(57)【要約】      （修正有）【課題】各貫通穴に対して均等な力を与えることで、バラツキを与えることなく各貫通穴からの液体の移動を迅速に行うことができる分析用マイクロプレートを提供する。【解決手段】分析用マイクロプレートは、第一表面１１及び第一裏面１２を有する第一プレート１０であって、第一表面１１と第一裏面１２との間で延在する複数の第一貫通穴１３を有する第一プレート１０を備える。第一貫通穴１３には、内面に捕捉抗体が付着され、かつ、液体を保持できる第一多孔質層１５が設けられている。第一プレート１０は遠心機に設置可能となっている。第一多孔質層１５で保持された液体は、遠心機から付与される第一表面１１から第一裏面１２に向かう力が第一閾値以上となることで、第一貫通穴１３から第一裏面１２側の外方に排出される。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析用マイクロプレートにおいて、
第一表面及び第一裏面を有する第一プレートであって、前記第一表面と前記第一裏面との間で延在する複数の第一貫通穴を有する第一プレートを備え、
前記第一貫通穴内に、内面に捕捉抗体が付着され、かつ、液体を保持できる第一多孔質層が設けられ、
前記第一プレートは遠心機に設置可能となっており、
前記第一多孔質層で保持された液体は、前記遠心機から付与される前記第一表面から前記第一裏面に向かう力が第一閾値以上となることで、前記第一貫通穴から前記第一裏面側の外方に排出されることを特徴とする分析用マイクロプレート。
【請求項２】
前記第一プレートの前記第一表面に設置される第二プレートをさらに備え、
前記第二プレートは第二表面及び第二裏面を有するとともに、前記第二表面と前記第二裏面との間で延在する複数の第二貫通穴を有し、
前記第二貫通穴内に、液体を保持できる第二多孔質層が設けられ、
前記第二プレートは前記第一プレートの前記第一表面に設置された状態で遠心機に設置可能となっており、
前記第二多孔質層で保持された液体は、前記遠心機から付与される前記第二表面から前記第二裏面に向かう力が第二閾値以上となることで、前記第二貫通穴から排出され前記第一貫通穴内に流入されることを特徴とする請求項１に記載の分析用マイクロプレート。
【請求項３】
前記第一多孔質層で液体を保持する力は、前記第二多孔質層で液体を保持する力よりも大きくなっていることを特徴とする請求項２に記載の分析用マイクロプレート。
【請求項４】
前記第二多孔質層で保持される液体は前記捕捉抗体に対する抗原を含むことを特徴とする請求項２又は３のいずれかに記載の分析用マイクロプレート。
【請求項５】
前記第二多孔質層で保持される液体は蛍光標識抗体を含む液体、酵素標識抗体を含む液体又は前記酵素標識抗体を発光させる基質を含む液体であることを特徴とする請求項２又は３のいずれかに記載の分析用マイクロプレート。
【請求項６】
前記第二プレートの前記表面に設置される第三プレートをさらに備え、
前記第三プレートは第三表面及び第三裏面を有するとともに、前記第三表面と前記第三裏面との間で延在する複数の第三貫通穴を有し、
前記第三貫通穴内に、液体を保持できる第三多孔質層が設けられ、
前記第三プレートは前記第二プレートの前記表面に設置された状態で遠心機に設置可能となっており、
前記第三多孔質層で保持された液体は、前記遠心機から付与される前記第三表面から前記第三裏面に向かう力が第三閾値以上となることで、前記第三貫通穴から排出され前記第二貫通穴内に流入されることを特徴とする請求項２乃至５のいずれか１項に記載の分析用マイクロプレート。
【請求項７】
前記第三多孔質層で液体を保持する力は、前記第一多孔質層で液体を保持する力及び前記第二多孔質層で液体を保持する力よりも大きくなっていることを特徴とする請求項６に記載の分析用マイクロプレート。
【請求項８】
前記第三多孔質層で保持される液体は洗浄液であることを特徴とする請求項６又は７のいずれかに記載の分析用マイクロプレート。
【請求項９】
第ｎ−１プレートに設置される第ｎプレート（ｎは４以上の整数である。）をさらに備え、
前記第ｎプレートは第ｎ表面及び第ｎ裏面を有するとともに、前記第ｎ表面と前記第ｎ裏面との間で延在する複数の第ｎ貫通穴を有し、
前記第ｎ貫通穴内に、液体を保持できる第ｎ多孔質層が設けられ、
前記第ｎプレートは前記第ｎ−１プレートの第ｎ−１表面に設置された状態で遠心機に設置可能となっており、
前記第ｎ多孔質層で保持された液体は、前記遠心機から付与される前記第ｎ表面から前記第ｎ裏面に向かう力が第ｎ閾値以上となることで、前記第ｎ貫通穴から排出され第ｎ−１貫通穴内に流入されることを特徴とする請求項６乃至８のいずれか１項に記載の分析用マイクロプレート。
【請求項１０】
前記第ｎ多孔質層で液体を保持する力は、前記第ｎ−１貫通穴内に設けられた第ｎ−１多孔質層で液体を保持する力よりも大きくなっていることを特徴とする請求項９に記載の分析用マイクロプレート。
【請求項１１】
請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の分析用マイクロプレートと、
前記分析用マイクロプレートを保持し、前記分析用マイクロプレートの表面から裏面に向かって遠心力を付与する遠心機と、
を備えたことを特徴とする分析装置。
【請求項１２】
請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の分析用マイクロプレートを用いた分析方法において、
前記分析用マイクロプレートを遠心機に設置することと、
前記遠心機によって、前記分析用マイクロプレートの表面から裏面に向かって遠心力を付与することと、
を備えたことを特徴とする分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分析のために用いられる分析用マイクロプレート、このような分析用マイクロプレートを備えた分析装置、及び、このような分析用マイクロプレートを用いた分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、複数のウェルが設けられた平板からなり、生物学的又は化学的分析に使用するためのマイクロプレートが知られている。このマイクロプレートは、例えば、試薬中に含まれる抗体又は抗原の濃度を検出したり定量したりする際に用いられるELISA（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）等で使用される。
【０００３】
