(57)【要約】  本発明は、天然のＧＬＰ−１ペプチドと同等またはより優れた生物活性を有し、したがってＧＬＰ活性に関連する疾患または障害の治療または予防に有用な新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）−受容体修飾因子を提供する。さらに、本発明はＩＩ型糖尿病におけるインスリン分泌を刺激するだけでなく、他の有用なインスリン分泌反応も生じる新規な化学修飾されたペプチドを提供する。これらの合成ペプチドＧＬＰ−１受容体修飾因子は、タンパク分解開裂への増加した安定性を示し、それらを経口または非経口投与用の理想的な治療上の候補薬にする。本発明のペプチドは望ましい薬物動態的特性および糖尿病の効力モデルにおける望ましい効力を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの配列（配列番号：１）：
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
［式中、
Ｘaa1は、イミダゾールを含む天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；該アミノ酸は、アルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールアルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アリールアルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換された遊離アミノ基を適宜有し；および該遊離アミノ基が存在しない場合、Ｘaa1は、１またはそれ以上の炭素原子が１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された脱アミノヒスチジン体であり；
Ｘaa2は、Ｄ−アラニン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−エチル−Ｄ−アラニン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびイソバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa3は、（１）カルボン酸を含むアミノ酸側鎖または（２）イミダゾール側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり、その中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa4はグリシンであり；
Ｘaa5は、（Ｌ）−スレオニンおよび（Ｌ）−ノルバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa6は、２つの側鎖を有する二置換α炭素を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該２つの側鎖の少なくとも１つは芳香環を有し、および該２つの側鎖の少なくとも１つはアルキル基を有し；および該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１もしくはそれ以上のアルキル基または１もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換され；
Ｘaa7は、ヒドロキシル基で置換されたアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa8は、Ｌ−セリンおよびＬ−ヒスチジンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa9は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa10は、式ＩＩ：
【化１】
2008505899.tif 000081
（式中、Ｒ4は、水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ6は独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa11は、式ＩＶａ：
【化２】
2008505899.tif 000082
（式中、該アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；Ｒ4aは水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3aおよびＲ6aは各々独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；Ｒ7は水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は各々ＣまたはＮであるが、ただしＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＮであり；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸である］
を有するポリペプチドを含む単離されたポリペプチド。
【請求項２】
Ｘaa3が、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたヒスチジンである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
Ｘaa3が、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
Ｘaa6が、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、α−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、またはα−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項５】
Ｘaa7が、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたＬ−スレオニンである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項６】
Ｘaa9が、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項７】
Ｘaa1が、アルキル、ジアルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換される末端アミノ基を有する、Ｌ−ヒスチジンである請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項８】
Ｘaa1が、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−α−メチル−Ｈｉｓ、脱アミノ−Ｈｉｓ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、および（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル）からなる群から選択される、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項９】
Ｘaa2が、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択される、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１０】
Ｘaa4がグリシンである請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１１】
Ｘaa5がＬ−ＴｈｒおよびＬ−Ｎｖａからなる群から選択される請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１２】
Ｘaa6が、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロ−Ｐｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−２，６−ジフルオロ−Ｐｈｅからなる群から選択される請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１３】
Ｘaa7がＬ−Ｔｈｒである請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
Ｘaa8がＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択される請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
Ｘaa9がＬ−Ａｓｐである請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
Ｘaa10が、４−フェニル−フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２'−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンおよび４−［（３'，４'−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
Ｘaa11が、４−フェニル−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−クロロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４'−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メトキシフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３，５−ピリミジルアラニン、（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−α−Ｍｅ−３−ピリジルアラニンおよび４−（２'−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択され；
Ｘaa11のＣ末端カルボニル炭素が窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；および
Ｒ7が水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１８】
該ポリペプチドが、式ＶＩ：
【化３】
2008505899.tif 000083
［式中、
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１９】
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；および
Ｒ7が水素である、請求項１８の単離されたポリペプチド。
【請求項２０】
該ポリペプチドが、式ＶＩＩ：
【化４】
2008505899.tif 000084
［式中、
Ｒ8は、メチル、エチル、
【化５】
2008505899.tif 000085
からなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり； 
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項２１】
Ｒ8がメチル、および
【化６】
2008505899.tif 000086
からなる群から選択され；
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり； 
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；および
Ｒ7が水素およびメチルからなる群から選択される、請求項２０の単離されたポリペプチド。
【請求項２２】
該ポリペプチドが式ＶＩＩＩ：
【化７】
2008505899.tif 000087
［式中、
Ｒ9は、水素、メチルおよびアルキルからなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項２３】
Ｒ9が水素およびメチルからなる群から選択され；
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8がＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり； 
Ｒ7が水素である、請求項２２の単離されたポリペプチド。
【請求項２４】
該単離されたポリペプチドが下表の化合物群から選択される化合物である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【表１】
2008505899.tif 000088
【表２】
2008505899.tif 000089
【表３】
2008505899.tif 000090
【表４】
2008505899.tif 000091
【表５】
2008505899.tif 000092
【請求項２５】
該単離されたポリペプチドが下表の化合物群から選択される化合物である、請求項２４の単離されたポリペプチド。
【表６】
2008505899.tif 000093
【表７】
2008505899.tif 000094
【請求項２６】
該単離されたポリペプチドが下表の化合物群から選択される化合物である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【表８】
2008505899.tif 000095
【請求項２７】
該単離されたポリペプチドが下表の化合物群から選択される化合物である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【表９】
2008505899.tif 000096
【請求項２８】
該単離されたポリペプチドが
【化８】
2008505899.tif 000097
【化９】
2008505899.tif 000098
である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項２９】
該単離されたポリペプチドが
【化１０】
2008505899.tif 000099
【化１１】
2008505899.tif 000100
である、請求項２８の単離されたポリペプチド。
【請求項３０】
該単離されたポリペプチドが
【化１２】
2008505899.tif 000101
である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項３１】
式ＶＩａ：
【化１３】
2008505899.tif 000102
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（t−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ3aは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物。
【請求項３２】
式ＶＩＩａ：
【化１４】
2008505899.tif 000103
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ6aはメトキシであり；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物。
【請求項３３】
請求項１の単離されたポリペプチドおよびその医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３４】
請求項１の単離されたポリペプチドおよび少なくとも１つの治療剤を含む医薬組成物で、該治療剤が、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される医薬組成物。
【請求項３５】
該抗糖尿病剤が、ビグアナイド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲ γ アゴニスト、ＰＰＡＲ α／γデュアルアゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン増感剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アナログ、インスリンおよびメグリチナイドからなる群から選択される、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３６】
該抗糖尿病剤が、メトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロロプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、マルグリタザー、インスリン、Ｇｌ−２６２５７０、イサグリタゾン、ＪＴＴ−５０１、ＮＮ−２３４４、Ｌ８９５６４５、ＹＭ−４４０、Ｒ−１１９７０２、ＡＪ９６７７、レパグリニド、ナテグリニド、ＫＡＤ１１２９、ＡＲ−ＨＯ３９２４２、ＧＷ−４０９５４４、ＫＲＰ２９７、ＡＣ２９９３、ＬＹ３１５９０２、ＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８Ａおよびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３７】
該抗肥満剤が、β３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β化合物、ＣＢ−１アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストおよび摂食障害剤からなる群から選択される請求項３４の医薬組成物。
【請求項３８】
該抗肥満剤が、オーリスタット、ＡＴＬ−９６２、ＡＪ９６７７、Ｌ７５０３５５、ＣＰ３３１６４８、シブトラミン、トピラメート、アキソキン、デキサアンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンリモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）、およびマジンドールからなる群から選択される請求項３４の医薬組成物。
【請求項３９】
該脂質低下剤が、ＭＴＰ阻害剤、コレステロールエステル変換タンパク質、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性の上方制御剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびＡＣＡＴ阻害剤からなる群から選択される請求項３４の医薬組成物。
【請求項４０】
該脂質低下剤が、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、アバシミベ、ＴＳ−９６２、ＭＤ−７００、ＣＰ−５２９４１４、およびＬＹ２９５４２７からなる群から選択される請求項３４の医薬組成物。
【請求項４１】
請求項１の単離されたポリペプチドの治療上の有効量を治療が必要な哺乳類に投与することからなる、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療方法または進行もしくは発症を遅らせる方法。
【請求項４２】
さらに、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、および抗アテローム硬化剤からなる群から選択される１またはそれ以上の治療剤および脂質低下剤の治療上の有効量を、同時または連続して投与することからなる請求項４１の方法。
【請求項４３】
請求項３４の医薬組成物の治療上の有効量を治療が必要な哺乳類に投与することからなる、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療方法または進行もしくは発症を遅らせる方法。
【請求項４４】
請求項１のポリペプチドを含む製剤の非経口投与からなる、請求項１のポリペプチドの投与方法。
【請求項４５】
請求項１のポリペプチドを含む製剤の非経口でない投与からなる、請求項１のポリペプチドの投与方法。
【請求項４６】
該非経口投与が、静脈内（ＩＶ）ボーラス注入、ＩＶ注入、皮下投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、バッカル投与、経肺投与および眼の送達からなる群から選択される請求項４４の方法。
【請求項４７】
該皮下投与が速放性または徐放性製剤の使用を含む請求項４６の方法。
【請求項４８】
該筋肉内投与が速放性または徐放性製剤の使用を含む請求項４６の方法。
【請求項４９】
該製剤が、溶媒および共溶媒、溶解剤、乳化剤、濃化剤、キレート化剤、抗酸化剤、還元剤、抗微生物保存剤、緩衝剤およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および張性剤、並びに特別の添加剤からなる群から選択される医薬的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項４４の方法。
【請求項５０】
該製剤がカプセル化した輸送システムをさらに含む請求項４４の方法。
【請求項５１】
式ＶＩ：
【化１５】
2008505899.tif 000104
［式中、
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸； 
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、単離されたポリペプチド。
【請求項５２】
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり； 
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；
Ｒ7が水素である、請求項５１の単離されたポリペプチド。
【請求項５３】
式ＶＩＩ：
【化１６】
2008505899.tif 000105
［式中、
Ｒ8は、メチル、エチル、
【化１７】
2008505899.tif 000106
からなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、単離されたポリペプチド。
【請求項５４】
Ｒ8が、メチル、および
【化１８】
2008505899.tif 000107
からなる群から選択され
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり； 
Ｒ6がメトキシであり； 
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6aが水素であり；
Ｒ7が水素およびメチルからなる群から選択される、請求項５３の単離されたポリペプチド。
【請求項５５】
式ＶＩＩＩ：
【化１９】
2008505899.tif 000108
［式中、
Ｒ9は、水素、メチルおよびアルキルからなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、単離されたポリペプチド。
【請求項５６】
Ｒ9が、水素およびメチルからなる群から選択され；
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；
Ｒ7が水素である、請求項５５の単離されたポリペプチド。
【請求項５７】
下表の化合物群から選択される化合物である単離されたポリペプチド。
【表１０】
2008505899.tif 000109
【表１１】
2008505899.tif 000110
【表１２】
2008505899.tif 000111
【表１３】
2008505899.tif 000112
【表１４】
2008505899.tif 000113
【請求項５８】
下表の化合物群から選択される化合物である単離されたポリペプチド。
【表１５】
2008505899.tif 000114
【表１６】
2008505899.tif 000115
【請求項５９】
下表の化合物群から選択される化合物である単離されたポリペプチド。
【表１７】
2008505899.tif 000116
【請求項６０】
下表の化合物群から選択される化合物である単離されたポリペプチド。
【表１８】
2008505899.tif 000117
【請求項６１】
構造が
【化２０】
2008505899.tif 000118
【化２１】
2008505899.tif 000119
である単離されたポリペプチド。
【請求項６２】
構造が
【化２２】
2008505899.tif 000120
【化２３】
2008505899.tif 000121
である単離されたポリペプチド。
【請求項６３】
構造が
【化２４】
2008505899.tif 000122
である単離されたポリペプチド。
【請求項６４】
構造が
【化２５】
2008505899.tif 000123
である単離されたポリペプチド。
【請求項６５】
構造が
【化２６】
2008505899.tif 000124
である単離されたポリペプチド。
【請求項６６】
構造が
【化２７】
2008505899.tif 000125
である単離されたポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は米国特許仮出願第６０／５８５，３５８号（２００４年７月２日出願）および米国特許仮出願第６０／６８４，８０５号（２００５年５月２６日出願）の優先権主張をし、これらの出願はそれぞれ本明細書にそのまま引用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、未変性ペプチドのＧＬＰ−１の優れた生物特性を示し、ＧＬＰ−１未変性配列に比べタンパク分解開裂に増加した安定性を示し、これにより糖尿病症状の改善に有用である、新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）ペプチド受容体修飾因子、アゴニストまたは部分アゴニストを提供する。
【０００３】
（背景技術）
ＧＬＰ−１は、グルコース代謝、並びに胃腸での分泌および代謝において調整された機能を有する重要な腸ホルモンである。ヒトＧＬＰ−１は、プレプログルカゴンを起源とする３０個のアミノ酸ペプチドであり、例えば、遠位回腸中のＬ細胞で、膵臓で、および脳内で合成される。ＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−２を産するためのプレプログルカゴンの処理は、主にＬ細胞および脳幹内で起こる。ＧＬＰ−１は通常食物の摂取に応答して分泌され、特に炭水化物および脂質がＧＬＰ−１分泌を刺激する。ＧＬＰ−１はとても強く、低血糖症を引き起こすリスクが減少したグルコース依存性インスリン放出の効力がある刺激剤として確認されている。ＧＬＰ−１は、血漿グルカゴン濃度を低下させ、胃の空腹感を遅らせ、インスリン生合成を刺激し、インスリン感受性を向上させる（Nauck, 1997, Horm. Metab.Res. 47:1253-1258）。ＧＬＰ−１はまた、ブドウ糖耐性に障害のある患者におけるグルコースを感知し、応答する膵臓のβ細胞の能力も向上させる（Byrne, Eur. J. Clin. Invest., 28:72-78, 1998）。ヒトにおけるＧＬＰ−１のインスリン分泌効果は、一部インスリンレベルの増加のため、および一部インスリン感受性向上のため、グルコース代謝の速度を高める（D’Alessio, Eur. J. Clin. Invest., 28:72-78, 1994）。グルカゴン放出の阻害は、ＩＩ型糖尿病患者のＧＬＰ−１での治療に続いて見られるグルコースホメオスタシスにおける改善に貢献する付加的なメカニズムであると考えられる（Nauck, M.A., et al., Diabetologia 36:741-744, 1993）。上記のＧＬＰ−１の薬理特性は、それをＩＩ型糖尿病の治療のための非常に望ましい治療剤にする。
【０００４】
また、最近の研究で、わずかに多い生理学的量のＧＬＰ−１の注入が、有意に飽満を高め、通常の患者における食物摂取を減らすことが示されている（Flint, A., Raben, A., Astrup, A. and Holst, J.J., J.Clin.Invest, 101:515-520, 1998; Gutswiller, J.P., Goke, B., Drewe, J., Hildebrand, P., Ketterer, S., Handschin, D., Winterhaider, R., Conen, D and Beglinger, C. Gut 44:81-86, 1999;）。食物摂取および飽満の効果は、肥満患者においても保持されることが報告されている（Naslund, E., Barkeling, B., King, N., Gutniak, M., Blundell, J.E., Holst ,J.J., Rossner, S., and Hellstrom, P.M., Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord., 23:304-311, 1999）。
【０００５】
上記で引用された研究において、胃の空腹感におけるＧＬＰ−１の公表された効果はまた、その現象が怪しくもあった。胃の空腹感は食後の血糖変動を生じる。インスリン分泌の刺激に加えて、ＧＬＰ−１がＢ細胞新生を刺激しながら、転写因子である膵島−十二指腸ホメオボックス−１(islet-duodenal homeobox-1)（ＩＤＸ−１）の発現を刺激し、それによって糖尿病の効果的な治療および／または予防剤であり得ることも示されている（Stoffers, D.A., Kieffer, T.J. Hussain, M.A.,Drucker, D.J., Bonner-Weir, S., Habener, J.F. and Egan, J.M. Diabetes, 40:741-748, 2000）。ＧＬＰ−１はまた、胃酸分泌を阻害することも示されており（Wettergren, A., Schjoldager, B., Mortensen, P.E., Myhre, J., Christiansen, J., Holst, J.J., Dig. Dis. Sci., 38:665-673, 1993）、胃潰瘍に対する保護が提供されうる。
【０００６】
ＧＬＰ−１が、例えば、心臓保護、神経保護、並びに学習および記憶誘導となりうる多くの付加的な膵臓外の効果を有することが最近報告されている（reviewed in Ahren, B., Horm. Metab. Res. 36:842-845, 2004）。したがって、ＧＬＰ−１が心不全（Nikolaidis, L.A., et al., Circulation 110:955-961, 2004）、虚血／再灌流 傷害（Nikolaidis, L.A., et al., Circulation 109:962-965, 2004）、およびアルツハイマー病 （Perry, T. and Greig, N.H., J. Alzheimers Dis. 4:487-496, 2002）の治療に用い得ることも提案されている。
【０００７】
ＧＬＰ−１は、インクレチンホルモン、例えば、食事で誘発されるインスリン分泌を高める腸ホルモンである（Holst, J.J., Curr. Med. Chem., 6:1005-1017, 1999）。それは、プログルカゴンをコードするグルカゴン遺伝子の産物である。この遺伝子は、膵臓のＡ細胞中ばかりでなく、腸の粘膜の内分泌Ｌ細胞中でも発現される。プログルカゴンは、１６０個のアミノ酸を含むペプチド（タンパク質）である。プログルカゴンの更なる処理で、ａ）グルカゴン、ｂ）Ｎ末端、おそらく不活性なフラグメント、およびｃ）「メジャープログルカゴンフラグメント」として一般的に言及されるラージＣ末端フラグメントの産生となる。このフラグメントは生物学的に不活性であると考えられる。たとえこのフラグメントが膵臓中および腸のＬ細胞中のいずれにも存在しても、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２として一般的に言及される２つの高度に相同性のあるペプチドを生じる「メジャープログルカゴンフラグメント」の分解産物が観察されるのは、腸内だけである。これらの２つのペプチドは重要な生物学的活性を有する。ＧＬＰ−１のアミノ酸配列はそれ自体、Ｌ細胞に存在し、プログルカゴンの７８−１０７位に同定される。
【０００８】
現在、ＧＬＰ−１型分子の使用を含む療法は、かかるペプチドの血清半減期が極めて短いことから深刻な問題をもたらしている。例えば、ＧＬＰ−１（７−３７）は５分未満の血清半減期を有する。このように、拡張した薬物動態的プロファイルを有する、生物学的に活性なＧＬＰ−１受容体修飾因子、アゴニストまたはアンタゴニストの危機的な必要性が存在する。本発明が目指すのはこのことおよび他のニーズに対してである。
【０００９】
したがって、本発明は、未変性ペプチドのＧＬＰ−１の類似または優れた生物特性を示し、これにより糖尿病性および関連症状の改善に有用である、ＧＬＰ−１受容体修飾因子、アゴニスまたは部分アゴニストとして作用する新規なペプチドを提供する。
【００１０】
（発明の概要）
一つの態様として、本発明は、式Ｉの配列（配列番号：１）：
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
［式中、
Ｘaa1は、イミダゾールを含む天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；該アミノ酸は、アルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールアルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アリールアルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換された遊離アミノ基を適宜有し；および該遊離アミノ基が存在しない場合、Ｘaa1は、１またはそれ以上の炭素原子が１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された脱アミノヒスチジン体であり；
Ｘaa2は、Ｄ−アラニン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−エチル−Ｄ−アラニン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびイソバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa3は、（１）カルボン酸を含むアミノ酸側鎖または（２）イミダゾール側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり、その中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され； 
Ｘaa4はグリシンであり；
Ｘaa5は、（Ｌ）−スレオニンおよび（Ｌ）−ノルバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa6は、２つの側鎖を有する二置換α炭素を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該２つの側鎖の少なくとも１つは芳香環を有し、および該２つの側鎖の少なくとも１つはアルキル基を有し；および該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１もしくはそれ以上のアルキル基または１もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換され；
Ｘaa7は、ヒドロキシル基で置換されたアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa8は、Ｌ−セリンおよびＬ−ヒスチジンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa9は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa10は、式ＩＩ：
【化１】
2008505899.tif 000002
（式中、Ｒ4は、水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ6は独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa11は、式ＩＶａ：
【化２】
2008505899.tif 000003
（式中、該アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；Ｒ4aは水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3aおよびＲ6aは各々独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；Ｒ7は水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は各々ＣまたはＮであるが、ただしＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＮであり；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸である］
を有するポリペプチドを含む単離されたポリペプチドを対象とする。
【００１１】
さらに、Ｘaa3は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたヒスチジンであってもよい。Ｘaa3は、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であってもよい。
【００１２】
Ｘaa6は、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、α−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、またはα−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンであってもよい。
【００１３】
Ｘaa7は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたＬ−スレオニンであってもよい。
【００１４】
Ｘaa9は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であってもよい。
【００１５】
Ｘaa1は、アルキル、ジアルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換される末端アミノ基を有する、Ｌ−ヒスチジンであってもよい。
【００１６】
Ｘaa1は、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−α−メチル−Ｈｉｓ、脱アミノ−Ｈｉｓ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、および（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル）からなる群から選択されてもよい。
【００１７】
Ｘaa2は、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されてもよい。
【００１８】
Ｘaa4はグリシンであってもよい。
【００１９】
Ｘaa5は、Ｌ−ＴｈｒおよびＬ−Ｎｖａからなる群から選択されてもよい。
【００２０】
Ｘaa6は、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロ−Ｐｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−２，６−ジフルオロ−Ｐｈｅからなる群から選択されてもよい。
【００２１】
Ｘaa7はＬ−Ｔｈｒであってもよい。
【００２２】
Ｘaa8はＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されてもよい。
【００２３】
Ｘaa9はＬ−Ａｓｐであってもよい。
【００２４】
Ｘaa10は、４−フェニル−フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２'−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンおよび４−［（３'，４'−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択されてもよい。
【００２５】
Ｘaa11は、４−フェニル−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−クロロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４'−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メトキシフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３，５−ピリミジルアラニンおよび４−（２'−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択されてもよく；
この中で、Ｘaa11のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される。
【００２６】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは、式ＶＩ：
【化３】
2008505899.tif 000004
［式中、
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドであってもよい。
【００２７】
さらに、Ｘaa2は、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｘはフルオロであってもよく；
Ｙは水素であってもよく；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｒ3はエチルであってもよく；
Ｒ6はメトキシであってもよく；
Ｒ3aはメチルおよびエチルからなる群から選択されてもよく；
Ｒ6aは水素であってもよく；および
Ｒ7は水素であってもよい。
【００２８】
別の態様として、該ポリペプチドは、式ＶＩＩ：
【化４】
2008505899.tif 000005
［式中、
Ｒ8は、メチル、エチル、
【化５】
2008505899.tif 000006
からなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり； 
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドであってもよい。
【００２９】
さらに、Ｒ8はメチル、および
【化６】
2008505899.tif 000007
からなる群から選択されてもよく；
Ｘaa2は、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｘはフルオロであってもよく；
Ｙは水素であってもよく；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であってもよく； 
Ｒ3はエチルであってもよく；
Ｒ6はメトキシであってもよく；
Ｒ3aはメチルおよびエチルからなる群から選択されてもよく；
Ｒ6aは水素であってもよく；
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択されてもよい。
【００３０】
別の態様として、該ポリペプチドは式ＶＩＩＩ：
【化７】
2008505899.tif 000008
［式中、
Ｒ9は、水素、メチルおよびアルキルからなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドであってもよい。
【００３１】
さらに、Ｒ9は水素およびメチルからなる群から選択されてもよく；
Ｘaa2は、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｘはフルオロであってもよく；
Ｙは水素であってもよく；
Ｘaa8はＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｒ3はエチルであってもよく；
Ｒ6はメトキシであってもよく；
Ｒ3aはメチルおよびエチルからなる群から選択されてもよく；
Ｒ6aは水素であってもよく； 
Ｒ7は水素であってもよい。
【００３２】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは下表の化合物群から選択される化合物であってもよい。
【表１】
2008505899.tif 000009
【表２】
2008505899.tif 000010
【表３】
2008505899.tif 000011
【表４】
2008505899.tif 000012
【表５】
2008505899.tif 000013
【００３３】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは下表の化合物群から選択される化合物である。
【表６】
2008505899.tif 000014
【表７】
2008505899.tif 000015
【００３４】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは下表の化合物群から選択される化合物である。
【表８】
2008505899.tif 000016
【００３５】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは下表の化合物群から選択される化合物である。
【表９】
2008505899.tif 000017
【００３６】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは
【化８】
2008505899.tif 000018
【化９】
2008505899.tif 000019
【化１０】
2008505899.tif 000020
である。
【００３７】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは
【化１１】
2008505899.tif 000021
【化１２】
2008505899.tif 000022
である。
【００３８】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは
【化１３】
2008505899.tif 000023
である。
【００３９】
別の態様として、本発明は式ＶＩａ：
【化１４】
2008505899.tif 000024
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（t−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ3aは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物を対象とする。
【００４０】
別の態様として、本発明は式ＶＩＩａ：
【化１５】
2008505899.tif 000025
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ6aはメトキシであり；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物を対象とする。
【００４１】
別の態様として、本発明は本明細書で記載されているような単離されたポリペプチドおよびその医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を対象とする。
【００４２】
別の態様として、本発明は本明細書で記載されているような単離されたポリペプチドおよび少なくとも１つの治療剤を含む医薬組成物で、該治療剤が、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される医薬組成物を対象とする。
【００４３】
該抗糖尿病剤は、ビグアナイド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲ γ アゴニスト、ＰＰＡＲ α／γデュアルアゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン増感剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アナログ、インスリンおよびメグリチナイドからなる群から選択されてもよい。
【００４４】
該抗糖尿病剤は、メトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド(glipyride)、グリピジド、クロロプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、マルグリタザー、インスリン、Ｇｌ−２６２５７０、イサグリタゾン、ＪＴＴ−５０１、ＮＮ−２３４４、Ｌ８９５６４５、ＹＭ−４４０、Ｒ−１１９７０２、ＡＪ９６７７、レパグリニド、ナテグリニド、ＫＡＤ１１２９、ＡＲ−ＨＯ３９２４２、ＧＷ−４０９５４４、ＫＲＰ２９７、ＡＣ２９９３、ＬＹ３１５９０２、ＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８Ａおよびサクサグリプチンからなる群から選択されてもよい。
【００４５】
該抗肥満剤は、β３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β化合物、ＣＢ−１アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストおよび摂食障害剤からなる群から選択されてもよい。
【００４６】
該抗肥満剤は、オーリスタット、ＡＴＬ−９６２、ＡＪ９６７７、Ｌ７５０３５５、ＣＰ３３１６４８、シブトラミン、トピラメート、アキソキン、デキサアンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンリモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）、ＰＹＹ（３−３６）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）およびマジンドールからなる群から選択されてもよい。
【００４７】
該脂質低下剤は、ＭＴＰ阻害剤、コレステロールエステル変換タンパク質、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性の上方制御剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびＡＣＡＴ阻害剤からなる群から選択されてもよい。
【００４８】
該脂質低下剤は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、アバシミベ、ＴＳ−９６２、ＭＤ−７００、ＣＰ−５２９４１４、およびＬＹ２９５４２７からなる群から選択されてもよい。
【００４９】
別の態様として、本発明は本明細書に記載の単離されたポリペプチドの治療上の有効量を治療が必要な哺乳類に投与することからなる、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療方法または進行もしくは発症を遅らせる方法を対象とする。
【００５０】
該方法はさらに、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、および抗アテローム硬化剤からなる群から選択される１またはそれ以上の治療剤および脂質低下剤の治療上の有効量を、同時または連続して投与することを含んでもよい。
【００５１】
別の態様として、本発明は本明細書に記載の医薬組成物の治療上の有効量を治療が必要な哺乳類に投与することからなる、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療方法または進行もしくは発症を遅らせる方法を対象とする。
【００５２】
別の態様として、本発明は本明細書に記載のポリペプチドを含む製剤の非経口投与からなる、本明細書に記載のポリペプチドの投与方法を対象とする。
【００５３】
別の態様として、本発明は本明細書に記載のポリペプチドを含む製剤の非経口でない投与からなる、本明細書に記載のポリペプチドの投与方法を対象とする。
【００５４】
該非経口投与は、静脈内（ＩＶ）ボーラス注入、ＩＶ注入、皮下投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、バッカル投与、経肺投与および眼の送達からなる群から選択されてもよい。
【００５５】
該皮下投与は速放性または徐放性製剤の使用を含んでもよい。
【００５６】
該筋肉内投与は速放性または徐放性製剤の使用を含んでもよい。
【００５７】
該製剤は、溶媒および共溶媒、溶解剤、乳化剤、濃化剤、キレート化剤、抗酸化剤、還元剤、抗微生物保存剤、緩衝剤およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および張性剤、並びに特別の添加剤からなる群から選択される医薬的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。
【００５８】
該製剤はカプセル化した輸送（送達）システムをさらに含んでもよい。
【００５９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、未変性ペプチドのＧＬＰ−１の優れた生物特性を示し、ＧＬＰ−１未変性配列に比べタンパク分解開裂に増加した安定性を示し、これにより糖尿病症状の改善に有用である、新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）ペプチド受容体修飾因子、アゴニストまたは部分アゴニストを提供する。
【００６０】
本発明のおよび本明細書に記載される合成単離ペプチドは、望ましくはＧＬＰ−１受容体のアゴニストまたは部分アゴニストとして、ＧＬＰ−１受容体を調節することができる。これらの合成ペプチドは、ＧＬＰ−１と比べ優れたインビボでの効力および薬物動態的特性を示す、すなわち、該ペプチドは、食後の血漿グルコースの低下および同時に起こる血漿インスリンレベルの増加があり、これにより皮下、肺の、経鼻、バッカルまたは徐放的な投与のための理想的な治療の候補にする。
【００６１】
本発明には、例えば、式Ｉの配列（配列番号：１）：
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
［式中、
Ｘaa1は、イミダゾールを含む天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；該アミノ酸は、アルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールアルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アリールアルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換された遊離アミノ基を適宜有し；および該遊離アミノ基が存在しない場合、Ｘaa1は、１またはそれ以上の炭素原子が１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された脱アミノヒスチジン体であり；
Ｘaa2は、Ｄ−アラニン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−エチル−Ｄ−アラニン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびイソバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa3は、（１）カルボン酸を含むアミノ酸側鎖または（２）イミダゾール側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり、その中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa4はグリシンであり；
Ｘaa5は、（Ｌ）−スレオニンおよび（Ｌ）−ノルバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa6は、２つの側鎖を有する二置換α炭素を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該２つの側鎖の少なくとも１つは芳香環を有し、および該２つの側鎖の少なくとも１つはアルキル基を有し；および該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１もしくはそれ以上のアルキル基または１もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換され；
Ｘaa7は、ヒドロキシル基で置換されたアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa8は、Ｌ−セリンおよびＬ−ヒスチジンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa9は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa10は、式ＩＩ：
【化１６】
2008505899.tif 000026
（式中、Ｒ4は、水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ6は独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、水素、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa11は、式ＩＶａ：
【化１７】
2008505899.tif 000027
（式中、該アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；Ｒ4aは水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3aおよびＲ6aは各々独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；Ｒ7は水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は各々ＣまたはＮであるが、ただしＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＮであり；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、水素、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸である］
を有するポリペプチドを含む単離されたポリペプチドが含まれる。
【００６２】
本明細書中で提供される定義は、制限なく用いられ、別に断る場合を除き、本明細書を通して用いられる用語に適用される。
【００６３】
アミノ酸およびペプチド化学の当業者は、アミノ酸が一般式：
【化１８】
2008505899.tif 000028
（式中ＲおよびＲ’は本明細書で述べられている）によって表される化合物を含むことを知っている。別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アミノ酸」には、特に制限なく、「α」炭素と称される同一の炭素に結合するアミノ基およびカルボキシル基を含み、その中でＲおよび／またはＲ'は、水素を含む天然または非天然側鎖である。「α」炭素における絶対構造「Ｓ」は、「Ｌ」または「天然」構造と一般に称される。「Ｒ」および「Ｒ置換基」の両方が水素と等しい場合は、該アミノ酸はグリシンであり、キラルではない。
【００６４】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アミノアルコール」には、特に制限なく、天然または非天然型アミノ酸が含まれ、その中で、カルボキシ基は、バリノール、グリシノール、アラニノール、アリールアラニノール、ヘテロアリールアラニノールのようなメチルアルコールに置換（還元）される。
【００６５】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキル」には、特に制限なく、直鎖および分枝鎖の両方の炭化水素が含まれ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、それの様々な分枝鎖の異性体などのような通常の鎖で、１〜４０個の炭素、好ましくは１〜２０個の炭素、より好ましくは１〜８個の炭素が含まれる。更に、本明細書で定義されるようなアルキル基は、いずれかの有効な炭素原子上において、かかる鎖、例えば、これらに制限されないが、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシ、アリールアルキルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、アルカノイル、ハロ、ヒドロキシル、チオ、ニトロ、シアノ、カルボキシル、カルボニル（＝Ｏ）、サルボキサミド、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミド、アルキルアミノ、アリールアミド、ヘテロアリールアミド、アジド、グアニジノ、アミジノ、ホスホン基、ホスフィン基、スルホン基、スルホンアミド、ハロアリール、ＣＦ3、ＯＣＦ2、ＯＣＦ3、アリールオキシ、ヘテロアリール、シクロアルキルアルコキシアルキル、シクロヘテロアルキルなどに一般的に結合する１またはそれ以上の官能基で適宜置換されて、トリフルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピル、２−フルオロエチル、カルボキシメチル、シアノブチルなどのアルキル基を形成してもよい。
【００６６】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルケニル」には、特に制限なく、直鎖および分枝鎖の両方の炭化水素が含まれ、通常の鎖で、１またはそれ以上の二重結合を含む２〜４０個の炭素、好ましくは１〜３個の二重結合を含む２〜２０個の炭素、より好ましくは１〜２個の二重結合を含む２〜８個の炭素が含まれ、いずれの炭素も「アルキル」として上記で述べられたように適宜置換されてもよい。
【００６７】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキニル」には、特に制限なく、直鎖および分枝鎖の両方の炭化水素が含まれ、通常の鎖で、１またはそれ以上の三重結合を含む２〜４０個の炭素、好ましくは１〜３個の三重結合を含む２〜２０個の炭素、より好ましくは１〜２個の三重結合を含む２〜８個の炭素が含まれ、いずれの炭素も「アルキル」として上記で述べられたように適宜置換されてもよい。
【００６８】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「シクロアルキル」には、特に制限なく、１〜３個の環を含む飽和または一部不飽和（１または２個の二重結合を含む）環状炭化水素基、付加された、あるいは縮合したものが含まれ、全部で３〜２０個の炭素で形成する環で、好ましくは４〜７個の炭素で各々の環を形成した環を含む、単環式アルキル、二環式アルキルおよび三環式アルキルが含まれ；アリールとして述べられるような１個の芳香環に縮合してもよく、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシル、シクロヘキセニル、
【化１９】
2008505899.tif 000029
が含まれ、これらのいずれの基も、いずれかの有効な炭素原子を通して、水素、ハロ、ハロアルキル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキルアルキル、フルオレニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アリールチオ、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、シアノ、カルボキシル、カルボニル（＝Ｏ）、カルボキサミド、アミノ、アミノが１または２個の置換基（アルキル、アリールまたは定義の中で述べられた他のアリール化合物のいずれか）を含む置換アミノ、アミド、アジド、グアニジノ、アミジノ、ホスホン基、ホスフィン基、スルホン基、スルホンアミド、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニル、あるいは上記で示されたアルキル置換基のいずれかから選択される１個またはそれ以上の基で適宜置換されてもよい。
【００６９】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリール」とは、特に制限なく、環の部分（例えば、フェニルまたはナフチル）で６〜１０個の炭素を含む単環式および二環式芳香環基をいい、「アリール」（例えば、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル環）に縮合される１〜３個の付加的な環を適宜含んでいてもよく、いずれかの有効な炭素原子を通じて水素、アルキル、ハロ、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキルアルキル、フルオレニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アリールチオ、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシアルキル、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、シアノ、アミノ、アミノが１または２個の置換基（アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、もしくはアリールまたは定義の中で述べられた他のアリール化合物のいずれか）を含む置換アミノ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアルキルアミノカルボニル アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニル、あるいは上記で示されたアルキル置換基のいずれかから選択される１個またはそれ以上の基で適宜置換されてもよい。
【００７０】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキル」とは、特に制限なく、例えばベンジル、フェネチルまたはナフチルプロピルのようなアリール置換基（該アリールおよび／またはアルキル基は上記で定義されるように適宜置換されうる）を有する上記で定義されるようなアルキル基をいう。
【００７１】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「ヘテロアリールオキシ」、「アリールアルキルオキシ」、または「ヘテロアリールアルキルオキシ」には、特に制限なく、酸素原子と通じて結合される上記で定義されるようなアルキルまたはアリール基が含まれる。
【００７２】
本明細書で用いられている用語「ヘテロシクロ」、「ヘテロ環」、「ヘテロサイクリル」または「ヘテロ環（状）の」は、特に制限なく、飽和または不飽和の、炭素原子、並びに窒素、硫黄、酸素および／またはＳＯまたはＳＯ2基から選択される１〜４個のヘテロ原子（該窒素および硫黄ヘテロ原子は適宜酸化されていてもよく、および該窒素ヘテロ原子は適宜四級化されていてもよい）からなる、無置換または置換された安定な４−、５−、６−または７員単環式環システムを表す。該ヘテロ環は、安定な構造の産物が生じるようにいずれかのヘテロ原子または炭素原子で結合し得る。かかるヘテロ環基の例には、これらに制限されないが、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキソピロリジニル、オキソピペラジニル、オキソピペリジニルおよびオキサジアゾリルが含まれる。適宜、ヘテロシクロ基は、１またはそれ以上の官能基、例えば「アルキル」または「アリール」を対象に記載した官能基で置換してもよい。
【００７３】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロシクロアルキル」とは、特に制限なく、ヘテロシクロアルキル置換基を有する、上記で定義されたようなアルキル基をいい、この中で該「ヘテロシクロ」および／またはアルキル基は、上記で定義されているように適宜置換されうる。
【００７４】
本明細書で用いられている用語「ヘテロアリール」とは、特に制限なく、窒素、硫黄、酸素および／またはＳＯまたはＳＯ2基から選択される１またはそれ以上のヘテロ原子を含む５−、６−または７員芳香族ヘテロ環をいう。かかる環は、別のアリールまたはヘテロアリール環と縮合されてもよく、可能なＮ−オキシドを含んでいてもよい。かかるヘテロアリール基の例には、これらに限らないが、フラン、ピロール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、イソキサゾール、オキサゾール、イミダゾールなどが含まれる。適宜、ヘテロアリール基は、かかる鎖に一般的に結合する１またはそれ以上の官能基、例えば「アルキル」または「アリール」を対象に記載した官能基で置換してもよい。
【００７５】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールアルキル」とは、特に制限なく、ヘテロアリール置換基を有する、上記で定義されたようなアルキル基をいい、この中で該ヘテロアリールおよび／またはアルキル基は、上記で定義されているように適宜置換されうる。
