(57)【要約】【課題】大気塵による測定阻害を考慮したアレルゲン検出率を求め、大気中のアレルゲン量をより正確に知ることのできる測定方法、測定キットを提供する。【解決手段】本測定方法は、（ａ）通気性フィルタの表面に、アレルゲンを所定量ａ含むアレルゲン含有物を付着させ、（ｂ）前記通気性フィルタのうちの第１の領域および第２の領域を大気中に露出させて、前記通気性フィルタに空気を通過させ、（ｄ）前記所定量ａ、前記第１の領域に対するアレルゲン抽出操作によって得られる、前記第２の領域の面積に対応するアレルゲン量Ａ、前記第２の領域に対する前記操作によって得られるアレルゲン量Ｂを用いて、アレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／ａを求め、（ｅ）前記アレルゲン検出率を用いて、前記大気中のアレルゲン量Ｘを、下記式に従って求める。      Ｘ＝Ａ×ａ／（Ｂ−Ａ）【選択図】図１
2015068797.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シート状の通気性フィルタを用いて大気中のアレルゲン量を測定するための方法であって、
（ａ）前記通気性フィルタの表面の所定の領域に、アレルゲンを所定量ａ含むアレルゲン含有物を付着させ、
（ｂ）前記通気性フィルタのうちの前記所定の領域を含まない第１の領域および前記所定の領域を含む第２の領域を大気中に露出させて、前記通気性フィルタに空気を通過させ、
（ｃ）前記（ｂ）のステップの後、前記通気性フィルタの第１の領域および第２の領域のそれぞれの部分に対し、アレルゲンを抽出するための操作を行い、
（ｄ）前記所定量ａ、前記第１の領域に対する前記操作によって得られる、前記第２の領域の面積に対応するアレルゲン量Ａ、前記第２の領域に対する前記操作によって得られるアレルゲン量Ｂを用いて、アレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／ａを求め、
（ｅ）前記アレルゲン検出率を用いて、前記大気中のアレルゲン量Ｘを、下記式に従って求めることを特徴とするアレルゲン量の測定方法。
Ｘ＝Ａ×ａ／（Ｂ−Ａ）
【請求項２】
シート状の通気性フィルタを用いて大気中のアレルゲン量を測定するための方法であって、
（ａ）前記通気性フィルタの表面の２つの異なる領域のそれぞれに、アレルゲンを含むアレルゲン含有物を付着させ、
（ｂ）前記２つの領域のいずれも含まない第１の領域および前記２つの領域のうちの一方の領域を含む第２の領域を大気中に露出させるとともに、前記２つの領域のうちの他方の領域を含む第３の領域を有する前記通気性フィルタの残りの領域に対する空気の通過を遮断するマスク部材を、前記通気性フィルタに重ねて配置して、前記通気性フィルタに空気を通過させ、
（ｃ）前記（ｂ）のステップの後、前記通気性フィルタの前記第１の領域、前記第２の領域、および前記第３の領域のそれぞれの部分に対し、アレルゲンを抽出するための操作を行い、
（ｄ）前記第１の領域、前記第２の領域、および前記第３の領域のそれぞれの領域に対する前記操作によって得られる、前記第２の領域の面積に対応するアレルゲン量Ａ、アレルゲン量Ｂ、および、前記第２の領域に付着させたアレルゲン含有物のアレルゲン量に対応するアレルゲン量Ｃを用いてアレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／Ｃを求め、
（ｅ）前記アレルゲン検出率を用いて、前記大気中のアレルゲン量Ｘを、下記式に従って求めることを特徴とするアレルゲン量の測定方法。
Ｘ＝Ａ×Ｃ／（Ｂ−Ａ）
【請求項３】
前記（ｃ）のステップにおいて、前記第２の領域および前記第３の領域は互いに隣接して、前記通気性フィルタから切り出される、請求項２に記載のアレルゲン量の測定方法。
【請求項４】
前記第１の領域および前記第２の領域の面積が等しい、請求項１から３のいずれかに記載のアレルゲン量の測定方法。
【請求項５】
前記（ｃ）のステップにおいて、前記第１の領域および前記第２の領域は互いに隣接して、前記通気性フィルタから切り出される、請求項１から４のいずれかに記載のアレルゲン量の測定方法。
【請求項６】
前記（ｂ）のステップにおいて、アレルゲン含有物が付着された側の前記通気性フィルタの表面を上流側にして、前記通気性フィルタに空気を通過させる、請求項１から５のいずれかに記載のアレルゲン量の測定方法。
【請求項７】
前記アレルゲンはスギアレルゲンであり、前記アレルゲン含有物はスギ花粉である、請求項１から６のいずれかに記載のアレルゲン量の測定方法。
【請求項８】
大気中のアレルゲン量を測定するための測定キットであって、
