(57)【要約】【課題】外科的癒着の治療のための抗コネキシンポリヌクレオチドの使用の提供。【解決手段】外科的癒着の治療のためのコネキシン調節、ならびに関連した方法、組成物、および物品。本発明は、対象における術後癒着を予防または軽減する方法を提供し、この方法は、手術部位で患者に有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術切開部位で投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術中および／または手術後に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、（１）コネキシンタンパク質の発現を下方調節する、（２）ギャップジャンクションの形成を低減することによって、細胞間連絡を阻害する、（３）手術または外科的修復の部位での外科的癒着を予防または低減するのに、全体的または部分的に有効である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癒着、より具体的には外科的癒着、およびその治療方法、ならびに組成物、製剤、物品およびキットならびにこのような組成物を含む送達デバイスに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
以下は、本発明の理解に有用でありうる情報を含む。このことは、本明細書に記載される情報が、本明細書に記載または特許請求されている発明に対する先行技術であるか、もしくはこれに関連していることを認めるものでも、明示的にもしくは暗黙に言及される刊行物もしくは文書が先行技術であることを認めるものでもない。
【０００３】
ヒトおよび他の哺乳動物において、創傷は、細胞イベントおよび生化学的イベントの組織化された複雑なカスケードを誘発し、この結果、大半の場合において創傷の治癒がもたらされる。理想的に治癒した創傷とは、細胞レベル、組織レベル、器官レベル、および生物レベルにおける正常な解剖学的構造、機能、および外見が回復しているものである。手術、疾患、外傷、微生物、または外来物質のいずれにより誘発されたものでも、創傷の治癒は、炎症、上皮形成、新脈管形成、およびマトリックス沈着を含めたいくつものオーバーラップした段階を包含する複雑な過程により進行する。通常、これらの過程により、創傷の完成（ｍａｔｕｒｅ  ｗｏｕｎｄ）およびある程度の瘢痕形成がもたらされる。
【０００４】
癒着形成は、通常は分かれている体組織が瘢痕組織により連結される過程である。癒着は、最も一般的には手術切開、擦過または外傷に起因する。癒着はほとんど全ての型の手術の後に形成され得るが、通常の腹部手術、婦人科手術、整形外科手術および心臓外科手術後に最も高い頻度で生じる。腹部手術の後に、腹膜癒着形成の発生率は９０％ほど高くなり得ることが報告されている。特許文献１を参照されたい。複数回の手術を受けた患者における癒着の形成の発生率も、９０％ほど高いと考えられる。手術後の腹腔内および骨盤での癒着が、腹腔の手術から回復している患者における主な問題であり、癒着は患部組織間で形成される傾向がある。特許文献２を参照されたい。この問題が広く普及していることも、大きな経済的影響を有する。
【０００５】
癒着は手術後に最も一般的に生じるが、癒着は、外傷性傷害、炎症性疾患、腹腔内化学療法および放射線療法を含む手術以外の組織傷害からも起こる場合がある。その他の合併症のなかでも、外科的癒着の存在は、疼痛、違和感、および婦人科手術に起因する女性不妊症を伴う場合がある。腸閉塞は、例えば、外科的癒着に起因する合併症である。癒着は、腸閉塞および不妊の主な原因であることも報告されており、関連する合併症は慢性骨盤痛、尿道閉塞および排尿不全を含む。特許文献３を参照されたい。癒着形成は、腹膜への傷害の結果起こり得るものであり、次いで、これが傷害または外傷部位が炎症になる原因となり得る。炎症は治癒過程の一部分であるが、これは、瘢痕組織の線維帯の発達に貢献することにより癒着形成に貢献できる。フィブリン溶解とよばれる過程を通じて、線維帯は最終的に溶解する。しかし、線維帯が溶解しない場合、これらは、増殖性癒着に発展する可能性があり、これらが通常は分かれている器官および組織を連結して結合させる。細胞外マトリクスの過剰な生成および沈着が、腹膜癒着の発生を含む体全体の組織線維症を生じる鍵となる因子であり得ることが報告されている（特許文献４を参照されたい）。
【０００６】
癒着形成を予防するための種々のアプローチが報告されている。「Ｔｈｅ  Ｐｅｒｉｔｏｎｅｕｍ」、Ｄｉｚｅｒｅｇａ，  Ｇ．  Ｓ．およびＲｏｄｇｅｒｓ，  Ｋ．  Ｅ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、３０７〜３６９頁（１９９２年）中のＤｉｚｅｒｅｇａ，  Ｇ．  Ｓ．およびＲｏｄｇｅｒｓ，  Ｋ．  Ｅ．、「Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎｓ」を参照されたい。報告されている癒着の治療の全般的なカテゴリーは：１）腹膜滲出液中のフィブリン沈着の防止、２）局所組織炎症の軽減、および３）フィブリン沈着物の除去を含む。同上。しかし、何年にもわたる研究にもかかわらず、手術後癒着を予防するための製品がほとんど得られていないことが報告されている。Ｊｏｈｎｓ，  Ａ．、Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｕｐｄａｔｅ、７巻（６号）：５７７〜５７９頁（２００１年）。その間に、外科的癒着に伴う医療上の問題がより深刻になっている。なぜなら、いくつかの障害について繰り返しの外科的手順が全般的に増えているからである。つまり、外科的癒着を予防し、それらが引き起こす合併症を軽減するための化合物および方法の開発に対する著しい要求がある。
【０００７】
ギャップジャンクションは、直接的な細胞間情報伝達（ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）を促進する細胞膜構造である。ギャップジャンクションチャネルは、各々が６つずつのコネキシンサブユニットからなる２つのコネクソン（ｃｏｎｎｅｘｉｎ）（ヘミチャネル）から形成される。各６量体コネクソン（ｃｏｎｎｅｘｉｎ）は、向い側の膜内のコネクソン（ｃｏｎｎｅｘｉｎ）とドッキングして、単一のギャップジャンクションを形成する。ギャップジャンクションチャネルは、全身において見出されることが報告されている。例えば、角膜上皮などの組織は、６〜８層の細胞層を有するが、異なる層では異なるギャップジャンクションチャネルを発現することが報告されており、基底層ではコネキシン４３を有し、基底層から中翼細胞層ではコネキシン２６を有する。一般に、コネキシンは１つのタンパク質ファミリーであり、通常、それらの分子量により命名されるか、または系統発生に基づき、アルファ、ベータ、およびガンマのサブクラスに分類されている。ヒトで少なくとも２０種のアイソフォームが、また、マウスで少なくとも１９種のアイソフォームが同定されている。特徴的なパターンのコネキシンタンパク質発現を有する様々な組織および細胞型が報告されており、角膜などの組織は、傷害または移植後において、コネキシンタンパク質の発現パターンを変化させることが示されている（Ｑｕｉ，  Ｃ．ら（２００３年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１３巻、１９６７〜１７０３頁；  Ｂｒａｎｄｅｒ  ら（２００４年）、Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第１２２巻、１３１０〜２０頁）。
【０００８】
異常なコネキシン機能は、特定の疾患状態（例えば、心疾患）と関連し得ることが報告されている（Ａ．  Ｃ．  ｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏら、Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ、１９９４年、第５巻、６８６頁）。ある種のコネキシンタンパク質では、ギャップジャンクションを介した細胞間情報伝達レベルに影響を及ぼしうる外因性物質の追加により、代謝回転特性および輸送特性の変化が誘導されうる（Ｄａｒｒｏｗ，  Ｂ．、Ｊ．  ら（１９９５年）、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ、第７６巻、３８１頁；  Ｌｉｎ  Ｒら（２００１年）、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、第１５４巻、第４号、８１５頁）。ウイルス性疾患、真菌性疾患、および代謝性疾患に関係する遺伝子の発現調節について、アンチセンス技術が報告されている。例えば、特許文献１（ＨＩＶに対するオリゴヌクレオチド阻害剤）、特許文献２（単純ヘルペスウイルスのＶｍｗ６５  ｍＲＮＡにハイブリダイズし、複製を阻害するオリゴマー）を参照されたい。また、Ｂｅｃｋｅｒらに対する特許文献３（コネキシンに対するアンチセンスヌクレオチドを含む製剤）も参照されたい。ギャップジャンクションおよびヘミチャネルに対するペプチド阻害剤（模倣性ペプチドを含む）が報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄ，  Ｖ．Ｍ．  ら、Ａｍ  Ｊ．
Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、第２７９巻、Ｌ６１９〜Ｌ６２２頁（２０００年）；  Ｅｖａｎｓ，  Ｗ．Ｈ．およびＢｏｉｔａｎｏ，  Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．、第２９巻、６０６〜６１２頁；ならびにＤｅ  Ｖｒｉｅｓｅ  Ａ．Ｓ．  ら、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．、第６１巻、１７７〜１８５頁（２００１年）を参照されたい。また、ＢｅｃｋｅｒおよびＧｒｅｅｎ、ＰＣＴ／ＵＳ０６／０４１３１（「Ａｎｔｉ−ｃｏｎｎｅｘｉｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ」）も参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第６，６１３，３２５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，００２，５５１号明細書
【特許文献３】米国特許第６，６８９，８０３号明細書
【特許文献４】米国特許第６，８４１，１５３号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
簡単な要旨
本明細書で記載および特許請求される発明は、この「発明の概要」において説明または記載または言及される属性および実施形態を含むがこれらに限定されない多くの属性および実施形態を有する。それは包括的であることが意図されるものでなく、本明細書で記載および特許請求される発明は、限定ではなくて例示だけを目的として組み入れられているこの「発明の概要」に限定されるものでも、「発明の概要」において特定される特徴または実施形態により限定されるものでもない。
【００１１】
本発明は、外科的癒着を治療し、この発生率を低減し、かつ／または外科的癒着を予防するための方法を提供する。
【００１２】
一態様では、本発明は、癒着を予防または軽減する方法であって、それを必要とする対象に、抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法に関する。
【００１３】
本発明は、対象における術後癒着を予防または軽減する方法であって、手術部位で患者に有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法にも関する。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術切開部位で投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術中および／または手術後に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、（１）コネキシンタンパク質の発現を下方調節する、（２）ギャップジャンクションの形成を低減することによって、細胞間連絡を阻害する、（３）手術または外科的修復の部位での外科的癒着を予防または低減するのに、全体的または部分的に有効である。
【００１４】
本発明は、二次外科的癒着の形成を予防または軽減する方法であって、癒着を修復するための手順の後に、対象に有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法にも関する。一実施形態では、手順は、分離手順またはリリース手順である。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術切開部位で投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術中および／または手術後に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、（１）コネキシンタンパク質の発現を下方調節する、（２）ギャップジャンクションの形成を低減することによって、細胞間連絡を阻害する、（３）手術または外科的修復の部位での二次外科的癒着を予防または低減するのに、全体的または部分的に有効である。
【００１５】
ある特定の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術の間、または外傷の結果として露出し、または傷ついた上皮、結合、筋肉、および神経の組織、または他の組織に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは局所的に投与される。他の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、移植または滴下注入または注射される。
【００１６】
本発明は、癒着の形成を、その危険性がある患者において予防または軽減する方法であって、前記患者に治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法にも関する。一実施形態では、患者は、手術を受けている。一実施形態では、癒着は、外科的癒着である。一実施形態では、患者は、傷害または外傷を受けている。
【００１７】
一実施形態では、治療方法は、１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤の投与をさらに含む。
【００１８】
ある特定の実施形態によれば、対象は哺乳動物である。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。別の実施形態では、対象は動物またはトリである。トリにはペットおよび家禽が含まれる。動物にはブタ、ウシ、ならびに競技動物およびペット、例えば、ウマ、イヌおよびネコなどが含まれる。
【００１９】
本発明は、対象における外科的癒着の形成を予防または低減する方法であって、活性成分として抗コネキシンポリヌクレオチドを含有する有効量の治療製剤を投与する工程を含む方法にも関する。
【００２０】
本発明はさらに、患者における癒着を低減または予防する方法であって、組織損傷を受け、癒着形成の危険性がある組織に、抗コネキシンポリヌクレオチドおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を曝す工程を含む方法に関する。
【００２１】
したがって本発明は、例えば、外科的癒着を含めた癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物および製剤にも関する。
【００２２】
一態様では、本発明は、癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物は、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチド）を含む。好ましくは、医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含む。例えば、本発明は、（ａ）治療有効量の薬学的に許容されるコネキシンアンチセンスポリヌクレオチド、および（ｂ）薬学的に許容される担体もしくは希釈剤を含む、癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物を含む。
【００２３】
本発明は、（ａ）治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、および（ｂ）治療有効量の１または複数の治療剤を含む、癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物も含む。本発明は、（ａ）治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに（ｂ）治療有効量の１または複数の、および／または創傷治癒において有用な薬剤を含む、癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物を含む。本発明は、（ａ）治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、および（ｂ）治療有効量の１または複数の抗微小管剤を含む、癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物を含む。好ましくは、医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含む。
【００２４】
したがって、例えば、癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物は、例えば、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドと、１または複数の創傷治癒に有用な他の薬剤、例えば、創傷治癒を促進または改善することにおいて有効な成長因子、例えば、血小板由来成長因子、上皮成長因子、線維芽細胞成長因子（例えば、ＦＧＦ２）、血管内皮成長因子、およびトランスフォーミング成長因子β３など、ならびに／または創傷治癒を促進または改善することにおいて有効なサイトカイン、例えば、ＩＬ−７およびＩＬ−１０など、ならびに／または創傷治癒を促進または改善することにおいて有効な他の薬剤、例えば、ＩＧＦ（例えば、ＩＧＦ−１）およびＩＧＦＢＰ（例えば、ＩＧＦＢＰ−２）などとの混合物として、組合せ調製物の形態でも提供される。
【００２５】
「組合せ調製物」という用語は、上記で定義した組合せパートナーを個別に投与することもでき、異なる量の組合せパートナー（ａ）および（ｂ）による異なる固定の組合せを用いて投与することもできる、すなわち、同時投与、個別投与、または逐次投与しうるという意味における「要素キット（ｋｉｔ  ｏｆ  ｐａｒｔｓ）」を含む。したがって、キットの要素を、例えば、同時に投与することもでき、時間的にずらして投与する、すなわち、要素キットの任意の要素について、異なる時点および等しいかまたは異なる時間間隔で投与することもできる。
【００２６】
好適な実施形態では、組合せ調製物の投与により、そのような併用の結果として、投与時点が少なくなり、かつ／または投与間の時間間隔が増加する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、癒着を患っているか、癒着を形成する危険性がある対象に、遅延放出調製物、緩徐放出調製物、持続放出調製物、制御放出調製物、および／または反復作用調製物として処方された、有効量の１または複数の薬学的に許容されるコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドを含む製剤を含む。
【００２８】
さらなる態様では、本発明は、対象の皮膚に接着または他の方法で適用できる、経皮パッチ、包帯材、パッド、ラップ、マトリクス、および絆創膏を含み、前記物品は、治療有効量の１または複数の薬学的に許容される抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドを患者に送達することができることによって、癒着の形成を予防し、または遅延させる。
【００２９】
本発明は、治療有効量の１または複数の薬学的に許容される抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドを含有する、癒着を治療または予防するのに有用なデバイス、例えば、薬物リザーバを囲む速度制御膜、およびモノリシックマトリクスデバイスを含む。これらのデバイスは、本明細書に開示されるようにそれを必要とする対象を治療するために使用することができる。固体基材であって、抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドを、単独で、または固体基材上、もしくは固体基材中に分散させた、１または複数の治療剤および／または創傷治癒に有用な薬剤と組み合わせて含む固体基材の形態を含めた創傷包帯材またはマトリクスが提供されることが適当である。一実施形態では、本発明の医薬品は、創傷包帯材または創傷治癒促進マトリクスと組み合わせて提供される。好適な抗コネキシンポリヌクレオチドおよびコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、抗コネキシン４３ポリヌクレオチドおよびコネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチドである。
【００３０】
癒着を治療または予防するのに有用な医薬組成物は、併用投与、同時投与、別々の逐次投与、または持続性投与のために提供される。一実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤と同時に、またはほぼ同時に投与される。
【００３１】
ある特定の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４３、コネキシン４５、コネキシン４６およびコネキシン４６．６からなる群から選択されるコネキシンタンパク質発現を低減する。好適な実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、コンネキシオン（ｃｏｎｎｅｘｉｏｎ）４３の発現を低減する。別の好適な実施形態では、コネキシンはヒトコネキシンである。
【００３２】
コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドの例には、例えば、アンチセンス（修飾および非修飾骨格アンチセンス；例えば、コネキシンｍＲＮＡに結合するＤＮＡアンチセンスポリヌクレオチド）、ＲＮＡｉポリヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを含めた、抗コネキシンオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）が含まれる。
【００３３】
適当なコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、例えば、コネキシン４３（Ｃｘ４３）、コネキシン２６（Ｃｘ２６）、コネキシン３７（Ｃｘ３７）、コネキシン３０（Ｃｘ３０）、コネキシン３１．１（Ｃｘ３１．１）、およびコネキシン３２（Ｃｘ３２）に対するアンチセンスＯＤＮを含む。ある特定の実施形態では、適当な組成物は、例えば、Ｃｘ４３、２６、３０、および３１．１を標的にするポリヌクレオチドを含めた、組合せでの複数のコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドを含む。好適なコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシン４３を標的にする。
