(57)【要約】【課題】細胞、特に筋肉（骨格筋）細胞の糖取り込み促進剤、糖取り込み促進剤を含む、高血糖改善剤または糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防または治療剤、糖取り込み促進剤を含む飲食品用組成物、または該飲食品用組成物を含む飲食品を提供すること。【解決手段】一般式（１）：2015127304.tif 000007（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、水素またはＣ1〜6のアルキル、Ｒ4はＣ1〜6アルキル、Ｃ3〜6シクロアルキル、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環またはフェロセニルであって、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキルおよび５〜１０員の不飽和複素環は、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有する）で表される化合物またはその配糖体を含む糖取り込み促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
【化１】
2015127304.tif 000006
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、水素またはＣ1〜6のアルキル、Ｒ4はＣ1〜6アルキル、Ｃ3〜6シクロアルキル、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環またはフェロセニルであって、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環は、それぞれ独立して、無置換、またはハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有する）
で表される化合物またはその配糖体を含む糖取り込み促進剤。
【請求項２】
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が、それぞれ独立して、水素またはメチルであり、Ｒ4がＣ6〜14アリールまたはＣ6〜14アリールＣ1〜6アルキルであって、Ｃ6〜14アリールまたはＣ6〜14アリールＣ1〜6アルキルがヒドロキシまたはＣ1〜6アルコキシ置換基を有する請求項１記載の糖取り込み促進剤。
【請求項３】
Ｒ4がヒドロキシまたはメトキシ置換基を有するベンジルである請求項１または２記載の糖取り込み促進剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の糖取り込み促進剤を含む高血糖改善剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の糖取り込み促進剤を含む糖尿病または糖尿病合併症の予防または治療剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の糖取り込み促進剤を含む飲食品用組成物。
【請求項７】
請求項６記載の飲食品用組成物を含む飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖取り込み促進剤、糖取り込み促進剤を含む、高血糖改善剤、糖尿病または糖尿病合併症の予防または治療剤、糖取り込み促進剤を含む飲食品用組成物、または該飲食品用組成物を含む飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液中のグルコース濃度（血糖値）は、さまざまなホルモンの作用によって常に一定範囲内に調節されている。血糖値が上昇し過ぎると、膵臓から血液中にインスリンが分泌され、血液中の過剰な糖を細胞が取り込むように細胞を刺激することにより血糖値が低下する。一方、血糖値が低下し過ぎると、グルカゴン、アドレナリン、コルチゾール、成長ホルモンといったホルモンの働きにより血糖値が上昇する。このようなメカニズムによって、血糖値は非常に狭い範囲の正常域に保たれている。ただし、血糖降下作用を有するホルモンとしてはインスリンが知られているのみであり、インスリンの分泌や感受性に異常がある場合には、血糖値が高値を示すようになる。
【０００３】
糖尿病は、標的組織でのインスリン抵抗性や膵β細胞からのインスリン分泌不全により引き起こされる、血糖値が異常に高い状態となる疾患であるが、近年、食生活の欧米化や人口の高齢化に伴い、増加の一途を辿っている。このような糖尿病の予防・治療薬としては、種々のメカニズムのものが提案されているが、糖尿病患者では骨格筋における糖の取り込み量が減少していることが明らかにされていることから（非特許文献１〜３）、筋肉細胞の糖取り込み促進作用を有する組成物が提案されている（特許文献１および２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−５１７５１号公報
【特許文献２】国際公開第２００１３／１３３２１７号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】The Journal of clinical investigation，1985年，76巻，149-155頁
【非特許文献２】Diabetologia，2000年，43巻，821-835頁