特許文献１では、平面上に列をなして配列され、底面及び側面を有する複数のウェルを備えた基板が開示されている。そして、特許文献１では、ウェルの中に多孔質層が設けられることが開示されている。また、特許文献２では、複数の貫通穴を有するプラテンを含み、プローブ、細胞又は溶媒を固定するための器具であって、貫通穴の少なくともいくつかがプローブ、細胞又は溶媒を固定するための多孔質材料を中に有する器具が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００７−５３２９０６号公報
【特許文献２】特表２００４−５１０９９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１に開示された基板のウェルには底面が存在することから、ウェルに入れられた液体を排出して新たな液体を入れたりウェルを洗浄したりする際には基板を反転させる等の作業が必要となり、非常に時間がかかってしまう。
【０００６】
他方、特許文献２に開示された器具では、気体、液体もしくは固体のバースト又はピンを特定の貫通穴に適用することで、試薬又はプローブをレセプタクルに移送することが想定されている。しかしながら、このようなバーストやピンを用いた場合には、機構が複雑になる可能性があるだけでなく、貫通穴毎にバラツキが生じてしまい試薬等が貫通穴に残ってしまうこともある。また、とりわけバーストを利用した場合には試薬等が飛散してしまう可能性もある。
【０００７】
特許文献２では、貫通穴内の液体試料に対して陽圧又は陰圧をかけることも想定されているが、このような圧によって液体の移動を調整することは難しく、仮にどこかの貫通穴から液体が排出されると、その貫通穴から圧が抜けてしまい、各貫通穴に対して均等な圧力を与えることは非常に困難なものとなる。
【０００８】
本発明は、このような点を鑑みてなされたものであり、各貫通穴に対して均等な力を与えることで、バラツキを与えることなく各貫通穴からの液体の移動を迅速に行うことができる分析用マイクロプレートと、このような分析用マイクロプレートを備えた分析装置及びこのような分析用マイクロプレートを用いた分析方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明による分析用マイクロプレートは、
第一表面及び第一裏面を有する第一プレートであって、前記第一表面と前記第一裏面との間で延在する複数の第一貫通穴を有する第一プレートを備え、
前記第一貫通穴内に、内面に捕捉抗体が付着され、かつ、液体を保持できる第一多孔質層が設けられ、
前記第一プレートが遠心機に設置可能となっており、
前記第一多孔質層で保持された液体が、前記遠心機から付与される前記第一表面から前記第一裏面に向かう力が第一閾値以上となることで、前記第一貫通穴から前記第一裏面側の外方に排出される。
【００１０】
本発明による分析用マイクロプレートは、
前記第一プレートの前記第一表面に設置される第二プレートをさらに備え、
前記第二プレートが第二表面及び第二裏面を有するとともに、前記第二表面と前記第二裏面との間で延在する複数の第二貫通穴を有し、
前記第二貫通穴内に、液体を保持できる第二多孔質層が設けられ、
前記第二プレートが前記第一プレートの前記第一表面に設置された状態で遠心機に設置可能となっており、
前記第二多孔質層で保持された液体が、前記遠心機から付与される前記第二表面から前記第二裏面に向かう力が第二閾値以上となることで、前記第二貫通穴から排出され前記第一貫通穴内に流入されてもよい。
【００１１】
本発明による分析用マイクロプレートにおいて、
前記第一多孔質層で液体を保持する力は、前記第二多孔質層で液体を保持する力よりも大きくなってもよい。
【００１２】
本発明による分析用マイクロプレートにおいて、
前記第二多孔質層で保持される液体は前記捕捉抗体に対する抗原を含んでもよい。
【００１３】
本発明による分析用マイクロプレートにおいて、
前記第二多孔質層で保持される液体は蛍光標識抗体を含む液体、酵素標識抗体を含む液体又は前記酵素標識抗体を発光させる基質を含む液体であってもよい。
【００１４】
本発明による分析用マイクロプレートは、
前記第二プレートの前記表面に設置される第三プレートをさらに備え、
前記第三プレートが第三表面及び第三裏面を有するとともに、前記第三表面と前記第三裏面との間で延在する複数の第三貫通穴を有し、
前記第三貫通穴内に、液体を保持できる第三多孔質層が設けられ、
前記第三プレートが前記第二プレートの前記表面に設置された状態で遠心機に設置可能となっており、
前記第三多孔質層で保持された液体が、前記遠心機から付与される前記第三表面から前記第三裏面に向かう力が第三閾値以上となることで、前記第三貫通穴から排出され前記第二貫通穴内に流入されてもよい。
【００１５】
本発明による分析用マイクロプレートにおいて、
前記第三多孔質層で液体を保持する力は、前記第一多孔質層で液体を保持する力及び前記第二多孔質層で液体を保持する力よりも大きくなってもよい。
【００１６】
本発明による分析用マイクロプレートにおいて、
前記第三多孔質層で保持される液体は洗浄液であってもよい。
【００１７】
本発明による分析用マイクロプレートは、
第ｎ−１プレートに設置される第ｎプレート（ｎは４以上の整数である。）をさらに備え、
前記第ｎプレートが第ｎ表面及び第ｎ裏面を有するとともに、前記第ｎ表面と前記第ｎ裏面との間で延在する複数の第ｎ貫通穴を有し、
前記第ｎ貫通穴内に、液体を保持できる第ｎ多孔質層が設けられ、
前記第ｎプレートが前記第ｎ−１プレートの第ｎ−１表面に設置された状態で遠心機に設置可能となっており、
前記第ｎ多孔質層で保持された液体が、前記遠心機から付与される前記第ｎ表面から前記第ｎ裏面に向かう力が第ｎ閾値以上となることで、前記第ｎ貫通穴から排出され第ｎ−１貫通穴内に流入されてもよい。
【００１８】
本発明による分析用マイクロプレートにおいて、
前記第ｎ多孔質層で液体を保持する力は、前記第ｎ−１貫通穴内に設けられた第ｎ−１多孔質層で液体を保持する力よりも大きくなってもよい。
【００１９】
本発明による分析装置は、
上述した分析用マイクロプレートと、
前記分析用マイクロプレートを保持し、前記分析用マイクロプレートの表面から裏面に向かって遠心力を付与する遠心機と、
を備える。
【００２０】
本発明による分析方法は、
上述した分析用マイクロプレートを用いた分析方法であり、
前記分析用マイクロプレートを遠心機に設置することと、
前記遠心機によって、前記分析用マイクロプレートの表面から裏面に向かって遠心力を付与することと、
を備える。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、第一貫通穴を有する第一プレートを利用することから、第一貫通穴に対する液体の流入及び排出といった液体の移動を迅速に行うことができる。
【００２２】
