(57)【要約】  この発明はマイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータフッ化エレメンとそれらの類似体の合成過程に関するものである。さらに、この発明はマイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータフッ化エレメンの類似体をもとにした新しい薬剤、そして脳腫瘍、肺癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、直腸結腸癌、胃腸癌、胃癌のような癌の治療方法に関するものである。  発見者は癌治療、特に脳腫瘍、肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮頸癌、腸癌、乳癌、前立腺癌の治療法として、シスプラチン、５フルオロウラシル、タキソールとタキソールの類似体に限らず、マイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータフッ化エレメンとそれらの類似体を含むマイナス型ベータエレメン、及びマイナス型ベータエレメンの化学合成における中間物との併用療法を考えている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
＃＃ＳＴＲ６＃＃マイナス型ベータエレメンの構造のある化合物であって、
Ｑ１、Ｑ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｕ１、Ｕ２、Ｖ１、Ｖ２は各々水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ヘキシル、ＣＯ２Ｃ２Ｈ５、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）３ＯＨ、及び線形または分枝アルキル、アルコキシルアルキルの代用品又は非代用品、アルコキシルカルボニルの代用品又は非代用品、アリールオキシアルキルのの代用品又は非代用品、アロイルまたはベンゾイルの代用品又は非代用品、トリアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、アリルジアルキルシリル、トリアリルシリルからなる群から独立に選択され、ここで、ＷはＣ、Ｎ、Ｏから成る群から選ばれ、ｎは数字１〜５である、化合物。
【請求項２】
＃＃ＳＴＲ２＃＃（＋）−ｆｕｓｏｌ  又は＃＃ＳＴＲ７＃＃の構造のある化合物であって、
Ｑ１、Ｑ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｕ１、Ｕ２、Ｖ１、Ｖ２は各々水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ヘキシル、ＣＯ２Ｃ２Ｈ５、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）３ＯＨ、及び線形または分枝アルキル、アルコキシルアルキルの代用品又は非代用品、アルコキシルカルボニルの代用品又は非代用品、アリールオキシアルキルのの代用品又は非代用品、アロイルまたはベンゾイルの代用品又は非代用品、トリアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、アリルジアルキルシリル、トリアリルシリルからなる群から独立に選択され、ここでＷはＣ、Ｎ、Ｏから成る群から選ばれ、ｎは数字１〜５である、化合物。
【請求項３】
マイナス型ベータエレメン＃＃ＳＴＲ６＃＃の２つのデノボ合成ルート
【請求項４】
予想外にマイナス型ベータエレメンが効果的かつ安全で、多剤耐性効果がなく、毒性もなく、抗ウィルス性、抗微生物性、抗生物質、特に抗癌剤として広く利用できることの発見。
【請求項５】
マイナス型ベータエレメンの入手プロセスはもちろんのこと前記構造が得られるプロセスとしてのマイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメン派生物（＃＃ＳＴＲ９＃＃から＃＃ＳＴＲ１７＃＃まで）とマイナス型ベータエレメンのような構造。
【請求項６】
＃＃ＳＴＲ２１＃＃マイナス型ベータエレメンの構造のある化合物であって、
Ｑ１、Ｑ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｕ１、Ｕ２、Ｖ１、Ｖ２は各々水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ヘキシル、ＣＯ２Ｃ２Ｈ５、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）３ＯＨ、および線形または分枝アルキル、アルコキシルアルキルの代用品ま又は非代用品、アルコキシルカルボニルの代用品又は非代用品、アリールオキシアルキルのの代用品又は非代用品、アロイルまたはベンゾイルの代用品又は非代用品、トリアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、アリルジアルキルシリル、トリアリルシリルからなる群から独立に選択され、ここでＷはＣ、Ｎ、Ｏから成る群から選ばれ、ｎは数字１〜５である、化合物。
【請求項７】
＃＃ＳＴＲ２２＃＃マイナス型ベータエレメンの構造のある化合物であって、
Ｑ１、Ｑ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｕ１、Ｕ２、Ｖ１、Ｖ２は各々水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ヘキシル、ＣＯ２Ｃ２Ｈ５、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）３ＯＨ、および線形または分枝アルキル、アルコキシルアルキルの代用品ま又は非代用品、アルコキシルカルボニルの代用品又は非代用品、アリールオキシアルキルのの代用品又は非代用品、アロイルまたはベンゾイルの代用品又は非代用品、トリアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、アリルジアルキルシリル、トリアリルシリルからなる群から独立に選択され、ここでＷはＣ、Ｎ、Ｏから成る群から選ばれ、ｎは数字１〜５である、化合物。
【請求項８】
＃＃ＳＴＲ２３＃＃  マイナス型ベータフッ化エレメンの構造のある化合物であって、
Ｑ１、Ｑ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｕ１、Ｕ２、Ｖ１、Ｖ２のは各々水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ヘキシル、ＣＯ２Ｃ２Ｈ５、ＣＨ２ＯＨ、（ＣＨ２）３ＯＨ、および線形または分枝アルキル、アルコキシルアルキルの代用品又は非代用品、アルコキシルカルボニルの代用品又は非代用品、アリールオキシアルキルのの代用品又は非代用品、アロイルまたはベンゾイルの代用品又は非代用品、トリアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、アリルジアルキルシリル、トリアリルシリルからなる群から独立に選択され、ここでＷはＣ、Ｎ、Ｏから成る群から選ばれ、ｎは数字１〜５である、化合物。
【請求項９】
マイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメン派生物（その類似体）、及び単体、または他の製剤と併用して、抗ウイルス剤、抗菌剤及び抗癌剤として形成された
マイナス型ベータエレメンのような構造のある物質。
【請求項１０】
マイナス型ベータエレメン派生物（または、その類似体）と全ての利用できる薬物キャリヤーを有するマイナス型ベータエレメンと同じような構造。
【請求項１１】
脳腫瘍、肺癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、結腸直腸癌、胃腸癌、および胃癌に対して効果がある、請求項１、２、５、６、７、８における化学薬品。
【請求項１２】
マイナス型ベータエレメン、およびマイナス型ベータエレメンの派生物（又は、類似体）とマイナス型ベータエレメンの構造の治療に効果のある量をそれを必要とする被験者に投与することからなる被験者の癌治療法。
【請求項１３】
薬物の有効投与量が３ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇである請求項１２の方法。
【請求項１４】
マイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメン派生物（または類似体）及びマイナス型ベータエレメンのような癌細胞の逆多剤耐性（ＭＤＲ）効果。
【請求項１５】
哺乳類患者の少なくとも１つの癌細胞株に対する治療方法であって、以下の段階即ち、
癌患者を治療する際に、まず、薬学上許容できるキャリヤーで、治療濃度域の範囲内の有効投与量のシスプラチンと治療濃度域の範囲内の有効投与量のエレメン（又はマイナス型ベータエレメン類似体の１つ）を組み合わせて、癌患者を治療し、そして上記シスプラチンとマイナス型ベータエレメン（又はマイナス型ベータエレメン類似体の１つ）を上記哺乳類患者にとうよして、少なくとも１つの癌細胞株（脳癌、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、および前立腺癌のような）の進行に治療上効果的な変化をもたらす、段階からなる方法。
【請求項１６】
哺乳類患者の少なくとも１つの癌細胞株に対する治療方法であって、以下の段階即ち、
癌患者を治療する際に、まず、薬学上許容できるキャリヤーで、治療濃度域の範囲内の有効投与量の５フルオロウラシルと治療濃度域の範囲内の有効投与量のエレメン（又はマイナス型ベータエレメン類似体の１つ）を組み合わせて治療し、そして上記５フルオロウラシルとマイナス型ベータエレメン（又はマイナス型ベータエレメン類似体の１つ）を上記哺乳類患者に投与し、少なくとも１つの癌細胞株（脳癌、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、および前立腺癌のような）の進行に治療上効果的な変化をもたらす、段階からなる方法。
【請求項１７】
哺乳類患者の少なくとも１つの癌細胞株に対する治療方法であって、以下の段階即ち、
癌患者を治療する際に、まず、薬学上許容できるキャリヤーで、治療濃度域の範囲内の有効投与量のタキソール（または、その派生物うちの一つ）と治療濃度域の範囲内の有効投与量のマイナス型ベータエレメン（又はマイナス型ベータエレメン類似体の１つ）を組み合わせて治療し、そして上記タキソール（または、その派生物）とマイナス型ベータエレメン（又はマイナス型ベータエレメン類似体の１つ）を上記哺乳類患者に投与し、の少なくとも１つの癌細胞株（脳癌、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、および前立腺癌のような）の進行に治療上効果的な変化をもたらす、段階からなる方法。
【請求項１８】
哺乳類患者の少なくとも１つの癌細胞株に対する治療方法であって、以下の段階即ち、
薬学上許容できるキャリアーで、
１）これに限定しない一種以上の以下の抗癌剤を含む、即ち、テモダール、情報伝達経路の阻害剤、キナーゼ阻害剤、細胞周期停止誘導剤
２）有効投与量の一つ以上のマイナス型ベータエレメン及びその類似体、
とでのでの有効投与量の組合せにより癌患者を治療し、そして上記哺乳類患者に上記物質を投与し、これによりの少なくとも１つの癌細胞株（脳癌、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、および前立腺癌のような）の進行に治療上効果的な変化をもたらす、段階からなる方法。
【請求項１９】
予想外に＃＃ＳＴＲ２２＃＃マイナス型ベータエレメナルを化学療法の抗癌剤として、有効に広く利用できることの発見。
【請求項２０】
＃＃ＳＴＲ２３＃＃  マイナス型ベータフッ化エレメンおよび抗癌化学療法剤として、およびイメージングなどの目的での使用で、脳腫瘍の放射線治療薬剤として使用することができるマイナス型ベータエレメンフッ化物（放射性フッ化物１８を含む）を含む。
【請求項２１】
＃＃ＳＴＲ２１＃＃マイナス型ベータエレメン、または＃＃ＳＴＲ２２＃＃マイナス型ベータエレメナル、またはすべての利用可能な薬物キャリヤーを有する＃＃ＳＴＲ２３＃＃  マイナス型ベータフッ化物エレメン
【請求項２２】
被験者の癌を治療する方法であって、
患者の必要によって有効投与量を使用して、マイナス型ベータエレメナル、またはマイナス型ベータエレメナル類似体、またはマイナス型ベータエレメノール、またはマイナス型ベータエレメン類似体、またはマイナス型ベータフッ化エレメン、またはマイナス型ベータフッ化エレメン類似体の有効投与量を投与することからなる方法。
【請求項２３】
癌患者治療のため、単体、またはテモダール、シスプラチン、タキソール、タキソール派生物、５フルオロウラシルに限定せず、これらを含む抗癌剤及びその他の抗癌剤の１つまたは複数の組み合わせで形成されたマイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータエレメナル、およびマイナス型ベータフッ化エレメン及その類似体の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
I. エレメン混合物の抗癌剤としての有効性
エレメンの混合物（ベータ、ガンマ、デルタ型エレメンの混合物、主要物質はベータ型）はG. Cymbopogon winterianus Jowitt, Zhangzhou Aglaia odorataの花、 Fuzhou Aglaia odorataの花、 Chunging Aglaia odorataの花、Chunging Aglia odorataの葉、Zhangzhou Aglaia odorataの葉、Yibin geraniumの葉、Kunmin geraniumの葉、Litchi chenensis cinnamomiforium、dry Lauris nobilis、Citrus limonaの葉、Vitis vinifera grapeの葉、Clausena lansiumの葉、Foutunella margaritaの葉、Fortunella odorata、C. Wenyunjin Chen、そしてMagnolia sieboldiを含む多くから単利される自然化合物の混合物である。1954年に初めて抽出された（Heroit, V., Motl, O., Sorm, F., Coll. Czech. Chem. Commun 1954, 19, 990）。中国では、1983年からエレメン混合物は抗癌剤として開発されている。エレメン薬品はベータ型を主要物質とするエレメン異性体の混合物である。
1993年にエレメン混合物の乳剤（薬品中、0.5%濃度の65%純粋なベータ、ガンマ、デルタ型エレメン）は中国にて肺癌のために起こる胸膜腔内液の治療薬として承認された。1993年の承認の後、エレメン混合物の乳剤（0.5%濃度、65%純粋度）は10,000人以上の癌患者の治療に利用され多くの効果を示し、その有効性・安全性の特性は中国の医学雑誌に詳しく記述されている。この癌とは、肺癌、肝癌、腸癌、乳癌、前立腺癌とその他の癌である。
このエレメン混合物の治療上の性質は理解されていない。そして、１つ、または全部の主要成分が活性に必要なのか、それとも成分の１つである主要でない異性体、鏡像異性体が活性するのか解明されていない。私達の研究によると、動物実験では98%純粋なマイナス型ベータエレメンがエレメン混合物（2%濃度の注射、85%純粋度）の臨床効果と類似した結果を示している。
私達は初めて主要活性成分はマイナス型ベータエレメン（C15H24、分子質量  200.4）であることを発見し、さらにその成分は血液脳関門を通過でき脳腫瘍の治療に有効なことを発見した。
【０００２】
II. 分子メカニズム
１）エレメン混合物（0.5%濃度、65%純粋度）のメカニズム
エレメン混合物（65%純粋度）は癌細胞の成長と分裂を、細胞周期のG0/G1期からS期への移行を妨げる事によって抑制する（Xu, X.J. et al., Studies of β−Elemene's induction of human liver cancer cells, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  30-32, 1999）。フローサイトメトリー（20μg/ｍLエレメン、SMMC肝癌細胞）によると、エレメンはG0/G1期からS期への移行を遮断する。
免疫細胞化学のデータはエレメン混合物は主要抑制物質、p53の発現を抑制し、それは潜在的にDNA修復のためのG0/G1期からS期への移行を抑制するXu, X.J. et al., Studies of β-Elemene's induction of human liver cancer cells, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  30-32, 1999)。
エレメン混合物は電子顕微鏡とDNA断片化データ（Xu, X.J. et al., Studies of β-Elemene's induction of human liver cancer cells, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  30-32, 1999）によると、1度の投与量で時間に比例して人間の肝癌細胞のアポトーシスを誘発する。エレメン混合物はさらに人間の白血病K562細胞のBcl-2たんぱく質の発現を減少させ、アポトーシスを誘発する（Yuan. J., et al., Elemene induces apoptosis and regulates expression of bcl-2 protein in human leukemia K562 cells, Zhongguo Yao Li Xue Bao (Chinese Pharmacology Journal), 20:  103-106, 1999）。エレメン混合物は肺癌細胞（Aip-937, A549, SPC-Al、小細胞肺癌H128）（Qian, J. et al., The studies of Elemene Emulsion on the Reversion of human lung cancer cells, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  7-10, 1999）、メラノーマ細胞B16（Qiang, J., et al., The induction of Differentiation of B16 cells by Elemene Emulsion, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  16-19, 1999）の分化を抑制する。その超微細構造は微繊毛の減衰や核濃縮のような形態学的な変化に現れる。
