(57)【要約】  本開示は、二酸化チタンナノ粒子および流体ビヒクルなど、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を含んでなるサンスクリーン製剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤、および
（ｂ）流体ビヒクル
を含んでなるサンスクリーン製剤。
【請求項２】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物が二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウムおよび酸化鉄ならびにこれらの組み合わせよりなる群から選択される請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項３】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物が二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウムおよび酸化鉄ならびにこれらの組み合わせよりなる群から選択される金属酸化物ナノ粒子を含んでなる請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項４】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物が二酸化チタンナノ粒子を含んでなる請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項５】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物がシリカ源またはアルミナ源あるいはこれらの組み合わせで処理される請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項６】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物が高密度化剤の存在下で処理される請求項５に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項７】
高密度化剤がクエン酸である請求項６に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項８】
ペプチドをベースとする金属酸化物の金属酸化物が二酸化チタンナノ粒子である請求項７に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項９】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤がサンスクリーン製剤の総重量の２５ｗｔ％までを含んでなる請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１０】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤が、一般構造（ＳＢＰ）ｎ−ＳＳＡ（ここで、ＳＢＰは皮膚結合ペプチドであり、ＳＳＡは金属酸化物サンスクリーン剤であり、かつｎは１〜約５０の範囲である）を有するジブロック組成物を含んでなる請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１１】
ｎが約１〜約１０である請求項１０に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１２】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤が、一般構造［（ＳＢＰ）ｍ−Ｓ］ｎ−ＳＳＡ（ここで、ＳＢＰは皮膚結合ペプチドであり、Ｓは第１および第２の末端を有するスペーサーであり、ＳＳＡは前記金属酸化物サンスクリーン剤であり、ｍは１〜約５０の範囲であり、かつｎは１〜約５００の範囲である）を有するトリブロック組成物を含んでなる請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１３】
ｎが約１〜約１０である請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１４】
ＳＢＰが配列番号１である請求項１０または１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１５】
ＳＢＰが配列番号２、３、４、５、６、７および８よりなる群から選択されるペプチドである請求項１０または１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１６】
スペーサーが配列番号９を有するプロテアーゼカスパーゼである請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１７】
スペーサーがアルキル鎖、フェニル化合物、エチレングリコール、アミド、およびエステルから選択される請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１８】
スペーサーが親水性を示し、かつ１〜約１００原子鎖長を有する請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項１９】
スペーサーが親水性を示し、かつ約２〜約３０原子鎖長を有する請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２０】
スペーサーが、エタノールアミン、エチレングリコール、６個の炭素の原子鎖長を有するポリエチレン、３〜６反復単位を有するポリエチレングリコール、フェノキシエタノール、プロパノールアミド、ブチレングリコール、ブチレングリコールアミド、プロピルフェニル、エチル、プロピル、ヘキシル、ステリル、セチル、およびパルミトイルアルキルの鎖から選択される請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２１】
スペーサーが前記ＳＢＰおよびＳＳＡに共有結合され、かつ反応基を含んでなる請求項１２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２２】
スペーサーおよび反応基が二官能性架橋剤を含んでなる請求項２１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２３】
二官能性架橋剤が、ジアミン、ジアルデヒド、ビスＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル、ジイソシアネート、ビスオキシラン、およびジカルボン酸よりなる群から選択される請求項２２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２４】
スペーサーの各末端上の前記反応基が異なる請求項２２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２５】
架橋剤が以下の構造
【化１】
2008535788.tif 000005
（式中、Ｒ１はＨまたは−ＳＯ３Ｎａ、−ＮＯ２、および−Ｂｒから選択される置換基であり、ならびにＲ２は−ＣＨ２ＣＨ２（エチル）、−（ＣＨ２）３（プロピル）、または−（ＣＨ２）３Ｃ６Ｈ５（プロピルフェニル）を含んでなるスペーサーである）を有する請求項２２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２６】
架橋剤が３−マレイミドプロピオン酸Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエステルである請求項２２に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２７】
請求項１に記載の前記サンスクリーン製剤を皮膚または毛髪に適用するステップを含んでなる、前記皮膚または毛髪の処理方法。
【請求項２８】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物の結晶格子が前記金属酸化物の金属とは異なる元素でドープされて前記金属酸化物の色を変更する請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項２９】
格子が鉄またはマンガンでドープされている請求項２８に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項３０】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤の金属酸化物の結晶格子が前記金属酸化物とは異なる元素でドープされて前記金属酸化物の光活性を低下させる請求項１に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項３１】
金属酸化物の結晶格子がマンガン、鉄、バナジウム、またはクロムでドープされている請求項３０に記載のサンスクリーン製剤。
【請求項３２】
ドーパントが前記金属酸化物の総重量を基準にして約０．０１％〜約５％の範囲の量で存在する請求項２８または３０に記載のサンスクリーン製剤。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２００３年１２月１６日に出願された米国特許出願第１０／７３７，３５７号明細書の一部継続出願である、２００４年１２月１４日に出願された米国特許出願第１１／０１１，６７０号明細書の一部継続出願であり、それら双方はそれら全体が参照により本明細書中に援用される。
【０００２】
本出願は、２００４年９月７日に出願された米国特許出願第１０／９３５，６４２号明細書の一部継続出願であり、その全体が参照により本明細書中に援用される。
【技術分野】
【０００３】
本発明は、サンスクリーン組成物に関する。より詳細には、本発明は、無機金属酸化物および皮膚結合ペプチドに基づくサンスクリーン用スクリーン組成物に関する。
【背景技術】
【０００４】
二酸化チタンおよび酸化亜鉛などの特定の金属酸化物では、それらが有するサンスクリーン特性については知られている。二酸化チタンは、低毒性を有し、皮膚に対して非刺激性である。
【０００５】
ナノ構造粒子および物質は、現在、大きな注目を集めている。（一般に１００ｎｍ未満の粒子を示すように用いられる）ナノ粒子の小さいサイズは、バルク材に対してナノ粒子およびナノ構造物質の異なる特性（電子的、光学的、電気的、磁気的、化学的、および機械的）を担う可能性があり、それらは新しい産業用途に適するものになる。多数のこれらの新規用途において、水、有機溶媒、ワックス、オイル、ポリマーまたはこれらの混合物などの流体ビヒクル中に十分に分散される粒子および物質を提供および維持することは不可欠である。
【０００６】
二酸化チタン（ＴｉＯ２）ナノ粒子は、可視光に対して実質的に透明である、すなわち、透明であるが、紫外光を反射、散乱および吸収する。ナノ粒子は、色素サイズの二酸化チタン粒子と異なり、製剤の透明性が望ましい場合のサンスクリーン製剤において有益でありうる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現行のスキンケア組成物に伴う主な問題は、それらにおける長期持続効果に必要な耐久性が不足する点である。これが理由で、スキンケア剤の皮膚への結合を促進するための試みがなされている。
【０００８】
長期持続効果における改善された耐久性をもたらすサンスクリーン製剤に対する需要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第１の実施形態では、本開示は、
（ａ）ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤、および
（ｂ）流体ビヒクル
を含んでなるサンスクリーン製剤を提供する。
【００１０】
ペプチドに基づくスキンコンディショナーは、一般構造（ＳＢＰ）ｎ−ＳＳＡ（式中、ＳＢＰは皮膚結合ペプチドであり、ＳＳＡは金属酸化物サンスクリーン剤であり、かつｎは１〜約５０、詳細にはｎは約１〜約１０の範囲である）を有するジブロック組成物でありうる。
【００１１】
本発明の一実施形態では、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤は、一般構造［（ＳＢＰ）ｍ−Ｓ］ｎ−ＳＳＡ（式中、ＳＢＰは皮膚結合ペプチドであり、Ｓは第１および第２の末端を有するスペーサーであり、ＳＳＡは金属酸化物サンスクリーン剤であり、ｍは１〜約５０の範囲であり、かつｎは１〜約５００、詳細にはｎは約１〜約１０の範囲である）を有するトリブロック組成物でありうる。
【００１２】
本発明の一実施形態では、金属酸化物サンスクリーン剤は、二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウムおよび酸化鉄よりなる群、より典型的には二酸化チタンおよび酸化亜鉛よりなる群から選択される少なくとも１種の金属酸化物、およびさらに典型的には二酸化チタンを含んでなる。金属酸化物は、色素のサイズ範囲内またはナノ粒子のサイズ範囲内であってもよい。
