(57)【要約】      （修正有）【課題】個人における喘息の予防または処置のための方法の提供。【解決手段】個人に有効量の型別不能なインフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）に対する免疫反応を生じさせるための少なくとも１種類の抗原を、生理的に許容できるキャリヤーと一緒に含むワクチンを経口投与することによる、喘息を有している、又は喘息のリスクが考えられる個人、例えば現又は元喫煙者、反復性の気道感染、慢性的な咳及び痰（例えば慢性的な気管支炎における）、及び／又は内因性喘息の予防又は処置。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
個人における喘息の予防または処置のための方法であって、個人に有効量の型別不能なイ
ンフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）ワクチンを投与することを含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、喘息が内因性喘息である方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法であって、喘息が好中球性喘息である方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法であって、喘息が痰または唾液中の高い好中球レベルに特性づけら
れる方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法であって、個人がＮＴＨｉにさらされたことの
指標となる１以上のパラメーターを示す方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、個人がＮＴＨｉ特異的抗体を示す方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、抗体がＩｇＥ抗体である方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法であって、ワクチンが経口ワクチンである方法
。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、ワクチンが経口死菌ワクチンである方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、ワクチンが１種類以上の完全死菌ＮＴＨｉ分離物を含む
方法。
【請求項１１】
喘息の予防または処置のための経口ワクチンであって、ワクチンが型別不能なインフルエ
ンザ菌（ＮＴＨｉ）に対する免疫反応を生じさせるための少なくとも１種類の抗原を、生
理的に許容できるキャリヤーと一緒に含むワクチン。
【請求項１２】
請求項１１に記載のワクチンであって、経口死菌ワクチンであるワクチン。
【請求項１３】
請求項１１に記載のワクチンであって、少なくとも１種類の抗原が死菌または不活化型別
不能インフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）分離物、ＮＴＨｉ画分および抗原性の外膜の構成要素
からなるグループから選択されるワクチン。
【請求項１４】
請求項１２または１３に記載のワクチンであって、ワクチンが１種類以上の完全死菌ＮＴ
Ｈｉ分離物を含むワクチン。
【請求項１５】
個人における喘息の予防または処置のためにＮＴＨｉに対する免疫反応を生じさせるため
の、少なくとも１種類の抗原の使用。
【請求項１６】
請求項１５に記載の使用であって、少なくとも１種類の抗原が死菌または不活化型別不能
インフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）分離物、ＮＴＨｉ画分および抗原性の外膜の構成要素から
なるグループから選択される使用。
【請求項１７】
請求項１５に記載の使用であって、ワクチンが１種類以上の完全死菌ＮＴＨｉ分離物を含
む使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は喘息の予防または処置のための細菌性ワクチンの投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息は可逆的な気道の閉塞に特性づけられる気道の慢性の炎症状態であり、慣例的に外
因性（吸い込んだアレルゲン、例えば花粉およびハウスダストのダニに対するアレルギー
反応による）または内因性（古典的なアレルギーによらない）と分類されており、その機
構は未知である。喘息の後者の形は”特発性”喘息と呼ばれてきた。
【０００３】
最近報告された、喘息と診断された対象に基づく研究において、喘息は痰の中の好酸球
および好中球の数の差に基づいて分類された（Ｓｉｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６
）。研究における対象は、健康な対照の対象と比較したこれらの細胞型の存在に基づいて
異なる喘息のサブタイプに分けられた。いくつかの喘息のサブタイプは、好中球性喘息（
＞６１％好中球）および好酸球性喘息（＞１．０１％好酸球）を包含して識別された。好
中球性喘息のグループは、喘息の全体の数のおおよそ２０％を構成していた。研究はさら
に、評価の前の月の間に呼吸器管の感染を報告した対象はいなかったにも関わらず、これ
らの対象の大部分における、サンプリングの間の短期（４週間）および長期（平均５．３
年）両方の間隔にわたる持続性好中球増加を報告した。喘息の対象は健康な対照よりも高
いレベルの細胞内細菌およびマクロファージを有していることが分かったが、好中球性喘
息および他の喘息グループの間で有意な差は見られなかった。実際、見つかった細菌のレ
ベルは急性の細菌感染と一致するレベルよりも低いと述べられ、報告は好中球性喘息の炎
症過程を説明する細菌感染の証拠は無いと結論付けた。
【０００４】
型別不能なインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）（Ｎ
ＴＨｉ）は、慢性気管支炎（ＣＢ）と関連する最も一般的な病原菌である（Ｓｅｔｈｉ，
２００１）。ＮＴＨｉは健康な個人およびＣＢの患者（Ｓｅｔｈｉ，  ２００１）の上
気道（例えば、鼻、中耳、喉および副鼻腔洞（ｓｉｎｕｓｅｓ））、さらに呼吸器管の管
腔を含むいくつかの場所に見られ、粘膜下組織の間質中の粘膜上皮細胞に付着している（
Ｍｏｌｌｅｒ，  １９９８）。非閉塞性および閉塞性のＣＢの研究は、大部分の患者がＮ
ＴＨｉに持続感染していることを観察した（Ｍｕｒｐｈｙ，  ２００４）。
【０００５】
ＮＴＨｉおよび黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）は共
に、ＩｇＥを介さない、および増進されたＩｇＥを介した、ＣＢの患者の気道からの気管
支肺胞洗浄により得られたマスト細胞からのヒスタミン放出を誘導することが以前に示さ
れている。ＮＴＨｉの場合、外毒素がＩｇＥを介したヒスタミンの放出の増進の原因であ
る可能性があることが報告されている（Ｃｌｅｍｅｎｔｓｅｎ，  １９９０）。急性の再
燃の間にＣＢの患者から分離した免疫細胞は、患者自身の細菌に対して感作されており過
敏であることが示されている（Ｎｏｒｎ，  １９９４）。いくつかの研究は、菌類（例え
ばコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ））およびウイルス（例えば呼吸器多核体ウイル
ス、パラインフルエンザウイルス［Ｗｅｌｌｉｖｅｒ，１９８２］）および細菌（肺炎球
菌（Ｓ．  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）［Ｋｊａｅｒｇａｒｄ，  １９９６；  Ｔｅｅ，  １
９８２；  Ｐａｕｗｅｌｓ，  １９８０］、黄色ブドウ球菌（Ｓ．  ａｕｒｅｕｓ）［Ｒ
ｈｏｄｅ，  ２００４；  Ｔｅｅ，  １９８２］、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａ）［Ｓｈｅｎ，  １９８１］、およびマイコプラズマ・ニューモニエ
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）［Ｓｅｇｇｅｖ，  １９９６］）によ
る呼吸器感染に反応して特異的なＩｇＥ抗体が産生されることも報告した。ＮＴＨｉに特
異的なＩｇＥ抗体は、ＣＢ（Ｋｊａｅｒｇａｒｄ，  １９９６；  Ｔｅｅ  １９８２）お
よび嚢胞性線維症（Ｔｅｅ  １９８２）の患者の血清中にも同定されている。
【０００６】
気管支喘息の患者の研究において、ＮＴＨｉに対するＩｇＥ抗体は２９％で見られた。
ＮＴＨｉおよび／または肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
）に対する抗体は、他のＩｇＥを介する過敏性反応を有しない患者の２２％にも存在して
いた。しかし、様々な吸入性抗原に対する実証できるＩｇＥ抗体を有する（アレルギーの
表現型を示唆する）患者では、より高いレベルのＩｇＥ細菌抗体が見つかった（Ｐａｕｗ
ｅｌｓ，  １９８０）。細菌感染は喘息の誘発および再燃において役割を果たしている可
能性があるという仮説が立てられたが、喘息の再燃は主にウイルス感染により起こされる
と考えられてきた。実際、喘息の処置における細菌ワクチンの臨床効果には疑問が持たれ
、細菌ワクチンは現代の喘息の処置において何も役割を持たないという国際的な（ＷＨＯ
）推奨につながっている。
【０００７】
大量の研究が療法的な喘息への介入および処置に焦点を当てたにも関わらず、この病気
は依然として、現代の西洋化した社会における主要で犠牲が多く、かつ大きくなりつつあ
る問題である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Simpson, J.L., Scott, R., Boyle, M.J., Gibson, P.G. Inflammatory subtypes in asthma: Assessment and identification using induced sputum. Respirology 2006; 11, 54-61.