エレメン混合物によって引き起こされたアポトーシスは、Bcl-2やc-mycの減少、p53の上昇など、たんぱく質の発現レベルの効果に拠る様である。Bcl-2はアポトーシスを抑制する。Bcl-2たんぱく質は正常な肝細胞では発現されず、その高い発現は腫瘍細胞の生存に関与している。C-mycは分泌製たんぱく質であり、シグナル伝達経路を先行する。C-mycは細胞分裂を引き起こす可能性がある。ｐ53は腫瘍抑制因子の特徴を持ち、アポトーシスに関連している。細胞の中でDNAがダメージを受けたとき、p53たんぱく質のレベルは上昇しDNA修復におけるG0/G1期からS期の移行を抑制する。ｐ53の上昇レベルによって誘発された抑止は、やがてアポトーシスを引き起こす。
総合的に、エレメン混合物（65%純粋度）は腫瘍細胞における高い50%抑制濃度（体外20-50μg/ｍL）をもつ他の細胞障害性の癌治療薬と違う。臨床上の腫瘍の縮小効果はこの混合物のアポトーシスの誘発可能性、細胞分裂と分化の抑制を引き起こす事によるものである。しかし、私達の研究以前はその活性物質はわかっていなかった。
【０００３】
２）マイナス型ベータエレメン（98%純粋度）のメカニズム
私達は初めて、エレメン混合物の活性成分はマイナス型ベータエレメンであることを明らかにした。私達は、さらにマイナス型ベータエレメンの抗癌作用の分子メカニズムを解明するために生体外実験を行った。
マイナス型ベータエレメンは非小細胞肺癌（NSCLC）株化細胞、肺腺維芽細胞、気管支上皮の株化細胞において細胞成長の抑止効果が見られた。さらに、マイナス型ベータエレメンはNSCLC細胞のG2-M期での抑止、サイクリンB1とリン光体―Cdc2（Thr-161）のレベルの減少、p27ｋipIとリン光体―Cdc2（Tyr-15）のレベルの上昇が見られた。そして、マイナス型ベータエレメンはCdc2の脱リン酸し活性化させるCdc25Cの発現を抑制し、Cdc25Cをリン酸化させ不活性化させるチェックポイントキナーゼChk2の発現を増強させた。これらの発見はマイナス型ベータエレメンのNSCLC細胞におけるG2-M期での抑止がChk2依存のメカニズムに因っていることを示唆している。さらに、マイナス型ベータエレメンはNSCLC細胞のアポトーシスの引き金を引く。結果はマイナス型ベータエレメンがNSCLC細胞において、カスパーゼ-3、-7、-9の活性を抑制し、Bcl-2の発現を減少させ、チトクロムCの遊離を起こし、カスパーゼ-9とポリ(ADP-リボースポリメラーゼ)の切断レベルの上昇によって見られる。これらのデータはマイナス型ベータエレメンによる肺癌細胞の死滅効果はチトクロムCが仲介するミトコンドリアの遊離を通じておこるアポトーシスの経路であることを示しているのであろう（Wang, G. et al., Antitumor effect of (-)-beta-elemene in non-small-cell lung cancer cells is mediated via induction of cell cycle arrest and apoptotic cell death, Cell. Mol. Life. Sci., 62 (2005), in press）。
【０００４】
３）ベータエレメンの対多剤耐性効果
エレメンは多剤耐性効果（MDR）を起こさない（Wang, B.C. et al., The Experimental Studeis of Acssociation between Elemene and Tumor Multidrug Resistance, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  10-13, 1999）。人間の肝癌BEL-7402株化細胞は培養され、薬剤耐性系統BEL-7402/DOXを確立させた。48.9μｇ/ｍLのエレメンを加えた6週間後、薬剤耐性BEL-7402株化細胞はMDR1 mRNAやP型糖たんぱく質（P-gp）の発現が見られなかった。このように、薬剤耐性腫瘍細胞はエレメンに敏感である。
それ故に、発見者はマイナス型ベータエレメンの完全合成を試み、その結果マイナス型ベータエレメンとそれらの類似対の効率的な方法を開発した。それぞれの記述された方法はマイナス型ベータエレメンを得るためには不適切である。この発見はマイナス型ベータエレメンの合成途上の新しく有益な中間物とその類似対、マイナス型ベータエレメンとその類似体から誘導したもの、マイナス型ベータエレメンとその類似対から精製したもの、さらにマイナス型ベータエレメンとその類似体の癌治療での有効性を提供する。特に、マイナス型ベータエレメンとその類似体は体内の抗癌薬剤としての例外的な高い特異性を示し、癌治療に効果的で、現在使用されているタキソール、ビンブラスチン、アドリアマイシン、カンプトラシンを含む主要な化学療法よりも正常な細胞には毒性が少ない。
【０００５】
III．新しい薬剤を必要としている脳腫瘍分野
１）脳腫瘍の序論
新しい効果的な脳腫瘍の薬剤の開発は30年前と予後と死亡率が変わらず、他の悪性腫瘍の治療法よりも遅れている。主要な脳腫瘍のもっとも一般的なサブタイプである悪性グリオーマは悪性度と浸潤性が高く、神経学的に破壊的な腫瘍である。その最も悪性度の高い兆候は、最大の治療効果にもかかわらず平均生存期間が９から12ヶ月のグリオブラストーマである。
アメリカでは、15,000の脳腫瘍の症例が毎年レポートされている。50%以上のこれらの腫瘍は悪性グリオーマであり、7,500以上のグリオブラストーマの新しい症例があり、未分化星状細胞腫も毎年起こっている。脳腫瘍は15歳以下の子供たち、34歳までの青年たちの癌による死亡の2番目の原因である。さらに、脳腫瘍は65歳以上では、癌による死亡の2番目に急速に増えている原因である。患者の寿命を延ばすために、また価値ある生活のためにグリオブラストーマの効果的な治療法が緊急に必要になっている。
２）脳腫瘍の特定化段階
グリオーマは組織学的に、免疫組織化学的に、超微細構造的にグリアの分化が証明されている腫瘍として病理学的に定義されている。最も広く使われているグリオーマの分類、類別に関する図式は世界保健機関（WHO）の物である。グリオーマはアストロサイト、オリゴデンドログリア、上衣細胞の特色の発現によって仮定された分化の段階によって分類されている。そして、さまざまな細胞学的な特色によって判断された悪性度により、I期からIV期までに分類されている。第I期の腫瘍は生物学的に良性で、診断された時に外科的な治療が可能と見なされる状態である。第II期は低悪性度の悪性腫瘍で外科的には治療できないが、長い臨床治療が可能とされる状態である。第III期は悪性で数年以内に死亡するであろう状態で、第IV期（グリオブラストーマ）は非常に悪性で通常は化学治療で対応できず、９から12ヶ月以内に死亡する。
３）脳腫瘍の現在の治療法
主要な治療法は１）手術、２）放射能治療、３）化学治療、４）生物学的治療から成っている。脳は薬物送達に大きな問題があるので、化学治療は通常は血液関門抑制剤（例  マンニトール）と共に投与される。50%以上の患者が通常の治療法に加え、違う治療法を求めている。アメリカでの現在の化学治療は次のとおりである。
１）反血管新生薬剤が腫瘍への血液供給を停止させる。これらの薬剤はサリドマイド、TNP-470、血小板因子４（PF4）、インターフェロン、アンジネスタチンを含め現在研究中、または近々研究される。
２）分化薬剤は未成熟の状態で分割した腫瘍細胞を成熟させ、腫瘍の成長を停止させる。例に、レチノイン酸、フェニル酢酸塩、ブリオスタチンがある。
３）免疫療法は免疫組織をより効果的にし、癌細胞を探し破壊させる目的を持つ。現在、インターフェロン、リンパ球、腫瘍のワクチンを含め、免疫を上げるのに効率的な薬剤が研究されている。
４）その他の治療法はCPT-11、PCV、タモキシフェン、サリドマイド、VP-16/エトポシド、BCNUの様な薬剤を含む。通常BCNU（1,3-ビス(2-クロロエチル)-1-ニトロソ尿素）を使用したアジュバント化学療法はわずかに生存率を上昇させる。動脈注射によってBCNUを投与する試みは不可逆的な脳症や網膜への毒性のため同側性の視力の損失によって問題を複雑にしている。
現在、最も期待されている脳腫瘍のための化学療法の薬剤はTEMODARであり、1999年の8月にアメリカ食品医薬局から再発性の未分化星状細胞腫の大人の患者に対し承認された。TEMODAR（テモゾロミド）は血液脳関門を渡れる最初の経口化学治療薬剤である。この経口の細胞障害性のアルキル化剤はイミダゾテトラジンとして知られている新しいクラスの化合物の中でも期待されている薬剤である。TEMODARに対する総合的な腫瘍の反応率は完全反応（９％）と部分反応（１３％）を含む22%である。完全反応（CR）はすくなくとも2ヶ月続けてMRIで腫瘍の損失が見られた場合である。50%以上の腫瘍の減少が2ヶ月間見られた場合が部分反応（PR）である。
４）脳腫瘍治療におけるエレメン混合物の有効性
エレメンは血液脳関門（BBB）を渡る(Qian, J., New anti-tumor drug, Elemene's pharmacology and Clinical results, Chinese Journal of Clinical Oncology, July:  1-3, 1999)。トリチウムでラベルされたエレメンを実験動物に静脈内に注射するか、経口投与した。放射能は動物の脳で発見された。
エレメン混合物の投与(2%濃度、85%純粋度)は一次的、2次的な脳腫瘍の患者に対する治療法として中国食品医薬局より承認が未決定の状態である。この処方は中国の薬品技術調査委員会にて承認されている。臨床実験は中国で行われ、活性薬剤成分（API）を含むが、ちがうエレメンを安定させる不活性成分を含むエレメン混合物（2%濃度注射、85%純粋度）を透明の液体に入れ、新しい処方を試みた。61人の患者に対し、エレメン混合物（２％濃度注射、85%純粋度）は脳腫瘍の治療に現在入手できる薬剤（TEMODAR、BCNU、CCNUを含む）よりも患者の35-40%に腫瘍の縮小（CRとPR）が見られ有効だった。TEMODARの腫瘍の縮小率（CRとPR）は20%だった。CRとは完全反応で、処方された後検出不可能な腫瘍の縮小が見られることであり、PRとは部分反応で、処方前と比べて50%以上の腫瘍の大きさの縮小が見られることである。グリオブラストーマの最も長い生存はエレメン混合物（2%濃度注射、85%純粋度）投与後62ヶ月だった。
【０００６】
IV.  ベータエレメンの代謝産物としてのベータエレメナル
Li, Z.たちの論文ではダリアングループがベータエレメンの代謝産物（98%純粋度、主にベータエレメン）についてラットの胆汁を使って研究している。100ｍｇ/kg（薬剤量/ラットの体重）のベータエレメン(98%純粋度)を投与した後、ラットの胆汁の代謝産物がエーテルとして抽出された。質量分析、核磁気共鳴、赤外分光法、紫外分光法がラットの胆汁のベータエレメンの代謝産物を分析するために使用された。核磁気共鳴によると、ラットの胆汁の代謝産物の第10炭素と結合している第11炭素のメチル基がアルデヒドに酸化されていた。質量分析による代謝産物の分子質量は218だった。赤外分光法と紫外分光法によって、代謝産物の中のアルデヒドの存在が明らかにされた。ラットの胆汁の代謝産物の構造はベータエレメンから誘導されたもので、おそらくベータエレメナルである。このように、ベータエレメンの生体内での生体内変換が見られた。
しかし、上記の論文では筆者は発見されたエレメナルがどの立体鏡像異性体なのか区別していない。さらに、エレメナルの有効性と活性についても研究していない。
私達の動物実験のデータによるとトリチウムでラベルされたベータエレメンとその類似体とおそらくその代謝産物は血液脳関門（BBB）を渡ることができる。しかし、BBBを渡れるのがベータエレメンそれ自体なのか、その類似体なのか、その代謝産物なのか、またはそれらの組み合わせなのか、注意深い実験はされていない。このように、エレメンがどのように脳腫瘍に働くのかまだ理解されていない。
【０００７】
V. 伝統的な化学治療薬剤の多剤耐性
１）伝統的な化学治療薬剤の有効性
シスプラチン、5フルオロウラシル、タキソールとタキソールの類似体は多剤耐性によって効率が損なわれ、細胞障害性の可能性もあるが、長年有効な化学治療薬剤であった。
シスプラチンはとても確立された抗癌剤である。シスプラチンは1845年に最初に合成されたが、その細胞障害性は1965年まで記述されていない。電流密度がE. coliバクテリアの生殖を抑制するかどうかの実験がなされ、その結果、プラチナ電極から電気分解された生産物が抑制の原因であることが解明された。シスプラチンは1971年に臨床実験に入った。シスプラチンはプラチナ原子が水平な平面のシス位置にある塩化基とアンモニア基に囲まれた無機複合物である。細胞内で、水分子が塩化基と置換され、高い反応性をもつ荷電されたプラチナ複合体に成る。この複合体はストランド内、ストランド外、DNAと架橋結合するDNAと共有結合しDNAの働きを抑制する。実験データと臨床データはシスプラチンが放射能治療を増強すると示している。早期の研究では、シスプラチンは細胞周期の時期に特定でないとされていたが、最近の研究では細胞分裂において、複雑で様々な効果が明らかにされている。
シスプラチンの主な使用は膀胱癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、精巣癌である。シスプラチンが使われる他の癌では、副腎皮質癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、子宮体癌、消火器癌、胚細胞性腫瘍、婦人科肉腫、頭部、頚部の癌、肝芽腫、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、骨肉腫、甲状腺癌である。
タキソールと５フルオロウラシルはどちらも抗癌剤として有効であるが、多剤耐性もある。タキソールは前世紀の初めに発見されたが、この薬剤の臨床実験は1983年に始められた。タキソールは細胞周期において有糸分裂のチェックポイントで働く。タキソールは主に乳癌、卵巣癌、頭部、頚部の癌、肺癌に使用される。５フルオロウラシルは腫瘍細胞が腸管粘膜の正常な細胞よりもDNAの合成にウラシルをより効率的に利用する事実をもとに1957年に開発された。それは、細胞内で活性体であるフルオデオキシウリジン一リン酸（FdUMP）に代謝されるフッ化ピリミジンである。活性体はチミジンの正常な合成を抑制し、DNA合成を抑制する。5フルオロウラシルは細胞周期の時期に特定（S期）である。5フルオロウラシルは主に乳癌、直腸結腸癌、胃癌、肝癌に使用される。5フルオロウラシルは光線性角化症、膀胱癌、子宮頸癌、子宮体癌、頭部、頚部の癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌にも使用される。
【０００８】
２）癌細胞の多剤耐性の影響
癌細胞の多剤耐性の影響は化学療法薬剤の失敗の原因でもある。癌細胞にAという抗癌剤を投与された後、その癌細胞は抗癌剤Aに抵抗性を持つだけでなく抗癌剤Aとはちがう化学構造、機能、抑制メカニズムをもつ他の抗癌剤にも抵抗力をもつ。現在、細胞膜のP170糖たんぱく質の異常発現が
多剤耐性の１つの主な原因と言われている。P170は多剤耐性の定義にあるように細胞内の薬剤濃度を低くするために細胞内から薬剤を排出させる。現時点で、化学者達は１）カルシウムチャネル拮抗薬、２）カルモジュリン抑制剤、３）ステアロイドとホルモン、４）免疫修飾物質、５）抗生物質のような多くの多剤耐性に抵抗する薬剤を発見している。このような多剤耐性に抵抗する薬剤は体外実験では効果的であるが、人間への試行をするには毒性が高すぎる。
シスプラチンはP糖たんぱく質の発現を抑制する。Yang氏らの論文によると、P糖たんぱく質はシスプラチンを投与された卵巣癌株化細胞に発現が見られる(Yang, X., and Page, M., P-glycoptotein expressionin ovarian cancer cell line following treatment with cisplatin, Oncol. Res. 1995, 7(12):  619-24)。人間の卵巣癌の株化細胞、SKOV3はシスプラチン濃度の上昇（25-100ng/mL）とともに4ヶ月の間培養された。この過程で、細胞は細胞の大きさ、細胞投影とクラスター形成の減少など、著しい形態変化を示した。これは、細胞膜のP糖たんぱく質の出現と付随している。この新しい株化細胞はドキソルビシン、タキソール、アクチノマイシンD などの現状の多剤耐性薬剤への抵抗力をもち、SKOV3/CISと名づけた。SKOV3/CISはドキソルビシンに対するよりもベラパミルに反応(260倍)した。これは提唱されている多剤耐性のP糖たんぱく質メカニズムと同調するものだが、SKOV3/CIS株のシスプラチンに対する細胞障害性を増強するものではない。
