(57)【要約】本発明はヒトのI型およびII型糖尿病、具体的にはインスリン抵抗性糖尿病を治療するための化合物およびその医薬組成物を提供する。2008505161.tif 000025
2008505161.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2008505161.tif 000021
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである；
nは1〜4の整数である；xは1〜10の整数である；yは1〜10の整数である(ただし、｜x｜−｜y｜＝0である)；Mはバナジウムを含む金属イオンまたはその金属イオン錯体である。］。
【請求項２】
R1、R2、R3、R4、およびR5が、独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、((C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、またはNO2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する請求項1の式で示される化合物。
【請求項３】
n=1である請求項1または2の式で示される化合物。
【請求項４】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項1、2、または3のいずれかの式で示される化合物。
【請求項５】
ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)である請求項4の式で示される化合物。
【請求項６】
ヘキサキス(4-フルオロベンジルアミン)デカバナデート(V)である請求項3または4の式で示される化合物。
【請求項７】
n=3である請求項1または2の式で示される化合物。
【請求項８】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項7の式で示される化合物。
【請求項９】
ヘキサキス(3-フェニル-プロピルアミン)デカバナデート(V)である請求項8記載の化合物。
【請求項１０】
n=2である請求項1または2の式で示される化合物。
【請求項１１】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項10の式で示される化合物。
【請求項１２】
ヘキサキス(4-フルオロフェネチルアミン)デカバナデート(V)である請求項11記載の化合物。
【請求項１３】
n=4である請求項1または2記載の化合物。
【請求項１４】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項13記載の化合物。
【請求項１５】
ヘキサキス(4-フェニル-1-ブチルアミン)デカバナデート(V)である請求項14記載の化合物。
【請求項１６】
x=5およびy=5であり、M=HV10O28である請求項1、2、または3のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】
ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)である請求項16記載の化合物。
【請求項１８】
x=4およびy=4であり、M=H2V10O28である請求項1、2、または3のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９】
テトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)である請求項18記載の化合物。
【請求項２０】
請求項1、2、または3のいずれかに記載の化合物、およびその医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、またはアジュバントを含む医薬組成物。
【請求項２１】
インスリン模倣化合物またはインスリン代替化合物を含む請求項1〜20のいずれかに記載の化合物。
【請求項２２】
インスリン模倣化合物またはインスリン代替化合物を含む請求項22記載の医薬化合物。
【請求項２３】
医薬的有効量の該化合物または医薬組成物を投与する工程を含む、血漿インスリンが低下するか、またはインスリン応答性が低下するかまたはないことを特徴とする疾患、障害、または異常を有する動物を治療するための請求項1〜20のいずれかに記載の化合物、または請求項22記載の医薬化合物の使用。
【請求項２４】
該疾患がI型またはII型糖尿病である請求項23記載の使用。
【請求項２５】
該動物がヒトである請求項23記載の使用。
【請求項２６】
請求項1〜20のいずれかに記載の化合物、および溶媒、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含むその医薬組成物を製造するためのキット。
【請求項２７】
該化合物がインスリン模倣化合物またはインスリン代替化合物を含む請求項26記載のキット。
【請求項２８】
式：
【化２】
2008505161.tif 000022
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである；
nは1〜3の整数である；xは0〜2の整数である；yは4〜6の整数である(ただし、x＋y＝6である。)。ただし、(I)はヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート3水和物ではない。］。
【請求項２９】
R1、R2、R3、R4、およびR5が独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、(C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、またはNO2であるラジカルであるか；またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する請求項28記載の化合物。
【請求項３０】
n=1である請求項28記載の化合物。
【請求項３１】
x=0であり、y=6である請求項29または30に記載の化合物。
【請求項３２】
ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項31記載の化合物。
【請求項３３】
x=1であり、y=5である請求項28、29、または30のいずれかに記載の化合物。
【請求項３４】
ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項33記載の化合物。
【請求項３５】
x=2およびy=4である請求項28、29、または30のいずれかに記載の化合物。
【請求項３６】
テトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項35記載の化合物。
【請求項３７】
式：
【化３】
2008505161.tif 000023
で示されるアミンを、適切な酸性度の不活性溶媒中、アルカリ金属バナデートと反応させ、該反応媒質から該化合物を回収する工程を含む請求項1記載の化合物の製造方法
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキルまたはフェニルであるラジカルである；
nは1〜4の整数である。］。
【請求項３８】
アルカリ金属バナデートがナトリウムバナデートである請求項37記載の方法。
【請求項３９】
該溶媒が、水、(C1-C5)-脂肪族モノアルコールと水の混合物、または(C3-C7)-脂肪族ケトンと水の混合物である請求項37記載の方法。
【請求項４０】
該酸性度が有効pH値2〜7.5に対応する請求項39記載の方法。
【請求項４１】
ヒトを含む哺乳動物における糖尿病および/またはインスリン抵抗性病状を治療および/または予防するための医薬を製造するための、式：
【化４】
2008505161.tif 000024
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)の使用
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキルまたはフェニルであるラジカルである；
nは1〜3の整数である；xは0〜2の整数である；yは4〜6の整数である。ただしx＋y＝6である。］。
【請求項４２】
R1、R2、R3、R4、およびR5が独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、(C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、またはNO2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する請求項41記載の使用。
【請求項４３】
n=1である請求項42記載の使用。
【請求項４４】
x=0およびy=6である請求項41、42、または43のいずれかに記載の使用。
【請求項４５】
該化合物がヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項44記載の使用。
【請求項４６】
x=1およびy=5である請求項41、42、または43のいずれかに記載の使用。
【請求項４７】
該化合物がペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項46記載の使用。
【請求項４８】
x=2およびy=4である請求項41、42、または43のいずれかに記載の使用。
【請求項４９】
該化合物がテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項48記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病、ならびに糖尿病を治療するための化合物または医薬組成物に関する。具体的には、本発明はヒトのI型およびII型糖尿病を治療するための方法、化合物、および医薬組成物に関する。詳細には、本発明はin vivoでインスリンの代わりとなり得る化合物、およびヒトのI型およびII型糖尿病を治療するためのそのような化合物の医薬組成物の使用方法を提供するものである。具体的には、本発明は、インスリン模倣物質、すなわちインスリン非存在下でインスリン様作用をもたらすことができる化合物として使用するためのアリールアルキルアミンのバナジウム(V)塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病(diabetes、特により一般的な形はdiabetes mellitus)は、世界保健機関が流行病の割合に達すると認識している主な世界的健康問題である。糖尿病は今やほとんどの先進国で第4の主要死亡原因であり、開発途上国で急速に増加している疾患である。
【０００３】
糖尿病は、炭水化物を酸化する能力が、通常、膵臓、特にランゲルハンス島の障害により正常なインスリンのメカニズムが障害されることにより実質的に失われる代謝疾患である。過剰な尿排泄および一時的なケトアシドーシスにより血漿および尿中のグルコースレベルが異常に上昇することが糖尿病の特徴である。さらなる糖尿病の症状には、過剰な喉の渇き、糖尿、多尿、脂質血症、および空腹がある。該疾患を治療せずに放置すれば致命的ケトアシドーシスを生じ得る。糖尿病は最終的に目、腎臓、心臓、および手足を損傷し、妊娠を脅かし得る。個体が糖尿病に罹患していることを証明する臨床基準には、空腹時血漿グルコースレベルが126mg/dl以上(7mmol/L；正常レベルは典型的には100mg/dl以下(<5.6mmol/L)である)であることがある。あるいはまた、患者は、グルコース負荷試験(GTT)の2時点(その1点はグルコースを摂取して2時間以内でなければならない)の血漿グルコースレベルが200mg/dL(11mmol/L)以上を示すかもしれない。
【０００４】
糖尿病は、通常、I型糖尿病とII型糖尿病の2つの主なタイプに分類される。I型糖尿病、すなわちインスリン依存性糖尿病(IDDM)は、インスリン療法を行わないとケトアシドーシスを生じることにより定義される。I型糖尿病は幼児期に最も多く生じるので、若年型糖尿病とも呼ばれる。I型糖尿病は、発症と進行が急速で、全疾患の約10〜15%を占める。II型糖尿病、すなわち非インスリン依存性糖尿病 (NIDDM)は、持続性の高血糖があり、ケトアシドーシスは希であることを特徴とする。II型糖尿病は、典型的には40歳以降に生じ、徐々に進行する。発症が遅いため、II型糖尿病は以前は成人型糖尿病と呼ばれていた。断然最も頻繁に生じる糖尿病のタイプであるII型糖尿病は、その初期段階では臨床疾患を伴わないことが多く、かわりに血糖または尿糖レベルの上昇により検出される。
【０００５】
II型糖尿病の2つの主な形は、肥満との関連(または関連なし)に基づいて区別される。その2つのうち肥満と関連する形は重要性が増している。肥満と関連するII型糖尿病は、現在流行病の速度で増加しているので、主な関心事である。例えば、米国では臨床的に肥満と定義することができる40歳以下の人口の割合は現在25%を超える。さらに多くの子供が肥満であり、II型糖尿病が激増している。
【０００６】
I型およびII型糖尿病はいずれも現在では単一疾患ではなく多くの原因を有する疾患群と考えられている。I型およびII型糖尿病に共通するのは細胞へのグルコースの取り込みが減少することである。グルコースの細胞への取り込みは、典型的には膵臓中のランゲルハンス島から分泌されるホルモンであるインスリンにより触媒される。身体の組織細胞への糖グルコースの取り込みを促すことによりインスリンは代謝活性のためのエネルギーを提供する。グルコースの取り込み障害は体内で産生されるインスリン量の不足、または細胞がグルコースを取り込めない標的細胞の変化をもたらす。グルコースの取り込み障害は、グルコースの過剰な体内での産生と尿への排泄を生じる。
【０００７】
インスリンは、種々の細胞内情報伝達系の活性化により同化および抗異化反応を促す。インスリンの作用はそのインスリンレセプターへの結合により始まり、これが該レセプターの内因性チロシンキナーゼの活性化をもたらす(Hubbard et al., 1994, Nature 372: 746-754；Hubbard, 1997, EMBO J.,16: 5572-5581)。該レセプターチロシンキナーゼの機能はインスリンの生物学的作用に不可欠である(Hubbard et al., 1994, Id.；Hubbard, 1997, Id.；Ebina et al., 1985, Cell 40: 747-758；Ullrich et al., 1985, Nature 313: 756-761；White & Kahn, 1994, J. Biol. Chem. 269: 1-4)。インスリンレセプターはインスリンレセプター基質(IRS)タンパク質を含む種々の隣接基質をリン酸化する(White & Kahn, 1994, Id.)。これら事象は、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ、プロテインキナーゼB、または非定型プロテインキナーゼCのような下流の情報伝達分子の活性化をもたらす。
【０００８】
I型糖尿病の病因にはほとんど常にインスリン産生の重度または全体的な減少が含まれる。この減少は、典型的にはインスリン産生を担う膵臓のβ細胞の自己免疫的破壊の結果である。インスリン依存性糖尿病(I型糖尿病)の最も一般的な治療法は注射でインスリンを供給して該不足を置換することである。
【０００９】
II型糖尿病は、インスリン抵抗性およびインスリン不足の両方を生じる遺伝的異常から生じうる。II型糖尿病では、膵臓はしばしばかなりの量のインスリンを産生するが、該ホルモンは組織によるグルコースの利用を促すことができない。事実、II型糖尿病の特徴はインスリン抵抗性である。糖尿病患者の一部は重度のインスリン抵抗性を示し、インスリンを1日あたり2U/kg以上必要とする(Tritos & Mantzoros, 1998, J. Clin. Endocrinol. Metab. 83: 3025-3030；Vestergaard et al., 2001, J. Intern. Med. 250: 406-414)。しかしながら、II型糖尿病におけるインスリン抵抗性の分子的根拠はほとんど理解されていない。いくつかの研究が、肥満またはII型糖尿病がインスリンレセプター数の少しの低下(Olefsky et al., 1985, Amer. J. Med. 79: 12-22)、インスリン刺激レセプターチロシンキナーゼ活性の低下、およびレセプター介在IRSリン酸化またはホスファチジルイノシトール3-キナーゼまたはプロテインキナーゼC活性化の異常を特徴とする(Olefsky et al., 1985, Id；Beeson et al., 2003, Diabetes 52: 1926-1934；Caro et al., 1987, J. Clin. Invest 79: 1330-1337；Goodyear et al., 1995, J. Clin. Invest 95: 2195-2204；Kim et al., 1999, J. Clin. Invest 104: 733-741)ことを示している。すなわち、少なくともII型糖尿病患者の一部がインスリンの情報伝達における明らかな欠陥を有し、これはインスリン情報伝達カスケードを増強するための処置、とりわけインスリンレセプターを回避するインスリン置換をもたらすことにより克服されるであろう。
