(57)【要約】  新規の式(Ｉ)の4-アミノチアゾール誘導体を開示する。こられの化合物は、サイクリン依存性キナーゼを阻害する。これらの化合物及びそれらの医薬的に許容され得る塩及びエステルは、抗増殖性活性を有し、癌、特に固形腫瘍の治療または制御に有用である。本発明は、更にかかる化合物を含む医薬組成物、及び、癌、特に乳房、肺、結腸、及び前立腺の腫瘍を治療または制御する方法に関する。更なる開示は、これらの新規4-アミノチアゾール誘導体の調製における有用な中間体である。
2008505950.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2008505950.tif 000044
の化合物
（式中、
R1は：
(a)アリールで置換された低級アルキル、
(b)
【化２】
2008505950.tif 000045
及び
(C)
【化３】
2008505950.tif 000046
から成る群から選定され、
R2は：アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロ環から成る群から選定され、それぞれは：
(a)低級アルキル、
(b)ハロゲン、
(C)OR5、
(d)NH2；及び
(e)NO2：
から成る群から独立して選定される４個までの置換基によって置換されてよく、
R3は群、
(a)H、
(b)低級アルキル、
(C)CO2R6、
(d)C(O)R6、
(e)SO2R6、及び
(f)SO2NR5R6
から選定され；
R4及びR4'は、それぞれ独立して：
(a)H、
(b)オキソ、CO2R6、OR6及び/またはNH2で任意に置換された低級アルキル、
(C)S(O)nR7、
(d)OR8、
(e)NR5R6、及び
(f)CO2R6
から成る群から選定され；
R5及びR6は：
(a)H、
(b)N、
(c)低級アルキル、
(d)オキソ、CO2R9、OR9、及び/またはNR10R11、で置換された低級アルキル、
(e)ハロゲンで任意に置換され得るアリール、
(f)ヘテロアリール、
(g)アリール基が１つ以上のハロゲン置換基で任意に置換されたN-アリール、及び
(h)ハロゲンまたはCF3で置換されたアリール
から成る群からそれぞれ独立して選定され；
R7は低級アルキルまたはアリールであり；
R8は：
(a)H、
(b)低級アルキル、及び
(c)NR5R6で置換された低級アルキル
から成る群から選定され；
R9は群、H及び低級アルキルから選定され；
R10及びR11は、それぞれ独立してH及び低級アルキルから選定され；及び
ｎは0、1または2である）または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステル。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物
（式中
R1はアリールによって置換された低級アルキル、
【化４】
2008505950.tif 000047
から成る群から選定され；
R2は、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロ環から成る群から選定され、それぞれは群、
低級アルキル、
ハロゲン、
OR5、
NH2、及び
NO2
から独立して選定される４個までの置換基によって置換されてよく；
R3は群、
CO2R6、及び
SO2R6
から選定され、
R4及びR4'は群、
H、
オキソ、CO2R6、OR6及び/またはNH2で任意に置換された低級アルキル、
S(O)nR7、
OR8、
NR5R6、及び
CO2R6
からそれぞれ独立して選定され；
R5及びR6は群、
H、
N、
オキソ、CO2R9、OR9、及びNR10R11で置換された低級アルキル、
任意にハロゲンで置換され得るアリール、
ヘテロアリール、
アリール基が１つ以上のハロゲン置換基により任意に置換されるN-アリール、及び
ハロゲンまたはCF3で置換されるアリール
からそれぞれ独立して選定され；
R7は低級アルキルまたはアリールであり；
R8は群、
H、
低級アルキル、及び
NR5R6で置換された低級アルキル
から選定され；
R9は群、H及び低級アルキルから選定され；
R10及びR11は、H及び低級アルキルからそれぞれ独立して選定され；及び
ｎは、O、1、または2である）、または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステル。
【請求項３】
R2がフェニル、及びハロゲンまたはOR5で置換されたフェニルから選定される、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記フェニルがハロゲンで置換される請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記ハロゲンがフッ素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記フェニルがOR5で置換される請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
前記R5が低級アルキルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物
（式中：
R1は
【化５】
2008505950.tif 000048
であり、
R3は：
H、
CO2R6、
C(O)R6、
SO2R6、及び
SO2NR5R6
から成る群から選定され；
R5及びR6は：
H、及び
低級アルキル
から成る群からそれぞれ独立して選定され；及び
R2は、請求項１において与えた意味を有する）または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステル。
【請求項９】
R2が、ハロゲン、または-0-低級アルキルから独立して選定される置換基によって１箇所、２箇所、または３箇所が置換されたフェニルである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
R2が、-F、及び-0-CH3から選定される１個または２個の置換基によって任意に置換される、3-フルオロフェニルである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
4-[4-アミノ-5-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル、
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン、
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン、
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン、及び
1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノン、から成る群から選定される請求項８に記載の化合物。
【請求項１２】
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン、
1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノン、
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン、
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-スルホン酸ジメチルアミド、
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン、及び
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニル-ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル)メタノン、から成る群から選定される請求項８に記載の化合物。
【請求項１３】
R1が
【化６】
2008505950.tif 000049
であって、且つ
式中、
R4'がHであり；
R4がS(O)nR7であり；及び
R7が低級アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
R7がメチルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
R4が-S(O)2CH3である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
[4-アミノ-2-(4-メタンスルホニルフェニルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１７】
活性成分としての有効量の請求項１の化合物、及び医薬的に許容され得る担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
非経口投与に適する、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
治療有効量の少なくとも１つの請求項１に記載の化合物を、固形腫瘍の治療を必要とする対象に投与することを含んで成る、固形腫瘍を治療するための方法。
【請求項２０】
前記固形腫瘍が乳房腫瘍または結腸腫瘍である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
癌の治療における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
固形腫瘍の治療における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２３】
乳癌または結腸癌の治療における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
癌治療剤を製造するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２５】
固形腫瘍の治療剤を製造するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２６】
乳癌または結腸癌の治療剤を製造するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２７】
請求項１に記載の式Ｉの化合物を製造するための方法であって、
a)式2の化合物
R1-N=C=S    (2)
を式5の化合物
H2N-C≡N    (5)
と反応させて、式6の化合物
【化７】
2008505950.tif 000050
を与え、そして
b)前記式6の化合物を式4の化合物
【化８】
2008505950.tif 000051
と更に反応させて、
式Iの化合物
（式中、R1及びR2は請求項１で与えた意味を有する）を与えることによる方法。
【請求項２８】
実質的に本明細書で発表された新規化合物、中間体、製剤、プロセス、方法、及び使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイクリン依存性キナーゼを阻害する新規4-アミノチアゾール誘導体に関する。これらの化合物及びそれらの医薬的に許容され得る塩及びエステルは抗増殖性活性を有し、そしてとりわけ癌、特に固形腫瘍の治療または制御において有用である。本発明は、更にかかる化合物を含む医薬組成物、並びに癌を治療または制御する方法、最も詳細には乳房、肺、結腸及び前立腺腫瘍の治療または制御の方法に関する。最終的に、本発明は更に本明細書で開示した新規4-アミノチアゾール誘導体の調製において有用である新規中間体化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
