(57)【要約】【課題】    本発明の目的は入浴後の肌の角化が促進され、皮膚バリア機能が亢進し、さらに保湿性や肌荒れの改善等の効用があり美肌になる入浴剤を得ることにある。【解決手段】  加水分解コンキオリンと、水溶性にした真珠または／および真珠層と、コラーゲンを配合した入浴剤が上記課題を解決した。  さらに多価アルコール、層状無機化合、真珠粉末、真珠層粉末等を配合することによってより有効性の増すことも確認した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
加水分解コンキオリンと、水溶性にした真珠または／および真珠層と、コラーゲンを配合した入浴剤。
【請求項２】
さらに多価アルコールを配合した請求項１の入浴剤。
【請求項３】
さらに層状無機化合物を配合した請求項１乃至請求項２の入浴剤。
【請求項４】
さらに真珠粉末、真珠層粉末より選択される１種以上を含む請求項１乃至請求項３の入浴剤。
【請求項５】
多価アルコールがグリセリンである請求項１乃至請求項４の入浴剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、入浴後の肌の角化が促進され、皮膚バリア機能が亢進し、さらに保湿性や肌荒れの改善等の効用があり美肌になる入浴剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
入浴時に、菖蒲や柚子を入れる慣習が庶民のあいだに広まり、明治中期、種々の生薬を配合し、布袋に入れ煎出して用いる商品が利用されていました。さらに温泉の効用を家庭でも味わえるように、湯の花等の無機塩類を使用した入浴剤を利用することも行われています。さらに、着色や着香した入浴剤や炭酸ガスを発生し、有効性とともに精神的な効用もある製品も利用されている。
【０００３】
【非特許文献１】日本美容皮膚科学会 監修、「美容皮膚科学」南山堂、２００９年発行、P410-420
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は入浴後の肌の角化が促進され、皮膚バリア機能が亢進し、さらに保湿性や肌荒れの改善等の効用があり美肌になる入浴剤を開発することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らが鋭意検討した結果、加水分解コンキオリンと、水溶性にした真珠または／および真珠層と、コラーゲンを配合した入浴剤が本課題を解決することがわかった。
【０００６】
コンキオリンは貝殻や真珠類に含まれる硬蛋白質の一種でありアコヤガイ、クロチョウガイ、シロチョウガイ、イケチョウガイ等に比較的多く含まれている。加水分解コンキオリンの製造法としては特許１５８７７３０号、特許１５６０６１０号、特許１５８７７３４号等に記載されている。
【０００７】
具体的な製造方法は、アコヤガイ、クロチョウガイ、シロチョウガイ、イケチョウガイ等の真珠や貝殻等より脱灰して蛋白質を得、これを通常の方法で必要な加水分解を加えればよい。以下にその一例を示すがこれに限定されることはない。アコヤ貝、イガイ、カラスガイ等貝殻等を粉砕して希塩酸等でカルシウム分を除去し、遠心分離、濾過デカンテーション等の固液分離手法によって不溶物を集め、これを精製水を加えてよく撹拌し、遠心分離、濾過等によって不溶物を集める。必要によりこれを繰り返す。
【０００８】
更にこのコンキオリンに２〜１０％の塩酸水溶液を加えて、５０〜１１０℃で５時間〜５日間加水分解して、コンキオリンの加水分解物としてもよい。これを単にコンキオリンということもある。
【０００９】
希塩酸の代わりに希硫酸を用いて加水分解し、水酸化バリウムを用いて中和し、更に水酸化アルカリ液を用いてｐＨ５〜６になるように中和した後、沈澱物を遠心分離、濾過等により取り除いた加水分解液を公知の濃縮方法または乾燥方法を用いて濃縮液または乾燥粉末とする。加水分解に当たっては、コンキオリンがアミノ酸にまで完全に分解してしまわないように酸濃度、温度、時間を制御すべきことは勿論である。
【００１０】
次に、水溶性にした真珠または／および真珠層について説明すると、
