(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒト血清アルブミンを用いずに製造することができる、ＧＲＦ（成長ホルモン放出因子）を含有する安定な凍結乾燥製剤の提供。【解決手段】ＧＲＦ、ポリソルベート８０並びに二糖類、マンニトール、ポリエチレングリコール及び塩化ナトリウムからなる群より選ばれる少なくとも１つの賦形剤を含有する凍結乾燥製剤。ポリソルベート８０の含量がＧＲＦの含量に対して０．０７５〜０．６２５（Ｗ/Ｗ）である。二糖類の含量がＧＲＦの含量に対して２５〜３００（Ｗ/Ｗ）である。二糖類がトレハロース、スクロース、マルトースまたは乳糖である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト血清アルブミンを含まないＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ含有凍結乾燥製剤。
【請求項２】
Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ、ポリソルベート８０ならびに二糖類、マンニトール、ポリエチレングリコールおよび塩化ナトリウムからなる群より選ばれる少なくとも１つの賦形剤を含有する請求項１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項３】
ポリソルベート８０の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して０．０７５〜０．６２５（Ｗ/Ｗ）である請求項２に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項４】
ポリソルベート８０の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して０．１２５〜０．５（Ｗ/Ｗ）である請求項３に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５】
賦形剤として二糖類を含む請求項２〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６】
二糖類の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２５〜３００（Ｗ/Ｗ）である請求項５に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７】
二糖類の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して５０〜２５０（Ｗ/Ｗ）である請求項６に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８】
二糖類がトレハロース、スクロース、マルトースまたは乳糖である請求項５〜７のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項９】
二糖類がトレハロース、スクロースまたは乳糖である請求項８に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１０】
賦形剤としてマンニトールまたはポリエチレングリコールを含む請求項２〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１１】
マンニトールまたはポリエチレングリコールの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２００〜３００（Ｗ/Ｗ）である請求項１０に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１２】
マンニトールまたはポリエチレングリコールの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２５０（Ｗ/Ｗ）である請求項１１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１３】
賦形剤がマンニトールである請求項１０〜１２のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１４】
賦形剤として塩化ナトリウムを含む請求項２〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１５】
塩化ナトリウムの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２５〜１００（Ｗ/Ｗ）である請求項１４に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１６】
塩化ナトリウムの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して５０（Ｗ/Ｗ）である請求項１５に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１７】
４０℃で４週間保存した後の性状が白色の塊状粉末であり、かつＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量が保存当初の８０％以上である請求項１〜１６のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１８】
Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒがＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ放出活性を示すペプチドである請求項１〜１７のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１９】
Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒが配列番号１：Tyr - Ala - Asp - Ala - Ile - Phe - Thr - Asn - Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - Gly - Glu - Leu - Ser - Ala - Arg - Lys - Leu - Leu - Gln - Asp - Ile - Met - Ser - Arg - Glu - Gln - Gly - Glu - Ser - Asn - Gln - Glu - Arg - Gly - Ala - Arg - Ala - Arg - LeuNH2で表されるペプチドの酢酸塩である請求項１〜１７のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＲＦ（Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ：成長ホルモン放出因子）を含有する安定な凍結乾燥製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＲＦは、視床下部から分泌されるペプチドであり、その受容体に作用して下垂体前葉からのＧＨ（Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ：成長ホルモン）の分泌を促進することができる。ＧＲＦは水溶液中で化学的分解を受け易く、その原因としてＧＲＦを構成するアミノ酸の２７位メチオニンが酸化されやすいことが知られている。
ＧＲＦをはじめとするタンパク質やペプチドを患者に提供するためには、製剤として適切な期間、活性を保持する必要がある。しかし、これらの製剤は特に水溶液での安定性を保つことが困難である場合が多いため、しばしば、水溶液よりも良好に活性を保持する凍結乾燥製剤として提供される。そして、使用する場合は、例えば注射用水や生理食塩水等に凍結乾燥製剤を溶解して、水溶液状態に戻して使用する。
ＧＲＦ製剤は、ヒト血清アルブミンまたはグリシンを添加することにより、ＧＲＦの構成アミノ酸であるメチオニンの酸化を防ぎ、安定な凍結乾燥製剤が得られる（特許文献１参照）。また、ヒト血清アルブミンは、ＧＲＦ製剤において保存容器又は投与に用いられる装置へのＧＲＦの吸着を減少させるためにも用いられる。
ヒト血清アルブミンは、ＧＲＦ製剤のみならず、血液製剤、抗体、ホルモン、その放出刺激因子、ワクチン等を主たる成分（主薬）とする医療上重要な医薬品に適用（処方）されている添加剤である。ヒト血清アルブミンを添加剤として使用する目的には、例えば血液製剤においては各血液成分の安定化、タンパク質あるいはペプチド類を主薬とするバイオ製剤においてはその主薬成分の安定化、類縁物質生成の抑制、凍結乾燥医薬品における賦形剤、主薬の容器表面への吸着防止等が挙げられる。その効果は、特にタンパク質あるいはペプチド製剤において著しい効果が認められている。
しかしながら、ヒト血清アルブミンは、医療上有効であるものの、その利用に当たっては多くの改良すべき点を持っているのが実情である。まず、ヒト血清アルブミンは、主に献血によって取得されるヒト由来原材料であるためにヒト血液由来の感染症伝播リスクを完全に排除することができず、患者に有害な副作用を引き起こす可能性がある。また、副作用を引き起こし得る夾雑物を最小限にするためには、高度に精製されたヒト血清アルブミンを使用することが必要であり、ヒト血清アルブミンの品質に対して多大な注意を払わなければならない。
さらに、ヒト血清アルブミンを用いた医薬品を含む生物由来製品の製造には、その製造記録の数十年に亘る保管が義務付けられており、製造メーカーには多大な管理負担がある（非特許文献１参照）。また、生物由来製品を扱う医療機関、販売業者、賃貸業者等に対しても、同様に製-品に関する記録及び保存が義務付けられているため多大な管理負担がある（非特許文献２参照）。
加えて、ヒト血清アルブミンの供給量はその時々の献血量に依存することとなるため、ヒト血清アルブミンの供給が、ヒト血清アルブミンを添加剤として使用している医薬品の供給に影響する可能性がある。
近年、ヒト血清アルブミンによる感染性排除並びにヒト血清アルブミンの安定供給を目的として、遺伝子組換えヒト血清アルブミンの開発も顕著である（非特許文献３および非特許文献４参照）。しかし、その生産に利用するピキア酵母に対するアレルギー発現が懸念されるため、遺伝子組換えヒト血清アルブミンの使用においても安全性への配慮が不可欠と考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開昭６２−１４９６２３
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】薬事法施行規則（昭和３６年厚生省令第1号）第七章  生物由来製品の特例
【非特許文献２】薬事法第６８条
