(57)【要約】【課題】種子春化型の性質が、初期生育期において低温不感応性である緑体春化型に改変されたアブラナ科植物、及びその製造方法の提供。【解決手段】種子春化型アブラナ科植物と、キャベツとを交雑し、第１の雑種植物を作製する工程と、前記第１の雑種植物及び第１の雑種植物の子孫のいずれかに、前記種子春化型アブラナ科植物を戻し交雑し、第１の雑種植物の子孫を作製する工程と、前記第１の雑種植物の子孫から、緑体春化型の性質を有する植物を選択する工程とを含む種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物の製造方法などである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
種子春化型アブラナ科植物と、キャベツとを交雑し、第１の雑種植物を作製する工程と、
前記第１の雑種植物及び第１の雑種植物の子孫のいずれかに、前記種子春化型アブラナ科植物を戻し交雑し、第１の雑種植物の子孫を作製する工程と、
前記第１の雑種植物の子孫から、緑体春化型の性質を有する植物を選択する工程とを含むことを特徴とする種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物の製造方法。
【請求項２】
第１の雑種植物の子孫を作製する工程を複数回行う請求項１に記載のアブラナ科植物の製造方法。
【請求項３】
選択された緑体春化型の性質を有する植物を自家受粉する工程を含む請求項１から２のいずれかに記載のアブラナ科植物の製造方法。
【請求項４】
種子春化型アブラナ科植物が、葉根菜類である請求項１から３のいずれかに記載のアブラナ科植物の製造方法。
【請求項５】
葉根菜類が、ハクサイ、カブ、及びダイコンのいずれかである請求項４に記載のアブラナ科植物の製造方法。
【請求項６】
種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたことを特徴とするアブラナ科植物。
【請求項７】
アブラナ科植物が、葉根菜類である請求項６に記載のアブラナ科植物。
【請求項８】
葉根菜類が、ハクサイ、カブ、及びダイコンのいずれかである請求項７に記載のアブラナ科植物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）の植物は、基本的に花が咲く状態になるために一定期間低温に遭遇する必要があり、この低温要求性は「春化」と言われる。
前記春化には、種子春化型と、緑体春化型の２種類がある。前記種子春化型とは、種子の吸水後、すぐに低温に感応することで花芽を形成するものをいう。前記種子春化型のアブラナ科植物としては、ハクサイ、カブ、ダイコンなどがある。一方、前記緑体春化型とは、植物体がある程度生育（茎の太さが５ｍｍ程度が目安）してから、はじめて低温に感応し、開花の準備をするものをいう。
【０００３】
前記一定期間低温に遭遇すると、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）の植物は、とう立ち（「抽苔」と称することもある）する。この性質のため、葉根菜類の春まき栽培では、春先の低温に遭遇することにより、例えば、ハクサイでは結球の中心部に花茎が伸び出し、商品価値が無くなってしまうという問題がある。
前記問題は、「不時抽苔」と言われ、栽培現場では、抽苔を抑制する方法の開発や、とう立ちが遅い（「晩抽性」と称することもある）品種の開発が強く求められている。
【０００４】
前記抽苔を抑制する方法として、天然型アブシジン酸を有効成分として含有する抽苔抑制剤を用いる方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。しかしながら、抽苔抑制剤を用いる方法は、栽培面積の多いアブラナ科作物への施用には大量の製剤が必要で、栽培管理やコスト面で問題がある上、抽苔抑制剤が環境に及ぼす影響の検討はなされいないという問題がある。このような問題を生じない種子春化型のアブラナ科植物を緑体春化型に改変した品種の育成が待たれている。
しかし、種子春化型のアブラナ科植物を緑体春化型に改変した品種及びその製造方法は、未だ提供されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平４−２１７６０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、種子春化型の性質が、初期生育期において低温不感応性である緑体春化型に改変されたアブラナ科植物、及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。
