(57)【要約】      （修正有）【課題】レニンで活性化されたアンギオテンシン系に関連した身体的障害、好ましくは高血圧および高血圧関連血管疾病を予防および／または治療するために用いられるワクチン。【解決手段】薬学的に許容できる担体に結合したペプチドを含んでなるワクチンであって、該ペプチドはアミノ酸配列(X1)m(X2)n(X3)oX4X5HPX6を有し、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用であり、式中、X1はGまたはDであり；X2はA、P、M、GまたはRであり；X3はG、A、HまたはVであり；X4はS、A、DまたはYであり、X5はA、D、H、S、NまたはIであり、X6はA、LまたはFであり；ここでm、nおよびoは、oが0のときはmおよびnは0であり、nが0のときはmが0であるとの前提の下で、独立に0または1であり、但し、ペプチドはDRVYIHPFではない、ワクチン。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容できる担体に結合したペプチドを含んでなるワクチンであって、該ペプチドはアミノ酸配列：
(X1)m (X2)n (X3)o X4 X5 H P X6 (式I)
を有し、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用であり、
式I中、
X1はGまたはDであり、
X2はA、P、M、GまたはRであり、
X3はG、A、HまたはVであり、
X4はS、A、DまたはYであり、
X5はA、D、H、S、NまたはIであり、
X6はA、LまたはFであり、
ここで、m、nおよびoは、oが0のときはmおよびnは0であり、nが0のときはmが0であるとの前提の下で、独立に0または1であり、但し、ペプチドはDRVYIHPFではない、ワクチン。
【請求項２】
ペプチドが、 
GRVYIHPF、DPVYIHPF、DMVYIHPF、DGVYIHPF、DAVYIHPF、DRGYIHPF、DRAYIHPF、DRHYIHPF、DRVAIHPF、DRVSIHPF、DRVDIHPF、DRVYAHPF、DRVYNHPF、DRVYDHPF、DRVYHHPF、DRVYSHPF、DRVYIHPA、DRVYIHPL、DAAYIHPF、DRAAIHPF、DRVAAHPF、DRAYAHPF、DRAAAHPF、DAAAIHPF、DAGYIHPF、DAHYIHPF、DPGYIHPF、DPAYIHPF、DMGYIHPF、DMAYIHPF、DMHYIHPF、DGGYIHPF、DGAYIHPF、DGHYIHPF、DPVAIHPF、DMVAIHPF、DMVSIHPF、DRGAIHPF、DRHAIHPF、DRGYAHPF、DRGYDHPF、DRGYHHPF、DRGYSHPF、DRGYNHPF、DRAYDHPF、DRAYHHPF、DRAYSHPF、DRAYNHPF、DRHYAHPF、DRHYSHPF、DRHYNHPF、DRHYDHPF、DRHYHHPF、DRGADHPF、DRVAHHPF、DRHADHPF、GRGAIHPF、DPGAIHPF、DPGSIHPF、DMGAIHPF、DMGSIHPF、GPGYIHPF、GPGSIHPF、GMGSIHPF、DRGSIHPF、DPHAIHPF、DMHAIHPF、GPHAIHPF、GMHSIHPF、PVYIHPF、MVYIHPF、GVYIHPF、
AVYIHPF、RGYIHPF、RAYIHPF、RHYIHPF、RVAIHPF、RVSIHPF、RVDIHPF、RVYAHPF、RVYNHPF、RVYDHPF、RVYHHPF、RVYSHPF、RVYIHPA、RVYIHPL、AAYIHPF、RAAIHPF、RVAAHPF、
RAYAHPF、RAAAHPF、AAAIHPF、AGYIHPF、AHYIHPF、PGYIHPF、PAYIHPF、MGYIHPF、MAYIHPF、MHYIHPF、GGYIHPF、GAYIHPF、GHYIHPF、PVAIHPF、PVSIHPF、MVAIHPF、MVSIHPF、
RGAIHPF、RHAI-HPF、RGYAHPF、RGYDHPF、RGYHHPF、RGYSHPF、RGYNHPF、RAYDHPF、RAYHHPF、RAYSHPF、RA-YNHPF、RHYAHPF、RHYSHPF、RHYNHPF、RHYDHPF、RHYHHPF、RGADHPF、
RGAHHPF、RHADHPF、RHSIHPF、PGAIHPF、RHAIHPF、PGSIHPF、MGAIHPF、MGSIHPF、RGSIHPF、PHAIHPF、MHAIHPF、PHSIHPF、MHSIHPF、GYIHPF、AYIHPF、HYIHPF、VYAHPF、VYNHPF、
VYDHPF、VYHHPF、VYSH-PF、VYIHPA、VYIHPL、AAIHPF、AYAHPF、HYIHPF、GAIHPF、HAIHPF、GYAHPF、GYDHPF、GYH-HPF、GYSHPF、GYNHPF、AYDHPF、AYHHPF、AYSHPF、AYNHPF、
HYAHPF、HYSHPF、HYNHPF、HY-DHPF、HYHHPF、GAIHPF、HSIHPF、GSIHPF、HAIHPF、AIHPF、SIHPF、DIHPF、YAHPF、YNHPF、YDHPF、YHHPFおよびYSHPFからなる群から選択されたことを特徴とする、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
少なくとも１つのシステイン残基が式Iによるアミノ酸配列のＮ末端に結合していることを特徴とする、請求項１または２に記載のワクチン。
【請求項４】
担体が蛋白質担体であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１つに記載のワクチン。
【請求項５】
蛋白質担体がスカシガイ・ヘモシアニン（KLH）、破傷風トキソイド（TT）またはジフテリアトキソイド（DT）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項４に記載のワクチン。
【請求項６】
化合物がアジュバントと共に製剤化されること、特にミョウバンに吸着されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１つに記載のワクチン。
【請求項７】
レニンで活性化されたアンギオテンシン系が、高血圧、卒中、梗塞、肝不全、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化、血管障害、網膜出血および自己免疫疾患、好ましくは多発性硬化症からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１つに記載のワクチン。
【請求項８】
レニンで活性化されたアンギオテンシン系、好ましくは高血圧および高血圧関連疾患と関連した身体的障害を治療および／または予防するためのワクチンの製造のための、請求項１〜６のいずれか１つで定義された蛋白質の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学、免疫学、分子生物学およびウイルス学の分野に於いて、好ましくはレニンで活性化されたアンギオテンシン系に関連した身体的障害、好ましくは高血圧および高血圧関連血管疾病（CVD）を予防および／または治療するために用いられる薬物に関する。
【背景技術】
【０００２】
レニン・アンギオテンシン系（RAS）は、レニン・アンギオテンシン・アルドステロン系（RAAS）としても知られているが、RASは身体の異なる複数の生理学プロセスを調節するホルモン系である。RAS活性は、蛋白質アンギオテンシノーゲンを酵素レニンによりデカペプチドのアンギオテンシンI（Ang I）へ開裂することから始まる。レニン系の重要な生成物はオクタペプチドホルモンであるアンギオテンシンII（Ang II）であり、Ang II はアンギオテンシン変換酵素（ACE）によってAng Iから形成される。RASは、容量調節および血圧維持に重要な役割を果たす。しかしながら、レニン系の過剰活動は高血圧および対象器官損傷と関連する。
【０００３】
近年、レギン・アンギオテンシン系 (RAS)が、血圧調節および塩−水バランスに於けるその古典的役割を越えてかなり拡大していることが明らかになってきた。心臓血管および腎臓の組織の生理学的および病態生理学的プロセスを調節することに加えて、RASは、脳、内分泌腺、感覚器官、脂肪および免疫細胞を含む幾つかの追加的組織に対して作用していることが記述されてきた。この様に、RASはこれらの組織の生理学的および病態生理学的プロセスにも同様に重要な役目を果たしている。
【０００４】
RASの生理学的および病態生理学的な意味合いは極端に広いことから、RASをターゲットにした薬物療法は、高血圧、心不全および糖尿病性腎症の様な心臓血管疾患および腎臓疾患の治療における主要な臨床的手段となった。さらに、RASを遮断することは高血圧と連結した心臓血管疾患に影響するだけでなく、アテローム性動脈硬化症などの炎症プロセスとリンクする心臓血管事象をもまた減少させ得ることを、複数の異なる研究は示している。これらの基礎研究および動物実験は、アテローム性動脈硬化症的プラークの広がりおよび心臓リモデリングを直接引き起こす炎症性メディエータとしてのアンギオテンシンIIを強く支持する。
【０００５】
加えて、RASは、アテローム性動脈硬化症のみならず、多発性硬化症などの自己免疫疾患についても、その炎症的側面に対して中心的である様に見える。
【０００６】
さらに、レギン・アンギオテンシン系の遮断は初発糖尿病の発症を減らし、糖尿病合併症の危険を減らすことを示唆する証拠がある。他の研究では、インシュリン抵抗性の広がりおよびその糖尿病への関与につながるAng IIの効果の概観を提供している。レギン・アンギオテンシン系の構成要素は、インシュリン作用並びに代謝疾患の発達および進行と複雑な相互作用を持つ。
【０００７】
〈RAS、炎症性障害および自己免疫疾患（アテローム性動脈硬化症および多発性硬化症）〉
