(57)【要約】      （修正有）【課題】天然物由来で長期服用しても安心な炎症予防剤を提供すること。【解決手段】イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分中に有効成分として含有される、式（Ｉ）で示される複数種のアルキルレゾルシノール（ＡＲ）。好ましくは、下記式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１５の飽和又は不飽和のアルキル基であるＡＲ、同Ｒ1が炭素原子数１７の飽和又は不飽和のアルキル基であるＡＲ、同Ｒ1が炭素原子数１９の飽和又は不飽和のアルキル基であるＡＲ、同Ｒ1が炭素原子数２１の飽和又は不飽和のアルキル基であるＡＲ、同Ｒ1が炭素原子数２３の飽和又は不飽和のアルキル基であるＡＲ、及び同Ｒ1が炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基であるＡＲ。2015020993.tif 000006【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分を有効成分として含有し、該ピーク成分に、下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを複数種含む、特定アルキルレゾルシノール混合物が含有されている炎症予防剤。
【化１】
2015020993.tif 000005
【請求項２】
上記特定アルキルレゾルシノール混合物は、１）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを０．１〜１０．０質量％、２）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを１．０〜２０．０質量％、３）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１９の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを２５．０〜４０．０質量％、４）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２１の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを４０．０〜５５．０質量％、５）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２３の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを１．０〜１５．０質量％、及び６）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを０〜５．０質量％含有する請求項１に記載の炎症予防剤。
【請求項３】
上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が、Ｒ2に対してパラ位に結合した請求項２に記載の炎症予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症予防剤に関し、詳細には、血中遊離脂肪酸低下作用又は炎症性サイトカイン発現抑制作用による炎症予防作用が有効性を示す、炎症予防剤に関する。本発明が予防する「炎症」は、主として、脂肪で産生する炎症性サイトカイン及び遊離脂肪酸が健常時より有意に多い状態を意味する。この「炎症」により、炎症性サイトカインが全身に回り、他の臓器の炎症シグナルを活性化して動脈硬化やがんを誘導するリスクが高まるとされている。また、この「炎症」により、脂肪組織とマクロファージのパラクリン調節系が継続して発生し、脂肪組織を増悪する「悪循環」が形成されることから、この「炎症」は慢性的な炎症であると言える。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、種々の外因性又は内因性の組織障害刺激に対する生体防御応答の１つである。近年話題のメタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）の主要な機序は、インスリン抵抗性、腹部肥満、炎症と考えられており、内臓脂肪が蓄積し、脂肪細胞が大きくなると、マクロファージ等の免疫細胞が集まって慢性的な炎症が起こり、この炎症が動脈硬化や糖尿病等につながるおそれがある。また、肥満により肥大した脂肪細胞からは遊離脂肪酸が分泌され、これがインスリン抵抗性を生じさせると考えられており、血液中の遊離脂肪酸量の増加は、炎症性疾患の発症・進展に深く関与している。
【０００３】
炎症性疾患の多くは、生体内における炎症性サイトカインの制御異常が関連していると考えられている。炎症性サイトカインは、炎症を促進するサイトカインの総称で、IL-6、IL1-β等が炎症性サイトカインに分類される。炎症性サイトカインは、各種刺激によって血球から産生されるが、一方で、炎症を抑制する働きを有する抗炎症性サイトカイン（IL-10、IL-4等）も血球から産生され、健常時には、両サイトカインの産生量が適宜調整されているため、生体内における炎症反応は過剰になることなく正常範囲内に制御されている。
