(57)【要約】      （修正有）【課題】新たなバーシカン産生促進剤の提供。【解決手段】ゴールデンシルクを６０℃以上の溶媒で抽出するステップ、を含むゴールデンシルク抽出物の製造方法。前記溶媒が、酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性溶媒であるゴールデンシルク抽出物の製造方法。該製造方法により製造されるゴールデンシルク抽出物からなる、バーシカン産生促進剤。さらには、該バーシカン産生促進剤を含有する、皮膚外用剤、並びに、抗老化化粧料である該皮膚外用剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴールデンシルクを６０℃以上の溶媒で抽出するステップ、を含むゴールデンシルク抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記溶媒が、酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性混合溶媒である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の製造方法により製造されるゴールデンシルク抽出物からなる、バーシカン産生促進剤。
【請求項４】
請求項３に記載のバーシカン産生促進剤を含有する、皮膚外用剤。
【請求項５】
抗老化化粧料である請求項４に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗老化に関与するバーシカンの産生促進剤に関する。また、バーシカンの産生促進効果に優れたゴールデンシルク抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肌のしわ形成予防、肌のたるみの形成予防等、いわゆる皮膚老化抑制に関する研究が進められている。その中でも線維芽細胞は、コラーゲン・エラスチンといった、肌の張りや弾力を保つ働きをする物質を産生する重要な細胞であるため、様々な研究がなされている。
【０００３】
線維芽細胞により産生されることが知られているバーシカンは、大型のコンドロイチン硫酸プロテオグリカンであり、創傷治癒時に一時的に高レベルで発現することが知られている（非特許文献１参照）。
【０００４】
一方でシルク、特に加水分解シルク蛋白質は、様々な皮膚への作用が報告されており、例えば抗酸化作用、皮膚炎症防止作用、チロシナーゼ活性阻害作用、コラーゲン産生促進作用、保湿性向上作用、しわ形成抑制作用などが挙げられる（特許文献１、特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−２７７１１９号公報
【特許文献２】特開２００５−１５４４６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ARAKI Eri, et al., 日本結合組織学会学術大会抄録集  41巻, 54頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明では、新たなバーシカン産生促進剤、及び新たなゴールデンシルク抽出物の製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく研究をすすめ、シルクの中でも濃黄色の繭色を呈するゴールデンシルク抽出物が、線維芽細胞におけるバーシカン産生を促進させることを見出し、本発明を完成させた。
また、ゴールデンシルクの抽出物の抽出方法についても更に研究をすすめ、特定の方法により抽出したゴールデンシルクが、より高いバーシカン産生促進効果を奏することを見出した。
【０００９】
すなわち本発明の第一の態様は、特定の製造方法により得たゴールデンシルク抽出物からなる、バーシカン産生促進剤である。
また、本発明の第二の態様は、ゴールデンシルクを酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性混合溶媒により６０℃以上で抽出する抽出ステップ、を含むゴールデンシルク抽出物の製造方法である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、新たなバーシカン産生促進剤が提供される。本発明のバーシカン産生促進剤を皮膚外用剤に含有させることで、優れた抗老化作用を発揮する皮膚外用剤を提供できる。そのため、抗老化化粧料として好ましく用いられる。
また、本発明の第二の態様により、バーシカン産生促進作用が高められたゴールデンシルク抽出物が提供される。本製造方法で製造されるゴールデンシルク抽出物は、高い抗老化作用が確認されているＴＧＦ−βを凌駕する、高いバーシカン産生促進作用を呈する。そのため、抗老化化粧料の有効成分として好ましく用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例におけるバーシカンｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。
【図２】実施例におけるバーシカンｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について詳細に説明するが、本発明は具体的な実施態様にのみ限定されないことはいうまでもない。
【００１３】
本発明の実施態様に用いるゴールデンシルク（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｉｌｋ  Ｎｏ．１１）はカイコガ（Ｂｏｎｂｉｘ  ｍｏｒｉ）の繭糸であって、濃黄色を呈する繭糸である。主に、タイ王国  ランプン県  トンフォアチャン地方（Thunghuachang Lamphun Thailand）で生産されている特殊な繭であり、商業的にも入手可能である。
【００１４】
