(57)【要約】      （修正有）【課題】オキシレン受容体拮抗作用を示し、一定品質を有する単一の結晶として再現性良く得られる、オキサジアゾール化合物の安定な結晶形及びその製造方法の提供。【解決手段】Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドを低級アルコール等に溶解後、結晶化、乾燥させた、下記（ａ）〜（ｃ）の物性の少なくとも１つを有する結晶及びその製造方法。（ａ）粉末Ｘ線回折（Ｃｕ−Ｋα）で、２θ＝１４．９，２０．８，２４．９及び２６．８度のピーク；（ｂ）融点が１３８〜１４３℃；（ｃ）赤外線吸収スペクトルで、特性吸収帯が１６３１、１６２３、１３６５、１２３５、９５１及び８１９ｃｍ-1。【選択図】図１
2015131801.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（ａ）〜（ｃ）の物性の少なくとも１つを有する、Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドの結晶。
（ａ）粉末Ｘ線回折（Ｃｕ−Ｋα）において、２θ＝１４．９度、２０．８度，２４．９度及び２６．８度にピークを有する；
（ｂ）融点が１３８〜１４３℃である；又は
（ｃ）赤外線吸収スペクトルにおいて、特性吸収帯が１６３１ｃｍ-1、１６２３ｃｍ-1、１３６５ｃｍ-1、１２３５ｃｍ-1、９５１ｃｍ-1及び８１９ｃｍ-1にある。
【請求項２】
低級アルコール、酢酸エチル、若しくはジＣ1-4アルキルエーテル又はこれらの混合溶媒にＮ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドを溶解させた後、結晶化させ、乾燥させることを特徴とする請求項１に記載の結晶の製造方法。  
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドの結晶多形及びその製造方法に関する。更に詳しくは、例えば睡眠障害、うつ病、不安障害、パニック障害、統合失調症、薬物依存症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、摂食障害、頭痛、片頭痛、疼痛、消化器疾患、てんかん、炎症、免疫関連疾患、内分泌関連疾患、高血圧等の疾患など、オレキシン（ＯＸ）受容体が関与しているとされる疾患の治療剤及び予防剤として有用性が期待されるオレキシン受容体拮抗薬であるＮ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドの結晶多形及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オレキシンは、視床下部外側野に特異的に発現するプレプロオレキシンからスプライシングされる神経ペプチドである。これまでに、３３個のアミノ酸からなるＯＸ−Ａおよび２８個のアミノ酸からなるＯＸ−Ｂが同定されており、これらはいずれも睡眠・覚醒パターンの調節や摂食の調節に深く関与している。
【０００３】
ＯＸ−ＡおよびＯＸ−Ｂは、いずれもＯＸ受容体に作用する。ＯＸ受容体は、これまでにＯＸ１およびＯＸ２受容体の２つのサブタイプがクローニングされており、いずれも主として脳内に発現する７回膜貫通Ｇタンパク質共役型受容体であることが知られている。ＯＸ１受容体は、Ｇタンパク質サブクラスのうちＧｑと特異的に共役しており、一方でＯＸ２受容体はＧｑおよびＧｉ／ｏに共役している（非特許文献１及び非特許文献２参照）。
ＯＸ受容体のサブタイプによって組織分布は異なっており、ＯＸ１受容体はノルアドレナリン作動性神経の起始核である青斑核、ＯＸ２受容体はヒスタミン神経の起始核である結節乳頭核に高密度に発現している（非特許文献３、非特許文献４及び非特許文献５参照）。セロトニン神経の起始核である縫線核や、ドパミン神経の起始核である腹側被蓋野にはＯＸ１受容体とＯＸ２受容体両方の発現がみられる（非特許文献３参照）。オレキシン神経は脳幹と視床下部のモノアミン神経系に投射し、それらの神経に対して興奮性の影響を与えており、さらにＲＥＭ睡眠の制御に関わる脳幹のアセチルコリン神経にもＯＸ２受容体の発現がみられ、これらの神経核の活性にも影響を及ぼしている（非特許文献３及び非特許文献４参照）。
【０００４】
近年、ＯＸ１およびＯＸ２受容体と睡眠・覚醒調節との関連が注目されており、ＯＸ受容体拮抗作用を有する化合物の有用性が研究されている。ＯＸ−Ａをラットの脳室内に投与すると、自発運動量の亢進（非特許文献６及び非特許文献７参照）、常同行動の亢進（非特許文献７参照）、覚醒時間の延長（非特許文献６参照）などが認められる。ＯＸ−Ａの投与によるＲＥＭ睡眠時間の短縮作用は、ＯＸ受容体拮抗物質の前処置により完全に拮抗される（非特許文献８参照）。さらに、経口投与が可能なＯＸ１およびＯＸ２受容体を同程度に拮抗する物質の投与により、運動量の減少、入眠潜時の短縮、ｎｏｎ−ＲＥＭ睡眠量およびＲＥＭ睡眠の増加が報告されている（非特許文献９および非特許文献１０参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Zhu Y et al., J. Pharmacol. Sci., 92, 259-266, 2003.