【００３４】
好都合なことには、コネキシン４３に対するオリゴデオキシヌクレオチドは、ＧＴＡ  ＡＴＴ  ＧＣＧ  ＧＣＡ  ＡＧＡ  ＡＧＡ  ＡＴＴ  ＧＴＴ  ＴＣＴ  ＧＴＣ  （配列番号１）；  ＧＴＡ  ＡＴＴ  ＧＣＧ  ＧＣＡ  ＧＧＡ  ＧＧＡ  ＡＴＴ  ＧＴＴ  ＴＣＴ  ＧＴＣ  （配列番号２）；  ＧＧＣ  ＡＡＧ  ＡＧＡ  ＣＡＣ  ＣＡＡ  ＡＧＡ  ＣＡＣ  ＴＡＣ  ＣＡＧ  ＣＡＴ  （配列番号３）、配列番号１、２、もしくは３と少なくとも約７０パーセントの相同性を有するポリヌクレオチド、または中程度から高いストリンジェンシーの条件下で、コネキシン４３ｍＲＮＡにハイブリダイズするポリヌクレオチドから選択される。
【００３５】
本発明は、抗コネキシンポリヌクレオチドの抗癒着活性を評価する方法であって、癒着を形成する危険性がある細胞を抗コネキシンポリヌクレオチドと接触させる工程と、前記抗コネキシンポリヌクレオチドの抗癒着効果を決定する工程とを含む方法にも関する。一実施形態では、前記方法は、インビトロで実施される。別の実施形態では、前記方法は、インビボで実施される。
【００３６】
本発明はさらに、癒着を治療または予防するのに有用な製品であって、（ａ）（ｉ）抗コネキシンポリヌクレオチド、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体を有する医薬組成物、ならびに（ｂ）手術を受けているか、または他に癒着を有する危険性がある患者に医薬組成物を投与するための指示書を含む製品に関する。ある特定の実施形態では、指示書は、外科的手順後の外科的癒着を治療するために患者に医薬組成物を投与すること、および手順の部位または生じた創傷で、外科的癒着を予防または低減するのに十分な量で医薬組成物を投与することを記載している。好適な抗コネキシンポリヌクレオチドおよびコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、抗コネキシン４３ポリヌクレオチドおよびコネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチドである。一実施形態では、組成物は、治療有効量の１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤をさらに含む。一実施形態では、製品は、治療有効量の１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤を含有する組成物をさらに含む。
【００３７】
本発明は、癒着を治療または予防するのに有用な製品を作る方法であって、（２）治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含む容器、ならびに（ｂ）例えば、手術、傷害、もしくは外傷の結果として癒着を有するか、または癒着を有する危険性がある患者を治療するための指示書を含む方法に関する。好適な抗コネキシンポリヌクレオチドおよびコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、抗コネキシン４３ポリヌクレオチドおよびコネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチドである。一実施形態では、組成物は、治療有効量の１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤をさらに含む。一実施形態では、製品は、治療有効量の１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤を含有する組成物をさらに含む。
【００３８】
本発明はまたさらに、癒着を治療または予防するのに有用な製品を作る方法であって、（２）治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含む容器、ならびに（ｂ）修正的外科手術、例えば、リリース手順または分離手順の結果として、二次癒着を有するか、または二次癒着を形成する危険性がある患者を治療するための指示書を含む方法に関する。好適な抗コネキシンポリヌクレオチドおよびコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、抗コネキシン４３ポリヌクレオチド、およびコネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチドである。一実施形態では、組成物は、治療有効量の１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤をさらに含む。一実施形態では、製品は、治療有効量の１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤を含有する組成物をさらに含む。
【００３９】
本発明はさらに、癒着を治療または予防するのに有用な製品を作る方法であって、（ｉ）抗コネキシンポリヌクレオチド、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含有する１または複数の剤形を含有する物質と、（ｂ）患者に医薬組成物を投与することによって、癒着を有するか、または癒着を有する危険性がある患者を治療するための表示指示書とを包装する工程を含む方法に関する。ある特定の実施形態では、指示書は、手術を受けている患者において、癒着または二次癒着を治療するために、患者に剤形を投与することを記載している。
例えば、本願発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
対象における癒着形成を予防または軽減するための組成物であって、治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物。
（項目２）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、コネキシンタンパク質の発現を低減し、該コネキシンが、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３０．３、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４０．１、コネキシン４３、コネキシン４５、コネキシン４６、およびコネキシン４６．６からなる群から選択される、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、コネキシン２６、コネキシン３０、コネキシン３１．１、コネキシン３２、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、およびコネキシン４５から選択されるコネキシンの発現を低減する、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、コネキシン４３の発現を低減する、項目３に記載の組成物。
（項目６）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、またはＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである、項目２に記載の組成物。
（項目７）
前記組織が、上皮組織、結合組織、筋肉組織、および神経組織からなる群から選択される、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記対象が、外科的手順を受けたか、または受けている、項目１に記載の組成物。
（項目９）
外科的癒着形成を予防または低減するために、前記組成物が投与されることを特徴とする、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記組成物は、手術切開の部位で投与されることを特徴とする、項目８に記載の組成物。
（項目１１）
前記組成物は、内部手術部位で投与されることを特徴とする、項目８に記載の組成物。
（項目１２）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、ギャップジャンクション形成を低減することによって、細胞間連絡を阻害する、項目１に記載の組成物。
（項目１３）
前記コネキシンがヒトコネキシンである、項目２に記載の組成物。
（項目１４）
外科的癒着形成の危険性がある患者にて、外科的癒着形成を予防または軽減するための組成物であって、治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物。
（項目１５）
前記患者が、手術を受けたか、または受けている、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記組成物が、癒着形成を阻止または阻害するのに有効である量の抗コネキシンオリゴヌクレオチドを含む、項目１４に記載の組成物。
（項目１７）
前記抗コネキシンオリゴヌクレオチドが抗コネキシン４３オリゴヌクレオチドである、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
前記組成物が局所投与されることを特徴とする、項目１４に記載の組成物。
（項目１９）
前記組成物が移植または滴下注入されることを特徴とする、項目１４に記載の組成物。
（項目２０）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、配列番号３〜１２からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである、項目１または１４に記載の組成物。
（項目２１）
前記コネキシンオリゴヌクレオチドが、配列番号１および２から選択される、項目１または１４に記載の組成物。
（項目２２）
二次外科的癒着形成を予防または軽減するための組成物であって、前記組成物は、有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを含み、そして前記組成物は、癒着を修復する手順の後に投与されることを特徴とする、組成物。
（項目２３）
前記手順が、分離手順またはリリース手順である、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
前記組成物が、手術切開の部位で投与されることを特徴とする、項目２２に記載の組成物。
（項目２５）
前記組成物が、手術中および／または手術後に投与されることを特徴とする、項目２２に記載の組成物。
（項目２６）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、投与部位で、全体的または部分的に、コネキシンタンパク質の発現を下方調節するのに有効である、項目２２に記載の組成物。
（項目２７）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがコネキシン４３の発現を低減する、項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが抗コネキシン４３オリゴヌクレオチドである、項目２２に記載の組成物。
（項目２９）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがコネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目２２に記載の組成物。
（項目３０）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、またはＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである、項目２２に記載の組成物。
（項目３１）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、ギャップジャンクション形成を低減することによって、全体的または部分的に、細胞間連絡を阻害するのに有効である、項目２２に記載の組成物。
（項目３２）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、手術または外科的修復の部位で、全体的または部分的に、二次外科的癒着を予防または低減するのに有効である、項目２２に記載の組成物。
（項目３３）
抗コネキシンポリヌクレオチドを含む、癒着の処置または予防に使用するための洗浄溶液。
（項目３４）
前記洗浄溶液が、関節鏡下洗浄のため、気管支肺胞洗浄、胃洗浄、腹膜洗浄、または管洗浄のために処方される、項目３３に記載の洗浄溶液。
（項目３５）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが抗コネキシン４３オリゴヌクレオチドである、項目３３に記載の洗浄溶液。
（項目３６）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがコネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目３３に記載の洗浄溶液。
（項目３７）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、コネキシンタンパク質発現を低減する、項目３３から３６のいずれかに記載の洗浄溶液。
（項目３８）
（ａ）（ｉ）癒着を予防するのに有効な、０．０５μＭ〜３２００μＭの濃度で存在する量の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび（ｉｉ）薬学的に許容される担体を有する医薬組成物と、（ｂ）手術を受けたか、または受けている患者に、該医薬組成物を投与するための指示書とを含む製品。
（項目３９）
前記指示書が、外科的手順後に外科的癒着を低減または予防するために、前記患者に前記医薬組成物を投与する工程および該手順の部位または生じた創傷で外科的癒着を予防または低減するのに十分な量で該医薬組成物を投与する工程を記載している、項目３８に記載の製品。
（項目４０）
製品を作る方法であって、（ａ）（ｉ）癒着を予防するのに有効な、０．０５μＭ〜３２００μＭの濃度で存在する量の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を含有する容器と、（ｂ）外科的手順を受けている患者に、該医薬組成物を投与することによって、外科的癒着を有するか、または外科的癒着を有する危険性がある患者を治療するための表示指示書とを組み合わせる工程を含む方法。
（項目４１）
前記指示書が、前記患者に前記医薬組成物を投与する工程および前記手術部位で、癒着を予防または低減するのに十分な量で該医薬組成物を投与する工程を記載している、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
製品を作る方法であって、（ａ）（ｉ）癒着を予防するのに有効な量の抗コネキシンポリヌクレオチドおよび（ｉｉ）薬学的に許容される洗浄溶液を含む、癒着の処置または予防に使用するための洗浄溶液を含有する容器と、（ｂ）外科的手順中に患者に該洗浄溶液を投与するための表示指示書とを組み合わせる工程を含む方法。
（項目４３）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがコネキシン４３タンパク質発現を低減する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドがコネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドである、項目４２に記載の方法。
（項目４６）
前記抗コネキシンポリヌクレオチドが、ギャップジャンクション形成を低減することによって細胞間連絡を阻害する、項目４２に記載の方法。
（項目４７）
前記コネキシンがヒトコネキシンである、項目１、１４、または２２のいずれかに記載の組成物。
（項目４８）
前記コネキシンがヒトコネキシンである、項目３８、４０、または４２のいずれかに記載の製品。
（項目４９）
前記患者または対象がヒトである、項目１、１４、または２２のいずれかに記載の組成物。
（項目５０）
前記患者または対象が非ヒト動物である、項目１、１４、または２２のいずれかに記載の組成物。
（項目５１）
前記非ヒト動物が競技動物またはペット動物である、項目５０に記載の組成物。
（項目５２）
前記非ヒト動物がウマ、イヌ、またはネコである、項目５０に記載の組成物。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
詳細な説明
定義
本明細書で用いられる「対象」とは、ヒト、家畜動物、農場動物、動物園動物、競技動物、またはペット動物（イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなど）を含む任意の哺乳動物を指す。本明細書で好ましい哺乳動物は、成人、小児、および老齢者を含めたヒトである。
【００４１】
本明細書で用いられる「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」とは、全体的もしくは部分的に予防するか、または改善するかもしくは制御することを意味する。
【００４２】
本発明のポリヌクレオチドまたは組成物に関して本明細書で用いられる「治療有効量」または「有効量」とは、所望の生物学的結果、薬学的結果、または治療結果を誘導するのに十分な量を指す。その結果は、疾患もしくは障害もしくは状態の徴候、症状、もしくは原因の緩和、または生物学的系の他の任意の望ましい変化でありうる。本発明において、結果は、完全にまたは部分的に、癒着、外科的癒着および／または二次外科的癒着の発生率もしくは重篤の予防、遅延もしくは低減ならびに／または癒着、外科的癒着および／もしくは二次外科的癒着の形成の軽減を伴うものであろう。
【００４３】
本明細書で用いられる「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、治療的処置および予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）措置または予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指す。治療を必要とするものは、すでに癒着を有するもののほか、癒着を有する傾向があるか、または癒着が予防されるべきものを含む。
【００４４】
本明細書で使用する場合、「同時に」は、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、コネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチドが、単独で、あるいは１もしくは複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤と組み合わせて、同時に投与されることを意味するのに使用されるが、用語「組み合わせて」は、同時に、または物理的な組合せでない場合、これらがともに治療的に作用するのに利用可能である時間枠内で「逐次」、これらが投与されることを意味するのに使用される。したがって、「逐次」投与は、一方のポリヌクレオチドまたは薬剤が、別のポリヌクレオチドまたは薬剤の後に、数分（例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０）分以内、または１〜２４時間、１〜７日、もしくは１〜４週間もしくは数カ月のうちに投与されることを許容することができ、ただし、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／もしくは微小管剤は、有効量で同時に存在する条件がある。成分の投与間の時間遅延は、成分の正確な性質、これらの間の相互作用、およびこれらのそれぞれの半減期に応じて変化する。
【００４５】
本明細書で使用する場合、「抗コネキシンポリヌクレオチド」は、コネキシンｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現を減少させ、または阻害する。抗コネキシンポリヌクレオチドには、限定することなく、アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスポリヌクレオチド、他のポリヌクレオチド（ｓｉＲＮＡまたはリボザイム機能を有するポリヌクレオチドなど）などが含まれる。抗コネキシンポリヌクレオチドの適当な例には、コネキシンに対するアンチセンスポリヌクレオチドが含まれる。したがって、適当な抗コネキシンポリヌクレオチドには、例えば、アンチセンスポリヌクレオチド（例えば、コネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチド）が含まれ、これは、選択された組織、細胞、および対象において、コネキシンおよびギャップジャンクションの発現または活性を調節する。例示的な抗コネキシンポリヌクレオチドは、本明細書にさらに記載されている。
【００４６】
外科的癒着
本発明の他の態様において、抗コネキシンポリヌクレオチドを患者に投与することにより、癒着、外科的癒着および／または二次外科的癒着の発生率もしくは重篤さの治療、軽減、ならびに／または癒着、外科的癒着および／もしくは二次外科的癒着の予防もしくは遅延させる方法が提供される。
【００４７】
本明細書に記載されるように、外科的癒着の形成は、通常は分かれている体組織が一緒に成長する複雑な過程である。例えば、手術後癒着は、婦人科の大手術を受けた患者の約６０％〜９０％で起こると報告されている。組織（例えば上皮、結合、筋肉および神経の組織）の乾燥、虚血、熱傷、感染または異物の存在の結果としての外科的外傷は、組織癒着形成の刺激因子として長く認識されている。これらの癒着は、手術治療の失敗の主な原因であり、腸閉塞および不妊症の主な原因である。その他の癒着治療による合併症は、慢性骨盤痛、尿道閉塞および排尿不全を含む。
【００４８】
一般的に、癒着形成は、血管透過性を増加させ、フィブリノゲン流入およびフィブリン沈着をもたらす因子が放出される炎症性反応である。この沈着は、隣接する組織を架橋するマトリクスを形成する。線維芽細胞が蓄積し、マトリクスに接着し、コラーゲンを沈着し、血管形成を誘導する。この事象のカスケードが手術後４〜５日以内に防止できれば、癒着形成は阻害できる。
【００４９】
二次外科的癒着は、現存する癒着を修正するために設計された修正的外科的手順の結果としても形成され得る。この手順は、リリース手順または分離手順である。
【００５０】
特定の治療用組成物または治療法をその治療能力について評価するために、広範囲の動物モデルを用いることができる。簡単に、腹膜癒着は、２つの隣接する表面を通常含む重篤な損傷が課された結果として動物に起こることが観察されている。傷害は、機械的であるか、虚血によるかまたは異物の導入の結果であり得る。機械的傷害は、腸の圧挫（Ｃｈｏａｔｅら、Ａｒｃｈ．  Ｓｕｒｇ．  ８８巻：２４９〜２５４頁、１９６４年）および腸壁外層のはぎ取りまたは擦り落とし（Ｇｕｓｔａｖｓｓｏｎら、Ａｃｔａ  Ｃｈｉｒ．  Ｓｃａｎｄ  １０９巻：３２７〜３３３頁、１９５５年）を含む。腸管の主要な血管をループに隔離することにより、虚血が誘導される（Ｊａｍｅｓら、Ｊ．  Ｐａｔｈ．  Ｂａｃｔ．  ９０巻：２７９〜２８７頁、１９６５年）。領域に導入され得る異物は、滑石（Ｇｒｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｓｏｃ  Ｅｘｐ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．  １３３巻：５４４〜５５０頁、１９７０年）、ガーゼスポンジ（ＬｅｈｍａｎおよびＢｏｙｓ、Ａｎｎ．  Ｓｕｒｇ  １１１巻：４２７４３５頁、１９４０年）、毒性化学物質（Ｃｈａｎｃｙ、Ａｒｃｈ．  Ｓｕｒｇ．  ６０巻：１１５１〜１１５３頁、１９５０年）、細菌（Ｍｏｉｎら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．  ２５０巻：６７５〜６７９頁、１９６５年）および糞便（Ｊａｃｋｓｏｎ、Ｓｕｒｇｅｒｙ  ４４巻：５０７〜５１８頁、１９５８年）である。
