(57)【要約】【課題】厳密に低温管理することなく保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができ、安定に供給されうるインフルエンザワクチン乾燥製剤を提供する。また、該インフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法を提供する。【解決手段】インフルエンザワクチン抗原と、二糖とを含有するインフルエンザワクチン乾燥製剤であって、前記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上であるインフルエンザワクチン乾燥製剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インフルエンザワクチン抗原と、二糖とを含有するインフルエンザワクチン乾燥製剤であって、前記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とするインフルエンザワクチン乾燥製剤。
【請求項２】
二糖の含有量が、インフルエンザワクチン抗原中のＨＡ抗原１重量部に対して４０〜６００重量部である請求項１記載のインフルエンザワクチン乾燥製剤。
【請求項３】
インフルエンザワクチン抗原は、スプリットワクチン抗原又はサブユニットワクチン抗原である請求項１又は２記載のインフルエンザワクチン乾燥製剤。
【請求項４】
インフルエンザワクチン抗原は、スプリットワクチン抗原である請求項３記載のインフルエンザワクチン乾燥製剤。
【請求項５】
二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース及びメリビオースからなる群から選ばれる１種以上である請求項１、２、３又は４記載のインフルエンザワクチン乾燥製剤。
【請求項６】
インフルエンザワクチン抗原と、二糖とを含有するインフルエンザワクチン抗原含有水溶液を、非加熱下に乾燥するインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法であって、
前記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上である
ことを特徴とするインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法。
【請求項７】
インフルエンザワクチン抗原含有水溶液における二糖の含有量が、２〜３０ｗ／ｖ％である請求項６記載のインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法。
【請求項８】
非加熱下に乾燥する方法は、減圧乾燥法又は凍結乾燥法である請求項６又は７記載のインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザワクチン抗原を含有する乾燥製剤に関する。より詳細には、本発明は、厳密に低温管理することなく保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができ、安定に供給されうるインフルエンザワクチン乾燥製剤に関する。また、本発明は、該インフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザは、インフルエンザウイルスによる急性感染症の一種である。インフルエンザウイルスが感染し、インフルエンザを発症するまでの潜伏期間は、通常１〜２日間である。発症した場合には、３８度以上の発熱が現れ、全身倦怠感、頭痛、関節痛、筋肉痛等の全身症状に加え、喉の痛み、咳、鼻汁等の症状が現れる。一般に、１週間以内に回復する。インフルエンザは、高齢者、乳幼児、妊婦、呼吸器系や循環器系に慢性疾患を有する患者、糖尿病患者、慢性腎不全患者等が発症した場合、肺炎や気管支炎等の合併症を引き起すことがあり、重篤化して死に至ることもある。また、インフルエンザは短期間に集中して流行するため、社会的な影響を及ぼし、経済的な損失を生じさせることがある。
【０００３】
インフルエンザの重篤化を防ぐには、インフルエンザワクチンの投与が最も有効な方法である。インフルエンザワクチン製剤は、注射剤や点鼻剤として使用される液剤が一般的である。
しかしながら、インフルエンザワクチン液剤を流通させる場合、インフルエンザワクチン抗原の失活を防ぐため、流通及び保存の全工程で低温管理（いわゆるコールドチェーン）が必要となる。インフルエンザは地域により時期は異なるが、世界中で流行しており、低温管理が難しい国や地域に、インフルエンザワクチン抗原の活性を維持したまま、流通させることは困難である。
【０００４】
また、現在利用可能なインフルエンザワクチン抗原は、生きた弱毒化インフルエンザワクチン抗原と不活化させたインフルエンザワクチン抗原とに大別される。更に、不活化インフルエンザワクチン抗原は、（１）ホルマリン等で不活化された全粒子ウイルス、（２）有機溶媒や界面活性剤を用いてウイルス粒子を粉砕し、脂質エンベローブを可溶化させたスプリットワクチン抗原、（３）ヘマグルチニン抗原（ＨＡ抗原）及びノイラミダーゼ抗原（ＮＡ抗原）を精製したサブユニットワクチン抗原の３種類に分類される。いずれのワクチン抗原も、通常、有機溶媒や界面活性剤を用いてウイルス粒子を粉砕し、種類に応じてウイルスタンパク質を分離又は精製して調製される。
