(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ菌の増殖を抑制する小分子化合物、及び細菌感染、特に結核の処置におけるその使用法の提供。【解決手段】式ＶＩＩＩで表される化合物。2015187110.tif 000504（ｍは０〜３の整数；Ｘ３はＣＨ２、Ｏ、Ｓ又はＮＨ；Ｘ４はハロゲン化物、アルキル）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式  ＶＩＩＩ：
【化３２１】
2015187110.tif 000500
［式中、
ｍは、０、１、２、又は３であり；
Ｘ３は、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ及びＮＨを含む群より選択され；
Ｘ４は、ハロゲン化物、アルキル、ＯＲ２３、ＳＲ２４及びＮＲ２５Ｒ２６を含む群より選択され；
Ｒ２０は、アシル、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキルカルボン酸，アリールカルボン酸、アルキルカルボン酸アルキルエステル、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルヒドロキシ、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボン酸、シアノ、シクロアルキル、カルボン酸、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルキルエーテル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され；
Ｒ２１及びＲ２２は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ２３は、アシル、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、水素、チオ、スルホネート，及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され；
Ｒ２４は、アルキル、アルキルアリール、アルキレン、アルキニル、アリール、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル，及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され；そして
Ｒ２５及びＲ２６は、アシル、アルキル、アミノアルキル、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルキルエーテル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物。
【請求項２】
一般式ＶＩＩＩａ：
【化３２２】
2015187110.tif 000501
［式中、
Ｘ５は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ及びＣ＝Ｓを含む群より選択され；
Ｚ１及びＺ２は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、及び水素を含む群よりそれぞれ独立して選択されるか、又は二つの基が互いに結合して５又は６員の環、複素環及びヘテロアリール環を形成し（それらの基の任意のものが場合により置換されている）；
Ｒ２７及びＲ２８は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ２９及びＲ３０は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノを含む群よりそれぞれ独立して選択されるか、又は二つの基が互いに結合して５又は６員の環、複素環、アリール環及びヘテロアリール環を形成する（それらの基の任意のものが場合により置換されている）］を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
実施例７に示される式１２５〜３０１、好ましくは表４に示される１３２〜１３５、１３７、１３９〜１４０、１４７、１５１〜１５２、１６０、１６３、１７３、１８０、１８４〜１８５、１９３、１９５、１９９〜２０１、２０４、２０６〜２２２、２２４、２２６、２２９、２３１〜２４３、２４５〜２７８、２８０〜２８６及び２９０〜３０１の一つを有する、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
一般式ＩＩ：
【化３２３】
2015187110.tif 000502
［式中、
Ｒ５及びＲ６は、アシル、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、スルホネート及びスルホニル（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され、そして
Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物。
【請求項５】
Ｒ５及びＲ６が結合している、一般式ＩＩａ：
【化３２４】
2015187110.tif 000503
［式中、
ｎは、０、１、２、又は３であり；
Ｙ及びＺは、ＣＨ２、ＣＨＯＲ１０、ＣＨＮＲ１０Ｒ１１、ＣＲ１０Ｒ１１及びＮＲ１０を含む群よりそれぞれ独立して選択され；そして
Ｒ１０及びＲ１１は、アシル、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、水素、スルホネート及びスルホニル（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
表２に示される一般式ＩＩを有する式の一つ及び実施例６に示される式１〜１２３、好ましくは表４に示される１〜２４、２６〜３４、５４、５６、５８〜６１、６３〜６４、６７、９０〜１０１、１０３〜１０５、１０７〜１０９、１１２、１１４〜１１６及び１１８〜１２１の一つを有する、請求項４記載の化合物。
【請求項７】
表３に示される一般式Ｉ、ＩＩＩ〜ＶＩＩ及びＩＸ〜ＸＸの一つを有する化合物。
【請求項８】
細菌感染の処置に使用するための、請求項１〜７のいずれか記載の化合物。
【請求項９】
細菌感染の処置に使用するための、請求項１〜６のいずれか記載の化合物。
【請求項１０】
結核の処置に使用するための、請求項１〜７のいずれか記載の化合物。
【請求項１１】
結核の処置に使用するための、請求項１〜６のいずれか記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれか記載の化合物を含む薬学的組成物。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれか記載の化合物を含む薬学的組成物。
【請求項１４】
結核の処置を必要とするヒトに請求項１〜７のいずれか記載の化合物の適切な量を適用することを含む、結核を処置する方法。
【請求項１５】
結核の処置を必要とするヒトに請求項１〜６のいずれか記載の化合物の適切な量を適用することを含む、結核を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、小分子化合物、及び細菌感染、特に結核の処置におけるその使用に関する。
【０００２】
発明の背景
疾患としての結核（ＴＢ）は、毎年数百万人の死者をもたらし続けている。化学療法の不適当な使用は、薬物耐性の例数増加を導いた。この状況は、現在公知の薬物全てに極めて耐性の株の出現により悪化すると思われる（Van Rie 及びEnarson, 2006）。直接監視下指導における短期化学療法（ＤＯＴＳ）とも呼ばれる、国際的に推奨されるＴＢ防除戦略は、５種の抗細菌剤の組み合わせを６ヶ月を超える長期間服用することに依存している（http://www.who.int/tb/dots/en/）。数学モデルを使用して処置期間及びＴＢのダイナミクスを考慮すると、処置期間の短縮の利益は相当であると予測され、全世界のＴＢの重荷の軽減に大きく寄与すると思われた（Salomon et al., 2006）。
【０００３】
現在の化学療法は、一般情報経路並びにＲＮＡ重合及びタンパク質合成阻止などの重要な過程を中和すること、又はミコバクテリアに特異的な細胞エンベロープの合成を妨害することのいずれかによって、Mycobacterium tuberculosis菌を直接ターゲティングする化合物から成る。最も広く使用されている専用の抗結核薬であるイソニアジド、エチオナミド及びピラジナミドは、最初に活性化を必要とするプロドラッグである。活性型として、それらは広範囲のミコバクテリアターゲットに阻止活性を示し、そのターゲットはまだ完全には特徴づけられていない。ヒト免疫不全ウイルスのような他の慢性感染症については、M. tuberculosisの広範囲の重要な特徴をターゲティングする薬物を含めた多治療アプローチは、現在最も成功した戦略であることが証明された。したがって、M. tuberculosisに対して異なる作用機序を有する現在の薬物阻害剤の組み合わせが、この疾患の防除の解決となるであろう。
【０００４】
新しい抗ＴＢ薬を創薬するための最もやりがいのあるアプローチは、その細菌の生存に不可欠な重要な特徴をターゲティングする活性化合物をスクリーニングすることに頼っている。ヒトにおける結核菌残留の背景となる生物学的メカニズム、すなわち潜伏する細菌の位置および状態の理解はまだ欠如しているが、M. tuberculosisは、低酸素条件で原発性肉芽腫に存在し（Lenaerts et al., 2007）、様々な種類の細胞の中に潜む（Houben et al., 2006; Neyrolles et al., 2006）と考えられる。この細菌は、主にマクロファージ及び樹状細胞などの食細胞の内部に位置する。結核菌は、ホストマクロファージのファゴソームの中では、細胞外条件で成長しているときと異なる表現型を採ることが明らかに立証された（Rohde et al., 2007; Schnappinger et al., 2003）。感染すると、炎症応答が誘導されることによって、インターロイキン及びサイトカインを放出するＴリンパ球の動員が始まり、今度はそのことが感染マクロファージを活性化して、病原体の破壊を可能にする。したがって、ホストのマクロファージは、侵入する細菌を適切なトリガーにより除去することができる。さらにこのことは、M. tuberculosisを吸入したヒトの９５％超が発病しないという事実によって裏付けられ、ヒトのホスト応答が、M. tuberculosisによって誘導される病理発生を阻止するために大部分の場合で十分なことが示唆される。このことから、小分子化合物が免疫細胞応答のシグナルを模倣して、ミコバクテリアを浄化するようにホスト細胞を誘導することができるという仮説が生まれる。
【０００５】
したがって、ホストのマクロファージ内でのM. tuberculosisの増殖を抑制する化合物の検索を可能にする、高処理量スクリーニングに適した、細胞に基づく表現型アッセイを開発することが、本発明の目的であった。
【０００６】
今日まで、ホスト細胞内における結核菌成長のこの種の研究は、ホスト細胞を溶解させた後に系列希釈を行うコロニー形成単位（ＣＦＵ）の決定に依存したが、寒天プレート上で細菌を成長させるために３週間のインキュベーション期間が必要であった。細胞溶解及びルシフェリン基質の添加段階がまだ必要であるものの、ルシフェラーゼ発現ミコバクテリアが、実験期間の短縮に効果的であることが示された（Arain et al., 1996）。また、この種類の実験は、大規模スクリーニングが容易でない。
【０００７】
細菌感染に有効な化合物、特にホストマクロファージ内におけるM. tuberculosisの増殖を抑制するであろう化合物を同定することが、本発明の別の目的であった。
【０００８】
発明の説明
一局面では、本発明は、一般式ＶＩＩＩ：
【０００９】
【化１】
2015187110.tif 000002
［式中、
ｍは、０、１、２、又は３であり；
Ｘ３は、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ及びＮＨを含む群より選択され；
Ｘ４は、ハロゲン化物、アルキル、ＯＲ２３、ＳＲ２４及びＮＲ２５Ｒ２６を含む群より選択され；
Ｒ２０は、アシル、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキルカルボン酸、アリールカルボン酸、アルキルカルボン酸アルキルエステル、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルヒドロキシ、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボン酸、シアノ、シクロアルキル、カルボン酸、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルキルエーテル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され；
Ｒ２１及びＲ２２は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ２３は、アシル、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、水素、チオ、スルホネート、及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され；
Ｒ２４は、アルキル、アルキルアリール、アルキレン、アルキニル、アリール、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され；そして
Ｒ２５及びＲ２６は、アシル、アルキル、アミノアルキル、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ハロアルキルエーテル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物に関する。
【００１０】
一般に、本明細書に使用するときの「場合により置換されている」という用語は、アルキル、アルキレン、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロアリールなどの基が、非置換であるか、又は一つ若しくは複数の置換基で置換されていてもよいことを示すことを意味する。基に関して「置換されている」は、基の中の構成原子に結合している水素原子が置き換えられていることを示す。
【００１１】
別の局面では、本発明は、一般式ＶＩＩＩａ：
【００１２】
【化２】
2015187110.tif 000003
［式中、
Ｘ５は、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ及びＣ＝Ｓを含む群より選択され；
Ｚ１及びＺ２は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、及び水素を含む群よりそれぞれ独立して選択されるか、又は二つの基が相互に結合して５若しくは６員の環、複素環及びヘテロアリール環を形成し（それらの基の任意のものが場合により置換されている）；
Ｒ２７及びＲ２８は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ２９及びＲ３０は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルエーテル、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールエーテル、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノを含む群よりそれぞれ独立して選択されるか、又は二つの基が相互に結合して５若しくは６員の環、複素環、アリール及びヘテロアリール環を形成する（それらの任意のものが場合により置換されている）］を有する化合物に関する。
【００１３】
本明細書に使用するときの「アルキル」という用語は、直鎖または分岐鎖を有する置換又は非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル基などの基を示すことを意味する。
【００１４】
本明細書に使用するときの「シクロアルキル」という用語は、Ｃ３−Ｃ８環構造の置換又は非置換環式化合物などの基を示すことを意味する。
【００１５】
本明細書に使用するときの「ヘテロアリール」という用語は、環構造自体にＮ、Ｏ、及びＳの１個を超えるヘテロ原子を有する置換又は非置換の５〜９員芳香族化合物などの基を示すことを意味する。
【００１６】
本明細書に使用するときの「場合により置換された」という用語は、基の中の構成原子に結合した水素原子が、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、フッ素を含めたハロゲン、ＯＨ、ＮＯ２、ＯＲ３１、ＣＮ、ＮＲ３１Ｒ３２、ＣＯＲ３１、ＳＯＲ３２、ＳＯ２Ｒ３１、ＳＯ２ＮＲ３１、ＣＲ３１＝ＣＲ３１Ｒ３２、ＣＲ３１＝ＮＲ３２、アリール、アリールオキシ、Ｃ４−Ｃ１０ヘテロアリール基、又はＮＲ３１−ＣＯＲ３２、−Ｏ−ＣＯＲ３１などの基により置き換えられている可能性があることを示すことを意味する。
【００１７】
Ｒ３１及びＲ３２は、水素、アルキル、アルキルオキシ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルオキシ、アルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルオキシ、シクロアルキルアミノカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールアミノカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルキルカルボニル、ヘテロアリールアルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールアルキルカルボニルオキシ、ヘテロアリールアルキルアミノカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、フェニル、フェニルオキシ、フェニルアミノ、フェニルカルボニル、フェニルカルボニルアミノ、フェニルカルボニルオキシ、フェニルアミノカルボニル、及びフェニルオキシカルボニル（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される。
【００１８】
別の局面では、本発明は、実施例７に示される式１２５〜３０１、好ましくは表４に示される１３２〜１３５、１３７、１３９〜１４０、１４７、１５１〜１５２、１６０、１６３、１７３、１８０、１８４〜１８５、１９３、１９５、１９９〜２０１、２０４、２０６〜２２２、２２４、２２６、２２９、２３１〜２４３、２４５〜２７８、２８０〜２８６及び２９０〜３０１の一つを有する化合物に関する。特に好ましい化合物は、表４に示されるような式１３３、２３２及び２６４の一つを有する化合物である。
【００１９】
一局面では、本発明は、一般式ＩＩ：
【００２０】
【化３】
2015187110.tif 000004
［式中、
Ｒ５及びＲ６は、アシル、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、スルホネート及びスルホニル（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され、そして
Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物に関する。
【００２１】
別の局面では、本発明は、一般式ＩＩａ：
【００２２】
【化４】
2015187110.tif 000005
［式中、
ｎは、０、１、２、又は３であり；
Ｙ及びＺは、ＣＨ２、ＣＨＯＲ１０、ＣＨＮＲ１０Ｒ１１、ＣＲ１０Ｒ１１及びＮＲ１０を含む群よりそれぞれ独立して選択され；そして
Ｒ１０及びＲ１１は、アシル、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、水素、スルホネート及びスルホニル（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する、Ｒ５及びＲ６が結合している一般式ＩＩを有する化合物に関する。
【００２３】
別の局面では、本発明は、表２に示される一般式／骨格ＩＩを有する式の一つ及び実施例６に示される式１〜１２３、好ましくは表４に示される１〜２４、２６〜３４、５４、５６、５８〜６１、６３〜６４、６７、９０〜１０１、１０３〜１０５、１０７〜１０９、１１２、１１４〜１１６及び１１８〜１２１の一つを有する化合物に関する。特に好ましい化合物は、表４に示される式４及び２４の一つを有する化合物である。
【００２４】
好ましくは、上記と同義の化合物は、５〜２０μM、好ましくは５μM未満の濃度で、ホスト細胞、好ましくはマクロファージの内部における細菌の成長に、好ましくはM. tuberculosisの成長に阻止活性、好ましくは６５％を超える阻止活性を有する。
【００２５】
一局面では、本発明は、細菌感染の処置に使用するための、上記と同義の化合物に関する。
【００２６】
一局面では、本発明は、結核の処置に使用するための、上記と同義の化合物に関する。
【００２７】
一局面では、本発明は、上記と同義の化合物を含む薬学的組成物に関する。
【００２８】
一局面では、本発明は、上記と同義の化合物の適切な量を、結核の処置を必要とするヒトに適用することを含む、結核の処置法に関する。
【００２９】
別の局面では、本発明は、表３に示される一般式／骨格Ｉ、ＩＩＩ〜ＶＩＩ及びＩＸ〜ＸＸの一つを有する化合物に関する。
【００３０】
一局面では、本発明は、一般式Ｉ：
【００３１】
【化５】
2015187110.tif 000006
［式中、
Ｘ１及びＸ２は、ＣＨ及びＮＨを含む群よりそれぞれ独立して選択され；
Ｒ１及びＲ２は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択され；そして
Ｒ３及びＲ４は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、シアノ、シクロアルキル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択さる］を有する化合物に関する。
【００３２】
一局面では、本発明は、一般式ＩＩＩ：
【００３３】
【化６】
2015187110.tif 000007
［式中、
Ｒ１０及びＲ１１は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物に関する。
【００３４】
別の局面では、本発明は、一般式ＩＶ：
【００３５】
【化７】
2015187110.tif 000008
［式中、
Ａは、場合により置換されたヘテロアリール、ナフチル及びフェニルであり、そして
Ｒ１２は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択される］を有する化合物に関する。
【００３６】
一局面では、本発明は、一般式Ｖ：
【００３７】
【化８】
2015187110.tif 000009
［式中、
Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ１５は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物に関する。
【００３８】
別の局面では、本発明は、一般式ＶＩ：
【００３９】
【化９】
2015187110.tif 000010
［式中、
Ｒ１６は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキニル、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、シクロアルキル、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択され、そして
Ｒ１７は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、水素、ニトロ、チオ、スルホネート、スルホニル及びスルホニルアミノ（その任意のものが場合により置換されている）を含む群より選択される］を有する化合物に関する。
【００４０】
一局面では、本発明は、一般式ＶＩＩ：
【００４１】
【化１０】
2015187110.tif 000011
［式中、
Ｒ１８及びＲ１９は、アルコキシ、アルキル、アルキルアミノ、アルキレン、アルキルチオ、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルコキシ、アリールアミノ、アリールチオ、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアミノ、ヘテロシクロアルキル及び水素（その任意のものが場合により置換されている）を含む群よりそれぞれ独立して選択される］を有する化合物に関する。
【００４２】
別の局面では、本発明は、表２に示される一般式Ｉ、ＩＩＩ〜ＶＩＩ及びＩＸ〜ＸＸを有する式の一つを有する化合物に関する。
【００４３】
一局面では、本発明は、表１に挙げられる化合物に関する。
【００４４】
一局面では、本発明は、細菌感染の処置に使用するための、上記と同義の化合物に関する。
【００４５】
一局面では、本発明は、結核の処置に使用するための、上記と同義の化合物に関する。
【００４６】
一局面では、本発明は、上記と同義の化合物を含む薬学的組成物に関する。
【００４７】
一局面では、本発明は、上記と同義の化合物の適切な量を、結核の処置を必要とするヒトに適用することを含む、結核の処置法に関する。
【００４８】
別の局面では、本発明は、以下の段階を含むスクリーニング法に関する：
（ａ）蛍光ラベル化M. tuberculosisミコバクテリアを用いてホスト細胞をバッチ感染する段階；
（ｂ）遊離の未結合ミコバクテリアを除去する段階；
（ｃ）マルチウェルプレートに被験化合物を添加する段階；
（ｄ）蛍光ラベル化M. tuberculosisミコバクテリアに感染した該ホスト細胞を、該化合物を含む該マルチウェルプレートに蒔く段階；
（ｅ）蛍光ラベル化M. tuberculosisミコバクテリアに感染したホスト細胞及び該化合物を含む該マルチウェルプレートをインキュベーションする段階；
（ｆ）該ホスト細胞を蛍光ラベルする段階；
（ｇ）自動共焦点顕微鏡法を用いて該マルチウェルプレートを分析する段階。
【００４９】
本発明によるスクリーニング法は、ホストのマクロファージ内におけるM. tuberculosisの増殖を妨害する薬物の検索を可能にする、細胞に基づく表現型アッセイに相当する。このアッセイは、蛍光ラベル化ミコバクテリアに感染した、生きた蛍光ラベル化マクロファージを利用し、自動共焦点蛍光顕微鏡を用いて細胞内におけるミコバクテリアの成長を測定する。このアッセイは、大規模化学ライブラリーの高処理量スクリーニング（ＨＴＳ）のために設定された。
【００５０】
図及び表
これから図及び表を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】自動共焦点顕微鏡によるマクロファージ内部における結核菌の細胞内成長のモニタリングを示す図である：（ａ）感染後の異なる時点でM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰに感染したＲａｗ２６４．７細胞の代表的なピクチャー。（ｂ）画像解析：１：典型的な２色画像；２：丸で囲んだ対象は、検出された細胞に対応する；３：丸で囲んだ対象は細菌集合体に対応する；４：紫色の細胞は感染細胞に対応する。（ｃ、ｄ、ｅ）Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰに感染多重度０．５（灰色の四角）、１（黒丸）及び２（濃灰色の三角）で感染してから２時間〜７日後の感染細胞パーセンテージ及び平均細胞数の画像定量。未感染細胞（黒色のダイヤ形）を陰性対照として使用した。
【図２】インビトロ増殖蛍光アッセイ及び細胞に基づく表現型アッセイにおける参照薬の薬理学的検証及びＭＩＣ（最小阻止濃度）の比較を示す図である：（ａ）１μg/mLのＩＮＨ又はＤＭＳＯ対照の存在下での感染細胞の代表的なピクチャーである。（ｂ、ｃ、ｄ）ＩＮＨ、リファンピン及びエチオナミドの用量反応；黒色の四角及び線は、細胞に基づくアッセイでの増殖阻止に対応し；灰色の丸及び線は、インビトロ増殖阻止に対応し；代表的なデータセットを示す。
【図３ａ】細胞に基づく表現型アッセイのアッセイ自動化の検証を示す図である：（ａ）M. tuberculosis感染細胞のパーセントを３８４−プレートウェル−指数に対して示す。黒色の四角、濃灰色の四角、灰色の四角及び白色の四角は、それぞれＩＮＨ １μg/mL、リファンピン５μg/mL、ＰＢＳ及びＤＭＳＯ対照に対応する。
【図３ｂ】細胞に基づく表現型アッセイのアッセイ自動化の検証を示す図である：（ｂ）M. tuberculosis感染細胞のパーセントをリファンピンの濃度に対して示す。二つの独立した日に４枚の異なるプレートで実験を行った。
【図３ｃ】細胞に基づく表現型アッセイのアッセイ自動化の検証を示す図である：（ｃ）M. tuberculosis感染細胞のパーセントをＩＮＨの濃度に対して示す。二つの独立した日に４枚の異なるプレートで実験を行った。
【図４】２６５００種の化合物についての、細胞に基づく表現型アッセイ及びインビトロ増殖アッセイの初回スクリーニングの結果を示す図である。（ａ）感染比率に基づく阻止パーセントを各化合物及び分布に対して示す。（ｂ）ＲＦＵに基づく阻止パーセントを各化合物及び分布に対して示す。（ｃ）各化合物についての、細胞に基づく表現型アッセイとインビトロ成長アッセイの間の阻止パーセントの比較。
【図５】インビトロ増殖蛍光アッセイ及び細胞に基づく表現型アッセイによる、系列希釈の結果を示す図である：（ａ、ｂ、ｃ）インビトロの細菌増殖、（ｄ、ｅ、ｆ、）インビトロの増殖及び細胞内増殖の両方、並びに（ｇ、ｈ、ｉ）細胞内増殖だけを阻止する化合物についての典型的な曲線。（ａ、ｄ、ｇ）感染比率を化合物濃度に対して示す。（ｂ、ｅ、ｈ）細胞数を化合物濃度に対して示す。（ｃ、ｆ、ｉ）相対蛍光強度を化合物濃度に対して示す。化合物濃度は、Ｍ（モル濃度）単位で示す。
【図６ａ】（ａ）アッセイ自動化のスキームを示す図である。
【図６ｂ】（ｂ）３８４−プレート形式の説明を示す図である。Ａ〜Ｐ及びａ〜ｂは、ウェルＡ又はａに２０mg/mLの濃度で開始した、それぞれＩＮＨ及びリファンピンの２倍系列希釈に対応する。ＲＩＦ：リファンピン５μg/mL、Ｃｐｄ：化合物、ＩＮＨ１００：１μg/mL、ＩＮＨ５０：０．０５μg/mL。
【図６ｃ】（ｃ）３８４−プレートの用量−反応曲線の説明を示す図である。Ａ〜Ｐ及びａ〜ｂは、ウェルＡ又はａに２０mg/mLの濃度で開始した、それぞれＩＮＨ及びリファンピンの２倍系列希釈に対応する。ＲＩＦ：リファンピン５μg/mL、Ｃｐｄ：化合物、ＩＮＨ１００：１μg/mL、ＩＮＨ５０：０．０５μg/mL。
【図７】ＭＯＩ ２．５：１（対照ＩＮＨは５μM）で感染させた７日後の（ａ）Ｒａｗ２６７．４（細胞１０４個）、（ｂ）マウス骨髄由来マクロファージ及び（ｃ）５０ng/mL ｒｈＭ−ＣＳＦで分化させたヒト初代マクロファージ（１．５×１０４個）中のM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰに対する化合物４及び２４（５μM）の抗結核効果を示す図である。
【図８】M. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖに感染後の異なる時点でマクロファージから回収されたコロニー形成単位（ＣＦＵ）を示す図である。Ｒａｗ２６４．７細胞（ａ）又はマウスＢＭＤＭ（ｂ）のいずれかに１：１のＭＯＩで感染させ、表示量のピリドピリミジノン化合物２３２（２０μM）で処理した。対照としてＤＭＳＯ、ＩＮＨ（１０μM）及びＲＩＦ（１０μM）を用いた。
【００５２】
表１に、細胞内（ＱＩＭ）アッセイ又はインビトロ（ＱＵＭ）アッセイで阻止活性が確認された３４０個のヒットを挙げる。ここで、略語「ＱＩＭ」は、細胞内ミコバクテリアの定量を意味し、略語「ＱＵＭ」は、インビトロで増殖したミコバクテリアの定量を意味し、略語「ＣｅｌｌＮｂ」は、細胞数を意味する。
【００５３】
表２に、２μMで６５％を超える阻止活性を示したが２０μMで目に見える細胞毒性を全く有さず、したがって、３倍系列希釈の１０濃度によるさらなる確認のために選択された１２１個の化合物を挙げる。
【００５４】
表３は、表２に挙げた１２１個のヒットの独立した／一般的な分子骨格／分子式を要約したものである。
【００５５】
表４に、ジニトロベンズアミド誘導体及びピリドピリミジノン誘導体（それぞれ一般骨格ＩＩ及びＶＩＩＩ、表３参照）をそれぞれの阻止活性と共に挙げるが、太字で印刷した数は、実施例６及び７に挙げた化合物を表す。
【００５６】
表５に、ジニトロベンズアミド化合物４及び２４（表４参照）の細胞毒性及び抗菌スペクトルを示す。
【００５７】
表６に、ピリドピリミジノン化合物１３３（表４参照）の細胞毒性及び抗菌スペクトルを示す。
【００５８】
そして、表７に、代表的なジニトロベンズアミド化合物及びピリドピリミジノン化合物の自然耐性の頻度を示す。
【００５９】
実施例
これから以下の実施例を参照して本発明をさらに説明するが、これらの実施例は、本発明を例示するものであって、本発明の範囲を限定するものではないと意図される。
【００６０】
材料及び方法
遺伝子構築物及びミコバクテリア株
緑色蛍光タンパク質を発現しているM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖのリコンビナント株（Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰ）は、組み込み型プラスミドのトランスフォーメーション（形質転換）によって得られた（Abadie et al., 2005; Cremer et al., 2002）。Ｍｓ６ミコバクテリオファージ由来のこのプラスミドの中にｇｆｐ遺伝子をクローニングし、その遺伝子を強力なミコバクテリアプロモーターｐＢｌａＦ下で構成的に発現させる。M. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰについてのエレクトロコンピテント細胞は、アルブミン−デキストロース−カタラーゼ（ＡＤＣ、Difco, Sparks MD, USA）、グリセロール及び０．０５％ Tween 80を補充したMiddlebrook ７Ｈ９培地（Difco, Sparks MD, USA）で１５日間培養した培養液４００mLから調製した。３０００ｇで２０分間遠心分離することによって菌体を回収し、Ｈ２Ｏを用いて室温で２回洗浄し、再遠心分離後に室温で１〜２mLの１０％グリセロールに再懸濁した。２５０μlの菌液を、緑色蛍光タンパク質をコードするプラスミドと混合し、Biorad Gene Pulser（Biorad）を用いてエレクトロポレーションした。エレクトロポレーション後に、菌体を培地に再懸濁し、３７℃で１日放置した。オレイン酸−アルブミン−デキストロース−カタラーゼ（ＯＡＤＣ、Difco, Sparks MD, USA）及び５０μg/mLハイグロマイシン（Invitrogen, Carlsbad, CA USA）を補充したMiddlebrook ７Ｈ１１培地（Difco, Sparks MD, USA）でトランスフォーマントを選択した。選択された後の、ハイグロマイシン耐性で緑色蛍光を発するコロニーは、３週間後に出現した。Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰ株の培養物１００mLを、０．０５％ Tween 80及び５０μg/mLハイグロマイシンを補充したMiddlebrook ７Ｈ９−ＡＤＣ培地で増殖させた。細菌を回収し、２回洗浄し、５０mMリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）に懸濁した。次に、細菌を超音波処理し、１時間放置させ、残った凝集物を沈降させた。次に、細菌懸濁液を小分けして−８０℃で凍結した。小分けした１個を解凍したものを使用してＣＦＵ（コロニー形成単位）を定量してから植菌した。典型的な原液濃度は約２〜５×１０８CFU/mLであった。
【００６１】
ホスト細胞
マウスマクロファージ細胞系Ｒａｗ２６４．７（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−７１）、Ｊ７７４Ａ．１（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−６７）又は５０ng/mL ＰＭＡ（Sigma）で分化させたヒト単球（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−２０２）を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Gibco）を有するＲＰＭＩ１６４０（Gibco）中で増殖させた。
【００６２】
化合物
スクリーニングライブラリーからの合成小分子を、Corning製９６ウェル透明Ｖ底ポリプロピレンプレート（Corning、番号３９５６）の中で純粋なＤＭＳＯ（Sigma、D5879-５００mL）に１０mMの濃度で懸濁した（マスタープレート）。次に、それらの化合物をGreiner製384ウェルＶ型ポリプロピレンプレート（Greiner、番号７８１２８０）の中で再編成し、純粋なＤＭＳＯで終濃度２mMまで希釈した。これらの化合物は、使用まで凍結保存した。スクリーニングのために、化合物のプレートを室温で解凍するまでインキュベーションした。２５０nlの化合物を２回移して１：１００の最終希釈に到達させるEVObird液体ハンドラー（Evotec Technologies）を使用して、これらの化合物をＤＭＳＯ原液からアッセイプレートに直接添加した。この一段階希釈により、中間プレートの中で化合物が沈殿するリスクが低下し、低い最終ＤＭＳＯ濃度（１％）が可能になる。
【００６３】
陽性対照抗生物質（イソニアジド（Sigma, I3377-50G）及びリファンピン（Euromedex, 1059-8、５ｇ））及び陰性対照（ＤＭＳＯ）を各プレートの第１〜２列及び第２３〜２４列に手動で添加した（プレートの説明については図６ｂ参照）。
【００６４】
合計２６５００個の化合物を試験した。これらの化合物は、Timtecから販売されているライブラリー由来であった（２５０００個はActiProbe多様ライブラリーから、１０００個はキナーゼ阻害剤ActiTargKライブラリーから、５００個はプロテアーゼ阻害剤ActitargPライブラリーから）。スクリーニングされた化合物は、高い多様性及び薬物様性質（Lipinskiのルール−オブ−ファイブを使用（Lipinski et al., 2001））に基づいて選択した。最初にそれらを１濃度でスクリーニングした（初回選抜、濃度＝２０μM）。次に、最も活性な化合物を同定するために、初回選抜から選択された「陽性」化合物を３濃度（２０、２及び０．２μM）で試験することによって、かつ／又は１０濃度の３倍希釈（２０μM〜０．５nM）によって確認した。
【００６５】
マクロファージ浸潤アッセイの設定
最初に、５０μlの細胞液を３８４ウェルプレート（Evotec technologies番号７８１０５８）のウェル１個あたり細胞２０，０００個の密度で１６時間蒔き、次に、１０：１〜１：１（細菌：ホスト細胞）に変動する感染多重度（ＭＯＩ）で細菌懸濁液を感染させた。2時間後に、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、新鮮培地に希釈した化合物を添加した。細胞を３７℃および５％ＣＯ２下で最大７日間インキュベーションした。
【００６６】
マクロファージのバッチ感染アッセイのスケールアップ
３００mL中で１：１のＭＯＩで細胞（１．５×１０８個）にＨ３７Ｒｖ−ＧＦＰ懸濁物を３７℃で２時間振盪（１００rpm）しながら感染させた。１１００rpm（Beckman SX4250、１６５ｇ）で５分間遠心分離して２回洗浄後に、感染細胞懸濁物からの残りの細胞外菌体をアミカシン（２０μM、Sigma, A2324-5G）処理によって１時間殺菌した。最終遠心分離段階の後に、細胞培地に希釈したそれぞれの化合物１０μlを予備注入した３８４ウェルEvotecプレート（番号７８１０５８）に、Wellmate（Matrix）で細胞を分注した。次に、化合物の存在下で感染細胞を３７℃及び５％ＣＯ２下で５日間インキュベーションした。５日後に、マクロファージをＳＹＴＯ６０（Invitrogen, S11342）で染色し、その後プレートを密封し、画像を取得した。スクリーニングの間に、２時間毎にプレート３枚のセットに生細胞の染色を実施して、細胞化学染色に伴う長期間インキュベーションによる細胞死を制限した。
【００６７】
画像取得及びデータ解析
２０×水浸対物レンズ（NA 0.70）、４８８nm及び６３５nmレーザ及び４８８／６３５第１ダイクロイックミラーを用いて自動蛍光共焦点顕微鏡Opera（商標）（Evotec Technologies）で共焦点画像を記録した。次に、専用の研究所内画像解析ソフトウェア（ＩＭ）を使用して各画像を処理した。決定されたパラメーターは、総細胞数及び感染細胞数であった。簡潔には、アルゴリズムは、別の箇所に記載されたような（Fenistein et al.、原稿は印刷中）一連の処理段階を用いて、最初に赤色チャネルで細胞をセグメント分けする。それは一般に、１）オリジナル画像のヒストグラムを閾値処理すること（３クラスのＫ平均法）、２）細胞の平均半径に等しく設定した標準偏差でオリジナル画像にガウシアンフィルターを施すこと、３）４）各細胞自体の表面を規定する領域成長（region growing）のために、シード点として細胞の中心を与える、フィルター処理後の画像の局所極大値を検索すること、及び最終的に５）潜在的アーチファクト又はノイズとして極端に小さな細胞を排除することの連続に基づく。この段階は、赤色チャネルに合計細胞数を与える。次に、感染細胞は、緑色チャネルの強度が所与の強度閾値を超える、少なくとも所与のピクセル数（普通は３）を有する細胞と定義される。感染細胞対総細胞数の比は、関心がもたれる尺度である（感染比率と名付ける）。各ウェルについて、４個のピクチャーを記録し、各パラメーターについて４個の画像の平均を使用した。
【００６８】
次に、細胞内アッセイの画像解析又は従来の抗菌アッセイ（下記参照）のいずれかから得られたデータを、ActivityBase（ＩＤＢＳ）を使用して処理し、統計データ（各化合物についての阻止％、Ｚスコア、対照プレートについてのＺ’、ＣＶなど）を計算し、Oracleデータベースにデータを記憶させた。選別物の品質管理及びヒットの同定の両方に関する追加的な解析は、Spotfire（Tibco）及びPipelinepilot（Accelrys）を含めた多様なソフトウェアパッケージを用いて行った。
【００６９】
好気性細菌のインビトロ増殖アッセイ
M. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰの一定分量を凍結させたものを、０．０５％ Tween 80を補充したMiddlebrook ７Ｈ９−ＡＤＣ培地に１．５×１０６CFU/mLとなるように希釈した。最初に、Greiner μclear-black ３８４ウェルプレート（Greiner、番号７８１０９１）の中で、０．０５％ Tween 80を補充したMiddlebrook ７Ｈ９−ＡＤＣ培地１０μlに０．５μlの化合物をEVOBird（Evotec）によって予備注入した。次に、希釈された化合物の上部にＨ３７Ｒｖ−ＧＦＰ細菌の希釈懸濁液４０μlを添加し、最終的に１％ＤＭＳＯを含む容量５０μlとした。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２下で１０日間インキュベーションし、その後にVictor 3リーダー（Perkin-Elmer Life Sciences）を使用してＧＦＰ蛍光を記録した。