【０００４】
また近年、脂肪細胞、特に内臓脂肪と動脈硬化性疾患との関連が明らかになってきている。脂肪細胞は重量で身体の１０％以上を占める巨大な組織であり、中性脂肪としてエネルギーを貯蔵するのみならず、アディポサイトカイン（脂肪組織由来生理活性物質）を分泌することにより、生体ホメオスタシスの維持に積極的に参与していると考えられている。特許文献１には、アディポサイトカインの一種であるアディポネクチン（Adpn）の分泌促進作用と脂肪前駆細胞の分化抑制作用及び脂肪細胞の脂肪蓄積抑制との関係、並びに、抗肥満関連遺伝子群（PPARγ、Adpn、Leptin、aP2）の遺伝子発現変動及び血中Adpnと中性脂肪との関係が示唆されており、アディポネクチンの分泌を誘導することが動脈硬化、肥満、糖尿病等の予防・治療に有効であること、及び、特定の植物から抽出された特定成分がAdpnの分泌を誘導することが開示されており、該特定成分として、レゾルシノール誘導体を含有するものが開示されている。
【０００５】
また特許文献２には、合成されたアルキルレゾルシノール及びその塩が活性酸素除去能を有することが開示されており、これを用いた皮膚外用剤も開示されている。尚、アルキルレゾルシノールに関して特許文献２に開示されているのは、抗酸化作用に関するものであり、炎症性サイトカインが関連する炎症に関しては記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−６８１３２号公報
【特許文献２】特開２００１−３０２５０５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、天然物由来で長期服用しても安心な炎症予防剤に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分を有効成分として含有し、該ピーク成分に、下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを複数種含む、特定アルキルレゾルシノール混合物が含有されている炎症予防剤である。
【０００９】
【化１】
2015020993.tif 000002
【発明の効果】
【００１０】
本発明の炎症予防剤は、種々の炎症性疾患、特に、血中遊離脂肪酸量の増加又は炎症性サイトカイン発現上昇に起因する炎症性疾患の予防に有効である。特に本発明の炎症予防剤は、脂肪細胞の炎症性サイトカイン発現（産生）及び遊離脂肪酸産生量を低減させ、その結果、全身の臓器の炎症シグナル活性化を抑制し、動脈硬化やがんを誘導するリスクを低減させる。また、本発明の炎症予防剤の有効成分（アルキルレゾルシノール）は、植物由来のものであるため、安全性が高く、副作用のおそれが少ないので、本発明の炎症予防剤は、使用上の問題がなく有利である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、本発明の実施例の炎症予防剤の血中遊離脂肪酸低下作用を示すグラフである。
【図２】図２は、本発明の実施例の炎症予防剤のMCP-1（ケモカイン）発現抑制作用を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明の実施例の炎症予防剤のIL-6（炎症性サイトカイン）発現抑制作用を示すグラフである。
【図４】図４は、本発明の実施例の炎症予防剤のIL-1β（炎症性サイトカイン）発現抑制作用を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明の実施例の炎症予防剤のTNF-α（炎症性サイトカイン）発現抑制作用を示すグラフである。
【図６】図６は、本発明の実施例の炎症予防剤のAdpn分泌促進作用の有無の評価結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の炎症予防剤は、イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分を有効成分として含有する。このピーク成分（本発明の炎症予防剤の有効成分）には、上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを複数種含む、特定アルキルレゾルシノール混合物が含有されている。この特定アルキルレゾルシノール混合物は、血中遊離脂肪酸量の低下作用及び／又は炎症性サイトカインの発現抑制作用を有する。
【００１３】
アルキルレゾルシノールは、天然の非イソテルぺノイド系フェノール性両親媒性化合物であるレゾルシノール脂質として、種々の植物に含まれていることが知られており、アルキルレゾルシノールの給源としては、イネ科植物以外にも、例えば、ウルシ科、イチョウ科、ヤマモガシ科、ヤブコウジ科、サクラソウ科、ニクズク科、アヤメ科、サトイモ科、キク科のヨモギ、マメ科等が知られている。これらの植物の中でも、イネ科植物は、可食性有効成分としてのアルキルレゾルシノールの研究が進んでいること等から、本発明においては、アルキルレゾルシノールの給源として、イネ科植物を採用している。
