセイ確認の間に以前本発明者らの研究室で得られた値（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ２Ｅ１に対する）と類似しており、供給元によって決定された値（ＣＹＰ２Ｃ１９、及びＣＹＰ３Ａ４アッセイキット）とも類似していた。これらの値は、酵素活性は全アッセイにおいて損なわれるものではなかったことを示唆していた。
【００９１】
テストされた濃度範囲（０．０１６９〜３７．０μＭ）で、ピリドキサール−５’−リン酸はＣＹＰ酵素のうち７つ（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ２Ｅ１）の触媒活性を阻害しなかった（それぞれ図２、３、４、５、６、８、及び９）。しかしながら、ピリドキサール−５’−リン酸は、ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４酵素サブタイプの代謝活性を阻害した（図７、１０、及び１１）。ピリドキサール−５’−リン酸の力価はそれぞれＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４酵素サブタイプ（それぞれ−３３及び−３７μＭのＩＣ５０値）と比較的類似していた。ピリドキサール−５’−リン酸は、基質ＢＱよりもわずかに有意に（ＩＣ５０値＝２>７μＭ）基質ＢＦＣのＣＹＰ３Ａ４酵素仲介性代謝産物を阻害するように見られた（ＩＣ５０値>３７μＭ、それぞれ図１０及び１１）。ピリドキサール−５’−リン酸及び既知の阻害剤に対するＩＣ５０値のまとめは、図１２に示した。
【００９２】
結論
化合物ピリドキサール−５’−リン酸は、テストした濃度範囲（０．０１６９〜３７．０μＭ）において、７つのＣＹＰサブタイプ（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ２Ｅ１）の触媒活性を選択的に阻害しなかった。従って、臨床的に関連する薬剤相互作用は、ピリドキサール−５’−リン酸とこれら酵素の基質との間に生じるとは予想されなかった。ピリドキサール−５’−リン酸は、比較的高濃度（ＩＣ５０はＣＹＰ２Ｃ１９に対しては３３μＭで、ＣＹＰ３Ａ４に対しては３７μＭ以下）でテストした９つのヒトＣＹＰサブタイプの２つ（ＣＹＰ２Ｃ１９及びＣＹＰ３Ａ４）の触媒活性を選択的に阻害しなかった。しかしながら、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの２つのＣＹＰサブタイプに対するピリドキサール−５’−リン酸の比較的低い阻害力価に基づいて、重大な薬剤阻害作用の発生は起こりそうもないと予想される。
【実施例２】
【００９３】
冠動脈インターベンションに続く心筋虚血性障害の減少に対するピリドキサール−５’−リン酸の有効性
方法
研究概説
４つのセンターにおいて経皮的冠動脈インターベンション（ＰＣＩ）を患った６０人の患者を２：１二重盲検方法にランダムに分け、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療した。封入判定基準は、単一血管損傷の非−緊急ＰＣＩに対する事前決定、及び手続き（ｐｒｏｃｅｄｕｒａｌ）関連虚血性合併症に対する高リスクを決定する以下の臨床特徴：急性冠動脈症候群の存在（ＰＣＩの４８時間以内における胸部の痛み）、最近のＡＭＩ（＝７日）、減少した心外膜血流、血管造影血栓、駆出率＝３０％、或いは静脈移植片損傷、の＝１の同定が必要となる（Ｃａｌｉｆｆ  ＲＭ，Ａｂｄｅｌｍｅｇｕｉｄ  ＡＥ，Ｋｕｎｔｚ  ＲＥ，Ｐｏｐｍａ  ＪＪ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＣＪ，Ｃｏｈｅｎ  ＥＡ，Ｋｌｅｉｍａｎ  ＮＳ，Ｍａｈａｆｆｅｙ  ＫＷ，Ｔｏｐｏｌ  ＥＪ，Ｐｅｐｉｎｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｙｏｎｅｃｒｏｓｉｓ  ａｆｔｅｒ  ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  １９９８；３１：２４１−２５１；Ｔｈｅ  ＥＳＰＲＩＴ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ．Ｎｏｖｅｌ  ｄｏｓｉｎｇ  ｒｅｇｉｍｅｎ  ｏｆ  ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ  ｉｎ  ｐｌａｎｎｅｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｔｅｎｔ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．Ｌａｎｃｅｔ  ２０００；３５６：２０３７−２０４４）。