【００７０】
マクロファージ感染アッセイ及び画像解析
Ｒａｗ２６４．７（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−７１）（細胞１．５×１０８個）に、懸濁状態のＨ３７Ｒｖ−ＧＦＰ（Abadie et al., 2005, Cremer et al., 2002）を１：１のＭＯＩで３７℃で２時間振盪しながら感染させた。遠心分離で２回洗浄後に、感染細胞懸濁液からの残りの細胞外細菌をアミカシン（２０μM, Sigma, A2324）で１時間処理することによって殺菌した。最後の遠心分離段階の後で、化合物及び対照を予備注入した３８４ウェルEvotecプレート（番号７８１０５８）に細胞を分注した。次に、感染細胞を３７℃及び５％ＣＯ２下で５日間インキュベーションした。マウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）は、以前に記載されたように生成させた（Brodin et al., 2006）。簡潔には、６週齢雌性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６、Orientbio）の大腿骨及び脛骨から細胞を抽出し、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（どちらもInvitrogen, Carlsbad, CAのGibco（登録商標）製）及び１０％のＬ−９２９細胞馴化培地を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を健康志願者のバフィーコートから単離した。１％ＦＣＳを補充したＰＢＳに希釈したバフィーコートを１５mlのFicoll-Paque Plus（Amersham Biosciences, Sweden）で処理し、２５００×ｇで２０分間遠心分離した。ＰＢＭＣは、ＣＤ１４＋ビーズを用いた分離（Miltenyi Biotec, Germany）によって得られたが、それをＰＢＳ（１％ＦＣＳ）で３回洗浄し、ＲＰＭＩ１６４０培地、１０％ＦＣＳ及び５０ng/mlのリコンビナント-ヒトマクロファージコロニー刺激因子（R & D systems, Minneapolis）が入った７５cm2培養フラスコに移した。６日間経過した接着マウスＢＭＤＭ及びＰＢＭＣ由来ヒトマクロファージに１：１のＭＯＩでＨ３７Ｒｖ−ＧＦＰ（Abadie et al., 2005）を３７℃で２時間懸濁状態で感染させ、次に、徹底的に洗浄し、最終的に化合物又は対照と共にインキュベーションした。数日後に、マクロファージをSYTO 60（Invitrogen, S11342）で染色し、Opera（商標）（２０×水浸対物レンズ、NA 0.70）が組み込まれた、ＢＳＬ−３安全実験室に位置するEVOscreen-MarkIII全自動プラットフォームで画像取得を行った。ミコバクテリア-ＧＦＰは、５３５／５０nm検出フィルターと結合した４８８nmレーザを使用して検出し、細胞は、６９０／４０nm検出フィルターと結合した６３５nmレーザでラベルした。各プレートウェルについて４視野を記録し、次に、専用の研究所内画像解析ソフトウェア（ＩＭ）を使用して、別に記載されたように各画像を処理した（Fenistein et al.、印刷中）。
【００７１】
ミコバクテリア株及びインビトロ細菌増殖アッセイ
Mycobacterium tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ、Ｈ３７Ｒａ及びＢＣＧ Pasteurを参照株として使用した。全ての株は、０．０５％ Tween80を補充したMiddlebrook ７Ｈ９−ＡＤＣ培地に１．５×１０６CFU/mLになるように希釈した。最初に、３８４ウェルプレート（Greiner、番号７８１０９１）の中で、０．０５％ Tween80を補充したMiddlebrook ７Ｈ９−ＡＤＣ培地１０μlに０．５μlの化合物をEVOBird（Evotec）によって予備注入した。次に、希釈した化合物にＨ３７Ｒｖ−ＧＦＰ細菌の希釈懸濁液４０μlを添加し、最終的に１％ＤＭＳＯを含む容量５０μlとした。プレートを３７℃及び５％ ＣＯ２下で１０日間インキュベーションした。ミコバクテリアの増殖は、Victor 3リーダー（Perkin-Elmer Life Sciences）を使用してＨ３７Ｒｖ−ＧＦＰについてのＧＦＰ蛍光を測定することによって、又はレサズリン法で決定した。０．０５μg/mL及び１μg/mLのイソニアジド（Sigma, I3377）、１μg/mLのリファンピン（Euromedex）及びＤＭＳＯを対照として使用した。
【００７２】
細胞毒性アッセイ
化合物の毒性を検討するために、異なる生体組織由来の７株の細胞系を、１００μMからの３倍希釈系列の化合物の存在下で培養した。培養５日後に、レサズリン試験により細胞生存率を評価した。簡潔には、細胞を１０μg/mLのレサズリン（Sigma-Aldrich St. Louis, MO）と共に３７℃及び５％ ＣＯ２下で４時間インキュベーションした。上記のようにレゾフリン（resofurin）蛍光（ＲＦＵ）を測定した。細胞に対する毒性パーセンテージは、以下のように計算した：細胞毒性（％）＝（ＲＦＵＤＭＳＯ−ＲＦＵブランク）−（ＲＦＵ化合物−ＲＦＵブランク）／（ＲＦＵＤＭＳＯ−ＲＦＵブランク）×１００。細胞毒性のパーセンテージを化合物濃度に対してプロットし、最小毒性濃度（ＭＴＣ５０）は、対応する細胞系で５０％の毒性が観察された最低化合物濃度として非線形回帰分析により決定した。
【００７３】
自然耐性の頻度
自然突然変異の頻度は、漸増する濃度のジニトロベンザミド（０．２、０．８、１．６及び３．２μg/ml）又はピリドピリミジノン（０．４、０．８、１．６及び３．２μg/ml）化合物が入った７Ｈ１０プレートで決定した。化合物が入った寒天平板に、１０６、１０７及び１０８ＣＦＵを含む細菌懸濁液を広げた。３７℃で５〜６週間後にコロニーを計数し、本来の植菌数に対するコロニーの比として突然変異頻度を評価した。ＤＭＳＯ及びＩＮＨは、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。
【００７４】
実施例１：マクロファージに基づく表現型アッセイの設定及び自動画像定量
M. tuberculosis感染の最適条件を設定するために、最初に、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を構成的発現するミコバクテリアを異なる感染多重度（ＭＯＩ）でＲａｗ２６４．７マクロファージに感染させ、続いて動態解析を行った。細菌感染の７日後まで、生きたホスト細胞を赤色蛍光色素Syto60で毎日ラベルし、自動共焦点顕微鏡を使用して、生きた試料の共焦点画像を取得した。典型的な画像を図１ａに示す。最初の２４時間に、少数の分散した弱蛍光細菌が細胞内に局在した。２日目まで平均細胞数は増加し、ミコバクテリアは隣接細胞に拡大し始め、強蛍光細菌の領域を導いた。緑色シグナルの位置は、常に赤色細胞シグナルの位置から５μm以内の距離であり、大部分の場合に細胞シグナルと事実上重複する。これは、ミコバクテリアが細胞内で増殖する性質を確認するものである。４日目まで細胞数は顕著に減少し、細菌は大型で高度に蛍光を発生する凝集物を形成し、その凝集物は、５日目以降はほぼ画像全体に及ぶ。対照として、未感染細胞は、２日目に集密になるまで増殖し、７日目まで生存し続けた。
【００７５】
細胞内の細菌負荷を自動定量するために、研究室内の画像解析スクリプトを開発した。このスクリプトは、細胞数及び感染細胞のパーセンテージの自動定量を可能にする。ここで、感染細胞は、所定の閾値を超える強度を有する少なくとも３個の緑色ピクセルを含む細胞である（図１ｂ）。感染の２時間後に、２〜１０％のＲａｗ２６４．７細胞が、少数の細菌を内部に有することが分かった（図１ｃ）。感染細胞のパーセンテージ（以後、感染比率と名付ける）は、感染７２時間後から増加し続け、感染７日後には最大７０％に達した。感染比率におけるこの増加は、細胞死滅率の増加と相関した（図１ｄ／ｅ）。
【００７６】
実施例２：公知の抗結核薬の最小阻止濃度の比較
アッセイの設定の妥当性を確認するために、現行の抗結核薬がM. tuberculosisの細胞内成長に及ぼす効果を検討した。イソニアジド（ＩＮＨ）、リファンピン及びエチオナミドの２倍系列希釈を行い、続いて予めM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰに感染したマクロファージで試験した。インキュベーションの５日目に、マクロファージを染色し、上記のように自動共焦点顕微鏡で画像を取得した。ＩＮＨと共にインキュベーションした試料に対応するピクチャーで、ＤＭＳＯ陰性対照よりも多数の細胞及び少数の細菌が明らかに見られる。これは、ＩＮＨがM. tuberculosisの細胞内増殖と細菌介在性細胞毒性の両方を抑制することを示す（図２ａ）。画像抽出解析により、明らかな阻止用量反応曲線が得られた（図２ｂ）。平行して、同条件で緑色蛍光強度を記録することによって、ＩＮＨによるM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰのインビトロ増殖阻止をモニターした。両方の実験では、ＩＮＨについての最小阻止濃度（ＭＩＣ）は０．１μg/mLであったが、それは、M. tuberculosisの細胞外増殖について文献に報告されたＭＩＣと一致する（Andries et al., 2005）。標準的な抗結核薬であるエチオナミド（図２ｃ）及びエタンブトール（データは示さず）で類似の結果が得られたが、リファンピンについては、インビトロアッセイよりも細胞に基づくアッセイでＭＩＣの対数倍の減少があった（図２ｄ）。細胞に基づくアッセイにおけるリファンピンの有効性低下は、細胞への透過障害が原因と思われ、このアッセイでモニターされるのが細胞内抗菌活性であることをさらに実証している。したがって、高処理量スクリーニング（ＨＴＳ）のために、細胞内及びインビトロ両方のM. tuberculosis増殖アッセイを適応した。
【００７７】
実施例３：アッセイの規模拡大及び検証
ＨＴＳのためのプロトコールを簡略化するために、バッチ内でマクロファージにM. tuberculosisを感染させてから、化合物に分注した。軽く振盪しながら懸濁状態のマクロファージに３７℃でバッチ感染を実施した。ＰＢＳで３回洗浄し、分画遠心分離を行うことによって、及び細胞外微生物を選択的に殺菌することが知られている抗生物質であるアミカシンと共に追加的に１時間のインキュベーションを行う段階によって、遊離の未結合ミコバクテリアを除去した（図６ａ）。次に、化合物、ＤＭＳＯ又は抗生物質対照を予め分注したプレートに、M. tuberculosisに感染したマクロファージを蒔いた。日間再現性及びプレート間再現性を最初に試験した。このために、通常のＤＭＳＯ及び陽性対照（１μg/mL（ＭＩＣ１００）及び０．０５μg/mL（ＭＩＣ９０）のＩＮＨ並びに１μg/mLのリファンピン）のウェルに加えて、ＩＮＨ又はリファンピンのいずれかの系列希釈物を８枚のプレートに分注し、続いてそれらに感染細胞を蒔いた。同じ実験を連続する２日にわたり繰り返した。５日間のインキュベーション及びマクロファージの染色後に、各プレートからピクチャーを取得した。２日間の実験の間に各プレートのＤＭＳＯ陰性対照について決定された平均感染比率は、５０％〜７０％であったが、ＩＮＨ試料及びリファンピン試料についての平均感染比率は、２０％未満に低下した（図３ａ）。二つの実験の間で平均感染比率は幾分変化したが、ＩＮＨ陽性対照とＤＭＳＯ陰性対照との間の差は、どちらの日でも５倍を超えていた。対応のあるスチューデントのｔ検定を使用して各プレートについて計算したＰ値からも、陽性対照と陰性対照との間の有意差が確認された（ｐ＜０．０００００１、データは示さず）。加えて、本発明者らは、二重盲検対照試験（異なる３濃度でＩＮＨ及びリファンピンを添加）を行うことによって、プレート中の任意のウェルに分注された、M. tuberculosisの細胞内増殖感染の阻害剤を検出することができるかどうかを判定するための実験を行った。実際に、１００％の場合で添加が同定された（データは示さず）。まとめると、これらの結果は、このアッセイが、ＨＴＳ条件で阻害剤を十分に同定できるほど高感度であることを証明している。最終的に、参照化合物の用量反応をモニターすることによって、アッセイの頑健性をチェックした。プレート又は実験日に関わらず、抗生物質陽性対照についてほぼ同一のＭＩＣが決定された（図３ｂ／ｃ）。画像に基づく感染比率の定量から計算されたＭＩＣは、ＩＮＨ及びリファンピンについてそれぞれ０．１６±０．０５μg/mL及び２．４±１．３μg/mLであり、それをＣＦＵプレート培養によって確認した（データは示さず）。平行して、類似のアプローチで細胞外増殖アッセイを検証した（データは示さず）。
【００７８】
実施例４：細胞に基づく表現型アッセイを使用した小分子合成化合物の大規模ライブラリーの初回スクリーニング
検証された細胞に基づく表現型アッセイを用いてスクリーニングすべき第１のライブラリーとして、高い化学的多様性及びリピンスキーの法則（Lipinski et al., 2001）による薬物様性質について選択された２６５００個の小分子化合物のライブラリーを選んだ。単体で２０μMの化合物を用いて初回選別を実施した。処理量は、２５枚のプレートを処理する作業１日あたり約６０００個の化合物に設定した。M. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰを感染させる前に凍結原液から１０日間増殖させたＲａｗ２６４．７細胞を用いてスクリーニングを行った。スクリーニングの結果を受け入れるには、スクリーニングの日の始めと終わりに処理されたＩＮＨ及びリファンピンの２倍系列希釈物から得られたＭＩＣが、検証の間に得られた値と類似の結果を示さなければならない（上記参照）。次に、ＤＭＳＯとＩＮＨ（１μg/ml）との間のウインドウが３よりも大きく、各プレートに存在する３２０個の化合物について計算されたＣＶが２５未満ならば、スクリーニングされた各プレートは品質管理手順によって受け入れられる。そのような品質管理基準は、７５％よりも高い活性を有するヒットの同定を許す。続いて、各化合物についての阻止パーセントを、同じ３８４ウェルプレートで１μg/mL ＩＮＨ（１００％）とＤＭＳＯ（０％）との間の対応する平均感染比率に関して決定した。阻止パーセントの分布は、−２０％の阻止付近を中心とする（図４ａ）。６５％よりも大きな阻止効果を有する化合物を選択することを決定したが、それは、総化合物の１．５％にわずかに満たない数に対応する。
【００７９】
平行して、同じ化合物をM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖ−ＧＦＰ細菌の増殖に及ぼす阻止活性についてだけ試験した。古典的蛍光強度に基づくこのアッセイからの結果は、高度の再現性を示たことから、プレートの検証のための基準を、０．３５を超えるＺ’値（ＤＭＳＯ／ＩＮＨ）に設定した。この蛍光に基づくアッセイについての処理量は、１日あたり約２０，０００個の化合物であった。次に、６５％を超える阻止効果でM. tuberculosisの成長をインビトロで阻止した化合物が、０％を中心とする不活性集団から明らかに独立した集団に属することから、それらをヒットとして選択した（１．４％）（図４ｂ）。
【００８０】
次に、二つの異なるスクリーニングから集めた結果を編集及び比較した（図４ｃ）。異なる４集団を同定することができた：ｉ）細胞外細菌にだけ活性な化合物、ｉｉ）細胞内細菌にだけ活性な化合物、ｉｉｉ）両方の状態で活性な化合物又はｉｖ）不活性な化合物。６５７個の化合物（２．５％）は、前から三つの分類の一つに属したことから、さらなる研究のために選択した。
【００８１】
画像解析の間に測定することができる重要なパラメーターは、細胞毒性とも呼ばれる総細胞数である。低い細胞数は、二つの独立した現象、すなわち化合物の毒性及びM. tuberculosisの増殖が介在する細胞毒性の結果でありうる。実際、未感染細胞について画像１枚あたり５００個を超える細胞であるのに比べて、M. tuberculosisに感染５日後に、細胞数は画像１枚あたり１００個未満に減少した（図１ｅ）。対照的に、その化合物が無毒であって、ミコバクテリアの増殖を阻止する場合にだけ、高い細胞数が得られる。このことは、化合物の抗ミコバクテリア活性の第２の関連測定であることが分かる。しかし、少数の化合物だけに低い細胞数が認められることから、そして２０μMでの細胞毒性にかかわらず、ずっと低濃度で活性であることが後で証明されるであろう高活性化合物を選択し損なうことを本発明者らは避けたいことから、この基準を初回選別からのヒットの選択に適用しなかった。０．２よりも大きな総細胞数のＺ’（ＤＭＳＯ／ＩＮＨ）値の追加的な検証基準を以下のスクリーニング段階に取り入れた。
【００８２】
実施例５：スクリーニングの結果の確認、用量反応解析及びヒットの分類
選択された６５７個のヒットを最初に異なる３濃度、２０μM、２μM及び０．２μMで確認した。３４０個のヒットについて、細胞内アッセイ又はインビトロアッセイにより２０μM又は２μMのいずれかで活性を確認した（表１参照）。この一覧の後半で、１２１個の化合物が２μMで６５％を超える阻止活性を示すが、２０μMで目に見える細胞毒性を全く有さなかったことから、３倍希釈系列の１０濃度によるさらなる確認のために選択した（表２参照）。系列希釈により、１２１個の化合物全てが２５０nM〜２０μMのＭＩＣを有することが確認された。図５に示される結果は、観察された三つのタイプの挙動を代表するものであり、活性を感染比率として測定したとき、大部分の化合物は、明らかな用量反応曲線を示した（図５ｂ／ｅ／ｈ）。一方のアッセイと他方のアッセイの間でたとえＭＩＣが異なっても、細菌レベルに対して活性な化合物は、細胞外アッセイにおいて類似の活性を示す（図５ｃ／ｆ）。少数の化合物は、インビトロ細菌に明らかな活性を示さず（図５ｉ）、感染過程の間にだけ関与する細胞ターゲット又は細菌ターゲットに作用する薬物に相当するおそれがある。さらに、化合物濃度が増加したときの細胞数の劇的な減少により有毒化合物を同定することができ（図５ｄ）、無毒性化合物の活性は、細胞数に及ぼす用量反応の保護効果により立証される（図５ａ）。したがって、細胞数の検出は、一次アッセイと同じウェルにおける独立した二次アッセイに相当する。１２１個の化合物全ての系列希釈の結果を表２に示す。
【００８３】
確認された１２１個のヒットは、２０種の独立／一般骨格にクラスター化することができる（表３）。各骨格についての化合物数は、１〜６９種の分子まで様々である。化合物が６９個属する骨格からの分子は、ＩＮＨに類似する共通構造をもつことによって、スクリーニング結果の正当性を確認している。一つの骨格は、細胞内アッセイだけに活性であった分子を含み、その作用機序は、今後の研究の焦点となろう。
【００８４】
実施例６：ベンズアミド化合物の誘導体化
ベンズアミド化合物（骨格ＩＩ；表３参照）を、下記に概略する方法により誘導体化した（スキーム１〜７）。アミドの形成は、塩化アシルの代わりに、ＥＤＣ又はＤＣＣカップリング試薬を酸と共に使用する一般条件で行うことができる。結果として生じた誘導体を、上記アッセイを用いて阻止活性について調査し、その結果を表４に概要する。
【００８５】
【化１１】
2015187110.tif 000012
【００８６】
２−フェノキシエチルイソインドリン−１，３−ジオン（Ａ１）合成のための一般手順
２−（２−ヒドロキシエチル）イソインドリン−１，３−ジオン（１．６８mmol）の塩化メチレン溶液（１０mL）にＡＤＤＰ（１．６８mmol）、トリフェニルホスフィン（１．６８mmol）及びフェノール（３．１８mmol）を添加し、室温で撹拌した。一晩撹拌した後に、反応混合物を塩化メチレン（３０mL）で希釈し、１Ｍ ＮａＯＨ水溶液（５０mL）及び食塩水（５０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（４：１ヘキサン／酢酸エチル）により精製し、ヘキサン及び酢酸エチルの混液から再結晶化し、Ａ１を得た。
【００８７】
Ｎ−（２−フェノキシエチル）−ベンズアミド（Ａ２）合成のための一般手順
Ａ１（１．１４mmol）のメタノール溶液（１０mL）にヒドラジン一水和物（１．４２mmol）を添加し、結果として生じた混合物を窒素雰囲気下で還流させた。３時間後に、その反応混合物を室温まで冷却させ、真空中で濃縮した。残渣を塩化メチレン（１０mL）で沈殿させた。結果として生じた沈殿にセライト（Celite）を通過させて濾過し、濾液を真空中で濃縮し、アミン中間体を産出させた。そのアミンの塩化メチレン溶液（１０mL）にトリエチルアミン（０．４５mmol）及び塩化ベンゾイル（０．４５mmol）を０℃で添加し、結果として生じた混合物を室温で撹拌した。３時間後に、反応混合物を塩化メチレン（１０mL）で希釈し、１Ｍ ＨＣｌ水溶液（３０mL）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３０mL）及び食塩水（３０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（３：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、ヘキサン及び酢酸エチルの混合物から再結晶化し、Ａ２を得た。
【００８８】
３，５−ジニトロ−Ｎ−（２−フェノキシエチル）ベンズアミド（１）
【００８９】
【化１２】
2015187110.tif 000013
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.88 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 8.78 (brs, 1H), 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.07 (d, J = 2.0 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 40.1, 66.0, 114.5, 120.8, 127.6, 129.6, 137.8, 148.8, 158.9, 163.0。
【００９０】
Ｎ−（２−（２−メトキシフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２）
【００９１】
【化１３】
2015187110.tif 000014
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.89 (s, 3H), 3.92 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.91-7.02 (m, 4H), 7.63 (brs, 1H), 9.02 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.14 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 56.1, 68.8, 112.2, 115.8, 121.0, 121.5, 122.9, 127.3, 137.8, 147.5, 148.6, 149.8, 162.6。
【００９２】
Ｎ−（２−（３−メトキシフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（３）
【００９３】
【化１４】
2015187110.tif 000015
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.74 (s, 3H), 3.85 ( dd, J= 5.6 Hz, 4.8 Hz, 2H), 4.21 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 6.50 (m, 3H), 7.14 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 8.75 (brs, 1H), 9.04 (s, 1H), 9.08 (s, 2H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 40.1, 54.8, 66.1, 100.9, 106.5, 106.8, 120.9, 127.5, 130.0, 137.9, 148.8, 160.2, 161.2, 163.0。
【００９４】
Ｎ−（２−（４−メトキシフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（４）
【００９５】
【化１５】
2015187110.tif 000016
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72 (s, 3H), 3.91 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.12 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.74-6.80 (m, 4H), 7.21 (brs, 1H), 8.95 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.07 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 55.6, 66.8, 114.7, 115.4, 121.0, 127.2, 137.6, 148.5, 152.2, 154.3, 163.1；LC-MS (ESI, m/z)：361 [M+H]+。
【００９６】
Ｎ−（２−（２−クロロフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（５）
【００９７】
【化１６】
2015187110.tif 000017
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.93-6.95 (m, 2H), 7.19-7.24 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.12 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 34.9, 63.0, 109.7, 116.2, 117.7, 118.2, 122.3, 123.1, 125.5, 132.6, 143.7, 148.7, 157.9。
【００９８】
Ｎ−（２−（３−クロロフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（６）
【００９９】
【化１７】
2015187110.tif 000018
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (dd, J = 5.6, 10.8 Hz, 2H), 4.19 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.80-6.98 (m, 4H), 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.17 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 66.4, 110.7, 115.0, 121.2, 121.7, 127.2, 130.4, 135.1, 137.6, 148.7, 158.8, 163.0。
【０１００】
Ｎ−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（７）
【０１０１】
【化１８】
2015187110.tif 000019
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (dd, J = 5.6, 10.4 Hz, 2H), 4.17 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.78 (brs, 1H), 6.86 (dd, J = 2.4, 6.8 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 8.96 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 9.17 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 66.5, 115.7, 121.2, 126.5, 127.2, 129.6, 137.6, 148.9, 156.8, 163.0。
【０１０２】
Ｎ−（２−（２−フルオロフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（８）
【０１０３】
【化１９】
2015187110.tif 000020
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.91-7.06 (m, 4H), 7.39 (brs, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.15 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 68.3, 115.7, 116.3 (d, J = 20 Hz, due to F), 121.1, 122.3 (d, J = 7 Hz, due to F), 124.6 (d, J = 5 Hz, due to F), 127.3, 137.6, 146.2, 148.6, 152.8 (d, J = 250 Hz, due to F), 163.1；LC-MS (ESI, m/z)：350 [M+H]+。
【０１０４】
Ｎ−（２−（４−フルオロフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（９）
【０１０５】
【化２０】
2015187110.tif 000021
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.88 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.95-7.07 (m, 4H), 8.79 (brs, 1H), 9.07 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 9.11 (d, J = 2.0 Hz, 2H)。
【０１０６】
Ｎ−（２−（４−ヒドロキシフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１０）
【０１０７】
【化２１】
2015187110.tif 000022
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.66 (dd, J = 5.6, 11.2 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.65-6.68 (m, 2H), 6.76-6.80 (m, 2H), 8.91 (brs, 1H), 8.98 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 9.42 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz DMSO-d6) δ 40.1, 66.9, 116.2, 116.4, 121.5, 128.2, 137.4, 148.8, 151.8, 152.0, 163.1。
【０１０８】
Ｎ−（２−（３−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１１）
【０１０９】
【化２２】
2015187110.tif 000023
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.89 (dd, J = 5.6, 11.2 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.79 (brs, 1H), 9.05 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 1.2 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 39.9, 66.7, 107.8, 113.1, 113.6, 120.9, 127.6, 130.9, 137.8, 148.9, 150.1, 160.2, 163.0。
【０１１０】
Ｎ−（２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１２）
【０１１１】
【化２３】
2015187110.tif 000024
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.88 (dd, J = 10.8 Hz, 5.2 Hz, 2H), 4.27 ( t, J = 5.6 Hz, 2H), 7.03 (dd, J = 7.2, 2.0 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.78 (brs, 1H), 9.04 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.0 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 40.0, 66.8, 115.7, 120.9, 122.7, 127.6, 137.8, 142.7, 142.8, 148.9, 157.9, 163.1。
【０１１２】
４−（２−（３，５−ジニトロベンズアミド）エトキシ）安息香酸メチル（１３）
【０１１３】
【化２４】
2015187110.tif 000025
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.81 (s, 3H), 3.91 (t, J =5.6 Hz, 2H), 4.33 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 7.00 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.03 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.90 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.92 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 8.78 (brs, 1H), 9.03 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 9.07 (d, J = 2.4 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 39.9, 51.3, 66.5, 114.4, 120.9, 123.0, 127.6, 131.5, 137.8, 148.9, 162.8, 163.0, 166.1。
【０１１４】
Ｎ−（２−（４−アミノフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミドヒドロクロリド（１４）
【０１１５】
【化２５】
2015187110.tif 000026
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.67 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.52 (brs, 1H), 10.28 (brs, 3H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ40.1, 66.1, 115.4, 120.8, 124.3, 124.5, 127.5, 136.7, 148.1, 157.8, 162.4。
【０１１６】
Ｎ−（２−（４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１５）
【０１１７】
【化２６】
2015187110.tif 000027
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 1.44 (s, 9H), 3.83 (m, 2H), 4.18 (m, 2H), 6.84 (dd, J = 3.2, 9.2 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.15 (brs, 1H), 8.73 (brs, 1H), 9.03 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.0 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 27.8, 40.1, 66.4, 78.9, 114.8, 119.9, 120.9, 127.6, 133.3, 137.9, 148.8, 153.2, 154.4, 163.0；LC-MS (ESI, m/z)：469 [M+Na]+。
【０１１８】
Ｎ−（２−（４−メトキシフェノキシ）エチル）−３−ニトロベンズアミド（１６）
【０１１９】
【化２７】
2015187110.tif 000028
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.69 (s, 3H), 3.81 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.73-6.78 (m, 4H), 7.48 (brs, 1H), 7.53 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 8.56 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.8, 55.4, 66.7, 114.4, 115.2, 121.9, 125.8, 129.5, 133.1, 135.7, 147.8, 152.3, 153.9, 165.2。
【０１２０】
Ｎ−（２−（２−フルオロフェノキシ）エチル）−３−ニトロベンズアミド（１７）
【０１２１】
【化２８】
2015187110.tif 000029
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (dd, J = 5.6, 10.8 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.90-7.09 (m, 4H and brs, 1H), 7.62 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.63 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.8, 68.3, 115.6, 116.6 (d, J = 18.6 Hz, due to F), 122.3 (d, J = 5.3 Hz, due to F), 124.7 (d, J = 4.5 Hz, due to F), 126.0, 129.7, 133.0, 135.8, 146.3 (d, J = 10.4 Hz, due to F), 148.1, 152.6 (d, J = 245 Hz, due to F), 165.2。
【０１２２】
Ｎ−（２−（４−メトキシフェノキシ）エチル）ベンズアミド（１８）
【０１２３】
【化２９】
2015187110.tif 000030
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72 (s, 3H), 3.80 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.78-6.83 (m, 4H), 7.03 (brs, 1H), 7.35-7.45 (m, 4H), 7.74 (d, J = 11.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.4, 55.4, 67.1, 114.5, 115.2, 126.8, 128.3, 131.3, 134.1, 152.4, 153.9, 167.6。
【０１２４】
Ｎ−（２−（４−メトキシフェノキシ）エチル）−Ｎ−メチル−３，５−ジニトロベンズアミド（１９）
【０１２５】
【化３０】
2015187110.tif 000031
（２つの回転異性体、１：１）1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.18 (brs, 3H), 3.65 (brs, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.94 (brs, 1H), 4.03 (brs, 1H),4.27 (brs, 1H), 6.79-6.84 (brd, 4H), 8.55 (brs, 1H), 8.72 (brs, 1H), 9.04 (br s, 1H)。
【０１２６】
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−（４−メトキシフェノキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２０）
【０１２７】
【化３１】
2015187110.tif 000032
（２つの回転異性体、１：１）1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.22-1.30 (m, 3H), 3.42 (brs, 1H), 3.63 (brs, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.89 (brs, 1H), 4.01 (brs, 1H), 4.26 (brs, 1H), 6.80 (br, 4H), 8.53 (brs, 1H), 8.72 (brs, 1H), 9.04 (brs, 1H)。
【０１２８】
Ｎ−（３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２１）
【０１２９】
【化３２】
2015187110.tif 000033
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.04-2.20 (m, 2H), 3.76 (t, J = 6.0 Hz, 2H ), 3.77 (s, 3H), 4.17 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.85-6.91 (m, 4H), 7.24 (brs, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H)。
【０１３０】
４−（３−（３，５−ジニトロベンズアミド）プロポキシ）安息香酸メチル（２２）
【０１３１】
【化３３】
2015187110.tif 000034
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.21-2.24 (m, 2H), 3.77 (dd, J = 6.0, 12.0 Hz, 2H ), 3.89 (s, 3H), 4.24 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.04 (brs, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 28.4, 39.3, 52.0, 67.2, 113.9, 121.1, 123.3, 127.0, 131.8, 137.8, 148.6, 161.9, 162.5, 166.6。
