(57)【要約】【課題】本発明の一態様は、極性化合物の分離能を向上させることが可能な充填剤の製造方法を提供することを目的とする。【解決手段】本発明の一態様は、充填剤の製造方法において、ヒドロキシル基を有する無機粒子と、炭素数が５以上１００以下の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を反応させる工程と、シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させる工程を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５以上１００以下の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を反応させる工程と、
該シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式
【化１】
2015068651.tif 000017
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｒ３は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基であり、ｎは０以上５０以下の整数である。）
で表される化合物、一般式
【化２】
2015068651.tif 000018
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｒ４は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基であり、ｎは０以上５０以下の整数である。）
で表される化合物、一般式
【化３】
2015068651.tif 000019
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、ｍは１以上５０以下の整数である。）
で表される化合物、一般式
【化４】
2015068651.tif 000020
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｘは、単結合又はイミノ基である。）
で表される化合物又は一般式
【化５】
2015068651.tif 000021
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｘは、オキシ基又はイミノ基であり、ｎは３以上１０以下の整数である。）
で表される化合物を反応させる工程を有することを特徴とする充填剤の製造方法。
【請求項２】
前記シランカップリング剤は、一般式
【化６】
2015068651.tif 000022
（式中、Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基であり、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上８以下のアルキル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２以上８以下のアルケニル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２以上７以下のアルキニル基又は置換基により置換されていてもよい炭素数が６以上１２以下のアリール基であり、Ｒ４は、置換基により置換されていてもよい炭素数が５以上１００以下の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基であり、ｎは０以上５以下の整数である。）
で表される化合物又は一般式
【化７】
2015068651.tif 000023
（式中、Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基であり、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上８以下のアルキル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２以上８以下のアルケニル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２以上７以下のアルキニル基又は置換基により置換されていてもよい炭素数が６以上１２以下のアリール基であり、Ｒ３は、置換基により置換されていてもよい炭素数が５以上１００以下の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基であり、ｎは０以上５以下の整数である。）
で表される化合物であることを特徴とする請求項１に記載の充填剤の製造方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の充填剤の製造方法を用いて製造されていることを特徴とする充填剤。
【請求項４】
請求項３に記載の充填剤が充填されていることを特徴とするカラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、充填剤の製造方法、充填剤及びカラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、液体クロマトグラフィーで用いられるカラムに充填される充填剤として、シリカゲルの表面のシラノール基がシランカップリング剤により処理されている充填剤が汎用されている。
【０００３】
シランカップリング剤としては、オクタデシルクロロシラン、オクチルクロロシラン、ブチルクロロシラン、シアノプロピルクロロシラン、フェニルクロロシラン等が知られており、オクタデシルクロロシランが最も広範に使用されている。
【０００４】
しかしながら、極性化合物の分離能が不十分であった。
【０００５】
非特許文献１には、アダマンチルエチルトリクロロシランにより処理されている充填剤が開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Chromatographia  Vol．27，No．9/10，May  1989，p．405‐411
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、極性化合物の分離能をさらに向上させることが望まれている。
【０００８】