即ち、本発明の種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物の製造方法は、
種子春化型アブラナ科植物と、キャベツとを交雑し、第１の雑種植物を作製する工程と、
前記第１の雑種植物及び第１の雑種植物の子孫のいずれかに、前記種子春化型アブラナ科植物を戻し交雑し、第１の雑種植物の子孫を作製する工程と、
前記第１の雑種植物の子孫から、緑体春化型の性質を有する植物を選択する工程とを含むことを特徴とする。
【０００８】
本発明のアブラナ科植物は、種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によると、従来における前記諸問題を解決することができ、種子春化型の性質が、初期生育期において低温不感応性である緑体春化型に改変されたアブラナ科植物、及びその製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、実施例１のＢＣ２世代の染色体数と、各染色体数を有する個体群における低温処理後の開花個体数（上段）及び不開花個体数（下段）とを示したグラフである。なお、染色体数  ２９は、不開花個体のみであり、その数値を示す。
【図２】図２は、実施例１のＢＣ３世代の染色体数と、各染色体数を有する個体群における低温処理後の開花個体数（上段）及び不開花個体数（下段）とを示したグラフである。
【図３】図３は、実施例１のＢＣ３世代における、特定の染色体特異的マーカーを有する個体における低温処理後の開花率（グレー）及び不開花率（黒）の割合を示したグラフである。
【図４】図４は、実施例１のＢＣ３Ｓ１系統の個体群における低温処理後の開花までの日数と、個体数との関係を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物及びその製造方法）
本発明のアブラナ科植物は、種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物である。
本発明のアブラナ科植物は、本発明の種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物の製造方法により好適に製造することができる。
以下、本発明の製造方法の説明と併せて、本発明のアブラナ科植物についても説明する。
【００１２】
＜アブラナ科植物の製造方法＞
本発明のアブラナ科植物の製造方法は、第１の雑種植物作製工程と、戻し交雑工程と、選択工程とを少なくとも含み、さらに必要に応じてその他の工程を含む。
【００１３】
＜＜第１の雑種植物作製工程＞＞
前記第１の雑種植物作製工程は、種子春化型アブラナ科植物と、キャベツとを交雑し、第１の雑種植物を作製する工程である。
【００１４】
−種子春化型アブラナ科植物−
前記種子春化型アブラナ科植物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、葉根菜類が好ましい。
前記葉根菜類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ハクサイ、カブ、コマツナ、ミズナ（以上、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ）、ダイコン（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）などが挙げられる。これらの中でも、ハクサイ、カブ、ダイコンが好ましく、ハクサイがより好ましい。
前記種子春化型アブラナ科植物の品種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ハクサイでは「ＣＲ歓喜」（株式会社日本農林社製）、カブでは「ＣＲ鷹丸」（株式会社武蔵野種苗園製）、ダイコンでは「おしん」（タキイ種苗株式会社製）などが挙げられる。
【００１５】
−キャベツ−
前記キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）の品種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、「麗峰」（有限会社石井育種場製）などが挙げられる。
【００１６】
−交雑−
前記交雑の方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択して行うことができ、例えば、予め除雄した前記種子春化型アブラナ科植物の花へ、キャベツの花粉を交雑し、交雑後１週間から２週間経過したさく果を、５％蔗糖、０．８％寒天を含むＭＳ培地で人工培養することにより交雑することができる。
これにより、第１の雑種植物が得られる。
【００１７】
