(57)【要約】      （修正有）【課題】細胞やタンパク質を接着する機能を有する樹脂およびその製造方法を提供する。【解決手段】次の繰返しを有するＭｗが１．０×１０３〜１．０×１０７である樹脂。2015127355.tif 000026（Ｒ０、Ｒ１はＨ、Ｍｅ；Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル基、（ヘテロ）アリール基；Ｒ３〜Ｒ５はＨ、Ｃ１−４アルキル基；Ｘは２価基；ｍは０、１；ＹとＺが結合していない場合、ＹはＣＨを、ＺはＨ、Ｃ１−４アルキル基；ＹとＺが結合している場合、ＹはＣを、ＺはＮＲ（ＲはＨ、Ｃ１−４アルキル基））【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される繰り返し単位を有する、重量平均分子量１．０×１０３〜１．０×１０７の樹脂。
【化１】
2015127355.tif 000017
式（１）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。ＹおよびＺは結合していてもよく、両者が結合していない場合、Ｙはメチン基を、Ｚは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、両者が結合している場合、Ｙは４級炭素原子を、ＺはＮＲ（Ｒは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。）を表す。ここで、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。
【請求項２】
下記式（４）で表される、請求項１に記載の樹脂。
【化２】
2015127355.tif 000018
式（４）におけるＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ、Ｘ、およびｍの定義は前記式（１）における定義と同じであり、ｊは０以上１未満の数を表し、ｎは整数を表す。ただし、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。また、この樹脂は式（４）で明示されていない繰り返し単位を含んでいてもよい。
【請求項３】
下記式（７）で表される、請求項１に記載の樹脂。
【化３】
2015127355.tif 000019
式（７）におけるＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ、およびｍの定義は前記式（１）における定義と同じであり、Ｚ１は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、ｊは０以上１未満の数を表し、ｎは整数を表す。ただし、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。また、この樹脂は式（７）で明示されていない繰り返し単位を含んでいてもよい。
【請求項４】
Ｘが次の２価基の群から重複を許して選ばれる１種または２種以上の組合せからなる連結基である請求項１から３のいずれかに記載の樹脂。
【化４】
2015127355.tif 000020
【請求項５】
Ｒ０がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲが水素原子であり、ｍが１であり、Ｘが（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、または（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−である請求項２に記載の樹脂。
【請求項６】
Ｒ０、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲが水素原子であり、ｍが０である請求項２に記載の樹脂。
【請求項７】
Ｒ０がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＺ１が水素原子であり、ｍが１であり、Ｘが（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、または（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−である請求項３に記載の樹脂。
【請求項８】
Ｒ０、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＺ１が水素原子であり、ｍが０である請求項３に記載の樹脂。
【請求項９】
生体分子接着性である、請求項１から８のいずれかに記載の樹脂。
【請求項１０】
請求項９に記載の樹脂がコーティングされている細胞培養用基材。
【請求項１１】
下記式（２）で表される繰り返し単位を有する化合物と、下記式（３）で表されるアミノグアニジン誘導体とを脱水縮合する工程を含む、請求項２に記載の樹脂の製造方法。
【化５】
2015127355.tif 000021
【化６】
2015127355.tif 000022
式（２）中のＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、およびｍ、ならびに式（３）中のＲ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲの定義は前記式（４）における定義と同じであり、式（３）中のグアニジノ基部分は酸が付加した酸付加塩であってもよい。
【請求項１２】
下記式（５）で表される繰り返し単位を有する化合物と、下記式（６）で表される１−アミジノピラゾール誘導体とを反応させる工程を含む、請求項３に記載の樹脂の製造方法。
【化７】
2015127355.tif 000023
【化８】
2015127355.tif 000024
式（５）中のＲ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘおよびｍ、ならびに式（６）中のＲ４、Ｒ５、およびＺ１の定義は前記式（７）における定義と同じであり、式（６）中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。
【請求項１３】
