(57)【要約】      （修正有）【課題】血液中β−アミロイドを効率的に除去できるシステムを提供する。【解決手段】血液の注入口と排出口を備えるハウジングと、前記注入口からの血液が中空糸内腔に流入するように前記ハウジング内に収容される中空糸膜と、血液を体外に脱血し前記注入口に連結する血液回路と、流入したのちに中空糸内腔から中空糸外へ濾過された血液と、流入したのちに中空糸内腔を通過した血液とを混合する血液回路と、混合された血液を返血するための血液回路と、を備え、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する構成とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液の注入口と排出口を備えるハウジングと、
前記注入口からの血液が中空糸内腔に流入するように前記ハウジング内に収容される中空糸膜と、
血液を体外に脱血し前記注入口に連結する血液回路と、
流入したのちに中空糸内腔から中空糸外へ濾過された血液と、流入したのちに中空糸内腔を通過した血液とを混合する血液回路と、
混合された血液を返血するための血液回路と、を備え、
血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する、血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項２】
前記ハウジングが、濾過された血液の排出口と、通過した血液の排出口を備える、請求項１に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項３】
血液の一部を中空糸壁を横断して濾過させる血液ポンプをさらに備える、請求項１又は２に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項４】
流入させる血液流量（ＱＢ）と血液濾過量（ＱＦ）を制御する一の血液ポンプを備える、請求項３に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項５】
流入させる血液流量（ＱＢ）を制御する血液ポンプと、血液濾過量（ＱＦ）を制御する血液ポンプを備える、請求項３に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項６】
血液濾過量（ＱＦ）を制御する圧損構造をさらに備える、請求項１〜５のいずれか１項に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項７】
前記圧損構造が、オリフィスである、請求項６に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項８】
流入させる血液流量（ＱＢ）が、２０〜２００ｍＬ／ｍｉｎである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項９】
（流入させる血液流量）／（血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、２〜１００である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項１０】
中空糸膜が収容されたハウジングが、血液透析用カラムである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項１１】
中空糸が、ポリスルホン（ＰＳｆ）、ポリメチルメタアクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマアロイ（ＰＥＰＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、セルローストリアセテート（ＣＴＡ）、改質セルロース（ＢＥＭ）、及びエチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＡＬ）からなる群から選択される少なくとも１つの高分子を含有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項１２】
中空糸が、ポリスルホン（ＰＳｆ）、ポリメチルメタアクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマアロイ（ＰＥＰＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）からなる群から選択される少なくとも１つの高分子を含有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【請求項１３】
中空糸が、ポリビニルピロリドンをさらに含有する、請求項１１又は１２に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液中β−アミロイド除去システムに関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＤ）は脳内の神経細胞が変性することにより認知症になっていくと考えられている疾患である。その発症機構については、β−アミロイド（以下、「Ａβ」と略称する場合がある。）が脳に蓄積することを発端とする「アミロイド仮説」が最も有力であり、可溶性Ａβが記憶の長期増強を強く阻害することが知られている。
【０００３】
Ａβに対する抗体である抗Ａβ抗体の投与やＡβワクチンの投与により、認知症症状の改善とともに脳のＡβ沈着が消失することが報告され（非特許文献１）、アミロイド仮説に基づいて、アルツハイマー病を治療できる可能性が示唆されている。
また、アルツハイマー病のモデルマウスを用いた実験により、脳内Ａβが減少する際に血液中Ａβ量が有意に増加すること（非特許文献２）、免疫賦活機能を有さないＡβ結合物質（ＧｅｌｓｏｌｉｎやＧＭ１ガングリオシド）の末梢投与により脳内Ａβ量が減少すること（非特許文献３、４）、免疫賦活機能を持たない抗Ａβ抗体Ｆａｂ断片を血液中に投与すると脳内Ａβ量が減少すること（非特許文献５）などが示され、血液中Ａβ量の減少に伴い脳内Ａβが血液中に引き抜かれるという「引き抜き」仮説が提唱されている。また、この仮説に関連し、人工透析によって血液中Ａβ量が低下するとの報告がなされている（非特許文献６、７）。
【０００４】
Ａβには４０アミノ酸のＡβ1-40、４２アミノ酸のＡβ1-42をメインとして、３８アミノ酸のＡβ1-38、４３アミノ酸のＡβ1-43などが存在することが知られている。中でも、Ａβ1-42は凝集能が強く、神経毒性が強いと考えられている。