【０１３２】
Ｎ−（３−（２−フルオロフェノキシ）プロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２３）
【０１３３】
【化３４】
2015187110.tif 000035
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.19-2.25 (m, 2H), 3.83 (dd, J = 5.2, 11.2 Hz, 2H ), 4.27 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.90-7.11 (m, 4H), 7.50 (brs, 1H), 8.99 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 28.2, 40.0, 69.5, 114.0, 116.3 (d, J = 18 Hz, due to F), 120.9, 121.8 (d, J = 7.4 Hz, due to F), 124.7 (d, J = 3.7 Hz, due to F), 127.2, 127.3, 138.1, 147.3 (d, J = 245 Hz, due to F), 153.5, 162.7。
【０１３４】
【化３５】
2015187110.tif 000036
【０１３５】
Ｎ−（２−（ベンジルオキシ）エチル）−ジニトロベンズアミド（Ｂ２）の合成に関する一般手順
ジメチルホルムアミド（１０mL）中の２−（２−ヒドロキシエチル）イソインドリン−１，３−ジオン（１．１７mmol）の溶液に、水素化ナトリウム（２．３４mmol）及び臭化ベンジル（１．４０mmol）を０℃で加え、得られた混合物を室温で撹拌した。一晩撹拌した後、蒸留水（５０mL）を加え、得られた沈殿物を濾過により回収して、Ｂ１を得た。
【０１３６】
メタノール（１０mL）中のＢ１（０．８５mmol）の溶液に、ヒドラジン一水和物（０．８５mmol）を加え、得られた混合物を窒素雰囲気下で還流した。３時間後、反応混合物を室温に放冷し、真空下で濃縮した。残留物を、塩化メチレン（１０mL）で沈殿させた。得られた沈殿物をセライトを通して濾別し、濾液を真空下で濃縮して、アミンを得た。
【０１３７】
塩化メチレン（１０mL）中のアミンの溶液に、トリエチルアミン（１１３μl、０．８１mmol）及び塩化ベンゾイル（０．８１mmol）を０℃で加え、得られた混合物を室温で撹拌した。３時間後、反応混合物を塩化メチレン（３０mL）で希釈し、１M ＨＣｌ水溶液（５０mL）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（５０mL）及びブライン（５０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（３：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製し、ヘキサン類と酢酸エチルの混合物から再結晶化して、Ｂ２を得た。
【０１３８】
Ｎ−（２−（ベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２４）
【０１３９】
【化３６】
2015187110.tif 000037
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.72 (m, 4H), 4.55 (s, 2H), 6.75 (brs, 1H), 7.24-7.33 (m, 5H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.1, 73.4, 121.0, 127.2, 128.0, 128.2, 128.7, 137.5, 138.0, 148.6, 162.7；LC-MS (ESI, m/z)：346 [M+H]+。
【０１４０】
Ｎ−（２−（３−メトキシベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２５）
【０１４１】
【化３７】
2015187110.tif 000038
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.71-3.74 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 4.52 (s, 2H), 6.77-6.90 (m, 3H), 6.97 (brs, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.12 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.5, 55.2, 68.2, 73.1, 113.1, 113.6, 120.0, 120.9, 127.2, 129.6, 137.8, 139.1, 148.5, 159.7, 162.8。
【０１４２】
Ｎ−（２−（４−メトキシベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２６）
【０１４３】
【化３８】
2015187110.tif 000039
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.65-3.71 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 4.47 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 6.84 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.87 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.5, 55.3, 67.8, 73.1, 114.0, 121.0, 127.1, 129.6, 130.0, 137.9, 148.6, 159.5, 162.7。
【０１４４】
Ｎ−（２−（４−クロロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２７）
【０１４５】
【化３９】
2015187110.tif 000040
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.76 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 6.77 (brs, 1H), 7.25-7.32 (m, 4H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.15 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.3, 72.6, 121.1, 127.2, 128.8, 129.2, 134.0, 136.0, 137.8, 148.6, 162.7。
【０１４６】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２８）
【０１４７】
【化４０】
2015187110.tif 000041
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.76 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 6.79 (brs, 1H), 7.17-7.29 (m, 4H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.4, 72.5, 121.1, 125.8, 127.2, 127.8, 128.1, 129,2, 134.5, 137.8, 139.6, 148.6, 162.8。
【０１４８】
Ｎ−（２−（４−フルオロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２９）
【０１４９】
【化４１】
2015187110.tif 000042
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.76 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 6.74 (brs, 1H),7.02-7.06 (m, 2H), 7.30-7.33 (m, 2H), 8.92 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.1, 72.6, 115.5 (d, J = 22 Hz, due to F), 121.1, 127.1, 130.0 (d, J = 8.2 Hz, due to F), 133.5 (d, J = 3.0 Hz, due to F), 137.8, 148.6, 162.5 (d, J = 245 Hz, due to F), 162.7。
【０１５０】
Ｎ−（２−（２−フルオロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（３０）
【０１５１】
【化４２】
2015187110.tif 000043
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.75 (s, 4H), 4.64 (s, 2H), 7.07-7.17 (m, 3H), 7.29-7.39 (m, 1H and brs. 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.17 (t, J = 2.0 Hz, 1H)。
【０１５２】
３，５−ジニトロ−Ｎ−（２−（４−（トリフルオロメトキシ）ベンジルオキシ）エチル）ベンズアミド（３１）
【０１５３】
【化４３】
2015187110.tif 000044
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72-3.76 (m, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.31-7.35 (m, 2H and brs, 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.08 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.4, 72.2, 120.9, 121.0, 127.2, 129.1, 136.3, 137.7, 148.4, 148.7, 148.9, 162.9。
【０１５４】
３，５−ジニトロ−Ｎ−（２−（３−（トリフルオロメチル）ベンジルオキシ）エチル）ベンズアミド（３２）
【０１５５】
【化４４】
2015187110.tif 000045
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72-3.79 (m, 4H), 4.61 (s, 2H), 7.06 (brs, 1H), 7.45-7.55 (m, 4H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.10 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.7, 72.4, 121.0, 124.1, 124.6, 124.7, 127.2, 129.0, 130.6 (q, J = 32 Hz, due to F), 130.8, 137.7, 138.6, 148.6, 162.9。
【０１５６】
４−（（２−（３，５−ジニトロベンズアミド）エトキシ）メチル）安息香酸メチル（３３）
【０１５７】
【化４５】
2015187110.tif 000046
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.71-3.74 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 4.55 (s, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 2H and brs, 1H), 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.90 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.01 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.6, 52.2, 68.8, 72.6, 120.9, 127.3, 129.5, 129.7, 137.8, 142.9, 148.5, 163.0, 166.8。
【０１５８】
４−（（２−（３，５−ジニトロベンズアミド）エトキシ）メチル）安息香酸（３４）
【０１５９】
【化４６】
2015187110.tif 000047
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.74 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.72 (s, 2H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2H) 7.72 (brs, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H)。
【０１６０】
Ｎ−（２−（ベンジルオキシ）エチル）ベンズアミド（３５）
【０１６１】
【化４７】
2015187110.tif 000048
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62-3.68 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.24-7.49 (m, 8H), 7.73-7.76 (m, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.7, 68.8, 73.1, 126.9, 127.8, 128.4, 131.3, 134.5, 137.8, 167.5。
【０１６２】
Ｎ−（２−（３−（トリフルオロメチル）ベンジルオキシ）エチル）ベンズアミド（３６）
【０１６３】
【化４８】
2015187110.tif 000049
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63-3.70 (m, 4H), 4.56 (s, 2H), 6.72 (brs, 1H), 7.37-7.53 (m, 6H), 7.58 (s, 1H), 7.74-7.76 (m, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.7, 69.3, 72.3, 124.2, 124.3, 124.6, 126.9, 128.5, 128.9, 130.8, 131.5, 134.4, 139.0, 148.6, 167.6。
【０１６４】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）ベンズアミド（３７）
【０１６５】
【化４９】
2015187110.tif 000050
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62-3.69 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.17-7.50 (m, 7H), 7.75-7.77 (m, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.7, 69.0, 72.2, 125.6, 126.8, 127.6, 127.8, 128.4, 129,7, 131.3, 134.3, 139.9, 167.4。
【０１６６】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジフルオロベンズアミド（３８）
【０１６７】
【化５０】
2015187110.tif 000051
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64-3.69 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 6.54 (brs, 1H), 6.95 (tt, J = 2.4, 11.2 Hz, 1H), 7.19-7.33 (m, 6H)。
【０１６８】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ジクロロベンズアミド（３９）
【０１６９】
【化５１】
2015187110.tif 000052
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.13 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.55 (s, 2H), 7.27 - 7.29 (m, 3H), 7.42 (s, 1H), 7.46, (s, 1H), 7.81 (s, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.6, 67.2, 73.2, 127.0, 128.7, 128.8, 128.9, 130.7, 131.0, 135.4, 135.5, 141.4, 142.7, 171.5。
【０１７０】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンズアミド（４０）
【０１７１】
【化５２】
2015187110.tif 000053
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 - 3.68 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.89 (brs, 1H), 7.15 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.21 - 7.24 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.18 (s, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.3, 68.37, 72.5, 121.6, 125.0, 125.1, 125.7, 127.8, 128.1, 129.9, 132.0, 134.5, 136.6, 139.8, 164.8。
【０１７２】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−メトキシベンズアミド（４１）
【０１７３】
【化５３】
2015187110.tif 000054
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.65 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 4.49 (s, 2H), 6.51 (brs, 1H), 7.01 (dd , J = 8.0 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.28 (m, 3H), 7.25 - 7.34 (m, 3H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.9, 55.5, 69.2, 72.5, 112.4, 117.8, 118.7, 125.8, 127.8, 128.0, 129.6, 129.9, 134.5, 136.0, 140.0, 159.9, 167.5。
【０１７４】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−４−メトキシベンズアミド（４２）
【０１７５】
【化５４】
2015187110.tif 000055
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.66 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 4.49 (S, 2H), 6.48 (brs, 1H), 6.89 (d, J= 8.8 hz, 2H), 7.17 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 7.24 (m, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H) 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.8, 55.5, 69.4, 72.4, 113.8, 125.7, 126.8, 127.8, 128.0, 128.8, 129.8, 134.5, 140.1, 162.2, 167.1。
【０１７６】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンズアミド（４３）
【０１７７】
【化５５】
2015187110.tif 000056
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.68 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.62 (brs, 1H), 7.15 (dd, J = 1.2, 8.8 Hz, 1H), 7.22 - 7.23 (m, 2H), 7.36 (t, J =1.2 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 1.2, 4.4 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.0, 72.4, 119.3, 120.1, 123.8, 125.1, 125.7, 127.8, 128.0, 129.9, 130.1, 134.5, 136.6, 140.0, 149.4, 166.1。
【０１７８】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（４４）
【０１７９】
【化５６】
2015187110.tif 000057
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.68 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.14 - 7.17 (m, 1H), 7.23 - 7.24 (m, 2H), 7.3 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 68.9, 72.4, 125.6 (q, J = 3.7 Hz), 125.8, 127.5, 127.8, 128.1, 129.9, 138.1, 133.4, 134.5, 137.7, 140.0, 166.4。
【０１８０】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（４５）
【０１８１】
【化５７】
2015187110.tif 000058
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 (m, 4H), 4.46 (s, 2H), 6.96 (brs, 1H), 7.14 - 7.27 (m, 4H), 7.47 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 68.9, 72.3, 122.4, 124.1, 125.7, 127.7, 127.9, 128.0, 129.1, 129.8, 130.3, 130.8, 134.4, 135.2, 140.0, 166.3。
【０１８２】
３−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチルカルバモイル）安息香酸メチル（４６）
【０１８３】
【化５８】
2015187110.tif 000059
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.69 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 4.48 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.15 - 7.16 (m, 1H), 7.21 - 7.24 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.47 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.35 (t, J = 1.6 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 52.4, 69.0, 72.4, 125.7, 127.7, 127.8, 128.0, 128.9, 129.8, 130.5, 131.8, 132.4, 134.4, 134.8, 140.0, 166.3, 166.6。
【０１８４】
４−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチルカルバモイル）安息香酸メチル（４７）
【０１８５】
【化５９】
2015187110.tif 000060
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.66 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 4.48 (s, 2H), 6.65 (brs, 1H), 7.14 - 7.17 (m, 1H), 7.22 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.04 (d, J= 8.0 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 52.4, 69.0, 72.4, 125.7, 127.1, 127.8, 128.1, 129.9, 132.7, 134.5, 138.4, 140.0, 160.3, 166.7。
【０１８６】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−ニトロベンズアミド（４８）
【０１８７】
【化６０】
2015187110.tif 000061
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 (m, 4H), 4.45 (s, 2H), 7.13 - 7.23 (m, 5H), 7.53 (m, 1H), 8.08 (d, J =6.8 Hz, 1H) 8.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 68.7, 72.2, 122.0, 125.6, 125.9, 127.5, 127.8, 129.7, 129.8, 133.1, 134.2, 136.0, 139.9, 148.0, 165.3。
【０１８８】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−４−ニトロベンズアミド（４９）
【０１８９】
【化６１】
2015187110.tif 000062
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63 (m, 4H), 4.45 (s, 2H), 6.97 (brs, 1H), 7.12 - 7.25 (m, 4H), 7.87 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 8.15 (d, J = 6.4 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 68.7, 72.2, 123.6, 125.6, 127.5, 127.9, 128.2, 129.7, 134.3, 139.9, 140.0, 149.4, 165.6。
【０１９０】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−フルオロベンズアミド（５０）
【０１９１】
【化６２】
2015187110.tif 000063
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.56 - 3.61 (m, 4H), 4.43 (s, 2H), 6.66 (brs, 1H), 7.10 - 7.12 (m, 2H), 7.18 - 7.19 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.30 - 7.31 (m, 1H), 7.41 - 7.45 (m, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.9, 69.0, 72.4, 114.3 (d, J = 23.0 Hz, due to F), 118.4 (d, J = 20.8 Hz, due to F), 122.4 (d, J = 3.0 Hz, due to F), 125.7, 127.7, 128.0, 129.8, 130.2 (d, J = 8.2 Hz, due to F), 134.5, 136.7 (d, J= 6.7 Hz, due to F), 140.0, 163.0 (d, J= 245 Hz, due to F), 166.3 (d, J= 3.0 Hz, due to F)。
【０１９２】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−クロロベンズアミド（５１）
【０１９３】
【化６３】
2015187110.tif 000064
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.52 (brs, 1H), 7.17 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.24 (s, 2H), 7.31 - 7.36 (m, 2H), 7.44 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.1, 72.5, 125.1, 125.8, 127.5, 127.8, 128.1, 129.9, 130.0, 131.6, 134.6, 134.9, 136.3, 140.0, 166.3。
【０１９４】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−４−ヒドロキシベンズアミド（５２）
【０１９５】
【化６４】
2015187110.tif 000065
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 (s, 4H), 4.48 (s, 2H), 6.57 (brs, 1H), 6.84 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 7.31 (s,1H), 7.60 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 2H), 8.22 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.1, 72.5, 115.7, 125.4, 125.8, 127.8, 128.1, 129.0, 129.9, 134.5, 140.0, 160.2, 168.2。
【０１９６】
Ｎ−（２−（３−クロロベンジルオキシ）エチル）−３−ヒドロキシベンズアミド（５３）
【０１９７】
【化６５】
2015187110.tif 000066
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.65 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.64 (brs, 1H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 - 7.26 (m, 5H), 7.30 (s, 1H), 7.50 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.1, 72.5, 115.1, 117.8, 119.3, 125.9, 127.3, 128.1, 129.9, 130.0, 134.6, 135.4, 139.9, 157.2, 168.0。
【０１９８】
【化６６】
2015187110.tif 000067
【０１９９】
フェノキシ−ピロリジン−１−イル−メタノン（Ｃ２）の合成に関する一般手順
塩化メチレン（５０mL）中の（Ｓ）−３−ピロリジノール（１０mmol）及びトリエチルアミン（１１mmol）の溶液に、塩化ベンゾイル（８．６７mmol）を０℃で加えた。反応温度を室温に上げた。２時間後、反応混合物を塩化メチレン（５０mL）で希釈し、次に、０．５M ＨＣｌ水溶液（１００mL）及びブライン（１００mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（２：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｃ１を得た。
【０２００】
塩化メチレン（１０mL）中のＣ１（１．０７mmol）の溶液に、ＡＤＤＰ（１．２８mmol）、トリフェニルホスフィン（１．２８mmol）及びフェノール（１．２８mmol）を室温で加えた。一晩撹拌した後、反応混合物を塩化メチレン（３０mL）で希釈し、１M ＨＣｌ水溶液（５０mL）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（５０mL）及びブライン（５０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（２：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製し、ヘキサン類と酢酸エチルの混合物から再結晶化して、Ｃ２を得た。
【０２０１】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（５４）
【０２０２】
【化６７】
2015187110.tif 000068
（２つの回転異性体、１：１比）、融点１２４〜１２５℃；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.11-2.19 (m, 1H), 2.30-2.34 (m, 1H), 3.54-3.64 (m, 1H), 3.72 & 3.76 (s, 3H), 3.81-3.99 (m, 3H), 4.86-4.94 (m, 1H), 6.74-6.84 (m, 4H), 8.68 & 8.75 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.05 & 9.08 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.6, 32.4, 45.2, 47.7, 52.8, 54.8, 55.8, 55.9, 75.7, 115.0, 117.1, 117.3, 120.1, 120.2, 127.7, 127.9, 139.9, 140.0, 148.6, 150.4, 150.8, 154.8, 154.8, 164.7, 165.1；LC-MS (ESI, m/z)：388 [M+H]+。
【０２０３】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−フルオロフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（５５）
【０２０４】
【化６８】
2015187110.tif 000069
（２つの回転異性体、１：１比、７５％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.15-2.37 (m, 2H), 3.56-3.63 (m, 1H), 3.79-3.97 (m, 3H), 4.91-4.99 (m, 1H), 6.76-7.03 (m, 4H), 8.71 & 8.76 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.08 & 9.10 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.3, 45.1, 47.7, 52.7, 54.8, 75.5, 77.0, 116.2, 116.5, 116.9, 117.0, 117.1, 120.1, 120.2, 127.7, 127.8, 139.8, 139.9, 148.6, 152.6, 152.9, 157.9 (d, J = 245 Hz, due to F), 164.7, 165.0。
【０２０５】
（Ｒ）−Ｎ−（４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルオキシ）フェニル）アセトアミド（５６）
【０２０６】
【化６９】
2015187110.tif 000070
（２つの回転異性体、１：１比、６３％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.96 & 1.99 (s, 3H), 2.03-2.27 (m, 2H), 3.45-3.50 (m, 1H), 3.69-3.83 (m, 3H), 4.83-4.91 (m, 1H), 6.64 & 6.74 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.26 & 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.58 & 8.65 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.95-8.99 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3+ CD3OD) δ 23.3, 23.4, 29.7, 32.0, 45.0, 47.6, 52.6, 54.6, 75.0, 76.4, 115.8, 115.9, 120.0, 121.9, 127.4, 127.5, 127.6, 127.7, 132.4, 132.5, 139.4, 148.4, 152.8, 153.1, 165.0, 165.3, 169.7。
【０２０７】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（５７）
【０２０８】
【化７０】
2015187110.tif 000071
（２つの回転異性体、６：４比、６７％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.20-2.40 (m, 2H), 3.59-3.66 (m, 1H), 3.84-4.00 (m, 3H), 4.97-5.05 (m, 1H), 6.83 & 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.12 & 7.18 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.73 & 8.77 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.09 & 9.11 (d, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.2, 45.1, 47.6, 52.6, 54.7, 75.2, 76.7, 116.4, 120.1, 122.8, 127.7, 127.8, 139.6, 139.7, 143.4, 148.5, 155.0, 155.2, 164.7, 164.9。
【０２０９】
（Ｒ）−メチル ４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルオキシ）ベンゾアート（５８）
【０２１０】
【化７１】
2015187110.tif 000072
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.21 -2.37 (m, 2H), 3.57-3.65 (m, 1H), 3.85 & 3.87 (s, 3H), 3.89-3.99 (m, 3H), 5.03-5.11 (m, 1H), 6.82 & 6.91 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.93 & 7.99 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 8.70 & 8.75 (s, 2H), 9.07 & 9.09 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 22.1, 30.0, 32.4, 45.2, 47.7, 52.2, 52.8, 54.8, 74.9, 76.3, 115.0, 120.36, 123.7, 123.8, 127.8, 127.9, 132.0, 139.7, 148.6, 160.2, 160.5, 164.7, 166.7。
【０２１１】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（２−フルオロフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（５９）
【０２１２】
【化７２】
2015187110.tif 000073
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.26-2.33 (m, 2H), 3.62-3.97 (m, 3H), 4.00 & 4.36 (s, 1H), 5.06 & 5.21 (s, 1H), 7.11 & 7.27 (m, 4H), 8.78 & 8.83 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.01 & 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 29.9, 31.9, 44.9, 52.3, 54.4, 77.2, 78.7, 116.62, 116.67, 116.80, 116.85, 117.8 (d, J = 20 Hz, due to F), 120.04 (d, J = 3.7 Hz, due to F), 122.5, 122.6, 122.70, 122.77, 125.1, 125.15 (d, J= 3.7 Hz, due to F), 127.80 (d, J = 7.4 Hz due to F), 127.9, 139.8, 153.6 (d, J = 244 Hz, due to F), 165.4, 165.5.