【００１４】
アルキルレゾルシノールの給源として利用可能なイネ科植物としては、特に制限されないが、例えば、小麦、デュラム小麦、ライ麦、ライ小麦、大麦、オーツ麦、はと麦、トウモロコシ、イネ、ヒエ、アワ、キビ等の穀類が挙げられ、これら１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの穀類の中でも、高い活性が得られる点から、特に小麦、デュラム小麦等のコムギ属の植物が好ましく、小麦が更に好ましい。イネ科植物種子としては、任意の形態のイネ科植物種子で良く、例えば、イネ科植物種子（好ましくは種子外皮；糟糠類）そのもの；当該イネ科植物種子を切断、粉砕若しくは粉末化したもの；当該イネ科植物種子を乾燥したもの；当該イネ科植物種子を乾燥後粉砕若しくは粉末化したもの等でも良い。イネ科植物種子外皮を含む好適な例としては、ふすま、末粉、籾殻、ぬか等が挙げられる他、外皮を伴った種子も挙げられる。
【００１５】
イネ科植物種子のアルコールによる抽出方法は特に制限されないが、例えば、上記各種形態のイネ科植物種子をアルコール中に浸漬、攪拌又は還流する方法の他、超臨界流体抽出法等が挙げられる。前者の方法の場合、抽出温度は２〜１００℃が好ましく、抽出時間は３０分〜７２時間が好ましく、アルコール使用量は、イネ科植物種子１００質量部に対し５０〜２０００質量部が好ましい。
【００１６】
イネ科植物種子の抽出に用いられるアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の１価の低級アルコール（好ましくは炭素原子数１〜４のもの）、及び１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温（２５℃）で液体であるアルコールが挙げられる。これらのアルコールの中でも、操作性や環境性の点から、エタノールが好ましい。尚、イネ科植物種子の抽出に用いられるアルコールとしては、アルコール以外の水性成分（水、純水、蒸留水、水道水、酸性水、アルカリ水、中性水等）が含まれている含水エタノールを用いることもできる。含水アルコール中のアルコール含有量は、通常７０体積％以上、好ましくは８０体積％以上、より好ましくは９０体積％以上である。
【００１７】
本発明において、イネ科植物種子のアルコール抽出物の精製に用いられる分配クロマトグラフィーは、本発明の炎症予防剤の有効成分（特定アルキルレゾルシノール混合物）が得られる手法であればその種類は問わないが、移動相として非水系溶媒を用いる順相クロマトグラフィー法が好ましく、オープンカラム法、中圧カラム法、高速液体クロマトグラフィー等の公知の方法を適宜選択することができる。
【００１８】
分配クロマトグラフィーにおける移動相としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の１価の低級アルコール（好ましくは炭素原子数１〜４のもの）、及び１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温（２５℃）で液体であるアルコール；ジエチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン；ヘキサン；塩化メチレン；アセトニトリル；並びにクロロホルム等が挙げられ、これら溶媒の１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。複数の溶媒を組み合わせて移動相とする場合、分配クロマトグラフィーの実施中（イネ科植物種子のアルコール抽出物の精製中）において、複数の溶媒の混合比を一定にするイソクラクティックモードでも良く、あるいは該混合比を変化させるグラジエントモードでも良い。
【００１９】
分配クロマトグラフィーにおける担体としては、目的とする有効成分を担持−放出できる担体であればいずれも用いることができるが、一般的にはシリカゲル、ポリアクリルアミドゲル、デキストランゲル等を挙げることができる。
【００２０】
イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーにおける検出波長は、１７０〜３２０ｎｍであれば良く、好ましくは１９０〜２８０ｎｍである。
【００２１】
イネ科植物種子（好ましくはコムギ属の植物）のアルコール抽出物（好ましくはエタノール抽出物）の精製に好適な分配クロマトグラフィーの例として、下記分配クロマトグラフィーＡ及びＢが挙げられる。
・分配クロマトグラフィーＡ：担体としてシリカゲル及び移動相としてヘキサン−酢酸エチル混合溶媒を用いた中圧カラム法（中圧クロマトグラフィー）を用い、且つその分配クロマトグラフィーの実施中に、移動相を「ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒においてヘキサンの含有割合が相対的に高いもの」から「ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒においてヘキサンの含有割合が相対的に低いもの」へと変化させ（即ち、「ヘキサン大−少」へのグラジエントモードで用い）、且つ検出波長２５４ｎｍでのピーク成分を分取する。
