(57)【要約】【課題】炭水化物に対する細胞性免疫を活性化し得る微生物またはその部分の提供。【解決手段】本発明は、腫瘍および胃腸障害の予防および処置の分野に関する。より詳細には、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性癌腫の予防および処置に関する。本発明は、ｃｏｒｅｏｔｉｃｓおよびそれを調製するための方法ならびにそれを用いたｃｏｒｅ−１陽性障害の予防および処置の方法に関する。本発明は、Ｃｏｒｅ−１、ならびにＣｏｒｅ−１を有する腫瘍細胞およびＣｏｒｅ−１を有する分子に対して免疫応答を誘導するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物およびその断片を含んでいる栄養補助食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）および薬学的組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物および／または少なくとも１つのそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物を含んでいる、栄養補助食品および／または薬学的組成物からなる群から選択される製剤であって、ここで、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／または該そのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識され、そして、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物はＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の微生物である、製剤。
【請求項２】
請求項１に記載の製剤であって、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／または前記そのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される、製剤。
【請求項３】
前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体であるＮｅｍｏｄ−ＴＦ１およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって認識される、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
前記少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体による前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物の認識は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理の後に結合の低下を示す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の製剤であって、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）およびＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）からなる群から選択され、ここで、該群から選択される該微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される、製剤。
【請求項６】
請求項１から５のうちの少なくとも１項に記載の製剤であって、前記微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、製剤。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかに記載の製剤であって、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／もしくは＃５ならびに／またはその繰り返し単位を含む群から選択される炭水化物構造のうちの少なくとも１つを含む、製剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の製剤であって、前記微生物は、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）またはＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）である、製剤。
【請求項９】
請求項１から８のいずれかに記載の製剤であって、該製剤は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答、あるいは、Ｔｈ１細胞のＣＤ４陽性Ｔ細胞および／またはＣＤ８陽性細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を包含する細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強する、製剤。
【請求項１０】
前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が、化学的処理によって得られ、前記Ｃｏｒｅ−１構造が露出している、請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触するときに該抗体によって認識され、そして結合される、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物であって、ここで、該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１および
・ＨＨ８
からなる群から選択され、そして、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物はＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の微生物である、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
【請求項１２】
２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体であるＮｅｍｏｄ−ＴＦ１およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって認識され、そして結合される、請求項１１に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物。
【請求項１３】
前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体による前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の認識は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理の後に結合の低下を示す、請求項１１または１２に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物。
【請求項１４】
請求項１１〜１３のいずれかに記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、該微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、かつ、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
【請求項１５】
請求項１１から１４のうちの１項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／もしくは＃５ならびに／またはその繰り返し単位を含む群から選択される炭水化物構造のうちの少なくとも１つを含む、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
【請求項１６】
請求項１１〜１５のいずれか一項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、前記微生物は、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）またはＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）である、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
【請求項１７】
腫瘍を治療するためかまたは予防するための薬物および／または栄養補助食品を製造するための、請求項１１から１６のうちの少なくとも１項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物ならびに／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物の使用。
【請求項１８】
Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強するための、請求項１から１０のうちの少なくとも１項に記載の製剤、あるいは、請求項１１から１６のいずれかにおいて定義されるＣｏｒｅ−１陽性微生物、および／または該Ｃｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物を含む組成物。
【請求項１９】
少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかもしくは増強するため、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってＣｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御をもたらすため、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患、腫瘍もしくは転移の発生を減少させるためかもしくは予防するため、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患もしくは腫瘍の拡大もしくは転移を減少させるかもしくは予防するため、および／または、免疫系を強化するため、および／または免疫応答を改善するための、請求項１８に記載の製剤または組成物。
【請求項２０】
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を微生物の混合物から単離するための方法であって、
（ａ）健常なヒトおよび／もしくは患者、動物、土壌、食物ならびに／または植物から得られた微生物、ならびに／または、健常な個体および／もしくは患者の、ヒト消化管、ヒト大便、ヒト血液、ヒト組織および／もしくはヒト体液から得られた微生物からなる群から選択される微生物の混合物とＣｏｒｅ−１特異的抗体とを接触させる工程、および
（ｂ）該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される微生物を単離する工程
を包含する、方法。
【請求項２１】
前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体が、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項２０または２１に記載の方法であって、
（ａ）便サンプルから、全細菌を含んでいる微生物の混合物を単離する工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を該微生物の混合物と接触させる工程
（ｃ）好気性または嫌気性の条件下において該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体に結合する微生物を、磁気粒子分離を用いて単離する工程
（ｄ）Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ１によって結合される微生物を同定する工程であって、該結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、工程、および
（ｅ）それぞれ同定された微生物を、少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する能力についてインビトロで試験する工程
を包含する、方法。
【請求項２３】
請求項１から１６のいずれかに記載の、製剤あるいはＣｏｒｅ−１陽性微生物またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物がヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導するかまたは増強する能力を試験するための液性免疫応答試験であって、
ａ）該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該そのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片を投与されたヒトまたは動物から得たサンプルから、血清、血漿もしくは便由来の抗体を単離する工程；および
ｂ）
（ｉ）
ａ．アシアログリコホリンおよびグリコホリン、または
ｂ．アシアログリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリン、または
ｃ．アシアログリコホリンおよびグリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリン
を含む糖タンパク質に対するＥＬＩＳＡであって、
ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、アシアログリコホリンに対する該抗体の結合のほうが、グリコホリンおよび／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対する結合よりも有意に強く、そしてアシアログリコホリンに対する結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、ＥＬＩＳＡ；および／または
（ｉｉ）Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、および／または過ヨウ素酸塩で処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡを含む、ポリアクリルアミドに結合した炭水化物構造（ＰＡＡ結合体）に対するＥＬＩＳＡであって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する該抗体の結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、ＥＬＩＳＡ；および／または
（ｉｉｉ）ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９を含む細胞に対する結合についてのフローサイトメトリー試験であって、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性液性免疫応答は、該抗体のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうがＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そしてＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、フローサイトメトリー試験；および／または
（ｉｖ）ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９を含む細胞、およびＮＭ−ｗｔ、ＮＭ−Ｈ９、過ヨウ素酸塩で処理されたＮＭ−Ｄ４または過ヨウ素酸塩で処理されたＮＭ−Ｆ９に対する結合についての免疫蛍光試験であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、特定量の該抗体のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、ＮＭ−ｗｔもしくはＮＭ−Ｈ９または過ヨウ素酸塩で処理されたＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そしてＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、免疫蛍光試験
において、該抗体の結合を試験する工程；および／または
ｃ）該抗体の活性を試験する工程であって、
（ｉ）ユウロピウムまたはクロム−５１などの適当量のマーカーで標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体と、適当量の補体とともに、適当な時間にわたってインキュベートし、そして、該インキュベート後にユウロピウムまたはクロム−５１などの該マーカーの放出を測定することによって該細胞の溶解を判定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、または、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、補体なしの溶解、および／または該抗体なしの溶解、および／またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１に結合しないかまたはそれほど結合しない抗体を用いた溶解、および／または該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された抗体を用いたＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解よりも、高い溶解を示す、工程；および／または
（ｉｉ）ユウロピウムまたはクロム−５１などの適当量のマーカーで標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の該抗体と、適当量の免疫エフェクター細胞または末梢血単核球とともに、適当な時間にわたってインキュベートし、そして、該インキュベート後にユウロピウムまたはクロム−５１などの該マーカーの放出を測定することによって該細胞の溶解を判定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、またはＣｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、該抗体なしの溶解、および／またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１に結合しないかまたはそれほど結合しない抗体を用いた溶解、および／または該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された抗体を用いたＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解よりも高い溶解を示す、工程
を包含する、試験。
【請求項２４】
Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験であって、
ａ．適当量の未熟樹状細胞に、請求項１から１６のいずれかに記載の適当量の前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、そのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片または前記製剤を負荷する工程；
ｂ．成熟させるために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
ｃ．適当量の該負荷された樹状細胞を、樹状細胞によって活性化され得るかまたは抑制され得る、少なくとも１つの免疫細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物、または末梢血単核球細胞を含む適当量の免疫細胞と接触させる工程；
ｄ．活性化または抑制のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
ｅ．再刺激のために、適当量の、Ｃｏｒｅ−１を有する少なくとも１つの抗原または適当なコントロール抗原を負荷された、適当量の樹状細胞を加える工程；
ｆ．再刺激のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
ｇ．分泌されたＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの量を測定する工程であって、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する抗原を負荷された該樹状細胞で再刺激された該免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、負荷されていない対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／または、Ｃｏｒｅ−１を有する抗原を負荷された該樹状細胞で再刺激された該免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、Ｃｏｒｅ−１を有していない抗原を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示す、工程
を包含する、細胞性免疫応答試験。
【請求項２５】
請求項１から１０のいずれかに記載の製剤の成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に対する結合について微生物を試験する工程、および
（ｂ）ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答の誘導をインビトロで試験する工程
を包含し、それによって、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触するときに該抗体によって結合される微生物が同定され、該微生物が、請求項２３または２４に記載のＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの液性免疫応答試験または１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性であることによって特徴付けられるとき、少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する、
方法。
【請求項２６】
Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞を調製するためのインビトロの方法であって、適当量の樹状細胞を、適当量の請求項１１〜１６のいずれか１項において定義されたような、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片と接触させて、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの機能的樹状細胞を調製する工程を包含する、
方法。
【請求項２７】
Ｃｏｒｅ−１に対する、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株を調製するインビトロの方法であって、
・請求項２６に記載の、Ｃｏｒｅ−１に対する適当量の機能的樹状細胞を、適当量のＴ細胞と接触させる工程；および
・該Ｔ細胞を、請求項２６に記載の前記負荷された機能的樹状細胞とともに培養して、Ｃｏｒｅ−１に対して該Ｔ細胞を活性化するかまたはプライミングする工程
を包含する、方法。
【請求項２８】
Ｃｏｒｅ−１陽性の細胞および／または疾患に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導する、請求項２６または２７に記載の方法によって調製される、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞、Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞、あるいは、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを含む細胞組成物。
【請求項２９】
腫瘍を予防するためかまたは治療するための薬物および／または栄養補助食品を製造するための、請求項２８に記載の機能的樹状細胞、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株の使用。
【請求項３０】
Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するためかもしくは増強するため、および／またはＣｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞または活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株またはＴ細胞クローンを調製するための、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその断片を含む組成物。
【請求項３１】
請求項１１から１６のいずれかに記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片を含む、腫瘍の治療または予防のための組成物。
【請求項３２】
請求項１から１０のいずれかに記載の製剤、または請求項２９に記載の機能的樹状細胞、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株を含む、腫瘍の治療または予防のための組成物。
【請求項３３】
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を含む栄養補助食品または薬学的組成物を製造するための方法であって、
（ｉ）微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を単離する工程であって、
（ａ）健常なヒトおよび／もしくは患者、動物、土壌、食物および／もしくは植物から得られた微生物、ならびに／または、健常な個体および／もしくは患者の、ヒト消化管、ヒト大便、ヒト血液、ヒト組織および／もしくはヒト体液から得られた微生物からなる群より選択される微生物の混合物と、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体とを接触させる工程と、
（ｂ）該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される微生物を単離する工程と
を包含する、工程；および
（ｉｉ）該単離した微生物を、薬学的に許容可能なキャリアに添加し、栄養補助食品または薬学的組成物を調合する工程
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、胃腸の障害および癌の予防および処置の分野に関する。より詳細には、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、Ｃｏｒｅ−１抗原を有する癌腫の予防および処置に関する。本発明は、Ｃｏｒｅ−１、ならびにＣｏｒｅ−１を有する腫瘍細胞およびＣｏｒｅ−１を有する分子に対して免疫応答を誘導するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物およびその断片を含んでいる栄養補助食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）および薬学的組成物を提供する。Ｃｏｒｅ−１に対して特異的な免疫応答を誘導するかまたは増強することによって、これらの組成物は、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御を提供する。さらに、本発明は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導する栄養補助食品または薬学的組成物の有効な一部分として適切であるＣｏｒｅ−１陽性微生物の同定、選択および単離のための方法を提供する。本発明はまた、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を試験するための特定の液性および細胞性の免疫応答試験システムも提供し、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体および抗体組成物ならびに抗Ｃｏｒｅ−１樹状細胞、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株およびＴ細胞クローンを調製するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
異常なグリコシル化は、癌細胞の代表的な特徴である。それゆえ、糖タンパク質上および糖脂質上の炭水化物腫瘍抗原は、能動免疫療法および受動免疫療法に対する標的である。これらの非常に大量に存在する抗原は、腫瘍細胞の複雑なグリコシル化装置における変化が原因で、新規に発現されるか、またはアップレギュレートされる。脂質またはタンパク質に結合した様々な炭水化物腫瘍抗原が報告されており、例えば、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、フコシル化されたＧＭ１、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ、Ｌｅｙおよびムチンコア構造Ｔｎ、シアリル−ＴｎおよびＴｈｏｍｓｏｎ  Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原である。
【０００３】
Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原（ＴＦ）は、一連の報告において腫瘍抗原として報告されている、公知の炭水化物構造である。ＴＦは、２つの型、ＴＦαおよびＴＦβとして存在し、ＴＦは、タンパク質または糖脂質に結合され得る。
【０００４】
Ｃｏｒｅ−１は、二糖Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃであり、これは、癌腫細胞内のタンパク質のヒドロキシアミノ酸のセリンまたはトレオニンにαアノマー配置でＯ−グリコシド的に結合する。Ｃｏｒｅ−１は、Ｔｈｏｍｓｅｎ−ＦｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈのＴＦα構造に相当し、腫瘍上のタンパク質にのみ結合される。よって、Ｃｏｒｅ−１およびＴｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈという用語は、必ずしも同一の構造のことを指すわけではない。
【０００５】
Ｃｏｒｅ−１抗原は、健常組織および良性の罹患組織では他の炭水化物成分によって覆われているが、大部分の癌腫および一部の非上皮悪性腫瘍では覆われていない。ゆえに、ｃｏｒｅ−１抗原は、特異的な全癌（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ）抗原である（例として図２０を参照のこと）。
【０００６】
Ｃｏｒｅ−１は、重要な腫瘍抗原である。Ｃｏｒｅ−１は、６０％を超える原発性結腸癌、および結腸癌からの９０％を超える肝臓転移、ならびに他の主要な徴候の大部分の癌腫（乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌および他の消化器癌（例えば、胃癌および膵臓癌）を含む）上において発現する。Ｃｏｒｅ−１は、結腸癌を有する患者に対する独立した予後マーカーであり、Ｃｏｒｅ−１発現の強度が高まるのに従って、死亡率は上昇し、中間生存時間（ｍｅｄｉｕｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）は短くなる。肝臓転移の発生は、Ｃｏｒｅ−１の発現と相関する。Ｃｏｒｅ−１陽性の原発癌を有する患者は、およそ６０％の症例において肝臓転移を発症するのに対し、Ｃｏｒｅ−１陰性腫瘍を有する肝臓転移に対するリスクは、著しく低い（２０％未満）。Ｃｏｒｅ−１は、肝臓への転移を媒介するのに加えて、内皮を介した転移にも関与し得る。
【０００７】
肝臓転移における、ひときわ高い全癌（ｐａｎ−ｃａｒｃｉｎｏｍｉｃ）特異性、予後との関連性および直接的な関与は、Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ、特にＣｏｒｅ−１を、癌の免疫療法に対する最も重要な標的にする。
【０００８】
Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈに基づいて治療アプローチを提供するという試みがなされた。例えば、Ｓｈｉｇｏｅｋａら（１９９９）は、マウスモデルにおいてノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｄａｓｅ）で処置した結腸の２６個の細胞からの肝臓転移を抗Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ特異的モノクローナル抗体によって阻害したことを報告している。しかしながら、高度に特異的な抗ＴＦ抗体の作製が困難であること、および単一結合ドメインの固有の親和性が比較的低いＩｇＭアイソタイプの性質が原因で、ＴＦ特異的抗体は、今までのところ、さらに開発されなかった。さらに、いくつかの抗ＴＦ−Ａｇ抗体は、腫瘍細胞の望ましくない増殖を引き起こすので、臨床的に有用ではない。また、ＷＯ２００６／０１２６２６では、抗ＴＦ抗原抗体の治療的な使用が報告されている。ＴＦ特異的Ａｂの結合は、腫瘍細胞の増殖を阻害すると示されている（Ｊｅｓｃｈｋｅら、２００６）。
【０００９】
さらに、Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈに基づいてワクチンを開発するという試みがなされた。それらのほとんどは、抗体応答の誘導に焦点を当てたものであった。例えば、ＬｉｖｉｎｇｓｔｏｎおよびＬｌｏｙｄ（２０００）は、非天然のＴＦ結合体を用いた（ここで、合成ＴＦは、ＫＬＨにランダムに結合されたものであった）。この結合体は、合成ＴＦに対して液性免疫応答をもたらしたが、天然リガンド上のＴＦに対しては液性免疫応答をもたらさなかった（Ａｄｌｕｒｉら、１９９５）。よって、上記ＴＦ結合体は、腫瘍構造上のＴＦを認識しないので、ＴＦ特異的ではなかった。
【００１０】
ＳｐｒｉｎｇｅｒおよびＤｅｓａｉは、Ｏ型およびＭＮ型の赤血球に由来する糖タンパク質から構成されるＴ／Ｔｎワクチンを用いたワクチン接種を用い、それによって、少量のＩｇＭしか産生されなかったが、乳癌患者の生存時間が改善された。しかしながら、ＩｇＭは、それほど成熟した免疫応答を示さず、また、ＴＦ−Ａｇに対する抗体に関する以前の多くの研究は、ＩｇＭ抗体に関するものであったので、より著明に高度なＴＦ特異的免疫応答（ｉｍｍｕｎｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）が必要とされ、好ましくは、ＩｇＧ応答が必要とされる。
【００１１】
おそらくＴＦ陽性である微生物を報告している報告は少ししか知られていない。例えば、Ｓｐｒｉｎｇｅｒら（非特許文献１，非特許文献２）は、ニワトリおよびヒトにおいて、ヒト赤血球上のＴＦも認識し得るポリクローナル抗体応答をもたらし得る好気性微生物（Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ８６）について報告している。Ｓｐｒｉｎｇｅｒは、免疫応答の特異性を大雑把に判定するために、シアリダーゼで処理されたＴ赤血球を用いた抗Ｔの吸着および血球凝集アッセイを用いた。しかしながら、ヒト赤血球をシアリダーゼで処理すると、それらのうちＴＦに限らないいくつかの炭水化物エピトープがデマスキングされる。それゆえ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒによって試験された応答は、交差反応性のせいで、ＴＦに対する特異性を示さない。それぞれの非特異的な微生物は、ＴＦに対して特異的にもたらされる強力な免疫応答を生じるのではなく、類似のＴＦ様構造に対して特異的にもたらされる免疫応答を生じ、ゆえに、体内の非腫瘍の組織または細胞に対してもたらされる強力な免疫反応を生じ得るので、その非特異性に起因して、ワクチンとして限定的な適合性しか有しない。
【００１２】
グリコシル化機構の複雑性および種の特異性に起因して、Ｃｏｒｅ−１に基づく免疫療法は、癌患者に対してまだ利用可能ではない。なおもより重要なことには、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の発症を予防し得る薬剤が、患者にとって利用可能でない。
【００１３】
従来の治療は、通常、腫瘍の診断後に開始するが、その時点では、腫瘍が十分に確立されており、処置するのが難しいことが多い。ゆえに、患者から腫瘍の大部分を取り除くために、重篤な副作用を伴う侵襲性の治療（化学療法、放射線治療、手術）が用いられる。疾患の残存が最小となるように、主に補助療法の設定において免疫療法的な（Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ）選択肢が適用される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、Ｂｒｉｔ．Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ，１９８１，４７，４５３−４６０
【非特許文献２】Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  １９７９，ｖｏｌ．１９，ｎｏ．３  ｐｐ．２３３−２４９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍および胃腸障害の処置または予防に対する手段ならびにそれぞれの手段を得るのに適したツールを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
発明の説明
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片、ならびにＣｏｒｅ−１を有する腫瘍細胞およびＣｏｒｅ−１を有する分子に対する免疫応答を誘導するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物およびその断片を含んでいる栄養補助食品および薬学的組成物を提供する。さらに、本発明は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導する栄養補助食品または薬学的組成物の有効な一部分として適したＣｏｒｅ−１陽性微生物の同定、選択および単離のための方法を提供する。本発明はまた、Ｃｏｒｅ−１免疫応答を試験するための、特定の液性免疫応答試験システムおよび細胞性免疫応答試験システムを提供する。本発明はまた、抗Ｃｏｒｅ−１抗体および抗体組成物ならびに抗Ｃｏｒｅ−１のＴ細胞株およびＴ細胞クローンおよびＣｏｒｅ−１を提示する機能的樹状細胞を調製するための方法を提供する。
【００１７】
従って、本発明は、ヒトにおける特定の抗Ｃｏｒｅ−１抗体を誘導するかまたは抗Ｃｏｒｅ−１抗体レベルを上昇させることによって、腫瘍、特にＣｏｒｅ−１陽性腫瘍に対する防御的な免疫応答を誘導するための手段を提供する。さらに、本発明は、炭水化物標的、特にＣｏｒｅ−１などの腫瘍特異的炭水化物標的に対する特定の細胞性免疫応答を誘導するための手段を提供する。本発明はまた、適当なＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するためおよび単離するための方法を提供する。本発明の別の利点は、製剤の性質に起因して、非常に低コストでその製剤の製造が可能であるという点である。さらに、本製剤は、大規模な発酵槽において迅速に製造され得る。
【００１８】
本発明の製剤によって誘導される抗Ｃｏｒｅ−１抗体は、ほとんどの（無認識の）症例において、原発性腫瘍の発生および転移の広がりを予防し得る免疫学的監視メカニズムとして働くが、しかしながら、それは、特定の免疫応答が、十分に高い場合に限られる。ゆえに、本発明の目的は、腫瘍に対する特定の免疫防御を構築するためか、またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍および／またはそれらの転移の発生を予防するためかもしくは発生率を減少させるために、好ましくは健常ドナーの腸管の細菌叢由来のＣｏｒｅ−１陽性微生物を食品添加物として用いることによって、好ましくは特定の細胞性応答と組み合わされる高度に特異的な抗Ｃｏｒｅ−１価を誘導する手段を提供することである。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物および／または少なくとも１つのそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物を含んでいる、栄養補助食品および／または薬学的組成物からなる群から選択される製剤であって、ここで、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／または該そのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される、製剤。
（項目２）
項目１に記載の製剤であって、上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／または上記そのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される、製剤。
（項目３）
項目１または２に記載の製剤であって、上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｏｃｅａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｈｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆｉｎｅｇｏｌｄｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、ＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）および／またはＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）からなる群から選択され、ここで、該群から選択される該微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される、製剤。
（項目４）
項目１から３のうちの１項に記載の製剤であって、上記Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、該Ｃｏｒｅ−１特異的微生物の投与時に、Ｃｏｒｅ−１に対して特異的な免疫をもたらし、その免疫は、以下のとおり判定され得る：
ａ）該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される、少なくとも１つ、好ましくは２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、そして／または
ｂ）該Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、項目２４に定義されるような少なくとも１つの液性免疫応答試験において陽性であることを特徴とし、そして／または
ｃ）該Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、項目２５に定義されるようなＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの細胞性免疫応答試験において陽性であることを特徴とする、
製剤。
（項目５）
項目１から４のうちの少なくとも１項に記載の製剤であって、上記微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、製剤。
（項目６）
上記項目のいずれかに記載の製剤であって、上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／もしくは＃５ならびに／またはその繰り返し単位を含む群から選択される炭水化物構造のうちの少なくとも１つを含む、製剤。
（項目７）
上記項目のいずれかに記載の製剤であって、上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓであり、該Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識され、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、製剤。
（項目８）
項目７に記載の製剤であって、上記Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）および／またはＡＧ６ホモログもしくはＭＵ１ホモログであり、ここで、該ホモログは、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓであり、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識されることを特徴とし、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、製剤。
（項目９）
ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強する、上記項目のいずれかに記載の製剤であって、好ましくは、細胞性免疫応答は、Ｔｈ１細胞のＣＤ４陽性Ｔ細胞および／またはＣＤ８陽性細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を包含する、製剤。
（項目１０）
上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が、化学的処理によって得られ、上記Ｃｏｒｅ−１構造が露出している、項目９に記載の製剤。
（項目１１）
少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触するときに該抗体によって認識され、そして結合される、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物であって、ここで、該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
（項目１２）
項目１１に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、上記Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、該Ｃｏｒｅ−１特異的微生物の投与時に、Ｃｏｒｅ−１に対して特異的な免疫をもたらし、その免疫は、以下のとおり判定され得る：
ａ）該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される、少なくとも１つ、好ましくは２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され；そして／または
ｂ）該Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、項目２４に定義されるような少なくとも１つの液性免疫応答試験において陽性であることを特徴とし；そして／または
ｃ）該Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、項目２５に定義されるようなＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの細胞性免疫応答試験において陽性であることを特徴とする、
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
（項目１３）
項目１１または１２に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、該微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、かつ、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
（項目１４）
項目１１から１３のうちの１項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／もしくは＃５ならびに／またはその繰り返し単位を含む群から選択される炭水化物構造のうちの少なくとも１つを含む、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
（項目１５）
項目１１から１４のうちの少なくとも１項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓであり、該Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識され、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
（項目１６）
項目１５に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物であって、上記Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）および／またはＡＧ６ホモログもしくはＭＵ１ホモログであり、ここで、該ホモログは、それがＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓであり、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識されることを特徴とし、ここで、該抗体の結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物。
（項目１７）
腫瘍を治療するためかまたは予防するための薬物および／または栄養補助食品を製造するための、項目１１から１６のうちの少なくとも１項に記載のＣｏｒｅ−１陽性微生物ならびに／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物の使用。
（項目１８）
Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強するための、項目１から１０のうちの少なくとも１項に記載の製剤、項目１１から１６のいずれかにおいて定義されるＣｏｒｅ−１陽性微生物、および／または該Ｃｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物の使用であって、該使用は、有効量の該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／または該そのＣｏｒｅ−１陽性断片もしくは溶解物をヒトまたは動物に投与することを包含する、使用。
（項目１９）
少なくとも１つのヒトまたは動物において投与されたときにＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかもしくは増強するため、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってＣｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御をもたらすため、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患、腫瘍もしくは転移の発生を減少させるためかもしくは予防するため、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患もしくは腫瘍の拡大もしくは転移を減少させるかもしくは予防するため、および／または、免疫系を強化するため、および／または免疫応答を改善するための、項目１８に記載の使用。
（項目２０）
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を微生物の混合物から単離するための方法であって、
（ａ）健常なヒトおよび／もしくは患者、動物、土壌、食物ならびに／または植物由来の微生物、ならびに／または、健常な個体および／もしくは患者の、ヒト消化管、ヒト大便、ヒト血液、ヒト組織および／もしくはヒト体液由来の微生物からなる群から選択される微生物の混合物とＣｏｒｅ−１特異的抗体とを接触させる工程、および
（ｂ）該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される微生物を単離する工程
を包含する、方法。
（項目２１）
上記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体が、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
項目２０または２１に記載の方法であって、
（ａ）便サンプルから、全細菌を含んでいる微生物の混合物を単離する工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を該微生物の混合物と接触させる工程
（ｃ）好気性または嫌気性の条件下において該Ｃｏｒｅ−１特異的抗体に結合する微生物を、磁気粒子分離を用いて単離する工程
（ｄ）Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ１によって結合される微生物を同定する工程であって、該結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す、工程、および
（ｅ）それぞれ同定された微生物を、少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する能力について試験する工程
を包含する、方法。
（項目２３）
上記項目のいずれかに記載の製剤の成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に対する結合について微生物を試験する工程、および
（ｂ）ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答の誘導を試験する工程
を包含し、それによって、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触するときに該抗体によって結合される微生物が同定され、該微生物が、項目２４または２５に記載のＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの液性免疫応答試験または１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性であることによって特徴付けられるとき、少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する、
方法。
（項目２４）
上記項目のいずれかに記載の、製剤あるいはＣｏｒｅ−１陽性微生物またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物がヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導するかまたは増強する能力を試験するための液性免疫応答試験であって、
ａ）該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該そのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片をヒトまたは動物に投与する工程；および
ｂ）抗体、血清中の抗体、または該血清、血漿もしくは便から得られる抗体を単離する工程；および
ｃ）
（ｉ）
ａ．アシアログリコホリンおよびグリコホリン、または
ｂ．アシアログリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリン、または
ｃ．アシアログリコホリンおよびグリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリン
を含む糖タンパク質に対するＥＬＩＳＡであって、
ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、アシアログリコホリンに対する１つまたは複数の該抗体の結合のほうが、グリコホリンおよび／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対する結合よりも有意に強く、そしてアシアログリコホリンに対する結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたは複数の抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、ＥＬＩＳＡ；および／または
（ｉｉ）Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、および好ましくは過ヨウ素酸塩で処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡを含む、ポリアクリルアミドに結合した炭水化物構造（ＰＡＡ結合体）に対するＥＬＩＳＡであって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する１つまたは複数の該抗体の結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたは複数の抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、ＥＬＩＳＡ；および／または
（ｉｉｉ）ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９を含む細胞に対する結合についてのフローサイトメトリー試験であって、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性液性免疫応答は、該抗体のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうがＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そしてＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたは複数の抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、フローサイトメトリー試験；および／または
（ｉｖ）ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９、およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９を含む細胞、好ましくは、過ヨウ素酸塩で処理されたＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合についての免疫蛍光試験であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、特定量の１つまたは複数の該抗体のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、ＮＭ−ｗｔもしくはＮＭ−Ｈ９または過ヨウ素酸塩で処理されたＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そしてＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたは複数の抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、免疫蛍光試験
において、該抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合を試験する工程；および／または
ｄ）該抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の活性を試験する工程であって、
（ｉ）ユウロピウムまたはクロム−５１などの適当量のマーカーで標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体、血清中の抗体、または該血清、血漿もしくは便から得られた抗体と、適当量の補体とともに、適当な時間にわたってインキュベートし、そして、該インキュベート後にユウロピウムまたはクロム−５１などの該マーカーの放出を測定することによって該細胞の溶解を判定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、または、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、補体なしの溶解、および／または該抗体なしの溶解、および／またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１に結合しないかまたはそれほど結合しない１つまたは複数の抗体を用いた溶解、および／または該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または該その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたは複数の抗体を用いたＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解よりも、高い溶解を示す、工程；および／または
（ｉｉ）ユウロピウムまたはクロム−５１などの適当量のマーカーで標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体、血清中の抗体、または該血清、血漿もしくは便から得られた抗体と、適当量の少なくとも１つの免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を含む細胞の混合物または末梢血単核球とともに、適当な時間にわたってインキュベートし、そして、該インキュベート後にユウロピウムまたはクロム−５１などの該マーカーの放出を測定することによって該細胞の溶解を判定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、またはＣｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、該抗体なしの溶解、および／またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１に結合しないかまたはそれほど結合しない１つまたは複数の抗体を用いた溶解、および／または該製剤、該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたは複数の抗体を用いたＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解よりも高い溶解を示す、工程
を包含する、試験。
（項目２５）
Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験であって、
ａ．少なくとも１つの樹状細胞または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物、を含む適当量の未熟樹状細胞に、上記項目のいずれかに記載の適当量の上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、そのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片または上記製剤を負荷する工程；
ｂ．成熟させるために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
ｃ．適当量の該負荷された樹状細胞を、樹状細胞によって活性化され得るかまたは抑制され得る、少なくとも１つの免疫細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物、または末梢血単核球細胞を含む適当量の免疫細胞と接触させる工程；
ｄ．活性化または阻害のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
ｅ．再刺激のために、適当量の、Ｃｏｒｅ−１を有する少なくとも１つの抗原または適当なコントロール抗原を負荷された、少なくとも１つの樹状細胞または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を含む適当量の樹状細胞を加える工程；
ｆ．再刺激のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
ｇ．分泌されたＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの量を測定する工程であって、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する抗原を負荷された該樹状細胞で再刺激された該免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、負荷されていない対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／または、Ｃｏｒｅ−１を有する抗原を負荷された該樹状細胞で再刺激された該免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、Ｃｏｒｅ−１を有していない抗原を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／または、アシアログリコホリンを負荷された該樹状細胞で再刺激された該免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、グリコホリンまたは過ヨウ素酸塩で処理されたアシアログリコホリンを負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／または、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９の溶解物もしくは断片を負荷された該樹状細胞で再刺激された該免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示す、工程
を包含する、細胞性免疫応答試験。
（項目２６）
Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞を調製するための方法であって、適当量の樹状細胞または樹状細胞の混合物または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、
・前述の項目のいずれかにおいて定義されたような、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片；
・Ｃｏｒｅ−１を有する分子、または
・Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片
からなる群から選択される適当量の少なくとも１つの化合物と接触させて、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの機能的樹状細胞を調製する工程を包含する、
方法。
（項目２７）
Ｃｏｒｅ−１に対する、１つまたは複数の活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株を調製する方法であって、
・項目２６に記載の、Ｃｏｒｅ−１に対する適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程；および
・該Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物を、項目２６に記載の上記負荷された機能的樹状細胞とともに培養して、Ｃｏｒｅ−１に対して１つまたは複数のＴ細胞を活性化するかまたはプライミングする工程
を包含する、方法。
（項目２８）
項目２７に記載の方法であって、
（ａ）上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された項目２６に記載のＣｏｒｅ−１に対する適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程；および
（ｂ）該Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物を、該負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって、適当な条件下において培養して、Ｃｏｒｅ−１に対して１つまたは複数のＴ細胞を活性化するかまたはプライミングする工程；および
（ｃ）再刺激のために、上記Ｃｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された項目２６に記載の適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；および
（ｄ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
または
ａ）該Ｃｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された項目２６に記載のＣｏｒｅ−１に対する適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程；および
ｂ）該Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物を、該負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下において培養して、Ｃｏｒｅ−１に対して１つまたは複数のＴ細胞を活性化するかまたはプライミングする工程；および
ｃ）再刺激のために、上記項目のいずれかに記載の該Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された項目９に記載の適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；および
ｄ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程
を包含する、方法。
（項目２９）
Ｃｏｒｅ−１陽性の細胞および／または疾患に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導する、上記項目のいずれかに記載の方法によって調製される、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたは複数の活性化Ｔ細胞、そしてＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを含む細胞組成物。
（項目３０）
腫瘍を予防するためかまたは治療するための薬物および／または栄養補助食品を製造するための、上記項目のいずれかに記載の製剤および／または機能的樹状細胞、ならびに／あるいは、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株の使用。
（項目３１）
Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するためかもしくは増強するため、および／またはＣｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞または活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株またはＴ細胞クローンまたは抗体を調製するための、インビボまたはインビトロにおける、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその断片の使用。
（項目３２）
Ｃｏｒｅ−１に対するインビトロ細胞性免疫応答試験であって、
ａ．）少なくとも１つの樹状細胞に第１のＣｏｒｅ−１陽性化合物を負荷する工程であって、ここで、該Ｃｏｒｅ−１陽性化合物は、Ｃｏｒｅ−１を有する、工程；
ｂ．）該Ｃｏｒｅ−１陽性化合物を負荷された適当量の該少なくとも１つの樹状細胞を、樹状細胞によって活性化され得るかまたは抑制され得る適当量の免疫細胞と接触させる工程；
ｃ．）該免疫細胞と該負荷された樹状細胞との相互作用を可能にするために、培養する工程；
ｄ．）Ｃｏｒｅ−１を有する適当量の少なくとも１つの第２化合物を負荷された適当量の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を加える工程であって、ここで、該第２化合物は、該第１のＣｏｒｅ−１陽性化合物とは異なる、工程；
ｅ．）該免疫細胞の再刺激のために、培養する工程
ｆ．）再刺激された免疫細胞の量を測定する工程
を包含する、インビトロ細胞性免疫応答試験。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】Ｎｅｉｇｈｂｏｒ−Ｊｏｉｎｉｎｇ法（７）を用いて得られた、分離菌ＡＧ６、ＭＵ１、それらの最も近縁のもの、およびＥ．ｃｏｌｉ型の株の、明確にアラインメントされた配列（１２４８塩基対）に基づいた無根系統樹を示す図である。
【図２】図２ａは、プライマーＯＰＬ０７を用いた増幅後に得られたＬＨ  Ｅ．ｃｏｌｉ株のＰＣＲ産物を示す図である。レーン１−１ｋｂラダー；レーン２〜１１−ＬＨ株２〜５、８、１３〜１６、１８；レーン１２−株３２Ｅ．ｃｏｌｉ  ＤＳＭＺ８６９７。図２ｂは、プライマーＯＰＡ１８を用いた増幅後に得られたＭＵ株およびＡＧ６を示す図である。レーン１−１ｋｂラダー；レーン２〜５−ＭＵ株１、３〜５；レーン６−ＡＢ１２；レーン７−Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ  ＤＳＭＺ２０７９；レーン８−Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＤＳＭＺ１８９６；レーン９−Ｂ．ｖｕｌｇａｔｕｓ  ＤＳＭＺ１４４７；レーン１０−Ｂ．ａｃｉｄｉｆａｃｉｅｎｓ  ＤＳＭＺ１５８９６；レーン１１〜１３−ＡＧ６。
【図３】図３は、細菌株ＡＧ６、ＬＨ２およびＭＵ１（５×１０６細菌／ｍｌ）でコーティングし、Ｃｏｒｅ−１特異的モノクローナル抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２およびそれほど特異的ではないＡ６８−Ｂ／Ａ１１およびコントロール抗体Ａ６３−Ｂ／Ｃ２を用いたＥＬＩＳＡを示す図である。
【図３ａ】図３ａは、細菌株Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ＮＣＴＣ１１６３７、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＤＳＭＺ８６９７（株３２）およびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ  ＭＵ１株（各々、１０×ＯＤ６５０ｎｍ  ０，１に対応する密度）でコーティングし、モノクローナル抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１  Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２およびＡ６８−ＢＡ１１（コントロール抗体Ａ６３−Ｂ／Ｃ２のＯＤ４５０／６３０ｎｍマイナスＯＤ４５０／６３０ｎｍ）を用いたＥＬＩＳＡを示す図である。
【図４】ＡＧ６株のカプセル調製物のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット解析であって、Ａ）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルのアルシアンブルー色素Ｂ）ウエスタンブロットのＤＩＧ−グリカン染色Ｃ）Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２によるウエスタンブロットの染色を示す図である。
【図５】逆相クロマトグラフィによるｃｏｒｅ−１陽性多糖類の富化を示す図である。
【図６】Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６株のｃｏｒｅ−１陽性カプセル状多糖の繰り返し単位の配列を示す図である。
【図７】Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６のｃｏｒｅ−１陽性カプセル状多糖の繰り返し単位の構造（Ｌ−Ｆｕｃ：Ｌ−フコース、Ｄ−Ｇａｌ：Ｄ−ガラクトース、ＨｅｘＮＡｃ：Ｎ−アセチルヘキソサミン、Ｄ−Ｈｅｘ：Ｄ−ヘキソース、ＯＭｅ：Ｏ−メチル基）を示す図である。
【図８】Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６のｃｏｒｅ−１陽性カプセル状多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄ）の繰り返し単位の構造（Ｌ−Ｆｕｃ：Ｌ−フコース、Ｄ−Ｇａｌ：Ｄ−ガラクトース、ＨｅｘＮＡｃ：Ｎ−アセチルヘキソサミン、Ｄ−Ｈｅｘ：Ｄ−ヘキソース、ＯＭｅ：Ｏ−メチル基）を示す図である。
【図９】液性免疫応答試験１によるマウス血清の解析を示す図である。ＰＢＳ（Ｌ群）、Ｃｏｒｅ−１陰性細菌（Ｉ群）およびＣｏｒｅ−１陽性細菌（Ｋ群）で免疫されたマウス由来の血清中の、ＡＧＰおよび過ヨウ素酸処理ＡＧＰに対するＩｇＭ抗体を、ＥＬＩＳＡによって測定した。血清希釈１：２００、２１日目。
【図１０】炭水化物−ＰＡＡ結合体における免疫血清のＥＬＩＳＡシグナルであって、  ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルと比較して、ＰＡＡ結合体Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する４匹のＣ３ＨマウスからのＥＬＩＳＡシグナルの平均値（血清の希釈１：１００）を示す図である。
【図１１−１】図１１ａ〜ｅは、ＰＢＳ（Ｌ群）、Ｃｏｒｅ−１陰性細菌（Ｉ群）およびＣｏｒｅ−１陽性細菌（ＡＧ６，Ｋ群）で免疫されたマウスの２１日目のマウス血清のＦＡＣＳ解析であって、Ａ）ＦＡＣＳ解析の平均蛍光強度Ｂ）オーバーレイしたヒストグラム（黒：Ｌ群、青：Ｉ群、赤：Ｋ群）を示す図である。図１１ｃは、細菌株Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ  ＭＵ−１、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＨ２、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡＧ３、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ８６  ＤＳＭＺ８６９７＝３２で免疫されたマウスの血清を用いた液性免疫応答試験１の結果を示している（１群あたり４匹のマウスの平均値を示している）。図１１ｄは、細菌株Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ  ＭＵ−１、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＨ２、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡＧ３、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ８６  ＤＳＭＺ８６９７＝３２で免疫されたマウスの血清を用いた液性免疫応答試験２の結果を示している（１群あたり４匹のマウスの平均値を示している）。図１１ｅは、細菌株Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ  ＭＵ−１、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＨ２、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡＧ３、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ８６  ＤＳＭＺ８６９７＝３２で免疫されたマウスの血清を用いた液性免疫応答試験３の結果を示している（１群あたり４匹のマウスの平均値を示している）。
