(57)【要約】  器官又は組織における線維症を処置するための医薬の製造における５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドンの使用。それは、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドンが、様々なＥＣＭによって生産された細胞を阻害することができると共にそれらの効果がピルフェニドンよりも高いものであることを示唆する。従って、このタイプの化合物を、器官及び組織において抗繊維化剤を調製するための活性な成分として使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
器官又は組織の線維症を処置するための医薬の製造における、一般的な構造式（Ｉ）、
【化１】
2008535871.tif 000018
を有する、化合物、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２（１Ｈ）−ピリドン類の使用であって、ｎ＝１のとき、置換Ｒ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ニトロ、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化されたアルキル基である；ｎ＝２のとき、置換Ｒ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化されたアルキル基である、使用。
【請求項２】
ｎ＝１である場合には、Ｒは、Ｆ又はＢｒ又はＩであることができる；ｎが２であるとすれば、Ｒは、Ｆ又はＣｌ又はＢｒ又はＩ又は飽和の直鎖のアルキル基、又は飽和の直鎖のアルコキシ基、又は飽和の直鎖のハロゲン化されたアルキル基であることができると共に、Ｒ基についての相対的な位置は、オルト又はメタ又はパラであることができる、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化合物、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２（１Ｈ）−ピリドン類（一般的な構造式Ｉ）は、後に続く特徴：
ｎ＝１，Ｒ＝Ｂｒのとき、前記化合物は、１−（２−ブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３−ブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−ブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
ｎ＝１、Ｒ＝Ｆのとき、前記化合物は、１−（２−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
ｎ＝１、Ｒ＝Ｉのとき、前記化合物は、１−（２−ヨードフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３−ヨードフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−ヨードフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
ｎ＝２、Ｒ＝Ｆ又はＢｒ又はＣｌのとき、前記化合物は、１−（２，３−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，４−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
ｎ＝１又は２、Ｒ＝トリフルオロメチルのとき、前記化合物は、５−メチル−１−（２−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（２，３−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（２，４−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（２，５−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（２，６−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（３，４−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、及び５−メチル−１−（３，５−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
ｎ＝１又は２及びＲ＝メチルのとき、前記化合物は、５−メチル−１−（２−メチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（３−メチルフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，４−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、及び１−（３，５−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
ｎ＝１又は２、Ｒ＝メトキシのとき、前記化合物は、５−メチル−１−（２−メトキシフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、５−メチル−１−（３−メトキシフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、及び１−（３，５−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンである：
を有する、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
好適な置換Ｒは、３の位置におけるフルオロである、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記飽和の直鎖のアルキル基又は前記飽和の分岐鎖のアルキル基は、１−４個の炭素の好適なものと共に、１−６個の炭素を有する、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項６】
前記線維症は、糸球体の硬化症、腎性の間質性の線維症、肝臓の線維症、肺の線維症、腓骨の線維症、心筋の線維症、及び皮膚の線維症、外科手術後の付着、良性の前立腺の肥大、筋骨格の線維症、強皮症、アルツハイマー病、線維化の血管の疾患、並びに緑内障を含む、請求項１乃至５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
前記糸球体の硬化症は、糖尿病性の健康状態によって引き起こされる、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記腎性の間質性の線維症は、尿管の封鎖又は糖尿病のいずれかによるものである、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