・分配クロマトグラフィーＢ：担体としてシリカゲル及び移動相としてメタノールを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用い、且つ検出波長２１５ｎｍでのピーク成分を分取する。
【００２２】
本発明の炎症予防剤における有効成分の含有量、即ち、イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分（特定アルキルレゾルシノール混合物）の含有量は、血中遊離脂肪酸量の増加又は炎症性サイトカイン発現上昇に起因する炎症性疾患の予防効果をより確実に奏させるようにする観点から、本発明の炎症予防剤中、好ましくは７０質量％以上、更に好ましくは７５質量％以上である。上記有効成分（特定アルキルレゾルシノール混合物）の含有量は１００質量％、即ち、本発明の炎症予防剤は上記有効成分（特定アルキルレゾルシノール混合物）のみから構成されていても良い。
【００２３】
本発明の炎症予防剤の有効成分であり、イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分に含有されている、特定アルキルレゾルシノール混合物について説明すると、特定アルキルレゾルシノール混合物は、上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを複数種含む。
【００２４】
上記一般式（Ｉ）におけるＲ1に関し、炭素原子数１５〜２５の飽和アルキル基としては、代表例として、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−ノナデシル、ｎ−ヘンイコシル、ｎ−トリコシル、ｎ−ペンタコシル、ｎ−ヘプタコシル等の直鎖状のものが挙げられ、これらの他に、分岐状又は環状のものでも良い。これらの中でも、炭素原子数１５〜２３の飽和アルキル基が好ましい。
【００２５】
また、上記一般式（Ｉ）におけるＲ1に関し、炭素原子数１５〜２５の不飽和アルキル基としては、上記の炭素原子数１５〜２５の飽和アルキル基に対応するものが挙げられる。不飽和アルキル基に含まれる不飽和結合の数及び位置に特に制限はない。
【００２６】
また、上記一般式（Ｉ）におけるＲ2は水素原子であることが好ましく、また、Ｒ1はＲ2に対してパラ位に結合していることが好ましい。
【００２７】
上記特定アルキルレゾルシノール混合物に含まれ得るアルキルレゾルシノールの具体例としては、以下のものが挙げられる。
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）
【００２８】
上記特定アルキルレゾルシノール混合物の好ましい一例として、下記６種類のアルキルレゾルシノールを含有するものが挙げられる。本発明者らの知見によれば、下記６種類のアルキルレゾルシノールは、血中遊離脂肪酸低下作用及び炎症性サイトカイン発現抑制作用に特に優れ、血中遊離脂肪酸量の増加又は炎症性サイトカイン発現上昇に起因する炎症性疾患の予防に有効である。
１）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１５ともいう）。
２）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１７ともいう）。
３）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数１９の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１９ともいう）。
４）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２１の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２１ともいう）。
５）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２３の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２３ともいう）。
６）上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２５ともいう）。
【００２９】
ＡＲ１５として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数１５の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）が挙げられる。
ＡＲ１７として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数１７の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）が挙げられる。
