(57)【要約】  式(Ｉ)（式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、明細書に定義された通りである）の新規な5−置換された7−アミノ[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン誘導体及びその医薬上許容しうる塩と共にその製造方法、それを含んでなる医薬組成物並びに治療におけるその使用が開示されている。式(Ｉ)の化合物はCX3CR1受容体アンタゴニストであり、そのため神経変性障害、脱髄疾患、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患、関節リウマチ、肺疾患例えばCOPD、喘息、又は疼痛を治療又は予防に得に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2008535835.tif 000013
（式中、R1はCH3又はCH3CH2を表し；
R2はＨ、2−F、2−Cl、3−F、3−OCH3、3−CN、3−CF3、3−CONH2又は3−SO2CH3を表し；
R3はＨ又はCH3を表し；
R4はＨ又はCH3を表し；そしてR5はＨを表す；又はR4がCH3である場合、R5はＨ又はＦを表す)
の化合物及びその医薬上許容しうる塩。
【請求項２】
R3はＨを表す、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
R1はCH3を表す、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
R2はＨ、2−F又は3−CNを表す、請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
R4はＨを表す、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
R4はCH3を表す、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
R5はＦを表す、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
R5はＨを表す、請求項６記載の化合物。
【請求項９】
R1はCH3を表し；R2はＨ、2−F又は3−CNを表し；R3はＨを表し；R4はＨ又はCH3を表し；そしてR5はＨを表す、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1R)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)ブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル；
(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛(1S)−1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール；
3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル；
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルプロピル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール；
3−｛1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンズアミド；
(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛1−[3−(トリフルオロメチル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝(メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(2−クロロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(3−メトキシフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(3−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
である請求項１記載の式(Ｉ）の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項１１】
医薬として使用するための請求項１〜１０のいずれか１項記載の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項１２】
医薬上許容しうる添加剤又は担体と混合して、請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ）の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項１３】
CX3CR1受容体の拮抗作用が有益であるヒトの疾患又は身体状態にかかっている又はかかりやすい人に治療上有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を投与することを含む該疾患又は身体状態を治療する又はその危険性を軽減する方法。
【請求項１４】
神経変性障害、脱髄疾患、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患、関節リウマチ、肺疾患例えばCOPD、喘息、又は疼痛にかかっている又はかかりやすい人に治療上有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を投与することを含む、該疾患又は身体状態を治療する又はその危険性を軽減する方法。
【請求項１５】
多発性硬化症にかかっている又はかかりやすい人に治療上有効量の請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を投与することを含む、このような疾患又は身体状態を治療する又はその危険性を軽減する方法。
【請求項１６】
プラークの組成を変えてプラーク破裂及びアテローム血栓症イベントの危険性を軽減することによるアテローム性動脈硬化症の治療又は予防方法。
【請求項１７】
新しいアテローム硬化性の病変若しくはプラークの形成を予防する及び／若しくは軽減することによる、並びに／又は既存の病変及びプラークの進行を予防する若しくは遅らせることによるアテローム性動脈硬化症の治療又は予防方法。
【請求項１８】
CX3CR1受容体の拮抗作用が有益であるヒトの疾患又は身体状態を治療又は予防するための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用。
【請求項１９】
神経変性障害、脱髄疾患、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患、関節リウマチ、肺疾患例えばCOPD、喘息、又は疼痛を治療又は予防するための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用。
【請求項２０】
多発性硬化症を治療又は予防するための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用。
【請求項２１】
プラークの組成を変えてプラーク破裂及びアテローム血栓症のイベントの危険性を軽減することによってアテローム性動脈硬化症を治療又は予防するための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用。
【請求項２２】
新しいアテローム硬化性の病変若しくはプラークの形成を予防する及び／若しくは軽減することによって、並びに／又は既存の病変及びプラークの進行を予防する若しくは遅らせることによって、アテローム性動脈硬化症を治療又は予防するための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項に定義された式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用。
【請求項２３】
ａ) 式(II)：
【化２】
2008535835.tif 000014
(式中、R3、R4及びR5は式(Ｉ）に定義された通りである）の化合物を式(III)：
【化３】
2008535835.tif 000015
(式中、R1及びR2は式(Ｉ)に定義された通りであり、そしてL1は脱離基を表す）の化合物と反応させるか；又は
ｂ) 式(IV)：
【化４】
2008535835.tif 000016
(式中、R1及びR2は式(Ｉ)に定義された通りであり、そしてL2は脱離基を表す）の化合物を式(Ｖ)：
【化５】
2008535835.tif 000017
（式中、R3、R4及びR5は、式（Ｉ）に定義された通りである）の化合物と反応させ、そして必要に応じて、生成した式（Ｉ）の化合物又はその別の塩を、その医薬上許容しうる塩に変換するか；又は生成した式（Ｉ）の化合物をさらなる式（Ｉ）の化合物に変換し；そして所望により生成した式（Ｉ）の化合物をその光学異性体に変換することを含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載に定義された式（Ｉ）の化合物又はその医薬上許容しうる塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な5−置換された7−アミノ[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン誘導体並びにその製造方法、それを含んでなる医薬組成物及び治療におけるそれらの使用を開示する。
【背景技術】
【０００２】
ケモカインは、喘息、アテローム性動脈硬化症及びアレルギー疾患、並びに自己免疫病理、例えば関節リウマチ及び多発性硬化症を含む種々の疾患及び障害の免疫応答及び炎症性反応において重要な役割を果す。これらの小さな分泌された分子は、保存されたシステインモチーフを特徴とする８−14kDaタンパク質の増大するスーパーファミリーである。今のところ、ケモカインスーパーファミリーは、特性構造モチーフを示す４つの群、C−X−C、C−C及びC−X3−C及びXCファミリーからなる。C−X−C及びC−Cファミリーは配列の類似性を有し、そしてNHに隣接するシステイン残基のペア間への一つのアミノ酸の挿入を基準として互いに区別される。C−X3−Cファミリーは、NHに隣接するシステイン残基のペア間に三つのアミノ酸の挿入があることを基準にして他の２つのファミリーと区別される。対照的に、XCファミリーの構成メンバーは、最初の２つのシステイン残基の１つが欠如している。
【０００３】
C−X−Cケモカインは、いくつかの強力な誘引物質及び好中球の活性化剤、例えばインターロイキン−８(IL−8)及び好中球活性化ペプチド２(NAP−2)を含む。
【０００４】
C−Cケモカインは、単球、リンパ球及び好中球の強力な誘引物質を含む。例としては、ヒト単球走化性タンパク質１−３(MCP−1、MCP−2及びMCP−3)、RANTES (Regulated on Activation, Normal T−cell−Expressed and Secreted)、エオタキシン及びマクロファージ炎症性タンパク1α及び1β(MIP−1α及びMIP−1β)が含まれる。
【０００５】
C−X3−Cケモカイン(フラクタルカインとしても知られている)は、単球、Ｔ細胞、NK細胞及びマスト細胞ばかりでなく中枢神経系(CNS)のミクログリアの強力な誘引物質及び活性化剤である。
【０００６】
研究から、ケモカインの作用にはＧタンパク質共役受容体のサブファミリー、その中でもCCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10及びCCR11(C−Cファミリーの)；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4及びCXCR5(C−X−Cファミリーの)並びにCX3CR1(C−X3−Cファミリーの)と呼ばれる受容体が介在していることが証明されている。これらの受容体を調節する作用物質は、例えば上に記載した障害及び疾患の治療に有用となるため、これらの受容体は薬物開発の良好な標的である。
【０００７】
WO 00/09511は、C−X−C及びC−Cケモカインファミリーに関連のある受容体のアンタゴニストとして、特にCXCR2受容体のアンタゴニストとして有用なある種の2−置換された4−アミノ−チアゾロピリミジン誘導体を記載している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、部分的にWO 00/09511の包括的な範囲内にあるが、具体的な実施例としてその中に示されてない構造タイプの一群の化合物に関する。WO 00/09511に開示された実施例と比較して、本発明の化合物は、CX3CR1受容体のアンタゴニストとして驚くほど有用な性質を示す。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、式(Ｉ)