本発明の一態様は、上記の従来技術が有する問題に鑑み、極性化合物の分離能を向上させることが可能な充填剤の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一態様は、充填剤の製造方法において、ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５以上１００以下の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を反応させる工程と、該シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式
【００１０】
【化１】
2015068651.tif 000002
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｒ３は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基であり、ｎは０以上５０以下の整数である。）
で表される化合物、一般式
【００１１】
【化２】
2015068651.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｒ４は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１以上４以下のアルコキシ基であり、ｎは０以上５０以下の整数である。）
で表される化合物、一般式
【００１２】
【化３】
2015068651.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、ｍは１以上５０以下の整数である。）
で表される化合物、一般式
【００１３】
【化４】
2015068651.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｘは、単結合又はイミノ基である。）
で表される化合物又は一般式
【００１４】
【化５】
2015068651.tif 000006
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、置換基により置換されていてもよい炭素数が１以上９以下のアルキル基であり、Ｘは、オキシ基又はイミノ基であり、ｎは３以上１０以下の整数である。）
で表される化合物を反応させる工程を有する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の一態様によれば、極性化合物の分離能を向上させることが可能な充填剤の製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】実施例１の充填剤を用いた場合のクロマトグラムである。
【図２】比較例１の充填剤を用いた場合のクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
次に、本発明を実施するための形態を図面と共に説明する。
【００１８】
充填剤の製造方法は、ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を反応させる工程と、シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させる工程を有する。これにより、極性化合物の分離能を向上させることができる。
【００１９】
なお、一般に、ヒドロキシル基が残存する無機粒子に、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させると、ヒドロキシル基が減少するため、極性化合物との相互作用が減少し、極性化合物の分離能が低下する（例えば、特開平４−２１２０５８号公報参照）。
【００２０】
しかしながら、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤と反応させた無機粒子に、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させると、ヒドロキシル基は減少するが、極性化合物との相互作用が増大し、極性化合物の分離能を向上させることができる。
【００２１】
炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基としては、特に限定されないが、アダマンチル基（トリシクロ［３．３．１．１３，７］デシル基）、ビアダマンチル基、トリアダマンチル基、テトラアダマンチル基、ペンタアダマンチル基、ヘキサアダマンチル基、ヘプタアダマンチル基、オクタアダマンチル基、 ノナアダマンチル基、デカアダマンチル基、ウンデカアダマンチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロオクチル基、５−ビシクロ［２．２．１］ヘプチル基、２−（５−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エニル）エチル基、カンファニル基等が挙げられる。中でも、炭素数が５〜３０の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基が好ましい。
【００２２】
置換基としては、特に限定されないが、シアノ基、ハロゲン原子、イソシアネート基、アミノ基、カルボニル基、スルホ基等が挙げられる。
【００２３】
シランカップリング剤は、一般式
【００２４】
【化６】
2015068651.tif 000007
（式中、Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１〜４のアルコキシ基であり、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１〜４のアルコキシ基、置換基により置換されていてもよい炭素数が１〜８のアルキル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２〜８のアルケニル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２〜７のアルキニル基又は置換基により置換されていてもよい炭素数が６〜１２のアリール基であり、Ｒ４は、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基であり、ｎは０〜５の整数である。）
で表される化合物又は一般式
【００２５】
【化７】
2015068651.tif 000008
