(57)【要約】【課題】  水中でのＪ−ＩＣＧの解離を抑制することができ、保存安定性が高い造影用組成物を提供すること。【解決手段】  インドシアニングリーンのＪ会合体を含む水溶液を有する造影用組成物であって、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、及びアンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種の保存安定化剤をさらに有することを特徴とする造影用組成物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インドシアニングリーンのＪ会合体を含む水溶液を有する造影用組成物であって、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、及びアンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種の保存安定化剤をさらに有することを特徴とする造影用組成物。
【請求項２】
前記保存安定化剤が、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、アンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種である請求項１に記載の造影用組成物。
【請求項３】
前記保存安定化剤のモル濃度が、インドシアニングリーンのモル濃度に対して１倍以上である請求項１または２に記載の造影用組成物。
【請求項４】
前記保存安定化剤のモル濃度が、インドシアニングリーンのモル濃度に対して１．２５倍以上である請求項１乃至３のいずれか一項に記載の造影用組成物。
【請求項５】
前記保存安定化剤のモル濃度が、インドシアニングリーンのモル濃度に対して１００倍以上である請求項１乃至４のいずれか一項に記載の造影用組成物。
【請求項６】
前記インドシアニングリーンのＪ会合体が粒子形状をなし、粒径が１ｎｍ以上１０μｍ以下である請求項１乃至５のいずれか一項に記載の造影用組成物。
【請求項７】
前記インドシアニングリーンのＪ会合体が粒子形状をなし、粒径が１００ｎｍ以下である請求項１乃至６のいずれか一項に記載の造影用組成物。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の造影用組成物と分散媒とを有する光音響用の造影用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インドシアニングリーンのＪ会合体を有する造影用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
インドシアニングリーン（Ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、以下ＩＣＧと略すことがある）は近赤外領域に最大吸収波長をもつ蛍光色素である。
【０００３】
本明細書において、ＩＣＧとはシアニン骨格を有し、下記の式（１）で示される構造を有する化合物を指す。
【０００４】
【化１】
2015040185.tif 000002
【０００５】
なお、式（１）において
ＩＣＧは肝機能検査、循環機能検査、乳癌のセンチネルリンパ節の同定等の診断に用いられている体内診断用医薬品である。このようにＩＣＧは診断のためにヒト体内に安全に投与することができる医薬品であり、光音響造影剤等への応用にも期待されている。
【０００６】
光音響造影剤は、光音響イメージングに用いられる造影剤である。光音響イメージングは測定領域に光を照射することにより、測定領域内に存在する光吸収体分子が光を吸収した後に放出する熱が起こす体積膨張により生じる音響波の強度と音響波の発生位置を検出することにより、測定対象の画像を得る方法である。光音響イメージングにおいて、測定領域からの音響波の強度を大きくするため、大きな光吸収特性を持った材料から構成される光音響造影剤を用いることが有効である。
【０００７】
ＩＣＧは特定の条件下においてＪ会合体（以下、Ｊ−ＩＣＧと略すことがある）を形成することが知られている（非特許文献１）。ＩＣＧのＪ会合体は、ＩＣＧの多量体の一種であり、ＩＣＧの単量体（以下、単にＩＣＧと呼ぶ）に比べて、吸光度の極大が長波長側に移動し、８８０ｎｍ乃至９１０ｎｍに吸光度の極大を持つ。以下、ＩＣＧのＪ会合体をＪ−ＩＣＧ、ＩＣＧの単量体を単にＩＣＧと呼ぶ。
【０００８】
Ｊ−ＩＣＧはその光吸収帯が鋭くなることが知られ、同濃度の単量体と比較して、吸収極大波長における吸光度がＩＣＧに比べて数倍に増大し、大きな光吸収特性を持った材料である。
