(57)【要約】【課題】原発性腫瘍を標的にするばかりでなく、転移を抑制するための治療法を提供すること。【解決手段】本発明は、抗ＶＥＧＦ抗体を用いて、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患する患者の治療方法を提案するものである。本発明はまた、対応する製品を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用。
【請求項２】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で治療中の患者に投与されることを特徴とする請求項１記載の使用。
【請求項３】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療中の患者に投与されることを特徴とする請求項２記載の使用。
【請求項４】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で治療後の患者に投与されることを特徴とする請求項１記載の使用。
【請求項５】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療後の患者に投与されることを特徴とする請求項４記載の使用。
【請求項６】
当抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者であって、再発を防止又は低減させるための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用。
【請求項７】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で治療中の患者に投与されることを特徴とする請求項６記載の使用。
【請求項８】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療中の患者に投与されることを特徴とする請求項７記載の使用。
【請求項９】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で治療後に投与されることを特徴とする請求項６記載の使用。
【請求項１０】
当該医薬品が抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療後に投与されることを特徴とする請求項９記載の使用。
【請求項１１】
当該抗ＶＥＧＦ抗体が、ベバシズマブであるという点で特徴付けられる請求項１から１０のいずれか１項記載の使用。
【請求項１２】
当該抗ＨＥＲ２抗体が、トラスツズマブであるという点で特徴付けられる請求項１から１１のいずれか１項記載の使用。
【請求項１３】
抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための抗ＶＥＧＦ抗体。
【請求項１４】
抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者における転移を防止又は低減させるための抗ＶＥＧＦ抗体。
【請求項１５】
請求項１３又は請求項１４記載の抗ＶＥＧＦ抗体がベバシズマブであり、それがトラスツズマブでの一次単剤治療後に投与される、該抗ＶＥＧＦ抗体。
【請求項１６】
容器、抗ＶＥＧＦ抗体を含んでなるその容器に入った組成物、及び抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者に当該抗ＶＥＧＦ抗体を投与するようにその組成物の使用者に指示する包装インサートを含んでなることを特徴とする製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＶＥＧＦ抗体を用いて、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患する患者の治療に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
新脈管形成は様々な疾患の原因に関係があり、固形腫瘍、眼内新生血管症、例えば増殖性の網膜障害又は加齢黄斑変性症(AMD)、関節リウマチ、及び乾癬が含まれる(Folkman et al., J. Biol. Chem. 267 (1992) 10931- 10934; Klagsbrun et al., Annu. Rev. Physiol. 53 (1991) 217-239; and Garner, A., Vascular diseases, In:PathobioloＧｙ of ocular disease, A dynamic approach, Garner, A., and Klintworth, G. K. (eds.), 2nd edition, Marcel Dekker, New York (1994), pp 1625-1710)。固形腫瘍においては、新生血管形成が腫瘍細胞に、正常細胞と比較して増殖優位性及び増殖自立性を獲得することを可能にする。従って、腫瘍切片における微小血管の密度と乳癌及びいくつかの他の腫瘍における患者の生存率との間に相関性が確認されている(Weidner et al., N. Engl. J. Med. 324 (1991) 1-8; Horak et al., Lancet 340 (1992) 1120- 1124; and Macchiarini et al., Lancet 340 (1992) 145-146)。
【０００３】
血管内皮細胞増殖因子 (ＶＥＧＦ) は、腫瘍又は眼内疾患(Ferrara et al., Endocr. Rev. 18 (1997) 4-25; Berkman et al., J. Clin. Invest. 91 (1993) 153-159; Brown et al., Human Pathol. 26 (1995) 86-91; Brown et al., Cancer Res. 53 (1993) 4727-4735; Mattern et al., Brit. J. Cancer. 73 (1996) 931-934; and Dvorak et al., Am. J. Pathol. 146 (1995) 1029-1039)に関連する、正常及び非正常な新脈管形成、並びに新生血管形成の調節に関与する。抗ＶＥＧＦ中和抗体は、マウスにおいて、様々なヒト腫瘍細胞系の増殖を抑制する(Kim et al., Nature 362 (1993) 841-844; Warren et al., J. Clin. Invest. 95 (1995) 1789-1797; Borgstrom et al., Cancer Res. 56 (1996) 4032-4039; and Melnyk et al., Cancer Res. 56 (1996) 921-924). WO 94/10202、WO 98/45332、WO 2005/00900及びWO 00/35956は、ＶＥＧＦ に対する抗体について言及している。ヒト化モノクローナル抗体のベバシズマブ (商標名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）で販売される)は腫瘍治療で使われる抗ＶＥＧＦ抗体であり、かつ癌治療のために承認された唯一の抗脈管形成剤である(WO 98/45331)。
【０００４】
ＨＥＲ２は、ヒト上皮増殖因子受容体ファミリーの構成員であり、その細胞形質領域においてプロテインキナーゼ活性を有する。ＨＥＲ２は腫瘍細胞において過剰発現し、劣った予後及び生存期間と相関関係がある。それ故、ＨＥＲ２は乳癌治療の重要な標的である。ＨＥＲ２に対する抗体は、Takai N. et al., Cancer 104 (2005) 2701-2708; Yeon, C. H., et al., Invest New Drugs. 23 (2005) 391-409; Wong, W. M., et al, Cancer Pract. 7 (1999) 48-50; Albanell, J., et al., Drugs Today (Bare). 35 (1999) 931-46 によって知られている。
【０００５】
トラスツズマブ (商標名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で販売される)は、ＨＥＲ２が過剰発現／ＨＥＲ２遺伝子が増殖した転移性乳癌の治療に用いられる、組換え型ヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である。前臨床試験では、当該抗体がin vivo及びin vitroで抗癌活性を有することが実証されている。さらに、トラスツズマブの抗腫瘍活性の相加的又は相乗的な上昇が、マウスモデルにおける様々な抗腫瘍剤との併用において観察された。臨床試験においては、ＨＥＲ２が過剰発現した転移性乳癌患者において生存期間の延長が観察された。