しかしながら、インフルエンザウイルス粒子はステロール含有量が高く、一般的に安定であるが、ウイルス粒子を粉砕し、ウイルス粒子の脂質物資を除去して、ウイルスタンパク質を分離又は精製した場合、保存期間中に経時的に力価が低下する等の問題が生じる。このようにスプリットワクチン抗原及びサブユニットワクチン抗原は必ずしも安定とはいえないことから、インフルエンザワクチン抗原の活性を維持するため、流通及び保存の全工程で低温管理が必要となっている。
【０００５】
このようなインフルエンザワクチン液剤の欠点を克服するための方法として、乾燥製剤の形態にする試みがなされている。例えば、従来から、生のインフルエンザウイルスを保存する目的で糖が配合されており、特許文献１には、生きたインフルエンザウイルスにトレハロースを配合し、凍結乾燥させ、保存する方法が記載されている。非特許文献１には、インフルエンザウイルスの不活化全粒子ワクチン抗原の凍結乾燥に際して、ラクトース又はトレハロースを配合して、製剤化する方法が記載されている。非特許文献２には、鳥インフルエンザの不活化ウイルスにトレハロースを配合し、凍結乾燥させ、保存する方法が記載されている。
【０００６】
しかしながら、現在のところ安定性に優れたインフルエンザワクチン乾燥製剤は上市されておらず、より一層の安定性の改善が求められている。また、トレハロースは、１９９４年に株式会社林原によって安価な製造方法が確立されて以来、同社によってほぼ独占的に供給されている。トレハロースは、世界中で様々な用途に使用されており、一社による独占は安定供給に不安がある。実際、２０１１年に株式会社林原は会社更生法を申請したため、トレハロースの供給が危ぶまれる事態となった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表平２−５０３２６６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｒｏｂｅｒｔ  Ｊ．Ｇａｒｍｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ  ２００６；７（１）Ａｒｔｉｃｌｅ  １９，Ｅ１−Ｅ７
【非特許文献２】Ｍ．Ｓ．Ｐｉｚｚｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  Ｖｏｌ．３９（２０１１），１４９−１５１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記の状況を鑑みて、本発明は、厳密に低温管理することなく保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができ、安定に供給されうるインフルエンザワクチン乾燥製剤を提供することを目的とする。また、本発明は、該インフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の課題を解決するため、鋭意検討した結果、本発明者らは、種々の添加剤のなかでも特にスクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上によりインフルエンザワクチン抗原を安定化した乾燥製剤とすることにより、従来の液剤のように厳密に低温管理することなく保存しても、インフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持できることを見出した。また、このようなインフルエンザワクチン乾燥製剤は、安価で安定に供給されうる二糖によりインフルエンザワクチン抗原が安定化されているため、このようなインフルエンザワクチン乾燥製剤もまた、安定に供給されうるものである。
【００１１】
すなわち、本発明は、インフルエンザワクチン抗原と、二糖とを含有するインフルエンザワクチン乾燥製剤であって、上記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上であるインフルエンザワクチン乾燥製剤である。
上記二糖の含有量は、インフルエンザワクチン抗原中のＨＡ抗原１重量部に対して４０〜６００重量部であることが好ましい。
上記インフルエンザワクチン抗原は、スプリットワクチン抗原又はサブユニットワクチン抗原であることが好ましく、スプリットワクチン抗原であることがより好ましい。
上記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース及びメリビオースからなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
また、本発明は、インフルエンザワクチン抗原と、二糖とを含有するインフルエンザワクチン抗原含有水溶液を、非加熱下に乾燥するインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法であって、上記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上であるインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法である。
