(57)【要約】      （修正有）【課題】ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２（ＡＬＤＨ２）活性のモジュレーターとして機能する化合物、および該化合物を含む薬剤組成物の提供。【解決手段】式１で表される化合物、又はそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、或いは誘導体。2015061836.tif 000041［Ｒ１〜Ｒ３は各々独立に、Ｈ、ハロゲン原子、置換／非置換のフェニル基、脂肪族基、アルキル基、置換アルキル基、置換／非置換のヘテロ環基、置換／非置換のアリール基及び置換／非置換のヘテロアリール基；ＡはＣ又はＳ；Ａ＝Ｃである場合はａ＝１、Ａ＝Ｓである場合はａ＝２；Ａｒ１及びＡｒ２は置換／非置換のアリール基］【選択図】図１２
2015061836.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2015061836.tif 000040
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のそれぞれは、Ｈ；ハロ；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択され；
ＡはＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２であり；
Ａｒ１およびＡｒ２は、置換または非置換のアリール基から独立して選択される］
で表される化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２００７年３月８日出願の米国仮特許出願第６０／９０５，９６３号の利益を主張し、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている。
連邦支援の研究に関する記述
国立衛生研究所から授与された助成金番号ＡＡ１１１４７号に準じて、米国政府は本発明において特定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００２】
血液および酸素が欠乏した組織は、不可逆的な臓器障害の可能性を伴った虚血性壊死または梗塞を起こす。手術中などの一部の状況下では、一部の臓器の虚血をもたらす血流の中断が不可避である。さらに、固形腫瘍の場合は、血流を中断させて実際に虚血を誘発させることが望ましい。臓器または組織への血液および酸素の流れが回復した後（再灌流）、臓器はすぐに虚血前のその正常な状態に戻るわけではない。例えば、虚血性心筋症の場合、再灌流した虚血後の非壊死心筋は収縮性が乏しく、また、高エネルギーヌクレオチドの濃度が低く、細胞内オルガネラ機能が抑制されており、ゆっくりとしか回復しない膜損傷を有する。
【０００３】
ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２（ＡＬＤＨ２）は核ゲノム内にコードされており、ミトコンドリア内へと輸送される。ＡＬＤＨ２は、それぞれが５００個のアミノ酸残基からなる４つの同一のサブユニットからなる四量体タンパク質である。この四量体は、二量体の二量体とみなすことができる。二量体を形成する単量体間の境界面は、四量体を形成する２つの二量体間の境界面とは異なっており、より大規模である。それぞれのサブユニットは、３つの主ドメイン、すなわち、触媒ドメイン、補酵素またはＮＡＤ＋−結合ドメイン、およびオリゴマー化ドメインからなる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許公開第２００５／０１７１０４３号明細書
【特許文献２】国際公開第ＷＯ２００５／０５７２１３号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｌａｒｓｏｎ他（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：３０５５０；Ｌｉ他（２００６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１６：５０６
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２（ＡＬＤＨ２）活性のモジュレーターとして機能する化合物、および該化合物を含む薬剤組成物を提供する。本発明は、対象化合物、または対象薬剤組成物を投与することを含む治療方法を提供する。本発明はさらに、ＡＬＤＨ２のアゴニストを同定するためのアッセイを提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】ヒトＡＬＤＨ２のアミノ酸配列（配列番号：１）およびヒトＡＬＤＨ２のＥ４８７Ｋ変異体のアミノ酸配列を各々示す図である。
【図２】蛍光アルデヒドデヒドロゲナーゼ酵素アッセイを示す模式図である。
【図３】ヒトＡＬＤＨ２のＥ４８７Ｋ変異体の酵素活性に対する２つの例示的なＡＬＤＨ２アゴニストの効果を示す図である。
【図４】ヒトＡＬＤＨ２のＥ４８７Ｋ変異体の酵素活性に対する２つの例示的なＡＬＤＨ２アゴニストの効果を示す図である。
【図５】例示的なＡＬＤＨ２アゴニストの構造（図５Ａ）、ならびに例示的なＡＬＤＨ２アゴニストのＡＬＤＨ２に対する特異性を示す結果（図５Ｂおよび５Ｃ）を示す図である。
【図６】心筋梗塞のｅｘ  ｖｉｖｏモデルにおける例示的なＡＬＤＨ２アゴニストの効果を示す図である。
【図７】ヒトＡＬＤＨ２のＥ４８７Ｋ変異体に対する様々なＡＬＤＨ２アゴニストの活性を示す図である。
【図８】例示的なＡＬＤＨ２アンタゴニストによるＡＬＤＨ２の阻害を示す図である。
【図９】例示的なＡＬＤＨ２アンタゴニストによるＡＬＤＨ２の阻害を示す図である。
【図１０】例示的なＡＬＤＨ２アンタゴニストによるＡＬＤＨ２の阻害を示す図である。
【図１１】心筋梗塞のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける例示的なＡＬＤＨ２アゴニストの効果を示す図である。
【図１２】ＡＬＤＨ２活性に対する化合物ＢＤＤＢ、ＸＯ−４３、およびＸＯ−４４の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
定義
本明細書中で使用する用語「ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２」すなわち「ＡＬＤＨ２」とは、ＮＡＤ＋依存性の反応で、アルデヒド（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸入、もしくは吸収した化合物から産生されたアルデヒド）をその対応する酸へと酸化する酵素をいう。例えば、ＡＬＤＨ２は、化合物、例えば、摂取、吸収、吸入、または通常の代謝中に産生される毒性化合物の分解から生じるアルデヒドを酸化する。
【０００９】
用語「ＡＬＤＨ２」には、様々な種由来のＡＬＤＨ２が包含される。様々な種由来のＡＬＤＨ２のアミノ酸配列が公的に入手可能である。例えば、ヒトＡＬＤＨ２アミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０２９６７号およびＮＰ＿０００６８１号の下に見つかり、マウスＡＬＤＨ２アミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３３７８６号の下に見つかり、ラットＡＬＤＨ２アミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿１１５７９２号の下に見つかる。本明細書中で使用する用語「ＡＬＤＨ２」にはまた、ＡＬＤＨ２酵素活性を保持する断片、融合タンパク質、および変異体（例えば、１つまたは複数のアミノ酸の置換、付加、欠失、および／または挿入を有する変異体）も包含される。特定の酵素活性のあるＡＬＤＨ２変異体、断片、融合タンパク質などは、本明細書中に記載の方法を適応することによって確認することができる。ＡＬＤＨ２変異体の例は、図１Ｂに示すように（配列番号２のアミノ酸５０４）ヒトＡＬＤＨ２のアミノ酸位置４８７で、またはヒトＡＬＤＨ２のアミノ酸４８７に対応する位置で、ＧｌｕからＬｙｓへの置換を含む、ＡＬＤＨ２ポリペプチドである。この突然変異体は、「Ｅ４８７Ｋ突然変異体」、「Ｅ４８７Ｋ変異体」、または「Ｇｌｕ５０４Ｌｙｓ多型」と呼ぶ。例えば、Ｌａｒｓｏｎ他（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：３０５５０；およびＬｉ他（２００６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１６：５０６を参照されたい。ＡＬＤＨ２変異体は、対応する野生型ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性の少なくとも約１％を保持している。例えば、Ｅ４８７Ｋ変異体は、図１Ａに示すアミノ酸配列（配列番号１）を含む酵素の活性の少なくとも約１％を保持している。
【００１０】
用語「単離した化合物」とは、自然に存在する他の化合物から実質的に分離された、またはそれと比較して濃縮されている化合物を意味する。単離した化合物は、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％純粋、少なくとも約９８重量％純粋、または少なくとも約９９重量％純粋である。本発明は、ジアステレオマー、そのラセミ体および分割された鏡像異性的に純粋な形態、ならびに製薬上許容されるその塩を包含することを意図する。
【００１１】
状態または疾患を「治療すること」またはその「治療」には、（１）状態の少なくとも１つの症状を予防すること、すなわち、疾患に曝されているもしくは罹患しやすくなっている可能性があるが、未だ疾患の症状を経験もしくは示していない哺乳動物において、臨床的症状が顕著に発生しないことをもたらすこと、（２）疾患を阻害すること、すなわち、疾患もしくはその症状の発生を停止または軽減させること、または（３）疾患を緩和すること、すなわち、疾患もしくはその臨床的症状の退行を引き起こすことが含まれる。
【００１２】
「治療有効量」または「有効量」とは、疾患を治療するために哺乳動物または他の対象に投与した場合に、別の薬剤と組み合わせて、または単独で１つもしくは複数の用量で、疾患のそのような治療をもたらすために十分である、化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重篤度、ならびに治療する対象の年齢、重量などに応じて変化する。
【００１３】
用語「対象」、「個体」、および「患者」とは、本明細書中で互換性があるように使用し、本明細書中に記載の製薬学的方法、組成物および治療を必要とし得る任意の哺乳動物または非哺乳動物種のメンバーまたは複数のメンバーをいう。したがって、対象および患者には、それだけには限定されないが、霊長類（ヒトを含む）、イヌ科動物、ネコ科動物、有蹄動物（例えば、ウマ科動物、ウシ、ブタ(swine)（例えば家畜用ブタ(pig)）、トリ、および他の対象が含まれる。ヒトならびに商業的に重要な非ヒト哺乳動物（例えば、家畜および飼いならした動物）が、特に関心を持たれている。
【００１４】
「哺乳動物」とは、任意の哺乳動物種のメンバーまたは複数のメンバーをいい、例として、イヌ科動物、ネコ科動物、ウマ科動物、ウシ、ヒツジ、げっ歯目など、および霊長類、特にヒトが含まれる。非ヒト動物モデル、特に哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ネズミ（例えば、マウス、ラット）、ウサギ目などを、実験的調査に使用し得る。
【００１５】
本明細書中で使用する用語「単位剤形」とは、それぞれの単位が、製薬上許容される希釈剤、担体またはビヒクルに関連して所望の効果を生じるために十分な量で計算した、事前に決定した量の本発明の化合物を含む、ヒトおよび動物対象の単位用量として適した、物理的に別個の単位をいう。本発明の新規単位剤形の規格は、用いる具体的な化合物および達成する効果、ならびに宿主におけるそれぞれの化合物に関連する薬力学に依存する。
【００１６】
用語「生理的条件」とは、生細胞に適合性のある条件、例えば、主に生細胞と適合性のある温度、ｐＨ、塩分などの水性条件を包含することを意図する。
【００１７】
「製薬上許容される賦形剤」、「製薬上許容される希釈剤」、「製薬上許容される担体」、および「製薬上許容されるアジュバント」とは、一般に安全であり、無毒性であり、生物学的にも他の様式でも望ましくないものでない薬剤組成物の調製に有用な、賦形剤、希釈剤、担体、およびアジュバントを意味し、獣医学的使用およびヒトの製薬的使用に許容される賦形剤、希釈剤、担体、およびアジュバントが含まれる。明細書および特許請求の範囲中で使用する「製薬上許容される賦形剤、希釈剤、担体およびアジュバント」には、１つおよび複数のそのような賦形剤、希釈剤、担体、およびアジュバントが含まれる。
【００１８】
本明細書中で使用する「薬剤組成物」とは、哺乳動物、特にヒトなどの対象への投与に適した組成物を包含することを意図する。一般に、「薬剤組成物」は無菌的であり、対象内で望ましくない応答を誘発することができる汚染物質を含まない（例えば、薬剤組成物中の（１つまたは複数の）化合物は製薬グレードである）。薬剤組成物は、経口、頬側、直腸、非経口、腹腔内、皮内、気管内などを含めたいくつかの異なる投与経路を介して、それを必要としている対象または患者に投与するように設計することができる。或る実施形態では、組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）以外の浸透促進剤を用いた、経皮経路による投与に適している。他の実施形態では、薬剤組成物は、経皮投与以外の経路による投与に適している。或る実施形態では、薬剤組成物には、対象化合物および製薬上許容される賦形剤が含まれる。或る実施形態では、製薬上許容される賦形剤はＤＭＳＯ以外である。
【００１９】
本明細書中で使用する本発明の化合物の「製薬上許容される誘導体」には、その塩、エステル、エノールエーテル、エノールエステル、アセタール、ケタール、オルトエステル、ヘミアセタール、ヘミケタール、酸、塩基、溶媒和物、水和物またはプロドラッグが含まれる。そのような誘導体は、そのような誘導体化のための知られている方法を用いて、当業者が容易に調製し得る。生じた化合物は、実質的な毒性効果なしに動物またはヒトに投与し得、製薬上活性があるか、またはプロドラッグである。
【００２０】
化合物の「製薬上許容される塩」とは、製薬上許容され、かつ親化合物の所望の薬理活性を保有する塩を意味する。そのような塩には、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸を用いて形成される酸付加塩；もしくは酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス−（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸を用いて形成される酸付加塩；または（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオンのいずれかによって置き換えられた場合に形成される塩；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基と配位した場合に形成される塩が含まれる。
【００２１】
本発明の化合物の「製薬上許容されるエステル」とは、製薬上許容され、かつ親化合物の所望の薬理活性を保有するエステルを意味し、それだけには限定されないが、それだけには限定されないがカルボン酸、リン酸、ホスフィン酸、スルホン酸、スルフィン酸およびボロン酸を含めた酸性基の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルエステルが含まれる。
【００２２】
本発明の化合物の「製薬上許容されるエノールエーテル」とは、製薬上許容され、かつ親化合物の所望の薬理活性を保有するエノールエーテルを意味し、それだけには限定されないが、式Ｃ＝Ｃ（ＯＲ）の誘導体が含まれる［式中、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキルまたはヘテロシクリルである］。
【００２３】
本発明の化合物の「製薬上許容される溶媒和物または水和物」とは、製薬上許容され、かつ親化合物の所望の薬理活性を保有する溶媒和または水和の複合体を意味し、それだけには限定されないが、本発明の化合物と１つまたは複数の溶媒または水分子、あるいは１〜約１００個、または１〜約１０個、または１〜約２、３もしくは４個の溶媒または水分子との複合体が含まれる。
【００２４】
「プロドラッグ」とは、そのようなプロドラッグを哺乳動物対象に投与した場合に、以下に示す一般式のうちの１つまたは複数に記載の活性親薬物を、ｉｎ  ｖｉｖｏで放出する任意の化合物を意味する。以下に示す一般式のうちの１つまたは複数の化合物のプロドラッグは、修飾がｉｎ  ｖｉｖｏで切断されて親化合物を放出し得るような様式で、一般式の化合物中に存在する官能基を修飾することによって、調製する。プロドラッグには、以下に示す一般式のうちの１つまたは複数中のヒドロキシ、アミノ、またはスルフヒドリル基が、ｉｎ  ｖｉｖｏで切断されてそれぞれ遊離のヒドロキシル、アミノ、またはスルフヒドリル基を再生し得る任意の基と結合している、以下に示す一般式のうちの１つまたは複数の化合物が含まれる。プロドラッグの例には、それだけには限定されないが、以下に示す一般式のうちの１つまたは複数の化合物中のヒドロキシ官能基のエステル（例えば、酢酸、ギ酸、および安息香酸の誘導体）、カルバメート（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニル）などが含まれる。
【００２５】
本明細書中で使用する用語「有機基」および「有機ラジカル」とは、脂肪族基、環状基、芳香族基、その官能化された誘導体および／またはその様々な組合せとして分類される炭化水素基を含めた、任意の炭素含有基を意味する。用語「脂肪族基」とは、飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭化水素基を意味し、例えば、アルキル、アルケニル、およびアルキニル基が包含される。用語「アルキル基」とは、例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヘプチル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−オクチル、ドデシル、オクタデシル、アミル、２−エチルヘキシルなどを含めた、置換または非置換の、飽和の直鎖または分枝鎖状の炭化水素基または鎖（例えば、Ｃ１〜Ｃ８）を意味する。適切な置換基には、カルボキシ、保護されたカルボキシ、アミノ、保護されたアミノ、ハロ、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、ニトロ、シアノ、モノ置換アミノ、保護されたモノ置換アミノ、ジ置換アミノ、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７アシル、Ｃ１〜Ｃ７アシルオキシなどが含まれる。用語「置換アルキル」とは、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、アミノ、保護されたアミノ、シアノ、ハロ、トリフロロメチル、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、またはカルボキシ、アミノ、および／もしくはヒドロキシ塩によって、１〜３回置換された、上記定義したアルキル基を意味する。ヘテロアリール環の置換基と併せて使用した場合、用語「置換（シクロアルキル）アルキル」および「置換シクロアルキル」とは、「置換アルキル」基について記載したものと同じ基で置換された、以下に定義するものである。用語「アルケニル基」とは、１つまたは複数のビニル基などの炭素−炭素二重結合を有する、不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭化水素基を意味する。用語「アルキニル基」とは、１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を有する、不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭化水素基を意味する。用語「環状基」とは、脂環式基、芳香族基、またはヘテロ環基として分類される閉環炭化水素基を意味する。用語「脂環式基」とは、脂肪族基に似ている特性を有する環状炭化水素基を意味する。用語「芳香族基」または「アリール基」とは、単環または多環の芳香族炭化水素基を意味し、１つまたは複数のヘテロ原子が含まれていてもよく、以下にさらに定義する。用語「ヘテロ環基」とは、環中の原子のうちの１つまたは複数が炭素以外の元素（例えば、窒素、酸素、硫黄など）である閉環炭化水素を意味し、以下にさらに定義する。
【００２６】
「有機基」は官能化されているか、または、保護されていても保護されていなくてもよいカルボキシル、アミノ、ヒドロキシルなどの有機基と会合した追加の官能基を他の様式で含んでいてもよい。例えば、語句「アルキル基」には、メチル、エチル、プロピル、ｔ−ブチルなどの純粋に開鎖の飽和炭化水素アルキル置換基だけでなく、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルスルホニル、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシルなどの当分野で知られているさらなる置換基を保有するアルキル置換基も含まれることを意図する。したがって、「アルキル基」には、エーテル、エステル、ハロアルキル、ニトロアルキル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、スルホアルキルなどが含まれる。
【００２７】
用語「ハロ」および「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード基をいう。同一または異なる、１つまたは複数のハロゲンが存在することができる。特に興味深いハロゲンには、クロロおよびブロモ基が含まれる。
【００２８】
用語「ハロアルキル」とは、１つまたは複数のハロゲン原子によって置換された、上記定義したアルキル基をいう。ハロゲン原子は同一または異なっていてよい。用語「ジハロアルキル」とは、同一または異なっていてよい２つのハロ基によって置換された、上述のアルキル基をいう。用語「トリハロアルキル」とは、同一または異なっていてよい３つのハロ基によって置換された、上述のアルキル基をいう。用語「ペルハロアルキル」とは、アルキル基中のそれぞれの水素原子がハロゲン原子によって置き換えられている、上記定義したハロアルキル基をいう。用語「ペルフルオロアルキル」とは、アルキル基中のそれぞれの水素原子がフルオロ基によって置き換えられている、上記定義したハロアルキル基をいう。
【００２９】
用語「シクロアルキル」とは、完全に飽和または部分的に不飽和である、単環、二環、または三環の飽和環を意味する。そのような基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、シス−またはトランスデカリン、ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エン、シクロヘキサ−１−エニル、シクロペント−１−エニル、１，４−シクロオクタジエニルなどが含まれる。
【００３０】
用語「（シクロアルキル）アルキル」とは、上記シクロアルキル環のうちの１つが上記定義したアルキル基を置換していることを意味する。そのような基の例には、（シクロヘキシル）メチル、３−（シクロプロピル）−ｎ−プロピル、５−（シクロペンチル）ヘキシル、６−（アダマンチル）ヘキシルなどが含まれる。
【００３１】
用語「置換フェニル」とは、１つまたは複数の部分、一部の例では、置換または非置換の、ハロゲン、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ１〜Ｃ７アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７アシル、Ｃ１〜Ｃ７アシルオキシ、カルボキシ、オキシカルボキシ、保護されたカルボキシ、カルボキシメチル、保護されたカルボキシメチル、ヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチル、アミノ、保護されたアミノ、（モノ置換）アミノ、保護された（モノ置換）アミノ、（ジ置換）アミノ、カルボキサミド、保護されたカルボキサミド、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）カルボキサミド、保護されたＮ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）カルボキサミド、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）カルボキサミド、トリフルオロメチル、Ｎ−（（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）スルホニル）アミノ、Ｎ−（フェニルスルホニル）アミノまたはフェニルからなる群から選択される、１つ、２つ、または３つの部分で置換したフェニル基を特定し、これにより、例えば、ビフェニルまたはナフチル基が生じる。
【００３２】