いくらかの薬剤はシスプラチンの多剤耐性効果を減少させる。論文によるとシクロスポリンDから反合成されたウンデカペプチドSDZ PSC833は多くの製剤のトランスポーターであるP糖たんぱく質を抑制する(Baekelandt, M., et al., Phase I/II trial of cisplatin and doxorubicin with SDZ PSC 833 in patients with refractory ovarian cancer, Proc. Annu. Meet. Am. Soc. Clin. Oncol 1997；16：A757)。組織学的に卵巣癌が検証された患者は、少なくても2周期にわたりシスプラチンとアントラサイクリンの組み合わせを投与した後、少なくとも3周期にわたり病状が安定しているかで抵抗力を定義し、あれば適格とした。そして、PSCに加えて50mg/ｍ2のシスプラチンとドキソルビシンを投与した。その結果、PSCと一緒に投与する時のドキソルビシンの最大許容量は35mg/m2であった。シスプラチンとドキソルビシンと共にSDZ PSC833を静脈内に投与することによって、臨床医は病状が進行していてあまり治療されていない患者に主要な反応と容認できる範囲の毒性を見ることができた。
多剤耐性薬剤の適用は臨床薬剤の抵抗を克服することであり化学治療の効果を促すことであるので重要なことである。20年近くの間、多くの薬剤抵抗に対する薬剤が発見されてきたが、毒性と副作用のために臨床実験は制限されてきた。
私達は、マイナス型ベータエレメンがシスプラチン、5フルオロウラシル、タキソール（とその類似体）の多剤耐性効果に抵抗することを最初に発見した。マイナス型ベータエレメンとその類似体はシスプラチン、5フルオロウラシル、タキソール（とその類似体）と組み合わせて投与することができる。臨床実験では、ベータエレメン乳剤（主要成分はマイナス型ベータエレメン）が心臓、肝臓、腎臓に無害であり、骨髄の働きを抑制する事もないことが実証された。
【発明の開示】
【０００９】
マイナス型ベータエレメナル、マイナス型ベータエレメノール、そしてマイナス型フッ化ベータエレメンとマイナス型エレメンの類似体について
１）この発見の目的はマイナス型ベータエレメンの合成とその抗癌剤としての有益性を提供するものである。
２）この発見の目的はマイナス型ベータエレメンとその類似体の合成途上の中間物の有益性を提供するものである。
３）さらなるこの発見の目的はそのような中間物の合成方法を提供するものである。
４）この発見の目的は現在の製薬と併用することも含めマイナス型ベータエレメンの類似体を使った癌の治療方法の成分の有益性を提供するものである。
５）この発見の目的は現在の製薬と併用することも含めマイナス型ベータエレメンの類似体を使った癌の治療方法を提供するものである。
６）この発見の目的はシスプラチン、タキソール(とその類似体)、5フルオロウラシルなど他の抗癌剤とマイナス型ベータエレメンの組み合わせ療法である。マイナス型ベータエレメンとその類似体は体内、体外の癌細胞の多剤耐性だけに有効でなく、正常な細胞より多剤耐性の細胞のほうに毒性が強い付帯的に高感応な薬剤として活性し、シスプラチンなどの障害細胞性の薬剤と併用する事により、同濃度の単体としての薬剤よりもさらに活性化する相乗的な薬剤である。マイナス型ベータエレメンとその類似体は癌の株化細胞の成長を抑制するシスプラチン、タキソール(とその類似体)、5フルオロウラシルの５０％抑制濃度を減少させることができる。つまり、癌患者に対するシスプラチン、タキソール(とその類似体)、5フルオロウラシルの投与量を減少させる。このように細胞障害性の副作用を減少することができる。
マイナス型べータエレメンの代謝産物であるマイナス型ベータエレメナルはマイナス型ベータエレメンよりもさらに強力な抗癌剤である
この発見は、マイナス型ベータエレメナルの明白な合成である。その結果、マイナス型ベータエレメナルとその類似体の効率的な合成過程を発見した。さらに、この発見はマイナス型ベータエレメナルとその類似体の新しい働きを提供することである。この利用法の発見は予想外のことであった。マイナス型ベータエレメナルはマイナス型ベータエレメンよりもさらに強力な抗癌作用がある。さらに、マイナス型ベータエレメナルはマイナス型ベータエレメンの代謝産物であり、人間の体内での半減期が長い。このように、薬品投与方法を単純化することができる。
その他のマイナス型ベータエレメンの類似体
この発見は、マイナス型ベータエレメナルの合成である。その結果、マイナス型ベータエレメノールとその類似体の効率的な合成過程を発見した。マイナス型ベータエレメノールはマイナス型ベータエレメンよりも可溶性が高い。それは利点である。マイナス型ベータエレメノールは抗癌剤としてマイナス型ベータエレメンと同じくらいに有用である。
この発見は、マイナス型フッ化ベータエレメンの合成である。その結果、マイナス型フッ化ベータエレメンとその類似体の効率的な合成過程を発見した。マイナス型フッ化ベータエレメン（放射能物質18F を用いた）画像薬剤として利用できる。例として、放射能治療薬剤として脳に利用できる。マイナス型フッ化ベータエレメンは抗癌剤としてマイナス型ベータエレメンと同じくらいに有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
１）マイナス型ベータエレメンとその類似体の組成と合成過程
この発見は、想像外に効果的で安全で多剤耐性効果がなく、毒性もないマイナス型ベータエレメンの抗ウィルス性、抗微生物性、抗生物質、特に抗癌剤としてひろく利用できることを主張する。さらに、マイナス型ベータエレメンの類似体の構造もマイナス型ベータエレメンの合成過程とともに途上で得られる構造、合成過程も主張する。マイナス型ベータエレメンとその類似対は単体、または他の製剤と併用して、抗ウィルス性、抗微生物性、抗癌剤として利用できることを主張する。
マイナス型ベータエレメンの合成
今まで、マイナス型ベータエレメンは鏡像異性的に純粋な単体として合成されていなかった。鏡像異性的な純粋度は薬剤の正確な評価に非常に大事なものである。例えば、サリドマイドの２つの鏡像異性体は１つは非常に有益な薬剤であり、もう１つはひどい奇形を起こす催奇形物質である。私達のマイナス型ベータエレメンの単体としての合成は重要な影響を与えるとともに、発見者はマイナス型ベータエレメンとその類似体の合成方法を主張する。下記が４つの合成方法である。
【００１１】
第1部：最初にS型プラス型カーボーンからのマイナス型ベータエレメンと広域にわたってマイナス型ベータエレメンのような化合物の2つの新しい合成を主張する。予測されるのは、下に記述する。
A) S型プラス型カービーンから始めて、マイナス型ベータエレメン類似体SC-1は例えば2-プロぺニル銅化リチウム（ギルマン試薬）を使って2-プロペニル基を付加し、トリエチルシリルクロライドでエノラートを補足し、シリルエノルエーテルを付加する事によって比較的容易に合成される。SC-1からSC-2への変換は次のような合成手順でマイナス型ベータエレメン-6-オンを合成する事によって起こる。エノルエーテルSC-1をエノンSC-2に（パラジウムを用いて）酸化させる。引き続いて、銅試薬の効果を使って水素化物を1,4位に共役付加させ、メチルヨウ素を補足しα,α-ジメチルケトンを合成する。エクアトリアルなメチル基のC-H結合の活性化（ケトンから誘導させたオキシムを利用して）はさらにアルコールに酸化し、オレフィン化を経てマイナス型ベータエレメン-6-オンを合成する。C-H結合の活性化の酸化物はパラジウムかプラチナが考えられる。マイナス型ベータエレメン-6-オンからヒドラジン、水酸化カリウム、熱、ウォルフ-キシュナー還元法などでマイナス型ベータエレメンに還元される。
B) 2番目の過程はS型プラス型カーボーンを用いて上記のA）に類似しているが、この過程では他のマイナス型ベータエレメン型の分子が合成される。Sがたプラス型ガーボーンの第３位（マイナス型ベータエレメンと同じつけ方）を酸化させ、保護させる。必要ならば、SC-3が合成される（例にあるように、3-水酸化基はトリエチルシリルエーテルとして保護される）。上記のA）と類似した過程を経て2-プロぺニル銅化リチウム（ギルマン試薬）を使って2-プロペニル基を付加し、トリエチルシリルクロライドでエノラートを補足し、エノルエーテルを保護し2-プロペニル基と共役付加によってSC-4が比較的容易に合成される。この中間物からマイナス型ベータエレメン-3-恩への変換次の通りである。SC-4 からエノンへの酸化はパラジウムをつかってできる。そして、銅試薬の効果を使って水素化物を1,4位に共役付加させ、メチルヨウ素を補足しα,α-ジメチルケトンを合成する。エクアトリアルなメチル基のC-H結合の活性化はケトンから誘導させたオキシムを利用し、さらにアルコールに酸化し、オレフィン化を経てアルデヒドを合成する。残ったカルボニル基は還元によって取り除かれる。トリエチルシリルエーテルの除去によってアルコールになり、さらに酸化されてマイナス型ベータエレメン-3-オンが合成される。マイナス型ベータエレメン-3-オンからマイナス型ベータエレメンへの変換はカルボニル基の還元によって、用意にできる。
【００１２】
第2章：コーリー合成法を基にして
マイナス型ベータエレメンの中間物テルぺノイド（##STR6##）を経て99%以上の純粋度をもつプラス型フスコール(##STR2##)
グラニオールと1.1等量のβ,β-ジメチルアクリロイルクロライドと1.5等量のトリエチルアミン(CH2Cl2、-78℃、3時間)の反応でβ,γ-不飽和エステル##STR3##(収率99%)がおそらくビニルケテン中間物を経て合成される。##STR3##と1.1等量のS,S型ブロモボラン##STR1##と8.3等量のトリエチルアミン(-70℃、27時間、その後４℃、３６時間)でアイルランド−クライセン合成物##STR4a##が主要合成物として少量のジアステレオマーと共に合成される(85％  収率合計)。混合物を適当な一級アミン(LiAlH4, Et2O, 23℃、24時間)で還元し、AgNO3で前処理したシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ジアステレオマー的に純粋な##STR4b##が99%以上の鏡像異性体的に純粋度で合成される(収率  70%)。##STR4c##を1.1等量のEt2AlCl (CH2Cl2, -78℃、1.5時間)で反応させ、抽出し、AgNO3で前処理したシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、エクアトリアルなアルコールが輪になった##STR5a##（収率88%）と3%収率の極性の少ないジアステレオマー（エクアトリアル位の水酸化基とアキシャル位のベータイソプロピル基を置換基に持つ）が合成される。1.2等量の過酸化水素水で10分酸化した後に  ##STR5b##と2-クロロ-1,3-ジメチル-1,3,2-ジアザフォスフォレンとトリエチルアミン（CH2Cl2, 23℃、75分）の反応で ##STR5b##が合成される。そして、NH3-THF溶液の中で多量のリチウムとtert-アミルアルコール（４等量）で還元し（-33℃、10時間）、プラス型ベータエレメン（##STR6##、収率95%）[α]23D+15.4(c=0.6、CHCl3)が合成される。これらは、自然から抽出されたマイナス型ベータエレメンの確証的なサンプルとはNMRや赤外線分光法では識別不可能である。
マイナス型ベータエレメン(##STR6##)は2段階の反応でメチルケトン##STR7## に変換される。1：1のtert-ブチルアルコールと水の溶液で触媒作用のジヒドロキシル化反応をシャープレスフタラジンと結合したビスエーテルとジヒドロキニデン、（DHQD）2-PHAL(0.1等量)、K2OsO4(0.01等量)、K3Fe(CN)6（3等量）、K2CO3（３等量）、CH3SO3NH2(1等量)で0℃で11時間反応させた。シリカゲルで精製し、1,4位のイソプロペニル基に特異に反応しメチル基に変換したジオール（収率76%；##STR6##からの反応では収率92%）が合成される。1,2-ジオールを３等量のNaIO4（4：1  THF-H2O、23℃、30分）で分断させ##STR7##が収率96%で合成される。この非常に特異的な反応はOsO4と最近分子モデルを基に提唱された（DHQD）2-PHALによる非対称性のジヒドロキシル化反応の触媒作用によって##STR6##の持つ3つの2重結合の１つに起こる。メチルケトン##STR7##と20等量の（n-BuO）2POCH2CH=CHCOOn-BuとLiOt-Bu（THF溶液で4段階に分けて加える、23℃、48時間）でシリカゲルクロマトグラフィーで精製され、テトラエンエステル##STR8##が収率80%で合成される。##STR8##と５等量のMeLi（Et2O、-30℃、12時間）の反応でプラス型フスコール（##STR2##）、［α］23D+19.7°（c=1、CHCl3）が収率95%で無色液体として合成される。
この中の‘直線状、または分枝の鎖状アルキル基’とはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、t-ブチル基、sec-ブチル基、シクロペンテル基、シクロヘキシル基に限った事ではない。アルキル基とは炭素原子を１から１４の炭素原子を含むが、１から９の炭素原子をもつことが好ましい。そして、アシル基、アリール基、アルコキシ基、アリロキシ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、カルボキシアミド基、n-アシルアミノ基などの様々な置換基で置換されている。
この中の”アルコキシカルボニル基”、”アシル基”、”アルコキシル基”とはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、n-ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ヒドロキシプロピルカルボニル基、アミノエトキシカルボニル基、sec-ブトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基に限った事ではない。アシル基とは、ホルミル基、アセチル基、プロピニル基、ブチリル基、ペナノイル基などが例になるが、これら限った事ではない。アルコキシ基とは、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、n-ブトキシ基、sec-ブトキシ基、シクロペンチロキシ基などが例になるが、これらに限った事ではない。
この中の”アリル基”とはフェニル基、ピリジル基、ピリル基、インドリル基、ナフチル基、チオフェニル基、フリル基に限ったことではない。これらはアシル基、アリール基、アルコキシ基、アリロキシ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、カルボキシアミド基、n-アシルアミノ基などの様々な置換基で置換されている。アリロキシ基とはフェノキシ基、2-メチルフェノキシ基、3-メチルフェノキシ基、2-ナフトキシ基などが例になるが、これらに限ったことではない。アクロキシ基とは、アセトキシ基、プロパノイロキシ基、ブチリロキシ基、ペンタノイロキシ基などが例になるが、これらに限ったことではない。
この発見は、##STR7##や##STR8##の構造をふくめ、ベータエレメンの類似体の癌治療作用を提供するものである。
【００１３】
R,  R.sub.0、R'グループとは、それぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、付属物としてヒドロキシ基、アルコキシ基、フッ素、NR.sub.1 R.sub.2、N-ヒドロキシミノ基、N-アルコキシミノ基であり、R.sub.1 R.sub.2とは、それぞれ、H,フェニル基、ベンジル基、直線状、または分枝の鎖状アルキル基である。R''とは、--CHY.dbd.CHX、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2−フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Xとは、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2-フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Yとは、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことである。Zとは、O、N（OR.sub.3）、NNR.sub.4 R.sub.5のことであり、ｎとは０，１，２，３である。具体化の１つには、##STR6##の構造をもつものがある。
Rとは、H、メチル基、エチル基、n-プロピル基、n-へキシル基、Ch.sub.2水酸化基、(CH.sub.2).sub.3水酸化基のことである。
この発見は、##STR４##の構造を提供するものである。
R,  R.sub.0、R'グループとは、それぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、付属物としてヒドロキシ基、アルコキシ基、フッ素、NR.sub.1 R.sub.2、N-ヒドロキシミノ基、N-アルコキシミノ基であり、R.sub.1 R.sub.2とは、それぞれ、H、フェニル基、ベンジル基、直線状、または分枝の鎖状アルキル基である。R''とは、--CHY.dbd.CHX、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2−フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Xとは、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2-フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Yとは、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことである。Zとは、O、N（OR.sub.3）、NNR.sub.4 R.sub.5のことであり、R.sub.3 R.sub.4 R.sub.5 とは、それぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことであり、ｎとは０，１，２，３である。具体化の１つには、##STR４##の構造をもつものがある。RとはH、メチル基、エチル基、n-プロピル基、n-へキシル基、Ch.sub.2水酸化基のことである。