【０００６】
WO 2005/012531は、直腸癌、転移性乳癌、及び腎臓癌の治療において、抗ＥｒｂＢ抗体(例えばＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、別名トラスツズマブ)及び／又は抗ＶＥＧＦ抗体(例えばＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）、別名ベバシズマブ)と併用することができる抗体について記述している。WO 2005/063816によれば、抗ＶＥＧＦ抗体は転移性乳癌の治療において抗ＥｒｂＢ抗体と併用できる。WO 98/45331によれば、疾病の予防又は治療における抗ＶＥＧＦ抗体の効果は、当該抗体を当該目的のために有効な他剤、例えばＨＥＲ２受容体に結合できる抗体と、順次又は組み合わせて投与することにより改善され得る。WO2005/00090及びWO 2003/077841はまた、腫瘍治療のための抗ＥｒｂＢ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の併用について開示している。Pegram, M. D., et al, Seminars in OncoloＧｙ 29 (2002) 29-37 では、乳癌治療における抗ＶＥＧＦ抗体と抗ＥｒｂＢ２抗体の併用について説明している。
【０００７】
臨床の腫瘍学者達は、癌治療の失敗は、必ずしも、一般的に外科手術で扱われる原発性腫瘍の増殖によるのではなく、むしろ別組織への転移拡散により引き起こされるということで意見が一致している。種々の細胞障害性薬物による原発性腫瘍の沈静は、必ずしも抗転移活性を示すものとは言えない。かえって、複数の抗癌剤に対する応答で増大した転移が観察された（Geldof et al., Anticancer Res 8 (1988) 1335-40, Murphy, J., Clin. Oncol. 11 (1993) 199-201, and De Larco et al., Cancer Res. 61 (2001) 2857-61）。原発性腫瘍を標的にするばかりでなく、転移を抑制するための治療法開発の必要性が明らかに存在する。
【０００８】
これらの抗転移活性は例えば、Schneider, T., et al, Clin. Exp. Metas. 19 (2002) 571-582 による方法で評価することができる。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００１０】
さらなる実施態様は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体の使用である。
【００１１】
本発明はさらに、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療のための抗ＶＥＧＦ抗体を含んでなる。
【００１２】
さらなる実施態様は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための抗ＶＥＧＦ抗体である。
【００１３】
抗ＨＥＲ２抗体による治療は、好ましくは当該抗ＨＥＲ２抗体での一次単剤治療である。
【００１４】
当該抗ＶＥＧＦ抗体は、好ましくはベバシズマブと同じエピトープに結合するものである。
【００１５】
当該抗ＶＥＧＦ抗体は、好ましくはベバシズマブである。
【００１６】
当該抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくはトラスツズマブである。
【００１７】
好ましい実施形態としては、本発明が患者に対して、抗ＶＥＧＤＦ抗体及び抗ＨＥＲ２を共投与することを含んでなる。
【００１８】
本発明はさらに、容器、抗ＶＥＧＦ抗体を含んでなるその容器に入った組成物、及び抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者に当該抗ＶＥＧＦ抗体を投与するようにその組成物の使用者に指示する包装インサートを含んでなる製品、を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】トラスツズマブ治療失敗後の腫瘍増殖に対する、ａ）トラスツズマブ及びベバシズマブ組み合わせた治療、及び、ｂ）ベバシズマブ単独治療の抗腫瘍活性。腫瘍体積（mm3）の平均値をｙ軸にプロット；腫瘍細胞の注入後の日数をｘ軸にプロットした。Ａ）媒体（円）、Ｂ）負荷用量30 mg/kg、維持用量15 mg/kg、週１回のトラスツズマブ（四角）。60日で、Ｂ群の動物はさらに３群、Ｂ’（60日後四角）、C及びDに分けられた。トラスツズマブ単独での治療を、週１回、15 mg/kg（維持用量）でＢ'群にのみ続けた。Ｃ）61日後から、週１回のトラスツズマブ 維持用量15 mg/kgと、週２回の追加的なベバシズマブ治療５ mg/kgを組み合わせ（三角）、Ｄ）61日後から、トラスツズマブでの治療を中止し、週２回のベバシズマブ５ mg/kg（×）。１（*）又は複数（***）のマウスを、終結基準に基づき犠牲にした時点が、１又は複数のアスタリスク（*）で示されている。
【図２】（Ａ）無治療の媒体群、（Ｂ）トラスツズマブ治療のみ（83日まで）、（Ｃ）トラスツズマブ治療のみ（27日−60日）の後、トラスツズマブ及びベバシズマブの組み合わせ治療（61日−112日）、並びに（Ｄ）トラスツズマブ治療のみ（27日−60日）の後、ベバシズマブ治療のみ（61日−112日）の肝移転の結果。ヒトＡｌｕ ＤＮＡ配列の平均値（pg/ml）を、リアルタイムＰＣＲを用いて肝組織から定量しｙ軸にプロットした。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明において"ＶＥＧＦ"なる語は、血管内皮細胞増殖因子(Swiss-Prot No. P 15692)であって、選択的（alternative）スプライシング型(例えば、Leung et al., Science, 246 (1989) 1306-1309, and Houck et al., MoI. Endocrin., 5 (1991) 1806-14を参照）、及び活性フラグメントであって好ましくはそのＮ末端フラグメントを表す。
【００２１】
本発明において"抗ＶＥＧＦ抗体"なる語は、特異的にＶＥＧＦに結合し、抗新脈管形成活性を発現する抗体である。好適なヒト化抗ＶＥＧＦ抗体又は本明細書中の変異型抗ＶＥＧＦ抗体は、ヒトＶＥＧＦに、Ｋｄ値が１×10-8 Ｍ以下、好ましくは５×lO-9 Ｍ以下で結合する。該抗ＶＥＧＦ抗体は Presta et al.,Cancer Res. 57 (1997) 4593-4599 に従って作成された、組換え型ヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体（ベバシズマブ）と同じ当該エピトープに結合するモノクローナル抗体である。好適な抗体はベバシズマブである。抗ＶＥＧＦ抗体及びその製造法は、例えば、米国特許第6,054,297号, US2003/0190317, 米国特許第6,632,926, 米国特許第6,884,879号, 及び US 2005/0112126 に述べられている。
【００２２】
ベバシズマブは、変異導入されたヒトＩｇＧ１フレームワーク領域、及びヒトＶＥＧＦがその受容体へ結合することを阻止する、マウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体由来の抗原結合性相補性決定領域を含む。フレームワーク領域の大部分を含む、ベバシズマブのアミノ酸配列のおよそ93％は、ヒトＩｇＧ１由来である。また配列の約７％はマウス抗体Ａ４．６．１由来である。ベバシズマブは分子量約149,000ダルトンであり、グリコシル化されている。ベバシズマブ及びその調製方法はEP 1325932に記載されている。
【００２３】
本発明における"ＨＥＲ２"なる語は、185-kDaの成長因子受容体を表し、ｎｅｕ及びｃ‐ｅｒｂＢ‐２ (Slamon et al., Science 235 (1987) 177-182; Swiss-Prot P04626)とも表記され、その機能がヒト乳癌細胞における腫瘍性形質転換と関連している。乳癌の20-30％の患者において該タンパク質の過剰発現が確認され、これは、疾患の局所的な進行、癌再発可能性の増大、及び患者の生存期間の低下と相関関係がある。胃、子宮内膜、唾液腺、非小細胞肺、膵臓、卵巣、腹膜、前立腺又は結腸直腸の癌に罹患している患者の30-40％にも、当該タンパク質の過剰発現が確認され得る。
【００２４】