【図１１−２】図１１ａ〜ｅは、ＰＢＳ（Ｌ群）、Ｃｏｒｅ−１陰性細菌（Ｉ群）およびＣｏｒｅ−１陽性細菌（ＡＧ６，Ｋ群）で免疫されたマウスの２１日目のマウス血清のＦＡＣＳ解析である。
【図１１−３】図１１ａ〜ｅは、ＰＢＳ（Ｌ群）、Ｃｏｒｅ−１陰性細菌（Ｉ群）およびＣｏｒｅ−１陽性細菌（ＡＧ６，Ｋ群）で免疫されたマウスの２１日目のマウス血清のＦＡＣＳ解析である。
【図１２】無菌マウス由来の血清の液性免疫応答試験１（コントロールマウスおよび細菌株ＡＧ６で免疫された３匹の異なるマウス）を示す図である。
【図１３】０〜２８日目に毎日、ＡＧ６株のＡ）２×１０１１（Ａ群）またはＢ）２×１０１０（Ｂ群）の低温殺菌された細菌で経口的に免疫されたＣ３Ｈマウス由来の血清の液性免疫応答試験１を示す図である。個別のマウスのグリコホリン（ＧＰ）、アシアログリコホリン（ＡＧＰ）および過ヨウ素酸塩処理ＡＧＰ（ＡＧＰ＋ＰＪ）に対する、２１日目のＥＬＩＳＡシグナルが示されている。
【図１４】低温殺菌されたＣｏｒｅ−１陽性細菌（ＡＧ６株）で経口的に免疫されたＣ３Ｈマウス由来の血清の液性免疫応答試験３を示す図である。０日目および２８日目の血清を１：３００希釈し、細胞株ＮＭ−ｗｔおよびＮＭ−Ｄ４に対する結合についてフローサイトメトリーで解析した。
【図１５】ヒト腫瘍細胞株からの、Ｃｏｒｅ１−陽性ＭＮ−Ｄ４（ＤＣ／Ｄ４）細胞溶解物またはＣｏｒｅ１陰性ＮＭｗｔ（ＤＣ／ｗｔ）細胞溶解物を負荷されたＤＣによる再刺激後にＣｏｒｅ１陽性細菌溶解物（ＡＧ６およびＭＵ１）に対して産生されたＴ細胞によるサイトカイン産生を示す図である。溶解物を負荷されたＮＭ−ＤＣとＣｏｒｅ１特異的抗体との事前のインキュベーションによるサイトカイン産生の阻害（ＤＣ／Ｄ４＋Ａｋ）が示されている。Ａ）Ｔ細胞によるＧＭ−ＣＳＦ産生（ＣＩＲＴ１）Ｂ）Ｔ細胞によるＴＮＦα産生（ＣＩＲＴ２）である。
【図１６】細胞性免疫応答試験２：ヒト腫瘍細胞株からの、Ｃｏｒｅ１陽性（ＤＣ／Ｄ４）細胞溶解物またはＣｏｒｅ１陰性（ＤＣ／ｗｔ）細胞溶解物を負荷されたＤＣによる再刺激後のレスポンダーＴ細胞によるＩＦＮ−γ産生および溶解物を負荷されたＮＭ−ＤＣとＣｏｒｅ１特異的抗体との事前のインキュベーションによるサイトカイン産生の阻害（ＤＣ／Ｄ４＋Ａｋ）についてのＥＬＩＳｐｏｔアッセイの結果を示す図である。
【図１７】細胞性免疫応答試験３：ヒト腫瘍細胞株からの、Ｃｏｒｅ１陽性（ＤＣ／Ｄ４）細胞溶解物またはＣｏｒｅ１陰性（ＤＣ／ｗｔ）細胞溶解物を負荷されたＤＣによる再刺激後のレスポンダー細胞（Ｒ）に対するＴ細胞増殖アッセイ（ＷＳＴ）および溶解物を負荷されたＮＭ−ＤＣとＣｏｒｅ１特異的抗体との事前のインキュベーションによる増殖の阻害（ＤＣ／Ｄ４＋Ａｋ）を示す図である。
【図１８】細胞性免疫応答試験４：Ｃｏｒｅ−１陰性（ＡＧ３）細菌もしくはＣｏｒｅ−１陽性（ＡＧ６）細菌またはＣｏｒｅ−１陰性（ＮＭ−ｗｔ）ヒト細胞株もしくはＣｏｒｅ−１陽性（ＮＭ−Ｄ４）ヒト細胞株を負荷されたｍＮＭ−ＤＣの免疫蛍光解析を示す図である。
【図１９−１】Ｃｏｒｅ−１陽性成分の炭水化物構造を示す図である。Ｌ−Ｆｕｃ：Ｌ−フコース、Ｄ−ＧａｌＮＡｃ：Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｄ−Ｇａｌ：Ｄ−ガラクトサミン、Ｈｅｘ：ヘキソース、ＨｅｘＮＡｃ：Ｎ−アセチルヘキソサミン、ＯＭｅ：Ｏ−メチル化。そのような構造は、例えば、ＡＧ６上に見られる。
【図１９−２】Ｃｏｒｅ−１陽性成分の炭水化物構造を示す図である。Ｌ−Ｆｕｃ：Ｌ−フコース、Ｄ−ＧａｌＮＡｃ：Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｄ−Ｇａｌ：Ｄ−ガラクトサミン、Ｈｅｘ：ヘキソース、ＨｅｘＮＡｃ：Ｎ−アセチルヘキソサミン、ＯＭｅ：Ｏ−メチル化。そのような構造は、例えば、ＡＧ６上に見られる。
【図２０】隠されたＣｏｒｅ−１抗原および露出したＣｏｒｅ−１抗原を示す図である。
【図２１】図２１は、２１日目におけるＰＡＡ結合体Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃａ−ＰＡＡおよびＰＡＡ結合体Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃａ−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルを示している。ＰＡＡ４８に対するシグナルが、ＰＡＡ４３に対するシグナルよりも少なくとも３０％高い場合に、その血清を陽性とみなした。この基準を考慮して、６匹中５匹の（Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ｂ１およびＢ５）マウスが、ｃｏｒｅ−１特異的液性免疫応答を生じた。
【図２２−１】選択されたＣｏｒｅ−１陽性株ならびにＣｏｒｅ−１陽性ではなかった株を、様々な抗生物質に対する感受性によって特徴付けた表を示している。
【図２２−２】選択されたＣｏｒｅ−１陽性株ならびにＣｏｒｅ−１陽性ではなかった株を、様々な抗生物質に対する感受性によって特徴付けた表を示している。
【図２３】本発明の細胞応答試験の全体像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
Ａ）栄養補助食品、薬学的組成物および免疫応答試験
第１の局面によれば、本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物ならびに／またはその少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物を含んでいる、栄養補助食品および／または薬学的組成物からなる群から選択される製剤を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物および／またはＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される。よって、本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物を含んでいる、栄養補助食品または薬学的組成物を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触するとき、その抗体によって認識され、結合される。
【００２１】
本発明の１つの重要な局面は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｓｉｍ）および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片が、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識されることである。ゆえに、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体と接触するとき、前記抗体と特異的に結合する。それゆえ、Ｃｏｒｅ−１構造は、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物において前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体に対して接近可能であり、他の構造によって「隠されて」いない。試験の際に（適当な試験は、以下で説明する）判定され得るこの重要な特徴は、Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の断片もしくは溶解物が、Ｃｏｒｅ−１を有し、ゆえにＣｏｒｅ−１と少なくとも免疫化学的に実質的に同一であり、単にＣｏｒｅ−１に似ているエピトープではないことを保証する。この特徴は、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物によって，十分にＣｏｒｅ−１特異的な免疫応答を引き起こすことを確実にするために重要である。微生物がＣｏｒｅ−１を有していることを判定するために使用され得るこのようなＣｏｒｅ−１特異的抗体は、腫瘍、関連する周辺においてＣｏｒｅ−１構造を特異的に認識する。従って、これらの抗体は、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物を、ヒトの胃腸障害においておよびヒトの腫瘍上に存在するＣｏｒｅ−１抗原に特によく似た（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｍｉｍｉｃｋｉｎｇ）Ｃｏｒｅ−１構造を有することを判定するために使用することができる。この特徴（Ｃｏｒｅ−１特異性）は、従来技術において公知の、Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原をおそらく有する微生物由来の本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物のことを示す。上で概説され、以下の比較実施例に示されるように、従来技術において公知の微生物は、単にＴｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ（またはＣｏｒｅ−１）に似ている炭水化物構造を有しているがゆえに、例えばＰＮＡ（ＴＦ特異性を推定的に判定するために使用される）と交差反応した。しかしながら、ＰＮＡは多くの様々な炭水化物エピトープと交差反応するので、ＰＮＡは、ＴＦ特異的ではない。ゆえに、ＴＦ様の構造（交差反応性）とＴＦと同一の構造との間に区別は存在しない。また、これらの公知の微生物は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって認識されず、ゆえにその抗体と特異的に結合しない（以下を参照のこと）。このことは、その公知の微生物が、それぞれの応答を誘発することができるための、Ｃｏｒｅ−１の免疫化学的／免疫学的な特徴を有しないので、その微生物は、Ｃｏｒｅ−１抗原を有さず、ゆえにその微生物が投与されてもヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導することができないことを証明している。しかしながら、そのような特異的な応答は、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、ゆえに治療的効果または予防的な効果をもたらすのに必要である。
【００２２】
本発明の微生物が本当にＣｏｒｅ−１陽性であるという事実（Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を使用することによって判定され得ること）に起因して、本発明は、Ｃｏｒｅ−１抗原に対して特異的な免疫応答、ゆえに強力な免疫応答を誘導するかまたは増強するＣｏｒｅ−１陽性微生物を含んでいる製剤を提供する。本発明の製剤は、Ｃｏｒｅ−１に特異的な高レベルの抗Ｃｏｒｅ−１抗体を誘導することによって、腫瘍特異的様式で免疫系を活性化する。本発明者らが知る限り、本発明は、腫瘍に対して特異的な免疫防御を活性化させることができる最初の抗原特異的な食品添加物／栄養補助食品または医薬であり、炭水化物、特にＣｏｒｅ−１腫瘍抗原に特異的な免疫応答を誘導することができる最初の食品添加物である。
【００２３】
Ｃｏｒｅ−１特異的抗体、ならびに好ましいＣｏｒｅ−１特異的抗体、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の組み合わせ、またはＣｏｒｅ−１特異的抗体の好ましい組み合わせという用語は、定義の項および本明細書中の別の箇所において詳細に説明されている。
【００２４】
１つの実施形態によれば、上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される。
【００２５】
これらの抗体は、Ｃｏｒｅ−１以外の他の炭水化物構造と交差反応性をほとんど示さないか、または全く示さないことによって高度にＣｏｒｅ−１特異的であることが判明した。これらの抗体は、腫瘍に関連する様式でタンパク質上のＣｏｒｅ−１（αアノマー型またはβアノマー型のいずれか）を認識し、その抗体は、好ましくは、ＨＨ８、Ａ７８−Ｇ／Ａ７、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１；より好ましくは、Ａ７８−Ｇ／Ａ７、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１である。特異性を増強するために、微生物が、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、ゆえに本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物であることを判定するため／試験するために、これらの抗体の２つ以上を使用してもよい。
【００２６】
Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の結合は、炭水化物構造に対して特異的であり、その炭水化物構造は、同じ結合基準を有するので、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の結合が過ヨウ素酸塩感受性であるか否かを解析することによって、ヒトの癌に関連するＣｏｒｅ−１と同じ免疫化学的特徴が判定され得る。過ヨウ素酸塩処理は、Ｃｏｒｅ−１をはじめとした炭水化物構造の外側の炭水化物環を破壊することによって、Ｃｏｒｅ−１エピトープを破壊する。抗体の結合の低下は、通常、過ヨウ素酸による酸化後に観察される。従って、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の結合が、Ｃｏｒｅ−１特異的であるとき、過ヨウ素酸塩処理後に結合が低下する。驚いたことに、当初、Ｃｏｒｅ−１陽性でなかった多くの生物において、過ヨウ素酸塩処理によってＡｂ結合の増大が見出された。この過ヨウ素酸酸化によって、明らかにＴＦ様である新しい炭水化物構造が見出される。しかしながら、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体が接近可能なＣｏｒｅ−１エピトープが、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物上にすでに存在する場合は、過ヨウ素酸塩処理によって、Ｃｏｒｅ−１エピトープが破壊されるはずなので、過ヨウ素酸酸化後に結合が増大することは、微生物が元々はＣｏｒｅ−１陽性ではないことを強く示唆するものである。しかしながら、天然にはＣｏｒｅ−１陽性ではなく、過ヨウ素酸塩処理などの化学的処理によってＣｏｒｅ−１陽性微生物に変換され得るそのような微生物もまた、本発明の範囲に包含され、本発明の製剤の成分として、例えば過ヨウ素酸塩処理（Ｃｏｒｅ−１を露出させた）後に使用され得る。
【００２７】
１つの実施形態によれば、本発明は、上に記載されたような栄養補助食品または医薬製剤を提供し、ここで、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、好ましくは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７の組み合わせおよびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１によって認識される／結合される少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物が使用され、前記結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、最も好ましくは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１によって認識／結合されるが、Ａ６８−Ｂ／Ａ１１によって認識されない／結合されない少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物が使用される。このプロファイルは、ヒトの癌に関連するＣｏｒｅ−１構造の結合基準と似ているので、非常に好ましい。
【００２８】
好ましい実施形態において、前記製剤は、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識するＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する。微生物がＣｏｒｅ−１陽性であるという事実に起因して、Ｃｏｒｅ−１抗原に対する免疫応答は、投与時に誘導／増強される。これにより、例えば、Ｃｏｒｅ−１を有する新たに生じる腫瘍細胞が排除され得るかその腫瘍細胞の数が減少し得、それによって、原発腫瘍の成長が予防されるかまたは減少するという免疫学的監視のメカニズムが確立される。本発明の製剤は、少なくとも１つのヒトまたは動物において投与されるとき、前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってＣｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御として機能する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、および／または、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患、腫瘍または転移の発生を減少させるかもしくは予防する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、および／またはＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の拡大または転移を減少させるかもしくは予防する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、および／または免疫系を強化する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、および／または免疫応答を改善する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答、を誘導するかまたは増強する。
【００２９】
ゆえに、本発明は、ヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞および／またはＣｏｒｅ−１陽性疾患を認識する免疫応答を誘導する少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる栄養補助食品を提供する。従来のプロバイオティクスおよびプレバイオティクスは、免疫系の全体的な非特異的刺激をもたらす。従来技術の系において腫瘍特異的な系に関連するものはなく、特に、Ｃｏｒｅ−１に対する腫瘍特異的な系は存在しない。
【００３０】
前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片、およびＣｏｒｅ−１陽性微生物の好ましい断片ならびにそれらの組み合わせは、定義の項および本明細書中の別の箇所において詳細に説明されている。前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識される。前記微生物またはその断片を同定するためおよび単離するための方法もまた本明細書中において説明される。
【００３１】
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片は、Ｃｏｒｅ−１に似た抗原を有する事実に起因して、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原、ならびに／またはＣｏｒｅ−１陽性の腫瘍細胞および／もしくは疾患に対する免疫応答の特異性を誘導する活性成分である。
【００３２】
前記Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、前記Ｃｏｒｅ−１特異的微生物が投与されると、ｃｏｒｅ１に対して特異的な免疫をもたらす。Ｃｏｒｅ−１特異的免疫を引き起こす能力は、以下の方法のうちの少なくとも１つによって判定され得る：
ａ）前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＨ８
・ＨＢ−Ｔ１
からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、ここで、前記抗体の結合は、好ましくは、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である；
ｂ）前記Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、本明細書中に記載される少なくとも１つの液性免疫応答試験において陽性であることを特徴とする；
ｃ）前記Ｃｏｒｅ−１特異的微生物および／またはそのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、本明細書中に記載されるＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの細胞性免疫応答試験において陽性であることを特徴とする。
【００３３】
これによって、使用される微生物が、本当にＣｏｒｅ−１陽性であり、Ｃｏｒｅ−１抗原に対して所望の特異的な免疫応答を引き起こすことができることが確実になる。しかしながら、上に記載されたように、例えば過ヨウ素酸塩処理などの化学的処理によってＣｏｒｅ−１陰性微生物からＣｏｒｅ−１陽性微生物に変換される微生物を使用することもまた、本発明（ｐｒｅｓｅｎｔ）の範囲内である。それぞれの処理によってＣｏｒｅ−１陽性になる、それぞれに処理された微生物もまた、本発明の範囲内であり、それらの特徴は、露出したＣｏｒｅ−１エピトープをすでに有する／含む微生物と同じ方法／試験によって判定され得る。
【００３４】
本製剤のＣｏｒｅ−１特異性を増強するために、Ｃｏｒｅ−１陽性であるかまたは例えば過ヨウ素酸塩処理によってＣｏｒｅ−１陽性になり得、かつ、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識される微生物を使用することができ、ここで、前記抗体の結合は、好ましくは、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である。
【００３５】
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／もしくは＃５を含む群から選択される炭水化物構造ならびに／またはそれらの繰り返し単位のうちの少なくとも１つを含み得る。以上のように、Ｃｏｒｅ−１陽性生物は、αアノマー配置またはβアノマー配置で結合され得る。
【００３６】
さらに、本発明者らは、驚いたことに、Ｃｏｒｅ−１陽性のＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株（例えば、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ）が存在することを見出した。これは知られていなかった。従って、Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓが提供され、それが本発明の製剤において使用され得、ここで、前記Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも１つ、好ましくは２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される。
【００３７】
前記抗体の結合は、好ましくは、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である。
【００３８】
好ましくは、前記Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、健常ドナーから単離される。前記Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、例えば、Ｂａｃｅｒｔｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ（例えば、新しい菌株であるＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）および／またはＡＧ６ホモログもしくはＭＵ１ホモログ）であり得るか、またはそれに関連し、ここで、前記ホモログは、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓが
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１
・Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２
・Ａ７８−Ｇ／Ａ７
・ＨＢ−Ｔ１
・ＨＨ８
からなる群から選択される少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識されることを特徴とし、ここで、前記抗体の結合は、好ましくは、過ヨウ素酸塩処理後に結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である。実施例において証明されるように、これらの株は、Ｃｏｒｅ−１に対して非常に強い免疫応答を誘発し、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓに関連するものである。それらは、非常に強いＣｏｒｅ１発現を示し、ゆえに、多くのＣｏｒｅ−１エピトープを含み、Ｃｏｒｅ−１特異的ｍＡｂ（ＴＦ１およびＴＦ２）に結合し、ここで、結合が過ヨウ素酸塩感受性であることから、Ｃｏｒｅ−１が表面上に接近可能に存在することが示唆される。Ｃｏｒｅ１の発現／検出は、酵素消化後、低温殺菌後および／または凍結乾燥後にも変化しないことから、それが経口医薬製剤に適した成分となる。さらに、ＡＧ６について、本発明者らは、繰り返し単位内の分枝成分としてαアノマー配置の腫瘍に関連するＣｏｒｅ−１構造を証明した（図１９の＃５もまた参照のこと）。この結果は、カプセル状の多糖内のＴＦ抗原が露出して局在することにより、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のより良い認識および結合によってヒトにおいてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答の誘導を増加させ得るので、非常に重要である。
【００３９】
好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片を含んでいる、栄養補助食品および／または薬学的組成物からなる群から選択される製剤を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはＣｏｒｅ−１陽性の溶解物もしくは断片は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識され、ここで、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２、Ａ７８−Ｇ／Ａ７、ＨＢ−Ｔ１および／またはＨＨ８を含む群から選択される。
【００４０】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、前記製剤を提供し、ここで、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のＮＥＭＯＤ−ＴＦ２およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ１と結合し、ここで、前記抗体の結合は、過ヨウ素酸塩処理後に結合の有意な低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である。
【００４１】
よって、本発明の製剤（例えば、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を含んでいる、食物または薬）は、予防的および治療的な目的で、および免疫学的活性を支持する際に使用され得る。本発明の医薬製剤は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物（過ヨウ素酸塩処理などの化学的処理によってＣｏｒｅ−１陽性となり得るもの）および薬学的に許容可能なキャリアを含む。本発明の製剤（例えば、ｃｏｒｅ−１陽性微生物を含んでいる薬物）の調製および投与は、公知の手法に従う。例えば、本製剤は、所望の適用方法に適した組成物を形成するために、従来のガレノスアジュバント（ｇａｌｅｎｉｃ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ）と組み合わされ得る。例えば、本発明の化合物は、非経口的または経腸的な適用に適した、活性な化合物と有害に反応しない従来の賦形剤、すなわち、薬学的に許容可能な有機キャリア物質または無機キャリア物質との混合物として使用され得る。適当な薬学的に許容可能なキャリアとしては、水、塩溶液、アルコール、植物油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、粘稠性のパラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリドおよび脂肪酸ジグリセリド、ペンタエリスリトール（ｐｅｎｔａｅｙｒｉｔｏｌ）脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、タルクなどが挙げられるがこれらに限定されない。詳細は、以下で説明する。
【００４２】
前記製剤は、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答、好ましくは、Ｔｈ１型細胞性免疫応答を誘導し得るかまたは増強し得る。好ましい実施形態において、本製剤は、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答、好ましくは、Ｔｈ１細胞のＣＤ４陽性Ｔ細胞および／またはＣＤ８陽性細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を包含する細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強する。
【００４３】
本発明はまた、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる栄養補助食品を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合され、そして、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識するＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する。
【００４４】
本発明はまた、ヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞および／またはＣｏｒｅ−１陽性疾患を認識する免疫応答を誘導する少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる薬学的組成物も提供する。
【００４５】
本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる医薬製剤を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のそれぞれの抗体と接触する場合に少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識され、結合され、そして、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識するＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する。本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または医薬製剤を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合され、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強する。
【００４６】
前記免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および／またはＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答である。体液性免疫に加えて、細胞性免疫の活性化が、本発明の製剤／ｃｏｒｅｏｔｉｃｓの予防的および治療的な能力を大きく増強する。
【００４７】
さらなる実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する液性免疫応答および細胞性免疫応答を誘導する少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または医薬製剤を提供する。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態において、栄養補助食品または薬学的組成物は、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってＣｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御として機能するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかまたは増強する。
【００４９】
少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または薬学的組成物は、本明細書中に示されるようなＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってそれらの細胞に対する防御として機能するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を確立するために使用され得、その破壊する能力とは、例えば、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の誘導、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を効率的に殺滅する、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するＣｏｒｅ−１抗体のＣｏｒｅ−１特異的補体依存性細胞傷害、または実施例に示されるような、および本明細書中に記載されるような、Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞応答によるＴＮＦαおよび／もしくはＩＮＦγの分泌（Ｃｏｒｅ−１を有するそれらの腫瘍細胞に対して特異的な細胞傷害性Ｔ細胞媒介性の腫瘍細胞殺滅に対する、当業者によって科学的に認識される代用マーカー）である。
【００５０】
本発明のさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または薬学的組成物は、栄養補助食品を（少なくとも１つの）健常個体に経口的に投与することによって、上に記載されたようにＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有する、それらの細胞に対する防御として機能する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を構築するために、使用される。
【００５１】
本発明のさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる栄養補助食品または薬学的組成物は、栄養補助食品を（少なくとも１つの）健常個体に経口的に投与することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の発生を減少させるためか、またはなおもさらに好ましくは、予防するために、使用される。
【００５２】
本発明の栄養補助食品または薬学的組成物は、少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍を処置するために使用される。本発明のさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または医薬製剤は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍または転移の発生を減少させるためか、またはなおもより好ましくは、予防するために、使用される。
【００５３】
さらなる実施形態において、本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または薬学的組成物を提供し、それらは、少なくとも１つのヒトまたは動物において、投与されるとき、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の拡大または転移を減少させるか、または予防する。
【００５４】
本発明のさらなる実施形態において、栄養補助食品または医薬製剤は、少なくとも２つの異なるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含む。
【００５５】
本発明のさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品または医薬製剤は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を、免疫応答を誘導するかまたは増強する少なくとも１つの他の有益な微生物と組み合わせて含む。
【００５６】
本発明のさらなる実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる栄養補助食品は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患に罹患している患者に本栄養補助食品を経口的に投与することによってそのような疾患または腫瘍を処置するために使用される。
【００５７】
本発明のさらなる実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる医薬製剤は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍に罹患している患者においてそのような疾患または腫瘍を処置するために使用される。
【００５８】
本発明の別の実施形態において、本発明の上述の栄養補助食品または薬学的組成物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物およびＣｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つの断片、優先的には、２つ以上のＣｏｒｅ−１陽性微生物由来の断片を包む。
【００５９】
Ｃｏｒｅ−１に対する前記液性免疫応答は、以下で詳細に説明される液性免疫応答試験１、２、３、４、５または６のうちの少なくとも１つによって検出され得る、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体応答である。
【００６０】
本発明はまた、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験（液性免疫応答試験１）を提供し、その試験は、アシアログリコホリンおよびグリコホリンまたはアシアログリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンまたはアシアログリコホリンおよびグリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを含む糖タンパク質に対する、抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をＥＬＩＳＡにおいて試験する工程を包含し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、その抗体のアシアログリコホリンに対する結合のほうが、グリコホリンおよび／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対する結合よりも有意に強い結合を示す。アシアログリコホリンは、Ｃｏｒｅ−１構造を含むが、グリコホリンは、含まない。ゆえに、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物によって引き起こされる陽性の液性免疫応答は、アシアログリコホリンに対する検出可能な結合をもたらし得るが、グリコホリン（ｇｌｙｃｏｈｏｒｉｎ）に対する結合は、ほとんどもたらさないか、または全くもたらさない。過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンもまた、Ｃｏｒｅ−１エピトープを喪失しており、ゆえに、陽性の液性免疫応答が、本発明のＣｏｒｅ−１陽性の微生物／製剤によって引き起こされるか否かを判定する試験システムである。より好ましい実施形態において、この結合は、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片、またはそれらを含んでいる製剤の投与後に有意に高くなる。
【００６１】
前記液性免疫応答試験１は、アシアログリコホリンおよびグリコホリンまたは過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを含む糖タンパク質に対する、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をＥＬＩＳＡにおいて試験し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、その抗体のアシアログリコホリンに対する結合のほうが、グリコホリンおよび／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対する結合よりも有意に強い結合を示す。好ましい実施形態において、前記試験は、アシアログリコホリンおよびグリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを含む。好ましい実施形態において、アシアログリコホリンに対するシグナルは、グリコホリンに対するシグナルよりも少なくとも５０％高く、過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対するシグナルよりも少なくとも３０％高い。好ましい実施形態において、アシアログリコホリンに対するシグナルは、グリコホリンに対するシグナルの少なくとも２倍、および／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対するシグナルの１．５倍、なおもさらに好ましくは、グリコホリンに対するシグナルの少なくとも３倍および／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対するシグナルの２倍、なおもさらに好ましくは、グリコホリンに対するシグナルの少なくとも５倍および／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対するシグナルの４倍である。好ましい実施形態において、アシアログリコホリンに対するシグナルは、本発明の製剤の投与後に有意に上昇し、それは、過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対するシグナルよりも少なくとも３０％高い。好ましい実施形態において、アシアログリコホリンに対するシグナルは、本発明の製剤の投与後に５０％高く、より好ましくは、８０％高く、なおもより好ましくは、１００％高くなり、それは、過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対するシグナルよりも少なくとも３０％高い。
【００６２】
液性免疫応答試験１の好ましい実施形態は、実施例１１において詳細に説明される。
【００６３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験（液性免疫応答試験２）を提供し、その試験は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、および好ましくは、過ヨウ素酸塩処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡを含む、ポリアクリルアミド（ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄ）に結合した炭水化物構造（ＰＡＡ結合体）に対する、抗体、血清中の抗体、またはその血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をＥＬＩＳＡにおいて試験する工程を包含し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する上記１つまたはそれ以上の抗体の結合のほうが、過ヨウ素酸塩処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する結合よりも有意に強い結合を示し、好ましくはまた、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する上記１つまたはそれ以上の抗体の結合のほうが、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡに対する結合よりも高い結合を示すか、または、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する、本発明の製剤で免疫された後のヒトまたは動物から得られた抗体（例えば、免疫血清）の結合のほうが、免疫前のヒトまたは動物から得られた抗体（例えば、免疫前血清）よりも有意に強い結合を示す。これらの人工のポリアクリルアミド構造には、Ｃｏｒｅ−１構造にそれぞれ密接な関係がある構造も含まれ、それらは、引き起こされる液性免疫応答の特異性を判定するために使用され得る。
【００６４】
前記液性免疫応答試験２は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、および好ましくは、過ヨウ素酸塩処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡを含む、ポリアクリルアミドに結合した炭水化物構造（ＰＡＡ結合体）に対する、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をＥＬＩＳＡにおいて試験し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する上記抗体の結合のほうが、過ヨウ素酸塩処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、および好ましくは、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡに対する結合よりも有意に強い結合を示す。好ましい実施形態において、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する結合は、過ヨウ素酸塩処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡおよびＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡに対する結合の少なくとも２倍である。
【００６５】
好ましい実施形態において、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルに対する、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルは、免疫前のＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルに対する、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルよりも本発明の製剤で免疫した後のほうが５０％高く、より好ましくは、少なくとも７０％高く、なおもより好ましくは１００％高い。
【００６６】
好ましい実施形態において、本発明の製剤での免疫後のＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルは、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルよりも３０％高く、より好ましくは、少なくとも５０％高く、より好ましくは、少なくとも７０％高く、そしてなおもより好ましくは、１００％高い。
【００６７】
液性免疫応答試験２の好ましい実施形態は、実施例１１において詳細に説明される。
【００６８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験（液性免疫応答試験３）を提供し、その試験は、抗体、血清中の抗体、またはその血清、血漿もしくは便から得られた抗体の、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９（またはＮＭ−Ｈ９Ｄ８  ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０６）を含む細胞に対する結合をフローサイトメトリー試験においてその結合について試験する工程を包含し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９（両方ともＣｏｒｅ−１抗原を有する）に対する上記抗体の結合のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９（Ｃｏｒｅ−１抗原を有していない）に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そして／または本発明の製剤の投与後のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する上記抗体の結合のほうが有意に強い結合を示す。
【００６９】
前記液性免疫応答試験３は、血清中の抗体、またはその血清、血漿もしくは便から得られた抗体の、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９を含む細胞に対する結合をフローサイトメトリー試験においてその結合について試験し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する上記抗体の結合のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９よりも有意に強い結合を示す。好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９における陽性細胞のパーセンテージは、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９のパーセンテージの２倍、なおもさらに好ましくは５倍である。
【００７０】
本発明の別の好ましい実施形態において、上記フローサイトメトリーの結果は、以下の式に従って計算される：
（免疫サンプルのＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する陽性細胞％−免疫前サンプルのＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する陽性細胞％）／（免疫サンプルのＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する陽性細胞％−免疫前サンプルのＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する陽性細胞％）＝Ｘ、ここで（免疫サンプルのＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する陽性細胞％−免疫前サンプルのＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する陽性細胞％）≧１であり、Ｘ≧１０、より好ましくは、Ｘ＞２０、なおもより好ましくはＸ＞３０の場合、液性免疫応答試験は陽性である。
【００７１】
液性免疫応答試験３の好ましい実施形態は、実施例１１において詳細に説明される。
【００７２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験（液性免疫応答試験４）を提供し、その試験は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９、および好ましくは、過ヨウ素酸塩処理されたＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９を含む細胞に対する、抗体、血清中の抗体、またはその血清、血漿もしくは便から得られた抗体の結合を免疫蛍光試験においてその結合について試験する工程を包含し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９（両方ともＣｏｒｅ−１抗原を有する）に対する特定量の上記１つまたはそれ以上の抗体の結合のほうが、ＮＭ−ｗｔもしくはＮＭ−Ｈ９（Ｃｏｒｅ−１抗原を有していない）または過ヨウ素酸塩処理されたＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９（ここで、Ｃｏｒｅ−１抗原は過ヨウ素酸塩処理によって破壊される）に対する結合よりも強い結合を示し、そして／または、本発明の製剤を投与した後のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する上記抗体の結合のほうが有意に高い結合を示す。
【００７３】
前記液性免疫応答試験４は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９、および好ましくは過ヨウ素酸塩処理されたＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９を含む細胞に対する、血清、血漿もしくは便中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られた抗体の結合を免疫蛍光試験においてその結合について試験し、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する上記抗体の結合のほうが、ＮＭ−ｗｔもしくはＮＭ−Ｈ９または過ヨウ素酸塩処理されたＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９に対する結合よりも強い結合を示す。好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合は、蛍光強度において明らかに高く、そして／または、蛍光陽性細胞のパーセンテージは、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞におけるほうが、過ヨウ素酸塩で処理された後のＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９における蛍光陽性細胞のパーセンテージよりも高い。その免疫蛍光法試験は、抗血清の段階希釈および／または同一の露光条件下における写真撮影によって、より定量的になり得る。
【００７４】
液性免疫応答のＣｏｒｅ−１陽性についての他の適当な試験は、免疫蛍光法またはフローサイトメトリー解析においては、様々なＣｏｒｅ−１陽性細胞（例えば、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１、Ａ−２０４）およびＣｏｒｅ−１陰性細胞株（例えば、ＢＴ−２０、ＨＴ−２９）を使用するか、または、適当な試験システム、優先的には、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーもしくは免疫蛍光においては、他のＣｏｒｅ−１を有する分子（例えば、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＢＳＡまたはＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＫＬＨ）またはＣｏｒｅ−１を有する糖ペプチド（上記細胞または抗原を過ヨウ素酸塩処理しているかまたはされていないもの）、および好ましくは、Ｃｏｒｅ−１を有しないしかるべき（ａｃｃｏｒｄｉｎｇ）陰性分子（例えば、ＢＳＡ）との組み合わせまたはシアリル化されたＣｏｒｅ−１構造との組み合わせを使用する。原則として、上に記載した試験１〜４において使用されるのと同じ、ポリアクリルアミドまたはキャリアタンパク質（例えば、グリコホリンタンパク質バックボーンまたは脂質）に結合した炭水化物構造は、他のキャリア分子（例えば、タンパク質バックボーンまたはペプチドまたはポリペプチドまたは脂質または化学構造（例えば、ＢＳＡ、ＫＬＨ）または定義されるより短いペプチドまたはクロマトグラフィにおけるカラムベッド用に使用されるような化学構造）に結合されたときにも使用され得る。当業者は、過ヨウ素酸塩処理を用いて、または用いずに、それらの細胞または抗原を選択することもでき、また、Ｃｏｒｅ−１についての液性免疫応答を試験するための適当な方法を選択し、改変することもできる。しかしながら、上述の液性免疫応答試験１〜４および本発明によって提供される特に好ましいそれらの組み合わせが、明らかに好ましく、実施例から分かるように特異性に関して、明白な利点を有する。
【００７５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験（液性免疫応答試験５）を提供し、その試験は、
ａ）適当量のユーロピウムまたはクロム−５１で標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られた抗体と、適当量の補体とともに、適当な時間（代表的には３〜５時間または一晩）にわたって、インキュベートする工程；
ｂ）（ａ）におけるインキュベートの後、ユーロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって、細胞の溶解を測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の液性免疫応答はＣｏｒｅ−１を含んでいる細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９細胞の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、あるいは、抗体なしの溶解よりも、および／または、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１と結合しないかもしくはほとんど結合しない１つの抗体または複数の抗体による溶解よりも、有意に高いＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解を示す、工程
を包含する。
【００７６】
前記液性免疫応答試験５は、誘導される液性免疫応答またはＣｏｒｅ−１特異的な抗体のＣｏｒｅ−１特異的な補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）（ある特定の抗体によって媒介されるエフェクターメカニズムである）を標的細胞の溶解試験において試験する。この試験は、適当量の標識された、Ｃｏｒｅ−１陽性標的細胞（例えば、ＺＲ７５−１、好ましくは、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９）を、適当量の血清中の抗体、または血清から得られた抗体、または単離されたＣｏｒｅ−１抗体と、適当量の補体とともに、適当な時間（代表的には３〜５時間）にわたって、インキュベートする工程を包含する。そのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞は、溶解される細胞の測定を可能にするユーロピウムまたはクロム−５１で標識されている。溶解された細胞の量は、好ましくは、インキュベーション後の、ユーロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって決定される。適当なコントロールは、当業者によって測定され得、例えば、Ｃｏｒｅ−１陰性細胞（好ましくは、ＮＭ−Ｗｔおよび／またはＮＭ−Ｈ９）、標的細胞に結合しない抗体もしくは抗体混合物、および／または補体なしである。この試験は、適当量の抗体、標識された腫瘍細胞の数、補体の濃度およびインキュベーション時間に関して、本発明における用途のために、および記載されるように、当業者によって最適化され得る。
【００７７】
本発明の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は、好ましくは、ユーロピウム放出アッセイを用いて測定される。標的細胞ＮＭ−Ｄ４を、８００μｌのユーロピウム緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４、９３ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭジエチレントリアミン五酢酸、２ｍＭ酢酸ユーロピウム（ＩＩＩ））中、４℃において１０分間インキュベートし、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）においてエレクトロポレーションし（７１０Ｖ，１パルス，３０μｓ）、続いて、氷上でさらに１０分間インキュベートする。その後、その細胞をＲＰＭＩ／５％ＦＣＳ中で５回洗浄し、９６ウェル丸底プレート（Ｎｕｎｃ；５×１０３／ウェル）に播種する。様々な希釈の２０μｌの抗体含有溶液または対応するコントロール（培地、アイソタイプコントロールヒトＩｇＭ）を加えた後、そのサンプルを室温において２０分間インキュベートする。１０μｌの１：１０希釈補体（乳のみウサギ補体）を、対応するウェルに加える。コントロールのウェルには、補体溶液の代わりに１０μｌのＲＰＭＩ／５％ＦＣＳを加える。自然放出を測定するために、標的細胞を培地のみとインキュベートし、エタノールを用いた標的の完全溶解によって最大放出を測定する。３７℃で４時間インキュベーションした後、そのプレートを５００×ｇで５分間遠心し、すべてのウェルから２０μｌの無細胞上清を、予め調製しておいた平底プレート（Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上の１ウェルあたり２００μｌの増強溶液（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ）にピペットで移す。室温で１５分間インキュベーションした後、蛍光を測定する（Ｖｉｃｔｏｒ２Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ）。特異的な細胞傷害性は、等式（実験溶解−自然溶解）／（最大溶解−自然溶解）×１００％から得られる。
【００７８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験（液性免疫応答試験６）を提供し、その試験は、
ａ）適当量のユーロピウムまたはクロム−５１で標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られた抗体と、適当量の少なくとも１つの免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞もしくは末梢血単核球を含む細胞の混合物とともに、適当な時間にわたって、代表的には３〜５時間または一晩にわたって、インキュベートする工程、および
ｂ）（ａ）におけるインキュベートの後、ユーロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって、細胞の溶解を測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の液性免疫応答はＣｏｒｅ−１を含んでいる細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、あるいは、抗体なしの溶解よりも、および／または、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１と結合しないかもしくはほとんど結合しない１つの抗体または複数の抗体による溶解よりも、有意に高い溶解を示す、工程
を包含する。
【００７９】
前記液性免疫応答試験６は、標的細胞溶解試験において、免疫エフェクター細胞と組み合わせて、誘導される液性免疫応答またはＣｏｒｅ−１特異的抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）（ある特定の抗体によって媒介されるエフェクターメカニズムである）を試験する。この試験は、適当量の標識されたＣｏｒｅ−１陽性標的細胞（例えば、ＺＲ７５−１、好ましくはＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９）を、適当量の血清中の抗体または血清から得られた抗体または分離されたＣｏｒｅ−１抗体と、適当量の免疫エフェクター細胞（例えば、ＰＢＭＣ（末梢血単核球）に存在するもの）とともに、十分な時間、代表的には３〜５時間または一晩にわたって、インキュベートする工程を包含する。Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞は、溶解される細胞の測定を可能にするユーロピウムまたはクロム−５１で標識されている。溶解された細胞の量は、好ましくは、インキュベーション後の、ユーロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって測定される。適当なコントロールは、当業者によって測定され得、例えば、Ｃｏｒｅ−１陰性細胞（好ましくは、ＮＭ−ＷｔまたはＮＭ−Ｈ９）、標的細胞に結合しない抗体もしくは抗体混合物、および／または免疫エフェクター細胞（例えば、ＰＢＭＣ）なしである。この試験は、適当量の抗体、標識された腫瘍細胞の数、免疫エフェクター細胞の数およびインキュベーション時間に関して、本発明における用途のために、当業者によって最適化され得る。
【００８０】
本発明の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、好ましくは、ユーロピウム放出アッセイを用いて測定される。標的細胞ＮＭ−Ｄ４を、８００μｌのユーロピウム緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４、９３ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭジエチレントリアミン五酢酸、２ｍＭ酢酸ユーロピウム（ＩＩＩ））中、４℃において１０分間インキュベートし、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）においてエレクトロポレーションし（７１０Ｖ，１パルス，３０μｓ）、続いて、氷上でさらに１０分間インキュベートする。その後、その細胞をＲＰＭＩ／５％ＦＣＳ中で５回洗浄し、９６ウェル丸底プレート（Ｎｕｎｃ；５×１０３／ウェル）に播種する。様々な濃度（２００μｌのインキュベーション体積中、０．０５〜５０μｇ／ｍｌの最終濃度）の２０μｌのＣｏｒｅ１特異的抗体または対応するコントロール（培地、アイソタイプコントロールＩｇＧ）を加えた後、ＰＢＭＣ（ヒト末梢血単核（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｅ）細胞、８０μｌ）を、エフェクター細胞として、１００：１〜１０：１の様々なエフェクター細胞／標的細胞比、好ましくは５０：１を用いて加える。自然放出を測定するために、エフェクター細胞を含まない８０μｌのＲＰＭＩ／５％ＦＣＳを加える。最大放出は、エタノールを用いた標的の完全な溶解の後、測定される。
【００８１】
３７℃で４時間インキュベーションした後、そのプレートを５００×ｇで５分間遠心し、すべてのウェルから２０μｌの無細胞上清を、予め準備しておいた平底プレート（Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上の１ウェルあたり２００μｌの増強溶液（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ）にピペットで移す。室温で１５分間インキュベーションした後、蛍光を測定する（Ｖｉｃｔｏｒ２  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ）。特異的な細胞傷害性は、等式（実験溶解−自然溶解）／（最大溶解−自然溶解）×１００％から得られる。
【００８２】
好ましい実施形態において、前記液性免疫応答試験１〜６は、その試験の前に、
ａ．栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分あるいはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程
ｂ．抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体を分離する工程をさらに包含する。
【００８３】
好ましい実施形態において、本発明は、本明細書中の別の箇所に記載されるような、製剤、あるいはＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片もしくは溶解物がヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導するかまたは増強する能力を試験するための液性免疫応答試験を提供し、その試験は、
ａ）本明細書中の別の箇所に記載されるような、前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片をヒトまたは動物に投与する工程；および
ｂ）抗体、血清中の抗体、またはその血清、血漿もしくは便から得られる抗体を単離する工程；および
ｃ）
（ｉ）アシアログリコホリン、ならびにグリコホリンまたはアシアログリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンまたはアシアログリコホリンおよびグリコホリンおよび過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを含む糖タンパク質に対する、上記抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をＥＬＩＳＡにおいて試験する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、アシアログリコホリンに対する前記１つまたはそれ以上の抗体の結合のほうが、グリコホリンおよび／または過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンに対する結合よりも有意に強い結合を示し、そして、アシアログリコホリンに対する結合のほうが、前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたはそれ以上の抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、工程；および／または
（ｉｉ）Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、および好ましくは、過ヨウ素酸塩処理されたＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡを含む、ポリアクリルアミドに結合した炭水化物構造（ＰＡＡ結合体）に対する、上記抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をＥＬＩＳＡにおいて試験する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対する前記１つまたはそれ以上の抗体の結合のほうが、前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたはそれ以上の抗体の結合よりも有意に強い結合を示す、工程；および／または
（ｉｉｉ）ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９を含む細胞に対する、上記抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合をフローサイトメトリー試験においてその結合について試験する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する上記抗体の結合のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そしてＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つまたはそれ以上の抗体に対する結合よりも有意に強い結合を示す、工程；および／または
（ｉｖ）ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９、およびＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９、および好ましくは、過ヨウ素酸塩処理されたＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９を含む細胞に対する、上記抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の結合を免疫蛍光試験においてその結合について試験する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する特定量の上記１つまたはそれ以上の抗体の結合のほうが、ＮＭ−ｗｔもしくはＮＭ−Ｈ９または過ヨウ素酸塩処理されたＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９に対する結合よりも有意に強い結合を示し、そしてＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９に対する結合のほうが、前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された上記１つまたはそれ以上の抗体に対する結合よりも有意に強い結合を示す、工程；および／または
ｄ）抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られる抗体の活性を試験する工程であって、
（ｉ）適当量のユウロピウムまたはクロム−５１で標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られた抗体と、適当量の補体とともに、適当な時間にわたって、代表的には３〜５時間にわたってインキュベートし、そして、インキュベート後のユウロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって上記細胞の溶解を測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、補体なしの溶解、および／または抗体なしの溶解、および／またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１に結合しないかまたはほとんど結合しない１つもしくはそれ以上の抗体を用いる溶解、および／または前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つもしくはそれ以上の抗体を用いたＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解よりも高い溶解を示す、工程；および／または
（ｉｉ）適当量のユウロピウムまたはクロム−５１で標識された、適当量のＺＲ７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔを、適当量の抗体、血清中の抗体、または血清、血漿もしくは便から得られた抗体と、適当量の少なくとも１つの免疫エフェクター細胞または免疫エフェクター細胞を含む細胞の混合物または末梢血単核球とともに、適当な時間にわたって、代表的には３〜５時間または一晩にわたってインキュベートし、そして、インキュベート後のユウロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって上記細胞の溶解を測定する工程であって、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の液性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４細胞またはＮＭ−Ｆ９細胞の溶解のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高い溶解を示すか、またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、抗体なしの溶解、および／またはＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１に結合しないかまたはほとんど結合しない１つもしくはそれ以上の抗体を用いた溶解、および／または前記製剤、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または前記その溶解物もしくは断片を投与する前の同じ動物またはヒトからしかるべく単離された１つもしくはそれ以上の抗体を用いたＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９またはＺＲ−７５−１の溶解よりも高い溶解を示す、工程
を包含する工程
を包含する。
【００８４】
本発明のさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分もしくは溶解物を含んでいる栄養補助食品または薬学的製剤は、上記の液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも２つの液性免疫応答試験について、好ましくは、液性免疫応答試験１および３について、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３について、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４について、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６について、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５、最も好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験について陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導する。