【００５１】
現在のところ、癒着の形成の予防を評価するための典型的な動物モデルは、ウサギの子宮の擦過を含むウサギ子宮角モデル（Ｌｉｎｓｋｙら、Ｊ．  Ｒｅｐｒｏｄ．  Ｍｅｄ．
３２巻（１号）：１７〜２０頁、１９８７年）、子宮の擦過および血行遮断を含むウサギの子宮角血行遮断改変モデル（Ｗｉｓｅｍａｎら、Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｓｕｒｇ．  ７巻：５２７〜５３２頁、１９９４年）および壁側腹膜の一部の切除と盲腸の擦過とを含むウサギ盲腸側壁モデル（ＷｉｓｅｍａｎおよびＪｏｈｎｓ、Ｆｅｒｔｉｌ  ＳｔｅｒｉＬ  Ｓｕｐｐｌ：２５Ｓ、１９９３年）を含む。これらおよびその他の報告されている評価モデルが、本明細書に記載される。
【００５２】
抗コネキシンポリヌクレオチド
抗コネキシンポリヌクレオチドには、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチド、ならびにコネキシン発現を下方調節または阻害する（例えば、ｍＲＮＡ転写または翻訳の下方調節）ことを可能にする機能性を有するポリヌクレオチドが含まれる。下方調節の場合、これは、コネキシン発現が下方調節される部位で、ギャップジャンクションによる直接の細胞間連絡を低減する効果を有することになる。
【００５３】
適当な抗コネキシンポリヌクレオチドには、ＲＮＡｉポリヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。
【００５４】
ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、およびリボザイムポリヌクレオチドのほか、骨格が改変および混合されたポリヌクレオチドなどの、アンチセンスポリヌクレオチドおよび他の抗コネキシンポリヌクレオチドの合成は、当業者に公知である。例えば、Ｓｔｅｉｎ  Ｃ．Ａ．およびＫｒｉｅｇ  Ａ．Ｍ．（編）、「Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、１９９８年、（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ）を参照されたい。
【００５５】
一態様によれば、コネキシン発現の下方調節は一般に、アンチセンスポリヌクレオチド（ＤＮＡポリヌクレオチドまたはＲＮＡポリヌクレオチドなど）を用いるアンチセンス法に基づき、またより具体的に、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）の使用に基づきうる。これらのポリヌクレオチド（例えば、ＯＤＮ）は、（１または複数の）コネキシンタンパク質を標的としてこれらを下方調節する。ポリヌクレオチドは、一本鎖であることが典型的であるが、二本鎖の場合もある。
【００５６】
アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンの転写および／または翻訳を阻害しうる。ポリヌクレオチドは、コネキシン遺伝子またはコネキシンｍＲＮＡからの転写および／または翻訳の特異的な阻害剤であり、他の遺伝子またはｍＲＮＡからの転写および／または翻訳を阻害しないことが好ましい。生成物は、（ｉ）コード配列に対する５’側、および／または（ｉｉ）コード配列に対する、および／または（ｉｉｉ）コード配列に対する３’側にあるコネキシン遺伝子またはコネキシンｍＲＮＡに結合しうる。
【００５７】
アンチセンスポリヌクレオチドは一般に、コネキシンｍＲＮＡに対してアンチセンスである。このようなポリヌクレオチドはコネキシンｍＲＮＡにハイブリダイズすることが可能であり、したがって、転写、ｍＲＮＡのプロセッシング、核からのｍＲＮＡの輸送、翻訳、またはｍＲＮＡの分解を含む、コネキシンｍＲＮＡ代謝の１つまたは複数の側面に干渉することにより、コネキシン発現を阻害しうる。アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡにハイブリダイズして、ｍＲＮＡ翻訳の直接的な阻害および／またはｍＲＮＡの不安定化を引き起こしうる二重鎖を形成することが典型的である。このような二重鎖は、ヌクレアーゼによる分解に対して感受性でありうる。
【００５８】
アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの全部または一部にハイブリダイズしうる。アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡのリボソーム結合領域またはコード領域にハイブリダイズすることが典型的である。ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの全部または一部の領域に対して相補的でありうる。例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの全部または一部の完全な相補体でありうる。しかし、絶対的な相補性は必要とされず、生理学的条件下において約２０℃、３０℃、または４０℃を超える融解温度を有する二重鎖を形成するのに十分な相補性を有するポリヌクレオチドが、本発明における使用に特に適する。
【００５９】
したがって、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡに対して相補的な配列の相同体であることが典型的である。ポリヌクレオチドは、約５０℃〜約６０℃における０．０３Ｍ塩化ナトリウムおよび０．０３Ｍクエン酸ナトリウムなどの中程度〜高度に厳密な条件下においてコネキシンｍＲＮＡにハイブリダイズするポリヌクレオチドでありうる。
【００６０】
一部の態様について述べると、適切なポリヌクレオチドは、約６〜４０ヌクレオチドの長さであることが典型的である。ヌクレオチドは、好ましくは約１２〜約３５ヌクレオチドの長さでもあり、代替的には、約１２〜約２０ヌクレオチドの長さでもあり、より好ましくは、約１８〜約３２ヌクレオチドの長さでもありうる。代替的な態様によれば、ポリヌクレオチドは、少なくとも約４０ヌクレオチド、例えば、少なくとも約６０ヌクレオチドまたは少なくとも約８０ヌクレオチドの長さでありえ、最長約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約１０００、約２０００、または約３０００ヌクレオチド以上の長さでありうる。
【００６１】
ポリヌクレオチドにより標的とされる１または複数のコネキシンタンパク質は、下方調節が行われる部位に依存する。これは、コネキシンサブユニットの組成に関して、全身の異なる部位において（１または複数の）ギャップジャンクションの構成が一様でないことを反映する。コネキシンは、一態様における、ヒトもしくは動物の天然に存在するコネキシンであるか、またはコネキシンの発現または活性を低下させる予定の組織内の天然に存在するコネキシンである。コネキシン遺伝子（コード配列を含む）は一般に、表２に示すコネキシン４３コード配列との相同性など、本明細書で言及される１または複数の特異的なコネキシンのコード配列との相同性を有する。コネキシンは、αコネキシンまたはβコネキシンであることが典型的である。コネキシンはαコネキシンであり、治療される組織において発現することが好ましい。
【００６２】
しかし、組織内における分布に関して、一部のコネキシンタンパク質は、他のコネキシンタンパク質よりも遍在性である。最も広範に存在するコネキシンタンパク質の１つが、コネキシン４３である。コネキシン４３を標的とするポリヌクレオチドが、本発明における使用に特に適する。他の態様では、他のコネキシンが標的とされる。
【００６３】
好ましい一態様において、アンチセンスポリヌクレオチドは、１種のコネキシンタンパク質のｍＲＮＡだけを標的とする。このコネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが最も好ましい。別の態様において、コネキシンタンパク質は、コネキシン２６、３０、３１．１、３２、３６、３７、４０、または４５である。他の態様において、コネキシンタンパク質は、コネキシン３０．３、３１、４０．１、または４６．６である。
【００６４】
別個のコネキシンタンパク質を標的とするポリヌクレオチドを組み合わせて用いることもまた意図される（例えば、１種、２種、３種、４種以上の異なるコネキシンを標的とすることができる）。例えば、コネキシン４３を標的とするポリヌクレオチドと、コネキシンファミリーの１つまたは複数の他のメンバー（コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４５、および４６．６など）とを標的とするポリヌクレオチドを、組み合わせて用いることができる。
【００６５】
代替的に、アンチセンスポリヌクレオチドは、複数種のコネキシンタンパク質に対するポリヌクレオチドを含みうる組成物の一部でもありうる。ポリヌクレオチドが対象とするコネキシンタンパク質の１つは、コネキシン４３であることが好ましい。オリゴデオキシヌクレオチドが対象とする他のコネキシンタンパク質は、例えば、コネキシン２６、３０、３０．３、３１．１、３２、３６、３７、４０、４０．１、４５、および４６．６を含みうる。各種のコネキシンを対象とするのに適する例示的なポリヌクレオチド（およびＯＤＮ）を、表１に示す。
【００６６】
個々のアンチセンスポリヌクレオチドは、特定のコネキシンに特異的な場合もあり、１種、２種、３種以上の異なるコネキシンを標的とする場合もある。特異的なポリヌクレオチドが一般に、コネキシン間において保存されないコネキシン遺伝子またはコネキシンｍＲＮＡ内の配列を標的とする一方、非特異的なポリヌクレオチドは、各種コネキシンの保存的配列を標的とする。
【００６７】
本発明で用いられるポリヌクレオチドは、非改変のホスホジエステルオリゴマーでありうるのが好都合である。このようなオリゴデオキシヌクレオチドは、長さが変わりうる。３０マーのポリヌクレオチドが特に適することが分かっている。
【００６８】
本発明の多くの態様は、オリゴデオキシヌクレオチドに関して説明される。しかし、これらの態様では、他の適切なポリヌクレオチド（ＲＮＡポリヌクレオチドなど）も用いうることが理解される。
【００６９】
アンチセンスポリヌクレオチドは、化学修飾することができる。これにより、ヌクレアーゼに対するこれらの耐性を増強することができ、これらが細胞内に入る能力を増強することができる。例えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを用いることができる。他のデオキシヌクレオチド類似体は、メチルホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロジチオエート、Ｎ３’Ｐ５’−ホスホラミデート、ならびにオリゴリボヌクレオチドホスホロチオエートおよびそれらの２’−Ｏ−アルキル類似体、ならびに２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドメチルホスホネートを含む。代替的に、混合骨格オリゴヌクレオチド（「ＭＢＯ」）も用いることができる。ＭＢＯは、ホスホチオエートオリゴデオキシヌクレオチドのセグメントと、改変されたオリゴデオキシヌクレオチドまたはオリゴリボヌクレオチドの適切に配置されたセグメントとを含有する。ＭＢＯは、ホスホロチオエート結合のセグメントと、非イオン性で、ヌクレアーゼまたは２’−Ｏ−アルキルオリゴリボヌクレオチドに対して極めて耐性なメチルホスホネートなどの、他の改変オリゴヌクレオチドの他のセグメントとを有する。改変骨格オリゴヌクレオチドおよび混合骨格オリゴヌクレオチドを調製する方法は、当技術分野において公知である。
【００７０】
本発明で用いられるアンチセンスポリヌクレオチドの正確な配列は、標的のコネキシンタンパク質に依存する。一実施形態において、適切なコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドは、表１に記載される以下の配列から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドなどのポリヌクレオチドを含みうる。
【００７１】
【表１】
2015013880.tif 000002
本明細書に記載の、ポリヌクレオチドの組合せ組成物の調製に適するポリヌクレオチドは、例えば、上記の表１に記載したコネキシン４３に対するポリヌクレオチドと、コネキシン２６、３０、３１．１、３２、および３７に対するポリヌクレオチドとを含む。
【００７２】
本発明において用いられるアンチセンスポリヌクレオチドの正確な配列は、標的のコネキシンタンパク質に依存するが、コネキシン４３の場合、以下の配列：
ＧＴＡ  ＡＴＴ  ＧＣＧ  ＧＣＡ  ＡＧＡ  ＡＧＡ  ＡＴＴ  ＧＴＴ  ＴＣＴ  ＧＴＣ（配列番号１）；
ＧＴＡ  ＡＴＴ  ＧＣＧ  ＧＣＡ  ＧＧＡ  ＧＧＡ  ＡＴＴ  ＧＴＴ  ＴＣＴ  ＧＴＣ（配列番号２）；および
ＧＧＣ  ＡＡＧ  ＡＧＡ  ＣＡＣ  ＣＡＡ  ＡＧＡ  ＣＡＣ  ＴＡＣ  ＣＡＧ  ＣＡＴ（配列番号３）
を有するアンチセンスポリヌクレオチドが特に適することが分かっている。
【００７３】
例えば、コネキシン２６、３１．１、および３２に適するアンチセンスポリヌクレオチドは、以下の配列：
５’  ＴＣＣ  ＴＧＡ  ＧＣＡ  ＡＴＡ  ＣＣＴ  ＡＡＣ  ＧＡＡ  ＣＡＡ  ＡＴＡ（コネキシン２６）（配列番号４）；
５’  ＣＧＴ  ＣＣＧ  ＡＧＣ  ＣＣＡ  ＧＡＡ  ＡＧＡ  ＴＧＡ  ＧＧＴ  Ｃ（コネキシン３１．１）（配列番号９）；および
５’  ＴＴＴ  ＣＴＴ  ＴＴＣ  ＴＡＴ  ＧＴＧ  ＣＴＧ  ＴＴＧ  ＧＴＧ  Ａ（コネキシン３２）（配列番号１２）
を有する。
【００７４】
本発明の方法により有用な他のコネキシンアンチセンスポリヌクレオチド配列は、
５’  ＣＡＴ  ＣＴＣ  ＣＴＴ  ＧＧＴ  ＧＣＴ  ＣＡＡ  ＣＣ  ３’（コネキシン３７）（配列番号５）；
５’  ＣＴＧ  ＡＡＧ  ＴＣＧ  ＡＣＴ  ＴＧＧ  ＣＴＴ  ＧＧ  ３’（コネキシン３７）（配列番号６）；
５’  ＣＴＣ  ＡＧＡ  ＴＡＧ  ＴＧＧ  ＣＣＡ  ＧＡＡ  ＴＧＣ  ３’（コネキシン３０）（配列番号７）；
５’  ＴＴＧ  ＴＣＣ  ＡＧＧ  ＴＧＡ  ＣＴＣ  ＣＡＡ  ＧＧ  ３’（コネキシン３０）（配列番号８）；
５’  ＡＧＡ  ＧＧＣ  ＧＣＡ  ＣＧＴ  ＧＡＧ  ＡＣＡ  Ｃ  ３’（コネキシン３１．１）（配列番号１０）；および
５’  ＴＧＡ  ＡＧＡ  ＣＡＡ  ＴＧＡ  ＡＧＡ  ＴＧＴ  Ｔ  ３’（コネキシン３１．１）（配列番号１１）
を含む。
【００７５】
コネキシンタンパク質を対象とする、ＯＤＮを含むポリヌクレオチドは、任意の簡便な従来の手法により、それらのヌクレオチド配列に関して選択することができる。例えば、コンピュータプログラムであるＭａｃＶｅｃｔｏｒおよびＯｌｉｇｏＴｅｃｈ（Ｏｌｉｇｏｓなど、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎ、ＵＳＡ製）を用いることができる。選択されると、ＤＮＡ合成器を用いてＯＤＮを合成することができる。
【００７６】
ポリヌクレオチドの相同体
抗コネキシンポリヌクレオチドはまた、ポリヌクレオチドの相同体を含む。本明細書では、相同性および相同体（例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡ中の配列に対する相補体の相同体でありうる）について論じる。このようなポリヌクレオチドは、例えば、（相同配列の）少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約４０、少なくとも約１００以上の連続ヌクレオチドの領域にわたって、対象の配列と少なくとも約７０％の相同性、好ましくは少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％の相同性を有することが典型的である。
【００７７】
相同性は、当技術分野における任意の方法に基づいて計算することができる。例えば、ＵＷＧＣＧパッケージでは、相同性を計算するのに用いうるＢＥＳＴＦＩＴプログラム（例えば、そのデフォルト設定で用いられる）が提供される（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら（１９８４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第１２巻、３８７〜３９５頁）。ＰＩＬＥＵＰアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴアルゴリズムは、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｓ．  Ｆ．（１９９３年）、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｖｏｌ、第３６巻、２９０〜３００頁；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ，  Ｆら（１９９０年）、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、第２１５巻、４０３〜１０頁において説明される通り、相同性を計算するか、または配列を整列するのに用いることができる（それらのデフォルト設定における場合が典型的である）。
【００７８】
ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）により公に入手可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列中における同じ長さのワードにより整列する場合、ある正の値の閾値スコアＴにマッチするかまたはこれを満たすクエリー配列中における長さＷの短いワードを同定することによる、高スコアリング配列対（ＨＳＰ）の同定を伴う。Ｔを、近傍ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）と称する。これらの初期近傍ワードヒットは、それらを含有するＨＳＰを見出す検索を開始するためのシード（ｓｅｅｄ）として作用する。ワードヒットは、累積のアライメントスコアが増大しうる限りにおいて、各配列に沿って両方向に延長される。各方向におけるワードヒットの延長は、累積アライメントスコアが、達成されたその最大値から量Ｘだけ低下する場合；累積スコアが、１つまたは複数の負のスコアの残基アライメントの累積により、ゼロ以下に低下する場合；またはいずれかの配列の端部に到達する場合に停止される。
【００７９】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸにより、アラインメントの感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴプログラムでは、ワード長（Ｗ）、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、第８９巻、１０９１５〜１０９１９頁を参照されたい）によるアライメント（Ｂ＝５０）、期待値（Ｅ＝１０）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比較が、デフォルトとして用いられる。
【００８０】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムでは、２つの配列間における類似性に対する統計学的解析が実施される。例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、第９０巻、５８７３〜５７８７頁を参照されたい。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間におけるマッチが偶然に生じる確率を示す、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、第２の配列に対して第１の配列を比較した場合の最小合計確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、また最も好ましくは約０．００１未満である場合、ある配列は別の配列に対して類似すると考えられる。
【００８１】
相同配列は、少なくとも約２、５、１０、１５、２０以上（または約２、５、１０、１５、２０以下）の変異（置換、欠失、または挿入でありうる）により対象配列と異なることが典型的である。これらの変異は、相同性の計算との関連で、上述の領域のいずれかにわたって測定することができる。
【００８２】
相同配列は、バックグラウンドを有意に上回るレベルで、元の配列に選択的にハイブリダイズすることが典型的である。選択的なハイブリダイゼーションは、中程度〜高度に厳密な条件（例えば、約５０℃〜約６０℃における０．０３Ｍ塩化ナトリウムおよび０．０３Ｍクエン酸ナトリウム）を用いて達成することが典型的である。しかし、このようなハイブリダイゼーションは、当技術分野において公知の任意の適切な条件下で実施することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」を参照されたい）。例えば、高い厳密性が必要とされる場合、適切な条件は６０℃における０．２×ＳＳＣを含む。より低い厳密性が必要とされる場合、適切な条件は６０℃における２×ＳＳＣを含む。
【００８３】
治療剤
治療剤は、現在、存在していて公知であるにせよ、後に開発されるにせよ、創傷の治療、または創傷治癒の促進に有用な、薬学的に許容される薬剤を含む。治療剤として、例えば、抗感染薬、麻酔薬、鎮痛薬、抗生物質、睡眠薬、ならびにステロイド性および非ステロイド性抗炎症剤が挙げられる。好適な治療剤として、局所ステロイド抗炎症剤、抗微生物剤、局部および局所麻酔薬、ならびに局所オピオイドが挙げられる。ある特定の実施形態では、１、２、３、４、５、または６つの治療剤を、組み合わせて使用することができる。
【００８４】
創傷治癒に有用な薬剤
本明細書で使用する場合、創傷治癒に有用な薬剤には、創傷治癒カスケードの刺激物質、エンハンサー、または正のメディエーターが含まれ、これらは、１）自然創傷治癒過程を促進もしくは加速し、または２）不適当な、もしくは遅延した創傷治癒に関連する作用を低減し、この作用として、例えば、有害な炎症、上皮形成、血管新生およびマトリクス堆積、ならびに瘢痕および線維症が挙げられる。
【００８５】
正のメディエーター、エンハンサー、および刺激物質には、例えば、創傷治癒もしくは活性な創傷治癒過程の量、質、もしくは有効性、または創傷部位での創傷治癒関連成長因子もしくはサイトカイン、または創傷治癒関連成長因子もしくはサイトカイン受容体の活性化を刺激、増強、促進、または加速（すなわち、アゴナイズ）することができる薬剤が含まれる。そのような薬剤として、例えば、創傷治癒関連成長因子もしくはサイトカイン、または部分的に修飾された形態の創傷治癒関連成長因子もしくはサイトカインを挙げることができる。部分的に修飾された形態の創傷治癒関連成長因子またはサイトカインは、例えば、天然の創傷治癒関連成長因子またはサイトカインより長い半減期を有することができる。あるいはこれは、創傷治癒関連成長因子またはサイトカイン代謝の阻害剤とすることができる。
【００８６】
創傷治癒に有用な薬剤には線維形成調節剤が含まれ、これは例えば、線維形成性病態を予防および／または抑制、低減、または改善することができる任意の薬剤を含む。例示的な線維形成モジュレーターには、例えば、創傷関連炎症反応、傷害部位への好中球の動員；マクロファージおよび内皮細胞の活性化および動員；いくつかのサイトカイン／ケモカインの分泌を介したリンパ球および／または好酸球の動員および活性化；細胞毒性メディエーターおよび線維形成性サイトカインの放出；細胞増殖、ＥＣＭ合成および血管新生の補強および活性化に関連する直接制御因子または間接制御因子が含まれる。