本発明における"抗ＨＥＲ２抗体"なる語は、マウスの抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５と同じＨＥＲ２のエピトープに特異的に結合する抗体であり、Hudziak et al., MoI. Cell. BioL 9 (1989) 1165-1172 に記載されている。抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５それ自身も含む、"ＨＥＲ２の４Ｄ５エピトープ"に結合する抗ＨＥＲ２抗体とその製造法は、例えば米国特許第6,054,297号, WO 89/06692, 米国特許第6,399,063号, 第6,165,464号, 第6,054,297号, 第5,772,997号, WO 2003/087131, WO 01/00245, WO 01/00238, WO 00/69460, WO 99/31140, WO 98/17797に記載されている。本発明の好ましい実施形態としては、その抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブであり、それは長期間事前に抗癌治療を受けていた、ＨＥＲ２が過剰発現する転移乳癌を有する患者において、臨床的に活性である組換え型ヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２又はトラスツズマブと呼ばれる、マウスの抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５のヒト化版）(Baselga et al, J Clin. Oncol. 14 (1996) 737-744) である。トラスツズマブ及びその製造法はEP 590058に記載されている。
【００２５】
"エピトープ４Ｄ５"は、該抗体４Ｄ５ (ATCC CRL 10463) が結合する、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインにおける領域である。このエピトープは、ＥｒｂＢ２の膜貫通領域に隣接している。４Ｄ５エピトープに結合する抗体をスクリーニングする、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed. Harlow and David Lane (1988)に記載される如き、日常的なクロス‐ブロッキングアッセイ（cross-blocking assay）が実施できる。他にＥｒｂＢ２の４Ｄ５エピトープに抗体結合の有無を評価するエピトープマッピングが実施し得る。
【００２６】
当該出願において使用される"エピトープ"なる語は、抗体に特異的に結合できるタンパク質決定基を表す。エピトープは通常、アミノ酸又は糖の側鎖の如き化学的に活性な表面分子群で構成され、特異的な３次元構造特性及び特異的なチャージ特性を有している。コンフォメーション又は非コンフォメーションのエピトープは、前者へ結合するが後者に結合しないことが変性溶媒の存在で消失するという点で識別される。エピトープが属する抗原のサイズに依存し、１の抗原当たり複数のエピトープが有効であり得、よって同様に１の抗原当たり複数の抗体結合部位（＝エピトープ）の可能性がある。
【００２７】
抗体は例えばヒト、マウス、又はラットのポリペプチドに対して産生することができる。抗体はポリクローナル又はモノクローナルのいずれであっても、標的抗原を特異的に認識するものは本発明に包含される。該抗体は当業者に周知の標準の免疫学的技術を用いることで産生される。抗体は、ポリクローナルもしくはモノクローナルで、又は例えばヒト化抗体のために組換えで作成され得る。抗体が既知の治療用抗体と同じエピトープに結合しないことの判定は、競合試験システムで容易に結論付けることができる。
【００２８】
同一の標的抗原に結合する２の抗体の考えられるエピトープの重複は、競合試験システムを用いて検出できる。本目的のために、例えば酵素イムノアッセイを用いて、固定された標的抗原に対する結合について、該新規抗体がどの程度既知の抗体と競合するかがテストされる。このため、適切に固定された標的抗原はラベルされた当該既知の抗体及び過剰の注目の抗体とともにインキュベートされる。結合したラベルしているものの検出により、注目の抗体がどの程度結合部位（＝エピトープ）から当該既知の抗体を追い出し得るのか、容易に確認し得る。当該既知の抗体に対して注目の抗体が、同濃度又はより高濃度において、好ましくはlO5 倍過剰である場合において、もし10％超、好ましくは20％超の置換が生じていれば、エピトープの重複がある。それは注目の抗体が、当該既知の抗体と同じエピトープに結合したことを意味する。
【００２９】
"標的抗原"なる語は、その対応する治療用抗体が結合する生体分子のことを表す。例えば、ＨＥＲ２(= ＥｒｂＢ２ 又はｐ185 neu)に対する治療用抗体、例えば Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）又は Ｏｍｎｉｔａｒｇ（登録商標）の標的抗原はＨＥＲ２であり、ＥＧＦｒに対する治療用抗体、例えば Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）の標的抗原はＥＧＦｒであり、ＶＥＧＦに対する治療用抗体、例えば Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）の標的抗原はＶＥＧＦである。標的抗原は、可溶性、即ち分泌しているかもしくは分散している標的抗原、または（細胞）膜結合の標的抗原のいずれかがあり得る。
【００３０】
イムノアッセイは当業者にとって周知である。当該アッセイを実施する方法、並びに実際の応用及び手順は関係する教科書に要約されている。関係する教科書の例としては、Tijssen, P., Preparation of enzyme- antibody or enzyme-macromolecule conjugates, In: Practice and theory of enzyme immunoassays, Burdon, R.H. and v. Knippenberg, P. H. (eds.), Elsevier, Amsterdam (1990), pp. 221-278; 、免疫学検出法を扱っている各巻で、Colowick, S. P. and Caplan, N.O. (eds.), Methods in EnzymoloＧｙ, Academic Press,、の特に70, 73, 74, 84, 92 及び121巻が挙げられる。
【００３１】
ＨＥＲ２受容体タンパク質の"過剰発現"の語は、特定の組織又は器官由来の正常細胞における発現レベルと比較して、患者のその組織又は器官にある腫瘍由来の細胞におけるＨＥＲ２受容体タンパク質の異常な発現レベルを意味している。ＨＥＲ２受容体の過剰発現を特徴とする癌に罹患している患者は、当業界において既知の標準的アッセイによって決定され得る。好ましくは、過剰発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出法を用いて、凍結され又はパラフィンに包埋された組織断片の固定された細胞で測定される。組織染色と組み合わせると、標的タンパク質の所在が決定され、腫瘍の中でのその発現の程度が、定性的及び半定量的に測定可能である。当該ＩＨＣ検出アッセイは当業界において既知であり、臨床試験法（Clinical Trial Assay (CTA)）、市販のLabCorp ４Ｄ５試験、及び市販のＤＡＫＯ ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（登録商標）（DAKO, Carpinteria, Calif.）が含まれる。最後の測定法は、当該ＨＥＲ２タンパク質の過剰発現を有する癌を同定するため、０から３＋の細胞染色の特定の範囲（０は通常発現、３＋は最も強い陽性発現を意味する）を用いる(Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）全処方情報; September 1998; Genentech, Inc., San Francisco, Calif.参照)。それ故、１＋, ２＋, 又は３＋、好ましくは２＋ 又は３＋、さらに好ましくは３＋の範囲で、ＨＥＲ２タンパク質の過剰発現を特徴とする癌に罹患している患者は、本発明の治療法の恩恵を受ける。
【００３２】
"ＨＥＲ２陽性癌"の語は、例えば乳癌、胃癌（gaster cancer）、子宮内膜癌、唾液腺癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、卵巣癌、腹膜癌、前立腺癌、又は結腸直腸癌、の如きＨＥＲ２タンパク質の過剰発現を特徴とする癌を意味する。
【００３３】