上記インフルエンザワクチン抗原含有水溶液における上記二糖の含有量は、２〜３０ｗ／ｖ％であることが好ましい。
上記非加熱下に乾燥する方法は、減圧乾燥法又は凍結乾燥法であることが好ましい。
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１２】
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、インフルエンザワクチン抗原を含有する。
ここにいう「乾燥製剤」とは、含水率が２０重量％以下である製剤を意味する。
【００１３】
上記インフルエンザワクチン抗原に使用されるインフルエンザウイルスは特に限定されず、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス株、Ｂ型インフルエンザウイルス株等が挙げられる。
【００１４】
上記インフルエンザワクチン抗原は特に限定されないが、発育鶏卵でウイルス粒子を増殖させた後、有機溶媒や界面活性剤を用いてウイルス粒子を粉砕し、種類に応じてウイルスタンパク質を分離又は精製して調製されたスプリットワクチン抗原又はサブユニットワクチン抗原であることが好ましく、スプリットワクチン抗原であることがより好ましい。
【００１５】
上記スプリットワクチン抗原の種類は特に限定されず、例えば、ヘマグルチニン（ＨＡ）抗原、ノイラミダーゼ（ＮＡ）抗原、マトリックス（Ｍ１）抗原、マトリックス（Ｍ２）抗原、核タンパク（ＮＰ）抗原等が挙げられる。なかでも、インフルエンザワクチン乾燥製剤の投与により効果的に免疫を獲得させる観点から、ヘマグルチニン（ＨＡ）抗原が好ましい。
上記インフルエンザワクチン抗原は単一のウイルス抗原を含有してもよく、２種類以上のウイルス抗原を含有してもよい。
【００１６】
上記インフルエンザワクチン抗原を製造する方法は特に限定されず、従来公知の方法を使用することができる。例えば、インフルエンザ患者又はインフルエンザ感染動物から単離されたウイルス株を定法によって鶏卵や細胞等に感染させて培養し、精製したウイルス原液からインフルエンザワクチン抗原を製造してもよい。また、遺伝子工学的に組換えウイルスや特定の抗原を種々の細胞で産生させたものを材料として、インフルエンザワクチン抗原を製造してもよい。
【００１７】
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、二糖を含有する。
上記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上である。これらの二糖は、上記インフルエンザワクチン抗原を安定化するものであり、また、水によく溶解するため、インフルエンザワクチン乾燥製剤を製造するためのインフルエンザワクチン抗原含有水溶液に容易に添加される。
上記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース及びメリビオースからなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００１８】
上記二糖の含有量は、上記インフルエンザワクチン抗原中のＨＡ抗原１重量部に対して、７００重量部未満であることが好ましく、４０〜６００重量部であることがより好ましい。上記含有量が４０重量部未満であると、上記二糖による安定化の効果が充分に得られないことがある。上記含有量が６００重量部を超えると、インフルエンザワクチン乾燥製剤の吸湿性が高くなり、厳密に低温管理することなく保存するとインフルエンザワクチン抗原の活性が低下することがある。上記含有量の更に好ましい下限は８０重量部、更に好ましい上限は５６０重量部であり、特に好ましい下限は４００重量部、特に好ましい上限は５００重量部である。
【００１９】
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤の含水率は、２０重量％以下であれば特に限定されないが、１０重量％以下であることが好ましい。上記含水率が２０重量％を超えると、厳密に低温管理することなく保存するとインフルエンザワクチン抗原の活性が低下することがある。
なお、ここにいう「含水率」は、第十六改正日本薬局方、一般試験法、乾燥減量法、第一法に従い求める。すなわち、本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤の試験片を１０５℃３時間の条件で加熱したときの、重量の減少割合により求める。
【００２０】
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、厳密に低温管理することなく保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができるため、従来の液剤に比べて、流通及び保存を容易にできる。
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、例えば、０〜５０℃の保存温度で保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができる。上記保存温度のより好ましい下限は２℃、より好ましい上限は４０℃である。
【００２１】