アテローム性動脈硬化症は慢性の炎症性疾患であり、血管細胞、免疫系および幾つかの器官を含む。白血球、内皮および平滑筋細胞がアテローム性動脈硬化症的炎症において重要な役割を果たすことが示されてきたが、最近の証拠はまた、炎症プロセスを変調することが判明した因子であるサイトカインおよびケモカインに対する直接的活性をも支持する。最近の研究は今や、ペプチドホルモン・アンギオテンシンIIに対する新たな炎症活性を示唆している。レギン・アンギオテンシン系は炎症の促進に重要な役割を果たす。と云うのも、アンギオテンシンIIはアテローム性動脈硬化促進的サイトカイン分泌を誘発し、内分泌機能障害を増加するからである。アンギオテンシンIIは、サイトカイン、ケモカインおよび成長因子の動脈管壁内分泌を調節するのみならず、接着分子（VCAM-1、ICAM-1、P-セレクチン）の発現をも調節する。これに加えて、レギン・アンギオテンシン系はアテローム性動脈硬化症および腎臓障害の双方に於いて、補体系の活性化を調節することができることが示された。この炎症性カスケードは、血管内膜への炎症細胞動員を増加することによって血管炎症応答を活性化する。動員された細胞はアンギオテンシンIIを生産することができ、正のフィードバック応答を生み出す結果となり、こうして炎症性悪循環を維持することができる。
【０００８】
多発性硬化症（MS）のような慢性の炎症疾患およびヒトの慢性疾患全ての中で最も一般的なもの、アテローム性動脈硬化症、の間の交差部分はそれらの名称間で共通の“硬化症”のルーツを遙かに遠く越えているかも知れないことを、異なる複数の刊行物が最近示した。それらの刊行物は、多発性硬化症 (MS) およびその動物モデル、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)、によって例示される自己免疫において、RASもまた主要な役割を果たしていることを示した。著者は、MSと云う脳損傷においてRASがアップレギュレートされることを、プロテオミックスを用いて観察した。ACE 阻害剤によるアンギオテンシンII生産遮断またはアンギオテンシンII受容体遮断剤によるアンギオテンシンII信号伝達の阻害は、自己反応性TH1およびTH17細胞を抑制し、抗原特異的な CD4_FoxP3_調節T細胞（Treg 細胞）を促進した。ACE阻害剤による治療は、麻痺性EAEを逆転する十分な性能を持った豊富なCD4_FoxP3_T細胞を誘導する。従って、RASの修飾はヒトの自己免疫疾患への適用に対する魅力的な治療戦略であると著者は結論づけた。
【０００９】
〈RASおよび心臓血管疾病 - 高血圧〉
心臓血管疾病(CVD)は、世界中において死亡の主要原因である。世界保健機関(WHO)によれば、全世界で死亡のほぼ30%がCVDに起因すると云うことができる。CVDは心臓および血管の障害によって生じ、多様な症状を網羅する。これらは、心筋梗塞、梗塞、卒中、心不全および末期腎疾患を含む。CVDにとって最も行き渡っているリスクは、高血圧である。2000年に、世界の成人人口の１／４以上が高血圧を持っており、もし適切な対処が採られなければ、この数は引き続いて増加するであろう。
【００１０】
一般的に血液の高い圧力と呼ばれる高血圧は、140 mmHg以上の収縮期血圧および／または90 mmHg以上の拡張期血圧を有する慢性的に高められた血液の圧力として定義される。“高血圧の予防、検出、評価および治療についての合同国内委員会（Joint National Committee on Prevention, Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Pressure）”によって定義された指針は、120および139 mmHgの間の収縮期血圧および／または80および89 mmHgの間の拡張期血圧を持ったヒトは、前高血圧症と見なされるべきであり、CVDを予防するために健康を増進する様な変化が要求されることを示唆する。従って、血圧降下はCVDを予防するための重要な戦略である。第１段階として、血圧降下は、不健康な食事、身体的不活発および喫煙のような主要な因子を標的にしたライフスタイルの変化によって達成することができる。しかしながら、本態性高血圧の治療は特別の療法を要する。血圧の重要な調節役は、治療介入の魅力的な標的になってきたレギン・アンギオテンシン系(RAS)である。従って、RASの構成要素に具体的に作用する医薬が高血圧の治療において重要な臨床手段となってきた。
【００１１】
RAS経路は、レニンによるアンギオテンシノーゲンの開裂に始まるカスケードである。テニンは第一に腎臓の傍糸球体細胞の顆粒中で合成され貯蔵されるアスパルチル・ペプチド加水分解酵素であって、アンジオテンシノーゲンに対する高い基質特異性を有する。アンギオテンシノーゲンは肝細胞により主に生産され、循環系中に構成成分として分泌される。アンギオテンシノーゲンは、レニンによってN末端で開裂されてデカペプチド・アンギオテンシンI (Ang I；1〜10 ペプチド)を形成し、Ang Iは直ちに、生物学的に活性なオクタペプチド・アンギオテンシンII (Ang II；1〜8 ペプチド)に転換される。Ang IIと対照的に、Ang Iは何ら生物学的活性を持たない様に見え、専らAng IIへの前駆体としてのみ存在する。Ang I の開裂は基本的に、しかし専らではなく、アンギオテンシン変換酵素 (ACE)によって仲介される。この膜結合メタロプロティナーゼは肺の血管上皮上に見いだされる内皮細胞の表面に高い濃度で発現する。ACEの他にキマーゼがAng IIを生産することが示された。Ang IIはまた、トニンおよびカプテシンなどの酵素によってもアンギオテンシノーゲンから直接発生させることができる。加えて、他のAng I- およびAng II-誘導体、機能性ペプチド、は循環中にも見いだすことができる。これらはアミノ-、カルボキシ- または エンド-ペプチダーゼによって産生され、Ang(1-9)、Ang(1-7)、Ang III (2-8 ペプチド) およびAng IV (3-8 ペプチド)を含む。アンギオテンシン変換酵素II (ACE2)として知られるカルボキシペプチダーゼは、Ang Iと同様にAng IIにも作用する。ACE2はAng IからAng1-9を産生し、Ang IIからAng1-7を産生する。Ang1-9は次に、 ACEによってAng1-7へさらに変換することができる。血圧を高め、および高血圧症における血管リモデリングの主要なメディエータであると思われるAng IIとは対照的に、Ang1-7 ペプチドは血管拡張を促進し、それによって、Ang IIの潜在的に有害な作用を中和することができる。ペプチドAng1-7は、その受容体を通してマス腫瘍遺伝子産生物 （mass oncogen product）(MAS)に作用する。
【００１２】
Ang IIおよびAng 1-7はRASの主要なエフェクターペプチドと考えられ、一方、Ang IIIおよびAng IVはより低い活性 (Ang IIの活性の概ね40%)を有する。Ang IIの作用は、Ang II受容体と称される2つの7回膜貫通型受容体、タイプ 1 (AT1; 1aおよび1bのサブタイプ)ならびにタイプ 2 (AT2)、によって主に仲介される。AT1およびAT2サブタイプは、Ang IIを同様に結合するが、異なる細胞内局在化を有しており、種々の組織内に異なって発現する。Ang II 高血圧症作用の大部分は、AT1受容体に起因する。
【００１３】
全身を通して、Ang IIは強力な血管収縮剤である。腎臓において、Ang IIは糸球体細動脈を収縮させ、それによって全身の動脈血圧を高め、血流を減少させる。副腎皮質において、Ang IIはアルドステロンの放出を引き起こし、次に、腎臓中の細管が尿からより多くのナトリウムおよび水を再吸収するようにする。Ang IIはまた、中枢神経系にも作用してヒトの塩に対する欲求を増加させ、および喉が渇いたと感じさせる。加えて、Ang IIは抗利尿ホルモン(ADH)の放出を促す。
【００１４】
RASの構成要素の古典的役割は、血圧および電解質と同様に流体バランスを維持するために、内分泌因子として作用することである。このRAS循環に加えて、局所的なアンギオテンシン発生カスケードが幾つかの組織に存在する。所謂、組織RASは、パラクリンおよび／またはオートクリン因子として局所的に作用することができ、全体としてまた部分的に、循環している相方とは独立に機能することができる。
【００１５】
現在、幾つかの薬物が高血圧治療用に市販されている。これらは、例えば利尿剤およびカルシウムチャネル遮断剤を包含し、RASの構成要素を具体的に標的とした多数の医薬を含有する。後者は、ACEの活性部位に結合することによって、ならびに酵素が基質に結合しおよび開裂する能力を阻止することによって作用するACE阻害剤を含有する。特徴的なACE阻害剤の副作用は、空咳および初回投与低血圧／血管神経性浮腫である。RASを標的とする他のクラスの医薬は、アンギオテンシン受容体 (AT1)ブロッカー (ARBs)である。ARBsは、アンギオテンシンIIのAT1受容体への結合を遮断することによって、Ang IIの機能を特異的に阻害する。近年、RASを標的とする新規化合物、即ち、レニンを阻害する薬物、アリスケリン（Aliskerin）が市場に現れた。 
【００１６】
当該分野において、Ang IIより高いAT1受容体結合親和性を示すAng II拮抗剤の使用もまた示唆されている。文献WO 2005/044313 Aには、心臓疾患の治療に用いることができる化合物が開示されており、該疾患は線維症およびアテローム性動脈硬化症と関係する。WO 2005/044313 Aに開示された化合物は、一般式 X1X2VYIHPX3 を有するオクタペプチドを含んでなり、式中、X1 はいかなるアミノ酸残基であってよく、X2 はアルギニンまたはN-アルキル化アルギニンまたはアルギニン模倣体であってよく、およびX3 は疎水性測鎖を含むアミノ酸残基であってよい。これらの化合物は、AT1受容体に対して、アンギオテンシンIIよりも高い結合親和性を有する（拮抗作用的活性）。
【００１７】
GB 2001653 Aには、アンギオテンシンIIから誘導され、一般式XRVYIHPYを有する化合物が開示されており、式中、X はα-アミノオキシ脂肪族アシル基を表し、Yはロイシン、イソロイシン、アラニンまたはトレオニンであってよい。その様な化合物は、腎性高血圧の治療に用いることができる。
【００１８】