Ｘが次の２価基の群から重複を許して選ばれる１種または２種以上の組合せからなる連結基である請求項１１または１２に記載の製造方法。
【化９】
2015127355.tif 000025
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、側鎖にグアニジン残基を有する樹脂およびその製造方法、ならびにそれを固定化した細胞培養用足場材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ヒトＥＳ細胞やヒトｉＰＳ細胞等のヒト多能性幹細胞は、その再生医療への応用が世界的に注目されている。しかし、分化多能性（ｐｌｕｒｉｐоｔｅｎｃｙ）を保持したままヒト多能性幹細胞を培養、維持するためには、通常、マウス由来の繊維芽細胞をフィーダー細胞として用いて共培養する方法が一般的であり、フィーダー細胞の使用がヒト多能性幹細胞を臨床応用するうえでの大きな制約となっている。そこで、化学的組成が均一で、マウス等の異種由来の成分を含まない培養条件が求められており、成長因子等の細胞培養に有用なタンパク質や細胞そのものの接着を促進する細胞培養用基材の開発が期待されている。もっとも、こうした基材開発の要請はヒト多能性幹細胞に限られるものではなく、多様な細胞で求められている。
【０００３】
一方、グアニジノ基（本明細書において、「グアニジノ基」は１個のグアニジンユニットを表し、ビグアニド等グアニジンユニットの２量体またはそれ以上の多量体の構造は含まないものとする。）およびその酸付加塩は、水素結合や正電荷を介してタンパク質や細胞膜の主成分であるリン脂質等に親和性を示す特徴を有しており、バイオサイエンスのツールとしての応用が期待されている。また、末端に複数のグアニジノ基を有するデンドリマーが報告されている（非特許文献１）。しかし、デンドリマーは合成に多段階を要するため合成操作が煩雑で高分子量化が難しく、精製もしばしば困難なため、量産するには不向きという問題がある。一方、炭素―炭素結合を主骨格とするビニル系ポリマーで、側鎖にグアニジノ基を有するものは、化学合成が比較的容易なばかりか化学的に安定であるという利点もある。そのような側鎖グアニジン型ビニル系ポリマーは、これまで抗菌剤、吸水材料、化粧料、ポリマー電解質等の用途で知られているが（特許文献１〜４）、生体関連分子の接着や細胞培養用基材の用途を念頭に置いたものはなかった。
【０００４】
また、グアニジノ基を側鎖に効率よく導入する製造方法にも問題があった。例えば、特許文献３ではアミノ基からグアニジノ基への変換方法として、実施例を伴わない形で１−アミジノピラゾールが試薬の候補として記述されているが、非特許文献２の実験データにおいて、この試薬を用いる当該変換反応は定量的に進行しておらず、側鎖アミノ基のグアニジノ基への高効率的な変換は困難と予見された。また、特許文献４では、ジシアナミドを用いて側鎖アミンポリマーのアミノ基をグアニジノ基に変換する製造方法が記述されているが、大過剰の酸、塩基、水を使用するため、工業的な生産には適していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平５−３２０２３０号公報
【特許文献２】ＣＮ１２８６７０７Ａ
【特許文献３】特開２００２−３２７０１５号公報
【特許文献４】ＣＮ１０１７３５５４２Ａ
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】アメリカ化学会誌１３４刊、１５２７３頁、２０１２年
【非特許文献２】Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５７刊、２４９７頁、１９９２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、細胞やタンパク質を接着する機能を有する樹脂およびその実用的な製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、グアニジノ基を有する特定構造の樹脂によって上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は下記式（１）で表される繰り返し単位を有する、重量平均分子量１．０×１０３〜１．０×１０７の樹脂である。
【化１】
2015127355.tif 000002
【００１０】
式（１）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５はそれぞれ独立して水素原子または炭素原子数１〜４のアルキル基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。ＹおよびＺは結合していてもよく、両者が結合していない場合、Ｙはメチン基を、Ｚは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、両者が結合している場合、Ｙは４級炭素原子を、ＺはＮＲ（Ｒは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。）を表す。ここで、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。
【００１１】
また、本発明は前記式（１）で表される繰り返し単位を有する、重量平均分子量１．０×１０３〜１．０×１０７の生体分子接着性樹脂である。
【００１２】
さらに、本発明は下記式（２）
【化２】
2015127355.tif 000003
（式（２）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。）
で示される繰り返し単位を有する化合物と、下記式（３）
【化３】
2015127355.tif 000004
（式（３）中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲはそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。ただし、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。）