【００１３】
金属酸化物サンスクリーン剤は、
（ａ）金属酸化物のスラリーを形成するステップと、
（ｂ）金属酸化物のスラリーを高密度化剤と接触させるステップと、
（ｃ）該スラリーをアルミナ源、シリカ源またはそれら双方よりなる群から選択される金属酸化物源と接触させて処理された金属酸化物を形成するステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）で形成された該処理された金属酸化物を回収するステップと、
を含んでなるプロセスによって調製されうる。
【００１４】
典型的には、このプロセスによって調製される金属酸化物は、二酸化チタン、特に二酸化チタンナノ粒子である。このプロセスによって調製される金属酸化物粒子は、高い光安定性および／または高い化学的安定性を有することが判明している。さらに、ナノ粒子がサンスクリーン組成物に調合される場合、同粒子において凝集体（ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｅｓ）を形成する傾向が低下する。
【００１５】
金属酸化物ナノ粒子は、プラズマプロセスまたはゾルゲルプロセスを含む（がこれらに限定されない）、当該技術分野で周知の任意のプロセスによって調製されうる。
【００１６】
第２の実施形態では、本発明は、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤と流体ビヒクルとを混合するステップを含む、サンスクリーン製剤を調製するためのプロセスを提供する。
【００１７】
図面の簡単な説明および配列の説明
本発明は、本出願の一部を形成する、以下の詳細な説明および添付の配列の説明からより完全に理解されうる。
【００１８】
以下の配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２１〜１．８２５（「ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列の開示を含む、特許出願のための要求事項−配列規則（Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ａｎｄ／ｏｒ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅｓ−ｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｒｕｌｅｓ）」）に一致し、かつ世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）標準ＳＴ．２５（１９９８年）ならびにＥＰＯおよびＰＣＴの配列リストへの要求事項（規則５．２および４９．５（ａ−ｂｉｓ）、ならびに実施細則のセクション２０８および付録Ｃ）に一致する。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列データのために用いられる記号および形式は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２に示される規則に従う。
【００１９】
配列番号１〜８は、皮膚結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【００２０】
配列番号９は、カスパーゼ３切断部位のアミノ酸配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本開示は、長期持続性および耐久性、耐水性があり、かつ皮膚上でソフト感のあるサンスクリーン製剤を提供する。耐水性の改善により、皮膚の水への暴露後に再塗布する必要がなくなる。耐水性を与えるのに一般に用いられる重たいワックスおよびオイルを含有しない軽いスプレー式システムとして改善された製剤が提供されうる。
【００２２】
本開示のサンスクリーン製剤は、
（ａ）ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤、および
（ｂ）流体ビヒクル
を含んでなる。
【００２３】
金属酸化物サンスクリーン剤
金属酸化物サンスクリーン剤は、サンスクリーン特性を有する任意の金属酸化物でありうる。かかる金属酸化物は、典型的には二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウムおよび酸化鉄よりなる群、より典型的には二酸化チタンおよび酸化亜鉛よりなる群から選択され、かつさらにより典型的には二酸化チタンである。不透明なサンスクリーン製剤が好ましい場合には、直径が１００ｎｍより大きい粒子サイズを有する、二酸化チタンなどの色素サイズの金属酸化物粒子が特に有用でありうる。主要な粒子の測定により、粒子サイズ直径が判定される。
【００２４】
金属酸化物ナノ粒子、特に二酸化チタンナノ粒子は、特にサンスクリーン製剤の半透明性が好ましい場合に有用でありうる。ナノ粒子金属酸化物の具体的な例は、二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウムおよび酸化鉄よりなる群、より典型的には二酸化チタンおよび酸化亜鉛よりなる群から選択され、かつさらにより典型的には二酸化チタンである。ナノ粒子は、典型的には直径が１００ｎｍ未満の粒子サイズを有する。主要な粒子の直径の測定により、粒子サイズ直径が判定される。
【００２５】
本発明の一実施形態では、金属酸化物粒子は、金属酸化物粒子のスラリー、水および高密度化剤への添加によって処理された金属酸化物が形成されうる、シリカ源およびアルミナ源の少なくとも１つで処理されうる。
【００２６】
本発明は、高密度化剤の存在下でアモルファスアルミナで処理され、好ましくは表面処理される金属酸化物粒子を提供する。より詳細には、粒子は高密度化剤の存在下でアモルファスアルミナを用いる湿った処理プロセスにおいてコーティングされる。場合により、粒子は高密度化剤の存在下でアモルファスシリカによってもさらに処理され、好ましくは表面処理される。
【００２７】
本発明は、高密度化剤の存在下でアモルファスシリカで処理され、好ましくは表面処理される金属酸化物粒子も提供しうる。より詳細には、粒子は高密度化剤の存在下でアモルファスシリカを用いる湿った処理プロセスにおいてコーティングされる。場合により、粒子は高密度化剤の存在下でアモルファスアルミナによってもさらに処理される。
【００２８】
本発明の一実施形態では、金属酸化物粒子のスラリーが加熱され、高密度化剤がスラリーに添加される。スラリーは、不水溶性の金属酸化物粒子の水性混合物である。スラリーはｐＨ調節により塩基性組成物を形成し、次いでアルミナ源またはシリカ源あるいはそれら双方、典型的にはアルミン酸ナトリウムまたはケイ酸ナトリウムで処理される。スラリーは、アルミナ源またはシリカ源あるいはそれら双方での処理後、特定のｐＨで保持され、粒子を硬化するのに十分な期間、昇温される。硬化ステップの目的は、アルミナおよび／またはシリカを粒子上に、より典型的には粒子をアルミナ層および／またはシリカ層でコーティングすることによって堆積させることである。
【００２９】
本発明の一実施形態では、スラリーの初期温度は、最適には約３０℃より高く、典型的には約３５℃より高く、さらにより典型的には約５０℃より高く、かつさらにより典型的には約６０℃より高い。温度は、約３０〜約１００℃、より典型的には約４０℃〜約１００℃、およびさらにより典型的には約６０℃〜約１００℃の範囲内であってもよいが、より低い温度であっても有効でありうる。本発明の一実施形態では、スラリーの初期温度は、最適には約５０℃より高く、典型的には約６０℃より高く、より典型的には約６０℃〜約１００℃の範囲内であるが、より低い温度であっても有効でありうる。アルミナ源および／またはシリカ源の量は、最適には未処理の金属酸化物の重量を基準にしてＡｌ２Ｏ３として約５〜約１５％の範囲内である。
【００３０】
アルミナおよび／またはシリカ処理の間、強い鉱酸を使用してもよい。ＨＣｌ、ＨＮＯ３およびＨ２ＳＯ４を含むがこれらに限定されない強い鉱酸であればいずれを使用してもよい。小さい実験室規模のバッチプロセスにおける最適な酸の添加時間は、添加される１％Ａｌ２Ｏ３および／またはＳｉＯ２当たり０．５分〜約２．０分の範囲である（大きい工場規模のバッチにおいて１％Ａｌ２Ｏ３および／またはＳｉＯ２当たり３０分まで）。時間が長くなると、より優れた生成物が得られても割合が犠牲になる可能性がある。
【００３１】
アルミナおよび／またはシリカの添加後、スラリーのｐＨは、典型的には中性レベルで保持される。最適には７＋０．５である。値が高くなれば、特にアルミナにおいて望ましくない相がもたらされ、値が低くなれば、堆積が不完全なものになりうる。
【００３２】
次いで、アルミナおよび／またはシリカで処理されたスラリーは、典型的には粒子上にアルミナおよび／またはシリカのコーティングを形成させることによってアルミナおよび／またはシリカを金属酸化物粒子上に堆積させるのに十分な時間保持される。保持時間は、典型的には小さい実験室規模のバッチにおいて１％アルミナおよび／またはシリカ当たり３分である（大きい工場規模のバッチにおいて１％アルミナおよび／またはシリカ当たり２０分まで）。より短時間の適用は可能であるが、処理が有効なものではない可能性がある。この保持ステップは、典型的には中性ｐＨを維持しながら行われ、昇温される。したがって、ｐＨは通常７．０＋０．５で維持される。本発明の一実施形態では、スラリーの温度は、最適には約３０℃より高く、典型的には約３５℃より高く、さらにより典型的には約５０℃より高く、かつさらにより典型的には約６０℃より高い。温度は、約３０〜約１００℃、より典型的には約４０℃〜約１００℃、およびさらにより典型的には約６０℃〜約１００℃の範囲内であってもよいが、より低い温度であっても有効でありうる。温度は、通常では約５０℃、典型的には約４５℃より高く、より典型的には約５５〜約６０℃で維持される。
【００３３】
本発明の金属酸化物組成物、特にナノ粒子組成物は、一般に未処理の金属酸化物の重量を基準にして約３〜約２０％、より典型的には約５〜約１５％のアモルファスアルミナを含有する。本発明の粒子状組成物は、一般に未処理の金属酸化物の重量を基準にして約２〜約２０、一般に約５〜約１８％のアモルファスシリカを含有しうる。
【００３４】
次いで、アルミナおよび／またはシリカで処理された金属酸化物粒子は、通常では濾過、洗浄および乾燥される。ナノ粒子が金属酸化物として用いられる場合、最終粒子は、色素より小さいサイズ範囲内にあり、典型的には、直径の平均粒子サイズは、走査電子顕微鏡などの当該技術分野で周知の技術による測定によると、約８０〜約１２５ナノメーターであり、約１００ナノメーター未満である場合がある。
【００３５】
本発明の好ましい実施形態では、スラリーはシリカ源とアルミナ源の双方で処理される。本実施形態では、金属酸化物粒子のスラリーが加熱され、高密度化剤がスラリーに添加される。スラリーは、水不溶性の金属酸化物粒子の水性混合物である。次いで、スラリーはｐＨ調節により塩基性組成物を形成し、次いでシリカ源、典型的にはケイ酸ナトリウムで処理される。ｐＨは酸の添加によってより中性レベルに低下し、その後、スラリーはアルミナ源、典型的にはアルミン酸ナトリウムで処理される。シリカ源およびアルミナ源での処理後、スラリーは特定のｐＨで保持され、粒子を硬化するのに十分な時間、昇温される。硬化ステップの目的は、シリカおよびアルミナを粒子上に、より詳細には粒子をシリカ層およびアルミナ層でコーティングすることによって堆積させることである。
【００３６】
処理は高密度化剤の存在下で行われる。高密度化剤は、シリカおよび／またはアルミナのコーティングを高密度化するのに重要である。適切な高密度化剤は、クエン酸またはリン酸などのリン酸イオン源または硫酸ナトリウムなどの硫酸イオン源を含有する。クエン酸は、その分散促進特性故に好ましい高密度化剤である。高密度化剤の有用量は、シリカおよびアルミナコーティングを適切に高密度化するのに十分な量である。過剰な高密度化剤は、シリカおよびアルミナコーティングの高密度化を最大化することになるが、高密度化剤の浪費につながる場合がある。
【００３７】
高密度化剤の適量は、未処理の金属酸化物の重量を基準にして約０．５％〜約３．０％、より典型的には約０．８％〜約２．４％の範囲内であってもよい。スラリー中の金属酸化物の濃度は、約５０ｇ／ｌ〜約５００ｇ／ｌ、より典型的には約１２５〜２５０ｇ／ｌの範囲であるが、より低いレベルも可能である。比較的低濃度のスラリーを使用するとコーティングが十分に均一になることが判明している。スラリーの温度は、通常、約３０〜約１００℃、典型的には約３５〜約１００℃、より典型的には約４５〜約１００℃、最適には約８５〜約１００℃の範囲であるが、仮に温度がそれらより上下しても有効でありうる。シリカ源の添加前に、スラリーはアルカリ性の範囲内に維持され、ｐＨは典型的には８．５より高く、より典型的には９．０以上であるが、これは使用される機器に依存しうる（連続的な含水処理においてはより低いｐＨが可能な場合がある）。最適なシリカの堆積重量は、典型的には未処理の金属酸化物の重量を基準にしてＳｉＯ２として約２〜約２０％、より典型的には約５〜約１８％である。しかし、任意のシリカレベルで改善が見られる可能性がある。
