(57)【要約】【課題】ＦＤＦ０３抗体およびそれの使用の提供。【解決手段】本発明は、がんの処置において有用である、インビトロおよびインビボにおけるＦＤＦ０３の生物学的な活性の、調節因子の同定ならびに使用のための方法に関連する。一実施形態において、本発明は、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法を提供し、これは（腫瘍増殖の阻害を必要としている）被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む。ある実施形態において、薬剤はＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片であり；抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体であり得；腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍であり；あるいは被験体はヒトである。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体、部分的なアゴニスト抗体、またはこれらの抗原結合断片を含む、結腸がんを有する被験体における腫瘍増殖を阻害するための組成物。
【請求項２】
前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記腫瘍は原発性の腫瘍または転移性の腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記被験体はヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
ＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体、部分的なアゴニスト抗体、またはこれらの抗原結合断片を含む、結腸がんを有する被験体における転移の負荷を低減するための組成物。
【請求項６】
前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記被験体はヒトである、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
ＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗原結合断片を含む、乳がんを有する被験体における腫瘍増殖を阻害するための組成物。
【請求項９】
前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記腫瘍は原発性の腫瘍または転移性の腫瘍である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記被験体はヒトである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
ＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗原結合断片を含む、乳がんを有する被験体における転移の負荷を低減するための組成物。
【請求項１３】
前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記被験体はヒトである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗原結合断片が、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ）２からなる群より選択される、請求項１、５、８または１２のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明は免疫学および医薬品の分野に関連する。さらにとりわけ、本発明はインビボにおける抗腫瘍活性を高めるためのＦＤＦ０３活性の調節、およびそのような調節を媒介する化合物の同定に関連する。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景）
免疫細胞の活性化の閾値は、自己および異種抗原の認識を通して受け取られる、活性化ならびに阻害シグナルによって調節される。活性化または阻害受容体に影響する遺伝的欠損は、免疫機構を、自己と非自己との間を識別することができない状態にし、これは自己免疫または感染性因子および形質転換された細胞に対する異常な応答を引き起こす（例えば、非特許文献１および非特許文献２を参照のこと）。
【０００３】
免疫機構の細胞は、多数の型の、受容体として働く膜結合型タンパク質を持つ。これらの受容体に対するリガンドは、小分子、タンパク質（例えば、サイトカインまたはケモカイン）もしくは別個の細胞上に存在している膜結合型タンパク質であり得る。そのリガンドによる受容体の占有、可溶性抗体による受容体の結合、似ている受容体（ｌｉｋｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）同士での架橋、および似ていない受容体（ｕｎｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）同士での架橋は、細胞活性における変化を結果として生じ得る。これらの事象のいくつかは「細胞の活性化」を結果として生じ、一方他の事象は「細胞の阻害」を結果として生じる。
【０００４】
免疫細胞およびこれらの活性化または阻害の研究は：形質膜への酵素のリクルート；細胞膜における「脂質ラフト」への酵素のリクルート（非特許文献３）、および形質膜への膜結合型受容体のリクルートに関連している。脂質ラフトは、脂質分子の低下した流動性を有する形質膜の領域である。細胞の活性化または阻害はまた、受容体のリン酸化状態における変化；細胞の増殖状態における変化；カルシウムの流動；遺伝的発現における変化；分泌または脱顆粒における変化；細胞の分化；細胞の増殖速度における変化；細胞移動における変化；および走化性における変化に関連する。細胞の活性化はまた、Ｔ細胞アネルギーの逆転を含み得る（例えば、非特許文献４および非特許文献５を参照のこと）。
【０００５】
シグナル伝達事象（これは上記の変化の何れかを結果として生じる）が、活性化するかまたは阻害するかについての問題は、個々の論拠の上で決定され得る。例えば、同定されていない受容体の占有が、サイトカインｍＲＮＡの遺伝的発現、分泌（もしくは脱顆粒）、炎症性サイトカインの放出、食細胞または溶解活性の上昇を結果として生じる場合、上記同定されていない受容体は活性化受容体と呼ばれ得る。同様に、同定されていない受容体の占有が、公知の活性化受容体に依存している活性を阻害する場合、この同定されていない受容体は阻害受容体と呼ばれ得る。
【０００６】
受容体が活性化するかまたは阻害するかについての決定は、この受容体がタンパク質である場合、この受容体のポリペプチド配列によって予測され得る。注目は二つの異なるモチーフに集中している：ＩＴＩＭおよびＩＴＡＭである。ＩＴＩＭは、免疫受容体のチロシンに基づいた阻害モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）を表し、一方、ＩＴＡＭは、免疫受容体のチロシンに基づいた活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）を意味する。受容体の細胞質領域内に一つまたはそれより多いＩＴＩＭモチーフをもつ多数のポリペプチド受容体は、阻害することが見出されている。一方、細胞質領域内に一つまたはそれより多いＩＴＡＭ配列をもつ多数のポリペプチド受容体は、活性化することが見出されている。
【０００７】
最近、多数のそのような免疫調節受容体（ＴＲＥＭ、ＭＤＬ−１、ＦＤＦ０３、ＤＣＩＲ、およびＣＤ２００など）が骨髄性細胞上で同定されている。ＦＤＦ０３は、対になった免疫グロブリン様２型受容体（Ｐａｉｒｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ  ｔｙｐｅ  ２  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＰＩＬＲ）としても公知である。ＰＩＬＲファミリーは阻害（ＰＩＬＲα）および活性化（ＰＩＬＲβ）アイソフォームの両方を含む。両方の受容体は、ｖ型免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、かつ好中球，単球および樹状細胞の表面上で発現される。ＰＩＬＲｂはまた、マウスならびにヒトの両方におけるＮＫ細胞とＴ細胞のわずかな集団とにおいても存在する。（例えば、非特許文献６を参照のこと）。ＰＩＲＬαは、その細胞質ドメイン内にＩＴＩＭを持つ。一方ＰＩＬＲβは、ＩＴＡＭをもつＤＡＰ１２アダプタ分子と結合することによって、活性化シグナルを伝達（ｔｒａｎｓｄｕｃｅ）する。マウスのアイソフォームに対する推定上のリガンドは、ＣＤ９９様分子であると同定され、さらにより最近、ＣＤ９９上のＯ−グリカン糖鎖は受容体認識に関与されることが観察された。ＤＣおよびマクロファージにおける初期の研究は、ＰＩＬＲαがＩＴＡＭに媒介される活性化シグナルを阻害し得る（これは、受容体の、ＩＴＩＭをもつファミリーの間で一般的な特徴である）ことを示している。ＰＩＬＲαは、ＦＤＦ０３がトランスフェクトされたＵ９３７細胞において、ＣＤ３２／ＦｃγＲＩＩによって誘導される細胞内Ｃａ＋２動員を妨害することによって阻害機能を示した。ＰＩＬＲａはまた、単純ヘルペスウイルス１エントリー共受容体（ｈｅｒｐｅｓ−ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ−１  ｅｎｔｒｙ  ｃｏ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）として同定されている（例えば、非特許文献７を参照のこと。
【０００８】
先天免疫は、先天免疫細胞が、力強く応答するように誘導されるために、特定の微生物の病原体または腫瘍に関連した抗原に事前に暴露することを必要としないという点で、適応免疫と区別される。さらに、先天免疫細胞によって利用される受容体は多形ではなく（ｎｏｎ−ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ）、そして、通常、微生物の病原体上に存在する特異的な分子のパターンを認識する。したがって、先天免疫細胞は、病原体に対する防御の第一線を提供する。一般に、先天免疫応答は、病原体およびがんへの防御の第一線として、種々の骨髄性系列細胞を通じて媒介される。骨髄性系列細胞としては、マクロファージ、単球、樹状細胞、好中球、好酸球、顆粒球、マスト細胞、好塩基球などが挙げられる。さらに、ＮＫ細胞は先天免疫の一部であり、ならびに、これらは改変された自己（ａｌｔｅｒｅｄ  ｓｅｌｆ）（特に、多数の腫瘍細胞の場合のように、ＭＨＣクラスＩ発現を欠いている細胞）を認識することが可能な、多形ではない受容体を発現する。上で指摘されたように、ＦＤＦ０３受容体は、骨髄性系列細胞の表面上で発現される。さらに、ＦＤＦ０３の活性化形態はＮＫ細胞上で発現され得る。最近の研究は、多様な多形ではない受容体に由来するシグナル伝達を処理することによって、先天免疫細胞は、微生物の病原体または腫瘍細胞標的上で識別し得るという概念について調査した。例を挙げれば、一つの病原体は、発現された種々の分子に基づいた、受容体の相互作用を誘発し得、そして別の病原体は、受容体の異なるアレイ（ａｒｒａｙ）を誘発し得る（つまり、定性的または定量的様式で、異なる応答を誘発する）。したがって、二つまたはそれより多いアゴニスト分子を用いる組み合わせの治療を用いて、先天細胞上の受容体の結合を誘発することは、病原体除去または腫瘍細胞を殺すことを誘導する能力を増強し得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｗａｌｋｅｒおよび  Ａｂｂａｓ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）２：１１−１９