【非特許文献３】Biochemical Society transactions，2005年，33巻，354-357頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、細胞、特に筋肉（骨格筋）細胞の糖取り込み促進剤、糖取り込み促進剤を含む、高血糖改善剤または糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防または治療剤、糖取り込み促進剤を含む飲食品用組成物、または該飲食品用組成物を含む飲食品を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、所定のイソキノリン誘導体に、細胞、特に筋肉（骨格筋）細胞の糖取り込みを促進する作用があることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）：
【化１】
2015127304.tif 000002
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、水素またはＣ1〜6アルキル、Ｒ4はＣ1〜6アルキル、Ｃ3〜6シクロアルキル、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環またはフェロセニルであって、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環は、それぞれ独立して、無置換、またはハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有する）
で表される化合物またはその配糖体を活性成分として含んでなる糖取り込み促進剤に関する。
【０００９】
一般式（Ｉ）において、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が、それぞれ独立して、水素またはメチルであり、Ｒ4がＣ6〜14アリールまたはＣ6〜14アリールＣ1〜6アルキルであって、Ｃ6〜14アリールまたはＣ6〜14アリールＣ1〜6アルキルがヒドロキシまたはＣ1〜6アルコキシ置換基を有することが好ましい。
【００１０】
一般式（Ｉ）において、Ｒ4がヒドロキシまたはメトキシ置換基を有するベンジルであることがより好ましい。
【００１１】
さらに、本発明は、前記糖取り込み促進剤を含む高血糖改善剤に関する。
【００１２】
また、本発明は、前記糖取り込み促進剤を含む糖尿病または糖尿病合併症の予防または治療剤に関する。
【００１３】
さらに、本発明は、前記糖取り込み促進剤を含む飲食品用組成物に関する。
【００１４】
本発明は、前記飲食品用組成物を含む飲食品に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の糖取り込み促進剤は、細胞、特に筋肉（骨格筋）細胞において、糖取り込みを促進することができるので、高血糖の改善、さらには糖尿病および糖尿病合併症の予防または治療に有用である。また、本発明の糖取り込み促進剤を用いれば、高血糖の改善、さらには糖尿病また糖尿病合併症の予防および改善に有用な、飲食品用組成物および飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、所定のイソキノリン誘導体を活性成分として含む糖取り込み促進剤、該糖取り込み促進剤を含む、高血糖改善剤または糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防または治療剤、糖取り込み促進剤を含む飲食品用組成物、または該飲食品用組成物を含む飲食品に関する。
【００１７】
本発明の活性成分は、所定のイソキノリン誘導体、すなわち一般式（Ｉ）で表される化合物またはその配糖体である。
【化２】
2015127304.tif 000003
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立して、水素またはＣ1〜6アルキル、Ｒ4はＣ1〜6アルキル、Ｃ3〜6シクロアルキル、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環またはフェロセニルであって、Ｃ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル、５〜１０員の不飽和複素環は、それぞれ独立して、無置換、またはハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有する）
【００１８】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物またはその配糖体は、ラセミ体、光学異性体またはその任意の混合物であってもよい。
【００１９】
本明細書において、「Ｃ1〜6のアルキル」は、炭素数１〜６の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基を意味し、具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ヘキシルなどが挙げられ、メチルまたはエチルが好ましい。
【００２０】
本明細書において、「Ｃ3〜6シクロアルキル」は、炭素数１〜６の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基を意味し、具体的には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられ、シクロプロピルが好ましい。
【００２１】
本明細書において、「Ｃ6〜14アリール」は、炭素数６〜１４の芳香族炭素環基を意味し、フェニル、ナフチルなどが挙げられ、フェニルが好ましく、なかでもハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有することが好ましく、ヒドロキシまたはＣ1〜6アルコキシ置換基を有することがより好ましい。置換基の位置は特に限定されるものではないが、フェニルの場合パラ位であることが好ましい。
