(57)【要約】  本発明は、構造（Ｉ）：2008505095.tif 000082［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｑ、ｎ、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10及びＲ11が明細書に定義されている。］を有するエストロゲン受容体モジュレータ、又はその薬学的に許容される塩を提供する。更に本発明は、前記化合物の製造方法及び使用法を提供する。
2008505095.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2008505095.tif 000062
［式中、Ｑが、構造ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶ：
【化２】
2008505095.tif 000063
を有し、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8及びＲ11がそれぞれ独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＯＲ20、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、ＮＲ20Ｒ21、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｎが０又は１であり、
Ｒ20及びＲ21がそれぞれ独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＣＦ3、ベンジル、−ＣＯ2（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）及び−ＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から選択され、ただし、
ａ）Ｒ2又はＲ3の一方が−ＯＲ20であり、
ｂ）Ｒ9又はＲ10の一方が−ＯＲ20であり、
ｃ）Ｒ2が−ＯＲ20である場合、Ｒ1及びＲ3が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｄ）Ｒ3が−ＯＲ20である場合、Ｒ2及びＲ4が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｅ）Ｒ9が−ＯＲ20である場合、Ｒ8及びＲ10が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｆ）Ｒ10が−ＯＲ20である場合、Ｒ9及びＲ11が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、そして
ｇ）Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11がそれぞれＨであり、ｎが０である場合、Ｒ10がＯＲ20ではない。］
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｑが構造ＩＩを有する請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素及びハロゲンからなる群から選択され、かつ、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、メトキシ、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2及びＣ1〜Ｃ6アルキルからなる群から選択される請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｑが構造ＩＩＩを有する請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素及びハロゲンからなる群から選択され、かつ、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、メトキシ、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2及びＣ1〜Ｃ6アルキルからなる群から選択される請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｑが構造ＩＶを有する請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素及びハロゲンからなる群から選択され、かつ、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、メトキシ、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2及びＣ1〜Ｃ6アルキルからなる群から選択される請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
ｎが０である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
ｎが１である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
以下の構造：
【化３】
2008505095.tif 000064
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
以下の構造：
【化４】
2008505095.tif 000065
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
以下の構造：
【化５】
2008505095.tif 000066
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
以下の構造：
【化６】
2008505095.tif 000067
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
以下の構造：
【化７】
2008505095.tif 000068
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
以下の構造：
【化８】
2008505095.tif 000069
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
以下の構造：
【化９】
2008505095.tif 000070
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
以下の構造：
【化１０】
2008505095.tif 000071
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
以下の構造：
【化１１】
2008505095.tif 000072
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
以下の構造：
【化１２】
2008505095.tif 000073
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
以下の構造：
【化１３】
2008505095.tif 000074
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２５】
以下の構造：
【化１４】
2008505095.tif 000075
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２６】
以下の構造：
【化１５】
2008505095.tif 000076
を有する請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２７】
哺乳動物において、骨粗鬆症を治療若しくは抑制する方法、又は骨の無機質脱落を抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項２８】
哺乳動物において、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性直腸炎又は結腸炎を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項２９】
哺乳動物において、前立腺肥大、子宮平滑筋腫、乳ガン、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣ガン、メラノーマ、前立腺ガン、結腸ガン、グリオーム又はアスティオブラストミア（astioblastomia）を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３０】
哺乳動物において、コレステロール、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）若しくはＬＤＬレベルを低下させる方法、又は高コレステロール血症、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、再狭窄若しくは血管痙攣を抑制若しくは治療する方法、又は血管損傷を抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３１】
哺乳動物において、認知力を強化若しくは神経保護する方法、又は老年性認知症、アルツハイマー病、認識衰退、脳卒中、不安若しくは神経変性障害を治療若しくは抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３２】
哺乳動物において、フリーラジカル誘導病状を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３３】
哺乳動物において、膣若しくは外陰部萎縮、萎縮性膣炎、膣の乾燥、掻痒症、性交疼痛症、排尿困難、頻尿、尿失禁、又は尿路感染を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３４】
哺乳動物において、血管運動症状を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３５】
哺乳動物において、避妊する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３６】
哺乳動物において、関節リウマチ、変形性関節症又は脊椎関節症を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３７】
哺乳動物において、関節鏡視下又は外科的処置による続発性の関節障害を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３８】
哺乳動物において、受胎能を処理又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項３９】
哺乳動物において、虚血、再かん流障害、喘息、胸膜炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、ブドウ膜炎、敗血症、出血性ショック又はII型糖尿病を治療又は抑制する方法であって、有効量の、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする前記方法。
【請求項４０】
請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物又はその組み合わせ、及び１以上の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４１】
１以上の以下の化合物：
ａ）５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、
ｂ）ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、
ｃ）５−ブロモ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、
ｄ）３，８−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、
ｅ）３，９−ジヒドロキシ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−１２−オキサ−ジベンゾ［ａ，ｅ］アズレン−１１−カルボニトリル、
ｆ）３，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、
ｇ）３，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、
ｈ）３，８−ジヒドロキシ−５，５−ジメチル−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、
ｉ）６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−３，８−ジオール、
ｊ）３，８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−１０−カルボニトリル、
ｋ）１０−ブロモ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−３，８−ジオール、
ｌ）２，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−ベンゾニトリル、
ｍ）２，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル又はその薬学的に許容される塩及び１以上の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４２】
以下の工程：
ａ）式Ｖ：
【化１６】
2008505095.tif 000077
［式中、ＸがＣｌ、Ｂｒ又はＩであり、
Ｐが保護基である。］
で表される化合物を、式ＶＩ：
【化１７】
2008505095.tif 000078
［式中、Ｍが金属であり、
Ｌが配位子であり、
Ｐ’がＨ又は保護基であり、
ｎ’が０〜５の整数である。］
で表される化合物とカップリングさせて、式ＶＩＩ：
【化１８】
2008505095.tif 000079
で表される化合物を形成する工程、及び
ｂ）基Ｐ及びＰ’を除去し、得られる脱保護化合物を環化して、式Ｉ：
【化１９】
2008505095.tif 000080
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｑ、ｎ、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11は請求項１で定義されるとおりである。］
で表される化合物を形成する工程を含む、請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項４３】
ＰがＳｉ（Ｒ’）3、ＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル、ＣＯ2ベンジル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルであり、且つ各Ｒ’が独立して、Ｃ1〜Ｃ6アルキル又はフェニルであり、そして
Ｐ’がＨ、Ｓｉ（Ｒ’）3、ＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルであり、ここで各Ｒ’が独立して、Ｃ1〜Ｃ6アルキル又はフェニルからなる群から選択される請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
ＰがＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル、ＣＯ2ベンジルであり、
Ｐ’がＣ1〜Ｃ6アルキルであり、及び
ＭがＢであり、
Ｌが（ＯＨ）若しくは（ＯＣ1〜Ｃ6アルキル）であり、ｎ’が２であるか、又は
ＭがＳｎであり、
Ｌが（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）であり、ｎ’が３である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
工程ｂ）におけるＰが有機又は無機水酸化物を用いて除去され、工程ｂ）におけるＰ’が三臭化ホウ素、ヨウ化水素酸、ピリジンヒドロクロリド又はピリジンヒドロブロミドを用いて除去される請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
環化がＰ’の除去中に生じる請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
請求項４２〜４６のいずれか記載の方法により製造される化合物。
【請求項４８】
下式：
【化２０】
2008505095.tif 000081
［式中、ｎ、Ｒ1〜Ｒ4及びＲ8〜Ｒ11は請求項１で定義されるとおりである。］
で表される化合物を環化して、式Ｉで表される化合物を形成する工程、及び式Ｉで表される化合物を、その薬学的に許容される塩として単離する任意の工程を含む請求項１に記載の式Ｉで表される化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エストロゲン剤として有用な四環式化合物、その化合物の製造方法、及びその化合物の使用法に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物の組織におけるエストロゲンの多面的効果は、十分に実証されてきた（Dey, M., Lyttle, C.R., Pickar, J. H. Maturitas (2000), 34(S2): S25-S33, Speroff, L., Ann. N. Y. Acad. Sci. (2000), 900, 26-36, Nozaki, M., Ernst Schering Res. Found. Workshop (2000), Suppl. 4, 115-125）。エストロゲン受容体（ＥＲ）は核ホルモンＥＲファミリーの一員であり、そのコアクチベーター及びコリプレッサー（まとめてコレギュレーターと称する）を含む大多数のタンパク質との相互作用、並びにエストロゲン応答配列（ＥＲＥ）によって転写を調節する。ＥＲＥによる細胞の転写機構に影響を及ぼす能力に加え、ＥＲは、ＥＲのＤＮＡとの直接相互作用に関係なく、転写過程に影響を及ぼすことも可能である。例えば、１７β−エストラジオールがＩＬ−６プロモーター活性を抑制可能であることが明らかにされた。この抑制では、ＥＲに結合する１７β−エストラジオールを必要とするが、機能的なＤＮＡ結合ドメインを有しているのかどうかには左右されない（Ray, A., Profontaine, K. E., Ray, P. J., J. Biol. Chem. (1994), 269: 12940）。リガンドが結合していないＥＲが、特にＥＲのＡＢドメインを含むＡＦ−１において、セリン残基のリン酸化反応後の転写過程に影響を及ぼす場合さえある。
【０００３】
近年、１７β−エストラジオールに関して高い親和性を有する第２のＥＲ（ＥＲβ）が同定された。ＥＲβの物理的な構造と最初に同定されたＥＲ（ＥＲα）との比較において、ＥＲβの長さは短いものの（５３０ＡＡ対５９５ＡＡ）、同一の機能ドメインを含んでいることが明らかとなった。ＥＲβのＡＢドメインは、ＥＲαに対して少々切り取られており（１４８ＡＡ対１８０ＡＡ）、そして、驚くべきことではないが、２種のＥＲ間でＡＦ−１活性化能力が異なっている（Mclnerney, E. M., Weis, K. E., Sun, J., Mosselman, S., Katzenellenbogen, B. S., Endocrinology (1998), 139(11): 4513-4522）。Ｃドメイン（ＤＮＡ結合ドメイン）は、２種類のＥＲ（９６％）間の顕著な相同性を示しており、更に、かかる２種類のＥＲは、所定のＥＲＥに対して類似の親和性を持って結合することが期待されるであろう。しかしながら、２種類のＥＲがＥＲＥのビトジェネリン（vitogenellin）、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、ｐＳ２、カテプシンＤ、及びアセチルコリントランスフェラーゼに結合することが示されたとはいえ、２種類のＥＲは、同一の親和性を持って結合する必要があるわけではない（Hyder, S. M., Chiappetta, C., Stancel, G. M., Biochem. Pharmacol. (1999) 57: 597-601）。対照的に、２種類のＥＲのＥドメイン（リガンド結合ドメイン又はＬＢＤ）は、６０％の相同性を共有しているにすぎない。しかしながら、２種類のＥＲの構造分析により、リガンド接触領域における残基が極めて類似することが示され、２残基だけが異なっている（ＥＲα４２１（Ｍｅｔ）ＥＲβ３７３（ＩＩｅ）；ＥＲα３８４（Ｌｅｕ）ＥＲβ３３６（Ｍｅｔ））。更に、２種類のＥＲの全体的な配列の差異により、サブタイプと、ＥＲ転写機構を有効にするか又は修正する種々のコレギュレータータンパク質との間で異なる相互作用をもたらす場合がある。実際、予備的な研究により、コレギュレーターＳＲＣ−３がＥＲβよりＥＲαとより強く相互作用することが示唆されている（Suen, C. S., Berrodin, T. J., Mastroeni, R., Cheskis, B. J., Lyttle, C. R., Frail, D., J. Biol. Chem. (1998), 273(42): 27645-27653）。
