(57)【要約】【課題】簡単に作製することができ、かつ、隔壁を交換することが可能な脂質二重膜形成器具を提供すること。【解決手段】脂質二重膜形成器具は、基板と、基板内に形成された、互いに当接する一対のウェルと、一対のウェル間に配置された隔壁カセットとを具備する。隔壁カセットは、孔径が５００ nm〜５００μmの１個又は複数の貫通孔を有する隔壁と、隔壁を挟持する一対の支持フィルムとを具備する。隔壁と一対の支持フィルムとは一体化されており、各支持フィルムには、隔壁の貫通孔を内包する透孔が形成されて各支持フィルムの各透孔と隔壁の貫通孔とが全体として貫通している。基板の一対のウェルの当接部分には溝が設けられており、隔壁カセットは、溝に着脱自在に挿入され、隔壁カセットが溝に挿入されている状態で、一対のウェルが隔壁を介して互いに接触し、隔壁の１個又は複数の貫通孔が前記一対のウェルの双方に開口している。【選択図】図２
2015077559.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板と、該基板内に形成された、互いに当接する一対のウェルと、該一対のウェル間に配置された隔壁カセットとを具備し、該隔壁カセットは、１個又は複数の貫通孔を有する隔壁と、該隔壁を挟持する一対の支持フィルムとを具備し、該隔壁と該一対の支持フィルムとは一体化されており、各支持フィルムには、前記隔壁の前記１個又は複数の貫通孔を内包する透孔が形成されて各支持フィルムの各透孔と前記隔壁の前記１個又は複数の貫通孔とが全体として貫通しており、前記基板の前記一対のウェルの当接部分には溝が設けられており、前記隔壁カセットは、該溝に着脱自在に挿入され、前記隔壁カセットが該溝に挿入されている状態で、前記一対のウェルが前記隔壁を介して互いに接触し、前記隔壁の前記１個又は複数の貫通孔が前記一対のウェルの双方に開口している脂質二重膜形成器具。
【請求項２】
前記一対のウェルの底面に、各ウェル外と接続される電極が配設されており、該電極とウェル外とを接続する配線が、前記基板の裏面上に形成されている請求項１記載の脂質二重膜形成器具。
【請求項３】
前記隔壁の前記貫通孔の孔径が５００nm〜５００μmである請求項１又は２記載の脂質二重膜形成器具。
【請求項４】
前記隔壁が、前記貫通孔を形成した自己支持性のポリマーフィルムである請求項１〜３のいずれか１項に記載の脂質二重膜形成器具。
【請求項５】
前記ポリマーフィルムがパリレン樹脂フィルムである請求項１〜４のいずれか１項に記載の脂質二重膜形成器具。
【請求項６】
前記一対のウェルが、前記基板に複数対設けられている請求項１〜５のいずれか１項に記載の脂質二重膜形成器具。
【請求項７】
単一のウェルであって、複数のウェルと同時に前記対を形成するものを具備する請求項１〜６のいずれか１項に記載の脂質二重膜形成器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質二重膜を形成するための器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物を構成する細胞や、細胞内に存在するミトコンドリア、ゴルジ体、小胞体等の各種オルガネラ、細胞核等は、外側が生体膜で覆われており、この生体膜は、基本的に脂質二重膜から構成されている。生理活性を有する様々なタンパク質、すなわち、レセプターや酵素等がこの脂質二重膜を貫通する形で脂質二重膜上に保持されている。これらの膜貫通タンパク質は、生体内で重要な役割を果たしている。特に、細胞膜上に存在する各種レセプターは、生体内に存在するリガンドと結合することにより、様々な生理学的反応を引き起こす引き金になることがわかっている。このため、レセプターの機能を亢進する各種リガンドや、レセプターの機能を阻害する阻害剤等が医薬品として用いられており、また、新たな医薬品として利用可能な天然又は人工のリガンドや阻害剤が研究されている。
【０００３】