【非特許文献２】Sethi S, Murphy TF.  Bacterial infection in chronic obstructive pulmonary disease in 2000: a state-of-the-art review.  Clin Microbiol Rev 2001; 14: 336-363.
【非特許文献３】Moller LVM, Timens W, van der Bij W et al. Haemophilus influenzae in lung explants of patients with end-stage pulmonary disease. Am J Respir Crit Care Med 1998; 157: 950-56.
【非特許文献４】Murphy TF, Brauer AL, Schiffmacher AT, Sethi S. Persistent colonization by Haemophilus influenzae in chronic obstructive pulmonary disease. Am J Respir Crit Care Med 2004; 170: 266-72.
【非特許文献５】Clementsen P, Milman N, Kilian M. et al. Endotoxin from Haemophilus influenzae enhances IgE-mediated and non-immunological histamine release. Allergy 1990; 45: 10-17.
【非特許文献６】Norn S, Jensen L, Kjaergard LL, Permin H, Stahl Skov P, Espersen F. Bacteria-induced IgE-mediated histamine release: Examination of patients with chronic bronchitis (CB) during acute exacerbations. Agents Actions 41, Special Conference Issue 1994: C22-C23.
【非特許文献７】Welliver RC, Wong DT, Middleton E Jr, Sun M, McCarthy N, Ogra PL. Role of parainfluenza virus-specific IgE in pathogenesis of croup and wheezing subsequent to infection. J Pediatrics 1982; 101: 889-96.
【非特許文献８】Kjaergard LL, Larsen FO, Norn S, Clementsen P, Stahl Skov P, Permin H. Basophil-bound IgE and serum IgE directed against Haemophilus influenzae and Streptococcus pneumoniae in patients with chronic bronchitis during acute exacerbations. APMIS 1996; 104: 61-67.
【非特許文献９】Tee RD, Pepys J. Specific IgE serum antibodies to bacterial antigens in allergic lung disease. Clin Allergy 1982; 12: 439-50.  18.
【非特許文献１０】Pauwels R, Verschraegen G, Van Der Straiten M. IgE antibodies to bacteria with bronchial asthma. Allergy 1980; 157: 665-9.
【非特許文献１１】Rohde G, Gevaert P, Holtappels G et al. Increased IgE-antibodies to Staphylococcus aureus enterotoxins in patients with COPD. Respir Med 2004; 98: 858-64.
【非特許文献１２】Shen J, Brackett R, Fischer T, Holder A, Kellogg F, Michael JG. Specific Pseudomonas immunoglobulin E antibodies in sera of patients with cystic fibrosis. Infect Immun 1981; 32: 967-68.
【非特許文献１３】Seggev JS, Sedmak GV, Kurup VP. Isotype-specific antibody responses to acute Mycoplasma pneumoniae infection. Ann Allergy Asthma Immunol 1996; 77: 67-73.