非制御の細胞増殖は、癌の特質である。癌性腫瘍細胞は、典型的に細胞分裂周期を直接的または間接的に調節する遺伝子の損傷のいくつかの形態を有す。
【０００３】
細胞周期の多様な段階を経る細胞の発達は、調節タンパク質、サイクリン、及びキナーゼから成る一連の多酵素複合体によって調節される。これらのキナーゼはサイクリン依存性キナーゼ(Cdks)と呼ばれる。Cdksは細胞周期の至る所で発現するが、サイクリンのレベルは、細胞周期の段階に応じて変化する。
【０００４】
細胞周期制御の４つの主要な段階は、G1、S、G2、及びMとして一般的に表現される。細胞周期制御のためのいくつかの必須酵素は、サイクリンD/Cdk4、サイクリンD/Cdk6、サイクリンE/Cdk2、サイクリンA/Cdk2、及びサイクリンB/Cdk1(Cdc2/サイクリンBとしても公知)であるように思われる。サイクリンD/Cdk4、サイクリンD/Cdk6、及びサイクリンE/Cdk2は、網膜芽細胞腫リンタンパク質、pRbのリン酸化反応によってG1期及びG1からS期への移行を介する経路を制御する。サイクリンA/Cdk2はS期を介する経路を調節し、そしてサイクリンB/Cdk1はG2チェックポイントを制御し、そしてM(有糸分裂)期への進入を調節する。
【０００５】
細胞周期の進行は、Cdk1(cdc2)とCdk2によって調節され、細胞の細胞質分裂が起こる時に早期G1を超える。従って、これらのCdksの薬物阻害は、細胞増殖を阻むだけでなく、アポトーシス細胞死も引き起こすだろう。細胞はG1制限点を一度通過したら、S期になり、それらは継続した細胞周期進行のために成長因子刺激に関係しなくなる。
【０００６】
DNA複製の完了によって、細胞はM期と細胞質分裂のための準備にある細胞周期のG2期に入る。Cdk1はサイクリンA及びBの両方と関連する細胞周期の後期を介して細胞経路を調節することを示した。Cdk1の完全な活性化は、サイクリン結合と特異的リン酸化反応（Morgan, D. O., De Bondt, H. L., Curr. Opin. Cell. Biol. 1994, 6, 239-246）の両方を要求する。一度、活性化されたら、Cdk1/サイクリン複合体は、M期の間に細胞分裂の準備をする。
【０００７】
上記のようなG１期からS期への移行は、Cdk4のサイクリンD及びCdk2のサイクリンEとの複合体によって調節される。これらの複合体は、転写因子E2Fを放出し、そしてS期で要求される遺伝子の発現を可能にする腫瘍抑制タンパク質網膜芽細胞腫(pRb)をリン酸化する(Nevins, J. R. Science 1992, 258, 424-429; Lavia, P. BioEssays 1999, 21, 221-230)。Cdk4/サイクリンDとCdk2/サイクリンE複合体の活性を遮断することは、G1期における細胞周期を阻む。例えば、Cdk4/サイクリンD複合体のキナーゼ活性を遮断するp16INK4aを含むINK4ファミリーのタンパク質は、G1での拘束をもたらす(Sherr, C. J. Science 1996, 274, 1672-1677)。特異的遮断は既に検討されている(Vidal, A. Gene 2000, 247, 1-15)。
【０００８】
更に近年の実験では、Cdk4のサイクリンD3との複合体は、G2期を介する細胞周期進行において役割を果たすことを示す。この複合体のp16または優性陰性のCdk4を用いることによる阻害は、pRbを発現しない細胞におけるG2期での拘束をもたらす(Gabrielli B. G.等. J. Biol. Chem. 1999, 274, 13961-13969)。
【０００９】
pRb経路における多くの欠陥は、多様な癌に関与することが示されている。例えばCdk4の過剰発現は遺伝性のメラノーマの症例において観察され(Webster, K. R. Exp. Opin. Invest. Drugs 1998, 7, 865-887)；サイクリンDは多くのヒトの癌で過剰発現し(Sherr, C. J. Science 1996, 274, 1672-1677)；p16は多くの腫瘍において突然変異または欠失し(Webster, K. R. Exp. Opin. Invest. Drugs 1998, 7, 865-887)；そしてpRb機能は多くのヒトの癌における突然変異または欠失を介して失われる(Weinberg, R. A. Ce// 1995, 81, 323-330)。この経路における欠陥は、予後への影響を有することが示されている。例えばp16の損失は、非小細胞肺癌(NSCLC)及び悪性メラノーマにおける不良な予後に相関する(Tsihlias, J.等. Annu. Rev. Med. 1999, 50, 401-423)。遺伝子及び/または発現レベルでのサイクリンD1及び/またはpRbの異常は、90%を上回る一連の非小細胞肺癌標本で存在し、サイクリンD1及び/またはpRbが肺癌形成において重要なステップを表すことを示している(Marchetti, A.等. Int. J. cancer 1998, 75, 573-582)。50人の膵臓癌の患者のうちの49人において(98%)、pRb/p16経路はp16遺伝子及びサイクリンD関連の不活性化を介してもっぱら無効にされた(Schutte, M.等. cancer Res. 1998, 57, 3126-3134)。多くの組織でのpRb及びサイクリン/サイクリン依存性キナーゼ発現との関連性の検討に関しては、Teicher, B.A. Cancer Chemother. Pharmacol. 2000, 46, 293-304を参照する。
【００１０】
G1からS期への細胞周期の進行を制御する中で、その役割を介するヒト癌でのCdk4/サイクリンD/pRb経路の関与、及びこの経路を調節することによる可能性のある治療利益のおかげで、この経路の因子を阻害または促進する試薬にかなり関心があった。例えば、癌細胞への影響は、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び当該経路に関与するタンパク質の過剰発現または添加を用いて示された。例えば、Lukas, J.等. Nature 1995, 79, 573-582; Nevins, J. R. Science 1992, 258, 424-429; Lim, I. K.等. Molecular Carcinogenesis 1998, 23, 25-35; Tam, S. W.等. Oncogene 1994, 9, 2663- 2674; Driscoll, B.等. Am. J. Physiol. 1997, 273 (Lung Cell. MoI. Physiol.), L941-L949; 及びSang, J.等. Chin. ScL Bull. 1999, 44, 541-544)を参照。
【００１１】
従って、細胞増殖の調節におけるcdkの役割がかなり確立された。例えば、上記の通り、抗増殖性治療剤として、Cdk4、Cdk2及びCdk1経路における標的を阻害する化合物の使用を立証する広範な文献が存在する。従って、細胞増殖の阻害剤は、可逆的な細胞増殖抑制剤として作用し、異常な細胞成長を特徴とする疾患過程、例えば炎症(例えば良性前立腺肥大症、家族性線種様(adenomauosis)、ポリープ症、神経線維腫症、アテローム性動脈硬化症、肺繊維症、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、移植拒絶感染症)、ウィルス性感染症(ヘルペスウィルス、ポックスウィルス、エプスタイン-バーウィルスに制限されずに含む)、自己免疫性疾患(例えば、狼瘡、リウマチ性関節炎、乾癬、炎症性大腸炎)、神経変性障害(アルツハイマー病に制限されずに含む)、及び神経変性疾患(例えば、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜色素変性症、脊髄性筋萎縮症、及び脳変性)を含む癌、及び他の細胞増殖性疾患等の治療において有用である。
【００１２】
いくつかの明白な小分子の分類は、Cdks：オロモウシン及び他のプリンアナログ、フラボピリドール、スタウロスポリン、UCN-01及び他のインドロカルバゾール、9-ヒドロキシエリプチシン、インディルビン、paullones、ジアリール尿素、キナゾリン、インドピラゾール、[2,3-d]ピリドピリミジン、fascaplysin、アミノチアゾール, ジアミノチアゾール、p-teridinones、及びピラゾール等の阻害剤として同定された(Carlson等., Cancer Res.. 1996, 56, 2973-2978: De Azevedo等., Eur. J. Biochem., 1997, 243, 518-526; Bridges, A.J. , Exp. Opin. Ther. Patents. 1995, 5, 12451257; Reinhold等., J. Biol. Chem. 1998, 278, 3803-3807; Kakeya, H.等., Cancer Res.. 1998, 58, 704-710; Harper, J.W., Cancer Surveys 1997, 29, 91-107; Harrington, E.A.,等., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 11945-11950; Meijer, L.,等., Eur. J. Biochem.. 2000, 267, 1-13; Garrett, M.D.等., Current Opin. Genetics Develop. 1999, 9, 104-111; Mgbonyebi, O. P.等., Cancer Res.. 1999, 59, 1903-1910; Hoessel等., Nature Cell Biology. 1999, 1, 60-67; Zaherevitz等., Cancer Res., 1999, 59, 2566-2569; Honma, T.,等., 221st National ACS Meeting.. 2001 : Medi 136; Sielecki, T.M., 等., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 1157-1160; Nugiel, D. A.,等., J. Med. Chem., 2001, 44, 1334-1336; Fry, D. W.等., J. Biol. Chem. 2001, 276, 16617-15523; Soni, R.,等., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000, 275, 877; Ryu, C-K.等., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10, 461 ; Jeong, H-W.,等., Bioorg. Med. Chem. Lett.. 2000, 10, 1819; Toogood等., J. Med. Chem., 2000, 43, 4606-4616; Chong, W., Fischer, Curr. Opin. in Drug Discov. and Develop., 2001 , 4, 623-634, WO0009921845, Toogood. P., WO0119825, Toogood P., WO0138315, Reich S. H., WO0179198, Webster, K. US 6,262,096.)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