【００８７】
そのような薬剤の部分的な修飾は、アミノ酸残基の添加、欠失、または置換によるものとすることができる。置換は例えば、保存的置換とすることができる。したがって、部分的に修飾された分子は、これが由来した分子の相同体である場合がある。これは、由来した分子と少なくとも約４０％、例えば、約５０、６０、７０、８０、９０または９５％相同性でありうる。
【００８８】
本明細書で使用する場合、創傷治癒に有用な薬剤として、例えば、当技術分野で現在公知の、または後に開発される創傷治療モダリティーのための創傷治癒促進剤、または瘢痕低減剤；創傷治癒を促進するための、天然もしくは合成成長因子、サイトカインまたはこれらのモジュレーター、創傷治癒促進生体工学マトリクス、包帯材、包帯などを含めた、典型的な因子、薬剤、またはモダリティーを挙げることができる。適当な例として、それだけに限らないが、１）局所療法もしくは包帯材療法および関連療法ならびに創傷清拭剤（ｄｅｂｒｉｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、Ｓａｎｔｙｌ（登録商標）コラゲナーゼなど）、ならびにＩｏｄｏｓｏｒｂ（登録商標）（カデキソマーヨウ素（ｃａｄｅｘｏｍｅｒ  ｉｏｄｉｎｅ））；２）例えば、銀含有剤、例えば、ＳＡＧ（銀抗菌ゲル）、（ＣｏｌｌａＧＵＡＲＤ（商標）、Ｉｎｎｏｃｏｌｌ，  Ｉｎｃ）（精製タイプＩコラーゲンタンパク質ベース包帯材）、ＣｏｌｌａＧＵＡＲＤ  Ａｇ（感染性創傷もしくは感染の危険性がある創傷のための、銀で含浸されたコラーゲン−ベース生理活性包帯材）、ＤｅｒｍａＳＩＬ（商標）（深く、重度に浸出している創傷のための、コラーゲン−合成発泡複合体包帯材）などを含めた全身もしくは局所クリームもしくはゲルを含めた抗微生物剤；３）例えば、Ｄｅｒｍｏｇｒａｆｔ（サイトカインおよび成長因子を分泌するヒト線維芽細胞の３次元基質培養）、Ａｐｌｉｇｒａｆ（登録商標）（ヒトケラチノサイトおよび線維芽細胞）、Ｇｒａｆｔｓｋｉｎ（登録商標）（正常な皮膚と組織学的に同様であり、正常な皮膚によって生成されるものと同様の成長因子を生成する、表皮細胞および線維芽細胞の二分子膜）、ＴｒａｎｓＣｙｔｅ（ヒト線維芽細胞に由来する一時的な皮膚代替品）、およびＯａｓｉｓ（登録商標）（成長因子および細胞外基質成分、例えばコラーゲン、プロテオグリカン、およびグリコサミノグリカンなどの両方を含む活性バイオマテリアル）を含めた、細胞療法もしくは生体工学処理皮膚（ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｓｋｉｎ）、皮膚代替品、および皮膚等価物；４）例えば、ＮＧＦ、ＮＴ３、ＢＤＧＦ、インテグリン、プラスミン、セマフォリング（ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎｇ）、血液由来成長因子、ケラチノサイト成長因子、組織成長因子、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ（３つのサブタイプ、すなわちＡＡ、ＡＢ、およびＢのうちの１もしくは複数を使用することができる）、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＴＧＦβ３、ＴＧＦβ３、ＴＧＦβ１、およびＴＧＦβ２の相対的レベルを調節する因子（例えば、マンノース−６−ホスフェート）、例えば、エストロゲン、エストラジオール、もしくはエチニルエストラジオール、ジエノエストロール、メストラノール、エストラジオール、エストリオール、結合型エストロゲン、ピペラジンエストロンサルフェート、スチルボエストロール、ホスフェステロール（ｆｏｓｆｅｓｔｅｒｏｌ）四ナトリウム、リン酸ポリエストラジオール、チボロン、フィトエストロゲン、１７−β−エストラジオールからなる群から選択されるエストロゲン受容体アゴニストを含めた性ステロイド；サイモシン−β−４などの胸腺ホルモン、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、線維芽細胞成長因子（���えば、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ７）、ケラチノサイト成長因子、ＴＮＦ、炎症反応モジュレーターのインターロイキンファミリー、例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、およびＩＬ−１０、ならびにこれらのモジュレーター；ＩＮＦ（ＩＮＦ−α、−β、および−δ）；アクチビンもしくはインヒビンの刺激物質、ならびにインターフェロンγプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）およびアデノシン３’，５’−環状モノホスフェート（ｃＡＭＰ）経路のメディエーターの阻害剤；アデノシンＡ１アゴニスト、アデノシンＡ２アゴニスト、を含めた創傷治癒を促進するために創傷に導入されたサイトカイン、成長因子、もしくはホルモン（天然および合成の両方）、または５）例えば、天然もしくは合成の両方の相同体、ＶＥＧＦのアゴニストおよびアンタゴニスト、ＶＥＧＦＡ、ＩＧＦ；ＩＧＦ−１、炎症促進性サイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、およびレプチンを含めた創傷治癒に有用な他の薬剤、ならびに６）ＩＧＦ−１およびＫＧＦ  ｃＤＮＡ、自己血小板ゲル、次亜塩素酸（Ｓｔｅｒｉｌｏｘ（登録商標））、リポ酸、一酸化窒素合成酵素３、基質メタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ−９）、ＣＣＴ−ＥＴＡ、αｖβ６インテグリン、成長因子−初回刺激を受けた線維芽細胞およびデコリン、銀含有創傷包帯材、Ｘｅｎａｄｅｒｍ（商標）、パパイン創傷清拭剤、ラクトフェリン、サブスタンスＰ、コラーゲン、および銀−ＯＲＣ、胎盤アルカリホスファターゼもしくは胎盤増殖因子、ヘッジホッグシグナル伝達のモジュレーター、コレステロール合成経路のモジュレーター、およびＡＰＣ（活性化プロテインＣ）、ケラチノサイト成長因子、ＴＮＦ、トロンボキサンＡ２、ＮＧＦ、ＢＭＰ骨形態形成タンパク質、ＣＴＧＦ（結合組織成長因子）、創傷治癒ケモカイン、デコリン、乳酸誘導血管新生のモジュレーター、タラ肝油、胎盤アルカリホスファターゼ、もしくは胎盤増殖因子、およびサイモシンβ４を挙げることができる。ある特定の実施形態では、１、２、３、４、５、または６つの創傷治癒に有用な薬剤を組み合わせて使用することができる。
【００８９】
上記の創傷治癒に有用な薬剤（例えば、成長因子およびサイトカインを含む）は、すべての天然に存在する多形（例えば、成長因子またはサイトカインの多形）を包含することが理解されるべきである。機能的断片、前記創傷治癒に有用な薬剤またはその機能的断片のうちの１つを含むキメラタンパク質、創傷治癒に有用な薬剤の１または複数のアミノ酸の同類置換によって得られる相同体、および種同族体も包含される。１または複数の創傷治癒に有用な薬剤は、組換えＤＮＡ技術の生成物であってもよく、１または複数の創傷治癒に有用な薬剤は、トランスジェニック技術の生成物であってもよいことが企図される。例えば、血小板由来成長因子は、組換えＰＤＧＦ、またはＰＤＧＦについてのコード配列を含む遺伝子療法ベクターの形態で提供することができる。
【００９０】
断片またはその部分的に修飾された形態は、創傷治癒に有用な薬剤の断片または部分的に修飾された形態を指し、これは、因子の生物学的機能性または創傷治癒機能性を保持するが、これはもちろん、追加の機能性を有することができる。部分的な修飾は、例えば、アミノ酸残基の添加、欠失、または置換によるものとすることができる。例えば、置換は、同類置換とすることができる。したがって、部分的に修飾された分子は、創傷治癒に有用な薬剤の相同体である場合がある。これらは例えば、前記因子と少なくとも約４０％の相同性を有することができる。これらは例えば、前記因子と少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、または９５％の相同性を有することができる。例えば、ある特定の実施形態では、ＩＬ−１０またはその断片もしくは部分的に修飾された形態は、約１μＭと約１０μＭの間の濃度で投与することができる。これは、約２．５μＭと約５μＭの間の濃度で投与することができる。ある特定の他の実施形態では、ＩＬ−１０またはその断片もしくは部分的に修飾された形態は、創傷治癒の直前に投与することができるが、創傷の約７日以内に投与される場合、有効となり得る。これは、少なくとも２回の機会に投与することができる。
【００９１】
抗微小管剤
例示的な抗微小管剤として、例えば、ジテルペノイド（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、およびその誘導体または類似体）、ならびにビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）；白金配位錯体（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）が挙げられる。
【００９２】
剤形および製剤ならびに投与
本発明の薬剤は、本明細書で言及される疾患、障害または状態のいずれかを有するか、またはその危険性がある対象など、治療を必要とする対象に投与することができる。こうして、対象の状態を改善することができる。抗コネキシンポリヌクレオチドは、治療による対象の身体の処置に用いることができる。これらは、本明細書で言及される疾患、障害または状態のいずれかを治療する薬剤の製造において用いることができる。
【００９３】
抗コネキシンポリヌクレオチドは、実質的に単離形態で存在しうる。生成物は、生成物の意図される目的に干渉しない担体または希釈剤と混合することができ、これをなおも実質的に単離状態にあるとみなしうることが理解される。本発明の生成物はまた、実質的に精製形態の場合もあり、この場合、生成物は一般に、ポリヌクレオチドの、または調製物の乾燥質量の、約８０％、８５％、または９０％（例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を含む）を構成する。
【００９４】
意図される投与の経路に応じて、本発明の医薬品、医薬組成物、組合せ調製物、および薬剤は、例えば、溶液、懸濁液、点滴、スプレー、軟膏剤（ｓａｌｖｅｓ）、クリーム、ゲル、泡沫、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、エマルジョン、ローション、ペイント、持続放出製剤、または粉末の形態をとる可能性があり、（１または複数の）有効成分の約０．０１％〜約１％、有効成分の約１％〜５０％、有効成分の約２％〜６０％、有効成分の約２％〜７０％、または有効成分の最大約９０％を含有することが典型的であり、（１または複数の）有効成分の約０．２％〜７０％を含有することが好ましい。他の適切な製剤は、プロニックゲルベースの製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ベースの製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ｈｙｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）（ＨＰＭＣ）ベースの製剤を含む。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
【００９５】
ゲルまたはゼリーは、ゼラチン、トラガカント、またはセルロース誘導体を含むがこれらに限定されない適切なゲル化剤を用いて作製することができ、保湿剤、皮膚軟化剤、および防腐剤としてグリセロールを含みうる。軟膏は、脂肪基剤、蝋基剤、または合成基剤中に組み込まれた有効成分からなる半固体調製物である。適切なクリームの例は、油中水エマルジョンおよび水中油エマルジョンを含むがこれらに限定されない。油中水クリームは、セチルアルコールまたはセトステアリルアルコールなどの脂肪族アルコールによる乳化剤および乳化蝋と類似するがこれらに限定されない特性を有する適切な乳化剤を用いて調合することができる。水中油クリームは、セトマクロゴール乳化蝋などの乳化剤を用いて調合することができる。適切な特性は、エマルジョンの粘稠度を変化させる能力、および広範なｐＨにわたる物理および化学の両面における安定性を含む。水溶性または混和性のクリーム基剤は、防腐剤系を含有する場合があり、また、許容される生理学的なｐＨを維持するように緩衝化することもできる。
【００９６】
泡沫調製物は、不活性の噴霧剤を用いる適切なアプリケーターにより、加圧エアゾールキャニスターから送達するように調合することができる。泡沫基剤の製剤に適する賦形剤は、プロピレングリコール、乳化蝋、セチルアルコール、およびステアリン酸グリセリルを含むがこれらに限定されない。潜在的な防腐剤は、メチルパラベンおよびプロピルパラベンを含む。
【００９７】
本発明の薬剤を薬学的に許容される担体または希釈剤と組合せて、医薬組成物を作製することが好ましい。適切な担体および希釈剤は、等張性の食塩液、例えば、リン酸塩緩衝化食塩液を含む。適切な希釈剤および賦形剤はまた、例えば、水、食塩液、デキストロース、グリセロールなど、およびこれらの組合せ物も含む。加えて、所望の場合、保湿剤または乳化剤、安定化剤またはｐｈ緩衝剤などの物質もまた存在しうる。
【００９８】
「薬学的に許容される担体」という用語は、組成物を投与される個体に有害な抗体の生成をそれ自体では誘導せず、不適切な毒性なしに投与しうる任意の薬学的な担体を指す。適切な担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、およびアミノ酸コポリマーなどの大型でゆっくりと代謝される高分子でありうる。
【００９９】
例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などのような鉱酸塩、および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸塩など、薬学的に許容される塩もまた存在しうる。
【０１００】
適切な担体物質は、局所投与用のクリーム、ローション、スプレー、泡沫、ゲル、エマルジョン、ローション、またはペイントのための基剤として一般に用いられる任意の担体またはビークルを含む。例は、乳化剤、炭化水素による基剤を含む不活性担体、乳化基剤、非毒性溶媒、または水溶性の基剤を含む。特に適切な例は、プルロニック、ＨＰＭＣ、ＣＭＣ、および他のセルロース基剤の成分、ラノリン、硬質パラフィン、液体パラフィン、軟質黄色パラフィン、または軟質白色パラフィン、白色蜜蝋、黄色蜜蝋、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ジメチコーン、乳化蝋、ミリスチン酸イソプロピル、微晶質蝋、オレイルアルコール、およびステアリルアルコールを含む。
【０１０１】
薬学的に許容される担体またはビークルは、ゲルであることが好ましく、非イオン性ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーゲル、例えば、プルロニックゲル、好ましくはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）であることが適切である。このゲルは、低温では液体であるが、生理学的温度では急速に固まり、これにより、薬剤の放出が適応部位またはその部位にすぐの近接部位に限定されるので特に好ましい。
【０１０２】
カゼイン、ゼラチン、アルブミン、膠、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、またはポリビニルアルコールなどの補助剤もまた、本発明の製剤中に組み入れることができる。
【０１０３】
他の適切な製剤は、プロニックゲル基剤の製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）基剤の製剤、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）基剤の製剤を含む。組成物は、局所投与、点滴投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、または経皮投与を含む、任意の所望の送達形態に応じて調合することができる。他の有用な製剤は、徐放調製物または遅延放出調製物を含む。
【０１０４】
投与される製剤は、トランスフェクション剤を含有しうる。このような薬剤の例は、陽イオン剤（例えば、リン酸カルシウムおよびＤＥＡＥデキストラン）およびリポフェクション剤（例えば、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍ（商標）およびｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標））、ならびに界面活性剤を含む。
【０１０５】
一実施形態において、製剤がポリヌクレオチドの細胞透過を補助する界面活性剤をさらに含むか、または製剤が任意の適切な充填剤を含有する。ＤＭＳＯなど、任意の適切な無毒性界面活性剤を組み入れることができる。代替的に、尿素などの経皮透過剤も組み入れることができる。
【０１０６】
場合により、抗コネキシンポリヌクレオチドは、１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗線維剤とともに処方することができる。ある特定の実施形態では、１、２、３、４、５、または６つの治療剤を、組み合わせて使用することができる。ある特定の実施形態では、１、２、３、４、５、または６つの創傷治癒に有用な薬剤を、組み合わせて使用することができる。
【０１０７】
一態様では、単独の、または１もしくは複数の治療剤および／もしくは創傷治癒において有用な薬剤と組み合わせた、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、創傷包帯材またはマトリクスの形態で提供される。ある特定の実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（１もしくは複数の治療剤もしくは創傷治癒において有用な薬剤とともに、またはこれを伴わずに）は、直接適用するために、液体、半固体、もしくは固体組成物の形態で提供され、あるいは組成物は、包帯材ガーゼもしくはマトリクスなどの固体接触層の表面に施され、または固体接触層中に組み込まれる。創傷包帯材組成物は、例えば、流体またはゲルの形態で提供することができる。１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（１もしくは複数の治療剤もしくは創傷治癒において有用な薬剤とともに、またはこれを伴わずに）は、局所適用のために、従来の薬学的賦形剤と組み合わせて提供することができる。適当な担体として、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびこれらの混合物を含めたセルロース誘導体を含有するプルロニックゲル、ポラキサマーゲル、ヒドロゲル；ならびにポリアクリル酸を含有するヒドロゲル（カルボポール）が挙げられる。適当な担体には、局所医薬製剤に使用されるクリーム／軟膏、例えば、セトマクロゴール乳化軟膏に基づくクリームも含まれる。上記担体は、アルギネート（増粘剤または刺激薬として）、ベンジルアルコールなどの保存剤、リン酸水素二ナトリウム／リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨを制御するための緩衝剤、塩化ナトリウムなどの浸透圧モル濃度を調節するための薬剤、およびＥＤＴＡなどの安定剤を含むことができる。
【０１０８】
所与の対象に対して有効な投与量は、集団の少なくとも５０％に対して治療的に有効な用量内にあり、このレベルにおいてほとんどまたはまったく毒性を示さないことが好ましい。
【０１０９】
本発明の方法および組成物において用いられる各抗コネキシンポリヌクレオチドの有効用量は、用いられる１または複数の特定の抗コネキシンポリヌクレオチド、投与方式、投与頻度、治療される創傷、治療される創傷の重症度、投与経路、治療される患者部分集団の必要、またはその患者の異なる必要がその患者に特異的な年齢、性別、体重、関連する医学的な創傷に起因しうる個々の患者の必要を含むいくつかの因子に応じて異なりうる。
【０１１０】
適当な用量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約０．４ｍｇなどの体重１ｋｇ当たり約０．００１〜約１ｍｇとすることができる。しかし、適当な用量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約０．０５０ｍｇなどの体重１ｋｇ当たり約０．００１〜約０．１ｍｇであってもよい。約１〜１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、および４００〜５００マイクログラムまたはそれ以上、ならびに最大約５００〜１０００マイクログラムの用量が適切である。本明細書に述べるように、繰り返し適用が企図される。繰り返し適用は一般に、１週間に約１回、または治癒が止まっている、もしくは遅くなっていると思われる場合があるとき、適用される。
【０１１１】
さらに他の投与量レベルは、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約１ナノグラム（ｎｇ）と約１ｍｇの間の本明細書に記載されるそれぞれの薬剤である。ある特定の実施形態では、対象化合物のそれぞれの投与量は一般に、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ〜約１０ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約０．１マイクログラム〜約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約２０ｎｇ〜約１００ｎｇ、体重１ｋｇ当たり０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜約１ｍｇの範囲となる。ある特定の実施形態では、対象化合物のそれぞれの投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり０．００１ｍｇ〜約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜約０．１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜約１ｍｇの範囲、または体重１ｋｇ当たり約１ｍｇとなる。１つを超える抗コネキシンポリヌクレオチドが使用される場合、各抗コネキシンポリヌクレオチドの投与量は、他のものと同じ範囲である必要はない。例えば、一方の抗コネキシンポリヌクレオチドの投与量は、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜約１ｍｇの間とすることができ、別の抗コネキシンポリヌクレオチドの投与量は、体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜約１ｍｇの間とすることができる。本明細書に述べるように、繰り返し適用が企図される。繰り返し適用は一般に、１週間に約１回、または創傷治癒が止まっている、もしくは遅くなっていると思われる場合があるとき、適用される。
【０１１２】
