(57)【要約】      （修正有）【課題】患者の神経変性および／またはミエリン形成を処置する方法の提供。【解決手段】アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発するプロゲスチン化合物で患者を処置する。プロゲスチン化合物は、好ましくは、１６−メチレン−１７α−アセトキシ−１９−ノルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンを含み、方法は、避妊とミエリン修復および神経変性の処置との両方を提供するために、プロゲスチン化合物をエストロゲン化合物と組み合わせるステップを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における神経変性の治療方法であって、アンドロゲン受容体と相互作用せず、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導せずに、プロゲステロン受容体に対する結合を発揮し、プロゲステロン−受容体誘導性生物学的応答を惹起する、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な用量で前記患者を治療することを含み、前記薬学的に有効な用量が５ｍｇ／日以下を含む経口投与剤形であり、それにより神経変性が予防され、または減少する方法。
【請求項２】
前記患者が女性患者を含み、前記方法が前記女性患者を同時にエストロゲン化合物で治療するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記エストロゲン化合物がエストラジオールを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記薬学的に有効な用量が、前記患者によって吸収される１００〜４５０μｇ／日を提供する、前記薬学的に有効な用量の量を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記エストラジオールの用量が、前記患者によって吸収される約１０〜１５０μｇ／日を提供する、前記エストラジオールの量を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記薬学的に有効な投与が、前記患者に提供される連続投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記薬学的に有効な投与が、前記患者に提供される断続投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記断続投与が、３週間の前記投与の投薬、およびそれに続く１週間の前記投与の休薬を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記プロゲスチン化合物の前記薬学的に有効な投与が、経皮投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記プロゲスチン化合物が、１６−メチレン−１７α−アセトキシ−１９−ノルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン、１８−メチルＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストン、ノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロン、および１７−ヒドロキシプロゲステロンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記処置が、経皮形態で前記所定の投与を提供するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記経皮形態が、経皮ゲル、経皮溶剤、経皮スプレー、および経皮パッチからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記治療が、前記予め決定された用量を経鼻スプレーの形態で提供するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記処置方法が、膣内錠剤、膣内ゲル、および膣内リングからなる群から選択される経皮製品を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記処置方法が、皮下埋込を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
閉経後女性の神経変性を処置する方法であって、前記閉経後女性の神経変性を予防または低減するのに十分な投与で、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発するプロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与で前記閉経後女性を処置するステップと、天然エストラジオールの所定の投与を同時に提供するステップとを含む方法。
【請求項１７】
患者の多発性硬化症、アルツハイマー病、およびパーキンソン病からなる群から選択される病態に示される神経変性を処置する方法であって、前記病態の再発を予防または低減するのに十分な投与で、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発するプロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与で前記患者を処置するステップを含む方法。
【請求項１８】
患者における虚血障害の治療方法であって、アンドロゲン受容体と相互作用せず、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導せずに、プロゲステロン受容体に対する結合を発揮し、プロゲステロン受容体誘導性生物学的応答を惹起する、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な用量で前記患者を治療することを含み、前記薬学的に有効な用量が全梗塞体積を少なくとも３２％減少させるために十分な前記プロゲスチン化合物の量を含む方法。
【請求項１９】
前記薬学的に有効な用量が、前記患者によって吸収される約０．１〜１．０ｇ／日を提供する、前記プロゲスチン化合物の量を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記薬学的に有効な用量が、前記患者によって吸収される約１００〜８００μｇ／日を提供する、前記プロゲスチンの量を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記薬学的に有効な用量が、前記患者に提供される継続的用量を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記薬学的に有効な用量が、前記患者に提供される断続的用量を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記プロゲスチン化合物の前記薬学的に有効な用量が、経皮的用量を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記プロゲスチン化合物が、１６−メチレン−１７α−アセトキシ−１９−ノルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン、１８−メチルネストロン（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストン、ノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロンおよび１７−ヒドロキシプロゲステロンからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記治療が、前記予め決定された用量を経皮形態で提供するステップを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記経皮形態が、経皮ジェル、経皮溶液、経皮もしくは経鼻スプレーおよび経皮パッチからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記治療方法が、皮下埋込を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記治療方法が、前記予め決定された用量を経鼻スプレーの形態で提供するステップを含む、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、英語で公開された２０１０年１０月１９日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／５３２０１号の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．３７１に基づいて国内段階に移行した２０１２年５月３１日出願の出願番号第１３／５００，００８号の一部継続出願で、引用することにより本明細書の一部をなすものとする２００９年１０月１９日出願の米国特許仮出願第６１／２７９，３２０号の出願日の利益を主張する。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、ミエリン変性および神経変性の予防の分野に関する。より詳細には、本発明は、多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、およびパーキンソン病（ＰＤ）などの疾患、ならびに脳卒中の変性態様の予防または処置に関する。さらに特に、本発明は、脳卒中または外傷性脳傷害などによる虚血性損傷の予防または治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
