(57)【要約】  本発明は、過増殖性細胞分裂を示す様々な細胞型に対して細胞障害性を示すカロメリア・アマラントイデス（Calomeria amaranthoides）から単離された抽出物および化合物ならびにかかる化合物の誘導体および類似体に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I：
【化１】
2008535775.tif 000007
［式中、
R1〜R6は独立してH、OH、ハロ、CH2、(C1〜C8)アルキル-、(C1〜C8)アルキル-O-、HO-(C1〜C8)アルキル-、NC-、H2N-、H2N-(C1〜C8)アルキル-、HO-(C＝O)-、HO-(C＝O)-(C1〜C8)アルキル、(C1〜C8)アルキル-(C＝O)-、(C1〜C8)アルキル-(C＝O)-(C1〜C8)アルキル-、H2N-(C＝O)-、H2N-(C＝O)-(C1〜C8)アルキル-およびシクロアルキル-からなる群より選択され、但し、
R1＝CH3；R1'＝CH3；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝O；であるときはR6≠CH3（Δ4,5）であり；
R1＝H；R1'＝-；R2＝CH3；R3＝H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH3（Δ1,10）であり；
R1＝CH3；R1'＝H；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH2であり；
R1＝CH3；R1'＝H；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH3、OHであり；
R1＝H；R1'＝CH3、R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH3、OHであり；
R1＝-；R1'＝CH3；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝O；であるときはR6≠CH3（Δ4,5）である］
で表わされる化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項２】
次式：
【化２】
2008535775.tif 000008
で表される化合物からなる群より選択される化合物またはその製薬上許容される塩。
【請求項３】
製薬的に有効な量の請求項1または請求項2に記載の化合物、および製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４】
過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す増殖を阻害するかまたは細胞を排除する方法であって、有効量の請求項1または請求項2に記載の化合物を細胞に投与することを含む上記方法。
【請求項５】
患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する方法であって、患者に有効量の請求項３に記載の組成物を投与することを含む上記方法。
【請求項６】
過増殖性細胞分裂に関連する症状が固形癌および造血性悪性癌を含む、請求項４または請求項５に記載の方法。
【請求項７】
固形癌が胃腸腫瘍、肝臓および胆道の癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、乳癌、悪性黒色腫、卵巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、頭部および首の癌、膀胱癌、肉腫および骨肉腫、カポジ肉腫、AIDS関連カポジ肉腫および腎癌を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
固形癌が卵巣癌である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する医薬の製造における、請求項１または請求項２に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
過増殖性細胞分裂に関連する症状が固形癌および造血性悪性癌を含む、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
固形癌が胃腸腫瘍、肝臓および胆道の癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、乳癌、悪性黒色腫、卵巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、頭部および首の癌、膀胱癌、肉腫および骨肉腫、カポジ肉腫、AIDS関連カポジ肉腫および腎癌を含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
固形癌が卵巣癌である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す細胞に対して細胞傷害性活性を示すカロメリア・アマラントイデス（Calomeria amaranthoides）の抽出物。
【請求項１４】
抽出物が有機溶媒による抽出物である、請求項１３に記載の抽出物。
【請求項１５】
有機溶媒がクロロホルムである、請求項１４に記載の抽出物。
【請求項１６】
抽出物が図5Aに示したプロトンNMRスペクトル、および図5Bに示したC13 NMRスペクトルを示す、請求項１４に記載の抽出物。
【請求項１７】
製薬的に有効な量の請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の抽出物および製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１８】
増殖を阻害するまたは過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す細胞を排除する方法であって、細胞に有効量の請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の抽出物を投与することを含む上記方法。
【請求項１９】
患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する方法であって、患者に有効量の請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の抽出物を投与することを含む上記方法。
【請求項２０】