他の有用な用量は、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約１〜約１０マイクログラムの範囲である。ある特定の用量は、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約１〜２、約１〜５、約２〜４、約５〜７、および約８〜１０マイクログラムとなる。他の有用な用量は、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約１５マイクログラム、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約２０マイクログラム、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約２５マイクログラム、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約３０マイクログラム、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約３５マイクログラム、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約４０マイクログラム、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約５０マイクログラム、および創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約１００マイクログラムを含めた、創傷のサイズまたは治療される面積１平方センチメートル当たり約１０マイクログラム超である。他の有用な用量は、創傷のサイズもしくは治療される面積１平方センチメートル当たり約１５０マイクログラム、創傷のサイズもしくは治療される面積１平方センチメートル当たり約２００マイクログラム、創傷のサイズ１平方センチメートル当たり約２５０マイクログラム、または創傷のサイズもしくは治療される面積１平方センチメートル当たり約５００マイクログラムである。本明細書に述べるように、繰り返し適用が企図される。繰り返し適用は一般に、１週間に約１回、または創傷治癒が止まっている、もしくは遅くなっていると思われる場合があるとき、適用される。
【０１１３】
例えば、ある特定の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、治療部位および／または治療部位に隣接する箇所で、約０．０１マイクロモル（μＭ）、または０．０５μＭ〜約２００μＭの最終濃度で適用することができる。好ましくは、アンチセンスポリヌクレオチド組成物は、約０．０５μＭ〜約１００μＭの最終濃度で適用され、より好ましくは、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、約１．０μＭ〜約５０μＭの最終濃度で適用され、より好ましくは、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、約５〜１０μＭ〜約３０〜５０μＭの最終濃度で適用される。さらに、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、約８μＭ〜約２０μＭの最終濃度で適用され、あるいは抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、約１０μＭ〜約２０μＭの最終濃度、または約１０〜約１５μＭの最終濃度で適用される。ある特定の他の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、約１０μＭの最終濃度で適用される。さらに別の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、約１〜１５μＭの最終濃度で適用される。患者に抗コネキシン剤が投与される場合の用量は、患者の年齢、体重、および全般的な状態、治療される状態、ならびに投与される特定の抗コネキシン剤などの、各種の因子に依存する。
【０１１４】
抗コネキシン剤の適切な治療有効用量は、約０．０１〜約０．４ｍｇ／ｋｇ体重など、約０．００１〜約１ｍｇ／ｋｇ体重でありうる。しかし、適切な用量は、約０．０１〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ体重など、約０．００１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ体重でありうる。
【０１１５】
約１〜１００、１００〜２００、１００〜３００または２００〜３００、１００〜４００または２００〜４００または３００〜４００、および１００〜５００または２００〜５００または３００〜５００または４００〜５００マイクログラムの治療有効用量の抗コネキシン剤が適切である。約１〜１０００マイクログラムの用量もまた適切である。最大２ミリグラムの用量もまた用いることができる。１または複数の抗コネキシン剤が包帯材の形態で提供される場合、用量は適切な形で調整され、所望の総用量投与を維持するよう上方に調整されることが典型的である。
【０１１６】
代替的に、抗コネキシンオリゴヌクレオチドの場合、組成物中における薬剤の用量は、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または容積に対する組成物の濃度を基準として決定することができる。例えば、一部の局所適用において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、グラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは容積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜約１０マイクログラムの範囲にある。一部の用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１〜２、約１〜５、約２〜４、約５〜７、および約８〜１０マイクログラムである。他の有用な用量は、創傷サイズの平方センチメートル当たり約１０マイクログラムを超え、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約１５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約２０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約２５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり約３０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約３５マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約４０マイクログラム、創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約５０マイクログラム、および創傷サイズの平方センチメートル当たり少なくとも約１００〜少なくとも約１５０マイクログラムを含む。他の用量は、平方センチメートル当たり約１５０〜２００マイクログラム、平方センチメートル当たり約２００〜２５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約２５０〜３００マイクログラム、平方センチメートル当たり約３００〜３５０マイクログラム、平方センチメートル当たり約３５０〜４００マイクログラム、および平方センチメートル当たり約４００〜５００マイクログラムを含む。
【０１１７】
一部の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、治療部位および／または治療部位に隣接して、約０．０１マイクロモル（μＭ）または０．０５μＭ〜約２００μＭ、  または最大３００μＭ、または最大１０００μＭ、または最大２０００μＭ、または最大３２００μＭ以上の最終濃度、およびこれらの用量数値内にある任意の用量および用量範囲で適用することができる。アンチセンスポリヌクレオチド組成物は約０．０５μＭ〜約１００μＭの最終濃度で適用されることが好ましく、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は約１．０μＭ〜約５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましく、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は約５〜１０μＭ〜約３０〜５０μＭの最終濃度で適用されることがより好ましい。加えて、組合わされた抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は約８μＭ〜約２０μＭの最終濃度で適用され、また代替的に、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は約１０μＭ〜約２０μＭの最終濃度、または約１０〜約１５μＭの最終濃度で適用される。他の一部の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチドは、約１０μＭの最終濃度で適用される。さらに別の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチド組成物は、約１〜１５μＭの最終濃度で適用される。他の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチドは、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０〜２００μＭ、２００〜３００μＭ、３００〜４００μＭ、４００〜５００μＭ、５００〜６００μＭ、６００〜７００μＭ、７００〜８００μＭ、８００〜９００μＭ、９００〜１０００、または１０００〜１５００μＭ、または１５００μＭ〜２０００μＭ、または２０００μＭ〜３０００μＭ以上で適用される。
【０１１８】
抗コネキシンポリヌクレオチドの投与量は、例えば、約０．１〜１、１〜２、２〜３、３〜４、または４〜５マイクログラム（μｇ）、約５〜約１０μｇ、約１０〜約１５μｇ、約１５〜約２０μｇ、約２０〜約３０μｇ、約３０〜約４０μｇ、約４０〜約５０μｇ、約５０〜約７５μｇ、約７５〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、および２５０μｇ〜約５００μｇを含む。上記で言及した通り、０．５〜約１．０ミリグラム以上の投与量もまた提供される。投与容量は治療される部位のサイズに依存し、例えば、約２５〜１００μＬ〜約１００〜２００μＬ、約２００〜５００μＬ〜約５００〜１０００μＬの範囲でありうる。より大きな治療部位には、ミリリットル用量もまた適切である。本明細書に述べるように、繰り返し適用が企図される。繰り返し適用は一般に、１週間に約１回、または創傷治癒が止まっている、もしくは遅くなっていると思われる場合があるとき、適用される。
【０１１９】
抗コネキシンポリヌクレオチドは、投与後少なくとも約０．５〜１時間、少なくとも約１〜２時間、少なくとも約２〜４時間、少なくとも約４〜６時間、少なくとも約６〜８時間、少なくとも約８〜１０時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間にわたってコネキシンタンパク質の発現を下方調節するか、またはギャップジャンクションの形成を調節するのに十分な量で投与されると好都合である。
【０１２０】
対象発明の組成物および方法における各抗コネキシンポリヌクレオチドの用量はまた、それが適用される領域のサイズ、長さ、深さ、面積、または容積に対する組成物の濃度を基準として決定することもできる。例えば、一部の局所適用および他の適用、例えば、点滴において、医薬組成物の用量は、医薬組成物の質量（例えば、マイクログラム）または適用領域の長さ、深さ、面積、もしくは容積当たりの医薬組成物の濃度（例えば、μｇ／ｕｌ）に基づいて計算することができる。
【０１２１】
投与される最初および任意の引き続く投与量は、本明細書に述べられる要因に依存する。オリゴヌクレオチドに応じて、投与量および投与のためのプロトコールは変化し、投与量は、選択される投与方法、例えば、局部投与または局所投与にも依存する。
【０１２２】
用量は、単一適用または分割された適用で投与することができる。用量は１回投与することができ、または適用は繰り返すことができる。一般に、適用は、治癒が促進されるまで毎週繰り返され、または繰り返し適用は、治癒が遅くなり、もしくは止まっている場合に行うことができる。用量は、３〜７日、またはそれ以上離して適用することができる。繰り返し適用は、例えば、創傷治癒が遅くなり、または止まっている場合、例えば、毎週、または隔週、または毎月、または他の頻度で行うことができる。ある特定の眼の用途などのいくつかの指示については、最大毎時間のより頻繁な投薬を使用することができる。
【０１２３】
本明細書に記載される医薬組成物の調製に適した創傷治癒に有用な薬剤は、当技術分野で公知であるような方法を使用して調製および投与することができる（例えば、米国特許第７，０９８，１９０号、同第６，３１９，９０７号、同第６，３３１，２９８号、同第６，３８７，３６４号、同第６，４５５，５６９号、同第６，５６６，３３９号、同第６，６９６，４３３号、同第６，８５５，５０５号、同第６，９００，１８１号、同第７，０５２，６８４号、およびＥＰ１１００５２９Ｂ１を参照）。各抗コネキシンポリヌクレオチドおよび創傷治癒に有用な薬剤の濃度は、他のものと同じ範囲である必要はない。他の量は、当業者に分かり、容易に決定される。例えば、本明細書で記載されるような様々な態様および実施形態による適当な組合せ投与および製剤は、「Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ＰＤＧＦ，  ＫＧＦ，  ＩＧＦ，  ａｎｄ  ＩＧＦＢＰ  ｆｏｒ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ」という表題の、ＬｅｗｉｓへのＵＳ６９０３０７８に記載されているような投薬レジメンに従って投与することができる。
【０１２４】
投与される最初および任意の引き続く投与量は、患者の年齢、体重、状態、および治療される疾患、創傷、障害、または生物学的状態に依存する。創傷治癒に有用な薬剤に応じて、投与量および投与のためのプロトコールは変化し、投与量は、選択される投与方法、例えば、局所投与または全身投与にも依存する。
【０１２５】
創傷治癒に有用な薬剤は、内部または外部に適用することができ、線維性の病変部もしくは範囲を示しているか、またはその危険性がある任意の組織に向けることができる。ＩＧＦの局所投与については、例えば、酸化亜鉛製剤を適用することができ、これは、Ｔａｒｎｏｗら、Ｓｃａｎｄ  Ｊ．  Ｐｌａｓｔ  Ｒｅｃｏｎｓｔｒ  Ｈａｎｄ  Ｓｕｒｇ．  ２８巻：２５５〜２５９頁（１９９４年）に記載されているように、ＩＧＦの局所的な産生を誘発する。ＰＤＧＦの有効用量は、米国特許第４，８６１，７５７号に記載されているように、局所的に適用される場合、５ｎｇ／ｍｍ２以上であり、Ｌｅｐｉｓｔｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ  ２０９巻：３９３〜３９９頁（１９９５年）に記載されているように、線維芽細胞集団に適用される場合、少なくとも１ｎｇ／ｍｌの局所濃度のＰＤＧＦのアイソフォーム（例えば、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、またはＰＤＧＦ−ＡＢ）、最大約３０ｎｇ／ｍｌの局所濃度であることが報告されている。ＰＤＧＦは、ゲル１ｇ当たり約１０μｇ〜約５００μｇ、ゲル１ｇ当たり約２０μｇ〜約２００μｇ、および約３０μｇ〜約１００μｇ、最適には、ゲル１ｇ当たり約１００μｇの濃度で、カルボキシメチルセルロースゲル製剤で投与することができる。ＰＤＧＦの有効性は、投与される溶液１ｍｌ当たり約３μｇ〜約３００μｇの範囲内で実現されている。
【０１２６】
Ｓｏｔｏｚｏｎｏら、Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｔｈａｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３６巻：１５２４〜２９頁（１９９５年）に記載されているように、約５μｇ／ｍｌの濃度のＫＧＦ約５０μｌは、上皮組織への局所適用によって創傷治癒に有効となり得る。米国特許第４，８６１，７５７号に記載されているように、ＩＧＦの有効量は、ＰＤＧＦと同時投与される場合、少なくとも２．５ｎｇ／ｍｍ２〜約５ｎｇ／ｍｍ２の範囲であり、ＰＤＧＦとＩＧＦの比は、重量対重量で約１：１０〜２５：１の範囲であり、最も有効な比は、重量対重量で約１：１〜約２：１のＰＤＧＦとＩＧＦである。Ｊｙｕｎｇら、Ｓｕｒｇｅｒｙ１１５巻：２３３〜２３９頁（１９９４年）に記載されているように、ＩＧＦと組み合わせて投与されるＩＧＦＢＰは、約１１：１のＩＧＦ：ＩＧＦＢＰのモル比で、約１．５μｇのリン酸化ＩＧＦＢＰを伴った約５μｇのＩＧＦの用量レベルで、創傷治癒を増大させることが示された。
【０１２７】
ポリペプチド治療剤、例えば、ＰＤＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦおよびＩＧＦＢＰポリペプチドの投与について、投与量は、適用が対象となっている組織１ｋｇ当たり約５μｇ〜約５０μｇ、また約５０μｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、また、組織１ｋｇ当たり約１００μｇ〜約５００μｇ、および約２００〜約２５０μｇ／ｋｇの範囲とすることができる。ポリヌクレオチド治療剤については、例えば、遺伝子療法投与プロトコールにおいて、患者におけるポリヌクレオチドの発現強度に応じて、組織を標的にした投与について、ＰＤＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ、およびＩＧＦＢＰコード配列を含めた発現可能コンストラクトを含有するベクターは、注入または投与１回当たり、遺伝子療法プロトコールにおける局所投与について約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡ、また、遺伝子療法プロトコールにおける局所投与の間に約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、また、約１μｇ〜約２ｍｇのＤＮＡ、約５μｇのＤＮＡ〜約５００μｇのＤＮＡ、および約２０μｇ〜約１００μｇの範囲で、ならびに約２５０μｇを投与することができる。したがって、形質転換および発現の作用機序および有効性などの要因は、ＤＮＡ治療剤の投与についての究極の有効性に必要とされる投与量を生じさせる考慮事項である。より多量の発現が望まれる場合、組織のより大きい範囲にわたって、より大量のＤＮＡ、もしくは投与の連続的なプロトコールにおいて再投与される同じ量、または例えば、創傷部位の異なる隣接もしくは近接する組織部分へのいくつかの投与が、正の治療結果を生じさせるのに必要とされる場合がある。
【０１２８】
本明細書に記載される医薬組成物の調製に適した治療剤は、当技術分野で公知であるような方法を使用して処方および投与することができる。投与される最初および任意の引き続く投与量は、患者の年齢、体重、状態、および治療される疾患、創傷、障害、または生物学的状態に依存する。治療剤に応じて、投与量および投与のためのプロトコールは変化し、投与量は、選択される投与方法、例えば、局所投与または全身投与にも依存する。
【０１２９】
本明細書に述べるように、組合せで投与される抗コネキシンポリヌクレオチドまたは別の薬剤の用量は、単独で投与されるときに投与される用量から下方調整することができる。
【０１３０】
別の好適な実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドならびに１または複数の治療剤および／または創傷治癒に有用な薬剤の併用により、前記薬剤が単独で投与されるときの有効用量と比較して、任意のそのような薬剤の有効用量が低減される。ある特定の実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドと組み合わせて使用されるときの薬剤の有効用量は、単独で使用されるときの薬剤の用量の約１／１５〜約１／２、約１／１０〜約１／３、約１／８〜約１／６、約１／５、約１／４、約１／３または約１／２である。
【０１３１】
別の好適な実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤および／または創傷治癒に有用な薬剤の併用により、前記薬剤が単独で投与されるときの頻度と比較して、前記薬剤が投与される頻度が低減される。したがって、これらの組合せは、望まれる治療目的を実現するのに以前必要とされたものより、低いかつ／または少ない用量のそれぞれの薬剤の使用を可能にする。
【０１３２】
用量は、単一適用または分割された適用で投与することができる。用量は１回投与することができ、または適用は繰り返すことができる。
【０１３３】
単独の、あるいは１もしくは複数の治療剤および／または１もしくは複数の創傷治癒において有用な薬剤と組み合わせた、１あるいは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、同じまたは異なる経路によって投与することができる。本発明の様々な薬剤は、療法の過程の間に異なる時間に別々に、または分割された、もしくは単一の組合せ形態で同時に投与することができる。
【０１３４】
線維症の治療において有用な１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、それだけに限らないが、固体支持体（包帯材および他のマトリクスなど）ならびに医薬製剤（ゲル、混合物、懸濁液、および軟膏など）を使用する局所投与を含めた、局所投与（部位に対して末梢性または直接）によって送達されることが好ましい。一実施形態では、固体支持体は、生体適合性膜、または治療部位中への挿入体を含む。別の実施形態では、固体支持体は、包帯材またはマトリクスを含む。本発明の一実施形態では、固体支持体組成物は、緩徐放出固体支持体組成物とすることができ、この組成物中で、創傷治癒において有用な１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、緩徐放出固体マトリクス、例えば、アルギネート、コラーゲン、または合成生体吸収性ポリマーのマトリクスなどの中に分散している。固体支持体組成物は、無菌であるか、低い生体負荷（ｌｏｗ  ｂｉｏ−ｂｕｒｄｅｎ）であることが好ましい。一実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む洗浄溶液を使用することができる。
【０１３５】
別の実施形態では、約１〜約１００μｇ／ｃｍ２（好ましくは約１０〜約５０μｇ／ｃｍ２）の抗コネキシン剤を含有する洗浄溶液は、傷害または手術の時点で、またはこれらの直後に使用される。すべての実施形態において、他の抗コネキシンポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの効力および耐容性を調整された等価な用量で投与される。
【０１３６】
１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（１もしくは複数の治療剤もしくは創傷治癒に有用な薬剤とともに、またはこれを伴わずに）の送達は、ある期間、場合によっては、約０．５時間、１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、もしくは約２４時間、またはそれ以上にわたって行うことができ、より重度の創傷において特に有利となり得る。場合によっては、細胞の喪失は、手順の部位を十分越えて周囲細胞に及ぶことがある。そのような消失は、最初の手順の２４時間以内に起こる場合があり、ギャップジャンクション細胞間連絡によって媒介される。（１または複数の）抗コネキシンポリヌクレオチドの投与は、細胞間連絡を調節し、追加の細胞の喪失または傷害または傷害の結果を最小限にする。