WO 2002/087504 A、WO 2001/043761 A、 WO 2001/098325 AおよびWO 2000/002905 Aは、アンギオテンシンII類縁体として機能する化合物を提供する。
【００１９】
市場では高血圧を治療する異なる薬物類が入手可能であるが、高血圧は依然として不適切に処置されたままになっている。粗末な全体治療の幸運が、高血圧の無症候性という点にある一方、他方では、該幸運が、少なくとも１日に１回の自己投与を要する薬物療法での長期間治療の必要性という点にある。 
【００２０】
最近、能動免疫療法が、高血圧およびその関連疾病を治療する潜在的な新戦略として関心を増しつつある。
【００２１】
高血圧治療のための RASの構成要素に対する予防接種（ワクチン接種: vaccination）の実行可能性が異なる複数の動物モデルにおいて示された (Michel-JB et al., Am Heart J. 1989; 117:756)。最初の一つのアプローチにおいて、レニンに対する予防接種が血圧を低下させるために有効であることが示された。しかしながら、動物が自己免疫性腎炎に罹患し始めたことから、このアプローチはその後の年月で追求されなかった(Michel-JB et al., Circulation. 1990; 81(6):1899-910)。他のアプローチは、ACEおよびAT1Rの様な、細胞表面の膜貫通蛋白質として発現するRASの構成要素に対する免疫応答の誘導を狙って行われた。幾つかの研究グループが、AT1Rに対する能動免疫化を研究した。幾つかの研究は、AT1RのN末端に対する抗体が自発性高血圧ラットにおける高血圧の発達を弱めることができることを報告しているが、大部分のアプローチは血圧に対する大きな効果を得なかった。ACEに対する能動免疫化についてのデータは非常に限られている。一つの報告はウサギの予防接種を記述しているが、しかし、50動物中わずか１体が検知し得るACE抗体を形成したに止まった(Soffer-RL et al., Fed. Proc. 1983; 42(19):2735-9)。アンギオテンシノーゲンに対する能動免疫化について入手可能な報告は無いが、幾つかの研究がアンギオテンシンIおよびアンギオテンシンIIに対する予防接種の実現可能性を開拓した。
【００２２】
担体蛋白質（例えば、スカシガイ・ヘモシアニン（KLH））に共役したAng Iでの予防接種は、高度に抗原特異的な体液性免疫応答を誘発するに至った。異なる動物モデルを用いての実験設定において、(i) 該抗体は、ウエスタンブロット分析で明らかにされたように、アンギオテンシンIに対して結合することができたこと、および (ii)血圧が著しく減少し、RASに対するアンギオテンシンの効果が遮断されたことを示していることから、アンギオテンシンIに対する予防接種で誘発された抗体は機能性を有する様に見えた(Downham et al., Br J Clin Pharmacol. 2003; 56:505-12.)。それとは対照的に、健常人ボランティアにおいては、血圧低下効果は見られなかった (Downham et al., 2003)。この発見はさらに、KLHに共有結合で結合し、ミョウバンに吸着されたAng Iの12アミノ酸類縁体で治療された高血圧患者での研究で確かめられた（PMD3117として参照する）（Brown et al., Clin Sci. 2004; 107:167-73）。重要なことは、この治療レジメンがよく耐性があって長持ちして、抗原特異的な体液性免疫応答を誘発した点である。加えて、この治療は、レニンおよびアルドステロン水準の変化として検出されたレニン系に対する効果を示した。しかしながら、PMD3117での予防接種は、プラセボ対照群との比較において、血圧に何の影響も示さなかった(Brown et al., 2004)。それとは対照的に、プロテリックス（Protherics）によって開発され、ミョウバンを新規なアジュバント、即ち、共ワクチンHT（登録商標）で置換されたこのAng Iワクチンの僅かに異なるさらなる発達が効果を示した。この新ワクチン製剤の投与が前臨床設定おいて、抗アンギオテンシン抗体力価で10倍の増加を来し、ならびに、健常人被験者は収縮期および拡張期の血圧に変化を示した。しかしながら、血圧はほんの僅かに減少したのみで、しかも安静時のみであり、より重要になる活動期の間ではなかった。 
【００２３】
RASを遮断することができる抗体を誘導しようとする他のアプローチは、アンギオテンシンIIから誘導されたペプチドを抗原として用いた。Ang II-担体蛋白質共役物の注射が血圧低下の結果を来さなかった先行する研究とは対照的に、ウイルス様粒子(VLP)と共役したAng IIでの予防接種は、高度に抗アンギオテンシン特異的な体液性免疫応答を誘発するに至り、このことは血圧の統計的に意味のある減少と平行していた(Ambuehl et al., J Hypertension. 2007;25:63-72.)。最近の臨床研究においては、しかしながら、この血圧低下効果が、ウイルス様粒子と共役したアンギオテンシンIIを用いた予防接種後に観察することができなかった。このことは、このペプチドワクチンによって誘発された体液性免疫応答が、最適または十分ではなかったかもしれないことを示唆している。従って当分野においては、アンギオテンシンペプチドを標的とする、新規でより有効なワクチンを提供する必要性が残っている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
RASによって引き起こされたアンギオテンシンIIの高められたレベルと関連した状態を予防し治療するための、ワクチンに基づいた薬物療法を提供することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
薬学的に許容できる担体に結合したペプチドを含んでなるワクチンであって、該ペプチドはアミノ酸配列：
(X1)m (X2)n (X3)o X4 X5 H P X6   (式I)
を有し、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用であり、
式I中、
X1はGまたはDであり、
X2はA、P、M、GまたはRであり、
X3はG、A、HまたはVであり、
X4はS、A、DまたはYであり、
X5はA、D、H、S、NまたはIであり、
X6はA、LまたはFであり、
ここで、m、nおよびoは、oが0のときはmおよびnは0であり、nが0のときはmが0であるとの前提の下で、独立に0または1であり、但し、該ペプチドはDRVYIHPFではないワクチンが、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連する身体的障害を治療しおよび／または予防するために適切に使用できることが判明した。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの1位に対する蛋白質変異体（variants）の免疫原性を示す。
【図２】図２は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの2位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図３】図３は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの3位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図４】図４は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの4位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図５】図５は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの5位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図６】図６は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの6位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図７】図７は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの7位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図８】図８は、Ang II ペプチドCDRVYIHPFの8位に対する蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図９】図９は、2個以上のアミノ酸がアラニンで置換された蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図１０】図１０は、3個のアミノ酸が異なる位置に於いて、これらの位置に好適なアミノ酸置換基を用いて置換された蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図１１】図１１は、2〜4個のアミノ酸が異なる位置に於いて、これらの位置に好適なアミノ酸置換基を用いて置換された蛋白質変異体の免疫原性を示す。
【図１２】図１２は、最初のN末端アミノ酸を欠く切断されたアンギオテンシンVARIOTOPE型（version）の免疫原性を示す。
【図１３】図１３は、最初の2または3個のN末端アミノ酸を欠く切断されたアンギオテンシンVARIOTOPE型の免疫原性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
式Iのアミノ酸配列を有するペプチドがレニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用に用いることができるのみならず、式IIおよびIIIのアミノ酸配列を有するペプチドもまた用いることができる。従って、本発明の他の側面は薬学的に許容できる担体に結合したペプチドを含んでなるワクチンであって、該ペプチドはアミノ酸配列：
(X1)m (X2)n (X3)o X4 X5 X6 P X7 （式II）