前記肝臓の線維症は、住血吸虫の感染に由来するものである、請求項６に記載の使用。
【請求項１０】
前記化合物の投与は、経口的な、注射の、又は局所的な適用によるものであり；前記化合物を、適合性の製薬の担体及び／又は他の薬物と共に処方することができる、請求項１乃至９のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン類の使用に関係する。より詳しくは、本発明は、器官又は組織における線維症を処置するための医薬の製造における５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン類の使用に関係する。
【背景技術】
【０００２】
線維症は、様々な器官又は組織において起こり得るが、いずれの器官又は組織の内の健康な細胞の低減及び繊維化の結合性の組織の質量における増加をも引き起こすと共に、ついには、器官又は組織の正常な構造を損傷させる。損傷は、影響を及ぼされた器官又は組織の生理学的な及び生化学的な機能を減損し得ると共に、器官が完全に活動停止させられることを引き起こすこともある。器官及び組織の線維症についての病原論、診断の方法、予防及び処置の方法は、広範に研究されてきたものである。大幅な進歩は、ある一定のエリアにおいてなされてきたものである。しかしながら、特に有効な治療法のものを開発するというエリアにおいて、なお多数の挑戦がある。
【０００３】
器官又は組織の線維症が、柔組織の細胞の炎症性の変性及び昏睡を引き起こすものである、炎症、免疫学的な反応、虚血、血液力学の変化などのような多重の因子によって引き起こされることは、一般に信じられることである。減損した柔組織の細胞は、次には、数多くのサイトカイン類及び成長因子を解放するためにマクロファージを活性化させるが、それらの間で、ＴＧＦ−βが、決定的なものである。ＴＧＦ−βは、細胞を生産する静止状態の細胞外の基質（ＥＣＭ）を活性化すると共にそれらを筋繊維芽細胞の中へ戻すことができる。新しく形成された筋繊維芽細胞は、コラーゲン、ＥＣＭの鍵となるタンパク質の生産を増加させるだけでなく、ＥＣＭの破壊をもまた減少させる。正味の結果は、器官又は組織の線維症に至るものである、細胞外の基質の累積である。このように、器官又は組織の線維症の発症及び発達は、炎症性の応答の結果及び炎症性のサイトカイン類、主としてＴＧＦ−βの生産である。ＥＣＭの累積並びに器官及び組織の線維症の形成におけるＴＧＦ−βの重大な役割のおかげで、論理的に、抗繊維化の薬物の早期の発達における重要な目標の一つは、化合物を調査することであるが、それは、炎症前のサイトカイン、ＴＧＦ−βの生産を阻害することができるものである。しかしながら、いずれの抗繊維化の薬物の候補についても、より確信するデータは、明白に、様々な生体内の繊維化のモデルを使用する試験から来ることになる。
【０００４】
抗炎症及び抗繊維化の活性を呈示するものである、多くの化合物は、記載されてきたものである。米国特許第３，８３９，３４６号明細書（特許文献１）、米国特許第３，９７４，２８１号明細書（特許文献２）、米国特許第４，０４２，６９９号明細書（特許文献３）、及び米国特許第４，０５２，５０９号明細書（特許文献４）は、後に続くピリドン様の式（Ｏ）：
【０００５】
【化２】
2008535871.tif 000002
を備えた合計で２９個の化合物を公表したが、そこでは、Ａは、芳香族の基である。これらの化合物は、良好な抗炎症及び鎮痛性の活性を有すると共に、尿酸及びブドウ糖の血清のレベルを低減することができる。一つの化合物、特に５−メチル−１−フェニル−２（１Ｈ）−ピリドンは、最良の活性及び低い毒性を有する。
【０００６】
米国特許第５，５１８，７２９号明細書（特許文献５）及び米国特許第５，７１６，６３２号明細書（特許文献６）が、抗繊維化の活性をＮ−置換された２（１Ｈ）−ピリドン（Ｉ）又はＮ−置換された３（１Ｈ）−ピリドンのいずれかの追加の４４個の化合物まで拡張するが、欧州特許出願公開第１１３８３２９号明細書（特許文献７）は、有効な抗繊維化の化合物：ピルフェニドン（ＰＦＤ，５−メチル−１０−フェニル−２（１Ｈ）−ピリドン）を記載した。
【０００７】
５−メチル−１−フェニル−２（１Ｈ）−ピリドン（ピルフェニドン，ＰＦＤ）の抗繊維化の活性の効能は、様々な動物のモデル及び人間の臨床的な試行においてさらに立証されてきた（Ｓｈｉｍａｚｕ  ｅｔ  ａｌ．，ピルフェニドンは、部分的な腎臓切除を伴ったラットにおける残存物の腎臓におけるコラーゲンの累積を予防する。Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．５２（Ｓｕｐｐｌｅ  ６３）：Ｓ２３９−２４３（１９９７）（非特許文献１）；Ｒａｇｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，新しい抗繊維化剤、ピルフェニドンでの特発性の肺の線維症の処置。Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１５９：１０６１−１０６９  （１９９９）（非特許文献２））ものである。これらの研究は、ピルフェニドンが、予防するだけでなく、過剰な細胞外の基質の累積を逆転させることをもまた示唆した。ピルフェニドンの薬理学的な機構は、まだ十分に理解されてきたものではないが、しかし、データは、今まで、ピルフェニドンが、（ＴＧＦ−βを含む）サイトカイン類を下方制御することに有効な化合物であると共に、多重の因子を規制することを通じて繊維芽細胞の活性を減少させることを示唆する。
【０００８】
中国特許第０２１１４１９０．８号は、後に続く一般的な構造の式（Ｉ）：
【０００９】
【化３】
2008535871.tif 000003
を有する、合計３８個の新しい５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２（１Ｈ）−ピリドン化合物の識別及び合成を記載した。
【００１０】
ｎ＝１である場合には、置換Ｒは、Ｆ、Ｂｒ、Ｉであることができる。ｎ＝２である場合には、置換Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン化されたアルキル基であることができる。Ｒ基についての相対的な位置は、オルト又はメタ又はパラである。
【００１１】