また、Ａβモノマーよりも、Ａβオリゴマが神経毒性の主体であることが報告されている（非特許文献８）。Ａβモノマー、Ａβオリゴマ、可溶性プロトフィブリルの間には平衡が存在し、さらに凝集が進むと、線維状Ａβとして沈着する。
【０００５】
また、特許文献１には、中空糸表面へＡβが吸着除去されることを利用したβ−アミロイド除去システムが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１２−１６５９５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂａｙｅｒ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ２００５，  ６４，  ９４−１０１
【非特許文献２】Ｌｅｍｅｒｅ，  Ｃ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｅｒｏｂｉｏｌ．  Ｄｉｓ．，  ２００３，  １４，  １０−１８
【非特許文献３】Ｍａｔｓｕｏｋａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２００３，  ２３，  ２９−３３
【非特許文献４】Ｂｅｒｇａｍａｓｃｈｉｎｉ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２００４，  ２４，  ４１４８−４１８６
【非特許文献５】Ｌｅｖｉｔｅｓ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２００６，  ２６，  １１９２３−１１９２８
【非特許文献６】京都医学界雑誌，第５３巻，第１号，平成１８年６月，１１３−１２０頁
【非特許文献７】Ｉｓａｂｅｌ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  ２００６，  １０，  ４３９−４４３
【非特許文献８】Ｗａｌｓｈ，ＤＭ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２００２；４１６：５３５−９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、「引き抜き」仮説に鑑みて、アルツハイマー病患者の血液中Ａβを効率的に除去することが、脳内Ａβの蓄積を減少させアルツハイマー病の治療又は予防に有効な手段になると考えた。
そこで、本発明においては、血液中Ａβを効率的に除去できるシステムを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、Ａβオリゴマが中空糸膜による吸着除去では、十分に除去できないことを発見した。しかしながら、Ａβオリゴマは、中空糸壁を横断して血液を通過させて、中空糸の膜厚方向への濾過を行うことによって除去できることを見出し、また、膜厚方向への濾過を行うことにより、Ａβモノマーも安定に除去することができることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させるシステムを提供する。
［１］
血液の注入口と排出口を備えるハウジングと、
前記注入口からの血液が中空糸内腔に流入するように前記ハウジング内に収容される中空糸膜と、
血液を体外に脱血し前記注入口に連結する血液回路と、
流入したのちに中空糸内腔から中空糸外へ濾過された血液と、流入したのちに中空糸内腔を通過した血液とを混合する血液回路と、
混合された血液を返血するための血液回路と、を備え、
血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する、血液中β−アミロイド除去システム。
［２］
前記ハウジングが、濾過された血液の排出口と、通過した血液の排出口を備える、［１］に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［３］
血液の一部を中空糸壁を横断して通過させる血液ポンプをさらに備える、［１］又は［２］に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［４］
流入させる血液流量（ＱＢ）と血液濾過量（ＱＦ）を制御する一の血液ポンプを備える、［３］に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［５］
流入させる血液流量（ＱＢ）を制御する血液ポンプと、血液濾過量（ＱＦ）を制御する血液ポンプを備える、［３］に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［６］
血液濾過量（ＱＦ）を制御する圧損構造をさらに備える、［１］〜［５］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［７］
前記圧損構造が、オリフィスである、［６］に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［８］
流入させる血液流量（ＱＢ）が、２０〜２００ｍＬ／ｍｉｎである、［１］〜［７］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［９］
（流入させる血液流量）／（血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、２〜１００である、［１］〜［８］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［１０］
中空糸膜が収容されたハウジングが、血液透析用カラムである、［１］〜［９］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［１１］
中空糸が、ポリスルホン（ＰＳｆ）、ポリメチルメタアクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマアロイ（ＰＥＰＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、セルローストリアセテート（ＣＴＡ）、改質セルロース（ＢＥＭ）、及びエチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＡＬ）からなる群から選択される少なくとも１つの高分子を含有する、［１］〜［１０］いずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［１２］
中空糸が、ポリスルホン（ＰＳｆ）、ポリメチルメタアクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマアロイ（ＰＥＰＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）からなる群から選択される少なくとも１つの高分子を含有する、［１］〜［１１］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システム。