【００２２】
本明細書において、「Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキル」は、前記に定義したＣ6〜14アリールに結合した前記に定義したＣ1〜6アルキルを意味し、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピルなどが挙げられ、ベンジルが好ましく、なかでもハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有することが好ましく、ヒドロキシまたはＣ1〜6アルコキシ置換基を有することがより好ましい。置換基の位置は特に限定されるものではないが、ベンジルの場合パラ位であることが好ましい。
【００２３】
本明細書において、「５〜１０員の不飽和複素環」は、１つ以上のヘテロ原子を有する５〜１０員の不飽和複素環であれば特に限定されるものではない。具体的には、チエニル、ピリジル、キノリニルなどが挙げられる。５〜１０員の不飽和複素環は、無置換、またはハロゲン、ヒドロキシ、ニトロおよびＣ1〜6アルコキシからなる群より選択される少なくとも１つの置換基を有する。
【００２４】
本明細書において、「ハロゲン」には、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などが挙げられ、フッ素または臭素が好ましい。
【００２５】
本明細書において、「配糖体」には、単糖類、二糖類、三糖類などとの配糖体が挙げられ、アロース、ガラクトース、グルコース、フルクトースなどの糖単位から構成することができ、具体的には、フルクトース、グルコースまたはスクロースによる配糖体が好ましく、グルコースによる配糖体がより好ましい。また、これらの糖は、一般式（Ｉ）の化合物のＲ4置換基に結合されていることが好ましく、特に、Ｒ4が、ヒドロキシまたはＣ1〜6アルコキシ置換基を有するＣ6〜14アリール、Ｃ6〜14アリールＣ1〜6アルキルまたは５〜１０員の不飽和複素環である場合に、そのヒドロキシまたはＣ1〜6アルコキシ置換基部分を利用して糖がエーテル結合されているものがより好ましい。
【００２６】
一般式（Ｉ）で表される化合物の具体例としては、１−（４−ヒドロキシベンジル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（８）、１−（４−ヒドロキシベンジル）−６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（９）、６，７−ジヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１０）、６，７−ジヒドロキシ−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−シクロプロピル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、６，７−ジヒドロキシ−１−フェニル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、６，７−ジヒドロキシ−１−（４−ニトロフェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、６，７−ジヒドロキシ−１−（４−メトキシフェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−（３−ヒドロキシフェニル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−（２−ヒドロキシフェニル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−（４−ブロモフェニル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−（４−フルオロフェニル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−ベンジル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、６，７−ジヒドロキシ−１−（２−チエニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、６，７−ジヒドロキシ−１−（３−ピリジニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、６，７−ジヒドロキシ−１−（３−キノリニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−フェロセニル−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンなどが挙げられる。
【００２７】
一般式（Ｉ）で表される化合物の配糖体の具体例としては、１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（ヒゲナミングルコシド）（１）、（Ｓ）−１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１２）などが挙げられる。
【００２８】
本発明の一般式（Ｉ）で表されるイソキノリン誘導体は、蓮芯より単離するか、あるいは当業者に既知の有機合成反応を用いて、たとえば、Chem. Commun., 2011, 47, 3242-3244に記載されているように、ドーパミン塩酸塩とアルデヒドとのカップリング反応により下記スキームのように製造することができる。