【００７６】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素と結合する上記のアルキル基をいい、例えば、ＣＨ3ＯＣ（Ｏ）−、ＣＨ3ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−またはＣＨ2（ＯＨ）ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−が挙げられる。
【００７７】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールオキシカルボニル」とは、特に制限なく、−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素と結合する上記のアリール基をいう。
【００７８】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素と結合する上記のアラルキル基をいう。
【００７９】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロサイクリルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、ヘテロサイクリル基のいずれかの炭素原子が−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素に結合している上記で定義されているようなヘテロサイクリル基をいう。
【００８０】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロサイクリルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、ヘテロサイクリル基のいずれかの炭素原子が−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素に結合している上記で定義されているようなヘテロサイクリル基をいう。
【００８１】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、ヘテロサイクリル基のいずれかの炭素原子が−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素に結合している上記で定義されているようなヘテロアリールアルキル基をいう。
【００８２】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキルカルバモイル」とは、特に制限なく、−ＮＣ（Ｏ）−基の窒素に結合している上記で定義されているようなアルキル基をいい、例えば、ＣＨ3ＮＨＣ（Ｏ）−、ＣＨ3ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）−または（ＣＨ3）2ＮＨＣ（Ｏ）−が挙げられ、２個のアルキル基が存在する場合は、該アルキル基は適宜結合して４、５、６または７員環を形成でき、例えば、
【化２０】
2008505899.tif 000030
となる。
【００８３】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキルカルバモイル」とは、特に制限なく、−ＮＣ（Ｏ）−基の窒素に結合している上記で定義されているようなアリールアルキル基をいう。
【００８４】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロサイクリルカルバモイル」とは、特に制限なく、−ＮＣ（Ｏ）−基の窒素に結合している上記で定義されているようなヘテロ環基をいう。
【００８５】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキルスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなアルキル基をいい、例えば、ＣＨ3Ｓ（Ｏ）2−、ＣＨ3ＣＨ2Ｓ（Ｏ）2−または（ＣＨ3）2ＣＨ2Ｓ（Ｏ）2−が挙げられる。
【００８６】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなアリール基をいう。
【００８７】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキルスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなアリールアルキル基をいう。
【００８８】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなヘテロアリール基をいう。
【００８９】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールアルキルスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなヘテロアリールアルキル基をいう。
【００９０】
用語「受容体修飾因子」とは、ＧＬＰ−１受容体に作用してその能力を変え、下流シグナル現象を制御する化合物をいう。受容体修飾因子の例には、標準的な薬理学の教科書（例えば、E.M. Ross and T.P. Kenakin in Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th edition (2001)  McGraw Hill, Chapter 2, pp. 31-43）に定義されているような、アゴニスト、アンタゴニスト、部分アゴニスト、インバースアゴニスト、アロステリックアンタゴニストおよびアロステリックポテンシエーターが含まれる。
【００９１】
当業者は本件および当該技術分野で提供されるような用語の意味を容易に認識する。
【００９２】
用語「糖尿病および関連障害または関連症状」は、これらに限らないが、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、耐糖能障害、肥満症、高血糖、シンドロームＸ、代謝異常症侯、糖尿病性合併症、および高インスリン血症をいう。
【００９３】
本明細書で用いられている用語「脂質調節」または「脂質低下」剤は、特に制限なく、ＬＤＬを低下させ、および／またはＨＤＬを上昇させ、および／またはトリグリセリドを低下させ、および／または総コレステロールを低下させる薬剤、および／または脂質障害を治療的に処置する他の公知のメカニズムをいう。
【００９４】
本発明の治療剤の投与には、これに制限されないが、本発明の薬剤の治療上の有効量の投与が含まれる。本明細書で用いられている用語「治療上の有効量」は、特に制限なく、本発明の組成物の投与によって治療されうる症状を治療または予防する治療剤の量をいう。その量は、検出できうる治療または予防または改善効果を示す十分な量である。その効果には、例えば、これに制限されないが、本明細書に挙げられる症状の治療または予防が含まれうる。患者への正確な有効量は、患者の大きさおよび健康状態、治療される症状の状態および程度、担当医の助言、および投与に選択された治療剤または治療剤の組合せに依存する。したがって、前もって正確な有効量を明記しておくことは有用ではない。
【００９５】
本発明のペプチドは、ｏｂ／ｏｂマウスにおけるブドウ糖耐性試験で評価し、以下の実施例２２に記載されているように相対インビボ効力を評価した。本発明のペプチドは、WO 2003/033671（本明細書にそのまま引用される）からの化合物Ｉによって例示されるペプチドに関連した、グルコース低下の効力モデルにおける優れた効能および優れた薬物動態（実施例２５に記載される、イヌでの皮下注射によって測定されるような）を示し、それは表ＩおよびＩＩに図示されている。
【化２１】
2008505899.tif 000031
【化２２】
2008505899.tif 000032
【００９６】
表Ｉ
2008505899.tif 000033
表ＩＩ
2008505899.tif 000034
ＡＵＣ＝曲線下の面積。ＡＵＣ値は、個々の動物においてベースラインとして絶食の血漿グルコース値を用いて計算する。ＡＵＣにおけるパーセントの変化は、同実験においてベヒクル処置された群でのＡＵＣに関して計算される。所定のｐ値は、偏差の解析（ＡＮＯＶＡ）、続くフィッシャーのｐｏｓｔ ｈｏｃテストを用いたベヒクル処置された群と比較して決定する（**ＮＳ＝統計的有意差なし）。
【００９７】
本明細書に記載されているペプチドおよびそのアナログは、様々な固相技術を用いた化学合成、例えばバラニィらの文献［G. Barany and R.B. Merrifield, 「The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology」; Volume 2 -「Special Methods in Peptide Synthesis, Part A」, pp. 3-284, E. Gross and J. Meienhofer, Eds., Academic Press, New York, 1980; およびin J. M. Stewart and J. D. Young, 「Solid-Phase Peptide Synthesis」, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL, 1984.］に記載されている方法によって製造され得る。
【００９８】
本発明における使用の所望の戦略は、アミノ酸側鎖を一時的に保護するためのｔｅｒｔ−ブチル基と共に、α−アミノ基を一時的に保護するためのＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルメチルオキシカルボニル）基に基づく（参照：例えば、E. Atherton and R. C. Sheppard, 「The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group」, in「The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology」; Volume 9 -「Special Methods in Peptide Synthesis, Part C」, pp. 1-38, S. Undenfriend and J. Meienhofer, Eds., Academic Press, San Diego, 1987.）。
【００９９】
本発明のペプチドは、ペプチドのＣ末端から始める不溶のポリマー支持体（「レジン」ともいう）上での段階的な方法で合成できる。合成はアミドまたはエステル結合の形成を通じて該レジンにペプチドのＣ末端アミノ酸を付けることで開始する。これは最後にそれぞれＣ末端アミドまたはカルボン酸として生じているペプチドを外す。あるいは、Ｃ末端アミノアルコールが存在する場合は、ここに記載されているように、Ｃ末端残基は２−メトキシ−４−アルコキシベンジルアルコールレジン（SASRIN(登録商標), Bachem Bioscience, Inc., King of Prussia, PA）に結合してもよく、ペプチド配列構築が完了後、生じたペプチドアルコールはＴＨＦ中のＬｉＢＨ4で外される（参照：J. M. Stewart and J. D. Young, supra, p. 92）。
【０１００】
該合成に用いられるＣ末端アミノ酸およびすべての他のアミノ酸は、α−アミノ保護基が合成中に選択的に除かれ得るように他と異なって保護されたα−アミノ基および（もし存在するなら）側鎖官能基性を有することが要求される。アミノ酸のカップリングは、活性エステルとしてのそれのカルボキシル基の活性化およびレジンに付いたＮ−末端アミノ酸の遮断されていないα−アミノ基との反応によって行われる。α−アミノ基脱保護およびカップリングの進行は完全なペプチド配列が構築するまで繰り返す。該ペプチドは次いで、副反応を制限するために通常適当なスカベンジャーの存在下、側鎖官能基性の同時の脱保護を伴いレジンから脱保護する。生じたペプチドは最終的に逆相ＨＰＬＣで精製される。
【０１０１】
最終的なペプチドへの前駆体として要求されるペプチジルレジンの合成には、市販品として入手可能な架橋ポリスチレンポリマーレジン（Novabiochem、San Diego、CA； Applied Biosystems、Foster City、CA）が利用される。本発明に使用される好ましい固体の支持体は、Ｃ末端カルボキサミド用に、４−（２'，４'−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシアセチル−ｐ−メチルベンズヒドリルアミンレジン（リンク アミド ＭＢＨＡレジン）；９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールドレジン（シーバー アミドレジン）；４−（９−Ｆｍｏｃ）アミノメチル−３，５−ジメトキシフェノキシ）バレリル−アミノメチル−メリフィールドレジン（ＰＡＬレジン）である。最初と後のアミノ酸のカップリングは、ＤＩＣ／ＨＯＢＴ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、またはＤＩＣ／ＨＯＡＴ、ＨＡＴＵ／ＨＯＡＴからそれぞれ生成されるＨＯＢＴまたはＨＯＡＴ活性エステルを用いて行われ得る。本発明に使用される好ましい固体の支持体は、保護されたペプチドフラグメント用に、２−クロロトリチルクロリドレジンおよび９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールドレジン（シーバー アミドレジン）である。２−クロロトリチルクロリドレジンへの最初のアミノ酸の負荷は、ジクロロメタンおよびＤＩＥＡ中のレジンとのＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の反応によって、最もよく達成される。必要なら、少量のＤＭＦを加えてアミノ酸の溶解を促進してもよい。
【０１０２】
本明細書に記載される１１量体ペプチドアナログの合成は、ペプチドシンセサイザー、例えば、アドバンスドケムテック万能ペプチドシンセサイザー(Advanced Chemtech Multiple Peptide Synthesizer)（ＭＰＳ３９６）またはアプライド バイオシステムズ(Applied Biosystems Inc.)ペプチドシンセサイザー（ＡＢＩ ４３３Ａ）を用いて行いうる。ＭＰＳ３９６を用いたなら、９６個までのペプチドが同時に合成された。ＡＢＩ４３３Ａシンセサイザーを用いたなら、個々のペプチドが連続して合成された。どちらの場合ににおいても、順次の固相ペプチド合成は、本明細書に述べられているＦｍｏｃ／ｔ−ブチル保護戦略を利用して行われた。
【０１０３】
Ｘaa11位およびＸaa10位に存在する非天然型で非売のアミノ酸は、２つの方法の１つで、該ペプチド鎖に導入された。最初のアプローチでは、Ｂｏｃ−またはＦｍｏｃ保護された非天然型アミノ酸を適当な有機合成方法を用いて溶液中製造した。生じた誘導体を次いでペプチドの順次の合成に用いた。あるいは、要求される非天然型アミノ酸を、合成有機化学方法を直接用いてレジンの上に作った。非天然型で非売のアミノ酸がＸaa6位または他のいずれかのＸaa位で導入の必要が合った場合、要求されるＦｍｏｃ保護された非天然型アミノ酸を溶液中合成した。かかる誘導体は次いで順次の固相ペプチド合成に用いた。
【０１０４】
本発明に用いる目的物は、以下に示すＦｍｏｃアミノ酸誘導体である。
【化２３】
2008505899.tif 000035
【化２４】
2008505899.tif 000036
【０１０５】
それぞれペプチド用のペプチジルレジン前駆体は、標準的な方法（参照：例えば、D. S. King et al. Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266）を用いて開裂および脱保護してもよい。本発明に用いられる望ましい方法は、スカベンジャーとして水およびＴＩＳの存在下ＴＦＡの使用である。典型的には、該ペプチジルレジンは、室温で２〜６時間ＴＦＡ／水／ＴＩＳ（９４：３：３、ｖ：ｖ：ｖ；１ｍＬ／１００ｍｇのペプチジルレジン）中攪拌される。使い終わったレジンは次いで濾去し、ＴＦＡ溶液を濃縮し、または減圧乾燥する。生じたクルードのペプチドは、沈澱させて、Ｅｔ2Ｏで洗浄するか、またはプレパラティブＨＰＬＣでの精製のためにＤＭＳＯまたは５０％酢酸水に直接溶解させる。
【０１０６】
目的の純度を有するペプチドは、プレパラティブＨＰＬＣ、例えば、ウォーターズ４０００型または島津製作所ＬＣ−８Ａ型液体クロマトグラフを用いる精製で得られる。クルードなペプチドの該溶液を、ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラムに注入し、２２０ｎｍのＵＶ吸収で溶離液をモニターしながら、１４〜２０ｍＬ／分の流速を用いて、どちらも０.１％ＴＦＡで緩衝化されたＭｅＣＮ／水の直線的なグラジエントで溶離する。精製したペプチドの構造は、エレクトロスプレーＭＳ分析で確認できる。
【０１０７】
以下の略号は、実施例および本明細書の他の箇所で用いられる。
Ｐｈ＝フェニル
Ｂｎ＝ベンジル 
ｉ−Ｂｕ＝イソブチル
ｉ−Ｐｒ＝イソプロピル
Ｍｅ＝メチル
Ｅｔ＝エチル
Ｐｒ＝ｎ−プロピル 
Ｂｕ＝ｎ−ブチル
ＴＭＳ＝トリメチルシリル 
ＴＩＳ＝トリイソプロピルシラン
Ｅｔ2Ｏ＝ジエチルエーテル
ＨＯＡｃまたはＡｃＯＨ＝酢酸
ＭｅＣＮまたはＣＨ3ＣＮ＝アセトニトリル
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ＝α，α，α−トリフルオロエタノール
Ｅｔ2ＮＨ＝ジエチルアミン
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリドン
ＤＣＭ＝ジクロロメタン 
ｎ−ＢｕＬｉ＝ｎ−ブチルリチウム 
Ｐｄ／Ｃ＝パラジウム炭素
ＰｔＯ2＝酸化白金
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ｍｉｎ＝分
ｈまたはｈｒ＝時
Ｌ＝リットル
ｍＬまたはｍｌ＝ミリリットル
μＬ＝マイクロリットル
ｇ＝グラム
ｍｇ＝ミリグラム
ｍｏｌ＝モル
ｍｍｏｌ＝ミリモル
ｍｅｑ＝ミリ当量
ｒｔまたはＲＴ＝室温
ｓａｔまたはｓａｔ’ｄ＝飽和
ａｑ．＝水（の）
ｍｐ＝融点
Ｂｉｐ＝ビフェニルアラニン
ＬｉＢＨ4＝水素化ホウ素リチウム
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモ−コハク酸アミド
ＢＯＰ試薬＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ジメチルアミノ−ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート（カストロ試薬）
ＰｙＢＯＰ試薬＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＣＴＵ＝２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＤＭＡＰ＝４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＡＣ＝３−エチル−３'−（ジメチルアミノ）プロピル−カルボジイミド塩酸塩（または１−［（３−（ジメチル）アミノ）プロピル］）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩）
ＦｍｏｃまたはＦＭＯＣ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＢｏｃまたはＢＯＣ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｃｂｚ＝カルボベンジルオキシまたはカルボベンゾキシまたはベンジルオキシカルボニル
ＨＯＢＴまたはＨＯＢＴ・Ｈ2Ｏ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
Ｃｌ−ＨＯＢｔ＝６−クロロ−ベンゾトリアゾール
ＨＯＡＴ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィ
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィ
ＬＣ／ＭＳ＝高速液体クロマトグラフィ／マススペクトル
ＭＳまたはＭａｓｓ Ｓｐｅｃ＝マススペクトル
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＳｃまたはＳＣ＝皮下の
ＩＰまたはｉｐ＝腹腔内
ＧＴＴ＝ブドウ糖耐性試験
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモコハク酸イミド
【０１０８】
式ＩＶａのアミノ酸合成の一般的方法
式ＩＶａの保護されたアミノ酸はいくつかの方法で製造できる。例えば（反応式Ａ）、ヨードブロモ−ヘテロ環ｉ（式中、Ｘ3＝Ｎ）は、標準的な文献の方法で、ボロン酸とパラジウム媒介触媒を介してカップリングし、アリールヘテロ環ブロミドｉｉを与え、それはリチウム化し、ジメチルホルムアミドのようなアシル化剤で反応させてアルデヒド体ｉｉｉを与えることができる。該アルデヒド体は水素化ホウ素ナトリウムまたは類似の試薬でアルコール体ｉｖに還元し、対応するブロミド体ｖは、４８％臭化水素酸中化合物ｉｖの延長した還流によって製造される。オドンネルの方法（O’Donnell，Tetrahedron Letters 39 8775 (1998)）後のキラル触媒を用いた化合物ｖとの２−（ジフェニルメチル−エンアミノ）酢酸 ｔｅｒｔ−ブチルのアルキル化は、キラルなエステル体ｖｉへと導き、それは強い非水系の酸で脱保護およびＦｍｏｃＣｌでの処理後、優位に一方のキラル体のＦｍｏｃ ｔ−ブチルエステル体ｖｉｉを与える。通常の有機溶媒からの化合物ｖｉｉの再結晶化で、エナンチオマー過剰率＞９５％の化合物ｖｉｉｉが得られる。強い非水系の酸を用いた該エステルの除去で、式ＩＶａの化合物が得られる。
【０１０９】
あるいは、式ＩＶａの化合物は、メチルヘテロ環ｉｘ（反応式Ｂ）のラジカル誘導ブロム化してブロモメチルヘテロ環ｘを得ることによって製造できる。上記のオドンネル(O'Donnell)の方法による化合物ｘのアルキル化および類似の再結晶化で、高エナンチオマー過剰率でキラルなエステル体ｘｉｉｉに導かれる。反応式Ａに記載のようなボロン酸カップリングで、式ＩＶａの化合物に導かれる。
【化２５】
2008505899.tif 000037
【化２６】
2008505899.tif 000038
【０１１０】
化合物ｉｘは、オキシ臭化リンでの処理によってヒドロキシヘテロ環ｘｉｖから製造される（反応式Ｃ）。
【化２７】
2008505899.tif 000039
【０１１１】
中間体ｉｘの別の合成には、亜鉛−銅カップリングによる、化合物ｘｖ、メチル−３−イオド−アラネート、および化合物ｉを用いる（反応式Ｄ）。
【化２８】
2008505899.tif 000040
【０１１２】
アリールピリミジニルメチルブロミド体ｘｘｉｉｉ（Ｘ2、Ｘ3＝Ｎ、Ｘ1、Ｘ4＝ＣＲ4a）は、アリールニトリルｘｖ（反応式Ｅ）から製造できる。
【化２９】
2008505899.tif 000041
【０１１３】
ヒドロキシピリミジン体ｘｖｉは、ヒドロキシルアミン塩酸塩での該ニトリル体の処理によって化合物ｘｖから製造される。ピリミジン体ｘｖｉｉは化合物ｘｖｉの水素化から生じる。エノールメチレンマロネートｘｖｉｉｉでの化合物ｘｖｉｉの縮合でピリミジン体ｘｉｘへと導き、それはオキシ塩化リンでクロル化して、化合物ｘｘが得られる。触媒による水素化を経由する脱ハロゲン化により、化合物ｘｘｉへと導き、ＤｉＢＡｌを用いた還元でアルコール体ｘｘｉｉを得る。オキシ臭化リンを用いた該アルコールの処理で不安定なブロミド体ｘｘｉｉｉへと導き、これは保護されたアミノ酸ｖｉを得るために反応式Ａにあるようにすぐに使用しなければならない。
【０１１４】
式ＩＶａ（Ｒ7＝Ｍｅ）の化合物は、カパディアの方法（Kapadia, J. Org. Chem. 66 1903 (2001)）でオキサゾリジン体ｘｘｉｖから製造される（反応式Ｆ）。カリウムヘキサメチルジシラジドまたは他の強塩基を用いる化合物ｖとの化合物ｘｘｉｖのアルキル化で、化合物ｘｘｖを得る。化合物ｘｘｖの強酸加水分解、続く該アミンの保護（ＦｍｏｃＣｌまたはＦｍｏｃＯＳｕなどを用いる）で、式ＩＶａのタイプの化合物を得る。
【化３０】
2008505899.tif 000042
【０１１５】
ペプチド化学分野における当業者には、アミノ酸がＤおよびＬ異性体の両方として生じ、本発明が本明細書に記載されたペプチドの合成に導入されたアミノ酸の異性体のいずれかまたは混合物の使用を含むことは承知されている。
【０１１６】
実施例１
１１量体ペプチドの同時固相ペプチド合成
ＭＰＳ−３９６ペプチドシンセサイザーによる自動同時合成プロトコールを用いる連続するペプチド鎖伸張の前に、Ｘaa10位およびＸaa11位にアミノ酸を含むジペプチジルレジンを、バッチ単位のモードで以下の手動の方法を用いて製造した。手動によるカップリングに用いられるＮ−α−Ｆｍｏｃ保護されたビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン誘導体の合成は、上記の一般的な実験に、および実施例１０〜１６および実施例２１〜２２に同様に記載されている。
【０１１７】
いくつかの１１量体アナログ合成に十分な９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−３−イルオキシ−メリフィールドレジン（シーバーアミドレジン；負荷量：０.５〜０.７ｍｍｏｌ／ｇ）の量は、ＤＭＦ（４×１０ｍＬ／ｇ、５分）で洗浄して増やした。Ｆｍｏｃ基は次いで、２つの処理、すなわち、それぞれ５および１５分で、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（１０ ｍＬ／ｇ）での処理を用いて除去した。該レジンは、ＤＭＦ（４×１０ｍＬ／ｇ）およびＮＭＰ（４×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。０.５Ｍ Ｆｍｏｃ−Ｌ−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン−ＯＨ（ＨＣｌ塩）（１.１当量）、（または式ＩＶａで表されるいずれかの他のアミノ酸の同化合物）、ＰｙＢＯＰ（１.１当量）およびＤＩＥＡ（３.３当量）のＮＭＰ溶液を、該レジンに加えた。次いでレジンを振り混ぜ、１６〜２４時間ボルテックスした。カップリングの完了は定性的ニンヒドリン試験を用いてモニターした。レジンを排水し、ＮＭＰ（３×１０ ｍＬ／ｇ）およびＤＭＦ（３×１０ ｍＬ／ｇ）で洗浄し、１０％無水酢酸／ＤＣＭ（１０ ｍＬ／ｇ）で９０分間処理した。ＤＣＭ洗浄（４×１０ ｍＬ／ｇ）後、媒介されたＤＩＣ／ＨＯＡｔを用いた第２の手動カップリングサイクルは次いで、２０％ピペリジン／ＤＭＦでＦｍｏｃ基の除去から始め、カップリングステップにおいて式ＩＩで表されるようなＦｍｏｃ保護されたビフェニルアラニンアナログを用いて、行った。この合成反応式で、目的のＦｍｏｃ保護されたジペプチジル−シーバーアミドレジンを生成した。
【０１１８】
計画されたアナログのセットの合成に要求されるかかるジペプチジルレジンは、以下の方法における１回のランにつき９６個までのペプチドの自動ＭＰＳ合成に用いられた。該ジペプチジルレジンは、ジクロロメタン／ＤＭＦ（６０:４０）中の懸濁液として、アドバンスドケムテックＭＰＳ ３９６ シンセサイザーの９６ウェル反応器の中に、反応器のウェルあたりレジンの０.０１〜０.０２５ｍｍｏｌ（２０〜５０ｍｇ）に対応する量で、負荷された。反応器は該機器の上にセットされ、排水された。ウェルは次いでＤＭＦ（０.５〜１.０ ｍＬ、３×２分）で洗浄され、あらかじめプログラムされた配列合成表によって決定されているようなそれぞれのペプチド配列を集めるのに要求されている自動カップリングサイクルの数に合わせた。
【０１１９】
典型的な０.０２５ｍｍｏｌ／ウェルの９６個の化合物の同時合成に用いられる詳細な段階的合成プロトコールは、以下に記載されている。このプロトコールは、個々の１回のランあたり１２〜９６の範囲のアナログの配列の同時合成に適用された。一般的な合成プロトコールは、反応式１に図示されている。
【化３１】
2008505899.tif 000043
【０１２０】
合成を開始する前に、以下の試薬溶液を調製し、要求されるように機器に置いた：１.５Ｍ（１５％）ピペリジン／ＤＭＦ；０.５Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ；０.３６Ｍ ＤＩＣ／ＮＭＰ；１Ｍ（１０％）無水酢酸／ＤＭＦ。要求されるＦｍｏｃ保護されたアミノ酸を０.３６Ｍの０.３６Ｍ ＨＯＡｔ／ＮＭＰ溶液として調製し、３２位のアミノ酸ラックにおける適当な位置に置いた。
【０１２１】
上記で調製されたＦｍｏｃ保護されたジペプチジルレジンは２０％ピペリジン／ＤＭＦ（１.０ｍＬ；１×５分；１×１５分）での処理により脱保護された。レジンは次いでＮＭＰ（８×１.０ ｍＬ）で洗浄された。
【０１２２】
次のアミノ酸、典型的にはＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、または要求されるなら適当な直交の保護をされた別のＦｍｏｃ−アミノ酸のカップリングは、適当なＦｍｏｃ−アミノ酸（０.０７５ ｍｍｏｌ、３.０当量）、ＨＣＴＵ（０.０７５ ｍｍｏｌ、３.０当量）およびＤＩＥＡ（０.１５ ｍｍｏｌ、６.０当量）のＮＭＰ（１ ｍＬ）溶液の手動でのすべてのウェルへの添加によって行われた。窒素気圧（３〜５ｐｓｉ）による反応器の排出およびＮＭＰ（４×１.０ ｍＬ）でのウェルの洗浄後、カップリングは３時間続けられた。
【０１２３】
次のカップリングサイクルは、上記で述べられているようなＦｍｏｃ基の除去から始め、この位置で望まれる配列の置換によって要求されるようなＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの、または異なるＦｍｏｃ−アミノ酸のカップリングが含まれた。該カップリングは、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ用に記載されたカップリングに一致する方法で実施された。次のカップリングステップは、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは他の選択されたＦｍｏｃ−アミノ酸のいずれかを、要求されているこの配列の位置に導入する同じ方法で実施された。
【０１２４】
次のＦｍｏｃ−アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｐｈｅ−ＯＨまたはそれのアナログ）は以下のようにカップリングした：通常の方法でのＦｍｏｃの脱保護後、Ｆｍｏｃ−アミノ酸（１〜５当量）、ＨＯＡｔ（１〜５当量）およびＤＩＣ（１〜５当量）は、ＮＭＰ（１.０ ｍＬ）溶液として手動で加えられ、該カップリングは１６〜２４時間続けられた。該カップリングはこのケースでは繰り返さなかった。通常のカップリング後の洗浄の後、該ペプチジルレジンを本明細書中で記載しているような無水酢酸でキャッピングした。
【０１２５】
次のカップリングステップには、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたはこの位置での配列置換によって要求されるような置換アナログが含まれた。１０当量のＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは置換アナログが用いられ、該カップリングが１６時間続けられ、用いられたカップリング試薬がＮＭＰ中のＤＩＣ／ＨＯＡｔであること以外は、該カップリングはＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨおよびそのアナログの初期のＭＰＳカップリングに記載されているように行われた。通常のカップリング後の洗浄の後、該ペプチジルレジンを１０％無水酢酸／ＤＣＭ（１×１ｍＬ×６０分）でキャッピングした。
【０１２６】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨのカップリングに記載されている同一のカップリングプロトコールが使用され、次の３つのアミノ酸残基に繰り返された。Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨは、上記段落で記載されているＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ残基として、目的の１１量体ペプチドアナログの配列アセンブリを完成させるために、カップリングした。ある配列の位置で要求される市販品としておよび非市販品として入手可能な非天然型アミノ酸のカップリングのために、６位（Ｘaa6）での新規なアミノ酸用に上述されたカップリングと類似の単一のカップリングプロトコールを用いた。
【０１２７】
最終的に、Ｆｍｏｃ基を、上述のように２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去し、該ペプチジルレジンをＤＭＦ（４×１.０ ｍＬ）およびＤＣＭ（４×１.０ ｍＬ）で洗浄した。該レジンを次いで、１０〜１５分窒素ガス（５ｐｓｉ）の定圧を用いて反応器ブロック上で乾燥した。
【０１２８】
ａ．開裂／脱保護
目的のペプチドは、以下のようなＴＦＡ開裂混合物で処理して、それぞれのペプチジルレジンから、開裂／脱保護された。ＴＦＡ／ＤＣＭ／トリ−イソプロピルシラン（７０：２８：２）（１.０ｍＬ）の溶液は、反応器のブロック内の各ウェルに加えられ、次いで１０分間ボルテックスした。これはもう２回繰り返され、ウェルからの該ＴＦＡ溶液は、風袋を量る前の、反応器の底の上にマッチングした９６のバイアルブロックにあるバイアルの中に正圧によって収集された。該バイアルはキャップされ、さらに９０分間弱くボルテックスされた。該バイアルはキャップせずに、スピードバック(登録商標)（サバント）で約０.２ｍＬの量まで濃縮した。該クルードなペプチドは、次いで更にジイソプロピルエーテル（３ｍＬ）を加えて、短くボルテックスして沈殿化した。沈澱物は遠心分離で小さくまとめ、上清をデカントした。該バイアルはスピードバック(登録商標)（サバント）で乾燥し、典型的には＞１００％の収率（２０〜４０ｍｇ）でクルードなペプチドを得た。該クルードなペプチドは、以下のプレパラティブＨＰＬＣで精製するために、２ｍＬの０.６％水酸化アンモニウムに直接溶かした。
【０１２９】
ｂ．クルードなペプチドのプレパラティブＨＰＬＣ精製
プレパラティブＨＰＬＣは、ウォーターズ４０００型または島津製作所ＬＣ−８Ａ型液体クロマトグラフで実施した。クルードなペプチドの各溶液をＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラムに注入し、どちらも０.１％ＴＦＡで緩衝化されたＭｅＣＮ／水の直線的なグラジエントで溶離した。用いた典型的なグラジエントは、１４ ｍＬ／分の流速で、１５分かけて２０％〜５０％［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］で、２２０ｎｍの流出ＵＶ検出であった。溶離した目的の生成物は、典型的には１０〜１１分後不純物とよく分離し、通常フラクションコレクターに単一の１０〜１５ｍＬのフラクションに集められた。目的のペプチドは、ＨＰＬＣフラクションの凍結乾燥でアモルファスの白色散剤として得られた。
【０１３０】
ｃ．精ペプチドのＨＰＬＣ分析
上記のようにプレパラティブＨＰＬＣで精製後、各ペプチドはＳＣＬ−１０Ａシステムコントローラー、ＳＩＬ−１０Ａ自動注入装置、ＳＰＤ１０ＡＶまたはＳＰＤ−Ｍ６Ａ ＵＶ／ＶＩＳ検出器、またはＳＰＤ−Ｍ１０Ａダイオードアレイ検出器からなる島津製作所ＬＣ−１０ＡＤまたはＬＣ−１０ＡＴ分析用ＨＰＬＣシステムの分析ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。ＹＭＣ ＯＤＳ Ｓ３（４.６×５０ｍｍ）カラムを用い、溶離は以下のグラジエントの一つを用いて行った：８分かけて１０〜７０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ａ）；８分かけて５〜８０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｂ）；８分かけて５〜７０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｃ）；８分かけて２５〜７５％Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｄ）；８分かけて２０〜７５％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｅ）；８分かけて１５〜７０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｆ）；８分かけて１０〜９０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｇ）；８分かけて２０〜６５％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｈ）；８分かけて５〜９０％ Ｂ／Ａ、２.０ｍＬ／分（方法Ｉ）；８分かけて５〜９０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｊ）；８分かけて２０〜８０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｋ）；８分かけて１０〜１００％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｌ）；８分かけて１０〜７５％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｍ）。移動相Ａ：０.１％ ＴＦＡ／水；移動相Ｂ：０.１％ ＴＦＡ／アセトニトリル。純度は典型的には＞９０％だった。
【０１３１】
ｄ．マススペクトル分析による構造確認
各ペプチドは、フローインジェクションまたはＬＣ／ＭＳモードにてエレクトロスプレイマススペクトル分析（ＥＳ−ＭＳ）で構造確認した。ファインニガン(Finnigan)ＳＳＱ７０００ 単一四極子マススペクトル装置（ThermoFinnigan、San Jose、CA）を、正および負イオンエレクトロスプレーモードにてすべての分析で用いた。フルスキャンデータは、１.０秒のスキャン時間で３００〜２２００ａｍｕのマス範囲にわたって要求された。四極子は単位導入法(unit resolution)で操作した。フローインジェクション分析のために、マススペクトル装置はウォーターズ６１６ ＨＰＬＣポンプ（Waters Corp.、Milford、MA）に調整され、ＨＴＳ ＰＡＬ自動注入装置（CTC Analytics、Zwingen、Switzerland）が添えられた。サンプルは０.１％水酸化アンモニウムを含む水：アセトニトリル＝５０：５０の移動相に注入した。分析の流速は０.４２ｍＬ／分であり、注入量は６μｌであった。サーモセパレーションズ コンスタメトリック(ThermoSeparations Constametric)３５００液体クロマトグラフ（ThermoSeparation Products、San Jose、CA）およびＨＴＳ ＰＡＬ自動注入装置を、ＬＣ／ＭＳ分析用に用いた。クロマトグラフ分離は、ルナ(Luna)Ｃ18、５ミクロンカラム、２×３０ｍｍ（Phenomenex、Torrance、CA）を用いて行った。分析の流速は１.０ｍＬ／分であり、カラム排出はエレクトロスプレイインターフェイスの中への流量を４００μl／分にするよう分配した。４分かけた０％〜１００％ Ｂ／Ａの直線的グラジエントを操作し、その中で移動相Ａは１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む水：アセトニトリル＝９８：２であり、移動相Ｂは１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む水：アセトニトリル＝１０：９０であった。ＵＶの応答は２２０ｎｍでモニターした。該サンプルを２００μlのＨ2Ｏ：ＭｅＣＮ＝５０:５０（０.０５％ ＴＦＡ）に溶かした。注入量は５μｌであった。
【０１３２】
すべての場合において、実験的に測定された分子量は、計算されたモノ同位体の分子量の０.５ダルトン以内であった。
【０１３３】
実施例２
Ａ．Ｎ−アシル化された１１量体ペプチドアナログ合成の一般的方法（反応式２）.
Ｎ−アシル化した１１量体ペプチドアナログの合成は、反応式２に示すように、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０１５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造した。Ｆｍｏｃ基は本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、本明細書に記載されている一般的方法に記載されているカップリングプロトコールを用いて、関連したＦｍｏｃ保護されたアミノ酸またはカルボン酸とカップリングされた。適当な無水物が入手可能な場合は、Ｎ−アシル化はＮＭＰ中の５当量の無水物を用いて行った。生じたＮ−アシル化された１１量体アナログ（３）は開裂／脱保護され、本明細書に記載されている一般的方法で、プレパラティブＨＰＬＣで精製した。
【化３２】
2008505899.tif 000044
【０１３４】
Ｂ．１１量体ペプチドアナログのＮ−カルバメート誘導体合成の一般的方法
１１量体ペプチドアナログのＮ−カルバメート誘導体の合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０１５ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、三級アミンのような適当な塩基の存在下関連したクロロホルメート体と、あるいはジカルボネートと、またはｐ−ニトロフェニルまたはフェニルまたはヒドロキシ−スクシンイミジルカルボネートのような活性なカルボネートと反応させる。
【０１３５】
Ｃ．１１量体ペプチドアナログのＮ−ウレア誘導体合成の一般的方法
１１量体ペプチドアナログのＮ−ウレア誘導体の合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０２５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、例えば文献（K. Burgess et al., J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 1556-1564）にあるように製造した関連したイソシアネートと反応される；あるいはレジン中間体２は関連したカルバモイルクロリドと反応され得る。同様に、１０量体ペプチドアナログのＮ−ウレア誘導体は、保護された１０量体ペプチジルレジン中間体から始め、Ｆｍｏｃの除去および生じたペプチジルレジン中間体の関連したイソシアネートまたはカルバミルクロリドとの反応で製造してよい。
【０１３６】
Ｄ．１１量体ペプチドアナログのＮ−スルホンアミド合成の一般的方法
１１量体ペプチド アナログのＮ−スルホンアミドの合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０２５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、関連したスルホニルクロリドと反応される。同様に、１０量体ペプチドアナログのＮ−スルホンアミドは、保護された１０量体ペプチジルレジン中間体から始め、Ｆｍｏｃの除去および生じたペプチジルレジン中間体の関連したスルホニルクロリドとの反応で製造してよい。
【０１３７】
Ｅ．            １１量体ペプチドアナログのＮ−スルホニルウレア誘導体合成の一般的方法
１１量体ペプチドアナログのＮ−スルホニルウレア誘導体の合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０２５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、関連したスルファモイルクロリド Ｒ4Ｒ5Ｎ−ＳＯ2−Ｃｌと反応して、スルホニル尿素中間体を産生する（参照：例えば、P. Davern et al. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 2, 1994 (2), 381-387）。同様に、１０量体ペプチドアナログのＮ−スルホニル尿素誘導体は、保護された１０量体ペプチジルレジン中間体から始め、Ｆｍｏｃの除去および生じたペプチジルレジン中間体の関連したスルファモイルクロリド Ｒ4Ｒ5Ｎ−ＳＯ2−Ｃｌとの反応で製造してよい。
【０１３８】
実施例３
アプライド バイオシステムズ モデル ４３３Ａ ペプチドシンセサイザーを用いた１１量体ペプチドアナログの固相合成
以下が、アップグレードされたアプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)モデル ４３３Ａ ペプチドシンセサイザーを用いた、典型的な１１量体ペプチドアナログの固相合成の一般的記載である。アップグレードされたシンセサイザーのハードウェアおよびソフトウェアは、カップリングのフィードバックコントロールで、Ｆｍｏｃ脱保護ステップの伝導率のモニタリングを可能にした。該プロトコールは、０.０５〜１.０ｍｍｏｌの合成スケールの範囲が許容された。
【０１３９】
２つの非天然型Ｃ末端アミノ酸の導入は、１１量体アナログの同時合成に関連して、上記に記載した。かかるＦｍｏｃ保護されたジペプチジルレジンは、このＡＢＩ合成に用いられた。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.１ ｍｍｏｌ）は、機器上の適当なサイズの容器の中に入れ、６回ＮＭＰで洗浄し、２２％ピペリジン／ＮＭＰ（各々２および８分）での２回の処理を用いて脱保護した。１または２回の追加のモニタリングされた脱保護ステップは、モニタリングの選択の条件を満足するまで行った（最後の２つの伝導率基準の脱保護ピークの間の差は＜１０％）。全脱保護時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジルレジンはＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングした。手順は次ステップに用いられている実施例によって図示されている。
【０１４０】
このように、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨは、以下の方法を用いて次にカップリングした：Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、１０当量）を２ｍＬのＮＭＰ中溶解し、０.４５Ｍ ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔのＤＭＦ（２.２ ｍＬ）溶液および２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１ｍＬ）の続く添加で活性化した。活性化されたＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の溶液を次いで反応容器に移し、該カップリングを、脱保護ステップからのフィードバックに依存して、３０〜６０分間を続けた。該レジンを次いでＮＭＰで６回洗浄し、目的の配列の集合体を完成させるために、上述のような追加の脱保護／カップリングサイクルを８回行った。連続して用いられたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｐｈｅ（２−フルオロ）−ＯＨまたはそのアナログ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨであった。最終的に、上記で述べたように、該Ｆｍｏｃ基は２２％ピペリジン／ＮＭＰで除去され、該ペプチジルレジンをＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄し、真空乾燥した。
【０１４１】
あるいは、Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸（０.２６ｍｍｏｌ）が０.５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（０.５２ｍＬ）およびＤＩＣ（４０μＬ）のその後の添加によって活性化され、手動で反応容器に移され、１４〜１８時間カップリングされた修正されたカップリングプロトコールが用いられた。
【０１４２】
Ａ．開裂／脱保護
目的のペプチドは、ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９６：２：２）（３.０ｍＬ）の溶液で２時間処理して、そのそれぞれのペプチジルレジンから開裂／脱保護した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ｍＬ）ですすぎ、およびＴＦＡ濾液を合わせて、３５ｍＬのＥｔ2Ｏに加えた。生じた沈殿物を遠心分離で集め、最終的に乾燥し、白色の固形物としてクルードなペプチド生成物を得た（２３２ｍｇ）。これを本明細書に記載のようにプレパラティブＨＰＬＣで精製した。用いたグラジエントは、４０分かけての１５％〜４５％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］であった。純粋な生成物を含むフラクションは、集められ、凍結乾燥され、純粋な生成物を得た（２８.４ｍｇ、回収率：１８％）。
【０１４３】
実施例４
式ＩＩおよびＩＶａで表されるＸaa10位およびＸaa11位でのビフェニルアラニンおよびフェニル−ヘテロアリール−アラニンアナログの合成
Ｘaa10位およびＸaa11位の残基が、式ＩＩおよびＩＶａで表される置換アミノ酸アナログ、すなわち、ビフェニルアラニンアナログ（Ｂｉｐアナログ）またはフェニル−ヘテロアリール−アラニンアナログによって表されたこれらのアナログでは、ペプチド鎖への導入は、以下の２つのアプローチの一つで実施された。
【０１４４】
Ａ．アプローチＡ：固相スズキ縮合
アプローチＡにおいて、固相スズキ縮合は、その後の固相ペプチド合成を実施するのに適した様式で要求される修飾されたビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン残基を製造するのに実施され、ターゲットのペプチドを得た。ターゲットのペプチドにおけるＸaa11位のアミノ酸が修飾されたビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン残基で表される場合、反応式３に示されるように製造された。Ｂｏｃ α−アミン保護基除去後、鎖の伸張は、前のセクションに記載されているように、多様なペプチド合成を用いて続けられ、目的の１１量体ペプチドまたはそれの誘導体を得た。修飾されたビフェニルアラニンアナログがターゲットのペプチドのＸaa10位にある場合、要求されるアミノ酸は反応式４に示されるように、固体の支持体上の適切なジペプチド前駆体を用いて製造された。
【０１４５】
要求される修飾されたビフェニルアラニン誘導体を含む生じたジペプチジル部分は次いで、ターゲットの１１量体ペプチドまたはそれの誘導体の合成を行うのに用いた。Ｘaa10位およびＸaa11位の両方が新規なビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン残基を要求した場合、２つの一連の固相スズキ反応は反応式５（下記）に示すように実施された。
【０１４６】
１．Ｘaa11位で式ＩＶａで表されるアミノ酸を含むシンフェーズ(登録商標)ランタンの製造の一般的方法（スズキカップリング）
【化３３】
2008505899.tif 000045
【０１４７】
ａ．一般的方法Ａ
クノール結合(Knorr linkage)（Ｂｏｃ−アミノ酸−レジン）またはアミノ酸−クノール結合（Ｂｏｃ−ジペプチド−レジン）を介して直接結合したＮα−Ｂｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸残基またはＮα−Ｂｏｃ−Ｌ−４−ヨードフェニルアラニン残基で誘導化されたシンフェーズ(SynPhase)(登録商標)ランタン(Lantern)（Ａシリーズ（０.０７５ ｍｍｏｌ／ランタン）またはＤシリーズ（０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン）、ミモトープス(Mimotopes)製）を、ネジの蓋付きの１３×１００ｍｍガラス培養チューブに入れた。（以下の方法はＤシリーズランタンに用いた。反応物の同様の比を、Ａシリーズランタンを含む反応に用いた。）アリール−またはヘテロアリール−ボロン酸（０.１４０ｍｍｏｌ、４当量）を０.３０ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドに溶かした。生じた溶液を１３×１００ｍｍガラス培養チューブ中の該ランタンに加えた。
【０１４８】
リン酸カリウム（０.２８０ｍｍｏｌ、８当量、２Ｍ水溶液の０.１４ ｍＬ）をアリール−またはヘテロアリール−ボロン酸溶液に加え、続いて４.０ｍｇのテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）触媒（約１０モル％、０.００３５ ｍｍｏｌ）を含む０.１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液を加えた。生じた混合物を窒素で覆い、反応容器をしっかりと蓋をし、軌道型振とう器において１７〜２０時間８０℃で置いた。Ｂｏｃ基開裂の前に、該ランタンを濾過器具に移し、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３×１ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１ｍＬ）で洗浄した（ランタンあたり、最低３分／洗浄サイクル）（以下の一般的方法を参照）。
【０１４９】
ｂ．一般的方法Ｂ
反応は、別の触媒を用いる以外は一般的方法Ａのように行った。この手順のために、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）を触媒として用いた。Ｄ−シリーズランタンスケールの反応のために、約１０ｍｏｌ％（０.００３５ｍｏｌ）触媒を用いた。
【０１５０】
２．Ｂｏｃ基の開裂方法
ａ．方法Ａ
（以下の方法をＤシリーズランタンに適用させる：０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン。同様に適切に量られた方法が、Ａシリーズランタン用に用いられた：０.０７５ｍｍｏｌ／ランタン。）一般的方法ＡまたはＢに記載のようにして製造されたＢｏｃ保護されたランタンを、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、２，６−ルチジンおよびジクロロメタン（容量比 １：１：３）を含む０.５ｍＬの試薬溶液で処理した。それぞれ緩和な攪拌しながら１時間のかかる２つの試薬処理後、該レジンをジクロロメタン（４×１.０ ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×１.０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１.０ｍＬ）で洗浄した。該ランタンを次いで、ペプチド合成シークエンスの次のアシル化（カップリング反応）に付した。
【０１５１】
ｂ．方法Ｂ
一般的方法ＡまたはＢに記載されているように製造されたＢｏｃ保護されたランタンは、緩和な攪拌しながら室温で１時間０.５ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ／無水１，４−ジオキサンで処理した。該ランタンは、１，４−ジオキサン（２×１.０ｍＬ）、１０％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン／Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（容量：容量）（２×１.０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３×１.０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１.０ｍＬ）で洗浄し、次工程のアシル化（カップリング反応）ステップに用意される遊離のアミノ−ランタンを得た。
【０１５２】
実施例６
Ｘaa10位で修飾されたビフェニルアラニン残基を含むランタン製造の一般的方法
スズキカップリングに代わる上述の一般的方法（ＡおよびＢ）は、反応式４に示されるように、シンフェーズ(登録商標)ランタンに結合するアミノ酸（Ｘaa11位で）で開始し、Ｘaa10位で修飾したＰｈｅを含む要求されるジペプチジルランタンを得るのに利用された。
【化３４】
2008505899.tif 000046
【０１５３】
実施例７
Ｘaa10位およびＸaa11位の両方で式ＩＩおよび式ＩＶａで表されるアミノ酸を含むランタン製造の一般的方法
Ｘaa11位が修飾されたアナログ用に上述された方法（反応式１）の活用およびスズキカップリング方法の２つの連続する回数での実施により、以下の反応式５に図示のように、Ｘaa10位およびＸaa11位の両方で修飾されたフェニルアラニンおよびフェニル−ヘテロアリールアラニン残基を含むジペプチジルランタンを産生した。
【０１５４】
実施例８
シンフェーズ(登録商標)ランタンにおけるペプチドのアシル化／伸張の一般的方法
ａ．Ｆｍｏｃ脱保護の方法
Ｄシリーズ シンフェーズ(登録商標)ランタン（０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン負荷）を、０.５ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（８：２、容量：容量）に加えた。弱く攪拌した。１時間後、該ランタンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×１.０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１.０ ｍＬ）で洗浄し、ランタンを少なくとも３分／洗浄に浸した。
【０１５５】
ｂ．アシル化／アミノ酸カップリングの方法（反応式６）
側鎖およびα−アミン保護されたアミノ酸（０.１０５ ｍｍｏｌ）を、０.５ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（１：１）に溶解した。この溶液に、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０.１０５ ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０.３１５ ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド（０.１０５ ｍｍｏｌ）を加えた。α−アミン保護されたペプチドを含んだＤシリーズランタン（０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン）を該溶液に加えた後、アミノ酸溶液を１０分間置いた。バイアルに蓋をし、弱く１６〜２０時間攪拌した。該ランタンを次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×１.０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１.０ｍＬ）で洗浄し、ランタンを３〜５分／洗浄サイクルに浸した。
【化３５】
2008505899.tif 000047
【化３６】
2008505899.tif 000048
【０１５６】
実施例９
フラグメント縮合を介するペプチド製造の一般的方法
アプローチＡにおいて、固相スズキ縮合は、実施例７に記載のように、Ｘaa10位およびＸaa11位で式ＩＩ、式ＩＶａで表される要求されるアミノ酸を製造するのに実施された。該ジペプチドは、同時（方法Ａ）または連続する（方法Ｂ）Ｎ末端α−アミン保護基の除去を伴って、支持体から開裂された。該ジペプチドは次いで完全に側鎖を保護した９個のアミノ酸ペプチドにカップリングさせた（下記参照）。続く側鎖の脱保護および精製により、目的の１１量体ペプチド生成物を生じた。
【０１５７】
Ａ．アプローチＡ：溶液相フラグメント縮合
アプローチＡにおいて、Ｂｏｃ保護されたまたはＦｍｏｃ保護されたＮ末端α−アミンを伴ったシンフェーズ(登録商標)ランタンに結合した目的のジペプチドを製造するために、固相スズキ縮合およびアシル化（実施例７に記載のように）を実施した。該ジペプチドは、酸性条件下ランタン支持体から開裂された。Ｂｏｃ保護されたＮ末端α−アミン化合物の場合、酸性開裂は反応式７に示されるように、α−アミンの同時の脱保護に至らし、これらは精製されるか、またはフラグメントカップリング工程に直接持って行った。
【０１５８】
Ｆｍｏｃ保護されたＮ末端α−アミン化合物を含むジペプチドは、反応式８に示すように、酸性条件下開裂され、Ｎ末端α−アミンは溶液中脱保護された。これらのジペプチドは精製され、次いでフラグメントカップリング工程に持って行った。
【０１５９】
１．シンフェーズ(登録商標)ランタンからのジペプチド開裂の方法
ａ．方法Ａ（Ｂｏｃ保護されたジペプチド；反応式７参照）
Ｄシリーズシンフェーズ(登録商標)ランタンは、１ドラムガラスバイアルに入れられた。トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１、０.５ ｍＬ）の溶液を、該バイアルに加えた。該バイアルに蓋をし、軌道型振とう器（１００ｒｐｍ）上で２時間弱く振とうした。開裂した溶液を新しいバイアルに移し、更に０.５ ｍＬトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１）を該ランタンに加えた。バイアルを再度蓋し、軌道型振とう器（１００ｒｐｍ）上で２時間弱く振とうした。第２の開裂した溶液を第１の溶液に加え、該ランタンをジクロロメタンですすいだ。すすぎ液を先の開裂した溶液に加え、溶媒を蒸発させてα−アミンのトリフルオロ酢酸塩として、ジペプチドを得た。
【化３７】
2008505899.tif 000049
【０１６０】
ｂ．方法Ｂ（Ｆｍｏｃ保護されたジペプチド化合物；反応式８）
Ｆｍｏｃ保護されたジペプチドは、方法Ａにおいて上述されているように、シンフェーズ(登録商標)ランタンから開裂された。該ランタンはジクロロメタンですすがれ、すすぎ液／開裂した溶液の混合液から溶媒は蒸発させた。生じた残渣（１ドラムバイアル中）に、０.４０ｍＬのジメチルホルムアミド／ピペリジン(８：２)（容積：容積）を加えた。バイアルを蓋し、４５分間反応を行った。残っている溶媒を蒸発して除去し、生じた生成物を、Ｃ−１８カラムおよびＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ／ＴＦＡ溶媒系を用いてＨＰＬＣで精製し、（溶媒を蒸発後）α−アミンのトリフルオロ酢酸塩としてジペプチドを得た。
【化３８】
2008505899.tif 000050
【０１６１】
２．側鎖保護された９量体ペプチド Ｃ末端カルボン酸の固相合成の方法（反応式９）
Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）、０.５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（５当量）およびＤＩＣ（５当量）のＮＭＰ（５ ｍＬ）溶液を、室温で１８時間（Ｌ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−２−クロロ−クロロトリチルレジン（３.０ ｇ、２.１６ ｍｍｏｌ）と共にボルテックスした。ＮＭＰで数回洗浄後、Ｆｍｏｃ基を、１.５Ｍ ピペリジン／ＤＭＦで２回（５分および１０分）処理して除去した。そのカップリングにＦｍｏｃ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（２−Ｒ−６−Ｒ”）−ＯＨおよびＢｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをそれぞれ１.１当量および１.５当量用いること、およびＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（２−Ｒ−６−Ｒ”）−ペプチジルレジン上にカップリングするのにＨＡＴＵ／ＨＯＡｔおよびＤＩＥＡ（４当量）を用いること以外、これらのカップリングおよび脱保護ステップを７回繰り返して、目的の配列を集めた。
【０１６２】
集めることが完結したとき、該ペプチジルレジンをＤＣＭで洗浄し、次いで保護された９量体ペプチドＣ末端カルボン酸を、室温で１時間ＤＣＭ／ＡｃＯＨ／ＴＦＥ（８：１：１、ｖ：ｖ：ｖ）で処理してすすぎ液から除いた。該レジンを濾去し、濾液を蒸発乾固させ、ＡｃＣＮ／水（２：１）中に溶かし、２回凍結乾燥し、純粋な生成物を得て（２.７７７ｇ、８１％）、更に精製することなく続くフラグメントカップリングステップに用いた。
【化３９】
2008505899.tif 000051
【０１６３】
３．溶液相フラグメントカップリング反応の方法
これらの反応は、１ドラムバイアル中の単一化合物形式中および２ｍＬの９６ウェルプレート中の化合物のパラレルアレイ中の両方において実施された。以下の記載（反応式１０に示される）は単一化合物の場合に適用されるが、９６ウェルプレート中で実施される反応に完全に類似している。
【０１６４】
ジペプチド（０.０１ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ塩は、１.５ ｍＬのガラスバイアル中、０.５％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含む０.２５ｍＬのＴＨＦに溶かした。大きな孔のカルボネートレジン（ＭＰ−カルボネート、０.０３ ｍｍｏｌ、Argonaut Technologies）をバイアルに加えた。バイアルに蓋をし、室温で２時間攪拌した。該溶液を濾過し、過剰の溶媒を蒸発して除いた。
【０１６５】
側鎖が保護された９量体ペプチドＣ末端カルボン酸（０.００８ ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、０.００８ｍｍｏｌ）を含むクロロホルム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９：１）溶液（０.１５ ｍＬ）を、ジペプチドアミンを含むバイアルに加えた。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、０.０８ｍｍｏｌ）を、０.０５ ｍＬのクロロホルム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９：１）溶液に加えた。バイアルに蓋をし、反応液を室温で１６時間軌道型振とう器上で攪拌した。残った溶媒をバイアルから蒸発させた。
【０１６６】
１１量体ペプチド側鎖およびＮ末端α−アミンを、０.４０ ｍＬのトリフルオロ酢酸／トリイソプロピルシラン（ＴＦＡ／ＴＩＳ）（９７.５：２.５）で１時間脱保護した。残った溶媒を蒸発して取り去り、該１１量体ペプチド生成物を次いでＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ／ＴＦＡ溶媒系を用いて、目的の生成物の集合体の検出によって流出の収集を誘発してＨＰＬＣで精製した。
【化４０】
2008505899.tif 000052
【０１６７】
Ｂ．アプローチＢ：溶液中でのスズキカップリングを用いた式ＩＩおよびＩＶａで表されるＦｍｏｃ−アミノ酸アナログの合成
以下の実施例は、式ＩＩおよびＩＶａで表されるいくつかのＦｍｏｃ−アミノ酸アナログの合成を図示しており、実施例１に記載されているように、該アナログは１１量体および他のペプチドアナログの固相合成に利用された。
【０１６８】
実施例１０
Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２'−エチル−４'−メトキシ−ビフェニルアラニン［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−Ｂｉｐ（２'−Ｅｔ−４'−ＯＭｅ）］の合成
以下の反応式１１は、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２'−エチル−４'−メトキシ−ビフェニルアラニンの合成を記載する。
【化４１】
2008505899.tif 000053
【０１６９】
１．Ｂｏｃ−Ｌ−チロシン−Ｏ−トリフレート
Ｂｏｃ−Ｌ−チロシンメチルエステル（２５ｇ、８５ ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（３６.２５ｇ、３３９ｍｍｏｌ、４当量）の乾燥ＤＣＭ（２００ ｍＬ）溶液に、Ｎ2下−４０℃に保って、無水トリフルオロメタンスルホン酸（４７.７４ｍｇ、１６９.５ ｍｍｏｌ、２当量）のＤＣＭ（１００ ｍＬ）溶液を３０分かけてゆっくりと加えた。該溶液を−４０℃でさらに２時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析で反応が完了していることがわかった。反応をさらに２０ｍＬの水でクエンチした。分液し、有機層を１Ｎ ＨＣｌ（３×２００ｍＬ）、飽和Ｎａ2ＣＯ3（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）および食塩水（２００ｍＬの）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空乾燥して、赤色の油状物として粗生成物を得た。それをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ（３００ｇ シリカゲル、０〜５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン グラジエント）にかけた。生成物を含んだフラクションを減圧濃縮し、白色の固形物として目的化合物（２７ｇ、収率７５％）を得た。
【０１７０】
２．２−エチル−４−メトキシ−フェニルボロン酸
ａ．方法Ａ