前記交雑により得られる第１の雑種植物は、前記種子春化型アブラナ科植物と、前記キャベツとから染色体が伝達されており（例えば、ハクサイとキャベツとを交雑した場合には、ハクサイからｎ＝１０（Ａゲノム）、キャベツからｎ＝９（Ｃゲノム））、異種ゲノムの構成では、正常な配偶子が期待できないため、コルヒチン処理を行うことが好ましい。
前記コルヒチン処理の方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択して行うことができ、例えば、０．０５％のコルヒチン溶液を含む脱脂綿を前記第１の雑種植物の腋芽上に２４時間おくことにより行うことができる。
これにより、染色体数を倍加して、複二倍体の第１の雑種植物が得られる。前記複二倍体中には同一ゲノムがそれぞれ一対存在するため、正常な減数分裂が起こり稔性のある花粉及び種子を有する。
【００１８】
＜＜戻し交雑工程＞＞
前記戻し交雑工程は、前記第１の雑種植物及び第１の雑種植物の子孫のいずれかに、前記種子春化型アブラナ科植物を戻し交雑し、第１の雑種植物の子孫を作製する工程である。
【００１９】
−戻し交雑−
前記戻し交雑の方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択して行うことができ、例えば、予め除雄した記第１の雑種植物及び第１の雑種植物の子孫のいずれかの花へ、前記種子春化型アブラナ科植物の花粉を交雑することにより行うことができる。
これにより、第１の雑種植物の子孫が得られる。
【００２０】
前記戻し交雑工程の回数は、１回であってもよいし、複数回であってもよいが、複数回行うことが好ましい。
前記戻し交雑工程を複数回行う場合には、直前の戻し交雑工程で得られた第１の雑種植物の子孫に、前記種子春化型アブラナ科植物を戻し交雑することにより行うことができる。
【００２１】
前記戻し交雑工程では、得られた第１の雑種植物の子孫にＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａのＢｏＦＬＣ２遺伝子領域が導入されていることが、前記子孫における低温処理後の不開花個体数の割合を向上させることができる点で、好ましい（後述の実施例１参照）。
前記ＢｏＦＬＣ２遺伝子領域が導入されているか否かを確認する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＤＮＡマーカーの有無を測定することにより確認する方法が挙げられる。
前記ＤＮＡマーカーとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記キャベツのＣ２染色体に座乗するＢｏＦＬＣ２遺伝子に特異的なＤＮＡマーカーが好ましい。
前記ＢｏＦＬＣ２遺伝子に特異的なＤＮＡマーカーの具体例としては、下記配列番号：１、配列番号：２で表されるマーカーなどが挙げられる。
５’−ｃｇｃｔｔｃｃｇｔｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｔｔｔａｃ−３’（配列番号：１）
５’−ｃｃｇａｇａａａｔｃｃａｃａｔｇａｇａｔｃｔｇ−３’（配列番号：２）
【００２２】
＜＜選択工程＞＞
前記選択工程は、前記第１の雑種植物の子孫から、緑体春化型の性質を有する、即ち初期生育期において低温不感応性である植物を選択する工程である。
【００２３】
前記初期生育期において低温不感応性である植物を選択する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記戻し交雑工程で得られた個体の種子を寒天培地に播種し、吸水させた種子の状態で４℃、８週間低温処理した後、前記低温処理した種子を鉢上げし、温室内で約２ヶ月間成長させ、各個体が開花するか否かを確認し、開花しなかった個体を初期生育期において低温不感応性である植物であるとして選択する方法が好ましい。
【００２４】
前記選択工程により、種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物を選択することができる。
【００２５】
また、前記選択工程では、選択に供する個体の染色体数を調べることが好ましい。前記染色体数を調べる方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記キャベツのＣ１染色体〜Ｃ９染色体に特異的なＤＮＡマーカーを用いる方法が挙げられる。
前記染色体数を調べ、該染色体数が目的とするアブラナ科植物が本来有する染色体数であり、かつ、前記低温不感応性である個体を選択することにより、より確実に、種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物を選択することができる。
【００２６】