【化３】
2015127304.tif 000004
（式中、Ｒ4は一般式（Ｉ）で定義したものである）
【００２９】
また、スキーム１においてＲ4は、保護基により保護されていてもよく、その場合、反応後、保護基を脱離させ、Ｒ4とすることができる。
【００３０】
さらに、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の配糖体は、蓮芯より単離するか、あるいは一般式（Ｉ）の化合物に当業者に既知のグリコシル化反応、たとえば、グルコシルイミダードやグルコシルブロミドと一般式（Ｉ）の化合物とのカップリング反応（Chem. Rev. 1993, 93, p.1503-1531）などを用いて製造することができる。
【００３１】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物またはその配糖体は、スキーム１などにより合成する場合、基本的にラセミ体となるが、その後必要に応じて、種々の既知の方法により、たとえば光学活性カラム等を用いた液体クロマトグラフィーなどにより光学活性体に分離することができる。また、配糖化してジアステレオマーとした後、液体クロマトグラフィーなどにより分離することもできる。
【００３２】
（医薬品製剤）
本発明の一般式（Ｉ）によって表される化合物またはその配糖体は、優れた細胞糖取り込み促進活性を有し、人または温血動物の血糖値を低下させることができるので、これを活性成分として配合することにより、糖取り込み促進剤または高血糖改善剤として、高血糖症、糖尿病、糖尿病関連疾患（例えば、肥満、高脂血症、高コレステロール血症、脂質代謝異常、高血圧症、脂肪肝、メタボリックシンドローム、浮腫、心不全、狭心症、心筋梗塞、動脈硬化症、高尿酸血症、痛風）、または糖尿病合併症（例えば、網膜症、腎症、神経障害、白内障、足壊疽、感染症、ケトーシス）の予防または治療に用いることができる。
【００３３】
本発明の糖取り込み促進剤または高血糖改善剤の投与経路は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。その剤形は、投与経路に応じて適宜選択することができ、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、腸溶剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、外用液剤、湿布剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤、坐剤、経腸栄養剤などを挙げることができる。これらは、症状に応じてそれぞれ単独でまたは組み合わせて用いることができる。これらの製剤には、必要に応じて、賦形剤、結合剤、防腐剤、酸化安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤などの、この分野において通常用いられる補助剤が使用される。
【００３４】
本発明の糖取り込み促進剤または高血糖改善剤の投与量は、活性成分の化合物、投与の目的、投与対象者の状況（性別、年齢、体重など）、疾患の程度などに応じて異なるが、例えば、活性化合物換算で、通常、成人に対して、１日あたり、経口投与の場合、好ましくは１ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５ｇである。
【００３５】
（医薬部外品）
本発明の糖取り込み促進剤または高血糖改善剤は、上記のような医薬品としてだけでなく、医薬部外品などとしても用いることができる。医薬部外品として用いる場合、必要に応じて、医薬部外品などの技術分野で通常用いられている種々の補助剤とともに用いられ得る。かかる補助剤としては、上述のものをいずれも用いることができる。また、溶液状、懸濁液状、シロップ状、顆粒状、クリーム状、ペースト状、ゼリー状などの所望の形状で、あるいは必要に応じて成形して使用してもよい。これらに含まれる本発明の活性成分の量は、特に限定されず、使用目的、使用形態に応じて適宜選択することができるが、例えば、上記で示した投与量に相当する量を使用することができる。
【００３６】
（高血糖改善飲食品用組成物、飲食品）
本発明の飲食品用組成物は、糖取り込み促進作用を奏する本発明の活性成分に、必要に応じて、この分野で通常用いられる補助剤を添加して調製することができる、かかる補助剤としては、上述のものをいずれも用いることができる。
【００３７】
本発明の飲食品用組成物は、高血糖改善効果を発揮することができるので、該薬理効果を備えた飲食品、例えば、健康食品、健康飲料、特定保健用食品、機能性食品、栄養補助食品、その他ヒト以外の温血動物に対する飼料などに用いることができる。中でも、糖類を多く含んだ飲食物素材に本発明の飲食品用組成物を添加した場合には、筋肉細胞の糖取り込み促進作用による効率的なエネルギー供給効果を奏し、また、それに伴う筋肉組織の活性化・増強・増大や肉体疲労軽減、運動能力の向上などの効果を奏することから、優れたエネルギー補助飲食品を提供することができる。
【００３８】
本発明の飲食品用組成物を飲食物に用いる場合、必要に応じて、例えば、甘味料、香辛料、調味料、防腐剤、保存料、殺菌剤、酸化防止剤などの食品に通常用いられる添加剤を配合することができる。また、固形状、粉末状、顆粒状、溶液状、懸濁液状、シロップ状、クリーム状、ペースト状、ゼリー状などの所望の形状で、あるいは必要に応じて成形して使用してもよい。これらに含まれる本発明の活性成分の量は、特に限定されず、使用目的、使用形態に応じて適宜選択することができるが、例えば、上記で示した投与量に相当する量を使用することができる。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例をあげて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００４０】
