(57)【要約】【課題】植物の含有成分として知られている化合物についてＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性作用を検討し、当該作用を増強し得る化合物を示すことを課題とする。【解決手段】上記課題を解決するために、アピゲニン、カルノシン酸、ジオスメチン、ケンフェロール、ルテオリン、ケルセチン二水和物、ルチン、エピガロカテキンガラート、アカセチンのうち１又は２以上を含み、酸化蛋白質分解酵素（ＯＰＨ）のＡＧＥｓ分解活性を増強するＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤及びＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する飲食品などを提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アピゲニン、カルノシン酸、ジオスメチン、ケンフェロール、ルテオリン、ケルセチン二水和物、ルチン、エピガロカテキンガラート、アカセチンのうち１又は２以上を含み、酸化蛋白質分解酵素（ＯＰＨ）のＡＧＥｓ分解活性を増強するＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する飲食品。
【請求項３】
請求項１に記載のＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する健康食品。
【請求項４】
請求項１に記載のＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する食品添加物。
【請求項５】
請求項１に記載のＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する医薬品。
【請求項６】
請求項１に記載のＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する化粧品。
【請求項７】
請求項１に記載のＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化蛋白質を分解する生体内酵素である酸化蛋白質分解酵素（ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ：ＯＰＨ）のＡＧＥｓ分解作用を活性化させる「ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤」、及び、「ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を含有する飲食品や医薬品」などに関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内での蛋白質糖化反応が皮膚老化、認知症、癌、高血圧、動脈硬化症などの加齢による機能低下や疾病に関与していることが明らかになっている。例えば、糖化反応により蛋白質は褐変化するが、これにより、肌などにくすみが生じることになる。このような加齢により生じる疾病や機能低下をもたらす要因となる糖化反応を阻害するための研究が種々行われている（特許文献１）。また、蛋白質の糖化反応により生じる最終生成物であるＡＧＥs（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を分解することについての研究も行われている（特許文献２）。
【０００３】
本発明者らはＡＧＥｓを分解する作用が、酸化蛋白質を分解する酵素であるＯＰＨに備わることを明らかにした。そして、ＯＰＨのＡＧＥｓ分解作用を増強させる植物抽出物を見出すことができた（特願２０１２−２７７２０９号など）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第４１９５８４０号公報
【特許文献２】特開２００７−１１９３７３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明においては、植物の含有成分として知られている化合物についてＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性作用を検討し、当該作用を増強し得る化合物を示すことを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、第一の発明として、アピゲニン、カルノシン酸、ジオスメチン、ケンフェロール、ルテオリン、ケルセチン二水和物、ルチン、エピガロカテキンガラート、アカセチンのうち１又は２以上を含み、酸化蛋白質分解酵素（ＯＰＨ）のＡＧＥｓ分解活性を増強する「ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤」を提供する。
【０００７】
第二の発明として、第一の発明に記載の「ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤」を含有する飲食品、健康食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品、化粧品を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性を増強する「ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤」を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】各化合物のＡＧＥｓ分解活性増強率の測定結果を示す図