Cdk4/サイクリンD経路を阻害する化合物の検討は：Harris, W. and Wilkinson, S., Emerging Drugs.. 2000, 5, 287-297；Dumas, J., Exp. Opin. Ther. Patents. 2001 , 11, 405-429; Sielecki T.,等., J. Med. Chem.. 2000, 43, 1-18. WO 99/21845, 6,569,878 B1 , 2003/0220326 A1,及びWO 2003011843 A1に見られ、それらの関連する全ては、一般式
【化１】
2008505950.tif 000003
の4-アミノチアゾールを開示する。これらの化合物は、サイクリン依存性キナーゼの阻害剤であることが述べられている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、式
【化２】
2008505950.tif 000004
の新規の4-アミノチアゾール誘導体
（式中、
R1は：
(a)アリールで置換された低級アルキル、
(b)
【化３】
2008505950.tif 000005
(C)
【化４】
2008505950.tif 000006
から成る群から選定され、
R2は：アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロ環から成る群から選定され、それぞれ独立して：
(a)低級アルキル、
(b)ハロゲン、
(C) OR5、
(d) NH2；及び
(e) NO2；から成る群から選定される４つまでの置換基で置換されてよく、
R3は、群
(a)H、
(b)低級アルキル、
(c)CO2R6、
(d)C(O)R6、
(e)SO2R6、及び
(f)SO2NR5R6；から選定され、
R4及びR4'は：
(a)H、
(b)任意にオキソ、CO2R6、OR6及び/またはNH2で置換された低級アルキル、
(C)S(O)nR7、
(d)OR8、
(e)NR5R6、及び
(f)CO2R6；から成る群からそれぞれ独立して選定され、
R5及びR6は：
(a)H、
(b)N、
(c)低級アルキル、
(d)オキソ、CO2R9、OR9、及び/またはNR10R11で置換された低級アルキル、
(e)任意にハロゲンで置換され得るアリール、
(f)ヘテロアリール、
(g)アリール基が１つ以上のハロゲン置換基で任意に置換されたN-アリール、及び
(h)ハロゲンまたはCF3で置換されたアリール；から成る群からそれぞれ独立して選定され、
R7は低級アルキルまたはアリールであり；
R8は：
(a)H、
(b)低級アルキル、及び
(c)NR5R6で置換された低級アルキル；から成る群から選定され、
R9はH及び低級アルキルの群から選定され；
R10及びR11はH及び低級アルキルからそれぞれ独立して選定され；及び
ｎはO、1または2である）
またはそれらの医薬的に許容され得る塩またはエステルに関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
これらの化合物は、サイクリン依存性キナーゼを阻害する。これらの化合物及びそれらの医薬的に許容され得る塩及びエステルは抗増殖性活性を有し、そして癌、特に固形腫瘍の治療または制御に有用である。
【００１６】
本発明は、１つ以上の本発明の化合物、または医薬的に許容され得るそれらの塩またはエステル、及び医薬的に許容され得る担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００１７】
本発明は、更に癌、好適には固形腫瘍、及びより好適には乳房、肺、結腸及び前立腺癌の治療のための医薬を調製するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００１８】
更に本発明は治療有効量の式Iの化合物、または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステルを治療を必要とする患者に投与することによる、癌を治療または制御するための方法、より詳細には固形腫瘍の治療または制御のための方法、とりわけ乳房、肺、結腸及び前立腺腫瘍の治療または制御の方法に関する。
【００１９】
最終的に、本発明は式Iの化合物の調製において有用な新規中間化合物にも関する。
【００２０】
本明細書で使用される以下の用語は、以下の定義を有する：
【００２１】
"アリール"とは、1価の単環または二環芳香族炭素環式炭化水素ラジカルを意味し、好適には6-10員の芳香族環系を意味する。好適なアリール基は、フェニル、ナフチル、トリル及びキシリルに制限されずに含む。
【００２２】
"シクロアルキル"は、３〜８個の原子を含む非芳香族、部分的または完全に飽和した１価の環式炭化水素ラジカルを意味する。シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルを含む。
【００２３】
"有効量"とは、処置される対象の疾患の兆候を予防、緩和、もしくは改善させる、または処置される対象の生存を延長させるに十分である量を意味する。
【００２４】
"ハロゲン"とは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味し、好適にはフッ素または塩素を意味する。
【００２５】
"ヘテロ原子"とは、N、O及びSから選定される原子を意味する。
【００２６】
"ヘテロアリール"とは、２個の環までを含む芳香族ヘテロ環系を意味する。好適なヘテロアリール基は、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピリジン、ピラジニル、オキサゾリル、チアキソリル、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、ベンゾフラン、及びテトラゾリルに制限されずに含む。
【００２７】
"ヘテロ環"または"ヘテロシクリル"とは、飽和した、または部分的に飽和した、３〜８個の環原子の非芳香族環式ラジカルを意味し、ここで１〜３個の環原子は、窒素、酸素、S(O)n(nは0〜2の整数)、またはそれらの組合せから選定されたヘテロ原子であり、残りの環原子はCである。好適なヘテロ環の例は、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、インドリン、テトラヒドロピラニル、チオモルホリノ、ペンタメチレンスルフィド、及びペンタメチレンスルホンである。
【００２８】
"Ki"は、リガンド/阻害剤(本発明に係る化合物)の標的タンパク質への熱力学的結合の程度を言う。Kiは、とりわけ、後の実施例18に発表されたように計測できる。
【００２９】
単独または他の用語との結合にある"低級アルキル"は（例えば低級アルキル-ヘテロ環）、1〜6個、好適には1〜4個の炭素原子を有する直鎖または分岐した飽和脂肪族炭化水素を意味する。典型的な低級アルキル基はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、t-ブチル、2-ブチル、ペンチル、ヘキシル等を含む。
【００３０】
"オキソ"は=0を意味する。
【００３１】
"医薬的に許容され得るエステル"とは、慣習的にエステル化されたカルボキシル基を有する式Ｉの化合物を言い、そのエステルは、式Iの化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、そしてin vivo(生体中)で対応の活性カルボン酸へ開裂する。in vivoで対応のカルボン酸(R40C(=O)OH)に開裂する（この場合は加水分解）エステル基の例は、低級アルキルエステルであり、それはNR41R42で置換されてよく、R41とR42は低級アルキルであり、またはNR41R42は一緒になって単環脂肪族ヘテロ環（例えばピロリジン、ピペリジン、モルホリン、N-メチルピペラジン等）を形成し；式R40C(=O)OCHR43OC(=O)R44のアシルオキシアルキルエステルであり、R43は水素またはメチルであり、そしてR44は低級アルキルまたはシクロアルキルであり；式R40C(=O)OCHR43OC(=O)OR45のカルボネートエステルであり、R43は水素またはメチルであり、及びR45は低級アルキルまたはシクロアルキルであり；或いは式 R40C(=O)OCH2C(=O)NR41R42のアミノカルボニルメチルエステルであり、R41及びR42は水素または低級アルキルであり、またはNR41R42は一緒になって単環脂肪族ヘテロ環、例えばピロリジン、ピペリジン、モルホリン、N-メチルピペラジン等を形成する。本明細書で使用されるR40は、R2、R3、R4及びR4'と同一の定義を有する。
【００３２】
低級アルキルエステルの例は、メチル、エチル、及びn-プロピルエステル等である。NR41R42で置換された低級アルキルエステルの例は、ジエチルアミノエチル、2-(4-モルホリニル)エチル、2-(4-メチルピペラジン-1-イル)エチルエステル等である。アシルオキシアルキルエステルの例は、ピバロキシメチル(pivaloxymethyl)、1-アセトキシエチル、及びアセトキシメチルエステルである。カルボネートエステルの例は、1-(エトキシカルボニルオキシ)エチル及び1-(シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ)エチルエステルである。アミノカルボニルメチルエステルの例は、N,N-ジメチルカルバモイルメチル及びカルバモイルメチルエステルである。
【００３３】
医薬化合物を送達するためのエステルの例及び使用に関する更なる情報は、Design of Prodrugs. Bundgaard H ed. (Elsevier, 1985) で入手できる。H. Ansel等., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)、pp.108-109；Krogsgaard-Larsen,等., Textbook of Drug Design and Development (2d Ed. 1996) pp. 152-191も参照する。
【００３４】
"医薬的に許容され得る塩"とは、慣用の酸付加塩または塩基付加塩を言い、式Iの化合物の生物学的有効性及び特質を保有し、且つ適宜、非毒性の有機酸または無機酸、或いは有機塩基または無機塩基から形成される。実例の酸付加塩は、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、及び硝酸等の無機酸から由来するもの、及び例えばp-トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸等の有機酸から由来するものを含む。実例の塩基付加塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム及び水酸化第４級アンモニウム、例えば、水酸化テトラメチルアンモニウム等から由来するものを含む。医薬化合物(即ち、薬物)の塩への化学修飾は、改良した化合物の物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性及び溶解性を得るための薬学者に周知の技術である。例えば、H. Ansel等., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)、pp. 196及び1456-1457を参照する。
【００３５】
"医薬的に許容され得る"、例えば医薬的に許容され得る担体、賦形剤等は、薬理学的に許容され得、且つ対象に対して実質的に非毒性である、投与される特定の化合物を意味する。
【００３６】