で示されるアミノグアニジン誘導体とを脱水縮合する工程を含む、下記式（４）で表される共重合体の製造方法である。
【００１３】
【化４】
2015127355.tif 000005
【００１４】
式（４）中、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ、Ｘ、およびｍの定義は前記式（２）または前記式（３）における定義と同じであり、ｎは正の整数を表し、ｊは０以上１未満の数を表す。
ただし、この式（４）で表される共重合体は、出発物質たる前記式（２）で示される繰り返し単位をもつ化合物に由来する他の繰り返し単位が含まれることを許容する。
【００１５】
また、本発明は下記式（５）
【化５】
2015127355.tif 000006
（式（５）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｒ３は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。）
で示される繰り返し単位を有する化合物と、下記式（６）
【化６】
2015127355.tif 000007
（式（６）中、Ｒ４、Ｒ５、およびＺ１はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。ただし、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。）
で示される１−アミジノピラゾール誘導体とを反応させる工程を含む、下記式（７）で表される共重合体の製造方法である。
【００１６】
【化７】
2015127355.tif 000008
【００１７】
式（７）中、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ、Ｘ、Ｚ１、およびｍの定義は前記式（５）または前記式（６）における定義と同じであり、ｎは正の整数を表し、ｊは０以上１未満の数を表す。
ただし、この式（７）で表される共重合体は、出発物質たる前記式（５）で示される繰り返し単位をもつ化合物に由来する他の繰り返し単位が含まれることを許容する。
【００１８】
また、本発明は前記式（１）で表される繰り返し単位を有する、重量平均分子量１．０×１０３〜１．０×１０７の樹脂を、基材に固定化した細胞培養用基材である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の樹脂は細胞やタンパク質の接着性を有する。そのため、これを基材に固定化することで、細胞培養に好適な基材が得られる。
また、本発明の製造方法によれば、本発明の樹脂が工業的に実用的な方法で製造できる。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
＜本発明の樹脂＞
本発明は下記式（１）で表される繰り返し単位を有する、重量平均分子量１．０×１０３〜１．０×１０７の樹脂である。
【００２１】
【化８】
2015127355.tif 000009
【００２２】
式（１）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５はそれぞれ独立して水素原子または炭素原子数１〜４のアルキル基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。ＹおよびＺは結合していてもよく、両者が結合していない場合、Ｙはメチン基を、Ｚは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、両者が結合している場合、Ｙは４級炭素原子を、ＺはＮＲ（Ｒは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。）を表す。ここで、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。
【００２３】
前記式（１）中、Ｘは２価の連結基を表す。連結基Ｘが存在しない場合（すなわち、ｍ＝０の場合）も好ましいが、連結基を有する場合（すなわち、ｍ＝１の場合）、かかるＸとしては、下記式（８）の２価基の群から選ばれる１種または２種以上の組合せからなる基であることが好ましい。
【００２４】
【化９】
2015127355.tif 000010
【００２５】
ここで、Ｘが上記２価基の群から選ばれる２種以上の組合せからなる基である場合は、同じ基が重複（連続を含む）して選択されてもよいが、重複して選択される基があるか否かを問わず、化学的に安定な組み合わせでなければならない。上記２価基の群から重複を許して選ばれる２価基の個数としては、１〜４個が好ましく、２〜４個がさらに好ましく、３個が特に好ましい。例えば、Ｘは（Ｒ２が結合している炭素原子）−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、または（Ｒ２が結合している炭素原子）−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−が好ましい。
【００２６】
前記式（１）中、Ｒ１は水素原子またはメチル基を表すが、水素原子が好ましい。
前記式（１）中、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表す。ここで「炭素数１〜６のアルキル基」とは、直鎖状または分岐鎖状の飽和の脂肪族炭化水素基を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、２−メチルブチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基等が挙げられ、好ましくはメチル基である。また、「炭素数１〜６のアリール基もしくはヘテロアリール基」とは、芳香族の環状置換基を意味し、例えばフェニル基、２−フリル基、３−フリル基、２−チエニル基、３−チエニル基、２−ピリル基、３−ピリル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基等が挙げられ、好ましくはフェニル基である。Ｒ２としては、水素原子、メチル基、およびフェニル基が好ましい。
【００２７】