これらの膜貫通タンパク質や、そのリガンド、阻害剤等を開発するためには、生体内と同じ状態、すなわち、膜貫通タンパク質が生体膜に保持された状態で各種測定を行うことが望まれる。また、創薬スクリーニング等においては、自動化装置を用いて多数の脂質二重膜を同時に形成し、形成された多数の脂質二重膜を用いて同時並行的にスクリーニングを行うことができれば、スクリーニングの効率を高めることができ、有利である。このような自動化を達成するためには、脂質二重膜が自動化装置（ロボット）を用いた場合でも再現性良く形成され、かつ、一旦形成された脂質二重膜は、自動化装置内での輸送や測定処理中に破壊されることなく安定に存在することが望まれる。
【０００４】
これを達成するために、本願出願人は先に、孔径が５００ nm〜５００μmの１個又は複数の貫通孔を有する隔壁を介して隔てられた２つのウェルのそれぞれに脂質二重膜形成性脂質溶液を添加する工程と、各ウェルに水又は水溶液を添加して前記脂質溶液中に水又は水溶液の液滴を形成させる工程と、この状態で放置して前記貫通孔の部分に脂質二重膜を形成させる工程とを含む、脂質二重膜の形成方法及びこの方法に用いられる器具を発明し、特許出願した（特許文献１）。特許文献１に記載されている方法によれば、前記貫通孔の部分に脂質二重膜が再現性良く形成され、一旦形成された脂質二重膜は、自動化装置内での輸送や測定処理中に破壊されることなく安定に存在する。しかしながら、特許文献１記載の方法に用いられる脂質二重膜形成器具は、各ウェルをそれぞれ異なる基板内に形成し、隔壁を一対の補強フィルムの間に挟み、合計２個の基板と、合計２枚の補強フィルムと、隔壁とを接着剤で貼り合わせ、さらに各ウェルの底部を塞ぐ基板を接着剤で貼り合わせて作製している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開2012-81405号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１記載の脂質二重膜形成器具は、作製に手間がかかり、また、隔壁を新たな隔壁と交換することはできない。このため、使用により隔壁が劣化した場合や、新品の隔壁を用いて実験を行いたい場合には、器具全体を新たに作製する必要があり、不便でコストもかかるものであった。
【０００７】
従って、本発明の目的は、簡単に作製することができ、かつ、隔壁を交換することが可能な脂質二重膜形成器具を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、隔壁を一対の支持フィルムで挟持して一体化した隔壁カセット内に隔壁を保持すると共に、ダブルウェルチャンバーを構成する一対のウェルが当接する部分に溝を形成し、この溝に前記隔壁カセットを挿入して、前記一対のウェルを隔壁で仕切るようにすれば、一対のウェルを単一の基板内に形成することができ、隔壁で仕切るために接着操作が不要となり、かつ、溝に挿入した隔壁カセットを新たな隔壁カセットと交換することにより器具形成後でも簡便に隔壁が交換可能となることに想到し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、基板と、該基板内に形成された、互いに当接する一対のウェルと、該一対のウェル間に配置された隔壁カセットとを具備し、該隔壁カセットは、孔径が５００ nm〜５００μmの１個又は複数の貫通孔を有する隔壁と、該隔壁を挟持する一対の支持フィルムとを具備し、該隔壁と該一対の支持フィルムとは一体化されており、各支持フィルムには、前記隔壁の前記１個又は複数の貫通孔を内包する透孔が形成されて各支持フィルムの各透孔と前記隔壁の前記１個又は複数の貫通孔とが全体として貫通しており、前記基板の前記一対のウェルの当接部分には溝が設けられており、前記隔壁カセットは、該溝に着脱自在に挿入され、前記隔壁カセットが該溝に挿入されている状態で、前記一対のウェルが前記隔壁を介して互いに接触し、前記隔壁の前記１個又は複数の貫通孔が前記一対のウェルの双方に開口している脂質二重膜形成器具を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、特許文献１記載の脂質二重膜形成器具と比べて、遙かに簡便に脂質二重膜形成器具を作製することができ、器具の量産にも適しており、また、器具を形成し、脂質二重膜形成に使用した後、容易に隔壁を交換することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の脂質二重膜形成器具の好ましい具体例の模式平面図である。
