(57)【要約】【課題】ブラジキニンのＥＡＥへの病態への関与を明らかにし、エナラプリルなどのＡＣＥ阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物の多発性硬化症（ＭＳ）などの中枢神経性脱髄性自己免疫疾患の治療への新たな用途、並びにその用法及び用量を開発する。【解決手段】ＡＣＥ阻害薬であるエナラプリルの低用量投与は血清ブラジキニン濃度を上昇させ、中枢神経系へのインターロイキン−１７陽性細胞の浸潤を低下させると共にＥＡＥの臨床及び脱髄及び炎症性インデックス等の病理学的な重篤度を改善する。本発明で認めた高血圧症に対して使用される投与量の１／１００から１／１０の低用量での中枢神経性脱髄性自己免疫疾患に対する顕著な改善効果は、循環器領域での使用で認められる副作用を発現することなく、安全性の高い中枢神経系薬としての新たな用途としてアンジオテンシン変換酵素阻害薬を含有する医薬組成物と、そのための用法及び用量を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
中枢神経性脱髄性自己免疫疾患の治療、緩和及び／又は進展を抑制するためのアンジオテンシン変換酵素阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物であって、該アンジオテンシン変換酵素阻害薬の投与量は、アンジオテンシン変換酵素によるブラジキニンの不活性化を低下し、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）からなる群から選択される少なくとも１つのサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量であることを特徴する、医薬組成物。
【請求項２】
前記アンジオテンシン変換酵素阻害薬の投与量は、血清のブラジキニン濃度及び／又はブラジキニン受容体１（Ｂ１Ｒ）が上向き調節される用量であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の投与量は、血液脳関門の透過性を亢進させる用量、又は、ＩＬ−１７陽性細胞の中枢神経系への遊走を阻害する用量であることを特徴とする、請求項１又は２のいずれか1項に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記アンジオテンシン変換酵素阻害薬の投与量は、抗高血圧症の治療に使用される通常の投与量の１/１００から１/１０の用量であることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記中枢神経性脱髄性自己免疫疾患は、自己免疫性脳脊髄炎、多発性硬化症、慢性進行性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、視神経脊髄炎、横断性脊髄炎、びまん性硬化症、シルダー汎発性脳硬化症、急性散在性脳脊髄炎、急性播種性脳脊髄炎及び急性出血性白質脳炎、並びにアルツハイマー病からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分は、エナラプリル、ペリンドプリル、トランドラプリル、ベナゼプリル、テモカプリル、キナプリル、リシノプリル、イミダプリル、アラセプリル、シラザプリル、カプトプリル、デラプリル、ラミプリル、フォシノプリル、スピラプリル及びモエキシプリル、並びにこれらの塩及び溶媒和物から選択されることを特徴とする、請求項１ないし５のいずれか1項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分がエナラプリル又はエナラプリルの塩若しくは溶媒和物であることを特徴とする、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
経口投与用であることを特徴とする、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
多発性硬化症の治療、緩和及び／又は進展を抑制するためのアンジオテンシン変換酵素阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物であって、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分はエナラプリルであり、エナラプリルの経口投与量は、成人に対してマレイン酸塩として０．００１から０．１ｍｇ／日／患者、０．０１から０．５ｍｇ／日／患者、又は０．１から１．０ｍｇ／日／患者から選択されることを特徴とする、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、中枢神経系自己免疫疾患の治療、緩和及び／又は進展抑制用のアンジオテンシン変換酵素阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物、並びにその用法及び用量に関する。
【背景技術】
【０００２】
多発性硬化症（ＭＳ）は中枢神経系（ＣＮＳ）の自己免疫性炎症性疾患であり、脱ミエリン及び軸索変性によることが明らかになっている（非特許文献１）。フィンゴリモド、ナタリズマブ、リツキシマブ、テリフノミド及びアレムツズマブなどのＭＳに対する新たな治療法がＭＳの再発予防に導入されているが、その効果は限定的である（非特許文献２ないし６）。また、これらの薬剤は、易感染性を含む高い副作用発現率や抗体耐性等の問題も有する。
【０００３】
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）はアンジオテンシンIIの生成を促進し、また、カリクレイン／キニン系（ＫＫＳ）の最終産物であり炎症を含む種々の組織傷害で放出されるブラジキニンの不活性化を促進する（非特許文献７、８）。近年、ＫＫＳは中枢神経系の炎症と闘う内因性標的として認識されている（非特許文献８ないし１０）。正常状態ではブラジキニン受容体（Ｂ１Ｒ）は、低レベルで存在し、組織傷害及び炎症性メディエーターによって選択的に誘導され得る（非特許文献１１）。ブラジキニンはＡＣＥによって不活化される。その結果、ブラジキニンとＢ１Ｒ活性の上向き調節を生じる。近年、Ｂ１Ｒの活性化は脳炎誘発性Ｔリンパ球の中枢神経系への関与を減少し、それによってＡＣＥ阻害薬の免疫調節メカニズムを明らかにする可能性が報告されている（非特許文献８）。そして、ブラジキニンと中枢神経系の炎症とが関連するものと考えられる。今日までにＡＣＥ阻害薬とサイトカイン産生との関連性について、以下のことが報告されている。ＡＣＥ阻害薬はインターロイキン（ＩＬ）−６の循環量を減少し（非特許文献１２）、ＩＬ−１０濃度を増加し（非特許文献１３）、アンジオテンシンIIによる炎症を促進するケモカイン類の発現の上向き調節を阻止し（非特許文献１４）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）と顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）によって刺激されたヒト単球からのアンジオテンシンIIの放出を阻害する（非特許文献１５）。
【０００４】
ＡＣＥ阻害剤は、高血圧症の治療薬の第一選択薬の一つであり、循環器領域で世界中で比較的安全に使用されている。しかし、抗高血圧薬として通常使用される投与量では、空咳（乾性咳嗽）が副作用として認められ、日本では、２０ないし３０％に投与1週間から数か月以内に出現するとされている。この空咳は海外では１５％の頻度との報告もある（非特許文献１６）。また、空咳以外でも、生命予後に影響を与える重篤な副作用も含むＡＣＥ阻害剤の副作用として、呼吸困難を伴う血管浮腫、ショック、急性腎不全、高カリウム血症、血球障害、膵炎、肝機能障害及び皮膚障害などが報告されている（日本高血圧学会高血圧治療ガイドライン作成委員会、日本高血圧学会編集「高血圧治療ガイドライン２００９」、ライフサイエンス出版、東京、2009年1月）。
【０００５】
また、実験的自己免疫性脳脊髄炎を含む炎症性疾患の治療におけるＡＣＥ阻害薬の有益な効果が報告されているものの（非特許文献９、１７、１８）、そのメカニズムについてはほとんど解明されていない。また、その治療効果は、高血圧症などの循環器領域で使用される用量に基づくものであり、臨床応用した場合、上記の副作用が発現するものと考えられる。
【０００６】
さらに、アルツハイマー病の病態に関与するβアミロイドタンパク質は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０及びＩＬ−１７等のサイトカインの脳内濃度の上昇やＴｈ１７細胞の活性化等の脳内免疫システムの上向き調節を惹起することが報告されており（非特許文献１９、２０）、ＡＣＥ阻害薬によりＴｈ１７細胞の中枢神経系への遊走を阻害することにより、アルツハイマー病の治療、緩和及び/又は進展予防を発揮することが期待される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Compston A.ら、Lancet 2008;372:1502.