【化１】
2008535835.tif 000002
（式中：
R1はCH3又はCH3CH2を表し；
R2はＨ、2−F、2−Cl、3−F、3−OCH3、3−CN、3−CF3、3−CONH2又は3−SO2CH3を表し；
R3はＨ又はCH3を表し；
R4はＨ又はCH3を表し；そして
R5はＨを表すか；又はR4がCH3である場合、R5はＨ又はＦを表す)
の化合物及びその医薬上許容しうる塩を提供する。
【００１０】
式(Ｉ)の化合物は、立体異性体及び／又は互変異性体の形態で存在することができる。全ての鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、互変異性体及びそれらの混合物が本発明の範囲内に含まれることはもちろんである。
【００１１】
一実施態様において、R1はCH3を表す。別の実施態様において、R1はCH3CH2を表す。
一実施態様において、R2はＨ、2−F、3−F、2−Cl、3−OCH3、3−CN又は3−CF3表す。別の実施態様において、R2はＨ、2−F又は3−CNを表す。別の実施態様において、R2はＨを表す。別の実施態様において、R2は2−Fを表す。別の実施態様において、R2は3−CNを表す。
【００１２】
一実施態様において、R3はＨを表す。
一実施態様において、R4はCH3を表す。別の実施態様において、R4はＨを表す。
一実施態様において、R5はＨを表す。
一実施態様において、R4はCH3を表し、そしてR5はＦを表す。
一実施態様において、R4はCH3を表し、そしてR5はＨを表す。
一実施態様において、R1はCH3を表し；R2は、Ｈ、2−F、3−F、2−Cl、3−OCH3、3−CN又は3−CF3を表し；R3はＨを表し；R4はＨ又はCH3を表し；そしてR5はＨを表す。
【００１３】
別の実施態様において、R1はCH3を表し；R2はＨ、2−F又は3−CNを表し；R3はＨを表し；R4はＨ又はCH3を表し；そしてR5はＨを表す。
別の実施態様において、R1はCH3を表し；R2はＨ、2−F又は3−CNを表し；R3はＨを表し；R4はＨを表し；そしてR5はＨを表す。
別の実施態様において、R1はCH3を表し；R2はＨ、2F又は3−CNを表し；R3はＨを表し；R4はCH3を表し；そしてR5はＨ又はＦを表す。
別の実施態様において、R1はCH3を表し；R2はＨを表し；R3はＨを表し；R4はCH3を表し；そしてR5はＨを表す。
【００１４】
式(Ｉ)の格別な化合物としては、
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1R)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)ブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル；
(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛(1S)−1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール；
3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル；
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルプロピル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール；
3−｛1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンズアミド；
(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛1−[3−(トリフルオロメチル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝(メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(2−クロロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(3−メトキシフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(3−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール；
及びそれらの医薬上許容しうる塩が含まれる。
【００１５】
WO 00/09511に記載された化合物と比較した場合、本発明の化合物は、チアゾロピリミジン環系の5−位における分枝チオベンジル基の存在を特徴とする。すなわち、本発明の化合物では水素でないR1基が組み込まれている。
【００１６】
本発明によれば、本発明者らは、さらに
ａ) 式(II)：
【化２】
2008535835.tif 000003
（式中、R3、R4及びR5は式(Ｉ)に定義された通りである）の化合物を式(III)：
【化３】
2008535835.tif 000004
（式中、R1及びR2は式(Ｉ)に定義された通りであり、そしてL1は脱離基を表す）の化合物と反応させるか；又は
ｂ) 式(IV)
【化４】
2008535835.tif 000005
(式中、R1及びR2は式(Ｉ)に定義された通りであり、そしてL2は脱離基を表す）の化合物を式(Ｖ)
【化５】
2008535835.tif 000006
(式中、R3、R4及びR5は、式(Ｉ)に定義された通りである）の化合物と反応させ、そして必要に応じて、生成した式(Ｉ)の化合物又は該化合物の別の塩をその医薬上許容しうる塩に変換するか；又は生成した式(Ｉ)の化合物をさらなる式(Ｉ)の化合物に変換し；そして所望により生成した式(Ｉ)の化合物をその光学異性体に変換することからなる、式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の製造方法を提供する。
【００１７】
方法(ａ)では、反応体(II)及び(III)を適切な有機溶媒、例えばジメチルスルホキシド(DMSO)、アセトニトリル又は1−メチル−2−ピロリドン(NMP)中で一緒にカップリングさせる。反応は、場合により、添加された有機又は無機塩基、例えばトリエチルアミン、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)又は水素化ナトリウムの存在下で行なわれる。反応は、場合により、温和な還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウムの存在下で行なわれる。反応は、適切な温度、通常、室温と溶媒の沸点との間で実施される。反応は、一般に１時間から１週間までの期間、又は分析により必要な生成物の形成が完了したことがわかるまで継続される。
【００１８】
方法(ｂ)では、適切な有機溶媒、例えばテトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド又は1−メチル−2−ピロリドン中で反応体(IV)と(Ｖ)とを一緒にカップリングさせる。反応は、場合により、添加した塩基の存在下で行なわれる。この塩基は、有機塩基、例えばトリエチルアミン又はN,N−ジイソプロピルエチルアミン、又は無機塩基、例えば炭酸カリウムであることができる。反応は、適切な温度、通常、室温と溶媒の沸点との間で実施されるが、密閉反応器を用いる場合、場合により高い温度で実施される。反応は、一般に１時間から１週間の期間、又は分析により必要な生成物の形成が完了したことがわかるまで継続させる。
【００１９】
適切な脱離基L1及びL2は、ハロゲン、特にクロロ又はブロモである。一実施態様において、L1及びL2はそれぞれクロロを表す。
【００２０】
上記方法においてアミン、ヒドロキシル又は他の潜在的に反応性の基を保護することが望ましい又は必要でありうることは当業者に明らかである。適切な保護基及びこのような基を付加し及び除去する方法の詳細は、一般に当技術分野でよく知られている。Greene 及び Wutsによる“Protective Groups in Organic Synthesis”、第3版(1999)参照。
【００２１】
本発明は、塩形態の式(Ｉ)の化合物を含む。適切な塩としては、有機若しくは無機の酸又は有機若しくは無機の塩基を用いて形成されたものが含まれる。このような塩は、通常、医薬上許容されるが、医薬上許容されない酸又は塩基の塩は本化合物の製造及び精製に有用なものでありうる。
【００２２】
式(Ｉ)の化合物の塩は、遊離化合物又はその塩、その鏡像異性体又はラセミ体を１当量又はそれ以上の当量の適切な酸又は塩基と反応させることよって形成させることができる。反応は、塩が不溶性である溶媒若しくは媒体中で又は塩が可溶性である溶媒、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル、又は混合溶媒中で実施することができ、それは真空で又は凍結乾燥によって除去することができる。また、反応は複分解法であってもよく、又はイオン交換樹脂上で実施することができる。
【００２３】
式(II)の化合物は、WO 00/09511から知られているか又は当業者に容易に明らかな公知の方法を用いて製造することができる。
【００２４】
式(IV)の化合物は、WO 00/09511に開示されたものと類似の方法を用いて、又は当業者に容易に明らかな他の知られている方法を用いて製造することができる。
【００２５】
式(III)及び(Ｖ)の化合物は、商業的に入手可能であるか、又は文献において知られているか、又は当業者に容易に明らかな公知の方法を用いて製造することができる。
【００２６】
式(II)、(III)、(IV)及び(Ｖ)の化合物を製造するための適切な特定の方法は、本明細書の実施例のセクションに詳述されており、このような方法は、本発明の方法の具体的な実施態様を表す。
【００２７】
例えば、式(II)の化合物、そしてそれから式(Ｉ)の化合物は、スキーム１に示したように製造することができる：
【化６】
2008535835.tif 000007
【００２８】
中間体化合物は、このような形態又は保護された形態で用いることができる。適切な保護基及びこのような基を付加及び除去する方法の詳細は、一般に当技術分野でよく知られている。Greene及びWutsによる“Protective Groups in Organic Synthesis”、第3版(1999)参照。
【００２９】
本発明の化合物及びそれへの中間体は、その反応混合物から単離することができ、そして必要に応じて標準技術を用いてさらに精製することができる。
【００３０】
式(Ｉ)の化合物は、立体異性体の形態で存在することができる。従って、全ての鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体及びそれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。種々の光学異性体は、従来の技術、例えば分別結晶又はHPLCを用いて化合物の立体異性体の混合物を分離することによって単離することができる。別法として、種々の光学異性体は、光学活性な出発物質を用いて、直接製造することができる。
【００３１】
式(Ｉ)の化合物は、２個の立体中心を含み、従って式(Ia)〜(Id)に示したような４つの別々の立体異性体形態で存在することができる。
【化７】
2008535835.tif 000008
【００３２】
全てのこのような４つの立体異性体及びそれらのすべての混合物は、本発明の範囲内に含まれる。一実施態様において、式(Ｉ)の化合物は、式(Ia)に示したような立体化学を有する。別の実施態様において、式(Ｉ)の化合物は、式(Ib)に示したような立体化学を有する。
【００３３】
また、中間体化合物は、立体異性体の形態で存在することができ、そして精製された鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体又は混合物として用いることができる。
【００３４】
式(Ｉ)の化合物及びその医薬上許容しうる塩は、それらがCX3CR1受容体のアンタゴニストとして薬理活性を有するため有用である。特に、WO 00/09511に具体的な実施例として示された化合物と比較した場合、本発明の式(Ｉ)の化合物は、CX3CR1受容体の阻害について有意に改善された効力及び／又はCXCR2受容体の阻害について減少した効力を有する。本発明の好ましい化合物は、CX3CR1の阻害について高められた効力及びCXCR2の阻害について減少した効力の両方を示す。
【００３５】
一側面において、本発明は、医薬として使用するための式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を提供する。
【００３６】