【００８５】
Ｃｏｒｅ−１に対する前記細胞性免疫応答は、例えば、本明細書中に記載される細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも１つによって検出され得る、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞応答である。より好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答またはヘルパーＴ細胞応答である。なおより好ましいのは、細胞性免疫応答試験１、２、３、４および５によって検出され得る、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答およびヘルパーＴ細胞応答である、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答である。最も好ましいのは、細胞性免疫応答試験１、２、３、４および５によって検出され得る、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答およびＴｈ１型ヘルパーＴ細胞応答である、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答である。
【００８６】
前記細胞性免疫応答試験は、炭水化物陽性微生物を負荷された樹状細胞を免疫細胞と接触させ、そして適切な時間にわたって、そして適切な条件下で培養し、続いて、再刺激のために、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された樹状細胞を加え、そして、適切な時間および条件で培養し、続いて、分泌されたＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαまたはＩＮＦγの量を測定するか、あるいはＴ細胞の増殖、またはＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαもしくはＩＮＦγの分泌の阻害、またはＣｏｒｅ−１に対する抗体による増殖を測定するか、あるいは樹状細胞上のＣｏｒｅ−１の提示を測定するか、あるいは活性化免疫細胞、好ましくは、活性化Ｔ細胞によるＣｏｒｅ−１陽性細胞の溶解を測定する工程を包含する。
【００８７】
前記樹状細胞（本明細書中でＤＣとも呼ばれる）は、任意の樹状細胞または樹状細胞の混合物または樹状細胞を含む細胞の混合物または少なくとも１つの樹状細胞であり得る。その樹状細胞は、健常なヒトドナーもしくは疾患（例えば、腫瘍疾患もしくはクローン病もしくはＣｏｒｅ−１陽性疾患または本明細書中の別の箇所において列挙される疾患のうちの１つが挙げられるがこれらに限定されない）を有するヒトドナーまたは動物から由来し得る。前記ＤＣは、当業者に公知のとおりに得て、負荷することができ、代表的には、当業者に公知の適当な分子のある特定の組み合わせを用いると未熟樹状細胞（ｉＤＣ）に分化する、ヒトの血液または骨髄由来のＣＤ３４陽性前駆体細胞またはＣＤ１４陽性単球細胞から得られる。ｉＤＣは、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはＣｏｒｅ−１を有する分子または適切なコントロールを負荷され、当業者に公知の適当な分子のある特定の組み合わせを用いてさらに成熟することにより、Ｔ細胞を活性化することができる負荷成熟樹状細胞（ｍＤＣ）に対応する、負荷樹状細胞が得られる。
【００８８】
前記ＤＣはまた、樹状細胞株（例えば、ヒト樹状細胞株ＮＥＭＯＤ−ＤＣ（Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ；ｗｗｗ．ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ．ｃｏｍから入手可能）またはＭｕｔｚ−３が挙げられるがこれらに限定されない）が起源であり得る。
【００８９】
前記樹状細胞の負荷とは、樹状細胞を、適切な分化状態および成熟状態において、適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分もしくは溶解物あるいは少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子とともに、適当な時間、代表的には２４〜４８時間にわたってインキュベートし（代表的には、これは、適当な分子と組み合わせた、上に記載された成熟工程の中で行う）、免疫細胞（好ましくは、Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞を含むＴ細胞）を活性化することができる負荷樹状細胞をもたらすことを意味する。
【００９０】
前記免疫細胞は、ＰＢＭＣ（末梢血単核球）、またはＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、好ましくはＣＤ４＋かつＣＤ８＋Ｔ細胞を含む他の細胞集団であり得る。当業者は、それらの細胞をヒトまたは動物から得る方法を知っており、それらの細胞の作製は、ヒトの血液または白血球除去血（ｌｅｕｋａｐｈｅｒａｓｅｓ）の血液細胞からフィコール勾配によって調製する工程を包含し得、そして、場合によってはＴ細胞特異的な磁気選別技術によるさらなる富化を包含し得る。
【００９１】
好ましい実施形態において、上記樹状細胞は、少なくとも１つのＭＨＣクラス分子において、好ましくは、ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子において、より好ましくは少なくとも１つのＭＨＣクラスＩおよび１つのＭＨＣクラスＩＩ分子において、より好ましくは、より多くのＭＨＣ分子において、最も好ましくはすべてのＭＨＣ分子において、上記免疫細胞とマッチする。後者は、同じ個体由来の樹状細胞および免疫細胞を得ることによって、達成され得る。
【００９２】
負荷された樹状細胞とともに免疫細胞を培養し、そしてその後、負荷された樹状細胞を加えるのに適した前記時間および条件は、当業者に公知であり、その細胞が存在する条件を考慮に入れて、当業者によって最適化され得る。代表的には、インキュベーション時間は、２工程（初回の活性化および再刺激）の各々に対して７〜１０日である。
【００９３】
記載される細胞性免疫応答試験の意味における前記Ｃｏｒｅ−１を有する分子とは、十分な量の、Ｃｏｒｅ−１を有する細胞もしくは腫瘍細胞、Ｃｏｒｅ−１を有するタンパク質、またはＣｏｒｅ−１を有するポリペプチドのことを意味する。Ｃｏｒｅ−１を有する前記細胞または腫瘍細胞は、生存しているものか、もしくは死んでいるものであり得るか、あるいは、それらの細胞由来の溶解物またはその部分であり得、より好ましいのは、溶解物である。Ｃｏｒｅ−１を有するタンパク質は、キャリアタンパク質などのＣｏｒｅ−１を有する任意のタンパク質であり得、ここで、そのＣｏｒｅ−１は、腫瘍上に結合している。Ｃｏｒｅ−１を有するポリペプチドは、Ｃｏｒｅ−１を有する任意のポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｔｉｄｅ）、好ましくは、ｍＤＣ上にＣｏｒｅ−１とともに提示され得るものであり得る。
【００９４】
記載される細胞性免疫応答試験の意味における前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物とは、生存しているものか、もしくは死んでいるものであり得るか、あるいは、それらの細胞由来の溶解物またはその部分であり得る、十分な量の特定のＣｏｒｅ−１陽性微生物のことを意味し、より好ましいのは、その溶解物または部分である。
【００９５】
コントロールは、免疫応答の陽性をさらに確認するために使用されるべきである。当業者は、以下および実施例１２においていっそう詳細に記載されるように、適切なコントロールを使用することができる。例は、Ｃｏｒｅ−１を有する分子について記載されるようにＤＣ上に負荷され、そして再刺激のために使用されるコントロールの使用であり、（ｉ）Ｃｏｒｅ−１が陰性である細胞、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１を有する分子として、対応する形式でＣｏｒｅ−１陽性細胞に可能な限りよく似ている細胞（例えば、生細胞もしくは死細胞またはそれらの細胞由来の溶解物もしくはその部分）；（ｉｉ）Ｃｏｒｅ−１を有しないタンパク質、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１を有する分子として使用されるのと同じであるが、Ｃｏｒｅ−１を有しないタンパク質、好ましくは、任意のグリコシル化を有しないか、またはシアリル化Ｃｏｒｅ−１構造またはＴｎ構造（ＧａｌＮＡｃα１−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）を含むタンパク質、（ｉｉｉ）Ｃｏｒｅ−１を有しないポリペプチド、好ましくはＣｏｒｅ−１を有する分子として使用されるのと同じであるが、Ｃｏｒｅ−１を有しないポリペプチド、好ましくは、任意のグリコシル化を有しないか、またはシアリル化Ｃｏｒｅ−１構造を有するポリペプチド、を含み得る。さらなるコントロールは、（ｉｖ）Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷されたｍＤＣと同じ方法（成熟に必要な分子および条件を含む）で処理されたが、Ｃｏｒｅ−１を有する分子に対応する任意のさらなる分子を有しない、負荷されていないｍＤＣまたは上述のコントロール（ｉ〜ｉｉｉ）であり得る。実施例および好ましい実施形態では、最も適当なコントロールを詳細に記載しているが、他の適当なものが、当業者によって選択され得る。
【００９６】
本発明の好ましい実施形態において、樹状細胞は、白血病細胞株ＭＵＴＺ−３から得られる機能的樹状細胞（ＤＳＭＺ  ＡＣＣ２９５）またはＭＵＴＺ−３由来の細胞（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＤＣ）［ＤＥ１０１３９４２８  Ａ１、ＷＯ２００３／０２３０２３  Ａ１、ＥＰ０１４１９２４０、ＵＳ２００４０２６５９９８、ＣＡ２４５７２８７、１０１３９４２８．４（ＤＥ）、ＰＣＴ／ＥＰ０２／０９２６０、０２７５８４７４．７（ＥＰ）、ＵＳ１０／４８６，９６６、ＣＡ２，４５７，２８７）において記載されているようなもの］、および、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ［ｗｗｗ．Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ．ｃｏｍ］から入手可能なものである。それらの樹状細胞は、Ｔ細胞を活性化することが十分にでき、ＭＨＣクラス分子を含む表面上の抗原をプロセッシングし、そして／または提示することが十分にできる、活性な樹状細胞である。本発明のさらに好ましい実施形態において、樹状細胞は、ＭＵＴＺ−３から得られる機能的樹状細胞またはＭＵＴＺ−３由来の細胞（例えば、ＮＭＤ−２００）であり、免疫細胞は、ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ｂ４４、好ましくは、ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ４４などのＭＨＣクラスＩ分子においてマッチする。さらに好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９の溶解物は、Ｃｏｒｅ−１を有する分子として使用され、そして、ＮＭ−ｗｔ［これは、ＷＯ２００５／０１７１３０  Ａ２およびＥＰ１６５４３５３に記載されるようなＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９の親細胞である］またはＮＭ−Ｈ９［ＮＭ−Ｈ９Ｄ８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０６であり、これは、シアリル化の能力が異なり、したがって、ＮＭ−Ｄ４およびＮＭ−Ｆ９とは対照的にその表面上にＣｏｒｅ−１を有さない］は、生きているかもしくは死滅しており、または、これらの細胞もしくはその部分からの溶解物のような対応する形式でコントロールとして使用され、ＤＣ上に負荷され、かつ、再刺激のために使用される溶解物がより好ましい。別の好ましい実施形態において、グリコホリンもしくは過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンは、各々がアシアログリコホリンについてのコントロールとしてＤＣ上に負荷されかつ再刺激のために使用される。より好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９およびアシアログリコホリンの溶解物は、再刺激のためのＣｏｒｅ−１を有する分子として使用され、そして、グリコホリンもしくは過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンおよび／または負荷されていないＤＣが、陰性コントロールとして使用される。
【００９７】
当業者に公知の細胞性の免疫学的方法に対してどのコントロールが特に代表的であるかは実験ごとに異なるので、コントロールは、当業者に公知のように、その試験に対して並行して設定されなければならない。
【００９８】
１つの実施形態によれば、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する、インビトロにおける細胞性免疫応答試験を提供し、その試験は、
ａ．）少なくとも１つの樹状細胞に第１のＣｏｒｅ−１陽性化合物を負荷する工程（ここで、前記Ｃｏｒｅ−１陽性化合物は、Ｃｏｒｅ−１を有する）；
ｂ．）前記Ｃｏｒｅ−１陽性化合物を負荷された適当量の前記少なくとも１つの樹状細胞を、樹状細胞によって活性化され得るかまたは抑制され得る適当量の免疫細胞と接触させる工程；
ｃ．）前記免疫細胞と、前記負荷された樹状細胞との相互作用を可能にするために培養する工程；
ｄ．）Ｃｏｒｅ−１を有する適当量の少なくとも１つの第２化合物を負荷された、適当量の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を加える工程（ここで、前記第２化合物は、前記第１のＣｏｒｅ−１陽性化合物と異なる）；
ｅ．）前記免疫細胞の再刺激のために培養する工程、
ｆ．）再刺激された免疫細胞の量を測定する工程
を包含する。
【００９９】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または化合物が一般に細胞性免疫応答を引き起こすことができるか否かを測定するための方法を提供する。これまで、従来技術では、炭水化物は、細胞性免疫応答を引き起こすことができないと考えられていた。しかしながら、現在、ある特定の炭水化物、ここではＣｏｒｅ−１が、細胞性免疫応答を誘発することができると見出された。従って、ある特定の炭水化物、ここではＣｏｒｅ−１が、（例えば、本発明によるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはＣｏｒｅ−１結合体によって）提示される形態で、実際に、それぞれの応答を引き起こし得るかを測定するため、それによって、前記Ｃｏｒｅ−１陽性化合物が、適当な治療薬／栄養補助食品であるかを測定するための試験システムを提供することが重要である。従って、本発明は、樹状細胞が、Ｔ細胞などの免疫細胞をプライミングでき、かように刺激することができるので、樹状細胞を使用する。樹状細胞は、自身が遭遇した化合物をプロセッシングし、そしてそのプロセッシングした化合物／抗原を自身の表面上に提示する。しかしながら、樹状細胞などのＭＨＣ細胞は、ある特定の種類の抗原のみを提示することができ、そして、これらの化合物／微生物が細胞性免疫応答を誘発することができる場合にのみ、−その微生物上もしくはキャリア上のその周囲において−Ｃｏｒｅ−１エピトープが樹状細胞によって正確に提示され得るか否かを測定することが重要である。この細胞性免疫応答試験の原理は、図２３に図解されている。
【０１００】
ゆえに、樹状細胞は、目的のＣｏｒｅ−１陽性化合物を負荷される。前記化合物は、例えば、本明細書中に記載されるようなＣｏｒｅ−１を有する微生物、腫瘍細胞またはＣｏｒｅ−１を有する他の任意の化合物であり得る。負荷に適する条件およびＣｏｒｅ−１構造を有する適当な化合物は、本明細書中に記載される。
【０１０１】
そして、前記負荷された樹状細胞を、免疫細胞、特に、Ｔ細胞などのリンパ球と接触させる。その免疫細胞は、例えば、ヒトドナーから得ることができる。免疫細胞のレセプターがマッチする、抗原を提示している樹状細胞は、リンパ球を活性化し、かように刺激し、それによってそれらの増殖および生存が可能となる。樹状細胞によって提示される抗原とマッチしないリンパ球は、活性化されず、死滅する。
【０１０２】
この１回目の刺激によって、前記負荷された樹状細胞によって提示される任意の対応する抗原（存在する場合、Ｃｏｒｅ−１が挙げられる）に特異的な活性化リンパ球が提供される。しかしながら、本方法の目的は、目的の炭水化物／抗原−ここでは、Ｃｏｒｅ−１−を含む化合物が細胞性応答を刺激することができるかどうかを同定することである。
【０１０３】
ゆえに、目的のＣｏｒｅ−１がリンパ球を刺激し、そして細胞性応答を引き起こすかどうかを測定するために、リンパ球を再刺激する選択工程を行う。前記選択工程では、例えば樹状細胞などの抗原提示細胞に、目的のＣｏｒｅ−１もまた有する第２化合物を負荷する。しかしながら、前記第２化合物は、第１化合物とは異なるものである。例えば、第１化合物は、Ｃｏｒｅ−１を有する微生物であり、そして第２化合物は、Ｃｏｒｅ−１を有する腫瘍細胞である。この第２化合物もまた、ＡＰＣによってプロセッシングされ、前記ＡＰＣによってその抗原が提示される。第２化合物が、第１化合物とは異なるものであるので、提示されるほとんどの抗原、好ましくはすべての抗原が、目的のＣｏｒｅ−１のほかに、１回目に提示された抗原と異なる。これは、それらのリンパ球だけが、前記ＡＰＣによって提示されたマッチする抗原、すなわち、Ｃｏｒｅ−１を見つけ出す２回目の再刺激に対して生き残るという効果を有する。１回目の樹状細胞ならびに２回目のＡＰＣの両方が、Ｃｏｒｅ−１（またはＣｏｒｅ−１を免疫学的に模倣する構造）を含むかまたはＣｏｒｅ−１からなる抗原を提示する場合、前記抗原を認識するリンパ球が刺激され、そしてそれらが再刺激されるとき生き残る。前記第２のＣｏｒｅ−１陽性化合物を負荷された前記ＡＰＣと接触するとき、マッチするパートナーが見つからないそれらのリンパ球は、再刺激されないことに起因して死滅する。この選択工程によって、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性応答の検出が確実にする。
【０１０４】
最後の工程では、リンパ球が、実際に再刺激されたかどうかを測定する。これは、例えば、
−前記リンパ球が（再）刺激される場合に分泌されるリンパ球の分泌産物（例えば、インターフェロンα、インターフェロンγまたはＧＭ−ＣＳＦ）
−Ｔ細胞の増殖
を測定することによって行われ得る。
【０１０５】
再刺激が起きているかどうかを測定するのに適した試験は、本明細書中に記載される。
【０１０６】
前記試験の特異性は、樹状細胞／ＡＰＣによって提示されているときのＣｏｒｅ−１を特異的に認識する炭水化物結合構造を用いることによって増強され得る。前記実施形態によれば、工程ｃ）による前記刺激されたリンパ球の少なくとも一部は、Ｃｏｒｅ−１結合分子の存在下において、適当量の少なくとも１つの第２のＣｏｒｅ−１陽性化合物を負荷された適当量の抗原提示細胞（ＡＰＣ）と接触する（ここで、前記第２化合物は、前記第１のＣｏｒｅ−１陽性化合物とは異なる）。前記Ｃｏｒｅ−１結合分子は、ＡＰＣと前記リンパ球との相互作用を遮断し、それによって、再刺激が妨げられおよびそれゆえ細胞の生存が妨げられる。このさらなる工程は、目的のＣｏｒｅ−１が、リンパ球を特異的に刺激し、そしてかように特異的な細胞性免疫応答を引き起こすことをさらに確実にする。この特異性を増大する／確かにする工程は、並行して（工程ｃによる刺激されたリンパ球を分割することによって）行われ得るか、または前記増大する／確かにする工程を追加的に、つまり後で行うことによって行われ得る。適切なＣｏｒｅ−１結合分子、好ましくは抗体は、本明細書中に記載される。
【０１０７】
一つの実施形態によれば、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験（細胞性免疫応答試験１）を提供し、その試験は、
ａ）適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物もしくは部分、それらを含んでいる製剤と、本発明の栄養補助食品または薬学組成物を負荷された、適当量の、少なくとも１つの樹状細胞を含む樹状細胞、複数の樹状細胞、または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、適当量の、少なくとも１つの免疫細胞を含む免疫細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物、または末梢血単核球（これらは、樹状細胞によって活性化され得るか、または抑制され得る）とともに、接触させる工程、
ｂ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下で、培養する工程、
ｃ）適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された、適当量の、少なくとも１つの樹状細胞を含む樹状細胞、複数の樹状細胞、または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を加える工程、
ｄ）再刺激のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下で、培養する工程、
ｅ）分泌されたＧＭ−ＣＳＦの量を例えばＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴによって測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌のほうが、対応する負荷されていない樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌よりも高いこと、そして／または、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌のほうが、Ｃｏｒｅ−１を有していない分子を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌よりも高いこと、そして／または、アシアログリコホリンを負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌のほうが、グリコホリンもしくは過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌よりも有意に高いこと、そして／または、（ｉｖ）ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物または部分を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌のほうが、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌よりも有意に高いことを示す工程、
を包含する。
【０１０８】
対応する免疫細胞とは、少なくとも１つの免疫細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞もしくは末梢血単核球を含む細胞の混合物、または別の箇所に記載される他の細胞、および細胞の混合物であるかあるいはそれらを含む同じ免疫細胞（この免疫細胞は、樹状細胞によって活性化され得るか、または抑制され得る）が、比較を可能にするために、前記免疫細胞に対して使用されるもの以外の、コントロール分子または試験分子、分子の混合物、細胞、細胞の溶解物もしくは部分、微生物もしくはその部分を用いる、コントロール試験または比較試験に使用されることを意味する。
【０１０９】
対応する樹状細胞とは、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された、少なくとも１つの樹状細胞、複数の樹状細胞、または少なくとも１つの樹状細胞もしくは別の箇所に記載される他の細胞を含む細胞の混合物、およびＴ細胞を活性化することができる細胞の混合物であるかあるいはそれらを含む同じ樹状細胞が、比較を可能にするために、コントロール分子もしくは試験分子、分子の混合物、細胞、細胞の溶解物もしくは部分、微生物もしくはそれらの部分を用いて、または前記樹状細胞に対して使用されるもの以外の任意のものを用いずに、コントロール試験または比較試験のために使用されることを意味する。
【０１１０】
このことは、当業者に公知であり、それらは、当業者によって選択され得る。これは、実施例において詳細に示される。明確にするために：例えば、最適に比較できるように、同じ調製物からの同じ量の免疫細胞を、同じ量のアシアログリコホリンを負荷された、そして、平行して同じ量のグリコホリンまたは過ヨウ素酸塩処理アシアログリコホリンを負荷された同じ調製物からの同じ量の樹状細胞と接触させ、そして、その試験において使用する。
【０１１１】
変形は、当業者に公知であり、当業者によって測定され得るか、または実施例に詳細に記載される。
【０１１２】
前記細胞性免疫応答試験１は、ＧＭ−ＣＳＦの誘導される特異的な分泌を測定することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物によるＣｏｒｅ−１特異的なＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋活性型Ｔ細胞へのＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を試験し、この試験は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分を負荷された樹状細胞と免疫細胞とを接触させる工程、適切な時間および条件で培養する工程、続いて、再刺激のために、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された樹状細胞を加える工程、および適切な時間および条件で培養する工程、続いて、この再刺激に応答して分泌されたＧＭ−ＣＳＦの量を測定する工程を包含する。分泌されたＧＭ−ＣＳＦの量の前記測定は、好ましくは、ＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴによって、より好ましくは、ＥＬＩＳＡによって行われ、この測定は、当業者に公知である。本発明の最も好ましい実施形態において、細胞性免疫応答試験１は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された、ＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた機能的樹状細胞を、少なくともＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ２）および（ＨＬＡ−Ｂ４４）においてマッチするＰＢＭＣ（末梢血単核球）と接触させる工程、適切な時間および条件で、代表的には７〜１０日間、これらの細胞を培養する工程、続いて、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物またはアシアログリコホリンを負荷されたＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた機能的樹状細胞を、再刺激のために加える工程、そして適切な時間および条件で、代表的には７〜９日間培養する工程、続いて、ＥＬＩＳＡ解析またはＥＬＩＳＰＯＴ解析において、分泌されたＧＭ−ＣＳＦの量を測定する工程を包含する。ＧＭ−ＣＳＦ放出のＥＬＩＳＡ解析およびＥＬＩＳＰＯＴ解析は、当業者に公知であり、実施例に詳細に記載される。Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の細胞性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物を負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌のほうが、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞の分泌よりも高い分泌を示し、そして／または、アシアログリコホリンを負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ分泌のほうが、グリコホリンで負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞の分泌よりも高い分泌を示す。好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９で誘導されたＧＭ−ＣＳＦの分泌は、ＮＭ−Ｗｔで誘導されたものよりも２倍高く、より好ましくは、２倍高い。好ましい実施形態において、アシアログリコホリンで誘導されたＧＭ−ＣＳＦの分泌は、グリコホリンで誘導されたものよりも２倍高く、より好ましくは、３倍高い。細胞性免疫応答試験１の好ましい実施形態は、実施例１２において詳細に記載される。
【０１１３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験（細胞性免疫応答試験２）を提供し、この試験は、
ａ．適当量の、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物もしくは部分、それらを含んでいる製剤、本発明の栄養補助食品または薬学組成物を負荷された、適当量の、少なくとも１つの樹状細胞、樹状細胞（複数）または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、少なくとも１つの免疫細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物または末梢血単核球（これらは、樹状細胞によって活性化され得るか、または抑制され得る）を含む適当量の免疫細胞と接触させる工程
ｂ．適切な時間にわたって、そして適切な条件下で培養する工程
ｃ．適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された、適当量の、少なくとも１つの樹状細胞を含む樹状細胞、複数の樹状細胞、または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を加える工程
ｄ．再刺激のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下で培養する工程、および
ｅ．分泌されたＩＦＮγおよび／または分泌されたＴＮＦαの量をＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴによって測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、対応する負荷されていない樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＩＦＮγおよび／もしくはＴＮＦαの分泌よりも高いこと、そして／または、Ｃｏｒｅ−１を有している分子を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦα分泌のほうが、Ｃｏｒｅ−１を有していない分子を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも高いこと、そして／または、アシアログリコホリンを負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、グリコホリンもしくは過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高いこと、そして／または、（ｉｖ）ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物または部分を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＩＮＦγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高いことを示す工程、
を包含する。
【０１１４】
前記細胞性免疫応答試験２は、特異的に誘導されたＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌を測定することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物による、Ｃｏｒｅ−１特異的な活性化された細胞傷害性Ｔ細胞に対する、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）およびまたはＴｈ１（傷害性Ｔヘルパー細胞））の活性化を試験し、この試験は、Ｃｏｒｅ−１微生物を負荷された樹状細胞と免疫細胞とを接触させる工程、および、適切な時間および条件で培養する工程、続いて、再刺激のために、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された樹状細胞を加える工程、および適切な時間および条件で培養する工程、続いて、この再刺激に応答して分泌されたＧＭ−ＣＳＦの量を測定する工程を包含する。分泌されたＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの量の前記測定は、好ましくは、ＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴによって、より好ましくは、ＥＬＩＳＰＯＴによって行われ、その測定は、当業者に公知である。本発明の最も好ましい実施形態において、細胞性免疫応答試験２は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された、ＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた機能的樹状細胞を、少なくともＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ４４）においてマッチするＰＢＭＣ（末梢血単核球）と接触させる工程、適切な時間および条件で、代表的には７〜１０日間、これらの細胞を培養する工程、続いて、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物、またはアシアログリコホリンを負荷されたＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた機能的樹状細胞を、再刺激のために加える工程、適切な時間および条件で、代表的には７〜９日間培養する工程、続いて、分泌されたＩＦＮγの量をＥＬＩＳＰＯＴ解析によって測定する工程および／または分泌されたＴＮＦαの量をＥＬＩＳＡ解析によって測定する工程を包含する。ＴＮＦαおよびＩＦＮγのＥＬＩＳＡ解析およびＥＬＩＳＰＯＴ解析は、当業者に公知であり、実施例に詳細に記載される。Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の細胞性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９の溶解物を負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞によるＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞の分泌よりも高い分泌を示し、そして／または、アシアログリコホリンを負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞のＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、グリコホリンを負荷されたＤＣで再刺激された免疫細胞の分泌よりも高い分泌を示す。好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９で誘導されるＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌は、ＮＭ−ｗｔで誘導される分泌よりも２倍高く、より好ましくは、３倍高い。好ましい実施形態において、アシアログリコホリンで誘導されるＧＭ−ＣＳＦの分泌は、グリコホリンで誘導される分泌よりも２倍高く、より好ましくは３倍高い。細胞性免疫応答試験２の好ましい実施形態は、実施例１２に詳細に記載される。
【０１１５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験（細胞性免疫応答試験３）を提供し、前記細胞性免疫応答試験３は、
ａ）適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された、適当量の、少なくとも１つの樹状細胞を含む樹状細胞、複数の樹状細胞、または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物、その溶解物もしくは部分、それらを含んでいる製剤、本発明の栄養補助食品あるいは薬学組成物を、適当量の、少なくとも１つの免疫細胞を含む免疫細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物、または末梢血単核球（これらは、樹状細胞によって活性化され得るか、または抑制され得る）と接触させる工程、ｂ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下で培養する工程、
ｃ）適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された、適当量の、少なくとも１つの樹状細胞を含む樹状細胞、複数の樹状細胞、または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を加える工程、
ｄ）再刺激のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下で培養する工程、および
ｅ）好ましくはＷＳＴ反応を比色測定と組み合わせて使用することによって、増殖および／または増殖誘導を測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された前記樹状細胞で再刺激されたときの、ある特定の時間にわたる培養後のＴ細胞の増殖または数のほうが、対応する負荷されていない樹状細胞で再刺激された増殖または数よりも高いこと、そして／または、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された前記樹状細胞で再刺激されたときの、ある特定の時間にわたる培養後のＴ細胞の増殖または数のほうが、Ｃｏｒｅ−１を有していない分子を負荷された対応する樹状細胞で再刺激されたときの増殖または数よりも有意に高いこと、そして／または、アシアログリコホリンを負荷された前記樹状細胞で再刺激されたときの、ある特定の時間にわたる培養後の免疫細胞の増殖またはＴ細胞の数のほうが、グリコホリンもしくは過ヨウ素酸塩処理されたアシアログリコホリンを負荷された対応する樹状細胞で再刺激されたときの増殖または数よりも有意に高いこと、そして／または、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物または部分を負荷された前記樹状細胞で再刺激されたときの、ある特定の時間にわたる培養後の免疫細胞の増殖またはＴ細胞の数のほうが、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞の増殖または数よりも有意に高いことを示す工程、
を包含する。
【０１１６】
前記細胞性免疫応答試験３は、Ｔ細胞の増殖の誘導を測定することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物によるＣｏｒｅ−１に特異的な活性化Ｔ細胞に対するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を試験し、この試験は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された樹状細胞と免疫細胞とを接触させる工程、適切な時間および条件で培養する工程、続いて、再刺激のために、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された樹状細胞を加える工程、適切な時間および条件で培養する工程、続いて、増殖を測定する工程を包含する。増殖誘導の前記測定は、好ましくは、ＷＳＴ反応を、比色測定ならびにＤＣのみおよび再刺激されていない免疫細胞のみの差し引きと組み合わせて用いて行われ、それは、当業者に公知であり、実施例１２に記載される。本発明の最も好ましい実施形態において、細胞性免疫応答試験３は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された、ＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた機能的樹状細胞を、少なくともＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ４４）においてマッチするＰＢＭＣ（末梢血単核球）と接触させる工程、適切な時間および条件で、代表的には７〜１０日間、これらの細胞を培養する工程、続いて、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物またはアシアログリコホリンを負荷されたＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた機能的樹状細胞を、再刺激のために加える工程、適切な時間および条件で、代表的には７〜９日間培養する工程、続いて、上に、および実施例１２にさらに詳細に記載されるように増殖率を測定する工程を包含する。Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷されたＤＣで再刺激されたＴ細胞の増殖のほうが、ＤＣのみおよび負荷されていないｍＤＣまたは対応するコントロールで負荷されたＤＣと接触したＴ細胞の増殖率よりも高い増殖を示す。好ましい実施形態において、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９を負荷されたＤＣで誘導されたＴ細胞の増殖は、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９で誘導されたものよりも２倍高く、より好ましくは３倍高い。細胞性免疫応答試験３の好ましい実施形態は、実施例１２において詳細に記載される。
【０１１７】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験（細胞性免疫応答試験４）を提供し、その試験は、適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片、それらを含んでいる製剤、本発明の栄養補助食品もしくは薬学的組成物、またはＣｏｒｅ−１を有する分子、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を含んでいる混合物、Ｃｏｒｅ−１が陽性である細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された、適当量の１つもしくはそれ以上の樹状細胞または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体、好ましくは、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７と接触させる工程を包含し、ここで、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の結合が、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷された前記１つまたはそれ以上の樹状細胞に対する結合のほうが、負荷されていない対応する１つもしくはそれ以上の樹状細胞に対する結合、またはＣｏｒｅ−１を有していない分子もしくは過ヨウ素酸塩で処理されたＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された対応する１つもしくはそれ以上の樹状細胞に対する結合よりも強いとき、および／または、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の結合が、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物もしくは断片、その栄養補助食品、薬学的組成物または製剤を負荷された前記１つもしくはそれ以上の樹状細胞に対する結合のほうが、負荷されていない対応する１つもしくはそれ以上の樹状細胞に対する結合またはＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合されない微生物を負荷された対応する１つもしくはそれ以上の樹状細胞に対する結合、または過ヨウ素酸塩処理後のＣｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された対応する１つもしくはそれ以上の樹状細胞に対する結合よりも強い結合であるとき、前記１つまたはそれ以上の樹状細胞上のＣｏｒｅ−１の陽性の提示が存在する。
【０１１８】
前記細胞性免疫応答試験４は、樹状細胞がＣｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された後にその樹状細胞の表面上にＣｏｒｅ−１を提示する能力（負荷された樹状細胞が微生物由来のＣｏｒｅ−１をプロセッシングし、そしてＴ細胞などの免疫細胞に提示する能力を示す）を試験し、この試験は、適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物を、適当な分化状態および成熟状態、好ましくは、当業者に公知の分子の適切なカクテルを用いて後にｍＤＣに成熟する未熟ＤＣと接触させる工程、および本発明のＣｏｒｅ−１特異的抗体と前記負荷されたＤＣとの結合を試験することによって、負荷されたＤＣによるＣｏｒｅ−１の提示を測定する工程を包含する。前記結合の試験は、適切な方法、好ましくは、免疫細胞化学、免疫蛍光またはフローサイトメトリー、より好ましくは、免疫細胞化学によって行われ、これらの方法は当業者に公知であり、実施例に記載される。その試験は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷されたＤＣに対するＣｏｒｅ−１特異的抗体の結合のほうが、負荷されていないＤＣに対する結合よりも、またはより好ましくは、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって結合されない微生物で負荷されたＤＣに対する結合よりも、もしくは過ヨウ素酸塩処理後のＣｏｒｅ−１陽性微生物を負荷されたＤＣに対する結合よりも強いとき、負荷されたＤＣの陽性の提示を示す。本発明の最も好ましい実施形態において、細胞性免疫応答試験４は、ＭＵＴＺ−３に由来する細胞から得られた適当量の機能的未熟樹状細胞と、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の溶解物とを接触させる工程、続いて、実施例１２に記載されるような適当な分子のカクテルを用いて、２４時間〜４８時間、培養して成熟させる工程、およびＣｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１もしくはＮｅｍｏｄ−ＴＦ２もしくはＡ７８−Ｇ／Ａ７を用いた免疫蛍光顕微鏡法（免疫細胞化学）によりＣｏｒｅ−１の提示を試験する工程を包含する。好ましい実施形態において、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７の結合は、Ｃｏｒｅ−１陰性微生物を負荷されたＤＣよりも少なくとも２倍高く、より好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷されたＤＣに対するＮｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７の強力な結合が検出され得、そして、背景レベルを上回る抗体の結合は、負荷されていないＤＣまたはＣｏｒｅ−１陰性微生物を負荷されたＤＣでは得られない。
【０１１９】
細胞性免疫応答試験４の好ましい実施形態は、実施例１２において詳細に記載される。
【０１２０】
別の実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験（細胞性免疫応答試験５）を提供し、その試験は、
ａ）適当量のユーロピウムまたはクロム−５１で標識された、細胞株ＺＲ−７５−１、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＮＭ−Ｈ９および／またはＮＭ−ｗｔ由来の適当量の標的細胞を、Ｃｏｒｅ−１に向けられた少なくとも１つの免疫細胞またはＣｏｒｅ−１に向けられた少なくとも１つの免疫細胞を含む細胞の混合物とともに、適当な時間（代表的には３〜６時間または一晩）にわたって、そして適当な条件下でインキュベートする工程、および
ｂ）ユーロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって、標的細胞の溶解を測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対して陽性の細胞性免疫応答は、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解のほうがＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９の溶解よりも有意に高いことを示し、そして／または、Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞とインキュベートされた、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解のほうが、対応するコントロール免疫細胞とインキュベートされた、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９もしくはＺＲ−７５−１の溶解よりも有意に高いことを示す、工程
を包含する。
【０１２１】
前記ＣＩＲＴ（細胞性免疫応答試験）５は、Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞（例えば、１つのＴ細胞または複数のＴ細胞、Ｔ細胞クローン、Ｔ細胞株、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／またはＰＢＭＣが挙げられるがこれらに限定されない）のＣｏｒｅ−１に特異的な細胞傷害を試験する。
【０１２２】
Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞の作製は、本明細書中の別の箇所において記載される。
【０１２３】
本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞は、本発明の製剤、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分もしくは溶解物をヒトまたは動物に投与することによって、より好ましくは、本発明の製剤、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分もしくは溶解物をヒトまたは動物に投与することによって、続いて、当業者に公知の技術および本明細書中に記載される技術（例えば、全血もしくは白血球搬出法の血球からの免疫細胞のＦｉｃｏｌｌ勾配分離、および／または、免疫磁気ビーズ分離技術による免疫細胞の部分集団の分離であるがこれらに限定されない）によって、そのヒトまたは動物から免疫細胞を分離することによって、得られる。
【０１２４】
本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞は、ＣＩＲＴ５において、本発明の製剤、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分もしくは溶解物あるいはＣｏｒｅ−１を有する分子または腫瘍細胞を負荷された樹状細胞を使用する前に、本明細書中のいずれかの場所に記載されるようにして、それらで少なくとも１回再刺激される。
【０１２５】
本発明のより好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞は、ＣＩＲＴ５において、本発明の製剤、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分もしくは溶解物あるいはＣｏｒｅ−１を有する分子または腫瘍細胞を負荷された樹状細胞を使用する前に、それらで少なくとも２回以上再刺激され、ここで、異なるキャリア上のＣｏｒｅ−１（例えば、微生物、Ｃｏｒｅ−１を有する分子、Ｃｏｒｅ−１を有するタンパク質または腫瘍細胞上のＣｏｒｅ−１またはそれら由来のＣｏｒｅ−１が挙げられるがこれらに限定されない）が、再刺激の異なる回に対して使用される。
【０１２６】
さらにより好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１で活性化されたＴ細胞は、Ｃｏｒｅ−１を含み、かつ、Ｃｏｒｅ−１微生物上、好ましくは、溶解の量を測定するために使用されない、Ｃｏｒｅ−１が陽性である腫瘍細胞からの溶解物上に存在しない別の分子または細胞もしくは前記細胞の断片を負荷された樹状細胞で少なくとも１回再刺激される。本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１に対してもたらされる免疫細胞の活性化もしくは調製、またはＣｏｒｅ−１特異的免疫細胞の再刺激、またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞の溶解は、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって阻害される。
【０１２７】
この試験は、適当量の標識されたＣｏｒｅ−１陽性標的細胞（例えば、ＺＲ７５−１、好ましくは、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９）を、Ｃｏｒｅ−１に向けられた適当量の免疫細胞とともに、適当な時間、代表的には、３〜６時間または一晩にわたってインキュベートする工程を包含する。上記Ｃｏｒｅ−１陽性細胞は、溶解された細胞の測定を可能にするユーロピウムまたはクロム−５１で標識される。溶解された細胞の量は、好ましくは、インキュベーション後の、ユーロピウムまたはクロム−５１の放出を測定することによって測定される。適当なコントロールは、当業者によって測定され得、例えば、Ｃｏｒｅ−１陰性細胞（好ましくは、ＮＭ−ＷｔもしくはＮＭ−Ｈ９）またはＣｏｒｅ−１に向けられていない対応するコントロール免疫細胞であり得る。この試験は、標識された腫瘍細胞の適当な数、免疫エフェクター細胞の適当な数および適当なインキュベーション時間に関して、本発明において使用するために、当業者によって最適化され得る。
【０１２８】
好ましい実施形態において、ＣＩＲＴ５は、ユーロピウム放出アッセイを用いて行われる。標的細胞ＮＭ−Ｄ４を、８００μｌのユーロピウム緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４、９３ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭジエチレントリアミン五酢酸、２ｍＭ酢酸ユーロピウム（ＩＩＩ））中、４℃において１０分間インキュベートし、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）においてエレクトロポレーションし（７１０Ｖ，１パルス，３０μｓ）、続いて、氷上でさらに１０分間インキュベートする。その後、その細胞をＲＰＭＩ／５％ＦＣＳ中で５回洗浄し、９６ウェル丸底プレート（Ｎｕｎｃ；５×１０３／ウェル）に播種する。その後、様々なエフェクター細胞／標的細胞比１００：１〜５：１、好ましくは、５０：１〜２０：１のエフェクター細胞／標的細胞比を用いて、Ｃｏｒｅ−１に向けられた免疫細胞または対応する免疫細胞をエフェクター細胞として加える（１００μｌ／ウェル）。自然放出を測定するために、エフェクター細胞を含んでいない１００μｌのＲＰＭＩ／５％ＦＣＳを加える。最大放出は、エタノールを用いた標的の完全な溶解の後に測定される。
【０１２９】
３７℃で４時間インキュベーションした後、そのプレートを５００×ｇで５分間遠心し、すべてのウェルから２０μｌの無細胞上清を、予め準備しておいた平底プレート（Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上の１ウェルあたり２００μｌの増強溶液（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ）にピペットで移す。室温で１５分間インキュベーションした後、蛍光を測定する（Ｖｉｃｔｏｒ２  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ）。特異的な細胞傷害性は、等式（実験溶解−自然溶解）／（最大溶解−自然溶解）×１００％から得られる。
【０１３０】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験を提供し、その試験は、
ａ．）少なくとも１つの樹状細胞または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を含む適当量の未熟樹状細胞に、適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物もしくは断片、または本明細書中の別の箇所に記載されるような製剤を負荷する工程
ｂ．）成熟させるために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程
ｃ．）適当量の前記負荷された樹状細胞を、少なくとも１つの免疫細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物、または末梢血単核球を含む適当量の免疫細胞（これらは樹状細胞によって活性化され得るかまたは阻害され得る）と接触させる工程
ｄ．）活性化または阻害のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程
ｅ．）適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する抗原または適当なコントロール抗原を負荷された、少なくとも１つの樹状細胞または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を含む適当量の樹状細胞を再刺激のために加える工程
ｆ．）再刺激のために、適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程
ｇ．）ＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴによって、分泌されたＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの量を測定する工程であって、ここで、Ｃｏｒｅ−１に対する陽性の細胞性免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１を有する抗原を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、負荷されていない対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／またはＣｏｒｅ−１を有する抗原を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、Ｃｏｒｅ−１を有していない抗原を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／またはアシアログリコホリンを負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、グリコホリンまたは過ヨウ素酸塩で処理されたアシアログリコホリンを負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示し、そして／またはＮＭ−Ｄ４またはＮＭ−Ｆ９の溶解物または断片を負荷された前記樹状細胞で再刺激された前記免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌のほうが、ＮＭ−ｗｔまたはＮＭ−Ｈ９の溶解物を負荷された対応する樹状細胞で再刺激された対応する免疫細胞のＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγおよび／またはＴＮＦαの分泌よりも有意に高い分泌を示す、工程
を包含する。
【０１３１】
本発明のさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは部分を含んでいる栄養補助食品または薬学組成物は、細胞性免疫応答試験１〜５のうち少なくとも２つの細胞性免疫応答試験について陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答を誘導する。
【０１３２】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは部分を含んでいる栄養補助食品または薬学的製剤は、少なくとも１つの液性免疫応答試験および少なくとも１つの細胞性免疫応答試験について陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性および細胞性の免疫応答を誘導する。
【０１３３】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは部分を含んでいる栄養補助食品または薬学的製剤は、少なくとも２つの液性免疫応答試験および２つの細胞性免疫応答試験、好ましくは、液性免疫応答試験１および３ならびに細胞性免疫応答試験１および３、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３ならびに細胞性免疫試験１、２および３、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４ならびに細胞性免疫応答試験１、２、３および４、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６ならびに５つすべての細胞性免疫応答試験、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５ならびに５つすべての細胞性免疫応答試験、最も好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験について陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性および細胞性の免疫応答を誘導する。
【０１３４】
別の好ましい実施形態において、本発明は、細胞性免疫応答試験１〜５を提供し、ここで、樹状細胞、複数の樹状細胞、または樹状細胞を含む細胞の混合物は、前記免疫細胞と接触するとき成熟樹状細胞である少なくとも１つの樹状細胞を含む。
【０１３５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、細胞性免疫応答試験１〜５を提供し、ここで、樹状細胞、複数の樹状細胞、または細胞の混合物は、ＭＵＴＺ−３由来の細胞から得られる機能的樹状細胞を含む。
【０１３６】
別の好ましい実施形態において、本発明は、細胞性免疫応答試験１〜５を提供し、ここで、前記免疫細胞は、前記樹状細胞と少なくとも１つのＭＨＣクラスＩ分子においてマッチする。
【０１３７】
別の好ましい実施形態において、本発明は、細胞性免疫応答試験１〜５を提供し、ここで、Ｃｏｒｅ−１を有する分子は、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９の溶解物または部分、あるいはアシアログリコホリンである。
【０１３８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において、本発明による栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤によって誘導されるかまたは増大される、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を測定するための、上に記載されたような免疫応答試験のうちのいずれかの使用について言及する。
【０１３９】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤を投与せずに、または投与する前に、ヒトまたは動物における天然に存在する免疫応答を試験するための上に記載されたような免疫応答試験のうちのいずれかの使用について言及する。
【０１４０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、本発明による栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤の、有効量、最大有効量、用量、投薬レジメン、投与経路、組成、調合、キャリアおよびそれらとともに使用される他の分子を測定し、最適化するための上に記載されたような免疫応答試験のうちのいずれかの使用について言及する。
【０１４１】
本発明の前記栄養補助食品は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片のみ（例えば、生存しているかもしくは死滅している微生物、凍結乾燥された微生物、または低温殺菌された微生物、あるいはそれらの溶解物または成分または断片、あるいは液体中に少なくとも部分的に可溶化された形態が挙げられるがこれらに限定されない）からなり得るか、または追加の成分（例えば、当業者に公知の他の栄養分、栄養添加物、または食物もしくは飲み物の添加物、溶液またはエマルジョンが挙げられるがこれらに限定されない）からなり得る。前記栄養補助食品は、様々な形態（例えば、カプセル、錠剤、エマルジョン、粉末、液体）で経口的に適用され得る。栄養補助食品は、単独で投与され得るか、または食物もしくは飲み物に混合され得る。前記栄養補助食品は、任意の食物、飲み物、飲み物もしくは食物の成分、食品添加物、または独立系の栄養補助食品でもあり得る。
【０１４２】
好ましい実施形態において、栄養補助食品は、カプセルまたは錠剤として使用される。別の好ましい実施形態において、栄養補助食品は、食物または飲み物（例えば、本発明の別の箇所において列挙されるものが挙げられるがこれらに限定されない）に混合される。
【０１４３】
Ｂ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が免疫応答を誘導する能力を試験するための方法、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を単離するための方法、栄養補助食品および薬学的組成物に適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分が、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導する能力を試験するための方法をさらに提供し、その方法は、
ａ）適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分を少なくとも１つのヒトまたは動物に投与する工程、
ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つにおいて免疫応答を試験する工程
を包含する。
【０１４４】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分が、Ｃｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答を誘導する能力を試験するための方法をさらに提供し、その方法は、
ａ）適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分を少なくとも１つのヒトまたは動物に投与する工程、および
ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの細胞性免疫応答試験において免疫応答を試験する工程
を包含する。
【０１４５】
好ましい実施形態において、本発明は、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤のいずれかが、免疫応答を誘導する能力を試験するための方法、およびどのような免疫応答が誘導されているかを測定する方法を提供する。
【０１４６】
別の好ましい実施形態において、本発明は、用量、投薬レジメン、投与経路、製剤、キャリア、あるいは栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤において使用されるか、またはそれらと共に使用される他の成分を測定する方法を提供する。
【０１４７】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が液性免疫応答を誘導する能力を試験するための方法をさらに提供し、その方法は、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、より好ましくは４つ、より好ましくは５つ、最も好ましくは６つすべての液性免疫応答試験を包含し、少なくとも１つの動物またはヒトに、試験する適当量の微生物を経口的または全身的に投与して（さらなるアジュバント有りまたは無しで）、そして血清中の抗体または血清、血漿もしくは便から得られた抗体を、好ましくは、微生物を投与する前の血清中の抗体または血液、血漿もしくは便から得られた抗体と比較して試験する。当業者は、微生物の適当量および血液から抗体を得る方法および適当なコントロールを決定することができる。この試験は、本明細書中および／または実施例１１に詳細に記載される。
【０１４８】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が細胞性免疫応答を誘導する能力を試験するための方法をさらに提供し、その方法は、細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、最も好ましくは５つすべての細胞性免疫応答試験を包含する。
【０１４９】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が細胞傷害性細胞性免疫応答を誘導する能力を試験するための方法をさらに提供し、その方法は、少なくとも細胞性免疫応答試験２、好ましくは２および１、より好ましくは２、３および、および最も好ましくは５つすべての細胞性免疫応答試験を包含する。
【０１５０】
本発明の両方の実施形態において、これらの試験は、上に記載されたように、インビトロまたは細胞性免疫応答試験１〜３または５において行われ、少なくとも１つの動物またはヒトに、試験する適当量の微生物を経口的または全身的に与えることで行われ（さらなるアジュバント有りまたは無しで）、そして免疫細胞を血液から得て、（ｉ）上に記載されたような細胞性試験１〜３または５に従って試験するか、または（ｉｉ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷された樹状細胞と免疫細胞とを接触させず、そしてＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷された樹状細胞のみを再刺激のために加えるという点を変えて、上に記載されたような細胞性試験１〜３または５に従って試験する。（ｉ）は、好ましくは、インビボの効果を増大させるため、およびより弱い応答として読み出されることを改善するために使用され、そして（ｉｉ）は、好ましくは、強い応答に対して使用される。当業者は、微生物の適当量および適当なコントロールを測定することができる。この試験は、実施例１２において詳細に記載される。
【０１５１】
本発明は、好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が液性および細胞性の免疫応答を誘導する能力を試験するための方法（この方法は、上に記載された方法の組み合わせに相当する）をさらに提供し、その方法は、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つおよび細胞性免疫応答試験１〜４のうちの少なくとも１つ、好ましくは液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも２つおよび少なくとも１つ、より好ましくは、細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも２つ、より好ましくは、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも３つ、より好ましくは、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも４つおよび細胞性免疫応答試験１〜５のすべて、より好ましくは、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも５つ、および細胞性免疫応答試験１〜５のすべて、最も好ましくは、液性免疫応答試験１〜６の６つすべておよび細胞性免疫応答試験１〜５の５つすべてを包含する。
【０１５２】
本発明は、本発明の意味におけるＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定する方法、およびＣｏｒｅ−１陽性微生物とＣｏｒｅ−１陰性微生物との混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を分離する方法も提供する。
【０１５３】
本発明は、微生物の混合物から、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を分離するための方法をさらに提供し、その方法は、
（ａ）Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を微生物の混合物と接触させる工程、および
（ｂ）前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される微生物を分離する工程
を包含する。
【０１５４】
好ましい実施形態において、本発明は、微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を分離するための方法をさらに提供し、ここで、工程（ｂ）において、前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される微生物の分離／富化のために磁性粒子を使用する。好ましい実施形態において、本発明は、微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を分離するための方法をさらに提供し、ここで、前記微生物の混合物は、健常なヒトおよび／もしくは患者、動物、土壌、食品または植物由来の微生物を含む混合物である。
【０１５５】
好ましい実施形態において、本発明は、微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を分離するための方法をさらに提供し、ここで、前記微生物の混合物は、健常な個体または患者のヒト胃腸管、ヒト大便、ヒト血液、ヒト組織またはヒト体液由来の微生物を含む混合物である。
【０１５６】
好ましい実施形態において、本発明は、微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を分離するための方法をさらに提供し、その方法は、嫌気性（ａｎａｅｒｏｂ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の分離を可能にする嫌気性条件下において行われる。
【０１５７】
前記微生物の混合物は、少なくとも２つの異なる微生物（例えば、天然（例えば、土壌、食物、植物、動物、健常な個体または患者のヒト胃腸管、ヒト血液、ヒト組織、ヒト体液が挙げられるがこれらに限定されない）において存在するものが挙げられるがこれらに限定されない）の任意の混合物であり得、最も好ましいのは、健常な個体由来の微生物の混合物である。上記微生物は、好ましくは、上記混合物とＣｏｒｅ−１特異的抗体とを接触させる前に、適当な溶液に入れる。上記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、好ましくは、磁気ビーズなどのキャリアに結合されており、それによって、前記キャリアに結合している微生物の分離が可能になる。そしてＣｏｒｅ−１特異的分子を微生物の混合物と一緒にした後、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体に結合しているそれらの微生物を、抗体に結合していないものから分離する。代替の実施形態において、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、キャリアに結合しておらず、磁気ビーズクロマトグラフィベッド物質などのキャリアに結合している抗体を特異的に分離する方法（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬまたは抗ＩｇＭ抗体もしくは抗ＩｇＧ抗体）を用いることによって、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体とともに分離する。本発明の好ましい実施形態では、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体に結合しているＣｏｒｅ−１陽性微生物を、適当な緩衝液（例えば、ＰＢＳ−ａ）で十分に洗浄し、そして選択培地および非選択培地（例えば、ＭＲＳ、ＢＳＭ、ＫＦ、Ｎ、Ｓ、ＷＣ、ＢＨＩ、ＣＢＡおよびＳＴが挙げられるがこれらに限定されない）（詳細は表３を参照のこと）上に平板培養する。その結果生じたコロニーをプレートからかきとり、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を用いた親和性富化のさらなる回に適用する。コロニーを拾い、再度画線し、そしてＣｏｒｅ−１発現についてＥＬＩＳＡおよび免疫蛍光において解析する（より詳細は実施例１〜９）。本明細書および実施例から、一部の当業者は、様々な起源からの様々な細菌について、上記方法を調整するかまたは最適化することができる。
【０１５８】
好ましい特別な実施形態において、上記方法は、嫌気性のＣｏｒｅ−１陽性微生物の分離を可能にする嫌気性条件下で行われ、それは、例えば、ヒトの消化管由来の大部分の微生物にとって重要である。上記方法は、実施例１〜９において詳細に記載される。
【０１５９】