用語「置換フェニル」の例には、２、３または４−クロロフェニル、２，６−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、２、３または４−ブロモフェニル、３，４−ジブロモフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニル、２、３または４−フルオロフェニルなどのモノ−またはジ（ハロ）フェニル基；２、３、または４−ヒドロキシフェニル、２，４−ジヒドロキシフェニル、その保護されたヒドロキシ誘導体などのモノまたはジ（ヒドロキシ）フェニル基；２、３、または４−ニトロフェニルなどのニトロフェニル基；シアノフェニル基、例えば、２、３または４−シアノフェニル；２、３、または４−メチルフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２、３または４−（イソプロピル）フェニル、２、３、または４−エチルフェニル、２、３または４−（ｎ−プロピル）フェニルなどのモノ−またはジ（アルキル）フェニル基；モノまたはジ（アルコキシ）フェニル基、例えば、２，６−ジメトキシフェニル、２、３または４−（イソプロポキシ）フェニル、２、３または４−（ｔ−ブトキシ）フェニル、３−エトキシ−４−メトキシフェニルなど；２、３または４−トリフルオロメチルフェニル；２、３もしくは４−カルボキシフェニルまたは２，４−ジ（保護されたカルボキシ）フェニルなどのモノ−もしくはジカルボキシフェニルまたは（保護されたカルボキシ）フェニル基；２、３もしくは４−（保護されたヒドロキシメチル）フェニルまたは３，４−ジ（ヒドロキシメチル）フェニルなどのモノ−もしくはジ（ヒドロキシメチル）フェニルまたは（保護されたヒドロキシメチル）フェニル；２、３もしくは４−（アミノメチル）フェニルまたは２，４−（保護されたアミノメチル）フェニルなどのモノ−もしくはジ（アミノメチル）フェニルまたは（保護されたアミノメチル）フェニル；あるいは２、３または４−（Ｎ−（メチルスルホニルアミノ））フェニルなどのモノ−またはジ（Ｎ−（メチルスルホニルアミノ））フェニルが含まれる。また、用語「置換フェニル」は、置換基が異なるジ置換フェニル基、例えば、３−メチル−４−ヒドロキシフェニル、３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル、２−メトキシ−４−ブロモフェニル、４−エチル−２−ヒドロキシフェニル、３−ヒドロキシ−４−ニトロフェニル、２−ヒドロキシ−４−クロロフェニルなども表す。
【００３３】
用語「（置換フェニル）アルキル」とは、上述のアルキル基のうちの１つと結合した上記置換フェニル基のうちの１つを意味する。例には、２−フェニル−１−クロロエチル、２−（４’−メトキシフェニル）エチル、４−（２’，６’−ジヒドロキシフェニル）ｎ−ヘキシル、２−（５’−シアノ−３’−メトキシフェニル）ｎ−ペンチル、３−（２’，６’−ジメチルフェニル）ｎ−プロピル、４−クロロ−３−アミノベンジル、６−（４’−メトキシフェニル）−３−カルボキシ（ｎ−ヘキシル）、５−（４’−アミノメチルフェニル）−３−（アミノメチル）ｎ−ペンチル、５−フェニル−３−オキソ−ｎ−ペント−１−イル、（４−ヒドロキシナプト−２−イル）メチルなどの基が含まれる。
【００３４】
上述のように、用語「芳香族」または「アリール」とは、６員の環状炭素をいう。また、上述のように、用語「ヘテロアリール」とは、酸素、硫黄および／または窒素原子、特に窒素などの１〜４個のヘテロ原子を、単独でまたは硫黄もしくは酸素環原子と結合して有する、任意選択で置換された５員または６員の環を示す。
【００３５】
さらに、上記任意選択で置換された５員または６員の環は、任意選択で、芳香族の５員または６員の環系と縮合していることができる。例えば、環は、任意選択で、ピリジンまたはトリアゾール系などの芳香族の５員または６員の環系、好ましくはベンゼン環と縮合していることができる。
【００３６】
以下の環系が、用語「ヘテロアリール」によって示されるヘテロ環（置換であれ非置換であれ）基の例である：チエニル、フリル、ピロリル、ピロリジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、チアトリアゾリル、オキサトリアゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサジニル、トリアジニル、チアジアジニルテトラゾロ、１，５−［ｂ］ピリダジニルおよびプリニル、ならびにベンゾ縮合誘導体、例えば、ベンゾオキサゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイミダゾリルおよびインドリル。
【００３７】
上記任意選択で置換されたヘテロアリール環の置換基は、１〜３個のハロ、トリハロメチル、アミノ、保護されたアミノ、アミノ塩、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、カルボキシ、保護されたカルボキシ、カルボン酸塩、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、ヒドロキシ基の塩、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、置換（シクロアルキル）アルキル、フェニル、置換フェニル、フェニルアルキル、および（置換フェニル）アルキルである。ヘテロアリール基の置換基は、本明細書中でここまでに定義したとおりであるか、または、トリハロメチルの場合は、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリブロモメチル、もしくはトリヨードメチルであることができる。ヘテロアリール環の上記置換基と併せて使用した場合、「低級アルコキシ」とはＣ１〜Ｃ４アルコキシ基を意味し、同様に、「低級アルキルチオ」とはＣ１〜Ｃ４アルキルチオ基を意味する。
【００３８】
用語「（モノ置換）アミノ」とは、フェニル、置換フェニル、アルキル、置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アシル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７置換アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル、Ｃ７〜Ｃ１６アルキルアリール、Ｃ７〜Ｃ１６置換アルキルアリールおよびヘテロアリール基からなる群から選択される１個の置換基を有するアミノ基をいう。（モノ置換）アミノは、さらに、用語「保護された（モノ置換）アミノ」に包含されるアミノ保護基を有することができる。用語「（ジ置換）アミノ」とは、フェニル、置換フェニル、アルキル、置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ７アシル、Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル、Ｃ７〜Ｃ１６アルキルアリール、Ｃ７〜Ｃ１６置換アルキルアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される２個の置換基を有するアミノ基をいう。２つの置換基は同一または異なるものであることができる。
【００３９】
用語「ヘテロアリール（アルキル）」とは、任意の位置で上記定義したヘテロアリール基によって置換された、上記定義したアルキル基を示す。
【００４０】
「任意選択の」または「任意選択で」とは、続いて記載する現象、状況、特徴、または要素が起こってもよいが必ずしも起こる必要はないことを意味し、また、記載には、現象または状況が起こる場合およびそれらが起こらない場合が含まれる。例えば、「任意選択でアルキル基でモノまたはジ置換されたヘテロシクロ基」とは、アルキルが存在してもよいが必ずしも存在する必要はないことを意味し、また、記載には、ヘテロシクロ基がアルキル基でモノまたはジ置換されている状況およびヘテロシクロ基がアルキル基で置換されていない状況が含まれる。
【００４１】
同じ分子式を有するが、その原子の結合の性質もしくは順序または空間中のその原子の配置が異なる化合物は、「異性体」と呼ばれる。空間中のその原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、互いに重ね合わせることができないが鏡像であるものは「鏡像異性体」と呼ばれる。化合物が不斉中心を有する場合、例えば、それが４つの異なる基と結合している場合、１対の鏡像異性体が可能である。鏡像異性体はその不斉中心の絶対的立体配置によって特徴づけることができ、カーン（Ｃａｈｎ）およびプレログ（Ｐｒｅｌｏｇ）のＲ−とＳ−の順序付けルールによって記載されるか、または、分子が偏光の平面を回る様式に応じて記載され、右旋性もしくは左旋性（すなわち、それぞれ（＋）もしくは（−）−異性体）と指定される。キラル化合物は、個々の鏡像異性体としてまたはその混合物として存在することができる。鏡像異性体を均等な割合で含む混合物は「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【００４２】
対象化合物は１つまたは複数の不斉中心を保有し得る。したがって、そのような化合物は、個々の（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−立体異性体として、またはその混合物として生成することができる。別段に指摘しない限りは、明細書および特許請求の範囲内の特定の化合物の記載または命名には、個々の鏡像異性体およびラセミであれその他のものであれその混合物がどちらも含まれることを意図する。立体異性体の立体化学を決定する方法およびその分割方法は当分野で周知である（例えば、第４章、「先進的有機化学（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、第４版、Ｊ．Ｍａｒｃｈ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９２年の考察参照）。
【００４３】
本明細書中で使用する「と組み合わせて」とは、例えば、第１の化合物を、第２の化合物の投与の全過程中に投与する使用；第１の化合物を、第２の化合物の投与と重複する期間で投与する使用、例えば、第１の化合物の投与を、第２の化合物を投与する前に開始し、第１の化合物の投与を、第２の化合物の投与が終了する前に終了すること；第２の化合物の投与を、第１の化合物を投与する前に開始し、第２の化合物の投与を、第１の化合物の投与が終了する前に終了すること；第１の化合物の投与を、第２の化合物の投与を開始する前に開始し、第２の化合物の投与を、第１の化合物の投与が終了する前に終了すること；第２の化合物の投与を、第１の化合物の投与を開始する前に開始し、第１の化合物の投与を、第２の化合物の投与が終了する前に終了することをいう。したがって、「組み合わせて」とは、２つ以上の化合物の投与を含むレジメンもいうことができる。また、本明細書中で使用する「と組み合わせて」とは、同一または異なる配合物中で、異なる経路の同一によって、かつ同一または異なる剤形型で投与し得る２つ以上の化合物の投与もいう。
【００４４】
本発明をさらに説明する前に、実施形態は当然ながら変化し得るため、本発明は記載した特定の実施形態に限定されないことを理解されたい。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書中で使用する用語は特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図しないことも理解されたい。
【００４５】
値の範囲を提示した場合は、その間のそれぞれの値は、文脈によりそうでないと明らかに示されている場合以外は下限の単位の１０分の１まで、その範囲の上限および下限とその定めた範囲内の任意の他の定めた値またはその間の値との間で、本発明内に包含されることを理解されたい。これらのより小さな範囲の上限および下限は、そのより小さな範囲内に独立して含まれてもよく、本発明内に包含されるが、但し、定めた範囲内で限界を具体的に排除する場合もある。定めた範囲に限界の一方または双方が含まれる場合は、これらの含まれる限界の一方または双方を排除した範囲も本発明に含まれる。
【００４６】
特に定義しない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の技術者によって一般的に理解される意味と同じ意味を持つ。本明細書中に記載のものと類似または等価の任意の方法および材料も本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料を以下に記載する。本明細書中で言及するすべての出版物は、言及されている出版物と関連した方法および／または材料を開示および説明するために、本明細書中に参考として組み込まれている。
【００４７】
本明細書および添付の特許請求の範囲中で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、文脈によりそうでないと明らかに示されている場合以外は、複数形の指示対象が含まれることも注意されたい。したがって、例えば、「（ａ）ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２アゴニスト（アゴニスト）」への言及には複数のそのようなアゴニストが含まれ、「（ｔｈｅ）薬剤組成物」への言及には１つまたは複数の薬剤組成物および当業者に知られているその等価物への言及が含まれ、他もそうである。さらに、特許請求の範囲は、任意選択の要素をすべて排除するように記載されている場合があることに注意されたい。したがって、本記述は、特許請求の範囲の要素の列挙、または「否定的な」限定の使用に関連した「もっぱら」、「のみ」などの排他的な用語の使用の先行詞として役割を果たすことを意図する。
【００４８】
本明細書中に記載する出版物は、本出願の出願日以前のその開示に関してのみ提供する。本明細書中に記載のものはすべて、先行発明の利点によって本発明がそのような出版物に先行する権利を持たないことを許容するものであると解釈されるべきでない。さらに、提供した出版物の日付は実際の出版日と異なる場合があり、これらは独立して確認する必要がある。
【００４９】
詳細な説明
本発明は、ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２（ＡＬＤＨ２）活性のモジュレーターとして機能する化合物、および該化合物を含む薬剤組成物を提供する。ＡＬＤＨ２のアゴニストは、例えば、虚血性ストレスに関連する状態、慢性のフリーラジカル関連疾患、急性のフリーラジカル関連疾患、ニトログリセリンに対する非感受性（例えば、狭心症および心不全におけるもの）、高血圧、糖尿病、ならびに骨粗鬆症を含めた様々な障害の治療に有用である。ＡＬＤＨ２のアゴニストはまた、エタノール、メタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、ポリ塩化ビニル、異種アルデヒド、および生体アルデヒドなどの化合物の個体内レベルを低下させるためにも有用である。ＡＬＤＨ２のアゴニストはまた、摂取、吸収、または吸入した場合にＡＬＤＨ２のアルデヒド基質を生じさせる化合物の個体内レベルを低下させるためにも有用である。ＡＬＤＨ２のアンタゴニストは、ＡＬＤＨ２アンタゴニストを標準の癌治療のアジュバントとして使用する、癌などの障害を治療するために有用である。ＡＬＤＨ２のアンタゴニストはまた、アルコール依存症を治療するために有用である。ＡＬＤＨ２のアンタゴニストはまた、麻薬嗜癖を治療するために有用である。本発明は、対象化合物、または対象薬剤組成物を投与することを含む治療方法を提供する。本発明はさらに、ＡＬＤＨ２のアゴニストを同定するためのアッセイを提供する。
【００５０】
或る実施形態では、治療する個体はヒトである。或る実施形態では、対象方法に従って治療するヒトは、２つの「野生型」ＡＬＤＨ２対立遺伝子を有するヒトである、例えば、図１Ａに示すように、２つの野生型ＡＬＤＨ２対立遺伝子によってコードされているＡＬＤＨ２は、位置４８７にグルタミン酸を有する。他の実施形態では、対象方法に従って治療するヒトは、１つまたは２つの「ＡＬＤＨ２＊２」対立遺伝子を有するヒトである、例えば、図１Ｂに示すように、一方または両方のＡＬＤＨ２対立遺伝子によってコードされているＡＬＤＨ２は、アミノ酸位置４８７としてリシンを含む。Ｅ４８７Ｋ多型性は半優性の多型性であり、「野生型」ＡＬＤＨ２よりも有意に低い酵素活性を有するＡＬＤＨ２四量体をもたらす。したがって、ＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子に対してヘテロ接合性またはホモ接合性である個体は、「野生型」ＡＬＤＨ２対立遺伝子に対してホモ接合性である個体よりもはるかに低いｉｎ  ｖｉｖｏのＡＬＤＨ２活性レベルを有する。ＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子に対してヘテロ接合性またはホモ接合性である個体は、そのような個体におけるＡＬＤＨ２活性のレベルは特に低く、ＡＬＤＨ２活性レベルのどのような増加も治療効果をもたらすと予測されるため、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療から恩恵を受けると予測される。以下により詳細に記載するように、ＡＬＤＨ２活性のどのような増加も、虚血性障害などの状態の治療、ニトログリセリンに対するそのような個体の応答性の増加などにおいて有益である。
【００５１】
ＡＬＤＨ２活性化剤（アゴニスト）を同定するためのスクリーニング方法におけるＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体などのＡＬＤＨ２変異体の使用も提供する。Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体の酵素活性は「野生型」ＡＬＤＨ２よりも低いため、試験化合物の作用活性の読取値はより高感度である。
【００５２】
ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２のモジュレーター
本発明は、ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２（ＡＬＤＨ２）活性のモジュレーターとして機能する化合物、および該化合物を含む薬剤組成物を提供する。モジュレーターには、アゴニスト（本明細書中で「活性化剤」とも呼ぶ）およびアンタゴニスト（本明細書中で「阻害剤」とも呼ぶ）が含まれる。
【００５３】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２活性を変調する化合物は、ＡＬＤＨ２のデヒドロゲナーゼ活性を変調する、例えば、化合物は、アルデヒド（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸入、もしくは吸収した化合物から産生されたアルデヒド）を対応する酸へと酸化することにおいて、デヒドロゲナーゼ活性を変調する。他の実施形態では、ＡＬＤＨ２活性を変調する化合物は、ＡＬＤＨ２のエステラーゼ活性を変調する。他の実施形態では、ＡＬＤＨ２活性を変調する化合物は、ＡＬＤＨ２のレダクターゼ活性を変調する。例えば、ＡＬＤＨ２は、そのレダクターゼ活性を介してニトログリセリンを一酸化窒素（ＮＯ）へと変換することができる。
【００５４】
上述のように、或る実施形態では、ＡＬＤＨ２活性を変調する化合物は、ＡＬＤＨ２のデヒドロゲナーゼ活性を変調する、例えば、化合物は、アルデヒド（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸入、もしくは吸収した化合物から産生されたアルデヒド）を対応する酸へと酸化することにおいて、デヒドロゲナーゼ活性を変調する。
【００５５】
様々な化合物がＡＬＤＨ２のアルデヒド基質を生じさせることができる。ＡＬＤＨ２のアルデヒド基質を生じさせることができる化合物の非限定的な例には、エタノール、様々な殺虫剤、塩化ビニル（例えばポリ塩化ビニル）などの工業毒、およびピルベートが含まれる。例えば、化合物は哺乳動物によって摂取、吸収（例えば皮膚を介して）、または吸入され、続いて哺乳動物内でＡＬＤＨ２のアルデヒド基質へと変換される。
【００５６】
生体アルデヒドには、哺乳動物によって産生される、例えば、哺乳動物によって代謝的に産生されるアルデヒドが含まれる。生体アルデヒドの非限定的な例には、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）などのω−６多価不飽和脂肪酸；ヘキサナール；アクロレイン；グリオキサール；クロトンアルデヒド；トランス−２−ノネナール；４−オキソ−２−ノネナール；および４−ヒドロキシ−２−ノネナール（ＨＮＥ）（例えば、Ｅｌｌｉｓ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００７）１１５：１３、ＰｉｃｋｌｏおよびＭｏｎｔｉｎｅ（２００７）Ｊ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ．１２：１８５参照）；３−アミノプロパナール（３−ＡＰ）、ポリアミンオキシダーゼの産物；ならびにチロシン、セリンおよびスレオニンのアルデヒド産物（Ｗｏｏｄ他、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ（２００６）１０９５；１９０参照）が含まれる。
【００５７】
異種アルデヒドには、哺乳動物の体外の供給源から、哺乳動物によって摂取、吸収、または吸入されるアルデヒドが含まれる。異種アルデヒドには、例えば、ホルムアルデヒドおよびグルタルアルデヒド（例えば、ＭｃＧｒｅｇｏｒ他、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｏｘｉｃｏｌ（２００６）３６：８２１およびＰａｎｄｅｙ他、Ｈｕｍ  Ｅｘｐ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．（２０００）１９：３６０）；クロロアセトアルデヒド（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ他、Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００７）６３６：１７８参照）；ならびにタバコの煙中に存在する反応性アルデヒド（Ｓｉｍｔｈ他、Ｉｎｈａｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．（２００６）１８：６６７参照）が含まれる。
【００５８】
ミトコンドリアＡＬＤＨ２の基質である化合物の非限定的な例には、３，４−ジヒドロキシフェイルアセトアルデヒド（ＤＯＰＡＬ）；ホルムアルデヒド；アセトアルデヒド；プロピオンアルデヒド；ｎ−ブチルアルデヒド；カプロンアルデヒド；ヘプタアルデヒド；ペンタアルデヒド；オクチルアルデヒド；デシルアルデヒド；レチンアルデヒド；３−ヒドロキシベンズアルデヒド；２，５−ジヒドロキシベンズアルデヒド；フェニルアセトアルデヒド；３−フェニルプロピオンアルデヒド（例えば、Ｗａｎｔ他（２００２）Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ３０：６９参照）；シンナモイルおよびヒドロシンナモイルアルデヒドならびにその誘導体アルデヒド（例えばｐ−ニトロシンナムアルデヒド、ｐ−（ジメチルアミノ）シンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、α−フェニルプロピオンアルデヒド）；ベンズアルデヒドおよびその誘導体アルデヒド（例えば、２，４−ジニトロ−ベンズアルデヒド、ｏ−ニトロ−ベンズアルデヒド、ｐ−ニトロ−ベンズアルデヒド、ｐ−メチル−ベンズアルデヒド、ｍ−メチル−ベンズアルデヒド、ｐ−メトキシ−ベンズアルデヒド、ｐ−（ジメチルアミノ）−ベンズアルデヒド、ｍ−メトキシ−ベンズアルデヒド、ｍ−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド、３，４−ジメトキシ−ベンズアルデヒド、ｏ−メトキシ−ベンズアルデヒド）；ナフトアルデヒドおよびその誘導体アルデヒド（例えば、５−ブロモ−１−ナフトアルデヒド、５−ニトロ−１−ナフトアルデヒド、６−［Ｏ−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ］−２−ナフトアルデヒド、６−（ジメチルアミノ）−２−ナフトアルデヒド）；クマリン−４−カルボキシアルデヒドおよびその誘導体アルデヒド（例えば、７−アセトキシ−クマリン−４−カルボキシアルデヒド、７−（ジメチルアミノ）−クマリン−４−カルボキシアルデヒド、７−メトキシ−クマリン−４−カルボキシアルデヒド、６，７−ジメトキシ−クマリン−４−カルボキシアルデヒド）；キノリン、キノリノンカルボキシアルデヒド、およびその誘導体アルデヒド（例えば、キノリン−３−カルボキシアルデヒド、７−（ジメチルアミノ）−２−キノリノン−４−カルボキシアルデヒド、キノリン−４−カルボキシアルデヒド、６−メトキシ−２−キノリノン−４−カルボキシアルデヒド）；フェナントレン−９−カルボキシアルデヒド；インドール−３−アルデヒド、インドール−３−アクトアルデヒド；５−メトキシインドール−３−カルボキシアルデヒド；３−ピリジンカルボキシアルデヒド；フルオレン−２−カルボキシアルデヒド（例えば、Ｋｌｙｏｓｏｖ、（１９９６）、Ｂｉｏｃｈｅｍｓｔｒｙ３５：４４５７参照）；４−ヒドロキシノネナール；マロンジアルデヒド；３，４−ジヒドロキシフェニルアセトアルデヒド；ならびに５−ヒドロキシルインドール−３−アセトアルデヒドが含まれる。また、例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ他（２００５）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７７：３３８３；Ｍａｒｃｈｉｔｔｉ他（２００７）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．５９：１２５；ならびにＨｏｆｆｍａｎおよびＭａｓｅｒ（２００７）Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｖ．３９：８７も参照されたい。