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１９９.５ ｇ、０.４６５ ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（８００ ｍＬ）懸濁液を、１０分間パージし、１０℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（１６９ ｍＬ、０.４６５ ｍｏｌ、２.７５Ｍ溶液）をゆっくり３０分かけて加え、１時間攪拌した。２−ブロモ−５−メトキシベンズアルデヒド（１００ ｇ、０.４６５ ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液を、ゆっくりと３０分間かけて加えた。添加後、反応混合物を１時間攪拌した。石油エーテル（２Ｌ）を加え、反応混合物をさらに３０分間攪拌した。反応混合物をシリカゲルパッドで濾過した。該パッドをジエチルエーテルで洗浄した。有機洗浄液を合わせて、３０℃以下で濃縮し、該粗生成物を、溶離液として１００％石油エーテルを用いた６０−１２０ シリカゲルクロマトグラフィで精製した。
収率：９２ｇ、９０％、薄黄色液体として。
【０１７１】
酢酸エチル（６５０ｍＬ）中の２，２’−二ピリジル（２４.３ ｇ、０.１５ ｍｏｌ）および２−ブロモ−５−メトキシスチレン（６５ｇ、０.３１ｍｏｌ）を０℃に冷却した。該溶液をパージして、１０％パラジウム炭素（１６.２５ ｇ、２５％）を窒素気流下加えた。反応混合物を２ｋｇの圧力下、パールシェーカー(Parr shaker)中３日間水素下で攪拌した。反応の進行をＨＰＬＣでモニターした。反応混合物をセライトで濾過し、濾液を５％重硫酸カリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、３０℃以下で濃縮した。
収率：６０ｇ、９１％、薄黄色液体として。
【０１７２】
４−ブロモ−３−エチルアニソール（９４ ｇ、０.４３７ ｍｏｌ）のＴＨＦ（９００ｍＬ）溶液を、７８℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（２４９ｍＬ、０.５５ｍｏｌ）を同温度で滴下した。攪拌を７８℃で１時間続けた。ホウ酸トリ−ｎ−ブチル（１７７ ｍＬ、０.６５５ ｍｏｌ）を７８℃でゆっくり加えた。冷浴を除き、反応混合物を０℃に加温し、０℃で１.５Ｎ 塩酸でクエンチした。有機層を分液した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせて食塩水で洗浄し、濃縮した。得られた残渣を石油エーテル中３０分間攪拌した。得られた固形物を濾過し、真空乾燥した。
収率：６５ｇ、８２％、白色の固形物として。
【０１７３】
ｂ．方法Ｂ（反応式１２参照）
乾燥アセトン（５００ ｍＬ）中の３−エチルフェノール（５０ｇ、０.４ｍｏｌ、純度９８％、Ｆｌｕｋａ）およびＫ2ＣＯ3（２８３ ｇ、２.０５ ｍｏｌ）の混合物に、ヨウ化メチル（２９０ ｇ、２.０５ ｍｏｌ）を加えた。反応混合物をオートクレーブに移し、７０℃で終夜還流した。反応混合物をセライトパッドで濾過した。該パッドをアセトンで洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて、濃縮した。生成物をＤＣＭに溶かし、濾過し、蒸発乾固した。
収率：５０ｇ、９０ ％、茶色の液体として。
【０１７４】
３−エチルアニソール（５０ｇ、０.３６７６ ｍｏｌ）およびＮ−ブロモコハク酸イミド（７２ｇ、０.４ｍｏｌ）のアセトニトリル（１Ｌ）溶液を、暗室下室温で８時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で濃縮し、得られた残渣をＣＣｌ4に再溶解し、濾過した。濾液を濃縮し、生成物を分画蒸留で精製した。収率：３５ｇ、４３％、薄黄色液体として。４−ブロモ−３−エチルアニソールを、方法Ａに記載のように対応するボロン酸に変換した。
【０１７５】
反応のスケールアップの目的で、４−ブロモ−３−エチルアニソールの２−エチル−４−メトキシ−ボロン酸への変換は、グリニャール方法を用いて行ってもよい。かかる方法は、ＴＨＦ中の４−ブロモ−３−エチルアニソールのＭｇ（１.１当量）との反応、続いて方法Ａに記載のような生じたグリニャール中間体のトリ−ｎ−ブチル−またはホウ酸トリメチルとの反応によるグリニャール試薬の形成を含む。
【化４２】
2008505899.tif 000054
【０１７６】
３．Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン
Ｂｏｃ−Ｌ−チロシンＯ−トリフレート（８１ｇ、０.１９ ｍｏｌ）の乾燥トルエン（６００ｍＬ）溶液を、１０分間窒素でパージした。２００ｍＬの水中のＫ2ＣＯ3（３６ ｇ、０.２６ ｍｏｌ）を加え、続いて２−エチル−４−メトキシ−フェニルボロン酸（３６ ｇ、０.２ ｍｏｌ）を加え、反応混合物を窒素を用いて１０分間パージした。Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（１６.１８ｇ、０.０１４ｍｏｌ）、エタノール（２００ ｍＬ）およびＴＨＦ（４００ ｍＬ）を加え、反応混合物を攪拌しながら１００℃に４時間加熱した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣をＤＣＭ（１.０Ｌ）に溶かした。有機層を１０％水酸化ナトリウム溶液、１５％クエン酸溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。該粗生成物を６０−１２０−メッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ（１０％酢酸エチル／石油エーテル）で精製した。収率：５０ ｇ、６５ ％、黄色の液体として。
【０１７７】
Ｂｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニンのメチルエステル（６０ｇ、０.１４６ ｍｏｌ）のＴＨＦ（４５０ ｍＬ）およびメタノール（８５ｍＬ）混合液に、８５ｍＬの水中の水酸化ナトリウム（２４ ｇ、０.５８ ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、濃縮し、残渣を水（１００ｍＬ）に溶かし、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を２０％クエン酸を用いてｐＨ １まで酸性にし、酢酸エチルで抽出した。抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。収率：５５ ｇ、９４ ％、無色の液体として。
【０１７８】
Ｂｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン（５５ ｇ、０.１３８ ｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１リットル）に溶解し、乾燥ＨＣｌガスを６時間室温でパージした。得られた固形の生成物を濾過し、真空乾燥した。収率：４６ｇ、１００％。遊離アミノ酸塩酸塩（３０ ｇ、０.０８９ ｍｏｌ）のＴＨＦ（７００ｍＬ）溶液に、水（２４０ ｍＬ）中のＮａＨＣＯ3（２９ ｇ、０.３５８ ｍｏｌ）を加えた。Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（３０ ｇ、０.０８９ ｍｏｌ）を３０分間かけて何回かに分けて加えた。反応混合物を終夜室温で攪拌した。ＴＨＦを真空下除去し、水（２.０Ｌ）を加えた。該澄明な溶液をエーテルで抽出し、不純物を除去した。該水溶液をｐＨ １まで酸性にし、酢酸エチルで抽出した。該有機層を水および食塩水で洗浄し、蒸発乾固した。収率：３７ｇ、８０％。
【０１７９】
実施例１１
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン塩酸塩］の合成
以下の反応式１３には、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成が記載されている。
【化４３】
2008505899.tif 000055
【０１８０】
１．５−ブロモ−２−ｏ−トリルピリジン
トルエン（８ｍＬ）および２Ｍ炭酸ナトリウム水（３.２ｍＬ）中の５−ブロモ−２−ヨードピリジン（９１０ｍｇ、３.２１ ｍｍｏｌ）および２−ｏ−トリルボロン酸（４３６ｍｇ、３.２１ ｍｍｏｌ、１.０当量）のアルゴンパージされ、脱気されたスラリーに、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３６ｍｇ、０.０３２ｍｍｏｌ、０.０１当量）を加えた。反応混合物をパージして、アルゴンでもう２回脱気して、次いでアルゴン下１５時間還流をセットした。反応液を冷却し、水およびＥｔＯＡｃ間で分液処理した。分液して、水層をＥｔＯＡｃでもう１回抽出した。該有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、真空乾燥して、橙色の油状物として粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィ（７：３ ＣＨ2Ｃｌ2／ヘキサン）による精製で、黄色の油状物として標題化合物を得た（６６６ ｍｇ、収率：８４％）。
【０１８１】
２．６−ｏ−トリルニコチンアルデヒド
上記化合物（１２５ｍｇ、０.５０ ｍｍｏｌ）の攪拌したＴＨＦ（２.０ ｍＬ）溶液にアルゴン下−７４℃で、温度が−７１℃を超えないように、２.５Ｍ ｎ−ＢｕＬｉのヘキサン溶液（２２０μＬ、０.５５ ｍｍｏｌ、１.１当量）を５分かけて加えた。淡緑溶液が形成し、３０分後に濃緑色になった。４５分後、ＤＭＦ（４９.４μＬ、０.６１ ｍｍｏｌ、１.２当量）を加え、反応液を−４０℃まで加温した。１４時間後、明橙色の溶液となった。反応液を１０％クエン酸でクエンチし、該混合物を素早く２０分間室温で攪拌した。生じた明黄色の溶液をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮して、黄色の油状物を得た。このようにして得られたクルードな混合物を、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：２４）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（２.５×１０ｃｍカラム）で精製し、白色の固形物を得た（ｍｐ ８２〜８４℃、９０.３ｍｇ、収率９１％）。
【０１８２】
３．（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メタノール
６−o−トリルニコチンアルデヒド（１.０７０ｇ、５.４３ ｍｍｏｌ）のエタノール（１９ ｍＬ）溶液に０〜５℃で、水素化ホウ素ナトリウム（２８７ｍｇ、７.５ ｍｍｏｌ、１.４当量）を加えた。２時間後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチし、３０分後ジクロロメタンと食塩水の間で分液処理した。有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、無色の油状物として示された生成物を得た（１.０８ ｇ、収率：１００％）。
【０１８３】
４．５−（ブロモメチル）−２−ｏ−トリルピリジン臭化水素塩
（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メタノール（４.４９ｇ、２２.５ ｍｍｏｌ）の４８％臭化水素酸（７５ｍＬ）溶液を、６４時間加熱還流した。反応混合物を部分的に冷却し、黄褐色の固形残渣がフラスコ内に残るまで、過剰の臭化水素酸を減圧蒸留（１１０℃ @ ２ Torr）で除いた。蒸留は、蒸留器具と真空ポンプの間に置いた大きなＫＯＨペレットトラップを用いて行った。固形の残渣をジエチルエーテル中スラリー化し、濾過し、窒素気流下乾燥して、生成物を得た（７.３８ ｇ、収率：９５％）。
【０１８４】
５．（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−o−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート
５−（ブロモメチル）−２−o−トリルピリジン臭化水素酸塩（８００ｍｇ、２.３３ｍｍｏｌ）、２−（ジフェニルメチレンアミノ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（６８９ｍｇ、２.３３ｍｍｏｌ、１.０当量）およびＯ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジウムブロミド（１４１ｍｇ、０.２３３ ｍｍｏｌ、０.１当量）の攪拌したジクロロメタン（１４ ｍＬ）混合液に−７８℃でアルゴン下、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（１.６８７ ｍＬ、５.８３ ｍｍｏｌ、２.５当量）を５分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で１０時間攪拌し、次いでインシトゥーで室温まで加温した。該混合物を溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：４）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１０ｃｍカラム）で直接精製し、黄褐色の油状物を得た（１.１０ ｇ、収率：１００％）。
【０１８５】
６．（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート（１.１０ｇ、２.３３ ｍｍｏｌ）の攪拌したＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に室温でアルゴン下、クエン酸（２.７９５ｇ、１４.５４ ｍｍｏｌ、６.５当量）の水（９ ｍＬ）溶液を加えた。２０時間後、反応混合物を水（５ ｍＬ）で希釈し、エーテル（１０ ｍＬ）で２回洗浄した。水相を次いで固形の炭酸ナトリウムでｐＨ ９にし、ジクロロメタンで２回抽出した。
【０１８６】
ジクロロメタン抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。生じた油状物をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、室温にて１０％炭酸ナトリウム溶液（７.２ｍＬ）および次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（７０３ｍｇ、２.５６ ｍｍｏｌ、１.１当量）で処理した。１４時間後、反応混合物をジクロロメタンで２回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：１９）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（２.５×１０ｃｍカラム）で精製し、無色の油状物を得た（１.０８２ ｇ、収率：９１％）。２０ ｍＬのヘキサン／ジクロロメタン（７：１）から再結晶化で、白色の固形物を得た（２８７ｍｇ）。母液を濃縮し、アモルファスの白色の固形物の標題化合物を得た（７７９ｍｇ、収率６３％）。キラルＨＰＬＣ分析（４.６×２５０ｍｍ ＡＤカラム、溶離液としてヘプタン：メタノール：エタノール＝３８：１：１、流速１ｍＬ／分）により９８％ｅｅであった。
【０１８７】
７．（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート（１.７５ｇ、３.１９ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（５.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で２時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をエーテル（１０ｍＬ）に溶かし、それに１Ｍ ＨＣｌ／エーテル（５ｍＬ）溶液を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色の粉末として目的化合物を得た（１.６５ ｇ、収率：１００％）。
【０１８８】
実施例１２
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成
以下の反応式１４は、３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化４４】
2008505899.tif 000056
【０１８９】
１．２−ブロモ−５−（ブロモメチル）ピリジン
５−メチル−２−ブロモピリジン（１０.３２０ｇ、６０.０ ｍｍｏｌ）および再結晶化されたＮ−ブロモコハク酸イミド（５.３３９ｇ、３０.０ｍｍｏｌ、０.５当量）の四塩化炭素（１５０ｍＬ）の攪拌したスラリーに、ＡＩＢＮ（２００ｍｇ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気して、アルゴン下の還流をセットした。９０分後、反応混合物を室温まで冷却し、濾過し、濾液を濃縮し、黄色の油状物を得た。プロトンＮＭＲでは、混合物が５３％（ｍｏｌ）の未反応５−メチル−２−ブロモピリジン、４３％の標題化合物および４％の２−ブロモ−５−（ジブロモメチル）ピリジンを含むことを示した。該混合物はさらに精製することなく以下の方法にすぐに用いた。
【０１９０】
２．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート
２−ブロモ−５−（ブロモメチル）ピリジン（見かけ２６.４ ｍｍｏｌ）、２−（ジフェニルメチレンアミノ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（７.７９８ｇ、２６.４ ｍｍｏｌ、１.０当量）およびＯ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジウムブロミド（１.６０ｇ、２.６４ ｍｍｏｌ、０.１当量）の攪拌したジクロロメタン（１００ ｍＬ）混合液に−７８℃でアルゴン下、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（１１.４６ ｍＬ、３９.６ ｍｍｏｌ、１.５当量）を５分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で７時間攪拌し、次いでインシトゥーで室温まで加温した。反応混合物を次いで濃縮し、ＴＨＦ（７５ ｍＬ）に溶かし、クエン酸（２２ｇ）の水（７５ｍＬ）溶液で処理した。７時間激しく攪拌後、該混合物をエーテル（７５ ｍＬ）で２回抽出した。有機抽出物を合わせて、水（２５ ｍＬ）で１回洗浄した。水抽出物を合わせて、固形の炭酸ナトリウムでｐＨ ８にした。該水溶液を更に精製することなく、次反応の更なる処理に用いた。
【０１９１】
３．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート
上記からの水溶液を、９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（７.５４５ｇ、２７.５ ｍｍｏｌ、１.０４当量）のＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液に室温で加えた。１４時間後、反応混合物を酢酸エチルで２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：２４）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（１２×２５ｃｍカラム）で精製し、無色の油状物を得た（７.２５ｇ、収率：９１％）。１２０ｍＬのヘキサン／ジクロロメタン（５：１）からの再結晶化で、少量の白色の固形物を得て、濾去した。母液を濃縮し、アモルファスの白色の固形物の標題化合物を得た（４.９６ｇ、収率：６２％）。キラルＨＰＬＣ分析（４.６×２５０ｍｍ ＡＤカラム、溶離液として３８：１：１＝ヘプタン：メタノール：エタノール、流量１ｍＬ／分）により９７.２％ｅｅであった。
【０１９２】
４．２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート（１.０２ｇ、１.９５ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（３.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で２時間攪拌した。反応混合物を３５℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物を３ｍＬのジクロロメタンに溶解し、それに６ｍＬの１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色の粉末として標題化合物を得た（８４５ ｍｇ、収率８６％）。
【０１９３】
実施例１３
（２Ｓ） ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸 塩酸 ［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２'−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン］の合成
以下の反応式１５は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化４５】
2008505899.tif 000057
【０１９４】
１．（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
攪拌した（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート（１.７５ｇ、３.３５ｍｍｏｌ）および２−エチルフェニルボロン酸（１.００５ｇ、６.７０ｍｍｏｌ、２当量）のイソプロパノール／トルエン（１：１、５０ ｍＬ）スラリーに、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（２５.０ ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（II）クロリド（１２４ｍｇ、０.１６７ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加え、該混合物を再度アルゴンでパージし、脱気した。素早く攪拌した混合物をアルゴン下８０℃に加熱した。２０時間後、反応混合物を室温まで冷却し、一部濃縮し、イソプロパノールを除いた。残渣を酢酸エチルと水との間で分液処理し、水相をもう一回酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、茶色の油状物を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：９）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍ カラム）精製で、無色の油状物として目的化合物を得た（１.２５ ｇ、収率７７％）。
【０１９５】
２．（２Ｓ） ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（１.５３ ｇ、２.７９ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（５.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、２時間室温で攪拌した。反応混合物を３５℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をエーテルに溶かして、それに１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液（６ｍＬ）を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄して、白色の粉末として目的の生成物を得た（１.３８ ｇ、収率９３％）。
【０１９６】
実施例１４
（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−［（２'−エチル−４'−メトキシ）フェニル］−３−ピリジルアラニン］の合成
以下の反応式１６は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化４６】
2008505899.tif 000058
【０１９７】
１．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
攪拌した（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート（６１３ ｍｇ、１.１７ ｍｍｏｌ）および２−エチルフェニルボロン酸（４２２ ｍｇ、２.３４ ｍｍｏｌ、２当量）のイソプロパノール／トルエン（１：１、２０ ｍＬ）スラリーに、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（１０.０ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（II）クロリド（４３.２ｍｇ、０.０５９ ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加え、該混合物を再度アルゴンでパージし、脱気した。素早く攪拌した混合物をアルゴン下８０℃に加熱した。９時間後、反応混合物を室温まで冷却し、一部濃縮し、イソプロパノールを除いた。残渣を酢酸エチルと水との間で分液処理し、水相をもう一回酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、茶色の油状物を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（３：１７）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍ カラム）精製で、無色の油状物として目的化合物を得た（４０１ ｍｇ、収率５９％）。
【０１９８】
２．（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩：
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（４０１ｍｇ、０.６９ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、２時間室温で攪拌した。反応混合物を３０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をエーテルに溶かして、それに１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液（２ｍＬ）を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄して、白色の粉末として目的の生成物を得た（３３６ ｍｇ、収率８４％）。
【０１９９】
実施例１５
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート ［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン ｔｅｒｔ−ブチルエステル］の別法合成
以下の反応式１７は、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートの別法合成を記載する。
【化４７】
2008505899.tif 000059
【０２００】
１．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート：
攪拌した（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート（１.７５ ｇ、３.３５ ｍｍｏｌ）および２−メチルフェニルボロン酸（９１３ ｍｇ、６.７０ ｍｍｏｌ、２当量）のイソプロパノール／トルエン（１：１、５０ ｍＬ）スラリーに、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（２５.０ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（II）クロリド（１２４ｍｇ、０.１６７ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加え、該混合物を再度アルゴンでパージし、脱気した。
【０２０１】
素早く攪拌した混合物をアルゴン下８０℃に加熱した。２０時間後、反応混合物を室温まで冷却し、一部濃縮し、イソプロパノールを除いた。残渣を酢酸エチルと水との間で分液処理し、水相をもう一回酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、茶色の油状物を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：９）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍカラム）精製で、無色の油状物として目的化合物を得た（１.８１ ｇ、収率９０％）。
【０２０２】
実施例１６
以下の反応式１８は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートのアナログの一般的な合成を記載する。
【化４８】
2008505899.tif 000060
【０２０３】
１．（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−［６−（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）］プロパノエート
丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ−Ｌ−ブロモ−３−ピリジルアラニン（３００ｍｇ、０.５７３ ｍｍｏｌ）、３−クロロ−４−フルオロフェニルボロン酸（２００ ｍｇ、１.１４５ ｍｍｏｌ、２当量）、２Ｍ炭酸ナトリウム溶液（１.１４５ ｍＬ、２.２９ ｍｍｏｌ、４当量）、トルエン（５ ｍＬ）、イソプロピルノール（５ｍＬ）およびＰｄＣｌ2（ＰＣｙ）3）2（４２ ｍｇ、０.０５７３ ｍｍｏｌ、０.１当量）を加えた。該反応溶液をアルゴンでパージし、次いで５時間８０℃にした。反応液を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ ｍＬ）で希釈した。該溶液を水（３０ ｍＬ）および食塩水（２０ ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。クルードな油状物をシリカゲルクロマトグラフィ（１２ｇｍ シリカゲル、０−４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンのグラジエント）にかけて、油状物として目的化合物を得た（２４５ｍｇ、収率７５％）。
【０２０４】
２．（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（２４０ ｍｇ、０.４２９ ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、ＴＦＡ（３ ｍＬ）を加えた。反応液を室温で５時間攪拌した。溶媒を蒸発乾固し、残渣をプレパラティブＨＰＬＣ（メタノール−水のグラジエント、０.１％ ＴＦＡ）にかけた。生成物を含んだフラクションの濃縮により、ＴＦＡ塩として目的化合物を得た（２００ ｍｇ、収率９３％）。
【０２０５】
実施例１７
化合物１（化合物ＩＩ）の合成
Ｘaa11 アミノ酸として（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニンおよびＸaa10 アミノ酸として（Ｓ）−（２'−エチル−４'−メトキシ）ビフェニルアラニンを含む目的のジペプチジルレジンを、実施例１に記載のように製造した。ペプチド鎖の伸張は次いで、アミノ酸Ｘaa1−Ｘaa9のための実施例１に記載のカップリングプロトコールを用いて完了した。生じたペプチジルレジンを乾燥し、２ ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２）で１.５時間処理した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１×１ ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせて、ジエチルエーテル（３０ ｍＬ）に加え、短時間ボルテックスし、次いで−１５℃で１時間維持した。沈澱した固形物を遠心沈降して集め、スピードバック中乾燥した。粗生成物を以下のようにプレパラティブＨＰＬＣで精製した。該クルードなペプチドを０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム（１ｍＬ）、水（２ｍＬ）およびアセトニトリル（１ｍＬ）に溶かした。該ペプチドをＯＤＳ−Ａ１０μｍ充填剤を含むＹＭＣカラム（ＳＨ−３４３−１０Ｐ）、２５０×２０ ｍｍ Ｉ．Ｄ．に負荷した。該カラムにＯＤＳ１０μｍ充填剤ガードカラムＹＭＣ（Ｇ−３４０−１０Ｐ）、５０×２０ｍｍ Ｉ．Ｄ．を備えた。該ペプチドは、１５ｍＬ／分の流速で、５０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の２０％から４５％のグラジエントで溶離した。集めた適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：１４.４分）で純度９８.６％のペプチドを得た：２０分かけて、１ｍＬ／分での１０％から７０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント；溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／アセトニトリル；カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １００×４.６ｍｍ、粒子径３μｍ、孔径１２ｎｍ。
マススペクトル：ESI (M+H)+ = 1528.9および(M+2H)/2 = 765.3
【０２０６】
化合物１１８（化合物ＩＩＩ）の合成
上記のＸaa4−Ｘaa11ペプチジルレジン（０.０６７ｍｍｏｌ）のサンプルをＦｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）、残基Ｘaa3、および０.５Ｍ ＨＯＡｔ（５当量）ＤＭＦの溶液と共に５分間プレボルテックスし、ＤＩＣ（５当量）を含めて１８時間ボルテックスした。該レジンを排水し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。レジンに結合したペプチド（０.０３４ｍｍｏｌ）を脱保護し、残渣Ｘaa3のために先に記載されたようなＦｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（５当量）とのカップリングをし、レジンに結合したＦｍｏｃ−［Ｘaa2−Ｘaa11］−ペプチドを得た。
【０２０７】
該レジン（０.０１７ｍｍｏｌ）を、残基Ｘaa2のために記載したように、脱保護し、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）でカップリングした。目的のペプチドを、ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９４：３：３）（５.０ ｍＬ）溶液で３時間処理して、それぞれのペプチジルレジンから開裂／脱保護した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ ｍＬ）ですすぎ、ＴＦＡ濾液を合わせて、蒸発させ、油状の固形物としてクルードなペプチド生成物を得た（３９ ｍｇ）。これを２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＡｃＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の５％から６５％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：５.６５分）で純度９２％の化合物ＩＩＩを得た（５.４ｍｇ、回収率１８.９％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1554.8 amu.
【０２０８】
化合物１１９の合成
先の合成において記載されたＦｍｏｃ−［Ｘaa3−Ｘaa11］−ペプチジル−シーバーレジンのサンプル（０.０１５ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ−［Ｎ−メチル−（Ｄ）−Ａｌａ］−ＯＨ（５当量）および０.５Ｍ ＨＯＡｔ（５当量）のＤＭＦ溶液と共に５分間プレボルテックスし、ＤＩＣ（５当量）を含めて４時間ボルテックスした。該レジンを排水し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ基を、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（３ｍＬ）で５および１５分間処理して除去した。該レジンをＤＭＦ（８×３ｍＬ）で洗浄し、次いで先の合成に記載されたように、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）とカップリングした。目的のペプチドを、ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９４：３：３）（５.０ ｍＬ）の溶液で３時間処理して、各々のペプチジルレジンから開裂／脱保護した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ ｍＬ）ですすぎ、ＴＦＡ濾液を合わせて、蒸発させた。生じた油状の固形物をアセトニトリル／水（１：１、２ｍＬ）中に溶かし、２０分かけての［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の５％から６５％］のグラジエントのプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：５.６５分）で純度９９％の化合物１１９を得た（５.２ｍｇ、回収率１８.５％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1528.9 amu.
【０２０９】
化合物１２０の合成
先に記載のように製造されたＦｍｏｃで保護された［Ｘaa10−Ｘaa11］−ジペプチジル−シーバーレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）のサンプルを、実施例３に記載のようなアプライド バイオシステムズ４３３Ａペプチド シンセサイザーのファーストモック(FastMoc、登録商標）プロトコールを用いて、９個の更なるカップリングサイクルに付した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）を、機器の適当な大きさの容器に入れ、ＮＭＰで６回洗浄し、２０％ピペリジン／ＮＭＰで２つの処理（各２および８分）を用いて脱保護した。１つの付加的なモニターされた脱保護ステップは、モニタリングオプションの条件を満足するまで行われた。全脱保護の時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジルレジンをＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングさせた。その方法を次工程で用いる実施例で詳述されている。
【０２１０】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨを、以下の方法を用いて次にカップリングした。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、２０当量）を２ ｍＬのＮＭＰに溶かし、０.４５Ｍ ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔのＤＭＦ（２.２ ｍＬ）溶液および２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１ ｍＬ）の続く添加で活性化した。活性化したＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の溶液を次いで、反応容器に移し、カップリングを脱保護ステップからのフィードバックに依存して３０〜６０分間続けさせた。該レジンを次いでＮＭＰで６回洗浄し、該カップリングプロトコールを繰り返した。目的のＸaa4−Ｘaa11配列の集合体を完成するために、これを上記の更に５回の脱保護／カップリングサイクルに付した。続いてカップリングされたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨであった。結局、ペプチジルレジンは、ＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（５５：４５）のスラリー中のＡＣＴ ３９６ マルチプル ペプチド シンセサイザーに加えた。該レジンをＤＭＦで２回洗浄し、実施例１に記載のように１.５Ｍ ピペリジン／ＤＭＦで２つの処理を用いて脱保護した。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（４.０当量）を、続く０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ（４.０当量）およびＤＩＣ（４.０当量）の添加で活性化し、反応容器に手動で移し、２時間カップリングさせた。該レジンは１分ボルテックスしながらＮＭＰ（４×０.５ ｍＬ）ですすいだ。先のカップリングのために記載されたＦｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨを以下のようにカップリングした。Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（２.４当量）を、ＮＭＰ（０.１２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（２.４当量）およびＤＩＣ（２.４当量）の続く添加で活性化した。該溶液を反応容器に手動で移し、１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをＮＭＰ（０.２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（４当量）およびＤＩＣ（４当量）中のアミノ酸（４当量）溶液を手動で反応容器に加えて活性化した。カップリング反応液を１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基を先のカップリングのために記載されたように除去した。該ペプチドのＴＦＡ開裂／脱保護を実施例１に記載のように行った。これを２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の１０％から６０％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：４.８８分）で純度９４％の化合物１２０を得た（２１.７ ｍｇ、回収率４２％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1604.9 amu.
【０２１１】
化合物１３３の合成
先の合成に記載のようなＦｍｏｃで保護された［Ｘaa2−Ｘaa11］−ペプチジル−シーバーレジン（０.０１７ｍｍｏｌ）のサンプルは、脱アミノ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）およびＨＡＴＵ（５当量）の０.５ ＨＯＡｔのＤＭＦ（５当量）溶液、並びに２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（５当量）溶液と共に１８時間ボルテックスした。該レジンを排水し、ＤＭＦ（６×２ｍＬ）およびＤＣＭ（３×２ ｍＬ）で洗浄した。目的のペプチドは、それぞれのペプチジルレジンから、ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９４：３：３）（５.０ ｍＬ）の溶液で３時間処理して、開裂／脱保護された。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ ｍＬ）ですすぎ、ＴＦＡ濾液を合わせて蒸発させた。生じた油状の固形物（３２ｍｇ）をアセトニトリル／水（１：１、２ｍＬ）に溶かし、２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の５％から６５％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：６.０１分）で純度９９％の化合物１３３を得た（７.４ｍｇ、回収率２４.６％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1539.8 amu.
【０２１２】
化合物１２１の合成
先に記載のように製造されたＦｍｏｃで保護された［Ｘaa10−Ｘaa11］−ジペプチジル−シーバーレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）のサンプルを、実施例３に記載のようなアプライド バイオシステムズ４３３Ａペプチド シンセサイザーのファーストモック(FastMoc、登録商標）プロトコールを用いて、９個の更なるカップリングサイクルに付した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）を、機器の適当な大きさの容器に入れ、ＮＭＰで６回洗浄し、２０％ピペリジン／ＮＭＰで２つの処理（各２および８分）を用いて脱保護した。１つの付加的なモニターされた脱保護ステップは、モニタリングオプションの条件を満足するまで行われた。全脱保護の時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジルレジンをＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングさせた。その方法を次工程で用いる実施例で詳述されている。
【０２１３】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯtＢｕ）−ＯＨを、以下の方法を用いて次にカップリングした。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、２０当量）を２ ｍＬのＮＭＰに溶かし、０.４５Ｍ ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔのＤＭＦ（２.２ ｍＬ）溶液および２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１ ｍＬ）の続く添加で活性化した。活性化したＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の溶液を次いで、反応容器に移し、カップリングを脱保護ステップからのフィードバックに依存して３０〜６０分間続けさせた。該レジンを次いでＮＭＰで６回洗浄し、該カップリングプロトコールを繰り返した。目的のＸaa4−Ｘaa11配列の集合体を完成するために、これを上記の更に５回の脱保護／カップリングサイクルに付した。続いてカップリングされたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（tＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨであった。結局、ペプチジルレジンは、ＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（５５：４５）のスラリー中のＡＣＴ ３９６ マルチプル ペプチド シンセサイザーに加えた。該レジンをＤＭＦで２回洗浄し、実施例１に記載のように１.５Ｍ ピペリジン／ＤＭＦで２つの処理を用いて脱保護した。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯtＢｕ）−ＯＨ（４.０当量）を、続く０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ（４.０当量）およびＤＩＣ（４.０当量）の添加で活性化し、反応容器に手動で移し、２時間カップリングさせた。該レジンは１分ボルテックスしながらＮＭＰ（４×０.５ ｍＬ）ですすいだ。先のカップリングのために記載されたＦｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨを以下のようにカップリングした。Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（２.４当量）を、ＮＭＰ（０.１２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（２.４当量）およびＤＩＣ（２.４当量）の続く添加で活性化した。該溶液を反応容器に手動で移し、１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをＮＭＰ（０.２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（４当量）およびＤＩＣ（４当量）中のアミノ酸（４当量）溶液を手動で反応容器に加えて活性化した。カップリング反応液を１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基を先のカップリングのために記載されたように除去した。該ペプチドのＴＦＡ開裂／脱保護を実施例１に記載のように行った。これを２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の１０％から６０％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：２０.８分）で純度９１％の化合物１２１を得た（２１.７ ｍｇ、回収率４２％）：２５分かけて、１ｍＬ／分での１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント；溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦ���／アセトニトリル；カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ｍｍ、粒子径３μｍ、孔径１２ｎｍ。
マススペクトル：ESI (M+H)+ = 1568.9および(M+2H)/2 = 785.2
【０２１４】
実施例１８
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸［α−メチル−β−［１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル］プロピオン酸］の合成
［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸はＩｍｐとして略してもよい。参照：下記の「アミノ酸の略号および構造」］
１−トシル−４（５）−ヒドロキシメチルイミダゾール
以下の方法は文献［Agr. Biol. Chem., 38 (5), 1097-1099, 1974］に準じた。Ｎａ2ＣＯ3（８.４ ｇ、０.０８ ｍｏｌ）の水（４０ ｍＬ）溶液に、４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール塩酸塩（２.７ ｇ、０.０２ ｍｏｌ）を加えた。溶解が完了したとき、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（４.５８ ｇ、０.０２４ ｍｏｌ）の酢酸エチル（３０ ｍＬ）溶液を、５分間かけて滴下して加えた。反応混合物を５時間攪拌させた。分液処理し、酢酸エチルを更に加えた（２０ ｍＬ）。有機相を、０.１Ｍ Ｎａ2ＣＯ3（２×２０ ｍＬ）、水（１×２０ ｍＬ）および次いで飽和ＮａＣｌ（１×２０ ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル相をＭｇＳＯ4（２ ｇ）および活性炭（１ｇ）で１０分間処理した。固形物をセライトパッドで濾去し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣が結晶化を始めた。新たに酢酸エチルを加え（１０ ｍＬ）、該溶液をヒートガンで温め、固形物を再溶解させた。生成物が終夜室温で結晶化した。結晶物質を集めて、酢酸エチル（５ ｍＬ）、次いでエチルエーテル（１０ ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥し、３.５９ ｇの恒量を得た。
【０２１５】
１−トシル−４（５）−アセトキシメチルイミダゾール
１−トシル−４（５）−ヒドロキシメチルイミダゾール（２.５２ ｇ、１０ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１０ ｍＬ）に溶かした。これにトリエチルアミン（２.０２ ｇ、２０ｍｍｏｌ）を室温で滴下して加え、続いて１５分かけて無水酢酸（１.３３ ｇ、１３ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。該混合物を４日間室温で攪拌し、ＬＣ／ＭＳでモニターした。クロロホルムを減圧で留去し、残渣を酢酸エチル（６０ ｍＬ）に溶かした。有機層を０.１Ｍ 炭酸水素ナトリウム、水および次いで飽和塩化ナトリウム（すべて各１×４０ ｍＬ）で連続して洗浄した。有機層を活性炭および硫酸マグネシウムで同時に処理し、次いでセライトパッドで濾過した。溶媒を減圧留去し、生じた残差を温酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶かした。この溶液にゆっくりとジエチルエーテル（２０ ｍＬ）を加えた。該溶液を終夜室温で結晶化するために置いておいた。結晶を集めて、ジエチルエーテル（２×１０ ｍＬ）で洗浄し、終夜真空乾燥して、１.５５ｇを得た。
【０２１６】
メチル−α−カルボメトキシ−α−メチル−β−４−（１−トシルイミダゾール）−プロピオネート
以下の方法は文献［Synthetic Communications, 19(7&8), 1157-1165, 1989］に準じた。１−トシル−４（５）−アセトキシメチルイミダゾール（０.３５１６ ｇ、１.２ｍｍｏｌ）およびメチルマロン酸ジメチル（０.１４８５ ｇ、１.０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ ｍＬ）溶液を、粉末状のＫＯＨ（０.１６９４ ｇ、３.０ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（０.０４９６ ｇ、０.１５ｍｍｏｌ）の攪拌したアセトニトリル（１ ｍＬ）懸濁液に加えた。ＨＰＬＣ分析で確認して、反応は４０分後に完了した。反応混合物エチルエーテル（１００ ｍＬ）に注ぎ、セライトパッドで濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解し、０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3（１×１５ ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１×１５ ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。溶媒を減圧留去し、生じた油状物を真空のデシケーターに３日間入れて、０.２０７ｇを得た。
【０２１７】
α−メチル−β−４−イミダゾール プロピオン酸
メチル−α−カルボメトキシ−α−メチル−β−４−（１−トシルイミダゾール）−プロピオネート（０.１８６ ｇ、０.５ｍｍｏｌ）を、メタノール（２ ｍＬ）に溶かした。これに１.０Ｎ ＮａＯＨ（１.５ ｍＬ）を加え、反応液を終夜攪拌させた。プレパラティブＨＰＬＣで精製後、凍結乾燥で得られた生成物（０.１３６６ ｇ）を１.０Ｎ ＮａＯＨ（５ ｍＬ）に溶かし、ＰＴＦＥで裏付けされたキャップで封されたスクリューキャップチューブ（１６×１００ｍｍ）中２時間１００℃に加熱し、続いて濃ＨＣｌ（２ ｍＬ）を添加し、６時間１４５℃で加熱した。目的のデカルボキシル化生成物が形成された。溶液すべてを濾過し、ＹＭＣ Ｇ−３４０−１０Ｐ ＯＤＳ ５０×２０ｍｍ プレパラティブＨＰＬＣカラムにのせた。生成物を６０分かけての０％から６０％［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］のグラジエントで溶離した。グラジエントの１１〜１３分に相当するフラクションをプールし、凍結し、凍結乾燥して、生成物を得た（３２ ｍｇ）。
【０２１８】
α−メチル−β−［１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル］プロピオン酸
α−メチル−β−４−イミダゾールプロピオン酸（０.０３０５ ｇ、０.１１４ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（０.０６１７ ｇ、０.７３４ｍｍｏｌ）の水溶液（１ ｍＬ）（ｐＨ ８.０４）に、２，４−ジニトロフルオロベンゼン（０.０３２３ ｇ、０.１７４ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１.０ ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を終夜ボルテックスした。ＭｅＣＮを減圧留去し、残渣を水（２ｍＬ）に再溶解し、濾過し、１.５および０.５ ｍＬの２つの各分画でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２） ５μｍ １００×２１.２ｍｍ プレパラティブＨＰＬＣカラムにのせた。生成物を、４０分かけての０％から８０％の［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］のグラジエントで溶離した。グラジエントの１２.５〜１４.５分に相当するフラクションをプールし、サバント スピードバック(登録商標)で終夜乾燥した。更に生成物を、水不溶性の粗生成物をＤＭＳＯに溶かし、続いて上記のようなプレパラティブＨＰＬＣで精製して回収した。フラクションを合わせて、凍結乾燥後精生成物を得た（３１ｍｇ）。
【０２１９】
実施例１９
化合物１３７および１３８の合成
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸を、以下のように関連のＸaa2−Ｘaa11−ペプチジル−シーバーレジンにカップリングさせた。
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸（０.０２６７ｇ、０.０８３ｍｍｏｌ）、６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ（０.０１５１ ｇ、０.０８９ｍｍｏｌ）およびＨＣＴＵ（０.０３６０ ｇ、０.０８７ｍｍｏｌ）のＮＭＰ／ＤＣＭ（１ｍＬ、３：１）溶液に、ＤＩＥＡ（０.０３１５ ｇ、０.２４４ｍｍｏｌ）を加えた；該溶液を短時間ボルテックスし、次いで実施例１９に記載のように製造した関連のＦｍｏｃ保護されたＸaa2−Ｘaa11−ペプチジル−シーバーレジンに加えた。カップリングを１６時間続けさせた。ペプチジルレジンをＮＭＰ、次いでＤＣＭ（３×１.５ｍＬ×１分）で洗浄し、次いで１０％無水酢酸／ＤＣＭ（１×２ｍＬ×９０分）で処理し、続いてＤＣＭ、次いでＤＭＦで洗浄（３×１.５ ｍＬ×１分）した。該ペプチジルレジンを１０％チオフェノール／ＤＭＦ（１.５ ｍＬ）で１時間処理し、ＤＭＦおよびＤＣＭ（４×１.５ ｍＬ×１分）で洗浄した。ペプチジルレジンを次いで、ＴＦＡ／ＤＣＭ／ＴＩＳ（３：１.９：０.１）（１ ｍＬ）で１０分間処理し、濾過した。濾液を集めて、もう１時間弱くボルテックスした。ＴＦＡ混合物をスピードバック中約０.５ ｍＬに濃縮し、ＭＴＢＥ（４ ｍＬ）に加えた。１時間後、沈澱した生成物を遠心分離によって集め、洗浄し、次いで乾燥し、粗生成物を得た（０.０８４１ｇ）。これをプレパラティブＨＰＬＣで以下のように精製した。クルードなペプチドを溶かして、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）（５μｍ、２５０×３０ｍｍ）カラムに注入し、４０分かけて２０％から５０％［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］の直線的なグラジエント（１５ｍＬ／分の流速、２１７ｎｍの流出液ＵＶ検出）を用いて溶離した。目的の生成物を含むフラクションをプールし、凍結乾燥し、純度９７.５％のペプチドを得た（２６.７ｍｇ）：以下の条件下でＨＰＬＣ保持時間２１.２分：１ｍＬ／分で２５分かけて１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント、溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ、カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ｍｍ、粒子径３μｍ、１２ｎｍ孔径。
マススペクトル分析：ESI (M+H)+ = 1527.9および(M+2H)/2 = 764.9.
【０２２０】
ペプチドのプレパラティブキラルＨＰＬＣ精製：
ジアステレオマー性ペプチド混合物（１０ ｍｇ）をＭｅＣＮ／ＭｅＯＨに溶かした。該溶液をＣｈｉｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｖ ２.２×５０ｃｍ、５μｍカラムにのせて、２０ｍＬ／分にてＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）3／ＣＨ3ＣＯＯＨ：６５／３５／０.５／０.５で溶離した。異性体Ａを２９および３５分の間で集めた。異性体Ｂを３６および４４分の間で集めた。第２の行使（ラン）は上記のようになされた。異性体Ａを含むフラクションを合わせて、約５ｍＬに濃縮し、水／ＭｅＣＮ（４：１）で希釈し、該溶液を凍結乾燥した。異性体Ｂを同様の方法で行った。生じた残差をプレパラティブＨＰＬＣでＴＦＡ塩に変換した。各ペプチドをＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２） ５ μｍ １００×２１.２ ｍｍカラムに注入し、４０分かけて２０％から５０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］］の直線的なグラジエント（１０ｍＬ／分の流速、２１７ｎｍの流出液ＵＶ検出）を用いて溶離した。目的の生成物を含むフラクションをプールし、凍結し、凍結乾燥して、純度１００％の異性体Ａを得た（６.０ｍｇ）：以下の条件下でＨＰＬＣ保持時間２１.２８分：１ｍＬ／分で２５分かけて１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント、溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ、カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ ｍｍ、３μｍ 粒子径、１２ｎｍ孔径。
マススペクトル分析：ESI (M+H)+ = 1527.6および(M+2H)/2 = 764.7
類似の方法で、純度１００％のペプチド異性体Ｂを得た（４.９ｍｇ）：以下の条件下でＨＰＬＣ保持時間２１.３分：１ｍＬ／分で２５分かけて１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント、溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ、カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ ｍｍ、粒子径３μｍ、１２ｎｍ孔径。
ESI (M+H)+ = 1527.5および(M+2H)/2 = 764.6
【０２２１】
実施例２０
本明細書に記載の合成方法を用いて、表Ｉに示される１１量体ペプチドを製造した。各化合物について表Ｉに示されるＸaa1−Ｘaa11は、以下の式Ｉをいう。
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
【０２２２】
表Ｉ
【表１０】
2008505899.tif 000061
【表１１】
2008505899.tif 000062
【表１２】
2008505899.tif 000063
【表１３】
2008505899.tif 000064
【表１４】
2008505899.tif 000065
【表１５】
2008505899.tif 000066
【表１６】
2008505899.tif 000067
【化４９】
2008505899.tif 000068
【化５０】
2008505899.tif 000069
【化５１】
2008505899.tif 000070
【化５２】
2008505899.tif 000071
【化５３】
2008505899.tif 000072
【０２２３】
アミノ酸およびペプチド化学の技術分野の当業者は、４位またはパラ位にフェニル置換基を有するフェニルアラニンアミノ酸が４−（フェニル）フェニルアラニンまたは４，４'−ビフェニルアラニンとして別に定義され得、したがって「Ｂｉｐ」として略されてもよいことを知りうる。「アミノ酸の略号および構造」のセクションおよび本明細書の表に示されている略号のために、ビフェニルアラニンアミノ酸は、例えば「Ｂｉｐ（２'−Ｍｅ）」として略してもよく、それはその４位に２'−メチルフェニル基で置換されたフェニルアラニンが存在することを示しており、その中で２'−メチル基がフェニル環の結合している点との関係でオルト位であることを意図する。
【０２２４】
実施例２１
（２（ＲおよびＳ）−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸］の合成
以下の反応式２１は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化５４】
2008505899.tif 000073
【０２２５】
１．Ｎ’−ヒドロキシ−２−メチルベンゾアミジン
攪拌したｏ−トルニトリル（９.９２ ｇ、８４.７ ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（７.８２ ｇ、９３.２ ｍｍｏｌ）の水（２０ ｍＬ）溶液に、イソプロパノール（１００ ｍＬ）を加える。反応混合物をアルゴン下加熱還流する。２０時間後、反応混合物を冷却し、蒸発させ、イソプロパノールの大部分を除いた。半固形の残渣を水およびヘキサンの間で分液処理し、生じた固形物を集めて、乾燥し、白色の固形物を得た（８.０３ ｇ、収率８３％）。
【０２２６】
２．２−メチルベンゾアミジニウムアセテート
攪拌した上記化合物（７.８２ｇ、５２.１ ｍｍｏｌ）の酢酸（１００ ｍＬ）溶液に室温でアルゴン下、無水酢酸（５.６５ ｍＬ、５.６５ ｍｍｏｌ、１.１５当量）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１.０ｇ）を加えた。該混合物を攪拌し、アルゴンで２回パージした。該混合物を次いで水素雰囲気下（〜１ａｔｍ）３時間攪拌した。反応混合物をパージし、セライトで濾過した。濾液を蒸発して、黄褐色の固形物として生成物を得た（１０.３２ ｇ、収率９９％）。
【０２２７】
３．エチル ４−ヒドロキシ−２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート
攪拌したエタノール（５７ ｍＬ）にアルゴン下０−５℃で、油状物に分散した水素化ナトリウム（６０％、２.３５ｇ、５８.７ ｍｍｏｌ）を、１０分かけて何回かに分けて加えた。さらに１０分後、２−メチルベンゾアミジニウムアセテート（５.７０ｇ、２９.３ ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。生じた橙色のスラリーを攪拌し、（２−エトキシ−メチレン）マロン酸ジエチル（５.９３ ｍＬ、２９.３ ｍｍｏｌ）のエタノール（１４ ｍＬ）溶液を５分かけて加えた。該混合物を加熱還流し、溶液を泡立てた。１５時間後、該溶液を冷却し、氷水（３００ ｍＬ）に注いだ。生じた溶液を攪拌し、濃塩酸（２.３ ｍＬ、２７.６ ｍｍｏｌ）を加えて、該溶液をｐＨ７にした。生じた灰白色の凝集スラリーを濾過し、Ｎ2気流下乾燥し、白色の固形物として標題化合物を得た（６.８７ ｇ、収率９１％）。
【０２２８】
４．エチル ４−クロロ−２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート
エチル４−ヒドロキシ−２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート（４.００ｇ、１５.５ ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（１１.６ ｍＬ、１２４ ｍｍｏｌ）溶液を、加熱還流した（塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して）。３時間後、過剰のＰＯＣｌ3を蒸留して除いた（〜２０Ｔｏｒｒ、９０〜１００℃の油浴）。残留する赤色の油状物を冷やして固形化した。該固形物を粉砕し、ＥｔＯＡｃ（１００ ｍＬ）で覆った。該スラリーを−５℃に冷却し、炭酸カリウム溶液（２Ｍ、２５ ｍＬ、５０ ｍｍｏｌ）と共に１０分間激しく振とうした。生じた橙色の相を分けて、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させて、ヘキサンでトリチュレート後、淡橙色の固形物として標題化合物を得た（３.５８ ｇ、収率８４％）。
【０２２９】
５．エチル ２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート
室温で上記化合物（２.３３ｇ、８.４２ ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１.１７ｍＬ、８.４２ ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（３５ ｍＬ）溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（２１０ ｍｇ）で処理した。素早く攪拌した混合物をアルゴンで２回パージし、次いで水素雰囲気下（〜３ａｔｍ）３時間付した。反応混合物をパージし、セライトで濾過し、蒸発させた。ヘキサンから再蒸発して、黄色の固形物として標題化合物を得た（１.８８ ｇ、収率９２％）。
【０２３０】
６．（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）メタノール
攪拌した上記化合物（２.１０ｇ、８.６７ ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４５ ｍＬ）溶液にアルゴン下−７８℃で、ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液（１.５Ｍ、１２.７ ｍＬ、１９.１ ｍｍｏｌ）を加えた。９０分後、酒石酸カリウムナトリウム溶液（１Ｍ、１９.１ ｍＬ、１９.１ｍｍｏｌ）を滴下して加え、細かく凍結した分散物を攪拌し、室温まで加温させた。該混合物を水およびジクロロメタン環で分液処理した。有機相を分けて、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させて、黄色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍカラム、１：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、白色の固形物として標題化合物を得た（９７５ ｍｇ、収率５６％）。
【０２３１】
７．（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）メチルブロミドおよび（Ｒ，Ｓ） ｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート
上記化合物（９１８ ｍｇ、４.５８ ｍｍｏｌ）およびオキシ臭化リン（２.２０ｇ、７.６７ｍｍｏｌ）の混合物を、（塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して）１２０℃に加熱した。１時間後、反応混合物を蒸留した（〜２０Ｔｏｒｒ、９０〜１００℃の油浴）。生じた黒色の樹脂製の残分を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで覆い、０℃に再度冷却し、注意深く２Ｎ炭酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ、１０ ｍｍｏｌ）で処理した。有機抽出物である不安定な２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）メチルブロミドを乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、＜３０℃で蒸発させて、黄色のガラス状物を得て（１.３５ｇ）、すぐに次反応に用いた。
【０２３２】
攪拌した上記化合物（１.３１ｇ、３.６４ ｍｍｏｌ）、２−（ジフェニルメチレンアミノ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１.０７５ｇ、３.６４ ｍｍｏｌ、１.０当量）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（１１７ ｍｇ、０.３６ ｍｍｏｌ、０.１当量）のジクロロメタン（１６ ｍＬ）混合液に−７８℃でアルゴン下、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（１.５８ ｍＬ、５.４６ ｍｍｏｌ、１.５当量を５分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で１時間攪拌し、次いでインシトゥーで室温まで加温させた。１７時間後、該混合物を溶離液としてエチルエーテル／ジクロロメタン（３：４７）を用いてシリカゲルクロマトグラフィ（５×２０ｃｍカラム）で直接精製し、黄色の油状物としてｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエートを得た（１.４５ ｇ、収率７８％）。
【０２３３】
攪拌したｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（１.４５ ｇ、２.３３ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２ ｍＬ）溶液に室温でアルゴン下、クエン酸の（３.４０ ｇ、１７.７ ｍｍｏｌ、５.８当量）水（１２ ｍＬ）溶液を加えた。３時間後、反応混合物を水で希釈し、エーテルで２回洗浄した。水相を次いで固形の炭酸ナトリウムでｐＨ ９にして、ジクロロメタンで２回抽出した。
【０２３４】
ジクロロメタン抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。生じた油状物をＴＨＦ（６ ｍＬ）に溶かし、室温で１０％炭酸ナトリウム溶液（４.２ ｍＬ）、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（８６４ ｍｇ、３.３４ ｍｍｏｌ、１.１当量）で処理した。２時間後、反応混合物をＥｔＯＡｃで２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：１９）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍ カラム）で精製し、無色の油状物を得た（１.６１ ｇ、収率９９％）。
【０２３５】
生成物をＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ（１：１、１３０ｍＬ）に溶かした。１０分後、沈澱が生じた。濾過後、濾液をキラルクロマトグラフィ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤカラム、５×５０ｃｍ、２０μをパッキング；溶離液として２：２：９６ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ／ヘキサン、流速５０ｍＬ／分）に付して、収集し、プールし、蒸発した後、２つのフラクションを得た。
（Ｓ）ｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（ピリジンアナログと比較して同定）、２２１ ｍｇ、＞９８％ｅｅ；および
（Ｒ）ｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート、２９５ ｍｇ、９６％ｅｅ、
いずれもキラルＨＰＬＣ分析（４.６×２５０ｍｍ ＡＤカラム、溶離液として２：２：９６ ヘプタン：メタノール：エタノール、流速１ｍＬ／分）による。
【０２３６】
８ａ．（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−o−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（２２０ ｍｇ、０.４１ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２.１ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で４時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をトルエンで２回再溶解し、蒸発させて、白色の粉末として標題化合物を得た（１９５ ｍｇ、収率９９％）。
【０２３７】
８ｂ．（２Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（２９０ ｍｇ、０.５４ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２.７ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で４時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をトルエンで２回再溶解し、蒸発させて、白色の粉末として標題化合物を得た（２５５ ｍｇ、収率９８％）。
【０２３８】
実施例２２
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−２−メチル−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸の合成
以下の反応式２２は、（（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−２−メチル−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸の合成を記載する。
【化５５】
2008505899.tif 000074
【０２３９】
１．（２Ｒ，４Ｓ）−ベンジル ４−メチル−５−オキソ−２−フェニル−４−（（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メチル）オキサゾリジン−３−カルボキシレート
攪拌した実施例１１．４の化合物（５１５ ｍｇ、１.５０ ｍｍｏｌ）のスラリーに−７８℃でアルゴン下、カリウムヘキサメチルジシラジドのトルエン溶液（０.５Ｍ、３.０８ ｍＬ、１.５４ ｍｍｏｌ）を加えた。２０分後、同量のカリウムヘキサメチルジシラジドおよび（２Ｒ，４Ｒ）−ベンジル ４−メチル−５−オキソ−２−フェニルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（４６７ｍｇ、１.５０ｍｍｏｌ）（S. R. Kapadia、J. Org. Chem. 66 1903 (2001)）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を、別のシリンジで３０分かけて別途滴下して加えた。反応混合物を室温まで加温した。１４時間後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液に注ぎ、エーテルで２回抽出した。有機抽出物を合わせて、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍカラム、溶離液として１：３ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、白色の泡状物として標題化合物を得た（２４０ ｍｇ、収率３３％）。
【０２４０】
２．（２Ｒ，４Ｓ）−ベンジル ４−メチル−５−オキソ−２−フェニル−４−（（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メチル）オキサゾリジン−３−カルボキシレート
攪拌した上記化合物（２４０ｍｇ、０.４９ ｍｍｏｌ）および３０％ＨＢｒの酢酸（４ ｍＬ）溶液を、２４時間加熱還流した。生じた溶液を蒸発乾固させ、次いで水（９ｍＬ）に再溶解した。該溶液をエーテルで１回抽出した。水相を固形の炭酸水素ナトリウム（７５０ｍｇ）でｐＨ８に調整し、次いでＦｍｏｃＯＳｕ（２１６ ｍｇ、０.８４ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液を加えたとき、室温で攪拌した。６０時間後、反応混合物を５％クエン酸溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を合わせて、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させた。アセトニトリル／水（９：１）から結晶化し、白色の固形物として標題化合物を得た（５２ ｍｇ、２２％）。
【０２４１】
実施例２３
サイクリックＡＭＰ測定
ＧＬＰ−１受容体はＧタンパク質共役受容体である。生物活性体であるＧＬＰ−１（７−３６）−アミドは、ＧＬＰ−１受容体に結合し、シグナル伝達と通じてアデニルシクラーゼの活性化を引き起こし、細胞内ｃＡＭＰ濃度を増加させる。ＧＬＰ−１受容体を刺激する際のペプチド化合物のアゴニズムをモニターするために、アデニルシクラーゼ活性は細胞内ｃＡＭＰ含有量をアッセイしてモニターした。全長のヒトグルカゴン様ペプチド１受容体は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞において安定に発現され、クローンの細胞系(clonal lines)は、確立された。クローンはＧＬＰ−１の飽和用量に応じて、ｃＡＭＰ含有量における最大の増加でスクリーンし、クローンＣＨＯ−ＧＬＰ１Ｒ−１９を選択した。
【０２４２】
細胞は、ハムＦ１２栄養培地（ギブコ＃１１７６５−０５４）、１０％ ＦＢＳ、１×Ｌ−グルタミン、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、および０.４ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８中培養した。ＣＨＯ−ＧＬＰ−１Ｒ−１９細胞（培地１００μｌ中２０，０００）を、９６ウェル組織培養マイクロタイタープレートの各ウェル中にプレートし、３７℃で５％ＣＯ2雰囲気下終夜インキュベートした。アッセイの日に、細胞を１００μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１回洗浄した。バイオメック(Biomek)２０００を、アッセイを開始する前に、すべてのペプチドを連続して希釈するのに用いた。一連の希釈は１００％ＤＭＳＯで行った。ペプチドプレートを、プレートメイトプラス(Platemate Plus)を用いて、アッセイの開始前に作り；１.５μＬの化合物をＶボトムプレートに移し、１００μＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（非選択性ホスホジエステラーゼ阻害剤）で増補した１５０μＬのアッセイバッファーをプレートに加え、１：１００の希釈およびＤＭＳＯの１％の最終濃度を得た。
【０２４３】
ｃＡＭＰ標準曲線を作成するために、０.２−２５.６ｐｍｏｌ／ウェルの範囲でｃＡＭＰの連続する希釈を、溶解試薬１（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｃＡＭＰ ＳＰＡキット）中に組成した。各５０μｌのｃＡＭＰ標準液を手で加え、７０μｌのミックス試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｃＡＭＰ ＳＰＡキット）を、マルチドロップを用いて加えた。プレートを次いでシールし、１５時間Ｔｒｉｌｕｘカウンターでカウントした。この標準曲線を用いて、ＣＰＭをｃＡＭＰのｐｍｏｌに転換した。
【０２４４】
１．プレートメイトプラスにおけるｃＡＭＰアッセイプロトコール
細胞プレートおよびペプチドプレートを、プレートメイト上に負荷した。該培地をウェルからアスピレートし、捨てた。ウェルあたり１００μＬのペプチド／バッファー混合物を次いで、ペプチドプレートから加え、アッセイを開始した。インキュベート３０分後、ペプチド／バッファーを除き、５０μＬの溶解試薬１溶液をウェルごとに加えた。プレートを室温で１時間、または冷蔵してシールするなら終夜置いておいた。７０μＬのｃＡＭＰ検出試薬（あらかじめ混合した125Ｉ−ｃＡＭＰ アナログ、ＳＰＡビーズに共役した抗ｃＡＭＰ抗体および抗ウサギ抗体−すべてＡｍｅｒｓｈａｍ ｃＡＭＰ ＳＰＡキットから得られる）を、マルチドロップを用いて加え、プレートをシールした。１５時間後、該プレートを、Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンターでカウントした。
【０２４５】
化合物の用量依存は、同一の２つの片対数濃度で決定した。１０ｎＭのＧＬＰ−１を、最大活性を決定するためのリファレンス標準として用いた。標準曲線は、サイクリックＡＭＰの公知の量を用いて決定した。処理された細胞で合成されたｃＡＭＰの量をサイクリックＡＭＰ標準曲線から決定し、最大のＧＬＰ−１で刺激された活性のパーセンテージを計算し、対数化合物濃度に対してプロットした。データを非線形回帰曲線の当てはめ（４つのパラメーターＳ状用量応答曲線）で解析し、化合物のＥＣ50を決定した。実施例によって、本発明のペプチドは、０.０００５ｎＭ〜１０ｎＭの範囲、より好ましくは０.０００５ｎＭ〜０.２００ｎＭの範囲でのＥＣ50値を有する。
【０２４６】
実施例２４
インビボ実験
ペプチドは、各マウスが投与される溶液の同容量／同重量を受けるように、ｎｍｏｌ／ｋｇで投与される用量に相当するｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で、適当なベヒクル中溶解した。雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−ｏｂ／ｏｂマウス（１０週齢）を、フィードされた血漿グルコースおよび体重に基づいて、群あたり６匹のマウスの群にランダム化した。終夜絶食後、マウスの体重を量り、実験室に置いた。その環境で３０分後、マウスは−３０分でしっぽの先から採血し、すぐにベヒクルまたはベヒクルに溶かしたペプチド（０.１ｍＬ溶液／体重１００ｇ）を皮下（ｓｃ）注射した。０時間で、マウスを採血し、次いで５０％グルコース（２ｇ／ｋｇ）を腹腔内に注入し、腹腔内ブドウ糖耐性テスト（ｉｐＧＴＴ）を開始した。マウスはグルコース注入後、３０、６０、１２０および１８０分に採血した。血液サンプルはカリウムＥＤＴＡに引き込み、実験の間氷上に置き、その後４℃、３０００ｒｐｍで１０分間遠心沈降した。血漿サンプルをコバスシステム(Cobas System)中のグルコース分析で１１倍に希釈した。別の５μｌの血漿サンプルを、２０μｌのサンプル希釈剤（インスリンＥＬＩＳＡアッセイキット、Crystal Chem Inc.）で５倍に希釈し、ウルトラセンシティブマウスインスリンＥＬＩＳＡキット（Crystal Chem Inc.）を用いて、続く分析のために−２０℃で保存した。
【０２４７】
ｏｂ／ｏｂマウス（インスリン抵抗性のマウスのモデル）における化合物Ｉ、化合物ＩＩおよび化合物ＩＩＩに対するインビボグルコース低下特性は、上記に記載している。ペプチドＩの皮下投与は、腹腔内ブドウ糖耐性テスト（ｉｐＧＴＴ）において、曲線の下の血漿グルコース領域（ＡＵＣ）が０と１８０分の間の用量依存の方法で減少することを伴って、食後のグルコース可動域曲線を減少させた（図１）。化合物ＩのＥＤ50は、５０ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。これらの動物における食後の血漿インスリンレベルでは、付随的で統計的に有意な用量依存性の増加があった（図２）。化合物Ｉで処置された動物における血漿グルコースおよびインスリンの変化の間の相互関係は（図１および図２）、グルコースの低下効果が化合物Ｉによるインスリン放出の刺激によって媒介されることを示唆している。
【０２４８】
より重大で、予期できないこととして、化合物ＩＩおよび化合物ＩＩＩは、時間依存性（０と１８０分の間）で、ｏｂ／ｏｂマウスにおける皮下投与に続く食後の血漿グルコースにおける統計的に有意な減少を生ずる（図３および４）。食後のグルコースにおける化合物ＩＩの効果は、１−１００ｎｍｏｌ／ｋｇの間の用量依存性であり、血漿グルコースＡＵＣは１００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で８５.８％減少した（図３）。より重大で、予期できないこととして、化合物ＩＩでのＥＤ50は、５ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定され、化合物ＩＩは、用量基準において化合物Ｉよりも約１０倍以上の高活性であることが示唆された。化合物ＩＩＩのグルコース低下活性でのＥＤ50は、２.５ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された（図４）。
【０２４９】
実施例２５
イヌの薬物動態実験
化合物ＩＩの薬物動態的パラメーターは、雄のビーグル犬（ｎ＝４、１４±１ｋｇ）で決定した。終夜絶食に続いて、各動物は大腿静脈を経由した静脈内ボーラス（６７μｇ／ｋｇ）として、または肩甲骨付近での皮下注射（６７μｇ／ｋｇ）で、化合物ＩＩを投与された。各動物は静脈内および皮下投与の両方を、クロスオーバーデザインに従った投与の間で１週間休薬して受けた。両投与経路のための投与ベヒクルは、プロピレングリコール：リン酸緩衝液（５０：５０）であった。連続の血液サンプルは、投与前と、静脈内投与後０.０８３、０.２５、０.５、０.７５、１、２、４、６、８、２４、および３０時間後に、ＥＤＴＡを含む微量遠心管に集め；皮下投与後では、０.２５、０.５、０.７５、１、２、４、６、８、２４、および３０時間後に、ＥＤＴＡを含む微量遠心管に集めた。約０.３ｍＬの血液を各時間ポイントで集めた。血液サンプルをすぐに４℃で遠心分離した。得られた血漿をドライアイスで凍結させ、−２０℃で保存した。血漿薬物レベルは、上記のＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて決定した。
【０２５０】
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる化合物ＩＩの定量
インビボのイヌの実験からの血漿サンプルは、内部標準を含んだアセトニトリルの２つの容量で、血漿タンパク質を沈澱させて、分析の準備をした。サンプルをボルテックス混合し、遠心分離で沈澱したタンパク質を除いた。生じた上清を９６ウェルプレートに移し、１０μＬを分析用に注入した。サンプルをパッカードマルチプローブＩＩ(Packard Multiprobe II)およびクアドラ９６リキッドハンドリングシステム(Quadra 96 Liquid Handling System)で調製した。
【０２５１】
ＨＰＬＣシステムは、２つの島津製作所ＬＣ１０ＡＤポンプ（Columbia、MD）、ＣＴＣ ＰＡＬオートサンプラー（Leap Technologies、Switzerland）からなった。用いたカラムは、ＹＭＣ Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８（２.０×５０ｍｍ、３μｍ）（YMC、Inc.、Milford、MA）であった。カラム温度は５０℃を維持し、流速は０.３ｍＬ／分であった。移動相Ａは１０ｍＭ ギ酸アンモニウムおよび０.１％ ギ酸水からなり、移動相Ｂは０.１％ギ酸／アセトニトリルからなった。初期の移動相組成は５％Ｂであり、カラムを平衡化するために１分間５％Ｂを維持した。該組成を２分かけて９５％Ｂに傾斜を付け、もう１分それを維持した。移動相を次いで１分で初期の状態に戻した。全分析時間は５分であった。スウィッチングバルブを用いた。０−１分の間の溶離液を廃液に流した。
【０２５２】
ＨＰＬＣを、Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００マススペクトル計（Applied Biosystems、Foster City、CA）にインターフェイスで連結させ、ターボイオンスプレーイオン化源を備えさせた。超高純度窒素を噴霧およびターボガスとして用いた。ターボガスの温度は３００℃にセットし、インターフェイスヒーターは６０℃にセットした。データ取得は、選択された反応モニタリング（ＳＲＭ）を利用した。化合物ＩＩにおいて（Ｍ＋２Ｈ）2+種、およびＢＭＳ−５０１１４３（ＩＳ）において（Ｍ＋２Ｈ）2+を表すイオンは、Ｑ１において選択され、３.５×１０-3ｔｏｒｒの圧力の高純度窒素で衝突的に解離し、Ｑ３で後にモニタリングされる特定の生成物イオンを形成した。トラジションおよびボルト数は表１にまとめてある。
2008505899.tif 000075
【０２５３】
標準曲線濃度は、１から１０００ｎＭの範囲で、および４から５０００ｎＭのの範囲で、それぞれ低用量および高用量から得られたインビボサンプルのために用いた。該曲線を 相反する濃度で重みを付けた二次回帰（１／ｘ2）で適合させた。標準液を２つ同時に分析した。品質管理（ＱＣ）サンプルは標準液として同濃度でブランクマトリックス中調製され、各分析セットでも分析した。化合物ＩＩでは、ＱＣの８０％以上の計算された濃度は、見かけ濃度が２０％以内であり、受け入れられるアッセイ行為を示していた。
【０２５４】
データ解析
時間データに対する化合物ＩＩの血漿濃度は、ＫＩＮＥＴＩＣＡ(登録商標)ソフトウェアプログラムを用いて非分画的な方法で分析した。ＣmaxおよびＴmax値は実験的な観察から直接記録した。ＡＵＣ0-nおよびＡＵＣtot値を直線および対数台形加重(trapezoidal summations)の組み合わせを用いて計算した。全身血漿クリアランス（ＣＬP）、終末半減期（t1/2）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、および定常状態の分布容積（Ｖｓｓ）を、動脈内または静脈内投与後、計算した。全身血液クリアランス（ＣＬB）は、全身血漿クリアランスおよび血漿への血液濃度比を用いて計算した。ＣＬBおよびＶｓｓ値は、文献に報告されている標準肝臓血流および全体内水値とそれぞれ比較された。絶対皮下バイオアベイラビリティ（％として表す）は、化合物ＩＩの皮下投与後の用量標準化したＡＵＣ値の比を、静脈内投与後のそれに見なして、見積もられた。
【０２５５】
イヌの薬物動態の結果
静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与に続く雄のビーグル犬における化合物ＩＩの薬物動態的パラメーターを表２にまとめている。
化合物ＩＩは、低い全身クリアランス（０.９±０.２ｍＬ／分／ｋｇ；３.２％の肝臓血流、３１ｍＬ／分／ｋｇ）を示した。定常状態の分布容積（Ｖｓｓ）は、０.１０±０.０３Ｌ／ｋｇ（２度の血管性体液、０.０５Ｌ／ｋｇ；７１％の細胞外体液、０.１４Ｌ／ｋｇ）であり、制限された血管外分配を示した。見積もられた開裂半減期は５.１±０.５時間であり、平均滞留時間は３.０ ± １.０時間であった。６７μｇ／ｋｇの皮下投与後のピーク濃度に達する時間（Ｔmax）は、５.０±１.０時間に生じた。皮下投与後の最大血漿濃度（Ｃmax）は９０±２９ｎＭであった。イヌにおける化合物ＩＩの皮下バイオアベイラビリティは９３±２２％であった。
2008505899.tif 000076
【０２５６】
実施例２６
非経口投与経路
Ａ．以下の組成を有する肺／吸入または経鼻送達用の液体製剤を、以下に記載のように製造する。
2008505899.tif 000077
【０２５７】
量り取られた量の１１量体ペプチドを、最適なｐＨの少量の水に溶かした。カプティソル(Captisol)を薬物溶液に加え、約５分攪拌する。ＮａＯＨおよびＨＣｌを加え、ｐＨを目的の値（５〜８の間）に調整する。精製水を加えて、最終量を１ｍｌにする。保存剤、抗酸化剤、緩衝塩、および共溶媒のような他の不活性成分を、ｐＨ調整前に必要に合わせて加える。水を加え、目的の量にする。
【０２５８】
上記溶液製剤は、シリンジミクロスプレーを用いた細かいスプレー、またはエアジェットもしくは超音波ネブライザーとして、肺に投与できる。上記溶液を計測された経鼻スプレーまたはシリンジミクロスプレーで、鼻腔に送達させることができる。
【０２５９】
Ｂ．以下の組成を有する肺／吸入または経鼻送達用のドライ粉末製剤を、以下に記載のように製造する。
2008505899.tif 000078
【０２６０】
量り取られた量の１１量体ペプチド、好ましくは５ミクロン未満の空気動力学的粒径（ＭＭＡＤ）であるペプチドを、吸入グレード乳糖３０−１００μｍ（Ｒｅｓｐｉｔｏｓｅ、DMV International）と、チューブラ(Turbula、登録商標)ミキサー中５分間ブレンドする。上記のドライ粉末ブレンドを、粉末吸入器またはドライ粉末吸入器で肺まで送達することができる。
【０２６１】
Ｃ．以下の組成を有する肺／吸入または経鼻送達用の懸濁液製剤を、以下に記載のように製造する。
2008505899.tif 000079
【０２６２】
微粉末１１量体ペプチドは、レシチンと高圧ガス（例えば、ヒドロフルオロ炭素（ＨＦＡ’ｓ）の混合物中均一に懸濁させる。該懸濁液は、加圧され、量り取られた用量吸入器に移す。
【０２６３】
Ｄ．ラットにおける溶液製剤からの１１量体ペプチド吸収
2008505899.tif 000080
【０２６４】
１１量体ペプチドは、ペントバルビタールの腹腔内注入で麻酔された雄のスプラーグドーリーラットに（上記の）溶液として投与された。薬物を、肺送達を得るためにシリンジミクロスプレーで気管に導入、または鼻腔内送達用の各鼻孔へのピペッタで点滴した。血液サンプルを、４時間かけてカニューレ処置した頸動脈からヘパリン処理したバキュテーナーへ集めた。血液サンプルを遠心分離し、単離された血漿をＬＣ／ＭＳによる分析まで−８０℃で保存した。血漿−時間濃度曲線から、薬物動態的パラメーターを計算し、表に報告した。３匹のラットを各投与経路に用いた。データは平均±標準偏差として得られる。Ｔmaxは中間値として報告される。
【０２６５】
有用性および組み合わせ
Ａ．有用性
本発明は、新規な１１量体ペプチドを提供し、該ペプチドは優れた特性を有し、例えば、該１１量体ペプチドがＧＬＰ−１受容体に対するアゴニスト活性を有するような、ＧＬＰ−１受容体修飾因子として作用する。更に、本発明の１１量体ペプチドは、ＧＬＰ−１未変性配列と比較して、タンパク分解開裂に対する安定性の上昇を示す。
【０２６６】
従って、本発明の化合物は、様々な症状および障害の治療のために、哺乳動物（ヒトが好ましい）に投与することができる。該症状および障害の治療としては、これらに限らないが、例えば、糖尿病（好ましくは、ＩＩ型糖尿病、耐糖障害、インスリン抵抗性および糖尿病合併症、例えば、腎障害、網膜症、神経障害および白内障）、高血糖症、高インスリン血症、高コレステロール血症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、高グリセリド血症、肥満症、創傷治癒、組織虚血、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、ＡＩＤＳ、腸疾患（例えば、壊死性腸炎、微絨毛封入体疾患(microvillus inclusion disease)または腹腔疾患）、炎症性腸症候群、化学療法誘発性腸粘膜萎縮症もしくは障害、拒食症、骨粗鬆症、代謝異常症侯群、並びに炎症性腸疾患（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎）の進行または発症を治療または遅延することを含む。本発明の化合物はまた、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の血中レベルを上昇するのに使用することができる。
【０２６７】
また、JohannssonによるJ. Clin. Endocrinol. Metab., 82, 727-34 (l997)中に詳述されている「シンドロームＸ」または代謝性症候群とまとめて呼ばれる症状、疾患および病弊は、本発明の化合物を用いて処置することができる。
【０２６８】
Ｂ．組み合わせ
本発明は、その範囲内に、活性成分として少なくとも１つの式Ｉの化合物の治療上の有効量を単独で、または医薬的に許容し得る担体もしくは希釈剤と組み合わせて含有する医薬組成物を含む。適宜、本発明の化合物は、単独で、本発明の他の化合物と組み合わせて、または１またはそれ以上の他の治療剤（例えば、抗糖尿病薬）もしくは他の医薬的に活性な物質と組み合わせて、使用することができる。
【０２６９】
本発明の化合物は、上記の疾患の処置に有用な他のＧＬＰ−１ペプチド受容体修飾因子（例えば、アゴニストまたは部分アゴニストで、例えばペプチドアゴニスト）または上述の障害の治療に有用な他の適当な治療剤（例えば、抗糖尿病薬、抗高血糖薬、抗高脂血症薬／脂質低下薬、抗肥満症薬（食欲の抑制薬／調節薬を含む）および抗高血圧薬）と組み合わせて使用することができる。また、本発明の化合物は、以下の治療剤の１またはそれ以上と組み合わせることができる：不妊症薬、多嚢胞性卵巣症候群の治療剤、増殖障害の治療剤、虚弱症(frailty)の治療剤、関節炎の治療剤、移植における同種移植拒絶反応の予防剤、自己免疫疾患の治療剤、抗ＡＩＤＳ薬、抗骨粗鬆症薬、免疫調節性疾患の治療剤、抗血栓薬、循環器病の治療剤、抗菌剤、抗精神病薬、慢性炎症性腸疾患もしくは症候群の治療剤、および／または拒食症の治療剤。
【０２７０】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な抗糖尿病薬としては、例えばビグアナイド（例えば、メトホルミンまたはフェンホルミン）、グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボースまたはミグリトール）、インスリン（インスリン分泌促進薬またはインスリン増感薬を含む）、メグリチナイド（例えば、レパグリニド）、スルホニル尿素（例えば、グリメピリド、グリブリド、グリクラジド、クロルプロパミドおよびグリピジド）、ビグアナイド／グリブリドの組み合わせ（例えば、グルコバンス（登録商標））、チアゾリジンジオン（例えば、トログリタゾン、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾン）、ＰＰＡＲ−アルファアゴニスト、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマデュアルアゴニスト、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、脂肪酸結合タンパク質の阻害剤（ａＰ２）、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＳＧＬＴ２阻害剤を含む。
【０２７１】
他の適当なチアゾリジンジオンは、三菱社製ＭＣＣ−５５５（米国特許第5,594,0l6に開示）、グラクソウェルカム社製ＧＬ−２６２５７０、エングリタゾン(englitazone)（ＣＰ−６８７２２、ファイザー社製）またはダルグリタゾン(darglitazone)（ＣＰ−８６３２５、ファイザー社製）、イサグリタゾン(isaglitazone)（ＭＩＴ／Ｊ&Ｊ）、ＪＴＴ−５０１（ＪＰＮＴ／Ｐ＆Ｕ）、Ｌ−８９５６４５（メルク社製）、Ｒ−１１９７０２（三共／ＷＬ社製）、ＮＮ−２３４４（Dr. Reddy／ＮＮ製）またはＹＭ−４４０（山之内製）を含む。
【０２７２】
適当なＰＰＡＲアルファ／ガンマデュアルアゴニストとしては、マルグリタザー（ブリストルマイヤーズ・スクイーブ）、ＡＲ−ＨＯ３９２４２（アストラ／ゼネカ社製）、ＧＷ−４０９５４４（グラクソ−ウェルカム社製）、ＫＲＰ２９７（キョーリンメルク社製）、並びにムラカミらによる「A Novel Insulin Sensitizer Acts As a Coligand for Peroxisome Proliferation - Activated Receptor Alpha (PPAR alpha) and PPAR gamma. Effect on PPAR alpha Activation on Abnormal Lipid Metabolism in Liver of Zucker Fatty Rats」, Diabetes 47, 1841-1847 (1998)および米国特許出願番号09/644,598（2000年9月18日出願）（このものは本明細書の一部を構成し、それらに記載されている用量を使用する）に開示するものを含み、そして好ましいと示されている化合物は本明細書中の使用において好ましい。
【０２７３】
適当なａＰ２阻害剤としては、米国特許出願番号09/391,053（1999年9月7日出願）および米国特許出願番号09/519,079（2000年3月6日出願）を含み、これらは明細書に記載する用量を使用する。
【０２７４】
本発明の化合物と組み合わせて使用することができる適当なＤＰＰ４阻害剤としては、WO99/38501、WO99/46272、WO99/67279（PROBIODRUG）、WO99/67278（PROBIODRUG）、WO99/61431（PROBIODRUG）に開示するもの、ＮＶＰ−ＤＰＰ７２８Ａ（１−［［［２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル］アミノ］アセチル］−２−シアノ−（Ｓ）−ピリジン（ノバルティス）（これは、HughesらによるBiochemistry, 38(36), 11597-11603, 1999に開示）、ＬＡＦ２３７、サクサグリプチン、ＭＫ０４３１、ＴＳＬ−２２５（トリプトフィル(tryptophyl)−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（YamadaらによるBioorg. & Med. Chem. Lett. 8 (1998) 1537-1540に記載）、２−シアノピロリジドおよび４−シアノピロリジド（AshworthらによるBioorg. & Med. Chem. Lett., 6巻, No.22, 1163-1166頁および2745-2748頁 (1996)により開示）（これらは、上記刊行物に記載されている用量で使用する）を含む。
【０２７５】
適当なメグリチナイド(meglitinide)としては、ナテグリニド（ノバルティス社製）またはＫＡＤ１２２９（ＰＦ／キッセイ社製）を含む。
【０２７６】
本発明のＧＬＰ−１受容体修飾因子と組み合わせて使用することができる他の適当なグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）の例には、ＧＬＰ−ｌ(１−３６)アミド、ＧＬＰ−１(７−３６)アミド、ＧＬＰ−１(７−３７)（Habenerによる米国特許出願番号5,6l4,492に開示）、並びにＡＣ２９９３（アミリン社製(Amylin))、ＬＹ−３１５９０２（リリー社製）およびＮＮ−２２１１（ノボノルディスク(NovoNordisk)社製）を含む。
【０２７７】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な抗高脂血症薬／脂質低下薬としては例えば、１またはそれ以上のＭＴＰ阻害剤、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＡＣＡＴ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、回腸Ｎａ+／胆汁酸共輸送体阻害剤、ＬＤＬ受容体活性の上方制御剤、胆汁酸金属イオン封鎖剤、コレステロールエステル転送タンパク質阻害剤（例えば、ＣＰ−５２９４１４（ファイザー社製））、および／またはニコチン酸およびその誘導体を含む。
【０２７８】
上記の通り使用することができるＭＴＰ阻害剤としては、米国特許第5,595,872号、米国特許第5,739,135号、米国特許第5,712,279号、米国特許第5,760,246号、米国特許第5,827,875号、米国特許第5,885,983号および米国特許第5,962,440号に開示されているものを含む。
【０２７９】
式Ｉの化合物の１またはそれ以上と組み合わせて使用してもよいＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、メバスタチンおよび関連化合物（米国特許第3,983,140号に開示）、ロバスタチン(メビノリン)および関連化合物（米国特許第4,231,938号に開示）、プラバスタチンおよび関連化合物（例えば、米国特許第4,346,227号に開示）、シンバスタチンおよび関連化合物（米国特許第4,448,784号および4,450,171号に開示）を含む。本明細書中で使用することができる他のＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、これらに限定されないが、フルバスタチン（米国特許第5,354,772号に開示）、セリバスタチン（米国特許第5,006,530号および第5,177,080号に開示）、アトルバスタチン（米国特許第4,681,893号、第5,273,995号、第5,385,929号および第5,686,104号に開示）、アタバスタチン（ニッサン／サンキョー社製のニスバスタチン(nisvastatin)（ＮＫ−１０４））（米国特許第5,011,930号に開示）、ビサスタチン(visastatin)（シオノギ−アストラ／ゼネカ社製（ＺＤ−４５２２））（米国特許第5,260,440号に開示）および関連スタチン化合物（米国特許第5,753,675号に開示）、メバロノラクトン(mevalonolactone)誘導体のピラゾールアナログ（米国特許第4,613,610号に開示）、メバロノラクトン誘導体のインデン誘導体（ＰＣＴ特許出願WO 86/03488に開示）、６−[２−(置換−ピロール−１−イル)−アルキル]ピラン−２−オンおよびその誘導体（米国特許第4,647,576号に開示）、シアル(Searle’)製ＳＣ−４５３５５（３−置換ペンタン二酸誘導体）ジクロロアセテート、メバロノラクトンのイミダゾールアナログ（ＰＣＴ出願WO 86/07054に開示）、３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロパン−ホスホン酸誘導体（仏国特許第2,596,393号に開示）、２,３−ジ置換ピロール、フランおよびチオフェン誘導体（欧州特許出願番号0221025に開示）、メバロノラクトンのナフチルアナログ（米国特許第4,686,237号に開示）、オクタヒドロナフタレン（例えば、米酷特許第4,499,289号に開示）、メビノリンのケトアナログ(ロバスタチン)（欧州特許出願番号0142146 A2に開示）、およびキノリン誘導体およびピリジン誘導体（米国特許第5,506,219号および第5,691,322号に開示）が含まれる。
【０２８０】
好ましい抗高脂血症薬は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アタバスタチンおよびＺＤ−４５２２である。
【０２８１】
また、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素を阻害するのに有用なホスフィン酸化合物（例えば、ＧＢ第2205837号に開示されているもの）は、本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当である。
【０２８２】
本明細書での使用に適当なスクアレンシンセターゼ阻害剤としては、これらに限定されないが、α−ホスホノスルホン（米国特許第5,712,396号に開示）、BillerらによるJ. Med. Chem., 1988, 31巻, No. 10, 1869-1871頁に開示されているもの（これは、イソプレノイド（ホスフィニルメチル）ホスホネートを含む）、並びに他の公知のスクアレンシンセターゼ阻害剤（例えば、米国特許第4,871,721号および第4,924,024号、並びにBiller, S.A., Neuenschwander, K., Ponpipom, M.M.およびPoulter, C.D.によるCurrent Pharmaceutical Design, 2, 1-40 (1996)に開示されているもの）を含む。
【０２８３】
加えて、本明細書での使用に適当な他のスクアレンシンセターゼ阻害剤としては、テルペノイドピロホスフェート（P. Ortiz de MontellanoらによるJ. Med. Chem., 1977, 20, 243-249に開示）、ファルネシルジホスフェートアナログＡおよびプレスクアレンピロホスフェネート（ＰＳＱ−ＰＰ）アナログ（CoreyおよびVolanteによるJ. Am. Chem. Soc., 1976, 98, 1291-1293に開示）、およびホスフィニルホスホネート（McClard, R.W.らによるJ.A.C.S., 1987, 109, 5544によって報告）、およびシクロプロパン（Capson, T.L., PhD dissertation, June, 1987, Dept. Med. Chem. U of Utah, Abstract, Table of Contents, 16, 17, 40-43, 48-51頁, 要約によって報告）を含む。
【０２８４】
式Ｉの化合物の１またはそれ以上と組み合わせて使用することができるフィブル酸誘導体としては、フェノフィブレート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート、クリノフィブラートなど、プロブコールおよび関連化合物（米国特許第3,674,836号に開示）（プロブコールおよびゲムフィブロジルが好ましい）、胆汁酸金属封鎖剤（例えば、コレスチラミン、コレスチポールおよびＤＥＡＥ−セファデックス（セコレックス(Secholex)（登録商標）、ポリセキシド(Policexide)（登録商標））、並びにリポスタビル(lipostabil)( ローヌ・プーラン社)、エーザイ Ｅ−５０５０（Ｎ−置換エタノールアミン誘導体）、イマニキシル(imanixil)（ＨＯＥ−４０２）、テトラヒドロリプスタチン(tetrahydrolipstatin)（ＴＨＬ）、イスチグマスタニルホスホリルコリン(istigmastanylphos-phorylcholine)（ＳＰＣ, ロッシュ）、アミノシクロデキストリン（田辺製薬）、味の素 ＡＪ−８１４（アズレン誘導体）、メリナミド（住友）、Ｓａｎｄｏｚ５８−０３５、アメリカンシアナミド(Cyanamid)ＣＬ−２７７,０８２およびＣＬ−２８３,５４６（ジ置換尿素誘導体）、ニコチン酸、アシピモックス(acipimox)、アシフラン(acifran)、ネオマイシン、ｐ−アミノサリチル酸、アスピリン、ポリ(ジアリルメチルアミン)誘導体（例えば、米国特許第4,759,923号に開示）、四級アミンポリ(ジアリルメチルアンモニウムクロリド)およびイオネン(ionenes)（例えば、米国特許第4,027,009号に開示）、および他の公知の血清中コレステロール低下薬を含む。
【０２８５】
１またはそれ以上の式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができるＡＣＡＴ阻害剤としては、例えばDrugs of the Future 24, 9-15 (1999), (アバシミミベ(Avasimibe)）；「The ACAT inhibitor, Cl-1011 is effective in the prevention and regression of aortic fatty streak area in hamsters」、NicolosiらによるAtherosclerosis (シャノン(Shannon), Irel). (1998), 137(1), 77-85；「The pharmacological profile of FCE 27677: a novel ACAT inhibitor with potent hypolipidemic activity mediated by selective suppression of the hepatic secretion of ApoB100-containing lipoprotein」、Ghiselli, GiancarloによるCardiovasc. Drug Rev. (1998), 16(1), 16-30；「RP 73163: a bioavailable alkylsulfinyl-diphenylimidazole ACAT inhibitor」, Smith, C.らによるBioorg. Med. Chem. Lett. (1996), 6(1), 47-50；「ACAT inhibitors: physiologic mechanisms for hypolipidemic and anti-atherosclerotic activities in experimental animals」, Krauseらによる編: Ruffolo, Robert R., Jr.；Hollinger, Mannfred A.によるInflammation: Mediators Pathways (1995), 173-98, Publisher: CRC, Boca Raton, Fla.；「ACAT inhibitors: potential anti-atherosclerotic agents」, SliskovicらによるCurr. Med. Chem. (1994), 1(3), 204-25；「Inhibitors of acyl-CoA: cholesterol O-acyl transferase (ACAT) as hypocholesterolemic agents. 6. The first water-soluble ACAT inhibitor with lipid-regulating activity. Inhibitors of acyl-CoA: cholesterol acyltransferase (ACAT). 7. Development of a series of substituted N-phenyl-N'-[(1- phenylcyclopentyl)methyl]ureas with enhanced hypocholesterolemic activity」, StoutらによるChemtracts: Org. Chem. (1995), 8(6), 359-62中に開示されているもの、またはＴＳ−９６２（大正製薬製）を含む。
【０２８６】
抗高脂血症薬は、ＬＤ２受容体活性の上方調節因子（例えば、ＭＤ−７００（大正製薬製）およびＬＹ２９５４２７（イーライリリー製））であってもよい。
【０２８７】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当なコレステロール吸収阻害剤としては例えば、ＳＣＨ４８４６１（Schering-Plough製）、並びにAtherosclerosis 115, 45-63 (1995)およびJ. Med. Chem. 41, 973 (1998)中に開示されているものを含む。
【０２８８】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な回腸Ｎａ+／胆汁酸共輸送体阻害剤としては、Drugs of the Future, 24, 425-430 (1999)中に開示されているものを含む。
【０２８９】
１またはそれ以上の式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができるリポキシゲナーゼ阻害剤としては、１５−リポキシゲナーゼ（１５−ＬＯ）阻害剤（例えば、ベンズイミダゾール誘導体（例えば、WO 97/12615に開示））、１５−ＬＯ阻害剤（例えば、WO 97/12613に開示）、イソチアゾロン(isothiazolone)（例えば、WO96/38144に開示）、および１５−ＬＯ阻害剤（例えば、Sendobryらによる「Attenuation of diet-induced atherosclerosis in rabbits with a highly selective 15-lipoxygenase inhibitor lacking significant antioxidant properties」、Brit. J. Pharmacology (1997) 120, 1199-1206およびCornicelliらによる「15-Lipoxygenase and its Inhibition: A Novel Therapeutic Target for Vascular disease」、Current Pharmaceutical Design, 1999, 5, 11-20に開示）を含む。
【０２９０】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な降圧剤としては例えば、ベータアドレナリン作動性ブロッカー、カルシウムチャンネルブロッカー（Ｌ−タイプおよびＴ−タイプ；例えばジルチアゼム、ベラパミル、ニフェジピン、アムロジピンおよびミベフラジル(mybefradil)、利尿薬（例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、フルメチアジド(flumethiazide)、ヒドロフルメチアジド、ベンゾフルメチアジド、メチルクロロチアジド、トリクロロメチアジド、ポリチアジド、ベンゾチアジド、エタクリル酸トリクリナフェン(tricrynafen)、クロルサリドン(chlorthalidone)、フロセミド、ムソリミン(musolimine)、ブメタニド、トリアムトレン(triamtrenene)、アミロライド、スピロノラクトン）、レニン阻害剤、ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル、ゾフェノプリル(zofenopril)、フォシノプリル(fosinopril)、エナラプリル、セラノプリル(ceranopril)、シラゾプリル(cilazopril)、デラプリル、ペントプリル(pentopril)、キナプリル、ラミプリル、リシノプリル）、ＡＴ−１受容体アンタゴニスト（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、バルサルタン）、ＥＴ受容体アンタゴニスト（例えば、シタキセンタン(sitaxsentan)、アトルセンタン(atrsentan)および米国特許第5,612,359号および第6,043,265号に開示されている化合物）、デュアルＥＴ／ＡＩＩアンタゴニスト（例えば、WO 00/01389に開示されている化合物）、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤、バソペプシダーゼ(vasopepsidase)阻害剤（デュアルＮＥＰ−ＡＣＥ阻害剤）（例えば、オパマトリラット(omapatrilat)およびゲモパトリラット(gemopartrilat)、および硝酸塩を含む。
【０２９１】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な抗肥満薬としては、例えばＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２またはＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニスト、ＭＣＨアンタゴニスト、ＧＨＳＲアンタゴニスト、ＣＲＨアンタゴニスト、ベータ３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体ベータ薬物、ＣＢ−１ アンタゴニストおよび／又は摂食障害剤を含む。
【０２９２】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができるベータ３アドレナリン作動性アゴニストは、ＡＪ９６７７（武田／大日本)、Ｌ７５０３５５（メルク）、ＣＰ３３１６４８（ファイザー）、または他の公知のベータ３アゴニスト（例えば、米国特許第5,541,204号、第5,770,615号、第5,491,134号、第5,776,983号、および第5,488,064号）を含むが、ＡＪ９,６７７、Ｌ７５０,３５５およびＣＰ３３１６４８が好ましい。
【０２９３】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができるリパーゼ阻害剤としては例えば、オルリスタット(orlistat)またはＡＴＬ−９６２（Alizyme）を含むが、オルリスタットが好ましい。
【０２９４】
適宜式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができるセロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤は、シブトラミン(sibutramine)、トピラメート(topiramate)（ジョンソンアンドジョンソン社製)またはアクソキン(axokine)（Regeneron）を含むが、シブトラミンおよびトピラメートが好ましい。
【０２９５】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができる甲状腺受容体ベータ化合物としては例えば、甲状腺受容体リガンド（例えば、WO97/21993（U. Cal SF)、WO99/00353 (KaroBio)およびGB98/284425 (KaroBio)中に開示されているもの）を含むが、KaroBio出願の化合物が好ましい。
【０２９６】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＣＢ−１アンタゴニストとしては例えば、ＣＢ−１アンタゴニストおよびリモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）を含む。
【０２９７】
ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストの例には、それぞれＰＹＹ（３−３６）および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）が含まれる。
【０２９８】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができる摂食障害剤は、デキサムフェタミン(dexamphetamine)、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンまたはマジンドールを含むが、デキサムフェタニンが好ましい。
【０２９９】
適当な抗精神病薬の例としては、クロザピン、ハロペリドール、オランザピン（Zyprexa(登録商標)）、プロザック（Prozac(登録商標)）およびアリピプラゾール(aripiprazole)（Abilify(登録商標)）を含む。
【０３００】
上記の特許および特許出願は、本明細書の一部を構成する。
【０３０１】
本発明の化合物と組み合わせて使用する場合に、上記の他の治療薬は例えば、上記の特許中に記載されている通りまたはさもなければ当該分野の当業者によって決定される通り、医師の卓上参考書(Physician's Desk Reference)に示す量で使用することができる。
【０３０２】
用量および製剤化
適当な式Ｉの１１量体ペプチドは、糖尿病または他の関連疾患を治療するために、該化合物を単独でおよび／または医薬製剤の形態で許容し得る担体と一緒に混合して、患者に投与することができる。糖尿病の治療における当該分野の当業者は、それらの治療が必要な哺乳動物（ヒトを含む）への該化合物の用量および投与経路を容易に決定することができる。投与経路としては、これらに限定されないが、例えば経口、口腔内、直腸、経皮、バッカル、鼻腔内、肺、皮下、筋肉内、皮内、舌下、結腸内(intracolonic)、眼球内(intraoccular)、静脈内、または腸投与を含む。該化合物は、許容される薬務（Finglらによるin The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ch. 1, p.1, 1975; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18版., Mack Publishing Co, Easton, PA, 1990）に基づいく投与経路に応じて製剤化する。
【０３０３】
本発明の医薬的に許容し得る１１量体ペプチド組成物は、多数の剤形（例えば錠剤、カプセル剤（このものの各々は、徐放性または時間放出性の製剤を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、インシトゥーゲル剤、ミクロスフェア剤、結晶複合体、リポソーム剤、マイクロ乳濁剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、エロゾルスプレー剤、および乳濁剤）で投与することができる。本発明の組成物はまた、経口、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、経皮または筋肉内の形態で、全て医薬分野の当業者にとってよく知られる剤形を用いて、投与することもできる。該組成物は、単独で投与することができるが、しかし通常、選択した投与の経路および標準的な薬務に基づいて、医薬的な担体と一緒に投与される。
【０３０４】
本発明の組成物の投与計画は、当然に公知の因子（例えば、特定の薬物の薬力学的な性質、並びに投与の様式および経路；レシピエントの種類、年齢、性別、健康、医学上の病状、および体重；症候群の性質および大きさ；同時の治療の種類；処置の回数；投与経路；患者の腎臓機能および肝臓機能；所望する効果）に応じて変わるであろう。医師または獣医師は、該病状の進行を予防し、カウントし(counter)、または抑止するのに必要とされる薬物の有効量を決定し、そして処方することができる。
【０３０５】
一般的なガイダンスによって、該活性成分の１日経口投与量は、示された効果のために使用する場合には、約０．００１〜１０００ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり、１日当たり約０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇの間が好ましく、約０．６〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の間が最も好ましい。静脈内の場合には、示された効果のために使用する場合には、該活性成分の１日投与量は、一定の速度の注入の期間で毎分／体重Ｋｇ当たり、０．００１ｎｇ〜１００．０ｎｇの間の範囲である。それらの一定の静脈内注入は、毎分／体重Ｋｇ当たり０．０１ｎｇ〜５０ｎｇの速度で投与することが好ましく、毎分／体重Ｋｇ当たり０．１ｎｇ〜１０．０ｍｇであることが最も好ましい。本発明の組成物は、１回の１日投与量で投与することができたり、あるいは全１日投与量を１日、２回、３回または４回の分けた用量で投与することができる。本発明の組成物はまた、デポ製剤によって投与することもでき、これにより所望するならば日／週／月の期間にわたって該薬物の持続性の放出が可能となる。
【０３０６】
本発明の組成物は、適当な鼻腔内ベヒクルの局所使用による鼻腔内形態で、または、または経皮皮膚パッチを用いる経皮経路によって、投与することができる。経皮送達系の形態で投与する場合には、薬物投与は当然に薬物投与計画の間、間欠よりも連続であろう。
【０３０７】
本発明の組成物は典型的に、投与の意図する形態（すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、高圧ガスのあるなしで製造されるエアロゾルスプレー剤、およびシロップ剤である）に関して適当に選択し、そして通常の薬務と一致する、適当な医薬的な希釈剤、賦形剤または担体（これらは、まとめて本明細書中で医薬的担体と呼ぶ）と一緒に混合物で投与する。
【０３０８】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与の場合には、活性薬物構成物は、経口で非毒性の医薬的に許容される、不活性な担体と組み合わせることができ、該担体としては、これらに限定されないが、例えば、乳糖、デンプン、ショ糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸ジカルシウム、硫酸カルシウム、マンニトールおよびソルビトールを含む。液体形態での経口投与の場合には、該経口薬物組成物は、いずれかの経口で非毒性の医薬的に許容し得る不活性な担体（これらに限定されないが、例えば、エタノール、グリセロールおよび水を含む）と組み合わせることができる。その上、所望したりまたは必要な場合には、適当な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤をまた、該混合物中に含有することもできる。適当な結合剤としては、これらに限定されないが、例えば、デンプン、ゼラチン、天然の糖（例えば、グルコース、ベータ−ラクトース、コーン甘味料を含むが、これらに限定されない）、天然および合成のガム（例えば、アラビアガム、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールおよびワックス）を含む。これらの剤形における滑沢剤としては、例えばオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムを含む。崩壊剤としては、これらに限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、およびキサンタンガムを含む。
【０３０９】
本発明の組成物はまた、混合型ミセルまたはリポソームの送達システム（例えば、小さい単層小胞、大きな単層小胞および多重層小胞）の形態で投与することもできる。リポソームは、様々なリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から生成することができる。浸透エンハンサーを、薬物の吸収を増大するために加えることができる。
【０３１０】
プロドラッグは、薬剤の多数の望ましい性質（すなわち、溶解度、アベイラビリティ、製剤化など）を増大させることが知られるので、本発明の化合物はプロドラッグ形態で送達することができる。従って、本発明の化合物は、本特許請求する化合物のプロドラッグ、そのものを送達する方法、およびそのものを含有する組成物にまで及ぶことを意図する。
【０３１１】
本発明の組成物はまた、ターゲットとすることができる薬物担体としての可溶性ポリマーと一緒に組み合わせることもできる。該ポリマーは、ポリビニル−ピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリシンを含むことができる。更に、本発明の組成物は、薬物（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロン(polyepsilon)カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル(polyorthoesters)、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性のブロック共重合体）の制御された放出を達成する際に有用な生分解性ポリマークラスと組み合わせることができる。
【０３１２】
投与に適した剤形（医薬組成物）は、用量単位当たり活性成分の約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムを含むことができる。これらの医薬組成物中、該活性成分は通常、組成物の総重量ベースで重量比約０．５％〜９５％の量で存在する。
【０３１３】
ゼラチンカプセル剤は、活性成分および粉末状担体（例えば、乳糖、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸）を含み得る。同様な希釈物を用いて、圧縮した錠剤を製造することができる。錠剤およびカプセル剤は共に、何時間にもわたって薬物の連続的な放出を得るために、徐放性製品として製造することができる。圧縮した錠剤は、いずれかの望ましくない味をマスクしそして空気から錠剤を防止するために、糖衣またはフィルムコーティングしたり、あるいは胃腸管中での選択的な崩壊のために腸溶コーティングすることができる。
【０３１４】
経口投与のための液体剤形は、患者の許容性を増大するために、着色剤および芳香剤を含むことができる。
【０３１５】
通常、水、適当な油、生理食塩水、デキストロース（グルコース）水溶液、および関連当溶液およびグリコール（例えば、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）は、非経口液剤のための適当な担体である。非経口投与のための液剤は、活性成分の水溶性塩、適当な安定化剤、および必要ならば緩衝化物質を含むことが好ましい。抗酸化剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸）の単独または組み合わせは、適当な安定化剤である。クエン酸およびその塩、並びにＥＤＴＡナトリウムをまた使用する。また、非経口溶液は、保存剤（例えば、ベンズアルコニウムクロリド、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノール）を含むことができる。
【０３１６】
適当な医薬的な担体は、本分野における標準的な刊行物である、Remington： The Science and Practice of Pharmacy, 19版, Mack Publishing Company, 1995中に記載されている。
【０３１７】
本発明の組成物の投与のための代表的な有用な医薬的な剤形は、以下に示す通り例示することができる。
【０３１８】
カプセル剤
多数の単位カプセル剤を、標準的な２片の硬カプセル剤を、粉末状の活性成分（１００ミリグラム）、乳糖（１５０ミリグラム）、セルロース（５０ミリグラム）およびステアリン酸マグネシウム（６ミリグラム）と一緒に充填することによって製造することができる。
【０３１９】
軟ゼラチンカプセル剤
消化性油（例えば、大豆油、綿実油またはオリーブ油）中の活性成分の混合物を調製し、そしてこのものをゼラチン中に容積移送式ポンプ(positive displacement pump)によって注入して、活性成分（１００ミリグラム）を含有する軟カプセルを得てもよい。該カプセル剤は洗浄し、そして乾燥するべきである。
【０３２０】
錠剤
錠剤を通常の方法によって製造し、その結果、用量単位は例えば、活性成分（１００ミリグラム）、コロイド状二酸化ケイ素（０．２ミリグラム）、ステアリン酸マグネシウム（５ミリグラム）、微結晶性セルロース（２７５ミリグラム）、デンプン（１１ミリグラム）および乳糖（９８．８ミリグラム）である。適当なコーティングを使用して、嗜好性を増大したり、または吸収を遅らせることができる。
【０３２１】
注入剤
本発明の１１量体ペプチド組成物の注射剤は、整った体内に適用されているような賦形剤の使用を要求してもしなくてもよい。これらの賦形剤には、これらに限らないが、溶媒および共溶媒、溶解補助剤、乳濁剤または濃化剤、キレート化剤、抗酸化剤および還元剤、抗菌保存剤、緩衝剤およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および強度調整剤および特別の添加剤が含まれる。注射製剤は無菌で、パイロジェンフリーで、溶液の場合、粒子の問題がない必要がある。