【０００９】
このようにＪ−ＩＣＧは光音響造影剤の良好な材料として期待できる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ２２０，１９９７，Ｐａｇｅｓ３８５−３９２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者は、Ｊ−ＩＣＧを水中で保存すると、その水溶液の８８０ｎｍ乃至９１０ｎｍの吸光度が低下することを見出した。８８０ｎｍ乃至９１０ｎｍの吸光度が低下したのは、Ｊ−ＩＣＧが解離し、ＩＣＧ単量体となってしまったからだと考えられる。
【００１２】
すなわち、Ｊ−ＩＣＧを光音響造影剤として提供するにあたり、水溶液中でのＪ−ＩＣＧの保存安定性を高める必要があった。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明に係る造影用組成物は、インドシアニングリーンのＪ会合体を含む水溶液を有する造影用組成物であって、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、及びアンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種の保存安定化剤をさらに有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に係る造影用組成物によれば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、及びアンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種を含むため、水中でのＪ−ＩＣＧの解離を抑制することができ、保存安定性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】４℃の各試薬中のＪ−ＩＣＧの保存安定性評価の結果を示すグラフである。
【図２】２５℃の各試薬中のＪ−ＩＣＧの保存安定性評価の結果を示すグラフである。
【図３】３７℃の各試薬中のＪ−ＩＣＧの保存安定性評価の結果を示すグラフである。
【図４】塩化ナトリウム濃度と、塩化ナトリウム水溶液中でのＪ−ＩＣＧの保存安定性との関係を示すグラフである。
【図５】１０ｍＭアルカリ金属塩等の水溶液中でのＪ−ＩＣＧの保存安定性の評価結果を示すグラフである。
【図６】１ｍＭアルカリ金属塩等の水溶液中でのＪ−ＩＣＧの保存安定性の評価結果を示すグラフである。
【図７】０．１ｍＭアルカリ金属塩等の水溶液中でのＪ−ＩＣＧの保存安定性の評価との関係を示すグラフである。
【図８】アルカリ土類金属塩の濃度と、アルカリ土類金属塩水溶液中でのＪ−ＩＣＧの保存安定性の評価との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施形態について説明する。
【００１７】
（造影用組成物）
本実施形態に係る造影用組成物は、インドシアニングリーンのＪ会合体を含む水溶液がさらに保存安定化剤を有する。本発明者は、水溶液中でＪ−ＩＣＧの水中での保存安定性を高める保存安定化剤を検討した結果、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアンモニウムイオンが保存安定性を高める効果があることを見出した。
【００１８】
ここで、水は分子間の相互作用により特定の構造体（構造水）を形成しているが、一部の水分子は溶質を水和できる自由水として存在する。Ｊ−ＩＣＧは自由水により水和し、多量体であったものが解離して、単量体となると考えられる。また、ＩＣＧは親水性の硫酸基（負電荷）をもつため、硫酸基部分が水和し、Ｊ会合体が水中で解離すると推測される。
【００１９】
保存安定化剤によりＪ−ＩＣＧの解離が抑制される理由として２つのことが考えられる。
【００２０】
第１に、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアンモニウムイオンが自由水をひきつけ、これらイオンの周囲に固定する。そのため、ＩＣＧの周囲の自由水の量が減少し、Ｊ−ＩＣＧの解離に必要な自由水が減少するため、Ｊ−ＩＣＧの解離が抑制される。
【００２１】
第２に、ＩＣＧの有するアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアンモニウムイオンと、硫酸基とが結合することで、硫酸基の水和が抑制され、Ｊ−ＩＣＧの解離が抑制される。
【００２２】
このような理由により、本実施形態に係る造影用組成物の保存安定性は高い。
【００２３】