【非特許文献２】Kappos L.ら、N Engl J Med 2006;355:1124.
【非特許文献３】Polman C.H.ら、N Engl J Med 2006;354:899.
【非特許文献４】Hawker Kら、Ann Neurol 2009;66:460.
【非特許文献５】O'Connor P.ら、N Engl J Med 2011;365:1293.
【非特許文献６】Coles A.J.ら、Neurology 2012;78:1069.
【非特許文献７】Prat A.ら、J Neuropathol Exp Neurol 2000;59:896.
【非特許文献８】Schulze-Topphoff U.ら、Nat Med 2009;15:788.
【非特許文献９】Stegbauer J.ら、Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106:14942.
【非特許文献１０】Cayrol R.ら、Nat Immunol 2008;9:137.
【非特許文献１１】Marceau F.ら、Nat Rev Drug Discov 2004;3:845.
【非特許文献１２】Gullestad L.ら、J Am Coll Cardiol 1999;34:2061.
【非特許文献１３】Schieffer B.ら、J Am Coll Cardiol 2004;44:362.
【非特許文献１４】da Cunha V.ら、Atherosclerosis 2005;178:9.
【非特許文献１５】Kim M.P.ら、J Leukoc Biol 2005;78:195.
【非特許文献１６】Just P.M., Pharmacotherapy. 1989;9:82.
【非特許文献１７】Constantinescu C.S.ら、Immunopharmacol Immunotoxicol. 1995;17:471.
【非特許文献１８】Platten M.ら、Proc Natl Acad Sci U S A 2009;106:14948.
【非特許文献１９】Yin Y.ら、Microbiol Immunol. 2009;53:281.
【非特許文献２０】Jin J.J.ら、J Neuroinflammation. 2008;29:23.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、多発性硬化症などの中枢神経系の自己免疫疾患に対して、副作用の発現が小さいＡＣＥ阻害薬、又はその塩若しくは溶媒和物を有効成分として含有する医薬組成物、並びにその用法及び用量を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、多発性硬化症（ＭＳ）の動物モデルで、実験的自己免疫性脊髄炎（ＥＡＥ）における病因へのブラジキニンの関与を検討し、ＥＡＥマウスで多発性硬化症の治療の標的であるかを検討した。本発明者らは、ＡＣＥ阻害薬であるエナラプリルの１．０又は０．２ｍｇ／ｋｇ／日を、ＥＡＥマウスに経口投与した。さらに、血清中のブラジキニン及びサイトカイン類の濃度を測定した。そして、本発明者らは、エナラプリルの投与は血清ブラジキニン濃度を上昇させ、中枢神経系へのインターロイキン（ＩＬ）−１７細胞の浸潤を抑制すると共にＥＡＥの臨床及び病理学的な重篤度を改善することを見出した。そこで、活性成分としてＡＣＥ阻害薬を含有し、投与量が、ＡＣＥによるブラジキニンの不活性化を低下し、他のサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量である、中枢神経系の自己免疫炎症性疾患の治療、緩和及び／又は進展を抑制するための医薬組成物に関する本発明を完成した。
【００１０】
本発明は、ブラジキニンのＥＡＥへの病態への関与を明らかにし、エナラプリルを含むＡＣＥ阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物のＭＳを含む中枢神経性脱髄性自己免疫疾患の治療への新たな医薬組成物、並びにその用法及び用量を提供する。
【００１１】
具体的には、本発明は、中枢神経性脱髄性自己免疫疾患の治療、緩和及び／又は進展を抑制するためのＡＣＥ阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物であって、該ＡＣＥ阻害薬の投与量は、ＡＣＥによるブラジキニンの不活性化を低下し、その他のサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量、血清のブラジキニン濃度及び／又はブラジキニン受容体１（Ｂ１Ｒ）が上向き調節される用量、血液脳関門の透過性を亢進させる用量、及び/又はＩＬ−１７陽性細胞の中枢神経系への遊走を阻害する用量の医薬組成物としてのＡＣＥ阻害剤を提供する。
【００１２】
本発明における前記医薬組成物において、前記ＡＣＥ阻害薬の投与量は、ＡＣＥによるブラジキニンの不活性化を低下し、その他のサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量である。
【００１３】
本発明の前記医薬組成物において、ＡＣＥ阻害剤の投与量は、ＡＣＥによるブラジキニンの不活性化を低下し、さらに、血清のブラジキニン濃度及び／又はブラジキニン受容体１（Ｂ１Ｒ）を上向き調節し、その他のサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量である。
【００１４】
本発明の前記医薬組成物において、ＡＣＥ阻害薬の投与量は、さらに、血液脳関門の透過性を亢進させる用量、又は、ＩＬ−１７陽性細胞の中枢神経系への遊走を阻害する用量である。
【００１５】
本発明の前記医薬組成物において、ＡＣＥ阻害薬の投与量は、抗高血圧症の治療に使用される通常の投与量の１/１００ないし１/１０の用量である。
【００１６】
本発明の前記医薬組成物において、前記その他のサイトカインは、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）からなる群から選択される少なくとも１つである。
【００１７】
本発明の前記医薬組成物において、前記中枢神経性脱髄性自己免疫疾患は、自己免疫性脳脊髄炎、多発性硬化症、慢性進行性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、視神経脊髄炎、横断性脊髄炎、びまん性硬化症、シルダー汎発性脳硬化症、急性散在性脳脊髄炎、急性播種性脳脊髄炎及び急性出血性白質脳炎、並びにアルツハイマー病からなる群から選択される。
【００１８】
本発明の前記医薬組成物において、前記ＡＣＥ阻害薬は、エナラプリル、ペリンドプリル、トランドラプリル、ベナゼプリル、テモカプリル、キナプリル、リシノプリル、イミダプリル、アラセプリル、シラザプリル、カプトプリル、デラプリル、ラミプリル、フォシノプリル、スピラプリル及びモエキシプリル、並びにこれらの塩及び溶媒和物から選択される。
【００１９】
本発明の前記医薬組成物において、前記ＡＣＥ阻害薬は、エナラプリル又はエナラプリルの塩若しくは溶媒和物である。
【００２０】
本発明の前記医薬組成物は経口投与用である。
【００２１】
本発明の前記医薬組成物において、前記ＡＣＥ阻害薬はエナラプリルであり、前記エナラプリルの経口投与量は、成人に対してマレイン酸塩として０．００１から０．１ｍｇ／日／患者、０．０１から０．５ｍｇ／日／患者、又は０．１から１．０ｍｇ／日／患者から選択される。
【００２２】