本実施態様において抽出物は、エキス状、オイル状、粉末状のいずれであってもよく、溶媒を用いてエキスやオイルとして抽出した抽出液を乾燥させ、粉末状の抽出物としてもよい。
本実施態様に用いるゴールデンシルク抽出物の製造方法例のうち、好ましい抽出液の製造方法の態様を以下に示す。
＜抽出ステップ＞  
本実施態様に係る製造方法は、ゴールデンシルクを６０℃以上の溶媒で抽出する抽出ステップを含む。本ステップを含むことで、バーシカン産生能が高いゴールデンシルク抽出液を得ることができる。前記溶媒としては、酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性混合溶媒が好ましい。
アルコール溶媒としては、低級アルコールが好ましく、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどが挙げられる。このうち、メタノール、エタノールが好ましく、エタノールが抽出効率の観点からより好ましい。また、アルコールと水との混合溶媒においては、通常アルコールが４０％ｖ／ｖ以上含まれることが好ましく、５０％ｖ／ｖ以上含まれることが抽出効率の観点から特に好ましい。また、上限は特段限定されず、通常９９．９％ｖ／ｖ以下である。
【００１５】
また、ゴールデンシルクを加水分解させるため、本実施態様における抽出溶媒は酸性であることが好ましい。ｐＨは通常７より小さく、３以下であることが好ましく、２以下であることがより好ましい。ｐＨの下限は特段限定されないが、通常ｐＨ１以上である。
なお、アルカリ性溶媒でもゴールデンシルクを加水分解させることはできるが、アルカリ性溶媒で抽出したゴールデンシルク抽出物は、黄褐色の着色が強く、皮膚外用剤等の組成物に配合する際に好ましくない。酸性溶媒で抽出したゴールデンシルク抽出物は着色が少ないため、本実施態様では酸性溶媒を用いる。
抽出溶媒を酸性とするためには、例えば硫酸、塩酸、硝酸などの酸を溶媒中に適量添加することができる。これらのうち、抽出物の着色をより少なくできることから、塩酸が特に好ましい。
【００１６】
抽出ステップは、加温下にて実施する。加温下にて抽出ステップを行うことで、バーシカン産生能が高いゴールデンシルク抽出液を得ることができる。
加温は、６０℃以上であり、８０℃以上であることが好ましい。一方上限は特段限定されず、圧力を過度に変動させることのない、安全性を確保できる範囲で行えばよい。
【００１７】
抽出ステップにおける抽出は、抽出温度にもよるが、通常１０分以上行い、３０分以上行うことがより好ましく、１時間以上行うことが更に好ましい。抽出時間の上限は特段限定されないが、通常２０時間以下であり、１０時間以下であることが好ましい。
【００１８】
本実施態様に係る製造方法では、抽出ステップで抽出された抽出液は更に以下のステップを経ることが好ましい。
＜中和ステップ＞  
酸性溶媒を用いた場合、抽出された抽出液は、ゴールデンシルクの加水分解のために酸性となっていることから、アルカリにより中和するステップを有することが好ましい。
中和は、ＮａＯＨやＫＯＨなどのアルカリを加えることによりできる。
その他、適宜澱を析出させて純度を上げたり、濾過ステップを設けて不純物などを除去することもできる。
【００１９】
こうして製造されたゴールデンシルク抽出液は、高いバーシカン産生能を有する。例えば、皮膚伝達物質であるＴＧＦ−βの存在は、しわ改善効果を有することが知られており（例えば特開２０１２−２５０９６８参照）、ＴＧＦ−βにより線維芽細胞のバーシカンのｍＲＮＡの発現量が増加することを、本発明者らは確認している（後述する実施例における陽性対照）。本実施態様におけるゴールデンシルク抽出液は、ＴＧＦ−βを凌駕する高いバーシカン産生能を有し得るものである。具体的には、正常ヒト線維芽細胞５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに５０％エタノール水溶液を添加し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４８時間培養した際のｍＲＮＡ発現量（対照：コントロール）に対し、ゴールデンシルク抽出物を蒸発残分として１質量％となるように正常ヒト線維芽細胞に添加し、培養した際のｍＲＮＡ発現量が１．５倍以上であることが好ましく、好ましくは２．０倍以上である。このような高いバーシカン産生能を有する皮膚外用剤は、本実施態様に係るバーシカン産生促進剤を含有している可能性があり得る。
【００２０】
本実施態様に係るゴールデンシルク抽出液は、このように高いバーシカン産生能を有することから、皮膚外用剤に添加することで、抗老化作用を有する皮膚外用剤とすることができる。
皮膚外用剤としては、化粧料、医薬部外品等として適用される。
本実施態様における、皮膚外用剤中のゴールデンシルク抽出物濃度は、通常、０．００００１質量％以上、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上であり、通常３０質量％以下、好ましくは１０質量％以下であり、より好ましくは５質量％以下である。上記範囲とすることで、好適に抗老化作用を有する皮膚外用剤とすることができる。
【００２１】
本実施態様に係る皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品などの用途に応じて、適宜必要な成分を含有させることができる。
このうち、化粧料、特に抗老化化粧料として用いることが好ましい。
化粧料に適用される場合、通常化粧料に使用される成分を広く配合することが可能であり、また、その剤形や用途についても、何ら限定されない。以下、化粧料に適用される場合、化粧料中に含有させることができる成分について説明する。
【００２２】
有効成分としては、美白成分、シワ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物等が挙げられる。なお、上記説明したゴールデンシルク抽出物と重複して配合してもかまわない