前記選択工程の回数は、１回であってもよいし、複数回であってもよい。
前記選択工程を行う時期としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記戻し交雑工程の後、後述する自家受粉工程の後などが挙げられる。
【００２７】
＜＜その他の工程＞＞
前記その他の工程としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、自家受粉工程を含むことが好ましい。
【００２８】
−自家受粉工程−
前記自家受粉工程は、前記選択工程で選択された緑体春化型の性質を有する植物を自家受粉する工程である。
【００２９】
−−自家受粉−−
前記自家受粉の方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択して行うことができ、例えば、前記選択工程で得られた植物体の蕾に対して公知の方法である蕾受粉法を用いて行うことができる。
これにより、初期生育期において低温不感応性である緑体春化型の性質が固定されたアブラナ科植物を得ることができる。
【００３０】
前記自家受粉工程の回数は、１回であってもよいし、複数回であってもよいが、複数回行うことが好ましい。
【００３１】
本発明のアブラナ科植物は緑体春化型に改変されており、初期生育期において低温不感応性であるため、春まき栽培で問題となる不時抽苔を回避することができ、葉根菜類の早期春まき栽培に対応可能である。
【実施例】
【００３２】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３３】
（実施例１：種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物の製造）
＜第１の雑種植物作製工程＞
種子春化型アブラナ科植物として、ハクサイ（Ｂ． ｒａｐａ、２ｎ＝２０、ゲノム構成：ＡＡ）の「ＣＲ歓喜」（株式会社日本農林社製）を母親とし、キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ、２ｎ＝１８、ゲノム型ＣＣ）の「麗峰」（有限会社石井育種場製）と以下のようにして交雑した。
予め除雄したハクサイの花へ、キャベツの花粉を交雑し、交雑胚を得た。
前記交雑胚を含む交雑後１週間から２週間経過したさく果を、５％蔗糖、０．８％寒天を含むＭＳ寒天培地上で無菌培養し、第１の雑種植物（以下、「Ｆ１雑種−１」と称することがある）を得た。得られたＦ１雑種−１は、鉢上げ後、農業用ビニールで覆い、適宜栽培条件に慣れさせた。
【００３４】
前記Ｆ１雑種−１（２ｎ＝１９、ゲノム構成：ＡＣ）は、前記ハクサイからｎ＝１０（Ａゲノム）、前記キャベツからｎ＝９（Ｃゲノム）の染色体が伝達されているが、Ａ＋Ｃの異種ゲノムの構成では正常な配偶子（花粉、卵）が期待できないため、以下のコルヒチン処理を行い、染色体数を倍加して、ゲノム構成がＡＡＣＣ（２ｎ＝３８）の複二倍体（以下、「Ｆ１雑種−２」と称することがある）を作製した。前記複二倍体中には同一ゲノムがそれぞれ一対存在するため、正常な減数分裂が起こり稔性のある花粉及び種子を有する。
−コルヒチン処理−
０．０５％のコルヒチン溶液を含む脱脂綿を雑種植物の腋芽上に２４時間おき、処理した。
【００３５】
＜戻し交雑工程＞
＜＜ＢＣ１個体の作製＞＞
前記Ｆ１雑種−２に、前記ハクサイの「ＣＲ歓喜」を以下のようにして戻し交雑し、ＡＡＣのゲノム構成を持つ子孫（以下、「ＢＣ１個体」と称することがある）を作製した。
−戻し交雑−
予め除雄した前記Ｆ１雑種−２の花へハクサイの花粉を交雑した。
【００３６】
＜＜ＢＣ２世代の作製＞＞
前記ＢＣ１個体に、前記ハクサイの「ＣＲ歓喜」を上述と同様にして戻し交雑し、１８２個体の子孫（以下、「ＢＣ２世代」と称することがある）を作製した。
【００３７】
−添加染色体数の推定−
Ｃ１染色体〜Ｃ９染色体特異的な以下のＤＮＡマーカー（以下、「プライマーセット」と称することがある）を用い、前記ＤＮＡマーカーの有無については、植物体からＭｕｒｒａｙ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  （１９８０）らの方法に従ってＤＮＡを調製し、定法に従ったＰＣＲ法によって、前記染色体特異的なＤＮＡマーカーの増幅によって判定することにより、前記ＢＣ２世代の染色体数を推定した。結果を図１に示す。
なお、染色体の推定には、１つの染色体に対して複数のＤＮＡマーカーを用い、前記複数のＤＮＡマーカーのうちの少なくとも１つが検出された場合には、当該染色体を有すると推定した。
〔ＤＮＡマーカー〕
（１）  Ｃ１染色体
・  Ｃ１Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ１Ａ」と称することがある。）