【発明の概要】
【０００９】
大まかに言うと、本発明は、型別不能なインフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）は、ＮＴＨｉの
持続的なコロニー形成および／または反復してそれにさらされることの結果として、重症
の喘息の引き金として機能し得るという発明者らによる認識に由来する。特に、本発明者
らは、ＮＴＨｉに対するＩｇＥ抗体は（しばしば複合的な多因子性の状況において）喘息
の非常に重要な媒介者であることを見出した。理論に制限されることなく、本発明者らは
下気道における吸入された／コロニー形成しているＮＴＨｉの減少は喘息を起こす機構の
活性化を減少させる、または本質的に回避すると信じている。喘息の誘発を減少させるこ
とにより、本明細書で記述されるＮＴＨｉワクチンを用いた療法は喘息処置の必要性およ
び関連する喘息の薬物治療も減少させることができる可能性がある。
【００１０】
従って、本発明のある観点において、個人に有効量のＮＴＨｉワクチンを投与すること
を含む、個人における喘息の予防または処置のための方法が提供される。
ワクチンは細菌に対する有効な免疫反応を誘導するあらゆるＮＴＨｉワクチンであるこ
とができる。通常、ワクチンはＮＴＨｉに対する経口ワクチンであり、より一般的には経
口死菌ＮＴＨｉワクチンであろう。
【００１１】
本発明の別の観点において、喘息の予防または処置のための経口ワクチンが提供され、
ワクチンは少なくとも１種類のＮＴＨｉの抗原を生理的に許容できるキャリヤーと一緒に
含む。
【００１２】
本発明の別の観点において、個人における喘息の予防または処置のためにＮＴＨｉに対
する免疫反応を生じさせるための少なくとも１種類の抗原の使用が提供される。
抗原は、例えば、死菌または不活化ＮＴＨｉ分離物、ＮＴＨｉ画分およびＮＴＨｉの抗
原性の外膜の構成要素（例えば、表面抗原またはそれらの断片）からなるグループから選
択される抗原であることができる。
【００１３】
典型的には、完全な死菌ＮＴＨｉが、本明細書で記述する喘息の予防または処置のため
のワクチンまたは方法において用いられるであろう。
個人は診断された喘息を有していることができ、または喘息のリスクが考えられる個人
、例えば現または元喫煙者、反復性の気道感染、慢性的な咳および痰（例えば慢性的な気
管支炎における）、および／または内因性喘息を有する個人であることができる。少なく
とも１つの形において、個人はＮＴＨｉにさらされたことを示す１個以上のパラメーター
、例えば例えば高い好中球のレベル、痰または唾液中のＮＴＨｉの存在、および／または
ＮＴＨｉに特異的な抗体を有しているであろう。本発明の少なくともいくつかの態様は、
好中球性喘息の予防または処置における特別な用途を有する。
【００１４】
好都合なことに、本発明の１個以上の態様に従うＮＴＨｉワクチンの投与は、個人にお
けるＩｇＥ抗体の減少および／または喘息（例えば内因性または好中球性喘息）の症状ま
たは重症度の減少につながることができる。
【００１５】
この明細書を通して、単語”含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）”、または”含む（ｃｏｍｐｒ
ｉｓｅｓ）”もしくは”含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”のような変形は、述べられた要
素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程のグループを包含するが、他のい
ずれかの要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程のグループを排除する
ことは決してないことを暗に意味することは理解されるであろう。この明細書で言及され
る全ての刊行物を本明細書に援用する。この明細書に包含された文書、証書、資料、考案
、論文または同様のもののあらゆる論考は、単に本発明のために前後関係を提供するため
である。それは、これらの事のいずれかまたは全てが先行技術基準の一部を形成する、ま
たはこの出願の優先日の前にそれがどこにでも存在したため本発明に関係する分野におけ
る共通の一般的知識であったという自認であると受け取られるべきではない。
【００１６】
本発明の特徴および利点は、それの態様の下記の詳細な記述からさらに明らかになるで
あろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１はプラセボ試験グループのうがいにおいて分離されたＮＴＨｉの平均数を示すグラフである；
【図２】図２はプラセボグループおよび経口死菌ＮＴＨｉワクチンで免疫された処置グループにおける血清ＮＴＨｉ特異的ＩｇＧレベルを示すグラフである；ならびに
【図３】図３はプラセボグループおよび経口死菌ＮＴＨｉワクチンで免疫された処置グループにおける唾液ＮＴＨｉ特異的ＩｇＧレベルを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
喘息は臨床的には喘鳴、可逆的な気道閉塞および気管支の活動過剰により定義される。
喘息の最も一般的な原因は吸入したアレルゲンに対するＩｇＥを介した過敏性反応であり
、結果として喘息は”外因性”または”内因性”と分類される。しかし、長年の喘息を有
する個人は、肺の損傷および関連する気道の反復する感染に由来する咳および痰を発現し
得る。例えば、長年の咳および痰を有し喘鳴を発現する気管支炎の個人、ならびに反復性
の喘息および気道感染を有する個人も存在する。
【００１９】
喘息の試験では慣例的に、別個のグループを試験することに注意が払われており、一般
に明確に定義された喘息（例えば古典的な外因性喘息）を有する対象は他のグループ（例
えば喫煙に関連する気道疾患を有するグループ）から分けられ、これは他の喘息のグルー
プと分離された定義された喘息のグループで試験を実施することにつながる。しかし、こ
れは人工的な類別であり、むしろ、スキーム１に図説したように喘息を気道疾患のスペク
トルとして見るのがより現実的である。
【００２０】
【数１】
2015042661.tif 000002
【００２１】
スキーム１：喘息疾患のスペクトル
喘息のこれらの異なる臨床上の発現に関して様々な異なる所見が述べられた。手短に言
えば、これらは次のように要約することができる。
【００２２】
・吸入した抗原（例えば花粉）に対するＩｇＥ抗体の誘導は古典的なアレルギー性喘息
を引き起こし、ここでアレルゲン特異的ＩｇＥがマスト細胞に結合してマスト細胞の顆粒
消失および媒介物質、例えばヒスタミンの放出を起こし、それがアレルギー症状を引き起
こす。
【００２３】
・損傷した気道のコロニー形成および間欠性のウイルス感染は気管支中への好中球の流
入（急性気管支炎）（通常は、気管支の”炎症”の結果として起こると考えられる喘鳴と
関連している）につながり得る。
【００２４】
・肺の損傷につながる喫煙は、対象を気道の感染が起こりやすくし得る。
しかし、臨床で診断された喘息を有する多くの喘息の対象は、これらの構成要素に関し
て’混合’されており、この喘息疾患のスペクトルは異なる病原経路が喘息につながるこ
とができこれらの経路は共存できるという認識により調和させることができると提案され
ている。特に、理論に制限されることなく、発明者らは、実証できる古典的なアレルゲン