【非特許文献２】Ｌａｎｉｅｒ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１５：３０８−３１４
【非特許文献３】ＹａｎｇおよびＲｅｉｎｈｅｒｚ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６６，１８７７５
【非特許文献４】Ｌｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９８）２７３，１９９１４
【非特許文献５】Ｓｕｎｄｅｒ−ＰｌａｓｓｍａｎおよびＲｅｉｎｈｅｒｚ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９８）２７３，２４２４９
【非特許文献６】Ｓｈｉｒａｔｏｒｉら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．（２００４）１９９：５２５−３３
【非特許文献７】Ｓａｔｏｈら、Ｃｅｌｌ（２００８）１３２：９３５−９４４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
免疫、特にがん免疫の調節因子についての必要性が存在する。本発明は、ＦＤＦ０３受容体の調節因子を用いてがん免疫を調節する方法を提供することで、この必要性を満たす。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、造血細胞上の細胞表面分子であるＦＤＦ０３活性化受容体（ＰＩＬＲβ）および阻害受容体（ＰＩＬＲα）の調節は、腫瘍もしくはがんへの継続している免疫応答のダイナミクス（ｄｙｎａｍｉｃｓ）または初期免疫応答の開始を変え得、あるいは転移を阻害することを変え得るという発見に基づいている。したがって、受容体は、インビボにおける免疫応答を調節するための重要な標的であり得る。
【００１２】
本発明は、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法を提供し、これは（腫瘍増殖の阻害を必要としている）被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む。ある実施形態において、薬剤はＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片であり；抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体であり得；腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍であり；あるいは被験体はヒトである。
【００１３】
被験体における転移の負荷を低減するための方法もまた提供される。この方法は（転移の負荷の低減を必要としている）被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む。ある実施形態において、薬剤はＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片であり；抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体であり；あるいは被験体はヒトである。
【００１４】
本発明は、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法を提供し、この方法は（腫瘍増殖の阻害を必要としている）被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体の両方に結合する薬剤を投与することを含む。ある実施形態において、薬剤はＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体に結合する二重特異的（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体またはこの抗体の断片であり；抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体であり；腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍であり；あるいは被験体はヒトである。
【００１５】
転移の負荷を低減するための方法もまた提供される。この方法は、（転移の負荷の低減を必要としている）被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体の両方に結合する薬剤を投与することを含む。ある実施形態において、薬剤はＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗体の断片であり；抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体であり；あるいは被験体はヒトである。
例えば、本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）  腫瘍増殖の阻害を必要としている被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法。
（項目２）  上記薬剤は上記ＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片である、項目１に記載の方法。
（項目３）  上記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、項目２に記載の方法。
（項目４）  上記腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍である、項目１に記載の方法。
（項目５）  上記被験体はヒトである、項目１に記載の方法。
（項目６）  転移の負荷の低減を必要としている被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む、被験体における転移の負荷を低減するための方法。
（項目７）  上記薬剤は上記ＦＤＦ０３阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片である、項目６に記載の方法。
（項目８）  上記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、項目７に記載の方法。
（項目９）  上記被験体はヒトである、項目６に記載の方法。
（項目１０）  腫瘍増殖の阻害を必要としている被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体に結合する薬剤を投与することを含む、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法。
（項目１１）  上記薬剤は上記ＦＤＦ０３阻害受容体および上記ＦＤＦ０３活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗体の断片である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）  上記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）  上記腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍である、項目１０に記載の方法。
（項目１４）  上記被験体はヒトである、項目１０に記載の方法。
（項目１５）  転移の負荷の低減を必要としている被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体およびＦＤＦ０３活性化受容体に結合する薬剤を投与することを含む、転移の負荷を低減するための方法。
（項目１６）  上記薬剤は上記ＦＤＦ０３阻害受容体および上記ＦＤＦ０３活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗体の断片である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）  上記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）  上記被験体はヒトである、項目１５に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、（ＦＤＦ０３活性化受容体およびＦＤＦ０３阻害受容体に結合する二重特異的抗体である）ＤＸ１７３抗体を用いた処置に際した、４Ｔ１乳癌の腫瘍増殖の阻害を示す。
【図２】図２は、ＤＸ１７３を用いた処置に際した、４Ｔ１乳癌の腫瘍形成の阻害を示す。
【図３】図３は、ＤＸ１７３を用いた処置に際した、４Ｔ１乳癌の転移の負荷の減少を示す。
【図４】図４は、（ＦＤＦ０３阻害受容体に結合するアゴニスト抗体である）ＤＸ２７６抗体を用いた処置に際した、ＣＴ−２６結腸癌の腫瘍増殖の阻害を示す。
【図５】図５は、ＤＸ２７６を用いた処置に際した、ＣＴ−２６結腸癌の腫瘍形成の阻害を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（本発明の詳細な説明）
本発明は、免疫応答の重大な調節因子としての、ＦＤＦ０３受容体の生理学的な役割に関連する。マウスのモデルにおいて、ＦＤＦ０３受容体の阻害形態を刺激することは、原発性の腫瘍および副産物の両方への抗腫瘍免疫反応性の増大ならびに転移の負荷の低減を結果として生じ、このことはＦＤＦ０３が免疫学的監視における重要なプレーヤーであることを示唆する。したがって、本発明の目的は、特にがんにおける免疫反応性を変えるためのＦＤＦ０３の調節に関連する。ＦＤＦ０３受容体を調節する薬剤を同定する能力は、免疫応答の外部調節を可能にし、さらに、腫瘍の免疫学的監視の増進が、発癌および腫瘍増殖を防げない場合、少なくとも低減することを可能にし得る。
【００１８】
開示を明瞭にするために、かつ限定するためではなく、本発明の詳細な説明は、後に続く小区分に分けられる。
【００１９】
（Ａ．定義）