（式中、Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基又は炭素数が１〜４のアルコキシ基であり、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、炭素数が１〜４のアルコキシ基又は置換基により置換されていてもよい炭素数が１〜８のアルキル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２〜８のアルケニル基、置換基により置換されていてもよい炭素数が２〜７のアルキニル基又は置換基により置換されていてもよい炭素数が６〜１２のアリール基であり、Ｒ３は、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基であり、ｎは０〜５の整数である。）
で表される化合物であることが好ましい。
【００２６】
一般式（６）、（７）において、アルキル基、アルケニル基、アリール基の置換基としては、特に限定されないが、シアノ基、ハロゲン原子、イソシアネート基、アミノ基、カルボニル基、スルホ基等が挙げられる。
【００２７】
一般式（６）で表される化合物としては、特に限定されないが、化学式
【００２８】
【化８】
2015068651.tif 000009
で表されるアダマンチルエチルトリクロロシラン、化学式
【００２９】
【化９】
2015068651.tif 000010
で表されるシクロペンチルトリクロロシラン、化学式
【００３０】
【化１０】
2015068651.tif 000011
で表されるシクロヘキシルトリクロロシラン、化学式
【００３１】
【化１１】
2015068651.tif 000012
で表されるシクロオクチルトリクロロシラン、化学式
【００３２】
【化１２】
2015068651.tif 000013
で表される５−ビシクロ［２．２．１］ヘプチルトリクロロシラン、化学式
【００３３】
【化１３】
2015068651.tif 000014
で表される２−（５−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エニル）エチルトリクロロシラン、化学式
【００３４】
【化１４】
2015068651.tif 000015
で表されるカンファニルトリクロロシラン等が挙げられ、二種以上併用してもよい。
【００３５】
一般式（７）で表される化合物としては、特に限定されないが、化学式
【００３６】
【化１５】
2015068651.tif 000016
で表される１，３−ビス［２−（５−ビシクロ［２．２．１］ヘプチル）エチル］テトラメチルジシロキサン等が挙げられ、二種以上併用してもよい。
【００３７】
なお、ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を反応させる際に、一般式（６）、（７）で表される化合物を併用してもよい。
【００３８】
ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を反応させる方法としては、特に限定されないが、溶媒中で反応させる方法等が挙げられる。
【００３９】
溶媒としては、特に限定されないが、トルエン、キシレン等が挙げられる。
【００４０】
なお、シランカップリング剤がハロシリル基を有する場合、発生する酸をトラップするため、塩基の存在下、反応させることが好ましい。
【００４１】
塩基としては、特に限定されないが、ピリジン、イミダゾール等が挙げられる。
【００４２】
ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤と反応させる温度は、通常、０〜４００℃である。
【００４３】
ヒドロキシル基を有する無機粒子と、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤と反応させる時間は、通常、０．５〜７２時間である。
【００４４】
一般式（１）〜（５）において、アルキル基の置換基としては、特に限定されないが、フェニル基、シアノ基、アルコキシ基等が挙げられる。
【００４５】
一般式（１）で表される化合物としては、特に限定されないが、ジメチルジメトキシシラン、１，１，３，３−テトラメチルジシロキサン、１，３−ジメトキシテトラメチルジシロキサン、１，１，３，３，５，５−ヘキサメチルトリシロキサン等が挙げられ、二種以上併用してもよい。
【００４６】
一般式（２）で表される化合物としては、特に限定されないが、ジエチルメチルシラン、トリエチルシラン、トリメチルメトキシシラン等が挙げられ、二種以上併用してもよい。
【００４７】
一般式（３）で表される化合物としては、特に限定されないが、ヘキサメチルジシロキサン、テトラデカメチルヘキサシロキサン等が挙げられる。
【００４８】
一般式（４）で表される化合物としては、特に限定されないが、ヘキサメチルジシラン、ヘキサメチルジシラザン等が挙げられ、二種以上併用してもよい。
【００４９】
一般式（５）で表される化合物としては、特に限定されないが、ヘキサメチルシクロトリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサシロキサン、ヘキサメチルシクロトリシラザン等が挙げられ、二種以上併用してもよい。
【００５０】
なお、シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させる際に、一般式（１）〜（５）で表される化合物を併用してもよい。
【００５１】
シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させる方法としては、特に限定されないが、不活性ガス雰囲気下、気相中で反応させる方法、溶媒中で反応させる方法等が挙げられる。
【００５２】
不活性ガスとしては、特に限定されないが、窒素、ヘリウム、アルゴン等が挙げられる。
【００５３】
溶媒としては、特に限定されないが、メタノール、トルエン、キシレン等が挙げられる。
【００５４】
なお、シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、ハロシリル基を有する一般式（１）又は（２）で表される化合物を溶媒中で反応させる場合、発生する酸をトラップするため、塩基の存在下、反応させることが好ましい。
【００５５】
塩基としては、特に限定されないが、ピリジン、イミダゾール等が挙げられる。
【００５６】
また、シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を溶媒中で反応させる場合、酸触媒又は塩基触媒の存在下、反応させてもよい。
【００５７】