ＨＥＲ２陽性癌は、例えば肺癌、非小細胞肺癌(NSCL)、気管支肺胞性肺癌、骨癌 、膵臓癌、皮膚癌、頭部や首の癌、皮膚又は眼内の黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌（stomach cancer）、胃癌（gastric cancer）、結腸癌、乳癌、子宮癌、ファローピウス管癌、子宮内膜癌、頸癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、食道癌、腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、腎又は尿道の癌（cancer of the kidney or urethra）、腎細胞癌、腎盤癌、中皮腫、肝細胞癌、胆管癌、慢性又は急性白血病、リンパ球のリンパ腫（lymphocytic lymphomas）、中枢神経系（CNS）癌、脊髄ブロック癌、脳幹神経膠腫、多形性グリア芽細胞腫、星状細胞増加症、シュヴァン細胞腫（schwannomas）、上衣細胞腫（ependymomas）、髄芽細胞腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫、上記記載中任意の難治性癌、又は１もしくは複数の上記記載の癌の組合せがあり得る。前癌状態又は病変には、例えば口腔白斑症、日光角化症、結腸又は直腸の前癌ポリープ、胃上皮形成異常、腺腫形成異常（adenomatous dysplasia）、遺伝性非ポリポーシス大腸癌（HNPCC）、バレット症候群、膀胱形成異常（bladder dysplasia）、及び頸部前癌状態（precancerous cervical conditions）が含まれる。好ましい実施形態としては、癌は再発したＨＥＲ２陽性乳癌であり、それは好ましくは当該抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療中又は治療後である。ここで当該抗ＨＥＲ２抗体は好ましくはトラスツズマブである。
【００３４】
"乳癌"なる語は、異常な胸部細胞（breast cells）の無秩序な増殖を表す。それは、上皮内腺管癌（ductal carcinoma in situ）、侵襲性腺管癌、上皮内小葉癌、侵襲性小葉癌、髄様癌、乳頭のパジェット病、及び転移性乳癌を含む。
【００３５】
"再発した癌"なる語は、当初は先の治療に応答していたが、その治療応答が維持されなくなった、腫瘍患者の異常な細胞の無秩序な増殖を意味する。"再発したＨＥＲ２陽性癌"なる語は、当初は抗ＨＥＲ２抗体、好ましくはトラスツズマブを用いた先の治療に応答していたが、その治療応答が、当該抗ＨＥＲ２抗体で治療中に維持されなくなった、腫瘍患者におけるＨＥＲ２タンパク質の過剰発現を特徴とする、異常細胞の無秩序な増殖を意味する。腫瘍患者であって、当初は抗ＨＥＲ２抗体を用いた先の治療に応答していたが、その治療応答が維持されなくなった者を"再発者"と表す。
【００３６】
治療応答（ＲＥ）は、患者の治療を評価するための当業界に周知の臨床及び研究室データから得られる結果により確認された、医師の医療判断に基づいて確立されている。当該データは例えば、臨床試験、細胞学的又は組織学的な技術、内視鏡検査法又は腹腔鏡検査、超音波、ＣＴ及びＭＲＩスキャン、胸部Ｘ線及びマンモグラフィ、並びに腫瘍マーカー、例えばＣＥＡ、Ｃｙｆｒａ、ＣＡ１５−３、インターロイキン８、及び可溶性ＨＥＲ２の濃度測定から得ることができる。好ましくは、腫瘍応答（ＲＥ）の決定にはＲＥＣＩＳＴ基準が使用できる（Therasse et al., J. Nat. Cancer Institute. 92 (2000) 205-216）。
【００３７】
これらのＲＥＣＩＳＴ基準によると、固形腫瘍に対する腫瘍応答は、腫瘍の進行又は退行の体積（例えばＣＴにより測定）に依存して４つのレベルに分類される（Therasse, et al. J. Nat. Cancer Institute. 92 (2000) 205-216)）。：完全応答 (ＣＲ) 又は部分応答 (ＰＲ)、安定疾患 (ＳＤ) 及び進行性疾患 (ＰＤ) (表１参照)。さらに、欧州癌研究治療機構(ＥＯＲＴＣ) は、２-[18F]-フルオロ- ２ - デオキシグルコース 陽電子発光トモグラフィ(ＦＤＧ−ＰＥＴ) (Young H., et al., Eur J Cane 35 (1999) 1773-1782 and Kellof, G. J. , et al, Clin Cane Res 11 (2005) 2785- 2808) により測定された腫瘍の代謝作用に依存した４つのレベルの分類を提唱した。: 完全代謝応答(ＣＭＲ) 又は部分代謝応答(ＰＭＲ)、安定代謝疾患(ＳＭＤ)及び進行性代謝疾患(ＰＭＤ) (表２参照)。
【００３８】
【表１】
2015214582.tif 000003
【００３９】
それゆえ、本発明における、応答（ＲＥ）及び非応答（ＮＲ）は、もっとも好ましくは、上記のＲＥＣＩＳＴ及びＦＤＧ−ＰＥＴ基準の両方を用いた、ＣＴ及び２-[18F]-フルオロ- ２ - デオキシグルコース 陽電子発光トモグラフィ(ＦＤＧ−ＰＥＴ) (Kellof, G. J. ., et al, Clin Cane Res 11 (2005) 2785- 2808 and Young H., et al., Eur J Cane 35 (1999) 1773-82) の組み合わせにより得られたデータに基づいて確立されるものである。ゆえに、本発明に係る応答（ＲＥ）及び非応答（ＮＲ）は以下のように決定される：
【００４０】
応答（ＲＥ）：ＣＲ又はＰＲはＣＴ−ＲＥＣＩＳＴ基準により確立され（表１）、ＣＭＲ又はＰＭＲはＦＤＧ−ＰＥＴにより確立される（表２）。ゆえに、応答（ＲＥ）は、ＣＴ及びＰＥＴ測定の組み合わせによる以下の４ケースの１を意味する：ＣＲ及びＣＭＲ、ＰＲ及びＰＭＲ、ＣＲ及びＰＭＲ、ＰＲ及びＣＭＲ。
【００４１】
非応答（ＮＲ）：ＳＤ又はＰＤはＣＴ−ＲＥＣＩＳＴ基準により確立され（表１）、ＳＭＤ又はＰＭＤはＦＤＧ−ＰＥＴにより確立される（表２）。ゆえに、ＣＴ及びＰＥＴ測定の組み合わせによる以下の４ケースが、非応答（ＮＲ）を意味する：ＳＤ及びＳＭＤ、ＳＤ及びＰＭＤ、ＰＤ及びＳＭＤ、並びにＰＤ及びＰＭＤ。
【００４２】
応答は、通常治療開始後３から８週程度、好ましくは６週程度で決定される。この応答決定は通常４から８週の間隔で、好ましくは６から８週で繰り返される。第一の決定で、有意な応答（ＲＥ）が確認されると、その後再発（最初の決定後の非応答（ＮＲ）を意味する）は最短でも第二の応答決定で決定付けられる。抗ＶＥＧＦ抗体での治療は、最短でもＨＥＲ２陽性癌の再発の決定後に開始される。好ましくは、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の抗ＶＥＧＦ抗体での治療は、当該抗ＨＥＲ２抗体での治療開始後、最短でも12週、さらに好ましくは15週、一層さらに好ましくは18週後に開始される。好ましい実施形態は、治療されるべき癌が、再発したＨＥＲ２陽性癌であり、好ましくは再発したＨＥＲ２陽性の乳癌である。
【００４３】
"ＨＥＲ２陽性癌に罹患している患者"なる語は、患者であって、第一の応答決定後に応答（ＲＥ）が決定され、且つ第二の又はその後の応答決定において非応答（ＮＲ）が決定された者を表す。
【００４４】
本明細書において使用する際には、"患者"なる語は、治療すべき癌、前癌状態もしくは病変の治療を必要としているヒトを表す。しかしながら、"患者"なる語は、治療を必要としている、非ヒト動物、とりわけ好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、及び非ヒト霊長類の如き哺乳類を表し得る。
【００４５】
"群"の語は、患者群並びに患者亜群を表す。
【００４６】
本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００４７】
本発明はさらに、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療のための抗ＶＥＧＦ抗体を含んでなる。抗ＶＥＧＦ抗体は好ましくはベバシズマブであり、それはトラスツズマブで一次単剤治療後に投与されることが望ましい。
【００４８】
より好ましい実施態様は、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。これは、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用であり、ＨＥＲ２陽性癌の再発後、患者に対し当該抗ＶＥＧＦ抗体及び当該抗ＨＥＲ２抗体を共投与することを含んでなる。
【００４９】
ゆえに、好適には当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で治療中の患者に投与されるものである。好ましい実施形態としては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療中、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療のための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。ゆえに、好ましくは、当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療中の患者に対し、投与されるものである。