ＰＣＩ手順或いは標準併用療法に対する全ての一般的な禁忌に加えて、主な排除判定基準は、ＰＣＩ直前の正常上限を超えるクレアチンキナーゼ（ＣＫ−ＭＢ）上昇、心房細動或いは左脚ブロックの心電図根拠、或いは臨床的に著しい異常実験所見（トランスアミナーゼ、ビリルビン、或いはアルカリホスファターゼが正常上限の１．５倍以上、或いは血清クレアチニンが１．８ｍｇ／ｄｌ以上）のあらゆる証拠である。血管再生前の減少値の証拠と共に、ピークトロポニン値が定期ＰＣＩの２４時間以上前に報告されたという条件で、患者は前記研究においてトロポニン測定値が上昇していると確認された。インフォームドコンセントを行った後、ランダムに分けてＰ５Ｐで治療された患者に、１０ｍｇ／ｋｇ経口用量としてＰＣＩの４時間以上前に腸溶コーティングＰ５Ｐを投与し、その後１４日間５ｍｇ／ｋｇを１日２回の用量で経口投与した。治療の中断に対するコンプライアンス及び理由は全ての患者に対して記録した。
【００９４】
研究エンドポイント及び定義
本研究の主要目的は、高リスク選択ＰＣＩにおける心保護的薬剤としてのＰ５Ｐで治療する可能性を評価することであった。梗塞サイズの主なエンドポイントは、基線にてＰＣＩの開始のすぐ前に開始し６時間毎で２４時間実行した一連のＣＫ−ＭＢ酵素測定を用いた台形法則によって評価された（Ｐｒｅｓｓ  ＷＨ，Ｔｅｕｋｏｌｓｋｙ  ＳＡ，Ｖｅｔｔｅｒｌｉｎｇ  ＷＴ，Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ＢＰ．Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｒｅｃｉｐｅｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４：１２７−１３３）。ＰＣＩ後２４時間以内での心筋虚血の発生は、連続１２−リード心電図モニタリング（Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，ボストン、マサチューセッツ州）を用いて第二のエンドポイントとして評価した。周術期（ｐｅｒｉｐｒｏｃｅｄｕｒａｌ）虚血の証拠は、１分以上持続し他のエピソードとは１分以上分けられた、ＰＣＩの６０分期間内で１００μＶ以下のＳＴ−セグメント抑制として定義した。ＳＴ−セグメント偏差曲線下の領域は、最初の開始から最後のコントラスト注入まで測定した。全ての心マーカー及びＳＴ−セグメントモニタリングデータは、治療割当てが見えない（ｂｌｉｎｄｅｄ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）コア実験によって解析した（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｒｙｌａｎｄ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ボルチモア、メリーランド州；Ｄｕｋｅ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ドーラン、ノースキャロライナ州）。付加的な事前に指定した第二のエンドポイントは、３０日複合体及び死亡の個人発生比率；非致死性梗塞；新規或いは悪化心不全、或いは主要な有害虚血制現象の非存在として定義される純臨床安全性に加えた再発性虚血；心筋梗塞における血栓溶解（ＴＩＭＩ）主要出血；及び肝臓機能或いは凝固テスト異常、を含む。急性心筋梗塞（ＡＭＩ）は、正常の上限（正常の上限７ｎｇ／ｍｌ）の３倍以上のＣＫ−ＭＢ上昇及び／若しくは正常の上限（正常の上限０．１ｎｇ／ｍｌ）の１．５倍以上のトロポニンＴレベルとして定義した。以前のトロポニン（或いはＣＫＭＢ）値が正常の上限以上であった場合、値をＡＭＩの定義を満たすために正常の上限の２倍以上（ＣＫ−ＭＢでは３倍以上）に加えて、基線測定の５０％以上とすることが必要となる。日常的な化学、完全血液数値、及び凝固アッセイは基線、ランダムに分けた後７日目、及び３０日目で行った。ピーク周術期ＣＫ−ＭＢ及びトロポニンレベルにおける基線からＰＣＩ２４時間後以内の最大差異も検査した。
【００９５】
データ採取及び統計学的解析
研究薬剤の１以上用量を投与され、ＰＣＩを受けた患者は、全ての第一及び第二の有効性及び安全性エンドポイントに対して解析した。研究薬剤の１以上用量を投与されたがＰＣＩを受け無かった患者は、第一の有効性及びＳＴセグメントモニタリング解析から排除したが、安全性解析には含めた。統計学的テストは、０．０５のレベルの２面性であり、包括解析原則を用いた。Ｗｉｌｃｏｘｏｎ  ｒａｎｋ−ｓｕｍテストも用いた。サンプルのサイズが小さいので、カテゴリー的変数は、Ｐｅａｒｓｏｎ’ｓ  ｃｈｉ−ｓｑｕａｒｅテストを利用した、ＳＴ−セグメントモニタリングデータは例外でＦｉｓｈｅｒ’ｓ  ｅｘａｃｔテストを用いて比較した。統計学的解析はＳＡＳバージョン８．２（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，キャリー、ノースキャロライナ州）を用いて行った。