【非特許文献２】Zeitzer JM et al., Trends Pharmacol. Sci., 27, 368-374, 2006.
【非特許文献３】Marcus JN et al., J. Comp. Neurol, 435, 6-25, 2001.
【非特許文献４】Trivedi JP et al., FEBS Lett, 438, 71-75, 1998.
【非特許文献５】Yamanaka A et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 290, 1237-1245, 2002.
【非特許文献６】Hagan JJ et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 10911-10916, 1999.
【非特許文献７】Nakamura T et al., Brain Res., 873, 181-187, 2000.
【非特許文献８】Smith MI et al., Neurosci. Lett., 341, 256-258, 2003.
【非特許文献９】Brisbare-Roch C et al., Nat. Med., 13, 150-155, 2007.
【非特許文献１０】Cox CD et al., J. Med. Chem., 53, 5320-5332, 2010.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、ＯＸ受容体拮抗作用を示し、一定の品質を有する単一の結晶として再現性良く得られ、医薬品及び医薬品原料の製造に用いられる原薬の結晶として安定的に供給されることが可能で、保存安定性に優れた物理学的特性を有する新規な化合物の結晶形と製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド（以下、化合物（Ａ）と記すこともある）が、高いＯＸ受容体拮抗作用を示すことを示し、また物理的特性に優れた化合物（Ａ）の結晶を提供することができることを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本願発明の１つの態様は、
（１）下記（ａ）〜（ｃ）の物性の少なくとも１つを有する、
Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドのＡ形結晶である。
（ａ）粉末Ｘ線回折（Ｃｕ−Ｋα）において、２θ＝１４．９度、２０．８度，２４．９度及び２６．８度にピークを有する；
（ｂ）融点が１３８〜１４３℃である；又は
（ｃ）赤外線吸収スペクトルにおいて、特性吸収帯が１６３１ｃｍ-1、１６２３ｃｍ-1、１３６５ｃｍ-1、１２３５ｃｍ-1、９５１ｃｍ-1及び８１９ｃｍ-1にある。
また、本願発明の他の態様は、
（２）低級アルコール、酢酸エチル、又はジＣ1-4アルキルエーテル又はこれらの混合溶媒にＮ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドを溶解させた後、結晶化させ、乾燥させることを特徴とする（１）に記載の化合物（Ａ）のＡ形結晶の製造方法。  
【発明の効果】
【０００９】
Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドのＡ形結晶は室温付近の温度で安定な結晶であり、保存安定性に優れている。さらに、粉砕等の製剤操作によっても結晶形の転移を起こさないため、取り扱いやすく、有用な医薬品原料となりうることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】化合物（Ａ）のＡ形結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図２】化合物（Ａ）のＡ形結晶の示差熱分析／熱質量測定カーブを示す。
【図３】化合物（Ａ）のＡ形結晶の赤外吸収スペクトル（ＡＴＲ法）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明を実施するための形態を具体的に説明する。
本発明の化合物であるＮ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド（以下、化合物（A）と記すことがある）は、下記に示す化学構造を有している。
【００１２】
【化１】
2015131801.tif 000003
【００１３】
化合物（Ａ）のＡ形結晶は、次の（ａ）〜（ｃ）の物性の少なくとも１つを有する。
（ａ）粉末Ｘ線回折（Ｃｕ−Ｋα）において、２θ＝１４．９度、２０．８度，２４．９度及び２６．８度にピークを有する；
（ｂ）融点が１３８〜１４３℃である；又は
（ｃ）赤外線吸収スペクトルにおいて、特性吸収帯が１６３１ｃｍ-1、１６２３ｃｍ-1、１３６５ｃｍ-1、１２３５ｃｍ-1、９５１ｃｍ-1及び８１９ｃｍ-1にある。
化合物（Ａ）のＡ形結晶の粉末Ｘ線回折パターンは図１に、示差熱分析／熱質量測定カーブは図２に、赤外線吸収スペクトルは図３に示した通りである。
図１〜３から分かるように、本発明の製造方法により製造される化合物（Ａ）のＡ形結晶は、基本的に純度の高い結晶であることが分かる。結晶の純度は高いものが望ましく、好ましくは他の結晶形のものを実質的に含まないものである。