多発性硬化症（ＭＳ）は、男性の２倍以上の女性が罹患する中枢神経系（ＣＮＳ）の進行性および身体障害性の疾患である（１〜４）。ＭＳでは神経細胞損傷が早期に始まり（５）、急性軸索傷害が活動性の脱髄中に既に存在することがエビデンスから示されている。しかし、ＭＳで再ミエリン化が起こり（６、７）、それが軸索消失からの保護を示す（８）ことが知られている。実際、有意な軸索損傷は、再ミエリン化されたプラークにおいて観察することができない（５）。軸索は、ＭＳが進行するにつれて再ミエリン化を受けにくくなる。さらに、脳卒中は、神経細胞損傷もまねく脳血管障害である。一過性中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）の実験モデルでは、閉塞によって誘導された梗塞体積は、対照の無傷マウスよりもプロゲステロン受容体欠乏マウス（ＰＲノックアウトマウス）での方がはるかに大きかった。
【０００４】
多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）およびパーキンソン病（ＰＤ）を含むいくつかのＣＮＳ疾患の神経変性プロセスには、神経炎症ならびに神経変性が関与し、その頻度は閉経後の女性で増加する。類似の神経変性プロセスはまた、脳卒中患者などの虚血性障害に罹患した患者、または外傷性脳傷害（ＴＢＩ）などの脳血管の偶発的事故の影響を受けた患者に存在する。
【０００５】
神経細胞損傷はまた、脳卒中など他の状況で起こる可能性もある。脳卒中は、脳細胞への血液供給の中断から生じる脳血管事象である。すなわち、神経細胞は、酸素およびグルコース欠乏に対するその感受性、ならびに梗塞部位からの神経組織損傷の進行性拡散が原因で破壊される可能性がある。したがって、脳卒中患者に、神経細胞の破壊からの保護と病変の拡散回避との両方、ならびに損傷を受けた組織の再生支持の処置を施す重大な努力がなされている。プロゲステロンは、以前、効率的な神経保護剤であることが確認されている。実際、病変発生後、プロゲステロン自体は、脳細胞での産生速度が高まる。プロゲステロン処置はまた、脳卒中の動物モデルにおいて脳虚血後に病変サイズを減少させるのに有効であることが分かっており（１８）、脳動脈閉塞後に虚血性脳損傷を抑制することが分かっている（１９）。脳卒中は、毎年約１００，０００例以上にのぼる重大な公衆衛生問題である。急性脳卒中の治療として唯一承認されているのは、治療域が限定され、出血の危険を引き起こす組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）による血栓溶解法である。
【０００６】
Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンは、脳において増殖効果および神経保護効果を及ぼすことが分かっている（２０、２１）。
【０００７】
再発寛解型ＭＳの患者の約３分の２は、出産可能年齢の女性である（９）。妊娠中に生じるレベルなどの高レベルの女性ステロイドは、ＭＳの女性の症状の寛解に関与する可能性があることが知られている。これは、特に、エストロゲンおよびプロゲステロン（ＰＲＯＧ）のレベルがピークに達する妊娠第三期中に当てはまり、一方、産褥期に再発割合が増加する（９）。
【０００８】
ＭＳの女性は、妊娠期、産褥期、または閉経期に関連するＭＳ症状の変化を経験する。スウェーデンで実施された研究（１０）では、面接調査した１４８人のＭＳ女性の４０％が、閉経期に関連するＭＳ症状の悪化を報告し、若い女性の４分の１以上が、妊娠中に症状が軽減したことを報告した。３人に１人の女性が分娩後の症状の増加を報告しており、これは、性ステロイドが疾患を保護（妊娠中に高レベルで存在したとき）、または悪化（分娩後または閉経期に減少したとき）させる役割を果たしていることを示唆していた。
【０００９】
また、ＭＳなどの病態に有効な処置方針には、不可逆的な軸索消失を予防するために軸索脱髄を逆転させる治療剤が包含されなければならない。エストロゲンおよびプロゲステロンの女性ホルモンは、ＭＳおよび神経保護に対して有益な効果を有する可能性がある。
【００１０】
グルタミン酸損傷の４８時間前に１７β−Ｅ２およびプロゲスチンを単独および組合せで用いて処置した初代海馬神経細胞培養物では、エストラジオール、プロゲステロン、および１９−ノルプロゲステロンは、単独または組合せで、グルタミン酸毒性からの保護を示した。対照的に、酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）は、グルタミン酸毒性からの保護を示さなかった。ＭＰＡは、効果がない神経保護剤であるだけでなく、同時投与すると、エストロゲン誘導性の神経保護を減弱させた（１１）。これらの結果は、ホルモン療法に適切な分子を選択することによる、閉経期および老齢期中の神経機能の維持、ならびにアルツハイマー病などの神経変性疾患からの保護に重要な意味を有する可能性がある。
【００１１】
プロゲステロン受容体（ＰＲ）の発現および神経前駆細胞増殖の調節は、成体ラット脳に由来するＮＰＣを使用して調査された。プロゲステロン媒介性の神経前駆細胞（ＮＰＣ）増殖および有糸分裂細胞周期遺伝子の同時調節は、哺乳類の脳の神経形成を促進させるための潜在的な新規の治療標的である（１２）。
【発明の概要】
【００１２】
本発明によれば、今回、上記その他の目的は、患者の神経変性を処置する方法であって、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発する、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与で患者を処置するステップを含む。錠剤、カプセルなどの経口剤形の場合、薬学的に許容される用量は、５ｍｇ／日以下で、それによって神経変性が予防され、または減少する。好ましい実施形態では、ネストロン（登録商標）の薬学的に有効な用量は、特定の剤形にかかわらず、患者による１００〜４５０μｇ／日の吸収を引き起こす。好ましくは、薬学的に有効な投与は、患者に提供される連続投与を含む。しかし、別の一実施形態では、薬学的に有効な投与は、患者に提供される断続投与を含む。好ましくは、断続投与は、３週間の上記投与の投薬およびそれに続く１週間の上記投与の休薬を含む。
【００１３】
本発明の方法の一実施形態によれば、この方法は、女性患者を同時にエストロゲン化合物で治療することを含む。好ましくは、エストロゲン化合物は、エストラジオールを含み、好ましい実施形態では、エストラジオールの量は、患者によって吸収される約１０〜１５０μｇ／日を提供するのに十分な量である。
【００１４】
本発明の方法の別の一実施形態によれば、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与は、経皮剤形を含む。
【００１５】
本発明の方法の別の一実施形態によれば、プロゲスチン化合物は、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、１８−メチルＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストン、ノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロン、および１７−ヒドロキシプロゲステロンからなる群から選択される。好ましい一実施形態では、プロゲスチン化合物は、酢酸ノメゲストロールを含み、その薬学的に有効な投与は、２．５〜５ｍｇ／日を含む。別の一実施形態では、プロゲスチン化合物は、トリメゲストンを含み、その薬学的に有効な投与は、約０．５〜１ｍｇ／日を含む。別の一実施形態によれば、プロゲスチン化合物は、ジエノゲストを含み、その薬学的に有効な投与は、約２〜３ｍｇ／日を含む。別の一実施形態によれば、プロゲスチン化合物は、ドロスピレノンを含み、その薬学的に有効な投与は、約３ｍｇ／日を含む。別の一実施形態では、プロゲスチン化合物は、酢酸クロルマジノンを含み、その薬学的に許容される投与は、約５ｍｇ／日を含む。
【００１６】
本発明の方法の別の一実施形態によれば、処置は、経皮ゲル、経皮溶剤、経皮スプレー、および経皮パッチからなる群から選択される経皮形態で所定の投与を提供することを含む。別の一実施形態では、方法は、膣内錠剤、膣内ゲル、および膣内リングからなる群から選択される経皮形態で所定の投与を提供することを含む。本発明の方法の別の実施形態では、治療は、予め決定された用量を経鼻スプレーの形態で提供することを含む、以前にステロイド化合物で有効であることが示された任意の投与形態を含むことができる。
【００１７】
本発明の方法の別の一実施形態によれば、方法には、皮下埋込を含む処置が包含される。
【００１８】
