(57)【要約】【課題】ブラシ等での洗浄が難しかった培養容器内を容易に洗浄できる方法を提供すること。【解決手段】本発明は、微細藻類の培養容器の洗浄方法に関し、この方法は、微細藻類を培養した後の培養液を培養容器から排出する工程、培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う工程、及び培養容器の汚れ領域に光を照射する工程の各工程を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
微細藻類を培養した後の培養液を培養容器から排出する工程、
培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う工程、及び
培養容器の汚れ領域に光を照射する工程
を含む、微細藻類の培養容器の洗浄方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，微細藻類の培養により有機物の付着などで汚れた培養容器（例えば、フラスコ、水槽など）の洗浄方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
二酸化炭素は、地球温暖化の原因となる温室効果ガスの一つとして排出量の削減が課題とされている。二酸化炭素を削減する手段として、植物の光合成を利用する方法がある（特許文献１参照）。植物の中でも、特に微細藻類は陸生植物と比較して高い増殖力を有するため、有望な二酸化炭素の削減手段として注目されている。例えば、油成分を内部で生成して蓄積する微細藻類があるが、これを用いて、発電所や工場で二酸化炭素の排出量を抑えながら燃料を合成するプロセスが検討されている（特許文献２参照）。この他、微細藻類の光合成を利用した二酸化炭素を有効利用する装置が提案されている。
【０００３】
二酸化炭素の固定に用いられる微細藻類には淡水性のものと海産性のものがある。海産性の藻類には、例えばクロロコッカムリトラーレのように高濃度の二酸化炭素の存在下でも培養が可能で、かつ脂質を生成するものがある（非特許文献１）。この微細藻類のように、二酸化炭素に対する耐性が高いものを、例えば燃料電池などの高濃度の二酸化炭素を排出する装置と共に用いれば、当該装置から直接二酸化炭素が導入できるばかりか、その濃度では生存できない他の微生物のコンタミネーション（汚染）を避けることができるという利点もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平７−３１３１４１
【特許文献２】国際公開第ＷＯ２００６／１０９５８８
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】M.Ota et.al., Bioresource Technology 100 (2009) 5237-5242
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
微細藻類は、二酸化炭素を原料とし、炭化水素、脂質などの有機物を生産する。培養が進み、培養物内の細胞の濃度が高くなると、培養容器に付着する有機物も増加する。培養容器が汚れてくると、この汚れが、光合成に必要な光の容器内への細胞に到達するのを妨げるため、定期的な洗浄が必要となる。しかしながら、培養容器内の付着物の洗浄は、細胞に脂質が含まれていることから、培養容器の壁に強く粘着しており、汚れを落とすことは容易ではない。また、直接ブラシなどで洗浄する方法は、構造の複雑な培養容器には不適である。従って、物理的な手段（例えば、ブラシなどによる掻き取りなど）以外の培養容器の洗浄方法が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、上記の課題を解決する為のものである。即ち、本発明に係る培養容器の洗浄方法は、
培養後の培養液を培養容器から排出する工程、
培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う工程、及び
培養容器の汚れ領域に光を照射する工程
を含む。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の微細藻類の培養容器の洗浄方法によれば、ブラシ等で洗浄が難しかった培養容器内部を容易に洗浄することができる。即ち、ブラシ等による物理的な手段以外の非接触的方法で、培養容器の壁に付着した汚れ（本明細書で、「汚れ」とは、培養終了後の微細藻類自体、微細藻類の分泌する炭水化物、脂質などを含む有機物などの廃棄又は洗浄すべき物質をいう。）を容易にオゾン水中に溶解させることができ、汚れの洗浄及び除去を可能とする。培養容器内部に培養のための各種部品などがあり、物理的手段での洗浄が困難な場合でも、オゾン水の利用及び光の照射が可能であれば、本発明の洗浄方法を適用することが可能であり、培養容器の精密な構造に影響を与えることなく付着した汚れを取り除くことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】培養容器の洗浄前の状態を示す写真と、オゾン水のみで洗浄した後の培養容器の状態及び本発明の洗浄方法（オゾン水及び紫外線照射）で洗浄した後の培養容器の状態を示す写真である。