【０００４】
２種類のＥＲと種々のコレギュレータータンパク質との異なる相互作用の他に、２種類のＥＲは、同一の広がりを持っていない組織分布も有している。両方のＥＲが共発現する所定の組織内においてでさえ、所定の細胞型において、ＥＲの一方の局在化が生じることもある。例えば、ヒトの卵巣において、ＥＲαとＥＲβの両方のＲＮＡ発現を検出可能である。免疫染色により、ＥＲβが、小、中、そして大の卵胞（follicles）、膜（theca）及び黄体（corpora lutea）において顆粒膜細胞を含む多様な細胞型に存在し、一方、ＥＲαが顆粒膜細胞の核においてだけでなく、膜又は黄体において弱く発現することが実証されている（Taylor, A. H., Al-Azzawi, F., J. Mol. Endocrinol. (2000), 24(1): 145-155）。子宮内膜において、免疫染色は、管腔上皮細胞と間質細胞の核におけるＥＲα及びＥＲβの両方を示すものの、驚くべきことに、ＥＲβは子宮内膜の腺上皮から弱く現れるか、又は現れない（Taylor等）。前立腺、尿路上皮及び膀胱の筋層を含む殆どの雄の組織の上皮細胞、並びに睾丸のセルトリ細胞についても、ＥＲβに関して免疫陽性である。重要なＥＲβ免疫反応性は、海馬、すなわちＥＲαだけに関して陽性に染色される組織を除いて脳の殆どの領域において検出された（同書）。
【０００５】
エストロゲンは、循環系に対してプラスの作用を及ぼすことが示され、これは閉経後に観察される心血管疾患のリスクの増大を説明するのに役立つ場合がある。ＬＤＬ ＥＲのアップレギュレーションにより肝臓においてエストロゲンの作用により循環系にプラスとなることがあり（従って、ＬＤＬレベルを低下させる、推定上のＥＲ仲介応答）、一方、動脈壁に対する直接作用が役割を持つこともあり得る。血管損傷後（ネズミの動脈の表皮剥離）、内皮細胞におけるＥＲβメッセージはＥＲαのメッセージの４０倍もアップレギュレートすることが明らかとなった（Makela, S., Savolainen, H., Aavik, E., Myllarniemi, M., Strauss, L., Taskinen, E., Gustafsson, J. A., Hayry, P. (1999), 96(12): 7077-7082）。更に、このような同一の応答は、ＥＲβノックアウトマウスにおいても抑制されるものの、１７β−エストラジオールは、ＥＲαノックアウトマウスにおいて血管損傷応答を抑制することが可能であった（Lafrati, M. D., Karas, R, H., Aronovitz, M., Kim, S., Sullivan, Jr., T. R., Lubahn, D. B., O'Donnell, Jr., T. F., Korach, K. S., Mendelsohn, M. E., Nat. Med. (N. Y.) (1997), 3(5): 545-548; Karas, R. H., Hodgin, J. B., Kwoun, M., Krege, J. H., Aronovitz, M., Mackey, W., Gustafsson, J. A., Korach, K. S., Smithies, O., Mendelsohn, M. E., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1999), 96(26): 15133-15136）。もし、その応答がまだ特定できないＥＲにより抑制されないとすれば、損傷応答を、２種類のＥＲの一方に対して選択的であるリガンドによって抑制することが可能であるだろう。
【０００６】
一般的なエストロゲンがＥＲと結合する場合、ＥＲは、ＨＳＰ９０並びに他の分子シャペロンから分離し、そして別のＥＲと二量体になる。このような活性化の機構を両方のＥＲで共有するため、ＥＲの両方が発現する組織でヘテロ二量化が生じる可能性がある。実際に、ＥＲαとＥＲβのヘテロ二量体は、ＤＮＡと、ＥＲαホモ二量体に等しく、ＥＲβホモ二量体より大きな親和性で結合する（Cowley, S. M., Hoare, S., Mosselman, S., Parker, M. G., J. Biol. Chem. (1997), 272(32): 19858-19862）。
【０００７】
ＥＲサブタイプのシグナリングの効果に関して、膨大な研究がこれまで行われてきたにもかかわらず、なすべきことが依然として残っているのは明らかである。これまで知られている古典的なエストロゲン作用薬による患者の治療は、患者に対して極めて価値があり且つ必要な場合もあるのに、そのダウンサイドリスクなしに行われていないことが知られている。従って、より多くの治療法の選択肢を患者集団に提供する新規なエストロゲン様物質に関して、当該技術における要求を殆ど満たしていない。サブタイプ選択的なエストロゲンは、まさにそうした代わりの選択肢を提供し、本発明において提供される。
【発明の開示】
【０００８】
［発明の要約］
本発明は、ＥＲαとＥＲβの両方に対して明確な親和性を有する化合物を提供する。更に本発明は、その化合物の製造方法、及びそのための使用法を提供する。ある実施形態において、化合物は、式Ｉ：
【化２１】
2008505095.tif 000003
［式中、Ｑが、構造ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶ：
【化２２】
2008505095.tif 000004
を有し、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8及びＲ11がそれぞれ独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＯＲ20、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、ＮＲ20Ｒ21、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｎが０又は１であり、
Ｒ20及びＲ21がそれぞれ独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＣＦ3、ベンジル、−ＣＯ2（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）及び−ＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から選択され、ただし、
ａ）Ｒ2又はＲ3の一方が−ＯＲ20であり、
ｂ）Ｒ9又はＲ10の一方が−ＯＲ20であり、
ｃ）Ｒ2が−ＯＲ20である場合、Ｒ1及びＲ3が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｄ）Ｒ3が−ＯＲ20である場合、Ｒ2及びＲ4が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｅ）Ｒ9が−ＯＲ20である場合、Ｒ8及びＲ10が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｆ）Ｒ10が−ＯＲ20である場合、Ｒ9及びＲ11が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、そして
ｇ）Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11がそれぞれＨであり、ｎが０である場合、Ｒ10がＯＲ20ではない。］
又は式Ｉで表される化合物の薬学的に許容される塩を有する。
【０００９】
ある実施形態において、Ｑは構造ＩＩを有する。かかる実施形態において、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であることもある。さらなるこのような実施形態において、Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。さらなるこのような実施形態において、Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。さらなるこのような実施形態において、Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。
【００１０】
Ｑが構造ＩＩを有し、そしてＲ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である実施形態において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、メトキシ、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルである。かかる実施形態において、ｎは０であることもある。かかる実施形態において、ｎは１であることもある。
【００１１】
ある実施形態において、Ｑは構造ＩＩＩを有する。かかる実施形態において、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であることもある。さらなるこのような実施形態において、Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。さらなるこのような実施形態において、Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。さらなるこのような実施形態において、Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。
【００１２】
Ｑが構造ＩＩＩを有し、そしてＲ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である実施形態において、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、メトキシ、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルである。かかる実施形態において、ｎは０であることもある。さらなるこのような実施形態において、ｎは１である。
【００１３】
ある実施形態において、Ｑは構造ＩＶを有する。かかる実施形態において、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であることもある。さらなるこのような実施形態において、Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。さらなるこのような実施形態において、Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。さらなるこのような実施形態において、Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。
【００１４】
Ｑが構造ＩＶを有し、そしてＲ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である実施形態において、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、メトキシ、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルである。かかる実施形態において、ｎは０であることもある。さらなるこのような実施形態において、ｎは１である。
【００１５】
更に本発明は、以下の構造：
【化２３】
2008505095.tif 000005
【化２４】
2008505095.tif 000006
を有する化合物又は各々の化合物の薬学的に許容される塩を提供する。
【００１６】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、骨粗鬆症を治療若しくは抑制する方法、又は骨の無機質脱落を抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００１７】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性直腸炎又は結腸炎を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００１８】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、前立腺肥大、子宮平滑筋腫、乳ガン、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣ガン、メラノーマ、前立腺ガン、結腸ガン、グリオーム又はアスティオブラストミア（astioblastomia）を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００１９】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、コレステロール、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）若しくはＬＤＬレベルを低下させる方法、又は高コレステロール血症、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、再狭窄若しくは血管痙攣を抑制若しくは治療する方法、又は血管損傷を抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２０】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、認知力の強化若しくは神経保護する方法、又は老年性認知症、アルツハイマー病、認識衰退、脳卒中、不安又は神経変性障害を治療若しくは抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２１】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、フリーラジカル誘導病状を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２２】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、膣若しくは外陰部萎縮、萎縮性膣炎、膣の乾燥、掻痒症、性交疼痛症、排尿困難、頻尿、尿失禁、又は尿路感染を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２３】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、血管運動症状を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２４】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、避妊する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２５】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、関節リウマチ、変形性関節症又は脊椎関節症を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２６】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、関節鏡視下又は外科的処置による続発性の関節障害を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２７】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、受胎能を処理又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２８】
他の実施形態において、本発明は、哺乳動物において、虚血、再かん流障害、喘息、胸膜炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、ブドウ膜炎、敗血症、出血性ショック又はII型糖尿病を治療又は抑制する方法であって、有効量の、本発明の化合物を哺乳動物に供給することを特徴とする方法を提供する。
【００２９】
本発明によれば、更に、本発明の１以上の化合物及び１以上の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。ある実施形態において、医薬組成物は、１以上の５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、５−ブロモ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、３，８−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、３，９−ジヒドロキシ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−１２−オキサ−ジベンゾ［ａ，ｅ］アズレン−１１−カルボニトリル、３，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、３，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、３，８−ジヒドロキシ−５，５−ジメチル−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−３，８−ジオール、３，８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−１０−カルボニトリル、１０−ブロモ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−３，８−ジオール、２，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−ベンゾニトリル、２，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル及び１以上の薬学的に許容される担体を含む。
【００３０】
他の実施形態において、本発明は、以下の工程：
ａ）式Ｖ：
【化２５】
2008505095.tif 000007
［式中、ＸがＣｌ、Ｂｒ又はＩであり、Ｐが保護基であり、そして他の構成変数は上述した通りである。］
で表される化合物を、式ＶＩ：
【化２６】
2008505095.tif 000008
［式中、Ｍが金属であり、Ｌが配位子であり、Ｐ’がＨ又は保護基であり、ｎ’が０〜５の整数であり、そして他の構成変数は上述した通りである。］
で表される化合物とカップリングさせて、式ＶＩＩ：
【化２７】
2008505095.tif 000009
で表される化合物を形成する工程、及び
ｂ）基Ｐ及びＰ’を除去し、得られる脱保護化合物を環化して、式Ｉ：
【化２８】
2008505095.tif 000010
で表される化合物を形成する工程を含む、本発明の化合物の製造方法を提供する。
【００３１】
ある実施形態において、ＰがＳｉ（Ｒ’）3、ＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル、ＣＯ2ベンジル又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、各Ｒ’が独立して、Ｃ1〜Ｃ6アルキル又はフェニルであり、そしてＰ’がＨ、Ｓｉ（Ｒ’）3、ＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、ここで各Ｒ’が独立して、Ｃ1〜Ｃ6アルキル又はフェニルである。