酸触媒としては、特に限定されないが、塩酸等が挙げられる。
【００５８】
塩基触媒としては、特に限定されないが、アンモニア、トリエチルアミン等が挙げられる。
【００５９】
シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を気相中で反応させる温度は、通常、１８０〜５００℃である。
【００６０】
シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を溶媒中で反応させる温度は、通常、室温〜１５０℃である。
【００６１】
シランカップリング剤と反応させた無機粒子と、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物を反応させる時間は、通常、０．５〜９６時間である。
【００６２】
ヒドロキシル基を有する無機粒子としては、特に限定されないが、シリカ、酸化チタン、酸化亜鉛、酸化ジルコニウム、酸化アルミニウム、ゼオライト等が挙げられる。中でも、全多孔性シリカ、多孔質ガラス、モノリスシリカ、コアシェル型シリカ（表面多孔性シリカ）等のヒドロキシル基を有する多孔質粒子が好ましい。
【００６３】
ヒドロキシル基を有する無機粒子の平均粒径は、通常、１〜２００μｍであり、２〜５０μｍであることが好ましく、２〜２０μｍであることがさらに好ましい。
【００６４】
ヒドロキシル基を有する多孔質粒子の細孔径は、通常、１〜１００ｎｍであり、４〜５０ｎｍであることが好ましく、５〜３０ｎｍであることがさらに好ましい。
【００６５】
ヒドロキシル基を有する多孔質粒子の比表面積は、通常、５０〜８００ｍ２／ｇであり、５０〜６００ｍ２／ｇであることが好ましく、５０〜５００ｍ２／ｇであることがさらに好ましい。
【００６６】
なお、ヒドロキシル基を有する無機粒子を、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤と反応させる前に、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤以外のシランカップリング剤と反応させてもよい。
【００６７】
また、置換基により置換されていてもよい炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤を、一般式（１）、（２）、（３）、（４）又は（５）で表される化合物と反応させる前に、炭素数が５〜１００の単環式又は多環式脂肪族炭化水素基を有するシランカップリング剤以外のシランカップリング剤と反応させてもよい。
【００６８】
充填剤は、カラムに充填して、液体クロマトグラフィーに適用することができ、試料を分析又は分取することができる。
【実施例】
【００６９】
以下、本発明の実施例について、さらに詳しく説明するが、本発明は、実施例により限定されない。
【００７０】
［比較例１］
平均粒径が３μｍ、比表面積が１５０ｍ２／ｇのコアシェル型シリカ２．５ｇを三口フラスコに入れた後、１２０℃で１０時間減圧乾燥させ、冷却した。次に、トルエン１０ｍＬを加えた後、１時間還流した。さらに、アダマンチルエチルトリクロロシラン０．７ｍＬを加えた後、脱水ピリジン０．６ｍＬを加え、３時間還流した。次に、ろ過した後、クロロホルム２０ｍＬ及びメタノール２０ｍＬで洗浄した。さらに、６０％アセトニトリル１０ｍＬを加えた後、１時間攪拌し、ろ過した。次に、メタノール２０ｍＬで洗浄した後、１２０℃で１０時間減圧乾燥させ、充填剤を得た。充填剤は、カーボン量が５．０７％であった。
【００７１】
［実施例１］
比較例１の充填剤２．０ｇを６０ｍＬの耐圧容器に入れた後、１２０℃で５時間減圧乾燥させ、冷却した。次に、窒素雰囲気下、ジメチルジメトキシシラン０．６ｍＬを加えた後、２５０℃で１６時間反応させた。さらに、クロロホルム２０ｍＬ及びメタノール２０ｍＬで洗浄した後、１２０℃で１６時間減圧乾燥させ、充填剤を得た。充填剤は、カーボン量が５．５９％であった。
【００７２】
［極性化合物の分離］
充填剤をカラムに充填した後、移動相として、０．１質量％のギ酸及び５質量％のアセトニトリルを含む水／メタノール混合溶媒（体積比５／９５）を用いて、以下の条件で、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸、３，５−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸及び２，４−ジヒドロキシ安息香酸の混合物を分離した。
【００７３】
カラムの直径：２．１ｍｍ
カラムの長さ：１００ｍｍ
流速：２００μＬ／ｍｉｎ
温度：４０℃
検出器：ＵＶ検出器（波長２５４ｎｍ）
試料の注入量：０．３μＬ
図１及び図２に、実施例１及び比較例１の充填剤を用いた場合のクロマトグラムを示す。
【００７４】
図中、１〜６は、それぞれ２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸、３，５−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸及び２，４−ジヒドロキシ安息香酸のピークを意味する。
【００７５】
図１及び図２から、実施例１の充填剤は、比較例１の充填剤に対して、極性化合物の分離能が向上していることがわかる。
【００７６】
［実施例２］
平均粒径が３μｍ、比表面積が３００ｍ２／ｇの全多孔性シリカ２ｇを三口フラスコに入れた後、１２０℃で１０時間乾燥させ、冷却した。次に、トルエン１０ｍＬを加えた後、１時間還流した。さらに、アダマンチルエチルトリクロロシラン２．０ｍＬを加えた後、脱水ピリジン１．８ｍＬを加え、３時間還流した。次に、ろ過した後、クロロホルム４０ｍＬ及びアセトニトリル４０ｍＬで洗浄した。さらに、６０％アセトニトリル２０ｍＬを加えた後、１時間攪拌し、ろ過した。次に、メタノール３０ｍＬで洗浄した後、１２０℃で１０時間減圧乾燥させ、粉体を得た。
【００７７】
粉体２．０ｇを三口フラスコに入れた後、１２０℃で１０時間乾燥させ、冷却した。次に、トルエン１０ｍＬを加えた後、１時間還流した。さらに、ジメチルジクロロシラン０．５ｍＬを加えた後、脱水ピリジン０．４ｍＬを加え、３時間還流した。次に、ろ過した後、クロロホルム４０ｍＬ及びメタノール４０ｍＬで洗浄した。さらに、６０％アセトニトリル２０ｍＬを加えた後、１時間攪拌し、ろ過した。次に、メタノール３０ｍＬで洗浄した後、１２０℃で１０時間減圧乾燥させ、充填剤を得た。
【図１】
2015068651.tif 000024
【図２】
2015068651.tif 000025