【０１３７】
送達期間は、下方調節が誘発される部位、および望まれる治療効果の両方に依存する一方で、約０．５時間、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、もしくは約２４時間またはそれ以上の連続送達または緩徐放出送達がもたらされる。本発明によれば、これは、特に連続投与または緩徐放出投与用の製剤の形態で、薬学的に許容される担体またはビークルと一緒に、製剤中に抗コネキシンポリヌクレオチド（１もしくは複数の治療剤もしくは創傷治癒に有用な薬剤とともに、またはこれを伴わずに）を含めることによって実現することができる。
【０１３８】
本明細書に記載される投与経路および投与量は、単に指針として意図されており、これは、熟練した医師は、任意の特定の患者について、最適の投与経路および投与量を決定するためである。
【０１３９】
本明細書に参照または記載された疾患、障害、または状態を有するか、またはこれらを有する疑いがある対象を治療する任意の方法は、本明細書に記載された任意の用量、剤形、製剤、および／または組成物の投与を利用することができる。
【０１４０】
本明細書に記載されている医薬組成物の調製に適した治療剤および抗微小管剤は、当技術分野で公知であるような方法を使用して、処方および投与することができる。投与される最初および任意の引き続く投与量は、患者の年齢、体重、状態、および治療される疾患、創傷、障害、または生物学的状態に依存する。治療剤に応じて、投与量および投与のためのプロトコールは変化し、投与量は、選択される投与方法、例えば、局所投与または全身投与にも依存する。
【０１４１】
本明細書に述べるように、組合せで投与される抗コネキシンポリヌクレオチドまたは別の薬剤の用量は、単独で投与されるときに投与される用量から下方調整することができる。
【０１４２】
いくつかの薬剤の併用は、任意の個々の薬剤について必要とされる投与量を低減することができるが、これは、異なる薬剤の効果の開始および継続時間が、相補的となり得るためである。好適な実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤の併用は、相加的、相乗的、または超相加的効果を有する。
【０１４３】
場合によっては、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、１または複数の創傷治癒に有用な薬剤、および／または１または複数の抗微小管剤の組合せは、相加的効果を有する。他の場合では、組合せは、相加的を超える効果を有することができる。そのような効果は、「超相加的な」効果と本明細書で呼ばれ、相乗的な、または増強された相互作用に起因し得る。
【０１４４】
用語「創傷治癒の超相加的促進」は、抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤の組合せの投与によって生じる平均の創傷治癒を指し、任意の薬剤単独の個々の投与によって生じる創傷治癒の合計より統計的に有意に高い。抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤の組合せ投与によって生じるものが、個々の化合物の予期される相加的な値より「統計的に有意に高い」かどうかは、本明細書で記載されるような、および／または当業者によって公知の様々な統計的な方法によって決定することができる。用語「相乗的な」は、超相加的な阻害のタイプを指し、抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤の両方は個々に、創傷治癒を促進し、または線維症および瘢痕を低減する能力を有する。用語「増強された」は、超相加的な効果のタイプを指し、抗コネキシンポリヌクレオチド、または１もしくは複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／もしくは抗微小管剤のうちの１つは、個々に、創傷治癒を促進するための、増大された能力を有する。
【０１４５】
一般に、増強は、組合せ治療により、それぞれ、治療群において、個々の治療によって生じる平均創傷治癒の増大の合計と比較した場合、統計的に有意に超相加的である、治療群における平均創傷治癒の増大が生じるかどうかを決定することによって評価することができる。平均創傷治癒の増大は、対照群と治療群の平均創傷治癒の間の差異として計算することができる。創傷治癒の画分増大、すなわち「影響された画分」（Ｆａ）は、治療群の平均創傷治癒の増大量を、対照群の平均創傷治癒で除すことによって計算することができる。統計的に有意な増強を試験するには、それぞれの治療群についてのＦａを計算することが必要である。組合せ治療について予期される相加的なＦａは、組合せのいずれかの成分を受けている群からの平均Ｆａの合計であると理解することができる。例えば、両側１標本Ｔ検定を使用することによって、実験によって得られる結果が、ｐ値で測定した場合に、偶然だけによる可能性がどの程度であるかを評価することができる。０．０５未満のｐ値は、統計的に有意である、すなわち偶然だけによるものではなさそうであるとみなされる。したがって、組合せを、増強された超相加的効果を生じるものとみなすためには、組合せ治療群についてのＦａは、単一成分治療群について予期される相加的Ｆａより統計的に有意に高くなければならない。
【０１４６】
組合せ治療から相乗効果がもたらされるかどうかは、中央値効果／組合せ指標によるアイソボログラム法（Ｃｈｏｕ，  Ｔ．およびＴａｌａｌａｙ，  Ｐ．（１９８４年）、Ａｄ．  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇ．、第２２巻、２７〜５５頁）により評価することができる。この方法では、抗コネキシンポリヌクレオチド単独に対する、創傷治癒に有用な１または複数の薬剤単独に対する、および固定したモル比での２者の組合せに対する中央値効果プロットに由来するパラメータに基づき、異なる用量効果レベルに対する組合せ指数（ＣＩ）値を計算する。ＣＩ値が＆１ｔ；１は相乗効果を示し、ＣＩ−１は相加効果を示し、ＣＰ１はアンタゴニスト効果を示す。この解析は、ＣａｌｃｕＳｙｎ，Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｆｏｒ  Ｄｏｓｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｂｉｏｓｏｆｔ（Ｄ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）などのコンピュータソフトウェアツールを用いて実施することができる。
【０１４７】
超相加的効果が、併用療法について存在するかどうかを分析するための、当技術分野で公知または後に開発される任意の方法は、１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤と組み合わせて使用するのに適した抗コネキシンポリヌクレオチドをスクリーニングすることにおいて使用するために企図されている。
【０１４８】
別の好適な実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤の併用により、前記薬剤が単独で投与されるときの有効用量と比較して、任意のそのような薬剤の有効用量が低減される。ある特定の実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドと組み合わせて使用される場合の薬剤の有効用量は、単独で使用されるときの薬剤の用量の約１／１５〜約１／２、約１／１０〜約１／３、約１／８〜約１／６、約１／５、約１／４、約１／３、または約１／２である。
【０１４９】
別の好適な実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、ならびに１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤、および／または抗微小管剤の併用により、前記薬剤が単独で投与されるときの頻度と比較して、前記薬剤が投与される頻度が低減される。したがって、これらの組合せは、望まれる治療目的を実現するのに以前必要とされたものより、低いかつ／または少ない用量のそれぞれの薬剤の使用を可能にする。
【０１５０】
用量は、単一適用または分割された適用で投与することができる。用量は１回投与することができ、または適用は繰り返すことができる。
【０１５１】
単独の、あるいは１もしくは複数の治療剤、１もしくは複数の創傷治癒において有用な薬剤、および／または１もしくは複数の抗微小管剤と組み合わせた、１あるいは複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、同じまたは異なる経路によって投与することができる。本発明の様々な薬剤は、療法の過程の間に異なる時間に別々に、または分割された、もしくは単一の組合せ形態で同時に投与することができる。
【０１５２】
１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤とともに、またはこれを伴わずに）は、それだけに限らないが、固体支持体（包帯材および他のマトリクスなど）ならびに医薬製剤（ゲル、混合物、懸濁液、および軟膏など）を使用する局所投与を含めた、局所投与（部位に対して末梢性または直接）によって送達されることが好ましい。一実施形態では、固体支持体は、生体適合性膜、または治療部位中への挿入体を含む。別の実施形態では、固体支持体は、包帯材またはマトリクスを含む。本発明の一実施形態では、固体支持体組成物は、緩徐放出固体支持体組成物とすることができ、この組成物中で、創傷治癒において有用な１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、緩徐放出固体マトリクス、例えば、アルギネート、コラーゲン、または合成生体吸収性ポリマーのマトリクスなどの中に分散している。固体支持体組成物は、無菌であるか、低い生体負荷であることが好ましい。一実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む洗浄溶液を使用することができる。
【０１５３】
抗コネキシン剤（１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤とともに、またはこれを伴わずに）は、所望の結果を実現する任意の様式で投与することができる。好適な方法には、管周囲投与（手術時の直接適用、または内視鏡、超音波、ＣＴ、ＭＲＩ、もしくは透視検査（ｆｌｕｏｒｏｓｃｏｐｉｃ）のガイダンスとともに）；外科的インプラントの「コーティング」；および手術部位での薬物溶出ポリマーインプラントの配置が含まれる。好適な実施形態では、０．５重量％〜２０重量％の抗コネキシンポリヌクレオチドがポリマー担体中に装填され（以下の実施例において記載されるように）、「ペースト」、「フィルム」、または「ラップ」として管周囲（腸間膜）表面に適用され、これは、ある期間にわたって薬物を放出する。内視鏡下での手順の間に、抗コネキシンポリマー調製物は、手術の間に処置された腹部臓器および骨盤臓器の腸間膜に、内視鏡内の送達ポートを介して、「スプレー」として適用することができる。特に好適な実施形態では、管周囲組成物は、約０．１重量％〜約５重量％の抗コネキシンポリヌクレオチドである。別の好適な実施形態では、約０．１％〜約２０％またはそれ以上、または抗コネキシン剤を含有するポリマーコーティングは、外科的インプラント（例えば、乳房インプラント、人工関節、血管移植片など）の表面に適用される。さらに別の好適な実施形態では、約０．０１重量％〜約２０重量％またはそれ以上の抗コネキシン剤を含有するポリマーインプラントが、手術部位に（例えば、洞腔、胸腔、腹腔中に、または脳手術の間の手術部位に直接）適用される。
【０１５４】
別の実施形態では、約１〜約１００μｇ／ｃｍ２（好ましくは約１０〜約５０μｇ／ｃｍ２）の抗コネキシン剤を含有する洗浄液が、医師によって、手術時または手術直後に使用され、手術の間または腹腔内に投与される。すべての実施形態において、他の抗コネキシンポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの効力および耐容性を調整された等価な用量で投与される。
【０１５５】
１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド（１または複数の治療剤、創傷治癒に有用な薬剤および／または抗微小管剤とともに、またはこれを伴わずに）の送達は、ある期間、場合によっては、約０．５時間、１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、もしくは約２４時間、またはそれ以上にわたって行うことができ、より重度の創傷において特に有利となり得る。場合によっては、細胞の喪失は、手順の部位を十分越えて周囲細胞に及ぶことがある。そのような消失は、最初の手順の２４時間以内に起こる場合があり、ギャップジャンクション細胞間連絡によって媒介される。（１または複数の）抗コネキシンポリヌクレオチドの投与は、細胞間連絡を調節し、追加の細胞の喪失または傷害または傷害の結果を最小限にする。
【０１５６】
送達期間は、下方調節が誘発される部位、および望まれる治療効果の両方に依存する一方で、約０．５時間、約１〜２時間、約２〜４時間、約４〜６時間、約６〜８、もしくは約２４時間またはそれ以上の連続送達または緩徐放出送達がもたらされる。本発明によれば、これは、特に連続投与または緩徐放出投与用の製剤の形態で、薬学的に許容される担体またはビークルと一緒に、製剤中に抗コネキシンポリヌクレオチド（１もしくは複数の治療剤もしくは創傷治癒に有用な薬剤とともに、またはこれを伴わずに）を含めることによって実現することができる。
【０１５７】
本明細書に記載される投与経路および投与量は、単に指針として意図されており、これは、熟練した医師は、任意の特定の患者および創傷について、最適の投与経路および投与量を決定するためである。
【０１５８】
本明細書に参照または記載された疾患、障害、または状態を有するか、またはこれらを有する疑いがある対象を治療する任意の方法は、本明細書に記載された任意の用量、剤形、製剤、および／または組成物の投与を利用することができる。
【０１５９】
包帯材およびマトリクス
一態様では、単独の、または、１もしくは複数の治療用ポリヌクレオチド、および／もしくは創傷治癒において有用なポリヌクレオチドと組み合わせた、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、包帯材またはマトリクスの形態で提供される。ある特定の実施形態では、本発明の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、直接適用するために、液体、半固体、もしくは固体組成物の形態で提供され、または組成物は、包帯材ガーゼもしくはマトリクスなどの固体接触層の表面に施され、もしくは固体接触層中に組み込まれる。包帯材組成物は、例えば、流体またはゲルの形態で提供することができる。単独の、または１もしくは複数の治療用ポリヌクレオチド、創傷治癒において有用な薬剤、および／もしくは抗微小管剤と組み合わせた、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、局所適用のために、従来の薬学的賦形剤と組み合わせて提供することができる。適当な担体として、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびこれらの混合物を含めたセルロース誘導体を含有するプルロニックゲル、ポラキサマーゲル、ヒドロゲル；ならびにポリアクリル酸を含有するヒドロゲル（カルボポール）が挙げられる。適当な担体には、局所医薬製剤に使用されるクリーム／軟膏、例えば、セトマクロゴール乳化軟膏に基づくクリームも含まれる。上記担体は、アルギネート（増粘剤または刺激薬として）、ベンジルアルコールなどの保存剤、リン酸水素二ナトリウム／リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨを制御するための緩衝剤、塩化ナトリウムなどの浸透圧モル濃度を調節するための薬剤、およびＥＤＴＡなどの安定剤を含むことができる。
【０１６０】
一実施形態では、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、コネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチド、好ましくはコネキシン４３アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドが、天然または合成マトリクス上で、単独で、または１もしくは複数の治療剤、創傷治癒において有用な薬剤および／もしくは抗微小管剤と組み合わせて投与される。
【０１６１】
適当な包帯材またはマトリクスは、例えば、単独の、または１もしくは複数の治療剤、創傷治癒において有用な薬剤、および／もしくは抗微小管剤と組み合わせた、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドとともに以下のものを含むことができる。抗コネキシン４３オリゴヌクレオチド、例えば、抗コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドが好適である。
【０１６２】
１）吸収材：適切な吸収材は、例えば、セルロース、木綿、またはレーヨンなどの高度に吸収性の繊維層と組み合わせた、例えば、半接着質または非接着層をもたらしうる、例えば、吸収性包帯材を含みうる。代替的に、吸収材は、主要な（ｐｒｉｍａｒｙ）包帯材または補助的な（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）包帯材として用いることができる。
【０１６３】
２）アルギン酸塩：適切なアルギン酸塩は、例えば、天然の多糖繊維または海藻に由来するキセロゲルからなる不織パッド、非接着パッド、およびリボンである包帯材を含む。適切なアルギン酸塩包帯材は、例えば、滲出物との接触の場合イオン交換過程を介して湿潤ゲルを形成しうる。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、やわらかく快適であり、不規則的な形状をした領域上での填塞、陥入、または適合が容易であるように設計される。一部の実施形態において、アルギン酸塩包帯材は、第２の包帯材と共に用いることができる。
【０１６４】
３）抗菌包帯材：適切な抗菌包帯材は、例えば、例えば銀およびポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）などの生体活性薬剤の送達を促進して、これが必要であるかまたは望ましい場所で、感染に対する効力を維持しうる包帯材を含みうる。一部の実施形態において、適切な抗菌包帯材は、例えば、スポンジ、浸透化織りガーゼ、フィルム包帯材、吸収性製品、アイランド包帯材、ナイロン繊維、非接着バリア、または材料の組合せとして入手可能でありうる。
【０１６５】
４）生体物質および生合成物質：適した生体物質包帯材または生合成物質包帯材は、例えば、天然供給源（例えば、ブタまたはウシ）に由来するゲル、溶液、または半透性シートを含みうる。一部の実施形態において、ゲルまたは溶液は、治療部位に適用され、バリア保護のための包帯材により被覆される。別の実施形態では、膜として作用する可能性があり、単回の適用後においてその場に残存する生体物質基剤（例えば、ブタの腸粘膜または膀胱組織）もしくは生合成物質基剤のシートをｉｎ  ｓｉｔｕで配置するか、または１もしくは複数、好ましくは２つの抗コネキシン剤を組み入れるように、生体物質包帯材もしくは生合成物質包帯材をあらかじめ調製することができる。
【０１６６】
５）コラーゲン：適切なコラーゲン包帯材は、例えば、ウシ、ブタ、もしくは鳥類の供給源、または他の天然の供給源もしくはドナーに由来する、例えば、ゲル、パッド、粒子、ペースト、粉末、シート、または溶液を含みうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、治療部位における滲出物と相互作用してゲルを形成しうる。一部の実施形態において、コラーゲン包帯材は、補助的な包帯材と組み合わせて用いることができる。
【０１６７】
６）複合材料：適切な複合材料包帯材は、例えば、物理的に異なる成分を単一の生成物へと混合して、例えば、細菌バリア、吸収、および接着など複数の機能を提供する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、複数の層からなり、半接着パッドまたは非接着パッドを組み込む。一部の実施形態において、複合材料はまた、例えば、接着性の輪郭を有する不織布製テープまたは透明フィルムも含む。他の一部の実施形態において、複合材料包帯材は、例えば、主要な包帯材としても補助的な包帯材としても機能することが可能であり、さらに別の実施形態において、包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１６８】
７）接触層：適切な接触層包帯材は、例えば、ある領域上に配置されて、例えば、治療部位に適用された他の薬剤または包帯材との直接的な接触から組織を保護する、薄型の非接着シートを含みうる。一部の実施形態において、接触層は、治療部位領域の形状に調和するように配置することができ、また多孔性であるため、透過する滲出物を、上部の補助的な包帯材に吸収させることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１６９】
８）弾性包帯：適切な弾性包帯は、例えば、伸縮して身体の外形に調和する包帯材を含みうる。一部の実施形態において、繊維成分は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨン、またはナイロンを含みうる。他の一部の実施形態において、弾性包帯は、例えば、第２層としてのまたは補助的包帯材としての吸収をもたらし、被覆をその場に保持するか、圧力を加えるか、または治療部位にクッションを与えることができる。さらに別の実施形態において、接触層包帯材は、局所医薬組成物と組み合わせて用いることができる。
【０１７０】
９）発泡体：適切な発泡体包帯材は、例えば、流体の保持が可能な小さな開放セルを有する、発泡ポリマー溶液（ポリウレタンを含む）のシートおよび他の形状を含みうる。例示的な発泡体は、例えば、他の材料と組み合わせて浸透化または層状化することができる。一部の実施形態では、発泡体の厚さおよび組成に基づいて吸収能を調製することができる。他の一部の実施形態において、治療部位と接触する領域は、取り外しを容易とするために非接着性でありうる。さらに別の実施形態において、発泡体は、接着性の輪郭および／または抗感染性バリアとして働きうる透明のフィルムコーティングと組み合わせて用いることができる。
【０１７１】
１０）ガーゼおよび不織包帯材：適切なガーゼ包帯材および織地包帯材は、例えば、吸収性の程度が多様な乾燥織地スポンジまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織スポンジおよび吸収性の程度が多様な乾燥織地ラップまたは吸収性の程度が多様な乾燥不織ラップを含みうる。例示的な繊維組成物は、例えば、木綿、ポリエステル、レーヨンを含みうる。一部の実施形態において、ガーゼおよび不織包帯材は、バルクにおいて滅菌の場合であれ非滅菌の場合であれ、また、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能でありうる。例示的なガーゼ包帯材および不織包帯材は、各種の治療部位を消毒、パッキング、被覆に用いることができる。
【０１７２】