【図２】本発明の脂質二重膜形成器具に用いられる隔壁カセットの好ましい１具体例の模式分解斜視図である。
【図３】図１における3-3'線切断部模式端面図である。
【図４】各ウェルの底部に、ウェル外と接続される電極を配設する方法の１具体例を説明する図である。
【図５】本発明の実施例で作製した脂質二重膜形成器具を用いて脂質二重膜が形成されたことを示す、ウェル間の電流の測定結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の脂質二重膜形成器具の好ましい具体例の模式平面図を図１に示す。図１に模式的に示す具体例では、基板１０中に、互いに当接する一対のウェル１４及び１６が形成され、これらの境界には溝１２が形成されている。溝１２には、後述する隔壁カセットが挿入される。基板の材質は特に限定されないが、アクリル板等のプラスチック板を好適に用いることができる。なお、図１に示す例では、ウェルの平面形状が基本的に円形であり、２つの円が接する境界部分のみが直線状になっているが、ウェルの形状は限定されるものではなく、後述する所定の隔壁によって隔てられていれば、他の形状でも問題はない。ウェルのサイズは、特に限定されないが、後述のように水又は水溶液の液滴を脂質溶液中に形成した際に脂質溶液が液滴によって圧迫されやすくなるように孔径が2mm〜8mm程度、さらに好ましくは3mm〜5mm程度、深さは孔径の50%〜200%、さらに好ましくは50%〜100%程度が好ましいが、この範囲よりも大きくても小さくても脂質二重膜を形成することが可能である。
【００１３】
図２に、本発明の脂質二重膜形成器具に用いられる隔壁カセット１８の好ましい１具体例の模式分解斜視図を示す。隔壁カセット１８は、隔壁２０と、該隔壁２０を挟持する一対の支持フィルム２２、２４とを具備する。隔壁２０には、１個又は複数の貫通孔２０ａが形成されている。図２に図示される例では５つの貫通孔２０ａが形成されている。なお、隔壁２０に設けられた貫通孔２０ａの数は１個でも複数個でもよく、通常、１個〜１０個程度、好ましくは１個〜６個程度である。貫通孔２０ａが複数存在する場合には、必ずしも全ての貫通孔において脂質二重膜が形成されるわけではなく、脂質溶液が液滴によって強く圧迫される貫通孔においてのみ脂質二重膜が形成される。貫通孔の孔径は、通常、好ましくは、５００ｎｍ〜５００μm、さらに好ましくは１０μm〜２００μmである。孔径が上記範囲よりも小さい場合も大きな場合も、脂質二重膜形成の再現性が低くなり、また、上記範囲よりも大きな場合には形成された脂質二重膜の安定性が低下する。また、貫通孔の形状は、脂質二重膜を再現性良く形成し、かつ、安定に維持する観点及び貫通孔の形成の容易さの観点から円形が最も好ましいが、脂質二重膜が形成可能であれば、他の形状、例えば楕円形や正多角形等の多角形を採用することも可能である。楕円形の場合、孔径は長径を意味し、多角形の場合にはそれに外接する円の直径を孔径とする。隔壁は、例えば、パリレン（ポリ-p-キシリレン）樹脂フィルムのような、好ましくは自己支持性のフィルムにフォトリソグラフィーにより貫通孔を形成することにより作製することができる。もっとも、フォトリソグラフィーによるパターニングが可能で自己支持性フィルムを与えることができる他のポリマー（例えばポリイミド等）も用いることができる。また、貫通孔の上記範囲の孔径であれば、フォトリソグラフィー以外の手法、例えば、マイクロドリルを用いた機械的な手法により形成することも可能である。この場合には、フォトリソグラフィーができない自己支持性の種々のポリマーフィルムも利用可能である。さらに、孔径が１μm未満の貫通孔は、フォトリソグラフィー等により孔径が１μm以上の貫通孔を形成し、この貫通孔の内壁に樹脂を蒸着して孔径を小さくすることにより形成することができる（特開２０１１−１４９８６８号公報）。なお、隔壁の厚さは、特に限定されないが、通常、５μｍ〜２０μｍ程度であり、市販のパリレン樹脂フィルムを好適に利用することができる。
【００１４】