本実施形態において、保存安定化剤は、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、およびアンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種であればよい。
【００２４】
また、２価であるアルカリ土類金属イオンは、１価であるアルカリ金属イオンやアンモニウムイオンに比べて、正電荷が２倍であるため、上記の自由水を固定する力がより大きいため、保存安定化剤としてより好ましい。
【００２５】
（Ｊ−ＩＣＧ）
本実施形態において、Ｊ−ＩＣＧは８８０ｎｍ乃至９１０ｎｍに吸光度の極大をもつものであれば特に限定されない。Ｊ−ＩＣＧは粒子形状をなす場合、一般的に１ｎｍ以上１０μｍ以下の粒径を有し、このような粒径Ｊ−ＩＣＧは、腫瘍造影、リンパ節造影に用いることができる。本実施形態におけるＪ−ＩＣＧの粒径は１０ｎｍ以上１μｍ以下であることが好ましく、腫瘍造影用途では１００ｎｍ以下であることがさらに好ましい。粒径が１００ｎｍ以下である粒子は、腫瘍に集積しやすいからである。
【００２６】
ただし造影用組成物は注射剤として用いるが、皮下投与可能な懸濁性注射剤では粒径１５０μｍ以下、血管内投与が可能な乳濁性注射剤では粒径７μｍ以下と規定されている。よってＪ−ＩＣＧの粒径はこの範囲であれば適用可能である。
【００２７】
ここで、Ｊ−ＩＣＧの製法を例示する。１．５〜８ｍＭ濃度のＩＣＧの水溶液を７０℃で累計１２時間加温した後、室温で６日間静置以上することにより、ＩＣＧのＪ会合体を調製することができる。
【００２８】
（保存安定化剤）
本実施形態に係る保存安定化剤は、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、アンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種であればよく、２種以上を組み合わせてもよい。
【００２９】
アルカリ金属イオンの例としては、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、ルビジウムイオン、セシウムイオンが挙げられる。
【００３０】
アルカリ土類金属イオンの例としては、ベリリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、ストロンチウムイオン、バリウムイオンが挙げられる。
【００３１】
特に医薬品の添加剤としてはナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、アンモニウムイオンからなる群から選択される少なくとも１種を用いることが好ましい。
【００３２】
また、本実施形態に係る保存安定化剤は、薬理上許容できる範囲内でアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、アンモニウムイオンから構成される塩を使用できる。
【００３３】
また、本実施形態における保存安定化剤の好ましいモル濃度としてＩＣＧのモル濃度に対して１倍以上であることが好ましく、１．２５倍以上であることがさらに好ましく、１００倍以上であることが特に好ましい。
【００３４】
また、本実施形態における保存安定化剤の好ましいモル濃度としてＩＣＧのモル濃度に対して、アルカリ土類金属イオンは１倍以上、アルカリ金属イオン及びアンモニウムイオンは１００倍以上であることが好ましい。
【００３５】
上限濃度は特に限定されないが、保存安定化剤が水に溶解できる濃度である必要がある。
【００３６】
また本実施形態に係る造影用組成物は、さらに保存安定化剤以外の添加剤を有していてもよい。
【００３７】
添加剤として例えば緩衝液などのｐＨ調整剤、あるいは等張化剤を用いることができる。
【００３８】
（光音響用の造影用組成物）
本実施形態に係る光音響用の造影用組成物は、本実施形態に係る造影用組成物と、分散媒とを有する。ここで分散媒は、本実施形態に係る化合物を分散させるための液状の物質であり、例えば注射用蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、ブドウ糖水溶液などが挙げられる。また、光音響造影効果を高めるための添加剤、すなわち、熱膨張率が高い材料や、比熱利用料が小さい材料などを適宜添加してもよい。
【００３９】
本実施形態に係る光音響用の造影用組成物は、上記本実施形態に係る造影用組成物をこの分散媒に予め分散させておいてもよい。また、本実施形態に係る造影用組成物と分散媒とをキットにしておき、生体内に投与する前に造影用組成物を分散媒に分散させて使用してもよい。
【００４０】
