(57)【要約】【課題】殺菌・滅菌試験の指標に用いるバイオロジカルインジケーターにおいて、試験体の濡れ性が悪くても、菌液を均一に塗布することを目的とする。菌液を均一に塗布することで、菌検査でより正確な結果が得られる。【解決手段】その表面を試験体１３に当接した状態で電子線等を照射して試験体１３の透過殺菌効果を測定するための菌保持体１１であって、試験体１３表面に密着可能な表面形状を備え、且つ当該表面の水性溶媒への濡れ性が十分高いことを特徴とするバイオロジカルインジケーター用菌保持体１１、及び実際に菌を保持したインジケーター２０である。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
その表面を試験体に当接した状態で電子線等を照射して試験体の透過殺菌効果を測定するための菌保持体であって、試験体表面に密着可能な表面形状を備え、且つ当該表面の水性溶媒への濡れ性が十分高いことを特徴とするバイオロジカルインジケーター用菌保持体。
【請求項２】
請求項１に記載の菌保持体と試験体とをセットにしたことを特徴とするバイオロジカルインジケーターキット。
【請求項３】
請求項１に記載のバイオロジカルインジケーター用菌保持体の当接側表面が、均一な菌層により被覆されていることを特徴とするバイオロジカルインジケーター。
【請求項４】
前記菌層に、試験体が分離可能に当接されていることを特徴とする請求項３に記載のバイオロジカルインジケーター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、殺菌・滅菌試験の指標に用いるバイオロジカルインジケーター（生物指標）に関する。特に、フィルム状の基材に対して殺菌処理を行ったときの殺菌効果を確認するためのバイオロジカルインジケーター及びそのための部材に関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオロジカルインジケーターは、指標となる菌（細菌・真菌）を一定数担持する物体であり、様々な微生物実験や、殺菌・滅菌試験等で広く利用されている。バイオロジカルインジケーター単体で、あるいは当該バイオロジカルインジケーターを、殺菌効果を判定したい物質と一緒に種々の殺菌処理を施した後、バイオロジカルインジケーター上に残った菌を培養して、その生存数を判定することにより、菌に対する殺菌処理の効果を評価するものである（例えば特許文献１参照）。
【０００３】
このようなバイオロジカルインジケーターは様々なタイプのものが市販されており、例えば一定量の菌が密閉容器に封入されているものが知られている。しかし、密閉容器に封入されているものはその容器の存在により、殺菌方法によっては、正確に殺菌効果を測定できないという問題がある。
【０００４】
このような問題に対応するために、所望の対象物に菌を付着させ、殺菌効果等を測定することができるように、水やアルコールなどの溶媒に規定の割合で菌を分散させた懸濁液が市販されている。このような懸濁液は、対象物が濡れ性のよい物体（以下、試験体と記す。）であれば均一に塗布することが可能で、再現性のよい殺菌試験結果を得ることができる。
【０００５】
しかし、溶媒になじみの悪い樹脂などの試験体に、懸濁液を均一に塗布することは困難であった。特に、プラスチック製の包装基材など、面積が大きい撥水性の基材に直接菌を保持させたい場合、図３（ａ）に示すように基材（試験体１３）表面が懸濁液１４をはじいてしまうので、水滴が付着した領域と、はじかれて残らない領域とに分かれてしまう。その結果、図３（ｂ）に示すように菌１２の付着量もまばらになるので、そのような基材１３について殺菌処理を行うと、正確な結果が得られない、再現性が悪いといった問題があった。
【０００６】
特に、菌体が大きい場合、菌同士が重なり合ってしまい、実際よりも殺菌効果が小さいと見なされる等、正確な結果が得られなかった。この方法で評価を行うと、要求される殺菌効果を保つためには、本来必要とすべき条件よりも過酷な条件設定になるため、設備が過剰となる、殺菌対象物や包装された物質が劣化するといった問題が生じることになる。試験対象となる基材表面に濡れ性を向上させる処理を施せば懸濁液を均一に塗布できるようになるが、基材の性質を変えてしまっては基材そのものに対する正しい試験とはならないため、採用できない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開昭５９−９７６６４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、濡れ性の悪い基材に対しての電子線照射、紫外線照射等による透過殺菌条件を再現性よく評価することのできるバイオロジカルインジケーターを提供することとする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を達成するためになされた請求項1に記載の発明は、その表面を試験体に当接した状態で電子線等を照射して試験体の透過殺菌効果を測定するための菌保持体であって、試験体表面に密着可能な表面形状を備え、且つ当該表面の水性溶媒への濡れ性が十分高いことを特徴とするバイオロジカルインジケーター用菌保持体としたものである。
