(57)【要約】  本発明は、イノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩、リチウム塩、ベリリウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、バリウム塩、ルビジウム塩およびセシウム塩を含めた、イノシトールトリピロリン酸の様々な塩、これらの塩を含む組成物、様々な塩を作製する方法、ならびに上記の塩の使用方法に関する。使用方法は、各種の癌、アルツハイマー病、脳卒中および骨粗鬆症を治療するために、上記の塩の有効量を個体に投与することを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩。
【請求項２】
前記イノシトールトリピロリン酸が、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸である、請求項１に記載のカルシウム塩。
【請求項３】
イノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩、および医薬として許容されるその補助剤、希釈剤、担体、または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項４】
前記イノシトールトリピロリン酸が、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸が、癌を治療する投与量で製剤される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記癌が、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、神経芽細胞腫、および骨肉腫からなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記癌が、乳癌、疲弊(prostrate)癌、腎細胞癌、脳腫瘍、卵巣癌、結腸癌、膀胱癌、膵癌、胃癌、食道癌、皮膚黒色腫、肝臓癌、肺癌、睾丸癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮頚癌、リンパ腫、副甲状腺癌、陰茎癌、直腸癌、小腸癌、甲状腺癌、子宮癌、ホジキンリンパ腫、口唇癌および口腔癌、皮膚癌、白血病、ならびに多発性骨髄腫からなる群の１種または複数から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸の投与量が、約０．５〜１．５ｇ／ｋｇである、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸の投与量が、約０．９〜１．１ｇ／ｋｇである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
有機化合物を含有するカルシウム塩を、ミオイノシトールトリピロリン酸の過剰プロトン化形態に加えることを含む、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸カルシウム塩を作製する方法。
【請求項１１】
有機化合物を含有する前記カルシウム塩が水酸化カルシウムである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ミオイノシトールトリピロリン酸の過剰プロトン化形態の量に対して、少なくとも３対１の比の水酸化カルシウムを加える、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項４に記載の組成物の医薬として許容される量を、個体に投与するステップを含む、癌を治療する方法。
【請求項１４】
前記組成物を、約０．５および１．５ｇ／ｋｇの投与量で個体に投与する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物を、約０．９および１．１ｇ／ｋｇの投与量で個体に投与する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩の有効量を、個体に投与することを含む、ヘモグロビンＰ５０値をより高い酸素分圧値に移動させる方法。
【請求項１７】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、組成物の一部として投与する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、補助剤、希釈剤、担体、または賦形剤の１種または複数を含有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、約０．５および１．５ｇ／ｋｇの投与量で投与する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、約０．９および１．１ｇ／ｋｇの投与量で投与する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
ミオイノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩の有効量を、個体に投与することを含む、アルツハイマー病を治療する方法。
【請求項２２】
前記ミオイノシトールトリピロリン酸が、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、約０．５および１．５ｇ／ｋｇの投与量で投与する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、約０．９および１．１ｇ／ｋｇの投与量で投与する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ミオイノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩の有効量を、個体に投与することを含む、脳卒中または骨粗鬆症を治療する方法。
【請求項２６】
前記ミオイノシトールトリピロリン酸が、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、約０．５および１．５ｇ／ｋｇの投与量で投与する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩を、約０．９および１．１ｇ／ｋｇの投与量で投与する、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国特許法１１９条（ｅ）に基づき、参照によりその全体を本明細書中に組み込む、２００５年３月１８日出願の米国仮出願第６０／６６３，４９１号に対する利益を主張する。
【０００２】
本発明は、赤血液による酸素送達を向上させるためのイノシトール−トリピロリン酸のカルシウム塩（ＩＴＰＰ−Ｃａ）の使用のための組成物および方法を対象とする。ＩＴＰＰ−Ｃａは、赤血球の形質膜を通り、赤血球のヘモグロビンの酸素親和性を低下させる能力を有するヘモグロビンのアロステリックエフェクターである。本発明はさらに、血管新生を阻害し、酸素欠乏腫瘍の放射線感受性を高めるためのＩＴＰＰ−Ｃａの使用を対象とする。本発明はさらに、酸素欠乏腫瘍中のＰＯ２を高めるためのＩＴＰＰ−Ｃａの使用を対象とする。
【背景技術】
【０００３】
成人したヒトの脈管系において、血液の容積は約５〜６リットルである。この容積の約２分の１を赤い血液細胞（赤血球）、白い血液細胞（白血球）、および血小板を含めた細胞が占めている。赤血球は、血液の細胞成分の大半を構成する。血液の液体部分である血漿は、約９０パーセントが水および１０パーセントが各種溶質である。このような溶質には、血漿タンパク質、有機代謝物および老廃産物、および無機化合物が挙げられる。
【０００４】
赤血球の主な機能は、酸素を肺から体組織に運搬し、二酸化炭素を除去するために組織から肺に運搬することである。酸素は水溶液にほとんど可溶性でないので、酸素は血漿によってはほとんど運搬されない。血液によって運ばれる酸素の大部分は、赤血球のヘモグロビンによって運搬される。哺乳動物の赤血球は、核、ミトコンドリアまたは他の細胞内の細胞小器官を含有せず、それ自身の代謝において酸素を使用しない。赤血球は、酸素の結合と運搬に関与するヘモグロビンを約３５重量％含有する。
【０００５】
ヘモグロビンは、約６４，５００ダルトンの分子量を有するタンパク質である。ヘモグロビンは４本のポリペプチド鎖と、鉄原子が二価鉄状態で結合している４個のヘム補欠分子族とを含有する。ヘモグロビン分子のタンパク質部分である通常のグロビンは、２本のα鎖および２本のβ鎖からなる。４本の鎖のそれぞれは、鎖が折りたたまれた特有の三次構造を有する。４本のポリペプチド鎖は、ほぼ四面体の配置で組み合っており、ヘモグロビン特有の四次構造を構成する。１個のヘム基が各ポリペプチド鎖に結合し、それは分子状酸素の１個の分子に可逆的に結合することができる。ヘモグロビンが酸素と結合すると、オキシヘモグロビンが形成される。酸素が放出されると、オキシヘモグロビンはデオキシヘモグロビンに還元される。
【０００６】
腫瘍を含めた組織への酸素の送達は、血流量、赤血球数、赤血球中のヘモグロビン濃度、ヘモグロビンの酸素親和性、および特定の種においては、高い酸素親和性を有する赤血球内ヘモグロビンおよび低い酸素親和性を有する赤血球内ヘモグロビンのモル比などが挙げられるいくつかの要素に依存するが、ここに挙げる物だけに限定されない。ヘモグロビンの酸素親和性は、同様に４つの要素に依存する。すなわち、（１）酸素分圧、（２）ｐＨ、（３）ヘモグロビン中の２，３−ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）濃度、および（４）二酸化炭素濃度である。肺では、１００ｍｍＨｇの酸素分圧で、循環ヘモグロビンの約９８％が酸素で飽和している。これは、血液の全酸素運搬能を表す。十分に酸素化している場合は、哺乳動物の全血１００ｍｌは、約２１ｍｌの気体酸素を運搬できる。