別の側面において、本発明は、CX3CR1受容体の拮抗作用が有益である疾患又は身体状態を治療又は予防するための医薬の製造における式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用を提供する。
【００３７】
別の側面において、本発明は、神経変性障害、脱髄疾患、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患、関節リウマチ、肺疾患、例えばCOPD、喘息、又は疼痛を治療又は予防するための医薬の製造における式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用を提供する。
【００３８】
別の側面において、本発明は、多発性硬化症(MS)を治療又は予防するための医薬の製造における式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用を提供する。
【００３９】
別の側面において、本発明は、新しいアテローム硬化性の病変若しくはプラークの形成を予防及び／若しくは軽減することによって、並びに及び／又は既存の病変及びプラークの進行を予防若しくは遅らせることによって、アテローム性動脈硬化症を治療又は予防するための医薬の製造における式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用を提供する。
【００４０】
別の側面において、本発明は、プラークの組成を変えてプラーク破裂及びアテローム血栓症イベントの危険性を軽減することによってアテローム性動脈硬化症を治療又は予防するための医薬の製造における式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用を提供する。
【００４１】
また、本発明によれば、CX3CR1受容体の拮抗作用が有益である疾患又は身体状態にかかっている又はその危険性のある人に、式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩の治療上有効量を投与することを含む、前記疾患若しくは身体状態を治療する又はその危険性を軽減する方法が提供される。
【００４２】
また、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を人に投与することを含む、神経変性障害、脱髄疾患、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患、関節リウマチ、肺疾患例えばCOPD、喘息、又は疼痛にかかっている又はその危険性のある人において前記疾患若しくは身体状態を治療する又は危険性を軽減する方法が提供される。
【００４３】
また、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を人に投与することを含む、多発性硬化症(MS)にかかっている又はその危険性のある人において、前記疾患若しくは身体状態を治療する又は危険性を軽減する方法が提供される。
【００４４】
また、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を人に投与することを含む、アテローム性動脈硬化症にかかっている又はその危険性のある人において、新しいアテローム硬化性の病変若しくはプラークの形成を予防及び／若しくは軽減することによって、並びに／又は既存の病変及びプラークの進行を予防若しくは遅らせることによって、前記疾患若しくは身体状態を治療する又は危険性を軽減する方法が提供される。
【００４５】
また、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を人に投与することを含む、アテローム性動脈硬化症にかかっている又はその危険性のある人においてプラーク破裂及びアテローム血栓症イベントの危険性が軽減されるようにプラークの組成を変えることによって前記疾患若しくは身体状態を治療する又は危険性を軽減する方法が提供される。
【００４６】
別の側面において、本発明は、CX3CR1受容体の拮抗作用が有益である疾患又は身体状態の治療又は予防に使用するため、医薬上許容しうる補助剤、添加剤又は担体と混合して、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４７】
別の側面において、本発明は、神経変性障害、脱髄疾患、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患、関節リウマチ、COPD、喘息又は疼痛の治療又は予防に使用するため、医薬上許容しうる補助剤、添加剤又は担体と混合して、治療上有効量の式(Ｉ)
の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４８】
別の側面において、本発明は、多発性硬化症の治療又は予防に使用するため、医薬上許容しうる補助剤、添加剤又は担体と混合して、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００４９】
別の側面において、本発明は、新しいアテローム硬化性の病変及び／若しくはプラークの形成を予防する及び軽減することによって、並びに／又は既存の病変及びプラークの進行を予防する若しくは遅らせることによって、アテローム性動脈硬化症の治療又は予防に使用するため、医薬上許容しうる補助剤、添加剤又は担体と混合して、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００５０】
別の側面において、本発明は、プラーク破裂及びアテローム血栓症イベントの危険性が軽減されるようにプラークの組成を変えることによってアテローム性動脈硬化症の治療又は予防に使用するため、医薬上許容しうる補助剤、添加剤又は担体と混合して、治療上有効量の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩をに含んでなる医薬組成物を提供する。
【００５１】
式(Ｉ)の化合物及びその医薬上許容しうる塩は、CX3CR1受容体の活性の調節が望ましい疾患又は身体状態の治療又は予防における使用が適応となる。特に、化合物は、ヒトを含む哺乳動物における神経変性障害又は脱髄疾患の治療における使用が適応となる。とりわけ、化合物は、多発性硬化症の治療における使用が適応となる。また、化合物は、疼痛、関節リウマチ、骨関節炎、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症、末梢動脈疾患及び肺動脈高血圧の治療に有用であることが示される。
【００５２】
特に挙げることができる身体状態は、神経変性疾患及び痴呆障害、例えばアルツハイマー病、筋萎縮側索硬化症及び他の運動ニューロン疾患、クロイツフェルトヤコブ病及び他のプリオン病、HIV脳症、ハンチントン病、前頭側頭型痴呆、レビー小体痴呆及び血管性痴呆；多発神経障害、例えばギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発根神経障害、多病巣性運動性の神経障害及び神経叢障害；CNS脱髄、例えば急性散在性／出血性脳脊髄炎及び亜急性硬化性汎脳炎；神経筋障害、例えば重症筋無力症及びランバート−イートン症候群；脊椎障害、例えば熱帯性痙性不全対麻痺及びスティックマン症候群；新生物随伴症候群、例えば小脳変性症及び脳脊髄炎；外傷性脳損傷；片頭痛；がん；同種移植拒絶；全身性硬化症；ウィルス感染；寄生虫伝染病（parasite-transmitted disease）を媒介とする疾患、例えばマラリア；歯周疾患；心筋梗塞；発作（stroke）；冠状動脈性心疾患；虚血性心疾患；再狭窄；関節リウマチ；肺疾患、例えばCOPD；喘息又は疼痛である。
【００５３】
また、本発明の化合物は、新しいアテローム硬化性の病変若しくはプラークの形成を予防する及び／若しくは軽減することによる、並びに／又は既存の病変及びプラークの進行を予防する若しくは遅らせることによる、アテローム性動脈硬化症の治療における使用が適応となる。
【００５４】
本発明の化合物はまた、プラーク破裂及びアテローム血栓症イベントの危険性が軽減されるようにプラークの組成を変えることによるアテローム性動脈硬化症の治療における使用が適応となる。
【００５５】
また、本発明の化合物は、炎症性大腸疾患(IBD)の寛解を誘発する及び／又は寛解を維持することによる炎症性大腸疾患(IBD)、例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎の治療における使用が適応となる。
【００５６】
誰でも予期するように、予防は、当該疾患又は身体状態の以前のエピソードを患ったことがある、又はそうでない場合は危険性が高まっていると判断される人の治療に特に有意義である。一般に特定の疾患又は身体状態を発症する危険性のある人としては、疾患若しくは身体状態の家族歴を有する人、又は特に疾患若しくは身体状態を発症しやすいことが遺伝的試験若しくはスクリーニングによって確認されている人が含まれる。
【００５７】
上記の治療適応症に対して、投与する用量は、当然のことながら、使用する化合物、投与方式及び所望の治療により変化する。しかしながら、一般に１mg〜2000mg／日の間の固体形態の投与量で化合物を投与した時に満足な結果が得られる。
【００５８】
式(Ｉ)の化合物及びその医薬上許容しうる誘導体は、それ自体で又は化合物若しくは誘導体が医薬上許容しうる補助剤、賦形剤若しくは担体と混合して存在する適切な医薬組成物の形態で使用することができる。投与は、経腸的(経口、舌下又は直腸を含む)、鼻腔内、静脈内、局所又は他の非経口経路によることができるが、これらに限定されない。適切な医薬製剤を選択し及び製造する従来の方法は、例えば“Pharmaceuticals − The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988に記載されている。医薬組成物は、好ましくは80％未満、そしてより好ましくは50％未満の式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む。
【００５９】
また、成分を混合することを含むこのような医薬組成物の製造方法が提供される。
【００６０】
さらに本発明は、式(Ｉ)の化合物若しくはその医薬上許容しうる塩、又は式(Ｉ)の化合物を含んでなる医薬組成物若しくは製剤が、心血管性−及び脳血管性アテローム硬化症及び末梢動脈疾患のいずれか１つを治療するための療法及び／又は薬剤と同時に又は順次施用・投与される併用療法に関する。
【００６１】
特に、式(Ｉ)の化合物又はその医薬上許容しうる塩は、以下の群の１つ又はそれ以上の化合物と併せて投与することができる：
１) 抗炎症剤、例えば、
a) NSAID(例えばアセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、ジクロフェナク、インドメタシン)；
b) ロイコトリエン合成阻害剤(5−LO阻害剤(例えばAZD4407、ジレウトン(Zileuton)、リコフェロン(licofelone)、CJ13610、CJ13454)；FLAP阻害剤、例えばBAY−Y−1015、DG−031、MK591、MK886、A81834；LTA4ヒドロラーゼ阻害剤、例えばSC56938、SC57461A)；
c) ロイコトリエン受容体アンタゴニスト；(例えばCP195543、アメルバント(amelubant)、LY293111、アコレート、MK571)；
２) 抗高血圧剤、例えば、
a) ベータ遮断薬(例えばメトプロロール、アテノロール、ソタロール)；
b) アンギオテンシン変換酵素阻害剤(例えばカプトプリル、ラミプリル、キナプリル、エナラプリル)；
c) カルシウムチャネル遮断薬(例えばベラパミル、ジルチアゼム、フェロジピン、アムロジピン)；
d) アンギオテンシンII受容体アンタゴニスト(例えばイルベサルタン、カンデサルタン、テルミサルタン(telemisartan)、ロサルタン)；
３) 抗凝固剤(anti−coagulantia)、例えば、
a) トロンビン阻害剤(例えばキシメラガトラン)、ヘパリン、第Xa因子阻害剤)；
b) 血小板凝集阻害薬(例えばクロピドグレル(clopidrogrel)、チクロピジン、プラスゲル、AZ4160)；
４）脂質代謝のモジュレーター、例えば、
a) インスリンセンシタイザー、例えばPPAR作動薬(例えばピオグリタゾン、ロシグリタゾン、ガリダ(Galida)、ムラグリタザール(muraglitazaar)、ゲフェムロジル(gefemrozil)、フェノフィブラート)；
b) HMG−CoAレダクターゼ阻害剤、スタチン(例えばシンバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ピタバスタチン)；
c) コレステロール吸収阻害剤(例えばエゼチミブ)；
d) IBAT阻害剤(例えばAZD−7806)；
e) LXR作動薬(例えばGW−683965A、T−0901317)；
f) FXR受容体モジュレーター；