米国特許第５，７１６，６３２号明細書は、米国特許第３，９７４，２８１号明細書におけるＧａｄｅｋａｒによって当初より記載された５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２（１Ｈ）−ピリドンの６個の構造の式を列挙した。これらの“置換されたフェニル”化合物について、Ｇａｄｅｋａｒは、最良の生物学的な活性を備えた化合物として置換されてないフェニルを教示するものである構造−活性な関係を確立した。しかしながら、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２（１Ｈ）−ピリドン、１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンが、試験管内である一定の生物学的な活性を示したことは、報告されてきたものである（Ｊ．Ｃｅｎｔ．Ｓｏｕｔｈ  Ｕｎｉｖ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２９：１３９（２００４））。このように、構造の式ＩＩを有する置換されたフェニル化合物が、いずれの望ましい抗繊維化の活性をも有するのであろうかどうかを決定することは、関心のあることである。
【特許文献１】米国特許第３，８３９，３４６号明細書
【特許文献２】米国特許第３，９７４，２８１号明細書
【特許文献３】米国特許第４，０４２，６９９号明細書
【特許文献４】米国特許第４，０５２，５０９号明細書
【特許文献５】米国特許第５，５１８，７２９号明細書
【特許文献６】米国特許第５，７１６，６３２号明細書
【特許文献７】欧州特許出願公開第１１３８３２９号明細書
【非特許文献１】Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．５２（Ｓｕｐｐｌｅ  ６３）：Ｓ２３９−２４３（１９９７）
【非特許文献２】Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１５９：１０６１−１０６９（１９９９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
前述の背景技術に基づいて、本発明は、ピリドン化合物の新規な群を公表するが、それらを、器官又は組織の線維症の予防及び処置用の抗繊維化の薬物の調製に使用することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、新規な群のピリドン化合物について一般的な構造の式（Ｉ）：
【００１４】
【化４】
2008535871.tif 000004
を提供する。
【００１５】
ｎ＝１の場合には、置換Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ニトロ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン化されたアルキルの基であることができる；ｎ＝２の場合には、置換Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン化されたアルキルの基であることができる。これらの化合物を、薬物の調製に使用することができると共に、それは、幅広い一連の範囲の抗器官線維症又は抗組織線維症を有するものである。
【００１６】
本発明において、用語“抗器官又は組織線維症”は、器官／組織における線維症を予防すること、又は、器官／組織における繊維化の工程を遅くする若しくは停止させることを、及び／又は、器官／組織における繊維化の健康状態を逆転することを、意味する。
【００１７】
構造式（Ｉ）においては、好適なｎの数は、１であると共に好適なＲは、Ｆ、Ｂｒ、Ｉである。
【００１８】
ｎ＝２の場合には、Ｒは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、飽和の直鎖のアルキル基、飽和の直鎖のアルコキシ基、飽和の直鎖のハロゲン化されたアルキル基であることができる。Ｒ基についての相対的な位置は、オルト又はメタ又はパラである。
【００１９】
Ｆについての好適な位置は、メタの位置、即ち、３’−フルオロフェニルである。
【００２０】
本発明におけるアルキル置換基は、１−６個の炭素を備えた飽和の直鎖の又は分岐のもののいずれかであると共に、好適なものは、１−４個の炭素である。
【００２１】
５−メチル−１−（置換された  フェニル）−２（１Ｈ）−ピリドン（構造の式Ｉ）の他の例は、後に続く化合物：を含むが、しかし、それらに限定されるものではない。
【００２２】
ｎ＝１，Ｒ＝Ｂｒのとき、化合物は、１−（２−ブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３−ブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−ブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンであることができる。
【００２３】
ｎ＝１，Ｒ＝Ｆのとき、化合物は、１−（２−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンであることができる。
【００２４】
ｎ＝１，Ｒ＝Ｉのとき、化合物は、１−（２−ヨードフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３−ヨードフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−ヨードフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンできる。
【００２５】
ｎ＝２，Ｒ＝Ｆ、Ｂｒ、又はＢｒのとき、化合物は、１−（２，３−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，４−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ジブロモフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ジクロロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ジフルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンであることができる。
【００２６】
ｎ＝１又は２及びＲ＝トリフルオロメチルのとき、化合物は、１−（２−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，３−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，４−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，５−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（２，６−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，４−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン、１−（３，５−ビス−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドンであることができる。
【００２７】