ＡＲ１９として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数１９の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）が挙げられる。
ＡＲ２１として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数２１の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）が挙げられる。
ＡＲ２３として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数２３の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）が挙げられる。
ＡＲ２５として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数２５飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）が挙げられる。
【００３０】
ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１、ＡＲ２３及びＡＲ２５の含有量は、血中遊離脂肪酸量の増加又は炎症性サイトカイン発現上昇に起因する炎症性疾患を効果的に予防する観点から、それぞれ、下記範囲内にあることが好ましい。
ＡＲ１５の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは０．１〜１０．０質量％、更に好ましくは０．１〜５．０質量％、特に好ましくは０．５〜１．５質量％である。
ＡＲ１７の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは１．０〜２０．０質量％、更に好ましくは５．０〜１５．０質量％、特に好ましくは８．０〜１２．０質量％である。
ＡＲ１９の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは２５．０〜４０．０質量％、更に好ましくは２７．５〜３７．５質量％、特に好ましくは３０．０〜３５．０質量％である。
ＡＲ２１の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは４０．０〜５５．０質量％、更に好ましくは４２．５〜５２．５質量％、特に好ましくは４５．０〜５０．０質量％である。
ＡＲ２３の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは１．０〜１５．０質量％、更に好ましくは２．５〜１２．５質量％、特に好ましくは５．０〜１０．０質量％である。
ＡＲ２５の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは０〜５．０質量％、更に好ましくは０〜２．０質量％、特に好ましくは０〜１．５質量％である。
【００３１】
上記特定アルキルレゾルシノール混合物は、ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１、ＡＲ２３及びＡＲ２５以外の他のアルキルレゾルシノールの１種以上を含有していても良い。この他のアルキルレゾルシノールとしては、例えば、上記一般式（Ｉ）におけるＲ1が炭素原子数２７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２７ともいう）が挙げられる。ＡＲ２７として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数２７の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタコシルベンゼン（Ｃ２７：０）が挙げられる。
【００３２】
また、上記特定アルキルレゾルシノール混合物は、アルキルレゾルシノール以外の他の成分を含んでいても良く、このアルキルレゾルシノール以外の他の成分の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは３０質量％以下である。
【００３３】
上記特定アルキルレゾルシノール混合物の好ましい一例として、次の組成を有するものが挙げられる。即ち、ＡＲ１５として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）を１．２質量％、ＡＲ１７として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）を１０．９質量％、ＡＲ１９として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）を３３．９質量％、ＡＲ２１として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）を４６．４質量％、ＡＲ２３として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）を７．５質量％、及びＡＲ２５として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）を０．１質量％含有する特定アルキルレゾルシノール混合物である。