また、本発明によれば、第一多孔質層で保持された液体が、遠心機から付与される第一表面から第一裏面に向かう力が第一閾値以上となることで、第一貫通穴から第一裏面側の外方に排出される。このため、特許文献２に開示された器具を利用した場合と異なり、各貫通穴に対して確実に均等な力を与えることができ、バラツキを与えることなく各貫通穴から液体を移動させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、本発明の実施の形態による分析装置を上方から見た図である。
【図２】図２（ａ）は、本発明の実施の形態において、第一プレート、第二プレート、第三プレート、・・・、第ｎプレートを重ねる際の態様を示した側方概略断面図であり、図２（ｂ）は、本発明の実施の形態において、第一プレート、第二プレート、第三プレート、・・・、第ｎプレートを重ねた態様を示した側方概略断面図である。
【図３】図３（ａ）は、本発明の実施の形態において、第一プレート、第二プレート、第三プレート、第四プレートを重ねる際の態様を示した側方概略断面図であり、図３（ｂ）は、本発明の実施の形態において、第一プレート、第二プレート、第三プレート、第四プレートを重ねた態様を示した側方概略断面図である。
【図４】図４は、本発明の実施の形態による分析方法で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図５】図５は、図４で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図６】図６は、図５で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図７】図７は、図６で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図８】図８は、図７で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図９】図９は、図８で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図１０】図１０は、図９で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図１１】図１１は、図１０で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【図１２】図１２は、図１１で示された工程の後で行われる工程を説明するための側方概略断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
実施の形態
《構成》
以下、本発明に係る分析用マイクロプレート、分析装置及び分析方法の実施の形態について、図面を参照して説明する。ここで、図１乃至図１２は本発明の実施の形態を説明するための図である。本実施の形態の分析用マイクロプレート、分析装置及び分析方法はタンパク質やアミノ酸の検出に用いられるが、本実施の形態では、ELISA（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）を例に取って説明する。このELISAは、試料中に含まれる抗体又は抗原の濃度を検出したり定量したりする際に用いられる方法である。
【００２５】
図２（ａ）に示すように、本実施の形態の分析用マイクロプレート１００は、第一表面１１及び第一裏面１２を有する第一プレート１０を備えている。この第一プレート１０は、第一表面１１と第一裏面１２との間で延在する複数の第一貫通穴１３を有している。第一プレート１０は遠心機１５０（図１参照）内に設置可能となっている。各第一貫通穴１３には、内面に捕捉抗体が付着され、かつ、液体を保持できる第一多孔質層１５が設けられている。そして、第一多孔質層１５で保持された液体は、遠心機１５０から付与される第一表面１１から第一裏面１２に向かう力（図２（ａ）では上から下に向かう力）が第一閾値以上となることで、第一貫通穴１３から第一裏面１２側の外方に排出されることとなる。なお、本実施の形態の遠心機１５０には、第一貫通穴１３から第一裏面１２側の外方に排出された液体を受ける液体受け（図示せず）が設置されている。
【００２６】
図２（ａ）に示すように、本実施の形態の分析用マイクロプレート１００は、第一プレート１０の第一表面１１に設置される第二プレート２０をさらに備えている。この第二プレート２０は第二表面２１及び第二裏面２２を有するとともに、第二表面２１と第二裏面２２との間で延在する複数の第二貫通穴２３を有している。この第二プレート２０も遠心機１５０に設置可能となっており、第一プレート１０の第一表面１１上に載置されて、遠心機１５０内に設置されることとなる。各第二貫通穴２３には、液体を保持できる第二多孔質層２５が設けられている。そして、第二多孔質層２５で保持された液体は、遠心機１５０から付与される第二表面２１から第二裏面２２に向かう力（図２（ａ）では上から下に向かう力）が第二閾値以上となることで、第二貫通穴２３から排出され第一貫通穴１３内に流入されることとなる。
【００２７】
図２（ａ）に示すように、本実施の形態の分析用マイクロプレート１００は、第二プレート２０の第二表面２１に設置される第三プレート３０をさらに備えている。この第三プレート３０は第三表面３１及び第三裏面３２を有するとともに、第三表面３１と第三裏面３２との間で延在する複数の第三貫通穴３３を有している。この第三プレート３０も遠心機１５０に設置可能となっており、第二プレート２０の第二表面２１上に載置されて、遠心機１５０内に設置されることとなる。各第三貫通穴３３内には液体を保持できる第三多孔質層３５が設けられている。そして、第三多孔質層３５で保持された液体は、遠心機１５０から付与される第三表面３１から第三裏面３２に向かう力（図２（ａ）では上から下に向かう力）が第三閾値以上となることで、第三貫通穴３３から排出され第二貫通穴２３内に流入されることとなる。
【００２８】
図２（ａ）に示すように、本実施の形態の分析用マイクロプレート１００は、上記と同様にして、第三プレート３０の上方に設置される第ｎプレートｎ０（ｎは４以上の整数である。）をさらに備えてもよい。この第ｎプレートｎ０は第ｎ表面ｎ１及び第ｎ裏面ｎ２を有するとともに、第ｎ表面ｎ１と第ｎ裏面ｎ２との間で延在する複数の第ｎ貫通穴ｎ３を有している。第ｎプレートｎ０も遠心機１５０に設置可能となっており、第ｎ−１プレートの第ｎ−１表面上に載置されて、遠心機１５０内に設置されることとなる。各第ｎ貫通穴ｎ３は液体を保持できる第ｎ多孔質層ｎ５を有している。そして、第ｎ多孔質層ｎ５で保持された液体は、遠心機１５０から付与される第ｎ表面ｎ１から第ｎ裏面ｎ２に向かう力（図２（ａ）では上から下に向かう力）が第ｎ閾値以上となることで、第ｎ貫通穴ｎ３から排出され第ｎ−１貫通穴内に流入されることとなる。
