(57)【要約】【課題】Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有し、脳血管血流関門を通過可能であって、かつ水に易溶性の化合物を含有するアミロイドベータペプチド阻害剤を提供すること【解決手段】本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、キサントシン類を有効成分として含有し、キサントシン類は、好ましくは植物抽出物の形態で含有され、より好ましくは焙煎脱脂米糠の抽出物である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キサントシン類を有効成分として含有する、アミロイドベータペプチド阻害剤。
【請求項２】
前記キサントシン類が植物抽出物の形態で含有されている、請求項１に記載のアミロイドベータペプチド阻害剤。
【請求項３】
前記植物抽出物が、焙煎脱脂米糠の抽出物である、請求項２に記載のアミロイドベータペプチド阻害剤。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかの項に記載のアミロイドベータペプチド阻害剤を含む、医薬組成物。
【請求項５】
前記キサントシン類の含量が、組成物の全重量を基準にして０．１重量％〜２０重量％である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
請求項１から３のいずれかの項に記載のアミロイドベータペプチド阻害剤を含む、飲食物。
【請求項７】
前記キサントシン類の含量が、組成物の全重量を基準にして０．１重量％〜２０重量％である、請求項６に記載の飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドベータペプチドの脳の神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有するアミロイドベータペプチド阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドベータペプチド（以下、Ａβペプチドと略記することがある。）は、アルツハイマー病の病理的特徴の一つである老人班（βアミロイド線維）の主要構成成分として発見され、３９〜４３アミノ酸残基からなり、それ自身が凝集することにより、神経毒性を示し、細胞死を誘発することが知られている。
【０００３】
特許文献１には、ポリフェノール類を有効成分として含有し、βアミロイド線維の生成または脳組織への沈着を抑制するアルツハイマー病予防薬、または脳組織に沈着したβアミロイド線維の除去作用を有するアルツハイマー病治療薬が記載されている。
【０００４】
特許文献２は、アルツハイマー病などのアミロイド症を治療するため、カテキン類などの標準緑茶葉抽出物が既成のアルツハイマー型のアミロイド線維の分解／破壊を引き起こす能力を有し、後期のアルツハイマー患者などのアミロイド疾患に罹患した患者に有用であることを示唆している（段落００１０）。
【０００５】
特許文献３には、ウンカリア・トメントーサ（猫の爪）の植物由来の植物物質を有効成分として治療的有効量含有する、アルツハイマー病などのアミロイド疾患の治療のための医薬組成物が記載されている。また、特許文献３には、活性成分のウンカリア・トメントーサは脳血管血流関門を通過するのに最適化してもよいことが記載されている。
【０００６】
特許文献４には、Ａβペプチドの存在下で細胞死が惹起されるＰＣ１２細胞の細胞死を抑制し（Ａβペプチドの神経細胞毒性低減作用を有し）、脳血管血流関門を通過可能な低分子化合物として、２−フェニル−１，２−ベンゾイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン（以下、エブセレンという。）を見出したことが記載されている。
【０００７】
しかし、エブセレンは水に対し極めて難溶性の薬物である。エブセレンの水溶液を注射剤として用いるために、エブセレンの微粒子化（特許文献５）、リポソーム化（特許文献６）など種々の手段が試みられてきた。しかし、未だ注射剤として使用することができるほどの濃度にエブセレンを充分に溶解した水溶液は得られていない。
【０００８】
これに対し、特許文献７では、エブセレンを充分に溶解した水溶液を得るために、エブセレンのシクロデキストリン製剤を得ることを記載している。同製剤を得る方法として、特許文献７は、（１）エブセレンを水と混和し得る有機溶媒に溶解し、（２）それとは別にシクロデキストリンを水溶媒に溶解し、（３）エブセレンの水混和性有機溶液とシクロデキストリン水溶液とを混合し、そして（４）混合液を乾燥して得られる乾燥物を水溶媒と混合することにより、エブセレンを充分に溶解した水溶液を得ることができることを記載している。
【０００９】