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の実施の形態について説明する。なお、本発明は、これらの実施形態に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
<実施形態>
<概要>
【００１１】
本実施形態は、ＯＰＨのＡＧＥｓ分解作用活性について、コントロール（サンプル無添加）と比較して、増強作用が試験によって認められた化合物を有効成分として含むＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を提示する。
<構成>
【００１２】
本実施形態に係るＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤は、有効成分として、アピゲニン、カルノシン酸、ジオスメチン、ケンフェロール、ルテオリン、ケルセチン二水和物、ルチン、エピガロカテキンガラート、アカセチンのうち１又は２以上を含む。ここに挙げられた９の化合物それぞれは、後述するＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強作用の測定試験を行った１８の化合物の中で、化合物を添加しないコントロールに対して優れたＡＧＥｓ分解活性増強作用が認められたものである。
【００１３】
「ＯＰＨ」は、生体組織中に広く分布する生体内酵素であり、酸化蛋白質を優先的に分解するセリンプロテアーゼの一種であり、蛋白質のＮ末端アシル化アミノ酸を遊離する酵素であるアシルアミノ酸遊離酵素（Ａｃｙｌａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ：ＡＡＲＥ）として知られている。
【００１４】
本実施形態における化合物は、植物の含有成分として既知のものである。以下に、本実施形態における各化合物を説明する。
【００１５】
「アピゲニン（Ａｐｉｇｅｎｉｎ）」は、フラボンの誘導体であり分子式Ｃ１５Ｈ１０Ｏ５で示される。タイム、ダリア、フジモドキ、キクなどに含まれることが知られており、抗酸化作用などが報告されている。
【００１６】
「カルノシン酸（Ｃａｒｎｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）」は、分子式Ｃ２０Ｈ２８Ｏ４で示されるポリフェノール類である。ローズマリーやセージなどに含まれており、抗酸化作用などが報告されている。
【００１７】
「ジオスメチン（Ｄｉｏｓｍｅｔｉｎ）」は、フラボノイドの一種であり分子式Ｃ１６Ｈ１２Ｏ６で示される。タイムなどに含まれることが知られており、抗酸化作用などが報告されている。
【００１８】
「ケンペロール（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）」は、ケンフェロールとも称されるフラボノイドの一種であり子式Ｃ１５Ｈ１０Ｏ６で示される。ツルムラサキ、クロウメモドキ、タマネギ、ブロッコリー、マンサク、グレープフルーツ、キャベツ、大豆などに含まれることが知られており、抗酸化作用や瀉下作用などが報告されている。
【００１９】
「ルテオリン（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）」は、フラボノイドの一種であり分子式Ｃ１５Ｈ１０Ｏ６で示される。キク、ミント、タイム、ローズマリー、セロリ、パセリなどに含まれることが知られており、抗酸化作用や抗炎症作用などが報告されている。
【００２０】
「ケルセチン二水和物（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ  Ｄｉｈｙｄｒａｔｅ）」は、クエルセチン二水和物とも称されるフラボノイドの一種であり分子式Ｃ１５Ｈ１０Ｏ７・２Ｈ２Ｏで示される。ルイボス、タマネギ、ソバ、リンゴなどに含まれることが知られており、抗酸化作用などが報告されている。
【００２１】
「ルチン（Ｒｕｔｉｎ）」は、ケルセチンの誘導体でありフラボノイドの一種であり分子式Ｃ２７Ｈ３０Ｏ１５で示される。茶、ソバ、アスパラガス、スペアミントなどに含まれることが知られており、抗酸化作用や抗炎症作用などが報告されている。
【００２２】
「エピガロカテキンガラート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ；ＥＧＣＧ）」は、フラボノイドの一種であり分子式Ｃ２２Ｈ３０Ｏ１５で示される。茶に豊富に含まれるカテキンの一種であり、とくに強い抗酸化作用が報告されている。茶の他には豆類に含まれることが知られている。なお、没食子酸エピガロカテキンとも称される。
【００２３】
「アカセチン（Ａｃａｃｅｔｉｎ）」は、フラボノイドの一種であり分子式Ｃ１６Ｈ１２Ｏ５で示される。キクなどに含まれることが知られており、抗酸化作用や抗炎症作用などが報告されている。
【００２４】
上述した９の化合物を含有するＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤は、これを含有する飲食品、健康食品、食品添加物、医薬品、化粧品、医薬部外品などとして応用することが可能である。例えば、本実施形態の医薬品や医薬部外品とする場合には、ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて錠剤としてもよい。また、食品添加物や健康食品とする場合には、医薬品などのようにカプセルや錠剤のような形態で提供してもよいし、飲料、調味料、菓子等の各種の食品にＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤を添加した態様で提供することもできる。