アレルゲンを所定量ａ含むアレルゲン含有物が所定の領域に付着されたシート状の通気性フィルタと、
前記通気性フィルタのうちの前記所定の領域を含まない第１の領域および前記所定の領域を含む第２の領域のそれぞれの部分からアレルゲンを抽出するための抽出液と、を備えることを特徴とするアレルゲン量測定キット。
【請求項９】
大気中のアレルゲン量を測定するための測定キットであって、
２つの異なる領域のそれぞれに、アレルゲンを含むアレルゲン含有物が付着されたシート状の通気性フィルタと、
前記２つの領域のいずれも含まない第１の領域および前記２つの領域のうちの一方の領域を含む第２の領域を大気中に露出させるとともに、前記２つの領域のうちの他方の領域を含む第３の領域を有する前記通気性フィルタの残りの領域に対する空気の通過を遮断するマスク部材と、
前記通気性フィルタの前記第１の領域、前記第２の領域、および前記第３の領域のそれぞれの部分からアレルゲンを抽出するための抽出液と、を備えることを特徴とするアレルゲン量測定キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シート状の通気性フィルタを用いて大気中のアレルゲン量を測定するための方法、アレルゲン量測定キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
スギ花粉には、人体に直接影響があるとされるスギアレルゲンが含まれている。大気中のスギアレルゲン量を測定するための方法として、大量の空気を吸引して、大気中の浮遊物を濃縮して捕集するハイボリュームエアサンプラ等の装置を用いて、スギ花粉やスギ花粉の粉砕物を大気塵と混ざった状態で捕集し、捕集物の中からスギアレルゲンを抽出する方法が知られている。
ところで、大気塵の中には、アレルゲンを吸着する作用を持つ物質があり、スギアレルゲンがこのような物質に吸着されると、吸着されたアレルゲンが測定できないといった測定阻害が起き、大気中のアレルゲン量を正確に定量できなくなる。そこで、大気塵による測定阻害を抑えるためのブロッキング剤を抽出液に溶かして、大気塵に吸着されたスギアレルゲンを抽出させる方法が知られている（非特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】片山秀夫ら，環境中スギアレルゲン測定方法の検討，第３０回空気清浄とコンタミネーションコントロール研究大会
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、上記したブロッキング剤を含む抽出液を用いても、大気塵に吸着されたスギアレルゲンのすべてが抽出されるわけではない。また、測定阻害を起こす大気塵の組成や量は、サンプリングを行うときの風向きや、時間帯、天候等によって異なり、また、車両、機械設備からの排出物等、人の活動にも起因して発生するため、測定阻害が生じる程度は一定でない。このため、大気中のスギアレルゲン量を正確に知ることは容易でない。
本発明は、大気塵によって生じた測定阻害の程度を求めて、大気中のアレルゲン量をより正確に知ることのできる測定方法、測定キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一態様は、シート状の通気性フィルタを用いて大気中のアレルゲン量を測定するための方法であって、
（ａ）前記通気性フィルタの表面の所定の領域に、アレルゲンを所定量ａ含むアレルゲン含有物を付着させ、
（ｂ）前記通気性フィルタのうちの前記所定の領域を含まない第１の領域および前記所定の領域を含む第２の領域を大気中に露出させて、前記通気性フィルタに空気を通過させ、
（ｃ）前記（ｂ）のステップの後、前記通気性フィルタの第１の領域および第２の領域のそれぞれの部分に対し、アレルゲンを抽出するための操作を行い、
（ｄ）前記所定量ａ、前記第１の領域に対する前記操作によって得られる、前記第２の領域の面積に対応するアレルゲン量Ａ、前記第２の領域に対する前記操作によって得られるアレルゲン量Ｂを用いて、アレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／ａを求め、
（ｅ）前記アレルゲン検出率を用いて、前記大気中のアレルゲン量Ｘを、下記式に従って求めることを特徴とする。
Ｘ＝Ａ×ａ／（Ｂ−Ａ）
【０００６】
本発明の別の一態様は、シート状の通気性フィルタを用いて大気中のアレルゲン量を測定するための方法であって、
（ａ）前記通気性フィルタの表面の２つの異なる領域のそれぞれに、アレルゲンを含むアレルゲン含有物を付着させ、