一つの実施形態によれば、上記微生物は、食品から分離される。なおもより好ましい実施形態において、上記微生物は、胃腸系から、なおもより好ましくは、ヒト大便から分離される。上記方法は、実施例１〜９において詳細に記載される。ヒトの胃腸管に通常存在する細菌を使用することによって、望まれない副作用を引き起こさない予防的および治療的な薬剤（ａｇｅｎｓ）がもたらされる。炭水化物は、関連する免疫寛容原性（ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｃｉｔｙ）の欠如に関与し、関連するアレルギー反応を示さないという性質を有する。
【０１６０】
本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法をさらに提供し、その方法は、
ａ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に対するそれの結合について微生物を試験する工程、および
ｂ）本明細書中に記載されているような少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に結合しているこのＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定する工程
を包含する。
【０１６１】
Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物が最も好ましく、ここで、その結合は、過ヨウ素酸での処理後にＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２の結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である。
【０１６２】
本発明の好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に対するその結合について微生物を試験する工程は、ＥＬＩＳＡによって行われ、ここで、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体とともに、バックグラウンドシグナルの少なくとも３倍、より好ましくは５倍、なおもより好ましくは少なくとも１０倍のＥＬＩＳＡシグナルを示す。
【０１６３】
本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最も好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１との陽性のＥＬＩＳＡシグナルを示す。
【０１６４】
本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最も好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２との陽性のＥＬＩＳＡシグナルを示す。本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、過ヨウ素酸での処理後に、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体とのＥＬＩＳＡシグナルの低下を示し、好ましくは、そのＥＬＩＳＡシグナルは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも５０％、最も好ましくは、少なくとも８０％の低下を示す。
【０１６５】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、その方法は、
ａ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に対するその結合について試験する工程、および
ｂ）ヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答を誘導する能力について試験する工程、および
ｃ）本明細書中に記載される少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合され、そして本明細書中に記載される少なくとも１つの液性免疫応答試験１〜６または細胞性免疫応答試験１〜４に対して陽性であることによってヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答を誘導することができる、この微生物を同定する工程
を包含する。ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２に対して陽性であり、本明細書中（実施例９）に記載されるようなＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２の結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性であり、少なくとも１つの液性免疫応答試験および１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性であり、より好ましくは細胞性免疫応答試験２に対して少なくとも陽性である免疫応答を少なくとも１つのヒトまたは動物において誘導する、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が好ましい。ＴＦ１およびＴＦ２に対して陽性であり、本明細書中の任意の箇所に記載されるようなＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２の結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性であり、本明細書中に記載されるような液性免疫応答試験１、２、３および４ならびに細胞性免疫応答試験１、２、３および４に対して陽性であるＣｏｒｅ−１陽性微生物がなおもより好ましい。ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２が陽性であり、本明細書中の任意の箇所に記載されるようなＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２の結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性であり、本明細書中に記載されるような少なくとも５つの液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性であるＣｏｒｅ−１陽性微生物が最も好ましい。
【０１６６】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、同定される微生物は、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃（定義の項を参照のこと）の物質のいずれもと結合しない少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される。
【０１６７】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、同定される微生物は、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、そして＃リスト２＃に列挙されるＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、また、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４（ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０５）、ＮＭ−Ｆ９（ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０６）、ＺＲ−７５−１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５００）、ＣＡＭＡ−１（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２１）、ＫＧ−１（ＤＳＭ  ＡＣＣ１４）またはＡ−２０４（ＤＳＭ  ＡＣＣ２５０）のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合され、ここで、その結合は、過ヨウ素酸塩感受性である。ＮＭ−９細胞株およびＮＭ−Ｄ４細胞株は、Ｎｅｍｏｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．ＫＧ，Ｒｏｂｅｒｔ−Ｒｏｓｓｌｅ−Ｓｔｒａｓｓｅ  １０，１３１２５  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ（すなわち寄託人）によってＤＳＭＺに寄託されており、その寄託人は、本願の出願人が本明細書中に記載される寄託された生物材料に言及することを許可しており、かつ、本明細書中に記載される寄託された生物材料を欧州特許条約（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）のＲｕｌｅ２８（１）（ｄ）に従って公衆に入手可能にすることに無条件かつ撤回不能の承諾を本願の出願人に与えている。ＤＳＭＺは、Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ  Ｗｅｇ  １ｂ，Ｄ−３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙに存在する。上述のＤＳＭＺへの寄託物は、特許手続上の微生物の寄託の国際的な承認に関するブダペスト条約の約款に準じた。好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、同定される微生物は、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、そして＃リスト２＃に列挙されるＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、また、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する、少なくとも１つの抗体によって結合され（ここで、その結合は、過ヨウ素酸塩感受性である）、上記の結合特性のいずれかを有するがＰＡＡに結合された三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される。
【０１６８】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、同定される微生物は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７またはＮＥＭＯＤ−ＴＦ１によって結合される。
【０１６９】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、同定される微生物は、（ｂ）においてＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１によって結合される。
【０１７０】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、同定される微生物は、（ｂ）においてＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１によって結合されるが、Ａ６８−Ｂ／Ａ１１によって結合されない。
【０１７１】
好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品および薬学組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法に関し、ここで、ヒトまたは動物において本発明による製剤を投与した後に誘導される免疫応答は、本明細書中の別の箇所において記載されるような、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの液性免疫応答試験およびＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの細胞性免疫応答試験について陽性である免疫応答である。
【０１７２】
本発明の栄養補助食品および薬学組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法は、ＤＳＭＺに見られる株または他の微生物のコレクションなどの既存の株、または本発明による微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を分離するための方法によって分離されるＣｏｒｅ−１陽性微生物から、適当な微生物を同定するために使用され得る。
【０１７３】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性細菌を分離し、同定するための方法にも関し、その方法は、
ａ）便サンプルから全細菌を分離する工程、
ｂ）好気性または嫌気性の条件下で、１つ以上の以下のモノクローナルＣｏｒｅ−１抗体、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２およびＡ７８−Ｇ／Ａ７を用いてＣｏｒｅ−１陽性細菌の親和性富化を行う工程、
ｃ）富化された細菌を様々な選択培地上に平板培養し、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体またはレクチンに対する結合についてスクリーニングする工程
を包含する。
【０１７４】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性細菌を分離し、同定するための方法に関し、その方法は、
ａ）便サンプルから、全細菌を含む微生物の混合物を分離する工程
ｂ）Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を微生物の混合物と接触させる工程
ｃ）好気性または嫌気性の条件下において、磁性粒子分離を用いてＮｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７に結合する微生物を分離する工程
ｄ）富化された細菌を少なくとも１つの選択培地上に平板培養する工程
ｅ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される微生物を同定する工程を包含する。調製とは、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物が、例えば、覆われた形状（ｆｒｏｍ）でＣｏｒｅ−１構造を含む微生物からの化学的処理によって調製されることも意味する。例えば過ヨウ素酸塩処理などの化学的処理は、Ｃｏｒｅ−１構造を露出させることによって、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物をもたらし得る。別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性細菌を分離し、同定するための方法について言及し、その方法は、
ａ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に結合している純粋細菌株を産出する工程；および／または
ｂ）前記純粋細菌株が、少なくとも１つのヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するか、または増強する能力について試験する工程
を包含する。
【０１７５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物がＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導する能力を試験するための方法を提供し、その方法は、以下の工程：１）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を同定し、純粋な培養物を調製する工程；
２）腸の免疫的に有効な細菌の株を同定する工程；
３）免疫学的および毒物学的に試験された有効なＣｏｒｅ−１陽性調製物を、ヒト試験用の栄養添加物として調製する工程；
４）ヒトにおいてＣｏｒｅ−１特異的な免疫応答を誘導するか、または増強する工程；および必要であれば
５）前記微生物の免疫的に有効な定義されたＣｏｒｅ−１陽性の断片または成分を単離し、同定し、そして試験する工程を包含する。
【０１７６】
上記方法は、実施例１〜１０においても詳細に説明される。
【０１７７】
好ましい実施形態において、本発明は、微生物の混合物からＣｏｒｅ−１陽性微生物を単離するための方法を提供し、その方法は、
ａ．）健常なヒトおよび／もしくは患者、動物、土壌、食物ならびに／または植物由来の微生物、ならびに／または、健常個体および／または患者のヒト消化管、ヒト大便、ヒト血液、ヒト組織および／またはヒト体液由来の微生物を含む群から選択される微生物の混合物とＣｏｒｅ−１特異的抗体とを接触させる工程、および
ｂ．）前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体に結合されている微生物を単離する工程
を包含する。
【０１７８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性の細菌を単離するためおよび同定するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）全細菌を含む微生物の混合物を便サンプルから単離する工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１特異的抗体を微生物の混合物と接触させる工程
（ｃ）好気性または嫌気性の条件下でＣｏｒｅ−１特異的抗体に結合する微生物を、磁気粒子分離を用いて単離する工程
（ｄ）Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ１によって結合される微生物を同定する工程（その結合は、過ヨウ素酸塩処理後に結合の有意な低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である）および
（ｅ）少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する能力を試験する工程
を包含する。
【０１７９】
別の好ましい実施形態において、本発明は、前述の（ｐｒｅｃｅｅｄｉｎｇ）請求項のいずれかに記載の製剤の成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するための方法を提供し、その方法は、
ａ．微生物を少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体に対するその結合について試験する工程、および
ｂ．ヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答の誘導を試験する工程、および
ｃ．少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される前記微生物を同定する工程
を包含し、前記微生物は、本明細書中の別の箇所に記載されるようなＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの液性免疫応答試験または１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性であることを特徴とする、少なくとも１つのヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する。
【０１８０】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を調製するための方法にも関し、その方法は、
ａ）大部分の微生物を殺滅する条件下において、化学的突然変異原および／または物理的突然変異原（例えば、ＥＭＳ、ＵＶ、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔ）、マイクロ波、発癌性物質、発癌物質、突然変異原または放射線照射が挙げられるがこれらに限定されない）によって変異を誘導するための物質（ａｇｅｎｓ）と微生物とを接触させる工程、および
ｂ）生き残っている微生物を適当な条件下で培養する工程、
ｃ）本明細書中の別の箇所において記載されるようにＣｏｒｅ−１陽性微生物を富化し、分離し、そしておよび／または同定する工程、
ｄ）少なくとも１つのヒトまたは動物において、前記微生物がＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導するかまたは増強する能力について試験する工程
を包含する。
【０１８１】
本発明は、遺伝的工学（ｇｅｎｅｔｉｃａｌ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）によってＣｏｒｅ−１陽性微生物を産出するための方法にも関し、その方法は、
ａ）遺伝子、遺伝子の一部、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、オリゴペプチドまたはタンパク質を微生物中に誘導し、ノックアウトし、そして／またはサイレンシングして、それによって、Ｃｏｒｅ−１生合成、Ｃｏｒｅ−１分解または隣接するＣｏｒｅ−１の生合成もしくは分解に影響を及ぼす工程、および
ｂ）本明細書中の別の箇所において記載されるようにＣｏｒｅ−１陽性微生物を富化し、分離し、同定し、そして／または試験する工程
を包含する。
【０１８２】
１つの実施形態によれば、前記微生物は、Ｃｏｒｅ−１陰性微生物である。さらなる実施形態において、前記微生物は、腸管にとって有益な微生物（例えば、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓまたはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが挙げられるがこれらに限定されない）である。さらなる実施形態において、前記微生物は、従来の食品の製造に使用される微生物（例えば、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓまたはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが挙げられるがこれらに限定されない）である。別の実施形態において、前記微生物は、すでにＣｏｒｅ−１陽性であり、細胞表面上で発現されるＣｏｒｅ−１の量を増加させるために上記方法が使用される。
【０１８３】
Ｃ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の提供
本発明はまた、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物も提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識される。
【０１８４】
本発明は、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される。本発明はまた、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞またはＣｏｒｅ−１陽性疾患に対して特異的な免疫応答を誘導するＣｏｒｅ−１陽性微生物も提供する。
【０１８５】
本発明はまた、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物も提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な免疫応答を誘導する。
【０１８６】
本発明はまた、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する免疫応答の特異性を誘導する本発明の栄養補助食品または薬学的組成物の活性成分になるＣｏｒｅ−１陽性微生物も提供する。
【０１８７】
本発明は、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物において使用されるときに、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な免疫応答を誘導するかまたは増強するＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０１８８】
本発明の好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、以下の抗体
・ＨＢ−Ｔ１、ＨＨ８、Ａ７８−Ｇ／Ａ７、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１またはＮｅｍｏｄ−ＴＦ２、より好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃の物質のいずれにも結合しない少なくとも１つの抗体；
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、かつ、＃リスト２＃に列挙されている物質のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合しない少なくとも１つの抗体であって、この結合が過ヨウ素酸塩感受性である、抗体；
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、かつ、＃リスト２＃に列挙されている物質のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合は、過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７）、なおもより好ましくは、上記の結合特性のいずれかを有するが、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない少なくとも１つの抗体、なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１）；
・なおもより好ましくは、上記の抗体のうちの少なくとも２つ、なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７）、および上記の結合特性のいずれかを有するが、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない少なくとも１つの抗体；
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１）；
・なおもより好ましくは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１；
・なおもより好ましくは、Ａ６８−Ｂ／Ａ１１ではなく、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１；
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合しない、少なくとも１つの抗体であって、この結合が、過ヨウ素酸塩感受性である、抗体；
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７）、なおもより好ましくは、上記の結合特性のいずれかを有するが、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない少なくとも１つの抗体、なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１）；
・なおもより好ましくは、上記の抗体のうちの少なくとも２つ、なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されているＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７）および上記の結合特性のいずれかを有するが、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない少なくとも１つの抗体；
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合せず、＃リスト２＃に列挙されている物質のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合する少なくとも１つの抗体であって、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である、抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１）；
・なおもより好ましくは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１；
−および、なおもより好ましくは、Ａ６８−Ｂ／Ａ１１ではなく、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ１
のうちの少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触するとき、その抗体によって認識され、結合される。
【０１８９】
好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０１９０】
好ましい実施形態において、本発明は、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されている物質のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合する少なくとも１つの抗体によって結合され（その結合は、過ヨウ素酸塩感受性である）、上記の結合特性のいずれかを有するが、ＰＡＡに結合した三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない少なくとも１つの抗体によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０１９１】
より好ましい実施形態において、本発明は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７またはＮＥＭＯＤ−ＴＦ１によって認識／結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０１９２】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１によって認識／結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、ここで、その結合は、ＥＬＩＳＡにおいて試験され、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１を用いたときのＥＬＩＳＡシグナルは、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最も好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、バックグラウンドの少なくとも３倍である。別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、ここで、その結合は、ＥＬＩＳＡにおいて試験され、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２を用いたときのＥＬＩＳＡシグナルは、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最もより好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、バックグラウンドの少なくとも３倍である。別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、ここで、その結合は、ＥＬＩＳＡにおいて試験され、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２を用いたときのＥＬＩＳＡシグナルは、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最も好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、バックグラウンドの少なくとも３倍であり、その結合は、過ヨウ素酸処理後にＥＬＩＳＡシグナルの低下を示す過ヨウ素酸塩感受性であり、好ましくは、そのＥＬＩＳＡシグナルは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも５０％および最も好ましくは、少なくとも８０％の低下を示す。
【０１９３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、ここで、その結合は、ＥＬＩＳＡにおいて試験され、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１を用いたときのＥＬＩＳＡシグナルは、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最も好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、バックグラウンドの少なくとも３倍であり、その結合は、過ヨウ素酸処理後にＥＬＩＳＡシグナルの低下を示す過ヨウ素酸塩感受性であり、好ましくは、そのＥＬＩＳＡシグナルは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも５０％および最も好ましくは、少なくとも８０％の低下を示す。
【０１９４】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、ここで、その結合は、ＥＬＩＳＡにおいて試験され、そのＥＬＩＳＡシグナルは、１×１０７／ｍｌ、より好ましくは、５×１０６／ｍｌ、なおもより好ましくは、１×１０６／ｍｌ、最も好ましくは、１×１０５／ｍｌの微生物濃度でコーティングされるとき、バックグラウンドの少なくとも３倍であり、その結合は、過ヨウ素酸処理後にＥＬＩＳＡシグナルの低下を示す過ヨウ素酸塩感受性であり、好ましくは、そのＥＬＩＳＡシグナルは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも５０％および最も好ましくは、少なくとも８０％の低下を示す。
【０１９５】
好ましい実施形態において、本発明は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強するＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０１９６】
本発明の好ましい実施形態において、前記免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する液性免疫応答、またはＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する細胞性免疫応答である。
【０１９７】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する液性免疫応答およびＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する細胞性免疫応答である。
【０１９８】
前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体、好ましいＣｏｒｅ−１特異的抗体、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の組み合わせ、またはＣｏｒｅ−１特異的抗体の好ましい組み合わせは、定義の項および本明細書中の別の箇所に詳細において説明される。
【０１９９】
前記栄養補助食品または薬学的組成物およびそれらの好ましい実施形態は、本明細書中の別の箇所において詳細に説明される。
【０２００】
Ｃｏｒｅ−１に対する前記液性免疫応答およびＣｏｒｅ−１に対する前記細胞性免疫応答は、本発明の別の箇所、ならびに、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するしかるべき抗体またはＴ細胞応答を検出することができる液性免疫応答試験および細胞性免疫応答試験において詳細に説明される。
【０２０１】
好ましい実施形態において、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な液性免疫応答および細胞性免疫応答（少なくとも１つの液性免疫応答試験および少なくとも１つの細胞性免疫応答試験によって検出され得る）を誘導するかまたは増強する。
【０２０２】
好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２によって結合され（その結合は、過ヨウ素酸塩感受性である）、液性免疫応答試験１、２および３のうちの少なくとも２つならびに細胞性免疫応答試験１、２および３のうちの少なくとも１つにおいて陽性である、少なくとも１つのヒトまたは動物において免疫応答を誘導するかまたは増強する。
【０２０３】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも２つの液性免疫応答試験に対して陽性である、好ましくは、液性免疫応答試験１および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５に対して陽性である、最も好ましくは、５つすべての液性免疫応答試験に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答である。
【０２０４】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも２つの細胞性免疫応答試験に対して陽性であるＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答である。
【０２０５】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、少なくとも１つの液性免疫応答試験および少なくとも１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および細胞性免疫応答である。
【０２０６】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、少なくとも２つの液性免疫応答試験および２つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、好ましくは、液性免疫応答試験１および３ならびに細胞性免疫応答試験１および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３ならびに細胞性免疫試験１、２および３に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４ならびに細胞性免疫試験１、２、３および４に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６ならびに５つすべての細胞性免疫試験に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５ならびに５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である、最も好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および細胞性免疫応答である。
【０２０７】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、本明細書中に示されるようなＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってそれらの細胞に対する防御として機能するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を確立するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供し、その破壊する能力とは、例えば、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の誘導、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を効率的に殺滅する、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するＣｏｒｅ−１抗体のＣｏｒｅ−１特異的補体依存性細胞傷害、ならびに／または、Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞応答によるＴＮＦαおよび／もしくはＩＮＦγの分泌（本発明の栄養補助食品または薬学的組成物として使用されるとき、Ｃｏｒｅ−１を有するそれらの腫瘍細胞に対して特異的な細胞傷害性Ｔ細胞媒介性の腫瘍細胞殺滅に対する、当業者によって科学的に認識される代用マーカー）である。
【０２０８】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、栄養補助食品を（少なくとも１つの）健常個体に経口的に投与することによって本明細書中の別の箇所に記載されるようなＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有する、それらの細胞に対する防御として機能する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を構築するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０２０９】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品の成分として（少なくとも１つの）健常個体に経口的に投与することによってＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の発生を減少させるためかまたはなおもさらに好ましくは予防するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０２１０】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、本発明の医薬製剤の成分として（少なくとも１つの）個体に投与されるときにＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の発生を減少させるためかまたはなおもさらに好ましくは予防するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０２１１】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍に罹患している患者に栄養補助食品を経口的に投与することによってそのＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍を処置するための栄養補助食品の活性成分として使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０２１２】
好ましい実施形態において、本発明は、本明細書中の別の箇所に記載されるような薬学的組成物を投与することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍に罹患している患者のＣｏｒｅ−１陽性疾患または腫瘍を処置するための薬学的組成物の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０２１３】
より好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の経口投与の後に、本明細書中に記載される少なくとも１つの液性免疫試験または細胞性免疫試験および上に記載されたような好ましい実施形態に対して陽性であることによって、ヒトにおいてＣｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答の誘導を優先的に示す、栄養補助食品製剤の適当な成分であるＣｏｒｅ−１陽性微生物を提供する。
【０２１４】
最も好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２への結合が陽性であり（前記抗体の結合は、本明細書中の任意の箇所に記載されるような過ヨウ素酸による処理の後にＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２の結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である）、少なくとも１つのヒトまたは動物において、本明細書中に記載されるような、液性免疫応答試験１、２および３ならびに細胞性免疫応答試験１、２および３、なおもより好ましくは、少なくとも５つの液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験、なおもより好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である免疫応答を誘導する。
【０２１５】
好ましい実施形態において、本発明は、
（ｉ）本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物、または
（ｉｉ）ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｏｃｅａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｈｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆｉｎｅｇｏｌｄｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、ＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）および／またはＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）からなる群から選択されるＣｏｒｅ−１陽性微生物を含んでいる栄養補助食品または医薬製剤または食品添加物を提供するかまたは使用し、ここで、前記群から選択される前記微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、かつ、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識される。
【０２１６】
これらの微生物が、それ自体はＣｏｒｅ−１陽性ではないので、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を引き起こすことができる微生物／株を選択することが重要である。ゆえに、前記微生物が、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、そして前記抗体と接触する場合にその抗体によって結合されることが重要である。Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を引き起こす能力は、本明細書中に記載される液性試験システムおよび細胞性試験システムによっても判定され得る。この特異性の選択は、重要であり、従来技術を用いて本発明の微生物（ｍｉｃｒｏｏｒａｇｎｉｓｍｓ）と比較するときに明らかになる。
【０２１７】
例えば、Ｇ．Ｆ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒらは、血清型Ｏ８６の株由来のＥ．ｃｏｌｉを与えた後のＴ抗原の誘導について報告している。これらの実験では、抗Ｔ抗体を評価するために、シアリダーゼで処理された赤血球を用いた凝集試験を用いた。赤血球のシアリダーゼ処理は、Ｃｏｒｅ−１エピトープのデマスキングをもたらすが、多くのさらなるエピトープも同様にデマスクする。ゆえに、このアッセイは、Ｃｏｒｅ−１特異的ではない。非特異的な抗Ｃｏｒｅ−１抗体を使用した。これらの株が、本発明のＣｏｒｅ−１陽性であるか否かを調べるために、本発明者らは、本発明者らのスクリーニング手順にいくつかのＥ．ｃｏｌｉ株、中でも菌株保存機関（ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）からの確立された７つのＥ．ｃｏｌｉ株、特に、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＤＳＭＺ  ８６９７株（株３２）（これは、血清型（ｓｅｒｏｔｙｏｐｅ）Ｏ８６であり、ゆえに、Ｓｐｒｉｎｇｅｒによって使用されたＥ．ｃｏｌｉ株と強い関連がある；もとの株は、入手不可能であった）を含めた。さらに、本発明者らは、３人の健常ヒト被験体の便サンプルから得られた、ＴＦ特異的抗体を用いた親和性濃縮後の１２個のＥ．ｃｏｌｉ株を試験した。しかしながら、これらの株のいずれもが、過ヨウ素酸塩処理後にＴＦ特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ−１およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２との結合の所望の低下を示さなかった。血清型Ｏ８６（株３２）のＥ．ｃｏｌｉ株では、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２およびＢ／Ａ１１との結合は、過ヨウ素酸塩を用いた処理（糖構造の破壊）後にだけ示された。このことは、隠れたＣｏｒｅ−１の発現を示唆し、Ｃｏｒｅ−１エピトープが、接近可能ではないがゆえに、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を引き起こすために利用可能ではないことを意味する。このことを確かめるために、マウスを免疫した後に、血清型Ｏ８６のＥ．ｃｏｌｉ株（＝３２）を液性免疫応答試験において試験した。驚いたことに、本発明者らがＨＩＲＴ１においてこれらのマウスの血清中に抗ＡＧＰ抗体（ほとんど特異的ではない）を見出したのに対し、特異的な試験であるＨＩＲＴ２およびＨＩＲＴ３において陽性ではない結果が得られた。これらの結果は、前記Ｅ．ｃｏｌｉ株によって誘導される、ＰＡＡ上またはヒト腫瘍細胞上のＣｏｒｅ−１を認識するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答ではないことを証明する（詳細については、実施例を参照のこと）。従って、ＴＦ陽性ということになっている血清型Ｏ８６のＥ．ｃｏｌｉ株は、それが（本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物とは対照的に）Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を引き起こすことができないので、実際のところ、この問題を解決するためには不適当である。ゆえに、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、かつ、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体と接触する場合に少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識され、前記抗体によって結合されるＥ．ｃｏｌｉ株を選択することが重要である。上で概説したように、隠された形態でＣｏｒｅ−１を含んでいるそれぞれの微生物は、過ヨウ素酸塩処理などの化学的処理によってＣｏｒｅ−１陽性微生物に変換され得る。上記微生物が前記処理後にＣｏｒｅ−１陽性微生物であるかを判定するのに適した試験方法は、上で説明されている。
【０２１８】
Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒを用いても、同様の結果が見出された。Ｋｌａａｍａｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ  ｖｏｌ．３１，Ｎｏｓ  ３＆４，ｐｐ．１９１−２０４，２００２）は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ＮＣＴＣ１１６３７株がＴ抗原特異的抗体との結合について陽性であると報告した。本発明者らは、本発明者らのＥＬＩＳＡ実験においてＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ＮＣＴＣ１１６３７株を約５〜１０×１０６細菌／ウェルで並行して使用し、その結果、Ｃｏｒｅ−１陽性ＡＧ６株およびＭＵ１株に対するＮｅｍｏｄ−ＴＦ１抗体およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２抗体の強い結合がもたらされた。しかしながら、本発明者らは、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１抗体およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２抗体とＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ＮＣＴＣ１１６３７株との結合を検出できなかった。過ヨウ素酸で処理した後にだけ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  ＮＣＴＣ１１６３７株は、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１抗体と結合し、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２抗体とは結合しなかった。このことは、過ヨウ素酸塩処理後にだけ検出されるＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ上のＣｏｒｅ−１の隠れた発現を示唆する。Ｋｌａａｍａｓらの実験において、Ｃｏｒｅ−１の結果は、使用した抗体の特異性が低いこと、またはＣｏｒｅ−１を含む分解産物をある程度含み得る非常に多い量の細菌（１０８／チューブ）を使用したことに起因するものであり得た。さらに、栄養補助食品または医薬においてＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒを使用することは困難である。ヒト胃のＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉのコロニー形成は、慢性的な感染症を誘導し、胃十二指腸潰瘍疾患の病原において重要な役割を果たし、そして胃粘膜のＢ細胞リンパ腫の発症に関連する。ゆえに、ヒトの予防または処置におけるＨ．ｐｙｌｏｒｉの適用は、困難である。従って、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉは、好ましくは本発明において使用されない。
【０２１９】
より好ましくは、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ（例えば、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓおよびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）を含む群から選択され、なおもより好ましくは、２００６年１０月２０日にＧｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ，Ｒｏｂｅｒｔ−Ｒｏｅｓｓｌｅ−Ｓｔｒ．１０，１３１２５  Ｂｅｒｌｉｎ（Ｇｅｒｍａｎｙ）によってＢｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ（Ｇｅｒｍａｎｙ）に存在する「ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ」に寄託された、新種Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、新種Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）を含む群から選択される。
【０２２０】
別の好ましい実施形態において、本発明の製剤を提供し、ここで、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｈｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆｉｎｅｇｏｌｄｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、ＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）を含む群から選択される。
【０２２１】
好ましい実施形態において、細菌株は、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）を含む群から選択される。
【０２２２】
本発明のさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品または医薬製剤のＣｏｒｅ−１陽性微生物（活性成分）は、様々な株のＣｏｒｅ−１陽性微生物の組み合わせである。
【０２２３】
さらに好ましい実施形態において、前記活性成分は、ＡＧ６株およびＭＵ１株から選択される様々な株のＣｏｒｅ−１陽性微生物の組み合わせである。
【０２２４】
さらに好ましい実施形態において、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物（製剤）は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物と少なくとも１つの他の有益な微生物（例えば、ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓおよび／またはｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが挙げられるがこれらに限定されない）との組み合わせ、なおもより好ましくは、他の有益な微生物と組み合わされる様々な株のＣｏｒｅ−１陽性微生物の組み合わせを含む。
【０２２５】
本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、非病原性の微生物である。本発明のさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、健常ドナーから単離される。本発明のさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、健常ドナーから単離され得る。
【０２２６】
本発明のさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその断片は、腫瘍を治療または予防するための薬物および／または栄養補助食品を当業者に公知の手法によって製造するために使用される。
【０２２７】
本発明のさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその断片は、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するためかもしくは増強するために、および／あるいは、機能的樹状細胞または活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株もしくはＴ細胞クローンまたはＣｏｒｅ−１に対する抗体を調製するために、インビボまたはインビトロにおいて使用される。
【０２２８】
本発明のさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、生存している生物として栄養補助食品または薬学的組成物において使用される。
【０２２９】
本発明のさらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、生存している生物として使用され、経口的に投与される。
【０２３０】
本発明のさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品または薬学的組成物において使用されるＣｏｒｅ−１微生物は、少なくとも１つの抗生物質に対して感受性である。
【０２３１】
本発明のさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品において使用されるＣｏｒｅ−１微生物は、腸においてコロニー形成することができる。
【０２３２】
本発明の別の好ましい実施形態において、栄養補助食品または薬学的組成物において使用されるＣｏｒｅ−１微生物は、死滅したものである。
【０２３３】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品または薬学的組成物において使用されるＣｏｒｅ−１微生物は、低温殺菌されたものである。
【０２３４】
なおもより本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、生存している生物として栄養補助食品または薬学的組成物において使用され、この微生物は、健常ヒトドナーから単離されたものであり、ヒトの腸においてコロニー形成することができ、また、抗生物質感受性である。
【０２３５】
なおもより本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１微生物は、低温殺菌された形態で栄養補助食品において使用され、この微生物は、健常ヒトドナーの腸から単離されたものであり、抗生物質感受性である。
【０２３６】
本発明の別の好ましい実施形態において、薬学的組成物において使用されるＣｏｒｅ−１微生物は、死滅したものであるかまたは溶解されたものである。
【０２３７】
本発明のさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品または薬学的組成物において使用されるＣｏｒｅ−１微生物は、凍結乾燥されたものである。
【０２３８】
選択されたＣｏｒｅ−１陽性株ならびにＣｏｒｅ−１陽性ではなかった株を様々な抗生物質に対するそれらの感度（表１−図２２を参照のこと）およびＣｏｒｅ−１特異的抗体に対する結合（表２を参照のこと）によって特徴付けた。
【０２３９】
（表２）
【０２４０】
【表２】
2015134813.tif 000002
Ｄ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分の提供
本発明は、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物の部分を提供し、ここで、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合される。
【０２４１】
本発明は、栄養補助食品または薬学組成物を含む群から選択される本発明の栄養補助食品または薬学的組成物のための成分として使用するための、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物の適当な部分を提供し、ここで、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合される。
【０２４２】
本発明は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性の腫瘍細胞に対して特異的な免疫応答を誘導する本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物の部分を提供する。
【０２４３】
本発明は、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供し、ここで、そのＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片は、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な免疫応答を誘導する。
【０２４４】
本発明は、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物の活性成分になり、そしてヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する免疫応答特異性を誘導する、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２４５】
本発明は、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物において使用されるときに、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な免疫応答を誘導するかまたは増強するＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２４６】
前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体、好ましいＣｏｒｅ−１特異的抗体、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の組み合わせまたはＣｏｒｅ−１特異的抗体の好ましい組み合わせは、定義の項および本明細書中の別の箇所に詳細に説明される。
【０２４７】
前記栄養補助食品または薬学的組成物およびそれらの好ましい実施形態は、本明細書中の別の箇所において詳細に説明される。
【０２４８】
前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分とは、実施例（実施例１０）に記載される、前記微生物のより小さい一部分の調製物または精製物（例えば、細胞壁調製物、エンベロープ調製物、溶解物、リポ多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄ）調製物、カプセルの調製物またはカプセル多糖調製物）のことを意味し、一部の当業者は、１つの適当な方法または適当な方法の組み合わせを最適化し、選択することができる。前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分には、好ましくは、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性成分が含まれる。前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｍ）由来の調製物または精製物によって得ることができる。前記調製物および精製物は、当業者に公知の方法によって得ることができ、その方法は、例えば、上で記載された方法、または単一もしくは連続的な細胞の分画、フェノール水抽出、エーテル抽出、リゾチーム消化またはクロマトグラフィの方法である。Ｃｏｒｅ−１陽性成分またはＣｏｒｅ−１陽性成分を含む部分は、当業者に公知の試験システム（例えば、ＥＬＩＳＡまたはドットブロットが挙げられるがこれらに限定されない）において、その部分と少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体との結合によって検出される。本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性成分を含む部分は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィによって得られる。
【０２４９】
好ましい実施形態において、１回の調製工程または精製工程が使用される。別の好ましい実施形態において、少なくとも調製工程および精製工程の組み合わせが使用される。
【０２５０】
さらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、微生物全体と比べて前記部分中で富化されており、これは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と前記部分との結合が該微生物全体との結合よりも増加していることによって測定され得（例えば、ＥＬＩＳＡによって）、好ましくは、同じ体積中に含まれる生物学的物質の重量が等しいときに測定される。
【０２５１】
前記Ｃｏｒｅ−１陽性成分とは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物の任意の成分のことを意味する。前記Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、その天然分子の形態で利用可能であり得る少なくとも１つのＣｏｒｅ−１炭水化物構造またはＣｏｒｅ−１模倣構造を含み、ここで、それは、微生物の一部（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、脂質、セラミド、Ｃｏｒｅ−１、リポタンパク質、多糖、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカン、リポ多糖または糖タンパク質）であるか、または前記天然分子の一部として存在するか、または単独で存在する。前記Ｃｏｒｅ−１陽性成分はまた、例えば、Ｃｏｒｅ−１を放出する過ヨウ素酸塩処理などの化学的処理によって、消化された形態のＣｏｒｅ−１を有する成分から得られ得る。Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、本発明の意味において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物自体の部分としてか、または他の非天然キャリア構造（例えば、タンパク質、脂質、ポリアクリルアミドなどの化学的な分子）に結合されたＣｏｒｅ−１陽性微生物の部分として使用され得る。好ましくは、それは、天然の形態で使用される。Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、単一のＣｏｒｅ−１炭水化物構造もしくはＣｏｒｅ−１模倣構造または前記構造の繰り返し単位を含み得、さらなるＣｏｒｅ−１構造もしくはＣｏｒｅ−１単位または他の生体分子構造を含み得る。前記Ｃｏｒｅ−１模倣構造は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合される構造であり、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答またはＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答、より好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答およびＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答を誘導する。
【０２５２】
本発明の好ましい実施形態において、前記免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する液性免疫応答またはＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する細胞性免疫応答である。
【０２５３】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する液性免疫応答およびＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する細胞性免疫応答である。
【０２５４】
Ｃｏｒｅ−１に対する前記液性免疫応答およびＣｏｒｅ−１に対する前記細胞性免疫応答は、本発明における別の箇所、ならびにＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するしかるべき抗体またはＴ細胞応答を検出し得る液性免疫応答試験および細胞性免疫応答試験において詳細に説明される。
【０２５５】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも２つの液性免疫応答試験に対して陽性である、好ましくは、液性免疫応答試験１および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５に対して陽性である、最も好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答である。
【０２５６】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも２つの細胞性免疫応答試験に対して陽性であるＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答である。
【０２５７】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、少なくとも１つの液性免疫応答試験および少なくとも１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および細胞性免疫応答である。
【０２５８】
本発明のなおもさらに好ましい実施形態において、前記免疫応答は、少なくとも２つの液性免疫応答試験および２つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、好ましくは、液性免疫応答試験１および３ならびに細胞性免疫応答試験１および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３ならびに細胞性免疫試験１、２および３に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４ならびに細胞性免疫試験１、２、３および４に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６ならびに５つすべての細胞性免疫試験に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５ならびに５つすべての細胞性免疫試験に対して陽性である、最も好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および細胞性免疫応答である。
【０２５９】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、本明細書中に示されるようなＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってそれらの細胞に対する防御として機能するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を確立するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供し、その破壊する能力とは、例えば、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の誘導、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を効率的に殺滅する、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するＣｏｒｅ−１抗体のＣｏｒｅ−１特異的補体依存性細胞傷害、および／または、Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞応答によるＴＮＦαおよび／もしくはＩＮＦγの分泌（本発明の栄養補助食品または薬学的組成物として使用されるとき、Ｃｏｒｅ−１を有するそれらの腫瘍細胞に対して特異的な細胞傷害性Ｔ細胞媒介性の腫瘍細胞殺滅に対する、当業者によって科学的に認識される代用マーカー）である。
【０２６０】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、栄養補助食品を（少なくとも１つの）健常個体に経口的に投与することによって、上に記載されたようなＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有する、それらの細胞に対する防御として機能する前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を構築するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２６１】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、本発明の栄養補助食品の成分として（少なくとも１つの）健常個体に経口的に投与することによってＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の発生を減少させるためかまたはなおもさらに好ましくは予防するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２６２】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、本発明の医薬製剤の成分として（少なくとも１つの）個体に投与されるときにＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の発生を減少させるためかまたはなおもさらに好ましくは予防するために使用され得るＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２６３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍に罹患している患者に栄養補助食品を経口的に投与することによってそのＣｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍を処置する栄養補助食品の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２６４】
好ましい実施形態において、本発明は、本明細書中の別の箇所に記載されるような薬学的組成物を投与することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍に罹患している患者のＣｏｒｅ−１陽性疾患または腫瘍を処置する薬学的組成物の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２６５】
より好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片の経口投与の後に、本明細書中に記載される少なくとも１つの液性免疫試験または細胞性免疫試験および上に記載されたような好ましい実施形態に対して陽性であることによって、ヒトにおいてＣｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する免疫応答の誘導を優先的に示す、栄養補助食品製剤の適当な成分であるＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片を提供する。
【０２６６】
最も好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２への結合が陽性であり（前記抗体の結合は、本明細書中の任意の箇所に記載されるような過ヨウ素酸による処理の後にＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２の結合の低下を示す過ヨウ素酸塩感受性である）、本明細書中に記載されるような、液性免疫応答試験１、２および３ならびに細胞性免疫応答試験１、２および３、なおもより好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である免疫応答を誘導する。