隔壁２０と一対の支持フィルム２２、２４とは一体化されている。ここで、「一体化されている」とは、隔壁２０と一対の支持フィルム２２、２４とが互いの位置関係を維持した状態で固定されていることを意味し、これら３つの部材は常に行動を共にする。固定は、例えば、隔壁２０を支持フィルム２２、２４の間に挟み込んだ状態で支持フィルム２２、２４を接着剤で接着することにより行うことができる。隔壁２０も接着剤で支持フィルム２２、２４に接着してもよいが、接着することなく、支持フィルム２２、２４の間に挟持するだけでも隔壁２０を摩擦力により固定することが可能である。支持フィルム２２と２４は、接着剤で容易に接着できるが、熱融着等、他の方法で貼り合わせてもよい。支持フィルム２２と２４には、それぞれ透孔２２ａ、２４ａが形成されている。透孔２２ａ、２４ａは、隔壁２０の前記１個又は複数の貫通孔２０ａを内包するものであり、従って、各支持フィルム２２、２４の各透孔２２ａ、２４ａと隔壁２０の１個又は複数の貫通孔２０ａとが全体として貫通している。その結果、隔壁カセット１８を上記溝１２に挿入した状態では、１個又は複数の貫通孔２０ａはそれぞれ、ウェル１４及び１６の双方に開口している（図３参照）。なお、支持フィルム２２、２４は、任意の材料で構成することができ、例えば、ポリメチルメタクリレート樹脂フィルムのようなプラスチックフィルムを好適に利用することができる。また、支持フィルム２２、２４の厚さは、限定されないが、通常、0.1 mm〜0.3 mm程度である。隔壁カセット１８を上記溝１２に挿入した状態の断面図を図３に模式的に示す。図３は、図１の3-3'線切断部端面図である。ただし、図１には図示されていない隔壁カセット１８も図示されている。なお、明瞭性のため、隔壁２０の貫通孔２０ａは１つだけ図示しており、また、各部材のサイズの比率は実物とは大きく異なる。
【００１５】
各ウェルの底面には、電極（図示せず）を設けることができる。電極は、後述する方法により隔壁の貫通孔に脂質二重膜を形成した後、該脂質二重膜を介して各ウェル間に流れる電流を測定することなどに役立つ。この場合、電極は、ウェル外部の電流計等に接続されるが、この電極とウェル外とを接続する配線を、基板１０の裏面上に形成することが好ましい。特許文献１記載の器具では、基板の上面に配線を設けているが、裏面に配線を設けることにより、デザインの自由度が大きくなり、量産化しやすくなる。
【００１６】
上記した脂質二重膜形成器具は、ドリルにより上側基板にウェル１４、１６となる透孔と溝１２を形成し、下側から底板を貼り付け、溝１２に上記隔壁カセット１８を挿入することにより形成することができる。この場合、上側基板と底板により基板１０が形成されることになる。さらに、各ウェルの底部に電極を配設し、これをウェル外と接続することにより、例えば、各ウェル間を流れる電流を測定することが可能になる。この電極の配設及び接続方法の１具体例を図４に基づき説明する。図４のａ及びｂに示すとおり、上記した２つのウェル１４及び１６の中央部にそれぞれスルーホール１４ａ及び１６ａを形成する。なお、図４のｂは、図４のａにおけるｂ−ｂ’切断部端面図である。次に、図４のｃに示すように、基板１０の裏面にAg/AgClペースト１７を全面塗布し、スルーホール１４ａ及び１６ａ内にもAg/AgClペースト１７を充填する。次に、基板１０の裏面上のAg/AgClペースト１７を拭き取る。これにより、スルーホール１４ａ及び１６ａ内のみにAg/AgClペーストが残留し、これによって、ウェル１４及び１６の底部にそれぞれ電極１７’が形成される（図４のｄ）。電極１７’は、スルーホール１４ａ及び１６ａをそれぞれ介して基板１０の裏側にも露出している。従って、例えば、図４のｅに示すように、基板１０の裏面上に例えば、銀蒸着等により配線１９を形成して、ウェル外と接続することができる。各配線１９の端部には、所望によりスルーホールを形成して、例えば、該スルーホールの内部並びに該スルーホールの表面及び裏面周縁部にAg/AgClペーストを塗布してターミナル２１とすることができる（下記実施例参照）。この場合、ターミナル２１は、基板１０の表面側にも形成されるので、微小電流測定アンプ等の測定機器を基板の表面側にも接続することができる。このように、基板の裏面側に配線を形成することにより、配線作製の自由度を大きくすることができ、量産に有利である。特に、後述のように、１枚の基板に複数のウェル対を形成する場合には、基板表面に配線を形成するよりも遙かに配線がしやすくなる。
