(57)【要約】  パクリタキセルを、移動相としてメチルイソブチルケトンとより極性の小さい溶媒を含む溶媒混合物を使用して、カラムクロマトグラフィーによってシリカゲル上でセファロマンニンを含む混合物から単離する。より極性の小さい溶媒は、(C5-C8)脂肪族炭化水素、(C6-C8)芳香族炭化水素、(C1-C4)ジアルキルエーテルまたはそれらの混合物であってよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
パクリタキセルとセファロマンニンの分離方法であって、以下のステップ：
a)パクリタキセルとセファロマンニン組成物を、シリカゲルを含む容器に適用し；
b)前記容器により極性が小さい溶媒と混合したメチルイソブチルケトンを含む溶媒混合物を適用し；
c)該容器から該溶媒混合物とパクリタキセルを溶出し；そして
d)パクリタキセルを含む溶出溶媒混合物の１つ以上のフラクションを収集すること、を含んで成る方法。
【請求項２】
前記パクリタキセルとセファロマンニン組成物が、タクスス(Taxus）植物の全体、或いはそれらの生の樹皮または乾燥した樹皮、根、葉、または枝の抽出物から成る群から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記パクリタキセルとセファロマンニン組成物が、タクスス植物の細胞培養物を抽出することによって得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記パクリタキセルとセファロマンニン組成物が、タキサン産生真菌の培養によって調製される発酵ブロスを抽出することにより得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記パクリタキセルとセファロマンニン組成物が、遺伝子的にパクリタキセル産生のために修飾された細菌株の培養によって調製される発酵ブロスを抽出することによって得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記パクリタキセルとセファロマンニン組成物が、パクリタキセルとセファロマンニンの結晶性混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記極性の小さい溶媒が、C5-C8脂肪族炭化水素、C6-C8芳香族炭化水素、C1-C4ジアルキルエーテルまたはそれらの混合物から成る群から選定される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記C5-C8脂肪族炭化水素が、ヘキサンまたはヘプタンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記C6-C8芳香族炭化水素がトルエンである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記C1-C4ジアルキルエーテルが、ジブチルエーテル、ジイソブチルエーテル、またはtert-ブチルメチルエーテルである、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記パクリタキセルとセファロマンニン組成物の重量の約１部が、シリカゲルの重量の約20部超を含む容器に適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記メチルイソブチルケトンとより小さい極性の溶媒が、約3：1(V/V)から約1：4(V/V)の容積比にある溶媒混合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記極性のより小さい溶媒が、トルエン、ヘキサン、またはtert-ブチルメチルエーテルから選定される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記パクリタキセルを含む溶媒混合物の収集された１以上のフラクションが約0.5%未満のセファロマンニンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
パクリタキセルを含む溶媒混合物の1以上の溶出したフラクションを乾燥させて、結晶性パクリタキセルを回収することを更に含んで成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
