(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＸが請求項１で挙げた意味を有し、チロシンキナーゼ、特にＴＩＥ−２およびＲａｆ−キナーゼの阻害剤であり、腫瘍を治療するために使用することもできる化合物に関する。2008535874.tif 000013
2008535874.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物であって、
【化１】
2008535874.tif 000010
式中、
Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2を表し、
Ｒ1は、ＨまたはＡを表し、
Ｒ2、Ｒ3はそれぞれ互いに独立して、Ｈ、Ａ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＯＡまたはＣＮを表し、
Ｒ4は、ＡｒまたはＨｅｔ1を表し、
Ｒ5、Ｒ6はそれぞれ互いに独立して、ＨまたはＡを表し、
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、２個から６個のＣ原子を有するアルケニル、２個から６個のＣ原子を有するアルキニル、ＮＯ2、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＮ、ＣＨＯ、ＣＯＡ、フェニル、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔ、ＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＣｙｃ、ＮＨ（ＣＨ2）nＣｙｃ、Ｏ（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6、ＮＲ1（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6および／またはＯ（ＣＨ2）mＮＲ1（ＣＨ2）mＯＲ1によって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、Ｃ原子２個から６個を有するアルケニル、Ｃ原子２個から６個を有するアルキニル、ＮＯ2、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＮ、ＣＨＯ、ＣＯＡ、フェニル、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔ、ＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＣｙｃ、ＮＨ（ＣＨ2）nＣｙｃ、Ｏ（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6、ＮＲ1（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6および／またはＯ（ＣＨ2）mＮＲ1（ＣＨ2）mＯＲ1によって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から４個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する単環または二環芳香族複素環を表し、
Ｈｅｔは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、フェニル、ＣＯＯＡ、ＣＮおよび／またはカルボニル酸素（＝Ｏ）によって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から４個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する単環または二環飽和、不飽和または芳香族複素環を表し、
Ａは、さらに、１〜７個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよい、１個から１０個のＣ原子を有するアルキルを表し、
Ｃｙｃは、３個から７個のＣ原子を有するシクロアルキルを表し、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
ｎは、０、１、２、３または４を表し、
ｍは、１、２、３または４を表す化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項２】
Ｒ2、Ｒ3がＨを表す請求項１に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項３】
Ａｒが非置換であるか、または、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表す、請求項１または２に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項４】
Ｈｅｔ1が非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から３個のＮおよび／またはＯ原子を有する芳香族単環複素環を表す、請求項１から３の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項５】
Ｈｅｔが非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換または二置換されていてよい、１個から３個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する飽和、不飽和または芳香族の単環複素環を表す、請求項１から４の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項６】
Ｈｅｔが１個から３個のＮ原子を有する非置換の飽和または芳香族の単環複素環を表す、請求項１から５の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項７】
Ｈｅｔ1が、非置換であるか、または、Ｈａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよいピリジルまたはイソキサゾリルを表す、請求項１から６の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項８】
Ｈｅｔが、ピリジル、ピロリル、ピリミジニル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピロリジニルまたはピペリジニルを表す、請求項１から７の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項９】
Ａが、１個から６個のＣ原子を有し、さらに、１個から５個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキルを表す、請求項１から８の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項１０】
Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2を表し、
Ｒ1は、ＨまたはＡを表し、
Ｒ2、Ｒ3は、Ｈを表し、
Ｒ4は、ＡｒまたはＨｅｔ1を表し、
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から３個のＮおよび／またはＯ原子を有する芳香族単環複素環を表し、
Ｈｅｔは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換または二置換されていてよい、１個から３個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する飽和、不飽和または芳香族の単環複素環を表し、
Ａは、１個から６個のＣ原子を有し、さらに、１個から５個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキルを表し、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
ｎは、０、１または２を表す、請求項１から９の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項１１】
Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2を表し、
Ｒ1は、ＨまたはＡを表し、
Ｒ2、Ｒ3は、Ｈを表し、
Ｒ4は、ＡｒまたはＨｅｔ1を表し、
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよいピリジルまたはイソキサゾリルを表し、
Ｈｅｔは、１個から３個のＮ原子を有する非置換の飽和または芳香族の単環複素環を表し、
Ａは、１個から６個のＣ原子を有し、さらに、１個から５個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキルを表し、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
ｎは、０、１または２を表す、請求項１から１０の一項または複数項に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【請求項１２】
以下の群から選択された、請求項１に記載の化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物、塩、互変異性体および立体異性体およびそれらの全割合の混合物。
【表１】
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【請求項１３】
ａ）Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＸが請求項１で示した意味を有する式ＩＩの化合物
【化２】
2008535874.tif 000012
を、Ｒ4が請求項１で示した意味を有する式ＩＩＩの化合物
Ｒ4−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ          ＩＩＩ
と反応させるか、または
ｂ）式ＩＩの化合物を、Ｒ4が請求項１で示した意味を有する式ＩＶの化合物
Ｒ4−ＮＨ2          ＩＶ
およびクロロ炭酸エステルと反応させるか、または
ｃ）加溶媒分解剤または水素化分解剤で処理することによって従来のアミノ保護基を水素と置換するか、従来の保護基によって保護されたアミノ基を遊離することにより、加溶媒分解剤および／または水素化分解剤で処理することによって、その機能的誘導体の１つから遊離させるか、
および／または式Ｉの塩基または酸を塩のその塩の１つに変換させることを特徴とする、請求項１から１２に記載の式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に使用可能な誘導体、塩、溶媒和物、互変異性体および立体異性体の調製方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の式Ｉの化合物の少なくとも１種および／またはそれらの薬剤として有用な誘導体、塩、溶媒和物、互変異性体および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物、および場合によって賦形剤および／または補助剤を含む医薬品。
【請求項１５】
キナーゼシグナル伝達の阻害、調節および／またはモジュレーションが役割を果たす疾患の治療のための医薬品を調製するための、請求項１に記載の化合物、
およびそれらの薬剤として有用な誘導体、塩、溶媒和物、互変異性体および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物の使用。
【請求項１６】
前記キナーゼが、チロシンキナーゼおよびＲａｆキナーゼの群から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記チロシンキナーゼが、ＴＩＥ−２、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲおよび／またはＦＬＴ／ＫＤＲである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
請求項１に記載の化合物によって、チロシンキナーゼを阻害することによって影響を受ける疾患を治療するための医薬品を調製するための、請求項１に記載の化合物、およびそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物の請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
請求項１に記載の化合物によって、ＴＩＥ−２、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲおよび／またはＦＬＴ／ＫＤＲを阻害することによって影響を受ける疾患を治療するための医薬品を調製するための、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
治療する疾患が固形癌である、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記固形癌は、扁平上皮、膀胱、胃、腎臓、頭部および頚部、食道、子宮頚部、甲状腺、小腸、肝臓、脳、前立腺、尿生殖器、リンパ系、胃、喉頭および／または肺の腫瘍の群に由来する、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記固形癌は、単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、神経膠芽腫および乳癌由来である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
前記固形癌は、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、神経膠芽腫、結腸癌および乳癌の群に由来する、請求項２０に記載の使用。
【請求項２４】
治療する前記疾患が血液および免疫系の腫瘍である、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２５】
前記腫瘍が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病および／または慢性リンパ性白血病の群に由来する、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
血管形成が関与する疾患の治療のための、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２７】
前記疾患が眼疾患である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
網膜血管新生、糖尿病性網膜症、年齢誘発性黄斑変性および／または炎症性疾患の治療のための、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２９】
前記炎症性疾患が、関節リウマチ、乾癬、接触性皮膚炎、および遅延過敏型反応の群に由来する、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
骨肉腫、骨粗鬆症およびくる病の群に由来する、骨の病変の治療のための、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項３１】
式Ｉの化合物の治療有効量を群１）エストロゲン受容体調節因子、２）アンドロゲン受容体調節因子、３）レチノイド受容体調節因子、４）細胞毒性剤、５）抗増殖剤、６）プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、７）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、８）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、９）逆転写阻害剤および１０）他の血管形成阻害剤の群の化合物と併用して投与する、固形癌の治療のための医薬品を調製するための、請求項１に記載の式Ｉの化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用。
【請求項３２】
式Ｉの化合物の治療有効量を、放射線治療および１）エストロゲン受容体調節因子、２）アンドロゲン受容体調節因子、３）レチノイド受容体調節因子、４）細胞毒性剤、５）抗増殖剤、６）プレニルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、７）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、８）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、９）逆転写阻害剤および１０）他の血管形成阻害剤の群の化合物と併用して投与する、固形癌の治療のための医薬品を調製するための、請求項１に記載の式Ｉの化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用。
【請求項３３】
請求項１による化合物の治療有効量を増殖因子受容体阻害剤と併用して投与する、ＴＩＥ−２活性の妨害に基づく疾患の治療のための医薬品を調製するための、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項３４】
Ｒａｆキナーゼによって引き起こされるか、媒介されるか、および／または促進される疾患の治療のための医薬品を調製するための式Ｉの化合物の、請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項３５】
前記Ｒａｆキナーゼは、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲａｆおよびＲａｆ−１からなる群から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項３６】
前記疾患は、過剰増殖性および非過剰増殖性疾患の群から選択される、請求項３４に記載の使用。
【請求項３７】
前記疾患が癌である、請求項３４または３５に記載の使用。
【請求項３８】
前記疾患が非癌性である、請求項３４または３５に記載の使用。
【請求項３９】
前記非癌性疾患が、乾癬、関節炎、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患および免疫不全疾患からなる群から選択される、請求項３４、３５または３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記疾患が、脳癌、肺癌、扁平上皮細胞癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸癌、乳癌、頭部癌、頚部癌、食道癌、喉頭癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病および急性白血病からなる群から選択される、請求項３４、３５または３７の一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明の目的は、価値のある特性を有する新規化合物、特に、医薬品を調製するために使用することができる新規化合物を発見することである。
【０００２】
本発明は、化合物に、キナーゼシグナル伝達、特にチロシンキナーゼおよび／またはセリン／トレオニンキナーゼシグナル伝達の阻害、調節および／または調整が役割を果たす化合物の使用に、さらに、これらの化合物を含む医薬組成物に、およびキナーゼ誘発性疾患を治療するための化合物の使用に関する。
【０００３】
詳細には、本発明は、チロシンキナーゼシグナル伝達を阻害、調節および／または調整する式Ｉの化合物に、これらの化合物を含む組成物に、哺乳動物における血管形成、癌、腫瘍の形成、増殖および伝播、動脈硬化、加齢性黄斑変性、脈絡膜血管新生および糖尿病性網膜症などの眼疾患、炎症性疾患、関節炎、血栓症、線維症、糸球体腎炎、神経変性、乾癬、再狭窄、創傷治癒、移植拒絶、代謝、免疫系の疾患、さらに自己免疫疾患、硬変、糖尿病ならびに不安定性および透過性を含む血管の疾患などのチロシンキナーゼ誘発性疾患および状態を治療するためのその使用法に関する。
【０００４】
チロシンキナーゼは、少なくとも４００種のメンバーを伴う酵素の一群であり、これらは、アデノシン三リン酸（γ−リン酸）の末端リン酸基の、タンパク質中のチロシン残基への移動を触媒する。チロシンキナーゼは、基質リン酸化を介して、様々な細胞機能におけるシグナル伝達において決定的な役割を果たしていると考えられている。シグナル伝達の正確なメカニズムは、未だ不明であるが、チロシンキナーゼが、細胞増殖、発癌現象および細胞分化において重要な因子であることは判明している。