（ｂ）前記２つの領域のいずれも含まない第１の領域および前記２つの領域のうちの一方の領域を含む第２の領域を大気中に露出させるとともに、前記２つの領域のうちの他方の領域を含む第３の領域を有する前記通気性フィルタの残りの領域に対する空気の通過を遮断するマスク部材を、前記通気性フィルタに重ねて配置して、前記通気性フィルタに空気を通過させ、
（ｃ）前記（ｂ）のステップの後、前記通気性フィルタの前記第１の領域、前記第２の領域、および前記第３の領域のそれぞれの部分に対し、アレルゲンを抽出するための操作を行い、
（ｄ）前記第１の領域、前記第２の領域、および前記第３の領域のそれぞれの領域に対する前記操作によって得られる、前記第２の領域の面積に対応するアレルゲン量Ａ、アレルゲン量Ｂ、および、前記第２の領域に付着させたアレルゲン含有物のアレルゲン量に対応するアレルゲン量Ｃを用いてアレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／Ｃを求め、
（ｅ）前記アレルゲン検出率を用いて、前記大気中のアレルゲン量Ｘを、下記式に従って求めることを特徴とする。
Ｘ＝Ａ×Ｃ／（Ｂ−Ａ）
【０００７】
本発明のさらに別の一態様は、大気中のアレルゲン量を測定するための測定キットであって、
アレルゲンを所定量ａ含むアレルゲン含有物が所定の領域に付着されたシート状の通気性フィルタと、
前記通気性フィルタのうちの前記所定の領域を含まない第１の領域および前記所定の領域を含む第２の領域のそれぞれの部分からアレルゲンを抽出するための抽出液と、を備えることを特徴とする。
【０００８】
本発明のさらに別の一態様は、大気中のアレルゲン量を測定するための測定キットであって、
２つの異なる領域のそれぞれに、アレルゲンを含むアレルゲン含有物が付着されたシート状の通気性フィルタと、
前記２つの領域のいずれも含まない第１の領域および前記２つの領域のうちの一方の領域を含む第２の領域を大気中に露出させるとともに、前記２つの領域のうちの他方の領域を含む第３の領域を有する前記通気性フィルタの残りの領域に対する空気の通過を遮断するマスク部材と、
前記通気性フィルタの前記第１の領域、前記第２の領域、および前記第３の領域のそれぞれの部分からアレルゲンを抽出するための抽出液と、を備えることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の測定方法、測定キットによれば、大気塵によって生じた測定阻害の程度を求めることができ、これにより、大気中のアレルゲン量をより正確に知ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本実施形態の測定方法を示すフローである。
【図２】（ａ）は、本実施形態の測定方法で用いられる通気性フィルタを示す図である。（ｂ）は、本実施形態の測定方法で用いられるマスク部材を示す図である。
【図３】図２に示す通気性フィルタとマスク部材を重ねて示す図である。
【図４】（ａ）は、図２に示す通気性フィルタを吸引装置に取り付けた状態を示す側面図である。（ｂ）は、当該取り付け状態を示す正面図である。
【図５】本実施形態の変形例に係る測定方法で用いられる通気性フィルタを示す図である。
【図６】図５に示す通気性フィルタとマスク部材を重ねて示す図である。
【図７】本実施形態の測定キットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明のアレルゲン量の測定方法、アレルゲン量測定キットについて説明する。
【００１２】
（アレルゲン量の測定方法）
本実施形態の測定方法は、シート状の通気性フィルタを用いて大気中のアレルゲン量を測定するための方法であり、スギ花粉由来のアレルゲンであるＣｒｙｊ１、Ｃｒｙｊ２の量を好適に測定することができる。以降の説明では、スギアレルゲン量を測定する場合を例に説明するが、本実施形態の測定方法は、スギアレルゲンの測定に限らず、大気中を浮遊する可能性のある他の種類のアレルゲンの量を測定することもできる。他の種類のアレルゲンとしては、例えば、ヒノキ、イネ等の他の花粉由来のアレルゲン、ネコ、イヌ等のペット由来のアレルゲン、カビ、ダニ等に由来するアレルゲンが挙げられる。
【００１３】
本実施形態の測定方法で用いられるシート状の通気性フィルタには、スギ花粉と同程度の大きさ（数μｍ）の粒子を捕集することのできるものであれば、特に制限されないが、例えば、比色法による捕集効率が６５％以上のものが用いられる。
通気性フィルタは、アレルゲン量の測定精度を高められる点で、捕集効率が高いものが好ましく用いられる。上記捕集効率の高い通気性フィルタは、例えば、ＪＩＳ  Ｚ８１２２に定めるＨＥＰＡフィルタ（High Efficiency Particulate Air Filter）以上の性能のフィルタである。また、通気性フィルタは、後述するサンプリング時にサンプラに負荷をかけない観点から、圧力損失の低いものが好ましく用いられる。圧力損失の低い通気性フィルタは、例えば、空気を流速５．３ｃｍ／秒で通過させたときの圧力損失が２５０Ｐａ未満である。