【００２９】
ちなみに、第一多孔質層１５、第二多孔質層２５、第三多孔質層３５、・・・、第ｎ多孔質層ｎ５の材料は例えばポリスチレンとなっている。
【００３０】
本実施の形態では、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１は、第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっている。また、第三多孔質層３５で液体を保持する力Ｆ３は、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１及び第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっている。また、第ｎ多孔質層ｎ５で液体を保持する力Ｆｎは、第ｎ−１多孔質層で液体を保持する力Ｆｎ−１よりも大きくなっている。つまり、各多孔質層で液体を保持する力は以下のような数式で示すことができる。
Ｆ２＜Ｆ１＜Ｆ３＜・・・＜Ｆｎ−１＜Ｆｎ（ｎは４以上の整数である。）
なお、各多孔質層における液体を保持する力は、多孔質層に形成されている穴の径の大きさ、空隙率等によって適宜調整される。
【００３１】
図１に示すように、第一貫通穴１３、第二貫通穴２３、第三貫通穴３３、・・・、第ｎ貫通穴ｎ３の各々は、水平方向で例えば９６個設けられている。なお、本実施の形態では、測定対象となる抗原と検量線を書くための濃度の異なる抗原が、第二貫通穴２３の第二多孔質層２５で保持されることとなる。ちなみに濃度の異なる抗原は、例えば２倍、４倍、８倍、・・・というように希釈されたものを用いてもよいし、例えば１０倍、１００倍、１０００倍、・・・というように希釈されたものを用いてもよい。
【００３２】
本実施の形態の図２（ａ）（ｂ）乃至図１２では、第一貫通穴１３、第二貫通穴２３、第三貫通穴３３、・・・、第ｎ貫通穴ｎ３は、互いに対向した位置に配置されているが、これに限られることはなく、第一貫通穴１３、第二貫通穴２３、第三貫通穴３３、・・・、第ｎ貫通穴ｎ３が対向することなく互いにずれて配置されていてもよい。また、各貫通穴が多孔質層で満たされている必要はない。本実施の形態では、第一貫通穴１３は第一多孔質層１５で満たされているが、第二貫通穴２３は第二裏面２２側の一部が第二多孔質層２５で満たされ、第三貫通穴３３は第三裏面３２側の一部が第三多孔質層３５で満たされ、第ｎ貫通穴ｎ３は第ｎ裏面ｎ２側の一部が第ｎ多孔質層ｎ５で満たされている。
【００３３】
本実施の形態の一例としては、以下のものを挙げることができる。第一多孔質層１５が反応場となり、例えば抗原（目的タンパク質）に対する捕捉抗体が吸着されている。また、第二多孔質層２５では、抗原（目的タンパク質）を含む液体が保持されている。また、第三多孔質層３５ではリン酸緩衝生理食塩水（Phosphate buffered saline）（以下「ＰＢＳ」と言う。）等の通常の細胞洗浄溶液等からなる洗浄液が保持されている。また、第四多孔質層４５では蛍光標識抗体を含む液体が保持されている。また、第五多孔質層ではＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。
【００３４】
また、本実施の形態の別の例としては、以下のものを挙げることができる。第一多孔質層１５が反応場となり、例えば抗原（目的タンパク質）に対する捕捉抗体が吸着されている。また、第二多孔質層２５では、抗原（目的タンパク質）を含む液体が保持されている。また、第三多孔質層３５ではＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。また、第四多孔質層４５では酵素標識抗体を含む液体が保持されている。また、第五多孔質層ではＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。また、第六多孔質層では酵素標識抗体を発光させる基質を含む液体が保持されている。また、第七多孔質層ではＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。
【００３５】
また、一度に全ての処理をする必要はなく、以下のように複数回に分けて処理することもできる。一回目の遠心機１５０による処理では、反応場となる第一多孔質層１５を有する第一プレート１０が遠心機１５０に設置される。なお、この第一プレート１０には抗原（目的タンパク質）に対する捕捉抗体が吸着されている。第一プレート１０の上に、抗原（目的タンパク質）を含む液体を保持する第二多孔質層２５を有する第二プレート２０が設置される。この第二プレート２０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持する第三多孔質層３５を有する第三プレート３０が設置される。この第三プレート３０の上に、検出抗体（一次抗体）を含む液体を保持する第四多孔質層４５を有する第四プレート４０が設置される。この第四プレート４０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持する第五多孔質層を有する第五プレートが設置される。このように設置した上で、遠心機１５０によって遠心力を付与して一回目の処理が終了する（なお、遠心機１５０における具体的な処理内容については後で説明する。）。このように一回目の処理が終了すると、一回目の処理を経た第一プレート１０はそのままの状態で、酵素標識二次抗体を含む液体を保持する第二多孔質層２５を有する第二プレート２０が設置される。この第二プレート２０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持する第三多孔質層３５を有する第三プレート３０が設置される。この第三プレート３０の上に、酵素標識二次抗体を発光させる基質を含む液体を保持する第四多孔質層４５を有する第四プレート４０が設置される。この第四プレート４０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持する第五多孔質層を有する第五プレートが設置される。このように設置した上で、遠心機１５０によって遠心力を付与して二回目の処理が終了する。
【００３６】