【０３２２】
投与に適した非経口組成物は例えば、共溶媒または他の賦形剤を含むか含まない医薬的に許容されるバッファー中１．５重量％の活性成分を撹拌することによって製造することができる。該溶液を、塩化ナトリウムを用いて等張とし、そして減菌化するべきである。
【０３２３】
懸濁剤
水性懸濁剤を、経口および／または非経口投与のために製造することができ、その結果、例えば各５ｍＬは細かく分けた活性成分（１００ｍｇ）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（２０ｍｇ）、安息香酸ナトリウム（５ｍｇ）、ソルビトール溶液、U.S.P.（１．０ｇ）、およびバニリン（０．０２５ｍＬ）または他の芳香剤を含む。
【０３２４】
生分解性微粒子
注射による投与に適した徐放性非経口組成物は例えば、適当な生分解性ポリマーを溶媒中に溶解し、該ポリマー溶液に含有する活性成分を加え、そして該溶媒をマトリックスから除去することによって調製し、その結果、活性成分がマトリックス全般に分布した該ポリマーのマトリックスを形成することができる。
【０３２５】
明らかに、本発明の多数の改変および変化が上記の教示に照らして可能である。従って、特許請求の範囲内で、本発明は本明細書中に具体的に記載する以外に実施することができると、理解される。
【０３２６】
本発明は、本発明の個別の態様の単なる例示として意図される、記載する具体的な実施態様による範囲内に限定されるものではない。本明細書中に示したりおよび記載するものに加えて、機能的に等価な方法および成分は、上記の記載および添付する図面から当該分野の当業者にとって明らかであろう。それらの改変は、特許請求の範囲の範囲内であると意図する。本明細書で引用するすべての引例は、本明細書にそのまま引用される。
【図面の簡単な説明】
【０３２７】
【図１】図１は、腹腔内ブドウ糖耐性テスト（ｉｐＧＴＴ）において、化合物Ｉの皮下注射による血漿グルコースの効果（肥満のｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図２】図２は、ｉｐＧＴＴにおいて、化合物Ｉの皮下注射による血漿インスリンの効果（ｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図３】図３は、ｉｐＧＴＴにおいて、化合物ＩＩの皮下注射による血漿グルコースの効果（ｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図４】図４は、ｉｐＧＴＴにおいて、化合物ＩＩＩの皮下注射による血漿グルコースの効果（ｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図１】
2008505899.tif 000126
【図２】
2008505899.tif 000127
【図３】
2008505899.tif 000128
【図４】
2008505899.tif 000129
【手続補正書】
【提出日】平成19年6月8日(2007.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの配列：
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
［式中、
Ｘaa1は、イミダゾールを含む天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；該アミノ酸は、アルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールアルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アリールアルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換された遊離アミノ基を適宜有し；および該遊離アミノ基が存在しない場合、Ｘaa1は、１またはそれ以上の炭素原子が１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された脱アミノヒスチジン体であり；
Ｘaa2は、Ｄ−アラニン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−エチル−Ｄ−アラニン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびイソバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa3は、（１）カルボン酸を含むアミノ酸側鎖または（２）イミダゾール側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり、その中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa4はグリシンであり；
Ｘaa5は、（Ｌ）−スレオニンおよび（Ｌ）−ノルバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa6は、２つの側鎖を有する二置換α炭素を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該２つの側鎖の少なくとも１つは芳香環を有し、および該２つの側鎖の少なくとも１つはアルキル基を有し；および該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１もしくはそれ以上のアルキル基または１もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換され；
Ｘaa7は、ヒドロキシル基で置換されたアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa8は、Ｌ−セリンおよびＬ−ヒスチジンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa9は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa10は、式ＩＩ：
【化１】
2008505899.tif 000130
（式中、Ｒ4は、水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ6は独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa11は、式ＩＶａ：
【化２】
2008505899.tif 000131
（式中、該アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；Ｒ4aは水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3aおよびＲ6aは各々独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；Ｒ7は水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は各々ＣまたはＮであるが、ただしＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＮであり；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸である］
を有するポリペプチドを含む単離されたポリペプチド。
【請求項２】
Ｘaa3が、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたヒスチジンである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
Ｘaa3が、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸である、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項４】
Ｘaa6が、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、α−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、またはα−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンである、請求項１〜３のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項５】
Ｘaa7が、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたＬ−スレオニンである、請求項１〜４のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項６】
Ｘaa9が、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸である、請求項１〜５のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項７】
Ｘaa1が、アルキル、ジアルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換される末端アミノ基を有する、Ｌ−ヒスチジンである請求項１〜６のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項８】
Ｘaa1が、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−α−メチル−Ｈｉｓ、脱アミノ−Ｈｉｓ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、および（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル）からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項９】
Ｘaa2が、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１０】
Ｘaa4がグリシンである請求項１〜９のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１１】
Ｘaa5がＬ−ＴｈｒおよびＬ−Ｎｖａからなる群から選択される請求項１〜１０のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１２】
Ｘaa6が、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロ−Ｐｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−２，６−ジフルオロ−Ｐｈｅからなる群から選択される請求項１〜１１のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１３】
Ｘaa7がＬ−Ｔｈｒである請求項１〜１２のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
Ｘaa8がＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択される請求項１〜１３のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
Ｘaa9がＬ−Ａｓｐである請求項１〜１４のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
Ｘaa10が、４−フェニル−フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２'−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンおよび４−［（３'，４'−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
Ｘaa11が、４−フェニル−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−クロロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４'−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メトキシフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３，５−ピリミジルアラニン、（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−α−Ｍｅ−３−ピリジルアラニンおよび４−（２'−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択され；
Ｘaa11のＣ末端カルボニル炭素が窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；および
Ｒ7が水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項１〜１６のいずれかの単離されたポリペプチド。
【請求項１８】
該ポリペプチドが、式ＶＩ：
【化３】
2008505899.tif 000132
［式中、
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項１９】
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；および
Ｒ7が水素である、請求項１８の単離されたポリペプチド。
【請求項２０】
該ポリペプチドが、式ＶＩＩ：
【化４】
2008505899.tif 000133
［式中、
Ｒ8は、メチル、エチル、
【化５】
2008505899.tif 000134
からなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項２１】
Ｒ8がメチル、および
【化６】
2008505899.tif 000135
からなる群から選択され；
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；および
Ｒ7が水素およびメチルからなる群から選択される、請求項２０の単離されたポリペプチド。
【請求項２２】
該ポリペプチドが式ＶＩＩＩ：
【化７】
2008505899.tif 000136
［式中、
Ｒ9は、水素、メチルおよびアルキルからなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、請求項１の単離されたポリペプチド。
【請求項２３】
Ｒ9が水素およびメチルからなる群から選択され；
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8がＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり； 
Ｒ7が水素である、請求項２２の単離されたポリペプチド。
【請求項２４】
式ＶＩａ：
【化８】
2008505899.tif 000137
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（t−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ3aは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物。
【請求項２５】
式ＶＩＩａ：
【化９】
2008505899.tif 000138
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ6aはメトキシであり；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物。
【請求項２６】
式ＶＩ：
【化１０】
2008505899.tif 000139
［式中、
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、単離されたポリペプチド。
【請求項２７】
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり； 
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；
Ｒ7が水素である、請求項２６の単離されたポリペプチド。
【請求項２８】
式ＶＩＩ：
【化１１】
2008505899.tif 000140
［式中、
Ｒ8は、メチル、エチル、
【化１２】
2008505899.tif 000141
からなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、単離されたポリペプチド。
【請求項２９】
Ｒ8が、メチル、および
【化１３】
2008505899.tif 000142
からなる群から選択され
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8が、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり； 
Ｒ6がメトキシであり； 
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6aが水素であり；
Ｒ7が水素およびメチルからなる群から選択される、請求項２８の単離されたポリペプチド。
【請求項３０】
式ＶＩＩＩ：
【化１４】
2008505899.tif 000143
［式中、
Ｒ9は、水素、メチルおよびアルキルからなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドである、単離されたポリペプチド。
【請求項３１】
Ｒ9が、水素およびメチルからなる群から選択され；
Ｘaa2が、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘがフルオロであり；
Ｙが水素であり；
Ｘaa8がＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3がエチルであり；
Ｒ6がメトキシであり；
Ｒ3aがメチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aが水素であり；
Ｒ7が水素である、請求項３０の単離されたポリペプチド。
【請求項３２】
ＧＬＰ−１受容体と結合して活性化する、配列番号：９３のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３３】
配列番号：１〜１６、１８〜５９、６１〜６３、６５〜７７、７９、８１〜８９、および９１〜９２からなる群から選択される、請求項３２のポリペプチド。
【請求項３４】
ペプチドが配列番号：１、５８、５９、６１、７０、８１、８２、９１、または９２のアミノ酸配列を含む、請求項３２のポリペプチド。
【請求項３５】
配列番号：１〜１６、１８〜５９、６１〜６３、６５〜７７、７９、８１〜８９、および９１〜９２からなる群から選択される配列を含むポリペプチド。
【請求項３６】
【化１５】
2008505899.tif 000144
【化１６】
2008505899.tif 000145
【化１７】
2008505899.tif 000146
からなる群から選択されるポリペプチド。
【請求項３７】
配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項３８】
以下の構造：
【化１８】
2008505899.tif 000147
からなるポリペプチド。
【請求項３９】
請求項１〜２３、２６〜３１、および３２〜３８のいずれかのポリペプチド、並びに医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４０】
請求項１〜２３、２６〜３１、および３２〜３８のいずれかのポリペプチド、並びに少なくとも１つの治療剤を含む組合せ医薬で、該治療剤が、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される組合せ医薬。
【請求項４１】
該抗糖尿病剤が、ビグアナイド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ペルオキシソーム増殖活性化受容体（ＰＰＡＲ）γ アゴニスト、ＰＰＡＲ α／γデュアルアゴニスト、脂肪細胞脂質結合タンパク質（ａＰ２）阻害剤、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）阻害剤、インスリン増感剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、インスリンおよびメグリチナイドからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤である、請求項４０の組合せ医薬。
【請求項４２】
該抗糖尿病剤が、メトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロロプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、マルグリタザー、インスリン、ファーグリタイザー、イサグリタゾン、レグリタイザー、バラグリタゾン、Ｌ８９５６４５、［（Ｚ）−１，４−ビス｛４−［３，５−ジオキソ−１，２，４−オキサジアゾリジン−２−イル）メチル］フェノキシ｝ブタ−２−エン］、リボグリタゾン、ラファエグロン、レパグリニド、ナテグリニド、（Ｓ）−２−ベンジル−４−オキソ−４−（シス−パーヒドロイソインドール−２−イル）酪酸カルシウム塩、テサグリタイザー、Ｌ−フェニルアラニン，Ｎ−［（１Ｚ）−１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１−プロペニル］―４−［３−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）プロピル］、５−［（２，４−ジオキソ−５−チアゾリジニル）メチル］−２−メトキシ−Ｎ−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］−ベンズアミド、エクセナチド、８−３６−グルカゴン関連ペプチドＩ（デグー），Ｎ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロピル］−２６−Ｌ−アルギニン−３４−［Ｎ６−（１−オキソオクチル）−Ｌ−リジン］−３６ａ、ビルダグリプチンおよびサクサグリプチンからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤である、請求項４１の組合せ医薬。
【請求項４３】
該抗肥満剤が、β３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン再取り込み阻害剤、ドパミン再取り込み阻害剤、セロトニンおよびドパミン再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β化合物、ＣＢ−１アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストおよび摂食障害剤からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤である、請求項４０の組合せ医薬。
【請求項４４】
該抗肥満剤が、オーリスタット、セチリスタット、ラファブレゴン、Ｎ−［４−［２−［［（２Ｓ）−３−［（６−アミノ−３−ピリジニル）オキシ］−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］エチル］フェニル］−４−（１−メチルエチル）−ベンゼンスルホンアミドまたはＮ−［４−［２−［［３−［（６−アミノ−３−ピリジニル）オキシ］−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］エチル］フェニル］−４−（１−メチルエチル）−（Ｓ）−ベンゼンスルホンアミド、ＣＰ３３１６４８、シブトラミン、トピラメート、アキソキン、デキサアンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミン、リモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）、およびマジンドールからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤である、請求項４３の組合せ医薬。
【請求項４５】
該脂質低下剤が、ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、コレステロールエステル変換タンパク質、ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ ＣｏＡ）還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体活性の上方制御剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびアシル補酵素Ａコレステロール アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤である、請求項４０の組合せ医薬。
【請求項４６】
該脂質低下剤が、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、アバシミベ、Ｎ−２，６−ビス（１−メチルエチル）フェニル］−２−（テトラデシルチオ）−アセタミド、３−（１３−ヒドロキシ−１０−オキソテトラデシル）５，７−ジメトキシ−１（３Ｈ）−イソベンゾフラノン、トリセトラピブ、および３α，４α，５α）−４−（２−プロペニルコレスタン−３−オールからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤である、請求項４５の組合せ医薬。
【請求項４７】
請求項１〜２３、２６〜３８のいずれかの単離されたポリペプチドを有効成分として含む、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療剤または進行もしくは発症を遅らせる薬剤。
【請求項４８】
さらに、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、および抗アテローム硬化剤からなる群から選択される１またはそれ以上の治療剤および脂質低下剤を、同時または連続して投与することを特徴とする請求項４１の治療剤。
【請求項４９】
請求項３９〜４６の医薬組成物または組合せ医薬を含む、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療剤または進行もしくは発症を遅らせる薬剤。
【請求項５０】
非経口投与用である、請求項４７〜４９のいずれかの治療剤または薬剤。
【請求項５１】
非経口でない投与用である、請求項４７〜４９のいずれかの治療剤または薬剤。
【請求項５２】
該非経口投与が、静脈内（ＩＶ）ボーラス注入、ＩＶ注入、皮下投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、バッカル投与、経肺投与および眼の送達からなる群から選択される請求項５０の治療剤または薬剤。
【請求項５３】
該皮下投与が速放性または徐放性製剤の使用を含む請求項５２の治療剤または薬剤。
【請求項５４】
該筋肉内投与が速放性または徐放性製剤の使用を含む請求項５２の治療剤または薬剤。
【請求項５５】
該製剤が、溶媒および共溶媒、溶解剤、乳化剤、濃化剤、キレート化剤、抗酸化剤、還元剤、抗微生物保存剤、緩衝剤およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および張性剤、並びに特別の添加剤からなる群から選択される医薬的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項５０の治療剤または薬剤。
【請求項５６】
該製剤がカプセル化した輸送システムをさらに含む請求項５０の治療剤または薬剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は米国特許仮出願第６０／５８５，３５８号（２００４年７月２日出願）および米国特許仮出願第６０／６８４，８０５号（２００５年５月２６日出願）の優先権主張をし、これらの出願はそれぞれ本明細書にそのまま引用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、未変性ペプチドのＧＬＰ−１の優れた生物特性を示し、ＧＬＰ−１未変性配列に比べタンパク分解開裂に増加した安定性を示し、これにより糖尿病症状の改善に有用である、新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）ペプチド受容体修飾因子、アゴニストまたは部分アゴニストを提供する。
【０００３】
（背景技術）
ＧＬＰ−１は、グルコース代謝、並びに胃腸での分泌および代謝において調整された機能を有する重要な腸ホルモンである。ヒトＧＬＰ−１は、プレプログルカゴンを起源とする３０個のアミノ酸ペプチドであり、例えば、遠位回腸中のＬ細胞で、膵臓で、および脳内で合成される。ＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−２を産するためのプレプログルカゴンの処理は、主にＬ細胞および脳幹内で起こる。ＧＬＰ−１は通常食物の摂取に応答して分泌され、特に炭水化物および脂質がＧＬＰ−１分泌を刺激する。ＧＬＰ−１はとても強く、低血糖症を引き起こすリスクが減少したグルコース依存性インスリン放出の効力がある刺激剤として確認されている。ＧＬＰ−１は、血漿グルカゴン濃度を低下させ、胃の空腹感を遅らせ、インスリン生合成を刺激し、インスリン感受性を向上させる（Nauck, 1997, Horm. Metab.Res. 47:1253-1258）。ＧＬＰ−１はまた、ブドウ糖耐性に障害のある患者におけるグルコースを感知し、応答する膵臓のβ細胞の能力も向上させる（Byrne, Eur. J. Clin. Invest., 28:72-78, 1998）。ヒトにおけるＧＬＰ−１のインスリン分泌効果は、一部インスリンレベルの増加のため、および一部インスリン感受性向上のため、グルコース代謝の速度を高める（D’Alessio, Eur. J. Clin. Invest., 28:72-78, 1994）。グルカゴン放出の阻害は、ＩＩ型糖尿病患者のＧＬＰ−１での治療に続いて見られるグルコースホメオスタシスにおける改善に貢献する付加的なメカニズムであると考えられる（Nauck, M.A., et al., Diabetologia 36:741-744, 1993）。上記のＧＬＰ−１の薬理特性は、それをＩＩ型糖尿病の治療のための非常に望ましい治療剤にする。
【０００４】
また、最近の研究で、わずかに多い生理学的量のＧＬＰ−１の注入が、有意に飽満を高め、通常の患者における食物摂取を減らすことが示されている（Flint, A., Raben, A., Astrup, A. and Holst, J.J., J.Clin.Invest, 101:515-520, 1998; Gutswiller, J.P., Goke, B., Drewe, J., Hildebrand, P., Ketterer, S., Handschin, D., Winterhaider, R., Conen, D and Beglinger, C. Gut 44:81-86, 1999;）。食物摂取および飽満の効果は、肥満患者においても保持されることが報告されている（Naslund, E., Barkeling, B., King, N., Gutniak, M., Blundell, J.E., Holst ,J.J., Rossner, S., and Hellstrom, P.M., Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord., 23:304-311, 1999）。
【０００５】
上記で引用された研究において、胃の空腹感におけるＧＬＰ−１の公表された効果はまた、その現象が怪しくもあった。胃の空腹感は食後の血糖変動を生じる。インスリン分泌の刺激に加えて、ＧＬＰ−１がＢ細胞新生を刺激しながら、転写因子である膵島−十二指腸ホメオボックス−１(islet-duodenal homeobox-1)（ＩＤＸ−１）の発現を刺激し、それによって糖尿病の効果的な治療および／または予防剤であり得ることも示されている（Stoffers, D.A., Kieffer, T.J. Hussain, M.A.,Drucker, D.J., Bonner-Weir, S., Habener, J.F. and Egan, J.M. Diabetes, 40:741-748, 2000）。ＧＬＰ−１はまた、胃酸分泌を阻害することも示されており（Wettergren, A., Schjoldager, B., Mortensen, P.E., Myhre, J., Christiansen, J., Holst, J.J., Dig. Dis. Sci., 38:665-673, 1993）、胃潰瘍に対する保護が提供されうる。
【０００６】
ＧＬＰ−１が、例えば、心臓保護、神経保護、並びに学習および記憶誘導となりうる多くの付加的な膵臓外の効果を有することが最近報告されている（reviewed in Ahren, B., Horm. Metab. Res. 36:842-845, 2004）。したがって、ＧＬＰ−１が心不全（Nikolaidis, L.A., et al., Circulation 110:955-961, 2004）、虚血／再灌流 傷害（Nikolaidis, L.A., et al., Circulation 109:962-965, 2004）、およびアルツハイマー病 （Perry, T. and Greig, N.H., J. Alzheimers Dis. 4:487-496, 2002）の治療に用い得ることも提案されている。
【０００７】
ＧＬＰ−１は、インクレチンホルモン、例えば、食事で誘発されるインスリン分泌を高める腸ホルモンである（Holst, J.J., Curr. Med. Chem., 6:1005-1017, 1999）。それは、プログルカゴンをコードするグルカゴン遺伝子の産物である。この遺伝子は、膵臓のＡ細胞中ばかりでなく、腸の粘膜の内分泌Ｌ細胞中でも発現される。プログルカゴンは、１６０個のアミノ酸を含むペプチド（タンパク質）である。プログルカゴンの更なる処理で、ａ）グルカゴン、ｂ）Ｎ末端、おそらく不活性なフラグメント、およびｃ）「メジャープログルカゴンフラグメント」として一般的に言及されるラージＣ末端フラグメントの産生となる。このフラグメントは生物学的に不活性であると考えられる。たとえこのフラグメントが膵臓中および腸のＬ細胞中のいずれにも存在しても、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２として一般的に言及される２つの高度に相同性のあるペプチドを生じる「メジャープログルカゴンフラグメント」の分解産物が観察されるのは、腸内だけである。これらの２つのペプチドは重要な生物学的活性を有する。ＧＬＰ−１のアミノ酸配列はそれ自体、Ｌ細胞に存在し、プログルカゴンの７８−１０７位に同定される。
【０００８】
現在、ＧＬＰ−１型分子の使用を含む療法は、かかるペプチドの血清半減期が極めて短いことから深刻な問題をもたらしている。例えば、ＧＬＰ−１（７−３７）は５分未満の血清半減期を有する。このように、拡張した薬物動態的プロファイルを有する、生物学的に活性なＧＬＰ−１受容体修飾因子、アゴニストまたはアンタゴニストの危機的な必要性が存在する。本発明が目指すのはこのことおよび他のニーズに対してである。
【０００９】
したがって、本発明は、未変性ペプチドのＧＬＰ−１の類似または優れた生物特性を示し、これにより糖尿病性および関連症状の改善に有用である、ＧＬＰ−１受容体修飾因子、アゴニスまたは部分アゴニストとして作用する新規なペプチドを提供する。
【００１０】
（発明の概要）
一つの態様として、本発明は、式Ｉの配列：
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
［式中、
Ｘaa1は、イミダゾールを含む天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；該アミノ酸は、アルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールアルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アリールアルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換された遊離アミノ基を適宜有し；および該遊離アミノ基が存在しない場合、Ｘaa1は、１またはそれ以上の炭素原子が１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された脱アミノヒスチジン体であり；
Ｘaa2は、Ｄ−アラニン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−エチル−Ｄ−アラニン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびイソバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa3は、（１）カルボン酸を含むアミノ酸側鎖または（２）イミダゾール側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり、その中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され； 
Ｘaa4はグリシンであり；
Ｘaa5は、（Ｌ）−スレオニンおよび（Ｌ）−ノルバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa6は、２つの側鎖を有する二置換α炭素を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該２つの側鎖の少なくとも１つは芳香環を有し、および該２つの側鎖の少なくとも１つはアルキル基を有し；および該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１もしくはそれ以上のアルキル基または１もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換され；
Ｘaa7は、ヒドロキシル基で置換されたアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa8は、Ｌ−セリンおよびＬ−ヒスチジンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa9は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa10は、式ＩＩ：
【化１】
2008505899.tif 000148
（式中、Ｒ4は、水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ6は独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa11は、式ＩＶａ：
【化２】
2008505899.tif 000149
（式中、該アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；Ｒ4aは水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3aおよびＲ6aは各々独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；Ｒ7は水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は各々ＣまたはＮであるが、ただしＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＮであり；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸である］
を有するポリペプチドを含む単離されたポリペプチドを対象とする。
【００１１】
さらに、Ｘaa3は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたヒスチジンであってもよい。Ｘaa3は、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であってもよい。
【００１２】
Ｘaa6は、各々１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、α−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、またはα−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンであってもよい。
【００１３】
Ｘaa7は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換されたＬ−スレオニンであってもよい。
【００１４】
Ｘaa9は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された、Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であってもよい。
【００１５】
Ｘaa1は、アルキル、ジアルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換される末端アミノ基を有する、Ｌ−ヒスチジンであってもよい。
【００１６】
Ｘaa1は、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−α−メチル−Ｈｉｓ、脱アミノ−Ｈｉｓ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、および（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル）からなる群から選択されてもよい。
【００１７】
Ｘaa2は、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されてもよい。
【００１８】
Ｘaa4はグリシンであってもよい。
【００１９】
Ｘaa5は、Ｌ−ＴｈｒおよびＬ−Ｎｖａからなる群から選択されてもよい。
【００２０】
Ｘaa6は、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロ−Ｐｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−２，６−ジフルオロ−Ｐｈｅからなる群から選択されてもよい。
【００２１】
Ｘaa7はＬ−Ｔｈｒであってもよい。
【００２２】
Ｘaa8はＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されてもよい。
【００２３】
Ｘaa9はＬ−Ａｓｐであってもよい。
【００２４】
Ｘaa10は、４−フェニル−フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−メトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４'−エトキシ−２'−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２'−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンおよび４−［（３'，４'−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択されてもよい。
【００２５】
Ｘaa11は、４−フェニル−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−クロロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３'，５'−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４'−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メトキシフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（３'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２'−メチルフェニル）−３，５−ピリミジルアラニンおよび４−（２'−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択されてもよく；
この中で、Ｘaa11のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される。
【００２６】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは、式ＶＩ：
【化３】
2008505899.tif 000150
［式中、
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され； 
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドであってもよい。
【００２７】
さらに、Ｘaa2は、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｘはフルオロであってもよく；
Ｙは水素であってもよく；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｒ3はエチルであってもよく；
Ｒ6はメトキシであってもよく；
Ｒ3aはメチルおよびエチルからなる群から選択されてもよく；
Ｒ6aは水素であってもよく；および
Ｒ7は水素であってもよい。
【００２８】
別の態様として、該ポリペプチドは、式ＶＩＩ：
【化４】
2008505899.tif 000151
［式中、
Ｒ8は、メチル、エチル、
【化５】
2008505899.tif 000152
からなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり； 
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され；
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；および
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドであってもよい。
【００２９】
さらに、Ｒ8はメチル、および
【化６】
2008505899.tif 000153
からなる群から選択されてもよく；
Ｘaa2は、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏおよびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｘはフルオロであってもよく；
Ｙは水素であってもよく；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であってもよく； 
Ｒ3はエチルであってもよく；
Ｒ6はメトキシであってもよく；
Ｒ3aはメチルおよびエチルからなる群から選択されてもよく；
Ｒ6aは水素であってもよく；
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択されてもよい。
【００３０】
別の態様として、該ポリペプチドは式ＶＩＩＩ：
【化７】
2008505899.tif 000154
［式中、
Ｒ9は、水素、メチルおよびアルキルからなる群から選択され；
Ｘaa2は、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸および２−メチルピペリジン−２−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸であり；
ＸおよびＹは各々独立して、水素およびフルオロからなる群から選択され；
Ｘaa8は、Ｌ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｒ3は、水素、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6は、水素、ヒドロキシ、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され； 
Ｒ3aは、水素、フルオロ、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ6aは、水素、メチルおよびメトキシからなる群から選択され；
Ｒ7は、水素およびメチルからなる群から選択される］
のポリペプチドであってもよい。
【００３１】
さらに、Ｒ9は水素およびメチルからなる群から選択されてもよく；
Ｘaa2は、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｘはフルオロであってもよく；
Ｙは水素であってもよく；
Ｘaa8はＬ−ＳｅｒおよびＬ−Ｈｉｓからなる群から選択されるアミノ酸であってもよく；
Ｒ3はエチルであってもよく；
Ｒ6はメトキシであってもよく；
Ｒ3aはメチルおよびエチルからなる群から選択されてもよく；
Ｒ6aは水素であってもよく； 
Ｒ7は水素であってもよい。
【００３２】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは下表の化合物群から選択される化合物であってもよい。
【表１】
2008505899.tif 000155
【表２】
2008505899.tif 000156
【表３】
2008505899.tif 000157
【表４】
2008505899.tif 000158
【表５】
2008505899.tif 000159
【００３３】
本明細書および特許請求の範囲で記載された対象の好ましい態様において、ポリペプチドは、配列番号：１、２、４、９、１０、１９、２０、２３、３８、４３、４６、４９、５７、５８、５９、６１、６２、６３、６５、６９、７０、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４および９０からなる群から選択される。
【００３４】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは
【化８】
2008505899.tif 000160
【化９】
2008505899.tif 000161
【化１０】
2008505899.tif 000162
である。
【００３５】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは
【化１１】
2008505899.tif 000163
【化１２】
2008505899.tif 000164
である。
【００３６】
別の態様として、該単離されたポリペプチドは
【化１３】
2008505899.tif 000165
である。
【００３７】
別の態様として、本発明は式ＶＩａ：
【化１４】
2008505899.tif 000166
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（t−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ3aは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物を対象とする。
【００３８】
別の態様として、本発明は式ＶＩＩａ：
【化１５】
2008505899.tif 000167
［式中、
Ｐは、水素、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）であり；
Ｒ6aはメトキシであり；
Ｒ10はＯＨおよびＮＨ2からなる群から選択され；および
Ｒ7は水素およびメチルからなる群から選択される］
の化合物を対象とする。
【００３９】
別の態様として、本発明は本明細書で記載されているような単離されたポリペプチドおよびその医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を対象とする。
【００４０】
別の態様として、本発明は本明細書で記載されているような単離されたポリペプチドおよび少なくとも１つの治療剤を含む医薬組成物で、該治療剤が、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される医薬組成物を対象とする。
【００４１】
該抗糖尿病剤は、ビグアナイド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲ γ アゴニスト、ＰＰＡＲ α／γデュアルアゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン増感剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アナログ、インスリンおよびメグリチナイドからなる群から選択されてもよい。
【００４２】
該抗糖尿病剤は、メトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド(glipyride)、グリピジド、クロロプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、マルグリタザー、インスリン、Ｇｌ−２６２５７０（ファーグリタイザー、farglitizar）、イサグリタゾン、ＪＴＴ−５０１（レグリタイザー、reglitizar）、ＮＮ−２３４４（バラグリタゾン、balaglitazone）、Ｌ８９５６４５（CAS RN: 335149-08-1）、ＹＭ−４４０《（Ｚ）−１，４−ビス｛４−［３，５−ジオキソ−１，２，４−オキサジアゾリジン−２−イル）メチル］フェノキシ｝ブタ−２−エン》、Ｒ−１１９７０２（リボグリタゾン、rivoglitazone）、ＡＪ９６７７（ラファエグロン、rafaegron）、レパグリニド、ナテグリニド、ＫＡＤ１１２９《（Ｓ）−２−ベンジル−４−オキソ−４−（シス−パーヒドロイソインドール−２−イル）酪酸カルシウム塩》、ＡＲ−ＨＯ３９２４２（テサグリタイザー、tesaglitizar）、ＧＷ−４０９５４４《Ｌ−フェニルアラニン，Ｎ−［（１Ｚ）−１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１−プロペニル］―４−［３−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）プロピル］》、ＫＲＰ２９７《５−［（２，４−ジオキソ−５−チアゾリジニル）メチル］−２−メトキシ−Ｎ−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］−ベンズアミド》、ＡＣ２９９３《エクセナチド(exenatide)、８−３７−グルカゴン様ペプチドＩ（ヒト）−Ｎ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロピル］−２６−アルギニン−３４−［Ｎ６−（１−オキソオクチル）−Ｌ−リジン］》、ＬＹ３１５９０２《８−３６−グルカゴン関連ペプチドＩ（デグー），Ｎ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロピル］−２６−Ｌ−アルギニン−３４−［Ｎ６−（１−オキソオクチル）−Ｌ−リジン］−３６ａ》、ＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８Ａ（ビルダグリプチン、vildagliptin）およびサクサグリプチンからなる群から選択されてもよい。
【００４３】
該抗肥満剤は、β３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β化合物、ＣＢ−１アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストおよび摂食障害剤からなる群から選択されてもよい。
【００４４】
該抗肥満剤は、オーリスタット、ＡＴＬ−９６２（セチリスタット、cetilistat）、ＡＪ９６７７（ラファブレゴン、rafabregon）、Ｌ７５０３５５《Ｎ−［４−［２−［［（２Ｓ）−３−［（６−アミノ−３−ピリジニル）オキシ］−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］エチル］フェニル］−４−（１−メチルエチル）−ベンゼンスルホンアミド；またはＮ−［４−［２−［［３−［（６−アミノ−３−ピリジニル）オキシ］−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］エチル］フェニル］−４−（１−メチルエチル）−（Ｓ）−ベンゼンスルホンアミド》、ＣＰ３３１６４８（CAS RN: 335149-25-2）、シブトラミン、トピラメート、アキソキン、デキサアンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミン、リモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）、ＰＹＹ（３−３６）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）およびマジンドールからなる群から選択されてもよい。
【００４５】
該脂質低下剤は、ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、コレステロールエステル変換タンパク質、ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ ＣｏＡ）還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体活性の上方制御剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびアシル補酵素Ａコレステロール アシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤からなる群から選択されてもよい。
【００４６】
該脂質低下剤は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、アバシミベ、ＴＳ−９６２《Ｎ−２，６−ビス（１−メチルエチル）フェニル］−２−（テトラデシルチオ）−アセタミド》、ＭＤ−７００《３−（１３−ヒドロキシ−１０−オキソテトラデシル）５，７−ジメトキシ−１（３Ｈ）−イソベンゾフラノン》、ＣＰ−５２９４１４（トリセトラピブ、torcetrapib）、およびＬＹ２９５４２７《３α，４α，５α）−４−（２−プロペニルコレスタン−３−オール》からなる群から選択されてもよい。
【００４７】
別の態様として、本発明は本明細書に記載の単離されたポリペプチドの治療上の有効量を治療が必要な哺乳類に投与することからなる、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療方法または進行もしくは発症を遅らせる方法を対象とする。
【００４８】
該方法はさらに、抗糖尿病剤、抗肥満剤、降圧剤、および抗アテローム硬化剤からなる群から選択される１またはそれ以上の治療剤および脂質低下剤の治療上の有効量を、同時または連続して投与することを含んでもよい。
【００４９】
別の態様として、本発明は本明細書に記載の医薬組成物の治療上の有効量を治療が必要な哺乳類に投与することからなる、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎障害、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖、高インスリン血症、シンドロームＸ、糖尿病性合併症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症の、治療方法または進行もしくは発症を遅らせる方法を対象とする。
【００５０】
別の態様として、本発明は本明細書に記載のポリペプチドを含む製剤の非経口投与からなる、本明細書に記載のポリペプチドの投与方法を対象とする。
【００５１】
別の態様として、本発明は本明細書に記載のポリペプチドを含む製剤の非経口でない投与からなる、本明細書に記載のポリペプチドの投与方法を対象とする。
【００５２】
該非経口投与は、静脈内（ＩＶ）ボーラス注入、ＩＶ注入、皮下投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、バッカル投与、経肺投与および眼の送達からなる群から選択されてもよい。
【００５３】
該皮下投与は速放性または徐放性製剤の使用を含んでもよい。
【００５４】
該筋肉内投与は速放性または徐放性製剤の使用を含んでもよい。
【００５５】
該製剤は、溶媒および共溶媒、溶解剤、乳化剤、濃化剤、キレート化剤、抗酸化剤、還元剤、抗微生物保存剤、緩衝剤およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および張性剤、並びに特別の添加剤からなる群から選択される医薬的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。
【００５６】
該製剤はカプセル化した輸送（送達）システムをさらに含んでもよい。
【００５７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、未変性ペプチドのＧＬＰ−１の優れた生物特性を示し、ＧＬＰ−１未変性配列に比べタンパク分解開裂に増加した安定性を示し、これにより糖尿病症状の改善に有用である、新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）ペプチド受容体修飾因子、アゴニストまたは部分アゴニストを提供する。
【００５８】
本発明のおよび本明細書に記載される合成単離ペプチドは、望ましくはＧＬＰ−１受容体のアゴニストまたは部分アゴニストとして、ＧＬＰ−１受容体を調節することができる。これらの合成ペプチドは、ＧＬＰ−１と比べ優れたインビボでの効力および薬物動態的特性を示す、すなわち、該ペプチドは、食後の血漿グルコースの低下および同時に起こる血漿インスリンレベルの増加があり、これにより皮下、肺の、経鼻、バッカルまたは徐放的な投与のための理想的な治療の候補にする。
【００５９】
本発明には、例えば、式Ｉの配列：
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
［式中、
Ｘaa1は、イミダゾールを含む天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；該アミノ酸は、アルキル、アシル、ベンゾイル、Ｌ−ラクチル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アリールアルキルオキシカルボニル、ヘテロサイクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アリールアルキルカルバモイル、ヘテロサイクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルで適宜置換された遊離アミノ基を適宜有し；および該遊離アミノ基が存在しない場合、Ｘaa1は、１またはそれ以上の炭素原子が１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換された脱アミノヒスチジン体であり；
Ｘaa2は、Ｄ−アラニン、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｎ−エチル−Ｄ−アラニン、２−メチル−アゼチジン−２−カルボン酸、α−メチル−（Ｌ）−プロリン、２−メチルピペリジン−２−カルボン酸およびイソバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa3は、（１）カルボン酸を含むアミノ酸側鎖または（２）イミダゾール側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり、その中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa4はグリシンであり；
Ｘaa5は、（Ｌ）−スレオニンおよび（Ｌ）−ノルバリンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa6は、２つの側鎖を有する二置換α炭素を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該２つの側鎖の少なくとも１つは芳香環を有し、および該２つの側鎖の少なくとも１つはアルキル基を有し；および該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１もしくはそれ以上のアルキル基または１もしくはそれ以上のハロ基で適宜置換され；
Ｘaa7は、ヒドロキシル基で置換されたアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa8は、Ｌ−セリンおよびＬ−ヒスチジンからなる群から選択される天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa9は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を有する天然型または非天然型アミノ酸であり；この中で該アミノ酸の１またはそれ以上の炭素原子は、１またはそれ以上のアルキル基で適宜置換され；
Ｘaa10は、式ＩＩ：
【化１６】
2008505899.tif 000168
（式中、Ｒ4は、水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3およびＲ6は独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、水素、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸であり；
Ｘaa11は、式ＩＶａ：
【化１７】
2008505899.tif 000169
（式中、該アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素と結合して、カルボキサミド（ＮＨ2）を形成し；Ｒ4aは水素、アルキル、およびハロからなる群から選択され；Ｒ3aおよびＲ6aは各々独立して、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；Ｒ7は水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4は各々ＣまたはＮであるが、ただしＸ1、Ｘ2、Ｘ3およびＸ4の少なくとも１つはＮであり；該アミノ酸のβ炭素に隣接するフェニル環は、水素、アルキルまたはハロでさらに適宜置換され；および該アミノ酸のβ炭素の遠位末端のフェニル環は、水素、ハロ、メチル、エチル、アルキル、ヒドロキシル、メトキシ、およびアルコキシでさらに適宜置換される）の天然型または非天然型アミノ酸である］
を有するポリペプチドを含む単離されたポリペプチドが含まれる。
【００６０】
本明細書中で提供される定義は、制限なく用いられ、別に断る場合を除き、本明細書を通して用いられる用語に適用される。
【００６１】
アミノ酸およびペプチド化学の当業者は、アミノ酸が一般式：
【化１８】
2008505899.tif 000170
（式中ＲおよびＲ’は本明細書で述べられている）によって表される化合物を含むことを知っている。別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アミノ酸」には、特に制限なく、「α」炭素と称される同一の炭素に結合するアミノ基およびカルボキシル基を含み、その中でＲおよび／またはＲ'は、水素を含む天然または非天然側鎖である。
【００６２】
「α」炭素における絶対構造「Ｓ」は、「Ｌ」または「天然」構造と一般に称される。
【００６３】
「Ｒ」および「Ｒ置換基」の両方が水素と等しい場合は、該アミノ酸はグリシンであり、キラルではない。
【００６４】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アミノアルコール」には、特に制限なく、天然または非天然型アミノ酸が含まれ、その中で、カルボキシ基は、バリノール、グリシノール、アラニノール、アリールアラニノール、ヘテロアリールアラニノールのようなメチルアルコールに置換（還元）される。
【００６５】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキル」には、特に制限なく、直鎖および分枝鎖の両方の炭化水素が含まれ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、それの様々な分枝鎖の異性体などのような通常の鎖で、１〜４０個の炭素、好ましくは１〜２０個の炭素、より好ましくは１〜８個の炭素が含まれる。更に、本明細書で定義されるようなアルキル基は、いずれかの有効な炭素原子上において、かかる鎖、例えば、これらに制限されないが、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシ、アリールアルキルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、アルカノイル、ハロ、ヒドロキシル、チオ、ニトロ、シアノ、カルボキシル、カルボニル（＝Ｏ）、サルボキサミド、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミド、アルキルアミノ、アリールアミド、ヘテロアリールアミド、アジド、グアニジノ、アミジノ、ホスホン基、ホスフィン基、スルホン基、スルホンアミド、ハロアリール、ＣＦ3、ＯＣＦ2、ＯＣＦ3、アリールオキシ、ヘテロアリール、シクロアルキルアルコキシアルキル、シクロヘテロアルキルなどに一般的に結合する１またはそれ以上の官能基で適宜置換されて、トリフルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピル、２−フルオロエチル、カルボキシメチル、シアノブチルなどのアルキル基を形成してもよい。