この発見は、##STR５##の構造を提供するものである。
R,  R.sub.0、R'グループとは、それぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、付属物としてヒドロキシ基、アルコキシ基、フッ素、NR.sub.1 R.sub.2、N-ヒドロキシミノ基、N-アルコキシミノ基であり、R.sub.1 R.sub.2とは、それぞれ、H、フェニル基、ベンジル基、直線状、または分枝の鎖状アルキル基である。R''とは、--CHY.dbd.CHX、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2−フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Xとは、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2-フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Yとは、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことである。Zとは、O、N（OR.sub.3）、NNR.sub.4 R.sub.5のことであり、R.sub.3 R.sub.4 R.sub.5とはそれぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことであり、ｎとは０，１，２，３である。具体化の１つには、##STR6##の構造をもつものがある。Rとは、H、メチル基、エチル基、n-プロピル基、n-へキシル基、Ch.sub.2水酸化基、(CH.sub.2).sub.3水酸化基のことである。
この発見は、##STR7##の構造を提供するものである。
R,  R.sub.0、R'グループとは、それぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、付属物としてヒドロキシ基、アルコキシ基、フッ素、NR.sub.1 R.sub.2、N-ヒドロキシミノ基、N-アルコキシミノ基であり、R.sub.1 R.sub.2とは、それぞれ、H、フェニル基、ベンジル基、直線状、または分枝の鎖状アルキル基である。R''とは、--CHY.dbd.CHX、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2−フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Xとは、直線状、または分枝の鎖状アルキル基、フェニル基、2-メチル-1,3-チアゾリニル基、2-フラニル基、3-フラニル基、4-フラニル基、2-ピリジル基、３-ピリジル基、4-ピリジル基、イミダゾイル基、2-メチル-1,3-オキサゾリニル基、3-インドイル基、6-インドイル基のことである。Yとは、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことである。Zとは、O、N（OR.sub.3）、NNR.sub.4 R.sub.5のことであり、R.sub.3 R.sub.4 R.sub.5とはそれぞれ、H、直線状、または分枝の鎖状アルキル基のことであり、ｎとは０，１，２，３である。
【００１４】
第１章の合成過程の利点について
マイナス型ベータエレメンの鏡像異性体の合成に加え、この合成過程は鏡像特異性であり、合成の基本変換以外には一般的である。他の合成と違い、この合成過程はイソプロピル基を脱離したC4とメチル基を変換させたC1を含めてC1、C2、C3、C4、C5、C6の誘導体を提供する。
それぞれの誘導体は次のとおりである。
C1.  C1位はアルキル反応によってC2位に水素化物を付加する1,4-位の共役付加過程で特異的に操作できる。アルキル反応するグループはいろいろあるが、スキームにあるように一般的にR4としている。もし、アルキル反応するグループがメチル基であれば、α,α-ケトンが合成され、ひきつづきR1とされているエクアトリアルなメチル基が酸化され、アルコール、ケトン、また他のカルボニル基の類似体のようなメチル基が酸化されたものを操作でき、同様にカルボニル基の類似体の誘導体化はR1置換基をいろいろなものに変えられる。このように、C1位にあるR1とR4は合成途中で操作できる。
C2.  C2位もよく操作できる。C2位のR2とQ2のグループは２つの方法のどれかで操作できる。1つは合成過程Aをつかい、1,4位の共役付加過程でSC-1、SC-2のような構造を合成する。置換基の様々な種類は付加され操作可能である。
この多用途性は合成過程Bを使ってもよい。しかし、合成過程Bはさらなる多用途性がある。マイナス型ベータエレメン-3-オンが主なもので、カルボニル基、エノレートの反応性の利点を使いC4のとなりの置換基によってC2位の特異性が誘導される。
C3.  C3位は合成過程Bを使って誘導を特異できる。例えば、SC-3 とSC-4とマイナス型ベータエレメン-３-オンはC3位の変換の代表例である。さらに、SC-3とSC-4のトリエチルシリロキシ基を変換すること、マイナス型ベータエレメン-３-オンのC3位のケトン基を誘導することはU2とV2グループの置換基と特異性によって操作できる。
C4.  C4位の誘導体も比較的容易にできる。SC-1とSC-4の近い対象性が重要なポイントである。この近い対象性はマイナス型ベータエレメンのような物質を直接合成させる。さらに、合成過程AとBはC4位の置換基を直接操作できる。例えば、C4位の２-プロペニル基の酸化（カーボーンから直接合成できる）はマイナス型ベータエレメン-６-オンのような、またマイナス型ベータエレメン-３-オンのような誘導体を合成できる。その誘導体はC4位（Q1グループも含めて）を容易に置換できる。さらに、C4位の２-プロペニル基を離脱することとは、レトロクライセン凝縮反応でケトン基をオレフィンに酸化することによって容易にできる。イソプロペニル基の誘導体も容易にできる。このようにQ1とR3グループはC4位の特異性によって操作できる。
C5.  スタンダードな過程を経て、α,α-位が置換されたケトン、例えば、α,α-ジメチルケトンやマイナス型ベータエレメン-６-オンに関連した物質が合成される。それは、イノレイト化学をりようしたC5位の特異性とU3とV3置換基によって操作できる。
C6.  C6を変換させることは、C3の変換誘導体を合成する事ができる。つまりカルボニル基の誘導体は容易に鏡像特異性を作り出し、さらに変換できる。たとえば、オレフィン化とE1とV1の置換基によって操作できる。
以上記述した事に加えて、輪状の拡大、縮小も中央の輪に５か７つの炭素原子がふくまれていればマイナス型ベータエレメンの誘導体で容易に合成できる。Wとは、炭素、窒素、酸素であり、また炭素の場合はUとVの置換基と同等の置換基を付加できる。同様に、Wが窒素であった場合、Rは下に記述してあるようないろいろな置換基が付加できる。
【００１５】
マイナス型ベータエレメンの類似体合成と組成の主張
この発見は、想像外に効果的で安全で多剤耐性効果がなく、毒性もないマイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型フッ化ベータエレメンの抗癌剤としてひろく利用できることを主張する。さらに、マイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型フッ化ベータエレメンとその類似体の構造も主張する。マイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型フッ化ベータエレメンの合成方法も主張する。マイナス型ベータエレメン、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型フッ化ベータエレメンとその類似対は単体、または他の製剤と併用して、抗癌剤として利用できることを主張する。
マイナス型ベータエレメナルは化学合成によってラセミ体、もしくは鏡像特異的に純粋な単体として合成できる。鏡像特異的な純粋度は薬剤の評価に重要な事である。例えば、サリドマイドの２つの鏡像異性体は１つは非常に有益な薬剤であり、もう１つはひどい奇形を起こす催奇形物質である。私達のマイナス型ベータエレメンの単体としての合成は重要な影響を与えるとともに、発見者はマイナス型ベータエレメナルとその類似体の合成方法を主張する。
マイナス型ベータエレメナルと他の薬草から抽出したものの混合物（Ito, S., Endo, K., Honma, H., and Ota, K. New constitutes of Thujopsis Dolabrata, Tetrahedron Letters, 1965, 42, 3777-3781.  deKraker, J., et al., Germacrenes from fresh costus roots, Phytochemistry 2001, 58, 481-487）。この混合物はマイナス型ベータエレメナルの単体の活性は起こらない。わたしたちの発見では、純粋なマイナス型ベータエレメン（９８%純度）から合成したマイナス型ベータエレメナルを構造を得るためにNMR、回転実験を行った。
ベータエレメナルとして主張している物質はラットの胆汁のなかにベータエレメンの代謝産物として９８%ベータエレメンと共に見付けられた。しかし、物質の鏡像特異性を決定できるデータはとられていない。発見者のこの特許において、初めて純粋なマイナス型ベータエレメナルの生物学的な活性が発見された。
【００１６】
２）抗癌剤としての主張
マイナス型ベータエレメンの誘導体の合成と腫瘍株化細胞の成長抑制試験
マイナス型ベータエレメンの１０の誘導体（FIG. 6）とマイナス型ベータエレメンの３つの類似体（FIG. 8）は合成され腫瘍株化細胞の成長抑制を体外で試験した。
さらに、発見者は薬剤の他の物質と併用した場合のマイナス型ベータエレメンに関連する誘導体の治療に有効な投与量として癌治療方法を提供した。この方法は白血病や腫瘍の治療として有効であろう。特に、この治療法は脳腫瘍、肺癌、乳癌、前立腺癌、直腸結腸癌に有効である。
この発見は薬剤の墓の物質と併用してもマイナス型ベータエレメンの類似体を活性成分とした癌治療薬剤をていきょうする。この製薬薬剤は他の活性成分とも併用できる。
マイナス型ベータエレメンに関連した類似体は、特に体外でも、体内でも多剤薬剤抵抗があらわれた時、癌治療に非常に有益である。下の表にあるように、細胞の多剤耐性に抵抗する薬剤として癌治療剤として有益である。
治療のための投与量の規模と投与の方法は病状と重症度に因る。一般的に、日々の抗癌剤の投与量は哺乳類の体重につき3-300mg/kg、10-40mg/kgを1度、また数度の投与が好まれる。異常なケースでは、80mg/kg以上の投与が必要になるだろう。
哺乳類、特に人間には様々な有益な量と形での投与法が考えられる。例えば、経口、直腸、局所的、非経口的、視覚、肺、鼻などの方法が考えられる。投与の形としては、錠剤、トローチ、分散、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルが考えられる。
投与法は経口、直腸、局所的（経皮的な方法、エアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、ダストパウダー）、非経口的（皮下、筋肉内、動脈内、静脈内）、視覚（眼）、肺（鼻や口からの吸引）、鼻の投与法がある。投与の方法は症状の内容と重症度に因る。製薬として使われているいかなる方法で投与されるであろう。
経口投与の形としては、いかなる薬剤の溶液も利用できる。例えば、水、グリコール、油、アルコール、香料、保存料、着色料、経口薬剤を作るのに必要なもの（懸濁液、エリキシル剤、溶液）やでんぷん、糖、微結晶性のセルロース、希釈液、顆粒化するもの、潤滑性のもの、統合剤、分解剤なとが考えられる。粉、カプセル、錠剤のような経口固体薬剤は経口液体薬剤よりも好まれる。カプセルには水溶液、非水溶液でコーティングしてもよい。さらに、上記のような投与は発見された物質は装置からの離脱によって操作される。
現在発見されている製薬薬剤は、経口投与、特にカプセルや錠剤のような分散型のユニットになったものが適用される。そのカプセルや錠剤には、すでに決められた量の活性成分が、粉、顆粒、または液体、水溶液、非水溶液の混合物、水と油の乳濁液として含まれている。このような成分は製薬として使われているいかなる方法でつくられる。一般的に、薬剤は均一に活性成分と液体、固体キャリアでつくられ、必要ならば好まれる形にかたぬいてある。たとえば、錠剤は１つ、もしくは多くの修飾成分と共に圧縮、型抜きによってつくられている。錠剤は活性成分を粉や顆粒にし、結合剤、潤滑剤、希釈液、表面的に活性、分解物質と混合され適当な機械で圧縮される。かたぬきは希釈液で湿気を与え、活性物質を混合され適当な機械でかたぬきされる。
この発見は後に書かれてある実験詳細でさらによく理解されるだろう。しかし、この技術は特異の方法、結果として後に書かれているように図解的を用いて容易に発見が理解されるだろう。マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータエレメナル、マイナス型フッ化ベータエレメンといろいろな保護基を用いたその類似体の合成方法、と合成途上の中間物は技術として理解される。その保護基は図解式にかかれている例を記述した。
【００１７】
３）抗癌剤としての併用療法
マイナス型ベータエレメンとその類似体、誘導体は体内、体外にて特に多剤耐性（MDR）が存在する癌治療に有益である。下の例に書かれているように細胞の多剤耐性に抵抗する薬剤として多剤耐性で苦しむ癌の症状を治療、予防、寛解させるために有益である。
この発見は単体としての薬剤の有効性に限らず、シスプラシン、5フルオロウラシル、タキソール、タキソールの類似体の投与とマイナス型ベータエレメン、とその類似体、誘導体の１つの投与の組み合わせの治療法も提供する。それによって、投与量を最小におさえることができる。マイナス型ベータエレメンはシスプラチン、5フルオロウラシル、タキソール、タキソールの類似体の有益性を癌の株化細胞において増強させる。上に書いてあるマイナス型ベータエレメンの類似対でも同じような作用がある。
この治療上に有益な投与量とは薬剤が組織、システム、動物、人間に生物学的に医学的に反応する研究者、獣医、医師、臨床医が考えた投与量である。治療法の変化は生化学的性質に現れ、病状や症状を軽減する。予防的に輸液ナ投与量とは、薬剤が組織、システム、動物、人間に生物学的に医学的に予防する研究者、獣医、医師、臨床医が考えた投与量である。治療枠とは有益な最小量と最大量の平均値のことでその結果、患者への毒性症状がでる直前の量である。
シスプラチン、タキソール、パクリタキセル、5フルオロウラシルと上に記述した［マイナス型ベータエレメンとその類似体、誘導体の1つ］との組み合わせを利用した投与療法は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別、症状、病状、治療状態、投与の仕方、患者の心臓、腎臓、肝臓の機能、特異な塩やエステルなどの混合物などいろいろなことに因る。様々な投与量は治療枠に因る。併用療法として２つの活性成分が使われているので、併用される事でそれぞれの成分の作用強度と相乗効果は得られる。これらの効果は治療的に有効な量、予防的に有効な量をきめるために臨床医によって考慮されている。
この発見は１）シスプラシン、タキソール、パクリタキソル、5フルオロウラシル、と２）上に記述した［マイナス型ベータエレメンとその類似体、誘導体の1つ］を活性成分として、薬剤に適用したキャリアを用いた癌治療の薬剤を提供する。現在発見されている薬剤成分はさらに他の活性成分の薬剤と構成される。
この発見は、マイナス型ベータエレメンとそれに関連する物質はシスプラチン、パクリタキセル、タキソテア、５フルオロウラシルの他の物質の効果的な投与量で併用した場合の治療に有効な投与量として癌治療方法を提供した。この方法は腫瘍の治療として有効であろう。特に、この治療法は脳腫瘍、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、頚部癌、対腸癌、乳癌、前立腺癌に有効である。
哺乳類、特に人間に効果的な量を投与する適当な方法がある。たとえば、経口、直腸、局所的、非経口的、視覚、肺、鼻などの投与方法がある。投与の形として、錠剤、トローチ、分散、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾルなどがある。
投与法は経口、直腸、局所的（経皮的な方法、エアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、ダストパウダーを含め）、非経口的（皮下、筋肉内、動脈内、静脈内）、視覚（眼）、肺（鼻や口からの吸引）、鼻の投与法がある。投与の方法は症状の内容と重症度に因る。製薬として使われているいかなる方法で投与されるであろう。
【００１８】
実例
例１
##STR3##の合成
(E)- ゲラニル3-メチル-3-ブテン酸