パクリタキセルとセファロマンニンを分離するための方法であって、以下のステップ：
a)パクリタキセルとセファロマンニン組成物を、シリカゲルを含む容器に適用し；
b)より極性の小さい溶媒と共に混合されたメチルイソブチルケトンを含む溶媒混合物を前記容器に適用し；
c)該溶媒混合物、パクリタキセル、及びセファロマンニンを該容器から溶出し；
d)高濃度のパクリタキセルを含む溶出溶媒混合物の１以上のフラクションを収集し；そして
e)高濃度のセファロマンニンを含む溶出溶媒混合物の１以上のフラクションを収集すること、を含んで成る方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パクリタキセルの天然アナログ、セファロマンニン(cephalomannin)からのパクリタキセルの分離のための方法に関する。詳細には、本発明は、シリカゲルクロマトグラフィーによるセファロマンニンからのパクリタキセルの分離に関する。
【背景技術】
【０００２】
パクリタキセルは、元来"タキソール"として公知であり、ヒト卵巣腫瘍、乳房腫瘍、及び 肺腫瘍の治療に有用である重要な化学療法剤である。それは多くのヒトの癌への期待を示し、そしてその臨床での使用は、いくつかの論文（Rowinsky, E. K., Ann. Rev. Med. 48:353 1997; Van Hoff, D. D., Semin. Oncol. 24:3 (1997); DeFuria, M. D., Phytomedicine 4:273 (1997);及びEisenhauer, E. A., Vermorken, J. B., Drugs 55:5 (1998)等）で報告されている。
【０００３】
パクリタキセルは天然の化合物であり、Wani,等により太平洋イチイ(Taxus brevifolia)の木の皮から最初に単離された(J. Am. Chem. Soc. 93:2325 (1971)）。その時から、研究者たちは、パクリタキセルが、ヨーロッパイチイ(Taxus baccata)、ヒマラヤイチイ(Taxus Wallichiana)、中国イチイ(Taxus celebita)、日本イチイ(Taxus cuspidata)、カナダイチイ(Taxus canadensis)、メキシコイチイ(Taxus globosa)、フロリダイチイ(Taxus floridana)及び観賞用イチイ(Taxus media)、並びにそれらの雑種及び品種の全てを含む、全ての他のタクスス(Taxus）属において存在することを認識してきた。
【０００４】
植物起源からのパクリタキセルの単離は、或る程度はその非常に低いバイオマス濃度により、及びある程度はパクリタキセルに関連した類似構造及び特質を有する他のタキサンの存在により、複雑且つ困難である。タキサン、セファロマンニンは、特にパクリタキセルからの分離が困難である。それは、実質的にパクリタキセルを含む全ての公知源に存在し、そしてタクスス植物のタイプによって、パクリタキセル/セファロマンニン比は約1：10から、高くても約1：1の濃度範囲にある。
【０００５】
他のタキサン不純物は、結晶化によってパクリタキセルから分離することができるが、セファロマンニンはパクリタキセルと一緒に結晶化する傾向がある。セファロマンニンとパクリタキセルは、その構造において一つの側鎖基のみが相違する。それらの構造を比較のために以下に再現する。
【化１】
2008505108.tif 000002
【０００６】
それらの化合物を分離するために使用される一つの方法は、それらの化学反応性における差異を活かし、より反応性のセファロマンニンの誘導体を形成する。例えば、セファロマンニンから伸びたオレフィン基は、パクリタキセルの任意の部分よりも、より迅速に酸化、または臭素化され、そしてパクリタキセルから容易に分離されるセファロマンニン誘導体を形成するために使用することができる。例えば、Kingston, D. G. L,等, J. Nat. Prod. 55:259 (1992)); Beckvermit, J. T.,等., J. Org. Chem. 61:9038 (1996);米国特許No. 5,654,448を参照。
【０００７】
