(57)【要約】【課題】グラム陽性細菌に対するワクチンにおけるＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の提供。【解決手段】本発明は、グラム陽性細菌に対する、特に、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｉｓ、およびＳ．ｅｑｕｉに対する、防御を誘導するワクチン組成物において有用である防御抗原を提供する。本発明はまた、種々の連鎖球菌および／またはブドウ球菌の種の間の交差防御を含めて、グラム陽性細菌感染に対して抗体を誘導するため、およびこれを処置または防御するためにＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を用いる方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００９年１月１２日に出願されたＵＳ６１／１４３，８５９の利益を主張し、ＵＳ６１／１４３，８５９の全容は参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、免疫学およびワクチン学の分野にある。詳細には、本発明は、グラム陽性細菌由来の抗原および免疫におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
グラム陽性細菌は、最も毒性のヒトおよび動物の病原のいくつかを含み、多くの重篤な疾患および引き続く続発症の原因となる。グラム陽性細菌感染に対して有効なワクチンが引き続き当該分野で必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
「Ｃｎａ＿Ｂドメイン」は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓのコラーゲン結合表面タンパク質中でコラーゲン結合を媒介しない領域として最初に記載された。反復性のＢ領域の構造は、βサンドイッチ構造を形成する。この領域は、細菌細胞表面から離れたリガンド結合ドメインを示すＳ．ａｕｒｅｕｓコラーゲン結合タンパク質中のストーク（ｓｔａｌｋ）を形成すると考えられる。Ｃｎａ＿Ｂドメインを含んでいるタンパク質は、
【０００５】
【数１】
2015193659.tif 000002
を含めて種々のグラム陽性の病原性細菌に存在する。
【０００６】
下の特定の実施例に記載されるとおり、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃｐａタンパク質（Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６、配列番号２３）のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号７）は、免疫原性である。これに対して惹起された特異的抗体は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ｓｕｉｓ、およびＳ．ｅｑｕｉの組み換えタンパク質を認識する。ＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８タンパク質血清に含まれる抗体の約半分は、Ｃｎａ＿Ｂドメインに特異的であり、かつＭ１８株由来のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿Ｂドメインに対して惹起された抗血清（「抗Ｃｎａ＿Ｂ血清」）は、タンパク質全体（「ＧＡＳ＿Ｍ１８＿ｃｐａ」）に対して惹起された抗血清では検出されなかったタンパク質をウエスタンブロット中で検出し、かつＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅの食作用性の殺傷を媒介する。Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６のＣｎａ＿Ｂドメインはまた、ＧＢＳでチャレンジされたマウス中の受動的防御も媒介する。従って、連鎖球菌のＣｎａ＿Ｂドメインまたは他のグラム陽性細菌（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）タンパク質のＣｎａ＿Ｂドメインに対して抗体を惹起するという利点がある。
【０００７】
本発明は、グラム陽性細菌に対する、特にＳ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ＧＢＳ）、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ＧＡＳ）、Ｓ．ｅｑｕｉ、およびＳ．ｓｕｉｓのうちの１つ以上に対する防御を誘導するワクチン組成物中で有用であるＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を提供する。本発明はまた、種々の連鎖球菌および／またはブドウ球菌の種の間の交差防御を含めて、グラム陽性細菌感染に対して抗体を誘導するため、およびこれを処置または防御するためにＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を用いる方法を提供する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３４〜１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでいるＣｎａ＿Ｂドメイン抗原であって、ここで該アミノ酸配列のＮ末端アミノ酸のアミノ基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のカルボキシル基にペプチド結合によって連結されず、および／または該アミノ酸配列のＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のアミノ基にペプチド結合によって連結されない、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目２）
配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３４〜１４４からなる群より選択される２つのアミノ酸配列を含む、項目１に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目３）
アミノ酸配列、配列番号１を含んでいる、項目１に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目４）
アミノ酸配列、配列番号１からなる、項目１に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目５）
第一のグラム陽性細菌のタンパク質の第一のＣｎａ＿Ｂドメインおよび第二のグラム陽性細菌のタンパク質の第二のＣｎａ＿Ｂドメインを含んでおり、ここで該第一および第二のグラム陽性のタンパク質は異なるタンパク質である、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目６）
前記第一のグラム陽性細菌のタンパク質が、連鎖球菌のタンパク質である、項目５に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目７）
前記第一のグラム陽性細菌のタンパク質が、ブドウ球菌のタンパク質である、項目５に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目８）
前記第一のＣｎａ＿Ｂドメインが、アミノ酸配列、配列番号７４を含む、項目５に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目９）
前記第一のＣｎａ＿Ｂドメインが、配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３４〜１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列である、項目５に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１０）
２つの同一のＣｎａ＿Ｂドメインを含む、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１１）
アミノ酸配列、配列番号７４を含むＣｎａ＿Ｂドメイン抗原であって、ここで該アミノ酸配列のＮ末端アミノ酸のアミノ基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のカルボキシル基にペプチド結合によって連結されず、および／または該アミノ酸配列のＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のアミノ基にペプチド結合によって連結されない、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１２）
（ａ）配列番号１、および配列番号１のＮ末端における配列番号１８の０〜７０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１のＣ末端における配列番号１８の０〜２８２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｂ）配列番号２、および配列番号２のＮ末端における配列番号１８の０〜７０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２のＣ末端における配列番号１８の０〜３９０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｃ）配列番号３、および配列番号３のＮ末端における配列番号１９の０〜２９４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３のＣ末端における配列番号１９の０〜３９０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｄ）配列番号４、および配列番号４のＮ末端における配列番号２０の０〜２９７個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号４のＣ末端における配列番号２０の０〜３９６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｅ）配列番号５、および配列番号５のＮ末端における配列番号２１の０〜３１０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５のＣ末端における配列番号２１の０〜３８０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｆ）配列番号６、および配列番号６のＮ末端における配列番号２２の０〜２８８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６のＣ末端における配列番号２２の０〜３９３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｇ）配列番号７、および配列番号７のＮ末端における配列番号２３の０〜７０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号７のＣ末端における配列番号２３の０〜３９２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｈ）配列番号８、および配列番号８のＮ末端における配列番号２４の０〜９０６個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８のＣ末端における配列番号２４の０〜５８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｉ）配列番号９、および配列番号９のＮ末端における配列番号２５の０〜６５４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号９のＣ末端における配列番号２５の０〜６４６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｊ）配列番号１０、および配列番号１０のＮ末端における配列番号２６の０〜５１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１０のＣ末端における配列番号２６の０〜７６８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｋ）配列番号２７、および配列番号２７のＮ末端における配列番号４５の０〜１６９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２７のＣ末端における配列番号４５の０〜５２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｌ）配列番号２８、および配列番号２８のＮ末端における配列番号４６の０〜１６０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２８のＣ末端における配列番号４６の０〜７５個の追加の連続するアミノ酸；
（ｍ）配列番号２９、および配列番号２９のＮ末端における配列番号４７の０〜５１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２９のＣ末端における配列番号４７の０〜７７８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｎ）配列番号３０、および配列番号３０のＮ末端における配列番号４８の０〜５２個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３０のＣ末端における配列番号４８の０〜７８６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｏ）配列番号３１、および配列番号３１のＮ末端における配列番号４９の０〜３６５個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３１のＣ末端における配列番号４９の０〜５０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｐ）配列番号３２、および配列番号３２のＮ末端における配列番号５０の０〜１２９０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３２のＣ末端における配列番号５０の０〜６２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｑ）配列番号３３、および配列番号３３のＮ末端における配列番号５１の０〜３９４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３３のＣ末端における配列番号５１の０〜６５個の追加の連続するアミノ酸；
（ｒ）配列番号３５、および配列番号３５のＮ末端における配列番号５２の０〜９８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３５のＣ末端における配列番号５２の０〜３６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｓ）配列番号５３、および配列番号５３のＮ末端における配列番号６３の０〜４５９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５３のＣ末端における配列番号６３の０〜６８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｔ）配列番号５４、および配列番号５４のＮ末端における配列番号６４の０〜６０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５４のＣ末端における配列番号６４の０〜７６２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｕ）配列番号５５、および配列番号５５のＮ末端における配列番号６５の０〜２７１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５５のＣ末端における配列番号６５の０〜４１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｖ）配列番号６６、および配列番号６６のＮ末端における配列番号７２の０〜７０３個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６６のＣ末端における配列番号７２の０〜４７３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｗ）配列番号６７、および配列番号６７のＮ末端における配列番号７２の０〜９２４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６７のＣ末端における配列番号７２の０〜３５３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｘ）配列番号６８、および配列番号６８のＮ末端における配列番号７３の０〜３４４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６８のＣ末端における配列番号７３の０〜７６１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｙ）配列番号３４、および配列番号３４のＮ末端における配列番号４７の０〜７４８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３４のＣ末端における配列番号４７の０〜６２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｚ）配列番号５７、および配列番号５７のＮ末端における配列番号６５の０〜１６１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５７のＣ末端における配列番号６５の０〜１４１個の追加の連続するアミノ酸；
（ａａ）配列番号８０、および配列番号８０のＮ末端における配列番号８２の０〜３４８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８０のＣ末端における配列番号８２の０〜５３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｂｂ）配列番号８１、および配列番号８１のＮ末端における配列番号８３の０〜３５８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８１のＣ末端における配列番号８３の０〜１２４個の追加の連続するアミノ酸；
（ｃｃ）配列番号８４、および配列番号８４のＮ末端における配列番号８７の０〜３５０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８４のＣ末端における配列番号８７の０〜２４４個の追加の連続するアミノ酸；
（ｄｄ）配列番号８５、および配列番号８５のＮ末端における配列番号８７の０〜５３９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８５のＣ末端における配列番号８７の０〜５５個の追加の連続するアミノ酸；
（ｅｅ）配列番号８６、および配列番号８６のＮ末端における配列番号８８の０〜３３６個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８６のＣ末端における配列番号８８の０〜７４個の追加の連続するアミノ酸；