本発明によれば、閉経後女性の神経変性を処置する方法であって、閉経後女性の神経変性を予防または低減するのに十分な投与で、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発する、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与で閉経後女性を処置するステップと、天然エストラジオールの所定の投与を同時に提供するステップとを含む方法を提供する。本発明のこの方法の好ましい一実施形態では、プロゲスチン化合物は、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）を含み、好ましくは、患者によって吸収される約１００〜４５０μｇ／日を提供するのに十分な量で与えられる。好ましい一実施形態では、エストラジオールは、患者によって吸収される約１０〜１５０μｇ／日を提供するのに十分な量で与えられる。
【００１９】
本発明のこの方法の一実施形態では、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与法は、経皮ジェル、経皮溶液、経皮スプレー、経皮パッチからなる群から選択された経皮剤形、膣内錠剤、膣内ジェルおよび膣内リングを含み、または別の実施形態では、経鼻スプレーの形態である。
【００２０】
本発明によれば、患者の多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、および脳卒中からなる群から選択される病態に示される神経変性を処置する方法であって、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発する、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与で患者を処置するステップを含み、薬学的に有効な投与が５ｍｇ／日以下であり、それによって神経変性が予防または低減される方法を提供する。好ましくは、プロゲスチン化合物は、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）を含む。別の一実施形態では、プロゲスチン化合物は、１８−メチルＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストン、ノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロン、および１７−ヒドロキシプロゲステロンからなる群から選択される。
【００２１】
本発明によれば、アンドロゲン受容体と相互作用せず、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導せずに、プロゲステロン受容体に対する結合を発揮し、プロゲステロン−受容体誘導性生物学的応答を惹起する、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な用量で患者を治療することを含む、患者の虚血障害を治療するための方法であって、この薬学的に有効な用量が全梗塞体積を減少させるために十分な量のプロゲスチン化合物を含む、方法を提供する。したがって、梗塞（虚血変化）の外部におけるいかなるこのような減少も、例えば、脳卒中の患者にとって有益である。好ましい実施形態では、全梗塞体積の減少は、少なくとも約３２％（Ｐ＜０．０１）、好ましくは約３０％と６０％との間、最も好ましくは少なくとも約５０％であり、および／またはプロゲスチン化合物の量は、大脳皮質内の虚血病変を、この場合、好ましくは少なくとも約２２％（Ｐ＜０．０１）、好ましくは約２０％と６０％との間、最も好ましくは少なくとも約４０％減少させるために十分であり、および／またはプロゲスチン化合物の量は、皮質下構造内の虚血病変を、この場合、好ましくは少なくとも約５２％（Ｐ＜０．０１）、好ましくは約３０％と７０％との間、最も好ましくは少なくとも約５０％減少させるために十分である。さらに、これらのプロゲスチン化合物、最も好ましくはネストロン（登録商標）による治療は、脳卒中事象の約６時間以内の脳卒中後梗塞域を少なくとも約３０％、好ましくは少なくとも３０％と６０％との間、最も好ましくは少なくとも約５０％を減少させることができる。さらに、中等度の外傷性脳傷害のこれらのプロゲスチン化合物、最も好ましくはネストロン（登録商標）の治療レベルの投与による治療は、脳卒中の場合とほぼ同量だけ脳障害領域を減少させ、すなわち、脳卒中事象の約６時間以内の少なくとも約３０％、好ましくは約２０％と６０％との間、最も好ましくは約５０％を減少させ、さらに脳の損傷を受けた領域を修復するために神経再生を誘導することが見出された。
【００２２】
本発明のこの方法の一実施形態によれば、特にネストロン（登録商標）による治療に関して、薬学的に有効な用量は、用量摂取が経口的であるか、または別の方法であるかに関係なく、患者によって実際に吸収される薬剤約０．０３〜１．０ｍｇ／日、好ましくは約１００〜８００μｇ／日を含む。
【００２３】
患者によって実際に吸収されることが望ましい薬学的に有効な用量の正確な量は、患者の性別および特定の投与方法を考慮して変化するだろう。したがって、上記で記載した広範な範囲には、様々な送達形態で、男女両方に吸収される量が含まれる。この範囲内で、例えば、女性で膣内リングを使用する場合、最適な用量は約２００μｇ／日（例えば、約１５０〜３５０μｇ／日）であり、経皮ジェルを使用する場合、最適用量は約３００μｇ／日（例えば、約２５０〜４５０μｇ／日）である。これらの場合、例えば、ジェル中のネストロン（登録商標）の量が２．５〜４．５ｍｇならば、１０％の吸収率で患者にこれらの量が供給される。他方で、男性の場合、経皮投与の最適用量は約８００μｇ／日（例えば、約７００〜８５０μｇ／日）であると考えられる。したがって、再度、例えば、経皮的に適用されるネストロン（登録商標）の量が７〜８．５ｍｇならば、吸収率１０％で患者にこれらの量が供給され、男性にこの薬剤を埋込送達する場合、男性によって吸収される最適な用量は３０〜１００μｇ／日の範囲である。
【００２４】
本発明のこの方法の別の実施形態によれば、薬学的に有効な用量は、患者に提供される継続的用量を含む。別の実施形態では、薬学的に有効な用量は、患者に提供される断続的用量を含む。
【００２５】
本発明の方法の別の実施形態によれば、プロゲスチン化合物の薬学的に有効な用量は、経皮的用量を含む。
【００２６】
本発明の方法の別の実施形態によれば、プロゲスチン化合物は、１６−メチレン−１７α−アセトキシ−１９−ノルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（ネストロン（登録商標））、１８−メチルネストロン（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストン、ノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロンまたは１７−ヒドロキシプロゲステロンである。
【００２７】
本発明の方法の別の実施形態によれば、治療には、予め決定された用量の、経皮形態での提供が含まれる。好ましくは、経皮形態には、経皮ジェル、経皮溶液、経皮スプレーまたは経皮パッチが含まれる。本発明の方法の別の実施形態によれば、治療には、予め決定された用量の、経鼻スプレーの形態での提供が含まれる。この実施形態は、脳卒中またはＴＢＩなどによる虚血変化の治療に関連して特に好ましく適用される。
【００２８】
本発明の方法の別の実施形態によれば、治療方法には、皮下埋込が含まれる。
【００２９】
本発明によれば、組織培養での予備研究および動物モデルから、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）（ＮＥＳ）、１９−ノルプロゲステロン由来の合成プロゲスチンを包含するが、アンドロゲン、エストロゲン、またはグルココルチコイドの作用を有さない特定のクラスのプロゲスチン化合物が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて、例えば、プロゲステロン、ならびにある種の他のプロゲスチン化合物と比較して、再ミエリン化により大きな有益な効果を有することが示された。様々なプロゲスチンの効果を比較するバイオアッセイがある。Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）は、アンドロゲンまたはエストロゲンの作用をまったく有さず、また、用量が治療量の２０００倍の場合を除いて、グルココルチコイド効果を発現しない。レボノルゲストレルやＭＰＡなどの他のプロゲスチンは、アンドロゲン応答を誘導し、ＭＰＡは、アンドロゲンおよびグルココルチコイドの応答を誘導し、ノルエチノドレルおよびノルエチステロンは、アンドロゲンおよびエストロゲンの応答を引き起こす。さらに、最近の研究では、ＮＥＳはまた、神経前駆細胞の増殖を刺激し、この場合も、プロゲステロン自体よりもさらに高く刺激することが示されている。これらの結果から、患者の神経変性を処置する方法であって、神経変性を予防または低減するのに十分な投与で、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答をまったく誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発する、プロゲスチン化合物の所定の投与で患者を処置するステップを含む方法の発見が導き出された。