(57)【要約】  本発明は式（Ｉ）の化合物に関する：ここで、Ｘ＋Ｙ＝ケト、又はＸ＝ＯＨ、及びＹ＝Ｈ、又はＸ＋Ｙ＝オキシム又はメチルオキシム、Ｂ＝ＯＨ、及びＣ＋Ｄ＝Ｃ１−Ｃ４直鎖若しくは分岐鎖アルキル、又はＣ＝Ｈ、及びＤ＝Ｃ１−Ｃ４直鎖若しくは分岐鎖アルキル、又はＢ＋Ｃ＝ケト、及びＤ＝メチル、ヒドロキシル、若しくはメチルアミノ、又はＢとＣ＝Ｈ、及びＤ＝メチルアミノ、又はＢ＋Ｃ＝オキシム、及びＤ＝メチル、及びＲ＝Ｃ１−Ｃ１０直鎖若しくは分岐鎖アルキル、医薬としてのその塩、エステル、又はエステルの塩、特に、神経保護剤としての式（Ｉ）の新規な化合物、及び医薬組成物。
2008512368.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2008512368.tif 000016
（式中、
−ＸはＹと一緒にケト官能基を表し、あるいはＸはヒドロキシル基を表し、そしてＹは水素を表し、あるいはＸとＹは一緒にオキシム基（−ＮＯＨ）又メチルオキシム基（＝ＮＨＯＭｅ）を表し、
−Ｂはヒドロキシル基を表し、そしてＣとＤは水素を表し、あるいはＣとＤは１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、あるいはＣは水素を表し、そしてＤは１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、
あるいはＢはＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤはメチル、ヒドロキシル又はメチルアミンを表し、
あるいはＢとＣは水素を表し、そしてＤはメチルアミンを表し、
あるいはＢとＣは一緒にオキシムを表し、そしてＤはメチルを表し、
そしてＲは１〜１０個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表す）
により記載される、ヒト又は動物の身体を処置するための治療方法における使用のための、即ち薬物としての化合物、
あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項２】
式Ｉにおいて、Ｒが以下のコレスタンラジカル
【化２】
2008512368.tif 000017
を表すことにより特徴づけられる、薬物としての、請求項１に記載の化合物、あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項３】
式Ｉにおいて、ＸがＹと一緒にケト官能基を表すことにより特徴づけられる、薬物としての、請求項１又は２に記載の化合物、あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項４】
式Ｉにおいて、Ｂがヒドロキシルを表し、そしてＣとＤが水素を表し、あるいはＣとＤが１〜４個の炭素原子を伴う２つの直鎖又は分岐鎖アルキルを表すことにより特徴づけられる、薬物としての、請求項１、２、又は３に記載の化合物、あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項５】
式Ｉにおいて、ＢがＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤがメチルを表すことにより特徴づけられる、薬物としての、請求項１、２、又は３に記載の化合物、あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項６】
式Ｉにおいて、ＸとＹが一緒にオキシムを表すことにより特徴づけられる、薬物としての、請求項１又は２に記載の化合物、あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項７】
−  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オール、
−  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアルコール、
−  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−ジメチルアルコール、
から選択される、薬物としての、請求項１に記載の化合物、
あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項８】
神経保護薬を得るための、請求項１に記載の化合物、あるいはその医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩の使用。
【請求項９】
前記神経保護薬が神経変性疾患を治療するために意図される、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記神経保護薬が、ハンチントン病、遺伝性又は孤発性の神経変性慢性疾患、加齢に関係する神経変性病変、遺伝性又は損傷性の末梢性神経障害、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害又は抗癌治療、脳、末梢神経若しくは脊髄の外傷、脳若しくは脊髄の虚血により誘発される神経障害、視覚の感覚ニューロンの遺伝性、損傷性若しくは加齢に関する変性又は視覚神経の変性、聴覚の感覚ニューロンの遺伝性、外傷性若しくは加齢に関する変性、大葉性萎縮症(lobar atrophies)及び血管性認知症、運動ニューロンの変性に関係する疾患及び外傷、ならびにより特には脊髄性筋萎縮症、特に乳児型脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、及び脊髄又は末梢運動神経の外傷、から選択される神経変性疾患を治療するために意図される、請求項８又は９に記載の使用。
【請求項１１】
前記神経保護薬が、ニューロンの変性又は死に関係する病変又は外傷から選択される神経変性疾患を、このような病変又は外傷に罹患した動物において治療するために意図されることを特徴とする、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記神経保護薬が、乳児型脊髄性筋萎縮症を治療するために意図されることを特徴とする、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記神経保護薬が、筋萎縮性側索硬化症を治療するために意図されることを特徴とする、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
請求項１に記載の式Ｉの化合物が、３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オール、あるいはその医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩であることを特徴とする、請求項８〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
式Ｉ
【化３】
2008512368.tif 000018
（式中、
−ＸとＹは一緒にオキシムを表し、ＢとＣは水素を表し、Ｃは水素を表し、そしてＤはメチルアミンを表し、
−ＸはＹと一緒にケト官能基を表し、Ｂはヒドロキシルラジカルを表し、そしてＣとＤはメチルを表し、
−ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤはメチルを表し、
−ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはヒドロキシルを表し、Ｃは水素を表し、そしてＤはメチルを表し、
−ＸとＹは一緒にメチルオキシム基を表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは水素を表す）により記載される化合物、
あるいは、その医薬的に許容される酸を伴う付加塩、又はそのエステル若しくは該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩。
【請求項１６】
活性成分として、少なくとも１つの請求項１に規定される薬物、並びに医薬的に許容される賦形剤を含有することを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１７】
活性成分として、少なくとも１つの請求項２に規定される薬物、並びに医薬的に許容される賦形剤を含有することを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１８】
活性成分として、少なくとも１つの請求項３〜７のいずれか一項に規定される薬物、並びに医薬的に許容される賦形剤を含有することを特徴とする、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物として、３，５−セコ−４−ノルコレスタンの誘導体の、特に、例えば、運動ニューロンの変性又は死に関する病状及び外傷における神経保護的な適用、これらを含有する医薬組成物、新規な誘導体、及びこれらの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経変性プロセスは、脳（中枢神経系、ＣＮＳ）、脊髄、及び末梢神経系（ＰＮＳ）により媒介される神経機能の喪失をもたらすニューロンの機能障害及び死により特徴づけられる。これらは、神経変性疾患又は障害、外傷又は毒に対する暴露からもたらされうる。