また、本発明は、多発性硬化症の治療、緩和及び／又は進展を抑制するためのアンジオテンシン変換酵素阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物であって、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分はエナラプリルであり、エナラプリルの経口投与量は、成人に対してマレイン酸塩として０．００１から０．１ｍｇ／日／患者、０．０１から０．５ｍｇ／日／患者、又は０．１から１．０ｍｇ／日／患者から選択される医薬組成物を提供する。
【００２３】
本発明の前記医薬組成物は、前記アンジオテンシン変換阻害薬から選択される１種類又は２種類以上の有効成分と、他の神経変性疾患の治療薬又は予防薬の有効成分とを含む場合がある。
【００２４】
本発明の前記医薬組成物は、生体内で前記ＡＣＥ阻害薬に代謝される誘導体又はその塩若しくは溶媒和物をプロドラッグとして含む場合がある。
【００２５】
本発明の前記医薬組成物は、生体内でエナラプリルに代謝されるエナラプリル誘導体又はその塩若しくは溶媒和物をプロドラッグとして含む場合がある。
【００２６】
また、本発明は、中枢神経性脱髄性自己免疫疾患の治療、緩和及び／又は進展を抑制するためのＡＣＥ阻害薬の有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、該ＡＣＥ阻害薬の投与量は、ＡＣＥによるブラジキニンの不活性化を低下し、その他のサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量、血清のブラジキニン濃度及び／又はブラジキニン受容体１（Ｂ１Ｒ）が上向き調節される用量、血液脳関門の透過性を亢進させる用量、及び/又はＩＬ−１７陽性細胞の中枢神経系への遊走を阻害する用量であることを特徴とする方法を提供する。
【００２７】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害薬の投与量は、ＡＣＥによるブラジキニンの不活性化を低下し、血清のブラジキニン濃度及び／又はブラジキニン受容体１（Ｂ１Ｒ）を上向き調節し、その他のサイトカインの血清中濃度に影響を与えない用量である。
【００２８】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害薬の投与量は、さらに、血液脳関門の透過性を亢進させる用量、又は、ＩＬ−１７陽性細胞の中枢神経系への遊走を阻害する用量である。
【００２９】
本発明の前記方法において、前記その他のサイトカインは、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）からなる群から選択される少なくとも１つである。
【００３０】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害薬の投与量は、抗高血圧症の治療に使用される通常の投与量の１/１００から１/１０の用量である。
【００３１】
本発明の前記方法において、前記中枢神経性脱髄性自己免疫疾患は、自己免疫性脳脊髄炎、多発性硬化症、慢性進行性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、視神経脊髄炎、横断性脊髄炎、びまん性硬化症、シルダー汎発性脳硬化症、急性散在性脳脊髄炎、急性播種性脳脊髄炎及び急性出血性白質脳炎、並びにアルツハイマー病からなる群から選択される。
【００３２】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害薬は、エナラプリル、ペリンドプリル、トランドラプリル、ベナゼプリル、テモカプリル、キナプリル、リシノプリル、イミダプリル、アラセプリル、シラザプリル、カプトプリル、デラプリル、ラミプリル、フォシノプリル、スピラプリル及びモエキシプリル、並びにこれらの塩及び溶媒和物からなる群から選択される。
【００３３】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害薬は、エナラプリル又はエナラプリルの塩若しくは溶媒和物である。
【００３４】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害薬の有効量を投与するステップは、経口投与による場合がある。
【００３５】
本発明の前記方法において、前記ＡＣＥ阻害剤の有効成分はエナラプリルであり、前記エナラプリルの経口投与量は、成人に対してマレイン酸塩として０．００１から０．１ｍｇ／日／患者、０．０１から０．５ｍｇ／日／患者、又は０．１から１．０ｍｇ／日／患者から選択される。
【００３６】
また、本発明は、多発性硬化症の治療、緩和及び／又は進展を抑制するための方法であって、アンジオテンシン変換酵素阻害薬の有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分はエナラプリルであり、エナラプリルの経口投与量は、成人に対してマレイン酸塩として０．００１から０．１ｍｇ／日／患者、０．０１から０．５ｍｇ／日／患者、又は０．１から１．０ｍｇ／日／患者から選択される方法を提供する。
【００３７】
本発明の前記方法において、前記アンジオテンシン変換阻害薬から選択される１種類又は２種類以上の有効成分と、他の神経変性疾患の治療薬又は予防薬の有効成分とを含む場合がある。
【００３８】
本発明の前記方法において、生体内で前記ＡＣＥ阻害薬に代謝される誘導体及びその塩若しくは溶媒和物をプロドラッグとして含む場合がある。
【００３９】
本発明の前記方法において、生体内でエナラプリルに代謝されるエナラプリル誘導体又はその塩若しくは溶媒和物をプロドラッグとして含む場合がある。
【発明の効果】
【００４０】
本発明で認めた循環器領域で使用されるエナラプリルの投与量の１／１００から１／１０の低用量での多発性硬化症などの中枢神経系の自己免疫疾患モデルでの顕著な脳障害の改善効果は、循環器領域での使用で認められる副作用を発現することなく、さらに、安全性の高い中枢神経系薬としてのＡＣＥ阻害剤としての医薬組成物の新たな用途と、そのための用法及び用量を提供するものである。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＥＡＥマウスに対するアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬エナラプリルの処置の実験プロトコールを示す概要図。
【図２Ａ】各種用量のエナラプリルの経口投与（０、０．２又は１．０ｍｇ/ｋｇ/日）によるＥＡＥ臨床スコアの重篤度に対する改善効果を示すグラフ。
【図２Ｂ】各種用量のエナラプリルの経口投与（０、０．２又は１．０ｍｇ/ｋｇ/日）によるＥＡＥ臨床スコアの累積スコア及び最大スコアに対する改善効果を示すグラフ。
【図３Ａ】エナラプリル経口投与（１．０ｍｇ/ｋｇ/日）によるブラジキニン濃度に及ぼす経時的な影響を示すグラフ。
【図３Ｂ】エナラプリル経口投与（１．０ｍｇ/ｋｇ/日）によるブラジキニン濃度の上昇とＥＡＥ重篤度の相関を示すグラフ。
【図４】エナラプリル投与マウス（１．０ｍｇ/ｋｇ/日、経口投与）及びエナラプリル非投与マウスにおける血清中サイトカイン濃度を示す分布図。
【図５】エナラプリル投与（１ｍｇ/ｋｇ/日、経口投与）マウス及びエナラプリル非投与マウスの摘出脊髄を固定後、ＨＥ染色、ＬＦＢ染色及びＩＬ−１７免疫染色で染色した脊髄切片の光学顕微鏡での観察像、及び病理学的所見に基づく炎症性インデックスに及ぼすエナラプリルの影響を表すグラフ。