［１３］
中空糸が、ポリビニルピロリドンをさらに含有する、［１１］又は［１２］に記載の血液中β−アミロイド除去システム。
【００１１】
また、本発明は、以下の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法、また、以下のアルツハイマー病を治療又は予防する方法を提供する。
［１４］
血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法であって、
血液を体外に脱血する工程
脱血した血液を、中空糸内腔に通液する工程
通液した血液を体内に返血する工程、を含有し
血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法。
［１５］
流入させる血液の流量（ＱＢ）が２０〜２００ｍＬ／ｍｉｎである、［１４］に記載の方法。
［１６］
流入させる血液の流量（ＱＢ）が４０〜６０ｍＬ／ｍｉｎである、［１４］又は［１５］に記載の方法。
［１７］
（流入させる血液流量）／（血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、２〜１００である、［１４］〜［１６］のいずれかに記載の方法。
［１８］
（流入させる血液流量）／（血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、５〜１０である、［１４］〜［１７］のいずれかに記載の方法。
［１９］
［１］〜［１３］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システムを用いる、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法。
［２０］
［１］〜［１３］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システムを用いる、［１４］〜［１９］のいずれかに記載の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法。
［２１］
血液中のβ−アミロイド濃度を低下させることにより、アルツハイマー病を治療又は予防する方法であって、
患者の血液を体外に脱血する工程、
脱血した血液を、中空糸に通液する工程、
通液した血液を該患者の体内に返血する工程、を含有し、
血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する、方法。
［２２］
流入させる血液の流量（ＱＢ）が２０〜２００ｍＬ／ｍｉｎである、［２１］に記載の方法。
［２３］
流入させる血液の流量（ＱＢ）が４０〜６０ｍＬ／ｍｉｎである、［２１］又は［２２］に記載の方法。
［２４］
（流入させる血液流量）／（血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、２〜１００である、［２１］〜［２３］のいずれかに記載の方法。
［２５］
（流入させる血液流量）／（血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、５〜１０である、［２１］〜［２４］のいずれかに記載の方法。
［２６］
［１］〜［１３］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システムを用いる、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させることにより、アルツハイマー病を治療又は予防する方法。
［２７］
［１］〜［１３］のいずれかに記載の血液中β−アミロイド除去システムを用いる、［１４］〜［２０］のいずれかに記載の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法により、アルツハイマー病を治療又は予防する方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、血液中Ａβを効率的に除去できるシステムを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本実施形態における血液中Ａβ除去システムの概略図を示す。
【図２】実施例１の製品ダイアライザーを用いた回路の概略図を示す。
【図３】実施例１におけるプール液中Ａβ1-40除去率の結果を示す。
【図４】実施例１における循環開始１５分後のプール液中Ａβ1-40除去率とＱＦとの関係を示す。
【図５】実施例２のミニモジュールを用いた回路の概略図を示す。
【図６】実施例２におけるプール液中の高分子量Ａβ1-42オリゴマ、低分子量Ａβ1-42オリゴマ、Ａβ1-42モノマーの経時的除去のＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔの結果を示す。
【図７】実施例３の製品ダイアライザーを用いた回路の概略図を示す。
【図８】実施例３におけるプール液中Ａβ1-42除去率の結果を示す。
【図９】実施例４におけるプール液中Ａβ1-42オリゴマ除去率の結果を示す。
【図１０】実施例４におけるＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔの結果を示す。
【図１１】参考例１におけるＡβ1-42モノマーの除去率の結果を示す。
【図１２】参考例１におけるＡβ1-42オリゴマの除去率の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を実施するための形態（以下、「本実施形態」という。）について以下詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
【００１５】
本実施形態の血液中β−アミロイド除去システムは、
血液の注入口と排出口を備えるハウジングと、
前記注入口からの血液が中空糸内腔に流入するように前記ハウジング内に収容される中空糸膜と、
血液を体外に脱血し前記注入口に連結する血液回路と、
流入したのちに中空糸内腔から中空糸外へ濾過された血液と、流入したのちに中空糸内腔を通過した血液とを混合する血液回路と、
混合された血液を返血するための血液回路と、を備え、
血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを中空糸で除去する、血液中β−アミロイド除去システムである。
【００１６】