過増殖性細胞分裂に関連する症状が固形癌および造血性悪性癌を含む、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
固形癌が胃腸腫瘍、肝臓および胆道の癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、乳癌、悪性黒色腫、卵巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、頭部および首の癌、膀胱癌、肉腫および骨肉腫、カポジ肉腫、AIDS関連カポジ肉腫および腎癌を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
固形癌が卵巣癌である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防するための医薬の調製における、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載のカロメリア・アマラントイデス（Calomeria amaranthoides）の抽出物の使用。
【請求項２４】
過増殖性細胞分裂に関連する症状が固形癌および造血性悪性癌を含む、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
固形癌が胃腸腫瘍、肝臓および胆道の癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、乳癌、悪性黒色腫、卵巣癌、子宮癌、子宮頚部癌、頭部および首の癌、膀胱癌、肉腫および骨肉腫、カポジ肉腫、AIDS関連カポジ肉腫および腎癌を含む、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
固形癌が卵巣癌である、請求項２４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広く、過増殖性細胞分裂を表す様々な細胞型に対して細胞傷害性活性を示すことを特徴とするカロメリア・アマラントイデス（Calomeria amaranthoides）植物から単離された抽出物および化合物、ならびにかかる化合物の誘導体および類似体に関する。
【背景技術】
【０００２】
香植物（Incense Plant）またはプラム潅木（Plum Bush）として一般的に知られるカロメリア・アマラントイデスはヒナギクAsteraceae科由来である。その外見はタバコ植物にいささか似ていて灰緑色のしわの多い葉を有し、その葉から芳香が放たれかつ触れると粘着性がある。植物は二年生であって、やや白い桃色、ある範囲の濃さの桃色、そして最も一般的には赤色にわたる範囲の色の花が咲く。花頭の外見は羽毛で飾られ、切花業界では高く評価されている。
【０００３】
カロメリア・アマラントイデスはオーストラリア固有植物であって、ニューサウスウェールズ（New South Wales）およびビクトリア（Victoria）地方の河川敷および海岸域に沿って成育している。植物の葉は、これらの地方に生息するオーストラリア固有動物の食料の一部であり、食料源としてこれらの植物に依存する動物においてほとんどまたは全く毒性がないことは明らかである。この知識は、収穫および花のアレンジ時のヒトによるカロメリア・アマラントイデスの花の取扱いと共に、カロメリア・アマラントイデス抽出物の薬物としての使用における哺乳動物に対する低い毒性を予想させる。
【０００４】
本発明者は、この度、カロメリア・アマラントイデスの抽出物が過増殖性細胞分裂を表すある特定の細胞型、特に癌細胞に対して強力かつ選択的な細胞傷害性を示すが、様々な正常細胞に対しては細胞傷害性を示さないことを確認した。
【発明の開示】
【０００５】
発明の概要
第1の態様によれば、本発明は、式I：
【化１】
2008535775.tif 000002
【０００６】
［式中、
R1〜R6は独立してH、OH、ハロ、CH2、(C1〜C8)アルキル-、(C1〜C8)アルキル-O-、HO-(C1〜C8)アルキル-、NC-、H2N-、H2N-(C1〜C8)アルキル-、HO-(C＝O)-、HO-(C＝O)-(C1〜C8)アルキル、(C1〜C8)-アルキル(C＝O)-、(C1〜C8)アルキル-(C＝O)-(C1〜C8)アルキル-、H2N-(C＝O)-、H2N-(C＝O)-(C1〜C8)アルキル-およびシクロアルキル-からなる群より選択され、但し、
R1＝CH3；R1'＝CH3；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝O；であるときはR6≠CH3（Δ4,5）であり；
R1＝H；R1'＝-；R2＝CH3；R3＝H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH3（Δ1,10）であり；
R1＝CH3；R1'＝H；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH2であり；
R1＝CH3；R1'＝H；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH3、OHであり；
R1＝H；R1'＝CH3、R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝H、H；であるときはR6≠CH3、OHであり；
R1＝-；R1'＝CH3；R2＝H、H；R3＝H、H；R3'＝H、H；R4＝H、H；R5＝O；であるときはR6≠CH3（Δ4,5）である］
で表わされる化合物またはその製薬上許容される塩を提供する。
【０００７】
具体的な式Iの好ましい化合物の例は、次式：
【化２】
2008535775.tif 000003
【０００８】
で表される化合物またはそれらの製薬上許容される塩である。
【０００９】
本発明の第2の態様によれば、過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す細胞に対して細胞傷害性活性を示すカロメリア・アマラントイデスの抽出物が提供される。
【００１０】
好ましくは、上記抽出物はカロメリア・アマラントイデスの葉から誘導される。
【００１１】
一実施形態においては、抽出物は有機溶媒により誘導される抽出物である。好ましくは、有機溶媒はクロロホルム、石油エーテル、ジクロロメタン、酢酸エチルおよびメタノールからなる群より選択される。最も好ましくは、上記溶媒はクロロホルムである。
【００１２】
ある好ましい実施形態においては、図5Aに示したプロトンNMRスペクトルおよび図5Bに示したC13NMRスペクトルを有する。