【００１０】
糖尿病、特にインスリン抵抗性II型糖尿病を治療する種々の努力がなされてきた。これら病状を治療するあるそのような方法の一つはいわゆる「インスリン模倣物質」、すなわち細胞がインスリンを取り込むことができるようにインスリンの機能を「模倣する」ことができる化合物を提供することである。
【００１１】
種々の無機化合物が単離細胞および組織中およびin vivoでインスリンの作用を模倣することが報告されてきた。そのような模倣物質には、バナジウム(IV)/(V)化合物(Heyliger et al., 1985, Science 227: 1474-7)、セレネート(McNeill et al., 1991, diabetes 40: 1675-8)、リチウム塩(Rodriquez-Gil et al., 1993, Arch. Biochem. Biophys. 301:411-5)、タングステン(VI)およびモリブデン(VI)化合物(US5,595,763およびLi et al., 1995, Biochemistry 34:6218-6225)がある。
【００１２】
上記無機化合物の中で、バナジウムおよびその誘導体は強力なインスリン模倣物質であると考えられてきた。インスリンの取り込みに対する細胞の感受性を増大するバナデートおよびパーオキソバナジウム複合体(酸素と結合した+5酸化状態のバナジウム、特にオルソバナデートVO43+、米国特許No.4,882,171参照)、およびバナジル VO2+塩および複合体(+4酸化状態のバナジウム、米国特許No.5,300,496参照)の効果に関する説得力のある証拠がある。バナジウム化合物は現在米国およびヨーロッパで臨床試験中である。しかしながら、細胞にグルコースを輸送する有望な結果が集まってきているが、バナジウム化合物の投与は有効量で重度の毒性問題を伴う。動物において望ましいインスリン模倣効果が達成されても、毒性レベルにほぼ近い投与濃度でなければならない。バナジウム処置では、治療に用いる特定のバナジウムの化学性状とは無関係にかなりの副作用が見られる(Domingo et al., 1991, Toxicology 66: 279-87)。血中グルコースレベルを低下させるのに適したあらゆる用量でバナジウム化合物毒性の重大な問題が、顕著な死亡率を含めて観察される。
【００１３】
in vivoでの細胞へのグルコース輸送は、バナデートをセミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ(SSAO)、例えばベンジルアミンまたはチラミンと組み合わせて用いることにより介在された。Enrique-Tarancon et al. (1998, J. Biol. Chem. 273: 8025-8032、およびEnrique-Tarancon et al., 2000, Biochem. J. 350: 171-180、またはWO 02/38152)が報告するように、ベンジルアミンまたはチラミンのようなアミンとバナデートとの組み合わせは、ラット3T3-L1脂肪細胞におけるグルコース輸送とGLUT4トランスロケーションを刺激することがわかった。Enrique-Tarancon et al. (1998, 2000, 上記)によれば、グルコース輸送は、強力なチロシンリン酸化から生じる細胞表面におけるGLUT4担体濃度の増加により刺激される。同様に、Marti et al. (1998, J. Pharmacol. Exper. Therap. 285: 342-349)は、グルコース輸送がチラミンとバナデートの組み合わせを用いて刺激されたと報告した。Marti et al. (1998, 上記)によれば、グルコース輸送の刺激は、MAO(モノアミンオキシダーゼ)およびSSAO阻害剤と、カタラーゼに感受性であった。Marti et al. (1995、上記)も、バナデートとチラミンを組み合わせた使用を開示した。特許出願WO 02/38152 A1は、インスリン効果を生じるのに相乗性が高いセミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ基質群のアミンおよびバナジウム(IV)/(V)化合物により形成された医薬複合剤について記載している。すなわち、この複合剤は、低濃度の金属で有用である。しかしながら、これらの成功は、バナデートの毒性による処置の副作用を避けるためにバナデートについて可能な最低有効用量でも確立する必要性を軽減する。
【００１４】
過去の全ての研究的努力にも関わらず、糖尿病の治療および/または予防は満足にはほど遠い。したがって、特に単一成分の新規抗糖尿病薬をみいだすことは有用である。これは、一般に2成分の薬剤の投与は、用量と簡単さの観点から1成分の薬剤の投与ほど満足できるものではないからである。
【００１５】
1日にインスリンを2U/kg以上必要とする重症のインスリン抵抗性の糖尿病患者の一部では、インスリンレセプターを回避するインスリン代替化合物による療法は有効な戦略かもしれない。さらに、I型糖尿病患者は代謝調節のために非経口的外因性インスリン注射に依存しているので、インスリンの作用とよく似た経口活性化合物の発見は、本疾患の代替療法をもたらすだろう。
【００１６】
すなわち、当該分野において、インスリンの効果によく似た、または好ましくはインスリンの情報伝達カスケードのインスリンレセプターから下流の地点で作用し、とりわけ細胞表面のインスリンレセプター分子の減少により生じる重症のインスリン抵抗性を克服するインスリン代替化合物である化合物および医薬組成物の必要性がある。
(発明の要約)
【００１７】
本発明はとりわけ細胞表面のインスリンレセプター分子の減少により生じる重症のインスリン抵抗性を克服するためのインスリン模倣物質またはインスリン代替化合物である化合物またはその医薬組成物を提供する。本発明は、低用量で有効であり、副作用が最小限の糖尿病、特にII型糖尿病を治療および/または予防するための有効なインスリン模倣物質またはインスリン代替化合物である化合物およびその医薬組成物を提供する。有効な医薬組成物を製剤化するための本発明により提供される化合物の使用方法、および本発明の該医薬組成物を、糖尿病、最も好ましくはヒトI型またはII型糖尿病を有する動物、最も好ましくはヒトに投与する方法も提供する。
【００１８】
具体的には、本発明は、単一成分として投与することができ、バナジウムとアミンの組み合わせよりはるかに良いインスリン模倣物質である、抗糖尿病薬、インスリン増感剤、インスリン模倣物質、またはインスリン代替化合物としてアリールアルキルアミンのバナデート塩を提供する。すなわち、本発明のある局面は、ヒトを含む哺乳動物の糖尿病および/またはインスリン抵抗性病状の治療および/または予防用の医薬を製造するための、式(I)：
【化１】
2008505161.tif 000003
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、Fl、Cl、Br、NO2、およびCH2NHC(=NH)NH2から選ばれるラジカルであるか、またはR1およびR2、およびそれらが結合する炭素がベンゼン環を形成する；pおよびqは1〜3の整数である；R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである；nは1〜3の整数である；xは0〜2の整数である：yは4〜6の整数である(ただし、ｘ＋ｙ＝６である)。]
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)を提供する。すなわち、上記式(I)のあらゆる化合物の投与を含む、ヒトを含む哺乳動物の糖尿病の治療および/または予防も本発明の一部である。
【００１９】
好ましい態様において、式(I)の化合物は、R1、R2、R3、R4、およびR5が独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、(C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、およびNO2から選ばれるラジカルである該化合物、およびR1およびR2、およびそれらが結合している炭素がベンゼン環を形成する該化合物である。より好ましい化合物は、ｎ＝１である該化合物である。具体的態様は、化合物(I)においてx=0、y=6；x=1、y=5；およびx=2、y=4であるものである。最も好ましい化合物は、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物、およびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である。本発明のデカバナデートのこれら態様は酸化状態(V)にある((V)の表示は本明細書では含まれるか省略されている。)。
【００２０】
本発明は、糖尿病および/またはインスリン抵抗性病状に罹患した、ヒトを含む哺乳動物を治療および/または予防する方法にも関する。本方法は、医薬的有効量の式(I)のバナジウム化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)を医薬的に許容される希釈剤または担体とともに該患者に投与することを含む。
【００２１】
本発明の別の局面によれば、適切な酸性度で不活性溶媒中、式(II)のアミンとアルカリ金属バナデートを反応させ、該反応媒質から式(I)の化合物を回収する工程を含む式(I)の化合物の製造方法を提供する。
【００２２】
【化２】
2008505161.tif 000004
【００２３】
好ましくは、該アルカリ金属バナデートはナトリウムバナデートである。該反応は、水中で、または水と、(C1-C5)脂肪族モノアルコール、例えばメタノール、エタノール、および1-ブタノール；および(C3-C7)脂肪族ケトン、例えばアセトン、2-プロパノン、および4-メチル-2-ペンタノンから選ばれる有機溶媒との混合物中で好都合に行うことができる。好ましくは、該酸性度は2〜7.5の有効反応pH値に対応する。
【００２４】
本発明のさらなる局面は、活性成分として治療的有効量の式(I)の化合物を適切な量の医薬的賦形剤または担体とともに含む医薬組成物に関する。本発明の化合物は、経口、非経口、直腸、または局所投与用に製剤化してよい。
【００２５】
本発明はさらに本発明の式Iの化合物と、該化合物の医薬組成物の製造または投与に有用な物質または他の試薬の組み合わせを含むキットを含む。本発明のキットで提供される溶液剤または希釈剤は、好ましくは水性溶液剤または希釈剤である。最も好ましくは、該キットは1またはそれ以上の容器中の単一医薬組成物中に本発明の化合物を含む。容器それ自体は、とりわけ、吸入器、シリンジ、ピペット、点眼器、または例えば本発明の医薬組成物を注射により投与することができるような他のそのような装置として本発明の医薬組成物を投与するのに有用かもしれない。本発明の医薬組成物またはその成分は、乾燥または凍結乾燥の形であり得、その再構成はキットに好都合に含まれる適切な溶媒を加えることにより行われる。医薬組成物の調製または再構成またはその投与の指示書も好都合に含まれる。
【００２６】
本発明のアリールアルキルアミンバナジウム(V)塩はバナデート単独よりはるかに強力なインスリン模倣物質であり好都合である。それはさらにバナジウムとアミンの組み合わせよりさらによい。すなわち、この化合物は、過剰量のバナデートから生じることが知られている毒性を低下させる。これは、糖尿病の治療および/または予防に関して、当該分野で知られたバナジウム組成物に対する本発明のアリールアルキルアミンバナジウム(V)塩を含む医薬組成物の重要な利点である。さらに本発明の組成物が単一成分として提供される事実は、用量および簡単さの観点から医薬組成物の製造に関して2成分(バナジウム＋アミン)の組み合わせに対して好都合である。
【００２７】
さらなる局面において、本発明は式：
【化３】
2008505161.tif 000005
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであり、
R3、R4、およびR5の少なくとも1はハロゲン、CF3、またはOCF3であるか、または
R1およびR2は一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する、
pおよびgは1〜3の整数である、
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである、
nは1〜4の整数である、
xは1〜10の整数である、
yは1〜10の整数である、
ただし、｜x｜−｜y｜＝0である、
Mは適切なpHであらゆる可能なオキソ酸およびポリオキソメタレートであるバナジウムイオンである。］
で示されるアリールアルキルアミンの塩、好ましくはバナジウム塩であるインスリン代替化合物を提供する。
【００２８】
好ましくは、該ハロゲン置換基はフッ素およびフッ素誘導体、例えばOCF3およびCF3であり、アルキルアミン置換基はベンゼン環上で互いにオルソまたはパラ位である。別の態様において、該ベンゼン環はあらゆる他の位置(ハロゲンおよびアルキルアミン置換基以外)が、限定されるものではないがアルキル(シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルを含む)ならびに置換アルキルおよびシクロアルキル；アシルおよび置換アシル；アリール、ヘテロアリール、および置換アリール；ハロゲン；およびニトロ-、ヒドロキシル、スルホ-、およびスルホニル-基を含む基で置換され得る。さらなる別の態様において、ベンゼン環は、芳香族シクロペンチルおよびシクロヘプチル環、またはそのヘテロ原子置換態様(限定されるものではないがピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、およびオキサゾールを含む)、およびその置換誘導体、ならびにナフチル、置換ナフチル、およびヘテロ原子置換ナフチル基、またはフェノールで置換され得る。本発明は、さらに医薬的に許容される希釈剤、溶媒、賦形剤、またはアジュバント、またはその混合物を用いて製剤化された式IIまたは式IIAのハロゲン置換アリールアルキルアミン、より好ましくはそのバナジウム塩を含む医薬組成物を提供する。本発明は、さらに本発明の式IIおよび式IIAのインスリン代替化合物およびそのバナジウム塩、ならびに該インスリン代替化合物または塩の医薬組成物を製造または投与するのに有用な物質もしくは他の試薬の組み合わせを含むキットを含む。本発明のキットで提供される溶液剤または希釈剤は好ましくは水性溶液剤または希釈剤である。最も好ましくは、該キットは1またはそれ以上の容器に単一医薬組成物中の本発明化合物を含む。該容器それ自体は、とりわけ、吸入器、シリンジ、ピペット、点眼器、または本発明の医薬組成物を例えば注射により投与することができる他のそのような装置として本発明の医薬組成物を投与するのに有用かもしれない。本発明の医薬組成物またはその成分は、乾燥または凍結乾燥の形で提供することができ、その再構成物は該キットに好都合に含まれる適切な溶媒を加えることにより提供される。医薬組成物の調製または再構成、またはその投与のための指示書も好都合に含まれる。
【００２９】
本発明は、さらにインスリン欠乏、抵抗性、または無効に関連する疾患もしくは障害、好ましくは糖尿病、最も好ましくはヒトI型またはII型糖尿病、および特にインスリン抵抗性糖尿病を治療する方法を提供する。本発明が提供する方法において、治療は、それを必要とする哺乳動物、最も好ましくはヒト、好ましくはI型またはII型糖尿病を有するヒト、特にインスリン抵抗性糖尿病を有するヒトに本発明の化合物または医薬組成物を投与することにより行われる。
【００３０】
本発明の特に好ましい態様は、以下のある好ましい態様のより詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
(図面の簡単な説明)
【００３１】
