(57)【要約】      （修正有）【課題】エビネランの全草を有効に活用するための抽出物等の提供。【解決手段】エビネラン原料を，溶媒を用いて抽出を行うことを特徴とするエビネラン溶媒抽出物。前記溶媒が，水，水溶性アルコール，又はこれらの混合溶媒であり、前記水溶性アルコールが，エタノール，又はメタノールであるエビネラン溶媒抽出物。エビネランの全草を用いた溶媒抽出物は，ヒアルロニダーゼ阻害作用及びAGEs生成抑制作用を有することから，エビネランの全草を用いた溶媒抽出物を原料として製造された医薬は，肌荒れ防止や関節の老化の予防等，生体内の様々なアンチエイジング作用を有する製品として期待できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
エビネラン原料を，溶媒を用いて抽出を行うことを特徴とするエビネラン溶媒抽出物
【請求項２】
前記エビネラン原料が，エビネランの全草であることを特徴とする請求項１に記載のエビネラン溶媒抽出物
【請求項３】
前記溶媒が，水，水溶性アルコール，又はこれらの混合溶媒であることを特徴とする請求項１または請求項２のいずれか１項に記載のエビネラン溶媒抽出物
【請求項４】
前記水溶性アルコールが，エタノール，又はメタノールであることを特徴とする請求項３に記載のエビネラン溶媒抽出物
【請求項５】
請求項１から４に記載のエビネラン溶媒抽出物を原料として製造されることを特徴とする医薬
【請求項６】
用途が，肌荒れ防止であることを特徴とする請求項５に記載の医薬
【請求項７】
用途が，関節の老化の予防であることを特徴とする請求項５に記載の医薬
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，エビネランを原料とした溶媒抽出物，ならびにこれを原料として製造される医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
エビネランは，日本，中国，台湾，韓国などの山地の陰地に自生するラン科（Orchidaceae）の多年生草木である。エビネランは，その全草または根茎が九子連環草と称され，扁桃腺，痔癒および打撲傷の治療薬として用いられている。
また，エビネランの根茎には，ジフェナントレン化合物やインドール配糖体などの有用な成分が含まれていることが知られている（特許文献１から３）。しかしながら，エビネランの根茎を除いた全草の有効性については，完全に明らかになっているとはいえない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−２６５４２５
【特許文献２】特開平１０−２６５４９２
【特許文献３】特開平１０−２６５４９３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記事情を背景として本発明では，エビネランの全草を有効に活用するための抽出物等の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明者らは，鋭意研究の結果，エビネランの全草を用いた抽出物が，ヒアルロニダーゼ阻害作用およびAGEs生成抑制作用を有することを見出し，本発明を完成させた。
すなわち，エビネランの全草（花部を含む）を用いた溶媒抽出物は，ヒアルロニダーゼ阻害作用およびAGEs生成抑制作用をもとに，肌荒れ防止や関節の老化の予防など，生体内の様々なアンチエイジング作用が期待される。このことから，発明者らは，エビネランの全草を用いた溶媒抽出物，ならびにこれを原料とする医薬の発明を完成させたものである。
【０００６】
本発明は，以下の構成からなる。
本発明の第一の構成は，エビネラン原料を，溶媒を用いて抽出を行うことを特徴とするエビネラン溶媒抽出物である。
【０００７】
本発明の第二の構成は，前記エビネラン原料が，エビネランの全草であることを特徴とする第一の構成に記載のエビネラン溶媒抽出物である。
本発明の第三の構成は，前記溶媒が，水，水溶性アルコール，又はこれらの混合溶媒であることを特徴とする第一又は第二の構成に記載のエビネラン溶媒抽出物である。
【０００８】
本発明の第四の構成は，前記水溶性アルコールが，エタノール，又はメタノールであることを特徴とする第三の構成に記載のエビネラン溶媒抽出物である。
本発明の第五の構成は，第一から第四の構成に記載のエビネラン溶媒抽出物を原料として製造されることを特徴とする医薬である。
本発明の第六の構成は，用途が，肌荒れ防止であることを特徴とする第五の構成に記載の医薬である。