製造例１：（Ｓ）−ヒゲナミングルコシド（１）の合成
（ａ）２−（４−（（tert−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）アセトアルデヒド（２）の合成
４−（２−ヒドロキシエチル）フェノール（２．５５ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（１８．５ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（５．２ｍＬ）を加えた。この溶液に、ＤＭＳＯ（２２ｍＬ）に溶解した三酸化硫黄−ピリジン錯体（７．０５ｇ、４４．３ｍｍｏｌ）を０℃で攪拌しながら滴下した。滴下終了後１時間室温で攪拌し、水を加えてクロロホルムで抽出した。抽出液を硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５０ｍＬ）に溶解し、イミダゾール（２．０７ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２８．６ｍｇ、０．２３４ｍｍｏｌ）、tert−ブチルジメチルクロロシラン（ＴＢＳＣｌ）（２．７０ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）を加えてアルゴン雰囲気下２時間攪拌した。反応液を水で希釈して酢酸エチル／ヘキサン＝１／１の混合溶媒で抽出した。有機層を１Ｍ塩酸水溶液、ブラインで順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／クロロホルム＝３／１、ヘキサン／酢酸エチル＝２０／１順次溶出）により精製して表題の化合物（２）を、収量１．４４ｇ、収率３２％で得た。
【００４１】
（ｂ）１−（４−（（tert−ブチルジメチルシリル）オキシ）ベンジル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（３）の合成
化合物（２）（１．０２ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）およびドーパミン塩酸塩（５１５．３ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２０ｍＬ）と０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０、５ｍＬ）との混合溶媒に溶解し、５０℃で１６時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させてから減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝９／１、４／１で順次溶出）により精製して、表題の化合物（３）を、収量１８６．４ｍｇ、収率１８％で得た。
【００４２】
（ｃ）６，７−ジアセトキシ−２−カルボベンジルオキシ−１−（４−ヒドロキシベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（４）の合成
化合物（３）（１８６．４ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）と水（５ｍＬ）との混合溶媒に溶解し、クロロギ酸ベンジル（ＣｂｚＣｌ）（１２０μＬ、０．８４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を攪拌しながら飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨ８に調整した。１０分後、反応液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させてから減圧下濃縮した。残渣をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（０．７ｍＬ、５．００ｍｍｏｌ）を加えた。ここに塩化アセチル（０．２ｍＬ、２．８１ｍｍｏｌ）を加えて、アルゴン雰囲気下１５分間攪拌した。次に反応液にフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液（１Ｍ、０．５ｍＬ）を加えさらに５分間攪拌した。反応液を水で希釈し、クロロホルムで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させてから減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／アセトン＝３／１、２／１で順次溶出）により精製して、表題の化合物（４）を、収量１４０．５ｍｇ、収率５９％で得た。
【００４３】
（ｄ）６，７−ジアセトキシ−２−カルボベンジルオキシ−１−（４−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（６）の合成