このように、Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有し、脳血管血流関門を通過可能であって、かつ水に易溶性の物質が所望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００５−１０４８５０号公報
【特許文献２】特開２００４−５３７５７６号公報
【特許文献３】特許第４３８６４７０号公報
【特許文献４】国際公開第９８／０８８３１号
【特許文献５】特公平７−１３０１６号公報
【特許文献６】特公平８−３００６４号公報
【特許文献７】国際公開第２００２／０５５０７６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記問題点を解決することを課題とし、Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有し、脳血管血流関門を通過可能であって、かつ水に易溶性を呈するアミロイドベータペプチド阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、キサントシン類を有効成分として含有するアミロイドベータペプチド阻害剤を提供する。
【００１３】
１つの実施形態では、上記キサントシン類が植物抽出物の形態で含有されている。
【００１４】
さらなる実施態様では、上記植物抽出物は、焙煎脱脂米糠の抽出物である。
【００１５】
本発明はまた、上記アミロイドベータペプチド阻害剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
１つの実施形態では、上記医薬組成物中の上記キサントシン類の含有量は、組成物全重量を基準にして０．００１重量％〜２０重量％である。
【００１７】
本発明はまた、上記アミロイドベータペプチド阻害剤を含む飲食物を提供する。
【００１８】
１つの実施形態では、上記飲食物中の上記キサントシン類の含有量は、組成物全重量を基準にして０．００１重量％〜２０重量％である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有し、脳血管血流関門を通過可能であって、かつ水に易溶性のアミロイドベータペプチド阻害剤を提供することができる。本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、Ａβペプチドに起因するアルツハイマー病を低用量で予防・治療するための医薬組成物に利用することができる。さらに、本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、食品材料に含まれるような植物抽出物を用いて得ることができるため、飲食物としても利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】マウス胎児海馬ニューロンを７日間培養し、焙煎米糠抽出物、Ａβ、Ｃｕ２＋を添加後、４８時間培養し、ＬＤＬ細胞毒性テストキットにてニューロンの生存率を測定した結果を示すグラフである。
【図２】マウス胎児海馬ニューロンを７日間培養し、焙煎米糠抽出物、Ａβ、Ｃｕ２＋を添加後、４８時間培養し、抗ＡＰＰ抗体でニューロンを免疫染色した写真であり、ａは、コントロールとして焙煎米糠抽出物、ならびにＡβおよびＣｕ２＋をいずれも添加しなかった未処理の場合でのニューロンの状態を示す写真であり、ｂは、ＡβおよびＣｕ２＋のみを添加した場合でのニューロンの状態を示す写真であり、そしてｃは、焙煎米糠抽出物、ならびにＡβおよびＣｕ２＋をいずれも添加した場合でのニューロンの状態を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
（アミロイドベータペプチド阻害剤）
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有する。例えば、マウス胎児海馬ニューロンをＡβペプチドおよびＣｕ２＋存在下で培養すると、通常、著しい細胞死が観察される。アミロイドベータペプチド阻害剤は、たとえＡβペプチド、およびＣｕ２＋と共存させたとしても、このような著しい細胞死を引き起こさず、ニューロンの生存率を大幅に回復させることができる。
【００２２】
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤のＡβペプチドに対する阻害反応の態様は、Ａβペプチドを単位構造としたものが重合してβアミロイド線維を形成する反応を阻害する態様、およびβアミロイド線維を分解する態様のいずれをも包含する。
【００２３】
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、キサントシン類を有効成分として含有する。
【００２４】
本明細書において、「キサントシン類」とは、キサントシン化合物そのもの、すなわち、２，６−ジヒドロキシ−９−β−Ｄ−リボフラノシル−９Ｈ−プリン；Ａβペプチドを阻害し、薬理学的に許容され得る、キサントシンの誘導体；およびそれらの塩；ならびにこれらの組み合わせ；を包含していう。