<試験>
【００２５】
本試験は、上記９の化合物の他にも９の化合物を対象として、ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強作用の測定するものである。他の化合物としては、バナバなどに含まれる「コロソリン酸（Ｃｏｒｏｓｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）」、ビワなどに含まれる「マスリニック酸（Ｍａｓｌｉｎｉｃ  Ａｃｉｄ）」、ローズマリーやタイムなどに含まれる「ロスマリニック酸（Ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）」、甜茶の原料であるテンヨウケンコウシなどに含まれる「ルブソサイド（Ｒｕｂｕｓｏｓｉｄｅ）」、茶などに含まれる「カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）」、「エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）」、「エピカテキンガラート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）」、「エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）」、「ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）」を用いた。サンプル調製及び試験方法、結果などについて以下に詳述する。
【００２６】
（１）サンプルの調製
【００２７】
それぞれの化合物に応じて水、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のいずれかを溶媒とし、１ｍｇ／ｍＬとなるよう溶解してサンプルを調製した。なお、上述の化合物のうち、アカセチン、アピゲニン、コロソリン酸、ジオスメチン、ケンペロール、ルテオリン、マスリニック酸、ケルセチン二水和物、ロスマリニック酸、ルチンについては、フナコシ会社の試薬を用いた。また、カルノシン酸は東京化成工業株式会社の試薬を用い、ルブソサイドは和光純薬工業株式会社の試薬を用いた。また、カテキン、エピカテキン、エピカテキンガラート、エピガロカテキンについては、栗田工業株式会社の試薬を用いた。また、エピガロカテキンガラート、ガロカテキンについては、長良サイエンス株式会社の試薬を用いた。
【００２８】
（２）ＡＧＥｓ分解活性増強作用の測定
【００２９】
ＯＰＨの反応基質としてはＡＧＥ‐ＨＡＳ（ＡＧＥ化したヒト血清アルブミン）を調製した。すなわち１００ｍｍｏｌ/Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４） ２５ｍＬ、２ｍｏｌ/Ｌグルコース（Ｇｌｃ）５ｍＬ、４０ｍｇ/ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）１０ｍＬ、蒸留水１０ｍＬを混合し、６０°Ｃで４０時間インキュベートした。
【００３０】
ＯＰＨとしてはアシルアミノ酸遊離酵素ＡＡＲＥ（タカラバイオ株式会社）を使用した。ＡＡＲＥ酵素（０．５Ｕ/ｍＬ）は、ＡＡＲＥ酵素０．５Ｕを入れたチューブに２５０ｍｍｏｌ/Ｌリン酸ナトリウム緩衝液（酵素の付属品）の５倍希釈溶液を１ｍＬ入れ攪拌して作製した。
【００３１】
反応液を以下の表１に基づいて４種（反応液Ａ−Ｄ）調製し、それぞれ３７°Ｃで１８時間インキュベートした。
【表１】
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【００３２】
インキュベート終了後は、反応液をそれぞれ９６ウェルマイクロプレート（黒）に２００μＬ添加し、マイクロプレートリーダーで励起波長３７０ｎｍ、検出波長４４０ｎｍにおけるＡＧＥｓ由来蛍光を測定した。
【００３３】
各反応液の蛍光値は、５μＬ/ｍＬの０．１Ｎ硫酸キニーネ水溶液の測定値を１０００とした時の相対値を算出した。ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強率は、各反応液の蛍光値を下記の式１に当てはめて求めた。
（式１）ＡＧＥｓ分解活性増強率（％）＝｛１−（Ａ−Ｃ−Ｄ）÷（Ｂ−Ｃ）｝×１００
【００３４】
（３）結果
【００３５】
ＡＧＥｓ分解活性増強率の測定結果を図１に示す。図示するように、ルテオリン、ケンペロール、カルノシン酸、ケルセチン二水和物、ルチン、ジオスメチン、アピゲニン、エピガロカテキンガラート、アカセチンについて、優れたＡＧＥｓ分解活性増強作用が認められた。
<実施形態  効果>
【００３６】
アピゲニン、カルノシン酸、ジオスメチン、ケンフェロール、ルテオリン、ケルセチン二水和物、ルチン、エピガロカテキンガラート、アカセチンのうち１又は２以上を含み、酸化蛋白質分解酵素（ＯＰＨ）のＡＧＥｓ分解活性を増強する「ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強剤」を提供することが可能となる。
【図１】
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