【背景技術】
【０００５】
チロシンキナーゼは、受容体チロシンキナーゼと非受容体チロシンキナーゼに分類することができる。受容体チロシンキナーゼが、細胞外部分、膜内外部分および細胞内部分を有する一方で、非受容体チロシンキナーゼは、もっぱら細胞内である（ＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒおよびＵｌｌｒｉｃｈによる総説、Ｎｅｕｒｏｎ  ９、３８３−３９１（１９９２）および１および２０（１９９２）参照）。
【０００６】
受容体チロシンキナーゼは、様々な生物学的活性を有する多数の膜内外受容体からなる。例えば、受容体チロシンキナーゼの約２０種の異なるサブファミリーが同定されている。ＨＥＲサブファミリーとして知られている１つのチロシンキナーゼサブファミリーは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４からなる。この受容体サブファミリーのリガンドには、上皮増殖因子、ＴＧＦ−α、アンフィレグリン、ＨＢ−ＥＧＦ、ベータセルリンおよびヘレグリンが含まれる。これらの受容体チロシンキナーゼの別のサブファミリーは、インスリンサブファミリーであり、これには、ＩＮＳ−Ｒ、ＩＧＦ−ＩＲおよびＩＲ−Ｒが含まれる。ＰＤＧＦサブファミリーには、ＰＤＧＦ−αおよび−β受容体、ＣＳＦＩＲ、ｃ−ｋｉｔならびにＦＬＫ−ＩＩが含まれる。加えて、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、胎児肝臓キナーゼ−１（ＦＬＫ−１）、胎児肝臓キナーゼ−４（ＦＬＫ−４）およびｆｍｓチロシンキナーゼ−１（ｆｌｔ−１）からなるＦＬＫファミリーがある。ＰＤＧＦおよびＦＬＫファミリーは、これら２つの群の類似性により通常は、一緒に論じられる。受容体チロシンキナーゼに関する詳細な検討に関しては、参照により本明細書に援用されるＰｌｏｗｍａｎらによる論文、ＤＮ＆Ｐ７（６）：３３４〜３３９、１９９４を参照されたい。
【０００７】
さらにＲＴＫ（受容体チロシンキナーゼ）は、ＴＩＥ２およびそのリガンドアンギオポイエチン１および２も含む。現在では、これらのリガンドのますます多くの同族体が発見されているが、これらの作用は未だ、詳細明確には証明されていない。ＴＩＥ１は、ＴＩＥ２の同族体として知られている。ＴＩＥ  ＲＴＫは、内皮細胞で選択的に発現され、血管新生および血管熟成のプロセスに関与している。したがってこれらは、特に血管系の疾患および血管が利用されるか、改質される病理において価値ある目的となり得る。血管形成および熟成の予防に加えて、血管形成の刺激も、活性成分のための価値のある目的になり得る。Ｇ．Ｂｒｅｉｅｒ  Ｐｌａｃｅｎｔａ（２０００）２１、Ｓｕｐｐｌ  Ａ、Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｒ  Ｒｅｓ  １４、Ｓ１１〜Ｓ１５、Ｆ．Ｂｕｓｓｏｌｉｎｏら、ＴＩＢＳ  ２２、２５１〜２５６（１９９７）、Ｇ．Ｂｅｒｇｅｒｓ  ＆  Ｌ．Ｅ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ３、４０１〜４１０（２００３）、Ｐ．Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  ＆  Ｈｕｎｔｅｒ  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１、３５５〜３６５（２００１）、Ｍ．Ｒａｍｓａｕｅｒ  ＆  Ｐ．Ｄ’Ａｍｏｒｅ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．ＩＮｖｅｓｔ．１１０、１６１５〜１６１７（２００２）、Ｓ．Ｔｓｉｇｋｏｓら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １２、９３３〜９４１（２００３）による血管新生、腫瘍発生およびキナーゼシグナル伝達に関する総説論文を参照することができる。
【０００８】
癌治療において既に試験されているキナーゼ阻害剤の例が、Ｌ．Ｋ．Ｓｈａｗｙｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １、１１７〜１２３（２００２）およびＤ．Ｆａｂｂｒｏ  ＆  Ｃ．Ｇａｒｃｉａ−Ｅｃｈｅｖｅｒｒｉａ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ５、７０１〜７１２（２００２）に示されている。
【０００９】
非受容体チロシンキナーゼも同様に、多数のサブファミリーからなり、Ｓｒｃ、Ｆｒｋ、Ｂｔｋ、Ｃｓｋ、Ａｂｌ、Ｚａｐ７０、Ｆｅｓ／Ｆｐｓ、Ｆａｋ、Ｊａｋ、ＡｃｋおよびＬＩＭＫが含まれる。これらのサブファミリーはそれぞれ、種々の受容体にさらに再分類される。例えば、Ｓｒｃサブファミリーは、最も大きなサブファミリーの１つである。これには、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、Ｂｌｋ、Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＹｒｋが含まれる。酵素のＳｒｃサブファミリーは、腫瘍形成と関連づけられている。非受容体チロシンキナーゼのより詳細な議論に関しては、参照により本明細書に援用されるＢｏｌｅｎによる論文、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、８：２０２５〜２０３１（１９９３）を参照。
【００１０】
受容体チロシンキナーゼおよび非受容体チロシンキナーゼは共に、癌、乾癬および過剰免疫応答が含まれる様々な病原的状態をもたらす細胞シグナル伝達経路に関与している。
【００１１】
様々な受容体チロシンキナーゼおよびそれに関連している増殖因子は、血管新生において役割を果たすが、いくつかは、血管新生を間接的に促進すると、提唱されている（ＭｕｓｔｏｎｅｎおよびＡｌｉｔａｌｏ、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２９：８９５〜８９８、１９９５）。これらの受容体チロシンキナーゼのうちの１種は、ＦＬＫ−１とも称される、胎児肝臓キナーゼ１である。ＦＬＫ−１のヒト類似体は、キナーゼ挿入ドメイン含有受容体ＫＤＲであり、これは高い親和性でＶＥＧＦに結合することから、血管内皮細胞増殖因子受容体２またはＶＥＧＦＲ−２としても知られている。最後に、マウス型のこの受容体もＮＹＫと称されている（Ｏｅｌｒｉｃｈｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８（１）：１１〜１５、１９９３）。ＶＥＧＦおよびＫＤＲは、血管内皮細胞の増殖ならびにそれぞれ血管形成および血管新生と称される血管の形成および発芽において重要な役割を果たすリガンド−受容体対である。
【００１２】
血管新生は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の過剰な活性を特徴とする。ＶＥＧＦは、実際に、リガンドのファミリーからなる（Ｋｌａｇｓｂｕｒｎ  ａｎｄ  Ｄ’Ａｍｏｒｅ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ７：２５９〜２７０、１９９６）。ＶＥＧＦは、高親和性膜貫通チロシンキナーゼ受容体ＫＤＲ、およびＦｌｔ−１または血管内皮細胞増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ−１）としても知られている関連ｆｍｓチロシンキナーゼ−１に結合する。細胞培養および遺伝子ノックアウト実験により、それぞれの受容体が血管新生の種々の局面に寄与することが示されている。ＫＤＲは、ＶＥＧＦのマイトジェン機能を媒介し、Ｆｌｔ−１は、細胞接着に関連する機能などの非マイトジェン機能を調整すると考えられる。したがって、ＫＤＲを阻害することによって、マイトジェンＶＥＧＦ活性レベルが調整される。実際、腫瘍増殖は、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニストの抗血管新生作用に影響を受けることが判明している（Ｋｉｍら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２、ｐｐ．８４１〜８４４、１９９３）。
【００１３】
ＶＥＧＦＲに関して３種のＰＴＫ（タンパク質チロシンキナーゼ）受容体が同定されている：ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）；ＶＥＧＲＦ−２（Ｆｌｋ−１またはＫＤＲ）およびＶＥＧＦＲ−３（Ｆｌｔ−４）。ＶＥＧＦＲ−２が特に重要である。
【００１４】
固形腫瘍は、増殖の支持に必要な血管の形成に関して血管新生に依存しているため、これらの腫瘍は、チロシンキナーゼ阻害剤で治療することができる。これらの固形腫瘍には、単球性白血病、脳、尿生殖路、リンパ系、胃、咽頭の癌ならびに肺腺癌および小細胞肺癌を含む肺の癌が含まれる。さらなる例には、Ｒａｆ活性化癌遺伝子（例えば、Ｋ−ｒａｓ、ｅｒｂ−Ｂ）の過剰発現または活性化が観察される癌腫が含まれる。これらの癌腫には、膵臓癌および乳癌が含まれる。したがって、これらのチロシンキナーゼの阻害剤は、これらの酵素に起因する増殖性疾患の予防および治療に適している。
【００１５】
ＶＥＧＦの血管新生活性は、腫瘍に限定されない。ＶＥＧＦは、糖尿病性網膜症において網膜または網膜近傍に生じる血管新生活性の原因となる。この網膜での血管増殖は、視力低下をもたらし、最後には失明に至る。眼ＶＥＧＦｍＲＮＡおよびタンパク質レベルは、霊長類での網膜静脈閉塞およびマウスでのｐＯ2レベルの低下などの状態によってさらに上昇し、このことが、新生血管形成をもたらす。抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体またはＶＥＧＦ受容体免疫融合体（ＶＥＧＦreceptor immunofusions)の眼内注射は、霊長類モデルおよび齧歯類モデルの両方で、眼の新生血管形成を阻害する。ヒト糖尿病性網膜症におけるＶＥＧＦの誘発の原因にかかわらず、眼ＶＥＧＦの阻害はこの疾患の治療に適している。
【００１６】
さらにＶＥＧＦの発現は、壊死部に隣接する動物およびヒト腫瘍の低酸素領域で著しく増加する。加えて、ＶＥＧＦは、癌遺伝子ｒａｓ、ｒａｆ、ｓｒｃおよびｐ５３変異型（いずれも癌の撲滅に重要である）の発現によってアップレギュレーションされる。抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体は、ヌードマウスにおいて、ヒト腫瘍の増殖を阻害する。同じ腫瘍細胞は培養においてＶＥＧＦを発現し続けるが、この抗体はその分裂速度を低減しない。そのため、腫瘍由来のＶＥＧＦは、自己分泌マイトジェン因子として機能しない。したがって、ＶＥＧＦは、そのパラクリン血管内皮細胞走化性およびマイトジェン活性を介して血管新生を促進することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍増殖に寄与する。さらに、これらのモノクローナル抗体は、無胸腺マウスで典型的に血管化が十分でないヒト結腸癌の増殖を阻害し、接種細胞から生じる腫瘍数を低減する。
【００１７】
細胞質チロシンキナーゼドメインを除去するが、膜アンカーを保持するように切断されたマウスＫＤＲ受容体相同体、Ｆｌｔ−１、Ｆｌｋ−１のＶＥＧＦ結合構築体のウイルスでの発現は、おそらくは膜貫通内皮細胞ＶＥＧＦ受容体とのヘテロダイマー形成の優性阻害機序によって、マウスにおいて移植性膠芽細胞腫の増殖を実質的に停止する。ヌードマウスにおいて通常は固形腫瘍として増殖する胚幹細胞は、両方のＶＥＧＦ対立遺伝子がノックアウトされている場合、検出可能な腫瘍を形成しない。総合すると、これらのデータは、固形腫瘍の増殖におけるＶＥＧＦの役割を示している。ＫＤＲまたはＦｌｔ−１の阻害は、病的血管新生に関与し、腫瘍増殖は血管新生に依存することが知られているため、これらの受容体は、血管新生が病理全体の一部である疾患、例えば炎症、糖尿病性網膜血管形成、ならびに種々の形態の癌の治療に適している（Ｗｅｉｄｎｅｒら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２４、ｐｐ．１〜８、１９９１）。
【００１８】
内皮特異的受容体チロシンキナーゼＴＩＥ−２のリガンドであるアンギオポイエチン１（Ａｎｇ−１）は、新規の血管新生因子である（Ｄａｖｉｓら、Ｃｅｌｌ、１９９６、８７：１１６１〜１１６９；Ｐａｒｔａｎｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１２：１６９８〜１７０７（１９９２）；米国特許第５５２１０７３号；第５８７９６７２号；第５８７７０２０号；および第６０３０８３１号）。頭字語ＴＩＥは、「ＩｇおよびＥＧＦ相同ドメインを有するチロシンキナーゼ」の略語である。ＴＩＥは、血管内皮細胞および初期造血細胞においてのみ発現する受容体チロシンキナーゼの一群を識別するために用いられる。ＴＩＥ受容体キナーゼは典型的に、ＥＧＦ様ドメインおよび鎖間のジスルフィド橋結合によって安定化した細胞外フォールドユニットからなる免疫グロブリン（ＩＧ）様ドメインの存在を特徴とする（Ｐａｒｔａｎｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９、２３７：１５９〜１７２）。血管発生の初期段階にその機能を発揮するＶＥＧＦとは対照的に、Ａｎｇ１およびその受容体ＴＩＥ−２は、血管発生の後期段階、すなわち血管転換（血管内腔の形成に関連する転換）および成熟中に作用する（Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓら、Ｃｅｌｌ、１９９８、９３：６６１〜６６４；Ｐｅｔｅｒｓ，Ｋ．Ｇ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，１９９８、８３（３）：３４２〜３；Ｓｕｒｉら、Ｃｅｌｌ  ８７、１１７１〜１１８０（１９９６））。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
したがって、ＴＩＥ−２の阻害は、血管新生によって開始される新しい血管系の転換および成熟を中断するはずであり、それにより血管新生のプロセスを中断するはずであることが予期される。さらに、ＶＥＧＦＲ−２のキナーゼドメイン結合部位における阻害は、チロシン残基のリン酸化を遮断し、血管新生の開始を阻止するために役立つであろう。したがって、ＴＩＥ−２および／またはＶＥＧＦＲ−２の阻害は腫瘍血管新生を妨げ、腫瘍増殖を遅延する、または完全に排除するために役立つはずであると仮定されなければならない。したがって、不適切な血管新生に関連する癌および他の疾患の治療を提供することができるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、ＴＩＥ−２活性の乱れまたは障害に関連する疾患を予防および／または治療するためにＴＩＥ−２を調節、調整または阻害する方法を対象とする。特に式Ｉの化合物は、一定の形態の癌の治療で用いることもできる。さらに、式Ｉの化合物は、一定の既存の癌化学療法において相加的または相乗的作用をもたらすために使用することもでき、かつ／または一定の既存の癌化学療法および放射線療法の効力を回復させるために用いることもできる。
【００２１】
さらに、式Ｉの化合物は、ＴＩＥ−２の活性または発現の単離および研究のために用いることができる。加えて、これらは特に、ＴＩＥ−２活性の乱れまたは障害に関連する疾患の診断方法で用いるのに適している。
【００２２】
さらに本発明は、ＶＥＧＦＲ−２活性の乱れまたは障害に関連する疾患を予防および／または治療するためにＶＥＧＦＲ−２を調節、調整または阻害する方法を対象とする。
【００２３】
さらに本発明は、Ｒａｆキナーゼの阻害剤としての式Ｉの化合物に関する。
【００２４】
タンパク質リン酸化は、細胞機能を調節するための基礎的なプロセスである。タンパク質キナーゼおよびホスファターゼの協調作用は、リン酸化の程度を制御し、したがって、特定の標的タンパク質の活性を制御する。タンパク質リン酸化の主たる役割の１つはシグナル伝達にあり、ここで細胞外シグナルは、例えばｐ２１ras／ｒａｆ経路において、タンパク質リン酸化および脱リン酸化事象のカスケードによって増幅および伝播される。
【００２５】
ｐ２１ras遺伝子は、ハーベイ（Ｈａｒｖｅｙ）（Ｈ−Ｒａｓ）およびカーステン（Ｋｉｒｓｔｅｎ）（Ｋ−Ｒａｓ）ラット肉腫ウイルスの癌遺伝子として発見された。ヒトでは、細胞Ｒａｓ遺伝子（ｃ−Ｒａｓ）の特徴的な突然変異は、多くの様々な型の癌と関連づけられている。Ｒａｓを構成的に活性化するこれらの突然変異対立遺伝子は、培養において、例えばマウス細胞系ＮＩＨ３Ｔ３などの細胞を形質転換することが示されている。
【００２６】
ｐ２１ras癌遺伝子は、ヒト固形癌腫の発生および進行の重要な要因であり、すべてのヒト癌腫の３０％で突然変異している（Ｂｏｌｔｏｎら、（１９９４）Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９、１６５〜７４；Ｂｏｓ．（１９８９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４９、４６８２〜９）。その正常な非変異型では、Ｒａｓタンパク質は、ほぼすべての組織において、増殖因子受容体が対象とするシグナル伝達カスケードの主要な要素である（Ａｖｒｕｃｈら、（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．、１９、２７９〜８３）。
【００２７】
生化学的には、Ｒａｓは、グアニンヌクレオチド結合タンパク質であり、ＧＴＰ結合活性化型とＧＤＰ結合静止型とのサイクリングは、Ｒａｓ内因性ＧＴＰアーゼ活性および他の調節タンパク質によって厳密に制御される。Ｒａｓ遺伝子産物は、グアニン三リン酸（ＧＴＰ）およびグアニン二リン酸（ＧＤＰ）に結合し、ＧＴＰをＧＤＰに加水分解する。Ｒａｓは、ＧＴＰ結合状態で活性である。癌細胞のＲａｓ突然変異体において、内因性ＧＴＰアーゼ活性は低下し、その結果として、タンパク質は、例えば酵素Ｒａｆキナーゼなどの下流エフェクターに構成的増殖シグナルを伝達する。このことが、これらの突然変異体を有する細胞の癌増殖をもたらす（Ｍａｇｎｕｓｏｎら、（１９９４）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．、５、２４７〜５３）。Ｒａｓ癌原遺伝子は、高等真核生物において受容体および非受容体チロシンキナーゼによって開始される増殖および分化シグナルを伝達するために、機能的に無傷のＣ−Ｒａｆ−１癌原遺伝子を必要とする。
【００２８】
活性化Ｒａｓは、Ｃ−Ｒａｆ−１癌原遺伝子の活性化に必要であるが、それによりＲａｓがＲａｆ−１タンパク質（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）キナーゼを活性化する生化学的段階は、今では十分に特徴が明らかにされている。Ｒａｆキナーゼに対する非活性化抗体を投与してＲａｆキナーゼシグナル経路を阻害することによって、あるいは優性阻害ＲａｆキナーゼまたはＲａｆキナーゼの基質である優性阻害ＭＥＫ（ＭＡＰＫＫ）の共発現によって活性Ｒａｓの作用を阻害することにより、形質転換細胞の正常な増殖表現型への返転がもたらされることが示されている（Ｄａｕｍら、（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９、４７４〜８０；Ｆｒｉｄｍａｎら．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９、３０１０５〜８；Ｋｏｌｃｈら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ、３４９、４２６〜２８および総説でＷｅｉｎｓｔｅｉｎ−Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒら、Ｐｈａｒｍ．＆  Ｔｈｅｒａｐ．（２０００）８８、２２９〜２７９参照）。
【００２９】
同様に、Ｒａｆキナーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドによる）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで様々なヒト腫瘍型の増殖の阻害と関連している（Ｍｏｎｉａら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６、２、６６８〜７５）。
【００３０】