【００２５】
キサントシンの誘導体としては、例えば、キサントシンのリン酸化誘導体、キサントシンのメチル化誘導体、キサンチンおよびその誘導体、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２６】
「キサントシンのリン酸化誘導体」とは、キサントシンの糖部分にリン酸基がエステル結合した化合物を指していい、リン酸基が結合する糖部分の位置は特に限定されず、結合するリン酸基の数は少なくとも１つである。すなわち、キサントシンのリン酸化誘導体は、一（モノ）リン酸体、二（ジ）リン酸体、三（トリ）リン酸体のいずれであってもよい。このようなキサントシンのリン酸化誘導体の例としては、モノリン酸誘導体（例えば、キサントシン−２’−モノリン酸、キサントシン−３’−モノリン酸、キサントシン−５’−モノリン酸（キサンチル酸）など）；ジリン酸誘導体（例えば、キサントシン−２’,３’−ジリン酸、キサントシン−２’,５’−ジリン酸、キサントシン−３’,５’−ジリン酸など）；トリリン酸誘導体（例えば、キサントシン−２’，３’,５’−トリリン酸など）；およびこれらの脂肪酸エステルなどのエステル類；ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２７】
キサントシンのメチル化誘導体としては、例えば、カフェイン、パラキサンチン、テオフィリン、テオブロミンなどのキサンチン類、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２８】
キサントシンの塩としては、上記キサントシン誘導体のモノアルカリ金属塩またはジアルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩など）、および上記キサントシン誘導体のモノアルカリ土類金属塩またはジアルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２９】
本発明において、キサントシン類は、精製された形態のもの、後述する、植物等から得られた抽出物の形態のもの、またはこれらの組み合わせのいずれであってもよい。
【００３０】
キサントシン類が、例えば、植物等から得られた抽出物の形態のものである場合、好ましくは、焙煎植物繊維の熱水抽出物、あるいは、焙煎植物繊維の熱水抽出物をさらに有機溶媒で抽出して得られた抽出物である。
【００３１】
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤の形態としては、特に限定されないが、好ましくは、当業者が通常用いる経口投与用の剤形である。例えば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤である。
【００３２】
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、キサントシン類のＡβペプチドに対する阻害作用を阻害しない範囲の量で、他の添加剤を含有し得る。他の添加剤としては、特に限定されず、例えば、賦形剤、充填剤、希釈剤、着色剤、保存料、香料、甘味剤、緩衝剤、および溶解補助剤、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３３】
賦形剤としては、特に限定されず、例えば、トウモロコシデンプンなどのデンプン類、結晶セルロース、乳糖、グラニュー糖、ブドウ糖などの糖類、マンニトール、キシリトール、ソルビトールなどの糖アルコール、軽質無水ケイ酸、タルク、酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、無水リン酸水素カルシウム、第三リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、滑石、およびアラビアゴム、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３４】
充填剤としては、特に限定されず、例えば、微結晶セルロース、マンニトール、ラクトース、およびリン酸カルシウム、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３５】
希釈剤としては、特に限定されず、例えば、炭水化物、グルコースなどの単糖類、スクロース、無水ラクトース、ラクトース一水和物などのオリゴ糖、およびソルビトール、マンニトール、エリスリトール、キシリトールなどの糖アルコール、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３６】