g) ホスホリパーゼ阻害剤；
５) 抗狭心症薬、例えば硝酸薬及び亜硝酸薬；
６) 酸化的ストレスのモジュレーター、例えば、抗酸化剤(プロブコール)、ミエロペルオキシダーゼ阻害剤。
【実施例】
【００６２】
以下の実施例によって、本発明を説明するが、決して限定されない。
【００６３】
一般的な方法
使用した全ての溶媒は分析用グレードであり、そして商業的に入手可能な無水の溶媒を常用的に反応に用いた。反応は、典型的に窒素又はアルゴンの不活性雰囲気下で実施した。
1H及び13C NMRスペクトルは、Z−勾配の５mm BBOプローブを備えたVarian Unity+ 400核磁気共鳴分光計、又はZ−勾配の60μlデュアルインバースフロープローブを備えたBruker Avance 400核磁気共鳴分光計、又はZ−勾配の4−核プローブを備えたBruker DPX400核磁気共鳴分光計のいずれかで、プロトンについては400MHzで、そして炭素−13については100MHzで記録した。600MHzの1H NMRスペクトルは、Z−勾配の５mm BBI プローブヘッドを備えたBruker av600核磁気共鳴分光計で記録した。300MHzの1H NMRスペクトルは、５mm BBIプローブヘッドを備えたVarian Gemini 300 NMRで記録した。実施例に特記しない限り、スペクトルは、プロトンについては400MHzで、そして炭素−13については100MHz記録した。以下の基準シグナルを用いた：DMSO−d6の中心線δ2.50 (1H), δ39.51 (13C)；CD3ODの中心線δ3.31 (1H) 又はδ 49.15 (13C)；アセトン−d6 2.04 (1H), 206.5 (13C)；及びCDCl3δ7.26(1H)、CDCl3の中心線δ77.16(13C)(他の指摘がない限り)。鏡像体余剰は、Cyclodex Bカラム上でGC(等温溶離(isothermic elution)100℃)によって測定した。
【００６４】
質量スペクトルは、Alliance 2795(LC)及びZQ単一四重極質量分析計からなるWaters LCMSで記録した。質量分析器はエレクトロスプレーイオン源(ESI)を備えており、陽又は陰イオンモードで運転した。キャピラリー電圧は３kVであり、質量分析器はm/z 100−700で走査し、走査時間は0.3又は0.8秒であった。分離は、Waters X−Terra MS、C8−カラム(3.5μm，50又は100mm×2.1mm i.d.)、又はScantecLab's ACE 3 AQカラム(100mm×2.1mm i.d.)のいずれかで実施した。カラム温度は40℃に設定した。中性又は酸性移動相系を用いて４〜５分、流速0.3ml／分で０％〜100％有機相で直線勾配をかけて実施した。中性移動相系：10mMアセトニトリル／[NH4OAc(水性)／MeCN(95：5)]、又は[10mM NH4OAc(水性)／MeCN(1/9)]／[10mM NH4OAc(水性)／MeCN(9/1)]。酸性移動相系：[133mM HCOOH(水性)／MeCN(5/95)]／[８mM HCOOH(水性)／MeCN(98/2)]。
【００６５】
別法として、質量スペクトルは、VF−5 MSカラム(ID 0.25mm×30m，0.25μm(Varian Inc.))を用いてGC−MS(GC 6890，5973N MSD，Agilent Technologies)で記録した。直線温度勾配を25℃／分(40℃−300℃)適用した。MSはCIイオン源を備えており、反応体ガスはメタンであった。MSはm/z 50−500の間で走査し、走査速度は3.25走査／秒に設定した。HPLC分析は、G1379Aマイクロ真空脱ガス装置、G1312Aバイナリーポンプ、G1367A Wellplateオートサンプラ、G1316A Thermostatted Column Compartment及びG1315Bダイオードアレイ検出器から構成されるAgilent HP1000システムで実施した。カラム：X-Terra MS，Waters，4.6×50mm，3.5μm。カラム温度は40℃に、そして流速は1.5ml／分に設定した。ダイオードアレイ検出器は210−300nmから走査し、ステップ及びピーク幅は、それぞれ２nm及び0.05分に設定した。直線勾配を適用し、４分で０％から100％までのアセトニトリルで実施した。移動相：アセトニトリル／MilliQ Water中５％アセトニトリル中の10mM酢酸アンモニウム。
【００６６】
典型的な反応後処理手順は、酢酸エチルのような溶媒で生成物を抽出し、水で洗浄し、続いてMgSO4又はNa2SO4で有機相を乾燥し、そして真空で溶液を濃縮することからなる。
【００６７】
薄層クロマトグラフィ(TLC)は、Merck TLC−プレート(シリカゲル60 F254)上で実施し、UVを用いてスポットを視覚化した。フラッシュクロマトグラフィは、RediSepTM順相フラッシュカラムを用いてCombi Flash(R) CompanionTMに又はMerck Silica gel 60(0.040−0.063mm)に予め形成した。フラッシュクロマトグラフィに用いる典型的な溶媒は、クロロホルム／メタノール、トルエン／酢酸エチル及び酢酸エチル／ヘキサンの混合物であった。
【００６８】
分取クロマトグラフィは、ダイオードアレイ検出器を備えたGilson自動分取HPLCで実施した。カラム：XTerra MS C8，19×300mm，７μm。アセトニトリル／MilliQ Water中の５％アセトニトリル中の0.1M酢酸アンモニウムの勾配で、13分で20％から60％アセトニトリルまで実施した。流速：20ml／分。別法として、精製はWaters Symmetry(R)カラム(C18，５μm，100mm×19mm)を備えたShimadzu SPD−10A UV−vis.−検出器を有するセミ分取Shimadzu LC−8A HPLCで実施した。MilliQ Water中のアセトニトリル／0.1％トリフルオロ酢酸の勾配で、20分で35％から60％アセトニトリルまで実施した。流速：10ml／分。
【００６９】
再結晶は、通常溶媒又は溶媒混合物、例えばエーテル、酢酸エチル／ヘプタン及びメタノール／水中で実施した。
【００７０】
以下の略語を用いた；DCM＝ジクロロメタン；DIPCl＝β−クロロジイソピノカンフェニルボラン(DIP−クロリドTM)；DIPEA＝N,N−ジイソプロピルエチルアミン；DMF＝N,N−ジメチルホルムアミド；DMSO＝ジメチルスルホキシド；NCS＝N−クロロスクシンイミド；NMP＝1−メチル−2−ピロリドン；THF =テトラヒドロフラン；aq＝水性；conc＝濃縮された。
【００７１】
使用した出発物質は、市販供給元から入手するか又は文献の方法に従って製造し、実験データは報告されたものと一致した。以下のものは、製造した出発物質の例である：
(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エタノール：Garrett, C. E. Tetrahedron: Asymmetry 2002, 13, 1347−1349; Doucet, H. Chem. Eur. J. 1999, 5, 1320−1330；
(R)−N−メチルロイシノール：Aitali, M.; Allaoud, S.; Karim, A.; Meliet, C.; Mortreux, A. Tetrahedron: Asymmetry 2000, 11, 1367−1374；
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール：WO 02/076990；
5−(ベンジルチオ)−7−クロロ[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン：WO 00/09511；
3−(1−ヒドロキシエチル)ベンズアミド：Watson, C.Y; Whish, W.J.D; Threadgill, M.D. Bioorg. Med. Chem. 1998 6(6) 721−34；
1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エタノン：T. Fujita, J. Iwasa and C. Hansch,
Journal of the American Chemical Society 1964, 86, 5175−5180；
(1−クロロプロピル)ベンゼン：Desai, V. R.; Nechvatal, A.; Tedder, J. M. J. Chem. Soc. (B) 1969, 30−32；
3−[(1S)−1−ヒドロキシエチル]ベンゾニトリル：Belley, M. Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 2697−2704；
1−(3−メトキシフェニル)エタノール：Handa, S. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1  1995, 1623−1633；
(2R)−2−アミノ−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール：Truong, V.L; Gauthier, J.Y; Boyd, M; Roy, B; Scheigetz, J. Synlett 2005, 8, 1279−1280；S鏡像異性体の経路に従った：
(1S)−1−(3フルオロフェニル)エタノール：Pastor, I. M. Chem. Eur. J. 2003, 9, 4031−4045。
【００７２】
一般的な方法Ａ
水素化ホウ素ナトリウム(0.1当量)、DIPEA(1.5当量)及び一般式(III)の化合物(1.2当量)を窒素雰囲気下でDMSO中の一般式(II)の化合物(1.0当量)に加えた。反応が完了する(LC−MS、HPLC又はTLCによってモニターした)まで、得られた反応混合物を40℃で撹拌した。混合物を氷水へ注ぎ、そして生成物をDCM又はEtOAcで抽出した。合わせた有機相を乾燥して真空で濃縮した。粗生成物を必要に応じて、分取HPLC又はフラッシュカラムクロマトグラフィを用いて精製した。
【００７３】
一般的な方法Ｂ
【化８】
2008535835.tif 000009
THF中のB1(1.0当量)を０℃、アルゴン雰囲気下でTHF中の(＋)−DIPCl(B2を得るため)又は(−)−DIPCl(B3を得るため)(1.5当量)に加えた。反応混合物を一夜ゆっくりと室温に到達するにまかせた。溶媒を蒸発させ、続いてEt2O及びジエタノールアミン(2.2当量)を添加した。反応が完了するまで混合物を撹拌した(LC−MS、HPLC又はTLCによってモニターした)。形成された沈殿を濾過し、Et2Oで洗浄し、そして濾液を真空で濃縮した。粗生成物は、必要に応じて分取HPLC又はフラッシュカラムクロマトグラフィを用いて精製した。
【００７４】
一般的な方法Ｃ
【化９】
2008535835.tif 000010
THF中のトリフェニルホスフィン(1.3当量)をアルゴン雰囲気下、０℃でTHF中のNCS(1.3当量)に加えた。得られた混合物を周囲温度で30分間撹拌した。C1又はC2(１当量)を０℃で加え、反応が完了するまで反応混合物を周囲温度で撹拌した(LC−MS、HPLC又はTLCによってモニターした)。溶媒を蒸発させ、続いてヘキサンを添加し、そして濾過により沈殿を除去した。濾液を真空で濃縮し、そして粗生成物は、必要に応じて分取HPLC又はフラッシュカラムクロマトグラフィを用いて精製した。
【００７５】
実施例１
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール
a) 1−[(1R)−1−クロロエチル]−2−フルオロベンゼン
(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エタノール(3.56ｇ、25mmol)から出発して一般的な方法Ｃを用いて標題化合物を収率65％、鏡像体余剰93％で得た。
1H NMR (CDCl3) δ 7.53 (td, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 5.42 (q, 1H), 1.84 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 158 [M+H]+。
【００７６】
b) (2R)−2−｛[2−アミノ−5−(ベンジルチオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝ペンタン−1−オール
5−(ベンジルチオ)−7−クロロ[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン(6.0ｇ，19.4mmol)をNMP(30mL)中に溶解した。DIPEA(8.4mL，48.5mmol)及び2−アミノ−(2R)−１−ペンタノール(3.5ｇ，33.9mmol)を加え、そして混合物を110℃に４日間加熱した。周囲温度に冷却した後、混合物を水(200mL)中へ注いだ。沈殿した生成物を濾過により集め、水で洗浄し、そしてさらに精製することなく次の工程に用いた(7.0ｇ，収率97％)。