乾燥状態のジクロロメタンを溶液とし、ゲラニオール（225μl、1.29mmol，1.0当量）とトリエチルアミン（271μl、1.94mmol，1.5当量）を−78℃まで冷却させ、3,3ジメチルアクリロイル（159μl，1.43mmol，1.1当量）を一滴ずつ加える。3時間後、水（1ml）とジクロロメタン（1ml）で溶液を希釈し、クーリングバスから取り出す。混合物はジクロロメタン（3×20ml）で抽出し、有機化合物はMgSO4で乾燥させ、真空状態で濃縮させる。ラジアルクロマトグラフィーを用いて（4mmSiO2プレート、溶離剤、7%−EtOAc−ヘキサン誘導体、4-6留分、30ml/留分）無色オイル状生成物##STR3##（301mg、1.27mmol、99%収率）として生成させる。Rf出発原料0.14、生成物、0.51（5：1ヘキサン誘導体−EtOAc、アニスアルデヒド）。FTIR（フィルム）2970、2919、2858、1738、1653、1445、1377、1206、1153、987、896cm-1。Sup.1H NMP（400MHz、CDCl3）δ5.31−5.35（m、1H）5.04−5.08（m、1H）、4.88（bs、1H）、4.83（bs、1H）4.60(s、1H)、4.58(s、1H)、3.01(s、2H)、2. 00-2.09(m、4H)、1.79(s、3H)、1.69(s、3H)、1.66(s、3H)、3.01(s、2H)、2.00-2.09(m、4H)、1.79(s、3H)、1.69(s、3H)、1.66(s、3H)、1.58(s、3H)。sup.13CNMR(101MHz,CDl3)171.2、142.2、138.6、131.7、123.7、118.2、114.5、61.4、43.4、39.4、26.2、25.6、22.3、17.6、16.4。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C15H24O2]+236.1776を分析した結果は236.1768であることが分かった。
【００１９】
例２
##STR4a##の合成
(2S,3S)−2−イソプロペニル−3、７−ジメチル−3−ビニル−6−オクテノイックアシド
70℃で(R,R)-1,2-ジフェニル−1と2−エチレンジアミン（718mg、0.940mmol、1.0当量）の3,5−ビス（トリフルオロメチル）ベンゼンスルホンアミドを3時間程度乾燥させる。フラスコ内の空気を抜き、乾燥N2で洗い流し、これを３回繰り返す。新しく蒸留したジクロロエタン（32ml）を加え、均質溶液を−78℃まで冷却させる。10分後、新しく蒸留したBbr3（3.76ml、0.5M、CH2Cl2を溶液とする、1.88mmol、2.0当量）を加える。−78℃で溶液を５分間程度かき混ぜ、23℃まで加熱させる。16時間後、真空状態で全ての揮発性物質を除去し、生成した白い固体生成物をジクロロメタン（20ml）に溶かし、再び溶液を濃縮させる。60分後、フラスコ内の空気を抜き、N2で３回洗い流す。ときどき振り混ぜて白色固体生成物を新しく蒸留したトルエン（32ml）に充分に溶解させる。ブロムボラン（##STR1##）を−78℃まで冷却させ、一滴ずつEt3N(983μl，7.05mmol，7.5当量)を加え、混合物を溶液になるまで25分間かき混ぜる。−78℃で冷却された##STR3##（175mg、0.740mmol、0.8当量）を一滴ずつ加え、トルエン（4ml）に溶かす。生成した溶液を−70℃で27時間かき混ぜ、それから、４℃まで加熱させる。36時間後、生成した溶液を23℃まで加熱させ、ジエチルエーテル（40ml）で希釈させ、10%HCl で溶液をpH1まで酸性にする。ジエチルエーテル（4×60ml）で抽出し、エーテル抽出物はMgSO4で乾燥させ、真空状態で濃縮させ、3：1の黄色いオイル（149.2mg、0.631mmol、収率85%）状の##STR4a##と少量のジアステレオマーを生成させる。Rf出発原料0.71。生成物、0.26（5%MeOH-CHCl3、Verghns）。FTIR（フィルム）3084、3055、2972、2972、2859、2729、1707、1638、1452、1413、1377、1265、916、742cm−1。Sup.1HNMR（400MHz、CDCl3）δ6.09、5.86（dd、1H、J=10.9、17.5、主生成物）、4.96−5.12（m、5HO）3.08（s、1H、主生成物）、3.07（s、1H、少量生成物）、1.85−1.91（m、2H）、1.85（s、3H）、1.67（s、3H）、1.60（s、3H）、1.41−1.57（m、2H）、1.18（s、3H、主生成物）、1.12（s、3H、少量生成物）。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C15H24O2]+236.1776を分析した結果は236.1783であることが分かった。
【００２０】
例３
##STR4b##の合成
(2S,3S)−2−イソプロペニル−3、7−ジメチル−3−ビニル−6−オクタノール
23℃でLiAlH4（15mg,0.138mmol,5.0当量）を用いて、乾燥ジエチルエーテル（2ml）を溶液とする##STR4a##と少量のジアステレオマー（18mg、0.076mmol、1.0当量）の混合物を処理する。12時間後、LiAlH4（15mg、0.138mmol、5.0当量）とジエチルエーテル（2ml）を加え、さらに12時間後、順次にH2O（50μl）、NaOH(15%w/v、50μl)とH2O（150μl）を加え、10分間かき混ぜ、濾過し、最後にMgSO4で乾燥させ、真空状態で濃縮させる。フラッシュクロマトグラフィー法（10gSiO2、溶離剤、10%EtOAc−ヘキサン誘導体。生成物、7-21留分、10ml/留分）で3：1の無色オイル（15.8mg、0.071mmol、収率93%）状の##STR4b##と少量のジアステレオマーを生成させる。Rf出発原料、0.46。生成物、0.72（12%MeOH-CHCl3, アニスアルデヒド）。ラジアルクロマトグラフィー（4mm SiO2プレート、溶離剤、4：1EtOAc−ヘキサン誘導体、少量、留分11-15。##STR4b##、留分16-35、30ml/留分）を用いて、AgNO3溶液で3：1のジアステレオマーを分離させる。それから、シリカゲル（20g、200mlの10％EtOAc−ヘキサン誘導体）で純##STR4b##とジアステレオイソメルを生成させる。AgNO3溶液薄層クロマトグラフィー（TLC）：Rf##STR4b##、0.20。少量0.35（12%MeOH-CHCl3、アニスアルデヒド）。##STR4b##の鏡像異性体の純度は高性能液体クロマトグラフィーによる高速分離を行うことで、有効率は99：1を上回った。（キラルカラム、1%2-プロパノール−ヘキサン誘導体、214nm、1ml/分、保持時間：S,S−異性体、##STR4b##=9.4分間、R,R−異性体=23分間）：[α]23D-40.2°(c=0.54,CHCl3 )。FTIR（フィルム）3377、3080、2969、2925、2858、1639、1450、1414、1376、1033、1005、912、893cm-1。sup.11H  NMR( 500MHz、CDCl3)δ5.80（dd、1H、J=10.8、17.5）、5.02−5.08（m、3H）、4.91（dd、1H、J=1.3、17.5）、4.83（d、1H、J=1.6）、3.72（dd、1H、J=4.3、10.7）、1.82−1.90（m、2H）、1.77（m、3H）、1.67（d、1H、J=0.8）、1.57（s、3H）、1.30−1.44（m、2H）、1.04（s、3H）。.sup.13 C NMR（101MHz、CDCl3）144.4、144.3、131.3、124.7、115.7、112.8、61.1、58.6、41.2、39.4、25.7、23.2、22.6、20.8、17.6。高分解能質量分析計(CI,NH3)m/zを用いて[C15H26O]+ NH3240.2327を分析した結果は240.2317であることが分かった。
【００２１】
例４
##STR4c##の合成
(2S,3S)−2−イソプロペニル−3、7−ジメチル−3−ビニル−6−オクタノール
23℃でジクロロメタン（2ml）を溶液とする##STR4b##の中に乾燥ジクロロメタン（5ml）を溶液とする Dess-Martin試薬のけん濁液（232mg、0.546mmol、1.5当量）を加える。一時間後、セライト545で溶液を濾過し、真空状態で濃縮させてから、ヘキサン誘導体で希釈させ、再びセライト545で溶液を濾過する。濃縮された溶液を更に真空状態で濃縮させ、フラッシュクロマトグラフィー法（10g SiO2；溶離液、4%EtOAc−ヘキサン誘導体、生成物、留分4-8；10ml/留分）で##STR4c##（79mg、0.359mmol、収率98%）を無色オイルとして生成させる。Rf出発原料0.28、生成物、0.58（5：1ヘキサン誘導体−EtOAc、アニスアルデヒド）。[α]23D-40.2°(c=0.91、CHCl3 )。FTIR(フィルム) 2970、2921、2859、1721、1638、1453、1377、914 cm-1。.sup.1H NMR(500MHz、CDCl3)δ9.65(d、1H、J=4.5)、5.92(dd、1H、J=10.9、17.6)、5.14−5.17(m、2H)、5.06(t、1H、J=7.1)、 5.00(d、1H、J=17.6)、4.88(s、1H)、2.70(s、3H)、1.38−1.50(m、2H)、1.15(s、3H)、 1.67(s、3H)、1.57(s、3H)、1.38−1.50(m、2H)、1.15(s、3H)。sup.13C NMR(126MHz、CDCl3)d202.0、143.1、139.5、131.5、124.2、116.8、114.2、67.1、42.3、39.1、25.7、25.6、22.4、20.6、17.6。高分解能質量分析計(EI,Pos)m/zを用いて[C15H24O]+220.1827を分析した結果は220.1817であることが分かった。
【００２２】
例5
##STR5a##の合成
(1S,2S,3S,6S)−2,6−ジイソプロピル−3−ビニルメチル−シクロヘキサノール
−78℃でジエチルアルミニウム塩化物（210μl、1.8Mトルエンを溶液とする0.379mmol、1.1当量）を一滴ずつ乾燥ジクロロメタン（10ml）を溶液とする##STR4c##（76mg、0.344mmol、1.0当量）に滴下する。1.5時間後、トリエチルアミン（500μl）を加え、クーリングバスから取り出し、この溶液を飽和NaHCO3（20ml）とジクロロメタン（2×20ml）の混合物に加え、MgSO4で結合した有機フラクションを乾燥させ、真空状態で濃縮させる。フラッシュクロマトグラフィー法で（15gSiO2、溶離剤、4%ヘキサン誘導体、生成物、11-23、10ml）96：4の##STR5a##と少量のジアステレオマー（70.1mg、0.318mmol、収率92%））を生成させる。Rf：出発原料、0.58．生成物、0.41（5：1ヘキサン誘導体−EtOAc、アニスアルデヒド）。ラジアルクロマトグラフィー（2mmプレート、溶離液、5：1ヘキサン誘導体−EtOAc、生成物、留分10-33、3ml留分）を用いて、AgNO3溶液でジアステレオマー混合物を分離させる。それから、シリカゲル（10g、150ml4%EtOAc−ヘキサン誘導体に溶かす）で無色オイル状の純##STR5a##（収率88％）として生成させる。AgNO3溶液薄層クロマトグラフィー（TLC）：Rf##STR5b##、0.08。少量0.17（12%MeOH-CHCl3、アニスアルデヒド）。[α]23D+17.8°(c=0.91、CHCl3 )。FTIR(フィルム)3566、3486、2969、2931、1639、1454、1375、1004、910、889 cm-1。.sup.1H NMR(500MHz、CDCl3)δ5.78(dd、1H、 J=10.9、17.4)、5.06（s、1H）、4.88-4.92(m、4H)、4.76(s、1H)、3.77(t、1H、 J=10.4)、2.08 (dt、1H、J=4.8、 10.8)、1.98(d、1H、J=10.4)、1.90(bs、1H)、 1.80(s、3H)、 1.79(s、3H)、1.51-1.66(m、3H)、 1.42(dt、1H、J=3.1、13.0)、1.06(s、3H)；.sup.13C NMR(101MHz、CDCl3)d148.9、147.1、144.2、114.1、112.2、110.3、69.3、59.7、53.7、41.3、39.0、26.2、25.0、19.5、18.1。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C15H24O]+220.1827を分析した結果は220.1826であることが分かった。
【００２３】
例６
##STR5b##の合成
2−クロル−１,３−ジメチル−1,3,2−ジアザホスファシクロペンタンと##STR5a##で##STR5b##を生成する
23℃で、2-クロロ-1と3-ジメチル-1と3,2ジアザホスファシクロペンタン（10μl、0.076mmol、1.4当量）を一滴ずつ##STR5a##（12mg、0.054mmol、1.0当量）とトリエチルアミン（8μl、0.06mmol、1.1当量）を乾燥ジクロロメタン（1ml）に溶かした溶液に滴下する。75分後、適宜の水素パーオキサイド（7μl、30%水溶液、0.065mmol、1.2当量）を加え、10分間よくかき混ぜ、飽和Na2SO4（1ml）で冷却させる。再び、5分間よくかき混ぜ、溶液をジクロロメタン（20ml）と水（20ml）の混合物に加える。水の部分はジクロロメタン（2×20ml）で抽出され、そして、結合した有機フラクションはMgSO4で乾燥し、真空状態で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー法で（10g SiO2、溶離剤、1% MeOH-CHCl3、生成物、留分12-15、10ml/留分）##STR5a##（2.5mg、収率21%）を回収するほかに、無色オイル状##STR5b##も生成させる。Rf出発原料、0.78。生成物、0.35（5%MeOH-CHCl3、Verghns）。[α]23D+25.4°(c=1.03、CHCl3 )。FTIR(フィルム)3079、2934、2880、1647、1451、1269、1240、1160、1003、941 cm-1。.sup.1H NMR(500MHz、CDCl3)δ5.74(dd、1H、J=10.3)、2.93-3.04（m、4H）、2.50-2.54(m、6H)、 2.17-2.22(m、1H)、 2.00-2.06(m、1H)、1.87(s、3H)、1.36-1.70(m、4H)、1.04(s、3H)。 .sup.13C NMR(101MHz、 CDCl3) δ148.5、146.9、142.7、114.6(bm)、112.9、110.4、77.8(bm)、 58.7(bm)、53.8、 47.3(d)、41.7、38.7、 33.8、33.6、27.9、20.3、18.3。 sup.31 P NMR(121MHz、CDCl3、Ph3Pの外部規格は-6ppmとする。δ22.65 (t、J=10)。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C19H33O2N2P]+352.2280を分析した結果は352.2285であることが分かった。
【００２４】
例7
##STR6##の合成
マイナス型ベータエレメン
-33℃で乾燥テトラヒドロフラン（1.5ml）に乾燥された##STR5b##（53mg、0.152mmol、1.0当量、トルエンの共沸混合物）とtert-アミルアルコール（67μl、0.608mmol、4.0当量）を多量リチウムが含まれている青色アンモニア溶液（5ml）に滴下する。テトラヒドロフランでフラスコをよくすすぎ、10時間程度溶液をかき混ぜる。イソプレン溶液(ca.300μl)と飽和水溶状HN4C1(2ml)を滴下し、冷却させ、そして、ペンタン類(4ml)で希釈する。23℃まで加熱させ、ペンタンの混合物（2×30ml）に溶液を加え、結合した有機フラクションはNa2SO4で乾燥し、真空状態で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー法で（10g SiO2、溶離剤、生成物、留分4-7、10ml/留分）無色オイル状##STR6b##（29.5mg、0.144mmol、収率95%）を生成させる。Rf出発原料、0.00。生成物、0.71（ペンタン、Verghns）。[α]23D-15.4°(c=0.59、CHCl3)。 FTIR (フィルム)3083、 2969、2931、1644、 1454、1440、1374、1004、 909cm-1。 sup.1H NMR(500MHz、CDCl3)δ5.82(dd、 1H、J=11.0、17.4)、 4.88-4.92(m、2H)、4.82(t、1H、J=1.6)、4.70-4.72(m、2H)、4.59(bs、1H)、1.99-2.03(m、1H)、1.92-1.96 (m、2H)、1.75(s、1H)、1.71(s、3H)、1.42-1.63(m、6H)、1.01(s、3H)。sup.13C NMR(101 MHz、CDl3)δ150.4、150.3、147.7、112.1、109.8、 108.2、52.8、45.7、39.9、39.8、32.9、26.8、24.7、21.1、16.6。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C15H24]+204.1878を分析した結果は204.1869であることが分かった。
【００２５】
例8
##STR7##の合成
(1S,3R,4R)-1-アセチル-3-イソプロペニル-4-ビニルシクロヘキサン