【００１４】
通気性フィルタには、例えば、ろ紙、不織布、織布、ろ過膜が用いられる。ろ紙には、紙、ガラス繊維、有機繊維を材質とするものが挙げられる。有機繊維を構成する繊維の材質は、特に限定されないが、例えば、ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン等の樹脂が挙げられる。通気性フィルタはシート状であり、例えば、厚みは１ｍｍ以下である。
【００１５】
図１に、本実施形態の測定方法を説明するフローを示す。本実施形態の測定方法は、ステップ１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０を備える。
ステップ１００では、通気性フィルタの表面にスギ花粉（アレルゲン含有物）を塗布する。なお、アレルゲン含有物であるスギ花粉には、その粉砕物も含まれる。また、本明細書においてアレルゲン含有物には、アレルゲン以外の成分を有しないアレルゲン自身（アレルゲン単体）も含まれる。図２に、本実施形態の測定方法で用いられる通気性フィルタ１を示す。通気性フィルタ１は、円形のＨＥＰＡフィルタろ紙である。通気性フィルタ１の片側の表面には、図２に示すように、２つの塗布スポット３（所定の領域）があり、ここにスギ花粉が塗布される。なお、図２では、塗布スポット３を分かりやすく示すために実線で示しているが、通気性フィルタ１にこのような実線が描かれていなくてもよい。また、スギ花粉を塗布する場所は、厳密に、図示される塗布スポット３上でなくてもよく、図２において破線で示す矩形状の領域（第２の領域）７内であれば、塗布スポット３内からはみ出てもよい。なお、図２に示す塗布スポット３は、所定領域からはみ出さずに塗布するために２箇所にあるが、１つ、３つ、４つ等であってもよく、また、その形状も制限されない。
【００１６】
塗布スポット３には、所定量ａのスギアレルゲン、を含むスギ花粉を塗布する。所定量ａは、予め定めた量であってもよく、通気性フィルタ１への塗布後に、計算、測定等によって確認できた量であってもよい。２つの塗布スポット３に塗布されたスギ花粉に含まれるアレルゲン量の総和は、上記所定量ａに等しい。所定量ａは、後述するアレルゲン検出率、スギアレルゲン量の計算に用いられる。所定量ａは、例えば、１〜１０ｎｇである。所定量ａのスギアレルゲンを含むスギ花粉の塗布量は、例えば、スギ花粉の量と、スギ花粉に含まれるスギアレルゲンの量とを関連付ける表を参照して定められる。
スギ花粉の塗布の方法は、特に制限されないが、例えば、スギ花粉を純水に分散させ、所定濃度に調整したものを通気性フィルタ1に含浸、乾燥させることで行うことができる。なお、スギ花粉が塗布された通気性フィルタ１は、スギアレルゲンの不活化を抑えるため、サンプリングを行うまでの間、乾燥状態で冷凍（例えば−１８℃以下）で保存しておくことが好ましい。
【００１７】
次のステップ１０２では、スギ花粉が塗布された通気性フィルタ１に空気を通過させ、サンプリングを行う。サンプリングに際しては、スギ花粉が塗布された通気性フィルタ１の表面のうち、塗布スポット３を含まない第１の領域５、および、塗布スポット３を含む第２の領域７、を大気中に露出させる。第１の領域５は、図２（ａ）において破線で示すように、第２の領域７と同様に、矩形状に区画された領域である。なお、通気性フィルタ１の表面には、第１の領域５、第２の領域７の位置が破線等で示されていてもよく、示されていなくてもよい。
第１の領域５は、第２の領域７と隣り合うよう区画されていることが好ましい。これにより、次のステップ１０４において、第１の領域５と第２の領域７を、つながった状態で切り出せるため、切出しを簡単に行えるとともに、後述するマスク部材の開口１１ａの数が１つで足り、マスク部材を簡単に作成できる。第１の領域５および第２の領域７の面積は、特に制限されないが、互いに等しいことが好ましい。これにより、アレルゲン検出率およびアレルゲン量の計算を、これらの領域５，７の面積の違いを考慮せずに行うことができる。第１の領域５、第２の領域７は、例えば、縦５０ｍｍ×横２５ｍｍの大きさの矩形形状に定められる。
【００１８】