【００１７】
上記した本発明の脂質二重膜形成器具を使用して脂質二重膜を形成する方法自体は、特許文献１に記載された公知の方法と同様である。すなわち、上記した２つのウェル１４及び１６（以下、この一対のウェルをダブルウェルチャンバー又はDWCと呼ぶことがある）のそれぞれに、脂質二重膜形成性脂質溶液を添加して各ウェルに該脂質溶液を充填する。ここで、脂質二重膜形成性脂質としては、リポソームの作製に用いられている周知のリン脂質でよく、生体膜における反応を模するためには、生体膜と同じか類似したものが好ましく、この分野において従来から広く用いられているリン脂質、例えば、卵黄フォスファチジルコリン、ジフィタノイルフォスファチジルコリン(diphytanoyl phosphatidylcholine, DPhPC)、ジパルミトイルフォスファチジルコリン(dipalmytoyl phosphatidylcholine)、パルミトイルオレオイルフォスファチジルコリン(1-Palmitoyl 2-Oleoyl phosphatidylcholine, POPC)、ジオレオイルフォスファチジルコリン(Dioleoyl phosphatidylcholine, DOPC)等を好ましい例として挙げることができる。これらの多くは市販されているので、市販品を好ましく用いることができる。また２つのウェルに異なる種類の脂質を導入することにより、簡便に非対称膜を形成することもできる。
【００１８】
脂質二重膜の形成に用いられる溶液中のリン脂質の濃度は、脂質二重膜が形成可能な濃度であれば特に限定されないが、通常、5g/L〜30g/L程度、好ましくは10g/L〜20g/L程度である。また、リン脂質溶液の溶媒は、特に限定されないが、有機溶媒が好ましく、n-デカンのような脂肪族炭化水素溶媒が好ましい。
【００１９】
次に、各ウェルに水又は水溶液を添加して前記脂質溶液中に水又は水溶液の液滴を形成させる。添加はマイクロピペットを用いて容易に行うことができる。この工程で液滴を形成する液は、純水であってもよいし、水系緩衝液（主たる溶媒が水である緩衝液）のような水溶液であってもよい。各ウェルに添加する水又は水溶液の量は、特に限定されないが、脂質二重膜を効率良く形成する観点から、各ウェルに充填されている脂質溶液の体積の１倍〜５倍程度が好ましく、さらに好ましくは1.5倍〜３倍程度である。
【００２０】
本発明の器具により形成される脂質二重膜は、該脂質二重膜に保持された状態におけるタンパク質の性質や機能を調べたり、該タンパク質に結合して、その生理活性を変化させるリガンドをスクリーニングしたりその性質を調べたりする各種測定に好適に用いられるものであるので、脂質二重膜は、タンパク質を含んでいることが好ましく、特に生体内で生体膜に保持された状態で機能している膜貫通タンパク質が好ましい。脂質二重膜に保持するタンパク質としては、各種レセプターや酵素を挙げることができ、例としては、α−ヘモリシン、グラミシジン、アラメチシンなどのペプチドタンパク質類、各種イオンチャンネル、ABCトランスポータタンパク質等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。タンパク質が水溶性の場合、上記水溶液としてタンパク質の水溶液を用いることが好ましく、水系緩衝液中にタンパク質を含む水溶液を用いることがさらに好ましい。これらの溶液中のタンパク質の濃度は、特に限定されるものではなく、適宜選択することができるが、通常、1nM〜1mM程度、好ましくは0.1μM〜10μM程度である。なお、タンパク質は、２つのウェルのいずれか一方に添加される水溶液中に含まれていればよいが、両方のウェルに添加される水溶液中に含まれていてもよい。また、脂質二重膜に保持するタンパク質が脂溶性の場合には、膜タンパク質を発現させたプロテオリポソームを本デバイス中の脂質膜に融合させることで使用可能である。
【００２１】
脂質溶液内で上記液滴を形成すると、脂質溶液が圧迫されて隔壁に押しつけられ、この部分で脂質溶液の層と水層とがある程度の圧力で接することとなる。この際に隔壁の貫通孔内に脂質二重膜が形成される。脂質二重膜は、水又は水溶液の液滴を形成した状態で、通常３分間〜１時間程度放置することにより、隔壁の貫通孔を塞ぐ形で形成される。