（ｆｆ）配列番号１２２、および配列番号１２２のＮ末端における配列番号１２１の０〜５９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２２のＣ末端における配列番号１２１の０〜１０３０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｇｇ）配列番号１２３、および配列番号１２３のＮ末端における配列番号１２１の０〜５２４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２３のＣ末端における配列番号１２１の０〜５６１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｈｈ）配列番号１２４、および配列番号１２４のＮ末端における配列番号１２１の０〜６３７個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２４のＣ末端における配列番号１２１の０〜４５１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｉｉ）配列番号１２５、および配列番号１２５のＮ末端における配列番号１２１の０〜７５９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２５のＣ末端における配列番号１２１の０〜３２８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｊｊ）配列番号１２６、および配列番号１２６のＮ末端における配列番号１２１の０〜９０４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２６のＣ末端における配列番号１２１の０〜１８８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｋｋ）配列番号１３４、および配列番号１３４のＮ末端における配列番号１３２の０〜５９１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３４のＣ末端における配列番号１３２の０〜６８３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｌｌ）配列番号１３５、および配列番号１３５のＮ末端における配列番号１３２の０〜７０３個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３５のＣ末端における配列番号１３２の０〜５７２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｍｍ）配列番号１３６、および配列番号１３６のＮ末端における配列番号１３２の０〜８１４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３６のＣ末端における配列番号１３２の０〜４６１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｎｎ）配列番号１３７、および配列番号１３７のＮ末端における配列番号１３２の０〜９２４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３７のＣ末端における配列番号１３２の０〜３５１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｏｏ）配列番号１３８、および配列番号１３８のＮ末端における配列番号１３２の０〜１０３５個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３８のＣ末端における配列番号１３２の０〜２４１個の追加の連続するアミノ酸；および
（ｐｐ）配列番号１３９、および配列番号１３４のＮ末端における配列番号１３２の０〜５９８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３４のＣ末端における配列番号１３２の０〜２２５個の追加の連続するアミノ酸；
からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１３）
配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、および１３９〜１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、項目１２に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１４）
（ａ）配列番号１、および配列番号１のＮ末端における配列番号１８の０〜７０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１のＣ末端における配列番号１８の０〜２８２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｂ）配列番号２、および配列番号２のＮ末端における配列番号１８の０〜７０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２のＣ末端における配列番号１８の０〜３９０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｃ）配列番号３、および配列番号３のＮ末端における配列番号１９の０〜２９４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３のＣ末端における配列番号１９の０〜３９０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｄ）配列番号４、および配列番号４のＮ末端における配列番号２０の０〜２９７個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号４のＣ末端における配列番号２０の０〜３９６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｅ）配列番号５、および配列番号５のＮ末端における配列番号２１の０〜３１０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５のＣ末端における配列番号２１の０〜３８０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｆ）配列番号６、および配列番号６のＮ末端における配列番号２２の０〜２８８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６のＣ末端における配列番号２２の０〜３９３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｇ）配列番号７、および配列番号７のＮ末端における配列番号２３の０〜７０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号７のＣ末端における配列番号２３の０〜３９２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｈ）配列番号８、および配列番号８のＮ末端における配列番号２４の０〜９０６個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８のＣ末端における配列番号２４の０〜５８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｉ）配列番号９、および配列番号９のＮ末端における配列番号２５の０〜６５４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号９のＣ末端における配列番号２５の０〜６４６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｊ）配列番号１０、および配列番号１０のＮ末端における配列番号２６の０〜５１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１０のＣ末端における配列番号２６の０〜７６８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｋ）配列番号２７、および配列番号２７のＮ末端における配列番号４５の０〜１６９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２７のＣ末端における配列番号４５の０〜５２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｌ）配列番号２８、および配列番号２８のＮ末端における配列番号４６の０〜１６０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２８のＣ末端における配列番号４６の０〜７５個の追加の連続するアミノ酸；
（ｍ）配列番号２９、および配列番号２９のＮ末端における配列番号４７の０〜５１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号２９のＣ末端における配列番号４７の０〜７７８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｎ）配列番号３０、および配列番号３０のＮ末端における配列番号４８の０〜５２個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３０のＣ末端における配列番号４８の０〜７８６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｏ）配列番号３１、および配列番号３１のＮ末端における配列番号４９の０〜３６５個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３１のＣ末端における配列番号４９の０〜５０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｐ）配列番号３２、および配列番号３２のＮ末端における配列番号５０の０〜１２９０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３２のＣ末端における配列番号５０の０〜６２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｑ）配列番号３３、および配列番号３３のＮ末端における配列番号５１の０〜３９４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３３のＣ末端における配列番号５１の０〜６５個の追加の連続するアミノ酸；
（ｒ）配列番号３５、および配列番号３５のＮ末端における配列番号５２の０〜９８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３５のＣ末端における配列番号５２の０〜３６個の追加の連続するアミノ酸；
（ｓ）配列番号５３、および配列番号５３のＮ末端における配列番号６３の０〜４５９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５３のＣ末端における配列番号６３の０〜６８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｔ）配列番号５４、および配列番号５４のＮ末端における配列番号６４の０〜６０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５４のＣ末端における配列番号６４の０〜７６２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｕ）配列番号５５、および配列番号５５のＮ末端における配列番号６５の０〜２７１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５５のＣ末端における配列番号６５の０〜４１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｖ）配列番号６６、および配列番号６６のＮ末端における配列番号７２の０〜７０３個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６６のＣ末端における配列番号７２の０〜４７３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｗ）配列番号６７、および配列番号６７のＮ末端における配列番号７２の０〜９２４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６７のＣ末端における配列番号７２の０〜３５３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｘ）配列番号６８、および配列番号６８のＮ末端における配列番号７３の０〜３４４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号６８のＣ末端における配列番号７３の０〜７６１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｙ）配列番号３４、および配列番号３４のＮ末端における配列番号４７の０〜７４８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号３４のＣ末端における配列番号４７の０〜６２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｚ）配列番号５７、および配列番号５７のＮ末端における配列番号６５の０〜１６１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号５７のＣ末端における配列番号６５の０〜１４１個の追加の連続するアミノ酸；
（ａａ）配列番号８０、および配列番号８０のＮ末端における配列番号８２の０〜３４８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８０のＣ末端における配列番号８２の０〜５３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｂｂ）配列番号８１、および配列番号８１のＮ末端における配列番号８３の０〜３５８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８１のＣ末端における配列番号８３の０〜１２４個の追加の連続するアミノ酸；
（ｃｃ）配列番号８４、および配列番号８４のＮ末端における配列番号８７の０〜３５０個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８４のＣ末端における配列番号８７の０〜２４４個の追加の連続するアミノ酸；
（ｄｄ）配列番号８５、および配列番号８５のＮ末端における配列番号８７の０〜５３９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８５のＣ末端における配列番号８７の０〜５５個の追加の連続するアミノ酸；
（ｅｅ）配列番号８６、および配列番号８６のＮ末端における配列番号８８の０〜３３６個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号８６のＣ末端における配列番号８８の０〜７４個の追加の連続するアミノ酸；
（ｆｆ）配列番号１２２、および配列番号１２２のＮ末端における配列番号１２１の０〜５９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２２のＣ末端における配列番号１２１の０〜１０３０個の追加の連続するアミノ酸；
（ｇｇ）配列番号１２３、および配列番号１２３のＮ末端における配列番号１２１の０〜５２４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２３のＣ末端における配列番号１２１の０〜５６１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｈｈ）配列番号１２４、および配列番号１２４のＮ末端における配列番号１２１の０〜６３７個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２４のＣ末端における配列番号１２１の０〜４５１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｉｉ）配列番号１２５、および配列番号１２５のＮ末端における配列番号１２１の０〜７５９個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２５のＣ末端における配列番号１２１の０〜３２８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｊｊ）配列番号１２６、および配列番号１２６のＮ末端における配列番号１２１の０〜９０４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１２６のＣ末端における配列番号１２１の０〜１８８個の追加の連続するアミノ酸；
（ｋｋ）配列番号１３４、および配列番号１３４のＮ末端における配列番号１３２の０〜５９１個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３４のＣ末端における配列番号１３２の０〜６８３個の追加の連続するアミノ酸；
（ｌｌ）配列番号１３５、および配列番号１３５のＮ末端における配列番号１３２の０〜７０３個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３５のＣ末端における配列番号１３２の０〜５７２個の追加の連続するアミノ酸；
（ｍｍ）配列番号１３６、および配列番号１３６のＮ末端における配列番号１３２の０〜８１４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３６のＣ末端における配列番号１３２の０〜４６１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｎｎ）配列番号１３７、および配列番号１３７のＮ末端における配列番号１３２の０〜９２４個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３７のＣ末端における配列番号１３２の０〜３５１個の追加の連続するアミノ酸；
（ｏｏ）配列番号１３８、および配列番号１３８のＮ末端における配列番号１３２の０〜１０３５個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３８のＣ末端における配列番号１３２の０〜２４１個の追加の連続するアミノ酸；および
（ｐｐ）配列番号１３９、および配列番号１３９のＮ末端における配列番号１３２の０〜５９８個の追加の連続するアミノ酸、および／または配列番号１３９のＣ末端における配列番号１３２の０〜２２５個の追加の連続するアミノ酸；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原であって、
ここで、該アミノ酸配列のＮ末端アミノ酸のアミノ基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のカルボキシル基にペプチド結合によって連結されず、および／または該アミノ酸配列のＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のアミノ基にペプチド結合によって連結されない、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１５）
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原であって：
Ａ（ＬＢ）ｎ
からなり、
ここで：
Ａは第一のＣｎａ＿Ｂドメインであり；
Ｂは第二のＣｎａ＿Ｂドメインであり；
ｎは１〜１０であり；かつ
Ｌは独立して、存在しないかまたはアミノ酸リンカーである、
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１６）
配列番号１２７〜１３１および１３３〜１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目１５に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１７）
前記第一のＣｎａ＿Ｂドメインおよび少なくとも１つの第二のＣｎａ＿Ｂドメインが、２つの異なるグラム陽性細菌のタンパク質のドメインである、項目１５に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１８）
前記２つの異なるグラム陽性のタンパク質が、連鎖球菌の２つの異なる種由来である、項目１７に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目１９）
前記グラム陽性細菌のタンパク質のうちの少なくとも１つが、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｉｓ、およびＳ．ｅｑｕｉからなる群より選択される細菌由来である、項目１７に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目２０）
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原であって：
Ａ（ＬＢ）ｎ
を含み、ここで：
Ａは第一のＣｎａ＿Ｂドメインであり；
Ｂは第二のＣｎａ＿Ｂドメインであり；
ｎは１〜１０であり；かつ
Ｌは独立して、存在しないかまたはアミノ酸リンカーであり；そして