通気性フィルタ１の第１の領域５および第２の領域７を露出させるために、図２（ｂ）に示すマスク部材１１が用いられる。マスク部材１１は、第１の領域５、第２の領域７を除く通気性フィルタ１の残りの部分に対する空気の通過を遮断する。マスク部材１１の材質は、特に制限されず、紙製、樹脂製、金属製のものが挙げられる。マスク部材１１の厚みは、サンプリング中の大気の温度や湿気が通気性フィルタ１１に及ぼす影響が抑えられるよう、一定以上の厚みを有していることが好ましい。マスク部材１１の厚みは、紙製である場合は、例えば０．１〜０．２ｍｍである。サンプリングの際に空気の上流側に配されるマスク部材１１の表面には、ガスバリア性、撥水性を付与するためのコーティング層が設けられてもよい。
【００１９】
マスク部材１１には、開口１１ａが設けられている。開口１１ａは、マスク部材１１が通気性フィルタ１に重ねて配置された場合に、図３に示すように、第１の領域５および第２の領域７が、開口１１ａの領域と重なって外部に露出する形状に形成される。図３は、通気性フィルタ１とマスク部材１１を重ねて示す図である。開口１１ａの大きさ、形状は特に制限されないが、例えば、縦５０ｍｍ×横５０ｍｍの大きさの正方形である。
【００２０】
サンプリングは、マスク部材１１を重ねて通気性フィルタ１をサンプラに取り付けて行う。サンプラは、フィルタを介して大量の空気を吸引することで、フィルタ上に、大気中の浮遊物質を濃縮して集める装置である。サンプラとしては、公知のハイボリュームエアサンプラ、アンダーセンサンプラ等が用いられる。図４に、通気性フィルタ１およびマスク部材１１が取り付けられたハイボリュームエアサンプラ２１を示す。図４（ａ）はその側面図であり、図４（ｂ）はその正面図である。ハイボリュームエアサンプラ２１は、通気性フィルタ１が取り付けられるフィルタ取付部２３を有している。フィルタ取付部２３は、通気性フィルタ１を保持するためのリング状の部材２４を有している。通気性フィルタ１は、スギ花粉が塗布された方の表面を上流側（図２（ａ）において左側）に向け、マスク部材１１を重ねてフィルタ取付部２３に取り付けられる。これにより、通気性フィルタ１に塗布されたスギ花粉がサンプラ内に吸い込まれるのを防止できる。サンプリングの期間は、季節、天候等の条件を考慮して適宜定められ、例えば数日間である。サンプリングの間は、空気の吸引速度を一定に維持することが好ましく、例えば数百Ｌ／分である。
【００２１】
次のステップ１０４では、スギアレルゲンを抽出するための操作を行う。抽出操作は、ステップ１０２のサンプリングの後、通気性フィルタ１から切り出された、第１の領域５および第２の領域７のそれぞれの部分に対して行われる。２つの領域５，７は、隣り合って定められているので、通気性フィルタ１から別々に切り出す必要がない。２つの領域５，７は、同じ面積に切り出されてもよいが、異なる面積に切り出されてもよい。異なる面積に切り出される場合は、少なくとも第２の領域７の面積に対する第１の領域５の面積の割合が分かるように、切り出したそれぞれの領域５，７の面積を求めておく。また、２つの領域５，７を切り分けて分離する際に、例えば、２つの領域５，７の境界線が不明瞭であっても、すべての塗布スポット３が、分離する１つの領域に含まれていればよい。この場合、切り分けた２つの領域の面積は予め求めておく。
【００２２】
抽出操作は、例えば、非特許文献１に記載された、ブロッキング剤を含む抽出液を用いて行う。ブロッキング剤は、タンパク質を吸着する性質を有する大気塵中の物質（測定阻害物質）に吸着されたスギアレルゲンを測定阻害物質から分離させる作用を有し、例えば、スキムミルク、ウシ血清アルブミン等が用いられる。抽出液としては、ＨＥＰＥＳ（4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid）緩衝液が用いられる。ＨＥＰＥＳ緩衝液は、抗原としてのスギアレルゲンがｐＨの変化による影響を受けないようにする。ＨＥＰＥＳ緩衝液の組成は特に制限されないが、例えば、ＮａＣｌ、ＥＤＴＡ、ポリソルベート２０（Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate）、ＨＥＰＥＳ、ＮＨ４ＨＣＯ３を含有する。ブロッキング剤のＨＥＰＥＳ緩衝液中の濃度は、特に制限されず、例えば０．１〜１０重量％である。
【００２３】
抽出操作は、例えば、次の手順で行うことができる。通気性フィルタ１から切り出した２つの領域５，７をそれぞれ試験管に入れ、上記ブロッキング剤を含む抽出液を添加する。次いで、撹拌機を用いて分散させ、遠心分離により固形分を沈殿させ、上澄み液の濃度を、次のステップ１０６において測定することにより、抽出されたアレルゲン量が測定される。
【００２４】