後述の実施例に示されるように、本発明の製造方法により製造される化合物（Ａ）のＡ形結晶は、一定の品質を有する単一の結晶として再現性良く得られ、医薬品及び医薬品原料の製造に用いられる原薬の結晶として安定的に供給されることが可能で、保存安定性に優れた物理学的特性を有する。
【００１４】
次に、化合物（Ａ）のＡ形結晶の製造方法について説明する。本発明のＡ形結晶は、以下のような再結晶操作により得られる。たとえば、所定の有機溶媒に化合物（A）を加熱溶解させた後、徐冷することにより結晶を析出させ、析出した結晶をろ過、遠心分離等により溶媒と分離した後に乾燥させることにより化合物（Ａ）のＡ形結晶を得ることができる。なお、再結晶は、１度のみならず２度以上繰り返してもよいが、通常は１度のみ再結晶を行う。
再結晶前の原料の化合物（Ａ）を溶解させる所定の有機溶媒とは、例えば低級アルコール、酢酸エチル、ジＣ1-4アルキルエーテル、アセトン、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯなどの一般的な有機溶媒又は、これらの有機溶媒の混合溶液が挙げられる。
【００１５】
低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２-プロパノールなどが挙げられる。好ましくは、メタノールもしくはエタノールである。
ジＣ1-4アルキルエーテルとしては、ジエチルエーテル、ジイソピルエーテル、ｔブチル−メチルエーテルなどが挙げられる。
【００１６】
化合物（A）を溶解させる濃度は１〜５０質量％、好ましくは５〜５０質量％である。ここで質量％とは、溶液中または懸濁液中の化合物（A）のＡ形結晶の質量パーセントである。
化合物（A）のＡ形結晶の結晶化は、通常０〜１００℃で行う。
化合物（A）のＡ形結晶の乾燥は、通常１００℃以下で行う。
【００１７】
本明細書中における「睡眠障害」とは、入眠時、睡眠持続相又は覚醒時の障害であり、例えば、不眠症等を挙げることができる。また、不眠症の分類としては、入眠障害、中途覚醒、早朝覚醒、熟眠障害等を挙げることができる。
本発明の化合物の結晶は、経口又は非経口的に投与することができる。その投与剤型は錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、トローチ剤、軟膏剤、クリーム剤、皮膚貼付剤、乳剤、懸濁剤、坐剤、注射剤等であり、いずれも慣用の製剤技術（例えば、第１５改正日本薬局方に規定する方法等）によって製造することができる。これらの投与剤型は、患者の症状、年齢、体重、及び治療の目的に応じて適宜選択することができる。
これらの製剤は、本発明の化合物を含有する組成物に薬理学的に許容されるキャリヤー、すなわち、賦形剤（例えば、結晶セルロース、デンプン、乳糖、マンニトール）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム）、その他薬理学的に許容される各種添加剤を配合し、製造することができる。
本発明の化合物は、成人患者に対して１回の投与量として０．００１〜５００ｍｇを１日１回又は数回に分けて経口又は非経口で投与することが可能である。なお、この投与量は治療対象となる疾病の種類、患者の年齢、体重、症状等により適宜増減することができる。
【実施例】
【００１８】
次に、参考例、実施例及び試験例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
粉末Ｘ線は、Ｒｉｇａｋｕ  ＲＩＮＴ２２００Ｕｌｔｉｍａｌｌｌにて測定した。
示差熱分析／熱質量測定（ＴＧ／ＤＴＡ）は、Ｒｉｇａｋｕ  Ｔｈｅｒｍｏ  ｐｌｕｓ  ＥｖｏＴＧ８１２０にて測定した。
赤外線吸収スペクトルは、ＩＲＡｆｆｉｎｉｔｙ−１（島津製作所）にて測定した。
以下の参考例及び実施例においてカラムクロマトグラフィーを使用して精製した際の「ＫＰ−ＮＨ」にはＢｉｏｔａｇｅ社ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅ  ＫＰ−ＮＨを使用した。
【００１９】
以下の参考例および実施例において、高速液体クロマトグラフィーマススペクトル（ＬＣＭＳ）は以下の２種類の条件のいずれかにより測定した。
条件１
測定機械：Ａｇｉｌｅｎｔ社  Ａｇｉｌｅｎｔ２９００及びＡｇｉｌｅｎｔ６１５０
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１ｘ５０ｍｍ
溶媒：Ａ液；０．１％ギ酸含有水、Ｂ液；０．１％ギ酸含有アセトニトリル
グラジエント：０分（Ａ液／Ｂ液＝８０／２０）、１．２〜１．４分（Ａ液／Ｂ液＝１／９９）
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ、検出法：ＵＶ  ２５４ｎｍ
イオン化法：エレクトロンスプレー法（ＥＳＩ：Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｓｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）
条件２
測定機械：Ａｇｉｌｅｎｔ社  Ａｇｉｌｅｎｔ２９００及びＡｇｉｌｅｎｔ６１５０
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１ｘ５０ｍｍ