を有し、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用であり、
式I中、
X1 はG、AまたはDであり、
X2 はA、P、M、GまたはRであり、
X3 はG、A、HまたはVであり、
X4 はS、A、DまたはYであり、
X5 はA、D、H、S、NまたはIであり、
X6 はYまたはHであり、
X7 はA、V、L、IまたはFであり、
ここで、oが0のときはmおよびnが0であり、およびnが0のときはmが0であるとの前提の下、m、nおよびoは独立に0または1であり、但し、該ペプチドはDRVYIHPFではない。
【００２８】
本発明の特に好ましい態様によれば、ワクチンはアミノ酸配列：
X1X2X3X4X5X6PX7    （式III）
を有するペプチドを含んでなり、該ペプチドはレニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害、好ましくは高血圧およびそれに関連した疾患の治療および／または予防に用いることができ、ここで、 
X1 はG、AまたはDであり、
X2 はA、P、M、GまたはRであり、
X3 はG、A、HまたはVであり、
X4 はS、A、DまたはYであり、
X5 はA、D、H、S、NまたはIであり、
X6 はYまたはHであり、
X7 はA、V、L、IまたはFであり、
但し、該ペプチドはDRVYIHPFではない。
【００２９】
本発明のワクチンは、担体蛋白質（または、T細胞エピトープを含む蛋白質）と結合して哺乳類に投与されたときに、アンギオテンシンIまたはアンギオテンシンIIに向けた抗体の生産を具体的に誘発することができる。式I〜IIIで概要が示されるペプチドは、Ang IよりもAng II を、より高い明確性をもって認識する抗体を誘発し得る。式I〜IIIで概要が示される配列を有し、およびHを有し、ならびにLをそのC末端に有するペプチド X1X2X3X4X5X6PX7HL（両方のアミノ酸ともAng Iから誘導される）を含んでなるワクチンは、例えば、Ang IIよりもAng I をより高い明確性をもって認識し得る抗体を誘発し得る。このことは、アンギオテンシンペプチドのただ一つの種を標的にするか、またはそれらの組合せを標的にするかの、具体的標的設定を可能とする。これらの抗体が該哺乳類のアンギオテンシン由来ペプチドに結合するが故に、アンギオテンシンペプチドの水準（level）は大きく影響され、従って、これらの免疫原は、RASまたは他のプロテアーゼ（例えば、キマーゼ）によって生産されるアンギオテンシンIIの高揚した水準と関連する症状（conditions）と戦うための免疫療法的戦略（又は、アプローチ）の中で用いることができる。分子活動様式の如何なる特別な理論に制限されることを意図することなしに、本発明のペプチド変異体（variants）は、１以上のアンギオテンシンペプチド種に結合する抗体を誘発することができる免疫原として活動し、かくして、アンギオテンシンペプチドの全ての関連する種を同時に中和するであろう。一方、誘発された抗体はアンギオテンシンIIのC末端に特異的に結合することができる。これらの条件下、誘発された抗体はさらに、アンギオテンシンIIがその受容体AT1Rに結合するのを遮断するであろう。 
【００３０】
式I〜IIIで特定されたアミノ酸残基は、上で示されたそれぞれのアミノ酸で交換することができる。その様な多様化によって得られるアミノ酸配列は、原初のアンギオテンシンII配列（DRVYIHPF）とは同一でない１、２、３、４、５、６または７個のアミノ酸残基を含んでいてよい。最も好ましい式I〜IIIは、アンギオテンシンII配列から少なくとも１、より好ましくは少なくとも２のアミノ酸残基が変化してよく、および最大７、好ましくは最大６、より好ましくは最大５、より好ましくは最大４、更により好ましくは最大３のアミノ酸残基が変化してよい。
【００３１】
上記で特定された式のペプチドはまた、５、６、７または８のアミノ酸残基（X1またはX2またはX3 から数えて末端のアミノ酸残基に至るまで）を含有してよい。
【００３２】
本発明によるペプチドは、5、6、7または8〜20、好ましくは、5、6、7または8〜15、特には、5、6、7、8または9のアミノ酸残基を持ったペプチドであってよい。本発明のペプチドはまた、300までの、好ましくは200までの、より好ましくは150までの、さらにより好ましくは100までのアミノ酸残基を持ったポリペプチドまたは蛋白質の部分であってよい。
【００３３】
本発明のペプチドは、自然発生的なアンギオテンシンII（DRVYIHPF）と同じではない。 本発明のワクチンは、アンギオテンシンペプチドに反応性を有するホストの中に免疫学的応答を引き出すであろう。 
【００３４】
本発明のペプチドは、単離されたペプチドまたは他のペプチドもしくはポリペプチドの一部分として、当該分野でよく知られた化学合成手法によって合成的に製造することができる。それに代えて、該ペプチドはペプチドを産生する微生物中で製造することができ、次いで単離され、所望の場合には更に精製される。ペプチド変異体は、細菌、酵母または真菌類の様な微生物中で、哺乳類または昆虫細胞のような真核細胞中で、または、アデノウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、バキュロウイルス、バクテリオファージ、シンドビルウイルスもしくはセンダイウイルスの様な組み換えウイルスベクター中で製造することができる。該化合物／ペプチドを製造するために適切な細菌は、大腸菌、枯草菌またはペプチドを発現することのできる如何なる他の細菌をも含む。該化合物／ペプチドを発現するための適切な酵母の型は、出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）、分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe）、カンジダ、メタノール資化酵母（Pichia pastoris）またはペプチドを発現することのできる他のいかなる酵母をも含む。対応する方法は当該分野でよく知られている。組換的に製造されたペプチドの単離および精製方法もまた当該分野でよく知られており、例えば、ゲルろ過、アフィニティクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ等を含む。
【００３５】
ペプチドの単離を促進するために、融合ポリペプチドが作成されてよく、ペプチドは並進的に融合され（共有結合され）て、アフィニティクロマトグラフィでの単離を可能とする異型のポリペプチドとなる。典型的な異型のポリペプチドは、His-Tag（例えば、His6; 6 ヒスチジン残基）、GST-Tag（グルタチオン-S-転移酵素）などである。融合ポリペプチドはペプチドの精製を容易にするのみならず該ペプチドの精製中における分解を防ぐこともある。もし、精製後に異型ポリペプチドを除去することが望ましいなら、融合ペプチドはペプチドおよび異型ポリペプチドの間の接合部に開裂サイトを含んでよい。開裂サイトは、そのサイトのアミノ酸配列に特異的な酵素（例えば、プロテアーゼ）で開裂されるアミノ酸配列からなる。
【００３６】
本明細書で用いられる“薬学的に許容される担体に結合したペプチド”および“担体に結合したペプチド”は、担体に融合した、または、共役したペプチドを指す。もし、本発明のペプチドが担体に融合または共役しているなら（例えば、カルボキシル、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、イミダゾリル、グアニジルまたはインドリル基経由で）、ペプチドおよび蛋白質担体の間にリンカーが存在してよい。
【００３７】
本発明の特に好ましい態様によれば、式Iの置換基は以下の様であってよい：
X1 はGまたはD、
X2 はG、R、A、PまたはM、
X3 はA、VまたはG、
X4 はY、AまたはS、
X5 はN、I、D、SまたはA および／または
X6 はF。
【００３８】
本発明の好ましい実施態様によれば、式Iから誘導されるペプチドは以下からなる群から選択される： GRVYIHPF、DPVYIHPF、DMVYIHPF、DGVYIHPF、DAVYIHPF、DRGYIHPF、DRAYIHPF、DRHYIHPF、DRVAIHPF、DRVSIHPF、DRVDIHPF、DRVYAHPF、DRVYNHPF、DRVYDHPF、DRVYHHPF、DRVYSHPF、DRVYIHPA、DRVYIHPL、DAAYIHPF、DRAAIHPF、DRVAAHPF、DRAYAHPF、DRAAAHPF、 DAAAIHPF、DAGYIHPF、DAHYIHPF、DPGYIHPF、DPAYIHPF、DMGYIHPF、DMAYIHPF、DMHYIHPF、DGGYIHPF、DGAYIHPF、DGHYIHPF、DPVAIHPF、 DMVAIHPF、DMVSIHPF、DRGAIHPF、DRHAIHPF、DRGYAHPF、DRGYDHPF、DRGYHHPF、DRGYSHPF、DRGYNHPF、DRAYDHPF、DRAYHHPF、DRAYSHPF、DRAYNHPF、DRHYAHPF、DRHYSHPF、DRHYNHPF、DRHYDHPF、DRHYHHPF、 DRGADHPF、DRVAHHPF、DRHADHPF、GRGAIHPF、DPGAIHPF、DPGSIHPF、DMGAIHPF、DMGSIHPF、GPGYIHPF、GPGSIHPF、GMGSIHPF、DRGSIHPF、DPHAIHPF、DMHAIHPF、GPHAIHPF、GMHSIHPF、PVYIHPF、MVYIHPF、GVYIHPF、AVYIHPF、RGYIHPF、RAYIHPF、RHYIHPF、RVAIHPF、RVSIHPF、RVDIHPF、RVYAHPF、RVYNHPF、RVYDHPF、RVYHHPF、RVYSHPF、RVYIHPA、 RVYIHPL、AAYIHPF、RAAIHPF、RVAAHPF、RAYAHPF、RAAAHPF、AAAIHPF、 AGYIHPF、AHYIHPF、PGYIHPF、PAYIHPF、MGYIHPF、MAYIHPF、MHYIHPF、GGYIHPF、GAYIHPF、GHYIHPF、PVAIHPF、PVSIHPF、MVAIHPF、MVSIHPF、RGAIHPF、RHAIHPF、RGYAHPF、RGYDHPF、RGYHHPF、RGYSHPF、RGYNHPF、RAYDHPF、RAYHHPF、RAYSHPF、RAYNHPF、RHYAHPF、RHYSHPF、RHYNHPF、RHYDHPF、RHYHHPF、RGADHPF、RGAHHPF、 RHADHPF、RHSIHPF、 PGAIHPF、RHAIHPF、PGSIHPF、MGAIHPF、MGSIHPF、RGSIHPF、PHAIHPF、MHAIHPF、PHSIHPF、MHSIHPF、GYIHPF、AYIHPF、HYIHPF、VYAHPF、VYNHPF、VYDHPF、VYHHPF、VYSHPF、VYIHPA、VYIHPL、AAIHPF、AYAHPF、HYIHPF、GAIHPF、HAIHPF、GYAHPF、GYDHPF、GYHHPF、GYSHPF、GYNHPF、AYDHPF、AYHHPF、AYSHPF、AYNHPF、HYAHPF、HYSHPF、HYNHPF、HYDHPF、HYHHPF、GAIHPF、HSIHPF、GSIHPF、HAIHPF、AIHPF、SIHPF、DIHPF、YAHPF、YNHPF、YDHPF、YHHPFおよびYSHPF。