パクリタキセルからセファロマンニンを単離するための他のアプローチは、多様なタイプのクロマトグラフィーに関与する。多くの例は、例えば、Dauh-Rurng Wu,等, J. Chrom. A, 702:233 (1995); Koppaka V. Rao,等, Pharm. Res. 12:1003 (1995);及びXuefeng Yang,等, J. Chrom. A, 813:201 (1998)を含む文献中に見出すことができる。更に逆相クロマトグラフィーは、いくつかの特許（例えば:米国特許No.5,279,949;米国特許No.5,380,916;及び米国特許No.5,969,165等）においてパクリタキセルの最終精製に関して発表されている。更に連続工程もシミュレートした移動層逆相クロマトグラフィー手順をもとに開発された（Dauh-Rurng Wu,等, J. Chrom. A, 855:71 (1999)）。しかしながら、逆相クロマトグラフィーを使用する欠点は、所望されない7-epi-パクリタキセルへのパクリタキセルの異性化を不利に引き起こし得る溶媒を含む水を必要とすることである。
【０００８】
パクリタキセルを精製するために使用される更なる方法は、込み入った勾配溶離または多様な移動相組成物を用いるいくつかの連続的なクロマトグラフィーステップのいずれかに基づく（Young Kwang Park,等., J. Liq. Chrom. & Rel. Technol. 22(18):2755 (1999)）。他のアプローチでは、吸着剤としてアルミナを有する順相クロマトグラフィーを使用する。あいにく塩素化有機溶媒は、しばしばアルミナによる移動相として使用される。更に、パクリタキセルのエピ化及び化学的分解は、溶出時間に依存して、共にこの系において起こる（Zhiqiang Z., Zhiguo S. J., Liq. Chrom. & ReI. Technol. 23(17):2683 (2000)）。
【０００９】
近年、有機エステルを用いるシリカ上のパクリタキセルのクロマトグラフィーの精製は、米国特許No.6,333,419で発表された。ここで発表された方法は、セファロマンニンからパクリタキセルを分離するために設計されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
パクリタキセルとセファロマンニンを分離するために有効且つ簡易な方法の必要性は、なお継続して存在している。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の概要
本発明の利点は、セファロマンニンからパクリタキセルを分離するための簡易、安価及び有効な方法である。
【００１２】
それら及び他の利点は、シリカゲルクロマトグラフィーを使用してセファロマンニンからパクリタキセルを分離する方法によって少なくとも部分的に満たされている。この方法は、パクリタキセルの大規模精製のための都合よく適合され得る。
【００１３】
本発明の態様は、セファロマンニンとパクリタキセル組成物を、シリカを含む容器（例えばカラム）に適用し、その後、メチルイソブチルケトンをより極性が小さい溶媒と一緒に含む溶媒混合物をこの容器に適用することを含む。この溶媒混合物を容器に加え、溶媒及び少なくともパクリタキセルとセファロマンニンを容器から別々に溶出させる。パクリタキセルを含む溶出する溶媒混合物の１つ以上のフラクションは、その後回収される。所望されるならば、セファロマンニンを含むフラクションは、更に別に収集することができる。純粋なパクリタキセルは、その後、最も高い濃度のパクリタキセルを含む適当なフラクションから、所望されるならば溶媒混合物の蒸発及び残渣の結晶化によって単離することができる。
【００１４】
本発明の更なる利点は、後述の詳細な説明から当業者に容易に理解され、ここでは本発明の好適な態様のみが、単に本発明を実施する説明の方法によって提示及び説明される。本発明は他の態様及び多様の態様が可能であること、そして本発明のいくつかの詳細は、本発明から逸脱せずに多様な明白な観点において修飾することができることが理解されるだろう。本発明は、いくつかのまたは全てのそれらの特定の詳細な説明なしでも実施され得る。他の例では、本発明を不必要にあいまいにしないために、周知のプロセス操作を詳細に記載していない。従って、図面及び説明は、事実上説明に役立つものであり、限定的でないと見なされる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明は、パクリタキセルがセファロマンニンから、メチルイソブチルケトン及び他のより極性が小さい溶媒を移動相として含む溶媒混合物を用いて、シリカゲルクロマトグラフィーによって効果的に分離できることの発見に起因する。当該方法は、高純度のパクリタキセル（例えば約0.5％未満のセファロマンニンを有するパクリタキセル製品であって、工業規模での製造に適用することができる）を生産するための簡易、安価及び有効な方法を提供する。