【００５０】
好ましい実施態様としては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。これは、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者を治療するための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用であり、ＨＥＲ２陽性癌の再発後、患者に対し当該抗ＶＥＧＦ抗体のみを患者に投与することを含んでなる。
【００５１】
ゆえに、好適には当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で治療後の患者に投与されるものである。好ましい実施形態としては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療後、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療のための医薬品の製造のための、抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。ゆえに、好ましくは、当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療後の患者に対し、投与されるものである。
【００５２】
当該抗ＶＥＧＦ抗体は、好ましくはベバシズマブと同じエピトープに結合するものである。
【００５３】
当該抗ＶＥＧＦ抗体は、好ましくはベバシズマブである。
【００５４】
当該抗ＨＥＲ２抗体は、好ましくはトラスツズマブである。
【００５５】
本明細書における"一次治療"は、初期の診断及び／又は外科手術の後に最初に癌又は転移の治療のために与えられるものを表す。これは補助療法的又は新補助療法的な化学療法又は免疫療法であってよい。本明細書における"補助療法的化学療法又は免疫療法"とは、癌再発を阻止する目的の外科手術後の治療を意味し、"新補助療法的化学療法又は免疫療法"とは、腫瘍サイズを縮小させるという考えで、外科手術より先に与えられる治療を意味する。本明細書における"化学療法"とは、癌治療のための化学的もしくは生化学的物質、例えば、５‐フルオルウラシル（5-fluoruracil）の如き細胞障害性薬物、又はトラスツズマブの如きモノクローナル抗体もしくはエルロチニブ（erlotinib）の如きキナーゼ阻害剤でのターゲット療法を表す。
【００５６】
本明細書における"一次単剤治療"なる語は、（２又はそれ以上の化学的又は生化学的物質での一次治療を意味する、"一次の組み合わせ治療"なる語と対照的に）単一の化学的もしくは生化学的な物質での、上記の如く定義された一次治療を意味する。
【００５７】
好ましい実施形態としては、本発明は該抗ＶＥＧＦ抗体と該ＨＥＲ２抗体を患者に共投与することを含んでなる。
【００５８】
"医薬品の製造のための方法"の語は、本明細書で特定された指示での使用、及び特に腫瘍、腫瘍転移、又は一般的な癌の治療においての使用のための医薬品の製造を表す。
【００５９】
さらに本発明は、治療的に効果的な量の抗ＶＥＧＦ抗体を患者に投与することを含んでなる、抗ＨＥＲ２抗体での治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療法を含んでなる。好ましい実施形態としては、本発明は抗ＨＥＲ２抗体での治療中に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療法で、ＨＥＲ２陽性癌の再発後、患者に対し当該抗ＶＥＧＦ抗体及び当該抗ＨＥＲ２抗体を共投与することを含んでなる。
【００６０】
好ましい実施形態としては、本発明は抗ＨＥＲ２抗体で治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者の治療法で、ＨＥＲ２陽性癌の再発後、患者に対し治療的に効果的な量の当該抗ＶＥＧＦ抗体のみを患者に投与することを含んでなる。
【００６１】
本明細書で使われる"治療"なる語は、特にことわりのない場合は、患者における、腫瘍、腫瘍転移、他の発癌性もしくは腫瘍性細胞の増殖の、進行の逆行、軽減、阻害、又は部分的もしくは完全な増殖の阻止を意味する。本明細書で使われる"治療"の語は、特にことわりのない場合は、当該治療の行為を表す。
【００６２】
"治療の方法" 又はそれと同意なる語句は、例えば癌に適用したときに、患者における癌細胞の数を減少もしくは除去させるべく、又は癌の症状の軽減のために設計された行為を表す。癌又は他の増殖性の疾患の"治療方法"は、実際に癌細胞もしくは他の疾患が除去され、実際に細胞数もしくは疾患が減少し、又は実際に癌もしくは他の疾患の症状が軽減するであろうことを必ずしも意味している訳ではない。しばしば、癌治療の方法は、成功可能性が低い状態であっても行われ、しかしそれは、医療の歴史及び患者の推定生存確率を鑑みて、それでもなお全体的に有益な行為とみなされる。
【００６３】
抗体は患者に対し治療的に効果的な量を投与されることは自明であり、その効果的な量とは、研究者、獣医、医師又は他の臨床医により探求されてきている、組織、器官系、動物又はヒトの生化学的又は医学的応答を誘導するであろう対象の化合物又は組み合わせの量である。
【００６４】
抗ＶＥＧＦ抗体の投与量もしくは抗ＶＥＧＦ及び抗ＨＥＲ２抗体の共投与量、又は投与タイミングは、治療される患者のタイプ（種、性、年齢、体重、等）及び状態ならびに治療される病気や状態の重篤度に依存するであろう。通常は、典型的なベバシズマブ及びトラスツズマブの如き抗ＶＥＧＦ抗体及び抗ＨＥＲ２抗体の用量が用いられる。例えば、本発明による抗体の投与のための用量は、１又は複数回の独立した投与、又は連続的点滴で、抗体が約１μg /kg から 50 mg/kg (例えば 0.1-20 mg/kg)であり得る。典型的な日常の用量は、約１μg /kg から約100 mg/kg の範囲であろう。好ましい観点においては、抗体は、２から３週毎に、約１mg/kg から約 15 mg/kgの範囲で投与される。好ましいトラスツズマブの用量は、負荷量として４mg/kg投与され、及びその後の連続的点滴として週に３度の２mg/kg から６mg/kg、好ましくは２mg/kgの投薬が、疾患の進行が確認されるまで施される。好ましいベバシズマブの用量は、静脈点滴として14日毎に１度、５mg/kg から 15mg/kg、好ましくは５mg/kg から 10 mg/kgである。
【００６５】
"抗ＨＥＲ２抗体で治療中"なる語は、抗ＨＥＲ２抗体と投与される抗ＶＥＧＦ抗体の"共投与"を表す。"共投与"は、同時か連続的のいずれかで抗ＨＥＲ２抗体に加えて抗ＶＥＧＦ抗体が投与されることを意味する。共投与は、同時又はいずれの順序で連続的でも可能であるが、ここで、両方の（又は全ての）活性剤がそれらの生化学的活性を同時に発揮する期間があることが好ましい。両抗体が同時に投与される場合は、用量は１回の投与で同日に、例えば１回の連続的な点滴で投与される。両抗体が連続的に投与される場合は、用量は２回の独立した投与で同日に、例えば２の独立した連続的な点滴がなされるか、又は当該抗体の１種が１日目に投与され第２抗体が２日目から７日目、好ましくは２日目から４日目に投与される。抗ＶＥＧＦ抗体及び抗ＨＥＲ２抗体の維持量に関しての"共投与"なる語は以下のことを意味している。即ち、治療サイクルが両抗体にとって適切であれば、維持量が同時に投与される例えば１回の連続的な点滴か、または維持量が連続的に投与される例えば１日か数日以内のどちらかで、例えば抗ＨＥＲ２抗体の維持量が３週ごとに投与され抗ＶＥＧＦ抗体の維持量が２週間ごとに投与される、のいずれでもよい。他の治療サイクル、通常１から４週、好ましくは２から３週、も両抗体に使用し得る。
【００６６】
"抗ＨＥＲ２抗体で治療後"なる語は、抗ＶＥＧＦ抗体の投与であって、それが抗ＨＥＲ２抗体での治療が中断した後に投与されるものを表す。
【００６７】
好ましい実施形態においては、当該医薬品は患者における転移の低減、当該患者の生存期間の延長、当該患者の無増悪生存率の上昇、応答期間の延長のために有用であり、生存期間、無増悪生存率、応答率、又は応答期間により測定された、治療された患者の統計的に有意でかつ臨床的に意義ある進歩をもたらす。好ましい実施形態においては、当該医薬品はある患者群において応答率の上昇に有用である。
【００６８】
好ましい実施形態においては、当該医薬品は、当該抗ＶＥＧＦ抗体、好適にはベバシズマブと抗ＨＥＲ２抗体、好適にはトラスツズマブの患者への共投与により、抗ＨＥＲ２抗体で治療中に再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の低減に有用である。