置換されたアルキルのような"置換された"とは、当該置換が１箇所以上の部位で起こり得ることを意味し、特に断りのない限り、それぞれの置換部位での置換基は特定のオプションから独立して選定される。
【００３７】
"治療的有効量"とは、有意にヒト腫瘍細胞株を含むヒト腫瘍細胞の増殖を阻害し、及び/または分化を妨げる、少なくとも１つの式Iの化合物、または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステルの量を意味する。
【００３８】
本発明の１つの好適な態様では、式Ｉの化合物
（式中、
R1はアリールによって置換された低級アルキル、
【化５】
2008505950.tif 000007
から成る群から選定され；
R2はアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロ環の群から選定され、ここでは、
低級アルキル、
ハロゲン、
OR5、
NH2、及び
NO2から成る群から選定される４個までの置換基によってそれぞれ独立に置換されてよく；
R3は群、
CO2R6、及び
SO2R6から選定され、
R4及びR4'は群、
H、
オキソ、CO2R6、OR6及び/またはNH2で任意に置換された低級アルキル、
S(O)nR7、
OR8、
NR5R6、及び
CO2R6からそれぞれ独立して選定され；
R5及びR6は群、
H、
N、
オキソ、CO2R9、OR9、及びNR10R11で置換された低級アルキル、
ハロゲンヘテロアリールによって任意に置換され得るアリール、
アリール基が(h)１つ以上のハロゲン置換基によって任意に置換されるN-アリール、及び
ハロゲンまたはCF3で置換されたアリールからそれぞれ独立して選定され；
R7は、低級アルキルまたはアリールであり；
R8は群、
H、
低級アルキル、及び
NR5R6で置換された低級アルキルから選定され；
R9は群、H及び低級アルキルから選定され；
R10及びR11は、H及び低級アルキルからそれぞれ独立して選定され；及び
ｎは0、1または2である）または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステルを提供することである。
【００３９】
式Iの化合物の好適な態様では、R2はフェニルであり、好適にはハロゲンで置換されたフェニルであり、最適にはFで置換されたフェニルであり、そしてOR5中のR5は低級アルキルである。最適な態様では、R2は１個か２個のF分子で置換されたフェニルであり、且つ１つのOR5基中のR5は低級アルキルであり、好適にはメチルである。
【００４０】
式Ｉの化合物の他の好適な態様では、R2は上記定義の通りであり、且つR1は
【化６】
2008505950.tif 000008
（式中
R3は群、
H、
CO2R6、
C(O)R6、
SO2R6、及び
SO2NR5R6から選定され；
R5及びR6は群、
H、及び
低級アルキルからそれぞれ独立して選定される）、または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステルである。
【００４１】
特に好適には、上記定義したような化合物であって、式中、R2はフェニルであり、１箇所、２箇所または３箇所がハロゲン、または-0-低級アルキルから独立して選定された置換基により置換される化合物である。
【００４２】
本発明の更に他の好適な態様では、式Ｉの化合物
（式中、
R1は、
【化７】
2008505950.tif 000009
であり；
R2は3-フルオロフェニルであり、-F、及び-0-CH3から選定される１つまたは２つの置換基により任意に置換され；
R3は群、
H、
CO2R6、
C(O)R6、
SO2R6及び
SO2NR5R6から選定され；
R5及びR6は群、
H、及び
低級アルキルからそれぞれ独立して選定される）または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステルを提供することである。
【００４３】
上記式Iの化合物の例は、制限されずに：
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル、
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル、
4-[4-アミノ-5-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル、
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン、
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4- メトキシフェニル)メタノン、
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン、
l-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノン、
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン)、
1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノン、
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン、
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-スルホン酸ジメチルアミド、
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン、及び
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニル-ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル)メタノン、を含む。
【００４４】
本発明の他の態様では、R1は
【化８】
2008505950.tif 000010
であり、式中R4はS(O)nR7であり、ここでR7は低級アルキルであり、好適にはメチルである。最適には、R4は-S(O)2CH3である。
【００４５】
上記式Iの化合物の例は:
[4-アミノ-2-(4-メタンスルホニルフェニルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノンを含む。
【００４６】
本明細書で開示され、且つ上記式Ｉでカバーされた化合物は、互変異性または構造異性を示してよい。本発明はそれらの化合物の任意の互変異性体もしくは構造異性体、またはかかる形態の混合物を包含し、且つ上記式に描かれる任意の１つの互変異性体または構造異性体に限定されないことが意図される。
【００４７】
他の態様では、本発明の化合物の例は、制限されずに以下を含む：
【表１】
2008505950.tif 000011
【表２】
2008505950.tif 000012
【表３】
2008505950.tif 000013
【表４】
2008505950.tif 000014
【表５】
2008505950.tif 000015
【００４８】
本発明の化合物は、任意の慣用手段で調製され得る。これらの化合物を合成するための適切な方法は、実施例に提供される。一般的に式Iの化合物は、後述の１つの合成経路によって調製することができる。
【００４９】
環化
本発明の化合物は、スキームIII に示すように、公知の反応を用いて、アルキル化及び多くのチオ尿素誘導体の環化によって調製することができる。特に使用することができるチオ尿素誘導体はニトロアミジノチオ尿素である(Binu, R. 等. Org. Prep. Proced. Int.1998,30,93-96);1-[(arylthiocarbamoyl)amino]-3,5-dimethylpyrazoles(Jenardanan , G. C.等. Synth. Commun. 1997, 27, 3457-3462);及びN-(aminoiminomethyl)-N'-phenylthioureas (Rajasekharan, K. N.等. Synthesis 1986, 353-355)。
【００５０】
アルキル化と環化により本発明の化合物を調製するために使用することができる他のチオ尿素誘導体は、N-シアノチオ尿素である(Gewald, K. 等. J. Prakt. Chem. 1967, 97-104)。例えば、以下のスキームIIIに準じて、式6のN-シアノチオ尿素を例えば式4のブロモメチルケトン等のハロメチルケトンと、およそ室温から約65℃の間の温度で反応させて、式7の化合物を得ることができる。商業的に入手できない場合は、式(2)と(4)の出発原料はそれぞれ以下に例を挙げる。
【００５１】
【化９】
2008505950.tif 000016
【化１０】
2008505950.tif 000017
【００５２】
或いは、本発明の化合物は、更に以下のスキームIVに示す通り、式9の樹脂に結合し置換された(アミノチオキソメチル)カルバムイミドチオ酸メチルエステルを式4のブロモメチルケトンと反応させることによって都合よく調製される。
【化１１】
2008505950.tif 000018
【００５３】
式9の樹脂に結合したチオ尿素誘導体は、有機合成の当業者に公知の任意の慣用手順によって作ることができる。例えば、塩基（第三アミン等、例えばトリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン）の存在下で、不活性溶媒（極性非プロトン性溶媒等、例えばN,N-ジメチルホルムアミド）中で、式8の樹脂に結合したチオウロニウム塩を式2のイソチオシアネートと反応させることによって都合よく調製することができる。当該反応は、室温周辺の温度で都合よく実施される。その後、当該樹脂に結合した式9のチオ尿素誘導体は、適切な不活性溶媒（極性非プロトン性溶媒等、例えばN,N-ジメチルホルムアミド）で、室温周辺温度で、ハロメチルケトン(例えば、式4のブロモメチルケトン)を処理することによって、式7の産物へ変換される。
【００５４】
立体異性体混合物の光学的に純粋な立体異性体への分割(式Iの化合物がキラルである場合)
【００５５】
式Iの異性体の光学分割は、例えば分解(resolution)またはキラル高圧液体クロマトグラフィー(キラルHPLCとしても公知)等の公知の方法によって実行することができる。分解方法は周知であり、"Enantiomers, Racemates, and Resolutions" (Jacques, J.等. John Wiley and Sons, NY, 1981)に概説される。キラルHPLCの方法も周知であり、"Separation of Enantiomers by Liquid Chromatographic Methods" (Pirkle, W. H. and Finn, J. in "Asymmetric Synthesis", Vol. 1, Morrison, J. D., Ed., Academic Press, Inc., NY 1983, pp. 87-124)に概説される。
【００５６】
塩基性窒素を担う式Iの化合物の医薬的に許容され得る酸付加塩への変換
【００５７】
塩基性窒素を担う式Ｉの化合物の医薬的に許容され得る酸付加塩への任意の変換は、慣用手段によって成し得る。例えば当該化合物は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等、または適宜有機酸、例えば酢酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸等で処理することができる。
【００５８】
カルボン酸基を担う式Iの化合物の医薬的に許容され得るアルカリ金属塩への変換