【００３４】
本発明の炎症予防剤は、イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーのピーク成分（上記特定アルキルレゾルシノール混合物）、並びに必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、賦形剤、その他の添加剤、その他の成分を含有するものである。本発明の炎症予防剤は、常法により製剤化することができ、その場合、本発明の炎症予防剤の剤型は、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口剤である。また、本発明の炎症予防剤に含有可能な「その他の成分」としては、その他の薬効作用を有する成分、抗炎症薬、各種ビタミン類、生薬、ミネラル類等が挙げられる。
【００３５】
本発明の炎症予防剤中の有効成分（特定アルキルレゾルシノール混合物）の含有量は、炎症予防剤の剤型、投与又は摂取する者の症状や年齢性別等によって適宜変化させることができ、人を対象とする場合、通常、本発明の炎症予防剤の有効成分の投与量又は摂取量が１人（６０ｋｇ換算で）１日当たり０．５〜５０００ｍｇとなるように含有させることが好ましい。
【００３６】
本発明の炎症予防剤は、人又は動物に直接投与若しくは摂取させても良いし、又は飲食品若しくは動物用飼料に添加する等して間接的に投与又は摂取させても良い。後者の場合、炎症予防剤の添加対象である飲食品としては、パン類、麺類、タブレット、キャンディー等の菓子類、清涼飲料、ジュース、栄養ドリンク等の飲料等が挙げられるが、これらに限定されるものではなく、また、炎症予防剤の飲食品又は動物用飼料への添加時期も、特に制限されるものではなく、飲食品又は動物用飼料の製造工程中に添加しても良く、製造された飲食品又は動物用飼料に添加しても良い。
【００３７】
本発明の炎症予防剤は、特に、高脂肪食に添加して人又は動物に摂取させるのが効果的である。高脂肪食としては、例えば、動物用飼料として販売されているＤ１２４９２（脂肪含量３０質量％、リサーチダイエット社製）が挙げられる。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例及び試験例を挙げて、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例及び試験例により制限されるものではない。
【００３９】
〔実施例〕
下記＜抽出精製法＞により、小麦ふすま（イネ科植物種子）から特定アルキルレゾルシノール混合物を得、これを炎症予防剤とした。小麦ふすまから得られた特定アルキルレゾルシノール混合物（実施例の炎症予防剤）の組成は次の通り。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）１．２質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）１０．９質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）３３．９質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）４６．４質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）７．５質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）０．１質量％。
【００４０】
＜抽出精製法＞
小麦ふすまに質量で５倍量のエタノールを添加して、６００ｒｐｍ、室温の条件で、１６時間撹拌抽出した。抽出物を濾過して不要物を除きエタノール抽出液を回収した後、エタノールを留去し、小麦ふすま（イネ科植物種子）のエタノール抽出物を得た。次いで、このエタノール抽出物を中圧クロマトグラフィーによって精製した。中圧クロマトグラフィー条件は下記の通りである。溶出開始後３１〜３６分に出現するピーク成分を回収して、溶媒留去し、目的とする特定アルキルレゾルシノール混合物を得た。
（中圧クロマトグラフィーの条件）
・カラム：シリカゲル（インジェクトカラム３Ｌ、ハイフラッシュカラム５Ｌ、６０Å、４０μｍ、山善株式会社製）
・移動相：ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒（体積比）＝９０／１０にて９分、８０／２０にて１５分、６０／４０にて１６分
・検出波長：２５４ｎｍ
【００４１】
尚、上記＜抽出精製法＞におけるエタノール抽出物の精製は、中圧クロマトグラフィーに代えて、ＨＰＬＣによって行うこともできる。その場合、エタノール抽出物にメタノールを添加して該エタノール抽出物の濃度が２００ｕｇ／ｍｌのメタノール添加液を調製し、該メタノール添加液を、孔径０．４５μｍのフィルターを通過させ、その通過分を、ＨＰＬＣの試料とする。ＨＰＬＣの条件は下記の通り。