【００１０】
また、請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の菌保持体と試験体とをセットにしたことを特徴とするバイオロジカルインジケーターキットとしたものである。
【００１１】
また、請求項３に記載の発明は、請求項１に記載のバイオロジカルインジケーター用菌保持体の当接表面が、均一な菌層により被覆されていることを特徴とするバイオロジカルインジケーターとしたものである。
【００１２】
また、請求項４に記載の発明は、前記菌層に、試験体が分離可能に当接されていることを特徴とする請求項３に記載のバイオロジカルインジケーターとしたものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、試験体表面の形状に沿った表面形状を備え、かつ当該表面の水性溶媒への濡れ性が十分高い物体を菌保持体として用いれば、これに菌を含む懸濁液を均一に塗布し乾燥することが可能で、保持体表面に均一な菌の層を作ることができる。
したがって、試験体表面の濡れ性に関係なく透過殺菌効果を正確に評価することができる。
【００１４】
また、このような菌保持体と試験体とを組み合わせてキット化すれば、市販の種々の菌含有懸濁液が利用できる。
【００１５】
また、特定の菌で予め被覆された菌保持体表面がバイオロジカルインジケーターとして提供されれば、種々の試験体を準備して覆うだけで、殺菌効果の測定が容易に実施できるという効果がある。
【００１６】
さらに 、予め試験体で覆われたバイオロジカルインジケーターであれば、殺菌効果の測定が即座に実施できるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の第一の形態である菌保持体の形状を模式的に表した断面図である。（ａ）平坦、（ｂ）湾曲。
【図２】（ａ）バイオロジカルインジケーターの第二の形態を模式的に表した断面図である。（ｂ）バイオロジカルインジケーターの第三の形態を模式的に表した断面図である。
【図３】従来の試験体への菌懸濁液の塗布を模式的に表した断面図である。
【図４】実施例の結果を示した折れ線グラフである。
【図５】比較例の結果を示した折れ線グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
図１は、本発明になるバイオロジカルインジケーター用の菌保持体１１の一例を、試験体１３とともに模式的に示したものである。菌保持体１１は、少なくとも特定の試験体１３表面に密着可能な表面形状を備え、かつ当該表面は水性溶媒への濡れ性が十分高い。図１（ａ）は試験体１３表面が平坦な場合、（ｂ）は湾曲している場合を模式的に示したもので、菌保持体１１の表面形状も試験体１３表面に密着するような形状である必要がある。
【００１９】
電子線照射や紫外線照射等による殺菌テストには、菌保持体１１と試験体１３のセット及び菌の懸濁液が必要である。菌保持体１１に塗布した懸濁液を乾燥させて得た菌を試験体１３に密着させ、試験体１３側から照射を行う。
また、一般に試験体１３には、フィルム基材を想定しており、保持体１１の表面は平坦であるが、図１（ｂ）は、液体容器のような表面に湾曲・凹凸がある試験体の場合を想定している。
【００２０】
図２（ａ）は、本発明になるバイオロジカルインジケーター２０の別の形態例を示したもので、菌保持体１１の表面に菌１２を均一に散布保持したものである。均一とは、菌層の厚みが同じで散布密度も表面各所で一定ということである。この形態は、種々の試験体を菌１２の上に当接させることが可能である。
【００２１】
図２（ｂ）は、本発明になるバイオロジカルインジケーター２０のさらに別の例を模式的に示したものである。当該形態は、少なくとも試験体１３と、当該試験体１３表面の形状に沿った表面形状を備え、かつ水性溶媒への濡れ性が十分高い菌保持体１１と、当該菌保持体表面１１に均一に保持された菌１２とを備えている。ここで、試験体１３は、菌保持体表面に保持された菌１２とは分離可能な状態で当接している。この形態は、直ちに電子線や紫外線等を照射できる。また、試験体１３が取り外せるので、後の菌培養などが容易に行える。
【００２２】
菌保持体１１としては、菌懸濁液の塗布時のなじみがよく、均一な塗布膜が形成できる程度に濡れ性が高いものが好ましい。材質としては耐久性と濡れ性の高さからステンレス（ＳＵＳ）製の板が最も好ましいが、ガラス類等でも構わない。濡れ性を高めるために表面処理を行ってもよい。また、所定の菌以外を取り除くために、殺菌・滅菌処理を施す必要がある。菌保持体の厚みや大きさは、その表面形状が試験体の表面と密着可能であれば特に制限はなく、使用用途により調整してよいが、試験体がフィルムや積層体である場合、縦横５０ｍｍ程度、厚さ１ｍｍ程度の板状が好ましい。
【００２３】