1：1の2-メチル-2-プロパノール-水（1.5ml）を溶液とし、(DHQD)2-PHAL溶液(11mg、0.0137mmol、0.1当量)とカリウムオスミウム酸(VI)二水和物(0.5mg、0.014mmol、0.01当量)とカリウムフェリシアン（135mg、0.411mmol、3.0当量）と炭酸カリウム（57mg、0.411mmol、3.0当量）およびメタンスルホンアミド（13mg、0.137mmol、1.0当量）などの溶液を0℃まで冷却させる。0℃で２相性混合物を##STR6##（28mg、0.137mmol、1.0当量）に加え、反応混合物を11時間程度かき混ぜ、溶液の色と沈殿が消えるまでNa2SO3を加える。そして、溶液を23℃まで加熱させ、ジクロロメタン（20ml）と水の混合物（20ml）に加える。水溶液はメチレンクロライド（2 × 20ml）で抽出し、結合した有機フラクションはNa2SO4で乾燥させ、真空状態で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー法（15gSiO2、溶離剤は28%のEtOAcヘキサン誘導体とする。生成物、留分19-30、10ml/留分）で##STR6##（5mg、0.024mmol、収率17%）を回収するほか、無色の3：1の1,2グリコールのジアステレオマー混合物（24.8 mg、0.104 mmol、収率76%）を生成させる。23℃でヨードプロテイン（62 mg、0.289 mmol、3.0当量）を4：1のテトラヒドロフラン-水（2ml）の1,2グリコール溶液(23 mg、0.096 mmol、1.0当量)に加える。30分後、溶液をメチレンクロライド（20ml）と水（20ml）の混合物に加え、水溶液はメチレンクロライド（2 × 20ml）で抽出し、結合した有機フラクションはNa2SO4で乾燥させ、真空状態で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー法（10gSiO2、溶離剤は28%のEtOAcヘキサン誘導体とする。生成物、留分3-9、10ml/留分）で無色オイル状##STR7##（19 mg、0.092 mmol、収率96%）として生成させる。Rf 出発原料、0.07。生成物、0.61 (3:1ヘキサン誘導体-EtOAc、 Verghns)。 [□]23D +37.0(c=1.0、 CHCl3)。 FTIR(フィルム)3082、2971、2935、2864、1711、1638、1441、1373、1353、908、892 cm-1。 sup.1 H NMR (500 MHz、 CDCl3) □ 5.80(dd、1H、J=10.6、17.8)、4.89-4.93 (m、2H)、4.84 (t、1H、J=1.4)、4.60 (s、1H)、2.37-2.43 (m、1H)、2.16 (s、3H)、1.97-2.00 (m、 1H)、1.74-1.78 (m、1H)、1.67-1.71 (m、5H)、1.46-1.59 (m、3J)、1.00 (s、3H)。sup.13 C NMR (101 MHz、CDCl3)□211.6、149.6、146.9、112.6、110.3、52.0、51.9、39.6、39.1、29.4、28.2、24.7、23.7、16.5。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C14H22O]+ 206.1671を分析した結果は206.1661であることが分かった。
【００２６】
例9
##STR2##の合成
(+)-フスコール
-78℃でブチル基リチウム(244 ul、1.57 Mをヘキサン誘導体に溶かす、0.384 mmol、4.95当量)を2-メチル-2-プロパノール-水(37 ul、0.388 mmol、5.0当量)を4：1のテトラヒドロフランに溶かした溶液に加える。15分後、ブチル基（ジブチルホスホノ）-2-ブテン酸(108 ul、0.388 mmol、5.0当量)を加え、混合物に対して加熱を行い、溶液を形成させる。更に15分後、23℃で黄色いクリーム状の炭素リン酸塩化合物溶液を##STR7## (16 mg、0.078 mmol、1.0当量)をテトラヒドロフラン（1.5ml）に溶かした溶液に加える。18時間後、同じ方法で別の5当量の炭素リン酸塩化合物を加える。これを28〜41時間内で繰り返す。かき混ぜてから48時間後、反応混合物はジクロロメタンで希釈し、シリカゲルで(15 g、200 ml CH2Cl2)真空状態で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー法（15gSiO2、溶離剤は1.5%のEtOAc-ヘキサン誘導体、生成物、留分7-15、10ml/留分）で12：1のジアステレオマー混合物のブチル基5-[(1'S,3'R,4'R)-3'-イソプロペニル-4'-メチル基-4'-エチレンシクロヘキシル]-(E,E)- ジプロペニル(22.1 mg、0.067 mmol、収率87%)を生成させる。Rf 出発原料0.55、生成物、0.75（5：1ヘキサン誘導体-EtOA、アニスアルデヒド）。薄層クロマトグラフィー（0.5mmプレート、9：1ペンタン類ジエチル・エーテル、Rfトランス型、トランス型-5-[(1'S,3'R,4'R)-3'-イソプロペニル-4'-メチル基-4'ビニルシクロヘキシル]-(E,E)- ヘキサジエノアート、0.42），無色オイル状の純の5-[(1'S,3'R,4'R)-3'-イソプロペニル-4'-メチル基-4'-ビニルシクロヘキシル]-(E,E)- ヘキサジエノアート、収率80%）を生成させる。：[α]23D+24.5°(c=1.17、CHCl3)。
−30℃でメチルリチウム（161μl、1.5Mをジエチルエーテルに溶かす。0.242mmol、5.0当量）を5-[(1'S,3'R,4'R)-3'-イソプロペニル-4'-メチル基-4'-ビニールシクロヘキシル]-(E,E)- ヘキサジエノアート（16mg、0.048mmol、1.0当量）のエーテル溶液に加える。12時間後、水溶NH4CIで冷却され、それから23℃まで加熱させ、ジエチル・エーテル(10ml)と水(10ml)の混合物に加える。ジエチル・エーテル(2×20ml)によって水の部分は抽出され、そして、結合した有機フラクションは、Na2SO4で乾燥させ、真空状態で濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー法（15gSiO2、溶離剤、6%EtOAc、-1%トリエチルアミン−ヘキサン誘導体、生成物、留分10-20、10ml/留分）で無色オイル状##STR2##（12.5mg、0.043mmol、収率90%）として生成させる。Rf出発原料、0.75。生成物、0.27（5：1ヘキサン誘導体−EtOAc、アニスアルデヒド）。[α]23D+19.7°(c=1.0、CHCl3)；FTIR (フィルム)3402、3360、3082、2971、 2928、 2860、1637、 1441、1374、966、908、890 cm-1。UV/vis λmax=240nm、ε=35、000。sup.1H NMR(500MHz、CDCl3)δ6.48(dd、1H、J=10.8、15.3)、5.87(d、1H、J=10.8)、5.82(dd、1H、 J=11.1、17.2)、5.76(d、1H、J=15.3)、4.88-4.92(m、2H)、4.81(t、1H、J-1.5)、4.58(s、1H)、2.01(dd、1H、J=3.5、12.6)、1.95-1.98(m、1H)、1.79(s、3H)、1.70(s、3H)、1.43-1.60 (m、6H)、 1.35(s、6H)、1.00(s、3H)。sup.13C NMR(126MHz、CDl3)、δ150.2、147.6、143.4、139.3、123.1、122.3、112.1、109.9、70.9、52.8、47.7、39.9、39.8、32.7、29.9、26.6、24.7、16.7、15.3。高分解能質量分析計(EI、Pos)m/zを用いて[C20H32O]+288.2453を分析した結果は288.2440であることが分かった。
【００２７】
例10
##STR9##（Lr-1）の合成
（R又はS）-2-（(1R,3S,4S)-3-イソプロペニル-4-メチル基-4-ビニール-シクロヘキシル）-プロパン-1,２-ジオール
1H NMR(400Mhz、CDCl3):δ=6.10(1H、dd、J=17.6、10.8Hz)、5.15(1H、d、J=18Hz)、 5.06 (1H、d、J =10.8 Hz )、4.70(2H、s)、3.42(1H、dd、J=11.2、8.4Hz)、3.23(1H、dd、J=11.2、5.2Hz)、2.78(1H、s)、2.15(1H、dd、J=8.0、5.2Hz)、2.01(1H、dd、J=12.4、3.2Hz)、1.93 (1H、tt、J=12.0、3.2Hz)、1.73(3H、s)、1.61-1.56(1H、m)、1.52-1.24(5H、mシリーズ)、1.26 (3H、s)、1.09(3H、s)。
【００２８】
例11
##STR10##（Lr-2）の合成
(S)-2-((1R,3R,4S)-3-イソプロペニル-4-メチル基-4-ビニール-シクロヘキシル)-プロパン-1,2-ジオールと(R)- 2-((1R,3R,4S)-3-イソプロペニル-4-メチル基-4-ビニール-シクロヘキシル)-プロパン-1,2-ジオール
1H NMR(400Mhz、CDC13):δ=5.79(1H、dd、J=17.6、10.8Hz)、 4.81-4.91 (3H、 m)、4.58(s、0.5H)、4.56(s、0.5H)、3.58(1H、1/2ABq、J =10.8 Hz)、3.43(1H、1/2ABq、J =10.8 Hz)、2.26(1H、br s)、2.08 (1H、br s)、1.96(1H、dd、J=12.4、4.0Hz)、1.70(s、1.5H)、1.69(s、1.5H)、1.64-1.22((7H、mシリーズ)、1.14(3H、s)、0.98 (3H、s)。
【００２９】
例12
##STR11##（Lr-3）の合成
1-((1R、3R、4S)-3-イソプロペニル-4-メチル基-4-ビニール-シクロヘキシル)- エタノン
1H NMR(400Mhz、CDCl3):δ=5.89(1H、dd、J=17.6、10.4Hz)、4.91(1H、d、J=13.6Hz)、4.91(1H、d、J=15.6Hz)、4.84(1H、s)、4.60（IH、s）、2.46-2.36(1H、s)、2.16(3H、s)、1.99(1H、dd、J=9.2、 7.2Hz)、1.79-1.66(2H、 m)、1.71(3H、s)、1.57-1.44(4H、 m)、0.99(3H、s)。
【００３０】
例13
##STR12##（Lr-4）の合成
（S）-1,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2エノールと（Ｒ）-1,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2エノール
1H NMR(400Mhz、CDCl3):δ=1.55(t、1H、1JHH=12.5Hz)、1.61(br s、1H)、1.67(s、3H)、 1.72(s、3H)、1.81(s、3H)、1.94(m、0.5H)、1.97(m、0.5H)、2.03(m、0.5H)、2.06(m、0.5H)、2.10(m、0.5H)、2.15(m、0.5H)、2.25(m、1H)、1.94(m、0.5H)、1.97(m、0.5H)、4.72 (s、2H)、4.81(s、1H)、4.97(s、1H)、5.62(s、1H)
【００３１】
例14
##STR13##（Lr-5）の合成
（S）-5-イソプロペニル-1,2-ジメチル-シ-クロヘキシル-2-エノールと（Ｒ）-5-イソプロペニル-1,2-ジメチル-シ-クロヘキシル-2-エノール
1H NMR(400Mhz、CDCl3):δ=1.33(s、3H)、1.50(bs、1H)、1.66(t、1H、2JHH=12.1Hz)、1.74(s、6H)、1.89-1.98(m、2H)、2.09(m、1H)、2.30(br t、1H)、4.74(s、2H)、5.41(s、1H)
【００３２】
例15
##STR14##（Lr-6）の合成
(S)-3,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノン
1H NMR(400Mhz、CDC13):δ=1.75(br s、6H)、1.88(s、3H)、 2.29-2.70(m、5H)、2.29-2.70 (m、5H)、4.76(s、2H)、4.81(s、1H)、5.05(s、1H)
【００３３】
例16
##STR15##（Lr-7）の合成
(1S,5S)-3,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノールと(1R,5S)-3,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノール
1H NMR(400Mhz、CDCl3):δ=1.53(t、1H、xJHH=12.0Hz)、1.65(br s、1H)、1.72(s、3H)、1.74(s、3H)、1.78(s、3H)、2.09-2.18(m、3H)、2.26(br t、1H)、4.18(br t、1H)、4.65(s、
1H)、4.73(s、1H)、4.93(s、1H)
【００３４】
例17
##STR16##（Lr-8）の合成
(1R,5S)-1-イソブチル-3,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノールと(1S,5S)-1-イソブチル-3,5-ジイソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノール
1H NMR(300Mhz、CDCl3):δ=0.92(2、d、3H)、0.99(2、d、3H)、1.54(m、2H)、1.72(s、3H)、1.74(s、3H)、1.83(m、1H)、1.87(m、1H)、1.95(m、1H)、2.10-2.18(mセット（2）、1H)2.28(br t、1H)、4.74(s、2H)、5.37(m、1H)
【００３５】
例18
##STR17##（Lr-9 とLr-10）の合成
(S)-5-イソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノンと(R)-5-イソプロペニル-2-メチル基-シクロヘキシル-2-エノン
1H NMR(300Mhz、CDCl3):δ=1.67(s、3H)、1.69(s、3H)、2.30-2.69(m、5H)、4.76(s、1H)、4.80(s、1H)、6.77(br s、1H) 
【００３６】
例19
##STR21##の合成
マイナス型ベータエレメノール
K2CO3(580mg、4.205mmol)をジクロロメタン(DMC、50ml)のベータ型エレメン液(##STR6##、純度98%、780mg、3.823mmol)に加え、0℃まで冷却させる。15分経過したところで、m-CPBA（純度70%/wt、942mg、3.823mmol）を加える。0℃で２時間かき混ぜした後に、濾過法によって白降汞を取り除き、DCM（10ml）で沈殿物を洗う。室温で減圧濃縮を行い、結合した有機相を粘着性のある透明液体を生成させる。更に、生成物をFCCとSiO2で浄化させる。ヘキサン類における3%の酢酸エチルで溶離させ、反応を起こしていなかったβ型エレメン（198mg、25%）を生成させる。ヘキサン誘導体における5%の酢酸エチルで継続的に溶離させ、2:1のジアステレオマーエポキシド(450mg、53％)混合物を生成させ、この混合物はさらなる浄化なしで次のステップで使用される。乾燥エーテル(10ml)にジイソプロピルアミン溶液を溶かし、-70℃に達するまでn-BuLi 触媒（1.6M、ヘキサン溶液5.96ml）を加え、それから、室温に達するまで10分以上置く。生成したエポキシド（350mg、1.591mmol）溶液を一滴ずつ乾燥エーテル(20ml)に溶かし、室温で、アルゴンの中で5時間程度かき混ぜる。水(5ml)で反応を冷却させ、ペンタン(150ml)で抽出する。有機相は水(30ml)と塩水(30ml)で洗い、NaSO4で乾燥させる。溶剤の蒸発によって黄色粘稠液が生成される。この黄色粘稠液をFCC，SiO2で浄化させ、20%のエチルアセテートで溶離を行い、2:1のアリル基のアルコール混合物（270ml、77%）を生成させる。繰り返しコラムクロマトグラフィーを行い、純異性体(##STR21##，マイナス型ベータエレメノール)が得られる。##STR21##とマイナス型ベータエレメノールのスペクトルデータは以下通りである。
IR vmax(neat)/cm-13336、3080、2928、1639、1439、890。δH(300MHz、CDCl3) 5.82 (1H、dd、J=15.0、10.5)5.05(1H、bs)、4.95-4.92(2H、m)、4.88(1H、bs)、4.83(bs、1H)、4.59(bs、1H)、4.15(bs、2H)、2.10-1.98(2H、m)、1.71(3H、s)、1.70-1.40(6H、mシリーズ)、1.02(3H、s)。δc(75MHz、CDCl3)153.8、150.2、147.6、112.3、110.1、108.1、65.5、53.0、41.7、40.2、40.1、33.6、27.5、25.1、16.9.[α]D25-25(c0.9、 CHCl3)。
【００３７】
例20 
##STR22##的合成
マイナス型ベータエレメナル
ヘキサン誘導体における##STR21##とマイナス型ベータエレメナル（43mg、0.195mmol）をMnO2(430mg、150℃で、真空状態で12時間活性化させる)に加え、室温で25分間かき混ぜる。濾過によってMnO2を取り除き、そして、沈殿物はヘキサン類（5ml）で洗う。濾液を蒸発させ、残留物をFCCとSiO2で浄化させ、1:3のエチルアセテート-ヘキサン類で溶離させ、無色液体即ち純アルデヒド##STR22##、マイナス型ベータエレメナル（34mg、80%）溶出剤として生成させる。
スペクトルデータ：
IR vmax(neat)/cm-13081、2927、2698、1691、1637、1438、1372、890。δH(300MHz、CDCl3) 9.53 (1H、s)、6.29(1H、s)、5.99 (1H、s)、5.83(1H、dd、J=17.7、10.5) 4.94-4.82(3H、mシリーズ)、4.57 (bs、1H)、2.62-2.48(1H、m)、2.14-2.04(1H、m)、1.71(3H、s)、1.78-1.40(6H、mシリーズ)、1.03(3H、s)。δc(75MHz、CDCl3)194.6、154.9、150.0、147.4、133.1、112.3、110.2、52.7、40.0、 39.9、 36.7、33.0、27.1、25.2、16.9。[α]D25-35.4(c0.9、CHCl3)
【００３８】
例21
##STR23##の合成
マイナス型ベータ弗化エレメン