【００３２】
ある実施形態において、ＰがＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル又はＣＯ2ベンジルであり、Ｐ’がＣ1〜Ｃ6アルキルであり、そしてａ）ＭがＢであり、Ｌが（ＯＨ）又は（ＯＣ1〜Ｃ6アルキル）であり、ｎ’が２であるか、又はｂ）ＭがＳｎであり、Ｌが（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）であり、ｎ’が３である。かかる実施形態において、工程ｂ）におけるＰが有機又は無機水酸化物を用いて除去され、工程ｂ）におけるＰ’が三臭化ホウ素、ヨウ化水素酸、ピリジンヒドロクロリド又はピリジンヒドロブロミドを用いて除去されることもある。上述の実施形態において、環化は、Ｐ’の除去中に生じることもある。
【００３３】
［発明の詳細な説明］
ある実施形態において、本発明は、式Ｉ：
【化２９】
2008505095.tif 000011
［式中、Ｑが、構造ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶ：
【化３０】
2008505095.tif 000012
を有し、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8及びＲ11がそれぞれ独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＯＲ20、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、ＮＲ20Ｒ21、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｎが０又は１であり、
Ｒ20及びＲ21がそれぞれ独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＣＦ3、ベンジル、−ＣＯ2（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）及び−ＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から選択され、ただし、
ａ）Ｒ2又はＲ3の一方が−ＯＲ20であり、
ｂ）Ｒ9又はＲ10の一方が−ＯＲ20であり、
ｃ）Ｒ2が−ＯＲ20である場合、Ｒ1及びＲ3が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｄ）Ｒ3が−ＯＲ20である場合、Ｒ2及びＲ4が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｅ）Ｒ9が−ＯＲ20である場合、Ｒ8及びＲ10が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、
ｆ）Ｒ10が−ＯＲ20である場合、Ｒ9及びＲ11が独立して、水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、ハロゲン、−ＣＦ3、−ＣＦ2ＣＦ3、−ＣＨ2ＣＦ3、−ＳＲ20、−ＣＮ、−ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、−ＣＨ＝ＣＨＣＮ、−ＮＯ2、−ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＯ2、−ＣＨ＝ＣＨＮＯ2及び−ＣＯＲ20からなる群から選択され、そして
ｇ）Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11がそれぞれＨであり、ｎが０である場合、Ｒ10がＯＲ20ではない。］
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３４】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑは構造ＩＩを有する。
【００３５】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。式Ｉで表される化合物の他の実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。更に他の実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。更に他の実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。
【００３６】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、且つＲ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、そしてＲ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルである。
【００３７】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、且つＲ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、ｎが０である。
【００３８】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑが構造ＩＩを有し、且つＲ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、ｎが１である。
【００３９】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑは構造ＩＩＩを有する。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。更に他の実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。他の実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。
【００４０】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、そしてＲ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、メチル（Me）、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルである。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、そしてｎが０である。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＩＩを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、そしてｎが１である。
【００４１】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑは構造ＩＶを有する。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ3及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。更に他の実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ2及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。他の実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ2及びＲ10がそれぞれ独立して、ＯＲ20である。
【００４２】
式Ｉで表される化合物のある実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、そしてＲ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルである。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、そしてｎが０である。ある実施形態において、Ｑが構造ＩＶを有し、Ｒ3及びＲ9がそれぞれ独立して、ＯＲ20であり、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ8及びＲ10がそれぞれ独立して、水素又はハロゲンであり、Ｒ11がＣＮ、ハロゲン、ＯＣＨ3、ＣＨ2ＣＮ、ＮＯ2又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、そしてｎが１である。
【００４３】
ある実施形態において、本発明は、以下の構造：
【化３１】
2008505095.tif 000013
【化３２】
2008505095.tif 000014
【化３３】
2008505095.tif 000015
を有する化合物又は各々の化合物の薬学的に許容される塩を提供する。
【００４４】
本発明の化合物は、エストロゲン剤を含み、エストロゲン剤に関し、又はエストロゲン剤により影響を及ぼされる、哺乳動物における種々の病気及び疾患の症状の治療又は抑制に有用である。かかる病気及び疾患の非限定例としては、骨粗鬆症、骨の無機質脱落、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性直腸炎、結腸炎、前立腺肥大、子宮平滑筋腫、乳ガン、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣ガン、メラノーマ、前立腺ガン、結腸ガン、グリオーム、astioblastomia、高コレステロール血症、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、再狭窄、血管痙攣及び血管損傷の治療又は抑制である。
【００４５】
更に本発明の化合物は、認知力を強化又は神経保護させ、哺乳動物における老年性認知症、アルツハイマー病、認識衰退、脳卒中、不安又は神経変性障害を治療又は抑制し、哺乳動物において、フリーラジカル誘導病状を治療又は抑制し、哺乳動物において、膣若しくは外陰部萎縮、萎縮性膣炎、膣の乾燥、掻痒症、性交疼痛症、排尿困難、頻尿、尿失禁及び尿路感染を治療又は抑制し、そして哺乳動物において、血管運動症状を治療又は抑制する場合での使用法を見出した。
【００４６】
更に本発明の化合物は、避妊し、哺乳動物において、関節リウマチ、変形性関節症又は脊椎関節症を治療又は抑制し、哺乳動物において、関節鏡視下又は外科的処置による続発性の関節障害を治療又は抑制し、哺乳動物において、受胎能を処理又は抑制し、哺乳動物において、虚血、再かん流障害、喘息、胸膜炎、多発性硬化症、全身性紅斑性狼瘡、ブドウ膜炎、敗血症、出血性ショック又はII型糖尿病を治療又は抑制し、そして哺乳動物において、コレステロール、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）又はＬＤＬレベルを低下させる場合に有用である。
【００４７】
更に本発明は、本発明の１以上の化合物及び１以上の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。ある実施形態において、医薬組成物は、１以上の５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、５−ブロモ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−３，９−ジオール、３，８−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、３，９−ジヒドロキシ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−１２−オキサ−ジベンゾ［ａ，ｅ］アズレン−１１−カルボニトリル、３，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、３，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、３，８−ジヒドロキシ−５，５−ジメチル−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル、６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−３，８−ジオール、３，８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−１０−カルボニトリル、１０−ブロモ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−ｃ］クロメン−３，８−ジオール、２，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−ベンゾニトリル、２，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル及び１以上の薬学的に許容される担体を含む。
【００４８】
本発明の化合物は、式Ｖ：
【化３４】
2008505095.tif 000016
［式中、ＸがＣｌ、Ｂｒ又はＩであり、Ｐが保護基である。］
で表される化合物を、式ＶＩ：
【化３５】
2008505095.tif 000017
［式中、Ｍが金属であり、Ｌが配位子であり、ｎ’が０〜５の整数であり、Ｐ’がＨ又は保護基である。］
で表される化合物とカップリングさせて、式ＶＩＩ：
【化３６】
2008505095.tif 000018
で表される化合物を形成し、そして
ｂ）基Ｐ及びＰ’を除去し、得られる脱保護化合物を環化して、式Ｉ：
【化３７】
2008505095.tif 000019
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｑ、ｎ、Ｒ7、Ｒ7'、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11は上記で定義されるとおりである。］
で表される化合物を形成することによって調製され得る。
【００４９】
上述した方法のある実施形態において、ＰがＳｉ（Ｒ’）3、ＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル、ＣＯ2ベンジル、又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、各Ｒ’が独立して、Ｃ1〜Ｃ6アルキル又はフェニルであり、そしてＰ’がＨ、Ｓｉ（Ｒ’）3、ＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル、又はＣ1〜Ｃ6アルキルであり、ここで、各Ｒ’が独立して、Ｃ1〜Ｃ6アルキル又はフェニルである。上述した方法の他の実施形態において、ＰがＣＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯＯＣ1〜Ｃ6アルキル、ＣＯベンジル又はＣＯ2ベンジルであり、Ｐ’がＣ1〜Ｃ6アルキルであり、そしてａ）ＭがＢであり、Ｌが（ＯＨ）又は（ＯＣ1〜Ｃ6アルキル）であり、ｎ’が２であるか、又はｂ）ＭがＳｎであり、Ｌが（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）であり、ｎ’が３である。かかる実施形態において、工程ｂ）におけるＰが有機又は無機水酸化物を用いて除去され、工程ｂ）におけるＰ’が三臭化ホウ素、ヨウ化水素酸、ピリジンヒドロクロリド又はピリジンヒドロブロミドを用いて除去されることもある。上述の実施形態において、環化は、Ｐ’の除去中に生じることもある。
【００５０】
本発明の化合物は、その化合物の薬学的に許容される塩を含むが、ここで、本発明の化合物が塩基部分を含む場合は、該薬学的に許容される塩は、有機及び無機酸から形成することが可能である：例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、及び同様に知られている許容される酸。本発明の化合物が酸性部分を含む場合、塩は、有機及び無機塩基から形成されても良い：例えば、アルカリ金属塩（例：ナトリウム、リチウム又はカリウム）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、１〜６個の炭素原子を含むアルキルアンモニウム塩又は各アルキル基に１〜６個の炭素原子を含むジアルキルアンモニウム塩、及び各アルキル基に１〜６個の炭素原子を含むトリアルキルアンモニウム塩。
【００５１】
本明細書で用いられるアルキルなる用語は、直鎖、分岐及び環式炭化水素を含む炭化水素基を意味する目的で使用され、非限定例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、シクロプロピルメチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、シクロペンチル、シクロペンチルメチル、ｎ−ヘキシル、シクロヘキシル等が挙げられる。本明細書において、アルキルなる用語は、非環式炭化水素基及び環式炭化水素基の両方を包含する意図で使用されると理解すべきである。本発明による化合物のある実施形態において、アルキル基は非環式である。他の実施形態において、アルキル基は環式であり、そして他の実施形態において、アルキル基は、環式と非環式の両方である。
【００５２】
本発明の化合物及び方法におけるアルキル基は、１個のハロゲンから最大で過ハロゲン化で任意に置換されていても良い。ある実施形態において、ペルフルオロ基が好ましい。ハロゲンで任意に置換されたアルキル基の例は、ＣＦ3、ＣＨ2ＣＦ3、ＣＣｌ3、ＣＨ2ＣＨ2ＣＦ3ＣＨ3、ＣＨ（ＣＦ3）2及び（ＣＨ2）6−ＣＦ2ＣＣｌ3である。
【００５３】
本発明の化合物の置換基は、本明細書の種々の位置で群又は範囲で開示している。本発明は、かかる群及び範囲の構成をそれぞれ、及び各々のサブコンビネーションで含むことを特に意図している。例えば、“Ｃ1〜Ｃ6アルキル”なる用語は、特に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル等を個々に開示する意図で用いられている。本発明で用いられるハロゲンなる用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含む、第ＶＩＩ族元素の通常の意味を有している。
【００５４】
本発明の方法における化合物が１個以上の非対称原子含むことにより、光学異性体（エナンチオマー）及びジアステレオマーを生じさせ得る場合、本発明の方法は、全てのかかる光学異性体（エナンチオマー）及びジアステレオマー（幾何異性体）；並びにラセミ体で且つ分解され、鏡像異性的に純粋なＲ及びＳ立体異性体；並びにＲ及びＳ立体異性体の他の混合物又はこれらの薬学的に許容される塩を含む。光学異性体を、当業者等に知られている標準的な手法によって純粋な形で得ることができ、限定するものではないが、例えば、ジアステレオマー塩の形成、速度論的分割、及び不斉合成が挙げられる。本発明は、全ての考え得る位置異性体、及びその混合物を包含すると理解され、これを、当業者等に知られている標準的な分離処手法によって純粋な形で得ることができ、限定するものではないが、例えば、カラムクロマトグラフィ、薄膜クロマトグラフィ及び高速液体クロマトグラフィが挙げられる。
【００５５】
本発明に含まれる化合物又は物質を供給することに関し、本発明により使用される“供給”なる用語は、かかる化合物又は物質を直接投与すること、或いは有効量の化合物又は物質を体内で形成するであろうプロドラッグ、誘導体又は類似体を投与することを意味する。
【００５６】
以下に記載される標準的な薬理試験の手法から明らかとなるように、本発明の化合物は、エストロゲン欠乏又は過剰によって少なくとも部分的に仲介されるか、或いはエストロゲン剤の使用により治療又は抑制されても良い症状、疾患又は病状の治療又は抑制において有用なＥＲモジュレーターである。本発明の化合物は、産生される内因性エストロゲンの水準が大きく減少している近閉経、閉経又は閉経後の患者の治療において特に有用である。閉経は、最後の自然月経期間として定義されるのが一般的であり、そして血流中おける循環エストロゲンを実質的に低減させる卵巣機能の停止という特徴を有している。本明細書で用いられるように、閉経は、外科的に又は化学的に生じ得るか、或いは卵巣機能の早期縮小又は停止をもたらす病状により生じるエストロゲン産生の減少状態も含む。