【００５９】
カルボン酸基を担う式Iの化合物の医薬的に許容され得るアルカリ金属塩への任意の変換は、慣用手段によって成し得る。例えば、当該化合物は、無機塩基、例えば水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等で処理され得る。
【００６０】
カルボン酸基を担う式Iの化合物の医薬的に許容され得るエステルへの変換
【００６１】
カルボン酸基を担う式Iの化合物の医薬的に許容され得るエステルへの任意の変換は、慣用手段によって成し得る。エステル形成のための条件は、反応条件に対する分子中の他の官能基の安定性に依存するだろう。分子中の他の部位が酸性条件に対して安定ならば、当該エステルは、アルコール中の無機酸(例えば硫酸)の溶液中で加熱することによって都合よく調製され得る。当該分子が酸性条件に対して安定でないならば都合がよいエステルを調製するための他の方法は、カップリング試薬の存在中、且つ任意の更なる当該反応を促進し得る試薬の存在中でアルコールにより化合物を処理することを含む。多くのかかるカップリング試薬は、有機化学の当業者に公知である。２つの例は、ジシクロヘキシルカルボジイミドとトリフェニルホスフィン/ジエチルアゾジカルボキシレートである。カップリング試薬としてジシクロヘキシルカルボジイミドが使用される場合、当該反応は、アルコール、ジシクロヘキシルカルボジイミド、及び任意の触媒量(0-10モル%)で存在するN,N-ジメチルアミノピリジンにより、不活性溶媒（ハロゲン化された炭化水素等、例えばジクロロメタン）中で、約0度から室温周辺の温度で、好適には室温周辺の温度で、酸を処理することによって都合よく実施される。カップリング試薬としてトリフェニルホスフィン/ジエチルアゾジカルボキシレートが使用される場合、当該反応は、アルコール、トリフェニルホスフィン及びジエチルアゾジカルボキシレートにより、不活性溶媒（エーテル、例えばテトラヒドロヒラン、または芳香族炭化水素、例えばベンゼン等）中で、約0度から室温周辺の温度で、好適には約0度で、酸を処理することによって都合よく実施される。 
【００６２】
組成物/製剤
他の態様では、本発明は少なくとも１つの式Ｉの化合物、または医薬的に許容され得るそれらの塩もしくはエステル、及び医薬的に許容され得る賦形剤及び/または担体を含む医薬組成物を含んで成る。
【００６３】
これらの医薬組成物は、経口、例えば錠剤、コート錠、糖衣錠、ハードもしくはソフトゼラチンカプセル、溶液、乳濁物または懸濁物の形態で投与され得る。それらは経腸、例えば坐剤の形態でも投与され得、または非経口、例えば注射液の形態でも投与され得る。
【００６４】
式Iの化合物、及び/またはそれらの塩もしくはエステルを含む本発明の医薬組成物は、当業界において公知の方法（例えば、慣用の混合、カプセル封入、溶解、造粒、乳化、封入、糖衣作成、または凍結乾燥方法による）で製造され得る。これらの医薬調製品は、治療的に不活性な無機または有機担体により製剤化され得る。ラクトース、コーンスターチまたはそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩は、錠剤、コート錠、糖衣錠及びハードゼラチンカプセルのためのかかる担体として使用され得る。ソフトゼラチンカプセルのための適切な担体は、植物油、ワックス及び脂肪を含む。活性物質の性質に依存して、一般的に担体は、ソフトゼラチンカプセルの場合には要求されない。溶液及びシロップの製造のために適した担体は、水、ポリオール、サッカロース、転化糖及びグルコースである。注入に適した担体は、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油、リン脂質及び界面活性剤である。坐剤に適した担体は、天然油または硬化油、ワックス、脂肪及び半液体ポリオールである。
【００６５】
医薬調製品は、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、コーティング剤、または抗酸化剤も含有し得る。それらは、式Ｉ以外の追加の活性成分を含む他の治療的に価値のある物質も更に含み得る。
【００６６】
用法用量
上記の通り、式Ｉの化合物を含む本発明の化合物は、癌の化学的予防を含む細胞増殖性疾患の治療または制御において有用である。化学的予防は侵襲性癌の発達を、突然変異発症の開始を遮断するか、またはすでに抑制的な腫瘍再発にかけられた前癌状態の細胞の発達を遮断することによって阻害するとして定義される。前記化合物を含むそれらの化合物と製剤は、固形腫瘍、例えば乳房、肺、結腸及び前立腺腫瘍等の治療または制御において特に有用である。
【００６７】
本発明にかかる化合物の治療有効量とは、処置される対象の疾患の兆候を予防、緩和、もしくは改善させる、または生存を延長させるために有効な化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当業者にある。
【００６８】
本発明にかかる化合物の治療有効量または用法用量は広い範囲で変化させることができ、そしてそれは当業界において公知の方法で決定され得る。かかる用法用量は、投与される特定の化合物、投与経路、処置される症状、及び処置される患者を含むそれぞれに特定なケースで個々の要求に対して調整されるだろう。一般的に、体重およそ70 Kgの成人のヒトへの経口または非経口投与の場合は、約10 mgから約10,000 mgの一日投与量、好適には、約200 mgから約1,000 mgの一日投与量が適切だろうが、指示された場合は、上限を超えてよい。一日投与量は、単回投与もしくは分割投与、または非経口投与として投与可能であり、継続的な注入として与えてもよい。
【００６９】
組合せ
本発明の化合物は、公知の抗癌治療（放射線治療等）、または細胞増殖抑制剤もしくは細胞毒性剤（例えば制限されずに、DNA相互作用剤（シスプラチンまたはドキソルビシン等）；トポイドメラーゼII阻害剤（エトポシド等）；トポイソメラーゼI阻害剤（CPT-11またはトポテカン等）；チューブリン相互作用剤（パクリタキセル、ドセタキセルまたはエポシロン等）；ホルモン剤（タモキシフェン等）；チミジレート合成酵素阻害剤（5-フルオロウラシル等）；及び代謝拮抗剤（メトトレキサート等）等）との組合せで使用してよい(組合せて、または連続的に投与される)。式Ｉの化合物は、p53転写促進のモジュレーターとの組合せにおいても使用してよい。
【００７０】
固定された投与として製剤化されるならば、上記の組合せ製品は、本発明の化合物を上記の用法用量の範囲内で、且つ他の医薬的に活性な薬剤、またはその認可された投与での治療の範囲内で含む。例えば、早期cdk1阻害剤olomucineが、アポトーシス誘導において周知の細胞毒性剤と相乗的に作用することが見出された(J. Cell Sci, 1995, 108, 2897-2904)。併用投与または組合せが不適切な場合、式Ｉの化合物を、公知の抗癌剤または細胞毒性剤と連続的に投与してもよい。本発明は投与の順番に制限されず：式Ｉの化合物は、公知の抗癌剤または細胞毒性剤の投与前または投与後に投与され得る。例えばcdk阻害剤フラボピリドールの細胞毒性活性は、抗癌剤投与との投与順番によって影響される(Cancer Research, 1997, 57, 3375)。
【００７１】
実施例
以下の実施例は、好適な本発明の化合物及び製剤の合成方法及び使用方法を説明する。これらの実施例及び調製品は説明に役立つものであり、制限することを意図するものではない。本明細書に添付した特許請求の範囲によって定義されるような本発明の精神及び範囲の中にある他の態様であってよいことが理解されるだろう。
【実施例１】
【００７２】
4-イソチオシアネートピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１２】
2008505950.tif 000019
【００７３】
4-アミノピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(5.0 g、25 mmol)(Astatech, Inc)をジメチルホルムアミド(120 ml)に溶かし、そして-15℃に冷却した。ジメチルホルムアミド(100 mL)中のチオカルボニルジイミダゾール(4.8 g, 27 mmol)(Aldrich)を-10℃未満でゆっくり付加した。当該混合物を室温で14時間攪拌した。 全ての溶媒を真空下で除去し、そして残渣を塩化メチレン(200 ml)中に溶かし、そして水で２回洗浄した。当該溶媒を除去し、そして残渣をヘキサンで粉砕した。これを濾過して当該溶液をNoriteで処理し、セライトを通して濾過した。溶媒の除去は、4-イソチオシアネートピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(5.7g, 94%収率)をオイルとして与えた。LR-MS-EI(+)：242 MWに対応する。
【実施例２】
【００７４】
2-ブロモ-1-(3-フルオロフェニル)エタノン
【化１３】
2008505950.tif 000020
【００７５】
ジオキサン(250 ml)中の1-(3-フルオロフェニル)エタノン(14.0 g, 100 mmol) (Aldrich)の溶液を、12〜15℃で、ジオキサン(120 ml)に0.5時間かけて滴下した臭素の溶液(17 g, 105 mmol)で処理した。これを15分間攪拌し、そして溶液のほとんどを除去した。残渣をヘキサン(200 ml)に採取し、水で２回洗浄し、乾燥させた(MgSO4)。溶媒を除去して、2-ブロモ-1-(3-フルオロフェニル)エタノンを得た。
1H NMR (CDCI3), 300 MHz) δ3.71 (s, 2H, CH2), 7.30-7.77(m, 4H, 芳香族)。
【実施例３】
【００７６】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１４】
2008505950.tif 000021
【００７７】
2O℃で、tert-ブタノール(5 ml)及びアセトニトリル(35 mL)中の4-イソチオシアネートピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(2.4 g, 10 mmol)(実施例1)及びシアナミド(0.42 g, 10 mmol)(Aldrich)の混合物を、カリウムtert-ブトキシド(1.0M/THF, 10 ml,10 mmol, Aldrich)で15分間処理した。2-ブロモ-1-(3-フルオロフェニル)エタノン (2.0 g, 9.2 mmol)(実施例2)を付加し、そして懸濁物を2時間攪拌した。溶媒を除去し、固体残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し(60%〜70%酢酸エチル/ヘキサン)、2.4 g(57%収率)の4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1- カルボン酸tert-ブチルエステルを与えた。
【００７８】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.36 (m, 2H, NCH2), 1.41 (s, 9H, 3CH3), 1.88 (m, 2H, NCH2), 2.88 (brd, 2H, NCH2), 3.6-4.0 (m, 1 H, CH), 3.87 (m, 2H, NCH2), 7.31 (t, 1 H, 芳香族), 7.38 (d, 1H, 芳香族), 7.48 (t, 1H, 芳香族), 7.51 (q, 1H, 芳香族), 8.01 (brd, 1H, NH), 8.48 (brd, 1H, NH), 8.70 (brd, 1H, NH).