【０２６７】
本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、細菌のリポ多糖の一部ではない。
【０２６８】
好ましい実施形態において、本発明は、
・本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片、または
・少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つの断片を含んでいる、栄養補助食品または医薬製剤または食品添加物を提供するかまたは使用し、ここで、上記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｏｃｅａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｈｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｊｏｈｎｓｏｎｅｌｌａ、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆｉｎｅｇｏｌｄｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、ＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ、ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）および／またはＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）からなる群から選択され、ここで、前記群から選択される前記微生物は、Ｃｏｒｅ−１陽性であり、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって特異的に認識される。Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒは病原体であり、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒがその病原性の性質に起因してリスクなしに生きたまま使用することができないので、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、好ましくはＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒではない。
【０２６９】
より好ましくは、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ（例えば、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓおよびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｃａｃｃａｅ）を含む群から選択され、なおもより好ましくは、２００６年１０月２０日にＧｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ，Ｒｏｂｅｒｔ−Ｒｏｅｓｓｌｅ−Ｓｔｒ．１０，１３１２５  Ｂｅｒｌｉｎ（Ｇｅｒｍａｎｙ）によってＢｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ（Ｇｅｒｍａｎｙ）に存在する「ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ」に寄託された、新種ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）を含む群から選択される。
【０２７０】
本発明のさらに好ましい実施形態において、栄養補助食品または医薬製剤のＣｏｒｅ−１陽性微生物の断片（活性成分）は、１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物由来の断片の組み合わせまたは優先的に様々な株の様々なＣｏｒｅ−１陽性微生物由来の断片の組み合わせを含む。上記断片は、同じかまたは異なる調製型または精製型であり得、好ましくは、様々な分子キャリア構造または分子擬態（ｍｉｍｉｋｒｙ）構造（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、脂質、セラミド、炭水化物、リポタンパク質、多糖、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカンまたは糖タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない）を有するか、または別の天然もしくは合成の分子の一部分としての、Ｃｏｒｅ−１陽性成分の組み合わせである。
【０２７１】
さらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の前記断片（活性成分）は、少なくとも２つの異なる株、好ましくは、新種ＡＧ６（ＤＳＭ１８７２６）およびＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）のＣｏｒｅ−１陽性微生物のＣｏｒｅ−１陽性成分の組み合わせを含む。
【０２７２】
さらに好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片（活性成分）は、ＡＧ６株のＣｏｒｅ−１陽性微生物のＣｏｒｅ−１陽性成分を含む。本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の前記断片は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／または＃５を含む群から選択される炭水化物構造を含む。
【０２７３】
本発明の別の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の前記断片は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／または＃５を含む群から選択される炭水化物構造の繰り返し単位を含む。
【０２７４】
本発明の別の好ましい実施形態において、前記断片は、図１９の＃１、＃２、＃３、＃４および／もしくは＃５を含む群から選択される炭水化物構造のうちの少なくとも１つならびに／またはそれらの繰り返し単位を含む。
【０２７５】
本発明の別の好ましい実施形態において、前記炭水化物構造または前記それらの繰り返し単位は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物からの濃縮および／または精製および／または単離によって得られる。
【０２７６】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記炭水化物構造または前記それらの繰り返し単位は、ＡＧ６株からの濃縮および／または精製およびまたは単離によって得られる。
【０２７７】
詳細は、実施例１０に示される。
【０２７８】
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記炭水化物構造または前記それらの繰り返し単位は、化学合成によって得られる。
【０２７９】
当業者は、図８に記載の炭水化物構造またはその繰り返し単位を化学的に合成するのに適した条件および方法を決定することができる。
【０２８０】
さらに好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の断片（活性成分）は、ＭＵ１株のＣｏｒｅ−１陽性微生物のＣｏｒｅ−１陽性成分を含む。
【０２８１】
別の好ましい実施形態において、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つの断片および少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物を含む。
【０２８２】
さらに好ましい実施形態において、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物は、少なくとも１つの他の有益な微生物（例えば、ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓおよび／またはｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが挙げられるがこれらに限定されない）と組み合わされたＣｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つの断片、なおもより好ましくは、他の有益な微生物と組み合わされた様々な株のＣｏｒｅ−１陽性微生物の組み合わせ断片を含む。
【０２８３】
別の好ましい実施形態において、本発明の栄養補助食品または薬学的組成物は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つの断片、および少なくとも１つの他の有益な微生物（例えば、ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓおよび／またはｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが挙げられるがこれらに限定されない）と組み合わされた少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物を含む。
【０２８４】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において適当な組成物または製剤として投与されるときにＣｏｒｅ−１、ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するかまたは増強するＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２８５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において適当な組成物または製剤として投与されるときに、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってＣｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御として機能するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかまたは増強するＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２８６】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において適当な組成物または製剤として投与されるときに、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患、腫瘍または転移の発生を減少させるかまたは予防するＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２８７】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において適当な組成物または製剤として投与されるときに、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍の拡大または転移を減少させるかまたは予防するＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２８８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのヒトまたは動物において適当な組成物として投与されるときに、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍を処置するために使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２８９】
別の好ましい実施形態において、本発明は、栄養補助食品を健常個体に経口的に投与することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の発症を予防するため、その腫瘍の発症のリスクを低下させるため、またはその腫瘍の発生を減少させるために栄養補助食品の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２９０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の疾患に罹患している患者に栄養補助食品を経口的に投与することによって、腫瘍の拡大もしくは転移もしくは転移の拡大もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍もしくは腫瘍細胞の再発までの時間を予防するかもしくは減少させるためか、生活の質もしくは生存時間の中央値もしくは再発までの時間の速度を改善するためか、または、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を有しているかもしくは有していた腫瘍患者を処置するために、栄養補助食品の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２９１】
別の好ましい実施形態において、本発明は、薬学的組成物を健常個体に投与することによってＣｏｒｅ−１陽性腫瘍の発症を予防するためか、その腫瘍の発症のリスクを低下させるためか、その腫瘍の発生を減少させるために、薬学的組成物の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２９２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の疾患に罹患している患者に薬学的組成物を投与することによって、腫瘍の拡大もしくは転移もしくは転移の拡大もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍もしくは腫瘍細胞の再発までの時間を予防するかもしくは減少させるためか、生活の質もしくは生存時間の中央値もしくは再発までの時間の速度を改善するためか、または、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を有しているかもしくは有していた腫瘍患者を処置するために、薬学的組成物の活性成分として使用されるＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を提供する。
【０２９３】
Ｅ）Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する免疫防御を誘導するための方法、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍を予防および／または処置するための方法、ならびにＣｏｒｅ−１陽性疾患を処置または予防するための方法
本発明は、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するためかまたは増強するための方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または薬学的組成物またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０２９４】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して特異的な液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するためかまたは増強するための方法を提供し、その方法は、本明細書中の別の箇所に記載されるような、有効量の製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片もしくは溶解物をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０２９５】
好ましい実施形態において、本発明は、上記の方法を提供し、ここで、前記栄養補助食品または前記医薬製剤または前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その断片または前記それらを含んでいる製剤は、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって認識／結合される少なくとも１つの微生物（ｍｉｒｃｏｒｏｒｇａｎｉｓｍ）、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物からの溶解物または断片を含む。
【０２９６】
本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性の癌細胞または疾患細胞を破壊する能力を有することによって、Ｃｏｒｅ−１陽性の癌細胞に対する防御として機能する、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するためまたは増強するための方法を提供する。
【０２９７】
好ましい実施形態において、本発明は、本明細書中に示されるようにＣｏｒｅ−１陽性癌細胞を破壊する能力を有することによってそのような癌細胞に対する防御として機能するＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するための方法を提供し、その破壊する能力とは、例えば、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体の誘導、Ｃｏｒｅ−１陽性の腫瘍細胞を効果的に死滅させる、それらの細胞に対するＣｏｒｅ−１特異的抗体のＣｏｒｅ−１特異的な補体依存性細胞傷害の誘導、ならびに／または実施例に示されるような、および本明細書中に記載されるような、Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞応答によるＴＮＦαおよび／もしくはＩＮＦγの分泌（Ｃｏｒｅ−１を有するそれらの腫瘍細胞に対して特異的な細胞傷害性Ｔ細胞媒介性の腫瘍細胞死滅に対する、当業者によって科学的に認識される代用マーカー）であり、そしてこの方法は、有効量の栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分（それらは本明細書中の別の箇所において記載される）あるいはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物において投与する工程を包含する。
【０２９８】
本発明は、腫瘍、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の発生を減少させるための方法、またはなおもより好ましくは予防するための方法をさらに提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分（それらは本明細書中の別の箇所において記載される）あるいはそれらを含んでいる製剤を、ヒトまたは動物（好ましくは、健常な個体）において投与する工程を包含する。
【０２９９】
本発明は、腫瘍、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の拡散または転移を減少させるための方法、またはなおもより好ましくは予防するための方法をさらに提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分（それらは本明細書中の別の箇所において記載される）あるいはそれらを含んでいる製剤を、ヒトまたは動物において投与する工程を包含する。
【０３００】
本発明は、腫瘍、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍を処置する方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分（それらは本明細書中の別の箇所において記載される）あるいはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物において投与する工程を包含する。
【０３０１】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患の発生を減少させるための方法、またはなおもより好ましくは予防するための方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分（それらは本明細書中の別の箇所において記載される）あるいはそれらを含んでいる製剤を、ヒトまたは動物（好ましくは、健常な個体）において投与する工程を包含する。
【０３０２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対して、ヒトまたは動物をワクチン接種するためまたは免疫するための方法を提供し、その方法は、
ｉ）Ｃｏｒｅ−１に向けられた、有効量の機能的樹状細胞または少なくとも１つの機能的樹状細胞を含む細胞の混合物を少なくとも１回ヒトまたは動物に投与し、そしてそのヒトまたは動物において前記機能的樹状細胞によって免疫応答を誘導する工程、および
ｉｉ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、および／または、その部分および／または溶解物を含む薬学的組成物の有効量の少なくとも１回の投与によって免疫応答を追加免疫する工程
を包含する。
【０３０３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、ヒト細胞または動物細胞由来の分子上に存在するＣｏｒｅ−１に対して、ヒトまたは動物をワクチン接種するための方法を提供し、その方法は、
ｉ）Ｃｏｒｅ−１に向けられた、有効量の活性型Ｔ細胞、Ｔ細胞クローン、Ｔ細胞株または少なくとも１つの活性型Ｔ細胞を含む細胞の混合物をヒトまたは動物に少なくとも１回投与し、そしてそのヒトまたは動物において前記活性型Ｔ細胞によって免疫応答を誘導する工程、および
ｉｉ）Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその部分および／またはその溶解物を含む有効量の薬学組成物の少なくとも１回の投与によって免疫応答を追加免疫する工程
を包含する。
【０３０４】
機能的樹状細胞、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株およびＴ細胞クローンの調製は、本明細書中の別の箇所において説明される。
【０３０５】
本発明の好ましい実施形態において、（ｉ）の下の前述の方法による投与は、１回行われる。本発明の別の好ましい実施形態において、（ｉ）の下の前述の方法による投与は、２回行われる。本発明の別の好ましい実施形態において、（ｉ）の下の前述の方法による投与は、少なくとも３〜５回行われる。
【０３０６】
本発明の好ましい実施形態において、前述の方法の（ｉｉ）による有効量の薬学組成物の投与によって免疫応答を追加免疫する工程は、１回行われ、本発明の別の好ましい実施形態において、追加免疫は、２〜１０回、より好ましくは１０回超、より好ましくは最大２０回行われ、最も好ましくは、追加免疫は、数ヶ月から数年の期間にわたって規則的な間隔で、継続して行われる。
【０３０７】
本発明の好ましい実施形態において、免疫応答の追加免疫は、プライミングの近くに１〜５回行われ、その後、３ヶ月から１年、または１年から１０年の間隔で行われる。
【０３０８】
機能的樹状細胞、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株およびＴ細胞クローンの調製は、本明細書中の別の箇所において説明される。
【０３０９】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性疾患の拡大を減少させるためかまたはなおもさらに好ましくは予防するための方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０３１０】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性疾患を処置する方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０３１１】
本発明は、免疫系を強化するかまたは免疫応答を改善する方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所において記載される）またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。これは、例えば、免疫系の状態、例えば、感染症または腫瘍に対する状態を全般的に改善すること、他の免疫刺激剤またはプロバイオティクスまたはプレバイオティクスまたはアジュバント（ａｄｊｕｖａｎｓ）としての作用の活性を改善することであり得るが、これらに限定されない。
【０３１２】
本発明の好ましい実施形態において、上記の方法の、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所において記載される）またはそれらを含んでいる製剤は、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１および／またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって認識／結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物由来の少なくとも１つの微生物（ｍｉｃｒｏｒｏｒｇａｎｉｓｍ）、溶解物または断片を含む。
【０３１３】
好ましい実施形態において、上記の方法の、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所において記載される）またはそれらを含んでいる製剤は、ＡＧ６株（ＤＳＭ１８７２６）および／またはＭＵ１（ＤＳＭ１８７２８）株由来の少なくとも１つの微生物（ｍｉｒｃｏｏｒｇａｎｉｓｍ）、溶解物または断片を含む。
【０３１４】
製剤という用語は、薬学的に許容可能なキャリアまたは食品添加物および／もしくは栄養補助食品に対して許容可能なキャリアを含み得る栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片、あるいは栄養補助食品のみ、薬学的組成物のみ、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物のみまたはその断片のみ、のうちの少なくとも１つを含んでいる、投与するのに適した形態の任意の物質または物質の組成物のことを意味する。
【０３１５】
発生を予防するという用語は、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤を、Ｃｏｒｅ−１陽性癌またはＣｏｒｅ−１陽性疾患の発症のリスクまたは割合または確率を低下させる目的で被験体に対して使用することを指す。
【０３１６】
腫瘍またはＣｏｒｅ−１陽性疾患の拡大または腫瘍の転移を減少させるかまたは予防するという用語は、体内における他の器官もしくは他の部位または他の個体へのその疾患の転移または拡大のリスクまたは割合または確率を低下させる目的で、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤を、被験体に対して使用することを指す。
【０３１７】
処置という用語は、癌、癌の症状、癌に向かう素因、生存時間または進行するまでの時間を、治癒するか、治すか、軽減するか、緩和するか、変更するか、改良するか、回復するか、改善するか、または影響する目的で、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤を個体または被験体に対して使用することを指す。
【０３１８】
前記Ｃｏｒｅ−１陽性疾患は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のうちの少なくとも１つによって結合され得るかあるいは身体の成分またはヒトもしくは動物の身体内に存在する成分と関連する、ウイルス、微生物または他の生物学的材料（例えば、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のうちの少なくとも１つによって結合される細胞、微生物、ウイルスまたは粒子が挙げられるがこれらに限定されない）に関連する任意の疾患である。
【０３１９】
「有効量」の、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤のうちのいずれかは、１人１日あたり約１×１０６〜約１×１０１４ｃｆｕ（ｃｆｕ／人／日）に相当するかまたはそれから得られる、生存しているかまたは死滅している微生物、またはこれらの微生物の溶解物もしくは断片を含み、ここで、ｃｆｕは、当業者に公知であり、当業者によって決定され得る１つの微生物に対する尺度としてのコロニー形成単位である；
本発明の別の実施形態において、有効量は、少なくとも１つの個体においてＣｏｒｅ−１に対する液性免疫応答または細胞性免疫応答を誘導する、好ましくは、本明細書中の別の箇所に記載されているＣｏｒｅ−１に対する免疫応答試験のうちの少なくとも１つによって検出可能な、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答および細胞性免疫応答を誘導する、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤の量である。
【０３２０】
本発明の別の実施形態において、有効量は、少なくとも１つの個体のおのおのにおいて、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する免疫防御をもたらすためか、癌に対する予防効果を有するためか、または癌に対する治療的な効果を有するためか、または別のＣｏｒｅ−１陽性疾患に対する予防的もしくは治療的な効果を有するために必要な、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤の量である。
【０３２１】
個体または個体の群に対する有効量は、好ましくは、本明細書中の別の箇所において記載されるＣｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの免疫応答試験を用いて、および好ましくは、好ましい実施形態として本明細書中の別の箇所において記載される、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答試験の組み合わせを用いて、および／または当業者に公知かもしくは本明細書中の別の箇所において記載される臨床的な応答試験を用いて、当業者によって測定され得、そして／または最適化され得る。
【０３２２】
これらの有効量は、例えば、被験体、投薬回数および投薬のタイムスケジュール、栄養補助食品、薬学的（ｐｈａｒｍａｃｅｔｉｃａｌ）組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分の形式または製剤、投与経路および投与の時間的な計画、予防または処置などの使用目的、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または癌の状態に応じて、ある人に対する、上に記載された量または投与量、または本明細書中の別の箇所において記載される好ましい量もしくは投与量と異なり得、そして、それらは、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤を投与される種、人種（品種）、および個別の動物間または個別のヒト間によって、異なり得る。当業者は、好ましくは（ｐｅｒｆｅｒａｂｌｙ）本明細書中に記載される本発明の説明および実施形態を用いることによって、個体または個体の群に対して、適当なそして／または最適な投与量、投与経路および時間的な計画を測定することができる。
【０３２３】
１つより多い個体、より好ましくは、かなりの数の個体、より好ましくは、個体の少なくとも１０％、より好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、最も好ましくは、大部分において、Ｃｏｒｅ−１に対する前記免疫応答を誘導するか、または増強する、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤の有効量および投与量が、好ましい。
【０３２４】
好ましい実施形態において、有効量は、少なくとも１つの個体においてＣｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導する、前記栄養補助食品、前記薬学組成物、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その部分またはそれらを含む前記製剤の量である。
【０３２５】
好ましい実施形態において、前記誘導される免疫応答または増強される免疫応答は、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つおよび細胞性免疫応答試験１〜５のうちの１つによって検出可能な、Ｃｏｒｅ−１に対する、液性および細胞性の免疫応答である。好ましい実施形態において、有効量は、Ｃｏｒｅ−１に対する本明細書中に記載される免疫応答試験のうちの少なくとも２つにおいて陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５に対して陽性である、より好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験に対して陽性である、なおもより好ましくは、細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも２つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、なおもより好ましくは、少なくとも１つの液性免疫応答試験および少なくとも１つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、なおもより好ましくは、少なくとも２つの液性免疫応答試験および２つの細胞性免疫応答試験に対して陽性である、好ましくは、液性免疫応答試験１および３ならびに細胞性免疫応答試験１および３に対して陽性である、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３ならびに細胞性免疫試験１、２および３に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４ならびに細胞性免疫試験１、２、３および４に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および６ならびに５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である、なおもより好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３、４および５ならびに５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である、最も好ましくは、６つすべての液性免疫応答試験および５つすべての細胞性免疫応答試験に対して陽性である、免疫応答を誘導する、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤の量である。
【０３２６】
好ましい実施形態において、有効量は、少なくとも１つの個体のおのおのにおいて、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する免疫防御をもたらすためか、癌に対する予防効果を有するためか、または癌に対する治療的な効果を有するためか、または別のＣｏｒｅ−１陽性疾患に対する予防的もしくは治療的な効果を有するために必要な、前記栄養補助食品、前記薬学組成物、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その画分またはそれらを含む前記製剤の量である。
【０３２７】
別の好ましい実施形態において、有効量は、少なくとも１つの個体において、最大のまたは最大に近い、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導する、前記栄養補助食品、前記薬学組成物、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その部分またはそれらを含む前記製剤の量である。
【０３２８】
なおもより好ましい実施形態において、好ましい有効量は、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答試験において当業者によって検出されるとき、最大のまたは最大に近い、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導する、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤の量であり、ここで、この最大の免疫応答は、すべての免疫応答試験において陽性である必要はないが、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対して最大の抗体応答もしくは抗体価および／またはＣｏｒｅ−１に対して、より好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対して、より好ましくは、その両方に対して最大のＴ細胞応答をもたらし、最も好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答試験１および３において最大の抗体価を少なくとも示し、そして／またはＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答試験１もしくは２もしくは３において最大のＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞応答を少なくとも示す。
【０３２９】
好ましい実施形態において、有効量の前記栄養補助食品、前記薬学組成物、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その部分または前記製剤は、１個体の１用量あたり約１×１０６〜約１×１０１４ｃｆｕに相当するか、またはそれから得られる、生存しているかもしくは死滅している微生物またはこれらの微生物の溶解物もしくは部分を含む。
【０３３０】
より好ましい実施形態において、有効量の栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤は、１×１０７〜１×１０１３ｃｆｕ／人／日、より好ましくは、２×１０８〜１×１０１２、より好ましくは（ｐｒｅｆｅｒｒａｂｌｙ）１×１０９〜１×１０１１ｃｆｕ／人／日に相当するか、またはそれから得られる、生存しているかもしくは死滅している微生物、これらの微生物の溶解物または部分を含む。
【０３３１】
上記有効量または有効用量は、当業者によって認識されるように、投与経路、賦形剤の使用および他の物質（例えば、免疫促進のためのもの、免疫応答を誘導するためのものまたは免疫防御を構築するものまたは癌を予防するかもしくは処置するもの）と同時に使用することの可能性に応じても、異なり得る。
【０３３２】
上記有効量または有効用量は、当業者によって認識されるように、使用する形式（例えば、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤としての使用）、ならびにそれらがその生存している部分、死滅している部分、または溶解した部分を含むかどうか、ならびに投薬の量回数、ならびに投薬の間隔に応じても、異なり得る。それらは、好ましくは、当業者によって、提供される本発明、本発明の試験および方法を用いることによって測定され得、そして最適化され得る。
【０３３３】
好ましい実施形態において、栄養補助食品は、１日２回以上から、１日、１週間または１ヶ月に１回、短期間から１年間の長さにわたって、好ましくは、４週間から２年間にわたる毎日または毎週の使用で、経口的に投与される。
【０３３４】
別の好ましい実施形態において、単回用量が、個体に投与される。別の好ましい実施形態において、反復用量が、個体に投与される。別の好ましい実施形態において、有効量は、単回用量に相当する。別の好ましい実施形態において、有効量は、反復用量に相当する。
【０３３５】
好ましい実施形態において、薬学組成物は、ただ１回の投薬から多数回の投薬で、好ましくは、毎週から毎月、３ヶ月毎または６ヶ月毎、またはそれらの時間をずらした組み合わせで、全身投与され得、そして、６ヶ月毎から毎年、５年毎から１０年毎の免疫の回復と組み合わされ得る。
【０３３６】
本発明の別の好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは部分を含む栄養補助食品製剤のヒトにおける有効な用量は、０．１ｍｇ／ｍ２〜１０ｇ／ｍ２、より好ましくは、１０ｍｇ／ｍ２〜１０ｇ／ｍ２、なおもさらに好ましくは、０．１ｇ／ｍ２〜１０ｇ／ｍ２である。
【０３３７】
別の好ましい実施形態において、その製剤は、最初に全身投与され、続いて、免疫の回復のために経口投与される。
【０３３８】
投与という用語は、ヒトまたは動物を、有効量の栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤（それらはさらなるキャリアを使用し得る）と接触させることを意味する。投与経路には、ヒトまたは動物を、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤と接触させるための任意の方法が含まれる。Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答、Ｃｏｒｅ−１もしくはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する免疫防御、癌に対する予防効果、または癌に対する治療的な効果をもたらす投与経路（例えば、経口投与、全身投与、吸入または皮膚もしくは別の表皮との接触を介した投与が挙げられるがこれらに限定されない）が、好ましく、それらは、上または本明細書中の別の箇所において記載されるような好ましい形態で測定され得る。当業者は、最も適当な投与経路を選択することができる。
【０３３９】
投与経路および製剤の例および好ましいものは、以下に記載される：
栄養補助食品は、好ましくは、経口的に、例えば、カプセル、錠剤、エマルジョン、粉末、液体のいずれかとして、任意の食品もしくは飲み物の形態で、または、食品添加物などの食品もしくは飲み物の成分として、投与される。栄養補助食品は、単独で投与され得るか、または少なくとも１つの他の成分と混合され得る。単独での栄養補助食品または少なくとも１つの他の成分とのその混合物は、単独で投与され得るか、または食品もしくは飲み物の中に混合され得る。
【０３４０】
栄養補助食品だけでなく、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤の経口投与用の製剤は、任意の経口的に許容可能な剤形または有効量の栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤であり得、それらとしては、錠剤、カプセル、ナノ粒子、エマルジョンならびに水性の懸濁液、分散液および溶液が挙げられるがこれらに限定されない。錠剤に対して通常使用されるキャリアとしては、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤もまた、代表的に錠剤に加えられる。カプセルの形態での経口投与のために、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁液またはエマルジョンが経口的に投与されるとき、活性成分は、乳化剤または懸濁剤と組み合わされて油相に懸濁され得るか、または溶解され得る。所望であれば、ある特定の甘味剤、香味料または着色剤を加えることができる。
【０３４１】
経口投与用の製剤は、任意の経口的に許容可能な剤形、または有効量の、栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤であり得、それらとしては、錠剤、カプセル、ナノ粒子、エマルジョンならびに水性の懸濁液、分散液および溶液が挙げられるがこれらに限定されない。錠剤に対して通常使用されるキャリアとしては、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤もまた、代表的に錠剤に加えられる。カプセルの形態での経口投与のために、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁液またはエマルジョンが経口的に投与されるとき、活性成分は、乳化剤または懸濁剤と組み合わされて油相に懸濁され得るか、または溶解され得る。所望であれば、ある特定の甘味剤、香味料または着色剤を加えることができる。
【０３４２】
本発明の製剤は、経口的に投与されてもよいし、非経口的に投与されてもよい。非経口投与としては、注射（例えば、点滴注入、皮下、静脈内または筋肉内の注射）、軟膏もしくは経皮的薬物による経皮的な適用、および坐剤による直腸適用が挙げられる。組成物が経口的に投与される場合、その組成物は、ハードカプセル、ソフトカプセル、顆粒、粉末、細粒、丸剤、トローチ、錠剤、ゆっくりとした活性成分の送達系、液体および懸濁液の形態で調製され得る。その調製は、薬学分野における従来の方法によって容易に行われ得る。
【０３４３】
投与様式および剤形は、当然のことながら、所定の処置の適用にとって望ましく、かつ有効な、化合物または組成物の治療量に影響する。本発明の製剤が、経口投与の形態で調製される場合、その組成物は、通常の薬剤における通常の薬学的成分（例えば、充填剤、増量剤、結合剤、膨化剤、界面活性物質、滑沢剤などの希釈剤および賦形剤）を用いて調製され得る。通常の成分の特定の例としては、賦形剤（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ）（例えば、乳糖、白砂糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロースおよびケイ酸）；結合剤（例えば、水、エタノール、単純シロップ、グルコース液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、シェラック、メチルセルロース、リン酸カリウムおよびポリビニルピロリドン）；膨化剤（例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、寒天粉末、ラミナラン粉末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプンおよび乳糖）；崩壊阻害剤（ｄｅｃａｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（例えば、白砂糖、ステアリン酸、カカオバターおよび硬化油）；吸収促進剤（例えば、第四アンモニウム塩およびラウリル硫酸ナトリウム）；保湿剤（例えば、グリセリンおよびデンプン）；吸収剤（例えば、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイトおよびコロイドケイ酸）；および滑沢剤（例えば、精製タルクおよびステアリン酸塩）が挙げられる。必要であれば、調製物は、着色料、保存剤、香料、香味剤および甘味剤をさらに含む。
【０３４４】
適当な薬学的に許容可能な塩は、当業者に周知であり、そのような塩としては、無機酸および有機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸）の塩基性塩が挙げられる。さらに、本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、例えば、置換基がカルボキシ部分を含む場合、薬学的に許容可能な陽イオンを用いて形成され得る。適当な薬学的に許容可能な陽イオンは、当該分野で周知であり、そのような陽イオンとしては、アルカリ、アルカリ土類アンモニウムおよび四級アンモニウム陽イオンが挙げられる。
【０３４５】
好ましい実施形態において、薬学組成物の投与経路は、静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、頭蓋内注射、腫瘍内注射、上皮内注射、経皮的送達、経食道（ｐｅｒ  ｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ）投与、腹内投与、付属器内（ｉｎｔｒａａｐｅｎｄｉｃｕｌａｒ）投与、動脈内投与、関節内投与、気管支内投与、頬内（ｉｎｔｒａｂｕｃｃａｌ）投与、嚢内投与、心臓内投与、軟骨内投与、洞内投与、頭部内投与、結腸内投与、皮内投与（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、嚢胞内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）投与、皮内投与（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、腺管内（ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ）投与、十二指腸内投与、束内投与、脂肪内（ｉｎｔｒａｆａｔ）投与、網状体内（ｉｎｔｒａｆｉｌａｒ）投与、脳溝内（ｉｎｔｒａｆｉｓｓｕｒａｌ）投与、胃内投与、腺内（ｉｎｔｒａｇｌａｎｄｕｌａｒ）投与、肝臓内投与、腸内（ｉｎｔｒａｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）投与、層内（ｉｎｔｒａｌａｍｅｌｌａｒ）投与、病変内投与、靭帯内投与、舌内投与、乳腺内投与、髄内投与、髄膜内投与、心筋内投与、鼻腔内投与、眼内投与、手術中の（ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅ）投与、口内投与、骨内投与、卵巣内投与、膵臓内（ｉｎｔｒａｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）投与、壁内（ｉｎｔｒａｐａｒｉｅｔａｌ）投与、骨盤内投与、心膜内投与、会陰内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｎｅａｌ）投与、腹腔内投与、胎盤内（ｉｎｔｒａｐｌａｃｅｎｔａｌ）投与、胸膜内投与、橋内（ｉｎｔｒａｐｏｎｔｉｎｅ）投与、前立腺内投与、肺内投与、脊髄内（ｉｎｔｒａｒａｃｈｉｄｉａｎ）投与、直腸内投与、腎臓内投与、強膜内投与、陰嚢内投与、区内（ｉｎｔｒａｓｅｇｍｅｎｔａｌ）投与、トルコ鞍内（ｉｎｔｒａｓｅｌｌａｒ）投与、脊髄内（ｉｎｔｒａｓｐｉｎａｌ）投与、脾臓内投与、胸骨内投与、基質内投与、滑液嚢内投与、足根内（ｉｎｔｒａｔａｒｓａｌ）投与、精巣内投与、胸腔内（ｉｎｔｒａｔｈｏｒａｃｉｃ）投与、扁桃内投与、気管内投与、管内（ｉｎｔｒａｔｕｂａｌ）投与、鼓室内投与、尿管内投与、尿道内投与、子宮内投与、膣内投与、脈管内（ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ）投与、室内投与、脊椎内投与、膀胱内投与および硝子体内投与からなる群から選択される。
【０３４６】
本発明のより好ましい実施形態において、投与（＝接触）経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、経皮的（局所的）、経粘膜的、腹腔内、鼻腔内、直腸経腸的および経口投与が挙げられる。
【０３４７】
本発明の製剤は、それら中の成分の薬学的に許容可能な塩を含み得る。薬学的に許容可能な塩としては、無機酸（例えば、塩酸またはリン酸など）または有機酸（例えば、酢酸、酒石酸、マンデル酸など）を用いて形成される酸付加塩が挙げられる。遊離カルボキシル基を用いて形成される塩は、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄など）および有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミノ、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなど）から得ることができる。生理的に容認できるキャリアは、当該分野で周知である。液体キャリアの例（Ｅｘｅｍｐｌａｒｙ）は、活性成分に加えて物質を含んでいない滅菌水溶液および水であるか、または緩衝液（例えば、生理学的ｐＨ値におけるリン酸ナトリウム）、生理食塩水もしくはその両方（例えば、リン酸緩衝食塩水）を含む。なおもさらに、水性キャリアは、２つ以上の緩衝塩、ならびに塩（例えば、塩化ナトリウムおよび塩化カリウム）、デキストロース、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよび他の溶質を含み得る。液体組成物は、水に加えて、そして水以外の液相も含み得る。そのようなさらなる液相の例は、グリセリン、綿実油などの植物油、オレイン酸エチルなどの有機エステルおよび水−油エマルジョンである。製剤は、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分、代表的には、組成物の総重量あたり少なくとも０．１重量パーセントのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分を含む。重量パーセントは、組成物の全重量に対する、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分の重量の比である。従って、例えば、０．１重量パーセントは、１００グラムの全組成物あたり、０．１グラムのＣｏｒｅ−１陽性微生物Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分である。
【０３４８】
用語「薬学的に許容可能な塩」とは、生物学的有効性および遊離塩基の特性を保持していて、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐトルエンスルホン酸（ｐｔｄｕｅｎｅｓｕｌｆ  ｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、サリチル酸など）との反応によって得られる化合物の塩のことを指す。薬学的に許容可能な塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類塩およびアンモニウム塩が挙げられる。
【０３４９】
活性成分として、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分を含んでいる製剤は、経口での使用に適した形態、例えば、錠剤、トローチ、舐剤、水性もしくは油性の懸濁液、分散性の粉末もしくは顆粒、エマルジョン、ハードカプセルもしくはソフトカプセル、またはシロップまたはエリキシルであり得る。経口での使用が意図された組成物は、薬学組成物を製造するための分野で公知の任意の方法に従って調製され得、そのような組成物は、薬学的に的確で、味のよい調製物を提供するために、甘味剤、香味料、着色剤および保存剤からなる群から選択される１つ以上の物質を含み得る。錠剤は、錠剤の製造に適した、薬学的に許容可能な無毒性の賦形剤と混合されて活性成分を含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム）；造粒剤および膨化剤、例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア、および滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであり得る。上記錠剤は、コーティングされていなくてもよいし、または胃腸管（ｇａｓｔｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ）内における崩壊および吸収を遅延させるため、公知の技術によってコーティングされていてもよく、そしてそれによって長時間にわたる持続性の作用を提供する。例えば、時間遅延物質（例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリル）が使用され得る。それらを、米国特許第４，２５６，１０８号；同第４，１６６，４５２号；および同第４，２６５，８７４号に記載されている技術によってコーティングすることにより、制御放出用の浸透性の治療的錠剤が形成され得る。本発明による製剤は、１つ以上の薬物（それらは調節剤（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）に連結されていてもよいし、組成物内で遊離していてもよい）も含むか、あるいは、含み得る。実質的には、任意の薬物は、以下に記載されるように種々の目的のために、本明細書中に記載されるような調節剤と組み合わせて投与され得る。調節剤とともに投与され得る薬物のタイプの例としては、鎮痛薬、麻酔薬、抗狭心症薬、抗真菌薬、抗生物質、抗癌薬（例えば、タキソールまたはマイトマイシンＣ）、抗炎症薬（例えば、イブプロフェンおよびインドメタシン）、駆虫薬、抗うつ薬、解毒薬、制吐薬、抗ヒスタミン剤、抗高血圧薬、抗マラリア薬、抗微小管剤（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ａｇｅｎｔｓ）（例えば、コルヒチンまたはビンカアルカロイド）、抗片頭痛剤、抗菌薬、抗精神病薬（ａｎｔｉｐｈｓｙｃｈｏｔｉｃｓ）、解熱薬、防腐薬、抗シグナル伝達剤（ａｎｔｉ-
ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）（例えば、タンパク質キナーゼＣインヒビターまたは細胞内カルシウム動員のインヒビター）、抗関節炎薬、アンチトロンビン剤、抗結核薬、鎮咳薬、抗ウイルス薬、食欲抑制薬、心臓作用性薬物、薬物依存の薬物、下剤、化学療法剤、冠血管、大脳または末梢の血管拡張薬、避妊薬、抑制薬、利尿薬、去痰薬、成長因子、ホルモン剤、催眠薬、免疫抑制剤、麻酔薬拮抗薬、副交感神経刺激興奮薬、鎮静薬、刺激薬、交感神経興奮薬、トキシン（例えば、コレラ毒素）、精神安定薬および泌尿器抗感染薬が挙げられる。
【０３５０】
経口で使用するための製剤は、活性成分が不活性な固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水もしくは油性の媒質、例えば、落花生油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセルとしても存在し得る。水性懸濁液は、水性懸濁液の調製に適した賦形剤と混合されて活性な成分を含む。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウムポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムであり；分散剤または保湿剤は、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合物（例えば、ポリオキシエチレンと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート））であり得る。水性懸濁液は、１つ以上の保存剤、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味料、および１つ以上の甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）も含み得る。
【０３５１】
油性懸濁液は、活性成分を、植物油、例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油もしくはやし油、または、鉱油、例えば、流動パラフィンに懸濁することによって調合され得る。油性懸濁液は、糊稠剤、例えば、蜜ろう、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含み得る。上に示したような甘味剤および香味料は、味のよい経口調製物を提供するために加えられ得る。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を加えることによって保存され得る。
【０３５２】
水を加えることによる水性懸濁液の調製に適した分散性の粉末および顆粒は、分散剤または保湿剤、懸濁剤および１つ以上の保存剤と混合されて、活性成分を提供する。適当な分散剤または保湿剤および懸濁剤は、例示され、例えば、甘味剤、香味料および着色剤もまた存在し得る。
【０３５３】
本発明の製剤は、水中油型エマルジョンの形態でもあり得る。その油相は、植物油、例えば、オリーブ油もしくは落花生油、または鉱油、例えば、流動パラフィンまたはこれらの混合物であり得る。適当な乳化剤は、天然に存在するゴム（例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム）、天然に存在するホスファチド（例えば、ダイズ、レシチン）、ならびに脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル（例えば、ソルビタンモノオレエート）、および前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）であり得る。そのエマルジョンは、甘味剤および香味料も含み得る。
【０３５４】
シロップおよびエリキシルは、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースとともに調合され得る。そのような製剤は、粘滑剤、保存剤および香味料ならびに着色剤も含み得る。薬学組成物は、無菌の注射可能な水性または油性（ｏｌｅａｇｅｎｏｕｓ）の懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、上で述べた適当な分散剤または保湿剤および懸濁剤を用いて、公知の技術に従って調合され得る。無菌の注射可能な調製物は、無毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオールの溶液として（ａｓ  ａｂｓｏｌｕｔｉｏｎ）でもあり得る。水、リンガー溶液および等張性塩化ナトリウム溶液が、許容可能なビヒクルおよび溶媒の中で使用され得る。さらに、無菌の固定油は、溶媒または懸濁媒体として通常使用されている。この目的で、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む任意の緩和な固定油が、使用され得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射可能物を調製するための用途が見出されている。約０．０１ｍｇ〜約１４０ｍｇ／キログラム体重／日の桁の投薬レベルが、上に示された状態の処置において有用である（約２．５ｍｇ〜約７ｇ／患者／日）。例えば、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍は、約０．０１〜５０ｍｇの化合物／キログラム体重／日の投与によって効果的に処置され得る（約０．５ｍｇ〜約３．５ｇ／患者／日）。キャリア物質と組み合わされて単回投与形態を生じ得る活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に応じて異なる。例えば、ヒトの経口投与が意図された製剤は、総組成物の約５〜約９５％で異なり得る。単位剤形は、一般に約１ｍｇ〜約１０ｇの活性成分を含む。しかしながら、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、投与の食餌時間、投与経路、排出速度、薬剤の併用および治療を受けている特定の疾患の重症度を含む種々の因子に左右されることが理解される。本発明による化合物の有効投与量は、特定の化合物、毒性および阻害活性、処置される状態、ならびにその化合物が単独で投与されるのか、または他の治療とともに投与されるのかを含む因子に応じて異なる。代表的には、有効投与量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１５００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約１〜１５０ｍｇ／ｋｇ体重、および最も好ましくは、約５０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。本発明は、上述した病的状態を処置するためのプロセスまたは方法にも関する。本発明の化合物は、予防的に、または治療的に、好ましくは、述べた障害に対して有効な量で、そのような処置が必要な温血動物、例えば、ヒトに、投与され得、その化合物は、好ましくは、薬学組成物または栄養補助食品の形態で使用される。
【０３５５】
薬学的に許容可能な賦形剤およびキャリア溶液の調合は、例えば、経口、非経口、静脈内、鼻腔内および筋肉内の投与および調合を含む種々の処置レジメンにおいて本明細書中に記載される特定の組成物を用いるのに適した投薬レジメンおよび処置レジメンが開発されているように、当業者に周知である。
【０３５６】
Ａ．経口送達
ある特定の適用において、本明細書中に開示される製剤は、経口投与を介してヒトまたは動物に送達され得る。そのようなものとして、これらの組成物は、不活性な希釈剤もしくは同化可能な食用キャリアとともに調合され得るか、または硬殻もしくは軟殻ゼラチンカプセル内に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得るか、または食餌の食物に直接組み込まれ得る。
【０３５７】
活性な化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、摂取可能な錠剤、バッカル錠（ｔａｂｌｅｓ）、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラートなどの形態で使用され得る。その錠剤、トローチ、丸剤、カプセルなどは、以下のもの：トラガカントゴム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチンのような結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；膨化剤（例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸など）；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も含み得；そして甘味剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはサッカリン）が加えられ得るか、または香味料（例えば、ペパーミント、ウインターグリーン油またはチェリーフレーバー）も含み得る。単位剤形がカプセルであるとき、その単位剤形は、上記のタイプの物質に加えて、液体キャリアを含み得る。様々な他の物質が、コーティング剤として存在し得るか、またはその単位剤形の物理的形態を改変するために存在し得る。例えば、錠剤、丸剤またはカプセルは、シェラック、糖またはその両方を用いてコーティングされ得る。シロップまたはエリキシルは、甘味剤として活性化合物スクロース、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素および香料（チェリーまたはオレンジの香料など）を含み得る。当然のことながら、任意の単位剤形を調製する際に使用される任意の物質は、薬学的に純粋かつ使用される量において実質的に無毒性であるべきである。さらに、その活性な化合物は、徐放性の調製物および製剤に組み込まれ得る。
【０３５８】
代表的には、これらの製剤は、少なくとも約０．１％の活性な化合物またはそれ以上を含み得るが、当然のことながら、活性成分のパーセンテージは、様々であり得るし、都合よく、製剤全体の重量または体積の約１もしくは２％〜約６０％もしくは７０％またはそれ以上であり得る。当然、治療的に有用な組成物の各々における活性な化合物の量は、適当な投与量がその化合物の所与の任意の単位用量で得られるように調製され得る。溶解性、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、生成物の貯蔵寿命などの因子ならびに他の薬理学的考慮は、そのような薬学的製剤を調製する当業者によって熟慮され、種々の投与量および処置レジメンが望ましいことがある。
【０３５９】
あるいは、経口投与の場合、本発明の組成物は、うがい薬、歯磨剤、バッカル錠、経口スプレーまたは舌下経口で投与される製剤の形態において、１つ以上の賦形剤とともに組み込まれ得る。例えば、うがい薬は、ホウ酸ナトリウム溶液（ドーベル液）などの適切な溶媒中に活性成分を必要量で組み込んで調製され得る。あるいは、活性成分は、経口溶液（例えば、ホウ酸ナトリウム、グリセリンおよび重炭酸カリウムを含むもの）に組み込まれ得るか、または歯磨剤に分散され得るか、または水、結合剤、研磨剤、香味料、発泡剤および保湿剤を含み得る組成物に治療有効量／有効用量で加えられ得る。あるいは、その組成物は、舌の下に置かれ得るかもしくは別途口の中で溶解され得る、錠剤または溶液の形態にされ得る。
【０３６０】
Ｂ．注射可能な送達
ある特定の状況において、本明細書中に開示される製剤を、非経口的、静脈内、筋肉内または腹腔内に送達することが望ましいことがある。遊離塩基または薬理学的に許容可能な塩としての活性な化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性物質と適切に混合された水中に調製され得る。分散物は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物中に、ならびに油中に調製され得る。貯蔵および使用の通常の条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐために保存剤を含む。
【０３６１】
注射による使用に適した薬学的形態としては、無菌の水溶液または分散液、および無菌の注射用の溶液または分散液の即時調合調製用の無菌の粉末が挙げられる。すべての場合において、その形態は、無菌でなければならないし、容易に注射できる（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）程度の流体でなければならない。それは、製造および貯蔵の条件下において安定でなければならないし、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されていなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物および／または植物油を含む、溶媒または分散媒であり得る。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することによって、分散液の場合は必要な粒径を維持することによって、そして界面活性物質を使用することによって、維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって容易にされ得る。多くの場合において、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用の組成物の持続的な吸収は、吸収を遅延させる組成物、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによってもたらされ得る。
【０３６２】
水溶液における非経口投与の場合、例えば、その溶液は、必要であれば適切に緩衝化されるべきであり、第１に、液体希釈剤を、十分な食塩水またはグルコースを用いて等張性にするべきである。これらの特定の水溶液は、特に、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内の投与に適している。この文脈において、使用することができる無菌の水性媒質は、本発明の開示に鑑みて、当業者に公知である。例えば、１つの投与量は、１ｍｌの等張性のＮａＣｌ溶液に溶解され得、そして１０００ｍｌの皮下注入液に加えられ得るか、または所定の注入部位に注射され得る。必然的に、処置される被験体の状態に応じて、投与量のいくつかの変形がとられる。いずれにしても、投与に関与する者は、個別の被験体に対して適切な用量を測定することになる。さらに、ヒトへの投与の場合、調製物は、生物製剤の規準に関する国家または地域の官庁が求めている、無菌性、発熱性および全般的な安全性および純度の規準を満たすべきである。
【０３６３】
無菌の注射可能な溶液は、上で列挙された様々な他の成分を含んでいる適切な溶媒に、活性な化合物を必要な量で組み込むことによって調製され、必要であればその後フィルター滅菌される。一般に、分散液は、様々な滅菌活性成分を、基礎的な分散媒および上に列挙されたもののうち必要とされる他の成分を含む無菌のビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌の粉末の場合、好ましい調製方法は、予めろ過された無菌の溶液からの活性成分および任意の付加的な所望の成分の粉末をもたらす、真空乾燥および凍結乾燥である。
【０３６４】
本明細書中に開示される組成物は、中性または塩の形態で調合され得る。薬学的に許容可能な塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基を用いて形成される）および無機酸（例えば、塩酸またはリン酸など）または有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）を用いて形成される塩が挙げられる。遊離カルボキシル基を用いて形成される塩はまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄など）および有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなど）から得られ得る。調合したら、溶液は、投薬製剤に適合した様式で、そして治療的に有効な量で、投与される。製剤は、種々の剤形（例えば、注射用溶液、薬物放出カプセルなど）で容易に投与される。
【０３６５】
本明細書中で使用されるとき、「キャリア」には、任意およびすべての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング剤、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤（ａｎｔｉｆｉｎｇａｌ  ａｇｅｎｔｓ）、等張剤および吸収遅延剤、緩衝液、キャリア溶液、懸濁液、コロイドなどが含まれる。薬学的に活性な物質に対するそのような媒質および物質の使用は、当該分野で周知である。任意の通常の媒質または物質が活性成分と不適合である場合を除いて、治療的組成物におけるそれらの使用が企図される。補充性の活性成分もまた、その組成物に組み込まれ得る。
【０３６６】
句「薬学的に許容可能な」とは、ヒトに投与したときにアレルギー性または類似の都合の悪い反応をもたらさない分子の本質および組成物に関係する。活性成分としてタンパク質を含む水性組成物の調製は、当該分野において十分に理解されている。代表的には、そのような組成物は、液体の溶液または懸濁液としての注射可能物として調製され；注射用の溶液または注射用の懸濁液、注射の前の液体に適した固体の形態もまた調製され得る。その調製物は、乳化もされ得る。
【０３６７】
本発明の好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品またはその製剤を、食品添加物としてヒトに適用する。
【０３６８】
本発明の好ましい実施形態において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品またはその製剤を、医療用の食品としてヒトに適用する。
【０３６９】
本発明は、食品添加物または食品もしくはその成分として少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品またはその製剤にも関する。本発明の文脈における食品は、生存している有機体によって消費される、液体の飲み物を含む任意の物質である。食品は、動物／ヒトに対する主なエネルギー源および栄養源であり、通常、動物または植物が起源である。その食品は、肉、乳または卵のような動物性の産物を含んでいない、一般にすべての種類の食品である厳格菜食主義者の好ましい食品である。本発明の文脈における食品は、動物性の産物を含む非厳格菜食主義者の好ましい食品でもある。本発明の文脈における食品は：
（ｉ）加工されているか、部分的に加工されているか、または加工されていないかにであって、栄養的価値の有無に関係なくヒトによって消化されると意図されるか、または消化されると合理的に予想される、任意の物質または産物；
（ｉｉ）水および他の飲み物；
（ｉｉｉ）チューインガムもしくはキャンディ産物；ならびに／または
（ｉｖ）食品を調製する際の要素または成分として使用される物品および物質
である。本発明の文脈における食品は、狩猟、採集、およびいくつかの集団に対しては地域的に重要であるがその他の人に対してはそれほどではない生存するための他の方法とともに、耕作、飼育および漁業によって伝統的に入手される。近代の先進国では、食糧供給は、生産される食品の量を最大にする一方で、コストを最小限にすることを目標としている、農業、工業用農業（ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  ｆａｒｍｉｎｇ）、水産養殖および養魚の技術にますます依存している。これらとしては、脱穀機、播種機からトラクターおよびコンバインなどまでに及ぶ、開発されてきた機械化された（ｍｅｃｈａｎｉｓｅｄ）ツールへの依存が挙げられる。これらは、高収穫を促進するためおよび収量を減少させる昆虫または哺乳動物に立ち向かうために農薬の使用と組み合わされてきている。より最近では、より持続可能な農作業への傾向が強まってきている。このアプローチ（消費者の要求によって部分的に助長される）は、生物多様性、地域的な自己依存および有機農法の方法を促進する。
【０３７０】
本発明の文脈における加工食品（少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含む食物）の種類は：
・飲み物：ビール、ジュース、ソフトドリンク、スカッシュ、ワイン、乳、乳製品または他のアルコール飲料もしくは非アルコール飲料を含む飲み物、例えば、水（単なる炭酸水を含む）、果汁および野菜汁、ソフトドリンク、淡水（ａｇｕａｓ  ｆｒｅｓｃａｓ）、レモネード、コーラ、ジンジャーエール、アイロンブルー（ｉｒｎ  ｂｒｕ）、ルートビア、サルサパリラ、クリームソーダ、タンポポおよびゴボウ、スカッシュ、水で希釈された果物風味のシロップ、スポーツドリンク、インフュージョン（ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ）、コーヒー、茶、乳飲料、例えば、乳、ヨーグルトドリンク、チョコレートミルク、ミルクシェイク、エッグノッグ、アーモンドミルク、オルチャタ、アルコール飲料、カクテル−混合酒、熱い飲料、例えば、ホットチョコレート、ホットサイダー、カプチーノまたはパールミルクティ・パンは、コムギまたは他の穀物のふくれあがった生地からできている、多くの国にとって主要な食物であり、例えば、ライムギ−コムギ、トーストブレッド（ホワイトブレッド）、全粒、コムギ−ライムギ、ホワイトブレッド、マルチグレイン、ライムギ、ヒマワリの種子、カボチャの種子、ピザ、チャパティ（ｃｈａｐａｔｉｓ）、トルティーヤ、バゲット、ピタ、ラヴァッシュ、ビスケット、プレッツェル、ナン、ベーグル、プーリー、ケーキ、プンパーニッケル、全粒パン、コムギ胚芽パン、全粒、全麦パンおよび多くの他のバリエーション