【００３８】
アルミナ処理に先立ち、ＨＣｌ、ＨＮＯ３およびＨ２ＳＯ４を含む任意の強い鉱酸を用いることでスラリーが中性化されうる。バッチプロセスに最適な酸の添加時間は、小さい実験室規模のバッチにおいて添加される１％ＳｉＯ２当たり０．５〜約４分の範囲である（大きい工場規模のバッチにおいて１％ＳｉＯ２当たり３０分まで）。時間が長くなると、より優れた生成物が得られても割合が犠牲になる可能性がある。
【００３９】
次いで、シリカで処理されたスラリーは、好ましくは金属酸化物粒子上でのシリカコーティングを堆積するのに十分な時間保持される。保持時間は、典型的には小さい実験室規模のバッチにおいて１％シリカ当たり５分である（大きい工場規模のバッチにおいて１％シリカ当たり２０分まで）。より短時間の適用は可能であるが、コーティングは有効なものではない可能性がある。この保持ステップは、典型的には中性からアルカリ性ｐＨを維持しながら行われ、昇温される。したがって、ｐＨは通常、７．０＋１．０以上、典型的には約１０以下に維持される。温度は通常、約８０℃より高く、典型的には約９０℃より高く、より典型的には約９５〜約１００℃で維持される。
【００４０】
アルミナ処理では、スラリーの初期温度は、最適には約８０℃より高く、典型的には約９０℃より高く、より典型的には約９５℃〜約１００℃の範囲内であるが、より低い温度であっても有効でありうる（またはさらにより有効であってもスラリーの冷却に必要なエネルギーおよび時間を犠牲にしうる）。アルミン酸塩の量は、最適には未処理の金属酸化物の重量を基準にしてＡｌ２Ｏ３として約５〜約１５％の範囲内である。
【００４１】
ＨＣｌ、ＨＮＯ３およびＨ２ＳＯ４を含むアルミナ処理の間、任意の強い鉱酸を使用してもよい。小さい実験室規模のバッチプロセスにおける最適な酸の添加時間は、添加される１％Ａｌ２Ｏ３当たり０．５〜約２．０分の範囲である（大きい工場規模のバッチにおいて１％Ａｌ２Ｏ３当たり３０分まで）。時間が長くなると、より優れた生成物が得られても割合が犠牲になる可能性がある。
【００４２】
アルミナの添加後、スラリーのｐＨは、典型的には中性レベルで保持される。最適には７＋０．５である。値が高くなれば、望ましくないアルミナ相がもたらされ、値が低くなれば、堆積が不完全なものになりうる。
【００４３】
次いで、アルミナで処理されたスラリーは、シリカコーティングが堆積されている金属酸化物粒子上にアルミナコーティングを形成するのに十分な時間保持される。保持時間は、典型的には小さい実験室規模のバッチにおいて添加される１％アルミナ当たり３分である（大きい工場規模のバッチにおいて１％アルミナ当たり２０分まで）。より短時間の適用は可能であるが、コーティングは有効なものではない可能性がある。この保持ステップは、典型的には中性ｐＨを維持しながら行われ、昇温される。したがって、ｐＨは通常では７．０＋０．５で維持される。温度は通常では約５０℃、典型的には約４５℃より高く、より典型的には約５５〜約６０℃で維持される。
【００４４】
本発明におけるシリカおよびアルミナで処理された粒子状組成物、特にナノ粒子組成物は、一般に未処理の金属酸化物の重量を基準にして約２〜約２０％、一般に約５〜約１８％のアモルファスシリカ、および未処理の金属酸化物の重量を基準にして約３〜約２０％、より典型的には約５〜約１５％のアモルファスアルミナを含有しうる。
【００４５】
次いで、シリカおよびアルミナで処理された金属酸化物粒子は、通常では濾過、洗浄および乾燥される。ナノ粒子が金属酸化物として用いられる場合、最終粒子は色素未満のサイズ範囲内にあり、典型的には直径の平均粒子サイズは約８０〜約１２５ナノメーター、さらには約１００ナノメーター未満である。
【００４６】
本発明における使用および上記シリカ−アルミナ処理プロセスにおいては、二酸化チタンナノ粒子が好ましい。任意の二酸化チタンナノ粒子が適切でありうる。例として、適切な二酸化チタンナノ粒子は、米国特許第５，４５１，３９０号明細書、米国特許第５，６７２，３３０号明細書および米国特許第５，７６２，９１４号明細書において記載されている。二酸化チタンＰ２５は、デグッサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）から入手可能な適切な市販品の一例である。二酸化チタンナノ粒子の他の商用供給者として、ケミラ（Ｋｅｍｉｒａ）、ザハトレーベン（Ｓａｃｈｔｌｅｂｅｎ）およびタイカ（Ｔａｙｃａ）が挙げられる。
【００４７】
二酸化チタンナノ粒子は、液体懸濁液中の粒子の粒子サイズ分布を測定する動的光散乱による測定によると、典型的には１００ナノメーター（ｎｍ）未満の平均粒子サイズ直径を有する。粒子は、典型的には約３ｎｍ〜約６０００ｎｍの範囲でありうる凝集体である。当該技術分野で既知の任意のプロセスを用いることで、かかる粒子を調製可能である。プロセスは、二酸化チタンナノ粒子が生成されるという条件で、チタンハロゲン化物の気相酸化または可溶性チタン錯体からの溶液沈殿を含みうる。
【００４８】
二酸化チタンナノ粒子を調製するための好ましいプロセスは、典型的には４００〜２０００℃の範囲で、酸素およびチタンハロゲン化物、好ましくは四塩化チタンの高温反応領域への注入によるものである。反応領域内に存在する高温条件下で、高い比表面積および狭いサイズ分布を有する二酸化チタンナノ粒子が形成される。リアクター内のエネルギー源は、プラズマトーチなどの任意の熱源でありうる。場合により、リアクターは、反応物質注入口からの供給物が高温ガス排出に誘導されて再循環領域の下流のリアクターチャンバーに入ることを保証するフローホモジナイザー（ｆｌｏｗ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）も含みうる。フローホモジナイザーは、２００２年１２月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／４３４１５８号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）において記載されている。
【００４９】
金属酸化物、特に二酸化チタンは、実質的に純粋でありうるかまたは１つもしくはそれ以上の他の無機物質を含有しうる。金属酸化物の結晶格子は、ある元素でドープされて金属酸化物に対して新規のまたは改良された特性を与えうる。ドーパントの例として、シリコン、アルミニウム、ジルコニウム、鉄、マンガン、バナジウム、クロムまたはマグネシウムが挙げられる。結晶格子は、鉄またはマンガンでドープされて金属酸化物の色を変化させうる。例えば、金属酸化物、特に二酸化チタンの結晶格子は、鉄またはマンガンでドープされて二酸化チタンに「淡黄色（ｂｕｆｆ）」の色を与えうる。かかる着色された二酸化チタンは、皮膚に日焼けの外観を与えることがサンスクリーン製剤として望ましい場合、製剤として有用でありうる。金属酸化物、特に二酸化チタンの結晶格子はまた、マンガン、鉄、バナジウムまたはクロムなどの元素でドープされて、二酸化チタンの光活性を低下させうる。市販のドープされた二酸化チタン製品は、ザハトレーベン（Ｓａｃｈｔｌｅｂｅｎ）によって販売される、ホムビテック（Ｈｏｍｂｉｔｅｃ）（登録商標）ＲＭ３００およびホムビテック（Ｈｏｍｂｉｔｅｃ）（登録商標）ＲＭ４００である。オクソニカ（Ｏｘｏｎｉｃａ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）は、製品の名称がオプティソル（Ｏｐｔｉｓｏｌ）（商標）である、少量（１％未満）のマンガンを含有する超微細な二酸化チタンについて記述している。ドーパントは、典型的には少量、典型的には金属酸化物の総重量を基準にして約０．０１％〜約５％、詳細には約０．１％〜約１％の範囲内で存在する。
【００５０】
場合によりシリカおよび／またはアルミナで処理される金属酸化物は、１つもしくはそれ以上の追加の金属酸化物を含有してもよい。追加の金属酸化物は、１つもしくはそれ以上のシリカ、アルミナ、ジルコニアおよびマグネシアであってもよく、当業者にとって既知の技術を用いて金属酸化物粒子に混和してもよい。例として二酸化チタンの場合、これらの金属酸化物を混和できるのは、チタン化合物が他の金属酸化物化合物と共酸化または共沈殿される場合である。もしかかる共金属（ｃｏ−ｍｅｔａｌ）が存在する場合、それらは好ましくは金属酸化物の総重量を基準にして約０．１〜約５％の量で存在する。二酸化チタンはまた、上記のシリカ−アルミナ処理を含む任意の他の処理に先立ち、当業者に既知の技術を用いて適用される１つもしくはそれ以上のかかる金属酸化物のコーティングを有する場合がある。本発明の一実施形態では、実質的に純粋な二酸化チタンのスラリーは、スラリーとクエン酸の接触に先立ちアルミナで「前処理」される。前処理は、典型的には金属酸化物の総重量を基準にして約１〜約４％の量に対して行われる。
【００５１】
典型的には、アルミナで前処理された二酸化チタンにおいて、本発明によって作製された生成物におけるアルミナの最終レベルは、もしＴｉＯ２がアルミナで処理される場合、約２．５％高めである。コーティング中にアルミナ粒子を含有するかまたはアルミナ粒子に混和される二酸化チタンナノ粒子が上記のようにシリカ−アルミナで処理される場合、利点があることが判明している。例えば、シリカ処理ステップは、アルミナを含有する二酸化チタン粒子に適用される場合、より有効であることが判明している。さらに、（下記のビタミンＣ黄変試験によって判定される）化学的安定性がより高く、かつプロセスによって生成される特大粒子がより少ない、詳細にはアルミナを含有しない二酸化チタン出発物質に比べて約１０％少ないことが判明している。「特大粒子」という用語は、マイクロトラック（ＭＩＣＲＯＴＲＡＣ）超微粒子アナライザーによる測定として直径が約２００ｎｍより大きい凝集体を意味する。
【００５２】
金属酸化物サンスクリーン剤に対する需要が高まっている１つの領域として、パーソナルケア製剤、特にサンスクリーン剤としてのサンスクリーンが挙げられる。二酸化チタンナノ粒子は、太陽の有害な紫外線（ＵＶ  ＡおよびＵＶ  Ｂ放射）からの保護をもたらす。ＵＶ  ＡとＵＶ  Ｂの双方の放射は、そばかす、日焼け（紅斑）、しわ、および早老の原因にまで及ぶ数多くの皮膚の問題に関与している。さらに、ＵＶ  Ａ放射は皮膚癌と関連している。
【００５３】
分散剤は通常、流体ビヒクル中の金属酸化物、特に二酸化チタンナノ粒子を効果的に分散させるのに必要である。分散剤を注意深く選択することは重要である。二酸化チタンナノ粒子と併用させるのに典型的な分散剤は、脂肪族アルコール、飽和脂肪酸および脂肪酸アミンを含む。
【００５４】
典型的には金属酸化物サンスクリーン剤、特にサンスクリーン製剤に混和される二酸化チタンナノ粒子の量は、製剤の重量を基準にして約２５ｗｔ％まで、より典型的には約０．１ｗｔ％から約１５ｗｔ％まで、およびさらにより典型的には約６ｗｔ％であってもよく、量は製剤の所望の太陽光線保護指数（ＳＰＦ）に依存する。
【００５５】
ペプチドに基づくスキンコンディショナー
以下の定義は、本明細書において用いられ、特許請求の範囲および明細書の解釈において言及されるべきである。
「ＳＢＰ」は皮膚結合ペプチドを意味する。
「ＳＳＡ」は金属酸化物サンスクリーン剤を意味する。
「Ｓ」はスペーサーを意味する。
【００５６】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合によって互いに結合される２個もしくはそれより多数のアミノ酸を示す。
【００５７】
本明細書において用いられる「皮膚」という用語は、ヒト皮膚、またはブタ皮膚、ヒト皮膚の代わりであるビトロ・スキン（Ｖｉｔｒｏ−Ｓｋｉｎ）（登録商標）およびエピダーム（Ｅｐｉｄｅｒｍ）（商標）を示す。
【００５８】
「ファージ−ペプチド−皮膚複合体」という用語は、ペプチド上の結合部位を介して皮膚に結合されたファージ−ペプチドを含んでなる構造を意味する。
【００５９】
「非標的」という用語はある基質を示し、ここではそれに対する結合親和性を有するペプチドは望ましくない。スキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ペプチドの選択においては、非標的は毛髪およびプラスチックを含むがこれらに限定されない。
【００６０】
「厳密」という用語は、本発明の皮膚結合ペプチドの選択に適用される際には、ペプチドを皮膚から溶出するのに用いられる溶出剤（通常は洗剤）の濃度を示す。溶出剤の濃度が高い場合には、より厳密な条件が得られる。
【００６１】
「アミノ酸」という用語は、タンパク質またはポリペプチドの塩基性化学構造単位を示す。以下の略語は、特定のアミノ酸を同定するのに本明細書中で用いられる。
【００６２】
【表１】
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【００６３】
「遺伝子」は、コーディング配列の上流（５’非コーディング配列）および下流（３’非コーディング配列）の調節配列を含む、特定のタンパク質を発現する核酸断片を示す。「天然遺伝子」は、それ自身の調節配列を伴う天然に見出される遺伝子を示す。「キメラ遺伝子」は、天然遺伝子ではない任意の遺伝子を示し、天然に共に見出されることのない調節およびコーディング配列を含んでなる。したがって、キメラ遺伝子は、異なるソース由来の調節配列およびコーディング配列、または同じソース由来であるが天然に見出される様式とは異なる様式で配列された調節配列およびコーディング配列を含みうる。