。
化粧料における美白成分の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、１〜５質量％がより好ましい。
【００２３】
シワ改善成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、ビタミンA又はその誘導体が、レチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールやウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。化粧料におけるシワ改善成分の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、１〜５質量％がより好ましい。
【００２４】
動植物由来の抽出物としては、一般的に医薬品、化粧料、食品等に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボカドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、インドキノエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エイジツエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オレンジエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クジンエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、ゲンノショウコエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コケモモエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、茶エキス、チョウジエキス、チンピエキス、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
化粧料中における動植物由来抽出物の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、１〜５質量％がより好ましい。
【００２５】
抗炎症成分としては、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸及びその塩、
グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩である。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、１〜５質量％がより好ましい。
【００２６】
油性成分としては、極性油、揮発性炭化水素油等が挙げられる。
極性油としては、合成エステル油として、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２−ヒドロキシステアリル酸コレステリル、ジ−２−エチルヘキシル酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ−アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキシル酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ペンタンエリスリトール、トリ−２−エチルヘキシル酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパンを挙げることができる。
【００２７】
さらに、セチル２−エチルヘキサノエート、２−エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、アセトグリセライド、パルミチン酸２−ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−２−オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ−２−ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、ミリスチン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−ヘキシルデシル、アジピン酸２−ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２−エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、オクチル  メトキシシンナメート等も挙げられる。
【００２８】
また、天然油として、アボカド油、ツバキ油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルミチン酸グリセリン等が挙げられる。
【００２９】
揮発性炭化水素油としては、イソドデカン、イソヘキサデカン等が挙げられる。
【００３０】
界面活性剤としては、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、
ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、
ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等） 、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコ
ール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪
酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等） 、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、等が挙げられる。
【００３１】
多価アルコールとしては、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等が挙げられる。
【００３２】
増粘剤としては、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸，キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等が挙げられる。
【００３３】
粉体類としては、表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、が挙げられる。
【００３４】
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２'−ヒドロキシ−５'−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４'−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、等が挙げられる。
【００３５】
また、化粧料の製造方法は特段限定されず、適用される化粧料の剤形に応じて、既知の方法と適宜用いることで製造すればよい。化粧料として適用される場合の剤形は、通常知られているローション剤形、乳液剤形、エッセンス剤形、クリーム剤形、粉体含有剤形の何れをも取ることが出来る。
【実施例】
【００３６】
以下、具体的な実験例をあげて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の態様にのみ限定されない。
＜実施例１＞
ゴールデンシルク（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｉｌｋ  Ｎｏ．１１  タイ王国ランプン県トンフォアチャン地方産）１０ｇを、９５％エタノール１容量に水１容量を加えた希エタノール溶液４００ｍｌと濃塩酸１ｍｌとの混合溶媒（ｐＨ１．８３）に浸漬させ、８０℃で７時間抽出を行った。
抽出後、ろ過したろ液を、１ＮのＮａＯＨで中和した。その後、中和した抽出液を５℃で静置し澱を析出させた。澱が析出した抽出液をろ過し、ゴールデンシルク抽出液１を得た。
【００３７】
＜実施例２＞
抽出溶媒を、９９．５％エタノール溶液４００ｍｌと濃塩酸１ｍｌとの混合溶媒とした以外は実施例１と同様にして、ゴールデンシルク抽出液２を得た。
【００３８】
＜比較例１＞
抽出溶媒を水４００ｍｌと６Ｍ水酸化ナトリウム溶液１ｍｌとの混合溶媒で抽出後、１Ｍの塩酸により中和した以外は実施例１と同様にして、ゴールデンシルク抽出液３を得た。
＜比較例２＞
日本産の白い絹繊維１０ｇを、水４００ｍｌと濃塩酸１ｍｌとの混合溶媒（ｐＨ１．８３）に浸漬させ、１２０℃で１時間抽出を行った以外は実施例１と同様にして、シルク抽出液４を得た。
【００３９】
＜比較例３＞
抽出溶媒を９５％エタノール１容量に水１容量を加えた希エタノール溶液４００ｍｌと濃塩酸１ｍｌとの混合溶媒とし、抽出温度を４０℃とした以外は実施例１と同様にして、ゴールデンシルク抽出液５を得た。
【００４０】
＜比較例４＞
抽出温度を室温とし、抽出時間を６日間とした以外は、比較例３と同様にして、ゴールデンシルク抽出液６を得た。
【００４１】
＜バーシカン産生促進評価＞
正常ヒト繊維芽細胞５０００ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに上記各抽出液を蒸発残分として１質量％の濃度となるように添加して、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４８時間培養した。培養後、ｍＲＮＡを回収して、ＲＴ−ＰＣＲでバーシカンのｍＲＮＡ発現量を測定した。なお、発現量は、内部標準物質を基準に算出した。また、対照として、抽出液の代わりに５０％エタノールを添加した対照（コントロール）、及び陽性対照として抗老化作用を有するＴＧＦ−βを２ｎｇ添加した場合について、同様にｍＲＮＡ発現量を測定した。結果を図１及び図２に示す。
【００４２】
図１に示すように、抽出溶媒として酸アルコールを使用した抽出液１及び２を線維芽細胞に添加した場合は、対照（コントロール）と比較して２．０倍以上のバーシカンのｍＲＮＡ発現量があり、優れたバーシカン産生促進作用を有することが理解できる。特に抽出液のアルコール濃度が高い抽出液１では、コントロールと比較して約２．５倍のｍＲＮＡ発現量があり、極めて高いバーシカン産生促進作用を有する。一方、アルコールを含まない溶媒で抽出した抽出液３及び４を線維芽細胞に添加した場合は、コントロールと比較して約１．２倍程度のｍＲＮＡ発現量にとどまった。
また、図２に示すように、４０℃で抽出した抽出液５又は室温で抽出した抽出液６を線維芽細胞に添加した場合は、コントロールよりも小さいバーシカンのｍＲＮＡ発現量であった。すなわち、６０℃よりも高い温度で抽出した抽出液にこそ、高いバーシカン産生促
進作用が認められることがわかる。
以上より、ゴールデンシルクの抽出液には、バーシカン産生促進作用があり、また、特定のステップにより抽出することで、高いバーシカン産生促進作用を有するゴールデンシルクの抽出液を製造することができる。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明のバーシカン産生促進剤は、皮膚外用剤、特に抗老化化粧料に好適に配合し得る。
【図１】
2015131797.tif 000003
【図２】
2015131797.tif 000004