【００５７】
従って、本発明の化合物は、骨粗鬆症の治療又は抑制、及び新しい骨組織の個々の形成と古い組織の吸収におけるバランスの悪さから生じ、これにより骨の純損失をもたらすこともある骨の無機質脱落の抑制において有用である。かかる骨の減少は、所定の範囲の個体、特に閉経後の女性、両側卵巣摘出を受けた女性、長期間のコルチステロイド療法を受けている若しくは受けた女性、性器異常発育を経験している女性、及びクッシング症候群を経験している女性にもたらされる。歯及び口腔の骨を含む骨置換への特定の要求について、骨折、欠陥骨格を有する個体、及び骨関連の手術及び／又は人工器官の移植を受けている個体において、上記の化合物を用いて対処することも可能である。上述したような課題に加えて、本発明の化合物を、変形性関節症、低カルシウム血症、高カルシウム血症、パジェット病、骨軟化症、骨石灰脱失症、多発性骨髄腫及び骨組織に対して悪影響を与える他の形態のガンの治療又は抑制において用いることが可能である。
【００５８】
本発明の化合物は、前立腺肥大、子宮平滑筋腫、乳ガン、子宮内膜症、子宮内膜ガン、多嚢胞性卵巣症候群、子宮内膜ポリープ、良性乳房疾患、腺筋症、卵巣ガン、メラノーマ、前立腺ガン、結腸ガン、及びグリオーム又はastioblastomia等のＣＮＳガンを含む良性又は悪性の異常組織の成長を治療又は抑制する場合についても有用である。
【００５９】
本発明の化合物は、心臓保護作用を示し、コレステロール、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）、及びＬＤＬレベルを低下させる場合に有用であり；高コレステロール血症、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、再狭窄及び血管痙攣を抑制若しくは治療し、そして免疫介在性血管損傷を誘導する細胞イベントによる血管損傷を抑制する場合に有用である。このような心臓血管保護特性は、閉経後の患者をエストロゲンで治療して骨粗鬆症を抑制する場合、及びエストロゲン療法を必要としている男性に対して非常に重要である。
【００６０】
本発明の化合物は、抗酸化物質でもあるので、フリーラジカル誘導病状を治療又は抑制するのに有用である。抗酸化物質療法を必要と保証する特定の状況は、中枢神経系障害、アルツハイマー病、骨疾患、老化、炎症性疾患、末梢血管疾患、関節リウマチ、自己免疫疾患、呼吸困難、肺気腫、再かん流障害の予防、ウィルス性肝炎、慢性活動性肝炎、結核、乾癬、全身性紅斑性狼瘡、成人呼吸窮迫症候群、中枢神経系の外傷及び脳卒中が原因である。
【００６１】
本発明の化合物は、認知力の強化において、及び老年性認知症、アルツハイマー病、認識衰退、神経変性障害の治療又は抑制において、神経保護作用又は認知力の強化の提供において有用でもある。
【００６２】
本発明の化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性直腸炎、クローン病、結腸炎、及び更年期関連症状、例えば、顔面潮紅を含む血管運動症状、膣若しくは外陰部萎縮、萎縮性膣炎、膣の乾燥、掻痒症、性交疼痛症、排尿困難、頻尿、尿失禁、尿路感染、血管運動症状（例えば顔面潮紅、筋肉痛、関節痛、不眠症、被刺激性等）、並びに男性型禿頭症、皮膚萎縮、アクネ、II型糖尿病、不正子宮出血、及び不妊症を治療又は抑制するのに有用でもある。
【００６３】
本発明の化合物は、無月経が有利である病状、例えば白血病、子宮内膜除去、慢性腎疾患若しくは慢性肝疾患又は凝固病若しくは凝固障害に有用である。
【００６４】
本発明の化合物は、特にプロゲスチンと結合された場合に避妊薬として使用可能である。
【００６５】
本発明の医薬組成物との関連で有効成分なる用語は、薬学的な利益を提供しないとして一般に認識されるであろう非活性成分と対照的に、主要な薬学的利益を提供する医薬組成物の成分を意味するように意図される。医薬組成物なる用語は、少なくとも１の有効成分、及び少なくとも１の有効成分ではない成分（非限定例、フィラー、色素又は持続放出に用いられる機構）を含む組成物を意味するよう意図され、これにより、組成物は、哺乳動物（非限定例、人間）において特定の有効な成果のために使用にすることができる。
【００６６】
特定の病状又は障害の治療又は抑制に対して投与する場合、有効な投薬量は、利用される特定の化合物、投与の方式、症状、及びその重症性、治療される症状の重症性、並びに治療される個体に関連する種々の物理的要因に応じて変更可能である。本発明の化合物は、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日の経口量で有効に投与され得る。単回投与又は２回以上の分割投与で、約１０ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日の投与が好ましく、更に好ましくは約５０ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日であろう。計画された１日の投与量は、投与経路により変更されるであろう。
【００６７】
本発明の有効化合物を受け手の血流に対して導くのに有用な任意の手法、例えば経口で、移植を介して、非経口で（静脈注射、腹腔内投与及び皮下注射を含む）、直腸内に、鼻腔内に、経膣的に、及び経皮的にてかかる投与量を投与しても良い。
【００６８】
本発明の有効化合物を含む経口製剤は、従来から用いられている任意の経口剤形、例えばタブレット、カプセル、口腔形、トローチ、ロゼンジ（lozenges）及び経口液体、懸濁液又は溶液を含んでいても良い。カプセルは、活性化合物と、不活性フィラー及び／又は希釈剤、例えば薬学的に許容されるデンプン（例えば、トウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、糖類、人工甘味料、粉末状セルロース、例えば結晶性及び微結晶性セルロース、小麦粉、ゼラチン、ガム等との混合物を含んでいても良い。有用なタブレット製剤は、一般的な圧縮、湿式造粒又は乾式造粒法によって作製されても良く、そして薬学的に許容される希釈剤、結合剤、滑剤、崩壊剤、表面変性剤（界面活性剤を含む）、懸濁化剤又は安定剤（これを限定するものではないが、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアゴム、キサンタンゴム、クエン酸ナトリウム、錯体シリケート、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロース、ソルビトール、リン酸ジカルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプン及び粉砂糖）を利用してもよい。好ましい表面変性剤は、非イオン性及びアニオン性の表面変性剤が含まれる。表面変性剤の代表例は、これを限定するものではないが、ポロキサマー（poloxamer）188、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアール（cetostearl）アルコール、セトマクロゴール乳化ワックス（cetomacrogol emulsifying wax）、ソルビタンエステル、コロイド状の二酸化ケイ素、ホスフェート、ナトリウムドデシルスルフェート、マグネシウムアルミニウムシリケート、及びトリエタノールアミンが含まれる。本発明における経口製剤は、標準的な遅延又は持続放出製剤を利用して、活性化合物の吸収性を変更することが可能である。経口製剤は、水又は果汁において投与用有効成分から構成されていても良く、必要により適当な可溶化剤又は乳化剤を含んでいても良い。
【００６９】
化合物をエアロゾルの剤形で直接気道に投与するのが望ましい場合もある。
【００７０】
本発明の化合物を、非経口的に又は腹腔内に投与することも可能である。遊離塩基又は薬学的に許容される塩としての活性化合物の溶液又は懸濁液を、ヒドロキシ−プロピルセルロース等の界面活性剤と適当に混合された水中において調製することが可能である。分散液をグリセロール、液体のポリエチレングリコール及び油中におけるこれらの混合物において調製することも可能である。保存及び使用の通常の条件下、かかる製剤は、微生物の成長を抑制するための防腐剤を含んでいる。
【００７１】
注入可能な使用に好適な医薬剤形は、注入可能な無菌溶液又は分散液の即時調製のための無菌の水溶液又は分散液及び無菌粉末を含む。全ての場合において、剤形は、無菌である必要があり且つ簡易な注入可能性（syringability）が存在する程度に流動性である必要がある。製造及び保存条件下で安定である必要があり且つバクテリア及び菌類等の微生物の汚染作用に対して腐敗しないように保存する必要がある。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例：グリセロール、プロピレングリコール及び液体のポリエチレングリコール）、これらの好適な混合物及び植物油を含む溶剤又は分散媒体であっても良い。
【００７２】
このような開示目的において、経皮投与は、体の表面並びに上皮組織及び粘膜組織を含む身体上の通路の内層を通過する全ての投与を含むと理解される。かかる投与は、ローション、クリーム、フォーム、パッチ、懸濁液、溶液、及び座薬（直腸及び膣）における本発明の化合物、又はその薬学的に許容される塩を用いて行われても良い。
【００７３】
経皮投与は、活性化合物、及び該活性化合物に対して不活性であり、皮膚に対して無毒であり、そして皮膚を介して血流中に体内吸収用の薬剤の運搬を可能にする担体を含む経皮パッチを用いて達成することができる。担体は、クリーム及び軟膏、ペースト、ゲル、並びに閉塞手段等の多くの形態を取ることが可能である。クリーム及び軟膏は、水中油型又は油中水型の粘稠液又は半固体エマルジョンであっても良い。有効成分を含む石油又は親水性石油に分散される吸収性粉末より構成されるペーストも適当である。種々の閉鎖手段を使用して、有効成分を血流中に放出することが可能であり、例えば、担体を伴う有効成分若しくは担体を伴わないい有効成分を含む容器を覆う半透膜、又は有効成分を含むマトリックスが挙げられる。他の閉鎖手段は文献に知られている。
【００７４】
座薬製剤は、カカオバター（ワックスを添加して、又はワックスを添加せず座薬の融点を変更する）及びグリセリンを含む一般的な材料から作製されても良い。水溶性の座薬基体、例えば種々の分子量のポリエチレングリコールを用いることも可能である。
【００７５】
明確にするために別個の実施形態で記載されている本発明の所定の特徴を、単一の実施形態での組み合わせで提供可能でもあることは認識される。逆に言えば、明確にするために個々の実施形態で記載されている本発明の種々の特徴を、別個に又は好適なサブコンビネーションで提供することも可能である。
【００７６】
本発明の明細書に記載されている化合物、組成物及び方法のある実施形態において、化合物、組成物及び方法は、３，８−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリルを除外する。
【００７７】
本発明を、特定の実施例に基づき更に詳細に説明する。以下の実施例は、説明目的のために提供されているものであり、いかなる手法で本発明を限定する意図で用いられているものではない。当業者等は、本質的に同一の結果を得るために変更又は修正され得る種々の重要ではないパラメータを容易に認識するであろう。
【実施例】
【００７８】
［実施例の化合物の合成］
以下の実施例に記載の化合物の合成を、以下のスキーム１〜９に記載した。本明細書に記載の化学的な製造法は、当該技術で知られている任意の好適な方法によりモニターすることが可能であった。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例、1Ｈ又は13Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例、ＵＶ−可視）、及び質量分光法等の分光光度手段、或いは高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＣＬ）又は薄膜クロマトグラフィ等のクロマトグラフィによりモニター可能であった。
【００７９】
【化３８】
2008505095.tif 000020
【００８０】
【化３９】
2008505095.tif 000021
【００８１】
【化４０】
2008505095.tif 000022
【００８２】
【化４１】
2008505095.tif 000023
【００８３】
【化４２】
2008505095.tif 000024
【００８４】
本発明の代表的な調製例を、以下に記載する。化合物の命名は、構造をChemDraw（登録商標）5又はChemDraw（登録商標）Ultraに入力し、そして構造から名称への変換ツールにより名称を生成して作成した。
【００８５】
［実施例１、２及び３の調製］（スキーム１より）
２−ブロモ−６−メトキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ナフタレン−１−オン（３）
６−メトキシ−１−テトラロン１（１００ｇ、０．５６７モル）をエチルエーテル（２Ｌ（リットル））に溶解させ、そして１時間でＢｒ2（３０ｍｌ、０．５９モル）を滴下し、処理した。溶液を更に２時間撹拌し、その後、１０％のＮａ2ＳＯ3溶液、ＮａＨＣＯ3及びブライン（brine）で洗浄した。この溶液を一晩放置し、次の日、３０ｇの結晶をろ別した。残りの溶液を濃縮して、更に９８ｇの生成物を得た。所望の生成物を集めた収量は、１２８ｇ（８８％）であった。材料を“そのまま（as is）”次の反応に使用した。
【００８６】
酢酸２−ブロモ−６−メトキシ−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（５）
３（８０ｇ、０．３２５モル）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解した溶液を−７８℃に冷却し、０．６５リットルの、ＴＨＦにおける０．５３モルのＬｉＨＭＤＳをゆっくり添加して処理した。反応物を−７８℃で更に１５分間撹拌し、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中における無水酢酸（１００ｇ、０．９８モル）を迅速に添加して処理した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、反応混合物をエチルエーテルで希釈し、そしてＨＣｌ（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ3、水及びブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ4で乾燥した後、反応物をろ過し、濃縮して、８３ｇの、放置した時に最終的に固化される暗色油を得た。融点：３８〜４２℃；
【化４３】
2008505095.tif 000025
【００８７】
２−（２，４−ジメトキシ−フェニル）−６−メトキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ナフタレン−１−オン（７）
化合物５（４．０ｇ、０．０１４モル）及び２，４−ジメトキシベンゼンボロン酸（３．０ｇ、０．０１６モル）の溶液、ＫＦ（４．０ｇ、０．０６９モル）及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（０．７５ｇ、０．０００７モル）を、ジオキサン（１００ｍＬ）中において還流下で一晩加熱した。粗反応生成物（室温まで冷却後）を、５０％ＮａＯＨ（３０ｍＬ、水溶液）溶液で処理し、室温条件下、ＴＣＬにより酢酸エノールの加水分解が終了ことを示すまで撹拌した。塩基性溶液を２ＮのＨＣｌで中和し、減圧下にジオキサンを除去した。これにより得られた混合物を酢酸エチルで抽出し、ＮａＨＣＯ3、ブラインで洗浄し、そしてＭｇＳＯ4で乾燥した。ろ過し、濃縮し、シリカゲルでクロマトグラフィ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン−勾配）して、白色固体として７を得た（２．９ｇ、７１％）。融点：１１６〜１１８℃。
【化４４】
2008505095.tif 000026
【００８８】
５，６−ジヒドロ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−３，９−ジオール（実施例１）
Ｐｙｒ−ＨＣｌ中における化合物７（１．５ｇ、０．００４８モル）を２００℃で１時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ及び２ＮのＨＣｌ間に分配した。ＥｔＯＡｃ層をＮａＨＣＯ3、ブラインで洗浄し、そしてＭｇＳＯ4で乾燥した。溶液をろ過し、濃縮し、そしてシリカゲルでクロマトグラフィ処理（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３：７〜６：４）した。生成物（実施例１）を、約１２％の完全酸化物質（実施例２）で汚染した：融点＝２１９〜２２０℃；ＭＳ  ｍ／ｚ２５３（Ｍ＋Ｈ）+。
【００８９】
ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−３，９−ジオール（実施例２）
実施例１（０．２２ｇ、０．０００８７モル（純度８８％の物質に対して））を、ＤＤＱ（０．２４ｇ、０．００１モル）で処理し、そしてジオキサン（２０ｍＬ）中で３０分間還流加熱した。反応混合物をシリカゲルで濃縮し、クロマトグラフィ処理して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３：７）、実施例２（０．１ｇ、４６％）を得た。融点：２５０〜２６０℃。
【化４５】
2008505095.tif 000027
【００９０】
５−ブロモ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−３，９−ジオール（実施例３）
実施例２（０．２５ｇ、１．０ミリモル）及びピリジン（０．７９ｇ、１０ミリモル）を塩化メチレン（１０ｍｌ）に溶解した溶液を、無水酢酸（０．５０ｇ、５．０ミリモル）で処理した。２時間後、反応物を、２ＮのＨＣｌで洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、ビス−アセチル化中間体を白色固体として得た（０．２８ｇ、８５％）。ビス−アセテート（０．２８ｇ、０．８４ミリモル）を塩化メチレン（１０ｍｌ）に溶解した溶液を、Ｂｒ2（０．１５ｇ、０．９２ミリモル）で処理した。１時間後、反応物を１０％亜硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥し、そして濃縮した。粗生成物をＴＨＦ（１０ｍｌ）／ＭｅＯＨ（２ｍｌ）に溶解させ、２ＮのＮａＯＨ（１ｍｌ）を添加した。１時間後、反応物を２ＮのＨＣｌに注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を乾燥し、そして濃縮して、固体を得て、これをＣＨ2Ｃｌ2と一緒に粉末にし、その後、ろ過して、実施例３を固体として得た（０．１３ｇ、４７％）。融点：１９７〜２００℃。
【化４６】
2008505095.tif 000028
【００９１】
［実施例４及び５の調製］（スキーム１及び２より）
６−ブロモ−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−５−オン（４）
２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−５−オン２（０．５ｇ、２．６２ミリモル）を、酢酸エチル及びクロロホルムの１：１混合物（１０ｍＬ）に取り込み、その後、ＣｕＢｒ2（１．１７ｇ、５．２６ミリモル）を添加し、そして反応物を７５℃で１時間加熱した。反応物をろ過し、そして濃縮した。これにより得られた材料を、Ｅｔ2Ｏに取り込み、水（２回）、飽和ＮａＨＣＯ3（２回）及びブライン（１回）で洗浄した。エーテル層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮して、０．１３９ｇ（９８．５％）の生成物４を粘稠液として得た。
【化４７】
2008505095.tif 000029
【００９２】
酢酸６−ブロモ−２−メトキシ−８，９−ジヒドロ−７Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−５−イルエステル（６）