MS (ESI+) m/z 376 [M+H]+。
【００７７】
c) (2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)
アミノ]ペンタン−1−オール
丸底フラスコにドライアイス−エタノール凝縮器を取り付け、ドライアイス−エタノール冷浴中に浸漬した。アンモニア(250mL)をフラスコ中で凝縮させ、続いて(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(ベンジルチオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝ペンタン−1−オール(6.8ｇ，18.1mmol)を添加した。得られた混合物を−33℃まで温まるにまかせ、青色が現れて30秒間持続するまで金属ナトリウムを少片で加えた。次いで、一さじの固体塩化アンモニウムを添加して反応をクエンチした。アンモニアを蒸発させて残留物に水(250mL)を加えた。生成した混合物を1M HCl(水性)で中和した。沈殿した生成物を濾過により集め、水で洗浄し、真空で乾燥して標題化合物4.15ｇ(収率80％)を得た。
MS (ESI+) m/z 286 [M+H]+。
【００７８】
d) (2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール(703mg，2.46mmol)及び1−[(1R)−1−クロロエチル]−2−フルオロベンゼン(469mg，2.96mmol)から出発して一般的な方法Ａを用いて標題化合物を収率96％で得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 8.38 (br s, 2H), 7.55 (td, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.20 (m, 1H),
7.18 (d, 1H), 5.26 (q, 1H), 4.19 (br s, 1H), 3.43 (dd, 5.6 Hz, 1H), 3.35 (dd, 1H), 1.69 (d, 3H), 1.66−1.42 (m, 2H), 1.39−1.21 (m, 2H), 0.86 (t, 3H); 
MS (ESI+) m/z 408 [M+H]+。
【００７９】
実施例２
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(800mg，2.67mmol)及び1−[(1R)−1−クロロエチル]−2−フルオロベンゼン(509mg，3.21mmol)から出発して一般的な方法Ａを用いて標題化合物を収率41％で得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.97 (s, 2H), 7.53 (td, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 5.22 (q, 1H), 4.61 (t, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.38 (dt, 1H), 3.28 (m, 1H), 1.65 (d, 3H), 1.59 (m, 1H), 1.49−1.32 (m, 2H), 0.87 (d, , 3H), 0.84 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 422 [M+H]+。
【００８０】
実施例３
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(320mg，1.01mmol)及び(1−ブロモエチル)−ベンゼン(245mg，1.21mmol)から出発して一般的な方法Ａに従って標題化合物を収率67％で２つのジアステレオマーの混合物として得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.94 (s, 2H), 7.16 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.97 (m, 1H), 6.77 (d, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.87 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 1.72 (dd, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.42 (m, 2H), 0.87 (d, 3H), 0.85 (m, 3H);
MS (ESI+) m/z 405 [M+H]+。
【００８１】
実施例４
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1R)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]
ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール(実施例３)(500mg)をHPLC精製して標題の単一ジアステレオマー(150mg)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.98 (s, 2H), 7.45 (m, 2H), 7.32 (m, 2H), 7.24 (m, 1H), 6.87 (d, 1H), 4.95 (q, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 1.68 (d, 3H), 1.62 (m, 1H), 1.42 (m, 2H), 0.88 (d, 3H), 0.82 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 405 [M+H]+。
【００８２】
実施例５
3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)ブチル]アミノ｝[1,3]
チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル
a)3−[(1R)−1−クロロエチル]ベンゾニトリル
3−[(1S)−1−ヒドロキシエチル]ベンゾニトリル(3.35ｇ，22.8mmol)から出発して一般的な方法Ｃに従って標題化合物を収率79％で得た。
1H NMR (DMSO−d6): δ 7.97 (s, 1H), 7.82 (m, 2H), 7.60 (t, 1H), 5.40 (q, 1H), 1.80 (d, 3H);
13C NMR (DMSO−d6): δ 144.1, 131.2, 131.6, 130.3, 129.9, 118.4, 111.6, 57.41, 25.5;
MS (ESI+) m/z 166 [M+H]+。
b) 3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)ブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル
2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)ブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5(6H)−チオン(2.87ｇ，10.0mmol)及び3−[(1R)−1−クロロエチル]ベンゾニトリル(2.31ｇ，13.9mmol)から出発して一般的な方法Ａに従って標題化合物を収率75％で得た。
1H NMR (DMSO−d6): δ 8.00 (s, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.52 (t, 1H), 6.90 (d, 1H), 5.00 (q, 1H), 4.63 (t, 1H), 4.13 (br s, 1H), 3.41 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 1.66 (d, 3H), 1.57 (m, 1H), 1.43 (m, 1H), 1.29 (m, 2H), 0.86 (t, 3H);
13C NMR (DMSO−d6): δ 170.8, 168.7, 165.1, 155.7, 145.9, 132.3, 130.8, 130.6, 129.5, 118.7, 111.2, 63.3, 59.7, 51.8, 42.3, 33.0, 21.8, 18.8, 14.0; 
MS (ESI+) m/z 415 [M+H]+。
【００８３】
実施例６
(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛(1S)−1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール
a) (1S)−1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エタノール
一般的な方法Ｂに従って1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エタノン(2.00ｇ，10.1mmol)から標題化合物を収率58％で製造した。
MS (ESI+) m/z 201 [M+H]+。
b)1−[(1R)−1−クロロエチル]−3−(メチルスルホニル)ベンゼン
一般的な方法Ｃに従って(1S)−1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エタノール(100mg，0.50mmol)から標題化合物を収率21％で製造した。
MS (ESI+) m/z 219 [M+H]+。
c) (2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛(1S)−1−[3−(メチルスルホニル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール
一般的な方法Ａに従って(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(16.5ｇ，55.3mmol)及び1−[(1R)−1−クロロエチル]−3−(メチルスルホニル)ベンゼン(12.1ｇ，55.3mmol)から標題化合物を製造した。
1H NMR (600 MHz, DMSO−d6): δ 8.00 (m, 3H) 7.81 (m, 2H) 7.60 (t, 1H) 6.91 (d, 1H) 5.06 (q, 1H) 4.66 (t, 1H) 4.24 (br s, 1H) 3.38 (m, 1H) 3.28 (m, 1H) 3.23 (s, 3H) 1.69 (d, 3H) 1.59 (m, 1H) 1.34−1.46 (m, 2H) 0.86 (m, 6H);
MS (ESI+) m/z 482 [M+H]+。
【００８４】
実施例７
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール
a) [(1R)−1−クロロエチル]ベンゼン
(1S)−1−フェニルエタノール(25ｇ，0.20mol)から出発して一般的な方法Ｃを用いて標題化合物を収率67％で得た。
1H NMR (CDCl3) δ 7.42 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 5.09 (q, 1H), 1.85 (d, 3H);
MS (CI) m/z 141 [M+1]+。
b) (2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]ペンタン−1−オール(100mg，0.35mmol)及び[(1R)−1−クロロエチル]ベンゼン(54mg，0.38mmol)から出発して一般的な方法Ａを用いて標題化合物を収率23％で得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ ppm 7.96 (br s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.22 (m, 1H), 6.86 (d, 1H), 4.95 (m, 1H), 4.64 (t, 1H), 4.17 (br s, 1H), 3.44 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 1.66 (d, 3H), 1.58 (m, 1H), 1.44 (m, 1H), 1.36−1,21 (m, 2H), 0.85 (t, 3H);
MS (ESI+) m/z 390 [M+H]+。
【００８５】