１１）親水コロイド：適切な親水コロイド包帯材は、例えば、ゼラチン、ペクチン、またはカルボキシメチルセルロースからなるウェハー、粉末、またはペーストを含みうる。一部の実施形態において、ウェハーは自己接着性であり、接着性の輪郭を伴う場合であれ伴わない場合であれ入手可能であり、また多種多様な形状およびサイズで入手可能である。例示的なハイドロコロイドは、外形合わせを必要とする領域において有用である。一部の実施形態において、粉末およびペーストの親水コロイドは、第２の包帯材と組み合わせて用いることができる。
【０１７３】
１２）ヒドロゲル（アモルファス）：適切なアモルファスヒドロゲル包帯材は、例えば、水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持し、治療部位に水分を補給するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、補助的な包帯材カバーと組み合わせて用いることができる。
【０１７４】
１３）ヒドロゲル：浸透化包帯材：適切な浸透化ヒドロゲル包帯材は、例えば、アモルファスヒドロゲルに浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。アモルファスヒドロゲルは、例えば、乾燥治療部位に水分を与え、湿潤性の治癒環境を維持するように設計された、水、ポリマー、および不定形の他の成分による製剤を含みうる。
【０１７５】
１４）ヒドロゲルシート：適切なヒドロゲルシートは、例えば、水中において不溶性であり、膨潤により水溶液と相互作用する、架橋された親水性ポリマーの三次元ネットワークを含みうる。例示的なヒドロゲルは、高度に適合性でありそして透過性であり、それらの組成に応じて、広範な量のドレナージを吸収できる。一部の実施形態において、ヒドロゲルは、治療部位に対して非接着性であるか、または取り外しが容易であるように処置される。
【０１７６】
１５）浸透化包帯材：適切な浸透化包帯材は、例えば、溶液、エマルジョン、油、ゲル、または例えば、食塩液、油、亜鉛塩、ワセリン、ゼロフォーム（ｘｅｒｏｆｏｒｍ）、およびスカーレットレッド（ｓｃａｒｌｅｔ  ｒｅｄ）のほか、本明細書に記載の化合物を含む、他の一部の薬学的に活性な化合物もしくは担体薬剤に浸したガーゼおよび不織スポンジ、ロープ、ならびにストリップを含みうる。
【０１７７】
１６）シリコンゲルシート：適切なシリコンゲルシート包帯材は、例えば、メッシュまたは布により補強されるかまたはこれに結合した架橋ポリマーからなる軟質カバーを含みうる。
【０１７８】
１７）溶液：適切な液体包帯材は、例えば、細胞外マトリックス中に見出される多タンパク質物質および他のエレメントの混合物を含みうる。一部の実施形態では、デブリドマンおよび洗浄の後において例示的な溶液を治療部位に適用し、次いで、吸収性包帯材または非接着性パッドにより被覆することができる。
【０１７９】
１８）透明フィルム：適切な透明フィルム包帯材は、片面が接着剤によりコーティングされる、多様な厚さのポリマー膜を含みうる。一部の実施形態において、透明フィルムは液体、水、および細菌に対しては不透過性であるが、水蒸気および大気中の気体に対しては透過性である。一部の実施形態では、透明性により、治療部位が視覚化される。
【０１８０】
１９）充填剤：適切な充填剤包帯材は、例えば、ビーズ、クリーム、泡沫、ゲル、軟膏、パッド、ペースト、クッション（ｐｉｌｌｏｗ）、粉末、ストランド、または他の調合物を含みうる。一部の実施形態において、充填剤は非接着性であり、経時放出型抗菌剤を含みうる。例示的な充填剤は、湿潤環境の維持、滲出物の管理、また、例えば、部分層創傷および全層創傷、感染創傷、排液性創傷、およびパッキングを要する深部創傷の治療に有用でありうる。
【０１８１】
本明細書に参照または記載された疾患、障害、および／または状態を有するか、これらを有する疑いがあるか、これらへの素因を有するか、またはこれらの危険性がある対象を治療する任意の方法は、本明細書に記載された任意の用量、剤形、製剤、および／または組成物の投与を利用することができる。
【０１８２】
治療
したがって、本発明によれば、細胞間連絡を一過性および部位特異的な様式で調節または下方調節することができる製剤、ならびに細胞外環境とのコネキシンを介した連絡の調節が提供される。したがって、この製剤は、療法の方法および他の治療において用途を有する。
【０１８３】
癒着を生じ得る組織損傷の場合では、本発明の製剤は、癒着を予防し、または重症度を低減すること、および必要である場合、癒着の最小化を促進することの両方において有効となる。したがって、この製剤は、例えば、外部外傷、外科的介入、または疾患状態の結果であろうとなかろうと、癒着の予防および／または治療において利点を有することになる。
【０１８４】
本明細書に提供されるポリヌクレオチド、組成物、および方法を利用して、手術の多種多様な外科的癒着および合併症を治療または予防することができる。癒着形成は、様々な外科的手順を複雑にする。上述したように、外科的癒着は、腹腔または骨盤腔における、実質的にいずれの開放外科手術または内視鏡外科的手順も複雑にする。
【０１８５】
したがって、本発明は、対象における術後癒着を予防または軽減する方法であって、手術部位で患者に有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法に関する。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術切開部位で、および／またはこの部位付近に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術中および／または手術後に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、（１）コネキシンタンパク質の発現を下方調節する、（２）ギャップジャンクション形成を低減することによって、細胞間連絡を阻害する、（３）手術または外科的修復の部位での外科的癒着を予防または低減するのに、全体的または部分的に有効である。
【０１８６】
本発明は、二次外科的癒着の形成を予防または軽減する方法であって、癒着を修復するための手順の後に、対象に有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法にも関する。一実施形態では、手順は、分離手順またはリリース手順である。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術切開部位で投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術中および／または手術後に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、（１）コネキシンタンパク質の発現を下方調節する、（２）ギャップジャンクション形成を低減することによって、細胞間連絡を阻害する、（３）手術または外科的修復の部位での二次外科的癒着を予防または低減するのに、全体的または部分的に有効である。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、手術の間、または外傷の結果として露出し、または傷ついた上皮、結合、筋肉、および神経の組織、または他の組織に投与される。一実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、局所的に投与される。他の実施形態では、抗コネキシンポリヌクレオチドは、移植または滴下注入または注射される。
【０１８８】
したがって、本発明は、対象における傷害または外傷に関連する癒着を予防または軽減する方法であって、外傷または傷害の部位で、患者に有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを投与する工程を含む方法に関する。
【０１８９】
抗コネキシンポリヌクレオチドは、所望の結果を実現する任意の様式で投与することができる。好適な方法には、管周囲投与（手術時の直接適用、または内視鏡、超音波、ＣＴ、ＭＲＩ、もしくは透視検査のガイダンスとともに）；外科的インプラントの「コーティング」；および手術部位での薬物溶出ポリマーインプラントの配置が含まれる。好適な実施形態では、０．５重量％〜２０重量％の抗コネキシンポリヌクレオチドがポリマー担体中に装填され（以下の実施例において記載されるように）、「ペースト」、「フィルム」、または「ラップ」として管周囲（腸間膜）表面に適用され、これは、ある期間にわたって薬物を放出し、その結果、外科的癒着の発生が低減される。内視鏡下での手順の間に、抗コネキシンポリマー調製物は、手術の間に処置された腹部臓器および骨盤臓器の腸間膜に、内視鏡内の送達ポートを介して、「スプレー」として適用することができる。特に好適な実施形態では、管周囲組成物は、約０．１重量％〜約５重量％抗コネキシンポリヌクレオチドである。別の好適な実施形態では、約０．１％〜約２０％またはそれ以上、または抗コネキシン剤を含有するポリマーコーティングは、外科的インプラント（例えば、乳房インプラント、人工関節、血管移植片など）の表面に適用されることによって、インプラントの近傍における被包／不適切な瘢痕が予防される。さらに別の好適な実施形態では、約０．０１重量％〜約２０重量％またはそれ以上の抗コネキシンポリヌクレオチドを含有するポリマープラントが、手術部位に（例えば、洞腔、胸腔、腹腔中に、または脳手術の間の手術部位に直接）適用され、その結果、炎症の再発、癒着形成、または瘢痕が低減される。別の実施形態では、約１〜約１００μｇ／ｃｍ２（好ましくは約１０〜約５０μｇ／ｃｍ２）の抗コネキシンポリヌクレオチドを含有する洗浄液が、医師によって、手術時または手術直後に使用され、手術の間または腹腔内に投与される。すべての実施形態において、他の抗コネキシンポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの効力および耐容性を調整された等価な用量で投与される。
【０１９０】
本発明は、抗コネキシンポリヌクレオチドの抗癒着活性を評価する方法であって、癒着を形成する危険性がある細胞を抗コネキシンポリヌクレオチドと接触させる工程と、前記抗コネキシンポリヌクレオチドの抗癒着効果を決定する工程とを含む方法にも関する。一実施形態では、前記方法は、インビトロで実施される。別の実施形態では、前記方法は、インビボで実施される。
【０１９１】
癒着を治療するための治療可能性を評価するのに、いくつかの動物モデルが使用されている。使用することができる２つのモデル系は、側壁癒着モデルおよび子宮角モデルであり、実施例においてより完全に記載されている。これらのモデルは、癒着の予防または軽減における、抗コネキシンポリヌクレオチド（１もしくは複数の治療剤、創傷治癒において有用な薬剤、および／もしくは抗微小管剤とともに、またはこれを伴わずに）の可能性を決定するのに使用することができる。これらのモデルの両方を使用して得られた結果と、癒着予防における有用性との間の明らかな相関が、ＩＮＴＥＲＣＥＥＤ（ＴＣ７）を用いて得られ、これについて、明らかな臨床的有効性が示され、婦人科手術における癒着予防についてのＦＤＡ認可が得られた。
【０１９２】
腹膜側壁モデルにおいて、ウサギを、筋肉内に、１．２ｍｇ／ｋｇのアセチルプロマジンを用いて予備麻酔（ｐｒｅ−ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅ）し、５５ｍｇ／ｋｇのケタミン塩酸塩と５ｍｇ／ｋｇのキシラジンの混合物を用いて麻酔する。無菌手術を準備した後、正中開腹術を実施する。右側腹壁上で、３×５ｃｍの範囲の腹膜および腹横筋を取り出す。盲腸を体外に露出し、指で圧力をかけることによって、全盲腸表面にわたって漿膜下出血を生じさせる。次いで盲腸を、その正常な解剖学位置に戻す。試験されるポリヌクレオチドを、Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプ（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）中に入れることによって、手術後の合間を通じて、分子を連続的に放出させる。Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプを皮下空間に配置し、送達管により、ポンプを側壁における障害部位と接続する。ビークルを対照ウサギのポンプ内に入れる。腹壁および皮膚を、標準化された様式で閉じる。７日後にウサギを屠殺し、癒着を伴う側壁傷害の面積の割合を求める。さらに、形成した癒着の粘着性を以下のシステムを使用してスコア化する。
０＝癒着なし
１＝軽度の、容易に切断可能な癒着
２＝中等度癒着；切断可能でない、臓器を引き裂かない
３＝高密度な癒着；切断可能でない、除去されるとき引き裂く  。
【０１９３】
癒着の面積または粘着性の低減は、有益と考えられる。
【０１９４】
追加の実験では、ウサギ子宮角モデルを使用することができる。このモデルは、手術後、ウサギにおいて、重度の癒着を引き起こすことが以前に示されている［Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，  Ｋ．ら、「Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｒａｂｂｉｔｓ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．、７７巻、１０２〜１０６頁（１９８４年）］。ウサギを麻酔し（１３０ｍｇ／ｋｇのケタミンおよび２０ｍｇ／ｋｇのアセチルプロマジン  ｉｍ）、無菌手術を準備する。正中開腹術を実施し、ガーゼを用いて、点状の出血が生じるまで漿膜表面を擦りむくことによって両子宮角上に外科的外傷をつける。副行血液供給を除くことによって、両子宮角の虚血を誘発する。外傷をつけた後、腹壁を２層で閉じる。試験されるポリヌクレオチドを、腹膜側壁モデルについて記載したように送達するが、管は、傷害された子宮角上に配置する。子宮角モデルを用いて、癒着の全体的な程度を表すために初期スコアを与える（０〜４＋）。様々な臓器への癒着を伴う角の表面の割合を、全体的な癒着スコアの下の表に示す。
【０１９５】
組成物
本発明は、癒着（例えば、外科的および二次外科的癒着）を治療または予防することにおいて有用な医薬組成物および製剤を対象とし、この組成物または製剤は、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドなどの治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む。
【０１９６】
同様に、他の組織損傷の場合において、本発明の方法、組成物、および製剤は、癒着を治療または予防することにおいて有効である。したがって、この組成物および製剤は、癒着の治療において明らかな利点を有する。
【０１９７】
好適な一形態では、組成物は、１種のコネキシンタンパク質のみのｍＲＮＡに対する、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドを含有する。コネキシンタンパク質は、コネキシン４３であることが最も好ましい。
【０１９８】
あるいは、組成物は、１種を超えるコネキシンタンパク質に対するポリヌクレオチドを含むことができる。ポリヌクレオチドが向けられるコネキシンタンパク質の１つは、コネキシン４３であることが好ましい。オリゴデオキシヌクレオチドが向けられる他のコネキシンタンパク質として、例えば、コネキシン２６、３０、３１．１、３２、および３７を挙げることができる。様々なコネキシンに対して向けられる適当な例示的ポリヌクレオチド（およびＯＤＮ）を表１に示す。
【０１９９】
本発明の多くの態様が、オリゴデオキシヌクレオチドを参照して説明されている。しかし、他の適当なポリヌクレオチド（ＲＮＡポリヌクレオチドなど）を、これらの態様において使用することができることが理解される。他の抗コネキシンオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドである。
【０２００】
したがって、一態様では、本発明は、癒着の発生を予防または軽減するための治療的処置において使用するための組成物を提供し、これは、少なくとも１つの抗コネキシンポリヌクレオチド、好ましくは抗コネキシン４３ポリヌクレオチドを含む。好適な実施形態では、この組成物は、薬学的に許容される担体またはビークルをさらに含む。
【０２０１】
製造者のキット、薬剤、および物品
一態様では、本発明は、癒着（例えば、外科的および二次外科的癒着）を予防または治療するためのキットを提供する。
【０２０２】
このキットは、本明細書に記載される１または複数の組成物を含むことができる。例えば、キットは、線維性疾患、障害または状態を有するか、これらの危険性があるか、またはこれらへの素因を有する対象の治療に有効な、有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、抗コネキシン４３ポリヌクレオチドを含む組成物を含むことができる。一実施形態では、キットは、癒着を有するか、癒着を形成する危険性があるかまたはこれらへの素因を有する対象の治療に有効な、有効量の１または複数のポリヌクレオチド相同体を含む組成物を含む。
【０２０３】
場合により、１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチドは、癒着を有するか、癒着を形成する危険性があるかまたはこれらへの素因を有する対象の治療に有用な薬剤の製造において使用することもできる。一実施形態では、この薬剤は、治療有効量の抗コネキシンポリヌクレオチド、好ましくは抗コネキシン４３ポリヌクレオチド、および薬学的に許容される担体を含む。
【０２０４】
別の態様では、本発明は、有効量の１または複数の抗コネキシンポリヌクレオチド、例えば、抗コネキシン４３ポリヌクレオチドを含む容器、および癒着を有するか、癒着を形成する危険性があるかまたはこれらへの素因を有する対象の治療のための使用を含めた使用のための指示書を含む製品を含む。
【０２０５】
本発明のより良好な理解は、以下の実験セクションを参照して得られる。以下の実験は、例示的であり、本発明、または特許請求の範囲を限定することは決して意図されていない。
【実施例】
【０２０６】
（実施例１）
水溶液は、約４０００のポリオキシプロピレン疎水性ベース平均分子量と、約１１，５００の総平均分子量とを有し、コポリマーの総重量の約７０重量％の量のオキシエチレン基を含むポリエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーで作製される。このコポリマーは、商標ＰＬＵＦＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ−１２７の下でＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪにより販売される。
【０２０７】
溶液は、ポリマーを冷（４℃）蒸留水中に、約１０重量％〜約３０重量％の濃度になるように溶解することにより作製される。より具体的な溶液の手法は、「Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｋｉｎ  Ｉ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７  Ｇｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｕｒｎｓ」、Ｊ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｍａｔｅｒ．  Ｒｅｓ．  ６巻、５２７頁、１９７２年に記載される。このような溶液は、その開示が本明細書に参照により組み込まれる米国特許第５，３６６，７３５号に記載される。
【０２０８】
（実施例２）
以下の試験手法を、手術による傷害を受けたラットに対する上記の実施例１の溶液または抗コネキシンポリヌクレオチドを含む実施例１の溶液または他の製剤の影響を決定するために用いる。３００〜４００グラムの体重の２２匹の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにペントバルビタールナトリウム（体重１キログラムあたり３０ミリグラム）を腹側の腹壁の左腰領域から腹腔内投与することにより麻酔をかける。その後、腹部表面をポビドンヨード溶液で洗浄し、剃毛した後に、５センチメートルの縦方向正中線切開により開腹する。各子宮角の１センチメートルの区画の漿膜をはがし、壁側腹膜の向かい合う１平方センチメートルを、その下にある筋肉層を含めて切除する。止血はしなくてよい。
【０２０９】
その後、実施例１の製剤を、子宮角の手術により傷害を受けた領域と、腹部の片側だけであるが壁側腹膜の手術による傷害との両方に４℃の温度にて適用する。製剤の１回目の適用がゲルを形成した後に、製剤の第２層を適用する。およそ０．５〜１．５立方センチメートルの製剤を、子宮角の手術により傷害を受けた１センチメートルの沈査および壁側腹膜組織の手術により傷害を受けた１平方センチメートルの領域の両方を適切に覆う（腹部の片側で）のに必要な量に応じて適用する。
【０２１０】
同様に手術により傷害を受けた腹部のもう一方の側は未処置のままにした。漿膜をはがした子宮角の一部分を、次いで、手術による傷害の０．５センチメートル内で、単一３−０ＶＩＣＲＹＬ結紮縫合により壁側腹膜領域とつなげる。このことは、子宮角の傷害を受けた表面が、再腹膜化が起こるまで腹膜の壁側領域の手術による傷害の近傍に確実にあるようにするために行う。腹壁を１層の０−０ＶＩＣＲＹＬ結節縫合で閉じ、２１日後に、それぞれの動物を屠殺して、癒着の存在について腹部を調べた。
【０２１１】
以下の採点システムを用いて、得られた結果を評価する：
０＝癒着は観察されない。
１＝手術による傷害領域の２５％での癒着。
２＝手術による傷害領域の５０％での癒着。
３＝手術による傷害領域の１００％での癒着。
【０２１２】
形成された癒着の粘着性を、以下の採点システムに従って評価する：
０．０＝分離に対する抵抗なし。
０．５＝癒着を断裂させるのに中程度の分離力が要求される。
１．０＝分離のために強い力または切断が必要。
【０２１３】
得られた結果についての評点は、それぞれの採点システムにおける結果を加算することにより得られる。よって、結果は、評価されるそれぞれの手術による傷害領域について０．０〜４．０の範囲である。データを、順位和検定および分散分析によっても解析する。
【０２１４】
それぞれのラットの両側の手術による傷害領域の片側のみがブロックコポリマー溶液または抗コネキシンポリヌクレオチドを含むブロックコポリマー溶液で処置されるので、それぞれのラットは、それ自体が対照を有する。
【０２１５】
生存動物を評価して、腹部の未処置の対照の側で癒着が発生したものを決定する。２０匹の生存ラットの癒着の程度を記録する。癒着の面積および粘着性を含むブロックコポリマー処置領域についての併せた点数を評価する。
【０２１６】
（実施例３）
Ａ．キトサンフィルムの調製
５ｇのキトサン塩酸塩（２０％のアセチル化度、Ｐｒｏｎｏｖａ）を、２％酢酸溶液（０．５Ｌ、１％ｖ／ｗ）に溶解する。溶液を、滅菌を目的として、１２５℃にて１時間オートクレーブにかける。冷却の後に、フィルムをペトリ皿の中で、この場合は２０ｍＬの溶液を用いて作る。次いで、フィルムを室温にて乾燥させ、リン酸ナトリウムバッファー０．２Ｍ、ｐＨ９．０を皿に加えることにより中和する。フィルムをこのバッファー中で室温にて２〜４時間放置し、次いで、蒸留水で３〜４回洗浄し、再び乾燥させる。
【０２１７】
Ｂ．キトサンフィルムの代替調製物
５ｇのキトサン塩酸塩（４５％のアセチル化度、Ｐｒｏｎｏｖａ）を水（０．５Ｌ、１％ｖ／ｗ）に溶解する。溶液を、滅菌を目的として、１２５℃にて１時間オートクレーブにかける。冷却の後に、フィルムをペトリ皿の中で、この場合は２０ｍＬの溶液を用いて作る。次いで、フィルムを室温にて乾燥させ、リン酸ナトリウムバッファー０．２Ｍ、ｐＨ９．０を皿に加えることにより中和する。フィルムをこのバッファー中で室温にて２〜４時間放置し、次いで、蒸留水で３〜４回洗浄し、再び乾燥させる。
【０２１８】
Ｃ．試験ポリヌクレオチドをイオン結合させたキトサンフィルムの調製