【００１６】
本明細書中で言及される特許、公開された出願、及び科学文献は、当業者の知識を構築し、そして参照よって組み入れられた個々について詳細且つ個別に提示されているのと同一の範囲である参照によってそれらの全体が本明細書に組み入れられている。本明細書で引用された任意の参照、及び本明細書の特定の教示の間の任意の矛盾点(conflict)は、後者を支持して解決するものとする。同様に、従来から理解されてきた語または句の定義と本明細書で詳細に教示した語または句の定義の間の任意の矛盾点は、後者を支持して解決するものとする。
【００１７】
本明細書で使用される単数形"a"、"an"及び"the"は、その内容が明確に指定されない限り、特にそれらを言及する複数形も包含する。
【００１８】
本明細書で使用される用語"約(about)"は、大雑把に(roughly)、または前後(around)の範囲にある、おおよそ(approximately)を意味する。用語"約(about)"が数値範囲との結合で使用される場合、発表された下限及び上限の数値を広げることによりその範囲は修正される。一般的に、本明細書で使用される用語"約(about)"は、20％分散で、下の表示数値及び上の表示数値を修正する。
【００１９】
移行句(transitional phrase)または特許請求の範囲の本体を問わず、本明細書で使用される、用語"含む(comprise(s))"及び"含んでいる(comprising)"とは、限定のない意味を有すものとして解釈される。即ち、当該用語は、句"少なくとも有している"または"少なくとも含んでいる"と同義的に解釈される。本明細書においてプロセスで使用される場合の用語"含んでいる(comprising)"とは、当該プロセスが、少なくとも挙げられたステップを含むが、更なるステップも含み得ることを意味する。本明細書において化合物または組成物で使用される場合の用語"含んでいる(comprising)"とは、当該化合物または組成物が少なくとも挙げられた特徴または成分を含むが、更なる特徴または成分も含み得ることを意味する。
【００２０】
本明細書で使用される変数の数値域の詳述は、本発明がその範囲内の任意の数値と同等の変数で実行され得ることを伝えることを意図する。従って、本質的に別個である変数に関しては、当該変数は当該範囲のエンドポイントを含む数値域の任意の整数値と同等であり得る。同様に、本質的に連続的である変数に関しては、当該変数は当該範囲のエンドポイントを含む数値域の任意の実数値と同等であり得る。例として、0〜2の数値を有するとして記載された変数は、本質的に別個である変数に関しては0、1または2であってよく、そして本質的に連続的である変数に関しては、0.0、0.1、0.01、0.001、または任意の他の実数値であってよい。
【００２１】
特に断わりのない限り、本明細書において使用される語"または(or)"は、"及び/または"を意味する"を含めた(inclusive)"において使用され、且つ"どちらか一方/または(either/or)"を意味する"排他的(exclusive)"なものではない。
【００２２】
本発明の特定の態様に対する言及は、以下の詳説中にされている。本発明は、これらの特定の態様との結合を発表するが、かかる特定の態様に本発明が限定されることを意図するものではないことが理解されるだろう。それどころか、本発明の精神、及び添付の特許請求の範囲によって定義される発明の範囲の中に含まれ得るような代替物、修正品、及び同等物を補うことが意図される。以下の説明では、本発明の完全な理解を提供するために、多くの特定の詳細が発表されている。本発明は、いくつかのまたは全てのこれらの特定の詳細なしで実行され得る。他の例では、周知のプロセス操作は、本発明を不必要にあいまいにしないために、詳細には発表されていない。
【００２３】
当業者に公知の任意の適切な材料及び/または方法は、本発明の実施において利用することができる。しかしながら、好適な材料及び方法は記載されている。特に断りのない限り、後の記載及び実施例でなされる言及の材料、試薬等は、市販元から入手できる。
