(57)【要約】【課題】新たなセラミド合成促進剤の提供。【解決手段】アラリアエスクレンタ（Alaria esculenta）抽出物を有効成分とするセラミド合成促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アラリアエスクレンタ（Alaria esculenta）抽出物を有効成分とするセラミド合成促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セラミド合成促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂質の一種であるセラミドは、生体内で大部分を占めるグリセロ脂質に比べて量的には少ないが、重要な生理的役割を持つことが知られている。皮膚では特に表皮角層にセラミドが集積しており、細胞間で独特のラメラ構造を形成している細胞間脂質の主成分となっている（非特許文献１）。角層は、皮膚の保湿能や生体の物理的保護を始めとする重要な役割、いわゆるバリア機能を持っており、細胞間脂質はこのバリア機能の実体であり（非特許文献２）、その意味でセラミドは生体防御の要の物質の一つといえるものである。
【０００３】
肌荒れや乾燥肌、また各種皮膚疾患では、この角層の健全な形成が妨げられ、バリア機能低下が起きていることが報告されている。例えば、皮膚表面の加齢に伴う表皮層のターンオーバーの低下、あるいは光や温度、気象条件などの外的要因によって生じる肌荒れや乾燥肌が挙げられる。これらはバリア機能の低下により、本来皮膚が有している保水能力の低下と水分蒸散量の増加が生じた結果誘発されると考えられている（非特許文献３）。またアトピー性皮膚炎では、患者の炎症部のみならず非炎症部でもバリア機能の低下や崩壊が見られ、患者皮膚中セラミドの全般的な、あるいは特定の種類の含量低下が報告されている（非特許文献４）。このほか乾癬でも患者の皮膚中のセラミド量の変動が報告されており（非特許文献５）、これが皮膚バリア崩壊と関係していると考えられる。
【０００４】
このようなバリア機能の低下や皮膚バリアの崩壊からくる肌荒れや乾燥肌、皮膚疾患に対しては、従来、保湿成分の投与で皮膚の乾燥状態を防ぎ潤いを持たせたり、抗炎症剤による湿疹の抑制等が試みられてきた。しかし、これらの方法は、角質表面への水分あるいは保湿成分の一時的な補給に留まるため皮膚内部に充分な潤いを持続的に与えることができなかったり（非特許文献６）、一時的に炎症を抑えても効果の持続性や副作用という面から、必ずしも十分な対処法とはいえなかった。
【０００５】
これに対し、近年バリア機能を担う細胞間脂質の主要構成成分であるセラミドを外部補給することで皮膚の改善治療を試みることも行われ、肌荒れ状態やアトピー性皮膚炎に有効なことが報告されている（非特許文献７）。しかしながら、この方法は効果の出現が早いと思われる半面、従来から用いられていた保湿剤などと同様、効果の持続性の点で不十分な場合があり、皮膚の状態によっては経皮吸収の低下で効果発現が不十分になる場合などが考えられる。
【０００６】
このような課題を克服する技術として、最近では皮膚表層内部で表皮細胞のセラミド合成促進作用を活発化させるものとして、ニコチン酸誘導体や様々植物抽出物が報告されている（例えば、特許文献１、特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平０９−００２９５２号公報
【特許文献２】特開２００６−１１１５６０号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Lukas Landmann：Anat Embryol,178,1-3,1988
【非特許文献２】芋川玄爾：香粧会誌,1(4),250-253,1991
【非特許文献３】赤崎秀一ほか：日皮会誌,98(1),41-51,1988
【非特許文献４】川島真：香粧会誌,15(4),261-262,1991
【非特許文献５】Stefania Motta etc：Arch Dermatol,130,452-456,1994
【非特許文献６】武村俊之：ファルマシア,28,1,1992
【非特許文献７】檜垣祐子ほか：アレルギーの臨床,13(12),26-28,1993
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、従来の化合物や植物抽出物は、その効果や感触上の点から、必ずしも十分に満足できるものとは限らなかった。
従って、本発明の課題は、効果と感触の点からより優れたセラミド合成促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
かかる事情に鑑み、本発明者等は、鋭意検討した結果、褐藻類であるアラリアエスクレンタより得られる抽出物が有効なセラミド合成促進作用を有し、さらに感触の面でも優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
即ち、本発明はアラリアエスクレンタ（Alaria esculenta）抽出物を有効成分とするセラミド合成促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、皮膚表皮細胞に働きかけてセラミド合成を促進し、荒れ肌改善及び各種皮膚疾患の治療により持続的な効果が期待され、さらに感触にも優れるセラミド合成促進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】試験例１における、表皮細胞のセラミド合成に及ぼすアラリアエスクレンタ抽出物の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の構成について詳述する。