【０００７】
ヘモグロビンが酸素を結合させる能力に対する酸素分圧およびｐＨの影響は、ヘモグロビンの酸素飽和曲線を調べることによって最もよく示される。酸素飽和曲線は、ヘモグロビン分子の溶液が気相中の種々の酸素分圧と平衡状態であるときの、酸素分子によって占められているヘモグロビン分子の全ての酸素結合部位の割合を表す。
【０００８】
ヘモグロビンの酸素飽和曲線はＳ字形である。したがって、酸素の最初の分子を結合すると、追加の酸素分子を結合するための残りのヘモグロビンの親和性が増加する。酸素分圧が増加すると、各ヘモグロビン分子が飽和して、上限である酸素分子４個を含有するプラトーが近づく。
【０００９】
ヘモグロビンによる酸素の可逆的結合は、式：
ＨＨｂ＋＋Ｏ２  ←→  ＨｂＯ２＋Ｈ＋
によるプロトンの放出を伴う。
【００１０】
したがって、ｐＨの上昇は、所与の分圧で平衡を右方に移動させ、ヘモグロビンをより多くの酸素に結合させることとなる。ｐＨの低下は、結合した酸素を減少させることとなる。
【００１１】
肺において、空隙中の酸素分圧は約９０〜１００ｍｍＨｇであり、正常血液のｐＨ（最高７．６）と比較してｐＨも高い。したがって、ヘモグロビンは、肺内でほぼ最大限に酸素で飽和される傾向となろう。この圧力およびｐＨでは、ヘモグロビンは、約９８パーセント酸素で飽和している。他方、末梢組織内の毛細血管において、酸素分圧はほんの約２５〜４０ｍｍＨｇであり、ｐＨもほぼ中性（約７．２〜７．３）である。筋細胞は、高率で酸素を使用し、したがって酸素の局所濃度を低下させるため、結合した酸素の一部の組織への放出が促進される。血液が筋肉中の毛細血管を通過すると、酸素は赤血球中のほぼ飽和したヘモグロビンから血漿中に、次いで筋細胞中に放出されることとなる。ヘモグロビンは、筋肉の毛細血管を通過するときに、結合した酸素の約４分の１を放出することとなり、そのためヘモグロビンが筋肉から出るときに、約７５パーセントのみの飽和となる。一般に、組織から出た静脈血中のヘモグロビンは、肺と末梢組織間で繰り返される循環において、約６５〜９７パーセントの酸素飽和状態で循環する。したがって、酸素分圧およびｐＨは、ヘモグロビンによる酸素の放出をもたらすように共に機能する。
【００１２】
ヘモグロビンの酸素化の度合いを調節する第３の重要な要素は、アロステリックエフェクターである２，３−ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）である。ＤＰＧは、哺乳動物の赤血球中のヘモグロビンの通常の生理的エフェクターである。ＤＰＧは、肺内の酸素分圧と関連付けながら、赤血球中のヘモグロビンの酸素結合親和性を調節する。細胞内のＤＰＧ濃度が高くなると、ヘモグロビンの酸素への親和性は低くなる。
【００１３】
組織への酸素の送達が慢性的に減少すると、赤血球中のＤＰＧ濃度は、正常な個体のＤＰＧ濃度より高くなる。例えば、高い高度では酸素分圧は相当に減少する。それに対応して、組織内の酸素分圧は減少する。正常なヒト被験者がより高い高度に移動した数時間以内に、赤血球中のＤＰＧ値は増加し、より多くのＤＰＧが結合し、ヘモグロビンの酸素親和性が低下する。赤血球のＤＰＧ値の増加は、低酸素症を患っている患者にも起こる。この調節によって、ヘモグロビンはその結合した酸素をより容易に組織に放出し、肺内の減少したヘモグロビンの酸素化を補う。この逆の変化は、ヒトがより高い高度に順応し、より低い高度に下りた場合に起こる。
【００１４】
通常血液から単離されるとき、ヘモグロビンは、相当な量のＤＰＧを含有する。ヘモグロビンから、そのＤＰＧが「除去」された場合、酸素へより高い親和性を示す。ＤＰＧが増加すると、ヘモグロビンの酸素結合親和性は減少する。したがって、組織中のヘモグロビンからの酸素の正常な放出のために、ＤＰＧなどの生理的アロステリックエフェクターは必須である。
【００１５】
ＤＰＧは、哺乳動物の赤血球中のヘモグロビンの通常の生理的エフェクターである一方、リン酸化イノシトールは、いくつかの鳥類および爬虫類の赤血球中で同じ役割を果たすことが見出されている。イノシトール６リン酸（ＩＨＰ）は、哺乳動物の赤血球膜を通過できないが、ＤＰＧの結合部位で哺乳動物の赤血球のヘモグロビンと結合し、ヘモグロビンのアロステリック構造を変化させることができ、その効果はヘモグロビンの酸素への親和性を減少させることである。例えば、ＤＰＧは、ＤＰＧよりヘモグロビンの酸素親和性をより強力に減少させるＩＨＰによって置換される場合がある。ＩＨＰは、ＤＰＧより１０００倍高いヘモグロビンに対する親和性を有し（R.E.Beneschら、Biochemistry, Vol.16, 2594-2597ページ（１９７７））、ｐＨ７．４で、３７℃で、ヘモグロビンＰ５０を９６．４ｍｍ，Ｈｇの値まで増加させる（J.Biol.Chem., Vol.250, 7093-7098ページ（１９７５））。
【００１６】
ある種のヘモグロビンのアロステリックエフェクターを赤血球中に導入し、これによってヘモグロビンの酸素への親和性を低下させ、血液の酸素の効率的な使用を向上させることで、哺乳動物の赤血球の酸素放出能を高めることができる。この現象は、肺または循環器系の機能不全により組織酸素化の減少を患っている個体を治療するための、様々な医療用途を示唆する。
【００１７】
このような変性した赤血球の使用から得られる有望な医療効果によって、赤血球中のヘモグロビンのアロステリックエフェクターのカプセル化を可能にする様々な技術が従来技術において開発されてきた。したがって、カプセル化手順を補助しまたは簡略化するための数々の装置が設計されてきた。当技術分野において公知のカプセル化方法には、浸透圧パルス（膨潤）および細胞再構成、制御された溶解および再封入、リポソーム取込み、および電気穿孔法が挙げられる。電気穿孔法の現在の方法は、商業的利用に適切な規模ではこの手順を商業的に非実用的なものとしている。
【００１８】
下記の参照は、ＩＨＰを充填したリポソームの相互作用によるポリリン酸の赤血球への組込みを記述している。Gersondeら、「無処置の赤血球へのポリリン酸の取り込みによる細胞内ヘモグロビンの酸素親和性の改変と、毛細血管システムにおける亢進されたＯ２遊離（Modification of the Oxygen Affinity of Intracellular Hemoglobin by Incorporation of Polyphosphates into Intact Red Blood Cells and Enhanced O2 Release in the Capillary System）」、Biblthca.Haemat., No.46, 81-92ページ（１９８０）；Gersondeら、「エフェクター含有脂質小胞との融合によるイノシトール６リン酸取り込み後の、ヒト赤血球のＯ２遊離能およびBohr効果の亢進（Enhancement of the O2 Release Capacity and of the Bohr-Effect of Human Red Blood Cells after Incorporation of Inositol Hexaphosphate by Fusion with Effector-Containing Lipid Vesicles）」、ヘモグロビンの協同的結合の起源（Origins of Cooperative Binding of Hemoglobin）（１９８２）、およびWeiner、「リポソーム技術による生存赤血球内Ｈｂ−Ｏ２解離の右方移動（Right Shifting of Hb-O2 Dissociation in Viable Red Cells by Liposomal Technique）」、Biology of the Cell, Vol.47（１９８３）。
【００１９】
さらに、Nicolauらの米国特許第４，１９２，８６９号、同第４，３２１，２５９号、および同第４，４７３，５６３号には、流体を充填した脂質小胞を赤血球膜と融合し、その中身を赤血球内に堆積する方法が記載されている。この方法では、ＩＨＰなどのアロステリックエフェクターを赤血球内に輸送することが可能であり、その極めて高い結合定数によって、ＩＨＰはヘモグロビン中のその結合部位でＤＰＧを置換する。
【００２０】
リポソーム技術によれば、溶液が飽和し脂質小胞の混合物が溶液中で懸濁するまでＩＨＰを、リン酸緩衝液に溶解させる。次いで、この懸濁液を超音波処理または注入工程にかけ、次いで遠心分離する。懸濁液の上層は、ＩＨＰを含有する小さな脂質小胞を含有し、次いでこれらを回収する。回収した懸濁液に赤血球を加え、インキュベーションするが、この間にＩＨＰを含有する脂質小胞は赤血球の細胞膜と融合し、したがってその内容物が赤血球内部に堆積する。次いで変性した赤血球を洗浄し、血漿に加え、生成物を完成させる。
【００２１】
リポソーム技術に関連する不利な点としては、赤血球中に取り込まれるＩＨＰ濃度の再現性が乏しいこと、および処置後の赤血球の相当な溶血が挙げられる。さらに、手順が冗長で複雑であるため商業化は現実的でない。
【００２２】