５ｇのキトサン塩酸塩（４５％のアセチル化度、Ｐｒｏｎｏｖａ）を水（０．５Ｌ、１％ｖ／ｗ）に溶解する。溶液を、滅菌を目的として、１２５℃にて１時間オートクレーブにかける。冷却の後に、フィルムをペトリ皿の中で、この場合は２０ｍＬの溶液を用いて作る。次いで、フィルムを室温にて乾燥させ、抗コネキシン試験ポリヌクレオチドの溶液（例えば０．５Ｌの水中に１２５ｇ）を加える。室温にて３時間後、フィルムを２×０．５Ｌの水ですすぎ、乾燥させる。
【０２１９】
（実施例４）
実施例３のようにして調製したフィルムを、以下の動物モデルにおいて抗癒着膜として用いる。ラットの腹壁を開き、矢状線の両側に外科的様式で約１２×１０ｍｍの創傷を作る。一方の欠損を、約１８×１５ｍｍの小片の実施例３のフィルムで覆い、他方の欠損は覆わずに放置する。膜を、Ｄｅｘｏｎ（登録商標）７−０を用いて、縫合線が腹腔に曝露されないような様式で縫合する。  
【０２２０】
結果を２および４週間後に評価する。
【０２２１】
フィルムの下の腹部欠損は、瘢痕組織が実質的に形成されて治癒され、フィルム周囲には炎症反応および被膜形成の徴候がある。
【０２２２】
（実施例５）
実施例３Ｃに従って形成されたフィルムを、以下の動物モデルにおいて抗癒着膜として用いる。
【０２２３】
ラットの腹壁を開き、矢状線の両側に外科的様式で約１２×１０ｍｍの創傷を作る。
【０２２４】
一方の欠損を、約１８×１５ｍｍのフィルムで覆い、他方の欠損は覆わずに放置する。膜を、実施例４と同様の様式で縫合する。
【０２２５】
覆わずに放置した創傷の領域は、いくつかの癒着を示したのに対し、フィルムで覆われた創傷は癒着があったとしても非常に少なかった。
【０２２６】
（実施例６）
上記の実施例３Ｃに記載されるようにしてキトサン抗コネキシンポリヌクレオチドから調製したフィルムを、上記のように壁側腹壁上に作製した創傷（１０×１２ｍｍ、深さ１ｍｍ）を覆うように配置する。同じ創傷を腹壁の反対側に作製し、実施例３ＡまたはＢに記載されるキトサンフィルムで覆う。癒着形成の発生を２週間後に評価する。フィルムの光学顕微鏡検査を用いて、中皮様細胞が覆う範囲、およびフィルムと傷つけた腹壁組織との間の界面での炎症性細胞の浸潤を含めて創傷の治癒を評価する。
【０２２７】
（実施例７）
それぞれ１７５〜２２５グラムの体重の雌のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットをこの研究で用いる。ラットを、手術の前に少なくとも２日間隔離する。ラットを、１２：１２時間の明暗サイクルで飼育器中にて飼育する。食物および水は、手術直後の期間以外は自由に与える。
【０２２８】
ラットは、開腹術の標準化された処置を受ける（ケタミン／ロンパンでの筋肉内麻酔、動物用ハサミでの剃毛、ベタジンでの洗浄、アルコールでの洗浄）。次いで、正中線上に２ｃｍの切開を作った。２重壁ゼラチンカプセルを、切開部を通して腹部の右側に置く。抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、１〜１０、最大約１００μｇ／ｋｇ／日）を手術の前に１〜３日間もしくは１〜３時間、次いで剖検まで１１日間、所望により種々の時間に投与する。腹壁および皮膚を、次いで、２層の４−０  Ｅｔｈｉｌｏｎ縫合を用いて縫合して閉じる。手術後に、ラットに３日間鎮痛剤を与え、病的状態および死亡の徴候について１日２回観察する。
【０２２９】
１１日間の手術後観察期間の後の総合観察の際に、創傷の閉鎖を評価し、動物を瘢痕形成について評価する。
【０２３０】
（実施例８）
活性ポリヌクレオチド単独または抗癒着ポリヌクレオチドとの組合せの、腹膜手術後の癒着形成の低減（ｒｅｄａｃｔｉｏｎ）における有効性を評価または定量化するために、いくつかの研究を行う。２つのモデル系を用いる：側壁癒着モデルおよび子宮角モデル。これらのモデル両方を用いて得られた結果と、癒着予防における有用性との間の明確な相関がＩＮＴＥＲＣＥＥＤ（ＴＣ７）で実証されており、これについては、臨床上の明確な有効性が示されており、婦人科手術における癒着予防についてのＦＤＡ承認が得られている。
【０２３１】
Ａ．ウサギ側壁モデル
腹膜側壁モデルにおいて、ウサギに１．２ｍｇ／ｋｇのアセチルプロマジンを用いて予備麻酔をかけ、５５ｍｇ／ｋｇのケタミン塩酸塩および５ｍｇ／ｋｇキシラジンの混合物を用いて筋肉内麻酔をかける。滅菌手術の準備の後に、正中線開腹術を行う。腹膜および腹横筋の３×５ｃｍの領域を、右側方腹壁にて除去する。盲腸を体外に出し、指で圧力を加えて、全ての盲腸表面にわたって漿膜下出血を創出する。次いで、盲腸をその正常な解剖学的位置に戻す。抗コネキシンポリヌクレオチド、または試験されるその組成物を、Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプ（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）に入れて、術後休止期にわたって分子の連続的な放出を可能にする。Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプは、皮下空間に配置し、送達チューブはポンプと側壁の傷害部位とを連結する。対照ウサギのポンプ中にはビークルを入れる。腹壁および皮膚を、標準化された様式で閉じる。
【０２３２】
７日後に、ウサギを屠殺し、癒着に含まれる側壁傷害の面積を決定する。さらに、形成される癒着の粘着性を、以下のシステムを用いて評点する。
０＝癒着なし
１＝軽度、容易に剥離可能な癒着
２＝中等度の癒着；剥離可能でない、器官を引き裂かない
３＝密な癒着；剥離可能でない、除去する際に引き裂く。
【０２３３】
癒着の面積または粘着性の低減は、有益であると考えられる。
【０２３４】
Ｂ．ウサギ子宮角モデル
さらなる実験において、ウサギ子宮角モデルを用いる。このモデルは、手術後にウサギにおいて重篤な癒着を引き起こすことが以前に示されている［Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，  Ｋ．ら、「Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｒａｂｂｉｔｓ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．、７７巻、１０２〜１０６頁（１９８４年）。ウサギに麻酔をかけ（１３０ｍｇ／ｋｇケタミンおよび２０ｍｇ／ｋｇアセチルプロマジン、筋肉内）、滅菌手術の準備をする。正中線開腹術を行い、両方の子宮角に、点状出血が生じるまでガーゼで漿膜表面を擦ることにより手術による外傷を与える。副行血液供給を除去することにより、両方の子宮角の虚血を誘導する。いくつかの研究において、物質を、上記のようなＡｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプおよびチューブを介して傷害部位に送達する。その他の研究においては、試験化合物の一部分を手術の最後に傷害部位に適用し、残りの物質を閉じる前に切開部位を通して適用する。対照は、手術対照およびビークル対照を含む。腹壁および皮膚を、標準化された様式で閉じる。
【０２３５】
７日後に、ウサギを屠殺し、癒着に含まれる子宮角傷害の面積のパーセンテージを決定する。癒着の全体の範囲を表す初期点数を得る（０〜４＋）。種々の器官への癒着に含まれる子宮角の表面のパーセンテージを、次いで、決定する。
【０２３６】
（実施例９）
癒着を軽減するための、抗コネキシンポリヌクレオチド装填ＰＣＬフィルムの使用を、ウサギ子宮角モデルで調べる。
【０２３７】
Ａ．方法
ウサギ子宮角モデルを、止血を行って、Ｗｉｓｅｍａｎら、１９９２年（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３７巻：７６６〜７７０頁）に実質的に記載されるようにして行う。雌のニュージーランドホワイトウサギに麻酔をかけ、皮膚および腹壁を通して正中線切開を行う。両方の子宮角を探して体外に出す。フレンチカテーテルスケールを用いて、それぞれの子宮角の直径を測定して記録する。フレンチスケールでサイズ８〜１６（境界を含む）の子宮角を有するウサギのみを用いる。第１０号外科用メスを用いて、子宮角分岐部からおよそ１ｃｍの、５ｃｍの長さのそれぞれの子宮角を片側について４０回、点状出血が生じるまで掻爬する。止血は、タンポン挿入により達成する。
【０２３８】
動物は、無作為に：未処置（手術対照）；ポリマービークル対照；抗コネキシンポリヌクレオチド（ビークル中に０．１％）；および抗コネキシンポリヌクレオチド（ビークル中に０．００１〜１％）を受ける。試験ポリヌクレオチド（０．４〜２．５ｍｌ）を、１８ゲージの針を介して子宮角に適用する。子宮角を骨盤に戻し、腹部切開を閉じる。
【０２３９】
手術の１８、３１、３２、３３および６０日後に、動物を、ペントバルビタールナトリウム（１２０ｍｇ／ｍｌ；１ｍｌ／ｋｇ）の静脈内注射により安楽死させる。動物の体重を記録する。開腹し、手術部位を検査する。癒着は、以下のようにして盲検観察者により採点される。
【０２４０】
癒着の範囲
癒着に含まれるそれぞれの子宮角の全長（ｃｍ）を判断して記録する。
【０２４１】
癒着の粘着性
癒着を、０（なし）、１．０（フィルム状癒着）および２．０（強固、鋭い剥離を必要とする）として採点する。
【０２４２】
子宮回旋の程度
子宮回旋の程度を、以下のスケールに従って記録する。
回旋なし：明確に識別される癒着したかまたは癒着していない子宮角のまっすぐな長さ。部分的に回旋：子宮角は癒着し、子宮角長の５０％〜７５％が、まっすぐな部分の識別を妨げるようにもつれている。
完全に回旋：子宮角が完全にもつれているので、子宮の解剖学的分析が不可能である。
【０２４３】
（実施例１０）
５週齢の雌のハムスター（１群あたり１０匹のハムスター）に、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与することにより麻酔をかけ、腹部領域での正中線切開の後に、子宮を綿棒でこする。その後、試験ポリヌクレオチド（例えば、１〜５０×１０−４〜１０−６モル／Ｌ）の食塩水溶液１ｍＬを腹腔内に滴下し、次いで切開部位を縫合した。一方、対照として、食塩水のみを滴下し、同様の処置を続ける。
【０２４４】
手術の４週間後に、動物を安楽死させ、腹部を曝露し、癒着を調べた。癒着は、以下の５段階の評点システムを用いて決定し、データをマン−ホイットニーＵ検定に従って解析する。
【０２４５】
癒着の点数
０：癒着なし
１：非常に弱い癒着（容易に剥離可能なフィルム様の癒着）
２：限定的な癒着（１点のみで剥離が困難な強い癒着）
３：広範囲の癒着（いくつかの点で剥離が困難な強い癒着）
４：非常に強い癒着（剥離不可能な非常に強い癒着）。
【０２４６】
（実施例１１）
６週齢のＳＤラットを、ペントバルビタール麻酔（７０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内注射）の下で、下腹部領域での正中線切開に付し、切開部から盲腸を取り出す。盲腸の漿膜の２つの部分（それぞれ約２ｃｍ２）を綿棒で１００回、点状出血が生じるまで擦り、その後、１００μＬのエタノールを滴下する。盲腸を腹腔に再び配置し、次いで、試験抗コネキシンポリヌクレオチドの２ｍＬリン酸緩衝食塩水（以下、ＰＢＳと短縮する、ｐＨ７．４）溶液を腹腔内に滴下し、次いで切開部を縫合する。それぞれの試験ポリヌクレオチド溶液の濃度は所望されるとおりである。対照群において、ＰＢＳのみを滴下し、同様の処置を続ける。それぞれの群は１１または１２匹のラットを有する。手術の１週間後に、動物を安楽死させ、腹部を再切開し、盲腸の癒着状態を、癒着強度および癒着面積を指標として用いる癒着点数に従って評価する。点数の値を、以下の５段階の点数に従って決定する。この関係において、癒着領域（％）は、擦った領域の面積に対する癒着部分の合計面積のパーセンテージとして決定する。
【０２４７】
癒着の点数
０：癒着なし
１：一部分（癒着領域の２５％未満）のみに限定された容易に剥離可能な癒着
２：広範囲にわたる（癒着領域の２５％以上）容易に剥離可能な癒着、または剥離が困難な一部分のみに限定された癒着（癒着領域の２５％未満）
３：広範囲にわたる（癒着領域の２５％以上）剥離が困難な癒着
４：剥離が不可能な癒着、または剥離の際に漿膜の傷害を伴う癒着。
【０２４８】
（実施例１２）
ビーグル犬に麻酔をかけ、その両目の結膜をそれぞれ、実体顕微鏡の下で１０ｍｍ×５ｍｍのサイズではがす。その時に、腱は無傷のまま結膜側に残し、強膜側には残さない。抗コネキシン試験ポリヌクレオチドの食塩水溶液に浸漬したスポンジを、切開部位に３分間置き、切開部に１０−０ナイロン糸の一針を施す。試験ポリヌクレオチド溶液の濃度は所望されるとおりであり、ビークルまたは食塩水を対照群に用いる（１群あたり６匹のイヌ）。
【０２４９】
手術の７日後に、動物を安楽死させ、眼球を取り出し、癒着を調べる。モデルの準備において縫合に用いた糸を切断した後に、ピンセットで結膜部分を引っ張り、癒着の状態を評点することにより評価を行った。点数の値は、以下の５段階の点数に従って決定し、マン−ホイットニーＵ検定をデータの解析に用いた。
【０２５０】
癒着の点数
０：癒着なし
１：非常に弱い癒着（容易に剥離可能なフィルム様の癒着）
２：限定的な癒着（１点のみで剥離が困難な強い癒着）
３：広範囲の癒着（いくつかの点で剥離が困難な強い癒着）
４：非常に強い癒着（剥離不可能な非常に強い癒着）。
【０２５１】
本発明は、上述の特定の好適な実施形態によって限定されない。本発明の概念からそれることなく、開示した好適な実施形態に対して様々な改変を行うことができることが、当業者に思いつくであろう。すべてのそのような改変は、本発明の範囲内であることが意図される。
【０２５２】
（実施例１３）
抗コネキシン剤は、好都合には、本発明の方法による投与に適する形態に調合される。
【０２５３】
適当な製剤は、以下の調合剤の混合物を含む。１つまたは複数の個々の抗コネキシン剤および調合剤の量は、予定される特定の用途に依存するはずである。
【０２５４】
【表２】
2015013880.tif 000003
（実施例１４）
本発明の方法による使用のための製剤を、下記の割合で化合物を混合することによって調製する。好ましい一実施形態において、抗コネキシン剤は、抗コネキシンポリヌクレオチドである。別の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号１のアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０２５５】
製剤Ａ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中抗のコネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．３３％）。製剤は、ｐＨ約６．７４および浸透圧モル濃度２４４の透明なゲルである。
【０２５６】
製剤Ｂ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；０．５％ＢＡＣ（０．１％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．２３％）。製剤は、ｐＨ約６．６５および浸透圧モル濃度２３０の透明なゲルである。
【０２５７】
製剤Ｃ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ポリクオタニウム１０（０．５％）；ポロキサマー１８８（０．１％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９５．７３％）。製剤は、ｐＨ約６．５９および浸透圧モル濃度２３３のやや濁ったゲルである。
【０２５８】
製剤Ｄ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ＳＬＥＳ（０．５％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９５．８３％）。製剤は、ｐＨ約６．８および浸透圧モル濃度２４６の透明なゲルである。
【０２５９】
製剤Ｅ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ポロキサマー１８８（０．１％）；２５Ｋポリエチレンイミン（０．０７５％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．１５５％）。製剤は、ｐＨ約７．８および浸透圧モル濃度２４９の濁ったゲルである。
【０２６０】
製剤Ｆ
以下の材料で構成されている（％ｗ／ｗ）−リン酸塩緩衝化食塩水中の抗コネキシン剤（０．４７％）；メチルパラベン（０．１７％）；プロピルパラベン（０．０３％）；プロピレングリコール（１．５％）；ＨＰＭＣ（１．５％）；ヒアルロン酸ナトリウム（０．１％）；および１０ｍＭリン酸緩衝液（９６．２３％）。製剤は、ｐＨ約６．８８および浸透圧モル濃度２８９の透明なゲルである。
【０２６１】
本明細書において参照されたかまたは言及されたすべての特許、出版物、科学論文、ウェブサイトならびに他の文書および資料は、本発明が属する技術分野の当業者の技術水準を示すものであり、これらの参照文書および資料はそれぞれ、個別にその全体が参照により組み込まれたか、またはその全体が本明細書に記載された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、任意の上記の特許、出版物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および別の参照資料または文書の、任意のおよびすべての資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を保有する。
【０２６２】
本特許の書面説明部分は、すべての特許請求の範囲を含む。さらに、すべての元の特許請求の範囲、ならびにあらゆる優先権書類からのすべての特許請求の範囲を含めた、すべての特許請求の範囲は、本明細書の書面説明部分中に、その全体が参照により本明細書に組み込まれており、出願者は、本願の書面記載部分または任意の他の部分中に、あらゆるそのような特許請求の範囲を物理的に組み込む権利を留保する。したがって、例えば、いかなる場合でも、請求項の正確な言い回しが、本特許の書面説明部分においてこの通りの言葉で示されていないと断定して、この請求項についての書面説明を提供していないとされているとして、本特許を解釈することはできない。
【０２６３】
特許請求の範囲は法に従って解釈される。しかし、任意の請求項またはその一部を解釈することの、主張または認識される容易さまたは困難に逆らうことなく、いかなる場合でも、本特許に導く１または複数の出願を遂行する間の、請求項またはその任意の一部のいずれの調整または修正も、従来技術の一部を形成しない、そのあらゆる均等物に対する任意の権利を失ったとして解釈することはできない。
【０２６４】
本明細書に開示された特徴のすべては、任意の組合せで組み合わせることができる。したがって、別段に明白に述べられていない限り、開示されたそれぞれの特徴は、一般的な一連の均等物または同様の特徴の例であるだけである。  
【０２６５】
本発明を、その詳細な説明とともに説明してきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明を例示し、その範囲を限定しないことが意図されていることが理解されるべきである。したがって、前述のことから、本発明の特定の実施形態を、例示の目的で本明細書に記載してきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な改変を行うことができることが理解される。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内であり、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除いて限定されない。
【０２６６】
本明細書に記載されている具体的な方法および組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、それらは例示的であって本発明の範囲を限定するものではない。別の目的、態様、および実施形態が、本明細書を考慮すれば当業者には思いつくはずであり、本特許請求の範囲によって定義されている通り本発明の精神に包含される。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、様々な置換および変更を本明細書に開示されている本発明に対して行ってもよいことが、当業者には容易に明らかとなるはずである。例示的に本明細書に適当に記載されている本発明は、本明細書において不可欠であると特に開示されていない任意の１つまたは複数の要素、あるいは１つまたは複数の限定の不在下で実施されてもよい。したがって、例えば、本発明の実施形態または実施例において、本明細書におけるそれぞれの場合において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有している」などの用語は、包括的であって限定ではないと読み取るべきである。例示的に本明細書に記載されている方法およびプロセスは、異なる順序の工程で適当に実施されてもよく、必ずしも本明細書または本特許請求の範囲に示された工程の順序に制限されない。
【０２６７】
使用されてきた用語および表現は、説明の用語として使用され、限定の用語としては使用されず、そのような用語および表現の使用において、示し、説明した特徴の任意の均等物、またはその一部を除外する意図はまったくないが、様々な改変が、請求した本発明の範囲内で可能であることが認識される。したがって、様々な実施形態および／または好適な実施形態、および随意の特徴によって、本発明を具体的に開示してきたが、当業者が行使することができる、本明細書に開示された概念のあらゆる改変および変形は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であるとみなされることが理解される。
【０２６８】
本発明を広く、一般的に本明細書に説明してきた。一般的な開示内に入るより狭い種および亜群分類のそれぞれも、本発明の一部を形成する。これは、本発明の一般的な説明を含み、ただし削除された物質が、本明細書に具体的に列挙されているかどうかにかかわらず、属から任意の対象物を除く条件または負の限定がある。
【０２６９】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、脈絡により明らかに別に指示がない限り、複数の参照を含み、用語「Ｘおよび／またはＹ」は、「Ｘ」もしくは「Ｙ」または「Ｘ」と「Ｙ」の両方を意味し、名詞の後の文字「ｓ」は、その名詞の複数形および単数形の両方を示すことも理解されるべきである。さらに、本発明の特徴または態様が、マーカッシュ群の観点から説明されている場合、本発明は、マーカッシュ群の任意の個々のメンバー、およびマーカッシュ群のメンバーの任意の亜群を包含し、またそれによってこれらの観点から説明されることが意図され、これを当業者は認識し、出願者は、出願または特許請求の範囲を修正することによって、マーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはマーカッシュ群のメンバーの任意の亜群を具体的に指す権利を保有する。
【０２７０】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。本特許は、本明細書に具体的および／または明確に開示されている具体的な実施例または実施形態または方法に限定されると解釈され得ない。いかなる場合においても、本特許は、そのような陳述が、出願人による答弁書において明確に認められた限定または制限がなければ、特許商標庁のいかなる審査官またはいかなる別の当局者もしくは関係者によってなされたいかなる陳述によっても限定されると解釈されるものではない。
【配列表】
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