本実施形態においては、血液の一部を中空糸膜の膜厚方向に誘導することにより、Ａβモノマーが、中空糸内腔表面又は中空糸外表面だけでなく膜厚方向の表面にも吸着され、血液中Ａβモノマー濃度が低下する。また、中空糸内腔から中空糸外へ血液の一部を横断させて、血液を濾過することで、中空糸壁表面でＡβオリゴマが濾過除去されるためＡβオリゴマ濃度が低下すると考えられる。
【００１７】
本実施形態においては、血液中のＡβモノマー及びＡβオリゴマを効率よく除去することができるため、患者の血液中Ａβを効率的に除去できる。それにより、患者において、脳内Ａβの蓄積を減少させアルツハイマー病の治療又は予防に有効な手段になると考えられる。
【００１８】
本実施形態において、患者とは、特に限定されず、アルツハイマー病を発症している患者であってもよく、アルツハイマー病を発症する前の患者であってもよい。
【００１９】
本実施形態においては、中空糸を横断的に膜厚方向に血液を通液することにより、中空糸膜表面（中空糸内腔表面及び中空糸外表面を含む）及び中空糸膜壁内の細孔での濾過により、Ａβモノマーや、低分子量Ａβオリゴマと平衡関係にある高分子量Ａβオリゴマ及びＡβプロトフィブリルの除去も同時に行うことができる。
【００２０】
本実施形態において、血液の一部を中空糸膜の膜厚方向に誘導することにより、Ａβモノマーが、中空糸内腔表面だけでなく膜厚方向の表面にも吸着され、血液中Ａβモノマー濃度が低下する。また、中空糸内腔から中空糸外へ血液の一部を濾過させることで、中空糸内腔表面又は中空糸膜壁内でＡβオリゴマが濾過除去されるためＡβオリゴマ濃度が低下すると考えられる。
そして、中空糸内腔を通過した血液と、中空糸内腔から中空糸外側に出てきた血液とを混合して返血用の血液とすることにより、血液中Ａβモノマー及び血液中Ａβオリゴマを同時に効率的に、すなわち、血液中Ａβを効率的に除去することができる。
【００２１】
本実施形態における血液中Ａβ除去システムの概略図を図１に示す。図１においては、血液は中空糸内腔を通液され、中空糸内腔表面及び中空糸の厚み部分（中空糸膜の内表面と外表面の間の多孔質部分）にＡβが吸着される。また、中空糸内腔から中空糸外へと血液が通過する際に、血液が濾過され、血液中に含まれるＡβが除去される。主として、Ａβオリゴマは、中空糸壁で濾過されることにより除去され、Ａβモノマーは、中空糸内腔表面及び中空糸壁面表面の細孔に主として吸着して除去されると考えられる。
濾過された血液においては、ＡβモノマーとＡβオリゴマが除去されており、中空糸内腔を通液された血液においては、Ａβモノマーが除去されており、濾過された血液と中空糸内腔を通液された血液を混合することで、Ａβが除去されると考えられる。Ａβが除去された混合血液は、血液回路より返血される。
【００２２】
本実施形態で用いられる中空糸膜は、血液を通液、濾過することができる中空糸膜であれば、特に限定されるものではないが、例えば、人工透析、血液濾過、及び血漿分離などにおいて用いられる中空糸膜が挙げられ、市販の中空糸膜を用いてもよい。
中空糸膜としては、例えば、セルロースアセテート、改質セルロース、銅アンモニアセルロース等のセルロース系中空糸膜や、ポリアクリロニトリル、ポリメチルメタアクリレート、ポリエチレン、ポリフッ化ビニリデン、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマーアロイ、ポリビニルアルコール、ポリスルホン、ポリアミド、ポリイミド、ポリフェニルエーテル、ポリエーテルスルホン、エチレンビニルアルコール共重合体等の合成高分子系中空糸膜などが挙げられる。中でも、静電的結合及び／又は疎水結合を利用しているため、疎水性の高分子を用いることが好適であり、ポリスルホン、ポリメチルメタアクリレート、ポリエーテルスルホンポリアリレートポリマーアロイ、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリルなどの高分子から形成される中空糸膜が好ましい。
【００２３】
中空糸膜の材料としては、血液適合性を含めて、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリハイドロキシエチルメタクリレートなどをさらに含有していることが好ましく、ポリスルホンとポリビニルピロリドンからなる高分子混合物から製造される中空糸膜が挙げられる。
また、上記ポリビニルピロリドンなどは、ポリスルホンなどの高分子と、混合して紡糸してもよいが、ポリスルホンなどの高分子を用いて紡糸して得られる中空糸膜にコーティングするために用いてもよい。
【００２４】
本実施形態において用いられる中空糸膜は、公知の方法により製造することができるが、中空糸膜の太さは、好ましくは、０．０１〜１ｍｍである。
【００２５】
本実施形態において、中空糸膜は、通液される血液を中空糸内腔から中空糸外へ濾過することができれば、ハウジング内での形状は特に限定されるものではないが、中空糸膜は、ハウジング内に収納された中空糸膜型モジュールとして用いることができる。
【００２６】
中空糸膜がハウジング内に備えられている形態としては、中空糸膜カラム様の中空糸膜型モジュールとして、筒型のハウジング内に多数本の中空糸膜からなる中空糸膜束として収納されていてもよい。
この場合、中空糸膜束の両端が、ポリウレタン等の樹脂組成物を充填して形成する封止部としての樹脂層部により接着固定（シール）されていてもよい。
本実施形態においては、ハウジングには、ハウジング内に血液を通液させ、排出させるための、血液の注入口と、排出口を供えている。ハウジングの排出口を出た後に血液は混合されてもよく、混合された血液がハウジングの排出口から出てもよい。
【００２７】
このような中空糸膜を備えるモジュールとしては、いわゆるダイアライザーとして用いられるモジュール（透析カラム）や、特開２００５−５２７１６号、国際公開第２００６／０２４９０２号、国際公開第２００４／０９４０４７号などに記載されているモジュールが挙げられ、本実施形態における中空糸膜が収容されたハウジングとして好適に用いることができる。ハウジングとしては、血液透析用カラムを用いてもよく、市販の血液透析用カラムを用いてもよい。
【００２８】
本実施形態において、脱血するための血液回路から送液されてくる血液は、中空糸膜の中空糸内腔に通液されるが、中空糸内腔へ流入させる血液流量（ＱＢ）が、好ましくは２０〜２００ｍＬ／ｍｉｎであり、より好ましくは３０〜７０ｍＬ／ｍｉｎであり、さらに好ましくは、４０〜６０ｍＬ／ｍｉｎである。
また、本実施形態において、脱血するための血液回路から送液されてくる血液は、中空糸膜の中空糸内腔に通液され、血液の一部が中空糸内腔から中空糸外へ通液されるが、（中空糸内腔へ流入させる血液流量）／（中空糸内腔から中空糸外への血液濾過量）（ＱＢ／ＱＦ）比が、好ましくは２〜１００であり、より好ましくは３〜５０であり、さらに好ましくは５〜１０である。