化合物（４）（５０．２ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）と２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルコピラノシルトリクロロアセトイミデート（５）（８０．８ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）とを無水ジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解し、活性化した粉末状のモレキュラーシーブ４Ａ（２１９ｍｇ）を加えてアルゴン雰囲気下０℃で１０分間攪拌した。ここに、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体のジクロロメタン溶液（１０％（ｖ／ｖ）、１５０μＬ）を加えてアルゴン雰囲気下０℃で１０分間攪拌した。反応液をセライトろ過して飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させてから減圧下濃縮した。残渣を分取薄層シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／アセトン＝２／１）により精製して、表題の化合物（６）を、収量８４．２ｍｇで定量的に得た。
【００４４】
（ｅ）６，７−ジヒドロキシ−２−カルボベンジルオキシ−１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（７）の合成
化合物（６）（８４．２ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、５Ｍのナトリウムメトキシドのメタノール溶液（０．１ｍＬ）を加えて５分間攪拌した。反応液に強酸性陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ（登録商標）  ５０ＷＸ８、ダウ・ケミカル社製）を加え、綿栓ろ過して得られたろ液を減圧下濃縮した。残渣を分取薄層シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝７／１）により精製して、表題の化合物（７）を、収量３４．１ｍｇ、収率５８％で得た。
【００４５】
（ｆ）（Ｓ）−ヒゲナミングルコシド（１）の合成
化合物（７）（１７．１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、触媒量の水酸化パラジウムを加えて水素雰囲気下１時間攪拌した。反応液をセライトろ過して得られたろ液を減圧下濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｓｕｓｔａｉｎ  Ｃ１８カラム、ジーエルサイエンス社製：０．１％トリフルオロ酢酸、１０％ＭｅＣＮ水溶液）により精製して、表題の化合物（１）を、収量５．３ｍｇ、収率１７％で得た。
【００４６】
製造例２：１−（４−ヒドロキシベンジル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（８）の合成
前記製造例１（ｂ）で得られた化合物（３）を、ＴＨＦ中においてＴＢＡＦで処理することによりtert−ブチルジメチルシリル基をはずして表題の化合物（８）を得ることができる。
【００４７】
製造例３：１−（４−ヒドロキシベンジル）−６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（９）の合成
前記製造例１（ｂ）で得られた化合物（３）を、ＤＭＦ中において炭酸カリウムおよびヨウ化メチルでアミノ基およびヒドロキシル基をメチル化し、その後、製造例２と同様にしてtert−ブチルジメチルシリル基をはずして表題の化合物（９）を得ることができる。
【００４８】
製造例４：６，７−ジヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１０）の合成
（ａ）６，７−ジアセトキシ−２−カルボベンジルオキシ−１−（４−ヒドロキシベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１１）の合成
前記製造例１（ｂ）で得られた化合物（３）を、１，４−ジオキサンおよび水の混合溶媒中において、製造例１（ｃ）と同様にクロロギ酸ベンジル（ＣｂｚＣｌ）を作用させ、アミンをカルボベンジルオキシで保護し、ついで、ＤＭＦ中において炭酸カリウムおよび臭化ベンジル（ＢｎＢｒ）で処理してヒドロキシル基をベンジル化し、その後、製造例２と同様にしてtert−ブチルジメチルシリル基をはずして表題の化合物（１１）を得ることができる。
【００４９】
（ｂ）１−（４−メトキシベンジル）−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１０）の合成
（ａ）で得られる化合物（１１）を、ＤＭＦ中において、炭酸カリウムおよびヨウ化メチルでヒドロキシル基をメチル化し、その後、メタノール中で触媒量の水酸化パラジウムを加えて水素雰囲気下で処理して表題の化合物（１０）を得ることができる。
【００５０】
製造例５：１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−６，７−ジメトキシ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１２）の合成
（ａ）６，７−ジベンジルオキシ−２−カルボベンジルオキシ−１−（４−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１３）の合成
前記製造例４（ａ）で得られる化合物（１１）と２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルコピラノシルトリクロロアセトイミデート（５）とを製造例１（ｄ）と同様にして表題の化合物（１３）を得ることができる。
【００５１】
（ｂ）６，７−ジベンジルオキシ−１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１４）の合成