ｎ＝１又は２及びＲ＝メチルのとき、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドンは、１−（２−メチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（３−メチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，３−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，４−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，５−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，６−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（３，４−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（３，５−ジメチルフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン：である。
【００２８】
ｎ＝１又は２及びＲ＝メトキシルのとき、化合物は、１−（２−メトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（３−メトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，３−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，４−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，５−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（２，６−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジン、１−（３，５−ジメトキシフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）ピリジンであることができる。
【００２９】
本発明の例に従って、好適な製薬の組成物を、抗腎性間質性線維症、抗糸球体硬化症、抗肝臓硬化症、抗肺硬化症、抗腹膜線維症、抗心筋線維症、抗皮膚線維症、抗外科的手術後付着、抗良性前立腺肥大、抗筋肉骨格線維症、抗強皮症、抗アルツハイマー病、及び、抗繊維化血管の薬物として使用することができる。
【００３０】
また、本発明の例に従って、一般的な構造の式（Ｉ）の化合物を、住血吸虫症によって引き起こされた肝臓の線維症の処置のための治療の薬剤を調製するために使用することができる。
【００３１】
また、本発明の例に従って、一般的な構造の式（Ｉ）の化合物を、糖尿病によって引き起こされた糸球体の硬化症の処置のための治療の薬剤を調製するために使用することができる。
【００３２】
また、本発明の例に従って、一般的な構造の式（Ｉ）の化合物を、尿のトラックの封鎖又は糖尿病によって引き起こされた腎性の間質性の線維症の処置のための治療の薬剤を調製するために使用することができる。
【００３３】
また、本発明の例に従って、一般的な構造の式（Ｉ）の化合物からの調製された治療の薬剤を、経口的な、注射可能な、又は局所的な経路を通じて投与することができる。治療の試剤を、いずれの適当な製薬の処方にも調製することができる。
【００３４】
本発明においては、選択された化合物を、細胞を生産するＥＣＭ及び線維症の疾患についての様々な動物モデルを使用することで、試験してきたものである。結果は、５−メチル−１−（置換されたフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン類が、細胞を生産する様々なＥＣＭを抑制することが可能なもの、及び、ピルフェニドンよりも効能のあるものであることを立証する。従って、新規な化合物のこの群を、抗器官又は組織の繊維化の薬物について活性な成分として使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
本発明において、５−メチル−１−（３’−フルオロフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＦ−ＰＤ）は、抗繊維化の薬物の調製を例証するための例として使用されるが、それらは、５−メチル−１−（置換されたフェニル）２−（１Ｈ）−ピリドン類を含むものである。ＡＫＦ−ＰＤ、５−メチル−１−（３’−フルオロフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドンは、中国特許第０２１１４１９０．８号明細書に記載された工程に従って作られる。
【００３６】
例１
１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン及びピルフェニドンによるマウスの糸球体間質の細胞の増殖の抑制
【００３７】
細胞の増殖は、ＭＴＴ分析によって測定された。１０％の胎児の血清を備えたＤＭＥＭは、細胞の培養物の媒質として使用された。細胞は、懸濁液において調製され（１×１０５／ｍｌ）、且つ、懸濁液の１００μＬが、９６個のウェルのプレートの各々のウェルへ移された。一度細胞が、プラスチックへ付着させられると、培養物は、血清の無い媒質に変化させられ、且つ、別の２４時間の間連続させられた。血清の無い媒質は、吸引され、且つ、１０％の血清の媒体における様々な濃度の５−メチル−１−（３’−フルオロフェニル）−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）又はピルフェニドン（ＰＦＤ）は、各々の濃度について５個の複製を備えた各々のウェルの中へ追加された。細胞は、１２、２４、及び４８時間の後の薬物の処置においてＭＴＴ（ウェル当たり１０μＬ）で染色された。４時間の温置の後に、ＭＴＴを備えた媒質は、各々のウェルから吸引された。一百μＬのＭＴＴの溶媒が、１５分の間に各々のウェルへ追加された。そして、溶解させられたＭＴＴは、５７０ｎｍにおけるプレートの読取装置で測定された。
【００３８】
結果は、表１に示される。２４時間で、５００μｇ／ｍｌのＡＫＦ−ＰＤは、マウスの糸球体間質の細胞の増殖を抑制したが、しかし、５００μｇ／ｍｌのピルフェニドンは、しなかった。１０００μｇ／ｍｌ及び２５００μｇ／ｍｌの濃度では、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、マウスの糸球体間質の細胞の増殖を抑制したが、しかし、ＡＫＦ−ＰＤは、ピルフェニドンよりも効能のあるものであった。４８時間の時点で、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、全ての試験する濃度のレベルにおいてマウスの糸球体間質の細胞に抑制的な効果を有するものであった；しかしながら、ＡＫＦ−ＰＤは、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌでピルフェニドンよりも強い効果を示した。結論において、ＡＫＦ−ＰＤは、マウスの糸球体間質の細胞の増殖を抑制することができると共にある一定の濃度のレベルでピルフェニドンよりも効能のある抑制的な効果を有する。