【００１３】
他の実施形態においては抽出物は非極性抽出物である。
【００１４】
一実施形態においては、抽出物の細胞傷害性活性は抽出物内の2種以上の化合物の間の相乗的相互作用から生じる。
【００１５】
第3の態様によれば、本発明は、製薬上有効量の第３の態様による抽出物と製薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
第4の態様によれば、本発明は、過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す増殖を阻害するかまたは細胞を排除する方法であって、有効量の第３の態様による抽出物を細胞に投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
第5の態様によれば、本発明は、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する方法であって、有効量の第３の態様による抽出物を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００１８】
第6の態様によれば、本発明は、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防するための医薬の調製における、第３の態様によるカロメリア・アマラントイデスの抽出物の使用を提供する。
【００１９】
第7の態様によれば、本発明は、製薬上有効量の本発明の化合物と製薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
第8の態様によれば、本発明は、過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す増殖を阻害するかまたは細胞を排除する方法であって、有効量の本発明の化合物を細胞に投与することを含む方法を提供する。
【００２１】
第9の態様によれば、本発明は、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する方法であって、有効量の第7の態様による組成物を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００２２】
第10の態様によれば、本発明は、、過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防するための医薬の製造に本発明による化合物の使用を提供する。
【００２３】
好ましくは、過増殖性細胞分裂に関連する症状は固形癌または造血性悪性癌である。より好ましくは、上記症状は卵巣癌である。
【００２４】
本発明の化合物には、式Iおよび式II（例えば、エナンチオマーおよびジアステレオマー）の全ての立体配座の異性体（例えば、cisおよびtrans異性体）および全ての光学異性体ならびにかかる異性体のラセミ、ジアステレオマーおよび他の混合物が含まれる。
【００２５】
一実施形態において、本発明は過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す細胞に対して細胞傷害性活性を示す、カロメリア・アマラントイデスの抽出物から単離された化合物の誘導体および類似体に関する。
【００２６】
さらなる実施形態において、本発明は過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す増殖を阻害または細胞を排除する方法であって、上記細胞にカロメリア・アマラントイデスの抽出物から単離された有効量の1種以上の化合物、および／または誘導体または類似体を投与することを含む上記方法に関する方法に関する。
【００２７】
本発明の他の実施形態によれば、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する方法であって、有効量のカロメリア・アマラントイデスの抽出物および／またはかかる抽出物から単離される1種以上の化合物、および／または1種以上の化合物の誘導体もしくは類似体を患者に投与することを含む上記方法が提供される。
【００２８】
本発明のさらに他の実施形態によれば、本発明は、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防するための医薬の調製における、カロメリア・アマラントイデスの抽出物から単離された1種以上の化合物、および／または1種以上の化合物の誘導体もしくは類似体の使用が提供される。
【００２９】
本発明のさらなる実施形態によれば、本発明は製薬上有効量のカロメリア・アマラントイデスからの抽出物、および／またはカロメリア・アマラントイデスの抽出物から単離された化合物および／またはその誘導体または類似体、および製薬上許容される担体を含む医薬調製物を提供する。
【００３０】
特に好ましい一形態においては、少なくとも抽出物の1つは、ユーデスマノリド様構造、特にセスキテルペンラクトン、ポリアセチレン、アルカロイド、クマリン、プレニル化クマリン、フラボノイド、p-ヒドロキシアセトフェノン、アセトフェノン、ジテルペン、リグナン（特にジフラノイドリガンド）およびDNAトポイソメラーゼインヒビター、および／または上記化合物の誘導体または類似体からなる群より選択される少なくとも1つの化合物を含有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
好ましい実施形態の詳細な説明
本明細書全体を通して、文脈が特に断らない限り、用語「含む」は表明したステップまたはエレメントまたはステップもしくはエレメントのグループを包含することを意味し、他のステップまたはエレメントまたはステップもしくはエレメントのグループを排除するものでないと理解されるであろう。
【００３２】
本明細書における先行技術への言及は、その先行技術がオーストラリアにおける一般知識の部分を形成することの承認または何らかの形の示唆でなく、そのように受け取ってはならない。
【００３３】
その最も広い形態において、本発明はカロメリア・アマラントイデス植物の1以上の部分からの抽出物に関する。当業者は、粗植物材料から抽出物を合成する多数の異なる方法、例えば、粗植物材料をカットまたはチョップすることから出発して、それを少なくとも1種の溶媒に曝して植物抽出物を得る方法が存在することを理解するであろう。あるいは、例えば、粗植物材料を最初に微細な粉末に粉砕してソクスレー抽出法で処理することができる。
【００３４】