【００３９】
特に好ましいペプチドは以下の通りである：
DPVYIHPF、DMVYIHPF、DGVYIHPF、DAVYIHPF、DRGYIHPF、DRAYIHPF、DRHYIHPF、DRVAIHPF、DRVYAHPF、DRVYNHPF、DRVYDHPF、DRVYSHPF、DRVYIHPL、DAAYIHPF、DRAAIHPF、DRVAAHPF、DRAYAHPF、DAGYIHPF、DAHYIHPF、DPGYIHPF、DPAYIHPF、DMGYIHPF、DMAYIHPF、DMHYIHPF、DGGYIHPF、DGAYIHPF、DGHYIHPF、DMVSIHPF、DRGAIHPF、DRGYAHPF、DRGYDHPF、DRGYSHPF、DRGYNHPF、DRAYDHPF、DRAYSHPF、DRAYNHPF、DRHYAHPF、DRHYSHPF、DRHYNHPF、DRHYDHPF、GPGYIHPF、GPGSIHPF、DRGSIHPF、PVYIHPF、GVYIHPF、AVYIHPF、RGYIHPF、RAYIHPF、RHYIHPF、RVAIHPF、RVSIHPF、RVDIHPF、RVYAHPF、RVYNHPF、RVYDHPF、RVYSHPF、RVYIHPL、AAYIHPF、RAAIHPF、RVAAHPF、RAYAHPF、AGYIHPF、AHYIHPF、PGYIHPF、PAYIHPF、GGYIHPF、GAYIHPF、GHYIHPF、PVSIHPF、MVSIHPF、RGAIHPF、RGYAHPF、RGYDHPF、RGYSHPF、RGYNHPF、RAYDHPF、 RAYSHPF、RAYNHPF、RHYAHPF、RHYSHPF、RHYNHPF、RHYDHPF、RHSIHPF、PGAIHPF、RHAIHPF、PGSIHPF、MGAIHPF、MGSIHPF、MGYIHPF、RGSIHPF、PHAIHPF、MHAIHPF、PHSIHPF、MHSIHPF、GYIHPF、AYIHPF、VYAHPF、VYNHPF、VYDHPF、VYSHPF、AAIHPF、AYAHPF、HYIHPF、GAIHPF、GYAHPF、GYDHPF、GYSHPF、GYNHPF、AYDHPF、AYSHPF、AYNHPF、GAIHPFおよびGSIHPF。
【００４０】
さらにより好ましいペプチドは、DPVYIHPF、DMVYIHPF、DGVYIHPF、DAVYIHPF、DRGYIHPF、DRAYIHPF、DRHYIHPF、DRVYIHPL、DAAYIHPF、DRAAIHPF、DRVAAHPF、DRAYAHPF、DAGYIHPF、DAHYIHPF、DPGYIHPF、DPAYIHPF、DMGYIHPF、DMAYIHPF、DMHYIHPF、DGGYIHPF、DGAYIHPF、DGHYIHPF、DMVSIHPF、DRGAIHPF、DRGYAHPF、DRGYDHPF、DRGYSHPF、DRGYNHPF、DRAYDHPF、DRAYSHPF、DRAYNHPF、GPGYIHPF、 PVYIHPF、GVYIHPF、RGYIHPF、RAYIHPF、RVSIHPF、RVYIHPL、AAYIHPF、RAAIHPF、RAYAHPF、AGYIHPF、PGYIHPF、PAYIHPF、GAYIHPF、PVSIHPF、MVSIHPF、RGAIHPF、RGYAHPF、RGYSHPFおよびGYIHPFであり、ここで、最も好ましいペプチドは、DPVYIHPF、DMVYIHPF、DAAYIHPF、DRAAIHPF、DRAYAHPF、DAGYIHPF、DPGYIHPF、DGAYIHPF、DMVSIHPF、DRGAIHPF、DRGYDHPF、DRGYSHPF、PVYIHPF、GVYIHPF、AAYIHPF、RAAIHPF、RAYAHPF、PGYIHPF、PVSIHPF、MVSIHPFおよびRGAIHPFである。
【００４１】
本発明の好ましい態様によれば、
式IIおよびIIIのX1 はG、AまたはDであり、
式IIおよびIIIのX2 はG、A、P、MまたはRであり、
式IIおよびIIIのX3 はG、A、HまたはVであり、
式IIおよびIIIのX4 はS、A、DまたはYであり、
式IIおよびIIIのX5 はA、D、H、S、NまたはIであり、
式IIおよびIIIのX6 はYまたはHであり、
式IIおよびIIIのX7 はA、V、L、IまたはFである。
上記のアミノ酸残基は特に好ましい置換基である。
【００４２】
本発明のペプチドはN末端での切断を含んでよく、そのため、これらのペプチドは第１、第２および／または第３のアミノ酸残基を失う。
【００４３】
ペプチドは好ましくは以下からなる群から選択される：GRVYIHPF、DPVYIHPF、DMVYIHPF、DGVYIHPF、DAVYIHPF、DRGYIHPF、DRAYIHPF、DRHYIHPF、DRVAIHPF、DRVSIHPF、DRVDIHPF、DRVYAHPF、DRVYNHPF、DRVYDHPF、DRVYHHPF、DRVYSHPF、DRVYIYPF、DRVYIHPA、DRVYIHPV、DRVYIHPL、DRVYIHPI、DAAYIHPF、DRAAIHPF、DRVAAHPF、DRAYAHPF、DRAAAHPF、ARAAIHPF、ARVAAHPF、DAAAIHPF、DAAAAHPF、  DAVAAHPF、DAGYIHPF、DAHYIHPF、DPGYIHPF、DPAYIHPF、DMGYIHPF、DMAYIHPF、DMHYIHPF、DGGYIHPF、DGAYIHPF、DGHYIHPF、DPVAIHPF、DPVSIHPF、DMVAIHPF、DMVSIHPF、DRGAIHPF、DRHAIHPF、DRGYAHPF、DRGYDHPF、DRGYHHPF、DRGYSHPF、DRGYNHPF、DRAYDHPF、DRAYHHPF、DRAYSHPF、DRAYNHPF、DRHYAHPF、DRHYSHPF、DRHYNHPF、DRHYDHPF、DRHYHHPF、DRHYIYPF、DRGADHPF、DRGAHHPF、DRVAHHPF、DRHADHPF、GRGAIHPF、GRHSIHPF、GRHADYPF、DPGAIHPF、GRHAIHPF、DPGSIHPF、DMGAIHPF、DMGSIHPF、GPGYIHPF、GMGYIHPF、GPGSIHPF、GMGSIHPF、DRGSIHPF、DPHAIHPF、DMHAIHPF、GPHAIHPF、GMHAIHPF、GPHSIHPFおよびGMHSIHPF。
【００４４】
最初のN末端アミノ酸残基を失う切断型は好ましくは以下からなる群から選択される：PVYIHPF、MVYIHPF、GVYIHPF、AVYIHPF、RGYIHPF、RAYIHPF、RHYIHPF、RVAIHPF、RVSIHPF、RVDIHPF、RVYAHPF、RVYNHPF、RVYDHPF、RVYHHPF、RVYSHPF、RVYIYPF、RVYIHPA、RVYIHPV、RVYIHPL、RVYIHPI、AAYIHPF、RAAIHPF、RVAAHPF、RAYAHPF、RAAAHPF、RAAIHPF、RVAAHPF、AAAIHPF、AAAAHPF、AVAAHPF、AGYIHPF、AHYIHPF、PGYIHPF、PAYIHPF、MGYIHPF、MAYIHPF、MHYIHPF、GGYIHPF、GAYIHPF、GHYIHPF、PVAIHPF、PVSIHPF、MVAIHPF、MVSIHPF、RGAIHPF、RHAIHPF、RGYAHPF、RGYDHPF、RGYHHPF、RGYSHPF、RGYNHPF、RAYDHPF、RAYHHPF、RAYSHPF、RAYNHPF、RHYAHPF、RHYSHPF、RHYNHPF、RHYDHPF、RHYHHPF、RHYIYPF、RGADHPF、RGAHHPF、RVAHHPF、RHADHPF、RHSIHPF、RHADYPF、PGAIHPF、RHAIHPF、PGSIHPF、MGAIHPF、MGSIHPF、RGSIHPF、PHAIHPF、MHAIHPF、PHSIHPFおよびMHSIHPF。
【００４５】
最初の２つのN末端アミノ酸残基を失う切断型は好ましくは以下からなる群から選択される： GYIHPF、AYIHPF、HYIHPF、VAIHPF、VSIHPF、VDIHPF、VYAHPF、VYNHPF、VYDHPF、VYHHPF、VYSHPF、VYIYPF、VYIHPA、VYIHPV、VYIHPL、VYIHPI、AAIHPF、VAAHPF、AYAHPF、AAAHPF、HYIHPF、GAIHPF、HAIHPF、GYAHPF、GYDHPF、GYHHPF、GYSHPF、GYNHPF、AYDHPF、AYHHPF、AYSHPF、AYNHPF、HYAHPF、HYSHPF、HYNHPF、HYDHPF、HYHHPF、HYIYPF、GADHPF、 GAHHPF、VAHHPF、HADHPF、GAIHPF、HSIHPF、HADYPF、GSIHPFおよびHAIHPF。
【００４６】
最初の３つのN末端アミノ酸残基を失う切断型は好ましくは以下からなる群から選択される： AIHPF、SIHPF、DIHPF、YAHPF、YNHPF、YDHPF、YHHPF、YSHPF、YIYPF、YIHPA、YIHPV、YIHPL、YIHPI、AAHPF、ADHPF、AHHPFおよびADYPF。
【００４７】