【実施例４】
【００７９】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１５】
2008505950.tif 000022
【００８０】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを、実施例２に従い1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)エタノン(Aldrich)の臭素化から出発して調製し、引き続き実施例3に記載された結晶化によって、4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを与えた。
【００８１】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.37 (m, 2H, CH2), 1.41 (s, 9H, 3CH3), 1.80 (m, 2H, CH2), 2.78 (brd, 2H, NCH2), 3.32 (m, 2H, NCH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.85 (m, 3H, OCH3), 7.22 (t, 1H, 芳香族), 7.45 (d, 1H, 芳香族), 7.48 (m, 1H, 芳香族), 7.94 (brd, 1H, NH), 8.45 (brd, 1H, NH), 8.65 (brd, 1H, NH). 
【００８２】
HRMS: (M+H)+: 実測値: 451.1813; 理論値451.1810.
【実施例５】
【００８３】
4-[4-アミノ-5-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１６】
2008505950.tif 000023
【００８４】
4-[4-アミノ-5-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを、実施例２に従い1-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)エタノン(Matrix)の臭素化から出発して、引き続き実施例３に発表したような結晶化によって調製し、4-[4-アミノ-5-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを与えた。
【００８５】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.48 (m, 2H, CH2), 1.92 (m, 2H, CH2), 2.55 (s, 9H, 3CH3), 2.75 (m, 2H, CH2), 3.39 (m, 2H, CH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.81 (s, 3H, OCH3), 6.92 (m, 1H, 芳香族), 7.50 (m, 1H, 芳香族), 7.6 (2x brd, 1 H, NH), 7.8 (brd, 1H, NH), 7.99 (m, 1 H, 芳香族), 9.0 (brd, 1H, NH).
【００８６】
LR-MS-ES(+/-)：468 MWに対応する。
【実施例６】
【００８７】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン
【化１７】
2008505950.tif 000024
【００８８】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.82 g, 1.95 mmol)(実施例3)をトリフルオロ酢酸(16 ml)と塩化メチレン(30 ml)の混合物に溶かした。1時間後、全ての溶媒を除去し、そして残渣を塩化メチレン(300 ml)に溶かした。これを10%のNa2CO3(50 ml)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、及び濃縮して半固体を与えた。これをエチルエーテルで粉砕し、濾過して、450 mg(72%収率)の[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノンを与えた。
【００８９】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.38 (m, 2H, CH2), 1.88 (m, 2H, CH2), 2.95 (m, 2H, CH2), 3.32 (brd, 2H, CH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.78 (s, 3H, OCH3), 7.31 (t, 1H, 芳香族), 7.38 (d, 1H, 芳香族), 7.48 (t, 1H, 芳香族), 7.51 (q, 1H, 芳香族), 8.01 (brd, 1H, NH), 8.48 (brd, 1H, NH), 8.70 (brd, 1H, NH).
【００９０】
LR-MS-ES(+/-):320 MWに対応する。
【実施例７】
【００９１】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン) 
【化１８】
2008505950.tif 000025
【００９２】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.30 g, 0.66 mmol)(実施例4)を実施例6で発表した方法で脱保護し、220 mg(90％収率)の[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノンを与えた。
【００９３】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.36 (m, 2H, CH2), 1.75 (m, 2H, CH2), 2.88 (brd, 2H, CH2), 3.32 (m, 2H, CH2), 3.2-3.4 (brd, 1H, NCH), 3.78 (s, 3H, OCH3), 7.23 (t, 1H, 芳香族), 7.48 (t, 1H, 芳香族), 7.62 (t, 1H, 芳香族), 8.01 (brd, 1H, NH), 8.48 (brd, 1H, NH), 8.70 (brd, 1H, NH).
【００９４】
LR-MS-ES(+/-):350 MWに対応する。
【実施例８】
【００９５】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン
【化１９】
2008505950.tif 000026
【００９６】
4-[4-アミノ-5-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.30 g, 0.64 mmol)(実施例5)を実施例6で発表した方法で脱保護し、123 mg (52％収率)の[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノンを与えた。
【００９７】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.38 (m, 2H, CH2), 1.78 (m, 2H, CH2), 2.91 (brd, 2H, CH2), 3.35 (m, 3H, CH & NCH2), 3.75 (s, 3H, OCH3), 6.95 (m, 1H, 芳香族), 7.43 (m, 1H, 芳香族), 8.01 (brd, 1H, NH), 8.48 (brd, 1H, NH), 8.70 (brd, 1H, NH).
【００９８】
LR-MS-ES(H＋/-):368 MWに対応する。
【実施例９】
【００９９】
1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノン
【化２０】
2008505950.tif 000027
【０１００】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン(0.10 g, 0.31 mmol)(実施例6)をテトラヒドロフラン(20 ml)、クロロホルム(6 ml)、及びピリジンの混合物に溶かし、そして-1O℃に冷却した。これを塩化アセチル(0.032 g, 43 mmol)で処理し、そして0.5時間、室温で攪拌した。これを冷塩化メチレン(100 mL)で希釈し、そして10％Na2CO3(aq)で２回洗浄した。乾燥(Na2SO4)及び溶媒除去後、残渣をテトラヒドロフランとヘキサンの混合物から沈殿させて、35 mg(30％収率)の1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノンを与えた。
【０１０１】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.28 (m, 1H, CH), 1.41 (m, 1H, CH) 1.92 (m, 2H, CH2), 2.75 (t, 1H, NCH), 3.14 (t, H, NCH), 3.32 (s, 3H, COCH3), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.77 (d, 1H, NCH), 4.22 (d, 1H, NCH), 7.31 (t, 1H, 芳香族), 7.38 (d, 1H, 芳香族), 7.48 (t, 1H, 芳香族), 7.51 (q, 1H, 芳香族), 8.01 (brd, 1H, NH), 8.48 (brd, 1H, NH), 8.72 (brd, 1H, NH).
【０１０２】
HRMS: (M+H)+: 実測値: 363.1288; 理論値 363.1286. 
【実施例１０】
【０１０３】
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン
【化２１】
2008505950.tif 000028
【０１０４】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロフェニル)メタノン(0.09 g, 0.28 mmol)(実施例6)を実施例9と同様の方法で、メタンスルホニルクロライドで処理し、35 mg(40％収率)の[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-フェニル)メタノンを与えた。
【０１０５】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz)δ1.54 (m, 2H, CH2), 2.03 (m, 2H, CH2), 2.88 (m, 5H, NCH2 & SCH3), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH),3.51 (d, 2H, NCH2), 7.32 (t, 1H, 芳香族), 7.38 (d, 1H, 芳香族), 7.48 (t, 1H, 芳香族), 7.52 (q, 1H, 芳香族), 7.99 (brd, 1H, NH), 8.48 (brd, 1H, NH), 8.77 (brd, 1H, NH).
【０１０６】
HRMS: (M+H)+: 実測値: 399.0960; 理論値 399.0956. 
【実施例１１】
【０１０７】
1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノン
【化２２】
2008505950.tif 000029
【０１０８】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン(0.125 g, 0.36 mmol)(実施例7)を実施例9と同様の方法で、アセチルクロライドで処理し、100 mg(77％収率)の1-[4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-イル]エタノンを与えた。
【０１０９】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz)δ1.38 (dm, 2H, CH2), 1.92 (m, 2H, CH2), 2.02 (s, 3H, COCH3), 2.76 (t, 1H, NCH), 3.26 (t, 1H, NCH), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.77 (m, 1H, NCH), 3.90 (s, 3H, OCH3), 4.22 (m, 1H, NCH), 7.23 (t, 1H, 芳香族), 7.47 (t, 1H, 芳香族), 7.50 (t, 1H, 芳香族), 7.9-8.5 (brd, 2H, 2NH), 8.69 (brd, 1H1 NH).
【０１１０】
HRMS: (M+H)+: 実測値: 393.1396; 理論値 393.1391. 