リポソーム技術に関連する不利な点を解決する試みにおいて、赤血球を溶解し再封入する方法が開発された。この方法は、下記の刊行物に記載されている。Nicolauら、「赤血球中のヘモグロビンのアロステリックエフェクターの組込み。生理学的効果（Incorporation of Allosteric Effectors of Hemoglobin in Red Blood Cells.Physiologic Effects）」、Biblthca.Haemat., 51号、92-107ページ、（１９８５）。関連するRoparsらの米国特許第４，７５２，５８６号および同第４，６５２，４４９号にはまた、赤血球の溶解および再封入を制御することによって、赤血球とリポソームの相互作用を回避する、ヒトまたは動物の赤血球中で生物活性を有する物質をカプセル化する手順が記載されている。
【００２３】
この技術は、浸透圧パルス技術と同様の様式で機能する連続流透析システムとして、最もよく特徴付けられる。具体的には、少なくとも１種類の透析要素の一次コンパートメントが、赤血球の水性懸濁液の供給を連続して受け、一方透析要素の二次コンパートメントは、赤血球懸濁液と比較して低張の水溶液を含有する。低張の溶液によって、赤血球は溶解する。次いで、この赤血球溶解物は生物活性物質と接触し、赤血球に取り込まれる。赤血球膜を再封入するために、赤血球溶解物の浸透圧および／または膠質浸透圧を増加させ、再封入された赤血球の懸濁液を回収する。
【００２４】
関連するGoodrichらの米国特許第４，８７４，６９０号および同第５，０４３，２６１号には、赤血球の凍結乾燥および再構成に関わる関連する技術が開示されている。赤血球を再構成する方法の一部として、ＩＨＰを含めた様々なポリアニオンを加えることが開示されている。開示された方法による赤血球の処置によって、細胞の活性は影響を受けない。おそらく、ＩＨＰは再構成過程の間に細胞に取り込まれており、したがってヘモグロビンの活性が維持される。
【００２５】
Francoらの米国特許第４，４７８，８２４号および同第４，９３１，２７６号には、効率的に細胞を溶解し、再封入することによって、ＩＨＰを含めた非イオン剤を効率的に哺乳動物の赤血球に導入するための第２の関連する方法および装置が記載されている。この手順は、「浸透圧パルス技術」として記載されている。浸透圧パルス技術を実施するにあたり、供給された濃厚赤血球を懸濁させ、細胞の内外に容易に拡散する化合物を含有する溶液中でインキュベーションするが、この化合物の濃度はそれが細胞中に拡散するのに十分であるので、細胞内容物は高張となる。次いで、導入される少なくとも１種類の所望の作用の存在下で、高張の細胞を含有する溶液を本質的に等張の水性媒体で希釈することによって、膜貫通型イオン勾配が生じ、したがって水が細胞中に拡散し、その結果膨張し、細胞の外膜の透過性が増加する。この「浸透圧パルス」によって水が細胞中に拡散し、その結果細胞が膨張し、所望の剤に対する外側細胞膜の透過性が増加する。膜透過性の増加は、少なくとも１種類の剤が細胞内に輸送され、化合物が細胞外に拡散するのを可能にするのに十分な時間維持される。
【００２６】
浸透圧パルス技術の実施において使用され得るポリアニオンには、水溶性で赤血球の外側の脂質二分子膜に対して破壊的でないピロリン酸、トリポリリン酸、リン酸化イノシトール、２，３−ジホスホグリセリン酸（ＤＰＧ）、アデノシン３リン酸、ヘパリン、およびポリカルボン酸が挙げられる。
【００２７】
浸透圧パルス技術には、カプセル化の低収率、不完全な再封入、細胞内容物の損失およびそれに付随する細胞寿命の減少を含めたいくつかの欠点がある。この技術は、冗長、複雑であり、自動化に適さない。このような理由により、浸透圧パルス技術は、商業上の成功をあまり収めていない。
【００２８】
様々な生物活性物質を赤血球にカプセル化する他の方法は、電気穿孔法である。Mouneimneらの「電気穿孔法を使用した赤血球のイノシトール６リン酸のカプセル封入によって引き起こされた、オキシヘモグロビン解離曲線の安定した右方シフト(Stable rightward shifts of the oxyhemoglobin dissociation curve induced by encapsulation of inositol hexaphosphate in red blood cells using electroporation)」FEBS, Vol.275, No.1, 2, p.117〜120（１９９０）において記載されているように、電気穿孔法は、赤血球中のＩＨＰを含めた様々な細胞タイプの異分子のカプセル化のために用いられてきた。米国特許第５，６１２，２０７号も参照されたい。
【００２９】
血管新生は、新しい血管が組織または器官に生成することであり、組織内の酸素圧と関連する。通常の生理条件下では、ヒトおよび動物は極めて特定の限られた状況においてのみ血管新生を経験する。例えば、血管新生は、創傷治癒、胎児および胎胚の発生、ならびに黄体、子宮内膜および胎盤の形成において通常観察される。
【００３０】
血管新生は、血管新生の刺激物質および阻害物質の高度に制御されたシステムによって制御されている。血管新生の制御は、ある種の病態において変化し、多くの場合、疾患と関連する病理的損傷は、制御されない血管新生と関係する。制御された血管新生および制御されない血管新生の両方とも、同様に進むと考えられている。内皮細胞および周皮細胞は、基底膜に囲まれており、毛細血管血管を形成する。内皮細胞および白血球により放出された酵素による基底膜のびらんと共に、血管新生は開始する。次いで、血管内腔を裏打ちしている内皮細胞が、基底膜を通して突き出る。血管新生刺激物質は、内皮細胞がびらんした基底膜を通過して移動することを誘発する。移動細胞は、親血管からの「出芽」を形成し、そこで内皮細胞が有糸分裂し増殖する。内皮の出芽は互いに合流し、ループ状毛細血管を形成し、新しい血管を作る。
【００３１】
持続的で制御されない血管新生は、多くの病態、腫瘍転移、および内皮細胞による異常増殖において起こる。制御されない血管新生が存在する多様な病理学的病態は、血管新生依存性疾患または血管新生関連疾患として共にグループ化されてきた。
【００３２】
腫瘍増殖は、血管新生依存性であるという仮説は、最初に１９７１年に提案された（Folkman, New Eng.J.Med., 285: 1182〜86（１９７１））。この仮説は、その最も簡単な用語で「腫瘍の『取得』が一度起こると、腫瘍細胞集団における増殖の全ては、腫瘍上に集中する新しい毛細血管の増加が先行するはずである。」と記述する。現在では腫瘍の「取得」とは、数立方ミリメートルの容積を占める腫瘍細胞集団（数百万個以下の細胞）が、既存の宿主微小血管上で存在し続けることができる、腫瘍増殖の前血管形成相を示すと理解される。この相を超えた腫瘍容積の膨張には、新しい毛細血管の誘導を必要とする。例えば、マウスの早期前血管形成相における肺の微小転移は、組織学分野の高性能顕微鏡検査によってでなければ、検出不可能であろう。
【００３３】
血管新生は、固形腫瘍および血液由来の腫瘍を含めたいくつかの異なる種類の癌と関連付けられてきた。血管新生が関連付けられてきた固形腫瘍には、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、神経芽細胞腫、および骨肉腫が挙げられるが、これらだけに限定されない。血管新生は、血液由来の腫瘍とも関連付けられる。例えば、白血病、貧血、血液凝固能の低下、ならびにリンパ節、肝臓および脾臓の拡大を通常伴う、白血球の無制限の増殖が起こる骨髄の任意の様々な急性または慢性新生物疾患などである。血管新生は、白血病腫瘍および多発性骨髄腫症を引き起こす骨髄内の異常において役割を果たしていると考えられている。
【００３４】
小児期の最も頻度の高い血管新生疾患の１つは、血管腫である。血管腫は、新しく形成された血管からなる腫瘍である。ほとんどの場合、腫瘍は良性で、治療介入なしで消失する。より重症例では、腫瘍は大きな海綿状および浸潤性形態に進行し、臨床的合併症を生じる。血管腫の全身性形態である血管腫症は、高い死亡率を有する。現在用いられている治療法では治療できない治療抵抗性の血管腫が存在する。
【００３５】
他の血管新生に関連した疾患は、関節リウマチである。間節の滑膜表層内の血管が、血管新生を受ける。新しい血管網が形成することに加えて、内皮細胞が因子および活性酸素種を放出し、それがパンヌスの増殖および軟骨組織の破壊の原因となる。血管新生は、変形性関節炎においても役割を果たしている場合がある。血管新生関連因子による軟骨細胞の活性化は、関節の破壊の一因となる。後期においては、血管新生因子は新たな骨増殖を促進する。軟骨組織の破壊を防ぐ治療的介入は、疾患の進行を止め、関節炎に苦しむ人に安心を与えることができる。
【００３６】
慢性炎症も、病理的血管新生を伴う場合がある。潰瘍性大腸炎およびクローン病などの疾患は、炎症性組織内への新しい血管の内部成長を伴う組織変化を示す。南米で発見された細菌性感染であるバルトネラ症は、血管内皮細胞の増殖によって特徴付けられる慢性期をもたらす場合がある。血管新生と関連する他の病理学的役割は、アテローム性動脈硬化症で見出される。血管内腔内に形成されるプラークは、血管新生刺激活性を有することが示されてきた。
【００３７】
前述のようにいくつかの一連の証拠により、血管新生は固形腫瘍の増殖および持続性ならびにその転移に必須のものであることが示されている。ひとたび血管新生が刺激されると、繊維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦおよびｂＦＧＦ）および血管内皮増殖因子／血管透過性因子（ＶＥＧＦ／ＶＰＦ）を含めた種々の血管新生因子の生成が、腫瘍により上方制御される［２，３］。
【００３８】
