(57)【要約】  本発明は、簡単に官能基化されたグルコサミン等の糖から、中性で、低分子量の９９ｍＴｃでラベル化された、及び１８６Ｒｅでラベル化された、高い放射化学的収率の炭水化物錯体の製造方法若しくは調製方法を提供する。具体的には、上記合成は、フェロセン化合物をレニウム若しくはテクネチウムのトリカルボニル錯体へと変換するシングル・リガンド・トランスファー（ＳＬＴ）若しくはダブル・リガンド・トランスファー（ＤＬＴ）反応を利用している。当該フェロセン化合物は、例えば、チオ、アミノ、及びアルコールの機能を含む各種機能性基を介して糖と繋がっており、水可溶性及び比較的水に不溶な化合物の両方を含む、幅広い範囲の、放射性同位体でラベル化された糖錯体を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖前駆体を合成する工程と、
キレート配位子を合成する工程と、
上記糖前駆体とキレート配位子とを反応させ、糖−金属錯体を形成する工程と、
上記糖−金属錯体を放射性同位体によりラベル化させ、放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体を得る工程とを含む、放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【請求項２】
上記放射性同位体が９９ｍＴｃ若しくはＲｅ同位体からなる群より選択される、請求項１に記載の放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【請求項３】
上記糖−金属錯体が二座若しくは三座配位子系を含む、請求項１に記載の放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【請求項４】
上記キレート配位子が鉄（Ｆｅ）を含む、請求項１に記載の放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【請求項５】
上記キレート配位子がフェロセンである、請求項１に記載の放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【請求項６】
放射性同位体でラベル化された上記糖−金属錯体が水溶性である、請求項１に記載の放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【請求項７】
放射性同位体でラベル化された上記糖−金属錯体が水不溶性である、請求項１に記載の放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、放射性同位体でラベル化された糖−金属錯体の合成方法、並びに該方法により得られる放射性標識化物質に関するものである。
【０００２】
〔背景技術〕
放射性同位体でラベル化された炭水化物は、２−１８Ｆ−フルオロ−２−デオキシ−グルコース（ＦＤＧ）のポジトロンＣＴ（ＰＥＴ）における造影剤としての成功によって、核医学への応用に対する関心が増しつつある。ＦＤＧの成功は、ある部分、ＦＤＧがヘキソキナーゼの基質であり、グルコース代謝を受けるため、心臓の能力（cardiac viability）及び腫瘍の両方を画像化することができるという有用性に起因している。この成功は、ＦＤＧと同様の特性及び有用性を有する、単一光子放出グルコース類似体（single-photon emitting glucose analog）が、単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）として使用することができるかどうかという疑問を引き起こした。１８Ｆの比較的短い半減期（１１０分）のため、加速器を備えたごく近接した化学実験室内の施設や医療施設にその使用は限定されていた。その結果、１８Ｆの使用は、医療への応用に幅広く利用するには実用的ではないＦＤＧ法として提供されていた。
【０００３】
比較すると、９９ｍＴｃ（恐らくＳＰＥＣＴ用途に最も利用されている同位体）は９９Ｍｏ発生器からＮａ９９ｍＴｃＯ４として製造され、幅広く入手することができ、比較的安価である。テクネチウムの第三周期遷移金属類似体であるレニウムは、テクネチウムと同様の化学的性質を有し、治療的核医学に応用可能な物理的性質を有する、粒子放射する放射性同位体を含んでいる。このような理由により、ＦＤＧの生体配分（biodistribution）並びにレニウム化合物類似体の治療的潜在能力を模倣する９９ｍＴｃ  ＳＰＥＣＴトレーサーは特に有用かもしれない。９９ｍＴｃは画像化用途に幅広く利用されているが、トレーサーを調整することに関する解決すべき厄介な１つの問題として、この同位元素をキレート若しくは有機金属結合を介して分子に取り付けなければならず、これにより研究は困難を極めている。
【０００４】
幅広く利用される、９９ｍＴｃのような同位元素をベースとしたＳＰＥＣＴ類似体により、これらの物質は医学界で広く利用できるようになるだろう。Ｔｃと同じ列の元素の中で、同位体１８６／１８８Ｒｅもまた治療方針の発展において望みがある。治療的に有用な、β−を放射する放射元素としては、半減期が１２時間〜５日であることが好ましい。また、１ＭｅＶβ−粒子の組織への浸透の深さは、およそ５ｍｍである。さらには、β−粒子の崩壊の一部は、１００〜３００ｋｅＶガンマ光子の放射を伴い、この放射元素の振る舞いは、都合が良いことにガンマカメラを使用することにより追跡することができる。１８６／１８８Ｒｅの上記核特性は、これらの目的とよく合致している。