【非特許文献３】遺伝子組換え人血清アルブミン（ｒＨＳＡ）製剤（メドウェイ注）の開発（大谷渡、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅｓ  Ｖｏｌ．  ４６  Ｎｏ．２  ２００８、９４―９９）
【非特許文献４】日経バイオ年鑑２０１２（日経バイオテク編、日経ＢＰ社、２０１１、４０２−４１０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、ＧＲＦ製剤としてヒト血清アルブミンを用いない代替処方による安定供給を行うこと、すなわちヒト血清アルブミンを用いずに、長期保存が可能なＧＲＦの凍結乾燥製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、医薬品添加剤として実績が認められている賦形剤（二糖類、アルコール類（マンニトールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ））または塩化ナトリウム）と、同様に医薬品添加剤使用実績のある界面活性剤であるポリソルベート８０を同時に添加する方法を見出した。
この方法により、ヒト血清アルブミン使用時と同様に長期保存が可能なＧＲＦ製剤を製するに至った。具体的に長期保存が可能とは、４０℃で４週間保存した後のＧＲＦ製剤が、白色の塊状をした粉末（白色塊状粉末）の性状を示し、ＧＲＦ含量（凍結乾燥製剤調製時のＧＲＦの含量に対する割合：％）が８０％以上であることを指す。更には再溶解時のｐＨがｐＨ３．０以上６．５以下かつ薬液調製時ｐＨの±０．７の範囲であることが望ましい。また、ＧＲＦの類縁物質であるメチオニン酸化体Ａ及びＢの生成量が少ない（各々のピーク面積％が０．３％以下）ことが望ましい。なお、本製剤の性状「白色の塊状をした粉末（白色塊状粉末）」とは具体的に、白色の凍結乾燥ケーキを形成する医薬品の組成物を示す。
本発明の方法はＧＲＦ製剤のみならず、ヒト血清アルブミンを用いて製造されている血液製剤、抗体、ホルモン、その放出刺激因子、ワクチン等の製剤の代替方法として使用できる可能性がある。
すなわち、本発明は、以下のものに関する。
【０００７】
［項１］  ヒト血清アルブミンを含まないＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ含有凍結乾燥製剤。
【０００８】
［項２］  Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ、ポリソルベート８０ならびに二糖類、マンニトール、ポリエチレングリコールおよび塩化ナトリウムからなる群より選ばれる少なくとも１つの賦形剤を含有する項１に記載の凍結乾燥製剤。
【０００９】
［項３］  ポリソルベート８０の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して０．０７５〜０．６２５（Ｗ/Ｗ）である項２に記載の凍結乾燥製剤。
【００１０】
［項４］  ポリソルベート８０の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して０．１２５〜０．５（Ｗ/Ｗ）である項３に記載の凍結乾燥製剤。
【００１１】
［項５］  賦形剤として二糖類を含む項２〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００１２】
［項６］  二糖類の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２５〜３００（Ｗ/Ｗ）である項５に記載の凍結乾燥製剤。
【００１３】
［項７］  二糖類の含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して５０〜２５０（Ｗ/Ｗ）である項６に記載の凍結乾燥製剤。
【００１４】
［項８］  二糖類がトレハロース、スクロース、マルトースまたは乳糖である項５〜７のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００１５】
［項９］  二糖類がトレハロース、スクロースまたは乳糖である項８に記載の凍結乾燥製剤。
【００１６】
［項１０］  賦形剤としてマンニトールまたはポリエチレングリコールを含む項２〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００１７】
［項１１］  マンニトールまたはポリエチレングリコールの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２００〜３００（Ｗ/Ｗ）である項１０に記載の凍結乾燥製剤。
【００１８】
［項１２］  マンニトールまたはポリエチレングリコールの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２５０（Ｗ/Ｗ）である項１１に記載の凍結乾燥製剤。
【００１９】
［項１３］  賦形剤がマンニトールである項１０〜１２のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００２０】
［項１４］  賦形剤として塩化ナトリウムを含む項２〜４のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００２１】
［項１５］  塩化ナトリウムの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して２５〜１００（Ｗ/Ｗ）である項１４に記載の凍結乾燥製剤。
【００２２】