本発明の好ましい態様によれば、少なくとも１つのシステイン残基が、式I、IIおよび／またはIIIならびに上述の全ての具体的ペプチドのアミノ酸配列のN末端に結合している。 
【００４８】
本発明のペプチドはさらに、そのN末端に少なくとも１つのシステインを含んでいてよい。このシステイン残基は、ペプチドを他の分子または担体に結合させるために反応性基として役立てることができる。例えば、この基はペプチドを担体蛋白質に結合させるために用いることができる。システイン残基はまた、本発明のペプチドのC末端に結合することもできる。
【００４９】
本発明のペプチドは担体、特に蛋白質担体に結合される。
【００５０】
哺乳類におけるアンギオテンシンペプチドに特有の抗体産生を促進するために、本発明の化合物は単体に結合される。
【００５１】
本発明の好ましい態様によれば、担体はスカシガイ・ヘモシアニン（KLH）、破傷風トキソイド（TT）またはジフテリアトキソイド（DT）またはT細胞エピトープを含む他のいかなる蛋白質もしくはペプチドからなる群から選択される。
【００５２】
本発明の好ましい態様によれば、ペプチドは、薬学的に許容できる担体、好ましくは、KLH （スカシガイ・ヘモシアニン）、破傷風トキソイド、アルブミン結合蛋白質、ウシ血清アルブミン、デンドリマー（MAP; Biol. Chem. 358: 581）、蛋白質リンカー（または、隣接領域)に連結しているのと同様に、Singh et al., Nat. Biotech. 17 (1999), 1075-1081 (特に、この文献の表１）に記載されたアジュバント基質、および O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9) (2003), 727-735 (特に、そこに記述された内因性の免疫増強性化合物および送達システム)に記載されたアジュバント基質またはそれらの混合物にも連結している。共役化学（例えば、 GMBSの様なヘテロ２官能性化合物、および、勿論、“Bioconjugate Techniques”, Greg T. Hermansonに記載されたような他の化合物経由の) は、この意味において当業者に知られた反応から選択することができる。さらに、ワクチン組成物は、アジュバント、好ましくは低溶解性アルミニウム組成物、特に水酸化アルミニウム、によって製剤化されてよい。勿論、MF59リン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、サイトカイン（例えば、IL-2、IL-12、GM-CSF）、サポニン（例えば、QS21）、MDP誘導体、CpGオリゴマー、LPS、MPL、ポロホスファゼン、エマルジョン（例えば、Freund's, SAF）、リポゾーム、ウイロゾーム、コクリエート（cochleates）、PLGマイクロ粒子、ポロキサマー粒子、ウイルス様粒子、易熱性エンテロトキシン（LT）、コレラトキソイド（CT）、ミュータントトキソイド（例えば、LTK63およびLTR72）、マイクロ粒子および／または重合リポゾームの様なアジュバントもまた使用できる
【００５３】
本発明の好ましい態様によれば、蛋白質はアジュバントによって製剤化され、好ましくは、ミョウバンに吸着させて製剤化される。
【００５４】
関連の態様において、本発明はRASに関連した疾病、障害または状態の治療または予防に有益であり、限定的ではないが、高血圧、卒中、梗塞、腎不全、うっ血性心不全、血管障害または網膜出血を含む。加えて、本発明の態様に含まれる蛋白質を用いる免疫化はアテローム性動脈硬化プラーク形成、動脈血栓症および血管炎症関連疾患の治療または予防に用いることができる。これに加えて、多発性硬化症のような自己免疫疾患の治療も本発明に含まれる蛋白質を用いて行うことができる
【００５５】
本発明のワクチンは皮下、筋肉内、皮膚内、静脈内に投与してよい（例えば、“Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations”, Sarfaraz Niazi, CRC Press Inc, 2004を参照のこと）。投与経路に応じて、薬物はそれぞれの担体、アジュバントおよび／または不活性添加剤を含有してよい。
【００５６】
本発明によるワクチンは、０．１  ｎｇ〜１０  ｍｇ、好ましくは１０  ｎｇ〜１  ｍｇ、特に１００  ｎｇ〜１００  μｇ、またはそれに代えて、例えば、１００  ｆｍｏｌ〜１０  μｍｏｌ、好ましくは１０  ｐｍｏｌ〜１  μｍｏｌ特に、１００  ｐｍｏｌ〜１００  ｎｍｏｌの量で本発明の化合物を含有する。本発明の化合物または蛋白質は用量当たり、好ましくは１００  ｎｇ〜１  ｍｇ、より好ましくは１  μｇ〜５００  μｇ、さらにより好ましくは１０  μｇ〜１００  μｇ、特に２０〜４０または３０  μｇの量で哺乳類に投与される。典型的には、ワクチンはまた、補助剤、例えば、緩衝剤、安定剤等を含んでよい
【００５７】
本発明のさらに他の側面は、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連する身体的障害、好ましくは高血圧および高血圧関連疾患を治療し予防するための本発明による蛋白質の使用に関する。
【００５８】
本発明で開示されたアミノ酸残基の略称はIUPAC勧告に従う:
【表１】
2015214552.tif 000002
【００５９】
本発明はさらに図および実施例で説明されるが、それらに限定されるものではない。
【００６０】
それぞれの図において、X軸上には指示された蛋白質で免疫された動物から誘導された血清が列挙されている。Y軸上には、誘引された血清の相対的力価が示されている。Ang II治療動物から誘導された力価が100%と設定された。力価は50%最大結合（half-maximal binding）（即ち、ODmax/2）を与える血清希釈として計算された。白棒は予防接種に用いられたペプチドに対する力価を示し、一方、黒棒はAng IIペプチドに対する力価を表す。
【実施例】
【００６１】
実施例１： Ang IIペプチドの位置走査
血圧制御RASの重要構成要素のアンギオテンシンII（Ang II）を予防接種研究手段の標的として選定した。従って、アンギオテンシンIIを標的とする体液性免疫応答を誘発することができるペプチドを同定し、選択した。
【００６２】
用語“位置走査（positional scanning）”とは、一定の蛋白質またはペプチド領域内のそれぞれの位置で系統的にアミノ酸（AA）残基を他のアミノ酸類（AAs）で置換する技術を云う。この技術は、蛋白質-蛋白質相互作用の研究、ペプチド-蛋白質相互作用の研究、および／またはペプチド若しくは蛋白質ドメインの機能性の研究に限ってのみ用いられおよび適用されてきた。
【００６３】
位置走査技術は今や、オクタペプチドAng II (DRVYIHPF)に対する適切な VARIOTOPEを特定するために、免疫学の分野に移転され、適用された。この実施例の目的は、Ang IIペプチドを標的とするポリクローン／オリゴクローン体液性免疫応答の誘発を支援し又は少なくとも阻害しない各位置に対するAAを特定するためであった。
【００６４】
従って、実験の最初のセットにおいて、Ang II配列の各位置を、類似の又は異なる特性を持つアミノ酸で系統的に置換した（2位に対する表1を参照のこと)。引き続き、全ての3個のペプチドを、付加的N末端システインを経由して蛋白質担体スカシガイ・ヘモシアニン（KLH）に化学的に結合して、アジュバントとしてのミョウバンと共にマウス（BALB/c）に投与した。予防接種したマウスからの血清を、指示されたペプチドの免疫原性を分析するために用いた。この目的のために、ペプチド基準のELISAアッセイを用いて注射されたペプチド（即ち、Ang II 蛋白質変異体、VARIOTOPE）に対する血清力価を明らかにし、同様に、Ang IIペプチドに対する得られた血清の結合能力を明らかにした。
【００６５】
表１．  2位におけるアミノ酸置換による蛋白質変異体
【表２】
2015214552.tif 000003
【００６６】
図（1位〜8位に対して図1〜8)に、これらの実験から得られた結果を示す。X軸上には、示されたペプチドで免疫化された動物から誘導された血清を列記する。Y軸上には、誘発された血清の力価を示す。Ang IIで治療された動物から誘導された力価を100%と設定した。力価は、50%最大結合（即ち、ODmax/2）を与える血清希釈として計算した。白棒は予防接種（vaccination）に用いられたペプチドに対する力価を示し、一方黒棒はAng IIペプチドに対する力価を表す。
【００６７】
1位に対する全ての試験したAng IIペプチド変異体は、注射されたペプチドに結合する抗体を誘発することが可能であって（図1）、アミノ酸交換はその免疫原性を完全には消去しないことを示しているが、幾つかのペプチド変異体は、かなり低い力価を示す血清を誘導した（芳香族アミノ酸交換を有するペプチド変異体）。これとは対照的に、1位にGを持つペプチド変異体は、注射されたペプチドに対して、Ang IIで治療された動物から誘導された血清力価の殆ど２倍ほど高い血清力価を誘発する能力を有するように見える。Ang IIに対する応答性はこの変異体を用いることで、おおよそ50%程増加した。A、T、E、N、RまたはHを最初の位置に含むペプチド変異体から誘導される血清はAng IIペプチドから誘導される血清から大きくは異なっていない。1位にあるL、F、Yの様な芳香族または脂肪族残基は、Ang IIを認識する免疫応答を誘発するためには余り有益でないように見える。
【００６８】
従って、1位は以下のAAを有してよい：
-原初のAAであるD
-アミノ酸 G、A 
- E、N、R、Hなどの極性アミノ酸
【００６９】
図2に概説したように、2位のアルギニンがPまたはMで置換されたペプチドを用いた免疫法は力価およびAng IIに対する応答性も増加させた。例えば、RをAへ、またはRをKへ置換したペプチドは、Ang IIペプチドで誘発された血清と同じ力価を示す血清を惹起した。これらの結果は、2位のRに代えてPまたはMは体液性免疫応答を誘発するためにより有益であることを示す。AおよびKは、例えば、Rと同様に良好に見える。 