血管新生制御におけるＶＥＧＦの役割は、熱心な研究の目的であった［５〜１０］。ＶＥＧＦが生理的血管新生において重要な律速段階を示す一方、腫瘍増殖と関連するなどの病理的血管新生においても重要であるように思われる［１１］。ＶＥＧＦは、血管漏出を誘発するその能力に基づいて血管透過性因子としても知られている［１３］。いくつかの固形腫瘍は、十分な量のＶＥＧＦを生成し、これが内皮細胞の増殖および遊走を刺激し、したがって血管新生が誘発される［１２，１３］。ＶＥＧＦ発現は、様々な種類のヒト癌の予後に著しく影響を与えることが示されてきた。腫瘍中の酸素圧は、ＶＥＧＦ遺伝子発現の制御において重要な役割を有している。ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現は、種々の病態生理学的環境の下で低酸素圧に曝されることにより誘発される［１３］。腫瘍増殖はＶＥＧＦ発現を誘発する低酸素によって特徴付けられ、転移性疾患の発生の予測因子でもあり得る。
【００３９】
したがって必要とされるものは、組織、特に腫瘍内の酸素圧を調節することができる、実質的に無毒性の組成物および方法である。さらに必要とされるものは、赤血球のＰ５０値の有意な右方移動をもたらすことのできる、単純で、容易に投与され、好ましくは経口投与される組成物である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４０】
（発明の概要）
本発明は、異常な血管新生によって特徴付けられる疾患の治療に効果的な、イノシトール−トリピロリン酸のカルシウム塩（ＩＴＰＰ−Ｃａ）を含む組成物を提供するものである。本発明の組成物および方法が従来技術の組成物と比較して実質的に無毒性であるという点で、本発明の組成物および方法は従来技術より著しい利点を有する。本発明はまた、腫瘍を含めた組織への酸素の制御送達を高めるための、ＩＴＰＰ−Ｃａを使用する実質的に無毒性の方法も提供する。例えば、ヒトまたは動物の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の制御は、赤血球に入ったＩＴＰＰ−Ｃａを用い、したがって循環赤血球の酸素親和性を低下させることにより行うことができる。本発明の一実施形態では、ＩＴＰＰ−Ｃａは、ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現、タンパク質濃度、および腫瘍細胞増殖に影響を与えることができる。また、ＩＴＰＰ−Ｃａを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方でＶＥＧＦ発現を制御する方法も意図しており、したがって本発明の範囲内に含むものである。
【００４１】
本発明はさらに、固形腫瘍に酸素を送達し、血管新生を抑制し、酸素欠乏腫瘍の放射線感受性を高めるために、純粋なヘモグロビンおよび赤血球中でＩＴＰＰ−Ｃａを使用するための実質的に無毒性の組成物および方法を含む。本発明はさらに、酸素欠乏腫瘍中でＰＯ２を高めるための、ＩＴＰＰ−Ｃａの使用に関する。ＩＴＰＰ−Ｃａは、ヘモグロビンのアロステリックエフェクターであり、ヘモグロビンの酸素親和性を減少させることができる、これによりヘモグロビンによる酸素放出が高められる。細胞の要求に応じ、ＩＴＰＰ−Ｃａは腫瘍細胞中のＶＥＧＦ発現、したがって血管新生を抑制することができる。
【００４２】
望ましくない血管新生、または本明細書において定義する望ましくない血管新生に特徴付けられる疾患としては、内皮細胞の過度もしくは異常刺激（例えば、アテローム性動脈硬化症）、血液由来の腫瘍、固形腫瘍および腫瘍転移；良性腫瘍、例えば、血管腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマおよび化膿性肉芽腫；血管機能障害、異常創傷治癒、炎症性疾患および免疫不全、ベーチェット病、痛風もしくは痛風性関節炎、糖尿病性網膜症；未熟児網膜症（水晶体後線維増殖症）、黄斑変性症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障などの他の眼球の血管新生疾患；ならびにオスラー・ウェーバー症候群（オスラー・ウェーバー・ランデュ病）が挙げられるが、これらだけに限定されない。本発明により治療することのできる癌としては、乳癌、疲弊(prostrate)癌、腎細胞癌、脳腫瘍、卵巣癌、結腸癌、膀胱癌、膵癌、胃癌、食道癌、皮膚黒色腫、肝臓癌、肺癌、睾丸癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮頚癌、リンパ腫、副甲状腺癌、陰茎癌、直腸癌、小腸癌、甲状腺癌、子宮癌、ホジキンリンパ腫、口唇癌および口腔癌、皮膚癌、白血病または多発性骨髄腫が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【００４３】
本発明の一目的は、ＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用して癌および他の血管新生の病態および状態を治療するための、実質的に無毒性の組成物および方法を提供することである。
【００４４】
本発明の他の目的は、ＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用して酸素欠乏腫瘍への酸素送達を高めるための、組成物および方法を提供することである。
【００４５】
本発明のさらに他の目的は、ＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用して血管新生を阻害するための、組成物および方法を提供することである。
【００４６】
本発明の他の目的は、ＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用して酸素欠乏腫瘍の放射線感受性を高めるための、組成物および方法を提供することである。
【００４７】
本発明のさらに他の目的は、ＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用して酸素欠乏腫瘍および疾患を治療する、組成物および方法を提供することである。
【００４８】
本発明の他の目的は、組織、特に腫瘍中の酸素圧を制御することができるＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用する、組成物および方法を提供することである。
【００４９】
本発明の他の目的は、ＩＴＰＰ−Ｃａを有効量で使用して、赤血球のＰ５０値の有意な右方移動をもたらすことのできる、単純で、容易に投与され、好ましくは経口投与される組成物を提供することである。
【００５０】
本発明のこれらのおよび他の目的、特徴ならびに利点は、開示された実施形態の下記の詳細な説明の概説の後に明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５１】
（発明の詳細な説明）
本発明による有用な組成物には、イノシトール−トリピロリン酸のカルシウム塩（ＩＴＰＰ−Ｃａ）が挙げられる。本発明の組成物は、ＩＴＰＰ−Ｃａと組み合わせて、あるいは互いに混合して、あるいは場合により単独で使用して、ＩＴＰＰのリチウム塩、ベリリウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、バリウム塩、ルビジウム塩およびセシウム塩を含み得ることも意図しており、したがって本発明の範囲内に含むものである。
【００５２】
ＩＴＰＰは、抗血管新生および抗腫瘍の特性を示し、血管新生もしくは増殖に関連する事象、状態、または物質を制御するのに有用である。本明細書で使用する場合、血管新生もしくは増殖に関連する事象、状態、または物質の制御とは、血管新生もしくは増殖に関連する可能性があり、または関連すると考えられており、本発明の組成物の投与に起因する、任意の種類の因子、状態、活性、指標、化学物質もしくは化学物質の組合わせ、ｍＲＮＡ、受容体、マーカー、メディエーター、タンパク質、転写活性などにおける、任意の質的変化または量的変化を意味する。本発明は、記載された特徴を有する下記の特許請求の範囲における他の組成物または化合物に及ぶことを当業者なら理解するであろう。下記および他に文献中で詳しく述べられるアッセイを使用して、各試験化合物についてこのような特徴を測定することができる。
【００５３】
他のこのようなアッセイには、組織培養プレートでの細胞の計数、または代謝アッセイによる細胞数判定、または標識した（放射化学的に例えば、３Ｈ−チミジン標識もしくは蛍光標識した）ヌクレオチドまたは免疫反応性（ＢｒｄＵ）ヌクレオチドのＤＮＡへの組込みが挙げられる。さらに、抗血管新生活性は、ラット大動脈輪などのｅｘ−ｖｉｖｏモデルにおける、内皮細胞遊走、内皮細胞の細管形成、または血管増殖によって評価し得る。
【００５４】
経口投与された場合、ＩＴＰＰは毒性がほとんどまたは完全になく、抗腫瘍および抗増殖活性を示す。ＩＴＰＰについて、Ｐ５０値（ヘモグロビンの５０％飽和でのＰ５０）の移動として測定されるヘモグロビンのＯ２親和性の減少を誘発する能力を試験した。マウスのヘモグロビンおよび全血では、ヘモグロビンでは２５０％まで、全血では４０％までのより高いＰＯ２へのＰ５０の移動が観察された。
【００５５】
マウスおよびブタにおいてＩＴＰＰで得られた結果は、血流障害の場合に赤血球による酸素送達を制御された方法で高める能力によって、治療法としての開発の可能性を強く示唆する。
【００５６】
本発明は、１ｇ／体重ｋｇの割合で静脈内にＩＴＰＰ−Ｎａを注入されたブタは、それらの系へのＩＴＰＰ−Ｎａの導入に関連した有益な特性を有することを見出した（参照により本明細書中にその全体を組み込む、米国特許仮出願第６０／５８５，８０４号に記載の通り）。しかし、ＩＴＰＰ−Ｎａの導入は、いくつかの有害な副作用ももたらした。このような副作用には、皮膚の潮紅、心拍数の増加、およびＣａ２＋血漿濃度の減少が挙げられる。