さらなる形態において、本発明はカロメリア・アマラントイデス植物の抽出物から単離された化合物、およびその誘導体または類似体に関する。
【００３５】
当業者は植物抽出物中に含有される化合物を単離しかつ特徴付けるために利用しうる多数の方法が存在することを理解するであろう。かかる方法の例としては、限定されるものでないが、クロマトグラフィにより適当な吸着剤を用いて抽出物を分画する方法、および高性能液体および遠心向流クロマトグラフィを用いて抽出物を精製する方法が挙げられる。
【００３６】
さらに、純粋な公知のまたは新しい構成成分を、紫外、赤外、X線、および1Hおよび13C核磁気共鳴（NMR）分光法を含む質量分析および分光法などの方法を用いて特徴づけることができる。一旦解明されると、構成成分は合成法を介して調製することができる。
【００３７】
他の形態において、カロメリア・アマラントイデスの抽出物または上記抽出物から単離された化合物またはその誘導体もしくは類似体は過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す細胞に対する細胞傷害性活性を表す。
【００３８】
本明細書に使用される用語「過増殖性細胞分裂に関連する症状」は、正常な対照速度と比較して増加した細胞分裂速度により特徴付けられるまたは別な方法で関わる、臨床症状を意味する。過増殖性細胞分裂に関連する症状には、限定されるものでないが、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、肥満症、混合骨髄増殖性および脊髄形成異常症状などの骨髄増殖性症候群；乾癬、非水疱性先天性魚鱗癬様紅皮症などの皮膚増殖性症状が含まれる。過増殖性細胞分裂に関連する症状にはまた、良性または悪性に関わらず、造血性悪性癌を含む癌が含まれる。
【００３９】
好ましい形態において、過増殖性細胞分裂に関連する症状は癌である。
【００４０】
さらなる形態において、本発明は過増殖性細胞分裂に関連する症状を表す細胞に対して細胞傷害性活性を示すカロメリア・アマラントイデスの抽出物からの化合物の誘導体および類似体に関する。
【００４１】
本発明の化合物には、酸付加塩、陰イオン塩および双性イオン塩などの全ての塩が含まれ、そして特に当業者に公知でありうる製薬上許容される塩が含まれる。用語「製薬上許容される塩」は電荷を保持しかつ医薬とともに投与することができる有機または無機部分、例えば、塩の対陽イオンまたは対陰イオンを意味する。製薬上許容される陽イオンは当業者に公知であり、限定されるものでないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛および四級アミンが挙げられる。製薬上許容される陰イオンは当業者に公知であり、限定されるものでないが、塩素、酢酸、トシレート、クエン酸、炭酸水素および炭酸が挙げられる。
【００４２】
製薬上許容される塩としては、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、桂皮酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルコン酸、塩酸、臭化水素酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ナフトエ酸、ヒドロキシナフトエ酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ナフタレンアクリル酸、オレイン酸、蓚酸、オキサロ酢酸、リン酸、ピルビン酸、p-トルエンスルホン酸、酒石酸、トリフルオロ酢酸、トリフェニル酢酸、トリカルバリル酸、サリチル酸、硫酸、スルファミン酸、スルファニル酸およびコハク酸から形成される塩が挙げられる。
【００４３】
用語「誘導体」は、受給者に投与すると間接または直接に親化合物または代謝物を与えることができる、またはそれ自体が活性を表す活性化合物の誘導体を意味し、それらには、例えばリン酸誘導体およびスルホン酸誘導体が含まれる。従って、誘導体には溶媒和物、製薬的に活性なエステル、プロドラッグなどが含まれる。誘導体にはまた、in vivoで切断されて本発明の化合物またはそれらの活性部分を与えることができる生理学的に切断可能な脱離基をもつ誘導体が含まれる。上記脱離基には、アシル、リン酸塩、硫酸塩、スルホン酸が含まれうるのであって、それらは好ましくは、モノ-、ジ-およびペル-アシルオキシ置換された化合物であり、その場合、1以上の連結しているヒドロキシ基はアシル基、好ましくはアセチル基により保護されている。典型的には、本発明のアシルオキシ置換された化合物は容易に切断されて対応するヒドロキシ置換された化合物になることができる。
【００４４】
他の実施形態においては、本発明は、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防する方法であって、有効量の抽出物および／または抽出物から単離された1以上の化合物または1以上の化合物の誘導体または類似体を患者に投与することを含む上記方法に関する。
【００４５】
症状を治療または予防する文脈において「有効量」は、その量の活性物質の、1回用量でまたは一連の用量の一部として、かかる治療または予防を要する個体への投与が、その症状に対する治療または予防に有効であることを意味する。有効量は治療する個体の健康および物理的状態、治療する個体の分類学的グループ、組成物の製剤、医学的状況の評価、および他の関係因子に応じて変化しうる。上記の量は比較的広い範囲にありうるので、日常的な試みを介して決定することができる。
【００４６】
用語「患者」はヒトまたは他の哺乳動物の患者を意味し、本発明の方法を用いて試験または治療することが所望であるいずれの個体も含みうる。しかし、「患者」は症候群が存在することを意味しないことは理解されるであろう。本発明の範囲に包含される好適な哺乳動物には、限定されるものでないが、霊長類、家畜（例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ロバ、ブタ）、実験用動物（例えば、ウサギ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター）、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ）および捕獲野生動物（例えば、キツネ、シカ、ディンゴ）が含まれる。
【００４７】
いずれかの好適な投与を採用して患者に本発明の医薬調製物および医薬を与えることができる。例えば、経口、直腸、非経口、舌下、頬側、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、吸入、眼内、腹腔内、脳室内、経皮などを採用することができる。