【００２４】
実験と研究の後、メチルイソブチルケトンを移動相として薄層クロマトグラフィー中で試験した時、パクリタキセルとセファロマンニンの十分な分離が達成されたことが発見された。しかしながら、ケトン自体は、大量のパクリタキセル混合物をカラムクロマトグラフィーによって分離するための移動相として用いるには極性が強すぎることが見出された。カラムクロマトグラフィーの移動相の極性は、その後、１種以上のより極性の小さい溶媒の付加によって減少した。より極性が小さく、且つ本発明を実施するために適切な溶媒は、脂肪族炭化水素；芳香族炭化水素；ジアルキルエーテル；またはそれらの混合物を含む。
【００２５】
本発明に係るパクリタキセルとセファロマンニンの分離のためのクロマトグラフィーのプロセスは、比較的単純である。それは順相シリカゲル(normal phase silica gel)を利用し、且つ高圧装置を必要としない。もっともかかる装置は当業界において知られているように使用できる。しかしながら、出発原料の重量の１部ごとに、シリカゲルの重量を２０部のみ使用する場合であっても、単純なカラムにより、良好な分離を達成することができる。シリカゲルのより大きな比率は、出発原料の組成物及び得られる単離パクリタキセルの所望される純度に依存して使用することができる。任意のシリカは本発明の実施において使用することができる。シリカ、またはシリカゲルは、多様な市販源から大量に入手することができ、そしてそれは約25〜約200μmの範囲の多様な粒子径で売られている。
【００２６】
本発明の一つの態様の実施において、出発パクリタキセル組成物、即ち、パクリタキセルとセファロマンニンを含む混合物は、容器（例えば、シリカを有するカラム）に適用される。最初のパクリタキセル混合物は、パクリタキセル含有植物（例えばタクスス植物)の生または乾燥樹皮、根、葉及び／または枝葉、もしくは該植物全体からの抽出物等の共通源から得ることができる。更に他の起源のパクリタキセルも本発明の実施における使用が意図され、栽培されたタクスス植物の細胞培養、タキサン産生真菌の培養によって調製された発酵ブロス；パクリタキセル産生のために遺伝子操作された菌種の培養によって調製された発酵ブロス等から得られた粗抽出物または精製抽出物を含む。
【００２７】
出発パクリタキセル混合物がセファロマンニンに加えて実質的な量の成分を含む場合、本発明に係るシリカゲルクロマトグラフィーに当該混合物を適用する前に、当該混合物を当業界で公知の精製にかけて、不純物の量を減らすことができる。出発パクリタキセル混合物が、当業界において公知の精製ステップ（例えばクロマトグラフィー、結晶化等）によって得られるような部分的に精製されたパクリタキセルの抽出物であることが好適であるが、本明細書で発表された方法はそれらに限定されない。
【００２８】
出発パクリタキセル組成物を容器に適用する時、分離のために使用される溶媒混合物を含む溶媒で最初に希釈することができる。セファロマンニンからパクリタキセルを分離するために使用することができる適切な溶媒混合物は、より極性が小さい溶媒と一緒にメチルイソブチルケトンを含む。本発明の実施において、希釈または濃縮された出発パクリタキセル混合物を容器に適用し、そして更に当該溶媒混合物も容器に適用して、パクリタキセルとセファロマンニン、そして存在するならば可能性のある他の成分をもたらし、容器中のシリカを通してこれらの成分を分割及び分離する。その後、実質的にセファロマンニンが存在しない高純度のパクリタキセルを溶出溶媒で収集することができる。更にセファロマンニンを同様に収集することができる。
【００２９】
本発明の態様では、移動相として使用される溶媒の沸点は、約130℃より低いべきであり、産物としては、好適には蒸発によるクラマトグラフィーフラクションから回収される。しかしながら溶媒の沸点が非常に低いならば、溶媒の蒸発は、環境問題を提起する。従って、好適には、本発明の態様の実施において使用されるより極性の小さい溶媒は、(C5-C8)脂肪族炭化水素、例えばヘキサンまたはヘプタン；(C6-C8)芳香族炭化水素、例えばトルエン；(C1-C4)ジアルキルエーテル、例えばジブチルエーテル、ジイソブチルエーテル、またはtert-ブチルメチルエーテル；またはそれらの混合物を含む。
【００３０】