【００５９】
ＡＬＤＨ２アゴニスト
本発明は、ＡＬＤＨ２アゴニスト（「活性化剤」とも呼ばれる）、およびＡＬＤＨ２アゴニストを含む薬剤組成物を提供する。ＡＬＤＨ２のアゴニストは、例えば、虚血性ストレスに関連する状態、慢性のフリーラジカル関連疾患、急性のフリーラジカル関連疾患、ニトログリセリンに対する非感受性（例えば、狭心症および心不全におけるもの）、高血圧、糖尿病、ならびに骨粗鬆症を含めた様々な障害の治療に有用である。アゴニストはまた、アルコール乱用、メタノール中毒、エチレングリコールモノメチルエーテル中毒、および他の異種または生体アルデヒド化合物による中毒の解毒にも有用である。
【００６０】
ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６１】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性（例えば、アルデヒド（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸入、もしくは吸収した化合物から産生されたアルデヒド）を対応する酸へと酸化することにおけるデヒドロゲナーゼ活性）を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６２】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６３】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６４】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６５】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性（例えば、アルデヒド（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸入、もしくは吸収した化合物から産生されたアルデヒド）を対応する酸へと酸化することにおけるデヒドロゲナーゼ活性）を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６６】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６７】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６８】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００６９】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性（例えば、アルデヒド（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸入、もしくは吸収した化合物から産生されたアルデヒド）を対応する酸へと酸化することにおけるデヒドロゲナーゼ活性）を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００７０】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００７１】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性を、アゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる。
【００７２】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２に対して特異的（例えば選択的）である、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を増加させるが、サイトゾルアルデヒドデヒドロゲナーゼ−１（ＡＬＤＨ１）の同じ酵素活性を実質的に増加させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素の同じ酵素活性を少なくとも約５％以上増加させる濃度で使用した場合に、ＡＬＤＨ１酵素の酵素活性を、増加させる場合は約５％未満、約２％未満、または約１％未満増加させる。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）の酵素活性を実質的に増加させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を少なくとも約５％以上増加させる濃度で使用した場合に、ＡＤＨの酵素活性を、増加させる場合は約５％未満、約２％未満、または約１％未満増加させる。
【００７３】
例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２に対して特異的（例えば選択的）である、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素のデヒドロゲナーゼ活性を増加させるが、サイトゾルアルデヒドデヒドロゲナーゼ−１（ＡＬＤＨ１）のデヒドロゲナーゼ活性を実質的に増加させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素のデヒドロゲナーゼ活性を少なくとも約５％以上増加させる濃度で使用した場合に、ＡＬＤＨ１酵素のデヒドロゲナーゼ活性を、増加させる場合は約５％未満、約２％未満、または約１％未満増加させる。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）のデヒドロゲナーゼ活性を実質的に増加させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素のデヒドロゲナーゼ活性を少なくとも約５％以上増加させる濃度で使用した場合に、ＡＤＨのデヒドロゲナーゼ活性を、増加させる場合は約５％未満、約２％未満、または約１％未満増加させる。
【００７４】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭのＥＣ５０を有する。
【００７５】
例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭの、ミトコンドリアＡＬＤＨ２のデヒドロゲナーゼ活性のＥＣ５０を有する。
【００７６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭの、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのＥＣ５０を有する。
【００７７】
例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭの、配列番号：１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性のＥＣ５０を有する。
【００７８】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭの、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのＥＣ５０を有する。
【００７９】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭの、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性のＥＣ５０を有する。
【００８０】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストはＮ−ベンジル−ベンズアミド化合物である。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す一般式Ｉの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化１】
2015061836.tif 000003
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のそれぞれは、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択される。
【００８１】
ＡはＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２である。
Ａｒ１およびＡｒ２は、置換アリール基、非置換アリール基、置換ヘテロアリール基および非置換ヘテロアリール基から独立して選択される。
【００８２】
例えば、或る実施形態では、式ＩのＡｒ１およびＡｒ２は、独立して、
【化２】
2015061836.tif 000004
である［式中、Ｒ４〜Ｒ８はそれぞれ、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択される］。他の実施形態では、式ＩのＡｒ１およびＡｒ２は、独立して、置換または非置換のヘテロ環基、例えば、置換または非置換のピリジン、チアゾール、イミダゾール、チオフェン、キノリン、イソキノリン、またはフラン基である。
【００８３】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストはＮ−ベンジル−ベンズアミド化合物である。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す一般式ＩＩの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化３】
2015061836.tif 000005
式中、ＸｎおよびＸｙはそれぞれ、独立して、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはハロゲン（例えば、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ、もしくはＩ）であり；ｎは整数０または１であり；ｙは整数０または１である。
・・・（点線）は任意選択の結合であり；ｚは整数０、１、または２である。
ＡはＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２である。
Ａｒは非置換もしくは置換のアリール基、置換ヘテロアリール基、または非置換ヘテロアリール基である。
Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択される。
【００８４】
例えば、或る実施形態では、式ＩＩのＡｒは、
【化４】
2015061836.tif 000006
である。式中、Ｒ４〜Ｒ８はそれぞれ、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択される。或る実施形態では、Ｒ４およびＲ８はメチル基であり、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はＨである。或る実施形態では、Ｒ４およびＲ８はハロゲン基（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）であり、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はＨである。
【００８５】
他の実施形態では、式ＩＩのＡｒは、置換または非置換のヘテロ環基、例えば、置換または非置換のピリジン、チアゾール、イミダゾール、チオフェン、キノリン、イソキノリン、またはフラン基である。或る実施形態では、式ＩＩのＡｒは、置換ピリジニル基、例えば、ジハロゲノ置換ピリジニル基である。
【００８６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す一般式Ｉａの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化５】
2015061836.tif 000007
式中、ＸｎおよびＸｙはそれぞれ、独立して、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはハロゲン（例えば、Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ、もしくはＩ）である。
・・・（点線）は任意選択の結合である。
ｚは整数０、１、または２であり、但し、１）Ｘ＝ハロゲンであり、・・・が結合でない場合、ｚ＝０であり；２）ｚ＝０であり、Ｘ＝Ｏであり、・・・は結合ではなく、１つまたは複数の酸素原子（Ｘ）が存在する場合、酸素はメチル基と結合している。
ｎは整数０または１である。
ｙは整数０または１である。
Ａ＝ＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２である。
Ａｒはフェニルまたはチオフェン環であり；Ａｒは、カルボニルまたはスルホニル基に対してオルトの位置で、メチル、ハロ、トリフルオロメチル、またはフェニルから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されており；Ａｒは、カルボニルまたはスルホニル基に対してメタまたはパラのハロゲンによって任意選択で置換されており；Ａｒがチオフェン環である場合、カルボニルまたはスルホニル基は、２または３位でチオフェン環と結合している。
【００８７】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物１の構造を有する。
【化６】
2015061836.tif 000008
化合物１：（Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２，６−ジクロロベンズアミド）
【００８８】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物２の構造を有する。
【化７】
2015061836.tif 000009
化合物２：（Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２，６−ジフルオロベンズアミド）
【００８９】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物３の構造を有する。
【化８】
2015061836.tif 000010
化合物３：（Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２−ブロモベンズアミド）
或る実施形態では、化合物１、化合物２、および化合物３のうちの１つまたは複数が特に除外される。
【００９０】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物４の構造を有する。
【化９】
2015061836.tif 000011
化合物４：（Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２−ヨードベンズアミド）
【００９１】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示すＸＯ−３、ＸＯ−４、ＸＯ−５、ＸＯ−９、ＸＯ−２８、ＸＯ−２９、ＸＯ−３３、ＸＯ−３６、ＸＯ−３９、ＸＯ−１２、ＸＯ−１３、ＸＯ−６、ＸＯ−７、ＸＯ−８、ＸＯ−１１、ＸＯ−２２、ＸＯ−２５、およびＸＯ−２６と命名された化合物のうちの１つの構造を有する。
【化１０】
2015061836.tif 000012
【化１１】
2015061836.tif 000013
【００９２】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物ＸＯ−４３の構造を有する。
【化１２】
2015061836.tif 000014
【００９３】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物ＸＯ−４４の構造を有する。
【化１３】
2015061836.tif 000015
【００９４】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物ＸＯ−４５の構造を有する。
【化１４】
2015061836.tif 000016
【００９５】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、以下に示す化合物ＸＯ−４６の構造を有する。
【化１５】
2015061836.tif 000017
【００９６】
化合物がＡＬＤＨ２アゴニストであるかどうかは容易に確認することができる。ＡＬＤＨ２のデヒドロゲナーゼ活性のアッセイは当分野で知られており、任意の既知のアッセイを使用することができる。デヒドロゲナーゼアッセイの例は、例えば、Ｓｈｅｉｋｈ他（（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１８８１７〜１８８２２）；ＶａｌｌａｒｉおよびＰｉｅｔｒｕｓｚｋｏ（１９８４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９：４９２２；ならびにＦａｒｒｅｓ他（（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１３８５４〜１３８６０）を含めた様々な出版物中に見出される。
【００９７】
デヒドロゲナーゼ活性のアッセイの例として、ＡＬＤＨ２を、２５℃で、５０ｍＭのピロリン酸ナトリウムＨＣｌ緩衝液、ｐＨ９．０、１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４、または５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４中でアッセイし、但し、緩衝液には、ＮＡＤ＋（例えば、０．８ｍＭのＮＡＤ＋、またはそれより高いもの、例えば、１ｍＭ、２ｍＭ、または５ｍＭのＮＡＤ＋）および１４μＭのプロピオンアルデヒドなどのアルデヒド基質が含まれる。ＮＡＤ＋の還元を、分光光度計を用いて３４０ｎｍで、または蛍光微小光度計を用いた蛍光増加によって監視する。酵素活性は、標準の分光光度方法を用いて、例えば、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、かつ図２に模式図を示すように、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）の酸化形態からその還元形態ＮＡＤＨの還元反応を３４０ｎｍで測定することによって、アッセイすることができる。例示的なアッセイでは、反応は、２５℃で、０．１のＮａＰＰｉ緩衝液、ｐＨ９．５、２．４ｍＭのＮＡＤ＋および基質として１０ｍＭのアセトアルデヒド中で実施する。酵素活性は、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、ＮＡＤ＋からＮＡＤＨへの還元反応によって３４０ｎｍで測定する。あるいは、ＮＡＤＨの生成を、ＮＡＤＨを消費し、検出可能なシグナルを提供する別の酵素反応と連結させることができる。そのような酵素反応の例は、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、かつ図２に模式図を示すように、リザズリンをその酸化した蛍光化合物レゾルフィンへと還元する、ジアフォラーゼに基づいた反応である。蛍光レゾルフィンを５９０ｎｍで検出することにより、ＡＬＤＨ２酵素活性の任意の変化のための、増幅されたより高感度のシグナルがもたらされる。
【００９８】
化合物がＡＬＤＨ２のエステラーゼ活性を増加させるかどうかは、エステラーゼ活性の任意の既知のアッセイを用いて決定することができる。例えば、ＡＬＤＨ２のエステラーゼ活性は、ｐ−ニトロフェノールの形成速度を４００ｎｍで、２５ｍＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）（ｐＨ７．５）中で、８００μＭのｐ−酢酸ニトロフェニルを基質として、室温で、ＮＡＤ＋を加えてまたは加えずに監視することによって、決定することができる。ニトロフェノールの４００ｎｍでのｐＨ依存性モル吸光係数である１６ｍＭ−１ｃｍ−１を使用することができる。例えば、Ｌａｒｓｏｎ他（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１２９４０）を参照されたい。ＡＬＤＨ２のエステラーゼ活性は、ｐ−ニトロフェノールの形成速度を、４００ｎｍで、５０ｍＭのＰｉｐｅｓ（ｐＨ７．４）中で、１ｍＭのｐ−酢酸ニトロフェニル酢酸を基質として用いて測定することによって、決定することができる。ｐ−ニトロフェノラートの４００ｎｍでのモル吸光係数である１８．３×１０３Ｍ−１ｃｍ−１を、その形成速度の計算に使用することができる。例えば、Ｈｏ他（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４４：８０２２）を参照されたい。
【００９９】
化合物がＡＬＤＨ２のレダクターゼ活性を増加させるかどうかは、レダクターゼ活性の任意の既知のアッセイを用いて決定することができる。ＡＬＤＨ２のレダクターゼ活性は、二硝酸１，２−グリセリルおよび二硝酸１，３−グリセリルの形成速度を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）または液体シンチレーション分光測定方法を用いて、放射標識した基質を使用して測定することによって、決定することができる。例えば、０．１ｍＭまたは１ｍＭのＧＴＮ（三硝酸グリセリル）を、１００ｍＭのＫＰｉ（ｐＨ７．５）、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮＡＤＨ、１ｍＭのＮＡＤＰＨを含むアッセイ混合物（１ｍｌ）と共に、ＡＬＤＨ２の存在下でインキュベーションする。３７℃で約１０分間〜約３０分間インキュベーションした後、反応を停止させ、ＧＴＮおよびその代謝物を３×４ｍｌのエーテルで抽出し、プールし、溶媒を窒素流によって蒸発させる。最終体積は、続くＴＬＣ分離およびシンチレーション計数のためにエタノール中に１００ｍｌ未満に保つ。例えば、ＺｈａｎｇおよびＳｔａｍｌｅｒ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９９：８３０６を参照されたい。
【０１００】
化合物がＡＬＤＨ２の酵素活性を増加させるかどうかを決定する別の方法は、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体を使用して、以下により詳細に記載する。
【０１０１】
ＡＬＤＨ２アンタゴニスト
本発明は、ＡＬＤＨ２アンタゴニスト（「ＡＬＤＨ２阻害剤」とも呼ぶ）、およびＡＬＤＨ２アンタゴニストを含む薬剤組成物を提供する。或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、アルコール嗜癖を治療するために有用である。他の実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、癌化学療法剤に対する癌細胞の感度を増加させる。したがって、或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、癌の治療における標準の癌治療のアジュバントとして有用である。
【０１０２】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０３】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０４】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０５】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０６】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０７】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０８】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのエステラーゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１０９】
或る実施形態では、ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性を、アンタゴニストが存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドのレダクターゼ活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低下させる。
【０１１０】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２に対して特異的（例えば選択的）である、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を低下させるが、サイトゾルアルデヒドデヒドロゲナーゼ−１（ＡＬＤＨ１）の酵素活性を実質的に低下させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を少なくとも約１０％以上低下させる濃度で使用した場合に、ＡＬＤＨ１酵素の酵素活性を、低下させる場合は約１０％未満、約５％未満、約２％未満、または約１％未満低下させる。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）の酵素活性を実質的に低下させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を少なくとも約１０％以上低下させる濃度で使用した場合に、ＡＤＨの酵素活性を、低下させる場合は約１０％未満、約５％未満、約２％未満、または約１％未満低下させる。