【００３９】
表１
マウスの糸球体間質の細胞におけるＡＫＦ−ＰＤ及びＰＥＤの効果
【００４０】
【表１】
2008535871.tif 000005
＊ｐ＜０．０５  対  対照；＊＊ｐ＜０．０１  対  対照；＊＊＊ｐ＜０．００１対  対照
＋ｐ＜０．０５  対  ＡＫＦ−ＰＤ；＋＋ｐ＜０．０１  対  ＡＫＦ−ＰＤ；＋＋＋ｐ＜０．００１  対  ＡＫＦ−ＰＤ
例２
−１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン及びピルフェニドンによるラットの心筋の繊維芽細胞の増殖の抑制
【００４１】
細胞の増殖は、ＭＴＴ分析によって測定された。１０％の胎児の血清を備えたＤＭＥＭは、細胞の培養物の媒質として使用された。細胞は、懸濁液において調製され（１×１０５／ｍｌ）、且つ、懸濁液の１００μＬが、９６個のウェルのプレートの各々のウェルへ移された。一度細胞が、プラスチックへ付着させられると、培養物は、血清の無い媒質に変化させられ、且つ、別の２４時間の間に温置させられた。そして、血清の無い媒質は、吸引され、且つ、１０％の血清の媒体における様々な濃度の１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）又はピルフェニドン（ＰＦＤ）は、各々の濃度について５個の複製を備えた各々のウェルの中へ追加された。細胞は、１２、２４、又は４８時間の後の薬物の処置においてＭＴＴ（ウェル当たり１０μＬ）で染色された。４時間の温置の後に、ＭＴＴを備えた媒質は、各々のウェルから吸引された。一百μＬのＭＴＴの溶媒が、１５分の間に各々のウェルへ追加され、且つ、溶解させられたＭＴＴは、５７０ｎｍにおけるプレートの読取装置で測定された。
【００４２】
結果は、表２に示される。１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ及び２５００μｇ／ｍｌの濃度で、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、２４時間の処置の後にラットの心筋の繊維芽細胞の増殖を抑制することができる；しかしながら、１０００μｇ／ｍｌ及び２５００μｇ／ｍｌのレベルで、ＡＫＦ−ＰＤは、ピルフェニドンよりも効能のあるものであった。同じ濃度の範囲で、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、４８時間の後に細胞の増殖における抑制的な効果を示したが、しかし、ＡＫＦ−ＰＤは、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、及び１０００μｇ／ｍｌで、より能のあるものであった。結論において、ＡＫＦ−ＰＤは、ラットの心筋の繊維芽細胞においてピルフェニドンよりも効能のある抗増殖剤である。
【００４３】
表２
ラットの心筋の繊維芽細胞におけるＡＫＦ−ＰＤ及びＰＥＤの効果
【００４４】
【表２】
2008535871.tif 000006
＊ｐ＜０．０５  対  対照；＊＊ｐ＜０．０１  対  対照；＊＊＊ｐ＜０．００１  対  対照
＋ｐ＜０．０５  対  ＡＫＦ−ＰＤ；＋＋ｐ＜０．０１  対  ＡＫＦ−ＰＤ；＋＋＋ｐ＜０．００１  対  ＡＫＦ−ＰＤ
例３
１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン及びピルフェニドンによる人間の星状細胞の増殖の抑制
細胞の増殖は、ＭＴＴ分析によって測定された。１０％の胎児の血清を備えたＤＭＥＭは、細胞の培養物の媒質として使用された。細胞は、懸濁液において調製され（１×１０５／ｍｌ）、且つ、懸濁液の１００μＬが、９６個のウェルのプレートの各々のウェルへ移された。一度細胞が、プラスチックへ付着させられると、培養物は、血清の無い媒質に変化させられ、且つ、別の２４時間の間に温置させられた。そして、血清の無い媒質は、吸引され、且つ、１０％の血清の媒体における様々な濃度の１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）又はピルフェニドン（ＰＦＤ）は、各々の濃度について５個の複製を備えた各々のウェルの中へ追加された。細胞は、１２、２４、又は４８時間の後の薬物の処置においてＭＴＴ（ウェル当たり１０μＬ）で染色された。４時間の温置の後に、ＭＴＴを備えた媒質は、各々のウェルから吸引された。一百μＬのＭＴＴの溶媒が、１５分の間に各々のウェルへ追加され、且つ、そして、溶解させられたＭＴＴは、５７０ｎｍにおけるプレートの読取装置で測定された。
【００４５】
結果は、表３に示される。５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ、及び２５００μｇ／ｍｌで、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、１２時間の後の薬物の処置から始まる人間の星状細胞の増殖を抑制することができる。２４時間の時点で、１０００μｇ／ｍｌ及び２５００μｇ／ｍｌのＡＫＦ−ＰＤは、ピルフェニドンよりも抑制的なものであった。４８時間で、ＡＫＦ−ＰＤは、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ及び２５００μｇ／ｍｌの濃度でピルフェニドンよりも抑制的なものであった。結論において、ＡＫＦ−ＰＤは、人間の星状細胞においてピルフェニドンよりも効能のある抗増殖剤である。
【００４６】
表３
人間の星状細胞におけるＡＫＦ−ＰＤ及びＰＥＤの効果
【００４７】
【表３】
2008535871.tif 000007
＊ｐ＜０．０５  対  対照；  ＊＊ｐ＜０．０１  対  対照；  ＊＊＊ｐ＜０．００１  対  対照
＋ｐ＜０．０５  対  ＡＫＦ−ＰＤ；  ＋＋ｐ＜０．０１  対  ＡＫＦ−ＰＤ；  ＋＋＋ｐ＜０．００１  対  ＡＫＦ−ＰＤ
例４
１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン及びピルフェニドンによるラットの肺の繊維芽細胞の増殖の抑制
【００４８】
細胞の増殖は、ＭＴＴ分析によって測定された。１０％の胎児の血清を備えたＤＭＥＭは、細胞の培養物の媒質として使用された。細胞は、懸濁液において調製され（１×１０５／ｍｌ）、且つ、懸濁液の１００μＬが、９６個のウェルのプレートの各々のウェルへ移された。一度細胞が、プラスチックへ付着させられると、培養物は、血清の無い媒質に変化させられ、且つ、別の２４時間の間に温置させられた。そして、血清の無い媒質は、吸引され、且つ、１０％の血清の媒体における様々な濃度の１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）又はピルフェニドン（ＰＦＤ）は、各々の濃度について５個の複製を備えた各々のウェルの中へ追加された。細胞は、８、２０、又は４４時間の後の薬物の処置においてＭＴＴ（ウェル当たり１０μＬ）で染色された。４時間の温置の後に、ＭＴＴを備えた媒質は、各々のウェルから吸引された。一百μＬのＭＴＴの溶媒が、１５分の間に各々のウェルへ追加され、且つ、溶解させられたＭＴＴは、５７０ｎｍにおけるプレートの読取装置で測定された。