次のステップ１０６では、抽出されたスギアレルゲンの量を測定する。２つの領域５，７のそれぞれから抽出されたスギアレルゲン量を測定するための方法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）法、ＥＬＩＳＰＯＴ（Enzyme-Linked ImmunoSpot）法が用いられるが、感度が高い点で、ＥＬＩＳＡ法が好ましく用いられる。ＥＬＩＳＡ法の中で、サンドイッチ法、競合法、直接吸着法のいずれの方法が用いられてもよいが、特異性が高い点で、サンドイッチ法が好ましく用いられる。サンドイッチＥＬＩＳＡ法による測定は、例えば、次の手順で行うことができる。
マイクロプレートウエルを固相としてスギアレルゲンを吸着させたものに対し、ステップ１０４において抽出された抽出液を希釈した希釈検体を添加し、インキュベートさせる。インキュベート終了後、洗浄し、ＨＲＰ（ペルオキシダーゼ）を結合させたスギアレルゲン抗体を加え、さらにインキュベートさせる。洗浄後、ウエルに残ったＨＲＰを、発色剤であるＴＭＢ（3,3',5,5'-tetramethylbenzidine）と反応させる。次いで、酸性溶液を添加して反応を停止させ、反応により生じた黄色の生成物を、マイクロプレートリーダを用いて４５０ｎｍ（副波長６２０ｎｍ）で比色測定する。なお、以上の作業に先立って、上記希釈検体の代わりにスギアレルゲンの標準溶液を添加して、上記した手順で吸光度を測定、プロットして標準曲線を作成しておく。吸光度は、スギアレルゲン濃度にほぼ比例するため、希釈検体について得られた吸光度から、この標準曲線を用いて、抽出液中のスギアレルゲン量が決定される。
【００２５】
次のステップ１０８では、アレルゲン検出率を求める。アレルゲン検出率は、上記所定量（既知量ともいう）をａ、第１の領域５に対する抽出操作を経て得られる、第２の領域７の面積に対応するアレルゲン量をＡ、第２の領域７に対する抽出操作を経て得られるアレルゲン量をＢで表すとき、（Ｂ−Ａ）／ａで表される。上記第２の領域７の面積に対応するアレルゲン量とは、第１の領域５と第２の領域７の面積が等しい場合は、第２の領域７に対する抽出操作を経て得られるアレルゲン量を意味し、両領域５，７の面積が異なる場合は、第２の領域７に対する抽出操作を経て得られるアレルゲン量を、第２の領域７の面積に対する第１の領域５の面積の割合で割り算した値を意味する。たとえば、ステップ１０４において、第１の領域５を第２の領域７の３倍の面積に切り出した場合は、ステップ１０６で測定された当該第１の領域５のアレルゲン量を３で割った値を、上記第２の領域７の面積に対応するアレルゲン量Ａとする。
【００２６】
ここで、アレルゲン検出率が（Ｂ−Ａ）／ａで表される理由について説明する。アレルゲン量Ａは、未知の大気中のアレルゲン量Ｘに、未知のアレルゲン検出率を乗じて得られた量であると考えることができる。このことは、
Ａ＝Ｘ×アレルゲン検出率
で表される。一方、アレルゲン量Ｂは、既知量ａと、未知のアレルゲン量Ｘとの和に、未知のアレルゲン検出率を乗じた値であると考えることができる。このことは、
Ｂ＝（ａ＋Ｘ）×アレルゲン検出率
で表される。ここで、アレルゲン量Ｂからアレルゲン量Ａを引き算すると、
Ｂ−Ａ＝ａ×アレルゲン検出率
となり、アレルゲン検出率は（Ｂ−Ａ）／ａで表せる。
【００２７】
このように、本実施形態によれば、サンプリング時の環境条件による複雑な影響を考慮しなくても、アレルゲン検出率を、上記ａ、Ａ、Ｂを用いて、簡単に求めることができる。また、測定阻害が生じた程度は、アレルゲン検出率が高いほど小さく、アレルゲン検出率が小さいほど大きいと考えられるため、アレルゲン検出率を求めることで、測定阻害が生じた程度を、上記ａ，Ａ，Ｂを用いて求めることができる。
【００２８】
次のステップ１１０では、ステップ１０８で求めたアレルゲン検出率を用いて、大気中のアレルゲン量Ｘを、下記式（１）に従って求める。
Ｘ＝Ａ×ａ／（Ｂ−Ａ）      （１）
これにより、大気中のアレルゲン量をより正確に知ることができる。
【００２９】
本実施形態によれば、上述したように、塗布スポットを含む領域と、塗布スポットを含まない領域を定めた通気性フィルタを用いる簡便な方法によって、アレルゲン検出率、大気中のアレルゲン量を求めることができる。また、本実施形態によれば、大気塵による測定阻害の程度を、直接測定することなくアレルゲン検出率を求めることができ、求めたアレルゲン検出率を用いて、測定阻害が生じた程度を知ることができる。さらに、本実施形態によれば、求めたアレルゲン検出率を用いて、大気中のアレルゲン量を求めることができ、より正確に大気中のアレルゲン量を知ることができる。
【００３０】
なお、本実施形態の測定方法では、マスク部材１１を用いなくてもよい。通気性フィルタ１において、第１の領域５および第２の領域７が定められていれば、上記した手順で、それぞれの領域に対して抽出操作を行うことができ、抽出された量に基づいて、アレルゲン検出率、大気中のアレルゲン量を求めることができる。