本実施形態においては、Ａβ除去率、及び、単位時間当たりの血液処理量を勘案して、実際のモジュールを設計すればよい。
【００２９】
斯かる血液の流速を維持するデバイスとして、血液ポンプが血液中Ａβ除去システムに備えられていてもよい。
血液ポンプは、中空糸膜に血液を連続的に供給することができれば特に限定されないが、例えば、血液浄化装置用のポンプや人工透析用のポンプ、ペリスタポンプ(ローラーポンプ)などが挙げられる。
また、通常、血液は、中心膜型モジュール等に通液される場合、血液凝固を防ぐために、血液中に抗凝固剤を含有させて通液させるため、抗凝固剤を血液と混合するチャンバーが設けられていてもよい。
さらに、通液される血液の圧力を測定するための、圧モニターや、返血される血液中の気泡を確認するためのモニターが設けられていてもよく、血液をサンプリングできるようになっていてもよい。
【００３０】
かかる血液ポンプにより、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ血液を通過させることが好ましく、一つの血液ポンプにより、中空糸内腔へ流入させる血液流量（ＱＢ）と中空糸内腔から中空糸外への血液濾過量（ＱＦ）を制御してもよく、中空糸内腔へ流入させる血液流量（ＱＢ）を制御する血液ポンプと、中空糸内腔から中空糸外への血液濾過量（ＱＦ）を制御する血液ポンプを別々に備えていてもよい。
一の血液ポンプにより、血液処理量を適宜調整することにより、送液される圧力等を調整して、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ血液を通過させることができる。血液ポンプは、注入口側に設けられていてもよく、排出口側に設けられていてもよい。
【００３１】
本実施形態の血液中Ａβ除去システムにおいては、補液を供給する補液ポンプや、補液を貯蔵する補液タンクなどが設けられていてもよい。
【００３２】
本実施形態の血液中Ａβ除去システムにおいては、β−アミロイドを、中空糸膜表面及び膜厚部に吸着及び濾過させて除去するため、β−アミロイドの除去率を上げるためにも、血液を中空糸内腔、中空糸外、膜厚内部へ効率よく接触させるために、部分的であっても逆ろ過を防止することが好ましい。
ダイアライザー型の中空糸膜を用いた場合においては、透析液側の圧力を低く設定することにより、逆ろ過を防止することができるので、透析液側の流量が、特に限定されるものではないが、１００ｍＬ／ｍｉｎ以下であることが好ましい。
【００３３】
このような逆ろ過を防止する方法としては、中空糸の充填率を、血液透析用のダイアライザーより低くすることや、有効中空糸部分の容器の長さＬと直径Ｄの比Ｌ／Ｄを、血液透析用のダイアライザーより低くする、つまり太短くすることが挙げられる。
【００３４】
本実施形態の血液中Ａβ除去システムにおいては、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ通過させることで中空糸により濾過した血液と、中空糸内腔を通過した血液とを混合する血液回路と、を備える。
かかる血液回路において、血液ポンプが備えられていてもよく、中空糸内腔へ流入させる血液流量（ＱＢ）を制御する圧損構造を備えていてもよい。また、中空糸外へ流入させる血液流量を制御する圧損構造を備えていてもよい。
中空糸内腔へ流入された血液の一部が中空糸内腔から中空糸外へ通過することのできる圧損構造であれば、特に限定されるものではないが、例えば、オリフィスを備える血液中Ａβ除去システムとしてもよい。
【００３５】
また、本実施形態において、中空糸の細孔を制御して濾過圧を発生させて、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ通過させることもできる。
本実施形態における中空糸の細孔は、アルブミンをほとんど通過させない程度の小ささを有することが好ましい。
また、膜内外の圧力差（ＴＭＰ）を制御することによって、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ通過させることもできる。
【００３６】
本実施形態においては、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法を実施することができる。
本実施形態の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法は、
血液を体外に脱血する工程
脱血した血液を、中空糸内腔に通液する工程
通液した血液を体内に返血する工程、を含有し、
血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させて、β−アミロイドを除去する、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法である。
本実施形態において、血液の一部を中空糸内腔から中空糸外へ横断して濾過させるには、本実施形態の血液中Ａβ除去システムを用いることが好ましい。
【００３７】
血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法は、血液を体外に脱血し、脱血した血液を中空糸膜に通液し、通液した血液を体内に返血する体外循環を行うことにより実施することができる。
かかる一連の工程は、いわゆる人工透析や血液ろ過などの血液浄化技術に類似する方法として実施することができるが、一例を挙げれば、患者の血液を体外循環させるべく可撓性チューブから成る血液回路が使用される。
体外循環を行うための血液回路は、一般に、患者から血液を採取する動脈側穿刺針が先端に取り付けられた動脈側血液回路と、患者に血液を戻す静脈側穿刺針が先端に取り付けられた静脈側血液回路と、動脈側血液回路と静脈側血液回路との間に中空糸膜とを備える。
動脈側血液回路、中空糸膜、及び静脈側血液回路は、可撓性チューブで連結されており、患者から脱血された血液は、可撓性チューブ内を通液され、中空糸膜と接触させられる。
すなわち、血液は、動脈側血液回路より、患者体内より体外へ脱血されて、血液回路内に導入され、血液回路内の可撓性チューブを通り、中空糸膜へ通液される。
中空糸膜へ通液された血液中のβ−アミロイドは中空糸膜と接することにより、β−アミロイドが中空糸膜に吸着・濾過され、中空糸膜を通液後の血液中のβ−アミロイド濃度が低下する。本実施形態においては、Ａβモノマーのみならず、低分子量Ａβオリゴマ、高分子量Ａβオリゴマ及びＡβプロトフィブリルなども効率よく除去することができるため、血液中のβ−アミロイドを効率よく除去することができる。それにより、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法として提供される。