・ケーキおよびクッキー、例えば、エンゼルフードケーキ、リンゴケーキ、バーブカ、ブッチェラート、ブントケーキ、バターケーキ、バタフライケーキ、ニンジンケーキ、チーズケーキ、チョコレートケーキ、クリスマスケーキ、シフォンケーキ、クロカンブーシュ、カップケーキ、デビルズフードケーキ、エクルズケーキ、フェアリーケーキ、フルーツケーキ、ジャーマンチョコレートケーキ、ジェノヴァケーキ、ジンジャーブレッド、ゴブ（ｇｏｂ）、グーイー（ｇｏｏｅｙ）バターケーキ、ホットミルクケーキ、アイスクリームケーキ、ジャファケーキ（ｊａｆｆａ  ｃａｋｅｓ）、発酵ケーキ（ｌｅａｖｅｎｅｄ  ｃａｋｅ）、月餅（ｍｏｏｎｃａｋｅ）、パネトーネ、パイナップルケーキ、パウンドケーキ、クイーンエリザベスケーキ、小豆ケーキ（ｒｅｄ  ｂｅａｎ  ｃａｋｅ）、レッドベルベットケーキ、ザッハトルテ、シムネルケーキ、スパイスケーキ、スポンジケーキ、サンケーキ、ティーケーキ、タルトタタン、バニラスライスまたはウェディングケーキ・チーズは、凝固した乳製品であり、多くの種類が存在し、例えば、サルド（ｓａｒｄｏ）チーズ、テストゥーリ（ｔｅｓｔｏｕｒｉ）チーズ、ボクマキーリ（ｂｏｋｍａｋｉｒｉ）チーズ、クウェイト（ｋｗａｉｔｏ）チーズ、ウーキー（ｗｏｏｋｉｅ）チーズ、アカウィ（ａｃｋａｗｉ）チーズ、バスケット（ｂａｓｋｅｔ）チーズ、レブネ、ジブネアラビエ（ｊｉｂｎｅｈ  ａｒａｂｉｅｈ）チーズ、ケナファ（ｋｅｎａｆａ）チーズ、ナボーリシ（ｎａｂｏｕｌｓｉ）チーズ、パニール、アフィヌール（ａｆｆｉｎｅｕｒ）、ベルクケーゼ（ｂｅｒｇｋａｅｓｅ）、ブリムゼン（ｂｒｉｍｓｅｎ）、ダッハシュタイナー（ｄａｃｈｓｔｅｉｎｅｒ）、チロリアングレイ（ｔｙｒｏｌｅａｎ  ｇｒｅｙ）チーズ、ルネベルグ（ｌｕｎｅｂｅｒｇ）、ボーヴォールデ（ｂｅａｕｖｏｏｒｄｅ）チーズ、ブリュッセルチーズ、エルベ（ｈｅｒｖｅ）チーズ、リンバーガーチーズ、マレッツ（ｍａｒｅｄｓｏｕｓ）チーズ、パッセンダーレ（ｐａｓｓｅｎｄａｌｅ）チーズ、プラトードエルベ（ｐｌａｔｅａｕ  ｄｅ  ｈｅｒｖｅ）チーズ、ポステル（ｐｏｓｔｅｌ）チーズ、レメドー（ｒｅｍｅｄｏｕ）チーズ、デーニッシュブルーチーズ、デーニッシュティルジット（ｄａｎｉｓｈ  ｔｉｌｓｉｔ）またはティルジットハバーティ（ｔｉｌｓｉｔ  ｈａｖａｒｔｉ）、アルガウ（ａｌｌｇａｅｕ）エメンタールチーズ、カンボゾーラチーズ、ハルツァー（ｈａｒｚｅｒ）チーズ、リンバーガーチーズ、シュプンディケーゼ（ｓｐｕｎｄｅｋａｅｓ）チーズ、フェタチーズ、ハロウミチーズまたはモッツァレッラチーズ・デザートは、通常甘いものであり、一般にメイン料理の後に出される一品であり、例えば、アイスクリーム、例えば、ビスケットまたはクッキー、ケーキ、クランブル、カスタード、フルーツ、ゼラチンデザート、アイスクリーム、メレンゲ、ペストリー、パイまたはタルト、プディング、ソルベ、スフレまたはトライフル・フレンチフライ、チップ、例えば、ポテトチップまたは「クリスプ」、トルティーヤチップまたはコーンチップ・機能性食品（機能性食品は、栄養学および薬学の混成語である栄養補助食品と呼ばれ、一般に加工され���食品を包含し得；おおまかなカテゴリーには、機能性食品の成分から作られているか、または「ビタミンが豊富な」製品のような、健康を促進する添加物を添加して栄養価が高められた、加工食品、および生鮮食品（例えば、野菜）が包含され、そしてこのカテゴリーにとって具体的な請求にかかるものは添付されているとおりである）・ジャムおよびゼリー  例えば、スグリ−、アカフサスグリ−、クロフサスグリ−、柑橘類果実−、リンゴ−、ラズベリー−、イチゴ−および熟成ブラックベリー−ジャムまたはローヤルゼリー・パスタ、例えば、成形されたパスタ、カムパネルラ（ｃａｍｐａｎｅｌｌｅ）、カサレッチョ、カヴァテッリ、コンキリエ、コンキリオーニ、ファルファッレ、フィオーリ、フジッリ、フジッリブカーティ、ジュメーリィ、ジーリ、グラミーニャ、ルマーケ、ルマコニ、マルタリアーティ、オレッキエッテ、ピーペ、クアドレフィオレ（ｑｕａｄｒｅｆｉｏｒｅ）、ラジアトリ、リッチョリーニ、ロテッレ、ロティーニ、スピラリーニ、ストロッツァプレッティ、トルキオまたはトロフィエ・パイ  例えば、ベーコンおよび卵のパイ、鶏肉およびキノコのパイ、コーンビーフパイ、コーニッシュパイ、フィッシュパイ、カラクッコ（ｋａｌａｋｕｋｋｏ）、クーリビヤカ（ｋｕｌｅｂｊａｋａ）、ピザパイ、ポークパイ、ポットパイ、スコッチパイ、シェパードパイ、スターゲージーパイ、ステーキパイ、ステーキアンドキドニーパイ、アップルパイ、バナナクリームパイ、ブラックベリーパイ、ブルーベリーパイ、ボストンクリームパイ、バンブルベリーパイ、チェリーパイ、チョコレートクリームパイ、ココナッツクリームパイ、カスタードパイ、ダッチアップルパイ、グレープパイ、キーライムパイ、レモンメレンゲパイ、レモンパイ、ミックスベリーパイ、オレンジパイ、ピーチパイ、ルバーブパイ、ストロベリールバーブパイ、ストロベリーパイまたはヴィネガーパイ・ピザ  例えば、標準的なタイプおよびそれらの各々のトッピングとしては：マリナラまたはナポリターナ：トマト、オリーブ油、オレガノおよびニンニク；マルゲリータ：トマト、オリーブ油、生のバジルの葉およびフィオール・ディ・ラッテ（牛乳から作られるモッツァレッラ）またはモッツァレラ・ディ・ブッファラ；フォルマッジョ・エ・ポモドーロ（ｆｏｒｍａｇｇｉｏ  ｅ  ｐｏｍｏｄｏｒｏ）：トマト、オリーブ油およびおろしたパルメザンチーズ、必要に応じてバジルの葉；リピエーノ（ｒｉｐｉｅｎｏ）またはカルゾーネ：フィオール・ディ・ラッテまたはモッツァレラ・ディ・ブッファラ、時折リコッタ・チーズも、オリーブ油およびサラミ、他の肉、野菜などまたはストロンボリ（ｓｔｒｏｍｂｏｌｉ）：モッツァレラ、肉、野菜などが挙げられる・加工肉  例えば、両生類の肉、ヒキガエル、人工肉（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｍｅａｔ）、人造肉（ｉｍｉｔａｔｉｏｎ  ｍｅａｔ）、培養肉（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｅａｔ）、牛肉（ウシ）、水牛、畜牛、ステーキ、子牛（ｖｅａｌ）（子牛（ｃａｌｖｅｓ））、ヤク、家禽類（鳥類）、ニワトリ、アヒル、狩猟鳥、シチメンチョウ、イヌ科、魚介類、魚類、サメ、甲殻類、カニ、ウサギ、マトン（ヒツジ）、ラム、豚肉（ブタ）、ハム（腰臀部）、ベー��ン（塩漬け肉の片）または昆虫・サンドイッチ  例えば、アラム（ａｒａｍ）サンドイッチ、詰まったバゲット（ｆｉｌｌｅｄ  ｂａｇｕｅｔｔｅ）、ベーコンバティ、ロールパン（ｂｕｎ）、バーガー、ブリート、チップバティ、クラブサンドイッチ、グリルドチーズ、ドネルケバブ、ジョージアホット（ｇｅｏｒｇｉａ  ｈｏｔｓ）、メルトサンドイッチ：ツナメルトなど、パニーニ、ステーキサンドイッチ、タコス、ティーサンドイッチ、トーストサンドイッチ、トルタまたはラップ・サラダ  例えば、シーザーサラダ、シェフサラダ、コブサラダ、グリークサラダ、イタリアンサラダ、メスクランサラダ、ニース風サラダ、グリーンビーンズサラダのような豆サラダ、セブンビーンサラダ、チキンサラダ、タマゴサラダ、フルーツサラダ（スライスされ、皮を剥かれた果物が、それら自体の汁において用いられるかまたはドレッシングとともに用いられる）、ラープ（ｌａｒｂ）、パスタサラダ、ポテトサラダ、そう麺サラダ、ソムタム、タブーリ、ウォルドーフサラダまたはウォーターゲートサラダ・ソース  例えば、ホワイトソース、キノコソース、アルマンドソース、アメリケーヌソース、シュープレームソース、クリーミーブラウンソース（ｅｌｏｕｔｅ  ｂｒｏｗｎ  ｓａｕｃｅｓ）、ボルドレーズソース、ブルゴーニュ風ソース、シャトーブリアンソース、アフリケーヌソース（ｓａｕｃｅ  ａｆｒｉｃａｉｎｅ）、ロベールソース、ベシャメルソース、モルネーソース、乳化ソース、ベアネーズソース、オランデーズソース、マヨネーズ、タルタルソース、クリーム状サラダドレッシング、バターソース、ブールブラン、カフェドパリ、スイートソース、魚醤、サンバル、バーベキューソース、モレ、トマトソースまたはザジキ・ソーセージ  例えば、アンデュイユ、ブラックプディング、ブラッドソーセージ、自家製田舎ソーセージ（ｂｏｅｒｅｗｏｒｓ）、ブラートブルスト、朝食用ソーセージ、ブティファーラ、チョリソ、カンバーランドソーセージ、ファルーコルヴ（ｆａｌｕｋｏｒｖ）、フエ（ｆｕｅｔ）、ハギス、キースカ（ｋｉｅｓｋａ）、キールバーサ、キシュカ（ｋｉｓｈｋａ）、キシュカ（ｋｉｓｈｋｅ）、クナックヴルスト、コブバーサ（ｋｏｖｂａｓａ）、ランドイェーガー、リングイッサ、レバーソーセージ、ルカンカ、メットヴルスト、ミンスミート、モルタデッラ、サラミ、ソージューク（ｓｏｕｊｏｕｋ）、チューリンゲン、ヴァイスヴルストまたはホワイトプディング・スナック食品：菓子、ポテトチップス、チョコレート、堅パン、キャンディーバー、ジャンクフード  例えば、ゆで落花生、キャンディーバー、チートス、チェックスミックス（ｃｈｅｘ  ｍｉｘ）、クッキー、クラッカー、コンボス（ｃｏｍｂｏｓ）、ファッジラウンド（ｆｕｄｇｅ  ｒｏｕｎｄｓ）、フラフープ（ｈｕｌａ  ｈｏｏｐｓ）、アイスクリーム、ムーンパイ（ｍｏｏｎ  ｐｉｅｓ）、パイレーツブーティ（ｐｉｒａｔｅ’ｓ  ｂｏｏｔｙ）、ポップコーン、ポークラインズ、ポテトチップス、プレッツェル、スマートパフ（ｓｍａｒｔ  ｐｕｆｆｓ）、ソフトドリンク、スノーボール（ｓｎｏｗ  ｂａｌｌｓ）、スチューデントフード（ｓｔｕｄｅｎｔ  ｆｏｏｄ）、スイスロールケーキ、ティン��ス（ｔｉｎｇｓ）、ツインキー、ベジーブーティ（ｖｅｇｇｉｅ  ｂｏｏｔｙ）またはゼブラケーキ（ｚｅｂｒａ  ｃａｋｅｓ）・スープ  例えば、デザートスープ（ココナツミルク、乳、果実およびタピオカパールから作られるフィリピンのスープであるギナターン（ｇｉｎａｔａａｎ））；日本の小豆スープであるお汁粉または果物のスープ、冬瓜スープ、みそ汁、フォー、ラーメン、サイミン、ルーマニアのジャガイモのスープ、アヴゴレモノ、ボルシチ、ブイヤベース、キャラルー、コッカリーキー、ファネスカ（ｆａｎｅｓｃａ）、ガスパチョ、ダルスープ、ミネストローネ、マリガトニースープ、スコッチブロス、スネルトゥ（ｓｎｅｒｔ）、サリャンカ（ｓｏｌｙａｎｋａ）、タラトール（ｔａｒａｔｏｒ）またはワーテルゾイ・糖または糖製品  例えば、ゴールデンシロップ、キャンディまたはチョコレート・ヨーグルト、凝乳、サワークリーム、ホイップクリーム  例えば、ラッシー、ケフィア、アイラン（ａｙｒａｎ）、ドゥー（ｄｏｏｇｈ）またはタラトール・ドリンクパウダーまたはドリンクタブレット  例えば、ビタミンドリンクまたはミネラルドリンク・カプセルまたは錠剤  治療的食品（治療的食品は、特定の、通常は栄養的、治療的な目的のためにデザインされた食品である）、機能性食品、医療用の食品、経腸食品、非経口的な食品、特定の健康用途の食品。例は、主に高齢者を対象に作られた、栄養価が高められたミルクシェイクドリンクのＥｎｓｕｒｅ、および重篤な栄養不良の（ｍａｌｎｏｕｒｉｓｈｅｄ）小児の緊急用の栄養補給のためにデザインされている、ピーナッツがベースの食品のＰｌｕｍｐｙ’ｎｕｔである。
【０３７１】
別の好ましい実施形態において、本発明の製剤は、一般用医薬品として製造される。
【０３７２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかもしくは増強する方法および／またはＣｏｒｅ−１陽性疾患を予防するかもしくは処置する方法を提供し、ここで、前記栄養補助食品、前記薬学組成物、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その部分またはそれらを含んでいる前記製剤は、健常な個体に投与される。
【０３７３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかもしくは増強する方法および／またはＣｏｒｅ−１陽性疾患を予防するかもしくは処置する方法を提供し、ここで、前記栄養補助食品、前記薬学組成物、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その部分またはそれらを含んでいる前記製剤は、癌、腫瘍、少なくとも１つの腫瘍もしくは癌細胞または少なくとも１つの転移を有する個体に投与される。
【０３７４】
特に、上記栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤は、健常な個体または患者（各々が、好ましくは、癌、腫瘍、または以下もしくは本明細書中の別の箇所に記載されるような癌性疾患もしくは腫瘍性の疾患から選択される少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を含む）において、癌、腫瘍、癌細胞またはそれらからもたらされる転移に対する免疫応答を誘導するため、腫瘍細胞、癌、腫瘍、１つもしくはそれ以上の癌細胞またはそれらからもたらされる転移に対する免疫防御として機能する免疫応答を誘導するため、腫瘍または癌、転移（単数）および／もしくは転移（複数）を処置するため、そして／または、癌、腫瘍、１つもしくはそれ以上の癌細胞またはそれらからもたらされる転移の発生、拡散または転移を減少させるかもしくは予防するために、使用され得る。例えば、処置は、原発性の腫瘍または癌、残存する最小の腫瘍、あるいは癌の疾患、再発および／もしくは転移またはその一部に向けられる。上記腫瘍または癌の処置は、補助処置としても、遂げられ得る。上記栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤は、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の疾患、腫瘍または腫瘍細胞の予防においても使用され得る。例えば、予防的な使用は、腫瘍および転移を予防に向けられる。これらの抗腫瘍物質は、周知の方法に従って、または本明細書中の別の箇所において記載されるように、適当な形態で投与される。好ましい変形は、これらの抗腫瘍性の物質または薬物の、経口的、静脈内、体腔への局所的、例えば、腹腔内、直腸内、胃腸内の経路、局所的、例えば、腫瘍、器官またはリンパ管（結節内（ｉｎｔｒａｎｏｄａｌ））に直接、そして皮下、皮内または皮膚上、および筋肉内への、注射または投与である。好ましい様式において、投与のタイプは、組み合わされ得、その場合、本明細書中の別の箇所において詳細に記載されるように、投与が処置と異なる日または処置と同じ日に行われ得る。本発明によれば、２個以上の本発明の栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはそれらを含んでいる製剤を組み合わせることも可能であり、ならびにそれらと、同じ時または別の時に適切に投与されるかまたは適用される、１つ以上の薬物または腫瘍処置（例えば、抗体治療、化学療法または放射線療法）の１つまたはこれらとの組み合わせを組み合わせることもできる。
【０３７５】
上記癌、腫瘍、腫瘍細胞、癌細胞またはそれらからもたらされる転移は、耳鼻咽喉領域、肺、縦隔、胃腸管、泌尿生殖器系、婦人科系、乳房、内分泌系、皮膚、骨の癌性疾患または腫瘍疾患、および軟部組織肉腫、中皮腫、メラノーマ、中枢神経系の新生物、乳児期の癌性疾患または腫瘍疾患、リンパ腫、白血病、新生物随伴症候群、不明な原発腫瘍を有する転移（ＣＵＰ症候群）、腹膜癌腫症（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｏｓｅｓ）、免疫抑制関連の悪性疾患および／または腫瘍転移の群から選択される。
【０３７６】
より具体的には、癌、腫瘍、腫瘍細胞、癌細胞またはそれらからもたらされる転移は、以下のタイプの癌：乳房、前立腺および結腸の腺癌；気管支に生じるすべての型の肺癌；骨髄癌、メラノーマ、ヘパトーム、神経芽細胞腫；パピローマ；アプドーマ、分離腫、鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患（ｃａｒｃｉｎｏｉｄ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）、癌腫（例えば、ウォーカーカルシノーマ、基底細胞癌、鱗状基底（ｓｑｕａｍｏｂａｓａｌ）癌腫、ブラウンピァスカルシノーマ、腺管癌、エールリッヒ腫瘍、上皮内癌（ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、癌−２カルシノーマ（ｃａｎｃｅｒ−２  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、メルケル細胞カルシノーマ、粘液性癌（ｍｕｃｏｕｓ  ｃａｎｃｅｒ）、非小細胞気管支カルシノーマ（ｎｏｎ−ｐａｒｖｉｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、燕麦細胞癌、乳頭状癌、硬癌（ｓｃｉｒｒｈｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支肺胞癌（ｂｒｏｎｃｈｉｏ-ａｌｖｅｏｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支癌（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮癌および移行上皮癌）；組織球（ｈｉｓｔｉｏｃｙｔｉｃ）機能障害；白血病（例えば、Ｂ細胞白血病、混合細胞型白血病、ヌル細胞型白血病、Ｔ細胞白血病、慢性Ｔ細胞白血病、ＨＴＬＶ−ＩＩ関連白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、肥満細胞性白血病および骨髄性白血病に関連するもの）；悪性組織球増殖症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、孤立性形質細胞腫；細網内皮症、軟骨芽細胞腫；軟骨腫、軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；白血肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；ユーイング肉腫；滑膜性腫瘍；腺線維腫；腺リンパ腫；癌肉腫、脊索腫、頭蓋咽頭腫、未分化胚細胞腫、過誤腫；間葉腫；中腎腫、筋肉腫、エナメル上皮腫、セメント質腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫、絨毛腫；腺癌、アデノーマ；胆管腫；コレステリン腫；円柱腫；嚢胞腺癌、嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；半陰陽性卵巣腫瘍；汗腺腫；ランゲルハンス島細胞腫瘍；ライディッヒ細胞腫；パピローマ；セルトーリ細胞腫、卵胞膜細胞腫、平滑筋腫；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；節神経腫、神経膠腫；髄芽腫、髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫、神経線維腫、神経腫、傍神経節腫、非クロム親和性傍神経節腫、被角血管腫、好酸球増加随伴性血管類リンパ組織増殖症；硬化血管腫（ｓｃｌｅｒｏｔｉｚｉｎｇ  ａｎｇｉｏｍａ）；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管周囲細胞腫、血管肉腫；リンパ管腫、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫；松果体腫；葉状嚢肉腫（ｃｙｓｔｏｓａｒｃｏｍａ  ｐｈｙｌｌｏｉｄｅｓ）；血管肉腫；リンパ管肉腫；粘液肉腫、卵巣癌；肉腫（例えば、ユーイング肉腫、実験的に、カポジ肉腫およびマスト細胞肉腫）；新生物（例えば、骨新生物、乳房新生物、消化系の新生物、結腸直腸新生物、肝臓新生物、膵臓新生物、下垂体新生物、精巣新生物、眼窩新生物、頭頚部の新生物、中枢神経系の新生物、聴覚器官、骨盤、気道および泌尿生殖管の新生物）；神経線維腫症および頸部の扁平上皮細胞の異形成、および／またはこれらのうちのだれでもからもたらされる転移を含み得る。
【０３７７】
好ましい実施形態において、上記癌、腫瘍、腫瘍細胞、癌細胞またはそれらからもたらされる転移は、以下：耳鼻咽喉領域の腫瘍（鼻の内側（ｉｎｎｅｒ  ｎｏｓｅ）、副鼻腔、鼻咽頭、唇、口腔、口腔咽頭部、喉頭、下咽頭、耳、唾液腺の腫瘍を含む）および傍神経節腫、肺の腫瘍（非小細胞気管支カルシノーマ、小細胞気管支カルシノーマ）の腫瘍を含む、縦隔の腫瘍、胃腸管の腫瘍（食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸の腫瘍、ならびに結腸癌および直腸癌および肛門癌を含む）、泌尿生殖器腫瘍（腎臓、尿管、膀胱、前立腺、尿道、陰茎および精巣の腫瘍を含む）、婦人科の腫瘍（子宮頸部、膣、外陰部の腫瘍、子宮癌、悪性トロホブラスト疾患、卵巣癌、卵管（Ｔｕｂａ  Ｆａｌｏｐｐｉｉ）の腫瘍を含む）、腹腔の腫瘍、乳癌、内分泌器官の腫瘍（甲状腺、副甲状腺、副腎皮質の腫瘍を含む）、内分泌の膵臓腫瘍、カルチノイド腫瘍およびカルチノイド症候群、多発性内分泌腫瘍症、骨および軟部組織の肉腫、中皮腫、皮膚腫瘍、黒色腫（皮膚黒色腫および眼球内黒色腫を含む）、中枢神経系の腫瘍、乳児期の腫瘍（網膜芽細胞腫、ウィルムス腫瘍を含む）、神経線維腫症、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫腫瘍ファミリー、横紋筋肉腫、リンパ腫（非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、中枢神経系の原発性リンパ腫を含む）、ホジキン病、白血病（急性白血病、慢性骨髄性およびリンパ性白血病を含む）、形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、新生物随伴症候群、不明な原発腫瘍による転移（ＣＵＰ症候群）、腹膜癌腫症、免疫抑制関連の悪性疾患（カポジ肉腫などのＡＩＤＳ関連の悪性疾患、ＡＩＤＳ関連のリンパ腫、中枢神経系のＡＩＤＳ関連のリンパ腫、ＡＩＤＳ関連のホジキン病およびＡＩＤＳ関連の肛門生殖器腫瘍を含む）、移植関連の悪性疾患、転移した腫瘍（脳転移、肺転移、肝臓癌、肝臓転移、骨転移、胸膜および心膜の転移を含む）および悪性腹水、ならびに／またはこれらのうちのだれでもからもたらされる転移、の群から選択される、本発明に記載の定義においてＣｏｒｅ−１が陽性である、少なくとも１つの細胞、または好ましくはかなりの数の細胞またはより好ましくは大部分の腫瘍細胞を含む癌性疾患または腫瘍疾患の群から選択される。
【０３７８】
別の好ましい実施形態において、上記癌、腫瘍、腫瘍細胞、癌細胞またはそれらからもたらされる転移は、癌性疾患または腫瘍疾患（例えば、乳癌、胃腸癌（結腸癌（ｃｏｌｏｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、胃癌、膵臓癌、結腸癌（ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ）、早期胃癌、小腸癌を含む）、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌、悪性黒色腫および／もしくは肝臓癌ならびに／またはこれらのうちのだれでもからもたらされる転移を含む群から選択される。
【０３７９】
さらに好ましい実施形態において、上記癌、腫瘍、腫瘍細胞、癌細胞またはそれらからもたらされる転移は、少なくとも１つの細胞、好ましくは、かなりの数の細胞、またはより好ましくは、大部分の腫瘍細胞を含む癌性疾患または腫瘍疾患の群から選択され、その疾患は、本発明による定義においてＣｏｒｅ−１が陽性であり、乳癌、胃腸癌（結腸癌、胃癌、膵臓癌、結腸癌、早期胃癌、小腸癌を含む）、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌、悪性黒色腫および／もしくは肝臓癌、ならびに／またはこれらのうちのだれでもからもたらされる転移の群から選択される。
【０３８０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかもしくは増強する方法および／またはＣｏｒｅ−１陽性疾患、癌、腫瘍、少なくとも１つの腫瘍細胞もしくは癌細胞、またはＣｏｒｅ−１陽性である少なくとも１つの細胞を含む、少なくとも１つの転移を予防するかもしくは処置する方法を提供する。
【０３８１】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘導するかもしくは増強する方法、および／またはＣｏｒｅ−１陽性疾患を予防するかもしくは処置する方法を提供し、ここで、個体は、乳癌、胃腸腫瘍（結腸癌、胃癌、膵臓癌、結腸癌、早期胃癌、小腸癌を含む）、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌、悪性黒色腫および／または肝臓癌ならびに／またはこれらのうちのだれでもからもたらされる転移を含む癌性疾患または腫瘍疾患の群から選択される癌、腫瘍、少なくとも１つの腫瘍細胞もしくは癌細胞または少なくとも１つの転移を有する。
【０３８２】
健常なヒト志願者を用いた研究において、Ｃｏｒｅ−１に対する血清抗体価は、栄養補助食品を初めて適用する前に、Ｃｏｒｅ−１に対する既存の抗体応答を測定する液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つを用いることによって測定され、好ましくは、ヒト治験のために、抗Ｃｏｒｅ−１抗体のレベルが無いか、または低い志願者を選択する。それらの志願者では、ＡＧ６もしくはＭＵ１またはプラセボを含む栄養補助食品が、３〜３０週間にわたって経口的に投与される。少なくとも２つの異なる投与量の経口適用が行われる。栄養補助食品の経口投与を開始する前および開始後は適当な間隔で、液性応答試験１〜６および／または細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも１つを用いることによって、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体および／またはＴ細胞応答を測定することによって免疫応答が追跡される。液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つまたは細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも１つにおいて陽性であることによって正に試験される研究の前の力価と比べて、栄養補助食品を投与された志願者群のかなりの数の志願者において、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体応答および／またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞応答の有意な増加が観察される。プラセボ群では、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体またはＴ細胞の応答の増加が、それほど頻繁には観察されないか、または低い程度でしか観察されない。
【０３８３】
このことは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍または転移の予防、減少のためにまたはそれらの拡大に対して、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御あるいはその処置として機能する、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を構築するための、ヒトにおける栄養補助食品の有効性を示す。
【０３８４】
Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍を有するヒト免疫適格性癌患者を用いる研究において、薬学的組成物を初めて適用する前に、Ｃｏｒｅ−１に対する既存の抗体応答を測定する液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つを用いることによって、Ｃｏｒｅ−１に対する血清抗体価を測定する。ＡＧ６もしくはＭＵ１またはプラセボを含む薬学的組成物を、経口的、腹膜内または静脈内に、３〜７０週間にわたって数回投与する。少なくとも２つの異なる適当な投与量の投与を行う。液性応答試験１〜６および／または細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも１つを用いることによって、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体応答および／またはＴ細胞応答を測定することによって免疫応答が追跡され、そして／または、進行するまでの時間、腫瘍のない生存時間ならびに／または腫瘍の体積および／もしくは部位を測定することによって臨床応答が追跡され、その各々は、薬学的（ｐｈａｒｍｅｕｔｉｃａｌ）組成物の投与を開始する前および開始した後は適切な間隔で行われる。本発明の製剤の投与群のかなりの数の志願者において、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つまたは細胞性免疫応答試験１〜５のうちの少なくとも１つにおいて陽性であることによって正に試験されるとき、研究の前の力価と比べて、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体応答またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞応答の有意な増加が観察され、そして／または、製剤を投与されたかなりの数の患者において部分的もしくは完全な臨床応答または進行するまでの時間もしくは生存時間の延長が観察される。プラセボ群では、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体応答またはＴ細胞応答の増加は、それほど頻繁に観察されないか、または低い程度でしか観察されず、そして／または臨床応答が全く観察されないか、もしくは著しく低い臨床応答しか観察されない。
【０３８５】
このことは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の発生または転移の予防、減少のためにまたはそれらの拡大に対して、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御あるいはその処置として機能する、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を構築するための、ヒトにおける薬学的組成物の有効性を示す。
【０３８６】
生存している生物（ヒト／動物）の体内でＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片と接触させることによって、Ｃｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に結合する抗体の産生が開始される。驚いたことに、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体は、新たに生じる癌細胞に対する免疫学的監視メカニズムとして機能する。
【０３８７】
Ｆ）胃腸の障害を処置するためかまたは予防するための方法
別の好ましい実施形態において、本発明は、胃腸の障害または疾患の発生または拡大を減少させるためかまたは予防するための方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０３８８】
有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤は、本明細書中の別の箇所において説明される。
【０３８９】
別の好ましい実施形態において、本発明は、胃腸の障害または疾患の発生または拡大を減少させるためかまたは予防するための方法を提供し、ここで、前記栄養補助食品または前記医薬製剤または前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）または前記製剤は、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって認識／結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物由来の少なくとも１つの微生物、溶解物または断片であるか、またはそれらを含む。
【０３９０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、胃腸の障害または疾患の発生または拡大を減少させるためかまたは予防するための方法を提供し、ここで、前記栄養補助食品または前記医薬製剤または前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物もしくは前記その断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）または前記製剤は、ＡＧ６株（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１株（ＤＳＭ１８７２８）およびＬＨ２株（ＤＳＭ１８７２７）、より好ましくは、ＡＧ６株またはＭＵ１株、最も好ましくはＡＧ６株由来の少なくとも１つの微生物、溶解物または断片であるか、またはそれらを含む。
【０３９１】
別の好ましい実施形態において、本発明は、胃腸の障害または疾患を処置する方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０３９２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、胃腸の障害または疾患を処置する方法を提供し、ここで、その胃腸の疾患は、炎症性腸疾患または機能性腸障害である。
【０３９３】
本発明は、胃腸の障害または疾患、好ましくは、炎症性腸疾患または機能性腸障害の発生を減少させるためかまたは好ましくは予防するための方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤を、ヒトまたは動物に、好ましくは、健常個体に投与する工程を包含する。
【０３９４】
本発明は、胃腸の障害または疾患、好ましくは、炎症性腸疾患または機能性腸障害の拡大を減少させるためかまたはなおもさらに好ましくは予防するための方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０３９５】
本発明は、胃腸の障害または疾患、好ましくは、炎症性腸疾患または機能性腸障害を処置する方法を提供し、その方法は、有効量の栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤をヒトまたは動物に投与する工程を包含する。
【０３９６】
本発明の好ましい実施形態において、上記の方法の、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤は、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって認識／結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物由来の少なくとも１つの微生物、溶解物または断片を含む。
【０３９７】
好ましい実施形態において、上記の方法の、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤は、ＡＧ６株（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１株（ＤＳＭ１８７２８）、より好ましくは、ＡＧ６株由来の、少なくとも１つの微生物、溶解物または断片を含む。
【０３９８】
投与経路、有効な投与量、製剤は、本明細書中の別の箇所に記載されるようなものであり、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍を処置するためかまたは予防するための方法において記載されているようなものである。好ましい実施形態において、１０９〜１０１２個のＣｏｒｅ−１陽性微生物を含む１日あたり２用量を、少なくとも２週間にわたって投与する。
【０３９９】
上記の胃腸の障害は、好ましくは、機能性腸障害および炎症性腸疾患を含む群から選択され；ここで、炎症性腸疾患は、クローン病、回腸炎および／または潰瘍性大腸炎を含む群から（ｆｏｒｍ）選択され、機能性腸障害は、胃食道逆流、消化不良、過敏性腸症候群および／または機能性腹痛を含む群から選択される。本発明の文脈における消化管は、以下の構成要素：口（頬側前庭；唾液腺、粘膜、歯および舌を含む）、咽頭、食道および噴門、胃（幽門洞および幽門、腸（ｂｏｗｅｌ）または腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）を含む）：小腸（３つの部分：十二指腸、空腸、回腸を有する）；大腸（３つの部分：盲腸（虫垂は盲腸に付着している）；結腸（上行結腸、横行結腸、下行結腸およびＳ状結腸）；直腸を有する）および／または肛門からなる。
過敏性腸症候群、クローン病（ＣＤ）、回腸炎または潰瘍性大腸炎を有するヒト患者を用いる研究において、ＡＧ６もしくはＭＵ１またはプラセボを含む栄養補助食品または薬学的組成物を、経口的に３〜３０週間にわたって数回投与する。少なくとも２つの異なる適当な投与量の投与を行う。臨床応答（例えば、腹部膨満または鼓腸の減少、ＣＤの緩解の維持、生活の質の改善、発赤までの時間の短縮または発赤の重症度の低下、下痢の減少、回腸嚢炎の緩解の維持、活動性潰瘍性大腸炎（ａｃｔｉｖｅ  ｕｌｃｅｒａｔｉｃｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）の緩解の誘導または維持）が追跡され、その各々は、栄養補助食品または薬学的組成物の投与を開始する前および開始した後は適切な間隔で行われる。上記の症状または臨床応答の少なくとも１つの有意な改善が、プラセボ群に対して、栄養補助食品または薬学的組成物を投与されたかなりの数の患者において観察される。
【０４００】
このことは、ヒトにおける、胃腸の障害の予防、減少のため、拡大または処置に対する、栄養補助食品または薬学的組成物の有効性を示す。
【０４０１】
Ｇ）抗体産出のための方法
本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物またはポリクローナル血清を産出するための方法も提供し、その方法は、
（ａ）上記栄養補助食品、薬学組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその部分をヒトまたは動物と接触させる工程
（ｂ）上記Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する液性免疫応答を誘導するか、または増強する工程
（ｃ）前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を分離する工程
を包含する。
【０４０２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を産生する細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）上記請求項のいずれかに記載の製剤、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片をヒトまたは動物と接触させる工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導するかまたは増強する工程
（ｂ）前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を産生する少なくとも１つの細胞を調製する工程
を包含する。
【０４０３】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を産生する細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）本発明の栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片をヒトまたは動物と接触させる工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導するかまたは増強する工程
（ｃ）前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を産生する少なくとも１つの細胞を調製する工程
を包含する。
【０４０４】
前記最終工程（ｃ）は、様々な方法、例えば、
（ｉ）抗Ｃｏｒｅ−１抗体を産生する少なくとも１つの細胞の不朽化、好ましくは、ハイブリドーマ技術において行われるような不朽細胞株との融合、または好ましくは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）などの適当なウイルスによる感染、もしくはＥＢＶ由来のＥ１などの、細胞の不朽化をもたらす少なくとも１つの遺伝子の組換えトランスフェクションによって；または
（ｉｉ）上記抗Ｃｏｒｅ−１抗体の少なくとも可変領域、または抗体の特異性に関与する抗Ｃｏｒｅ−１抗体の少なくとも結合領域のペプチド配列の解析、および任意のアイソタイプの抗体全体もしくはそのフラグメントまたは抗Ｃｏｒｅ−１抗体のフラグメントの融合タンパク質、あるいは少なくとも１つの他のアミノ酸またはポリペプチド配列を有する抗体全体として抗Ｃｏｒｅ−１抗体をコードするＤＮＡを用いた細胞の形質転換によって、
行われ得る。
【０４０５】
上記抗体を安定して産生することができる細胞が好ましく、その細胞とは、抗体を産生するために適当量のサイクルにわたって継代され得る（例えば、ハイブリドーマ細胞および別途不朽化された細胞が挙げられるがこれらに限定されない）か、または安定して組換え的に形質転換された細胞（例えば、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＳＰ２、Ｙ０、ＰｅｒＣ．６、Ｈｅｃ２９３が挙げられるがこれらに限定されない）であり得ることを意味する。しかしながら、ＣＯＳもしくはＨｅｃ２９３細胞またはＢ細胞における発現のような一過性の発現もまた、本発明の実施形態である。
【０４０６】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体を作製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を産生する前記細胞の少なくとも１つの細胞を適当な条件下で生育する工程
（ｂ）前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を単離する工程
をさらに包含する。
【０４０７】
本発明の好ましい実施形態において、前記抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体は、培養上清から単離される。
【０４０８】
本発明の好ましい実施形態において、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体を産生する前記細胞は、単一細胞のクローン化によって得られる。
【０４０９】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体モノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ配列を作製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片をヒトまたは動物と接触させる工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答を誘導するかまたは増強する工程
（ｃ）抗Ｃｏｒｅ−１抗体を産生する細胞または細胞クローンを単離する工程
（ｄ）抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくはそのフラグメントをコードする遺伝物質を解析するか、または抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくはそのフラグメントのペプチド配列を解析する工程
を包含する。
【０４１０】
好ましい実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体モノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を提供する。
【０４１１】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ配列を提供する。
【０４１２】
好ましい実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物またはポリクローナル血清、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体もしくはその少なくとも１つのフラグメントを提供する。
【０４１３】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体もしくはそのフラグメントを産生する細胞を提供する。
【０４１４】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物またはそれらの少なくとも１つのフラグメントを産生する細胞を提供する。
【０４１５】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、トランスジェニックマウスからのヒト化抗体またはヒト抗体である、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体またはそのフラグメントを提供する。
【０４１６】
好ましい実施形態において、本発明は、上に記載されたような、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体またはそれらの少なくとも１つのフラグメントを産生する細胞を提供する。
【０４１７】
前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体は、本発明の意味において、ヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１抗原および／またはＣｏｒｅ−１陽性の腫瘍細胞を認識する誘導可能な任意の抗体であり得、好ましくは、本明細書中の定義または別の箇所において記載される結合性または特異性の基準を有するＣｏｒｅ−１特異的抗体である抗体であり得、本明細書においてより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合するが、ＴＦｂ−ＰＡＡにはほとんどもしくは全く結合せず、かつ、ＰＡＡに結合した三糖類Ｃｏｒｅ−２に結合するが、リスト＃２に列挙されるＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンには結合するが、グリコホリンには結合せず、さらに、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ４もしくはＺＲ−７５−１のような少なくとも１つの腫瘍細胞に結合する抗体であり、ここで、これらの結合は、過ヨウ素酸塩感受性であり、そして、なおさらに好ましいのは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合するが、ＴＦｂ−ＰＡＡにはほとんどもしくは全く結合せず、かつ、ＰＡＡに結合した三糖類Ｃｏｒｅ−２に結合せず、リスト＃２に列挙されるＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンには結合するが、グリコホリンには結合せず、さらに、少なくとも細胞ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１に結合する抗体であって、これらの結合は、過ヨウ素酸塩感受性である。
【０４１８】
本発明の意味における前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体組成物は、ヒトまたは動物において、Ｃｏｒｅ−１抗原および／またはｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を認識する抗体の任意の誘導性の混合物であり得る。本発明の意味における前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物は、単一の抗体または抗体の混合物（例えば、モノクローナル抗体、モノクローナル抗体の混合物、ポリクローナル抗体混合物（例えば、抗体血清またはその画分）または少なくとも１つのモノクローナル抗体とポリクローナル抗体混合物との混合物が挙げられるがこれらに限定されない）であり得る。前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤなどの任意の誘導性の抗体型、または当業者に公知の技術によってそれらから得られる任意のフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、マルチボディ（ｍｕｌｔｉｂｏｄｉｅｓ）、抗体融合タンパク質、二重特異性抗体およびヒト化抗体またはキメラ化（ｃｈｉｍａｅｒｉｚｅｄ）抗体が挙げられるがこれらに限定されない）であり得るか、またはそれらを含み得る。
【０４１９】
本発明の方法によって作製される抗ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物は、現在利用可能なＣｏｒｅ−１特異的抗体または抗体組成物中のＣｏｒｅ−１特異的抗体に対して利点を有しており、その利点は、以下の特徴のうちの少なくとも１つである：
（ｉ）ＩｇＭとは異なる抗体型を有する
（ｉｉ）より迅速に調製することができるかまたは単離することができる
（ｉｉｉ）より多量に調製することができる
（ｉｖ）より多くの腫瘍の状態を認識する
（ｖ）より高い親和性を有する
（ｖｉ）免疫試験（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫組織化学または免疫細胞化学）においてより高い結合シグナルを示す
（ｖｉｉ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するＡＤＣＣ活性を有する
（ｖｉｉｉ）適当量の上記抗体とともにインキュベートされるときに、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞において細胞の成長または増殖を阻害する
（ｉｘ）適当量の上記抗体とともにインキュベートされる少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞においてアポトーシスなどの細胞死を誘導する
（ｘ）ＩｇＧである、
抗Ｃｏｒｅ−１抗体を得ることができる。
【０４２０】
（ｉ）ＩｇＭとは異なる抗体型を有する、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体を含む
（ｉｉ）Ｃｏｒｅ−１に対するＩｇＧ抗体を含む
（ｉｉｉ）上記抗体の主要な抗Ｃｏｒｅ−１断片としてＩｇＧ抗体を含む
（ｉｖ）Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ陽性腫瘍細胞を認識する、より多量の抗体を含む
（ｖ）より高い抗体価の抗Ｃｏｒｅ−１抗体を含む
（ｖｉ）免疫試験（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫組織化学、免疫細胞化学または免疫蛍光法）においてより高い結合シグナルを示す
（ｖｉｉ）より高い親和性を有する
（ｖｉｉｉ）少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対するＡＤＣＣ活性を有する（ｉｘ）適当量の上記抗体とともにインキュベートされるときに、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞において細胞の成長または増殖を阻害する
（ｘ）適当量の上記抗体とともにインキュベートされる少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞においてアポトーシスなどの細胞死を誘導する、
抗Ｃｏｒｅ−１抗体組成物を得ることができる。
【０４２１】
上記の特徴の少なくとも２つを示し、より好ましくは少なくとも３つを示し、より好ましくは少なくとも４つを示し、より好ましくは少なくとも５つを示し、より好ましくは少なくとも６つを示し、より好ましくは少なくとも７つを示し、より好ましくは少なくとも８つを示し、より好ましくは少なくとも９つを示し、より好ましくはすべてを示す、抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物が好ましい。
【０４２２】
好ましい実施形態において、抗Ｃｏｒｅ−１抗体は、モノクローナル抗体である。
【０４２３】
好ましい実施形態において、抗Ｃｏｒｅ−１抗体混合物は、ポリクローナル抗血清である。
【０４２４】
任意の動物またはヒトを、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその断片と接触させ得、ヒトおよびマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ラクダ、ニワトリ、ハムスター、モルモットまたはサルであり、ポリクローナル抗体血清に対する抗体応答をもたらすのに特に適当であると当業者に知られている動物（例えば、ウサギ、ヤギ、ラット、ヒト、チンパンジーおよびマウスが挙げられるがこれらに限定されない）が好ましく、モノクローナル抗体をもたらすのに特に適当であると当業者に知られている動物（例えば、マウス、ラット、ヒトが挙げられるがこれらに限定されない）がなおもさらに好ましく、ヒト抗体遺伝子の少なくとも一部を有するトランスジェニックマウスおよびヒトがさらに好ましい。
【０４２５】
接触させるとは、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／またはその断片を投与するための、Ｃｏｒｅ−１に対する液性応答を誘導することができる本明細書中の別の箇所に記載されている任意の投与方法または投与経路のことを意味する。当業者に公知のさらなるアジュバントが、免疫原性を増大させるために使用され得る。経口投与および全身性投与、後者のなかでも静脈内（ｉｎｔｒａ  ｖｅｎｅｏｕｓ）、皮内または皮下の投与、さらに、腹腔内投与が、好ましい。
【０４２６】
Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答の誘導は、本発明の液性免疫応答試験において試験され得、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも１つが、本明細書中の別の箇所において記載されるように陽性でなければならず、好ましい実施形態において、血清、血漿または便から得られる前記抗体は、Ｃｏｒｅ−１に対する抗体を産生する細胞（例えば、Ｂ細胞もしくは不死化Ｂ細胞、または組換え的にＣｏｒｅ−１抗体を発現する細胞）から得られる抗体も含む。これらの抗体は、当業者に公知の種々の方法において得ることができ、好ましい実施形態において、血液からの血清もしくは血清の画分、または適当な抗原（例えば、Ｃｏｒｅ−１が陰性の微生物抗原、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１が陰性の微生物）に対して予め吸収された血清もしくは血清の画分、または抗体産生細胞からの抗体（例えば、全細胞上清または断片化された細胞上清の形態の、上に記載された抗体）、または精製抗体は、液性免疫試験１〜６のうちの少なくとも１つにおいて、血清、血漿または便から得られた前記抗体として使用される。
【０４２７】
好ましい実施形態において、本発明は、液性免疫応答試験１〜６のうちの少なくとも５つの液性免疫応答試験において陽性である、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物またはポリクローナル血清、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体またはその少なくとも１つのフラグメントを提供する。
【０４２８】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、好ましくは、液性免疫応答試験１および３において陽性であり、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２および３において陽性であり、より好ましくは、液性免疫応答試験１、２、３および４において陽性であり、より好ましくは、液性免疫試験５において陽性であり、最も好ましくは液性免疫試験６において陽性である、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物またはポリクローナル血清、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体またはその少なくとも１つのフラグメントを提供する。
【０４２９】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されている物質のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合し（その結合は過ヨウ素酸塩感受性である）、ＩｇＧであるか、またはＩｇＧが起源である、抗Ｃｏｒｅ−１抗体もしくは抗体組成物またはポリクローナル血清、抗Ｃｏｒｅ−１モノクローナル抗体もしくはその少なくとも１つのフラグメントを提供する。
【０４３０】
好ましい実施形態において、抗Ｃｏｒｅ−１抗体は、ＴＦａ−ＰＡＡに特異的に結合するＣｏｒｅ−１であり、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されている物質のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４、ＮＭ−Ｆ９およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合し（その結合は過ヨウ素酸塩感受性である）、ＩｇＧであるかまたはＩｇＧが起源である、モノクローナル抗体またはそのフラグメントであり、より好ましくは、そのモノクローナル抗体は、トランスジェニックマウスまたはヒト由来のヒト化抗体またはヒト抗体であり、最も好ましくは、その抗体は、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対してＡＤＣＣ活性を示す。
【０４３１】
当業者は、記載される方法をその目的で使用することができ、記載される目的を達成するのに適した条件を選択し、採用することができる。当業者は、例えば、適当な動物またはヒトおよび免疫条件を選択することができるし、適当な細胞を選択することができるし、細胞を不死化することができるし、ペプチド配列あるいは抗体またはそのフラグメントもしくは一部のペプチド配列をコードするＤＮＡを解析することができるし、適当な抗体型またはフラグメントを選択することができるし、細胞の組換えトランスフェクションに適したベクターを作製することができるし、抗体産生に適した細胞を選択し、安定的または一過性に形質転換することができるし、その細胞または細胞クローンを選択し、生育することができるし、抗体またはそのフラグメントを単離し、精製することができる。
【０４３２】
本発明の別の実施形態において、抗Ｃｏｒｅ−１抗体は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはそのフラグメントの少なくとも１つを用いることによって作製されて、ファージディスプレイまたはリボソームディスプレイなどの手法を用いて抗体ライブラリーから抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体混合物が単離され得る。
【０４３３】
別の実施形態において、本発明は、抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を作製するための方法のことを言及し、その方法は、
ａ．）栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を、抗体ファージライブラリー（例えば、ファージミドまたはファージベクターベースのライブラリー）またはヒトもしくは動物から得られた抗体リボソームディスプレイライブラリーまたはキメラ抗体と接触させる工程
ｂ．）前記栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片に対する結合によって、前記抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を単離する工程
を包含する。
【０４３４】
好ましい実施形態において、ヒト抗体遺伝子、ヒト化抗体遺伝子、キメラ抗体遺伝子または動物抗体遺伝子の合成抗体ライブラリーを用いる。より好ましい実施形態において、そのライブラリーは、栄養補助食品、薬学的組成物、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物および／または断片で免疫された少なくとも１つの動物および／またはヒトのレパートリーから構築される。当業者は、特異的な抗体を作製するためかまたは選択するための、これらのライブラリーの構築方法およびそれらのライブラリーの使用方法を知っている。
【０４３５】
本発明の好ましい実施形態は、実施例において説明される。
【０４３６】
Ｈ）Ｃｏｒｅ−１特異的な樹状細胞、Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンおよびＴ細胞株の調製
驚いたことに、本発明の提供されるＣｏｒｅ−１陽性微生物は、ヒト樹状細胞によって提示されるとき、Ｃｏｒｅ−１特異的様式でヒトＴ細胞を活性化することもできた（インビトロ）。炭水化物腫瘍抗原、特にＣｏｒｅ−１などの小型の無電荷炭水化物に対する細胞性免疫応答および特に細胞傷害性細胞性免疫応答を証明する報告はない。免疫系の重要な制御因子であるヒト樹状細胞上のヒト腫瘍炭水化物抗原の提示に関する報告もなく、特に、微生物由来のヒト炭水化物構造の提示に関する報告もない。対照的に、ヒトは、炭水化物特異的細胞性免疫応答をもたらさず、特に、炭水化物腫瘍抗原に対して炭水化物特異的細胞性免疫応答をもたらさないというのが、一般的な科学的意見である。本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物は、ヒト樹状細胞によってプロセッシングされて提示され、そしてそのそれぞれを負荷された樹状細胞を使用して、Ｃｏｒｅ−１に対して特異的に主要なヒトＴ細胞を活性化することができた。本発明のＣｏｒｅ−１陽性細菌由来の溶解物で感作されることによって調製されたＴ細胞は、特異的なＴ細胞応答、特に、細胞傷害性Ｔ細胞応答を証明するサイトカインの分泌によって証明されるように、Ｃｏｒｅ−１陽性ヒト腫瘍細胞溶解物で再刺激された後に強力な免疫応答を示した。
【０４３７】
ヒト樹状細胞に、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物または一般にＣｏｒｅ−１を有する分子を負荷し、ヒトＴ細胞のＣｏｒｅ−１特異的活性化を達成することが可能であることは、驚くべきことである。前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷されたヒト樹状細胞によって活性化された免疫細胞が、Ｃｏｒｅ−１を有する分子（例えば、ＮＭ−Ｄ４もしくはＮＭ−Ｆ９からの溶解物またはアシアログリコホリン）を負荷されたヒト樹状細胞を用いて、さらに活性化され得るか、または再刺激され得ることは、なおもさらに驚くべきことであり、これは、（ｉ）Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞が、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物によって活性化され得ること、および（ｉｉ）この免疫応答が、Ｃｏｒｅ−１を有する分子を負荷されたＤＣによってさらに活性化され得るかまたは再刺激され得るＣｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞を含むことを示す。Ｃｏｒｅ−１構造が、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を負荷されたＤＣならびにアシアログリコホリンを負荷されたＤＣ上において、Ｃｏｒｅ特異的抗体によって検出され得ることもさらに驚くべきことである。ＧＭ−ＣＳＦの分泌およびＴ細胞の増殖だけでなく、ＩＮＦγ（インターフェロンγ）の分泌も、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物を用いて強力に誘導され得ることは、さらに驚くべきことであり、ＴＮＦα（腫瘍壊死因子α）が、Ｃｏｒｅ−１特異的細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を示すこともなおもさらに驚くべきことである。Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞が、好ましくはインビトロにおいて少なくとも４回再刺激され得、それが、Ｔ細胞によって媒介される、腫瘍抗原および腫瘍に対して強力かつ特異的な細胞性免疫応答を示唆するということは、さらに驚くべきことである。本発明によって提供されるＣｏｒｅ−１陽性微生物がヒトにおいて強力な抗Ｃｏｒｅ−１細胞性免疫応答を誘導することができるというこれらの免疫応答は、当業者には通じないことである。
【０４３８】
従って、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、適当量の、樹状細胞または樹状細胞の混合物または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、適当量の、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片（本明細書中の別の箇所に記載されるような）またはＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片と、適当な時間にわたって、適当な条件下で接触させて、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの機能的樹状細胞を調製する工程を包含する。
【０４３９】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、適当量の、樹状細胞または樹状細胞の混合物または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、本明細書中の別の箇所において記載されるような適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片と、適切な時間にわたって適切な条件下で接触させて、Ｃｏｒｅ−１を負荷された少なくとも１つの機能的樹状細胞を調製する工程を包含する。
【０４４０】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、適当量の、樹状細胞または樹状細胞の混合物または少なくとも１つの樹状細胞を含む細胞の混合物を、本明細書中の別の箇所において記載されるような、適当量の、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片と、適当な時間にわたって適当な条件下で接触させて、Ｃｏｒｅ−１を負荷された少なくとも１つの機能的樹状細胞を調製する工程を包含する。
【０４４１】
Ｃｏｒｅ−１に対する前記機能的樹状細胞は、本発明の細胞性免疫応答試験によって優先的に試験され得、かつ、本明細書中の別の箇所において記載される細胞性免疫応答試験のうちの少なくとも１つにおいてＣｏｒｅ−１に対して陽性である、Ｃｏｒｅ−１に対して少なくとも１つのＴ細胞を活性化する樹状細胞または樹状細胞の混合物である。好ましい実施形態において、その機能的樹状細胞は、その表面上にＣｏｒｅ−１を提示しており、例えば、細胞性免疫応答試験４において記載されているようにＣｏｒｅ−１特異的抗体によって検出され得る。本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞は、未熟樹状細胞または未熟樹状細胞の混合物または少なくとも１つの未熟樹状細胞を含む樹状細胞の混合物を、本明細書中の別の箇所において記載されるような適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片と、適当な時間にわたって、適当な条件下で接触させて、例えば、分子ＴＮＦα（腫瘍壊死因子α）、ＬＰＳ（リポ多糖）もしくはＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ  Ｇｕｅｒｉｎ）、ＩＮＦγ（インターフェロンγ）、デキサメタゾンおよび／またはＴＧＦβ（トランスフォーミング成長因子β）を含む前記樹状細胞を、本明細書中の別の箇所において記載されるような適当な条件を用いて、また当業者に公知のとおり、Ｃｏｒｅ−１を負荷された機能的樹状細胞に成熟させることによって得られた。本発明の好ましい実施形態において、上記樹状細胞は、ＭＵＴＺ−３またはＮｅｍｏｄＤＣ（Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｍｙ；ｗｗｗ．ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ．ｃｏｍから入手可能）に由来し、そしてさらに好ましい未熟樹状細胞は、ＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦの使用を含む適当な条件下で代表的には約１週間、ＭＵＴＺ−３細胞またはＮｅｍｏｄＤＣから調製され、得られた未熟樹状細胞またはｉＮＭＤＣを、前記適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片と接触させ、その細胞を、代表的には約１〜２日間、例えば、ＴＮＦα、ＬＰＳ、ＢＣＧ、ＩＮＦγ、デキサメタゾンまたはＴＧＦβ、好ましくはＴＮＦαを含む適当な条件を用いて成熟させることによって、Ｃｏｒｅ−１に対する前記機能的樹状細胞に対応する、Ｃｏｒｅ−１を負荷された成熟（ｍａｔｕｔｕｒｅ）樹状細胞が得られる。
【０４４２】
本発明の好ましい実施形態は、実施例において説明される。
【０４４３】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された、適当量の機能的樹状細胞または少なくとも１つの機能的樹状細胞を含む細胞の混合物を、少なくとも１つのＴ細胞と接触させる工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上のＴ細胞を活性化するためかまたはプライミングするために、前記１つまたはそれ以上のＴ細胞を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程
を包含する。
【０４４４】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）適当量のＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された、適当量の機能的樹状細胞または少なくとも１つの機能的樹状細胞を含む細胞の混合物を、１つもしくはそれ以上のＴ細胞または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上のＴ細胞を活性化するためかまたはプライミングするために、前記１つもしくはそれ以上のＴ細胞または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程
を包含する。
【０４４５】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
（ａ）適当量のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された適当量の機能的樹状細胞を、１つまたはそれ以上のＴ細胞と接触させる工程
（ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上のＴ細胞を活性化するためかまたはプライミングするために、前記１つまたはそれ以上のＴ細胞を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程
（ｃ）再刺激のために、Ｃｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物または断片を負荷された機能的樹状細胞を加える工程
（ｄ）適切な時間にわたって、適切な条件下で培養する工程
を包含する。
【０４４６】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
ａ）適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程
ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上のＴ細胞を活性化するためかまたはプライミングするために、前記Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程
を包含する。
【０４４７】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、
ａ）適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程
ｂ）Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上のＴ細胞を活性化するためまたはプライミングするために、前記Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程
を包含する。
【０４４８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞を調製するための方法を提供し、その方法は、前述の方法の工程（ａ）および（ｂ）を包含し、それに続いて、
（ｃ）再刺激のために、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物または断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；または、再刺激のために、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；および
（ｄ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程
を包含する。
【０４４９】
別の好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株を調製するための方法を提供し、その方法は、前述の方法の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を包含し、それに続いて、さらに少なくとも１回の再刺激を含み、その再刺激の１回は、以下の工程（ｅ）および（ｆ）または工程（ｇ）および（ｈ）、
（ｅ）再刺激のために、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞またはその溶解物もしくは断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；
（ｆ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程、および
（ｇ）再刺激のために、適当量の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその溶解物もしくは断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程
（ｈ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程。
のいずれかを含む。
【０４５０】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株を調製するための方法を提供し、その方法は、前記再刺激をさらに２回、さらに包含する。より好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株を調製するための方法を提供し、その方法は、前記再刺激の回をさらに３回包含する。さらにより好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株を調製するための方法を提供し、その方法は、前記再刺激の回をさらに５回包含する。
【０４５１】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを調製するための方法を提供し、ここで、前記再刺激の回のうちの少なくとも１回の前に、細胞をクローン化するさらなる工程が、行われる。
【０４５２】
好ましい実施形態において、上記１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株であり、再刺激の１回に相当する（ｃ）および（ｄ）が、好ましくは２回、より好ましくは３回、より好ましくは４回行われ、最も好ましくは５回以上の再刺激がＴ細胞株において行われる。
【０４５３】
好ましい実施形態において、上記１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンであり、再刺激の１回に相当する（ｃ）および（ｄ）が、好ましくは２回、より好ましくは３回、より好ましくは４回行われ、最も好ましくは５回以上の再刺激がＴ細胞株において行われ、それらの細胞は、例えば、単一細胞希釈によって、再刺激の前に少なくとも１回クローン化される。
【０４５４】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを調製するための方法を提供し、ここで、前記機能的樹状細胞は、成熟樹状細胞である。
【０４５５】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを調製するための方法を提供し、ここで、前記機能的樹状細胞および１つまたはそれ以上のＴ細胞は、ヒト細胞である。
【０４５６】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株またはＴ細胞クローンを調製するための方法を提供し、ここで、前記機能的樹状細胞は、ＭＵＴＺ−３［特許出願１０１３９４２８．４（ＤＥ）、ＰＣＴ／ＥＰ０２／０９２６０、０２７５８４７４．７（ＥＰ）、ＵＳ１０／４８６，９６６、ＣＡ２，４５７，２８７、ＤＥ１０１３９４２８Ａ１、ＷＯ２００３／０２３０２３Ａ１、ＥＰ０１４１９２４０、ＵＳ２００４０２６５９９８、ＣＡ２４５７２８７］（例えば、Ｎｅｍｏｄ−ＤＣ（Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ，ｗｗｗ．ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ．ｃｏｍから入手可能））に由来する。
【０４５７】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞株またはＴ細胞クローンを調製するための方法を提供し、ここで、前記機能的樹状細胞および１つまたはそれ以上のＴ細胞は、少なくとも１つのＭＨＣクラス分子においてマッチする。
【０４５８】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞（１つもしくはそれ以上）、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株を調製するための方法を提供し、その方法は、
ａ．本明細書中の別の箇所に記載されるようなＣｏｒｅ−１に対する適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程；および