DAST（ジエチルアミノ硫黄、23μl、0.173mmol）を乾燥DCM（0.3ml）における##STR21##、マイナス型ベータエレメン（38mg、0.173mmol）溶液に滴下し、アルゴンで１.5時間かき混ぜる（室温可）。反応混合物は0℃で飽和NaHco3溶液(1ml)で冷却され、DCM（15ml）で抽出する。有機相は水（6ml×2）と塩水（10ml）で洗い、乾燥させる。溶剤を蒸発させ、生成した黄色残留物をFCCとSiO2で浄化させ、0.05%エチルアセテートのペンタン溶離剤で溶離し、無色液体の高揮発性弗化物即ち##STR23##、マイナス型ベータ弗化エレメン（14mg、36%）を生成させる。
スペクトルデータ：
IR vmax(neat)/cm-13081、2929、1638、1439、1373、995、906。δH(300MHz、CDCl3)5.82(1H、dd、J=17.7、10.5)、5.11(1H、d、J=2.7)、5.05(1H、bs)、4.93(2H、d、J=3.6)、4.89(1H、bs)、4.84(1H、t、J=1.2)、4.78(1H、s)、4.60(1H、bs)2.18-2.00(2H、m)、1.72(3H、s)、1.71-1.44(6H、mシリーズ)、1.02 (3H、s)、δc(75MHz、CDCl3)150.1、147.5、112.4、111.9、111.8、110.2、85.2 (d、J=664Hz)、52.9、40.1、40.0、33.3、27.3、25.1、16.9. [α]D25-61(c0.9、 CHCl3)
【００３９】
例22
純マイナス型ベータエレメンの生体外腫瘍細胞成長抑制の効果  
純マイナス型ベータエレメン
純マイナス型ベータエレメンが人間の癌細胞への抗腫瘍活性の効果はMTT比色法、又はMTT試薬キット（Cell Titer 96（登録商標）細胞増殖分析評価、プロメガ(株) マディソン、WI）で分かる。メーカーの説明をお読みになり、ご使用ください。MTT分析評価法は細胞生存の評価でよく使用されている方法で、生細胞がMTTをホルマザンに変換する能力に基づいて評価する。MTTは可溶性テトラゾリウム塩[3-(4,5-ジメチル-2-チアゾール)-2,5-ジフェニールテトラゾリウム臭化物]で、ジメチルスルホキシド(DMSO)における分光測定法で測定する。
組織培養法によってMTT(2μg/ml)マイナス型ベータエレメンだけで治療された癌細胞を培養プレートの中で4時間程度培養する。細胞をOMDO（125ul）溶液に分散され、96穴MRI 吸光度計(ThermoLabsystems社、Chantilly、VA)を用いて、吸光度を測定する。570nmと630nmでの吸光度の差異に基づいてMTT染料減少量を計算する。処置された細胞の生存力はMTT染料減少量として、未処置のコントロール細胞に比例して表される。MTT（10μl）だけが含まれている培地で培養された細胞を対照対象として使用する。実験を3回繰り返し、8-12 穴プレートで行われた。
表1 マイナス型ベータエレメンの人間癌細胞の生体外細胞毒性への影響
（MTT法の分析評価結果）
2008505893.tif 000002
【００４０】
例23
純マイナス型ベータエレメンの生体内腫瘍細胞成長に対する抑制効果
効力研究
薬理学研究によると、1日一回静脈内に7.5、15、30、60mg/kgのマイナス型ベータエレメンを投与し、それを10日続けるとマウスの寿命を伸ばすことができる。1）人間の神経膠腫細胞株SHG-44があるヌードマウスの体内細胞SHG-44はそれぞれ132.84、140.46、150.3と159.81%に達したのである。2）マウス神経膠腫細胞株G422があるヌードマウスの体内細胞G422はそれぞれ138.78、144.90、153.06と163.27%に達したのである。これらの実験は何回も繰り返され、そして、その結果は全て一致したのである。G422神経膠腫異種移植(皮下異種移植)は3種の濃度での腫瘍抑制率はそれぞれ60.89%、47.11%、32.00%である。SHG-44神経膠腫異種移植(皮下異種移植)は3種の濃度での腫瘍抑制率はそれぞれ63.24 %、51.35%と37.83%である。
表2 マイナス型ベータエレメンの人間神経膠腫G422に対する治療効果
（脳へ異種移植）
2008505893.tif 000003
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す、以下の表も同じである。
抗ガン剤薬理学ガイドラインによると、抗ガン剤の延命率は、有効になるためには125%以上でなければならない。
表3  マイナス型ベータエレメンの人間神経膠腫SHG44に対する治療効果
2008505893.tif 000004
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す、以下の表も同じである。
抗ガン剤薬理学ガイドラインによると、抗ガン剤の延命率は、有効になるためには125%以上でなければならない。
表4 マイナス型ベータエレメン(直接腫瘍への注射)人間神経膠腫G-422に対する治療効果
（皮下へ異種移植）
2008505893.tif 000005
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
表5マイナス型ベータエレメン(直接腫瘍へ投与)
人間神経膠腫SHG-44Gに対する治療効果
（皮下へ異種移植）
2008505893.tif 000006
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
【００４１】
1日二回静脈内に12.5、25、50mg/kgのマイナス型ベータエレメンを注射し、それを10日続けると以下の疾患を抑制することができる。1）異種移植マウス体内の人間乳癌(キャップ-37)の成長に対する抑制率は異なる投与量によってそれぞれ36.09％、45.31％、51.33％に達した。2）異種移植マウス体内の人間直腸癌（HCT-8）の成長に対する抑制率はを異なる投与量によってそれぞれ38.32％、49.49％、57.15％に達した。3）異種移植マウス体内の前立腺癌（PC-3M）の成長に対する抑制率はを異なる投与量によってそれぞれ27.95％、34.78％、46.58%に達した。4）異種移植マウス体内の卵巣癌（ao10/17）の成長に対する抑制率はを異なる投与量によってそれぞれ28.28％、35.03％、46.58%に達した。以上の実験はすべて何度も繰り返された。
実験材料
テスト用薬品：マイナス型ベータエレメン注射液（10mg/ml）と対照群乳濁液溶液
溶剤：対照群乳濁液溶液
陽性対照：シクロホスファミド（CTX）注射液、上海華聯製薬有限会社製（胃注射）、1日1回、7日続ける。
腫瘍源：1）人間卵巣癌ao10/17、2）人間前立腺癌C-3M、3）人間肺癌A549、4）人間肝臓癌QGY、5）人間直腸癌HCT-8、6）人間乳癌Bcap-37、7）人間神経膠腫SHG422、8）マウス神経膠腫G422。人間神経膠腫細胞株SHG44、膵癌MGC、肝臓癌QGY、白血病HL60。以上は上海医薬工業研究院より提供された。
実験動物：
実験動物提供機関：ヌードマウスは中国科学院上海実験動物センターから提供する。品質証明書：No. 005,Hudong
昆明マウスは当動物機関から提供する。品質の証明書：No. 107,Hudong
体重：6週間ヌードマウス、18〜20ｇ。
性別：メス、オス。毎回の動物実験で同じ性別マウスを対象とする。
実験動物数量：被験群と対照群の実験用ヌードマウスは6匹、昆明マウスは10匹であり、二つの陰性対照群を設ける。
投与量：ベータ型エレメン注射液、50、25、12.5mg/kg/回。
薬物実験計画：静脈内注射（i.v.）、1日2回、これを10日続ける。総注射回数は20回である。
対照実験：陰性対照群のブランク液の投与量は被験群の投与量と同じく、1日2回、静脈内注射する。これを10日続ける。
1日一回、毎回は対照群に対して30mg/kg/のシクロホスファミド（CTX）を与え、これを7日続ける。マイトマイシンC(MMC)（協和有限会社による提供）を試験管内実験の陽性対照とする。
生体内実験：
マウス腋窩皮膚への異種移植：腫瘍源（細胞溶液数1×107/ml、被験マウス一匹ごと0.2ml溶液を投与する）をヌードマウスの腋窩皮膚に注入し、滅菌済みの細胞培養フードで培養する。二日目からベータ型エレメンを投与し、治療を行う。3週後に被験マウスを殺し、各マウスから腫瘍を取り出し、重さを測る。以下の公式で腫瘍抑制率を計算する。
腫瘍抑制率％＝[(陰性対照群の平均腫瘍重さ-被験群の平均腫瘍の重さ)/陰性対照群の平均腫瘍重さ] ×100
人間の腫瘍源異種移植は、同じ手順で行う。食物、パッド、おり、器具などは使用する前に必ず殺菌する。ヌードマウスは無菌飼育室内で飼育する。
マウス脳への腫瘍異種移植：神経膠腫細胞株G-422又は44（対数増殖期）は細胞培養フードの中で2×107/mlまで希釈し、各マウスの脳に0.05mlの腫瘍細胞を注入する。2日目からベータ型エレメンを投与し、異種移植されたマウスを治療する。次の30日間、被験マウスの寿命を記録し、延命率は以下の公式で計算する。
延命率＝[(対照群平均生存日-被験群平均生存日)/対照群平均生存日] ×100
結果：
ベータ型エレメンの投与量はそれぞれ50、25、12.5mg/kg/回であるとき、A549肺癌異種移植に対する腫瘍抑制率iv×10 bidはぞれぞれ43.08%、40.0%、31.28%であった。
【００４２】
表6 マイナス型ベータエレメンの人間肺癌A549に対する治療効果
(腋窩皮膚へ異種移植)
2008505893.tif 000007
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
ベータエレメンがQGY肝臓癌異種移植腫瘍に対する抑制率（以上の実施要綱と同じ）はそれぞれ45.89%、37.20%、30.92%である。
表7  マイナス型ベータエレメンの人間肺癌QGYに対する治療効果
(腋窩皮膚へ異種移植)
2008505893.tif 000008
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
ベータエレメンがao10/17卵巣癌異種移植腫瘍に対する抑制率（以上の実施要綱と同じ）はそれぞれ46.42%、36.25%、31.08%である。
表8   マイナス型ベータエレメンの人間卵巣癌ao10/17に対する治療効果
(腋窩皮膚へ異種移植)
2008505893.tif 000009
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
ベータエレメンがPC-3M前列腺癌異種移植腫瘍に対する抑制率（以上の実施要綱と同じ）はそれぞれ46.58%、34.78%、27.95%である。
表9   マイナス型ベータエレメンの人間前列腺癌PC-3Mに対する治療効果
(腋窩皮膚へ異種移植)
2008505893.tif 000010
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
ベータエレメンがHCT-8結腸癌異種移植腫瘍に対する抑制率（以上の実施要綱と同じ）はそれぞれ54.20%、46.01%、35.10%である。
【００４３】
表10   マイナス型ベータエレメンの結腸癌HCT-8に対する治療効果
(腋窩皮膚へ異種移植)
2008505893.tif 000011
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
ベータエレメンがBcap-37乳癌異種移植腫瘍に対する抑制率（以上の実施要綱と同じ）はそれぞれ48.08%、43.23%、33.08%である。
表11   マイナス型ベータエレメンの乳癌Bcap-37に対する治療効果
(腋窩皮膚へ異種移植)
2008505893.tif 000012
***はP<0.01で、陰性対照群と比較した結果を示す。
注：例23に、ベータ型エレメンはマイナス型ベータエレメンのことである。
普通薬理学研究
普通薬理学研究によると、ビーグル犬の静脈内に20、40、80mg/kgのマイナス型ベータエレメンを投与し、投与した2時間後に、ビーグル犬の心臓の動きは明らかにゆったりと落ちつくようになった。また40と80mg/kgの投与量はQ-Rの間隔に伸びることができる。更に、80mg/kgの投与量は最高血圧を下げられることができる、研究結果によると、マイナス型ベータエレメンは心臓疾患を抑制することができ、そして、心電図と呼吸に対する影響がまったくない。また、マイナス型ベータエレメンはマウスのコントロール能力に対しても影響がある。
【００４４】
例24
マイナス型ベータエレメンの毒性試験
毒性試験の研究
上海医薬工業研究院毒理研究室はマイナス型ベータエレメンの毒性についての研究を行った結果は、0.5%のマイナス型ベータエレメン乳液は齧歯動物に対する致死量（LD50）は半数に上ることが分かった、致死量（LD50）は表12の示すとおりである。
表12  0.5%のマイナス型ベータエレメン乳液の齧歯動物に対する半数致死量（LD50）
2008505893.tif 000013
生き残っている動物から典型的な臨床徴候が見られなかった。ほとんど動物の死亡は薬の投与から24時間以内に起こり、毒性臨床特徴は主に呼吸困難、おう吐、下痢症状であった。亡くなった動物の体内から肝臓障害が見られなかった。
慢性毒性の研究
上海医薬工業研究院の毒理学部はそれぞれマウスとビーグル犬に対して、2つの慢性毒性研究を行った。ビーグル犬を3つのグループ（n＝６プル/グループ）に分け、それぞれ15、30、75mg/kg/dのベータ型エレメンを静脈内へ投与する。これを28日間続ける。高用量グループは吐き気、おう吐、食欲不振、体重減少、流涎及びその他の副作用が見られた。また、高用量グループの生化学パラメタにもいくつかの変化があった。低用量と中用量グループは投与剤エレメンに関連する典型的な病理学変化が見られなかった。投与量は15mg/kgであるグループは注射による皮膚の刺激反応があったほか、その他の徴候が見られなかった。したがって、15mg/kgはエレメンの非毒性投与量であると考えられる。
マウスを3つのグループ（n＝20、オス、メス各半分を占める）に分け、それぞれ7.5、15、30mg/kg/dのベータ型エレメンを静脈内へ投与する。これを28日間続ける。高用量グループのマウス6匹が死亡した。これらのマウスの胃部の出血（40-100ml）が見られた。高用量・中用量グループの動物はすべて腹水症を発症し、その後、ベータ型エレメンを投与しなかった４週間の間に、有意な改善効果は認められなかった。低用量グループと二つの対照群（10%のブドウ糖グループと偽薬乳濁液グループ）にも著しい変化が見られなかった。被験マウスの血液と血清の生物化学実験結果により、中・高用量グループマウスに貧血や白血球増加症状が見られた。回復段階で中・高用量グループのいつくかのマウスのASTとALTレベルに異常が発生したのが見られた。組織学研究結果によると、高用量グループマウスの腹腔、骨盤腔と気管の膜がある程度厚くなり、また、茶色粒子の沈殿も見られた。また、マウスのいくつかの器官に炎症が起こったのも分かった。注射による皮膚の刺激反応があっただけで、エレメンの蓄積した毒性（via i.p.）はあまり強くないことから、安全投与量は7.57.5mg/kg/dであると考えられる。
【００４５】
例25
ベータエレメン（2%乳濁液）の脳腫瘍に対する治療効果
脳腫瘍患者にとって、ベータエレメンは臨床上重要な役割を担うものである。遠大製薬有限公司は1999年3月から2001年4月までかけて、中国食品・薬物管理局の指定した病院で実施した臨床試験では、エレメンの静脈内投与（IV）または動脈内投与を採用した。被験者39名の膠芽腫患者のうち、完全寛解（CR）は5%で、部分寛解（PR）は31%で、全体的な腫瘍寛解率は36%であった。脳腫瘍薬TemodarのCR+PRの寛解率はただ20％だけがあった。さらに、エレメンを投与した後、90%患者のめまい、頭痛、言語障害、神経機能不全、まひなどの症状が和らぎ、アレルギー反応は全く見られなかった。また、肝臓、腎臓、心臓、胃腸、神経システムなどへの副作用も見られなかった。致命的な反応を起こした患者もなく、おう吐又は血液病学異常が見られかなった。
実験課題：2%エレメン注射溶液による第二期悪性頭蓋内腫瘍への治療
試験薬物：2％エレメン注射溶液
適応症：悪性頭蓋内腫瘍
スポンサー：大連医学院薬物科学研究所
大連遠大製薬有限公司
中国大連
プロジェクト責任者：Xu Hai
ドキュメントタイプ：臨床実験レポート
開発段階：第二段階（中国）
研究開始日：1999年4月
研究終了日：2001年3月25日
2008505893.tif 000014
2008505893.tif 000015
結果：
有効性
8週目、腫瘍の大きさの平均値と中央値はベースラインより著しく減少。
2%エレメン注射液の前向き臨床研究：
第8週目のベースラインに基づく腫瘍大きさの平均値と中央値の変化
2008505893.tif 000016
1これらの違いは統計学的に非常に重要な情報である。p<=0.05
全部有効と一部有効の評価基準を満たした患者の割合は44％よりわずかを上回った。
前向き臨床研究：2%エレメン注射液の有効率
（世界衛生組織の有効率分類による）
2008505893.tif 000017
1は総ての評価対象は投与前後のCT/MRIの検診結果とする。
2%エレメン注射液は原発性脳腫瘍と転移性脳腫瘍の治療に対して効果があることは認められている。
前向き臨床研究：2%エレメン注射液の有効率
（世界衛生組織の有効率分類による）
2008505893.tif 000018
1は総ての評価対象は投与前後のCT/MRIの検診結果とする。
臨床的にベースラインの病気の特定徴候が顕著に改善された。
2%エレメン注射液の前向き臨床研究：
投与後第8週目、ベースラインより病気特定徴候の発生率の変化
2008505893.tif 000019
*ベースラインの統計によると、顕著な改善を示した。
安全性
実験室評価：
血液病学の変異がベースラインより臨床的に重要な変化が見られなかった。実験期間、第7週目で被験者のうちALT値がわずかに上昇した患者の二人を除き、その他の患者の肝臓と腎臓機能は総て正常だった。これらの異常に対して、研究結果に基づき、臨床的に意味のないと認められた。
有害事象：