ここで、該第一のＣｎａ＿ＢドメインのＮ末端アミノ酸のアミノ基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のカルボキシル基にペプチド結合によって連結されず、および／または該第二のＣｎａ＿ＢドメインのＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質において連結されているアミノ酸のアミノ基にペプチド結合によって連結されない、
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目２１）
配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３３〜１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列から本質的になる、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目２２）
項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原；および
細菌抗原、
を含む、融合ポリペプチド。
（項目２３）
キャリアタンパク質に結合されている項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原または項目２２に記載の融合ポリペプチド。
（項目２４）
項目１〜２１のいずれかに記載の単離されたＣｎａ＿Ｂドメイン抗原または項目２２に記載の融合ポリペプチドをコードする核酸分子。
（項目２５）
発現ベクターである、項目２４に記載の核酸分子。
（項目２６）
項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原または項目２２に記載の融合ポリペプチドをコードする発現ベクターを含んでいる、宿主細胞。
（項目２７）
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原または融合ポリペプチドを作製する方法であって：
発現ベクターが該Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原または該融合ポリペプチドを発現する条件下で項目２６に記載の宿主細胞を培養する工程と；
該Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原または該融合ポリペプチドを収集する工程と；
を包含する、方法。
（項目２８）
１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメインに対して選択的に結合する単離された抗体であって、ここで各々のＣｎａ＿Ｂドメインは、配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７４〜７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３４〜１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体。
（項目２９）
アミノ酸配列、配列番号１を含んでいるポリペプチドに結合する、項目２８に記載の単離された抗体。
（項目３０）
モノクローナル抗体である、項目２８または２９に記載の単離された抗体。
（項目３１）
少なくとも３０％のＧＢＳ株５１５のオプソニン食作用を誘導する、項目２８〜３０のいずれかに記載の単離された抗体。
（項目３２）
項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原；
項目２２に記載の融合ポリペプチド；
項目２４に記載の核酸分子；および
項目２８に記載の単離された抗体
からなる群より選択される、活性因子；ならびに
薬学的に許容され得るキャリア
を含む、組成物。
（項目３３）
（ａ）項目３２に記載の組成物を含んでいる容器と；
（ｂ）Ｃｎａ＿Ｂドメインを含んでいるグラム陽性細菌のタンパク質に対する免疫応答を惹起するために該組成物を用いるための説明書と；
を備える、キット。
（項目３４）
グラム陽性細菌による感染を処置することにおける使用のための項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原または項目２２に記載の融合ポリペプチド。
（項目３５）
前記グラム陽性細菌が、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｉｓ、およびＳ．ｅｑｕｉからなる群より選択される、項目３４に記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
（項目３６）
グラム陽性細菌による感染を低減する方法であって、該方法を必要とする個体に対して、有効量の項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原または項目２２に記載の融合ポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。
（項目３７）
前記グラム陽性細菌が、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｉｓ、およびＳ．ｅｑｕｉからなる群より選択される、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
単離された抗原である、項目１〜２１のいずれかに記載のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１Ａは、隣接するドメイン（「Ｆｂシグナル」）と一緒にクローニングしたＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓタンパク質Ｃｐａ＿Ｍ１８（Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６）のＣｎａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列（配列番号１）である（「Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ」）。図１Ｂは、クローニングされたドメインを図示している。実施例１を参照のこと。
【図２】図２は、精製された組み換えＨｉｓタグＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインを含んでいるＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルである。実施例１を参照のこと。
【図３】図３Ａ〜図３Ｄは、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃｐａ＿Ｍ１８（Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６）Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインが免疫原性であること、およびＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメイン抗血清がＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓの種々のＭ株由来のＣｐａおよびＦ２（ＭＧＡＳ２０９６＿Ｓｐｙ０１１９）タンパク質（図３Ａ〜図３Ｃ）、ならびにＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ（図３Ｃ〜図３Ｄ）およびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（図３Ｄ）の線毛成分を認識することを示しているウエスタンブロットである。実施例１を参照のこと。
【図４】図４Ａ〜図４Ｂは、Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ抗血清の反応性（図４Ａ）とＣｐａ＿Ｍ１８抗血清の反応性（図４Ｂ）とを比較しているウエスタンブロットである。実施例１を参照のこと。
【図５】図５は、組み換えＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂに対して惹起された抗血清（実施例１を参照のこと）および分化したＨＬ−６０細胞を用いるＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ株５１５およびＪＭについてのオプソニン食作用（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）アッセイの結果を示しているグラフである。実施例２を参照のこと。
【図６】図６は、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ変異体株Ｒ１３（線毛アイランド（ｐｉｌｉ  ｉｓｌａｎｄ）２を欠く）およびその補完株（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ線毛Ｍ１またはＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ線毛Ｍ６を含んでいる）についてのオプソニン食作用アッセイの結果を示しているグラフである。実施例２を参照のこと。
【図７】図７は、種々のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ株由来のＣｐａタンパク質のＣｎａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列のアラインメントである。
【０００９】
【化１】
2015193659.tif 000003
【図８】図８は、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来の線毛タンパク質のＣｐａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列のアラインメントである。
【００１０】
【化２】
2015193659.tif 000004
【図９】図９は、Ｍ１８株由来のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＧＢＳアイランド１線毛成分のアミノ酸のアラインメントである。
【００１１】
【化３】
2015193659.tif 000005
【図１０】図１０は、Ｍ１８株由来のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＧＢＳアイランド２線毛成分のアミノ酸配列のアラインメントである。
【００１２】
【化４】
2015193659.tif 000006
【図１１】図１１は、Ｍ１８株由来のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＧＢＳアイランド３線毛成分のアミノ酸配列のアラインメントである。
【００１３】
【化５】
2015193659.tif 000007
【図１２】図１２は、Ｍ１８株由来のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ線毛株ＴＩＧＲ４成分のアミノ酸配列のアラインメントである。
【００１４】
【化６】
2015193659.tif 000008
【図１３】図１３は、Ｍ１８株由来のＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＣｎａ＿Ｂドメインを含んでいるＳ．ａｕｒｅｕｓタンパク質のアミノ酸配列のアラインメントである。
【００１５】
【化７】
2015193659.tif 000009
【図１４】図１４は、Ｃｎａ＿Ｂ抗血清がＳ．ｓｕｉｓ組み換えタンパク質を認識したことを示しているウエスタンブロットである。
【００１６】
【化８】
2015193659.tif 000010
【図１５】図１５は、Ｃｎａ＿Ｂ抗血清がＳ．ｅｑｕｉ組み換えタンパク質を認識したことを示しているウエスタンブロットである。
【００１７】
【化９】
2015193659.tif 000011
【図１６】図１６は、２つのＳ．ｓｕｉｓタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿Ｂドメイン（Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６、配列番号２３）（配列番号７）のアラインメントである。
【００１８】
【化１０】
2015193659.tif 000012
【図１７】図１７は、２つのＳ．ｅｑｕｉタンパク質のＣｎａ＿ＢドメインとのＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＣｐａタンパク質のＣｎａ＿Ｂドメイン（Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６、配列番号２３）（配列番号７）のアラインメントである。
【００１９】
【化１１】
2015193659.tif 000013
【図１８】図１８は、選択されたＧＢＳ株とのＧＡＳ  Ｃｎａ＿Ｂ血清交差反応のＦＡＣＳ分析である。
【図１９】図１９は、実施例４に記載されるＥＬＩＳＡアッセイの結果を示しているグラフである。
【図２０】図２０は、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原に対する抗血清は、ＧＢＳタンパク質抽出物におけるＧＢＳ線毛を認識するということを示しているウエスタンブロットである。「α−ＧＡＳ＿Ｃｎａ＿Ｂ＿Ｍ１８」は、実施例１に記載のとおり、Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ−Ｍ１８で免疫したマウス由来の抗血清である。
【図２１】図２１は、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫したマウスは、ＧＡＳ皮下感染モデルにおける皮膚病変面積の低減を示すということを示しているグラフである。実施例６を参照のこと。
【図２２】図２２は、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫したマウスは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでチャレンジした場合、鼻咽頭コロニー形成率の低減を示すということを示しているグラフである。実施例７を参照のこと。
【図２３】図２３は、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫したマウスは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓでチャレンジした場合、鼻咽頭コロニー形成率の低減を示すということを示しているグラフである。実施例９を参照のこと。
【図２４】図２４は、キメラＣｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫した母から生まれたマウスは、キメラＣｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫した場合、コントロールよりも生存率の増大を示すということを示しているグラフである。実施例１を参照のこと。
【図２５】図２５は、キメラＣｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫したマウスは、ＧＡＳ皮下感染モデル中で皮膚病変面積の減少を示したということを示しているグラフである。実施例６を参照のこと。
【図２６Ａ】図２６Ａ〜図２６Ｂは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ｓｕｂｓｐ．  ａｕｒｅｕｓ  ＮＣＴＣ８３２５のＳｄｒＤタンパク質の図示およびアミノ酸配列（配列番号１３２）である（図２６Ａ）；前述のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の図示およびそのアミノ酸配列（配列番号１３２）であり、Ｃｎａ＿Ｂドメインを示している（図２６Ｂ）。
【図２６Ｂ】図２６Ａ〜図２６Ｂは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ｓｕｂｓｐ．  ａｕｒｅｕｓ  ＮＣＴＣ８３２５のＳｄｒＤタンパク質の図示およびアミノ酸配列（配列番号１３２）である（図２６Ａ）；前述のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の図示およびそのアミノ酸配列（配列番号１３２）であり、Ｃｎａ＿Ｂドメインを示している（図２６Ｂ）。
【図２７】図２７Ａ〜図２７Ｃは、Ｃｎａ＿Ｂドメインのクローニング、発現および精製である。図２７Ａは、ＳｄｒＤのクローニングされたＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１３４〜１３８）を図示している。図２７Ｂは、クローニングされたドメイン（配列番号１３３）のアミノ酸配列である。図２７Ｃは、精製されたＣｎａ＿Ｂドメインを含んでいるＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルである。
【図２８】図２８は、Ｃｎａ＿Ｂ＿ＳｄｒＤは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＵＳＡ３００での感染に対してマウスモデルにおいて防御を付与するということを示しているグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
（Ｃｎａ＿Ｂドメイン）
任意のグラム陽性細菌タンパク質由来のＣｎａ＿Ｂドメインを、本発明の組成物および方法で用いてもよい。種々のＳ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｓｕｉｓおよびＳ．ｅｑｕｉタンパク質由来のＣｎａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列は、図７〜図１３、図１６および図１７に示され、配列番号２〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６、６７、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３４〜１３８として列挙されている配列に示される。Ｃｎａ＿Ｂドメインを含んでいる他のタンパク質の例は、配列番号８９〜１０２および１３２に示される。Ｃｎａ＿Ｂドメインは代表的には、図７〜１３に「Ｇボックス」として特定される１つ以上の配列を含む。図７〜１３に示されるＧボックスのアミノ酸配列のコンセンサス配列を、配列番号７４に示す。
【００２１】
（改変体）
いくつかの実施形態では、本発明のＣｎａ＿Ｂドメインの改変体は、配列番号２〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６、６７、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３４〜１３８のいずれかに対して少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する。代表的には、Ｃｎａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列と、Ｃｎａ＿Ｂドメインの改変体のアミノ酸配列との間の何らかの相違は、１つ以上の保存的アミノ酸置換（代表的には、１、２、３、４、５、６、７または８個の置換）に起因する。しかし、アミノ酸欠失または挿入もまた可能である。
【００２２】
いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換は化学的特性に基づき、かつ、保存的アミノ酸置換としては、正に荷電されたアミノ酸の別の正に荷電されたアミノ酸による置換（例えば、Ｈ、Ｋ、Ｒ）；負に荷電されたアミノ酸の別の負に荷電されたアミノ酸による置換（例えば、Ｄ、Ｅ）；極めて疎水性のアミノ酸の別の極めて疎水性のアミノ酸による置換（例えば、Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ）；疎水性の低いアミノ酸の別の疎水性の低いアミノ酸による置換（例えば、Ａ、Ｇ、Ｈ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｙ）；部分的に疎水性のアミノ酸の別の部分的に疎水性のアミノ酸による置換（例えば、Ｋ、Ｒ）；脂肪族のアミノ酸の別の脂肪族のアミノ酸による置換（例えば、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｖ）；極性のアミノ酸の別の極性のアミノ酸による置換（例えば、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｙ）；芳香族のアミノ酸の別の芳香族のアミノ酸による置換（例えば、Ｆ、Ｈ、Ｗ、Ｙ）；および小型のアミノ酸の別の小型のアミノ酸による置換（例えば、Ｄ、Ｎ、Ｔ）が挙げられる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換は、ＢＬＯＳＵＭ６２表を用いて決定される。ＢＬＯＳＵＭ６２表は、タンパク質配列セグメントの約２，０００個の局所マルチプルアラインメント由来のアミノ酸置換マトリックスであり、関連のタンパク質の５００を超える群の高度に保存された領域を表す（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５，１９９２）。ＢＬＯＳＵＭ６２の置換頻度は、Ｃｎａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列へ導入され得る保存的アミノ酸置換を規定するために用いられ得る。これらの実施形態では、保存的置換とは好ましくは、−１より大きいＢＬＯＳＵＭ６２値によって示される置換を指す。例えば、アミノ酸置換は、その置換が、０、１、２または３というＢＬＯＳＵＭ６２値によって特徴付けられる場合保存的である。このシステムによれば、好ましい保存的アミノ酸置換は、少なくとも１（例えば、１、２または３）というＢＬＯＳＵＭ６２値で特徴付けられるが、より好ましい保存的アミノ酸置換は、少なくとも２（例えば、２または３）というＢＬＯＳＵＭ６２値で特徴付けられる。
【００２４】
特定のアミノ酸置換または改変は、図７〜図１３に示されるようにＣｎａ＿Ｂドメインをアラインメントすることによって特定され得る。このような選択肢の任意の組み合わせを含んでいるＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（下記）は、本発明の範囲内である。
【００２５】
（Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原）
「Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原」は、上記のような１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメインを含み、かつＮ末端、Ｃ末端またはその両方で追加のアミノ酸を含んでも含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原は、配列番号１〜１０、２７〜３５、５３〜５７、６６〜６８、７５、７６、８０、８１、８４〜８６、１１０〜１１７、１２２〜１２６、および１３３〜１３８のいずれかからなる。他の実施形態では、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原は、Ｃｎａ＿Ｂドメインおよび天然の細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌）のタンパク質におけるＣｎａ＿Ｂドメインに直接隣接しない他のアミノ酸配列を含む。すなわち、このような抗原では、Ｃｎａ＿ＢドメインのＮ末端アミノ酸のアミノ基は、天然の細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌）のタンパク質において連結されるアミノ酸のカルボキシル基に対してペプチド結合によって連結されず、および／またはＣｎａ＿ＢドメインのＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、天然のグラム陽性細菌のタンパク質、例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ＧＢＳ）、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ＧＡＳ）、Ｓ．ｅｑｕｉ、またはＳ．ｓｕｉｓのタンパク質において連結されるアミノ酸のアミノ基に対してペプチド結合によって連結されない。「天然の」グラム陽性細菌のタンパク質とは、グラム陽性細菌中で、それらが自然に存在しているように見出されるタンパク質であり：「天然の」の連鎖球菌またはブドウ球菌のタンパク質とは、それぞれ、連鎖球菌またはブドウ球菌の細菌中で、それらが自然に存在しているように見出されるタンパク質である。
【００２６】
さらに他の実施形態では、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原は、Ｃｎａ＿ＢドメインならびにそのドメインのＮ末端および／またはＣ末端（単数または複数）の追加のアミノ酸からなり、ただし、このＣｎａ＿Ｂドメイン抗原は、全長の細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌の）タンパク質（表１〜３２を参照のこと）からなることはない。
【００２７】
他の実施形態では、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原は、式：
Ａ（ＬＢ）ｎ
のポリペプチドからなり、
ここで：
Ａは第一のＣｎａ＿Ｂドメインであり；Ｂは第二のＣｎａ＿Ｂドメインであり；ｎは整数であり（代表的には、１〜１０；例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）であり；かつＬは独立して、存在しないかまたはアミノ酸リンカーである。このような抗原におけるＣｎａ＿Ｂドメインは、同じであっても、異なっても、または同じであるいくつかのＣｎａ＿Ｂドメインと、異なるいくつかのＣｎａ＿Ｂドメインとの混合物であってもよい（すなわち、全てのＣｎａ＿Ｂドメインは、異なってもよいし、または２つ以上のＣｎａ＿Ｂドメインは、同じであってもよい）。例えば、Ｃｎａ＿Ｂドメインは、２つ以上の異なるグラム陽性のタンパク質、特にグラム陽性の球菌のタンパク質、例えば、連鎖球菌タンパク質、ブドウ球菌タンパク質のドメインであっても、または２つ以上の異なる種もしくは株（例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｉｓおよび／またはＳ．ｅｑｕｉ）のタンパク質のドメインであってもよい。
【００２８】
アミノ酸リンカーは、任意のＣｎａ＿Ｂドメインの間に存在する場合、代表的には、６〜１２個のアミノ酸（例えば、６、７、８、９、１０、１１または１２個）を含む。ＧＳＧＧＧＧ（配列番号７９）は、有用なリンカーの例である。Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原中のリンカーは、同じであっても異なってもよい。
【００２９】
式Ａ（ＬＢ）ｎのＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の例としては、配列番号１０８を含むかまたは配列番号１０８からなるタンパク質が挙げられる。配列番号１０８は、Ｎ末端からＣ末端に、ＳＡＧ＿０６４５のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１２）、アミノ酸配列ＶＤＳ、第一のアミノ酸リンカー（配列番号７９）、ＳＡＮ＿１５１８のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１３）、第二のアミノ酸リンカー（配列番号７９）、ＳＡＬ＿１４８７の第一のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１０）、アミノ酸配列ＮＳＧ、ＳＡＬ＿１４８７の第二のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１１）、およびアミノ酸ＫＱＩを含む。
【００３０】
式Ａ（ＬＢ）ｎのＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の他の例としては、配列番号１０９を含むかまたは配列番号１０９からなるタンパク質が挙げられる。配列番号１０９は、Ｎ末端からＣ末端に、ＳＡＧ＿０６４５のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１２）、アミノ酸配列ＶＤＳ、第一のアミノ酸リンカー（配列番号７９）、ＳＡＮ＿１５１８のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１３）、第二のアミノ酸リンカー（配列番号７９）、ＳＡＬ＿１４８６の第一のＣｎａ＿Ｂドメイン（１１４）、アミノ酸配列ＬＰＬ、ＳＡＬ＿１４８６の第二のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１１５）、およびアミノ酸配列ＤＩＥを含む。
【００３１】
式Ａ（ＬＢ）ｎのＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の他の例としては、配列番号１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７または１３８を含むかまたはそれらからなるタンパク質が挙げられる；実施例８および１０を参照のこと。
【００３２】
上記のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原では、βプリーツのシートを切断しないように、アミノ酸配列ＶＤＳ、ＮＳＧ、ＫＱＩ、ＬＰＬおよびＤＩＥが含まれる。Ｃｎａ＿Ｂドメインの三次構造の保存を補助するために本発明のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原において他のこのようなアミノ酸配列を含むことは当業者の技術の十分に範囲内である。
【００３３】
式Ａ（ＬＢ）ｎのＣｎａ＿Ｂドメイン抗原のさらに他の例は以下を含む。
【００３４】
ａ．Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６（例えば、配列番号７）およびＭ６＿Ｓｐｙ０１５９）（例えば、配列番号８）ならびにＭＧＡＳ２０９６＿Ｓｐｙ０１１９（例えば、配列番号１２１）のＣｎａ＿Ｂドメイン；これらとしては、配列番号１２１の５つのＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１２２〜１２６）の融合物を含むＣｎａ＿Ｂドメイン抗原が挙げられる。Ｓｐｙ０１５９のＣｎａ＿Ｂドメインのコード配列は、配列番号１２０に示される。Ｓｐｙ０１１９のコード配列は、配列番号１１９に示される。配列番号１２１のヌクレオチド１８１〜３９０、１５７６〜１７９７、１９１５〜２１２７、２２８１〜２４９６および２７１６〜２９１６は、それぞれ配列番号１２２〜１２６に示されるＣｎａ＿Ｂドメインをコードする。
【００３５】
ｂ．Ｓ．ａｕｒｅｕｓのＳｄｒＤ（例えば、配列番号１３４〜１３８；配列番号６６、および／または６７；配列番号１３９）、およびＣｎａ＿Ｂ＿キャップ（例えば、配列番号６８）のＣｎａ＿Ｂドメイン。
【００３６】
ｃ．Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＳＰ＿０４６３）（例えば、配列番号５３）、Ｃｎａ＿Ｂ＿ＲｒｇＡ（ＳＰ＿０４６２）（例えば、配列番号５４および／または５６）、およびＣｎａ＿Ｂ＿ＲｒｇＣ（ＳＰ＿０４６４）（例えば、配列番号５５および／または５７）のＣｎａ＿Ｂドメイン。
【００３７】
ｄ．Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６（例えば、配列番号７）、ＳＡＧ０６４５（配列番号３３）、ＲｒｇＢ（ＳＰ＿０４６３）（例えば、配列番号５３）、およびＳｄｒＤ（例えば、配列番号１３４〜１３８；配列番号６６および／または配列番号６７；配列番号１３９）のＣｎａ＿Ｂドメイン。
【００３８】
本発明のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原はまた、上記の任意のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を含んでもよい。これらの実施形態のいくつかでは、Ｃｎａ＿ＢドメインのＮ末端アミノ酸のアミノ基は、天然の細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌）のタンパク質において連結されるアミノ酸のカルボキシル基に対してペプチド結合によって連結されず、および／またはＣｎａ＿ＢドメインのＣ末端アミノ酸のカルボキシル基は、天然の細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌）のタンパク質において連結されるアミノ酸のアミノ基に対してペプチド結合によって連結されない。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本発明の１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原は、別の細菌抗原、好ましくは別の細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌の）抗原を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な抗原は、例えば、ＷＯ９９／０５４４７、ＷＯ０２／０３４７７１、ＷＯ０４／０１８６４６、ＷＯ０５／０２８６１８、ＷＯ０５／０３２４８２、ＷＯ０６／０４２０２７およびＷＯ０６／０７８３１８に開示される。
【００４０】
１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメインおよび他のドメイン、例えばフォン・ヴィレブランド因子Ａ（ｖＷＦＡ）ドメイン（例えば、配列番号１０５、１０６、１０７）を含んでいる融合ポリペプチドも、本発明の範囲内であり、例えば：
ａ．Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６）（例えば、配列番号７）のＣｎａ＿ＢドメインおよびｖＷＦＡ＿ｃｐａ＿Ｍ６＿（Ｍ６＿Ｓｐｙ０１５９）（例えば、配列番号１０５）；および
ｂ．ＳＡＧ０６４５（例えば、配列番号３３）のＣｎａ＿ＢドメインおよびｖＷＦＡ＿ＳＡＬ＿１４８７（例えば、配列番号１０６）。
【００４１】
このような融合ポリペプチドは、種々の融合パートナーの間のリンカー配列および／または各々の融合パートナーに隣接する配列を含んでもよく、下の表１〜３７および表４３〜４８に開示されるものから選択され得る。
【００４２】
【表１】
2015193659.tif 000014
【００４３】
【表２】
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【００４４】
【表３】
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【００４５】
【表４】
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【００４６】
【表５】
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【００４７】
【表６】
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【００４８】
【表７−１】
2015193659.tif 000020
【００４９】
【表７−２】
2015193659.tif 000021
【００５０】
【表８−１】
2015193659.tif 000022
【００５１】
【表８−２】
2015193659.tif 000023
【００５２】
【表９−１】
2015193659.tif 000024
【００５３】
【表９−２】
2015193659.tif 000025
【００５４】
【表１０】
2015193659.tif 000026
【００５５】
【表１１−１】
2015193659.tif 000027
【００５６】
【表１１−２】
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【００５７】
【表１２−１】
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【００５８】
【表１２−２】
2015193659.tif 000030
【００５９】
【表１３Ａ−１】
2015193659.tif 000031
【００６０】
【表１３Ａ−２】
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【００６１】
【表１３Ｂ−１】
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【００６２】
【表１３Ｂ−２】
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【００６３】
【表１４−１】
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【００６４】
【表１４−２】
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【００６５】
【表１５−１】
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【００６６】
【表１５−２】
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【００６７】
【表１５−３】
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【００６８】
【表１６】
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【００６９】
【表１７】
2015193659.tif 000041
【００７０】
【表１８Ａ−１】
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【００７１】
【表１８Ａ−２】
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【００７２】
【表１８Ｂ−１】
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【００７３】
【表１８Ｂ−２】
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【００７４】
【表１８Ｃ−１】
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【００７５】
【表１８Ｃ−２】
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【００７６】
【表１８Ｄ】
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【００７７】
【表１９】
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【００７８】
【表２０−１】
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【００７９】
【表２０−２】
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【００８０】
【表２１】
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【００８１】
【表２２−１】
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【００８２】
【表２２−２】
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【００８３】
【表２３−１】
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【００８４】
【表２３−２】
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【００８５】
【表２４−１】
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【００８６】
【表２４−２】
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【００８７】
【表２５】
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【００８８】
【表２６−１】
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【００８９】
【表２６−２】
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【００９０】
【表２７】