ここでいう真珠とは，生きた真珠貝の中で球状または半球状(多少の変形を含む)に形成される代謝生産物であって，かつ、この外見しうる部分の主たる構成物質が、真珠貝の真珠層と等質であるものをいう。
真珠貝は貝殻に真珠層を有する貝類をいうが、二枚貝綱、腹足綱、頭足綱などのうち特定の古い系統の貝類を指し、例示すれば、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベガイ、イガイ、ムラサキイガイ、ヤコウガイ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カサガイ等が挙げられる。
このうち、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイが養殖も実施されており原料の確保の点から好ましい。
【００１１】
これらの真珠層を有する貝殻を利用する場合は貝殻に付着した、触手動物、軟体動物、節足動物、環形動物、脊索動物、海藻類等々多種多様の生物や海泥等の無機物を、水、ブラシ、ヘラ等で取り除く。（勿論貝肉等もなるべく取り除いておく）
また、貝殻の内、殻皮層、稜柱層もブラシ、ヘラ、グラインダーを用いて取り除く。また、特開昭６２−１２０３１９号公報、特開２００３−２５０４８９号公報、特開２０１１−７２２０７号公報等にも種々の方法が記載されているので任意の方法を選択すればよい。なお、貝殻付着物はある程度取り除いた方がよいが、殻皮層、稜柱層は場合によっては取り除く必要はない。
真珠は、有核の場合は必要により核を取り除いて用いる。
以上、真珠或いは真珠層を有する貝殻の一方又は両方を用いて、以下の可溶化を行うが可溶化をスムーズに行うために破砕・粉砕工程を必要に応じて加える。
破砕・粉砕は、金槌、棒等で破砕してもよいし、ジャイレトリクラッシャー 、コーンクラッシャー、シングルロールクラッシャー、ダブルロールクラッシャー 、インパクトクラッシャー、ボールミル、ハンマーミル、ロッドミル等のクラッシャーや粉砕機を用いて破砕・粉砕を行ってもよい。
【００１２】
破砕・粉砕工程の前後に、必要に応じて加熱・焼成工程を入れる。破砕・粉砕工程の前に行えば、破砕・粉砕が容易になるが、必要な加熱・焼成時間が長くなり、破砕・粉砕工程の後に行えば、その逆となり、真珠や貝殻の種類や目的によって加熱・焼成工程を行う手順を選択する。また、加熱・焼成工程は特に必要ではなく、真珠や貝殻の種類や目的によって実施すればよい。また、貝殻の場合、加熱温度を調整することによって、真珠層以外を除去する目的でも利用できる。
加熱・焼成の条件は通常２００〜２０００℃で３０分〜５時間実施する。
これに、酸を加えて水に可溶化する。
用いる酸は、カルシウムと反応して水に溶解するものであれば用いることができる。例示すれば、塩酸、硝酸、乳酸、酢酸、グリコール酸等の無機酸、有機酸を挙げることができる。
【００１３】
なかでもコストの面から塩酸が選択されるが、特許登録第４８１２１５０号公報に記載されているようにグリコール酸を用いると角質除去、美白等の効果も付与できる。
酸は真珠或いは真珠層を有する貝殻が、全て或いは一部が溶解する量を加える。この場合塩酸等の場合、発泡するので、必要に応じて、水を加えて、撹拌する。撹拌は加えた水の量、貝殻の粉砕程度、反応温度、発砲の程度等によって撹拌の強度を選択する。
また、反応時間、反応温度も諸条件によって変化するが、１mm以下に粉砕した場合は、１０時間〜１週間程度が好ましい。
これを必要に応じて、濾過、遠心分離等の工程を加えて利用する。
【００１４】
コラーゲンは動物の皮膚、例えば、牛皮、豚皮、魚皮から抽出することができる。抽出方法としては例えば、まず、魚皮から不純タンパク質、血液、色素、脂質等をナイフ等の刃物を用いたり、水流により除き、次いで塩溶液、塩基性溶液で洗浄し、さらに有機溶剤で洗浄して不純物を取り除く。さらにアテロ化、サクシニル化、加水分解等を行ってもよい。
貝肉類より抽出したコラーゲンも有効なコラーゲンの１つである。（特許登録第３９２９３６９号）
【００１５】
これらのほかに多価アルコールを配合すると有効性が高くなる。
多価アルコールを例示すれば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１,２−ペンタンジオール、ジプロピレングリコール等が挙げられるが、特に好ましいのはグリセリンである。