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤を製造する方法としては、上記インフルエンザワクチン抗原と、上記二糖とを含有するインフルエンザワクチン抗原含有水溶液を、非加熱下に乾燥する方法が好ましい。これは、上記インフルエンザワクチン抗原は熱に不安定であるため、非加熱下に乾燥することが好ましいためである。
すなわち、本発明は、インフルエンザワクチン抗原と、二糖とを含有するインフルエンザワクチン抗原含有水溶液を、非加熱下に乾燥するインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法であって、上記二糖は、スクロース、マルトース、パラチノース、メリビオース、イソマルト、セロビオース、アロラクトース、イソマルトース、ソホロース、ラクトビオン酸、ラミナリビオース、キシロビオース、ツラノース、ゲンチオビオース、ルチノース、コージビオース、ニゲロース、ロビノース、ネオヘスペリドース、スクラロース及びマルチトールからなる群から選ばれる１種以上であるインフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法である。
【００２２】
上記インフルエンザワクチン抗原含有水溶液における上記インフルエンザワクチン抗原の含有量は、１００μｇＨＡ／ｍＬ以上であることが好ましい。上記含有量が１００μｇＨＡ／ｍＬ未満であると、インフルエンザワクチン乾燥製剤の安定性が悪化することがある。上記含有量のより好ましい下限は２００μｇＨＡ／ｍＬである。
上記インフルエンザワクチン抗原含有水溶液における上記インフルエンザワクチン抗原の含有量の上限は特に限定されず、１０００μｇＨＡ／ｍＬを超えるものであってもよい。
【００２３】
上記インフルエンザワクチン抗原含有水溶液における上記二糖の含有量は、３５ｗ／ｖ％未満であることが好ましく、２〜３０ｗ／ｖ％であることがより好ましい。上記含有量が２ｗ／ｖ％未満であると、上記二糖による安定化の効果が充分に得られないことがある。上記含有量が３０ｗ／ｖ％を超えると、インフルエンザワクチン乾燥製剤の吸湿性が高くなり、厳密に低温管理することなく保存するとインフルエンザワクチン抗原の活性が低下することがある。また、上記二糖の結晶化が促進され、インフルエンザワクチン抗原の活性を低下させる恐れもある。上記含有量の更に好ましい下限は４ｗ／ｖ％、更に好ましい上限は２８ｗ／ｖ％であり、特に好ましい下限は２０ｗ／ｖ％、特に好ましい上限は２５ｗ／ｖ％である。
【００２４】
上記非加熱下に乾燥する方法は特に限定されないが、減圧乾燥法又は凍結乾燥法が好ましく、凍結乾燥法が特に好ましい。上記凍結乾燥法は特に限定されず、従来公知の凍結乾燥装置を用いた方法を使用することができる。
【発明の効果】
【００２５】
本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、厳密に低温管理することなく保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができるため、従来の液剤に比べて、流通及び保存を容易にできる。
また、本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、安価で安定に供給されうる二糖によりインフルエンザワクチン抗原が安定化されているため、本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤もまた、安定に供給されうるものである。
更に、本発明のインフルエンザワクチン乾燥製剤は、そのまま、あるいは、用時に生理食塩水や注射水等の生体投与可能な溶媒に溶解又は分散させて使用することもできるため、様々な投与形態に適応しうる。具体的には、鼻粘膜、口腔内粘膜、眼粘膜、耳粘膜、生殖器粘膜、咽頭粘膜、気道粘膜、気管支粘膜、肺粘膜、胃粘膜、腸管粘膜又は直腸粘膜に投与する粘膜投与製剤、あるいは、注射剤として用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下に本発明の実施例を示し、更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２７】
（実施例１）
（凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤）
インフルエンザＨＡ抗原（Ａ型Ｈ１Ｎ１：Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９、阪大微生物病研究会製）に表１に記すスクロース（和光純薬工業製）を添加した後、下記組成の調製用ＰＢＳ（リン酸緩衝塩化ナトリウム液）を加え、２０ｗ／ｖ％スクロース、５００μｇＨＡ／ｍＬインフルエンザＨＡ抗原（インフルエンザＨＡ抗原１重量部に対してスクロース４００重量部）となるようインフルエンザワクチン抗原含有水溶液を調製した。得られたインフルエンザワクチン抗原含有水溶液１０μＬを、１．５ｍＬのセイフロックチューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に分注し、凍結乾燥させた。
【００２８】
調製用ＰＢＳ