異なる定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって普通に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で参照される全ての特許、公開された特許出願および他の出版物ならびにＧｅｎＢａｎｋおよび他のデータベース由来の配列は、その全容が参照によって援用される。本節で示される定義が、参照によって本明細書に援用される特許、公開された特許出願および他の出版物ならびにＧｅｎＢａｎｋおよび他のデータベース由来の配列で示される定義に反するまたはそうでなければ矛盾する場合、本節で示される定義が、参照によって本明細書に援用される定義に優先する。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」とは、「少なくとも一つ」または「一つもしくはそれより多数」を意味する。
【００２１】
動物、ヒト、実験用被験体、細胞、組織、器官、または生物学的な流体に適用する場合、「投与」および「処置」とは、動物、ヒト、被験体、細胞、組織、器官、または生物学的な流体への、外因性の薬学的、治療上の、診断上の薬剤、化合物、もしくは組成物の接触をいう。「投与」および「処置」とは、例えば、治療上の、プラシーボの、薬物動態学の、診断上の、研究の、および実験の方法をいい得る。「細胞の処置」とは、細胞への試薬の接触および流体への試薬の接触（この流体が、細胞と接触している場合）を含む。「投与」および「処置」とはまた、試薬、診断上の、結合する組成物による、または別の細胞による、（例えば、細胞の）インビトロおよびエクスビボの処置を意味する。ヒト、獣医学または研究用被験体に適用する場合、「処置」とは、治療上の処置、予防または防止の措置、研究および診断上の適用をいう。ヒト、獣医学もしくは研究用被験体または細胞、組織、もしくは器官に適用する場合、「処置」とは、ＦＤＦ０３活性を調節することが可能な薬剤を、ヒトもしくは動物の被験体、細胞、組織、生理学的な区画または生理学的な流体と接触させることを含む。「細胞の処置」とはまた、ＦＤＦ０３阻害受容体アゴニストまたはＦＤＦ０３二重特異的薬剤が、（例えば、流体相またはコロイド相において）適切な一つのＦＤＦ０３受容体または複数のＦＤＦ０３受容体と接触する状態、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストが流体と接触している（例えば、この流体は細胞もしくは受容体と接触している）が、このアゴニストまたはアンタゴニストが細胞もしくは受容体と接触していることは実証されていない状態も含む。
【００２２】
本明細書で使用される場合、用語「薬剤」とは、本発明の分子の発現および／または活性を調節する（例えば、上方に調節する（ｕｐ−ｍｏｄｕｌａｔｅ）または刺激するおよび下方に調節する（ｄｏｗｎ−ｍｏｄｕｌａｔｅ）または阻害する）化合物を含む。本明細書で使用される場合、用語「インヒビター」もしくは「阻害する薬剤」とは、本発明の分子の発現および／または活性を阻害する薬剤を含む。
【００２３】
「インヒビター」および「アンタゴニスト」または「アクチベーター」および「アゴニスト」とは、それぞれ、阻害するまたは活性化する分子をいい、例えば、リガンド、受容体、補因子、遺伝子、細胞、組織、または器官の、例えば活性化のための分子をいう。例えば、遺伝子、受容体、リガンドまたは細胞の調節因子は、遺伝子、受容体、リガンドまたは細胞の活性を変更する分子であり、ここで活性は、その調節の特性において活性化され得、阻害され得または変えられ得る。調節因子は、単独で働き得、または補因子（例えば、タンパク質、金属イオン、もしくは小分子）を使用し得る。インヒビターは、例えば、遺伝子、タンパク質、リガンド、受容体、もしくは細胞を、減らす、遮断する、妨害する、活性化を遅らせる、不活性化する、脱感作する、または、ダウンレギュレートする化合物である。アクチベーターは、例えば、遺伝子、タンパク質、リガンド、受容体，もしくは細胞を、増やす、活性化する、促進する、活性化を高める、感作する、またはアップレギュレートする化合物である。インヒビターはまた、構成的活性を低減する、遮断する、または不活性化する組成物としても定義され得る。「アゴニスト」は、標的と相互作用し、標的の活性化の増進を引き起こす、または促進する化合物である。アゴニストはまた、機能のサブセットの活性化を含む（すなわちこれは、「部分的なアゴニスト」である）。「アンタゴニスト」は、アゴニストの作用に対立する化合物である。アンタゴニストは、アゴニストの活性を妨害する、低減する、阻害するまたは中和する。アンタゴニストはまた、同定されたアゴニストがない場合でさえ、標的（例えば、標的受容体）の構成的活性を妨害する、阻害する、または低減し得る。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」とは、抗原性のエピトープに特異的に結合するために必要な可変領域配列を含む、単離されたまたは組換え型の結合する薬剤をいう。したがって、抗体は、所望の生物学的活性（例えば、特異的な標的抗原に結合する）を示す、抗体またはそれの断片のあらゆる形態である。したがって，これは最も広い意味で用いられ、そして具体的には、（全長のモノクローナル抗体を含む）モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラの抗体、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、多特異的な抗体（例えば、二重特異的抗体）および所望の生物学的活性を示す限り、抗体の断片（ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、およびＦａｂ２を含むがこれらに限定されない）を含む。
【００２５】
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用されるときは、語句「これらの抗体の断片」または「これらの抗原結合断片」とは、その生物学的活性を実質的に保持している、抗体の断片または誘導体を含む。したがって、抗体断片は、全長の抗体の一部であり、そして通常、その抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、抗体断片から形成された、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２，およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃ−Ｆｖ）；ならびに多特異的抗体が挙げられる。一般に、抗体断片または誘導体は、その生物学的活性の少なくとも５０％を保持している。好ましくは、抗体断片または誘導体は、その生物学的活性の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％を保持している。抗体断片は、その生物学的な活性を実質的に変えない保存的アミノ酸置換を含み得る。
【００２６】
本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質の抗体の集団から取得された抗体をいう。すなわち集団を構成する個々の抗体が、可能であるような自然に起こる変異（これは、少ない量で存在し得る）を除き、同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原エピトープ（またはリガンド）に対し、向けられる。対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、一般に、種々のエピトープに対して向けられる（または特異的である）多数の抗体を含む。用語、モノクローナルとは、その抗体が、抗体の実質的に均質な集団から取得されること、および何れかの特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されないことを示す。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得、または、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製され得る。有用なモノクローナル抗体はまた、例えばＣｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）において記載される技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【００２７】
本明細書に参照されるモノクローナル抗体は、キメラ抗体（免疫グロブリン）を含み、これにおいて、重鎖および／もしくは軽鎖の一部は、特定の種に由来するまたは特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の、対応する配列と同一あるいはそれに対し相同であり、一方、鎖の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の、対応する配列と同一あるいはそれに対し相同である。本明細書に参照されるモノクローナル抗体は、所望の生物学的活性を示す限り、キメラ抗体の断片もまた含む（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照のこと）。
【００２８】
本明細書で使用される場合、用語「発癌」とは、悪性のもしくは新生物の細胞または腫瘍の発生をいう。
【００２９】
本明細書で使用される場合、用語「細胞に媒介される応答」とは、Ｔ細胞ならびに免疫機構の非特異的な細胞（ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、好酸球および好塩基球を含むがこれらに限定されない）によって媒介される抗原、細胞、または生物への宿主の応答をいう。
【００３０】
「有効量」は、医学的病状の症状もしくは兆候を改善するためまたは防ぐために十分な量を含む。有効量はまた、診断を可能にするためまたは容易にするために十分な量を意味する。特定の患者または獣医学の被験体のための有効量は、処置される病状、患者の総合的な健康状態、投与の方法経路および用量ならびに副作用の重症度などの要因に依存して変動し得る（例えば、Ｎｅｔｔｉらに出された米国特許第５，８８８，５３０号を参照のこと）。有効量は、顕著な副作用もしくは有害な影響を避ける最大の用量または投薬のプロトコールであり得る。効果は、少なくとも５％、普通には少なくとも１０％、より普通には少なくとも２０％、最も普通には少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも６０％、理想的には少なくとも７０％、より理想的には少なくとも８０％、および最も理想的には少なくとも９０％の診断上の測定値またはパラメーターの改善を結果として生じる。ここで１００％は、正常な被験体によって示される診断上のパラメーターとして定義される（例えば、Ｍａｙｎａｒｄら、（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照のこと）。