【００９６】
結果
高リスクＰＣＩにおけるＰ５Ｐの研究に登録された６０人の患者では、全患者はＰ５Ｐ或いはプラセボで治療を受けたが、４人の患者（３人のＰ５Ｐ、１人のプラセボ）は計画された血管再生を受けなかった。付加的な３人の患者は、心臓酵素データの回収が不完全であったため曲線解析下の領域から排除した。結果として、５３及び６０人の患者は第一の有効性、及び３０日臨床及び／若しくは安全性解析にそれぞれ含まれた。
【００９７】
血管再生の前の発生した心血管疾患の存在、及び心血管リスク因子は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボにランダムに分けられた患者と急性冠動脈症候群を患った患者を研究したより大きな同時期の試行における代表的な患者集団との間では類似していた。表１は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療した患者における基線、臨床、心電図、及び血管造影特性をまとめたものである。集団の全体的な平均年齢は５８歳で、患者の８１．７％は男性で、２１．７％は以前にＰＣＩ及び／若しくはバイパス手術を受けていた。血管再生に対する指標としての最近のＡＭＩはＰ５Ｐで治療された患者においてより一般的に起こるが、各群におけるほぼ同数の患者は急性冠動脈症候群を示し、全患者の半分がＰＣＩの前にトロポニンレベルが上昇していた。
【００９８】
対照患者における心外膜流の減少のより高い発生率を除き、基線血管造影及び手続き特性も治療群の間で同様に現れた（表１）。Ｐ５Ｐ或いはプラセボの投与は、ＰＣＩの前にそれぞれ平均６．１及び８．４時間で起こった。ステント移植は、プラセボ治療群では１００％、Ｐ５Ｐ治療群では９７．３％行われた。遠位性塞栓保護を用いて１度のみ静脈移植片インターベンションが行われた。両群において右冠動脈は最も一般的に治療されたが、プラセボで治療された少数の患者は伏在静脈移植片の血管再生を受けた。表２は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療した患者に対する手続き及び血管造影結果をまとめたものである。手続き血管造影合併症（例えば、主要解離、突然静脈閉鎖）はまれであった（表２）。
【００９９】
中央周術期ＣＫ−ＭＢ領域下曲線に従って測定された周術期梗塞サイズ第一のエンドポイントは、３２．９ｎｇ／ｍｌから１８．６ｎｇ／ｍｌ（ｐ＝０．０３８）に減少し、これはＣＫ−ＭＢの分布のシフトを反映している。表３は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療した患者に対する周術期心臓マーカー及びＳＴモニタリング結果をまとめたものである。図１３は、Ｐ５Ｐ（Ａ）及びプラセボ（Ｂ）で治療された患者に対する、対数−正規分布に適合された濃度曲線下面積ＣＫ−ＭＢ値を図示したものである。同様に、最大周術期ＣＫ−ＭＢレベルは、Ｐ５Ｐを投与された患者の間で著しく低かった。カテゴリー的分類によって、３０日非致死性ＡＭＩの発生率は群の間では違わなかった（Ｐ５Ｐでは１２．８％対（ＶＳ）プラセボでは１０．０％、ｐ＝１．０）。死亡はなく、３０日複合体有害現象比率（死亡、非致死性ＡＭＩ、新規及び／若しくは悪化心不全、或いは再発性虚血）は同じであった（Ｐ５Ｐでは１７．９％対（ＶＳ）プラセボでは１５．０％、ｐ＝１．０）。
【０１００】
心電図ＳＴモニタリングデータは、ＰＣＣＩを受け、治療を受けた患者の９４．６％に対して利用可能であった（表３）。ＰＣＩ後虚血は、両群の患者の約１５％において起こった。Ｐ５Ｐ治療群においてＰＣＩ後虚血はより低い割合が観察されたが（１４．７％対（ＶＳ）１７．６％、ｐ＝０．７８）、連続性心電図モニタリング当たりの虚血パラメーターにおける有意な差異は見られなかった。
【０１０１】
Ｐ５Ｐでの治療に関連した安全性の問題は同定されなかった。主要な出血の発生（２．８％Ｐ５Ｐ対（ＶＳ）１０．５％プラセボ、ｐ＝０．２７）、及び血液産物輸血（２．５％Ｐ５Ｐ対（ＶＳ）１０．０％プラセボ、ｐ＝０．２６）はまれであり、群の間で著しく異なるものではなかった。７日目及び３０日目での日常的な化学或いは凝固研究の異常性における差異は見られなかった。しかしながら両方の群において、約１／４の患者は予定された２週間での終了の前に薬剤療法を中断した（３０．８％Ｐ５Ｐ対（ＶＳ）２５．０％プラセボ、ｐ＝０．７７）。Ｐ５Ｐを摂取した患者でＰＣＩを受けなかった患者（３人の患者、７．５％）に対しては、早期中断の最も共通した原因は、胃腸過敏症とそれに続く非特異的筋骨格痛であった。
【０１０２】
結論
周術期虚血性合併症に対する高リスク患者において、ビタミンＢ６代謝産物Ｐ５Ｐでの治療は、心筋障害の減少と関連しており、これはＰＣＩ後に放出されたＣＫ−ＭＢの総量における減少が反映したものである。Ｐ５Ｐ療法は、ピーク周術期ＣＫ−ＭＢ上昇における有意な減少、ＣＫ−ＭＢの分布のより低いレベルへの移行（図１３）、及び周術期梗塞サイズの減少と関連していた。
