(57)【要約】【課題】    本発明の目的は、ヒアルロニダーゼを阻害し、シワやタルミに、さらには接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱症等に有効な製剤を得ることにある。【解決手段】  本発明者らが鋭意検討した結果、白朮、イシゲ、桑枝、マコモの抽出物が上記目的を達することがわかった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
白朮、イシゲ、桑枝、マコモより選択される１種以上植物よりの抽出物を配合したことを特徴とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロニダーゼを阻害し、シワやタルミに、さらには接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱症等に有効な製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの皮膚の老化の代表的な変化はシワやタルミであり、高年齢層や女性にとっては肌の大きな悩みの一つとなっている。
その原因として、加齢のほかに、乾燥、酸化、太陽光（紫外線）による影響等がある。
具体的な組織学的現象としては、真皮中のコラーゲン、エラスチン、グリコサミノグリカン等の細胞外マトリックス成分の変化が挙げられ、そのグリコサミノグリカンの中でも特にヒアルロン酸は結合組織に広く分布する高分子多糖体として知られており、皮膚中の水分を大量に保持し、又、ゲル状の形態を呈している。従って、ヒアルロン酸の質的・量的な減少が皮膚老化において重要であると考えられている。
また、炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱症、その他肌荒れに伴うか各種皮膚疾患等の原因や発祥機構は多種多様であるが、その原因としてヒアルロニダーゼによるものが知られている。
前記ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸を加水分解する酵素であるが、ヒアルロン酸は間充組織に見られるムコ多糖であって微生物や毒物の侵入及び伝播の防止に役立っているものであるから、ヒアルロニダーゼの作用が活発化するとヒアルロン酸による防御作用が減退することによる障害が起こりやすくなる。また、ヒアルロニダーゼはI型アレルギー反応にも関係し、肥満細胞からの脱顆粒反応を支配する酵素であると考えられている。従って、ヒアルロン酸の安定化を図り、肥満細胞からの種々ケミカルメディエーターの放出を防ぐことによって、保湿の強化又は抗炎症作用が期待できる。
そこで、このようなヒアルロニダーゼ阻害活性作用を有する物質を天然物から抽出することが試みられており、例えば、オスベッキア属植物の抽出物、藤茶抽出物、ローズマリー、タイム及びメリッサ抽出物などが報告されている。（特許文献１〜３参照）
【０００３】
また、白朮（ビャクジュツ）は、漢方生薬の１種であり、キク科の植物であるオケラ（Atractylodes japonica）、オオバナオケラ（Atractylodes ovata）等のオケラ属の周皮を除いた根茎部分（ワビャクジュツ）、オオバナオケラ（Atractylodes ovata）の根茎部をいう。美白、シワ改善等の目的で外用剤に用いられている。（特許文献４〜５）。
イシゲは、褐藻植物門、褐藻網、ナガマツモ目、イシゲ科、イシゲ属の海藻で、学名Ishige okamurai Yendoといい、茨城以南の沿岸で広く分布する褐藻類である。食用には硬いので適さない。  すでに、美白、育毛、痩身或いは抗菌・防腐等の目的で皮膚外用剤や食品に利用されている。（特許文献６〜８）
桑は学名をモルス  ボムビシス（Morus Bombycis）、モルス  アルバ（Morus alba）等と称する桑の木の乾燥した葉を言う。モルス  ボムビシスは日本各地、および南千島、朝鮮、中国、ベトナムからインド、カシミールの温帯から亜熱帯に分布する。山地にはえ、畑に栽植される落葉高木であり、クワまたはヤマグワと呼ばれる。モルス  アルバは中国，朝鮮半島の原産で日本には古くより渡来し、庭園樹、街路樹、養蚕用に各地で栽植される落葉高木で、カラグワ、トウグワと呼ばれている。これは、従来解熱、鎮咳、涼血、明目薬として、感冒、咳嗽、頭痛、目疾、脚気、水腫、腹痛、下痢、撲損お血などに応用し、医薬品としてすでに用いられている。ニキビ治療薬として利用されている。（特許文献９）
マコモ（真菰）は、日本をはじめ、東アジアや東南アジアに分布し、沼地の水辺、川の岸辺、湖などに生育するイネ科マコモ属の多年草で学名Zizania latifoliaという。  マコモの花芽に黒穂菌が寄生し、根元が筍状に肥大したものを「マコモダケ」といい、緑色の葉鞘を何枚か剥ぎとり、食用として利用されている。また黒穂菌がついてできた芽は絵の具や眉墨に利用されている。  この部位は食用以外にも抗炎症作用を有する皮膚外用剤や幹細胞の未分化維持剤及び増殖促進剤として利用されている。（特許文献１０〜１１）  これ以外の部位は、肥料やムシロ（葉）に一部利用されているにすぎず、有効で且つ高度な利用方法が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−５５２４２号公報