前記式（１）中、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、さらにＹおよびＺが結合している場合、ＺはＮＲを表し、Ｒは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表すが、成長因子のようなタンパク質の生体分子に対しては水素結合を介して親和性を示すと考えられるため、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲのうち、少なくとも１つは水素原子であることが好ましい。
ここで「炭素数１〜４のアルキル基」とは、直鎖状または分岐鎖状の飽和の脂肪族炭化水素基を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられるが、好ましくはメチル基である。
【００２８】
本発明の樹脂は、重量平均分子量が１．０×１０３〜１．０×１０７である。重量平均分子量が１．０×１０３未満であると、樹脂を再沈殿等の精製操作で純度を向上させるのが難しくなるため、好ましくない。また、１．０×１０７を超えると溶媒への溶解性が低下するため、再沈殿や透析操作による精製が困難になるため、好ましくない。５．０×１０３〜５．０×１０６であることが好ましく、１．０×１０４〜１．０×１０６であることがさらに好ましく、２．０×１０４〜２．０×１０５であることが特に好ましい。
【００２９】
本発明の樹脂に含まれるグアニジノ基は、酸が付加した酸付加塩であってもよいが、細胞そのものに対しては細胞膜表面の負電荷と静電的な相互作用により樹脂は親和性を示すと考えられるため、グアニジノ基は酸付加塩であることが好ましい。かかる酸付加塩を形成しうる酸としては、有機酸または無機酸のいずれであってもよく、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸、安息香酸、ソルビン酸、ニコチン酸、ウロカニン酸、ピロリドンカルボン酸等のモノカルボン酸；シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタミン酸、アジピン酸、ピメリン酸、コルク酸、アゼライン酸、セバシン酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸等のジカルボン酸；グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、о、ｍまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸等のヒドロキシ酸；グリシン、アラニン、β−アラニン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン、チロシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイン、シスチン、プロリン、ヒドロキシプロリン、ピペコリン酸、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、リシン、ヒスチジン、オルニチン、アルギニン、アミノ安息香酸等のアミノ酸；メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸等の低級アルキルスルホン酸；ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のアリールスルホン酸；フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等のハロゲン化水素酸；過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、炭酸等の無機酸；を挙げることができる。
【００３０】
用いる酸の種類については特に制限はないが、培地のように細胞の増殖を促進する成分に含まれる酸であることが望ましく、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン、チロシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイン、シスチン、プロリン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、塩酸、リン酸、および炭酸が好ましい。
【００３１】
本発明の樹脂は、前記式（１）で表される繰り返し単位以外に、疎水性ユニットおよび／または親水性ユニットを含んでいてもよい。こうしたユニットとしては、アルコールと（メタ）アクリル酸とのエステル、アミンと（メタ）アクリル酸とのアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、（メタ）アクリロニトリル、スチレン、ｐ−メチルスチレン、ｐ−クロロスチレン、ビニルメチルエーテル、ビニルシクロヘキシルエーテル、酢酸ビニル、マレイン酸ジエチル、マレイン酸ジブチル等のビニルモノマー、ビニル基含有マクロモノマー等を由来とする繰り返し単位が好ましく例示される。特に好ましくは炭素数１から２０のアルコールと（メタ）アクリル酸とのエステルを由来とする繰り返し単位、およびアミンと（メタ）アクリル酸とのアミドを由来とする繰り返し単位である。ここで「（メタ）」なる表記は、「メタ」があるものとないものの両者を意味する（以下同じ）。
【００３２】