【実施例３】
【０１０３】
冠動脈インターベンションに続く心筋虚血性障害に対するフィブリン酸誘導体との組み合わせにおけるピリドキサール−５’−リン酸の有効性
方法
実施例１の研究データを用いた。実施例１に記載された６０人の患者における、Ｐ５Ｐ治療に加えてフィブリン酸誘導体（フェノフィブラート、１６０〜２００ｍｇ／日）での補助治療を受けた患者を同定した。
【０１０４】
結果
Ｐ５Ｐ及びフィブリン酸誘導体で治療された患者において、最大周術期ＣＫ−ＭＢレベルの第二のエンドポイントが３．４１ｎｇ／ｍｌ（プラセボ）から０．７５ｎｇ／ｍｌ（Ｐ５Ｐ及びフェノフィブラート）まで減少した。
【０１０５】
結論
Ｐ５Ｐ及びフィブリン酸誘導体併用療法は、ピーク周術期ＣＫ−ＭＢ上昇の有意な減少、及び周術期梗塞サイズの減少に関連していた。
【実施例４】
【０１０６】
マウスにおけるアテローム性動脈硬化に対するＰ５Ｐ及びフィブリン酸誘導体併用療法の効果
目的
アテローム性動脈硬化の動物モデルにおけるＰ５Ｐの抗−動脈硬化効果を検討し、増強された或いは相乗的な抗−動脈硬化効果に対するフィブリン酸誘導体とのＰ５Ｐの併用を検討すること。
【０１０７】
研究は、アポリポタンパク質Ｅ−ノックアウト（ａｐｏＥ−ＫＯ）マウスにおける、フェノフィブラート及び両方の組み合わせと比較した、Ｐ５Ｐの潜在的な抗−動脈硬化効果を検討するために設計した。本研究は、アテローム性動脈硬化性損傷形成、血漿リポタンパク質、リポタンパク質酸化、ホモシステインレベル、及び炎症に対するマーカーに対する両方の薬剤、単独及び併用での効果を比較した。
【０１０８】
薬剤
薬剤フェノフィブラートはＳｉｇｍａから入手可能である。本研究のために選択したフェノフィブラートの用量は、高脂血症マウスでの以前の研究（Ｄｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ，Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２  Ｄｅｃ  １３；２７７（５０）：４８０５１−７）で使用された用量に基づいていた。前記薬剤は、１日当たり１００ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でマウスの食事に混合した。Ｐ５ＰはＣａｎＡｍ  Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．によって提供される。１日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重の用量をマウスの食事に混合した。
【０１０９】
実験設計
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンド（ｎ＝６０）のオスａｐｏＥ−／−マウスはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）から購入した。マウスには研究の間中、食事と水を不断給餌で与えた。６週齢で、前記動物を血漿脂質濃度及び体重をそろえて、各１５匹ずつ４つの群に分けた。１５匹マウスの４群には、９％（ｗｔ／ｗｔ）脂肪を含むＰｉｃｏＬａｂマウス食（Ｊａｍｉｅｓｏｎ’ｓ  Ｐｅｔ  Ｆｏｏｄ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ）（対照）、或いは１００ｍｇ／ｋｇフェノフィブラート（フィブラート群）、１ｍｇ／ｋｇ  Ｐ５Ｐ（Ｐ５Ｐ群）、或いは１００ｍｇ／ｋｇフェノフィブラート＋１ｍｇ／ｋｇ  Ｐ５Ｐ（フィブラート／Ｐ５Ｐ群）を添加した同じ食事を与えた。前記動物は２８週間食事療法に供し、週２回体重測定した。全ての動物実験は、動物保護組織委員会によって許可されている。
【０１１０】
脂質及びリポタンパク質解析、及びフィブリノーゲン、血清アミロイドＡ、及びフォン・ヴィレブランド因子の測定
４時間断食期間の後、血液サンプルを尾部切開によって得た。総血漿コレステロール、トリグリセリドレベル、及びリポタンパク質プロファイルは、他（Ｖｏｌｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｉｅｔａｒｙ  ｐｌａｎｔ  ｓｔａｎｏｌ  ｅｓｔｅｒｓ  ｒｅｄｕｃｅ  ＶＬＤＬ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｉｌｅ  ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｅ＊３−ｌｅｉｄｅｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  ２００１；２１：１０４６−１０５２）で記載したように、ｔ＝０、３、６、１１、１９、２４及び２８週で測定した。