への過敏性反応無しの多くの喘息（例えば、ハウスダスト、花粉および同様のものに対す
るＩｇＥに関する陰性の試験結果、および／または高い好酸球数を有する）における喘鳴
の主要な原因は、ＮＴＨｉの好中球を誘導し活性化する能力と共同したＮＴＨｉのコロニ
ー形成および／または反復してそれにさらされることへのＩｇＥ抗体を介した反応による
ものであると考える。具体的には、ＮＴＨｉワクチンは末梢気道へのＮＴＨｉの負荷を軽
減することができ、いわゆる”内因性喘息”に有効な処置を提供することができる。
【００２５】
より大まかには、ＮＴＨｉワクチンからの利益は、ＮＴＨｉにさらされたことを示す１
個以上のパラメーター、例えば高い好中球レベル（高い好酸球レベルを伴う、または伴わ
ない）、例えば痰または唾液中のＮＴＨｉにより示される現在のＮＴＨｉ感染、および／
またはＮＴＨｉ特異的抗体を示すそれらの個人、ならびに例えば喫煙（慢性閉塞性肺疾患
（ＣＯＰＤ））または慢性気管支炎（特に喘鳴を有するそれらの個人）に起因する損傷し
た気道を有するそれらの個人により引き出され得る。例えば、損傷した気道を有する個人
はＮＴＨｉおよび他の細菌性病原体による感染／コロニー形成を非常に起こしやすいこと
が認識されている。気道への損傷は古典的には喫煙の結果として起こるが、外因性喘息も
気道を損傷し得る（従って、ＮＴＨｉ感染と関連する咳および痰のより遅い発症）。組み
合わされた機構を有する喘息の個人（例えばＮＴＨｉに対するＩｇＥ抗体を有するアトピ
ーの対象）においても利益が生じる可能性があり、喘息および喘息症状の処置は、一般に
はＮＴＨｉにさらされたことの結果であるＩｇＥ生産の誘導の減少または回避の結果とし
てのものである。
【００２６】
抗体レベルは、血液、血清、血漿、痰または唾液試料において、酵素結合免疫吸着アッ
セイ（ＥＬＩＳＡ）または他の免疫アッセイを含むあらゆる適切な一般に知られる分析プ
ロトコルを用いて測定することができる。ＮＴＨｉ特異的抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｉｇ
ＧおよびＩｇＥならびにそれらのサブクラス、例えばＩｇＧ１および／またはＩｇＧ３の
１種類以上から選択することができる。総ＩｇＥおよび／またはＮＴＨｉ特異的ＩｇＥ抗
体は、一般に痰または唾液試料において測定されるであろう。好中球レベルも、唾液また
は痰において、細胞染色に続く顕微鏡的評価を含むあらゆる適切な一般に知られる分析法
を用いて測定することができる。同様に、当技術で知られるあらゆる適切な方法を、ＮＴ
Ｈｉ感染のＮＴＨｉ数／レベルを測定するのに用いることができる。抗体レベル、好中球
レベルおよびＮＴＨｉ数は、古典的外因性喘息（例えば好酸球性および／または反応性過
剰を示す）または例えば、喘息ではない対照または他の適切な参照グループに由来する対
応する参照レベル（ｌｅｖｅｌ（ｓ））に対して比較することができる。喘息グループを
区別するための統計的方法は、例えばＳｉｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，２００６に記述され
ている。
【００２７】
本発明の方法で利用されたワクチンは、通常は完全死菌または不活化（例えば弱毒化）
ＮＴＨｉ分離物（ｉｓｏｌａｔｅ（ｓ））（例えばホルマリンで殺したもの）を含有する
であろう。しかし、外側の細胞膜および／または表面抗原を含む、またはそれで構成され
る、可溶性の、または微粒子状のＮＴＨｉ抗原は、完全死菌有機体と同様に、またはその
代わりに利用することができる。１個以上の態様において、選択されたＮＴＨｉ分離物（
ｉｓｏｌａｔｅ（ｓ））の外側の細胞膜画分または膜タンパク質（ｐｒｏｔｅｉｎ（ｓ）
）が利用されるであろう。例えば、ＮＴＨｉ  ＯＭＰ  Ｐ６は高度に保存された１６ｋＤ
ａのリポタンパク質であり（Ｎｅｌｓｏｎ，  １９８８）、これはヒトの殺菌性抗体の標
的であり、ヒトにおいて、および動物のモデルにおいて防御を誘導する。慢性閉塞性肺疾
患（ＣＰＯＤ）において、ＯＭＰ  Ｐ６は、ＮＴＨｉ感染からの相対的な防御と関連する
リンパ球の増殖反応を喚起することが示されている（Ａｂｅ，  ２００２）。従って、Ｏ
ＭＰ  Ｐ６またはいずれかの他の適切な外膜ＮＴＨｉタンパク質、ポリペプチド（例えば
Ｐ２、Ｐ４およびＰ２６）またはそれらのタンパク質もしくはポリペプチドの抗原性断片
はＮＴＨｉワクチンにおける用途を見出し得る。
【００２８】
可溶性の、および／または微粒子状の抗原は、死菌または生存可能な、選択されたＮＴ
Ｈｉ分離物（ｉｓｏｌａｔｅ（ｓ））を破砕することにより製造できる。ワクチンにおけ
る使用のための画分は、次いで遠心、濾過および／または当技術で知られる他の適切な技
法により調製することができる。超音波処理または適切な界面活性剤を利用した溶解およ
び撹拌、ならびにそれらの技法の組み合わせを含め、必要なレベルの細胞の破砕を得られ
るあらゆる方法を用いることができる。超音波処理が用いられる場合、必要な程度の細胞
の破砕または特定の大きさもしくは大きさの範囲の可溶性および／または微粒子状物質の
生成を得るために、分離物は数個の超音波処理工程を受けることができる。
【００２９】
型別不能なインフルエンザ菌分離物ＨＩ−１６４（Ｈｕｎｔｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，  Ｆｒｅｎｃｈｓ  Ｆｏｒｅｓｔ，  ＮＳＷ  ２０８６，  Ａｕｓ
ｔｒａｌｉａ）は、本明細書で記述する喘息の予防または処置のためのワクチンにおける
使用に特に適している。
【００３０】
ワクチンは通常、選択された細菌の分離物（ｉｓｏｌａｔｅ（ｓ））および／または抗
原を、ワクチン組成物の約０．１％から１００％ｗ／ｗまでの量で含むであろう。ワクチ
ンの有効投与量は、ワクチンの提案される送達（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）の方式および性質（
例えば粉末、液体、エアロゾルでの送達等）を考慮に入れるであろう。完全死菌ワクチン
に関しては、投与されるその、またはそれぞれの細菌分離物の投与量は、通常は約１０９
〜約１０１２死菌、より好ましくは約１０１０〜約１０１１死菌の範囲内であろう。ワク
チンの最適投与量は、異なる投与量を異なるグループの試験哺乳類に投与した後、続いて
それぞれのグループの動物をＮＴＨｉに感染させ、満足のいく病原の浄化値を得るのに必
要な投与レベルを決定することにより決定することができる。
【００３１】
ワクチンはＮＴＨｉ感染に対して有効な免疫反応を生じさせるのに適したいずれかの投
与計画に従って投与することができる。例えば、ワクチンの１回量を１年に１度冬の前に
投与することができる。数週間または数ヶ月の間隔をあけて投与される１回以上の”ブー
スター”量のワクチンを与えてもよい。あるいは、ＮＴＨｉによる感染および／またはコ
ロニー形成に対して有効な免疫反応を生じさせるために数回の量のワクチンが数週間の過
程にわたって投与されてもよい。
【００３２】
ワクチン自体は、生理的に許容できる緩衝液または流体を利用して再構成された、凍結
乾燥された（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ  ｏｒ  ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ）ワクチンであ