前記炭素数１〜２０のアルコールと（メタ）アクリル酸のエステルの例としては、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロピル、（メタ）アクリル酸イソプロピル、（メタ）アクリル酸ブチル、（メタ）アクリル酸イソブチル、（メタ）アクリル酸−ｓｅｃ−ブチル、（メタ）アクリル酸−ｔｅｒｔ−ブチル、（メタ）アクリル酸ペンチル、（メタ）アクリル酸−ｓｅｃ−ペンチル、（メタ）アクリル酸−１−エチルプロピル、（メタ）アクリル酸イソペンチル、（メタ）アクリル酸ネオペンチル、（メタ）アクリル酸−３−メチルブチル、（メタ）アクリル酸ヘキシル、（メタ）アクリル酸−２−メチルペンチル、（メタ）アクリル酸−４−メチルペンチル、（メタ）アクリル酸−２−エチルブチル、（メタ）アクリル酸シクロペンチル、（メタ）アクリル酸シクロヘキシル、（メタ）アクリル酸ヘプチル、（メタ）アクリル酸−２−ヘプチル、（メタ）アクリル酸−３−ヘプチル、（メタ）アクリル酸オクチル、（メタ）アクリル酸−２−オクチル、（メタ）アクリル酸−２−エチルヘキシル、（メタ）アクリル酸イソオクチル、（メタ）アクリル酸ノニル、（メタ）アクリル酸−３，３，５−トリメチルヘキシル、（メタ）アクリル酸デシル、（メタ）アクリル酸ウンデシル、（メタ）アクリル酸ラウリル、（メタ）アクリル酸セチル、（メタ）アクリル酸ステアリル、（メタ）アクリル酸エイコシル、（メタ）アクリル酸メチルシクロヘキシル、（メタ）アクリル酸ノルボルニル、（メタ）アクリル酸ベンジル、（メタ）アクリル酸フェネチル、グリシジル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリル酸−２，２−ジフルオロエチル、（メタ）アクリル酸−２，２，２−トリフルオロエチル、（メタ）アクリル酸−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロイソプロピル、（メタ）アクリル酸−２−フルオロベンジル、（メタ）アクリル酸−３−フルオロベンジル、（メタ）アクリル酸−４−フルオロベンジル、（メタ）アクリル酸−３，４−ジフルオロベンジル、（メタ）アクリル酸−２，３，４，５−テトラフルオロベンジル、（メタ）アクリル酸ペンタフルオロベンジル、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、メトキシエチル（メタ）アクリレート、エトキシエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリレート等が例示される。
【００３３】
前記アミンと（メタ）アクリル酸とのアミドの例としては、Ｎ−ヘキシルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド等の炭素数１〜２０のアルキル基をアミドの窒素原子上に有するモノまたはジ置換（メタ）アクリルアミド誘導体、Ｎ−ヒドロキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド、Ｎ−（メタ）アクリロイルモルホリン、Ｎ−ポリアルキレンオキシ（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド等が例示される。
【００３４】
前記式（１）中、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４の炭化水素基を表すが、水素原子が好ましい。
また、ＹおよびＺは、両者が結合していないとき、Ｙはメチン基を、Ｚは水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表すが、この場合のＺとしては水素原子が好ましい。一方、両者が結合している場合、Ｙは４級炭素原子を、ＺはＮＲ（Ｒは炭素数１〜４のアルキル基を表す。）を表すが、かかるＲとしては水素原子が好ましい。
【００３５】
前記式（１）で表される繰り返し単位の中では、ＹとＺが結合している場合、Ｒ０がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲが水素原子であり、ｍが１であり、Ｘが（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、または（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）であるもの、ならびにＲ０、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲが水素原子であり、ｍが０であるものが好ましい。
【００３６】
一方、ＹとＺが結合していない場合、Ｒ０がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＺ１が水素原子であり、ｍが１であり、Ｘが（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、または（Ｒ２が結合している炭素原子）−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−であるもの、ならびにＲ０、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＺ１が水素原子であり、ｍが０であるものが好ましい。
【００３７】
前記式（１）で表される繰り返し単位の中では、Ｒ０がメチル基であり、Ｒ１が水素原子であり、Ｘが２価連結基、例えば前記式（８）の２価基の群から選ばれる１種または２種以上の組合せからなる基であり、Ｙがメチン基であり、Ｒ２が水素原子または炭素数１〜６のアルキル基もしくはアリール基であり、Ｒ３が炭素数１〜４のアルキル基であり、Ｒ４、Ｒ５、およびＺが水素原子であるものは好ましい。
【００３８】
前記の疎水性ユニットおよび／または親水性ユニットが、本発明の樹脂全体の重量に対して含まれる割合としては、８０重量％以下であることが好ましく、５０重量％以下であることがさらに好ましく、２０重量％以下であることが特に好ましい。８０重量％を超えると、樹脂全体に占めるグアニジノ基の割合が少なくなり、生体分子に対する接着性を発現するうえで不利になる。
【００３９】
前記式（４）および（７）において、グアニジン構造をもつ繰り返し単位の導入割合１−ｊは、それぞれ０．２５以上であることが好ましく、０．５０以上であることがさらに好ましく、０．７５以上であることが特に好ましい。
【００４０】
＜本発明の製造方法１＞
前記式（１）においてＹとＺが結合した繰り返し単位を有する本発明の樹脂に含まれる下記式（４）で表される樹脂は、例えば次の製造方法により製造できる。
【００４１】
すなわち、下記式（２）
【化１０】
2015127355.tif 000011
（式（２）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。）
で示される繰り返し単位を有する化合物と、下記式（３）
【化１１】
2015127355.tif 000012