【００５７】
ＩＴＰＰは、経口、経静脈、または経腹腔で投与された場合、形成中の腫瘍形成におけるＰＯ２を高めることによって増殖中の腫瘍の血管新生を阻害する。本発明はさらに、ヒトまたは動物にＩＴＰＰの有効量を投与することによって、ヒトまたは動物の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を制御する方法を提供する。より詳細には、本発明は、ＬＬＣ細胞系でのＶＥＧＦ  ｍＲＮＡおよびタンパク質発現におけるＩＴＰＰの用量依存的効果を提供する。Ｃ５７ＢＬ／６腫瘍マウスにおけるＶＥＧＦ遺伝子発現をアッセイし、ＩＴＰＰが誘発するＶＥＧＦの下方制御の効果を測定し、細胞増殖の調節と関連付けた。本発明は、ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現、タンパク質濃度、および腫瘍細胞増殖を制御する方法の開発をもたらした。このような研究の結果は、用量依存的なＩＴＰＰが誘発するＶＥＧＦの下方制御と細胞増殖との間の強い相関関係を示し、ＩＴＰＰはＶＥＧＦが媒介する腫瘍血管新生および腫瘍細胞増殖率を減少させることができることを示唆する。したがって、ＩＴＰＰによるＶＥＧＦの下方制御は、腫瘍細胞増殖を減少させる。
【００５８】
より高いＯ２分圧へのＰ５０値の移動は、腫瘍中でＶＥＧＦをコードする低酸素遺伝子の発現を阻害する。ＶＥＧＦをコードする低酸素遺伝子の発現は、腫瘍中で血管新生が刺激を受けるのに必要である。これが起こらない場合は、血管新生は著しく阻害され、新しい血管は腫瘍中で形成されない。
【００５９】
ＶＥＧＦ発現に関して得た結果は、腫瘍中の酸素分圧の上昇は低酸素遺伝子の発現阻害の原因であるため、腫瘍中の酸素分圧はＩＴＰＰが投与されると上昇することを示唆する。この観察は非常に重要な疑問を提起する。すなわち、このＰＯ２の増加は癌細胞の有望な放射線増感剤として作用し得ないかということである。酸素は非常に有望な放射線増感剤であり、実際ＩＴＰＰによって腫瘍中のＰＯ２が増加した場合は、癌の放射線療法の有効性を高める重大な結果をもたらし得る。
【００６０】
ＩＴＰＰは、一方では血管新生の阻害剤として、他方では放射線増感剤として、固形腫瘍の治療において潜在的な重要な補助剤である。
【００６１】
軽度から中等度のアルツハイマー病の患者において、側頭葉内側の酸素代謝が著しく影響を受けることが知られている。この手がかりは、アルツハイマー病における側頭葉内側の機能障害を実証した。アルツハイマー病を患っていない対照群より、アルツハイマー病を有していることが示された患者において、側頭葉内側および頭頂葉および側頭葉外側の皮質における平均酸素代謝が著しく低いことも知られている（参照により本明細書中にその全体を組み込む、IshiiらによるJ.Nucl.Med. 37(7): 1159-65、１９９６年７月、を参照のこと）。したがって、アルツハイマー病を有していることが示された患者を治療する１つの有望な手段は、血液脳関門を通る酸素を増加させることである。これを行う１つの方法は、ＩＴＰＰのカルシウム塩などのＩＴＰＰによる治療などのヘモグロビンのアロステリックエフェクターを用いることであろう。
【００６２】
ＩＴＰＰのカルシウム塩などのＩＴＰＰの使用は、認知症の様々な形態と関連する種々の血管性疾患の治療においても役立ち得る。脳は、血液ネットワークが脳に酸素含有血液を届けることに依存しているので、脳への酸素の供給が途絶えると、脳細胞は死ぬ恐れがあり、これによって血管性認知症の症状を引き起こす場合がある。これらの症状は、急性で、脳卒中に続いて、または一連の軽い脳卒中を通じて時間の経過とともに起こり得る。したがって、様々な形態の認知症と関連する血管性疾患の患者を治療する１つの有望な手段は、血液脳関門などの患部で利用できる酸素を増加させることである。これを行うための１つの方法は、ＩＴＰＰのカルシウム塩などのＩＴＰＰによる治療などのヘモグロビンのアロステリックエフェクターを用いることであろう。
【００６３】
さらに、ＩＴＰＰのカルシウム塩などのヘモグロビンのアロステリックエフェクターによる個体の治療は、脳卒中患者および骨粗鬆症の両方に有益な効果を有し得る。脳卒中および骨が少なくなる疾患である骨粗鬆症は、通常２つの異なる健康上の問題であると考えられているが、これらの間に関連があり得ることが見出されてきた。脳卒中後生存している患者は、患者を骨折の高いリスクにおく疾患である骨粗鬆症を患う可能性が相当高い。脳卒中患者の骨折は、脳卒中によって麻痺した側の体に起こることが多い。
【００６４】
血液および酸素の脳への供給が止まる、または大幅に減少するときに脳卒中は起こることが知られている。脳の一部への栄養に富んだ血液および酸素の供給が途絶えると、脳のその部分に制御されている身体の機能（視覚、発語、歩行など）が損なわれる。米国では毎年５００，０００人を超える人々が脳卒中に罹患し、これらのうち１５０，０００人がその結果として死亡する。脳への酸素流量を増加させる１つの手段は、ＩＴＰＰのカルシウム塩の治療などのヘモグロビンのアロステリックエフェクターの使用による。したがって、脳卒中または骨粗鬆症を潜在的に患う可能性のある個体を治療する有望な方法は、例えばＩＴＰＰのカルシウム塩での個体の治療による。
【００６５】
本発明によってまた企図されることは、ＩＴＰＰの化合物もしくは薬物、またはそのプロドラッグからなるインプラントまたは他の装置であり、その薬物またはプロドラッグは、持続放出のために生分解性または非生分解性ポリマーに製剤される。非生分解性ポリマーは、ポリマー自体は分解されないが、物理的または機械的過程によって制御された方法で薬物を放出する。生分解性ポリマーは、体内の自然の過程で徐々に加水分解されまたは可溶化され、混合薬物またはプロドラッグの段階的放出を可能にするように設計される。薬物またはプロドラッグは、ポリマーに化学的に結合することができ、または混合によってポリマーに組み込むことができる。生分解性ポリマーおよび非生分解性ポリマーの両方、ならびに制御された放出のために薬物をポリマーに組み込む方法は、当業者には周知である。このようなポリマーの例は、参照により本明細書中にその全体を組み込む、BremらによるJ.Neurosurg 74: p.441〜446（１９９１）などの多くの参照文献に見出すことができる。このようなインフ゜ラントまたは装置は、送達が所望される場所、例えば、腫瘍部位の近くに移植することができる。
【００６６】
本発明の化合物に加えて、本発明の医薬組成物も、上記で言及した１つまたは複数の病態の治療において、１種または複数の有用な薬剤を含有し、あるいは（同時に、または順次に）共に投与され得る。
【００６７】
当業者であれば、レミントン薬科学（Remington’s Pharmaceutical Sciences）第１７版などの標準的な文献を参照して、どのようにこれらの製剤が作製され、どのようにそれらが投与され得るか決定できるであろう。
【００６８】
本発明のさらなる態様では、血管新生または細胞分裂促進または炎症と関連する状態の予防または治療のための、薬剤の調製のために、本発明によるＩＴＰＰ−ＣａなどのＩＴＰＰの化合物またはそのプロドラッグの使用が提供される。
【００６９】
本発明のさらなる態様では、本発明によるＩＴＰＰ−ＣａなどのＩＴＰＰの化合物またはそのプロドラッグを含む医薬組成物が、医薬として許容される担体、希釈剤、補助剤または賦形剤と共に提供される。
【００７０】
この医薬組成物は、アルツハイマー病の治療、脳卒中および／または骨粗鬆症の治療のための、血管新生または細胞分裂促進または炎症に関連する状態の予防または治療に使用し得る。
【００７１】
本発明のさらなる態様では、血管新生、あるいは細胞分裂、肥大性増殖もしくは炎症の加速度的または増加した量と関連する状態の予防あるいは治療の方法が提供され、前記方法は、このような予防または治療を必要としている患者に、本明細書に記載する本発明によるＩＴＰＰ−ＣａなどのＩＴＰＰの化合物またはそのプロドラッグの有効量を投与することを含む。前記状態の予防または治療は、前記状態の回復を含むことを理解すべきである。
【００７２】
本明細書で言及する「有効量」とは、治療的または予防的有効量を意味する。このような量は、適切な当業者であれば、治療する状態、投与経路および他の関連する要因を考慮して容易に決定することができる。このような人は、投与の適切な用量、様式および頻度を容易に決定できるであろう。本出願で参照する「個体」とは、所与の状態の治療を必要とし得る任意の動物を意味する。「個体」には、ヒト、他の霊長類、家庭のペット類、家畜、げっ歯類、他の哺乳動物、および通常獣医によって治療され得る任意の他の動物が挙げられる。
【００７３】
上記に記載した組成物は、公知の技術を用いた生理学的に許容できる製剤として提供することができ、これらの製剤は標準的な経路によって投与できる。一般に、局所、口、直腸、腹腔内または非経口（例えば、静脈内、皮下もしくは筋内）の経路によって、組み合わせたものを投与し得る。さらに、この組合せをポリマーに組み込み、このポリマーを、放出が所望される場所、例えば腫瘍箇所または治療する場所への送達が容易となるであろう腔もしくは血管の近くに埋め込んで、持続放出を可能にしてもよい。組成物の用量は、治療される状態、使用する特定の誘導体、ならびに患者の体重および状態などの他の臨床上の要因、ならびに化合物の投与経路によるであろう。しかし経口投与では、推奨用量は０．１〜５．０ｇ／ｋｇ／日の範囲である。経口投与の投与量は、０．５〜２．０ｇ／ｋｇ／日、あるいは約０．５〜約１．５ｇ／ｋｇ／日の範囲である。代替の実施形態では、経口投与の投与量は、約０．８０〜１．０ｇ／ｋｇ／日、あるいは約０．９〜１．１ｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【００７４】