溶媒：Ａ液；０．１％ギ酸含有水、Ｂ液；０．１％ギ酸含有アセトニトリル
グラジエント：０分（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）、１．２分（Ａ液／Ｂ液＝５０／５０）、１．３８分（Ａ液／Ｂ液＝３／９７）
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ（０〜１．２分）、１．０ｍＬ／ｍｉｎ（１．２〜１．３８分）、検出法：ＵＶ  ２５４ｎｍ
イオン化法：エレクトロンスプレー法（ＥＳＩ：Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｓｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）
参考例及び実施例中、以下の用語及び試薬は下記のように表記した。
ＤＭＴ−ＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド）、ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン）、ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）。
参考例及び実施例中、室温とは２５℃付近を示し、通常２０〜３０℃を示す。
【００２０】
参考例１  Ｎ−エチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル］−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド  
【００２１】
【化２】
2015131801.tif 000004
【００２２】
（２Ｓ）−２−（エチルアミノ）プロパン−１−オール（２２．３ｇ）をＤＭＦ（４００ｍＬ）に加え攪拌した。この混合物に１２℃以下を保ちながら、５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）安息香酸（４０．０ｇ）を加えた。同温度で、ＤＩＰＥＡ（１０３ｍＬ）、ＤＭＴ−ＭＭ（７０．８ｇ）を加え１時間攪拌した。その後、室温まで昇温し、４日間撹拌した。反応混合物を体積比で半分程度まで減圧濃縮後、残渣に水（１００ｍＬ）を加えて１時間撹拌した。析出した固体をろ取後、温風乾燥、さらに減圧下乾燥させた。得られた固体に酢酸エチル（４４０ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌後、ろ過した。ろ液にＮＨ型シリカゲル（富士シリシア化学社製、６０ｇ）を加えて室温で１時間撹拌し、懸濁液をろ過後、酢酸エチル（２００ｍＬ）で洗い流した。ろ液を減圧下濃縮することにより固体を得た。この固体を酢酸エチル−ヘキサン溶液（１０：１、８０ｍＬ）で撹拌洗浄後、濾取、乾燥することにより、無色固体として表題化合物（３７．４ｇ）を得た。
ＬＣＭＳ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  １．０５７、１．２０６  ｍｉｎ．（条件２）
ＭＳ  （ＥＳＩ  ｐｏｓ．）  ｍ／ｚ  ：  ２８９  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【００２３】
参考例２  Ｎ−［（２Ｓ）−１−シアノプロパン−２−イル］−Ｎ−エチル−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド
【００２４】
【化３】
2015131801.tif 000005
【００２５】
参考例１で得られたＮ−エチル−Ｎ−［（２Ｓ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル］−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド（９１．０ｇ）をクロロホルム（５５０ｍＬ）に加え、室温にて攪拌した。この混合物に、３０℃以下を保ちながら、塩化チオニル（２５．２ｍＬ）を滴下した。室温にて１時間撹拌後、反応混合物を減圧下濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル（１３５０ｍＬ）に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（４００ｍＬ）を加えて塩基性（ｐＨ８）にした。分液後、水層を酢酸エチル（４００ｍＬ）で抽出した。さらに水層を酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出した。あわせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄後、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥した。乾燥剤を濾別後、減圧下濃縮した。得られた残渣をＤＭＳＯ（３８０ｍＬ）に溶解させ、シアン化ナトリウム（１２．６ｇ）を加えた。この時、反応混合物は、４７℃まで上昇した。反応混合物を室温まで放冷し、一晩撹拌した。反応混合物に水（１１４０ｍＬ）を加えた後、氷冷下２時間撹拌した。析出した固体をろ取し、水（３５０ｍＬ）で洗い流した後、温風乾燥、さらに減圧下乾燥させることにより、薄橙色固体として表題化合物（７０．７ｇ）を得た。