【００６９】
好ましい実施形態においては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００７０】
さらなる実施形態は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体である。当該抗ＶＥＧＦ抗体は、好ましくはベバシズマブであり、それは好適にはトラスツズマブで一次単剤治療の後に投与される。
【００７１】
好ましい実施形態においては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療中に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００７２】
ゆえに、好適には当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で治療中に投与される。
【００７３】
好ましい実施形態においては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体での一次単剤治療中に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００７４】
ゆえに、好適には当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療中に投与される。
【００７５】
好ましい実施形態においては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００７６】
ゆえに、好適には当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で治療後に投与される。
【００７７】
好ましい実施形態においては、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において、転移の予防又は低減のための医薬品の製造のための抗ＶＥＧＦ抗体の使用を含んでなる。
【００７８】
ゆえに、好適には当該医薬品は、当該抗ＨＥＲ２抗体で一次単剤治療後に投与される。
【００７９】
本発明における"転移"なる語は、患者において、原発性腫瘍からどこか他の１又は複数の部位への癌性細胞の伝播を表す。癌が転移したかを決定する方法は、当業界で既知であり、骨スキャン、胸部Ｘ線、ＣＡＴスキャン、ＭＲＩスキャン、及び腫瘍マーカーテストが含まれる。
【００８０】
"転移予防のための医薬品"又は"転移低減のための医薬品"なる語は、本明細書中で、患者において、原発性腫瘍から他の１又は複数の部位への癌性細胞のさらなる伝播を阻害又は低減するように、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者における転移に対して予防する薬剤としての医薬品の使用を意味する。これは、原発性、転移性腫瘍又は癌の転移が阻止され、遅らせられ、又は抑制されることを意味する。好ましくは、肝臓の転移が予防又は低減され、それは原発性腫瘍から肝臓への癌性細胞の転移性伝播が予防又は低減されることを意味する。
【００８１】
本発明との関係において、抗ＨＥＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療において、又は先の治療、好ましくは抗ＨＥＲ２抗体による先の一次単剤治療の失敗後の抗ＶＥＧＦ抗体治療において（即ち一次トラスツズマブ単剤治療で治療後に再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において）、追加的な他の細胞障害性、化学療法性、又は抗癌性の薬剤又は化合物でこれらの薬剤の効果を高めるものを使用し得る。抗ＨＥＲ２抗体を加えた抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療又は抗ＶＥＧＦ抗体治療は、好ましくは、当該薬剤の効果を高める追加的な細胞障害性の化学療法的な又は抗癌性の薬剤又は化合物なしで使用される。
【００８２】
当該薬剤は、例えば、アルキル化剤又はアルキル化作用を持つ剤、例えばシクロホスファミド（ＣＴＸ；例えばｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；例えばｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えばｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、ブスルファン（例えばｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、メルファラン、カルムスチン(ＢＣＮＵ)、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣ等；代謝拮抗剤、例えばメトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えばｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、６‐メルカプトプリン（６ＭＰ）、６‐チオクアニン (６ＴＧ)、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５‐フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えばＸｅｌｏｄａ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）等、抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えばａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン等；アルカロイド、例えばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンの如きビンカアルカロイド、その他の抗腫瘍剤、例えばパクリタキセル（例えばｔａｘｏｌ（登録商標））及びパクリタキセル誘導体、細胞増殖抑制性剤、デキサメタゾン（ＤＥＸ；例えばｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））の如きグルココルチコイド、プレドニゾンの如きコルチコステロイド、ヒドロキシウレアの如きヌクレオシド酵素阻害剤、アスパラギナーゼ、ロイコボリン及びその他の葉酸誘導体の如きアミノ酸枯渇酵素、及び同様の多種多様な抗腫瘍剤を含む。下記薬剤も追加的薬剤として使い得る：アルニフォスチン（ａｒｎｉｆｏｓｔｉｎｅ (例えばｅｔｈｙｏｌ（登録商標）)、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えばｄｏｘｉｌ（登録商標））、ゲムシタビン（例えばｇｅｍｚａｒ（登録商標））、ダウノルビシンリポ（例えばｄａｕｎｏｘｏｍｅ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えばｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリピン、カンプトセシン、ＣＰＴ １１（イリノテカン）、１０‐ヒドロキシ ７‐エチル‐カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル。好ましくは、抗ＨＥＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療又は抗ＶＥＧＦ抗体治療は、これら追加的な薬剤又は化合物なしで使用される。
【００８３】