本発明の製剤は、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、カシェ剤、液剤、懸濁剤、乳剤、散剤、エアゾール剤、坐薬、スプレー剤、パステル剤、軟膏、クリーム剤、ペースト剤、フォーム剤、ゲル剤、タンポン、ペッサリー、顆粒剤、ボーラス、うがい薬、または経皮貼布の形態で投与することができる。
【００７５】
この製剤は、口、直腸、鼻、吸入、（皮膚、経皮、頬側および舌下を含めた）局所、膣、（皮下、筋内、静脈内、腹腔内、皮内、眼球内、気管内、および硬膜外を含めた）非経口または吸入による投与に適切なものを含む。この製剤は、好都合には単位剤形で提供してもよく、従来の製剤技術によって調製し得る。このような技術は、有効成分および医薬担体または賦形剤を混合するステップを含む。一般にこの製剤は、有効成分を液体担体または微粉化した固体担体または両方と均一に完全に混合し、次いで必要に応じて製品を成形することによって調製される。
【００７６】
経口投与に適した本発明の製剤は、それぞれが所定の量の有効成分を含有するカプセル剤、カシェ剤または錠剤などの個別単位として；散剤または顆粒剤として；水性液体もしくは非水性液体中の液剤または懸濁剤として；あるいは水中油型液体乳剤または油中水型乳剤として、などで提供し得る。
【００７７】
錠剤は、任意選択で１種または複数の補助成分と共に、圧縮または成型によって作製され得る。圧縮錠剤は、有効成分が散剤または顆粒剤などの易流動性の形態で、結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存料、表面活性剤または分散剤と任意選択で混合して、適切な機械で圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を、適切な機械で成型することによって作製され得る。この錠剤は、任意選択でコーティングまたは刻印してもよく、錠剤中の有効成分のゆっくりとしたまたは制御された放出を可能にするように製剤してもよい。
【００７８】
口腔内での局所投与に適切な製剤には、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカントなどの香味付けされた基剤中に成分を含むトローチ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性な基剤中に有効成分を含むトローチ剤；ならびに適切な液体担体中に投与する成分を含むうがい薬が挙げられる。
【００７９】
皮膚への局所投与に適切な製剤には、医薬として許容される担体中に投与される成分を含む軟膏、クリーム剤、ゲル剤およびペースト剤として提供し得る。好ましい局所送達システムは、投与される成分を含有する経皮貼布である。
【００８０】
直腸投与のための製剤は、例えば、カカオバターおよび／またはサリチル酸を含む適切な基材を用いた坐薬として提供し得る。
【００８１】
担体が固体である経鼻投与に適切な製剤は、鼻から薬用粉末を吸入する方法、すなわち、鼻の近くに保持した散剤の容器から鼻腔を通して急速に吸入する方法で投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉体を含む。例えばスプレー式点鼻薬としてまたは点鼻剤として投与する、担体が液体である適切な製剤は、有効成分の水溶液または油性溶液を含む。
【００８２】
膣投与に適切な製剤は、有効成分に加えて、当技術分野において適切であるとして公知の担体などの成分を含有するペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤またはスプレー剤製剤として提供し得る。
【００８３】
吸入に適切な製剤は、有効成分に加えて、当技術分野において適切であるとして公知の担体などの成分を含有するミスト剤、粉剤、散剤またはスプレー剤製剤として提供し得る。
【００８４】
非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤と、緩衝液と、制菌剤と、対象とする受容者の血液と等張の製剤とする溶質とを含有し得る水性および非水性の無菌注射液；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性の無菌懸濁液を含む。この製剤は、単位用量または多回用量の容器、例えば密封されたアンプルおよびバイアルで提供されてもよく、注入のために使用直前に無菌液体担体、例えば、水を加えることのみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されて良い。即時調合注射液および懸濁液は、上記で記載した種類の無菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製されて良い。
【００８５】
好ましい単位用量製剤は、本明細書において上記で記載したような、投与される成分の１日用量または単位、１日の部分用量、あるいはその適切な画分を含有する製剤である。
【００８６】
成分、特に上記の成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類を考慮にいれると、当技術分野で従来の他の剤を含み得ることを理解すべきである。例えば、経口投与に適した製剤は、製剤をより口当たりよく、容易に飲み込めるようにするため、香味剤または他の剤を含み得る。
【実施例】
【００８７】
実験
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験のために、ＩＴＰＰを脱イオン水に溶解し、ｐＨをｐＨ７に調節し、全血とのインキュベーションのためにＩＴＰＰ溶液の容量オスモル濃度を、グルコースで２７０〜２９７ｍＯｓＭに調節した。ヘモグロビンとＩＴＰＰとの混合物を、混合直後にHEMOX analyzer（PD Marketing, LONDON）で分析した。赤血球をＩＴＰＰと３７℃で１時間インキュベーションした。インキュベーション後に、細胞をＢｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ＝７．０）で３回洗浄し、次いでＰ５０測定のために使用した。
【００８８】
ＩＴＰＰを経口投与したｉｎ  ｖｉｖｏで行われた実験において、循環ＲＢＣのＰ５０値の有意な移動が観察された。ＩＴＰＰを飲料水に２０ｇ／Ｌ濃度（＝２７ｍＭ、ｐＨ〜７．０）に溶解し、適宜飲用に供した。
【００８９】
下記の実施例は、本発明を例示するが、それを限定するものではない。したがって、修正が行われる場合があり、それも本発明の趣旨および範囲内にあるという了解のもとでこれらの実施例を提示する。
【００９０】
（実施例１）
マウスにおけるＯ２−ヘモグロビン解離曲線（ＯＤＣ）の誘発された右方移動（経口投与）
１２匹（１２）のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＩＴＰＰ溶液（２０ｇ／Ｌ濃度＝２７ｍＭ、ｐＨ〜７．０）を４日間与えた（２４時間につき２５ｍｌまで）。３匹（３）の対照マウスは純水を摂取し、４匹（４）の対照マウスにはミオイノシトール６リン酸（ＩＨＰ）溶液（ＩＴＰＰと同じ濃度およびｐＨ）を与えた。Ｐ５０値を測定するために、全てのマウスから、０日目（処置が開始される前）、ならびに１日目、２日目、４日目、６日目、７日目、８日目、１０日目、１１日目および１２日目（処置が開始された後）に血液を採取した。
【００９１】
結果
ＩＴＰＰの経口適用は、マウスのＰ５０の有意な右方移動（３１％まで）をもたらした。
【００９２】
ＩＴＰＰを２７ｍＭの濃度で経口投与すると、マウスの循環赤血球のＰ５０値の右方移動をもたらす（図２を参照のこと。）。最大移動が得られる前に約４８時間のタイムラグがある。最大のＰ５０移動は、ＩＴＰＰの経口投与の開始後２日目から４日目の間に得られる。摂取を４日目に止めた場合は、１２日後にＰ５０値は対照値に戻る。ＩＴＰＰ摂取は赤血球数への有意な効果がある。理論に縛られることは望まないが、赤血球形成の下方制御が見られる赤血球数へのＩＴＰＰ摂取の効果は、上昇したＰ５０のためであると考えられている。赤血球の溶解はｉｎ  ｖｉｔｒｏではけっして起こらなかったので、溶血は除外することができる。マウスのナトリウムおよびカリウムおよびカルシウムなどのイオン濃度は、ＩＴＰＰの経口適用後は正常であった（図３）。図３は、ＩＴＰＰ（４匹のマウス）、ＩＨＰ（３匹のマウス）または水（３匹のマウス）の経口投与後０日目、７日目および１１日目に得た、ナトリウム、カリウムおよびカルシウムの血清濃度の平均値およびＳＤを含む。
【００９３】
０日目、７日目および１１日目に、全てのマウスから血球数を測定した。ＩＴＰＰを摂取したマウスの赤血球数は減少した。異なる群のマウスの血液中の白血球数（例えば、顆粒球、マクロファージなど）には有意な差異はなかった。図４は、対照と比較した、移動したＯＤＣのマウスのＲＢＣ数を示す。図４はさらに、ＩＴＰＰを受けたマウスのＰ５０移動（％）と赤血球数／ｍｍ３の関係を示す。予備データに基づくと、赤血球数およびそれらのＰ５０値移動の間に反比例関係が存在するように見える。赤血球数の基礎値は、一度ＩＴＰＰの摂取１２日後にΔＰ５０が０％になると回復する。
【００９４】
（実施例２）
マウスにおけるＯＤＣの誘発された右方移動（腹腔内注入）