【００１６】
層状無機化合物は、浴槽に入浴剤を使用したときに、真珠光沢を生じるものであれば利用できる。
マイカ、合成マイカ、セリサイト、タルク等が例示できるが、さらに酸化チタン被覆マイカ、酸化チタン被覆合成マイカ等が真珠光沢がより効率的に生じるので有効である。
また、真珠或いは貝殻の真珠層も勿論使用できる。
真珠或いは貝殻の真珠層の利用方法としては特開２００３−０９５８５５に記載されている方法を用いることでできる。
これらは、真珠光沢を失わない程度に粉砕する。これらは板状であるので、平均粒子径という表現が適切であるかは別として、通常の粒子径測定器で測定した場合に５〜２００μ範囲に入る粒径であれば使用できる。（なお、本発明ではマルバーン社製のマスターザイザー２０００で測定した。）
特にマイカ、合成マイカを薄層状に酸化チタンで被覆した酸化チタン被覆マイカ、酸化チタン被覆合成マイカが好ましい。
【００１７】
さらには、無機塩を配合すると有効性が増すことがわかった。無機塩は入浴剤に配合する場合もあるが無機塩を多く含む温泉に本発明の入浴剤を用いた場合にも同様に有効性が向上することがわかった。
無機塩類を例示すれば、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム（重曹）、セスキ炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム（食塩）、塩化カリウム、硫酸ナトリウム（芒硝）、硫酸マグネシウム、メタケイ酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、硝酸カルシウム、硫酸アルミニウム、硫化ナトリウム、硫化カリウム、湯の花、海水乾燥物等が挙げられる。
【００１８】
さらにこれらに加えて、はコンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理して得た物質（以下コハクコンキオリンと称す）、酸性ムコ多糖、グリコーゲン等の配合がより有効な製剤を作り出す。
コハクコンキオリンの製造方法は特開平７−１６５５２６号公報などに記述されている。この作成方法はコンキオリンの加水分解物の水溶液中で攪拌しつつ、ｐＨ６〜９に保ちつつ無水コハク酸を添加する。添加量はコンキオリンの加水分解の割合やすべてをスクシニル化する必要はないので目的等によって無水コハク酸の量は調整することによって得られる。
酸性ムコ多糖を例示すれば、ヒアルロン酸、テイコイン酸、コロミン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸等があり、これらはナトリウム塩、カリウム塩等の塩の形で配合しても良い。
【００１９】
以上のことを踏まえて入浴剤を作成するが、これ以外の配合物も必要に応じて選択する。
これを例示すれば、
生薬（海藻）類では、ウイキョウ、オウゴン、オウバク、カミツレ、コウボク、米発酵エキス、サフラン、ジュウヤク、ショウブ、センキュウ、チンピ、トウキ、トウヒ、ニンジン、ユズ、ヨモギ、アロエ、ボウフウ、ハッカ葉、モモ葉、ショウキョウ、甘草、ケイヒ、コンブ、ジャイアントケルプ、ヒジキ、ヒバマタ、テングサ、キリンサイ、ツノマタ、クロレラ、ユーグレナ、アオノリ等。
酵素類では、パパイン、パンクレアチン、蛋白質分解酵素等。
有機酸類では、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸、マレイン酸、酒石酸、乳酸等。
油成分では、液状ラノリン、ホホバ油、ステアリルアルコール、オリーブ油、大豆油、流動パラフィン、白色ワセリン、スクワラン、コメ胚芽油、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル等。
糖類では、ソルビトール、ブドウ糖、ショ糖、キシロース、エリスリトール、マンニトール、トレハロース、キシリット等。
着色剤では、赤米色素、アカネ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、クチナシ色素、スピルリナ色素、チェリー色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチン等。