【０００５】
これらのことについては相当な興味が持たれており、神経学、心臓学、並びに腫瘍学における造影剤及び／又は治療剤として使用することができる放射性金属（radiometal）、炭水化物誘導体の改良が必要とされている。特に、糖−フェロセニル若しくは糖−キレート誘導体を経由した９９ｍＴｃ、１８６／１８８Ｒｅでラベル化された糖の合成方法の確立について興味が持たれている。
【０００６】
最近、ＳＰＥＣＴによる脳及びその他の臓器の撮像に用いられる、９９ｍＴｃでラベル化された、若しくは１８６／１８８Ｒｅでラベル化された有機医薬（例えば、ステロイド、トロパン、ペプチド等）の合成について幾つか報告がなされている。これらの中で最も成功した試みは、パーキンソン病の患者の撮像に有用な、ドーパミン再摂取抑制剤である、９９ｍＴｃ−ＴＲＯＤＡＴを作り出したことである。この化合物は、運動性疾患を観察するためのＰＥＴ造影剤として用いられる、１８Ｆ及び１１Ｃでラベル化されたトロパン類似体の研究の副産物である。幾つかの総合施設の研究者は、ドーパミン作用系を観察するためのトロパンＰＥＴ造影剤の開発を数年に亘って取り組んできた。９９ｍＴｃ類似体を合成する上記業績を進展させることにより、上記研究をＳＰＥＣＴを用いる医学界において幅広く利用させることができる。驚くことに、比較的高分子量である、Ｔｃ−ＢＡＴ（ビス（アミノエタンチオール））金属錯体（Ｃ４Ｈ１２Ｎ２Ｓ２ＯＴｃ）のトロパン誘導体への取り付けは、受容体の薬物に対する結合能力を無効化しない。
【０００７】
〔発明の簡単な説明〕
本発明は、簡単に官能基化されたグルコサミンから、中性で、低分子量の９９ｍＴｃでラベル化された、及び１８６Ｒｅでラベル化された、高い放射化学的収率の炭水化物錯体の製造方法若しくは調製方法を提供する。
【０００８】
〔実施形態の詳細な説明〕
クロム−トリカルボニル部分がステロイドの芳香族環、若しくはシクロペンタジエニルクロムトリカルボニルのペンダント基として１７α位に取り付けられている、β−エストラジオール誘導体のレニウムカルボニル錯体は、エストラジオール受容体に対する高い親和性を有することが示されている。９９ｍＴｃでラベル化されている、５−ＨＴ１Ａセロトニン脳受容体配位子の合成もまた、分子の中性二座配位子アミン配位子（Ｎ^Ｎ’）部位のキレート化により取り付けられるテクネチウム−トリカルボニル部位により成されている。
【０００９】
９９ｍＴｃの医薬以外の使用としては、以下に示すように、フェロセン化合物をレニウム若しくはテクネチウム−トリカルボニル錯体へ変換する、ダブル・リガンド・トランスファー（double ligand transfer（ＤＬＴ））（合成Ｉ）若しくはシングル・リガンド・トランスファー（single ligand transfer（ＳＬＴ））（合成II及び合成III）を実現するための手法を使用する、シクロペンタジエニルトリカルボニル−［９９ｍＴｃ］−トロパン結合によるラベル化がある。
【００１０】
【化１】
2008512360.tif 000002
放射能を有するＲｅ及びＴｃの化学形態としては、ＲｅＯ４−若しくはＴｃＯ４−のみが利用可能であるため、多くのレニウム及びテクネチウム放射性医薬品は、＋５酸化状態の金属を有する無機錯体である。ＤＬＴ及びＳＬＴ反応は、同位体の過レニウム酸塩及び過テクネチウム酸塩型から、（シクロペンタジエニル）トリカルボニルテクネチウム及び（シクロペンタジエニル）トリカルボニルレニウムの有機金属放射性医薬品を形成することの可能性を広げる。ＤＬＴ反応は条件が厳しいため、以下（合成ＩＶ）に示すような間接的なアプローチを用いることにより、Ｔｃ若しくはＲｅとの糖−Ｃｐ錯体の合成が達成されている。
【００１１】
＜間接的ＤＬＴ＞
【００１２】
【化２】
2008512360.tif 000003
【００１３】
しかしながら、ＳＬＴ反応を適用することにより、５０〜７０％の放射化学的収率で、以下に示すようなＩＳＯＬＩＮＫボラノカルボネートキット（ＩＳＯＬＩＮＫ boranocarbonate kit）を用いることによりＴｃの糖−金属Ｃｐ誘導体を合成することが可能である。
【００１４】
【化３】
2008512360.tif 000004
【００１５】
フェロセンは、そのシクロペンタジエニル環の１つ若しくは両方に、様々な各種機能を付与して合成することができる。その結果、フェロセニル−糖結合体（例えば、以下に示す１２の結合を含む）を首尾よく調製することができる可能性がある。
【００１６】
【化４】
2008512360.tif 000005
【００１７】
フェロセンは、糖上に存在しているチオ、アミノ、及び／又はアルコール機能性基（functionalities）を介して糖と結合している。上記糖は、有機可溶性フェロセン誘導体を生じる、完全に保護された状態であるか、水溶性結合体を生じる保護されてない状態である。
【００１８】
〔金属キレートを介したＴｃ及びＲｅ−糖〕