【００４８】
他の実施形態において、本発明は、カロメリア・アマラントイデスの抽出物および／またはカロメリア・アマラントイデスの抽出物から単離される1種以上の化合物および／または1種以上の化合物の誘導体もしくは類似体の、患者における過増殖性細胞分裂に関連する症状を治療または予防するための医薬の調製における使用に関する。
【００４９】
さらなる実施形態において、本発明は、製薬的に有効な量のカロメリア・アマラントイデスからの抽出物、および／またはカロメリア・アマラントイデスからの抽出物から単離された１種以上の化合物および／または1種以上の化合物の誘導体もしくは類似体、および製薬上許容される担体を含む医薬調製物に関する。
【００５０】
「製薬上許容される担体」は、医薬または医薬調製物を患者へ投与するために安全に使用しうる固体または液体充填剤、希釈剤またはカプセル封入物質を意味する。当技術分野で周知の、特定の投与経路、様々な製薬上許容される担体に応じて使用することができる。これらの担体は、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝化溶液、乳濁化剤、等張生理食塩水、および発熱物質を含まない水をからなる群より選択することができる。
【００５１】
経口または非経口投与に好適な本発明の医薬調製物および医薬は、それぞれ所定の量の抽出物、または抽出物から単離された1種以上の化合物および／またはそれらの誘導体または類似体を、粉末または顆粒として、または水性液、非水性液中の溶液もしくは水中油乳濁液または油中水液体乳濁液中の懸濁液として含有するカプセル、小袋または錠剤などの区切られた単位として提供することができる。かかる調製物および医薬は、薬学のいずれの方法により調製することもできるが、全ての方法は、上記の抽出物を担体と結合して1種以上の必要な成分を構成するステップを含む。一般に、医薬調製物および医薬は、抽出物を液担体と均一かつ緊密に混合し、次いで、必要であれば、製品を所望の提供物に形状化することにより調製する。
【００５２】
本発明による医薬組成物は、症状に関連する症候の前に、または症状の症候の発症後に、患者に投与することができる。調製物および医薬中に存在する治療薬を、患者を治療する時点に十分な量だけ与える。
【００５３】
先に指摘したように、本発明の抽出物および化合物を、腫瘍の治療に使用するための医薬および医薬調製物の調製に用いることができる。
【００５４】
特に、本発明のカロメリア・アマラントイデス抽出物、カロメリア・アマラントイデス抽出物を含む医薬および医薬組成物、および／またはかかる抽出物から単離された化合物、および／またはかかる化合物の誘導体もしくは類似体は、様々な腫瘍に対して特に有効であり、上記腫瘍には、例えば、胃腸腫瘍などの固形腫瘍、例えば結腸直腸癌、胃食道癌、肝臓および胆道の癌および膵臓癌、前立腺癌；精巣癌；肺癌；乳癌；悪性黒色腫；卵巣癌；子宮癌例えば子宮頚癌；頭部および頚部癌；膀胱癌；肉腫および骨肉腫；AIDS関連カポジ肉腫を含むカポジ肉腫；腎癌；白血球病などの造血性悪性腫瘍およびAIDS関連リンパ腫を含むリンパ腫が含まれる。
【００５５】
さらに、本発明の抽出物および化合物、またはそれらから、および／または抽出物から単離された化合物および／またはそれらの誘導体または類似体から作られる医薬調製物または医薬を、以上に示したスケジュール治療に従い、場合により、他の抗腫瘍薬とともに、抗癌療法において同時に、別々にもしくは逐次に使用する複合製剤として投与することができる。
【００５６】
上記の追加の抗腫瘍薬としては、例えば、アルキル化剤、トポイソメラーゼIおよびIIインヒビター、抗微小管剤および抗代謝物が挙げられる。具体的な抗腫瘍薬の例としては、マスタード、例えばメルファラン、クロランブシル、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミドおよびブスルファン；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン、ロムスチン、セムスチンおよびホテムスチンなど；テトラジン、例えばダカルバジンおよびテモゾロミド；アジリジン、例えばチオテパおよびマイトマイシンC；白金誘導体、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチンおよびロバプラチン；カンプトセシン誘導体、例えばCTP-11、トポテカン、9-アミノ-カンプトセシン、9-ニトロ-カンプトセシンおよび10,11-メチレンジオキシ-カンプトセシン；アントラサイクリン誘導体、例えばドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ネモルビシンおよびイダルビシン；ポドフィロトキシン化合物エトポシドおよびテニポシド；アントラキノン誘導体様ミトキサントロンおよびロソキサントロン；アクリジン誘導体様アムサクリンおよびアクチノマイシンD；タキサン、例えばパクリタキセルまたはドセタキセル；ビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン；エストラムスチン；葉酸代謝拮抗薬、例えばメトトレキセート、トリメトレキセート、トムデキス；5-フルオロピリミジン、例えば5-FU、フロクスウリジン、フトラフールおよびカペシタビン；シチジン類似体、例えばシタラビン、アザシチジンおよびゲムシタビンがある。
【００５７】
投与剤形としては、錠剤、分散液、懸濁液、注入液、溶液、シロップ、トローチ、カプセル、座剤、エーロゾル、経皮パッチなどが挙げられる。これらの投与剤形にはまた、この目的のために設計された注入もしくは移植徐放性デバイスまたはさらにこの方式で作動するように工夫された他の移植片の剤形も挙げられる。治療薬の徐放は治療薬を例えば、アクリル樹脂を含む疎水性ポリマー、ワックス、高級脂肪アルコール、ポリ乳酸およびポリグリコール酸およびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのある特定のセルロース誘導体を用いてコーティングすることにより行うことができる。さらに、徐放は他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフェアにより行うことができる。
【００５８】