【０１１１】
例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２に対して特異的（例えば選択的）である、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素のデヒドロゲナーゼ活性を低下させるが、サイトゾルアルデヒドデヒドロゲナーゼ−１（ＡＬＤＨ１）のデヒドロゲナーゼ活性を実質的に低下させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素のデヒドロゲナーゼ活性を少なくとも約１０％以上低下させる濃度で使用した場合に、ＡＬＤＨ１酵素のデヒドロゲナーゼ活性を、低下させる場合は約１０％未満、約５％未満、約２％未満、または約１％未満低下させる。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）のデヒドロゲナーゼ活性を実質的に低下させない、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、ＡＬＤＨ２酵素のデヒドロゲナーゼ活性を少なくとも約１０％以上低下させる濃度で使用した場合に、ＡＤＨのデヒドロゲナーゼ活性を、低下させる場合は約１０％未満、約５％未満、約２％未満、または約１％未満低下させる。
【０１１２】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは５０μＭ未満のＩＣ５０を有する、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは約５０μＭ〜約５ｎｍ、または５ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、約５０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約３０ｎＭ、約３０ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約２０ｎＭ、約２０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５ｎＭ、または約５ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【０１１３】
例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは５０μＭ未満のＩＣ５０を有する、例えば、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは約５０μＭ〜約５ｎｍ、または５ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、約５０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約３０ｎＭ、約３０ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約２０ｎＭ、約２０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５ｎＭ、または約５ｎＭ未満の、ミトコンドリアＡＬＤＨ２のデヒドロゲナーゼ活性のＩＣ５０を有する。
【０１１４】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約５０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約３０ｎＭ、約３０ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約２０ｎＭ、約２０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５ｎＭ、または約５ｎＭ未満の、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのＩＣ５０を有する。
【０１１５】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、約５０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約３０ｎＭ、約３０ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約２０ｎＭ、約２０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５ｎＭ、または約５ｎＭ未満の、配列番号１（図１Ａに示す）に記載の、または配列番号１のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドのデヒドロゲナーゼ活性のＩＣ５０を有する。
【０１１６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す一般式ＩＩＩの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化１６】
2015061836.tif 000018
式中、Ａｒは非置換または置換のフェニル基であり；
ｎ＝０、１、２、または３であり；
Ａ＝ＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ；ハロ；置換または非置換のフェニル基；アミド、脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基である。
【０１１７】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す一般式ＩＶの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化１７】
2015061836.tif 000019
式中、Ａｒは、置換または非置換のフェニルまたはピリジル基であり；
Ｒ１は、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；置換または非置換のフェニル基；アミド、脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から選択される。
【０１１８】
或る実施形態では、式ＩＶのＲ１は、
【化１８】
2015061836.tif 000020
［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５のそれぞれは、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；アミド；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択される］から選択される。
【０１１９】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す一般式Ｖの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化１９】
2015061836.tif 000021
式中、ｎは０〜２０の整数（例えば、０、１、２、２、３、４、５〜１０、１０〜１５、または１５〜２０）であり；
Ａｒは、非置換または置換のフェニル、ナフチル、またはピリジルであり；
Ｒ１は、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；アミド；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基であり；
Ｚは、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；アミド；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基である。
【０１２０】
或る実施形態では、式ＶのＺは、
【化２０】
2015061836.tif 000022
から選択される。
【０１２１】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す一般式ＶＩの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化２１】
2015061836.tif 000023
式中、Ａｒは、置換または非置換のフェニルまたはベンゾジオキサリルであり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；アミド；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基であり；
点線は、置換または非置換であり得る任意選択のベンゼン環である。
【０１２２】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す一般式ＶＩＩの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化２２】
2015061836.tif 000024
式中、
Ａｒ＝置換または非置換のアリール基であり；
Ｚ＝置換または非置換のヘテロ環基であり；
Ｙ＝Ｃ、Ｏ、Ｎ、またはＳであり；
Ａ＝ＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合、ｎ＝１であり、Ａ＝Ｓである場合、ｎ＝２であり；
ｍ＝０〜２０の整数（例えば、０、１、２、３、４、５、５〜１０、１０〜１５、または１５〜２０）である。
【０１２３】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す一般式ＶＩＩａの化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体である：
【化２３】
2015061836.tif 000025
式中、
Ｙ＝Ｃ、Ｏ、Ｎ、またはＳであり；
Ａ＝ＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合、ｎ＝１であり、Ａ＝Ｓである場合、ｎ＝２であり；
ｍ＝０、１、２、または３であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のそれぞれは、Ｈ、ハロゲン、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシル、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＮＯ２、置換もしくは非置換のアミン、置換もしくは非置換のアミド、置換もしくは非置換の環状基、置換もしくは非置換のヘテロ環基、置換もしくは非置換のアリール基、または置換もしくは非置換のヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ａは０、１、２、３、または４であり、ｂは０、１、２、３、または４である。
【０１２４】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す化合物５（図９中で化合物６２９２３と呼ぶ）である。
【化２４】
2015061836.tif 000026
【０１２５】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す化合物６（図９中で化合物４６０７２と呼ぶ）である。
【化２５】
2015061836.tif 000027
【０１２６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す化合物７（図１０中で化合物３２２０８と呼ぶ）である。
【化２６】
2015061836.tif 000028
【０１２７】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、以下に示す化合物８〜１８から選択される。
【化２７】
2015061836.tif 000029
【化２８】
2015061836.tif 000030
【化２９】
2015061836.tif 000031
【０１２８】
化合物がＡＬＤＨ２アンタゴニストであるかどうかは容易に確認することができる。ＡＬＤＨ２のアッセイは当分野で知られており、任意の既知のアッセイを使用することができる。アッセイの例は、例えば、Ｓｈｅｉｋｈ他（（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１８８１７〜１８８２２）およびＦａｒｒｅｓ他（（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１３８５４〜１３８６０）を含めた様々な出版物中に見つかる。例えば、ＡＬＤＨ２を、２５℃で、５０ｍＭのピロリン酸ナトリウムＨＣｌ緩衝液、ｐＨ９．０、１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４、または５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４中でアッセイし、但し、緩衝液には、ＮＡＤ＋（例えば、０．８ｍＭのＮＡＤ＋、またはそれより高いもの、例えば、１ｍＭ、２ｍＭ、または５ｍＭのＮＡＤ＋）および１４μＭのプロピオンアルデヒドなどの基質が含まれる。ＮＡＤ＋の還元を、分光光度計を用いて３４０ｎｍで、または蛍光微小光度計を用いた蛍光増加によって監視する。酵素活性は、標準の分光光度方法を用いて、例えば、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）の酸化形態からその還元形態ＮＡＤＨの還元反応を３４０ｎｍで測定することによって、アッセイすることができる。例示的なアッセイでは、反応は、２５℃で、０．１のＮａＰＰｉ緩衝液、ｐＨ９．５、２．４ｍＭのＮＡＤ＋および基質として１０ｍＭのアセトアルデヒド中で実施する。酵素活性は、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、ＮＡＤ＋からＮＡＤＨへの還元反応によって３４０ｎｍで測定する。あるいは、ＮＡＤＨの生成を、ＮＡＤＨを消費し、検出可能なシグナルを提供する別の酵素反応と連結させることができる。そのような酵素反応の例は、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、リザズリンをその酸化した蛍光化合物レゾルフィンへと還元する、ジアフォラーゼに基づいた反応である。蛍光レゾルフィンを５９０ｎｍで検出することにより、ＡＬＤＨ２酵素活性の任意の変化のための、増幅されたより高感度のシグナルがもたらされる。
【０１２９】
薬剤組成物、用量、投与経路
本発明は、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを含む薬剤組成物を提供する。本発明は、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストを含む薬剤組成物を提供する。用語「ＡＬＤＨ２アゴニスト」および「ＡＬＤＨ２アンタゴニスト」は、本明細書中では「ＡＬＤＨ２活性モジュレーター」または「活性剤」と総称して使用する。対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターは１つまたは複数の製薬上許容される賦形剤と共に配合する。様々な製薬上許容される賦形剤が当分野で知られており、本明細書中で詳述する必要はない。製薬上許容される賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）「レミントン：製薬学の科学および実施（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；製薬剤形および薬物送達系（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ他編、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；ならびに製薬賦形剤の手引き（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ他編、第３版、Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃ．を含めた様々な出版物中に十分に記載されている。
【０１３０】
ビヒクル、アジュバント、担体または希釈剤などの製薬上許容される賦形剤は、容易に公的に入手可能である。さらに、ｐＨ調節剤および緩衝剤、等張性調節剤、安定化剤、湿潤剤などの製薬上許容される補助物質が、容易に公的に入手可能である。
【０１３１】
対象方法では、対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターを、自己免疫疾患に所望の軽減をもたらすことができる任意の好都合な手段を用いて、宿主に投与し得る。したがって、対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターは、治療的投与のために様々な配合物内に取り込ませることができる。より詳細には、対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターは、適切な製薬上許容される担体または希釈剤との組合せによって薬剤組成物中に配合することができ、固体、半固体、液体または気体形態で、例えば錠剤、カプセル、散剤、顆粒、軟膏、液剤、坐薬、注射剤、吸入剤およびエアロゾルとして、調製物中に配合し得る。
【０１３２】
製薬剤形中では、対象活性剤は、その製薬上許容される塩の形態で投与してもよく、または、対象活性剤は、単独で、もしくは他の製薬上活性のある化合物と適切に会合させておよび組み合わせて使用してもよい。以下の方法および賦形剤は単なる例示であり、いかなる様式でも限定するものではない。
【０１３３】
経口調製物には、対象活性剤を単独で、または適切な添加剤、例えば、ラクトース、マンニトール、コーンスターチまたはジャガイモデンプンなどの慣用の添加剤；結晶性セルロース、セルロース誘導体、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプンまたはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤；タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；ならびに所望する場合は、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存料および香味料と組み合わせて使用して、錠剤、散剤、顆粒またはカプセルを作製することができる。
【０１３４】
対象活性剤は、植物または他の同様の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸またはプロピレングリコールのエステルなどの水性または非水性溶媒中に、所望する場合は、可溶化剤、等張化剤、懸濁剤、乳化剤、安定化剤および保存料などの慣用の添加剤と共に、それらを溶解、懸濁または乳化させることによって、注射用の調製物中に配合することができる。
【０１３５】
対象活性剤は、吸入によって投与するエアロゾル配合物中で利用することができる。対象活性剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容される加圧噴霧剤中に配合することができる。
【０１３６】
さらに、対象活性剤は、乳化基剤または水溶性基剤などの様々な基剤と混合することによって坐薬として作製することができる。活性剤は、坐薬によって直腸投与することができる。坐薬には、体温で融解するが室温で固化している、カカオ脂、カーボワックスおよびポリエチレングリコールモノメチルエーテルなどのビヒクルが含まれることができる。
【０１３７】
シロップ、エリキシル、および懸濁液などの経口または直腸投与用の単位剤形を提供してもよく、それぞれの単位用量、例えば、茶さじ量、食さじ量、錠剤または坐薬は、事前に決定した量の対象活性剤を含む。同様に、注射または静脈内投与用の単位剤形は、滅菌水、通常生理食塩水または別の製薬上許容される担体中の液剤としての組成物中で対象活性剤を含み得る。
【０１３８】
本明細書中で使用する用語「単位剤形」とは、それぞれの単位が、製薬上許容される希釈剤、担体またはビヒクルに関連して所望の効果を生じるために十分な量で計算した、事前に決定した量の対象活性剤を含む、ヒトおよび動物対象の単位用量として適した、物理的に別個の単位をいう。対象活性剤の規格は、用いる具体的な化合物および達成する効果、ならびに宿主におけるそれぞれの化合物に関連する薬力学に依存する。
【０１３９】
対象活性剤は、注射による投与用に配合することができる。典型的には、注射用組成物は液体の液剤または懸濁液として調製し、注射前に液体ビヒクル中の溶液または懸濁液にするために適した固体形態も調製し得る。また、調製物は乳化されていてもよく、または活性成分がリポソームビヒクル内にカプセル封入されていてもよい。
【０１４０】
或る実施形態では、対象活性剤は連続送達系によって送達する。用語「連続送達系」とは、本明細書中で「制御送達系」と互換性があるように使用し、カテーテル、注射装置などと組み合わせた連続（例えば制御）送達装置（例えばポンプ）が包含され、その幅広い種類が当分野で知られている。
【０１４１】
機械または電気機械的注入ポンプも、本発明と共に使用するために適している場合がある。そのような装置の例には、例えば、米国特許第４，６９２，１４７号；第４，３６０，０１９号；第４，４８７，６０３号；第４，３６０，０１９号；第４，７２５，８５２号；第５，８２０，５８９号；第５，６４３，２０７号；第６，１９８，９６６号などに記載のものが含まれる。一般に、活性剤の送達は、様々な補充可能なポンプ系のうちの任意のものを使用して達成することができる。ポンプは、経時的に一貫した徐放性を提供する。或る実施形態では、薬剤は、薬物が不透過性のリザーバ内の液体配合物中にあり、連続的な様式で個体に送達される。
【０１４２】
一実施形態では、薬物送達系は、少なくとも部分的に移植可能な装置である。移植可能な装置は、当分野で周知の方法および装置を用いて、任意の適切な移植部位に移植することができる。移植部位とは、薬物送達装置を導入して配置する、対象の身体内の部位である。移植部位には、必ずしもそれだけには限定されないが、真皮下、皮下、筋肉内、または対象の身体内の他の適切な部位が含まれる。或る実施形態では、薬物送達装置の移植および除去に好都合なため、皮下移植部位を使用する。
【０１４３】
本発明での使用に適した薬物放出装置は、様々な動作様式のうちの任意のものに基づき得る。例えば、薬物放出装置は、拡散系、対流系、または浸食系（例えば浸食に基づいた系）に基づくことができる。例えば、薬物放出装置は、電気化学的ポンプ、浸透圧ポンプ、電気浸透圧ポンプ、蒸気圧ポンプ、または浸透圧破裂基質（ｏｓｍｏｔｉｃ  ｂｕｒｓｔｉｎｇ  ｍａｔｒｉｘ）であることができ、例えば、薬物をポリマー内に取り込ませ、ポリマーが薬物浸透性高分子材料（例えば生分解性の薬物浸透性高分子材料）の分解と同時に薬物配合物の放出をもたらす。他の実施形態では、薬物放出装置は、電気拡散系、電解ポンプ、発泡ポンプ、圧電ポンプ、加水分解系などに基づく。
【０１４４】
機械または電気機械的注入ポンプに基づく薬物放出装置も、本発明と共に使用するために適している場合がある。そのような装置の例には、例えば、米国特許第４，６９２，１４７号；第４，３６０，０１９号；第４，４８７，６０３号；第４，３６０，０１９号；第４，７２５，８５２号などに記載のものが含まれる。一般に、対象の治療方法は、様々な補充可能な交換不可能なポンプ系のうちの任意のものを使用して達成することができる。経時的により一貫した徐放性を一般に提供するため、ポンプおよび他の対流系が一般に好ましい。或る実施形態では、より一貫した徐放性および比較的小さな大きさというその合わせた利点のため、浸透圧ポンプを使用する（例えば、ＰＣＴ公開出願ＷＯ９７／２７８４０ならびに米国特許第５，９８５，３０５号および第５，７２８，３９６号参照）。本発明での使用に適した例示的な浸透圧駆動装置には、必ずしもそれだけには限定されないが、米国特許第３，７６０，９８４号；第３，８４５，７７０号；第３，９１６，８９９号；第３，９２３，４２６号；第３，９８７，７９０号；第３，９９５，６３１号；第３，９１６，８９９号；第４，０１６，８８０号；第４，０３６，２２８号；第４，１１１，２０２号；第４，１１１，２０３号；第４，２０３，４４０号；第４，２０３，４４２号；第４，２１０，１３９号；第４，３２７，７２５号；第４，６２７，８５０号；第４，８６５，８４５号；第５，０５７，３１８号；第５，０５９，４２３号；第５，１１２，６１４号；第５，１３７，７２７号；第５，２３４，６９２号；第５，２３４，６９３号；第５，７２８，３９６号などに記載のものが含まれる。
【０１４５】
或る実施形態では、薬物送達装置は移植可能な装置である。薬物送達装置は、当分野で周知の方法および装置を用いて、任意の適切な移植部位に移植することができる。下記に言及するように、移植部位とは、薬物送達装置を導入して配置する、対象の身体内の部位である。移植部位には、必ずしもそれだけには限定されないが、真皮下、皮下、筋肉内、または対象の身体内の他の適切な部位が含まれる。
【０１４６】