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【００９１】
【表２８】
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【００９２】
【表２９】
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【００９３】
【表３０】
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【００９４】
【表３１】
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【００９５】
【表３２】
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【００９６】
【表３３−１】
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【００９７】
【表３３−２】
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【００９８】
【表３４−１】
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【００９９】
【表３４−２】
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【０１００】
【表３５−１】
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【０１０１】
【表３５−２】
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【０１０２】
【表３６−１】
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【０１０３】
【表３６−２】
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【０１０４】
【表３７−１】
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【０１０５】
【表３７−２】
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【０１０６】
【表４３−１】
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【０１０７】
【表４３−２】
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【０１０８】
【表４４−１】
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【０１０９】
【表４４−２】
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【０１１０】
【表４４−３】
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【０１１１】
【表４５−１】
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【０１１２】
【表４５−２】
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【０１１３】
【表４６−１】
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【０１１４】
【表４６−２】
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【０１１５】
【表４７−１】
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【０１１６】
【表４７−２】
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【０１１７】
【表４８−１】
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【０１１８】
【表４８−２】
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（核酸分子）
本発明は、本発明のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原をコードする核酸分子を含む。本発明はまた、このような分子に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を包含する。特定の配列次第で、配列同一性の程度は好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。ヌクレオチド配列間の同一性は好ましくは、パラメーターであるギャップ・オープン・ペナルティ＝１２およびギャップ・エクステンション・ペナルティ＝１によるアフィン・ギャップ・サーチを用いて、ＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）中で実現されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムによって決定する。
【０１１９】
本発明はまた、これらの分子にハイブリダイズし得る核酸分子を提供する。ハイブリダイゼーション反応は、種々のストリンジェンシーの条件下で行ってもよい。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを増大する条件は、広く知られており、かつ当該分野で公開されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，１９８９の７．５２頁を参照のこと。関連の条件の例としては、（ストリンジェンシー漸増の順序で）以下が挙げられる：２５℃、３７℃、５０℃、５５℃および６８℃というインキュベーション温度；１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣおよび０．１×ＳＳＣ（ここでＳＳＣは、０．１５ＭのＮａＣｌおよび１５ｍＭのクエン酸緩衝液である）および他の緩衝液系を用いるそれらの等価物の緩衝液濃度；０％、２５％、５０％および７５％というホルムアミド濃度；５分〜２４時間のインキュベーション時間；１、２またはそれ以上の洗浄工程；１、２または１５分という洗浄インキュベーション時間；および６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水という洗浄溶液。ハイブリダイゼーション技術およびそれらの最適化は、当該分野で周知である。例えば、
【０１２０】
【化１２】
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を参照のこと。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、低ストリンジェンシー条件下で標的にハイブリダイズする；他の実施形態では、本発明の核酸分子は、中ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする；好ましい実施形態では、本発明の核酸分子は、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の例は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の例は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の例は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【０１２２】
（Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原の産生）
（組み換え産生）
遺伝子コードの縮重性は周知である。従って、本発明のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原をコードする任意の核酸分子（ポリヌクレオチド）を用いて、そのタンパク質を組み換え的に産生してもよい。Ｃｎａ＿Ｂドメイン含有タンパク質をコードする核酸分子は、標準的な核酸精製技術を用いて適切な細菌（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌）から単離してもよいし、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの増幅技術を用いて、もしくは自動シンセサイザーを用いて合成してもよい。Ｃａｒｕｔｈｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５  ２２３，１９８０；Ｈｏｒｎら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５  ２３２，１９８０；Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１０，１０５〜１１，１９８４；Ｇｒａｎｔｈａｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．９，ｒ４３−ｒ７４，１９８１を参照のこと。
【０１２３】
ｃＤＮＡ分子は、テンプレートとしてｍＲＮＡを用いて標準的な分子生物学技術で行ってもよい。ｃＤＮＡ分子はその後、当該分野で周知の分子生物学技術を用いて複製してもよい。ＰＣＲのような増幅技術を用い、テンプレートとしてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡのいずれかを用いて、本発明のポリヌクレオチドの追加のコピーを得てもよい。
【０１２４】
必要に応じて、ポリヌクレオチドは、限定するものではないが、ポリペプチドまたはｍＲＮＡ産物のクローニング、プロセシングおよび／または発現を改変する変更を含めて、種々の理由についてコード配列を変更するための当該分野で一般に公知の方法を用いて操作されてもよい。遺伝子フラグメントおよび合成オリゴヌクレオチドの無作為断片化およびＰＣＲ再アセンブリによるＤＮＡシャッフリングを用いて、ヌクレオチド配列を操作してもよい。例えば、部位指向性変異誘発を、新しい認識部位を挿入するため、グリコシル化パターンを変更するため、コドン出現頻度（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を変えるため、スプライシングバリアントを生じさせるため、変異を導入するためなどに用いてもよい。
【０１２５】
核酸分子は、Ｎ末端リーダー配列（Ｃｎａ＿Ｂを含む天然のタンパク質のＮ末端リーダー配列、または別の選り抜きのＮ末端リーダー配列のいずれか）のコード配列を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列の修飾、例えば、精製タグ配列の付加またはコドン最適化を用いて発現を促進する。例えば、発現されたタンパク質は、ポリヒスチジン（ＨＩＳ）またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）などのタグを含んでもよい。このようなタグを用いて、発現されたタンパク質の精製、検出を容易にし、および安定性を助長してもよい。特定の原核生物宿主または真核生物宿主にとって好ましいコドンを選択して、タンパク質発現の速度を増大させてもよく、または所望の特性、例えば、天然に存在する配列から生成される転写物の半減期よりも長い半減期を有するＲＮＡ転写物を産生してもよい。これらの方法は、当該分野で周知であり、かつＷＯ０５／０３２５８２に記載されている。
【０１２６】
（発現ベクター）
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原をコードする核酸分子を、挿入されたコード配列の転写および翻訳の必須エレメントを含む発現ベクター中に挿入してもよい。当業者に周知である方法を用いて、コード配列ならびに適切な転写および翻訳制御エレメントを含んでいる発現ベクターを構築してもよい。これらの方法としては、インビトロの組み換えＤＮＡ技術、合成技術およびインビボの遺伝子組み換えが挙げられる。
【０１２７】
（宿主細胞）
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原を作製するための宿主細胞は、原核生物であってもまたは真核生物であってもよい。Ｅ．ｃｏｌｉが好ましい宿主細胞であるが、他の適切な宿主としては、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、酵母、バキュロウイルス、哺乳動物細胞などが挙げられる。
【０１２８】
宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節する能力、または発現されたポリペプチドを所望の方式でプロセシングする能力に関して選択され得る。ポリペプチドのこのような修飾としては、限定するものではないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化およびアシル化が挙げられる。ポリペプチドの「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングをまた、正確な挿入、フォールディングおよび／または機能を促進するために用いてもよい。翻訳後活性のための特定の細胞機構および特徴的な機構を有する種々の宿主細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９）から入手可能であり、かつ外来のタンパク質の正確な修飾およびプロセシングを確実にするように選択され得る。ＷＯ０１／９８３４０を参照のこと。
【０１２９】
発現構築物は、十分確立された技術を用いて宿主細胞に導入され得、この技術としては限定するものではないが、トランスフェリン−ポリカチオン媒介性ＤＮＡトランスファー、裸のまたは被包性核酸でのトランスフェクション、リポソーム媒介性の細胞融合、ＤＮＡコーティングラテックスビーズの細胞内輸送、プロトプラスト融合、ウイルス感染、エレクトロポレーション、「遺伝子銃」方法、およびＤＥＡＥまたはリン酸カルシウム媒介性のトランスフェクションが挙げられる。
【０１３０】
発現ベクターで形質転換された宿主細胞は、細胞培養物からのタンパク質の発現および収集に適切な条件下で培養され得る。形質転換された細胞によって作製されるタンパク質は、用いられるヌクレオチド配列および／または発現ベクターに依存して分泌されてもよいし、または細胞内に含まれてもよい。当業者は、発現ベクターが、原核生物細胞膜または真核生物細胞膜を介した可溶性ポリペプチドの分泌を指向するシグナル配列を含むように設計され得ることを理解する。
【０１３１】
（精製）
公知の方法を用いて細胞培養培地から精製され得るように、シグナルエクスポート配列を、組み換え産生Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原中に含んでもよい。あるいは、組み換え産生された本発明のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を、操作された宿主細胞から単離して、細胞中の他の成分、例えば、タンパク質、炭水化物または脂質から、当該分野で周知の方法を用いて分離してもよい。このような方法としては限定するものではないが、サイズ排除クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム分画、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、および分取ゲル電気泳動が挙げられる。精製されたＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の調製物は少なくとも８０％純粋であり；好ましくは、この調製物は、９０％、９５％または９９％純粋である。調製物の純度は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動などの当該分野で公知の任意の方法によって評価され得る。必要に応じて、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原を、例えば、尿素を用いて可溶化してもよい。
【０１３２】
（化学合成）
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原は、例えば、固相技術を用いて合成してもよい。例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９  ５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９，２０２  ０４，１９９５を参照のこと。タンパク質合成は、手動の技術を用いて行ってもよいし、または自動で行ってもよい。自動化合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて達成してもよい。必要に応じて、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原の一部を別々に合成して、化学的方法を用いて組み合わせ、完全な分子を産生してもよい。
【０１３３】
（薬学的組成物）
本発明は、医薬としての使用のための組成物を提供する。本発明の薬学的組成物は、グラム陽性細菌に対する、特に連鎖球菌またはブドウ球菌（例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、および／またはＳ．ａｕｒｅｕｓ）に対する免疫応答を惹起するために有用である。いくつかの実施形態では、この組成物は、連鎖球菌および／またはブドウ球菌の感染を処置するため、ならびにこのような感染のリスクを低減するために有用である。
【０１３４】
本発明の薬学的組成物は、少なくとも１つの活性因子を含み、この活性因子は、本明細書に開示されたようなＣｎａ＿Ｂドメイン抗原であっても、またはＣｎａ＿Ｂドメイン抗原をコードする核酸分子であってもよい。この疾患は、例えば、菌血症、髄膜炎、産褥熱、猩紅熱、丹毒、咽頭炎、膿痂疹、壊疽性筋膜炎、筋炎またはトキシックショック症候群であってもよい。
【０１３５】
Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原またはＣｎａ＿Ｂドメイン抗原をコードする核酸分子を含んでいる組成物は好ましくは、免疫原性組成物であり、かつさらに好ましくはワクチン組成物である。本発明による薬学的組成物は、予防的であってもまたは治療的であってもよいが、代表的には予防的である。薬学的組成物は、グラム陽性細菌（例えば、連鎖球菌および／またはブドウ球菌）感染のリスクを低減するか、またはグラム陽性細菌（例えば、連鎖球菌および／またはブドウ球菌）感染の重篤度もしくはグラム陽性細菌（例えば、連鎖球菌および／またはブドウ球菌）感染の症状を低減する場合、「予防的」である。従って、本発明は、グラム陽性細菌（例えば、連鎖球菌および／またはブドウ球菌）感染の治療的処置または予防的処置のための方法を包含する。動物、好ましくは、哺乳動物、最も好ましくはヒトが処置され得る。この方法は、本発明の免疫原性組成物の治療量または予防量を動物に投与する工程を包含する。
【０１３６】
このような組成物のｐＨは、代表的には６〜８、好ましくは約７である。ｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。この組成物は、無菌であるか、および／または発熱物質を含まないであろう。この組成物は、ヒト組織（例えば、血液）に対して等張であり得る。
【０１３７】
本発明のいくつかの組成物は、本明細書に記載の１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を含む。本発明の他の組成物は、前記抗原をコードする１つ以上の核酸分子、および必要に応じてこの組成物中に含まれ得る他の抗原を含む（下を参照のこと）。例えば、
【０１３８】
【化１３】
2015193659.tif 000092
を参照のこと。代表的には、核酸分子は、例えば、プラスミドの形態のＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原および１つ以上の核酸分子を含んでもよい。
【０１３９】
（追加の活性因子）