本発明の第七の構成は，用途が，関節の老化の予防であることを特徴とする第五の構成に記載の医薬である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により，エビネランの全草を有効に活用するための抽出物等の提供が可能となった。すなわち，エビネランの全草を用いた溶媒抽出物は，ヒアルロニダーゼ阻害作用およびAGEs生成抑制作用を有する。このことから，エビネランの全草を用いた溶媒抽出物を原料として製造された医薬は，肌荒れ防止や関節の老化の予防など，生体内の様々なアンチエイジング作用を有する製品として期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ヒアルロニダーゼ阻害作用実験結果
【図２】AGEs生成抑制作用実験結果
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のエビネラン溶媒抽出物について説明を行う。
【００１２】
本発明のエビネラン溶媒抽出物は，エビネラン原料を用いる。エビネラン原料としては，エビネランの全草を用いればよい。これらをそのまま用いてもよいし，乾燥させた後，原料として用いてもよい。
【００１３】
エビネラン原料について，溶媒を用いて抽出を行う。用いる溶媒としては，エビネラン原料からの有効成分の抽出が可能な限り特に限定する必要はなく，水，又は種々の有機溶媒を用いることができる。
溶媒として，水，メタノールやエタノールなどの水溶性アルコール，又はこれらの混合溶媒を用いることが好ましい。これにより，安価かつ効率的に，有効成分の抽出を行うことが可能となり，エビネラン溶媒抽出物の製造コストを減少させる効果を有する。
有機溶媒として，最も好ましくは，エタノールを用いることができる。エタノールは，人体への毒性が低い有機溶媒であるため，エビネラン溶媒抽出物や，これを原料に製造される医薬の安全性を向上させる効果を有する。
【００１４】
エビネラン溶媒抽出物は，優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を有することから，肌荒れ防止や関節の老化の予防，抗炎症・抗アレルギーなどの作用が期待できる。
すなわち，ヒアルロニダーゼは，ヒアルロン酸の加水分解酵素であり，動物組織に広く分布している。その基質となるヒアルロン酸は，皮膚・靭帯・関節液・眼の硝子体などの組織に多く存在するムコ多糖の一種であり，例えば，皮膚や口腔においては，細胞の保護・栄養の運搬・組織水分の保持・柔軟性の維持等に，また関節液として組織構造・機能の維持及び潤滑性の保持等に重要な役割を果たしている。
皮膚や口腔，関節における生体ヒアルロン酸量は，老化又は病的状態により減少し，その結果，皮膚の乾燥・肌荒れ・ハリ・弾力性の低下，シミ・しわの増加あるいは関節の潤滑性悪化による関節痛等を引き起こす。このような状態に対して，ヒアルロニダーゼ阻害剤は，ヒアルロン酸の分解を抑制し，生体ヒアルロン酸量の維持に寄与する。
また，ヒアルロニダーゼ阻害剤は，ヒアルロン酸を配合した化粧料の皮膚への塗布や関節へのヒアルロン酸の注入等の措置による外因性ヒアルロン酸の安定化にも利用することができる。
さらには，ヒアルロニダーゼ阻害剤はヒアルロニダーゼに起因する抗炎症・抗アレルギー剤にも利用することができる。これはヒアルロニダーゼが炎症時に活性化され，結合組織のマトリックスを破壊し，炎症系の組織への浸潤・血管の透過性を亢進すること・I型アレルギーにおける肥満細胞からのヒスタミンの遊離の過程に介在している可能性が高いことによる。従って，抗炎症剤・抗アレルギー剤であるインドメタシン・アスピリン・クロモグリク酸ナトリウム・トラニラスト等には高いヒアルロニダーゼ阻害活性が認められている。
これらより，ヒアルロニダーゼ阻害作用剤は，肌荒れ防止や関節の老化の予防，抗炎症・抗アレルギーなどの効果が期待できる。
【００１５】
また，エビネラン溶媒抽出物は，優れたAGEs生成抑制作用を有することから，糖尿病合併症の治療あるいは予防や，アンチエイジングなどの作用が期待できる。
すなわち，糖尿病などで慢性的に高血糖が続くことや，老化などに長期間血糖が作用することにより，循環血液中や組織でAGEsの生成が促進され，血管合併症（糖尿病性血管障害）が発症する。糖尿病性血管障害では，毛細血管障害がおこり，動脈側の毛細血管の基底膜が肥厚することが特徴とされる。
また近年，老化に伴い体内のたんぱく質が糖化（AGEs化）を受け，その生成物が種々の老化現象を引き起こすとも報告されている。そこでAGEsの生成阻害によって糖尿病の合併症などを治療あるいは予防，またアンチエイジングに寄与する方法が求められ，いくつか示されており，このことからAGEs生成抑制剤は，糖尿病合併症の治療あるいは予防や，アンチエイジングなどに対する効果が期待できる。
【００１６】
前述のような効果を目的として，エビネラン溶媒抽出物を原料に用いて医薬を製造することができる。本発明において医薬とは，薬事承認を得ているような医薬品に限定するものではなく，本発明の趣旨に基づき治療効果や予防効果の発揮が期待される医薬品，医薬部外品，サプリメント，又は健康食品など様々な形態の製品を指すものとして定義される。