【００４９】
結果は、表４に示される。２４時間の処置の後で、ＡＫＦ−ＰＤは、１０００μｇ／ｍｌと同程度の低いところにラットの肺の繊維芽細胞の増殖を抑制することができるであろうし、且つ、それは、２５００μｇ／ｍｌでピルフェニドンよりも抑制的なものであった。４８時間の処置の後に、両方の化合物は、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ、及び２５００μｇ／ｍｌの薬物の濃度で効果を有するが、しかし、ＡＫＦ−ＰＤの抗増殖の効果は、５００μｇ／ｍｌ及び１０００μｇ／ｍｌの濃度でピルフェニドンのものよりも強いものであった。結論において、ＡＫＦ−ＰＤは、ラットの肺の繊維芽細胞においてピルフェニドンよりも効能のある抗増殖剤である。
【００５０】
表４
ラットの肺の繊維芽細胞におけるＡＫＦ−ＰＤ及びＰＥＤの効果
【００５１】
【表４】
2008535871.tif 000008
＊ｐ＜０．０５  対  対照；  ＊＊ｐ＜０．０１  対  対照；  ＊＊＊ｐ＜０．００１  対  対照
＋ｐ＜０．０５  対  ＡＫＦ−ＰＤ；  ＋＋ｐ＜０．０１  対  ＡＫＦ−ＰＤ；  ＋＋＋ｐ＜０．００１  対  ＡＫＦ−ＰＤ
例５
１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン及びピルフェニドンによる人間の皮膚の傷を形成する繊維芽細胞の増殖の抑制
細胞の増殖は、ＭＴＴ分析によって測定された。１０％の胎児の血清を備えたＤＭＥＭは、細胞の培養物の媒質として使用された。細胞は、懸濁液において調製され（１×１０５／ｍｌ）、且つ、懸濁液の１００μＬが、９６個のウェルのプレートの各々のウェルへ移された。一度細胞が、プラスチックへ付着させられると、培養物は、血清の無い媒質に変化させられ、且つ、別の２４時間の間に温置させられた。そして、血清の無い媒質は、吸引され、且つ、１０％の血清の媒体における様々な濃度の１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）又はピルフェニドン（ＰＦＤ）は、各々の濃度について５個の複製を備えた各々のウェルの中へ追加された。細胞は、１２、２４、又は４８時間の後の薬物の処置においてＭＴＴ（ウェル当たり１０μＬ）で染色された。４時間の温置の後に、ＭＴＴを備えた媒質は、各々のウェルから吸引された。一百μＬのＭＴＴの溶媒が、１５分の間に各々のウェルへ追加させられ、且つ、溶解させられたＭＴＴは、５７０ｎｍにおけるプレートの読取装置で測定された。
【００５２】
結果は、表５に示される。１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ、及び２５００μｇ／ｍｌの濃度での２４時間の間における薬物の処置の後で、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、人間の皮膚の繊維芽細胞の成長を阻害することが可能なものであった；しかしながら、ＡＫＦ−ＰＤは、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ、及び２５００μｇ／ｍｌの濃度でピルフェニドンよりも効能のあるものであった。４８時間の処置の後に、５００μｇ／ｍｌ又は１０００μｇ／ｍｌのＡＫＦ−ＰＤは、類似の濃度のピルフェニドンよりも多くの阻害を示した。結論において、ＡＫＦ−ＰＤは、人間の皮膚の繊維芽細胞においてピルフェニドンよりも効能のある抗増殖剤である。
【００５３】
表５
人間の皮膚の傷を形成する繊維芽細胞におけるＡＫＦ−ＰＤ及びＰＥＤの効果
【００５４】
【表５】
2008535871.tif 000009
＊ｐ＜０．０５  対  対照；＊＊ｐ＜０．０１  対  対照；＊＊＊ｐ＜０．００１  対  対照
＋ｐ＜０．０５  対  ＡＫＦ−ＰＤ；＋＋ｐ＜０．０１  対  ＡＫＦ−ＰＤ；＋＋＋ｐ＜０．００１  対  ＡＫＦ−ＰＤ
例６
１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン及びピルフェニドンによる人間の腹膜の中皮の細胞の増殖の抑制
【００５５】
細胞の増殖は、ＭＴＴ分析によって測定された。１０％の胎児の血清を備えたＤＭＥＭは、細胞の培養物の媒質として使用された。細胞は、懸濁液において調製され（１×１０５／ｍｌ）、且つ、懸濁液の１００μＬが、９６個のウェルのプレートの各々のウェルへ移された。一度細胞が、プラスチックへ付着させられると、培養物は、血清の無い媒質に変化させられ、且つ、別の２４時間の間に温置させられた。そして、血清の無い媒質は、吸引され、且つ、１０％の血清の媒体における様々な濃度の１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）又はピルフェニドン（ＰＦＤ）は、各々の濃度について５個の複製を備えた各々のウェルの中へ追加された。細胞は、１２、２４、又は４８時間の後の薬物の処置においてＭＴＴ（ウェル当たり１０μＬ）で染色された。４時間の温置の後に、ＭＴＴを備えた媒質は、各々のウェルから吸引された。一百μＬのＭＴＴの溶媒が、１５分の間に各々のウェルへ追加され、且つ、溶解させられたＭＴＴは、５７０ｎｍにおけるプレートの読取装置で測定された。
【００５６】
結果は、表６に示される。５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ、及び２５００μｇ／ｍｌの濃度での２４時間の間における薬物の処置の後で、ＡＫＦ−ＰＤ及びピルフェニドンの両方は、人間の腹膜の中皮の細胞の成長を阻害することが可能なものであった；しかしながら、ＡＫＦ−ＰＤは、１０００μｇ／ｍｌ及び２５００μｇ／ｍｌの濃度でピルフェニドンよりも効能のあるものであった。４８時間の処置の後に、１０００μｇ／ｍｌのＡＫＦ−ＰＤは、類似の濃度のピルフェニドンよりも多くの阻害を示した。結論において、ＡＫＦ−ＰＤは、人間の腹膜の中皮の細胞においてピルフェニドンよりも効能のある抗増殖剤である。
【００５７】
表６
人間の腹膜の中皮の細胞においてＡＫＦ−ＰＤ及びＰＦＤの効果
【００５８】
【表６】
2008535871.tif 000010
＊ｐ＜０．０５  対  対照；  ＊＊ｐ＜０．０１  対  対照；  ＊＊＊ｐ＜０．００１  対  対照
＋ｐ＜０．０５  対  ＡＫＦ−ＰＤ；  ＋＋ｐ＜０．０１  対  ＡＫＦ−ＰＤ；  ＋＋＋ｐ＜０．００１  対  ＡＫＦ−ＰＤ
例７
糸球体硬化症及び間質性の腎性の線維症における１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＦ−ＰＤ）の効果