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１つ以上の追加の活性因子を含んでもよい。このような因子としては限定するものではないが、以下が挙げられる：（ａ）本発明の別のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原、（ｂ）小児科ワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｃ）年配または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｄ）（ａ）〜（ｃ）をコードする核酸分子、（ａ）〜（ｃ）に特異的に結合する抗体、およびＧＢＳポリサッカリド抗原（下記で規定するとおり）。
【０１４０】
（抗体）
グラム陽性細菌（例えば、連鎖球菌および／またはブドウ球菌）タンパク質のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を用いて、抗体、好ましくは防御抗体を生成してもよい。「抗体」としては本明細書において用いる場合、限定するものではないが、インタクトな免疫グロブリン分子、およびＣｎａ＿Ｂドメインに結合し得るそのフラグメントが挙げられる。従って、「抗体」としては、モノクローナル抗体、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９、２９３〜９９、１９９１；米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ａｂ）フラグメントおよびＦｖ分子；非共有結合ヘテロ二量体（例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．６９，２６５９〜６２，１９７２；Ｅｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９，４０９１〜９６，１９８０）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５８９７〜８３，１９８８）；二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディ（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３１，１５７９〜８４，１９９２；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４９Ｂ，１２０〜２６，１９９２）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２，３２３〜２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９，１５３４〜３６，１９８８；および１９９４年９月２１日公開、英国特許公開番号ＧＢ２，２７６，１６９号）；およびこのような分子から得られる任意の機能的なフラグメント、ならびにファージディスプレイなどの慣用的でないプロセスを通じて得られる抗体を挙げることができる。
【０１４１】
抗体は、これが、免疫化学アッセイで用いられる場合、他のタンパク質によって提供される検出シグナルよりも少なくとも５倍、１０倍、または２０倍高い検出シグナルを提供する場合、本発明によるＣｎａ＿Ｂドメインに対して特異的に結合する。好ましくは、Ｃｎａ＿Ｂドメインに特異的に結合する抗体は、溶液からＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を免疫沈降し得る。いくつかの実施形態では、Ｃｎａ＿Ｂドメインに特異的に結合する抗体は、ＧＢＳ株５１５のオプソニン食作用を少なくとも３０％誘導する（例えば、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００％）。
【０１４２】
（追加の抗原）
本発明の組成物は、本発明の治療方法または予防方法での使用のために１つ以上の抗原と組み合わせて投与されてもよい。好ましい抗原としては、下に列挙される抗原が挙げられる。さらに、本発明の組成物は、下に列挙される任意の病原体によって生じる感染を処置または予防するために用いられ得る。下に記載される抗原との組み合わせに加えて、本発明の組成物はまた、本明細書に記載のアジュバントと組み合わせてもよい。
【０１４３】
（ＧＢＳポリサッカリド抗原）
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ＧＢＳポリサッカリド抗原を含む。Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＧＢＳ炭水化物は代表的には、交互のα−（１→２）およびα−（１→３）リンクからなるＬ−ラムノピラノース（Ｒｈａｐ）骨格および交互のラムノース環に接続されたＤ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃｐＮＡｃ）残基β−（１→３）を有する分枝構造を特徴とする（Ｋｒｅｉｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．１７，１１７〜３０，１９９５）。本発明の組成物で有用なＧＢＳポリサッカリド抗原は以下の式：
【０１４４】
【化１４】
2015193659.tif 000093
を有し、式中、Ｒは、末端還元Ｌ−ラムノースまたはＤ−ＧｌｃｐＮＡｃであり、かつｎは約３〜約３０の数である。
【０１４５】
本発明に従って用いられるＧＢＳポリサッカリド抗原は、天然に見出されるような、実質的に全長のＧＢＳ炭水化物であってもよく、または天然の長さよりも短くてもよい。全長ポリサッカリドは、例えば、弱酸中での加水分解によって、加熱によって、サイジングクロマトグラフィーによって、などで、本発明での使用のための短いフラグメントを提供するように脱重合され得る。しかし、実質的に全長のサッカリドを用いることが好ましい。詳細には、約１０ｋＤａの分子量を有するサッカリドを用いることが好ましい。分子量は、デキストラン標準物に対するゲル濾過によって測定され得る。
【０１４６】
サッカリドは、天然に見出されるＧＢＳ炭水化物に対して化学的に修飾されてもよい。例えば、このサッカリドは、脱Ｎアセチル化（部分的にまたは完全に）、Ｎプロピオン酸化（部分的にまたは完全に）などされてもよい。例えば、免疫原性に対する脱アセチル化などの効果は、慣用的なアッセイによって評価され得る。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ＧＢＳポリサッカリド抗原は、キャリア、例えば、変異したジフテリア毒素ＣＲＭ１９７および下に記載の他のキャリアに結合体化される。
【０１４８】
本発明での使用のための抗原としては、限定するものではないが、下に示される以下の抗原のうちの１つ以上、または下に示される１つ以上の病原体由来の抗原が挙げられる。
【０１４９】
（Ａ．細菌抗原）
本発明での使用に適切な細菌抗原としては、タンパク質、ポリサッカリド、リポポリサッカリド、および外膜小胞（細菌から単離されても、精製されても、または由来してもよい）が挙げられる。さらに、細菌抗原としては、細菌溶解物および不活化細菌処方物が挙げられ得る。細菌抗原は、組み換え発現によって産生されてもよい。細菌抗原としては好ましくは、そのライフサイクルの少なくとも１段階の間、細菌の表面に露出されるエピトープが挙げられる。細菌抗原は好ましくは、複数の血清型にまたがって保存される。細菌抗原としては、下に示される細菌の１つ以上に由来する抗原、および下に特定される特定の抗原の例が挙げられる。
【０１５０】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ：Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ抗原としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ血清群、例えば、Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙおよび／またはＢから精製されるかまたはそれらに由来する、タンパク質（例えば、引用文献１〜７に特定されるタンパク質）、サッカリド（ポリサッカリド、オリゴサッカリド、またはリポポリサッカリドを含む）、または外膜小胞（引用文献、８、９、１０、１１）を挙げることができる。Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓタンパク質抗原は、付着、オートトランスポーター（ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）、毒素、Ｆｅ獲得タンパク質、および膜会合タンパク質（好ましくは、内在性外膜タンパク質）から選択され得る。
【０１５１】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカリド（ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドを含む）および／またはタンパク質を挙げることができる。サッカリド抗原は、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆから選択され得る。タンパク質抗原は、ＷＯ９８／１８９３１、ＷＯ９８／１８９３０、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、ＷＯ９７／４３３０３、およびＷＯ９７／３７０２６において特定されたタンパク質から選択され得る。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのタンパク質は、Ｐｏｌｙ  Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  Ｔｒｉａｄファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ切断型、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ切断型、ＣｂｐＸ切断−ＬｙｔＸ切断キメラタンパク質、肺炎球菌溶血素（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５またはＳｐ１３３から選択され得る。
【０１５２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原としては、ＷＯ０２／３４７７１またはＷＯ２００５／０３２５８２に特定されるタンパク質（ＧＡＳ４０を含む）、ＧＡＳ  Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（ＷＯ０２／０９４８５１およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：１９３〜２００、ならびにＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ  １４（１０）：９４４〜９４８に記載のものを含む）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム会合タンパク質（Ｓｈｐ）およびストレプトリジンＳ（ＳａｇＡ）を挙げることができる。
【０１５３】
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ：Ｍｏｒａｘｅｌｌａ抗原としては、ＷＯ０２／１８５９５およびＷＯ９９／５８５６２に特定される抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ−抗原、および／またはＬＰＳが挙げられる。
【０１５４】
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ：百日咳抗原としては、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、また必要に応じて、パータクチンおよび／または凝集原２および３の抗原との組み合わせが挙げられる。
【０１５５】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ抗原としては、非毒性の組み換えＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａに必要に応じて結合体化されたＳ．ａｕｒｅｕｓ５型および８型の莢膜ポリサッカリド、例えば、ＳｔａｐｈＶＡＸＴＭ、または表面タンパク質由来の抗原、インバシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、貪食作用を阻害する表面因子（カプセル、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ生産物、プロテインＡ、コアグラーゼ、凝固因子および／または真核生物細胞膜を溶解する（必要に応じて無毒化された）膜損傷毒素（溶血素、白血球毒素、ロイコシジン）が挙げられる。
【０１５６】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ：Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ抗原としては、粘液関連抗原（ＳＡＡ）が挙げられる。
【０１５７】
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ（破傷風）：破傷風抗原としては、本発明の組成物と組み合わせて／結合体化されて、キャリアタンパク質として好ましくは用いられる、破傷風毒素（ＴＴ）が挙げられる。
【０１５８】
Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）：ジフテリア抗原としては、ＣＲＭ１９７などの、好ましくは無毒化されたジフテリア毒素が挙げられる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調節するか、阻害するか、またはそれと関連し得る抗原は、本発明の組成物との組み合わせ／共投与／結合体化を考慮される。このジフテリア毒素は、キャリアタンパク質として用いられ得る。
【０１５９】
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原としては、Ｈｉｂサッカリド抗原が挙げられる。
【０１６０】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ抗原としては、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＬＰＳ、さらに詳細にはＰＡＯ１から単離されたＬＰＳ（Ｏ５血清型）、および／または外膜タンパク質、例としては外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）が挙げられる（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００１
Ｍａｙ；６９（５）：３５１０〜３５１５）。
【０１６１】
Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ。細菌抗原は、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ
ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ由来であり得る。
【０１６２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原としては、ＷＯ０２／３４７７１、ＷＯ０３／０９３３０６、ＷＯ０４／０４１１５７またはＷＯ２００５／００２６１９に特定されるタンパク質またはサッカリド抗原が挙げられる（例としては、タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６およびＧＢＳ３２２、ならびに例としては、血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ由来のサッカリド抗原）。
【０１６３】
Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ：Ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原としては、Ｐｏｒ（またはポーリン）タンパク質、例えば、ＰｏｒＢ（Ｚｈｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４）２２：６６０〜６６９を参照のこと）、トランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ）結合タンパク質、例えば、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）７１（１）：２７７〜２８３を参照のこと）、不透明タンパク質（例えば、Ｏｐａ）、還元修飾可能（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ）タンパク質（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ｏｕｔｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｖｅｓｉｃｌｅ（ＯＭＶ））調製物が挙げられる（Ｐｌａｎｔｅら、Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）１８２：８４８〜８５５参照）。また、例えば、ＷＯ９９／２４５７８、ＷＯ９９／３６５４４、ＷＯ９９／５７２８０、ＷＯ０２／０７９２４３も参照のこと。
【０１６４】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ：Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原としては、血清型Ａ、Ｂ、ＢａおよびＣ（トラコーマの因子、失明の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２＆Ｌ３（性病性リンパ肉芽腫に関連する）および血清型Ｄ〜Ｋ由来の抗原が挙げられる。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｓ抗原としてはまた、ＷＯ００／３７４９４、ＷＯ０３／０４９７６２、ＷＯ０３／０６８８１１、またはＷＯ０５／００２６１９に特定された抗原、例としては、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ様（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４），ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）が挙げられ得る。
【０１６５】
Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒）：梅毒抗原としてはＴｍｐＡ抗原が挙げられる。
【０１６６】
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ（軟性下疳を生じる）：Ｄｕｃｒｅｙｉ抗原としては、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が挙げられる。
【０１６７】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ：抗原としては、トリサッカリド反復、または米国特許第号６，７５６，３６１号に示される他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ由来抗原が挙げられる。
【０１６８】
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ：Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗原としては、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹおよび／またはウレアーゼ抗原が挙げられる。
【０１６９】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ：抗原としては、Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原の１６０ｋＤａの赤血球凝集素が挙げられる。
【０１７０】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ抗原としては、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００２  ８月；７０（８）：４４１４）が挙げられる。
【０１７１】
Ｅ．ｃｏｌｉ：Ｅ．ｃｏｌｉ抗原は、腸管毒素原性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＡｇｇＥＣ）、分散付着性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＤＡＥＣ）、腸管病原性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＨＥＣ）由来であり得る。