【０２１３】
（Ｓ）−メチル−４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルオキシ）ベンゾアート（６０）
【０２１４】
【化７３】
2015187110.tif 000074
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 2.21-2.29 (m, 2H), 3.58 & 3.61 (s, 1H), 3.69 & 3.71 (s, 3H), 3.73-4.02 (m, 3H), 4.99 & 5.06 (s, 1H), 6.77-6.94 (m, 4H), 8.73 & 8.77 (s, 2H), 8.96 & 8.99 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 31.9, 44.1, 44.7, 52.2, 54.2, 55.1, 55.2, 76.0, 77.5, 114.82, 114.88, 117.2, 119.6, 127.7, 127.8, 140.5, 148.7, 151.1, 151.3, 154.7, 164.6, 164.7。
【０２１５】
（Ｓ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（６１）
【０２１６】
【化７４】
2015187110.tif 000075
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 2.19-2.28 (m, 2H) 3.60-4.01 (m, 4H), 4.98 & 5.06 (s, 1H), 6.76-6.94 (m, 4H), 8.73 & 8.76 (s, 2H), 8.95 & 8.99 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 31.9, 44.7, 52.2, 54.2, 55.0, 55.1, 65.8, 75.9, 77.5, 114.81, 114.87, 117.2, 119.6, 127.7, 127.8, 128.6, 129.8, 140.4, 148.7, 151.3, 154.7, 164.6, 164.7。
【０２１７】
（Ｓ）−Ｎ−（４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルオキシ）フェニル）アセトアミド（６２）
【０２１８】
【化７５】
2015187110.tif 000076
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 1.99 (s, 3H), 2.22-2.28 (m, 2H), 3.54-4.06 (m, 3H), 5.04 & 5.11 (s, 1H), 6.80 & 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46-7.70 (m, 4H, brs, 1H), 8.73 & 8.76 (s, 2H), 8.95 & 8.99 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 24.1, 24.2, 30.0, 32.2, 45.2, 47.7, 52.7, 54.7, 75.1, 76.6, 115.9, 120.0, 120.1, 127.7, 127.8, 128.7, 128.8, 131.6, 132.0, 132.4, 132.6, 132.7, 132.8, 139.7, 148.4, 153.1, 165.0, 169.1。
【０２１９】
（Ｓ）−４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルオキシ）安息香酸（６３）
【０２２０】
【化７６】
2015187110.tif 000077
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 2.31-2.42 (m, 2H), 3.61-3.65 (m, 1H), 3.75-4.06 (m, 3H), 5.19 & 5.28 (s, 1H), 7.02 & 7.13 (d, J =8.8 Hz, 2H), 7.98 & 8.06 (d, J =8.8 Hz, 2H), 8.72 & 8.78 (d, J =2.0 Hz, 2H), 9.02 & 9.05 (s, 1H)。
【０２２１】
（Ｓ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（２−フルオロフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（６４）
【０２２２】
【化７７】
2015187110.tif 000078
（２つの回転異性体、１：１比）、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.14-2.24 (m, 2H), 3.50-3.88 (m, 4H), 4.98 & 5.08 (s, 1H), 6.86-7.15 (m, 4H), 8.65 & 8.69 (s, 2H), 8.88 & 8.92 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) 29.1, 31.1, 44.1, 51.5, 53.6, 76.4, 77.9, 115.7, 115.8, 115.9, 116.0, 117.1 (d, J = 22.3 Hz, due to F), 119.2 (d, J = 3.7 Hz, due to F), 121.7, 121.83, 121.88, 121.9, 124.2 (d, J = 3.7 Hz, due to F), 127.0, 139.0, 144.1, 144.4, 148.0, 152.8 (d, J = 242.6 Hz, due to F), 164.6, 164.7.
【０２２３】
（Ｒ）−（３−（２−フルオロフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（フェニル）メタノン（６５）
【０２２４】
【化７８】
2015187110.tif 000079
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.02-2.24 (m, 2H), 3.51-3.91 (m, 4H), 4.85 & 4.98 (s, 1H), 6.86-7.09 (m, 4H), 7.36-7.48 (m, 3H), 7.52 (d, J = 5.2, 1H), 7.53 (d, J =5.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.3, 32.4, 44.3, 47.5, 52.1, 54.8, 78.0, 79.0, 116.8, 117.0, 117.9, 118.6, 122.6, 122.7, 122.9, 123.0, 124.6 (d, J = 3.7 Hz due to F), 127.2, 127.4, 128.5, (d, J= 3.7 Hz, due to F), 130.1, 130.3, 136.7, 136.9, 144.7 (d, J = 20.1 Hz due to F), 153.8 (d, J = 245.6 Hz, due to F), 155.2, 170.0, 170.2。
【０２２５】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（フェニル）メタノン（６６）
【０２２６】
【化７９】
2015187110.tif 000080
（２つの回転異性体、１：１比）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.99-2.21 (m, 2H), 3.48-3.66 (m, 2H), 3.68 & 3.73 (s, 3H), 3.79-3.89 (m, 2H), 4.74 & 4.96 (s, 1H), 6.71 (s, 2H), 6.76 (s, 2H), 7.34 & 7.36 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 7.46 & 7.52 (d, J = 5.2 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 32.3, 44.4, 47.6, 52.1, 54.8, 55.8, 55.9, 76.0, 114.9, 115.0, 117.1, 117.3, 127.3, 127.4, 128.50, 128.54, 130.1, 130.2, 136.8, 137.0, 150.9, 151.1, 154.5, 154.6, 169.9, 170.2；LC-MS (ESI, m/z)：298.1 [M+H]+。
【０２２７】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−ヒドロキシピロリジン−１−イル）メタノン（６７）
【０２２８】
【化８０】
2015187110.tif 000081
（２つの回転異性体、１：１比）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.98-2.11 (m, 2H), 3.23 (brs, 1H), 3.37-3.48 (m, 1H), 3.61-3.79 (m, 3H), 4.47 & 4.56 (s, 1H), 8.62 & 8.67 (s, 2H), 8.99 - 9.00 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 33.0, 34.9, 45.1, 47.6, 55.5, 57.5, 69.4, 70.9, 120.1, 120.2, 127.8, 139.8, 139.9, 148.5, 165.1, 165.3。
【０２２９】
（Ｒ）−（３−（３−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（３−メトキシフェニル）メタノン（６８）
【０２３０】
【化８１】
2015187110.tif 000082
（２つの回転異性体、１：１比、８５％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.97 - 2.22 (m, 2H), 3.48 - 3.65 (m, 2H), 3.68 & 3.71 (s, 3H), 3.73 & 3.76 (s, 3H), 3.79 - 3.89 (m, 2H), 4.74 - 4.84 (m, 1H), 6.70 - 6.80 (m, 4H), 6.86 - 6.92 (m, 1H), 6.99 & 7.01 (s, 1H), 7.04 & 7.08 (s, 1H), 7.21 - 7.28 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 32.3, 44.5, 47.7, 52.2, 54.8, 55.6, 55.8, 76.0, 112.6, 112.8, 114.9, 115.0, 116.1, 116.6, 117.1, 117.2, 119.4, 119.6, 129.27, 129.32, 138.1, 150.9, 151.1, 154.5, 159.7, 169.8。
【０２３１】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（３−メトキシフェニル）メタノン（６９）
【０２３２】
【化８２】
2015187110.tif 000083
（２つの回転異性体、１：１比、８３％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.97 - 2.22 (m, 2H), 3.48 - 3.65 (m, 2H), 3.68 & 3.71 (s, 3H), 3.73 & 3.76 (s, 3H), 3.79 - 3.89 (m, 2H), 4.72 - 4.84 (m, 1H), 6.70 - 6.80 (m, 4H), 6.86 - 6.92 (m, 1H), 6.99 - 7.08 (m, 2H), 7.21 - 7.28 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.2, 32.1, 44.4, 47.6, 52.1, 54.4, 55.33, 55.62, 75.8, 113.4, 114.7, 116.9, 128.63, 128.75, 129.16, 129.32, 131.9, 150.9, 154.3, 160.9, 169.48, 169.79。
【０２３３】
（Ｒ）−メチル ３−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−カルボニル）ベンゾアート（７０）
【０２３４】
【化８３】
2015187110.tif 000084
（２つの回転異性体、１：１比、８７％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.99 - 2.24 (m, 2H), 3.45 - 3.65 (m, 2H), 3.67 & 3.71 (s, 3H), 3.75 - 3.82 (m, 2H), 3.86 & 3.87 (s, 3H), 4.74 - 4.86 (m, 1H), 6.72 & 6.80 (m, 4H), 7.40 - 7.67 (m, 1H), 7.66 & 7.71 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.04 (t , J = 9.0 Hz, 1H), 8.13 & 8.19 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.3, 47.3, 52.2, 54.5, 55.5, 55.6, 75.7, 114.7, 114.8, 116.9, 117.0, 128.1, 128.2, 128.5, 128.6, 130.9, 134.0, 131.5, 131.6, 136.8, 136.9, 150.5, 150.7, 154.33, 154.38, 166.6, 168.6, 168.9。
【０２３５】
（Ｒ）−メチル ４−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−カルボニル）ベンゾアート（７１）
【０２３６】
【化８４】
2015187110.tif 000085
（２つの回転異性体、１：１比、８５％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.98 - 2.11 (m, 1H), 2.15 - 2.25 (m, 1H), 3.42 - 3.67 (m, 2H), 3.68 & 3.71 (s, 3H), 3.77 - 3.81 (m, 1H), 3.83 - 3.88 (m, 1H), 3.86 & 3.88 (s, 3H), 4.73 - 4.86 (m, 1H), 6.69 - 6.75 (m, 2H), 6.80 (s, 2H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.2, 47.2, 51.9, 52.2, 54.3, 55.5, 55.6, 75.6, 114.7, 114.8, 116.8, 117.0, 127.0, 127.1, 129.5, 129.6, 131.2, 131.3, 140.7, 140.8, 150.5, 150.7, 154.3, 154.4, 168.7, 168.9。
【０２３７】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（３−（トリフルオロメチル）フェニル）メタノン（７２）
【０２３８】
【化８５】
2015187110.tif 000086
（２つの回転異性体、１：１比、８２％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.04 - 2.15 (m, 1H), 2.21 - 2.30 (m, 1H), 3.48 - 3.67 (m, 2H), 3.72 & 3.75 (s, 3H), 3.78 - 3.90 (m, 2H), 4.79 - 4.90 (m, 1H), 6.74 - 6.83 (m, 4H), 7.48 - 7.55 (m, 1H), 7.64 - 7.82 (m, 3H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 32.1, 44.5, 47.5, 52.2, 54.6, 55.7, 55.8, 75.8, 114.8, 114.9, 117.0, 117.2, 124.2, 124.3, 129.0, 129.1, 130.4, 130.6, 137.3, 137.4. 150.6, 150.8, 154.5, 154.6, 168.3, 168.6。
【０２３９】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（４−（トリフルオロメチル）フェニル）メタノン（７３）
【０２４０】
【化８６】
2015187110.tif 000087
（２つの回転異性体、１：１比、５５％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.06 (m, 1H), 2.20-2.25 (m, 1H), 3.49-3.70 (m, 2H), 3.72 & 3.75 (s, 3H), 3.81-3.88 (m, 2H), 4.72 & 8.89 (m, 1H), 6.74-6.83 (m, 4H), 7.23-7.50 (m, 4H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 32.2, 44.5, 47.5, 52.2, 54.6, 55.7, 55.8, 75.8, 76.8, 114.9, 117.0, 117.2, 119.8, 120.1, 122.5, 122.6, 125.6, 125.8, 130.0, 130.1, 138.5, 149.1, 150.6, 150.9, 154.5, 168.2。
【０２４１】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタノン（７４）
【０２４２】
【化８７】
2015187110.tif 000088
（２つの回転異性体、１：１比、６７％）、黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.23 (m, 2H), 3.43 - 3.68 (m, 2H), 3.69 & 3.72 (s, 3H), 3.72 - 3.83 (m, 2H), 4.75 - 4.88 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 7.58 - 7.66 (m, 4H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.1, 30.1, 32.2, 38.9, 44.6, 47.6, 52.2, 54.7, 55.8, 75.9, 114.9, 115.0, 117.1, 117.3, 125.5, 125.6, 127.7, 128.8, 150.8, 151.0, 154.6, 154.7, 168.5, 168.6。
【０２４３】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（３−ニトロフェニル）メタノン（７５）
【０２４４】
【化８８】
2015187110.tif 000089
（２つの回転異性体、１：１比、８４％）、黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.00 - 2.24 (m, 2H), 3.48 - 3.56 (m, 1H), 3.68 & 3.72 (s, 3H), 3.73 - 3.88 (m, 3H), 4.79 - 4.89 (m, 1H), 6.71 - 6.83 (m, 4H), 7.52 - 7.59 (m, 1H), 7.81 & 7.87 (d, J = 7.6 H, 1H), 8.22 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 8.32 & 8.38 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.0, 44.5, 47.4, 52.2, 54.5, 55.5, 55.6, 75.6, 77.0, 114.7, 114.8, 116.9, 117.0, 122.2, 122.3, 124.6, 124.7, 129.6, 133.1, 133.2, 138.0, 138.1, 147.8, 150.4, 150.6, 154.3, 154.4, 166.9, 167.2。
【０２４５】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（４−ニトロフェニル）メタノン（７６）
【０２４６】
【化８９】
2015187110.tif 000090
（２つの回転異性体、１：１比、７３％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.31 (m, 2H), 3.44 - 3.69 (m, 2H), 3.72 & 3.75 (s, 3H), 3.80 - 3.90 (m, 2H), 4.79 - 4.90 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 7.63 & 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.22 & 8.24 (d, J = 8.2 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 31.9, 44.3, 47.2, 52.0, 55.5, 75.5, 76.7, 114.7, 114.8, 116.8, 116.9, 123.5, 128.0, 128.2, 128.6, 142.4, 142.5, 148.4, 150.3, 150.6, 154.3, 154.4, 167.3, 167.6。
【０２４７】
（Ｒ）−（３−フルオロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（７７）
【０２４８】
【化９０】
2015187110.tif 000091
（２つの回転異性体、１：１比、７８％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.11 (m, 1H), 2.12 - 2.42 (m, 1H), 3.48 - 3.69 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.78 - 3.87 (m, 2H), 4.76 - 4.88 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 7.05 - 7.36 (m, 4H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.3, 47.4, 52.0, 54.5, 55.6, 75.7, 114.4, 114.8, 116.9, 117.1, 122.8, 122.9, 130.1, 130.2, 138.6, 138.7, 150.6, 150.8, 154.4, 154.5, 162.4 (d, J = 245 Hz, due to F), 168.3, 168.5.
【０２４９】
（Ｒ）−（３−クロロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（７８）
【０２５０】
【化９１】
2015187110.tif 000092
（２つの回転異性体、１：１比、８７％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.24 (m , 2H), 3.47 - 3.69 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.78 - 3.86 (m, 2H), 4.75 - 4.88 (m, 1H), 6.73 - 6.82 (m, 4H), 7.26 - 7.42 (m, 3H), 7.46 & 7.52 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.3, 47.4, 52.0, 54.5, 55.6, 55.7, 75.7, 76.7, 114.7, 114.8, 116.6, 117.1, 125.1, 125.3, 127.3, 127.4, 129.7, 129.8, 130.0, 130.1, 134.3, 138.2, 138.3, 150.5, 150.7, 154.4, 168.1, 168.4
【０２５１】
（Ｒ）−（３−ヒドロキシフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（７９）
【０２５２】
【化９２】
2015187110.tif 000093
（２つの回転異性体、１：１比、５３％）、白色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.96 - 2.25 (m, 2H), 3.53 - 3.74 (m, 2H), 3.77 & 3.81 (s, 3H), 3.83 - 3.94 (m, 2H), 4.73 & 4.87 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 6.85 - 6.98 (m, 2H), 7.08 - 7.20 (m, 2H), 8.21 (brs, 1H)；
【０２５３】
（Ｒ）−（４−ヒドロキシフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（８０）
【０２５４】
【化９３】
2015187110.tif 000094
（２つの回転異性体、１：１比、３７％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.32 (m, 2H), 3.59 - 3.71 (m, 2H), 3.74 & 3.76 (s, 3H), 3.79 - 3.93 (m, 2H), 4.80 - 4.91 (m, 1H), 6.75 - 6.84 (m, 4H), 7.21 - 7.24 (m, 2H), 7.56 & 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.01 & 8.03 (brs, 1H)。
【０２５５】
（Ｒ）−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（８１）
【０２５６】
【化９４】
2015187110.tif 000095
（２つの回転異性体、１：１比、６３％）、黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.14 (m, 1H), 2.25 - 2.27 (m, 1H), 3.56 - 3.65 (m, 2H), 3.72 &3.74 (s, 3H), 3.81 - 3.91 (m, 2H), 4.81 - 4.89 (m, 1H), 6.76 (m, 4H), 7.16 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 7.78 & 7.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.29 & 8.37 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 31.8, 45.0, 47.6, 52.6, 54.9, 55.9, 115.1, 117.2, 117.3, 120.4, 124,7, 125.0, 128.8, 133.1, 136.9, 137.0, 151.0, 154.7, 156.4, 166.9, 167.3。
【０２５７】
（Ｒ）−（３，５−ジクロロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（８２）
【０２５８】
【化９５】
2015187110.tif 000096
（２つの回転異性体、１：１比、８５％）、淡黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.02 - 2.10 (m, 1H), 2.20 - 2.25 (m, 1H), 3.47 - 3.70 (m, 2H), 3.72 & 3.74 (s, 3H), 3.75 - 3.85 (m, 2H), 4.78 - 4.87 (m, 1H), 6.74 - 6.82 (m, 4H), 7.34 -7.41 (m, 3H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.4, 47.4, 52.1, 54.4, 55.6, 55.7, 75.5, 114.8, 116.9, 125.6, 125.7, 130.0, 135.1, 139.2, 139.3, 150.4, 150.7, 154.4, 154.5, 166.7, 167.0。
【０２５９】
（Ｒ）−（３，５−ジフルオロフェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（８３）
【０２６０】
【化９６】
2015187110.tif 000097
（２つの回転異性体、１：１比、７５％）、黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.27 (m, 2H), 3.48 - 3.67 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.77 - 3.85 (m, 2H), 4.78 - 4.88 (m, 1H), 6.73 - 6.87 (m, 5H), 6.99 & 7.06 (d, J = 5.6 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.0, 44.4, 47.3, 52.1, 54.9, 55.6, 75.6, 105.3, 105.4, 110.3, 110.4, 110.5, 110.7, 114.8, 116.9, 117.1, 150.2, 154.9, 162.4 (d, J = 250 Hz, due to F), 162.5 (d, J = 250 Hz, due to F), 167.0, 167.3.
【０２６１】
（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（８４）
【０２６２】
【化９７】
2015187110.tif 000098
（２つの回転異性体、１：１比、６５％）、黄色の液体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.08 - 2.14 (m, 1H), 2.24 - 2.29 (m, 1H), 3.47 - 3.67 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.76 - 3.91 (m, 2H), 4.81 - 4.91 (m, 1H), 6.74 - 6.83 (m, 4H), 7.90 - 8.12 (m, 3H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.1, 44.6, 47.4, 52.3, 54.5, 55.6, 75.6, 114.8, 114.9, 116, 9, 117.2, 123.7, 124.3, 127.5, 127.7, 131.1, 132.1, 138.5, 138.6, 150.4, 150.7, 154.5, 154.7, 166.5, 166.8。
【０２６３】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（ピリジン−３−イル）メタノン（８５）
【０２６４】
【化９８】
2015187110.tif 000099
（２つの回転異性体、１：１比、８２％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.00 - 2.10 (m, 1H), 2.16 - 2.24 (m, 1H), 3.48 - 3.58 (m, 1H), 3.64 - 3.73 (m, 1H), 3.67 & 3.69 (s, 3H), 3.73 - 3.85 (m, 2H), 4.75 - 4.85 (m, 1H), 6.69 - 6.78 (m, 4H), 7.25 - 7.31 (m, 1H), 7.78 &7.83 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.57 - 8.61 (m, 1H), 8.71 & 8.77 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 31.9, 44.3, 47.2, 51.9, 54.4, 55.49, 55.53, 75.5, 114.66, 114.69, 116.8, 116.9, 123.1, 123.2, 132.3, 134.8, 134.9, 147.9, 148.1, 150.39, 150.63, 150.83, 150.89, 154.2, 154.3, 167.0, 167.3。
【０２６５】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（ピリジン−４−イル）メタノン（８６）
【０２６６】
【化９９】
2015187110.tif 000100
（２つの回転異性体、１：１比、７９％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.04 - 2.23 (m, 2H), 3.46 - 3.67 (m, 2H), 3.70 & 3.72 (s, 3H), 3.73 - 3.90 (m, 2H), 4.78 - 4.88 (m, 1H), 6.76 - 6.82 (m, 4H), 7.34 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 8.66 (d, J = 13.2 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.6, 31.7, 44.0, 46.8, 51.7 ,53.9, 55.3, 55.4, 75.3, 114.5, 114.6, 116.7, 116.8, 120.9, 121.0, 143.6, 143.7, 149.7, 150.2, 154.1, 154.2, 166.9, 167.1。
【０２６７】
（Ｒ）−４−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−カルボニル）ピリジン  １−オキシド（８７）
【０２６８】
【化１００】
2015187110.tif 000101
（２つの回転異性体、１：１比、９７％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.11 (m, 1H), 2.21 - 2.26 (m, 1H), 3.50 - 3.68 (m, 2H), 3.70 & 3.72 (s, 3H), 3.74 - 3.88 (m, 2H), 4.79 - 4.87 (m, 1H), 6.70 - 6.81 (m, 4H), 7.25 - 7.41 (m, 2H), 8.17 - 8.20 (m, 1H), 8.29 & 8.35 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.0, 44, 7, 47.3, 52.3, 54.4, 55.7, 75.4, 114.8, 116.9, 117.0, 124.5, 126.0, 126.1, 135.7, 135.8, 137.9, 138.1, 140.1, 150.3, 154.5, 154.5, 164.1, 164.3。
【０２６９】
（Ｒ）−４−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−カルボニル）ピリジン−１−オキシド（８８）
【０２７０】
【化１０１】
2015187110.tif 000102
（２つの回転異性体、１：１比、９５％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.10 (m, 1H), 2.22 - 2.27 (m, 1H), 3.52 - 3.68 (m, 2H), 3.70 & 3.72 (s, 3H), 3.76 - 3.83 (m, 2H), 4.80 - 4.87 (m, 1H), 6.70 - 6.79 (m, 4H), 7.40 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.13 - 8.18 (m, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 32.1, 44.7, 47.3, 52.4, 54.4, 55.6, 75.4, 114.8, 116.9, 125.0, 125.1, 132.9, 133.0, 139.1, 150.3, 150.6, 154.4, 154.6, 165.3。
【０２７１】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェノキシ）ピロリジン−１−イル）（ピリミジン−５−イル）メタノン（８９）
【０２７２】
【化１０２】
2015187110.tif 000103
（２つの回転異性体、１：１比、８４％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.13 (m, 1H), 2.23 - 2.28 (m, 1H), 3.52 - 3.67 (m, 2H), 3.69 & 3.72 (s, 3H), 3.78 - 3.88 (m, 2H), 4.79 - 4.89 (m, 1H), 6.70 - 6.80 (m, 4H), 8.56 & 8.91 (s, 2H), 9.20 & 9.22 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.1, 44.7, 52.3, 54.4, 55.6, 55.7, 75.5, 114.8, 116.9 ,117.0 130.2, 130.3, 150.3, 150.6, 154.5, 154.6, 155.5, 155.6, 159.4, 159.5, 164.5。
【０２７３】
（３，５−ジニトロフェニル）（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）メタノン（９０）
【０２７４】
【化１０３】
2015187110.tif 000104
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 1.50-1.56 (m, 2H), 1.80-1.90 (m, 2H), 3.30-3.42 (m, 2H), 3.63 (brs, 1H), 3.94-4.05 (m, 3H), 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.95 (d, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 33.7, 34.5, 39.5, 44.9, 66.0, 119.1, 127.4, 140.2, 148.8, 165.1。
【０２７５】
４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピペリジン−４−イルオキシ）安息香酸メチル（９１）
【０２７６】
【化１０４】
2015187110.tif 000105
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 1.84 (brs, 2H), 1.96 (brs, 2H), 3.31 (brs, 1H), 3.59-3.74 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.84-3.96 (m, 1H), 4.63-4.66 (m, 1H), 6.81-6.85 (m, 2H), 7.87-7.90 (m, 2H), 8.50 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H)。
【０２７７】
（３，５−ジニトロフェニル）（４−（４−メトキシフェノキシ）ピペリジン−１−イル）メタノン（９２）
【０２７８】
【化１０５】
2015187110.tif 000106
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.85-1.98 (m, 4H), 3.35 (brs, 1H), 3.68-3.80 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.93 (brs, 1H), 4.49 (brs, 1H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.57 (s, 2H), 9.03 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 31.2, 39.3, 44.6, 55.8, 71.9, 115.0, 117.9, 119.8, 127.5, 139.6, 148.7, 150.8, 154.6, 165.4。
【０２７９】
Ｎ−（４−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピペリジン−４−イルオキシ）フェニル）アセトアミド（９３）
【０２８０】
【化１０６】
2015187110.tif 000107
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.62-1.96 (m, 4H), 1.97 (s, 3H), 3.48 (m, 3H), 3.93 (brs, 1H), 4.56 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.64 (s, 2H), 8.33 (s, 1H), 9.74 (s, 1H);
【０２８１】
（３，５−ジニトロフェニル）（４−（２−フルオロフェノキシ）ピペリジン−１−イル）メタノン（９４）
【０２８２】
【化１０７】
2015187110.tif 000108
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.70-2.10 (m, 4H), 3.39-4.11 (m, 4H), 4.59 (m, 1H), 6.86-6.92 (m, 1H), 7.01-7.15 (m, 3H), 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 31.1, 31.9, 45.5, 49.6, 75.0, 117.6 (d, J = 18.6 Hz, due to F), 119.5, 120.5, 123.3 (d, J = 6.7 Hz, due to F), 126.0 (d, J = 3.7 Hz, due to F), 128.6, 140.6, 146.1, 149.8, 154.8 (d, J = 242.6 Hz, due to F), 166.9。
【０２８３】
（３，５−ジニトロフェニル）（４−（２−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル）メタノン（９５）
【０２８４】
【化１０８】
2015187110.tif 000109
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.02-3.12 (m, 4H), 3.62 (brs, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.87 (brs, 2H), 6.85-6.95 (m, 4H), 8.68 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.96 ( d, J = 2.4 Hz, 1H)；LC-MS (ESI, m/z)：387 [M+H]+。
【０２８５】
（３，５−ジニトロフェニル）（４−（４−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル）メタノン（９６）
【０２８６】
【化１０９】
2015187110.tif 000110
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.08-3.17 (m, 4H), 3.68 (brs, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.88 (brs, 2H), 6.82 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.93, (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 42.4, 47.7, 50.5, 50.9, 54.9, 114.4, 118.8, 119.3, 127.7, 139.9, 145.6, 148.8, 154.5, 165.2；LC-MS (ESI, m/z)：387 [M+H]+。
【０２８７】
（４−（２−クロロフェニル）ピペラジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（９７）
【０２８８】
【化１１０】
2015187110.tif 000111
1H NMR (400 MHz, アセトン-d6) δ 3.09-3.17 (m, 4H), 3.70 (brs, 2H), 3.94 (brs, 2H), 7.07 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 9.00 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, アセトン-d6) δ 43.3, 48.7, 51.6, 52.1, 120.0, 122.0, 125.3, 128.5, 128.9, 129.4, 131.4, 140.6, 149.6, 149.8, 166.1；LC-MS (ESI, m/z)：391 [M+H]+。
【０２８９】
【化１１１】
2015187110.tif 000112
【０２９０】
ｔ−ブチル−ベンジルオキシピロリジン−１−カルボキシラート（Ｄ１）の合成に関する一般手順
ジメチルホルムアミド（１０mL）中の（Ｒ）−tert−ブチル ３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキシラート（３．２mmol）の溶液に、水素化ナトリウム（３．２mmol）及び臭化ベンジル（３．２mmol）を０℃で加え、得られた混合物を室温で撹拌した、一晩撹拌した後、蒸留水（５０mL）を加え、得られた沈殿物を濾過により回収して、Ｄ１を得た。
【０２９１】
ベンジルオキシ−ピロリジニル−フェニルメタノン（Ｄ２）の合成に関する一般手順
Ｄ１（０．４３mmol）をトリフルオロ酢酸（５mL）に溶解し、室温で撹拌した。１時間後、反応混合物を真空下で濃縮して、アミンを得た。塩化メチレン（５mL）中のアミンの溶液に、トリエチルアミン（０．５１mmol）及び塩化ベンゾイル（０．５１mmol）を０℃で加え、得られた混合物を室温で撹拌した。３時間後、反応混合物を塩化メチレン（３０mL）で希釈し、１M ＨＣｌ水溶液（３０mL）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３０mL）及びブライン（３０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（３：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製し、ヘキサン類と酢酸エチルの混合物から再結晶化して、Ｄ２を得た。
【０２９２】
（Ｒ）−（３−（ベンジルオキシ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（９８）
【０２９３】
【化１１２】
2015187110.tif 000113
（２つの回転異性体、１：１比、２３％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.18 - 2.29 (m, 2H), 3.53 - 3.58 (m, 1H), 3.76 - 3.93 (m, 3H), 5.12 -5.37 (m, 3H), 7.34 - 7.44 (m, 5H), 8.67 & 8.73 (d, J= 1.6 Hz, 2H), 9.08 & 9.09 (d, J= 1.6 Hz, 1H)。
【０２９４】
（（Ｒ）−３−（３−クロロベンジルオキシ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（９９）
【０２９５】
【化１１３】
2015187110.tif 000114
（２つの回転異性体  ３：１比、７５％）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.93 - 2.21 (m, 2H), 3.38 - 3.83 (m, 4H), 4.13 - 4.47 (m, 1H), 4.99 & 5.07 (s, 1H), 5.17 & 5.29 (s, 1H), 7.07 - 7,29 (m, 4H), 8.64 & 8.69 (s, 2H), 8.98 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.2, 45.1, 47.6, 52.3, 54.8, 70.3, 70.4, 76.4, 78.0, 120.0, 120.1, 125.5, 125.6, 127.5, 127.7, 127.8, 127.9, 128.1, 129.9, 134.5, 134.6, 139.7, 139.8, 139.9, 148.5, 164.7, 164.8.