ＬｉＨＭＤＳ（９．９８ｍＬの、ＴＨＦ中における１Ｍ溶液、９．９８ミリモル）を、ＴＨＦ（１０ｍＬ）に取り込み、−７８℃に冷却した。その後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中における６−ブロモ−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−ベンゾシクロヘプテン−５−オン４（２．４４ｇ、９．０７ミリモル）を滴下し、２０分間撹拌した。ＴＨＦ（２ｍＬ）中におけるＡｃ2Ｏを添加し、０℃で１時間撹拌した。反応物をエーテルで希釈し、その後、１ＮのＨＣｌ（２回）、希ＮａＨＣＯ3及びブラインで洗浄し、そしてＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮して、３．０ｇの生成物６を黄色の粘稠液として得た。
【化４８】
2008505095.tif 000030
【００９３】
２，５−ジメトキシ−３−（６−メトキシ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−ベンゾニトリル（１４）
窒素下に酢酸２−ブロモ−６−メトキシ−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル５（５．６ｇ、１９ミリモル）及び２，５ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル１３（７．０ｇ、２１ミリモル）をジオキサンに溶解した溶液に対して、臭化銅（０．１５ｇ、１．１ミリモル）及びジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．７４ｇ、１．１ミリモル）を添加し、そしてこの混合物を４時間還流した。その後、反応物を冷却し、そして２ＮのＮａＯＨ及びメタノールを添加した。反応物を約４０℃に暖め、数時間撹拌した。反応物を再び冷却し、その後、２ＮのＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。溶剤を減圧下に除去し、そして残留物に酢酸エチルを添加した。この混合物を飽和炭酸水素ナトリウム及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、そして、酢酸エチル／ヘキサン（１：９〜３：７）を用いてシリカゲルでクロマトグラフィ処理して、生成物を黄褐色の固体として溶出した（１．２ｇ）。
【化４９】
2008505095.tif 000031
【００９４】
２，５−ジメトキシ−３−（２−メトキシ−５−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）ベンゾニトリル（１５）
酢酸６−ブロモ−２−メトキシ−８，９−ジヒドロ−７Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−５−イルエステル６（１．０ｇ、３．２１ミリモル）を、ＣｕＩ（０．０６１ｇ、０．３２１ミリモル）、Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（０．２９６ｇ、０．２５７ミリモル）及び必要量の１／３の２，５−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（合計１．１５ｇに対して〜０．３８３ｇ、合計３．３５ミリモル）と一緒にジオキサン（１５ｍＬ）に取り込んだ。残りの２／３の２，５−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（０．７６７ｇ）をジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、そして滴下漏斗に導入した。反応物を還流下で３０分間加熱し、その後、５ｍＬのスタンナン／ジオキサン混合物を添加し、更に３０分間還流した。したがって、残りの５ｍＬのスタンナン／ジオキサン混合物を添加し、反応物を一晩還流を続けた。ＴＣＬにより、出発材料が依然として存在していることが示された。その後、更にＣｕＩ（０．０３ｇ）及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（０．０７４ｇ）を添加し、更に３時間還流した。アセテートを加水分解するために、同体積の２ＮのＮａＯＨを、ＴＨＦ及びＭｅＯＨと一緒に添加し、反応物を５０℃で１時間加熱した。２ＮのＨＣｌを添加して、ｐＨ１を得た。反応混合物を濃縮し、これにより得られた材料をＥｔＯＡｃに取り込み、飽和ＮａＨＣＯ3（２回）、ブライン（１回）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、Florisil（登録商標）で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィした（ＥｔＯＡＣ／ヘキサン；１：９〜１：７）。生成物を、０．３０６ｇの、黄色固体の生成物として単離し、そしてこの材料の０．１３０ｇを、ＰｒｅｐＨＰＬＣ（Luna（登録商標）C18（Phenomenex, Torrance, California）；１：１ＡｃＣＮ／Ｈ2Ｏ〜９５：５ＡｃＣＮ／Ｈ2Ｏ）により更に精製した。
【化５０】
2008505095.tif 000032
【００９５】
３，８−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−１０−カルボニトリル（実施例４）
２，５−ジメトキシ−３−（６−メトキシ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−ベンゾニトリル１４（０．５ｇ、１．４８ミリモル）をジクロロメタンに溶解した溶液に対して、１．０Ｍの三臭化ホウ素（１０ｍＬ、１０ミリモル）を添加し、これを４８時間撹拌した。反応物を２ＮのＨＣｌでクエンチングし、減圧下に溶剤を除去し、そして残留物を酢酸エチルと２ＮのＨＣｌの間に分配した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濃縮した。残留物を、メタノール／ジクロロメタン（２：９８〜３：９７）を用い、Biotage（登録商標）フラッシュ精製系（Uppsala, Sweden）でクロマトグラフィした。生成物画分を集め、濃縮し、これにより黄色固体の沈殿を得た（０．１６ｇ）。融点：３５５〜３５８℃。
【化５１】
2008505095.tif 000033
【００９６】
３，９−ジヒドロキシ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−１２−オキサ−ジベンゾ［Ａ，Ｅ］アズレン−１１−カルボニトリル（実施例５）
２，５−ジメトキシ−３−（２−メトキシ−５−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾシクロヘプテン−６−イル）−ベンゾニトリル１５（０．１２２ｇ、０．３４７ミリモル）を、ピリジンヒドロクロリドと一緒に丸底フラスコに導入し、２００℃で１時間加熱した。室温に冷却後、固体をＥｔＯＡｃ／２ＮのＨＣｌ混合物に取り込んだ。層を分離し、ＥｔＯＡｃ層を２ＮのＨＣｌ（２回）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ4で乾燥した。生成物を、シリカゲルにおけるカラムクロマトグラフィ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：３〜ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：２）によって精製して、０．０４８ｇの、依然として不純物を含んでいた生成物を得た。更にこの材料を、ＨＰＬＣ（５：９５のＡＣＮ／Ｈ2Ｏ〜９５：５のＡＣＮ／Ｈ2Ｏ）によって精製して、０．０１２７ｇの純粋な生成物を得た。
【化５２】
2008505095.tif 000034
【００９７】
スタンナン１３の調製（スキーム３より）
３−ブロモ−２−ヒドロキシ−５−メトキシ−安息香酸メチルエステル（８）
５−メトキシサリチル酸メチルエステル（２０ｍＬ、０．１３モル）をクロロホルムに溶解した溶液に対して、臭素を１５分間で滴下した。この混合物を室温で一晩撹拌した。溶剤を減圧下に除去して、８を黄色固体として得た（３５ｇ）。生成物を更に精製することなく次の工程で使用した。
【化５３】
2008505095.tif 000035
【００９８】
３−ブロモ−２，５−ジメトキシ安息香酸メチルエステル（９）
３−ブロモ−２−ヒドロキシ−５−メトキシ−安息香酸メチルエステル８（〜３５ｇ、０．１３モル）をアセトンに溶解した溶液に対して、ヨウ化メチル（２２．１ｇ、０．１５６モル）及び炭酸カリウム（３６ｇ、０．２６モル）を添加した。この混合物を還流下に４時間加熱し、その後、室温条件下で一晩撹拌した。反応物を水（５００ｍＬ）に注ぎ、エーテル中で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濃縮して、９を固体生成物として得た（３１．６ｇ）。
【化５４】
2008505095.tif 000036
【００９９】
３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−安息香酸（１０）
３−ブロモ−２，５−ジメトキシ安息香酸メチルエステル９（３１．６ｇ、１１５ミリモル）をＴＨＦ−メタノールに溶解した溶液に対して、５０％のＮａＯＨ（１０ｍＬ）を添加し、この混合物を還流下で４時間加熱し、その後、反応物を室温に冷却して、一晩撹拌した。溶剤を減圧下に除去し、２ＮのＨＣｌをｐＨ１になるまで添加して、そして混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、１０を白色固体として提供した（２７．８ｇ）。
【化５５】
2008505095.tif 000037
【０１００】
３−ブロモ−２，５−ジメトキシベンズアミド（１１）
３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−安息香酸１０（２７．７ｇ、０．１０６モル）を塩化チオニル（１５５ｍＬ、２．１２モル）に溶解させ、この溶液を少量のＤＭＦ（０．２５ｍＬ）に添加した。この混合物を還流下で２時間加熱し、その後、室温条件下で一晩撹拌した。塩化チオニルを減圧下に除去し、ＴＨＦと交換した。その後、トリエチルアミン（１５ｍＬ、０．１０７モル）を添加し、反応物を氷浴中で冷却した。アンモニアを混合物中で約８分間泡立てた。冷却浴を取り除き、反応物を室温条件下で一晩撹拌した。溶剤を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチルと２ＮのＨＣｌの間に分配した。有機層を２ＮのＨＣｌで１回、その後、飽和炭酸水素ナトリウムで、最後にブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、粗生成物１１を得た（２７ｇ）。
【化５６】
2008505095.tif 000038
【０１０１】
３−ブロモ−２，５−ジメトキシベンゾニトリル（１２）
３−ブロモ−２，５−ジメトキシベンズアミド１１（２６．７ｇ、０．１０３モル）をＴＨＦに溶解した溶液に対して、オキシ塩化リン（１４ｍＬ、０．１５モル）を添加し、そしてこの混合物を還流下に一晩加熱した。溶剤を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチルと水の間に分配した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濃縮した。残留物をメタノールと一緒に粉末にし、オフホワイトの生成物を得た（１９．６ｇ）。
【化５７】
2008505095.tif 000039
【０１０２】
２，５−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（１３）
３−ブロモ−２，５−ジメトキシベンゾニトリル１２（１２．３ｇ、５１ミリモル）をジオキサンに溶解した溶液に対して、ヘキサメチルジチン（２０ｇ、６１ミリモル）を添加し、この混合物を窒素でパージ処理した。その後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３ｇ、２．６ミリモル）を添加し、反応物を還流下に６時間加熱し、その後、室温に冷却して、一晩撹拌した。溶剤を減圧下に除去し、残留物を、酢酸エチル／ヘキサン（３：９７）を用いてシリカゲルにおいてクロマトグラフィ処理し、１３を白色固体として溶出した（１１．９ｇ）。融点：７４〜７６℃。
【化５８】
2008505095.tif 000040
【０１０３】
［実施例６及び７の調製］（スキーム４より）
３−ブロモ−２，６−ジメトキシ−ベンゾニトリル（１６）
２，６−ジメトキシベンゾニトリル（５ｇ、３１ミリモル）をジクロロメタンに溶解した溶液に対して、ジクロロメタン中における臭素を１時間で滴下した。反応物を室温条件下で一晩撹拌した。溶剤を減圧下に除去して、生成物１６を白色固体として得た（８．０ｇ）。融点：１１３〜１１５℃。この材料を更に精製することなく使用した。
【化５９】
2008505095.tif 000041
【０１０４】
２，６−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（１７）
窒素下に３−ブロモ−２，６−ジメトキシ−ベンゾニトリル１６（５．８ｇ、２４ミリモル）をジオキサンに溶解した溶液に対して、ヘキサメチルジチン（１０．０ｇ、３０．５ミリモル）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．３９ｇ、１．２ミリモル）を添加し、そしてこの混合物を２４時間還流した。反応物を濃縮し、そして酢酸エチル／ヘキサン（１：９）を用いてシリカゲルでクロマトグラフィ処理して、生成物１７を溶出した（４．８４ｇ）。
【化６０】
2008505095.tif 000042
【０１０５】
２，６−ジメトキシ−３−（６−メトキシ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）ベンゾニトリル（１８）
窒素下に酢酸２−ブロモ−６−メトキシ−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（４．０ｇ、１３．５ミリモル）及び２，６−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（４．８４ｇ、１４．８ミリモル）をジオキサンに溶解した溶液に対して、臭化銅（１０６ｍｇ、０．７４ミリモル）及びジクロロビス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５２０ｍｇ、０．７４ミリモル）を添加し、この混合物を２時間還流した。その後、反応物に対して、メタノール（１０ｍＬ）中における２ＮのＮａＯＨ（１３．５ｍＬ、２７ミリモル）を添加し、１時間撹拌した。その後、反応物を、２ＮのＨＣｌによりｐＨ６に酸性化し、そして溶剤を減圧下に除去し、酢酸エチルと交換した。この混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム及びブラインで洗浄した。その後、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、メタノール／ジクロロメタン（２：９８）を用いてシリカゲルでクロマトグラフィ処理して、生成物１８を溶出した。
【化６１】
2008505095.tif 000043
【０１０６】
３，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−１０−カルボニトリル（実施例６）
２，６−ジメトキシ−３−（６−メトキシ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）ベンゾニトリル（０．５１ｇ、１．５ミリモル）をジクロロメタンに溶解した溶液に対して、１．０ＭのＢＢｒ3（７．６ｍＬ、７．６ミリモル）を添加し、この混合物を室温条件下で４時間撹拌した。この反応物を２ＮのＨＣｌでクエンチングし、そして溶剤を減圧下に除去し、酢酸エチルと交換した。この混合物を２ＮのＨＣｌで２回、その後ブラインで１回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、メタノール／ジクロロメタン（１：９９）を用いてシリカゲルでクロマトグラフィ処理して、実施例６を黄褐色の固体として溶出した（０．１３５ｇ）。融点：３００℃を超える。
【化６２】
2008505095.tif 000044
【０１０７】
３，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−１０−カルボニトリル（実施例７）
３，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−カルボニトリル（実施例６（５１ｍｇ、０．１９ミリモル））をジオキサンに溶解した溶液に対して、ＤＤＱ（５０ｍｇ、０．２２ミリモル）を添加し、この混合物を１時間還流した。反応物を濃縮して、メタノール／ジクロロメタン（５：９５）を用いてシリカゲルでクロマトグラフィ処理して、実施例７を白色固体として溶出した（１８ｍｇ）。融点：３００℃を超える。
【化６３】
2008505095.tif 000045
【０１０８】
［実施例８の調製］（スキーム５より）
酢酸２−ブロモ−６−メトキシ−４，４−ジメチル−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（１９）
６−メトキシ−４，４−ジメチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ナフタレン−１−オン（３．８ｇ、１８．８ミリモル）をエーテル（５０ｍｌ）に溶解した冷却溶液に対して、臭素（０．９６ｍｌ、１８．６ミリモル）を滴下した。１時間後、反応物を１０％の亜硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、臭化物を白色固体として得て（４．５ｇ）、粗製で使用した。これにより得られた臭化物の一部（１．５ｇ、５．３ミリモル）をＴＨＦ（３０ｍｌ）に溶解させ、−７８℃に冷却し、そしてＬＨＭＤＳ（５．５ｍｌの１Ｍ）を滴下して処理した。２０分後、無水酢酸（１．６ｍｌ、１５．９ミリモル）を滴下し、反応物を０℃で１時間撹拌した。水を添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮し、そして生成物を、シリカゲルにおいてカラムクロマトグラフィによって精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：１９）、１９を油として得た（１．１ｇ）。
【０１０９】
２，５−ジメトキシ−３−（６−メトキシ−４，４−ジメチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−ベンゾニトリル（２０）
ジオキサン（５０ｍｌ）中における酢酸２−ブロモ−６−メトキシ−４，４−ジメチル−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル１９（１ｇ、３．１ミリモル）、２，５−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（１ｇ、３．１ミリモル）、Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（０．３ｇ）及びＣｕＩ（５０ｍｇ）を１８時間加熱した。その後、反応物を冷却し、１ＮのＮａＯＨ（５ｍｌ）を添加し、反応物を１時間撹拌し、水に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィによって精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３：７）、２０を黄色油として得た（０．２５ｇ、２２％）。
【０１１０】
３，８−ジヒドロキシ−５，５−ジメチル−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−１０−カルボニトリル（実施例８）