【００２２】
タンパク質がα−ヘモリシンやアラメチシン等のイオンチャネルを形成するタンパク質である場合、脂質二重膜にタンパク質が正しく保持されると、保持されたタンパク質の部分がイオンチャネルを形成して、２つのウェルが電気的に導通される。従って、２つのウェル間に所定の電圧をかけ、脂質二重膜を介して流れる電流を測定することにより、タンパク質が脂質二重膜中に正しく保持された脂質二重膜が形成されたことを確認することができる。また、タンパク質に種々の物質を作用させることにより、タンパク質の構造を変化させてイオンチャネルを閉じたり広げたりする物質をスクリーニングすることもでき、このような物質は何らかの生理活性を発揮する可能性があり、医薬品の候補となり得る。従って、２つのウェル間の電流を測定することが望まれる場合が少なくない。このための電極及び配線については上記したとおりである。
【００２３】
DWCは、１枚の基板に１個だけ形成してもよいが、複数形成することもできる。DWCが１枚の基板中に複数個形成された基板を用い、複数のDWC内で同時並行して脂質二重膜を形成してもよい。この場合には、創薬スクリーニング等の測定も各DWCで同時並行して行うことが可能となり、創薬スクリーニング等の効率を大幅に高めることができる。また、１つのウェルの両側にそれぞれウェルを配置したり、１つのウェルを囲むように３つのウェルを配置したりすることにより、単一のウェルが、複数のウェルと同時にそれぞれDWCを形成するようにウェルを配置することも可能である。
【００２４】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２５】
実施例１  脂質二重膜形成器具の作製
１．  隔壁の作製
市販のパリレン樹脂フィルム（厚さ１０μm）に、特許文献１に記載された方法により、フォトリソグラフィーを用いて直径100μｍ又は150μmの貫通孔を図２に示すように５個形成した。
【００２６】
２．  DWCの作製
厚さ３mmの第１のアクリル板（上側基板）に、ドリルで図１に示すDWCと溝を形成した。DWCの直径は4mm、溝の長さは6 mm、幅は0.45 mmであった。次いで、アクリル板の下部に第２のアクリル板（底板）を貼り付けてDWCの底部を形成した。次に図４に示すように、各ウェルの底部にスルーホールを形成し、基板裏面にAg/AgClペーストを塗布して各スルーホール内にAg/AgClペーストを充填して各ウェルの底部に電極を形成した。基板裏面に、上記電極と接続する配線を銀蒸着により形成した。各配線の端部には、底板にスルーホールを形成し、スルーホール内部に及びその表面及び裏面の周縁部にAg/AgClおよびAgペーストを塗布してターミナルとした。
【００２７】
実施例２    脂質二重膜の形成
EXTRASYNTHESEより購入した卵黄フォスファチジルコリン(EggPC)のデカン溶液(SIGMA Aldrich, 20 mg/ml) 3μLずつを各ウェルに滴下した。続いて、一方のウェルに16 μLのバッファ(リン酸緩衝液 1M KCl)を，もう一方にチャネルを形成する膜タンパク質であるアルファヘモリシン（αHL、SIGMA Aldrich, 30 nM)が混合されたバッファを滴下した。器具にTecella社の微小電流測定アンプであるPICO 2を接続し、ウェル間に120mVの電圧を印加し、サンプリングレート500 kHz、フィルター約50 kHzの条件下で電流測定を行いながらしばらく静置すると、脂質二分子膜が形成されαHLが再構成されチャネル電流が確認された。結果を図５に示す。図５中、横軸は時間、縦軸はウェル間の電流を示す。
【符号の説明】
【００２８】
１０  基板
１２  溝
１４  ウェル
１６  ウェル
１７  Ag/AgClペースト
１８  隔壁カセット
１９  配線
２０  隔壁
２１  ターミナル
２２  支持フィルム
２４  支持フィルム
【図１】
2015077559.tif 000003
【図２】
2015077559.tif 000004
【図３】
2015077559.tif 000005
【図４】
2015077559.tif 000006
【図５】
2015077559.tif 000007