図1は、単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの効果を示すグラフである。この図では、Vは2-デオキシグルコース輸送の速度(基礎速度との比で示す)に対応し、結果は平均＋平均の標準誤差(SEM)である。脂肪細胞は以下の条件で刺激物質の非存在下でインキュベーションした：基礎(1)；100nMインスリン存在下(2)；0.5μM (3)、1μM (4)、2.5μM (5)、5μM (6)、10μM (7)、25μM (8)、50μM (9)、および100μM (10)の濃度のヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート存在下。細胞はセミカルバジド阻害剤(1mM)、および10μMヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(11)、25μMヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(12)、または50μMヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(13)の存在下でもインキュベーションした。同時に、細胞は、100μMナトリウムバナデートおよび100μMベンジルアミンの存在下、1mMセミカルバジドの非存在下(14)または存在下(15)でインキュベーションした。
【００３２】
図2は、単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートおよびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの効果を示すグラフである。Vは2-デオキシグルコースの取り込み速度(基礎群との比較で示す)に対応し、結果は平均＋平均標準誤差である。脂肪細胞は以下の条件で刺激物質の非存在下でインキュベーションした：基礎(1)；100nMインスリン存在下(2)；10μM (3)および25μM (4)の濃度のヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート存在下；10μM (8)および25μM (9)の濃度のペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート；および10μM (11)および25μM(12)の濃度のテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート。該細胞をセミカルバジド阻害剤(1mM)、および25μMヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(5)、25μMペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(10)、または25μMのテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(13)の存在下でもインキュベーションした。同時に、細胞を、100μMナトリウムバナデート (6)の存在下、または250μMナトリウムバナデート(7)の存在下でインキュベーションした。
【００３３】
図3は、ストレプトゾトシンによる糖尿病ラットの血糖症に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの慢性(長期)治療(処置)効果を示すグラフである。図3において、[G]は、種々の処置日(t/d)に測定した血中グルコース濃度(mg/dl)に対応する。糖尿病ラットをミニ浸透ポンプにより緩衝溶液(◆)、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(2.5μmol/kg/日)(■)、または同用量のナトリウムデカバナデート(○)で処置した。
【００３４】
図4は、エストレプトゾトシンによる糖尿病ラットの血糖症に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートによる慢性経口処置を示すグラフである。図4において、[G]は、種々の処置日(t/d)に測定した血中グルコース濃度(mg/dlで示す)に対応する。ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(5μmol/kg/日、第0日〜第7日(矢印で示す)；および10μmol/kg/日、第7日から処置)(■)、または同用量のナトリウムデカバナデート(◆)の単回連日経口用量で処置した。非糖尿病ラットの血糖症も図に示す(▲)。
【００３５】
図5A〜5Cは、脂肪細胞におけるグルコース輸送に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)、ペンタキス(ベンジル アンモニウム)デカバナデート(B5V10)、およびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B4V10)の刺激効果を示す。示したすべての値は、4〜5観察/群の平均±SEMであり、*は、基礎輸送値と比較した2-DG取り込みの有意な刺激(P<0.001)を示す。図5Aにおいて、†は、基礎輸送値と比較した2-DG取り込みの有意な刺激(P<0.05)を示す。
【００３６】
図6Aは、本発明のインスリン代替化合物のアリールアルキルアミン成分の有利な態様の化学構造を示す。
【００３７】
図6Bは、単離ラット脂肪細胞のグルコース輸送に対する本発明のインスリン代替化合物のアリールアルキルアミン成分のバナジウム塩の効果を示す。*は、インスリン刺激輸送値と比較した25μM化合物存在下でインキュベーションした群における2-DG取り込みの有意な刺激(P<0.05)を示す。
【００３８】
図7A〜7Eは、脂肪細胞におけるヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートで活性化し、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ阻害剤で阻害した細胞内情報伝達経路を示す(図7E)。値は4〜5観察/群の平均±SEMである。*は、基礎輸送値と比較した2-DG取り込みの有意な刺激(P<0.05)を示す。
【００３９】
図8Aおよび8Bは、糖尿病のラットまたはマウスモデルにおける投与したヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの抗糖尿病効果を示す。すべての値は6〜7観察の平均±SEMである。二元ANOVAは、B6V10と非処置またはV10群間の有意差の存在を示した(図8A、P<O.01；図8B、P<0.001)。図8Aに示す結果のBonferroniポスト検定は、処置第8日からの非処置群と比較したB6V10群の有意差を示す(P<O.01)。
【００４０】
図9Aおよび9Bは、循環インスリンが検出不能なストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットにおける投与したヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの抗糖尿病効果を示す結果を示す。値は6〜7観察の平均±SEMである。二元ANOVAは、B6V10と非処置(P<0.01、図9A；またはP<0.05、図9B)間の有意差の存在を示した。
(具体的態様の詳細な説明)
【００４１】
本発明は、抗糖尿病薬、インスリン増感剤、インスリン模倣薬、またはインスリン代替化合物である化合物およびその医薬組成物を提供する。本発明は、糖尿病、好ましくはヒトI型および/またはII型糖尿病、および特にインスリン抵抗性糖尿病を治療するための化合物およびその塩、ならびにその医薬組成物を提供する。本発明が提供する化合物、塩、および医薬組成物は、抗糖尿病薬、インスリン増感剤、インスリン模倣薬、またはインスリン代替化合物であり、好ましくはハロゲン化アリールアルキルアミン、最も好ましくはそのバナジウム塩、または該アリールアルキルアミンおよびバナジウム、セレニウム、モリブデン、またはタングステン塩の混合物として提供される。本発明化合物の医薬組成物の製造方法、および本発明の該化合物または医薬組成物の投与方法も提供する。
【００４２】
本発明は、詳細にはハロゲン化アリールアルキルアミンおよびそのバナジウム塩をin vitroで脂肪細胞に有力なインスリン模倣効果およびin vivoでインスリン代替効果を示す非ペプチド小分子として提供する。これら化合物のいかなる理論または作用機序に縛られることなく、少なくともこれら化合物のあるものはインスリンレセプターのリン酸化を欠くAktの急速な活性化を特徴とするインスリン情報伝達を引き起こすことによりインスリンレセプターから下流のある地点でインスリン情報伝達カスケードに作用するようである。本発明が提供する特定の化合物、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート((C7H10N)6V10O28-2H2O；B6V10)は、インスリン高脂肪食給餌マウスに投与するとグルコース抵抗性の改善と、血漿インスリンレベルの改善をもたらした。糖尿病のラットまたはマウスモデルに対するB6V10の慢性経口または皮下投与は血中グルコースレベルの有意な低下をもたらした。特に、B6V10は、循環インスリンが検出不能な重症の糖尿病ラットで抗糖尿病効果を示した。さらに、B6V10は、脂肪細胞の脂肪分解を阻害し、糖尿病ラットの遊離脂肪酸、トリグリセリド、およびコレステロールの血漿濃度を正常化した。これらの結果は、本発明が提供する化合物がインスリンレセプターの下流のインスリン情報伝達を活性化するインスリン代替化合物であることを示した。そのような化合物は、疾患、異常、または障害がインスリンレセプター応答性の阻害または廃絶に関連するか、それにより生じる糖尿病、重症のインスリン抵抗性、または異常脂質血症における治療的用途がある。
【００４３】
本発明は、式：
【化４】
2008505161.tif 000006
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10Rn、COR12、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルである;
R3、R4、およびR5の少なくとも1つはハロゲン、CF3、またはOCF3である；または、
R1およびR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する間を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；R6、R7、Rs、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)アルキルまたはフェニルであるラジカルである；nは1〜4の整数である；
ここで、xは1〜10の整数である、yは1〜10の整数である；
ただし、｜x｜＋｜y｜=0である。］
で示されるアリールアルキルアミンの塩、好ましくはバナジウム塩を提供するものであり、該塩は適切なpHであらゆる可能なオキソ酸およびポリオキソメタレートの形のバナジウムを含む金属塩である。
【００４４】
好ましくは、該ハロゲン置換基はフッ素およびフッ素誘導体、例えばOCF3およびCF3であり、該アルキルアミン置換基はベンゼン環上で互いにオルソまたはパラ位にある。別の態様において、該ベンゼン環は、あらゆる他の位置(ハロゲンおよびアルキルアミン置換基)が限定されるものではないがアルキル(シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルを含む)、および置換アルキルおよびシクロアルキル；アシルおよび置換アシル；アリール、ヘテロアリール、および置換アリール；ハロゲン；およびニトロ、ヒドロキシル、スルホ-およびスルホニル-基を含む基で置換されうる。さらなる別の態様において、該ベンゼン環は、芳香族シクロペンチル、およびシクロヘプチル環、または限定されるものではないがピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、およびオキサゾールを含むそのヘテロ原子置換態様、およびその置換誘導体、ならびにナフチル、置換ナフチル、およびヘテロ原子置換ナフチル基、またはフェノールで置換されうる。
【００４５】
特定の態様において、本発明は、アリールアルキルアミンのバナデート塩を抗糖尿病薬および/またはインスリン増感剤として提供し、これは単一成分として投与することができ、バナジウムとアミンの組み合わせよりよいインスリン模倣物質である。すなわち、本発明の局面は、ヒトを含む哺乳動物の糖尿病および/またはインスリン抵抗性病状を治療および/または予防するための医薬を製造するための、式(I)：
【化５】
2008505161.tif 000007
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、およびCH2NHC(=NH)NH2から選ばれるラジカルである；または、
R1およびR2は一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびqは1〜3の整数である；R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキルまたはフェニルであるラジカルである；nは1〜3の整数である；xは0〜2の整数である、yは4〜6の整数である、ただし、x+y=6である。］
で示されるバナジウム化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)の使用に関する。すなわち、上記式(I)のあらゆる化合物の投与を含むヒトを含む哺乳動物の糖尿病の治療および/または予防も本発明の一部である。
【００４６】
好ましい態様において、式(I)の化合物は、R1、R2、R3、R4、およびR5が独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、(C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、およびNO2から選ばれるラジカルである該化合物、およびR1およびR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する該化合物である。より好ましい化合物は、n=1である該化合物である。具体的な態様において、x=0、y=6であり、x=1、y=5であり、およびx=2、y=4であるときの化合物(I)の化合物である。最も好ましい化合物は、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物、およびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である。
【００４７】
本発明において「アルキル」、「低級アルキル」、および「C1-C6アルキル」は、炭素数1-6の直鎖または分岐鎖アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、2-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、および3-メチルペンチルを意味する。
【００４８】
本発明において「アルコキシ」、「低級アルコキシ」、および「C1-C6アルコキシ」は、炭素数1〜6の直鎖または分岐鎖アルコキシ基、例えばメトシキ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペントキシ、2-ペンチル、イソペントキシ、ネオペントキシ、ヘキソキシ、3-ヘキソキシ、および3-メチルペントキシを意味する。
【００４９】
本発明において用語「ハロゲン」はフッ素、臭素、塩素、およびヨウ素を意味する。
【００５０】
本発明において「シクロアルキル」、例えばC3-C7シクロアルキルは、3〜7個の原子を有するシクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルを意味する。
【００５１】
「アリール」は、単環(例えば、フェニル)、多環(例えば、ビフェニル)、または少なくとも一つが芳香族である多縮合環を有する芳香族炭素環基(例えば、1,2,3,4-テトラヒドロナフチル、ナフチル、アントリル、またはフェナントリル)を意味し、これは所望により例えば、ハロゲン、C1-C6アルキル、C1-C6アルコキシ、C1-C6アルキルチオ、トリフルオロメチル、C1-C6アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、およびヒドロキシでモノ、ジ、またはトリ置換されている。好ましいアリール基には、フェニル、インダニル、ビフェニル、およびナフチルがあり、そのそれぞれが所望により本明細書に記載のごとく置換されている。より好ましいアリール基には、フェニルおよびナフチルがあり、そのそれぞれが所望により本明細書に記載のごとく置換されている。
【００５２】