【実施例１２】
【０１１１】
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン
【化２３】
2008505950.tif 000030
【０１１２】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン(0.11 g, 0.31 mmol)(実施例7)を実施例9と同様の方法でメタンスルホニルクロライドにより処理し、30 mg(23％収率)の[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノンを与えた。
【０１１３】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.46 (m, 2H, CH2), 2.01 (m, 2H, CH2), 2.90 (m, 5H, CH2 & SCH3), 3.55(m, 2HCH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.91 (s, 3H, OCH3), 7.24 (t, 1H, 芳香族), 7.47 (t, 1H, 芳香族), 7.59 (t, 1H, 芳香族), 7.9-8.5 (brd, 2H, 2NH), 8.71 (brd, 1H, NH).
【０１１４】
HRMSEI: (M+H)+: 実測値: 428.0982; 理論値 428.0988.
【実施例１３】
【０１１５】
4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-スルホン酸ジメチルアミド
【化２４】
2008505950.tif 000031
【０１１６】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)メタノン(0.08 g, 0.022 mmol)(実施例7)を、ジイソプロピルエチルアミンが更に触媒およびシリカゲルのショートプラグとして使用されることを除き（酢酸エチルはサンプルの前精製のために使用した）実施例9と同様の方法で、ジメチルスルファモイルクロライドにより処理し、30 mg(22％収率)の4-[4-アミノ-5-(3-フルオロ-4-メトキシベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-スルホン酸ジメチルアミドを与えた。
【０１１７】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz)δ1.51 (m, 2H, CH2), 1.97 (m, 2H, CH2), 2.77 (s, 6H, 2x NCH2), 2.99 (m, 2H, CH2), 3.52 (m, 2H, CH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.89 (s, 3H, OCH3), 7.9-8.5 (brd, 2H, 2NH), 8.71 (brd, 1 H, NH). 
【０１１８】
HRMS: (M+H)+: 実測値: 458.1331 ; 理論値 458.1327.
【実施例１４】
【０１１９】
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン
【化２５】
2008505950.tif 000032
【０１２０】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン メタノン(0.05 g, 0.14 mmol)(実施例8)を、ジイソプロピルエチルアミンが触媒として更に使用されることを除き、実施例9と同様の方法で、メタンスルホニルクロライドで処理し、50 mg(90％収率)の[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノンを与えた。
【０１２１】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ1.57 (m, 2H, CH2), 1.92 (m, 2H, CH2), 2.85 (m, 5H, SCH3 & NCH2), 3.53 (m, 2H, NCH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 3.88(s, 3H, OCH3), 6.72 (m, 1H, 芳香族), 7.42 (m, 1H, 芳香族), 7.6 (2x brd, 1H, NH), 7.8 ( brd, 1H, NH), 7.99 (m, 1H, 芳香族), 9.0 (brd, 1H, NH).
【０１２２】
LR/LC/MS: (M+H):446 MWに対応する。
Ki CDK1 = 0.001μM; Ki CDK2 = 0.001μM; Ki CDK4 = 0.002 μM.
【実施例１５】
【０１２３】
イソチオシアネート-4-メタンスルホニルベンゼン
【化２６】
2008505950.tif 000033
【０１２４】
4-メタンスルホニルフェニルアミン(2.4 g, 14 mmol)の溶液を水(30 ml)及び塩酸(9 mL, 37%)の混合物に溶かした。これを室温で、よく攪拌しながら、チオホスゲン(1.5 g, 13.2 mmol)で滴下処理した。1時間後、懸濁物を濾過し、水で洗浄し、そしてP2O5で乾燥させて、2.4 g(85％収率)の1-イソチオシアネート-4-メタンスルホニルベンゼンを与えた。
【０１２５】
1H NMR (CDCI3), 300 MHz δ3.09 (s, 3H, CH3), 7.41 (d, 2H, 芳香族), 7.98 (d, 2H, 芳香族).
【実施例１６】
【０１２６】
[4-アミノ-2-(4-メタンスルホニルフェンイルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノン
【化２７】
2008505950.tif 000034
【０１２７】
[4-アミノ-2-(4-メタンスルホニルフェニルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノンを、実施例２に従い1-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)エタノン(Matrix)の臭素化から出発して、引き続き実施例３に発表されたジアミノチアゾール形態を調製し、固体を与えた。これをシリカゲルクロマトグラフィーで精製し(2.5%メタノール/塩化メチレン)、純粋なフラクションをエーテルで粉砕し、濾過し、15 mg(12%収率)の[4-アミノ-2-(4-メタンスルホニルフェニルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,3-ジフルオロ-6-メトキシフェニル)メタノンを得た。
【０１２８】
1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ3.18 (s, 3H, SCH3), 3.68 (s, 3H, OCH3), 6.95 (m, 1H, 芳香族), 7.50 (m, 1H, 芳香族), 7.74 (dd, 4H, 芳香族), 8.2 (brd, 1H, NH), 11.21 (s, 1 H1 NH).
【０１２９】
HRMS: (M+H)+: 実測値: 440.0545; 理論値 440.0545.
【実施例１７】
【０１３０】
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニル-ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル)メタノン
2-メチル-イソチオ尿素樹脂(34350-95)
【化２８】
2008505950.tif 000035
【０１３１】
エタノールと1,4-ジオキサン(500 ml, 1：4)の混合物にMerrifield 樹脂 (5Og、4.3 mmolのCl/gを有する、Fluka)及びチオ尿素(5eq, 82g, 1.8 mol, Aldrich)を付加した。当該混合物を85℃で5日間振った。濾過した後、樹脂をジメチルホルムアミド(3 x 50 ml)、イソプロパノール(3 x 50 ml)、ジクロロメタン(3 x 50 ml)及びエチルエーテル(3 x 50 mL)で洗浄した。デシケーター中で３日間、産物を乾燥させた後、77.5 gのオフホワイト色の2-メチル-イソチオ尿素樹脂を得た。産物を示す微量分析では、3 mmol /gの量を有した。
【０１３２】
4-[3-(2-メチルイソチオウレイド)チオウレイド-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル樹脂
【化２９】
2008505950.tif 000036
【０１３３】
100 mlの容器にメチルイソチオ尿素樹脂(2.9 g)(実施例17a)、4-イソチオシアネートピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(実施例1)のジメチルホルムアミド溶液、及び4当量のジイソプロピルアミンを添加した。当該混合物を室温で一晩かけて振った。当該反応混合物を濾過して、生産樹脂をジメチルホルムアミド(3 x 30 ml)、イソプロピルアルコール(3 x 30 ml)、ジクロロメタン(3 x 30 ml)及びジエチルエーテル(3 x 30 mL)で洗浄し、その後、デシケーター中で３日間乾燥させた。分析によると1.8 mmol/g保有する、3.93 gのオフホワイト色の産物を得た。
【０１３４】
4-[4-アミノ-5-(2,6-ジフルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノ-ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化３０】
2008505950.tif 000037
【０１３５】
無水ジメチルホルムアミド(10 mL)、4-[3-(2-メチル-イソチオウレイド)チオウレイド]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル樹脂(0.60 g, 1.08 mmol)、2-ブロモ-1-(2,6-ジフルオロフェニル)エタノン(0.616 g, 2.6 mmol, 2eq )(実施例2)、ポリマーに結合したジイソプロピルエチルアミン(PS-DIEA, Aldrich)(823 mg, 3eq )の混合物をフラスコに添加し、一晩振った。スカベンジャー樹脂、PS-Trisamine(0.612 g, 2.5 eq, Argonaut)を当該反応混合物に付加した。反応混合物を一晩振って、その後、短いシリカゲルカートリッジを通して濾過した。当該樹脂をジクロロメタンで洗浄し(3 x 10 ml)、そして洗浄溶液をもとのろ液と組合せた。当該組合せた溶液を濃縮し、そしてシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。0.276 gの4-[4-アミノ-5-(2,6-ジフルオロベンゾイル)チアゾール-2-イルアミノピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルをオフホワイト色の固体として得た(62％収率)。
【０１３６】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル)メタノン
【化３１】
2008505950.tif 000038
【０１３７】
4-[4-アミノ-5-(2,6-ジフルオロベンゾイル-チアゾール-2-イルアミノ]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.276 g, 0.63 mmol)を含むフラスコに、1,4-ジオキサン溶液(10 ml)中の4NのHCI(2 ml)を添加した。当該混合物を2 h、室温で攪拌した。反応混合物を濃縮し、そして残渣をエチルエーテルで粉砕し、0.262 gの粗[4-アミノ-2-(ピペリジン-4- イルアミノ)チアゾール-5-イル](2,6-ジフルオロフェニル)メタノンを得た。それは次のステップで直接使用した。
【０１３８】
[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル-メタノン
【化３２】
2008505950.tif 000039
【０１３９】
[4-アミノ-2-(ピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル)メタノン(0.25 g, ステップDからの粗産物)、無水ジクロロメタン(1.5 ml)及びメタンスルホニルクロライド(3eq, 155μL)をフラスコに添加した。その後、ジエチルイソプロピルアミン(6 eq, 697μL)を上記混合物に付加した。反応混合物を、室温で、一晩攪拌した。当該反応混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムを通して精製した。0.38 gの[4-アミノ-2-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イルアミノ)チアゾール-5-イル]-(2,6-ジフルオロフェニル)メタノンを明るい茶色の固体として得た。ステップDとEの全ての収率は15％であった。
【０１４０】
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ1.45-1.57 (m, 2H, CH2), 1.95-2.05 (m, 2H, CH2), 2.82-2.90 (m, 5H, CH3, CH2), 3.45-3.55 (m, 2H, CH2), 3.6-4.0 (ブロード, 1H, CH), 7.14-7.20 (m, 2H, 芳香族), 7.45-7.55 (m, 1H, 芳香族), 8.15-8.25 (ブロード, 1H, NH2), 8.7-8.9 (ブロード, 1H, NH ).