［項１６］  塩化ナトリウムの含量がＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量に対して５０（Ｗ/Ｗ）である項１５に記載の凍結乾燥製剤。
【００２３】
［項１７］  ４０℃で４週間保存した後の性状が白色の塊状粉末であり、かつＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒの含量が保存当初の８０％以上である項１〜１６のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００２４】
［項１８］  Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒがＧｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ放出活性を示すペプチドである項１〜１７のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００２５】
［項１９］  Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒが配列番号１：Tyr - Ala - Asp - Ala - Ile - Phe - Thr - Asn - Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - Gly - Glu - Leu - Ser - Ala - Arg - Lys - Leu - Leu - Gln - Asp - Ile - Met - Ser - Arg - Glu - Gln - Gly - Glu - Ser - Asn - Gln - Glu - Arg - Gly - Ala - Arg - Ala - Arg - LeuNH2で表されるペプチドの酢酸塩である項１〜１７のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【発明の効果】
【００２６】
本発明により、ヒト血清アルブミンを用いることなく長期間安定なＧＲＦの凍結乾燥製剤が得られる。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下に本発明の実施形態について詳細に説明する。
本発明における「ＧＲＦ」とはＧＨ放出活性を示すペプチドを表す。通常、アミノ酸が４４個、４０個、３７個等からなる数種類のペプチド（いずれもＮ末端側に全く同一構造が組み込まれたもの）が知られている（Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ６（１９８３）３４３−３５３参照）。好ましくは配列番号１で表されるアミノ酸４４個からなるペプチドの酢酸塩である。
配列番号１：
Tyr - Ala - Asp - Ala - Ile - Phe - Thr - Asn - Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - Gly - Glu - Leu - Ser - Ala - Arg - Lys - Leu - Leu - Gln - Asp - Ile - Met - Ser - Arg - Glu - Gln - Gly - Glu - Ser - Asn - Gln - Glu - Arg - Gly - Ala - Arg - Ala - Arg - LeuNH2
本発明における「ポリソルベート８０」とは、非イオン性界面活性剤の一つであり、モノオレイン酸ソルビタン１モルに約２０モルの酸化エチレン基がエーテル結合したものである。モノオレイン酸ソルビタンとは無水ソルビトールの水酸基の一部をオレイン酸でエステル化したものを表す。ポリソルベート８０のＩＵＰＡＣ名は「ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート」である。通常、医薬品添加剤として用いることができ、水溶性で安全性の高い乳化剤として軟膏剤（クリーム）に用いられるほか、油溶性ビタミンの可溶化剤として注射剤やドリンク剤にも用いられている。本発明におけるポリソルベート８０の好ましい含量はＧＲＦの含量に対して０．０７５〜０．６２５（Ｗ/Ｗ）であり、より好ましくは０．１２５〜０．５（Ｗ/Ｗ）である。
本発明における好ましい「賦形剤」は、アルコール類、二糖類または塩化ナトリウムであり、より好ましくはマンニトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、乳糖、マルトース、スクロース、トレハロースまたは塩化ナトリウムであり、さらにより好ましくはマンニトール、乳糖、スクロース、トレハロースまたは塩化ナトリウムである。
本発明における「アルコール類」とは、炭化水素の水素原子を水酸基で置換した化合物を指し、一般式Ｒ−ＯＨで表される。但し、水酸基がベンゼンに直接結合したものはフェノール類であってアルコール類ではない。具体的にはマンニトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等が挙げられ、好ましくはマンニトールである。本発明におけるマンニトールまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の好ましい含量はＧＲＦの含量に対して２００〜３００（Ｗ/Ｗ）であり、より好ましくは２５０（Ｗ/Ｗ）である。