高分子では、クインシード、寒天、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸塩、カルボキシビニルポリマー等。
【００２０】
ビタミン類では、レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ又はその誘導体、エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）等。
アミノ酸では、  バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
【００２１】
抗酸化剤、抗炎症剤、抗菌剤、美白剤、その他薬剤では、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ヒドロキシチロソール、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、セサモール、セサモリン、ゴシポール、イクタモール、インドメタシン、カオリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸メチル、アセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、ｄ−カンフル、ｄｌ−カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイアズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、甘草エキス、シコンエキス、エイジツエキス、アラントイン、アクリノール、イオウ、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、スルファミン、マーキュロクロム、ラクトフェリン又はその加水分解物、塩化アルキルジアミノエチルグリシン液、トリクロサン、次亜塩素酸ナトリウム、クロラミンＴ、サラシ粉、ヨウ素化合物、ヨードホルム、ソルビン酸又はその塩、サルチル酸、デヒドロ酢酸、パラヒドロキシ安息香酸エステル類、ウンデシレン酸、チアミンラウリル硫酸塩、チアミンラウリル硝酸塩、フェノール、クレゾール、ｐ−クロロフェノール、ｐ−クロロ−ｍ−キシレノール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾール、チモール、フェネチルアルコール、感光素１０１号、感光素２０１号、感光素４０１号、酵母菌抽出エキス、納豆菌代謝物、海泥又は泥、火山灰、アルブチン等が例示できる。
【００２２】
以上の配合物を製剤化する。配合成分や量によっては制限はあるが、常法により、散剤、粉状、顆粒、液状、錠剤等の剤形とすることができる。
また、多価アルコール等の水溶性物質と層状無機化合物等の水不溶性物質を分けて２剤タイプとすることも場合によっては有効である。
【実施例】
【００２３】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００２４】
実施例１
加水分解コンキオリン（注−１）                １００ｇ
水溶性にした真珠（注−２）                      ２０ｇ
コラーゲン（注−３）                            ５０ｇ
酸化チタン被覆合成マイカ（平均粒子径  ２２μ）  ２０ｇ
グリセリン                                    ２００ｇ
【００２５】
実施例２
酸化チタン被覆マイカ（平均粒子径  ２２μ）      ２０ｇ
加水分解コンキオリン（注−１）                １００ｇ
水溶性にした真珠（注−２）                      ２０ｇ
コラーゲン（注−３）                            ５０ｇ
真珠層粉末（注−４）                            １０ｇ
硫酸ナトリウム                                １００ｇ