本実施形態における造影用組成物は光イメージングに用いることができる。
【００４１】
本実施形態において光イメージングとは、光を照射することで、イメージング（画像化）することを意味する。すなわち、本実施形態に係る造影用組成物に光が照射されることで、音響波や蛍光などを発する。発せられた音響波を検出することで光音響イメージングをすることができ、発せられた蛍光を検出することで蛍光イメージングをすることができる。なお、光音響イメージングは、光音響トモグラフィー（断層撮影法）を含む概念である。
【実施例】
【００４２】
本発明に係る造影用組成物の実施例について説明する。
【００４３】
以下の実施例ではＪ−ＩＣＧを有する造影用組成物の具体例を挙げているが、以下の実施例で記載している試薬や反応条件は、変更が可能であり、それらの変更は本発明の範囲に包摂されるものとする。したがって以下の実施例は、本発明の理解を助けることが目的であり、本発明の範囲を何ら制限するものではない。なお、図１乃至８において、８９５ｎｍ吸光度とは８９５ｎｍの波長の光における吸光度を意味する。
【００４４】
（実施例１）
（１）Ｊ−ＩＣＧ水溶液の調製
インドシアニングリーン（標準品、一般財団法人医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団社製）３１６ｍｇに５１ｍｌの、イオンを除去して得られた水（以下、単に水と記載する）を添加し、室温で超音波照射処理（３周波超音波洗浄器  ＶＳ−１００ＩＩＩ、アズワン社製）を１０分間行った。超音波照射処理は２８ｋＨｚで６０秒、４５ｋＨｚで６０秒、１００ｋＨｚを３秒のサイクルを繰り返して、全体として１０分間行い、８ｍＭのＩＣＧ水溶液を調製した。このＩＣＧ水溶液を７０℃で６時間加温し、１８時間室温で保存した後、再度７０℃で６時間加温した。その後２５℃で６日間保存しＪ−ＩＣＧ水溶液を調製した。
【００４５】
（２）保存安定化剤の調製
Ｊ−ＩＣＧ水溶液の保存安定性を高めるための保存安定化剤を調製した。ＭＥＳ（２−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ，ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ、同仁化学社製）、ＨＥＰＥＳ（２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、同仁化学社製）、ＰＩＰＥＳ（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−１，４−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、シグマ社製）、ＭＯＰＳ（３−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、同仁化学社製）、ＴＥＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、同仁化学社製）、ＣＡＰＳ（Ｎ−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、シグマ社製）、それぞれの試薬を水に溶解させ、１Ｍ溶液を調製し、水酸化ナトリウムと塩酸でｐＨを調整した。具体的にはＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳはｐＨ７．０、ＣＡＰＳはｐＨ１０．０に調整した。ｐＨを調整して得られたこれらの溶液を水で希釈して１０ｍＭ溶液をとした。これら調製した試薬をＧｏｏｄ緩衝液と呼ぶ。
【００４６】
リン酸二水素ナトリウム・２水和物（キシダ化学社製）とリン酸水素二ナトリウム・１２水和物（和光純薬社製）をそれぞれ水に溶解させ、１Ｍの水溶液を調製した。これら２つの溶液の混合比を変えて混和し、ｐＨ３．０、ｐＨ７．０、ｐＨ１２．１の１Ｍのリン酸緩衝液を調製した。これらの１Ｍリン酸緩衝液を水で希釈してそれぞれ１０ｍＭの水溶液とした。調製した試薬をリン酸緩衝液と呼ぶ。
【００４７】
クエン酸一水和物（和光純薬社製）とクエン酸三ナトリウム二水和物（ナカライテスク社製）をそれぞれ水に溶解し、１Ｍ溶液を調製した。これら２つの溶液をｐＨ３．０になるように混合し、１Ｍクエン酸緩衝液を調製した。１Ｍクエン酸緩衝液を水で希釈して１０ｍＭの水溶液とした。調製した試薬をクエン酸緩衝液と呼ぶ。
【００４８】
炭酸水素ナトリウム（ナカライテスク社製）と炭酸ナトリウム（ナカライテスク社製）をそれぞれ水に溶解し、１Ｍの水溶液を調製した。これら２つの溶液をｐＨ１０．０になるように混合し、１Ｍの炭酸緩衝液を調製した。１Ｍ炭酸緩衝液を水で希釈して１０ｍＭの水溶液とした。調製した試薬を炭酸緩衝液と呼ぶ。