塩化ナトリウム（和光純薬工業製）                    ４．２５ｇ
リン酸水素二ナトリウム１２水和物（和光純薬工業製）  １．７６ｇ
リン酸二水素ナトリウム２水和物（和光純薬工業製）    ０．３５ｇ
蒸留水                                              ５００ｍＬにメスアップ
【００２９】
（比較例１）
（液状インフルエンザＨＡワクチン製剤）
二糖を添加せず、かつ、凍結乾燥を行わずインフルエンザワクチン抗原含有水溶液をそのまま用いたこと以外は実施例１と同様にして、液状インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００３０】
（比較例２）
（凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤）
二糖を添加しなかったこと以外は実施例１と同様にして、凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００３１】
＜測定例１：インフルエンザＨＡワクチンの活性測定＞
（１）１ｖｏｌ％ニワトリ赤血球浮遊液の調製
ニワトリ保存血液（日本バイオテスト研究所製）を遠沈管に入れて、９００Ｇで５分間遠心分離を行った後、上清と白血球層とを除去した。次いで、遠沈管中の赤血球に下記組成の希釈用ＰＢＳ（リン酸緩衝塩化ナトリウム液（ｐＨ７．２））を加えて撹拌した後、遠心分離を行って上清を除去した。この操作を３回繰り返した。希釈液が入った容器に、遠沈管の赤血球を取り分けて混和し、１ｖｏｌ％ニワトリ赤血球浮遊液を調製した。
【００３２】
希釈用ＰＢＳ
塩化ナトリウム（和光純薬工業製）                    ８．５ｇ
リン酸水素二ナトリウム１２水和物（和光純薬工業製）  １．４２５ｇ
リン酸二水素ナトリウム２水和物（和光純薬工業製）    ０．１３５ｇ
蒸留水                                              １０００ｍＬにメスアップ
【００３３】
（２）活性測定
Ｖ底マイクロプレートのウェルに、１．２倍希釈系列のインフルエンザＨＡワクチン製剤を５０μＬ入れ、その後、１ｖｏｌ％ニワトリ赤血球浮遊液を５０μＬ加えた。ピペッティングでよく混和し、室温で１時間静置した後、赤血球を完全凝集させたインフルエンザＨＡワクチン製剤の最終希釈倍数をＨＡ価とした。
二糖を添加せず、かつ、凍結乾燥を行わなかった比較例１の液状インフルエンザＨＡワクチン製剤を５℃で保存したときのＨＡ価を１００％とした場合の相対値（％）を表１に記す。
【００３４】
【表１】
2015091791.tif 000002
【００３５】
表１の結果から、インフルエンザＨＡ抗原は何も加えずに凍結乾燥すると活性が著しく低下してしまうが、スクロースを２０ｗ／ｖ％添加して凍結乾燥するとＨＡ価が安定に維持されることを確認した。
【００３６】
（実施例２〜１７）
（凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤）
二糖の種類又は含有量、或いは、凍結乾燥前液量を表２に記すように変更したこと以外は実施例１と同様にして、凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００３７】
（比較例３）
（液状インフルエンザＨＡワクチン製剤）
凍結乾燥を行わずインフルエンザワクチン抗原含有水溶液をそのまま用いたこと以外は実施例１と同様にして、液状インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００３８】
（比較例４〜７）
（凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤）
二糖を表４に記す単糖又は三糖に変更したこと以外は実施例１と同様にして、凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００３９】
（実施例１８〜２１）
（凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤）
インフルエンザＨＡ抗原の含有量を表５に記すように変更したこと以外は実施例１と同様にして、凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００４０】
（実施例２２、２３、２４）
（凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤）
インフルエンザＨＡ抗原の種類及び含有量を表６に記すように変更したこと以外は実施例１と同様にして、凍結乾燥インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００４１】
（比較例８、９、１０）
（液状インフルエンザＨＡワクチン製剤）
二糖を添加せず、かつ、凍結乾燥を行わずインフルエンザワクチン抗原含有水溶液をそのまま用いたこと以外は実施例２２、２３、２４と同様にして、液状インフルエンザＨＡワクチン製剤を得た。
【００４２】
＜測定例２：保存後のインフルエンザＨＡワクチンの活性測定＞