【図６】ＥＡＥでのアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬のメカニズムを示す概略図。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本明細書において、「ＡＣＥ阻害薬」とは、アンジオテンシン(アンギオテンシン)IからアンジオテンシンIIへの転換に関わるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）を阻害し、降圧効果をもたらす高血圧治療薬として使用される化合物又はその塩若しくは溶媒和物をいう。
【００４３】
本明細書において、「アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬」は、例えば、エナラプリル、ペリンドプリル、トランドラプリル、ベナゼプリル、テモカプリル、キナプリル、リシノプリル、リシノプリル、イミダプリル、アラセプリル、シラザプリル、カプトプリル、デラプリル、ラミプリル、フォシノプリル、スピラプリル及びモエキシプリルなどの又はその塩若しくは溶媒和物をいう。しかし、これらに限定されない。
【００４４】
前記ＡＣＥ阻害薬は、血圧降下作用以外にも、ＡＣＥによるブラジキニンやサブスタンスＰの分解に対する分解抑制作用、及び、免疫系細胞におけるインターロイキン等の産生阻害作用等、多面的な作用が報告されている（「高血圧治療ガイドライン２００９」日本高血圧学会高血圧治療ガイドライン作成委員会、日本高血圧学会編集、ライフサイエンス出版、東京、2009年1月；「JAPIC医療用医薬品集」、日本医薬情報センター編集、日本医薬情報センター出版、東京、2011）。
【００４５】
本明細書において、「ＡＣＥ阻害剤」とは、前記ＡＣＥ阻害薬を有効成分として含有し、薬学的に許容可能な医薬品添加物を配合し、中枢神経性脱髄性免疫疾患の治療に使用される医薬組成物をいう。
【００４６】
本明細書において、「高血圧症」とは、本態性高血圧症，腎性高血圧症、腎実質性高血圧症、腎血管性高血圧症、悪性高血圧を含むが、これらに限定されない。
【００４７】
本明細書において、「中枢神経性脱髄性自己免疫疾患」とは、自己免疫性脳炎、多発性硬化症、慢性進行性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、視神経脊髄炎、横断性脊髄炎、びまん性硬化症、シルダー汎発性脳硬化症、急性散在性脳脊髄炎、急性播種性脳脊髄炎及び急性出血性白質脳炎、並びにアルツハイマー病などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
本明細書において、「通常の投与量」とは、日本の薬事法又は国外においては該薬事法に相当する法律等に基づき承認された医薬品の通常使用される投与量をいい、該医薬品の添付文書等に表示されている用量をいう。また、高血圧症における通常の投与量は「JAPIC医療用医薬品集２０１２」（日本医薬情報センター編、日本医薬情報センター、東京、２０１２年）などに記載されている。
【００４９】
具体的には、日本における高血圧症に対する成人への通常の投与量及びその用法として、エナラプリルはマレイン酸塩として５〜１０ｍｇを１日１回経口投与、ペリンドプリルはペリンドプリルエルブミンとして２〜４ｍｇを１日１回経口投与、カプトリルは１日３７．５〜７５ｍｇを３回に分割経口投与、デラプリルはデラプリル塩酸塩として１日３０〜６０ｍｇを朝夕の２回に分割経口投与、シラザプリルはシラザプリル（無水物）として１日１回０．５ｍｇより経口投与し漸次増量し、最大１日１回２ｍｇまで、リシノプリルはリシノプリル（無水物）として１０〜２０ｍｇを１日１回経口投与、イミダプリルはイミダプリル塩酸塩として５〜１０ｍｇを１日１回経口投与、テモカプリルはテモカプリル塩酸塩として１日１回２〜４ｍｇ経口投与、キナプリルはキナプリルとして５〜２０ｍｇを１日１回経口投与、アラセプリルはアラセプリルとして１日２５〜７５ｍｇを１〜２回に分割経口投与、ベナゼプリルはベナゼプリル塩酸塩として５〜１０ｍｇを１日１回経口投与、トランドラプリルはトランドラプリルとして１〜２ｍｇを１日１回経口投与、リシノプリルはリシノプリル（無水物）として１０〜２０ｍｇを１日１回経口投与する用量が薬事法に基づき承認されている。
【００５０】
本明細書において、サイトカインとは、種々の細胞が産生するタンパク質で、特異的な受容体に結合し、免疫、炎症反応の生業作用、抗ウイルス作用、抗腫瘍作用又は細胞増殖・分化の調節作用など細胞間相互作用を媒介するタンパク質をいう。本明細書においては、特に、前記ＡＣＥ阻害薬の高血圧症に対する通常の投与量の患者への投与により血清中濃度が影響を受けるアンジオテンシンＩ，アンジオテンシンII，ブラジキニン、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）などをいうが、これらに限定されない。
【００５１】
ＡＣＥ阻害薬は、循環器分野において、単に患者の血圧を低下させるだけではなく、その疾患の進展に炎症性反応が関与する動脈硬化症に対しても治療効果を有することが認められており、そのメカニズムとして免疫系細胞でのサイトカインの産生及び放出に作用することが考えられている。
【００５２】
カプトリルはマウスにおいて免疫系細胞である脾臓細胞に対してインタロイキン−４及び１０の産生を抑制する（Albuquerque.D.A.D.ら、Kidney Int. 2004; 65: 846）。エナラプリル及びぺリンドプリルは、ヒトにおいて血圧に影響を及ぼさない用量で、Ｔ細胞からのＩＮＦ−γやＴＮＦα放出を抑制する（Krysiak R.ら、Pharmacological Reports 201;63:1151）。エナラプリル及びぺリンドプリルは、ヒトにおいて血圧に影響を及ぼさない用量で、各２０ｍｇ/日及び４ｍｇ/日の投与によって、炎症刺激に伴って血中の単球からのＩＬ−１βやＴＮＦα放出を抑制する（Krysiak R.ら、Pharmacological Reports 2012;64:1466）。エナラプリルは、ヒトで血圧に影響を及ばさない用量で血中のＩＬ−６濃度を低下させる（Montalescot Gら、European Heart Journal 2009;30:2733）。エナラプリル及びぺリンドプリルは、ヒトにおいて血圧に影響を及ぼさない用量で、血症中ＩＬ−１０濃度を増加させる（Krysiak R.ら、Pharmacological Reports 2008;60:514）。また、エナラプリルは自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）において、１０ｍｇ/ｋｇの投与量で、血清中のＩＬ−１０濃度を増加し、ＩＬ−６濃度を減少させる（Dalpiaz P.L.M. ら、Brazilian Journal of Medical and Biological Research 2013;46:171）。カプトリルは、感染刺激による脾臓Ｔ細胞でのＩＬ−１７及びＩＮＦ−γの産生上昇を抑制する（Silva-Filho J. L.ら、PLOS ONE  2013;8:e62999）。
【００５３】
生体内の炎症反応の抑制作用は、前記のとおり、抗動脈硬化作用との点では有用であるものの、一方で、感染症に対する易感染性の上昇作用を惹起する可能性も懸念される。ＡＣＥ阻害剤服用患者において、血管浮腫発症時に著明なＣＲＰ上昇を伴うことが報告されている（Bas Mら、Br J Clin Pharmacol 2004;59:233）。