グリセリン                                    １００ｇ
１．２−ペンタンジオール                      １００ｇ
【００２６】
実施例３
加水分解コンキオリン（注−１）                １００ｇ
水溶性にした真珠（注−２）                      ２０ｇ
コラーゲン（注−３）                            ５０ｇ
真珠層粉末（注−５）                            １０ｇ
コハクコンキオリン（注−６）                    １０ｇ
アコヤ貝由来酸性多糖（注−７）                  １０ｇ
アコヤ貝由来グリコーゲン（注−８）              １０ｇ
硫酸ナトリウム                                  １０ｇ
硫酸マグネシウム                                １０ｇ
塩化ナトリウム                                  ５０ｇ
グリセリン                                    １００ｇ
【００２７】
注−１  加水分解コンキオリンの作成方法
脱灰したアコヤ貝由来コンキオリンを乾燥物として１ｋｇに９８％硫酸を水で３０倍希釈した液を１０ｌを加え、ガラス容器に密封し、１１０℃、２４時間加熱した。分解終了後、用いた硫酸の当量の９０％の水酸化バリウムを充分攪拌しつつ、少量づつ加えた。さらにｐＨ５．８まで１％水酸化ナトリウム水溶液で中和した。次に２０００Ｇ、１０分間、遠心分離したのち、さらに０．４５ミクロンのメンブランフィルターにてろ過し、これを凍結乾燥した。
【００２８】
注−２ 水溶性にした真珠の作成方法
真珠より核を取り除き、乳鉢ですり潰した。これを１０５０℃で、３時間焼成した後、放冷した。
これを０．８９ｇに精製水５００ｇを加え、室温で１時間撹拌したのち、ガラスろ紙 GA-55(ADVANTEC)で濾過後、８．５％塩酸でｐＨ６．０に調整した。これを濾過滅菌した。
【００２９】
注−３  コラーゲンの作成方法
アコヤ貝は真珠養殖が終わって、真珠を取り出したあとの貝肉を集める。得られたアコヤ貝肉８８０ｇを食塩で塩もみし、ぬめりを除去したのち、０．６Ｍ  ＫＣｌ１２００ｍＬ中にて２時間ホモジナイズし、デカンテーションにより貝肉を集める。その後、０．４５Ｍ  ＮａＣｌ  １２００ｍＬ中にて２時間攪拌したのち、デカンテーションにより貝肉を集め、１４６ｇの断片アコヤ貝肉が得られた。さらに、この断片貝肉を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液にて溶解し、ｐＨ６〜７に中和後、上清を透析膜（和光純薬：ダイアライシスメンブラン３６）に付し、外液を精製水とし一夜透析を行った。
【００３０】
注−４  真珠層粉末の作成方法
１．アコヤ貝貝殻３．０kg、塩酸３．０kg、水道水６．０kg、酸化アルミニウムを材質とした研磨石（直径８mm長さ１５mmの斜円柱）１０．０kgを層内容積６５リッターの回転式可傾型バレル研磨機（株式会社ＴＫＸ社製、形式ＮＫ−６５型）に入れ、密封した状態で、回転数３８ｒｐｍで３０分間回転させた。なお研磨機の蓋には内径０．８cmと内径１．６cmのバルブを設置した。取り出し時には蓋に取り付けたバルブを徐々に開放した後、研磨機の蓋（投入口）を開け、内容物を取り出す。
２．次いで、振動式選別機（株式会社ＴＫＸ社製、形式ＫＥＥ−３型、選別網２cm角）を用いて貝殻と研磨石を分別し、水洗した。これを５％水酸化ナトリウム水溶液５kgに１８時間浸漬した。その後、水でよく洗ったのちに、１％塩酸水溶液５kgに２時間浸漬後水洗した。
３．これを７５℃、１時間乾燥し、カッターミル（株式会社西村機械製作所製、形式ＫＭ−Ｄ３型）とアトマイザー（不二パウダル株式会社製、形式Ｅ２Ｗ−７５型）で粉砕し、平均粒子径１８０ミクロンまで粉砕した。
４．これに約２倍量のエタノールを加えて、３０分間攪拌した後、遠心分離機で過剰なエタノールを回収したのち、タンブルドライヤー（楠木機械社製バキュームタンブルドライヤー）を使用し、１５０℃で減圧乾燥させた。