【０２９６】
（（Ｒ）−３−（２−フルオロベンジルオキシ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（１００）
【０２９７】
【化１１４】
2015187110.tif 000115
（２つの回転異性体  １：１比）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.02 - 2.30 (m, 2H), 3.50 & 3.52 (s, 1H), 3.63 - 3.94 (m, 3H), 4.24 & 4.33 (s, 1H), 4.48 & 4.56 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 6.99 - 7.44 (m, 4H), 8.69 & 8.75 (s, 2H), 9.10 (s, 1H)。
【０２９８】
（（Ｒ）−３−（３−（トリフルオロメチル）ベンジルオキシ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（１０１）
【０２９９】
【化１１５】
2015187110.tif 000116
（２つの回転異性体  ２：１比）、1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.06 - 2.29 (m, 2H), 3.53 & 3,55 (s, 1H), 3.78 - 3.96 (m, 3H), 4.27 & 4.35 (s, 1H), 4.51 & 4.62 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 7.47 - 7.62 (m, 4H), 8.69 & 8.74 (s, 2H), 9.07 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 32.1, 45.1, 47.7, 52.4, 54.9, 70.4, 70.5, 76.7, 78.2, 120.1, 124.1, 124.3, 124.83, 124.87, 127.7, 127.8, 129.2, 130.8, 130.9, 138.7, 138.8, 139.7, 139.8, 148.5, 165.0。
【０３００】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（ピリジン−４−イルメトキシ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１０２）
【０３０１】
【化１１６】
2015187110.tif 000117
（２つの回転異性体、１：１比、７５％）、褐色の油状物；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.99 - 2.24 (m, 2H), 3.49 - 3.92 (m, 4H), 4.20 - 4.28 (m, 1H), 4.41 - 4.61 (m, 2H), 7.14 - 7.24 (m, 2H), 8.49 - 8.56 (m, 2H), 8.67 & 8.70 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.04 (d, J= 1.6 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 32.3, 45.1, 47.6, 52.3, 54.8, 69.4, 69.5, 76.9, 78.5, 120.1, 121.6, 121.7, 121.8, 127.7, 127.8, 139.8, 139.9, 146.6, 146.8, 148.5, 150.1, 150.2, 164.7。
【０３０２】
【化１１７】
2015187110.tif 000118
【０３０３】
アミノピロリジニル−フェニル−メタノン（Ｅ３）の合成に関する一般手順
塩化メチレン（５０mL）中の（Ｓ）−（＋）−Ｎ−Ｂｏｃ−３−ピロリジノール（２．６７mmol）及びトリエチルアミン（４．０１mmol）の溶液に、メタンスルホニルクロリド（４．０１mmol）を氷浴下で加え、得られた混合物を４℃でさらに撹拌した。２時間後、残留物を塩化メチレン（５０mL）で希釈し、水（１００mL）及びブライン（１００mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（２：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｅ１を得た。
【０３０４】
Ｅ１（０．７５mmol）とアミン（３．７５mmol）の溶液を、１００℃で撹拌した。一晩撹拌した後、残留物を塩化メチレン（３０mL）に溶解し、水（３０mL）及びブライン（３０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｅ２を得た。
【０３０５】
塩化メチレン（２０mL）中のＥ２（０．９６mmol）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５mL）を加えた。３時間後、溶媒を真空下で除去した。反応混合物を塩化メチレン（２０mL）に溶解し、０℃に冷却した。トリエチルアミン（４．８３mmol）及び塩化ベンゾイル（１．０５mmol）を加えた。２時間後、残留物を塩化メチレン（２０mL）で希釈し、水（４０mL）及びブライン（４０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｅ３を得た。
【０３０６】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−メトキシフェニルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１０３）
【０３０７】
【化１１８】
2015187110.tif 000119
（２つの回転異性体、１：１比、６３％）、褐色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.93 - 2.01 (m, 1H), 2.14 - 2.30 (m, 1H), 3.26 - 3.30 & 3.44 - 3.50 (m, 1H), 3.54 - 3.72 (m, 2H), 3.61 & 3.68 (s, 3H), 3.80 - 3.91 (m, 1H), 3.95 - 4.05 (m, 1H), 6.43 & 6.55 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.62 & 6.70 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 8.58 & 8.67 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 8.95 - 8.99 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.4, 32.4, 45.2, 47.9, 52.6, 53.0, 54.4, 55.0, 55.8, 55.9, 115.0, 115.1, 115.2, 115.3, 120.1, 127.6, 127.7, 139.6, 140.5, 140.7, 148.5, 148.6, 152.8, 152.9, 165.2, 165.4。
【０３０８】
（Ｒ）−（３−（４−ブトキシフェニルアミノ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（１０４）
【０３０９】
【化１１９】
2015187110.tif 000120
（２つの回転異性体、１：１比、５４％）、褐色の固体；融点１１８〜１２０□；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.83 - 0.98 (m, 3H), 1.39 - 1.52 (m, 2H), 1.61 - 1.76 (m, 2H), 2.02 - 2.05 (m, 1H), 2.24 - 2.41 (m, 1H), 3.33 - 3.37 & 3.50 - 3.63 (m, 2H), 3.66 - 4.13 (m, 6H), 6.47 & 6.60 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.70 & 6.78 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 8.66 & 8.74 (s, 2H), 9.05 & 9.08 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 ) δ 14.0, 14.1, 19.4, 19.5, 30.9, 31.6, 31.7, 32.9, 45.3, 47.9, 52.8, 53.4, 54.6, 55.2, 68.5, 68.6, 115.0, 115.2, 116.0, 116.2, 120.2, 127.8, 127.9, 139.9, 140.1, 140.4, 148.6, 152.7, 164.9, 165.1。
【０３１０】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−フェノキシフェニルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１０５）
【０３１１】
【化１２０】
2015187110.tif 000121
（２つの回転異性体、１：１比、６０％）、褐色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.00 - 2.06 (m, 1H), 2.18 - 2.35 (m, 1H), 3.32 - 3.35 & 3.48 - 3.54 (m, 1H), 3.61 - 3.78 (m, 2H), 3.82 - 4.12 (m, 2H), 6.47 & 6.60 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.77 - 6.97 (m, 5H), 7.17, 7.24 (m, 2H), 8.63 & 8.69 (d, J= 1.6 Hz, 2H), 9.01 & 9.04 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3+ CD3OD ) δ 30.6, 32.5, 45.3, 47.9, 52.3, 53.0, 54.0, 55.1, 114.5, 114.8, 117.4, 117.5, 120.2, 121.3, 121.4, 122.4, 122.5, 127.7, 127.8, 129.7, 139.6, 142.8, 143.0, 148.6, 148.8, 165.2, 165.3。
【０３１２】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１０６）
【０３１３】
【化１２１】
2015187110.tif 000122
（２つの回転異性体、１：１比、８３％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.78 - 1.89 (m, 1H), 2.03 - 2.15 (m, 1H), 3.12 - 3.17 (m, 1H), 3.37 - 3.45 (m, 1H), 3.52 - 3.95 (m, 3H), 5.15 - 5.23 (m, 1H), 6.36 - 6.56 (m, 4H), 8.38 & 8.44 (brs, 1H), 8.64 & 8.67 (s, 2H), 8.81 & 8.84 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 29.6, 31.3, 44.6, 46.9, 51.6, 51.9, 53.3, 54.1, 113.8, 114.2, 115.6, 115.7, 119.4, 127.4, 127.5, 139.6, 139.7, 140.3, 140.4, 148.0, 148.1, 148.5, 148.7, 164.2。
【０３１４】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（フェニルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１０７）
【０３１５】
【化１２２】
2015187110.tif 000123
（２つの回転異性体、１：１比、８０％）、赤色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.99 - 2.04 (m, 1H), 2.17 - 2.33 (m, 1H), 3.28 - 3.31 & 3.57 -3.95(m, 4H), 4.04 - 4.11 (m, 1H), 6.46 - 6.48 (m, 1H), 6.59 - 6.70 (m, 2H), 7.02 - 7.14 (m, 2H), 8.60 & 8.67 (s, 2H), 8.98 & 9.01 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.3, 32.2, 45.1, 47.8, 51.7, 52.8, 53.3, 54.9, 113.2, 113.5, 118.3, 118.4, 120.0, 127.6, 127.7, 129.4, 139.5, 146.3, 146.4, 148.4, 148.5, 165.1, 165.3。
【０３１６】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（ピリジン−２−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１０８）
【０３１７】
【化１２３】
2015187110.tif 000124
（２つの回転異性体、１：１比、７０％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.00 - 2.44 (m, 2H), 3.38 - 4.11 (m, 4H), 4.38 & 4.50 (m, 1H), 6.36 & 6.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.57 & 6.64 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.37 & 7.44 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.98 & 8.11 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.67 & 8.73 (s, 2H), 9.05 & 9.09 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.4, 32.6, 45.1, 47.7, 51.7, 52.9, 55.3, 76.7, 101.8, 108.3, 113.7, 119.9, 127.7, 137.5, 137.7, 147.8, 147.9, 148.3, 148.4, 157.2, 157.4, 164.8, 164.9。
【０３１８】
（Ｒ）−（３−（シクロヘキシルアミノ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（１０９）
【０３１９】
【化１２４】
2015187110.tif 000125
（２つの回転異性体、１：１比、６９％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 0.99 - 1.35 (m, 6H), 1.60 - 1.98 (m, 5H), 2.15 - 2.32 (m, 1H), 2.39 - 2.57 (m, 1H), 3.24 - 3.60 (m, 2H), 3.63 - 3.73 (m, 2H), 3.81 - 3.91 (m, 1H), 8.73 & 8.78 (s, 2H), 9.10 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 24.7, 24.8, 24.9, 25.6, 25.7, 30.6, 32.4, 33.3, 33.4, 45.2, 47.7, 52.6, 54.5, 54.8, 54.9, 55.1, 119.7, 127.4, 127.5, 139.5, 148.3, 164.9, 165.0。
【０３２０】
（Ｒ）−Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１１０）
【０３２１】
【化１２５】
2015187110.tif 000126
（２つの回転異性体、１：１比、１５％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.01 - 1.22 (m, 3H), 1.62 - 1.86 (m, 6H), 2.18 - 2.26 (m, 1H), 2.74 - 2.89 (m, 1H), 3.30 - 3.35 (m, 1H), 3.50 - 3.78 (m, 2H), 3.97 - 4.19 (m, 4H), 8.51 & 8.56 (s, 2H), 8.74 (s, 2H), 9.09 - 9.10 (m, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.8, 24.9, 25.3, 25.5, 27.3, 30.0, 31.8, 45.6, 48.7, 48.9, 50.0, 53.6, 54.8, 60.5, 119.8, 120.0, 126.7, 127.8, 139.8, 140.1, 140.2, 140.4, 148.6, 148.2, 164.4, 164.7, 166.6, 166.7.
【０３２２】
（Ｒ）−（３−（４−メトキシフェニルアミノ）ピロリジン−１−イル）（フェニル）メタノン（１１１）
【０３２３】
【化１２６】
2015187110.tif 000127
（２つの回転異性体、１：１比、７５％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.84 - 1.88 (m, 1H), 2.08 - 2.32 (m, 1H), 3.26 - 3.34 & 3.49 - 4.03 (m, 5H), 3.69 & 3.72 (s, 3H), 6.48 & 6.50 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.71 & 6.76 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 7.36 - 7.51 (m, 5H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.7, 32.5, 44.5, 47.7, 52.6, 52.7, 54.2, 55.2, 55.8, 55.9, 114.7, 114.9, 115.0, 127.2, 128.3, 130.1, 136.7, 140.8, 141.0, 152.6, 170.0。
【０３２４】
（Ｒ）−（３−（３−クロロベンジルアミノ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（１１２）
【０３２５】
【化１２７】
2015187110.tif 000128
（２つの回転異性体、１：１比、３２％）淡黄色の固体として；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.83 - 1.89 (m, 1H), 2.01 - 2.08 & 2.14 - 2.19 (m, 1H), 2.75 (brs, 1H), 3.15 - 3.19 & 3.35 - 3.83 (m, 7H), 7.05 - 7.23 (m, 4H), 8.58 & 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.97 - 8.99 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.4, 32.1, 45.2, 47.7, 51.2, 51.4, 52.4, 54.9, 55.2, 57.5, 119.8, 126.0, 126.2, 127.2, 127.3, 127.5, 127.6, 127.8, 128.0, 129.7, 129.8, 134.1, 134.2, 139.5, 139.6, 141.3, 141.7, 148.2, 148.3, 164.7, 164.8。
【０３２６】
（Ｒ）−Ｎ−（３−クロロベンジル）−ｎ−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１１３）
【０３２７】
【化１２８】
2015187110.tif 000129
（２つの回転異性体、１：１比、４４％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.26 - 2.35 (m, 2H), 3.56 - 4.05 (m, 4H), 4.57 - 4.65 (m, 3H), 7.06 - 7.15 (m, 2H), 7.24 - 7.35 (m, 2H), 8.50 - 8.62 (m, 4H), 8.97 - 9.02 (m, 2H)；LC-MS (ESI, m/z)：599 [M+H]+。
【０３２８】
（Ｒ）−（３−（ベンジルアミノ）ピロリジン−１−イル）（３，５−ジニトロフェニル）メタノン（１１４）
【０３２９】
【化１２９】
2015187110.tif 000130
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.59 (brs, 1H), 1.87-1.94 (m, 1H), 2.06-2.24 (m, 1H), 3.20 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 0.5H ), 3.46-3.89 (m, 6.5H), 7.15-7.36 (m, 5H), 8.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.03 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H), 9.06 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H)。
【０３３０】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１１５）
【０３３１】
【化１３０】
2015187110.tif 000131
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.51 (brs, 1H), 1.89-1.94 (m, 1H), 2.10-2.28 (m, 1H), 3.24 (dd, J = 5.2, 10.0 Hz, 0.5H ), 3.45-3.92 (m, 6.5H), 7.40-7.61 (m, 4H), 8.65 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.06 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H), 9.08 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H)。
【０３３２】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（２−フルオロベンジルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１１６）
【０３３３】
【化１３１】
2015187110.tif 000132
（２つの回転異性体、１：１比、７５％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.89 - 1.94 (m, 1H), 2.11 - 2.25 (m, 1H), 3.22 - 3.89 (m, 7H), 6.93 & 7.02 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.20 & 7.33 (m, 2H), 8.66 & 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.06 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.7, 32.5, 45.3, 47.8, 51.3, 51.5, 52.7, 55.1, 55.4, 57.7, 115.1, 115.3, 119.8, 119.9, 127.6, 127.7, 129.4, 129.6, 135.4, 135.5, 139.8, 148.3, 148.4, 162.0 (d, J = 245 Hz, due to F), 162.1 (d, J = 245 Hz, due to F), 164.5, 164.6。
【０３３４】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（２−フルオロベンジルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノンヒドロクロリド（１１７）
【０３３５】
【化１３２】
2015187110.tif 000133
（２つの回転異性体、１：１比、９２％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CD3OD + D2O) δ 2.24 - 2.35 (m, 1H), 2.48 - 2.63 (m, 1H), 3.48 - 4.34 (m, 7H), 7.13 & 7.24 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.47 & 7.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 8.73 & 8.8 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CD3OD + D2O) δ 28.1, 29.7, 45.5, 50.6, 50.7, 51.9, 56.6, 57.7, 81.1, 117.0, 117.1, 127.7, 128.6, 128.7, 133.2, 133.3, 139.0, 147.1, 149.7, 167.5, 167.6。
【０３３６】
（Ｒ）−（３，５−ジニトロフェニル）（３−（ピリジン−４−イルメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）メタノン（１１８）
【０３３７】
【化１３３】
2015187110.tif 000134
（２つの回転異性体、１：１比、６９％）、黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.80 (br, 1H), 1.88 - 2.23 (m, 2H), 3.23 - 3.89 (m, 7H), 7.17 & 7.26 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.45 & 8.52 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.65 & 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.04 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 32.4, 44.7, 47.7, 52.4, 54.8, 55.9, 76.0, 115.0, 115.1, 117.2, 117.4, 124.4, 124.5, 127.0, 129.1, 130.6, 130.8, 137.5, 137.7, 150.8, 151.0, 154.7, 154.8, 168.5, 168.8。
【０３３８】
【化１３４】
2015187110.tif 000135
【０３３９】
（Ｒ）−Ｎ−ベンゾイルピロリジニル−ベンズアミド（Ｆ５）の合成に関する一般手順
ＤＭＦ（１５mL）中のＦ１（３．７７mmol）の溶液に、アジ化ナトリウム（１１．００mmol）を加え、得られた混合物を７０℃に温めた。３時間後、溶媒を真空下で除去し、酢酸エチル（５０mL）に溶解し、水（５０mL）及びブライン（５０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｆ２を得た。
【０３４０】
Ｆ２（２．６８mmol）の溶液に、１０％パラジウム担持活性炭を加え、水素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を、cellite 545を使用して濾過し、得られた濾液を真空下で濃縮して、Ｆ３を得た。
【０３４１】
塩化メチレン（１０mL）中のＦ３（０．７７mmol）及びトリエチルアミン（１．１６mmol）の溶液に、塩化ベンゾイル（１．００mmol）を氷浴下で加えた。反応混合物を室温に上げた。２時間後、反応混合物を塩化メチレン（２０mL）で希釈し、水（３０mL）及びブライン（３０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（２：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｆ４を得た。
【０３４２】
塩化メチレン（１０mL）中のＦ４（０．５９mmol）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．５mL）を加え、室温で撹拌した。３時間後、溶媒を真空下で除去した。粗生成物を塩化メチレン（１０mL）に溶解し、トリエチルアミン（０．４１mL、２．９６mmol）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、次に、３，５−ジクロロベンゾイルクロリド（０．６５mmol）を加えた。得られた混合物を室温に上げた。２時間後、溶媒を真空下で除去し、粗残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１  ヘキサン類／酢酸エチル）により精製して、Ｆ５を得た。
【０３４３】
（Ｒ）−Ｎ−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イル）−３−（トリフルオロメトキシ）ベンズアミド（１１９）
【０３４４】
【化１３５】
2015187110.tif 000136
（２つの回転異性体、１：１比、６７％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.07 - 2.18 (m, 1H), 2.29 - 2.40 (m, 1H), 3.49 - 3.60 (m, 1H), 3.68 - 3.76 (m, 1H), 3.87 - 3.98 (m, 2H), 4.60 - 4.74 (m, 1H), 7.19 - 7.60 (m, 5H), 8.51 & 8.59 (s, 2H), 8.91 & 8.96 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.5, 45.3, 48.0, 49.2, 50.8, 51.9, 54.8, 119.9, 120.0, 120.2, 124.3, 125.7, 127.6, 130.2, 135.7, 136.0, 139.4, 148.4, 148.5, 149.2, 164.9, 165.0, 166.5, 166.6。
【０３４５】
（Ｒ）−Ｎ−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イル）−４−メトキシベンズアミド（１２０）
【０３４６】
【化１３６】
2015187110.tif 000137
（２つの回転異性体、１：１比、０．１９ｇ、７６％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.08 - 2.15 (m, 1H), 2.35 - 2.47 (m, 1H), 3.47 - 4.08 (m, 4H), 3.81 & 3.84 (s, 3H), 4.62 - 4.64 & 4.77 - 4.78 (m, 1H), 6.45 & 6.50 (brs, 1H), 6.82 & 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.62 & 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.62 & 8.71 (s, 2H), 9.04 & 9.08 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 32.8, 45.2, 48.0, 48.9, 50.5, 52.2, 55.2, 55.6, 60.6, 113.9, 120.2, 125.6, 126.1, 127.7, 127.8, 129.0, 139.5, 148.5, 162.7, 164.9, 165.0, 167.4。
【０３４７】
（Ｒ）−３−クロロ−Ｎ−（１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イル）ベンズアミド（１２１）
【０３４８】
【化１３７】
2015187110.tif 000138
（２つの回転異性体、１：１比、６６％）、淡黄色の固体；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.94 - 2.20 (m, 2H), 3.33 - 3.83 (m, 4H), 4.42 - 4.55 (m, 1H), 7.43 - 7.60 (m, 2H), 7.71 - 7.90 (m, 2H), 8.66 & 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 2H, brs, 1H), 8.83 - 8.86 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 29.3, 31.5, 44.6, 47.0, 48.4, 49.9, 51.1, 53.3, 119.4, 119.5, 126.2, 126.3, 127.0, 127.1, 127.5, 130.2, 130.3, 131.1, 133.0, 133.1, 136.1, 136.3, 139.5, 139.6, 148.0, 164.0, 164.1, 165.0, 165.1。
【０３４９】
（Ｓ）−１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルメタンスルホナート（１２２）
【０３５０】
【化１３８】
2015187110.tif 000139
（２つの回転異性体、１：１比、９２％）、白色の固体；融点１３８〜１４０℃；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.25 - 2.46 (m, 2H), 3.03 & 3.10 (s, 3H), 3.59 - 3.67 & 3.75 - 4.03 (m, 4H), 5.28 - 5.40 (m, 1H), 8.68 & 8.73 (s, 2H), 9.08 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 31.1, 33.6, 38.9, 39.0, 44.7, 47.2, 53.3, 55.3, 78.2, 78.6, 120.5, 127.8, 127.9, 139.3, 148.7, 164.8, 165.0; LC-MS (ESI, m/z)：360 [M+H]+。
【０３５１】
（Ｒ）−１−（３，５−ジニトロベンゾイル）ピロリジン−３−イルメタンスルホナート（１２３）
【０３５２】
【化１３９】
2015187110.tif 000140
（２つの回転異性体、１：１比、８９％）、白色の固体；1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.16 - 2.32 (m, 2H), 2.94 & 3.02 (s, 3H), 3.50 - 3.91 (m, 4H), 5.19 - 5.30 (m, 1H), 8.58 & 8.63 (s, 2H), 8.97 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.7, 33.1, 38.3, 38.4, 44.5, 46.9, 53.0, 55.0, 78.5, 79.0, 120.1, 127.6, 139.0, 148.4, 164.9, 165.0。
【０３５３】
実施例７：  ピリドピリミジノン化合物の誘導体化
ピリドピリミジノン化合物（骨格VIII；表３参照）は、下記（スキーム８〜１０）で概説した方法に従って誘導体化を受けた。得られた誘導体を、上記のアッセイを使用して阻害活性に関して検査し、結果を表４にまとめる。
【０３５４】
【化１４０】
2015187110.tif 000141
【０３５５】
Ｇ１の合成に関する一般手順
２−アミノ−３−ピコリン（１．０mmol）をマロン酸ジエチル（１．０mmol）に溶解した。溶液を１７０℃に１２時間加熱した。冷却後、暗色の残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で粉砕した。残留した淡い固体を濾過により回収し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄して、Ｇ１を得た。
【０３５６】
Ｇ２の合成に関する一般手順
ＤＭＦ（２．０mL）に、ＰＯＣｌ３（３．０mmol）を０℃で加えた。混合物を０℃で４０分間撹拌した後、ＤＭＦ（２．０mL）中のＧ１（１．０mmol）の溶液を加え、８０℃で１時間撹拌した。混合物を冷却し、真空下で濃縮した。残留物を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（１０mL×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｇ２を得た。
【０３５７】
Ｇ３の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（２．０mL）中のＧ２（１．０mmol）の撹拌した溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２．０mmol）を加えた。混合物を０℃に冷却した。５分後、アミン（１．０mmol）を滴下し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、ブライン（１０mL）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｇ３を得た。
【０３５８】
Ｇ４の合成に関する一般手順
Ｇ２（０．５mmol）を、tert−ブチル アルコール１０．４mL及び２−メチル−２−ブテン２．５mLに溶解した。水４．２mL中の亜塩素酸ナトリウム（４．５９mmol）及びリン酸ニ水素ナトリウム（３．４６mmol）の溶液を滴下した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、揮発性成分を真空下で除去し、残留物を水１０mlに溶解し、ヘキサンを１０mlずつ用いて２回抽出した。水層を、ＨＣｌ（水溶液）でｐＨ＝３に酸性化し、塩化メチレンを１０mLずつ用いて抽出した。合わせた有機層を冷水２０mLで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、Ｇ４を得た。
【０３５９】
Ｇ３からＧ５の合成に関する一般手順
Ｇ３（３６．６μmol）を、tert−ブチル アルコール７６０μl及び２−メチル−２−ブテン１８０μlに溶解した。水３００μl中の亜塩素酸ナトリウム（３３５μmol）及びリン酸ニ水素ナトリウム（２５３μmol）の溶液を滴下した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、揮発性成分を、真空下で除去し、残留物を水１０mlに溶解し、ヘキサンを１０mlずつ用いて２回抽出した。水層を、ＨＣｌ（水溶液）でｐＨ＝３に酸性化し、塩化メチレンを１０mlずつ用いて抽出した。合わせた有機層を冷水２０mlで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、Ｇ５を得た。
【０３６０】
Ｇ４からＧ５の合成に関する一般手順
ＤＭＦ（２．０mL）中のＧ４（１．０mmol）の撹拌した溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２．０mmol）及びアミン（１．５mmol）を加え、混合物を６０℃で一晩撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、ブライン（１０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、ヘキサンと塩化メチレンの混合物からの再結晶化により精製して、Ｇ５を得た。
【０３６１】
Ｇ６の合成に関する一般手順
ＣＨ２Ｃｌ２（３mL）の溶液中の２−アミノ−３−ピコリン（４．０mmol）の溶液及び乾燥ピリジン（１mL）を、ＣＨ２Ｃｌ２（３mL）中のエチル ３−クロロ−３−オキソ−プロピオナート（５．３mmol）の撹拌した溶液に室温で滴下した（添加の間、白色の煙の放出を伴う発熱反応が発生した）。得られた温かい混合物を、室温で３０分間撹拌し、次に、冷水３０mLに注いだ；過剰量の炭酸ナトリウムを撹拌しながら注意深く加え、混合物を室温で１時間さらに撹拌した。次に、有機層を回収し、水相をＣＨ２Ｃｌ２で数回抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｇ６を得た。
【０３６２】
Ｇ７の合成に関する一般手順
Ｇ６（１．８３mmol）、ＰＯＣｌ３（０．５mL）及びポリリン酸（１３７mg）の混合物を、１３０℃で３時間撹拌しながら加熱した。冷却後、無水エタノールを加え、混合物を３０分間還流し、次に放冷した。混合物を炭酸ナトリウム水溶液で処理し、ＣＨ２Ｃｌ２（１０mL×３）で徹底的に抽出した。合わせた層を水（１０mL）、ブライン（１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過して、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｇ７を得た。
【０３６３】
Ｇ８の合成に関する一般手順
ＤＭＦ（０．９６mL）中のＧ６（１mmol）の溶液に、炭酸カリウム（５．０mmol）、続いてフェノール（１．９４mmol）を加えた。１００℃で１２時間後、溶液を２３℃に放冷した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０mL）で洗浄し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２０mL×３）で抽出した。合わせた有機層を１N ＨＣｌ（２０mL×２）で洗浄し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｇ８を得た。
【０３６４】
Ｇ９の合成に関する一般手順
ＤＭＦ（２．０mL）に、ＰＯＣｌ３（３．０mmol）を０℃で加えた。混合物を０℃で４０分間撹拌した後、ＤＭＦ（２．０mL）中のＧ８（１．０mmol）の溶液を加え、８０℃で１時間撹拌した。混合物を冷却し、真空下で濃縮した。残留物を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（１０mL×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｇ９を得た。
【０３６５】
エチル ３−（３−メチルピリジン−２−イルアミノ）−３−オキソプロパノアート（１２４）
【０３６６】
【化１４１】
2015187110.tif 000142
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 2.25 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 4.20 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 9.67 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.9, 17.7, 42.6, 61.7, 113.8, 129.3, 138.8, 147.6, 148.8, 163.5, 168.4。
【０３６７】
２−ヒドロキシ−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１２５）
【０３６８】
【化１４２】
2015187110.tif 000143
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.48 (s, 3H), 5.44 (s, 1H), 7.20 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.52 (brs, 1H)。
【０３６９】
２−ヒドロキシ−８−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１２６）
【０３７０】
【化１４３】
2015187110.tif 000144
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.50 (s, 3H), 4.88 (s, 1H), 7.20 - 7.24 (m, 2H), 8.85 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.98 (br s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 20.6, 80.3, 114.4, 117.1, 127.7, 146.7, 153.5, 155.3, 162.3。
【０３７１】
２−クロロ−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１２７）
【０３７２】
【化１４４】
2015187110.tif 000145
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.57 (s, 3H), 6.45 (s, 1H), 7.12 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.93 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 102.3, 115.8, 125.7, 134.7, 136.9, 150.0, 157.6, 157.9。
【０３７３】
２−クロロ−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１２８）
【０３７４】
【化１４５】
2015187110.tif 000146
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.64 (s, 3H), 7.30 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.42 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.7, 107.3, 117.7, 127.0, 135.6, 140.6, 150.0, 156.4, 160.2, 187.1。
【０３７５】
２−クロロ−８−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１２９）
【０３７６】
【化１４６】
2015187110.tif 000147
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.59 (s, 3H), 7.24 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 9.09 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.40 (s, 1H)。
【０３７７】
２−クロロ−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３０）
【０３７８】
【化１４７】
2015187110.tif 000148
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.32 (s, 3H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H), 10.16 (s, 1H)。
【０３７９】
２−クロロ−６−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３１）
【０３８０】
【化１４８】
2015187110.tif 000149
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.11 (s, 3H), 6.98 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.79 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 10.29 (s, 1H)。
【０３８１】
９−メチル−４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３２）
【０３８２】
【化１４９】
2015187110.tif 000150
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 6.89 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.80 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.27 (s, 1H), 11.67 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.1, 94.6, 113.6, 121.8, 124.2, 125.9, 128.7, 133.6, 138.1, 138.9, 152.5, 153.8, 160.2, 190.2。
【０３８３】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３３）
【０３８４】
【化１５０】
2015187110.tif 000151
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.97 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 H, 1H), 7.69 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.27 (s, 1H), 11.72 (brs, 1H)。
【０３８５】
９−メチル−４−オキソ−２−（３−（トリフルオロメトキシ）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３４）
【０３８６】
【化１５１】
2015187110.tif 000152
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.99 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 10.32 (s, 1H), 11.86 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 94.7, 114.2, 114.7, 116.5, 119.7, 126.1, 129.7, 133.8, 139.4, 139.7, 149.4, 152.6, 157.0, 160.1, 190.4。
【０３８７】
９−メチル−４−オキソ−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３５）
【０３８８】
【化１５２】
2015187110.tif 000153
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.49 (s, 1H), 6.98 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.87 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.30 (s, 1H), 11.85 (brs, 1H)。
【０３８９】
２−（４−tert−ブチルフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３６）
【０３９０】
【化１５３】
2015187110.tif 000154
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 (s, 9H), 2.48 (s, 3H), 6.89 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.30 (s, 1H), 11.68 (br s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.2, 31.3, 34.3, 94.6, 113.5, 121.4, 125.6, 125.9, 133.6, 135.6, 138.8, 147.2, 152.6, 156.7, 160.4, 190.2。
【０３９１】
２−（３−クロロベンジルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３７）
【０３９２】
【化１５４】
2015187110.tif 000155
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 4.80 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.87 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.24-7.26 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 7.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.34 (brs, 1H), 10.30 (s, 1H)。
【０３９３】
９−メチル−２−モルホリノ−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３８）
【０３９４】
【化１５５】
2015187110.tif 000156
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.30 (s, 3H), 3.65 (d, J = 2.4 Hz, 4H), 3.72 (d, J = 3.2 Hz, 4H), 6.74 - 6.77 (m, 1H), 7.49 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.01 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 49.5, 67.0, 95.9, 112.9, 125.7, 133.0, 138.1, 150.5, 158.4, 162.3, 186.2
【０３９５】
２−（４−（２−クロロフェニル）ピペラジン−１−イル）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１３９）
【０３９６】
【化１５６】
2015187110.tif 000157
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.41 (s, 3H), 3.19 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.92 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 6.82 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.15 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 49.3, 51.4, 96.1, 112.7, 120.5 ,124.0, 125.8, 127.6, 128.8, 130.6, 133.0, 137.8, 148.7, 150.5, 158.6, 162.5, 186.4。
【０３９７】
２−（３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１４０）
【０３９８】
【化１５７】
2015187110.tif 000158
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.05 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.73 (s, 2H), 6.78 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.06 - 7.17 (m, 4H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 10.21 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 28.7, 46.3, 52.0, 96.1, 112.5, 125.8, 126.2, 126.6, 128.4, 133.0, 133.9, 134.6, 137.5, 150.3, 158.6, 162.3, 186.7。
【０３９９】
２−（イソブチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１４１）
【０４００】
【化１５８】
2015187110.tif 000159
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.95 (d, J = 4Hz, 6H), 1.90 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 3.41 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 6.76 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.24 - 7.52 (m, 1H), 8.69 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 9.67 (brs, 1H), 10.22 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 20.4, 28.7, 48.1, 94.4, 112.5, 125.9, 133.2, 138.1, 152.8, 159.5, 160.7, 190.2。
【０４０１】
２−（ジエチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１４２）
【０４０２】
【化１５９】
2015187110.tif 000160
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 2.36 (s, 3H), 3.65 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 6.72 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.12 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.2, 17.7, 45.3, 96.2, 112.2, 125.8, 133.0, 137.3, 150.2, 158.5, 162.6, 186.9。
【０４０３】
２−（シクロヘキシルメチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１４３）
【０４０４】
【化１６０】
2015187110.tif 000161
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.93 - 1.02 (m, 2H), 1.11 - 1.25 (m, 3H), 1.57 - 1.77 (m, 6H), 2.36 (s, 3H), 3.43 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.75 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.65 (brs, 1H), 10.21 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 26.0, 26.5, 31.1, 38.2, 47.0, 94.4, 112.5, 125.8, 133.2, 138.0, 152.8, 159.4, 160.6, 190.2
【０４０５】
２−クロロ−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１４４）
【０４０６】
【化１６１】
2015187110.tif 000162
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.58 (s, 3H), 7.53 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.97 (d. J = 6.8 Hz, 1H), 13.53 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 16.7, 108.1, 117.1, 125.6, 133.3, 138.7, 148.2, 152.0, 154.6, 163.9。
【０４０７】
２−クロロ−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１４５）
【０４０８】
【化１６２】
2015187110.tif 000163
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.49 (s, 3H), 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 13.46 (br s, 1H)。
【０４０９】
２−クロロ−６−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１４６）
【０４１０】
【化１６３】
2015187110.tif 000164
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.00 (s, 3H), 7.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 13.35 (br s, 1H)。
【０４１１】
９−メチル−４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１４７）
【０４１２】
【化１６４】
2015187110.tif 000165
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.70 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.70 (brs, 1H), 14.31 (s, 1H)。
【０４１３】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１４８）
【０４１４】
【化１６５】
2015187110.tif 000166