【００５９】
ラットの糖尿病性の腎臓の疾患は、抗糸球体硬化症及び腎性の間質性の線維症を予防する際に１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）の有効性を試験するためにストレプトゾトシン（ＳＴＺ）によって誘発された。
【００６０】
八週間の老齢の雄のウィスターラット（１８０ｇ〜２２０ｇ）は、正常なもの、糖尿病性のネフローゼ、糖尿病性のネフローゼ／バルサルタン、又は糖尿病性のネフローゼ／ＡＫＦ−ＰＤとして無作為に群分けされた。糖尿病は、ＳＴＺの５５ｍｇ／ｋｇの単一の腹腔内の注射によって誘発された。糖尿病性の健康状態は、２４時間の後で、後に続く試験の結果：１３．９ｍｍｏｌ／Ｌの空腹時の血中のブドウ糖、１６．７ｍｍｏｌ／Ｌの無作為の血中のブドウ糖、及び陽性の尿中のブドウ糖によって、確認された。糖尿病性のラットが、４週の後で３０ｍｇ／日よりも高い尿中のタンパク質のレベルを有するものであったとすれば、ラットのモデルは、糖尿病性のネフローゼについて確立された。
【００６１】
糖尿病性のネフローゼ／ＡＫＦ−ＰＤの群におけるラットは、５００ｍｇ／ｋｇ／日のＡＫＦ−ＰＤが経口的に給餌され、且つ、糖尿病性のネフローゼ／バルサルタンの群におけるラットは、３０ｍｇ／ｋｇ／日のバルサルタンが給餌された。正常な生理食塩水が、糖尿病性のネフローゼの群におけるラットに給餌された。１２週の薬物の処置の後に、全てのラットは、犠牲にされ、且つ、それらの腎臓は、病理学的な検査のために取り除かれた。糸球体及び腎臓の細管の間質の組織についての標準的な組織病理学的なスコアリングシステムについての参照文献は、：Ｒａｄｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＩｇＡ腎障害における腎臓の成果を予測すること。Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．８：１９９−２０７  （１９９７）；Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，プロマイシンの腎障害におけるアンギオテンシンＩＩ受容体の拮抗物質とアンギオテンシンを転換する酵素の阻害剤との間における腎臓の保護の効果及びそれらの可能性のある機構の比較。Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｍｕｌｔ．Ｏｒｇａｎ  Ｄｉｓ．Ｅｌｄｅｒｌｙ  １：３６−４０（２００２）である。
【００６２】
腎臓の組織の顕微鏡の検査の結果は、表７に示される。いずれの処置無しの糖尿病性のネフローゼのラットと比較すると、ＡＫＦ−ＰＤで処置されたラットは、それらの糸球体及び腎臓の細管の間質の組織におけるより少ない損傷を示したが、ＡＫＦ−ＰＤが、糖尿病性の健康状態によって引き起こされた糸球体硬化症及び腎臓の細管の間質の線維症を有効に処置することもあることを示唆する。
【００６３】
表７
異なる処置の群からの組織病理学的なスコア
【００６４】
【表７】
2008535871.tif 000011
例８
肺の線維症における１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＦ−ＰＤ）の効果
【００６５】
ブレオマイシンで誘発されたラットの肺の線維症は、１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＤ−ＰＤ）を試験するために選択される。雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（６−８週の老齢のもの、１８０〜２２０ｇ）は、規則正しい条件の下で世話された。動物は、３個の群：偽の外科手術の群、モデル疾患の群、及び疾患／ＡＫＦ−ＰＤの群へと無作為に分割された。６ｍｇ／ｋｇ／４ｍｌのブレオマイシンは、モデル疾患の群及び疾患／ＡＫＦ−ＰＤの群におけるラットの気管へとゆっくりと浸出された。同じ量の正常な生理食塩水は、偽の外科手術の群におけるラットの気管へと浸出された。
【００６６】
５００ｍｇ／ｋｇのＡＫＦ−ＰＤは、手術より先の２日から手術後の２７日を通じて、毎日、疾患／ＡＫＦ−ＰＤの群におけるラットの腹部の中へと直接的に勢いよく流された。正常な生理食塩水は、疾患の群及び偽の外科手術の群の両方において全ての動物について使用された。動物は、２７日後の外科手術に犠牲にされ、且つ、肺の組織が、病理学的な試料の調製について取り除かれた。各々のラットからのヘマトキシリン・エオシン染色された肺の組織は、繊維化の病変の頻度及び重症度を決定するために、顕微鏡の下で検査された。肺の組織の線維症の評価は、Ｓｚａｐｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，裸の胸腺欠損のマウスにおけるブレオマイシンで誘発された間質性の肺の疾患。Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１２０：８９３−９（１９７９）の方法に従って実行された。表８に示されたように、ＡＫＦ−ＰＤで処置されたラットは、疾患の群におけるものと比較すると、あまり重症なものではない繊維化の病変を示したが、ＡＫＦ−ＰＤが、肺の線維症の疾患を処置するための有効な薬剤であることもあることを示唆する。
【００６７】
表８
繊維化の病変の頻度及び重症度の比較
【００６８】
【表８】
2008535871.tif 000012
例９
肝臓の線維症における１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＦ−ＰＤ）の効果
【００６９】
Ｋｕｎ  Ｍｉｎｇ（ＫＭ）マウスは、を住血吸虫症の肝臓の線維症を誘発させるために住血吸虫症のミラシジウムに感染させられた。四週から六週までの老齢の雄のＫｕｎ  Ｍｉｎｇ（ＫＭ）マウス（１８−２２ｇ）は、健常なもの、感染させられたもの、感染させられたもの／ピクイトン（Ｐｙｑｕｉｔｏｎ）、感染させられたもの／γ−インターフェロン、及び感染させられたもの／ＡＫＦ−ＰＤの群へと無作為に群分けされた。十匹の住血吸虫症のミラシジウムが、感染のために各々のマウスのシェービングされた腹部の皮膚に置かれた。感染させられたもの／ピクイトン、感染させられたもの／γ−インターフェロン、及び感染させられたもの／ＡＫＦ−ＰＤの群における感染後の八週のマウスは、４日の間における６５０ｍｇ／ｋｇのピクイトンで処置することによって、消毒された。五百ｍｇ／ｋｇのＡＫＦ−ＰＤが、感染させられたもの／ＡＫＦ−ＰＤの群の消毒されたマウスへ、毎日、経口的に与えられた。消毒されたマウスには、毎日、（筋肉内の）５０，０００単位のγ−インターフェロンが与えられた。感染させられたもの／ピクイトン及び感染されられたものの群における消毒されたマウスには、薬物の投与の処置と同じ方式で、一日に一度、通常の生理食塩水が経口的に与えられた。薬物又は通常の生理食塩水の処置は、８週の間に連続させられた。全てのマウスは、薬物の処置を中断した後一週で、犠牲にされ、且つ、各々のマウスからの肝臓の左葉が、病理学的な検査のために取得された。