【０１７２】
Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭疽）：Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原は必要に応じて無毒化され、両方が防御抗原（ＰＡ）として公知の共通のＢ成分を共有し得るＡ成分（致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択され得る。
【０１７３】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ（ペスト）：ペスト抗原としては、Ｆ１莢膜抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００３  Ｊａｎ；７１（１）：３７４〜３８３）、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９９  Ｏｃｔ；６７（１０）：５３９５）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ  Ｖ抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９７  Ｎｏｖ；６５（１１）：４４７６〜４４８２）が挙げられる。
【０１７４】
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：結核抗原としては、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）および／またはＥＳＡＴ−６の融合タンパク質（必要に応じて陽イオン性脂質小胞中で処方される）（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００４  １０月；７２（１０）：６１４８）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００４  Ａｕｇ  ２４；１０１（３４）：１２６５２）、および／またはＭＰＴ５１抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００４  ７月；７２（７）：３８２９）が挙げられる。
【０１７５】
Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ：抗原としては、外膜タンパク質、例としては、外膜タンパク質Ａおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）（Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．２００４  Ｎｏｖ  １；１７０２（２）：１４５）、ＬＰＳおよび表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９８９  Ｊｕｎ；２補遺：８１）が挙げられる。
【０１７６】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ。細菌抗原は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ由来であり得る。
【０１７７】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：抗原としては、ＷＯ０２／０２６０６で特定される抗原が挙げられる。
【０１７８】
Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ：抗原としては、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にＶｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅＩＩのリポポリサッカリド、Ｏ１イナバＯ特異的ポリサッカリド、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ  Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｉｎｆｅｃｔ
Ｉｍｍｕｎ．２００３  Ｏｃｔ；７１（１０）：５４９８〜５０４）、および／またはＺｏｎｕｌａ  ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ（閉鎖帯）毒素（Ｚｏｔ）が挙げられる。
【０１７９】
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ（腸チフス）：抗原としては、莢膜ポリサッカリド、好ましくは結合体（Ｖｉ、すなわち、ｖａｘ−ＴｙＶｉ）が挙げられる。
【０１８０】
Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）：抗原としては、リポタンパク質（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣおよびＯｓｐＤ）、他の表面タンパク質、例えば、ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）、デコリン−結合タンパク質（例えば、ＤｂｐＡ）、および抗原的に可変のＶＩタンパク質、例えば、Ｐ３９およびＰ１３と会合する抗原（内在性膜タンパク質、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００１  Ｍａｙ；６９（５）：３３２３〜３３３４）、ＶｌｓＥ、抗原性変異タンパク質（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  Ｖａｒｉａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９  Ｄｅｃ；３７（１２）：３９９７）が挙げられる。
【０１８１】
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ：抗原としては、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ外膜タンパク質（ＯＭＰ）が挙げられる。
【０１８２】
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ：抗原としては、ＯＭＰ、例としては、ＯＭＰ  Ａ、または必要に応じて破傷風毒素に結合体化されたポリサッカリドが挙げられる。
【０１８３】
本発明の組成物で有用なさらなる細菌抗原は、任意の上記の莢膜抗原、ポリサッカリド抗原、またはタンパク質抗原であってもよい。さらなる細菌抗原としてはまた、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物が挙げられ得る。さらに、抗原としては、任意の上述の細菌の生の、弱毒化、および／または精製されたバージョンが挙げられる。抗原は、グラム陰性またはグラム陽性細菌に由来し得る。この抗原は、好気性細菌または嫌気性細菌由来であってもよい。
【０１８４】
さらに、任意の上記の細菌由来のサッカリド（ポリサッカリド、ＬＰＳ、ＬＯＳまたはオリゴサッカリド）は、別の因子または抗原、例えば、キャリアタンパク質に結合体化されてもよい（例えば、ＣＲＭ１９７）。このような結合体化は、米国特許第５，３６０，８９７号およびＣａｎ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９８４  Ｍａｙ；６２（５）：２７０〜５に示されるように、タンパク質上のアミノ基に対するサッカリド上のカルボニル部分の還元的アミノ化によって達成された直接結合体化であり得る。あるいは、このサッカリドは、リンカーを通じて、例えば、コハク酸アミドまたはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９６およびＣＲＣ、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９３に示される他の連結で結合体化され得る。
【０１８５】
（Ｂ．ウイルス抗原）
本発明における使用に適切なウイルス抗原としては、不活化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス処方物、精製されたサブユニット処方物、ウイルスタンパク質（ウイルスから単離、精製または由来してもよい）、およびウイルス様粒子（Ｖｉｒｕｓ  Ｌｉｋｅ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ（ＶＬＰ））が挙げられる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の培養基上で増殖させられたウイルスから誘導され得る。あるいは、ウイルス抗原は、組み換え発現されてもよい。ウイルス抗原は好ましくは、そのライフサイクルの少なくとも１段階の間ウイルスの表面に露出されるエピトープを含む。ウイルス抗原は好ましくは、複数の血清型または単離体にまたがって保存される。ウイルス抗原としては、下に示される１つ以上のウイルス由来の抗原、および下に特定される特定の抗原の例が挙げられる。
【０１８６】
オルソミクソウイルス：ウイルス抗原は、インフルエンザＡ、ＢおよびＣなどのオルソミクソウイルスに由来し得る。オルソミクソウイルス抗原は、１つ以上のウイルスタンパク質、例としては、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリクスタンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１つ以上の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ）から選択され得る。好ましい抗原としてはＨＡおよびＮＡが挙げられる。
【０１８７】
インフルエンザ抗原は、大流行間期の（例年の）インフルエンザ株に由来し得る。あるいは、インフルエンザ抗原は、世界的流行を生じる能力のある株（すなわち、現在循環中の株における赤血球凝集素に比較して新しい赤血球凝集素を有するインフルエンザ株、または鳥類被験体で病原性であり、かつヒト集団に水平伝播する能力を有するインフルエンザ株、またはヒトに対して病原性であるインフルエンザ株）に由来し得る。
【０１８８】
パラミクソウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス科ウイルス、例えば、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）および麻疹ウイルス属（麻疹）に由来してもよい。
【０１８９】
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス、例えば、ＲＳウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ（ＲＳＶ））、ウシＲＳウイルス、マウスのニューモウイルスおよびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスに由来し得る。好ましくは、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原は、以下のタンパク質、例としては、表面タンパク質融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）および低分子疎水性（Ｓｍａｌｌ  Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ）（ＳＨ）タンパク質、マトリクスタンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、ＰおよびＬならびに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２のうちの１つ以上から選択され得る。好ましいニューモウイルス抗原としては、Ｆ、ＧおよびＭが挙げられる。例えば、Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．２００４  Ｎｏｖ；８５（Ｐｔ１１）：３２２９を参照のこと。ニューモウイルス抗原はまた、キメラウイルス中に処方されてもよいし、またはキメラウイルスに由来してもよい。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含んでもよい。
【０１９０】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス、例えば、パラインフルエンザウイルス１〜４型（ＰＩＶ）、ムンプス、センダイウイルス、シミアン・ウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルスおよびニューキャッスル病ウイルスに由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスは、ＰＩＶまたはムンプスである。パラミクソウイルス抗原は、以下のタンパク質のうちの１つ以上から選択され得る：赤血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、巨大（Ｌａｒｇｅ）タンパク質（Ｌ）、およびマトリクスタンパク質（Ｍ）。好ましいパラミクソウイルスタンパク質としては、ＨＮ、Ｆ１およびＦ２が挙げられる。パラミクソウイルス抗原はまた、キメラウイルス中に処方されてもよいし、またはキメラウイルスに由来してもよい。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含んでもよい。市販のムンプスワクチンは、生の弱毒化ムンプスウイルスを、単価型で、または、麻疹および風疹のワクチンと組み合わせて（ＭＭＲ）含む。
【０１９１】
麻疹ウイルス：ウイルス抗原は、麻疹ウイルス、例えば、麻疹由来であってもよい。麻疹ウイルス抗原は、以下のタンパク質のうちの１つ以上から選択され得る：赤血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、巨大（Ｌａｒｇｅ）タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、およびマトリクス（Ｍ）。市販の麻疹ワクチンは、生の弱毒化麻疹ウイルスを、代表的には、ムンプスおよび風疹と組み合わせて（ＭＭＲ）含む。
【０１９２】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス、例えば、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルスおよびアフトウイルスに由来し得る。ポリオウイルスのようなエンテロウイルス由来の抗原が好ましい。
【０１９３】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス、例えば、ポリオウイルス１型、２型または３型、コクサッキーＡウイルス１型〜２２型および２４型、コクサッキーＢウイルス１型〜６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）ウイルス１〜９、１１〜２７および２９〜３４型、ならびにエンテロウイルス６８〜７１に由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスは、ポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は好ましくは、以下のカプシドタンパク質、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３およびＶＰ４のうちの１つ以上から選択される。市販のポリオワクチンとしては、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が挙げられる。
【０１９４】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパルナウイルス、例えば、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）由来であり得る。市販のＨＡＶワクチンは、不活化ＨＡＶワクチンを含む。
【０１９５】
トガウイルス：ウイルス抗原は、ルビウイルス、アルファウイルスまたはアルテリウイルスなどのトガウイルス由来であり得る。風疹ウイルスなどのルビウイルス由来の抗原が好ましい。トガウイルス抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２，ＮＳＰ−３またはＮＳＰ−４から選択され得る。トガウイルス抗原は好ましくはＥ１、Ｅ２またはＥ３から選択される。市販の風疹ワクチンは、生の低温適応ウイルスを、代表的には、ムンプスおよび麻疹のワクチンと組み合わせて含む（ＭＭＲ）。
【０１９６】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、フラビウイルス、例えば、ダニ媒介脳炎（ＴＢＥ）、デング（１、２、３または４型）、黄熱病、日本脳炎、西ナイル脳炎、セント・ルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポーワッサン脳炎に由来し得る。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂおよびＮＳ５から選択され得る。フラビウイルス抗原は好ましくは、ＰｒＭ、ＭおよびＥから選択される。市販のＴＢＥワクチンは、不活化ウイルスワクチンを含む。
【０１９７】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ペスチウイルス、例えば、ウシウイルス性下痢症（ＢＶＤＶ）、古典的ブタコレラ（ＣＳＦＶ）またはボーダー病（ＢＤＶ）由来であり得る。
【０１９８】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパドナウイルス、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス由来であり得る。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、ＭおよびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択され得る。市販のＨＢＶワクチンとしては、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが挙げられる。
【０１９９】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）由来であり得る。ＨＣＶ抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリプロテイン、ＮＳ３４５−コアポリプロテイン、コア、および／または非構造領域由来のペプチドのうちの１つ以上から選択され得る（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）。
【０２００】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、ラブドウイルス、例えば、リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）由来であってもよい。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、巨大（ｌａｒｇｅ）タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択され得る。市販の狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞または胎児アカゲザル肺細胞で増殖した死滅ウイルスを含む。
【０２０１】
カリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）：ウイルス抗原は、カリシウイルス科、例えば、ノーウォークウイルス、およびノーウォーク様ウイルス、例えば、ハワイウイルスおよびスノー・マウンテン（Ｓｎｏｗ  Ｍｏｕｎｔａｉｎ）ウイルスに由来し得る。