【００５４】
ＡＣＥ阻害薬の一種であるエナラプリルは、高血圧症ラットのモデルにおいて、５ｍｇ/ｋｇ/日(Jackson B.ら、Tohoku J. Exp. Med., 1992;166:155)、及び高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）では２５ｍｇ/ｋｇの投与量で血圧降下作用を示すことが報告されている（Richer C.ら、Arch Mal Coeur Vaiss. 1982;75:55、Richer Cら、Hypertension. 1983;5:312）。脳卒中易発性高血圧自然発症ラット（ＳＨＲＳＰ）では、１から３０ｍｇ/ｋｇ/日の投与量で血圧降下作用を示すと報告されている（Unger T.ら、Arzneimittelforschung 1984;34:1426）。
【００５５】
一方で、前記のように、ＡＣＥ阻害剤は、高血圧症の治療において、高頻度に発現する副作用として空咳、生命予後にも影響を与える副作用として呼吸困難を伴う血管浮腫、その他の副作用として急性腎不全、膵炎、高カリウム血症及びショックを発現する。
【００５６】
特に、ＡＣＥ阻害剤の高血圧症における通常の投与量における副作用として、呼吸困難を伴う血管浮腫が、生命予後に大きく影響する副作用として挙げられている。ＡＣＥ阻害剤による血管浮腫は、主に顔面(眼瞼、頬)、口唇、舌、咽頭領域に生じることが報告されている。ＡＣＥ阻害剤は、３０００万人で使用され、血管浮腫の発現頻度は０．１から２％と報告されている（Am J Manag Care. 2005;11:S392)。さらに、ＡＣＥ阻害剤の高血圧症の治療における副作用として急性腎不全が認められる急性腎不全は、主に食欲不振、嘔吐、下痢、腹痛、血尿、体重減少、関節痛、けん怠感、発熱、全身性の潮紅、皮疹があらわれ、乏尿、浮腫、手足のむくみ等が生じる。高カリウム血症では、神経・筋症状（脱力感、筋麻痺、知覚異常）、消化器症状（悪心、嘔吐、腹痛、下痢）、心症状（心音微弱、心電図変化、不整脈、心房細動、心停止）があらわれることがある。膵炎での症状は、一般的に知られている急性膵炎の臨床所見として腹痛、嘔気、嘔吐、アミラーゼ上昇、リパーゼ上昇などがある（「高血圧治療ガイドライン２００９」日本高血圧学会高血圧治療ガイドライン作成委員会、日本高血圧学会編集、ライフサイエンス出版、東京、2009年1月；「JAPIC医療用医薬品集」、日本医薬情報センター編集、日本医薬情報センター出版、東京、2011）。
【００５７】
これらの副作用は、前記のようにＡＣＥ阻害薬の多面的な作用に起因するものであり、治療等に対する有効用量を上回るＡＣＥ阻害薬の服用を回避することは、患者の生命予後やＱＯＬ(Quolity of Life)に有用である。
【００５８】
そこで、本発明に基づき、中枢性自己免疫性脱髄性疾患の治療、緩和及び／又は進展予防のための化合物として前記エナラプリルなどのＡＣＥ阻害薬を低用量でＩＬ−４、ＩＬ−６，ＩＬ−１０，ＩＬ−１７、ＩＮＦ−γ又はＴＮＦ−αの血清中濃度に影響を与えることなく使用できる。そこで、この低用量のＡＣＥ阻害剤は、前記、高血圧症で認められる前記の副作用を発現リスクを低下し、高い安全性で使用することが可能である。
【００５９】
本明細書において、「塩」とは、金属塩、アミン塩、酸塩、酢酸塩、酸付加塩、塩基付加塩などを含むいずれかの塩をいう。前記金属塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩などの場合がある。エナラプリルはマレイン酸塩、デラプリル、イミダプリル、テモカプリル及びキナプリルは塩酸塩、ペリンドプリルはエルブミン塩が好ましい。しかし、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書において、「溶媒和物」とは、例えば有機溶媒との溶媒和物、水和物等をいう。シラザプリル及びリシノプリルは、これらの水和物がもっとも好ましいが、これらに限定されない。
【００６１】
本発明の医薬組成物に含有されるアンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分は、市販の化合物を使用することができるが、これに限定されない。
【００６２】
本発明のＡＣＥ阻害薬を含有する医薬組成物は、前記有効成分、又はその塩若しくは溶媒和物を、錠剤若しくはカプセル剤等の経口剤、静脈投与用、皮下投与用若しくは筋肉内投与用の注射剤、軟膏剤若しくはパップ剤等の外用剤、坐剤、経膣剤又は噴霧剤などの製剤として、患者に投与することができる。
【００６３】
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害薬を有効成分として含有する医薬組成物の前記製剤は、当業者によく知られた薬学的に許容可能な医薬品添加物を添加することにより製造できる。前記医薬品添加物は、賦形剤、結合剤、滑剤、崩壊剤、溶解剤、緩衝剤、着色剤、香料、甘味料、防腐剤、安定化剤、及び、当業者に知られたその他の医薬品添加剤を含むが、これらに限らない。これらの医薬品添加物は、例えば、医薬品添加物事典２００７（日本医薬品添加剤協会編集、2007年7月、薬事日報社、東京）に記載された用法及び用量となるように製剤に添加し、使用することができる。
【００６４】
本発明の医薬品組成物の有効成分として含有するＡＣＥ阻害薬は、高血圧症の前記通常の投与量１/１０００から１/３、１/５００から１/５又は１/１００から１/１０の範囲の投与量で投与することができる。好ましくは、各ＡＣＥ阻害薬の高血圧症に対する通常の投与量の１/１００から１/１０の用量を投与する。
【００６５】
また、患者の体重、年齢、性別、症状、既往歴等に応じて、前記投与量を適宜増減することができる。
【００６６】
エナラプリルを有効成分として含有する医薬組成物の経口投与の場合、マレイン酸塩として、成人の場合、０．００１から０．１ｍｇ／日／患者、０．０１から０．５ｍｇ／日／患者、又は０．１から１．０ｍｇ／日／患者である。
【００６７】
本発明のＡＣＥ阻害薬を含有する医薬組成物において、例えば、エナラプリルを有効成分とする場合として下記の処方例が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
エナラプリルのカプセルの処方例
本発明のエナラプリルを含有する医薬組成物は、例えば、エナラプリルのマレイン酸塩０．１ｍｇに医薬品添加物として、これらに限定されない乳糖水和物、トウモロコシデンプン、アルファー化デンプン、炭酸水素ナトリウム、黄色三二酸化鉄、三二酸化鉄及びステアリン酸マグネシウムの本技術分野で使用される適当量を合計５０ｍｇとなるように混合し、攪拌機で成分が均一となるように撹拌後、打錠機で打錠することにより製造することができる。また、医薬品添加物を適宜増加させることにより、１錠が１００ｍｇや２００ｍｇの錠剤を製造することができる。
【００６９】
注射剤、懸濁剤、カプセル剤、坐剤等は、米国特許４８８２０４３号及び５００１１１３号に記載の方法に従って処方し、それぞれの製剤として本発明の医薬組成物を製造することができる。
【００７０】
エナラプリル以外のＡＣＥ阻害薬についても、エナラプリルと同様の方法で、各ＡＣＥ阻害薬を有効成分として含有する医薬品組成物としての製剤を製造し、患者に投与することができる。
【００７１】