インフルエンザＨＡワクチン製剤入りのチューブの蓋を閉めた後、乾燥剤入りの密閉容器にチューブを入れ、３０℃又は４０℃で１ヵ月保存した。
実施例１〜９、１２〜１７、比較例１〜７では、上記組成の調製用ＰＢＳを１０００μＬ加えて再溶解したインフルエンザＨＡワクチン製剤のＨＡ価を、測定例１と同様に測定した。
実施例１０、１１では、蒸留水を５０μＬ加えて再溶解し、上記組成の調製用ＰＢＳを加えて１０００μＬとしたインフルエンザＨＡワクチン製剤のＨＡ価を、測定例１と同様に測定した。
実施例１８、１９、２０、２１では、上記組成の調製用ＰＢＳをそれぞれ８００μＬ、６００μＬ、４００μＬ、２００μＬ加えて再溶解したインフルエンザＨＡワクチン製剤のＨＡ価を、測定例１と同様に測定した。
実施例２２及び比較例８、実施例２３及び比較例９、実施例２４及び比較例１０では、上記組成の調製用ＰＢＳをそれぞれ３００μＬ（Ａ型Ｈ３Ｎ２）、１２００μＬ（Ｂ型ビクトリア系統）、２００００μＬ（Ｂ型山形系統）加えて再溶解したインフルエンザＨＡワクチン製剤のＨＡ価を、測定例１と同様に測定した。
二糖を添加せず、かつ、凍結乾燥を行わなかった比較例１の液状インフルエンザＨＡワクチン製剤を５℃で保存したときのＨＡ価を１００％とした場合の相対値（％）を表２〜６に記す。
【００４３】
【表２】
2015091791.tif 000003
【００４４】
表２の結果から、スクロース（和光純薬工業製）、マルトース（和光純薬工業製）、メリビオース（和光純薬工業製）、パラチノース（和光純薬工業製）を添加してインフルエンザＨＡ抗原を凍結乾燥すると、４０℃で１ヵ月間保存してもＨＡ価が安定に維持されることを確認した。
スクロースを添加する場合には、スクロースを２０〜２５ｗ／ｖ％（インフルエンザＨＡ抗原１重量部に対してスクロース４００〜５００重量部）添加してインフルエンザＨＡ抗原を凍結乾燥すると、最も安定的にＨＡ価が維持されることを確認した（実施例１、６）。マルトースを添加する場合には、マルトースを１０〜４０ｗ／ｖ％（インフルエンザＨＡ抗原１重量部に対してマルトース２００〜８００重量部）添加してインフルエンザＨＡ抗原を凍結乾燥すると、最も安定的にＨＡ価が維持されることを確認した。
また、凍結乾燥前液量を変えてもＨＡ価が安定に維持されることを確認した（実施例１０、１１）。
【００４５】
【表３】
2015091791.tif 000004
【００４６】
表３の結果から、インフルエンザＨＡ抗原は何も加えずに凍結乾燥すると活性が著しく低下してしまうことを確認した（比較例２）。また、スクロースを２０ｗ／ｖ％添加したインフルエンザＨＡ抗原を液体のまま、４０℃で１ヵ月間保存すると、時間の経過と共にＨＡ価が低下することを確認した（比較例３）。
【００４７】
【表４】
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【００４８】
表４の結果から、単糖（グルコース（和光純薬工業製）、ガラクトース（和光純薬工業製）又はフルクトース（和光純薬工業製））或いは三糖（ラフィノース（和光純薬工業製））を２０ｗ／ｖ％添加してインフルエンザＨＡ抗原を凍結乾燥するとＨＡ価が低下することを確認した。
【００４９】
【表５】
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【００５０】
表５の結果から、スクロースを２０ｗ／ｖ％添加してインフルエンザＨＡ抗原を凍結乾燥すると、４０℃で１ヵ月間保存しても、１００〜４００μｇＨＡ／ｍＬのインフルエンザＨＡ抗原含有量（インフルエンザＨＡ抗原１重量部に対してスクロース５００〜２０００重量部）のいずれにおいてもＨＡ価が安定に維持されることを確認した。
【００５１】
【表６】
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【００５２】
表６の結果から、Ａ型Ｈ１Ｎ１と同様に、Ａ型Ｈ３Ｎ２（Ａ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３６１／２０１１、阪大微生物病研究会製）及びＢ型（Ｂ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８（ビクトリア系統）又はＢ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／１／２０１０（山形系統）、阪大微生物病研究会製）でも、スクロースを２０ｗ／ｖ％（Ａ型Ｈ３Ｎ２の１重量部に対してスクロース５００重量部、Ｂ型（ビクトリア系統）１重量部に対してスクロース６６７重量部、Ｂ型（山形系統）の１重量部に対してスクロース５００重量部）添加してインフルエンザＨＡ抗原を凍結乾燥すると、４０℃で１ヵ月間保存してもＨＡ価が安定に維持されることを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明によれば、厳密に低温管理することなく保存してもインフルエンザワクチン抗原の活性を安定に維持することができ、安定に供給されうるインフルエンザワクチン乾燥製剤を提供することができる。また、本発明によれば、該インフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法を提供することができる。