【００６４】
「外来」遺伝子は、通常、宿主生物内に見出されることはないが遺伝子転移によって宿主生物に導入される遺伝子を示す。外来遺伝子は、非天然の生物に挿入される天然遺伝子またはキメラ遺伝子を含みうる。
【００６５】
「合成遺伝子」は、当業者に既知の手順を用いて化学的に合成されるオリゴヌクレオチドビルディングブロックから構築されうる。これらのビルディングブロックは、ライゲートされてアニールされて遺伝子セグメントが形成され、それらは次いで酵素によって構築されて全遺伝子を作製する。ＤＮＡ配列に関連する「化学的に合成された」とは、ヌクレオチド成分がインビトロで構築されたことを意味する。手動によるＤＮＡ化学合成については周知の手順を用いて行うことができる一方、自動化された化学合成については多数の市販の機械の１つを用いて行ってもよい。したがって、遺伝子をヌクレオチド配列の最適化に基づく最適な遺伝子発現に適合させることで宿主細胞のコドンバイアスを反映させてもよい。当業者は、もしコドンの使用が宿主にとって好ましいコドン群に向けてバイアスされる場合、遺伝子発現が成功する可能性について理解している。好ましいコドンについては、配列情報が得られる宿主細胞を由来とする遺伝子の調査に基づいて判定しうる。
【００６６】
「コーディング配列」は、特定のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を示す。「適切な調節配列」は、コーディング配列の上流（５’非コーディング配列）、内部、または下流（３’非コーディング配列）に位置し、かつ関連するコーディング配列の転写、ＲＮＡプロセシングまたは安定性、あるいは翻訳に作用するヌクレオチド配列を示す。調節配列は、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位およびステムループ構造を含みうる。
【００６７】
「プロモーター」は、コーディング配列または機能的ＲＮＡの発現を制御可能なＤＮＡ配列を示す。一般に、コーディング配列はプロモーター配列に対して３’方向に位置する。プロモーターは、それら全体が天然遺伝子由来であるか、天然に見出される異なるプロモーター由来の異なる要素からなるか、またはさらに合成ＤＮＡセグメントを含んでなる場合がある。異なるプロモーターが、異なる組織型内または細胞型内で、発生の異なる段階で、または異なる環境条件もしくは生理的条件に反応して遺伝子の発現を指示しうることが当業者によって理解されている。ほぼ常に大部分の細胞型内で遺伝子の発現を引き起こすプロモ−ターは、一般に「構成的プロモーター」と称される。さらに、ほとんどの場合、調節配列の正確な境界が完全に確定されていないことから、異なる長さのＤＮＡ断片が同一のプロモーター活性を有する場合があることが認識されている。
【００６８】
本明細書中で用いられる「発現」という用語は、本発明の核酸断片由来のセンス（ｍＲＮＡ）またはアンチセンスＲＮＡの転写および安定な蓄積を示す。発現はｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳も示す場合がある。
【００６９】
「形質転換」という用語は、核酸断片の宿主生物ゲノムへの転移により遺伝的に安定な形質がもたらされることを示す。形質転換された核酸断片を含む宿主生物は、「トランスジェニック」または「組み換え」または「形質転換された」生物と称される。
【００７０】
「宿主細胞」という用語は、外来性のポリヌクレオチド配列により形質転換または形質移入されているか、あるいは形質転換または形質移入可能である細胞を示す。
【００７１】
「プラスミド」、「ベクター」および「カセット」という用語は、細胞の中央代謝の一部ではない遺伝子を運搬することが多く、通常は環状二本鎖ＤＮＡ分子の形態である特別な染色体要素を示す。かかる要素は、任意のソース由来の一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡの、自己複製配列、ゲノム融合配列、ファージまたはヌクレオチド配列、線形体または環状体である場合があり、ここでは多数のヌクレオチド配列が、適切な３’非翻訳配列を伴う選択された遺伝子産物におけるプロモーター断片およびＤＮＡ配列を細胞に導入することが可能な固有の作製物に連結または組み換えがなされている。「形質転換カセット」は、外来遺伝子を含みかつ特定の宿主細胞の形質転換を促進する外来遺伝子以外の要素を有する特定のベクターを示す。「発現カセット」は、外来遺伝子を含みかつ外来宿主内でのその遺伝子の発現の促進を可能にする外来遺伝子以外の要素を有する特定のベクターを示す。
【００７２】
「ファージ」または「バクテリオファージ」という用語は、細菌に感染するウイルスを示す。本発明の目的にかなうように別の形態が使用される場合がある。好ましいバクテリオファージは、Ｍ１３と称される「野生型」ファージ由来である。Ｍ１３系は細菌内部で成長可能であることから、それが感染する細胞を破壊することはないが新たなファージを連続的に作る原因になる。それは一本鎖ＤＮＡファージである。
【００７３】
「ファージディスプレイ」という用語は、バクテリオファージ粒子またはファージミド粒子の表面上の機能的な外来ペプチドまたは小タンパク質の提示を示す。遺伝子組み換えファージは、ペプチドをそれらの天然表面タンパク質のセグメントとして提示するのに使用されうる。異なる遺伝子配列を有するファージ集団により、ペプチドライブラリーが作製されうる。
【００７４】
「ＰＣＲ」または「ポリメラーゼ連鎖反応」は、特定のＤＮＡセグメントの増幅において用いられる技術である（米国特許第４，６８３，１９５号明細書および米国特許第４，８００，１５９号明細書）。
【００７５】
本明細書中で用いられる標準の組み換えＤＮＡおよび分子クローニング技術は、当該技術分野で周知であり、サンブルック  Ｊ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ．）、フリッツ  Ｅ．Ｆ．（Ｆｒｉｔｓｃｈ  Ｅ．Ｆ．）およびマニアティス  Ｔ．（Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ．）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、コールド・スプリング・ハーバー（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ）、ニューヨーク州（１９８９年）（以下、「マニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）」）；およびシルハヴィ  Ｔ．Ｊ．（Ｓｉｌｈａｖｙ  Ｔ．Ｊ．）、ベナン  Ｍ．Ｌ．（Ｂｅｎｎａｎ  Ｍ．Ｌ．）およびエンキスト  Ｌ．Ｗ．（Ｅｎｑｕｉｓｔ  Ｌ．Ｗ．）、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、コールド・スプリング・ハーバー（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ）、ニューヨーク州（１９８４年）；およびアウスベル  Ｆ．Ｍ．（Ａｕｓｕｂｅｌ  Ｆ．Ｍ．）ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（グリーン・パブリッシング・アソシエイツ・アンド・ワイリー・インターサイエンス（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）（１９８７年）による出版）に記載されている。
【００７６】
皮膚結合ペプチド
本明細書中で定義される皮膚結合ペプチド（ＳＢＰ）は、親和性の高い皮膚に特異的に結合するペプチド配列である。本発明の皮膚結合ペプチドは、約７アミノ酸〜約４５アミノ酸、より好ましくは約７アミノ酸〜約２０アミノ酸、最も好ましくは約７〜約１２アミノ酸である。
【００７７】
適切な皮膚結合配列は、当該技術分野で周知の方法を用いて選択されうる。本発明のペプチドはランダムに作製され、次いでそれらの皮膚に対する結合親和性に基づき、特定の皮膚試料に対して選択される。ペプチドのランダムライブラリーの作製は、周知であり、細菌ディスプレイ（ケンプ  ｄ．ｊ．（ｋｅｍｐ  ｄ．ｊ．）；ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕｓａ  ７８（７）：４５２０−４５２４頁（１９８１年）、およびヘルフマン（ｈｅｌｆｍａｎ）ら、ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕｓａ  ８０（１）：３１−３５頁（１９８３年））、酵母ディスプレイ（チエン（ｃｈｉｅｎ）ら、ｐｒｏｃ  ｎａｔｌ  ａｃａｄ  ｓｃｉ  ｕｓａ  ８８（２１）：９５７８−８２頁（１９９１年））、コンピナトリアル（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ）固相ペプチド合成（米国特許第５，４４９，７５４号明細書、米国特許第５，４８０，９７１号明細書、米国特許第５，５８５，２７５号明細書、米国特許第５，６３９，６０３号明細書）、およびファージディスプレイ技術（米国特許第５，２２３，４０９号明細書、米国特許第５，４０３，４８４号明細書、米国特許第５，５７１，６９８号明細書、米国特許第５，８３７，５００号明細書）を含む種々の技術によって実施される場合がある。かかる生体ペプチドライブラリーを作製するための技術は、当該技術分野で周知である。典型的な方法は、ダニ  ｍ．ｊ．（ｄａｎｉ  ｍ．ｊ．）、Ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＆  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｒｅｓ．、２１（４）：４４７−４６８頁（２００１年）、シドゥ（ｓｉｄｈｕ）ら、ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ３２８：３３３−３６３頁（２０００年）、ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、ブライアン  ｋ．ケイ（ｂｒｉａｎ  ｋ．Ｋａｙ）、ジル・ウインター（ｊｉｌｌ  ｗｉｎｔｅｒ）、およびジョン・マッカファーティ（ｊｏｈｎ  ｍｃｃａｆｆｅｒｔｙ）ら編；アカデミック・プレス（ａｃａｄｅｍｉｃ  ｐｒｅｓｓ）、ｎｙ、１９９６年において記載されている。さらに、ファージディスプレイライブラリーは、ニュー・イングランド・バイオラブズ（ｎｅｗ  ｅｎｇｌａｎｄ  ｂｉｏｌａｂｓ）（ビバリー（ｂｅｖｅｒｌｙ）、マサチューセッツ州（ＭＡ））から購入可能である。
【００７８】
ペプチドをランダムに作製するための好ましい方法は、ファージディスプレイによるものである。ファージディスプレイはインビトロ選択技術であり、ここではペプチドまたはタンパク質がバクテリオファージのコートタンパク質に遺伝的に融合されて、ファージビリオンの外表面上に融合ペプチドの提示がなされる一方、ＤＮＡはビリオン内で融合残基をコード化している。提示されたペプチドとそれをコード化するＤＮＡの間のこの物理的な連結により、膨大な数のペプチド変異体のスクリーニングが可能になり、ここで各ペプチドは「バイオパニング（ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）」と称される単純なインビトロ選択手順により対応するＤＮＡ配列に連結されている。バイオパニングは、その最も単純な形態では、ファージディスプレイがなされた変異体のプールを目的の標的とともにインキュベートし、結合していないファージを洗い流し、かつファージと標的の間の結合相互作用の妨害によって特異的に結合されたファージを溶出することにより、行われる。次いで、溶出されたファージがインビボで増幅されかつプロセスが繰り返されて、最も緊密な結合配列を支持するファージプールの段階的濃縮がもたらされる。選択／増幅を３回以上行った後、各クローンがＤＮＡ配列決定により特徴づけられる。
【００７９】
詳細には、適切なペプチドライブラリーが作製された後、ライブラリーは適量の皮膚試料と接触される。ヒト皮膚試料は、死体またはインビトロでヒト皮膚の培養物から入手されうる。さらに、ブタ皮膚のビトロ・スキン（Ｖｉｔｒｏ−Ｓｋｉｎ）（登録商標）（ＩＭＳ社（ＩＭＳ  ｉｎｃ．）、ミルフォード（Ｍｉｌｆｏｒｄ）、コネチカット州（ＣＴ）から入手可能）およびエピダーム（Ｅｐｉｄｅｒｍ）（商標）（マテック（Ｍａｔｔｅｋ  ｃｏｒｐ．）、アシュランド（Ａｓｈｌａｎｄ）、マサチューセッツ州（ＭＡ）から入手可能）は、ヒト皮膚の代用物として使用される場合がある。ペプチドライブラリーは、皮膚試料と接触するための適切な溶液中に溶解される。一実施形態では、ペプチドライブラリーは、界面活性剤を含有する緩衝生理食塩水溶液中に溶解される。適切な溶液は０．５％トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）（登録商標）２０を含有するトリス−緩衝生理食塩水（ｔｂｓ）である。ペプチドの皮膚表面への物質移動速度を高めるために、溶液が任意の手段によって撹拌されることにより、最大の結合を得るのに必要な時間が短縮されうる。最大の結合を得るのに必要な時間は、皮膚試料の大きさ、ペプチドライブラリーの濃度、および撹拌速度などの多数の因子に依存して変化する。必要な時間は、当業者により、通常の実験を用いて容易に決定されうる。典型的には、接触時間は１０分から１時間である。場合により、ファージディスプレイライブラリーを、皮膚試料との接触に先立ちまたはそれと同時に、毛髪またはプラスチックなどの非標的と接触させることで、非標的に結合する望ましくないファージ−ペプチドを除去することが可能である。