（式（３）中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲはそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。ただし、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。）
で示されるアミノグアニジン誘導体とを脱水縮合する工程を含む、下記式（４）で表される共重合体の製造方法である。
【００４２】
【化１２】
2015127355.tif 000013
【００４３】
式（４）中、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ、Ｘ、およびｍの定義は前記式（２）または前記式（３）における定義と同じであり、ｎは正の整数を表し、ｊは０以上１未満の数を表す。
ただし、この式（４）で表される共重合体は、出発物質たる前記式（２）で示される繰り返し単位をもつ化合物に由来する他の繰り返し単位が含まれることを許容する。
前記式（２）および前記式（３）におけるＸ、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ、およびｍの定義は、いずれも前記式（１）における定義と同じであり、前記式（１）において好ましいものとして挙げた置換基は、前記式（２）および前記式（３）においても好ましい。
【００４４】
ここで、前記式（２）の繰り返し単位を有する高分子は、対応する構造のビニルモノマーを重合させることにより得られる。また、前述の「疎水性ユニットおよび／または親水性ユニット」のモノマーと共重合させてもよい。前記式（２）に対応する構造のビニルモノマーとしては、メチルビニルケトンのように購入可能なものもあるが、無水クロトン酸等の酸無水物、アクリル酸塩化物、メタクリル酸塩化物等の酸塩化物と、チオケトン化合物またはヒドロキシケトン化合物等とを反応させることによっても製造可能であり、それぞれ好適に用いうる。
【００４５】
前記式（２）で表される繰り返し単位を有する化合物の重量平均分子量は、製造しようとする前記式（４）で表される共重合体の重量平均分子量に基づいて決めればよい。
前記式（３）で表されるアミノグアニジン誘導体としては、塩酸塩、炭酸塩等の酸塩の形でアミノグアニジンが入手可能であり、対応する誘導体は、これらアミノグアニジンの酸塩を塩基の存在下でアルキルハライドと反応させることにより製造できる。
前記式（３）で表されるアミノグアニジン誘導体はそのまま用いることができるが、その酸塩を用いる場合、化学量論量の塩基の存在下で反応を進行させることが好ましい。反応系中に用いる塩基としては、水酸化バリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。
【００４６】
反応溶媒は、反応基質が溶解するものであることが好ましく、例えば水、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドを単独で、または２種以上を混合して使用することができる。アセトン、２−ブタノン等のケトン系の溶媒は、アミノグアニジン誘導体と反応してしまうため、好ましくない。反応は系中を撹拌しながら５℃〜６５℃で１分間〜６時間行うことが好ましい。
【００４７】
アミノグアニジン誘導体およびその酸塩の使用量については、側鎖ケトン基のモル数をＫ、所望のグアニジノ基の導入割合をＣ´としたとき、Ｋ×Ｃ´のモル数以上であれば特に制限はないが、過剰に用いた分は廃棄物となるだけなので、Ｋ×Ｃ´の２倍以下のモル数であることが好ましい。
【００４８】
＜本発明の製造方法２＞
また、前記式（１）においてＹとＺが結合していない繰り返し単位を有する本発明の樹脂に含まれる下記式（７）で表される樹脂は、例えば次の製造方法により製造できる。
【００４９】
すなわち、下記式（５）
【化１３】
2015127355.tif 000014
（式（５）中、Ｒ０およびＲ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜６のアルキル基、アリール基、もしくはヘテロアリール基を表し、Ｒ３は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｘは２価の連結基を表し、ｍは０または１を表す。）
で示される繰り返し単位を有する化合物と、下記式（６）
【化１４】
2015127355.tif 000015
（式（６）中、Ｒ４、Ｒ５、およびＺ１はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。ただし、式中のグアニジノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよい。）
で示される１−アミジノピラゾール誘導体とを反応させる工程を含む、下記式（７）で表される共重合体の製造方法である。
【００５０】
【化１５】
2015127355.tif 000016
【００５１】
式（７）中、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ、Ｘ、Ｚ１、およびｍの定義は前記式（５）または前記式（６）における定義と同じであり、ｎは正の整数を表し、ｊは０以上１未満の数を表す。
ただし、この式（７）で表される共重合体は、出発物質たる前記式（５）で示される繰り返し単位をもつ化合物に由来する他の繰り返し単位が含まれることを許容する。
【００５２】
前記式（５）および前記式（６）におけるＸ、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびｍの定義は、いずれも前記式（１）における定義と同じであり、前記式（１）において好ましいものとして挙げた具体例は、前記式（５）および前記式（６）においても好ましい。
ここで、前記式（５）中の側鎖アミノ基は酸が付加した酸付加塩であってもよく、前記式（６）の１−アミジノピラゾール誘導体は、取扱いの容易さから、酸が付加した酸付加塩であることが好ましい。
【００５３】