【００３１】
本明細書で使用される場合、用語「ＦＤＦ０３阻害受容体」とは、供給源（共同に所有されるＷＯ９８／２４９０６において開示されるＦＤＦ０３阻害を含むがこれに限定されない）にかかわらず、ＦＤＦ０３阻害受容体タンパク質の全ての形態を含む。「ＦＤＦ０３活性化受容体」とは、供給源（共同に所有されるＷＯ２０００／０４０７２１において開示されるＦＤＦ０３活性化受容体を含むがこれに限定されない）にかかわらず、ＦＤＦ０３活性化受容体タンパク質の全ての形態を含む。明確に区別されない限り、「ＦＤＦ０３」は両方の受容体をいい得る。
【００３２】
本明細書で使用される場合、用語「転移性の腫瘍」とは、原発性の腫瘍から離れた部位で増殖する腫瘍細胞をいう。「転移の負荷」とは、転移性の腫瘍の定量化をいう。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語「ぺプチド」とは、ぺプチド結合によって連結されているアミノ酸の比較的短い鎖を含む。用語「ぺプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）」とは、ぺプチドを模倣するまたは拮抗することができる、ペプチド性ではない構造上の要素を含む、化合物を含む。
【００３４】
本明細書で使用される場合、用語「原発性の腫瘍」とは、本来の位置にとどまっている腫瘍をいう。
【００３５】
「小分子」は、腫瘍およびがんの生理機能ならびに障害の処置のために提供される。「小分子」は、１０ｋＤ未満、一般に２ｋＤ未満、および好ましくは１ｋＤ未満の分子量を有する分子として定義される。小分子としては、無機分子、有機分子、無機成分を含む有機分子、放射性原子を含む分子、合成分子、ぺプチド模倣物および抗体模倣物（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｉｍｅｔｉｃ）が挙げられるが、これらに限定されない。治療に役立つものとして、小分子は、細胞に対しより透過性であり、分解の影響をより受けにくく、および大きな分子より免疫応答を惹起する傾向が少なくあり得る。抗体およびサイトカインのぺプチド模倣物ならびに小分子の毒素などの小分子は、記載されている（例えば、Ｃａｓｓｅｔら、（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３０７：１９８−２０５；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２；Ｌｉ（２０００）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２５１−１２５６；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓら、（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９：４１１−４２０；Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉら、（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．８：２１８５−２１９９；Ｄｏｍｉｎｇｕｅｓら、（１９９９）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６：６５２−６５６；ＳａｔｏおよびＳｏｎｅ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３７１：６０３−６０８；Ｓｔｅｗａｒｔらに出された米国特許第６，３２６，４８２号を参照のこと）。
【００３６】
本明細書で使用される場合、用語「被験体」とは、免疫応答が惹起され得るあらゆる生きている生物をいい、好ましくは被験体は哺乳動物である。例示的な被験体としては、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ヤギ、およびヒツジが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」とは、哺乳動物、（例えば、ヒト）由来のＴ細胞系列内のあらゆる細胞をいう。好ましくは、Ｔ細胞はＣＤ４および／もしくはＣＤ８のいずれか、ならびに腫瘍特異的Ｔ細胞受容体を発現する前駆またはエフェクターＴ細胞である。本明細書に記載される種々のＴ細胞集団は、当該分野で公知である、これらのサイトカインプロフィールおよびこれらの機能に基づいて、定義され得る。
【００３８】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」とは、疾患もしくは障害を治療する、癒す、緩和する、取り除く、変える、治す、改善する、好転させるまたは疾患もしくは障害に影響する目的を伴なった、被験体への治療剤の適用もしくは投与、あるいは被験体から単離された組織または細胞株への治療剤の適用もしくは投与をいう。この被験体は、疾患もしくは障害、疾患もしくは障害の症状または疾患もしくは障害への疾病素質を有する。
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「腫瘍」とは、あらゆる悪性のまたは新生物の細胞をいう。
【００４０】
（Ｂ．細胞応答の調節）
本明細書において特徴とされるのは、被験体の腫瘍に対する、細胞に媒介される応答を、刺激するまたは増大させるための方法であり、これは、この方法を必要としている被験体へ、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激する、または阻害および活性化の両方のＦＤＦ０３受容体に結合する薬剤を投与することを含む。さらに本明細書において特徴とされるのは、標的に対する、細胞の細胞傷害性を上昇させる方法であり、これは、細胞に、ＦＤＦ０３活性を調節する薬剤の有効量を投与することを含み、ここで、ＦＤＦ０３阻害受容体の活性は高められる。さらに、本明細書において特徴とされるのは、腫瘍の微小環境によって誘導される免疫抑制性環境を和らげる方法である。
【００４１】
ＦＤＦ０３発現細胞が関与する、細胞に媒介されるあらゆる応答は、開示された方法を用いて、刺激され得または増強させられ得る。そのような細胞に媒介される応答は、先天免疫細胞応答を含む。細胞に媒介される応答は当該分野で使用されている慣用的方法によって測定され得る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、ｅｄｓ．，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，最新の版）を参照のこと。
【００４２】
特に、ＦＤＦ０３活性の操作は、標的に対する、細胞の細胞傷害性の上昇を結果として生じ得る。ＦＤＦ０３を発現するあらゆる細胞傷害性細胞（または細胞傷害性細胞の前駆体）は、ＦＤＦ０３に媒介される相互作用を通じてその標的と相互作用する。すなわち、ＦＤＦ０３を必要とする細胞傷害性エフェクター細胞への分化および／もしくは刺激は、本方法によって調節され得る。そのような細胞としては、ＮＫ細胞、Ｔｒｅｇ、ＮＫＴ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、マクロファージ、樹状細胞、好中球およびマスト細胞が挙げられるが、これらに限定されない。細胞の細胞傷害性は、任意の適切な方法によって評価され得る。例示的な方法としては、標識された標的細胞からの放射性同位元素標識（ｒａｄｉｏｌａｂｅｌ）（例えば、５１Ｃｒ）の放出を試験すること、比色分析（例えば、ＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性分析（Ｐｒｏｍｅｇａ））、グランザイム放出分析、乳酸デヒドロゲナーゼ分析、および生物発光の細胞傷害性分析（例えば、Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ））が挙げられる。さらに、ＦＤＦ０３アゴニストは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞またはＢ細胞の高められた誘導を引き起こし得る。これは、抗原提示プロセスまたは抗腫瘍エフェクターフェイズ（ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｐｈａｓｅ）の間に、生来の骨髄性系列細胞を、上記細胞を活性化する分子を発現するように誘導することによる；すなわち、適応免疫のエフェクター細胞の間接的な活性化である。
【００４３】
あらゆる適切な標的細胞は、本発明の細胞に媒介される応答、特に細胞傷害性の応答のための標的であり得る。好ましくは、標的は哺乳動物である。標的は、応答する細胞に対して同系、同種異系、または異種であり得る。大半の実施形態において、標的は同系または同種異系である。好ましい実施形態において、標的は応答するエフェクター細胞に対して同系である。標的細胞は正常または異常な細胞であり得る。例示的細胞としては、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、および組換え法によってＦＤＦ０３リガンドを発現する細胞が挙げられる。したがって、標的細胞としては、ＣＴ−２６または４Ｔ１細胞などの樹立細胞株、短期間の（ｓｈｏｒｔ  ｔｅｒｍ）細胞株、または被験体から取られたサンプルから単離された細胞（例えば、分離された腫瘍細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。ＦＤＦ０３またはＦＤＦ０３リガンドを発現する細胞において、発現は、天然におこり得、または当該分野で公知の方法を用いる組換え法によっておこり得る。例えば、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，最新版）を参照のこと。
【００４４】
いくつか実施形態において、腫瘍標的または他の細胞標的は、ＦＤＦ０３に対するリガンドを発現する。ときには、ＦＤＦ０３リガンド（またはＦＤＦ０３関連リガンド）はＣＤ９９である。
【００４５】