【００８０】
多数のランダムに作製されたペプチドは、接触時に皮膚に結合してペプチド−皮膚複合体を形成することになる。未結合のペプチドは洗浄によって除去されうる。未結合の全物質が除去された後、試験基質に対して様々な程度の結合親和性を有するペプチドは、様々なストリンジェンシー（ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｉｅｓ）を有する緩衝液での選択された洗浄によって分画されうる。用いられる緩衝液のストリンジェンシーを高めると、ペプチド−基質複合体において要求されるペプチドと基質の間の結合力が高まる。
【００８１】
多数の物質を用い、ペプチド選択における緩衝溶液のストリンジェンシーが変化する場合があり、ここでは酸性ｐＨ（１．５〜３．０）；塩基性ｐｈ（１０〜１２．５）；ＭｇＣｌ２（３〜５ｍ）およびＬｉＣｌ（５〜１０ｍ）などの高塩濃度；水；エチレングリコール（２５〜５０％）；ジオキサン（５〜２０％）；チオシアン酸塩（１〜５ｍ）；グアニジン（２〜５ｍ）；尿素（２〜８ｍ）；およびＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＤＯＣ（デオキシコール酸ナトリウム）、ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ−４０、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００、より典型的であるトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）２０などの異なる界面活性剤の様々な濃度が含まれるがこれらに限定されない。これらの物質は、トリス−ＨＣｌ、トリス−緩衝生理食塩水、トリス−ホウ酸塩、トリス−酢酸、トリエチルアミン、リン酸緩衝液、およびグリシン−ＨＣ（ここではトリス−緩衝生理食塩水溶液が好ましい）を含むがこれらに限定されない緩衝溶液中で調製されうる。
【００８２】
皮膚に対して高められた結合親和性を有するペプチドを、高められたストリンジェンシーを有する緩衝液を用いて選択プロセスを繰り返すことによって溶出可能であることが理解されるであろう。
【００８３】
次いでファージ−ペプチド−皮膚複合体が、ある時間、典型的には１〜３０分間、溶出剤と接触されて、皮膚からファージ−ペプチドが解離するが、ファージ−ペプチドの一部は、この処理後、依然として皮膚に結合された状態で残存しうる。場合により、ファージ−ペプチド−皮膚複合体は、溶出剤と接触する前に新しい容器に移される。溶出剤は、酸（ｐＨ１．５〜３．０）；塩基（ｐｈ１０〜１２．５）；ＭｇＣｌ２（３〜５ｍ）およびＬｉＣｌ（５〜１０ｍ）などの高塩濃度；水；エチレングリコール（２５〜５０％）；ジオキサン（５〜２０％）；チオシアン酸塩（１〜５ｍ）；グアニジン（２〜５ｍ）；および尿素（２〜８ｍ）（ここでは酸による処理がより典型的である）を含むがこれらに限定されない任意の既知の溶出剤でありうる。もし使用される溶出緩衝液が酸または塩基である場合、中性緩衝液が添加されてｐｈが中性範囲に調節される。任意の適切な緩衝液の使用が可能であり、酸溶出緩衝液を伴う使用については１ｍ  トリス−ＨＣｌ  ｐｈ９．２が好ましい。
【００８４】
次いで、溶出されたファージ−ペプチドまたは残存する結合されたファージ−ペプチド、あるいは溶出されたファージ−ペプチドと残存する結合されたファージ−ペプチドの双方は、当該技術分野で既知の方法を用いて増幅される。例えば、溶出されたファージ−ペプチドおよび残存する結合されたファージ−ペプチドは、ファン（Ｈｕａｎｇ）ら、上記に記載のように、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＥＲ２７３８などの細菌宿主細胞に感染させることによって増幅されうる。感染された宿主細胞はＬＢ（ルリア−ベルターニ（Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ））培地などの適切な成長培地内で成長され、この培養物はＩＰＴＧ（イソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）およびＳ−Ｇａｌ（商標）（３，４−シクロヘキセノエスクレチン（ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｏｅｓｃｕｌｅｔｉｎ）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド）を有するＬＢ培地などの適切な成長培地を含む寒天上に広げられる。成長後、ＤＮＡの単離および配列決定のためにプラークが採取され、スキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ペプチド配列が同定される。あるいは、溶出されたファージ−ペプチドおよび残存する結合されたファージ−ペプチドは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの核酸増幅方法を用いて増幅されうる。そのアプローチにおけるＰＣＲは、参照により本明細書中に援用される米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書中でのジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らによる記載のように、溶出されたファージ−ペプチドおよび／または残存する結合されたファージ−ペプチド上で適切なプライマーを用いて行われる。
【００８５】
一実施形態では、溶出されたファージ−ペプチドおよび残存する結合されたファージ−ペプチドは細菌宿主細胞に感染させることによって増幅され、増幅されたファージ−ペプチドは新しい皮膚試料に接触され、上記のプロセス全体が１回もしくはそれ以上の回数繰り返されてスキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ファージ−ペプチド内に集積された集団が得られる。バイオパニングサイクルを所望の回数行った後、増幅されたファージ−ペプチド配列が当該技術分野で周知の標準のＤＮＡ配列決定技術を用いて決定されて、スキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ペプチド配列が同定される。
【００８６】
皮膚結合ペプチドの作製
本発明の皮膚結合ペプチドは、当該技術分野で周知の標準のペプチド合成方法（例えば、スチュワート（ｓｔｅｗａｒｔ）ら、ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、ピアース・ケミカル社（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）、ロックフォード（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ）、イリノイ州（ＩＬ）、１９８４年；ボダンスズキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、シュプリンガー・フェアラーク（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８４年；およびペニントン（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ）ら、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、トトワ（Ｔｏｔｏｗａ）、ニュージャージー州、１９９４年を参照）を用いて調製されうる。さらに、多数の企業がカスタムペプチド合成サービスを提供している。
【００８７】
あるいは、本発明のペプチドは、組み換えＤＮＡおよび分子クローニング技術を用いて調製されうる。異種宿主細胞内、特に微生物宿主細胞内で皮膚結合ペプチドをコード化する遺伝子が生成されうる。
【００８８】
本発明の結合ペプチドの発現において好ましい異種宿主細胞は、真菌または細菌のファミリー内で幅広く見出される可能性があり、かつ温度、ｐＨ値、および溶媒耐性の広範囲にわたり成長する微生物宿主である。転写、翻訳、およびそのタンパク質生合成装置は細胞供給原料（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｆｅｅｄｓｔｏｃｋ）に関係なく同じであることから、細胞バイオマスを生成するのに用いられる炭素供給原料に関係なく機能的遺伝子が発現される。宿主株の例として、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）などの真菌種または酵母種、またはサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ロードコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、メチロモナス（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ）、メチロバクター（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）、アナバエナ（Ａｎａｂａｅｎａ）、チオバチルス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、メタノバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）およびクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）などの細菌種が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８９】
種々の発現系を用いることで、本発明のペプチドを生成してもよい。かかるベクターは、染色体、エピソームおよびウイルス由来ベクター、例えば、細菌プラスミド由来ベクター、バクテリオファージ由来ベクター、トランスポゾン由来ベクター、挿入要素由来ベクター、酵母エピソーム由来ベクター、バキュロウイルス、レトロウイルスなどのウイルス由来ベクター、ならびにコスミッドやファージミドなど、プラスミドおよびバクテリオファージ遺伝要素由来ベクターなどのこれらの組み合わせを由来とするベクターを含むがこれらに限定されない。発現系コンストラクトは、発現を調節するとともに引き起こす調節領域を含む場合がある。一般に、宿主細胞内でのポリヌクレオチドまたはポリペプチドの維持、増殖または発現に適する任意の系またはベクターは、これに関連する発現のために使用される場合がある。微生物の発現系および発現ベクターは、宿主細胞の成長との関連において外来タンパク質の高レベルの発現を指示する調節配列を含む。調節配列は当業者に周知であり、例として、例えばエンハンサー配列といったベクター内の調節因子の存在を含む、化学的または物理的刺激に応答して遺伝子発現のオンまたはオフを誘発するものが挙げられるがこれらに限定されない。これらのいずれかを用いるならば、本発明の結合ペプチドのいずれかを生成するためのキメラ遺伝子の作製が可能である。次いで、これらのキメラ遺伝子が形質転換を介して適切な微生物に導入されるならば、ペプチドの高レベルの発現が可能である。
【００９０】
適切な宿主細胞の形質転換にとって有用なベクターまたはカセットは、当該技術分野で周知である。典型的には、ベクターまたはカセットは、関連遺伝子の転写および翻訳を指示する配列、１つもしくはそれ以上の選択可能なマーカー、および自律的複製または染色体の統合を可能にする配列を含んでなる。適切なベクターは、転写開始制御を内在させる遺伝子の領域５’および転写終結を制御するＤＮＡ断片の領域３’を含む。それは、両方の制御領域が形質転換された宿主細胞に対して相同な遺伝子由来である場合に最も好ましいが、かかる制御領域が生成宿主として選択される特定の種に対して天然の遺伝子由来である必要がないものと理解されるべきである。選択可能なマーカー遺伝子は、大腸菌におけるテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性など、形質転換された宿主細胞の選択における表現型形質をもたらす。
【００９１】