５’−ｔａａｃｇｃｔｇｔｔｇｇｔｃｃａａｔｔｃｔａｇｔｇ−３’（配列番号：３）
５’−ｃｃａｃａｇｇａｔｃｔｔｔｃｃｔｃｃｔａｃｃｔａａ−３’（配列番号：４）
・  Ｃ１Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ１Ｂ」と称することがある。）
５’−ａａｔｔｔａａａｃｃｔｃａｔｔｔｔｃｔｔｃ−３’（配列番号：５）
５’−ａｃｃｔｃｃａｔｔｇｔｇｔｃｔｇａｔ−３’（配列番号：６）
（２）  Ｃ２染色体
・  ＢｏＦＬＣ２遺伝子検出用マーカー（以下、「Ｃ２ＦＬＣ」と称することがある。）
５’−ｃｇｃｔｔｃｃｇｔｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｔｔｔａｃ−３’（配列番号：１）
５’−ｃｃｇａｇａａａｔｃｃａｃａｔｇａｇａｔｃｔｇ−３’（配列番号：２）
・  Ｃ２Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ２Ａ」と称することがある。）
５’−ｇｃｇａｃａｔｇｇｔａａｔｔｇａａｇｔｔ−３’（配列番号：７）
５’−ｔｔｔａａｔｇｇｇｔｃｃａｔｇａｔａｇｃ−３’（配列番号：８）
・  Ｃ２Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ２Ｂ」と称することがある。）
５’−ｃｇｃｔｔｃｔｃｔｔｃａｔｃｔｇｃｔ−３’（配列番号：９）
５’−ａａｔｔｔｇｔｔｔｃｔｔｃａｇｃｃｇ−３’（配列番号：１０）
（３）  Ｃ３染色体
・  Ｃ３Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ３Ａ」と称することがある。）
５’−ｔｃｃｃａａｃａａａａｇａｇｔｃｃａ−３’（配列番号：１１）
５’−ｃａｇｃｇａａｃｃｇａｇｔｃｔａａａ−３’（配列番号：１２）
・  Ｃ３Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ３Ｂ」と称することがある。）
５’−ｇｔｇａｃａｔｃｔａｔｃｃｃｃａａａｃｇｔａｃａｇ−３’（配列番号：１３）
５’−ａｔａａａｃｇａａｇｃｇａｇｔｇｔｇａｔｇｇｔｔａ−３’（配列番号：１４）
（４）  Ｃ４染色体
・  Ｃ４Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ４Ａ」と称することがある。）
５’−ｔｇａｃｇｔｇｔｇａｇｃａａｃａｇａ−３’（配列番号：１５）
５’−ｃｔｇａｇｔｃａｃａａｇｃｃｇａｇｔ−３’（配列番号：１６）
・  Ｃ４Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ４Ｂ」と称することがある。）
５’−ｃｇａｔａｃｔｔｇｇａｇｃｇｔｇｔｃ−３’（配列番号：１７）
５’−ｃｔｇｇｔｇｔｃｔｔａａｃｃａｃｇｃ−３’（配列番号：１８）
（５）  Ｃ５染色体
・  Ｃ５Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ５Ａ」と称することがある。）
５’−ｇａｇａｔｃｇａａｇｇｔｃｔｃｇｇｔ−３’（配列番号：１９）
５’−ｇａｇｔｃｇａａａｃａｇｔｇｇｔｇｇ−３’（配列番号：２０）
・  Ｃ５Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ５Ｂ」と称することがある。）
５’−ｃｇａｇａｔｔｔａｃｔｔｇｃｃｇａｔｔｔｇ−３’（配列番号：２１）
５’−ａｔａａｔｃｃｔｇｇｔａａｇｔｇｇｔａａｃ−３’（配列番号：２２）
（６）  Ｃ６染色体
・  Ｃ６Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ６Ａ」と称することがある。）
５’−ｃｃｔａｃｃｔｔｃｃｔｔｔａｃｃａａｃｃ−３’（配列番号：２３）
５’−ｇｇｔｇａｔｇａｔｇａｔｇｇｇａｇａ−３’（配列番号：２４）
・  Ｃ６Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ６Ｂ」と称することがある。）
５’−ｃｇａｇｇｇｃｇａａｔｔｇｇａ−３’（配列番号：２５）
５’−ｃｃａｔｃａａｃａｇｃｃａｔｃｔｔｃ−３’（配列番号：２６）
（７）  Ｃ７染色体
・  Ｃ７Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ７Ａ」と称することがある。）
５’−ｃｔｇｔｇａｃｔｇｃａｔｔｇｃｔｇａ−３’（配列番号：２７）
５’−ａｃａｃａａｔａａａｇｔｇｃｇｇｃｔ−３’（配列番号：２８）