本発明の実施における多くの溶媒の組合せは、メチルイソブチルケトンにより作り出すことができる。それらの溶媒混合物の大多数は、商業的に入手でき、安価且つ無毒であり、そのために容易に工業規模での使用に適用できる。本発明の実施において、任意の量の１種以上のより極性の小さい溶媒をメチルイソブチルケトンに付加することができる。溶媒の比率は、出発パクリタキセル組成物中の成分の含有量及び質、精製される材料の量等を含むいくつかの要因に依存するだろう。本明細書で提供する当業者に与えられるガイドラインは、通常の実験を用いるたけで、パクリタキセルを単離するためにケトンと混合する１種以上のより極性の小さい溶媒の適切な量を容易に決定することができる。本発明の実施の一つの態様では、メチルイソブチルケトン、対、より極性が小さい溶媒は、約3：1(V/V)から約1：4(V/V)の容積比にある溶媒混合物を含む。
【００３１】
工業適用のために好適な移動相は、メチルイソブチルケトン及びトルエンの混合物である。パクリタキセルとセファロマンニンの優れた分離を提供することに加えて、本溶媒混合物は、都合よく容易に回復可能な沸点を有する。
【００３２】
溶媒混合物を、シリカゲルを保持する容器及びパクリタキセル組成物に付加した後、溶媒を容器から溶出し、そして実質的にセファロマンニンが存在しない高濃度のパクリタキセルを含む溶出したフラクションを収集した。高濃度のセファロマンニン、及び存在するならば他の成分を含むフラクションを、更に分離フラクションとして収集できる。その後パクリタキセルフラクション、及びセファロマンニンフラクションを、溶媒の真空蒸発によって更に単離することができる。乾燥の程度は、産物が粘性残渣となるか、または固体結晶性塊となるかを指示するだろう。所望されるならば、得られたパクリタキセル産物は、適切な溶媒からの結晶化によって更に精製され、高純度で結晶形態のパクリタキセルを得ることができる。溶媒の迅速蒸発と完全に一緒になった有機溶媒系の使用は、所望されないパクリタキセルの7-epi-パクリタキセルへの異性化を都合よく減少または排除する。これは公知の逆相クロマトグラフィーを基礎とする単離方法を越える他の利点を提供する。
【００３３】
実施例
以下の実施例は、本発明の所定の好適な態様を更に説明することを意図し、事実上制限するものではない。当業者は、通常の実験を用いるたけで、本明細書において発表された特定の物質及び手順に対する多数の同等物を認識または確定することができるだろう。
【実施例１】
【００３４】
約55%のパクリタキセルと約19%のセファロマンニンを含む約99.6 gの粗結晶性パクリタキセル組成物(図1に示す)を約1000mLのメチルイソブチルケトン及びケトン(40:60 V/V)の混合物に溶かした。当該溶液を約18 kgのシリカ(シリカゲル, Merck 60、粒子径約25〜40(μm)を充填したカラムにかけた。その後、当該カラムをメチルイソブチルケトン及びトルエン(40：60 V/V)溶媒混合物で溶出した。溶出溶媒のフラクションを20 L程度ずつ採取し、HPLCによって分析した。純粋なパクリタキセルを含むフラクションを蒸発し、乾燥させて、約84.035%のパクリタキセルと約0.145%のセファロマンニンを含む約59.04ｇの乾燥産物を与えた。パクリタキセルとセファロマンニンの相対比率は、100/0.173であった(HPLC分析を図２に示す)。アセトンとヘキサン(1：1 V/V)からのこの材料の結晶化は、約96.272%のパクリタキセルと約0.131%のセファロマンニンを含む結晶性産物(45.80 g)を与えた(HPLC分析を図３に示す)。
【実施例２】
【００３５】
約72.7%のパクリタキセルと約11.2 %のセファロマンニンを含む約1395 gの粗結晶性パクリタキセル(図4に示す)を20 Lのメチルイソブチルケトンとトルエン(40:60 V/V)の溶媒混合物に溶かした。その後、当該溶液を約185 kgのシリカ(シリカゲル、Merck 60、粒子径約25〜40μm)を有すカラムにかけた。その後、カラムをメチルイソブチルケトンとトルエン(40:60 V/V)の混合物で溶出した。溶液のフラクションを100 Lずつ採取し、そしてHPLCで分析した。純粋なパクリタキセルを含むフラクションを蒸発し、乾燥させた。当該乾燥物は約840 gのパクリタキセルと約1.62 gのセファロマンニンを含んだ。パクリタキセルとセファロマンニンの相対比率は、100/0.193であった。アセトンとヘキサン(1:1 V/V)の混合物からのこの材料の結晶化は、約96.225%のパクリタキセルを含む結晶性産物(635ｇ)を与えた。セファロマンニン含有量は、HPLC検出器の定量限界よりも低かった(HPLC分析を図５に示す)。