実施例８
3−｛(1S)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンゾニトリル
一般的な方法Ａに従って(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(200mg，0.67mmol)及び3−[(1R)−1−クロロエチル]ベンゾニトリル(166mg，1.0mmol)から標題化合物を収率31％で製造した。
1H NMR (CD3OD) δ 7.89−7.76 (m, 2H) 7.57 (d, 1H) 7.49 (m, 1H) 5.12 (q, 1H) 4.42 (br s, 1H) 3.53 (m, 1H) 3.44 (m, 1H) 1.63−1.76 (m, 4H) 1.41−1.60 (m, 2H) 0.96 (t, 6H);
MS (ESI+) m/z 429 [M+H]+。
【００８６】
実施例９
(2R)−2−(｛2−アミノ−5−[(1−フェニルプロピル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝アミノ)−4−メチルペンタン−1−オール
一般的な方法Ａによって(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(30mg，100μmol)と(1−クロロプロピル)ベンゼン(15.5μL，100μmol)との反応から２つのジアステレオマーの混合物として標題化合物を合成して油状物として13mg(収率31％)を得た。
1H NMR (CD3OD) δ 7.39 (t, 2H) 7.28 (m, 2H) 7.20 (t, 1H) 4.85 (dd, 1H) 4.57−4.40 (m, 1H) 3.62 (m, 1H) 3.59−3.48 (m, 1H) 2.25−2.11 (m, 1H) 2.01 (m, 1H) 1.79−1.65 (m, 1H) 1.63−1.53 (m, 1H) 1.53−1.42 (m, 1H) 1.01−0.87 (m, 9H);
MS (ESI+) m/z 418 [M+H]+。
【００８７】
実施例10
3−｛(1R)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンズアミド
a) 3−(1−クロロエチル)ベンズアミド
ジエチルアニリン(390μL，2.45mmol)をDCM(20mL)中にスラリー化した3−(1−ヒドロキシエチル)ベンズアミド(400mg，2.45mmol)に加え、そして反応混合物を氷浴で冷却した。塩化チオニル(255μL，2.47mmol)を滴加して、反応物を一夜冷蔵庫中に置いた。水を加え、反応混合物をDCMで二回抽出し、10％HCl溶液で洗浄し、飽和炭酸水素塩溶液で中和し、ブラインで処理し、乾燥(MgSO4)、濾過して蒸発乾固した。粗生成物をジエチルエーテル／ヘキサンから再結晶させて白色固形物として標題化合物335mg(収率75％)を得た。
1H NMR (クロロホルム−d) δ 7.90 (s, 1H) 7.73 (d, 1H) 7.62 (d, 1H) 7.46 (t, 1H) 5.14 (q, 1H) 1.88 (d, 3H) 1.60 (s, 2H);
MS (ESI+) m/z 183, 185 [M+H]+。
b) 3−｛(1R)−1−[(2−アミノ−7−｛[(1R)−1−(ヒドロキシメチル)−3−メチルブチル]アミノ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−5−イル)チオ]エチル｝ベンズアミド
一般的な方法Ａによって(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(30mg，100μmol)と3−(1−クロロエチル)ベンズアミド(20mg，100μmol)との反応から標題化合物を２つのジアステレオマーの混合物として合成した。分取HPLCにより混合物を分離して油状物として単一ジアステレオマー(６mg，収率13％)を得た。
1H NMR (CD3OD) δ 7.99 (s, 1H) 7.73 (d, 1H) 7.69 (d, 1H) 7.41 (t, 1H) 5.15 (q, 1H) 4.43−4.52 (m, 1H) 3.54 (m, 1H) 3.47 (m, 1H) 1.74 (d, 3H) 1.70 (m, 1H) 1.59−1.42 (m, 2H) 0.96 (t, 6H); 
MS (ESI+) m/z 447 [M+H]+。
【００８８】
実施例11
(2R)−2−｛[2−アミノ−5−(｛1−[3−(トリフルオロメチル)フェニル]エチル｝チオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル]アミノ｝−4−メチルペンタン−1−オール
一般的な方法Ａによって(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(30mg，0.1mmol)と3−(1−ブロモエチル)トリフルオロメチルベンゼン(15.5μL，0.1mmol)との反応から標題化合物を２つのジアステレオマーの混合物として合成して油状物として38mg(収率81％)を得た。
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ 7.81−7.71 (m, 2H) 7.57−7.44 (m, 2H) 5.16 (q, 1H) 4.43 (s, 0.5H) 4.31 (s, 0.5H) 3.59 (m, 1H) 3.55−3.40 (m, 1H) 1.74 (t, 3H) 1.69 (m, 0.5H) 1.63 (m, 0.5H) 1.54 (m, 1H) 1.49−1.37 (m, 1H) 0.96 (dd, 3H) 0.86 (dd, 1.5H); 
MS (ESI+) m/z 472 [M+H]+。
【００８９】
実施例12
(2R)−2−[｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝(メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
a)(2R)−2−[[2−アミノ−5−(ベンジルチオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル](メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
5−(ベンジルチオ)−7−クロロ[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン(1.5ｇ，4.86mmol)、DIPEA(691mg，5.35mmol)及び(R)−N−メチルロイシノール(956mg，7.29mmol)をNMP(7.5mL)中で混合した。生成した溶液を窒素雰囲気下、110℃で２日間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を氷上へ注いだ。生成した黄色沈殿を濾過により集め、水で洗浄して真空で乾燥した。粗生成物をシリカ上のフラッシュカラムクロマトグラフィ(DCM：EtOAc 50：50から0：100)によって精製して黄色固形物として標題化合物1.42ｇ(収率72％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.97 (br s, 2H), 7.40 (m, 2H), 7.28 (m, 2H), 7.21 (m, 1H), 4.73 (dd, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.32 (br s, 2H), 3.52−3.37 (m, 2H), 3.00 (s, 3H), 1.55−1.35 (m, 2H), 1.27 (m, 1H), 0.88 (d, 3H), 0.80 (d, 3H); 
MS (ESI+) m/z 404 [M+H]+。
【００９０】
b) (2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)(メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
３つ口丸底フラスコをドライアイス／エタノール冷却浴中に浸漬し、ドライアイス／エタノール凝縮器を備えつけた。系を窒素でフラッシュし、アンモニア(約50mL)をフラスコ中に凝縮させた。(2R)−2−[[2−アミノ−5−(ベンジルチオ)[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル](メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(１ｇ，2.5mmol)をフラスコに加えると透明な黄色溶液が生成した。金属ナトリウムの小片(サイズ２−３mm)を一つずつ反応混合物に加えた。持続性の青色(＞20秒)が現れた時に、一さじの固形NH4Clを加えて反応物をクエンチした。アンモニアを蒸発させた。水(50mL)を加え、そして1M HCl(水性)を用いて混合物をpH７に中和した。沈殿した黄色固形物を濾過により集め、水で洗浄し、真空で乾燥して標題化合物630mg(収率80％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 12.78 (br s, 1H), 8.43 (br s, 2H), 4.84 (br, 2H), 3.52−3.38 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.55−1.33 (m, 2H), 1.32−1.20 (m, 1H), 0.87 (m, 6H); 
MS (ESI+) m/z 314 [M+H]+。
【００９１】
c) (2R)−2−[｛2−アミノ−5−[(1−フェニルエチル)チオ][1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル｝(メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
一般的な方法Ａによって(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)(メチル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(31.4mg，0.1mmol)と1−ブロモエチルベンゼン(13.5μL，0.1mmol)との反応から標題化合物を２つのジアステレオマーの混合物として合成して26mg(収率62％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.96 (s, 2H) 7.43 (t, 2H) 7.32 (m, 2H) 7.23 (t, 1H) 5.02−4.92 (m, 1H) 4.83−4.71 (m, 1H) 4.64 (s, 1H) 3.53−3.38 (m, 2H) 3.01 (d, 3H) 1.68 (dd, 3H) 1.52 (m, 1H) 1.43 (m, 1H) 1.35−1.24 (m, 1H) 0.88 (d, 3H) 0.83 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 418 [M+H]+。
【００９２】
実施例13
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(2−クロロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
a) 1−クロロ−2−(1−クロロエチル)ベンゼン
塩化チオニル(1.49ｇ，12.6mmol)をトルエン(50mL)中の1−(2−クロロフェニル)エタノール(1.0ｇ，6.3mmol)に加え、そして混合物を室温で２時間撹拌するにまかせた。反応混合物に、10％HCl水溶液(20mL)を加えた。有機相を分離し、さらなる10％HCl水溶液、ブライン(20mL)で洗浄し次いで分離、乾燥して蒸発させて収率72％で1−クロロ−2−(1−クロロエチル)ベンゼンを得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.72 (1H, d), 7.48 (1H, m), 7.39 (2H, m), 5.59 (1H, q), 1.84 (3H, d)。