【図２】軽微な汚れが付着した培養容器の状態を示す写真と、当該容器を本発明の洗浄方法で洗浄した後の培養容器の状態を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明に係る培養容器の洗浄方法は、
微細藻類を培養した後の培養液を培養容器から排出する工程、
培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う工程、及び
培養容器の汚れ領域に光を照射する工程
の各工程を含む。
【００１１】
本発明は、本発明者らが、オゾン水及び太陽光、紫外線のような光を組み合わせて、微細藻類及び微細藻類の分泌する炭水化物、脂質等を含む有機物等の付着した培養容器が洗浄できることを見出したことに基づく。ここで、オゾン水は、汚水などの浄化に使用できることが知られており、また、紫外線のような光は、光触媒などと組み合わせて建築物の壁の汚れ防止等に利用される。しかし、微細藻類及び微細藻類の分泌する有機物、脂質等の付着した培養容器に対して、オゾン水と光の照射を組み合わせて、前記の汚れをオゾン水に溶解させ、培養容器に付着した汚れを除去するという発想は、当分野においては全くなかった。本発明は、このような独特の構成により、物理的手段での洗浄が困難な、培養容器に付着した汚れを取り除くことができる。
【００１２】
本発明の具体的な特徴は、培養容器内にオゾン水を充填して、汚れ領域をオゾン水で覆い、且つ、光を当該汚れ領域に照射することにある。本発明の方法によれば、汚れ領域を物理的にブラシ等で擦る必要はない。培養容器内に付着した汚れはオゾン水中に溶解し、洗浄後はオゾン水を排出するだけでよい。
【００１３】
以下に本発明の各工程を説明する。
【００１４】
（１）微細藻類を培養した後の培養液を培養容器から排出する工程
本発明の第１の工程は、微細藻類の培養後の培養液を培養容器から排出する工程である。培養液の排出方法は特に限定されない。排出方法には、例えば、培養容器の液体注入口等の開口部から容器を傾斜させて、培養液を排出することが含まれる。また、培養容器に排出口等があれば当該排出口から培養液を排出してもよい。更に、適切であれば、ポンプなどを含めた吸引などの排出手段により、排出を行ってもよい。
【００１５】
本発明の洗浄方法において、微細藻類の培養方法に制限はなく、どのような培養方法に用いた培養容器であっても、洗浄の対象とすることができる。
【００１６】
本発明で、培養容器内で培養される対象は、微細藻類である。本発明では、微細藻類は緑藻類が好ましく、クロロコッカムリトラーレがより好ましい。
【００１７】
本発明において、「培養液」は、微細藻類等の培養されるもの自体、培養に必要な培養媒体（培養溶媒、培養に必要な栄養物等）、及び、培養により生じた有機物、脂質などを含む溶液をいう。
【００１８】
培養容器は、微細藻類が培養できるものであれば特に限定されない。例えば、ガラス製のフラスコ、水槽、或いは、容器内部に培養のための部品を含むアクリル容器、複雑な構造を有するチューブ型培養槽などの培養容器を例示することができる。
【００１９】
（２）培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う工程
第２の工程は、培養液を排出した培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う工程である。
【００２０】
この工程の一実施形態では、培養容器内にオゾン水を充填し、培養容器内の汚れ領域をオゾン水で覆う。オゾン水は、オゾン水製造器（例えば、トヨタ車体株式会社、オゾンだっしゅ除菌名人等）によって製造したオゾン水を用いることができる。製造したオゾン水を、培養容器の注入口などの開口部から充填し、オゾン水で汚れの付着した部分（汚れ領域）が浸漬されるようにする。
【００２１】
別の実施形態では、培養容器内の汚れ領域を覆うように水等の適切な溶媒を充填し、これにオゾン発生器等からオゾンを発生させ、前記溶媒中にオゾンを導入する。オゾン発生器は通常の市販の装置を用いることができ、溶媒へのオゾンの導入はバブリングなどの通常の方法を用いてオゾン水を調製すればよい。オゾン水（オゾンを導入して調製する場合を含む）の濃度は飽和溶液、又は、０．４ｍｇ／Ｌ以上（即ち０．４ｍｇ／Ｌから飽和溶液）が好ましい。