【実施例３】
【００３６】
約55%のパクリタキセルと約19%のセファロマンニンを含む約4.1 gの粗結晶性パクリタキセル(図１に示す)を40 mLのメチルイソブチルケトンとヘキサン(70:30 V/V)混合物に溶かした。当該溶液を約15O gのシリカ(シリカゲル、Merck 100、粒子径約63〜200μm)で充填したカラムにかけた。その後、当該カラムをメチルイソブチルケトンとヘキサン70:30 (V /V)混合物で溶出した。溶出溶媒のフラクションを200 mLずつ採取し、HPLCにより分析した。純粋なパクリタキセルを含むフラクションを蒸発して乾燥させた。残渣(2.4 g)は約99.88 %のパクリタキセルと約0.12 %のセファロマンニンを含んだ。パクリタキセルとセファロマンニンの相対比率は、100/0.119であった(図6のHPLC分析)。
【実施例４】
【００３７】
約55%のパクリタキセルと約19%のセファロマンニンを含む約4.1gの粗結晶性パクリタキセル(図３のHPLC分析)を40 mLのメチルイソブチルケトンとtert-ブチルメチルエーテル(40:60 V /V)混合物に溶解させた。当該溶液を150 gのシリカ(シリカゲル、Merck 100、粒子径約63-200μm)を充填したカラムにかけた。その後、当該カラムをメチルイソブチルケトンとtert-ブチルメチルエーテル(40:60 V/V)を含む溶媒混合物で溶出した。その後、溶出溶媒のフラクションを200 mLずつ採取し、そしてHPLCで分析した。純粋なパクリタキセルを含むフラクションを蒸発し、乾燥させた。残渣(2.6 g)は、約99.41 %のパクリタキセルと約0.36 %のセファロマンニンを含んだ。パクリタキセルとセファロマンニンの相対比率は、100/0.458であった(HPLC分析は図７に示す)。
【００３８】
ここでの開示では、本発明の好適な態様及びほんの数例の汎用の実施例のみが発表される。本発明は多様な他の組合せ及び環境において使用することができ、且つ本明細書において示されたような本発明の概念の範囲内で改変または修飾することができることが理解される。従って、例えば、当業者は通常の実験を用いるたけで、本明細書で発表された特定の物質及び手順に対する多数の同等物を認識または確定することができるだろう。かかる同等物は本発明の範囲内にあるとみなされ、且つ特許請求の範囲で保護される。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、実施例1、3、及び4において使用される出発原料の組成物をHPCL分析で測定した通りに説明する。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図２】図２は、実施例１の主なフラクションの組成物をHPLC分析で測定した通りに説明する。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図３】図３は、実施例1の最終結晶産物の組成物を、HPLC分析で測定した通りに説明する。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図４】図４は、実施例2で使用した出発原料の組成物を、HPLC分析で測定した通りに示す。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図５】図５は、実施例2の最終結晶性産物の組成物を、HPLC分析で測定した通りに説明する。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図６】図６は、実施例3の主なフラクションの組成物を、HPLC分析で測定した通りに説明する。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図７】図7は、実施例4の主なフラクションの組成物を、HPLC分析で測定した通りに説明する。ここで横軸は分での溶出時間を表し、そして縦軸は吸光度単位を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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