Ｒａｆ−セリンおよびトレオニン特異的タンパク質キナーゼは、種々の細胞系において細胞増殖を刺激するサイトソル酵素である（Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．ら、（１９８８）、Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｔ．Ｃｕｒｒａｎ、Ｅ．Ｐ．Ｒｅｄｄｙ  ａｎｄ  Ａ．Ｓｋａｌｋａ（ｅｄｓ．）、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、ｐｐ２１３〜２５３；Ｒａｐｐ，Ｕ．Ｒ．ら、（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５３：１７３〜１８４；Ｒａｐｐ、Ｕ．Ｒ．ら、（１９９０）Ｉｎｖ  Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ＰｏｔｔｅｒおよびＭｅｌｃｈｅｒｓ（ｅｄｓ．）、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  １６６：１２９〜１３９）。
【００３１】
３種のアイソザイムが同定されている。
【００３２】
Ｃ−Ｒａｆ（Ｒａｆ−１）（Ｂｏｎｎｅｒ  Ｔ．Ｉ．ら、（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：１００９〜１０１５）。Ａ−Ｒａｆ（Ｂｅｃｋ  Ｔ．Ｗ．ら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：５９５〜６０９）およびＢ−Ｒａｆ（Ｑｋａｗａ，Ｓ．ら、（１９９８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２６５１〜２６５４；Ｓｉｔｈａｎａｎｄａｍ  Ｇ．ら、（１９９０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ：１７７５）。これらの酵素は、様々な組織での発現に差がある。Ｒａｆ−１は、研究されたすべての器官およびすべての細胞系で発現し、Ａ−ＲａｆおよびＢ−Ｒａｆは、それぞれ尿生殖組織および脳組織で発現する（Ｓｔｏｒｍ  Ｓ．Ｍ．（１９９０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ５：３４５〜３５１）。
【００３３】
Ｒａｆ遺伝子は、癌原遺伝子である。これらは、特に改変形態で発現されると、細胞の悪性形質転換を開始し得る。発癌活性化をもたらす遺伝子変化は、タンパク質のＮ末端阻害調節ドメインを除去または妨げることによって、構成的活性タンパク質キナーゼを生じる（Ｈｅｉｄｅｃｋｅｒ  Ｇ．ら、（１９９０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：２５０３〜２５１２；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．ら、（１９８７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ；Ｓ．Ａ．Ａａｒｏｎｓｏｎｍ、Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ、Ｔ．Ｓｕｇｉｍｕｒａ、Ｍ．Ｔｅｒａｄａ、Ｋ．Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ、およびＰ．Ｋ．Ｖｏｇｔ（ｅｄｓ．）、Ｊａｐａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｋｙｏ）。発癌的に活性化されているが、野生型ではない、大腸菌発現ベクターを用いて調製されたＲａｆタンパク質型のＮＩＨ３Ｔ３細胞へのマイクロインジェクションは、形態変換をもたらし、ＤＮＡ合成を促進する（Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．ら、（１９８７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ；Ｓ．Ａ．Ａａｒｏｎｓｏｎ、Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ、Ｔ．Ｓｕｇｉｍｕｒａ、Ｍ．Ｔｅｒａｄａ、Ｋ．ＴｏｙｏｓｈｉｍａおよびＰ．Ｋ．Ｖｏｇｔ（ｅｄｓ．）、Ｊａｐａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｋｙｏ；Ｓｍｉｔｈ  Ｍ．Ｒ．ら、（１９９０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：３８２８〜３８３３）。
【００３４】
したがって、活性化Ｒａｆ−１は、細胞増殖の細胞内活性化因子である。Ｒａｆ癌遺伝子は、細胞突然変異（Ｒａｓ復帰突然変異細胞）または抗Ｒａｓ抗体のマイクロインジェクションによる細胞Ｒａｓ活性の遮断に起因する増殖停止に打ち勝つため、Ｒａｆ−１タンパク質セリンキナーゼは、マイトジェンシグナル伝達の下流エフェクターの候補である（Ｒａｐｐ、Ｕ．Ｒ．ら、（１９８８）Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｔ．Ｃｕｒｒａｎ、Ｅ．Ｐ．ＲｅｄｄｙおよびＡ．Ｓｋａｌｋａ（ｅｄｓ．）、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、ｐｐ．２１３〜２５３；Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｒ．ら、（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３２０：５４０〜５４３）。
【００３５】
Ｃ−Ｒａｆ機能は、様々な膜結合型癌遺伝子による形質転換および血清に含有されるマイトジェンによる増殖刺激に必要とされる（Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｒ．ら、（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３２０：５４０〜５４３）。Ｒａｆ−１タンパク質セリンキナーゼ活性は、リン酸化を介してマイトジェンによって調節され（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｄ．Ｋ．ら、（１９８９）Ｃｅｌｌ  ５８：６４８〜６５７）、これはさらに細胞内分布をもたらす（Ｏｌａｈ  Ｚ．ら、（１９９１）Ｅｘｐ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．８４：４０３；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．ら、（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５３：１７３〜１８４）。Ｒａｆ−１活性化増殖因子には、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｄ．Ｋ．ら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８８５５〜８８５９）、コロニー刺激因子（Ｂａｃｃａｒｉｎｉ  Ｍ．ら、（１９９０）ＥＭＢＯ  Ｊ．９：３６４９〜３６５７）、インスリン（Ｂｌａｃｋｓｈｅａｒ  Ｐ．Ｊ．ら、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１１５〜１２１１８）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｒ．Ｋ．ら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８８５５〜８８５９）、インターロイキン−２（Ｔｕｒｎｅｒ  Ｂ．Ｃ．ら、（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１２２７）、およびインターロイキン−３ならびに顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｃａｒｒｏｌｌ  Ｍ．Ｐ．ら、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１９８１２〜１９８１７）が含まれる。
【００３６】
細胞のマイトジェン処理後、一過性に活性化されたＲａｆ−１タンパク質セリンキナーゼは、核周囲領域および核に転移する（Ｏｌａｈ，Ｚら、（１９９１）Ｅｘｐ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．８４：４０３；Ｒａｐｐ  Ｕ．Ｒ．ら、（１９８８）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｂｏｒ  Ｓｙｍ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５３：１７３〜１８４）。活性化Ｒａｆを含有する細胞は、遺伝子発現パターンが変わり（Ｈｅｉｄｅｃｋｅｒ  Ｇ．ら、（１９８９）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｓｔａｇｅ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、Ｎ．Ｃｏｌｂｕｒｎ（ｅｄｓ．）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．３３９〜３７４）、Ｒａｆ癌遺伝子は、一過性トランスフェクションアッセイにおいて、Ａｐ−１／ＰＥＡ３依存性プロモーターからの転写を活性化する（Ｊａｍａｌ  Ｓ．ら、（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４：４６３〜４６６；Ｋａｉｂｕｃｈｉ  Ｋ．ら、（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２０８５５〜２０８５８；Ｗａｓｙｌｙｋ  Ｃ．ら、（１９８９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２２４７〜２２５０）。
【００３７】
細胞外マイトジェンによるＲａｆ−１活性化には少なくとも２つの独立した経路がある。第１は、タンパク質キナーゼＣ（ＫＣ）を伴い、第２は、タンパク質チロシンキナーゼによって開始される（Ｂｌａｃｋｓｈｅａｒ  Ｐ．Ｊ．ら、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１３１〜１２１３４；Ｋｏｖａｃｉｎａ  Ｋ．Ｓ．ら、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１１５〜１２１１８；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  Ｄ．Ｋ．ら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８８５５〜８８５９；Ｓｉｅｇｅｌ  Ｊ．Ｎ．ら、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１８４７２〜１８４８０；Ｔｕｒｎｅｒ，Ｂ．Ｃ．ら、（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１２２７）。いずれの場合にも、活性化は、Ｒａｆ−１タンパク質リン酸化を伴う。Ｒａｆ−１リン酸化は、自己リン酸化によって増幅されたキナーゼカスケードの結果であるか、またはジアシルグリセロールによるＰＫＣ活性化に類似した、潜在的活性化リガンドとＲａｆ−１調節ドメインとの結合によって開始された自己リン酸化がもっぱらの原因である可能性がある（Ｎｉｓｈｉｚｕｋａ  Ｙ．（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３：３０５〜３１２）。
【００３８】
細胞調節が達成される主要な機序の１つは、膜を通過する細胞外シグナルの伝達、それに続く細胞内の生化学的経路の調整によるものである。タンパク質リン酸化は、細胞内シグナルが分子から分子に伝播され、最終的に細胞応答を引き起こす一過程である。これらのシグナル伝達カスケードは、高度に調節されており、多くのタンパク質キナーゼおよびタンパク質ホスファターゼの存在からわかるように、多くの場合重複している。タンパク質のリン酸化は、主としてセリン、トレオニン、またはチロシン残基で起こり、したがって、タンパク質キナーゼは、それらのリン酸化部位の特異性によって、すなわちセリン／トレオニンキナーゼ、およびチロシンキナーゼに分類されている。リン酸化は細胞内の非常に偏在的なプロセスであり、細胞表現型はこれらの経路の活性に大いに影響を受けるため、多数の疾病状態および／または疾患は、キナーゼカスケードの分子成分における異常活性化または機能的突然変異に起因すると現在考えられている。したがって、これらのタンパク質、およびそれらの活性を調整することのできる化合物を同定することに、かなりの注目が向けられている（総説に関してはＷｅｉｎｓｔｅｉｎ−Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒら、Ｐｈａｒｍａ．＆  Ｔｈｅｒａｐ．２０００、８８、２２９〜２７９参照）。
【００３９】
したがって、チロシンキナーゼおよび／またはＲａｆキナーゼのシグナル伝達を特異的に阻害、調節および／または調整する小化合物の合成が望ましく、本発明の目的である。
【００４０】
本発明による化合物およびそれらの塩は、十分に耐性でありながら、非常に有用な薬理学的特性を有することが見出された。
【００４１】
特にこれらは、チロシンキナーゼ阻害特性を示す。
【００４２】
さらに、本発明による化合物は、酵素Ｒａｆキナーゼの阻害剤であることが見出された。この酵素は、ｐ２１rasの下流エフェクターであるため、この阻害剤は、例えばＲａｆキナーゼに媒介される腫瘍および／または癌細胞増殖の治療において、Ｒａｆキナーゼ経路の阻害が指示されているヒトまたは動物薬で用いるための薬剤組成物に適していることがわかる。特に、ヒトおよび動物固形癌、例えばマウス癌の進行は、これらの癌の進行がＲａｓタンパク質シグナル伝達カスケードに依存しており、したがってカスケードの中断、すなわちＲａｆキナーゼの阻害による治療に感受性であるため、これらの化合物は、これらの癌の治療に適している。したがって、本発明による化合物または薬学的に許容できるその塩は、Ｒａｆキナーゼ経路に媒介される疾患、特に固形癌を含む癌、例えば癌腫（例えば、肺、膵臓、甲状腺、膀胱または結腸）、骨髄疾患（例えば、骨髄性白血病）または腺腫（例えば、絨毛状結腸腺腫）、病的血管新生および転移性細胞遊走を治療するために投与される。これらの化合物はさらに、補体活性化依存性慢性炎症（Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕら、（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２４：１９１〜１９９）およびＨＩＶ−１（ヒト免疫不全ウイルス１型）誘発性免疫不全（Ｐｏｐｉｋら、（１９９８）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７２：６４０６〜６４１３）の治療に適している。
【００４３】
本発明による化合物は、シグナル経路、特に本願明細書に記載のシグナル経路、好ましくはＲａｆキナーゼシグナル経路と相互作用し得ることが意外にも判明した。本発明による化合物は好ましくは、酵素に基づくアッセイ、例えば本願明細書に記載の酵素アッセイにおいて容易に証明され得る有利な生物活性を示す。そのような酵素に基づくアッセイにおいて、本発明による化合物は好ましくは、通常は適切な範囲、好ましくはマイクロモル範囲、さらに好ましくはナノモル範囲のＩＣ50値によって示される阻害作用を示し、そのような作用をもたらす。
【００４４】
本願明細書で検討されているように、これらのシグナル経路は、様々な疾患に関与している。したがって、本発明による化合物は、前記のシグナル経路のうちの１つまたは複数と相互作用することにより、前記のシグナル経路に依存している疾患を予防および／または治療するために適している。
【００４５】
したがって本発明は、本明細書に記載のシグナル経路の促進剤または阻害剤、好ましくは阻害剤としての本発明による化合物に関する。したがって本発明は好ましくは、Ｒａｆキナーゼ経路の促進剤または阻害剤、好ましくは阻害剤としての本発明による化合物に関する。したがって本発明は好ましくは、Ｒａｆキナーゼの促進剤または阻害剤、好ましくは阻害剤としての本発明による化合物に関する。本発明はさらに一層好ましくは、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲａｆおよびＣ−Ｒａｆ−１からなる群から選択される１種または複数のＲａｆキナーゼの促進剤または阻害剤としての、好ましくは阻害剤としての本発明による化合物に関する。本発明は特に好ましくは、Ｃ−Ｒａｆ−１の促進剤または阻害剤としての、好ましくは阻害剤としての本発明による化合物に関する。
【００４６】
本発明はさらに、Ｒａｆキナーゼにより誘発、媒介および／または伝播される疾患、好ましくは本願明細書に記載の疾患、特にＡ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲａｆおよびＣ−Ｒａｆ−１からなる群から選択されるＲａｆキナーゼにより誘発、媒介および／または伝播される疾患の治療および／または予防における本発明による１種または複数の化合物の使用に関する。本願明細書で検討される疾患は通常、２つの群、過剰増殖性疾患および非過剰増殖性疾患に分類される。これに関して、乾癬、関節炎、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患および免疫不全疾患は、非癌性疾患とみなされ、そのうち、関節炎、炎症、免疫疾患、自己免疫疾患および免疫不全疾患は、通常、非過剰増殖性疾患とみなされる。これに関して、脳腫瘍、肺癌、扁平上皮癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸直腸癌、乳癌、頭部癌、頚部癌、食道癌、婦人科癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病および急性白血病は、癌性疾患とみなされ、そのすべてが通常、過剰増殖性疾患とみなされる。特に癌細胞増殖、特にＲａｆキナーゼに媒介される癌細胞増殖は、本発明の標的となる疾患である。したがって本発明は、前記疾患を治療および／または予防する医薬品および／または医薬品活性成分としての本発明による化合物に、前記の疾患を治療および／または予防するための薬剤を調製するための本発明による化合物の使用に、さらに、そのような投与を必要としている患者に本発明による１種または複数の化合物を投与することを含む、前記疾患を治療するための方法に関する。
【００４７】
本発明による化合物は、異種移植腫瘍モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗増殖作用を有することを示すことができる。本発明による化合物は、例えば腫瘍増殖を阻害する、リンパ増殖性疾患に伴う炎症を緩和する、移植拒絶または組織修復による神経障害を阻害するなどのために、過剰増殖性疾患を有する患者に投与される。本発明の化合物は、予防または治療目的に適している。本明細書では、「治療」という用語は、疾患の予防および既存状態の治療の両方を指すために用いられる。増殖の予防は、例えば腫瘍の増殖を防ぐ、転移増殖を防ぐ、心臓血管手術に伴う再狭窄を減じるなどのために、顕性疾患の発症に先立って本発明による化合物を投与することによって達成される。あるいは、化合物は、患者の臨床症状を安定または改善することによって、進行中の疾患を治療するために用いられる。
【００４８】
宿主および患者は、任意の哺乳動物種、例えば霊長類種、特にヒト；マウス、ラット、およびハムスターを含む齧歯動物；ウサギ；ウマ、ウシ、イヌ、ネコなどに属することができる。動物モデルは、実験的研究に重要であり、ヒトの疾患治療のモデルを提供する。
【００４９】
本発明による化合物での治療に対する特定の細胞の感受性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験によって判定することができる。典型的に、細胞の培養を、活性剤が細胞死を誘発するか、遊走を阻害するのに十分な期間、通常は約１時間から１週間、様々な濃度の本発明による化合物と組み合わせる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、生検試料由来の培養細胞を用いて行うことができる。その後、処置後に残存する生存細胞をカウントする。
【００５０】
用量は、用いられる特定の化合物、特定の疾患、患者の状態などに応じて異なる。治療用量は典型的には、患者の生存性を維持しながら、標的組織において望ましくない細胞集団を大幅に減少するのに十分な量である。治療は一般的に、大幅な低減が生じるまで、例えば細胞負荷において少なくとも約５０％の低減まで継続され、望ましくない細胞が体内で本質的に検出されなくなるまで継続することができる。