「ヘテロアリール」は、芳香族環または芳香族環系を意味し、その各環は、5、6、または7員のものを含み、少なくとも1および4個までの環のメンバーは窒素、酸素、または硫黄から選ばれる。そのようなヘテロアリール基には、例えば、チエニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、(イス)オキサゾリル、ピリジル、ピリミジニル、(イソ)キノリニル、インドリル、ナプチリジニル、ベンズイミダゾリル、およびベンゾキサゾリルがある。好ましいヘテロアリールは、チアゾリル、ピリミジニル、ピリミジン-2-イル、インドリル、ピリジル、1-イミダゾリル、2-チエニル、1-または2-キノリニル、1-または2-イソキノリニル、1-または2-テトラヒドロイソキノリニル、2-または3-フラニル、および2-テトラヒドロフラニルがある。
【００５３】
「ヘテロシクロアルキル」は、3、4、5、6、または7員環の1またはそれ以上の炭素環系を意味し、これには独立して窒素、酸素、および硫黄から選ばれる少なくとも1および4個までのヘテロ原子を含む9〜11原子の縮合環系が含まれる。本発明の好ましいヘテロ環には、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルS-オキシド、チオモルホリニルS-オキシド、チオモルホリニルS,S-ジオキシド、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピロリジニル、ピロリニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ホモピペリジニル、ホモモルホリニル、テトラヒドロキノリニル、ホモチオモルホリニル、ホモチオモルホリニルS,S-ジオキシド、オキサゾリジノニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドラピロリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロフリル、ジヒドロピラニル、アゼパニル、ジアゼパニル、テトラヒドロチエニルS-オキシド、テトラヒドロチエニルS,S-ジオキシド、およびホモチオモルホリニルS-オキシドがある。
【００５４】
式(I)のアミンは、種々の方法により製造することができる。式(I)のアミンの最初の一般的製造方法を反応式Iに要約する。該方法は、式(III)のアルデヒドをヒドロキシルアミン(ここで、R1、R2、R3、R4、およびR5は前記と同意義である。)と反応させ、次いで得られたオキシムを還元することを含む。該アルデヒドと該ヒドロキシルアミンの反応は、適切な反応不活性溶媒中、好ましくは反応混合物の還流温度で実施する。該オキシムの還元は、好ましくは不活性溶媒中、PtO2を触媒に用いる触媒水素添加により行われる。
【００５５】
さらに、式(II)のアミンの一般的製造方法を反応式IIに要約する。該方法は、式(III)のアルデヒドをポリマー支持体上に固定したアミノ基で固相合成することによる還元的アミノ化を行うことを含む。該方法は、以下の工程を含む：a)ペプチド合成に普通に用いられる反応物質で酸不安定性リンカーを含むポリマー支持体の保護基(例えば9-フルオレニルメトキシカルボニル)を除去し；b)脱水剤を用いポリマー支持体の遊離アミノ官能基と該アルデヒドを縮合させ；c)水素化ホウ素リチウムのような還元剤で該イミンを還元し；d)酸性条件(例えばトリフルオロ酢酸)中、ポリマー支持体の該化合物を放出させる。
【００５６】
ポリマー支持体として用いることができる化合物には、ポリスチレンおよびポリスチレンにグラフトしたポリエチレングリコールがある。これら支持体には、酸不安定性リンカー、例えばXAL(((9-(アミノ)キサンテン-2-イル)オキシ)ブタン酸ハンドル)、およびRink(p-((R,S)-α-(1-(9H-フルオレン-9-イル)-メトキシホルムアミド)-2,4-ジメトキシベンジル)-フェノキシ酢酸)がある。
【００５７】
R1、R2、R3、R4、およびR5は、上記群から選ばれる置換基またはそのような置換基に変換することができるその中間体である。変換は該イミンの還元後に行われ、該アミノ基は2-ニトロフェニルスルフェニルのような保護基で保護される。例えば、ヒドロキシル置換基は、塩基の存在下でアルキル化剤でアルキル化することによりアルコキシ置換基に変換することができる。
反応式I
【００５８】
【化６】
2008505161.tif 000008
反応式II
【００５９】
【化７】
2008505161.tif 000009
【００６０】
本発明の抗糖尿病薬、インスリン増感剤、インスリン模倣物質、またはインスリン代替化合物は、同時、分離、または逐次投与のために提供され、ハロゲン化式Iアリールアルキルアミンおよび塩、最も好ましくはバナジウム塩を、好ましくは医薬的に許容される賦形剤または担体と組み合わせて含む。
【００６１】
本発明が提供するハロゲン化アリールアルキルアミンの塩は、好ましくはバナジウム塩であり、好ましくはその構造部分としてバナジウムを含む化合物である。該塩は荷電または非荷電の形で生じて良いが、本発明が提供する該塩は、典型的にはメタル金属の塩を含む。該塩が正に荷電している場合は、該塩はさらに負に荷電している対イオン、例えば、F-、Cl-、Br-、I-、OH-、または負の荷電を有する医薬的に許容される有機または無機イオン種を含む。該塩が負に荷電している場合は、該塩はさらに正に荷電した対イオンを含んでよい。正に荷電した対イオンは、典型的にはアルカリまたはアルカリ土類金属からの金属、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、および他の正に荷電したイオン、例えばアンモニウム、または正の荷電を有するあらゆる医薬的に許容される有機または無機イオン種を含む。正または負に荷電した塩が負または正に荷電した対イオンと結合すると、好ましくは中性塩が得られる。
【００６２】
バナジウム(V)は、典型的には酸化状態が(+4)または(+5)の、好ましくはテトラヘドリックまたはオクタヘドラル配位圏を有する本発明化合物およびその医薬組成物で存在する。本発明の組成物において、バナジウム、好ましくはV4+またはV5+はあらゆる化学的構成要素と共に生じうる。カチオンV4+またはV5+は、好ましくはバナデート(IV)/(V)、ペルバナデート、ポリオキソメタレート、バナジル塩、および/または水和または非水和のバナジルコンプレックスから選ばれるバナジウム化合物として生じる。カチオンV4+またはV5+は、常にV(IV/V)の原子の周りの配位圏により部分的に形成される化学的部分を伴う。該配位圏は、例えばバナデートアニオン(4個のオキシドイオンにより形成される配位圏)の場合またはペルオキシタングステート(オキシドおよびペルオキシドイオンの混合物により形成される配位圏)の場合において無機リガンド(オキシド、ヒドロキシド、ペルオキシドなど)により形成されうる。該配位圏は、異なる医薬的に許容される有機化合物および配位圏(例えば医薬的に許容されるアルコール、チオール、カルボン酸、アミン、アミノ酸、またはN-含有ヘテロサイクル)に属するO、S、またはN原子を介してV(IVA/V)原子と結合している分子またはイオンである有機リガンドにより形成されうる。混合無機/有機配位圏も可能である。該V(IV/V)原子により形成される構造およびその配位圏が中性でないとき、用語「化学的部分」は、V(IV/V)化合物全体を中性にするあらゆる医薬的に許容されるイオン種も含む。例えば、該バナデートアニオンは、常に中性バナデート塩を形成するカチオン(例えば、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、またはカルシウム、またはアリールアルキルアミン)を伴う。水性溶液において、種々のpHで確実に検出可能な割合で存在するオキソバナデートは、[VO4]3-、[HVO4]2-、[H2VO4]3-、[V2O7]4-、[HV2O7]3-、[V3O9]3-、[V4O12]4-、ヌードまたは種々のプロトン化状態のデカバナデート[V10O28]6-、および[VO2]+である。オキサニオンが中性形(例えば、MIIVO4)として出現する場合は、MIIはアルカリ土類金属から選ばれる金属、例えばMg2+またはCa2+である。バナデート(Vl)化合物の水和物が一般的(例えば、ナトリウムバナデートの水和物)であり、その使用も本発明内であると考えられる。
【００６３】
あらゆる前記化合物は、可溶性および/または可溶化形の本発明化合物およびその医薬組成物で存在してよい。したがって、本発明化合物およびその医薬組成物中に含まれる該バナジウム(V)/VI)化合物、およびその(カチオン)部分は、好ましくは例えば可溶性化合物を得るために選ばれる。
【００６４】
さらに、該バナジウム化合物は、好ましくは医薬的に許容される化合物である。本発明の文脈において、用語「医薬的に許容される化合物」は、それ自体が医薬的に許容される化学構造と結合したあらゆる前記化合物を含むことを意図する。用語「医薬的に許容される化合物」には、本発明化合物に含まれるあらゆる医薬的に許容される溶媒和物(例えば水和物)も含まれる。
【００６５】
本明細書において提供される、本発明の化合物および医薬組成物は、ハロゲン化アリールアルキルアミン、すなわち、好ましくは、第1アミンのハロゲン化誘導体、例えばチラミン、ベンジルアミン、2-(4-フルオロ-フェニル)-エチルアミン、4-フルオロ-ベンジルアミン、3-フェニル-プロピルアミン、4-フェニル-ブチルアミン、2,3-ジメトキシベンジルアミン、1-ナフタレンメチルアミン、デオキシエピネフリン、エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、ヒスタミン、β-フェニルエチルアミン、N-アセチルプトレシン、トリプタミン、n-オクチルアミン、n-ペンチルアミン、キヌラミン、3-メトキシチラミン、およびn-デシルアミンを含む。
【００６６】
ベンジルアミンおよびバナデートから製造した典型的なハロゲン化アリールアルキルアミンが本明細書において提供される：ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート((C7H10N)6V10O28；H2O；本明細書では「B6V10」という)、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート((C7H10N)5HV10O28；「B5V10」)、およびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート((C7H10N)4H2V10O2S；「B4V10」)。これらは、IRスペクトル、51V-NMR、1H/13C-NMR、元素分析、およびX線回折解析により溶液および固体状態で幅広く特徴づけられた。
【００６７】
アリールアルキルアミンおよびその塩の生物学的効果のプロフィールは、これら小非ペプチド分子がインスリンのin vivoにおける機能を代替することができることを示した。いかなる特定の理論や機序に縛られることなく、アリールアルキルアミンバナジウム塩はインスリンレセプターの下流の細胞内インスリン情報伝達経路を活性化する。すなわち、これら化合物による細胞内活性化は、インスリンレセプターの活性化なしに生じるThr308およびSer473両方のプロテインキナーゼBの急速なリン酸化を特徴とする。この観察結果に基づいて、アリールアルキルアミンバナジウム塩は、脂肪細胞における多くの情報伝達事象を引き起こすことができ、これにはタンパク質チロシンホスファターゼ活性の初期阻害、次いでインスリンレセプターチロシンキナーゼの活性化なしに生じるホスファチジルイノシトール3-キナーゼおよびプロテインキナーゼB/Aktの活性化が含まれる。結果として、本発明化合物は、インスリンに高度に抵抗性の、またはインスリンレセプターの応答性の阻害または廃絶に関連または付随する疾患、障害、または欠陥を有する個体に作用することができるインスリン代替薬である。
【００６８】
したがって、本発明のアリールアルキルアミンバナジウム塩は、代謝恒常性に関連する種々の組織に大きな活性を有する。本発明のアリールアルキルアミンバナジウム塩は、脂肪細胞におけるグルコース輸送を活性化し、脂肪分解を阻害する。骨格筋もグルコースの取り込みを急速に増強し、インスリン抵抗性に関連する糖尿病の動物モデルにおけるインスリン応答性を増大させることによりアリールアルキルアミンバナジウム塩と反応する(Abella et al.、2003、Diabetes 52：1004-1013)。アリールアルキルアミンバナジウム塩の成分もGoto-Kakizaki糖尿病ラットから得られる膵島におけるインスリン分泌を増強し、本発明のアリールアルキルアミンバナジウム塩がβ膵島細胞におけるインスリン分泌を増強することができることを示唆する(Abella et al.、2003、Id)。本発明の化合物および医薬組成物のこの局面の裏付けにおいて、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)の急性投与は、高脂肪食によりグルコース寛容としたマウスにおける血漿インスリンレベルパターンを改善した。
【００６９】
B6V10によるIn vivo慢性(長期)経口または皮下処置は、ストレプトゾトシン投与(45mg/kg)により糖尿病にしたラットにおける高血糖症を改善した。同様に、慢性B6V10処置は肥満糖尿病db/dbマウスにおける血糖症を改善した。さらに注目すべきことにB6V10は、非常に大用量のストレプトゾトシン(100 mg/kg)を投与した後における循環インスリンが検出不能の糖尿病ラットにおける高血糖を減少させるのに顕著に有効であった。B6V10処置は、動物に低血糖症をもたらさず、用いた用量で毒性副作用を示さなかった。これについて、抗糖尿病薬としてのB6V10の有効量は、齧歯類における「副作用がみられないレベル」の用量以下の、バナジウムの非常に低用量を意味することが示されるはずである(Trumbo et al.、2001、J. Amer. Dietetic Assoc. 101: 294-301 (2001)。この証拠に基づいて、アリールアルキルアミンバナジウム塩は、I型糖尿病、II型糖尿病、および重度のインスリン抵抗性を特徴とするII型糖尿病患者の一部の治療における治療的価値のある、新規クラスの抗糖尿病薬を意味する。アリールアルキルアミンバナジウム塩は、インスリンレセプターの下流段階のインスリン情報伝達を刺激するようであるので、該化合物は、例えばA型またはB型インスリン抵抗性症候群またはインスリン増感剤による処置に不応性であり、唯一の有効な治療が大用量のインスリンである他のタイプの重症インスリン抵抗性の患者におけるインスリンレセプター活性の欠如を特徴とする病状の治療に適している(Vestergaard et al.、2001、J. Intern. Med. 250: 406-414)。
【００７０】
本発明に関して、抗糖尿病薬、インスリン増感剤、インスリン模倣物質、またはインスリン代替化合物として使用するハロゲン化アリールアルキルアミンおよびその医薬的に許容される塩を含む本発明化合物、およびその医薬組成物の有効濃度は、バナジウム(V)/VI)化合物を単独使用したときにインスリン作用を模倣するのに必要な濃度より少なくとも一桁低いことは好都合である。臨床的観点から、該薬剤の毒性はバナジウム化合物単独に基づく薬剤毒性よりはるかに低い。このことは、糖尿病の治療および/または予防における本発明の医薬および医薬組成物の当該分野で知られた該組成物に対する大きな利点を示す。
【００７１】
式I、II、またはIIAの化合物およびそのバナジウム塩は医薬として有用であり、医薬組成物として提供することができる。該医薬組成物は、それ自体知られた方法で、例えば常套的混合、溶解、顆粒化、糖衣化、粉(ゲル)化、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥処理により製造することができる。
【００７２】
医薬組成物は、医薬的に用いることができ、活性化合物を製剤に加工するのを促す賦形剤および補助剤を含む1またはそれ以上の医薬的に許容される担体を用いて常套的方法で製剤化することができる。適切な製剤は選んだ投与経路に依存する。
【００７３】
注射用の、本発明の方法に従って製造される化合物は、適切な水性溶液、例えば生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理食塩水緩衝液を用いて製剤化することができる。経粘膜および経皮投与用には、バリアーを透過するのに適した浸透剤を製剤に用いる。そのような浸透剤は一般に当該分野で知られている。
【００７４】