患者血清中のサイトカイン濃度は、本発明のＡＣＥ阻害剤としての医薬組成物を患者に投与する前、又は投与後に患者より血液を採取し、その血清をＥＬＩＳＡ、液体クロマトグラフィーなどを使用して、当業者によく知られた方法によって定量することができる。ＥＬＩＳＡを使用する場合は、測定対象とするサイトカインに対する市販の測定キットを用い、該キットに添付の測定マニュアルに従って測定することができる。しかし、これらに限定されない。
【００７２】
中枢神経性脱髄性自己免疫疾患に対する治療、緩和又は進展予防に対する本発明の医薬組成物の効果は、例えば、該医薬品組成物の投与前及び投与後の神経症状（例えば、総合障害度評価尺度：ＥＤＳＳ）、ＭＲＩ又はＸ線CT等による画像診断、誘発電位検査、膠原病や抗アクアポリン（ＡＱＰ）４抗体などの抗体検査、髄液検査（髄液細胞数、ＩｇＧインデックス又はオリゴクローナルバンドの測定）、ＱＯＬ及び生命予後等を指標として評価することができるが、これらに限定されない。例えば、多発性硬化症の患者に対しては、多発性硬化症治療ガイドライン2010（日本神経学会、日本神経免疫学会及び日本神経治療学会監修、医学書院、東京、2010年11月）に記載の前記指標を含む各種スケールや指標に基づいて評価することができるが、これらに限定されない。
【００７３】
血液脳関門の透過性の亢進は、ＭＲＩ等による画像診断、患者脊髄の生検とその病理学的所見及び/又は脳圧測定等の方法により評価することができる。
【００７４】
Ｔｈ１７細胞の中枢神経系への遊走は、患者脊髄の生検とその病理学的所見、放射性元素で標識したＴｈ１７細胞の脊髄への放射活性集積の測定、及びＭＲＩ等の画像診断等の方法により評価することができる。
【００７５】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除および置換を行うことができる。
【００７６】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【００７７】
下記の実験において、実験動物に対する全操作は千葉大学の実験動物委員会で承認された後に実施された。
【実施例１】
【００７８】
１  材料及び方法
１．１  マウスへのＥＡＥの誘導
日本ＳＬＣ（静岡、日本）より野生型のＣ５７ＢＬ／６系マウスを購入した。マウスは千葉大学の無菌施設で１ケージあたり最大４匹で、齧歯類用粉餌を与え、自由な摂水・摂食環境下飼育した。実験的自己免疫性脊髄炎（ＥＡＥ）は、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）による免疫付与によって誘導した。殺菌処理したＨ３７Ｒａ型ヒト結核菌４００μｇを含む完全フロイントアジュバントに加えた合計２００μｇのＭＯＧペプチド３５−５５をＣ５７ＢＬ／６系マウスの皮下２か所に注入した（１日目）。１日目及び２日目に、５００ｎｇの百日咳毒素をＨｏｏｋｅキット（ＥＫ−０１１５、Hooke Laboratories、米国マサチューセッツ州ローレンス）を使用して腹腔内に投与した。
【００７９】
ＥＡＥは、下記を指標としてスコア化した。
０＝臨床症状なし
１＝尾部に部分的な麻痺
２＝尾部弛緩
３＝尾部下垂（limp tail）及び後肢の部分的な弱化（weakness）
４＝尾部下垂及び後肢の完全な弱化
５＝尾部下垂、後肢の完全弱化及び前肢の部分的な弱化
６＝後肢及び前肢の完全麻痺
【００８０】
１．２  ＥＡＥマウスに対するアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬エナラプリルの処置
ＡＣＥ阻害薬エナラプリル［（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−エナラプリルマレイン酸塩；和光純薬工業株式会社、大阪、日本］のＥＡＥの進展に対する効果を検討した。エナラプリルは粉餌に混合した。１日あたりの摂取量（１匹あたり３ｇ／日の混餌を摂餌）からエナラプリルの投与量は１匹あたり１ｍｇ／ｋｇ／日又は０．２ｍｇ／ｋｇ／日と算出された。投与量１．０ｍｇ／ｋｇ／日のエナラプリル（［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］；ｎ＝１２、１２匹中２匹は病理学的解析にのみ使用）又は投与量０．２ｍｇ／ｋｇ／日（［ＥＡＥ＋エナラプリル（０．２）群］；ｎ＝５）を、ＭＯＧでの免疫付与開始前１４日からＭＯＧでの免疫付与後３０日までマウスに投与した。比較のために、エナラプリルを投与しないＥＡＥマウスを実験に使用した（[ＥＡＥ群]；ｎ＝１２、１２匹中の２匹は病理学的解析にのみ使用）。この実験プロトコールの概要図を図１に示す。
【００８１】
１．３  血清ブラジキニンの測定
−１４、０、１８及び３０日目のマウスにおける血清ブラジキニン濃度をブラジキニン・エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）・キット（ｅｋ−００９−０１、Phoenix Pharmaceuticals,Inc.、米国カリフォルニア州）を使用し、製造者のマニュアルに従って測定した。つまり、第２抗体でコーティングされたＥＩＡプレートが、アッセイ緩衝液で５００倍に希釈された５０μｌのマウス血清と２時間インキュベーションした。４回の洗浄後、各ウェルに１００μｌのストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液を添加し、プレートを１時間インキュベーションした。プレートを４回洗浄し、各ウェルに１００μｌの基質溶液（ＴＭＢ）を添加し、さらに１時間インキュベーションした。最後に１００μｌの２Ｎ塩酸を添加した。４５０ｎｍの光学密度を測定した。ブラジキニン濃度は標準曲線を参照することにより算定した（ブラジキニンの測定範囲は５−５０，０００ｎｇ／ｍＬであった）。
【００８２】
１．４  血清サイトカインの測定
エナラプリルによりＥＡＥを緩和するメカニズムを検討するために、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αのマウス血清中濃度を確認した。前記血清中濃度は、ＥＡＥ誘導マウスのＥＡＥ誘導後−１４、０、１８日目のマウス血清試料を、多重蛍光磁気ビーズ法によるイムノアッセイ（Bio-Rad Laboratories、米国カリフォルニア州ハーキュールス）で、製造者のマニュアルに従って測定した。つまり、血清試料を遠心分離し、その上清を収集し、前記サイトカインを同時分析した。全ての血清試料は所定のＢｉｏ−Ｐｌｅｘ試料希釈剤で４倍に希釈した。次に、各試料又はサイトカインの標準液の５０μｌをウェルに添加し、６０分間インキュベーションした。３回の洗浄後、各ウェルに検出抗体（２５μｌ）を添加し、３０分間インキュベーションした。プレートを３回洗浄した後、５０μｌのストレプトアビジン−フィコエリスリンを各ウェルに添加し、続いて１０分間インキュベーションした。最後に、１２５μｌのアッセイ緩衝液を添加し、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘアレイリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、各サイトカインの血清中濃度を測定した。各サイトカインに対して標準曲線を参照することによりサイトカイン濃度を算出した。
【００８３】
１．５  病理学的解析