上記医薬または医薬調製物を、投与剤形と適合しうる方法でかつ患者を過増殖性細胞分裂に関連する症状に関連する症候群から軽減するような量でまたは患者を上記症状に関係する症候群を発症することから保護するのに十分な量で投与することができる。本発明の文脈において、患者に投与される用量は、患者において時間とともに上記の治療または予防効果などの有益な応答がなされるのに十分でなければならない。投与すべき治療薬の量は、年齢、性別、体重および一般健康状態などを含めて、治療する被験者に依存しうる。この点について、投与のための治療薬の正確な量は医師の判断に依存しうる。症状に対する治療または予防で投与すべき治療薬の有効量の決定において、医師は症状の進行を評価することができる。いずれの場合でも、本発明の治療薬の好適な投与は当業者が容易に決定することができる。かかる投与量は、本発明の治療薬のミリグラムからグラムまでのオーダーの範囲内にありうる。
【００５９】
本発明が容易に理解されかつ実施に移されるように、特に好ましい実施形態を次の限定されない実施例を用いてこれから説明する。
【００６０】
実施例1
1および2年生カロメリア・アマラントイデス植物からの溶媒抽出
様々な溶媒を用いて1年および2年生植物から活性成分を抽出した。
【００６１】
植物から採集した葉を乾燥して10gの出発物質を得て、それらが含有する有機物質を様々な溶媒、例えばクロロホルムおよびメタノールを用いて抽出したが、他の好適な溶媒としては石油エーテル、ジクロロメタン、酢酸エチル、または水が挙げられる。
【００６２】
概要を説明すると、カロメリア・アマラントイデスからの葉350gを1年および／または2年生植物から採集した。葉を太陽光に当てないで室温にて乾燥し、次いで小片に切断した。
【００６３】
乾燥した葉材料をクロロホルムに浸漬し、24〜48時間後に、葉の粗抽出物を得た。この粗抽出物をさらにシリカゲル（60H、5-40 μm； Merck）上に重力下でカラムクロマトグラフィを用いて吸着させた。1年生のカロメリア・アマラントイデス植物の葉から13画分を得た。2年生の同じカロメリア・アマラントイデス植物から、精製工程を繰り返して57画分を得た。
【００６４】
また、粗抽出物をメタノールを用いても得て、クロロホルムと比較した。
【００６５】
実施例2
カロメリア・アマラントイデスの粗抽出物の質量分析
実施例2により得た粗クロロホルム抽出物を質量分析を用いて分析した。この処理の結果を図1に示した。
【００６６】
化学イオン化質量分析を3段4極質量分析計（TSQMS）、ThermoFinniganを用いて実施して質量範囲を測定した。本装置はポジティブ・エレクトロスプレーを有した。
【００６７】
実施例3
カロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物の薄層クロマトグラフィ
使用した分析薄層クロマトグラフィプレートは、Merck、Darmstadt製のアルミニウム-バックシート（0.2mm）上のシリカゲル60F254であった。シリカゲル60H（5-40um）（Merck）をカラムクロマトグラフィ用に使用した。カロメリア・アマラントイデスの葉の粗クロロホルム抽出物から得た57画分を重力下でカラムクロマトグラフィを用いてサンプリングした。各画分の分析サンプルをTLCプレートの底部にスポットした。TLCプレートをクロロホルムまたはクロロホルム／メタノールで展開した。化合物を254nmのUV下で可視化してRfを計算した。
【００６８】
結果を図6Aに示した。
【００６９】
実施例4
カロメリア・アマラントイデスの抽出物の細胞傷害性
細胞増殖阻害アッセイ
L1210、卵巣癌細胞株、大腸癌細胞株、正常な卵巣および乳房細胞、ヒト皮膚繊維芽細胞およびヒトリンパ球の細胞培養
マウス白血球病細胞株（L1210）、5種の卵巣癌細胞株：JV、JC、JG（van Haaften-Dayら, Cancer Research 43：3725-3731, 1983）JoNおよびNF（van Haaften-Dayら, Cancer 65： 1753-1761, 1990）、大腸癌細胞株T/O、正常な卵巣および乳房組織からの上皮細胞（van Haaften-Dayら, Int J Gynecol Cancer 2： 41-48, 1992）、ヒト皮膚繊維芽細胞およびヒトリンパ球を、カロメリア・アマラントイデスの抽出物による増殖阻害および細胞傷害性について試験した。
【００７０】
104または5.104細胞/mlを24-ウエルプレート（Costar、USA）にまいて、培地全体積2ml／ウエルとした。使用した培地は、6mM L-グルタミン、ガラマイシン（2ml）および10〜15％ウシ胎児血清（FCS）を補充したRPMI1640（Flow laboratories）であった。2つのウエルを対照ウエルとして用いた。細胞を37℃にて5％CO2中で増殖し、24時間後になお対数増殖期にあることを見出した。
【００７１】
次いで細胞を色々な（乾燥した）植物抽出物の画分を用いてまたは粗抽出物を用いて処置した。サンプルをDMSOに溶解し、そして4μlを、細胞と2ml培地を含有する各ウエルに加えた。DMSOの最終濃度は0.02％未満/ウエルであった。各サンプルを（三重で）最終濃度1、10および100μg/mlにて試験した。
【００７２】
次いで、細胞を処置の24、48および72時間後に数えた。
【００７３】
化合物の細胞傷害性を、次のFinlayら（1984）によるメチレンブルーアッセイ、すなわち：
細胞増殖百分率％＝（処置した細胞の吸収／対照細胞の吸収）X100％
に従い、IC50値として表した。
【００７４】
培地をウエルから取り出し、200μlメチレンブルー／ウエルを加えて1時間インキュベートした。次いでウエルを3回水を用いて洗浄しそして1日間室温にて乾燥した。 200μlサルコシル（PBS中1％、Sigma）を加えて24ウエルプレートを5時間インキュベーター中に置いた。次いで100μl／ウエルを異なるチップを用いて96ウエル平底プレートへ移した。
【００７５】
UV吸収をマイクロプレートリーダーを用いて波長595nmにて読み取った。
【００７６】
正常な卵巣-および乳房組織の上皮細胞を24ウエルプレートで増殖し上のように処置して、24、48時間後にトリプシン処理した。細胞生存度を、光顕微鏡下でNeubauer血球計算器を用いて手作業で数えた。トリパンブルー排除の方法を用いた。最小200細胞を数えた。粗抽出物を用いて48時間後に増殖阻害または細胞生存度に僅かな影響しか見ることができなかった。
【００７７】
1年生カロメリア植物由来の分画した粗抽出物（13画分）の細胞障害性をメチレンブルーアッセイを用いて評価してIC50値として表した。卵巣癌細胞株JV（van Haaften-Dayら, Cancer Res. 43(8)、3725-31）を用いると、画分2、4、6および8が最高レベルの細胞傷害性を表した。