【００５１】
シグナル伝達経路を同定し、様々なシグナル伝達経路の相互作用を検出するために、様々な科学者が、適切なモデルまたはモデル系、例えば細胞培養モデル（例えば、Ｋｈｗａｊａら、ＥＭＢＯ、１９９７、１６、２７８３〜９３）および形質転換動物モデル（例えばＷｈｉｔｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２００１、２０、７０６４〜７０７２）を開発している。シグナル伝達カスケードでの一定の段階の決定に関して、シグナルを調節するために、相互作用化合物を利用することができる（例えばＳｔｅｐｈｅｎｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊ．、２０００、３５１、９５〜１０５）。さらに本発明による化合物を、動物および／または細胞培養モデルまたは本願明細書で挙げられている臨床疾患におけるキナーゼ依存性シグナル伝達経路を試験するための試薬として使用することができる。
【００５２】
キナーゼ活性の測定は、当業者にはよく知られている技術である。基質、例えば、ヒストン（例えばＡｌｅｓｓｉら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．１９９６、３９９、３、ｐ．３３３〜３３８）または塩基性ミエリンタンパク質を使用してキナーゼ活性を決定するための一般的な試験系は、文献に記載されている（例えばＣａｍｐｏｓ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｒ．ａｎｄ  Ｇｌｅｎｎｅｙ，Ｊｒ．，Ｊ．Ｒ．１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７、ｐ．１４５３５）。
【００５３】
キナーゼ阻害剤を同定するために、種々のアッセイ系が利用可能である。シンチレーション近接アッセイ（Ｓｏｒｇら、Ｊ．ｏｆ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、２００２、７、１１〜１９）およびフラッシュプレートアッセイでは、γＡＴＰを用いて基質としてのタンパク質またはペプチドの放射性リン酸化を測定する。阻害化合物の存在下では、検出される放射性シグナルが低減するか、まったく検出されない。さらに、ホモジニアス時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＨＴＲ−ＦＲＥＴ）、および蛍光偏光（ＦＰ）技法は、アッセイ法として適している（Ｓｉｌｌｓら、Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、２００２、１９１〜２１４）。
【００５４】
他の非放射性ＥＬＩＳＡアッセイ法は、特定のホスホ−抗体（ホスホ−ＡＢ）を用いる。このホスホ−ＡＢは、リン酸化基質にのみ結合する。この結合は、二次ペルオキシダーゼ複合抗ヒツジ抗体を用いて、化学発光によって検出することができる（Ｒｏｓｓら、２００２、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、まもなく発行、原稿ＢＪ２００２０７８６）。
【００５５】
細胞増殖の脱制御および細胞死（アポトーシス）に関連する多くの疾患がある。しかしながら、該当する状態には、これに限定されるものではないが、以下の状態が含まれる。本発明による化合物は、平滑筋細胞および／または炎症細胞の脈管の内膜層への増殖および／または遊走があり、例えば新生内膜閉塞病変の場合など、脈管の血流が制限される様々な状態の治療に適している。該当する閉塞性移植血管疾患には、アテローム性動脈硬化症、移植後の冠血管疾患、静脈移植血管狭窄、吻合周囲プロテーゼ再狭窄、血管形成またはステント留置術後の再狭窄などが含まれる。
【００５６】
本発明による化合物はさらに、ｐ３８キナーゼ阻害剤として適している。
【００５７】
ｐ３８キナーゼを阻害する複素アリール尿素は、国際公開第０２／８５８５９号パンフレット、ＷＯ０２／８５８５７パンフレットおよびＷＯ９９／３２１１１号パンフレットに記載されている。
【００５８】
先行技術
その他の複素環式尿素誘導体は、ＷＯ２００３／６８２２８によって公知である。その他のジアリール尿素は、ＷＯ００／４２０１２、ＷＯ０２／０６２７６３およびＷＯ０２／４４１５６に記載されている。
【００５９】
発明の概要
本発明は、式Ｉの化合物であって、
【００６０】
【化１】
2008535874.tif 000003
【００６１】
式中、
Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2を表し、
Ｒ1は、ＨまたはＡを表し、
Ｒ2、Ｒ3はそれぞれ互いに独立して、Ｈ、Ａ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＯＡまたはＣＮを表し、
Ｒ4は、ＡｒまたはＨｅｔ1を表し、
Ｒ5、Ｒ6はそれぞれ互いに独立して、ＨまたはＡを表し、
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、２個から６個のＣ原子を有するアルケニル、２個から６個のＣ原子を有するアルキニル、ＮＯ2、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＮ、ＣＨＯ、ＣＯＡ、フェニル、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔ、ＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＣｙｃ、ＮＨ（ＣＨ2）nＣｙｃ、Ｏ（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6、ＮＲ1（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6および／またはＯ（ＣＨ2）mＮＲ1（ＣＨ2）mＯＲ1によって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、２個から６個のＣ原子を有するアルケニル、２個から６個のＣ原子を有するアルキニル、ＮＯ2、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＡ、ＣＮ、ＣＨＯ、ＣＯＡ、フェニル、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔ、ＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＣｙｃ、ＮＨ（ＣＨ2）nＣｙｃ、Ｏ（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6、ＮＲ1（ＣＨ2）mＮＲ5Ｒ6および／またはＯ（ＣＨ2）mＮＲ1（ＣＨ2）mＯＲ1によって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から４個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する単環または二環芳香族複素環を表し、
Ｈｅｔは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、フェニル、ＣＯＯＡ、ＣＮおよび／またはカルボニル酸素（＝Ｏ）によって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から４個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する単環または二環の飽和、不飽和または芳香族の複素環を表し、
Ａは、１個から１０個のＣ原子を有し、さらに、１個から７個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキルを表し、
Ｃｙｃは、３個から７個のＣ原子を有するシクロアルキルを表し、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
ｎは、０、１、２、３または４を表し、
ｍは、１、２、３または４を表す化合物、
およびそれらの薬学的に有用な誘導体、溶媒和物(solvate)、塩、互変異性体(tautomer)および立体異性体に関し、それらの全割合の混合物を含む。
【００６２】
本発明はまた、これらの化合物の光学活性型（立体異性体）、鏡像異性体、ラセミ体、ジアステレオマーならびに水和物および溶媒和物に関する。化合物の溶媒和物とは、相互引力によって生じる不活性溶媒分子のその化合物上への付加を意味するとされている。溶媒和物は、例えば、一もしくは二水和物またはアルコラートである。
【００６３】
式Ｉはまた、互変異性体化合物、例えば、式ＩａまたはＩｂの互変異性体化合物を包含する。
【００６４】
【化２】
2008535874.tif 000004
【００６５】
薬学的に有用な誘導体とは、例えば、本発明による化合物の塩、さらにはいわゆるプロドラッグ化合物を意味するものとされている。プロドラッグ誘導体は、例えば、アルキルもしくはアシル基、糖もしくはオリゴペプチドで修飾され、生体中で迅速に切断されて本発明による活性化合物を形成する式Ｉの化合物を意味するものとされている。これらは、例えば、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１１５、６１〜６７（１９９５）に記載と同じように、本発明による化合物の重合体であって、生分解性の高分子誘導体も本発明は含む。
【００６６】
「有効量」という表現は、例えば、研究者または医師が組織、系、動物またはヒトで要求するか、または所望する生物学的または医学的応答を引き起こす医薬品または薬学的に活性のある成分の量を意味する。さらに、「治療有効量」という表現は、この量を投与されなかった対応する対象と比較して、以下の結果、すなわち、疾患、症候群、症状、病訴、障害または副作用の改善された治療、治癒、予防または排除、あるいは、疾患、病訴または障害の進行の低下をももたらす量を意味する。「治療有効量」という表現はまた、正常な生理学的機能の増強に有効な量を包含する。
【００６７】
本発明はまた、式Ｉの化合物の混合物の使用、例えば、２種のジアステレオマーの、例えば、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：１００または１：１０００の比の混合物の使用に関する。これらは、立体異性体化合物の混合物が特に好ましい。
【００６８】
本発明は、式Ｉの化合物およびそれらの塩、ならびに請求項１〜１０による式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に有用な誘導体、塩、溶媒和物、互変異性体および立体異性体の調製方法に関し、
ａ）Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＸが請求項１で示した意味を有する式ＩＩの化合物
【００６９】
【化３】
2008535874.tif 000005
【００７０】
を、Ｒ4が請求項１で示した意味を有する式ＩＩＩの化合物
Ｒ4−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ          ＩＩＩ
と反応させるか、または
ｂ）式ＩＩの化合物を、Ｒ4が請求項１で示した意味を有する式ＩＶ
の化合物
Ｒ4−ＮＨ2          ＩＶ
およびクロロ炭酸エステルと反応させるか、または
ｃ）加溶媒分解剤（solvolysing agent)または水素化分解剤(hydrogenolysing agent)で処理することによって従来のアミノ保護基を水素と置換するか、従来の保護基によって保護されたアミノ基を遊離することにより、加溶媒分解剤および／または水素化分解剤による処理によってその機能的誘導体の１つから遊離させるか、
および／または、式Ｉの塩基または酸をその塩の１つに変換することを特徴とする方法に関する。
【００７１】
上記および下記において、基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＸは、特に他に指示がなければ、式Ｉで指示した意味を有する。
【００７２】
Ａは、アルキルを表し、非分岐（直鎖）または分岐であり、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のＣ原子を有する。Ａは、好ましくは、メチル、さらに、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル、さらにまた、ペンチル、１−、２−または３−メチルブチル、１，１−、１，２−または２，２−ジメチルプロピル、１−エチル−プロピル、ヘキシル、１−、２−、３−または４−メチルペンチル、１，１−、１，２−、１，３−、２，２−、２，３−または３，３−ジメチルブチル、１−または２−エチルブチル、１−エチル−１−メチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−または１，２，２−トリメチルプロピル、さらに好ましくは、例えば、トリフルオロメチルを表す。
【００７３】
Ａは、特に好ましくは、１、２、３、４、５または６個のＣ原子を有するアルキル、好ましくは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルまたは１，１，１−トリフルオロエチルを表す。
【００７４】
シクロアルキルは、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルを表す。
【００７５】
Ｒ2およびＲ3は、好ましくはＨを表す。
【００７６】
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表すことが好ましい。
【００７７】
したがって、Ａｒは、例えば、フェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−フルオロフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−クロロフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−メチルフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−エチルフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−イソプロピルフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−トリフルオロメチルフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−メトキシフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−トリフルオロメトキシフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−ヒドロキシフェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−（トリアゾール−１−イル）フェニル、ｏ−、ｍ−またはｐ−（ピロリジン−３−イルオキシ）フェニル、２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル、３−トリフルオロメチル−４−（トリアゾール−１−イル）フェニル、３−トリフルオロメチル−６−（トリアゾール−１−イル）フェニル、３−トリフルオロメチル−６−（ピロリジン−３−イル−オキシ）フェニルまたは３−トリフルオロメチル−４−（ピロリジン−３−イルオキシ）フェニルを表す。
【００７８】
他の置換に関係なく、Ｈｅｔ1は、例えば、２−または３−フリル、２−または３−チエニル、１−、２−または３−ピロリル、１−、２，４−または５−イミダゾリル、１−、３−、４−または５−ピラゾリル、２−、４−または５−オキサゾリル、３−、４−または５−イソオキサゾリル、２−、４−または５−チアゾリル、３−、４−または５−イソチアゾリル、２−、３−または４−ピリジル、２−、４−、５−または６−ピリミジニルを表し、さらに好ましくは、１，２，３−トリアゾール−１−、−４−または−５−イル、１，２，４−トリアゾール−１−、−３−または５−イル、１−または５−テトラゾリル、１，２，３−オキサジアゾール−４−または−５−イル、１，２，４−オキサジアゾール−３−または−５−イル、１，３，４−チアジアゾール−２−または−５−イル、１，２，４−チアジアゾール−３−または−５−イル、１，２，３−チアジアゾール−４−または−５−イル、３−または４−ピリダジニル、ピラジニル、１−、２−、３−、４−、５−、６−または７−インドリル、４−または５−イソインドリル、１−、２−、４−または５−ベンズイミダゾリル、１−、３−、４−、５−、６−または７−ベンゾピラゾリル、２−、４−、５−、６−または７−ベンゾキサゾリル、３−、４−、５−、６−または７−ベンズイソオキサゾリル、２−、４−、５−、６−または７−ベンゾチアゾリル、２−、４−、５−、６−または７−ベンズイソチアゾリル、４−、５−、６−または７−ベンズ−２，１，３−オキサジアゾリル、２−、３−、４−、５−、６−、７−または８−キノリル、１−、３−、４−、５−、６−、７−または８−イソキノリル、３−、４−、５−、６−、７−または８−シンノリニル、２−、４−、５−、６−、７−または８−キナゾリニル、５−または６−キノキサリニル、２−、３−、５−、６−、７−または８−２Ｈ−ベンゾ−１，４オキサジニルを表し、さらに好ましくは、１，３−ベンゾジオキソール−５−イル、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル、２，１，３−ベンゾチアジアゾール−４−または−５−イルまたは２，１，３−ベンゾキサジアゾール−５−イルを表す。
【００７９】
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から３個のＮおよび／またはＯ原子を有する芳香族単環複素環を表すことが好ましい。Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、ピリジルまたはイソオキサゾリル表すことが特に好ましい。
【００８０】
他の置換に関係なく、Ｈｅｔは、例えば、２−または３−フリル、２−または３−チエニル、１−、２−または３−ピロリル、１−、２，４−または５−イミダゾリル、１−、３−、４−または５−ピラゾリル、２−、４−または５−オキサゾリル、３−、４−または５−イソオキサゾリル、２−、４−または５−チアゾリル、３−、４−または５−イソチアゾリル、２−、３−または４−ピリジル、２−、４−、５−または６−ピリミジニルを表し、さらに好ましくは、１，２，３−トリアゾール−１−、−４−または−５−イル、１，２，４−トリアゾール−１−、−３−または５−イル、１−または５−テトラゾリル、１，２，３−オキサジアゾール−４または−５−イル、１，２，４−オキサジアゾール−３−または−５−イル、１，３，４−チアジアゾール−２−または−５−イル、１，２，４−チアジアゾール−３−または−５−イル、１，２，３−チアジアゾール−４−または−５−イル、３−または４−ピリダジニル、ピラジニル、１−、２−、３−、４−、５−、６−または７−インドリル、４−または５−イソインドリル、１−、２−、４−または５−ベンズイミダゾリル、１−、３−、４−、５−、６−または７−ベンゾピラゾリル、２−、４−、５−、６−または７−ベンゾキサゾリル、３−、４−、５−、６−または７−ベンズイソオキサゾリル、２−、４−、５−、６−または７−ベンゾチアゾリル、２−、４−、５−、６−または７−ベンズイソチアゾリル、４−、５−、６−または７−ベンズ−２，１，３−オキサジアゾリル、２−、３−、４−、５−、６−、７−または８−キノリル、１−、３−、４−、５−、６−、７−または８−イソキノリル、３−、４−、５−、６−、７−または８−シンノリニル、２−、４−、５−、６−、７−または８−キナゾリニル、５−または６−キノキサリニル、２−、３−、５−、６−、７−または８−２Ｈ−ベンゾ−１，４オキサジニルを表し、さらに好ましくは、１，３−ベンゾジオキソール−５−イル、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル、２，１，３−ベンゾチアジアゾール−４または５−イルまたは２，１，３−ベンゾキサジアゾール−５−イルを表す。複素環基はまた、部分的に、または完全に水素化されていてよい。
【００８１】