マウスの脊髄を（重篤度が最高となる）ＥＡＥ誘導後１８日目に摘出した。脊髄の摘出においては［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］及び[ＥＡＥ群]の各群の平均的な重篤度スコアを有する２匹のマウスを安楽死させた。病理学的検討では、脊髄組織のホルマリン固定切片を使用した。つまり、脊髄組織に対して下記の工程が施された。ホルマリンによる最初の固定後、軸位平面で頸部より脊髄腰部へ脊髄組織を１０μｍ厚で薄切した。切片を、ヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）及びルクソール・ファスト・ブルー（ＬＦＢ）で染色した。脊髄切片の免疫組織化学的染色は、抗マウスＩＬ−１７ウサギモノクローナル抗体（BSS Inc.、米国）を使用し、アビジン−ビオチンコンプレックス法で実施した。切片のキシレンによる脱パラフィン処理と段階的な脱水処理後に、内在性のペルオキシダーゼ活性を１５分間の０．５％過酸化水素水によって失活させた。１０％正常ヤギ血清（Ｇ９０２３、シグマ  アルドリッチ  ジャパン合同会社、日本）のＰＢＳ溶液と希釈１次抗体（抗マウスＩＬ−１７ウサギモノクローナル抗体、１／１０００希釈）とを使用し、組織切片を４°Ｃで終夜インキュベーションした。切片を、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で洗浄した後に、希釈第２抗体：ビオチン化ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ＢＡ−１０００、Vector Labs、米国カリフォルニア州、１／１０００希釈）と、４°Ｃで終夜インキュベーションした。切片を、ＰＢＳＴ洗浄後、ベクタステインＡＢＣ試薬（ＰＫ−６１００、Vector Labs、米国カリフォルニア州；１：１０００に希釈）と２時間インキュベーションした。２時間のインキュベーション後、切片をＰＢＳＴで洗浄した。最後に、染色は、１０分間の３，３−ジアミノベンジジン  テトラヒドロクロライド（シグマ  アルドリッチジャパン合同会社）及び０．０３％過酸化水素水のトリス生理緩衝液により可視化された。その後、切片を光学顕微鏡で観察した。
【００８４】
組織学的評価では、１匹のマウスあたり頸部から腰部までの１０枚の縦方向切片を、下記の炎症所見（炎症性インデックス）に従ってスコア化した。
０＝炎症の所見なし
１＝血管周囲及び髄膜に限局した細胞浸潤
２＝実質組織への軽度の細胞浸潤
３＝実質組織への中等度の細胞浸潤
４＝実質組織への高度の細胞浸潤
【００８５】
１．６  統計学的解析
全てのデータは、治療企図主義（intention-to-treat principle）に従って解析された。基準値の変動は、対応のある連続測定に対してウイルコクソン符号順位検定を、対応のない連続測定に対してはマン・ホイットニーのＵ検定を適宜使用し、各実験群で比較した。スペルマンの順位相関係数を２つの変動の間の統計学的な依存性を評価するために使用した。全ての比較は予め計画され、統計学的検定は、両側検定で、ｐ＜０．０５を統計学的有意と判断した。
【００８６】
２  結果
２．１  エナラプリルによるＥＡＥ重篤度の改善効果
図２は、エナラプリルによるＥＡＥ重篤度の改善効果を示すグラフである。アスタリスク（＊）はｐ値が５％未満であることを示す。エナラプリルのＥＡＥマウスへの１．０ｍｇ／ｋｇ／日を投与する［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］は、[ＥＡＥ群]と比較して有意にＥＡＥの臨床スコアの重篤度を１４日目から２８日目に改善し（ｐ＜０．０５）、ＥＡＥスコアの積算値は改善した（ｐ＝０．００１６）。同様に、［ＥＡＥ＋エナラプリル（０．２）群］は[ＥＡＥ群]と比較して有意に１５から１９日目にＥＡＥの重篤度を軽減した（ｐ＜０．０５）（図２Ａ）。統計学的に有意でないものの、［ＥＡＥ＋エナラプリル群］のＥＡＥ臨床スコアの最大値は[ＥＡＥ群]のそれよりも低値であった（図２Ｂ）。
【００８７】
２．２  エナラプリルによるブラジキニン濃度の上昇とＥＡＥ重篤度の相関
図３は、エナラプリルによるブラジキニン濃度の上昇とＥＡＥ重篤度の相関を示すグラフである。アスタリスク（＊）はｐ値が５％未満であることを示す。アスタリスク（＊＊）はｐ値が１％未満であることを示す。［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］において、ブラジキニン濃度は−１４日目と比較して０日目では有意に上昇し（ｐ＝０．０１２）、１８日目では０日目と比較して有意に減少した（ｐ＝０．００７）。ＥＡＥマウスでは、ブラジキニン濃度は０日目と比較して１８日目で有意に減少した（ｐ＝０．０２８）（図３Ａ）。ブラジキニン比（０日目／−１４日目）はＥＡＥ積算スコアで負の相関性を示した（ｐ＝０．０３９、ｒ＝−０．４６９）（図３Ｂ）。
【００８８】
２．３  ＥＡＥにおける血清サイトカインに対するエナラプリルの無効果
図４は、エナラプリル処理マウス及びエナラプリル非処理マウスにおける血清中サイトカイン濃度を示す分布図である。アスタリスク（＊）はｐ値が５％未満であることを示す。[ＥＡＥ群]における血清ＩＬ−６及びＩＬ−１７濃度は１８日目で０日目と比較して有意に増加した。これらのサイトカインの変化は［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］においても確認された。他のサイトカインは０日目と１８日目との間で変化を認めなかった。エナラプリルの処置は、血清サイトカイン濃度に影響を与えなかった（図４）。
【００８９】
２．４  エナラプリルによる中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症、脱髄、及びＩＬ−１７陽性細胞のＣＮＳへの浸潤の軽減
図５は、エナラプリル処理マウス及びエナラプリル非処理マウスにおける病理学的所見を示す写真から作成した図及びグラフである。図５の染色像は、ＨＥ染色、ＬＦＢ染色、ＩＬ−１７免疫染色切片について、光学顕微鏡で各々の染色像のカラー画像を取得し、それぞれの染色方法の染色剤の色である赤紫色、青色又は褐色を主とする濃淡コントラストを表す白黒画像として表示した。アスタリスク（＊＊）はｐ値が１％未満であることを示す。[ＥＡＥ群]のマウス（ｎ＝２）及び［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］（ｎ＝２）のマウスをＥＡＥ誘導から１８日目に安楽死させた。[ＥＡＥ群]の中央の臨床スコアは４であり、［ＥＡＥ＋エナラプリル群］では１であった。エナラプリル処置はＥＡＥマウスの脊髄における細胞浸潤と脱髄を軽減した。さらに、脊髄におけるＩＬ−１７陽性浸潤細胞は、［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］で減少した。エナラプリル処置（１．０ｍｇ／ｋｇ／日）は、炎症性インデックスも有意に軽減した（[ＥＡＥ群]＝２．７±０．２［平均値±標準誤差］；［ＥＡＥ＋エナラプリル（１．０）群］＝０．６±０．２；ｐ＜０．００１）（図５）。
【００９０】
２．５  実施例の総括
前記実施例において、エナラプリル処置ＥＡＥマウスでの、血清ブラジキニン濃度の有意な上昇、ＥＡＥ臨床スコア、脱髄及び中枢神経系の炎症の軽減を示した。これらの結果はブラジキニンを含むＫＫＳ系がＥＡＥの病態に関与することを示す。
【００９１】