【００４９】
塩化ナトリウム（キシダ化学社製）を水に溶解し、１５０ｍＭ塩化ナトリウム水溶液を調製し用いた。調製した試薬を生理食塩水と呼ぶ。
【００５０】
上記調製したＪ−ＩＣＧの水溶液を保存安定化剤及び水でそれぞれ１／１０００希釈して造影用組成物を調製した。調製した造影用組成物を、４℃、２５℃、３７℃の温度条件でそれぞれ一定時間保存した後、８９５ｎｍの吸光度（以下ＯＤ８９５と記す）を測定した。吸光度測定はそれぞれの試薬で希釈したＪ−ＩＣＧ水溶液を９６穴プレートに２００μＬ／ｗｅｌｌ分注し、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ（サーモエレクトロン社製）で測定した。
【００５１】
その結果を図１に示した。４℃で保存した結果、水中での保存では経時的にＯＤ８９５が低下し、１か月後には完全にＯＤ８９５は消失した。一方すべての緩衝液及び生理食塩水中ではＯＤ８９５は１か月後でも低下は見られず、Ｊ−ＩＣＧを安定に保存できることが分かった。緩衝液の種類が異なっていても、あるいはｐＨ３．５〜１１の範囲でｐＨが異なっていても、Ｊ−ＩＣＧを安定に保存できることが分かった。これらＪ−ＩＣＧを安定に保存できる溶液にはナトリウムイオンが含まれており、ナトリウムイオンがＪ−ＩＣＧの安定化に寄与していることが分かった。
【００５２】
更に高温（２５℃、３７℃）で保存することにより、これらＪ−ＩＣＧを安定に保存できる溶液の安定化効果の大きさについても比較した。それらの結果を図２（２５℃保存）、図３（３７℃保存）に示した。高温保存した場合、水中での保存では２４時間後にＯＤ８９５が０近くとなった。一方、ｐＨ５．１〜１０の範囲の緩衝液及び生理食塩水中ではＯＤ８９５は１か月後でも比較的Ｊ−ＩＣＧを安定に保存できることが分かった。ただしｐＨ３．５のクエン酸緩衝液、ｐＨ３．６のリン酸緩衝液、ｐＨ１１のリン酸緩衝液中ではＯＤ８９５の低下が比較的大きく、強い酸性あるいは強い塩基性条件下で高温保存するとＪ−ＩＣＧの安定性が低下することも分かった。
【００５３】
（実施例２）
（Ｊ−ＩＣＧ安定化に必要な塩化ナトリウム濃度）
実施例１において、Ｊ−ＩＣＧの安定化のためにナトリウムイオンが有効であることが分かった。Ｊ−ＩＣＧ安定化のために有効なナトリウムイオン濃度範囲を調べ、結果を図４に示した。
【００５４】
方法は実施例１に準じ、生理食塩水（ＮａＣｌ  １５０ｍＭ）の代わりに、種々の濃度のＮａＣｌ水溶液を用い、２５℃保存条件で経時的にＯＤ８９５の吸光度を測定した。
【００５５】
ＩＣＧとして８μＭを含むＪ−ＩＣＧ水溶液において、ＮａＣｌ濃度１ｍＭ以上で１か月間安定に保存できた。ＩＣＧのモル濃度に対して、１２５倍のモル濃度以上のＮａＣｌを添加した場合が特に有効であり、ＩＣＧに対して、およそ１００倍のモル濃度以上のＮａＣｌを添加することによりＪ−ＩＣＧを特に安定に保存できることが分かった。
【００５６】
（実施例３）
（各種陽イオン添加によるＪ−ＩＣＧ安定化効果）
ナトリウムイオンはアルカリ金属イオンであり、他のアルカリ金属イオンにも同様な効果が見られるか調べた。同時にアルカリ土類金属イオンやアンモニウムイオンについても安定化効果を調べた。
【００５７】
方法は実施例１に準じ、生理食塩水の代わりに、種々のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩の水溶液、また比較対象として水酸化ナトリウム無添加のＨＥＰＥＳ水溶液を用いて、２５℃保存条件で経時的にＯＤ８９５の吸光度を測定した。また各塩溶液の濃度を１０、１、０．１ｍＭ濃度条件でＪ−ＩＣＧ安定化効果を比較した。
【００５８】
アルカリ金属塩は、塩化リチウム（関東化学社製）、（以下キシダ化学社製）塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化ルビジウム、塩化セシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、リン酸水素２ナトリウム、リン酸水素２カリウム、水酸化ナトリウムを用いた。これらを水で溶解し、１０、１、０．１ｍＭ濃度の水溶液を調製した。Ｊ―ＩＣＧ添加後、これらの塩化物塩、ヨウ化物塩、臭化物塩の水溶液（１０ｍＭ）のｐＨは５．３〜５．６、リン酸塩の水溶液（１０ｍＭ）はｐＨ８．８〜９．８、水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍＭ）はｐＨ１１．６であった。
【００５９】