一つの実施形態において、本方法の薬剤は、アゴニストＦＤＦ０３特異的抗体またはこれの生物学的に活性な断片である。アゴニスト抗体は、阻害ＦＤＦ０３受容体を認識する。さらに、ＦＤＦ０３の阻害および活性化の両方の形態を認識する二重特異的な抗体は、有用である。例示的抗体としては、二重特異的なＦＤＦ０３抗体およびＦＤＦ０３阻害受容体に対して特異的なアゴニスト抗体が挙げられる。二重特異的な抗体は、両方の受容体と天然で交差反応する抗体、または遺伝学的に操作された抗体であり得る。抗体は、細胞培養物、ファージ、または種々の動物（ウシ、ウサギ、ヤギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ヒツジ、イヌ、ネコ、サル、チンパンジー、類人猿が挙げられるがこれらに限定されない）において生成され得る。したがって、本方法において有用である抗体は、一般に、哺乳動物の抗体である。ファージ技術は、初期の抗体を単離するため、または変化させられた特異性もしくはアビディティ特性を有する改変体を生成するために使用され得る。そのような技術は、当該分野で慣用されており、かつ周知である。一つの実施形態において、抗体は当該分野で公知の組換え法によって産生される。例えば、組換え抗体は、宿主細胞に、抗体をコードしているＤＮＡ配列を含むベクターをトランスフェクトすることによって産生され得る。一つまたはそれより多数のベクターは、宿主細胞で少なくとも一つのＶＬおよび少なくとも一つのＶＨ領域を発現するＤＮＡ配列をトランスフェクトするために使用され得る。抗体生成および産生の組換え法の例示的説明としては、Ｄｅｌｖｅｓ，ＡＮＴＩＢＯＤＹ  ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ：ＥＳＳＥＮＴＩＡＬ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｗｉｌｅｙ，１９９７）；Ｓｈｅｐｈａｒｄら，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）；およびＧｏｄｉｎｇ，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）が挙げられる。
【００４６】
本方法において有用な抗体は、増大された半減期などの所望の機能を媒介することにおける、抗体のより強い効能を増大させるために組換え法によって修飾され得る。例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（ｅｄ．）ＡＮＴＩＢＯＤＹ  ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５）を参照のこと。例えば、抗体は、組換え法を用いる置換によって修飾され得る。一般に、置換は保存的置換である。例えば、抗体の定常領域における少なくとも一つのアミノ酸は、異なる残基で置き換わられ得る。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第６，１９４，５５１号、出願番号ＷＯ９９／５８５７２；およびＡｎｇａｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−０８（１９９３）を参照のこと。アミノ酸における修飾としては、アミノ酸の欠失、付加および置換が挙げられる。抗体はまた、抗体またはこれの生物学的に活性な断片が、別の生物学的に関連する作用物質（例えば、サイトカイン、接着分子、共起刺激分子など、およびそのような分子の生物学的に関連する一部）と結合されている融合タンパク質であり得る。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本方法において有用である薬剤は、ＦＤＦ０３阻害受容体に特異的な抗体、ＦＤＦ０３二重特異的抗体、またはこれらの生物学的に活性な断片である。モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、およびヒト化抗体が調製され得る（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（ｅｄｓ．）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（ｅｄｓ．）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；Ｖａｓｑｕｅｚらに出された米国特許第６，３２９，５１１号を参照のこと）。
【００４８】
抗原の精製は、抗体の生成のために必要ではない。免疫はＤＮＡベクター免疫によって行われ得る（例えば、Ｗａｎｇら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２２８：２７８−２８４を参照のこと）。また、動物は、目的の抗原を有する細胞を用いて免疫され得る。脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）は、その後、免疫された動物から単離され得、そしてこの脾細胞は、ハイブリドーマを産生するために骨髄腫細胞株と融合し得る（Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：１９１１−１９１８）。結果として生じるハイブリドーマは、機能的な分析または生物学的な分析（すなわち、精製された抗原の入手に依存しない分析）によって、所望の抗体の産生についてスクリーニングされ得る。細胞を用いる免疫は、抗体生成について、精製された抗原を用いる免疫より優れていることを証明し得る（Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４）。
【００４９】
抗原に対する抗体および受容体に対するリガンドの結合特性は、例えば、表面プラズモン共鳴（ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）（Ｋａｒｌｓｓｏｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４５：２２９−２４０；Ｎｅｒｉら（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：１２７１−１２７５；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７）または競合（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）ＥＬＩＳＡ（Ｆｒｉｇｕｅｔら（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７７：３０５−３１９；Ｈｕｂｂｌｅ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：３０５−３０６）によって測定され得る。抗体は、抗体の標的の抗原および関連する結合されたタンパク質を単離するため、アフィニティ精製に用いられ得る。例えば、Ｗｉｌｃｈｅｋら（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３−５５を参照のこと。
【００５０】
抗体は、普通には少なくとも約１０−３Ｍ、より普通には少なくとも１０−６Ｍ、一般には少なくとも１０−７Ｍ、より一般には少なくとも１０−８Ｍ、好ましくは少なくとも約１０−９Ｍ、およびより好ましくは少なくとも１０−１０Ｍ、および最も好ましくは少なくとも１０−１１ＭのＫＤで、結合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８５：３７９−３８９；Ｙａｎｇら（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３８：１７−２３；Ｃａｒｎａｈａｎら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（Ｓｕｐｐｌ．）９：３９８２ｓ−３９９０ｓを参照のこと）。
【００５１】
いくつか実施形態において、被験体はがんを有し、そして以下に記載されるように本発明の薬剤を用いて処置され得る。
【００５２】
（Ｃ．ＦＤＦ０３阻害薬剤を用いる処置の方法）
本明細書において特徴とされるのは、がんを防ぐまたは処置する方法であり、これは、がんを防ぐまたは処置することを必要としている被験体に、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的な活性を刺激する有効量の薬剤を投与することを含む。いくつか実施形態において、がんは皮膚がんである。
【００５３】
本方法によって処置される被験体としては、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、肉腫、または奇形癌を有する被験体が挙げられる。腫瘍は、副腎、膀胱、骨組織、骨髄、脳、胸部、頚部、胆嚢、神経節、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状の、および子宮のがんであり得る。そのような腫瘍としては：中枢神経系の新生物：多形性グリア芽細胞腫、神経膠星状細胞腫、乏突起膠細胞性腫瘍、上衣および脈絡膜叢腫瘍、松果の腫瘍、ニューロンの腫瘍、髄芽細胞腫、神経鞘腫、髄膜腫、髄膜の肉腫：眼の新生物：基底細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫；内分泌腺の新生物：下垂体性の新生物、甲状の新生物、副腎皮質の新生物、神経内分泌系の新生物、消化器（ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）内分泌系の新生物、性腺の新生物、頭および頚部の新生物：頭および頚部のがん、口腔、咽頭、喉頭、歯原性腫瘍：胸郭の新生物：大細胞肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胸郭の新生物、悪性の中皮腫、胸腺腫、胸郭の原発性生殖細胞腫瘍；消化管の新生物：食道の新生物、胃の新生物、肝臓の新生物、胆嚢の新生物、外分泌の膵臓の新生物、小腸の新生物、虫垂および腹膜、結腸および直腸の腺癌，肛門の新生物；尿生殖路の新生物：腎細胞癌、腎盤および尿管の新生物、膀胱の新生物、尿道の新生物、前立腺の新生物、陰茎の新生物、精巣の新生物；女性の生殖器官の新生物：外陰部および膣の新生物、頚部の新生物、子宮体の腺癌、卵巣がん、婦人科学の肉腫；胸部の新生物；皮膚の新生物：基底細胞癌、扁平上皮癌、皮膚線維肉腫、メルケル細胞腫；悪性の黒色腫；骨組織および軟組織の新生物：骨原性肉腫、悪性の線維性組織球腫、軟骨肉腫（ｃｈｒｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ）、ユーイング肉腫、未分化神経外胚葉性腫瘍、血管肉腫；造血系の新生物：骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、ＨＴＬＶ−１およびＴ細胞白血病／リンパ腫、慢性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、マスト細胞白血病；小児の新生物：急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、神経芽細胞腫、骨組織の腫瘍、横紋筋肉腫、リンパ腫、腎臓および肝臓の腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
あらゆる被験体は、本明細書で提供される方法および組成物を用いて処置され得る。そのような被験体は、そのような処置を必要としている、哺乳動物、好ましくは、ヒトである。開示された方法および組成物の獣医学的な使用もまた、意図される。そのような使用は、人に飼育されている動物、家畜および純血種の馬における、発癌の予防、がんの処置ならびに自己免疫疾患の予防および処置を含む。
【００５５】
種々の薬学的組成物ならびにそれらの調製および使用のための技術は、本開示を鑑みて、当業者に公知である。適切な薬理学的組成物および関連する投与上の技術の詳細な列挙のために、本明細書の詳細な教示を参照し得、これは、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．