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.55 (s, 3H), 7.04 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.28 (J= 8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.79 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 11.78 (brs, 1H)。
【０４１５】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−８−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１４９）
【０４１６】
【化１６６】
2015187110.tif 000167
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.49 (s, 3H), 6.93 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 2H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.72 (br s, 1H), 14.19 (s, 1H)。
【０４１７】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５０）
【０４１８】
【化１６７】
2015187110.tif 000168
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.41 (s, 3H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 11.70 (br s, 1H), 14.28 (s, 1H)。
【０４１９】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−６−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５１）
【０４２０】
【化１６８】
2015187110.tif 000169
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.03 (s, 3H), 6.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 - 7.27 (m, 2H), 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 11.76 (br s, 1H), 14.37 (s, 1H)。
【０４２１】
２−（３−フルオロフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５２）
【０４２２】
【化１６９】
2015187110.tif 000170
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.54 (s, 3H), 6.81 - 6.87 (m, 1H), 7.03 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.28 - 7.31 (m, 2H), 7.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 10.4Hz, 1H), 8.79 (d, J = 7.2 Hz 1H), 11.83 (b s, 1H), 14.26 (br s, 1H)。
【０４２３】
９−メチル−４−オキソ−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５３）
【０４２４】
【化１７０】
2015187110.tif 000171
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.54 (s, 3H), 7.05 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.58 (s 1H), 8.81 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.91 (br s, 1H)。
【０４２５】
９−メチル−４−オキソ−２−（３−（トリフルオロメトキシ）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５４）
【０４２６】
【化１７１】
2015187110.tif 000172
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.58 (s, 3H), 7.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.89 (br s, 1H), 14.26 (br s, 1H)。
【０４２７】
９−メチル−２−（３−ニトロフェニルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５５）
【０４２８】
【化１７２】
2015187110.tif 000173
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.60 (s, 3H), 7.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.33 (s, 1H), 11.84 (br s, 1H), 14.43 (br s, 1H)。
【０４２９】
２−（３−（メトキシカルボニル）フェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５６）
【０４３０】
【化１７３】
2015187110.tif 000174
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.57 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 7.052 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 11.83 (br s, 1H), 14.28 (br s, 1H)。
【０４３１】
２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５７）
【０４３２】
【化１７４】
2015187110.tif 000175
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.55 (s, 3H), 6.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 - 7.24 (m, 3H), 7.34 (s, 1H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０４３３】
２−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５８）
【０４３４】
【化１７５】
2015187110.tif 000176
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.45 (s, 3H), 6.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.10 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.26 (br s, 1H)。
【０４３５】
２−（４−tert−ブチルフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１５９）
【０４３６】
【化１７６】
2015187110.tif 000177
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.33 (s, 9H), 2.49 (s, 3H), 6.95 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 8.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.64 (br s, 1H) 14.31 (br s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.2, 31.3, 34.4, 85.3, 114.1, 121.3, 125.5, 125.7, 133.6, 135.4, 138.2, 147.4, 150.2, 157.0, 161.8, 169.7。
【０４３７】
２−（３−クロロベンジルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６０）
【０４３８】
【化１７７】
2015187110.tif 000178
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.38 (s, 3H), 4.83 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.17 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.40 (m, 3H), 7.50 (s, 1H), 7.89 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.82 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 14.25 (br s, 1H)。
【０４３９】
２−（ジエチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６１）
【０４４０】
【化１７８】
2015187110.tif 000179
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 2.41 (s, 3H), 3.68 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 6.67 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 14.08 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.8, 17.8, 45.4, 96.2, 112.2, 125.8, 133.0, 137.3, 150.2, 158.5, 162.6, 171.6。
【０４４１】
２−（イソブチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６２）
【０４４２】
【化１７９】
2015187110.tif 000180
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.93 - 1.99 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 3.43 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 6.84 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 9.52 (brs, 1H), 14.12 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 20.4, 28.7, 48.6, 84.8, 113.2, 125.7, 133.2, 137.5, 150.5, 159.7, 162.0, 169.9。
【０４４３】
２−（シクロヘキシルメチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６３）
【０４４４】
【化１８０】
2015187110.tif 000181
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.98 - 1.05 (m, 2H), 1.13 - 1.24 (m, 3H), 1.60 - 1.79 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 3.45 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 6.83 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.57 (brs, 1H), 14.13 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 26.0, 26.2, 31.2, 38.2, 47.4, 84.8, 113.2, 125.7, 133.2, 137.5, 150.5, 159.6, 162.0, 170.0。
【０４４５】
２−（シクロヘキシルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６４）
【０４４６】
【化１８１】
2015187110.tif 000182
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.19 - 1.42 (m, 5H), 1.56 - 1.60 (m, 2H), 1.70 - 1.76 (m, 2H), 1.94 - 1.98 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 6.79 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.42 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 14.14 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.8, 24.7, 25.7, 32.6, 50.0, 84.7, 113.1, 125.6, 133.1, 137.4, 150.5, 158.5, 162.0, 169.9。
【０４４７】
２−（シクロペンチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６５）
【０４４８】
【化１８２】
2015187110.tif 000183
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.54 - 1.67 (m, 4H), 1.73 - 1.78 (m, 2H), 2.04 - 2.10 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 4.51 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 6.83 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.47 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 14.15 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 24.1, 33.3, 53.0, 84.8, 113.3, 125.7, 133.3, 137.5, 150.5, 158.9, 162.0, 169.9。
【０４４９】
２−（シクロヘプチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６６）
【０４５０】
【化１８３】
2015187110.tif 000184
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 - 1.57 (m, 4H), 1.59 - 1.68 (m, 4H), 1.69 - 1.74 (m, 2H), 1.98 - 2.04 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 4.30 - 4.36 (m, 1H), 6.83 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.53 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 14.19 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 24.6, 28.1, 34.7, 52.3, 84.8, 113.1, 125.8, 133.2, 137.4, 150.4, 158.3, 162.1, 170.0。
【０４５１】
２−（１−（tert−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６７）
【０４５２】
【化１８４】
2015187110.tif 000185
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.51 (s, 9H), 1.61 - 1.65 (m, 2H), 2.01 - 2.03 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.99 - 3.05 (m, 2H), 3.98 - 4.00 (m, 2H), 4.26 - 4.33 (m, 1H), 6.88 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.56 (d, J = 6.8 Hz), 14.12 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 28.6, 31.6, 48.5, 66.4, 79.9, 85.0, 113.5, 125.9, 133.2, 137.8, 150.6, 154.9, 158.9, 162.0, 169.9。
【０４５３】
２−（２−（４−フルオロフェノキシ）エチルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６８）
【０４５４】
【化１８５】
2015187110.tif 000186
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 4.01 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.83 - 6.96 (m, 5H), 7.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.81 (brs, 1H), 14.01 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 40.5, 67.1, 85.3, 113.6, 115.8, 115.9, 116.0, 116.1, 125.9, 133.2, 137.9, 150.6, 154.8, 159.8, 161.9, 169.7。
【０４５５】
９−メチル−４−オキソ−２−（２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）エチルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１６９）
【０４５６】
【化１８６】
2015187110.tif 000187
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 4.03 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.18 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.91 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.82 (brs, 1H), 14.08 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 40.5, 66.9, 77.4, 85.4, 113.7, 115.7, 122.6, 126.0, 133.2, 138.0, 155.8, 157.6, 159.9, 162.0, 169.0, 170.4。
【０４５７】
９−メチル−２−モルホリノ−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１７０）
【０４５８】
【化１８７】
2015187110.tif 000188
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 3.65 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.74 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 6.86 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 13.98 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.1, 58.4, 64.8, 97.5, 113.6, 124.6, 132.6, 136.0, 148.1, 160.5, 161.7, 171.3。
【０４５９】
２−（３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１７１）
【０４６０】
【化１８８】
2015187110.tif 000189
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.45 (s, 3H), 3.03 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.08 (m, 2H), 4.73 (m, 2H), 6.83 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.06 - 7.18 (m, 4H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 13.73 (br s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 28.5, 46.1, 52.4, 86.4, 113.0, 125.5, 126.1, 126.2, 126.6, 128.4, 132.9, 133.7, 134.4, 136.8, 148.1, 159.9, 163.2, 165.3。
【０４６１】
２−（４−（２−クロロフェニル）ピペラジン−１−イル）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１７２）
【０４６２】
【化１８９】
2015187110.tif 000190
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 3.19 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.96 (m, 4H), 6.87 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 13.74 (br s, 1H)。
【０４６３】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−８−（４−メチルピペラジン−１−イル）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１７３）
【０４６４】
【化１９０】
2015187110.tif 000191
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.34 (s, 3H), 2.53 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.54 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 6.34 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 2.8, 8.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.86 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 11.5 (s, 1H), 14.18 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 46.1, 46.4, 54.4, 83.6, 98.8, 105.1, 120.0, 121.9, 124.0, 128.8, 129.9, 134.4, 139.9, 151.4, 155.6, 158.2, 161.8, 170.2。
【０４６５】
【化１９１】
2015187110.tif 000192
【０４６６】
Ｈ１の合成に関する一般手順
２−アミノ−３−ピコリン（１．０mmol）をジエチルエトキシメチレンマロナート（１．０mmol）に溶解した。溶液を１７０℃に１２時間加熱した。冷却後、暗色の残留物をＥｔＯＡｃ（１０mL）で粉砕した。残留した淡い固体を濾過により回収し、ＥｔＯＡｃで洗浄して、Ｈ１を得た。
【０４６７】
Ｈ２の合成に関する一般手順
Ｈ２Ｏ（３．０mL）及びＥｔＯＨ（１．０mL）中のＨ１（０．４３mmol）の撹拌した溶液に、ＬｉＯＨ（０．８６mmol）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、１N ＨＣｌ（１０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ２を得た。
【０４６８】
Ｈ３の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（２．０mL）中のＨ１（０．３８mmol）の撹拌した溶液に、ＬｉＡｌＨ４（０．５７mmol）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、１N ＮａＯＨ（２mL）を滴下した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ３を得た。
【０４６９】
Ｈ４の合成に関する一般手順
ＣＨ２Ｃｌ２（１．０mL）中のＨ３（９５μmol）の撹拌した溶液に、ＮａＨＣＯ３（２８５μmol）及びDess-Martinペルヨージナン（１１４μmol）を０℃で加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾別し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ４を得た。
【０４７０】
Ｈ５の合成に関する一般手順
キシレン（１０．０mL）中の２−アミノ−ピリジン（１０．６mmol）の撹拌した溶液に、ジエチルエトキシメチレンマロナート（２１．２mmol）を加えた。混合物を１４０℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、残留した淡い固体を濾過により回収し、ジエチルエーテルで洗浄して、Ｈ５を得た。
【０４７１】
Ｈ６の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（５．０mL）中のＨ５（０．４２mmol）の撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．６３mmol）及びｐ−トルエンスルホニルクロリド（０．４６mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応が完了した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０mL）で希釈し、１N ＨＣｌ（５０ml）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ml）及びブライン（５０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ６を得た。
【０４７２】
Ｈ７の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（１．２mL）中のＨ６（０．２５mmol）の撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．５mmol）及びアミン（０．２６mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応が完了した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、１N ＨＣｌ（１０ml）、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ml）及びブライン（１０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ７を得た。
【０４７３】
Ｈ８の合成に関する一般手順
エチレングリコール（３．０mL）中のＨ７（０．２７mmol）の撹拌した溶液に、メチルアミン（ＴＨＦ １．３mL中２N溶液）を加えた。混合物を１５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１０mL）を用いて加え、残留した淡い固体を濾過により回収し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ８を得た。
【０４７４】
Ｈ９の合成に関する一般手順
ＭｅＯＨ（８．０mL）中のＨ５（２．１３mmol）の撹拌した溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１１３mg）を加えた。混合物をＨ２下、室温で３時間撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を濾別し、真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃとヘキサン（１：４）で再結晶化して、Ｈ９を得た。
【０４７５】
Ｈ１０の合成に関する一般手順
ＣＨ２Ｃｌ２（５．０mL）中のＨ９（０．４２mmol）の撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．６３mmol）及びｐ−トルエンスルホニルクロリド（０．４６mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応が完了した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４０mL）で希釈し、１N ＨＣｌ（５０ml）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ml）及びブライン（５０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：２）により精製して、Ｈ１０を得た。
【０４７６】
Ｈ１１の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（２．０mL）中のＨ１０（０．２５mmol）の撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．５mmol）及びアミン（０．３７mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応が完了した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、１N ＨＣｌ（１０ml）、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ml）及びブライン（１０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して、Ｈ１１を得た。
【０４７７】
Ｈ１２の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（２mL）中のＧ３（１．０mmol）、アミン（１．１mmol）及びトリエチルアミン（２．０mmol）の溶液を、１時間還流し、室温に冷ました。溶媒を蒸発乾固し、これをＣＨ２Ｃｌ２（２０mL×３）で抽出した。
【０４７８】
反応混合物を５％重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機層をで乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過して、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ１２を得た。
【０４７９】
Ｈ１３の合成に関する一般手順
ＣＨ２Ｃｌ２（５mL）中のＧ３（１．１mmol）、アミン（１．０mmol）の溶液に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリム（２．０mmol）及び氷酢酸（２．０mmol）を室温で２０時間加えた。反応混合物に飽和塩化アンモニウム溶液を加え、１０分間撹拌した。反応混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２（２０mL）で抽出した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過して、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｈ１３を得た。
【０４８０】
エチル ９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１７４）
【０４８１】
【化１９２】
2015187110.tif 000193
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 2.62 (s, 3H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.05 (s, 1H), 9.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) 14.6, 18.2, 61.2, 105.3, 116.8, 127.0, 135.9, 138.2, 155.3, 158.4, 165.0, 189.1。
【０４８２】
９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１７５）
【０４８３】
【化１９３】
2015187110.tif 000194
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.56 (s, 3H), 7.12 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 9.21 (d, J = 7.2 Hz), 14.13 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ18.3, 110.9, 117.1, 128.1, 137.6, 141.1, 155.0, 157.1, 158.3, 171.3。
【０４８４】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１７６）
【０４８５】
【化１９４】
2015187110.tif 000195
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.51 (s, 3H), 3.27 (brs, 1H), 4.66 (s, 2H), 7.01 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.87 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) 18.2, 44.1, 111.2, 117.9, 127.1, 135.7, 139.8, 153.9, 155.6, 158.2。
【０４８６】
９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（１７７）
【０４８７】
【化１９５】
2015187110.tif 000196
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.63 (s, 3H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.85 (s, 1H), 9.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.33 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.2, 110.9, 117.5, 126.7, 136.5, 139.5, 153.1, 155.6, 158.1, 188.5。
【０４８８】
エチル ２−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１７８）
【０４８９】
【化１９６】
2015187110.tif 000197
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.42 (t, J = 7.2 Hz 3H), 4.45 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.13 (ddd, J = 1.2, 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.82 - 7.86 (m, 1H), 9.00 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 13.64 (brs, 1H, NH)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 62.3, 87.1, 115.3, 125.1, 128.7, 140.3, 148.4, 152.6, 155.5, 171.7。
【０４９０】
２−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（１７９）
【０４９１】
【化１９７】
2015187110.tif 000198
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.70 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.37, (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.70 (brs, 1H), 14.31 (s, 1H)。
【０４９２】
エチル ４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８０）
【０４９３】
【化１９８】
2015187110.tif 000199
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.44 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.93 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.29 - 7.36 (m, 3H), 7.65 - 7.68 (m, 3H), 8.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.39 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.4, 61.0, 85.5, 113.6, 122.5, 124.2, 124.5, 128.4, 128.6, 138.4, 139.0, 151.6, 155.9, 159.5, 169.6。
【０４９４】
エチル ２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８１）
【０４９５】
【化１９９】
2015187110.tif 000200
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.38 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 4.37 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.56 - 6.58 (m, 1H), 6.92 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H0, 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1h0, 7.12 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.22 (brs, 1H)。
【０４９６】
エチル ２−（２−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８２）
【０４９７】
【化２００】
2015187110.tif 000201
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.45 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.90 (dd, J = 7.2, 8.0 Hz, 1H), 7.05 - 7.08 (m, 2H), 7.13 (dd, J = 7.6, 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 7.6, 8.0 Hz, 1H), 9.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.52 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) 14.4, 61.3, 114.7, 120.1, 120.5, 122.9, 124.4, 127.0, 127.1, 129.0, 140.8, 149.3, 151.1, 158.6, 169.5。
【０４９８】
エチル ２−（３−ニトロフェニルアミノ）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８３）
【０４９９】
【化２０１】
2015187110.tif 000202
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.46 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 4.45 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.05 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.0, 8.4 Hz, 2H), 7.77 - 7.82 (m, 2H), 7.93 - 7.96 (m, 1H), 8.97 - 8.98 (m, 1H), 9.04 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 11.74 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) 14.4, 61.3, 86.1 ,114.5, 116.9, 118.4, 124.7, 127.4, 128.6, 129.2, 139.8, 148.5, 151.5, 155.7, 159.5, 169.6。
【０５００】
エチル ４−オキソ−２−フェノキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８４）
【０５０１】
【化２０２】
2015187110.tif 000203
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.42 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.15 - 7.17 (m, 3H), 7.24 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.41 (m, 3H), 7.77 (ddd, J = 1.6, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 9.10 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H);)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 61.3, 115.7, 121.8, 125.3, 128.5, 129.2, 128.7, 150.3, 152.5, 156.7, 164.1, 165.0。
【０５０２】
エチル ２−（３−フルオロフェノキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８５）
【０５０３】
【化２０３】
2015187110.tif 000204
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 4.40 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.91 - 6.98 m, 3H), 7.19 (ddd, J = 1.2, 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.32 - 7.36 (m, 1H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 - 7.82 (m, 1H), 9.10 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 61.4, 94.6, 109.8, 110.0, 112.2, 112.4, 115.9, 117.5, 117.6, 125.3, 128.5, 129.8, 129.9, 139.9, 150.3, 153.3, 156.6, 161.6, 163.8, 164.0, 164.5。
【０５０４】
エチル ４−オキソ−２−（３−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８６）
【０５０５】
【化２０４】
2015187110.tif 000205
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.43 (q, J = 7.0 Hz 2H), 7.21 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.52 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 9.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。
【０５０６】
メチル ２−クロロ−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８７）
【０５０７】
【化２０５】
2015187110.tif 000206
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.56 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 7.19 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.75 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.1, 52.8, 108.0, 116.7, 126.1, 134.9, 138.3, 149.1, 155.1, 155.2, 164.2。
【０５０８】
メチル ２−（３−クロロフェニルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８８）
【０５０９】
【化２０６】
2015187110.tif 000207
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.51 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 6.94 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.52 (br s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 52.1, 85.3, 113.7, 119.6, 121.9, 123.5, 126.4, 129.4, 133.2, 134.1, 138.4, 139.9, 151.0, 156.2, 158.6, 170.1。
【０５１０】
メチル ２−（３−クロロベンジルアミノ）−９−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１８９）
【０５１１】
【化２０７】
2015187110.tif 000208
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 4.77 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.80 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.20-7.24 (m, 3H), 7.34 (s, 3H), 7.50 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.69 (br s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.8, 44.4, 51.8, 84.6, 112.6, 125.5, 126.4, 127.2, 127.7, 129.7, 132.7, 134.3 ,137.6, 141.1, 151.3, 156.4, 160.8, 170.1。
【０５１２】
エチル ２−ヒドロキシ−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９０）
【０５１３】
【化２０８】
2015187110.tif 000209
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.82 - 1.93 (m, 4H), 2.86 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.4, 18.9, 21.9, 32.2, 43.0, 62.4, 90.9, 159.8, 165.1, 171.7, 173.5。
【０５１４】
エチル ４−オキソ−２−（トシルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９１）
【０５１５】
【化２０９】
2015187110.tif 000210
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.79 - 1.91 (m, 4H), 2.41 (s, 3H), 2.79 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.25 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 18.8, 21.6, 21.9, 31.8, 43.6, 61.9, 104.2, 129.1, 129.7, 134.2, 145.8, 159.4, 160.8, 162.0, 162.2。
【０５１６】
エチル ４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９２）
【０５１７】
【化２１０】
2015187110.tif 000211
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.80 - 1.92 (m, 4H), 2.80 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.36 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.08 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 11.2 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.6, 19.2, 22.2, 32.2, 42.4, 61.0, 88.4, 122.9, 124.4, 128.8, 138.4, 160.5, 160.8, 162.2, 169.8。
【０５１８】
エチル ２−（３−クロロフェニルアミノ）−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９３）
【０５１９】
【化２１１】
2015187110.tif 000212
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.76 - 1.88 (m, 4H), 2.76 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.29 (q, J 7.06 (dd, J = 7.2 Hz, 2H),  J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.3, 18.6, 22.1, 32.1, 42.6, 61.1, 81.4, 111.2, 111.7, 113.0, 128.4, 140.4, 149.6, 158.7, 161.12, 163.2, 170.4
【０５２０】
エチル ４−オキソ−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９４）
【０５２１】
【化２１２】
2015187110.tif 000213
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.88 - 1.97 (m, 4H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.41 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 11.2 (s, 1H);
【０５２２】
エチル ２−（２−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９５）
【０５２３】
【化２１３】
2015187110.tif 000214
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.81 - 1.94 (m, 4H), 2.65 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.65 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.18 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.85 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.06 - 7.12 (m, 2H), 9.98 (s, 1H), 11.3 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.6, 18.8, 21.9, 31.6, 42.6, 61.3, 88.4, 120.2, 120.7, 124.5, 127.1, 127.2, 149.1, 159.4, 159.5, 163.0, 169.6 。
【０５２４】
エチル ２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９６）
【０５２５】
【化２１４】
2015187110.tif 000215
1H NMR (400 MHz, CDCl3+MeOD-d4) δ 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.71 - 1.81 (m, 4H), 2.72 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.23 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + MeOD-d4) δ 14.2, 18.8, 21.9, 31.8, 42.4, 60.9, 79.8, 109.8, 111.6, 114.0, 129.4, 139.4, 149.7, 159.3, 160.2, 163.1, 169.6
【０５２６】
エチル ２−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキシラート（１９７）
【０５２７】
【化２１５】
2015187110.tif 000216
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.67 - 1.80 (m, 4H), 2.65 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.65 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.18 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 9.29 (s, 1H), 10.7 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.9, 18.9, 21.9, 32.1,  42.3, 60.4, 87.2, 115.7, 125.0, 130.1, 154.9, 159.4, 160.6, 163.3, 169.6。
【０５２８】
２−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−９−メトキシ−Ｎ−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボキサミド（１９８）
【０５２９】
【化２１６】
2015187110.tif 000217
融点＝２１８℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.97 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 4.41 (s, 3H), 6.89 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.40 - 7.44 (m, 1H), 8.46 - 8.51 (m, 2H), 8.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 12.98 (s, 1H);
【０５３０】
（Ｅ）−２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（シクロヘキシルイミノ）メチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１９９）
【０５３１】
【化２１７】
2015187110.tif 000218
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 - 1.37 (m, 3H), 1.41 - 1.50 (m, 2H), 1.56 - 1.59 (m, 1H), 1.73 - 1.76 (m, 4H), 3.16 - 3.22 (m, 1H), 6.85 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 6.94 (ddd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.58 (m, 1H), 7.90 - 7.91 (m, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.85 (dd, J = 0.8, 1.2 Hz, 1H), 13.40 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.4, 25.6, 34.9, 68.4, 91.6, 113.4, 119.2, 121.2, 123.0, 124.7, 127.6, 129.5, 134.2, 137.6, 140.8, 150.6, 156.3, 157.0, 158.3。
【０５３２】
（Ｅ）−２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（３−クロロフェニルイミノ）メチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２００）
【０５３３】
【化２１８】
2015187110.tif 000219
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.01 (dd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 2.0, 4.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.52 (ddd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.17 - 7.76 (m, 1H), 8.02 - 8.04 (m, 1H), 8.98 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H), 9.17 (s, 1H), 12.94 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 92.6, 114.0, 119.5, 119.8, 121.8, 123.9, 125.0, 125.7, 128.0, 129.7, 130.2, 134.4, 134.8, 138.7, 140.1, 151.3, 151.8, 157.0, 158.0, 158.9。
【０５３４】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（シクロペンチルアミノ）メチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０１）
【０５３５】
【化２１９】
2015187110.tif 000220
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.54 - 1.57 (m, 2H), 1.74 - 1.83 (m, 4H), 2.05 - 2.08 (m, 2H), 3.23 - 3.24 (m, 1H), 4.19 (s, 2H), 6.93 - 6.98 (m, 2H), 7.11 - 7.15 (m, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.61 - 7.65 (m, 1H), 7.74 - 7.75 (m, 1H), 8.73 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０５３６】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（シクロヘキシルアミノ）メチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０２）
【０５３７】
【化２２０】
2015187110.tif 000221