【００６６】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルケニル」には、特に制限なく、直鎖および分枝鎖の両方の炭化水素が含まれ、通常の鎖で、１またはそれ以上の二重結合を含む２〜４０個の炭素、好ましくは１〜３個の二重結合を含む２〜２０個の炭素、より好ましくは１〜２個の二重結合を含む２〜８個の炭素が含まれ、いずれの炭素も「アルキル」として上記で述べられたように適宜置換されてもよい。
【００６７】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキニル」には、特に制限なく、直鎖および分枝鎖の両方の炭化水素が含まれ、通常の鎖で、１またはそれ以上の三重結合を含む２〜４０個の炭素、好ましくは１〜３個の三重結合を含む２〜２０個の炭素、より好ましくは１〜２個の三重結合を含む２〜８個の炭素が含まれ、いずれの炭素も「アルキル」として上記で述べられたように適宜置換されてもよい。
【００６８】
別に断りがない限り、本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「シクロアルキル」には、特に制限なく、１〜３個の環を含む飽和または一部不飽和（１または２個の二重結合を含む）環状炭化水素基、付加された、あるいは縮合したものが含まれ、全部で３〜２０個の炭素で形成する環で、好ましくは４〜７個の炭素で各々の環を形成した環を含む、単環式アルキル、二環式アルキルおよび三環式アルキルが含まれ；アリールとして述べられるような１個の芳香環に縮合してもよく、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシル、シクロヘキセニル、
【化１９】
2008505899.tif 000171
が含まれ、これらのいずれの基も、いずれかの有効な炭素原子を通して、水素、ハロ、ハロアルキル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキルアルキル、フルオレニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アリールチオ、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、シアノ、カルボキシル、カルボニル（＝Ｏ）、カルボキサミド、アミノ、アミノが１または２個の置換基（アルキル、アリールまたは定義の中で述べられた他のアリール化合物のいずれか）を含む置換アミノ、アミド、アジド、グアニジノ、アミジノ、ホスホン基、ホスフィン基、スルホン基、スルホンアミド、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニル、あるいは上記で示されたアルキル置換基のいずれかから選択される１個またはそれ以上の基で適宜置換されてもよい。
【００６９】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリール」とは、特に制限なく、環の部分（例えば、フェニルまたはナフチル）で６〜１０個の炭素を含む単環式および二環式芳香環基をいい、「アリール」（例えば、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル環）に縮合される１〜３個の付加的な環を適宜含んでいてもよく、いずれかの有効な炭素原子を通じて水素、アルキル、ハロ、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキルアルキル、フルオレニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アリールチオ、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシアルキル、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、シアノ、アミノ、アミノが１または２個の置換基（アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、もしくはアリールまたは定義の中で述べられた他のアリール化合物のいずれか）を含む置換アミノ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアルキルアミノカルボニル アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニル、あるいは上記で示されたアルキル置換基のいずれかから選択される１個またはそれ以上の基で適宜置換されてもよい。
【００７０】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキル」とは、特に制限なく、例えばベンジル、フェネチルまたはナフチルプロピルのようなアリール置換基（該アリールおよび／またはアルキル基は上記で定義されるように適宜置換されうる）を有する上記で定義されるようなアルキル基をいう。
【００７１】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「ヘテロアリールオキシ」、「アリールアルキルオキシ」、または「ヘテロアリールアルキルオキシ」には、特に制限なく、酸素原子と通じて結合される上記で定義されるようなアルキルまたはアリール基が含まれる。
【００７２】
本明細書で用いられている用語「ヘテロシクロ」、「ヘテロ環」、「ヘテロサイクリル」または「ヘテロ環（状）の」は、特に制限なく、飽和または不飽和の、炭素原子、並びに窒素、硫黄、酸素および／またはＳＯまたはＳＯ2基から選択される１〜４個のヘテロ原子（該窒素および硫黄ヘテロ原子は適宜酸化されていてもよく、および該窒素ヘテロ原子は適宜四級化されていてもよい）からなる、無置換または置換された安定な４−、５−、６−または７員単環式環システムを表す。該ヘテロ環は、安定な構造の産物が生じるようにいずれかのヘテロ原子または炭素原子で結合し得る。かかるヘテロ環基の例には、これらに制限されないが、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキソピロリジニル、オキソピペラジニル、オキソピペリジニルおよびオキサジアゾリルが含まれる。適宜、ヘテロシクロ基は、１またはそれ以上の官能基、例えば「アルキル」または「アリール」を対象に記載した官能基で置換してもよい。
【００７３】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロシクロアルキル」とは、特に制限なく、ヘテロシクロアルキル置換基を有する、上記で定義されたようなアルキル基をいい、この中で該「ヘテロシクロ」および／またはアルキル基は、上記で定義されているように適宜置換されうる。
【００７４】
本明細書で用いられている用語「ヘテロアリール」とは、特に制限なく、窒素、硫黄、酸素および／またはＳＯまたはＳＯ2基から選択される１またはそれ以上のヘテロ原子を含む５−、６−または７員芳香族ヘテロ環をいう。かかる環は、別のアリールまたはヘテロアリール環と縮合されてもよく、可能なＮ−オキシドを含んでいてもよい。かかるヘテロアリール基の例には、これらに限らないが、フラン、ピロール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、イソキサゾール、オキサゾール、イミダゾールなどが含まれる。適宜、ヘテロアリール基は、かかる鎖に一般的に結合する１またはそれ以上の官能基、例えば「アルキル」または「アリール」を対象に記載した官能基で置換してもよい。
【００７５】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールアルキル」とは、特に制限なく、ヘテロアリール置換基を有する、上記で定義されたようなアルキル基をいい、この中で該ヘテロアリールおよび／またはアルキル基は、上記で定義されているように適宜置換されうる。
【００７６】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素と結合する上記のアルキル基をいい、例えば、ＣＨ3ＯＣ（Ｏ）−、ＣＨ3ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−またはＣＨ2（ＯＨ）ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）−が挙げられる。
【００７７】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールオキシカルボニル」とは、特に制限なく、−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素と結合する上記のアリール基をいう。
【００７８】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素と結合する上記のアラルキル基をいう。
【００７９】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロサイクリルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、ヘテロサイクリル基のいずれかの炭素原子が−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素に結合している上記で定義されているようなヘテロサイクリル基をいう。
【００８０】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロサイクリルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、ヘテロサイクリル基のいずれかの炭素原子が−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素に結合している上記で定義されているようなヘテロサイクリル基をいう。
【００８１】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル」とは、特に制限なく、ヘテロサイクリル基のいずれかの炭素原子が−ＯＣ（Ｏ）−基の酸素に結合している上記で定義されているようなヘテロアリールアルキル基をいう。
【００８２】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキルカルバモイル」とは、特に制限なく、−ＮＣ（Ｏ）−基の窒素に結合している上記で定義されているようなアルキル基をいい、例えば、ＣＨ3ＮＨＣ（Ｏ）−、ＣＨ3ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）−または（ＣＨ3）2ＮＨＣ（Ｏ）−が挙げられ、２個のアルキル基が存在する場合は、該アルキル基は適宜結合して４、５、６または７員環を形成でき、例えば、
【化２０】
2008505899.tif 000172
となる。
【００８３】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキルカルバモイル」とは、特に制限なく、−ＮＣ（Ｏ）−基の窒素に結合している上記で定義されているようなアリールアルキル基をいう。
【００８４】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロサイクリルカルバモイル」とは、特に制限なく、−ＮＣ（Ｏ）−基の窒素に結合している上記で定義されているようなヘテロ環基をいう。
【００８５】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アルキルスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなアルキル基をいい、例えば、ＣＨ3Ｓ（Ｏ）2−、ＣＨ3ＣＨ2Ｓ（Ｏ）2−または（ＣＨ3）2ＣＨ2Ｓ（Ｏ）2−が挙げられる。
【００８６】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなアリール基をいう。
【００８７】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「アリールアルキルスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなアリールアルキル基をいう。
【００８８】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなヘテロアリール基をいう。
【００８９】
本明細書で単独または別の基の一部として用いられている用語「ヘテロアリールアルキルスルホニル」とは、特に制限なく、−Ｓ（Ｏ）2−基の硫黄に結合している上記で定義されているようなヘテロアリールアルキル基をいう。
【００９０】
用語「受容体修飾因子」とは、ＧＬＰ−１受容体に作用してその能力を変え、下流シグナル現象を制御する化合物をいう。受容体修飾因子の例には、標準的な薬理学の教科書（例えば、E.M. Ross and T.P. Kenakin in Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th edition (2001)  McGraw Hill, Chapter 2, pp. 31-43）に定義されているような、アゴニスト、アンタゴニスト、部分アゴニスト、インバースアゴニスト、アロステリックアンタゴニストおよびアロステリックポテンシエーターが含まれる。
【００９１】
当業者は本件および当該技術分野で提供されるような用語の意味を容易に認識する。
【００９２】
用語「糖尿病および関連障害または関連症状」は、これらに限らないが、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、耐糖能障害、肥満症、高血糖、シンドロームＸ、代謝異常症侯、糖尿病性合併症、および高インスリン血症をいう。
【００９３】
本明細書で用いられている用語「脂質調節」または「脂質低下」剤は、特に制限なく、ＬＤＬを低下させ、および／またはＨＤＬを上昇させ、および／またはトリグリセリドを低下させ、および／または総コレステロールを低下させる薬剤、および／または脂質障害を治療的に処置する他の公知のメカニズムをいう。
【００９４】
本発明の治療剤の投与には、これに制限されないが、本発明の薬剤の治療上の有効量の投与が含まれる。本明細書で用いられている用語「治療上の有効量」は、特に制限なく、本発明の組成物の投与によって治療されうる症状を治療または予防する治療剤の量をいう。その量は、検出できうる治療または予防または改善効果を示す十分な量である。その効果には、例えば、これに制限されないが、本明細書に挙げられる症状の治療または予防が含まれうる。患者への正確な有効量は、患者の大きさおよび健康状態、治療される症状の状態および程度、担当医の助言、および投与に選択された治療剤または治療剤の組合せに依存する。したがって、前もって正確な有効量を明記しておくことは有用ではない。
【００９５】
本発明のペプチドは、ｏｂ／ｏｂマウスにおけるブドウ糖耐性試験で評価し、以下の実施例２２に記載されているように相対インビボ効力を評価した。本発明のペプチドは、WO 2003/033671（本明細書にそのまま引用される）からの化合物Ｉによって例示されるペプチドに関連した、グルコース低下の効力モデルにおける優れた効能および優れた薬物動態（実施例２５に記載される、イヌでの皮下注射によって測定されるような）を示し、それは表１および２に図示されている。
【化２１】
2008505899.tif 000173
【化２２】
2008505899.tif 000174
【００９６】
表１
2008505899.tif 000175
表２
2008505899.tif 000176
ＡＵＣ＝曲線下の面積。ＡＵＣ値は、個々の動物においてベースラインとして絶食の血漿グルコース値を用いて計算する。ＡＵＣにおけるパーセントの変化は、同実験においてベヒクル処置された群でのＡＵＣに関して計算される。所定のｐ値は、偏差の解析（ＡＮＯＶＡ）、続くフィッシャーのｐｏｓｔ ｈｏｃテストを用いたベヒクル処置された群と比較して決定する（**ＮＳ＝統計的有意差なし）。
【００９７】
本明細書に記載されているペプチドおよびそのアナログは、様々な固相技術を用いた化学合成、例えばバラニィらの文献［G. Barany and R.B. Merrifield, 「The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology」; Volume 2 -「Special Methods in Peptide Synthesis, Part A」, pp. 3-284, E. Gross and J. Meienhofer, Eds., Academic Press, New York, 1980; およびin J. M. Stewart and J. D. Young, 「Solid-Phase Peptide Synthesis」, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL, 1984.］に記載されている方法によって製造され得る。
【００９８】
本発明における使用の所望の戦略は、アミノ酸側鎖を一時的に保護するためのｔｅｒｔ−ブチル基と共に、α−アミノ基を一時的に保護するためのＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルメチルオキシカルボニル）基に基づく（参照：例えば、E. Atherton and R. C. Sheppard, 「The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group」, in「The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology」; Volume 9 -「Special Methods in Peptide Synthesis, Part C」, pp. 1-38, S. Undenfriend and J. Meienhofer, Eds., Academic Press, San Diego, 1987.）。
【００９９】
本発明のペプチドは、ペプチドのＣ末端から始める不溶のポリマー支持体（「レジン」ともいう）上での段階的な方法で合成できる。合成はアミドまたはエステル結合の形成を通じて該レジンにペプチドのＣ末端アミノ酸を付けることで開始する。これは最後にそれぞれＣ末端アミドまたはカルボン酸として生じているペプチドを外す。あるいは、Ｃ末端アミノアルコールが存在する場合は、ここに記載されているように、Ｃ末端残基は２−メトキシ−４−アルコキシベンジルアルコールレジン（SASRIN(登録商標), Bachem Bioscience, Inc., King of Prussia, PA）に結合してもよく、ペプチド配列構築が完了後、生じたペプチドアルコールはＴＨＦ中のＬｉＢＨ4で外される（参照：J. M. Stewart and J. D. Young, supra, p. 92）。
【０１００】
該合成に用いられるＣ末端アミノ酸およびすべての他のアミノ酸は、α−アミノ保護基が合成中に選択的に除かれ得るように他と異なって保護されたα−アミノ基および（もし存在するなら）側鎖官能基性を有することが要求される。アミノ酸のカップリングは、活性エステルとしてのそれのカルボキシル基の活性化およびレジンに付いたＮ−末端アミノ酸の遮断されていないα−アミノ基との反応によって行われる。α−アミノ基脱保護およびカップリングの進行は完全なペプチド配列が構築するまで繰り返す。該ペプチドは次いで、副反応を制限するために通常適当なスカベンジャーの存在下、側鎖官能基性の同時の脱保護を伴いレジンから脱保護する。生じたペプチドは最終的に逆相ＨＰＬＣで精製される。
【０１０１】
最終的なペプチドへの前駆体として要求されるペプチジルレジンの合成には、市販品として入手可能な架橋ポリスチレンポリマーレジン（Novabiochem、San Diego、CA； Applied Biosystems、Foster City、CA）が利用される。本発明に使用される好ましい固体の支持体は、Ｃ末端カルボキサミド用に、４−（２'，４'−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシアセチル−ｐ−メチルベンズヒドリルアミンレジン（リンク アミド ＭＢＨＡレジン）；９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールドレジン（シーバー アミドレジン）；４−（９−Ｆｍｏｃ）アミノメチル−３，５−ジメトキシフェノキシ）バレリル−アミノメチル−メリフィールドレジン（ＰＡＬレジン）である。最初と後のアミノ酸のカップリングは、ＤＩＣ／ＨＯＢＴ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、またはＤＩＣ／ＨＯＡＴ、ＨＡＴＵ／ＨＯＡＴからそれぞれ生成されるＨＯＢＴまたはＨＯＡＴ活性エステルを用いて行われ得る。本発明に使用される好ましい固体の支持体は、保護されたペプチドフラグメント用に、２−クロロトリチルクロリドレジンおよび９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールドレジン（シーバー アミドレジン）である。２−クロロトリチルクロリドレジンへの最初のアミノ酸の負荷は、ジクロロメタンおよびＤＩＥＡ中のレジンとのＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の反応によって、最もよく達成される。必要なら、少量のＤＭＦを加えてアミノ酸の溶解を促進してもよい。
【０１０２】
本明細書に記載される１１量体ペプチドアナログの合成は、ペプチドシンセサイザー、例えば、アドバンスドケムテック万能ペプチドシンセサイザー(Advanced Chemtech Multiple Peptide Synthesizer)（ＭＰＳ３９６）またはアプライド バイオシステムズ(Applied Biosystems Inc.)ペプチドシンセサイザー（ＡＢＩ ４３３Ａ）を用いて行いうる。ＭＰＳ３９６を用いたなら、９６個までのペプチドが同時に合成された。ＡＢＩ４３３Ａシンセサイザーを用いたなら、個々のペプチドが連続して合成された。どちらの場合ににおいても、順次の固相ペプチド合成は、本明細書に述べられているＦｍｏｃ／ｔ−ブチル保護戦略を利用して行われた。
【０１０３】
Ｘaa11位およびＸaa10位に存在する非天然型で非売のアミノ酸は、２つの方法の１つで、該ペプチド鎖に導入された。最初のアプローチでは、Ｂｏｃ−またはＦｍｏｃ保護された非天然型アミノ酸を適当な有機合成方法を用いて溶液中製造した。生じた誘導体を次いでペプチドの順次の合成に用いた。あるいは、要求される非天然型アミノ酸を、合成有機化学方法を直接用いてレジンの上に作った。非天然型で非売のアミノ酸がＸaa6位または他のいずれかのＸaa位で導入の必要が合った場合、要求されるＦｍｏｃ保護された非天然型アミノ酸を溶液中合成した。かかる誘導体は次いで順次の固相ペプチド合成に用いた。
【０１０４】
本発明に用いる目的物は、以下に示すＦｍｏｃアミノ酸誘導体である。
【化２３】
2008505899.tif 000177
【化２４】
2008505899.tif 000178
【０１０５】
それぞれペプチド用のペプチジルレジン前駆体は、標準的な方法（参照：例えば、D. S. King et al. Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266）を用いて開裂および脱保護してもよい。本発明に用いられる望ましい方法は、スカベンジャーとして水およびＴＩＳの存在下ＴＦＡの使用である。典型的には、該ペプチジルレジンは、室温で２〜６時間ＴＦＡ／水／ＴＩＳ（９４：３：３、ｖ：ｖ：ｖ；１ｍＬ／１００ｍｇのペプチジルレジン）中攪拌される。使い終わったレジンは次いで濾去し、ＴＦＡ溶液を濃縮し、または減圧乾燥する。生じたクルードのペプチドは、沈澱させて、Ｅｔ2Ｏで洗浄するか、またはプレパラティブＨＰＬＣでの精製のためにＤＭＳＯまたは５０％酢酸水に直接溶解させる。
【０１０６】
目的の純度を有するペプチドは、プレパラティブＨＰＬＣ、例えば、ウォーターズ４０００型または島津製作所ＬＣ−８Ａ型液体クロマトグラフを用いる精製で得られる。クルードなペプチドの該溶液を、ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラムに注入し、２２０ｎｍのＵＶ吸収で溶離液をモニターしながら、１４〜２０ｍＬ／分の流速を用いて、どちらも０.１％ＴＦＡで緩衝化されたＭｅＣＮ／水の直線的なグラジエントで溶離する。精製したペプチドの構造は、エレクトロスプレーＭＳ分析で確認できる。
【０１０７】
以下の略号は、実施例および本明細書の他の箇所で用いられる。
Ｐｈ＝フェニル
Ｂｎ＝ベンジル 
ｉ−Ｂｕ＝イソブチル
ｉ−Ｐｒ＝イソプロピル
Ｍｅ＝メチル
Ｅｔ＝エチル
Ｐｒ＝ｎ−プロピル 
Ｂｕ＝ｎ−ブチル
ＴＭＳ＝トリメチルシリル 
ＴＩＳ＝トリイソプロピルシラン
Ｅｔ2Ｏ＝ジエチルエーテル
ＨＯＡｃまたはＡｃＯＨ＝酢酸
ＭｅＣＮまたはＣＨ3ＣＮ＝アセトニトリル
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ＝α，α，α−トリフルオロエタノール
Ｅｔ2ＮＨ＝ジエチルアミン
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリドン
ＤＣＭ＝ジクロロメタン 
ｎ−ＢｕＬｉ＝ｎ−ブチルリチウム 
Ｐｄ／Ｃ＝パラジウム炭素
ＰｔＯ2＝酸化白金
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ｍｉｎ＝分
ｈまたはｈｒ＝時
Ｌ＝リットル
ｍＬまたはｍｌ＝ミリリットル
μＬ＝マイクロリットル
ｇ＝グラム
ｍｇ＝ミリグラム
ｍｏｌ＝モル
ｍｍｏｌ＝ミリモル
ｍｅｑ＝ミリ当量
ｒｔまたはＲＴ＝室温
ｓａｔまたはｓａｔ’ｄ＝飽和
ａｑ．＝水（の）
ｍｐ＝融点
Ｂｉｐ＝ビフェニルアラニン
ＬｉＢＨ4＝水素化ホウ素リチウム
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモ−コハク酸アミド
ＢＯＰ試薬＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ジメチルアミノ−ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート（カストロ試薬）
ＰｙＢＯＰ試薬＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＣＴＵ＝２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＤＭＡＰ＝４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＡＣ＝３−エチル−３'−（ジメチルアミノ）プロピル−カルボジイミド塩酸塩（または１−［（３−（ジメチル）アミノ）プロピル］）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩）
ＦｍｏｃまたはＦＭＯＣ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＢｏｃまたはＢＯＣ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｃｂｚ＝カルボベンジルオキシまたはカルボベンゾキシまたはベンジルオキシカルボニル
ＨＯＢＴまたはＨＯＢＴ・Ｈ2Ｏ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
Ｃｌ−ＨＯＢｔ＝６−クロロ−ベンゾトリアゾール
ＨＯＡＴ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィ
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィ
ＬＣ／ＭＳ＝高速液体クロマトグラフィ／マススペクトル
ＭＳまたはＭａｓｓ Ｓｐｅｃ＝マススペクトル
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＳｃまたはＳＣ＝皮下の
ＩＰまたはｉｐ＝腹腔内
ＧＴＴ＝ブドウ糖耐性試験
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモコハク酸イミド
【０１０８】
式ＩＶａのアミノ酸合成の一般的方法
式ＩＶａの保護されたアミノ酸はいくつかの方法で製造できる。例えば（反応式Ａ）、ヨードブロモ−ヘテロ環ｉ（式中、Ｘ3＝Ｎ）は、標準的な文献の方法で、ボロン酸とパラジウム媒介触媒を介してカップリングし、アリールヘテロ環ブロミドｉｉを与え、それはリチウム化し、ジメチルホルムアミドのようなアシル化剤で反応させてアルデヒド体ｉｉｉを与えることができる。該アルデヒド体は水素化ホウ素ナトリウムまたは類似の試薬でアルコール体ｉｖに還元し、対応するブロミド体ｖは、４８％臭化水素酸中化合物ｉｖの延長した還流によって製造される。オドンネルの方法（O’Donnell，Tetrahedron Letters 39 8775 (1998)）後のキラル触媒を用いた化合物ｖとの２−（ジフェニルメチル−エンアミノ）酢酸 ｔｅｒｔ−ブチルのアルキル化は、キラルなエステル体ｖｉへと導き、それは強い非水系の酸で脱保護およびＦｍｏｃＣｌでの処理後、優位に一方のキラル体のＦｍｏｃ ｔ−ブチルエステル体ｖｉｉを与える。通常の有機溶媒からの化合物ｖｉｉの再結晶化で、エナンチオマー過剰率＞９５％の化合物ｖｉｉｉが得られる。強い非水系の酸を用いた該エステルの除去で、式ＩＶａの化合物が得られる。
【０１０９】
あるいは、式ＩＶａの化合物は、メチルヘテロ環ｉｘ（反応式Ｂ）のラジカル誘導ブロム化してブロモメチルヘテロ環ｘを得ることによって製造できる。上記のオドンネル(O'Donnell)の方法による化合物ｘのアルキル化および類似の再結晶化で、高エナンチオマー過剰率でキラルなエステル体ｘｉｉｉに導かれる。反応式Ａに記載のようなボロン酸カップリングで、式ＩＶａの化合物に導かれる。
【化２５】
2008505899.tif 000179
【化２６】
2008505899.tif 000180
【０１１０】
化合物ｉｘは、オキシ臭化リンでの処理によってヒドロキシヘテロ環ｘｉｖから製造される（反応式Ｃ）。
【化２７】
2008505899.tif 000181
【０１１１】
中間体ｉｘの別の合成には、亜鉛−銅カップリングによる、化合物ｘｖ、メチル−３−イオド−アラネート、および化合物ｉを用いる（反応式Ｄ）。
【化２８】
2008505899.tif 000182
【０１１２】
アリールピリミジニルメチルブロミド体ｘｘｉｉｉ（Ｘ2、Ｘ3＝Ｎ、Ｘ1、Ｘ4＝ＣＲ4a）は、アリールニトリルｘｖ（反応式Ｅ）から製造できる。
【化２９】
2008505899.tif 000183
【０１１３】
ヒドロキシピリミジン体ｘｖｉは、ヒドロキシルアミン塩酸塩での該ニトリル体の処理によって化合物ｘｖから製造される。ピリミジン体ｘｖｉｉは化合物ｘｖｉの水素化から生じる。エノールメチレンマロネートｘｖｉｉｉでの化合物ｘｖｉｉの縮合でピリミジン体ｘｉｘへと導き、それはオキシ塩化リンでクロル化して、化合物ｘｘが得られる。触媒による水素化を経由する脱ハロゲン化により、化合物ｘｘｉへと導き、ＤｉＢＡｌを用いた還元でアルコール体ｘｘｉｉを得る。オキシ臭化リンを用いた該アルコールの処理で不安定なブロミド体ｘｘｉｉｉへと導き、これは保護されたアミノ酸ｖｉを得るために反応式Ａにあるようにすぐに使用しなければならない。
【０１１４】
式ＩＶａ（Ｒ7＝Ｍｅ）の化合物は、カパディアの方法（Kapadia, J. Org. Chem. 66 1903 (2001)）でオキサゾリジン体ｘｘｉｖから製造される（反応式Ｆ）。カリウムヘキサメチルジシラジドまたは他の強塩基を用いる化合物ｖとの化合物ｘｘｉｖのアルキル化で、化合物ｘｘｖを得る。化合物ｘｘｖの強酸加水分解、続く該アミンの保護（ＦｍｏｃＣｌまたはＦｍｏｃＯＳｕなどを用いる）で、式ＩＶａのタイプの化合物を得る。
【化３０】
2008505899.tif 000184
【０１１５】
ペプチド化学分野における当業者には、アミノ酸がＤおよびＬ異性体の両方として生じ、本発明が本明細書に記載されたペプチドの合成に導入されたアミノ酸の異性体のいずれかまたは混合物の使用を含むことは承知されている。
【０１１６】
実施例１
１１量体ペプチドの同時固相ペプチド合成
ＭＰＳ−３９６ペプチドシンセサイザーによる自動同時合成プロトコールを用いる連続するペプチド鎖伸張の前に、Ｘaa10位およびＸaa11位にアミノ酸を含むジペプチジルレジンを、バッチ単位のモードで以下の手動の方法を用いて製造した。手動によるカップリングに用いられるＮ−α−Ｆｍｏｃ保護されたビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン誘導体の合成は、上記の一般的な実験に、および実施例１０〜１６および実施例２１〜２２に同様に記載されている。
【０１１７】
いくつかの１１量体アナログ合成に十分な９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−３−イルオキシ−メリフィールドレジン（シーバーアミドレジン；負荷量：０.５〜０.７ｍｍｏｌ／ｇ）の量は、ＤＭＦ（４×１０ｍＬ／ｇ、５分）で洗浄して増やした。Ｆｍｏｃ基は次いで、２つの処理、すなわち、それぞれ５および１５分で、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（１０ ｍＬ／ｇ）での処理を用いて除去した。該レジンは、ＤＭＦ（４×１０ｍＬ／ｇ）およびＮＭＰ（４×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。０.５Ｍ Ｆｍｏｃ−Ｌ−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン−ＯＨ（ＨＣｌ塩）（１.１当量）、（または式ＩＶａで表されるいずれかの他のアミノ酸の同化合物）、ＰｙＢＯＰ（１.１当量）およびＤＩＥＡ（３.３当量）のＮＭＰ溶液を、該レジンに加えた。次いでレジンを振り混ぜ、１６〜２４時間ボルテックスした。カップリングの完了は定性的ニンヒドリン試験を用いてモニターした。レジンを排水し、ＮＭＰ（３×１０ ｍＬ／ｇ）およびＤＭＦ（３×１０ ｍＬ／ｇ）で洗浄し、１０％無水酢酸／ＤＣＭ（１０ ｍＬ／ｇ）で９０分間処理した。ＤＣＭ洗浄（４×１０ ｍＬ／ｇ）後、媒介されたＤＩＣ／ＨＯＡｔを用いた第２の手動カップリングサイクルは次いで、２０％ピペリジン／ＤＭＦでＦｍｏｃ基の除去から始め、カップリングステップにおいて式ＩＩで表されるようなＦｍｏｃ保護されたビフェニルアラニンアナログを用いて、行った。この合成反応式で、目的のＦｍｏｃ保護されたジペプチジル−シーバーアミドレジンを生成した。
【０１１８】
計画されたアナログのセットの合成に要求されるかかるジペプチジルレジンは、以下の方法における１回のランにつき９６個までのペプチドの自動ＭＰＳ合成に用いられた。該ジペプチジルレジンは、ジクロロメタン／ＤＭＦ（６０:４０）中の懸濁液として、アドバンスドケムテックＭＰＳ ３９６ シンセサイザーの９６ウェル反応器の中に、反応器のウェルあたりレジンの０.０１〜０.０２５ｍｍｏｌ（２０〜５０ｍｇ）に対応する量で、負荷された。反応器は該機器の上にセットされ、排水された。ウェルは次いでＤＭＦ（０.５〜１.０ ｍＬ、３×２分）で洗浄され、あらかじめプログラムされた配列合成表によって決定されているようなそれぞれのペプチド配列を集めるのに要求されている自動カップリングサイクルの数に合わせた。
【０１１９】
典型的な０.０２５ｍｍｏｌ／ウェルの９６個の化合物の同時合成に用いられる詳細な段階的合成プロトコールは、以下に記載されている。このプロトコールは、個々の１回のランあたり１２〜９６の範囲のアナログの配列の同時合成に適用された。一般的な合成プロトコールは、反応式１に図示されている。
【化３１】
2008505899.tif 000185
【０１２０】
合成を開始する前に、以下の試薬溶液を調製し、要求されるように機器に置いた：１.５Ｍ（１５％）ピペリジン／ＤＭＦ；０.５Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ；０.３６Ｍ ＤＩＣ／ＮＭＰ；１Ｍ（１０％）無水酢酸／ＤＭＦ。要求されるＦｍｏｃ保護されたアミノ酸を０.３６Ｍの０.３６Ｍ ＨＯＡｔ／ＮＭＰ溶液として調製し、３２位のアミノ酸ラックにおける適当な位置に置いた。
【０１２１】
上記で調製されたＦｍｏｃ保護されたジペプチジルレジンは２０％ピペリジン／ＤＭＦ（１.０ｍＬ；１×５分；１×１５分）での処理により脱保護された。レジンは次いでＮＭＰ（８×１.０ ｍＬ）で洗浄された。
【０１２２】
次のアミノ酸、典型的にはＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、または要求されるなら適当な直交の保護をされた別のＦｍｏｃ−アミノ酸のカップリングは、適当なＦｍｏｃ−アミノ酸（０.０７５ ｍｍｏｌ、３.０当量）、ＨＣＴＵ（０.０７５ ｍｍｏｌ、３.０当量）およびＤＩＥＡ（０.１５ ｍｍｏｌ、６.０当量）のＮＭＰ（１ ｍＬ）溶液の手動でのすべてのウェルへの添加によって行われた。窒素気圧（３〜５ｐｓｉ）による反応器の排出およびＮＭＰ（４×１.０ ｍＬ）でのウェルの洗浄後、カップリングは３時間続けられた。
【０１２３】
次のカップリングサイクルは、上記で述べられているようなＦｍｏｃ基の除去から始め、この位置で望まれる配列の置換によって要求されるようなＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨの、または異なるＦｍｏｃ−アミノ酸のカップリングが含まれた。該カップリングは、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ用に記載されたカップリングに一致する方法で実施された。次のカップリングステップは、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは他の選択されたＦｍｏｃ−アミノ酸のいずれかを、要求されているこの配列の位置に導入する同じ方法で実施された。
【０１２４】
次のＦｍｏｃ−アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｐｈｅ−ＯＨまたはそれのアナログ）は以下のようにカップリングした：通常の方法でのＦｍｏｃの脱保護後、Ｆｍｏｃ−アミノ酸（１〜５当量）、ＨＯＡｔ（１〜５当量）およびＤＩＣ（１〜５当量）は、ＮＭＰ（１.０ ｍＬ）溶液として手動で加えられ、該カップリングは１６〜２４時間続けられた。該カップリングはこのケースでは繰り返さなかった。通常のカップリング後の洗浄の後、該ペプチジルレジンを本明細書中で記載しているような無水酢酸でキャッピングした。
【０１２５】
次のカップリングステップには、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたはこの位置での配列置換によって要求されるような置換アナログが含まれた。１０当量のＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは置換アナログが用いられ、該カップリングが１６時間続けられ、用いられたカップリング試薬がＮＭＰ中のＤＩＣ／ＨＯＡｔであること以外は、該カップリングはＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨおよびそのアナログの初期のＭＰＳカップリングに記載されているように行われた。通常のカップリング後の洗浄の後、該ペプチジルレジンを１０％無水酢酸／ＤＣＭ（１×１ｍＬ×６０分）でキャッピングした。
【０１２６】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨのカップリングに記載されている同一のカップリングプロトコールが使用され、次の３つのアミノ酸残基に繰り返された。Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨは、上記段落で記載されているＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ残基として、目的の１１量体ペプチドアナログの配列アセンブリを完成させるために、カップリングした。ある配列の位置で要求される市販品としておよび非市販品として入手可能な非天然型アミノ酸のカップリングのために、６位（Ｘaa6）での新規なアミノ酸用に上述されたカップリングと類似の単一のカップリングプロトコールを用いた。
【０１２７】
最終的に、Ｆｍｏｃ基を、上述のように２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去し、該ペプチジルレジンをＤＭＦ（４×１.０ ｍＬ）およびＤＣＭ（４×１.０ ｍＬ）で洗浄した。該レジンを次いで、１０〜１５分窒素ガス（５ｐｓｉ）の定圧を用いて反応器ブロック上で乾燥した。
【０１２８】
ａ．開裂／脱保護
目的のペプチドは、以下のようなＴＦＡ開裂混合物で処理して、それぞれのペプチジルレジンから、開裂／脱保護された。ＴＦＡ／ＤＣＭ／トリ−イソプロピルシラン（７０：２８：２）（１.０ｍＬ）の溶液は、反応器のブロック内の各ウェルに加えられ、次いで１０分間ボルテックスした。これはもう２回繰り返され、ウェルからの該ＴＦＡ溶液は、風袋を量る前の、反応器の底の上にマッチングした９６のバイアルブロックにあるバイアルの中に正圧によって収集された。該バイアルはキャップされ、さらに９０分間弱くボルテックスされた。該バイアルはキャップせずに、スピードバック(登録商標)（サバント）で約０.２ｍＬの量まで濃縮した。該クルードなペプチドは、次いで更にジイソプロピルエーテル（３ｍＬ）を加えて、短くボルテックスして沈殿化した。沈澱物は遠心分離で小さくまとめ、上清をデカントした。該バイアルはスピードバック(登録商標)（サバント）で乾燥し、典型的には＞１００％の収率（２０〜４０ｍｇ）でクルードなペプチドを得た。該クルードなペプチドは、以下のプレパラティブＨＰＬＣで精製するために、２ｍＬの０.６％水酸化アンモニウムに直接溶かした。
【０１２９】
ｂ．クルードなペプチドのプレパラティブＨＰＬＣ精製
プレパラティブＨＰＬＣは、ウォーターズ４０００型または島津製作所ＬＣ−８Ａ型液体クロマトグラフで実施した。クルードなペプチドの各溶液をＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラムに注入し、どちらも０.１％ＴＦＡで緩衝化されたＭｅＣＮ／水の直線的なグラジエントで溶離した。用いた典型的なグラジエントは、１４ ｍＬ／分の流速で、１５分かけて２０％〜５０％［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］で、２２０ｎｍの流出ＵＶ検出であった。溶離した目的の生成物は、典型的には１０〜１１分後不純物とよく分離し、通常フラクションコレクターに単一の１０〜１５ｍＬのフラクションに集められた。目的のペプチドは、ＨＰＬＣフラクションの凍結乾燥でアモルファスの白色散剤として得られた。
【０１３０】
ｃ．精ペプチドのＨＰＬＣ分析
上記のようにプレパラティブＨＰＬＣで精製後、各ペプチドはＳＣＬ−１０Ａシステムコントローラー、ＳＩＬ−１０Ａ自動注入装置、ＳＰＤ１０ＡＶまたはＳＰＤ−Ｍ６Ａ ＵＶ／ＶＩＳ検出器、またはＳＰＤ−Ｍ１０Ａダイオードアレイ検出器からなる島津製作所ＬＣ−１０ＡＤまたはＬＣ−１０ＡＴ分析用ＨＰＬＣシステムの分析ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。ＹＭＣ ＯＤＳ Ｓ３（４.６×５０ｍｍ）カラムを用い、溶離は以下のグラジエントの一つを用いて行った：８分かけて１０〜７０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ａ）；８分かけて５〜８０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｂ）；８分かけて５〜７０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｃ）；８分かけて２５〜７５％Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｄ）；８分かけて２０〜７５％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｅ）；８分かけて１５〜７０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｆ）；８分かけて１０〜９０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｇ）；８分かけて２０〜６５％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｈ）；８分かけて５〜９０％ Ｂ／Ａ、２.０ｍＬ／分（方法Ｉ）；８分かけて５〜９０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｊ）；８分かけて２０〜８０％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｋ）；８分かけて１０〜１００％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｌ）；８分かけて１０〜７５％ Ｂ／Ａ、２.５ｍＬ／分（方法Ｍ）。移動相Ａ：０.１％ ＴＦＡ／水；移動相Ｂ：０.１％ ＴＦＡ／アセトニトリル。純度は典型的には＞９０％だった。
【０１３１】
ｄ．マススペクトル分析による構造確認
各ペプチドは、フローインジェクションまたはＬＣ／ＭＳモードにてエレクトロスプレイマススペクトル分析（ＥＳ−ＭＳ）で構造確認した。ファインニガン(Finnigan)ＳＳＱ７０００ 単一四極子マススペクトル装置（ThermoFinnigan、San Jose、CA）を、正および負イオンエレクトロスプレーモードにてすべての分析で用いた。フルスキャンデータは、１.０秒のスキャン時間で３００〜２２００ａｍｕのマス範囲にわたって要求された。四極子は単位導入法(unit resolution)で操作した。フローインジェクション分析のために、マススペクトル装置はウォーターズ６１６ ＨＰＬＣポンプ（Waters Corp.、Milford、MA）に調整され、ＨＴＳ ＰＡＬ自動注入装置（CTC Analytics、Zwingen、Switzerland）が添えられた。サンプルは０.１％水酸化アンモニウムを含む水：アセトニトリル＝５０：５０の移動相に注入した。分析の流速は０.４２ｍＬ／分であり、注入量は６μｌであった。サーモセパレーションズ コンスタメトリック(ThermoSeparations Constametric)３５００液体クロマトグラフ（ThermoSeparation Products、San Jose、CA）およびＨＴＳ ＰＡＬ自動注入装置を、ＬＣ／ＭＳ分析用に用いた。クロマトグラフ分離は、ルナ(Luna)Ｃ18、５ミクロンカラム、２×３０ｍｍ（Phenomenex、Torrance、CA）を用いて行った。分析の流速は１.０ｍＬ／分であり、カラム排出はエレクトロスプレイインターフェイスの中への流量を４００μl／分にするよう分配した。４分かけた０％〜１００％ Ｂ／Ａの直線的グラジエントを操作し、その中で移動相Ａは１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む水：アセトニトリル＝９８：２であり、移動相Ｂは１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む水：アセトニトリル＝１０：９０であった。ＵＶの応答は２２０ｎｍでモニターした。該サンプルを２００μlのＨ2Ｏ：ＭｅＣＮ＝５０:５０（０.０５％ ＴＦＡ）に溶かした。注入量は５μｌであった。
【０１３２】
すべての場合において、実験的に測定された分子量は、計算されたモノ同位体の分子量の０.５ダルトン以内であった。
【０１３３】
実施例２
Ａ．Ｎ−アシル化された１１量体ペプチドアナログ合成の一般的方法（反応式２）.
Ｎ−アシル化した１１量体ペプチドアナログの合成は、反応式２に示すように、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０１５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造した。Ｆｍｏｃ基は本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、本明細書に記載されている一般的方法に記載されているカップリングプロトコールを用いて、関連したＦｍｏｃ保護されたアミノ酸またはカルボン酸とカップリングされた。適当な無水物が入手可能な場合は、Ｎ−アシル化はＮＭＰ中の５当量の無水物を用いて行った。生じたＮ−アシル化された１１量体アナログ（３）は開裂／脱保護され、本明細書に記載されている一般的方法で、プレパラティブＨＰＬＣで精製した。
【化３２】
2008505899.tif 000186
【０１３４】
Ｂ．１１量体ペプチドアナログのＮ−カルバメート誘導体合成の一般的方法
１１量体ペプチドアナログのＮ−カルバメート誘導体の合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０１５ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、三級アミンのような適当な塩基の存在下関連したクロロホルメート体と、あるいはジカルボネートと、またはｐ−ニトロフェニルまたはフェニルまたはヒドロキシ−スクシンイミジルカルボネートのような活性なカルボネートと反応させる。
【０１３５】
Ｃ．１１量体ペプチドアナログのＮ−ウレア誘導体合成の一般的方法
１１量体ペプチドアナログのＮ−ウレア誘導体の合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０２５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、例えば文献（K. Burgess et al., J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 1556-1564）にあるように製造した関連したイソシアネートと反応される；あるいはレジン中間体２は関連したカルバモイルクロリドと反応され得る。同様に、１０量体ペプチドアナログのＮ−ウレア誘導体は、保護された１０量体ペプチジルレジン中間体から始め、Ｆｍｏｃの除去および生じたペプチジルレジン中間体の関連したイソシアネートまたはカルバミルクロリドとの反応で製造してよい。
【０１３６】
Ｄ．１１量体ペプチドアナログのＮ−スルホンアミド合成の一般的方法
１１量体ペプチド アナログのＮ−スルホンアミドの合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０２５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、関連したスルホニルクロリドと反応される。同様に、１０量体ペプチドアナログのＮ−スルホンアミドは、保護された１０量体ペプチジルレジン中間体から始め、Ｆｍｏｃの除去および生じたペプチジルレジン中間体の関連したスルホニルクロリドとの反応で製造してよい。
【０１３７】
Ｅ．            １１量体ペプチドアナログのＮ−スルホニルウレア誘導体合成の一般的方法
１１量体ペプチドアナログのＮ−スルホニルウレア誘導体の合成は、保護された１１量体ペプチジルレジン中間体（１）（０.０２５ ｍｍｏｌ）から始め、本明細書に記載されているように製造してよい。Ｆｍｏｃ基を本明細書に記載されている方法を用いて除去し、生じたレジン中間体２は、関連したスルファモイルクロリド Ｒ4Ｒ5Ｎ−ＳＯ2−Ｃｌと反応して、スルホニル尿素中間体を産生する（参照：例えば、P. Davern et al. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 2, 1994 (2), 381-387）。同様に、１０量体ペプチドアナログのＮ−スルホニル尿素誘導体は、保護された１０量体ペプチジルレジン中間体から始め、Ｆｍｏｃの除去および生じたペプチジルレジン中間体の関連したスルファモイルクロリド Ｒ4Ｒ5Ｎ−ＳＯ2−Ｃｌとの反応で製造してよい。
【０１３８】
実施例３
アプライド バイオシステムズ モデル ４３３Ａ ペプチドシンセサイザーを用いた１１量体ペプチドアナログの固相合成
以下が、アップグレードされたアプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)モデル ４３３Ａ ペプチドシンセサイザーを用いた、典型的な１１量体ペプチドアナログの固相合成の一般的記載である。アップグレードされたシンセサイザーのハードウェアおよびソフトウェアは、カップリングのフィードバックコントロールで、Ｆｍｏｃ脱保護ステップの伝導率のモニタリングを可能にした。該プロトコールは、０.０５〜１.０ｍｍｏｌの合成スケールの範囲が許容された。
【０１３９】
２つの非天然型Ｃ末端アミノ酸の導入は、１１量体アナログの同時合成に関連して、上記に記載した。かかるＦｍｏｃ保護されたジペプチジルレジンは、このＡＢＩ合成に用いられた。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.１ ｍｍｏｌ）は、機器上の適当なサイズの容器の中に入れ、６回ＮＭＰで洗浄し、２２％ピペリジン／ＮＭＰ（各々２および８分）での２回の処理を用いて脱保護した。１または２回の追加のモニタリングされた脱保護ステップは、モニタリングの選択の条件を満足するまで行った（最後の２つの伝導率基準の脱保護ピークの間の差は＜１０％）。全脱保護時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジルレジンはＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングした。手順は次ステップに用いられている実施例によって図示されている。
【０１４０】
このように、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨは、以下の方法を用いて次にカップリングした：Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、１０当量）を２ｍＬのＮＭＰ中溶解し、０.４５Ｍ ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔのＤＭＦ（２.２ ｍＬ）溶液および２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１ｍＬ）の続く添加で活性化した。活性化されたＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の溶液を次いで反応容器に移し、該カップリングを、脱保護ステップからのフィードバックに依存して、３０〜６０分間を続けた。該レジンを次いでＮＭＰで６回洗浄し、目的の配列の集合体を完成させるために、上述のような追加の脱保護／カップリングサイクルを８回行った。連続して用いられたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｐｈｅ（２−フルオロ）−ＯＨまたはそのアナログ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨであった。最終的に、上記で述べたように、該Ｆｍｏｃ基は２２％ピペリジン／ＮＭＰで除去され、該ペプチジルレジンをＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄し、真空乾燥した。
【０１４１】
あるいは、Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸（０.２６ｍｍｏｌ）が０.５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（０.５２ｍＬ）およびＤＩＣ（４０μＬ）のその後の添加によって活性化され、手動で反応容器に移され、１４〜１８時間カップリングされた修正されたカップリングプロトコールが用いられた。
【０１４２】
Ａ．開裂／脱保護
目的のペプチドは、ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９６：２：２）（３.０ｍＬ）の溶液で２時間処理して、そのそれぞれのペプチジルレジンから開裂／脱保護した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ｍＬ）ですすぎ、およびＴＦＡ濾液を合わせて、３５ｍＬのＥｔ2Ｏに加えた。生じた沈殿物を遠心分離で集め、最終的に乾燥し、白色の固形物としてクルードなペプチド生成物を得た（２３２ｍｇ）。これを本明細書に記載のようにプレパラティブＨＰＬＣで精製した。用いたグラジエントは、４０分かけての１５％〜４５％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］であった。純粋な生成物を含むフラクションは、集められ、凍結乾燥され、純粋な生成物を得た（２８.４ｍｇ、回収率：１８％）。
【０１４３】
実施例４
式ＩＩおよびＩＶａで表されるＸaa10位およびＸaa11位でのビフェニルアラニンおよびフェニル−ヘテロアリール−アラニンアナログの合成
Ｘaa10位およびＸaa11位の残基が、式ＩＩおよびＩＶａで表される置換アミノ酸アナログ、すなわち、ビフェニルアラニンアナログ（Ｂｉｐアナログ）またはフェニル−ヘテロアリール−アラニンアナログによって表されたこれらのアナログでは、ペプチド鎖への導入は、以下の２つのアプローチの一つで実施された。
【０１４４】
Ａ．アプローチＡ：固相スズキ縮合
アプローチＡにおいて、固相スズキ縮合は、その後の固相ペプチド合成を実施するのに適した様式で要求される修飾されたビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン残基を製造するのに実施され、ターゲットのペプチドを得た。ターゲットのペプチドにおけるＸaa11位のアミノ酸が修飾されたビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン残基で表される場合、反応式３に示されるように製造された。Ｂｏｃ α−アミン保護基除去後、鎖の伸張は、前のセクションに記載されているように、多様なペプチド合成を用いて続けられ、目的の１１量体ペプチドまたはそれの誘導体を得た。修飾されたビフェニルアラニンアナログがターゲットのペプチドのＸaa10位にある場合、要求されるアミノ酸は反応式４に示されるように、固体の支持体上の適切なジペプチド前駆体を用いて製造された。
【０１４５】
要求される修飾されたビフェニルアラニン誘導体を含む生じたジペプチジル部分は次いで、ターゲットの１１量体ペプチドまたはそれの誘導体の合成を行うのに用いた。Ｘaa10位およびＸaa11位の両方が新規なビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン残基を要求した場合、２つの一連の固相スズキ反応は反応式５（下記）に示すように実施された。
【０１４６】
１．Ｘaa11位で式ＩＶａで表されるアミノ酸を含むシンフェーズ(登録商標)ランタンの製造の一般的方法（スズキカップリング）
【化３３】
2008505899.tif 000187
【０１４７】
ａ．一般的方法Ａ
クノール結合(Knorr linkage)（Ｂｏｃ−アミノ酸−レジン）またはアミノ酸−クノール結合（Ｂｏｃ−ジペプチド−レジン）を介して直接結合したＮα−Ｂｏｃ−（Ｓ）−２−アミノ−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸残基またはＮα−Ｂｏｃ−Ｌ−４−ヨードフェニルアラニン残基で誘導化されたシンフェーズ(SynPhase)(登録商標)ランタン(Lantern)（Ａシリーズ（０.０７５ ｍｍｏｌ／ランタン）またはＤシリーズ（０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン）、ミモトープス(Mimotopes)製）を、ネジの蓋付きの１３×１００ｍｍガラス培養チューブに入れた。（以下の方法はＤシリーズランタンに用いた。反応物の同様の比を、Ａシリーズランタンを含む反応に用いた。）アリール−またはヘテロアリール−ボロン酸（０.１４０ｍｍｏｌ、４当量）を０.３０ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドに溶かした。生じた溶液を１３×１００ｍｍガラス培養チューブ中の該ランタンに加えた。
【０１４８】
リン酸カリウム（０.２８０ｍｍｏｌ、８当量、２Ｍ水溶液の０.１４ ｍＬ）をアリール−またはヘテロアリール−ボロン酸溶液に加え、続いて４.０ｍｇのテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）触媒（約１０モル％、０.００３５ ｍｍｏｌ）を含む０.１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液を加えた。生じた混合物を窒素で覆い、反応容器をしっかりと蓋をし、軌道型振とう器において１７〜２０時間８０℃で置いた。Ｂｏｃ基開裂の前に、該ランタンを濾過器具に移し、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３×１ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１ｍＬ）で洗浄した（ランタンあたり、最低３分／洗浄サイクル）（以下の一般的方法を参照）。
【０１４９】
ｂ．一般的方法Ｂ
反応は、別の触媒を用いる以外は一般的方法Ａのように行った。この手順のために、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）を触媒として用いた。Ｄ−シリーズランタンスケールの反応のために、約１０ｍｏｌ％（０.００３５ｍｏｌ）触媒を用いた。
【０１５０】
２．Ｂｏｃ基の開裂方法
ａ．方法Ａ
（以下の方法をＤシリーズランタンに適用させる：０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン。同様に適切に量られた方法が、Ａシリーズランタン用に用いられた：０.０７５ｍｍｏｌ／ランタン。）一般的方法ＡまたはＢに記載のようにして製造されたＢｏｃ保護されたランタンを、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、２，６−ルチジンおよびジクロロメタン（容量比 １：１：３）を含む０.５ｍＬの試薬溶液で処理した。それぞれ緩和な攪拌しながら１時間のかかる２つの試薬処理後、該レジンをジクロロメタン（４×１.０ ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×１.０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１.０ｍＬ）で洗浄した。該ランタンを次いで、ペプチド合成シークエンスの次のアシル化（カップリング反応）に付した。
【０１５１】
ｂ．方法Ｂ
一般的方法ＡまたはＢに記載されているように製造されたＢｏｃ保護されたランタンは、緩和な攪拌しながら室温で１時間０.５ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ／無水１，４−ジオキサンで処理した。該ランタンは、１，４−ジオキサン（２×１.０ｍＬ）、１０％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン／Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（容量：容量）（２×１.０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３×１.０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１.０ｍＬ）で洗浄し、次工程のアシル化（カップリング反応）ステップに用意される遊離のアミノ−ランタンを得た。
【０１５２】
実施例６
Ｘaa10位で修飾されたビフェニルアラニン残基を含むランタン製造の一般的方法
スズキカップリングに代わる上述の一般的方法（ＡおよびＢ）は、反応式４に示されるように、シンフェーズ(登録商標)ランタンに結合するアミノ酸（Ｘaa11位で）で開始し、Ｘaa10位で修飾したＰｈｅを含む要求されるジペプチジルランタンを得るのに利用された。
【化３４】
2008505899.tif 000188
【０１５３】
実施例７
Ｘaa10位およびＸaa11位の両方で式ＩＩおよび式ＩＶａで表されるアミノ酸を含むランタン製造の一般的方法
Ｘaa11位が修飾されたアナログ用に上述された方法（反応式１）の活用およびスズキカップリング方法の２つの連続する回数での実施により、以下の反応式５に図示のように、Ｘaa10位およびＸaa11位の両方で修飾されたフェニルアラニンおよびフェニル−ヘテロアリールアラニン残基を含むジペプチジルランタンを産生した。
【０１５４】
実施例８
シンフェーズ(登録商標)ランタンにおけるペプチドのアシル化／伸張の一般的方法
ａ．Ｆｍｏｃ脱保護の方法
Ｄシリーズ シンフェーズ(登録商標)ランタン（０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン負荷）を、０.５ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（８：２、容量：容量）に加えた。弱く攪拌した。１時間後、該ランタンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×１.０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１.０ ｍＬ）で洗浄し、ランタンを少なくとも３分／洗浄に浸した。
【０１５５】
ｂ．アシル化／アミノ酸カップリングの方法（反応式６）
側鎖およびα−アミン保護されたアミノ酸（０.１０５ ｍｍｏｌ）を、０.５ ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（１：１）に溶解した。この溶液に、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０.１０５ ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０.３１５ ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド（０.１０５ ｍｍｏｌ）を加えた。α−アミン保護されたペプチドを含んだＤシリーズランタン（０.０３５ｍｍｏｌ／ランタン）を該溶液に加えた後、アミノ酸溶液を１０分間置いた。バイアルに蓋をし、弱く１６〜２０時間攪拌した。該ランタンを次いでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×１.０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×１.０ｍＬ）で洗浄し、ランタンを３〜５分／洗浄サイクルに浸した。
【化３５】
2008505899.tif 000189
【化３６】
2008505899.tif 000190
【０１５６】
実施例９
フラグメント縮合を介するペプチド製造の一般的方法
アプローチＡにおいて、固相スズキ縮合は、実施例７に記載のように、Ｘaa10位およびＸaa11位で式ＩＩ、式ＩＶａで表される要求されるアミノ酸を製造するのに実施された。該ジペプチドは、同時（方法Ａ）または連続する（方法Ｂ）Ｎ末端α−アミン保護基の除去を伴って、支持体から開裂された。該ジペプチドは次いで完全に側鎖を保護した９個のアミノ酸ペプチドにカップリングさせた（下記参照）。続く側鎖の脱保護および精製により、目的の１１量体ペプチド生成物を生じた。
【０１５７】
Ａ．アプローチＡ：溶液相フラグメント縮合
アプローチＡにおいて、Ｂｏｃ保護されたまたはＦｍｏｃ保護されたＮ末端α−アミンを伴ったシンフェーズ(登録商標)ランタンに結合した目的のジペプチドを製造するために、固相スズキ縮合およびアシル化（実施例７に記載のように）を実施した。該ジペプチドは、酸性条件下ランタン支持体から開裂された。Ｂｏｃ保護されたＮ末端α−アミン化合物の場合、酸性開裂は反応式７に示されるように、α−アミンの同時の脱保護に至らし、これらは精製されるか、またはフラグメントカップリング工程に直接持って行った。
【０１５８】
Ｆｍｏｃ保護されたＮ末端α−アミン化合物を含むジペプチドは、反応式８に示すように、酸性条件下開裂され、Ｎ末端α−アミンは溶液中脱保護された。これらのジペプチドは精製され、次いでフラグメントカップリング工程に持って行った。
【０１５９】
１．シンフェーズ(登録商標)ランタンからのジペプチド開裂の方法
ａ．方法Ａ（Ｂｏｃ保護されたジペプチド；反応式７参照）
Ｄシリーズシンフェーズ(登録商標)ランタンは、１ドラムガラスバイアルに入れられた。トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１、０.５ ｍＬ）の溶液を、該バイアルに加えた。該バイアルに蓋をし、軌道型振とう器（１００ｒｐｍ）上で２時間弱く振とうした。開裂した溶液を新しいバイアルに移し、更に０.５ ｍＬトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１）を該ランタンに加えた。バイアルを再度蓋し、軌道型振とう器（１００ｒｐｍ）上で２時間弱く振とうした。第２の開裂した溶液を第１の溶液に加え、該ランタンをジクロロメタンですすいだ。すすぎ液を先の開裂した溶液に加え、溶媒を蒸発させてα−アミンのトリフルオロ酢酸塩として、ジペプチドを得た。
【化３７】
2008505899.tif 000191
【０１６０】