前記式（５）で表される繰り返し単位を有する化合物は、対応する構造のビニルモノマーを重合させることによって製造できる。また、前述の「疎水性ユニットおよび／または親水性ユニット」のモノマーと共重合させてもよい。前記式（５）の構造に対応するビニルモノマーは、無水クロトン酸等の酸無水物、アクリル酸塩化物、メタクリル酸塩化物等の酸塩化物とジアミン誘導体とを反応させることによって製造することができる。また、上記の酸無水物や酸塩化物と、フタルイミド構造を有するアルコールとを反応させた後、ヒドラジンとの反応でフタルイミドを開環することによっても製造できる。さらに、ポリアリルアミン塩酸塩等の市販品を購入することによっても入手可能であり、それぞれ好適に用いることができるが、製造または入手の容易さの点で、ジアミン誘導体との生成物、およびポリアリルアミン塩酸塩が特に好ましい。
【００５４】
前記式（５）で表される繰り返し単位を有する化合物の重量平均分子量は、製造しようとする前記式（７）で表される共重合体の重量平均分子量に基づいて決めればよい。
前記式（６）で表される１−アミジノピラゾール誘導体の入手については、塩酸塩、炭酸塩等の酸塩の形で１−アミジノピラゾールが市販品として得られ、その誘導体は塩基の存在下、１−アミジノピラゾール酸塩とアルキルハライドとを反応させることにより製造できる。
【００５５】
この１−アミジノピラゾールの酸塩はそのまま反応に用いることができるが、前記式（５）で表される繰り返し単位を有する化合物の側鎖アミノ基が酸塩の形の場合、アミン酸塩と化学量論量の塩基の存在下で反応を進行させることが好ましい。反応系中に用いる塩基としては、例えば水酸化バリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。反応溶媒は、反応基質が溶解するものであることが好ましく、例えば水、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド等を単独で、または２種以上を混合して使用することができる。アセトン、２−ブタノン等のケトン系の溶媒は側鎖のアミンと反応してしまうため、好ましくない。反応は系中を撹拌しながら５℃〜６５℃で１時間〜７２時間行うことが好ましい。１−アミジノピラゾールおよびその酸塩の使用量については、側鎖アミノ基のモル数をＡ、所望のグアニジノ基への変換割合をＣとしたとき、Ａ×Ｃのモル数以上であれば特に制限はないが、過剰に用いた分は廃棄物となるだけなので、Ａ×Ｃの２倍以下のモル数であることが好ましい。
【００５６】
前述の方法で製造した本発明の樹脂は、いずれも得られた樹脂溶液を再沈殿、溶媒溜去等の公知の方法で単離した後、種々の用途に供することができる。また、単離した本発明の樹脂を、所望により、再沈殿、溶剤洗浄、膜分離、吸着処理等によってさらに精製した後、用いることもできる。
【００５７】
＜重合法＞
前記式（２）および前記式（５）で表されるモノマーの重合方法、およびこれらのモノマーと前述の「疎水性ユニットおよび／または親水性ユニット」のモノマーとの共重合方法としては、一般的にはラジカル重合開始剤が用いられる。重合方法については特に制限はなく、溶液重合、バルク重合、懸濁重合等の種々の方法で重合させることができるが、特に溶液重合を利用するのが好ましい。重合時に用いられる溶媒としては、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン等の有機溶剤が挙げられる。これらの有機溶剤は、単独でまたは２種以上を混合して使用することができる。
【００５８】
重合時に用いられるラジカル重合開始剤としては、例えば２，２′−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、２，２′−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）、２，２′−アゾビス（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニトリル）、ジメチル−２，２′−アゾビスイソブチレート、２，２′−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）、１，１′−アゾビス（１−シクロヘキサンカルボニトリル）等のアゾ化合物、ベンゾイルパーオキシド、ジクミルパーオキシド、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルパーオキシド、ラウロイルパーオキシド等の過酸化物が用いられる。これらの重合開始剤は、全単量体成分に対して、通常０．０１〜５重量％用いることができる。
こうした重合は、通常、窒素やアルゴン等の不活性ガス雰囲気下で、温度３０℃〜１２０℃、好ましくは４０℃〜１００℃で１〜２０時間行われる。
【００５９】
＜細胞培養用基材＞
本発明の樹脂は、公知の方法で種々の細胞培養用基材に固定化することができる。例えば、カルボン酸を表面に豊富に有する基材に対して、樹脂の溶液を塗布・乾燥させることによって、グアニジノ基とカルボン酸との間の酸塩基対形成により、ポリイオンコンプレックスの形で基材に固定化することができる。カルボン酸を表面に豊富に有する基材は、ポリスチレン製の基材をプラズマ処理することにより製造可能であり、Ｃｏｒｎｉｎｇ社等からも市販されている。
【００６０】
固定化する基材の形状に関しては特に制限はなく、シャーレ、ローラーボトル、２４穴ウェルプレート、９６穴ウェルプレート、シート等、種々の形状の基材を用いることができるが、細胞の大量培養を効率的に行う上では、培養面積を稼ぐ意味で微小基材に固定化することが好ましい。微小基材の形状としてはシート状の形であることが好ましい。ビーズ状の微小基材を用いる場合は、細胞の大量培養に適用すると偏流を起こすことがあるため、酸素や栄養が十分に行き渡らない箇所が生じないよう留意すべきである。
シート状の微小基材の大きさは、各辺が５０μｍ〜２ｍｍ四方であることが好ましく、より好ましくは各辺が１００μｍ〜１ｍｍ四方である。
【実施例】
【００６１】
［実施例１］