２，５−ジメトキシ−３−（６−メトキシ−４，４−ジメチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−２−イル）−ベンゾニトリル２０（０．２ｇ、０．５５ミリモル）とピリジンＨＣｌ（１５ｇ）の混合物を２００℃に加熱した。１時間後、反応物を冷却し、２ＮのＨＣｌで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、固体を得て、これをカラムクロマトグラフィによって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：４）、実施例８を白色固体として得た（３５ｍｇ、２１％）。融点：３２１〜３２３℃。
【化６４】
2008505095.tif 000046
【０１１１】
［実施例９及び１０の調製］（スキーム６より）
３−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−７−メトキシ−クロメン−４−オン（２１）
３−ブロモ−７−メトキシ−クロメン−４−オン（２．５ｇ、１０ミリモル）、２，５−ジメトキシフェニルボロン酸（２．７３ｇ、１５ミリモル）、２ＭのＮａ2ＣＯ3（３０ｍｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（０．３０ｇ、０．３ミリモル）をトルエン（４０ｍｌ）及びＥｔＯＨ（５ｍｌ）に溶解した溶液を加熱還流した。３時間後、反応物を冷却し、そして有機層を分離し、乾燥し、濃縮して、油性の固体を得て、これをＭｅＯＨで粉末にし、ろ過して、２１を白色固体として得た（１．５ｇ、５１％）。
【０１１２】
２，５−ジメトキシ−３−（７−メトキシ−４−オキソ−４Ｈ−クロメン−３−イル）−ベンゾニトリル（２２）
３−ブロモ−７−メトキシ−クロメン−４−オン（１．８ｇ、７．１ミリモル）、２，５−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（２．３ｇ、７．１ミリモル）、Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（０．５ｇ）及びＣｕＩ（０．１ｇ）を５０ｍＬのジオキサンに溶解した溶液を加熱還流した。６時間後、反応物を冷却し、そして濃縮して、生成物を、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：４）、２２を固体として得た（０．９ｇ、３８％）。
【０１１３】
３−（２，５−ジヒドロキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロマン（chroman）−４−オン（２３）
３−（２，５−ジメトキシフェニル）−７−メトキシ−クロメン−４−オン２１（１．５ｇ、４．８ミリモル）をＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍｌ）に溶解した溶液に対して、ＢＢｒ3（２５ｍｌの１Ｍ）を滴下した。２０時間撹拌した後、反応物を冷却し、ＭｅＯＨで注意してクエンチングした。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、２ＮのＨＣｌで洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、固体を得て（１．１ｇ）、これをアセトンに取り込み、１０ｐｓｉ条件下にＰｔＯ2（０．１８ｇ）で水素化した。３時間後、反応物をCelite（登録商標）に通過させてろ過し、濃縮して、フォームを得た。このフォームを、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：４）、２３をフォームとして得た（０．４ｇ、３１％）。
【０１１４】
２，５−ジヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−４−オキソ−クロマン−３−イル）−ベンゾニトリル（２４）
２，５−ジメトキシ−３−（７−メトキシ−４−オキソ−４Ｈ−クロメン−３−イル）−ベンゾニトリル２２（０．９０ｇ、２．７ミリモル）とピリジンＨＣｌ（１５ｇ）の混合物を２００℃に加熱した。１時間後、反応物を冷却し、２ＮのＨＣｌで希釈した。その後、酸性層をＥｔＯＡｃで抽出し、乾燥し、濃縮し、そして生成物を、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３：２）、固体を得て（３００ｍｇ）、これをアセトンに取り込み、１０ｐｓｉ条件下にＰｔＯ2で水素化した。１．５時間後、反応物をろ過し、濃縮して、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して、２４をフォームとして得た（０．１５ｇ、１９％）。
【０１１５】
６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−Ｃ］クロメン−３，８−ジオール（実施例９）
３−（２，５−ジヒドロキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロマン−４−オン２３（０．３５ｇ、１．２５ミリモル）を飽和ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）に溶解させた溶液を加熱還流した。１時間後、反応物を冷却し、濃縮し、そして生成物を、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３：７）、実施例９を固体として得た（８０ｍｇ、２５％）。融点：２３８〜２４０℃。
【化６５】
2008505095.tif 000047
【０１１６】
３，８−ジヒドロキシ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−Ｃ］クロメン−１０−カルボニトリル（実施例１０）
２，５−ジヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−４−オキソ−クロマン−３−イル）−ベンゾニトリル２４（０．１４ｇ、０．４７ミリモル）を飽和ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）に溶解させた溶液を加熱還流した。１時間後、反応物を冷却し、固体が結晶化し、これをろ過によって集めて、実施例１０を固体として得た（６０ｍｇ、４３％）。融点：３００℃を超える。
【化６６】
2008505095.tif 000048
【０１１７】
［実施例１１の調製］（スキーム７より）
２−（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−（２，４−ジヒドロキシ−フェニル）−エタノン（３１）
（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−酢酸３０（１０ｇ、３６ミリモル）及びレゾルシノール（６．０ｇ、５４ミリモル）をＢＦ3−エテレート（etherate）（７５ｍｌ）に溶解させた溶液を８５℃に加熱した。４時間後、反応物を冷却し、氷に注いだ。その後、水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、３１を橙色の油として得て（１５ｇ）、これを次の工程に粗製として使用した。
【０１１８】
３−（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロメン−４−オン（３２）
２−（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−（２，４−ジヒドロキシ)
−エタノン３１（１５ｇの粗製）、トリエチルオルトホルメート（４０ｍｌ）、及びモルホリン（４０ｍｌ）の混合物を加熱還流した。２時間後、反応物を冷却し、２ＮのＨＣｌに注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、これにより得られた生成物を、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；３：７）、３２を固体として得た（４ｇ、２工程に対して３０％）。
【０１１９】
３−（３−ブロモ−２，５−ジヒドロキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロメン−４−オン（３３）
３−（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロメン−４−オン３２（４ｇ、１０．６ミリモル）をＣＨ2Ｃｌ2（１００ｍｌ）に溶解させた溶液に対して、ＢＢｒ3（３０ｍｌ、１Ｍ）を滴下した。２時間後、反応物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨで注意してクエンチングした。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、２ＮのＨＣｌで洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、暗色固体を得て、これをＭｅＯＨで粉末にし、ろ過して、３３を固体として得た（２．７ｇ、７３％）。融点：２５３〜２５５℃。
【化６７】
2008505095.tif 000049
【０１２０】
３−（３−ブロモ−２，５−ジヒドロキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロマン−４−オン（３４）
３３（１．５ｇ、４．３ミリモル）をアセトン（４０ｍｌ）に溶解させた溶液を、１０ｐｓｉ条件下にＰｔＯ2（０．２５ｇ）で水素化した。３時間後、反応物をCelite（登録商標）に通過させてろ過し、濃縮して、フォームを得て、このフォームを、シリカゲルでカラムクロマトグラフィ処理によって精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン；１：３）、３４をフォームとして得た（１ｇ、６６％）。
【０１２１】
１０−ブロモ−６Ｈ−ベンゾ［４，５］フロ［３，２−Ｃ］クロメン−３，８−ジオール（実施例１１）
飽和ＨＣｌ／ＭｅＯＨ中における３−（３−ブロモ−２，５−ジヒドロキシ−フェニル）−７−ヒドロキシ−クロマン−４−オン３４（０．９５ｇ、２．７ミリモル）を加熱還流した。３０分後、反応物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、油性の固体を得て、これをＣＨ2Ｃｌ2で粉末にし、ろ過して、実施例１１を固体として得た（０．６ｇ、６６％）。融点：２２２〜２２５℃。
【化６８】
2008505095.tif 000050
【０１２２】
前駆体３０の調製（スキーム８より）
３−ブロモ−２−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンズアルデヒド（２５）
４−メトキシサリチル酸メチル（３０ｇ、２００ミリモル）をクロロホルム（５００ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した溶液に対して、臭素（３２ｇ、２００ミリモル）を添加し、そして反応物を室温で５時間撹拌した。その後、反応物を１０％の亜硫酸ナトリウムで洗浄し、乾燥し、濃縮して、固体を得た。固体を、ヘキサンで粉末にし、ろ過して、２５を黄色の固体として得た（１４ｇ、３５％）。融点：１０７〜１１０℃。
【０１２３】
３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−ベンズアルデヒド（２６）
２５（１０ｇ、４３ミリモル）、ヨウ化メチル（７．３ｇ、５２ミリモル）、及びＫ2ＣＯ3（１２ｇ、８６ミリモル）をアセトン（２００ｍｌ）に溶解した溶液を加熱還流した。４時間後、反応物を冷却し、水に注ぎ、そしてエーテルで抽出した。エーテル層を乾燥し、濃縮して、生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、２６を固体として得た（７．０ｇ、６７％）。融点：６２〜６４℃。
【化６９】
2008505095.tif 000051
【０１２４】
（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−メタノール（２７）
２６（８．０ｇ、３３ミリモル）をＴＨＦ（１００ｍｌ）に溶解し、冷却（０℃）した溶液に対して、ＬｉＡｌＨ4（１５ｍｌの、ＴＨＦにおける１．０Ｍ）を滴下した。１５分後、反応物を２ＮのＨＣｌでクエンチングし、水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮して、２７を固体として得た（７．５ｇ、９３％）。融点：６５〜６７℃。
【化７０】
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【０１２５】
１−ブロモ−３−クロロメチル−２，５−ジメトキシ−ベンゼン（２８）
２７（７．５ｇ、３０ミリモル）及びＺｎＣｌ2（１ｇ）をＴＨＦ（１００ｍｌ）に溶解した溶液に対して、ＳＯＣｌ2（５．３１ｇ、４５ミリモル）を滴下した。室温条件下で１時間後、反応物を水に注ぎ、エーテルで抽出した。エーテルを乾燥し、濃縮して、生成物を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィによって精製して（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、２８を油として得た（５．５ｇ、７５％）。
【化７１】
2008505095.tif 000053
【０１２６】
（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−アセトニトリル（２９）
１−ブロモ−３−クロロメチル−２，５−ジメトキシ−ベンゼン２８（７．０ｇ、２６．４ミリモル）及びＫＣＮ（１，７ｇ、２６．４ミリモル）をＤＭＳＯ（５０ｍｌ）に溶解した溶液を、７５℃に加熱した。２時間後、反応物を冷却し、水に注いだ。水性層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を乾燥し、そして濃縮した。生成物を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィによって精製して（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、２９を油として得た（５．２ｇ、７７％）。
【化７２】
2008505095.tif 000054
【０１２７】
（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−酢酸（３０）
（３−ブロモ−２，５−ジメトキシ−フェニル）−アセトニトリル２９（５．２ｇ、２０．４ミリモル）を水（１０ｍｌ）、濃Ｈ2ＳＯ4（１０ｍｌ）及びＡｃＯＨ（３０ｍｌ）に溶解した溶液を１００℃に加熱した。３時間後、反応物を冷却し、水に注いだ。水性層をＥｔＯＡｃで抽出し、その後、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。生成物を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィによって精製して（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、３０を固体として得た（２．８ｇ、５５％）。融点：６２〜６５℃。
【化７３】
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【０１２８】
［実施例１２及び１３の調製］（スキーム９より）
２−ブロモ−７−メトキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ナフタレン−１−オン（３５）
７−メトキシ−１−テトラロン（５０ｇ、０．２８モル）をエーテルに溶解した溶液に対して、臭素（１５ｍＬ、０．２９モル）を２時間で滴下した。この溶液を更に２時間撹拌し、その後、１０％の亜硫酸ナトリウム、飽和炭酸水素ナトリウム及びブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、白色の結晶性生成物３５が沈殿するまで濃縮し、これを吸引ろ過によって集めた（６０．５ｇ）。
【化７４】
2008505095.tif 000056
【０１２９】
酢酸２−ブロモ−７−メトキシ−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル（３６）
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（５０ｍＬ、５０ミリモル）をＴＨＦに溶解した溶液を、窒素下に−７８℃に冷却し、この溶液に対して、ＴＨＦに溶解させた２−ブロモ−７−メトキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ナフタレン−１−オン３５（１１．６ｇ、４５ミリモル）を３０分で滴下した。この混合物を３０分間撹拌し、その後、無水酢酸（１２．８ｍＬ、１３５ミリモル）を１０〜１５分で滴下した。冷却用ドライアイス−アセトン（dry ice-acetone cooling）を取り除き、氷浴と交換し、そして反応物を０℃で１時間撹拌した。反応物をエーテルで希釈し、１ＮのＨＣｌ（３×２５ｍｌ）で洗浄し、その後希炭酸水素ナトリウム、水及びブラインで１回ずつ洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮して、３６を粘稠性の液体として得た（１３．２ｇ）。
【化７５】
2008505095.tif 000057
【０１３０】
２，５−ジメトキシ−３−（７−メトキシ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−ベンゾニトリル（３７）
酢酸２−ブロモ−７−メトキシ−３，４−ジヒドロ−ナフタレン−１−イルエステル３６（２．５ｇ、８．４ミリモル）及び２，５−ジメトキシ−３−トリメチルスタンニル−ベンゾニトリル（３．０ｇ、９．３ミリモル）をジオキサンに溶解した溶液に対して、臭化銅（０．１６ｇ、０．８４ミリモル）を添加し、そしてこの混合物を一晩還流した。反応物を冷却し、そして反応物に対して、メタノール中における２ＮのＮａＯＨ（８．４ｍＬ、１６．８ミリモル）を添加し、これを４０℃で約１時間暖めて、アセテートの加水分解を完了させた（次に、ＴＬＣ）。反応混合物を、２ＮのＨＣｌにより酸性化し、溶剤を減圧下に除去し、酢酸エチルを添加した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム及びブラインで洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、酢酸エチル／ヘキサン（５：９５〜１：９）を用いてシリカゲルでのクロマトグラフィにより、３７を溶出した（０．６ｇ）。
【化７６】
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【０１３１】
２，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−１０−ベンゾニトリル（実施例１２）
窒素下に２，５−ジメトキシ−３−（７−メトキシ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）−ベンゾニトリル３７（０．２７ｇ、０．８ミリモル）をジクロロメタンに溶解した溶液に対して、１．０ＭのＢＢｒ3（４．０ｍＬ、４ミリモル）を添加し、この混合物を室温条件下で一晩撹拌した。反応物を、２ＮのＨＣｌでクエンチングし、溶剤を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチルと２ＮのＨＣｌの間に分配した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮し、酢酸エチル／ヘキサン（１：３）を用いてシリカゲルでのクロマトグラフィにより、生成物をオフホワイトの固体として溶出した（１１５ｍｇ）。融点：２７７〜２７９℃。
【化７７】
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【０１３２】
２，９−ジヒドロキシ−ベンゾ［Ｂ］ナフト［２，１−Ｄ］フラン−１０−カルボニトリル（実施例１３）
２，９−ジヒドロキシ−５，６−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］ナフト［２，１−ｄ］フラン−１０−ベンゾニトリル（実施例１２（９５ｍｇ、０．３４ミリモル））をジオキサンに溶解した溶液に対して、ＤＤＱ（９３ｍｇ、０．４１ミリモル）を添加し、この混合物を４時間還流した。溶剤を減圧下に除去し、残留物をメタノール／ジクロロメタン（１：４）を用いてシリカゲルでのクロマトグラフィ処理することにより、生成物を褐色固体として溶出した（０．０７３ｇ）。融点：２９１〜２９５℃。