ｂ．方法Ｂ（Ｆｍｏｃ保護されたジペプチド化合物；反応式８）
Ｆｍｏｃ保護されたジペプチドは、方法Ａにおいて上述されているように、シンフェーズ(登録商標)ランタンから開裂された。該ランタンはジクロロメタンですすがれ、すすぎ液／開裂した溶液の混合液から溶媒は蒸発させた。生じた残渣（１ドラムバイアル中）に、０.４０ｍＬのジメチルホルムアミド／ピペリジン(８：２)（容積：容積）を加えた。バイアルを蓋し、４５分間反応を行った。残っている溶媒を蒸発して除去し、生じた生成物を、Ｃ−１８カラムおよびＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ／ＴＦＡ溶媒系を用いてＨＰＬＣで精製し、（溶媒を蒸発後）α−アミンのトリフルオロ酢酸塩としてジペプチドを得た。
【化３８】
2008505899.tif 000192
【０１６１】
２．側鎖保護された９量体ペプチド Ｃ末端カルボン酸の固相合成の方法（反応式９）
Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）、０.５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（５当量）およびＤＩＣ（５当量）のＮＭＰ（５ ｍＬ）溶液を、室温で１８時間（Ｌ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−２−クロロ−クロロトリチルレジン（３.０ ｇ、２.１６ ｍｍｏｌ）と共にボルテックスした。ＮＭＰで数回洗浄後、Ｆｍｏｃ基を、１.５Ｍ ピペリジン／ＤＭＦで２回（５分および１０分）処理して除去した。そのカップリングにＦｍｏｃ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（２−Ｒ−６−Ｒ”）−ＯＨおよびＢｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをそれぞれ１.１当量および１.５当量用いること、およびＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（２−Ｒ−６−Ｒ”）−ペプチジルレジン上にカップリングするのにＨＡＴＵ／ＨＯＡｔおよびＤＩＥＡ（４当量）を用いること以外、これらのカップリングおよび脱保護ステップを７回繰り返して、目的の配列を集めた。
【０１６２】
集めることが完結したとき、該ペプチジルレジンをＤＣＭで洗浄し、次いで保護された９量体ペプチドＣ末端カルボン酸を、室温で１時間ＤＣＭ／ＡｃＯＨ／ＴＦＥ（８：１：１、ｖ：ｖ：ｖ）で処理してすすぎ液から除いた。該レジンを濾去し、濾液を蒸発乾固させ、ＡｃＣＮ／水（２：１）中に溶かし、２回凍結乾燥し、純粋な生成物を得て（２.７７７ｇ、８１％）、更に精製することなく続くフラグメントカップリングステップに用いた。
【化３９】
2008505899.tif 000193
【０１６３】
３．溶液相フラグメントカップリング反応の方法
これらの反応は、１ドラムバイアル中の単一化合物形式中および２ｍＬの９６ウェルプレート中の化合物のパラレルアレイ中の両方において実施された。以下の記載（反応式１０に示される）は単一化合物の場合に適用されるが、９６ウェルプレート中で実施される反応に完全に類似している。
【０１６４】
ジペプチド（０.０１ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ塩は、１.５ ｍＬのガラスバイアル中、０.５％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含む０.２５ｍＬのＴＨＦに溶かした。大きな孔のカルボネートレジン（ＭＰ−カルボネート、０.０３ ｍｍｏｌ、Argonaut Technologies）をバイアルに加えた。バイアルに蓋をし、室温で２時間攪拌した。該溶液を濾過し、過剰の溶媒を蒸発して除いた。
【０１６５】
側鎖が保護された９量体ペプチドＣ末端カルボン酸（０.００８ ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、０.００８ｍｍｏｌ）を含むクロロホルム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９：１）溶液（０.１５ ｍＬ）を、ジペプチドアミンを含むバイアルに加えた。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、０.０８ｍｍｏｌ）を、０.０５ ｍＬのクロロホルム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９：１）溶液に加えた。バイアルに蓋をし、反応液を室温で１６時間軌道型振とう器上で攪拌した。残った溶媒をバイアルから蒸発させた。
【０１６６】
１１量体ペプチド側鎖およびＮ末端α−アミンを、０.４０ ｍＬのトリフルオロ酢酸／トリイソプロピルシラン（ＴＦＡ／ＴＩＳ）（９７.５：２.５）で１時間脱保護した。残った溶媒を蒸発して取り去り、該１１量体ペプチド生成物を次いでＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ／ＴＦＡ溶媒系を用いて、目的の生成物の集合体の検出によって流出の収集を誘発してＨＰＬＣで精製した。
【化４０】
2008505899.tif 000194
【０１６７】
Ｂ．アプローチＢ：溶液中でのスズキカップリングを用いた式ＩＩおよびＩＶａで表されるＦｍｏｃ−アミノ酸アナログの合成
以下の実施例は、式ＩＩおよびＩＶａで表されるいくつかのＦｍｏｃ−アミノ酸アナログの合成を図示しており、実施例１に記載されているように、該アナログは１１量体および他のペプチドアナログの固相合成に利用された。
【０１６８】
実施例１０
Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２'−エチル−４'−メトキシ−ビフェニルアラニン［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−Ｂｉｐ（２'−Ｅｔ−４'−ＯＭｅ）］の合成
以下の反応式１１は、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２'−エチル−４'−メトキシ−ビフェニルアラニンの合成を記載する。
【化４１】
2008505899.tif 000195
【０１６９】
１．Ｂｏｃ−Ｌ−チロシン−Ｏ−トリフレート
Ｂｏｃ−Ｌ−チロシンメチルエステル（２５ｇ、８５ ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（３６.２５ｇ、３３９ｍｍｏｌ、４当量）の乾燥ＤＣＭ（２００ ｍＬ）溶液に、Ｎ2下−４０℃に保って、無水トリフルオロメタンスルホン酸（４７.７４ｍｇ、１６９.５ ｍｍｏｌ、２当量）のＤＣＭ（１００ ｍＬ）溶液を３０分かけてゆっくりと加えた。該溶液を−４０℃でさらに２時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析で反応が完了していることがわかった。反応をさらに２０ｍＬの水でクエンチした。分液し、有機層を１Ｎ ＨＣｌ（３×２００ｍＬ）、飽和Ｎａ2ＣＯ3（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）および食塩水（２００ｍＬの）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空乾燥して、赤色の油状物として粗生成物を得た。それをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ（３００ｇ シリカゲル、０〜５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン グラジエント）にかけた。生成物を含んだフラクションを減圧濃縮し、白色の固形物として目的化合物（２７ｇ、収率７５％）を得た。
【０１７０】
２．２−エチル−４−メトキシ−フェニルボロン酸
ａ．方法Ａ
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１９９.５ ｇ、０.４６５ ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（８００ ｍＬ）懸濁液を、１０分間パージし、１０℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（１６９ ｍＬ、０.４６５ ｍｏｌ、２.７５Ｍ溶液）をゆっくり３０分かけて加え、１時間攪拌した。２−ブロモ−５−メトキシベンズアルデヒド（１００ ｇ、０.４６５ ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液を、ゆっくりと３０分間かけて加えた。添加後、反応混合物を１時間攪拌した。石油エーテル（２Ｌ）を加え、反応混合物をさらに３０分間攪拌した。反応混合物をシリカゲルパッドで濾過した。該パッドをジエチルエーテルで洗浄した。有機洗浄液を合わせて、３０℃以下で濃縮し、該粗生成物を、溶離液として１００％石油エーテルを用いた６０−１２０ シリカゲルクロマトグラフィで精製した。
収率：９２ｇ、９０％、薄黄色液体として。
【０１７１】
酢酸エチル（６５０ｍＬ）中の２，２’−二ピリジル（２４.３ ｇ、０.１５ ｍｏｌ）および２−ブロモ−５−メトキシスチレン（６５ｇ、０.３１ｍｏｌ）を０℃に冷却した。該溶液をパージして、１０％パラジウム炭素（１６.２５ ｇ、２５％）を窒素気流下加えた。反応混合物を２ｋｇの圧力下、パールシェーカー(Parr shaker)中３日間水素下で攪拌した。反応の進行をＨＰＬＣでモニターした。反応混合物をセライトで濾過し、濾液を５％重硫酸カリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、３０℃以下で濃縮した。
収率：６０ｇ、９１％、薄黄色液体として。
【０１７２】
４−ブロモ−３−エチルアニソール（９４ ｇ、０.４３７ ｍｏｌ）のＴＨＦ（９００ｍＬ）溶液を、７８℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（２４９ｍＬ、０.５５ｍｏｌ）を同温度で滴下した。攪拌を７８℃で１時間続けた。ホウ酸トリ−ｎ−ブチル（１７７ ｍＬ、０.６５５ ｍｏｌ）を７８℃でゆっくり加えた。冷浴を除き、反応混合物を０℃に加温し、０℃で１.５Ｎ 塩酸でクエンチした。有機層を分液した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせて食塩水で洗浄し、濃縮した。得られた残渣を石油エーテル中３０分間攪拌した。得られた固形物を濾過し、真空乾燥した。
収率：６５ｇ、８２％、白色の固形物として。
【０１７３】
ｂ．方法Ｂ（反応式１２参照）
乾燥アセトン（５００ ｍＬ）中の３−エチルフェノール（５０ｇ、０.４ｍｏｌ、純度９８％、Ｆｌｕｋａ）およびＫ2ＣＯ3（２８３ ｇ、２.０５ ｍｏｌ）の混合物に、ヨウ化メチル（２９０ ｇ、２.０５ ｍｏｌ）を加えた。反応混合物をオートクレーブに移し、７０℃で終夜還流した。反応混合物をセライトパッドで濾過した。該パッドをアセトンで洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて、濃縮した。生成物をＤＣＭに溶かし、濾過し、蒸発乾固した。
収率：５０ｇ、９０ ％、茶色の液体として。
【０１７４】
３−エチルアニソール（５０ｇ、０.３６７６ ｍｏｌ）およびＮ−ブロモコハク酸イミド（７２ｇ、０.４ｍｏｌ）のアセトニトリル（１Ｌ）溶液を、暗室下室温で８時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で濃縮し、得られた残渣をＣＣｌ4に再溶解し、濾過した。濾液を濃縮し、生成物を分画蒸留で精製した。収率：３５ｇ、４３％、薄黄色液体として。４−ブロモ−３−エチルアニソールを、方法Ａに記載のように対応するボロン酸に変換した。
【０１７５】
反応のスケールアップの目的で、４−ブロモ−３−エチルアニソールの２−エチル−４−メトキシ−ボロン酸への変換は、グリニャール方法を用いて行ってもよい。かかる方法は、ＴＨＦ中の４−ブロモ−３−エチルアニソールのＭｇ（１.１当量）との反応、続いて方法Ａに記載のような生じたグリニャール中間体のトリ−ｎ−ブチル−またはホウ酸トリメチルとの反応によるグリニャール試薬の形成を含む。
【化４２】
2008505899.tif 000196
【０１７６】
３．Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン
Ｂｏｃ−Ｌ−チロシンＯ−トリフレート（８１ｇ、０.１９ ｍｏｌ）の乾燥トルエン（６００ｍＬ）溶液を、１０分間窒素でパージした。２００ｍＬの水中のＫ2ＣＯ3（３６ ｇ、０.２６ ｍｏｌ）を加え、続いて２−エチル−４−メトキシ−フェニルボロン酸（３６ ｇ、０.２ ｍｏｌ）を加え、反応混合物を窒素を用いて１０分間パージした。Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（１６.１８ｇ、０.０１４ｍｏｌ）、エタノール（２００ ｍＬ）およびＴＨＦ（４００ ｍＬ）を加え、反応混合物を攪拌しながら１００℃に４時間加熱した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣をＤＣＭ（１.０Ｌ）に溶かした。有機層を１０％水酸化ナトリウム溶液、１５％クエン酸溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。該粗生成物を６０−１２０−メッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ（１０％酢酸エチル／石油エーテル）で精製した。収率：５０ ｇ、６５ ％、黄色の液体として。
【０１７７】
Ｂｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニンのメチルエステル（６０ｇ、０.１４６ ｍｏｌ）のＴＨＦ（４５０ ｍＬ）およびメタノール（８５ｍＬ）混合液に、８５ｍＬの水中の水酸化ナトリウム（２４ ｇ、０.５８ ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜攪拌し、濃縮し、残渣を水（１００ｍＬ）に溶かし、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を２０％クエン酸を用いてｐＨ １まで酸性にし、酢酸エチルで抽出した。抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。収率：５５ ｇ、９４ ％、無色の液体として。
【０１７８】
Ｂｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン（５５ ｇ、０.１３８ ｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１リットル）に溶解し、乾燥ＨＣｌガスを６時間室温でパージした。得られた固形の生成物を濾過し、真空乾燥した。収率：４６ｇ、１００％。遊離アミノ酸塩酸塩（３０ ｇ、０.０８９ ｍｏｌ）のＴＨＦ（７００ｍＬ）溶液に、水（２４０ ｍＬ）中のＮａＨＣＯ3（２９ ｇ、０.３５８ ｍｏｌ）を加えた。Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（３０ ｇ、０.０８９ ｍｏｌ）を３０分間かけて何回かに分けて加えた。反応混合物を終夜室温で攪拌した。ＴＨＦを真空下除去し、水（２.０Ｌ）を加えた。該澄明な溶液をエーテルで抽出し、不純物を除去した。該水溶液をｐＨ １まで酸性にし、酢酸エチルで抽出した。該有機層を水および食塩水で洗浄し、蒸発乾固した。収率：３７ｇ、８０％。
【０１７９】
実施例１１
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン塩酸塩］の合成
以下の反応式１３には、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成が記載されている。
【化４３】
2008505899.tif 000197
【０１８０】
１．５−ブロモ−２−ｏ−トリルピリジン
トルエン（８ｍＬ）および２Ｍ炭酸ナトリウム水（３.２ｍＬ）中の５−ブロモ−２−ヨードピリジン（９１０ｍｇ、３.２１ ｍｍｏｌ）および２−ｏ−トリルボロン酸（４３６ｍｇ、３.２１ ｍｍｏｌ、１.０当量）のアルゴンパージされ、脱気されたスラリーに、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３６ｍｇ、０.０３２ｍｍｏｌ、０.０１当量）を加えた。反応混合物をパージして、アルゴンでもう２回脱気して、次いでアルゴン下１５時間還流をセットした。反応液を冷却し、水およびＥｔＯＡｃ間で分液処理した。分液して、水層をＥｔＯＡｃでもう１回抽出した。該有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、真空乾燥して、橙色の油状物として粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィ（７：３ ＣＨ2Ｃｌ2／ヘキサン）による精製で、黄色の油状物として標題化合物を得た（６６６ ｍｇ、収率：８４％）。
【０１８１】
２．６−ｏ−トリルニコチンアルデヒド
上記化合物（１２５ｍｇ、０.５０ ｍｍｏｌ）の攪拌したＴＨＦ（２.０ ｍＬ）溶液にアルゴン下−７４℃で、温度が−７１℃を超えないように、２.５Ｍ ｎ−ＢｕＬｉのヘキサン溶液（２２０μＬ、０.５５ ｍｍｏｌ、１.１当量）を５分かけて加えた。淡緑溶液が形成し、３０分後に濃緑色になった。４５分後、ＤＭＦ（４９.４μＬ、０.６１ ｍｍｏｌ、１.２当量）を加え、反応液を−４０℃まで加温した。１４時間後、明橙色の溶液となった。反応液を１０％クエン酸でクエンチし、該混合物を素早く２０分間室温で攪拌した。生じた明黄色の溶液をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮して、黄色の油状物を得た。このようにして得られたクルードな混合物を、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：２４）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（２.５×１０ｃｍカラム）で精製し、白色の固形物を得た（ｍｐ ８２〜８４℃、９０.３ｍｇ、収率９１％）。
【０１８２】
３．（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メタノール
６−o−トリルニコチンアルデヒド（１.０７０ｇ、５.４３ ｍｍｏｌ）のエタノール（１９ ｍＬ）溶液に０〜５℃で、水素化ホウ素ナトリウム（２８７ｍｇ、７.５ ｍｍｏｌ、１.４当量）を加えた。２時間後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチし、３０分後ジクロロメタンと食塩水の間で分液処理した。有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、無色の油状物として示された生成物を得た（１.０８ ｇ、収率：１００％）。
【０１８３】
４．５−（ブロモメチル）−２−ｏ−トリルピリジン臭化水素塩
（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メタノール（４.４９ｇ、２２.５ ｍｍｏｌ）の４８％臭化水素酸（７５ｍＬ）溶液を、６４時間加熱還流した。反応混合物を部分的に冷却し、黄褐色の固形残渣がフラスコ内に残るまで、過剰の臭化水素酸を減圧蒸留（１１０℃ @ ２ Torr）で除いた。蒸留は、蒸留器具と真空ポンプの間に置いた大きなＫＯＨペレットトラップを用いて行った。固形の残渣をジエチルエーテル中スラリー化し、濾過し、窒素気流下乾燥して、生成物を得た（７.３８ ｇ、収率：９５％）。
【０１８４】
５．（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−o−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート
５−（ブロモメチル）−２−o−トリルピリジン臭化水素酸塩（８００ｍｇ、２.３３ｍｍｏｌ）、２−（ジフェニルメチレンアミノ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（６８９ｍｇ、２.３３ｍｍｏｌ、１.０当量）およびＯ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジウムブロミド（１４１ｍｇ、０.２３３ ｍｍｏｌ、０.１当量）の攪拌したジクロロメタン（１４ ｍＬ）混合液に−７８℃でアルゴン下、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（１.６８７ ｍＬ、５.８３ ｍｍｏｌ、２.５当量）を５分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で１０時間攪拌し、次いでインシトゥーで室温まで加温した。該混合物を溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：４）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１０ｃｍカラム）で直接精製し、黄褐色の油状物を得た（１.１０ ｇ、収率：１００％）。
【０１８５】
６．（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート（１.１０ｇ、２.３３ ｍｍｏｌ）の攪拌したＴＨＦ（９ｍＬ）溶液に室温でアルゴン下、クエン酸（２.７９５ｇ、１４.５４ ｍｍｏｌ、６.５当量）の水（９ ｍＬ）溶液を加えた。２０時間後、反応混合物を水（５ ｍＬ）で希釈し、エーテル（１０ ｍＬ）で２回洗浄した。水相を次いで固形の炭酸ナトリウムでｐＨ ９にし、ジクロロメタンで２回抽出した。
【０１８６】
ジクロロメタン抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。生じた油状物をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、室温にて１０％炭酸ナトリウム溶液（７.２ｍＬ）および次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（７０３ｍｇ、２.５６ ｍｍｏｌ、１.１当量）で処理した。１４時間後、反応混合物をジクロロメタンで２回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：１９）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（２.５×１０ｃｍカラム）で精製し、無色の油状物を得た（１.０８２ ｇ、収率：９１％）。２０ ｍＬのヘキサン／ジクロロメタン（７：１）から再結晶化で、白色の固形物を得た（２８７ｍｇ）。母液を濃縮し、アモルファスの白色の固形物の標題化合物を得た（７７９ｍｇ、収率６３％）。キラルＨＰＬＣ分析（４.６×２５０ｍｍ ＡＤカラム、溶離液としてヘプタン：メタノール：エタノール＝３８：１：１、流速１ｍＬ／分）により９８％ｅｅであった。
【０１８７】
７．（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート（１.７５ｇ、３.１９ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（５.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で２時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をエーテル（１０ｍＬ）に溶かし、それに１Ｍ ＨＣｌ／エーテル（５ｍＬ）溶液を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色の粉末として目的化合物を得た（１.６５ ｇ、収率：１００％）。
【０１８８】
実施例１２
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成
以下の反応式１４は、３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化４４】
2008505899.tif 000198
【０１８９】
１．２−ブロモ−５−（ブロモメチル）ピリジン
５−メチル−２−ブロモピリジン（１０.３２０ｇ、６０.０ ｍｍｏｌ）および再結晶化されたＮ−ブロモコハク酸イミド（５.３３９ｇ、３０.０ｍｍｏｌ、０.５当量）の四塩化炭素（１５０ｍＬ）の攪拌したスラリーに、ＡＩＢＮ（２００ｍｇ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気して、アルゴン下の還流をセットした。９０分後、反応混合物を室温まで冷却し、濾過し、濾液を濃縮し、黄色の油状物を得た。プロトンＮＭＲでは、混合物が５３％（ｍｏｌ）の未反応５−メチル−２−ブロモピリジン、４３％の標題化合物および４％の２−ブロモ−５−（ジブロモメチル）ピリジンを含むことを示した。該混合物はさらに精製することなく以下の方法にすぐに用いた。
【０１９０】
２．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート
２−ブロモ−５−（ブロモメチル）ピリジン（見かけ２６.４ ｍｍｏｌ）、２−（ジフェニルメチレンアミノ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（７.７９８ｇ、２６.４ ｍｍｏｌ、１.０当量）およびＯ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジウムブロミド（１.６０ｇ、２.６４ ｍｍｏｌ、０.１当量）の攪拌したジクロロメタン（１００ ｍＬ）混合液に−７８℃でアルゴン下、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（１１.４６ ｍＬ、３９.６ ｍｍｏｌ、１.５当量）を５分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で７時間攪拌し、次いでインシトゥーで室温まで加温した。反応混合物を次いで濃縮し、ＴＨＦ（７５ ｍＬ）に溶かし、クエン酸（２２ｇ）の水（７５ｍＬ）溶液で処理した。７時間激しく攪拌後、該混合物をエーテル（７５ ｍＬ）で２回抽出した。有機抽出物を合わせて、水（２５ ｍＬ）で１回洗浄した。水抽出物を合わせて、固形の炭酸ナトリウムでｐＨ ８にした。該水溶液を更に精製することなく、次反応の更なる処理に用いた。
【０１９１】
３．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート
上記からの水溶液を、９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（７.５４５ｇ、２７.５ ｍｍｏｌ、１.０４当量）のＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液に室温で加えた。１４時間後、反応混合物を酢酸エチルで２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：２４）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（１２×２５ｃｍカラム）で精製し、無色の油状物を得た（７.２５ｇ、収率：９１％）。１２０ｍＬのヘキサン／ジクロロメタン（５：１）からの再結晶化で、少量の白色の固形物を得て、濾去した。母液を濃縮し、アモルファスの白色の固形物の標題化合物を得た（４.９６ｇ、収率：６２％）。キラルＨＰＬＣ分析（４.６×２５０ｍｍ ＡＤカラム、溶離液として３８：１：１＝ヘプタン：メタノール：エタノール、流量１ｍＬ／分）により９７.２％ｅｅであった。
【０１９２】
４．２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート（１.０２ｇ、１.９５ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（３.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で２時間攪拌した。反応混合物を３５℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物を３ｍＬのジクロロメタンに溶解し、それに６ｍＬの１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色の粉末として標題化合物を得た（８４５ ｍｇ、収率８６％）。
【０１９３】
実施例１３
（２Ｓ） ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸 塩酸 ［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２'−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン］の合成
以下の反応式１５は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化４５】
2008505899.tif 000199
【０１９４】
１．（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
攪拌した（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート（１.７５ｇ、３.３５ｍｍｏｌ）および２−エチルフェニルボロン酸（１.００５ｇ、６.７０ｍｍｏｌ、２当量）のイソプロパノール／トルエン（１：１、５０ ｍＬ）スラリーに、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（２５.０ ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（II）クロリド（１２４ｍｇ、０.１６７ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加え、該混合物を再度アルゴンでパージし、脱気した。素早く攪拌した混合物をアルゴン下８０℃に加熱した。２０時間後、反応混合物を室温まで冷却し、一部濃縮し、イソプロパノールを除いた。残渣を酢酸エチルと水との間で分液処理し、水相をもう一回酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、茶色の油状物を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：９）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍ カラム）精製で、無色の油状物として目的化合物を得た（１.２５ ｇ、収率７７％）。
【０１９５】
２．（２Ｓ） ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（１.５３ ｇ、２.７９ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（５.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、２時間室温で攪拌した。反応混合物を３５℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をエーテルに溶かして、それに１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液（６ｍＬ）を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄して、白色の粉末として目的の生成物を得た（１.３８ ｇ、収率９３％）。
【０１９６】
実施例１４
（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−［（２'−エチル−４'−メトキシ）フェニル］−３−ピリジルアラニン］の合成
以下の反応式１６は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化４６】
2008505899.tif 000200
【０１９７】
１．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
攪拌した（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート（６１３ ｍｇ、１.１７ ｍｍｏｌ）および２−エチルフェニルボロン酸（４２２ ｍｇ、２.３４ ｍｍｏｌ、２当量）のイソプロパノール／トルエン（１：１、２０ ｍＬ）スラリーに、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（１０.０ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（II）クロリド（４３.２ｍｇ、０.０５９ ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加え、該混合物を再度アルゴンでパージし、脱気した。素早く攪拌した混合物をアルゴン下８０℃に加熱した。９時間後、反応混合物を室温まで冷却し、一部濃縮し、イソプロパノールを除いた。残渣を酢酸エチルと水との間で分液処理し、水相をもう一回酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、茶色の油状物を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（３：１７）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍ カラム）精製で、無色の油状物として目的化合物を得た（４０１ ｍｇ、収率５９％）。
【０１９８】
２．（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩：
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（４０１ｍｇ、０.６９ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２.０ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、２時間室温で攪拌した。反応混合物を３０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をエーテルに溶かして、それに１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液（２ｍＬ）を加えた。生じた白色の固形物を濾過し、エーテルで洗浄して、白色の粉末として目的の生成物を得た（３３６ ｍｇ、収率８４％）。
【０１９９】
実施例１５
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート ［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン ｔｅｒｔ−ブチルエステル］の別法合成
以下の反応式１７は、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートの別法合成を記載する。
【化４７】
2008505899.tif 000201
【０２００】
１．（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート：
攪拌した（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート（１.７５ ｇ、３.３５ ｍｍｏｌ）および２−メチルフェニルボロン酸（９１３ ｍｇ、６.７０ ｍｍｏｌ、２当量）のイソプロパノール／トルエン（１：１、５０ ｍＬ）スラリーに、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（２５.０ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴンで２回パージし、脱気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（II）クロリド（１２４ｍｇ、０.１６７ｍｍｏｌ、０.０５当量）を加え、該混合物を再度アルゴンでパージし、脱気した。
【０２０１】
素早く攪拌した混合物をアルゴン下８０℃に加熱した。２０時間後、反応混合物を室温まで冷却し、一部濃縮し、イソプロパノールを除いた。残渣を酢酸エチルと水との間で分液処理し、水相をもう一回酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、茶色の油状物を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：９）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍカラム）精製で、無色の油状物として目的化合物を得た（１.８１ ｇ、収率９０％）。
【０２０２】
実施例１６
以下の反応式１８は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートのアナログの一般的な合成を記載する。
【化４８】
2008505899.tif 000202
【０２０３】
１．（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−［６−（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）］プロパノエート
丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ−Ｌ−ブロモ−３−ピリジルアラニン（３００ｍｇ、０.５７３ ｍｍｏｌ）、３−クロロ−４−フルオロフェニルボロン酸（２００ ｍｇ、１.１４５ ｍｍｏｌ、２当量）、２Ｍ炭酸ナトリウム溶液（１.１４５ ｍＬ、２.２９ ｍｍｏｌ、４当量）、トルエン（５ ｍＬ）、イソプロピルノール（５ｍＬ）およびＰｄＣｌ2（ＰＣｙ）3）2（４２ ｍｇ、０.０５７３ ｍｍｏｌ、０.１当量）を加えた。該反応溶液をアルゴンでパージし、次いで５時間８０℃にした。反応液を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ ｍＬ）で希釈した。該溶液を水（３０ ｍＬ）および食塩水（２０ ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。クルードな油状物をシリカゲルクロマトグラフィ（１２ｇｍ シリカゲル、０−４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンのグラジエント）にかけて、油状物として目的化合物を得た（２４５ｍｇ、収率７５％）。
【０２０４】
２．（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（２４０ ｍｇ、０.４２９ ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、ＴＦＡ（３ ｍＬ）を加えた。反応液を室温で５時間攪拌した。溶媒を蒸発乾固し、残渣をプレパラティブＨＰＬＣ（メタノール−水のグラジエント、０.１％ ＴＦＡ）にかけた。生成物を含んだフラクションの濃縮により、ＴＦＡ塩として目的化合物を得た（２００ ｍｇ、収率９３％）。
【０２０５】
実施例１７
配列番号：１のペプチドの合成
Ｘaa11 アミノ酸として（Ｓ）−４−（２'−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニンおよびＸaa10 アミノ酸として（Ｓ）−（２'−エチル−４'−メトキシ）ビフェニルアラニンを含む目的のジペプチジルレジンを、実施例１に記載のように製造した。ペプチド鎖の伸張は次いで、アミノ酸Ｘaa1−Ｘaa9のための実施例１に記載のカップリングプロトコールを用いて完了した。生じたペプチジルレジンを乾燥し、２ ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２）で１.５時間処理した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１×１ ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせて、ジエチルエーテル（３０ ｍＬ）に加え、短時間ボルテックスし、次いで−１５℃で１時間維持した。沈澱した固形物を遠心沈降して集め、スピードバック中乾燥した。粗生成物を以下のようにプレパラティブＨＰＬＣで精製した。該クルードなペプチドを０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム（１ｍＬ）、水（２ｍＬ）およびアセトニトリル（１ｍＬ）に溶かした。該ペプチドをＯＤＳ−Ａ１０μｍ充填剤を含むＹＭＣカラム（ＳＨ−３４３−１０Ｐ）、２５０×２０ ｍｍ Ｉ．Ｄ．に負荷した。該カラムにＯＤＳ１０μｍ充填剤ガードカラムＹＭＣ（Ｇ−３４０−１０Ｐ）、５０×２０ｍｍ Ｉ．Ｄ．を備えた。該ペプチドは、１５ｍＬ／分の流速で、５０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の２０％から４５％のグラジエントで溶離した。集めた適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：１４.４分）で純度９８.６％のペプチドを得た：２０分かけて、１ｍＬ／分での１０％から７０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント；溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／アセトニトリル；カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １００×４.６ｍｍ、粒子径３μｍ、孔径１２ｎｍ。
マススペクトル：ESI (M+H)+ = 1528.9および(M+2H)/2 = 765.3
【０２０６】
配列番号：５８のペプチドの合成
上記のＸaa4−Ｘaa11ペプチジルレジン（０.０６７ｍｍｏｌ）のサンプルをＦｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）、残基Ｘaa3、および０.５Ｍ ＨＯＡｔ（５当量）ＤＭＦの溶液と共に５分間プレボルテックスし、ＤＩＣ（５当量）を含めて１８時間ボルテックスした。該レジンを排水し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。レジンに結合したペプチド（０.０３４ｍｍｏｌ）を脱保護し、残渣Ｘaa3のために先に記載されたようなＦｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（５当量）とのカップリングをし、レジンに結合したＦｍｏｃ−［Ｘaa2−Ｘaa11］−ペプチドを得た。
【０２０７】
該レジン（０.０１７ｍｍｏｌ）を、残基Ｘaa2のために記載したように、脱保護し、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）でカップリングした。目的のペプチドを、ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９４：３：３）（５.０ ｍＬ）溶液で３時間処理して、それぞれのペプチジルレジンから開裂／脱保護した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ ｍＬ）ですすぎ、ＴＦＡ濾液を合わせて、蒸発させ、油状の固形物としてクルードなペプチド生成物を得た（３９ ｍｇ）。これを２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＡｃＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の５％から６５％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：５.６５分）で純度９２％の配列番号５８のポリペプチドを得た（５.４ｍｇ、回収率１８.９％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1554.8 amu.
【０２０８】
配列番号５９のペプチドの合成
先の合成において記載されたＦｍｏｃ−［Ｘaa3−Ｘaa11］−ペプチジル−シーバーレジンのサンプル（０.０１５ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ−［Ｎ−メチル−（Ｄ）−Ａｌａ］−ＯＨ（５当量）および０.５Ｍ ＨＯＡｔ（５当量）のＤＭＦ溶液と共に５分間プレボルテックスし、ＤＩＣ（５当量）を含めて４時間ボルテックスした。該レジンを排水し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ基を、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（３ｍＬ）で５および１５分間処理して除去した。該レジンをＤＭＦ（８×３ｍＬ）で洗浄し、次いで先の合成に記載されたように、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）とカップリングした。目的のペプチドを、ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９４：３：３）（５.０ ｍＬ）の溶液で３時間処理して、各々のペプチジルレジンから開裂／脱保護した。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ ｍＬ）ですすぎ、ＴＦＡ濾液を合わせて、蒸発させた。生じた油状の固形物をアセトニトリル／水（１：１、２ｍＬ）中に溶かし、２０分かけての［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の５％から６５％］のグラジエントのプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：５.６５分）で純度９９％の配列番号：５９を得た（５.２ｍｇ、回収率１８.５％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1528.9 amu.
【０２０９】
配列番号６０のペプチドの合成
先に記載のように製造されたＦｍｏｃで保護された［Ｘaa10−Ｘaa11］−ジペプチジル−シーバーレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）のサンプルを、実施例３に記載のようなアプライド バイオシステムズ４３３Ａペプチド シンセサイザーのファーストモック(FastMoc、登録商標）プロトコールを用いて、９個の更なるカップリングサイクルに付した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）を、機器の適当な大きさの容器に入れ、ＮＭＰで６回洗浄し、２０％ピペリジン／ＮＭＰで２つの処理（各２および８分）を用いて脱保護した。１つの付加的なモニターされた脱保護ステップは、モニタリングオプションの条件を満足するまで行われた。全脱保護の時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジルレジンをＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングさせた。その方法を次工程で用いる実施例で詳述されている。
【０２１０】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨを、以下の方法を用いて次にカップリングした。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、２０当量）を２ ｍＬのＮＭＰに溶かし、０.４５Ｍ ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔのＤＭＦ（２.２ ｍＬ）溶液および２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１ ｍＬ）の続く添加で活性化した。活性化したＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の溶液を次いで、反応容器に移し、カップリングを脱保護ステップからのフィードバックに依存して３０〜６０分間続けさせた。該レジンを次いでＮＭＰで６回洗浄し、該カップリングプロトコールを繰り返した。目的のＸaa4−Ｘaa11配列の集合体を完成するために、これを上記の更に５回の脱保護／カップリングサイクルに付した。続いてカップリングされたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨであった。結局、ペプチジルレジンは、ＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（５５：４５）のスラリー中のＡＣＴ ３９６ マルチプル ペプチド シンセサイザーに加えた。該レジンをＤＭＦで２回洗浄し、実施例１に記載のように１.５Ｍ ピペリジン／ＤＭＦで２つの処理を用いて脱保護した。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（４.０当量）を、続く０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ（４.０当量）およびＤＩＣ（４.０当量）の添加で活性化し、反応容器に手動で移し、２時間カップリングさせた。該レジンは１分ボルテックスしながらＮＭＰ（４×０.５ ｍＬ）ですすいだ。先のカップリングのために記載されたＦｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨを以下のようにカップリングした。Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（２.４当量）を、ＮＭＰ（０.１２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（２.４当量）およびＤＩＣ（２.４当量）の続く添加で活性化した。該溶液を反応容器に手動で移し、１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをＮＭＰ（０.２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（４当量）およびＤＩＣ（４当量）中のアミノ酸（４当量）溶液を手動で反応容器に加えて活性化した。カップリング反応液を１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基を先のカップリングのために記載されたように除去した。該ペプチドのＴＦＡ開裂／脱保護を実施例１に記載のように行った。これを２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の１０％から６０％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：４.８８分）で純度９４％の配列番号：６０のポリペプチドを得た（２１.７ ｍｇ、回収率４２％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1604.9 amu.
【０２１１】
配列番号：７３のペプチドの合成
先の合成に記載のようなＦｍｏｃで保護された［Ｘaa2−Ｘaa11］−ペプチジル−シーバーレジン（０.０１７ｍｍｏｌ）のサンプルは、脱アミノ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）およびＨＡＴＵ（５当量）の０.５ ＨＯＡｔのＤＭＦ（５当量）溶液、並びに２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（５当量）溶液と共に１８時間ボルテックスした。該レジンを排水し、ＤＭＦ（６×２ｍＬ）およびＤＣＭ（３×２ ｍＬ）で洗浄した。目的のペプチドは、それぞれのペプチジルレジンから、ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９４：３：３）（５.０ ｍＬ）の溶液で３時間処理して、開裂／脱保護された。該レジンを濾去し、ＴＦＡ（１.０ ｍＬ）ですすぎ、ＴＦＡ濾液を合わせて蒸発させた。生じた油状の固形物（３２ｍｇ）をアセトニトリル／水（１：１、２ｍＬ）に溶かし、２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の５％から６５％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：６.０１分）で純度９９％の配列番号：７３のペプチドを得た（７.４ｍｇ、回収率２４.６％）：１０分かけて、流速２.５ｍＬ／分での５から８０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］のグラジエント；カラム：ＹＭＣ Ｓ５ ＯＤＳ（４.６×５０ｍｍ）。
ESI: (M+H)+ = 1539.8 amu.
【０２１２】
配列番号：６１のペプチドの合成
先に記載のように製造されたＦｍｏｃで保護された［Ｘaa10−Ｘaa11］−ジペプチジル−シーバーレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）のサンプルを、実施例３に記載のようなアプライド バイオシステムズ４３３Ａペプチド シンセサイザーのファーストモック(FastMoc、登録商標）プロトコールを用いて、９個の更なるカップリングサイクルに付した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０５ ｍｍｏｌ）を、機器の適当な大きさの容器に入れ、ＮＭＰで６回洗浄し、２０％ピペリジン／ＮＭＰで２つの処理（各２および８分）を用いて脱保護した。１つの付加的なモニターされた脱保護ステップは、モニタリングオプションの条件を満足するまで行われた。全脱保護の時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジルレジンをＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングさせた。その方法を次工程で用いる実施例で詳述されている。
【０２１３】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯtＢｕ）−ＯＨを、以下の方法を用いて次にカップリングした。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、２０当量）を２ ｍＬのＮＭＰに溶かし、０.４５Ｍ ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔのＤＭＦ（２.２ ｍＬ）溶液および２Ｍ ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１ ｍＬ）の続く添加で活性化した。活性化したＦｍｏｃ保護されたアミノ酸の溶液を次いで、反応容器に移し、カップリングを脱保護ステップからのフィードバックに依存して３０〜６０分間続けさせた。該レジンを次いでＮＭＰで６回洗浄し、該カップリングプロトコールを繰り返した。目的のＸaa4−Ｘaa11配列の集合体を完成するために、これを上記の更に５回の脱保護／カップリングサイクルに付した。続いてカップリングされたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（tＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨであった。結局、ペプチジルレジンは、ＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄した。Ｆｍｏｃ保護されたジペプチジルレジン（０.０２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（５５：４５）のスラリー中のＡＣＴ ３９６ マルチプル ペプチド シンセサイザーに加えた。該レジンをＤＭＦで２回洗浄し、実施例１に記載のように１.５Ｍ ピペリジン／ＤＭＦで２つの処理を用いて脱保護した。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯtＢｕ）−ＯＨ（４.０当量）を、続く０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ（４.０当量）およびＤＩＣ（４.０当量）の添加で活性化し、反応容器に手動で移し、２時間カップリングさせた。該レジンは１分ボルテックスしながらＮＭＰ（４×０.５ ｍＬ）ですすいだ。先のカップリングのために記載されたＦｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨを以下のようにカップリングした。Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（２.４当量）を、ＮＭＰ（０.１２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（２.４当量）およびＤＩＣ（２.４当量）の続く添加で活性化した。該溶液を反応容器に手動で移し、１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基の脱保護後、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをＮＭＰ（０.２ ｍＬ）で希釈した０.５Ｍ ＨＯＡｔのＤＭＦ溶液（４当量）およびＤＩＣ（４当量）中のアミノ酸（４当量）溶液を手動で反応容器に加えて活性化した。カップリング反応液を１８時間カップリングさせた。該レジンをＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基を先のカップリングのために記載されたように除去した。該ペプチドのＴＦＡ開裂／脱保護を実施例１に記載のように行った。これを２０分かけて［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］の１０％から６０％のグラジエントを用いたプレパラティブＨＰＬＣで精製した。純粋な生成物を含んだフラクションをプールし、凍結乾燥して、以下の条件下のＨＰＬＣ（保持時間：２０.８分）で純度９１％の配列番号：６１のポリペプチドを得た（２１.７ ｍｇ、回収率４２％）：２５分かけて、１ｍＬ／分での１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント；溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶��Ｂ：０.１％ＴＦＡ／アセトニトリル；カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ｍｍ、粒子径３μｍ、孔径１２ｎｍ。
マススペクトル：ESI (M+H)+ = 1568.9および(M+2H)/2 = 785.2
【０２１４】
実施例１８
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸［α−メチル−β−［１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル］プロピオン酸］の合成
［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸はＩｍｐとして略してもよい。参照：下記の「アミノ酸の略号および構造」］
１−トシル−４（５）−ヒドロキシメチルイミダゾール
以下の方法は文献［Agr. Biol. Chem., 38 (5), 1097-1099, 1974］に準じた。Ｎａ2ＣＯ3（８.４ ｇ、０.０８ ｍｏｌ）の水（４０ ｍＬ）溶液に、４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール塩酸塩（２.７ ｇ、０.０２ ｍｏｌ）を加えた。溶解が完了したとき、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（４.５８ ｇ、０.０２４ ｍｏｌ）の酢酸エチル（３０ ｍＬ）溶液を、５分間かけて滴下して加えた。反応混合物を５時間攪拌させた。分液処理し、酢酸エチルを更に加えた（２０ ｍＬ）。有機相を、０.１Ｍ Ｎａ2ＣＯ3（２×２０ ｍＬ）、水（１×２０ ｍＬ）および次いで飽和ＮａＣｌ（１×２０ ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル相をＭｇＳＯ4（２ ｇ）および活性炭（１ｇ）で１０分間処理した。固形物をセライトパッドで濾去し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣が結晶化を始めた。新たに酢酸エチルを加え（１０ ｍＬ）、該溶液をヒートガンで温め、固形物を再溶解させた。生成物が終夜室温で結晶化した。結晶物質を集めて、酢酸エチル（５ ｍＬ）、次いでエチルエーテル（１０ ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥し、３.５９ ｇの恒量を得た。
【０２１５】
１−トシル−４（５）−アセトキシメチルイミダゾール
１−トシル−４（５）−ヒドロキシメチルイミダゾール（２.５２ ｇ、１０ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１０ ｍＬ）に溶かした。これにトリエチルアミン（２.０２ ｇ、２０ｍｍｏｌ）を室温で滴下して加え、続いて１５分かけて無水酢酸（１.３３ ｇ、１３ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。該混合物を４日間室温で攪拌し、ＬＣ／ＭＳでモニターした。クロロホルムを減圧で留去し、残渣を酢酸エチル（６０ ｍＬ）に溶かした。有機層を０.１Ｍ 炭酸水素ナトリウム、水および次いで飽和塩化ナトリウム（すべて各１×４０ ｍＬ）で連続して洗浄した。有機層を活性炭および硫酸マグネシウムで同時に処理し、次いでセライトパッドで濾過した。溶媒を減圧留去し、生じた残差を温酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶かした。この溶液にゆっくりとジエチルエーテル（２０ ｍＬ）を加えた。該溶液を終夜室温で結晶化するために置いておいた。結晶を集めて、ジエチルエーテル（２×１０ ｍＬ）で洗浄し、終夜真空乾燥して、１.５５ｇを得た。
【０２１６】
メチル−α−カルボメトキシ−α−メチル−β−４−（１−トシルイミダゾール）−プロピオネート
以下の方法は文献［Synthetic Communications, 19(7&8), 1157-1165, 1989］に準じた。１−トシル−４（５）−アセトキシメチルイミダゾール（０.３５１６ ｇ、１.２ｍｍｏｌ）およびメチルマロン酸ジメチル（０.１４８５ ｇ、１.０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ ｍＬ）溶液を、粉末状のＫＯＨ（０.１６９４ ｇ、３.０ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（０.０４９６ ｇ、０.１５ｍｍｏｌ）の攪拌したアセトニトリル（１ ｍＬ）懸濁液に加えた。ＨＰＬＣ分析で確認して、反応は４０分後に完了した。反応混合物エチルエーテル（１００ ｍＬ）に注ぎ、セライトパッドで濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解し、０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3（１×１５ ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１×１５ ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。溶媒を減圧留去し、生じた油状物を真空のデシケーターに３日間入れて、０.２０７ｇを得た。
【０２１７】
α−メチル−β−４−イミダゾール プロピオン酸
メチル−α−カルボメトキシ−α−メチル−β−４−（１−トシルイミダゾール）−プロピオネート（０.１８６ ｇ、０.５ｍｍｏｌ）を、メタノール（２ ｍＬ）に溶かした。これに１.０Ｎ ＮａＯＨ（１.５ ｍＬ）を加え、反応液を終夜攪拌させた。プレパラティブＨＰＬＣで精製後、凍結乾燥で得られた生成物（０.１３６６ ｇ）を１.０Ｎ ＮａＯＨ（５ ｍＬ）に溶かし、ＰＴＦＥで裏付けされたキャップで封されたスクリューキャップチューブ（１６×１００ｍｍ）中２時間１００℃に加熱し、続いて濃ＨＣｌ（２ ｍＬ）を添加し、６時間１４５℃で加熱した。目的のデカルボキシル化生成物が形成された。溶液すべてを濾過し、ＹＭＣ Ｇ−３４０−１０Ｐ ＯＤＳ ５０×２０ｍｍ プレパラティブＨＰＬＣカラムにのせた。生成物を６０分かけての０％から６０％［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］のグラジエントで溶離した。グラジエントの１１〜１３分に相当するフラクションをプールし、凍結し、凍結乾燥して、生成物を得た（３２ ｍｇ）。
【０２１８】
α−メチル−β−［１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル］プロピオン酸
α−メチル−β−４−イミダゾールプロピオン酸（０.０３０５ ｇ、０.１１４ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（０.０６１７ ｇ、０.７３４ｍｍｏｌ）の水溶液（１ ｍＬ）（ｐＨ ８.０４）に、２，４−ジニトロフルオロベンゼン（０.０３２３ ｇ、０.１７４ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１.０ ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を終夜ボルテックスした。ＭｅＣＮを減圧留去し、残渣を水（２ｍＬ）に再溶解し、濾過し、１.５および０.５ ｍＬの２つの各分画でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２） ５μｍ １００×２１.２ｍｍ プレパラティブＨＰＬＣカラムにのせた。生成物を、４０分かけての０％から８０％の［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ ＴＦＡ／水］のグラジエントで溶離した。グラジエントの１２.５〜１４.５分に相当するフラクションをプールし、サバント スピードバック(登録商標)で終夜乾燥した。更に生成物を、水不溶性の粗生成物をＤＭＳＯに溶かし、続いて上記のようなプレパラティブＨＰＬＣで精製して回収した。フラクションを合わせて、凍結乾燥後精生成物を得た（３１ｍｇ）。
【０２１９】
実施例１９
配列番号：７７、７８、７９および８０のペプチドの合成
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸を、以下のように関連のＸaa2−Ｘaa11−ペプチジル−シーバーレジンにカップリングさせた。
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸（０.０２６７ｇ、０.０８３ｍｍｏｌ）、６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ（０.０１５１ ｇ、０.０８９ｍｍｏｌ）およびＨＣＴＵ（０.０３６０ ｇ、０.０８７ｍｍｏｌ）のＮＭＰ／ＤＣＭ（１ｍＬ、３：１）溶液に、ＤＩＥＡ（０.０３１５ ｇ、０.２４４ｍｍｏｌ）を加えた；該溶液を短時間ボルテックスし、次いで実施例１９に記載のように製造した関連のＦｍｏｃ保護されたＸaa2−Ｘaa11−ペプチジル−シーバーレジンに加えた。カップリングを１６時間続けさせた。ペプチジルレジンをＮＭＰ、次いでＤＣＭ（３×１.５ｍＬ×１分）で洗浄し、次いで１０％無水酢酸／ＤＣＭ（１×２ｍＬ×９０分）で処理し、続いてＤＣＭ、次いでＤＭＦで洗浄（３×１.５ ｍＬ×１分）した。該ペプチジルレジンを１０％チオフェノール／ＤＭＦ（１.５ ｍＬ）で１時間処理し、ＤＭＦおよびＤＣＭ（４×１.５ ｍＬ×１分）で洗浄した。ペプチジルレジンを次いで、ＴＦＡ／ＤＣＭ／ＴＩＳ（３：１.９：０.１）（１ ｍＬ）で１０分間処理し、濾過した。濾液を集めて、もう１時間弱くボルテックスした。ＴＦＡ混合物をスピードバック中約０.５ ｍＬに濃縮し、ＭＴＢＥ（４ ｍＬ）に加えた。１時間後、沈澱した生成物を遠心分離によって集め、洗浄し、次いで乾燥し、粗生成物を得た（０.０８４１ｇ）。これをプレパラティブＨＰＬＣで以下のように精製した。クルードなペプチドを溶かして、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）（５μｍ、２５０×３０ｍｍ）カラムに注入し、４０分かけて２０％から５０％［０.１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］の直線的なグラジエント（１５ｍＬ／分の流速、２１７ｎｍの流出液ＵＶ検出）を用いて溶離した。目的の生成物を含むフラクションをプールし、凍結乾燥し、純度９７.５％のペプチドを得た（２６.７ｍｇ）：以下の条件下でＨＰＬＣ保持時間２１.２分：１ｍＬ／分で２５分かけて１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント、溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ、カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ｍｍ、粒子径３μｍ、１２ｎｍ孔径。
マススペクトル分析：ESI (M+H)+ = 1527.9および(M+2H)/2 = 764.9.