【００７０】
肝臓の組織のＨＥで染色されたスライスの検査は、以下のように実行された。一般には、住血吸虫症のミラシジウムの感染の１６週の後で、住血吸虫の卵子で誘発された小結節の面積は、肝臓の線維症の重症度に直接的に相関するであろう。従って、住血吸虫の卵子で誘発された小結節の面積は、高い分解能のカラーの病理学の図式の分析器（ＨＰＩＡＳ−１０００）を使用することで、測定された。密に詰め込まれた卵子を備えた５個の小結節の面積の総和及び軽く詰め込まれた卵子を備えた５個の小結節の面積の総和は、各々のスライスについて測定された。表９及び１０に示されたように、ＡＫＦ−ＰＤで処置された動物は、処置無し（感染されたもののみ）又はピクイトンで処置された群のいずれかにおけるものよりも住血吸虫の卵子の小結節のより小さい面積（μｍ２）を有するものであった。これらの結果は、ＡＫＦ−ＰＤが、住血吸虫の肝臓の線維症を処置するための有効な薬理学的な薬剤であることもあることを示唆する。
【００７１】
表９  住血吸虫の卵子で誘発された小結節の面積の比較
【００７２】
【表９】
2008535871.tif 000013
表１０  表９における群についてのＰ値
【００７３】
【表１０】
2008535871.tif 000014
例１０
間質性のＮａｐｏｒｏｙｌ線維症のラットのモデルにおける１−（３’−フルオロフェニル）−５−メチル−２−（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＦ−ＰＤ）の効果
【００７４】
ＡＫＦ−ＰＤの抗線維症の効果は、単一の側の尿管の外科手術の結紮によって誘発された間質性のｎａｐｈｏｒｉａｌ線維症のＳＤのラットのモデルにおいて試験された。八週の老齢の雄のＳＤラット（１８０ｇ〜２２０ｇ）は、偽の外科手術の群、疾患のモデルの群、エナラプリル（１０ｍｇ／ｋｄ／日）の群、及びＡＫＦ−ＰＤ（５００ｍｇ／ｋｇ／日）の群へと無作為に分割された。無菌の条件の下で、疾患のモデルの群、エナラプリル及びＡＫＦ−ＰＤにおける全ての動物は、左の側の尿管の結紮のために外科手術の手順を有するものであった。偽の外科手術の群の動物は、結紮のステップを除いて、同じ外科手術の手順を経験した。それぞれの薬物は、手順より先の一日から外科手術の手順の後の１４日までエナラプリル及びＡＫＦ−ＰＤの群におけるラットへ経口的に投与された。通常の生理食塩水が、疾患のモデル及び偽の外科手術のものの群におけるラットに類似の様式で投与された。動物は、外科手術の手順の後の１４日に犠牲にされ、且つ、それらの左の腎臓は、病理学的な（ＨＥで染色する）検査のために、取り除かれた。間質性の区画についての組織学的なスコアリングは、Ｒａｄｆｏｒｄの方法（Ｒａｄｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｒｅｎａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ＩｇＡ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．  Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．８：１９９−２０７（１９９７））に従って行われた。表１１に示されたように、ＡＫＦ−ＰＤで処置されたラットは、疾患のモデル及びエナラプリルの群におけるものに対して比較することで、間質性の組織における低減された病変を示したが、ＡＫＦ−ＰＤが、間質性の腎性の線維症についての有効な薬物であることもあることを示唆するものである。
【００７５】
表１１
間質性の区画についての組織学的なスコアの比較
【００７６】
【表１１】
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例１１
１−（３−フルオロフェニル）−５−メチル−２（１Ｈ）−ピリドン（ＡＫＦ−ＰＤ）及びピルフェニドンの急性の毒性の比較
【００７７】
１８ｇ−２２ｇの間の重量である雄及び雌のＫｕｎ  Ｍｉｎｇ（ＫＭ）マウスは、Ｈｓｉａｎｇ−Ｙａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ、ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｓｏｕｔｈ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの動物の施設から獲得された。五十匹のＫｕｎ  Ｍｉｎｇマウスは、各々の群について５匹の雄及び５匹の雌のマウスを備えた、５個の群へと無作為に割り当てられた。動物は、薬物の処置（ＡＫＦ−ＰＤ又はピルフェニドンのいずれか）を開始する前に通常の水の供給と共に断食すること経験した。薬物は、胃管栄養法によって経口的に投与された。液体の薬物の体積は、２０ｍｌ／ｋｇの体重のものであった。ＡＫＦ−ＰＤが投与されたものについての薬用量の範囲は、１０７１ｍｇ／ｋｇから６０００ｍｇ／ｋｇまでであった。二つの隣接した用量の間における薬用量の差異は、１：０．６５（ある用量  対  次により低い用量）であった。全ての動物は、日常的な条件の下で維持された。薬物の処置の後の１４日以内の急性の毒性の反応及び死亡は、記録された。死体解剖は、全ての死亡した動物について行われ、且つ、目視の検査が、全ての器官において行われた。
【００７８】
ＬＤ５０は、Ｂｌｉｓｓの方法に従って計算された。１−（３−フルオロフェニル）−５−メチル−２（１Ｈ）−ピリドンについての急性の毒性ＬＤ５０は、２４０２．７０−−３６９５．７３ｍｇ／ｋｇの９５％の信頼限界で、２９７９．８９ｍｇ／ｋｇであった（表１２）。ピルフェニドンについてのＬＤ５０は、５５０．９−−１６５６．７ｍｇ／ｋｇの９５％の信頼限界で、９５５．４ｍｇ／ｋｇであった（表１３）。表１３の結果は、文献に報告されたもの997.7mg/kg（米国特許第５，３１０，５６２号明細書）及び１１１２  ｍｇ／ｋｇ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５：４８２３（２００５））：に非常に近いものである。これらの結果は、ＡＫＦ−ＰＤについての毒性は、ピルフェニドンのものに比較されると、３倍未満である（２９７８  対  ９５５）ことを示唆する。
【００７９】
表１２  
５−メチル−１−（３−フルオロフェニル）−２（１Ｈ）−ピリドンのＬＤ５０
【００８０】
【表１２】
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表１３
ピルフェニドンのＬＤ５０
【００８１】
【表１３】
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【国際調査報告】
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