ｂ．１つまたはそれ以上のＴ細胞をＣｏｒｅ−１に対して活性化するためかまたはプライミングするために、前記Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程
を包含する。
【０４５９】
好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞（１つもしくはそれ以上）、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株を調製するための方法を提供し、その方法は、
ａ）前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷されたＣｏｒｅ−１に対する適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程；および
ｂ）１つまたはそれ以上のＴ細胞をＣｏｒｅ−１に対して活性化するためかまたはプライミングするために、前記Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程；および
ｃ）再刺激のために、前記Ｃｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物または断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；および
ｄ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程；
または、
ａ）前記Ｃｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷されたＣｏｒｅ−１に対する適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を、適当量の少なくとも１つのＴ細胞またはＴ細胞の混合物または少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞の混合物と接触させる工程；および
ｂ）１つまたはそれ以上のＴ細胞をＣｏｒｅ−１に対して活性化するためかまたはプライミングするために、前記Ｔ細胞またはＴ細胞の混合物を、前記負荷された機能的樹状細胞とともに、適当な時間にわたって適当な条件下で培養する工程；および
ｃ）再刺激のために、上記請求項のいずれかに記載の前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷された適当量の少なくとも１つの機能的樹状細胞を加える工程；および
ｄ）適切な時間にわたって、そして適切な条件下において培養する工程
を包含する。
【０４６０】
本発明の好ましい実施形態は、実施例において説明される。
【０４６１】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、上に記載されたような、Ｃｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを提供する。
【０４６２】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つのＣＤ４＋ヘルパー細胞を含む、上に記載されたような、Ｃｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを提供する。
【０４６３】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの細胞傷害性Ｔ細胞を含む、上に記載されたような、Ｃｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを提供する。
【０４６４】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を殺滅するかまたは少なくとも１つの腫瘍細胞の殺滅を媒介する分子を分泌する、上に記載されたような、Ｃｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを提供する。
【０４６５】
少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性の腫瘍細胞を殺滅するかまたは少なくとも１つの腫瘍細胞の殺滅を媒介する分子を分泌する、本発明のＣｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株、または本発明のＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンとは、Ｃｏｒｅ−１に対する前記１つまたはそれ以上の細胞傷害性Ｔ細胞が、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を殺滅することを意味し、その殺滅は、ＩＮＦγもしくはＴＮＦαの分泌を測定する本明細書中の別の箇所において記載されるしかるべき細胞性免疫応答試験を用いるか、または細胞傷害性試験（例えば、細胞性免疫応答試験５）のいずれかによって測定され得、ここで、少なくとも１つの標識されたＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞は、主に当業者に公知の、本発明のＴ細胞、例えば、ＣＴＬもしくはＴｈ１応答を用いるか、または少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞の殺滅をもたらすしかるべき液性免疫応答および細胞性免疫応答の活性化を媒介する特異的なＣＤ４Ｔヘルパー応答を誘導することによって、前記Ｔ細胞によって溶解される。
【０４６６】
好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、その方法は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローン（上に記載されたような）またはそれらを含んでいる組成物のいずれかを投与する工程を包含する。
【０４６７】
好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、その方法は、上に記載されたような、適当量のＣｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞のうちの少なくとも１つまたはそれらを含んでいる組成物を投与する工程を包含する。
【０４６８】
好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、ここで、その患者は、Ｃｏｒｅ−１が陽性である癌細胞を有しているか、または有していた患者である。
【０４６９】
より好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、ここで、機能的樹状細胞は、自家のものである。別の好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、ここで、機能的樹状細胞は、ドナーが起源である同種異系のものである。
【０４７０】
好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、ここで、機能的樹状細胞は、ＭＵＴＺ−３由来のものである。
【０４７１】
好ましい実施形態において、本発明は、癌患者を処置する方法を提供し、ここで、機能的樹状細胞は、前記患者と少なくとも１つのＭＨＣクラス分子を共有する。本発明は、癌患者を処置する方法をさらに提供し、その方法は、Ｃｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つのＴ細胞を含む細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローン（本明細書中の別の箇所に記載される）または少なくとも１つのそれらを含んでいる組成物のうちのいずれかを投与する工程を包含する。
【０４７２】
本発明は、癌患者を処置する方法をさらに提供し、その方法は、本明細書中の別の箇所に記載される適当量のＣｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞のうちの少なくとも１つまたはそれらを含んでいる組成物を投与する工程を包含する。
【０４７３】
本発明の好ましい実施形態において、前記方法の少なくとも１つは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって、本明細書中の別の箇所に記載されるその好ましい実施形態において検出され得る、Ｃｏｒｅ−１が陽性である癌細胞を有しているか、または有していた患者に対して使用される。機能的樹状細胞が自家のものである前記方法がさらに好ましく、機能的樹状細胞が同種異系のものである前記方法がさらに好ましく、機能的樹状細胞がドナーに由来するときの前記方法がさらに好ましく、機能的樹状細胞がＭＵＴＺ−３由来のものである前記方法がなおもより好ましく、記載される機能的樹状細胞のいずれかがそれを投与される個体と少なくとも１つのＭＨＣクラス分子を共有するときの前記方法がなおもより好ましい。
【０４７４】
当業者は、本明細書中に開示される方法および材料を用いることによって、記載される職務を行うことができる。当業者は、それらの機能的樹状細胞またはＴ細胞を得るのに最良の条件、最良の投与経路、および／またはそれらを含む適当な組成物を決定することができ、そして／または特許出願ＤＥ１０１３９４２８Ａ１、ＷＯ２００３／０２３０２３Ａ１、ＥＰ０１４１９２４０、ＵＳ２００４０２６５９９８、ＣＡ２４５７２８７において、調製および使用についての好ましい実施形態にさらに説明されている。
【０４７５】
Ｃｏｒｅ−１に対する前記１つまたはそれ以上の活性化Ｔ細胞とは、調製された１つまたはそれ以上のＴ細胞またはＴ細胞を含む細胞組成物が、本発明の細胞性免疫試験の少なくとも１つ、好ましくは２つ、より好ましくは３つ、最も好ましくは４つすべてに対して陽性であることを意味する。好ましくは、それらは、少なくとも１つのＣＤ４＋ヘルパー細胞を含み、なおもより好ましくは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞を殺滅することができる少なくとも１つの細胞傷害性Ｔ細胞を含む。
【０４７６】
接触させるために使用される前記１つまたはそれ以上のＴ細胞は、標準的な方法によって前に単離されたかまたは濃縮された少なくとも１つのＣＤ４＋Ｔ細胞および／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞であるか、あるいは少なくとも１つのＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む細胞組成物である。
【０４７７】
前記溶解物は、それぞれＣｏｒｅ−１陽性（ｐｏｓｉｔｉｃｅ）微生物またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞からの任意の溶解物（例えば、凍結融解の反復、超音波処理、機械的な力または温度誘導によって調製される溶解物が挙げられるがこれらに限定されない）であり得る。
【０４７８】
Ｃｏｒｅ−１特異的Ｔ細胞の調製に関する詳細については、実施例１２を参照のこと。
【０４７９】
機能的樹状細胞は、Ｔ細胞を活性化することができる細胞である。Ｔ細胞の活性化とは、増殖の刺激および／またはナイーブＴ細胞から活性なＴ細胞への変換の刺激を意味する。活性なＴ細胞は、標的であるＣｏｒｅ−１またはＣｏｒｅ−１を有する腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導するかまたは助ける分子を分泌し、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性の腫瘍細胞の殺滅を媒介するそれらの細胞傷害性Ｔ細胞である。
【０４８０】
好ましい実施形態において、前記機能的樹状細胞は、成熟樹状細胞である。より好ましくは、成熟細胞が由来する樹状細胞前駆体は、ヒトから得られ、より好ましくは、１つもしくはそれ以上のＴ細胞が得られたか、または少なくとも１つのＭＨＣクラス分子においてマッチするヒトから得られる。より好ましい実施形態において、機能的樹状細胞は、ＭＵＴＺ−３由来であり、なおもさらに好ましくは、適切な量のＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物もしくは断片あるいはＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された、ＭＵＴＺ−３細胞またはそれ由来の細胞は、Ｉｌ−４およびＧＭ−ＣＳＦを用いて分化され、そして、例えば、適当量のＴＮＦ−αを用いて、本発明の機能的樹状細胞に相当する成熟樹状細胞にさらに成熟される。なおもより好ましい実施形態において、負荷された機能的樹状細胞は、少なくともＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ２）および（ＨＬＡ−Ｂ４４）においてマッチするＰＢＭＣ（末梢血単核球）とともに使用される。
【０４８１】
当業者は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物もしくは断片またはＣｏｒｅ−１を有する分子あるいはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞、その溶解物もしくは断片を負荷された機能的樹状細胞を調製するのに適した条件、ならびに１つまたはそれ以上のＴ細胞の適当な量および濃縮または精製の手順、そして両方の細胞を共に培養するのに適した条件（例えば、必要な時間、培地、培養条件およびさらなる因子）を決定することができる。機能的樹状細胞は、代表的には、６〜１０日以内に前駆体細胞から分化し、そしてさらに１〜２日間、負荷され、成熟される。前記負荷された機能的樹状細胞と前記１つまたはそれ以上のＴ細胞との培養は、代表的には７〜１０日間であり、再刺激のための各回について、代表的には７〜９日間、再刺激のために、負荷された機能的樹状細胞を加え、培養される。さらなる詳細は、実施例１２において示される。
【０４８２】
別の好ましい実施形態において、様々な起源由来の様々な樹状細胞または機能的樹状細胞（例えば、ＭＵＴＺ−３由来およびヒトのドナー由来の樹状細胞）が、プライミングおよび再刺激の異なる工程のために使用される。当業者は、最良の組み合わせを選択することができる。
【０４８３】
Ｃｏｒｅ−１に対する、１つまたはそれ以上のＴ細胞、または１つもしくはそれ以上のＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む細胞組成物の調製の成功は、本発明の少なくとも１つの細胞性免疫応答試験を用いて試験され得る。さらなる詳細は、本明細書中の別の箇所において記載される。好ましくは少なくとも２つの細胞性免疫応答試験が陽性であり、より好ましくは３つ、より好ましくは４つ、最も好ましくは５つすべての細胞性免疫応答試験が陽性である。
【０４８４】
樹状細胞、それらの使用法ならびにそれを使用するのに適した適当な条件および分子について本明細書で使用される説明は、本明細書中の別の箇所において記載される細胞性免疫応答試験に対しても妥当であり、またその逆もまた同じであり、本発明の他のすべての部分に対しても妥当であろう。
【０４８５】
別の実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞を提供する。
【０４８６】
別の実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの活性化Ｔ細胞を含むＴ細胞を提供する。
【０４８７】
別の実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株を提供する。別の実施形態において、本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを提供する。
【０４８８】
好ましい実施形態において、Ｔ細胞株またはＴ細胞クローンは、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または断片を負荷されたＭＵＴＺ−３由来の機能的樹状細胞を、ドナー由来、なおもより好ましくは、腫瘍患者由来、なおもより好ましくは、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体との結合が陽性である腫瘍を有する腫瘍患者由来の、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞またはその溶解物もしくは断片を負荷されたＭＵＴＺ−３由来の機能的樹状細胞による少なくとも１回の再刺激と組み合わせて使用して、調製された。
【０４８９】
本発明は、腫瘍治療として使用するための少なくとも１つの活性化Ｔ細胞を調製するための方法をさらに提供し、その方法は、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する活性化Ｔ細胞を患者に投与する工程を包含する。
【０４９０】
好ましい実施形態において、本発明は、上に記載されたような方法によって調製される、Ｃｏｒｅ−１陽性の細胞および／または疾患に対する液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導する、Ｃｏｒｅ−１に対する機能的樹状細胞、Ｃｏｒｅ−１に対する１つもしくはそれ以上の活性化Ｔ細胞、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞を含んでいる細胞組成物、Ｃｏｒｅ−１に対するＴ細胞株またはＣｏｒｅ−１に対するＴ細胞クローンを提供する。
【０４９１】
別の好ましい実施形態において、上に記載されたような、製剤および／または機能的樹状細胞および／または活性化Ｔ細胞（１つまたはそれ以上）、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株は、腫瘍の予防用または治療用の薬物および／または栄養補助食品を当業者に公知の手法によって製造するために使用される。
【０４９２】
本発明の好ましい実施形態は、実施例において説明される。
【０４９３】
Ｉ）キット
本発明は、本明細書中の別の箇所において記載されるようにヒトまたは動物においてＣｏｒｅ−１、Ｃｏｒｅ−１抗原またはＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞に対する特異的な液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導するためのキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分あるいはそれらを含んでいる製剤（これらは本明細書中の別の箇所に記載されている）およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０４９４】
より好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１特異的免疫応答は、Ｃｏｒｅ−１陽性癌細胞に対する防御として機能する。
【０４９５】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性の疾患または腫瘍、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の発生を減少させるかまたは予防するためのキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分または本明細書中の別の箇所に記載されているそれらの製剤あるいはそれらを含んでいる製剤およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０４９６】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性疾患の拡散または腫瘍の転移、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍の転移を減少させるかまたは予防するためのキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分または本明細書中の別の箇所に記載されているそれらの製剤あるいはそれらを含んでいる製剤、およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０４９７】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性疾患または腫瘍、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍を処置するキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分、または本明細書中の別の箇所に記載されているそれらの製剤、あるいはそれらを含んでいる製剤、およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０４９８】
本発明はまた、胃腸の障害の予防用および処置用のキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはその製剤（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤およびキットの使用法についての情報を備えている。
【０４９９】
本発明は、本明細書中の別の箇所に記載されているように免疫系を強化するかまたは免疫応答を改善するキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分または本明細書中の別の箇所に記載されているそれらの製剤あるいはそれらを含んでいる製剤、およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０５００】
本発明の好ましい実施形態において、上記のキットに備えられている、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片または製剤は、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１および／またはＡ７８−Ｇ／Ａ７およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２によって結合される、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物由来、好ましくは、ＡＧ６株（ＤＳＭ１８７２６）、ＭＵ１株（ＤＳＭ１８７２８）および／またはＬＨ２株（ＤＳＭ１８７２７）由来、より好ましくは、ＡＧ６株および／またはＭＵ１株由来、最も好ましくは、ＡＧ６株由来の、少なくとも１つの微生物、溶解物または断片を含む。
【０５０１】
上記キットは、キットの成分をどのように組み合わせるのかを記載している情報（使用記載書、インターネットアドレス）を含み得る。前記情報は、治療的なスキームにも関し得る。
【０５０２】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する本明細書中に記載される免疫応答試験のうちの少なくとも１つ、好ましくは、少なくとも２つ、より好ましくは、少なくとも１つの液性免疫応答試験および１つの細胞性免疫応答試験を含む、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を測定するためのキットにも関し、そのキットは、一致した免疫応答試験に記載されている物質の少なくとも１つおよびキットの使用についての情報を含んでいる。好ましい実施形態において、上記キットは、一致するコントロール、より好ましくは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分、または本明細書中の別の箇所に記載されているそれらの製剤、あるいはそれらを含んでいる製剤のうちの少なくとも１つをさらに含む。
【０５０３】
本発明は、本明細書中の別の箇所に記載されるような抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物を作製するためのキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または医薬製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその断片またはその製剤（これらは本明細書中の別の箇所に記載される）またはそれらを含んでいる製剤およびキットの使用法についての情報を備えている。
【０５０４】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの機能的樹状細胞を産出するためのキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分あるいはそれらを含んでいる製剤、およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０５０５】
好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの機能的樹状細胞を産出するためのキットは、樹状細胞株（例えば、ＭＵＴＺ−３またはＮｅｍｏｄ−ＤＣが挙げられるがこれらに限定されない）に由来する未熟樹状細胞をさらに含む。
【０５０６】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１に対する少なくとも１つの活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞、Ｔ細胞クローンまたはＴ細胞株を産出するためのキットにも関し、そのキットは、栄養補助食品または薬学的製剤またはＣｏｒｅ−１陽性微生物もしくはその部分またはその製剤あるいはそれらを含んでいる製剤、およびキットの使用についての情報を含んでいる。
【０５０７】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物、または少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子もしくは構造を含む微生物の部分を分離するためのキットにも関し、そのキットは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体または抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物と、キットの使用についての情報とを含んでいる。
【０５０８】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または少なくとも１つのＣｏｒｅ−１を有する分子もしくは構造を含む微生物の部分を同定するためのキットにも関し、そのキットは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体または抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物と、キットの使用についての情報とを含んでいる。
【０５０９】
本発明は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物または少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性の分子もしくは構造を含む微生物の部分を同定するかもしくは分離するためのキット、または本発明の栄養補助食品および薬学組成物に対する成分として使用するのに適したＣｏｒｅ−１陽性微生物を同定するためのキットにも関し、そのキットは、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体または抗Ｃｏｒｅ−１抗体または抗体組成物と、キットの使用についての情報とを含んでいる。
【０５１０】
本発明の好ましい実施形態において、本明細書中の別の箇所に記載されるような好ましいＣｏｒｅ−１特異的抗体、最も好ましくはＮｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２および／またはＡ７８−Ｇ／Ａ７が使用される。
【０５１１】
好ましい（ｐｅｒｆｅｒｒｅｄ）実施形態において、上記キットは、ポジティブコントロールとして、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物、その溶解物または部分を含む。
【０５１２】
本発明の好ましい実施形態は、実施例において説明される。
【０５１３】
定義：
本発明によれば、用語「栄養補助食品」とは、ヒトまたは動物によって経口的に摂取され得る、任意の栄養分、栄養分の組成物または製剤のことを意味し、それらとしては、例えば、様々な形態（例えば、カプセル、錠剤、エマルジョン、粉末、液体であるがこれらに限定されない）で、ならびに、任意の食物もしくは飲み物の形態で、またはその一部として、経口的に適用され得る、栄養分、栄養添加物、食品添加物、食餌性のサプリメント、医療用の食品、臨床的な食品、非経口摂取用の食品、経腸食品、特別な食餌性の用途のための食品、特定の健康用途の食品または機能性食品が挙げられるがこれらに限定されない。特別な場合において、栄養補助食品は、非経口的に供給され得る（非経口食物）。栄養補助食品は、単独で供給され得るか、または少なくとも１つの他の成分と混合され得る。単独での栄養補助食品または少なくとも１つの他の成分とのその混合物は、単独で供給され得るか、または食物もしくは飲み物に混合され得る。栄養補助食品という用語は、任意の食物、飲料、カプセル、錠剤、エマルジョン、粉末または液体のことも意味する。
【０５１４】
本発明によれば、用語「薬学組成物」は、薬物もしくは医薬もしくは生物製剤として使用され得る任意の組成物のことを意味するか、または薬物もしくは医薬もしくは生物製剤の成分である。
【０５１５】
本発明によれば、用語「Ｃｏｒｅ−１」とは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンα１−結合型に結合した、炭水化物構造のガラクトースβ１−３（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１；ＴＦα，ＴＦａ）のことを意味する。タンパク質またはポリペプチド上において、Ｃｏｒｅ−１は、セリンまたはトレオニンアミノ酸にＯ−グリコシド結合を介して共有結合している（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）。Ｃｏｒｅ−１は、様々なリンカーを介して、そして様々な密度で、天然もしくは合成のキャリア（例えば、ポリアクリルアミド（本明細書中でＰＡＡとも呼ばれる）または他の分子（例えば、クロマトグラフィベッド材料（例えば、セファロース））、ビオチンまたはタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、オバルブミン（Ｏｖａ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ））、トキシン、トキソイド、ビーズまたはナノ粒子とも結合され得る。本発明の意味において、Ｃｏｒｅ−１という用語は、Ｃｏｒｅ−１とは異なる化学構造を有するが、本発明のＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識され得、ゆえにＣｏｒｅ−１と免疫化学的に同一である立体構造を有するＣｏｒｅ−１擬態構造（例えば、ポリペプチド、ペプチド、脂質もしくは炭水化物またはそれらの組み合わせ）のことも意味する。従って、このＣｏｒｅ−１という用語は、βアノマー配置のＣｏｒｅ−１も包含する（図１９も参照のこと）。
【０５１６】
本発明によれば、用語「Ｃｏｒｅ−１特異的抗体」とは、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ（ＴＦａ−ＰＡＡ、ＴＦα−ＰＡＡ、Ｃｏｒｅ−１−ＰＡＡ）に特異的に結合するが、＃リスト１＃の物質のいずれにも結合しない任意の抗体のことを特に意味する。
【０５１７】
＃リスト１＃
ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ（ＧｌｃＮＡｃβ１−２’ＴＦ）
Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ（Ｈ型３）
ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌβ−ＰＡＡ（Ａｄｉ）
Ｇａｌα１−３−ＧａｌＮＡｃβ−ＰＡＡ（Ｔαβ）
これらはＬｅｃｔｉｎｉｔｙ  ｈｏｌｄｉｎｇｓ，Ｉｎｃから入手した。
【０５１８】
あるいは、すべての構造は、当業者によって作製され得、当業者は、結合体化に適した別のポリアクリルアミドまたは別の適当なキャリア分子、ならびにしかるべき炭水化物構造の結合に適した結合体化方法、および必要な中間体の合成を選択することもできる。
【０５１９】
Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、例えば、
・アシアログリコホリン（Ｃｏｒｅ−１を有する）に結合するが、グリコホリン（Ｃｏｒｅ−１を有していない）に結合しない抗体（この結合は、過ヨウ素酸塩感受性である）、
・より好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡ（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ）にほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃：タンパク質：
グリコホリン
ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）
ＰＡＡ−結合体：
アミノグルシトール
β−Ｎ−アセチルノイラミン酸（β−Ｎ−アセチルノイラミン酸）
α−Ｄ−グルコース（α−Ｄ−グルコース）
β−Ｄ−グルコース（β−Ｄ−グルコース）
α−Ｄ−ガラクトース（α−Ｄ−ガラクトース）
β−Ｄ−ガラクトース（β−Ｄ−ガラクトース）
α−Ｄ−マンノース（α−Ｄ−マンノース）
α−Ｄ−マンノース−６−リン酸（α−Ｄ−マンノース−６−リン酸）
α−Ｌ−フコース（α−Ｌ−フコース）
β−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（β−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
α−Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン（α−Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン，Ｔｎ，Ｔｎ）
β−Ｄ−ガラクトース−３−硫酸（β−Ｄ−ガラクトース−３−硫酸）
α−Ｎ−アセチルノイラミン酸（α−Ｎ−アセチルノイラミン酸）
β−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン−６−硫酸（β−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン−６−硫酸）
Ｌａｃ−ジ−ＮＡｃ（ＧａｌＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−，ＧａｌＮＡｃβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−）
ＧｌｃＮＡｃβ３Ｇａｌ（ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ−，ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ−）
Ｇａｌａ４ＧｌｃＮＡｃ（Ｇａｌα１−４ＧｌｃＮＡｃβ−，Ｇａｌα１−４ＧｌｃＮＡｃβ）
マルトース
Ｇａｌβ３Ｇａｌ（Ｇａｌβ１−３Ｇａｌβ−，Ｇａｌβ１−３Ｇａｌβ）
Ｌｅｃ（Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ−，Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ｌａｃ（Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ−，Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ）
ＬａｃＮＡｃ（Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−，Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−，）Ｆｕｃａ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃα１−３ＧｌｃＮＡｃβ−，Ｆｕｃα１−３ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ｆｕｃａ４ＧｌｃＮＡｃ，（Ｆｕｃα１−４ＧｌｃＮＡｃβ−，Ｆｕｃα１−４ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ｆｓ−２（ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃβ−，ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃβ）
Ｃｏｒｅ５（ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃα−，ＧａｌＮＡｃα１−３ＧａｌＮＡｃα−）
ＴααＧａｌα１−３ＧａｌＮＡｃα−，Ｇａｌα１−３ＧａｌＮＡｃα−，Ｔαα）
Ｇａｌα２Ｇａｌ（Ｇａｌα１−２Ｇａｌβ−，Ｇａｌα１−２Ｇａｌβ−，Ｇａｌａ２Ｇａｌ）
ＳｉａＴｎ（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα−；Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃαｓＴｎ）
３’−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃ（３’−Ｏ−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃβ−，３’−Ｏ−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃβ−）
３’−ｓｕ−Ｌｅｃ（３’−Ｏ−ｓｕ−Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ−，３’−Ｏ−ｓｕ−Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ）メリビオース（Ｇａｌα１−６Ｇｌｃβ−，Ｇａｌα１−６Ｇｌｃβ−）
（Ｓｉａ）２（Ｎｅｕ５Ａｃα２−８Ｎｅｕ５Ａｃα−，Ｎｅｕ５Ａｃα２−８Ｎｅｕ５Ａｃα）
Ｇａｌ２βＧａｌ（Ｇａｌβ１−２Ｇａｌβ−，Ｇａｌβ１−２Ｇａｌβ−，Ｇａｌβ２Ｇａｌ−）
６−Ｏ−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃ（Ｇａｌβ１−４（６−Ｏ−ｓｕ）ＧｌｃＮＡｃβ−，Ｇａｌβ１−４（６−Ｏ−ｓｕ）ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ａｄｉ（ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌβ−，ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌβ−）
Ｂｄｉ（Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ−，Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ）
６’−Ｏ−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃ（６’−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃβ−，６’−ｓｕ−ＬａｃＮＡｃβ−）
Ｈｄｉ（Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ−，Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ）
３’−Ｏ−ｓｕ−ＴＦ（３’−Ｏ−ｓｕ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−，３’−Ｏ−ｓｕ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−）
ジ−ＧａｌＮＡｃβ（ＧａｌＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃβ−，ＧａｌＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃβ）
ｃｏｒｅ３（ＧｌｃＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃα−，ＧｌｃＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃα）
ｃｏｒｅ６（ＧｌｃＮＡｃβ１−６ＧａｌＮＡｃα−，ＧｌｃＮＡｃβ１−６ＧａｌＮＡｃα）
ＧＡ１，ＧｇＯｓｅ３（ＧａｌＮＡｃβ１−４Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ−，ＧａｌＮＡｃβ１−４Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ）
Ｇａｌａ１−３’Ｌａｃ（Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ−，Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ）
ＧｌｃＮＡｃβ１−２’ＴＦ（ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−）Ｍａｎ３（Ｍａｎα１−６Ｍａｎα−Ｍａｎα１−３）
３’ＳＬＮ（Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ｐｋ（Ｇｂ３，ＧｂＯｓｅ３，Ｇａｌα１−４Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ−）
Ｌｅａ（Ｆｕｃα１−４ＧｌｃＮＡｃβ−Ｇａｌβ１−３）
Ｌｅｄ（Ｈ型１，Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ｌｅｘ（Ｆｕｃα１−３ＧｌｃＮＡｃβ−Ｇａｌβ１−４）
３’−ＳｉａＬｅｃ（Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ−）
Ｈ型３（Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−）
３’−ＳＬ（Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ−）
６’−ＳＬ（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ−）
３’−Ｏ−ｓｕ−Ｌｅａ（Ｆｕｃα１−４ＧｌｃＮＡｃβ−Ｏ−ｓｕ−３Ｇａｌβ１−３）
３’−Ｏ−ｓｕ−Ｌｅｘ（Ｆｕｃα１−３ＧｌｃＮＡｃβ−Ｏ−ｓｕ−３Ｇａｌβ１−４）
Ｇａｌａ１−３’ＬａｃＮＡｃ（Ｇａｌα１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ−）
（Ｓｉａ）３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−８Ｎｅｕ５Ａｃα２−８Ｎｅｕ５Ａｃα２−）
ＧｌｃＮＡｃβ１−３’ＴＦ（ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−）Ａｔｒｉ（Ｆｕｃα１−２  Ｇａｌβ−ＧａｌＮＡｃα１−３
（これらは、Ｌｅｃｔｉｎｉｔｙ  ｈｏｌｄｉｎｇｓ，Ｉｎｃ．から入手した）
の物質のいずれにも結合しない任意の抗体
である。
【０５２０】
あるいは、すべての構造体は、当業者によって作製され得、当業者は、結合体化に適した別のポリアクリルアミドまたは別の適当なキャリア分子、ならびにしかるべき炭水化物構造を結合させるのに適した結合体化方法および必要な中間体の合成を選択することができる。
・なおもより好ましくは、以下の抗体：ＨＢ−Ｔ１（ＩｇＭ）［ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ  ＧｍｂＨ，Ｈａｍｂｕｒｇから入手可能；Ｇｉｕｆｆｒｅ  Ｇ，Ｖｉｔａｒｅｌｌｉ  Ｅ，Ｔｕｃｃａｒｉ  Ｇ，Ｐｏｎｚ  ｄｅ  Ｌｅｏｎ  Ｍ，Ｂａｒｒｅｓｉ  Ｇ：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｎ，ｓｉａｌｏｓｙｌ−Ｔｎ  ａｎｄ  Ｔ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｉｎ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ｎｏｎｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｖｉｒｃｈｏｗｓ  Ａｒｃｈ  ４２９：３４５−３５２（１９９６）］、ＨＨ８（ＩｇＭ）［Ｃｌａｕｓｅｎ  Ｈ，Ｓｔｒｏｕｄ  Ｍ，Ｐａｒｋｅｒ  Ｊ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｇ，Ｈａｋｏｍｏｒｉ  Ｓ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｇｒｏｕｐ  Ａ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ−Ａ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５：１９９−２０４（１９８８）］、Ａ７８−Ｇ／Ａ７［Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎ；Ｋａｒｓｔｅｎ  Ｕ，Ｂｕｔｓｃｈａｋ  Ｇ，Ｃａｏ  Ｙ，Ｇｏｌｅｔｚ  Ｓ，Ｈａｎｉｓｃｈ  ＦＧ．Ａ  ｎｅｗ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ａ７８−Ｇ／Ａ７）ｔｏ  ｔｈｅ  Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ  ｐａｎ−ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９９５  Ｆｅｂ；１４（１）：３７−４４］、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１［Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎ；Ｇｏｌｅｔｚ  Ｓ，Ｃａｏ  Ｙ，Ｄａｎｉｅｌｃｚｙｋ  Ａ，Ｒａｖｎ  Ｐ，Ｓｃｈｏｅｂｅｒ  Ｕ，Ｋａｒｓｔｅｎ  Ｕ．Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ  ａｎｔｉｇｅｎ：ｔｈｅ  “ｈｉｄｄｅｎ”ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．２００３；５３５：１４７−６２］またはＮｅｍｏｄ−ＴＦ２［Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ，Ｂｅｒｌｉｎ；Ｇｏｌｅｔｚ  Ｓ，Ｃａｏ  Ｙ，Ｄａｎｉｅｌｃｚｙｋ  Ａ，Ｒａｖｎ  Ｐ，Ｓｃｈｏｅｂｅｒ  Ｕ，Ｋａｒｓｔｅｎ  Ｕ．Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ  ａｎｔｉｇｅｎ：ｔｈｅ“ｈｉｄｄｅｎ”ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．２００３；５３５：１４７−６２］から選択される抗体
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されているタンパク質およびＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である、抗体
・なおもより好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、＃リスト２＃に列挙されているタンパク質およびＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、そして、ＮＭ−Ｄ４［ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０５］、ＮＭ−Ｆ９［ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０６］、ＺＲ−７５−１、ＣＡＭＡ−１、ＫＧ−１またはＡ−２０４のうちの少なくとも１つのヒト腫瘍細胞株に結合し、その結合が、過ヨウ素酸塩感受性である、任意の抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７）
・より好ましくは、上記の結合特性のいずれかを有するが、ＰＡＡに結合している三糖Ｃｏｒｅ−２に結合しない任意の抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１）、
・最も好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡに結合し、かつ、ＴＦｂ−ＰＡＡにほとんど結合しないかまたは全く結合せず、ＰＡＡに結合している三糖Ｃｏｒｅ−２に結合せず、＃リスト２＃に列挙されているタンパク質およびＸ−ＰＡＡ構築物のいずれにも結合せず、アシアログリコホリンに結合し、かつ、グリコホリンに結合せず、ＮＭ−Ｄ４細胞、ＮＭ−Ｆ９細胞［ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０６］およびＺＲ−７５−１細胞に少なくとも結合し、その結合が過ヨウ素酸塩感受性である、任意の抗体（例えば、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１）
前記Ｃｏｒｅ−１特異的抗体は、異なる抗体のクラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤであるがこれらに限定されない）の任意の動物またはヒト由来の（例えば、マウス、ラット、ヒト、ラクダ、ヒト化もしくはキメラの）抗体全体またはＣｏｒｅ−１に対する結合特異性を含む限り抗体の任意のフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、一本鎖Ｆｖまたは単一ドメイン抗体）であり得る。それらの抗体は、少なくとも１つのさらなるアミノ酸または変異またはポリペプチド配列（例えば、タグ、リンカーまたは多量体化ドメイン）も含み得、それらは、動物以外の他の起源、植物、および、例えば、ファージディスプレイもしくはリボソームディスプレイを使用するかまたは組換え構築による合成抗体ライブラリーからの選択物にも由来し得る。
【０５２１】
ＴＦａ−ＰＡＡ；ＴＦｂ−ＰＡＡ（ＴＦβ−ＰＡＡ、ＴＦβ−ＰＡＡ）または他のＰＡＡ−構築物（Ｘ−ＰＡＡ）、アシアログリコホリンまたは腫瘍細胞に対するＣｏｒｅ−１特異的抗体の結合の過ヨウ素酸塩感度を試験する過ヨウ素酸塩処理は、Ｗｏｏｄｗａｒｄら［Ｗｏｏｄｗａｒｄ  ＭＰら（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７８：１４３−１５３］に従い、また、実施例において詳細に説明されている。当業者は、本明細書中の別の箇所に記載される別の方法に対する技術を採用してもよいし、条件に最適化してもよい。
【０５２２】
本発明によれば、用語「過ヨウ素酸塩感度」とは、例えば、実施例９の過ヨウ素酸塩処理において詳細に説明されるように、抗原または細胞を過ヨウ素酸塩で処理したときのこの抗原または細胞に対する抗体の結合が、過ヨウ素酸塩なしで処理された同じ抗原または細胞に対する結合よりも弱いことを意味する。抗体のＣｏｒｅ−１特異性についてその抗体の過ヨウ素酸塩感度を測定する場合、その結合の過ヨウ素酸塩感度は、好ましくは、ＴＦａ−ＰＡＡ、ＴＦｂ−ＰＡＡ、アシアログリコホリン、ＮＭ−Ｄ４［０３０１８５７６．３（ＥＰ）、ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００９２８１、ＷＯ２００５／０１７１３０Ａ２、ＥＰ１６５４３５３］）および／または他の腫瘍細胞を用いて試験される。好ましくは、過ヨウ素酸塩処理後の抗原または細胞の結合の低下は、過ヨウ素酸塩処理されていない対応物の５０％未満であり、なおもより好ましくは、過ヨウ素酸塩なしで処理された同じ抗原または細胞の２０％未満である。
【０５２３】
本発明の好ましいＣｏｒｅ−１特異的抗体は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２、Ａ７８−Ｇ／Ａ７、ＨＢ−Ｔ１、ＨＨ８であり、好ましい抗体は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２、Ａ７８−Ｇ／Ａ７およびＨＨ８であり、より好ましいのは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２およびＡ７８−Ｇ／Ａ７であり、なおもより好ましいのは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２であり、最も好ましいのは、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１である。ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２は、ＤＥ１０２５６９００．２、ＰＣＴ／ＤＥ２００３／００３９９４、ＥＰ０３７８８８５３．４、ＵＳ１０／５３６，８３４にも記載されている。ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２、Ａ７８−Ｇ／Ａ７およびＡ６８Ｂ／Ａ１１は、購入することによって入手することができ、例えば、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ  ＧｍｂＨ  Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能である。
【０５２４】
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃβ１−ＰＡＡ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ、アシアログリコホリン（ａｓｉｏａｌｏｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ）およびグリコホリンに対する抗体の結合は、好ましくは、ＥＬＩＳＡにおいて測定され、腫瘍細胞に対する結合は、好ましくは、実施例において詳細に説明されているフローサイトメトリー解析または免疫蛍光解析において測定される。当業者は、そのような抗体の結合を試験する別の方法（例えば、ｓｃａｔｃｈａｒｄ解析（細胞の結合に対して）、ＢＩＡＣＯＲＥ解析、ウエスタンブロット解析またはドットブロット解析（抗原結合に対して）が挙げられるがこれらに限定されない）を使用しても、採用してもよい。当業者はまた、Ｃｏｒｅ−１の結合を試験するために他のＣｏｒｅ−１を有する分子（例えば、適当なリンカーを用いるかまたは用いずに、ＫＬＨ、ビオチンまたはＢＳＡに結合した（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−））を使用してもよいが、しかしながら、上記の好ましい実施形態が、本発明の意味においては好ましい。
【０５２５】
本発明によれば、用語「Ｃｏｒｅ−１陽性微生物」とは、任意の微生物がＣｏｒｅ−１特異的抗体と接触する場合に、少なくとも１つの前記抗体によって結合される前記微生物のことを意味する。微生物がＣｏｒｅ−１陽性であることを判定するために、決定的なことは、前記微生物が、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体によって認識されることである。そのため、その微生物が、Ｃｏｒｅ−１であるエピトープを有するか、またはその構造がＣｏｒｅ−１（Ｃｏｒｅ−１擬態構造）に特に似ているエピトープを有し、ゆえにＣｏｒｅ−１特異的免疫応答を誘発することができることが、保証される。これには、Ｃｏｒｅ−１がβ型で結合されている微生物も包含される（図１９もまた参照のこと）。微生物は、天然にＣｏｒｅ−１陽性であり得るか、またはいくつかの実施形態においてＣｏｒｅ−１を露出させる化学物質でその微生物を処理すること（例えば、過ヨウ素酸塩処理）によってＣｏｒｅ−１陽性にされ得る。それぞれの処理によって、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体と特異的に結合するＣｏｒｅ−１陽性微生物がもたらされる場合、前記微生物が前記抗体と接触する場合、それは、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物である。しかしながら、その微生物がすでにＣｏｒｅ−１陽性である別のものが好ましい。
【０５２６】
接触時にＣｏｒｅ−１を認識し、そして結合する抗体以外に、他の構造体も存在する。レクチンは、例えば、Ｃｏｒｅ−１に結合することのできる、抗体分子ではない炭水化物結合分子である。例えば、ピーナッツ凝集素（ＰＮＡ）は、長年にわたる、古典的なＴｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ試薬である。しかしながら、これは、末端にＧａｌβ構造を有する他のグリカンにも結合するので、Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ特異的ではなく、むしろ、正常組織と広い反応性を示す（Ｃａｏら、１９９６）。１つの実施形態によれば、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体および少なくとも１つの非抗体であるＣｏｒｅ−１結合タンパク質（レクチン）（例えば、Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ（ピーナッツ）凝集素（ＰＮＡ）、Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃａｕｄａｔｕｓ凝集素（ＡＣＡ）、Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａレクチン（Ｊａｃａｌｉｎ）、Ｂａｕｈｉｎｉａ  ｐｕｒｐｕｒｅａレクチン（ＢＰＬ）またはＡｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ凝集素（ＡＢＡ）（であるがこれらに限定されない））［これらのレクチンは、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ，ＵＳＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡまたは他の供給源から入手可能である］によって認識／結合されることを特徴とする。好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合されることを特徴とする。より好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、少なくとも２つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって認識／結合されることおよびその結合が過ヨウ素酸塩感受性であることを特徴とする。さらに好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のＮＥＭＯＤ−ＴＦ１、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＡ７８−Ｇ／Ａ７によって結合／認識され、その結合が過ヨウ素酸塩感受性であることを特徴とする。最も好ましい実施形態において、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、ＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＮＥＭＯＤ−ＴＦ２またはＮＥＭＯＤ−ＴＦ１およびＡ７８−Ｇ／Ａ７によって認識／結合され、その結合は、過ヨウ素酸塩感受性である。これらの抗体はまた、本明細書中に記載される選択／同定プロセスのうちの１つにおいて、十分なＣｏｒｅ−１特異性を備えたＣｏｒｅ−１陽性微生物を調製するために非常に適している。
【０５２７】
Ｃｏｒｅ−１特異的抗体が本発明における微生物（ｍｉｃｏｏｒｇａｎｓｉｍ）に結合するか否かを試験するのに適した方法は、ＥＬＩＳＡおよび免疫蛍光法（実施例を参照のこと）であるが、当業者は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物を同定するために、フローサイトメトリーまたはいくつかの吸着手法などの他の試験システムを使用し得る。
【０５２８】
微生物に対するＣｏｒｅ−１特異的抗体の結合の過ヨウ素酸塩感度を試験する過ヨウ素酸塩処理は、実施例９において詳細に説明される。
【０５２９】
本発明によれば、用語「微生物のＣｏｒｅ−１過ヨウ素酸塩感度」とは、前記微生物が過ヨウ素酸塩で処理されたときに、前記微生物に対するＣｏｒｅ−１特異的抗体の結合が、例えば実施例に詳細に記載されるように過ヨウ素酸塩なしで処理された同じ微生物に対する結合と比べて、変化する（例えば、低下するかまたは増加する）ことを意味する。好ましい実施形態において、前記微生物に対するＣｏｒｅ−１特異的抗体の前記結合は、前記微生物が過ヨウ素酸塩で処理されたとき、過ヨウ素酸塩で処理されていない同じ微生物に対する結合よりも低く、低下する。上で概説したように、過ヨウ素酸塩は、Ｃｏｒｅ−１抗原の特定の構造を破壊する。より好ましい実施形態において、前記微生物の過ヨウ素酸塩処理後のその微生物に対するＣｏｒｅ−１特異的抗体の結合の前記低下は、過ヨウ素酸塩処理されていない対応物の８０％未満であり、なおもより好ましくは、５０％未満であり、最も好ましくは、３０％未満である。
【０５３０】
Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、任意の微生物であり得、それらとしては、例えば、細菌、ラン藻類、真正細菌、藻類、真菌（キノコ、酵母、クロボキン類（ｓｍｕｔｓ）、カビなど）、ウイルスおよび原生動物が挙げられるがこれらに限定されない。好ましいのは、細菌の微生物（例えば、土壌、植物、動物、ヒトまたは他の高等生物（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヤギ、ウサギ、マウス、チンパンジー）から単離された微生物が挙げられるがこれらに限定されない）である。好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物は、ヒトの胃腸系が起源である微生物である。
【０５３１】
本発明によれば、「Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分」という用語は、例えば、細胞壁調製物、エンベロープ調製物、溶解物、リポ多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄ）調製物、カプセル調製物もしくはカプセル多糖調製物、または前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物のＣｏｒｅ−１陽性成分のような前記微生物の一部の調製または精製のことを意味する。これらは、所望の免疫応答を誘発し得るために、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性成分を含むか、または、前記Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性成分から構成される。少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物からの調製、または精製によってそれらを得ることができる。前記調製物および精製物は、上に記載されたような当業者に公知の方法、または、１回もしくは連続的な細胞の分画、フェノール水抽出、エーテル抽出、リゾチーム消化またはクロマトグラフィ法によって得ることができる。さらに、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分という用語は、本発明のＣｏｒｅ−１陽性微生物上にも見られる、人工的に（ａｒｔｉｆｉｃａｌｌｙ）産出されたＣｏｒｅ−１陽性成分も含む。図１９は、例えば、いくつかのＣｏｒｅ−１陽性成分、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分（そこでは：ＡＧ６）を示している。Ｃｏｒｅ−１陽性微生物ＡＧ６のこれらのＣｏｒｅ−１陽性成分／部分は、化学的にも産出され得る。Ｃｏｒｅ−１陽性成分またはそのＣｏｒｅ−１陽性成分を含んでいる部分は、試験システム（例えば、当業者に公知である、ＥＬＩＳＡまたはドットブロットが挙げられるがこれらに限定されない）において、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体を結合させることによって、検出され得る。本発明の好ましい実施形態において、Ｃｏｒｅ−１陽性成分を含む部分は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的な抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィによって得られる。好ましい実施形態において、１回の調製工程または精製工程が使用される。別の好ましい実施形態において、少なくとも２回の調製工程または精製工程の組み合わせが使用される。
【０５３２】
本発明によれば、「Ｃｏｒｅ−１陽性成分」という用語は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的抗体によって結合されるＣｏｒｅ−１陽性微生物の任意の成分のことを意味する。前記Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、天然の分子の形成において利用され得る、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１炭水化物構造またはＣｏｒｅ−１模倣構造を含んでおり、それは、微生物の一部（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、脂質、セラミド、Ｃｏｒｅ−１、リポタンパク質、多糖、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカンまたは糖タンパク質）であるか、または前記天然分子の一部としてもしくは単独である。そのＣｏｒｅ−１陽性成分は、Ｃｏｒｅ−１陽性微生物の部分自体として本発明の意味において使用され得るか、または他の非天然キャリア構造（例えば、タンパク質、脂質、ポリアクリルアミドなどの化学的な分子）に結合され得る。好ましくは、それは、その天然の形態で使用される。Ｃｏｒｅ−１陽性成分は、単一のＣｏｒｅ−１−炭水化物構造もしくはＣｏｒｅ−１模倣構造または前記構造の繰り返し単位を含み得、さらなる炭水化物構造もしくは炭水化物単位または他の生体分子構造を含み得る。前記Ｃｏｒｅ−１模倣構造は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１特異的な抗体によって結合され得、そして／または、Ｃｏｒｅ−１に対する免疫応答を誘導し得、好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答またはＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答を誘導し得、そしてより好ましくは、Ｃｏｒｅ−１に対する液性免疫応答およびＣｏｒｅ−１に対する細胞性免疫応答を誘導し得る構造である。
【０５３３】
本発明によれば、ｃｏｒｅｏｔｉｃ（商標）という用語は、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含んでいる、栄養補助食品または栄養補助食品製剤のことを意味する。
【０５３４】
本発明によれば、用語「Ｃｏｒｅ−１陽性疾患」とは、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のうちの少なくとも１つによって認識され、そして結合され得るか、あるいは身体の構成要素に関連するか、またはヒトもしくは動物の体内に存在する、Ｃｏｒｅ−１抗原の存在によって特徴付けられる、ウイルス、微生物、真核細胞、腫瘍細胞または他の生物学的材料（例えば、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体のうちの少なくとも１つによって認識され、そして結合され得るＣｏｒｅ−１抗原の存在によって特徴付けられる、細胞、腫瘍細胞、微生物、ウイルスまたは粒子が挙げられるがこれらに限定されない）に関連する任意の疾患のことを意味する。
【０５３５】
用語「治療薬」は、本明細書中で使用されるとき、少なくとも１つのＣｏｒｅ−１陽性微生物またはその断片を含み、他の構成要素もしくはエレメント、または好ましくは、当業者に公知の、薬学的組成物、薬および薬物のキャリアをさらに含み得る。
【０５３６】
キャリアは、ヒトまたは患者への投与の前に、一般には活性な化合物の安定性またはバイオアベイラビリティを制御する目的で、その活性な化合物に会合され得る物質である。かかる製剤において使用するためのキャリアは、一般に、生体適合性であり、生分解性でもあり得る。キャリアとしては、例えば、一価または多価の分子（例えば、血清アルブミン（例えば、ヒトまたはウシのもの）、卵アルブミン、ペプチド、ポリリジンおよび多糖類（例えば、アミノデキストラン）およびポリアミドアミン）が挙げられる。キャリアにはまた、ビーズおよび微小粒子などの固体支持体の材料が含まれ、それらとしては、例えば、ポリラクテートポリグリコレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリアクリレート、ラテックス、デンプン、セルロースまたはデキストランが挙げられる。キャリアは、種々の方法（例えば、直接的な共有結合もしくはリンカー基を介した共有結合、非共有結合性の相互作用または混合を含む）で化合物を有し得る。
【０５３７】
本明細書中の別の箇所に記載されるようなＣｏｒｅ−１に対する免疫応答の誘導は、本発明の意味において、Ｃｏｒｅ−１に対するすでに存在する免疫応答の増強のことも意味する。
【０５３８】
限定する意図はないが、本発明は、以下の実施例を参照してより詳細に記載される。
【実施例】
【０５３９】
実施例１  嫌気性培養の技術および培地
細菌の培養において使用される嫌気性の技術は、ＢｒｅｚｎａｋおよびＣｏｓｔｉｌｏｗによって要約されている先に報告された方法に基づいた。還元剤としてシステイン・ＨＣｌを用いて調製した培地を、嫌気性培養チューブ（Ｏｃｈｓ，Ｂｏｖｅｎｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）またはガラス血清瓶に分注し、容器の総容積の約２分の１から３分の１の容積が気体の空間となるようにし、ブチルゴムの栓で密閉した。還元剤なしで調製した溶液（例えば、ＰＢＳ−ａ）を分注前に煮沸した。オートクレーブの前に、気相をＮ２／ＣＯ２（８０／２０，ｖ／ｖ）で置換した。これを達成するために、ブチルゴムの栓をしたビンに針を突き刺し、真空ポンプ（Ｖａｃｕｕｂｒａｎｄ，Ｗｅｒｔｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてその瓶を排気した。排気後、瓶をプロセス全体にわたって繰り返し振盪させながら、Ｎ２／ＣＯ２（８０／２０，ｖ／ｖ）を供給した。この気体を抜く手順および供給する手順を、全部で３回行った。その気体混合物を、容器に入れる前に熱パラジウム触媒の上を通過させて、その気体混合物中に残留する微量の酸素を除去した。リザズリン（１ｍｇｌ−１）をレドックス指示薬として用いた。
【０５４０】
プレーティング用の培地を層流フードの下で注ぎ、そして使用する前に少なくとも２４時間無酸素条件下で保存した。これを、３．５  Ｉ  ＡｎａｅｒｏＧｅｎ（Ｏｘｏｉｄ，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を備えている、またはＮ２／ＣＯ２／Ｈ２（８０／１０／１０，ｖ／ｖ／ｖ）が繰り返し流されている嫌気性チャンバーエアロック（Ｄｏｎ  Ｗｈｉｔｌｅｙ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｈｉｐｌｅｙ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を含んでいる加圧（１．５×１０５Ｐａ）嫌気性ジャーにおいて行った。サンプルの操作は、嫌気性チャンバー（ＭＡＣＳ気圧可変ワークステーション，Ｄｏｎ  Ｗｈｉｔｌｅｙ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｈｉｐｌｅｙ，ＥｎｇｌａｎｄまたはＣｏｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｇｒａｓｓ  Ｌａｋｅ，ＵＳＡ）において行った。
【０５４１】
未滅菌の溶液および物質をオートクレーブ（１２１℃，１．２×１０５Ｐａ，１５分）によって滅菌した。熱不安定性の化合物は、ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中の富化原液として産出し、フィルター滅菌し（０．２２μｍ，混合セルロースエステル，Ｒｏｔｈ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、必要な濃度で培地に加えた。
【０５４２】
実施例２  ｃｏｒｅ−１陽性微生物の親和性富化
２．１  ＴＦ１およびＴＦ２でコーティングされたＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）の調製
１００μｌの体積のＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｍ−４５０  Ｒａｔ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＭ，Ｄｙｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＳＡ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）の各々を２ｍｌのＳａｆｅ−Ｌｏｃｋ  Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に入れ、Ｄｙｎａｌ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（登録商標）−Ｓ（ＭＰＣ（登録商標）−Ｓ，Ｄｙｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）を用いて２ｍｌのリン酸緩衝化食塩水ａ（ＰＢＳ−ａ：８．１ｇｌ−１ＮａＣｌ、０．１６ｇｌ−１ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、０．９８ｇｌ−１Ｎａ２ＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、１ｇｌ−１ＢＳＡ，ｐＨ７．４）で２回洗浄し、そして２５μｌのＰＢＳ−ａに懸濁した。凍結乾燥されたＴＦ１またはＴＦ２細胞培養上清を１ｍｌのｍｉｌｌｉ−Ｑ合成グレード水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）に溶解した。溶解されたＴＦ１またはＴＦ２細胞培養上清（１ｍｌ）を、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）の入ったチューブに加え、試験管回転装置（モデル３４５２８，Ｓｎｉｊｄｅｒｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）上で４℃において３０分間インキュベートした。チューブをＭＰＣ（登録商標）−Ｓに置き、３分間静置した後、ピペットを用いて流体を除去した。そのＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）を２ｍｌのＰＢＳ−ａに再懸濁し、ＭＰＣ（登録商標）−Ｓに置き、そして流体をピペッティングで除去した。この洗浄工程を３回行った。洗浄されたＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）をその初めの容積である１００μｌのＰＢＳ−ａに懸濁した。この様式で調製されたＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）を、２ｍｌのＰＢＳ−ａでの３回の洗浄工程を繰り返した後、すぐに、または調製の２週間以内に、使用した。
【０５４３】
２．２  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）富化にむけての便サンプルの回収および処理
８人の志願者（表３）の便サンプルを有孔のプラスチックチューブに回収し、ＡｎａｅｒｏＧｅｎ  Ｃｏｍｐａｃｔ（Ｏｘｏｉｄ，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いて無酸素条件下において維持し、そして処理の前に最大で４時間４℃で保存した。志願者は、サンプリング日の前の少なくとも３ヶ月間、抗生物質を投与されておらず、通常の食事を消費していた健常成人であった。
【０５４４】
【表３】
2015134813.tif 000003
便サンプルの１０倍（ｗ／ｖ）希釈をＰＢＳ−ｂ（ＰＢＳ−ｂ：８．５ｇｌ−１ＮａＣｌ、０．３ｇｌ−１ＫＨ２ＰＯ４、０．６ｇｌ−１Ｎａ２ＨＰＯ４，ｐＨ７．０含有０．１ｇｌ−１ペプトンおよび０．２５ｇｌ−１システイン・ＨＣｌ）において調製した。６つの無菌の直径３ｍｍガラスビーズを加え、その希釈サンプルを低速でボルテックスすることによってホモジナイズした。そのホモジナイズしたサンプルを遠心して（３００×ｇ，１分，２１℃）、残屑を沈降させた。得られた上清の２００μｌを１．８ｍｌのＰＢＳ−ｂに加えることにより、元の便サンプルの約１００倍希釈を得た。これらの希釈物を２ｍｌのＰＢＳ−ｂで１回洗浄し（８０００×ｇ，５分，２１℃）、ペレットを２ｍｌのＰＢＳ−ｂに懸濁した。
【０５４５】
２．３  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）富化手順
１００倍希釈物からの２０μｌを、１８０μｌのＰＢＳ−ａおよびＴＦ１抗体またはＴＦ２抗体でコーティングされた５μｌのＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）を含む２ｍｌのチューブに加えた。そのチューブを試験管回転装置上で４℃において３０分間インキュベートした。そのチューブをＭＰＣ（登録商標）−Ｓに置き、３分間静置した後、できるだけ多くの上清を、シリンジおよび針を用いた吸引により除去した。そのサンプルを２ｍｌのＰＢＳ−ａで３回洗浄し、再度できるだけ多くの上清を除去した。
【０５４６】
２．４  選択培地および非選択培地上へのプレーティング