シッフ塩基錯体ベースの多数の糖−金属キレートは、以前はサリチルアルデヒド若しくは３−アルデヒド−サリチル酸と、グルコサミン誘導体とから合成されていた。このような配位子を用いることにより、金属としてＣｕ，Ｚｎ及びＣｏを用いた多数の錯体を形成することが可能であった。このような錯体の一般的な例を以下に示す（尚、Ｍは金属を表す）。
【００１９】
【化５】
2008512360.tif 000006
【００２０】
近年の取り組みにより、二座及び三座配位子系で配位するｆａｃ-［９９ｍＴｃ／Ｒｅ−（ＣＯ）３］＋部位の適用により、炭水化物を９９ｍＴｃ及びＲｅ同位体によりラベル化することができることが実証されている。
【００２１】
我々のアプローチは、グルコースに、その後行われる反応によって放射性同位体９９ｍＴｃ若しくは１８６／１８８Ｒｅと結合する、ペンダントキレート配位子を取り付けるものである。あるいは、金属キレートを機能させた後に、グルコースに取り付けることも可能である。ＦＤＧの特性を模倣するため、グルコース分子の特性におけるトレーサー基の効果は最小限度に抑えることが絶対に必要である。９９ｍＴｃでラベル化された現存するグルコース誘導体は、イオンであるか、それとも比較的高い分子量（すなわち、２つのグルコール部位を有している）であるため、この基準は満たさない。多目的に使える低原子価のｆａｃ-{Ｍ（ＣＯ）３}コア（Ｍ＝９９ｍＴｃＩ若しくは１８６ＲｅＩ）は、これらの取り組みにより用いられていた。表面配位した（facially coordinated）カルボニル配位子は、Ｔｃ＋１の酸化状態を安定化させるため、Ｔｃ及びＲｅの他の中間の酸化状態を安定化することを要求する、複雑な（多くの場合、大環状の）多座構造は除外される。単一なＮ及びＯドナーを有する中性の錯体の中で、ｆａｃ-｛Ｍ（ＣＯ）３コアは、生物系で有利である中程度の親油性を有している。
【００２２】
グルコサミン（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）は、アミンが潜在的な配位箇所として、並びに更なる機能化のための有効なターゲットとして作用するため、グルコシル配位子のための非常に魅力的な骨格である。更には、文献の中で、Ｎを機能化したグルコサミンは、ＧＬＵＴｓ（グルコーストランスポーター）及びヘキソキナーゼ（機能性基が大きい場合であっても、ＦＤＧｓの代謝と最も密接に結びついた酵素）は活性を示すことが示唆され、立証されている。
【００２３】
全ての溶媒及び化学物質（Fisher，Aldrich）は、試薬グレードを用い、明記しないとき以外は更なる精製は行っていない。ＨＬ１
【化６】
2008512360.tif 000007
及び［ＮＥｔ４］２［Ｒｅ（ＣＯ）３−Ｂｒ３］を、従来公知の手法に従って調製した。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ−４００により、４００．１３２及び１００．６２３ＭＨｚでそれぞれ記録した。調製した該化合物のケミカルシフトの帰属を下記表１に示す。
【００２４】
＜ＨＬ２及び［（Ｌ２）Ｒｅ（ＣＯ）３］のα−アノマーについての１Ｈ及び１３Ｃ｛１Ｈ｝ＮＭＲデータ（ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ（ｐｐｍ））＞
【００２５】
【表１】
2008512360.tif 000008
【００２６】
質量スペクトル（＋イオン）は、ＭａｃｒｏｍａｓｓＬＣＴ（エレクトロスプレーイオン化、ＥＳＩ）を用い、希薄メタノール溶液により求めた。元素分析は、Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ分析機器を用い、ブリティッシュ・コロンビア大学化学科で行われた。ＨＰＬＣ分液は、K-2501 absorption detector、Kapintek radiometric well counter、Synergi 4μm C-18 Hydro-RP analytical column（寸法：250´4.6mm）を備えた、Knauer Wellchrom K-1001 HPLCにより行った。ＨＰＬＣの溶媒は、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液（溶媒Ａ）及びアセトニトリル（溶媒Ｂ）からなる。サンプルは、リニアグラジエント法（３０分間で１００％溶媒Ａから１００％溶媒Ｂ）により分析を行った。このＨＰＬＣ分析の結果は図１に示す。
【００２７】
〔Ｎ−（２’−ヒドロキシベンジル）−２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（ＨＬ２）の合成〕
Ｎ−（２’−ヒドロキシベンジル）−２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（ＨＬ２）は、次のようにして合成した。ＨＬ１（１．００ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解させ、１０％Ｐｄ／Ｃ  ｗ／ｗ（５０ｍｇ）を該溶液に加え、反応混合物を作製した。この反応混合物を、加圧Ｈ２雰囲気下（５０ｂａｒ）で２４時間攪拌を行い、その後、濾過で清澄化させ、溶媒をエバポレートさせることにより、以下に示すＨＬ２（０．９８ｇ、９８％）を得た。Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ６・Ｈ２Ｏの計算値は、C, 51.48; H, 6.98; N, 4.62であり、分析値はC, 51.50; H, 6.81; N, 4.60であり、計算値とよく合致していた。