菌１２は、菌保持体１１の表面に当該菌が分散された懸濁液１４を均一に塗布し、乾燥することで、均一に散布保持させることができる。菌種の選定は、対象となる試験体の材質や殺菌方法、殺菌対象物の使用目的によっても異なり、細菌及び真菌の中から選ぶことができる。具体的にはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓやＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを挙げることができる。このような菌を含む懸濁液は、評価したい菌を含むものを適宜選択することができる。場合によっては、使用前に懸濁液を生理食塩水等で希釈することで、塗布しやすくしておくことが好ましい。
【００２４】
試験体１３は、その透過殺菌条件を試験したい物質であればなんでも良いが、濡れ性が悪い（撥水性が高い）ため、菌を含む懸濁液を均一に塗布することができないものが、本発明のバイオロジカルインジケーターには適している。菌保持体１１表面に菌が均一に保持されているため、試験体表面に擬似的に菌が保持された状態と見なすことができる。菌保持体表面との密着が可能であるように、試験体表面の凹凸はできる限り小さく、表面はすべらかであることが好ましい。試験体の形状としては、特にフィルム状であることが好ましい。
【００２５】
次いで、本発明のバイオロジカルインジケーター２０の製造方法の一例を説明する。
まず、菌保持体１１として例えば縦横５０ｍｍ程度のＳＵＳ製の板を用意する。このＳＵＳ板の表面形状は、試験体１３の形状に沿うよう、平坦である。このＳＵＳ板を殺菌及び
濡れ性向上のために、使用面をくまなく火炎で加熱し、十分に冷ました後、懸濁液として例えば酵母菌液を、例えばマイクロピペットを用いて縦横４０ｍｍ程度に均一に塗布する。懸濁液が十分に乾いた後、試験体１３を菌保持体２１に密着するように被せ（図２（ｂ））、例えば紙テープで四隅を固定する。こうして、図２（ｂ）に示す本発明になるバイオロジカルインジケーター２０が得られる。
【実施例１】
【００２６】
菌保持体として、ＳＵＳ製の板の使用面をくまなく火炎で加熱し、十分に冷ました。その後、菌保持体に、酵母菌液を、マイクロピペットを用いて０．０５ｍｌ塗布し、均一に伸ばした。菌液が十分に乾いた後、試験体であるＰＥＴフィルムを菌保持面に接触するように被せ、四隅を紙テープで固定した。こうして得られたバイオロジカルインジケーターの模式図を、図２（ｂ）に示す。このバイオロジカルインジケーターを、５枚用意し、電子線照射装置を用いて、線量を段階的に設定して、試験体の側から照射した。その後、各バイオロジカルインジケーター上の酵母の菌数を確認し、そのＤ値を測定した。結果を表１に、グラフを図４に示す。
【００２７】
なお、D値（Ｄｅｃｉｍａｌ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｖａｌｕｅ）とは、生菌数を１／１０に減少させる（９０％殺菌する）のに必要な殺菌処理単位であり、殺菌効果の評価に用いる。ここではＥＢ（電子線）吸収線量（単位：ｋＧｙ）を記載する。
【００２８】
【表１】
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（比較例１）
ＰＥＴフィルムを菌保持体兼試験体として、実施例１で用いたのと同一の酵母菌液を、マイクロピペットを用いて０．０５ｍｌ塗布し、均一に伸ばそうとした。この際、試験体として選ばれたＰＥＴフィルムは濡れ性が悪いので、菌液は均一に塗布できず、試験体上に点状になって残された（図３（ａ））が、そのまま乾燥した。こうして得られたバイオロジカルインジケーターの模式図を、図３（ｂ）に示す。このバイオロジカルインジケーターを、５枚用意し、電子線照射装置を用いて、線量を段階的に設定して、試験体の菌液塗布面の裏側から照射した。その後、各バイオロジカルインジケーター上の酵母の菌数を確認し、そのＤ値を測定した。結果を表２に、グラフを図５に示す。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
実施例１と比較例１でそれぞれ得られたＤ値は、実施例１では１．１ｋＧｙ、比較例１では４９．３ｋＧｙと、同じ線量を照射したにも関わらず、実施例１の殺菌効果が格段に大きかった。これは、菌液を均一に塗布した効果である。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明によるバイオロジカルインジケーターは、実施例１のように、比較的菌体が大きな菌の殺菌効果を測定するのに有利である。また、菌がムラ無く塗布できるので、種々の菌検査でより正確な結果を得ることができる。
【符号の説明】
【００３２】
１０、２０、３０、バイオロジカルインジケーター
１１、菌保持体
１２、菌
１３、試験体
１４、（菌を含む）懸濁液
２１、（菌を散布保持した）菌保持体  
【図４】
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【図５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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