【化７８】
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【０１３３】
［本発明の化合物の評価］
本発明の代表的な実施例を、ＥＲα及びＥＲβの両方への１７β−エストラジオールに対する競合能に関して評価した。この試験手法により、特定の化合物がＥＲに結合するのか（従って、“エストロゲン様”であるのか）どうか、及びＥＲα又はＥＲβに対して選択性があるのかどうかを決定するための方法論が提供される。値を、以下の表に示し、ＩＣ50として記録した。１７β−エストラジオールは、比較用の標準的基準として含まれる。用いられる手順を以下に簡単に示す。ヒトのＥＲα又はＥＲβのＥＲリガンド結合ドメイン（Ｄ、Ｅ＆Ｆ）を発現する大腸菌の粗溶解物を調製した。ＥＲと化合物の両方を、１ｍＭのＥＤＴＡを添加した１Ｘのダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で希釈した。高結合マスク化マイクロタイタープレートを使用して、１００μＬのＥＲ（１ｕＧ／ウェル）を、２ｎＭ［3Ｈ］−１７β−エストラジオール及び種々の濃度の化合物と結合させた。室温条件下で５〜１５時間後、プレートをＤＰＢＳ／１ｍＭのＥＤＴＡで洗浄し、液体シンチレーション計測法によって結合した放射活性が測定された。ＩＣ50を、１７β−エストラジオール結合の合計を５０％低減させる化合物の濃度として定義する。これにより得られた結果を以下の表１に記載する。
【０１３４】
【表１】
2008505095.tif 000061
【０１３５】
標準的な薬理試験方法で得られた結果により、本発明の化合物はエストロゲン様化合物であり、一部は、ＥＲβに対して優先的な親和性を有しているものの、その他は、依然としてＥＲαに対して著しい結合親和力を有していることが示されている。従って、本発明の化合物は、少なくとも部分的には、ＥＲ親和性の選択的なプロフィールに基づく活性の範囲に及ぶであろう。更に、各々の新規なＥＲリガンド錯体が他に類を見ないものであるので、つまり、その種々のコレギュラトリー（コレギュレーター）タンパク質との相互作用が比類のないものであるという理由から、本発明の化合物は、ＥＲリガンド錯体を有する細胞の状況に応じて異なる調節特性を示すであろう。例えば、幾つかの細胞型において、化合物は、エストロゲン作用薬として振る舞い、一方、他の組織において、拮抗薬として振る舞うことが可能である。かかる活性を有する化合物は、ＳＥＲＭｓ（選択性ＥＲモジュレーター）と称されることもあった。しかしながら、多くのエストロゲンと異なり、多くのＳＥＲＭｓは子宮の湿質量の増大を引き起こさない。このような化合物は、子宮において抗エストロゲン様であり、子宮の組織においてエストロゲン作用薬の栄養作用を完全に拮抗することが可能である。しかしながら、これらの化合物は、骨及び循環系においてエストロゲン作用薬として主として作用することが可能である。これらの化合物の組織選択性により、本発明の化合物は、哺乳動物において、エストロゲン欠乏（所定の組織、例えば骨又は心血管において）又はエストロゲンの過剰（子宮又は乳腺において）により引き起こされるか、又はこれらに結びつく病状又は症候群の治療又は抑制に有用である。
このような細胞−特異的制御の他にさらに、本発明の化合物は、一方のＥＲ型に対する作用薬として振る舞うと共に、他方に対して拮抗薬として振る舞うための潜在力をも有している。例えば、化合物は、ＥＲβに対して拮抗薬であっても良く、一方、ＥＲαに対して作用薬であっても良いことが実証された（Meyers, M. J., Sun, J., Carlson, K. E., Katzenellenbogen, B. S., Katzenellenbogen, J. A., J. Med. Chem. (1999), 42(13): 2456-2468）。このようなＥＲＳＡＡ（ER選択的作用薬拮抗薬）活性により、本一連の化合物における薬学的に顕著なエストロゲン活性が提供される。
【０１３６】
標準的な薬理試験手法は、所定の被検化合物の活性プロフィールを決定するのに容易に利用可能である。以下に、数種類の代表的な試験手順を短くまとめる。ＳＥＲＭｓに関する標準的な薬理試験手法は、米国特許番号第４４１８０６８号及び第５９９８４０２号にも記載されており、参照することによりこれらの全部は本明細書に取り込まれる。
【０１３７】
［ラットの子宮栄養性／抗栄養性試験手順］
化合物のエストロゲン及び抗エストロゲン特性を、未成熟ラットの子宮栄養試験において測定した（４日間、L. J. Black and R. L. Goode, Life Sciences, 26, 1453 (1980)を参照されたい）。Sprague-Dawley未成熟ラット（メス、１８日齢）を６個の群で試験した。動物は、１０μＧの化合物、１００μＧの化合物、１００μＧの化合物＋１μＧの１７β−エストラジオール（抗エストロゲン性を調べるため）及び１Ｇの１７β−エストラジオールを注入媒体である５０％のＤＭＳＯ／５０％生理食塩水と共に毎日腹腔内注射することにより処理した。４日目で、動物をＣＯ2窒息で犠牲にし、その子宮を取り除き、過剰の脂質を取り除き、そして体液を除去して、湿質量を計測した。所定の角（horn）の小切片を組織学用に取り出し、残りを用いて、全ＲＮＡを単離し、補体成分３（complement component 3）の遺伝子発現を評価した。
【０１３８】
６週卵巣除去ラット試験手順−骨及び心臓保護
メスのSprague Dawley CDラットのｏｖｘ又は偽ｏｖｘをTaconic Farm（Germantown, New York）から手術後１日で得る（体重範囲２４０〜２７５ｇ）。これらを、１２／１２（明／暗）のスケジュールで３又は４匹のラット／ケージで室内に収容し、食料（Purina（登録商標）5K96C、ラット用の食事）及び水を自由に与える。全ての検討のための処理は、動物が到着した１日後に開始し、表示されたように６週間、一週間に７日服用した。処理を受けていない年齢適合偽手術ラット群は、各検討において、無傷の、エストロゲンを十分備えた対照群として役立つ。
【０１３９】
全ての処理を、所定の濃度条件下の生理食塩水中の１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０で調製し、処理体積が０．１ｍＬ／１００ｇ体重とする。１７β−エストラジオールをトウモロコシ油（２０μｇ／ｍＬ）に溶解させ、そして０．１ｍＬ／ラットで皮下に供給する。全ての投与量を、体重測定の群平均に従い３週間の間隔で調整する。
【０１４０】
処理の開始５週間及び検討の終了前１週間において、各々のラットを骨ミネラル密度（ＢＭＤ）に関して評価する。頸骨近位端（proximal tibia）の合計及びトラベキュラー（trabecular）密度を、ＸＣＴ−９６０Ｍ（pQCT; Stratec Medizintechnik, Pforzheim, Germany）を用いて麻酔をかけたラットにおいて評価する。測定を以下のように行う：スキャン前の１５分、各ラットは、４５ｍｇ／ｋｇのケタミン、８．５ｍｇ／ｋｇのキシラジン及び１．５ｍｇ／ｋｇのアセプロマジンを腹腔内投与で麻酔する。
【０１４１】
右の後肢を、直径２５ｍｍのポリカーボネート管に通過させ、足関節を９０°で及び膝関節を１８０°でアクリルフレームにテープではる。ポリカーボネート管を、ｐＱＣＴの開口に対して垂直に維持するスライディングプラットフォームに取り付ける。このプラットフォームを調節することにより、大腿骨遠位骨端と頸骨近位骨端は、スキャン領域に入るだろう。２次元スカウトビュー（scout view）は、１０ｍｍの長さ及び０．２ｍｍのライン分解に対して実行する。スカウトビューをモニターに表示した後、頸骨近位骨端の位置を確認する。ｐＱＣＴスキャンを、この箇所から３．４ｍｍの末端で開始した。ｐＱＣＴスキャンは１ｍｍの厚さであり、０．１４０ｍｍのボクセル（３次元ピクセル）寸法を有し、そして薄片を通過する１４５個の投影から構成される。
【０１４２】
ｐＱＣＴスキャンの完了後、画像をモニターに表示する。腓骨を除いて頸骨を含む興味のある領域の概要をまとめる。軟組織は、反復アルゴリズムを用いて自動的に取り除かれる。残りの骨の密度（合計密度）をｍｇ／ｃｍ3単位で示す。骨の外側５５％は、同心のらせん形ではがされる。残りの骨の密度（トラベキュラー密度）をｍｇ／ｃｍ3単位で示す。ＢＭＤ評価の１週間後、ラットを二酸化炭素窒息により安楽死させ、コレステロール定量のために血液を回収する。子宮を取り除き、質量を計る。合計コレステロールは、Cholesterol/HP kitを使用するBoehringer-Mannheim Hitachi 911臨床分析機器（Ingelheim, Germany）により測定する。統計は、ダネットテストを用いるone-way分散分析により比較した。
【０１４３】
ＭＣＦ−７／ＥＲＥ増殖抑制試験の手順
試験化合物のストック溶液（通常、０．１Ｍ）を、ＤＭＳＯ中で調製し、そしてＤＭＳＯで１０〜１００倍に希釈して、１〜１０ｍＭの作業溶液を作製する。ＤＭＳＯストックを、４℃（０．１Ｍ）又は−２０℃（＜０．１Ｍ）にて保存する。ＭＣＦ−７細胞を、成長培地を用いて１週間に２回継代する［１０％（ｖ／ｖ）加熱非働化ウシ胎仔血清、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシン、及び２ｍＭ glutaMax-1を含むＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２培地］。細胞を、５％ＣＯ2／９５％加湿空気のインキュベーターの内側において３７℃のベント型フラスコ中で保持する。処理の１日前に、細胞を９６ウェルのプレートに２５０００／ウェルで成長培地で播種し、そして３７℃で一晩培養する。
【０１４４】
細胞を、実験用培地において５０μ／ウェルのアデノウイルス５−ＥＲＥ−ｔｋ−発光酵素の１：１０希釈で３７℃にて２時間感染させる［実験用培地：１０％（ｖ／ｖ）加熱非働化木炭除去（charcoal-stripped）ウシ胎仔血清、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭ glutaMax-1、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むフェノールレッド非含有Ｄ−ＭＥＭ／Ｆ−１２培地］。その後、ウェルを１５０μＬの実験用培地で１回洗浄する。最後に、細胞を、１５０μＬ／ウェルのビークル（０．１％ｖ／ｖ以下のＤＭＳＯ）での処理又は実験用培地に１０００倍以上で希釈される化合物での処理あたり、繰り返しの（in replicates）８ウェルで、３７℃で２４時間処理する。
【０１４５】
試験化合物の最初のスクリーニングを、１μＭの試験化合物のみ（作用薬モード）、又は０．１ｎＭの１７β−エストラジオールと組み合わせる１μＭの試験化合物（ＥＣ80；拮抗薬モード）の単一用量で行う。各９６ウェルプレートは、ビークル対照群（０．１％ｖ／ｖＤＭＳＯ）及び作用薬対照群（０．１又は１ｎＭの１７β−エストラジオール）も含む。用量反応実験を、対数的に１０-14から１０-5Ｍまで増加する濃度の活性化合物において、作用薬モード及び／又は拮抗薬モードにて行う。この用量反応曲線から、ＥＣ50及びＩＣ50値をそれぞれ得る。各処理群における最終ウェルは、ＥＲ拮抗対照として、５μＬの３×１０-5ＭのＩＣＩ−１８２７８０（１０-6Ｍの最終濃度）を含む。
【０１４６】
処理後、細胞を、２５μＬ／ウェルの１Ｘ細胞培養溶解試薬（Promega Corporation, Madison, Wisconsin）で１５分間シェーカー上で溶解する。細胞溶解液（２０μＬ）を、９６ウェルルミノメータープレートに移し、そしてルシフェラーゼ活性を、１００μＬ／ウェルのルシフェラーゼ基質（Promega Corporation）を使用して、MicroLumat LB 96 Pルミノメーター（EG & G Berthold, Wildbad, Germany）において測定する。基質の注入前に、１秒バックグラウンド測定を、各ウェルに対して作製する。基質の注入後、ルシフェラーゼ活性を１秒遅らせた後、１０秒間測定する。データをルミノメーターからマッキントッシュのパーソナルコンピュータに移し、そしてＪＭＰソフトウェアを用いて解析する（SAS Institute, Cary, North Carolina）；このプログラムは、各ウェルのルシフェラーゼ測定から読めるバックグラウンドを差し引き、その後、各処理に対する平均及び標準偏差を決定する。
【０１４７】
ルシフェラーゼデータを、対数で変換し、そしてＨｕｂｅｒ Ｍ−エスティメーターを使用して、変換された異常値の重み付けを軽くする（down-weight）。ＪＭＰソフトウェアを用いて、変換され且つ重み付けされたデータをone-wayＡＮＯＶＡに関して解析する（ダネットテスト）。化合物の処理を、作動薬モードにおけるビークル対照の結果、又は拮抗薬モードのポジティブ作用薬対照の結果（０．１ｎＭ１７β−エストラジオール）と対比する。最初の単回用量実験の場合、化合物の処理結果が、適当な対照から有意な差を有するときには（ｐ＜０．０５）、結果を、１７β−エストラジオール対照に対するパーセントとして示す［すなわち、（（化合物−ビークル対照）／（１７β−エストラジオール対照−ビークル対照））×１００］。更に、ＪＭＰソフトウェアを使用して、非線形用量反応曲線からＥＣ50及び／又はＩＣ50値も決定する。
【０１４８】
ＬＤＬ酸化の抑制−抗酸化剤の活性
ブタの大動脈を食肉処理場から得て、洗浄し、冷却したPBSで運搬し、そして大動脈内皮細胞を採取する。細胞を採取するために、大動脈の肋間血管を縛り、大動脈の一端をクランプする。新鮮で、フィルター滅菌した０．２％のコラゲナーゼ（シグマタイプＩ）を血管に導入し、その後、血管の他端をクランプして、閉鎖系を形成する。大動脈を、３７℃で１５〜２０分間培養し、その後、コラゲナーゼ溶液を回収し、２０００×ｇにて５分間遠心する。各ペレットを、木炭除去ＦＢＳ（５％）、ＮｕＳｅｒｕｍ（５％）、Ｌ−グルタミン（４ｍＭ）、ペニシリン−ストレプトマイシン（１０００Ｕ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ）及びゲンタマイシン（７５μｇ／ｍｌ）が追加されたフェノールレッド非含有ＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓＦ−１２培地からなる７ｍＬの内皮細胞培養培地に懸濁させ、１００ｍｍのペトリ皿に播種し、そして５％のＣＯ2において３７℃で培養する。２０分後、細胞をＰＢＳで濯ぎ、新鮮な培地を添加し、これを２４時間で再び繰り返した。約１週間後、細胞はコンフルエントである。内皮細胞を定期的に１週間に２回フィードし、そしてコンフルエントの場合、トリプシン処理し、そして１：７の割合で播種する。細胞を介した１２．５μｇ／ｍＬ ＬＤＬの酸化は、評価化合物（５μＭ）の存在下、３７℃で４時間に亘って進行可能である。結果を、遊離アルデヒドの分析用のＴＢＡＲＳ（チオバルビツール酸反応性物質）方法によって測定される酸化処理の抑制の割合として示す（Yagi K., Biochem Med 15: 212-216 (1976)）。
【０１４９】
Ｄ１２視床下部細胞試験の手順
Ｄ１２ラットの視床下部細胞を、ＲＣＦ１７親細胞系からサブクローンし、冷凍保存する。これは、ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）、ｇｌｕｔａＭａｘ−１（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）−ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）、並びに１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）中で規定通りに成長する。細胞を、サブコンフルエント密度（１〜４×１０6細胞／１５０ｍｍディッシュ）で、２〜１０％の木炭除去ＦＢＳを含むフェノール非含有培地（ＤＭＥＭ：Ｆ１２、ｇｌｕｔａＭａｘ、ペニシリン−ストレプトマイシン）に播種する。２４時間後、細胞に２％の裸血清（stripped serum）を含む培地を再供給する。作動薬活性を試験するために、細胞を、１０ｎＭの１７β−エストラジオール又は種々の用量の試験化合物（１ｍＭ又は１ｐＭ〜１ｍＭの範囲）で処理する。アンタゴニスト活性を試験するために、細胞を、種々の用量の試験化合物（１００ｐＭ〜１ｍＭ）の不存在下又は存在下、０．１ｎＭの１７β−エストラジオールで処理する。対照皿についても、ネガティブ対照としてのＤＭＳＯで処理する。ホルモンを添加してから４８時間後、細胞を溶解し、そして結合試験手法を行う。
【０１５０】
各々の結合試験手法では、１００〜１５０ｍｇのタンパク質を、１５０ｍｌの体積の１０ｎＭの3Ｈ−Ｒ５０２０＋１００倍過剰のＲ５０２０で培養する。トリプリケートの反応（Ｒ５０２０で３回、Ｒ５０２０無しで３回）を、９６ウェルプレートにおいて調製する。タンパク質抽出物を最初に添加し、その後、3Ｈ−Ｒ５０２０又は3Ｈ−Ｒ５０２０＋１００×非標識Ｒ５０２０を添加する。反応を室温条件下で１〜２時間行う。１００ｍｌの低温の５％木炭（Norit, SX-4, EM Science, Gibbstown, New Jersey）、ＴＥ ｐＨ７．４の０．５％のデキストラン６９Ｋ（Pharmacia, Uppsala, Sweden）を添加して、反応を停止させる。室温で５分後、結合又は非結合リガンドを、遠心によって分離する（５分、１０００ＲＣＦ、４℃）。上澄み液（〜１５０ｍｌ）を除去し、シンチュレーションバイアルに移す。シンチュレーション液（Beckman Ready Protein+, Fullerton, California）を添加した後、サンプルをシンチュレーションカウンターにおいて１分間に亘ってカウントする。
【０１５１】
ＣＮＳ視索前野でのプロゲステロンＥＲ
６０日齢のメスのSprague-Dawleyラットを卵巣切除する。動物を、１２時間明、１２時間暗の光周期で且つ水道水と齧歯動物の食物に対してフリーアクセスの動物保育設備に収容する。
【０１５２】
卵巣除去動物を、ビークル（５０％のＤＭＳＯ、４０％のＰＢＳ、１０％のエタノールのビークル）、１７β−エストラジオール（２００ｎｇ／ｋｇ）又は試験される化合物が注入される群に無作為に分ける。１７β−エストラジオールを注入する１時間前に、試験化合物を追加の動物に注入して、化合物の拮抗薬特性を評価する。皮下注入して６時間後、致死量のＣＯ2で動物を安楽死させ、その脳を回収し、冷凍する。
【０１５３】
動物から回収した組織を、−１６℃でクライオスタットにおいて裁断し、シランコートした顕微鏡用スライドに回収する。その後、切片包埋スライドを、４２℃で保持されたスライド加湿器において乾燥し、そして−８０℃で、乾燥したスライドボックス中で保存する。処理する前に、乾燥スライドボックスを室温にゆっくり暖めて（−２０℃で１２〜１６時間；４℃で２時間；室温で１時間）、スライド上の凝縮物の形成を除去することで、組織及びＲＮＡの分解を最小限にする。乾燥スライドを金属ラックに配置し、４％のパラホルムアルデヒド（ｐＨ９．０）中で５分間に亘って後固定し、そして上述したように処理する。
【０１５４】
ラットのＰＲｃＤＮＡ９（リガンド結合ドメイン）の８１５ｂｐフラグメントを含むプラスミドを線形化し、これを使用して、ラットのＰＲｍＲＮＡの一部に対して相補的なＳ３５−ＵＴＰ標識プローブを生成する。処理された切片包埋スライドを、リボプローブ（４〜６×１０6のＤＰＭ／スライド）及び５０％のホルムアミドを含む２０ｍｌのハイブリダイゼーションミックスでハイブリダイズし、そして５５℃の加湿チャンバーにおいて一晩培養する。午前中に、スライドを、２×ＳＳＣ（０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０１５Ｍのクエン酸ナトリウム；ｐＨ７．０）／１０ｍＭ  ＤＴＴに漬けた金属ラックに置く。全てのラックを大きな容器に移し、そして、室温で２×ＳＳＣ／１０ｍＭ  ＤＴＴ中において１５分間に亘って穏やかに撹拌しつつ洗浄する。その後、スライドをＲＮａｓｅ緩衝液中において３７℃にて３０分間洗浄し、３７℃で３０分間に亘ってＲＮａｓｅ  Ａ（２ｍｇ／ｍｌ）で処理し、そして室温で、１×ＳＳＣで１５分間洗浄する。次に、スライドを６５℃において、０．１×ＳＳＣで洗浄して（２×３０分）、非特異性の標識を取り除き、その後、室温で、０．１×ＳＳＣで１５分間濯ぎ、そして、段階系のアルコール：酢酸アンモニウム（７０％、９５％及び１００％）で脱水処理する。空気乾燥スライドを、エックス線フィルムに３日間露光し、その後、写真用に処理する。全動物から得られたスライドをハイブリダイズし、洗浄し、露光し、そして写真用の処理をして、アッセイ間の条件の変動に起因する差異を取り除く。