また、本実施形態の測定方法は、屋内および屋外のいずれにおいても行うことができる。
【００３１】
（測定方法の変形例）
次に、本実施形態の変形例に係る測定方法について説明する。
スギアレルゲンは、測定環境の温度、湿気等によっては不活化する。このため、サンプリングの期間が長いと、不活化した量が無視できないことが想定される。この変形例に係る測定方法は、サンプリングの期間中にスギアレルゲンが不活化することを考慮して、大気中のアレルゲン量を求める。
ここでは、上記実施形態の測定方法との相違に注目して説明する。
変形例では、上記実施形態のステップ１００において、２つの塗布スポット３のほかに、さらに、図５に示すように、スギ花粉が塗布される２つの塗布スポット４が定められている。本実施形態では塗布スポット４は２つあるが、１つ、３つ、４つ等であってもよい。図５は、変形例で用いられる通気性フィルタを示す図である。塗布スポット３と塗布スポット４で、塗布されるスギ花粉の量は等しくてもよく、異なっていてもよい。
【００３２】
変形例でも、上記実施形態のステップ１０２において、マスク部材１１が用いられるが、ここでは、マスク部材１１を通気性フィルタ１に重ねると、図６に示すように、塗布スポット３，４のいずれも含まない第１の領域５、および、塗布スポット３を含む第２の領域５、の２つの領域が露出するとともに、塗布スポット４を含む第３の領域９を有する通気性フィルタ１の残りの領域が覆われる。図６は、図５に示す通気性フィルタ１とマスク部材１１を重ねて示す図である。通気性フィルタ１およびマスク部材１１のサンプラ２１への取り付け、および、サンプリングの手順は、上記実施形態と同様である。
【００３３】
変形例では、上記実施形態のステップ１０４において、通気性フィルタ１の第１の領域５、第２の領域７に加え、第３の領域９の部分に対しても、アレルゲンを抽出するための操作を行う。３つの領域５，７，９は互いに隣接して、通気性フィルタ１から切り出され、さらに、それぞれの領域に分離される。抽出操作は、上記実施形態と同様である。抽出されたアレルゲン量の測定は、上記実施形態のステップ１０６と同様にして行われる。
【００３４】
変形例で求められるアレルゲン検出率は、上記実施形態で用いた、第２の領域７の面積に対応するアレルゲン量Ａ、第２の領域７に対する抽出操作を経て得られるアレルゲン量Ｂを用いるとともに、上記予め定めた量ａの代わりに、第３の領域９に対する抽出操作を経て得られた、第２の領域７に塗布したスギ花粉に含まれるアレルゲン量に対応するアレルゲン量Ｃを用いて、（Ｂ−Ａ）／Ｃで表される。上記第２の領域７に塗布したスギ花粉に含まれるアレルゲン量に対応するアレルゲン量Ｃとは、第２の領域７に塗布したスギ花粉のアレルゲン量と第３の領域９に塗布したスギ花粉のアレルゲン量が等しい場合は、第３の領域９に塗布したスギ花粉のアレルゲン量を意味し、両領域７，９に塗布したスギ花粉のアレルゲン量が異なる場合は、第３の領域９に塗布したスギ花粉のアレルゲン量を、第２の領域７に塗布したスギ花粉のアレルゲン量に対する第３の領域に塗布したスギ花粉のアレルゲン量の割合で割り算した値を意味する。たとえば、ステップ１００において、第３の領域９に、第２の領域に塗布したスギ花粉のアレルゲン量の２倍の量のアレルゲンを含むスギ花粉を塗布した場合は、第３の領域９に塗布したスギ花粉のアレルゲン量を２で割った値を、上記第２の領域７に塗布したスギ花粉に含まれるアレルゲン量に対応するアレルゲン量Ｃとする。なお、アレルゲン検出率および大気中のアレルゲン量を求める際に、上記所定量ａを単純に、第３の領域９に塗布したスギ花粉に含まれるアレルゲン量Ｃで置き換えることができる点で、両領域７，９に塗布したスギ花粉のアレルゲン量は等量であることが好ましい。
【００３５】
ここで、変形例のアレルゲン検出率を（Ｂ−Ａ）／Ｃと定めている理由について説明する。塗布スポット４に塗布されたスギ花粉は、サンプリングの間、マスク部材１１によって大気から遮断されるため、測定阻害による影響はないが、温度や湿気による影響は受けるため、一部が不活化すると考えられる。したがって、アレルゲン量Ｃは、サンプリング後も活性を有する正味のスギアレルゲン量であると考えられる。そこで、変形例では、上記実施形態のアレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／ａにおいて、既知量ａを、正味のスギアレルゲン量Ｃに置き換えることにより、大気の温度や湿気による影響を考慮したアレルゲン検出率を用いている。
【００３６】