この実施形態に関して、患者は、男性または女性の患者を含むことができる。さらに、本発明によれば、患者の神経変性を処置する方法は、神経変性を予防または低減するのに十分な投与で、アンドロゲン受容体と相互作用することなく、かつアンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答をまったく誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発するプロゲスチン化合物の薬学的に有効な投与を、エストロゲン化合物と共に用いて患者を処置するステップを含む。この実施形態では、患者は、好ましくは女性患者である。本発明の特定のプロゲスチン化合物は、広範な投与で、すなわち、患者の吸収する量が、埋込体などの使用によってわずか約３０μｇ／日から、錠剤などの使用によって約５ｍｇ／日まで、または他のこうした手段で３〜５ｍｇまでの広い範囲で、ゲル、パッチ、女性用膣内リングなどを包含する、経口と非経口のどちらもの様々な方法で施用することができる。同様に、エストロゲンの場合、送達される量は、１日あたりわずか１μｇ〜最高で約２，０００μｇの範囲とすることができる。また、約１００〜４５０μｇ／日のＮＥＳと、エストロゲン、特に、ゲル製剤での１０〜１５０μｇ／日（吸収量）のエストラジオールとを一緒に１日量として包含する閉経療法の処置は、神経変性および／またはミエリン変性の予防または低減を予想外に向上させることも考えられている。この処置はまた、これらの組成物を含有する���内リングを使用するなど経膣的に行うことができる。送達は、持続的、または３週間持続送達した後１週間送達を停止する順次送達など、順次的のどちらでもよい。
【００３０】
これらの治療は、閉経後の女性に適用できるだけでなく、ＭＳ、ＡＤ、ＰＤなどの症状における、および脳卒中またはＴＢＩなどの虚血障害のその他の原因に関連する神経変性の予防または減少における治療のためにも有用であり得ることがさらに発見された。
【００３１】
本発明の主な対象は、男性と女性の両患者の神経変性またはミエリン変性を処置する方法に関する。これは、主に、神経変性を予防または低減するために、１００〜４５０μｇ／日、最高で８００ｍｇ／日以下の投与レベルで、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などの特定のプロゲスチンの薬学的に有効な投与でこれらの患者を処置することを含む。
【００３２】
しかし、本発明の一実施形態では、本発明は、具体的には女性患者を対象とする。この処置の一態様では、プロゲスチンをエストラジオールなどのエストロゲン化合物と組み合わせて、一般に、神経変性および／またはミエリン修復の予防または低減の両方を、避妊またはホルモン療法と共に行うようにする。したがって、出産年齢の若い閉経前女性に関しては、ＭＳ、ＡＤ、ＰＤ、脳卒中などの神経変性病態の有無にかかわらず、避妊が確実にされ、一方、閉経後女性では、この場合も、これらの神経変性障害の有無にかかわらず、ホルモン療法処置も行うことができる。したがって、これらの組成物の組合せは、避妊および／またはホルモン療法処置に加えて、出産可能年齢または閉経後または産褥期中の女性におけるＭＳの再発を予防または低減するのに使用することができる。
【００３３】
好ましい一実施形態では、これは、上述のもの、好ましくはＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンを、最も好ましくは、この組成物を上述の特定の１日量投与するのに膣内リングの形で投与することによって実施される。
【００３４】
閉経後女性の場合、本発明の一実施形態では、本発明の化合物を、この場合も好ましくはＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンとエストラジオールとの両方の組合せを包含する経皮ゲルの形で投与する。このように、この方法は、ＭＳ、ＡＤ、ＰＤ、および脳卒中などのこれらの医学的状態の臨床状況にある神経変性を予防または処置できることが予想される。好ましくは、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンの１日量は、この場合もこうした閉経後女性において関連するエストロゲン療法の有無にかかわらず、１００〜４５０μｇ／日の範囲となる。プロゲスチンの投与は、神経増殖（ｎｅｕｒｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）への十分な効果を可能にし、子宮内膜（ｅｎｄｒｏｍｅｔｒｉａｌ）剥離を誘導させるために、持続的に、または処置しない期間を順次入れることで断続的に実施することができる。
【００３５】
一方、出産年齢にある若い閉経前女性の処置に関して、一実施形態では、本発明は、好ましくは膣内リングの形で、１日投与量として約２００μｇ／日の割合で、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンを持続して長期投与することを提供する。この場合も、ＭＳなどの神経変性病態の処置の有無にかかわらず、これによって確実に避妊される。さらに、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などの化合物自体の強力な抗排卵作用を考えると、これらの投与の長期実施は、妊娠の予防、ならびにＭＳの再発予防に適している。したがって、本発明によれば、神経保護の性質を有するこれらのプロゲスチンを含有しない現在のエストロゲン−プロゲスチン避妊薬のすべてとは対照的に、ほとんどの女性で使用される、さらなる健康上の利益を有する新規な避妊薬を開示する。
【００３６】
本発明の一態様の好ましい一実施形態によれば、約１ｍｇ〜４．５ｍｇの経皮施用用Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）（１０％吸収として、約１００〜４５０μｇ／日のＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標））を含有する経皮施用のための、好ましくはゲルの形の１日量のＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）を包含し、単独で与えることができ、または、好ましくは使用前に、閉経療法のために、０．５〜１．５ｍｇ、すなわち、５０〜１５０μｇ／日の経皮施用用エストラジオールと組み合わせることができる組成物を提供する。膣内リングを使用する好ましい一実施形態では、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）の１日量は、単独でも、または好ましくは１０〜５０μｇ／日の用量のエストラジオールとの組合せでも、約１００〜３００μｇ／日である。この実施形態では、これらの投与は、持続的に、または順次的に、例えば、３週間投与し、１週間投与しない治療計画などで施用することができる。
【００３７】
本発明の別の一実施形態によれば、閉経後女性を、神経変性障害の有無にかかわらず、神経前駆細胞増殖を誘導させるのに十分な投与で、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）を包含する上述のプロゲスチンを含む１日投与量単位を与えることによって、処置して、神経前駆細胞増殖を誘導させることができる。
【００３８】
本発明はまた、明らかに、患者の神経変性またはミエリン変性を処置するための男性と女性の両方への一般適用を有する。したがって、この方法は、神経変性を予防または低減するために、薬学的に有効な投与、好ましくは５ｍｇ／日以下の本発明のプロゲスチンを用いて患者を処置することを包含する。しかし、最も好ましいプロゲスチン、すなわちネストロン（登録商標）の場合、そのかなり高い効力を考慮して、利用するネストロン（登録商標）の量は、１００〜３００μｇ／日の間、好ましくは約２００μｇ／日の１日用量となる。
【００３９】
これらの用量のＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンを投与する方法は、例えば、非経口投与を含むことができる。非経口投与には、ゲル、経皮もしくは経鼻スプレー、経皮パッチによる、または膣内リングもしくは埋込体の形での経皮投与が包含され得る。本発明の経口活性なプロゲスチンの経口投与は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、糖衣錠、丸剤、ペレット、顆粒剤、散剤、液剤、乳剤、懸濁剤などの形で行うことができる。
【００４０】
本発明に従って使用することができる特定のプロゲスチン化合物に関しては、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）ならびに１８−メチルＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストンなどのプロゲスチン、ならびにノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロン、および１７−ヒドロキシプロゲステロンなどの非アンドロゲンプロゲスチンが包含され得る。一般的に、本発明の方法はこうして、神経変性および／またはミエリン変性の予防または減少のため、および／またはＭＳ、ＡＤ、ＰＤなどの症状の治療のため、または脳卒中もしくはＴＢＩが原因の虚血障害などの虚血障害の治療のために利用することができる。