また、さらに別の態様としては、長期間の反応時間を要するものを第二多孔質層２５で保持し、第三多孔質層３５、第四多孔質層４５、・・・、第ｎ多孔質層ｎ５ではＰＢＳ等の洗浄液のみを保持する態様も挙げることができる。この場合には、一例として、遠心機１５０による１回目の処理では、第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５で抗原（目的タンパク質）に対する捕捉抗体を保持し、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で抗原（目的タンパク質）を含む液体を保持し、第三多孔質層３５以降の多孔質層でＰＢＳ等の洗浄液を保持する。遠心機１５０による２回目の処理では、一回目の処理を経た第一プレート１０はそのままの状態で、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で蛍光標識抗体を含む液体を保持し、第三多孔質層３５以降の多孔質層でＰＢＳ等の洗浄液を保持する。別の例としては、遠心機１５０による１回目の処理では、第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５で抗原（目的タンパク質）に対する捕捉抗体を保持し、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で抗原（目的タンパク質）を含む液体を保持し、第三多孔質層３５以降の多孔質層でＰＢＳ等の洗浄液を保持する。遠心機１５０による２回目の処理では、一回目の処理を経た第一プレート１０はそのままの状態で、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で酵素標識抗体を含む液体を保持し、第三多孔質層３５以降の多孔質層でＰＢＳ等の洗浄液を保持する。遠心機１５０による３回目の処理では、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で酵素標識抗体を発光させる基質を含む液体を保持し、第三多孔質層３５以降の多孔質層でＰＢＳ等の洗浄液を保持する。
【００３７】
ちなみに、第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５で保持される捕捉抗体に対してブロッキング処理が行われていてもよい。この場合には、例えば、第一多孔質層１５で捕捉抗体を吸着した後でブロッキング処理を行い、その後で第一プレート１０を遠心機１５０に設置すればよい。
【００３８】
《方法》
本実施の形態の分析装置２００によって、行われる処理について説明する。なお、本実施の形態では、一例として、図３（ａ）（ｂ）に示すように、第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０を用い、蛍光標識抗体を利用した態様によって説明する。第四プレート４０は、第四表面４１及び第四裏面４２を有するとともに、第四表面４１と第四裏面４２との間で延在する複数の第四貫通穴４３を有している。
【００３９】
一回目の遠心機１５０による処理では、図３（ａ）に示すように、第一多孔質層１５が反応場となり、例えば抗原（目的タンパク質）に対する捕捉抗体が吸着されている。また、第二多孔質層２５では、抗原（目的タンパク質）を含む液体が保持されている。また、第三多孔質層３５では、ＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。また、第四多孔質層４５では、ＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。また、二回目の遠心機１５０による処理では、図８に示すように、一回目の処理を経た第一プレート１０はそのままの状態で、第二多孔質層２５では、蛍光標識抗体を含む液体が保持されている。また、第三多孔質層３５では、ＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。また、第四多孔質層４５では、ＰＢＳ等の洗浄液が保持されている。
【００４０】
まず、図３（ａ）に示すように、遠心機１５０に反応場となる第一多孔質層１５を有する第一プレート１０が設置される。なお、この第一多孔質層１５に対しては、捕捉抗体を吸着させた後で、ブロッキング処理が行われているものとする。遠心機１５０に設置された第一プレート１０の上に、抗原（目的タンパク質）を含む液体を保持した第二多孔質層２５を有する第二プレート２０が設置される。この第二プレート２０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持した第三多孔質層３５を有する第三プレート３０が設置される。この第三プレート３０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持した第四多孔質層４５を有する第四プレート４０が設置される。
【００４１】
ちなみに、図面では示していないが、ＰＢＳ等の洗浄液を保持する第三多孔質層３５及び第四多孔質層４５の厚みが第二多孔質層２５よりも厚くなっているか、第三プレート３０及び第四プレート４０の厚み自体が第二プレート２０よりも厚くなり、より多くの洗浄液を第三多孔質層３５及び第四多孔質層４５で保持できるようにしてもよい。
【００４２】
なお、抗原を含む液体、洗浄液等は、必ずしも多孔質層のみで保持されている必要はなく、図２（ａ）（ｂ）乃至図１２において多孔質層と当該多孔質層よりも上方側（後述のようにプレートを回転させている遠心機１５０の半径方向内方側）の両方で保持されてもよい。多孔質層で抗原を含む液体、洗浄液等が保持されている場合には、当該多孔質層よりも上方側でもこれら抗原を含む液体、洗浄液等を保持することができるためである。
【００４３】
上記のようにして第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０が遠心機１５０に設置されると、次に、遠心機１５０が第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０の各々を一体で回転させて、第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０の各々に対して遠心力を付与する。なお、遠心機１５０が回転する前には下から順に、第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０が載置されており、遠心機１５０が回転し出すと徐々に遠心機１５０の支持棒（図示せず）が横方向を向き始め、回転中心から第四プレート４０、第三プレート３０、第二プレート２０及び第一プレート１０の順に位置するようにして、第四プレート４０、第三プレート３０、第二プレート２０及び第一プレート１０の各々が一体で回転される。なお、このように第四プレート４０、第三プレート３０、第二プレート２０及び第一プレート１０の各々が一体で回転されている際には、各プレート１０，２０，３０，４０の法線が略水平方向を向いて回転されてもよい。