（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ２００３などの文書によってさらに補われ得る。
【００５６】
処方および送達方法は、通常、処置される部位および疾患に応じて適合させられる。例示的処方物としては、非経口の投与（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、または皮下投与）に適した処方物が挙げられるが、これに限定されない。非経口の投与に適した処方物は、ミセル、リポソームまたは薬物放出被膜に被包された処方物（遅い放出のために設計された生体適合性（ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）コーティング内に組み入れられた活性な薬剤）；摂取可能な処方物；クリーム、軟膏およびゲルなどの局所的な使用のための処方物；ならびに吸入剤，エアロゾルおよびスプレーなどの他の処方物を含む。本発明の化合物の投与量は、処置の必要性の程度および重症度、投与される組成物の活性、被験体の全体的な健康状態、ならびに当業者に周知である他の考慮すべきことにしたがって、変動する。
【００５７】
そのような化合物の毒性および治療上の効能は、細胞培養物または実験用動物において標準的薬学的手順によって決定され得る（例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療学上有効である用量）の決定）。有害な影響と治療上の効果との間の用量比は、治療指数であり、そしてそれはＬＤ５０とＥＤ５０との間の比として表され得る。高い治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養物分析および動物研究から取得されるデータは、ヒトにおける使用に対し、投与量の範囲を公式化する上で使用され得る。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどないまたは毒性がないＥＤ５０を含む、循環濃度（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の範囲内に位置する。投与量は、使用される投与形態および利用される投与の経路に依存して、上記の範囲内で変動し得る。的確な処方物、投与の経路および投与量は、患者の病状、年齢、体重、ならびに、治療の反応性を考慮して、個々の医師によって選択され得る。投薬の量および間隔は、所望の治療上の効果または最小有効濃度（ＭＥＣ）を維持するために十分である、活性部分の血漿レベルを提供するために、個々に調節され得る。ＭＥＣは、各化合物について変動するが、インビトロのデータ（例えば、ＦＤＦ０３阻害受容体の生物学的活性の５０〜９０％の刺激を達成するために必要な濃度）から見積もられ得る。
【００５８】
投与の様式は、特に重要ではない。一つの実施形態において、投与の様式は、Ｉ．Ｖ．ボーラスである。別の実施形態において、投与は局所的である。あるいは、例えば、腫瘍または自己免疫病変への、しばしば貯蔵のもしくは徐放性処方物での、化合物の直接的な注射を介して、全身性の様式ではなく局所的に化合物を投与し得る。
【００５９】
本発明の調節薬剤は、単独または一つもしくはそれより多い追加の薬剤との組み合わせにおいて投与され得る。例えば、一つの実施形態において、本明細書に記載される二つまたはそれより多い薬剤が、被験体に投与され得る。別の実施形態において、本明細書に記載される薬剤は、他の免疫調節薬剤との組み合わせにおいて投与され得る。他の免疫調節試薬の例としては、共起刺激のシグナルを遮断する抗体（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳに対する抗体）、ＣＴＬＡ４を介する阻害シグナルを活性化する抗体、および／または他の免疫細胞マーカーに対する抗体（例えば、ＣＤ４０に対する抗体、ＣＤ４０リガンドに対する抗体、もしくはサイトカインに対する抗体）、融合タンパク質（例えば、ＣＴＬＡ４−Ｆｃ、ＰＤ−１−Ｆｃ）、および免疫抑制性薬剤（例えば、ラパマイシン、シクロスポリンＡもしくはＦＫ５０６）が挙げられる。免疫調節試薬のなおより多くの例としては、トル（ｔｏｌｌ）様受容体（ＴＬＲ）のアゴニスト（例えば、ＣｐＧ  ＯＤＮオリゴ）が挙げられる。ある例において、免疫応答を上方に調節する他の薬剤（例えば、免疫応答を惹起するまたは増強させるため、Ｔ細胞活性化シグナルを送達する薬剤）をさらに投与することが望ましくあり得る。そのような薬剤としては、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−γなどのサイトカインの共投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）が挙げられるが、これに限定されない。抗ＩＬ−１０などのサイトカインアンタゴニストもまた、意図される。
（Ｄ．治療学の組成物、方法）
本発明は、例えば、増殖性の病状および障害（がん、腫瘍、新脈管形成、悪液質、がん悪液質、食欲不振、および前がん障害（例えば、形成異常症）を含む）の処置における使用のためのＦＤＦ０３抗体を提供する。
【００６０】
薬学的または滅菌の組成物（ＦＤＦ０３阻害受容体のアゴニスト、サイトカインアナログもしくはムテイン、それらに対する抗体、またはそれらの核酸を含む）を調製するために、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と混合される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照のこと。治療上および診断上の薬剤の処方物は、例えば、凍結乾燥された粉末、スラリー、水性の溶液もしくは懸濁物などの形態において、生理学的に受容可能な担体、賦形剤、または安定薬と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。
【００６１】
投与の経路は、例えば、局所的なもしくは皮膚の塗布によるか、皮下注射によるか、静脈内、腹腔内、大脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病巣内（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ）、もしくは肺の経路による注射または注入によるか、あるいは徐放性システムまたは埋没物による。遺伝子転移ベクター（例えば、中枢神経系のための遺伝子転移ベクター）は、記載されている（例えば、Ｃｕａら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：６０２−６０８；Ｓｉｄｍａｎら（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６；Ｌａｎｇｅｒら（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７；Ｌａｎｇｅｒ（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５；Ｅｐｓｔｅｉｎら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２；Ｈｗａｎｇら（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４；米国特許第６，３５０４６６号および第６，３１６，０２４号を参照のこと）。
【００６２】
治療薬（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）のために投与レジメンを選択することは、いくつかの要因（存在物の血清または組織のターンオーバー速度、症状のレベル、存在物の免疫抗原性、および生物学的なマトリックス内の標的細胞の接近しやすさを含む）に依存する。好ましくは、投与レジメンは、副作用の受容可能なレベルと両立させて、患者に送達される治療上の量を最大化する。したがって、送達される生物製剤の（ｂｉｏｌｏｇｉｃ）量は、一部、特定の存在物および処置される病状の重症度に依存する。抗体、サイトカイン、および小分子の適切な用量の選択における手引きは、入手できる（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照のこと）。
【００６３】
抗体、抗体の断片、およびサイトカインは、連続的な注入によって、または、例えば、一日、一週間、もしくは週当たり１〜７回の間隔での用量によって提供され得る。用量は、静脈内に、皮下に、局所的に、口に、鼻に、直腸に、筋肉内に、大脳内に、脊髄内に、または吸入によって提供され得る。好ましい用量のプロトコールは、顕著な望ましくない副作用を避ける最大の用量または用量頻度を含むものである。週単位の全用量は、普通には少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より普通には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、最も普通には少なくとも０．５μｇ／ｋｇ、一般的には少なくとも１μｇ／ｋｇ、より一般的には少なくとも１０μｇ／ｋｇ、最も一般的には少なくとも１００μｇ／ｋｇ、好ましくは少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ、最適には少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、より最適には少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、および最も最適には少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである（例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照のこと）。小分子治療薬（例えば、ぺプチド模倣物、天然産物、もしくは有機化学物質）の所望の用量は、モル／ｋｇの基準において、抗体またはポリペプチドのためのものとほぼ同じである。
【００６４】
特定の患者に対する有効量は、処置される病状、患者の総合的な健康状態、投与の方法経路および用量ならびに副作用の重症度などの要因に依存して変動し得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄら（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照のこと）。
【００６５】
一般的な獣医学の、実験用の、または研究の被験体としては、サル、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ウマ、およびヒトが挙げられる。
【００６６】