或る実施形態では、活性剤は、対象活性剤の投与をもたらすために、移植可能な薬物送達系、例えばプログラム可能な系を用いて送達する。例示的なプログラム可能な移植可能な系には、移植可能な注入ポンプが含まれる。例示的な移植可能な注入ポンプ、またはそのようなポンプと連結して有用な装置は、例えば、米国特許第４，３５０，１５５号；第５，４４３，４５０号；第５，８１４，０１９号；第５，９７６，１０９号；第６，０１７，３２８号；第６，１７１，２７６号；第６，２４１，７０４号；第６，４６４，６８７号；第６，４７５，１８０号；および第６，５１２，９５４号に記載されている。本発明に適用することができるさらなる例示的な装置は、Ｓｙｎｃｈｒｏｍｅｄ注入ポンプ（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ）である。
【０１４７】
適切な賦形剤ビヒクルは、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびその組合せである。さらに、所望する場合は、ビヒクルは、湿潤剤もしくは乳化剤またはｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含み得る。そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者に知られているか、または明らかである。例えば、レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ、第１７版、１９８５を参照されたい。投与する組成物または配合物は、いずれの場合でも、治療中の対象において所望の状態をもたらすために十分な量の薬剤を含む。
【０１４８】
用量および投薬
治療中の対象および状態ならびに投与経路に応じて、対象化合物は、例えば、０．１μｇ〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ／日の用量で投与し得る。一般に、異なる哺乳動物の治療効果の有効性は広く変動し、用量が人間ではラットよりも典型的には２０、３０またはさらには４０倍低い（単位体重あたり）ため、範囲は広い。同様に、投与様式も用量に大きな影響を有する場合がある。したがって、例えば、経口用量は注射用量の約１０倍であり得る。局所的送達経路にはより高い用量を使用し得る。
【０１４９】
例えば、対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターは、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ／用量、例えば、約１ｍｇ〜約５ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５ｍｇ、約２５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５０ｍｇ〜約７５ｍｇ、約７５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１２５ｍｇ、約１２５ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約１７５ｍｇ、約１７５ｍｇ〜約２００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約２２５ｍｇ、約２２５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜約４００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約４５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７５０ｍｇ、または約７５０ｍｇ〜約１０００ｍｇ／用量の量で投与することができる。
【０１５０】
例示的な用量は、静脈内投与に適した液剤、１日２〜６回摂取する錠剤、または１日１回摂取し、比例的に高い含量の活性成分を含む１つの持続放出カプセルもしくは錠剤などであり得る。持続放出効果は、異なるｐＨ値で溶解するカプセル材料によって、浸透圧によってゆっくりと放出するカプセルによって、または任意の他の既知の徐放性手段によって得られ得る。
【０１５１】
当業者は、用量レベルが具体的な化合物、症状の重篤度および対象の副作用に対する感受性の関数として変動する場合があることを容易に理解されよう。所定の化合物の好ましい用量は、様々な手段によって当業者が容易に決定可能である。
【０１５２】
使用する用量は達成すべき臨床的目的に応じて変動するが、或る実施形態では、適切な用量範囲は、化合物を個体に投与した約２４時間後に、治療中の個体から採取した血液試料中で約１μｇ〜約１，０００μｇまたは約１０，０００μｇまでの対象化合物をもたらすものである。
【０１５３】
シロップ、エリキシル、および懸濁液などの経口または直腸投与用の単位剤形を提供してもよく、それぞれの単位用量、例えば、茶さじ量、食さじ量、錠剤または坐薬は、事前に決定した量の、本発明の１つまたは複数の化合物を含む組成物を含む。同様に、注射または静脈内投与用の単位剤形は、滅菌水、通常生理食塩水または別の製薬上許容される担体中の溶液としての組成物中で化合物（複数可）を含み得る。
【０１５４】
或る実施形態では、複数用量の対象化合物を投与する。対象化合物の投与頻度は、様々な要因のうちの任意のもの、例えば症状の重篤度などに応じて変動する場合がある。例えば、或る実施形態では、対象化合物は、月に１回、月に２回、月に３回、隔週（ｑｏｗ）、週に１回（ｑｗ）、週に２回（ｂｉｗ）、週に３回（ｔｉｗ）、週に４回、週に５回、週に６回、隔日（ｑｏｄ）、１日１回（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与する。上述のように、或る実施形態では、対象化合物を連続的に投与する。
【０１５５】
対象化合物の投与期間、例えば対象化合物を投与する期間は、様々な要因のうちの任意のもの、例えば患者応答などに応じて変動する場合がある。例えば、対象化合物は、約１日〜約１週間、約２週間〜約４週間、約１カ月〜約２カ月、約２カ月〜約４カ月、約４カ月〜約６カ月、約６カ月〜約８カ月、約８カ月〜約１年間、約１年間〜約２年間、もしくは約２年間〜約４年間、またはそれより長い範囲の期間にわたって投与することができる。或る実施形態では、対象化合物は、個体の寿命の間、投与する。
【０１５６】
投与経路
対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターは、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｅｘ  ｖｉｖｏ方法、ならびに全身性および局所投与経路を含めた、薬物送達に適した任意の利用可能な方法および経路を用いて、個体に投与する。投与は、急性（例えば短期間、例えば、単一投与、１日〜１週間の投与）、または慢性（例えば長期間、例えば１週間よりも長い投与、例えば、約２週間〜約１カ月、約１カ月〜約３カ月、約３カ月〜約６カ月、約６カ月〜約１年間、もしくは１年間よりも長い期間にわたる投与）であることができる。
【０１５７】
慣用かつ製薬上許容される投与経路には、鼻腔内、筋肉内、気管内、皮下、皮内、経皮、舌下、局所的塗布、静脈内、直腸、経鼻、経口、ならびに他の経腸および非経口の投与経路が含まれる。投与経路は、所望する場合は組み合わせてもよく、または、薬剤および／もしくは所望の効果に応じて調節してもよい。化合物は、単一用量または複数用量で投与することができる。
【０１５８】
活性剤は、全身性または局所経路を含めた、慣用の薬物の送達に適した任意の利用可能な慣用の方法および経路を用いて、宿主に投与することができる。一般に、本発明によって企図される投与経路には、必ずしもそれだけには限定されないが、経腸、非経口、または吸入経路が含まれる。
【０１５９】
吸入投与以外の非経口投与経路には、必ずしもそれだけには限定されないが、局所的、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、関節内、脊髄内、胸骨内、および静脈内の経路、すなわち、消化管以外の任意の投与経路が含まれる。非経口投与は、薬剤の全身性または局所送達をもたらすために運ぶことができる。全身性送達を所望する場合、投与は、典型的には、製薬調製物の侵襲性または全身吸収された局所的または粘膜性投与を含む。
【０１６０】
薬剤はまた、経腸投与によって対象に送達することもできる。経腸投与経路には、必ずしもそれだけには限定されないが、経口および直腸（例えば坐薬を使用）の送達が含まれる。
【０１６１】
皮膚または粘膜を介して薬剤を投与する方法には、必ずしもそれだけには限定されないが、適切な製薬調製物の局所的塗布、経皮透過、注射および表皮投与が含まれる。経皮透過には、吸収促進剤またはイオン泳動が適切な方法である。イオン泳動透過は、数日間以上の間、無傷の皮膚から電気パルスによってその生成物を連続的に送達する、市販の「パッチ」を用いて達成し得る。
【０１６２】
治療方法
本発明は、それを必要としている個体に、有効量の対象アゴニスト、または有効量の対象アンタゴニストを投与することを一般に含む、様々な治療方法を提供する。対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、例えば、虚血性ストレスに関連する状態、慢性のフリーラジカル関連疾患、急性のフリーラジカル関連疾患、ニトログリセリンに対する非感受性（例えば、狭心症および心不全におけるもの）、高血圧、糖尿病、ならびに骨粗鬆症を含めた様々な障害の治療に適している。対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、癌細胞を癌化学療法剤または他の標準の癌治療に対して感作させるため；アルコール（例えば、エタノール、エチルアルコール）嗜癖を治療するため；および麻薬嗜癖を治療するために適している。
【０１６３】
虚血性ストレスに関連する状態の治療方法
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体における、虚血性ストレスに関連する状態の、予防的方法を含めた治療方法を提供する。虚血性ストレスに関連する状態には、虚血状態、虚血現象、虚血を生じさせる可能性のある状態、および虚血現象から生じる状態が含まれる。対象方法で治療可能な虚血性ストレスに関連する状態には、それだけには限定されないが、心筋梗塞（例えば急性心筋梗塞）、心臓手術、脳外傷、脳血管疾患、脳卒中、脊髄傷害、くも膜下出血、様々な臓器の虚血が起こる大手術、臓器移植、肢虚血（例えば、１型または２型糖尿病から生じる）などを含めた、任意の状態または現象から生じる虚血が含まれる。
【０１６４】
或る実施形態では、薬剤は、予想または予測される虚血現象の前、例えば虚血現象の約１時間〜約１週間、例えば、予想または予測される虚血現象の約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、約１２時間〜約１６時間、約１６時間〜約２４時間、約２４時間〜約３６時間、約３６時間〜約４８時間、約４８時間〜約７２時間、または約７２時間〜約１週間前に投与する。
【０１６５】
特定の状況下、例えば、対象が脳卒中を既に経験している場合、対象が心臓手術を受けようとしている場合などでは、活性剤を用いた前治療が望ましい。例えば、脳卒中を既に経験している患者は、２回目の脳卒中を経験する確率が高くなっている。一過性虚血性発作を起こしやすい対象も脳卒中のリスクが高い。くも膜下出血を患っている対象は、血管を狭窄する血管攣縮によって誘発されるさらなる虚血現象を経験し得る。脳などの臓器の外傷を経験している対象も虚血現象を起こしやすい。長時間にわたる手術を受ける対象も虚血現象を起こしやすい。上記状況は、対象が対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた前治療から恩恵を受ける状況を例示している。
【０１６６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、虚血現象後に投与する。例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、心虚血、再灌流傷害、脳血管疾患、急性心筋梗塞、くも膜下出血、および外傷などの虚血現象の有害作用を軽減させるために有効である。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、虚血現象の１分間以内〜１５時間以内、例えば、約１分間〜約５分間、約５分間〜約１０分間、約１０分間〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜約６０分間、約６０分間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、または約１２時間〜約１５時間後に投与する。或る実施形態では、増加した濃度の対象ＡＬＤＨ２アゴニストが、虚血現象の後に少なくとも数時間〜数日間、血漿中に維持される。
【０１６７】
例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を患った個体に、ＡＭＩの１分間以内〜１５時間以内、例えば、約１分間〜約５分間、約５分間〜約１０分間、約１０分間〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜約６０分間、約６０分間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、または約１２時間〜約１５時間後に投与する。
【０１６８】
慢性および急性のフリーラジカル関連疾患の治療方法
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体における急性および慢性のフリーラジカル関連疾患の治療方法を提供する。
【０１６９】
急性のフリーラジカル関連障害
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体における急性のフリーラジカル関連疾患の治療方法を提供する。対象方法で治療可能な急性のフリーラジカル関連障害には、癲癇発作（Ｐａｔｅｌ他（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７９：１０６５〜１０６９）；ＵＶ曝露から生じる皮膚損傷、および皮膚の光損傷（例えば「日光皮膚炎」）（Ａｌｄｉｎｉ他（２００７）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．２０（３）：４１６〜２３）；急性熱皮膚火傷傷害（Ｐｉｎｔａｕｄｉ他（２０００）Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｒｅｓ．３３（２）：１３９〜４６）；ならびに組織過酸素症（例えば、過酸素症誘発性慢性肺疾患および気管支肺異形成）（Ｘｕ他（２００６）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９１（５）：Ｌ９６６〜７５）が含まれる。
【０１７０】
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体における日光皮膚炎の治療方法を提供する。或る実施形態では、日光皮膚炎を治療する対象方法は、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを含む配合物を、日光皮膚炎によって冒された皮膚の領域に局所的塗布することを含む。
【０１７１】
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体における癲癇発作の治療方法を提供する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、癲癇発作が起こった後、例えば、癲癇発作の約１分間以内〜約５分間、約５分間〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜約１時間、または約１時間〜約４時間後に投与する。他の実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、予防的に投与する、例えば、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを、過去に癲癇発作を経験したことがある個体に、別の癲癇発作が起こる可能性を下げるために投与する。或る実施形態では、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、癲癇発作の重篤度、癲癇発作の頻度、および癲癇発作の持続期間のうちの少なくとも１つを減少させるために有効な量である。
【０１７２】
慢性のフリーラジカル関連疾患
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体における慢性のフリーラジカル関連疾患の治療方法を提供する。対象方法で治療可能な慢性のフリーラジカル関連障害には、パーキンソン病およびアルツハイマー病などの神経変性疾患（Ｂｕｒｋｅ他（２００３）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｄｉｓ．２（２）：１４３；ならびにＯｈｔａおよびＯｈｓａｗａ（２００６）Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、９（２）：１５５）；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；癌、例えば、食道癌（Ｃｈｅｎ他（２００６）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、２１１９（１２）：２８２７〜３１）；上気道消化管癌（Ｈａｓｈｉｂｅ他（２００６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ．１５（４）：６９６〜７０３）；頭頸部扁平細胞癌（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ他（２００６）Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ．２７（６）：３３４〜８；Ｙｏｋｏｙａｍａ他（２００５）Ａｌｃｏｈｏｌ．３５（３）：１７５〜８５）；アテローム性動脈硬化症などの心血管病（Ｎａｒｉｔａ他（２００３）Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２９（１０）：１４１５〜１４１９）などが含まれる。或る実施形態では、慢性のフリーラジカル関連疾患は、慢性（例えば１日１回）の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療によって治療する。
【０１７３】
本発明は、個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、アルツハイマー病（ＡＤ）を患っている個体においてＡＤを治療する方法を提供する。或る実施形態では、「有効量」の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、個体における認知機能の低下を少なくとも遅らせるために有効な量である。或る実施形態では、「有効量」の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、治療中の個体において記憶を向上させるために有効な量である。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、個体に、約３カ月〜約６カ月、約６カ月〜約１年間、または１年間より長い期間にわたって全身投与する。
【０１７４】
本発明は、個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体においてパーキンソン病を治療する方法を提供する。或る実施形態では、「有効量」の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、パーキンソン病の１つまたは複数の症状を寛解させるために有効な量である。或る実施形態では、「有効量」の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、疾患の進行を遅らせるために有効な量である。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、個体に、約３カ月〜約６カ月、約６カ月〜約１年間、または１年間より長い期間にわたって全身投与する。
【０１７５】
心臓状態の治療方法
本発明は、狭心症、心不全、狭心症および心不全におけるニトログリセリンに対する非感受性（Ｌｉ他（２００６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１６：５０６〜５１１）、高血圧（Ａｓｓｅｌｉｎ他（２００６）Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌ．ａｎｄ  Ｍｅｄ．４１：９７）、ならびに心疾患などの障害の治療方法を提供する。本方法は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む。
【０１７６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを、ニトログリセリン治療と併せて個体に投与する。対象ＡＬＤＨ２アゴニストおよびニトログリセリンは、同一の投与経路（例えば、経口、舌下、経皮、経舌など）によって投与することができる。代替方法では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストおよびニトログリセリンは、異なる投与経路によって投与することができる。例えば、或る実施形態では、ニトログリセリンを舌下、経舌、経皮、または経口投与し、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを異なる投与経路（例えば、静脈内、筋肉内など）によって投与する。ＡＬＤＨ２アゴニストは、ニトログリセリンを投与する前、その間、またはその後に投与することができる。
【０１７７】
有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、ニトログリセリンとの組合せ療法で投与した場合に、狭心症を、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した約１分間〜約２分間、約２分間〜約３分間、約３分間〜約４分間、約４分間〜約５分間、または約５分間〜約１０分間以内の期間に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量をいう。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストおよびニトログリセリンは、実質的に同時に、例えば、互いに約２分間以内、約１分間以内、または約３０秒間以内に投与する。用語「ニトログリセリンとの組合せ療法」には、対象ＡＬＤＨ２アゴニストをニトログリセリンと実質的に同時に投与すること；対象ＡＬＤＨ２アゴニストをニトログリセリンの投与の前に投与すること；対象ＡＬＤＨ２アゴニストをニトログリセリンの投与の後に投与することなどが包含される。
【０１７８】
或る実施形態では、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、高血圧を治療する、例えば、個体において高血圧の１つまたは複数の症状または徴候を軽減させるために有効な量である。例えば、或る実施形態では、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、個体において血圧を、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約２５％、またはそれより高く減少させる、あるいは、個体の血圧を正常な範囲内にするために有効な量である。
【０１７９】
或る実施形態では、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストとは、心疾患を治療する、例えば、個体において心疾患の１つまたは複数の症状または徴候を軽減させるために有効な量である。所定のＡＬＤＨ２アゴニストが心疾患を治療するために有効であるかどうかは、心臓機能を評価する標準の方法、例えば、心電図、血管造影図などを用いて決定することができる。
【０１８０】
解毒方法
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体において毒性化合物のレベルを低下させる方法を提供する。本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、毒性レベルの化合物（例えば、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸収、もしくは吸入した場合にＡＬＤＨ２のアルデヒド基質を生じさせる化合物）に関連する、あるいはそれから生じる障害の治療方法を提供し、個体における化合物レベルが無毒性レベルまで低下する。
【０１８１】
対象方法を用いて個体におけるレベルを低下させることができる毒性化合物には、それだけには限定されないが、エタノール、メタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、異種アルデヒド、生体アルデヒド、および摂取、吸収、または吸入した化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ代謝によって生じたアルデヒドが含まれる。対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、１つまたは複数の用量で投与した場合に、エタノール、メタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または摂取、吸収、もしくは吸入した化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ代謝によって生じたアルデヒドなどの化合物の毒性レベルを低下させるために有効な量で、投与する。或る実施形態では、アルデヒドはアセトアルデヒドである。