注射による痛みは最も一般的なことであった。92%（56名/61名）の患者の注射による痛みは世界衛生組織の定めているＩ級とＩＩ級基準に満たした。そのうち、Ｉ級基準に満たした患者は全体の56％を占め、ＩＩ級基準に満たした患者は全体の36%を占める。痛みは世界衛生組織の定めているＩ級又はＩＶ級に達した患者が見られなかった。薬物の毒性によって副作用を引き起こし、治療に至った患者がいなかった。毒性細胞、好中球減少、血小板減少、感染、胃腸の毒性などが見られなかった。
結論
エレメン薬品に関する相乗作用と薬物過量の症状は全く報告されていない。
2%エレメンは頭蓋内悪性腫瘍の治療に重要な役割を担う薬物で、実験の結果によると、エレメンは転移性腫瘍と原発性脳腫瘍の腫瘍の大きさを減少させ、患者の生存力を改善したであった。エレメンは優れた耐薬性を持ち、毒性がなく、その他の化学療法剤の治療効果を増進させる作用もあり、腫瘍の大きさを減少させ、現有の腫瘍治療用薬物よりよりよい安全性を持つ。2%エレメンはその他の治療薬との併用による複合治療法で、頭蓋内悪性腫瘍を治療するのをさらに研究する必要がある。2%エレメンはその他の悪性腫瘍に対して治療効果もあるかもしれない。 
【００４６】
例26  
0.5% ベータ型エレメン（乳濁質液）の肺癌に対する治療効果
研究1：第4期非小細胞肺癌に対して、エレメン注射乳濁液と放射線治療との複合治療を行う。
中華人民共和国大連医学院第二附属病院腫瘍科
研究者：Jie Li とJu-Sheng Hou
2008505893.tif 000020
【００４７】
研究2：肺癌の治療におけるエレメンの二相性動脈注入療法と化学療法との比較研究。
中華人民共和国貴陽医学院放射線科
研究者：Xin Li、Shao-Xiong Xu、Guo-Yan Shang。
2008505893.tif 000021
BAI：気管支動脈注入療法
PAI：肺動脈注入療法
DAI：気管支動脈と肺動脈注入複合療法
研究3：エレメン乳濁液が後期肺癌に対する治療効果の研究
中華人民共和国昆明第一人民病院呼吸システム科
研究者：Jia-liu Zhang、Xue-chang ZhangとJing-san Zhang。
2008505893.tif 000022
研究4：エレメン乳濁液で治療された肺癌患者の臨床試験結果
中華人民共和国南京白衣病院癌センター内科
研究者：Shu-kui Qin、Jun Qian、Lin WangとZe-ming He。
2008505893.tif 000023
【００４８】
例27
0.5% ベータエレメン（乳濁質液）の食道癌と膵癌に対する治療効果
研究5：エレメンの食道癌と膵癌に対する治療の臨床評価
中華人民共和国西安市  エレメンによる食道癌・膵癌治療臨床効果評価組
研究者：Shi-yong Yang。
2008505893.tif 000024
【００４９】
例28
0.5%ベータエレメン（乳濁質液）の胃腸管癌に対する治療効果
研究6：複数のエレメン交付法により、30例の悪性胃腸管腫瘍症例に対する治療効果
中華人民共和国章丘人民病院
研究者：Qing-zhen Zhang、Li-xian Cu、Xian-jun Zhu。
2008505893.tif 000025
研究7：エレメンの胃の腹水症の誘導による後期胃腸管腫瘍に対する臨床効果
中華人民共和国蘇州第二人民病院消化システム科
研究者：Gui-fen Niu和Nan-sheng Cheng。
2008505893.tif 000026
【００５０】
例29
ベータエレメン（0.5％乳濁液）の結腸直腸癌に対する治療効果
研究8：エレメン乳濁液の結腸直腸癌症例65例に対する臨床効果の分析
中華人民共和国福建省南品第一病院腫瘍科
研究者：Gao Xiang、Xue-zai Chen、Gui-feng Chen
2008505893.tif 000027
研究9：エレメン乳濁液の保守的な浣腸による後期結腸直腸癌症例に対する臨床効果
中華人民共和国福建省泉州市第一病院外科
研究者：Qun-xiong Pan、Jie-ji Guo
2008505893.tif 000028
研究10：直腸癌外科手術後、エレメンの鎖骨下静脈注射による腸閉塞症例18例に対する治療効果
中華人民共和国湖南省長沙市湖南薬草腫瘍病院
研究者：Rui-lan Li、Zhong-de
2008505893.tif 000029
【００５１】
例30
ベータエレメン（0.5％乳濁液）の胃癌に対する治療効果
研究11：エレメン乳濁剤で腸を通して悪性胃腫瘍に対する治療効果
中華人民共和国福建省建龍岩地方第二病院
研究者：Jin-lian Zhang 和 Mei-xia Wu
2008505893.tif 000030
【００５２】
例31
ベータエレメン（0.5％乳濁液）の原発性肝癌に対する治療効果
研究12：エレメンの肝動脈注射による原発性肝癌患者の臨床実験のまとめ
中華人民共和国江蘇省無錫市第四人民病院
研究者：Li-seng Xiao、Wei-ming Zhu
2008505893.tif 000031
【００５３】
例32
MTT法を用いて、エレメンの派生物LR1〜LR10の抗腫瘍効果の判定
例22に挙げられたMTT法を用いて、人間の神経膠腫細胞株の成長を抑制するLR1〜LR10のIC50を検出した。その結果は以下の表の示した通りである。
表13 エレメンの類似体の人間神経膠腫細胞に対する細胞毒性効力は
IC50（μg/ml）によって示される
2008505893.tif 000032
表14 エレメン類似体の3種類の人間脳腫瘍細胞に対する細胞毒性の効力は
C50（μg/ml）によって示される
2008505893.tif 000033
【００５４】
例33
マイナス型ベータエレメンを参照として、マイナス型ベータエレメノール、マイナス型ベータエレメナル、フッ化エレメン（以下はテスト用薬物という）は人間の癌細胞に対する抗腫瘍活性の効果はMTT法で分析評価され、又は説明書に基づいて、MTT試薬キット（Cell Titer 96（登録商標）細胞増殖分析評価、プロメガ(株) マディソン、WI）で測定する。MTT分析評価法は細胞生存の評価でよく使用されている方法で、生細胞がMTTをホルマザンに変換する能力に基づいて評価する。MTTは可溶性テトラゾリウム塩[3-(4,5-ジメチル-2-チアゾール)-2,5-ジフェニールテトラゾリウム臭化物]で、ジメチルスルホキシド(DMSO)における分光測定法で測定する。
テスト用薬物で治療された癌細胞を96穴の組織培養プレートの中でMTT（2μl）で4時間程度培養する。細胞をOMDO（125ul）溶液に分散させ、96穴MRI 吸光度計(ThermoLabsystems社、Chantilly、VA)を用いて、吸光度を測定する。570nmと630nmでの吸光度の差異に基づいてMTT染料減少量を計算する。処置さらた細胞の生存力はMTT染料減少量として、未処置のコントロール細胞に比例して表される。媒体とMTT（10μl）だけが含まれている培養プレートで培養された培養を対照対象として使用する。実験を3回繰り返し、8-12 穴プレートで行われた。
表15 エレメン類似体の細胞毒性効力はIC50によって示される
（MTT法で測定、2×104細胞/ml）
2008505893.tif 000034
【００５５】
例34
マイナス型ベータエレメンとシスプラチンとの併用による相助効果
マイナス型ベータエレメンとシスプラチンは人間癌細胞に対する抗腫瘍活性への影響はMTT法で分析評価され、又はメーカーの説明書に基づいて、MTT試薬キット（Cell Titer 96（登録商標）細胞増殖分析評価、プロメガ(株) マディソン、WI）で測定する。MTT分析評価法は細胞生存の評価でよく使用されている方法で、生細胞がMTTをホルマザンに変換する能力に基づいて評価する。MTTは可溶性テトラゾリウム塩[3-(4,5-ジメチル-2-チアゾール)-2,5-ジフェニールテトラゾリウム臭化物]で、この溶液はジメチルスルホキシドで溶解できる。分光測定法で測定する。
治療されていない癌細胞とシスプラチンで治療した癌細胞、又はマイナス型ベータエレメン（それぞれの癌細胞株はレベルIC20である）とシスプラチンとの併用で治療した癌細胞を96穴の組織培養プレートの中でMTT（2μl）で4時間程度培養する。細胞をOMDO（125ul）溶液に分散させ、96穴MRI 吸光度計(ThermoLabsystems社、Chantilly、VA)を用いて、吸光度を測定する。570nmと630nmでの吸光度の差異に基づいてMTT染料減少量を計算する。処置された細胞の生存力はMTT染料減少量として、未処置のコントロール細胞に比例して表される。媒体とMTT（10μl）だけが含まれている培養プレートで培養された培養を対照対象として使用する。実験を3回繰り返し、8-12 穴プレートで行われた。
表16 MTT分析評価結果により、マイナス型ベータエレメンでシスプラチン細胞毒性・
シスプラチンの感度が高められた度合い
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【００５６】
例35
タキサンが含まれているエレメンの新しい抗腫瘍薬用植物の人間の肺癌に対する生体化合物の特性
相乗作用分析による組み合せ効果の評価
（1）
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（2）
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CI値< 1.0：相乗作用
CI値＝1.0：相加効果
CI値〉1.0：拮抗作用
表17の示したとおり、タキソールとドセタキセルが含まれているエレメンは人間の肺癌細胞増殖へ抑制作用がある。これらのデータから、薬物の作用メカニズムが互いに排他的であるか又は互いに排他的でないと思われたとき、タキソールとドセタキセルが含まれているエレメンのCI値により、P53野生型細胞よりP53変異細胞とP53ヌル細胞に対する併用による相乗作用がもっと効果的であることが明らかかにされた。しかも、タキソールとドセタキセルが含まれているマイナス型ベータエレメン化合物は検出した肺癌細胞の類型によって、異なった変化を生じる。これらの変化は異なった肺癌細胞に対して、投与した薬物の効果率の違いを反映したのであるかもしれない。しかしながら、検出した4種類の細胞の中で、タキソール含まれているエレメンとドセタキセルが含まれているエレメンのCI値には明らかな差異が見られなかった。
表17  同時に4人の肺癌細胞に対して、タキソールとエレメンとの併用剤とドセタキセルとエレメンとの併用剤で治療した72時間後の投与剤の併用による相乗作用の分析
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表17は同時に4人の肺癌細胞に対して、タキソールとエレメンとの併用剤とドセタキセルとエレメンとの併用剤で治療した72時間後の投与剤の併用による相乗作用の評価結果である。CI値はFa50で示される。(Faは影響された細胞のことを示し、Fa50は50％細胞が抑制されたことを示す)。3つの独立している実験で4人の肺癌細胞株のすべての平均値と±SDが明らかにされた。
CI*は二種併用薬物の相互排他値である。
CI**は二種併用薬物の非相互排他値である。
【００５７】
例36
5フルオロウラシルとエレメンの併用による人間の直腸癌細胞に対する影響
発見：
（1）5フルオロウラシルとオキサリプラチンとマイナス型ベータエレメンの併用により、HCT-116、HCT-15、Caco-2とColo205の4種の直腸癌細胞に対して、拮抗作用がを示した。
（2）5フルオロウラシルとマイナス型ベータエレメンの併用により、HCT-116、HCT-15の直腸癌細胞に対して、拮抗作用がを示した。
caco2とColo205に対して、相加作用又は相乗作用を示した。
（3）オキサリプラチンとマイナス型ベータエレメンの併用により、HCT-116、HCT-15、Caco-2とColo205の4種の直腸癌細胞に対して、相加作用又は相乗作用を示した。
細胞培養と薬物療法
菌株保管会社「アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション」により提供された人間の直腸細胞株HCT-15、HCT-116、Caco-2、Colo205、HCT-15（+COX-2）に10%牛胎児血清を加え、37℃室温、5％CO2、加湿された環境で、ＲＰＭＩ1640培地で培養する。薬物療法を行う24時間前に細胞株を接種する。マイナス型ベータエレメンと5フルオロウラシル（δ）の併用による直腸癌細胞株に対する影響を研究する。実験用投与剤は100%DMSOで溶かす。
細胞増殖力の分析評価
薬物療法を行う24時間前に96穴プレート（3000細胞/穴）に細胞を接種する。各濃度のマイナス型ベータエレメン、5フルオロウラシルとオキサリプラチンとの併用で直腸癌細胞に対して、それぞれ4、8、12、24、72時間の治療を行う。5フルオロウラシルとオキサリプラチンとマイナス型ベータエレメンの併用による直腸癌細胞株HCT-116、HCT-15、Caco-2、Colo205、HCT-15（+COX-2）に対する投与剤の相互作用を研究する。エレメン（160μg/ml）でHCT-116、HCT-15、HCT-15（+COX-2）細胞に対して治療をし、エレメンと同じ濃度の5フルオロウラシルとオキサリプラチンとの併用でCaco-2細胞とColo205細胞に対して、治療を行い、以上の治療はそれそれ4、8、12、24、72時間を行う。又は、まずマイナス型ベータエレメン（160μg/ml）で2、4、6、8、12、24、36時間の治療を行い、それから、同じ濃度の5フルオロウラシルでHCT-116細胞とHCT-15細胞に対して、それぞれ2、4、6、8、12、24、36時間の治療を行う。又は、エレメン（80μg/ml）で2、4、6、8、12、24、36時間の治療を行い、それから、同じ濃度の5フルオロウラシルとオキサリプラチンとの併用でCaco-2細胞とColo205細胞に対して、それぞれ2、4、6、8、12、24、36時間の治療を行う。細胞の増殖力はCell Titer 96（登録商標）（プロメガ(株) マディソン、WI）細胞増殖で分析評価する。結果としては以下の新しい化合物[3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2テトラゾリウム、内塩、MTS] ) を検出した。溶液を濃度1mg/ml/穴の培地で37℃で1〜2時間培養する。96穴マイクロプレートリーダー（Molecular Devices、Wokingham、イギリス）を用いて、490nmで吸光度を測定する。
結果：
MTSで測定した結果による：マイナス型ベータエレメンと5フルオロウラシルとオキサリプラチンの併用で、4〜72時間の治療を行った結果として、HCT-116、HCT-15、Caco-2、Colo205に対して拮抗作用を示した。マイナス型ベータエレメンでCaco-2、Colo205に対して、2、4、6、12時間の治療を行い、それから、5フルオロウラシルで2、4、6、12時間の治療を行った結果として、Caco-2、Colo205に対して相乗作用を示した。マイナス型ベータエレメンでColo205、Caco-2に対して、24、36時間の治療を行い、それから、5フルオロウラシルで24、36時間の治療を行った結果として、Colo205、Caco-2に対して累加作用を示した。引き続き治療し、HCT-15とHCT-116に対して、拮抗作用を示した。また、マイナス型ベータエレメンで2〜36時間治療し、それからオキサリプラチンで2〜36時間治療した結果として、相乗作用を示した。表18中のマイナス型ベータエレメンをエレメンと略する。
表18   エレメンとオキサリプラチンとの併用剤を
直腸癌細胞HCT-116への連続投与による影響（n=8）
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5フルオロウラシルとの比較：*p<0.05、**p<0.01
オキサリプラチンとの比較：▲p<0.05、▲▲p<0.01
【００５８】
表19  5フルオロウラシルとオキサリプラチンとの併用剤を
直腸癌細胞HCT-15への連続投与による影響（n=8）
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5フルオロウラシルとの比較：*p<0.05、**p<0.01
オキサリプラチンとの比較：▲p<0.05、▲▲p<0.01
表20  5フルオロウラシルとオキサリプラチンとエレメンの併用剤を
直腸癌細胞Caco-2への連続投与による影響（n=8）
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5フルオロウラシルとの比較：*p<0.05、**p<0.01
オキサリプラチンとの比較：▲p<0.05、▲▲p<0.01
表21  5フルオロウラシルとオキサリプラチンとエレメンの併用剤を
直腸癌細胞Colo205への連続投与による影響（n=8）
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5フルオロウラシルとの比較：*p<0.05、**p<0.01
オキサリプラチンとの比較：▲p<0.05、▲▲p<0.01
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】マイナス型ベータエレメンの2つの合成スキーム
【図２】エレメン型構造とその類似体の主張
【図３】S型プラス型カーボーンからのマイナス型ベータエレメンの新規の合成過程の詳細
【図４】マイナス型ベータエレメンのコーリー合成法の分析
【図５】R型マイナス型カーボーンからエレメン類似体、プラス型フスコールの合成法
【図６】合成された10のマイナス型ベータエレメンの類似体の構造
【図７】ベータ、ガンマ、デルタ型エレメンの化学構造
【図８】マイナス型ベータエレメンの３つの類似体の化学構造
【図９】エレメノール、エレメナル、フッ化エレメンの類似体構造の主張
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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