（ＨＰＬＣの条件）
・カラム：シリカゲル（ＯＤＳ−８０Ａ、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ、ジーエルサイエンス株式会社製）
・ガードカラム：ＯＤＳ−８０Ａ、５μｍ、４．６×５０ｍｍ、
・カラム温度：３０℃
・移動相：メタノール１００％
・検出波長：２１５ｎｍ
【００４２】
〔試験例〕
実施例の炎症予防剤について、下記試験により、高脂肪食負荷マウスの体内での炎症性疾患への影響を調べた。その結果を図１〜図５に示す。図１〜図５中、「コントロール」は、普通食を摂餌したマウス群、「高脂肪食」は、高脂肪食を摂餌したマウス群、「ＡＲｓ」は、実施例の炎症予防剤（特定アルキルレゾルシノール混合物）が添加された高脂肪食を摂餌したマウス群である。尚、図１〜図４において、＊＊（アスタリスクが２つ）は、コントロールと高脂肪食との間における有意差が、有意水準ｐ＜０．０１で認められたことを示し、＊（アスタリスクが１つ）は、該有意差が、有意水準ｐ＜０．０５で認められたことを示す。また、＋＋（プラスが２つ）は、ＡＲｓと高脂肪食との間における有意差が、有意水準ｐ＜０．０１で認められたことを示し、＋（プラスが１つ）は、該有意差が、有意水準ｐ＜０．０５で認められたことを示す。
【００４３】
＜血中遊離脂肪酸低下作用及び炎症性サイトカイン発現抑制作用の確認試験＞
MCP-1は単球・リンパ球の遊走を引き起こすケモカインであり、脂肪組織へのマクロファージの浸潤を誘導している。脂肪組織へ浸潤したマクロファージがTNF-αを産生し、それが脂肪細胞に作用すると、遊離脂肪酸の過剰な放出が誘導される。誘導された遊離脂肪酸がマクロファージに浸潤すると、TNF-α産生を更に亢進する。このようにMCP-1とTNF-αと遊離脂肪酸とによって形成される、脂肪組織とマクロファージとの相互作用（パラクリン調節系）が悪循環を形成し、慢性炎症が発症する。その結果、IL-6やIL-1βといった炎症性サイトカインが脂肪組織から産生され、血液に入って全身に送られる。これらが動脈硬化やがんを誘導するリスクを増強させている。炎症予防剤の摂取が脂肪組織の慢性炎症に与える影響を確認するために、実験用マウスを複数匹用い、これらを普通食摂取群と、高脂肪食摂取群と、高脂肪＋炎症予防剤摂取群との３群に分け、各群の血中遊離脂肪酸量、及び炎症性サイトカインの遺伝子発現量（MCP-1量、IL-6量、IL-1β量及びTNF-α量）をそれぞれ測定した。確認試験のより具体的な手順は次の通り。
【００４４】
固形飼料として、普通食としてＤ１２４５０Ｂ（リサーチダイエット社製）、高脂肪食としてＤ１２４９２（リサーチダイエット社製）を用意し、また別途、高脂肪食であるＤ１２４９２に実施例の炎症予防剤（特定アルキルレゾルシノール混合物）を０．４質量％添加したもの（ＡＲｓ添加高脂肪食）を用意し、これらを滅菌した。C57BL/6系統のマウス（１６週齢の雄性、日本エスエルシー株式会社）を明期１２時間、暗期１２時間の明暗サイクル下（0:00点灯、12:00消灯）で３週間馴化飼育した後、これらのマウスを普通食摂餌群（６ケージ）と、高脂肪食摂餌群（６ケージ）と、ＡＲｓ添加高脂肪食摂餌群（６ケージ）との３群に分け、３週間自由摂食させた。自由摂食期間終了後、マウスを解剖し、血液及び精巣周辺の脂肪組織をサンプリングし、血中遊離脂肪酸量並びにMCP-1量、IL-6量、IL-1β量及びTNF-α量をそれぞれ測定した。血中遊離脂肪酸量の測定は、Free Fatty Acid Quantification Kit（BioVision K612-100）を用い、プロトコール通りに実施した。MCP-1、IL-6、IL-1β及びTNF-α量の遺伝子発現解析は下記解析法により行った。
【００４５】
＜MCP-1、IL-6、IL-1β及びTNF-αの遺伝子発現解析法＞
１．RNA抽出：精巣周辺脂肪組織を100mg測り、RNeasy Lipid Tissue MiniKit (Qiagen 74804)及びRNase-Free DNase set (Qiagen 79254) を用い、プロトコール通りにRNAを抽出した。Nano Drop ND-1000（Thermo Fisher Scientific）を用いて吸光度の測定を行い、260/280が2.0未満若しくは260/230が1.5未満のサンプルは、RNeasy MinElute Cleanup Kit (Qiagen 74204)を使用して精製を行った。
２．逆転写反応：こうして抽出したRNAを鋳型に、サーマルサイクラーを用いて、「３０℃１０分→４２℃４０分→９９℃５分」の条件で逆転写反応を行い、cDNA合成反応液を作成した。逆転写反応の反応条件を下記表１に示す。