【０１８２】
例として、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、過剰なアルコール（例えばエタノール）消費後に個体に投与し、個体における毒性レベルのアルコールまたはアルデヒド（例えばエタノールの代謝産物であるアルデヒド）は、ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療前の個体におけるアルコールまたはアルデヒドのレベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるアルコールまたはアルデヒドのレベルを、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量で、投与する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるアルコールまたはアルデヒドのレベルを無毒性レベルまで、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に低下させるために有効な量で、投与する。
【０１８３】
例として、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、過剰なアルコール（例えばエタノール）消費後に個体に投与し、個体におけるアセトアルデヒドのレベルは、ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療前の個体におけるアルコールまたはアルデヒドのレベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、アセトアルデヒドのレベルを、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量で、投与する。
【０１８４】
本発明は、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、アルデヒドの毒性を減少させる方法を提供する。或る実施形態では、有効量のＡＬＤＨ２アゴニストとは、アルデヒドの毒性の１つまたは複数の症状を軽減させるために有効な量である。例えば、或る実施形態では、有効量のＡＬＤＨ２アゴニストとは、例えば、頭痛、脱水、疲労、嘔気、嘔吐、下痢、脱力感、不安、被刺激性、羞明、音恐怖などを含めた、過剰なエタノール消費の１つまたは複数の症状を軽減させるために有効な量である。
【０１８５】
例として、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性レベルのアルデヒド（例えば過剰なエタノール消費後）を有する個体に投与し、個体における毒性があるアルデヒドレベルは、ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療前の個体におけるアルデヒドのレベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるアルデヒドレベルを、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量で、投与する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるアルデヒドレベルを無毒性レベルまで、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に低下させるために有効な量で、投与する。
【０１８６】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、上述のように、例えば過剰なエタノール消費後に、エタノールおよびアルデヒドの両方のレベルを低下させる。
【０１８７】
別の例として、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、メタノールまたはエチレングリコールモノメチルエーテルの毒性レベルを有する個体に投与し、メタノールまたはエチレングリコールモノメチルエーテルの毒性レベルは、ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療前の個体におけるメタノールまたはエチレングリコールモノメチルエーテルのレベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるメタノールまたはエチレングリコールモノメチルエーテルのレベルを、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量で、投与する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるメタノールまたはエチレングリコールモノメチルエーテルのレベルを無毒性レベルまで、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に低下させるために有効な量で、投与する。
【０１８８】
別の例として、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、薬物毒性、例えば、薬物（例えば、製薬化合物、違法薬物など）を摂取、吸収、または吸入した後に毒性レベルのアルデヒドを示す個体に投与する。或る実施形態では、アルデヒドは、薬物の摂取、吸収、または吸入後に、身体内における薬物の代謝によって生成される。アルデヒドの毒性レベルは、ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療前の個体におけるアルデヒドのレベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるアルデヒドレベルを、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量で、投与する。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、毒性があるアルデヒドレベルを無毒性レベルまで、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に低下させるために有効な量で、投与する。
【０１８９】
サルソリノールレベルを低下させる方法
本発明は、個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、個体においてサルソリノールレベルを低下させる方法を提供する。サルソリノール（１−メチル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキオノリン）は、ドーパミンとアセトアルデヒドとの縮合生成物である。アセトアルデヒドはエタノールの代謝産物である。血漿サルソリノールレベルは、アルコール依存症でない人よりもアルコール依存症の人で高い。サルソリノールレベルの低下は、アルコール嗜癖の軽減に有用である。
【０１９０】
或る実施形態では、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、それを必要としている個体に、過剰なアルコール（例えばエタノール）消費後に投与し、有効量は、ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療前の個体におけるサルソリノールレベルと比較して、個体におけるサルソリノールのレベルを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させることをもたらす。或る実施形態では、有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、それを必要としている個体に、任意の時点で投与する（例えば、必ずしも過剰なアルコール消費後ではない）。或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、サルソリノールレベルを、ＡＬＤＨ２アゴニストを投与した後の約５分間以内〜約１５分間、約１５分間〜約３０分間、約３０分間〜１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、もしくは約６時間〜約８時間、またはそれより後に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％、またはそれより多く低下させるために有効な量で、投与する。これらの実施形態の一部では、個体とは、アルコール依存症を診断された者である。アルコール依存症の症状および診断は、例えば、ＥｎｏｃｈおよびＧｏｌｄｍａｎ（２００２）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ、６５：４４１に記載されている。
【０１９１】
アルコール嗜癖の治療方法
本発明は、個体におけるアルコール（エタノール）嗜癖の治療方法を提供する。本方法は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストを投与することを一般に含む。
【０１９２】
対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、アルコール嗜癖を治療するために個体に定期的に投与することができる。例えば、或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、それを必要としている個体に、１日２回、１日１回、隔日、週に２回、週に１回、または月に２回投与する。対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストは、アルコール嗜癖を治療するために経皮「パッチ」の形態で投与することができる。
【０１９３】
本明細書中で使用する「アルコール嗜癖を治療すること」には、以下のうちの１つまたは複数を達成することが含まれる：アルコールの消費量の減少；アルコールを消費する頻度の減少；アルコールの渇望の減少；および過剰なアルコール消費の症状の１つまたは複数の軽減。アルコール嗜癖の文脈において本明細書中で使用する「アルコール」とは、エタノール、例えば、体積で２％、３％、４％、５％、またはそれより高いエタノールを含む飲料、例えば、ワイン、ビール、ウォッカ、ウイスキーなどをいう。
【０１９４】
癌の治療方法
本発明は、個体における癌の治療方法を提供する。本方法は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストを、標準の癌治療と併せて投与することを一般に含む。標準の癌治療には、手術（例えば癌組織の外科的除去）、放射線療法、骨髄移植、化学療法治療、生物学的応答調節剤治療、および前述のものの特定の組合せが含まれる。
【０１９５】
放射線療法には、それだけには限定されないが、ビームなどの外部から施用する供給源から、または小さな放射源の移植によって送達するＸ線またはγ線が含まれる。
【０１９６】
化学療法剤とは、癌細胞の増殖を減少させる非ペプチド（すなわち非タンパク質）化合物であり、細胞毒性剤および細胞分裂抑制剤が包含される。化学療法剤の非限定的な例には、アルキル化剤、ニトロソ尿素、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、およびステロイドホルモンが含まれる。
【０１９７】
細胞増殖を減少させるように作用する薬剤は当分野で知られており、幅広く使用されている。そのような薬剤には、それだけには限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、ダカルバジン、およびテモゾロマイドを含めた、アルキル化剤、例えば、窒素マスタード、ニトロソ尿素、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、およびトリアゼンが含まれる。
【０１９８】
代謝拮抗剤には、それだけには限定されないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロキシウリジン（ＦｕｄＲ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、ペントスタチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メトトレキサート、１０−プロパルギル−５，８−ジデアザフォレート（ＰＤＤＦ、ＣＢ３７１７）、５，８−ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボリン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、およびゲムシタビンを含めた、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤が含まれる。
【０１９９】
適切な天然物およびその誘導体（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン）には、それだけには限定されないが、Ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ，Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン；ブレキナール；アルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシンなど；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシド、テニポシドなど；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、塩酸ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン）、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシンおよびモルホリノ誘導体など；フェノキシゾン（ｐｈｅｎｏｘｉｚｏｎｅ）ビスシクロペプチド、例えばダクチノマイシン；塩基性糖ペプチド、例えばブレオマイシン；アントラキノングリコシド、例えばプリカマイシン（ミトラマイシン）；アントラセンジオン、例えばミトキサントロン；アジリノピロロインドールジオン、例えばマイトマイシン；大環状免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、ＦＫ−５０６（タクロリムス、プログラフ）、ラパマイシンなど等が含まれる。
【０２００】
他の抗増殖性細胞毒性剤は、ナベルベン、ＣＰＴ−１１、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イフォサミド、およびドロロキサフィンである。
【０２０１】
抗増殖活性を有する、微小管に影響を与える薬剤も使用に適しており、それだけには限定されないが、アロコルヒチン（ＮＳＣ４０６０４２）、Ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉｎ  Ｂ（ＮＳＣ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ７５７）、コルヒチン誘導体（例えばＮＳＣ３３４１０）、ドルスタチン１０（ＮＳＣ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ１５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、Ｔａｘｏｌ（登録商標）誘導体、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、チオコルヒチン（ＮＳＣ３６１７９２）、トリチルシステリン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、それだけには限定されないがエオプチロンＡ、エポチロンＢ、ディスコデルモリドを含めた天然および合成のエポチロン、エストラムスチン、ノコダゾールなどが含まれる。
【０２０２】
使用に適したホルモンモジュレーターおよびステロイド（合成類似体を含む）には、それだけには限定されないが、アドレノコルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾンなど；エストロゲンおよびプレゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、エストラジオール、クロミフェン、タモキシフェンなど；ならびに副腎皮質抑制剤、例えば、アミノグルテチミド；１７α−エチニルエストラジオール；ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド（Ｄｒｏｇｅｎｉｌ）、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）、およびＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）が含まれる。エストロゲンは増殖および分化を刺激し、したがって、エストロゲン受容体と結合する化合物を使用してこの活性を遮断する。コルチコステロイドはＴ細胞増殖を阻害し得る。
【０２０３】
他の化学療法剤には、金属錯体、例えば、シスプラチン（ｃｉｓ−ＤＤＰ）、カルボプラチンなど；尿素、例えばヒドロキシ尿素；ならびにヒドラジン、例えばＮ−メチルヒドラジン；エピドフィロトキシン；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；ロイコボリン；テガフールなどが含まれる。他の目的の抗増殖剤には、免疫抑制剤、例えば、ミコフェノール酸、サリドマイド、デスオキシスペルグアリン、アザスポリン、レフルノミド、ミゾリビン、アザスピラン（ＳＫＦ１０５６８５）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）（ＺＤ１８３９、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）などが含まれる。
【０２０４】
「タキサン(Taxanes)」には、パクリタキセル、および任意の活性タキサン誘導体またはプロドラッグが含まれる。「パクリタキセル」（本明細書では、類似体、配合物、および誘導体、例えば、ドセタキセル、ＴＡＸＯＬ（商標）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）（ドセタキセルの配合物）、パクリタキセルの１０−デスアセチル類似体およびパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾイル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル類似体が含まれると理解されたい）は、当業者に知られている技術を利用して容易に調製し得るか（ＷＯ９４／０７８８２、ＷＯ９４／０７８８１、ＷＯ９４／０７８８０、ＷＯ９４／０７８７６、ＷＯ９３／２３５５５、ＷＯ９３／１００７６；米国特許第５，２９４，６３７号；第５，２８３，２５３号；第５，２７９，９４９号；第５，２７４，１３７号；第５，２０２，４４８号；第５，２００，５３４号；第５，２２９，５２９号；およびＥＰ５９０，２６７も参照）、または、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、ミズーリ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓを含めた様々な商業的な供給元から得られ得る（タイヘイヨウイチイ由来のＴ７４０２もしくはタクスス・ヤンナネンシス由来のＴ−１９１２）。
【０２０５】
パクリタキセルは、パクリタキセルの一般的な化学的に入手可能な形態だけでなく、類似体および誘導体（例えば、上述のＴａｘｏｔｅｒｅ（商標）ドセタキセル）ならびにパクリタキセルコンジュゲート（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ、パクリタキセル−デキストラン、またはパクリタキセル−キシロース）にも言及するものであると理解されたい。
【０２０６】
また、用語「タキサン」には、親水性誘導体および疎水性誘導体をどちらも含めた様々な既知の誘導体も含まれる。タキサン誘導体には、それだけには限定されないが、国際特許出願ＷＯ９９／１８１１３に記載のガラクトースおよびマンノース誘導体；ＷＯ９９／１４２０９に記載のピペラジノおよび他の誘導体；ＷＯ９９／０９０２１、ＷＯ９８／２２４５１、および米国特許第５，８６９，６８０号に記載のタキサン誘導体；ＷＯ９８／２８２８８に記載の６−チオ誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号に記載のスルフェンアミド誘導体；ならびに米国特許第５，４１５，８６９号に記載のタキソール誘導体が含まれる。さらに、これには、それだけには限定されないが、ＷＯ９８／５８９２７；ＷＯ９８／１３０５９；および米国特許第５，８２４，７０１号に記載のものを含めたパクリタキセルのプロドラッグも含まれる。
【０２０７】
本発明の方法に関連して使用するために適した生物学的応答調節剤には、それだけには限定されないが、（１）チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）活性の阻害剤；（２）セリン／スレオニンキナーゼ活性の阻害剤；（３）腫瘍関連抗原アンタゴニスト、例えば腫瘍抗原と特異的に結合する抗体；（４）アポトーシス受容体アゴニスト；（５）インターロイキン−２；（６）ＩＦＮ−α；（７）ＩＦＮ−γ；（８）コロニー刺激因子；（９）血管形成の阻害剤；および（１０）腫瘍壊死因子のアンタゴニストが含まれる。
【０２０８】
対象方法は、適切な対照と比較した場合に、腫瘍量を、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、腫瘍の完全根絶まで減少させるために有効である。したがって、これらの実施形態では、「有効量」の対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストとは、標準の癌治療と併せて投与した場合、適切な対照と比較した場合に、腫瘍量を、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、腫瘍の完全根絶まで減少させるために有効な量である。実験動物系では、適切な対照は、薬剤で処置しない、遺伝子が同一の動物であり得る。非実験系では、適切な対照は、薬剤を投与する前に存在する腫瘍量であり得る。他の適切な対照はプラセボ対照であり得る。
【０２０９】
腫瘍量が減少したかどうかは、それだけには限定されないが、固形腫瘍の質量を測定すること；細胞学的アッセイを用いて腫瘍細胞数を計数すること；蛍光活性化細胞分取（例えば、腫瘍関連抗原に特異的な抗体を用いて）；腫瘍のコンピュータ断層撮影走査、磁気共鳴画像法、および／またはＸ線イメージングで腫瘍の大きさを推定および／または監視すること；生体試料、例えば血液中の腫瘍関連抗原の量を測定することなどを含めた、任意の知られている方法を用いて決定することができる。
【０２１０】
他の疾患
対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、糖尿病の治療において、それを必要としている個体に投与することができる。対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、骨粗鬆症の治療において、それを必要としている個体に投与することができる。
【０２１１】
糖尿病
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、糖尿病の治療方法を提供する。或る実施形態では、糖尿病を治療するための対象方法は、糖尿病によってもたらされる障害、例えば、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害などの治療を提供する。
【０２１２】
或る実施形態では、対象ＡＬＤＨ２アゴニストは、個体における血中グルコースレベルを低下させる、例えば、個体における血中グルコースレベルを、アゴニストを用いた治療が存在しない場合の血中グルコースレベルと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％低下させるために有効な量で、投与する。或る実施形態では、有効量のＡＬＤＨ２アゴニストとは、血中グルコースレベルを正常な範囲まで低下させるために有効な量である。正常な絶食血中グルコースレベルは、典型的には、食事前に約７０ｍｇ／ｄＬ〜約１１０ｍｇ／ｄＬの範囲である。食事の２時間後の正常な血中グルコースレベルは、通常は約１２０ｍｇ／ｄＬ未満である。経口グルコース負荷試験（約７５ｇのグルコースを含む糖溶液を飲み、その後、糖溶液を飲んだ後の様々な時点で血中グルコースレベルを測定することを含む）中の正常な血中グルコースレベルには、糖溶液を飲んだ２時間後に１４０ｍｇ／ｄＬ未満、および糖溶液を飲んだ０〜２時間後の間のすべての読取値が２００ｍｇ／ｄＬ未満であることが含まれる。また、血中グルコースレベルは時々ｍｍｏｌ／Ｌでも表す。正常な血中グルコースレベルは一般に約４ｍｍｏｌ／Ｌ〜８ｍｍｏｌ／Ｌである。正常な血中グルコースレベルは、一般に、食事の９０分後に約１０ｍｍｏｌ／Ｌ未満であり、食事前に約４ｍｍｏｌ／Ｌ〜約７ｍｍｏｌ／Ｌである。
【０２１３】