【００４１】
プロゲスチン化合物が、アンドロゲン受容体を妨害せず、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導せずに、プロゲステロン受容体に対する結合を発揮し、プロゲステロン−受容体誘導性生物学的反応を惹起する本発明の実施形態では、脳卒中などの事故の後のこのような化合物（プロゲステロンおよびネストロン（登録商標））による治療は、梗塞ならびに境界域における神経細胞密度を著しく増加させ、境界域のミクログリア密度の減少の結果として神経炎症応答を低下させることが発見された。したがって、プロゲステロンは、８ｍｇ／ｋｇの用量で有効性を示したが、一方、ネストロン（登録商標）は１００倍低い用量（０．０８ｍｇ／Ｋｇ）で同様の神経保護効果を示した。
【００４２】
上述のように、本発明によるプロゲスチンの１日量は、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン誘導性の生物学的応答を誘発するように選択される。
【００４３】
本発明の好ましい一実施形態によれば、神経保護の性質を有するこうしたプロゲスチンを含有しない現在のエストロ−プロゲスチン避妊薬のすべてとは対照的に、ほとんどの女性で使用される、さらなる健康上の利益を有する新規な避妊薬を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）とプロゲステロンの比較、および用量依存的なミエリン形成の促進を示すグラフ図である。
【図２】Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、リゾレシチン、およびＲＵ４８６によるミエリン形成の比較を示すグラフ図である。
【図３】前駆細胞の増殖に対するプロゲスチンの効果を示すグラフ図である。
【図４】前駆細胞の増殖に対する様々なプロゲスチンを示すグラフ図である。
【図５】様々なプロゲスチンの神経保護効果を示すグラフ図である。
【図６Ａ】ノルゲスチメートによって誘導されたＮＰＣ再生とプロゲステロンによって誘導されたＮＰＣ再生の比較を示すグラフ図である。
【図６Ｂ】ＮＰＣ再生に関するＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）とプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図６Ｃ】ＮＰＣ再生に関するノルエチノドレルとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図６Ｄ】ＮＰＣ再生に関するノルエチンドロンとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図７Ａ】神経保護効果に関するＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）とプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図７Ｂ】神経保護効果に関するノルエチノドレルとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図７Ｃ】神経保護効果に関するレボノルゲストレルとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図７Ｄ】神経保護効果に関するノルゲスチメートとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図７Ｅ】神経保護効果に関する酢酸メドロキシプロゲステロンとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図７Ｆ】神経保護効果に関するノルエチンドロンとプロゲステロンの比較を示すグラフ図である。
【図８Ａ】様々なプロゲスチンによるＮＰＣ増殖の細胞生存率の比較を示すグラフ図である。
【図８Ｂ】様々なプロゲスチンによるＮＰＣ増殖の細胞生存率の比較を示すグラフ図である。
【図８Ｃ】様々なプロゲスチンによるＮＰＣ増殖の細胞生存率の比較を示すグラフ図である。
【図９Ａ】様々なプロゲスチンのＰＣＮＡ発現を示すグラフ図である。
【図９Ｂ】ＴＵＮＥＬ陽性細胞のパーセントを示すグラフ図である。
【図１０】中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）４８時間後の梗塞、境界域および反対側半球における神経細胞密度を示した図である。
【図１１】プロゲステロンおよびネストロン（登録商標）投与後の梗塞の神経細胞密度増加を示したグラフである。
【図１２】プロゲステロンおよびネストロン（登録商標）投与後の境界域の神経細胞密度増加を示した図である。
【図１３】プロゲステロンおよびネストロン（登録商標）投与後の境界域のミクログリア密度減少を示した図である。
【図１４Ａ】ネストロン（登録商標）を使用したＭＣＡＯの４８時間後の梗塞体積を示した図である。
【図１４Ｂ】ネストロン（登録商標）の適用をベースにしたＭＣＡＯの４８時間後の運動協調性およびバランスを示した図である。
【図１５】プロゲスチンまたはネストロン（登録商標）の投与をベースにしたＭＣＡＯの４８時間後の境界域における神経細胞生存能を示した図である。
【図１６】プロゲステロンまたはネストロン（登録商標）の投与をベースにしたＭＣＡＯの４８時間後の梗塞内における神経細胞生存能を示した図である。
【図１７】プロゲステロンまたはネストロン（登録商標）の投与をベースにした反対側半球における神経細胞密度を示した図である。
【図１８】プロゲステロンまたはネストロン（登録商標）の投与をベースにしたＭＣＡＯの４８時間後の境界域におけるミクログリアを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明は特に、ある種のプロゲスチンの特定の特性の発見をベースにしている。特に、これらのプロゲスチン化合物は、神経変性を予防または減少させるために十分な用量で、アンドロゲン受容体と相互作用せず、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導せずに、プロゲステロン受容体に対する結合を発揮し、プロゲステロン−受容体誘導性生物学的応答を惹起し、この用量は、それにも関わらず、錠剤、カプセルなどの経口投与の場合、５ｍｇ／日以下である。したがって、これらのプロゲスチンには、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、１８−メチルＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）、酢酸ノメゲストロール、トリメゲストン、ノルゲスチメート、ジエノゲスト、ドロスピレノン、酢酸クロルマジノン、プロメゲストン、レトロプロゲステロン、および１７−ヒドロキシプロゲステロンが包含される。したがって、このクラスのプロゲスチンは、アンドロゲン受容体と相互作用し、（プロゲステロンでは）効果を示すのに５ｍｇ／日超、一般にプロゲステロンでは最高で１０ｍｇ／日、またはそれ以上の投与を必要とするプロゲステロンおよびレボノルゲストレルを除外する。本発明のプロゲスチン化合物にはまた、アンドロゲンまたはグルココルチコイドの生物学的応答を誘導することなく、プロゲステロン受容体との結合を生じさせ、プロゲステロン受容体誘導性の生物学的応答を誘発するプロゲスチン化合物が包含され得る。
【００４６】
本発明者らは、本発明に関する使用に非常に好ましいＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのプロゲスチンの現在の好ましいいくつかの投与を本明細書で説明している。しかし、こうした有効用量を送達させるために、これらのプロゲスチンの各々の投与がいくら必要とされるかは、特定の投与経路に応じて、製薬分野の技術の範囲内で日常的な実験によって決定される。しかし、下記に説明するような差異はあるが、本発明のこれらのプロゲスチン化合物のすべては、プロゲステロンなどの化合物の有効用量よりもかなり少ない量である５ｍｇ／日以下の投与で効果的に利用できることが分かった。ｉｎ  ｖｉｖｏで投与されるＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などのこれらのプロゲスチン化合物の各々の投与は、レシピエントの年齢、性別、健康状態、および体重、同時に行われる処置の種類、もし行われていれば処置の頻度、ならびに所望の薬剤効果の性質に依存する可能性があることを理解されたい。本明細書で提供する有効用量の範囲は、限定することを意図するものではなく、好ましい用量範囲を表しており、全体的に見て５ｍｇ／日以下のより低い投与範囲である。しかし、当業者なら理解し、決定できるように、その全体的な範囲内の最も好ましい投与は、個々の対象に合わせて調整することができる。