【００１７】
医薬の一態様として，例えば，エビネラン溶媒抽出物をスプレードライや凍結乾燥することにより，有効成分の粉末を得，散剤や粉剤として製品化することができる。これに加え，賦形剤，基剤，乳化剤，溶剤，又は安定剤等の添加剤を加えることにより，顆粒剤，錠剤，カプセル剤，又は丸剤等として用いることもできる。
また，別の態様として，エビネラン溶媒抽出物の有機溶媒を除去後，残留物に水や，必要に応じ可溶化剤などを加えた液体成分とし，これをもとに，健康飲料や健康食品等を製造することができる。
【実施例】
【００１８】
以下，本発明について，実施例を挙げて詳述するが，当然のことながら，本発明を実施例に基づいて限定的に解釈すべきものでないことはいうまでもない。
【００１９】
＜＜実験例１，溶媒抽出物の作製＞＞
１．宮崎産エビネ（Calanthe discolor）の花部を含む全草1.8kgを20％含水メタノールにて，80℃，3時間加熱還流を行った。
２．得られた抽出液を濾過し，残渣に20％含水メタノールを加え，同様の抽出操作を5回行った。
３．抽出操作を行った含水メタノール液を合わせ，減圧下，溶媒を除去した（メタノール抽出物）。
４．メタノール抽出物に水を加え，酢酸エチル，n-ブタノールを用いて分液操作を行い，酢酸エチル移行部（9.39g，0.6%），n-ブタノール移行部（17.25g，1.0%）および水移行部（43.50g，2.4%）を得た。
５．得られた酢酸エチルおよびn-ブタノール移行部を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（BW-200（Fuji Silysia Chemical, Ltd.），CHCl3-MeOH-H2O），逆相ODSカラムクロマトフラフィー（Chromatorex ODS DM1020T（Fuji Silysia Chemical, Ltd.），H2O→MeOH）および逆相HPLC（COSMOSIL 5C18-MS-II）を用いて分離精製を行った。その結果，21種の化合物が得られた。
【００２０】
＜＜実験例２．ヒアルロニダーゼ阻害作用実験＞＞
エビネランのメタノール抽出物が，ヒアルロニダーゼ阻害作用を有するかどうかを調べることを目的に，実験を行った。
【００２１】
＜実験方法＞
１．実験例１と同様の方法で得た，メタノール抽出物を実験に用いた。
２．1.9mg/mLヒアルロニダーゼ10μLに，メタノール抽出物20μLを加え，37℃で20分間インキュベートを行った。
３．インキュベート後，0.5mg/mL compound48/80を20μL加え，37℃で20分間インキュベートした
４．さらに，0.8mg/mLヒアルロン酸50μLを加え，37℃で40分間インキュベートを行い，0.4N NaOH20μL，ホウ酸溶液20μLを加え，100℃で3分間加熱を行った。
５．放冷後，10mg/mL p-ジメチルアミノベンズアルドヒドを600μL加え，37℃で20分間インキュベートした後，96穴マイクロプレートに分取し，マイクロプレートリーダー（SH-1000，コロナ電気社製）にて，吸光度（580nm）を測定した。
【００２２】
＜実験結果＞
１．結果を図１に示す。
２．メタノール抽出物は，コントロールと比較して，40μg/mLの濃度で有意な阻害活性を有し，IC50値も45μg/mLと非常に低い値であった。
３．これらの結果から，メタノール抽出物は，非常に優れたヒアルロニダーゼ阻害活性を有することが分かった。
【００２３】
＜＜実験例３．AGEs生成抑制作用＞＞
エビネランのメタノール抽出物が，AGEs生成抑制作用を有するかどうかを調べることを目的に，実験を行った。
【００２４】
＜実験方法＞
１．20mg/mLに調整したBSA溶液500μLと，250mg/mLに調整したD-glucose溶液400μL，および各濃度に調整したメタノール抽出物100μLをサンプルチューブ内で混和し，60℃で3日間，反応させた。
２．反応終了後，ブラックプレートに分取し，蛍光強度を測定した（em：440nm，ex:355nm）。
【００２５】
＜実験結果＞
１．結果を図２に示す。
２．メタノール抽出物は，コントロールと比較して，30μg/mLの濃度で有意な生成抑制作用を示した。
３．加えて，IC50値についても，陽性対照として用いたアミノグアニジンのIC50値（約100μg/mL）よりも，33μg/mLとはるかに低いことが分かった。
４．これらの結果から，メタノール抽出物は，非常に優れたAGEs生成抑制作用を有することが分かった。
【図１】
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【図２】
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