本発明との関係において、抗ＨＥＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療において、又は先の治療、好ましくは抗ＨＥＲ２抗体による先の一次単剤治療の失敗後の抗ＶＥＧＦ抗体治療において（即ち一次トラスツズマブ単剤治療で治療後に再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において）、抗ホルモン剤を使用し得る。本明細書中では、"抗ホルモン剤"なる語は、腫瘍に対するホルモン作用を、調節又は阻害するよう作用する、天然又は合成有機又はペプチド化合物を含む。抗ホルモン剤は、例えば：ステロイドレセプターアンタゴニスト、タモキシフェンの如き抗エストロゲン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性 ４（５）−イミダゾール、他のアロマターゼ阻害剤、４２‐ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ １１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｐｍ（登録商標））；抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、及びゴセレリン；医学的に許容可能な塩、酸、又は上記の任意の誘導体；糖タンパク質ホルモンのアゴニスト 及び／又は アンタゴニスト、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン、及びＬＨＲＨ（黄体形成ホルモン放出ホルモン）；ＬＨＲＨアゴニストコセレリン酢酸塩、市販のＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＬＨＲＨアンタゴニスト Ｄ−アラニンアミド Ｎ−アセチル-３-(２-ナフタルエチル) - Ｄ-アラニル-４-クロロ-Ｄ-フェニルアラニル-３-(３-ピリジニル)-Ｄ-アラニル-Ｌ-セリル-Ｎ６-(３-ピリジニルカルボニル)-Ｌ-リシル-Ｎ６-(３-ピリジニル-カルボニル)-Ｄ-リシル-Ｌ-ロイシル-Ｎ６-(l-メチルエチル)-Ｌ-リシル-Ｌ-プロリン（例えばＡｎｔｉｄｅ（登録商標）、Ａｒｅｓ−Ｓｅｒｏｎｏ）；ＬＨＲＨアンタゴニストガニレリクス酢酸塩；ステロイド性抗アンドロゲン シプロテロン酢酸エステル（ＣＰＡ）、メゲストロール酢酸エステル、市販のＭｅｇａｃｅ（登録商標）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ ＯｎｃｏｌｏＧｙ）；非ステロイド性抗アンドロゲンフルタミド（２-メチル-Ｎ-[４．２０-ニトロ-３-(トリフルオロメチル)フェニルプロパンアミド）、市販のＥｕｌｅｘｉｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ）；非ステロイド性抗アンドロゲンニルタミド、(５，５-ジメチル-３-[４- ニトロ-３-(トリフルオロメチル-４’-ニトロフェニル)-４，４-ジメチル-イミダゾリジン-ジオン)；及びその他の非許容性レセプター（ｎｏｎ−ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）、例えばＲＡＲ（レチノイン酸レセプター）アンタゴニスト、ＲＸＲ（レチノイドＸレセプター）、ＴＲ（甲状腺レセプター）、ＶＤＲ（ビタミン-Ｄレセプター）等。好ましくは、抗ＨＥＲ２抗体を加えた抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療又は抗ＶＥＧＦ抗体治療は、当該追加的な抗ホルモン剤なしで使用される。
【００８４】
化学的療法における、上記の細胞障害性又はその他の抗癌剤の使用は、癌治療業界において一般的に十分に特徴付けられており、ここでのそれらの使用は、寛容や効果のモニタリング及び投与の経路や投与量のコントロールと同様に、若干の調整を伴って検討される。例えば、細胞障害性薬剤の実際の投与量は、組織培養法（histoculture methods）を使用することにより決定された、その患者の培養細胞の応答に依存して変化し得る。一般的に、投与量は、追加的な他の薬剤がない場合に使用される量と比較して低減されるであろう。
【００８５】
効果的な細胞障害性薬剤の典型的な投与量は、メーカーによる推奨範囲であり得、ｉｎ ｖｉｔｒｏ応答又は動物モデルでの応答によって示される場合、濃度又は量を最大で約１０分の１まで減少させることができる。ゆえに、実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び初期の培養された悪性細胞もしくは組織培養された（histocultured）組織サンプルのｉｎ ｖｉｔｒｏ応答性、又は適切な動物モデルにおいて観察された応答に基づいた治療方法の有効性に依存するであろう。
【００８６】
本発明との関係において、抗ＨＥＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療において、又は先の治療、好ましくは抗ＨＥＲ２抗体による先の一次単剤治療の失敗後の抗ＶＥＧＦ抗体治療において（即ち一次トラスツズマブ単剤治療で治療後に再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において）追加的な抗増殖剤を使用し得る。例えば：酵素，ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼの阻害剤及びレセプター，チロシンキナーゼＰＤＧＦＲの阻害剤、米国特許 第6,080,769号, 第6,194,438号, 第6,258,824号, 第6,586,447号, 第6,071,935号, 第6,495,564号, 第6,150,377号, 第6,596,735号, 第6,479,513号, 及び国際特許公開公報 WO 01/40217に開示され請求の範囲に記載されている化合物を含む。好ましくは、抗ＨＥＲ２抗体を加えた抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療又は抗ＶＥＧＦ抗体治療は、当該追加的な抗増殖剤なしで使用される。
【００８７】
本発明との関係において、抗ＨＥＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療において、又は先の治療、好ましくは抗ＨＥＲ２抗体による先の一次単剤治療の失敗後の抗ＶＥＧＦ抗体治療において（即ち再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者において）、追加して、有効量の電離放射線が照射され及び／又は放射性医薬品が使われ得る。放射線源は、治療される患者に対し外部的か内部的のいずれかであり得る。線源が患者に対して外部的である場合は、当該治療は外照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。線源が患者に対して内部的である場合は、当該治療は近接照射療法（ＢＴ）と呼ばれる。本発明との関係において使用される放射性原子は、ラジウム、セシウム-137、イリジウム-192、アメリシウム-241、金-198、コバルト-57、銅-67、テクネチウム-99、ヨウ素-123、ヨウ素-131、及びヨウ素-111からなる群から選択されるが、必ずしもそれらに限定されない。本発明によるＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が抗体である場合、当該放射性同位体で該抗体をラベルすることもできる。好ましくは、抗ＨＥＲ２抗体を加えた抗ＶＥＧＦ抗体の組み合わせ治療又は抗ＶＥＧＦ抗体治療は、当該電離放射線なしで使用される。
【００８８】
放射線治療は、切除不能な又は手術不能な腫瘍及び／又は腫瘍転移を制御するための標準的な治療である。放射線治療が化学療法と組み合わされる場合は、改善された結果が得られている。放射線治療は、標的領域に投射された高線量放射線が、腫瘍と正常組織の両方において増殖細胞を死に至らしめるという原理に基づいている。放射線量療法は、一般的に、放射線吸収線量（Ｇｙ）、時間及び分割法の観点で定義され、腫瘍学者によって慎重に定義されるべきものである。患者が受ける照射量は、多種多様な考慮に基づくが、２つの最も重要なことは、身体の他の臨界的構造体や器官との関係における腫瘍の所在と、どの程度まで腫瘍が広がっているかということである。放射線治療中の患者のための治療の典型的な過程は、治療スケジュールが１から６週間に渡り、患者に対して１週間に5日、1日あたり約1.8から2.0Ｇｙの単回照射で、全照射量が10から80Ｇｙの間となる。本発明の好ましい実施形態においては、ヒトの患者における腫瘍が本発明及び放射線療法の組み合わせ治療で治療される場合に相乗効果がある。言い換えれば、本発明の組み合わせ又は単独治療を含んでなる薬剤による腫瘍増殖の阻害が向上するのは、放射線治療、随意に追加的な化学療法又は抗癌剤と組み合わせた場合である。補助的な放射線治療のパラメータは、例えば国際特許公開公報 WO 99/60023に記載されている。
【００８９】
当該抗体は、既知の手法に従い、ボーラス投与としての静脈注射により、又は一定時間の連続的な点滴により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内（intracerobrospinal）、皮下、関節内、滑液内、クモ膜下腔内による経路により患者に投与される。抗体の静脈内又は皮下投与が好ましい。
【００９０】
本発明はさらに、容器、抗ＶＥＧＦ抗体を含んでなるその容器に入った組成物、及び抗ＨＥＲ２抗体で治療中又は治療後に、再発したＨＥＲ２陽性癌に罹患した患者に当該抗ＶＥＧＦ抗体を投与するようにその組成物の使用者に指示する包装インサートを含んでなる、製品を提供する。
【００９１】
"包装インサート"なる語は、治療用製品の商品包装に習慣的に含まれ、指示、使用法、用量、投与、禁忌及び／又は当該治療用成否の使用に関する警告についての情報を含み得る使用書を表す。
【００９２】