所望の宿主細胞内でのキメラ遺伝子の発現を駆動するのに有用な開始制御領域またはプロモーターは多数存在し、当業者にとって周知である。遺伝子を駆動可能な事実上任意のプロモーターは、本発明の結合ペプチドの生成に適し、ＣＹＣ１、ＨＩＳ３、ＧＡＬ１、ＧＡＬ１０、ＡＤＨ１、ＰＧＫ、ＰＨＯ５、ＧＡＰＤＨ、ＡＤＣ１、ＴＲＰ１、ＵＲＡ３、ＬＥＵ２、ＥＮＯ、ＴＰＩ（サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）における発現に有用）；ＡＯＸ１（ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）における発現に有用）；ｌａｃ、ａｒａ、ｔｅｔ、ｔｒｐ、ｌＰＬ、ｌＰＲ、Ｔ７、ｔａｃ、およびｔｒｃ（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）における発現に有用）、ならびにａｍｙ、ａｐｒ、ｎｐｒプロモーターおよびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）における発現に有用な様々なファージプロモーターを含むがこれらに限定されない。
【００９２】
終結制御領域はまた、好ましい宿主に対して天然の様々な遺伝子を由来とする場合がある。場合により、終結部位は不要である場合があるが、もしそれが含まれるとしたら最も好ましい。
【００９３】
上記の適切なＤＮＡ配列を含むベクターおよび適切なプロモーターまたは制御配列を用いることで、適切な宿主を形質転換して宿主における本発明のペプチドの発現を可能にする場合がある。さらに細胞を伴わない翻訳系を用い、本発明のＤＮＡコンストラクト由来のＲＮＡを用いてかかるペプチドを生成してもよい。場合により、形質転換された宿主の分泌産物としてインスタント（ｉｎｓｔａｎｔ）遺伝子産物を生成することが望ましいかもしれない。所望のタンパク質の成長培地への分泌は、精製手順における簡素化およびそのコスト低減という利点を有する。分泌シグナル配列が細胞膜を横切る発現可能なタンパク質の能動輸送の促進に有用なことが多いことは、当該技術分野で周知である。分泌可能な形質転換された宿主の構築は、生成宿主内で機能的な分泌シグナルをコードするＤＮＡ配列の取り込みによって行われる場合がある。適切なシグナル配列を選択するための方法は、当該技術分野で周知である（例えば、欧州特許第５４６０４９号明細書および国際公開第９３２４６３１号パンフレットを参照）。分泌シグナルＤＮＡまたは促進因子（ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）は、発現を制御するＤＮＡとインスタント遺伝子または遺伝子断片との間、および後者を有する同じリーディングフレーム内に位置する場合がある。
【００９４】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤
本発明は、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を含んでなる。さらに、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤は、皮膚結合ペプチドと金属酸化物サンスクリーン剤の反応生成物である。さらに、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を、金属酸化物サンスクリーン剤を皮膚結合ペプチドで処理することによって形成してもよい。さらに、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤は、皮膚結合ペプチド（ＳＢＰ）と金属酸化物サンスクリーン剤（ＳＳＡ）との共役によって形成される。
【００９５】
皮膚結合ペプチド部分が皮膚に強く結合することにより、サンスクリーン剤の皮膚への付着の保持による長期持続性のサンスクリーン効果が得られる。皮膚結合ペプチドは、配列番号１として与えられる、ファン（Ｈｕａｎｇ）ら（同時係属および共有の米国特許出願第１０／９３５６４２号明細書）にて開示された皮膚結合ペプチド配列を含む、上記方法のスクリーニングによって選択された皮膚結合ペプチドを含むがこれらに限定されない。さらに、米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書におけるジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らおよび国際公開第０４０４８３９９号パンフレットにおけるジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）ら（それら全体が参照により本明細書中に援用される）にてそれぞれ記載された配列番号２および配列番号３〜８を含むがこれらに限定されない任意の既知の皮膚結合ペプチドが使用される場合がある。
【００９６】
本明細書中に記載の金属酸化物サンスクリーン剤は、二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化セリウムおよび酸化鉄を含むがこれらに限定されない。
【００９７】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤は、皮膚結合ペプチドを金属酸化物サンスクリーン剤に直接にまたはスペーサーを介して共有結合させることによって調製される。任意の既知のペプチドまたはタンパク質の化学抱合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）を用い、本発明のペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を形成することが可能である。化学抱合体は当該技術分野で周知である（例えば、ハーマンソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）（１９９６年）を参照）。適切なカップリング剤は、ペプチド上の末端アミン基および／またはカルボン酸末端基ならびに金属酸化物上のヒドロキシ基または他の基、具体的には金属酸化物の処理表面のアルミナおよび／またはシリカに対して反応性を示す、カルボジイミドカップリング剤、塩化二酸、ジイソシアネートおよび他の二官能性カップリング試薬を含むがこれらに限定されない。好ましいカップリング剤は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ）などのカルボジイミドカップリング剤であり、アルコールに共役するためのカルボン酸基、およびアミン基を活性化するのに使用される場合がある。
【００９８】
さらに、ペプチド上の反応性アミン基またはカルボン酸基を保護し、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤において所望の構造を作製することが必要な場合がある。ｔ−ブチロキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）など、アミノ酸における保護基の使用は、当該技術分野で周知である（例えばスチュワート（Ｓｔｅｗａｒｔ）ら、上記；ボダンスズキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）、上記；およびペニントン（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ）ら、上記を参照）。場合により、皮膚結合ペプチドに対する共役のため、カルボン酸基、アルコール基、アミン基、またはアルデヒド基などの反応基をサンスクリーン剤上に導入することが必要でありうる。これらの修飾は、当該技術分野で周知の酸化、還元などの通常の化学反応を用いて行われる場合がある。
【００９９】
皮膚結合ペプチドを金属酸化物サンスクリーン剤にスペーサーを介して共役することも望ましい場合がある。スペーサーがサンスクリーン剤をペプチドから分離するように機能することで、同剤がペプチドの皮膚への結合と干渉しないことが保証される。スペーサーは、アルキル鎖、フェニル化合物、エチレングリコール、アミド、エステルなどの種々の分子のいずれかでありうる。好ましいスペーサーは、親水性を示し、１〜約１００原子、より好ましくは２〜約３０原子の鎖長を有する。好ましいスペーサーの例として、エタノールアミン、エチレングリコール、６炭素原子の鎖長を有するポリエチレン、３〜６反復単位を有するポリエチレングリコール、フェノキシエタノール、プロパノールアミド、ブチレングリコール、ブチレングリコールアミド、プロピルフェニル、ならびにエチル、プロピル、ヘキシル、ステリル、セチル、およびパルミトイルアルキルの鎖が挙げられるがこれらに限定されない。スペーサーは、上記のカップリング化学物質のいずれかを用いてペプチドおよびサンスクリーン剤と共有結合されうる。スペーサーの取り込みを促進するため、ペプチドおよびサンスクリーン剤に対する共役において、スペーサーおよび反応基を両末端に含む二官能性架橋剤が使用される場合がある。適切な二官能性架橋剤は、当該技術分野で周知であり、１，６−ジアミノヘキサンなどのジアミン；グルタルアルデヒドなどのジアルデヒド；エチレングリコール−ビス（琥珀酸Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエステル）、ジサクシニミジルグルタレート（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｇｌｕｔａｒａｔｅ）、ジサクシニミジルスベレート（ｄｉｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｓｕｂｅｒａｔｅ）、およびエチレングリコール−ビス（サクシニミジルサクシネート（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｓｕｃｃｉｎａｔｅ））などのビスＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル；ヘキサメチレンジイソシアネートなどのジイソシアネート；１，４ブタンジイルジグリシジルエーテルなどのビスオキシラン；サクシニルジサリシレート（ｓｕｃｃｉｎｙｌｄｉｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）などのジカルボン酸などを含むがこれらに限定されない。異なる反応基を各末端に含むヘテロ二官能性架橋剤もまた使用される場合がある。ヘテロ二官能性架橋剤の例として、以下の構造を有する化合物が挙げられるがこれに限定されない。
【０１００】
【化１】
2008535788.tif 000003
【０１０１】
（式中、Ｒ１はＨまたは−ＳＯ３Ｎａ、−ＮＯ２、または−Ｂｒなどの置換基であり、かつＲ２は−ＣＨ２ＣＨ２（エチル）、−（ＣＨ２）３（プロピル）、または−（ＣＨ２）３Ｃ６Ｈ５（プロピルフェニル）などのスペーサーである）かかるヘテロ二官能性架橋剤の例として、３−マレイミドプロピオン酸Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエステルが挙げられる。これらの試薬のＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル基はコンディショナー上のアミン基またはアルコール基と反応する一方、マレイミド基はペプチド上に存在するチオール基と反応する。チオール基は、システイン基を結合ペプチド配列の少なくとも一方の末端に付加することによってペプチドに取り込まれうる。グリシンなどの数個のスペーサーのアミノ酸残基が結合ペプチド配列と末端システインの間に取り込まれることで、反応性のチオール基が結合配列から分離されうる。
【０１０２】
さらに、スペーサーは、任意のアミノ酸とその混合物とからなるペプチドでありうる。好ましいペプチドスペーサーは、アミノ酸のグリシン、アラニンおよびセリン、ならびにこれらの混合物からなる。さらに、ペプチドスペーサーは、配列番号２で与えられる、プロテアーゼカスパーゼの３部位などの特定の酵素切断部位を含む場合があり、皮膚からのサンスクリーン剤の酵素的除去が可能になる。ペプチドスペーサーは、１〜約５０アミノ酸長、好ましくは１〜約２０アミノ酸長でありうる。これらのペプチドスペーサーは、当該技術分野で既知の任意の方法によって結合ペプチド配列に連結されうる。例えば、結合ペプチド−ペプチドスペーサー−ジブロックの全体は、上記の標準のペプチド合成方法を用いて調製されうる。さらに、結合ペプチドとペプチドスペーサーブロックは、ペプチド上の末端アミンおよび／またはカルボン酸末端基に反応性を示す、カルボジイミドカップリング剤（例えば、ハーマンソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）（１９９６年）を参照）、塩化二酸、ジイソシアネートおよび他の二官能性カップリング試薬を用いて結合されうる。あるいは、結合ペプチド−ペプチドスペーサー−ジブロックの全体は、上記の組み換えＤＮＡおよび分子クローニング技術を用いて調製されうる。スペーサーはまた、ペプチドスペーサーと有機スペーサー分子の組み合わせである場合があり、上記の方法を用いて調製されうる。
【０１０３】
ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーンと皮膚の間の相互作用を高めるのに、複数の皮膚結合ペプチドを金属酸化物サンスクリーン剤に付着させることも望ましい場合がある。同じ皮膚結合ペプチドの複数のコピーまたは異なる皮膚結合ペプチドの組み合わせが使用されうる。大きな金属酸化物粒子および／または凝集体の場合、多数すなわち約１，０００個までの皮膚結合ペプチドがサンスクリーン剤に付着されうる。より少数すなわち約５０個までの皮膚結合ペプチドをより少ないサンスクリーンナノ粒子に付着させてもよい。したがって、本発明の一実施形態では、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤は、一般構造（ＳＢＰ）ｎ−ＳＳＡ（式中、ｎは１〜約１，０００、好ましくは１〜約５０の範囲である）を有する、スキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ペプチド（ＳＢＰ）と金属酸化物サンスクリーン剤（ＳＳＡ）からなるジブロック組成物である。
【０１０４】
別の実施形態では、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーンは、上記のように、スキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ペプチドをサンスクリーン剤から分離するスペーサー（Ｓ）を含む。皮膚結合ペプチドの複数のコピーは、単一のスペーサー分子に付着されうる。この実施形態では、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤は、一般構造［（ＳＢＰ）ｍ−Ｓ］ｎ−ＳＳＡ（式中、ｎは１〜約１，０００、好ましくはｎは１〜約５０の範囲、およびｍは１〜約５０、好ましくはｍは１〜約１０の範囲である）を有する、スキンケア組成物に抵抗性を示す皮膚結合ペプチド、スペーサー、およびサンスクリーン剤からなるトリブロック組成物である。
【０１０５】
本明細書で用いられるＳＢＰは総称であり、単一の皮膚結合ペプチド配列に言及することを意味するものではないことが理解されるべきである。上で用いられたｎまたはｍが１より大きい場合、一連の異なる配列の皮膚結合ペプチドが組成物の一部を形成しうる場合の状況を設けることは本発明の範囲内で十分になされる。
【０１０６】
サンスクリーン製剤
本発明のサンスクリーン製剤は、典型的には製剤の総重量を基準にして約２５ｗｔ％まで、典型的には約２ｗｔ％〜約１０ｗｔ％まで、さらにより好ましくは８ｗｔ％までの範囲の量のペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を含有することになり、同量は製剤の所望の太陽光線保護指数（ＳＰＦ）に依存する。
【０１０７】
サンスクリーン製剤の均衡は、流体ビヒクルおよび任意の他の添加剤から構成されることになる。典型的には、流体ビヒクルは、鉱油および脂肪アルコールを制限なく含有しうる水および他の溶媒を含んでなる。
【０１０８】
サンスクリーン製剤は通常はエマルジョンであり、エマルジョンの油相は典型的には本発明の金属酸化物などのＵＶ活性成分を含有する。サンスクリーン製剤は、典型的には水に加え、エモリエント、保湿剤、増粘剤、ＵＶ活性剤（ａｃｔｉｖｅｓ）、キレート剤、乳化剤、懸濁化剤（典型的にはもし粒子状ＵＶ活性剤を使用する場合）、防水剤、被膜剤および防腐剤を含有する。
【０１０９】
防腐剤の具体例としてパラベンが挙げられる。エモリエントの具体例として、オクチルパルミテート、セテアリルアルコール、およびジメチコーンが挙げられる。保湿剤の具体例として、プロピレングリコール、グリセリン、およびブチレングリコールが挙げられる。増粘剤の具体例として、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、セルロースガム、および硬化ヒマシ油が挙げられる。キレート剤の具体例として、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）２ナトリウムおよびＥＤＴＡ４ナトリウムが挙げられる。ＵＶ活性剤の具体例として、メトキシ桂皮酸エチルヘキシル、オクトクリレン、および二酸化チタンが挙げられる。乳化剤の具体例として、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸ポリエチレングリコール−１００、およびセテアレス−２０が挙げられる。懸濁化剤の具体例として、ジエタノールアミン−オレス−３−ホスフェートおよびネオペンチルグリコールジオクタノエートが挙げられる。防水剤の具体例として、Ｃ３０〜３８オレフィン／マレイン酸イソプロピル／ＭＡコポリマーが挙げられる。被膜剤の具体例として、ヒドロキシエチルセルロースおよびカルボマーナトリウムが挙げられる。
【０１１０】
分散剤を含有する二酸化チタンナノ粒子の分散を調整することを目的として、多数の手段の利用が可能である。例えば、凝集体をより小さい粒子に分解するのに、製粉や粉砕など、激しい混合が必要な場合がある。二酸化チタンナノ粒子の製造者は、顧客による使用を容易にするのに流体ビヒクル中での粒子の分散を調製および提供でき、それにより製剤への取り込みが簡素化される。
【０１１１】
サンスクリーン製剤は、さらなるサンスクリーニング性能を意図して典型的なサンスクリーン活性成分も含有しうる。典型的なサンスクリーン活性成分は周知である。具体例として、アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、アボベンゾン、シノキセート、ジオキシベンゾン、ホモサレート、メチルアントラニレート、オクトクリレン、メトキシ桂皮酸オクチル、サリチル酸オクチル、オキシベンゾン、パディメートＯ、フェニルベンズイミダゾール、スルイソベンゾン、サリチル酸トロラミンが挙げられる。さらに、最終製剤は、二酸化チタンと酸化亜鉛の組み合わせなどの金属酸化物サンスクリーン剤の組み合わせを含有しうる。
【０１１２】
皮膚を処理するための方法
別の実施形態では、動物体、具体的には哺乳類体、さらにより具体的にはヒト体の皮膚または毛髪を本開示のサンスクリーン製剤で処理するための方法が提供される。サンスクリーンと粒子状ＵＶ活性成分との調合に関する当業者に周知の方法を用い、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤のサンスクリーンへの取り込みを行ってもよい。サンスクリーン製剤は、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤と流体ビヒクルを任意のさらなる添加剤とともに混合することによって調製される。ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を、ホモジナイザーなどの任意の便利な手段により、約６０℃〜約９０℃、好ましくは約７０℃〜約８５℃の温度で流体ビヒクルに添加してもよい。
【０１１３】
本発明は、有効量のペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を含んでなる上記組成物の１つを毛髪または皮膚に適用して保護膜の形成を可能にすることにより、体の毛髪または皮膚の表面上にサンスクリーン製剤の保護膜を形成するための方法も含む。本開示の組成物は、スプレー、ブラッシング、および手による適用を含むがこれらに限定されない様々な手段により、皮膚または毛髪に適用されうる。サンスクリーン製剤を、保護膜を形成するのに十分な時間、好ましくは少なくとも約０．１〜６０分間、皮膚または毛髪と接触させたままにしてもよい。
【実施例】
【０１１４】
本発明は、以下の実施例においてさらに明らかにされる。これらの実施例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方、あくまで図示目的で与えられることが理解されるべきである。上記の考察およびこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的な特徴を確認でき、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明の様々な変更および改良を行うことでそれを様々な使用および条件に適合させることができる。
【０１１５】
試験方法
ビタミンＣの化学的安定性に対する黄変試験
オクチルパルミテート（ヘキサデカン酸２−エチルヘキシルエステル、ＣＡＳ＃２９８０６−７３−３、ヴァンダイク（ＶａｎＤｙｋ）による「セラフィル（Ｃｅｒａｐｈｙｌ）」の名称の下、使用可能）中、６．２５％アスコルビン酸パルミテート（Ｌ−アスコルビン酸６−パルミテート、９９％、ＣＡＳ＃１３７−６６−６、アルファ・エイサー（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）から市販）の標準溶液を調製する。へらおよびガラス板またはフーバーマーラー（Ｈｏｏｖｅｒ  Ｍｕｌｌｅｒ）モデルＭ５を使用し、溶液１．９＋０．０５ｍｌを０．４＋０．０１ｇの試験対象の二酸化チタン試料と完全に混合する。混合物を、６ミルのバード（Ｂｉｒｄ）フィルムアプリケータを使用して白色のラッカー塗りの３”×５”カード上に引き落とし、試験フィルムを形成する。試験フィルムの色（Ｌ＊ａ＊ｂ＊）を、色の読み取りに先立って暖められたビックガードナー（Ｂｙｋ−Ｇａｒｄｎｅｒ）モデルＣＢ−６８０５などのハンドヘルド式分光比色計を使用して測定し、較正し、Ｄ６５／１０°（イルミナント／オブザーバー）を用いるように設定した。試験フィルムと同様に、ブランクフィルムを純粋なオクチルパルミテートおよび超微細な二酸化チタンを用いて調製する。ブランクフィルムの色を試験フィルムの色と同様に測定する。試験およびブランクフィルムの色を比較することにより、デルタｂ＊値を判定する。デルタｂ＊値は化学的活性の測定値である。
【０１１６】
ＵＰＡ粒子のサイズ分布
マイクロトラック・ウルトラファイン・パーティクル・アナライザー（ＭＩＣＲＯＴＲＡＣ  ＵＬＴＲＡＦＩＮＥ  ＰＡＲＴＩＣＬＥ  ＡＮＡＬＹＺＥＲ）（ＵＰＡ）（リーズ・アンド・ノースラップ（Ｌｅｅｄｓ  ａｎｄ  Ｎｏｒｔｈｒｕｐ）の商標、ノースウェールズ（Ｎｏｒｔｈ  Ｗａｌｅｓ）、ペンシルバニア州（ＰＡ））では、動的光散乱の原理を用いて液体懸濁液中粒子の粒子サイズ分布が測定される。リーズ・アンド・ノースラップ（Ｌｅｅｄｓ  ａｎｄ  Ｎｏｒｔｈｒｕｐ）、ペンシルバニア州（ＰＡ）ノースウェールズ（Ｎｏｒｔｈ  Ｗａｌｅｓ）は、その器具を製造している。測定されるサイズ範囲は０．００３μｍ〜６μｍ（３ｎｍ〜６０００ｎｍ）である。ＵＰＡ分析を設定する場合、ＴｉＯ２の屈折率として２．５５を使用する。乾燥粒子試料を分散液体中に調製して測定を行う必要がある。手順例は以下のとおりである。
（１）０．０８ｇの乾燥粉末を検量する。
（２）７９．９２ｇの０．１％ピロリン酸四ナトリウム（ＴＳＰＰ）溶液を水に添加し、０．１ｗｔ％懸濁液を作製する。
（３）懸濁液を超音波プローブを使用して１０分間超音波処理する。超音波処理の間、懸濁液を水で満たされた（ｗａｔｅｒ−ｊａｃｋｅｔｅｄ）ビーカー内で冷却する必要がある。
（４）超音波処理が完了すると、分析用に一定分量を抜き取る。
注として、疎水性粒子を、ＴＳＰＰの溶液への添加前にまず数滴のエタノールで湿らさなければならない。
【０１１７】
これら試験の結果を下記各実施例において報告した。
【０１１８】
実施例１
米国特許出願公開第２００２／０１５５０５９Ａ１号明細書に記載のＲＦプラズマ酸化によって作製した１００ｇの二酸化チタンナノ粒子を含有する半ガロンのプラスチック製ジャグに、全容量８００ｍｌの研磨用の脱イオン水を添加し、混合物を撹拌した。二酸化チタンナノ粒子の出発物質は、マイクロトラック（Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ）ＵＰＡ動的光散乱機器による測定によると、９０ｎｍの平均粒子サイズ、１０ｗｔ％の５０ｎｍ未満の粒子サイズ、９０％の１５０ｎｍ未満の粒子サイズを有した。混合物を７の出力で１０分間超音波処理し、３２５メッシュのふるいを通して選別した。選別された混合物を、電気撹拌器、温度プローブおよびｐＨプローブを具備する２０００ｍｌのステンレス鋼製ビーカーに添加した。混合物をプロペラ羽根を使用して速やかに撹拌した。
【０１１９】
初期ｐＨは１であった。混合物を６０℃に加熱し、ｐＨを５０％ＮａＯＨ溶液（８．２ｇ）を用いて７．１に調節した。次いで、９．０ｇアルミン酸ナトリウム（２７．８ｗｔ％アルミナ）を添加した。ｐＨは１０．８であった。混合物を１５分間撹拌した。
【０１２０】