【０００３】
神経変性プロセスにより特徴づけられる最も重要な病状は、以下のものである：
−神経変性、遺伝性又は孤発性慢性疾患、顕著なアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄筋萎縮症、クロイツフェルト・ヤコブ病、多発性硬化症、腎白質ジストロフィー、癲癇、認知症、統合失調症、及びＡＩＤＳに関する神経性症候群；
−加齢に関する神経細胞の病変；
−遺伝性又は損傷性末梢神経障害、例えば、ファブリー病、シャルコー・マリー・トゥース病、クラッベ病、ロイコジストロフィー、糖尿病性神経障害、及び抗癌治療により誘発されるもの；
−脳、末梢神経、及び脊髄の外傷；
−脳血管卒中の結果による、あるいは血液洗浄（irrigation)の喪失により誘発される脳又は脊髄の虚血；
−視覚の感覚ニューロンの遺伝性、損傷性神経変性、又は加齢に関するもの、例えば、黄斑変性症、色素性網膜炎、又は緑内障により誘発される視覚神経の変性；
−聴覚の機能障害又は喪失をもたらす、聴覚の感覚ニューロンの外傷性、遺伝性変性又は加齢に関するもの。
【０００４】
これらの病状に影響するシグナル伝達経路の部分は、多くの神経変性疾患に共通する。アルツハイマー病は最も頻度の高い認知症である。これは脳の萎縮症、アンモン角におけるニューロンの主な喪失の出現の原因となり、そしてまたコリン作動性神経に影響する。他の病状、例えば、肺萎縮症（ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、レビー小体型認知症、血管性認知症、パーキンソン病）はこれらの認知症の症状の起源において有意な神経細胞死に関係する。
【０００５】
現在、神経変性を停止するための有効な治療は存在しない。死に対してニューロンを保護するための治療的アプローチは神経栄養タンパク質を供することである。
【０００６】
これらのタンパク質、例えば、ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）、ＣＮＴＦ（繊毛様神経栄養因子）、ＮＧＦ（神経成長因子）、ＧＤＮＦ（グリア細胞由来神経栄養因子）は、胚発生の間あるいは成人における病変後に合成される。これらの成長因子は、神経細胞の生存、成熟、及び分化を促進する。さらにこれらは、アポトーシスのメカニズムを抑制し、複数の生存経路を活性化し、そして多くの神経細胞集団を保護する。これらの使用は、ほとんどの神経変性において提唱される。
【０００７】
神経栄養因子の発現を活性化する、あるいはこれらの因子の作用を模倣する化合物は、神経変性症候群を治療するための治療的可能性を有する。
【０００８】
特に、神経変性を治療するために神経栄養性分子を供することは以下の目的に向けられる；
−ニューロンの末梢又は中枢標的からの供給の喪失、及び／又はこれらの因子の逆行性輸送の障害に関する神経栄養因子の潜在的な喪失を補償する；
−変性カスケードに関する生化学経路における非特異的経路に干渉する；
−樹状細胞の成長及び神経終末の分枝を補償する自然現象を促進する。
【０００９】
従って、これらの化合物は多くの病状、特に中枢及び末梢神経系に影響する病状において有益な効果を有する。
【００１０】
更に、上記の範囲内において、運動ニューロンは骨髄及び脳幹に顕著に存在するニューロンである。これらの変性又はこれらの死は、手足の筋肉の漸進的な衰えに導き、そして筋肉の萎縮及び痙攣の可能性（すなわち永久収縮）に導きうる。
【００１１】
脊髄及び／又は延髄運動ニューロンの変性及び死からもたらされる最も重要な病状は、シャルコー病、または更にルー・ゲーリック病としても知られる筋萎縮性側索硬化症、及びウェルドニッヒ・ホフマン病又はクーゲルベルク・ヴェランダー病としても知られる乳児脊髄筋萎縮症である。
【００１２】
更に、運動ニューロンの変性は、脊髄又は末梢運動神経の粉砕及び／又は切断を伴う外傷の場合にも観察される。
【００１３】
より一般的には、脊髄の運動ニューロンの変性又は死が関係する疾患についての脊髄筋萎縮症について言われている。
【００１４】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、異なるタイプの封入体、例えば、レビー小体に関する神経変性疾患であり、脊髄及び皮質運動ニューロンの変性、前頭型認知症にしばしば関係する致命的な結果により特徴づけられる。ＡＬＳの発生の間、神経支配の喪失を通じて変性現象は脳だけでなく脊髄、従って筋肉中にも発生する。
【００１５】
上述の病気を制御するための活性成分は常に求められている。
【発明の開示】
【００１６】
このたび、本出願人は、３，５−セコ−４−ノル−コレスタンの誘導体、及び特に３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オールが、運動及び末梢神経の神経保護特性、特に運動ニューロン、中枢神経系のニューロンに寄与し、従って薬物として有用であることを発見した。
【００１７】
本発明は、ヒト又は動物の治療のための治療的方法における使用、即ち薬物としての、式Ｉの化合物
【化１】
2008512368.tif 000003
（式中、
−ＸはＹと一緒にケト官能基を表し、あるいはＸはヒドロキシを表し、そしてＹは水素を表し、あるいはＸとＹは一緒にオキシム（−ＮＯＨ）又メチルオキシム（＝ＮＨＯＭｅ）を表し、
−Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは水素を表し、あるいはＣとＤは１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、あるいはＣは水素を表し、そしてＤは１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、
あるいはＢはＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤはメチル、ヒドロキシ又はメチルアミンを表し、
あるいはＢとＣは水素を表し、そしてＤはメチルアミンを表し、
あるいはＢとＣは一緒にオキシムを表し、そしてＤはメチルを表し、
そしてＲは１〜１０個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表す）、
これらのエステル、並びに医薬的に許容される酸を伴うこれらの付加塩を供する。
【００１８】
医薬的に許容される酸を伴う付加塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸、アルカン−スルホン酸、例えば、メタン−若しくはエタン−スルホン酸、アリールスルホン酸、例えば、ベンゼン−若しくはパラトルエン−スルホン酸、又はカルボン酸と形成される塩であってよい。
【００１９】
当業者に理解されるとおり、１又は複数のヒドロキシル基を含んで成る一定の式Ｉの化合物は、エステル化することができる。これらのエステル並びに医薬的に許容される酸を伴うこれらの付加塩は、一般的にそれ自体は直接的に活性ではないが、これらは対応するヒドロキシル化類似体のプロドラッグを形成する。ヒト器官中で代謝されるこれらのエステルは活性化合物に導く。これらのエステルもまた本発明の対象である。化学官能基を誘導するエステル、例えば、硫酸塩、リン酸塩、水溶性及び生物学的利用能を増大する酸及び塩基鎖にも言及することができる。塩基性官能基を有する化合物のエステルは、好ましくは例えば、１〜４個の炭素原子のアルキルを伴うジアルキルグリシンの誘導体であり、そして最も好ましくはジメチルグリシン、ジエチルグリシン、及びまたメチルピペラジンである。
【００２０】
本明細書中、「１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキル」の語は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、好ましくはメチル又はエチル、そして特にはメチルを意味する。
【００２１】
本明細書中、「１〜１０個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキル」の語は、例えば、以下に示すとおり、コレスタンの２−メチル−３−エチル−ヘプタン、３−エチル−ヘプタン、３−メチル−ヘプタン、好ましくは２−エチル−ヘプタン、そして特には２−メチル−ヘプタンラジカルを意味する。
【化２】
2008512368.tif 000004
【００２２】
従って、以下の式
【化３】
2008512368.tif 000005
（式中、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｘ及びＹは既に示された意味を有する）の化合物が、より特に保持される。
【００２３】
上述の式Ｉの化合物中、ＸがＹと一緒にケト官能基を表す式Ｉの化合物、並びに医薬的に許容される酸を伴う付加塩が特に保持される。
【００２４】
上記化合物は、より特には、
式中、
−Ｂがヒドロキシルを表し、そしてＣとＤが水素を表し、あるいはＣとＤは１〜４個の炭素原子をとも成る２つの直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、
−ＢがＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤがメチルを表す