【特許文献２】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献３】特開平８−３３３２６７号公報
【特許文献４】特開平０９−０７７６３５号公報
【特許文献５】特開平１０−１９４９４６号公報
【特許文献６】特開平０４−９５０１２号公報
【特許文献７】特開平１１−１８０８１３号公報
【特許文献８】特開２０００−２３６８４６号公報
【特許文献９】特開平１０−００７５４４号公報
【特許文献１０】特開２０１１−９３８８０号公報
【特許文献１１】特開２０１１−２１１９５７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的はヒアルロニダーゼを阻害し、シワやタルミに、さらには接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱症等に有効な製剤を得ることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らが鋭意検討した結果、白朮、イシゲ、桑枝、マコモの抽出物が上記目的を達することがわかった。
白朮、イシゲ、桑枝、マコモを、抽出効率を考え、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を用いる。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜１５質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部添加することが好ましい。
抽出に使用する有機溶媒の量は、原料となる植物（海藻）に対して望ましくは５〜１００倍量程度、さらに望ましくは１０〜５０倍量程度が良い。さらに抽出効率を上げるため、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
尚、抽出操作は１回のみの操作に限定されるものではない。抽出後の残渣に再度新鮮な溶媒を添加し、抽出操作を施すこともできるし、抽出溶媒を複数回抽出原料に接触させることも可能である。
必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良く、エバポレーターのような減圧濃縮装置や加熱による溶媒除去などにより、濃縮することができる。
また、この抽出物を合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０やセファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐ等）やデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）、限外濾過等を用いてさらに精製することも可能である。
【０００７】
本発明の製剤は、経口、注射、外用のいずれでも薬効を発現するが、皮膚外用剤として用いるのが好ましい。皮膚外用剤には、皮膚化粧料、外用医薬部外品、医療用皮膚外用剤が含まれる。
【０００８】
また、本発明の製剤には、上記成分の他に医薬品や化粧品の各種製剤において使用されている界面活性剤、油性成分、保湿剤、高分子化合物、紫外線吸収剤、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、ビタミン類、色素、香料、水等を配合することができる。
【０００９】
上記界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、非イオン性、天然、合成のいずれの界面活性剤も使用できるが、皮膚に対する刺激性を考慮すると非イオン性のものを使用することが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、例えばグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシド等が挙げられる。
【００１０】
油性成分としては、油脂類、ロウ類、炭化水素類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、精油類、シリコーン油類などを挙げることができる。油脂類としては、例えば大豆油、ヌカ油、ホホバ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ油、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド等の合成トリグリセリド等が；ロウ類としては、例えばカルナバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等が；炭化水素類としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ブリスタン等が；高級脂肪酸類としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等が；高級アルコール類としては、例えばラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール等が；エステル類としては、例えばオクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル等が；精油類としては、例えばハッカ油、ジャスミン油、ショウ脳油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイ皮油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン、テルペン系化合物等が；シリコーン油類としては、例えばジメチルポリシロキサン等が挙げられる。