本発明における「マンニトール」とは、マンノース（グルコースのエピマー）の糖アルコールである。医薬品添加物規格では「Ｄ−マンニトール」と表す。市販品としては「マンニット」（三菱商事フードテック）などがある。
本発明における「ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）」とは、一般式‐［‐ＣＨ２ＣＨ２Ｏ-］ｎ‐で示される線状ポリエーテルである。重合条件によって分子量２００〜１００００以上のものが知られており、液体からロウ状の堅い固体に至るまで種々の異なる性質を持つ。ＰＥＧの市販品としては、医薬品添加物辞典２００７（日本医薬品添加剤協会編、薬事日報社発行）に多くのものが記載されている。
本発明における「二糖類」とは、単糖二つがグリコシド結合で繋がったものを表し、具体的にはトレハロース、スクロース、乳糖、ラクツロース、マルトース、セロビオース等が挙げられ、好ましくはトレハロース、スクロースまたは乳糖が挙げられる。本発明における二糖類の好ましい含量はＧＲＦの含量に対して２５〜３００（Ｗ/Ｗ）であり、より好ましくは５０〜２５０（Ｗ/Ｗ）である。
本発明における「トレハロース」とは、２つのグルコースが１，１−グリコシド結合により結合した二糖類である。医薬品添加物規格では「トレハロース」と表す。市販品としては「トレハロースＧ」「トレハロースＳＧ」（共に林原生物化学研究所）、「トレハロース」（旭化成ケミカルズ）がある。
本発明における「スクロース」とはショ糖とも呼ばれ、グルコースとフルクトースがＣ１の還元性ＯＨ基で結合した、還元性を有さない二糖類である。医薬品添加物規格では「白糖」「精製白糖」と表される場合がある。市販品としては「スクロース」（ナカライテスク）、「精製白糖（製造専用）」（和光純薬）などがある。
本発明における「乳糖」とは、乳から得られる天然の二糖類を表し、１個のグルコース単位と１個のガラクトース単位からなる、α―及びβ―乳糖一水和物の混合物である。医薬品添加物規格として「乳糖水和物」と表される場合がある。市販品としては「乳糖一水和物（２００Ｍ）」（ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ）、「ＦＡＳＴ−ＦＬＯ」（鍋林）などがある。
本発明における「マルトース」とは、２つのα-グルコースがα-１，４‐グリコシド結合により結合した還元性を有する二糖類である。麦芽糖とも呼ばれる。医薬品添加物規格では「マルトース水和物」と表す。市販品としては「日食結晶マルトース」（日本食品化工）などがある。
本発明における「塩化ナトリウム」とは、ＮａＣｌの固体である。市販品としては「塩化ナトリウム」（大塚化学）などがある。本発明における塩化ナトリウムの好ましい含量はＧＲＦの含量に対して２５〜１００（Ｗ/Ｗ）であり、より好ましくは５０（Ｗ/Ｗ）である。
本発明の凍結乾燥製剤において、凍結乾燥前のＧＲＦ溶液のｐＨは、ｐＨ３．０〜６．５であり、好ましくはｐＨ３．２〜４．２である。弱酸性条件の安定性を増加させるための緩衝剤としては、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、およびこれらの組み合わせが挙げられ、特にクエン酸塩、リン酸塩等が有効である。ｐＨ調整剤としては、一般に医薬品に用いられるｐＨ調整剤から適宜選択し使用することができる。具体的には、塩酸、水酸化ナトリウム等が挙げられる。
本発明の凍結乾燥製剤には、上記添加剤のほか、本発明の効果に影響を与えない範囲で適宜、等張化剤、可溶化剤、溶解補助剤等、医薬品に一般に用いられる添加剤を使用可能である。
本発明の凍結乾燥製剤は、医薬品製造等で一般的に用いられる方法で製造することが可能である。例えば、５〜２５℃の一定温度に維持された環境下、適当な容器に注射用水を加え穏やかに撹拌しながら、予め秤量した添加剤、ＧＲＦを加え、最終的に所望のｐＨに調整する。その後、フィルターろ過等により滅菌し、ガラス等のバイアルの容器に充填し、ゴム栓等で半打栓して、凍結乾燥を実施し、必要に応じて窒素封入をすることにより凍結乾燥製剤を得る。
本発明の凍結乾燥製剤を用いて調製されるＧＲＦ製剤は、臨床現場において診断または治療の目的で一時的または長期的な投与が期待される。
【実施例】
【００２８】
以下に、実施例、比較例等を挙げて本発明の詳細を説明するが、本発明はこれに限定されない。
なお、ＧＲＦ（Ｓｏｍａｔｏｒｅｌｉｎ  Ａｃｅｔａｔｅ）としては、すべての実施例、比較例において、純度９９％に精製された配列番号１で表されるペプチドの酢酸塩を用いた。また、リン酸水素ナトリウム水和物として「リン酸水素二ナトリウム・１２水」（ナカライテスク社製）を用い、クエン酸水和物として「クエン酸一水和物（特級）」（ナカライテスク社製）を用い、塩酸として「１ｍｏｌ／Ｌ塩酸」（ナカライテスク社製）を用い、水酸化ナトリウムとして「１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液」（ナカライテスク社製）を用い、ポリソルベート８０として「ポリソルベート８０（ＨＸ２）」（日油社製）を用い、トレハロースとして「トレハ」（林原社製）を用い、スクロースとして「スクロース」（ナカライテスク社製）を用い、乳糖として「乳糖一水和物（２００Ｍ）」（ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）を用いた。
また、マンニトールとして「マンニット」（三菱商事フードテック社製）を用い、塩化ナトリウムとして「塩化ナトリウム」（ナカライテスク社製）を用い、イノシトールとして「イノシトール」（和光純薬社製）を用い、ソルビトールとして「ソルビトールＳＰ（１００Ｍ）」（日研化成社製）を用いた。