ＩＴＰＰ（ｐＨ７、２００μｌ）がマウスの腹腔内に注入された場合、循環赤血球のＰ５０値は２３％まで移動した。図５は、ＩＴＰＰは１５０ｍＭの濃度までマウスにおいて良好に忍容性を示す。ナトリウム、カリウムおよびカルシウムなどのイオン濃度は、腹腔内注入後は正常であった。６匹（６）のマウスには、それぞれＩＴＰＰを４５〜１５０ｍＭ（＝０．１７〜０．８８ｇ／体重ｋｇ）を腹腔内注入した。移動（％）および標準偏差の平均値を図５に示す。
【００９５】
ＩＴＰＰによって誘発されたＰ５０移動の濃度依存性は、この化合物が赤血球膜を通過することをさらに示している。
【００９６】
（実施例３）
子ブタにおけるＯＣＤの誘発された右方移動（静脈内注入）
ＩＴＰＰを子ブタにも静脈内（ＩＶ）注入した。化合物が１ｇ／ｋｇ体重の用量で注入されたときに、Ｐ５０の右方移動が観察された。
【００９７】
ＩＴＰＰの可能性のある副作用を調べるために、注入を受けた子ブタの血清中のカルシウムの濃度を測定した。注入直後の動物の血液中のＣａ２＋濃度の大幅な減少は、Ｃａ２＋を結合した３個の解離性リン酸基と共に、ＩＴＰＰが血液中の自由イオンとしてのその利用可能性を減少させる可能性を示した。注入の１日後に、子ブタ血液のＣａ２＋濃度は正常値に回復した。これらの結果を表１に示す。
【表１】
2008535804.tif 000002
【００９８】
この観察に基づいて、ＩＴＰＰの解離性リン酸基が飽和となるように、ＣａＣｌ２（ＩＴＰＰと等モル）溶液をＩＴＰＰ溶液と共に注入した。以前に観察された副作用はいずれも観察されなかった。カルシウム濃度は一定で、Ｐ５０移動は再び基準値の約２０％であった。ナトリウムおよびカリウムイオン濃度は、子ブタへのＩＴＰＰの静脈内注射後変化がなかった。
【００９９】
（実施例４）
腫瘍内ＰＯ２、血管新生およびＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現における、ＩＴＰＰによるヘモグロビンのＯ２親和性のｉｎ  ｖｉｖｏでの低下の効果
ＩＴＰＰを経口、静脈内、または腹腔内投与した場合、形成中の腫瘍のＰＯ２を増加させることによって増殖腫瘍内の血管新生を阻害する。３０匹（３０）のＣ５７ＢＬ／６マウスに、Ｐ５０値が対照値を少なくとも２０％上回る移動を示すまで、２０ｇ／ＬのＩＴＰＰを経口摂取させた。その後、全ての動物は、背側腔に注入された１×１０６のルイス肺癌（ＬＬＣ）細胞を受けた。異なる時点で、マウスの両群で増殖する腫瘍中のＶＥＧＦ  ｍＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲでアッセイした。
【０１００】
腫瘍組織試料を、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Roche, Reinach, スイス）を補足したＲＩＰＡ溶解緩衝液（１％ Nonidet ｐ−４０界面活性剤、５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール）中で粉砕した。４℃および１２，０００ｇで１０分間の遠心分離後に、組織抽出物のタンパク質濃度をブラッドフォード法によって測定した。界面活性剤に可溶なタンパク質試料（１０ｍｇ）を、１０％ビスアクリルアミドゲル中のＳＤＳ−ＰＡＧＥで大きさにより分離し、ニトロセルロース膜（Protran BA 85, Schleicher and Schuell, Dassel, ドイツ）に移した。１：２００の希釈度でヒト、マウスおよびラットの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ  Ａ−２０、ｓｃ−１５２、Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, カリフォルニア州）を認識するウサギポリクローナル抗体と４℃で一晩インキュベーションする前に、０．１％を含有するトリス緩衝生理食塩水中の１０％脱脂乳中で、室温で３時間膜をブロッキングした。次いで、膜を室温で６０分間抗ウサギ（１：１６，０００）ペルオキシダーゼコンジュゲート（Sigma-Aldrich, L’Isle d’Abeau Chesnes, フランス）で一次抗体についてプローブした。得られた複合体を強化化学発光のオートラジオグラフィー（Amersham Pharma Biotech, Orsay, フランス）によって可視化した。
【０１０１】
両群のＶＥＧＦ遺伝子のｍＲＮＡの濃度に差異があった。図６は、対照およびＩＴＰＰ摂取動物からの腫瘍中のＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ濃度を示すアガロースゲルを示す。ＬＬＣ細胞の接種後１５日目（トラック１：対照、トラック２：ＩＴＰＰ処置動物）および接種後３０日目（トラック３：対照動物、トラック４：ＩＴＰＰ処置動物）にそれぞれ２匹のマウスから採取した腫瘍組織からのＶＥＧＦ  ｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲアガロースゲルアッセイである。図７は、対照およびＩＴＰＰ処置ＬＬＣ担癌動物の腫瘍中で発現したＶＥＧＦのウエスタンブロットアッセイを示す。
【０１０２】
ゲルアッセイの定量化によって、９日目に、ＩＴＰＰを摂取した動物の腫瘍中に検出されたＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの量が１０，０００分の１に減少したことが示され、次いで処置動物および未処置動物間の差異はあるが、それらは減少する傾向であることが示された。これは循環赤血球に取り込まれるＩＴＰＰは腫瘍ＰＯ２を有意に増加させることを示す。
【０１０３】
（実施例５）
ミオイノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩の有効性
ミオイノシトールトリピロリン酸−ナトリウム塩（ＩＴＰＰ−Ｎａ）をＣａＣｌ２と混合すると、ＩＴＰＰ−ＮａおよびＩＴＰＰ−Ｃａ（ミオイノシトールトリピロリン酸カルシウム塩）の混合物が得られる。この混合物を、遊離ヘモグロビンまたは全血に加えた場合、それぞれ下記の表２および３に示すように、１７０％および２５％のＰ５０移動を誘発する。化合物１５について表２および３の結果を参照されたい。表２および３の化合物は下記の通りである。４はＩＴＰＰのピリジニウム塩、５はＩＴＰＰのナトリウム塩（すなわち、ＩＴＰＰ−Ｎａ）、７はＩＴＰＰのＮ，Ｎ−ジメチルシクロヘキシルアンモニウム塩、１１はＩＴＰＰのシクロヘプチルアンモニウム塩、１２はＩＴＰＰのシクロオクチルアンモニウム塩、１３はＩＴＰＰのピペラジニウム塩、１４はＩＴＰＰのトリピペラジニウム塩、および１５はＩＴＰＰのカルシウム塩（すなわち、ＩＴＰＰ−Ｃａ）である。
【０１０４】
表２および３において、ヘモグロビンのアロステリックエフェクターとして作用する能力に関してＩＴＰＰの全ての塩の有効性が見出すことができる。ＩＴＰＰのナトリウム塩およびカルシウム塩が、遊離ヘモグロビン（表２）および全血（表３）の両方にとって最良のアロステリックエフェクターのように見える。しかし、１ｇ／体重ｋｇの割合で静脈内にＩＴＰＰ−Ｎａを注入されたブタには、いくつかの有害な副作用をもたらした。ブタへのＩＴＰＰ−Ｎａの静脈内注射は、皮膚の紅潮、心拍数増加、および２．３８ｍｍｏｌ／Ｌから１．７６ｍｍｏｌ／ＬへのＣａ２＋血漿濃度減少をもたらした。
【０１０５】
同用量のＩＴＰＰのナトリウム塩およびカルシウム塩の混合物の投与は、前述の影響のいずれも誘発せず、Ｃａ２＋血漿濃度は２．３８ｍｍｏｌ／Ｌで変わらないままであった。
【０１０６】
Ｎａ＋およびＣａ２＋ＩＴＰＰ塩の混合物に毒性がないことが、下記に記載するＩＴＰＰ  Ｃａ２＋塩の合成および精製を誘導した。Ｃａ２＋ＩＴＰＰ塩は、ナトリウム塩のように純粋なヘモグロビン中または赤血球中で必ずしもアロステリックエフェクターではない（表２および３を参照のこと。）一方で、カルシウム塩を１つまたは複数の個体に投与したときに、ナトリウム塩と関連する有害な副作用のどれも有しなかった。その結果、ＩＴＰＰのカルシウム塩は、特別な利益があるものとして見出され、さらなる研究が行われた。
【０１０７】
（実施例６）
ミオイノシトール１，６：２，３：４，５−トリピロリン酸のカルシウム塩の調製
参照によりその全体を本明細書に組み込む、K.C.Fylaktakidou, J.M.Lehn, R.GreferathおよびC.Nicolau, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, ２００５、15, 1605〜1608に記載されるように、ミオイノシトールトリピロリン酸のヘキサナトリウム塩およびヘキサピリジニウム塩（ＩＴＰＰ−ＮａおよびＩＴＰＰ−ｐｙ）を、ミオイノシトール６リン酸（ＩＨＰ）から得る。ミオイノシトールトリピロリン酸の他の塩も、Fylaktakidouらの参照文献に従って作製することができる。フィチンの説明のために、これも参照によりその全体を本明細書に組み込む、L.F.JohnsonおよびM.E.Tate, Can.J.Chem., １９６９、47, 63も参照されたい。
【０１０８】
他の化合物を上記の化合物から作製することができる。例えば、ＩＴＰＰ−ｐｙの水溶液をイオン交換Dowex Ｈ＋カラムに通すことによって、ミオイノシトールトリピロリン酸の対応する過剰プロトン化形態（すなわち、ＩＴＰＰ−Ｈ）の溶液となる。
【０１０９】
３当量の水酸化カルシウム（ピロリン酸基当たり１当量）によるＩＴＰＰ−Ｈの処理によって、トリカルシウム塩ＩＴＰＰ−Ｃａが生じ、これは次いでロータリーエバポレーター（すなわち、ロトバップ(rotovap)）の使用などの、減圧下での水溶液の蒸発によって単離することができる。