中空糸膜より通液されて出てきた血液は、血液中β−アミロイド濃度が低下した血液として、静脈側血液回路より、患者体外から体内へ返血される。
【００３８】
本実施形態の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法は、患者に、好適には、アルツハイマー病患者に適用されることにより、アルツハイマー病患者における血液中のβ−アミロイド濃度を低下させることができる。また、アルツハイマー病の予備軍ともいうべき、アルツハイマー病には罹患していないものの、血液中Ａβ濃度が通常より高い患者や、アルツハイマー病の症状は発症していないものの病理学的にはアルツハイマー病患者と分類することができるような患者において、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させてもよい。
アルツハイマー病患者としては、体外循環を行うことができる患者であれば、特に限定されるものではない。また、本実施形態の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法は、アルツハイマー病を未発症の患者に適用することにより、アルツハイマー病の発症を予防する方法として用いることもできる。
【００３９】
本実施形態において、β−アミロイドは中空糸膜に吸着・濾過されることにより、血液中のβ−アミロイド濃度が低下するが、「β−アミロイドが中空糸膜に吸着される」とは、中空糸膜表面と、β−アミロイドが静電的結合及び／又は疎水結合している状態をいう。また、「β−アミロイドが中空糸膜に濾過される」とは、膜厚の細孔に、β−アミロイドが物理的に捕捉されている状態をいう。捕捉されたβ−アミロイドも、中空糸膜表面に静電的結合及び／又は疎水結合していてもよい。
【００４０】
本実施形態において、中空糸膜に患者の血液を通液することにより、β−アミロイドは、血液中の形態としてのβ−アミロイド−アルブミン複合体から解離し中空糸膜に吸着するが、複合体の一方のアルブミンは、血液中に遊離して存在する。
【００４１】
本実施形態の血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる方法は、好ましくは、血液中には、アルブミンと結合したβ−アミロイド−アルブミン複合体を含有し、前記方法は、血液を体外に脱血する工程、脱液した血液を少なくとも入口と出口を有するハウジングに、透析用中空糸膜を有する中空糸膜に通液する工程、通液した血液を体内に返血する工程、を含有し、体外の血液の流速は、中空糸内腔へ流入させる血液量として２０〜２００ｍＬ／ｍｉｎであって、前記通液する工程は、β−アミロイド−アルブミン複合体から、β−アミロイドを中空糸膜に吸着させて、アルブミンを遊離させることにより、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させる、血液中のβアミロイドを低下させる方法として実施してもよい。
【００４２】
本実施形態においては、血液中のβ−アミロイド濃度を低下させることにより、アルツハイマー病の治療又は予防する方法を提供することもできる。アルツハイマー病の治療又は予防する方法において、本実施形態における血液中Ａβ除去システムを用いてもよい。
【実施例】
【００４３】
以下、本実施形態を実施例及び比較例によってさらに具体的に説明するが、本実施形態はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００４４】
以下の実施例及び参考例において、Ａβとしては、和光純薬工業社製のヒトＡβ1-40又はヒトＡβ1-42の、塩酸塩を用いた。Ａβ1-40又はＡβ1-42は、１００μｇ／ｍＬのＡβを純水又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液として冷凍保存し、保存液を使用直前に解凍して用いた。
【００４５】
＜実施例１＞製品ダイアライザーを用いたプール液中のＡβ1-40除去
ポリスルホン（ＰＳｆ）製ダイアライザー（ＡＰＳ１３ＥＡ  旭化成メディカル社、Ｖ型）と血液透析用回路（日機装社）を用いて回路を図２の如く組み立てた。
血液側及び濾過ポンプにはＣｏｌｅ  Ｐａｒｍｅｒ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社製ＭＡＳＴＥＲ  ＦＬＥＸ  （７５１８−１０）を用い、ＱＦ＝１ｍＬ／ｍｉｎの場合のみ、濾過ポンプとしてＡＴＴＯ社製ＰＥＲＩＳＴＡポンプ（ＳＪ−１２１１）を用いた。
カルシウム不含リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（和光純薬工業社、ｐＨ７．２）５００ｍＬを流速２００ｍＬ／ｍｉｎでダイアライザー中空糸内腔をプライミングし、５ｍｇ／ｍＬに調整したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（和光純薬工業社・グロブリン不含生化学用）のＰＢＳ溶液２００ｍＬを流速５０ｍＬ／ｍｉｎにて３０分間循環させた。この後、４ｎｇ／ｍＬ  Ａβ1-40及び５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液２００ｍＬを流速５０ｍＬ／ｍｉｎでダイアライザーを通過させた。
４ｎｇ／ｍＬ  Ａβ1-40及び５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液２５０ｍＬをプール液（人体に相当）とし、ＱＢ＝５０ｍＬ／ｍｉｎ、ＱＦ＝１，５，１５，２５ｍＬ／ｍｉｎにてそれぞれ循環させた。プール液を５，１５，３０，６０分後に採取した。採取したサンプル中のＡβ1-40濃度はＨｕｍａｎ  βＡｍｙｌｏｉｄ（１−４０）  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ，Ｈｉｇｈ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ（和光純薬工業社）を用いたＥＬＩＳＡにて測定し、Ｘ分間循環後におけるプール液中Ａβ1-40除去率を次式により算出した。
プール液中Ａβ1-40除去率（Ｘ分）＝１００×｛１−（Ｘ分間循環後のプール液中Ａβ1-40濃度／循環開始時のプール液中Ａβ1-40濃度）｝
結果を図３に示す。ＱＢ＝５０ｍＬ／ｍｉｎの場合、ＱＦ＝１ｍＬ／ｍｉｎというＱＢに比して少量で濾過を行っても、ＱＦ＝０ｍＬ／ｍｉｎに比べて、Ａβ1-40の除去が速く効率的に行える。つまり、濾過速度（ＱＦ）が全くない場合よりも濾過を生じさせれば、中空糸内腔を流れていくＡβ1-40溶液は中空糸外側への流路を得るので、中空糸内腔から中空糸外へ移行する間に中空糸壁部分でＡβ1-40が吸着濾過されると推察された。