【００７０】
2位は以下のAAを有してよい：
-原初のAAであるR
-非極性および中性AAであるP、M、GおよびA
-E、H、Kなどの極性アミノ酸。
【００７１】
3位は以下のAAを有してよい：
-原初のAAであるV
-AAであるGおよびH（最も有益である）
-非極性および中性AAの、例えばA
-脂肪族AA、例えばL
-E、H、Kの様な極性であるアミノ酸。
【００７２】
4位では、原初のAAであるYは、全てのAAによってその特性に関わりなく置換することができる。
【００７３】
芳香族AAであるYおよびW、ならびにAAであるPは、原初のAAである5位のIを置換することはできない。他の全てのAAはこの目的のために用いることができる。
【００７４】
6位のHが指示されたアミノ酸で置換されたペプチドから誘導された結果を図6に示す。芳香族アミノ酸Hを、他の芳香族アミノ酸、例えばWおよびYにより置換した結果は、予防接種に用いられたペプチドよりも一層よくAng IIを認識するように見える血清を誘発する能力を有するペプチドを生成した。6位に非芳香族アミノ酸置換を持つペプチドでは、惹起された血清のAng IIに対する応答性はかなり減少した（60%まで）。これらの結果は 6位には芳香族アミノ酸（但し、Fではなく）を据えることができることを示す。
【００７５】
6位は以下のAAを有してよい：
-原初のAAでああるH
-Y、Wの様な芳香族側鎖を含有するアミノ酸。
【００７６】
7位は以下のAAを有してよい：
-原初のAAであるP
-その代わりに、F、W、Hの様な芳香族側鎖を有するアミノ酸を潜在的に用いることができる。
【００７７】
8位は以下のAAを有してよい：
-原初のAAであるF
-A、L、I、V、P、MなるAA。
【００７８】
実施例2： Ang II配列中の2つ以上のAA位置のアラニンを用いた組合せ交換
位置走査手法を実行した最初のインビボ実験から得られた結果を検証するため、ならびに、異なる位置での組み合わされたAA交換が、中性または有益なAAが原初のAAを置換するときに付加的なのか、または余り有益でないAAが一体化されたときは減算的なのかどうかを試験するために、Ang II中の2つ以上のアミノ酸を置換した。この目的のために次の一連の実験において、アミノ酸アラニンを用いた（表2）。アラニンが4位での有益な交換AAとして（図4）、1、2、3、5および8位に対する中立の交換AAとして（図1〜3、5、8および9）定義された。6および7位に対して、原初のAAsであるHおよびPをそれぞれアラニンに置換することは、あまり有益でない様に見えた（図6、7および9）。従って、アラニンを、1〜3、5および8（中立的交換）と組み合わせて4位に有する（有益な交換）ペプチド変異体は、Ang IIペプチドで惹起される血清からの力価より高いか少なくとも同一の値を有するAng IIに対する力価を誘発すると期待できる。1〜3、5および8位にアラニンを有するペプチド変異体は、Ang IIペプチドで惹起された血清と同等にAng IIを認識する免疫応答を少なくとも誘発するはずである。6および7位でのアラニンによる交換によるペプチド変異体（これらの位置に対する余り有益でない交換）は、Ang IIに対して減衰した応答性を持った血清を誘発すると期待することができる。
【００７９】
表2に列記された全てのペプチドを、ミョウバンに吸着されたKLHにN末端を通して化学的に再び結合して、実験動物（BALB/c マウス）中へ皮下組織内注射した。ELISAで血清を分析し、ペプチド変異体によって誘発された抗体応答を、原初のペプチドによって誘発された抗体応答と比較した。
【００８０】
表2. アミノ酸置換によるペプチド変異体の例 
【表３】
2015214552.tif 000004
【００８１】
アラニンで置換された全てのペプチド変異体は、注射されたペプチドに結合する抗体を誘発することができて、このことは、アミノ酸交換は免疫原性を失わせないことを示している（図9）。しかしながら、C-DAVYIAAFによって誘発された血清の力価は他の抗原によって誘発された力価と比べて低く、指定されたAAのアラニンによる組合せ交換はペプチドの免疫原性にとって余り有益でないことを示している（図9）。
【００８２】
ペプチド変異体で誘発された血清のAng IIに対する応答性の分析は、以下のペプチドによって誘発された血清がAng IIに対して減衰した応答性を示すことを明らかにした（表2）：C-DRVYAAPF、C-DRVYIHAA、C-DRAAAHAF、C-DAVYIAPF、C-DAVYIAAF、C-DAVYIAAA（図9）。これらの結果は、6位または7位に少なくとも１つのアラニン置換を有するAng II-ペプチド変異体（これらの位置に対する有益でないAA交換としてのアラニン）は、Ang IIに対する減衰した応答性を示す血清を誘発することを示している。このことは位置走査手法で得られた結果に沿っている。
【００８３】
Ang II分子の1〜5位でのアラニンの置換（これらの位置に対して、Aは中立のまたは有益なAA交換であると規定された)は、Ang IIの応答性を妨げない。これらの位置でのアラニン置換は、Ang IIで得られた値より高い力価の誘発に導いた。この効果は特に4位のYがアラニンで置換されたときに見られた（図9）。
【００８４】
ウイスターラット中の多様なアラニン修飾されたAng IIエピトープの調査は同様な結果を示していた。このことは、得られた結果はマウスに限定されるのではなく、他の種にも移すことができることを示唆する。
【００８５】
実施例3：アンギオテンシンVARIOTOPEの選択に対する異なる位置における有益なAA類の組み合わせ
次の実験において、それぞれの位置に対する有益な、および／または中性のAAの組み合わせを試験した。図10および11に見られるように位置走査実験中に選択された有益なアミノ酸を用いての異なる位置でのアミノ酸交換は、アンギオテンシンIIで誘発された応答と比較し得るかまたはより高いアンギオテンシンIIに対する体液性免疫応答を誘発することのできるVARIOTOPEの生成という結果を来した。
【００８６】
実施例4：最初のN末端アミノ酸残基を失った切断されたアンギオテンシンVARIOTOPE型
次の実験で、アンギオテンシンVARIOTOPEの切断型(version)を試験した。図12および13に見られるように、アンギオテンシンVARIOTOPE（上記の様に選択された）のそのN末端における短縮は、アンギオテンシンIIで誘発された応答と比較し得るか又はそれより高いアンギオテンシンIIに対する体液性免疫応答を誘発する能力を無効にさせない。
【図１】
2015214552.tif 000005
【図２】
2015214552.tif 000006
【図３】
2015214552.tif 000007
【図４】
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【図５】
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【図６】
2015214552.tif 000010
【図７】
2015214552.tif 000011
【図８】
2015214552.tif 000012
【図９】
2015214552.tif 000013
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年7月1日(2015.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容できる担体に結合したペプチドを含んでなるワクチンであって、該ペプチドはアミノ酸配列：
(X1)m (X2)n (X3)o X4 X5 H P X6 (式I)
を有し、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用であり、
式I中、
X1はGまたはDであり、
X2はA、P、M、GまたはRであり、
X3はG、A、HまたはVであり、
X4はS、A、DまたはYであり、
X5はA、D、H、S、NまたはIであり、
X6はA、LまたはFであり、
ここで、m、nおよびoは、oが0のときはmおよびnは0であり、nが0のときはmが0であるとの前提の下で、独立に0または1であり、但し、該ペプチドは、ペプチド（式I）を、ペプチド配列DRVYIHPFを持ったアンジオテンシンＩＩとは異なったものとする少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでなる、ワクチン。
【手続補正書】
【提出日】平成27年8月24日(2015.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容できる担体に結合したペプチドを含んでなるワクチンであって、該ペプチドはアミノ酸配列：
（Ｘ１）ｍ（Ｘ２）ｎ（Ｘ３）ｏＸ４Ｘ５ＨＰＸ６  （式Ｉ）
を有し、レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害の治療用および／または予防用であり、
式Ｉ中、
Ｘ１はＧまたはＤであり、
Ｘ２はＡ、Ｐ、Ｍ、ＧまたはＲであり、
Ｘ３はＧ、Ａ、ＨまたはＶであり、
Ｘ４はＳ、Ａ、ＤまたはＹであり、
Ｘ５はＡ、Ｄ、Ｈ、Ｓ、ＮまたはＩであり、
Ｘ６はＡ、ＬまたはＦであり、
ここで、ｍ、ｎおよびｏは、ｏが０のときはｍおよびｎは０であり、ｎが０のときはｍが０であるとの前提の下で、独立に０または１であり、但し、ペプチドはＤＲＶＹＩＨＰＦではない、ワクチン。
【請求項２】
ペプチドが、
ＤＭＶＹＩＨＰＦ、ＤＧＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＶＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＶＹＡＨＰＦ、ＤＲＶＹＮＨＰＦ、ＤＲＶＹＤＨＰＦ、ＤＲＶＹＨＨＰＦ、ＤＲＶＹＳＨＰＦ、ＤＡＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＡＡＡＩＨＰＦ、ＤＡＧＹＩＨＰＦ、
ＤＡＨＹＩＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦ、ＤＰＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＧＹＩＨＰＦ、ＤＭＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＨＹＩＨＰＦ、ＤＧＧＹＩＨＰＦ、ＤＧＡＹＩＨＰＦ、ＤＧＨＹＩＨＰＦ、ＤＰＶＡＩＨＰＦ，ＤＭＶＡＩＨＰＦ、ＤＭＶＳＩＨＰＦ、ＤＲＧＡＩＨＰＦ、ＤＲＨＡＩＨＰＦ、ＤＲＧＹＡＨＰＦ、ＤＲＧＹＤＨＰＦ、ＤＲＧＹＨＨＰＦ、ＤＲＧＹＳＨＰＦ、ＤＲＧＹＮＨＰＦ、ＤＲＡＹＤＨＰＦ、ＤＲＡＹＮＨＰＦ、ＤＲＨＹＡＨＰＦ、ＤＲＨＹＳＨＰＦ、
ＤＲＨＹＮＨＰＦ、ＤＲＨＹＤＨＰＦ、ＤＲＨＹＨＨＰＦ、ＤＲＧＡＤＨＰＦ、ＤＲＶＡＨＨＰＦ、ＤＲＨＡＤＨＰＦ、ＧＲＧＡＩＨＰＦ、ＧＭＧＳＩＨＰＦ、ＤＲＧＳＩＨＰＦ、ＤＰＨＡＩＨＰＦ、ＤＭＨＡＩＨＰＦ、ＧＰＨＡＩＨＰＦ、ＰＶＹＩＨＰＦ、
ＭＶＹＩＨＰＦ、ＧＶＹＩＨＰＦ、ＡＶＹＩＨＰＦ、ＲＧＹＩＨＰＦ、ＲＡＹＩＨＰＦ、
ＲＨＹＩＨＰＦ、ＲＶＡＩＨＰＦ、ＲＶＳＩＨＰＦ、ＲＶＤＩＨＰＦ、ＲＶＹＡＨＰＦ、
ＲＶＹＮＨＰＦ、ＲＶＹＤＨＰＦ、ＲＶＹＨＨＰＦ、ＲＶＹＳＨＰＦ、ＲＶＹＩＨＰＡ、
ＲＶＹＩＨＰＬ、ＲＡＡＩＨＰＦ、ＲＶＡＡＨＰＦ、
ＲＡＡＡＨＰＦ、ＡＡＡＩＨＰＦ、ＡＧＹＩＨＰＦ、ＡＨＹＩＨＰＦ、ＰＡＹＩＨＰＦ、
ＭＧＹＩＨＰＦ、ＭＡＹＩＨＰＦ、ＭＨＹＩＨＰＦ、ＧＧＹＩＨＰＦ、
ＧＡＹＩＨＰＦ、ＧＨＹＩＨＰＦ、ＰＶＡＩＨＰＦ、ＰＶＳＩＨＰＦ、ＭＶＡＩＨＰＦ、
ＭＶＳＩＨＰＦ、ＲＨＡＩＨＰＦ、ＲＧＹＡＨＰＦ、ＲＧＹＤＨＰＦ、
ＲＧＹＨＨＰＦ、ＲＧＹＳＨＰＦ、ＲＧＹＮＨＰＦ、ＲＡＹＤＨＰＦ、ＲＡＹＨＨＰＦ、
ＲＡＹＳＨＰＦ、ＲＡＹＮＨＰＦ、ＲＨＹＡＨＰＦ、ＲＨＹＳＨＰＦ、ＲＨＹＮＨＰＦ、
ＲＨＹＤＨＰＦ、ＲＨＹＨＨＰＦ、ＲＧＡＤＨＰＦ、ＲＧＡＨＨＰＦ、ＲＨＡＤＨＰＦ、
ＲＨＳＩＨＰＦ、ＰＧＡＩＨＰＦ、ＲＨＡＩＨＰＦ、ＰＧＳＩＨＰＦ、ＭＧＡＩＨＰＦ、
ＭＧＳＩＨＰＦ、ＲＧＳＩＨＰＦ、ＰＨＡＩＨＰＦ、ＭＨＡＩＨＰＦ、ＰＨＳＩＨＰＦ、
ＭＨＳＩＨＰＦ、ＡＹＩＨＰＦ、ＨＹＩＨＰＦ、ＶＹＡＨＰＦ、ＶＹＮＨＰＦ、
ＶＹＤＨＰＦ、ＶＹＨＨＰＦ、ＶＹＳＨＰＦ、ＶＹＩＨＰＡ、ＶＹＩＨＰＬ、ＡＡＩＨＰＦ、
ＡＹＡＨＰＦ、ＨＹＩＨＰＦ、ＨＡＩＨＰＦ、ＧＹＡＨＰＦ、ＧＹＤＨＰＦ、
ＧＹＨＨＰＦ、ＧＹＳＨＰＦ、ＧＹＮＨＰＦ、ＡＹＤＨＰＦ、ＡＹＨＨＰＦ、ＡＹＳＨＰＦ、
ＡＹＮＨＰＦ、ＨＹＡＨＰＦ、ＨＹＳＨＰＦ、ＨＹＮＨＰＦ、ＨＹＤＨＰＦ、ＨＹＨＨＰＦ、
ＨＳＩＨＰＦ、ＧＳＩＨＰＦ、ＨＡＩＨＰＦ、ＡＩＨＰＦ、ＳＩＨＰＦ、
ＤＩＨＰＦ、ＹＮＨＰＦ、ＹＤＨＰＦ、ＹＨＨＰＦおよびＹＳＨＰＦからなる群から選択されたことを特徴とする、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
ペプチドが、
ＤＧＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＶＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＶＹＡＨＰＦ、ＤＲＶＹＮＨＰＦ、ＤＲＶＹＤＨＰＦ、ＤＲＶＹＳＨＰＦ、ＤＡＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＡＧＹＩＨＰＦ、ＤＡＨＹＩＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦ、ＤＰＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＧＹＩＨＰＦ、ＤＭＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＨＹＩＨＰＦ、ＤＧＧＹＩＨＰＦ、ＤＧＡＹＩＨＰＦ、ＤＧＨＹＩＨＰＦ、
ＤＭＶＳＩＨＰＦ、ＤＲＧＡＩＨＰＦ、ＤＲＧＹＡＨＰＦ、ＤＲＧＹＤＨＰＦ、ＤＲＧＹＳＨＰＦ、ＤＲＧＹＮＨＰＦ、ＤＲＡＹＤＨＰＦ、ＤＲＡＹＮＨＰＦ、ＤＲＨＹＡＨＰＦ、ＤＲＨＹＳＨＰＦ、ＤＲＨＹＮＨＰＦ、ＤＲＨＹＤＨＰＦ、ＤＲＧＳＩＨＰＦ、ＰＶＹＩＨＰＦ、ＧＶＹＩＨＰＦ、
ＡＶＹＩＨＰＦ、ＲＧＹＩＨＰＦ、
ＲＡＹＩＨＰＦ、ＲＨＹＩＨＰＦ、ＲＶＡＩＨＰＦ、ＲＶＳＩＨＰＦ、ＲＶＤＩＨＰＦ、
ＲＶＹＡＨＰＦ、ＲＶＹＮＨＰＦ、ＲＶＹＤＨＰＦ、ＲＶＹＳＨＰＦ、ＲＶＹＩＨＰＬ、
ＲＡＡＩＨＰＦ、ＲＶＡＡＨＰＦ、ＡＧＹＩＨＰＦ、
ＡＨＹＩＨＰＦ、ＰＡＹＩＨＰＦ、ＧＧＹＩＨＰＦ、ＧＡＹＩＨＰＦ、
ＧＨＹＩＨＰＦ、ＰＶＳＩＨＰＦ、ＭＶＳＩＨＰＦ、ＲＧＹＡＨＰＦ、
ＲＧＹＤＨＰＦ、ＲＧＹＳＨＰＦ、ＲＧＹＮＨＰＦ、ＲＡＹＤＨＰＦ、ＲＡＹＳＨＰＦ、
ＲＡＹＮＨＰＦ、ＲＨＹＡＨＰＦ、ＲＨＹＳＨＰＦ、ＲＨＹＮＨＰＦ、ＲＨＹＤＨＰＦ、
ＲＨＳＩＨＰＦ、ＰＧＡＩＨＰＦ、ＲＨＡＩＨＰＦ、ＰＧＳＩＨＰＦ、ＭＧＡＩＨＰＦ、
ＭＧＳＩＨＰＦ、ＭＧＹＩＨＰＦ、ＲＧＳＩＨＰＦ、ＰＨＡＩＨＰＦ、ＭＨＡＩＨＰＦ、
ＰＨＳＩＨＰＦ、ＭＨＳＩＨＰＦ、ＡＹＩＨＰＦ、ＶＹＡＨＰＦ、ＶＹＮＨＰＦ、
ＶＹＤＨＰＦ、ＶＹＳＨＰＦ、ＡＡＩＨＰＦ、ＡＹＡＨＰＦ、ＨＹＩＨＰＦ、
ＧＹＡＨＰＦ、ＧＹＤＨＰＦ、ＧＹＳＨＰＦ、ＧＹＮＨＰＦ、ＡＹＤＨＰＦ、ＡＹＳＨＰＦ、
ＡＹＮＨＰＦ、およびＧＳＩＨＰＦからなる群から選択されたことを特徴とする、請求項１または２に記載のワクチン。
【請求項４】
ペプチドが、
ＤＭＶＹＩＨＰＦ、ＤＧＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＶＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＩＨＰＦ、ＤＡＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＡＧＹＩＨＰＦ、ＤＡＨＹＩＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦ、ＤＰＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＧＹＩＨＰＦ、ＤＭＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＨＹＩＨＰＦ、ＤＧＧＹＩＨＰＦ、ＤＧＡＹＩＨＰＦ、ＤＧＨＹＩＨＰＦ、ＤＭＶＳＩＨＰＦ、ＤＲＧＡＩＨＰＦ、ＤＲＧＹＡＨＰＦ、
ＤＲＧＹＤＨＰＦ、ＤＲＧＹＳＨＰＦ、ＤＲＧＹＮＨＰＦ、ＤＲＡＹＤＨＰＦ、ＤＲＡＹＮＨＰＦ、ＰＶＹＩＨＰＦ、ＧＶＹＩＨＰＦ、ＲＧＹＩＨＰＦ、
ＲＡＹＩＨＰＦ、ＲＶＳＩＨＰＦ、ＲＶＹＩＨＰＬ、ＲＡＡＩＨＰＦ、
ＡＧＹＩＨＰＦ、ＰＡＹＩＨＰＦ、ＧＡＹＩＨＰＦ、
ＰＶＳＩＨＰＦ、ＭＶＳＩＨＰＦ、ＲＧＹＡＨＰＦ、ＲＧＹＳＨＰＦ、
ＲＡＹＤＨＰＦ、ＲＨＹＡＨＰＦ、およびＲＨＹＤＨＰＦからなる群から選択されたことを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載のワクチン。
【請求項５】
ペプチドが、
ＤＭＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＶＹＩＨＰＦ、ＤＡＡＹＩＨＰＦ、ＤＲＡＹＡＨＰＦ、ＤＡＧＹＩＨＰＦ、ＤＡＨＹＩＨＰＦ、ＤＰＧＹＩＨＰＦ、ＤＧＡＹＩＨＰＦ、ＤＭＶＳＩＨＰＦ、ＤＲＧＡＩＨＰＦ、ＤＲＧＹＤＨＰＦ、ＤＲＧＹＳＨＰＦ、ＤＲＡＹＤＨＰＦ、ＤＲＨＹＡＨＰＦ、ＤＲＨＹＤＨＰＦ、ＰＶＹＩＨＰＦ、ＡＶＹＩＨＰＦ、
ＲＨＹＩＨＰＦ、ＧＶＹＩＨＰＦ、ＲＡＡＩＨＰＦ、
ＡＨＹＩＨＰＦ、ＰＶＳＩＨＰＦ、ＭＶＳＩＨＰＦ、ＲＡＹＤＨＰＦ、
ＲＨＹＡＨＰＦ、およびＲＨＹＤＨＰＦからなる群から選択されたことを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載のワクチン。
【請求項６】
少なくとも１つのシステイン残基が式Ｉによるアミノ酸配列のＮ末端に結合していることを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載のワクチン。
【請求項７】
担体が蛋白質担体であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載のワクチン。
【請求項８】
蛋白質担体がスカシガイ・ヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）およびジフテリアトキソイド（ＤＴ）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項７に記載のワクチン。
【請求項９】
アジュバントと共に製剤化されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載のワクチン。
【請求項１０】
アジュバントがミョウバンである、請求項９に記載のワクチン。
【請求項１１】
レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害が、高血圧、卒中、梗塞、腎不全、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化、血管障害、網膜出血および自己免疫疾患からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載のワクチン。
【請求項１２】
自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項１１に記載のワクチン。
【請求項１３】
レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害を治療および／または予防するためのワクチンの製造のための、請求項１〜６のいずれかで定義されたペプチドの使用。
【請求項１４】
レニンで活性化されたアンギオテンシン系と関連した身体的障害が高血圧および高血圧関連疾患である、請求項１３のペプチドの使用。
【外国語明細書】
2015214552.tif 000018
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【配列表】
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