血漿フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、及びフィブリノーゲンは、ｖＷＦ特異的（Ｔｒａｎｑｕｉｌｌｅ  ａｎｄ  Ｅｍｅｉｓ，Ｔｈｅ  ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ａｎｄ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｒａｔ  ｈｉｎｄｌｅｇ  ｒｅｇｉｏｎ．Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  １９９０；６３：４５４−４５８）、ＳＡＡ特異的（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）、及びフィブリノーゲン特異的（Ｋｏｃｋｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｉｂｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔｓ  ｖｉａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−［ａｌｐｈａ］．Ｂｌｏｏｄ  １９９９；９３：２９９１−２９９）なＥＬＩＳＡで測定した。
【０１１１】
血漿酸化ＬＤＬ濃度
９６ウェルポリスチレンプレート（Ｎｕｎｃ）は、４℃で一晩、酸化ＬＤＬ（ＰＢＳにおいて１０μｇ／ｍＬの濃度）或いは野生型ＬＤＬ（両方ともヒトから）でコーティングした。次の過程は以前に記載したもの（１０）と同様に実行した。ＩｇＧアイソタイプはＥＬＩＳＡキット（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で決定した。
【０１１２】
血漿ホモシステイン濃度
非空腹時の血液サンプルを得て、血漿ホモシステインをガスクロマトグラフィー−質量分析を用いて定量化した（Ｍｏｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ：ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｓａｍｐｌｅｓ  ｗｉｔｈ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  １９９５；４１：７５８−７５９）。
【０１１３】
アテローム性動脈硬化の組織学的評価
食事摂取の２８週間後、マウスを麻酔後に屠殺し、他のところで記載されたように血液収集した（Ｄｅｌｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ａｃｙｌ−ｃｏａ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ａｖａｓｉｍｉｂｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｔｏ  ｉｔｓ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  ａｐｏｅ＊３−ｌｅｉｄｅｎ  ｍｉｃｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１；１０３：１７７８−１７８６）。心臓を解剖し、リン酸緩衝液３．８％ホルマリン固定化液に一晩貯蔵し、パラフィンで埋封した。全大動脈弁全体の一連の横断面（５μｍ厚さ、３０μｍずつ離して並べた）を組織学的解析に使用した。切片はヘマトキシリン−Ｐｈｌｏｘｉｎｅ−サフランで日常的に染色した。１マウス当たり、３０μｍの間隔での４切片をアテローム性動脈硬化損傷の定量化及び能力（適性）判断のために使用した。全ての切片は画像化し、同一の照明、顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ）、カメラ（Ｈｉｔａｃｈｉ）、及びコンピュータ条件の下で貯蔵した。総損傷領域はＬｅｉｃａ  Ｑｗｉｎイメージ解析ソフトウェアを用いて決定した。実験群分配が見えない同じ操作者が全ての解析を実行した。アテローム性動脈硬化損傷における石灰化の程度は、Ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ染色の定量化によって決定し；コラーゲン内容物はシリウスレッドで染色した後、形態計測学的に定量化した。アテローム性動脈硬化の重症度を決定するために、以前、前記損傷を記載した（Ｄｅｌｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ，２００１）時と同様に５つのカテゴリーに分類した：［１］初期脂肪線条、［２］定型的脂肪線条、［３］穏和プラーク、［４］中程度プラーク、及び［５］重症プラーク。１マウス当たり、各損傷カテゴリーにおいて見出された全損傷のパーセンテージを計算した。