例えば、Ｂｅｒｋｏｗら編、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、第１６版、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、ＮＪ（１９９２年）；Ｇｏｏｄｍａｎら編、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｅｎ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、Ｅｌｍｓｆｏｒｄ、ＮＹ（１９９０年）；Ｋａｔｚｕｎｇ、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＮ（１９９２年）；Ａｖｅｒｙ’ｓ  Ｄｒｕｇ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第３版、ＡＤＩＳ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９８７年）；Ｅｂａｄｉ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ＆Ｃｏ．、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ（１９８５年）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、第１７版、Ａｌｐｈｏｎｚｏ  Ｒ．Ｇｅｎａｒｏ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８５年）を参照されたい。これらの参考文献を引用することにより本明細書の一部をなすものとする。
【００４７】
投与は、用量漸増研究を使用して、臨床医によって決定され得る。それが上記の好ましい範囲内にあることが予想され得る。さらに、この考察は本発明の非常に重要なプロゲスチン成分に特に言及しているが、もちろん、これはまた本願のエストロゲン成分にも同等の効力で適用され得る。
【００４８】
さらに、用語「薬学的に有効な」は、対象に所望の変化をもたらすのに十分な量を意味する。量は、特定の薬物の性能、所望の治療効果、および施用方法が意図する処置の提供期間などの要因に応じて変わる。製薬分野の技術者は、標準的な手順に従って薬物の毒性レベルと最小有効用量のどちらも決定することができる。例えば、適切な剤形は、標準的な分析技術、例えば、分光分析またはラジオイムノアッセイ分析によって、所与の薬物のｉｎ  ｖｉｖｏでの速度または溶出を測定して、調製することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの本発明の送達デバイスからの薬物の拡散は、例えば、Ｃｈｉｅｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６３巻、３６５ページ（１９７４年）に開示の方法、または米国特許第３，７１０，７９５号に記載の方法によって決定することができ、その開示を、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。
【００４９】
本出願人は、これらの特定のプロゲスチン化合物が、ミエリン形成に関して、また神経変性の処置、具体的には、ＭＳ、ＡＤ、ＰＤなどの病態の処置ならびに脳卒中およびＴＢＩなどによる虚血性損傷の処置に予想外の性質を有する可能性があり、さらに、これらの予想外の性質が、避妊目的に有用であることが知られているこれらの化合物を用いた避妊作用の処置と併せて得られることを発見した。
【００５０】
したがって、本発明のプロゲスチン化合物の特定の好ましい使用は、女性対象におけるエストロゲン化合物との併用である。当業者は、エストロゲン化合物から、エストロゲンが、エストラジオール、エチニルエストラジオール、エストラジオールスルフィマート（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｓｕｌｆｉｍａｔｅ）、吉草酸エストラジオール、酢酸エストラジオール、安息香酸エストラジオール、エストロン、エストリオール、コハク酸エストリオール、および硫酸エストロンなどの結合型ウマエストロゲンを包含する結合型エストロゲン、１７β−エストラジオール硫酸、１７α−エストラジオール硫酸、硫酸エキリン、１７β−硫酸ヒドロエキリン、１７α−硫酸ヒドロエキリン、硫酸エキレニン、１７β−硫酸ジヒドロエキレニン、１７α−硫酸ジヒドロエキレニン、エステトロール、またはそれらの混合物からなる群から選択され得ることを理解されよう。最も好ましいのは、エストラジオールである。
【００５１】
避妊を目的にプロゲスチンをエストロゲンと組み合わせることは、広く知られている。実際は、通常、女性の不正出血パターンを発生させることなく、また閉経後の使用のためでもなく、プロゲスチンを単独で使用することはできないので、これらの目的のためにこれらのプロゲスチンをエストロゲンと組み合わせることが必要になった。さらに、本発明の主旨は、本明細書に記載のある種のプロゲスチンが神経保護およびミエリン形成に関して予想外に優れた性質を有し、エストロゲンの添加が必ずしもその目的を支援するものではないという発見に基づいているが、ある種のエストロゲンをこれらのプロゲスチンと組み合わせて使用することにより、神経保護または神経再生およびミエリン修復に関してさらに大きな予想外の結果をもたらすことも可能である。
【００５２】
器官型の新生児ラットまたはマウスの小脳スライス培養物において実施した実験では、プロゲステロンは、軸索ミエリン形成を加速した（１３、１４）。本発明に従って実施した研究では、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）免疫活性によって測定されたように、プロゲステロン（ＰＲＯＧ）とＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）（ＮＥＳ）の両方が用量依存的にミエリン形成を促進することが分かった。２０μＭのＮＥＳが５０μＭのＰＲＯＧと同じくらい活性があったので、ＮＥＳはＰＲＯＧよりも著しく強力であることが分かった（図１）。また、処置してもＰＲノックアウトマウスからの小脳スライスでのミエリン形成は増大されなかったので、細胞内のプロゲステロン受容体（ＰＲ）がＰＲＯＧのミエリン形成促進作用（ｐｒｏｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ａｃｔｉｏｎ）を媒介する可能性が示された。
【００５３】
同じ動物モデルにおいて、ミエリン形成が完了するまで小脳スライスを培養し、次いで、周知の技術（１５）を利用して、リゾレシチン（ＬＹＳＯ）と共に一晩インキュベートして、脱髄を生じさせ、続いて、新鮮な培地で２０μＭのＮＥＳと共に３日間インキュベートした（スライスに１０％浸透）。スライスをＭＢＰに関して免疫染色した。図１に示すように、ＮＥＳは再ミエリン化を生じた。正常なミエリン形成が完了した後、リゾレシチンによって脱髄した後、および２０μＭのＮＥＳ、１０μＭのＲＵ４８６、またはＮＥＳ＋ＲＵ４８６と共に３日間インキュベートした後、小脳スライスにおけるＭＢＰ染色強度を測定した。このモデルでは、ＲＵ４８６がＮＥＳ活性を抑制するように見えるので、リゾレシチン脱髄小脳スライスのＮＥＳ刺激による再ミエリン化に、典型的なプロゲステロン受容体（ＰＲ）が関与する可能性がある（図２）。
【００５４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究での上記記載によれば、ＮＥＳのミエリン形成／再ミエリン化作用がプロゲステロン受容体（ＰＲ）によって媒介される可能性があることが明らかである。したがって、ＮＥＳは、ＰＲの強力なアゴニストであり、ＰＲ関連の生物学的応答を誘導するアンドロゲン活性を有さない最も強力なプロゲスチンの１つであり、プロゲステロンよりもさらに良好にミエリン再生を向上させると思われ、これは脱髄に関連する疾患または病態の処置となる可能性がある。
【００５５】
閉経後の女性では、神経変性疾患の増加はエストロゲンの欠乏と関係があり、プロゲステロンの役割にはほとんど注意が払われてこなかった。げっ歯類モデルの神経幹細胞の増殖に関する研究から、脳室下帯では、これらの細胞が急速に分裂し、介在神経細胞になる神経芽細胞を生じさせることが示された。プロゲステロンは、これらの前駆細胞の増殖を増大させる。細胞増殖に関して試験した様々なプロゲスチンのうちで、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）は、プロゲステロンと同じくらい有効、またはプロゲステロンよりさらに有効である。ノルエチノドレルおよびノルゲスチメートはまた、プロゲステロンより増殖性が高かった（図３）。しかし、他のプロゲスチンは、増殖に関してプロゲステロン（ＮＥＴ、ＬＮＧ）またはアンタゴニスト（ＭＰＡ、ＮＥＴＡ）ほど有効でなかった（図４）。
【００５６】
ＣＮＳの可塑性に対するＮＥＳおよび他のプロゲスチンの効果ならびにグルタミン酸毒性に対する神経保護効果も評価した。細胞をグルタミン酸塩に曝露させた後、こうした効果を決定するために、十分に容認されたアッセイとしてＬＤＨを測定し、神経細胞の生存率を様々なプロゲスチンの作用下で評価した。図５は、３種のプロゲスチンが、ＮＥＳが１０  −７Ｍのときにプロゲステロンと同等の効果を有し、ＰＲＯＧがより高い効果を発揮したが、より低い用量では、ＰＲＯＧよりもＬＮＧのアンドロゲンプロゲスチンの方が活性があることを示している。