着色剤としては、特に限定されず、例えば、カロチノイド色素、ウコン色素、カラメル色素、カロチン色素、クチナシ色素などの天然色素、および食用赤色２号、食用赤色３号、食用赤色４０号、食用赤色１０２号、食用赤色１０４号、食用赤色１０５号、食用赤色１０６号、食用黄色４号、食用黄色５号、食用緑色３号、食用青色１号及び食用青色２号などの食用タール色素、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３７】
保存料としては、特に限定されず、例えば、安息香酸、ポリリジン、ソルビタン、およびプロタミン、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３８】
香料としては、特に限定されず、ミントポリフェノール、カモミールエキス、シソエキスなどの天然香料、およびＬ−メントールなどの合成香料、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００３９】
甘味剤としては、特に限定されず、例えば、上記賦形剤および風味剤として挙げられる糖アルコールのほか、アスパルテーム、およびステビア、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００４０】
緩衝剤としては、特に限定されず、例えば、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、およびリン酸二水素ナトリウム、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００４１】
溶解補助剤としては、特に限定されず、例えば、酸化マグネシウム、酸化カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、炭酸ナトリウム、および炭酸水素ナトリウム、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００４２】
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤では、上記キサントシン類にこれらの添加剤が、当業者に公知の手段を用いて混合される。
【００４３】
（キサントシン類の調製方法）
次に、本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤を得るために、キサントシン類を含有する植物抽出物を用いる場合の、当該キサントシン類を含有する植物抽出物（特に焙煎植物抽出物）の調製方法について説明する。
【００４４】
本方法では、まず、原料の植物が焙煎され、植物焙煎物が作製される。
【００４５】
使用され得る原料の植物の部位としては、特に限定されず、例えば、植物体の果実、頴果、種皮、茎、葉などの任意の部位、およびこれらの組み合わせが挙げられる。原料となる植物は、乾燥したものまたは生のもののいずれであってもよい。抽出操作を行い易いとの理由から乾燥したものであることが好ましい。原料となる植物のより具体的な例としては、大豆、米糠、ふすま、小麦、米、茶葉、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。これらの植物は、当業者が通常用いる方法を用いて予め脱脂しておくことが好ましい。より好ましい植物の例としては、脱脂米糠が挙げられる。
【００４６】
原料植物の焙煎において、設定され得る焙煎の温度は、特に限定されず、例えば、１５０℃〜２３０℃であり、好ましくは、１７０℃〜２００℃である。焙煎の時間は、特に限定されず、例えば、５分間〜１時間であり、好ましくは、１０分間〜４０分間である。
【００４７】
次いで、上記植物焙煎物が熱水浴中に浸漬され、熱水抽出物が抽出される。
【００４８】
抽出に用いる水の量、すなわち、焙煎植物と水との浴比は、特に限定されず、例えば、焙煎植物の容量に対して５倍量〜３０倍量であり、好ましくは、１０倍量〜２０倍量である。抽出の温度は、特に限定されず、例えば、８０℃〜１００℃である。抽出の時間は、特に限定されず、例えば、１分間〜１８０分間である。
【００４９】
抽出後、植物焙煎物は、当業者に公知の方法（例えば、濾過）により、浸漬浴から除去される。このようにして、熱水抽出物を得ることができる。なお、除去した残渣（濾物）を用い、上記と同様の操作を繰り返してさらに熱水抽出を行ってもよい。
【００５０】
得られた熱水抽出物は、必要に応じて、例えば、重量比で０．１倍量〜０．３倍量になるまで濃縮されてもよい。さらに、この濃縮した熱水抽出物は、例えば、水分含量が４重量％以下になるまで、スプレードライ法、凍結乾燥法などの方法により乾燥させてもよい。濾液を濃縮して得られる濃縮物、またはさらに乾燥して得られる乾燥物が熱水抽出物として好適に用いることができる。
【００５１】
次いで、熱水抽出物は、有機溶媒または含水有機溶媒でさらに抽出される。
【００５２】