したがって、Ｈｅｔはまた、例えば、２，３−ジヒドロ−２−、−３−、−４−または−５−フリル、２，５−ジヒドロ−２−、−３−、−４−または５−フリル、テトラヒドロ−２−または−３−フリル、１，３−ジオキソラン−４−イル、テトラヒドロ−２−または−３−チエニル、２，３−ジヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−または−５−ピロリル、２，５−ジヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−または−５−ピロリル、１−、２−または３−ピロリジニル、テトラヒドロ−１−、−２−または−４−イミダゾリル、２，３−ジヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−または−５−ピラゾリル、テトラヒドロ−１−、−３−または−４−ピラゾリル、１，４−ジヒドロ−１−、−２−、−３−または−４−ピリジル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、−５−または−６−ピリジル、１−、２−、３−または４−ピペリジニル、２−、３−または４−モルホリニル、テトラヒドロ−２−、−３−または−４−ピラニル、１，４−ジオキサニル、１，３−ジオキサン−２−、−４−または−５−イル、ヘキサヒドロ−１−、−３−または−４−ピリダジニル、ヘキサヒドロ−１−、−２−、−４−または−５−ピリミジニル、１−、２−または３−ピペラジニル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、−５−、−６−、−７−または−８−キノリル、１，２，３，４−テトラヒドロ−１−、−２−、−３−、−４−、−５−、−６−、−７−または−８−イソキノリル、２−、３−、５−、６−、７−または８−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ−１，４−オキサジニルを意味し、さらに好ましくは、２，３−メチレンジオキシフェニル、３，４−メチレンジオキシフェニル、２，３−エチレンジオキシフェニル、３，４−エチレンジオキシフェニル、３，４−（ジフルオロメチレンジオキシ）フェニル、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−または６−イル、２，３−（２−オキソメチレンジオキシ）フェニルまたはさらに３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−６−または−７−イル、さらに好ましくは２，３−ジヒドロベンゾフラニルまたは２，３−ジヒドロ−２−オキソフラニルを表すことができる。
【００８２】
Ｈｅｔは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換または二置換されていてよい、１個から３個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する飽和、不飽和または芳香族の単環複素環を表すことが好ましい。Ｈｅｔは、１個から３個のＮ原子を有する非置換の飽和または芳香族の単環複素環を表すことが特に好ましい。Ｈｅｔは、ピリジル、ピロリル、ピリミジニル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピロリジニルまたはピペリジニルを表すことが特に好ましい。
【００８３】
Ｈａｌは、Ｆ、ＣｌまたはＢｒだけでなくＩを表すことが好ましいが、特に好ましいのはＦまたはＣｌである。
【００８４】
アルケニルは、２，３，４，５または６個のＣ原子を有し、ビニル、１−または２−プロペニル、１−ブテニル、イソブテニル、ｓｅｃ−ブテニルを表すことが好ましく、さらに好ましいのは１−ペンテニル、イソペンテニルまたは１−ヘキセニルである。
【００８５】
アルキニルは、２，３，４，５または６個のＣ原子を有し、好ましくはエチニル、プロピン−１−イル、さらにブチン−１−、ブチン−２−イル、ペンチン−１−、ペンチン−２−またはペンチン−３−イルを表すことが好ましい。
【００８６】
本発明を通して、複数回出現する基はすべて、同一であるか、または異なっており、すなわち、互いに独立している。
【００８７】
式Ｉの化合物は、１個または複数の不斉中心を有してよく、したがって、様々な立体異性体型で生じることができる。式Ｉは、これらの型すべてを包含する。
【００８８】
したがって、本発明は、特に、前記基のうちの少なくとも１個が前記で示した好ましい意味の１つを有する式Ｉの化合物に関する。化合物のいくつかの好ましい群は、以下の亜式ＩａからＩｊによって表すことができ、これらの式は式Ｉに従い、あまり詳細に示されていない基は、式Ｉで示した意味を有するが、
Ｉａにおいて、Ｒ2、Ｒ3はＨを表し、
Ｉｂにおいて、Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｉｃにおいて、Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から３個のＮおよび／またはＯ原子を有する芳香族単環複素環を表し、
Ｉｄにおいて、Ｈｅｔは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換または二置換されていてよい、１個から３個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する飽和、不飽和または芳香族の単環複素環を表し、
Ｉｅにおいて、Ｈｅｔは、１個から３個のＮ原子を有する非置換の飽和、または芳香族の単環複素環を表し、
Ｉｆにおいて、Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、ピリジルまたはイソオキサゾリルを表し、
Ｉｇにおいて、Ｈｅｔは、ピリジル、ピロリル、ピリミジニル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピロリジニルまたはピペリジニルを表し、
Ｉｈにおいて、Ａは、１個から６個のＣ原子を有し、さらに、１個から５個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキルを表し、
Ｉｉにおいて、Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2を表し、
Ｒ1は、ＨまたはＡを表し、
Ｒ2、Ｒ3は、Ｈを表し、
Ｒ4は、ＡｒまたはＨｅｔ1を表し、
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、１個から３個のＮおよび／またはＯ原子を有する芳香族単環複素環を表し、
Ｈｅｔは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換または二置換されていてよい、１個から３個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する飽和、不飽和または芳香族の単環複素環を表し、
Ａは、１個から６個のＣ原子を有し、さらに、１個から５個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキルを表し、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
ｎは、０、１または２を表し、
Ｉｊにおいて、Ｘは、ＯＨまたはＮＨ2を表し、
Ｒ1は、ＨまたはＡを表し、
Ｒ2、Ｒ3はＨを表し、
Ｒ4は、ＡｒまたはＨｅｔ1を表し、
Ａｒは、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡ、ＯＨ、（ＣＨ2）nＨｅｔ、Ｏ（ＣＨ2）nＨｅｔおよび／またはＮＨ（ＣＨ2）nＨｅｔによって一置換、二置換または三置換されていてよいフェニルを表し、
Ｈｅｔ1は、非置換であるか、またはＨａｌ、Ａ、ＯＡおよび／またはＯＨによって一置換、二置換または三置換されていてよい、ピリジルまたはイソオキサゾリルを表し、
Ｈｅｔは、１個から３個のＮ原子を有する非置換の飽和または芳香族の単環複素環を表し、
Ａは、１個から６個のＣ原子を有し、さらに、１個から５個のＨ原子がＦおよび／または塩素によって置換されていてよいアルキル基を表し、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
ｎは、０、１または２を表し、
ならびに、それらの薬学的に有用な誘導体、塩、溶媒和物、互変異性体および立体異性体によって表すことができ、それらの全割合の混合物を含む。
【００８９】
式Ｉの化合物およびその調製のための開始物質も、さらに、文献に記載されたように（例えば、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ［Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ］、Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）、それ自体公知の方法によって、正確にいえば、公知で、前記反応に適した反応条件下で、調製される。本明細書であまり詳細には記載していない、それ自体公知の変種も本明細書で使用することができる。
【００９０】
所望するならば、開始物質はまた、反応混合物から単離することによってではなく、さらに式Ｉの化合物にすぐに変換することによって、その場で形成することができる。
【００９１】
式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物を式ＩＩＩの混合物と反応させることによって好ましく得ることができる。
【００９２】
式ＩＩの化合物は新規で、式ＩＩＩの化合物は一般的に公知である。
【００９３】
この反応は一般的に、不活性溶媒中で、有機塩基、例えば、トリエチルアミン、ジメチルアニリン、ピリジンまたはキノリンなどの存在下で実施される。使用した条件に応じて、反応時間は、数分と１４日の間であり、反応温度は、約０℃と１５０℃の間であり、通常は１５℃と９０℃の間であり、特に好ましいのは１５℃と３０℃との間である。
【００９４】
適切な不活性溶媒の例は、炭化水素、例えば、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエンまたはキシレン；塩素化炭化水素、例えば、トリクロロエチレン、１，２−ジクロロエタン、四塩化炭素、クロロホルムまたはジクロロメタン；アルコール、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノール；エーテル、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはジオキサン；グリコールエーテル、例えば、エチレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）；ケトン、例えば、アセトンまたはブタノン；アミド、例えば、アセタミド、ジメチルアセタミドまたはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；ニトリル、例えば、アセトニトリル；スルホキシド、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；二硫化炭素；カルボン酸、例えば、ギ酸または酢酸；ニトロ化合物、例えば、ニトロメタンまたはニトロベンゼン；エステル、例えば、酢酸エチル、または前記溶媒の混合物である。
【００９５】
式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物を式ＩＶおよびクロロ炭酸エステル、例えば、４−ニトロフェニルエステルなどと反応させることによってさらに好ましく得ることができる。式ＩＶの化合物は、一般的に公知である。
【００９６】
この反応は一般的に、不活性溶媒中で、酸結合剤、好ましくは有機塩基、例えば、ＤＩＰＥＡ、トリエチルアミン、ジメチルアニリン、ピリジンまたはキノリンなどの存在下で実施される。アルカリまたはアルカリ土類金属水酸化物、アルカリまたはアルカリ土類金属、好ましくは、カリウム、ナトリウム、カルシウムまたはセシウムの炭酸塩または重炭酸塩または他の弱酸塩を添加することも好ましい。使用した条件に応じて、反応時間は、数分と１４日の間であり、反応温度は、約−３０℃と１４０℃の間であり、通常は−１０℃と９０℃の間であり、特に０℃と７０℃との間である。適切な不活性溶媒は、前記のものである。
【００９７】
式Ｉの化合物は、加溶媒分解剤または水素化分解剤で処理することによって、式Ｉの化合物を機能的誘導体の１種から遊離することによって得ることができることも好ましい。
【００９８】
加溶媒分解または水素化分解のための好ましい開始物質は、他は式Ｉに従うが、１個または複数の遊離アミノ基および／またはヒドロキシル基の代わりに対応する保護アミノ基および／またはヒドロキシル基を含有するもの、好ましくはＮ原子に結合したＨ原子の代わりにアミノ保護基を有するもの、特に、ＨＮ基の代わりにＲ’−Ｎ基を有するもの（Ｒ’がアミノ保護基を表す）、および／またはヒドロキシル基のＨ原子の代わりにヒドロキシル保護基を有するもの、例えば、式Ｉに従うが、−ＣＯＯＨ基の代わりに−ＣＯＯＲ”基を有するもの（Ｒ”は、ヒドロキシル保護基を表す）である。
【００９９】
開始物質の分子に、複数の、同一または異なった、保護アミノ基および／またはヒドロキシル基が存在することも可能である。存在する保護基が互いに異なるならば、多くの場合選択的に切断することができる。
【０１００】
「アミノ保護基」という表現は、一般的な用語で知られており、化学反応に対してアミノ基を保護（ブロック）するために適しているが、所望する化学反応が分子のどかかで実施された後で容易に除去される基に関する。このような基の代表例は、特に、非置換であるか、または置換されたアシル、アリール、アラアルコキシメチルまたはアルアルキル基である。アミノ保護基は、所望する反応（または反応系）の後で除去されるので、種類および大きさはあまり重大ではないが、１〜２０個、特に１〜８個のＣ原子を有するものが好ましい。「アシル基」という表現は、この方法に関しては最も広い意味で理解されるべきである。脂肪族、アラリファティック、芳香族または複素環カルボン酸またはスルホン酸、特に、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、特にアルアルコキシカルボニル基から得られたアシル基を包含する。このようなアシル基の例は、アルカノイル、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル；アルアルカノイル、例えば、フェニルアセチル；アロイル、例えば、ベンゾイルまたはトリル；アリールオキシアルカノイル、例えば、ＰＯＡ；アルコキシカルボニル、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、ＢＯＣ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）、２−ヨードエトキシカルボニル；アルアルコキシカルボニル、例えば、ＣＢＺ（「カルボベンゾキシ」）、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、ＦＭＯＣ；アリールスルホニル、例えば、Ｍｔｒである。好ましいアミノ保護基は、ＢＯＣおよびＭｔｒ、さらに、ＣＢＺ、Ｆｍｏｃ、ベンジルおよびアセチルである。
【０１０１】
「ヒドロキシル保護基」という表現は、同様に一般的な用語で知られており、化学反応に対してヒドロキシル基を保護するために適しているが、所望する化学反応が分子のどこかで実施された後で容易に除去される基に関する。このような基の代表例は、前述の非置換であるか、または置換されたアリール、アルアルキル基またはアシル基であり、さらにまた、アルキル基である。ヒドロキシル保護基は、所望する化学反応または反応系の後でまた除去されるので、その性質および大きさは重要ではないが、１〜２０個、特に１〜１０個のＣ原子を有する基が好ましい。ヒドロキシル保護基の例は、とりわけ、ベンジル、４−メトキシベンジル、ｐ−ニトロベンゾイル、ｐ−トルエンスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびアセチルで、ベンジルおよびｔｅｒｔ−ブチルは、特に好ましい。
【０１０２】
式Ｉの化合物は、使用した保護基に応じて機能的誘導体から、例えば、強酸を使用して、有利にはＴＦＡまたは過塩素酸を使用して、またその他の無機強酸、例えば、塩化水素酸または硫酸、有機強酸、例えば、トリクロロ酢酸またはスルホン酸、例えば、ベンゼン−もしくはｐ−トルエンスルホン酸を使用して、遊離する。他の不活性溶媒が存在することは可能であるが、いつも必要とは限らない。適切な不活性溶媒は、好ましくは、有機、例えば、酢酸などのカルボン酸、テトラヒドロフランまたはジオキサンなどのエーテル、ＤＭＦなどのアミド、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、さらに、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールなどのアルコールおよび水である。前述の溶媒の混合物もさらに適している。ＴＦＡは、他の溶媒を添加せずに過剰に使用することが好ましく、過塩素酸は酢酸および７０％過塩素酸の９：１の比の混合物の形態で使用することが好ましい。切断の反応温度は、約０℃と約５０℃との間が有利で、１５℃と３０℃の間（室温）が好ましい。
【０１０３】
例えば、ＢＯＣ、ＯＢｕｔおよびＭｔｒ基は、例えば、ジクロロメタンに溶かしたＴＦＡを使用して、またはジオキサンに溶かした約３Ｎから５ＮのＨＣｌを使用して、１５〜３０℃で切断することが好ましく、ＦＭＯＣ基は、ＤＭＦに溶かしたジメチルアミン、ジエチルアミンまたはピペリジンの約５から５０％溶液を使用して１５〜３０℃で切断できる。
【０１０４】
水素化分解によって除去可能な保護基（例えば、ＣＢＺ、ベンジル）は、例えば、触媒（例えば、パラジウムなどの貴金属触媒、有利には支持体上、例えば、炭素上にある）の存在下で、水素で処理することによって切断できる。本明細書で適切な溶媒は、前記に示した溶媒、特に、例えば、メタノールまたはエタノールなどのアルコール、またはＤＭＦなどのアミドである。水素化分解は、一般的に、約０と１００℃との間の温度、約１と２００バールとの間の圧力、好ましくは２０〜３０℃および１〜１０バールで実施される。ＣＢＺ基の水素化分解は、例えば、メタノールに溶かした５から１０％Ｐｄ／Ｃ、またはメタノール／ＤＭＦに溶かしたＰｄ／Ｃ上のギ酸アンモニウム（水素の代わり）を使用して、２０〜３０℃でうまく成功する。
【０１０５】
適切な不活性溶媒の例は、炭化水素、例えば、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエンまたはキシレン；塩素化炭化水素、例えば、トリクロロエチレン、１，２−ジクロロエタン、四塩化炭素、トリフルオロメチルベンゼン、クロロホルムまたはジクロロメタン；アルコール、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノール；エーテル、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはジオキサン；グリコールエーテル、例えば、エチレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）；ケトン、例えば、アセトンまたはブタノン；アミド、例えば、アセタミド、ジメチルアセタミド、Ｎ−メチル−ピロリドン（ＮＭＰ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；ニトリル、例えば、アセトニトリル；スルホキシド、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；二硫化炭素；カルボン酸、例えば、ギ酸または酢酸；ニトロ化合物、例えば、ニトロメタンまたはニトロベンゼン；エステル、例えば、酢酸エチル、または前記溶媒の混合物である。
【０１０６】
エステルは、例えば、酢酸を使用して、または水に溶かしたＮａＯＨもしくはＫＯＨ、水／ＴＨＦもしくは水／ジオキサンを使用して、０と１００℃との間の温度で鹸化することができる。
【０１０７】
さらに、遊離アミノ基は、酸塩化物または酸無水物またはアルキル化酸を使用して、非置換であるか、もしくは置換されたハロゲン化アルキルを使用して、またはＣＨ3−Ｃ（＝ＮＨ）−ＯＥｔと反応させて、有利には不活性溶媒、例えば、ジクロロメタンまたはＴＨＦ中で、および／または塩基、例えば、トリエチルアミンまたはピリジンの存在下で、−６０と＋３０℃との間の温度で、従来の方法でアシル化することができる。
【０１０８】
医薬品の塩およびその他の形態