【００５７】
ＰＲ＋／−およびＰＲ＋／＋マウスと比較してプロゲステロン受容体（ＰＲ）欠損マウス（ＰＲ−／−）を使用して実施した実験では、プロゲステロンおよびネストロン（登録商標）の両方を虚血および再灌流後に投与した。ネストロン（登録商標）は、虚血障害に対する保護に関して少なくとも同程度の結果を有することが見出されたが、プロゲステロンで必要な量と比較してはるかに低い用量であった。
【実施例１】
【００５８】
ラットの神経前駆細胞（ＮＰＣ）再生を決定するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで研究を行った。５−ブロモ−２−デオキシウリジン（ｄｅｏｘｉｕｒｉｄｉｎｅ）（ＢｒｄＵ）化学発光酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびその結果を、本明細書の図６Ａ〜Ｄに示している。細胞増殖は、ＢｒｄＵのＳ期取込みによって決定した。４〜６時間の飢餓（補充なし培地）後、ｂＦＧＦの存在下または不在下で、Ｐ４または試験プロゲスチンの濃度を変えて、非補充の維持培地においてｒＮＰＣに１０μＭのＢｒｄＵを１日間付加した。次いで、先に記載したようにｒＮＰＣを処理した（１、１４）。ブランク（ＢｒｄＵ付加なし）の値を引いた後、データを、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｎｅｕｍａｎ  Ｋｅｕｌｓ  ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｔｅｓｔを使用して、分析した。これらの結果は、２４時間で、ノルゲスチメートがすべての濃度でプロゲステロンよりも細胞増殖において一層強力であったことを実証している。Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）およびプロゲステロンは、それらのＥＣ１００濃度で同等の効果を示した。ノルエチノドレルは、低ナノモル範囲でプロゲステロンと同等の効果を生じたが、高ナノモル範囲ではプロゲステロンよりも著しく効果的であった。ノルエチンドロンは、プロゲステロンおよびレボノルゲストレルほど有効ではなく、酢酸ノルエチンドロンは、増殖に対する効果が最小または無しであり、酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）は、複数の濃度で増殖を著しく抑制した。
【実施例２】
【００５９】
神経変性損傷に対する神経保護の比較を行った。興奮毒性グルタミン酸塩によって誘導された変性からの初代海馬神経細胞の保護に関して、効果を決定した。７日間９０ウェル培養プレートでｉｎ  ｖｉｔｒｏ成長させた海馬神経細胞培養物を、ビヒクルだけまたは試験化合物で前処置し、続いて、先に記載したように２００μＭのグルタミン酸塩に曝露させた（１３）。グルタミン酸塩の曝露後、培養物をＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水で洗浄し、試験化合物または組合せを含有する新鮮なＮＢＭと交換した。培養物をインキュベーターに戻し、２４時間インキュベートした後、比色ＬＤＨ放出法を使用して、培地における神経細胞の生存率を分析した。試験したプロゲスチンの各々に関して用量反応分析を実施した。その結果を図７Ａ〜Ｆに示している。神経保護の効率を、以下の通りに計算した：ＮＥ＝（Ｖサンプル−Ｖグルタミン酸塩）／（Ｖ対照−Ｖグルタミン酸塩）。これから分かるように、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）は、プロゲステロンと同等の神経保護効果を誘導した。ノルエチノドレルは最小有効濃度においてプロゲステロンよりも強力であったが、レボノルゲストレルはプロゲステロンと同等の効果を示した。ノルゲスチメートはプロゲステロンほど強力ではなく、ＭＰＡとノルエチンドロンのどちらもプロゲステロンほど強力ではないことが分かった。
【実施例３】
【００６０】
ｉｎ  ｖｉｖｏ条件に対する上記のｉｎ  ｖｉｔｒｏ知見の全般的な能力を調査した。卵巣切除した生後３カ月の雌のスプラーグドーリーラットにおいて、様々なプロゲスチンを用いて、ラットのＮＰＣ増殖および細胞生存率の分析を実施した。細胞周期タンパク質発現をＷｅｓｔｅｒｎブロット解析によって決定した。図８Ａに見られる結果から、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）が、タンパク質レベルでのＰＣＮＡ発現の増加に関してプロゲステロンよりもわずかに優っているように見えることが示された。一方、レボノルゲストレルおよびＭＰＡは、ＰＣＮＡ発現に有意な効果を有さず、ＣＤＣ２タンパク質発現は、プロゲステロンとＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）の両方によって有意に増加されたが、レボノルゲストレルおよびＭＰＡでは増加されなかった。ＢｒｄＵ＋細胞の総数を評価するために、タンパク質分析に使用した対側海馬の半球を準備し、ＦＡＣＳ分析で処理した。各海馬ごとにＢｒｄＵ＋細胞の総数を決定し、ビヒクル対照に対して標準化した。その結果を図８Ｂに示しており、これは、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）が、Ｂｒｄ＋細胞数においてプロゲステロンよりもわずかに優って、有意な増加を示し、レボノルゲストレルが、プロゲステロンと同等であり、ＭＰＡが、ｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞増殖に有意な効果を有さなかったことを実証するものである。細胞生存率を測定するために、ミトコンドリア機能の促進、およびミトコンドリアの酸化的リン酸化経路のＡＴＰ合成酵素複合体Ｖのαサブユニット（ＣＶα）の酸化的障害発現の低減に関して、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット解析で評価した。図８Ｃに示した結果は、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）がプロゲステロンおよびレボノルゲストレルよりもさらに大きくＣＶＡ発現を増加させたが、ＭＰＡは、この場合も、ＣＶα発現レベルに有意な効果を及ぼさなかったことを実証している。
【実施例４】
【００６１】
Ｂａｘ、すなわち、チトクロムＣやＢｃｌ−２などのアポトーシス因子を放出するミトコンドリアへの翻訳によるアポトーシスメディエーターの発現レベルを決定するのに、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット解析を使用して、アポトーシスに対する様々なプロゲスチンの効果を研究した。ｉｎ  ｖｉｖｏでのアポトーシス活性の指標として、ＢａｘとＢｃｌ−２の比を使用した。得られた結果は、プロゲステロンおよびＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）の両方が、Ｂａｘ／Ｂｃｌ−２発現比に効果を有さず、レボノルゲストレルおよびＭＰＡが、その比を有意に増加させて、アポトーシス促進効果を示したことを実証していた。
【実施例５】
【００６２】
また、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの神経形成および細胞生存率に対する１７β−エストラジオール（Ｅ２）と様々なプロゲスチンとの組合せの影響も行った。したがって、卵巣切除した若い雌のスプラーグドーリーラットを、６グループに分け、Ｅ２単独、またはプロゲスチンのうちの１種と組み合わせたＥ２を注射した。２４時間後に海馬を単離して、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット解析およびフローサイトメトリーに関して、細胞生存率および神経形成それぞれに対する処置の影響を決定した。ＰＣＮＡの発現レベルを評価して、神経形成に必要な細胞周期への侵入に対する処置化合物の影響を決定した。その結果は、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）＋Ｅ２が最大のＰＣＮＡ発現および神経前駆細胞増殖を誘導することを実証していた（図９Ａを参照）。
【００６３】
重要なことには、エストラジオールと組み合わせたＮｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）は、ＴＵＮＥＬ陽性細胞、アポトーシスに対するマーカーの増加がないことから明らかなように、神経前駆細胞死を増加させなかった。対照的に、エストラジオールと組み合わせたＭＰＡとレボノルゲストレル（ｌｅｖｏｎｏｇｅｓｔｒｅｌ）のどちらも、ＴＵＮＥＬ陽性細胞の増加から明らかなように、アポトーシスを有意に増加させた（図９Ｂを参照）。上述のように、ＭＰＡとレボノルゲストレルの両方は、細胞増殖を増加させた。
【実施例６】
【００６４】