b)(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(2−クロロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(20mg，0.047mmol)及び1−クロロ−2−(1−クロロエチル)ベンゼン(10mg，0.057mmol)から出発して一般的な方法Ａによって標題化合物を収率24％で２つのジアステレオマーの混合物として得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.83 (2H, m), 7.48 (1H, d), 7.32 (1H, m), 7.15 (1H, m), 7.14 (1H, m), 6.79 (1H, d), 5.22 (1H, m), 4.13 (1H, m), 3.29−3.17 (2H, m), 1.52 (3H, dd), 1.47 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.25 (1H, m), 0.76 (3H, dd), 0.73 (3H, dd);
13C NMR (DMSO−d6) δ 171.18, 169.14, 165.75, 165.64, 155.97, 140.63, 132.62, 129.91, 129.04, 128.96, 127.94, 64.08, 63.88, 50.59, 24.70, 23.67, 22.33, 22.22, 22.01;
MS (ESI+) m/z 438, 440 [M+H]+。
【００９３】
実施例14
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(3−メトキシフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
a) 1−(1−クロロエチル)−3−メトキシベンゼン
1−(3−メトキシフェニル)エタノール(0.5ｇ、３mmol)から出発して実施例13(a)の方法を用いて標題化合物を収率59％で得た。
1H NMR (CDCl3) δ 7.22 (1H, m), 6.76 (2H, m), 6.62 (1H, dd), 4.81 (1H, q), 3.57 (3H, s), 1.62 (3H, d)。
b) (2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[1−(3−メトキシフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(20mg，0.07mmol)及び1−(1−クロロエチル)−3−メトキシベンゼン(9.7mg，0.06mmol)から出発して一般的な方法Ａに従って標題化合物を収率25％で２つのジアステレオマーの混合物として得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.89 (2H, s), 7.13 (1H, m), 6.87 (2H, m), 6.80 (1H, m), 6.71 (1H, m), 4.86 (1H, m), 4.55 (1H, br s), 4.17 (1H, m), 3.64 (3H, s), 1.51 (3H, d), 1.48 (1H, m), 1.31 (2H, m), 0.76 (6H, m);
MS (ESI+) m/z 434 [M+H]+。
【００９４】
実施例15
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
i) 方法(a)の使用
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(27ｇ，90mmol)及び[(1R)−1−クロロエチル]ベンゼン(19ｇ，135mmol)から出発して一般的な方法Ａを用いて標題化合物を収率42％で得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.95 (br s, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.31 (m, 2H), 7.22 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 4.96 (q, , 1H), 4.64 (t, 1H), 4.27 (br s, 1H), 3.44−3.30 (m, 2H), 1.66 (d, 3H), 1.59 (m, 1H), 1.41 (m, 2H), 0.87 (d, 3H), 0.84 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 404 [M+H]+。
【００９５】
ii) 方法(b)の使用
a) 6−アミノ−2−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝ピリミジン−4−オール
NaH(油中60％)(0.5ｇ，12.5mmol)、続いてNaBH4(40mg，１mmol)をDMF(20mL)中の6−アミノ−2−メルカプトピリミジン−4−オール一水和物(1.6ｇ，10mmol)に加えた。30分後、[(1R)−1−クロロエチル]ベンゼン(1.4ｇ，10mmol)を加え、反応混合物を16時間撹拌した。反応液を真空で容積約10mLに濃縮し、次いで水(約50mL)中へ注いだ。沈殿した固体物質を濾過し、そして水及びエーテルで洗浄して標題化合物(1.15ｇ，収率46％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.46−7.22 (m, 5H), 6.53 (br s, 2H), 4.99 (q, 1H), 4.92 (s, 1H), 1.67 (d, 3H)。
【００９６】
b) 2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−オール
ピリジン(0.6ｇ，7.6mmol)をDMF(20mL)中の6−アミノ−2−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝ピリミジン−4−オール(１ｇ，４mmol)及びKSCN(1.7ｇ，16mmol)に加えた。反応混合物を０℃に冷却し、次いで臭素(0.65ｇ，4.0mmol)をひとかたまりで加えた。２時間後、反応混合物を水中へ注ぎ、橙色の沈殿を濾過し、そして水で洗浄した。固形物をDMF(６mL)及び水(２mL)の混合物中に懸濁し、そして110℃に加熱した。30時間後、反応混合物を水中へ注ぎ、黄色がかった沈殿を濾過し、水及びエーテルで洗浄した。固形物を真空で40℃で乾燥して標題化合物(0.8ｇ，収率65％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 8.16 (br s, 1H), 7.47−7.24 (m, 5H), 5.05 (q, 1H), 1.71 (d,
3H)。
【００９７】
c) 7−クロロ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン
POCl3(１mL)をジオキサン(６mL)中のDMF(１mL)に加えた。2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−オール(１ｇ，3.3mmol)をひとかたまりで反応液に加えた。POCl3(１mL)を加え、そして反応混合物を80℃に約30分間加熱した。反応物を室温に冷却して氷上へ注いだ。生成した混合物を還流で約５時間加熱した。混合物を室温に達するにまかせ、その後EtOAcで抽出した。有機層をシリカゲルの層に通過させ、濃縮して乾燥状態にして標題化合物(１ｇ，収率95％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 8.91 (br s, 2H), 7.47−7.20 (m, 5H), 4.95 (q, 1H), 1.69 (d,
3H)。
【００９８】
d) 2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
DIPEA(400mg，３mmol)及びD−ロイシノール(400mg，3.4mmol)をNMP(６mL)中の7−クロロ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン(300mg，0.9mmol)に加え、そして混合物を120℃に24時間加熱した。混合物を水へ注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥(MgSO4)し、蒸発させて残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ(EtOAc)によって精製し、標題化合物(200mg，収率54％)を得た。
1H NMR (DMSO−d6) δ 7.95 (br s, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.31 (m, 2H), 7.22 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 4.96 (q, 1H), 4.64 (t, 1H), 4.27 (br s, 1H), 3.44−3.30 (m, 2H),
1.66 (d, 3H), 1.59 (m, 1H), 1.41 (m, 2H), 0.87 (d, 3H), 0.84 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 404 [M+H]+。
【００９９】
実施例16
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール
DIPEA(0.83mL，4.75mmol)をNMP(２mL)中の7−クロロ−5｛[(1S)−1−フェニルエチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン(0.49ｇ，1.52mmol)及び(2R)−2−アミノ−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール(２mmol)の溶液に加え、そして反応混合物を120℃で22時間撹拌した。HPLC精製により標題化合物(0.22ｇ，収率17％)を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48 (m, 2H), 7.32 (m, 2H), 7.23 (m, 1H), 5.09 (q, 1H), 4.66 (br s, 1H), 3.61−3.47 (m, 2H), 2.12−1.89 (m, 2H), 1.75 (d, 3H), 1.40 (m, 6H);
MS (ESI+) m/z 422 [M+H]+。
【０１００】
実施例17
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール
a) 6−アミノ−2−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝ピリミジン−4−オール
NaH(油中60％，1.05ｇ，26.3mmol)を少しずつ、続いてNaBH4(0.099ｇ，2.7mmol)をDMF(40mL)中の6−アミノ−2−メルカプトピリミジン−4−オール一水和物(4.23ｇ，26.3mmol)に加えた。30分後、DMF(10mL)中の1−[(1R)−1−クロロエチル]−2−フルオロベンゼン(5.0ｇ，31.5mmol)を加え、そして反応混合物を24時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、そして水とDCMとの間で分配し、有機相を乾燥(MgSO4)し、蒸発させた。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ(CHCl3中の５−10％MeOHの段階的勾配)で精製して標題化合物(5.20ｇ，収率75％)を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6): δ 7.35 (m, 1H), 7.13 (m, 1H), 6.99 (m, 2H), 6.29 (s, 2H), 5.00 (q, 1H), 4.76 (br s, 1H), 1.49 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 266 [M+H]+。
【０１０１】
b) 2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−オール
KSCN(10.76ｇ，110.7mmol)及びピリジン(3.9mL，49.2mmol)をDMF(70mL)中の6−アミノ−2−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝ピリミジン−4−オール(6.53ｇ，24.6mmol)に加えた。混合物を０℃に冷却し、そしてBr2を滴加した。3.5時間後、反応混合物を水へ注ぎ、そして形成した沈殿を濾過により集めた。固形物をDMF(75mL)及び水(15mL)の混合物中に懸濁し、そして120℃に８時間加熱した。反応混合物を水へ注ぎ、そして固形物を濾過により集め、そして真空で40℃で乾燥して標題化合物(6.42ｇ，収率81％)を得た。
MS (ESI+) m/z 323 [M+H]+.