本発明の前記化合物は、最終的に非塩形態で使用することができる。他方、本発明はまた、当業界で公知の方法によって様々な有機および無機の酸および塩基から得ることができる薬学的に許容される塩の形態のこれらの化合物の使用を包含する。式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩の形態は、ほとんどの部分が従来の方法によって調製される。式Ｉの化合物がカルボキシル基を含有するならば、その適切な塩の１種は、その化合物と、対応する塩基付加塩を得るために適した塩基とを反応させることによって形成することができる。このような塩基は、例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化リチウムを含むアルカリ金属水酸化物；水酸化バリウムおよび水酸化カルシウムなどのアルカリ土類金属水酸化物；カリウムエトキシドおよびナトリウムプロポキシドなどのアルカリ金属アルコキシド；およびピペリジン、ジエタノールアミンおよびＮ−メチル−グルタミンなどの様々な有機塩基である。式Ｉの化合物のアルミニウム塩も同様に含まれる。式Ｉのある種の化合物の場合、酸付加塩は、これらの化合物を薬学的に許容される有機酸および無機酸、例えば、ハロゲン化水素、例えば、塩化水素、臭化水素またはヨウ化水素、その他の無機酸および対応するそれらの塩、例えば、硫酸塩、硝酸塩またはリン酸塩など、およびアルキルおよびモノアリールスルホン酸、例えば、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸、およびその他の有機酸および対応するそれらの塩、例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、アスコルビン酸塩などで処理することによって形成することができる。したがって、式Ｉの化合物の薬学的に許容される酸付加塩には、以下のものが含まれる。酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アルギニン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、重硫酸塩、亜硫酸水素塩、臭化物、ブチラート、カンホラート、カンホスルホン酸塩、カプリル酸塩、塩化物、クロロ安息香酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、リン酸２水素塩、ジニトロ安息香酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、ガラクテレート（粘液酸由来）、ガラクツロン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミコハク酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヒプル酸塩、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、イソブチル酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メタリン酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル安息香酸塩、リン酸１水素塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、オレイン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニル酢酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、フタル酸塩、しかしこれは限定を意味しない。
【０１０９】
さらに、本発明による化合物の塩基塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、リチウム、マグネシウム、マンガン（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛塩が含まれるが、これは限定を意味するものではない。前述の塩のうち、好ましいのはアンモニウム塩；アルカリ金属塩、ナトリウムおよびカリウム、ならびにアルカリ土類金属塩、カルシウムおよびマグネシウムである。薬学的に許容される有機非毒性塩基から得られた式Ｉの化合物の塩には、一級、二級および三級アミン、天然に生じる置換アミンをも含めた置換アミン、環式アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、クロロプロカイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン（ベンザチン）、ジシクロヘキシルアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リドカイン、リシン、メグルミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン（トロメタミン）の塩も含まれるが、これは限定を意味するものではない。
【０１１０】
塩基性窒素含有基を含有する本発明の化合物は、ハロゲン化（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、イソプロピルおよびｔｅｒｔ−ブチル；硫酸ジ（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチルおよび硫酸ジアミル；ハロゲン化（Ｃ10〜Ｃ18）アルキル、例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ドデシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル；ならびにハロゲン化アリール（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、例えば、塩化ベンジルおよび臭化フェネチルなどの試薬を使用して四級化することができる。本発明の水溶性および油溶性化合物は、このような塩を使用して調製することができる。
【０１１１】
前述の好ましい医薬品の塩には、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ベシル酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、ヘミコハク酸塩、馬尿酸塩、塩化水素、臭化水素、イセチオン酸塩、マンデル酸塩、メグルミン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、リン酸塩、ピバル酸塩、リン酸ナトリウム、ステアリン酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、チオリンゴ酸塩、トシル酸塩およびトロメタミンが含まれるが、限定を意味するものではない。
【０１１２】
式Ｉの塩基性化合物の酸付加塩は、遊離塩基型を、所望の酸の十分量と接触させ、従来の方法で塩の形成を引き起こすことによって調製される。遊離塩基は、塩型を塩基と接触させ、従来の方法で遊離塩基を単離することによって再生することができる。遊離塩基型は、ある点において、極性溶媒中における溶解性などのある種の物理学的特性に関して、それらの対応する塩形態とは異なるが、本発明のために、この塩は、他の点では、それらそれぞれの遊離塩基型に対応する。
【０１１３】
このように、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、金属またはアミン、例えば、アルカリ金属およびアルカリ土類金属または有機アミンで形成される。好ましい金属は、ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびカルシウムである。好ましい有機アミンは、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンおよびプロカインである。
【０１１４】
本発明による酸性化合物の塩基付加塩は、遊離酸型を所望する塩基の十分量と接触させ、従来の方法で塩の形成を引き起こすことによって調製される。遊離酸は、塩型を酸と接触させ、従来の方法で遊離酸を単離することによって再生することができる。遊離酸型は、ある点において、極性溶媒中における溶解性などのある種の物理学的特性に関して、それらの対応する塩形態とは異なるが、本発明のために、この塩は、他の点では、それらそれぞれの遊離酸型に対応する。
【０１１５】
本発明による化合物がこの種の薬学的に許容される塩を形成できる複数の基を含有するならば、本発明はまた、複数の塩を包含する。一般的な複数の塩型には、例えば、重酒石酸塩、二酢酸塩、二フマル酸塩、二メグルミン酸塩、二リン酸塩、二ナトリウムおよび三塩化水素が含まれるが、これは限定を意味するものではない。
【０１１６】
前記に関して、本発明の関係では、「薬学的に許容される塩」という表現は、特にその塩型が、活性成分の遊離型または前に使用した活性成分のその他の塩型と比較して、活性成分の薬物動態学的特性の改善を示すならば、その塩の１つの形態の式Ｉの化合物を含む活性成分を意味するものと考えられる。活性成分の薬学的に許容される塩型はまた、体内における治療効果に関して今までなかった、さらにはこの活性成分の薬物動態に有益な影響を及ぼすことができる、所望する薬物動態学的特性をこの活性成分に初めてもたらすことができる。
【０１１７】
さらに、本発明は、式Ｉの少なくとも１種の化合物および／またはそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物、および場合によって賦形剤および／または補助剤を含む医薬品に関する。
【０１１８】
医薬製剤は、投与単位当たり予め決定された量の活性成分を含む投与単位形態で投与することができる。このような単位は、治療する状態、投与方法および患者の年齢、体重および症状に応じて、例えば、本発明の化合物を０．５ｍｇから１ｇ、好ましくは１ｍｇから７００ｍｇ、特に好ましくは５ｍｇから１００ｍｇ含むことができ、あるいは、医薬製剤は、投与単位当たり予め決定された量の活性成分を含む投与単位形態で投与することができる。好ましい投与単位製剤は、前記に示したような１日用量または部分用量、あるいは活性成分のそれらの対応する画分を含む製剤である。さらに、この種の医薬製剤は、医薬業界で一般的に知られている方法を使用して調製することができる。
【０１１９】
医薬製剤は、所望する任意の適切な方法によって、例えば、経口（頬側または舌下を含む）、経直腸、経鼻、局所（口腔、舌下または経皮を含む）、膣内、非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）法によって投与するために適応させることができる。このような製剤は、医薬業界で公知の方法すべてを使用して、例えば、活性成分と賦形剤または補助剤を一緒にして調製することができる。
【０１２０】
経口投与に適応した医薬製剤は、分離した単位として、例えば、カプセルまたは錠剤、粉末または顆粒、水性または非水性液体に溶かした溶液または懸濁液；食用泡または発泡食品；あるいは水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョンなどとして投与することができる。
【０１２１】
したがって、例えば、錠剤またはカプセルの形態で経口投与する場合、活性成分の構成要素を経口用非毒性の薬学的に許容される不活性賦形剤、例えば、エタノール、グリセロール、水などと一緒にすることができる。粉末は、化合物を適切な微細な大きさに粉末化し、それを同様の方法で粉末化した医薬賦形剤、例えば、食用炭水化物、例えば、澱粉またはマンニトールと共に混合することによって調製する。香料、保存剤、分散剤および色素は、同様に存在してよい。
【０１２２】
カプセルは、粉末混合物を前述のように調製し、成形したゼラチン型に充填することによって製造する。流動促進剤および潤沢剤、例えば、高分散珪酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたは固形ポリエチレングリコールなどを充填操作前に粉末混合物に添加することができる。崩壊剤または可溶化剤、例えば、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどを、カプセルを形成した後に医薬品の利用性を高めるために、同様に添加することができる。
【０１２３】
さらに、所望するならば、または必要ならば、適切な結合剤、潤沢剤および崩壊剤および色素を同様に混合物に組み入れることができる。適切な結合剤には、澱粉、ゼラチン、天然の糖類、例えば、グルコースまたはベータ−ラクトースなど、トウモロコシから製造された甘味料、天然および合成ゴム、例えば、アカシアゴム、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、蝋などが含まれる。これらの剤形で使用した潤沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、これらに限定はしないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製して、この混合物を顆粒にするか、または乾燥圧縮して、潤沢剤および崩壊剤を添加し、錠剤にするために混合物全体を圧縮して、製剤化される。粉末混合物は、適切な方法で粉末化された化合物と前述した通りの希釈剤または塩基、および場合によっては結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチンまたはポリビニルピロリドンなど、分解遅延剤、例えば、パラフィンなど、吸収促進剤、例えば、四級塩など、および／または吸収剤、例えば、ベントナイト、カオリンまたはリン酸二カルシウムなどと混合することによって調製される。粉末混合物は、結合剤、例えば、シロップ、澱粉ペースト、アラビアゴムまたはセルロース溶液または重合体物質で湿潤させ、篩に押しつけることによって顆粒化することができる。顆粒化の代替方法としては、粉末混合物を錠剤形成装置によって、不均一な形状の塊を生成して、顆粒を形成するために粉砕して処理することができる。顆粒は、錠剤成形型に粘着するのを防止するためにステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油を添加することによって滑らかにすることができる。その後、滑らかになった混合物を、錠剤を得るために圧縮する。本発明による化合物はまた、易流動性不活性賦形剤と一緒にして、次に顆粒化または乾燥圧縮段階を実施することなく直接圧縮して錠剤を得ることができる。シェラック密封層、糖または重合体物質の層および蝋の光沢層からなる透明な、または不透明な保護層を存在させてよい。色素は、様々な投薬単位を区別できるように、これらのコーティング剤に添加することができる。
【０１２４】
経口用液体、例えば、溶液、シロップおよびエリキシルは、所与の量が化合物の予め指定した量を含むように、投与単位の形態に調製することができる。シロップは、適切な香料を含む水性溶液に化合物を溶解することによって調製することができ、一方エリキシルは、非毒性アルコール性媒体を使用して調製する。懸濁液は、化合物を非毒性媒体に分散することによって製剤することができる。可溶化剤および乳化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテル、保存剤、香料添加物、例えば、ペパーミント油または天然甘味料またはサッカリン、またはその他の人工甘味料などは、同様に添加することができる。
【０１２５】
経口投与用の投与単位製剤は、所望するならば、マイクロカプセルにカプセル化することができる。製剤はまた、放出を延長するか、遅延させる様な方法で、例えば、重合体の微粒子状物質、蝋などをコーティングするか、または埋め込むことによって、調製することができる。
【０１２６】
式Ｉの化合物およびそれらの塩、溶媒和物および生理学的に機能的な誘導体はまた、リポソーム送達系の形態で、例えば、小さな単層小胞、大きな単層小胞および多層小胞などで投与することができる。リポソームは、様々なリン脂質、例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどから形成することができる。
【０１２７】
式Ｉの化合物およびそれらの塩、溶媒和物および生理学的に機能のある誘導体はまた、化合物分子を結合させた個々の担体としてモノクローナル抗体を使用して送達することができる。この化合物はまた、標的医薬品担体としての可溶性重合体に結合させることができる。このような重合体は、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノールまたは、パルミトイル基によって置換されたポリエチレンオキシドポリリシンを包含することができる。さらに、この化合物は、医薬品の制御放出を実現するために適した生分解性重合体の一種、例えば、ポリ乳酸、ポリ−エプシロン−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロキシピラン、ポリシアノアクリル酸エステルおよびヒドロゲルの架橋結合した、または両親媒性ブロック共重合体と結合させることができる。
【０１２８】
経皮投与に適した医薬製剤は、受容者の表皮と長時間、密接に接触するために、独立した膏薬として投与することができる。したがって、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３（６）、３１８（１９８６）の一般用語に記載されているように、イオン泳動によって、活性成分を膏薬から送達することができる。
【０１２９】
局所投与に適合した医薬化合物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ジェル、スプレー、エアロゾルまたは油剤として製剤化することができる。
【０１３０】
目またはその他の外部組織、例えば、口および皮膚の治療のためには、製剤を局所用軟膏またはクリームとして塗布することが好ましい。軟膏を生成するための製剤の場合、活性成分はパラフィンまたは水混和性クリームベースのいずれかと共に使用することができる。あるいは、活性成分は、水中油型クリームベースまたは油中水型クリームベースでクリームを生成するために製剤化することができる。
【０１３１】
目への局所適用に適合した医薬製剤には、活性成分を適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁した点眼薬が含まれる。
【０１３２】
口内での局所投与に適合した医薬製剤には、ロゼンジ、トローチおよび口内洗浄剤が含まれる。
【０１３３】
直腸投与に適合した医薬製剤は、座剤または浣腸の形態で投与することができる。
【０１３４】
担体物質が固形である経鼻投与に適合した医薬製剤は、粒径が、例えば、２０〜５００ミクロンの範囲で、鼻吸入を行う方法で、すなわち、鼻の近くに保持した粉末含有容器から鼻経路を介して迅速に吸入することによって投与される粗末を含む。担体物質として液体と共に経鼻スプレーまたは点鼻薬として投与するために適した製剤は、水または油中に活性成分溶液を包含する。
【０１３５】
吸入によって投与するために適合した医薬製剤は、微粒子化粉末または噴霧を包含し、エアロゾル、ネブライザーまたは注入器を備えた様々な種類の加圧ディスペンサーによって発生させることができる。
【０１３６】
膣投与に適合した医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、泡状製剤またはスプレー製剤として投与することができる。
【０１３７】
非経口投与に適合した医薬製剤には、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および治療する受容体の血液で製剤を等張にする溶質を含む水性および非水性滅菌注射溶液、ならびに懸濁媒体および増粘剤を含むことができる水性および非水性滅菌懸濁液が含まれる。製剤は、単回用量または多用量容器、例えば、密封したアンプルおよびバイアルに入れて投与することができ、使用直前に、滅菌担体液体、例えば注射用の水を添加することのみが必要とされるように、凍結乾燥（凍結乾燥）状態で保存することができる。この製法で調製される注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【０１３８】
前記の具体的に記載した構成要素に加えて、これらの製剤はまた、製剤の具体的な種類に関して当業界で使用されるその他の薬剤を含むことができ、したがって、例えば、経口投与に適した製剤は、香料を含むことができることは言うまでもない。
【０１３９】