・  Ｃ７Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ７Ｂ」と称することがある。）
５’−ａｃａａｇａｔｃｔｇｇａｔｃａａｃａｃｃｃｔｔ−３’（配列番号：２９）
５’−ｃａｇａｇａｇａｔｔｇｃａｃｇｃｔｇｇｔｔ−３’（配列番号：３０）
（８）  Ｃ８染色体
・  Ｃ８Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ８Ａ」と称することがある。）
５’−ｔｔｇａｔｃｃｇａａａｔｔｃｔｃｔｇｇ−３’（配列番号：３１）
５’−ａｇｇｃａａｇｃａａｔａｇａｔａａａｇｇ−３’（配列番号：３２）
・  Ｃ８Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ８Ｂ」と称することがある。）
５’−ｔｇｇｔｇｔａｔａｔｇｇｇａｔｃｇｇ−３’（配列番号：３３）
５’−ｇｔｔｔｇｃａｇａｃｃａｔｔｃｔｃｇ−３’（配列番号：３４）
（９）  Ｃ９染色体
・  Ｃ９Ａ検出用マーカー（以下、「Ｃ９Ａ」と称することがある。）
５’−ａｔｔｇｇｔｃｔｃｔｔａａｃｃｃｇｃ−３’（配列番号：３５）
５’−ｔｔｃｔｃｇａａｔｃｃｃｔｃｇａａ−３’（配列番号：３６）
・  Ｃ９Ｂ検出用マーカー（以下、「Ｃ９Ｂ」と称することがある。）
５’−ｃａｇｃｃａａｇａａｃｔｃｔｃｃａｔａｇｔ−３’（配列番号：３７）
５’−ｇｇａａｔｃａｇａｇａｔｃｃａａｇａｃｔｃ−３’（配列番号：３８）
【００３８】
図１に示すように、前記ＢＣ２世代は、２ｎ＝２０のＡＡゲノムに加え、Ｃゲノムの不特定の染色体（１本〜９本（図１の染色体数２１〜２９）を含んでおり、Ｃゲノム染色体を６本（図１の染色体数２６）含む個体が一番多く観察された（１９％）。
【００３９】
−抽苔特性の確認−
前記ＢＣ２世代の個体の抽苔特性を以下のようにして調べた。結果を図１に示す。
前記ＢＣ２世代の各個体の種子を寒天培地に播種し、吸水させた種子の状態で４℃、８週間低温処理した。その後、前記低温処理した種子を鉢上げし、温室内で約２ヶ月間成長させ、各個体が開花するか否かを確認した。
【００４０】
図１中、各棒グラフの上段は開花個体数を示し、下段は不開花個体数を示す。
図１に示すように、Ｃゲノムの染色体を１本〜５本持つ添加系統（図１の染色体数２１〜２５）では、開花個体数の割合が５０％〜７５％であるのに対し、Ｃゲノムの染色体を６本〜９本持つ添加系統（図１の染色体数２６〜２９）では、開花個体数の割合が０％〜１２％であり、Ｃゲノムの染色体を５本より多く有すると不開花となる傾向が見られた。
【００４１】
＜＜ＢＣ３世代の作製＞＞
前記ＢＣ２世代で選抜した１０個体（＃６、＃１９、＃４７、＃８１、＃８８、＃１０７、＃１１８、＃１７４、＃２０９、＃２２０）それぞれに、前記ハクサイの「ＣＲ歓喜」を上述と同様にして戻し交雑し、２１４個体の子孫（以下、「ＢＣ３世代」と称することがある）を作製した。
【００４２】
−添加染色体数の推定−
前記ＢＣ３世代の添加染色体数を、前記ＢＣ２世代と同様にして推定した。結果を図２に示す。
【００４３】
図２に示すように、前記ＢＣ３世代では、２ｎ＝２０〜２４の範囲の染色体数を持つ個体が得られ，そのうち９０個体（４２％）が、２ｎ＝２０のハクサイの染色体数を持っていた。
【００４４】
−抽苔特性の確認−
前記ＢＣ３世代の抽苔特性を、前記ＢＣ２世代と同様にして確認した。結果を図２に示す。
【００４５】
図２中、各棒グラフの上段は開花個体数を示し、下段は不開花個体数を示す。
図２に示すように、２ｎ＝２０のハクサイの染色体数を持っている個体のうち、２４個体が低温処理後２ヶ月経っても開花しなかった。
【００４６】
また、前記ＢＣ３世代の個体において、特定の染色体特異的マーカーを有する個体群における、前記低温処理後の開花率及び不開花率を算出した結果を図３に示す。
図３中、「Ｍａｋｅｒ  Ｎａｍｅ」は、前記ＤＮＡマーカーの名前を示し、「ｎ」は、前記マーカーが検出された個体数を示し、グレーの棒グラフは、開花した割合を示し、黒の棒グラフは、不開花の割合を示す。
図３に示すように、ＢｏＦＬＣ２遺伝子に特異的なＤＮＡマーカーが検出された個体群では、不開花の割合が有意に多いことがわかった。
【００４７】
＜自家受粉工程＞
＜＜ＢＣ３Ｓ１系統の作製＞＞
前記ＢＣ３世代の中で、２ｎ＝２０の染色体数を持っており、低温処理後２ヶ月経っても開花しなかった個体のうち、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４」、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４」のそれぞれについて、以下のようにして自家受粉を行い、２つのＢＣ３Ｓ１系統を育成した。