【００２８】
【化７】
2008512360.tif 000009
【００２９】
〔トリカルボニル（Ｎ−（２’−ヒドロキシベンジル）−２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）レニウム（Ｉ）（ＲｅＬ２（ＣＯ）３）の合成〕
以下に示す、トリカルボニル（Ｎ−（２’−ヒドロキシベンジル）−２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）レニウム（Ｉ）（ＲｅＬ２（ＣＯ）３）は、［ＮＥｔ４］２［Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３］（２００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、ＨＬ２（７４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム三水和物（４０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を水（７ｍＬ）に溶解させ、攪拌下で２時間かけて５０℃に加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に３０分かけて溶解させた。静置させた状態でのデカンテーションにより、茶色の残留物を回収した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、５：１ＣＨ２Ｃｌ２：ＣＨ３ＯＨ）により精製し、灰色がかった白色粉末（５８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４０％）を得た。以下に分析結果を示す。
【００３０】
ESI-MS: 556, 554 ([M + H]+), 578, 576 ([M + Na]+)
Ｃ１６Ｈ１８ＮＯ９Ｒｅ・Ｈ２Ｏの計算値は、C, 33.57; H, 3.52; N, 2.45であり、分析値はC, 33.55; H, 3.53; N, 2.75であり、計算値とよく合致している。
【００３１】
【化８】
2008512360.tif 000010
【００３２】
〔放射性同位体でのラベル化〕
［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋を、「Ｉｓｏｌｉｎｋ」ボラノカルボネートキット（"Ｉｓｏｌｉｎｋ" boranocarbonate kit）（Mallinckrodt  Inc.）を用いて、Ｎａ［９９ｍＴｃＯ４］（１ｍＬ、１００ＭＢｑ）の生理食塩水溶液から調製した。レニウムは、より高い化学的不活性及びより低い酸化還元電位を有するため、［１８６Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋はテクネチウムで用いたキットによる調製法は利用できなかった。［１８６Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋は、Ｎａ［１８６ＲｅＯ４］（０．５ｍＬ、１００ＭＢｑ）の生理食塩水溶液に、８５％Ｈ３ＰＯ４４．５μＬを加えた後、この溶液を、ＣＯで１０分間フラッシング（flushed）したボラン・アンモニア錯体３ｍｇに加えることにより調製した。この混合物を６０℃で１５分間加熱し、室温まで冷却した。ラベル化は、上記最終的に得られた溶液（０．５ｍＬ）と１ｍＭＨＬ２のＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、１ｍＬ）とを混合し、７５℃で３０分間定温放置することにより行われた。
【００３３】
〔安定性評価〕
［（Ｌ２）９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）］（１００μＬ、１０ＭＢｑ、ＨＬ２中１ｍＭ）を、１ｍＭヒスチジン若しくは１ｍＭシステインのＰＢＳ溶液９００μＬに加えた。この溶液を３７℃で定温放置させ、１，４，２４時間後にそれぞれサンプリングを行い、ＨＰＬＣ分析を行った。ヒスチジンのラベル化は、［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋を含む溶液を１ｍＭヒスチジンＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４、１ｍＬ）を加え、７５℃で３０分間定温放置することにより行った。ＨＰＬＣ分析により、放射性同位体で単一にラベル化された（single radiolabeled）生成物が形成していることが確認された。
【００３４】