化合物、並びにこれらのエステル及び医薬的に許容される酸を伴う付加塩が保持される。
【００２５】
上記の式Ｉの化合物中、式中ＸとＹが一緒にオキシムを表すもの、並びにこれらのエステル及び医薬的に許容される酸を伴う付加塩が特に保持される。
【００２６】
より特には、上記化合物は、
−ＢがＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤがメチル、ヒドロキシ、メチルアミンを表し、
−Ｂがヒドロキシを表し、そしてＣとＤが水素を表し、あるいはＣとＤが１〜４個の炭素原子を伴う２つの直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、あるいはＣが水素を表し、そしてＤが１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、
−ＢとＣが水素を表し、そしてＤがメチルアミンを表し、
−ＢがＣと一緒にオキシムを表し、そしてＤがメチルを表す、
化合物、並びにこれらのエステル及び医薬的に許容される酸を伴う付加塩が保持される。
【００２７】
最も特には、
−３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オール、
−３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアルコール、
−３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−ジメチルアルコール、
並びにこれらのエステル及びこれらの医薬的に許容される酸を伴う付加塩が保持される。
【００２８】
式Ｉの化合物又は上記化合物のファミリーの医薬的に許容される酸を伴う付加塩、これらのエステル、及び該エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩は、これにより特に保持される。
【００２９】
本発明の対象である化合物は、極めて興味深い薬理特性を有する。これらは特に運動ニューロンに関して、顕著な神経保護特性に著しく寄与する。
【００３０】
これらの特性は本明細書の以下の実施例において示される。これらは、上記の化合物、並びに医薬的に許容される酸を伴うこれらの付加塩の薬物としての使用を正当化する。
【００３１】
本発明に従う薬物は、これらの神経保護特性、例えば、神経変性障害、例えば、ハンチントン病、神経変性、遺伝性又は孤発性慢性疾患、加齢、遺伝性又は損傷性の末梢神経障害に関係する神経細胞病変、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害、又は抗癌治療、脳、末梢医神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血により誘発される神経障害、視覚の感覚ニューロンの遺伝性、損傷性変性若しくは加齢に関するもの又は視覚神経の変性、聴覚の感覚ニューロンの遺伝性、外傷性変性又は加齢に関するもの、肺萎縮症、及び血管性認知症、及び特に脊髄筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、及び脊髄又は末梢運動神経の外傷による病状の治療又は予防のための神経保護特性のためのこれらの用途が発見される。
【００３２】
本発明において、「治療」の語は、予防的、治癒的、対症的処置、並びに患者の管理（苦痛の軽減、寿命の向上、疾患の進行の減速）等を意味する。更に治療は他の成分又は治療、例えば、特に、本願において具体的にされた病状又は外傷の治療のための他の活性化合物との組み合わせにおいて行うことができる。
【００３３】
運動ニューロンに関するこれらの神経保護特性のために、上述したとおり、脊髄筋萎縮症、特に筋萎縮性側索硬化症又は乳児型脊髄性筋萎縮症の治療、及び脊髄又は末梢運動神経の外傷の治療においてこれらの用途が特に発見されている。
【００３４】
一般に、上記化合物の一日量は、治療効果を得るための最小用量となる。該用量は前述の異なる要因に依存する。前記の化合物、例えば、３，５−セコ−４−ノルコレスタン−５−オン  オキシム−３−オールの用量は、ヒトの場合、１日あたり０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇである。
【００３５】
必要ならば、１日あたり１、２、３、４、５、６回又はそれ以上の摂取、又は１日の適当な間隔あたり投与される複数回の副用量により投与することができる。
【００３６】
選択された量は、複数の要因、特に、投与経路、投与器官、投与瞬間、化合物の排出速度、該化合物との組み合わせにおいて使用される異なる製品、患者の年齢、体重、生理状態、並びに患者の病歴、及び医薬において知られるいずれかの他の情報に依存する。
【００３７】
担当医の処方は、一般に使用されるものより少ない投与量で開始することができ、これらの用量は、副作用の発生の可能性をより制御できるように徐々に増やされる。
【００３８】
また、本発明は、活性成分として、少なくとも１つの上述の化合物、又は医薬的に許容される酸を伴う１つのその付加塩を含有する医薬組成物に関する。
【００３９】
これらの組成物中、活性化合物は生理的に有効な投与量において有利に存在する；上述の化合物は、特に、神経保護に有効な量の少なくとも１つの上記活性成分を含有する。
【００４０】
薬物として、式Ｉにより記載された化合物、これらのエステル、医薬的に許容される酸を伴うこれらの付加塩、並びに上記エステルの医薬的に許容される酸を伴う付加塩は、消化性又は非経口経路のために意図される医薬組成物中に組み込むことができる。
【００４１】
本発明に従う医薬組成物は、特に上述のとおり、運動ニューロンの変性又は死に関する病状又は外傷に影響する対象の治療の間において、同時に、別々に、又は時間別に使用するための、更に少なくとも１つのほかの治療的な活性成分を含んで成ってよい。
【００４２】
本発明に従う医薬組成物又は薬物は、有利には、１又は複数の不活性な、即ち医薬的に不活性であり且つ無毒な、賦形剤又は担体を含んで成る。例えば、医薬用途に適合し、当業者に知られる生理食塩水、生理的、等張性緩衝溶液等にも言及できる。
【００４３】
該組成物は、分散剤、可溶化剤、安定化剤、防腐剤等から選択される１又は複数の薬剤又は担体を含んでよい。製剤（液体及び／又は注射用固形製剤）中に使用できる薬剤又は媒体は、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、シクロデキストリン、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物若しくは動物油、アカシア等である。該組成物は、注射用懸濁液として、任意的には剤形又は装置による持続性及び／又は遅延性放出を伴う、ゲル、油、錠剤、座薬、粉末、ゼラチンカプセル、カプセル等として処方することができる。このタイプの製剤について、薬剤、例えば、セルロース、カルボナート又はセルロースが有利に用いられる。
【００４４】
投与は当業者に既知のいずれかの方法、好ましくは経口経路又は注射により、典型的には腹腔内、脳内、くも膜下腔内、静脈内、動脈内、又は筋肉内経路により達成することができる。経口投与が好ましい。長期間の治療の場合、好ましい投与経路は舌下、経口又は経皮である。
【００４５】
注射のために、該化合物は一般的に、例えば、シリンジ又は点滴により注射することができる液体懸濁液として調製される。投与される流速、及び／又は注射用量又は一般的な用量は、患者、病状、投与方法等に従い当業者により適応することができるものと理解される。反復投与は、任意的に他の活性成分又はいずれかの医薬的に許容される担体（安定化剤の存在下におけるバッファー、生理食塩水、等張液等）との組み合わせにおいて行うことができる。
【００４６】
本発明は哺乳類、特にヒトにおいて使用することができる。
【００４７】
本発明の対象は、更に、上述のとおり、組成物を調製するための方法であって、既知の方法に従い、活性成分を許容される賦形剤、特に医薬的に許容される賦形剤と混合することを特徴とする方法である。
【００４８】
上述の式Ｉの化合物は既知であり、あるいは文献に記載される方法に従い調製することができる。式Ｉの一定の誘導体は新規な生成物である。
【００４９】
本発明の対象は、式Ｉ
【化４】
2008512368.tif 000006
により記載される新規な化合物
（式中、
−ＸとＹは一緒にオキシムを表し、ＢとＣは水素を表し、Ｃは水素を表し、そしてＤはメチルアミンを表し、
−ＸはＹと一緒にケト官能基を表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤはメチルを表し、
−ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤはメチルを表し、
−ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはヒドロキシルを表し、Ｃは水素を表し、そしてＤはメチルを表し、
−ＸとＹは一緒にメチルオキシム基を表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは水素を表す）、
並びに無機又は有機酸を伴うこれらの付加塩である。
【００５０】