経口投与用には、該化合物は活性化合物と当該分野でよく知られた医薬的に許容される担体を混合することにより容易に製剤化することができる。そのような担体は、本発明化合物を治療する患者により経口摂取されるように錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液体剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、サスペンジョン剤などとして製剤化するのを可能にする。経口使用のための医薬製剤は、固体賦形剤を用いて得、所望により得られた混合物を粉末にし、所望により適切な助剤を加えた後顆粒の混合物を加工し、錠剤または糖衣コアを得ることができる。適切な賦形剤は、具体的には充填剤、例えばセルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および/またはポリビニルピロリドン(PVP)などである。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、カンテン、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムのような崩壊剤を加えることができる。
【００７５】
糖衣コアは適切なコーティングを用いて提供される。この目的に濃縮糖溶液を用いることができ、これは、所望によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および/または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含むことができる。染料または色素を錠剤または糖衣コーティングに加え、活性化合物用量の種々の組み合わせを識別または特徴付けることができる。
【００７６】
経口的に用いることができる医薬製剤には、ゼラチン製プッシュフィットカプセル、およびゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールでできた密封軟カプセルがある。該プッシュフィットカプセルは、活性化合物を充填剤、例えばラクトース、結合剤、例えばデンプン、および/または潤滑剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および所望により安定化剤とともに含み得る。軟カプセルでは、活性化合物を、適切な溶液、例えば脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁させることができる。さらに、安定化剤を加えることができる。経口投与用のすべての製剤は、そのような投与に適した用量であるべきである。バッカル投与用の組成物は常套的方法で製剤化した錠剤またはローゼンジー剤の形を取りうる。
【００７７】
吸入投与用には、本発明の方法にしたがって製造した化合物は、加圧パックまたはネブライザーから適切なプロペラント、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガスを用いてエアロゾルスプレーの形で好都合に送達される。加圧エアロゾルの場合は、用量単位は定量を供給するバルブを与えることにより決定することができる。該化合物とラクトースやデンプンのような適切な粉末基剤の粉末混合物を含む、吸入器(inhaler)または吸入器(insufflator)で使用する、例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジを製剤化することができる。
【００７８】
該化合物は、注射、例えばボーラス注射または連続注入により非経口投与するために製剤化することができる。注射用の製剤は、保存料を加え、例えばアンプルまたは多用量容器中に単位剤形で存在しうる。該組成物は、油状または水性ビークル中のサスペンジョン、溶液、またはエマルジョンのような形をとることができ、懸濁化剤、安定化剤、および/または分散剤のような製剤化剤を含みうる。
【００７９】
非経口投与用の医薬製剤は、水溶性の活性化合物の水性溶液を含む。さらに、活性化合物のサスペンジョンは、適切な油状注射サスペンジョンとして製剤化することができる。適切な脂溶性溶媒またはビークルには、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばエチルオレエートまたはトリグリセリド、またはリポソームがある。水性注射用サスペンジョンは、該サスペンジョンの粘性を増加させる物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含みうる。所望により、該サスペンジョンは、高濃縮溶液の製造を可能にするために該化合物の溶解性を増加させる適切な安定剤または物質も含むことができる。あるいはまた、活性成分は、使用前に、適切なビークル、例えば無菌発熱物質不含水で再構築するために粉末の形でありうる。該化合物は、例えばココアバターや他のグリセリドのような常套的坐剤基剤を用い、坐剤や滞留浣腸のような直腸用組成物に製剤化することもできる。
【００８０】
前記製剤に加えて、該化合物はデポー製剤として製剤化することもできる。そのような長期作用製剤は、移植(例えば皮下または筋肉内に)または筋肉内注射により投与することができる。すなわち、例えば、該化合物は、適切なポリマーまたは疎水性物質(例えば許容される油中エマルジョン)またはイオン交換樹脂を用いて、またはやや溶けにくい誘導体、例えばやや溶けにくい塩として製剤化することができる。
【００８１】
本発明の抗糖尿病薬、インスリン増感剤、インスリン模倣物質、またはインスリン代替化合物の疎水性態様のための医薬担体は、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水溶性有機ポリマー、および水性相を含む共溶媒系である。該共溶媒系はVPD共溶媒系でありうる。VPDは、無水エタノール中の、3% w/vベンジルアルコール、8% w/v非極性界面活性剤ポリソルベート80、および65% w/vポリエチレングリコール300の溶液である。VPD共溶媒系(VPD:5W)は、水溶液中の5%デキストロースで1：1に希釈したVPDからなる。この共溶媒系は、疎水性化合物をよく溶解し、それ自身全身投与で低毒性である。もちろん、共溶媒系の割合はその溶解性および毒性特性を壊さずにかなり変更することができる。さらに、共溶媒成分の同一性は変化しうる。例えば他の低毒性非極性表面活性剤をポリソルベート80の代わりに用いることができ、ポリエチレングリコールの分画サイズを変更することができ、他の生体適合性ポリマーをポリエチレングリコール、例えばポリビニルピロリドンに代えることができ、他の糖または多糖でデキストロースを置き換えることができる。
【００８２】
あるいはまた、疎水性医薬化合物のための他の送達系を用いることができる。リポソームおよびエマルジョンは、疎水性薬のための送達用ビークルまたは担体のよく知られた例である。ジメチルスルホキシドのようなある種の有機溶媒も、通常毒性がより高いという代償があるが使用することができる。さらに、該化合物は持続放出系、例えば治療薬を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを用いて送達することができる。種々の持続放出物質が樹立されており、当業者によく知られている。持続放出カプセルは、その化学的性質に応じて数週間から100日間までにわたり化合物を放出することができる。治療的試薬の化学的性質と生物学的安定性に応じて、タンパク質および核酸の安定化のためのさらなる戦略を用いることができる。
【００８３】
医薬組成物は適切な固体またはゲル相担体または賦形剤を含むこともできる。そのような担体または賦形剤の例には、限定されるものではないが炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー、例えばポリエチレングリコールがある。
【００８４】
本発明の方法に従って製造される該化合物の医薬組成物を製剤化し、全身、局所(localiszed)、または局所(topical)投与を含む種々の手段を通して投与することができる。製剤化および投与の技術は「Remington's Pharmaceutical Sciences」(Mack Publishing Co.、Easton、PA)にみることができる。身体の所望の標的部位への送達を最大限にするために投与方法を選択することができる。適切な投与経路は、例えば経口、直腸、経粘膜、経皮、または腸投与；筋肉内、皮下、髄内注射、およびクモ膜下、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻内、または眼内注射を含む可能な送達を含みうる。
【００８５】
使用に適した医薬組成物には、活性成分がその意図する目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物がある。より具体的には、治療的有効量は、治療する対象の存在する症状を改善し、またはその進行を抑制するのに有効な量を意味する。有効量の決定は、特に本明細書に記載の詳細な開示に照らして十分当業者の能力内である。
【００８６】
非ヒト動物に投与するには、該薬剤または該薬剤を含む医薬組成物を動物の飼料や飲用水に加えてもよい。動物が飼料と共に該薬剤の適切な量を摂取するように薬剤の予め決定した用量を含む動物飼料および飲用水製品を製剤化することは好都合であろう。動物が消費するほぼ直前に飼料または飲用水に薬剤を含むプレミックスを加えることも好都合であろう。
【００８７】
本発明の方法にしたがって製造される好ましい化合物は、ある種の医薬特性を有するであろう。そのような特性には、限定されるものではないが、経口バイオアベイラビリティ、低毒性、低血清タンパク質結合性、および望ましいin vitroおよびin vivo半減期がある。アッセイを用いてこれら望ましい医薬特性を推定することができよう。バイオアベイラビリティを推定するのに用いるアッセイには、Caco-2細胞単層を含むヒト腸細胞単層を横切る輸送がある。血清タンパク質結合性はアルブミン結合アッセイから予測することができよう。そのようなアッセイは、Oravcova et al.の総説 (1996、Journal of Chromatography B-Biomedical Applications 677:1-28)に記載されている。化合物の半減期は、化合物の投与頻度に逆比例する。化合物のin vitro半減期は、KuhnzおよびGieschen (1998、Drug Metabolism and Disposition 26:1120-1127)に記載のミクロソーム半減期のアッセイから予測することができよう。そのような化合物の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物を用いる常套的医薬的方法、例えばLD50(個体群の50%が致死的な用量)、およびED50(個体群の50%における治療的有効用量)の測定により決定することができる。毒性作用と治療効果の用量比が治療指数であり、LD50とED50の比で表すことができる。高治療指数を示す化合物が好ましい。これら細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータを用いてヒトに使用する用量範囲を処方することができる。そのような化合物の用量は、毒性が全くまたはほとんどないED50を含む循環濃度範囲内にあることが好ましい。用量は、用いる剤形および用いる投与経路に応じてこの範囲内で変更しうる。正確な製剤、投与経路および用量は患者の病状に応じて個々の担当医師が選択することができる(例えば、Fing et al.、1975、THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS、Ch.1、p.1参照)。
【００８８】
投与量および間隔を個々に調節し、細菌細胞の増殖阻害効果を維持するのに十分な活性部分の血漿レベルを提供することができる。全身投与のための通常の患者への投与量は、70kgの男性に対し1日あたりバナジウム1.5mg等量以下の投与が維持されるべきである。局所投与または選択的取り込みの場合は、該化合物の有効局所濃度は血漿濃度と関連し得ない。
【００８９】
さらなる態様において、糖尿病(diabetes)、詳細には糖尿病(diabetes mellitus)、特にインスリン抵抗性状態、例えばII型糖尿病またはその関連疾患を治療するための本発明の医薬組成物を提供する。好ましくは、本発明の(医薬)組成物は抗糖尿病薬である。本発明の医薬組成物は、典型的にはハロゲン化アリールアルキルアミンと医薬的に許容されるバナジウム化合物の独創的組み合わせを含む。該独創的医薬組成物は、前投与、同時投与、または後投与で糖尿病を治療するのに適している。典型的には、該医薬組成物は経口、または静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸、および局所経路の投与を含む非経口的に投与される。
【００９０】
ハロゲン化アリールアルキルアミン、および医薬的に許容されるバナジウム(V)/VI)、(VI)化合物を含む本発明の(医薬)組成物の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物を用いる標準的医薬的手順により、例えばLD50(個体群の50%が致死的な用量)、およびED50(個体群の50%における治療的有効用量)の測定により決定することができる。毒性作用と治療効果の用量比が治療指数であり、LD50/ED50の比で表すことができる。高治療指数を示す本発明化合物(または組成物)が好ましい。副作用を示す可能性がある化合物を用いる場合は、正常細胞に対する潜在的損傷を最小限にして副作用を減らすように罹患組織部位にそのような試薬を標的化する送達システムを設計するよう注意すべきである。
【００９１】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータを用いてヒトに用いる用量範囲を処方することができる。投与する本発明化合物の用量は、毒性が全くまたはほとんどないED50を含む循環濃度範囲内にあることが好ましい。用量は、用いる剤形および用いる投与経路に応じてこの範囲内で変更しうる。本発明において投与するあらゆる独創的化合物の医薬的有効量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養で決定したIC50(すなわち、活性の半最大阻害を達成する被検化合物の濃度)を含む循環血漿濃度範囲を達成するよう処方することができよう。そのような情報を用いてヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。本発明の化合物は好ましくは10μM以下のIC50を有し、これは典型的には当該分野で用いられる生化学または細胞アッセイにより決定することができる。本発明のある化合物は、1〜10mMの濃度で有効である。この数字に基づいて、対象に投与するための適切な用量を得ることができる。親化合物の特性を増大するためのプロドラッグの形成は当該分野でよく知られている。そのような特性には、溶解性、吸収性、生体安定性、および放出時間がある(「Pharmaceutical Dosage Form and Drug Delivery Systems」(第6版)、Ansel et al.編、Williams & Wilkins、pgs. 27-29、(1995)参照)。本発明化合物の一般に用いられるプロドラッグは、主要薬物生体内変化の利点があるよう設計することができ、本発明の範囲内にあると考えられる。主要薬物生体内変化には、N-脱アルキル化、O-脱アルキル化、脂肪族ヒドロキシル化、芳香族ヒドロキシル化、N-酸化、S-酸化、脱アミノ化、加水分解反応、グルクロン酸化、硫酸化、およびアセチル化(Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (第9版)、Molinoff et al.編、McGraw-Hill、p.11-13、(1996)参照)がある。本発明の医薬組成物は、経口的、経鼻的、舌下、経直腸的、または経膣的に投与するように製剤化することができる。非経口的投与には、静脈内、関節内、筋肉内、腹腔内、および皮下注射、および注入技術の使用が含まれた。本発明の医薬組成物を形成するために、1またはそれ以上の本発明化合物は、1またはそれ以上の無毒性の医薬的に許容される成分、および所望により他の活性抗増殖剤と共に存在してよい。これら組成物は、Remington's Pharmaceutical Sciences (第14版)、編集長John E. Hoover、Mach Publishing Co.、(1970)、またはPharmaceutical Dosage Form and Drug Delivery Systems (第6版)、Ansel et al.編、Williams & Wilkins、(1995)に記載のような既知の技術を適用することにより製造することができる。
【００９２】
上記のように、ハロゲン化アリールアルキルアミンと医薬的に許容されるバナジウム(V)/(VI)化合物の独創的組み合わせを含む医薬組成物は経口使用に適した形であってよい。必要用量は、例えば年齢、体重、性別、投与方法(例えば経口または非経口)、および治療する疾患の重症度による。