グルコサミンとサリチルアルデヒドとを縮合させることにより形成するシッフ塩基は、９９ｍＴｃ（Ｖ）を含む遷移金属の配位子として従来より研究されている。［Ｍ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋（Ｍは、９９ｍＴｃ若しくは１８６Ｒｅ）の「放射性同位体でラベル化されていない（cold）」代用物として、出発物質［ＮＥｔ４］２［Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３］を用いて、我々は、［（Ｌ１）Ｒｅ（ＣＯ）３］錯体（ＥＳＩＭＳ（＋）により観測）を合成した。しかしながら、イミンと該錯体とは、加水分解に対して不安定であり、水性での放射性同位体のラベル化には不適当であることがわかった。このような加水分解の問題を避けるため、我々は、ＨＬ１を、より加水分解に対して強固な、アミンフェノールＨＬ２（Ｎ−（２’−ヒドロキシベンジル）−２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース、スキーム１）に還元した。ＨＬ１の触媒的水素化により、ＨＬ２が、その後の放射性同位体でのラベル化の研究に用いることができる純度で、９８％の収率で得られた。水中での、ＨＬ２の［ＮＥｔ４］２［Ｒｅ（ＣＯ３）Ｂｒ３］及びＮａＯＡｃとの反応により、［（Ｌ２）Ｒｅ（ＣＯ）３］が、カラムクロマトグラフィーによる精製後で４０％の収率で得られた。分子イオンは、ＥＳＩＭＳにより［（（Ｌ２）Ｒｅ（ＣＯ）３）＋Ｈ］＋として確認された。そして、バルクサンプルでの構造は、元素分析で確認した。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ）で観測されるアノマー比（α／β）は、１．９（ＨＬ２）から、１．１（錯体）へ変化を示した。これは、錯体形成により、２つのアノマー間の熱力学的安定性の差が減少したことを示唆している。
【００３５】
溶解性の理由で、完全なＮＭＲによる研究は、ＤＭＳＯ−ｄ６溶液（表１に反映）中で行った。錯体の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６）は、高度に入り組んでいるが、ＨＬ２と比較した場合における芳香族共鳴のシフト化及びブロード化は、フェノールの「腕」が、要望どおり、{ＲｅＩ（ＣＯ）３}部位の結合と関連していることを示している。各アノマーにおけるメチンプロトンシグナルの２つのダブレットへの分裂は、メチンプロトンが錯体の構造において非等価であることを示唆している。配位子においてＮ及びＯのドナー原子は、環中のメチン部分に組み込まれており、２つのプロトンをジアステレオトピック化学の環境下で強固に保持している。糖Ｃ１プロトン由来のシグナルは、両アノマーにおけるＨＬ２との比較において、低磁場シフトしていた。糖Ｃ２プロトン由来のシグナルも、明確に分離しており、両アノマーにおけるＨＬ２との比較において、僅かに低磁場シフトしていた。また、スペクトル中の小さい無関係なピークにより、少なくとも１つの他のマイナーな種が存在していることも示唆される。
【００３６】
一夜、ＣＤ３ＯＤ若しくはＤＭＳＯ−ｄ６溶液中での状態を保持させた場合、錯体のサンプルは、目に見えるように茶色となり、ピークの比較強度は増加した。これらの現象は、分解生成物により生じていることが示唆される。上記シグナルは、錯形成していないＨＬ２の化学シフトとは関連していない。マイナーな種は、錯体のＨＰＬＣにおけるＵＶ／可視分光法によっても検出され、時間と共に、より大きくなる。錯体の１３Ｃ｛１Ｈ｝ＮＭＲスペクトル（ｄ６−ＤＭＳＯ）では、α−アノマーについては完全に帰属され、β−アノマーについては部分的に帰属することができた（上記表１中に反映）。
【００３７】
Ｒｅカルボニルは、対称性の欠如により予期されるように、３つの鋭い共鳴を１９６ｐｐｍ〜１９８ｐｐｍに示した。両アノマーにおいて、フェノールＣＯ及びＣＨ２リンカー由来のピークは、ＨＬ２のこれら値と比べて、大きく低磁場にシフトしていた。このことから、ＲｅはフェノールのＯとグルコサミンのＮの両方と結合していることが明確に示唆される。
【００３８】
両アノマーのＣ１及びＣ２シグナルは、錯体形成により高磁場シフトしており、ヘキソース骨格における幾つかの僅かな構造変化が反映されていると推定される。これにより、α−アノマーの不安定化を生じさせ、ＨＬ２と比較したアノマー比の変化を生じさせる。α−アノマーにおけるＣ３シグナルは７．４ｐｐｍ低磁場シフトしており、Ｃ３グルコサミン水酸基は、予測される溶媒分子の環境中でのＲｅ中心と結合していることが示唆される。不運なことに、β−アノマーのＣ３は、ＤＭＳＯ溶液中での該アノマーの濃度が低いため、帰属することができなかった。
【００３９】
ＤＭＳＯは水若しくはメタノールよりも極性が低いため、通常、好ましくない、β−アノマーにおいて存在する双極子モーメントを安定化させることができない。Ｃ１の立体化学が、Ｃ３水酸基のＲｅに配位する傾向に依存した幾何学上の複数の結果を生じることは想像できないため、両アノマーは、同様の三座の方法によりＲｅと結合していると予測される。ＨＰＬＣにより測定した、ＨＬ２の［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋及び［１８６Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋によるラベル化は、それぞれ９５±２％及び９４±３％平均放射化学的収率で行われた（図１参照）。放射性同位体でラベル化された錯体の同一性は、放射性同位体でラベル化された生成物を、信頼のおける「放射性同位体でラベル化されていない（cold）」Ｒｅ錯体（ｔＲ＝１７．９分）と共に注入することにより、［（Ｌ２）９９ｍＴｃ（ＣＯ）３］（ｔＲ＝１７．９分）及び［（Ｌ２）１８６Ｒｅ（ＣＯ）３］（ｔＲ＝１８．２分）として確認された。