再灌流後のステロイド治療の効果を試験するために、ＰＲｌａｃｚ雄成体マウスを麻酔し、中大脳動脈（ＭＣＡ）を腔内フィラメントで１時間閉塞した。左総頸動脈を結紮後、熱融解接着剤でコーティングしたナイロンモノフィラメントを外頸動脈に施した動脈切開から導入し、内頸動脈内に進めた。ＭＣＡの閉塞は、レーザードップラー流速測定によってＭＣＡ領域内の脳血流量をモニターすることによって制御した。閉塞して１時間後にフィラメントを引き抜いて再灌流させ、総頸動脈結紮も取り除いた。マウスを無作為および盲検的にプロゲステロン、アロプレグナノロンまたはネストロン（登録商標）またはビヒクル処理（ゴマ油；ｓｉｇｍａ）のいずれかに割り付けた。ステロイドは全て、最初に少量のエタノールに溶解し、さらにゴマ油で希釈して、所望する最終ステロイド濃度を得た。注射は、確立された神経保護プロトコールに従って、ＭＣＡ閉塞（ＭＣＡＯ）の１、６および２４時間後に腹腔内（ＩＰ）に行った。処理マウスは、ＭＣＡＯの４８時間後に殺処分した。
【００６５】
脳梗塞体積および領域は、脳切片のトリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）染色後に測定した。この手順の詳細は、本明細書に参考として全体を組み込んだ「Ｐｒｏｇｅｓｔｏｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ａ  Ｋｅｙ  Ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｔｒｏｋｅ」Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、Ａｕｇｕｓｔ  ２０１２、１５３（８）、１〜１１ページに記載されている。図１０に示したように、ＭＣＡＯ４８時間後に、梗塞、境界域および反対側半球の神経細胞密度を確認することができる。図１１、１２および１３では、プロゲステロンおよびネストロン（登録商標）の投与後に、梗塞（図１１）および境界域（図１２）における神経細胞密度を明白に確認することができる。図１３では、プロゲステロンおよびネストロン（登録商標）投与後に境界域におけるミクログリア密度の減少も明らかに示される。
【００６６】
最後に、図１４ａおよび１４ｂに示したように、ＭＣＡＯ４８時間後に、梗塞体積に対するネストロン（登録商標）治療の保護効果が図１４Ａで明らかに示され、ロータロッド上での運動協調性およびバランスに対するネストロン（登録商標）治療の効果が図１４Ｂで示される。したがって、大脳皮質および皮質下構造の両方における全梗塞体積および虚血病変は、ＰＲ＋／＋マウスではネストロン（登録商標）治療によって明らかに減少したが、ＰＲ＋／−マウスでは減少しなかった。ロータロッドで評価したときの運動協調性はまた、梗塞体積と有意な負の相関を示した。ネストロン（登録商標）治療によって全梗塞体積は３２％減少し、大脳皮質内および皮質下構造における虚血病変はそれぞれ２２％および５２％減少し、ＰＲ＋／＋マウスがロータロッド上で維持した時間は３３％増加した。この結果は明らかに、ネストロン（登録商標）などの外来性プロゲスチンなどの追加的治療による長期神経保護効果およびＰＲの存在の重要性を示している。ネストロン（登録商標）がプロゲステロンよりも１００倍少ない用量で神経学的成績を改善したことがさらに示された。
【００６７】
本発明は、神経再生を刺激し、ＭＳまたはＡＤなどの神経変性障害、ならびに脳卒中またはＴＢＩをできる限り抑制し、逆転させる方法を提供する。
【００６８】
プロゲステロン受容体が神経保護において重要な役割を果たすことが示されたことはまったく予期しないことであり、ＴＢＩを含む様々な種類の損傷のための神経保護戦略において、またはプロゲステロンが有効であることが既に示されている変性プロセスに関して、これらの受容体を標的とするように設計された合成プロゲスチンを使用する道が開かれた。したがって、ＴＢＩなどの脳損傷モデルの以前の研究（２２）は、プロゲステロンがその代謝物アロプレグナノロンを介して神経保護効果を発揮することを示唆した。実際に、プロゲステロンがアロプレグナノロンを介してその神経保護効果を発揮することは、脳卒中でも提唱された（２３）。しかし、アロプレグナノロンは、プロゲステロン受容体には結合せず、ＧＡＢＡＡ受容体またはミトコンドリア活性を改変することによって作用するので、これはさらに、プロゲステロン受容体が神経保護において重要な役割を果たさないことを示唆している。
【００６９】
提案する方法は、膣内リングまたは膣内ゲルで、単独で、またはエストラジオールと組み合わせて投与される約１００〜４５０μｇ／日の用量のＮＥＳを用いてミエリン変性を逆転させるステップを含む。
【００７０】
本発明の別の一実施形態では、ＮＥＳ、またはアンドロゲンもしくはグルココルチコイドの性質を有さないプロゲスチンを、ホルモン療法および神経変性の実行可能な予防として低用量のエストロゲンを受ける閉経後女性に投与する。
【００７１】
本発明は、ＮＥＳが、プロゲステロンよりも神経前駆細胞の刺激ならびにミエリンの再生に活性があるという発見に関する。本発明のさらに中心となる態様は、プロゲステロン受容体に結合でき、ＰＲ誘導性の生物学的応答を誘導できる薬剤が、出産可能年齢の女性ならびに閉経後の女性にとって、神経変性を予防または逆転させるのに有効となるであろうということである。
【００７２】
用語「Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）」（ＮＥＳ）は、強力なプロゲステロンおよび抗排卵の作用を及ぼし、かつ治療レベルでのアンドロゲンまたはエストロゲンまたはグルココルチコイドの作用を有さない１９−ノルプロゲステロン誘導体を指す（１６）。具体的には、これは、１６−メチレン−１７α−アセトキシ−１９−ノルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンを指し、以前はＳＴ１４３５と呼ばれていた。
【００７３】
本明細書では、用語「ＤＤＵ」は、１日投与量単位を指し、このＤＤＵは、経口活性な他の１９−ノルプロゲステロン誘導体（ＮＥＳではない）の場合は経口製剤、または膣内製剤（ゲルもしくはリング）、または経皮製剤（ゲル、スプレー）、または経鼻スプレーの形をとる。
【００７４】
本明細書で使用する用語「避妊薬」は、妊娠の可能性を予防または低減するために投与される薬物を指す。
【００７５】
本発明は、プロゲステロンがミエリン修復を刺激するという事実に基づいている。これらの効果は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）によって媒介される。本発明は、ＮＥＳが、避妊効果も発揮する用量で、ＰＲＯＧよりも活性があり、ミエリンを再生できることを明らかにしている。
【００７６】
本発明はまた、神経組織の前駆細胞が、プロゲステロンと共に、さらに、より低用量でより高い活性を示すＮＥＳと共に培養されると、増殖することも明らかにしている。
【００７７】
また、プロゲステロン、およびいくつかのプロゲスチン、特にＮＥＳ、またノルゲスチメート（非アンドロゲン性ゴナン）、およびノルエチノドレル（エストロゲン活性を有するエストランプロゲスチン）は、前駆細胞増殖を刺激する。
【００７８】
ミエリン刺激ならびに神経再生に対するＮＥＳの優れた効果に基づいて、多発性硬化症および神経変性障害の医学的状態を改善させると同時に、出産年齢の女性の避妊または閉経期の女性のホルモン療法を提供することが、本発明の目的である。
【００７９】
本明細書において本発明を特定の実施形態に関して説明してきたが、これらの実施形態が本発明の原理および適用の単なる例示であることを理解されたい。したがって、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、例示の実施形態に多くの変更を行うことができ、他の取合せを考案することができることを理解されたい。
【産業上の利用可能性】
【００８０】
本出願で開示する神経変性またはミエリン形成の処置方法は、Ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ（登録商標）などの特定のプロゲスチン単独の、またはそれをエストラジオールなどのエストロゲンと組み合わせた非経口剤形の形において特に有用である。この組成物は、ゲル、液剤、経皮もしくは経鼻スプレー、もしくはパッチなどの経皮製品の形で、または膣内リングの形で使用され、患者が神経変性を低減するのにこのように使用することができ、エストロゲンと組み合わせると、避妊および／またはホルモン補充療法に使用することもできる。
【００８１】
［参考文献］
【表１Ａ】
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【表１Ｂ】
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【表１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
2015083557.tif 000010
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2015083557.tif 000012
【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図１】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【外国語明細書】
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