【００９３】
医薬組成物の製剤化方法は本明細書に記載のごとく具体的投与方法に適するように提供される。
【００９４】
本明細書では、治療的有効量の本発明の化合物、またはそのバナジウム、セレニウム、モリブデン、またはタングステン塩、およびその医薬組成物をそれを必要とする動物、最も好ましくはヒトに投与することを含むI型およびII型糖尿病の治療方法が提供される。
【００９５】
明細書および特許請求の範囲を通して、用語「含む(包含する)」およびその変形は、他の技術的特徴、付加物、成分、または工程を排除することを意図しない。本出願の要約は本明細書の一部を構成する。本発明のさらなる目的、利点および特徴は本明細書の分析により当業者に明らかであるか、本発明の実施により学ぶことができよう。以下の実施例および図面は、例示であって本発明を限定するものではない。
【００９６】
以下の実施例は、例示であって本発明を限定するものではない。本発明は、本発明の個々の局面を例示することを意図する例示的態様により範囲が限定されるものではない。特に、本発明に示し、記載したものに加えて本発明の種々の変更は、前記説明および添付の図面から当業者に明らかであろう。そのような変更も特許請求の範囲の範囲内にあるものとする。
【実施例】
【００９７】
以下の材料および方法を下記の具体的実施例に用いる。
材料
【００９８】
2-[1,2-3H]-D-デオキシグルコース(26Ci/mmol)はPerkinElmer Life、およびAnalytical Sciences Products (Boston、MA)から、[14C]ベンジルアミン(59Ci/mmol)はAmersham Biosciences (Little Chalfont、Buckinghamshire、England)から得た。精製ブタインスリンはEIi Lilly (Indianapolis、IN)から好意により譲られた。セミカルバジド・塩酸、ベンジルアミン・塩酸、ナトリウムオルソバナデート、ワートマニン、および他の化学薬品はSigma Aldrich (St. Louis、MO)から購入した。LY294002はCalbiochem (San Diego、CA)から購入した。ケタミンはMerieux (Imalgene、Merieux、France)から得た。コラゲナーゼI型はWorthington (Lakewood、NJ)から、コラゲナーゼPはRoche Diagnostics (Basel、Switzerland)から得た。慢性試験に用いた浸透圧ミニポンプはAlza Corporation (Palo Alto、CA)から得た。すべての電気泳動試薬および分子量マーカーはBio-Radから得た。強化化学発光試薬(スーパーシグナル基質)はAmersham (Arlington Heights、IL)から得た。抗ホスホチロシンモノクローナル抗体、および抗インスリンレセプターβ鎖ポリクローナル抗体はBD Biosciences (Franklin Lakes、NJ)から購入した。抗ホスホ-Thr308-PKB、および抗ホスホ-Ser473-PKBポリクローナル抗体はCell Signaling Technologies (Beverly、MA)から購入した。
動物
【００９９】
雄Wistarラット(体重180-220g)はHarlan(Interfauna lberica S.A.、Spain)から購入した。糖尿病は、ストレプトゾトシンの新鮮調製溶液(ある試験では用量は45mg/kg体重であり、他の試験では100 mg/kg体重(50mMクエン酸緩衝液、pH4.5)であった。)の単回腹腔内注射により誘導した。血糖症が300 mg/dl以上の糖尿病ラットのみを使用した。動物を22℃の12時間明/12時間暗周期の動物舎に収容し、自由採餌とした。用いたすべての方法は、University of Barcelona(Spain)の動物倫理委員会に承認された。db/db突然変異を有する雄マウスC57 BL/Ks(Jackson Laboratories、Bar Harbor、ME)はHarlan France (Gannat、France)から購入した。C57BL/6J雄マウスに(kcalで)脂肪から72%、タンパク質から28%、炭水化物から<1%を含む超高脂肪飼料(Burcelin et al.、2002、Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab 282: E834-E842)を16週間与えた。
糖尿病動物の慢性(長期)処置(治療)
【０１００】
B6V10 (2.5μmol/kg体重/日)またはデカバナデート(2.5μmol/kg体重/日)を供給する浸透圧ミニポンプをケタミン塩酸(95 mg/kg)およびキシラジン(10 mg/kg)で麻酔した糖尿病ラットに皮下移植した。B6V10またはデカバナデートを与えなかった動物をシャムオペレーションした。血糖症を、バナデートの投与前2週間、午前9時に尾血管から回収した動静脈血を用いて測定した。インスリン濃度を処置の前および後に測定した。別の実験では、B6V10を第一週は単用量5μmol/kg/日で、およびさらに2週間は10μmol/kg/日で胃管栄養法により投与した。コントロール群にはベンジルアミン非存在下で対応するデカバナデート塩を投与した。処置の終了時に動物を屠殺し、in vitro分析に用いるまで肝臓、脂肪体、心臓、および肺を-80℃に、血漿を-20℃に保った。
アミンオキシダーゼ活性アッセイ
【０１０１】
パーオキシダーゼ結合反応に基づくSSAO依存性H2O2生成物の連続分光学的検出は Abella et al. (2004、Diabetologia 47: 429-438)に記載のごとく、Holt et al.(1997、Anal. Biochem. 244: 384-392)に記載の方法に従って行った。
分析方法
【０１０２】
グルコーストレランス試験および慢性処置において、循環グルコース濃度を急速グルコース分析器(Accutrend(登録商標)Sensor Comfort、Roche、Basel. Switzerland)により測定した。血漿インスリン (IRI)濃度は、Crystal Chem Inc. (Downers Grove、IL)から得たキットを用いるELISA法により測定した。血漿トリグリセリド(Biosystems、Barcelona、Spain)およびNEFAS(Wako Chemicals、Neuss、Germany)を標準比色法により測定した。
細胞内信号伝達の分析
【０１０３】
単離脂肪細胞を、Abella et al. (2003、Diabetes 52: 1004-1013)に記載のごとく20 mM HES緩衝液、および抗プロテアーゼおよび抗ホスファターゼカクテル中で低浸透圧溶解により崩壊させ、全膜調製物を得た。タンパク質濃度は、γグロブリンをタンパク質濃度標準物として用い、Bradford法(Bradford、1976、Anal. Biochem. 72: 248-254)により測定した。免疫沈降およびイムノブロットアッセイは、免疫沈降にモノクローナル抗ホスホチロシン抗体を、イムノブロッティングに抗インスリンレセプター抗体を用い、Abella et al. (2004、Id.)に先に記載のごとく実施した。SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動は以下の常套的手順を用い膜タンパク質について実施した。タンパク質をイモビロンに移し、イムノブロッティングはCastello et al. (1994、J. Biol. Chem. 269: 5905-5912)に記載のごとく行った。
計算および統計分析
【０１０４】
グルコーストレランス試験におけるインスリンおよびグルコース反応を、グルコース注射後120分間にわたりまとめたインクレメンタル血漿値として計算した。インスリンおよびグルコース反応の面積下曲線はGraph Prismプログラム(供給源?)を用いて計算した。データ分布をKolmogorov-Smirnov検定により分析した。データを平均±SEMで示し、対応のないStudent t検定を用いて2群を比較した。実験系が2群以上を含む場合は、統計分析は一元または二元ANOVA、さらにポスト-hoc (Dunnett、TukeyまたはBonferroni) t検定により行った。統計分析は、SPSS 11.0またはGraphPad Prism 4プログラムを用いて行った。添付の実施例において以下の略号を用いた：ACN、アセトニトリル；TFA、トリフルオロ酢酸；THF、テトラヒドロフラン；MeOH、メタノール；Fmoc、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル；DMF、ジメチルホルムアミド；DIEA、N,N-ジイソプロピルエチルアミン；TMOF、トリメチルオルソフォルムアミド；MEI、ヨウ化メチル；XAL、((9-(アミノ)キサンテン-2-イル)オキシ)ブタン酸ハンドル；MBHA、p-メチルベンズヒドリルアミン樹脂；Rink樹脂、4-(2',4'-ジメトキシフェニル-Fmoc-アミノメチル)-フェノキシ樹脂；ESI-MS、エレクトロスプレーイオン化質量分析；IR、赤外分光法、HPLC、高速液体クロマトグラフィー；tR、保持時間；NMR、核磁気共鳴。
実施例1：ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物(C7NH10)6(V10O28)(H2O)2の製造
【０１０５】
ナトリウムバナデート(1.120 g、10 mol)を30 mlの水に溶解し、1N塩酸を加えてpHを7.4に調整した。次に、ベンジルアンモニウム塩酸を加え(0.525 g、6 mol)、固体の沈殿物を得た。それを減圧濾過し、30℃の減圧オーブン中で5酸化リンで乾燥し、標記化合物を得た。次いで、該化合物の飽和溶液を調整し、周囲温度で蒸発させて標記化合物を結晶として得た。
【０１０６】
【数１】
2008505161.tif 000010
実施例2：ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物(C7NH10)5(V10O28)(H2O)2の製造
【０１０７】
ナトリウムバナデート(1.120 g、10 mol)を30 mlの水に溶解し、pHを1N塩酸で5.5に調整した。次に、ベンジルアンモニウム塩酸を加え(0.525 g、6 mol)、固体の沈殿物を得た。ワークアップは実施例1の化合物について記載したのと同じであった。
【０１０８】
【数２】
2008505161.tif 000011
実施例3：テトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物(C7NH10)4(H2V10O28)(H2O)2の製造
【０１０９】
ナトリウムバナデート (1.120 g、10 mol)を30 mlの水に溶解し、pHを1N塩酸で2に調整した。次に、ベンジルアンモニウム塩酸を加え(0.525 g、6 mol)、固体の沈殿物を得た。ワークアップは実施例1の化合物について記載したものと同じであった。
【０１１０】
【数３】
2008505161.tif 000012
実施例4：2-ヒドロキシ-3-メトキシベンジルアミンの製造
【０１１１】
2-ヒドロキシ-3-メトキシベンズアルデヒド (1.52 g、10 mmol)をメタノール(10 ml)に溶解した。水中のヒドロキシルアミンの50%溶液(2.4 ml、40 mmol)を加え、混合物を還流した。30分間後、該溶媒を減圧下で蒸留し、得られた固体をエーテルに溶解し、最初に2容量の飽和1N HClで、次いで飽和NaHCO3溶液で、最後に飽和NaCl溶液で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して2-ヒドロキシ-3-メトキシベンゾキシムを得た。
【０１１２】
2-ヒドロキシ-3-メトキシベンゾキシム(83.5 mg、0.5 mmol)、およびPtO2 1H2O (5.67 mg、0.022 mmol)を酢酸(10 ml)に溶解した。混合物をH2で4bars(バール)に加圧し、一夜反応させた。混合物をcelite(セライト)で濾過し、次いで酢酸を減圧下で蒸留した。粗物質をテトラヒドロフランで洗浄した。(R：85%/R：95%)。
【０１１３】
【数４】
2008505161.tif 000013
実施例5：1-アミノメチル-n-ナフタレン-2-オールの製造
【０１１４】
2-ヒドロキシナフタレン-1-カルバルデヒド、(1.52 g、10 mmol)をメタノール(10 ml)に溶解した。水中ヒドロキシルアミンの50%溶液(2.4 ml、40 mmol)を加え、混合物を還流した。30分間後、溶媒を減圧下で蒸留し、得られた固体をエーテルに溶解し、最初に2容量の飽和1N HClで、次いで飽和NaHCO3溶液で、最後に飽和NaCl溶液で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して2-ヒドロキシ-ナフタレン-1-カルバルデヒドのオキシムを得た。
【０１１５】
2-ヒドロキシ-ナフタレン-1-カルバルデヒドのオキシム(94 mg、0.5 mmol)、およびPtO2-1H2O (5.67 mg、0.022 mmol)を酢酸(10 ml)に溶解した。混合物をH2で4バールに加圧し、一夜反応させた。これをceliteで濾過し、次いで酢酸を減圧下で蒸留した。粗物質をテトラヒドロフランで洗浄した。(R：94% / P：90%)。
【０１１６】
【数５】
2008505161.tif 000014
実施例6：2-ヒドロキシ-3-メトキシベンジルアミンの製造
【０１１７】
標記化合物を固相合成により得た。固相操作は、ポリエチレン多孔ディスクを取り付けたポリプロピレンシリン中で行った。溶媒および可溶性試薬を濾過して除去した。2-ヒドロキシ-3-メトキシベンズアルデヒド(15 equiv、250 mg)をTMOF (1 ml)を溶媒に用いてRink樹脂(100 mg、1.1 mmol/g)上で縮合させ、混合物をAr下、25℃で一夜撹拌してアルジミンを得た。樹脂を濾過して除去し、トリメチルオルソホルメート (TMOF；5x1 min)および乾燥テトラヒドロフラン(THF；5x1 min)で洗浄した。次に、該イミンの還元をAr下、乾燥THF中のLiBH4 (15 equiv、40μl)を用いて行い、混合物を65℃で5時間撹拌して対応する第2級アミンを得た。樹脂を濾過して除去し、THF、H2O、MeOH、およびDCMで数回洗浄した。該アミンを25℃で5時間DCM中の5% TFAを用いて樹脂から開裂させた。溶液を濾過し、N2下で蒸発させて乾燥し、標記化合物を純度98%で得た。
【０１１８】
【数６】
2008505161.tif 000015
実施例7：2-ヒドロキシナフチルメチルアミンの製造
【０１１９】
標記化合物を2-ヒドロキシ-1-ナフトアルデヒド(15 equiv、283 mg)から実施例6の記載と同様の方法に従って得た。純度：93%。
【０１２０】
【数７】
2008505161.tif 000016
実施例8：2,3-ジメトキシベンズアルデヒド(2,3-ジメトキシベンジルアミンを製造するための中間体)の製造
【０１２１】
2-ヒドロキシ-3-メトキシベンズアルデヒド(3.28 mmol、500 mg)を20 ml DMFに溶解し、次いでK2CO3 (3.28 mmol、453 mg)を加えた。混合物を室温で15分間撹拌した。次に、MeI (3.28 mmol、193μl)を加え、次いで混合物を室温で一夜撹拌した。次に、それを減圧下で濃縮し、次いで50 mlの5% NaOH水性溶液で希釈した。修飾アルデヒドをDCM (3x50 ml)で抽出し、MgSO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮した。
【０１２２】
【数８】
2008505161.tif 000017
実施例9：2,3-ジメトキシベンジルアミンの製造
【０１２３】
固相操作は、ポリエチレン多孔ディスクを取り付けたポリプロピレンシリンジ中で行った。溶媒および可溶性試薬を濾過して除去した。2,3-ジメトキシベンズアルデヒド(15 equiv)をTMOF (1 ml)を溶媒に用いてH2N-XAL-MBHA樹脂(38 mg、0.7 mmol/g)上で縮合させ、混合物をAr下、25℃で一夜撹拌してアルジミンを得た。次に、樹脂を濾過して除去し、TMOF (5x1 min.)および乾燥THF(5x1 min.)で洗浄した。Ar下乾燥THF中のLiBH4 (15 equiv、40μl)を用いて還元し、混合物を65℃で5時間撹拌して対応する第2級アミンを得た。樹脂を濾過して除去し、THF、H2O、MeOH、およびDCMで数回洗浄した。該アミンを25℃で5時間DCM中の5%TFAで樹脂から開裂させた。溶液を濾過し、N2下で蒸発させて乾燥した。