【００１５】
本発明に用いられるアラリアエスクレンタ（Alaria esculenta）は、褐藻綱コンブ目チガイソ科アラリア属に属する海藻であり、原産地はフランス北西部のブルターニュ地方の限られた地域である。
【００１６】
本発明に係るアラリアエスクレンタ抽出物は、アラリアエスクレンタを抽出原料として、常法に従って抽出することにより得られる。抽出に用いるアラリアエスクレンタの部位は特に限定されず、全藻、葉部、根部等いずれでもよく、生植物又は乾燥体を、そのまま又は適当な方法で裁断若しくは粉砕して用いることができる。抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール類、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類、ジエチルエーテル等のエーテル類、及びベンゼン等の芳香族化合物を用いることができ、これらから選ばれる二種以上の混合溶媒を用いることもできる。これらの抽出溶媒のうち、水、低級アルコール類及び多価アルコール類から選ばれる１種又は２種以上がより好ましい。抽出は一般に用いられている抽出方法を用いることができ、特に限定はされない。例えば低温抽出、常温抽出、加温抽出法により、３０分から１週間程度かけて抽出することができる。抽出物は、抽出液を濾過した濾液をそのまま使用しても、減圧濃縮しても、溶媒を蒸発させて乾固物としても構わない。また、必要に応じて吸着クロマトグラフィー等の精製手段に付すことも可能である。
【００１７】
また、アラリアエスクレンタ抽出物として市販されているものを使用することも可能であり、具体的にはＧＳＩクレオス社のＡＬＡＲＩＡＮＥ等が挙げられる。
【００１８】
アラリアエスクレンタ抽出物は、後記実施例に示すように、表皮細胞のセラミド合成を促進させる効果を有し、感触も良好である。従って、アラリアエスクレンタ抽出物を配合した皮膚化粧料にセラミド合成促進効果、及びセラミド合成促進に基づくバリア機能改善作用、保湿作用等と優れた使用感を付与することができる。
【００１９】
本発明のセラミド合成促進剤は、剤型的には例えば軟膏類、ローション類、乳液類、クリーム類、パック類、粉末類、顆粒類等の任意の剤型とすることができ、例えば使用形態として皮膚化粧料が挙げられる。皮膚化粧料の基剤としては、公知の外用基剤で良く、特に限定されない。そして適用する皮膚としては頭皮を含む人体上の皮膚全てに利用が期待できる。
【００２０】
本発明のセラミド合成促進剤における、アラリアエスクレンタより得られる抽出物の含有量は、用いる抽出物や使用する剤型によって様々で、一概には言えないが、一般にはセラミド合成促進剤の総量を基準として、アラリアエスクレンタ抽出物中の固形分換算で、０．００００１質量％（以下、単に％と略す。）以上が好ましく、０．０００１％以上がより好ましく、０．００１％以上がさらに好ましい。また、１０％以下が好ましく、５％以下がより好ましく、２％以下がさらに好ましい。具体的な範囲としては、０．００００１〜１０％が好ましく、より好ましくは０．０００１〜５％であり、さらに好ましくは０．００１〜２％である。これらの範囲であれば、より優れたセラミド合成促進効果を発揮させることができ、しかも使用時の感触が良好で、また個々の剤型を安定に保つことができる。
【００２１】
本発明のセラミド合成促進剤には、必要に応じて、通常、医薬品、医薬部外品、化粧料等の皮膚外用剤に配合される各種成分を、本発明の目的が達成される範囲内で適宜配合することができる。
【００２２】
具体的な成分としては、タール系色素、酸化鉄等の着色顔料、パラベン、フェノキシエタノール等の防腐剤、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、環状シリコーン等のシリコーン油、パラフィン、ワセリン等の炭化水素類、オリーブスクワラン、米スクワラン、米胚芽油、ホホバ油、ヒマシ油、紅花油、オリーブ油、マカデミアナッツ油、ヒマワリ油等の植物油、ミツロウ、モクロウ、カルナバロウ等のロウ類、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸セチル、イソステアリン酸イソステアリル、ミリスチン酸イソプロピル等のエステル油、エタノール等の低級アルコール類、セタノール、ベヘニルアルコール、ステアリルアルコール、長鎖分岐脂肪族アルコール等の高級アルコール類、コレステロール、フィトステロール、分岐脂肪酸コレステロールエステル、マカデミアナッツ脂肪酸フィトステリルエステル等のステロール類及び誘導体、硬化油等の加工油類、ステアリン酸、ミリスチン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、イソ型長鎖脂肪酸、アンテイソ型長鎖脂肪酸等の高級脂肪酸、リモネン、水素添加ビサボロール等のテルペン類、トリカプリル・カプリン酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸グリセリル、トリイソ型長鎖脂肪酸グリセリル、トリパルミチン酸グリセリル等のトリグリセリド、セチル硫酸ナトリウム、Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸塩等の陰イオン界面活性剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、多価アルコール脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、変性シリコーン、蔗糖脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤、テトラアルキルアンモニウム塩等の陽イオン界面活性剤、ベタイン型、スルホベタイン型、スルホアミノ酸型等の両性界面活性剤、レシチン、リゾフォスファチジルコリン、セラミド、セレブロシド等の天然系界面活性剤、酸化チタン、酸化亜鉛等の顔料、ジブチルヒドロキシトルエン等の抗酸化剤、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、硫酸ナトリウム、メタ珪酸ナトリウム、塩化カルシウム等の無機塩類、クエン酸ナトリウム、酢酸カリウム、琥珀酸ナトリウム、アスパラギン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ジクロロ酢酸、メバロン酸、グリチルリチン酸等の有機酸及びその塩、塩酸エタノールアミン、硝酸アンモニウム、塩酸アルギニン、ジイソプロピルアミン塩、尿素、デカルボキシカルノシン等の有機アミン類及びその塩、エデト酸等のキレート剤、キサンタンガム、カルボキシビニルポリマー、カラギーナン、ペクチン、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、寒天等の増粘剤、水酸化カリウム、ジイソプロパノールアミン、トリエタノールアミン等の中和剤、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルフォン酸塩等の紫外線吸収剤、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、マルチトール、ジグリセリン、ラフィノース等の多価アルコール、各種アミノ酸、アスコルビン酸、ビオチン、トコフェロール等のビタミン類及びアスコルビン酸硫酸エステル塩、アスコルビン酸燐酸エステル塩、ニコチン酸トコフェロール等のビタミン誘導体等が挙げられる。
【００２３】
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の実施態様を開示する。
【００２４】
＜１＞アラリアエスクレンタ抽出物を有効成分とするセラミド合成促進剤。
【００２５】
＜２＞アラリアエスクレンタ抽出物の含有量が、固形分換算で好ましくは０．００００１％以上、より好ましくは０．０００１％以上、さらに好ましくは０．００１％以上であり、また好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下、さらに好ましくは２％以下である＜１＞記載のセラミド合成促進剤。
＜３＞アラリアエスクレンタ抽出物の含有量が、固形分換算で好ましくは０．００００１〜１０％、より好ましくは０．０００１〜５％、さらに好ましくは０．００１〜２％である＜１＞又は＜２＞記載のセラミド合成促進剤。
＜４＞アラリアエスクレンタ抽出物が、アラリアエスクレンタより、水、低級アルコール類及び多価アルコール類から選ばれる１種又は２種以上により抽出されたものである＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載のセラミド合成促進剤。
＜５＞皮膚に適用されるものである＜１＞〜＜４＞のいずれかに記載のセラミド合成促進剤。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明によるセラミド合成促進効果を明らかにするための試験例、処方例を示す。尚、本発明はこれらに限定されるものではない。初めに培養皮膚表皮細胞を用いたセラミド合成促進効果の評価方法について述べる。
【００２７】
・培養表皮細胞
ヒト正常表皮角化細胞は市販品（Ｅｐｉｄｅｒｃｅｌｌ／新生児包皮：クラボウ社製）を用いた。
【００２８】
・表皮細胞培養用培地
ＭＣＤＢ１５３ＨＡＡ（和光純薬社より購入）をベースとし、ハイドロコーチゾン（０．５μｍｏｌ／Ｌ）、エタノールアミン（０．１ｍｍｏｌ／Ｌ）、ホスホエタノールアミン（０．１ｍｍｏｌ／Ｌ）、インシュリン（５μｇ／ｍＬ）、及びＥＧＦ（上皮細胞成長因子：１０ｎｇ／ｍＬ）を加えた「Ｋ−ＧＭ培地」を調製した。培養には、これにＢＰＥ（牛脳下垂体抽出液、クラボウ社より購入）を培地１ｍＬ当たり４μＬ添加し、表皮細胞培養用培地とした。
【００２９】
・Ｈｅｐｅｓ緩衝液
Ｈｅｐｅｓ７．１５g 、グルコース１．８g 、塩化カリウム０．２２g 、塩化ナトリウム７．７g 、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物０．２７g を精製水に溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．４に調整後、１Ｌにメスアップした。
【００３０】
・試料添加と表皮細胞抽出物の調製
細胞培養正常ヒト表皮細胞の細胞数をＫ−ＧＭ培地（ＢＰＥ添加）にて１×１０５個／ｍＬに調整し、６０ｍｍコラーゲンコートディッシュ（旭テクノグラス社製）に１ｍＬずつ播種し、これにＫ−ＧＭ培地２ｍＬを加えた計３ｍＬ／ディッシュを、９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で４日間静置培養した。