適切な用量の決定は、臨床家によって、例えば、処置に影響することが当該分野で公知であるもしくは疑われているパラメーターまたは要因、あるいは処置に影響することが予測されているパラメーターまたは要因を用いて、行われる。通常、用量は、最適な用量よりやや少ない量で始め、そして、その後は、あらゆる害のある（ｎｅｇａｔｉｖｅ）副作用と比較して、所望のまたは最適の効果が達成されるまで、わずかな増加量ずつ増大させられる。重要な診断上の測定としては、例えば炎症の、症状の測定、または産生される炎症性サイトカインのレベルの測定が挙げられる。好ましくは、使用される生物製剤は、処置に対し標的とされる動物と同じ種に由来し、それによって、試薬への体液性の応答を最小にする。
【００６７】
第二の治療剤（例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法の薬剤、抗生物質、もしくは放射線）を用いる共投与または処置のための方法は、当該分野で周知である（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＰｏｏｌｅおよびＰｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；ＣｈａｂｎｅｒおよびＬｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡを参照のこと）。治療薬の有効量は、一般には少なくとも１０％；普通には少なくとも２０％；好ましくは少なくとも約３０％；より好ましくは少なくとも４０％、および最も好ましくは少なくとも５０％、症状を減らす。
【００６８】
（Ｅ．キットおよび診断の試薬）
本発明は、診断のキットにおけるＦＤＦ０３タンパク質、その断片、核酸、およびその断片を提供する。結合組成物（ＦＤＦ０３の検出のための抗体または抗体断片、ならびにそれらの代謝産物および分解産物を含む）もまた提供される。一般に、キットは、ＦＤＦ０３ポリぺプチド、もしくはその抗原性断片のいずれか、それらへの結合組成物、または核酸（例えば、核酸のプローブもしくはプライマー）を含む区画を有する。核酸のプローブもしくはプライマーは、ＦＤＦ０３の活性化または阻害形態のいずれかをコードしている核酸に、ストリンジェント条件下で特異的にハイブリダイズする。
【００６９】
キットは、例えば、試薬および区画、試薬および使用のための指示書、または区画を伴なう試薬および使用のための指示書を含み得る。試薬は、ＦＤＦ０３タンパク質もしくはそれの抗原性の断片、結合組成物、または核酸を含み得る。例えば、生物学的なサンプルからもしくは化学物質のライブラリーから得られる、試験化合物の結合を決定するためのキットは、対照化合物、標識された化合物、および結合され標識された化合物から遊離の標識された化合物を分離するための方法を含み得る。
【００７０】
診断上の分析は、生きている細胞、細胞抽出物、細胞溶解産物、固定された細胞、細胞培養物、体液、または法医学のサンプルなどの生物学的な物質で用いられ得る。診断またはキットの目的のために有用である結合体化抗体としては、色素、同位体、酵素、および金属と連結された抗体が挙げられる（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１６８：８８３−８８９を参照のこと）。放射性同位元素標識免疫測定法（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、およびラボオンチップ（ｌａｂ  ｏｎ  ａ  ｃｈｉｐ）（米国特許第６，１７６，９６２号および第６，５１７，２３４号）などの、種々の分析のフォーマットが存在する。
【００７１】
本発明は、例えば、増殖性の病状、がん、腫瘍、および前がん障害（例えば、形成異常）の診断のための診断キットにおける、ＦＤＦ０３受容体のポリペプチドおよび核酸、これらの断片を提供する。
【００７２】
ＦＤＦ０３受容体ならびにそれの代謝産物および分解産物の検出のための、結合組成物（抗体または抗体断片を含む）もまた提供される。一般に、キットは、ＦＤＦ０３阻害受容体ポリぺプチドもしくはＦＤＦ０３活性化受容体ポリぺプチドのいずれか、またはそれらの抗原性の断片、それに対する結合組成物、あるいは核酸（核酸プローブ、プライマー、または分子ビーコンなど）を含む区画を有する（例えば、Ｒａｊｅｎｄｒａｎら（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１：５７００−５７１３；Ｃｏｃｋｅｒｉｌｌ（２００３）Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．１２７：１１１２−１１２０；Ｚａｍｍａｔｔｅｏら（２００２）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．８：８５−１０１；Ｋｌｅｉｎ（２００２）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８：２５７−２６０を参照のこと）。
【００７３】
診断の方法は、被験体（例えば、試験被験体）からのサンプルを、ＦＤＦ０３阻害受容体と特異的に結合する、結合組成物と、または阻害受容体もしくは活性化受容体の両方と結合する、二重特異的な結合組成物と接触させることを含み得る。上記方法は、対照被験体、正常な被験体からのサンプル、または試験被験体からの正常な組織もしくは流体と、結合組成物を接触させることをさらに含み得る。さらに、上記方法は、試験被験体への組成物の特異的な結合と、正常な被験体、対照被験体、または試験被験体からの正常な組織もしくは流体への組成物の特異的な結合とを比較することを加えて含み得る。試験サンプルもしくは試験被験体の発現または活性は、対照サンプルもしくは対照被験体からの発現または活性と比較され得る。対照サンプルは、例えば、免疫障害に罹患した患者における冒されていないまたは炎症を起こしていない組織のサンプルを含み得る。対照被験体もしくは対照サンプルからの発現または活性は、例えば、対照被験体の統計的に適切な群から得られる、前もって算定される値として提供され得る。
【００７４】
本発明の一般的な範囲は、以下の実施例の参照によって、最もよく理解される。以下の実施例は、本発明を具体的な実施形態に限定するとは意図されない。
【００７５】
本明細書における全ての引用は、あたかも各個々の出版物または特許出願が参照によって援用されるように、具体的にかつ個々に示される場合と同程度の範囲まで、参照によって本明細書に援用される。
【００７６】
本発明の多数の変更および変化は、当業者に明白であるように、その精神および範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書に記載される具体的な実施形態は、単に例として示され、そして本発明は、等価物の完全な範囲（添付の特許請求の範囲が権利を有する）とともに、そのような特許請求の範囲の用語によって限定され、そして、本発明は、例として本明細書に示されている具体的な実施形態によって制限されることはない。
【実施例】
【００７７】
（実施例）
（Ｉ．一般的な方法）
分子生物学における標準的方法は、記載されている（Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。標準的方法はまたＡｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹに載っており、これは、細菌の細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳動物の細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質の発現（Ｖｏｌ．３）ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【００７８】
免疫沈降、クロマトグラフィ、電気泳動、遠心分離、および結晶化を含む、タンパク質精製のための方法は記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学的分析、化学的修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の産生、タンパク質の糖化は、記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら  （２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照のこと）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の産生、精製、ならびに断片化は記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，上記）。リガンド／受容体の相互作用を特徴付けるための標準的技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【００７９】
フローサイトメトリーのための方法（蛍光細胞分析分離（ＦＡＣＳ）を含む）が、利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照のこと）。例えば、診断試薬としての使用のための、核酸（核酸プライマーおよびプローブを含む）、ポリペプチドならびに抗体の修飾に適している蛍光試薬は入手できる（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【００８０】
免疫機構の組織学の標準的な方法は、記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（ｅｄ．）（１９８６）Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。
【００８１】