ることができる。ワクチンは、１種類以上の凝結防止剤、保存剤、例えばチメロサールま
たはそうでなければ提案される投与方式に適しているもの、安定剤、例えばアミノ酸およ
び糖部分、甘味剤、例えばショ糖、乳糖またはサッカリン、界面活性剤、ｐＨ緩衝剤およ
びｐＨ調節剤、例えば水酸化ナトリウム、塩酸、リン酸一ナトリウムおよび／またはリン
酸二ナトリウム、医薬的に許容できるキャリヤー、例えば生理食塩水、溶媒および分散媒
および等浸透圧調合剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）も含有すること
ができる。ワクチンは１種類以上の抗原性補強剤を含むこともできる。適切な抗原性補強
剤には、例えばコレラトキシンＢサブユニットおよび一般に知られるアルミニウム抗原性
補強剤（ａｌｕｍ  ａｄｊｕｖａｎｔ）が包含される。通常、排他的にではないが、ワク
チンは抗原性補強剤無しである。
【００３３】
ワクチンにおけるその成分および媒質の使用法は、当技術において周知である。いずれ
かの一般に用いられる媒質または薬剤がＮＴＨｉの分離物（ｉｓｏｌａｔｅ（ｓ））もし
くは抗原、または提案される投与方式と適合できない場合を除き、それらの、本発明によ
り具体化される方法において用いられ得るワクチンの使用は、明確に包括される。例えば
生菌微生物、それらの画分および生物学的生成物、ならびに適切なサイトカインを包含す
る、免疫反応をブーストするための補足的な有効薬剤も、ワクチンに包含することができ
る。医薬的に許容できるキャリヤーおよび本発明のワクチン組成物において有用な成分の
組み合わせは、例えば熟練した対象者に周知であるハンドブックおよびテキスト、例えば
”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ”  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  
Ｐｈａｒｍａｃｙ  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  １９９５）”におい
て見つけることができ、その内容をそのまま本明細書に援用する。抗原性補強剤の具体的
な例には、コレラトキシンＢサブユニットおよび一般に知られるアルミニウム抗原性補強
剤が包含される。
【００３４】
経口死菌ワクチンは、乾燥した粉末として、または液体の形で投与することができる。
投与は、例えば注射（例えば皮下、または静脈内）により、経口で例えば投与単位形（ｄ
ｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）（例えば錠剤、カプセル、または投与される液体形（
ｄｏｓｅｄ  ｌｉｑｕｉｄ  ｆｏｒｍ））の注入（ｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）により、
またはスプレーとして成し遂げることができる。
【００３５】
本発明の１個以上の態様に従って投与することのできるＮＴＨｉワクチンの特に適切な
形には、腸溶性被覆された（ｅｎｔｅｒｉｃａｌｌｙ  ｃｏａｔｅｄ）錠剤、カプセルお
よび糖剤が包含される。
【００３６】
ワクチンはあらゆる適切な哺乳類の喘息モデルにも投与されてよいが、本発明に従って
ワクチンが投与される個体は普通はヒトであろう。本発明をさらに下記で限定的でない実
施例により記述する。
【実施例】
【００３７】
実施例１  慢性の気道疾患を有する対象はＮＴＨｉに対する高レベルのＩｇＥ抗体を有
する
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象および同年齢の対照集団を、唾液、血清お
よび痰中の総ＩｇＥおよびＮＴＨｉ特異的ＩｇＥのレベルに関して評価する試験を実施し
た。性別、年齢、喫煙習慣、および呼吸の症状についてのデータを包含する身体検査およ
び包括的アンケートを完了した。コルチコステロイド類および抗生物質の使用が、全対象
から記録された。肺機能は肺活量測定により評価した。健康な対照には能動喫煙者または
かつて喫煙していた経歴を有する者はいなかった。ＣＯＰＤグループでは１人を除く全て
の対照が喘鳴を示した。喘鳴は、胸部における随時のぜいぜい言う（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）
またはヒューヒュー鳴る（ｗｈｉｓｔｌｉｎｇ）音として定義された。試験した対象で前
月以内の呼吸器感染を有していた者はいなかった。全ての患者は臨床的に安定であった。
唾液および血液試料を集めた。
【００３８】
１．１  方法論
１．１．１  唾液
パラフィン刺激された全唾液を、穏やかな吸引により氷で冷却したチューブ中に１０分
間集め、２０，０００×ｇで、２０分間、４℃における遠心分離により清浄にし、澄んだ
上澄みを分析するまで−７０℃で凍らせておいた。
【００３９】
１．１．２  血清
１０ミリリットルの血液を常用の静脈穿刺により集め、室温で凝固させ、５，０００×
ｇで、４℃において１０分間遠心分離し、血清を分析するまで−７０℃で保管した。
【００４０】
１．１．３  痰ゾル（Ｓｐｕｔｕｍ  ｓｏｌ．）
一般に、対象はしたくなった時に（ｏｎ  ａｒｉｓｉｎｇ）咳をして吐き出して試料を
冷却しておくように指導された。痰の試料を、Ｃｏｕｒｃｏｌ  ｅｔ  ａｌ  （１９８５
）により記述された基準に従って顕微鏡検査により口咽頭の汚染に関して評価した。許容
できる試料から、４℃で６０分間、３０，０００×ｇにおいて遠心分離することにより痰
ゾルを調製し、分析するまで−７０℃で保管した。
【００４１】
１．１．４  ＮＴＨｉ抗原の調製
ＮＴＨｉ  ＯＭＰのｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ抽出物を、Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ  （
１９８８）により記述されたようにして調整した。ＮＴＨｉの高度に保存された１６ｋＤ
のリポタンパク質であるＰ６を、分取ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）を用
いて、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）法により、Ｋｙｄ  ｅｔ  ａｌ  （１９９４）
により記述されたようにして精製した。Ｐ６の精製のための分取ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、Ｂ
ｉｏ−Ｒａｄ  ４９１  Ｃｅｌｌ（ＢｉｏＲａｄ，  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  ＣＡ）を用い
て実施した。ＰＨＡＳＴ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，
ＮＪ）を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを実施し、ＯＭＰのｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔおよびＰ
６画分を１０−１５％勾配ゲルで分析した。低分子量標準（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）をそれ
ぞれのゲルで流した。ゲルをクマシーブルーおよび硝酸銀で染色した。
【００４２】
１．１．５  ＩｇＥ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）
２．０μｇ／ｍｌの濃度のヤギ抗ヒトＩｇＥ（Ｔａｇｏ，  Ｉｎｃ．  ＣＡ）を、試料
中の総ＩｇＥの測定に用いた。ＩｇＥ抗体はＥＬＩＳＡにより測定した。要するに、平底
９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ  Ｉ；  Ｐｏｌｙｓｏｒｐ，  
Ｎｕｎｃ，  Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，  Ｄｅｎｍａｒｋ）を、炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ  ９．６）中において適切な濃度の抗原１００μｌまたは炭酸水素ナトリウム緩衝液の
みを用いて４℃で一夜被覆した。ウェルを０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰ
ＢＳ  ｐＨ７．２（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）で３回洗浄し、次いで１００μｌのＰＢＳ／Ｔ
中１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ（放射性免疫アッセイグレード；  Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ  Ｌｏｉ
ｓ，  ＭＯ）を添加し、３７℃で６０分間おいた。ウェルをＰＢＳ／Ｔで洗浄し、次いで
１００μｌの１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／Ｔ中で希釈した試料をそれぞれのウェルに添加した。
プレートを３７℃でさらに６０分間保温し、その後それらを洗浄し、１００μｌの１％Ｂ
ＳＡ／ＰＢＳ／Ｔ中で１：１０００に希釈したビオチン標識ヤギ抗ヒトＩｇＥ（Ｔａｇｏ
，  Ｉｎｃ．  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，  ＵＳＡ）を添加し、３７℃でさらに６０分間保
温した。洗浄した後、１００μｌの１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／Ｔ中で１：４０，０００に希釈
したペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン（Ｔａｇｏ）をそれぞれのウェルに添加し
、３７℃で４５分間保温した。洗浄した後、１００μｌの基質緩衝液中の酵素基質３，３
’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｓｉｇｍａ）をそれぞれのウェルに添加し、室
温で１５〜３０分間保温した。反応を１００μｌの硫酸（１．０Ｍ）で停止し、吸光度を
４９０ｎｍにおいてＥＬＩＳＡプレートリーダー上で読み取った。試料中の総ＩｇＥの測
定のためにヤギ抗ヒトＩｇＥ（２．０μｇ／ｍｌ）（Ｂｉｏｃｌｏｎｅ，  Ａｕｓｔｒａ
ｌｉａ）、ならびに試料中のＯＭＰ  ＩｇＥおよびＰ６  ＩｇＥの測定のために１０人の
慢性気管支炎の対象からプールした血清の５個の２倍希釈を走らせて（ｒｕｎｎｉｎｇ）
、標準曲線を生成した。標準曲線および試料は、２重に（ｉｎ  ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）試
験した。炭酸緩衝液ウェルにおける試料の吸光度をそれぞれの抗体で被覆したウェルから
差し引いて最終的な結果を得た。総ＩｇＥに関する感度の範囲は０．１５〜２．４３ｎｇ
／ｍｌであった。交差力価測定を実施して、全ての抗体濃度ならびにタンパク質標準の濃
度および試料の希釈に有用な範囲を最適化した。
【００４３】
１．２  対照および処置グループにおける血清および痰のＩｇＥレベル
総ＩｇＥおよびＮＴＨｉ  ＩｇＥ抗体を、ＥＬＩＳＡアッセイにより、実施例１．１．
５で記述したように測定した。患者のプロフィールを表１ａに示す。得られた値を表１ｂ
に示す（提示した値は平均＋／−ＳＥＭを表す）。
【００４４】
表１ａ：対象のプロフィール
【００４５】
【表１】
2015042661.tif 000003
【００４６】
表１ｂ：反復性の気道感染および喘息を有する対象における総ＩｇＥ、ＮＴＨｉ  ＯＭ
Ｐに対するＩｇＥ、およびＮＴＨｉ  Ｐ６に対するＩｇＥ
【００４７】
【表２−１】
2015042661.tif 000004
【００４８】
【表２−２】
2015042661.tif 000005
【００４９】
ＮＤ  ＝  検出できない
ＥＵ  ＝  ＥＬＩＳＡ単位
１．３  ＩｇＥレベルおよびアレルギー性気道疾患
対象におけるＩｇＥレベルおよびアレルギー性呼吸器疾患の間の関係を評価した。患者
のプロフィールを表２ａに示す。要するに、気管支けいれんを伴う反復性の急性気管支炎
を有する対象（彼らのほとんどは喫煙しており早期の慢性気道疾患を有する）は、アレル
ギー性疾患の存在に関わらず、高レベルのＩｇＥ抗体を有していることが分かった。総Ｉ
ｇＥおよびＮＴＨｉ特異的ＩｇＥレベルを表２ｂに示す（提示した値は平均＋／−ＳＥＭ
を表す）。
【００５０】
表２ａ：対象のプロフィール
【００５１】
【表３】
2015042661.tif 000006
【００５２】
表２ｂ：総ＩｇＥおよびＮＴＨｉ抗原に特異的なＩｇＥ（ＯＭＰおよびＰ６）
【００５３】
【表４】
2015042661.tif 000007
【００５４】
ＮＤ  ＝  検出できない  ＥＵ  ＝  ＥＬＩＳＡ単位
１．４  論考
実施例１．２および１．３に提示した結果は、対照およびＣＯＰＤグループにおいて、
血清および唾液において総ＩｇＥのレベルで有意な差を示していない。しかし、ＣＯＰＤ
グループでは対照グループと比較してＩｇＥ  ＯＭＰ抗体で有意な増加が見られ（Ｐ＜０
．０１）、ＩｇＥ  ＯＭＰ抗体およびＩｇＥ  Ｐ６抗体の両方が痰中で検出された。結果
は、ＮＴＨｉ特異的ＩｇＥ抗体が慢性的気道疾患および喘息（喘鳴）を有する個人の血清
および分泌物中に普通に存在することを示している。
【００５５】
軽症〜重症のＣＯＰＤを有しており有効処置グループにおいて経口ワクチンで処置され
た対象は、気管支拡張薬療法の使用が５０％減少したことが分かった。さらに、３回の過
程のＮＴＨｉワクチン療法を行った後、好酸球の数が有効処置グループのみで有意に減少
したことが分かった。結論として、経口ＮＴＨｉ療法は急性期における気管支拡張薬療法
の使用を減少させ、ＮＴＨｉに特異的なアレルギー反応と関連する好酸球の数も減少させ
る。
【００５６】
実施例２
プラセボを対照とした二重盲検臨床試験を実施し、ここで過去２年間に１日あたり少な
くともタバコ１０本を喫煙していたことに基づいて６４人の対象が募集され、二重盲検試
験における経口ＮＴＨｉ療法またはプラセボ処置グループに配置された。対象は無作為に