好ましい実施形態としては、製品は医学的に許容されるキャリアをさらに含んでなる。製品はさらに殺菌した希釈剤を含むことができ、それは好ましくは分けられた付加的な容器に貯蔵される。
【００９３】
本明細書中で使用される、"医学的に許容されるキャリア"は、医学的な投与において適合する任意の及び全ての物質であって、溶媒、分散媒、被覆剤、防菌防黴剤、等張吸収遅延剤（isotonic and absorption delaying agents）、並びに医学的な投与において適合する他の物質及び化合物を含むものを意味している。任意の慣習的な媒体又は薬剤が活性化合物と非適合である場合を除いて、本発明の組成物中におけるそれらの使用は検討される。補助的な活性化合物も、当該組成物に組み込まれ得る。
【００９４】
下記の実施例及び図は本発明の理解の補助として提供され、真の範囲は添付の請求の範囲において説明している。本発明の精神から逸脱しない限り、説明された手法における変更は許容され得る。
【実施例】
【００９５】
序論
本研究は、ヒト胸部異種移植モデルにおいてトラスツズマブ単独治療の失敗の後に、ａ）トラスツズマブ及びベバシズマブの組み合わせ、ならびに、ｂ）ベバシズマブ単独治療の抗腫瘍活性を調べた。
本研究のさらなる目的は、転移における治療の効果を調べることであった。
【００９６】
試験試薬
トラスツズマブを、ヒスチジン-塩酸、α‐αトレハロース(6O mM)、0.01％ ポリソルブ（Ｐｏｌｙｓｏｒｂ），ｐＨ 6.0中に25 mg/ml 原液として用意した(Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））。ベバシズマブを、リン酸Ｎａ、α‐αトレハロース(6O mM)、0.01％ ポリソルブ（Ｐｏｌｙｓｏｒｂ）， ｐＨ 6.0中に25 mg/ml 原液として用意した(Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））。両溶液は注入のためにＰＢＳで適切に希釈した。
【００９７】
細胞系及び培養条件
ヒト乳癌細胞系ＫＰＬ−４は、炎症性皮膚転移を伴う乳癌患者の悪性胸水から樹立され、ＥｒｂＢファミリーレセプターを過剰発現させる（Kurebayashi et al., Br. J. Cancer 79 (1999) 707-17）。腫瘍細胞は、10 ％ウシ胎児血清(ＰＡＡ)及び2 mM Ｌ-グルタミン (Ｇｉｂｃｏ)を添加したＤＭＥＭ培地 (ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｕｓｔｒｉａ)、で５％ ＣＯ２の水飽和雰囲気下３７℃で定法にて培養した。
継代培養は、２回／週で分割しながらトリプシン／ＥＤＴＡ １×（ＰＡＡ）で行い、第６代継代細胞をｉｎ ｖｉｖｏ研究に使用した。
【００９８】
動物
ベージュのＳＣＩＤマウス(Ｃ．Ｂ．−17)；10−12週齢、体重18−20ｇ（Charles River, Sulzfeld, Germany）は、国際基準により12ｈ 明／12ｈ 暗の１日サイクルで（GV- Solas; Felasa; TierschG）、特定病原体フリー状態で維持する。到着後、動物は新環境に順応させるため、また観察のために動物施設の隔離した部分において１週間飼育される。継続的な健康モニタリングが定期的に行われる。飼料（Ａｌｌｔｒｏｍｉｎ）及び水（ｐＨ 2.5−３に酸性化した）は適宜与えた。
【００９９】
ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍増殖阻害研究
腫瘍細胞は培養フラスコ(Ｇｒｅｉｎｅｒ ＴｒｉＦｌａｓｋ)から回収し(ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ)、50 ml培養培地に移し、ＰＢＳ中で一度洗浄して再懸濁した。ＰＢＳでの追加的な洗浄ステップとろ過（セル ストレイナー; ファルコン lOOμm）の後に、最終細胞濃度を0.75 × 108 / mlとした。腫瘍細胞懸濁物を、細胞凝集を回避するため慎重にホールピペットで混合した。事前保温したチャンバー（plexiglas）内で小動物用のＳｔｅｐｈｅｎｓ吸入装置を用い、個別のマウスノウズマスク（シリコン）とイソフルラン（Pharmacia-Upjohn, Germany）を用い、閉鎖循環システム内で麻酔を施した。注入の２日前に当該動物を剪毛した。乳腺上皮脂肪帯（i. m.f.p.）注入により、細胞を、個々の麻酔されたマウスの右鼠径部の乳腺脂肪帯から２番目の位置に20 μl、正所性注入した。正所性移植のために、細胞懸濁物を乳首の下の皮膚を通して注入した。腫瘍細胞注入が実験の第１日目に対応する。
【０１００】
モニタリング
動物を、副作用の臨床的症状検出のため、日々コントロールした。本実験を通してモニタリングのために、動物の体重を週２回記録し、腫瘍体積をノギスで週２回測定した。原発性腫瘍体積は、ＮＣＩプロトコールにより計算した（TV = l/2ab2, ここでａとｂはmmで表示する腫瘍サイズの長径と短径, Teicher, B., Anticancer drug development guide, Humana Press, 5, (1997) 92）。計算値は平均と標準偏差として記録した。
【０１０１】
動物の治療
腫瘍体積がおよそ100 mm3の腫瘍保持マウスを無作為抽出した（各々の群 ｎ=10）。治療前の各群は密接にマッチングしており、細胞注入後27日に治療開始を行った。Ａ群：媒体群−週１回、腹腔内（ｉ.ｐ.）10 ml/kg ＰＢＳバッファを与えた。Ｂ群：ｉ.ｐ.にトラスツズマブを、負荷量として30 mg/kg投与後、維持量として週１回 15 mg/kg投与した。60日目にＢ群の動物はさらなる３つの群、Ｂ’、Ｃ及びＤに分けられた。トラスツズマブ単独での治療を、週１回、15 mg/kg（維持用量）でＢ'群にのみ続けた。Ｃ群：61日目に、Ｃ群の治療はトラスツズマブ （15 mg/kg 週１回、ｉ.ｐ.）とベバシズマブ（５ mg/kg 週２回、ｉ.ｐ.）の組み合わせ治療に転換した。Ｄ群：61日目に、Ｄ群の治療は、トラスツズマブ治療を中断し、ベバシズマブ単剤治療（５ mg/kg 週２回、ｉ.ｐ.）に転換した。
【０１０２】
転移の評価
犠牲にした動物における、腫瘍細胞の肺に至る転移の拡散を測定した。転移は、Schneider, T., et al., Clin. Exp. Metas. 19 (2002) 571- 582 に従って測定した。簡潔に言うと、肺組織を培養し、ヒトＡｌｕ配列をリアルタイムＰＣＲで定量した。リアルタイムＰＣＲで定量したヒトＤＮＡレベルの高さが、転移レベルの高さと一致する。
【０１０３】
結果
原発性腫瘍増殖における治療効果を、図１及び表１に示す。媒体群（Ａ群）における腫瘍は急速に増殖し、マウスは腫瘍細胞注入後73日で、腫瘍の潰瘍及び臨床的症状の進行により死亡した。トラスツズマブでの治療（Ｂ群）は腫瘍増殖を明らかに抑制している；しかし、腫瘍は50日あたりから再増殖している。61日目に開始した、トラスツズマブとベバシズマブの組み合わせ治療への変更（Ｃ群）及びベバシズマブ単剤治療への転換（Ｄ群）は、両方ともに、実験期間（112日）中の腫瘍増殖を完全に阻害し、治療はよく許容された。
【０１０４】
【表２】
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【０１０５】
肝転移の治療効果を図２及び表２に示す。トラスツズマブ治療失敗後のトラスツズマブとベバシズマブの組み合わせは、転移の顕著な減少をもたらした。ヒトＡｌｕ配列のレベル（第２組織への腫瘍細胞の侵襲と一致する）は、73日目に犠牲にされた媒体で治療された動物と比較して、61日目から開始した31日間の組み合わせ治療で治療した動物において明らかに低い。トラスツズマブ又はベバシズマブの単剤治療で治療された動物で、それぞれ83日目又は112日目に犠牲にされた動物においても、転移は抑制されていた。転移に対するこの驚くべき効果は、細胞障害性薬剤で観察される効果とは大きく異なる（Geldof et al., Anticancer Res. 8 (1988) 1335-40, Murphy, J., Clin. Oncol. 11 (1993) 199-201, and De Larco et al., Cancer Res. 61 (2001) 2857-61）。
【０１０６】
【表３】
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【図１】
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【図２】
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【外国語明細書】
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