【００４０】
そして、９９ｍＴｃ錯体の見込まれる生体内での安定性の予備的な評価として、システイン／ヒスチジンによる挑戦的実験を実施した。典型的な試験として、放射性同位体でラベル化された錯体を、１ｍＭシステイン若しくは１ｍＭヒスチジンのどちらか一方を含む、水性のリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）中、３７℃で定温放置させ、１、４及び２４時間後にそれぞれサンプリングした（以下の表３〜７に反映）。ＨＰＬＣ分析により、短期間ではあるが、上記錯体はシステイン若しくはヒスチジン溶液中で安定であることが示された（４時間では、３０％未満の上記錯体は変化なく残存していた）。ヒスチジンを用いた挑戦的実験の主要な分解生成物として、ヒスチジンでラベル化された［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋が確認された。
【００４１】
＜１ｍＭシステイン若しくはヒスチジン中での、３７℃、１、４及び２４時間後における［（Ｌ２）９９ｍＴｃ（ＣＯ）３］の残存率（％）＞
【００４２】
【表２】
2008512360.tif 000011
【００４３】
上記錯体の不安定性は、ドナー原子（特に第二級アミノ基及び炭水化物の水酸基）の比較的弱い結合能力によるかもしれない。錯体の安定性を高める変更について考えると、思いがけない上記三座結合により、我々は、三座配位子、及びソフトな｛Ｍ（ＣＯ）３｝中心との高い親和性を有する結合基を含む三座配位子について意図的に研究することを教えられた。
【００４４】
上記不安定性の問題を解決するために、グルコサミン−ジピコリルアミン結合体を以下に示すように開発した。
【００４５】
【化９】
2008512360.tif 000012
【００４６】
このジピコリルアミン誘導体は、以下に示すように９９ｍＴｃ及び１８６Ｒｅの両方と安定な錯体を形成した。
【００４７】
【化１０】
2008512360.tif 000013
【００４８】
これら化合物は、システイン／ヒスチジンによる挑戦的実験を２４時間行った場合であっても、ほとんど変化を示さず、これら錯体の安定性が高いことを示唆している。異なる長さのスペーサー鎖（arms）を有する他の三座炭水化物配位子もまた下記に示すように開発した。
【００４９】
〔リンカーの合成〕
【００５０】
【化１１】
2008512360.tif 000014
反応条件：（ｉ）ベンズアルデヒド，ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３，ＤＣＥ若しくはＦｍｏｃ−Ｃｌ，ＮａＨＣＯ３，ジオキサン若しくはＢｏｃ２Ｏ，Ｅｔ３Ｎ，ＤＣＭ；（ii）ＳＯ３−ピリジン錯体，Ｅｔ３Ｎ，ＤＭＳＯ，若しくはデス−マーチン・ペルヨージナン（Dess-Martin periodinane），ＤＣＭ
【００５１】
【化１２】
2008512360.tif 000015
反応条件：ベンズアルデヒド，ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３，ＤＣＥ若しくはＦｍｏｃ−Ｃｌ，ＮａＨＣＯ３，ジオキサン若しくはＢｏｃ２Ｏ，Ｅｔ３Ｎ，ＤＣＭ
【００５２】
〔糖前駆体の合成〕
【化１３】
2008512360.tif 000016
反応条件：（ｉ）３ａ／３ｂ／３ｃ，ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３，ＭｅＯＨ；（ii）Ｈ２，Ｐｄ（ＯＨ）２，ＥｔＯＨ若しくはＴＦＡ，ＤＣＭ若しくはピペリジン，ＤＭＦ；（iii）５ａ／５ｂ／５ｃ，ＤＣＣ，ＨＯＢＴ，ＤＭＦ
【００５３】
〔配位子の合成〕
【化１４】
2008512360.tif 000017
反応条件：（ｉ）２−ピリジンカルボキサルデヒド／１−ベンジル−２−イミダゾールカルボキサルデヒド／１−メチル−２−イミダゾール−カルボキサルデヒド／イミダゾールカルボキサルデヒド／サリチルアルデヒド／１７／１８／１９／２０，ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３，ＭｅＯＨ；（ii）２−ピリジン−カルボキサルデヒド／１−ベンジル−２−イミダゾールカルボキサルデヒド／１−メチル−２−イミダゾール−カルボキサルデヒド／イミダゾール−２−カルボキサルデヒド／サリチルアルデヒド／１７／１８／１９／２０／３ｂ−１，ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３，ＭｅＯＨ若しくはＢｒＣＨ２ＣＯ２Ｅｔ，Ｎａ２ＣＯ３，ＣＨ３ＣＮ；（iii）ａ．ＫＯＨ，Ｈ２Ｏ；ｂ．ピペリジン，ＤＭＦ（３ｂ−１誘導体）
【００５４】
【化１５】
2008512360.tif 000018
【００５５】
【表３】
2008512360.tif 000019