循環開始１５分後のプール液中Ａβ1-40除去率を縦軸に、ＱＦを横軸にとったグラフ（図４）から、ＱＢが５０ｍＬ／ｍｉｎにおいて、ＱＦが１ｍＬ／ｍｉｎ以上でプール液中のＡβ1-40除去率が向上し、ＱＦが５ｍＬ／ｍｉｎ以上あれば安定して高いＡβ1-40除去率が得られることがわかる。図４において、ＱＦ＝０ｍＬ／ｍｉｎとＱＦ＝５ｍＬ／ｍｉｎとの除去率には有意差がある（ｐ＝０．０３１）。また、ＱＦ＝０ｍＬ／ｍｉｎとＱＦ＝２５ｍＬ／ｍｉｎとの除去率には有意差がある（ｐ＝０．０３７）。
【００４６】
＜実施例２＞ミニモジュールを用いたプール液中のＡβ1-42除去
ポリスルホン（ＰＳｆ）製ダイアライザー（ＡＰＳ−ＳＡ  旭化成メディカル社、ＩＶ型）の中空糸８０本を取り出し、有効長８０ｍｍになるようウレタンで封入したダイアライザー型のミニモジュール（膜表面積０．００３７ｍ2）を作成した。
内径１ｍｍのシリコンチューブを用いて、ミニモジュールの中空糸内腔を通過した液と、中空糸壁で濾過された濾液が、いずれもプール液に戻るように回路を図５の如く組み立てた。プール液と濾液を３０分，１，２，１８，２４時間後に採取した。
Ａｔｔｏ社製ＰＥＲＩＳＴＡポンプ（ＳＪ−１２１１Ｌ）２台を用いて、ＱＢを９ｍＬ／ｈｒ（製品ダイアライザーの大きさに換算するとＱＢ＝５０ｍＬ／ｍｉｎに相当）、ＱＦを１．８ｍＬ／ｈｒ（製品ダイアライザーの大きさに換算するとＱＦ＝１０ｍＬ／ｍｉｎに相当）となるよう流量を調整した。
５０μｇ／ｍＬ  Ａβ1-42及び２．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液をプール液として調整することにより、Ａβ1-42オリゴマを作成した。
Ｗｅｓｔｅｒｎ  ＢｌｏｔでＡβ1-42オリゴマを確認するため、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔの感度を考慮して、通常の血液中の１００万倍も濃いＡβ1-42濃度で実験を行った。
Ａβ1-42オリゴマ除去の検討は、ＭＥＳ  ＳＤＳ  Ｒｕｎｎｉｎｇ  ＢｕｆｆｅｒとＮｕＰＡＧＥR  Ｎｏｖｅｘ  ４−１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いた還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（電気泳動）を行った後、ＰＶＤＦ（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ，  Ａｔｔｏ社）膜に転写し、Ａβ1-16に対するモノクローナル抗体６Ｅ１０（Ｃｏｖａｎｃｅ社  １：２０００）を一次抗体とし、二次抗体としては、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社  ヒト、ウシ等の蛋白でｐｒｅ−ａｂｓｏｒｂｅｄ）を１：５０００で用い、化学発光はＥＣＬ−Ｐｒｉｍｅ（ＧＥヘルスケア社）を用いて、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔで行った。
結果を図６に示す。プール液中の高分子量Ａβ1-42オリゴマ、低分子量Ａβ1-42オリゴマとも経時的に除去されていき、１８時間及び２４時間では、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ上ではほとんど検出されなくなった。
また、中空糸壁部分を通過した濾液では、ＢＳＡのごく薄いバンドが検出されるほかは、Ａβ1-42オリゴマ及びＡβ1-42モノマーのバンドはほとんど確認できなかった。
【００４７】
＜実施例３＞製品ダイアライザーを用いたプール液中のＡβ1-42オリゴマ除去
ポリスルホン（ＰＳｆ）製ダイアライザー（ＡＰＳ１３ＥＡ  旭化成メディカル社、Ｖ型）と血液透析用回路（日機装社製）を用いて回路を図７の如く組み立てた。
血液側及び濾過ポンプにはＣｏｌｅ  Ｐａｒｍｅｒ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ社製ＭＡＳＴＥＲ  ＦＬＥＸ  （７５１８−１０）を用い、ＱＦ＝１ｍＬ／ｍｉｎの場合のみ、濾過ポンプとしてＡＴＴＯ社製ＰＥＲＩＳＴＡポンプ（ＳＪ−１２１１Ｈ）を用いた。
ＰＢＳ５００ｍＬを流速２００ｍＬ／ｍｉｎでダイアライザー中空糸内腔をプライミングし、５ｍｇ／ｍＬに調整したＢＳＡ２００ｍＬを流速５０ｍＬ／ｍｉｎにて３０分間循環させた。この後、１．６μｇ／ｍＬ  Ａβ1-42及び５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液２００ｍＬを流速５０ｍＬ／ｍｉｎでダイアライザーを通過させた。
１．６μｇ／ｍＬ  Ａβ1-40及び５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液２５０ｍＬをプール液とし、ＱＢ＝５０ｍＬ／ｍｉｎ、ＱＦ＝５ｍＬ／ｍｉｎにて循環させた。また、対照として、ＱＦ＝０ｍＬ／ｍｉｎに設定して濾過を行なわずに循環を行った。
ダイアライザーの入口および出口、濾液（通常は透析液の入口）、及び、プール液を３０，１２０分後に採取した。採取したサンプル中のＡβ1-42濃度はＨｕｍａｎ  βＡｍｙｌｏｉｄ（１−４２）  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ，  Ｈｉｇｈ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ（和光純薬工業社製）を用いたＥＬＩＳＡにて測定し、Ｘ分間循環後におけるプール液中Ａβ1-42除去率を次式により算出した。
プール液中Ａβ1-42除去率（Ｘ分）＝１００×｛１−（Ｘ分間循環後のプール液中Ａβ1-42濃度／循環開始時のプール液中Ａβ1-42濃度）｝
また、Ｘ分間循環後におけるダイアライザー前後のＡβ1-42除去率（Ｄ前後除去率）を次式により算出した。
Ｄ前後Ａβ除去率＝１００×｛１−（Ｘ分間循環時点でのダイアライザー出口Ａβ1-42濃度／Ｘ分間循環時点でのダイアライザー入口Ａβ1-42濃度）｝
Ａβ1-42オリゴマは  ＩＢＬ社製ａｍｙｌｏｉｄ  β  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ（８２Ｅ１  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）ＥＬＩＳＡを用いて測定した。