変形例では、上記実施形態のステップ１１０において、式（１）に代えて、下記式（２）を用いてアレルゲン量を求める。
Ｘ＝Ａ×Ｃ／（Ｂ−Ａ）      （２）
【００３７】
変形例の測定方法によれば、第３の領域９に塗布スポット３にスギ花粉を塗布しておくことで、サンプリングの間にスギアレルゲンが不活化してアレルゲン量が減少した場合に、不活化したアレルゲン量が不明であっても、上記Ａ、Ｂ、Ｃを用いて、簡単にアレルゲン検出率を求めることができる。このアレルゲン検出率は、大気の温度や湿気による影響も考慮したものであるため、より実態に近いアレルゲン検出率が求められる。そして、このアレルゲン検出率を用いて、上記式（２）に従って計算することで、より精度の高い、大気中のアレルゲン量を知ることができる。
また、変形例の測定方法によれば、所定量ａを用いずに、アレルゲン検出率、および、大気中のアレルゲン量が求められるので、所定量ａが不明になった場合でも、これらの値を求めることができる。
【００３８】
（実験例）
実際に、上記変形例の測定方法を用いて、花粉が飛散していない季節に、室内で３日間サンプリングを行い、アレルゲンの抽出、測定を行った。通気性フィルタには、ＨＥＰＡフィルタろ紙（北越紀州製紙社製、Ｓ−３２０）を用いた。通気性フィルタの第２の領域７に、上記所定量ａとして１０ｎｇのスギアレルゲンを含むスギ花粉が付着されるよう、スギ花粉を純水に分散させたものを通気性フィルタに含浸させ、乾燥させた。サンプリングは、ハイボリュームエアサンプラ（柴田科学社製、ＨＶ５００Ｒ）を用いて行った。サンプリングの間、サンプラの吸引速度は５００Ｌ／分に維持した。
測定の結果、上記Ａ，Ｂ，Ｃに関して、Ａ＝０ｎｇ、Ｂ＝２．９ｎｇ、Ｃ＝３．０ｎｇであった。これらの値を用いて、アレルゲン検出率（Ｂ−Ａ）／Ｃ×１００＝９７％の値を得た。これにより、検出されないスギアレルゲン量が、正味のアレルゲン量に対し３％存在することが分かった。
【００３９】
（アレルゲン量測定キット）
次に、アレルゲン量測定キットについて説明する。
図７に、本実施形態のアレルゲン量測定キット３１を示す。
アレルゲン量測定キット３１は、大気中のアレルゲン量を測定するためのキットであって、通気性フィルタ１と、抽出液３３と、ブロッキング剤３５と、を備える。
通気性フィルタ１は、上記通気フィルタ１と同様である。なお、上記変形例のように、アレルゲンの不活化も考慮に入れたアレルゲン検出率、アレルゲン量を求める場合は、通気性フィルタ１には、塗布スポット３に加え、上述の変形例のように、塗布スポット４にもスギ花粉を塗布したものが用いられる。塗布スポット３および塗布スポット４に塗布されるスギ花粉の量は、等しくてもよく、異なっていてもよく、いずれの場合も、上記変形例と同様にしてアレルゲン検出率、および、アレルゲン量を求めることができる。
抽出液３３は、上記した抽出液であり、例えばＨＥＰＥＳ緩衝液が用いられる。抽出液３３は、プラスチック製又はガラス製の容器に充填されている。
ブロッキング剤３５は、上記したブロッキング剤であり、例えば、粉末状のスキムミルクが用いられる。ブロッキング剤３５は、プラスチック製の袋又は容器に充填されている。ブロッキング剤３５は、上記抽出操作の前に、抽出液３３に溶解させて用いられる。
測定キット３１は、さらに、上記マスク部材１１を備えていてもよい。マスク部材１１を用いることで、アレルゲンの不活化も考慮に入れたアレルゲン検出率、アレルゲン量を求めることができる。
【００４０】
本実施形態の測定キットによれば、上記測定方法を行う場合と同様にして、サンプリング、および、アレルゲンの抽出、測定を行うことができ、抽出されたアレルゲン量を用いて、アレルゲン検出率を求めることができ、測定阻害が起きている程度を知ることができる。また、アレルゲン検出率を用いて、式（１）又は式（２）に従って計算することで、さらに、大気中のアレルゲン量を求めることができ、大気中のアレルゲン量をより正確に知ることができる。
【００４１】
以上、本発明のアレルゲン量の測定方法、アレルゲン量測定キットについて詳細に説明したが、本発明は上記実施形態に限定されず、本発明の主旨を逸脱しない範囲において、種々の改良や変更をしてもよいのはもちろんである。
【符号の説明】
【００４２】
１  通気性フィルタ
３、４  塗布スポット（所定の領域）
５  第１の領域
７  第２の領域
９  第３の領域
１１  マスク部材
３１  測定キット
３３  抽出液
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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