プラセボおよび有効グループに分けられ、１ヶ月の間隔をおいて３過程の試験投薬を受け
た。それぞれの過程は、１日あたり２錠、３日間で構成されていた。有効な錠剤は、それ
ぞれ４５ｍｇのホルマリン死菌ＮＴＨｉ（有効な錠剤あたり１０１１死菌に相当する）を
含有していた。２週間ごとの７回の往診で血液、唾液、うがい液、咽頭スワブ、および鼻
腔スワブ（微生物学的評価のため）を集めた。
【００５７】
２．１  ＮＴＨｉの検出およびＮＴＨｉ特異的ＩｇＧの測定
驚いたことに、プラセボ処置およびワクチン処置グループにおける冬季にわたる測定は
両方のグループでＮＴＨｉを検出し、これは無作為にこの細菌にさらされたことを示すも
のであった。図１はそれぞれの往診におけるプラセボグループのうがい液中のＮＴＨｉの
平均レベルを示す。
【００５８】
ＮＴＨｉ特異的ＩｇＧは、血清および唾液においてＥＬＩＳＡアッセイにより測定した
。要するに、９６ウェルＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートのウェルをインフルエンザ
菌１６４（Ｈ．  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  １６４）の超音波処理抗原調製物で被覆した。
２〜８℃で一夜保温した後、プレートを洗浄し、様々な希釈率の血清または唾液の試料を
添加した。室温で６０分間保温した後、プレートを洗浄し、ホースラディッシュペルオキ
シダーゼ結合抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎカタログ番号ＡＰ１１２Ｐ）を添加し
た。室温でさらに６０分間保温した後、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｂｉｏｍｅｄｉ
ｑカタログ番号５０−７６−００）を添加した後、さらに室温で１０分間保温し、１Ｍリ
ン酸の添加により反応を停止した。ＢｉｏＲａｄマイクロプレートリーダー上で、４５０
ｎｍの第１フィルターおよび６５５ｎｍの参照フィルターを用いる２波長方式で吸光度を
読み取った。標準曲線を用いてそれぞれの試料におけるＥＬＩＳＡ単位を決定した。
【００５９】
プラセボグループにおける血清および唾液中のＮＴＨｉ特異的ＩｇＧのレベルは、ワク
チン処理したグループにおけるそのレベルよりも高く、より一定しなかった（図２および
図３参照）。発明者らは、これがプラセボグループではＮＴＨｉが下気道に到達した結果
全身でのＩｇＧの生産をもたらしたためであり、ワクチン処置したグループではＮＴＨｉ
は下気道に到達することを本質的に妨げられたと信じている。これを試験するため、うが
い液中でＮＴＨｉが検出された往診の数と往診１および６の間での血清ＩｇＧの対数変化
の間の関係についてプロットを作成した。プラセボおよび有効な対象を、彼らがうがい液
中でＮＴＨｉが見つかった往診を０〜１回有するか、または２〜４回有するかに従ってグ
ループ分けした。プラセボグループでは、血清ＩｇＧの明確な増加はＮＴＨｉが検出され
た数の増加と関連していた。これは有効処置グループでは見られなかった。プラセボおよ
び有効のＩｇＧの変化の間の差は統計的に有意であり（ｐ＝０．０１８６）、これはプラ
セボグループにおける血清ＩｇＧが確かにＮＴＨｉにより細菌が下気道に到達したことの
結果として生じさせられたことを示す。さらに、プラセボの洗液により多くのＮＴＨｉが
存在するほど、ＩｇＧ抗体レベルはより高かった。これはプラセボグループにおける唾液
のＮＴＨｉ特異的ＩｇＧの出現にも当てはまると信じている。
【００６０】
２．２  論考
ワクチンの有効性に関するマーカーとして、血清ＩｇＧ抗体を測定した。ワクチン処置
グループではＩｇＧ反応の明らかな欠如が見られ、一方プラセボ処置グループの患者は血
清ＩｇＧの増加を示した。理論に制限されること無く、発明者らは、プラセボグループで
観察されたＩｇＧの増加は、抗原提示細胞による細菌の取り込みおよび流入領域リンパ節
への輸送が抗細菌性ＩｇＧ反応を誘導する、下気道に到達した感染した細菌に対する免疫
反応を反映していると信じる。それに対し、ワクチン処置グループにおけるその反応の欠
如は、細菌が下気道に到達することを（粘膜ワクチン特異的免疫反応により）本質的に妨
げられたことを示す。０〜１回または２〜４回の往診においてＮＴＨｉが上気道で検出さ
れた対象におけるＩｇＧ反応の比較は、プラセボグループではＩｇＧが増加したが有効（
ワクチン）処置グループでは増加しなかったことも示した。これは、ＮＴＨｉでの経口ワ
クチン接種の後の血清ＩｇＧ測定は、感染にさらされることおよびこれが粘膜免疫形成に
より妨げられる程度を反映することを示唆する。唾液のＩｇＧ反応は、血清中で見られた
ＩｇＧ反応を反映していた。
【００６１】
概して、この試験は処置およびプラセボグループの両方における対象の上部呼吸器管に
おいてＮＴＨｉが検出されたこと、ならびに経口死菌ＮＴＨｉワクチン療法を用いた処置
が処置グループにおける血清および唾液中のＮＴＨｉ特異的ＩｇＧの減少につながったこ
とを証明し、これはワクチンがＮＴＨｉの下気道への接近を制限する、または防ぐのに成
功した（すなわち、喘息を開始するアレルゲンがより少ない）ことを示している。
【００６２】
このように、ＩｇＧ抗体の刺激により明示されたように、プラセボグループにおいての
みＮＴＨｉは下気道に接近し、ＮＴＨｉワクチンを用いた経口’免疫形成’は気道中のＮ
ＴＨｉアレルゲンを減少させた。
【００６３】
実施例３  軽症、中程度または重症の気道疾患を有する対象に経口投与される死菌ＮＴ
Ｈｉワクチンは抗喘息療法の使用を減少させる
軽症〜中程度または中程度〜重症の気道疾患を有する１４０人のヒトの対象を、二重盲
検式のプラセボを対照とした試験に募集し、経口死菌型別不能インフルエンザ菌（ＮＴＨ
ｉ）ワクチンの、喘鳴を伴う可逆的気道閉塞の数および重症度、ならびに併用薬物の使用
、さらに気道中のＮＴＨｉおよび他の細菌の存在に対する効果を評価した。
【００６４】
処置グループでは、対照グループと比較して抗喘息型薬物（気管支拡張薬、ステロイド
等）の使用の減少およびＮＴＨｉによる感染の減少が見られた。特に、ＮＴＨｉに対する
高いＩｇＥ抗体レベル（血清および分泌物）を有する対象の気道内のＮＴＨｉの特異的な
減少、および喘息症状の減少とその結果である喘息薬物の必要性の減少が得られた。
【００６５】
本発明を個別の実施例に関して記述したが、本発明の精神または範囲から逸脱すること
なく非常に多くの変更および／または修正がなされてよいことが当業者により理解される
であろう。本態様は、従って、全ての点で説明的であり限定的ではないと考えられるべき
である。
参考文献
1. Abe Y, Murphy TF, Sethi S, Faden HS, Dmochowski J, Harauchi Y, Thanavala YM
. Lymphocyte proliferative response to P6 of Haemophilus influenzae is associate
d with relative protection from exacerbations of chronic obstructive pulmonary d
isease. Am J Respir Crit Care Med 2002; 165: 967-71.