この抽出に使用され得る有機溶媒としては、特に限定されず、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコールなどの低級アルコール類、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、および四塩化炭素、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。好ましくは、メタノール、エタノールなどの低級アルコール類である。有機溶媒は、単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。２種以上を組み合わせる場合の混合容量比は特に限定されない。
【００５３】
この抽出に使用され得る含水有機溶媒としては、上記有機溶媒と水（水道水、イオン交換水、純水など）との混合溶液であって、例えば、含水アルコール、好ましくは、含水エタノールが挙げられる。
【００５４】
含水有機溶媒の含水率は特に限定されず、含水有機溶媒の重量を基準として、例えば、７０重量％〜９９重量％であり、好ましくは、８０重量％〜９８重量％である。
【００５５】
抽出に用いる溶媒の量（すなわち、熱水抽出物と有機溶媒または含水有機溶媒との混合比）は、特に限定されず、例えば、上記熱水抽出物（例えば、スプレードライ品）の容量に対して５倍量〜２０倍量であり、好ましくは、８倍量〜１０倍量である。抽出の温度は、特に限定されず、例えば、５０℃〜１００℃である。抽出の時間は、特に限定されず、例えば、３０分間〜３時間である。
【００５６】
抽出後、必要に応じて濾過が行われ、有機層が回収される。有機層は、必要に応じて、当業者に公知の手段を用いて、ペースト状または固体になるまで濃縮されてもよい。なお、この濃縮後、得られた抽出物を、さらに上記有機溶媒または含水有機溶媒による抽出を複数回行ってよい。このようにして、有機溶媒または含水有機溶媒による抽出物を得ることができる。得られた抽出物は、キサントシン類を豊富に含有する。
【００５７】
さらに、上記抽出物からキサントシン類を分離かつ精製してもよい。このような分離かつ精製に用いる手段としては、特に限定されず、例えば、抽出物をカラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、再結晶、蒸留、液々交流分配クロマトグラフィーなどの、当業者が通常用いる手段が挙げられる。
【００５８】
なお、得られた抽出物については、当業者に公知の方法（例えば、特開平８−２５６７９７号公報に記載されるような酵素を用いた定量方法）により、キサントシン類の定量を行うことができる。
【００５９】
（アミロイドベータペプチド阻害剤を含む医薬組成物または飲食物）
まず、本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤を医薬組成物として利用する場合について説明する。
【００６０】
本発明の医薬組成物は、上記アミロイドベータペプチド阻害剤を有効成分として含有する。
【００６１】
本発明の医薬組成物は、有効成分のキサントシン類を、組成物全重量を基準にして好ましくは、０．００１重量％〜２０重量％含有する。０．００１重量％よりも少ないと、充分な薬理効果（すなわち、投与された人の体内でのＡβペプチドに対する阻害を通じて後述するような疾患の治療または予防を行う効果）が発揮されないおそれがある。２０重量％よりも多いと、それ以上の当該薬理効果の向上が期待できず、むしろ生産コストが上昇するおそれがある。
【００６２】
医薬組成物に含まれるその他の添加剤としては、キサントシン類のＡβペプチドに対する阻害作用を阻害しない限り、特に限定されず、例えば、賦形剤、充填剤、希釈剤、着色剤、風味剤、甘味剤、緩衝剤、溶解補助剤、保存料、および香料、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００６３】
医薬組成物の形態としては、特に限定されないが、好ましくは、液剤である。液剤の調製にあたっては、本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤を当業者に公知の希釈剤（例えば、純水）で希釈することにより行われる。
【００６４】
本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤を含む医薬組成物の投与量は特に制限されない。患者の年齢、疾患の程度などに応じて適宜設定される。
【００６５】
本発明の医薬組成物が適用される疾患は、βアミロイド線維に起因する疾患である限り、特に限定されず、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症候群、プリオン病、２型糖尿病、およびこれらの組み合わせが挙げられる。本発明の医薬組成物は、Ａβペプチドからこれらの病因物質であるβアミロイド線維の形成を阻害し、およびβアミロイド線維を分解することにより、それぞれの疾患に対する予防薬または治療薬として用いることができる。
【００６６】