混合物を９２℃に加熱した。ｐＨは１０．０であった。次いで、１．６ｇの５０％クエン酸溶液を添加した。クエン酸添加後のｐＨは８．８であった。ｐＨを５０％ＮａＯＨ溶液を用いて１０．７に調節した。次いで、２１．５ｇのケイ酸ナトリウム（２７ｗｔ％シリカ）を強く撹拌しながら添加した。ｐＨは１０．７であった。約１５分にわたり、濃縮した（３８％）塩酸溶液を添加し、ｐＨを７に低下させた（１７．７ｇＨＣｌ）。混合物を９２〜９５℃で４５分間撹拌した。加熱を停止し、１５分にわたり１８．０ｇのアルミン酸ナトリウムを滴下添加しながら濃縮した（３８％ＨＣｌ）（１３．５ｇ）を用いてｐＨを６〜８の範囲に低下させた。ｐＨを７に維持しながら混合物を２０分間撹拌した。２０分後の温度は６０℃であった。ｐＨを濃縮した（３８％）ＨＣｌを用いて６．０±０．３に調節した。混合物を再び５分間撹拌した。最終混合物を濾過し、研磨用の脱イオン水で洗浄し、１４３ｍｈｏｓ／ｃｍ未満の伝導度（約３リットルの水、１０６μｍｈｏｓ／ｃｍ）にした。混合物を約３０分間真空乾燥して固形物を形成し、次いで固形物を約１５分間覆うようにエタノールを添加した。次いで固形物を再び約３０分間真空乾燥した。固形物をトレイ上、１２５℃のオーブン内で一晩乾燥した。乾燥粒子を挽き、３５メッシュスクリーンを通してふるい分けし、再び乾燥した。
測定されたＳｉＯ２：３．９％
測定されたＡｌ２Ｏ３：５．７％
【０１２１】
実施例２
５０．００ｇのデグッサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）製Ｐ２５チタンおよび４００ｍｌの研磨用の脱イオン水といった物質を１０００ｍｌのプラスチック製ビーカーに添加した。混合物を撹拌し、次いで７の出力で３分間超音波処理した。次いで、混合物を、電気撹拌器、温度プローブおよびｐＨプローブを具備する６００ｍｌのステンレス鋼製ビーカーに注いだ。混合物をプロペラ羽根を使用して撹拌した。混合物の初期ｐＨは３．３であった。混合物を約９５℃に加熱し、０．８ｇのクエン酸５０％溶液を添加した。ｐＨは２．７であった。ｐＨを、３．８ｇの５０％ＮａＯＨ溶液の添加により、１０％ＮａＯＨを用いて９〜９．５の範囲に調節した。１０．７５ｇのケイ酸ナトリウムを１４分にわたり滴下添加しながら８．１ｇの濃縮した（３８％）ＨＣｌの添加によって中性ｐＨを維持した。混合物を約２６００ｒｐｍで撹拌しながら１時間、ｐＨ９．５、９５℃で加熱した。９ｇのアルミン酸ナトリウムを１０分にわたり滴下添加しながら８．１ｇの濃縮した（３８％）ＨＣｌの添加によってｐＨを７に低下させた。加熱を停止し、混合物をｐＨ７で２０分間撹拌した。２０分後の温度は７５．５℃であった。ｐＨをＨＣｌを用いて６．０±０．３に調節し、５分間撹拌した。
【０１２２】
実施例１のように、混合物を濾過し、洗浄し、乾燥し、乾燥粒子を形成した。
測定されたＳｉＯ２：４．４％
測定されたＡｌ２Ｏ３：３．２％
【０１２３】
実施例３
ケイ酸ナトリウムの添加に先立ちアルミン酸ナトリウムを全く添加しない点を除き、実施例１に記載のように処理を行った。
測定されたＳｉＯ２：４．１％
測定されたＡｌ２Ｏ３：４．４％
【０１２４】
実施例４
実施例１に記載のように、二酸化チタンの水性混合物を調製し、撹拌し、次いで超音波処理し、ｐＨを調節した。初期ｐＨは１．５であった。混合物を６０℃に加熱し、ｐＨを５０％ＮａＯＨ溶液（８．２ｇ）を用いて７．３に調節した。次いで、９．０ｇのアルミン酸ナトリウム（２７．８ｗｔ％アルミナ）を添加した。ｐＨは１１．４であった。混合物を１５分間撹拌した。
【０１２５】
混合物を９２℃に加熱した。ｐＨは１０．９であった。次いで、４．８ｇの５０％クエン酸溶液を添加した。クエン酸添加後のｐＨは９．７であった。ｐＨを５０％ＮａＯＨ溶液を用いて１０．９に調節した。次いで、６４．５ｇのケイ酸ナトリウム（２７ｗｔ％シリカ）を強く撹拌しながら添加した。ｐＨは１１．０であった。約１５分にわたり濃縮した（３８％）塩酸溶液を添加してｐＨを７に低下させた（２３．５ｇ．ＨＣｌ）。混合物を２〜９５℃で４５分間撹拌した。加熱を停止し、５４．０ｇのアルミン酸ナトリウムを１３分間滴下添加しながら濃縮した（３８％ＨＣｌ）（３７．４ｇ）を用いてｐＨを６〜８の範囲に低下させた。ｐＨを７に維持しながら混合物を２０分間撹拌した。２０分後の温度は４４℃であった。ｐＨを濃縮した（３８％）ＨＣｌを用いて６．０±０．３に調節した。混合物を再び５分間撹拌した。最終混合物を濾過し、研磨用の脱イオン水で洗浄し、１４３ｍｈｏｓ／ｃｍ未満の伝導度（約３リットルの水、１００μｍｈｏｓ／ｃｍ）にした。混合物を約３０分間真空乾燥して固形物を形成し、次いで固形物を約１５分間覆うようにエタノールを添加した。次いで固形物を再び約３０分間真空乾燥した。固形物をトレイ上で１２５℃のオーブン内で一晩乾燥した。乾燥粒子を挽き、３５メッシュスクリーンを通してふるい分けし、再び乾燥した。
測定されたＳｉＯ２：１０．１％
測定されたＡｌ２Ｏ３：１４．５％
【０１２６】
実施例５
実施例１に記載のように、二酸化チタンの水性混合物を調製し、撹拌し、超音波処理し、ｐＨを調節した。次いで、実施例１に記載のように、それを６０℃に加熱し、１５分間撹拌し、次いで濾過し、洗浄し、乾燥した。
測定されたＳｉＯ２：０．０％
測定されたＡｌ２Ｏ３：０．０％
【０１２７】
実施例６
５０．００ｇのデグッサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）製Ｐ２５チタンおよび４００ｍｌの研磨用の脱イオン水といった物質を１０００ｍｌのプラスチック製ビーカーに添加した。混合物を撹拌し、次いで７の出力で３分間超音波処理した。次いで、混合物を、電気撹拌器用モーターで撹拌し、９２℃に加熱した。初期ｐＨは３．２であった。ｐＨを１．４ｇの１０％ＮａＯＨを用いて９．２に調節した。１８．５ｇのケイ酸ナトリウム溶液（２７ｗｔ％ＳｉＯ２）を８分にわたり滴下添加しながらＨＣｌ（１８％、１０．３ｇ、５０％希釈物）を用いて混合物のｐＨを９〜１０の範囲内に維持した。混合物を１時間加熱した。
【０１２８】
実施例１に記載のように、混合物を濾過し、洗浄し、乾燥し、かつ粒子を挽き、メッシュスクリーンを通してふるい分けし、再び乾燥した。
測定されたＳｉＯ２：８．３３％
【０１２９】
実施例７
実施例２に記載のように、二酸化チタンの水性混合物を調製し、撹拌し、次いで超音波処理した。初期ｐＨは３．３〜３．６の範囲内であった。混合物を約９１℃に加熱した。ｐＨを１．２４ｇの１０％ＮａＯＨを用いて９．４に調節した。３７．０４ｇのケイ酸ナトリウム溶液（２７ｗｔ％ＳｉＯ２）を約４０分にわたり滴下添加しながらＨＣｌ（１８％、２０．６３ｇ、５０％希釈物）を用いて混合物のｐＨを９〜９．５の範囲内に維持した。混合物を、約２７００ｒｐｍで混合しながら１時間、ｐＨ９．３で９１〜９７℃に加熱した。
【０１３０】
実施例１に記載のように、混合物を濾過し、洗浄し、乾燥し、かつ粒子を挽き、１００メッシュスクリーンを通してふるい分けし、再び乾燥した。
測定されたＳｉＯ２：１３．０％
【０１３１】
実施例８
実施例２に記載のように、二酸化チタンの水性混合物を調製し、撹拌し、次いで超音波処理した。初期ｐＨは３．４〜３．８の範囲内であった。混合物を９２℃に加熱した。ｐＨを１．１ｇの１０％ＮａＯＨを用いて９．２に調節した。５５．５６ｇのケイ酸ナトリウム溶液（２７ｗｔ％ＳｉＯ２）を約２７分にわたり滴下添加しながらＨＣｌ（３８％、３９．２０ｇ、５０％希釈物）を用いて混合物のｐＨを９〜９．５の範囲内に維持した。混合物を、約３５００ｒｐｍで混合しながら１時間、ｐＨ９．４で９４℃に加熱した。
【０１３２】
実施例１に記載のように、混合物を濾過し、洗浄し、乾燥し、かつ粒子を挽き、１００メッシュスクリーンを通してふるい分けし、再び乾燥した。
測定されたＳｉＯ２：２０．０％
【０１３３】
実施例９
実施例２に記載のように、二酸化チタンの水性混合物を調製し、撹拌し、次いで超音波処理した。初期ｐＨは３．０〜３．１の範囲内であった。混合物を９２℃に加熱した。ｐＨを約１．６ｇの１０％ＮａＯＨを用いて９．１〜９．５に調節し、そのｐＨで維持した。混合物を１時間、ｐＨ９．５で９０〜９８℃に加熱した。実施例１に記載のように、混合物を濾過し、洗浄し、乾燥したが、濾過および洗浄がケイ酸ナトリウムを使用してなされた実施例の場合よりも時間がかかる点は注目された。乾燥された物質は小麦色をしていた。粒子を挽き、１００メッシュスクリーンを通してふるい分けし、再び乾燥した。
測定されたＳｉＯ２＝０％
測定されたＡｌ２Ｏ３＝０％
【０１３４】
実施例１０
実施例１に記載のように、二酸化チタンの水性混合物を調製し、撹拌し、次いで超音波処理し、ｐＨを調節した。混合物を６０℃に加熱した。
【０１３５】
次いで、１９．５ｇの濃縮した（３８％）ＨＣｌを用いてｐＨを６〜８の範囲内に保持しながら２７．０ｇのアルミン酸ナトリウム（２７．８ｗｔ％アルミナ）を添加した。次いで、ｐＨおよび温度を維持しながら混合物を２０分間撹拌した。
【０１３６】
次いで、実施例１に記載のように、物質を濾過し、洗浄し、乾燥し、破砕した。
【０１３７】
測定されたＡｌ２Ｏ３＝４．７％
【０１３８】
【表２】
2008535788.tif 000004
【０１３９】
実施例６、７および８に記載のデルタｂ＊（化学的活性の指標）値は、％シリカの増加によってデルタｂ＊値が低下することからシリカのレベルが高まることが示され、これにより化学的に安定化した生成物がもたらされることを示す。しかし、シリカ含有量が増加するにつれ、ＰＳＤ値によって示されるように粒子が凝集体を形成する傾向が高まる。実施例２は、シリカおよびアルミナのコーティングを有する二酸化チタン粒子が、特に未処理の物質（実施例５）と比べて良好な化学的安定性があることを示す低いデルタｂ＊値を有し、さらに、ＰＳＤ値によって示されるように凝集体が実質的に低下することを示す。したがって、シリカおよびアルミナでコーティングされた、低い表面処理レベルを有する二酸化チタンナノ粒子は、高レベルのシリカを含有する二酸化チタン粒子と同程度に良好な（もしより良好でない場合）化学的安定性を示す特性を有する。実施例１、２および３は、この処理が、優れた有効性を有する異なるプロセスによって形成された二酸化チタンナノ粒子にも適用されて、特に未処理物質（実施例５）と比べて化学的に安定な粒子を生成する可能性があり、同粒子はシリカのみで処理された粒子（実施例８）と比べて凝集体を低下させていることを示す。
【０１４０】
実施例１１
本実施例の目的は、皮膚に対して高い結合親和性を有するファージペプチドの同定における好ましい実施形態について記載することである。フアン（Ｈｕａｎｇ）ら（同時係属および公有の米国特許出願第１０／９３５６４２号明細書）による記載のように改良されたバイオパニング方法を用いることで、高親和性の皮膚結合ファージペプチドクローンを同定した。ブタ皮膚はプロセスにおけるヒト皮膚についてのモデルとして機能し、上記参考文献にて引用された方法によって調製した。全部で２８個の単一の黒色のファージプラークをＤＮＡの単離および配列決定分析のためにランダムに採取し、１つの複製されたクローンを同定した。このファージペプチドのアミノ酸配列は、２８個の配列から９回認められたもので、配列番号１として与えられるＴＰＦＨＳＰＥＮＡＰＧＳであった。配列番号２は、カスパーゼ３の切断部位のＬＥＳＧＤＥＶＤを示す。
【０１４１】
実施例１２−予測
本実施例の目的は、実施例１〜１０に記載のように調製された、配列番号１として与えられる皮膚結合ペプチドの二酸化チタン粒子の表面との共有結合によって金属酸化物サンスクリーン剤を調製するための方法を記載することである。二酸化チタンの表面をアルミナおよびシリカでコーティングすることで光活性を低下させる。これらのコーティングにより、良好な表面化学反応が可能になり、特定の皮膚結合ペプチドとの共有結合が生じる。
【０１４２】
二酸化チタン（８７ｍｇ）、ペプチド（８０ｍｇ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（２２ｍｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）３ｍＬに添加できた。数滴のＴＨＦ中のジメチルアミノピリジンの溶液（１７μＬ）を、この混合物に撹拌しながら滴下添加した。得られた懸濁液を撹拌しながら６時間で４０℃に加熱した後、室温で一晩撹拌できた。トリフルオロ酢酸（０．６ｍＬ）を生成物に添加し、混合物をさらに６時間、撹拌できた。次いで、脱イオン水５ｍＬを反応混合物に添加できた。次いで、混合物を３，５０００ｒｐｍで２分間遠心し、上清をデカントできた。遠心管内に残存する固体を脱イオン水で洗浄し、再び遠心できた。この洗浄を上清のｐＨが約６．０に至るまで繰り返すことができた。
【０１４３】
実施例１３−予測
本実施例の目的は、ペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を含有するサンスクリーンを調製する方法を記載することである。長期持続性の耐水性サンスクリーンを、まずシクロペンタシロキサン（１０ｇ）およびシクロメチコン（１０ｇ）を約７５℃まで加熱することによって調製できたと推測される。実施例１２で記載のように調製した、最終製剤を基準にして約５ｗｔ％のペプチドをベースとする金属酸化物サンスクリーン剤を、完全に混合されるまで混合物に撹拌できた。次いで水（６０ｇ）を混合物にゆっくりと添加し、次いでホモジナイザー上で約５分間挽き、次いで冷却しておくことができた。
【０１４４】
本開示の例示的でかつ好ましい実施形態の説明は、本発明の範囲を限定することを意図されていない。添付の特許請求の範囲の真の精神および範囲から逸脱することなく、様々な改良、代替構造物および等価物を用いることが可能である。
【配列表】
2008535788000001.app
【国際調査報告】
2008535788.tif 000006
2008535788.tif 000007