〈比較例１〉
ＧＲＦ２００μｇ、トレハロース  １０ｍｇ、リン酸水素ナトリウム水和物  １４．８ｍｇ、クエン酸水和物  １０ｍｇをはかりとり、注射用水を適量添加後溶解し、溶液とした。塩酸または水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ３．２〜４．２に調整し、注射用水を用いて全量を１ｍＬとし、除菌フィルターにてろ過を行った。ガラスバイアルへ充填し、凍結乾燥を行った。窒素封入の後ゴム栓で密封し、キャップシールすることにより凍結乾燥製剤を得た。
【００２９】
〈実施例１〜４〉
比較例１と同様に表１で表される処方に従い製造し、実施例１〜４の凍結乾燥製剤を得た。
【００３０】
【表１】
2015224219.tif 000002
【００３１】
〔試験例１〕  ポリソルベート８０によるＧＲＦの安定性評価
比較例１、実施例１〜４の製剤を４０℃/７５％ＲＨに１週間、２週間及び３週間保存した。凍結乾燥製剤調製時に加えたＧＲＦ量（２００μｇ／ｍＬ）に対する保存開始時を含め３週間までの保存品に含まれるＧＲＦ含量（％）をそれぞれ液体クロマトグラフィーを用いて測定した。結果を表２に示す。ポリソルベート８０を添加することでＧＲＦ含量の低下が明らかに抑えられた。
また、ポリソルベート８０を添加した場合と、添加しない場合の類縁物質（ＧＲＦのメチオニン酸化体と推測される化合物：メチオニン酸化体Ａ及びメチオニン酸化体Ｂ（互いに構造異性体））の生成について、保存開始時の液体クロマトグラフィーを用いて測定した。その測定結果を表３に示す。ポルソルベート８０を添加しない場合は、類縁物質の生成量が各々０．３%以上であったが、ポリソルベート８０を添加するとそれらの生成量が各々０．３%以下に抑えられた。
以上より、ポリソルベート８０を添加した場合には、長期保存が可能な安定性を持つＧＲＦの凍結乾燥製剤が得られたが、添加しなかった場合には好ましい長期保存が可能な安定性を持つＧＲＦの凍結乾燥製剤は得られなかった。
【００３２】
【表２】
2015224219.tif 000003
【００３３】
【表３】
2015224219.tif 000004
【００３４】
〈実施例５〜１０〉および〈比較例２〜６〉
比較例１と同様に表４〜６で表される処方に従い製剤を製造し、実施例５〜１４および比較例２〜７の凍結乾燥製剤を得た。
【００３５】
【表４】
2015224219.tif 000005
【００３６】
【表５】
2015224219.tif 000006
【００３７】
【表６】
2015224219.tif 000007
【００３８】
〔試験例２〕  添加剤によるＧＲＦの安定性評価
実施例５〜１４および比較例２〜７の製剤を４０℃/７５％ＲＨに１週間、３週間および４週間保存した。保存後のサンプルの性状を目視にて確認し、その結果を表７に示す。長期保存が可能なＧＲＦ製剤（凍結乾燥製剤）を形成した場合の性状は「白色塊状粉末」である。凍結乾燥製剤調製時に加えたＧＲＦ量に対する保存開始時を含め４週間までの保存品のＧＲＦ含量（％）を試験例１と同様にそれぞれ測定し、その結果を表８に示す。また、保存後のサンプルを注射用水１ｍLにより復水し、ｐＨを測定し、その結果を表９に示す。
二糖類であるトレハロース、スクロースおよび乳糖を添加した場合、いずれの濃度であっても、白色塊状粉末の性状を示し、ＧＲＦの含量（％）が８０％以上であり、復水後も薬液調製時のｐＨから大きな変動が認められないことから、長期保存が可能なＧＲＦ製剤を示す結果が得られた。また、ＧＲＦ２００μｇに対して塩化ナトリウムを１０ｍｇまたはマンニトールを５０ｍｇ添加した場合にも、ＧＲＦの含量、性状およびｐＨのいずれも安定であり、長期保存が可能なＧＲＦ製剤を示す結果が得られた。しかしながら、その他の添加剤及び塩化ナトリウムとマンニトールの添加量では開始時または保存後のサンプルで性状が変化し、安定で長期保存が可能なＧＲＦ製剤（凍結乾燥製剤）を得ることはできなかった。
【００３９】
【表７】
2015224219.tif 000008
※「−」は、前回保存後測定時または開始時の評価で白色塊状粉末でなかったため未実施。
※「＊」は開始時の含量試験においてソマトレリン酢酸塩のピークが認められなかったため未実施。
【００４０】
【表８】
2015224219.tif 000009
※「−」は、性状の試験においてケーキの収縮が認められたため未実施。
【００４１】
【表９】
2015224219.tif 000010
※「−」は、前回保存後測定時または開始時の評価で白色塊状粉末でなかったため未実施。
※「＊」は開始時の含量試験においてソマトレリン酢酸塩のピークが認められなかったため未実施。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明により、ヒト血清アルブミンを用いなくても長期間安定なＧＲＦの凍結乾燥製剤が得られた。これによりヒト血液由来の感染症伝播リスクを完全に排除することができる。また、医薬品製造における製造記録保管等に関する製造メーカーの負担を排除することができ、さらに、医療機関等での生物由来製品に関する記録及び保管の負担も排除することができる。
【配列表フリーテキスト】
【００４３】
配列番号１：ＧＲＦ（Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ：成長ホルモン放出因子）
【配列表】
2015224219000001.app