次に、本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤を飲食物として利用する場合について説明する。
【００６７】
本発明の飲食物は、上記アミロイドベータペプチド阻害剤を含有する。
【００６８】
本発明の飲食物は、通常、食用に供されるもの全般を指し、その形態はどのようなものであってもよく、固形の食品に限定されず、飲料（例えば、液体飲料）も包含される。ここで、本明細書中で用いられる用語「飲食物」とは、摂取にあたり咀嚼を要するものおよび要しないもののいずれをも包含する食品全般をいい、ペースト状、固形状、ゼリー状などのいずれの形態をも包含する。飲食物の具体的な例としては、キャンディ、クッキー、ビスケットなどの菓子類；シロップ類；乾燥果実、乾燥野菜などの果実または野菜加工品；沢庵、キムチなどの漬物類；ビーフジャーキー、ハンバーグ、ハム、ソーセージなどの畜肉または魚肉製品；ラーメン、うどん、蕎麦、パスタ、素麺などの麺類；食パン、フランスパン、あんぱん、惣菜パンなどのパン類；大福、草もちなどの餅類；フルーツ缶詰などの缶・ビン詰類；ゼリー；アイスクリーム；栄養補助食品などのサプリメント；果実飲料；茶飲料；コーヒー飲料；乳飲料；アルコール飲料；清涼飲料；などが挙げられるが、特にこれらに限定されない。
【００６９】
本発明の飲食物は、有効成分のキサントシン類を、組成物全重量を基準にして好ましくは、０．００１重量％〜２０重量％含有することが好ましい。０．００１重量％よりも少ないと、摂取した人の体内でＡβペプチドに対する阻害が充分機能しないおそれがある。２０重量％よりも多いと、それ以上の阻害作用の向上が期待できず、むしろ生産コストが上昇するおそれがある。
【００７０】
本発明の飲食物は、例えば、上記アミロイドベータペプチド阻害剤を他の食品材料、栄養素（例えば、ビタミン、ミネラル、プロテインなど）、食品添加剤等とともに当業者に公知の手法により混合することにより製造される。本発明の飲食物は、Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有する成分を食品または飲料として手軽に摂取することができるという点で特に有用である。
【実施例】
【００７１】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００７２】
（実施例１：焙煎米糠抽出物のアミロイド神経毒性に対する阻害効果）
（１）焙煎脱脂米糠熱水抽出物のエタノール抽出物の調製
脱脂米糠１００重量部をロータリエバポレーターに仕込み、エバポレーターを回転させながら約１７０℃にて４０分間焙煎（浅炒り）した。得られた焙煎物を、焙煎物の容量に対して１０倍量の水中に入れ、加熱して約４０分間沸騰させた後、室温まで冷却した。次いで、濾過して濾物を除去し、焙煎脱脂米糠熱水抽出物を得た。
【００７３】
この抽出物を重量比で０．２倍量になるまで減圧下で濃縮し、次いでスプレードライ法により乾燥させた。得られた乾燥物（粉末）の水分含量は、赤外線水分計を用いて測定した結果、４重量％以下であった。
【００７４】
次いで、得られた乾燥物に、乾燥物の重量の１０倍量の９５％エタノールを添加して、６０℃〜６５℃にて２時間抽出した。その後、濾過して濾物を除去し、さらに減圧下で濃縮した。このようにして焙煎脱脂米糠熱水抽出物のエタノール抽出物（以下、焙煎米糠抽出物という）を得た。このエタノール抽出物の固形分含量および窒素含量を、加熱乾燥重量測定法およびケルダール法を用いて、３回測定して平均値を算出したところ、固形分含量が７６．５重量％であり、窒素含量が１．１重量％であった。
【００７５】
得られたエタノール抽出物に含まれるキサントシン類の濃度を、特開平８−２５６７９７号公報に記載の酵素を用いた定量方法により定量した。エタノール抽出物中のキサントシン類の濃度は０．０１〜０．０２重量％であった。
【００７６】
（２）焙煎米糠抽出物のアミロイド神経毒性に対する阻害効果
（試験薬）：試験直前にリン酸緩衝生理食塩水またはヘペス緩衝生理食塩水（ロンザジャパン（株）製）を無菌水にて連続希釈して調製した。
【００７７】
（神経細胞培養）：ラット（Ｊｃｌ：ＳＤ）胎児脳よりＥ１７の海馬ニューロンを分散させ、ポリスチレン製シャーレを用いて、Ｂ２７サプリメント含有神経細胞培養用基礎培地（Ｇｉｂｃｏ（登録商標））中で１０〜１４日間培養した。うち、半分のシャーレには、培養開始時に予め上記焙煎米糠抽出物を０．３％(ｗ／ｖ)の濃度で添加し、翌日にＡβペプチド(第１位アミノ酸−第４２位アミノ酸：配列番号１；ベーリンガーインゲルハイム社製；最終濃度：１０μＭ)と塩化銅（最終濃度：１００μＭ）を添加した。残りの一部は、培養米糠抽出物を添加することなく、Ａβペプチドと塩化銅とを添加し、残りはそのような処理を行わない未処理のコントロールとした。４日後、細胞の生存率を測定した。
【００７８】