窒素ガス雰囲気下、２０ｍＬのシュレンクチューブにアミノグアニジン塩酸塩（東京化成工業製）３７５．７ｍｇを加え、さらに２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（和光純薬製）１．５７ｍＬ、およびテトラヒドロフラン（和光純薬製）１４．１３ｍＬを加えてアミノグアニジンの混合溶液を得た。また、窒素ガス雰囲気下、５０ｍＬのシュレンクチューブにポリメチルビニルケトン（ポリスチレン換算での数平均分子量３０，０００）、２１０．７ｍｇを加え、精製水（和光純薬製）とテトラヒドロフランとの混合溶液（体積比で水：テトラヒドロフラン＝１：９の混合溶液）１．５ｍＬを加えてポリマーを溶解させた。そこに、撹拌しながら前記のアミノグアニジン混合溶液１５．０ｍＬを室温で滴下し、そのまま室温で３時間反応させた。生じた沈殿物をろ取し、テトラヒドロフランにて洗浄後、減圧乾燥することにより、３３８．５ｍｇのグアニジノ基含有樹脂を得た。
上記の樹脂を用いて、固体の１３Ｃ ＮＭＲスペクトル測定を行ったところ、Ｃ＝Ｎ結合に由来するピークが１６９．９ｐｐｍに一本だけ観測され、７４．６ｐｐｍにもピークが観測されたことから、非環状のヒドラゾンの形ではなく、５員環のアミナールの形でアミノグアニジンは側鎖に固定されていることがわかった。また、原料のケトン部に対応する２１４．９ｐｐｍのピークの積分値とＣ＝Ｎに由来するピークの積分値の比から、９３％の導入率でグアニジノ基が導入されていることがわかった。
【００６２】
［実施例２］
窒素ガス雰囲気下、２０ｍＬのシュレンクチューブにポリアリルアミン塩酸塩（Ａｌｄｒｉｃｈ製：重量平均分子量５８，０００）４０６．７ｍｇとＤＭＦ（和光純薬製）２．１７ｍＬとを加えた。そこに２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（和光純薬製）２．１７ｍＬを加えてポリマーを溶解させた。撹拌しながら、そこに１−アミジノピラゾール塩酸塩（和光純薬製）６３７ｍｇを室温で加え、そのまま室温で４８時間反応させた。その後、真空ポンプにて溶媒を溜去し、内容物を分画分子量１２，０００〜１４，０００の透析チューブ（アズワン製）に詰め、水を用いて一晩、透析精製操作を行った。その後、透析チューブ内の内容物をガラス製のシャーレに移し、減圧乾燥させたところ、３８３．２ｍｇのグアニジノ基含有樹脂が得られた。
重水を用いて、上記の樹脂の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定を行ったところ、原料のポリアリルアミンのメチン部分に由来する２．１８ｐｐｍのピークが観測されず、代わりに１．８６ｐｐｍにピークが観測されたことから、アミノ基からグアニジノ基への変換反応がほぼ定量的に進行しているものと考えられた。これは非特許文献２から予見されたことと異なり、効率よくアミノ基をグアニジノ基へ変換可能であったことを意味する。実際、上記の樹脂の１３ＣＮＭＲスペクトルにおいて、１５９．１ｐｐｍにグアニジノ基のＣ＝Ｎに由来すると考えられるピークが明確に観測されている。３−（トリメチルシリル）プロピオン酸−Ｄ４ナトリウム塩を外部標準物質として用いて、そのメチル基由来のピークを０ｐｐｍとしたときの、グアニジノ基含有樹脂の１３ＣＮＭＲスペクトルのピークは、１５９．１０、４６．３９、３６．３６、３３．５６ｐｐｍであった。
【００６３】
［実施例３］
実施例１で合成したグアニジノ基含有樹脂４．１ｍｇを超純水５．０ｍＬに溶かした。なお、超純水は日本ミリポア株式会社の製造装置であるElix Essential 5 UVとMilli−Q Synthesisとを用いて調製した（以下同じ）。この水溶液を、直径１００ｍｍの市販のシャーレ（ＣｅｌｌＢｉｎｄ（登録商標、以下同じ）：Ｃｏｒｎｉｎｇ製）に２．２０ｍＬ滴下し、５分間振盪して均一に水溶液をシャーレ表面に広げた後、５分間静置した。次に水溶液をパスツールピペットで吸出し、室温でシャーレを一晩風乾させた。その後、超音波カッターにてシャーレの中央付近を１ｃｍ角程度の大きさに切り出して、ＸＰＳ測定を行ったところ、観察された窒素原子は１１％であった。
なお、測定装置および分析方法は次の通りである。
光電子分光装置（XPS）；Thermo  Scientific社  K-Alpha、X線源；Al-Kαモノクロ（１４８６．７eV）、X線スポットサイズ；４００μｍ、Flood Gun on、真空度；＜５×１０−８mbar、検出角０度
測定：全元素定性分析  Survey scan（P.E.200eV）
高分解能分析    Narrow scan (P.E.50eV)  C1s, O1s, N1s
【００６４】
［実施例４］
実施例１で合成したグアニジノ基含有樹脂４．１ｍｇを超純水５．０ｍＬに溶かした。得られた水溶液を、直径１００ｍｍの市販のシャーレ（ＣｅｌｌＢｉｎｄ：Ｃｏｒｎｉｎｇ製）に２．２０ｍＬ滴下し、５分間振盪して均一に水溶液をシャーレ表面に広げた後、５分間静置し、水溶液をパスツールピペットで吸い出した。次に、超純水１０．０ｍＬのシャーレへの滴下、５分間の振盪、超純水のパスツールピペットでの吸出し、という一連の水洗操作を２回連続して行った。その後、室温でシャーレを一晩風乾させた後に、超音波カッターにてシャーレの中央付近を１ｃｍ角程度の大きさに切り出してＸＰＳ測定を行った。測定装置および分析方法は実施例３と同様である。観察された窒素原子は１０％であった。
【００６５】
［比較例１］
直径１００ｍｍの市販のシャーレ（ＣｅｌｌＢｉｎｄ：Ｃｏｒｎｉｎｇ製）に超純水を２．２０ｍＬ滴下し、５分間振盪して均一に水をシャーレ表面に広げた後、５分間静置し、水をパスツールピペットで吸い出した。その後、室温でシャーレを一晩風乾させた後に、超音波カッターにてシャーレの中央付近を１ｃｍ角程度の大きさに切り出してＸＰＳ測定を行った。測定装置および分析方法は実施例３と同様である。観察された窒素原子は１％であった。
比較例１ではほとんど窒素原子が確認されなかったのに対し、実施例３では有意に窒素原子が観測され、シャーレ基材上に本発明の樹脂が固定化されていることがわかった。また、実施例４のように水洗操作を行っても実施例３と同程度の量の窒素原子が観測されたことから、水洗してもコーティングが剥がれないほど、本発明の樹脂は培養基材に強く固定化されていることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
本発明の樹脂には有用タンパク質や細胞の接着を促進する特性があるので、これを基材表面に固定化すれば、例えば幹細胞の効率的な培養ができる細胞培養基材となしうる。