結果を表１に示す。ＱＦを５ｍＬ／ｍｉｎとすることで、プール液のオリゴマ濃度の低下を認めた。ＱＦ＝５ｍＬ／ｍｉｎ時の濾液中のＡβオリゴマ濃度は、ダイアライザーに流入するフィード液（ダイアライザ入口濃度）の１％以下であった。
また、Ａβ1-42モノマーについては、実施例１と同様に、ＱＦ＝５ｍＬ／ｍｉｎの方がＱＦ＝０ｍＬ／ｍｉｎに比べて除去が速く効率的であった（図８）。また、濾液中には、Ａβ1-42モノマーは検出されなかった。
【００４８】
【表１】
2015077369.tif 000003
【００４９】
＜実施例４＞ミニモジュールを用いたプール液中のＡβ1-42オリゴマ除去
ポリスルホン（ＰＳｆ）製ダイアライザー（ＡＰＳ−ＳＡ  旭化成メディカル社、ＩＶ型）の中空糸８０本を、有効長８０ｍｍになるようウレタンで封入した、ダイアライザー型のミニモジュール（膜表面積０．００３７ｍ2）を用いて、Ａβオリゴマが、中空糸への濾過で除去されるかどうかを検討した。
Ａβオリゴマの定量評価は、ａｍｙｌｏｉｄ  β  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ（８２Ｅ１  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）ＥＬＩＳＡ（免疫生物研究所（ＩＢＬ）社）で行った。Ａβオリゴマの分子量の定性的検討は、実施例２と同様に、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔで行った。
以下のＡβ1-42溶液を調製して濾過を行った。
実験１：５μｇ／ｍＬ  Ａβ1-42のＰＢＳ溶液。
実験２：５０μｇ／ｍＬ  Ａβ1-42のＰＢＳ溶液。
実験３：５μｇ／ｍＬ  Ａβ1-42及び２．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液。
実験４：５０μｇ／ｍＬ  Ａβ1-42及び２．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液。
ミニモジュールの中空糸内腔出口（Ｖ側）にシリコンチューブをつなぎ、鉗子で閉とし、ミニモジュールの透析液ポートのうちＡβ1-42溶液流入側はキャップで閉とし、中空糸内腔出口側の透析液ポートを開としてここから全濾過液をサンプリングした。
テルモ社製シリンジポンプを用いて、ミニモジュールの中空糸内腔入口（Ａ側）へＡβ1-42溶液を２０μＬ／ｍｉｎでフィードした。実験１及び２においては、実験直前に、ＰＢＳで回路及びミニモジュールを全濾過モードで２００μＬ／ｍｉｎ、３０分間洗浄した。また、実験３及び４においては、実験直前には、２．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液で回路及びミニモジュールを全濾過モードで２００μＬ／ｍｉｎ、１０分間プライミングした。
結果を図９に示す。また、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔの結果を図１０に示す。フィード液中にＡβ1-42モノマーのほか、ダイマー、トリマー、テトラマー等の低分子量Ａβ1-42オリゴマ、及び、分子量が５０ｋＤａ以上の高分子量Ａβ1-42オリゴマが多量に存在したが、濾過後の液には、全分子量領域に亘って、Ａβ1-42オリゴマ及びＡβ1-42モノマーが検出されなかった。中空糸による濾過でＡβ1-42オリゴマは効率よく除去された。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上ではダイマー、トリマー、テトラマー等のバンドが確認できるが、Ａβ1-42溶液中ではもっと大きな会合体を形成しており、中空糸のポア（１１．８ｋＤａのβ２ミクログロブリンは３０％以上通過できる）を通過できないものと考えられた。この会合体形成は、アルブミン非存在下でも起こると考えられる。
なお、実験３及び４のＢＳＡ入りのサンプルでのアルブミン領域のバンドは、Ａβ1-42を含まない実験１及び２のサンプルのＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ解析から、ＢＳＡ及び試薬ＢＳＡに含まれるウシ血液由来蛋白と二次抗体との交差反応であることが明らかになっている。
【００５０】
＜参考例１＞
ポリスルホン（ＰＳｆ）製中空糸のダイアライザー（ＡＰＳ−１３ＥＡ  旭化成メディカル社）を解体し、中空糸を取り出して、ほぼ２ｍｍ長に切断した。この中空糸断片を、シリコンチューブとポリプロピレン製ジョイントからなる２種のミニカラム（４−２カラム：０．６２９ｃｍ×２．０１ｃｍ、５−１カラム：０．３５０ｃｍ×６２．１４ｃｍ）に充填した。
ミニカラム内の中空糸断片を１０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液をＰＥＲＩＳＴＡポンプで６０ｍＬ／ｈｒで２０分間プライミングし、その後、４０ｎｇ／ｍＬ  Ａβ1-42及び１０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのＰＢＳ溶液を１５ｍＬ／ｈｒでフィードした。
Ａβ1-42オリゴマは  ＩＢＬ社製ａｍｙｌｏｉｄ  β  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  （８２Ｅ１  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）ＥＬＩＳＡを用いて測定し、Ａβ1-42モノマーは、和光純薬社製ヒトβアミロイド（１−４２）ＥＬＩＳＡキットワコーを用いて測定した。
Ｘ分間循環後におけるダイアライザー前後のＡβ1-42除去率（Ｄ前後除去率）を次式により算出した。
Ｄ前後Ａβ除去率＝１００×｛１−（ダイアライザー後Ａβ1-42濃度／ダイアライザー前Ａβ1-42濃度）｝
Ａβ1-42モノマーの除去率を図１１に、Ａβ1-42オリゴマの除去率を図１２に示す。中空糸断片では吸着除去のみが起こるが、その吸着除去のみで、Ａβ1-42モノマーは効率良く除去されている。一方、Ａβ1-42オリゴマは、吸着のみの除去では、大量の中空糸断片（５−１カラム）を用いればある程度除去できるが、経時的に除去能が大幅に低下した。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の血液中Ａβ除去システムにより脳内Ａβ量を減少させることができる可能性があり、アルツハイマー病の治療又は予防に有効である可能性がある。
【図１】
2015077369.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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