【００７８】
細胞生存度もAlamarブルー（BioSource、Europe）（Pageら、1993）を24-ウエルプレート（100μlAlamarブルーおよび1ml培地/ウエル）に加えた後に評価した。上清を96-ウエルプレートに移して細胞蛍光測定器により吸収を測定した。図3Aは粗クロロホルム抽出物を用いて様々な量で処置した卵巣癌細胞の活性の百分率（van Haaften-Dayら, (1990) Cancer 65(8), 1753-61）を示す。類似の結果は、ジクロロメタン抽出物を該癌細胞に用いたときに見られた。
【００７９】
図3Bは、72時間、色々な濃度の粗抽出物を用いて処置した24ウエルプレート中で増殖した正常な皮膚繊維芽細胞の活性の百分率を示し、図3Cは、72時間にわたり色々な濃度の粗抽出物を用いて96ウエルプレート中で増殖したヒトリンパ球の活性の百分率(Ansar Ahmed.,1994)を示す。
【００８０】
また、カロメリア・アマラントイデスの抽出物の細胞障害性をシスプラチン（Pharma chemie、Haarlem）およびドセタキソール（Aventis Pharma、Hoevelaken）の細胞障害性と、ヒト皮膚繊維芽細胞および卵巣癌株JC（Van Haaften-Dayら, 1983 Cancer Res. 43(8), 3725-31）を用いて比較した（図4）。繊維芽細胞を1、10または100μgのカロメリア抽出物（「CA」）、シスプラチン（「Cplat」）またはドセタキソール（「タキソール」）を用いて処置して細胞生存度を処置後48時間に観察し、顕微鏡写真により記録した（図4A）。同様に、卵巣癌細胞株JCを1、10または100μgのカロメリア抽出物、シスプラチンまたはドセタキソールを用いて処置して細胞生存度を処置後48時間に観察し、顕微鏡写真により記録した（図4B）。
【００８１】
繊維芽細胞において、シスプラチンまたはドセタキソールによる細胞傷害性は1μgの用量で48時間にて観察しうるが、10μgおよび100μgの両方の化合物で細胞生存度の大きい低下が見られ、カロメリア抽出物は繊維芽細胞において1μg抽出物ではそして10μgですら低い細胞傷害性しか表さないように見られる（図4A）。それ故にカロメリア抽出物は正常な表現型を表す細胞における細胞傷害性がシスプラチンまたはドセタキソールより低い。
【００８２】
対照的に、1、10または100μgのカロメリア抽出物は、JC卵巣癌細胞株において、1、10または100μgのシスプラチンと類似した毒性を示す（図4B）。JC細胞はドセタキソールに耐性が高いようであった。処置を10μg用量レベルにて48時間で比較すると、ドセタキソールはカロメリア抽出物またはシスプラチンより細胞障害性が低いと思われる。
【００８３】
従って、カロメリア抽出物は、卵巣癌細胞株に対して、シスプラチンまたはドセタキソールより大きい選択性を表し、癌細胞における細胞障害性であった投与量において、正常な表現型を表す細胞に対して有意に低い影響しか示さない。
【００８４】
カロメリアの抽出物は、細胞および核縮み、凝縮および断片化などの形態学的変化により特徴付けられるアポトーシス細胞死を引き起こすことが見出された。
【００８５】
L1210癌細胞株における抽出物の細胞傷害性を表1に示す。.
【表１】
2008535775.tif 000004
【００８６】
また、2年生の植物より採取した葉は、1年生の同じ植物より採取した葉から調製した抽出物より高い細胞障害性を有する抽出物を産生することも認められた。
【００８７】
実施例5
カロメリア・アマラントイデスの粗抽出物のHPLC分離
カロメリア・アマラントイデスの2年生植物の葉の粗抽出物、ならびに分画された抽出物をHPLCプロトコルを用いて分析した。
【００８８】
クロロホルム／メタノール／水＝1：1：1（v/v/v）を用いて粗葉抽出物の透明な2相分離を実施した。次いでクロロホルム層を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、ろ過しそして吹かして乾燥した。次いで得られる残留物をHPLC注入溶媒（ヘキサン：ジオキサン99.5：0.5、v/v）に溶解した。
【００８９】
この手法によって上記溶媒中の透明な溶液を得た。分離は、溶出液としてヘキサン：ジオキサン99.5：0.5、v/vを用いるシリカ5Si60順相HPLC-カラム（ランタイム30min、流速2.5ml/min、色々な波長（nm）範囲でのUV）で実施した。それぞれのランに対して50〜100μgの粗サンプルを分析250*4.6 id mmカラム上に注入した。
【００９０】
粗抽出物の分析に加えて、カラムクロマトグラフィから得た濃縮画分も順相HPLCにより分析した。
【００９１】
色々な波長で行った画分2のHPLC分析から得た出力を図2A〜2Jに示す。
【００９２】
あるいは、粗抽出物をLC-18-DBカラム（逆相）、5μ（250*4.6 id mm）のクロマトグラフィで処理した。分離はリン酸ナトリウムバッファー50mMおよび10mMヘプタンスルホン酸（pH3.4；ランタイム30〜50min.；流速1ml/min.、UV波長254nm）を用いて実施した。20μl抽出物を注入した。
【００９３】
得られるHPLC出力を図2Kに示す。異なるランタイムの繰返しランを図2Lおよび2Mに示す。
【００９４】
実施例6
カロメリア・アマラントイデスのクロロホルム画分の核磁気共鳴イメージング
カロメリア・アマラントイデスおよび重力下のカラムクロマトグラフィにより精製した画分由来の粗クロロホルム抽出物を、Varian Gemini 300 NMR分光計での核磁気共鳴分光法を用いて分析した。1H NMRは300MHzで、13C NMRは75 MHzでそれぞれ実施した。
【００９５】
粗植物抽出物からの13および57画分の分析量をトップにグラスウールを詰めた5mm直径NMRチューブ中のPBS/D2O 0.4mlに懸濁し、次いで対照となるPBS/D2O中の1mmol/Lのp-アミノ安息香酸を含有する5mm-直径NMRチューブ中に置いた。1H NMRスペクトルは37℃にて標準5mm直径プロトンヘッドを用いて記録した。画分12に対する1H NMRスペクトルを図5Aに、そして画分12に対する13C NMRスペクトルを図5Bに示す。
【００９６】
画分12由来の1H NMRスペクトルは、次のユーデスマノリド-様構造：
【化３】
2008535775.tif 000005
【００９７】
に特徴的なものであった。