−自家受粉−
前記「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４」、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４」のそれぞれについて、植物体の蕾から雌しべを露出させ、その雌しべに対して、その植物体の花粉を交配する蕾受粉法によって自家受粉を行った。
【００４８】
前記２つのＢＣ３Ｓ１系統の個体（「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４Ｓ１」、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４Ｓ１」について、前記ＢＣ２世代と同様に抽苔特性を調べた結果を図４に示す。
【００４９】
図４中、白の棒グラフは、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４Ｓ１」の結果を示し、黒の棒グラフは、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４Ｓ１」の結果を示す。
図４に示すように、２つの系統の約半数の個体が、低温処理後２ヶ月経っても開花しなかった（図４中の「ＮＦ」、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４Ｓ１」は１０個体、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４Ｓ１」は７個体）。
なお、低温処理後３週間で開花した個体数は、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４Ｓ１」が９個体、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４Ｓ１」が０個体であり、低温処理後４週間で開花した個体数は、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−４Ｓ１」が１個体、「ＢＣ３．Ｎｏ．８  １−５４Ｓ１」が６個体であり、低温処理後１週間、２週間、及び５週間で開花した個体は、なかった。
【００５０】
＜＜ＢＣ３Ｓ２系統の作製＞＞
前記ＢＣ３Ｓ１系統の個体の中で、低温処理後２ヶ月経っても開花しなかった個体について、上述と同様にして自家受粉を行ってＢＣ３Ｓ２系統を育成し、種子春化型の性質がキャベツ由来の緑体春化型の性質に改変されたハクサイを得た。
【００５１】
本発明の態様としては、例えば、以下のものなどが挙げられる。
＜１＞  種子春化型アブラナ科植物と、キャベツとを交雑し、第１の雑種植物を作製する工程と、
前記第１の雑種植物及び第１の雑種植物の子孫のいずれかに、前記種子春化型アブラナ科植物を戻し交雑し、第１の雑種植物の子孫を作製する工程と、
前記第１の雑種植物の子孫から、緑体春化型の性質を有する植物を選択する工程とを含むことを特徴とする種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたアブラナ科植物の製造方法である。
＜２＞  第１の雑種植物の子孫を作製する工程を複数回行う前記＜１＞に記載のアブラナ科植物の製造方法である。
＜３＞  選択された緑体春化型の性質を有する植物を自家受粉する工程を含む前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のアブラナ科植物の製造方法である。
＜４＞  種子春化型アブラナ科植物が、葉根菜類である前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載のアブラナ科植物の製造方法である。
＜５＞  葉根菜類が、ハクサイ、カブ、及びダイコンのいずれかである前記＜４＞に記載のアブラナ科植物の製造方法である。
＜６＞  種子春化型の性質が緑体春化型の性質に改変されたことを特徴とするアブラナ科植物である。
＜７＞  アブラナ科植物が、葉根菜類である前記＜６＞に記載のアブラナ科植物である。
＜８＞  葉根菜類が、ハクサイ、カブ、及びダイコンのいずれかである前記＜７＞に記載のアブラナ科植物である。
＜９＞  前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載の製造方法により製造された前記＜６＞から＜８＞のいずれかに記載のアブラナ科植物である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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