【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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原料：全ての溶剤及び試薬は、一般に認められているものを使用した。１（ｎ＝１〜５，７及び８）、２ｂ（ｎ＝１，２及び５）、２ｃ（ｎ＝１〜５）、４（ｎ＝０〜７，９及び１０）、５ｂ／５ｃ（ｎ＝２〜７及び１０）の化合物は、市販されている（Ａｃｒｏｓ，Ａｌｄｒｉｃｈ，ＴＣＩ，Ｆｌｕｋａ）。化合物２ａ、２ｂ、２ｃ、３ａ、３ｂ、３ｃは、文献（White, J.D.;Hansen, J. D, J.Org.Chem., 2005, 70, 1963-1977）に従って、５ａは、文献（Breitenmoser, R.A.; Heimgartner, Ｈ．， Helv.Chim. Acta 2001, 84, 786-796）に従って、調整した。尚、上記文献の内容は、そっくりそのまま本願明細書に組み込まれる。上記既知化合物６（Silva, 1999）、１７（Lim, 2005）、１８及び２０（Chang, C. J. et al., Inorg. Chem. (2004), 43, 6774-6779及びChang, C. J., Jaworski, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (2004)101, 1129-1134）、並びに１９（Nolan, E. et al., J. Inorg. Chem.(2004), 43, 2624-2635）は、対応する各文献の記載に従って調整した。当然ではあるが、当業者であれば、これら化合物及びこれらに関係する化合物を実現するための、付加的な合成及び／又は調整技術を構築することができるであろう。
【００５６】
〔実験〕
〔２ａの調製の基本手順〕
エタノールアミンの１，２−ジクロロエタン溶液に、ベンズアルデヒドを加え、窒素下、周囲温度で攪拌する。そして、トリアセトキシボロハイドライドナトリウムを加え、上記反応物を一定期間更に攪拌させる。上記反応物を、Ｎａ２ＣＯ３水溶液を加えることによりクエンチし、分離し、その後、ＣＨ２Ｃｌ２により水相から反応物を抽出する。混ぜ合わせた有機抽出物を食塩水で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。得られた溶液をロータリーエバポレーターで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより２ａを分離する。
【００５７】
〔２ｂの調製の基本手順〕
エタノールアミン及びＮａＨＣＯ３を含む１，４−ジオキサン溶液に、Ｆｍｏｃ−Ｃｌを加え、窒素下、周囲温度で攪拌する。上記反応物を一定期間攪拌させ、生じた固体を濾過し、濾液をロータリーエバポレーターにより濃縮し乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより２ｂを分離する。
【００５８】
〔２ｃの調製の基本手順〕
エタノールアミン及びＥｔ３Ｎを含むＣＨ２Ｃｌ２溶液に、Ｂｏｃ２Ｏを加え、窒素下、周囲温度で攪拌する。上記反応物を一定期間攪拌させ、ロータリーエバポレーターにより乾燥させる。得られたオイルを、ＣＨ２Ｃｌ２により移し取り、Ｎａ２ＣＯ３水溶液、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶媒を減圧下で除去し、カラムクロマトグラフィーにより２ｃを分離する。
【００５９】
〔７の調製の基本手順〕
純度を高めた、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−グルコサミン６（６・ＨＣｌをＮａ２ＣＯ３水溶液に溶解させ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、エバポレーターで乾燥させることにより調整）に、新しく調製した３ａを加える。得られた溶液を窒素下、周囲温度で攪拌させた後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３を加える。上記反応溶液をＮａ２ＣＯ３水溶液を加えることによりクエンチし、得られた混合物を分離する。更には、ＣＨ２Ｃｌ２により水相から反応物を抽出する。混ぜ合わせた有機抽出物を食塩水で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。得られた溶液をロータリーエバポレーターで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより７ａを単離する。
【００６０】
〔９の調製の基本手順〕
Ａｒ下、冷却した、５ａのＣＨ２Ｃｌ２溶液に、ＤＣＣ、ＨＯＢＴのＤＭＦ溶液をこの順で加える。一定期間定温を保持した後、純度を高めた、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−グルコサミン６を加える。その後、反応物を室温まで暖め、更に一定期間攪拌させる。固体状の副生成物は濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより９ａを分離する。