ＡＣＥは自己免疫炎症性疾患の促進に非常に関与し、炎症及びＴ細胞刺激に介在し、血液脳関門の透過性に影響する（非特許文献８、９、１６、１７）。実際に、ＡＣＥ遺伝子の多型は多発性硬化症（ＭＳ）の発症感受性に関連し（Lovrecic Lら、Acta Neurol Scand 2006;114:374）、ＭＳ患者においてＡＣＥレベルが増加することが報告されている（Constantinescu CSら、Arch Neurol 1997;54:1012、Matsushita Tら、J Neurol Sci 2010;295:41.）。
【００９２】
ＡＣＥ阻害薬は、アンジオテンシンIIの生成を阻害するだけではなく、ブラジキニン経路にも影響を与え、中枢神経系の自己免疫性を調節する。ブラジキニン受容体Ｂ１Ｒの活性化は中枢神経系への脳炎誘発性のＴリンパ球の関与を制限する（非特許文献８）。ＡＣＥの阻害は強力な制御性Ｔ細胞を誘導し、Ｔｈ１及びＴｈ１７−介在性ＥＡＥでの自己免疫性を調節する（非特許文献１７）。ＡＣＥ阻害薬がＥＡＥ重篤度を改善することは既に報告されている（非特許文献９、１６、１７）。しかしながら、そのメカニズム及び低用量で有効性を示すことは知られていなかった。
【００９３】
前記の実施例の結果により、ＡＣＥ阻害薬エナラプリルの低用量の投与が所定の免疫機能を抑制し、ＥＡＥスコアを緩和することが示された。推察されるメカニズムは、エナラプリル投与により、ＥＡＥマウスの中枢神経系へのＩＬ−１７陽性細胞の遊走の阻害に続いて、ブラジキニン濃度の上昇はＢ１Ｒ活性を活性化する。その結果、エナラプリルによるブラジキニン濃度の上昇は、ＥＡＥ重篤度を軽減する（図６）。
【００９４】
前記実施例において、ブラジキニン濃度は疾患の重篤度が最高の時に減少した。ブラジキニンは、Ｂ１Ｒに結合し、中枢神経系へのＴｈ１７細胞の遊走を調節する。このフェーズにおいて、中枢神経系でブラジキニンは消費され、減少する。かくして、ＥＡＥの中枢神経系においてブラジキニンと炎症性過程との間に強い相互作用が存在する。
【００９５】
Constantinescuらは、免疫付与からＡＣＥ阻害薬カプトリル３０ｍｇ／ｋｇ／日で処置した２１日目のルイスラットＥＡＥに対する効果を報告した。カプトリル処置及び非処置動物の臨床スコアの平均値と積算値の間に統計学的な有意差を認めた（非特許文献１６）。カプトリルの役割として、抗高血圧の特性に依存しない免疫応答の調節を彼らは提案している。エナラプリル（１０ｍｇ／ｋｇ／日）の免疫付与前３日間の処置、又はリシノプリル（１０ｍｇ／ｋｇ／日）の免疫付与前２日間の処置は、有意なＭＯＧ−ＥＡＥマウス又はプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）−ＥＡＥマウスの進行を有意に改善する結果をもたらす（非特許文献９）。
【００９６】
本発明者らは、低用量のＡＣＥ阻害薬がＥＡＥで改善効果を奏するメカニズムとして以下のように考えている。レニン−アンジオテンシン経路の遮断、特にアンジオテンシンIIタイプＩ受容体の遮断は、細胞に存在しケモカインの発現を障害するＣＤ１１ｂ又はＣＤ１１ｃ抗原の数を減少する。しかし、従来の検討におけるＡＣＥ阻害薬の量は、ヒトへの使用に対して過剰量であると考えられる。前記実施例において、エナラプリルの０．２から１．０ｍｇ／ｋｇ／日投与量であっても、ＥＡＥの重篤化を予防する効果という顕著な効果を本発明者らは示した。
【００９７】
ＥＡＥの病態において、ＩＬ−１７及びＩＬ−６は重要な役割を持つ（Komiyama Yら、J Immunol 2006;177:566；Quintana Aら、J Immunol 2009;183:2079；Eugster HPら、Eur J Immunol 1998;28:2178；Uzawa Aら、Clin Exp Immunol 2013;172:37）。前記実施例で示されたＥＡＥマウスに対する血清サイトカインの解析は、ＩＬ−１７及びＩＬ−６の有意な上向き調節を表すものでもある。しかしながら、低用量のエナラプリルは直接的に血清サイトカイン濃度に影響を与えなかった。
【００９８】
興味深いことに、本発明者らの免疫組織学的検討はＥＡＥマウスの脊髄におけるＩＬ−１７陽性細胞の存在を示すものであり、ＡＣＥ阻害薬処置ＥＡＥマウスにおいて免疫反応性の細胞は消失した。すなわち、血清ＩＬ−１７濃度は増加した。しかし、ＣＮＳに遊走するＩＬ−１７陽性細胞はエナラプリル処置ＥＡＥマウスで減少した。これらの結果は、ＡＣＥ阻害薬がＥＡＥマウスにおける血液脳関門機能を調節するとの過去の研究と一致する。
【００９９】
結論として、本発明者は、前記実施例でＥＡＥでの中枢神経系の炎症においてＫＫＳの極めて重要な役割を明らかにした。また、本発明者らは、低用量のＡＣＥ阻害薬投与による血清ブラジキニン濃度の上昇、及び中枢神経系へのＩＬ−１７陽性細胞の浸潤の改善よるＥＡＥ重篤度の緩和の結果を示した。ＡＣＥ阻害薬は、血液脳関門の透過性による自己免疫応答の制御との重要な役割を担うものである。したがって、ＫＫＳの調節はＥＡＥ及びＭＳの病態での決定的な要素であるものと考えられる。ＡＣＥ阻害剤は安価であり、前記の副作用の発現は認められるものの、循環器領域での適用で比較的安全に世界中で使用され、良好な耐用性を有する。ＫＫＳを標的とする薬剤であるＡＣＥ阻害剤は、ヒトのＭＳへの応用に対して魅力的な治療戦略である。従って、ＭＳ患者におけるＡＣＥ阻害剤での検討は、その安全性と有効性とが高く保証されており、ＡＣＥ阻害剤による治療はＭＳのみならず他の自己免疫性疾患に対して治療的な潜在力を有するものである。
【０１００】
前記実施例でＥＡＥでエナラプリルの０．２ｍｇ／ｋｇ／日で臨床スコアの改善傾向を、１．０ｍｇ／ｋｇ／日で統計学的有意な臨床スコアの改善効果を示した。本用量を齧歯類であるマウスで血圧降下作用を示す３０ｍｇ／ｋｇ／日（Krege J.H.ら、Hypertension. 1995;25:1111）、同２０ｍｇ／ｋｇ／日（Xu J.ら、Hypertension 2002;40:244）、及びラットにおける血圧降下作用を示す有効用量である２５ｍｇ/ｋｇ/日（Richer C.ら、Hypertension 1983;5:312）、５ｍｇ／ｋｇ（Jackson Bら、Tohoku J. Exp. Med. 1992;166:155）と比較すると、ヒトに対しては、高血圧症に対する投与量の１／１００から１／１０の投与量が中枢神経性脱髄性自己免疫疾患の有効用量と算定される。
【０１０１】
さらに、アルツハイマー病の病態に関与するβアミロイドタンパク質は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０及びＩＬ−１７等のサイトカインの脳内濃度の上昇やＴｈ１７細胞の活性化等の脳内免疫システムの上向き調節を惹起するところから、前記実施例で示されたＡＣＥ阻害薬による効果は、ＡＣＥ阻害剤の低用量の投与によりアルツハイマー病の治療、緩和及び／又は進展予防を発揮するものである。
【産業上の利用可能性】
【０１０２】
本発明は、有効成分としてＡＣＥ阻害薬を含有する医薬組成物を、ブラジキニンの不活性化を低下させ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ＩＮＦ−γ又はＴＮＦ−αなどのサイトカインの血清中濃度に影響を与えない範囲の投与量で使用することにより、高血圧症の治療で認められるアンジオテンシン変換酵素阻害剤の副作用の発現リスクが低く、高い安全で使用できる中枢神経性脱髄性自己免疫疾患に対する治療、緩和及び／又は進展抑制に利用可能である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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