アルカリ土類金属塩は、塩化マグネシウム（キシダ化学社製）、塩化カルシウム（ナカライテスク社製）、硫酸マグネシウム（和光純薬社製）を用いた。これらを水で溶解し、１０、１、０．１ｍＭ濃度の水溶液を調製した。Ｊ−ＩＣＧ添加後これらの溶液のｐＨは５．４〜５．７であった。
【００６０】
アンモニウム塩は、塩化アンモニウム（キシダ化学社製）と硫酸アンモニウム（和光純薬社製）を用いた。これらを水で溶解し、１０、１、０．１ｍＭ濃度の水溶液を調製した。Ｊ―ＩＣＧ添加後これらの溶液のｐＨは５．３〜５．４であった。
【００６１】
ＨＥＰＥＳ水溶液はＨＥＰＥＳ（同仁化学社製）を水に溶解し、１０、１、０．１ｍＭ濃度の水溶液を調製した。Ｊ―ＩＣＧ添加後のｐＨは５．３であった。
【００６２】
図５に１０ｍＭの各種塩の水溶液中での経時的Ｊ−ＩＣＧ安定化効果を示した。
【００６３】
実施例１及び２同様に水中では２４時間後にＯＤ８９５がほとんど消失した。一方、すべてのアルカリ金属塩水溶液では２５℃で１か月間、ＯＤ８９５の吸光度の大きな低下は見られず、Ｊ―ＩＣＧを安定に保存できることが分かった。更にアルカリ土類金属塩とアンモニウム塩の水溶液でも、アルカリ金属塩同等にＪ―ＩＣＧ安定化効果が高いことが分かった。
【００６４】
しかしナトリウムイオンを含まないＨＥＰＥＳ水溶液においては、実施例１で示したＨＥＰＥＳ緩衝液のようなＪ―ＩＣＧ安定化効果は見られなかった。実施例１におけるＨＥＰＥＳ緩衝液でのＪ―ＩＣＧ安定化効果は、ｐＨ調整のために添加したナトリウムイオンの効果であったことが確認できた。逆に実施例１で見られたＨＥＰＥＳ緩衝液のＪ―ＩＣＧ安定化効果の様に、アルカリ金属塩水溶液にＨＥＰＥＳのような緩衝剤が添加されていてもＪ―ＩＣＧの安定化効果は保たれることもわかった。
【００６５】
各種塩の水溶液の濃度を変えて上記同様な実験を試みた。実施例２において、塩化ナトリウムはＩＣＧのモル濃度に対して１２５倍のモル濃度、つまり塩の水溶液１ｍＭで安定化効果があることを示した。塩化ナトリウムで安定化効果があった１ｍＭの濃度の水溶液の結果を図６に、安定化効果が比較的低かった際の濃度である０．１ｍＭの水溶液の結果を図７に示した。
【００６６】
１ｍＭ濃度ではナトリウム以外のアルカリ金属イオンでも、ＯＤ８９５は大きな低下は見られず、ナトリウム同等なＪ−ＩＣＧの安定化効果が確認できた。そして０．１ｍＭ濃度ではナトリウム同様に他のアルカリ金属イオンでも、添加することで保存安定化効果は見られるが、１ｍＭ濃度や１０ｍＭ濃度に比べてＯＤ８９５ｎｍの吸光度は低下することがわかった。
【００６７】
また、どのアルカリ金属イオンでも同等な安定化効果があることが分かった。また同様にアンモニウムイオンでもアルカリ金属イオンと同等な効果があることも分かった。
【００６８】
一方、アルカリ土類金属イオンにおいては、アルカリ土類金属同様な安定化効果を持つことが分かったが、０．１ｍＭ濃度でもＯＤ８９５の低下は見られず、より低濃度でも安定化効果を示すことが分かった。
【００６９】
（実施例４）
（Ｊ−ＩＣＧ安定化に必要なアルカリ土類金属塩の濃度）
実施例３において、アルカリ土類金属イオンはアルカリ金属イオンに比べより低濃度でＪ−ＩＣＧ安定化効果があることが分かった。Ｊ−ＩＣＧ安定化のために有効なアルカリ土類金属イオン濃度範囲を調べ、結果を図８に示した。
【００７０】
方法は実施例１に準じ、生理食塩水（ＮａＣｌ  １５０ｍＭ）の代わりに、濃度を変えたアルカリ土類金属塩水溶液を用い、２５℃保存条件で経時的にＯＤ８９５の吸光度を測定した。アルカリ土類金属塩として塩化マグネシウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウムを用いた。
【００７１】
ＩＣＧとして８μＭを含むＪ−ＩＣＧ水溶液において、マグネシウムイオン、カルシウムイオンどちらも１０μＭ濃度以上で安定化効果が確認できた。ＩＣＧのモル濃度に対して１．２５倍以上のモル濃度のアルカリ土類金属イオンを添加することが特に有効であることがわかった。また、ＩＣＧのモル濃度に対して、およそ１倍以上のモル濃度のアルカリ土類金属イオンを添加することにより特にＪ−ＩＣＧを安定に保存できることが分かった。
【図１】
2015040185.tif 000003
【図２】
2015040185.tif 000004
【図３】
2015040185.tif 000005
【図４】
2015040185.tif 000006
【図５】
2015040185.tif 000007
【図６】
2015040185.tif 000008
【図７】
2015040185.tif 000009
【図８】
2015040185.tif 000010