また、本発明の対象は、上述の式Ｉの新規な化合物、並びにこれらの塩を調製するための方法であって、式II
【化５】
2008512368.tif 000007
（式中、Ｒは１〜１０個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表す）の化合物を、
−式Ｉの化合物（式中、Ｒは既に示された意味を有し、ＸとＹは一緒にオキシムを表し、ＢはＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤはメチルアミンを表す）を得るためにメチルアミン、続いてヒドロキシルアミンの作用にかけるか、
−あるいは
式III 
【化６】
2008512368.tif 000008
（式中、Ｒは既に示された意味を有する）の化合物を得るためにメチル化し、これを、
−式IV
【化７】
2008512368.tif 000009
（式中、Ｒは既に示された意味を有する）の化合物を得るために５位のケトン官能基を保護する薬剤の作用にかけ、これを
メチルリチウムと反応させ、それから５位のケトン官能基を保護する薬剤の作用にかけ、それから式Ｉ（式中、Ｒは既に示された意味を有し、ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖のアルキルを表す）を得るためにヒドロキシルアミンと反応させるか、
−あるいは、これをけん化し、それから式Ｈ3Ｃ−ＮＨ−ＯＣＨ3の化合物と反応させ、それから式Ｖ
【化８】
2008512368.tif 000010
の化合物を得るためにメチルリチウムと反応させ、
これをケトン官能基の還元にかけ、それから５位のケトン官能基を脱保護する薬剤にかけ、それから式Ｉ（式中、Ｒは既に示された意味を有し、ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣは１〜４個の炭素原子を伴う任意的に置換された直鎖又は分岐鎖のアルキルを表し、そしてＤは水素を表す）の化合物を得るためにヒドロキシルアミンと反応させるか、
−あるいは
これを式VI
【化９】
2008512368.tif 000011
（式中、Ｒは既に示された意味を有し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは水素を表す）の化合物を得るために還元し、
これを
−式VII 
【化１０】
2008512368.tif 000012
（式中、Ｒは既に示された意味を有する）の化合物を得るために酸化剤の作用にかけ、シッフ塩基により還元し、それから５位のケトン官能基を脱保護するための薬剤の作用にかけ、それから式Ｉ（式中、Ｒは既に示された意味を有し、ＸとＹは一緒にオキシムを表し、Ｂはメチルアミンを表し、そしてＣとＤは水素を表す）を得るためにヒドロキシルアミンと反応させるか、
−または５位のケトン官能基を脱保護するための薬剤の作用にかけ、それから式Ｉ（式中、Ｒは既に示された意味を有し、ＸとＹは一緒にオキシム、メチルオキシム、及びカルボキシメチルオキシムをそれぞれ表し、Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは水素を表す）の化合物を得るためにヒドロキシルアミン、メチルヒドロキシルアミン、及びカルボキシヒドロキシルアミンから選択されるアミンと反応させ、
そして式Ｉの化合物を単離し、そして所望の場合には塩化し、あるいは所望の場合には、それから式Ｉの化合物をエステル化する、
ことを特徴とする方法である。
【００５１】
上述の方法を適用するための優先的な条件下において、
−式IIの化合物とメチルアミンの反応は、特に適当な溶媒、例えば、ジクロロメタン又はジメチルホルムアミド中、塩基、例えば、Ｎ−メチルモルホリンの存在下において、酸性官能基、例えば、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）又はＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）を活性化するカップリング剤の存在下において行う。好ましくは、これはジクロロメタン中で４−ジメチルアミノピリジンに付随したＥＤＣＩ（１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド）の存在下において行われ、該混合物は室温において２４時間撹拌にかけられる。それから該生成物を溶液、好ましくはピリジン中に入れ、そしてその後５〜７、特には６当量のヒドロキシアミン塩酸塩を添加する。
【００５２】
式IIの化合物のメチル化は、塩化チオニルの存在下においてメタノールとの反応により、好ましくは適当な容量の７０％のメタノールと３０％のジクロロメタンの混合物中に式IIの酸を溶解することにより達成される。これを０℃に冷却し、そして３当量の塩化チオニルを滴下する。それからこれを室温で２時間撹拌する。
【００５３】
該化合物において、ケトン官能基の保護は、好ましくは過剰量、例えば、１０当量のトリメチルオルトホルマート及び十分な容量のエチレングリコール中に生成物を溶解し、それから無水ｐ−トルエンスルホン酸を添加することにより行われる。
【００５４】
式IVの化合物とメチルリチウムの反応は、好ましくは無水ＴＨＦ中で行われ、そして好ましくは約−４５℃に冷却後、過剰量のメチルリチウムを滴下する。
【００５５】
５位のケトン官能基をブロックするジオキソランの脱保護は、硫酸の存在下においてアセトン中で達成される。好ましくはこれは水／酢酸  １／１の混合物の存在下においてジオキサン中で達成される。該ケトンのオキシムは、上のとおり有利に産生される。
【００５６】
式IVの化合物のけん化は、ソーダにより、好ましくはジオキサン中で達成される。約２当量のソーダ水溶液が特に添加される。
【００５７】
該生成物は、式Ｈ3Ｃ−ＮＨ−ＯＣＨ3の化合物と、例えば、適当な溶媒、例えば、ジクロロメタン又はジメチルホルムアミド中で、塩基、例えば、Ｎ−メチルモルホリンの存在下において、酸性官能基、例えば、ＢＯＰ又はＴＢＴＵを活性化するカップリング剤の存在下において反応させる。好ましくは、これは溶媒中に滴下されているトリエチルアミンを伴うヒドロキシベンゾトリアゾールに付随するＥＤＣＩの存在下において達成される。
【００５８】
該生成物を、上述の手順に従い、アルゴン雰囲気下においてメチルリチウムと反応させ、それから３位のケトン官能基を水素化ホウ素ナトリウムにより還元する。
【００５９】
それから得られた生成物を５位のケトン官能基の脱保護にかけ、そして上述と同じ手順に従いヒドロキシアミンと反応させる。
【００６０】
−式VIの化合物を得るための式IVの化合物の還元は、好ましくは水素化アルミニウムリチウムにより、特にはこれをテトラヒドロフラン中の懸濁液に置くことにより達成される。これは、硫酸ナトリウム溶液を添加することにより、注意深く加水分解する。
【００６１】
−式VIの化合物の酸化は、ピリジニウムクロロクロメートにより達成される。
【００６２】
該生成物におけるシッフ塩基は、特にアルゴン下において、好ましくはエタノール中、トリエチルアミン、メチルアミン塩酸塩、及びチタンテトライソプロポキシドの存在下における可溶化により、それから水素化ホウ素ナトリウムを添加することにより即時に還元されて得られる。
【００６３】
５位のケトン官能基の脱保護、並びにヒドロキシアミンとの反応は、前述の条件下において行われる。
【００６４】
式IIの化合物は、文献において記載され、且つ商業的に利用できる既知の誘導体である。
【００６５】
本発明の対象は、更に、神経変性疾患、例えば、ハンチントン病、遺伝性又は孤発性の神経変性慢性疾患、加齢に関係する神経変性病変、遺伝性又は損傷性の末梢性神経障害、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害又は抗癌治療、脳、末梢神経若しくは脊髄の外傷、脳若しくは脊髄の虚血により誘発される神経障害、感覚ニューロンの遺伝性、外傷性若しくは加齢に関する変性又は視覚神経の変性に関するもの、聴覚の感覚ニューロンの遺伝性、外傷性若しくは加齢に関する変性、大葉性萎縮症(lobar atrophies)及び血管性認知症、運動ニューロンの変性に関係する疾患及び外傷、ならびにより特には脊髄性筋萎縮症、特に乳児型脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、及び脊髄又は末梢運動神経の外傷を治療することが特に意図される、神経保護薬を得るための、式Ｉ
【化１１】
2008512368.tif 000013
（式中、
−ＸはＹと一緒にケト官能基を表し、あるいはＸはヒドロキシルを表し、そしてＹは水素を表し、あるいはＸとＹは一緒にオキシム（＝ＮＯＨ）又メチルオキシム（＝ＮＨＯＭｅ）を表し、
−Ｂはヒドロキシルを表し、そしてＣとＤは水素を表し、あるいはＣとＤは１〜４個の炭素原子を伴う２つの直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、あるいはＣは水素を表し、そしてＤは１〜４個の炭素原子を伴う直鎖又は分岐鎖アルキルを表し、
あるいはＢはＣと一緒にケト官能基を表し、そしてＤはメチル、ヒドロキシ又はメチルアミンを表し、
あるいはＢとＣは水素を表し、そしてＤはメチルアミンを表し、
あるいはＢとＣは一緒にオキシムを表し、そしてＤはメチルを表わす）の化合物、