【００９８】
実施例7
式 Iの化合物の合成スキーム
【化４】
2008535775.tif 000006
【００９９】
2-メチル-3-フロ酸(2)の好適な塩基による処理の後、生じたジアニオンをメトキシシクロヘキセノン1により捕獲した。この反応から得た生成物を過剰のジアゾメタンにより処理してシントン3を得る。エステル3をLi(R1')2Cuにより処理することにより3環化合物4に直接、変換した後、C4ケトンを選択的保護する。C6カルボニルを還元し次いで生じるヒドロキシルを保護する。この物質を次いで2当量のm-クロロペル安息香酸（MCPBA）により処理した後、過剰のジアゾメタンにより開環したメチルエステル5を得る。メチルエステル5を、メタノール中のNaBH4により処理して3環エノン6を得る。このエノンを接触水素化処理し、次いでC11におけるメチル化とメチル基の酸化により化合物7を得る。次いで保護基の全体的脱保護により化合物8を得る。
【０１００】
当業者は、多数の変法と修飾が明らかであることを理解するであろう。当業者には明らかである全てのかかる変法と修飾は先に記載した広く明らかである精神と範囲内に包含されるものであると考えるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１０１】
【図１】カロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物の質量分析結果を示す。
【図２Ａ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｂ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｃ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｄ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｅ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｆ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｇ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｈ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｉ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｊ】シリカ5Si60順相HPLCカラムで分析して色々な波長で検出した、画分2（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）HPLC分析を示す。
【図２Ｋ】LC-18-DBカラム（逆相）で分析したカロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物のHPLC分析を示す。
【図２Ｌ】LC-18-DBカラム（逆相）で分析したカロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物のHPLC分析を示す。
【図２Ｍ】LC-18-DBカラム（逆相）で分析したカロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物のHPLC分析を示す。
【図３Ａ】カロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物を用いて様々な濃度で処置した卵巣癌細胞の活性の百分率をグラフで示した。
【図３Ｂ】カロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物を用いて様々な濃度で処置したヒト皮膚繊維芽細胞の活性の百分率をグラフで示した。
【図３Ｃ】カロメリア・アマラントイデスの粗クロロホルム抽出物を用いて様々な濃度で処置したヒトリンパ球の活性の百分率をグラフで示した。
【図４Ａ】1、10または100μg/mlのカロメリア・アマラントイデス抽出物、シスプラチン、またはドセタキソールを用いて処置したヒト皮膚繊維芽細胞（Fib.）の顕微鏡写真を示す。顕微鏡写真は48時間後に撮影した。
【図４Ｂ】1、10または100μg/mlのカロメリア・アマラントイデス抽出物、シスプラチン、またはドセタキソールを用いて処置したJC卵巣癌細胞の顕微鏡写真を示す。顕微鏡写真は処置後48時間に撮影した。
【図５Ａ】画分12（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）の1H NMRスペクトルを示す。
【図５Ｂ】画分12（カロメリア・アマラントイデス抽出物のカラムクロマトグラフィから回収した）の13C NMRスペクトルを示す。
【図６Ａ】カロメリア・アマラントイデスからの57種の抽出物についてのTLCプレートを示す。
【図１】
2008535775.tif 000009
【図２Ａ】
2008535775.tif 000010
【図２Ｂ】
2008535775.tif 000011
【図２Ｃ】
2008535775.tif 000012
【図２Ｄ】
2008535775.tif 000013
【図２Ｅ】
2008535775.tif 000014
【図２Ｆ】
2008535775.tif 000015
【図２Ｇ】
2008535775.tif 000016
【図２Ｈ】
2008535775.tif 000017
【図２Ｉ】
2008535775.tif 000018
【図２Ｊ】
2008535775.tif 000019
【図２Ｋ】
2008535775.tif 000020
【図２Ｌ】
2008535775.tif 000021
【図２Ｍ】
2008535775.tif 000022
【図３Ａ】
2008535775.tif 000023
【図３Ｂ】
2008535775.tif 000024
【図３Ｃ】
2008535775.tif 000025
【図４Ａ】
2008535775.tif 000026
【図４Ｂ】
2008535775.tif 000027
【図５Ａ】
2008535775.tif 000028
【図５Ｂ】
2008535775.tif 000029
【図６Ａ】
2008535775.tif 000030
【国際調査報告】
2008535775.tif 000031
2008535775.tif 000032
2008535775.tif 000033
2008535775.tif 000034