（生存率測定）：ＬＤＬ細胞毒性テストキット（和光純薬工業株式会社製）を用いて、添付書に記載のプロトコールに従って生存率を測定した。結果を図１に示す。また、（Ａβペプチド前駆体（ＡＰＰ）の遺伝子を、アデノウイルス法を用いて導入したニューロンを抗ＡＰＰ抗体（タカラバイオ（株）製）にて免疫染色し、顕微鏡下にてニューロンの生死を観察した。顕微鏡写真を図２に示す。
【００７９】
図１および２より明らかなように、Ａβペプチド（１０μＭ）および塩化銅（１００μＭ）に、上記焙煎米糠抽出物を共存させない場合（図２のｂ）、ラット胎児脳海馬ニューロンは著しい細胞死を示したが、当該焙煎米糠抽出物を共存させると、ニューロンの生存率は殆ど低下せず、未処理コントロール（図２のａ）と変わらない程度に維持され、毒性の軽減効果が認められた（図２のｃ）。よって、キサントシン類を含有する焙煎植物抽出物が良好なアミロイドベータペプチド阻害作用を示していたことがわかる。
【００８０】
（実施例２：焙煎米糠抽出物の経口投与ラットの脳中キサントシン類濃度）
実施例１で調製した焙煎脱脂米糠熱水抽出物のエタノール抽出物を水で希釈して１０％(ｗ／ｗ)焙煎米糠抽出物水溶液を調製した。
【００８１】
３週齢の雄ラット（Ｊｃｌ：ＳＤ）３匹に対し、１匹１日あたり２２．４ｍＬの１０％(ｗ／ｗ)焙煎米糠抽出物水溶液（抽出物摂取量２．２４ｍＬ／日／匹）を摂取させて６週間飼育した。コントロールのラット３匹に対しては、１匹１日あたり２１．５ｍＬの水を摂取させて６週間飼育した。
【００８２】
各ラットから脳を摘出し、脳の重量の５倍量の超純水を加えてホモジナイズした。この溶液を１０００Ｇにて１０分間の遠心分離に供した。この上清（ＰＮＳ画分；核を除いた細胞成分を含む）にメタノールを加え、ＰＮＳ画分の１０％(ｖ／ｖ)溶液とし、この溶液を再度遠心分離（４０００ｐｐｍ；１５分間）に供した。この上清を孔径０．４５μｍのメンブレンフィルターで濾過し、濾液を測定試料とした。
【００８３】
測定試料をＨＰＬＣにて分析した。ＨＰＬＣ分析条件は以下のとおりである。移動相のグラジエント制御を表１に示す。焙煎米糠抽出物を摂取させたラットの結果を以下の表２に示す。
【００８４】
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：ＯＤＳ（平均粒径３．５μｍ、内径６ｍｍ×長さ１５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
検出：ＵＶ２６０ｎｍ
試料注入量：２０μＬ
流量：１ｍＬ／分
移動相：Ａ，０．１Ｍ−ＮａＣｌＯ４＋０．１％Ｈ３ＰＯ４；Ｂ，アセトニトリル
【００８５】
【表１】
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【００８６】
【表２】
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【００８７】
表２より明らかなように、焙煎米糠抽出物を６週間にわたり、毎日２．２４ｍＬ与えたラットの脳からは、経口投与した焙煎米糠抽出物に含まれる有効成分のキサントシン類が１．５ｐｐｍ〜２．５ｐｐｍの濃度で検出された。これは、キサントシン類が脳血管血流関門を通過したことを示す。なお、ＨＰＬＣクロマトグラムの比較より、焙煎米糠抽出物を摂取させたラットでは、キサントシン類を示すピークを確認することができたが、コントロールのラットでは、このようなピークを確認することができなかった。
【００８８】
図２より明らかなように、Ａβペプチド（１０μＭ）および塩化銅（１００μＭ）に、上記焙煎米糠抽出物を共存させない場合（図２のｂ）、ラット胎児脳海馬ニューロンは顕微鏡下でも著しい細胞死を示したが（白矢印を参照）、当該焙煎米糠抽出物を共存させると、ニューロンの生存率は殆ど低下せず、未処理コントロール（図２のａ）と変わらない程度に多くの生存ニューロン（白抜き△印を参照）を確認することができた。毒性の軽減効果が認められた(図２のｃ)。よって、キサントシン類を含有する焙煎植物抽出物が良好なアミロイドベータペプチド阻害作用を示すことを確認することができた。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明によれば、Ａβペプチドの神経細胞に対する毒性を阻害する作用を有し、脳血管血流関門を通過可能であって、かつ水に易溶性のアミロイドベータペプチド阻害剤を提供することができる。本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、例えば、医薬組成物の有効成分として医薬製造分野において有用である。さらに、本発明のアミロイドベータペプチド阻害剤は、サプリメントなど食品分野における素材としても有用である。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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