【０１２４】
【数９】
2008505161.tif 000018
実施例10：2-メトキシナフチルアルデヒドの製造
【０１２５】
標記化合物を、2-ヒドロキシナフトアルデヒドについて実施例8に記載したのと同様の方法に従って得た。2-ヒドロキシナフトアルデヒド(2.90 mmol、500 mg)を20 ml DMFに溶解し、次いでK2CO3 (2.90 mmol、316 mg)を加えた。混合物を室温で15分間撹拌した。MeI (2.90 mmol、147μl)を加え、混合物を室温で一夜撹拌した。それを減圧下で濃縮し、次いで50 mlの5% NaOH水性溶液で希釈した。修飾アルデヒドをDCM (3x50 ml)で抽出し、MgSO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮した。
【０１２６】
【数１０】
2008505161.tif 000019
実施例11：2-メトキシナフチルアミンの製造
【０１２７】
固相操作はポリエチレン多孔ディスクを取り付けたポリプロピレンシリンジ中で行った。溶媒および可溶性試薬を濾過して除去した。2-メトキシナフトアルデヒド(15 equiv)をTMOF (1 ml)を溶媒として用いH2N-XAL-MBHA樹脂(29 mg、0.7 mmol/g)上で縮合させ、該混合物をAr下25℃で一夜撹拌してアルジミンを得た。該樹脂を濾過して除去し、次いでTMOF (5x1 min.)および乾燥THF (5x1 min.)で洗浄した。次に、還元をAr下、乾燥THF中のLiBH4 (15 equiv、40μl)を用いて行い、次いで混合物を65℃で5時間撹拌して対応する第2級アミンを得た。該樹脂を濾過し、THF、H2O、MeOH、およびDCMで数回洗浄した。該アミンを25℃で5時間DCM中の5%TFAで樹脂から開裂させた。溶媒を濾過し、N2で蒸発させて乾燥させた。
【０１２８】
【数１１】
2008505161.tif 000020
【０１２９】
実施例12-18は、図1に示すように本発明のアリールアルキルアミンバナジウム(V)塩がバナジウムとアミンの混合物により製造したものより良好なインスリン模倣物質であることを示す。それはインスリンと同じ方法でグルコース輸送の増加をもたらす。実施例13は、ベンジルアンモニウムデカバナデート塩の慢性投与が高血糖症の急速な減少をもたらすことも示す。実施例14はそれが経口的に服用できることも示す。
実施例12：単離脂肪細胞におけるグルコース輸送におけるヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートおよびペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートおよびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの効果
【０１３０】
バナデートおよびベンジルアミンにより形成される塩がインスリン模倣効果を生じるか否かを決定するため、単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送活性に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの濃度増加の影響について試験した。この実験結果を図1に示す。ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートは0.5μMの濃度から認識可能なグルコース輸送の刺激をもたらし、最大効果は2.5μMで観察され、半最大効果は1μM以上で観察された。ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの刺激効果はセミカルバジドにより完全にブロックされ、このことはセミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ活性がこの効果に必要であることを示唆する。ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートとのインキュベーションにより引き起こされる最大効果は、ベンジルアミンとバナデートの組み合わせで存在することにより生じるものより大きかった(図1)。これらの結果は、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートがバナデートとベンジルアミンの組み合わせより強力なインスリン模倣薬であることを示唆した。同様のアッセイにおいて、単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送におけるヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートおよびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの効果を分析した。該3化合物はグルコース輸送に対する顕著な刺激をもたらし(図2)、セミカルバジドインヒビター存在下でこの効果は阻害された。
実施例13：糖尿病ラットにおけるヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの慢性投与の効果
【０１３１】
糖尿病ラットの血糖症に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの慢性投与の効果を検討した。すなわち、インスリンを産生するβ膵臓細胞を破壊するストレプトゾトシンの静脈内投与によりラットに糖尿病を引き起こした。溶媒として用いた緩衝溶液またはナトリウムデカバナデートで処置したラットは2週間の処置の間その血糖症を実質的に緩和しなかった(図3)。これら条件下で、ラットへのヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの投与は、わすか4日間の処置後に検出された高血糖症の急速な低下をもたらした(図3)。11日間の処置後、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート処置ラットにおける血糖症は非糖尿病ラットと同様であった。14日間の処置で慢性ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート処置ラット由来の脂肪細胞を単離し、グルコース輸送速度を測定し、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート処置ラットの脂肪細胞は、インスリン存在下でみられるのと同等の基礎条件下でグルコース輸送の増加を示した。さらに、動物の血糖症と基礎グルコース輸送速度の間に逆相関がみられ、ヘキサキス(ベンジル-アンモニウム)デカバナデートの抗糖尿病効果において役割を果たすことを示唆した。
実施例14：糖尿病ラットにおけるヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの経口および慢性投与の効果
【０１３２】
糖尿病ラットの血糖症に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの経口投与の効果も試験した。ストレプトゾトシンの静脈内投与によりラットに糖尿病を引き起こし、次いでヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートまたはナトリウムデカバナデートの単用量をラットに投与した。血糖症は、ナトリウムデカバナデート処置ラットにおいて17日間の処置で実質的に影響がなかった(図4)。これら条件下で、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの5μmol/kg/日の7日間投与は、2日間処置後に高血糖症の中程度の低下を生じた(図4)。7日間の処置後、用量を10μmol/kg/日に増加させ、さらに10日間維持した。用量の増加は動物の血糖症のさらなる減少をもたらした。すなわち、ナトリウムデカバナデート処置ラットの血糖症は約450mg/dlであり、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート処置ラットの血糖症は約250 mg/dlであった。
実施例15：ある種のバナジウムアリールアルキルアミンのインスリン模倣能の分析
【０１３３】
ある種のバナジウムアリールアルキルアミンの可能性のあるインスリン模倣能を検討するため、単離ラット脂肪細胞における該化合物のグルコース輸送増強能を試験した。ウイスターラット由来の脂肪細胞を、基礎条件(基礎)または100nMインスリン(ins)、および1mMセミカルバジド(SCZ)の存在下もしくは非存在下の種々の濃度のヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)で45分間インキュベーションした。次に、2-DG輸送を5分間間隔で試験した。
【０１３４】
この実験結果を図5A〜5Cに示す。B6V10は、ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送を濃度依存性に刺激し(図5A)、最大効果はインスリンにより生じる最大刺激の85%であった。特に、25μM B6V10は100μM ベンジルアミンおよび100μMバナデートの組み合わせよりグルコース輸送の刺激が大きかった(データ示さず)。B6V10の刺激効果は、セミカルバジドにより完全にブロックされ、SSAO活性はこの細胞におけるB6V10の効果を観察するのに必要であることを示す。反対に、5〜50μMの範囲の濃度のナトリウムデカバナデート塩(V10)単独ではグルコース輸送を刺激しなかった(データ示さず；図5C参照)。
【０１３５】
B6V10の同様の刺激効果が単離マウス脂肪細胞で検出された(図5B)。FVBマウス由来の脂肪細胞を、基礎条件(基礎)または100nMインスリン(ins)、および1mMセミカルバジド(SCZ)の存在下もしくは非存在下の種々の濃度のヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)で45分間インキュベーションし、2-DG輸送を5分間測定した。等濃度のベンジルアミンおよびV10の添加は、単離マウス脂肪細胞におけるグルコース輸送に効果を示さず(データ示さず)、100μM B6V10によるグルコース輸送の刺激(93%増加)は、1mMベンジルアミンおよび1mMバナデートの組み合わせで生じた刺激(51%増加)より大きかった。この結果はB6V10がその組み合わせ成分に比べてさらなる関連生物学的特性を有することを示唆した。
【０１３６】
試験した3化合物(B6V10、B5V10、およびB4V10)を比較した。ウイスターラット由来の脂肪細胞を、基礎条件(基礎)または100nMインスリン(ins)、および1mMセミカルバジド(SCZ)の存在下もしくは非存在下の種々の濃度のデカバナデート(V10)、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B5V10)、またはテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B4V10)で45分間インキュベーションした。次に、2-DG輸送を5分間間隔で試験した。3化合物はすべて単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送活性のアクチベーターとして同様の効力を示した(図5C)。3化合物全てのグルコース輸送の刺激はセミカルバジドの存在下でブロックされた。
【０１３７】
これらの結果は、より低いベンジルアミン/バナジウム比でもアリールアルキルアミンバナジウム塩のインスリン代替効果は変わらないことを示唆する。さらなる実験において、図6Aに示す化合物(2-(4-フルオロ-フェニル)-エチルアミン(化合物A)、3-フェニル-プロピルアミン(化合物B)、4-フルオロ-ベンジルアミン(化合物C)、および4-フェニル-ブチルアミン(化合物D)という)の、単離ラット脂肪細胞における2-DGの取り込みを刺激する能力を上記実験方法を用いて評価した。この結果を図6Bに示す。ウイスターラット由来の脂肪細胞を基礎条件(基礎)下、または100nM インスリン(Ins)および種々の濃度の2-(4-フルオロ-フェニル)-エチルアミン(化合物A)、3-フェニル-プロピルアミン(化合物B)、4-フルオロ-ベンジルアミン(化合物C)、および4-フェニル-ブチルアミン(化合物D)のバナジウム塩の存在下で45分間インキュベーションした。2-DG輸送を5分間測定した。4化合物すべてがラット脂肪細胞のグルコース輸送を顕著に刺激し、最大刺激効果は化合物CおよびDのバナジウム塩と同様であった。低濃度(10μM)で誘導された刺激は、AおよびBのバナジウム塩よりCおよびDのバナジウム塩の方が高かった。これらの結果は、アリールアルキルアミンバナジウム塩が新規クラスのインスリン代替化合物であることを示唆する。
実施例16：バナジウムアリールアルキルアミンの作用機序
【０１３８】
B6V10の作用機序を単離ラット脂肪細胞で試験した。ウイスターラット由来の脂肪細胞を種々の時間25μM ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)存在下でインキュベーションした。細胞をインスリン(100nM、45 min)、デカバナデート(25μM、45min)、またはセミカルバジド(1mM、45min)存在下でもインキュベーションした。次に、2-デオキシグルコースの取り込み(結果を図7Aに示す)、インスリンレセプターのチロシンリン酸化(図7B)、ホスホ-Thr308-プロテインキナーゼB(図7C)、およびホスホ-Ser473-プロテインキナーゼB(図7D)を測定した。B6V10は、ラットインスリンレセプターにおけるThr473およびSer473のリン酸化により評価されるようにプロテインキナーゼBの急速な刺激を示し、これはB6V10添加後早ければ2.5分間で検出可能であった(図7B)。B6V10により誘導されるプロテインキナーゼBのリン酸化は、グルコース輸送の活性化と平行した(図7Cおよび7D)。この条件下で、インスリンレセプターのチロシンリン酸化はB6V10とインキュベーションした脂肪細胞では検出不能であり、このことはインスリン情報伝達の活性化の最初の部位がインスリンレセプターの下流であることを示唆した。
【０１３９】
セミカルバジドまたはホスファチジルイノシトール3-キナーゼインヒビターとのインキュベーションの効果も検討した。脂肪細胞を、ワートマニン(wortmannin)(2μM、45min)、LY294002(10μM、45 min)、またはセミカルバジド(1mM、45 min)の存在下または非存在下でB6V10(25μM、45 min)とインキュベーションし、次いで2-デオキシグルコースの取り込みを5分間測定した。B6V10で誘導したプロテインキナーゼBリン酸化の活性化はセミカルバジドによりブロックされ、これはデカバナデートでは観察されなかった。さらに、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼインヒビターのワートマニンおよびLY294002はB6V10誘導グルコース輸送をブロックした(図7E)。
実施例17：in vivoグルコーストレランスに対するB6V10の効果
【０１４０】
B6V10の慢性in vivo効果をストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットおよびdb/dbマウスで評価した。ストレプトゾトシン誘発(45mg/kg)糖尿病ラットをヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(2.5μmol/kg)(B6V10、■、図8A)またはデカバナデート(2.5μmol/kg)(V10、○、図8A)で皮下処置した。薬剤は、背部領域に移植した浸透圧ミニポンプにより皮下送達した。糖尿病ラットもシャムオペレーションした(無処置、◆、図8A)。B6V10の12日間の慢性皮下投与は、ストレプトゾトシン誘発糖尿病ラット(45mg/kgストレプトゾトシン)の高血糖と有意な相関をもたらした(図8A)。この実験は経口投与プロトコールを用いて繰り返した。ストレプトゾトシン誘発(45mg/kg)糖尿病ラットに、ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(5μmol/kgを第0日〜第7日、および10μmol/kg/日を第7日〜第17日)(B6V10、■、図8B)を経口処置するか、またはデカバナデート(10μmol/kg)(V10、○、図8B)を投与した。非糖尿病ラットも無処置とした(▲、図8B)。B6V10の17日間の連日経口投与も糖尿病ラット(45mg/kgストレプトゾトシン)の高血糖の有意な是正をもたらした(図8B)。同用量のデカバナデート(V10)による処置は、ストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットにおける血糖症を変化させなかった(図8Aおよび8B)。