【０１５５】
ラットの顔面潮紅−ＣＮＳ効果
６０日齢のメスの卵巣除去Sprague-Dawleyラットを、以下の外科手術により得る。外科手術は、最初の処理の少なくとも８日前に行われる。動物を、１２時間明／暗周期の条件下、個々に収容し、そして齧歯動物用の食事及び水を自由に与える。
【０１５６】
２種類の対照群を、各検討において包含させる。用量は、ゴマ油中における１０％ＤＭＳＯ（皮下（ｓｃ）検討）又は生理食塩水中における１．０％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（経口（ｐｏ）検討）中でｍｇ／ｋｇ平均群体重に基づき準備する。動物に対して、０．０１〜１０ｇｍ／ｋｇの平均群体重の範囲の用量で試験化合物を投与する。ビークル及びエチニルエストラジオール（ＥＥ）対照（０．１ｍｇ／ｋｇのｓｃ又は０．３ｍｇ／ｋｇのｐｏ）の対照群を各々の検討に包含させる。化合物をその阻害薬活性に関して試験する場合、ＥＥを、ｓｃ又はｐｏ検討に対して、それぞれ０．１又は０．３ｍｇ／ｋｇで共投与した。一日の尾皮膚の温度が測定されるまで、試験化合物を投与する。
【０１５７】
４日間の順応期間後、動物を、興味のある試験化合物で１日１回処理する。１０種類の動物／処理群が存在する。化合物は、襟首において０．１ｍｌのｓｃ注入又は０．５ｍｌの体積でｐｏにより投与される。３日目の処理で、モルフィンのペレット（７５ｍｇの硫酸モルフィン）を皮下に移植する。５日目の処理で、更に１又は２モルフィンペレットを移植する。８日目に、動物の約半分に、ケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ、筋肉注射）を注入し、そしてＭａｃＬａｂデータ取得システム（API Insturments, Milfold, MA）に連結された熱電温度計を、尾の根元から約１インチの尾の位置にテープ止めする。かかるシステムにより、尾皮膚の温度を連続的に測定可能となる。基準温度を１５分間測定し、その後、ナロキソン（１．０ｍｇ／ｋｇ）をｓｃ付与して（０．２ｍｌ）、モルフィンの作用を阻止し、その後、尾皮膚の温度を１時間測定する。９日目に、残りの動物を設定し、同様に解析する。
【０１５８】
単離したラットの大動脈リングにおける血管運動機能
Sprague Dawleyラット（２４０〜２６０グラム）を４群に分ける：
１．  卵巣除去されていない正常動物（無傷）
２．  ビークル処理された卵巣除去動物（オベックス）
３．  １７β−エストラジオール処理された卵巣除去動物（１ｍｇ／ｋｇ／日）
４．  試験化合物で処理された卵巣除去動物（すなわち、１ｍｇ／ｋｇ／日）。
【０１５９】
動物を、処理の約３週間前に卵巣除去する。各々の動物は、胃の胃管栄養法により脱イオン化蒸留水中において１％のＴｗｅｅｎ（登録商標）８０で懸濁させた１ｍｇ／ｋｇ／日の１７β−エストラジオールスルフェート又は試験化合物を受け取る。ビークル処理動物は、薬剤処理群で用いられたビークルの適量を受け取った。
【０１６０】
動物を、ＣＯ2吸入及び放血によって安楽死させる。その胸部大動脈を迅速に除去し、そして最終的なｐＨを７．４とするために９５％／５％のＣＯ2−Ｏ2でガス処理された、以下の組成（ｍＭ）を有する３７℃生理溶液中に置く：すなわち、ＮａＣｌ（５４．７）、ＫＣｌ（５．０）、ＮａＨＣＯ3（２５．０）、ＭｇＣｌ2２Ｈ2Ｏ（２．５）、Ｄ−グルコース（１１．８）及びＣａＣｌ2（０．２）。外膜を外表面から取り除き、そして血管を、２〜３ｍｍ幅のリングに裁断する。リングを、１０ｍＬの組織浴に吊し、一端は、浴の底部に接続され、他端は、力変換器に接続される。１ｇの静止張力を輪に対して施す。リングを、１時間平衡化し、そしてシグナルを捉え、分析する。
【０１６１】
平衡化後、リングを増加濃度のフェニレフリン（１０-8〜１０-4Ｍ）に曝し、そして張力を記録する。その後、浴を、新鮮な緩衝液で３回濯ぐ。洗浄後、２００ｍＭのＬ−ＮＡＭＥを組織浴に添加し、３０分間に亘って平衡化する。フェニレフリンの濃度反応曲線を繰り返す。
【０１６２】
８アームの放射状アーム迷路−認知強化
生存時に２００〜２５０ｇの重さのオスのSprague-DawleyのＣＤラット（Charles River, Kingston, NY）を用いる。１週間に亘って、ラットを、一つのケージに対して６匹収容し、標準的な実験用食料及び水を自由に入手可能にする。ハウジングは、午前６時の時点で１２時間の明／暗の光周期を有する２２℃で保持されたコロニー室内にある。施設に慣らした後、動物を個々に収容し、そして８５％の自由摂取体重（free-feeding weight）にて保持する。安定した体重が得られた後、ラットを８アームの放射状迷路に順応させる。
【０１６３】
迷路の構造は、Peele and Baronの構造を適応する（Pharmacology, Biochemistry, and Behavior, 29: 143-150, (1988)）。迷路は７５．５ｃｍの高さまで持ち上げられ、中心から放射状の、相互に等距離にある８つのアームで包囲された円形領域から構成されている。各々のアームは、長さ５８ｃｍ×高さ１３ｃｍである。透明なプレキシガラスシリンダーをおろして、各々のセッションの開始前、迷路の中心部分で動物を包囲する。迷路の各アームは、データ収集装置にインターフェース接続されている３組のフォトセルを具備しており、このデータ収集装置は同様にコンピュータにインターフェース接続されている。フォトセルを使用して、迷路におけるラットの動きを追跡する。ペレット供給器を、各アームの端部においてフードキャップの上側に配置し、アームの外側のフォトセルが所定のセッション中に最初に活性化される場合、４５ｍｇのチョコレートペレットを分配する。迷路を、視覚的合図として働く白黒の幾何学的ポスターを各々の壁に有する試験室に配置する。全ての訓練及び試験処理中、害のない（white）ノイズが聞き取れる（〜７０ｄｂ）。
【０１６４】
訓練の手順は、５つの相から構成され、それぞれ毎日のセッションで５〜１０分続ける。１０秒の遅延が、ラットが迷路の中心に配置される時間と、シリンダーを上げてセッションを開始するときの間に強制的に組み込まれる。相１中、食料制限のラットの組を、迷路に１０分間に亘って置き、４５ｍｇのチョコレートペレットを、８アームの迷路の間中に散乱させる。相ＩＩ中、各々のラットを、１０分間に亘って迷路に個々に置き、ペレットを、中央のフォトセルから各アームのフードキャップに対して散乱させる。相ＩＩＩ中、各々のラットを、１０分間に亘って迷路に置き、食料ペレットを、各アームのフードキャップの中と周囲にだけ配置する。相ＩＶ中、各々のラットを１０分間各アームから２つのペレットを集めるようにさせる。アームへのリエントリーは、エラーと見なす。このような手法で、ラットを日々訓練するが、これは、ラットが、３日間連続の訓練で合計二回以下のエラーで基準の動作を達成するまで行われる。慣れ及び訓練の合計時間は、約３週間である。
【０１６５】
試験化合物を、リン酸緩衝生理食塩水中で調製し、そして１ｍｌ／ｋｇの体積で投与する。スコポラミンＨＢｒ（０．３ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．）は、障害剤として働き、エラー割合の増大（記憶喪失）を生じた。試験化合物を、所定の試験日に初めて迷路に触れる３０分前に、スコポラミンと同時に腹腔内に付与する。
【０１６６】
試験化合物を評価するために、繰り返しの計測に用いる８×８の平均のとれたラテン方陣を設計して、最小量の動物を用いて高い実験効果を達成するようにする。１週間で２回に亘って８種類の実験セッションを、各々セッション内でランダム化された８回の処理で実施する（ビークル、スコポラミン、スコポラミンと組み合わせた３用量の試験化合物）。各処理は同じ回数の他の各処理に続けて行った。従って、各処理の残存効果を評価可能となり、そしてこれを直接処理効果から取り除く。ＡＮＯＶＡ後、調節された方法でダネットの両側テストにより多重比較を行う。
【０１６７】
最初に迷路に置いた間、５分内で４回正確な選択をしないか、或いは２回目に迷路に置いた最後に、合計８回の選択をしない動物を、そのセッションに対して“タイミングはずれ（timed-out）”と見なす。試験化合物を２回以上投与後に“タイミングはずれ”の動物は、解析から除外する。
【０１６８】
神経保護作用
初代皮質ニューロン培養物における細胞の時間依存死の抑制
初代皮質ニューロンを、Monyer等によるBrain Reserach ((1989), 483: 347-354)に記載されている種々の方法を用いてき０〜１日齢のラットの脳から作製した。分散された脳組織を、ＤＭＥＭ／１０％ＰＤＨＳ（妊娠ドナーウマ血清）中で３日間培養し、その後、シトシンアラビノシド（ＡＲＣ）で２日間処理して、汚染グリア細胞を取り除いた。５日目に、ＡＲＣ培地を取り除き、そしてＤＭＥＭ／１０％ＰＤＨＳで置換した。神経細胞を、使用前に更に４〜７日間培養した。
【０１６９】
対照の初代皮質ニューロン培養物は、培養中１２〜１８日の間に進行性細胞死を示す。１２種の培養物を、９日目に、試験化合物を、ＤＭＥＭ及び１０％のＰＤＨＳにおいて保持されている６種の培養物に添加する一方、対照として残りの培養物培地を保持した後、乳酸脱水素酵素（ＬＤ）の酵素レベルについて１２日目と１６日に評価した。ＬＤを、Wroblewski等によるProc. Soc. Exp. Biol. Med. ((1995) 90: 210-213)の種々の方法を用いて評価した。ＬＤは、組織の生存能力を測定するための臨床及び基礎研究の両方で一般的に用いられる細胞質内酵素である。培地中のＬＤの増加は、細胞死に直接関連している。
【０１７０】
低血糖により誘導される細胞毒性に対する神経保護作用
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から得られるＣ６グリオーマ細胞を、ＦＡＬＣＯＮ（商標）の２５ｃｍ2組織培養フラスコに、１×１０6細胞／ｍｌの濃度でＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地中に播種した。低血糖の始まる４時間前、維持培地を除き、単層を適当な培地中で２回洗浄し、その後、血清非含有か、又は血清非含有で且つ試験化合物中、３７℃で４時間培養した。クレブスリンガーホスフェート緩衝液を使用して、単層を２回洗浄してから、適当なグルコース処置を追加した。ＲＰＭＩ培地は、２ｍｇのグルコース／ｍｌを含む。フラスコを、６個の群に分け、各々は、１００％のグルコース（２ｍｇ／ｍｌ）、８０％のグルコース（１．６ｍｇ／ｍｌ）、６０％のグルコース（１．２ｍｇ／ｍｌ）又は０％のグルコース（緩衝液）を受け入れたか、或いは試験化合物で補足された。全てのフラスコを２０時間培養し、その後、トリパンブルーを利用して、生死細胞数の合計を評価した。
【０１７１】
興奮毒性アミノ酸に対する神経保護作用
ＳＫ−Ｎ−ＳＨ神経芽腫細胞を含む５種類の培養ディッシュを試験化合物で処理し、そして５種類の培養ディッシュをＲＰＭＩ培地で処理した。４時間後、全ての細胞をＮＭＤＡ（５００μＭ）で５分間処理した。その後、生死細胞の合計を計測した。
【０１７２】
酸素−グルコース欠乏に対する神経保護作用
アポトーシスを測定するためのピクノーゼの核の分析
皮質ニューロンを、Ｅ１８ラットの胎仔から調製し、そして、１０００００細胞／ウェルの密度でポリ−Ｄ−リシン（１０ｎｇ／ｍｌ）及び血清でプレコートされた８ウェルのチャンバースライドに播種する。細胞を、１０％のＦＣＳを含む高グルコースＤＭＥＭ中に播種し、そして１０％ＣＯ2／９０％空気で３７℃のインキュベーター中に保持する。翌日、培養培地をＢ２７で補足した高グルコースＤＭＥＭに置換することによって血清を取り除き、そして細胞を、更なる培地の交換無しに、実験の日までインキュベーター中に保持する。６日目、スライドを２種類の群、すなわち対照群と酸素−グルコース欠乏（ＯＧＤ）群に分ける。対照群における細胞は、グルコース及びカスタムＢ２７（抗酸化剤無し）を有するＤＭＥＭを受けとる。ＯＧＤ群における細胞は、カスタムＢ２７を有するグルコースＤＭＥＭを受け取らず、真空下で１５分間脱気する。細胞を、密閉チャンバー中において９０％Ｎ2／１０％ＣＯ2で１０分間フラッシュし、そして３７℃で６時間培養する。６時間後、対照及びＯＧＤ細胞の両方を、カスタムＢ２７を有するグルコース含有ＤＭＥＭにおいてビークル（ＤＭＳＯ）又は試験化合物を含む培地と交換する。細胞を３７℃の正常酸素圧のインキュベーターに戻す。２４時間後、細胞を４℃で、４％のＰＦＡに１０分間固定し、そしてＴｏ−Ｐｒｏ（蛍光性の核結合色素）で染色する。レーザー走査血球計算器を用いてピクノーゼの核を測定することにより、アポトーシスを評価する。
【０１７３】
細胞死の指標としての乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）放出の測定
皮質ニューロンを、Ｅ１８ラットの胎仔から調製し、そして、１５００００細胞／ウェルの密度でポリ−Ｄ−リシン（１０ｎｇ／ｍｌ）及び血清でプレコートされた４８ウェルの培養プレート中に播種する。細胞を、１０％のＦＣＳを含む高グルコースＤＭＥＭ中に播種し、そして１０％ＣＯ2／９０％空気で３７℃のインキュベーター中に保持する。翌日、培養培地をＢ２７で補足した高グルコースＤＭＥＭに置換することによって血清を取り除く。６日目、細胞を２種類の群、すなわち対照群とＯＧＤ群に分ける。対照群における細胞は、グルコース及びカスタムＢ２７（抗酸化剤無し）を有するＤＭＥＭを受け取る。ＯＧＤ群における細胞は、カスタムＢ２７を有するグルコースＤＭＥＭを受け取らず、真空下で１５分間脱気する。細胞を、密閉チャンバー中において９０％Ｎ2／１０％ＣＯ2で１０分間フラッシュし、そして３７℃で６時間培養する。６時間後、対照及びＯＧＤ細胞の両方を、カスタムＢ２７を有するグルコース含有ＤＭＥＭにおいてビークル（ＤＭＳＯ）又は試験化合物を含む培地と交換する。細胞を３７℃の正常酸素圧のインキュベーターに戻す。２４時間後、培養培地へのＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）の細胞放出を計測することによって、細胞死を評価する。ＬＤＨアッセイでは、５０μＬアリコートの培養培地を、９６ウェルのプレートに移す。１４０μＬの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）及び１００μＬの０．２ｍｇ／ｍｌＮＡＤＨを添加した後、プレートを室温下に、暗所に２０分間置く。１０μＬのピルビン酸ナトリウムを添加することによって反応を開始させる。Thermomax（登録商標）プレートリーダー（Molecular Devices, Sunnyvale, California）において、プレートは、３４０ｎＭにて直ぐに読み出される。吸光度、すなわちＮＡＤＨ濃度の指標を５秒毎に５分間に亘って記録し、ＮＡＤＨ消失速度を示す勾配を用いて、ＬＤＨ活性を計算する。
ＬＤＨ活性（Ｕ／ｍｌ）＝（Ａ／分）（ＴＣＦ）（２０）（0.0833）／（.78）
[式中、0.0833＝比例定数であり、0.78＝機器の光路長（ｃｍ）である。]。
【０１７４】
ＨＬＡラット試験の手順−クローン病及び炎症性腸疾患
オスのＨＬＡ−Ｂ２７ラットは、Taconic Farm（Germantown, NewYork）から入手し、そして食料（PMI Lab Diet（登録商標）5001）及び水に対して自由にアクセスさせる。検討の開始時、ラットは２２〜２６週齢である。
【０１７５】
ラットに、以下に列挙されるいずれかの製剤を７日間１日１回皮下投与する。各群５匹のラットであり、最後の投薬を安楽死の２時間前に投与する。
【０１７６】
製剤：
・ビークル（５０％ＤＭＳＯ／５０％ダルベッコのＰＢＳ）
・１７α−エチニル−１７β−エストラジオール（１０μｇ／ｋｇ）
・試験化合物。
【０１７７】
糞の質を日々観察し、そして以下の等級にしたがい格付けする：下痢＝３；軟らかい糞＝２；正常の糞＝１。試験手順の最後に、血清を回収し、−７０℃にて保存する。結腸の切片を組織学的分析用に作製し、そして更なるセグメントを、ミエロペルオキシダーゼ活性用に分析する。
【０１７８】
以下の方法を用いて、ミエロペルオキシダーゼ活性を測定する。結腸の組織を採取し、そして液体窒素中で急速冷凍する。結腸全体の代表的なサンプルを用いて、サンプル間の整合性を保証する。使用するまで組織を−８０℃にて保存する。次に、組織を秤量し（約５００ｍｇ）、そして１：１５ｗ／ｖの５ｍＭのＨ2ＫＰＯ4（ｐＨ６）洗浄緩衝液中でホモジナイズする。組織を、２〜８℃で、Sorvall（登録商標）RC5B遠心器中で２００００×ｇにて４５分間遠沈させる。その後、上澄み液を廃棄する。組織を再懸濁させ、そして１０ｍＭ ＥＤＴＡ及び０．５％ヘキサアンモニウムブロミドを含有する２．５ｍｌ（１：５ｗ／ｖ）の５０ｍＭ Ｈ2ＫＰＯ4中でホモジナイズして、細胞内のミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）の溶解を促進させる。組織を液体窒素中で冷凍し、３７℃の水浴中で解凍し、そして１５秒間超音波処理して、確実に膜を溶解する。この手順を３回繰り返す。その後、サンプルを氷上に２０分保持し、そして２〜８℃で、１２０００×ｇにて１５分間遠心する。上澄み液を以下の工程にて分析する。
【０１７９】
２．９ｍｌの５０ｍＭのＨ2ＫＰＯ4を０．０００５％のＨ2Ｏ2を含む０．１６７Ｏ−ジアニシジン／ｍｌと一緒に反応チューブに添加することによって試験混合物を調製する。過酸化水素を分解させた場合、Ｏ−ジアニシジンを酸化し、そして濃度依存的に４６０ｎｍで吸収する。混合物を２５℃に加熱する。１００μＬの組織上澄み液を反応チューブに添加し、２５℃で１分間培養し、その後、１ｍｌを使い捨てのプラスチック製キュベットに移す。光学密度（ＯＤ）を、２．９ｍｌの反応混合物及び１００μＬの０．５％アンモニウムブロミド溶液を含むブランクに対して、４６０ｎｍにて２分の反応時間毎に測定する。
【０１８０】
酵素活性単位を、４６０ｎｍにおける吸光度を、精製したヒトのＭＰＯ（３１．１ｕｎｉｔｓ／ｖｉａｌ）を用いて作製された標準曲線に対して対比することによって定量化する。ＭＰＯを再構成されており、そして１０ｍＭのＥＤＴＡ及び０．５％のヘキサアンモニウムブロミドを含む５０ｍＭのＨ2ＫＰＯ4を用いて、４種類の公知の濃度に連続的に希釈する。サンプルの吸光度をこの曲線に対して対比して、活性を決定する。
【０１８１】
組織学的分析を以下のように行う。結腸の組織を１０％の中性緩衝ホルマリンに浸漬する。結腸の各試験片を、評価のために４種類のサンプルに分離する。ホルマリン固定組織を、パラフィン包埋用の真空浸透処理機において加工処理する。サンプルを５μｍにて切片に切り分け、その後、バウトン−スミスの後に修正されたスコアを用いる盲式組織学的評価のためにヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色する（Boughton-Smith, N. K., Wallace, J. L., Morris, G. P., Whittle, B, J., Br. J. Pharmacol. (1988), 94: 65-72）。スコア化が完了した後、サンプルを非盲検化し、そしてデータを表にして、多重平均比較（multiple mean comparison）を用いるＡＮＯＶＡ線形モデルによって分析する。
【０１８２】
本明細書において述べた各々の特許、出願及び書籍を含む刊行物は、これらの全体を参照して本明細書に取り込まれるものと意図される。本発明は、２００４年７月１日に出願された米国仮出願第６０／５８４５１６号の優先権の利益を主張し、その全体を参照することにより本発明に組み込まれる。
【０１８３】
当業者等によって十分に理解されるように、本発明の要旨を逸脱することなく本発明の好ましい実施形態に大きな変更及び修正をしても良い。このような変更は全て、本発明の範囲内に在ることを意図している。
【国際調査報告】
2008505095.tif 000083
2008505095.tif 000084
2008505095.tif 000085
2008505095.tif 000086
2008505095.tif 000087
2008505095.tif 000088