【００６１】
〔７ａ／９ａからの８／１０の調製の基本手順〕
７ａのメタノール溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２を加える。Ｈ２による還元を１ａｔｍで行う。反応混合物を、メタノールにより洗浄した、セライトの詰め物により濾過し、溶媒をロータリーエバポレートし、８が得られる。
【００６２】
〔７ｂ／９ｂからの８／１０の調製の基本手順〕
７ｂをＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、ＴＦＡを加える。得られた溶液を、窒素下、周囲温度で一定期間攪拌する。得られた溶液をロータリーエバポレーターにより乾燥させ、得られた残渣をＣＨ２Ｃｌ２で移し取り、ＮａＨＣＯ３水溶液、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶媒のエバポレートの後、カラムクロマトグラフィーにより８を単離する。
【００６３】
〔７ｃ／９ｃからの８／１０の調製の基本手順〕
７ｃをＤＭＦに溶解し、ピペリジンを加える。得られた溶液を、窒素下、周囲温度で短期間攪拌し、ロータリーエバポレーターにより乾燥させる。そして、カラムクロマトグラフィーにより８を単離する。
【００６４】
〔８／１０からの１１／１２の調製の基本手順〕
８ａの１，２−ジクロロエタン溶液に、２−ピリジンカルボキサルデヒドを加える。得られた溶液を、窒素下、周囲温度で短期間攪拌し、その後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３を加える。反応物をＮａ２ＣＯ３水溶液でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２により抽出し、混ぜ合わせた抽出物を食塩水で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。得られた溶液をロータリーエバポレーターで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより１１ａの粗生成物を分離する。
【００６５】
〔１１／１２からの１３／１４の調製の基本手順〕
１１ａの１，２−ジクロロメタン溶液にサリチルアルデヒドを加える。得られた溶液を、窒素下、周囲温度で短期間攪拌し、その後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３を加える。反応物をＮａ２ＣＯ３水溶液でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２により抽出し、混ぜ合わせた抽出物を食塩水で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。得られた溶液をロータリーエバポレーターで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより１３ｅの粗生成物を分離する。
【００６６】
〔１３／１４からの１５／１６の調製の基本手順〕
１３ｅのメタノール溶液に、１Ｍ ＫＯＨを加える。得られた溶液を、窒素下、周囲温度で一定期間攪拌する。反応混合物を１Ｍ ＨＣｌで中和し、減圧下で乾燥させる。得られた残渣を水で移し取り、ＲＥＸＹＮ（Ｈ）をパスさせる。溶媒をエバポレートすることにより、１５ｅが得られる。
【００６７】
要約すれば、中性で、低分子量の９９ｍＴｃでラベル化された、及び１８６Ｒｅでラベル化された炭水化物錯体は、簡単に官能基化されたグルコサミンから、高い放射化学的収率で得られる。ＨＬ２は、６２／６４Ｃｕ及び６７／６８Ｇａの配位子として試験中であり、９９ｍＴｃ及び１８６／１８８Ｒｅの、炭水化物を含む他の配位子は研究中である。
【００６８】
多くの参考文献では、以前より主張されている暫定的な利用について特定している。現在の開示内容では、合成に関する知識の観点から、このような化合物を合成する分野における当業者によって左右される、分離及びキャラクタリゼーションの方法は、当業者が本発明を実施する上で十分であると信じるが、上記各文献の内容は、そっくりそのまま本願明細書に組み込まれる。思っているほど進歩していない通常の技量のレベルの範囲で、今後、本願発明を実施する上で必要不可欠と考えられるかもしれない上記文献中に開示された物質等は、新規物質を採用することなく、上述した本願での利用に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】代表的生成物の分析は、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液（溶媒Ａ）及びアセトニトリル（溶媒Ｂ）からなる溶媒を用いＨＰＬＣにより実施した。サンプルは、リニアグラジエント法（３０分かけて１００％溶媒Ａから１００％溶媒Ｂ）により分析を行った。ＨＰＬＣ分析の結果を図１に示す。
【図１】
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【国際調査報告】
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