４．脱色および不純物を除去するため、これを過酸化水素水に２４時間浸漬した、使用した過酸化水素水は過酸化水素として２％になるように希釈して用いた。浸漬後、水洗し、残存している過酸化水素水を除去するため、０．１％カタラーゼ緩衝溶液に２４時間浸漬処理した。なお、緩衝溶液はＮａＨ2ＰＯ4−Ｎａ2ＨＰＯ4のｐＨ６．７３の水溶液を用いた。
５．その後、充分水洗し、３０℃で５時間送風乾燥した。
【００３１】
注−５  着色真珠層粉末の作成方法
１．注−１の真珠層粉末の作成方法の１〜４を実施した。
２．これにクチナシグリーン（グリコ栄養食品）の０．１％水溶液７５ｇと上記の真珠層粉末２５ｇとを軽く攪拌した後、１２時間そのまま静置した。その後、充分水洗し、３０℃で５時間送風乾燥した。
【００３２】
注−６  コハクコンキオリンの作成方法
真珠５００ｇを塩酸１ｋｇを攪拌しながら徐々に加えて脱灰する。さらに１規定塩酸３００ｇを攪拌しながら徐々に加えて脱灰し、これを濾過して不溶物を集めた。これに水で３０倍に希釈した硫酸を１００ｍｌ加えて、ガラス容器に密封し、１１０℃で２４時間加熱分解した。冷却後、用いた硫酸の当量の９０％の水酸化バリウムを充分攪拌しつつ、少量づつ加えた。さらに、ｐＨ５．８まで１％水酸化ナトリウム水溶液を加えた。次に２００Ｇ、１０分間、遠心分離した後さらに０．４５ミクロンのメンブランフルターでろ過し、分解物を得た。これを凍結乾燥した。この物質を５．０ｇとり、精製水１００ｍｌに分散し、攪拌しつつ、無水コハク酸１ｇをｐＨ６〜９に１規定水酸化ナトリウム水溶液で保ちながら１５分おきに５回加えた。これを凍結乾燥した。
【００３３】
注−７  アコヤ貝由来酸性多糖の作成方法
ａ．  貝殻を取り除いたアコヤ貝１００ｋｇを加熱し、変性後、ミキサーで粉砕した。
ｂ．  これにアクチナーゼＥを１００ｇ加えて、４５℃で攪拌しつつ、２４時間放置した。
ｃ．  トリクロル酢酸を１０ｋｇ加えて攪拌し、１時間放置後遠心分離して沈殿を除去し、除蛋白を行った。更にセロハンチューブ４８時間透析を行って、低分子物質の除去を行った。
ｄ．  その後、塩化セチルピリジニウムを１ｋｇ加えて攪拌し、１時間放置後、遠心分離して、酸性多糖類のセチルピリジニウム塩の沈殿を得た。
ｅ．  この沈殿に２Ｍ塩化ナトリウムを加えて沈殿を溶解した。これに３倍のエチルアルコールを加えて攪拌し、１時間放置後遠心分離して、沈殿を得る。
ｆ．  この沈殿に精製水を少量加えて、沈殿を溶かし、エチルアルコールを濃度が８０％になるように加えて攪拌し、１時間放置後遠心分離して、沈殿を得る。
ｇ．  ｆを３回繰り返した。
【００３４】
注−８  アコヤ貝由来グリコーゲンの作成方法
金網上でアコヤ貝の粘液を除去し、その貝肉１５００ｇをワーリングブレンダーで２分間ホモジナイズした。これに蒸留水２５００mlを加え、沸騰水中で３０分間撹拌しながら加熱した。３５０Ｇで２０分間遠心分離し、残査に１０００mlの蒸留水を加え乳光を示さなくなるまで、同様に数回加熱した。このグリコーゲンの抽出液を合一し、東洋濾紙No.１を用い吸引濾過し、濾液を ３７５０mlまで減圧濃縮後、終濃度５容量％になるようにトリクロロ酢酸を加え、４℃で１２時間静置した。４５００Ｇで６０分間遠心分離し、タンパク質を除去後、上澄みに３倍量のエタノールを加えて終濃度７５容量％とし、沈澱させて粗製グリコーゲンを得た。これを４００mlの蒸留水で溶解し、次いで１６００mlのエタノールを加えて沈澱を集めた。この操作を３回繰り返しグリコーゲンを洗浄した。なおこのとき、完全に沈澱を形成させるために、塩化カルシウム飽和溶液を１〜２滴添加した。得られた沈澱は少量の冷蒸留水に溶解し、同液に対して透析後、２５００Ｇで１０分間遠心分離を行ない、上澄みを凍結乾燥して、アコヤ貝由来グリコーゲンを得た。このアコヤ貝由来グリコーゲンは、純度８９重量％であることがアンスロン濃硫酸法により同定された。
【００３５】
２１名で実施例１〜３について１週間に５回以上使用してもらった。（使用量はパネラーの好みにまかせた）
１か月に使用した後にアンケートを取ったところ、肌の肌理がよくなった、肌荒れがなくなった、肌がしっとりした等の意見が非常に多かった。