【００２２】
本明細書において、「オゾン水で覆う」とは、上述したように調製したオゾン水で、培養容器内の汚れの付着した部分（汚れ領域）を浸漬することを意味する。
【００２３】
（３）培養容器の汚れ領域に光を照射する工程
第３の工程は、汚れ領域を覆うようにオゾン水を満たした培養容器の汚れ領域に光を照射する工程である。
【００２４】
この工程で使用する光は、太陽光、紫外線等であることが好ましい。本発明では、２００〜６００ｎｍの波長を有する光が好ましく、２００〜４００ｎｍの光がより好ましい。例えば、紫外光ランプ（例えば、Ｄｅｅｐ  ＵＶランプ等）を用いることができる。
【００２５】
光の照射は、汚れ領域の一部に対して集中的に行い、これを汚れ領域全体にわたって走査してもよい。この場合、光源は、光を特定の方向に集光して照射できるような構造のものを用いればよい（例えば、（ウシオ電機、Ｄｅｅｐ  ＵＶランプ（ＯＰＭ２−５０２ＭＱ型）など）。別法として、汚れ領域全体を照射できる光源を用いて、例えば、培養容器の所望の方向（上方向、下方向など最も効率のよい方向）から、培養容器全体に光を照射してもよい。また、光源は１つであっても、複数であってもよい。
【００２６】
本発明において、オゾン水を、水などの溶媒へオゾンを導入して調製する場合、光照射は、溶媒へのオゾンの導入後に行ってもよく、或いは、オゾンを溶媒へ導入しながら行ってもよい。
【００２７】
光照射の時間は、汚れの程度により適宜選択すればよいが、好ましくは、１〜１５時間、より好ましくは、１〜１０時間．更に好ましくは、１〜５時間、更に好ましくは１〜２時間である。光照射の時の温度は、室温〜４０℃程度である。
【００２８】
上記の光照射の後、光照射を停止し、オゾン水を培養容器から排出する。更に、必要に応じて水洗等により容器内のオゾン水を洗い流すことができる。
【００２９】
以上の手順により、培養容器の壁に強く粘着した付着物の洗浄が可能となる。また、本発明の方法は、構造の複雑な培養容器に対しても容易に汚れを除去することができる。更に、オゾン水は時間とともにオゾンが脱気されるため、有毒な残留物を生じず、安全に洗浄が可能である。
【実施例】
【００３０】
以下に、本発明の具体的な実施の形態について図を参照して説明する。
【００３１】
微細藻類にはクロロコッカムリトラーレを用いた。培地には人工海水を用いた。これを三角フラスコに入れ窒素９５％、二酸化炭素５％の混合ガスを通気し、光強度１５５μｍｏｌ−ｐｈｏｔｏｎ／ｍ２／ｓ下、温度２２℃で２週間培養した。最終的に細胞濃度は１ｇ／Ｌ以上まで上がったが、容器全面に緑色の有機物が付着した。この様子が図１の洗浄前の写真である。これにオゾン水（トヨタ車体株式会社、オゾンだっしゅ除菌名人（ＯＷ０４ＧＴ型）で製造（オゾン濃度のスペック：０．４ｍｇ／Ｌ〜０．６ｍｇ／Ｌ））を充満させ、光（ウシオ電機、Ｄｅｅｐ  ＵＶランプ（ＯＰＭ２−５０２ＭＱ型、約２８０ｎｍ〜約６００ｎｍ）を２時間照射した。
【００３２】
比較のためにオゾン水のみを使用し、光を照射しない実験も行った。
【００３３】
図１の「洗浄後」と記された写真が光を照射して２時間後の写真である。本発明の方法に従った洗浄（図１の「洗浄後」の右側のフラスコ参照）では、光が照射された部分で汚れによる付着物がかなりなくなっていることが分かる。一方、オゾン水のみで光を照射させなかった場合（図１の「洗浄後」の左側のフラスコ参照）は、ほとんど付着物の除去は認められなかった。
【００３４】
図２に、図１の場合よりも軽微な汚れを本発明の方法により洗浄した場合の例を示す。洗浄の条件は、オゾン水を用い且つ１時間の光照射である。この例で示されるように軽微な汚れの場合は、本発明の方法で完全に汚れによる付着物が除去されることが一目瞭然である。
【００３５】
微細藻類の培養による培養容器の汚れは、汚れに脂質が含有されており、物理的にブラシなどで擦ってもなかなか落ちず手間がかかる。また、水槽などの培養容器では深い場所などではブラシがとどかないことがあり、複雑な構造を有する水槽の場合などでは、ブラシが使えないこともある。そのような場合に本発明の洗浄方法は有効である。更にオゾン水は時間とともにオゾンが脱気されるため、普通の水になり、有毒な残留物を生じず、安全に洗浄が可能となることも本発明の特徴である。
【図１】
2015171329.tif 000002
【図２】
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