あるいはそのエステルの１つ又はその医薬的に許容される酸を伴う付加塩の１つ、又は医薬的に許容される酸を伴うそのエステルの１つの付加塩の１つの使用である。
【００６６】
特に、本発明の対象は、特に症状又は外傷に罹患した哺乳類（一般的には患者）におけるニューロンの変性又は死に関係する症状又は外傷を治療するための神経保護薬を得るための上記式Ｉの化合物、塩、又はエステルの使用である。
【００６７】
より特には、本発明の対象は、乳児型脊髄性筋萎縮症及び筋萎縮性側索硬化症を治療するために意図される神経保護薬を得るための式Ｉの化合物、又はその塩若しくはエステルの１つの使用である。
【００６８】
これらの薬物の適用は、特にニューロンの生存率を向上するため、又は軸索成長を促進するために、これらの哺乳類に対して、通常、治療的有効量の式Ｉの化合物、又はそのエステルの１つ、特には３，５−セコ−４−ノルコレスタン−５−オン  オキシム−３−オールの投与を含んで成る。本発明の対象は、上述の疾患、特に神経変性疾患を治療するための方法、特にニューロンの生存率を向上するため又は軸索成長を促進するための症状又は外傷に罹患した哺乳類（一般的には患者）におけるニューロンの変性又は死に関係する症状又は外傷を治療するための方法であって、これらの哺乳類に対して治療的有効量の３，５−セコ−４−ノルコレスタン−５−オン  オキシム−３−オールの投与を含んで成る方法である。
【００６９】
更に本発明の対象は、特にニューロンの生存率を向上させるための、上述の障害及び特に症状又は外傷に罹患した哺乳類（一般的には患者）において、ニューロンの変性又は死に関係する症状又は外傷の１つを治療するための方法であって、これらの哺乳類に対して治療的有効量の式Ｉの化合物又はその塩若しくはエステルの１つの投与を含んで成る方法である。より具体的には、運動ニューロンの変性又は死に関係する症状は、筋萎縮性側索硬化症又は乳児型脊髄性筋萎縮症である。
【００７０】
本発明の対象は、４−コレステン−３−オンの利用可能な新規な誘導体、並びに先行技術において記載されているものを除く４−コレステン−３−オンの誘導体の製造である。従って、文献中に記載されているものは除外される。
【００７１】
式Ｉの薬物を適用するために上述された優先的な条件もまた、上に標的とされた発明のほかの対象、特に組成物、新規な誘導体、治療方法に適用され、そして逆もまた同じである。
【００７２】
以下の実施例は本願を説明する。
【００７３】
以下の保持時間は分と１／１００分で表される。
【００７４】
全ての生成物に使用される液体クロマトグラフィー法は以下のとおりである：
カラム：Macherey-Nagel-Nucleosil（登録商標） 300-6 C4-150×4.6 mm
勾配：水（＋０．０５％のトリフルオロ酢酸）／アセトニトリル（＋０．０５％のトリフルオロ酢酸）
ｔ＝０分：６０％のアセトニトリル，４０％のＨ2Ｏ
ｔ＝６分：１００％のアセトニトリル，０％のＨ2Ｏ
ｔ＝１１分：１００％のアセトニトリル，０％のＨ2Ｏ
ｔ＝１３分：６０％のアセトニトリル，４０％のＨ2Ｏ
ｔ＝１５分：６０％のアセトニトリル，４０％のＨ2Ｏ。
【００７５】
マススペクトロメーターのイオン化条件は：
ソース温度：２５０℃
コーン電圧：５０Ｖ
キャピラリー電圧：３ｋＶ
Ｒｆ  レンズ：０．３Ｖ
【実施例】
【００７６】
実施例１：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアミド
段階Ａ：
最初の段階において、２５０ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オイックアシッド（3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-oic acid)、３８ｍｇのメチルアミン塩酸塩、２５０ｍｇのＥＤＣＩ、１００ｍｇのＤＭＡＰ、及び２．５ｍＬのジクロロメタンをフラスコに入れる。該溶液を室温で２４時間撹拌し、それからジクロロメタンを添加することにより反応媒体を希釈し、そして１０％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、それから減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（９５／５  ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ）により精製する。１７６ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  ３−メチルアミドが６８％の収率で回収される。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：４．４２分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１８；［２Ｍ＋Ｈ］+＝８３５
【００７７】
段階Ｂ
次に、１ｍＬのピリジン中の５０ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  ３−メチルアミド、５０ｍｇのヒドロキシルアミン塩酸塩をフラスコに入れる。室温において１６時間撹拌を行い、それから反応媒体を減圧下で濃縮する。得られた残渣をＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物に取り、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮する。４０．６ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアミドが７８％の収率で回収される。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．７０分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４３３；［２Ｍ＋Ｈ］+＝８６５
【００７８】
実施例２：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−ジメチルアルコール
段階Ａ：
３７８ｍＬのメタノール中の１０．５ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−オイックアシッド（3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one-3-oic acid)、及び１４６ｍＬのジクロロメタンをフラスコ中で可溶化する。該混合物を０℃に冷却し、そして５．７ｍＬの塩化チオニルを滴下する。それから該混合物を室温で２時間撹拌する。反応媒体を減圧下で濃縮し、トルエンそれからジクロロメタンで同時蒸発させる。１０．３ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−メチルエステルが収率９４％で得られる。該生成物はいずれの精製もすることなく使用される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：４．６９分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１９；［２Ｍ＋Ｈ］+＝７８５
【００７９】
段階Ｂ：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルエステル
２５ｍＬのオルトギ酸トリメチル中の９．６２ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−メチルエステル、及び５３ｍＬのエチレングリコールをフラスコ中の溶液に入れる。それから４００ｍｇ（２．３ｍｍｏｌ）の無水ｐ−トルエンスルホン酸を添加し、そして該混合物を室温で１晩撹拌する。酢酸エチルを反応媒体に添加し、１０％炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄を行う。有機相を分離し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。９．９５ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルエステルが収率９３％で得られる。該生成物は精製することなく使用される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．７６分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４６３
【００８０】
段階Ｃ：
３００ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５−（エチレンジオキシ）−３−メチルエステルを５ｍＬの無水ＴＨＦ中に溶解する。該媒体を−４５℃に冷却し、それからエーテル中の１．３６ｍＬの１．６Ｍメチルリチウム溶液を滴下する。−４５℃で３０分間撹拌後、数滴のメタノールを反応媒体に添加し、そして室温に戻す。２０ｍＬのジエチルエーテル中に取り、炭酸水素ナトリウム飽和溶液、それから塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、それから減圧下で濃縮する。２９５ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−ジメチルアルコール（ＭＷ＝４６２）が９８％の収率で得られる。