或る実施形態では、対象治療方法は、対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与すること、および糖尿病を治療するための少なくとも第２の治療剤（例えばインスリン）を同時投与することを含む。本発明での使用に適したインスリンには、それだけには限定されないが、レギュラーインスリン、セミレンテ、ＮＰＨ、レンテ、プロタミン亜鉛インスリン（ＰＺＩ）、ウルトラレンテ、インスリングラルギン、インスリンアスパルト、アシル化インスリン、単量体インスリン、超活性インスリン、肝選択的インスリン、および任意の他のインスリン類似体または誘導体、ならびに前述の任意のものの混合物が含まれる。本発明での使用に適したインスリンには、それだけには限定されないが、米国特許第４，９９２，４１７号；第４，９９２，４１８号；第５，４７４，９７８号；第５，５１４，６４６号；第５，５０４，１８８号；第５，５４７，９２９号；第５，６５０，４８６号；第５，６９３，６０９号；第５，７００，６６２号；第５，７４７，６４２号；第５，９２２，６７５号；第５，９５２，２９７号；および第６，０３４，０５４号；ならびに公開ＰＣＴ出願ＷＯ００／１２１１９７；ＷＯ０９／０１０６４５；およびＷＯ９０／１２８１４に開示されているインスリン形態が含まれる。インスリン類似体には、それだけには限定されないが、超活性インスリン類似体、単量体インスリン、および肝特異的インスリン類似体が含まれる。
【０２１４】
骨粗鬆症
本発明は、それを必要としている個体に有効量の対象ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを一般に含む、骨粗鬆症の治療方法を提供する。或る実施形態では、「有効量」のＡＬＤＨ２アゴニストとは、個体において骨密度を増加させるために有効な量である。他の実施形態では、「有効量」のＡＬＤＨ２アゴニストとは、骨密度の損失速度を減少させるために有効な量である。
【０２１５】
治療に適した対象
対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーターを用いた治療に適した対象には、上述の状態を患っている個体；上述の状態を発生するリスクのある個体；対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーター以外の薬剤で上述の状態の治療を受けたが、そのような治療に応答しなかった個体、または最初はそのような治療に応答したが、後に再発した個体；上述の状態について対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーター以外の薬剤を用いた治療に不応性の個体；および上述の状態について対象ＡＬＤＨ２活性モジュレーター以外の薬剤を用いた治療を耐用できない個体が含まれる。
【０２１６】
ＡＬＤＨ２アゴニストを投与することを含む方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストの投与を含む対象治療方法は、酸化的ストレスに関連するまたはそれから生じる障害または状態；ニトログリセリン非感受性に関連する障害または状態；毒性レベルのエチルアルコール、アルデヒド、メタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、生体または異種アルデヒドなどに関連する障害または状態；ならびに心臓の疾患および状態、例えば、冠動脈疾患、狭心症などを含めた、上述の様々な状態の治療に適している。或る実施形態では、個体は、図１Ａに示すアミノ酸配列を有するＡＬＤＨ２をコードしているＡＬＤＨ２対立遺伝子に対してホモ接合性のヒトである。他の実施形態では、個体は、図１Ｂに示すＥ４８７Ｋ変異体を有するＡＬＤＨ２をコードしている、１つまたは２つのＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子を保有するヒトである。
【０２１７】
東アジア人口の約４０％が半優性のＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子を保有する。そのような個体は、顔面紅潮、嘔気、および頻脈のうちの１つまたは複数が含まれる、エタノール消費に対する応答によって特徴づけることができる。さらに、ＡＬＤＨ２＊２個体は、狭心症および冠動脈疾患などの障害においてニトログリセリン治療に対する応答性も低い。ＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子に対してヘテロ接合性またはホモ接合性である個体は、対象ＡＬＤＨ２アゴニストの投与を含む対象方法を用いた治療に適している。
【０２１８】
虚血性ストレスに関連する状態の治療方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象には、心臓手術を受ける予定のある個体または心臓手術を受けた個体；脳卒中を経験したことがある個体；脳外傷を患った個体；長時間手術を受ける個体；心筋梗塞（例えば急性心筋梗塞）を患った個体；脳血管疾患を患っている個体；脊髄傷害を有する個体；くも膜下出血を有する個体；および臓器移植を受ける個体が含まれる。対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象にはまた、虚血性肢障害、例えば、１型または２型糖尿病から生じるものを有する個体も含まれる。
【０２１９】
急性のフリーラジカル関連疾患の治療方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象には、癲癇発作を持つまたは経験したことがある個体；ＵＶ曝露から生じる皮膚損傷を有する個体；皮膚の光損傷を有する個体；急性熱皮膚火傷傷害を有する個体；および組織過酸素症を患っている個体が含まれる。
【０２２０】
慢性のフリーラジカル関連疾患の治療方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象には、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、または他の神経変性疾患を診断された個体；アテローム性動脈硬化症を有する個体；食道癌を有する個体；頭頸部扁平細胞癌を有する個体；および上気道消化管癌を有する個体が含まれる。
【０２２１】
心状態の治療方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象には、狭心症を有する個体；心不全を有する個体；狭心症または心不全の治療においてニトログリセリンに対する非感受性を示す個体；高血圧を有する個体；および心疾患を有する個体が含まれる。
【０２２２】
解毒方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象には、毒性があるアルデヒドレベル、例えば、毒性化合物の摂取、毒性化合物の吸入、毒性レベルの化合物の摂取もしくは吸入、または正常な代謝中のアルデヒドの生成によるものを有する個体が含まれる。そのような個体には、それだけには限定されないが、エタノール、メタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、または他の異種もしくは生体アルデヒド化合物を摂取または吸入した個体が含まれる。例えば、そのような個体には、殺虫剤、殺真菌剤、または他のそのような化合物を摂取または吸入した個体；過剰なレベルのエタノールを消費した個体などが含まれる。
【０２２３】
アルコール嗜癖の治療方法
対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストを用いた治療に適した対象には、アルコール依存症であるとみなされる個体（例えば、アルコールを飲むことに対する制御を損なうこと、薬物アルコールに没頭すること、有害な結果にもかかわらずアルコールを使用すること、およびアルコールの消費後に思考が歪曲することのうちの１つまたは複数によって特徴づけられた、原発性の慢性疾患を有する個体）；アルコール消費の休止後に禁断症状を患っている個体；アルコール依存を経験している個体（例えば、耐性、禁断、およびアルコールを飲む制御できない衝動と組み合わせたアルコール乱用）などを含めた、アルコール嗜癖を有する個体が含まれる。
【０２２４】
糖尿病の治療方法
対象ＡＬＤＨ２アゴニストを用いた治療に適した対象には、１型または２型糖尿病を有する個体が含まれる。治療に適した対象には、１型真性糖尿病を診断された個体が含まれ、そのような個体には、約１２６ｍｇ／ｄＬを超える絶食血中グルコースレベルを有する者が含まれる。そのような個体には、２時間のグルコース負荷試験（７５ｇの無水グルコース、経口）後に約２００ｍｇ／ｄＬを超える血中グルコースレベルを有する者が含まれる。治療に適した対象には、２型糖尿病を診断された個体；未だ２型糖尿病を診断されていないが、２型糖尿病を発症するリスクのある個体、例えば、２５を超える体重指数（キログラムの体重を身長（メートル）の二乗で除算）を有する個体、例えば、約２５〜約２７、約２７〜約３０、または３０を超える体重指数を有する個体が含まれる。
【０２２５】
癌の治療方法
上述の癌を治療するための対象ＡＬＤＨ２アンタゴニストを用いた治療に適した対象には、固形腫瘍を有する個体が含まれる。固形腫瘍には、それだけには限定されないが、組織球性リンパ腫、脳、尿生殖路、リンパ系、胃、喉頭ならびに肺腺癌および小細胞肺癌を含めた肺の癌が含まれる。
【０２２６】
スクリーニングアッセイ
本発明は、ＡＬＤＨ２アゴニストを同定する方法を提供する。本方法は、一般に、酵素活性が低下した変異体ＡＬＤＨ２酵素を試験化合物と、変異体ＡＬＤＨ２酵素の基質の存在下で接触させること；および変異体ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性に対する試験化合物の効果がある場合はそれを決定することを含む。
【０２２７】
「酵素活性が低下した変異体ＡＬＤＨ２酵素」とは、図１Ａに示したアミノ酸配列（配列番号１）を含む、または図１Ａに示したアミノ酸配列のアミノ酸１８〜５１７を含むＡＬＤＨ２酵素と比較して酵素活性が低下した変異体ＡＬＤＨ２酵素である、例えば、変異体ＡＬＤＨ２酵素は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、図１Ａに示したアミノ酸配列（配列番号１）を含む、または図１Ａに示したアミノ酸配列のアミノ酸１８〜５１７を含むＡＬＤＨ２酵素によって示される酵素活性の約９０％未満、約８０％未満、約７５％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、または約２％未満を示す。或る実施形態では、変異体ＡＬＤＨ２酵素は、図１Ｂに示したアミノ酸配列（配列番号２）、または図１Ｂに示したアミノ酸配列のアミノ酸１８〜５１７を含む。
【０２２８】
本明細書中で使用する用語「決定すること」とは、定量的および定性的な決定をどちらもいい、したがって、用語「決定すること」とは、本明細書中で「アッセイすること」、「測定すること」などと互換性があるように使用する。
【０２２９】
用語「候補剤」、「試験薬剤」、「薬剤」、「物質」、および「化合物」は、本明細書中で互換性があるように使用する。候補剤には、数々の化学クラス、典型的には、合成、半合成、または天然に存在する無機または有機分子が包含される。候補剤には、合成または天然化合物の大きなライブラリ中に見つかるものが含まれる。例えば、合成化合物ライブラリが、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（英国コーンウォール州Ｔｒｅｖｉｌｌｅｔ）、ＣｏｍＧｅｎｅｘ（カリフォルニア州Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）、およびＭｉｃｒｏＳｏｕｒｃｅ（コネチカット州Ｎｅｗ  Ｍｉｌｆｏｒｄ）から市販されている。珍しい化学ライブラリがＡｌｄｒｉｃｈ（ウィスコンシン州Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ）から入手可能である。あるいは、細菌、真菌、植物および動物の抽出物の形態の天然化合物のライブラリが、Ｐａｎ  Ｌａｂｓ（ワシントン州Ｂｏｔｈｅｌｌ）から入手可能であるか、または容易に生成可能である。
【０２３０】
候補剤は、５０より大きく約１０，０００ダルトン未満の分子量を有する小さな有機または無機化合物であってよく、例えば、候補剤は、約５０ダルトン〜約１００ダルトン、約１００ダルトン〜約１５０ダルトン、約１５０ダルトン〜約２００ダルトン、約２００ダルトン〜約５００ダルトン、約５００ダルトン〜約１０００ダルトン、約１，０００ダルトン〜約２５００ダルトン、約２５００ダルトン〜約５０００ダルトン、約５０００ダルトン〜約７５００ダルトン、または約７５００ダルトン〜約１０，０００ダルトンの分子量を有していてよい。候補剤は、タンパク質との構造的相互作用に必要な官能基、特に水素結合を含んでいてよく、少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボキシル基を含んでいてよく、官能的化学基を少なくとも２つ含んでいてよい。候補剤は、上記官能基のうちの１つまたは複数で置換された、環状炭素もしくはヘテロ環構造および／または芳香族もしくはポリ芳香族構造を含み得る。候補剤はまた、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造的類似体またはその組合せを含めた生体分子からも見つかる。
【０２３１】
本発明のアッセイには、試料（試験薬剤を存在させず、例えば、変異体ＡＬＤＨ２酵素および基質を含む試料）が含まれる、適切な対照が含まれる。一般に、様々な濃度に対する示差的応答を得るために、複数のアッセイ混合物を様々な薬剤濃度で並行して実行する。典型的には、これらの濃度のうちの１つが、陰性対照、すなわち、ゼロ濃度または検出レベル未満として役割を果たす。
【０２３２】
様々な他の試薬をスクリーニングアッセイに含め得る。これらには、最適酵素活性を容易にするためおよび／または非特異的もしくはバックグラウンド活性を減少させるために使用する薬剤を含めた、塩、中性タンパク質、例えばアルブミン、洗剤などの試薬が含まれる。プロテアーゼ阻害剤、抗微生物剤などの、アッセイの効率を向上させる試薬を使用し得る。アッセイ混合物の構成成分を、必要な活性をもたらす任意の順序で加える。インキュベーションを任意の適切な温度、典型的には４℃〜４０℃で行う。インキュベーション時間は最適な活性のために選択するが、迅速な高スループットスクリーニングを容易にするために最適化してもよい。典型的には、０．１時間〜１時間が十分である。
【０２３３】
目的の試験化合物は、変異体ＡＬＤＨ２の酵素活性を、試験化合物が存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる化合物である。
【０２３４】
或る実施形態では、目的の試験化合物は、配列番号２（図１Ｂに示す）に記載の、または配列番号２のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含むＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性を、試験化合物が存在しない場合のＡＬＤＨ２ポリペプチドの酵素活性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％（すなわち２倍）、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、もしくは少なくとも約５０倍、または５０倍よりも高く増加させる化合物である。
【０２３５】
或る実施形態では、目的の試験化合物はＡＬＤＨ２に特異的な化合物である、例えば、試験化合物は、変異体ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を増加させるが、サイトゾルアルデヒドデヒドロゲナーゼ−１（ＡＬＤＨ１）の酵素活性を実質的に増加させない、例えば、試験化合物は、変異体ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を少なくとも約５％以上増加させる濃度で使用した場合に、ＡＬＤＨ１酵素の酵素活性を、増加させる場合は約５％未満、約２％未満、または約１％未満増加させる。或る実施形態では、目的の試験薬剤は、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ）の酵素活性を実質的に増加させない、例えば、目的の試験薬剤は、変異体ＡＬＤＨ２酵素の酵素活性を少なくとも約５％以上増加させる濃度で使用した場合に、ＡＤＨの酵素活性を、増加させる場合は約５％未満、約２％未満、または約１％未満増加させる。
【０２３６】
或る実施形態では、目的の試験化合物は、約１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜約２５ｎＭ、約２５ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約７５ｎＭ、約７５ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約７５０ｎＭ、約７５０ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、約７５μＭ〜約１００μＭ、約１００μＭ〜約２５０μＭ、約２５０μＭ〜約５００μＭ、または約５００μＭ〜約１ｍＭのＥＣ５０を有する。
【０２３７】
候補剤を、トリパンブルー色素排除、ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド）アッセイなどの周知のアッセイを用いて、アッセイで使用する細胞に対してそれが示し得る任意の細胞毒性がある活性について評価する。細胞毒性がある活性を示さない薬剤が候補剤とみなされる。
【０２３８】
多くの実施形態では、スクリーニング方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、細胞を含まないアッセイで実施する。或る実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞を含まないアッセイでは精製した変異体ＡＬＤＨ２を用い、「精製した」とは、汚染物質または任意の他の望ましくない構成成分を含まないことをいう。対象のスクリーニング方法に適した精製した変異体ＡＬＤＨ２は、少なくとも約５０％純粋、少なくとも約６０％純粋、少なくとも約７０％純粋、少なくとも約７５％純粋、少なくとも約８０％純粋、少なくとも約８５％純粋、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、少なくとも約９８％純粋、少なくとも約９９％純粋、または９９％を超えて純粋である。
【０２３９】
或る実施形態では、精製した変異体ＡＬＤＨ２は、酵素活性を維持するために１つまたは複数の安定化剤を加えることによって、安定化される。或る実施形態では、精製した変異体ＡＬＤＨ２の溶液は、ミトコンドリアＡｌｄＤＨ２および約１０％〜約５０％のグリセロール、例えば、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約３０％〜約３５％、約３５％〜約４０％、約４０％〜約４５％、または約４５％〜約５０％のグリセロールの水溶液を含む。或る実施形態では、ミトコンドリアＡｌｄＤＨ２の溶液は、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡ）；ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌなどの塩；トリス緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、ピロリン酸ナトリウム緩衝液などの緩衝液；１つまたは複数のプロテアーゼ阻害剤などのうちの１つまたは複数をさらに含む。
【０２４０】
或る実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞を含まないアッセイでは組換え変異体ＡＬＤＨ２を用いる。組換え変異体ＡＬＤＨ２は、単細胞微生物、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物中で単細胞の実体として増殖させた多細胞生物の細胞などの様々な宿主細胞中で容易に調製される。適切な宿主細胞には、大腸菌などの細菌細胞；出芽酵母、ピキア・パストリス、ハンゼヌラ・ポリモルファ、クルイベロマイセス・ラクチス、ヤロウイア・リポリティカ、トルラ酵母、シゾサッカロマイセス・ポンベなどの酵母細胞；キイロショウジョウバエ細胞などの昆虫細胞；アフリカツメガエル細胞などの両生類細胞；ＣＨＯ細胞、３Ｔ３細胞などの哺乳動物細胞などが含まれる。或る実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞を含まないアッセイでは、ヒト変異体ＡＬＤＨ２、例えば、図１Ｂに示した配列のアミノ酸１８〜５１７に記載のアミノ酸配列を含む変異体ＡＬＤＨ２酵素を用いる。或る実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞を含まないアッセイでは、大腸菌細胞中で組換えによって産生した変異体ＡＬＤＨ２を用いる。
【０２４１】
或る実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞を含まないアッセイでは、融合パートナーとインフレームで融合した変異体ＡＬＤＨ２を含む融合タンパク質を用いる。或る実施形態では、融合パートナーは変異体ＡＬＤＨ２ポリペプチドのアミノ末端と結合している。他の実施形態では、融合パートナーは変異体ＡＬＤＨ２ポリペプチドのカルボキシル末端と結合している。他の実施形態では、融合パートナーは、変異体ＡＬＤＨ２ポリペプチドの内部の位置で変異体ＡＬＤＨ２ポリペプチドとインフレームで融合している。適切な融合パートナーには、それだけには限定されないが赤血球凝集素、ＦＬＡＧなどを含めたエピトープタグを含めた免疫学的タグ；それだけには限定されないが蛍光タンパク質、酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼなど）などを含めた、検出可能なシグナルを提供するタンパク質；融合タンパク質の精製または単離を容易にするポリペプチド、例えば、６Ｈｉｓタグ（例えばＡＬＤＨ２／６Ｈｉｓ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼなどの金属イオン結合ポリペプチドなど；細胞内局在化をもたらすポリペプチド；および細胞からの分泌をもたらすポリペプチドが含まれる。
【０２４２】
或る実施形態では、融合パートナーはエピトープタグである。或る実施形態では、融合パートナーは金属キレート化ペプチドである。或る実施形態では、金属キレート化ペプチドはヒスチジン多量体、例えば（Ｈｉｓ）６である。或る実施形態では、（Ｈｉｓ）６多量体は変異体ＡＬＤＨ２のアミノ末端と融合している。他の実施形態では、（Ｈｉｓ）６多量体は変異体ＡＬＤＨ２のカルボキシル末端と融合している。（Ｈｉｓ）６−変異体ＡＬＤＨ２の融合タンパク質は、様々な利用可能なニッケル親和性カラムのうちの任意のもの（例えばＨｉｓ結合樹脂、Ｎｏｖａｇｅｎ）を使用して精製する。
【０２４３】
ＡＬＤＨ２のアッセイは当分野で知られており、任意の既知のアッセイを対象のスクリーニング方法で使用することができる。アッセイの例は、例えば、Ｓｈｅｉｋｈ他（（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１８８１７〜１８８２２）およびＦａｒｒｅｓ他（（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１３８５４〜１３８６０）を含めた様々な出版物中に見つかる。例えば、ＡＬＤＨ２酵素活性を、２５℃で、５０ｍＭのピロリン酸ナトリウムＨＣｌ緩衝液、ｐＨ９．０、１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４、または５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４中でアッセイし、但し、緩衝液には、ＮＡＤ＋（例えば、０．８ｍＭのＮＡＤ＋、またはそれより高いもの、例えば、１ｍＭ、２ｍＭ、または５ｍＭのＮＡＤ＋）および１４μＭのプロピオンアルデヒドなどの基質が含まれる。ＮＡＤ＋の還元を、分光光度計を用いて３４０ｎｍで、または蛍光微小光度計を用いた蛍光増加によって監視する。
【０２４４】
ＡＬＤＨ２酵素活性は、標準の分光光度方法を用いて、例えば、ＵＳ２００５／０１７１０４３、またはＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）の酸化形態からその還元形態ＮＡＤＨの還元反応を３４０ｎｍで測定することによって、アッセイすることができる。例示的なアッセイでは、反応は、２５℃で、０．１のＮａＰＰｉ緩衝液、ｐＨ９．５、２．４ｍＭのＮＡＤ＋および基質として１０ｍＭのアセトアルデヒド中で実施する。酵素活性は、ＵＳ２００５／０１７１０４３、またはＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、ＮＡＤ＋からＮＡＤＨへの還元反応によって３４０ｎｍで測定する。あるいは、ＮＡＤＨの生成を、ＮＡＤＨを消費し、検出可能なシグナルを提供する別の酵素反応と連結させることができる。そのような酵素反応の例は、ＵＳ２００５／０１７１０４３、またはＷＯ２００５／０５７２１３に記載の、リザズリンをその酸化した蛍光化合物レゾルフィンへと還元する、ジアフォラーゼに基づいた反応である。蛍光レゾルフィンを５９０ｎｍで検出することにより、ＡＬＤＨ２酵素活性の任意の変化のための、増幅されたより高感度のシグナルがもたらされる。
【０２４５】
非限定的な一例として、ＡＬＤＨ２酵素活性の１２０μｌの反応混合物は以下の構成成分を含む：
４３μｌの１５０ｍＭのピロリン酸ナトリウム（ＮａＰＰｉ）緩衝液、ｐＨ９．０；