実施例18：アリールアルキルアミンのバナジウム塩のインスリン代替活性
【０１４１】
完全なインスリン非存在下でin vivo抗糖尿病効果を示すB6V10の効果。この目的で、ラットをβ膵臓インスリン含量を除去する大用量のストレプトゾトシン(100mg/kg)注射により糖尿病とした。該ラットでは血漿インスリンレベルが検出不能であった(図9B)。該ストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットを浸透圧ポンプで送達するB6V10 (2.5μmol/kg)で皮下処置(■、図9A)するか、非処置とした(●、図9A)。シャムオペレーションした非糖尿病ラットも無処置とした(▲、図9A)。糖尿病ラットは、血糖症を減少させることによりB6V10による皮下処置に反応した(図9A)。しかしながら、デカバナデートによる処置は、循環グルコースのいかなる変化も示さなかった(データ示さず)。治療用量のB6V10による慢性処置は体重や臓器重量に影響しなかった(データ示さず)。
【０１４２】
これら条件下の循環脂質濃度もアッセイした。浸透圧ポンプで送達するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(2.5μmol/kg)(広い縞のバー、図9B)またはデカバナデート(狭い縞のバー、図9B)で糖尿病ラットを28日間処置後、血漿インスリンおよびグルコースを測定した。非処置糖尿病ラット(黒バー、図9B)または非糖尿病ラット(白バー、図9B)をコントロールとして同時にアッセイした。図9Bに示すように、血漿グルコースは、インスリン量のいかなる観察しうる変化も伴わずに減少した。この結果は、該疾患の臨床的に許容される動物モデルにおけるこれらの結果に基づいて、B6V10をもちいてヒトのI型およびII型糖尿病においてインスリン処置に置き換えることができるであろうことを示唆する。
【０１４３】
前記開示は本発明のある特定の態様を強調し、それと同等のすべての修飾または変更は添付の特許請求の範囲に記載の本発明の精神および範囲内にあると理解すべきである。本発明およびそれを製造し用いる方法およびプロセスは、あらゆる当業者がそれを使用および製造することができるように完全、明確、簡潔かつ正確な用語で記載される。前記は本発明の好ましい態様を説明し、特許請求の範囲に記載の本発明の精神や範囲から逸脱することなくその修飾を行ってよいと理解すべきである。発明とみなされる対象を具体的に指摘し、明確にクレームするため、以下の特許請求の範囲をこの明細書の結論とする。
【図面の簡単な説明】
【０１４４】
【図１】単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの効果を示すグラフである。
【図２】単離ラット脂肪細胞におけるグルコース輸送に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート、ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートおよびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの効果を示すグラフである。
【図３】ストレプトゾトシンによる糖尿病ラットの血糖症に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの慢性(長期)治療(処置)効果を示すグラフである。
【図４】エストレプトゾトシンによる糖尿病ラットの血糖症に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートによる慢性経口処置を示すグラフである。
【図５】脂肪細胞におけるグルコース輸送に対するヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B6V10)、ペンタキス(ベンジル アンモニウム)デカバナデート(B5V10)、およびテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(B4V10)の刺激効果を示す。
【図６】本発明のインスリン代替化合物のアリールアルキルアミン成分の有利な態様の化学構造、および単離ラット脂肪細胞のグルコース輸送に対する本発明のインスリン代替化合物のアリールアルキルアミン成分のバナジウム塩の効果を示す。
【図７】脂肪細胞におけるヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートで活性化し、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ阻害剤で阻害した細胞内情報伝達経路を示す。
【図８】糖尿病のラットまたはマウスモデルにおける投与したヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの抗糖尿病効果を示す。
【図９】循環インスリンが検出不能なストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットにおける投与したヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデートの抗糖尿病効果を示す結果を示す。
【図１】
2008505161.tif 000026
【図２】
2008505161.tif 000027
【図３】
2008505161.tif 000028
【図４】
2008505161.tif 000029
【図５】
2008505161.tif 000030
【図６】
2008505161.tif 000031
【図７】
2008505161.tif 000032
【図８】
2008505161.tif 000033
【図９】
2008505161.tif 000034
【手続補正書】
【提出日】平成19年3月1日(2007.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2008505161.tif 000035
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである；
nは2〜4の整数である；xは1〜10の整数である；yは1〜10の整数である(ただし、｜x｜−｜y｜＝0である)；Mはバナジウムを含む金属イオンまたはその金属イオン錯体である。］。
【請求項２】
R1、R2、R3、R4、およびR5が、独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、((C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、またはNO2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する請求項1の式で示される化合物。
【請求項３】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項1、または2の式で示される化合物。
【請求項４】
n=3である請求項1または2の式で示される化合物。
【請求項５】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項4の式で示される化合物。
【請求項６】
ヘキサキス(3-フェニル-プロピルアミン)デカバナデート(V)である請求項5記載の化合物。
【請求項７】
n=2である請求項1または2の式で示される化合物。
【請求項８】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項7の式で示される化合物。
【請求項９】
ヘキサキス(4-フルオロフェネチルアミン)デカバナデート(V)である請求項8記載の化合物。
【請求項１０】
n=4である請求項1または2記載の化合物。
【請求項１１】
x=y=6であり、M=V10O28である請求項10記載の化合物。
【請求項１２】
ヘキサキス(4-フェニル-1-ブチルアミン)デカバナデート(V)である請求項11記載の化合物。
【請求項１３】
x=5およびy=5であり、M=HV10O28である請求項1または2に記載の化合物。
【請求項１４】
x=4およびy=4であり、M=H2V10O28である請求項1または2に記載の化合物。
【請求項１５】
式：
【化２】
2008505161.tif 000036
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、 NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルである(ただし、R3、R4、およびR5の少なくとも1はハロゲン、CF3、またはOCF3である)か、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである；
nは1〜4の整数である；xは1〜10の整数である；yは1〜10の整数である(ただし、｜x｜＋｜y｜＝0である。)；
Mはバナジウム塩イオンである。］。
【請求項１６】
R3およびR5の少なくとも1がフッ素、CF3、およびOCF3である請求項15記載の化合物。
【請求項１７】
ヘキサキス(4-フルオロフェネチルアミン)デカバナデート(V)である請求項16記載の化合物。
【請求項１８】
請求項1、2、または3のいずれかに記載の化合物、およびその医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、またはアジュバントを含む医薬組成物。
【請求項１９】
インスリン模倣化合物またはインスリン代替化合物を含む請求項1〜18のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】
インスリン模倣化合物またはインスリン代替化合物を含む請求項19記載の医薬化合物。
【請求項２１】
医薬的有効量の該化合物または医薬組成物を投与する工程を含む、血漿インスリンが低下するか、またはインスリン応答性が低下するかまたはないことを特徴とする疾患、障害、または異常を有する動物を治療するための請求項1〜18のいずれかに記載の化合物、または請求項20記載の医薬化合物の使用。
【請求項２２】
該疾患がI型またはII型糖尿病である請求項21記載の使用。
【請求項２３】
該動物がヒトである請求項21記載の使用。
【請求項２４】
請求項1〜18のいずれかに記載の化合物、およびその医薬組成物を製造するための溶媒、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含むキット。
【請求項２５】
該化合物がインスリン模倣化合物またはインスリン代替化合物を含む請求項24記載のキット。
【請求項２６】
式：
【化３】
2008505161.tif 000037
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキル、またはフェニルであるラジカルである；
nは1〜3の整数である；xは0〜2の整数である；yは4〜6の整数である(ただし、x＋y＝6である。)；ただし、(I)はヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート3水和物ではない。］。
【請求項２７】
R1、R2、R3、R4、およびR5が独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、(C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、またはNO2であるラジカルであるか；またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する請求項26記載の化合物。
【請求項２８】
n=1である請求項26記載の化合物。
【請求項２９】
x=0であり、y=6である請求項27または28に記載の化合物。
【請求項３０】
ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)である請求項29記載の化合物。
【請求項３１】
ヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項29記載の化合物。
【請求項３２】
x=1であり、y=5である請求項26、27、または28のいずれかに記載の化合物。
【請求項３３】
ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)である請求項32記載の化合物。
【請求項３４】
ペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項32記載の化合物。
【請求項３５】
x=2およびy=4である請求項26、27、または28のいずれかに記載の化合物。
【請求項３６】
テトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)である請求項35記載の化合物。
【請求項３７】
テトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項35記載の化合物。
【請求項３８】
式：
【化４】
2008505161.tif 000038
で示されるアミンを、適切な酸性度の不活性溶媒中、アルカリ金属バナデートと反応させ、該反応媒質から該化合物を回収する工程を含む請求項1記載の化合物の製造方法
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキルまたはフェニルであるラジカルである；
nは1〜4の整数である。］。
【請求項３９】
アルカリ金属バナデートがナトリウムバナデートである請求項38記載の方法。
【請求項４０】
該溶媒が、水、(C1-C5)-脂肪族モノアルコールと水の混合物、または(C3-C7)-脂肪族ケトンと水の混合物である請求項38記載の方法。
【請求項４１】
該酸性度が有効pH値2〜7.5に対応する請求項40記載の方法。
【請求項４２】
ヒトを含む哺乳動物における糖尿病および/またはインスリン抵抗性病状を治療および/または予防するための医薬を製造するための、式：
【化５】
2008505161.tif 000039
で示される化合物またはその医薬的に許容される溶媒和物(水和物を含む)の使用
［式中、R1、R2、R3、R4、およびR5は、独立してH、OH、(C1-C6)-アルキル、(C1-C6)-アルコキシ、NR6R7、(CH2)pNR8R9、O(CH2)qPh、CONR10R11、COR12、CF3、OCF3、F、Cl、Br、NO2、またはCH2NHC(=NH)NH2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する；pおよびgは1〜3の整数である；
R6、R7、R8、R9、R10、R11、およびR12は、独立してH、(C1-C4)-アルキルまたはフェニルであるラジカルである；
nは1〜3の整数である；xは0〜2の整数である；yは4〜6の整数である。ただしx＋y＝6である。］。
【請求項４３】
R1、R2、R3、R4、およびR5が独立してH、(C1-C6)-アルキル、OH、(C1-C6)-アルコキシ、O(CH2)qPh、CF3、OCF3、F、Cl、Br、またはNO2であるラジカルであるか、またはR1とR2が一緒になって縮合ベンゼンを有する環を形成する請求項42記載の使用。
【請求項４４】
n=1である請求項43記載の使用。
【請求項４５】
x=0およびy=6である請求項42、43、または44のいずれかに記載の使用。
【請求項４６】
該化合物がヘキサキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項45記載の使用。
【請求項４７】
x=1およびy=5である請求項42、43、または44のいずれかに記載の使用。
【請求項４８】
該化合物がペンタキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項47記載の使用。
【請求項４９】
x=2およびy=4である請求項42、43、または44のいずれかに記載の使用。
【請求項５０】
該化合物がテトラキス(ベンジルアンモニウム)デカバナデート(V)2水和物である請求項49記載の使用。
【請求項５１】
該化合物がヘキサキス(4-フルオロベンジル)アンモニウムデカバナデートである請求項42記載の使用。
【国際調査報告】
2008505161.tif 000040
2008505161.tif 000041
2008505161.tif 000042
2008505161.tif 000043