保持時間：５．５６分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ−（ＣＨ2ＯＨ−ＣＨ2ＯＨ＋Ｈ2Ｏ）＋Ｈ］+＝４０１
【００８１】
段階Ｄ：
６ｍＬの１／１の水／酢酸混合物、及び２９５ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−ジメチルアルコールをフラスコに添加し、該混合物を還流温度に１時間３０分加熱する。冷却後、反応媒体を酢酸エチルで希釈し、塩化ナトリウム飽和溶液、それから炭酸水素ナトリウム飽和溶液で洗浄する。最後に、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた原生成物をフラッシュクロマトグラフィー（８／２  石油エーテル／酢酸エチル）により精製する。１８０ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−ジメチルアルコールが６８％の収率で得られる。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．０８分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１９；［Ｍ−Ｈ2Ｏ＋Ｈ］+＝４０１；［２Ｍ＋Ｈ］＝８３７
【００８２】
実施例３：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−ジメチルアルコール
５３ｍＬのピリジン中の１ｇの実施例２の化合物、１ｇのヒドロキシルアミン塩酸塩、及び数ｍＬのジクロメタンを、ケトンを溶解するためにフラスコに入れる。該混合物を室温で１６時間撹拌し、それから減圧下で反応媒体を濃縮する。得られた残渣をＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物中に取り、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。８１４ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−ジメチルアルコールが７８％の収率で回収される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．０９分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４３４；［２Ｍ＋Ｈ］＝８６７
【００８３】
実施例４：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアルコール
段階Ａ：
２６ｍＬのジオキサン中の２ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルエステルをフラスコに入れる。８．６ｍＬの１Ｎソーダ溶液を添加する。該反応媒体を還流温度に１時間３０分加熱し、そしてジオキサンを減圧下で蒸発させる。得られた溶液を１Ｎの塩酸溶液を添加することによりｐＨ＝１となるまで酸性化し、そしてトルエンで２回抽出する。有機相を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。１．９２ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−オイックアシッドが９９％の収率で回収される。これは更に処理することなく以下の工程において使用する。
【００８４】
段階Ｂ：
３０ｍＬのジクロロメタン中の１．９ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−オイックアシッドをフラスコに入れる。該溶液に、１．０６ｇのＥＤＣＩ、７４３ｍｇのＨＯＢＴ、５３７ｍｇのＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩を添加し、それから１．３７ｍＬのトリエチルアミンを滴下する。該混合物を室温で１６時間撹拌する。ＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物を該反応媒体に添加し、そしてジクロロメタンで３回抽出する。有機相を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（８／２  ＣＨ2Ｃｌ2／酢酸エチル）により精製する。１．４６ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−（Ｎ，Ｎ−メトキシ−メチル）アミドが７０％の収率で回収される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．３１分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４９２
【００８５】
段階Ｃ：
２０ｍＬの無水テトラヒドロフラン中の１．４ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−（Ｎ，Ｎ−メトキシ−メチル）アミドをアルゴン下のフラスコに入れ、そして０℃に冷却する。それからエーテル中の３．３８ｍＬの１．６Ｍメチルリチウム溶液を滴下する。該反応媒体を０℃で３時間４０分撹拌し、それから７．２８ｍＬｔの水中の０．７２ｍＬの濃塩酸溶液を滴下する。テトラヒドロフランを減圧下で蒸発させ、得られた水溶液を、１Ｎソーダを添加することによりｐＨ＝１０となるまでアルカリ化する。該溶液をジエチルエーテルで抽出し、有機相を回収し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（９／１  石油エーテル／酢酸エチル）により精製する。９３０ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルケトンが７３％の収率で回収される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．６５分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４０３
【００８６】
段階Ｄ：
１．５ｍＬのメタノール中の工程Ｃ由来の１１９ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルケトンをフラスコに入れる。該混合物を０℃に冷却し、そして１０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加する。該反応媒体を０℃で１時間撹拌し、それから減圧下で濃縮する。残渣を水に取り、そしてジクロロメタンで抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。９４ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルアルコールが７８％の収率で回収され、該生成物はそれ自体として使用される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．２２分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝３８７
【００８７】
段階Ｅ：
５位のケトンを脱保護するために、実施例２の段階Ｄのとおりに実施する。
【００８８】
段階Ｆ：
１２１ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−メチルアルコール、１．５ｍＬのピリジン、及び１２１ｍｇのヒドロキシルアミン塩酸塩をフラスコに入れる。該溶液を室温で２日間撹拌する。反応媒体を減圧下で濃縮し、水中に取り、そしてジクロロメタンで抽出する。それから有機相を水で洗浄し、それから硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。これにより得られた生成物をフラッシュクロマトグラフィー（９／１  石油エーテル／酢酸エチル）により精製する。６６ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアルコールが５３％の収率で回収される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：４．９１分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４２０
【００８９】
実施例５：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアミン
段階Ａ：
６１５ｍｇのＬｉＡｌＨ4をフラスコ中の５７ｍＬのＴＨＦに懸濁させる。該混合物を０℃に冷却し、そして３．０ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−メチルエステルの溶液を５７ｍＬのテトラヒドロフラン中に滴下する。それから該混合物を０℃で５時間撹拌する。硫酸ナトリウム溶液を添加することにより注意深く加水分解を行い、得られた白色溶液を３０分間撹拌し、それから濾過する。濾液を減圧下で濃縮し、そして水中に取り、酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、それから減圧下で濃縮する。２．５５ｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−オールが８５％の収率で得られ、該生成物はそのまま使用される。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：４．８２分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ−（ＣＨ2ＯＨ−ＣＨ2ＯＨ＋Ｈ2Ｏ）＋Ｈ］+＝３７３