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.20 - 1.35 (m, 4H), 1.66 - 1.72 (m, 2H), 1.86 - 1.89 (m, 2H), 2.23 - 2.39 (m, 2H), 3.12 - 3.18 (m, 1H), 6.93 (ddd, J = 1.2, 6.8, 7.2 Hz, 1H), 6.99 (ddd, J = 0.8, 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.52 - 7.57 (m, 1H), 7.61 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.84 - 7.85 (m, 1H), 8.76 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 9.77 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.6, 25.0, 41.2, 57.9, 88.9, 114.6, 119.2, 121.1, 122.8, 124.6, 127.3, 129.4, 133.7, 137.3, 140.8, 149.6, 157.2, 158.8。
【０５３８】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（シクロヘプチルアミノ）メチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０３）
【０５３９】
【化２２１】
2015187110.tif 000222
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.40 - 1.59 (m, 6H), 1.72 - 1.81 (m, 4H), 2.18 - 2.23 (m, 2H), 3.07 - 3.12 (m, 1H), 4.05 (m, 2H), 6.82 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.49 (m, 2H), 7.78 - 7.80 (m, 1H), 8.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.00 (brs, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 23.8, 32.3, 41.5, 59.7, 89.7, 114.2, 118.7, 120.6, 122.4, 124.4, 127.2, 129.3, 133.7, 136.8, 140.9, 149.4, 157.2, 158.2。
【０５４０】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（イソプロピルアミノ）メチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０４）
【０５４１】
【化２２２】
2015187110.tif 000223
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (s, 3H), 1.26 (s, 3H), 2.30 - 3.06 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 6.87 (dd, J = 6.4, 7.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.83 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 22.1, 41.7, 48.9, 91.5, 113.7, 118.2, 120.1, 122.2, 124.6, 127.5, 129.5, 134.1, 136.2, 141.2, 149.5, 157.4, 157.8。
【０５４２】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（（シクロヘキシルアミノ）メチル）−８−（４−メチルピペラジン−１−イル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０５）
【０５４３】
【化２２３】
2015187110.tif 000224
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.20 - 1.34 (m, 3H), 1.71 - 1.91 (m, 3H), 1.92 - 2.04 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.23 - 2.36 (m, 6H), 3.04 - 3.10 (m, 5H), 4.01 (s, 2H), 5.87 (s, 1H), 6.55 (s, J = 8.0 hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.6 Hz,1H), 7.84 (s, 1H), 8.46 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 9.59 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.9, 25.3, 30.2, 41.2, 46.1, 46.3, 54.2, 58.4, 86.2, 98.9, 106.5, 119.3, 121.0, 122.3, 128.3, 129.5, 133.9, 141.9, 150.8, 154.8, 157.7, 158.9。
【０５４４】
【化２２４】
2015187110.tif 000225
【０５４５】
Ｊ１の合成に関する一般手順
メタノール（０．５mL）中のアルデヒド（０．９mmol）の溶液に、ＮａＢＨ４（１．３５mmol）を室温で加えた。１時間撹拌した後、反応混合物を塩化メチレン（１０mL）で希釈し、ブライン（１０ml）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、ヘキサン類と酢酸エチルの混合物からの再結晶化により精製して、Ｊ１を得た。
【０５４６】
Ｊ２の合成に関する一般手順
ＴＨＦ（１．０mL）中のエステル（０．０６mmol）の撹拌した溶液に、ＬｉＡｌＨ４（０．０９mmol）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応が完了した後、Ｈ２Ｏ（０．１mL）を滴下した。反応混合物を濾別し、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、Ｊ２を得た。
【０５４７】
Ｊ３の合成に関する一般手順
ＣＨ２Ｃｌ２（０．６mL）中のＪ１又はＪ２（０．１９mmol）の撹拌した溶液に、トリエチルアミン（０．３８mmol）及び塩化ベンゾイル（０．２８mmol）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応が完了した後、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１０mL）で希釈し、ブライン（１０ml）で洗浄した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、Ｊ３を得た。
【０５４８】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０６）
【０５４９】
【化２２５】
2015187110.tif 000226
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 4.80 (s, 2H), 6.87 - 6.90 (m, 1H), 8.03 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 7.6, 8.0 Hz, 2H), 7.53 - 7.58 (m, 3H), 8.36 (brs, 1H), 8.82 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 56.0, 94.80, 94.85, 113.8, 121.1, 121.2, 123.2, 123.3, 124.5, 127.5, 128.6, 136.4, 138.9, 139.0, 149.7, 157.1, 158.0, 158.1。
【０５５０】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド−［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０７）
【０５５１】
【化２２６】
2015187110.tif 000227
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.95 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.93 (t, J =6.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.38 (t, J =4.4 Hz, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.63 (t, J =6.8 Hz, 1H), 7.81 (t, J =1.6 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.92 (d, J =7.2 Hz, 1H),
【０５５２】
２−（３−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−カルボアルデヒド（２０８）
【０５５３】
【化２２７】
2015187110.tif 000228
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.94 (s, 2H), 6.94 (t, J =6.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J =8.8 Hz, 2H), 7.63 (t, J =7.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J =9.2 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.93 (d, J =7.2 Hz, 1H)。
【０５５４】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２０９）
【０５５５】
【化２２８】
2015187110.tif 000229
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.99 (s, 2H), 6.99 (d, J =6.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J =7.6 Hz, 2H), 7.69 (brs, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.96 (d, J =7.6 Hz, 1H)。
【０５５６】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（３−（トリフルオロメトキシ）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１０）
【０５５７】
【化２２９】
2015187110.tif 000230
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.95 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.84 (t, J =6.8 Hz, 1H), 6.92 (d, J =6.8 Hz, 1H), 7.30-7.34 (m, 3H), 7.59 (t, J =7.2 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.87 (d, J =6.4 Hz, 1H),
【０５５８】
メチル ３−（３−（ヒドロキシメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−２−イルアミノ）ベンゾアート（２１１）
【０５５９】
【化２３０】
2015187110.tif 000231
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (s, 3H), 4.99 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.96 (t, J =7.2Hz, 1H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.63 (t, J =7.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J =7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J =8.0 Hz, 1H), 8.21(s, 1H), 8.25 (brs, 1H), 8.96 (d, J =7.6 Hz, 1H)。
【０５６０】
３−（３−（ヒドロキシメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−２−イルアミノ）安息香酸（２１２）
【０５６１】
【化２３１】
2015187110.tif 000232
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.73 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 7.19 (t, J =7.2Hz, 1H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.45 (d, J =7.6 Hz, 1H), 7.86 (t, J =8.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J =8.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.89 (d, J =6.8 Hz, 1H)。
【０５６２】
２−（４−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１３）
【０５６３】
【化２３２】
2015187110.tif 000233
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.05 (d, J =7.2 Hz, 2H), 7.37 (d, J =8.8Hz, 2H), 7.44 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J =6.8 Hz, 2H), 7.88 (t, J =8.8 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.88 (d, J =6.4 Hz, 1H)。
【０５６４】
２−（２−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１４）
【０５６５】
【化２３３】
2015187110.tif 000234
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.01 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 6.97-7.01 (m, 3H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.42 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.66 (t, J =7.2 Hz, 1H), 8.41 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.99 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。
【０５６６】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１５）
【０５６７】
【化２３４】
2015187110.tif 000235
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 4.81 (s, 2H), 6.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.42 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 6.8, 8.8 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０５６８】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１６）
【０５６９】
【化２３５】
2015187110.tif 000236
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.83 (s, 2H), 6.77 (dd, J = 2.0 , 8.8 Hz, 2H), 7.04 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.67 (m, 2H), 7.67 - 7.73 (m, 1H), 8.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。
【０５７０】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（２−ヒドロキシフェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１７）
【０５７１】
【化２３６】
2015187110.tif 000237
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 3.71 (s, 1H), 4.86 (s, 2H), 6.88 (ddd, J = 1.6, 7.6, 8.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 6.98 (ddd, J = 1.6, 7.2, 8.0 Hz, 1H(, 7.05 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz,. 1H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.69 - 7.73 (m, 2H), 8.91 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H)。
【０５７２】
２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１８）
【０５７３】
【化２３７】
2015187110.tif 000238
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.03 (d, J =6.0 Hz, 2H), 6.96 (t, J =7.2 Hz, 1H), 7.16 (t, J =7.6 Hz, 2H), 7.2 (s, 1H), 7.39 (d, J =8.0 Hz, 2H), 7.56 (t, J =7.6 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 8.96 (d, J =7.2 Hz, 1H)。
【０５７４】
２−（３，５−ジクロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２１９）
【０５７５】
【化２３８】
2015187110.tif 000239
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.97 (d, J =6.0 Hz, 2H), 7.01-7.04 (m, 2H), 7.50 (t, J =6.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.71 (t, J =8.4 Hz, 2H), 8.24 (s, 1H), 8.98 (d, J =7.2 Hz, 1H)。
【０５７６】
２−（３，５−ジフルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２０）
【０５７７】
【化２３９】
2015187110.tif 000240
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.99 (d, J =6.0 Hz, 2H), 6.52 (t, J =8.8 Hz, 1H), 7.05 (t, J =5.6 Hz, 2H), 7.29 (d, J =2.0 Hz, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.72 (t, J =7.6 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.99 (d, J =6.4 Hz, 1H)。
【０５７８】
２−（２，６−ジメチルフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２１）
【０５７９】
【化２４０】
2015187110.tif 000241
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.23 (s, 6H), 5.02 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.92 (t, J =6.8 Hz 1H), 7.12 (s, 3H), 7.20 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.53 (t, J =6.8 Hz, 1H), 8.94 (d, J =6.4 Hz, 1H)。
【０５８０】
３−（ヒドロキシメチル）−２−フェノキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２２）
【０５８１】
【化２４１】
2015187110.tif 000242
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.31 (brs, 1H), 4.86 (s, 2H), 7.03 - 7.09 (m, 3H), 7.13 - 7.18 (m, 1H), 7.28 - 7.34 (m, 3H), 7.58 - 7.62 (m, 1H), 8.94 - 8.96 (m, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 56.0, 99.7, 115.2, 121.7, 125.1, 125.3, 127.4, 129.3, 136.8, 149.2, 152.8, 159.6, 164.0。
【０５８２】
２−（３−フルオロフェノキシ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２３）
【０５８３】
【化２４２】
2015187110.tif 000243
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 (brs, 1H), 4.78 (s, 2H), 6.78 - 6.85 (m, 3H), 7.02 (ddd, J = 1.2, 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.23 (m, 1H), 7.25 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.57 -7.62 (m, 1H), 8.89 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 55.3, 99.7, 109.4, 109.6, 111.7, 111.9, 115.2, 117.2, 117.3, 125.0, 127.3, 129.7, 129.8, 137.0, 149.0, 153.5, 153.6, 159.4, 161.4, 163.6, 163.8。
【０５８４】
２−（３−クロロフェノキシ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２４）
【０５８５】
【化２４３】
2015187110.tif 000244
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.51 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.79 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.95 - 6.98 (m, 1H), 7.04 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.08 - 7.10 (m, 1H), 7.20 (dd, J = 8.4, 8.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 - 7.63 (m, 1H), 8.91 9dd, J = 0.4, 7.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 53.3, 55.4, 99.7, 115.3, 120.1, 122.2, 125.1, 127.4, 129.8, 134.3, 137.0, 153.2, 159.2, 163.6。
【０５８６】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（フェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２５）
【０５８７】
【化２４４】
2015187110.tif 000245
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.85 - 1.93 (m, 4H), 2.15 (s, 2H), 2.84 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 11.2 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.6, 19.2, 22.2, 32.2, 42.4, 88.4, 122.9, 124.4, 128.8, 138.4, 160.5, 160.8, 162.2。
【０５８８】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２６）
【０５８９】
【化２４５】
2015187110.tif 000246
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.23 - 1.34 (m, 2H), 1.38 - 1.51 (m, 4H), 2.35 - 2.41 (m, 2H), 3.98 - 4.05 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 7.17 - 7.22 (m, 2H), 7.31 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 15.1, 23.1, 31.4, 42.4, 59.2, 61.4, 65.7, 122.8, 123.9, 125.6, 131.6, 134.3, 139.4, 157.9, 164.3
【０５９０】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２７）
【０５９１】
【化２４６】
2015187110.tif 000247
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.19 - 1.38 (m, 2H), 1.48 - 1.54 (m, 2H), 1.70 - 1.73 (m, 2H), 2.38 (t, J = 12.8 Hz, 1H), 3.98 - 4.06 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 - 7.59 (m, 2H), 7.83 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ14.3, 22.2, 30.5, 41.5, 58.4, 77.9, 119.8, 121.2, 127.0, 129.8, 130.1, (d, J = 26.8 due to CF3), 138.2, 146.1, 157.1, 163.6, 169.1。
【０５９２】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（２−ヒドロキシフェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２８）
【０５９３】
【化２４７】
2015187110.tif 000248
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.78 - 1.94 (m, 4H), 2.13 - 2.23 (m,, 2H), 2.61 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.98 - 4.05 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 6.81 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.98 - 7.12 (m, 2H), 10.11(s, 1H), 11.3 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.3, 21.4, 31.3, 42.1, 61.1, 87.7, 121.2, 126.4, 128.3, 128.6, 151.1, 161.3, 162.5, 163.7, 169.4。
【０５９４】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２２９）
【０５９５】
【化２４８】
2015187110.tif 000249
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.41 - 1.61 (m, 4H), 1.62 - 1.77 (m, 2H), 2.72 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.78 - 3.95 (m, 2H), 4.17 (s,2H), 6.43 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 2.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 21.8, 31.9, 42.4, 60.1, 79.8, 109.8, 111.6, 114.0, 129.4, 139.4,149.7, 159.3, 160.2, 163.1。
【０５９６】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３０）
【０５９７】
【化２４９】
2015187110.tif 000250
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.21 - 1.45 (m, 4H), 1.63 - 1.71 (m, 2H), 2.34 (t, J = 12.8 Hz, 1H), 3.98 - 4.05 (m, 2H), 4.19 (s, 2H), 6.75 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 14.9, 21.9, 32.1, 42.3, 60.4, 87.2, 115.7, 125.0, 130.1, 154.9, 159.4, 160.6, 163.3。
【０５９８】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３１）
【０５９９】
【化２５０】
2015187110.tif 000251
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 2.97 (brs, 1H), 4.93 (s, 2H), 6.89 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.73 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。
【０６００】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３２）
【０６０１】
【化２５１】
2015187110.tif 000252
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.06 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 4.92 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６０２】
２−（（３−クロロフェニル）（メチル）アミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３３）
【０６０３】
【化２５２】
2015187110.tif 000253
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.51 (s, 3H), 4.09 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.95 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.04 - 7.06 (m, 2H), 7.20 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６０４】
２−（（３−クロロフェニル）（メチル）アミノ）−３−（メトキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３４）
【０６０５】
【化２５３】
2015187110.tif 000254
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.49 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 6.91 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６０６】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−２−（３−（トリフルオロメトキシ）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３５）
【０６０７】
【化２５４】
2015187110.tif 000255
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 3.15 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.67 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25-7.27 (m, 1H), 7.32 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.72 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。
【０６０８】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（３−ヒドロキシフェニルアミノ）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３６）
【０６０９】
【化２５５】
2015187110.tif 000256
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.44 (s, 3H), 4.75 (s, 2H), 6.45 (dd, J = 2.4, 8.0 Hz, 1h), 6.84 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 8.0, 8.4 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 2.0, 2.4 Hz, 1H), 7.17 (dd, H = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 6.8 Hzm 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６１０】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（４−ヒドロキシフェニルアミノ）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３７）
【０６１１】
【化２５６】
2015187110.tif 000257
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 4.94 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.81 - 6.84 (m, 3H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.84 (s, 1H), 8.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６１２】
２−（４−tert−ブチルフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３８）
【０６１３】
【化２５７】
2015187110.tif 000258
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.34 (s, 9H), 2.40 (s, 3H), 3.07 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.61 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.21 (br s, 1H), 8.69 (d, J = 7.2 Hz, H)。
【０６１４】
２−（３−クロロベンジルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２３９）
【０６１５】
【化２５８】
2015187110.tif 000259
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.31 (s, 3H), 3.02 (s, 1H), 4.68 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.70 (s, 2H), 6.70 (dd, J = 5.6, 6.0 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.11 - 7.20 (m, 3H), 7.31 (s, 1H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 17.7, 44.2, 44.3, 55.8, 93.1, 93.2, 112.6, 125.4, 125.5, 126.9, 127.5, 129.5, 132.6, 134.0, 134.9, 141.7, 149.45, 149.47, 157.4, 159.10, 159.16。
【０６１６】
３−（ヒドロキシメチル）−２−（イソブチルアミノ）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４０）
【０６１７】
【化２５９】
2015187110.tif 000260
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.96 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.88 - 1.95 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 3.13 (brs, 1H), 3.32 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.78 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.08 (brs, 1H), 6.72 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 20.5, 28.9, 48.6, 57.1, 92.5, 112.1, 126.0, 132.5, 134.6, 149.6, 157.1, 159.5。
【０６１８】
２−（ジエチルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４１）
【０６１９】
【化２６０】
2015187110.tif 000261
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.22 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 2.35 (s, 3H), 3.41 (s, 1H), 3.63 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 4.44 (s, 2H), 6.65 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H) 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.9, 17.7, 44.0, 67.0, 92.2, 111.7, 125.8, 132.5, 134.4, 148.1, 160.7, 160.8。
【０６２０】
２−（シクロヘキシルメチルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４２）
【０６２１】
【化２６１】
2015187110.tif 000262
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.95 - 0.98 (m, 2H), 1.18 - 1.23 (m, 3H), 1.58 - 1.79 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 3.27 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.85 (brs, 1H), 4.74 (m, 2H), 6.21 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 26.2, 26.7, 31.3, 38.4, 47.5, 56.9, 92.8, 112.0, 126.0, 132.3, 134.5, 149.4, 156.9, 159.5。
【０６２２】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−２−モルホリノ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４３）
【０６２３】
【化２６２】
2015187110.tif 000263
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 (brs, 1H), 2.43 (s, 3H), 3.62 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 4.62 (s, 2H), 6.85 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 49.7, 58.9, 67.1, 95.5, 113.3, 125.2, 133.4, 135.0, 148.2, 160.6, 161.7。
【０６２４】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メチル−２−モルホリノ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンヒドロクロリド（２４４）
【０６２５】
【化２６３】
2015187110.tif 000264
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.42 (s, 1H), 3.62 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 4.62 (s, 2H), 6.85 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 49.7, 58.9, 67.1, 98.5, 113.3, 125.2, 133.4, 135.0, 148.2, 160.6, 161.7。
【０６２６】
７−ブロモ−２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４５）
【０６２７】
【化２６４】
2015187110.tif 000265
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.78 (s, 2H), 5.37 (s, 1H), 7.12 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz 1H), 7.42 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz 1H), 7.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47(s, 1H), 8.71 (s, 1H);
【０６２８】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−７−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４６）
【０６２９】
【化２６５】
2015187110.tif 000266
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.86 (s, 3H), 4.70 (s, 2H), 5.22 (s, 1H), 7.02 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.28 - 7.32 (m, 1H), 7.41 (dd, J = 1.2 Hz, 9.6 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.68 (m, 1H), 7.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.69 (s, 1H)
【０６３０】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４７）
【０６３１】
【化２６６】
2015187110.tif 000267
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.92 (s, 3H), 4.62 (s, 2H), 5.07 (s, 1H), 6.71 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 2.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) 54.8, 57.3, 93.8, 101.5, 109.3, 120.0, 120.9, 122.5, 129.5, 130.7, 133.4, 142.2, 151.9, 156.9, 157.8, 166.2。
【０６３２】
８−クロロ−２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４８）
【０６３３】
【化２６７】
2015187110.tif 000268
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.68 (s, 2H), 5.14 (brs, 1H), 7.03 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54, (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 8.0 Hz, 1H)。
【０６３４】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−（メチルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２４９）
【０６３５】
【化２６８】
2015187110.tif 000269
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.81 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 6.02 (s, 1H), 6.32 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 9.93 (s, 1H)。
【０６３６】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−８−（ジエチルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５０）
【０６３７】
【化２６９】
2015187110.tif 000270
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 3.44 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 3.99 (s, 2H), 4.82 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 2.1Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.06 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.71 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 12.7, 20.0, 44.7, 92.8, 97.1, 104.0, 118.9, 120.7, 121.9, 128.5, 129.5, 134.1, 142.8, 150.6, 151.9, 158.3, 159.2。
【０６３８】
３−（ヒドロキシメチル）−８−モルホリノ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５１）
【０６３９】
【化２７０】
2015187110.tif 000271
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.43 (s, 4H), 3.67 (s, 4H), 4.59 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.05, (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 2.8, 8.4 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.38 (s, 1H), 8.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 46.5, 55.1, 66.3, 91.5, 99.1, 105.4, 121.3, 122.6, 128.5, 129.1, 140.9, 151.4, 155.0, 156.7, 158.5。
【０６４０】
２−（３−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−モルホリノ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５２）
【０６４１】
【化２７１】
2015187110.tif 000272
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.46 (s, 4H), 3.68 (s, 4H), 4.59 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.06, (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 2.8, 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 8.52(s, 1H), 8.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 45.8, 54.2, 65.6, 91.3, 98.4, 105.0, 108.0 (d, J = 20 Hz, due to F), 116.0, 128.0, 129.8 (d, J = 10 Hz, due to F), 142.1 (d, J = 11 Hz, due to F), 150.6, 154.4, 156.1, 157.4, 161.0, 163.3。
【０６４２】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−モルホリノ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５３）
【０６４３】
【化２７２】
2015187110.tif 000273
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.45 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 3.69 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 4.58 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.01 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 2.8, 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.48(s, 1H), 8.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 45.4, 53.6, 65.7, 84.7, 98.6, 105.3, 117.8, 118.7, 119.8, 127.1, 130.2, 129.2, 141.8, 149.7, 153.0, 155.3, 157.4；LC-MS (ESI, m/z): 386 [M+H]+。
【０６４４】
３−（ヒドロキシメチル）−８−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５４）
【０６４５】
【化２７３】
2015187110.tif 000274
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.34 (s, 3H), 2.52 (t, J =5.2 Hz, 4H), 3.43 (t, J =5.2 Hz, 4H), 4.88 (s, 2H), 5.28 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.55 (d, J =8.0Hz, 1H), 7.05 (t, J =7.2Hz, 1H), 7.33 (t, J =7.6 Hz, 2H), 7.60 (d, J =7.6 Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 8.64 (d, J =8.0Hz, 1H)。
【０６４６】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−（４−メチルピペラジン−１−イル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５５）
【０６４７】
【化２７４】
2015187110.tif 000275
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.14 (s, 3H), 2.38 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.45 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.56 (s, 2H), 6.41 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 2.4, 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.0 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 10.4 (s, 1H), 14.18 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 45.6, 51.6, 54.0, 55.0, 85.3, 98.3, 105.1, 117.7, 118.5, 121.0, 127.9, 130.3, 133.0, 142.1, 150.8, 154.1, 156.4, 157.8；LC-MS (ESI, m/z)：400 [M+H]+。
【０６４８】
２−（３−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−（４−メチルピペラジン−１−イル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５６）
【０６４９】
【化２７５】
2015187110.tif 000276
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 2.54 (t, J =4.4 Hz, 4H), 3.48 (t, J =4.8 Hz, 4H), 4.87 (s, 2H), 5.23 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.60 (d, J = 8.4Hz, 1H), 6.73 (t, J = 8.4Hz, 1H), 7.12 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71-7.75 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.71 (d, J = 8.0Hz, 1H)。
【０６５０】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５７）
【０６５１】
【化２７６】
2015187110.tif 000277
無色の固体、融点２３５℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 4.07 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 7.2 Hz, 2H)。
【０６５２】
２−（４−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５８）
【０６５３】
【化２７７】
2015187110.tif 000278
無色の固体、融点２２７℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 4.10 (s, 2H), 6.85 (d, J = 7.2Hz, 1H), 7.23-7.28 (m, 4H), 7.87 (d, J = 6.8Hz, 2H), 8.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H)。
【０６５４】
２−（４−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２５９）
【０６５５】
【化２７８】
2015187110.tif 000279
無色の固体、融点２３２℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42(s, 3H), 4.12 (s, 2H), 6.85 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.21 (s, 1H), 7.31-7.38 (m, 2H), 7.85 (q, J = 4.8 Hz, 2H), 8.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６５６】
２−（３，４−ジクロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６０）
【０６５７】
【化２７９】
2015187110.tif 000280
無色の固体、融点２３０℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 6.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.36 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J =2.4 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.71 (s, 1H)。
【０６５８】
２−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−８−メチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６１）
【０６５９】
【化２８０】
2015187110.tif 000281
無色の固体、融点２２５℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 6.88 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.69-7.73 (m, 1H), 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.71 (s, 1H)。
【０６６０】
９−クロロ−２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６２）
【０６６１】
【化２８１】
2015187110.tif 000282
無色の固体、融点２３０℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.95 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.80 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.18 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０６６２】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６３）
【０６６３】