【０１４１】
HR-MS (M+H)+ : 実測値: 417.0865: 理論値 417.0861.
CDK1のKiは0.003 μM; CDK2 0.005 μM; CDK4 0.006 μM.
【０１４２】
本発明の化合物の薬理学的特質は、多くの薬理学的アッセイによって確認され得る。以下に例示される薬理学的アッセイは、本発明に係る化合物及びそれらの塩で実施した。本発明の化合物は、3μM未満のKi値、好適には0.5μM未満のKi値によるcdk4 活性；8μM未満、好適には0.5μM未満のKi値によるcdk2活性、及び10μM未満、好適には0.5μM未満のKi値によるcdk1 活性を示した。
【実施例１８】
【０１４３】
キナーゼアッセイ
Ki：測定
本実験は、組み換えヒトサイクリンB-CDK1、ヒトサイクリンE-CDK2またはヒトサイクリンD1-CDK4複合体を用いて実施した。バキュロウィルスベクターにおけるGST-サイクリンE(GST-cycE)、CDK2、GST-サイクリンB(GST-cycB)、CDK1、GST-CDK4及びサイクリンD1(cycD1)cDNAクローンは、Dr. W. Harperによって提供された（the Baylor College of Medicine, Houston, TX）。タンパク質はHigh Five(商標)昆虫細胞中で共発現し、そして複合体はグルタチオンセファロース樹脂(Pharmacia, Piscataway, NJ)で、以前に発表されたように精製した(Harper, J. W.等. Cell 1993, 75, 805-816)。6x-ヒスチジンタグ、網膜芽細胞腫(Rb)タンパク質(アミノ酸386-928)の切断形態は、cycD1-CDK4、cycB-CDK1及びcycE-CDK2アッセイの基質として使用した(発現プラスミドはDr. Veronica Sullivan（Department of Molecular Virology, Roche Research Centre, Welwyn Garden City, United Kingdom）より提供された）。Rbタンパク質は、CDK4、CDK2及びCDK1によるリン酸化反応のための天然基質である(Herwig and Strauss Eur. J. Biochem. Vol. 246 (1997) pp.581-601及び本明細書に引用された参考文献を参照)。
【０１４４】
62Kdタンパク質の発現は、M15 E.coli株の中のIPTG誘導可能なプロモーターの制御下にあった。細胞は超音波処理によって溶解し、そして精製は、pH 8.0で、予め1mMのイミダゾールで処理されたNi-キレートアガロースカラムへ溶解物を結合させることによって実行した。その後、緩衝剤のｐHを徐々に6.0まで減少させながら、当該樹脂を数回洗浄し、そして500 mMのイミダゾールで溶出した。溶出したタンパク質は、20 mMのHEPES、pH 7.5、30%グリセロール、200mMのNaCI、及び1 mMのDTTに対して透析された。精製したRb融合タンパク質ストックは、タンパク質濃度に関し定量され、分量化され、そして-70℃で貯蔵された。
【０１４５】
上記、CDK1、CDK2、及びCDK4を構成するタンパク質を用いるHTRFアッセイを準備した。これらは96-ウェルフォーマットで行い、384-ウェルプレートフォーマットを解読した。本アッセイは、ATPに関して、それぞれKmsを３回ずつ行った。
【０１４６】
CDK4アッセイにおいて、25 mM Hepes、pH 7.0、6.25mMのMgCI2、1.5 mMのDTT、135μMのATPの中での試験化合物の最終濃度を３倍に希釈した。DMSOの濃度は、4.76％以下であった。20μリットルを96-ウェルプレートのウェルに付加した。キナーゼ反応は、40 μl/ウェルの溶液（25 mM Hepes、pH 7.0、6.25mMのMgCI2、0.003%のTween-20、0.3mg/mlのBSA、1.5 mMのDTT 中に0.185μM Rb及び2.25μg/ml CDK4を含む）の付加によって開始した。CDK4が存在しないブランクウェルを含めた。プレートを37℃で、30分間、振りながら培養した。キナーゼ反応は、25 mMのHepes、pH 7.0、24 mMのEDTA、0.2 mg/mlのBSA中へ15μl/ウェルの1.6μMの抗-ホスホ-Rb(Ser780)抗体(Cell Signaling Inc.)を付加することによって終了した。30分後、37℃で、15μl/ウェルの3 nM Lance-Eu-W1024ラベル化抗-ウサギIgG及び抗-His6に結合した60 nMのアロフィコシアニン(PerkinElmer Life Sciences)を25 mMのHepes、pH 7.0、0.5 mg/mlのBSA中に付加した。引き続き、37℃で１時間培養し、それぞれのウェルの35μを２部ずつ、384-ウェルブラックプレートに移した。当該プレートをViewLuxまたはVictor Vリーダー(PerkinElmer Life Sciences)のいずれかを用いて、340 nmの励起波長、並びに615 nm及び665 nmの２重の放射波長を用いて読み取った。IC50値(読み出されるアッセイコントロール蛍光を50％まで減じる試験化合物の濃度)を、最初に665nmでネットリーディングから算出し、615nmでのユーロピウムリーディングで標準化した。ATP競合阻害剤に関し、Ki値を以下の方程式に従って算出した：
Ki = IC50/(1 + S/Km)    式中Sは基質濃度(ATP)を意味し、及びKmはATPのMichaelis-Menten定数を意味する。
【０１４７】
CDK1及びCDK2アッセイは、試薬とタンパク質濃度の僅かな違いを除き同様に処理した。
【０１４８】
両アッセイのための化合物と酵素緩衝物は、1OmMのMgCI2を含んだ。CDK1及びCDK2に関しては、それぞれの試薬のATP濃度は、162μM及び9OμMであった。0.15ng/μlの試薬濃度でのCDK1、及び0.06ng/μlの試薬濃度でのCDK2を使用した。検出試薬の試薬濃度は、3-12nMのEu-Abと60-9OnMのAPC-抗His 6の間に調整し、少なくとも10から1のバックグラウンド比に対するシグナルを与えた。
【実施例１９】
【０１４９】
【表６】
2008505950.tif 000040
【０１５０】
製造手順：
品目1、2及び3を適切なミキサーの中で15分間混合する。ステップ1からのパウダー混合物を、20％のポビドンK30溶液(品目4)と一緒に造粒する。ステップ2からの造粒物を50℃で乾燥させる。ステップ3からの造粒物を、適切な製粉装置に通過させる。品目5を粉砕した顆粒に付加し、ステップ4、そして3分間混合する。ステップ5からの造粒物を適切なプレス上で圧縮する。
【実施例２０】
【０１５１】
【表７】
2008505950.tif 000041
【０１５２】
製造手順：
品目1、2及び3を、適切なミキサー中で15分間混合する。品目4及び5を付加し、そして3分間混合する。適切なカプセル中に充填する。
【実施例２１】
【０１５３】
【表８】
2008505950.tif 000042
【０１５４】
製造手順：
品目2に品目１を溶かす。品目3、4及び5を品目6に付加し、そして分散するまで混合し、その後、均質化する。ステップ1からの溶液をステップ2からの混合物に付加し、そして分散物が半透明になるまで均質化する。0.2μmのフィルターを通し殺菌し、そしてバイアル中に充填する。
【実施例２２】
【０１５５】
【表９】
2008505950.tif 000043
製造手順：
品目2に品目1を溶かす。品目3、4及び5を品目6に付加し、そして分散するまで混合し、その後、均質化する。ステップ1からの溶液をステップ2からの混合物に付加し、そして当該分散物が半透明になるまで均質化した。0.2μmフィルターを通して殺菌し、バイアル中に充填した。
【０１５６】
本発明は特定且つ好適な態様への言及によって説明されたが、当業者は、変形及び修飾が本発明の一般的な実験及び実行を通して成し得ることを理解するだろう。従って、本発明は、前記に制限されることを意図せず、添付の特許請求の範囲及びその同等物によって定義される。
【国際調査報告】
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