（ａ）で得られる化合物（１３）を製造例１（ｆ）と同様にして、表題の化合物（１４）を得ることができる。
【００５２】
（ｃ）６，７−ジメトキシ−２−メチル−１−（４−（ｂ−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ベンジル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン（１２）の合成
（ｂ）で得られる化合物（１４）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中において、炭酸カリウムおよびヨウ化メチルにより、アミノ基およびヒドロキシル基をメチル化し、ついで製造例１（ｅ）と同様にして糖のアセチル基を脱保護して、表題の化合物（１２）を得ることができる。
【００５３】
実施例：Ｌ６骨格筋細胞による糖取り込み試験
（Ｌ６骨格筋細胞の作製）
Ｌ６筋芽細胞（財団法人ヒューマンサイエンス振興財団  ヒューマンサイエンス研究資源バンクから入手）を、ＤＭＥＭ培地（１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有）で、５×１０4細胞／ｍＬの細胞密度にし、該細胞を４８ウェル組織培養プレートに播種し（１穴当たり５００μＬ）、３７℃の５％炭酸ガス培養器にて、２〜３日間培養した。細胞がコンフルエントになった時点で、培地をＤＭＥＭ培地（２％（ｖ／ｖ）馬血清（ＨＳ）含有）に置換し、さらに１日おきに培地交換を行い、３７℃の５％炭酸ガス培養器にて７日間培養し、Ｌ６骨格筋細胞へ分化させた。こうして得た細胞を「糖取り込み試験」に使用した。
【００５４】
（糖取り込み試験）
Ｌ６骨格筋細胞の組織培養プレートの各ウェルから培地を吸引除去した後、各濃度の（Ｓ）−ヒグナミングルコシドの水溶液を２％ＨＳ含有ＤＭＥＭで希釈した試料３００μＬ（各試料中の（Ｓ）−ヒグナミングルコシドの濃度：（試料１：１００μＭ、試料２：１０μＭ、試料３：１μＭ））を加え、３７℃の５％炭酸ガス培養器にて４時間インキュベートした。ここで、陰性対照としてヒグナミングルコシド水溶液に代えて同量の超純水を用い、また、陽性対照としてＫＰＰＨ緩衝液に溶解した１０μＭインスリンを超純水でさらに希釈して調製した１μＭインスリン３０μＬと、ＤＭＥＭ培地２７０μＬからなる１００ｎＭインスリンを用いた。試験は二重で行い、各回いずれもｎ＝６とし、各回の実験結果から活性を算出した。
【００５５】
次いで、各ウェルから培地を除去し、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｈｅｐｅｓ（ＫＲＰＨ）緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、１ｍＭ ＭｇＳＯ4、１ｍＭ ＣａＣｌ2、１３６ｍＭ ＮａＣｌ、４．７ｍＭ ＫＣｌ、ｐＨ７．４）にて２回洗浄した後、１．０ｍＭ ２−ＤＧ（２−デオキシグルコース、ＳＩＧＭＡ社製）を含有したＫＲＰＨ緩衝液５００μＬ／ウェルを添加し、各ウェル混合物を３７℃の５％炭酸ガス培養器にて２０分間インキュベートし、２−ＤＧを細胞に取り込ませた。なお、後の蛍光値測定の際のバックグラウンド用として、２−ＤＧを含まないＫＲＰＨ緩衝液を用いて、同様の操作を行った。
【００５６】
次いで、各ウェルからＫＲＰＨ緩衝液を除去した後、細胞をＫＲＰＨ緩衝液で３回洗浄し、さらに風乾した。０．０５Ｍ ＮａＯＨ  ６０μＬ／ウェルを添加して、マイクロプレートミキサーで攪拌して細胞を溶解させ、さらに冷凍庫にプレートを入れて−８０℃で一旦凍結させた後、冷凍庫から出して融解した。オーブンにて８５℃、１時間処理し、内在のＮＡＤＰＨを破壊した。室温になるまで放冷後、５０ｍＭトリエタノールアミン緩衝液（ｐＨ８．１）を９０μＬ／ウェルおよび０．１Ｍ塩酸３０μＬ／ウェル加えることによりｐＨ８．１に調整し、プレートをマイクロプレートミキサーで撹拌した。プレートの各ウェル中の混合物について、２−ＤＧ量を下記の通りに測定し、バックグラウンドとしての測定値との差により、糖取り込み促進作用を評価した。
【００５７】
（２−ＤＧ量の測定）
上記の各ウェルの混合物５０μＬ／ウェルを、９６ウェル蛍光測定用ブラックプレートに入れ、さらにアッセイカクテル（１．３ｍＭ ＡＴＰ（オリエンタル酵母工業（株）製）、０．２ｍＭ ＮＡＤＰ＋（オリエンタル酵母工業（株）製）、１２unit／ｍＬ ヘキソキナーゼ（ＳＩＧＭＡ社製）、３２unit／ｍＬ グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、４unit／ｍＬ ジアフォラーゼ、５０μＭ レサズリンナトリウムより構成）５０μＬ／ウェルを添加し、マイクロプレートミキサーで撹拌した後、３７℃の培養器にて、各ウェル混合物を６０分間インキュベートした。
【００５８】
プレートの各ウェルについて、マイクロプレートリーダー（Bio-tech Instruments Inc製、Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）ＭＸ）にて、蛍光値（励起波長：５３０ｎｍ、測定波長：５９０ｎｍ）を測定した。測定した各蛍光値から、バックグラウンドの値を引いた。陰性対照の２−ＤＧ取り込み量を１として、各条件における２−ＤＧ取り込み量の相対値を得た（相対糖取り込み能）。
【００５９】
結果を表１に示す。ｔ検定による有意差は、*：Ｐ＜０．０１、**：Ｐ＜０．０２であった。
【表１】
2015127304.tif 000005
【００６０】
表１より、（Ｓ）−ヒゲナミングルコシドが、骨格筋細胞において優れた糖取り込み促進作用を有していることがわかる。