【００９０】
段階Ｂ：
７ｍＬのジクロロメタン中の４７６ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−オールをアルゴン下においてフラスコ中で溶解し、それから１８９ｍｇの中性アルミナ及び３９９ｍｇのクロロクロム酸ピリジニウムを添加し、該混合物を室温で３時間３０分撹拌する。該反応媒体をセライト（登録商標）において濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（９／１その後８／２のトルエン／酢酸エチル）により精製する。３２８ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−アールが６９％の収率で得られる。
保持時間：５．５７分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４３３
【００９１】
段階Ｃ：
３ｍＬのエタノール中の３２３ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−３−アールをアルゴン下においてフラスコ中で溶解させ、それから２０９μＬのトリエチルアミン、１００ｍｇのメチルアミン塩酸塩、及び４４４μＬのチタンテトライソプロポキシドを添加する。該反応媒体を室温で６時間撹拌し、そして４２．５ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加する。該混合物を室温で１６時間撹拌する。該反応媒体を濾過し、そしてジクロロメタンで洗浄する。濾液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（９／１から５／５のジクロロメタン／メタノール）により精製する。８４ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−オキシム−３−メチルアミンが２５％の収率で得られる。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．９３分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４４８
【００９２】
段階Ｄ：
５０ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５，５（エチレンジオキシ）−オキシム−３−メチルアミン、及び９７６μＬの１／１の水／酢酸混合物をフラスコに入れる。該混合物を６時間還流させる。冷却後、該反応媒体を酢酸エチルで希釈し、そして塩化ナトリウム飽和溶液、その後５％炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた生成物をフラッシュクロマトグラフィー（９５／５  ジクロロメタン／メタノール）により精製し、５ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−メチルアミンが１１％の収率で得られる。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．６８分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４０４
【００９３】
段階Ｅ：
５ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−メチルアミン、５ｍｇのヒドロキシルアミン塩酸塩、及び２８７μＬのピリジンをフラスコに入れる。該混合物を室温で１６時間撹拌する。それからこれをジクロロメタン中に取り、そして水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。５ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−メチルアミンが９１％の収率で得られる。
保持時間：３．６６分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１９
【００９４】
実施例６：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  メチルオキシム−３−オール
１ｍＬのピリジン中の２０ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−オール、２０ｍｇのＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩をフラスコに入れる。該混合物を室温で１６時間撹拌し、そして１０ｍｇのＯ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩を再度添加する。該混合物を、再度室温で１６時間撹拌し、それから該反応媒体を減圧下で濃縮する。得られた残渣をＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物中に取り、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー（９／１  石油エーテル／酢酸エチル）により精製される、１８ｍｇの黄色の油が得られ、５．８ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  メチルオキシム−３−オールが２７％の収率で回収される。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：５．５０分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４２０
【００９５】
実施例７：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  カルボキシメチルオキシム−３−オール
０．５ｍＬのピリジン中の５２ｍｇのケトン、２５ｍｇのカルボキシメトキシルアミンのヘミ塩酸塩をフラスコに入れる。該混合物を室温で２日間撹拌し、そして該反応媒体を減圧下で濃縮する。得られた残渣をＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物中に取り、有機相を分離し、水、その後２％塩酸溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（８／２  石油エーテル／酢酸エチル）により精製する。カルボキシメチルオキシムとして、３９％の収率を伴い２４ｍｇが得られる。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：４．４０分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４６４；［２Ｍ＋Ｈ］+＝９２７
【００９６】
実施例８
記載される処方により懸濁液を調製した。
３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オール  ２０ｍｇ／ｍＬ
賦形剤：油性乳濁液
【００９７】
実施例９
記載される処方により乾燥形態を調製した。
３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシンエステル塩酸塩  ２５０ｍｇ
賦形剤：ｇｓｐを満たしたカプセル  ７５０ｍｇ
【００９８】
実施例１０：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オールのプロドラッグ：３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシンエステル
１０〜１５ｍＬのジクロロメタン中の５０９ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−オール、１８２ｍｇのＮ，Ｎ−ジメチルグリシン塩酸塩、２７５ｍｇのＥＤＣＩ、及び２０７ｍｇのＤＭＡＰをフラスコに入れる。該混合物を室温で１６時間撹拌する。該反応媒体に５％炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、そしてジクロロメタンで抽出する。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（８／２  トルエン／酢酸エチル）により精製する。７８％の収率で４８８ｍｇを回収する。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．７７分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４７６
【００９９】
それから上記生成物を以下の反応にかける：