３０μｌの１０ｍＭのＮＡＤ＋；
１５μｌの８０ｍＭのアセトアルデヒド；
１μｌのリザズリン（Ｈ２Ｏ中に０．２ｍｇ／ｍｌ）；
１μｌのジアフォラーゼ（１単位、例えばクロストリジウム・クライベリ由来）；
２μｌの変異体ＡＬＤＨ２（例えば、２μｌの変異体ＡＬＤＨ２、（０．５〜２μｇ／μｌ）；および
試験する薬剤を含む２８μｌの溶液、該薬剤は適切な溶媒（例えば、水溶液、ＤＭＳＯなど）に再懸濁させている。
【０２４６】
上述の反応の蛍光検出を表１に記載する。
【表１】
2015061836.tif 000032
この反応は、９６ウェル、３８４ウェル、１５３６ウェルのマイクロウェルプレートなどの中で実施するか、または他のスクリーニング様式に適用させることができる。
【実施例】
【０２４７】
以下の実施例は、当業者に本発明をどのように作製および使用するかの完全な開示および記載を提供するために記載し、本発明者らがその発明であるとみなすものの範囲を限定することを意図せず、また、これらは、以下の実験が行った実験のすべてまたはそれしか行っていないことを示すことを意図しない。使用した数字（例えば、量、温度など）に関して精度を保証する努力はなされているが、ある程度の実験誤差および偏差を考慮されたい。別段に指摘しない限りは、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはその付近である。標準の略記、例えば、ｂｐ、塩基対（複数可）；ｋｂ、キロ塩基（複数可）；ｐｌ、ピコリットル（複数可）；ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）；ｍｉｎ、分（複数可）；ｈまたはｈｒ、時間（複数可）；ａａ、アミノ酸（複数可）；ｋｂ、キロ塩基（複数可）；ｂｐ、塩基対（複数可）；ｎｔ、ヌクレオチド（複数可）；ｉ．ｍ．、筋肉内；ｉ．ｐ．、腹腔内；ｓ．ｃ．、皮下などを使用し得る。
【０２４８】
実施例１：ＡＬＤＨ２アゴニストの同定および特徴づけ
方法
ＡＬＤＨ２アゴニスト（活性化剤）およびアンタゴニスト（阻害剤）のｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング
化合物は、図２に模式図を示した方法を用いてスクリーニングした。本質的に、反応は、２５℃で、０．１のＮａＰＰｉ緩衝液、ｐＨ９．５、２．４ｍＭのＮＡＤ＋および基質として１０ｍＭのアセトアルデヒド中で実施する。酵素活性は、ＮＡＤ＋からＮＡＤＨへの還元反応によって３４０ｎｍで測定する。あるいは、ＮＡＤＨの生成を、ＮＡＤＨを消費し、検出可能なシグナルを提供する別の酵素反応と連結させることができる。そのような酵素反応の例は、リザズリンをその酸化した蛍光化合物レゾルフィンへと還元する、ジアフォラーゼに基づいた反応である。
【０２４９】
例えば、ＡＬＤＨ２酵素活性の１２０μｌの反応混合物は以下の構成成分を含む：
４３μｌの１５０ｍＭのピロリン酸ナトリウム（ＮａＰＰｉ）緩衝液、ｐＨ９．０；
３０μｌの１０ｍＭのＮＡＤ＋；
１５μｌの８０ｍＭのアセトアルデヒド；
１μｌのリザズリン（Ｈ２Ｏ中に０．２ｍｇ／ｍｌ）；
１μｌのジアフォラーゼ（１単位、例えばクロストリジウム・クライベリ由来）；
２μｌの変異体ＡＬＤＨ２（例えば、２μｌの変異体ＡＬＤＨ２、（０．５〜２μｇ／μｌ）；および
試験する薬剤を含む２８μｌの溶液、薬剤は適切な溶媒（例えば、水溶液、ＤＭＳＯなど）に再懸濁させている。
【０２５０】
上述の反応の蛍光検出を表１に記載する。
【表２】
2015061836.tif 000033
【０２５１】
ヒスチジンでタグ付けしたＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２タンパク質
ヒトＡＬＤＨ２のＥ４８７Ｋ変異体（図１Ｂに示すアミノ酸配列参照）およびポリ−ヒスチジンタグが含まれる融合タンパク質を合成し、ＡＬＤＨ２アゴニストのスクリーニングに使用した。ポリヒスチジン（Ｈｉｓ）タグとインフレームで融合したＥ８７Ｋ変異体をコードしている発現構築物を大腸菌内に導入し、イソプロピル−１−チオ−３−Ｄ−ガラクトシド（ＩＰＴＧ）を加えることによって発現を誘発させ、Ｈｉｓでタグ付けしたＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体が産生された。Ｈｉｓでタグ付けしたＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体を結合するために金属イオン親和性カラムを用いて、Ｈｉｓでタグ付けしたＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体を大腸菌抽出物から精製した。Ｈｉｓでタグ付けしたＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体をカラムから溶出させ、スクリーニングアッセイで使用してＡＬＤＨ２アゴニストを同定した。
【０２５２】
Ｈｉｓでタグ付けしたＥ４８７  ＡＬＤＨ２は図１Ｂに示すアミノ酸１８〜５１７に由来し、ＨｉｓタグはＥ４８７変異体のＮ末端と融合していた。
【０２５３】
ｅｘ  ｖｉｖｏアッセイ
ラット心臓のｅｘ  ｖｉｖｏランゲンドルフ調製物を、無流虚血および再灌流傷害によって生じた損傷を評価するためのモデルとして使用した。これは、患者における心筋梗塞の臨床的状態を模倣する実験モデルである。ラット心臓を切除し、大動脈を介してランゲンドルフ装置にカニューレ挿入した。３７℃に維持した標準の酸素化したクレブ−ヘンスレイト（Ｋｒｅｂ−Ｈｅｎｓｌｅｉｔ）緩衝液を用いて逆行灌流を実施した。すべての心臓を最初の５〜１０分間の灌流期間によって安定化し、続いて様々な心保護剤またはＡｌｄＤＨ２阻害剤を、試薬に応じて１０〜３０分間送達した。一部の代表的な実験で使用した試薬には、エタノール（５０ｍＭ）、εＰＫＣアイソザイム選択的活性化ペプチドおよび阻害ペプチド（１μＭ）、シアナミド（５ｍＭ）ならびにニトログリセリン（２μＭ）が含まれていた。その後、２５分間の無流、続いて６０分間の再灌流によって、虚血を導入した。
【０２５４】
虚血／再灌流の損傷度合は、２つの独立した一般的に認められているパラメータによって測定した。１つのアッセイでは、心臓切片の横断面を再灌流の直後に得て、梗塞の大きさを測定するために塩化２，３，５−トリフェニル−テトラゾリウム（ＴＴＣ）で染色した。別のアッセイでは、再灌流中に採取したそれぞれの心臓からの再灌流液からリン酸クレアチンキナーゼ活性を測定した。データにより、２つの方法で心損傷を評価するために比較可能な結果が得られたことが示された。同一試料の別の切片からそれぞれの心臓からのホモジネートも得て、アルデヒドデヒドロゲナーゼ酵素活性について分析した。酵素活性は、アセトアルデヒドを基質として、ＮＡＤ＋を補因子として用いた上述の標準の分光光度方法によって決定した。
【０２５５】
結果
ヒスチジンでタグ付けしたＥ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体を用いて、ＡＬＤＨ２活性化剤をスクリーニングした。試験した６３，０００個の化合物のうち、３つの化合物がＡＬＤＨ２活性化剤として同定された。最初の３つの化合物は以下のとおりである。
【０２５６】
【化３０】
2015061836.tif 000034
この化合物は化合物１とも呼ばれ、Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２，６−ジクロロベンズアミドである。
【０２５７】
【化３１】
2015061836.tif 000035
この化合物は化合物２とも呼ばれ、Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２，６−ジフルオロベンズアミドである。
【０２５８】
【化２９】
2015061836.tif 000036
この化合物は化合物３とも呼ばれ、Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２−ブロモベンズアミドである。
【０２５９】
化合物２および３の活性を、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体に対して試験した。結果を図３に示す。化合物２および化合物３は、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体の酵素活性を、対照（活性化剤化合物なし）の活性よりもそれぞれ約３００％および６００％増加させた。（図３：右および左パネルの両方でｎ＝３。）
【０２６０】
化合物３の２−ヨード変異体を合成した。変異体は、Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２−ヨードベンズアミドである。２−ヨード変異体および化合物１の活性を、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体に対して試験した。結果を図４に示す。化合物１および化合物３の２−ヨード変異体は、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体の酵素活性を、対照（活性化剤化合物なし）の活性よりもそれぞれ約９００％および７００％増加させた。（図４：ｎ＝３）。
【０２６１】
ＡＬＤＨ２アゴニスト特異性
化合物１、２、および３の活性を、野生型ＡＬＤＨ２（「野生型」ＡＬＤＨ２は、図１Ａに示すように位置４８７にグルタミン酸を有する）、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体、およびＡＬＤＨ１Ａ１に対して試験した。化合物の構造を図５Ａに示す。結果を図５Ｂおよび５Ｃに示す。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイでは、野生型ＡＬＤＨ２酵素の活性は４１％〜６５％である。化合物１〜３は、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体を１０μＭ〜２０μＭで３００％〜９００％活性化させた。ベンゾジオキソールベンズアミド化合物（例えば化合物１〜３）によるＡＬＤＨ２の活性化は選択的であるとみなされた。ＡＤＨ１の酵素活性またはアルデヒドデヒドロゲナーゼ１（ＡＬＤＨ１）の近縁種サイトゾル形態に対して、これらの化合物は有意な効果を持たなかった。
【０２６２】
心筋梗塞モデルにおけるＡＬＤＨ２アゴニストの活性。
化合物１が心筋を虚血−再灌流の損傷から保護できるかどうかを決定するために、化合物１の効果を心筋梗塞のｅｘ  ｖｉｖｏモデルで試験した。結果を図６Ａ〜６Ｄに示す。図６Ａに示すように、梗塞の大きさは５７．７±５．４％から４１．６±４．１まで有意に減少した、ｐ＜０．０５、ｎ＝７。図６Ｂは、Ｎ−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）−２，６−ジクロロベンズアミド（ＢＤＤＢ）が存在する場合および存在しない場合における、ＩＲ傷害に曝された心臓切片の画像を示す。白色の組織は梗塞している。図６ＣはＣＰＫ放出を示す。ＣＰＫ放出は、５５３０±３２９単位／リットルから４３９６単位／リットルまで有意に減少した＊Ｐ＜０．０５、ｎ＝８）。図６Ｄは、化合物１で処置した心臓におけるＡＬＤＨ２酵素活性の増加を示す、３．３±０．３０から２．５±０．１１μモルのＮＡＤＨ／分／タンパク質１ｍｇ、＊＊ｐ＜０．０１、ｎ＝６）。
【０２６３】
さらなる化合物の合成
いくつかのさらなる化合物を合成した。これらの化合物（ＸＯ−３、ＸＯ−４、ＸＯ−５、ＸＯ−６、ＸＯ−７、ＸＯ−８、ＸＯ−９、ＸＯ−１１、ＸＯ−１２、ＸＯ−１３、ＸＯ−２２、ＸＯ−２５、ＸＯ−２６、ＸＯ−２８、ＸＯ−２９、ＸＯ−３３、ＸＯ−３６、およびＸＯ−３９と呼ばれる）の構造は上記に示されている。
【０２６４】
ＸＯ−３、ＸＯ−４、ＸＯ−５、ＸＯ−６、ＸＯ−７、ＸＯ−８、ＸＯ−９、ＸＯ−１１、ＸＯ−１２、ＸＯ−１３、ＸＯ−２２、ＸＯ−２５、ＸＯ−２６、ＸＯ−２８、ＸＯ−２９、ＸＯ−３３、ＸＯ−３６、およびＸＯ−３９と呼ばれる化合物を、アミンを酸塩化物またはスルホン酸塩化物と、塩基の存在下で反応させることによって合成した。ある場合には、３，４−ジフルオロ−ベンジルアミンを塩化２−ブロモ−ベンゾイルと、ジクロロメタン中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で反応させて、化合物ＸＯ−４を形成した。
【０２６５】
すべての化合物は薄層クロマトグラフィー、１Ｈ−核磁気共鳴、および質量分析によって確認した。
【０２６６】
図７は、Ｅ４８７Ｋ  ＡＬＤＨ２変異体の活性に対するこれらの化合物（ＸＯ−３、ＸＯ−４、ＸＯ−５、ＸＯ−６、ＸＯ−７、ＸＯ−８、ＸＯ−９、ＸＯ−１１、ＸＯ−１２、ＸＯ−１３、ＸＯ−２２、ＸＯ−２５、ＸＯ−２６、ＸＯ−２８、ＸＯ−２９、ＸＯ−３３、ＸＯ−３６、およびＸＯ−３９）の効果を示す。すべての化合物は１０μＭで使用し、アッセイは二つ組で実施した。（図７：ｎ＝３）。
【０２６７】
実施例２：ＡＬＤＨ２阻害剤の同定および特徴づけ
「野生型」ＡＬＤＨ２酵素を使用して、化合物を上述のようにスクリーニングした。スクリーニングした６３，０００個の化合物のうち、６つの阻害剤が同定された。図８、９、および１０中でそれぞれ＃０６２９２３、＃０４６０７２、および＃０３２２０８と呼ぶ、化合物のうちの３つを、ＡＬＤＨ２酵素活性に対するその効果についてアッセイした。結果を図８〜１０に示す。図８に示すように、化合物＃０６２９２３は、０．６３μＭのＩＣ５０でＡＬＤＨ２活性を阻害した。（図３、４、および８〜１０では、ｘ軸の単位は３４０ｎｍでのＯＤであることに注意されたい。図３、４、および７〜１０では、ｙ軸の単位は時間（分）である。図９に示すように、化合物＃０４６０７２は、１．１４μＭのＩＣ５０でＡＬＤＨ２活性を阻害した。（図９：ｎ＝３）。図１０に示すように、化合物＃０３２２０８は、１．６２μＭのＩＣ５０でＡＬＤＨ２活性を阻害した。（図１０：ｎ＝３）。
【０２６８】
最初のスクリーニングでＡＬＤＨ２阻害剤として同定されたさらなる化合物の構造（化合物８〜１８と呼ぶ、上記）を上記に提供する。
【０２６９】
実施例３：ＢＤＤＢはｉｎ  ｖｉｖｏで虚血／再灌流傷害に対して保護する
雄のウィスターラット（２５０〜３００ｇ）を３％のイソフルランによって麻酔した。左前下行枝冠状動脈（ＬＡＤ）の結紮に使用した外科的処置は、公開されているプロトコルに基づいている。動物に挿管し、ハーバードげっ歯類人工呼吸器を用いて、８０回の呼吸／分の速度で人工呼吸させた（５〜１５ｍｍＨｇ）。維持麻酔は１％の吸入性イソフルランによって提供し、体温は、熱電対温度計と接続した直腸プローブおよび適切な暖房毛布を用いて３７℃に維持した。心臓を胸骨正中切開によって曝露させた。２０分間の安定化期間の後、ＬＡＤ冠状動脈の回りに、大動脈起始部からのその開始点近くに結紮糸を配置した。結紮糸の末端をポリエチレンチューブに通して小さな引き結びを形成し、その中でシリンジプランジャーを心筋表面上に静置した。冠状動脈閉塞は、結紮糸を引きながらチューブをプランジャーに押し付け、次いでチューブを止血鉗子でクランプすることによって行った。閉塞は、左心室の自由壁がすぐに蒼白する観察によって特定された。再流は結紮糸を解放することによって行った。
【０２７０】
心臓の曝露および安定化の後、ＢＤＤＢを、カテーテルと接続し、心尖部を通って左心室内に挿入した３０Ｇ針を用いて、左心室内に直接注入した。正しい配置は、少量の血液がカテーテルに逆流したことおよび死後の解剖によって確認した。カテーテルをシリンジと連結し、ＢＤＤＢを０．０８ｍｌ／分の速度、０．１６ｍｌの標的体積、および８．５ｍｇ／ｋｇの最終濃度で注入した。ＢＤＤＢ処置の５分後、ＬＡＤを閉塞させた。対照心臓には、同一体積のＤＭＳＯを同一の流速で注入した。すべての実験で、３５分間の閉塞に続いて６０分間の再灌流を行った。
【０２７１】
再灌流の終了時、心臓を切除し、０．９％の生理食塩水で流した。梗塞の大きさの分析は、ＴＴＣを用いたｅｘ  ｖｉｖｏ実験で記載のものと同じ手順で実施した。０．４５ｍｌの血液試料を、０．０５ｍｌのヘパリンで準備刺激したシリンジ内に、ＬＡＤ閉塞の終了時点の１５分および３０分後に、左心室の尖端穿孔によって、引き込んだ。血清を卓上遠心分離器で５０００ｇ、５分間の遠心分離によって分離し、リン酸クレアチンキナーゼ（ＣＰＫ）値を決定した。
【０２７２】
結果を図１１に示す。左前下行枝（ＬＡ）冠状動脈の結紮により、左心室の自由壁に４３％の梗塞、および顕著な血液中へのクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）放出がもたらされた（図１１）。８．５ｍｇ／ｋｇのＢＤＤＢを左心室内にＬＡＤ結紮５分前に投与することにより、心筋梗塞の度合が約６０％、ＣＰＫ放出が約５７％減少した（図１１、ｐ＜０．０１）。これらの結果により、ＡＬＤＨ２の活性化が、心臓を虚血の損傷からｉｎ  ｖｉｖｏで保護するために十分であることが示された。
【０２７３】
実施例４：作用化合物ＸＯ４３、ＸＯ４４およびＢＤＤＢによるＡＬＤＨ２の活性化
図１２に示すＢＤＤＢ誘導体化合物、ＸＯ４３およびＸＯ４４を合成し、ＡＬＤＨ２酵素アッセイで試験した。どちらの化合物も、０．１のピロリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ９．５、２．４ｍＭのＮＡＤ＋および基質として１０ｍＭのアセトアルデヒドを２５℃で用いた標準のアッセイにおいて、ＡＬＤＨ２＊１およびＡＬＤＨ２＊２組換え酵素を活性化する潜在性を示した。酵素活性は、ＵＳ２００５／０１７１０４３およびＷＯ２００５／０５７２１３に記載のように、３４０ｎｍでのＮＡＤ＋からＮＡＤＨへの還元反応によって測定した。データを図１２に提示する。ＸＯ４３、ＸＯ４４およびＢＤＤＢは、１０〜２００μＭの範囲でＡＬＤＨ２活性化の用量依存性効果を示した。ＡＬＤＨ２＊１野生型酵素は約１８０％の活性の増加を示し、ＡＬＤＨ２＊２突然変異体酵素は、より高濃度で＞９００％の増加を示した。（図１２：右および左パネルの両方でｎ＝３。）
【０２７４】
本発明は、その具体的な実施形態を参照しながら記載したが、当業者には、本発明の真の精神および範囲から逸脱せずに、様々な変更を行ってもよく、等価物で置き換えてもよいことを理解されよう。さらに、本発明の特定の状況、材料、組成物、方法、方法ステップまたは複数のステップ、目的、精神および範囲に適応するために、多くの変形を行い得る。すべてのそのような変形が、本明細書に添付の特許請求の範囲内にあることを意図する。
【０２７５】
例示的な実施形態
１．  以下の式：
【化１】
2015061836.tif 000037
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のそれぞれは、Ｈ；ハロ；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択され；
ＡはＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２であり；
Ａｒ１およびＡｒ２は、置換または非置換のアリール基から独立して選択される］
で表される化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体。
２．  以下の式：
【化２】
2015061836.tif 000038
［式中、ＸｎおよびＸｙはそれぞれ、独立して、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはハロゲンであり；ｎは整数０または１であり；ｙは整数０または１であり；
・・・（点線）は任意選択の結合であり；ｚは整数０、１、または２であり；
ＡはＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２であり；
Ａｒは非置換または置換のアリール基であり；
Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ、Ｈ；ハロ（例えば、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード）；置換または非置換のフェニル基；脂肪族基、アルキル基；置換アルキル基；アルケニル基；アルキニル基；置換または非置換の環状基；置換または非置換のヘテロ環基；置換または非置換のアリール基；および置換または非置換のヘテロアリール基から独立して選択される］
で表される化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体。
３．  以下の式：
【化３】
2015061836.tif 000039
［式中、ＸはＯまたはＦであり；
・・・（点線）は任意選択の結合であり；
ｚは整数０、１、または２であり、但し、１）Ｘ＝Ｆであり、・・・が結合でない場合、ｚ＝０であり；２）ｚ＝０であり、Ｘ＝Ｏであり、・・・は結合ではなく、１つまたは複数の酸素原子（Ｘ）が存在する場合、酸素はメチル基と結合しており；
ｎは整数０または１であり；
ｙは整数０または１であり；
Ａ＝ＣまたはＳであり、Ａ＝Ｃである場合はａ＝１であり；Ａ＝Ｓである場合はａ＝２であり；
Ａｒはフェニルまたはチオフェン環であり；Ａｒは、カルボニルまたはスルホニル基に対してオルトの位置で、メチル、ハロ、トリフルオロメチル、またはフェニルから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されており；Ａｒは、カルボニルまたはスルホニル基に対してメタまたはパラのハロゲンによって任意選択で置換されており；Ａｒがチオフェン環である場合、カルボニルまたはスルホニル基は、２または３位でチオフェン環と結合している］
で表される化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、類似体、もしくは誘導体。
４．  ＡがＣであり、Ａｒが、カルボニル基に対してオルトの位置で置換されたフェニル環である、実施形態３に記載の化合物。
５．  置換基がハロゲンである、実施形態４に記載の化合物。
６．  ａ）実施形態１、実施形態２、または実施形態３に記載の化合物；および
ｂ）製薬上許容される賦形剤
を含む薬剤組成物。
７．  式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、またはＶＩＩの化合物。
８．  ａ）実施形態７に記載の化合物；および
ｂ）製薬上許容される賦形剤
を含む薬剤組成物。
９．  個体に有効量の実施形態６に記載の薬剤組成物を投与することを含む、それを必要としている個体において虚血性ストレス状態を治療する方法。
１０．  虚血状態が心虚血または脳卒中である、実施形態９に記載の方法。
１１．  薬剤組成物を、筋肉内、静脈内、皮下、および経口から選択される経路によって投与する、実施形態９に記載の方法。
１２．  個体がＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子を有する、実施形態９に記載の方法。
１３．  個体に有効量の実施形態６に記載の薬剤組成物を投与することを含む、それを必要としている個体において急性または慢性のフリーラジカル関連疾患を治療する方法。
１４．  薬剤組成物を、筋肉内、静脈内、皮下、および経口から選択される経路によって投与する、実施形態１３に記載の方法。
１５．  個体がＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子を有する、実施形態１３に記載の方法。
１６．  それを必要としている個体に、ニトログリセリン化合物、および実施形態１から３のいずれか一項に記載の化合物を、狭心症を治療するために有効な合わせた量で同時投与することを含む、狭心症を治療する方法。
１７．  ニトログリセリンおよびＡＬＤＨ２アゴニストを実質的に同時に投与する、実施形態１６に記載の方法。
１８．  個体がＡＬＤＨ２＊２対立遺伝子を有する、実施形態１６に記載の方法。
１９．  個体に有効量の実施形態６に記載の組成物を投与することを含み、化合物が、エタノール、メタノール、エチレングリコールモノメチルエーテル、塩化ビニル、異種アルデヒド、生体アルデヒド、または生体アルデヒドを生じさせる化合物である、個体において毒性レベルで存在する化合物のレベルを毒性レベル未満まで低下させる方法。
２０．  個体に有効量の実施形態８に記載の薬剤組成物を投与することを含む、それを必要としている個体において固形腫瘍を治療する方法。
２１．  薬剤を癌の標準の治療のアジュバントとして投与する、実施形態２０に記載の方法。
２２．  標準の癌治療が放射線療法である、実施形態２１に記載の方法。
２３．  標準の癌治療が化学療法である、実施形態２１に記載の方法。
２４．  ａ）Ｅ４８７Ｋ置換を含む変異体ＡＬＤＨ２ポリペプチドをＡＬＤＨ２の基質および試験薬剤と接触させること；ならびに
ｂ）変異体ＡＬＤＨ２の酵素活性に対する試験薬剤の効果がある場合はそれを決定し、変異体ＡＬＤＨ２の酵素活性を増加させる薬剤はＡＬＤＨ２アゴニストであること
を含む、ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ２）ポリペプチドのアゴニストを同定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
２５．  前記決定ステップが、生成されたＮＡＤＨのレベルを測定することを含む、実施形態２４に記載の方法。
２６．  前記測定が蛍光定量アッセイの使用を含む、実施形態２５に記載の方法。
２７．  変異体ＡＬＤＨ２が、配列番号２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２４に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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