これら上述の油性成分は一種又は二種以上を組み合わせて使用することができる。本発明においては、このうち特にミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸トリグリセリド、ラノリン、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンマイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸、リノレン酸、イソステアリン酸、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、オクタン酸セチル、オクタン酸トリグリセライド、ミリスチレン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸コレステロール、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ハッカ油、トウヒ油、ケイ皮油、ローズ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ゲラニオール、ピネン、リモネン、ジメチルポリシロキサンを使用することが好ましい。
【００１１】
本発明の製剤には、さらに下記のような成分を配合することができるが、その成分もこれらに限定されるものではない。
色素類；黄色４号、青色１号、黄色２０２号等の厚生省令に定められたタール色素別表Ｉ及びIIの色素、クロロフィル、リボフラビン、クロシン、紅花、アントラキノン等の食品添加物として認められている天然色素等。
ビタミン類；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等。
その他；殺菌剤、防腐剤、その他製剤上必要な成分等。
【００１２】
本発明の製剤は、前記必須成分に必要に応じて前記任意成分を加え、常法に従って製造することができ、クリーム、乳液、化粧水等の形態とすることができる。
製剤への配合量は固形分として、０．００００１〜１０重量％、好ましくは０．０００１〜１.０重量％である。
【実施例】
【００１３】
次に実施例（製造例）を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００１４】
製造例１
中国産白朮（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００１５】
製造例２
イシゲ（乾燥品）１０ｇに精製水を５００ｇを加えて、充分ホモジナイズした。これを遠心分離し、上澄みに対して４倍量のエタノールを加え、撹拌したのち、。これを遠心分離し、上澄みを得た。これをエバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１６】
製造例３
桑の枝（乾燥品）１０ｇに５０％エタノール３００ｍｌを加えて、時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１７】
製造例４〜６
マコモを水で洗ったのち、マコモダケ（可食部）と、葉と、根と、茎に分け細断したのち、５０℃で２４時間乾燥させた。
マコモダケ（可食部）と、葉と、茎をそれぞれ別々に５０ｇ取り、５０％エタノール水溶液を８００ml加えてときどき撹拌しつつ３日間放置し、これをエバポレートしたのち、凍結乾燥した。
マコモダケ（可食部）５０％エタノール抽出物を製造例４と、葉の５０％エタノール抽出物を製造例５と、茎の５０％エタノール抽出物を製造例６とした。
【００１８】
確認試験（ヒアルロニダーゼ阻害試験）
以下の方法で行った。
０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．１）を０．２mlと、ヒアルロニダーゼ（３４０unit／ml）を０．１ml入れ、インキュベーションした。（３７℃、２０分）
Ｃｏｎｐｏｕｎｄ４８／８０（０．５mg／ml）を０．２mlを加え、さらに３７℃、２０分インキュベーションした。
ヒアルロン酸（０．２mg／ml）を０．５mlを加え、さらに３７℃、４０分インキュベーションした。
０．４Ｎ  ＮａＯＨおよびホウ酸溶液（ｐＨ９．１）等量混合したものを０．４ml入れ、
３分間煮沸した後、水冷した。
Ｐ−ＤＭＡＢを３ml入れて３７℃で４０分インキュベートし分光光度計で測定した。（５８５nm）
【００１９】
各製造例を０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．１）に必要な濃度に溶解し、試験に供し、以下の式より阻害率を算出した。
2015091780.tif 000002
Ａ：酵素有、試験品無、Ｂ：酵素有、試験品有、Ｃ：酵素無、試験品無、Ｄ：酵素無、試験品有
結果を表１に示す。
【００２０】
【表１】
2015091780.tif 000003
【００２１】
製造例１〜６を皮膚外用剤として使用してみたところ、シワやタルミに、さらには接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱症等に有効であった。