３．ＰＣＲ反応：このcDNA合成反応液を用い、リアルタイムPCR機（7900HT：Applied Biosystems）を使用して、「５０℃、２分→９５℃、１０分→〔９５℃、１５秒→６０℃、１分〕×４５サイクル」の条件で遺伝子発現解析を行った（N=3）。ＰＣＲ反応の反応条件を下記表２に示す。プライマーは以下の配列のβ-Actinを用いた。そして、β-Actinと標的遺伝子のスレッシュホールドライン（0.256）でのCt値とを算出して次式に当てはめ、標的遺伝子（MCP-1、IL-6、IL-1β及びTNF-α）の発現量を算出した。
相対的遺伝子発現量＝2^（β-ActinのCt値−標的遺伝子のCt値）
【００４６】
・β-Actin：
Forward 5'-CGTCATTGCACGAAGACACAA-3'
Reverse 5'-CCTGGTCCACCATTTTAAGGC-3'
・MCP-1(monocytechemoattractant protein-1) ：
Forward 5'-CCACTCACCTGCTGCTACTCAT-3'
Reverse 5'-TGGTGATCCTCTTGTAGCTCTCC-3'
・IL-6(interleukin-6)：
Forward 5'-ACAACCACGGCCTTCCCTACTT-3'
Reverse 5'-CACGATTTCCCAGAGAACATGTG-3'
・IL-1β(interleukin-1β)：
Forward 5'-CACAGGAGCAACGACAAAATACCTGTG-3'
Reverse 5'-TCTTCTTTGGGTATTGCTTGG-3'
・TNF-α(tumor necreosis factor-α)：
Forward 5'-ACCCTCACACTCAGATCATCTTC-3'
Reverse 5'-TGGTGGTTTGCTACGACGT-3'
【００４７】
【表１】
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【００４８】
【表２】
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【００４９】
図１から明らかなように、高脂肪食摂餌群は、普通食摂餌群（コントロール）に比べて、血中遊離脂肪酸量が有意に増加しており、このことから、高脂肪食の摂取が、血中遊離脂肪酸量の増加を促進し、遊離脂肪酸が脂肪以外の組織でも炎症シグナルを活性化し、これに起因する炎症性疾患（例えば慢性の炎症性疾患である動脈硬化）を引き起こす原因となることが明らかである。しかし、このような炎症性疾患の原因となり得る高脂肪食に実施例の炎症予防剤を所定量添加した飼料を摂餌した群（ＡＲｓ）は、高脂肪食摂餌群に比べて血中遊離脂肪酸量が少なく、コントロールのそれと略同レベルであった。これにより、実施例の炎症予防剤による血中遊離脂肪酸低下作用が確認され、該炎症予防剤により、他の臓器での炎症シグナルの活性化が予防された。
【００５０】
また、図２及び図３から明らかなように、高脂肪食摂餌群は、普通食摂餌群（コントロール）に比べて、炎症性サイトカインであるMCP-1及びIL-6の発現量が有意に増加しており、このことから、高脂肪食の摂取が、炎症性サイトカイン発現を上昇させ、炎症性サイトカインが脂肪以外の組織でも炎症シグナルを活性化し、これに起因する炎症性疾患を引き起こす原因となることが明らかである。しかし、ＡＲｓは、高脂肪食摂餌群に比べて炎症性サイトカイン発現量が少なく、コントロールのそれと略同レベルであった。これにより、実施例の炎症予防剤による炎症性サイトカイン発現抑制作用が確認され、該炎症予防剤により、他の臓器での炎症シグナルの活性化が予防された。また、IL-1β及びTNF-αにおいては統計的な有意差は得られなかったものの、図４及び図５から明らかなように、同じく炎症性サイトカインであるMCP-1及びIL-6と同じ挙動を示した。
【００５１】
尚、実施例の炎症予防剤について、下記解析法により、アディポネクチン分泌促進作用の有無を調べた。その結果を図６に示す。図６中の「コントロール」、「高脂肪食」及び「ＡＲｓ」はそれぞれ上記の通りである。図６から明らかなように、３つの群の間でアディポネクチン分泌量に有意な差は見られず、このことから、実施例の炎症予防剤はアディポネクチン分泌促進作用を有しておらず、特許文献１に記載の如きアディポネクチン分泌促進剤とは作用効果が異なるものであることが明らかである。
【００５２】
＜アディポネクチンの遺伝子発現解析法＞
上記＜MCP-1、IL-6、IL-1β及びTNF-αの遺伝子発現解析法＞と同様に、RNA抽出、逆転写反応及びＰＣＲ反応を順次実施し、標的遺伝子（Adpn）の発現量を算出した。
・β-Actin：
Forward 5'-CGTCATTGCACGAAGACACAA-3'
Reverse 5'-CCTGGTCCACCATTTTAAGGC-3'
・Adpn（Adiponectin）：
Forward 5'-ATGGCAGAGATGGCACTCCT-3'
Reverse 5'-CCTTCAGCTCCTGTCATTCCA-3'
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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