【０１１４】
統計学的解析
結果は、Ｔｕｋｅｙテストの使用後の１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡによって解析し、特異的グループ間差異の有意性を評価した。
【実施例５】
【０１１５】
マウスにおけるアテローム性動脈硬化に対するＰ５Ｐ及びナイアシン併用療法の影響
目的
アテローム性動脈硬化の動物モデルにおけるＰ５Ｐの抗−アテローム生成効果を検討し、増強された或いは相乗的な抗−動脈硬化効果に対するナイアシンとのＰ５Ｐの併用を検討すること。
【０１１６】
前記研究は、アポリポタンパク質Ｅ−ｋｎｏｃｋｏｕｔ（ａｐｏＥ−ＫＯ）マウスにおける、ナイアシン及び両方の薬剤の組み合わせと比較した、Ｐ５Ｐの潜在的な抗−アテローム生成効果を検討するために設計した。前記研究は、アテローム性動脈硬化性損傷形成、血漿リポタンパク質、リポタンパク質酸化、ホモシステインレベル、及び炎症に対するマーカーに対する両方の薬剤、単独及び併用での効果を比較した。
【０１１７】
薬剤
前記薬剤ナイアシンはＳｉｇｍａから利用可能である。本研究のために選択したナイアシンの用量は、高脂血症マウスでの以前の研究（６）で使用された用量を基にした。これは１％の濃度でマウスの食事に混合した。Ｐ５ＰはＣａｎＡｍ  Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．から提供された。１日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重の用量もマウスの食事へ混合した。
【０１１８】
実験設計
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンド（ｎ＝６０）のオスａｐｏＥ−／−マウスはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）から購入した。マウスには研究の間中、食事と水を不断給餌で与えた。６週齢で、前記動物を血漿脂質濃度及び体重をそろえて、各１５匹ずつ４つの群に分けた。１５匹マウスの４群には、９％（ｗｔ／ｗｔ）脂肪を含むＰｉｃｏＬａｂマウス食（Ｊａｍｉｅｓｏｎ’ｓ  Ｐｅｔ  Ｆｏｏｄ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ）（対照）、或いは１％ナイアシン（ナイアシン群）、１ｍｇ／ｋｇ  Ｐ５Ｐ（Ｐ５Ｐ群）、或いは１％ナイアシン＋１ｍｇ／ｋｇ  Ｐ５Ｐ（ナイアシン／Ｐ５Ｐ群）を添加した同じ食事を与えた。前記動物は２８週間食事療法に供し、週２回体重測定した。全ての動物実験は、動物保護組織委員会によって許可されている。
【０１１９】
４時間断食期間の後、血液サンプルを尾部切開によって得た。総血漿コレステロール、トリグリセリドレベル、及びリポタンパク質プロファイルは、他（Ｖｏｌｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｉｅｔａｒｙ  ｐｌａｎｔ  ｓｔａｎｏｌ  ｅｓｔｅｒｓ  ｒｅｄｕｃｅ  ＶＬＤＬ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｉｌｅ  ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｅ＊３−ｌｅｉｄｅｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  ２００１；２１：１０４６−１０５２）で記載したように、ｔ＝０、３、６、１１、１９、２４及び２８週で測定した。血漿フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、及びフィブリノーゲンは、ｖＷＦ特異的（Ｔｒａｎｑｕｉｌｌｅ  ａｎｄ  Ｅｍｅｉｓ，Ｔｈｅ  ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ａｎｄ  ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｒａｔ  ｈｉｎｄｌｅｇ  ｒｅｇｉｏｎ．Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  １９９０；６３：４５４−４５８）、ＳＡＡ特異的（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）、及びフィブリノーゲン特異的（Ｋｏｃｋｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｆｉｂｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒｏｄｅｎｔｓ  ｖｉａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−［ａｌｐｈａ］．Ｂｌｏｏｄ  １９９９；９３：２９９１−２９９）なＥＬＩＳＡで測定した。