【０１１０】
あるいはＩＴＰＰ−Ｃａは、ＩＴＰＰ−Ｎａの水溶液に等モル量のＣａＣｌ２を加えることによって生成させることができる。得られた混合物は、ＮａＣｌが混入したＩＴＰＰ−Ｃａとなる。
【０１１１】
したがって一実施形態では、本発明は、イノシトールトリピロリン酸が任意選択でミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸である、イノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩に関する。ミオイノシトールトリピロリン酸のリチウム塩、ベリリウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、バリウム塩、ルビジウム塩およびセシウム塩などの、ミオイノシトールトリピロリン酸の他の塩を作製することができ、しがたってそれらは本発明の範囲内に含むことを意図する。このような塩は、ミオイノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩と組み合わせて使用することができる。あるいは、このような塩の混合物を作製でき、またはそれらはミオイノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩なしで使用することができる。
【０１１２】
他の実施形態では、本発明は、イノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩およびその医薬として許容される補助剤、希釈剤、担体、または賦形剤を含む医薬組成物に関する。この医薬組成物において、イノシトールトリピロリン酸は、任意選択でミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸である。代替の実施形態では、本発明の組成物はまた、ミオイノシトールトリピロリン酸のナトリウム塩も任意選択で含有し得る。ここに挙げられる物だけに限定されないが、ピリジニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロヘキシルアンモニウム塩、シクロヘプチルアンモニウム塩、シクロオクチルアンモニウム塩、ピペラジニウム塩およびトリピペラジニウム塩を含めた他のミオイノシトールトリピロリン酸塩は、ミオイノシトールトリピロリン酸のカルシウム塩と共に使用し得ることを意図しており、したがって本発明の範囲内に含む。
【０１１３】
一実施形態では、上記の組成物は、ミオイノシトールトリピロリン酸として、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸を含む。この組成物は、癌を治療する投与量に任意選択で調製される。治療可能な癌は、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、神経芽細胞腫、および／または骨肉腫が挙げられるが、これらだけに限定されない。さらに、治療される癌には、乳癌、疲弊癌、腎細胞癌、脳腫瘍、卵巣癌、結腸癌、膀胱癌、膵癌、胃癌、食道癌、皮膚黒色腫、肝臓癌、肺癌、睾丸癌、腎臓癌、膀胱癌、子宮頚癌、リンパ腫、副甲状腺癌、陰茎癌、直腸癌、小腸癌、甲状腺癌、子宮癌、ホジキンリンパ腫、口唇癌および口腔癌、皮膚癌、白血病、または多発性骨髄腫のうちの１種または複数を、任意選択で含み得る。
【０１１４】
一実施形態では、本発明の組成物は、１日当たり約０．５〜１．５ｇ／ｋｇ、および任意選択で約０．９〜１．１ｇ／ｋｇが有効量で送達されるように、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸（この化合物のカルシウム塩など）の投与量を送達する、上記で列挙した任意の方法で調製される。
【０１１５】
他の実施形態では、本発明はミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸カルシウム塩を作製する方法に関し、この方法は、有機化合物を含有するカルシウム塩をミオイノシトールトリピロリン酸の過剰プロトン化形態に加えるステップを含む。一実施形態では、有機化合物を含有するカルシウム塩は、水酸化カルシウム、塩化カルシウム、臭化カルシウム、ヨウ化カルシウム、およびフッ化カルシウムの１種または複数である。一実施形態では、この方法は、過剰プロトン化ミオイノシトールトリピロリン酸化合物の量と比較して、少なくとも３対１の比率の有機化合物を含有するカルシウムを加えることを含む。したがって、一実施形態では、この方法は、過剰プロトン化ミオイノシトールトリピロリン酸化合物の量と比較して、少なくとも３対１の比率の水酸化カルシウムを加えることを含む。
【０１１６】
他の実施形態では、本発明は、上記で列挙した組成物のいずれかの医薬として許容される量を個体に投与することを含む癌を治療する方法に関し、この組成物中の有効成分（すなわち、ＩＴＰＰ）は約０．５および１．５ｇ／ｋｇか、またはその代わりに、１日当たり約０．９〜１．１ｇ／ｋｇの投与量で、個体に投与される。
【０１１７】
他の実施形態において、本発明は、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩単独、または上記で列挙したＩＴＰＰの塩の１つと組み合わせて、有効量を個体に投与することを含む、ヘモグロビンＰ５０値をより高い酸素分圧値に移動させる方法に関する。この方法では、ミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩は、組成物の一部として任意選択で投与され、この組成物は、補助剤、希釈剤、担体、または賦形剤の１種または複数を任意選択で含有する。この組成物中のミオイノシトール１，６：２，３：４，５トリピロリン酸のカルシウム塩は、約０．５および１．５ｇ／ｋｇの投与量か、またはその代わりに、１日当たり約０．９〜１．１ｇ／ｋｇの投与量で投与される。あるいは、ＩＴＰＰ−Ｃａと組み合わせて他のＩＴＰＰ塩が使用される場合は、（全ての塩の形態からの）ＩＴＰＰの全投与量は、１日当たり約０．５および１．５ｇ／ｋｇの投与量で、またはその代わりに、１日当たり約０．９〜１．１ｇ／ｋｇの投与量で送達され得る。
【０１１８】
他の実施形態では、本発明の組成物は、ＩＴＰＰのカルシウム塩などのＩＴＰＰ塩の有効量を送達することによって、アルツハイマー病、脳卒中、および／または骨粗鬆症のいずれかを治療するために使用することができる。
【０１１９】
特定の組成物、発見法、活性源、および有効性の提案などを参照して本発明を説明してきたが、本発明がこのような例示的な実施形態または機構によって限定されることは意図されず、添付の特許請求の範囲に定義される本発明の範囲または趣旨を逸脱することなく変更を加えることができることは、当業者には明らかであろう。全てのこのような明らかな改変および変形は、添付の特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内に含むことを意図する。任意の実施形態からの上記に記載した１つまたは複数の任意の要素は、任意の他の実施形態の１つまたは複数の任意の要素と組み合わせられることを理解すべきである。さらに、範囲について言及している場合、この範囲内に入る任意の実数は、意図する終点であることを意図していることを理解すべきである。例えば、０．９〜１．１ｇ／ｋｇの範囲が与えられている場合、この範囲内に入る任意の実数値（例えば、０．９５４〜１．０５２ｇ／ｋｇ）は、このような値が明示的に述べられていなくても、本発明の亜属の範囲として意図することを、意図している。本明細書において参照されている全ての参照文献は、参照によりその全体を組み込む。最後に、上記の説明は本発明を限定するものと解釈されず、本発明は、むしろ上記の特許請求の範囲によって定義されるべきである。
【表２】
2008535804.tif 000003
【表３】
2008535804.tif 000004
【０１２０】
（参照文献）
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【図面の簡単な説明】
【０１２１】
【図１】イノシトール−トリピロリン酸（ＩＴＰＰ）のカルシウム塩の化学構造を示す。
【図２】ＩＴＰＰを４日間摂取したマウスのＯ２−ヘモグロビン解離曲線（ＯＤＣ）の誘発された右方移動の時間経過、ならびに対照動物における有意なＰ５０移動の欠如を示す。
【図３】マウスにおいてＩＴＰＰの経口適用後に、ナトリウムおよびカリウムおよびカルシウムなどのイオン濃度が正常であったことを示す。
【図４】ＩＴＰＰを摂取したマウスにおいて、Ｐ５０移動（％）と赤血球数／ｍｍ３の関係を示す。
【図５】マウスにおける１５０ｍＭの濃度までのＩＴＰＰ耐性を示す。ナトリウム、カリウムおよびカルシウムなどのイオン濃度は、腹腔内（ｉｐ）注入後は正常であった。
【図６】対照およびＩＴＰＰ摂取動物からの腫瘍中のＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ濃度を示すアガロースゲルを示す。
【図７】対照およびＩＴＰＰ処置ルイス肺癌（ＬＬＣ）担癌動物の腫瘍中に発現したＶＥＧＦのウエスタンブロットアッセイを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2008535804.tif 000009
【図６】
2008535804.tif 000010
【図７】
2008535804.tif 000011
【国際調査報告】
2008535804.tif 000012
2008535804.tif 000013