がんの処置および診断のための方法は、記載されている（例えば、Ａｌｉｓｏｎ（ｅｄ．）（２００１）Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｇｒｏｖｅ’ｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；Ｏｌｄｈａｍ（ｅｄ．）（１９９８）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，３ｒｄ．  ｅｄ．，Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌ．，Ｈｉｎｇｈａｍ，ＭＡ；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（ｅｄｓ．）（２００１）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｅｌａｎｏｍａ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｄｕｎｉｔｚ，Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ；Ｄｅｖｉｔａら（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｈｏｌｌａｎｄら（ｅｄｓ．）（２０００）Ｈｏｌｌａｎｄ−ＦｒｅｉＣａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＢＣ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；ＧａｒｒｅｔｔおよびＳｅｌｌ（ｅｄｓ．）（１９９５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｒｋｅｒｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ；ＭａｃＫｉｅ（１９９６）Ｓｋｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｏｓｂｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ；Ｍｏｅｒｔｅｌ（１９９４）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３０：１１３６−１１４２；Ｅｎｇｌｅｍａｎ（２００３）Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０（３  Ｓｕｐｐｌ．８）：２３−２９；Ｍｏｈｒら（２００３）Ｏｎｋｏｌｏｇｉｅ２６：２２７−２３３を参照のこと）。
【００８２】
例えば、抗原性断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能ドメイン、糖化部位および配列のアライメントを決定するためのソフトウェアパッケージならびにデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照のこと）。
【００８３】
（ＩＩ．ＦＤＦ０３受容体抗体の生成）
ＦＤＦ０３活性化受容体−Ｉｇ融合タンパク質を構築した。これはヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合されたマウスＦＤＦ０３活性化受容体の細胞外のドメインからなった。上記細胞外残基（アミノ酸２９−１９２に対応する、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｑ９ＵＫＪ０を参照のこと）を、プラスミドＬＬ１０９１を産生するため、修飾されたｐＣＤＭ８．Ｉｇ発現プラスミド（Ｅ．Ｅ  Ｂａｔｅｓら（１９９８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５：５１３）のＸｈｏ１部位にサブクローン化した。ＬＬ１０９１を、可溶性ＦＤＦ０３活性化受容体−Ｉｇ融合タンパク質を産生するために２９３Ｔ細胞中で一時的に発現させた。Ｌｅｗｉｓラットを、融合タンパク質を用いて免疫した。ハイブリドーマ融合物を、免疫したＦＤＦ０３活性化受容体−Ｉｇ融合タンパク質（そして、陰性の対照として、無関係のヒトＩｇ融合タンパク質）に対する、ＥＬＩＳＡによって選別した。
【００８４】
３２種の、抗体を産生しているハイブリドーマを選択し、そして抗体をマウスマスト細胞脱顆粒分析に基づいてさらに選別した。抗ＦＤＦ０３  ｍＡｂは、活性化ＦＤＦ０３がトランスフェクトされたマスト細胞株ＤＴ８６５の脱顆粒を誘導した。抗ＦＤＦ０３抗体の滴定を、９６ウェルの平らな底のプレート内で５０ｕｌ分析培地内（ＲＰＭＩ，１％ＢＳＡ，２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ）で行った。マウスＦＤＦ０３活性化受容体を発現しているマウスマスト細胞（ＤＴ８６５）を遠心沈殿（ｓｐｉｎ  ｄｏｗｎ）し、そして２×１０６／ｍｌに再懸濁し、１００ｕｌ／ウェルを抗体滴定に添加した。細胞を３７ｏ、５％ＣＯ２で１時間培養した。刺激期の終わりに、２０ｕｌを各ウェルから除去し、そして６０ｕｌの１．３ｍｇ／ｍｌ  Ｂ−ヘキソサミニダーゼ基質（４−ニトロフェニルＮ−アセチル−ｂ−Ｄ−グルコサミド，Ｓｉｇｍａ  Ｎ９３７６）に移した。上清／基質反応を３．５時間、３７℃で進行させた。反応を０．２Ｍグリシン、ｐＨ１０．７の添加によって停止させ、そしてＯＤ４０５−５７０を脱顆粒の程度を評価するために測定した。
【００８５】
ＦＤＦ０３阻害受容体−Ｉｇ融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合されたマウスＦＤＦ０３阻害受容体の細胞外ドメインからなった。上記細胞外残基（アミノ酸２９−２００に対応する；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＰ＿０３８４６７を参照のこと）を、プラスミドＬＬ１０９０を産生するため、修飾されたｐＣＤＭ８．Ｉｇ発現プラスミド（Ｅ．Ｅ  Ｂａｔｅｓら、上記）のＸｈｏ１部位にサブクローン化した。ＬＬ１０９０を、可溶性ＦＤＦ０３阻害受容体−Ｉｇを産生するために２９３Ｔ細胞中で一時的に発現させた。Ｌｅｗｉｓラットを、三個のＫＬＨが結合されたぺプチド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、およびマウスＦＤＦ０３阻害受容体−Ｉｇタンパク質を用いて免疫した。融合物を、免疫した融合タンパク質（そして、陰性の対照として、無関係のヒトＩｇ融合タンパク質）に対する、ＥＬＩＳＡによって選別した。
【００８６】
抗マウスＦＤＦ０３阻害受容体抗体の滴定を、９６ウェルの平らな底のプレート内で５０ｕｌ分析培地内（ＲＰＭＩ，１％ＢＳＡ，２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ）で行った。マウスＦＤＦ０３阻害受容体を発現しているマウスマスト細胞（ＤＴ８６６）を遠心沈殿し、そして２×１０６／ｍｌに再懸濁し、１００ｕｌ／ウェルを抗体滴定に添加した。最終濃度が１ｕｇ／ｍｌになるように、刺激する抗ＣＤ２００Ｒ抗体、ＤＸ８７を、その後５０ｕｌ／ウェルで添加した。細胞を３７ｏ、５％ＣＯ２で３０分間培養した。ウェルを２回洗浄した。ヤギの抗マウスＩｇを架橋試薬として１０ｕｇ／ｍｌで添加した。細胞を３７ｏ、５％ＣＯ２で１時間培養した。刺激期の終わりに、２０ｕｌを各ウェルから除去し、そして６０ｕｌの１．３ｍｇ／ｍｌ  β−ヘキソサミニダーゼ基質（４−ニトロフェニルＮ−アセチル−ｂ−Ｄ−グルコサミド，Ｓｉｇｍａ  Ｎ９３７６）に移した。上清／基質反応を３．５時間、３７℃で進行させた。反応を０．２Ｍグリシン、ｐＨ１０．７の添加によって停止させ、そしてＯＤ４０５−５７０を測定し、ＣＤ２００Ｒが誘導する脱顆粒の阻害の程度を評価した。
【００８７】
（ＩＩＩ．４Ｔ１腫瘍モデルにおけるＦＤＦ０３（ＤＸ１７３）処置）
ＤＸ１７３抗体は、活性化および阻害の両方のマウスＦＤＦ０３受容体を認識する。ラットの抗ヒトＩＬ−４  ｍＡｂ（２５Ｄ２）を対照として用いた。平板培養された４Ｔ１腫瘍細胞をトリプシン処理し（ＴｒｙｐＬＥ）そしてＦＢＳを除去するためにＰＢＳ（４５ｍｌ）中で２回洗浄した。細胞をその後、１．０×１０６細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳ中に再懸濁し、そして氷上に置いた。マウスに２００μＬ（２．０×１０５  細胞）を皮下に注射した。注射を膝から１．５ＣＭ尾側の左側腹部および膝から約０．５ＣＭ腹側の左側腹部に行った。
【００８８】
腫瘍移植後７日目に、動物を、表１において記載しているように、腫瘍の大きさの視覚的評価に基づいて３群に無作為に割り当てた（一群当たりｎ＝８）。腫瘍移植後７日目に、動物はまた、ＰＢＳ（緩衝液の対照）、１ｍｇのＩｇＧ１アイソタイプｍＡｂ（ＰＡＢ５５７）（Ａｂ対照）、または１ｍｇの抗ＦＤＦ０３二重特異的ｍＡｂ（ＤＸ１７３）のいずれかの皮下注射（２５０μＬ容量にて）を受けた。動物を、３週間にわたって、このレジメンを用いて週当たり３回処置した。
【００８９】
【表１】
2015214569.tif 000003
腫瘍の大きさを、ノギスを用いて、三種の寸法（幅および長さおよび高さ）において測定し、そして腫瘍体積を、以下の式を用いて計算した：４／３π（ｌ／２）（ｗ／２）（ｈ／２）式中ｌ、ｗ、およびｈは、長さ、幅、および高さをそれぞれ表す。腫瘍を、腫瘍増殖に対する処置の効果を評価するために、定期的に測定した。統計分析を、ｔ検定を用いて行った。最後の２回の測定（２５および２８日目）は、ＰＢＳおよびアイソタイプ処置のそれぞれのための６匹の動物ならびにＤＸ１７３処置のための５匹の動物を含んだ（動物の残りを骨髄性細胞分析のために用いた）。肺転移を測定するために、肺組織を、１０％の緩衝化されたホルマリン中で固定した。肺表面上の肺の転移性の病変の数を解剖顕微鏡下で定量化した。
【００９０】
図１および２は、二重特異的ＤＸ１７３抗体が、統計的に有意な様式において、腫瘍増殖を阻害または低減できたことを示す。図３は、ＤＸ１７３が、４Ｔ１腫瘍によって引き起こされる肺転移を低減することができたことを示す。
【００９１】
（ＩＶ．ＣＴ２６腫瘍モデルにおけるＦＤＦ０３（ＤＸ２７６およびＤＸ１７３）処置）  ＤＸ２７６  Ａｂは、阻害ＦＤＦ０３を認識し、ならびにＤＸ１７３  Ａｂは、活性化および阻害の両方のＦＤＦ０３を認識する。平板培養されたＣＴ２６腫瘍細胞を、トリプシン処理し（ＴｒｙｐＬＥ）そしてＦＢＳを除去するためにＰＢＳ（４５ｍｌ）中で２回洗浄した。細胞をその後、１．０×１０６細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳ中に再懸濁し、そして氷上に置いた。マウスに２００μＬ（２．０×１０５細胞）を皮下に注射した。注射を膝から１．５ＣＭ尾側の左側腹部および膝から約０．５ＣＭ腹側の左側腹部に行った。腫瘍移植後７日目に、動物を、表２において記載しているように、腫瘍の大きさの視覚的評価に基づいて４群に無作為に割り当てた（一群当たりｎ＝６）。腫瘍移植後８日目に、動物はまた、ＰＢＳ（緩衝液の対照）、１ｍｇのＩｇＧ１アイソタイプｍＡｂ（ＰＡＢ５５７）（Ａｂ対照）、１ｍｇの抗ＦＤＦ０３二重特異的ｍＡｂ（ＤＸ１７３）、または１ｍｇの抗ＦＤＦ０３阻害ｍＡｂ（ＤＸ２７６）のいずれかの皮下注射（２５０μＬ容量にて）を受けた。動物を、３週間にわたって、このレジメンを用いて週当たり３回処置した（全９回の処置）。
【００９２】
【表２】
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腫瘍の大きさを、ノギスを用いて三種の寸法（幅および長さおよび高さ）において測定し、そして腫瘍体積を、以下の式を用いて計算した：４／３π（ｌ／２）（ｗ／２）（ｈ／２）式中ｌ、ｗ、およびｈは、長さ、幅、および高さをそれぞれ表す。腫瘍を、腫瘍増殖に対する処置の効果を評価するために、定期的に測定した。
【００９３】
図４および５は、ＦＤＦ０３（ＤＸ２７６）の阻害形態に特異的なアゴニストｍＡｂが、腫瘍増殖および腫瘍形成の最も高いレベルを有したことを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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