洗浄されたサンプルを１ｍｌのＰＢＳ−ｂに懸濁し、１００μｌのアリコートを様々な選択培地および非選択培地（表４）上にスプレッドプレーティングし（ｓｐｒｅａｄ−ｐｌａｔｅｄ）、嫌気性チャンバー内において３７℃で４８時間インキュベートした。
【０５４７】
【表４】
2015134813.tif 000004
製造者の指示に従って固形培地を調製した。ＳＴ寒天の組成は、以下のとおりであった：１ｇｌ−１プロテオースペプトン、９ｇｌ−１肉由来ペプトン、３ｇｌ−１ＮａＣｌ、２ｇｌ−１Ｎａ２ＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、３ｇｌ−１肉抽出物、４ｇｌ−１酵母抽出物、６ｇｌ−１Ｄ（＋）−グルコース、０．５ｍｌｌ−１Ｔｗｅｅｎ８０、０．２５ｇｌ−１システイン・ＨＣｌ、１ｍｇｌ−１リザズリン、０．１ｇｌ−１ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、５ｍｇｌ−１ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．５ｇｌ−１、３．４ｍｇｌ−１ＭｎＳＯ４・２Ｈ２Ｏ、１．５ｇｌ−１細菌学的寒天，ｐＨ７．０。
【０５４８】
被験体１〜４に対しては、１回の富化手順からのコロニーをＥＬＩＳＡベースのスクリーニングにむけて選択した。被験体５〜８に対しては、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）富化手順を以下のとおり２回繰り返した：４８時間のインキュベーションの後、コロニーをプレートからかき取り、ＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度基準３〜５の範囲内でＰＢＳ−ｂに懸濁した（（１３）におけるように調製）。前述同様、この懸濁液の２０μｌのアリコートを１８０μｌのＰＢＳ−ａに加えた。富化手順およびプレーティング手順を、先に記載したように全部で３回行った。
【０５４９】
さらに４人の被験体（５ＡＢ、６ＭＵ、７ＬＨおよび８ＣＡ）の便サンプルをＣｏｒｅ１陽性細菌について富化した。その富化手順は、富化を全部で３回行ったという点をわずかに改変した。すなわち、最初の分離後に得られたコロニーをプレートからかき取り、さらなる富化に供した。この様式で６０個の新しい分離菌を得た。
【０５５０】
実施例３  分離菌の同定
３．１  生化学
ＶＩＴＥＫシステム（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ，Ｍａｒｃｙ  ｌ７Ｅｔｏｉｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて細菌を同定した。製造者の指示書に従って細菌を調製し、使用した同定カードは以下のとおりであった：嫌気性分離菌およびＭＲＳブロス中で生育することができる通性（ｆａｃｕｌａｔｉｖｅｌｙ）嫌気性グラム陽性桿菌（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉと疑われる）に対するＡＮＩカード、グラム陽性分離菌に対するＧＰＩカード、およびグラム陰性好気性分離菌に対するＧＮＩ＋カード。
【０５５１】
ＶＩＴＥＫシステム（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ，Ｍａｒｃｙ  ｌ’Ｅｔｏｉｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて得られた分離菌の生化学的な性質を表５にまとめた。嫌気性分離菌ＡＧ６、ＭＵ（１、３−５）およびＡＢ１２はすべてＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ群に属する一方で、好気性分離菌はすべてＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅのメンバーである；両方が、グラム陰性である。
【０５５２】
【表５】
2015134813.tif 000005
３．２  分子（配列測定）
Ｉｎｖｉｓｏｒｂ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  Ｋｉｔ  ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｅｋ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）をプロトコルＩＩＩＢに対する製造者の指示に従って使用して、液体培養物から得た洗浄細胞ペレット（１ｍｌの溶解緩衝液Ｄに懸濁したもの）からＤＮＡを抽出した。プライマー２７ｆ（５’ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ）および１４９２ｒ（５’ＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ）（１０）を用いて、細菌１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子を増幅した。
【０５５３】
各ＰＣＲを３つ組で行い、その反応混合物（５０μｌ）は：５０ｍＭ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭ各ｄＮＴＰ、１μＭ各プライマー、２．５単位ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および１μｌの鋳型ＤＮＡを含んでいた。ＰＣＲプログラムは：９４℃５分、そして９４℃１分、５５℃１分および７２℃１分を３０サイクル、最後に７２℃１０分であった。Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  ＰＣＲ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＵＳＡ）を製造者の指示に従って使用して、ＰＣＲ産物を精製した。その産物を、Ｔｒｉｓ−酢酸−ＥＤＴＡ緩衝液（４．８４ｇｌ−１Ｔｒｉｓ、１．１４２ｍｌｌ−１氷酢酸  ０．３７２ｇｌ−１ＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）中の１％アガロースゲル（ｗ／ｖ）における電気泳動で解析した。Ｌｏｗ  ＤＮＡ  Ｍａｓｓ  Ｌａｄｄｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＵＳＡ）を用いて、ＤＮＡ濃度を推定した。
【０５５４】
配列測定するために、本発明者らは、プライマー２７ｆ、３３８ｆ（５’ＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＧＴＡＧＧＡＧＴ）（２）、３３８ｒ（５’ＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣ）、９６８ｆ（５’ＡＡＣＧＣＧＡＡＧＡＡＣＣＴＴＡＣ）（１４）または１４９２ｒのいずれかを用いた。ＤＹＥｎａｍｉｃ（商標）ＥＴ  Ｄｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を製造者の指示に従って使用して、シークエンシング反応を行った。ＭｅｇａＢＡＣＥ  １０００  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＵＳＡ）を用いて、シークエンシング産物を解析した。Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  Ｓｕｉｔｅ  ９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＵＳＡ）のＣｏｎｔｉｇＥｘｐｒｅｓｓ機能を用いて、配列を構築し、手作業で調整した。続いて、それらの配列を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（１）のＢＬＡＳＴ関数を用いて得られた高度に類似の配列（９２％類似またはそれ以上）とアラインメントした。Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ  ＰｒｏｊｅｃｔのＢｉｏｅｄｉｔソフトウェアバージョン５．０．９またはＳｉｍｉｌａｒｉｔｙ  Ｍａｔｒｉｘバージョン１．１のＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ｉｄｅｎｔｉｔｙ  Ｍａｔｒｉｘ関数を用いて、明確にアラインメントされた配列から、類似度のパーセンテージを計算した。配列測定の結果は、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列測定サービス会社（ＡＭＯＤＩＡ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から得られた配列と比較することによって確かめた。
【０５５５】
上記分離菌の同定結果を表６に示し、分離菌ＡＧ６、ＭＵ１、それらの最も近縁のもの、およびＥ．ｃｏｌｉ  ＡＴＣＣ１１７５５型の株の配列に基づいた無根系統樹を図１に示す。
【０５５６】
【表６】
2015134813.tif 000006
３．３  ランダム増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）
Ｄｙｎａｂｅａｄ（登録商標）の富化手順を繰り返すことによって得られたいくつかのＣｏｒｅ１陽性分離菌は、異なる培地から分離されたにも関わらず、それらの細胞およびコロニーの形態が非常に類似しているように見えた。それらの株は、ＶＩＴＥＫシステムを用いて得られた生化学的なプロファイルに関しても類似していた。そこで、それらの分離された細菌は同一の株ではないのかという疑問が生じた。ＲＡＰＤは、株を区別するために適用することができる、配列情報を必要としない方法である。簡潔には、低ストリンジェンシーにおいて１０塩基対のプライマーを用いて全ゲノムＤＮＡをＰＣＲ増幅すると、標的ＤＮＡ中に存在する、プライマーと相同な配列に基づいてＤＮＡのランダムな配列が増幅される。得られたＰＣＲ産物をアガロースゲル電気泳動で分離し、そして得られたパターンを株間で比較する。すべてのＬＨ株に対して得られたバンドパターンが、使用した５つのＲＡＰＤプライマー（ＯＰＬ０７、Ｍ１３、ＯＰＸ１４、ＯＰＡ１６、ＯＰＡ１８）について類似していた。そのパターンは、血液型Ｂ活性を有すると報告されている株であるＥ．ｃｏｌｉのＤＳＭＺ８６９７株のパターンとは明らかに異なっていた（図２ａ）。ＭＵ株も、非常に良く似ているように見える（図２ｂ）；しかしながら、それらのバンドパターンは、ＡＧ６を含む他のＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株のパターンと明らかに異なっていた。１つのＣｏｒｅ１陽性株が、分離プロセス中に各陽性ドナーから繰り返し富化されたとみられる。分離された株は、個体間で異なっていた。
【０５５７】
実施例４  ＥＬＩＳＡベースのスクリーニング用の細菌の増殖および固定
十分に離れているコロニーを選択寒天プレートおよび非選択寒天プレートからランダムに拾い、非選択培地上に３回再画線した。シングルコロニーを拾い、最良の増殖がもたらされるものに応じて、ＳＴ（上記の通り、寒天を除いたもの）、ＷＣまたはＭＲＳブロスに接種し、３７℃で一晩増殖させた。これらの培養物を３００ｍｌの新鮮ＳＴ、ＷＣまたはＭＲＳブロスに接種し（１％）、３７℃で一晩増殖させた。細胞をペレットにし（８０００×ｇ，１５分，４℃）、１０ｍｌのＰＢＳ−ｃ（８ｇｌ−１ＮａＣｌ、０．２ｇｌ−１ＫＣｌ、１．４４ｇｌ−１Ｎａ２ＨＰＯ４、０．２４ｇｌ−１ＫＨ２ＰＯ４）（１２）に再懸濁した。この懸濁液を、ＰＢＳ−ｃ中の３０ｍｌの４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）溶液（（８）に従って調製したもの）を加えることによって４℃で３〜４時間固定した。次に、サンプルを４０ｍｌのＰＢＳ−ｃで洗浄し（８０００×ｇ，１５分，４℃）、ペレットを１５ｍｌのＰＢＳ−ｃに懸濁した後、等体積の９６％氷冷エタノールを加えた。サンプルを解析するまで−２０℃で保存した。
【０５５８】
細胞の形態ならびにグラム染色挙動を比較することによって、培養物の純度を検査した。培養物をＣＢＡ上に好気的にプレーティングして、酸素の存在下における増殖能力を測定し、そして好気的な夾雑物が存在しないことを検査した。
【０５５９】
実施例５  分離菌の維持
製造者の指示に従ってＭｉｃｒｏｂａｎｋチューブ（ＭＡＳＴ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ，Ｒｅｉｎｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）内で寒冷貯蔵物（Ｃｒｙｏ−ｓｔｏｃｋｓ）を維持し、−８０℃で保存した。通常貯蔵物（Ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｔｏｃｋｓ）をＷＣ、ＳＴまたはＭＲＳブロス中で維持した。これらを１４日ごとに継代した。好気性条件と嫌気性条件の両方における、グラム染色挙動、細胞の形態およびＣＢＡ画線プレート上でのコロニーの形態の定期的な比較を観察することによって、その培養物の純度を確かめた。
【０５６０】
実施例６  動物実験用の細菌の増殖、固定および凍結乾燥
動物実験において使用するために、上記細菌を生育し、以下の改変を行いつつセクション３に記載したように固定した：最初の培養物の体積を約４ｌとした。固定する前に、細菌を１００ｍｌのＰＢＳ−ｂで１回洗浄し（８０００×ｇ，１５分，４℃）、可能な最少量のＰＢＳ−ｂに再懸濁した。この懸濁液を等量の２つに分け、一方を固定（７．１）、他方を凍結乾燥（７．２）に用いた。
【０５６１】
６．１  固定
固定用の分を洗浄し（８０００×ｇ，１５分，４℃）、３０ｍｌのＰＢＳ−ｃに再懸濁した。この懸濁液をＰＢＳ−ｃ中の９０ｍｌの４％ＰＦＡ溶液に加え、４℃で３〜４時間固定した。ＰＦＡの除去を改善するために、サンプルを１２０ｍｌのＰＢＳ−ｃで３回洗浄した（８０００×ｇ，１５分，４℃）。細胞ペレットを４５ｍｌのＰＢＳ−ｃに懸濁した後、等体積の９６％氷冷エタノールを加えた。サンプルを−２０℃で保存した。
【０５６２】
動物に投与する前に、固定された細菌を、無菌条件下においてＬｉｄＢａｃチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）内で凍結乾燥することにより、エタノールを蒸発させた。固定された細菌に生存能がないことを確かめるために、それらの細菌をＷＣブロス中に接種し（１％）、ＣＢＡ上にプレーティングし、そして１週間にわたって増殖しないことをモニターした。
【０５６３】
６．２  低温殺菌
細菌の懸濁液をＰＢＳで２回洗浄し、少量のＰＢＳに再懸濁した。細菌の懸濁液を７２℃で３０分間インキュベートした。不活性化成功のコントロールとして、細菌を実施例４に記載したような適当な培養液中でインキュベートした。
【０５６４】
６．３  凍結乾燥
凍結乾燥用の分を、等体積の２４％フィルター滅菌スクロースに加え、２ｍｌのＬｉｄＢａｃチューブに３００μｌずつ等分した。これらのアリコートを１時間にわたって液体窒素中で急速凍結し、そのアリコートを予め−８０℃に冷やしておいたラックに置いた後、凍結乾燥した（Ａｌｐｈａ２−４，Ｃｈｒｉｓｔ，Ｏｓｔｅｒｏｄｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。凍結乾燥後、チューブの蓋を閉め、乾燥剤としてシリカゲルオレンジ（Ｒｏｔｈ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を加えたＡｎａｅｒｏｃｕｌｔ（登録商標）Ｃ小型ガス発生装置システム（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、そのチューブを４℃で保存した。
【０５６５】
６．４  細菌調製物の計数
０．０１ｍｍ深Ｔｈｏｍａチャンバー（ＬＯ−Ｌａｂｏｒｏｐｔｉｋ，Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈｓｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、固定された細菌調製物および凍結乾燥された細菌調製物の総細胞数を測定した。凍結乾燥された細菌については、一晩培養物ならびに凍結乾燥の直前および凍結乾燥の後の、１０倍段階希釈物をＷＣ寒天上にプレーティングすることによって、コロニー形成単位（ＣＦＵ）を測定した。この目的のために、凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）を３００μｌのＷＣブロスに溶解し、１５分間静置し、低速でボルテックスすることによって再懸濁し、そして段階希釈した。動物実験で使用する前および使用した後の凍結乾燥調製物のＣＦＵを数え上げることにより、生存能を確認した。セクション４に記載したように、調製物の純度を検査した。
【０５６６】
実施例７  血清サンプル
Ｓ−ｍｏｎｖｅｔｔｅシステム（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｎｕｅｍｂｒｅｃｈｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて血液を回収し、製造者の指示に従って血清を調製した。解析する前に、血清サンプルを分注して−８０℃で保存した。
【０５６７】
実施例８  便ＩｇＡ抽出
便サンプルを回収し、−８０℃で保存した。便を凍結乾燥し、正味乾燥重量を記録した。すべての操作を氷上で行った。いくつかの改変を行ったＧｒｅｗａｌ（６）に従って便ＩｇＡを抽出した。プロテアーゼインヒビター（５μｇｍｌ−１ロイペプチン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｍｅｒｃｋ）、４８μｇｍｌ−１４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニルフッ化物（Ｍｅｒｃｋ）、１μｇｍｌ−１アプロチニン、２μｇｍｌ−１ベスタチン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＩｇＡ抽出緩衝液（１ｇｌ−１ＢＳＡを含むＰＢＳ−Ｄｕｌｂｅｃｃｏ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ））中に１５μｌ／ｍｇの乾燥重量の割合で、凍結乾燥サンプル（約３０ｍｇ）を懸濁し、ホモジナイズした。そのサンプルを１０分ごとにボルテックスすることによって混合した。１時間インキュベーションした後、そのサンプルを遠心し（１６０００×ｇ，１０分，４℃）、上清を新しいチューブに回収した。ＩｇＡ抽出緩衝液中に１０μｌ／ｍｇの乾燥重量の割合で、残っているペレットを懸濁し、ホモジナイズした。この抽出手順を繰り返し、得られた上清を、最初の抽出工程からの上清と併せた。これらの上清を遠心し（１６０００×ｇ，１０分，４℃）、得られた上清を新しいチューブに移し、液体窒素中で急速凍結し、そして解析するまで−８０℃で保存した。
【０５６８】
実施例９  酵素結合免疫吸着アッセイによる細菌株のスクリーニング
固定された細菌をＰＢＳに希釈し、細胞数を１×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、１×１０８または５×１０８細胞／ｍｌに調整した。
【０５６９】
９６ウェルマイクロタイタープレートの１ウェルごとに５０μｌの細菌溶液を、３７℃で一晩コーティングした。プレートを、ＰＢＳ／０，０２％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した（同一の洗浄工程を各インキュベーション工程後に行った）。ＰＢＳ／２％ＢＳＡでプレートをブロッキングした後、ＥＬＩＳＡプレートを、様々な希釈度で、Ｃｏｒｅ−１を認識する様々なモノクローナル抗体（Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ２またはより特異的性の低いＡ６８／ＢＡ１１）またはコントロール抗体（Ａ６３−Ｂ／Ｃ２）を含むハイブリドーマ培養上清とともにインキュベートした。２次抗体として、ペルオキシダーゼ結合体化ポリクローナルヤギ抗マウス免疫グロブリン（Ｄａｋｏ  Ｐ０２６０）を用いた。基質としてＴＭＢを用いてこのアッセイを発色させ、２．５Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止し、４５０／６３０ｎｍにおける吸光度を測定した。抗体結合の過ヨウ素酸塩感度を測定するために、コーティングされたＥＬＩＳＡプレートを、抗体とのインキュベーションの前に、過ヨウ素酸ナトリウムとともにインキュベートした。そして、プレートを酢酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ４，５）で５分間洗浄し、その後、暗黒下で１時間、酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍＭ過ヨウ素酸とともにインキュベートした。プレートを酢酸ナトリウム緩衝液で洗浄し（５分間）、ＰＢＳ中の５０ｍＭ水素化ホウ素ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄ）を加えることによって反応を停止した（３０分間）。
【０５７０】
そのようなＥＬＩＳＡの結果の例を図３および３ａに示す。
【０５７１】
実施例１０：細菌のＣｏｒｅ−１含有成分の調製
１０．１．ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット解析による粗カプセル調製物の解析
ＡＧ６株の粗カプセル調製をＰａｎｔｏｓｔｉら（１９９１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５９，２０７５−２０８２）に従って行った。
【０５７２】
カプセル調製物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって解析し、Ｋａｒｌｙｓｈｅｖら（２００１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９，２７９−２８４）に従って、その調製物中の多糖をアルシアンブルー染色によって検出したところ、その調製物中に、種々の炭水化物を含むバンドおよび高パーセンテージの高分子量炭水化物が存在することが示された（図４Ａ）。ウエスタンブロットの後、ＤＩＧ−Ｇｌｙｃａｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＬａＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）によって多糖類を検出した。３７および２６ｋＤａに強いバンドが示された（図４Ｂ）。ウエスタンブロットにおけるｃｏｒｅ−１含有多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｇｅ）の検出は、ｃｏｒｅ−１特異的抗体ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２（培養上清）を用いて行われ、３７ｋＤａにｃｏｒｅ−１陽性バンドが示された（図４Ｃ）。
【０５７３】
１０．２．ｃｏｒｅ−１陽性多糖類のクロマトグラフィ富化
Ｈａｒａら、１９８９，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７９，１６２−１６６）に従った１１，２ｐｍｏｌ／μｇのＫＤＯ含有量、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって示されるように、ＡＧ６株のカプセル調製物内に、なおもリポ多糖類の夾雑物が存在していた。
【０５７４】
ゆえに、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら（２００１，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６８，３１３９−３１４４）に従って、プロパノール／メタノール勾配（図５を参照のこと）を用いたＣ１８カラムにおける逆相クロマトグラフィによって、カプセル多糖類およびリポ多糖類を分離した。溶出剤Ｂ（０，１Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ４．５中の７２％プロパノール／８％メタノール）の勾配によって多糖類を溶出した。画分内の多糖類の検出をドットブロットおよびＤＩＧ−Ｇｌｙｃａｎ−Ｋｉｔによって行った。ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１およびＮｅｍｏｄ−ＴＦ２を用いてｃｏｒｅ−１の検出を行った。１４〜１９％および２５〜４３％というプロパノール濃度で多糖類が溶出された。Ｃｏｒｅ−１特異的炭水化物は、２９〜２９，４％プロパノール（ＲＰ１）および３９〜４２％プロパノール（ＲＰ２）においてのみ検出された（図５を参照のこと）ことから、この方法によってｃｏｒｅ−１陽性多糖の強力な富化が示された。
【０５７５】
Ｃｏｒｅ−１陽性画分を、Ｔｚｉａｎａｂｏｓら（１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，１８２３０−１８２３５）に従って、弱酸加水分解によるさらなるクロマトグラフィ分離の後、０〜０．５Ｍ  ＮａＣｌ勾配を用いるＤＥＡＥ−クロマトグラフィに使用した。この方法によって、０Ｍ  ＮａＣｌ（Ｄ１）、０，０４Ｍ  ＮａＣｌ（Ｄ２）および０，９〜０，１７Ｍ  ＮａＣｌ（Ｄ３）で溶出された３つの画分にＣｏｒｅ−１陽性多糖類が分離され、それによって、ｃｏｒｅ−１陽性多糖類がさらに富化された。
【０５７６】
本発明のプロセスでは、Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６のカプセル状多糖類を精製し、その構造を質量分析によって解析する。好ましくは、そのＢ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６のカプセル状多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｅ）を、Ｐａｎｔｏｓｔｉら、１９９１によってすでに報告されているように、フェノール水抽出の後、エーテル抽出によって蓄積する。その後、逆相クロマトグラフィ（Ｃ１８  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ４□Ｆｕｓｉｏｎ−ＲＰ  ８０ｉ，２５０ｍｍ×１０ｍｍ，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）によって粗カプセル状調製物（ＣＰＳ）からｃｏｒｅ−１陽性多糖を蓄積する。粗カプセル状多糖抽出物および精製されたｃｏｒｅ−１陽性多糖の単糖成分を、ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ解析（高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィ，パルスアンペロメトリック検出）によって測定する。最終的には、ｃｏｒｅ−１陽性カプセル状多糖の構造を質量分析によって解析する。
【０５７７】
１０．３  Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６の粗カプセル状調製抽出物および精製カプセル状抽出物の単糖解析
最初の工程において、Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６の粗カプセル状調製物のｃｏｒｅ−１陽性多糖（ｐｏｌｙｓａｓｃｃｈａｒｉｄｅ）を、前にすでに記載したように逆相クロマトグラフィによって蓄積した。その後、精製収量ならびに蓄積されたｃｏｒｅ−１陽性多糖（ｐｏｌｙｓａｓｃｃｈａｒｉｄｅ）の単糖含有量をＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ解析によって測定した。
【０５７８】
単糖解析を行う前に、多糖抽出物を１００℃で４時間、２Ｎトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）によって完全に加水分解した。そのＴＦＡ加水分解中に、アセチル基が喪失した。ゆえに、単糖類のグルコサミンおよびガラクトサミン（ＧｌｃＮＨ２およびＧａｌＮＨ２）は、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＮ−アセチルガラクトサミン（ＧｌｃＮＡｃおよびＧａｌＮＡｃ）と区別することができなくなった。単糖類を、高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィで分離し、前にすでに記載したようなパルスアンペロメトリーによって検出した。単糖類を同定するためおよびそれらの濃度を測定するために、単糖外部標準および単糖内部標準を用いた。
【０５７９】
ＬＰＳおよびＣＰＳの比較（前述）のために測定された粗ＣＰＳ抽出物の単糖内容物の割合は、この比較のために測定された粗ＣＰＳ抽出物の単糖（ｍｏｎｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）含有量の割合と明らかに異なる。両方の粗ＣＰＳ抽出物は、Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６の異なる培養物から調製されたものであり、それらは、述べた種々の種類の単糖内容物についての詳述であり得る。
【０５８０】
逆相クロマトグラフィによって蓄積されたｃｏｒｅ−１陽性多糖類の収率は、３０％であった。粗カプセル状抽出物および精製されたカプセル状抽出物の単糖含有量の割合の比較から、フコース、ＧａｌＮＡｃ／ＧａｌＮＨ２、ガラクトースおよびグルコースの量の増加が明らかになったが、グルコースは、混入であり得る（表７）。ラムノース、ＧｌｃＮＨ２／ＧｌｃＮＡｃおよびマンノースの内容物の割合は、逆相クロマトグラフィによって減少し得た（表７）。カプセル状多糖類の特徴的な成分であるガラクツロン酸およびグルクロン酸は、精製ｃｏｒｅ−１陽性多糖抽出物において同定され得なかった。これらは、Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６が複数のカプセル状多糖を有することを示唆し得る。両方のカプセル状多糖類が、逆相クロマトグラフィによって互いから分離され得る。Ｔｚｉａｎａｂｏｓら（１９９２）もまた、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓのカプセルが、２つの異なる多糖類からなることを報告した。
【０５８１】
【表７】
2015134813.tif 000007
フコース、ＧａｌＮＨ２／ＧａｌＮＡｃおよびガラクトースの蓄積は、これらの単糖類が、ｃｏｒｅ−１陽性多糖の繰り返し単位の成分であることを示唆し得る。一方、大きく減少した単糖類は、低混入であり得る。
【０５８２】
１０．４  質量分析によるｃｏｒｅ−１陽性多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈｉｄｅ）の構造解析
上ですでに記載したようにマトリックス支援レーザー飛行時間型（ｔｉｍｅ−ｏｆｆ  ｆｌｉｇｈｔ）質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）およびエレクトロスプレーイオントラップ質量分析（ＥＳＩ−Ｉｏｎ−Ｔｒａｐ−ＭＳ）によって、ｃｏｒｅ−１陽性多糖の構造を解析した。
【０５８３】
ＥＳＩイオントラップ質量分析に向けて、１％酸性酸を用いた加水分解（１，５ｈ，１００℃）またはコンドロイチナーゼＡＢＣ（β１−４ＧａｌＮＡｃ／ＧｌｃＮＡｃ結合物の切断）もしくはβ１−３ガラクトシダーゼを用いた酵素による消化によって、蓄積されたｃｏｒｅ−１陽性多糖を部分化した。さらに、コンドロイチナーゼＡＢＣ／α１−３，４フコシダーゼまたは１％酸性酸／β１−３ガラクトシダーゼを用いた二重消化（ｄｏｂｂｌｅ  ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）による部分化を行った（すべての酵素をＧｌｙｋｏ  ＧｍｂＨから入手した）。すべての酵素による消化を３７℃で一晩インキュベートした。質量分析解析（ＭＳならびにＭＳ／ＭＳ）をポジティブモードおよびネガティブモードにおいて行った。解析を行う前に、製造者のマニュアルに記載されているようにすべてのサンプルをＣａｒｂｏｇｒａｐｈ  ＳＰＥ（Ａａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．）を用いて脱塩し、２，５ｍＭ  ＮＨ３／４０％アセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌ）で希釈した。
【０５８４】
ＭＡＬＤＩ−ＭＳ解析によってすでに同定されているｃｏｒｅ−１陽性グリカンフラグメントの構造を、ＥＳＩイオントラップ測定によって確認することができた。さらなるフラグメントもＥＳＩイオントラップ質量分析によって同定することができた（表８）。
【０５８５】
【表８】
2015134813.tif 000008
ＨｅｘＮＡｃ：Ｎ−アセチルヘキソサミン、Ｈｅｘ：ヘキソース、ｄｅｓＨｅｘ：デオキシヘキソース、Ｍ：メチル基
ｃｏｒｅ−１陽性カプセル状多糖の繰り返し単位の配列を、フラグメントを重複させることによって測定した（図６）。
【０５８６】
酵素的に消化されたｃｏｒｅ−１陽性多糖類の質量分析解析から、単糖類間のグリコシド結合が示唆された。さらに、ガラクトース（β１−３ガラクトシダーゼによる切断の成功）およびフコース（α１−３，４フコシダーゼによる切断の成功）を同定することができた（図７）。
【０５８７】
この結果は、前述の単糖解析と一致し、このことから、フコース、ガラクトースおよびＧａｌＮＡｃの蓄積が明らかになった。
【０５８８】
１０．５  カプセル状多糖の繰り返し単位の分枝二糖としてのｃｏｒｅ−１構造の検証
上記繰り返し単位におけるＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃの分枝ｃｏｒｅ−１構造は、エキソグリコシダーゼβ１−３ガラクトシダーゼおよびＨｅｘＮＡｃａｓｅ（β１−２，３，４，６ＧａｌＮＡｃ／ＧｌｃＮＡｃ切断）を用いて二重消化した後の、上に記載したような単糖（ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄ）解析によって特定されるはずである。
【０５８９】
等量のｃｏｒｅ−１陽性多糖（ｐｏｌｙｓｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む２つのサンプルを濾過することによって、それらのサンプルを遊離単糖類から精製した。その後、その２つのサンプルのうちの一方を３７℃において一晩、β１−３ガラクトシダーゼで消化した。上記の両方のサンプルを再度、１回濾過することにより、上記の消化されたサンプルから遊離ガラクトースを分離し、未消化のサンプルをネガティブコントロールとして用いた。続いて、残留物（ｒｅｔｅｎｔａｔｓ）を回収し、ＨｅｘＮＡｃａｓｅで消化した。最後に、両方のサンプルを再度濾過した。すべての溶出液をＨＰＡＥＣ−ＰＡＤで解析した。
【０５９０】
コントロールとして、ｃｏｒｅ−１構造が、二重消化によって除去されたがＨｅｘＮＡｃａｓｅ消化から影響を受けていない場合（ネガティブコントロール）、その残留物をＤＩＧ−Ｇｌｙｋａｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いるドットブロットで解析して多糖類を検出し、そしてｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１を用いることでｃｏｒｅ−１構造を同定した。
【０５９１】
二重消化されたサンプルの両方の溶出液（ｅｌｕａｔｓ）において、ガラクトース（第１溶出液）およびＧａｌＮＡｃ（第２溶出液）を、単糖（ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄ）解析によって同定することができた。エキソグリコシダーゼＨｅｘＮＡｃａｓｅで消化しただけのネガティブコントロールの溶出液では、ガラクトースもＧａｌＮＡｃも、同定することができなかった。これは、分枝ｃｏｒｅ−１構造Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃに対する強い示唆である。
【０５９２】
ＤＩＧ−Ｇｌｙｋａｎ検出キットを用いた、二重消化された残留物およびＨｅｘＮＡｃａｓｅで消化されたサンプルの、ニトロセルロース膜に適用されたドットブロット解析から、類似の多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄ）濃度が明らかになった。二重消化されたサンプルでは、ｃｏｒｅ−１構造を、これ以上検出することができなかったが、ＨｅｘＮＡｃａｓｅで消化されたサンプルでは、Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１抗体を用いた免疫ブロットによって、なおもｃｏｒｅ−１構造が同定された。
【０５９３】
１０．６  その分離されたフラグメントの解析によるｃｏｒｅ−１陽性多糖構造の検証
ｃｏｒｅ−１陽性多糖構造をさらに検証するために、グリカン（ｇｌｙｋａｎ）を１％酸性酸による加水分解によって部分化した（１，５ｈ，１００℃）。そのグリカンフラグメントを、Ｊ．Ｃ．Ｂｉｇｇｅら（１９９５）によってすでに報告されているようにフルオロフォア２−アミノベンズアミド（２−ＡＢ）で標識した。この手順のために、Ｃａｒｂｏｇｒａｐｈ  ＳＰＥカラム（Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  Ｉｎｃ．）での精製によって、サンプルから粒子および塩を除去し、凍結乾燥した。そのペレットをＤＭＳＯ／氷酢酸／シアノ水素化ホウ素ナトリウム中の５□ｌの２−ＡＢに溶解し、６０℃で２時間インキュベートした。その２−ＡＢ標識されたフラグメントをペーパークロマトグラフィによって遊離２−ＡＢと分離した。最後に、２−ＡＢ結合体化フラグメントを水で溶出した。凍結乾燥した後、そのペレットを５０％アセトニトリルに溶解した。そのフラグメントを、フラグメントの大きさに基づいて、蛍光検出を用いた順相ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  ３□ＮＨ２  Ａ１００，  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，溶出剤Ａ：１５ｍＭ  酢酸アンモニウム，溶出剤Ｂ：アセトニトリル）によって分離した。フラグメントの配列をＥＳＩ質量分析で解析した。最後に、グリコシド結合の検証、およびそのフラグメントの成分である単糖類のより良好な同定のために、前にすでに記載したように、エキソグリコシダーゼ（ｅｘｏｇｌｙｋｏｓｉｄａｓｅ）β１−３ガラクトシダーゼ、α１−３，４フコシダーゼおよびＨｅｘＮＡｃａｓｅを用いて、それらのオリゴ糖を消化した。消化の成功を、ＥＳＩ質量分析によって照合し、末端の単糖類の除去を、前にすでに記載したようにＨＰＡＥＣ−ＰＡＤによって同定した。
【０５９４】
ｃｏｒｅ−１陽性多糖の繰り返し単位のすでに同定されている構造を両方の解析によって確かめ、予想されたオリゴ糖フラグメントおよび切断された単糖類を得た（表９）。
【０５９５】
【表９−１】
2015134813.tif 000009
【０５９６】
【表９−２】
2015134813.tif 000010
結論として、ｃｏｒｅ−１陽性カプセル状多糖の繰り返し単位の構造（図８）が、種々の解析によって確認された。
【０５９７】
さらに、それらの結果から、Ｇａｌ−ＧａｌＮＡｃと骨格ＧａｌＮＡｃ分子との間のグリコシド結合がαアノマーであることが明らかになった（図１９、特に＃５も参照のこと）。この知見は、ＴＦのαアノマーに特異的なｍＡｂのＴＦ１、ＴＦ２およびＨＨ８を用いたドットブロット解析によって裏付けられた。ＴＦβに特異的なｍＡｂのＡ６８−Ｅ／Ａ２およびＡ６８−Ｅ／Ｅ３もまた使用した。それによって、Ｂ．ｏｖａｔｕｓ  ＡＧ６のカプセル状多糖の分枝構造内に腫瘍特異的ＡｇＴＦαが同定された。
【０５９８】
実施例１１  動物モデル
１１．１  死細菌によるマウスの腹腔内免疫
１１．１．１  液性免疫応答試験１によるマウス血清の解析
雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，１群あたり４匹）を、−１日目に５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄ）で処置した。０、７および１４日目に、マウスの腹腔内に、ＰＢＳ中の５×１０８細菌（ｃｏｒｅ−１陰性ＡＧ３株（Ｉ群）、３２もしくは５３もしくはｃｏｒｅ−１陽性ＡＧ６株（Ｋ群））またはＰＢＳのみ（Ｌ群）を注射した。血清サンプルを−４、２１、２７および３０日目に採取した。
【０５９９】
マウス血清をｃｏｒｅ−１に対する結合についてＥＬＩＳＡにおいて解析した。Ｃｏｒｅ−１を有する抗原として、アシアログリコホリンを用いた。ネガティブコントロールとして、過ヨウ素酸処理されたアシアログリコホリンを用いた。過ヨウ素酸塩処理は、ｃｏｒｅ−１の外側の炭水化物（ｃａｒｈｏｈｙｄｒａｔｅ）環を破壊して、Ｃｏｒｅ−１エピトープを破壊する。
【０６００】
９６ウェル平底マイクロタイタープレートを２μｇ／ｍｌの濃度のアシアログリコホリンＡ（ＡＧＰ）でコーティングした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。そのプレートの半分を以下のとおり過ヨウ素酸塩で処理した：
ウェルを、５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５とともに５分間インキュベートした後、酢酸緩衝液中の１０ｍＭ過ヨウ素酸とともに、暗黒下で１時間インキュベーションした。ウェルを５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５とともに５分間インキュベートした。水素化ホウ素ナトリウムとのインキュベーション（ＰＢＳ中５０ｍＭ，３０分間）によって反応を停止した。次に、プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。
【０６０１】
次いで、プレートに２％ＢＳＡを加えることによって３０分間ブロッキングした。
【０６０２】
様々な希釈のマウス血清とのインキュベーションを１．５時間行った。ペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗マウスＩｇＭ抗体（ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：５０００）を用いて、結合しているマウス免疫グロブリンを検出した。基質としてＴＭＢを用いてアッセイを発色させ、２．５Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止した。
【０６０３】
図９は、血清ＩｇＭ−抗体とｃｏｒｅ−１陽性ＡＧＰおよびｃｏｒｅ−１陰性ＡＧＰ（ＡＧＰ＋ＰＪ）との結合を示している。Ｃｏｒｅ−１陽性細菌で免疫された４匹のマウス（Ｋ群）のうちの３匹の血清だけがＡＧＰとの強力な結合を示したのに対し、ＰＪによるＣｏｒｅ−１の切断後のシグナルは低下している。
【０６０４】
ゆえに、ｃｏｒｅ−１陽性細菌は、マウスにおいてｃｏｒｅ−１に対する体液性免疫を誘導することができる。
【０６０５】
１１．１．２  液性免疫応答試験２によるマウス血清の解析
０、７および１４日目に、雄Ｃ３Ｈマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，１群あたり４匹）の腹腔内に、２００μｌのＰＢＳ中の、Ｃｏｒｅ−１陽性（ｐｏｓｔｉｖｅ）株およびＣｏｒｅ−１陰性株からの５×１０８低温殺菌細菌を注射した。血清を免疫の前ならびに１３、２１および２８日目に回収し、液性免疫応答試験２において解析した。
【０６０６】
コーティング緩衝液（８，４ｇ／ｌ  ＮａＨＣＯ３、３，５６ｇ／ｌ  Ｎａ２ＣＯ３、ｐＨ＝９，４９）中、５μｇ／ｍｌの様々な炭水化物−ＰＡＡ結合体（ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ、Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ、ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌβ−ＰＡＡ、Ｇａｌα１−３−ＧａｌＮＡｃβ−ＰＡＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡ）で９６ウェル平底マイクロタイタープレートをコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。
【０６０７】
プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。
【０６０８】
次いで、プレートに２％ＢＳＡを加えることによって３０分間ブロッキングした。
【０６０９】
様々な希釈のマウス血清とのインキュベーションを１．５時間行った。ペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗マウスＩｇＭ抗体（ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：５０００）を用いて、結合しているマウス免疫グロブリンを検出した。基質としてＴＭＢを用いてアッセイを発色させ、２．５Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を加えることによって反応を停止した。
【０６１０】
図１０は、０日目（免疫前の血清）および２１日目における１群あたり４匹のマウス由来の血清についての、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルに比較して、ＰＡＡ結合体Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナルの平均値を示している［相対的ＥＬＩＳＡシグナルは、等式：（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナル）＊１００／（ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡに対するＥＬＩＳＡシグナル）に従って計算する］。免疫血清が、免疫前の血清と比べて少なくとも５０％の増加を示した場合に、その血清を陽性と算定した。Ｃｏｒｅ−１陽性ＡＧ６およびＭＵ１株のみが、マウスにおいてＣｏｒｅ−１特異的液性免疫応答を誘導したことを示すことができた。
【０６１１】
１１．１．３  液性免疫応答試験３によるマウス血清の解析
雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，１群あたり４匹）を、−１日目に５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量のシクロホスファミドで処置した。０、７および１４日目に、マウスの腹膜内に、ＰＢＳ中の５×１０８細菌（ｃｏｒｅ−１陰性ＡＧ３株（Ｉ群）、３２もしくは５３もしくはｃｏｒｅ−１陽性ＡＧ６株（Ｋ群））またはＰＢＳのみ（Ｌ群）を注射した。血清サンプルを−４、２１、２７および３０日目に採取した。
【０６１２】
マウス血清と、Ｃｏｒｅ−１陽性およびｃｏｒｅ−１陰性のヒト腫瘍細胞株（それぞれＮＭ−ｗｔおよびＮＭ−Ｄ４；ＮＭ−ｗｔは、ＷＯ２００５／０１７１３０Ａ２およびＥＰ１６５４３５３に記載されているようにＮＭ−Ｄ４の親細胞であり、ＮＭ−Ｄ４は、ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０５としてＤＳＭＺに寄託されている）との結合を解析するために、フローサイトメトリー解析を行った。チューブ１本あたり３×１０５細胞をペレットにし、そのペレットを、５０μｌのマウス血清（ＰＢＳ／１０％ＦＣＳ中１：５０希釈）、コントロール抗体またはＰＢＳ／１０％ＦＣＳのみに再懸濁した。サンプルを４℃で２０分間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、そして遠心した。次に、細胞をＣｙ３結合体化ヤギ抗マウスＩｇＭ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＰＢＳ／１０％ＦＣＳ中１：２００）とともに４℃で２０分間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、フローサイトメトリー解析にむけて２００μｌのＰＢＳに再懸濁した。
【０６１３】
図１１ａおよびｂは、マウス血清由来のＩｇＭ抗体と、ヒト細胞株ＮＭ−ｗｔ（Ｃｏｒｅ−１陰性）およびＮＭ−Ｄ４（ｃｏｒｅ−１陽性）との結合を示している。Ｃｏｒｅ−１陰性ＮＭ−ｗｔ株に対する結合は、Ｃｏｒｅ−１陰性細菌（Ｉ群）およびＣｏｒｅ−１陽性細菌（Ｋ群）で免疫されたマウスの間で類似しているのに対し、Ｃｏｒｅ−１陽性ＮＭ−Ｄ４株に対しては、Ｋ群の４匹のマウスのうち３匹の結合が有意に強い。このことは、Ｃｏｒｅ−１陽性細菌で免疫されたマウスにおける液性免疫応答のｃｏｒｅ−１特異性を示唆している。
【０６１４】
１１．１．４  液性免疫応答試験１、２および３によるマウス血清の解析
０、７および１４日目に、Ｃ３Ｈマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，１群あたり４匹）の腹腔内に、２００μｌのＰＢＳ中の、Ｃｏｒｅ−１陽性Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓ株であるＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓＭＵ−１、Ａ６８−ＢＡ１１−陽性Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＨ２株およびＣｏｒｅ−１陰性Ｅ．ｃｏｌｉ株（ＡＧ３，Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ８６  ＤＳＭＺ８６９７＝３２）からの１×１０９低温殺菌細菌を免疫した。血清を免疫の前ならびに１３、２１および２８日目に回収し、上に記載されたような液性免疫応答試験１、２および３において解析した。
【０６１５】
ＡＧ３株は、すべての液性免疫応答試験に対して陰性であったが、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ８６およびＬＨ２株で免疫された後のマウスから回収された血清は、ＨＩＲＴ１においてＡＧＰ反応性抗体を示した。それにもかかわらず、Ｃｏｒｅ−１陽性ＭＵ−１のみが、ＨＩＲＴにおけるＡＧＰ特異的抗体の誘導に加えて、ＰＡＡ結合体（ＨＩＲＴ２）およびヒト腫瘍細胞（ＨＩＲＴ３）においてＣｏｒｅ−１に対して強力な抗Ｃｏｒｅ１特異的液性免疫応答を示した。ゆえに、本発明者らは、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｏｖａｔｕｓのＣｏｒｅ−１陽性微生物（ＭＵ−１）のみによって強力なＣｏｒｅ−１特異的液性免疫応答を誘導することができた。
【０６１６】
図１１ｃ〜ｅは、その結果を示している。
【０６１７】
１１．２．生のＣｏｒｅ−１陽性細菌による無菌マウスの経口免疫
２、３、４、９、１０、１１、１６、１７および１８日目に、無菌Ｃ３Ｈ−マウスをＡＧ６株の２×１０９生細菌で経口的に免疫した。血清サンプルを０日目（免疫前の血清）ならびに１４および２１日目に採取し、液性免疫応答試験１においてＡＧＰ特異的ＩｇＭ抗体について解析した。
【０６１８】
免疫されたマウスは、ＡＧＰでコーティングされたマイクロタイタープレートに対するマウス血清の結合によって示されたように、コントロールマウスに比べて抗ｃｏｒｅ−１価の上昇を示した。ペルオキシダーゼ結合体化抗マウスＩｇＭ抗体を用いて、結合したマウスＩｇＭの検出を行った。ｃｏｒｅ−１に対するシグナルの特異性は、過ヨウ素酸による処理（炭水化物構造の破壊）後のＥＬＩＳＡシグナルの低下によって示された。１４または２１日後に、３匹中３匹のマウスのＣｏｒｅ−１に対するＩｇＭ抗体のレベルが上昇したのに対し、コントロールマウスは、図１２に示されるように、ＡＧＰ＋ＰＪと比べて、ＡＧＰに対するＥＬＩＳＡシグナルの上昇を示さなかった。
【０６１９】
１１．３  低温殺菌および生のＣｏｒｅ−１陽性細菌による通常のマウスの経口免疫
Ｃ３Ｈ−マウスを、０〜２８日目に毎日、１×１０１１（Ａ群）または１×１０１０（Ｂ群）のＡＧ６株の低温殺菌細菌で経口的に免疫した。血清サンプルを−１日目（免疫前の血清）ならびに１３、２１、２８および３５日目に採取し、液性免疫応答試験１においてＡＧＰ特異的ＩｇＭ抗体について解析した。
【０６２０】
免疫後のマウスから回収された血清は、ＧＰまたはＡＧＰでコーティングされたマイクロタイタープレートへのマウス血清の結合によって示されたように、抗Ｃｏｒｅ−１価の上昇を示した（過ヨウ素酸による処理有りおよび無し）。結合したマウスＩｇＭの検出を、ペルオキシダーゼ結合抗マウスＩｇＭ抗体を用いて行った。ｃｏｒｅ−１に対するシグナルの特異性は、過ヨウ素酸による処理後のＥＬＩＳＡシグナルの低下によって（炭水化物構造の破壊、少なくとも３０％の低下）およびＧＰに対するシグナルの低下によって（少なくとも５０％のＡＧＰシグナルの上昇）示された。
【０６２１】
Ａ群の６匹中５匹のマウスおよびＢ群の８匹中５匹のマウスが、２１日目までにＣｏｒｅ−１特異的抗体を産生したことが示された（図１３）。
【０６２２】
液性免疫応答試験３において、Ｃｏｒｅ−１陰性細胞株ＮＭ−ｗｔに対する結合と比べて、Ｃｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞株ＮＭ−Ｄ４に対する結合について、フローサイトメトリーでマウス血清を解析した。チューブ１本あたり３×１０５細胞をペレットにし、そのペレットを５０μｌのマウス血清（ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：３００希釈）、コントロール抗体またはＰＢＳ／１％ＢＳＡのみに再懸濁した。サンプルを４℃で６０分間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、遠心した。次に、細胞をビオチン結合体化ヤギ抗マウスＩｇＭ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：２００）とともに４℃で６０分間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄した。その後、細胞をＣｙ３結合体化ストレプトアビジン（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：２００）とともに４℃で６０分間インキュベートし、フローサイトメトリー解析にむけて２００μｌのＰＢＳに再懸濁した。
【０６２３】
結果を以下の式に従って計算した：
（ＮＭ−Ｄ４免疫血清上の陽性細胞％−ＮＭ−Ｄ４免疫前血清上の陽性細胞％）／（ＮＭ−ｗｔ免疫血清上の陽性細胞％−ＮＭ−ｗｔ免疫前血清上の陽性細胞％）＝Ｘ
商Ｘ≧１０のときのマウス血清を、陽性と見なした（ここで、ＮＭ−ｗｔ免疫血清上の陽性細胞％−ＮＭ−ｗｔ免疫前血清上の陽性細胞％≧１）。
【０６２４】
２８日目に、１３匹中１１匹のマウスが、図１４に示されるようにＣｏｒｅ−１陽性ヒト腫瘍細胞株ＮＭ−Ｄ４に対する液性免疫応答をもたらした。
【０６２５】
液性免疫応答試験２において、２８日目のマウス血清をＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃａ−ＰＡＡ（ＰＡＡ４８）またはＧａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃａ−ＰＡＡ（ＰＡＡ４３）に対する結合について解析した。
【０６２６】
９６ウェル平底マイクロタイタープレートを、コーティング緩衝液（８，４ｇ／ｌのＮａＨＣＯ３、３，５６ｇ／ｌ  ＮＡ２ＣＯ３、ｐＨ＝９，４９）中５μｇ／ｍｌのＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃａ−ＰＡＡ（ＰＡＡ４８）またはＧａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃａ−ＰＡＡ（ＰＡＡ４３）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ブロッキングした後、血清とのインキュベーションを１，５時間行った。結合したマウス免疫グロブリンを、ペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗マウスＩｇＭ抗体（ＰＢＳ１％ＢＳＡ中１：５０００）を用いて検出した。基質としてＴＭＢを用いてアッセイを発色させ、２．５Ｎ  Ｈ２ＳＯＰ４を加えることによって反応を停止した。
【０６２７】
その結果を図２１に示す。１３匹中５匹のマウスが２８日目までにＣｏｒｅ−１特異的抗体を産生したことが示された。
【０６２８】
実施例１２  Ｃｏｒｅ−１陽性細菌の細胞性免疫応答誘導に対する能力（インビトロ）
１２．１  機能的樹状細胞の産出
樹状細胞株ＮｅｍｏｄＤＣ（ｐＮＭ−ＤＣ）が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対する供給源として用いられている。ｐＮＭ−ＤＣをｉＮＭ−ＤＣに分化させた後、それらに以下の細菌株：ＡＧ６、ＭＵ１、５２および５３の細菌溶解物（ＢａＬｙ）を負荷した。５０μｇ／ｍｌのすべてのＢａＬｙを、成熟サイトカインとともに培養液に加え、ｉＮＭ−ＤＣを成熟状態（ｍＮＭ−ＤＣ）に分化させた。
【０６２９】
より詳細には、第１工程において、１０００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ、１００Ｕ／ｍｌ
ＩＬ−４および２，５ｎｇ／ｍｌ  ＴＮＦ−αが加えられたＮｅｍｏｄＤＣ培地（７０％ＭＥＭ−α、２０％ＦＣＳ、１０％ＣＭ５６３７）中で７日間インキュベーションすることによって、ｐＮＭ−ＤＣ（１×１０５／ｍｌ）をｉＮＭ−ＤＣに分化させた。次に、１×１０６／ｍｌの未熟ＮＭ−ＤＣ（ｉＮＭ−ＤＣ）に、細菌溶解物（５０μｇ／ｍｌ）、腫瘍細胞溶解物（１×１０６ＮＭ−ＤＣに対する負荷用の１×１０６溶解腫瘍細胞）またはＡＧＰ−およびＧＰ−タンパク質（２０μｇ／ｍｌ）のいずれかを負荷し、７５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αを加えることによって、２日間成熟させた。
【０６３０】
ｍＮＭ−ＤＣの成熟表現型は、Ｔ細胞活性化の成功に非常に重要であり、その表現型をＣＤ１ａ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１１６、ＨＬＡ−ＡＢＣおよびＨＬＡ−ＤＲの発現について、フローサイトメトリーを用いて試験した。成熟ＤＣの表現型に対応する表現型を有するＤＣだけをＴ細胞活性化に用いた。
【０６３１】
１２．２  Ｃｏｒｅ−１に対する活性化Ｔ細胞の産出、ならびにＥＬＩＳＡを用いたＧＭ−ＣＳＦ（細胞性免疫応答試験１）およびＴＮＦ−α（細胞性免疫応答試験２）産生の検出
Ｃｏｒｅ−１陽性細菌溶解物を負荷されたＮＭ−ＤＣによるＴリンパ球のプライミングの７〜１０日後に、得られたＴ細胞（０，７〜１×１０６／ｍｌ）を、Ｃｏｒｅ１陽性（ｐｏｓｉｔｉｖ）腫瘍細胞溶解物（５０μｇ／ｍｌ）を負荷されたｍＮＭ−ＤＣ（１×１０５／ｍｌ）で再刺激した。４８時間のインキュベーションの後、上清を回収し、ＧＭ−ＣＳＦ−およびＴＮＦ−α−ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡ（商標）キットを用いて、ヒトＣｏｒｅ−１陽性腫瘍細胞株ＮＭ−Ｄ４に応答したサイトカイン産生を評価するためにアッセイした。
【０６３２】
９６ウェルプレートを、コーティング緩衝液中１：２５０希釈の５０μｌの適切な捕捉抗ヒト（ＧＭ−ＣＳＦまたはＴＮＦ−α）抗体で予めコーティングしておいた。洗浄工程およびブロッキング工程の後、１００μｌの上清または標準物質をマイクロウェルに加え、室温で２時間インキュベートした。検量線を書くために、０；７，８；１５，６；３１，２；６２，５；１２５；２５０ｐｇ／ｍｌの濃度の組換えヒトＧＭ−ＣＳＦおよび０；４，７；９，４；１８，８；３７，５；７５；１５０；３００ｐｇ／ｍｌの濃度の組換えヒトＴＮＦ−αを用いた。洗浄した後、１ウェルあたり１００μｌの調製された実際の検出溶液（Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を加え、プレートを室温で１時間インキュベートした。次の工程では、１ウェルあたり１００μｌのＴＭＢ  Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｒｅａｇｅｎｔを加えた。最後に３０分間インキュベーションし、そして５０μｌの停止溶液を加えた後、吸光度（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎｓ）を４５０ｎｍにおいて読み出した。
【０６３３】
図１５ＡおよびＢに示される結果は、Ｃｏｒｅ１陽性細菌溶解物に対して産生されたＴ細胞が、腫瘍抑制性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−αおよびＧＭ−ＣＳＦ）の産生によって、ヒト細胞株ＮＭ−Ｄ４からのＣｏｒｅ１陽性細胞溶解物（ｌｙｓａｔ）を負荷されたＤＣを認識することができるという明らかな証拠を示している。対照的に、Ｃｏｒｅ１陰性細胞溶解物に応答して、非常に低いレベルのサイトカインが放出された。さらに、この認識は、溶解物が負荷されたＮＭ−ＤＣとＣｏｒｅ１特異的抗体との事前のインキュベーションによって、特異的に阻害された。
【０６３４】
１２．３  Ｃｏｒｅ−１に向けられた活性化Ｔリンパ球によるＩＦＮ−γの分泌を評価するためのＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（細胞性免疫応答試験２）
抗原特異的刺激に応答したＩＦＮ−γの分泌を評価するために、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを用いた。このアッセイによって、予め感作されたＴ細胞が抗原特異的様式でＣｏｒｅ１抗原を認識する機能的能力の定量が可能になる。
【０６３５】
まず、細菌溶解物を負荷されたＤＣとＴリンパ球を共培養することによって、Ｔリンパ球をインビトロにおいて活性化させる。プライミングの７〜１０日後に、活性化Ｔ細胞を回収し、Ｃｏｒｅ１陽性（ＮＭ−Ｄ４）およびＣｏｒｅ１陰性（ＮＭ−ｗｔ）ヒト腫瘍細胞溶解物を負荷されたＤＣ（Ｔ細胞とＤＣとの比１０：１）で再チャレンジした。
【０６３６】
ＥＬＩＳｐｏｔプレートのウェルを、ＥＬＩＳｐｏｔプレートのニトロセルロースの基板に結合するマウス抗ヒトＩＦＮ−γ抗体（Ｍａｂｔｅｃｈ−Ｋｉｔ）で予めコーティングしておいた。再チャレンジされたＴ細胞をそのウェルに移し、インキュベーション中にサイトカインが放出される。各Ｔ細胞のまわりに局所的に放出されるＩＦＮ−γは、その特異的抗体に結合し、ゆえに、その特異的抗体によって「捕捉」される。２４時間のインキュベーション後、細胞を除去した。濃度１μｇ／ｍｌの２次抗ヒトＩＦＮγ抗体をウェルに加え；基質を不溶性の色の付いた生成物に変換することができる酵素に、このビオチン化抗体を結合させる。そのプレートを２回以上洗浄し、１μｇ／ｍｌの濃度の、酵素−ＡＰに結合体化されたストレプトアビジンを加える。最後に、沈殿基質ＢＣＩＰ＋ＮＢＴを加え、応答するＴ細胞側にスポットが現れるまでプレートをインキュベートする。色のついたスポットをカウントし、デジタルイメージングシステムを用いて解析する。
【０６３７】
その結果から、Ｃｏｒｅ１陽性細菌溶解物（ＡＧ６およびＭＵ１）に対して産生されたＴ細胞が、腫瘍抑制性サイトカインＩＦＮ−γの産生によって、ヒト腫瘍細胞株ＮＭ−Ｄ４からのＣｏｒｅ１陽性細胞溶解物を負荷されたＤＣを認識することができることが示された（図１６）。Ｃｏｒｅ１陰性細胞溶解物（Ｒ＋ＤＣ／ｗｔ）に応答して、非常に低いレベルのサイトカインが放出された。さらに、Ｃｏｒｅ１陽性細胞溶解物（Ｒ＋ＤＣ／Ｄ４）の認識の特異性は、Ｃｏｒｅ−１特異的抗体Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１（Ｒ＋ＤＣ／Ｄ４＋Ａｋ）を用いてサイトカイン放出を遮断することによって証明された。
【０６３８】
１２．４  細胞性免疫応答試験３：Ｔ細胞増殖アッセイ
ＥＬＩＳｐｏｔ解析について上に記載したような、感作されたＴ細胞および再刺激されたＴ細胞を、インキュベーション後にＥＬＩＳｐｏｔプレートから９６ウェルプレートに移し、比色分析の細胞増殖試薬ＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を用いてアッセイし、ここで、その試薬のテトラゾリウム塩は、ミトコンドリア酵素によって開裂され、発色する色素の量（４５０ｎｍにおいて読み出される）は、その培養物中の代謝的に活性な細胞の数に直接相関する。培地＋細胞が存在しないｗｓｔ−１の吸光度を、酵素結合免疫吸着測定リーダーのブランク位とした。その手順は、１ウェルあたり１０μｌのＷＳＴ増殖試薬（Ｒｏｃｈｅ）の一段階添加および３７℃での３時間のインキュベーション、続いて、４５０ｎｍにおける測定からなる。
【０６３９】
図１７の結果から、Ｃｏｒｅ１陽性細菌溶解物に対して産生されたＴ細胞が、特異的な増殖によって示されるように、ヒト腫瘍細胞株ＮＭ−Ｄ４からのＣｏｒｅ１陽性細胞溶解物を負荷されたＤＣを認識するという明らかな証拠を示している。さらに、この認識は、溶解物が負荷されたＮＭ−ＤＣとＣｏｒｅ１特異的抗体との事前のインキュベーションによって特異的に阻害された。
【０６４０】
１２．５  細胞性免疫応答試験４：細菌溶解物を負荷されたＤＣ上のＣｏｒｅ−１提示についての免疫蛍光法試験
細菌溶解物が負荷されたＮＭ−ＤＣによるＣｏｒｅ−１のプロセッシングおよび提示を解析するために、ｃｏｒｅ−１特異的モノクローナル抗体（Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１，ＮＥＭＯＤ−ＴＦ２）を用いて免疫蛍光解析を行った。成熟ＤＣの表面上における、プロセッシングされたＣｏｒｅ１−抗原の提示は、免疫蛍光法を用いて証明された。免疫蛍光法（ＩＦ）は、特異的抗原（Ｃｏｒｅ１）と特異的なＣｏｒｅ−１抗体との結合の後、１次抗体を認識するために使用される、蛍光色素で標識された２次抗体を加えることによって、細胞上の特異的抗原の可視化を可能にする技術である。
【０６４１】
第１工程において、ｐＮＭ−ＤＣ（１×１０５／ｍｌ）を、１０００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４および２，５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αが加えられたＮｅｍｏｄＤＣ培地（７０％ＭＥＭ−α、２０％ＦＣＳ、１０％ＣＭ５６３７）中で７日間インキュベーションすることによってｉＮＭ−ＤＣに分化させた。次に、１×１０６／ｍｌの未熟ＮＭ−ＤＣ（ｉＮＭ−ＤＣ）に、細菌溶解物（５０μｇ／ｍｌ）、腫瘍細胞溶解物（１×１０６ＮＭ−ＤＣに対する負荷用の１×１０６溶解腫瘍細胞）またはＡＧＰ−およびＧＰ−タンパク質（２０μｇ／ｍｌ）のいずれかを負荷し、７５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αを加えることによって、２日間成熟させた。
【０６４２】
成熟ＤＣおよび抗原負荷ＤＣを洗浄し、免疫蛍光染色に向けて、５０μｌあたり１×１０６細胞をマイクロタイタープレート上に入れた。培地（１０％ＦＣＳ）中に希釈された３μｇ／ｍｌのＣｏｒｅ−１特異的抗体（Ｎｅｍｏｄ−ＴＦ１）を細胞懸濁液とともに室温で１時間インキュベートした。洗浄工程の後、５０μｌの１：２００希釈された２次ヤギ抗マウスＩｇＭ、Ｃｙ３標識Ａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ／Ｄｉａｎｏｖａ）を加え、３０分間インキュベートした。洗浄工程の後、２０μｌの細胞懸濁液をＭｕｌｔｉｔｅｓｔスライド（１０ウェル，Ｒｏｔｈ）の各ウェルに入れた。免疫蛍光染色サンプルを、デジタルカメラＡｘｉｏＣａｍ（Ｚｅｉｓｓ）を備えたＡｘｉｏｐｌａｎ２蛍光顕微鏡で検鏡した。
【０６４３】
図１８は、プロセッシングされたＡＧ６−およびＮＭ−Ｄ４−Ｃｏｒｅ１陽性溶解物を有する成熟ｍＮＭ−ＤＣの陽性Ｃｏｒｅ−１特異的染色；およびＣｏｒｅ１陰性溶解物（ＡＧ３およびＮＭ−ｗｔ）を負荷されたｍＮＭ−ＤＣ上の陰性の免疫蛍光を示している。
【０６４４】
好ましい実施形態に関して本発明を記載してきたが、当業者は、本発明の精神から逸脱することなく、様々な改変、置換、省略および変更を行ってもよいことを認識するだろう。従って、本発明の範囲は、もっぱら以下の請求項の範囲（その均等物を包含する）によって限定されると意図される。ゆえに、本発明が、本発明の精神または不可欠な特徴から逸脱することなく、上に具体的に開示されたもの以外の形態で具体化され得ることは、本発明を扱う分野の当業者には明らかであろう。よって、上に記載された本発明の特定の実施形態は、すべての点において、例示として見なされるべきであり、限定であると見なされるべきでない。本発明の範囲は、前述の記載に含まれる実施例に限定されるのではなく、添付の請求項に示されるとおりである。本明細書中に記載される本発明の実施形態の様々な代替物が、本発明を実施する際に使用され得ることが理解されるべきである。以下の請求項が、本発明の範囲を定義し、これらの請求項およびその均等物の範囲内の方法および装置が、それによって包含されると意図される。
【０６４５】
【数１】
2015134813.tif 000011
出願人整理番号：４８  ６０２  Ｋ
受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０５についての、ＰＣＴ／ＲＯ／１３４様式に基づくさらなる表示
出願人はここにおいて、個々の規定を有する国に対して、本願において言及されている寄託された生物学的材料の試料の供与は、無関係の、指名された専門家に対してのみなさ得ることを要求する（適用可能な場合、特にオーストラリア、カナダ、クロアチア、デンマーク、フィンランド、ドイツ、アイスランド、ノルウェー、シンガポール、スペイン、スウェーデン、英国、ヨーロッパにおいて、「エキスパートソリューション（ｅｘｐｅｒｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」の要求）。
【０６４６】
したがって、ヨーロッパに関しては、出願人は、寄託された生物学的材料が、ＥＰＣ規則２８（３）において規定されるように、特許を付与する旨の告示が公表されるまで、または特許出願が拒絶され、取り下げられ、もしくは取り下げられたものとみなされる場合には出願の日から２０年間、試料の請求人により指名された専門家に試料を分譲することによってのみ入手可能となされる（ＥＰＣ規則２８（４））ことを要求する。
【０６４７】
【数２】
2015134813.tif 000012
【０６４８】
【数３】
2015134813.tif 000013
出願人整理番号：４８  ６０２  Ｋ
受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２６０６についての、ＰＣＴ／ＲＯ／１３４様式に基づくさらなる表示
出願人はここにおいて、個々の規定を有する国に対して、本願において言及されている寄託された生物学的材料の試料の供与は、無関係の、指名された専門家に対してのみなさ得ることを要求する（適用可能な場合、特にオーストラリア、カナダ、クロアチア、デンマーク、フィンランド、ドイツ、アイスランド、ノルウェー、シンガポール、スペイン、スウェーデン、英国、ヨーロッパにおいて、「エキスパートソリューション（ｅｘｐｅｒｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」の要求）。
【０６４９】
したがって、ヨーロッパに関しては、出願人は、寄託された生物学的材料が、ＥＰＣ規則２８（３）において規定されるように、特許を付与する旨の告示が公表されるまで、または特許出願が拒絶され、取り下げられ、もしくは取り下げられたものとみなされる場合には出願の日から２０年間、試料の請求人により指名された専門家に試料を分譲することによってのみ入手可能となされる（ＥＰＣ規則２８（４））ことを要求する。
【０６５０】
【数４】
2015134813.tif 000014
【０６５１】
【数５】
2015134813.tif 000015
出願人整理番号：４８  ６０２  Ｋ
受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０６についての、ＰＣＴ／ＲＯ／１３４様式に基づくさらなる表示
出願人はここにおいて、個々の規定を有する国に対して、本願において言及されている寄託された生物学的材料の試料の供与は、無関係の、指名された専門家に対してのみなさ得ることを要求する（適用可能な場合、特にオーストラリア、カナダ、クロアチア、デンマーク、フィンランド、ドイツ、アイスランド、ノルウェー、シンガポール、スペイン、スウェーデン、英国、ヨーロッパにおいて、「エキスパートソリューション（ｅｘｐｅｒｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」の要求）。
【０６５２】
したがって、ヨーロッパに関しては、出願人は、寄託された生物学的材料が、ＥＰＣ規則２８（３）において規定されるように、特許を付与する旨の告示が公表されるまで、または特許出願が拒絶され、取り下げられ、もしくは取り下げられたものとみなされる場合には出願の日から２０年間、試料の請求人により指名された専門家に試料を分譲することによってのみ入手可能となされる（ＥＰＣ規則２８（４））ことを要求する。
【０６５３】
【数６】
2015134813.tif 000016
【０６５４】
【数７】
2015134813.tif 000017
出願人整理番号：４８  ６０２  Ｋ
受託番号ＤＳＭ  １８７２６についての、ＰＣＴ／ＲＯ／１３４様式に基づくさらなる表示
出願人はここにおいて、個々の規定を有する国に対して、本願において言及されている寄託された生物学的材料の試料の供与は、無関係の、指名された専門家に対してのみなさ得ることを要求する（適用可能な場合、特にオーストラリア、カナダ、クロアチア、デンマーク、フィンランド、ドイツ、アイスランド、ノルウェー、シンガポール、スペイン、スウェーデン、英国、ヨーロッパにおいて、「エキスパートソリューション（ｅｘｐｅｒｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」の要求）。
【０６５５】
したがって、ヨーロッパに関しては、出願人は、寄託された生物学的材料が、ＥＰＣ規則２８（３）において規定されるように、特許を付与する旨の告示が公表されるまで、または特許出願が拒絶され、取り下げられ、もしくは取り下げられたものとみなされる場合には出願の日から２０年間、試料の請求人により指名された専門家に試料を分譲することによってのみ入手可能となされる（ＥＰＣ規則２８（４））ことを要求する。
【０６５６】
【数８】
2015134813.tif 000018
【０６５７】
【数９】
2015134813.tif 000019
出願人整理番号：４８  ６０２  Ｋ
受託番号ＤＳＭ  １８７２７についての、ＰＣＴ／ＲＯ／１３４様式に基づくさらなる表示
出願人はここにおいて、個々の規定を有する国に対して、本願において言及されている寄託された生物学的材料の試料の供与は、無関係の、指名された専門家に対してのみなさ得ることを要求する（適用可能な場合、特にオーストラリア、カナダ、クロアチア、デンマーク、フィンランド、ドイツ、アイスランド、ノルウェー、シンガポール、スペイン、スウェーデン、英国、ヨーロッパにおいて、「エキスパートソリューション（ｅｘｐｅｒｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」の要求）。
【０６５８】
したがって、ヨーロッパに関しては、出願人は、寄託された生物学的材料が、ＥＰＣ規則２８（３）において規定されるように、特許を付与する旨の告示が公表されるまで、または特許出願が拒絶され、取り下げられ、もしくは取り下げられたものとみなされる場合には出願の日から２０年間、試料の請求人により指名された専門家に試料を分譲することによってのみ入手可能となされる（ＥＰＣ規則２８（４））ことを要求する。
【０６５９】
【数１０】
2015134813.tif 000020
【０６６０】
【数１１】
2015134813.tif 000021
出願人整理番号：４８  ６０２  Ｋ
受託番号ＤＳＭ  １８７２８についての、ＰＣＴ／ＲＯ／１３４様式に基づくさらなる表示
出願人はここにおいて、個々の規定を有する国に対して、本願において言及されている寄託された生物学的材料の試料の供与は、無関係の、指名された専門家に対してのみなさ得ることを要求する（適用可能な場合、特にオーストラリア、カナダ、クロアチア、デンマーク、フィンランド、ドイツ、アイスランド、ノルウェー、シンガポール、スペイン、スウェーデン、英国、ヨーロッパにおいて、「エキスパートソリューション（ｅｘｐｅｒｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」の要求）。
【０６６１】
したがって、ヨーロッパに関しては、出願人は、寄託された生物学的材料が、ＥＰＣ規則２８（３）において規定されるように、特許を付与する旨の告示が公表されるまで、または特許出願が拒絶され、取り下げられ、もしくは取り下げられたものとみなされる場合には出願の日から２０年間、試料の請求人により指名された専門家に試料を分譲することによってのみ入手可能となされる（ＥＰＣ規則２８（４））ことを要求する。
【０６６２】
【数１２】
2015134813.tif 000022
【図１】
2015134813.tif 000023
【図２】
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【図３】
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【図３ａ】
2015134813.tif 000026
【図４】
2015134813.tif 000027
【図５】
2015134813.tif 000028
【図６】
2015134813.tif 000029
【図７】
2015134813.tif 000030
【図８】
2015134813.tif 000031
【図９】
2015134813.tif 000032
【図１０】
2015134813.tif 000033
【図１１−１】
2015134813.tif 000034
【図１１−２】
2015134813.tif 000035
【図１１−３】
2015134813.tif 000036
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2015134813.tif 000040
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９−１】
2015134813.tif 000044
【図１９−２】
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【図２０】
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【図２１】
2015134813.tif 000047
【図２２−１】
2015134813.tif 000048
【図２２−２】
2015134813.tif 000049
【図２３】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2015134813000001.pdf