【０２２０】
ペプチドのプレパラティブキラルＨＰＬＣ精製：
ジアステレオマー性ペプチド混合物（１０ ｍｇ）をＭｅＣＮ／ＭｅＯＨに溶かした。該溶液をＣｈｉｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｖ ２.２×５０ｃｍ、５μｍカラムにのせて、２０ｍＬ／分にてＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）3／ＣＨ3ＣＯＯＨ：６５／３５／０.５／０.５で溶離した。異性体Ａを２９および３５分の間で集めた。異性体Ｂを３６および４４分の間で集めた。第２の行使（ラン）は上記のようになされた。異性体Ａを含むフラクションを合わせて、約５ｍＬに濃縮し、水／ＭｅＣＮ（４：１）で希釈し、該溶液を凍結乾燥した。異性体Ｂを同様の方法で行った。生じた残差をプレパラティブＨＰＬＣでＴＦＡ塩に変換した。各ペプチドをＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２） ５ μｍ １００×２１.２ ｍｍカラムに注入し、４０分かけて２０％から５０％の［０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ］／［０.１％ＴＦＡ／水］］の直線的なグラジエント（１０ｍＬ／分の流速、２１７ｎｍの流出液ＵＶ検出）を用いて溶離した。目的の生成物を含むフラクションをプールし、凍結し、凍結乾燥して、純度１００％の異性体Ａを得た（６.０ｍｇ）：以下の条件下でＨＰＬＣ保持時間２１.２８分：１ｍＬ／分で２５分かけて１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント、溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ、カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ ｍｍ、３μｍ 粒子径、１２ｎｍ孔径。
マススペクトル分析：ESI (M+H)+ = 1527.6および(M+2H)/2 = 764.7
類似の方法で、純度１００％のペプチド異性体Ｂを得た（４.９ｍｇ）：以下の条件下でＨＰＬＣ保持時間２１.３分：１ｍＬ／分で２５分かけて１０％から６０％の溶媒Ｂ／Ａのグラジエント、溶媒Ａ：０.１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０.１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ、カラム：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ １５０×４.６ ｍｍ、粒子径３μｍ、１２ｎｍ孔径。
ESI (M+H)+ = 1527.5および(M+2H)/2 = 764.6
【０２２１】
実施例２０
本明細書に記載の合成方法を用いて、表３に示される１１量体ペプチドを製造した。各化合物について表３に示されるＸaa1−Ｘaa11は、以下の式Ｉをいう。
Ｘaa1−Ｘaa2−Ｘaa3−Ｘaa4−Ｘaa5−Ｘaa6−Ｘaa7−Ｘaa8−Ｘaa9−Ｘaa10−Ｘaa11  （Ｉ）
【０２２２】
表３
【表６】
2008505899.tif 000203
【表７】
2008505899.tif 000204
【表８】
2008505899.tif 000205
【表９】
2008505899.tif 000206
【表１０】
2008505899.tif 000207
【表１１】
2008505899.tif 000208
【表１２】
2008505899.tif 000209
【化４９】
2008505899.tif 000210
【化５０】
2008505899.tif 000211
【化５１】
2008505899.tif 000212
【化５２】
2008505899.tif 000213
【化５３】
2008505899.tif 000214
【０２２３】
アミノ酸およびペプチド化学の技術分野の当業者は、４位またはパラ位にフェニル置換基を有するフェニルアラニンアミノ酸が４−（フェニル）フェニルアラニンまたは４，４'−ビフェニルアラニンとして別に定義され得、したがって「Ｂｉｐ」として略されてもよいことを知りうる。「アミノ酸の略号および構造」のセクションおよび本明細書の表に示されている略号のために、ビフェニルアラニンアミノ酸は、例えば「Ｂｉｐ（２'−Ｍｅ）」として略してもよく、それはその４位に２'−メチルフェニル基で置換されたフェニルアラニンが存在することを示しており、その中で２'−メチル基がフェニル環の結合している点との関係でオルト位であることを意図する。
【０２２４】
実施例２１
（２（ＲおよびＳ）−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸］の合成
以下の反応式２１は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を記載する。
【化５４】
2008505899.tif 000215
【０２２５】
１．Ｎ’−ヒドロキシ−２−メチルベンゾアミジン
攪拌したｏ−トルニトリル（９.９２ ｇ、８４.７ ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（７.８２ ｇ、９３.２ ｍｍｏｌ）の水（２０ ｍＬ）溶液に、イソプロパノール（１００ ｍＬ）を加える。反応混合物をアルゴン下加熱還流する。２０時間後、反応混合物を冷却し、蒸発させ、イソプロパノールの大部分を除いた。半固形の残渣を水およびヘキサンの間で分液処理し、生じた固形物を集めて、乾燥し、白色の固形物を得た（８.０３ ｇ、収率８３％）。
【０２２６】
２．２−メチルベンゾアミジニウムアセテート
攪拌した上記化合物（７.８２ｇ、５２.１ ｍｍｏｌ）の酢酸（１００ ｍＬ）溶液に室温でアルゴン下、無水酢酸（５.６５ ｍＬ、５.６５ ｍｍｏｌ、１.１５当量）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１.０ｇ）を加えた。該混合物を攪拌し、アルゴンで２回パージした。該混合物を次いで水素雰囲気下（〜１ａｔｍ）３時間攪拌した。反応混合物をパージし、セライトで濾過した。濾液を蒸発して、黄褐色の固形物として生成物を得た（１０.３２ ｇ、収率９９％）。
【０２２７】
３．エチル ４−ヒドロキシ−２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート
攪拌したエタノール（５７ ｍＬ）にアルゴン下０−５℃で、油状物に分散した水素化ナトリウム（６０％、２.３５ｇ、５８.７ ｍｍｏｌ）を、１０分かけて何回かに分けて加えた。さらに１０分後、２−メチルベンゾアミジニウムアセテート（５.７０ｇ、２９.３ ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。生じた橙色のスラリーを攪拌し、（２−エトキシ−メチレン）マロン酸ジエチル（５.９３ ｍＬ、２９.３ ｍｍｏｌ）のエタノール（１４ ｍＬ）溶液を５分かけて加えた。該混合物を加熱還流し、溶液を泡立てた。１５時間後、該溶液を冷却し、氷水（３００ ｍＬ）に注いだ。生じた溶液を攪拌し、濃塩酸（２.３ ｍＬ、２７.６ ｍｍｏｌ）を加えて、該溶液をｐＨ７にした。生じた灰白色の凝集スラリーを濾過し、Ｎ2気流下乾燥し、白色の固形物として標題化合物を得た（６.８７ ｇ、収率９１％）。
【０２２８】
４．エチル ４−クロロ−２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート
エチル４−ヒドロキシ−２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート（４.００ｇ、１５.５ ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（１１.６ ｍＬ、１２４ ｍｍｏｌ）溶液を、加熱還流した（塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して）。３時間後、過剰のＰＯＣｌ3を蒸留して除いた（〜２０Ｔｏｒｒ、９０〜１００℃の油浴）。残留する赤色の油状物を冷やして固形化した。該固形物を粉砕し、ＥｔＯＡｃ（１００ ｍＬ）で覆った。該スラリーを−５℃に冷却し、炭酸カリウム溶液（２Ｍ、２５ ｍＬ、５０ ｍｍｏｌ）と共に１０分間激しく振とうした。生じた橙色の相を分けて、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させて、ヘキサンでトリチュレート後、淡橙色の固形物として標題化合物を得た（３.５８ ｇ、収率８４％）。
【０２２９】
５．エチル ２−ｏ−トリルピリミジン−５−カルボキシレート
室温で上記化合物（２.３３ｇ、８.４２ ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１.１７ｍＬ、８.４２ ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（３５ ｍＬ）溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（２１０ ｍｇ）で処理した。素早く攪拌した混合物をアルゴンで２回パージし、次いで水素雰囲気下（〜３ａｔｍ）３時間付した。反応混合物をパージし、セライトで濾過し、蒸発させた。ヘキサンから再蒸発して、黄色の固形物として標題化合物を得た（１.８８ ｇ、収率９２％）。
【０２３０】
６．（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）メタノール
攪拌した上記化合物（２.１０ｇ、８.６７ ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４５ ｍＬ）溶液にアルゴン下−７８℃で、ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液（１.５Ｍ、１２.７ ｍＬ、１９.１ ｍｍｏｌ）を加えた。９０分後、酒石酸カリウムナトリウム溶液（１Ｍ、１９.１ ｍＬ、１９.１ｍｍｏｌ）を滴下して加え、細かく凍結した分散物を攪拌し、室温まで加温させた。該混合物を水およびジクロロメタン環で分液処理した。有機相を分けて、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させて、黄色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍカラム、１：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、白色の固形物として標題化合物を得た（９７５ ｍｇ、収率５６％）。
【０２３１】
７．（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）メチルブロミドおよび（Ｒ，Ｓ） ｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート
上記化合物（９１８ ｍｇ、４.５８ ｍｍｏｌ）およびオキシ臭化リン（２.２０ｇ、７.６７ｍｍｏｌ）の混合物を、（塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して）１２０℃に加熱した。１時間後、反応混合物を蒸留した（〜２０Ｔｏｒｒ、９０〜１００℃の油浴）。生じた黒色の樹脂製の残分を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃで覆い、０℃に再度冷却し、注意深く２Ｎ炭酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ、１０ ｍｍｏｌ）で処理した。有機抽出物である不安定な２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）メチルブロミドを乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、＜３０℃で蒸発させて、黄色のガラス状物を得て（１.３５ｇ）、すぐに次反応に用いた。
【０２３２】
攪拌した上記化合物（１.３１ｇ、３.６４ ｍｍｏｌ）、２−（ジフェニルメチレンアミノ）酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１.０７５ｇ、３.６４ ｍｍｏｌ、１.０当量）およびテトラブチルアンモニウムブロミド（１１７ ｍｇ、０.３６ ｍｍｏｌ、０.１当量）のジクロロメタン（１６ ｍＬ）混合液に−７８℃でアルゴン下、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン（１.５８ ｍＬ、５.４６ ｍｍｏｌ、１.５当量を５分かけて加えた。反応混合物を−７８℃で１時間攪拌し、次いでインシトゥーで室温まで加温させた。１７時間後、該混合物を溶離液としてエチルエーテル／ジクロロメタン（３：４７）を用いてシリカゲルクロマトグラフィ（５×２０ｃｍカラム）で直接精製し、黄色の油状物としてｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエートを得た（１.４５ ｇ、収率７８％）。
【０２３３】
攪拌したｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（１.４５ ｇ、２.３３ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２ ｍＬ）溶液に室温でアルゴン下、クエン酸の（３.４０ ｇ、１７.７ ｍｍｏｌ、５.８当量）水（１２ ｍＬ）溶液を加えた。３時間後、反応混合物を水で希釈し、エーテルで２回洗浄した。水相を次いで固形の炭酸ナトリウムでｐＨ ９にして、ジクロロメタンで２回抽出した。
【０２３４】
ジクロロメタン抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。生じた油状物をＴＨＦ（６ ｍＬ）に溶かし、室温で１０％炭酸ナトリウム溶液（４.２ ｍＬ）、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド（８６４ ｍｇ、３.３４ ｍｍｏｌ、１.１当量）で処理した。２時間後、反応混合物をＥｔＯＡｃで２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：１９）を用いたシリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍ カラム）で精製し、無色の油状物を得た（１.６１ ｇ、収率９９％）。
【０２３５】
生成物をＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ（１：１、１３０ｍＬ）に溶かした。１０分後、沈澱が生じた。濾過後、濾液をキラルクロマトグラフィ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤカラム、５×５０ｃｍ、２０μをパッキング；溶離液として２：２：９６ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ／ヘキサン、流速５０ｍＬ／分）に付して、収集し、プールし、蒸発した後、２つのフラクションを得た。
（Ｓ）ｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（ピリジンアナログと比較して同定）、２２１ ｍｇ、＞９８％ｅｅ；および
（Ｒ）ｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−３−（２−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート、２９５ ｍｇ、９６％ｅｅ、
いずれもキラルＨＰＬＣ分析（４.６×２５０ｍｍ ＡＤカラム、溶離液として２：２：９６ ヘプタン：メタノール：エタノール、流速１ｍＬ／分）による。
【０２３６】
８ａ．（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−o−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（２２０ ｍｇ、０.４１ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２.１ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で４時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をトルエンで２回再溶解し、蒸発させて、白色の粉末として標題化合物を得た（１９５ ｍｇ、収率９９％）。
【０２３７】
８ｂ．（２Ｒ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリミジン−５−イル）プロパノエート（２９０ ｍｇ、０.５４ ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２.７ ｍＬ）溶液を、塩化カルシウムで満たした乾燥管で大気から保護して、室温で４時間攪拌した。反応混合物を４０℃以下で減圧濃縮し、生じた橙色の油状物をトルエンで２回再溶解し、蒸発させて、白色の粉末として標題化合物を得た（２５５ ｍｇ、収率９８％）。
【０２３８】
実施例２２
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−２−メチル−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸の合成
以下の反応式２２は、（（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−２−メチル−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸の合成を記載する。
【化５５】
2008505899.tif 000216
【０２３９】
１．（２Ｒ，４Ｓ）−ベンジル ４−メチル−５−オキソ−２−フェニル−４−（（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メチル）オキサゾリジン−３−カルボキシレート
攪拌した実施例１１．４の化合物（５１５ ｍｇ、１.５０ ｍｍｏｌ）のスラリーに−７８℃でアルゴン下、カリウムヘキサメチルジシラジドのトルエン溶液（０.５Ｍ、３.０８ ｍＬ、１.５４ ｍｍｏｌ）を加えた。２０分後、同量のカリウムヘキサメチルジシラジドおよび（２Ｒ，４Ｒ）−ベンジル ４−メチル−５−オキソ−２−フェニルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（４６７ｍｇ、１.５０ｍｍｏｌ）（S. R. Kapadia、J. Org. Chem. 66 1903 (2001)）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を、別のシリンジで３０分かけて別途滴下して加えた。反応混合物を室温まで加温した。１４時間後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液に注ぎ、エーテルで２回抽出した。有機抽出物を合わせて、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィ（５×１５ｃｍカラム、溶離液として１：３ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、白色の泡状物として標題化合物を得た（２４０ ｍｇ、収率３３％）。
【０２４０】
２．（２Ｒ，４Ｓ）−ベンジル ４−メチル−５−オキソ−２−フェニル−４−（（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メチル）オキサゾリジン−３−カルボキシレート
攪拌した上記化合物（２４０ｍｇ、０.４９ ｍｍｏｌ）および３０％ＨＢｒの酢酸（４ ｍＬ）溶液を、２４時間加熱還流した。生じた溶液を蒸発乾固させ、次いで水（９ｍＬ）に再溶解した。該溶液をエーテルで１回抽出した。水相を固形の炭酸水素ナトリウム（７５０ｍｇ）でｐＨ８に調整し、次いでＦｍｏｃＯＳｕ（２１６ ｍｇ、０.８４ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液を加えたとき、室温で攪拌した。６０時間後、反応混合物を５％クエン酸溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を合わせて、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、蒸発させた。アセトニトリル／水（９：１）から結晶化し、白色の固形物として標題化合物を得た（５２ ｍｇ、２２％）。
【０２４１】
実施例２３
サイクリックＡＭＰ測定
ＧＬＰ−１受容体はＧタンパク質共役受容体である。生物活性体であるＧＬＰ−１（７−３６）−アミドは、ＧＬＰ−１受容体に結合し、シグナル伝達と通じてアデニルシクラーゼの活性化を引き起こし、細胞内ｃＡＭＰ濃度を増加させる。ＧＬＰ−１受容体を刺激する際のペプチド化合物のアゴニズムをモニターするために、アデニルシクラーゼ活性は細胞内ｃＡＭＰ含有量をアッセイしてモニターした。全長のヒトグルカゴン様ペプチド１受容体は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞において安定に発現され、クローンの細胞系(clonal lines)は、確立された。クローンはＧＬＰ−１の飽和用量に応じて、ｃＡＭＰ含有量における最大の増加でスクリーンし、クローンＣＨＯ−ＧＬＰ１Ｒ−１９を選択した。
【０２４２】
細胞は、ハムＦ１２栄養培地（ギブコ＃１１７６５−０５４）、１０％ ＦＢＳ、１×Ｌ−グルタミン、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、および０.４ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８中培養した。ＣＨＯ−ＧＬＰ−１Ｒ−１９細胞（培地１００μｌ中２０，０００）を、９６ウェル組織培養マイクロタイタープレートの各ウェル中にプレートし、３７℃で５％ＣＯ2雰囲気下終夜インキュベートした。アッセイの日に、細胞を１００μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１回洗浄した。バイオメック(Biomek)２０００を、アッセイを開始する前に、すべてのペプチドを連続して希釈するのに用いた。一連の希釈は１００％ＤＭＳＯで行った。ペプチドプレートを、プレートメイトプラス(Platemate Plus)を用いて、アッセイの開始前に作り；１.５μＬの化合物をＶボトムプレートに移し、１００μＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（非選択性ホスホジエステラーゼ阻害剤）で増補した１５０μＬのアッセイバッファーをプレートに加え、１：１００の希釈およびＤＭＳＯの１％の最終濃度を得た。
【０２４３】
ｃＡＭＰ標準曲線を作成するために、０.２−２５.６ｐｍｏｌ／ウェルの範囲でｃＡＭＰの連続する希釈を、溶解試薬１（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｃＡＭＰ ＳＰＡキット）中に組成した。各５０μｌのｃＡＭＰ標準液を手で加え、７０μｌのミックス試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｃＡＭＰ ＳＰＡキット）を、マルチドロップを用いて加えた。プレートを次いでシールし、１５時間Ｔｒｉｌｕｘカウンターでカウントした。この標準曲線を用いて、ＣＰＭをｃＡＭＰのｐｍｏｌに転換した。
【０２４４】
１．プレートメイトプラスにおけるｃＡＭＰアッセイプロトコール
細胞プレートおよびペプチドプレートを、プレートメイト上に負荷した。該培地をウェルからアスピレートし、捨てた。ウェルあたり１００μＬのペプチド／バッファー混合物を次いで、ペプチドプレートから加え、アッセイを開始した。インキュベート３０分後、ペプチド／バッファーを除き、５０μＬの溶解試薬１溶液をウェルごとに加えた。プレートを室温で１時間、または冷蔵してシールするなら終夜置いておいた。７０μＬのｃＡＭＰ検出試薬（あらかじめ混合した125Ｉ−ｃＡＭＰ アナログ、ＳＰＡビーズに共役した抗ｃＡＭＰ抗体および抗ウサギ抗体−すべてＡｍｅｒｓｈａｍ ｃＡＭＰ ＳＰＡキットから得られる）を、マルチドロップを用いて加え、プレートをシールした。１５時間後、該プレートを、Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンターでカウントした。
【０２４５】
化合物の用量依存は、同一の２つの片対数濃度で決定した。１０ｎＭのＧＬＰ−１を、最大活性を決定するためのリファレンス標準として用いた。標準曲線は、サイクリックＡＭＰの公知の量を用いて決定した。処理された細胞で合成されたｃＡＭＰの量をサイクリックＡＭＰ標準曲線から決定し、最大のＧＬＰ−１で刺激された活性のパーセンテージを計算し、対数化合物濃度に対してプロットした。データを非線形回帰曲線の当てはめ（４つのパラメーターＳ状用量応答曲線）で解析し、化合物のＥＣ50を決定した。実施例によって、本発明のペプチドは、０.０００５ｎＭ〜１０ｎＭの範囲、より好ましくは０.０００５ｎＭ〜０.２００ｎＭの範囲でのＥＣ50値を有する。
【０２４６】
実施例２４
インビボ実験
ペプチドは、各マウスが投与される溶液の同容量／同重量を受けるように、ｎｍｏｌ／ｋｇで投与される用量に相当するｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で、適当なベヒクル中溶解した。雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−ｏｂ／ｏｂマウス（１０週齢）を、フィードされた血漿グルコースおよび体重に基づいて、群あたり６匹のマウスの群にランダム化した。終夜絶食後、マウスの体重を量り、実験室に置いた。その環境で３０分後、マウスは−３０分でしっぽの先から採血し、すぐにベヒクルまたはベヒクルに溶かしたペプチド（０.１ｍＬ溶液／体重１００ｇ）を皮下（ｓｃ）注射した。０時間で、マウスを採血し、次いで５０％グルコース（２ｇ／ｋｇ）を腹腔内に注入し、腹腔内ブドウ糖耐性テスト（ｉｐＧＴＴ）を開始した。マウスはグルコース注入後、３０、６０、１２０および１８０分に採血した。血液サンプルはカリウムＥＤＴＡに引き込み、実験の間氷上に置き、その後４℃、３０００ｒｐｍで１０分間遠心沈降した。血漿サンプルをコバスシステム(Cobas System)中のグルコース分析で１１倍に希釈した。別の５μｌの血漿サンプルを、２０μｌのサンプル希釈剤（インスリンＥＬＩＳＡアッセイキット、Crystal Chem Inc.）で５倍に希釈し、ウルトラセンシティブマウスインスリンＥＬＩＳＡキット（Crystal Chem Inc.）を用いて、続く分析のために−２０℃で保存した。
【０２４７】
ｏｂ／ｏｂマウス（インスリン抵抗性のマウスのモデル）における化合物Ｉ、配列番号：１および５８のポリペプチドに対するインビボグルコース低下特性は、上記に記載している。ペプチドＩの皮下投与は、腹腔内ブドウ糖耐性テスト（ｉｐＧＴＴ）において、曲線の下の血漿グルコース領域（ＡＵＣ）が０と１８０分の間の用量依存の方法で減少することを伴って、食後のグルコース可動域曲線を減少させた（図１）。化合物ＩのＥＤ50は、５０ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。これらの動物における食後の血漿インスリンレベルでは、付随的で統計的に有意な用量依存性の増加があった（図２）。化合物Ｉで処置された動物における血漿グルコースおよびインスリンの変化の間の相互関係は（図１および図２）、グルコースの低下効果が化合物Ｉによるインスリン放出の刺激によって媒介されることを示唆している。
【０２４８】
より重大で、予期できないこととして、配列番号：１および５８のポリペプチドは、時間依存性（０と１８０分の間）で、ｏｂ／ｏｂマウスにおける皮下投与に続く食後の血漿グルコースにおける統計的に有意な減少を生ずる（図３および４）。食後のグルコースにおける配列番号：１のポリペプチドの効果は、１−１００ｎｍｏｌ／ｋｇの間の用量依存性であり、血漿グルコースＡＵＣは１００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で８５.８％減少した（図３）。より重大で、予期できないこととして、配列番号：１のペプチドでのＥＤ50は、５ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定され、配列番号：１のポリペプチドは、用量基準において化合物Ｉよりも約１０倍以上の高活性であることが示唆された。配列番号：５８のペプチドのグルコース低下活性でのＥＤ50は、２.５ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された（図４）。
【０２４９】
実施例２５
イヌの薬物動態実験
配列番号：１のペプチドの薬物動態的パラメーターは、雄のビーグル犬（ｎ＝４、１４±１ｋｇ）で決定した。終夜絶食に続いて、各動物は大腿静脈を経由した静脈内ボーラス（６７μｇ／ｋｇ）として、または肩甲骨付近での皮下注射（６７μｇ／ｋｇ）で、配列番号：１のペプチドを投与された。各動物は静脈内および皮下投与の両方を、クロスオーバーデザインに従った投与の間で１週間休薬して受けた。両投与経路のための投与ベヒクルは、プロピレングリコール：リン酸緩衝液（５０：５０）であった。連続の血液サンプルは、投与前と、静脈内投与後０.０８３、０.２５、０.５、０.７５、１、２、４、６、８、２４、および３０時間後に、ＥＤＴＡを含む微量遠心管に集め；皮下投与後では、０.２５、０.５、０.７５、１、２、４、６、８、２４、および３０時間後に、ＥＤＴＡを含む微量遠心管に集めた。約０.３ｍＬの血液を各時間ポイントで集めた。血液サンプルをすぐに４℃で遠心分離した。得られた血漿をドライアイスで凍結させ、−２０℃で保存した。血漿薬物レベルは、上記のＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて決定した。
【０２５０】
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる配列番号：１のペプチドの定量
インビボのイヌの実験からの血漿サンプルは、内部標準を含んだアセトニトリルの２つの容量で、血漿タンパク質を沈澱させて、分析の準備をした。サンプルをボルテックス混合し、遠心分離で沈澱したタンパク質を除いた。生じた上清を９６ウェルプレートに移し、１０μＬを分析用に注入した。サンプルをパッカードマルチプローブＩＩ(Packard Multiprobe II)およびクアドラ９６リキッドハンドリングシステム(Quadra 96 Liquid Handling System)で調製した。
【０２５１】
ＨＰＬＣシステムは、２つの島津製作所ＬＣ１０ＡＤポンプ（Columbia、MD）、ＣＴＣ ＰＡＬオートサンプラー（Leap Technologies、Switzerland）からなった。用いたカラムは、ＹＭＣ Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８（２.０×５０ｍｍ、３μｍ）（YMC、Inc.、Milford、MA）であった。カラム温度は５０℃を維持し、流速は０.３ｍＬ／分であった。移動相Ａは１０ｍＭ ギ酸アンモニウムおよび０.１％ ギ酸水からなり、移動相Ｂは０.１％ギ酸／アセトニトリルからなった。初期の移動相組成は５％Ｂであり、カラムを平衡化するために１分間５％Ｂを維持した。該組成を２分かけて９５％Ｂに傾斜を付け、もう１分それを維持した。移動相を次いで１分で初期の状態に戻した。全分析時間は５分であった。スウィッチングバルブを用いた。０−１分の間の溶離液を廃液に流した。
【０２５２】
ＨＰＬＣを、Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ ４０００マススペクトル計（Applied Biosystems、Foster City、CA）にインターフェイスで連結させ、ターボイオンスプレーイオン化源を備えさせた。超高純度窒素を噴霧およびターボガスとして用いた。ターボガスの温度は３００℃にセットし、インターフェイスヒーターは６０℃にセットした。データ取得は、選択された反応モニタリング（ＳＲＭ）を利用した。配列番号：１のペプチドにおいて（Ｍ＋２Ｈ）2+種、およびＢＭＳ−５０１１４３（ＩＳ）において（Ｍ＋２Ｈ）2+を表すイオンは、Ｑ１において選択され、３.５×１０-3ｔｏｒｒの圧力の高純度窒素で衝突的に解離し、Ｑ３で後にモニタリングされる特定の生成物イオンを形成した。トラジションおよびボルト数は表４にまとめてある。
2008505899.tif 000217
【０２５３】
標準曲線濃度は、１から１０００ｎＭの範囲で、および４から５０００ｎＭのの範囲で、それぞれ低用量および高用量から得られたインビボサンプルのために用いた。該曲線を 相反する濃度で重みを付けた二次回帰（１／ｘ2）で適合させた。標準液を２つ同時に分析した。品質管理（ＱＣ）サンプルは標準液として同濃度でブランクマトリックス中調製され、各分析セットでも分析した。配列番号：１のペプチドでは、ＱＣの８０％以上の計算された濃度は、見かけ濃度が２０％以内であり、受け入れられるアッセイ行為を示していた。
【０２５４】
データ解析
時間データに対する配列番号：１のペプチドの血漿濃度は、ＫＩＮＥＴＩＣＡ(登録商標)ソフトウェアプログラムを用いて非分画的な方法で分析した。ＣmaxおよびＴmax値は実験的な観察から直接記録した。ＡＵＣ0-nおよびＡＵＣtot値を直線および対数台形加重(trapezoidal summations)の組み合わせを用いて計算した。全身血漿クリアランス（ＣＬP）、終末半減期（t1/2）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、および定常状態の分布容積（Ｖｓｓ）を、動脈内または静脈内投与後、計算した。全身血液クリアランス（ＣＬB）は、全身血漿クリアランスおよび血漿への血液濃度比を用いて計算した。ＣＬBおよびＶｓｓ値は、文献に報告されている標準肝臓血流および全体内水値とそれぞれ比較された。絶対皮下バイオアベイラビリティ（％として表す）は、配列番号：１のペプチドの皮下投与後の用量標準化したＡＵＣ値の比を、静脈内投与後のそれに見なして、見積もられた。
【０２５５】
イヌの薬物動態の結果
静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与に続く雄のビーグル犬における配列番号：１のペプチドの薬物動態的パラメーターを表５にまとめている。
配列番号：１のペプチドは、低い全身クリアランス（０.９±０.２ｍＬ／分／ｋｇ；３.２％の肝臓血流、３１ｍＬ／分／ｋｇ）を示した。定常状態の分布容積（Ｖｓｓ）は、０.１０±０.０３Ｌ／ｋｇ（２度の血管性体液、０.０５Ｌ／ｋｇ；７１％の細胞外体液、０.１４Ｌ／ｋｇ）であり、制限された血管外分配を示した。見積もられた開裂半減期は５.１±０.５時間であり、平均滞留時間は３.０ ± １.０時間であった。６７μｇ／ｋｇの皮下投与後のピーク濃度に達する時間（Ｔmax）は、５.０±１.０時間に生じた。皮下投与後の最大血漿濃度（Ｃmax）は９０±２９ｎＭであった。イヌにおける配列番号：１のペプチドの皮下バイオアベイラビリティは９３±２２％であった。
2008505899.tif 000218
【０２５６】
実施例２６
非経口投与経路
Ａ．以下の組成を有する肺／吸入または経鼻送達用の液体製剤を、以下に記載のように製造する。
2008505899.tif 000219
【０２５７】
量り取られた量の１１量体ペプチドを、最適なｐＨの少量の水に溶かした。カプティソル(Captisol)を薬物溶液に加え、約５分攪拌する。ＮａＯＨおよびＨＣｌを加え、ｐＨを目的の値（５〜８の間）に調整する。精製水を加えて、最終量を１ｍｌにする。保存剤、抗酸化剤、緩衝塩、および共溶媒のような他の不活性成分を、ｐＨ調整前に必要に合わせて加える。水を加え、目的の量にする。
【０２５８】
上記溶液製剤は、シリンジミクロスプレーを用いた細かいスプレー、またはエアジェットもしくは超音波ネブライザーとして、肺に投与できる。上記溶液を計測された経鼻スプレーまたはシリンジミクロスプレーで、鼻腔に送達させることができる。
【０２５９】
Ｂ．以下の組成を有する肺／吸入または経鼻送達用のドライ粉末製剤を、以下に記載のように製造する。
2008505899.tif 000220
【０２６０】
量り取られた量の１１量体ペプチド、好ましくは５ミクロン未満の空気動力学的粒径（ＭＭＡＤ）であるペプチドを、吸入グレード乳糖３０−１００μｍ（Ｒｅｓｐｉｔｏｓｅ、DMV International）と、チューブラ(Turbula、登録商標)ミキサー中５分間ブレンドする。上記のドライ粉末ブレンドを、粉末吸入器またはドライ粉末吸入器で肺まで送達することができる。
【０２６１】
Ｃ．以下の組成を有する肺／吸入または経鼻送達用の懸濁液製剤を、以下に記載のように製造する。
2008505899.tif 000221
【０２６２】
微粉末１１量体ペプチドは、レシチンと高圧ガス（例えば、ヒドロフルオロ炭素（ＨＦＡ’ｓ）の混合物中均一に懸濁させる。該懸濁液は、加圧され、量り取られた用量吸入器に移す。
【０２６３】
Ｄ．ラットにおける溶液製剤からの１１量体ペプチド吸収
2008505899.tif 000222
【０２６４】
１１量体ペプチドは、ペントバルビタールの腹腔内注入で麻酔された雄のスプラーグドーリーラットに（上記の）溶液として投与された。薬物を、肺送達を得るためにシリンジミクロスプレーで気管に導入、または鼻腔内送達用の各鼻孔へのピペッタで点滴した。血液サンプルを、４時間かけてカニューレ処置した頸動脈からヘパリン処理したバキュテーナーへ集めた。血液サンプルを遠心分離し、単離された血漿をＬＣ／ＭＳによる分析まで−８０℃で保存した。血漿−時間濃度曲線から、薬物動態的パラメーターを計算し、表に報告した。３匹のラットを各投与経路に用いた。データは平均±標準偏差として得られる。Ｔmaxは中間値として報告される。
【０２６５】
有用性および組み合わせ
Ａ．有用性
本発明は、新規な１１量体ペプチドを提供し、該ペプチドは優れた特性を有し、例えば、該１１量体ペプチドがＧＬＰ−１受容体に対するアゴニスト活性を有するような、ＧＬＰ−１受容体修飾因子として作用する。更に、本発明の１１量体ペプチドは、ＧＬＰ−１未変性配列と比較して、タンパク分解開裂に対する安定性の上昇を示す。
【０２６６】
従って、本発明の化合物は、様々な症状および障害の治療のために、哺乳動物（ヒトが好ましい）に投与することができる。該症状および障害の治療としては、これらに限らないが、例えば、糖尿病（好ましくは、ＩＩ型糖尿病、耐糖障害、インスリン抵抗性および糖尿病合併症、例えば、腎障害、網膜症、神経障害および白内障）、高血糖症、高インスリン血症、高コレステロール血症、血中脂肪酸またはグリセロールのレベルの上昇、高脂血症、高グリセリド血症、肥満症、創傷治癒、組織虚血、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、ＡＩＤＳ、腸疾患（例えば、壊死性腸炎、微絨毛封入体疾患(microvillus inclusion disease)または腹腔疾患）、炎症性腸症候群、化学療法誘発性腸粘膜萎縮症もしくは障害、拒食症、骨粗鬆症、代謝異常症侯群、並びに炎症性腸疾患（例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎）の進行または発症を治療または遅延することを含む。本発明の化合物はまた、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の血中レベルを上昇するのに使用することができる。
【０２６７】
また、JohannssonによるJ. Clin. Endocrinol. Metab., 82, 727-34 (l997)中に詳述されている「シンドロームＸ」または代謝性症候群とまとめて呼ばれる症状、疾患および病弊は、本発明の化合物を用いて処置することができる。
【０２６８】
Ｂ．組み合わせ
本発明は、その範囲内に、活性成分として少なくとも１つの式Ｉの化合物の治療上の有効量を単独で、または医薬的に許容し得る担体もしくは希釈剤と組み合わせて含有する医薬組成物を含む。適宜、本発明の化合物は、単独で、本発明の他の化合物と組み合わせて、または１またはそれ以上の他の治療剤（例えば、抗糖尿病薬）もしくは他の医薬的に活性な物質と組み合わせて、使用することができる。
【０２６９】
本発明の化合物は、上記の疾患の処置に有用な他のＧＬＰ−１ペプチド受容体修飾因子（例えば、アゴニストまたは部分アゴニストで、例えばペプチドアゴニスト）または上述の障害の治療に有用な他の適当な治療剤（例えば、抗糖尿病薬、抗高血糖薬、抗高脂血症薬／脂質低下薬、抗肥満症薬（食欲の抑制薬／調節薬を含む）および抗高血圧薬）と組み合わせて使用することができる。また、本発明の化合物は、以下の治療剤の１またはそれ以上と組み合わせることができる：不妊症薬、多嚢胞性卵巣症候群の治療剤、増殖障害の治療剤、虚弱症(frailty)の治療剤、関節炎の治療剤、移植における同種移植拒絶反応の予防剤、自己免疫疾患の治療剤、抗ＡＩＤＳ薬、抗骨粗鬆症薬、免疫調節性疾患の治療剤、抗血栓薬、循環器病の治療剤、抗菌剤、抗精神病薬、慢性炎症性腸疾患もしくは症候群の治療剤、および／または拒食症の治療剤。
【０２７０】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な抗糖尿病薬としては、例えばビグアナイド（例えば、メトホルミンまたはフェンホルミン）、グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボースまたはミグリトール）、インスリン（インスリン分泌促進薬またはインスリン増感薬を含む）、メグリチナイド（例えば、レパグリニド）、スルホニル尿素（例えば、グリメピリド、グリブリド、グリクラジド、クロルプロパミドおよびグリピジド）、ビグアナイド／グリブリドの組み合わせ（例えば、グルコバンス（登録商標））、チアゾリジンジオン（例えば、トログリタゾン、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾン）、ＰＰＡＲ−アルファアゴニスト、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマデュアルアゴニスト、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、脂肪酸結合タンパク質の阻害剤（ａＰ２）、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤およびＳＧＬＴ２阻害剤を含む。
【０２７１】
他の適当なチアゾリジンジオンは、三菱社製ＭＣＣ−５５５（米国特許第5,594,0l6に開示）、グラクソウェルカム社製ＧＬ−２６２５７０、エングリタゾン(englitazone)（ＣＰ−６８７２２、ファイザー社製）またはダルグリタゾン(darglitazone)（ＣＰ−８６３２５、ファイザー社製）、イサグリタゾン(isaglitazone)（ＭＩＴ／Ｊ&Ｊ）、ＪＴＴ−５０１（ＪＰＮＴ／Ｐ＆Ｕ）、Ｌ−８９５６４５（メルク社製）、Ｒ−１１９７０２（三共／ＷＬ社製）、ＮＮ−２３４４（Dr. Reddy／ＮＮ製）またはＹＭ−４４０（山之内製）を含む。
【０２７２】
適当なＰＰＡＲアルファ／ガンマデュアルアゴニストとしては、マルグリタザー（ブリストルマイヤーズ・スクイーブ）、ＡＲ−ＨＯ３９２４２（アストラ／ゼネカ社製）、ＧＷ−４０９５４４（グラクソ−ウェルカム社製）、ＫＲＰ２９７（キョーリンメルク社製）、並びにムラカミらによる「A Novel Insulin Sensitizer Acts As a Coligand for Peroxisome Proliferation - Activated Receptor Alpha (PPAR alpha) and PPAR gamma. Effect on PPAR alpha Activation on Abnormal Lipid Metabolism in Liver of Zucker Fatty Rats」, Diabetes 47, 1841-1847 (1998)および米国特許出願番号09/644,598（2000年9月18日出願）（このものは本明細書の一部を構成し、それらに記載されている用量を使用する）に開示するものを含み、そして好ましいと示されている化合物は本明細書中の使用において好ましい。
【０２７３】
適当なａＰ２阻害剤としては、米国特許出願番号09/391,053（1999年9月7日出願）および米国特許出願番号09/519,079（2000年3月6日出願）を含み、これらは明細書に記載する用量を使用する。
【０２７４】
本発明の化合物と組み合わせて使用することができる適当なＤＰＰ４阻害剤としては、WO99/38501、WO99/46272、WO99/67279（PROBIODRUG）、WO99/67278（PROBIODRUG）、WO99/61431（PROBIODRUG）に開示するもの、ＮＶＰ−ＤＰＰ７２８Ａ（１−［［［２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル］アミノ］アセチル］−２−シアノ−（Ｓ）−ピリジン（ノバルティス）（これは、HughesらによるBiochemistry, 38(36), 11597-11603, 1999に開示）、ＬＡＦ２３７、サクサグリプチン、ＭＫ０４３１、ＴＳＬ−２２５（トリプトフィル(tryptophyl)−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（YamadaらによるBioorg. & Med. Chem. Lett. 8 (1998) 1537-1540に記載）、２−シアノピロリジドおよび４−シアノピロリジド（AshworthらによるBioorg. & Med. Chem. Lett., 6巻, No.22, 1163-1166頁および2745-2748頁 (1996)により開示）（これらは、上記刊行物に記載されている用量で使用する）を含む。
【０２７５】
適当なメグリチナイド(meglitinide)としては、ナテグリニド（ノバルティス社製）またはＫＡＤ１２２９（ＰＦ／キッセイ社製）を含む。
【０２７６】
本発明のＧＬＰ−１受容体修飾因子と組み合わせて使用することができる他の適当なグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）の例には、ＧＬＰ−ｌ(１−３６)アミド、ＧＬＰ−１(７−３６)アミド、ＧＬＰ−１(７−３７)（Habenerによる米国特許出願番号5,6l4,492に開示）、並びにＡＣ２９９３（アミリン社製(Amylin))、ＬＹ−３１５９０２（リリー社製）およびＮＮ−２２１１（ノボノルディスク(NovoNordisk)社製）を含む。
【０２７７】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な抗高脂血症薬／脂質低下薬としては例えば、１またはそれ以上のＭＴＰ阻害剤、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＡＣＡＴ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、回腸Ｎａ+／胆汁酸共輸送体阻害剤、ＬＤＬ受容体活性の上方制御剤、胆汁酸金属イオン封鎖剤、コレステロールエステル転送タンパク質阻害剤（例えば、ＣＰ−５２９４１４（ファイザー社製））、および／またはニコチン酸およびその誘導体を含む。
【０２７８】
上記の通り使用することができるＭＴＰ阻害剤としては、米国特許第5,595,872号、米国特許第5,739,135号、米国特許第5,712,279号、米国特許第5,760,246号、米国特許第5,827,875号、米国特許第5,885,983号および米国特許第5,962,440号に開示されているものを含む。
【０２７９】
式Ｉの化合物の１またはそれ以上と組み合わせて使用してもよいＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、メバスタチンおよび関連化合物（米国特許第3,983,140号に開示）、ロバスタチン(メビノリン)および関連化合物（米国特許第4,231,938号に開示）、プラバスタチンおよび関連化合物（例えば、米国特許第4,346,227号に開示）、シンバスタチンおよび関連化合物（米国特許第4,448,784号および4,450,171号に開示）を含む。本明細書中で使用することができる他のＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、これらに限定されないが、フルバスタチン（米国特許第5,354,772号に開示）、セリバスタチン（米国特許第5,006,530号および第5,177,080号に開示）、アトルバスタチン（米国特許第4,681,893号、第5,273,995号、第5,385,929号および第5,686,104号に開示）、アタバスタチン（ニッサン／サンキョー社製のニスバスタチン(nisvastatin)（ＮＫ−１０４））（米国特許第5,011,930号に開示）、ビサスタチン(visastatin)（シオノギ−アストラ／ゼネカ社製（ＺＤ−４５２２））（米国特許第5,260,440号に開示）および関連スタチン化合物（米国特許第5,753,675号に開示）、メバロノラクトン(mevalonolactone)誘導体のピラゾールアナログ（米国特許第4,613,610号に開示）、メバロノラクトン誘導体のインデン誘導体（ＰＣＴ特許出願WO 86/03488に開示）、６−[２−(置換−ピロール−１−イル)−アルキル]ピラン−２−オンおよびその誘導体（米国特許第4,647,576号に開示）、シアル(Searle’)製ＳＣ−４５３５５（３−置換ペンタン二酸誘導体）ジクロロアセテート、メバロノラクトンのイミダゾールアナログ（ＰＣＴ出願WO 86/07054に開示）、３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロパン−ホスホン酸誘導体（仏国特許第2,596,393号に開示）、２,３−ジ置換ピロール、フランおよびチオフェン誘導体（欧州特許出願番号0221025に開示）、メバロノラクトンのナフチルアナログ（米国特許第4,686,237号に開示）、オクタヒドロナフタレン（例えば、米酷特許第4,499,289号に開示）、メビノリンのケトアナログ(ロバスタチン)（欧州特許出願番号0142146 A2に開示）、およびキノリン誘導体およびピリジン誘導体（米国特許第5,506,219号および第5,691,322号に開示）が含まれる。
【０２８０】
好ましい抗高脂血症薬は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アタバスタチンおよびＺＤ−４５２２である。
【０２８１】
また、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素を阻害するのに有用なホスフィン酸化合物（例えば、ＧＢ第2205837号に開示されているもの）は、本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当である。
【０２８２】
本明細書での使用に適当なスクアレンシンセターゼ阻害剤としては、これらに限定されないが、α−ホスホノスルホン（米国特許第5,712,396号に開示）、BillerらによるJ. Med. Chem., 1988, 31巻, No. 10, 1869-1871頁に開示されているもの（これは、イソプレノイド（ホスフィニルメチル）ホスホネートを含む）、並びに他の公知のスクアレンシンセターゼ阻害剤（例えば、米国特許第4,871,721号および第4,924,024号、並びにBiller, S.A., Neuenschwander, K., Ponpipom, M.M.およびPoulter, C.D.によるCurrent Pharmaceutical Design, 2, 1-40 (1996)に開示されているもの）を含む。
【０２８３】
加えて、本明細書での使用に適当な他のスクアレンシンセターゼ阻害剤としては、テルペノイドピロホスフェート（P. Ortiz de MontellanoらによるJ. Med. Chem., 1977, 20, 243-249に開示）、ファルネシルジホスフェートアナログＡおよびプレスクアレンピロホスフェネート（ＰＳＱ−ＰＰ）アナログ（CoreyおよびVolanteによるJ. Am. Chem. Soc., 1976, 98, 1291-1293に開示）、およびホスフィニルホスホネート（McClard, R.W.らによるJ.A.C.S., 1987, 109, 5544によって報告）、およびシクロプロパン（Capson, T.L., PhD dissertation, June, 1987, Dept. Med. Chem. U of Utah, Abstract, Table of Contents, 16, 17, 40-43, 48-51頁, 要約によって報告）を含む。
【０２８４】
式Ｉの化合物の１またはそれ以上と組み合わせて使用することができるフィブル酸誘導体としては、フェノフィブレート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート、クリノフィブラートなど、プロブコールおよび関連化合物（米国特許第3,674,836号に開示）（プロブコールおよびゲムフィブロジルが好ましい）、胆汁酸金属封鎖剤（例えば、コレスチラミン、コレスチポールおよびＤＥＡＥ−セファデックス（セコレックス(Secholex)（登録商標）、ポリセキシド(Policexide)（登録商標））、並びにリポスタビル(lipostabil)( ローヌ・プーラン社)、エーザイ Ｅ−５０５０（Ｎ−置換エタノールアミン誘導体）、イマニキシル(imanixil)（ＨＯＥ−４０２）、テトラヒドロリプスタチン(tetrahydrolipstatin)（ＴＨＬ）、イスチグマスタニルホスホリルコリン(istigmastanylphos-phorylcholine)（ＳＰＣ, ロッシュ）、アミノシクロデキストリン（田辺製薬）、味の素 ＡＪ−８１４（アズレン誘導体）、メリナミド（住友）、Ｓａｎｄｏｚ５８−０３５、アメリカンシアナミド(Cyanamid)ＣＬ−２７７,０８２およびＣＬ−２８３,５４６（ジ置換尿素誘導体）、ニコチン酸、アシピモックス(acipimox)、アシフラン(acifran)、ネオマイシン、ｐ−アミノサリチル酸、アスピリン、ポリ(ジアリルメチルアミン)誘導体（例えば、米国特許第4,759,923号に開示）、四級アミンポリ(ジアリルメチルアンモニウムクロリド)およびイオネン(ionenes)（例えば、米国特許第4,027,009号に開示）、および他の公知の血清中コレステロール低下薬を含む。
【０２８５】
１またはそれ以上の式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができるＡＣＡＴ阻害剤としては、例えばDrugs of the Future 24, 9-15 (1999), (アバシミミベ(Avasimibe)）；「The ACAT inhibitor, Cl-1011 is effective in the prevention and regression of aortic fatty streak area in hamsters」、NicolosiらによるAtherosclerosis (シャノン(Shannon), Irel). (1998), 137(1), 77-85；「The pharmacological profile of FCE 27677: a novel ACAT inhibitor with potent hypolipidemic activity mediated by selective suppression of the hepatic secretion of ApoB100-containing lipoprotein」、Ghiselli, GiancarloによるCardiovasc. Drug Rev. (1998), 16(1), 16-30；「RP 73163: a bioavailable alkylsulfinyl-diphenylimidazole ACAT inhibitor」, Smith, C.らによるBioorg. Med. Chem. Lett. (1996), 6(1), 47-50；「ACAT inhibitors: physiologic mechanisms for hypolipidemic and anti-atherosclerotic activities in experimental animals」, Krauseらによる編: Ruffolo, Robert R., Jr.；Hollinger, Mannfred A.によるInflammation: Mediators Pathways (1995), 173-98, Publisher: CRC, Boca Raton, Fla.；「ACAT inhibitors: potential anti-atherosclerotic agents」, SliskovicらによるCurr. Med. Chem. (1994), 1(3), 204-25；「Inhibitors of acyl-CoA: cholesterol O-acyl transferase (ACAT) as hypocholesterolemic agents. 6. The first water-soluble ACAT inhibitor with lipid-regulating activity. Inhibitors of acyl-CoA: cholesterol acyltransferase (ACAT). 7. Development of a series of substituted N-phenyl-N'-[(1- phenylcyclopentyl)methyl]ureas with enhanced hypocholesterolemic activity」, StoutらによるChemtracts: Org. Chem. (1995), 8(6), 359-62中に開示されているもの、またはＴＳ−９６２（大正製薬製）を含む。
【０２８６】
抗高脂血症薬は、ＬＤ２受容体活性の上方調節因子（例えば、ＭＤ−７００（大正製薬製）およびＬＹ２９５４２７（イーライリリー製））であってもよい。
【０２８７】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当なコレステロール吸収阻害剤としては例えば、ＳＣＨ４８４６１（Schering-Plough製）、並びにAtherosclerosis 115, 45-63 (1995)およびJ. Med. Chem. 41, 973 (1998)中に開示されているものを含む。
【０２８８】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な回腸Ｎａ+／胆汁酸共輸送体阻害剤としては、Drugs of the Future, 24, 425-430 (1999)中に開示されているものを含む。
【０２８９】
１またはそれ以上の式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができるリポキシゲナーゼ阻害剤としては、１５−リポキシゲナーゼ（１５−ＬＯ）阻害剤（例えば、ベンズイミダゾール誘導体（例えば、WO 97/12615に開示））、１５−ＬＯ阻害剤（例えば、WO 97/12613に開示）、イソチアゾロン(isothiazolone)（例えば、WO96/38144に開示）、および１５−ＬＯ阻害剤（例えば、Sendobryらによる「Attenuation of diet-induced atherosclerosis in rabbits with a highly selective 15-lipoxygenase inhibitor lacking significant antioxidant properties」、Brit. J. Pharmacology (1997) 120, 1199-1206およびCornicelliらによる「15-Lipoxygenase and its Inhibition: A Novel Therapeutic Target for Vascular disease」、Current Pharmaceutical Design, 1999, 5, 11-20に開示）を含む。
【０２９０】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な降圧剤としては例えば、ベータアドレナリン作動性ブロッカー、カルシウムチャンネルブロッカー（Ｌ−タイプおよびＴ−タイプ；例えばジルチアゼム、ベラパミル、ニフェジピン、アムロジピンおよびミベフラジル(mybefradil)、利尿薬（例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、フルメチアジド(flumethiazide)、ヒドロフルメチアジド、ベンゾフルメチアジド、メチルクロロチアジド、トリクロロメチアジド、ポリチアジド、ベンゾチアジド、エタクリル酸トリクリナフェン(tricrynafen)、クロルサリドン(chlorthalidone)、フロセミド、ムソリミン(musolimine)、ブメタニド、トリアムトレン(triamtrenene)、アミロライド、スピロノラクトン）、レニン阻害剤、ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル、ゾフェノプリル(zofenopril)、フォシノプリル(fosinopril)、エナラプリル、セラノプリル(ceranopril)、シラゾプリル(cilazopril)、デラプリル、ペントプリル(pentopril)、キナプリル、ラミプリル、リシノプリル）、ＡＴ−１受容体アンタゴニスト（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、バルサルタン）、ＥＴ受容体アンタゴニスト（例えば、シタキセンタン(sitaxsentan)、アトルセンタン(atrsentan)および米国特許第5,612,359号および第6,043,265号に開示されている化合物）、デュアルＥＴ／ＡＩＩアンタゴニスト（例えば、WO 00/01389に開示されている化合物）、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤、バソペプシダーゼ(vasopepsidase)阻害剤（デュアルＮＥＰ−ＡＣＥ阻害剤）（例えば、オパマトリラット(omapatrilat)およびゲモパトリラット(gemopartrilat)、および硝酸塩を含む。
【０２９１】
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適当な抗肥満薬としては、例えばＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２またはＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニスト、ＭＣＨアンタゴニスト、ＧＨＳＲアンタゴニスト、ＣＲＨアンタゴニスト、ベータ３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体ベータ薬物、ＣＢ−１ アンタゴニストおよび／又は摂食障害剤を含む。
【０２９２】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができるベータ３アドレナリン作動性アゴニストは、ＡＪ９６７７（武田／大日本)、Ｌ７５０３５５（メルク）、ＣＰ３３１６４８（ファイザー）、または他の公知のベータ３アゴニスト（例えば、米国特許第5,541,204号、第5,770,615号、第5,491,134号、第5,776,983号、および第5,488,064号）を含むが、ＡＪ９,６７７、Ｌ７５０,３５５およびＣＰ３３１６４８が好ましい。
【０２９３】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができるリパーゼ阻害剤としては例えば、オルリスタット(orlistat)またはＡＴＬ−９６２（Alizyme）を含むが、オルリスタットが好ましい。
【０２９４】
適宜式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができるセロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤は、シブトラミン(sibutramine)、トピラメート(topiramate)（ジョンソンアンドジョンソン社製)またはアクソキン(axokine)（Regeneron）を含むが、シブトラミンおよびトピラメートが好ましい。
【０２９５】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができる甲状腺受容体ベータ化合物としては例えば、甲状腺受容体リガンド（例えば、WO97/21993（U. Cal SF)、WO99/00353 (KaroBio)およびGB98/284425 (KaroBio)中に開示されているもの）を含むが、KaroBio出願の化合物が好ましい。
【０２９６】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＣＢ−１アンタゴニストとしては例えば、ＣＢ−１アンタゴニストおよびリモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ）を含む。
【０２９７】
ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストの例には、それぞれＰＹＹ（３−３６）および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）が含まれる。
【０２９８】
適宜本発明の化合物と組み合わせて使用することができる摂食障害剤は、デキサムフェタミン(dexamphetamine)、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンまたはマジンドールを含むが、デキサムフェタニンが好ましい。
【０２９９】
適当な抗精神病薬の例としては、クロザピン、ハロペリドール、オランザピン（Zyprexa(登録商標)）、プロザック（Prozac(登録商標)）およびアリピプラゾール(aripiprazole)（Abilify(登録商標)）を含む。
【０３００】
上記の特許および特許出願は、本明細書の一部を構成する。
【０３０１】
本発明の化合物と組み合わせて使用する場合に、上記の他の治療薬は例えば、上記の特許中に記載されている通りまたはさもなければ当該分野の当業者によって決定される通り、医師の卓上参考書(Physician's Desk Reference)に示す量で使用することができる。
【０３０２】
用量および製剤化
適当な式Ｉの１１量体ペプチドは、糖尿病または他の関連疾患を治療するために、該化合物を単独でおよび／または医薬製剤の形態で許容し得る担体と一緒に混合して、患者に投与することができる。糖尿病の治療における当該分野の当業者は、それらの治療が必要な哺乳動物（ヒトを含む）への該化合物の用量および投与経路を容易に決定することができる。投与経路としては、これらに限定されないが、例えば経口、口腔内、直腸、経皮、バッカル、鼻腔内、肺、皮下、筋肉内、皮内、舌下、結腸内(intracolonic)、眼球内(intraoccular)、静脈内、または腸投与を含む。該化合物は、許容される薬務（Finglらによるin The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ch. 1, p.1, 1975; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18版., Mack Publishing Co, Easton, PA, 1990）に基づいく投与経路に応じて製剤化する。
【０３０３】
本発明の医薬的に許容し得る１１量体ペプチド組成物は、多数の剤形（例えば錠剤、カプセル剤（このものの各々は、徐放性または時間放出性の製剤を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、インシトゥーゲル剤、ミクロスフェア剤、結晶複合体、リポソーム剤、マイクロ乳濁剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、エロゾルスプレー剤、および乳濁剤）で投与することができる。本発明の組成物はまた、経口、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、経皮または筋肉内の形態で、全て医薬分野の当業者にとってよく知られる剤形を用いて、投与することもできる。該組成物は、単独で投与することができるが、しかし通常、選択した投与の経路および標準的な薬務に基づいて、医薬的な担体と一緒に投与される。
【０３０４】
本発明の組成物の投与計画は、当然に公知の因子（例えば、特定の薬物の薬力学的な性質、並びに投与の様式および経路；レシピエントの種類、年齢、性別、健康、医学上の病状、および体重；症候群の性質および大きさ；同時の治療の種類；処置の回数；投与経路；患者の腎臓機能および肝臓機能；所望する効果）に応じて変わるであろう。医師または獣医師は、該病状の進行を予防し、カウントし(counter)、または抑止するのに必要とされる薬物の有効量を決定し、そして処方することができる。
【０３０５】
一般的なガイダンスによって、該活性成分の１日経口投与量は、示された効果のために使用する場合には、約０．００１〜１０００ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり、１日当たり約０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇの間が好ましく、約０．６〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の間が最も好ましい。静脈内の場合には、示された効果のために使用する場合には、該活性成分の１日投与量は、一定の速度の注入の期間で毎分／体重Ｋｇ当たり、０．００１ｎｇ〜１００．０ｎｇの間の範囲である。それらの一定の静脈内注入は、毎分／体重Ｋｇ当たり０．０１ｎｇ〜５０ｎｇの速度で投与することが好ましく、毎分／体重Ｋｇ当たり０．１ｎｇ〜１０．０ｍｇであることが最も好ましい。本発明の組成物は、１回の１日投与量で投与することができたり、あるいは全１日投与量を１日、２回、３回または４回の分けた用量で投与することができる。本発明の組成物はまた、デポ製剤によって投与することもでき、これにより所望するならば日／週／月の期間にわたって該薬物の持続性の放出が可能となる。
【０３０６】
本発明の組成物は、適当な鼻腔内ベヒクルの局所使用による鼻腔内形態で、または、または経皮皮膚パッチを用いる経皮経路によって、投与することができる。経皮送達系の形態で投与する場合には、薬物投与は当然に薬物投与計画の間、間欠よりも連続であろう。
【０３０７】
本発明の組成物は典型的に、投与の意図する形態（すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、高圧ガスのあるなしで製造されるエアロゾルスプレー剤、およびシロップ剤である）に関して適当に選択し、そして通常の薬務と一致する、適当な医薬的な希釈剤、賦形剤または担体（これらは、まとめて本明細書中で医薬的担体と呼ぶ）と一緒に混合物で投与する。
【０３０８】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与の場合には、活性薬物構成物は、経口で非毒性の医薬的に許容される、不活性な担体と組み合わせることができ、該担体としては、これらに限定されないが、例えば、乳糖、デンプン、ショ糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸ジカルシウム、硫酸カルシウム、マンニトールおよびソルビトールを含む。液体形態での経口投与の場合には、該経口薬物組成物は、いずれかの経口で非毒性の医薬的に許容し得る不活性な担体（これらに限定されないが、例えば、エタノール、グリセロールおよび水を含む）と組み合わせることができる。その上、所望したりまたは必要な場合には、適当な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤をまた、該混合物中に含有することもできる。適当な結合剤としては、これらに限定されないが、例えば、デンプン、ゼラチン、天然の糖（例えば、グルコース、ベータ−ラクトース、コーン甘味料を含むが、これらに限定されない）、天然および合成のガム（例えば、アラビアガム、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールおよびワックス）を含む。これらの剤形における滑沢剤としては、例えばオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムを含む。崩壊剤としては、これらに限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、およびキサンタンガムを含む。
【０３０９】
本発明の組成物はまた、混合型ミセルまたはリポソームの送達システム（例えば、小さい単層小胞、大きな単層小胞および多重層小胞）の形態で投与することもできる。リポソームは、様々なリン脂質（例えば、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から生成することができる。浸透エンハンサーを、薬物の吸収を増大するために加えることができる。
【０３１０】
プロドラッグは、薬剤の多数の望ましい性質（すなわち、溶解度、アベイラビリティ、製剤化など）を増大させることが知られるので、本発明の化合物はプロドラッグ形態で送達することができる。従って、本発明の化合物は、本特許請求する化合物のプロドラッグ、そのものを送達する方法、およびそのものを含有する組成物にまで及ぶことを意図する。
【０３１１】
本発明の組成物はまた、ターゲットとすることができる薬物担体としての可溶性ポリマーと一緒に組み合わせることもできる。該ポリマーは、ポリビニル−ピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド−ポリリシンを含むことができる。更に、本発明の組成物は、薬物（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロン(polyepsilon)カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル(polyorthoesters)、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性のブロック共重合体）の制御された放出を達成する際に有用な生分解性ポリマークラスと組み合わせることができる。
【０３１２】
投与に適した剤形（医薬組成物）は、用量単位当たり活性成分の約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムを含むことができる。これらの医薬組成物中、該活性成分は通常、組成物の総重量ベースで重量比約０．５％〜９５％の量で存在する。
【０３１３】
ゼラチンカプセル剤は、活性成分および粉末状担体（例えば、乳糖、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸）を含み得る。同様な希釈物を用いて、圧縮した錠剤を製造することができる。錠剤およびカプセル剤は共に、何時間にもわたって薬物の連続的な放出を得るために、徐放性製品として製造することができる。圧縮した錠剤は、いずれかの望ましくない味をマスクしそして空気から錠剤を防止するために、糖衣またはフィルムコーティングしたり、あるいは胃腸管中での選択的な崩壊のために腸溶コーティングすることができる。
【０３１４】
経口投与のための液体剤形は、患者の許容性を増大するために、着色剤および芳香剤を含むことができる。
【０３１５】
通常、水、適当な油、生理食塩水、デキストロース（グルコース）水溶液、および関連当溶液およびグリコール（例えば、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコール）は、非経口液剤のための適当な担体である。非経口投与のための液剤は、活性成分の水溶性塩、適当な安定化剤、および必要ならば緩衝化物質を含むことが好ましい。抗酸化剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸）の単独または組み合わせは、適当な安定化剤である。クエン酸およびその塩、並びにＥＤＴＡナトリウムをまた使用する。また、非経口溶液は、保存剤（例えば、ベンズアルコニウムクロリド、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノール）を含むことができる。
【０３１６】
適当な医薬的な担体は、本分野における標準的な刊行物である、Remington： The Science and Practice of Pharmacy, 19版, Mack Publishing Company, 1995中に記載されている。
【０３１７】
本発明の組成物の投与のための代表的な有用な医薬的な剤形は、以下に示す通り例示することができる。
【０３１８】
カプセル剤
多数の単位カプセル剤を、標準的な２片の硬カプセル剤を、粉末状の活性成分（１００ミリグラム）、乳糖（１５０ミリグラム）、セルロース（５０ミリグラム）およびステアリン酸マグネシウム（６ミリグラム）と一緒に充填することによって製造することができる。
【０３１９】
軟ゼラチンカプセル剤
消化性油（例えば、大豆油、綿実油またはオリーブ油）中の活性成分の混合物を調製し、そしてこのものをゼラチン中に容積移送式ポンプ(positive displacement pump)によって注入して、活性成分（１００ミリグラム）を含有する軟カプセルを得てもよい。該カプセル剤は洗浄し、そして乾燥するべきである。
【０３２０】
錠剤
錠剤を通常の方法によって製造し、その結果、用量単位は例えば、活性成分（１００ミリグラム）、コロイド状二酸化ケイ素（０．２ミリグラム）、ステアリン酸マグネシウム（５ミリグラム）、微結晶性セルロース（２７５ミリグラム）、デンプン（１１ミリグラム）および乳糖（９８．８ミリグラム）である。適当なコーティングを使用して、嗜好性を増大したり、または吸収を遅らせることができる。
【０３２１】
注入剤
本発明の１１量体ペプチド組成物の注射剤は、整った体内に適用されているような賦形剤の使用を要求してもしなくてもよい。これらの賦形剤には、これらに限らないが、溶媒および共溶媒、溶解補助剤、乳濁剤または濃化剤、キレート化剤、抗酸化剤および還元剤、抗菌保存剤、緩衝剤およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および強度調整剤および特別の添加剤が含まれる。注射製剤は無菌で、パイロジェンフリーで、溶液の場合、粒子の問題がない必要がある。
【０３２２】
投与に適した非経口組成物は例えば、共溶媒または他の賦形剤を含むか含まない医薬的に許容されるバッファー中１．５重量％の活性成分を撹拌することによって製造することができる。該溶液を、塩化ナトリウムを用いて等張とし、そして減菌化するべきである。
【０３２３】
懸濁剤
水性懸濁剤を、経口および／または非経口投与のために製造することができ、その結果、例えば各５ｍＬは細かく分けた活性成分（１００ｍｇ）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（２０ｍｇ）、安息香酸ナトリウム（５ｍｇ）、ソルビトール溶液、U.S.P.（１．０ｇ）、およびバニリン（０．０２５ｍＬ）または他の芳香剤を含む。
【０３２４】
生分解性微粒子
注射による投与に適した徐放性非経口組成物は例えば、適当な生分解性ポリマーを溶媒中に溶解し、該ポリマー溶液に含有する活性成分を加え、そして該溶媒をマトリックスから除去することによって調製し、その結果、活性成分がマトリックス全般に分布した該ポリマーのマトリックスを形成することができる。
【０３２５】
明らかに、本発明の多数の改変および変化が上記の教示に照らして可能である。従って、特許請求の範囲内で、本発明は本明細書中に具体的に記載する以外に実施することができると、理解される。
【０３２６】
本発明は、本発明の個別の態様の単なる例示として意図される、記載する具体的な実施態様による範囲内に限定されるものではない。本明細書中に示したりおよび記載するものに加えて、機能的に等価な方法および成分は、上記の記載および添付する図面から当該分野の当業者にとって明らかであろう。それらの改変は、特許請求の範囲の範囲内であると意図する。本明細書で引用するすべての引例は、本明細書にそのまま引用される。
【図面の簡単な説明】
【０３２７】
【図１】図１は、腹腔内ブドウ糖耐性テスト（ｉｐＧＴＴ）において、化合物Ｉの皮下注射による血漿グルコースの効果（肥満のｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図２】図２は、ｉｐＧＴＴにおいて、化合物Ｉの皮下注射による血漿インスリンの効果（ｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図３】図３は、ｉｐＧＴＴにおいて、配列番号１のポリペプチドの皮下注射による血漿グルコースの効果（ｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【図４】図４は、ｉｐＧＴＴにおいて、配列番号５８のポリペプチドの皮下注射による血漿グルコースの効果（ｏｂ／ｏｂマウスにおける）を図示する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
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【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
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【国際調査報告】
2008505899.tif 000225
2008505899.tif 000226