２３ｍＬのピリジン中の４８８ｍｇの得られた生成物、及び４８８ｍｇのヒドロキシルアミン塩酸塩をフラスコに入れる。該混合物を室温で１６時間撹拌し、それから反応媒体をＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物中に取り、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。７５％の収率で３７８ｍｇのオキシムが回収される。それから塩酸塩としての生成物を得るために、該生成物をＨＣｌ溶液で酸性化したエーテル溶液の存在下において塩化する。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．４３分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝４９１
【０１００】
実施例１１：  ３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−オールのプロドラッグ：３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン  オキシム−３−（４−メチル−１−ピペラジン）プロパノエートエステル
２〜３ｍＬのジクロロメタン中の２６４ｍｇの３，５−セコ−４−ノル−コレスタン−５−オン−３−オール、１２１ｍｇのリチウム塩としての４−メチル−１−ピペラジン−プロパン酸、１．４２５ｍｇのＥＤＣＩ、及び１０６ｍｇのＤＭＡＰをフラスコに入れる。該混合物を室温で１晩撹拌する。水を該反応媒体に添加し、そしてジクロロメタンで抽出する。有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（９８／２  トルエン／酢酸エチル）により精製する。５４ｍｇの所望の生成物が１５％の収率で回収される。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．６６分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝５４５
【０１０１】
それから生成物を以下の反応にかける：
１．２ｍＬのピリジン中の３０ｍｇの得られた生成物、及び３０ｍｇのヒドロキシルアミン塩酸塩をフラスコに入れる。該混合物を室温で５時間３０分撹拌し、それから反応媒体をＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ混合物中に取り、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で濃縮する。１３％の収率で１９ｍｇのオキシムが回収される。
分析
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：一致
保持時間：３．６６分
マススペクトロメトリーにおいて検出されたピーク：［Ｍ＋Ｈ］+＝５６０
【０１０２】
それから二塩酸塩としての生成物を得るために、該生成物を塩酸水溶液で酸性化したエーテル溶液の存在下において塩化する。
【０１０３】
【表１】
2008512368.tif 000014
【０１０４】
１．運動ニューロンの生存率における式Ｉの化合物の効果
式Ｉの化合物の神経保護作用を示すために、出願人はラット運動ニューロンの栄養欠乏のin vitroモデルにおいて、これらの活性を調査した。脊髄運動ニューロンの培養において、有用な参照は本願出願人のWO 0142784特許出願に従い作成することができる。
【０１０５】
ラットＥ１４胎仔の脊髄を解剖し、そしてトリプシン化（trypsination)後、腹側部を分離する。既知の方法により、運動ニューロンを他の脊髄細胞から分離する（"Immunoselection Strategies for Neural cell culture" におけるCamu et al., 1993,イムノパニングによるニワトリ及びラット胚からの脊髄運動ニューロンの精製、ニューロプロトコール：Neuroscience 2, 191-199における方法の手引き；Henderson et al., 1993。好中球は運動ニューロンの生存を促進し、胚性肢芽中に存在する。Nature 363 (6426): 266-70)。該細胞を密度勾配において遠心する。運動ニューロンは大細胞（低密度細胞）の画分に多く存在する。該画分の細胞を、運動ニューロンに存在する表面抗原である、抗−ｐ７５抗体と共にインキュベートする。マグネチックビーズとカップリングした二次抗体を加え、そして該細胞混合物をマグネット中のカラムに通過させる（Arce et al., 1999)。運動ニューロンのみが保持される：これらの純度は９０％のオーダーである。
【０１０６】
運動ニューロンは、Raoul et al., 1999, Programed cell death of embryonic motoneurons triggerd through the Fas death receptor. J. Cell. Biol 147(5): 1049-62に従い供給されたニューロベース培地中のポリオルニチン−ラミニンの基質における培養ウェル中に低密度で蒔かれる。ネガティブ・コントロール（栄養因子の不存在）及びポジティブ・コントロール（米国の会社であるPEPROTECH, Inc及びSigma-Aldrich 社から購入した、１ｎｇ／ｍＬのＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）、１ｎｇ／ｍＬのＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）、及び１０ｎｇ／ｍＬのＣＤＮＦ（毛様体神経栄養因子）の存在下）を各系においてインキュベートする。
【０１０７】
播種から６０分後、試験する化合物を添加し、そして培養液を５％ＣＯ2下において３７℃で３日間維持する。
【０１０８】
神経栄養因子の不存在下において、運動ニューロンは自発的な死の傾向を有する (Pettmann and Henderson, 1998, Neuronal cell death. Neuron 20 (4): 633-47)。３日後、生存している細胞中で蛍光するカルセインの存在下において細胞をインキュベート後、蛍光を測定することにより、生存率を評価する。
【０１０９】
３７℃の培養で３日後、５％ＣＯ2下の飽和湿度において、神経栄養因子を補充した培地中で最初に播種した運動ニューロンの最大５０％が生存し、一方基本培地のみにおける運動ニューロンは１５％以下の生存率である。
【０１１０】
試験される化合物の活性は、神経栄養因子を補充した培地における運動ニューロンの生存率の比較として、神経細胞用培地（neurobasal medium)にこれらを添加した場合の運動ニューロン死を防止する能力により評価した。
【０１１１】
基本培地中で運動ニューロンの良好な生存率を許容できる濃度において、本発明に従う式Ｉの化合物の活性を実証した。該生存率は数字、割合により表される。該割合が０以上であるならば、運動ニューロンの生存率における化合物の効果は陽性である。
【０１１２】
得られた結果は以下のとおりである：
【表２】
2008512368.tif 000015
【０１１３】
脊髄運動ニューロンにおけるこれらの栄養作用の長所により、本発明に従う式Ｉの化合物は、特に筋萎縮症の治療において、特に筋萎縮性側索硬化症又は乳児型脊髄性筋萎縮症において、そして精髄の外傷の治療において、薬物として有用であることが証明された。
【０１１４】
２．神経保護における式Ｉの化合物の効果
２〜３日齢の新生仔ラットにおいて顔面神経の軸索切断を行う。該動物は、神経の片側切断の４時間前、その後５日間毎日、化合物番号１１、３及び４の化合物を皮下に受ける。神経の切断から７日後、動物を麻酔し、それからパラホルムアルデヒドの心臓内注入により固定する。脳を取り出し、パラフィン中でインキュベートする。クレシルバイオレットで染色した顔面神経核の連続した７μｍの切片の組織学的分析により、無傷側並びに切断した神経側の運動ニューロンの数を計測することができる（Casanovas et al. Prevention by lamotrigine, MK-801 and N omega-nitro-L-arginine metyl ester of motoneuron cell death after neonatal axotomy, Neuroscience, 1996, 71, 313-325)。
【０１１５】
得られた結果は以下のとおりである：
軸索切断し、そして化合物番号１１、３及び４で経口的に処理した新生仔ラットにおける顔面神経核の運動ニューロンの生存率は、非切断神経と比較して、３〜３０ｍｇ／ｋｇの用量において最大４０％の増加、１０ｍｇ／ｋｇの用量において最大２５％の増加、３０ｍｇ／ｋｇの用量において最大３０％の増加をそれぞれ与えた。
【０１１６】
毒性実験
３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量において、特に化合物番号１１、３及び４のマウスへの腹腔内経路を介する投与は、最大１４日間継続する毎日の投与処理によって、いかなる有意な毒性も示さなかった。
【国際調査報告】
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