【００４４】
本実施の形態では、上述したように、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１は、第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっている。また、第三多孔質層３５で液体を保持する力Ｆ３は、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１及び第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっている。また、第四多孔質層４５で液体を保持する力Ｆ４は、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１、第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２及び第３多孔質層で液体を保持する力Ｆ３よりも大きくなっている。つまり、Ｆ２＜Ｆ１＜Ｆ３＜Ｆ４となっている。したがって、遠心機１５０から第二プレート２０に付与される力が第二閾値となると、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５から第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内に、抗原（目的タンパク質）を含む液体が流入される（図４参照）。このように抗原（目的タンパク質）を含む液体が第一多孔質層１５内に入ると、その回転数（例えば１００ｒｐｍ）を維持しつつ所定時間の間（例えば１０分間）、遠心機１５０による第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０の回転が継続される。
【００４５】
所定時間の間（例えば１０分間）回転が継続されると、回転数が上昇し始める。そして、遠心機１５０による回転が所定の回転数（例えば３００ｒｐｍ）となった時点で、遠心機１５０から第一プレート１０に付与される力が第一閾値となり、第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５から第一裏面１２側の液体受けに抗原（目的タンパク質）を含む液体が排出される（図５参照）。このように所定の回転数（例えば３００ｒｐｍ）になった時点で所定時間の間（例えば５分間）、当該回転数による回転が継続されてもよいし、当該回転数に留まることなく回転数を上昇させ続けてもよい。なお、液体受けで受けられた液体は、遠心機１５０の外方にそのまま排出されてもよいし、液体受け内に一時的に貯留されて遠心機１５０による処理が終了した後でまとめて排出されてもよい。
【００４６】
回転数がますます上昇され、遠心機１５０による回転が所定の回転数（例えば５００ｒｐｍ）となった時点で、遠心機１５０から第三プレート３０に付与される力が第三閾値となり、第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５から第三裏面３２側にＰＢＳ等の洗浄液が排出される（図６参照）。このように第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５から排出された洗浄液は第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５を通過して第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５に達する。そして、そのまま第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５から第一裏面１２側の液体受けにＰＢＳ等の洗浄液が排出される。なお、このように所定の回転数（例えば５００ｒｐｍ）になった時点で所定時間の間（例えば５分間）、当該回転数による回転が継続されてもよいし、当該回転数に留まることなく回転数を上昇させ続けてもよい。
【００４７】
回転数がますます上昇され、遠心機１５０による回転が所定の回転数（例えば１０００ｒｐｍ）となった時点で、遠心機１５０から第四プレート４０に付与される力が第四閾値となり、第四貫通穴４３内の第四多孔質層４５から第四裏面４２側にＰＢＳ等の洗浄液が排出される（図７参照）。このように第四貫通穴４３内の第四多孔質層４５から排出された洗浄液は第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５及び第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５を通過して第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５に達する。そして、そのまま第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５から第一裏面１２側の液体受けにＰＢＳ等の洗浄液が排出される。そして、このように所定の回転数（例えば１０００ｒｐｍ）になった時点で所定時間の間（例えば５分間）、第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０が回転された後で、遠心機１５０による１回目の処理が終了する。
【００４８】
次に、一回目の処理を経た第一プレート１０はそのままの状態で、第一プレート１０の上に、図８に示すように、蛍光標識抗体を含む液体を保持した第二多孔質層２５を有する第二プレート２０が設置される。この第二プレート２０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持した第三多孔質層３５を有する第三プレート３０が設置される。この第三プレート３０の上に、ＰＢＳ等の洗浄液を保持した第四多孔質層４５を有する第四プレート４０が設置される。
【００４９】
上記のようにして第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０が遠心機１５０に設置されると、次に、遠心機１５０が回転し各プレート１０，２０，３０，４０に対して遠心力を付与する。そして、遠心機１５０から第二プレート２０に付与される力が第二閾値となると、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５から第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内に、蛍光標識抗体を含む液体が流入される（図９参照）。このように蛍光標識抗体を含む液体が第一多孔質層１５内に入ると、その回転数（例えば１００ｒｐｍ）を維持しつつ所定時間の間（例えば１０分間）、遠心機１５０による第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０の回転が継続される。