【０１２０】
血漿酸化ＬＤＬ濃度
９６ウェルポリスチレンプレート（Ｎｕｎｃ）は、４℃で一晩、酸化ＬＤＬ（ＰＢＳにおいて１０μｇ／ｍＬの濃度）或いは野生型ＬＤＬ（両方ともヒトから）でコーティングした。次の過程は以前に記載したもの（１０）と同様に実行した。ＩｇＧアイソタイプはＥＬＩＳＡキット（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で決定した。
【０１２１】
血漿ホモシステイン濃度
非空腹時の血液サンプルを得て、血漿ホモシステインをガスクロマトグラフィー−質量分析を用いて定量化した（Ｍｏｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，Ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ：ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｓａｍｐｌｅｓ  ｗｉｔｈ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  １９９５；４１：７５８−７５９）。
【０１２２】
アテローム性動脈硬化の組織学的評価
食事摂取の２８週間後、マウスを麻酔後に屠殺し、他のところで記載されたように血液収集した（Ｄｅｌｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ａｃｙｌ−ｃｏａ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ａｖａｓｉｍｉｂｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｔｏ  ｉｔｓ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  ａｐｏｅ＊３−ｌｅｉｄｅｎ  ｍｉｃｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１；１０３：１７７８−１７８６）。心臓を解剖し、リン酸緩衝液３．８％ホルマリン固定化液に一晩貯蔵し、パラフィンで埋封した。全大動脈弁全体の一連の横断面（５μｍ厚さ、３０μｍずつ離して並べた）を組織学的解析に使用した。切片はヘマトキシリン−Ｐｈｌｏｘｉｎｅ−サフランで日常的に染色した。１マウス当たり、３０μｍの間隔での４切片をアテローム性動脈硬化損傷の定量化及び能力（適性）判断のために使用した。全ての切片は画像化し、同一の照明、顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ）、カメラ（Ｈｉｔａｃｈｉ）、及びコンピュータ条件の下で貯蔵した。総損傷領域はＬｅｉｃａ  Ｑｗｉｎイメージ解析ソフトウェアを用いて決定した。実験群分配が見えない同じ操作者が全ての解析を実行した。アテローム性動脈硬化損傷における石灰化の程度は、Ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ染色の定量化によって決定し；コラーゲン内容物はシリウスレッドで染色した後、形態計測学的に定量化した。アテローム性動脈硬化の重症度を決定するために、以前、前記損傷を記載した（Ｄｅｌｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ，２００１）時と同様な５つのカテゴリーに分類した：［１］初期脂肪線条、［２］定型的脂肪線条、［３］穏和プラーク、［４］中程度プラーク、及び［５］重症プラーク。１マウス当たり、各損傷カテゴリーにおいて見出された全損傷のパーセンテージを計算した。
【０１２３】
統計学的解析
結果は、Ｔｕｋｅｙテストの使用後の１−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡによって解析し、特異的グループ間差異の有意性を評価した。
【図面の簡単な説明】
【０１２４】
【図１】図１は、ＣＹＰ阻害アッセイにおいて測定された様々な代謝産物の蛍光に対するピリドキサール−５’−リン酸の影響を示したものである。図１（ａ）〜１（ｆ）は、ピリドキサール−５’−リン酸濃度の機能として、ＣＹＰ阻害アッセイにおいて測定された代謝産物（ＣＨＣ、７−ＨＣ、ＨＦＣ、フルオレッセイン、ＡＨＭＣ、及びキノリノール）の蛍光における減少を図示したものである。