ＬＣＭＳ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ０．７８２  ｍｉｎ．（条件１）
ＭＳ  （ＥＳＩ  ｐｏｓ．）  ｍ／ｚ  ：  ２９８  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【００２６】
参考例３  Ｎ−エチル−Ｎ−［（２Ｓ）−４−（ヒドロキシアミノ）−４−イミノブタン−２−イル］−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド  
【００２７】
【化４】
2015131801.tif 000006
【００２８】
参考例２で得られたＮ−［（２Ｓ）−１−シアノプロパン−２−イル］−Ｎ−エチル−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド（５８．４ｇ）をエタノール（３９２ｍＬ）に加え、室温にて攪拌した。この混合物に５０％ヒドロキシルアミン水溶液（３９ｍＬ）を加え、８０℃に加熱して３時間撹拌した。室温まで放冷後、反応液を水（１２０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（２４０ｍＬ）で３回抽出した。あわせた有機層をブライン（１２０ｍＬ）で洗浄後、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥した。乾燥剤をろ別後、減圧下濃縮し、淡黄色非晶質として、表題化合物（７３．７ｇ）を得た。
ＬＣＭＳ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ０．７６３  ｍｉｎ．（条件１）
ＭＳ  （ＥＳＩ  ｐｏｓ．）  ｍ／ｚ  ：  ３３１  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【００２９】
参考例４  Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド  
【００３０】
【化５】
2015131801.tif 000007
【００３１】
５−フルオロピリジン−２−カルボン酸（３０．４ｇ）をアセトニトリル（４８５ｍＬ）−ＤＭＦ（５５ｍＬ）混合液に加え攪拌した。この混合物に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（３８．５ｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。この混合物に参考例３の方法で得られたＮ−［（２Ｓ）−１−シアノプロパン−２−イル］−Ｎ−エチル−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド（６４．８ｇ）のアセトニトリル（１８０ｍＬ）−ＤＭＦ（２０ｍＬ）混合溶液を室温にて滴下した。同温度で１時間半撹拌し後、ＤＢＵ（２９．３ｍＬ）を滴下した。この混合物を８０℃に加熱して２時間撹拌後、室温にて一晩撹拌した。この混合物を減圧下濃縮後、得られた残渣を酢酸エチル（９００ｍＬ）に溶解させ、０．５Ｍ  塩酸（４００ｍＬ、３００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）で順に洗浄し、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥した。乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧下留去して、固体として表題化合物（６７ｇ）を得た。
ＬＣＭＳ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ０．９７４  ｍｉｎ．（条件１）
ＭＳ  （ＥＳＩ  ｐｏｓ．）  ｍ／ｚ  ：  ４３６  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【００３２】
実施例１  Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミド（化合物（Ａ））のＡ形結晶の製造法  
【００３３】
【化６】
2015131801.tif 000008
【００３４】
参考例４で得られた固体（６７ｇ）にエタノール（２６０ｍＬ）を加え、７０℃に加熱して１時間撹拌後、室温にて一晩撹拌した。析出した固体をろ取後、得られた固体上から冷やしたエタノール（５０ｍＬ）を流し、温風乾燥することにより、化合物（Ａ）のＡ形結晶（５５．５ｇ）を得た。
ＬＣＭＳ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ０．９７４  ｍｉｎ．（条件１）
ＭＳ  （ＥＳＩ  ｐｏｓ．）  ｍ／ｚ  ：  ４３６  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【００３５】
実施例２
実施例１の方法で得られた化合物（Ａ）のＡ形結晶の粉末Ｘ線回折パターンをリガク製の粉末Ｘ線回折装置（Ｕｌｔｉｍａ  ＩＩＩ）を用い、Ｃｕ―Ｋα線をＸ線源として測定した。２θ＝１４．９度、２０．８度，２４．９度及び２６．８度付近にピークが認められた。