【００５０】
所定時間の間（例えば１０分間）回転が継続されると、回転数が上昇し始める。そして、遠心機１５０による回転が所定の回転数（例えば３００ｒｐｍ）となった時点で、遠心機１５０から第一プレート１０に付与される力が第一閾値となり、第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５から第一裏面１２側の液体受けに蛍光標識抗体を含む液体が排出される（図１０参照）。このように所定の回転数（例えば３００ｒｐｍ）になった時点で所定時間の間（例えば５分間）、当該回転数による回転が継続されてもよいし、当該回転数に留まることなく回転数を上昇させ続けてもよい。
【００５１】
回転数がますます上昇され、遠心機１５０による回転が所定の回転数（例えば５００ｒｐｍ）となった時点で、遠心機１５０から第三プレート３０に付与される力が第三閾値となり、第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５から第三裏面３２側にＰＢＳ等の洗浄液が排出される（図１１参照）。このように第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５から排出された洗浄液は第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５を通過して第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５に達する。そして、そのまま第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５から第一裏面１２側の液体受けにＰＢＳ等の洗浄液が排出される。なお、このように所定の回転数（例えば５００ｒｐｍ）になった時点で所定時間の間（例えば５分間）、当該回転数による回転が継続されてもよいし、当該回転数に留まることなく回転数を上昇させ続けてもよい。
【００５２】
回転数がますます上昇され、遠心機１５０による回転が所定の回転数（例えば１０００ｒｐｍ）となった時点で、遠心機１５０から第四プレート４０に付与される力が第四閾値となり、第四貫通穴４３内の第四多孔質層４５から第四裏面４２側にＰＢＳ等の洗浄液が排出される（図１２参照）。このように第四貫通穴４３内の第四多孔質層４５から排出された洗浄液は第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５及び第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５を通過して第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５に達する。そして、そのまま第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５から第一裏面１２側の液体受けにＰＢＳ等の洗浄液が排出される。そして、このように所定の回転数（例えば１０００ｒｐｍ）になった時点で所定時間の間（例えば５分間）、第一プレート１０、第二プレート２０、第三プレート３０及び第四プレート４０が回転された後で、遠心機１５０による２回目の処理が終了し、遠心機１５０による処理が終了する。
【００５３】
《効果》
次に、上述した構成からなる本実施の形態によって達成される効果であって、まだ述べていない効果又はとりわけ重要な効果について説明する。
【００５４】
本実施の形態によれば、第一貫通穴１３を有する第一プレート１０を利用することから、第一表面１１側から液体を流入することができ、かつ、第一裏面１２側から液体を排出することができる。このため、第一貫通穴１３に対する液体の移動（流入及び排出）を簡易かつ迅速に行うことができる。
【００５５】
また、本実施の形態によれば、第一多孔質層１５で保持された液体が、遠心機１５０から付与される第一表面１１から第一裏面１２に向かう力が第一閾値以上となることで、第一貫通穴１３から第一裏面１２側の外方に排出される。このため、特許文献２に開示された器具を利用した場合と異なり、各第一貫通穴１３に対して確実に均等な力を与えることができ、バラツキを与えることなく各第一貫通穴１３から液体を移動させることができる。つまり、特許文献２に開示された発明において貫通穴内の液体試料に対して陽圧又は陰圧をかける態様を採用した場合には、仮にどこかの貫通穴から液体が排出されると、その貫通穴から圧が抜けてしまい、各貫通穴に対して均等な圧力を与えることは非常に困難なものとなる。これに対して、本実施の形態によれば、遠心機１５０を用いるので、各貫通穴に対して確実に均等な力を与えることができる。なお、特許文献２に開示された発明においてバーストやピンを用いた場合には、機構が複雑になる可能性があるだけでなく、貫通穴毎にバラツキが生じてしまい試薬等が貫通穴に残ってしまうこともある。また、とりわけバーストを利用した場合には試薬等が飛散してしまう可能性もある。この点、本実施の形態によれば、特許文献２に開示された発明によるこのような不都合を解消することができる。
【００５６】
また、本実施の形態によれば、第二多孔質層２５で保持された液体が、遠心機１５０から付与される第二表面２１から第二裏面２２に向かう力が第二閾値以上となることで、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５から排出され第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内に流入される。このため、遠心機１５０の回転数を調整することで、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５内に保持されていた液体を第一貫通穴１３内に流入させることができる。
【００５７】