式Ｉの化合物の治療有効量は、例えば、動物の年齢および体重、治療を必要とする正確な症状、その重症度、製剤の性質および投与方法を含むいくつかの要素に左右され、治療医または獣医によって最終的に決定される。しかし、腫瘍増殖、例えば、結腸癌または乳癌を治療するための本発明による化合物の有効量は一般的に、１日当たり０．１から１００ｍｇ／ｋｇ受容体（ほ乳類）の体重の範囲、特に一般的には、１日当たり１から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。したがって、体重７０ｇの成体ほ乳類の１日当たりの実際量は、通常７０と７００ｍｇとの間で、この量は、１日当たり単回用量として、または通常、１日当たり一連の分割用量（例えば、２、３、４、５または６回）で投与され、したがって、総１日用量が同じである。それらの塩もしくは溶媒和物のまたは生理学的に機能的な誘導体の有効量は、本発明による化合物の有効量の画分自体として測定することができる。同様の用量は、前述のその他の症状の治療に適していると考えることができる。
【０１４０】
さらに、本発明は、少なくとも１種の式Ｉの化合物および／またはそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物、ならびに少なくとも１種の他の薬剤活性成分を含む医薬品に関する。
【０１４１】
本発明はまた、
（ａ）式Ｉの化合物および／またはそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物の有効量、ならびに
（ｂ）他の医薬品活性成分の有効量の別個の容器からなるセット（キット）に関する。
【０１４２】
このセットは、適切な容器、例えば、箱、個々の瓶、バッグまたはアンプルを含む。このセットは、例えば、式Ｉの化合物の有効量および／またはそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物の有効量をそれぞれ含有する別個のアンプル、および溶解した形態、または凍結乾燥した形態の他の医薬品活性成分の有効量を含む。
【０１４３】
使用
本発明の化合物は、チロシンキナーゼ誘発疾患の治療におけるほ乳類、特にヒトのための薬剤活性成分として適している。これらの疾患には、腫瘍細胞の増殖、固形癌の増殖を促進する病的な血管新生（または血管形成）、目の血管新生（糖尿病性網膜症、年齢誘発黄斑変性など）および炎症（乾癬、関節リウマチなど）が含まれる。
【０１４４】
本発明には、癌の治療または予防のための医薬品を調製するための、式Ｉの化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用が包含される。治療に好ましい癌は、脳癌、尿生殖器癌、リンパ系の癌、胃癌、喉頭癌および肺癌の群から得られる。好ましい癌の形態の他の群は、単球性白血病、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、神経膠芽腫および乳癌である。
【０１４５】
血管形成が関係している疾患の治療または予防のための医薬品を調製するための、本発明による請求項１に記載の化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用も包含される。
【０１４６】
血管形成が関与しているこのような疾患は、眼疾患、例えば、網膜血管新生、糖尿病性網膜症、年齢誘発黄斑変性などである。
【０１４７】
炎症性疾患の治療または予防のための医薬品を調製するための、式Ｉの化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用も本発明の範囲内に含まれる。このような炎症性疾患の例には、関節リウマチ、乾癬、接触性皮膚炎、遅延過敏型反応などが含まれる。
【０１４８】
ほ乳類におけるチロシンキナーゼ誘発疾患またはチロシンキナーゼ誘発症状の治療または予防のための医薬品を調製するための、式Ｉの化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用も包含され、この方法では、本発明による化合物の治療有効量は、このような治療を必要とする病気のほ乳類に投与される。治療のための量は、具体的な疾患によって変化し、当業者があまり苦労せずに決定することができる。
【０１４９】
本発明にはまた、網膜血管新生の治療または予防のための医薬品を調製するための、式Ｉの化合物および／またはそれらの生理学的に許容される塩および溶媒和物の使用が包含される。
【０１５０】
眼疾患、例えば、糖尿病性網膜症および年齢誘発性黄斑変性の治療または予防方法は、同様に本発明の一部である。炎症性疾患、例えば、関節リウマチ、乾癬、接触性皮膚炎および遅延型過敏型反応の治療または予防のための使用、ならびに骨肉腫、骨関節炎およびくる病の群の骨の病変の治療および予防のための使用も同様に、本発明の範囲内にある。
【０１５１】
「チロシンキナーゼ誘発疾患または症状」という表現は、１種または複数のチロシンキナーゼの活性に依存する病理学的状態のことである。チロシンキナーゼは、増殖、接着および移動および分化を含む様々な細胞活性のシグナル伝達経路に直接的または間接的に関与する。チロシンキナーゼ活性に関係した疾患には、腫瘍細胞の増殖、固形癌の増殖を促進する病的な血管新生、目の血管新生（糖尿病性網膜症、年齢誘発黄斑変性など）および炎症（乾癬、関節リウマチなど）が含まれる。
【０１５２】
式Ｉの化合物は、癌を治療するために患者に投与することができる。本発明の化合物は、腫瘍の血管形成を阻害し、それによって腫瘍の増殖に影響を及ぼす（Ｊ．Ｒａｋ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５５：４５７５〜４５８０、１９９５）。式Ｉの本発明の化合物の血管形成阻害特性はまた、網膜血管新生に関連した失明のある種の形態の治療に適している。
【０１５３】
式Ｉの化合物はまた、ある種の骨の病変、例えば、骨肉腫、骨関節炎および腫瘍骨軟化症としても知られているくる病の治療に適している（Ｈａｓｅｇａｗａ他、Ｓｋｅｌｅｔａｌ  Ｒａｄｉａｌ．２８、ｐｐ．４１〜４５、１９９９；Ｇｅｒｂｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．５、Ｎｏ．６、ｐｐ．６２３〜６２８、Ｊｕｎｅ  １９９９）。ＶＥＧＦは、成熟破骨細胞で発現したＫＤＲ／Ｆｌｋ−１によって、破骨細胞による骨吸収を直接促進するので（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔ．４７３：１６１〜１６４（２０００）；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１４１：１６６７（２０００））、本発明の化合物はまた、骨粗鬆症およびパジェット病などの骨吸収に関連した症状の治療および予防に適している。この化合物はまた、脳水腫、組織障害および虚血後の再潅流損傷を減少させることによって、脳虚血現象、例えば、脳卒中の後で生じる組織障害の減少または予防のために使用することができる（Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  １１：２６５〜２７０（１９９８）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０４：１６１３〜１６２０（１９９９））。
【０１５４】
したがって、本発明は、キナーゼシグナル伝達の阻害、調節および／またはモジュレーションが役割を果たす疾患の治療のための医薬品を調製するため、式Ｉの化合物およびそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物の使用に関する。
【０１５５】
本明細書では、チロシンキナーゼおよびＲａｆキナーゼの群から選択されたキナーゼが好ましい。
【０１５６】
チロシンキナーゼは、ＴＩＥ−２、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲおよび／またはＦＬＴ／ＫＤＲが好ましい。
【０１５７】
請求項１に記載の化合物によって、チロシンキナーゼを阻害することによって影響を受ける疾患の治療のための医薬品を調製するための、式Ｉの化合物およびそれらの薬剤として有用な誘導体、溶媒和物および立体異性体、およびそれらの全割合の混合物の使用が好ましい。
【０１５８】
ＴＩＥ−２、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲおよび／またはＦＬＴ／ＫＤＲを請求項１に記載の化合物によって阻害することによって影響を受ける疾患を治療する医薬品を調製するための使用が特に好ましい。
【０１５９】
固形癌である疾患を治療するための使用が特に好ましい。
【０１６０】
固形癌は、扁平上皮、膀胱、胃、腎臓、頭部および頚部、食道、子宮頚部、甲状腺、小腸、肝臓、脳、前立腺、尿生殖器、リンパ系、胃、喉頭および／または肺の腫瘍の群から選択されることが好ましい。
【０１６１】
さらに、この固形癌は、肺腺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、神経膠芽腫、結腸癌および乳癌の群から選択されることが好ましい。
【０１６２】
さらに、血液および免疫系の腫瘍の治療、好ましくは急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病および／または慢性リンパ性白血病の群から選択された腫瘍の治療のために使用することが好ましい。
【０１６３】
さらに、本発明は、血管形成が関与する疾患の治療のための式Ｉの化合物の使用に関する。
【０１６４】
この疾患は、眼疾患であることが好ましい。
【０１６５】
本発明はさらに、網膜血管新生、糖尿病性網膜症、年齢誘発性黄斑変性および／または炎症性疾患の治療のための使用に関する。
【０１６６】
炎症性疾患は、関節リウマチ、乾癬、接触性皮膚炎および遅延過敏型反応の群から選択されることが好ましい。
【０１６７】
本発明はさらに、骨肉腫、骨粗鬆症およびくる病から生じる骨の病変の治療のための、本発明による化合物の使用に関する。
【０１６８】
式Ｉの化合物は、Ｒａｆキナーゼによって引き起こされるか、媒介されるか、および／または広がる疾患の治療のための医薬品を調製するために適しており、このＲａｆキナーゼは、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲａｆおよびＲａｆ−１からなる群から選択される。好ましくは増殖過剰性および非増殖過剰性疾患の群の疾患の治療のために使用することが好ましい。これらは、癌性疾患または非癌性疾患である。非癌性疾患は、乾癬、関節炎、炎症、子宮内膜症、瘢痕、良性前立腺肥大、免疫疾患、自己免疫疾患および免疫不全疾患からなる群から選択される。
【０１６９】
癌性疾患は、脳癌、肺癌、扁平上皮細胞癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、結腸癌、乳癌、頭部癌、頚部癌、食道癌、喉頭癌、甲状腺癌、リンパ腫、慢性白血病および急性白血病からなる群から選択される。
【０１７０】
式Ｉの化合物はまた、治療する症状に対して特に有用であるために選択されたその他の周知の治療薬と同時に投与することができる。例えば、骨の症状の場合、好ましい組合せには、再吸収抑制ビスホスホネート、例えば、アレンドロネートおよびリセドロネート、インテグリン遮断薬（さらに以下に定義する）、例えば、αｖβ３拮抗薬、ホルモン置換療法で使用される結合型エストロゲン、例えば、Ｐｒｅｍｐｒｏ（登録商標）、Ｐｒｅｍａｒｉｎ（登録商標）およびＥｎｄｏｍｅｔｒｉｏｎ（登録商標）、選択的エストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）、例えば、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ＣＰ−３３６、１５６（Ｐｆｉｚｅｒ）およびラソホキシフェン、カテプシンＫ阻害剤およびＡＴＰプロトンポンプ抑制剤との組合せが含まれる。
【０１７１】
本発明の化合物はまた、公知の抗癌剤との組合せに適している。これら公知の抗癌剤には、以下のエストロゲン受容体調節因子、アンドロゲン受容体調節因子、レチノイド受容体調節因子、細胞毒性剤、増殖抑制剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤および他の血管形成阻害剤が含まれる。本発明の化合物は、放射線療法と同時に投与するのに特に適している。放射線療法と併用したＶＥＧＦ阻害の相乗効果は、当業界で記載されている（ＷＯ００／６１１８６参照）。
【０１７２】
「エストロゲン受容体調節因子」は、機序に関係なく、エストロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を意味する。エストロゲン受容体調節因子の例には、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニルヒドラゾンおよびＳＨ６４６が含まれるが、これらだけに限定されない。
【０１７３】
「アンドロゲン受容体調節因子」は、機序に関係なく、アンドロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を意味する。アンドロゲン受容体調節因子の例には、フィナステリドおよびその他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾルおよびアビラテロンアセタートが含まれる。
【０１７４】
「レチノイド受容体調節因子」は、機序に関係なく、レチノイドの受容体への結合を妨害または阻害する化合物を意味する。レチノイド受容体調節因子の例には、ベキサロテン、トレチノイン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、９−ｃｉｓ−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチナミドおよびＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが含まれる。
【０１７５】
「細胞毒性剤」とは、主に細胞機能に直接作用することにより細胞死を引き起こすか、あるいは細胞における減数分裂を阻害または妨害する化合物を指し、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、挿入剤（インターカレーター）、微小管阻害剤およびトポイソメラーゼ阻害剤が含まれる。
【０１７６】
細胞毒性剤の例には、チラパジミン、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトル、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸イムプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス−アミンジクロロ（２−メチルピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルフォスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−ミュー−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジニルスペルミン、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アンルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５および４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニルダウノルビシンが含まれるが、これらに限定されない（ＷＯ００／５００３２参照）。
【０１７７】
微小管阻害剤の例には、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール、リゾキシン、ドラスタチン、ミボブリンイセチオネート、アウリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８およびＢＭＳ１８８７９７が含まれる。
【０１７８】
トポイソメラーゼ阻害剤は、例えば、トポテカン、ヒカプタミン、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソベンジリデンチャルトレウシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ｛３’，４’：ｂ，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）−ジオン、ルルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシエトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソル−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノエチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２−（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オンおよびジメスナである。
【０１７９】
「増殖抑制剤」（antiproliferative agent)には、アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００１、ならびに抗代謝薬、例えばエノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスファート、フォステアビンナトリウム水和物、ラルトリトレキセド、パルチトレキシド、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテインアスシジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソル、デキラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンおよび３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒドチオセミカルバゾンが含まれる。「増殖抑制剤」には、トラスツズマブなどの「血管形成阻害剤」に挙げられている化合物の他に、増殖因子に対するモノクローナル抗体、組換えウイルス媒介遺伝子転移により送達することができるｐ５３などの腫瘍抑制遺伝子（例えば、米国特許第６０６９１３４号参照）も含まれる。
【０１８０】
さらに、本発明は、分散性血管形成を特徴とする疾患の治療のための医薬品の調製のための、式Ｉの化合物の使用に関する。この疾患は、癌疾患であることが好ましい。
【０１８１】
分散性血管形成は、好ましくは、分散性ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３活性から生じる。
【０１８２】
したがって、ＶＥＧＦＲ−２活性を阻害するための医薬品を調製するために、本発明による化合物を使用することも特に好ましい。
【実施例】
【０１８３】
アッセイ
実施例で記載した式Ｉの化合物は、以下に記載したアッセイによって試験され、キナーゼ阻害活性を有することが発見された。その他のアッセイは、文献によって公知であり、当業者によって容易に実施することが可能であった（例えば、Ｄｈａｎａｂａｌ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：１８９〜１９７；Ｘｉｎ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：９１１６〜９１２１；Ｓｈｅｕ他、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１８：４４３５〜４４４１；Ａｕｓｐｒｕｎｋ他、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３８：２３７〜２４８；Ｇｉｍｂｒｏｎｅ他、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．５２：４１３〜４２７；Ｎｉｃｏｓｉａ他、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  １８：５３８〜５４９）。
【０１８４】
ＶＥＧＦ受容体キナーゼアッセイ
ＶＥＧＦ受容体キナーゼ活性は、放射標識リン酸の４：１ポリグルタミン酸／チロシン基質（ｐＥＹ）へのに取り込みによって測定される。リン酸化ｐＥＹ生成物は、フィルター膜に捕捉され、放射標識リン酸の取り込みはシンチレーションカウントによって定量される。
【０１８５】
材料
ＶＥＧＦ受容体キナーゼ