融点をリガク製の示差熱天秤（Ｔｈｅｒｍｏ  ｐｌｕｓ  ＥＶＯ  ＴＧ８１２０）及び同等の装置を用い、大気下にて、室温から約２５０℃まで１０℃／分の昇温速度で測定した。その結果、１３８〜１４３℃に融解に由来する吸熱ピークが認められた。
赤外スペクトルを島津製作所製のフーリエ変換赤外分光光度計（ＩＲＡｆｆｉｎｉｔｙ−１）を用い、全反射法（ＡＴＲ法）にて積算回数２０回、分解能：４ｃｍ-1の条件で測定した。１６３１ｃｍ-1、１６２３ｃｍ-1、１３６５ｃｍ-1、１２３５ｃｍ-1、９５１ｃｍ-1及び８１９ｃｍ-1付近にピークが認められた。
【００３６】
試験例  （オレキシン拮抗活性の測定）
試験化合物のヒトオレキシン１型受容体（ｈＯＸ１Ｒ）、オレキシン２型受容体（ｈＯＸ２Ｒ）に対する拮抗活性は文献（Ｔｏｓｈｉｋａｔｓｕ  Ｏｋｕｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２８０，  ９７６−９８１，  ２００１）に記載された方法を改変して行った。ｈＯＸ１Ｒ、ｈＯＸ２Ｒを強制発現させたＣｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｏｖａｒｙ（ＣＨＯ）細胞を９６ｗｅｌｌのＢｌａｃｋ  ｃｌｅａｒ  ｂｏｔｔｏｍプレート（Ｎｕｎｃ）の各ウェルに２４，０００個となるように播種し、０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸、０．５ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８、１０％  牛胎児血清を含むＨａｍ’ｓ  Ｆ−１２培地（以上インビトロジェン）で、３７℃、５％  ＣＯ2の条件下で１６時間培養した。培地を除去後、０．５μＭ  Ｆｌｕｏ−３ＡＭ  エステル（同仁）を含むアッセイ用緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（同仁）、Ｈａｎｋｓ’  ｂａｌａｎｃｅｄ  ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（インビトロジェン）、０．１％  牛血清アルブミン、２．５ｍＭ  プロベネシド、２００μｇ／ｍｌ  Ａｍａｒａｎｔｈ（以上Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ｐＨ７．４）を１００μＬ添加し６０分間、３７℃、５％  ＣＯ2にインキュベートした。Ｆｌｕｏ−３ＡＭ  エステルを含むアッセイ用緩衝液を除去したのち、試験化合物は１０ｍＭとなるようにジメチルスルホキシドで溶解してアッセイ用緩衝液で希釈後、１５０μＬを添加し、３０分間インキュベートした。
リガンドであるヒトオレキシン−Ａの２アミノ酸を置換したペプチド（Ｐｙｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−ＮＨ２；ペプチド研究所）はｈＯＸ１Ｒに対しては終濃度５００ｐＭ、ｈＯＸ２Ｒに対しては１ｎＭとなるようにアッセイ用緩衝液で希釈し、このリガンド溶液５０μＬを添加して反応を開始した。反応はＦｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＦＤＳＳ；浜松ホトニクス社製）を用いて各ｗｅｌｌの蛍光値を１秒毎に３分間測定し、最大蛍光値を細胞内Ｃａ2+濃度の指標として拮抗活性を求めた。試験化合物の拮抗活性は希釈緩衝液のみを添加したウェルの蛍光値を１００％、リガンドおよび化合物を含まない緩衝液を添加したウェルの蛍光値を０％として算出し、種々の濃度の試験化合物を添加した際の蛍光値から、５０％阻害濃度（ＩＣ50値）を求めた。
本発明の化合物（Ａ）の、ヒトオレキシン１型受容体に対する拮抗活性はＩＣ50＝０．８ｎＭ、オレキシン２型受容体に対する拮抗活性はＩＣ50＝９．５ｎＭであった。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明により、Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドは、ＯＸ受容体拮抗作用を有することが示された。従って、本発明化合物は、ＯＸ受容体拮抗作用によって調節される病気、例えば、睡眠障害、うつ病、不安障害、パニック障害、統合失調症、薬物依存症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、摂食障害、頭痛、片頭痛、疼痛、消化器疾患、てんかん、炎症、免疫関連疾患、内分泌関連疾患、高血圧等の治療又は予防薬として使用することが可能である。また、本発明により、Ｎ−エチル−Ｎ−｛（２Ｓ）−１−［５−（５−フルオロピリジン−２−イル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］プロパン−２−イル｝−５−メチル−２−（２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ベンズアミドのＡ形結晶は、優れた保存安定性、その他の物性を有しており、医薬品原体として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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