なお、本実施の形態では、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１が第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっていることから、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５から排出された液体であっても第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５で保持することができ（図４及び図９参照）、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５から排出された液体を必要な時間の間、第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５で保持することができる。このため、例えば第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で保持されていた液体に含まれる抗原（目的タンパク質）と第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内の捕捉抗体とを確実に反応させたり、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で保持されていた液体に含まれる蛍光標識抗体と第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内の抗原とを確実に反応させたり、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で保持されていた液体に含まれる酵素標識抗体と第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内の抗原とを確実に反応させたり、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で保持されていた液体に含まれる基質と第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内の酵素標識抗体とを確実に反応させたりすることができる。
【００５８】
また、本実施の形態によれば、第三多孔質層３５で保持された液体が、遠心機１５０から付与される第三表面３１から第三裏面３２に向かう力が第三閾値以上となることで、第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５から排出されて第二貫通穴２３を通過して第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内に流入される（図６及び図１１参照）。このため、遠心機１５０の回転数を調整することで、第三貫通穴３３内の第三多孔質層３５内に保持されていた液体を第一貫通穴１３内に流入させることができる。
【００５９】
また、本実施の形態によれば、第三多孔質層３５で液体を保持する力Ｆ３は、第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっている。このため、第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５で保持された液体が排出される前に、第三多孔質層３５で保持された液体が第二貫通穴２３内の第二多孔質層２５内に流入してしまい、これらの液体が混ざってしまうことを防止することができる。また、本実施の形態によれば、第三多孔質層３５で液体を保持する力Ｆ３は、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１よりも大きくなっているので、第二貫通穴２３から排出されて第一多孔質層１５に留まっている液体と第三多孔質層３５で保持されていた液体とが混ざってしまうことも防止することができる。
【００６０】
なお、このように第三多孔質層３５で液体を保持する力Ｆ３が第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１よりも大きくなっていることから、第三多孔質層３５から排出された液体は第一多孔質層１５で留まることなく通過してしまう。このため、第三多孔質層３５で保持される液体は第一多孔質層１５を通過しても支障のないものが好ましく、例えば洗浄液であることが好ましい。
【００６１】
本実施の形態によれば、第ｎ多孔質層ｎ５で保持された液体が（ｎは４以上の整数である。）、遠心機１５０から付与される第ｎ表面ｎ１から第ｎ裏面ｎ２に向かう力が第ｎ閾値以上となることで、第ｎ貫通穴ｎ３の第ｎ多孔質層ｎ５から排出されて第ｎ−１貫通穴、・・・、第二貫通穴２３を順次通過して第一貫通穴１３内の第一多孔質層１５内に流入される。このため、遠心機１５０の回転数を調整することで、第ｎ貫通穴ｎ３の第ｎ多孔質層ｎ５内に保持されていた液体を一気に第一貫通穴１３内に流入させることができる。
【００６２】
また、本実施の形態によれば、第ｎ多孔質層ｎ５で液体を保持する力Ｆｎは、第ｎ−１多孔質層で液体を保持する力Ｆｎ−１よりも大きくなっている。このため、第ｎ−１貫通穴の第ｎ−１多孔質層で保持された液体が排出される前に、第ｎ多孔質層ｎ５で保持された液体が第ｎ−１貫通穴の第ｎ−１多孔質層内に流入してしまい、これらの液体が混ざってしまうことを防止することができる。また、このように第ｎ多孔質層ｎ５で液体を保持する力Ｆｎが第ｎ−１多孔質層で液体を保持する力Ｆｎ−１よりも大きくなっており、既に述べているように、第三多孔質層３５で液体を保持する力Ｆ３が、第一多孔質層１５で液体を保持する力Ｆ１及び第二多孔質層２５で液体を保持する力Ｆ２よりも大きくなっているので、第ｎ多孔質層ｎ５で液体を保持する力Ｆｎは、Ｆｎ−１、・・・、Ｆ２及びＦ１よりも大きくなっている。このため、第ｎ多孔質層ｎ５から排出された液体と、Ｆｎ−１、・・・、Ｆ２及びＦ１のいずれかに保持された液体とが、混ざってしまうことも防止することができる。
【００６３】
ちなみに、目的タンパク質等の抗原の量を測定する際には、吸光度又は蛍光の発光量を用いて検量線を書くことが考えられる。この点、本実施の形態のように多孔質層を利用する場合には、吸光度を用いると各多孔質層によって光が吸収されてしまい、測定結果に影響を及ぼす可能性があるので、蛍光の発光量を用いて抗原の量を測定する方が好ましい。したがって、本実施の形態では、蛍光標識抗体を利用する態様を採用することが好ましい。
【００６４】
最後になったが、上述した各実施の形態の記載及び図面の開示は、特許請求の範囲に記載された発明を説明するための一例に過ぎず、上述した実施の形態の記載又は図面の開示によって特許請求の範囲に記載された発明が限定されることはない。
【図１】
2015102467.tif 000003
【図２】
2015102467.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2015102467.tif 000012
【図１１】
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【図１２】
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