2. Clementsen P, Milman N, Kilian M. et al. Endotoxin from Haemophilus influen
zae enhances IgE-mediated and non-immunological histamine release. Allergy 1990;
45: 10-17.
3. Courcol RJ, Damien JM, Ramon P, C Voisin C, Martin GR. Presence of alveolar
macrophages as a criterion for determining the suitability of sputum specimens 
for bacterial culture. Eur J Clin Microbiol 1985; 3: 122-25.
4. Kjaergard LL, Larsen FO, Norn S, Clementsen P, Stahl Skov P, Permin H. Baso
phil-bound IgE and serum IgE directed against Haemophilus influenzae and Strepto
coccus pneumoniae in patients with chronic bronchitis during acute exacerbations
. APMIS 1996; 104: 61-67.
5. Kyd JM, Taylor D, Cripps AW. Conservation of immune responses to proteins i
solated by preparative polyacrylamide gel electrophoresis from the outer membran
e of nontypable Haemophilus influenzae. Infect Immun 1994; 62: 5652-58.
6. Moller LVM, Timens W, van der Bij W et al. Haemophilus influenzae in lung e
xplants of patients with end-stage pulmonary disease. Am J Respir Crit Care Med 
1998; 157: 950-56.
7. Murphy TF, Bartos LC. Purification and analysis with monoclonal antibodies 
of P2, the major outer membrane protein of nontypable Haemophilus influenzae. In
fect Immun 1988; 56:1084-89.
8. Murphy TF, Brauer AL, Schiffmacher AT, Sethi S. Persistent colonization by 
Haemophilus influenzae in chronic obstructive pulmonary disease. Am J Respir Cri
t Care Med 2004; 170: 266-72.
9. Nelson, M.B., M.A. Apicelli., Murphy, T.F., Vankeulen, H., Spotila, L.D., R
ekosh, D. Cloning and sequencing of Haemophilus influenza outer membrane protein
P6. Infect. Immun. 1988; 56: 128-134.
10. Norn S, Jensen L, Kjaergard LL, Permin H, Stahl Skov P, Espersen F. Bacter
ia-induced IgE-mediated histamine release: Examination of patients with chronic 
bronchitis (CB) during acute exacerbations. Agents Actions 41, Special Conferenc
e Issue 1994: C22-C23.
11. Pauwels R, Verschraegen G, Van Der Straiten M. IgE antibodies to bacteria 
with bronchial asthma. Allergy 1980; 157: 665-9.
12. Rohde G, Gevaert P, Holtappels G et al. Increased IgE-antibodies to Staphy
lococcus aureus enterotoxins in patients with COPD. Respir Med 2004; 98: 858-64.
13. Seggev JS, Sedmak GV, Kurup VP. Isotype-specific antibody responses to acu
te Mycoplasma pneumoniae infection. Ann Allergy Asthma Immunol 1996; 77: 67-73.
14. Sethi S, Murphy TF.  Bacterial infection in chronic obstructive pulmonary 
disease in 2000: a state-of-the-art review.  Clin Microbiol Rev 2001; 14: 336-36
3.
15. Shen J, Brackett R, Fischer T, Holder A, Kellogg F, Michael JG. Specific P
seudomonas immunoglobulin E antibodies in sera of patients with cystic fibrosis.
Infect Immun 1981; 32: 967-68.
16. Simpson, J.L., Scott, R., Boyle, M.J., Gibson, P.G. Inflammatory subtypes 
in asthma: Assessment and identification using induced sputum. Respirology 2006;
11, 54-61.
17. Tee RD, Pepys J. Specific IgE serum antibodies to bacterial antigens in al
lergic lung disease. Clin Allergy 1982; 12: 439-50.
18. Welliver RC, Wong DT, Middleton E Jr, Sun M, McCarthy N, Ogra PL. Role of 
parainfluenza virus-specific IgE in pathogenesis of croup and wheezing subsequen
t to infection. J Pediatrics 1982; 101: 889-96.
【図１】
2015042661.tif 000008
【図２】
2015042661.tif 000009
【図３】
2015042661.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成26年11月26日(2014.11.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個人における喘息の急性の再燃の予防または処置において使用するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は有効量の型別不能なインフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）ワクチンを含み、ここで前記ワクチンは経口投与のためのものであり、そして前記喘息は高い好酸球レベル、および痰または唾液中の高い好中球レベルに特性づけられる、医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であって、喘息が内因性喘息である医薬組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の医薬組成物であって、痰または唾液中のＮＴＨｉおよびＮＴＨｉ特異的な抗体から選択される、ＮＴＨｉにさらされたことの指標となる１以上のパラメーターを個人が示す、医薬組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の医薬組成物であって、個人がＮＴＨｉ特異的抗体を示す医薬組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の医薬組成物であって、抗体がＩｇＥ抗体である医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、ワクチンが経口死菌ワクチンである医薬組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の医薬組成物であって、ワクチンが１種類以上の完全死菌ＮＴＨｉ分離物を含む医薬組成物。
【請求項８】
個人における喘息の急性の再燃の治療的および／または予防的処置における経口投与のための医薬の製造における型別不能なインフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）の使用であって、ここで前記喘息は高い好酸球レベル、および痰または唾液中の高い好中球レベルに特性づけられる、使用。
【請求項９】
請求項８に記載の使用であって、喘息が内因性喘息である、使用。
【請求項１０】
請求項８または９に記載の使用であって、ワクチンが経口死菌ワクチンである、使用。
【請求項１１】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載の使用であって、ここで前記医薬が、死菌または不活化型別不能インフルエンザ菌（ＮＴＨｉ）分離物、ＮＴＨｉ外膜画分およびＮＴＨｉの抗原性の外膜の構成要素からなるグループから選択される少なくとも１種類の抗原を含む、使用。
【請求項１２】
請求項１１に記載の使用であって、前記医薬が１種類以上の完全死菌ＮＴＨｉ分離物を含む、使用。