ヒトＫＤＲの細胞内チロシンキナーゼドメイン（Ｔｅｒｍａｎ、Ｂ．Ｉ．他、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９１）Ｖｏｌ．６、ｐｐ．１６７７〜１６８３）およびＦｌｔ−１（Ｓｈｉｂｕｙａ，Ｍ．他、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９０）Ｖｏｌ．５、ｐｐ．５１９〜５２４）は、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）遺伝子融合タンパク質としてクローニングされた。これは、ＧＳＴ遺伝子のカルボキシル末端に、インフレーム融合としてＫＤＲキナーゼの細胞質ドメインをクローニングすることによって実施された。可溶性組換えＧＳＴ−キナーゼドメイン融合タンパク質は、バキュロウイルス発現ベクター（ｐＡｃＧ２Ｔ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用して、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ２１）昆虫細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で発現した。
【０１８６】
溶解緩衝液
トリス５０ｍＭ  ｐＨ７．４、ＮａＣｌ  ０．５Ｍ、ＤＴＴ  ５ｍＭ、ＥＤＴＡ  １ｍＭ、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．５％、グリセロール１０％、ロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン各１０ｍｇ／ｍｌならびにフェニルメチルスルホニルフルオリド１ｍＭ（いずれもＳｉｇｍａ）
洗浄用緩衝液
トリス５０ｍＭ  ｐＨ７．４、ＮａＣｌ  ０．５Ｍ、ＤＴＴ  ５ｍＭ、ＥＤＴＡ  １ｍＭ、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．０５％、グリセロール１０％、ロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン各１０ｍｇ／ｍｌならびにフェニルメチルスルホニルフルオリド１ｍＭ
透析用緩衝液
トリス５０ｍＭ  ｐＨ７．４、ＮａＣｌ  ０．５Ｍ、ＤＴＴ  ５ｍＭ、ＥＤＴＡ  １ｍＭ、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．０５％、グリセロール５０％、ロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン各１０ｍｇ／ｍｌならびにフェニルメチルスルホニルフルオリド１ｍＭ
１０×反応緩衝液
トリス２００ｍＭ、ｐＨ７．４、ＮａＣｌ  １．０Ｍ、ＭｎＣｌ2  ５０ｍＭ、ＤＴＴ  １０ｍＭおよび牛血清アルブミン（ＢＳＡ）５ｍｇ／ｍｌ（Ｓｉｇｍａ）
酵素希釈用緩衝液
トリス５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＮａＣｌ  ０．１Ｍ、ＤＴＴ  １ｍＭ、グリセロール１０％、ＢＳＡ  １００ｍｇ／ｍｌ
１０×基質
ポリ（グルタミン酸／チロシン４：１）７５０μｇ／ｍｌ（Ｓｉｇｍａ）
停止溶液
トリクロロ酢酸３０％、ピロリン酸ナトリウム０．２Ｍ（いずれもＦｉｓｈｅｒ）
洗浄溶液
トリクロロ酢酸１５％、ピロリン酸ナトリウム０．２Ｍ
フィルタープレート
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＭＡＦＣ  ＮＯＢ、ＧＦ／Ｃガラスファイバー９６ウェルプレート
方法Ａ−タンパク質精製
１．Ｓｆ２１細胞を組換えウイルスで、５ウイルス粒子／細胞の感染多重度で感染させ、２７℃で４８時間増殖させた。
【０１８７】
２．全ステップは、４℃で実施した。感染細胞を１０００×ｇで遠心して収集し、１／１０量の溶解緩衝液で４℃で３０分間溶解し、その後１０００００×ｇで１時間遠心した。次に、溶解緩衝液で平衡化したグルタチオンセファロース酸（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に上清を通過させ、５倍量の同緩衝液で洗浄し、次に５倍量の洗浄用緩衝液で洗浄した。組換えＧＳＴ−ＫＤＲタンパク質を洗浄緩衝液／還元グルタチオン（Ｓｉｇｍａ）１０ｍＭで溶出し、透析用緩衝液で透析した。
【０１８８】
方法Ｂ−ＶＥＧＦ受容体キナーゼアッセイ
１．阻害剤または対照５μｌを５０％ＤＭＳＯ中で測定液に添加する。
【０１８９】
２．１０×反応緩衝液５μｌ、ＡＴＰ  ２５ｍＭ／［33Ｐ］ＡＴＰ１０μＣｉ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）５μｌおよび１０×基質５μｌを含有する反応混合液３５μｌを添加する。
【０１９０】
３．酵素希釈用緩衝液に溶かしたＫＤＲ（２５ｎＭ）１０μｌを添加することによって反応を開始する。
【０１９１】
４．混合して、室温で１５分間インキュベートする。
【０１９２】
５．停止溶液５０μｌを添加することによって反応を停止する。
【０１９３】
６．４℃で１５分間インキュベートする。
【０１９４】
７．フィルタープレートに一定量９０μｌを移す。
【０１９５】
８．吸引して、洗浄溶液で３回洗浄する。
【０１９６】
９．シンチレーションカクテル３０μｌを添加し、プレートを密封し、Ｗａｌｌａｃｅ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンターで計数する。
【０１９７】
ヒト臍帯静脈内皮細胞分裂促進アッセイ
増殖因子に対して分裂促進応答を媒介するＶＥＧＦ受容体の発現は、主として血管内皮細胞に限定される。培養中のヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ＶＥＧＦ処理に応答して増殖し、ＶＥＧＦ刺激に対するＫＤＲキナーゼ阻害剤の効果を定量する測定系として使用することができる。記載したアッセイでは、ＶＥＧＦまたは塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）を添加するまえに、静止状態のＨＵＶＥＣ単層を媒体または試験化合物で２時間処理する。ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦに対する分裂促進応答は、細胞性ＤＮＡへの［3Ｈ］チミジンの取り込みを測定することによって測定する。
【０１９８】
材料
ＨＵＶＥＣ
初代培養単離物としてＨＵＶＥＣ凍結物をＣｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．から入手する。細胞を内皮増殖培地（ＥＧＭ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）に入れ、３〜７回継体して分裂促進測定のために使用する。
【０１９９】
培養プレート
ＮＵＮＣＬＯＮ９６ウェルポリスチレン組織培養用プレート（ＮＵＮＣ＃１６７００８）。
【０２００】
測定培地
グルコース１ｍｇ／ｍｌを含有するダルベッコ改変イーグル培地（低グルコースＤＭＥＭ；Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）および牛胎児血清（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）１０％（ｖ／ｖ）
試験化合物
試験化合物の操作保存溶液を１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で所望する最終濃度を４００倍を上回るまで連続的に希釈する。細胞添加直前に測定培地で１×濃度まで最終的に希釈する。
【０２０１】
１０×増殖培地
ヒトＶＥＧＦ１６５の溶液（５００ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびｂＦＧＦの溶液（１０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を測定培地で調製する。
【０２０２】
１０×［3Ｈ］チミジン
［メチル−3Ｈ］チミジン（２０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｄｕｐｏｎｔ−ＮＥＮ）を低グルコースＤＭＥＭ培地で８０μＣｌ／ｍｌまで希釈する。
【０２０３】
細胞洗浄用培地
牛血清アルブミン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）１ｍｇ／ｍｌを含有するハンクス平衡塩溶液（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）
細胞溶解溶液
１Ｎ  ＮａＯＨ、２％（ｗ／ｖ）Ｎａ2ＣＯ3
方法１
ＥＧＭで維持したＨＵＶＥＣ単層をトリプシン処理によって収集し、９６ウェルプレートの１ウェル当たり測定培地１００μｌ当たり細胞４０００個の密度で播種する。細胞増殖は、５％ＣＯ2を含有する湿潤雰囲気中で３７℃、２４時間で停止させる。
【０２０４】
方法２
増殖停止培地を、媒体（０．２５％［ｖ／ｖ］ＤＭＳＯ）または所望する終濃度の試験化合物を含有する測定用培地１００μｌと置換する。測定はすべて、３連で実施する。次に、試験化合物を細胞に入れるために、細胞を３７℃／５％ＣＯ2で２時間インキュベートする。
【０２０５】
方法３
２時間の前処理期間の後、測定用培地、１０×ＶＥＧＦ溶液または１０×ｂＦＧＦ溶液のいずれかを１０μｌ／ウェルで添加することによって細胞を刺激する。その後、細胞を３７℃／５％ＣＯ2でインキュベートする。
【０２０６】
方法４
増殖因子存在下で２４時間経た後、１０×［3Ｈ］チミジン（１０μｌ／ウェル）を添加する。
【０２０７】
方法５
［3Ｈ］チミジンを添加して３日後、培地を吸引除去して、細胞を細胞洗浄用培地で２回（４００μｌ／ウェルの後２００μｌ／ウェル）洗浄する。次に、洗浄した接着細胞に細胞溶解溶液（１００μｌ／ウェル）を添加し、３７℃で３０分間暖めることによって可溶化する。細胞溶解物を、水１５０μｌを含有する７ｍｌガラス製シンチレーションバイアルに移す。シンチレーションカクテル（５ｍｌ／バイアル）を添加し、細胞関連放射活性を液体シンチレーション分光法によって測定する。これらの測定によると、式Ｉの化合物はＶＥＧＦの阻害剤であり、したがって、眼疾患、例えば、糖尿病性網膜症の治療および癌、例えば、固形癌の治療などにおいて、血管形成の阻害に適している。本発明の化合物は、培養したヒト血管内皮細胞のＶＥＧＦ誘発分裂誘発を、ＩＣ５０値０．０１〜０．５μＭで阻害する。これらの化合物はまた、関連チロシンキナーゼ（例えば、ＦＧＦＲ１およびＳｒｃファミリー、ＳｒｃキナーゼとＶＥＧＦＲキナーゼとの間の関係については、Ｅｌｉｃｅｉｒｉ他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ、Ｖｏｌ．４、ｐｐ．９１５〜９２４、Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９９参照）に選択性を示す。
【０２０８】
ＴＩＥ−２試験は、例えば、ＷＯ０２／４４１５６で示された方法と同様に実施することができる。
【０２０９】
このアッセイは、放射活性33Ｐ−ＡＴＰの存在下でＴｉｅ−２キナーゼによる基質ポリ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）のリン酸化において、試験すべき物質の阻害活性を測定する。リン酸化基質は、インキュベーション時間中に「フラッシュプレート」マイクロタイタープレートの表面に結合する。反応混合物を除去後、マイクロタイタープレートを数回洗浄し、表面上の放射活性をその後測定する。測定すべき物質の阻害効果によって、妨害されていない酵素反応と比較して放射活性の低下が生じる。
【０２１０】
前記および下記において、温度は℃で示す。以下の実施例において、「従来の後処理」とは、最終生成物の構成に応じて、必要ならば水を添加し、必要ならばｐＨを２と１０との間の値に調節し、混合物を酢酸エチルまたはジクロロメタンで抽出し、相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、留去して、生成物をシリカゲルのクロマトグラフィーおよび／または結晶化によって精製することを意味する。シリカゲルでのＲｆ値；溶出液：酢酸エチル／メタノール９：１。
【０２１１】
質量分析（ＭＳ）：ＥＩ（電子衝撃イオン化）Ｍ+
ＦＡＢ（高速原子衝撃）（Ｍ＋Ｈ）+
ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）（Ｍ＋Ｈ）+
ＡＰＣＩ−ＭＳ（大気圧化学イオン化−質量分析）（Ｍ＋Ｈ）+
実施例１
１−［４−（６−アミノプリン−９−イル）フェニル］−３−［２−（ピロリジン−３−イルオキシ）−５−トリフルオロメチルフェニル］ウレア（「１」）の調製は、以下のスキームと同様にして実施される。
【０２１２】
【化４】
2008535874.tif 000006
【０２１３】
１．１  ２−アミノシアノアセタミド４ｇをアセトニトリル１００ｍｌに溶解する。オルト酢酸トリエチル９ｍｌを添加し、この混合物を環流しながら１時間加熱する。この混合物を室温まで冷却し、Ｎ−Ｂｏｃ−１，４−フェニレンジアミン１０ｇを添加する。混合物全体を環流しながら一晩加熱する。この混合物を室温まで冷却する。不溶性物質を濾過し、アセトニトリルで十分洗浄し、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−アミノ−４−カルバモイル−イミダゾール−１−イル）フェニル］カルバマート（「１ａ」）６．５ｇを得る。ＨＰＬＣ−ＡＰＣＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ+］３１８。
【０２１４】
１．２  「１ａ」の１０ｇ、塩化メタンスルホニル６ｍｌおよびピリジン２０ｍｌをジクロロメタン２００ｍｌに添加する。混合物全体を室温で一晩攪拌する。後処理として、反応溶液をロータリーエバポレータで留去する。残渣を水に溶解し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、ロータリーエバポレータで留去する。残渣をジクロロメタンで磨砕し、吸引によって濾過し、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−アミノ−４−シアノ−イミダゾール−１−イル）フェニル］カルバマート（「１ｂ」）６．１ｇを得る。ＨＰＬＣ−ＡＰＣＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ+］３００。
【０２１５】
１．３  ９−（４−アミノフェニル）−９Ｈ−プリン−６−イルアミン）の調製
前記で調製したニトリル「１ｂ」の２ｇおよび酢酸ホルムアミジン２ｇを磁石攪拌子および環流冷却器を備えた３つ口フラスコ２５０ｍｌ内においてエチレングリコールモノメチルエーテル４０ｍｌ中に懸濁する。混合物全体を一晩窒素化で環流する。混合物は加熱中に透明になる。反応溶液を室温まで冷却する。次に、混合物をロータリーエバポレータで留去する。
【０２１６】
粗混合物「１ｃ」をジオキサンに溶かした２Ｎ  ＨＣｌ６０ｍｌで３時間処理する。この混合物を吸引濾過し、ジオキサンおよび石油エーテルで十分洗浄して、９−（４−アミノフェニル）−９Ｈ−プリン−６−イル−アミン（「１ｄ」）８００ｍｇを得る。ＨＰＬＣ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ+］２２７。
【０２１７】
１．４  ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−アミノ−４−トリフルオロメチルフェノキシ）ピロリジン−１−カルボキシラート４６０ｍｇおよび４−ニトロフェニルホルマート２７０ｍｇをジクロロメタン５０ｍｌに溶解し、ピリジン１７０ｍｌを添加する。この混合物を室温で２時間攪拌する。前記で調製したプリン「１ｄ」４００ｍｇおよびＮ−エチルジイソプロピルアミン０．７３ｍｌをその後この混合物に添加する。混合物全体を室温で一晩攪拌させておく。
【０２１８】
後処理として、反応溶液をロータリーエバポレータで留去し、酢酸エチルを残渣に添加する。混合物を水、１Ｎ  ＮａＯＨおよび濃ＮａＣｌ溶液で順次洗浄する。有機相を乾燥させ留去して、粗物質６７０ｍｇを得て、フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール９：１）によって精製して、１−［４−（６−アミノプリン−９−イル）フェニル］−３−［２−１−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルピロリジン−３−イルオキシ）−５−トリフルオロメチルフェニル］ウレア（「１ｅ」）２９０ｍｇを得る。ＡＰＣＩ−ＭＳ  ［Ｍ＋Ｈ+）５９９。
【０２１９】
１．５  「１ｅ」２８０ｍｇをジオキサンに溶かした２Ｎ  ＨＣ２０ｍｌと共に４時間攪拌する。この生成物をその後吸引濾過し、ジオキサンおよび石油エーテルで洗浄して、ジヒドロクロリドとして「１」２５０ｍｇを得る。ＨＰＬＣ−ＡＰＣＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ+］４９９。
【０２２０】
実施例２
１−［４−（６−アミノプリン−９−イル）フェニル］−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−ウレア（「２」）の調製
３−（トリフルオロメチル）フェニルイソシアネート１６０ｍｇおよび「１ｄ」２６０ｍｇをジクロロメタン３０ｍｌ中で一緒にする。トリエチルアミン０．３ｍｌを添加する。混合物全体を室温で一晩攪拌させておく。反応溶液をロータリーエバポレータで留去し、残渣をメタノールで磨砕して、粗物質１０５ｍｇを得る。精製のために、この粗生成物を調製用ＨＰＬＣユニットに通過させる。
【０２２１】
条件：
カラム：ＲＰ１８（７μｍ）Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ  ２５０×２５
溶出液：Ａ：９８Ｈ２Ｏ、２ＣＨ３ＣＮ、ＴＦＡ０．１％
Ｂ：１０Ｈ２Ｏ、９０ＣＨ３ＣＮ、ＴＦＡ０．１％
ＵＶ：  ２２５ＮＭ
流速：  １０ｍｌ／分
次に、精製した物質「２」６５ｍｇをＴＦＡ塩として得る。ＨＰＬＣ−ＡＰＣＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ+］４１３。
【０２２２】
実施例３
１−［４−（６−ヒドロキシプリン−９−イル）フェニル］−３−（３−（トリフルオロメチルフェニル）ウレア（「３」）の調製は、以下のスキームと同様にして実施される。
【０２２３】
【化５】
2008535874.tif 000007
【０２２４】
ＨＰＬＣ−ＡＰＣＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ+］４１５。
【０２２５】
実施例４
以下の化合物も同様に得られる。
【０２２６】
【表１】
2008535874.tif 000008
【０２２７】
薬理学的データ
キナーゼ阻害
【０２２８】
【表２】
2008535874.tif 000009
【０２２９】
以下の実施例は、医薬品に関する。
【０２３０】
実施例Ａ：注射バイアル
２回蒸留した水３ｌに溶かした式Ｉの活性成分１００ｇおよびリン酸水素２ナトリウム５ｇの溶液を、２Ｎ塩酸を使用してｐＨ６．５に調節し、滅菌濾過し、注射バイアルに移し、滅菌条件下で凍結乾燥し、滅菌条件下で密封する。各注射バイアルは、活性成分５ｍｇを含有する。
【０２３１】
実施例Ｂ：座剤
式Ｉの活性成分２０ｇと、ダイズレシチン１００ｇおよびカカオ脂１４００ｇとの混合物を融解し、型に注いで、冷却する。各座剤は、活性成分２０ｍｇを含有する。
【０２３２】
実施例Ｃ：溶液
溶液は、２回蒸留した水９４０ｍｌに溶かした式Ｉの活性成分１ｇ、ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ、９．３８ｇ、Ｎａ2ＨＰＯ4、・１２Ｈ2Ｏ、２８．４８ｇ、および塩化ベンザルコニウム０．１ｇから調製する。ｐＨを６．８に調節し、この溶液を１ｌにして、照射によって滅菌する。この溶液は、点眼薬の形態で使用することができる。
【０２３３】
実施例Ｄ：軟膏
式Ｉの活性成分５００ｍｇを無菌条件下でワセリン９９．５ｇと混合する。
【０２３４】
実施例Ｅ：錠剤
式Ｉの活性成分１ｋｇ、ラクトース４ｋｇ、馬鈴薯澱粉１．２ｋｇ、タルク０．２ｋｇおよびステアリン酸マグネシウム０．１ｋｇの混合物を圧縮して、各錠剤が活性成分１０ｍｇを含有するように従来の方法で錠剤を得る。
【０２３５】
実施例Ｆ：糖衣錠
実施例Ｅと同様にして錠剤を圧縮し、その後スクロース、馬鈴薯澱粉、タルク、トラガカントおよび色素のコーティングで従来の方法でコーティングする。
【０２３６】
実施例Ｇ：カプセル
各カプセルが活性成分２０ｍｇを含有するように、従来の方法で、式Ｉの活性成分２ｋｇを硬ゼラチンカプセルに導入する。
【０２３７】
実施例Ｈ：アンプル
２回蒸留した水６０ｌに溶かした式Ｉの活性成分１ｋｇの溶液を滅菌濾過し、アンプルに移し、滅菌条件下で凍結乾燥し、滅菌条件下で密封する。各アンプルは、活性成分１０ｍｇを含有する。
【国際調査報告】
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