【０１０２】
c) 7−クロロ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン
POCl3(2.77mL，29.7mmol)をジオキサン(30mL)中のDMF(3.07mL，39.6mmol)に加えた。30分後、この混合物をジオキサン(100mL)中の2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−オール(6.38ｇ，19.8mmol)の溶液に加えた。30分後、POCl3(2.77mL，29.7mmol)を加え、反応混合物を80℃に２時間加熱した。室温に冷却した後、生成した混合物を80℃で30分間、そして室温で２時間撹拌した。反応混合物を水へ注ぎ、そして形成した沈殿を集めた。固形物をフラッシュカラムクロマトグラフィ(CHCl3中の５％MeOH)で精製して標題化合物(5.91ｇ，収率88％)を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6): δ 8.94 (s, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.20 (m, 2H), 5.22 (q, 1H), 1.71 (d, 3H);
MS (ESI+) m/z 341 [M+H]+。
【０１０３】
d) (2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール
DIPEA(2.09mL，12.0mmol)をNMP(３mL)中の7−クロロ−5−｛[(1S)−1−(2−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−2−アミン(1.36ｇ，4.0mmol)及び(2R)−2−アミノ−4−フルオロ−4−メチルペンタン−1−オール(４mmol)に加えた。120℃で22時間反応混合物を撹拌した後、それを水へ注ぎ、沈殿を濾過により集めた。固形物をフラッシュカラムクロマトグラフィ(CHCl3中の５％−10％MeOHの段階的勾配)及び分取HPLCで精製して標題化合物(0.22ｇ，収率13％)を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.35 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.15 (q, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.35−3−21 (m, 2H), 1.82−1.72 (m, 2H), 1.50 (d, 3H), 1.17 (m, 6H);
MS (ESI+) m/z 440 [M+H]+。
【０１０４】
実施例18
(2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(3−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
a) 1−[(1R)−1−クロロエチル]−3−フルオロベンゼン
(1S)−1−(3−フルオロフェニル)エタノール(4.20ｇ，30mmol)から出発して一般的な方法Ｃを用いて標題化合物を収率49％、鏡像体余剰94.5％で得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO−d6) δ 7.47−7.30 (m, 3H); 7.16 (t, 1H); 5.36 (q, 1H); 1.78 (d, 3H)。
b) (2R)−2−[(2−アミノ−5−｛[(1S)−1−(3−フルオロフェニル)エチル]チオ｝[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール
(2R)−2−[(2−アミノ−5−メルカプト[1,3]チアゾロ[4,5−d]ピリミジン−7−イル)アミノ]−4−メチルペンタン−1−オール(0.30ｇ，1.0mmol)、1−[(1R)−1−クロロエチル]−3−フルオロベンゼン(0.17ｇ，1.1mmol)及びNaBH4(0.019ｇ，0.5mmol)から出発して一般的な方法Ａを用いて標題化合物を収率61％で得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.23 (m, 2H), 7.13 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 5.01 (q, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.43 (m, 2H), 1.63 (d, 3H), 1.44 (m, 2H), 0.88 (m, 6H);
MS (ESI+) m/z 422 [M+H]+。
【０１０５】
薬理学的スクリーニング
物質
組換えヒトフラクタルカイン(hCX3CL1)及び組換えヒトインターロイキン−8(IL−8又はhCXCL8)をPeproTech Inc., UK.から購入した。2200Ci／mmolの比放射能を有する組換え[125I]−フラクタルカイン(ヒト)及び[125I] hIL−8を、NENR Life Science Products, Inc., UK.から購入した。Fluo4−AMは、Molecular Probes, US.から購入した。他の全ての化学物質は分析グレードであった。
【０１０６】
細胞
完全ヒトCX3CR1 cDNA(GenBank受入れ番号U20350)をヒト脳mRNA (Superscript, Life Technologies)から抽出し、pCR−Blunt II TOPOベクター(InVitrogen)に結合した。対応する挿入hCX3CR1を分離してさらにpcDNA3.1zeoにサブクローニングした。プラスミドDNAをPlasmid Midi Kit(Qiagen)を用いて調製した。次いで、製造業者のプロトコールに従ってSuperfectトランスフェクション試薬(Qiagen)を用いてhCX3CR1についての発現プラスミドをキメラＧ−タンパク質Ｇαqi5を安定に発現するためのベクターを含むヒト胎性腎懸濁液(HEKS)293細胞株中に導入した。ゼオシン(500μg／mL)及びハイグロマイシン(100μg／mL)セレクションを用いて安定なクローンを生成させた。さらなる適用のため、ピリドキシンを含み、そして10％(v/v)ウシ胎児血清、２mM L−グルタミン、100U／mLペニシリン及び100mg／mLストレプトマイシン、250μg／mLゼオシン及び100μg／mLハイグロマイシンを補充されたダルベッコ改変イーグル培地／Ham'sニュートリエントミックスF12(DMEM/F12)中に細胞を維持した。
【０１０７】
Glutamaxを含み、そして10％FBS(PAA，オーストリアから)、１％非必須アミノ酸(NEAA)、100U／mLペニシリン及び100μg／mLストレプトマイシン(PEST)及び500μg／mLジェネティシン／G418を補充されたEMEM中で、AstraZeneca Charnwoodから入手したヒトCXCR2を発現する細胞を培養した。
【０１０８】
膜標品
細胞を37℃及び５％CO2で成長させ、10mMトリス−HCl pH 7.4，５mM EDTA，0.1mg／mlバシトラシンを含む緩衝液中60−80％集密で収穫した。細胞を300xgで10分間遠心分離し、ペレットを収穫緩衝液(harvesting buffer)(10mMトリス−HCl，pH 7.4，５mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)及び0.1mg／mLバシトラシン)中に再懸濁し、プールし、そしてDounceホモジナイザーを用いて均質化した。ホモジネートを48000xgで10分間遠心分離し、Ultra−Turrax T8を用いて収穫緩衝液中に再懸濁した。膜アリコートを−80℃で保存した。タンパク質濃度は、Harringtonによって記載されたように(1990, Anal. Biochem. 186, 285−287)、マイクロタイタープレートで測定した。
【０１０９】
in vitro受容体結合アッセイ
[125I]フラクタルカインの競合結合研究を、1000μL／ウェルの総容積で２mL 96−ディープウェルプレート(Beckman, Germany)中で実施した。各ウェルは、アッセイ緩衝液(50mM Hepes−KOH，pH 7.4，10mM MgCl2，１mM EDTA，0.1％(w/v)ゼラチン)中に10pM[125I]−フラクタルカイン及び１pMの受容体濃度に相当する膜を含む。10濃度(２ポイント／ログ単位)の試験化合物をDMSO中に予め溶解して加え、１％(v/v)DMSOの最終濃度にした。膜の添加によりアッセイを開始し、そして25℃で24時間インキュベートした。Brandel受容体結合収穫器を用いて、0.3％ポリエチルイミンで前処理したWhatman GF／Bガラス繊維フィルタを通して急速濾過することによって反応を停止させ、続いて氷冷緩衝液(10mM Hepes−KOH pH7.4，500mM NaCl)で洗浄した。シンチレーションカクテルを加え、そしてPackard 2500TR液体シンチレーションカウンター(Perkin Elmer, USA)で放射活性を測定した。
【０１１０】
[125I]−hIL−8の競合結合研究を最終容積200μLの白色透明な底面の96ウェルアイソプレート中、ｎ＝１で(in singlicates)実施し、そして各ウェルは、アッセイ緩衝液[50mM HEPES−KOH pH 7.4，10mM MgCl2，１mM EDTA，0.5％(w/v)ゼラチン]中に150pM[125I]−hIL−8(比放射能2200Ci／mmol)、20pM受容体に相当する膜−SPA標品及び1.5mg SPA−ビーズを含む。試験化合物を上記のように処理した。非特異的結合を、500nM 非標識化hIL−8の存在下で測定した。作動薬hIL−8(３pMから30nMまでの濃度−反応曲線)を、各試験の場合に参照化合物として用いた。ペプチド曲線はDMSOを含まない。140μL膜−SPA標品の添加により結合反応を開始し、試料を暗所にて室温で４時間インキュベートした。アッセイプレートを液体シンチレーションカウンター(Wallac MicroBeta(R) TriLux 1450 from PerkinElmer, USA)でカウントした。
【０１１１】
[35S]GTPγS結合
[35S]GTPγS結合研究は、DMSO(最終濃度１％)中に希釈した10濃度の阻害剤(２conc／ログ単位)を用いて二つ組で(in duplicates)透明な底面のマイクロタイタープレート中、室温で実施した。hCX3CR1受容体を発現する膜(最終濃度20μgタンパク質／ウェル)をSPAビーズと共に加え(最終濃度１mg／ウェル)、全てGTPγS結合緩衝液(50mMトリス−HCl，100mM NaCl，0.1％ゼラチン、15μgサポニン／mL及び３μM GDP，室温でpH 7.4)中に懸濁した。膜、SPAビーズ及び薬物を30分プレインキュベートした後、最大刺激用に310pMフラクタルカインを添加した。基底活性は、フラクタルカイン刺激(GTPγS結合緩衝液)なしで測定された活性として定義した。さらに30分後、[35S]GTPγSを添加して最終濃度0.1nM及び最終アッセイ容積0.2mlにして反応を開始した。30分後、2000rpmで２×５分間(異なる方向)遠心分離することによって実験を終了し、そして液体シンチレーションカウンター(Wallac MicroBeta(R) TriLux 1450)で放射活性を測定した。
【０１１２】
結果
本発明の選択された化合物について受容体結合データを表１に示す。参照化合物に相当するデータを表２に示した。
表１及び２のデータの比較は、R1がMe又はEtを表す本発明の化合物がいずれも、CX3CR1受容体ではR1がＨを表す対応する参照化合物より強力なアンタゴニストであり、CXCR2受容体ではその参照化合物よりも弱いアンタゴニストであることを明白に示している。CX3CR1受容体の拮抗作用に関するこのような高められた選択性は、有意な治療上の有益性が得られると期待される。
【０１１３】
【表１】
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【０１１４】
【表２】
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【国際調査報告】
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