【００３１】
その後、培養上清を吸引除去し、評価試料を規定濃度で添加したＫ−ＧＭ培地（ＢＰＥ添加）で培地を交換して、９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で７日間静置培養した。この間２日置きに培地交換を行った。７日目に０.５μＣｉの[14Ｃ]-セリン（アマシャム社製）を培地に添加して、更に２日間培養を行った。培養後、以下のごとく細胞を処理した。
【００３２】
・脂質の抽出
培地上澄を吸引除去し、５ｍＬのＨｅｐｅｓ緩衝液で２回洗浄した後、細胞をセルスクレーパー（住友べークライト製）でディッシュからかきとった。これを１．６ｍＬのＨｅｐｅｓ緩衝液に懸濁し、４ｍＬのメタノールと２ｍＬのクロロホルムを加え混合した。２０分間室温で静置した後、１.６ｍＬのクロロホルムと１.６ｍＬのＨｅｐｅｓ緩衝液をそれぞれ更に加え、よく撹拌した。撹拌後３０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離を行った後、クロロホルム層をとり、脂質画分を得た。クロロホルムを減圧遠心濃縮機により除き１ｍＬのベンゼンに再溶解した。
【００３３】
・セラミド画分の単離
ベンゼンに再溶解した試料を、イアトロビーズ（６ＲＳ−８０６０：イアトロン社製）１００μＬを充填したカラムに供し、ベンゼン−酢酸エチル（４：１）溶液で洗浄した後、酢酸エチル１ｍＬにて溶出させることにより、セラミド画分を得た。
【００３４】
・[14Ｃ]ラベルされたセラミドの放射活性測定
上記セラミド画分に取り込まれた放射活性を、液体シンチレーションカウンター（ＳＣ３１、Ａｌｏｋａ社製）にて測定した。
【００３５】
試験例（セラミド合成促進効果の評価）
評価試料として、ＡＬＡＲＩＡＮＥ（ＧＳＩクレオス社）（アラリアエスクレンタエキス分として０．５〜２．５％含有）を使用し、上記の評価方法に従って、セラミド合成促進効果を評価した。評価結果を図１に示す。評価結果は、試料無添加群における放射活性測定値をコントロールとして、これに対する各試料添加培養プレートの放射活性値の比率として示した。図１に示すように、評価試料の０．３％添加、１％添加においてセラミド合成促進効果が認められた。
【００３６】
以下、本発明のセラミド合成促進剤の処方例を示す。
【００３７】
処方例１〜３（スキンクリーム）
【００３８】
下記表１の親水性成分（Ａ）を湯浴で８０℃に加温し、混合した下記親油性成分（Ｂ）に攪拌しながら徐々に加えた。次に、ホモゲナイザーで攪拌して充分に乳化分散させた後、攪拌しながら徐々に冷却し、クリームを得た。
【００３９】
【表１】
2015229658.tif 000002
【００４０】
処方例４〜６（ローション）
下記表２の各成分をそれぞれ混合溶解し、攪拌して、ローションを調製した。
【００４１】
【表２】
2015229658.tif 000003
【００４２】
処方例７〜９（ジェル）
下記表３の成分（Ａ）及び成分（Ｂ）を各々６０℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、３０℃まで冷却して、ジェルを調製した。
【００４３】
【表３】
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【００４４】
処方例１０〜１２（ジェル）
下記表４の成分（Ａ）及び成分（Ｂ）を各々６０℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、３０℃まで冷却して、ジェルを調製した。
【００４５】
【表４】
2015229658.tif 000005
【００４６】
処方例１３〜１５（親油クリーム）
下記表５の成分（Ａ）及び成分（Ｂ）を各々６０℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、３０℃まで冷却して、親油クリームを調製した。
【００４７】
【表５】
2015229658.tif 000006
【００４８】
処方例１６〜１８（サンスクリーン）
下記表６の成分（Ａ）及び成分（Ｂ）を各々８０℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、３０℃まで冷却して、サンスクリーンを調製した。
【００４９】
【表６】
2015229658.tif 000007
【００５０】
処方例１９〜２１（入浴剤）
下記表７の成分（Ａ）及び成分（Ｂ）を各々６０℃に加熱溶解した後混合して、撹拌しつつ冷却し、３０℃まで冷却して、入浴剤を調製した。
【００５１】
【表７】
2015229658.tif 000008
【００５２】
上記処方例１〜２１のセラミド合成促進剤は、いずれも肌感触に優れるものである。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
以上の如く、本発明のセラミド合成促進剤は、表皮細胞に働きかけてそのセラミド合成を促進することができ、さらに感触にも優れるため、荒れ肌改善や各種皮膚疾患の治療においてより持続的に効果が期待できる優れた製剤として利用することができる。
【図１】
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