【図２】図２（ａ）及び２（ｂ）は、それぞれＦｕｒａｆｙｌｌｉｎｅ（フラフィリン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ１Ａ２（ＣＥＣからＣＨＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図３】図３（ａ）及び３（ｂ）は、それぞれＴｒａｎｙｌｃｙｐｒｏｍｉｎｅ（トラニルシプロミン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ１Ａ２（クマリンから７−ＣＨの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図４】図４（ａ）及び４（ｂ）は、それぞれＴｒａｎｙｌｃｙｐｒｏｍｉｎｅ（トラニルシプロミン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ａ６（ＥＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図５】図５（ａ）及び５（ｂ）は、それぞれケルセチン及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｃ８（ＤＢＦからフルオレッセインの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図６】図６（ａ）及び６（ｂ）は、それぞれＳｕｌｆａｐｈｅｎａｚｏｌｅ（スルファフェノゾール）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｃ９（ＭＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図７】図７（ａ）及び７（ｂ）は、それぞれＴｒａｎｙｌｃｙｐｒｏｍｉｎｅ（トラニルシプロミン）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｃ１９（ＣＥＣからＣＨＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図８】図８（ａ）及び８（ｂ）は、それぞれキニジン及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｄ６（ＡＭＭＣからＡＨＭＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図９】図９（ａ）及び９（ｂ）は、それぞれジエチルジチオカルバミン酸（ＤＤＴＣ）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ２Ｅ１（ＭＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図１０】図１０（ａ）及び１０（ｂ）は、それぞれＫｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ（ケトコナゾール）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ３Ａ４（ＢＦＣからＨＦＣの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図１１】図１１（ａ）及び１１（ｂ）は、それぞれＫｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ（ケトコナゾール）及びＰ５Ｐ濃度の機能として、ＣＹＰ３Ａ４（ＢＱからキノリノールの代謝）の触媒活性の阻害を図示したものである。
【図１２】図１２は、各ＣＹＰサブタイプの既知の阻害剤に対して、及びピリドキサール−５’−リン酸に対して推定されたＩＣ５０値をまとめたものである。
【図１３】図１３は、Ｐ５Ｐ（Ａ）及びプラセボ（Ｂ）で治療された患者に対する、対数−正規分布に適合された濃度曲線下面積ＣＫ−ＭＢ値を図示したものである。
【図１４】図１４（表１）は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療された患者における基準臨床的、心電計、及び血管造影特徴をまとめたものである。
【図１５】図１５（表２）は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療した患者に対する手続き及び血管造影結果をまとめたものである。
【図１６】図１６（表３）は、Ｐ５Ｐ或いはプラセボで治療した患者に対する、周術期心臓マーカー及びＳＴモニター結果をまとめたものである。
【図１】
2008505127.tif 000017
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
2008505127.tif 000029
【図１４】
2008505127.tif 000030
【図１５】
2008505127.tif 000031
【図１６】
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【国際調査報告】
2008505127.tif 000033
2008505127.tif 000034
2008505127.tif 000035
2008505127.tif 000036
2008505127.tif 000037