【化２８２】
2015187110.tif 000283
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.77 (s, 2H), 7.11 - 7.13 (m, 1H), 7.32 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.50 (m, 1H), 8.13 - 8.14 (m, 1H), 8.41 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.12 (dd, J = 1.2, 7.2 Hz, 1H)。
【０６６４】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−９−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６４）
【０６６５】
【化２８３】
2015187110.tif 000284
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.76 (s, 1H), 5.31 (brs, 1H), 7.11 - 7.13 (m, 1H), 7.18 -7.23 (m, 1H), 7.38 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.63 - 7.65 (m, 1H), 7.86 (dd, J = 8.4, 8.8 Hz, 1H), 8.12 - 8.13 (m, 1H), 8.73 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.96 (brs, 1H)。
【０６６６】
２−（４−クロロフェニルアミノ）−９−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６５）
【０６６７】
【化２８４】
2015187110.tif 000285
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.72 (s, 2H), 5.30 (brs, 1H), 7.15 - 7.20 (m, 1H), 7.41 - 7.44 (m, 2H), 7.79 - 7.82 (m, 2H), 7.84 - 7.86 (m, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.92 (brs, 1H)。
【０６６８】
９−フルオロ−２−（４−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６６）
【０６６９】
【化２８５】
2015187110.tif 000286
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.75 (s, 2H), 5.25 (brs, 1H), 7.13 - 7.25 (m, 3H), 7.73 - 7.77 (m, 2H), 7.80 - 7.85 (m, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.84 (brs, 1H)。
【０６７０】
２−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−９−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６７）
【０６７１】
【化２８６】
2015187110.tif 000287
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.74 (s, 2H), 5.24 (brs, 1H), 7.18 - 7.22 (m, 1H), 7.39 - 7.44 (m, 1H), 7.65 - 7.69 (m, 1H), 7.83 - 7.87 (m, 1H), 8.20 - 8.22 (m, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.91 (brs, 1H)。
【０６７２】
２−（３，４−ジフルオロフェニルアミノ）−９−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６８）
【０６７３】
【化２８７】
2015187110.tif 000288
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.75 (s, 2H), 5.26 (brs, 1H), 7.17 - 7.22 (m, 1H), 7.39 - 7.49 (m, 1H), 7.84 - 7.88 (m, 1H), 8.08 - 8.14 (m, 1H), 8.73 (m, J = 7.2 Hz, 1H), 8.93 (brs, 1H)。
【０６７４】
２−（３，４−ジクロロフェニルアミノ）−９−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２６９）
【０６７５】
【化２８８】
2015187110.tif 000289
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.75 (s, 2H), 5.27 (brs, 1H), 7.19- 7.23 (m, 1H), 7.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.7 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 7.85 - 7.89 (m, 1H), 8.83 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 9.00 (brs, 1H)。
【０６７６】
２−（１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−９−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７０）
【０６７７】
【化２８９】
2015187110.tif 000290
融点=184〜185℃；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.70 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.18 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.35 (s, 1H), 7.00 - 7.04 (m, 1H), 7.23 (dd, J = 2 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.28 - 7.32 (m, 2H), 7.68 (dd, J = 8 Hz, J = 8 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.64 (d, J = 6 Hz, 1H), 10.98 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) 55.2, 94.6 ,101.7 (d, J = 5.2 Hz, due to F), 111.6, 112.1 (d, J = 7.4 Hz, due to F), 113.7, 118.0, 119.8 (d, J = 17.1 Hz, due to F), 124.2 (d, J = 4.4 Hz, due to F), 126.5, 128.2, 131.9, 133.5, 151.6, 154.1, 156.3, 157.6。
【０６７８】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７１）
【０６７９】
【化２９０】
2015187110.tif 000291
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.93 (s, 3H), 4.71 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.29 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.97 - 7.01 (m, 1H), 7.06 - 7.10 (m, 1H), 7.27 - 7.32 (m, 3H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.47 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H)。
【０６８０】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−チオン（２７２）
【０６８１】
【化２９１】
2015187110.tif 000292
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.98 (s, 3H), 4.11 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.88 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 8.59 (d, J = 5.6 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) 26.9, 57.1, 94.2, 111.8, 112.7, 119.9, 121.1, 123.3, 128.9, 139.8, 143.7, 151.3, 155.6, 158.6。
【０６８２】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７３）
【０６８３】
【化２９２】
2015187110.tif 000293
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.94 (s, 3H), 4.68 (s, 2H), 6.99 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 7.2 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 2H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.77 (s, 1H)。
【０６８４】
２−（４−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７４）
【０６８５】
【化２９３】
2015187110.tif 000294
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.90 (s, 3H), 4.65 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.2 Hz, 7.6 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.42 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H)。
【０６８６】
２−（４−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７５）
【０６８７】
【化２９４】
2015187110.tif 000295
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.91 (s, 3H), 4.69 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.83 - 7.86 (m, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H)。
【０６８８】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７６）
【０６８９】
【化２９５】
2015187110.tif 000296
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.96 (s, 3H), 4.67 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 5.20 (s, 1H), 7.07 (dd, J = 7.2 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.95 (dd, J = 8.8 Hz, J = 8.8 Hz, 2H), 8.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H)。
【０６９０】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７７）
【０６９１】
【化２９６】
2015187110.tif 000297
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.97 (s, 3H), 4.72 (s, 2H), 5.32 (s, 1H), 7.14, (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.11 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.49 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.09 (s, 1H)。
【０６９２】
２−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７８）
【０６９３】
【化２９７】
2015187110.tif 000298
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.95 (s, 3H), 4.69 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.16 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 9.2 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.61 - 7.65 (m, 1H), 8.46 (dd, J = 0.8 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.59 (dd, J = 2.8 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.76 (s, 1H)。
【０６９４】
２−（３，４−ジフルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２７９）
【０６９５】
【化２９８】
2015187110.tif 000299
融点＝２３１℃（分解）；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (s, 3H), 4.66 (s, 2H), 5.17 (brs, 1H), 7.07 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.33 (m, 2H), 7.39 - 7.41 (m, 1H), 8.34 - 8.40 (m, 1H), 8.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H)；13C NMR (100 MHz, DMSO) δ 54.1, 56.8, 95.2, 109.1, 113.4, 116.0 (d, J = 3.8 Hz, due to F), 116.8, 118.7, 137.5 (d, J = 9.7 Hz, due to F), 143.2 (d, J = 11.9 Hz, due to F), 145.6, 147.5 (d, J = 13.4 Hz, due to F), 149.9 (d, J = 13.4 Hz, due to F), 150.6, 155.5。
【０６９６】
２−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８０）
【０６９７】
【化２９９】
2015187110.tif 000300
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.93 (s, 3H), 4.68 (s, 2H), 5.14 (s, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 9.79 (s, 1H)。
【０６９８】
２−（３，４−ジクロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８１）
【０６９９】
【化３００】
2015187110.tif 000301
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.93 (s, 3H), 4.66 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.16 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 2.8 Hz, 8.8 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.82 (s, 1H)。
【０７００】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（４−メチル−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８２）
【０７０１】
【化３０１】
2015187110.tif 000302
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.49 (t, J = 2.0 Hz, 3H due to CF3 ), 3.93 (s, 3H), 4.70 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 1.2 Hz, 6.8 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H)。 
【０７０２】
２−（４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８３）
【０７０３】
【化３０２】
2015187110.tif 000303
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.92 (s, 3H), 4.68 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.12 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.42 (m, 1H), 7.86 - 7.88 (m, 1H), 8.43 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.99 - 9.00 (m, 1H)。
【０７０４】
２−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−５−イルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８４）
【０７０５】
【化３０３】
2015187110.tif 000304
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.97 - 2.05 (m, 2H), 2.79 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.85 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 4.69 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.26 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 7.2 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 0.8 Hz, 7.6 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H)。
【０７０６】
２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８５）
【０７０７】
【化３０４】
2015187110.tif 000305
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.91 (s, 3H), 4.68 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.21 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.98 (s, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.05 - 7.07 (m, 1H), 7.26 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H)。
【０７０８】
２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８６）
【０７０９】
【化３０５】
2015187110.tif 000306
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.92 (s, 3H), 4.19 - 4.24 (m, 4H), 4.67 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 2.4 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 2.0 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H)。
【０７１０】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８７）
【０７１１】
【化３０６】
2015187110.tif 000307
融点＝１９５〜１９７℃；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.82 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 4.77 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.28 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.30 (m, 1H), 7.33 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.52 (dd, J = 1.2, 6.8 Hz, 1H), 8.62 (br s, 1H)。
【０７１２】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８８）
【０７１３】
【化３０７】
2015187110.tif 000308
融点＝１８６℃（分解）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.87 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 4.79 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.31 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 8.13(s, 1H), 8.34 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 8.73 (br s, 1H)。
【０７１４】
３−（ヒドロキシメチル）−９−メトキシ−２−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２８９）
【０７１５】
【化３０８】
2015187110.tif 000309
融点＝２０５℃（分解）；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.40 (s, 3H), 4.08 (s, 3H), 4.78 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.28 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.32 (1H, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 2.0, 9.0 Hz, 1H), 8.04 (m, 1H), 8.07(d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 1.2, 6.8 Hz, 1H), 8.75 (br s, 1H)。
【０７１６】
９−（ジフルオロメトキシ）−２−（４−フルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９０）
【０７１７】
【化３０９】
2015187110.tif 000310
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.67 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.14 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.07 - 7.11 (m, 3H), 7.17 (t, J = 74 Hz due to F2, 1H), 7.63 - 7.69 (m, 3H), 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H)。
【０７１８】
２−（４−クロロフェニルアミノ）−９−（ジフルオロメトキシ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９１）
【０７１９】
【化３１０】
2015187110.tif 000311
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.69 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.23 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 74 Hz, 1H, due to F2), 7.30 - 7.33 (m, 2H), 7.72 - 7.75 (m, 3H), 8.75 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.86 (s, 1H);
【０７２０】
９−（ジフルオロメトキシ）−２−（３，４−ジフルオロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９２）
【０７２１】
【化３１１】
2015187110.tif 000312
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.70 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.22 (s, 1H), 7.16 (dd, J = 7.2 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 74 Hz, due to F2, 1H), 7.33 - 7.38 (m, 2H), 7.75 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 7.6 Hz, 12.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H)；LC-MS (ESI, m/z)：370 [M+H]+。
【０７２２】
２−（３，４−ジクロロフェニルアミノ）−９−（ジフルオロメトキシ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９３）
【０７２３】
【化３１２】
2015187110.tif 000313
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.68 (s, 2H), 5.19 (s, 1H), 7.15 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 74 Hz, due to F2, 1H), 7.47 - 7.57 (m, 2H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.73 (dd, J = 1.6 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.92 (s, 1H)。
【０７２４】
２−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−９−（ジフルオロメトキシ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９４）
【０７２５】
【化３１３】
2015187110.tif 000314
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.68 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 5.18 (s, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 74 Hz, 1H, due to F2), 7.32 (dd, J = 9.2 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.54 (m, 1H), 7.73 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 2.8 Hz, 6.8 Hz, 1H), 8.74 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.86 (s, 1H)。
【０７２６】
２−（１Ｈ−インドール−５−イルアミノ）−９−（ジフルオロメトキシ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９５）
【０７２７】
【化３１４】
2015187110.tif 000315
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.72 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.23 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.34 (s, 1H), 7.05 - 7.09 (m, 1H), 7.23 (dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 74.4 Hz, 1H due to F2), 7.31 - 7.33 (m, 2H), 7.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.73 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 10.99 (s, 1H)。
【０７２８】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−６，８−ジメチル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９６）
【０７２９】
【化３１５】
2015187110.tif 000316
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.32 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.55 (s, 2H), 6.78 (s, 1H), 7.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 9.60 (s, 1H)；LC-MS (ESI, m/z)：330 [M+H]+。
【０７３０】
７，９−ジクロロ−２−（３−クロロフェニルアミノ）−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９７）
【０７３１】
【化３１６】
2015187110.tif 000317
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.65 (s, 2H), 5.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H)。
【０７３２】
２−（３−クロロフェニルアミノ）−７，９−ジフルオロ−３−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（２９８）
【０７３３】
【化３１７】
2015187110.tif 000318
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.69 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.31 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.18 - 8.23 (m, 1H), 8.68 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H)。
【０７３４】
（４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）メチルベンゾアート（２９９）
【０７３５】
【化３１８】
2015187110.tif 000319
融点＝１７８〜１７９℃；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.66 (s, 2H), 6.96 (ddd, J = 1.2, 1.2, 6.8 Hz, 1H), 7.06 - 7.10 (m, 1H), 7.33 - 7.44 (m, 5H), 7.53 - 7.56 (m, 1H), 7.61 - 7.65 (m, 1H), 7.72 (m, 2H), 8.12 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 9.14 (brs, 1H)。 
【０７３６】
（４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）メチルアセタート（３００）
【０７３７】
【化３１９】
2015187110.tif 000320
融点＝１６０〜１６１℃；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.13 (s, 3H), 6.92 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.04 - 7.08 (m, 1H), 7.30 - 7.37 (m, 3H), 7.59 - 7.66 (m, 3H), 8.91 (brs, 1H), 8.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H)。
【０７３８】
（４−オキソ−２−（フェニルアミノ）−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）メチルイソブチラート（３０１）
【０７３９】
【化３２０】
2015187110.tif 000321
融点＝１６１〜１６３℃；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.17 (d, J = 7.2 Hz, 6H), 2.62 - 2.65 (m, 1H), 6.94 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.04 - 7.08 (m, 1H), 7.31 - 7.38 (m, 3H), 7.60 - 7.67 (m, 3H), 8.95 (brs, 1H), 8.95 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。
【０７４０】
実施例８：ジニトロベンズアミド化合物に関する追加的な研究
二つの代表的な分子である化合物４及び２４を研究室内で再合成し、初代マクロファージを用いた従来のＣＦＵに基づく活性試験に供した（図７）。異なる３細胞系に感染させた５日後に、両化合物に関するＣＦＵ数が、ＩＮＨで見られた数と同様に１０分の１に減少したことが観察された。このことは、この系列の化合物の効力を確認している。
【０７４１】
毒性の問題に取り組むために、異なる生体組織由来の５細胞株のパネルに対して化合物４及び２４を試験した。漸増する量の化合物と共に細胞をインキュベーションし、共インキュベーションの５日後に細胞生存率をレサズリンで評価した。参照としてＤＭＳＯを含むウェルによって測定したレゾフリン蛍光を採用することによって、細胞毒性パーセンテージを決定した。細胞の５０％が死滅した濃度を最小毒性濃度（ＭＴＣ５０）として定義した。化合物４及び２４の両方は、細胞株のパネルに対して細胞毒性を示さなかったが、このことは、この系列の化合物が有望な抗結核新薬であることを示唆している（表５）。
【０７４２】
化合物４及び２４の活性の予想される特異性を洞察するために、広い抗菌スペクトルの分析を行い、これらのジニトロベンズアミド誘導体の効果が主に放線菌に限られ、最も強力な活性がMycobacgteriumに対して観察されたことを示した（表５）。特に重要なことには、試験されたＤＮＢは、多剤耐性（ＭＤＲ）及び超多剤耐性（extensively drug-resistant）（ＸＤＲ）臨床単離株に対しても高活性であったが、このことは、それらが現在の抗結核化合物と異なるターゲットに作用しうることを示唆している。
【０７４３】
化合物４及び２４について、M. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖの突然変異頻度を決定した。異なる濃度の化合物を補充した７Ｈ１０寒天培地に、漸増する数の細菌が増殖した。自然突然変異頻度の比率を評価するために、６週間成長させた後にコロニーを計数した（表７）。化合物４について、０．２μg/ml及び３．２μg/mlでそれぞれ１×１０−６及び１×１０−８の耐性頻度が見出された。したがって、自然突然変異率を１×１０−７と計算した。化合物２４について、０．２μg/ml及び３．２μg/mlで、突然変異頻度はそれぞれ７×１０−７及び１×１０−８であったが、これは、３．５×１０−７の平均頻度に対応する。全般的に、これらの値は、ＩＮＨ耐性突然変異体について観察された突然変異頻度（３×１０−６）よりも優れていた。このように、これらの結果は、このクラスの化合物が低い突然変異頻度を招くことを示している。
【０７４４】
実施例９：ピリドピリミジノン化合物に関する追加的な研究
表６に、異なるミコバクテリア種に対する代表的な一化合物１３３の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を示す。その化合物は、迅速成長性Mycobacterium smegmatis mc2に効果を有さないが、Ｈ３７Ｒｖ、Ｈ３７Ｒａ及びＢＣＧ Pasteurなどの典型的な実験室株を２μMのＭＩＣで阻止することができた。さらに重要なことには、ミコバクテリア臨床分離株に対する１３３の抗菌活性もまた試験した。多剤耐性（ＭＤＲ−ＴＢ）及び超多剤耐性（ＸＤＲ−ＴＢ）単離株についてのＭＩＣ値は、マイクロモル濃度の範囲内であった。
【０７４５】
毒性の問題に取り組むために、異なる生体組織由来の７細胞株のパネルに関して、化合物１３３を試験した。漸増する量の化合物と共に細胞をインキュベーションし、共インキュベーションの５日後にレサズリンを用いて細胞生存率を評価した。参照としてＤＭＳＯを含むウェルによって測定したレゾフリン蛍光を採用することによって、細胞毒性パーセンテージを決定した。細胞の５０％が死滅した濃度を最小毒性濃度（ＭＴＣ５０）として定義した。化合物１３３は、試験した全ての細胞系に対して１００μMまで細胞毒性を示さなかった（表６）。したがって、抗結核活性と細胞毒性の間の比率から成る選択指数は、細胞外ミコバクテリア及び細胞内ミコバクテリアの両方について５０を超えたが、これは、この一連の化合物が有望な抗結核新薬であることを示唆している。
【０７４６】
この一連の化合物が初代マクロファージに及ぼす効果をさらに決定した。図８に示すように、あらかじめ化合物２３２と共にインキュベーションされたホスト細胞は、感染５日目にＤＭＳＯ対照よりも少ない細菌を内部に有し、細胞数が多数であった。化合物１３３についても同様のデータが得られた（データは示さず）。次に、感染７日後に従来のＣＦＵ決定を行い、残りの細菌負荷を定量した。ヒト細胞及びマウス細胞の両方について、ＩＮＨと同様に両化合物でＣＦＵ数が１０分の１に減少することが観察された（図８）。このことは、この一連の化合物の効力を確認するものである。
【０７４７】
化合物２６４についてM. tuberculosis Ｈ３７Ｒｖの突然変異頻度を決定した。異なる濃度の化合物を補充した７Ｈ１０寒天培地上で、漸増する数の細菌が増殖した。６週間成長させた後で、自然突然変異頻度の比率を評価するためにコロニーを計数した（表７）。化合物２６４は、０．４及び０．８μg/mlでそれぞれ３．４×１０−６及び８×１０−６、並びに１．６μg/ml及び３．２μg/mlの両方で２×１０−８の耐性頻度をもたらした。したがって、自然突然変異率は、７×１０−７と計算された。全般的に、これらの値は、ＩＮＨについて観察された突然変異頻度（２．９×１０−６）よりも良好である。したがって、これらの結果は、このクラスの化合物が低突然変異頻度を招くことを示している。
【０７４８】
ＴＢ薬の創薬についての現在の難題の一つは、潜伏細菌に対して活性な化合物を同定することである。潜伏細菌の位置及び状態は議論すべき問題のままであるが、ミコバクテリアの潜伏について一般に共通する一仮説は、M. tuberculosis細菌がマクロファージ中で長期間生存することができ、他の細菌とは異なり活発に複製することができるというものである。M. tuberculosisのファゴソーム内プロファイルは複雑であり、多種多様な遺伝子が過剰発現し、時間的に調節され、環境因子にも依存する。まとめると、このことは、理想的なターゲットとして選択することができるであろう一つの特定の結核因子を同定することを困難にする。結果として、ターゲットに基づかない細胞に基づくアッセイは、細胞内M. tuberculosis阻害剤の検索に重要なツールである。
【０７４９】
マクロファージ内の細菌成長阻害剤の研究は、面倒なＣＦＵプレート培養、遅い細菌の増殖、安全性の要件及び適切な感染条件の設定の難しさが原因で、長い間制限されていた。結果として、インビトロ細胞外増殖に対して活性な化合物の初回選択後の二次アッセイとして、このアプローチを常に使用した。自動共焦点顕微鏡法の出現と共に、上述の制限に改めて取り組むことができると思われることから、本発明者らは、大規模化合物スクリーニングの実行可能性を示す。段階の数を最小にして安全性の要件に合致するように、マクロファージの懸濁バッチ感染を行うことを決定した。このために、ファゴサイトーシスされていない細胞外ミコバクテリアの除去に慎重に留意した。洗浄段階の間に使用した遠心分離条件は、感染細胞だけを回収し、細胞外細菌の大部分を捨てるように設定した。本発明者らは、未結合のミコバクテリアが総細菌負荷の１０％未満となることを顕微鏡法によって確認した（データは示さず）。ミコバクテリアは、ホスト細胞と独立して成長することができることから、どのような残りの細胞外細菌でも本発明者らのモデルの妥当性を大きく損なうことになろう。このために、プロトコールにアミカシン処理段階を加え、残りのミコバクテリアをさらに除去した。このように最適化されたプロトコールを用いると、化合物が添加される時点にはファゴサイトーシスされていないミコバクテリアがほとんど存在しない。得られた結果から、化合物処理で測定されるのは、特異的に細胞内ミコバクテリアに対する効果であることも実証される。実際に、本発明者らは、細胞透過性に乏しいことが知られている抗生物質であるリファンピンで弱い阻止を観察した。インビトロ成長アッセイに比べて細胞内アッセイにおけるリファンピンについてのＭＩＣが再現性をもって５０分の１に減少したことから、ターゲティングされた細菌が細胞外細菌ではないことが証明された。さもなければ、二つのアッセイの間でＭＩＣの差は見られないであろう。同様に、インビトロ成長アッセイではなく、細胞に基づく表現型アッセイでは、ミコバクテリアの増殖を阻止できる化合物もまた同定した。加えて、化合物と予備感染した細胞を混合するという事実は、一次感染阻害剤の同定の機会を減らすはずである。しかし、そのような化合物はなお、隣接細胞の感染の遮断剤として同定されるおそれがある。
【０７５０】
従来のＣＦＵプレート培養法に比べて、顕微鏡法に基づく蛍光細菌の検出は、死菌と生菌を区別するために十分なほど高感度ではない。それは、ＧＦＰシグナルが数日間安定であるからである。実際に、高濃度のＩＮＨ、リファンピン又は活性化合物下で、感染していると見られる細胞が常に１０％存在し、それは、初期感染比率と類似している。驚くことに、そのような試料をプレート培養後にＣＦＵを回復することはできなかった。潜伏細菌が増殖を回復することができるという事実によると（Cho et al., 2007）、顕微鏡法で検出された細菌は、潜伏細菌よりもむしろ死菌であるに違いない。したがって、本発明者らのアッセイは、マクロファージ内の細菌の増殖を妨害する化合物を検出するものである。
【０７５１】
十分に確立及び確認されているように（図１ａ）、マクロファージは高い細菌負荷を維持することができ、高い細菌負荷は、最後には細胞質の大きな部分を取り囲むことになり、場合によりマクロファージの細胞死を導く。M. tuberculosisがＢＣＧ（Bacille Calmette-Guerin）よりも感染性の因子であることは明らかであり、ＢＣＧは、高いＭＯＩでも大きな細胞毒性を誘導し損なう（データは示さず）。このことを考慮して、抗生物質で保護された対照よりもＤＭＳＯ試料中で細胞数が有意に減少した感染５日後に、データ取得を設定することを決定した。したがって、細胞数のモニタリングは、本発明者らが化合物の抗細菌活性を確認できるようにする追加的なパラメーターであった。
【０７５２】
直接的な蛍光アッセイとは異なり、画像アッセイの解析の方がずっと多様であることが証明された。アッセイの生物学的性質に固有のいくつかのパラメーターが、より低いＺ’値（普通はＨＴＳの検証のために受け入れられる）を一部説明している。残りの蛍光死菌は、Ｚ’値にあまり影響を及ぼさず、それよりもむしろＤＭＳＯ対照に関する感染比率の変動が矛盾の原因と思われる。同様に重要であるのは、感染時にマクロファージが遊走する傾向があり、それが今度は不均一なセットの画像を導いたという事実である（図２ａ）。しかし、初回選別の目的は、濃度２０μMで十分に活性な化合物を同定することであった。したがってこのために、感染比率に関して正のＺ’（ＩＮＨ／ＤＭＳＯ）が許容可能な値と見なされた。本発明によるヒットの選択の妥当性を最もよく証明するのは、ほぼ１００％のヒットが確認された、その後の系列希釈分析からである。各ヒットについて、感染比率に関してうまく一致した用量反応曲線が得られ、同様に無毒性化合物について細胞数に関する用量反応曲線が得られた。さらに、細胞数は、緑色蛍光の発光及びＧＦＰの発現と全く独立して、結果の追加的な確認をもたらした。
【０７５３】
明らかに、M. tuberculosisの細胞内増殖及びインビトロ増殖の両方に活性であることが見出された化合物が最も有望である。このライブラリーから単離された最良の阻害剤は、ＩＮＨと同じ範囲に阻止活性を有する。さらなる構造活性相関研究は、それらの活性を改善できるか判定し続けるであろう。この細胞に基づく表現型モデルを使用した別の研究の過程で、公知のインビトロ抗菌有効性を有する化合物についてng/mL程度まで下がったＭＩＣが得られたが、このことは、本発明記載のアッセイによりＩＮＨより低いＭＩＣを同定することができることを示している（データは示さず）。最も関心がもたれるのは、細胞内細菌アッセイだけにおいて活性な化合物であり、それは、その化合物が感染性株と無関係に新しい作用機序を有すると思われ、その化合物が治療不可能な多剤耐性（ＭＤＲ）株にも活性でありうることを示唆するからである。
【０７５４】
まとめると、上記結果は、自動蛍光顕微鏡を用いたM. tuberculosisの増殖のモニタリングが、高度に頑健で信頼できること、及びこの方法が強力な抗ＴＢ化合物の迅速選択を可能にすることを示している。
【０７５５】
【表１】
2015187110.tif 000322
2015187110.tif 000323
【０７５６】
【表２】
2015187110.tif 000324
2015187110.tif 000325
2015187110.tif 000326
2015187110.tif 000327
2015187110.tif 000328
2015187110.tif 000329
2015187110.tif 000330
2015187110.tif 000331
2015187110.tif 000332
2015187110.tif 000333
2015187110.tif 000334
2015187110.tif 000335
2015187110.tif 000336
2015187110.tif 000337
2015187110.tif 000338
2015187110.tif 000339
2015187110.tif 000340
2015187110.tif 000341
2015187110.tif 000342
2015187110.tif 000343
2015187110.tif 000344
2015187110.tif 000345
2015187110.tif 000346
2015187110.tif 000347
2015187110.tif 000348
2015187110.tif 000349
2015187110.tif 000350
2015187110.tif 000351
2015187110.tif 000352
2015187110.tif 000353
2015187110.tif 000354
2015187110.tif 000355
2015187110.tif 000356
2015187110.tif 000357
2015187110.tif 000358
2015187110.tif 000359
2015187110.tif 000360
2015187110.tif 000361
2015187110.tif 000362
2015187110.tif 000363
2015187110.tif 000364
2015187110.tif 000365
2015187110.tif 000366
2015187110.tif 000367
2015187110.tif 000368
2015187110.tif 000369
2015187110.tif 000370
2015187110.tif 000371
2015187110.tif 000372
2015187110.tif 000373
2015187110.tif 000374
2015187110.tif 000375
2015187110.tif 000376
2015187110.tif 000377
2015187110.tif 000378
2015187110.tif 000379
2015187110.tif 000380
2015187110.tif 000381
2015187110.tif 000382
2015187110.tif 000383
2015187110.tif 000384
2015187110.tif 000385
2015187110.tif 000386
2015187110.tif 000387
2015187110.tif 000388
2015187110.tif 000389
2015187110.tif 000390
2015187110.tif 000391
2015187110.tif 000392
2015187110.tif 000393
2015187110.tif 000394
2015187110.tif 000395
2015187110.tif 000396
2015187110.tif 000397
2015187110.tif 000398
2015187110.tif 000399
2015187110.tif 000400
2015187110.tif 000401
2015187110.tif 000402
2015187110.tif 000403
2015187110.tif 000404
2015187110.tif 000405
2015187110.tif 000406
2015187110.tif 000407
2015187110.tif 000408
2015187110.tif 000409
2015187110.tif 000410
2015187110.tif 000411
2015187110.tif 000412
2015187110.tif 000413
2015187110.tif 000414
2015187110.tif 000415
2015187110.tif 000416
2015187110.tif 000417
2015187110.tif 000418
2015187110.tif 000419
2015187110.tif 000420
2015187110.tif 000421
2015187110.tif 000422
2015187110.tif 000423
2015187110.tif 000424
2015187110.tif 000425
2015187110.tif 000426
2015187110.tif 000427
2015187110.tif 000428
2015187110.tif 000429
2015187110.tif 000430
2015187110.tif 000431
2015187110.tif 000432
2015187110.tif 000433
2015187110.tif 000434
2015187110.tif 000435
2015187110.tif 000436
2015187110.tif 000437
【０７５７】
【表３】
2015187110.tif 000438
2015187110.tif 000439
2015187110.tif 000440
2015187110.tif 000441
2015187110.tif 000442
2015187110.tif 000443
2015187110.tif 000444
2015187110.tif 000445
2015187110.tif 000446
2015187110.tif 000447
2015187110.tif 000448
2015187110.tif 000449
2015187110.tif 000450
2015187110.tif 000451
2015187110.tif 000452
2015187110.tif 000453
2015187110.tif 000454
2015187110.tif 000455
2015187110.tif 000456
2015187110.tif 000457
2015187110.tif 000458
2015187110.tif 000459
2015187110.tif 000460
2015187110.tif 000461
2015187110.tif 000462
2015187110.tif 000463
2015187110.tif 000464
2015187110.tif 000465
2015187110.tif 000466
2015187110.tif 000467
2015187110.tif 000468
2015187110.tif 000469
2015187110.tif 000470
2015187110.tif 000471
2015187110.tif 000472
2015187110.tif 000473
2015187110.tif 000474
2015187110.tif 000475
2015187110.tif 000476
2015187110.tif 000477
2015187110.tif 000478
【０７５８】
【表４】
2015187110.tif 000479
2015187110.tif 000480
2015187110.tif 000481
2015187110.tif 000482
2015187110.tif 000483
2015187110.tif 000484
【０７５９】
【表５】
2015187110.tif 000485
2015187110.tif 000486
2015187110.tif 000487
2015187110.tif 000488
2015187110.tif 000489
2015187110.tif 000490
2015187110.tif 000491
2015187110.tif 000492
2015187110.tif 000493
2015187110.tif 000494
2015187110.tif 000495
2015187110.tif 000496
【０７６０】
【表６】
2015187110.tif 000497
【０７６１】
【表７】
2015187110.tif 000498
【０７６２】
【表８】
2015187110.tif 000499
【図１】
2015187110.tif 000505
【図２】
2015187110.tif 000506
【図３ａ】
2015187110.tif 000507
【図３ｂ】
2015187110.tif 000508
【図３ｃ】
2015187110.tif 000509
【図４】
2015187110.tif 000510
【図５】
2015187110.tif 000511
【図６ａ】
2015187110.tif 000512
【図６ｂ】
2015187110.tif 000513
【図６ｃ】
2015187110.tif 000514
【図７】
2015187110.tif 000515
【図８】
2015187110.tif 000516
【手続補正書】
【提出日】平成27年5月21日(2015.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階：
（ａ）蛍光ラベル化M. tuberculosisミコバクテリアを用いてホスト細胞をバッチ感染する段階；
（ｂ）遊離の未結合ミコバクテリアを除去する段階；
（ｃ）マルチウェルプレートに被験化合物を添加する段階；
（ｄ）蛍光ラベル化M. tuberculosisミコバクテリアに感染した該ホスト細胞を、該化合物を含む該マルチウェルプレートに蒔く段階；
（ｅ）蛍光ラベル化M. tuberculosisミコバクテリアに感染したホスト細胞及び該化合物を含む該マルチウェルプレートをインキュベーションする段階；
（ｆ）該ホスト細胞を蛍光ラベルする段階；
（ｇ）自動共焦点顕微鏡法を用いて該マルチウェルプレートを分析する段階
を含む、スクリーニング方法。
【請求項２】
スクリーニング方法が、前記ホスト細胞内におけるM. tuberculosisの増殖を妨害する化合物を検索する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ホスト細胞がマクロファージである、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
自動共焦点顕微鏡法が、細胞内におけるミコバクテリアの成長を測定する、請求項１〜３のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
工程（ｇ）が、各々の化合物について、
総ホスト細胞数；
感染したホスト細胞の割合；及び／又は
感染の阻止パーセント
を決定することを含む、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
（ｉ）１００以下の総ホスト細胞数が、化合物の毒性及び／又はマクロファージ内部におけるM. tuberculosisの無制限の成長を示す；及び／又は
（ｉｉ）１００以上の総ホスト細胞数が、化合物が無毒であり、ミコバクテリアの成長を阻害することを示す、
請求項５記載の方法。
【請求項７】
以下：
工程（ｃ）において、公知の抗結核活性を有する化合物を陽性対照として加えること；
工程（ｃ）において、化合物の代わりにＤＭＳＯ又は抗生物質を陰性対照として加えること；
の少なくとも一つの工程を含む、請求項１〜６のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
M. tuberculosisミコバクテリアが、ＧＦＰでラベルされている、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
ホスト細胞が、ＳＹＴＯ６０でラベルされている、請求項１〜８のいずれか記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｂ）の後に、抗生物質でのインキュベーションを行う、請求項１〜９のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
大規模化学ライブラリーの高処理量スクリーニング（ＨＴＳ）のために使用される、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
ホスト細胞内でのM. tuberculosisの増殖を妨げ、請求項１〜１１のいずれか一項記載の方法により同定される、化合物。
【請求項１３】
下記式：
【化３２５】
2015187110.tif 000517
で示される、請求項１２記載の化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６１３】
【化２５７】
2015187110.tif 000518
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.34 (s, 9H), 2.40 (s, 3H), 3.07 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.61 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.21 (br s, 1H), 8.69 (d, J = 7.2 Hz, H)。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６２１】
【化２６１】
2015187110.tif 000519
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.95 - 0.98 (m, 2H), 1.18 - 1.23 (m, 3H), 1.58 - 1.79 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 3.27 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.85 (brs, 1H), 4.74 (m, 2H), 6.21 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 26.2, 26.7, 31.3, 38.4, 47.5, 56.9, 92.8, 112.0, 126.0, 132.3, 134.5, 149.4, 156.9, 159.5。
【外国語明細書】
2015187110000001.pdf