【０２０２】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、鳥類伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）由来であり得る。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、マトリクス（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）および赤血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択され得る。好ましくは、コロナウイルス抗原は、ＳＡＲＳウイルス由来である。ＳＡＲＳウイルス抗原は、ＷＯ０４／９２３６０に記載されている。
【０２０３】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス、例えば、オンコウイルス、レンチウイルス、またはスプーマウイルス由来であり得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２またはＨＴＬＶ−５由来であり得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２由来であり得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕおよびｖｐｒから選択され得る。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ  ｖｐｕ、ミニプロテイン、（好ましくは、ｐ５５ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失）から選択され得る。ＨＩＶ抗原は、以下の株の１つ以上に由来し得る：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４。
【０２０４】
レオウイルス：ウイルス抗原は、レオウイルス、例えば、オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルスまたはコルチウイルス由来であってもよい。レオウイルス抗原は、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２もしくはσ３、または非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳもしくはσ１ｓから選択され得る。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルス由来であってもよい。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択されてもよい。好ましいロタウイルス抗原としては、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７が挙げられる。
【０２０５】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルス、例えば、パルボウイルスＢ１９に由来し得る。パルボウイルス抗原は、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１およびＮＳ−２から選択され得る。好ましくは、パルボウイルス抗原は、カプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０２０６】
δ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ由来、特にＨＤＶ由来のδ抗原であってもよい（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号を参照のこと）。
【０２０７】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原は、ＨＥＶ由来であってもよい。
【０２０８】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶ由来であってもよい。
【０２０９】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、ヒトヘルペスウイルス、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）由来であり得る。ヒトヘルペスウイルス抗原は、前初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）および後期タンパク質（γ）から選択され得る。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１株由来であっても、またはＨＳＶ−２株由来であってもよい。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥまたはｇＩ）から選択されてもよい。ＶＺＶ抗原は、コア、ヌクレオカプシド、外被（ｔｅｇｕｍｅｎｔ）またはエンベロープのタンパク質から選択され得る。生の弱毒化ＶＺＶワクチンが市販されている。ＥＢＶ抗原は、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスカプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原の糖タンパク質（ＭＡ）から選択され得る。ＣＭＶ抗原は、カプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（例えば、ｇＢおよびｇＨ）、および外被タンパク質から選択され得る。
【０２１０】
パポバウイルス：抗原は、パポバウイルス、例えば、パピローマウイルスおよびポリオーマウイルス由来であってもよい。パピローマウイルスとしては、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３および６５が挙げられる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は、血清型６、１１、１６または１８由来である。ＨＰＶ抗原は、カプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）、もしくはＥ１〜Ｅ７、またはその融合物から選択され得る。ＨＰＶ抗原は好ましくは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）中に処方される。ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）のウイルスとしては、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが挙げられる。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ、ＶＰ２またはＶＰ３から選択され得る。
【０２１１】
さらに、本発明の組成物との組み合わせにおいて想定される、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，第４版（ＰｌｏｔｋｉｎおよびＯｒｅｎｓｔｅｉｎ、編集、２００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  第４版（Ｍｕｒｒａｙら、編集、２００２）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ  編集、１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第２版（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，編集、１９９１）に含まれる、抗原、組成物、方法および微生物が提供される。
【０２１２】
（Ｃ．真菌の抗原）
本発明での使用のための真菌の抗原は、下に示される真菌のうちの１つ以上に由来し得る。
【０２１３】
真菌の抗原は、以下：
【０２１４】
【化１５】
2015193659.tif 000094
を含む皮膚糸状菌に由来し得る。
【０２１５】
真菌の病原体は、
【０２１６】
【化１６】
2015193659.tif 000095
【０２１７】
【化１７】
2015193659.tif 000096
に由来し得る。
【０２１８】
真菌抗原を産生するためのプロセスは、当該分野で周知である（米国特許第６，３３３，１６４号を参照のこと）。好ましい方法では、真菌細胞（その細胞壁は実質的に除去されているか、または少なくとも部分的に除去されている）から入手可能な不溶性画分から可溶性画分が抽出および分離され、そのプロセスは以下の工程を含むという点で特徴付けられた：生きている真菌細胞を得る工程；細胞壁が実質的に除去されているか、または少なくとも部分的に除去されている真菌の細胞を得る工程；真菌の細胞（その細胞壁は実質的に除去されているか、または少なくとも部分的に除去されている）をバーストさせる工程；不溶性画分を得る工程；ならびにこの不溶性画分から可溶性画分を抽出および分離する工程。
【０２１９】
（Ｄ．ＳＴＤ抗原）
本発明の組成物は、性感染症（ＳＴＤ）由来の１つ以上の抗原を含んでもよい。このような抗原は、ＳＴＤ、例えば、クラミジア、性器ヘルペス、肝炎（例えば、ＨＣＶ）、陰部疣贅、淋病、梅毒および／または軟性下疳の予防または治療を提供し得る（ＷＯ００／１５２５５を参照のこと）。抗原は、１つ以上のウイルスまたは細菌のＳＴＤに由来し得る。本発明における使用のためのウイルスのＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）および肝炎（ＨＣＶ）由来であってもよい。本発明での使用のための細菌のＳＴＤ抗原は、例えば、
【０２２０】
【化１８】
2015193659.tif 000097
由来であってもよい。これらの病原体由来の特定の抗原の例は、上記される。
【０２２１】
（Ｅ．呼吸器抗原）
本発明の組成物は、呼吸器疾患を生じる病原体由来の１つ以上の抗原を含んでもよい。例えば、呼吸器抗原は、呼吸器ウイルス、例えば、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶおよびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）由来であってもよい。呼吸器抗原は、呼吸器疾患を生じる細菌、例えば、
【０２２２】
【化１９】
2015193659.tif 000098
由来であってもよい。これらの病原体由来の特定の抗原の例は上記される。
【０２２３】
（Ｆ．小児ワクチンの抗原）
本発明の組成物は、小児被験体における使用に適切な１つ以上の抗原を含んでもよい。小児被験体とは代表的には、約３歳未満、または約２歳未満、または約１歳未満である。小児抗原は、６カ月、１、２または３年にわたって複数回投与され得る。小児抗原は、小児集団を標的とし得るウイルス由来であっても、および／または小児集団が感染しやすいウイルス由来であってもよい。小児ウイルス抗原としては、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）のうちの１つ以上に由来する抗原が挙げられる。小児細菌抗原としては、
【０２２４】
【化２０】
2015193659.tif 000099
のうちの１つ以上に由来する抗原が挙げられる。これらの病原体に由来する特定の抗原の例は上記される。
【０２２５】
（Ｇ．年配または免疫無防備状態の個体における使用に適切な抗原）
本発明の組成物は、年配または免疫無防備状態の個体における使用に適切な１つ以上の抗原を含んでもよい。このような個体は、標的抗原に対するその免疫応答を改善するためにさらに高用量でまたはアジュバントされた（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）処方物を用いて、さらに高頻度でワクチン接種される必要があり得る。年配または免疫無防備状態の個体における使用について標的とされ得る抗原としては、以下の病原体のうちの１つ以上に由来する抗原が挙げられる：
【０２２６】
【化２１】
2015193659.tif 000100
オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体由来の特定の抗原の例は上記される。
【０２２７】
（Ｈ．青年期のワクチンでの使用に適切な抗原）
本発明の組成物は、青年期の被験体における使用に適切な１つ以上の抗原を含んでもよい。青年期は、以前に投与された小児の抗原の追加免疫が必要であり得る。青年期における使用に適切であり得る小児抗原は上記されている。さらに、青年期を標的として、性的活動の開始の前に防御免疫または治療免疫を確実にするためにＳＴＤ病原体由来の抗原を投与してもよい。青年期における使用に適切であり得るＳＴＤ抗原は上記されている。
【０２２８】
（Ｉ．抗原処方物）
本発明の他の局面では、吸着された抗原を有する微小粒子を作製する方法が得られる。この方法は、以下を包含する：（ａ）混合物であって（ｉ）水、（ｉｉ）界面活性剤、（ｉｉｉ）有機溶媒ならびに（ｉｖ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートからなる群より選択される生分解性ポリマーを含んでいる混合物を分散化することによってエマルジョンを提供する工程（このポリマーは代表的には、混合物中に、有機溶媒に対して約１％〜約３０％の濃度で存在するが、界面活性剤は代表的には、約０．００００１：１〜約０．１：１（さらに代表的には、約０．０００１：１〜約０．１：１、約０．００１：１〜約０．１：１、または約０．００５：１〜約０．１：１）の重量対重量の界面活性剤対ポリマーの比で混合物中に存在する）と；（ｂ）エマルジョンから有機溶媒を除去する工程と；（ｃ）微小粒子の表面に抗原を吸着させる工程。特定の実施形態では、この生分解性ポリマーは、有機溶媒に対して約３％〜約１０％の濃度で存在する。
【０２２９】
本明細書における使用のための微小粒子は、滅菌可能、非毒性および生分解性である材料から形成される。このような材料としては、限定するものではないが、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ＰＡＣＡ、およびポリシアノアクリレートが挙げられる。好ましくは、本発明での使用のための微小粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）から、詳細には、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドおよびグリコリドもしくはグリコール酸のコポリマー、例えば、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」）、またはＤ，Ｌ−ラクチドおよびカプロラクトンのコポリマーから誘導される。この微小粒子は、種々の分子量を有する任意の種々のポリマー性の出発材料、およびＰＬＧのようなコポリマーの場合には、種々のラクチド：グリコリド比から誘導され得、その選択は、部分的には共投与される高分子に依存して、かなり選択できる。これらのパラメーターは、下にさらに詳細に考察される。
【０２３０】
さらなる抗原としてまた、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も挙げられ得る。
【０２３１】
さらなる処方方法および抗原（特に腫瘍抗原）は米国特許第６，８８４，４３５号に提供される。
【０２３２】
（Ｊ．抗原の参考文献）
以下の参考文献は、本発明の組成物と組み合わせて有用な抗原を包含する。
【０２３３】
【数２】
2015193659.tif 000101
【０２３４】
【数３】
2015193659.tif 000102
【０２３５】
【数４】
2015193659.tif 000103
上記で引用された特許、特許出願、および文献の記事の全ての内容は、本明細書において詳細に示されるかのように参照によって援用される。
【０２３６】
（キャリアタンパク質）
サッカリドまたは炭水化物抗原が用いられる場合、免疫原性を増強するためにキャリアタンパク質に結合体化することが好ましい。
【０２３７】
【化２２】
2015193659.tif 000104
を参照のこと。好ましいキャリアタンパク質は、細菌毒素またはトキソイド、例えば、ジフテリアまたは破傷風のトキソイドである。ＣＲＭ  １９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。
【０２３８】
他のキャリアポリペプチドとしては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質（ＥＰ−Ａ−０３７２５０１）、合成ペプチド（ＥＰ−Ａ−０３７８８８１およびＥＰ−Ａ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ  ９３／１７７１２およびＷＯ  ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ  ９８／５８６６８およびＥＰ  Ａ  ０４７１１７７）、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤ（ＷＯ  ００／５６３６０）、サイトカイン（ＷＯ  ９１／０１１４６）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ  ００／６１７６１）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ  ０１／７２３３７）などが挙げられる。混合物がセリグラフＡおよびＣの両方由来の莢膜サッカリドを含む場合、ＭｅｎＡサッカリド：ＭｅｎＣサッカリドの比（ｗ／ｗ）が１より大きい（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１またはそれ以上）ことが好ましい場合がある。異なるサッカリドが、同じまたは異なる種類のキャリアタンパク質に結合体化されてもよい。必要に応じて任意の適切なリンカーを用いて、任意の適切な結合体化反応を用いてもよい。
【０２３９】
毒性タンパク質抗原は、必要に応じて無毒化され得る（例えば、化学的方法および／または遺伝学的方法による百日咳毒素の無毒化）。
【０２４０】
（薬学的に許容され得るキャリア）
本発明の組成物は代表的には、上述の成分に加えて、１つ以上の薬学的に許容され得るキャリアを含む。これらとしては、その組成物を投与された個体にとって有害な抗体の産生をそれ自体が誘導しない任意のキャリアが挙げられる。適切なキャリアは代表的には、大きく、緩徐に代謝される高分子、例えば、タンパク質、ポリサッカリド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸、アミノ酸コポリマーおよび脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）である。このようなキャリアは、当業者に周知である。組成物はまた、希釈剤、例えば、水、生理食塩水、グリセロールなどを含んでもよい。さらに、補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化物質なども存在してもよい。薬学的に許容され得る成分の詳細な考察は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ．第２０版，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で入手できる。
【０２４１】
（免疫調節剤）
（アジュバント）
本発明のワクチンは、他の免疫調節剤と組み合わせて投与され得る。詳細には組成物は通常、アジュバントを含む。本発明での使用のためのアジュバントとしては、限定するものではないが、以下のうちの１つ以上が挙げられる。
【０２４２】
（Ａ．ミネラル含有組成物）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なミネラル含有組成物としては、無機塩類、例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩が挙げられる。本発明は、無機塩類、例えば、水酸化物（例えば、オキシ水酸化物）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩など（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ．．．（１９９５）編集、Ｐｏｗｅｌｌ  ＆  Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍ．の第８章＆９章を参照のこと）、または種々の無機化合物の混合物（例えば、リン酸塩および水酸化物のアジュバントの混合物、必要に応じて、過剰のリン酸塩を有する）を包含し、ここでこの化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶質、アモルファスなど）をとり、塩（単数または複数）に対する吸着が好ましい。ミネラル含有組成物はまた、金属塩の粒子として処方されてもよい（ＷＯ００／２３１０５）。
【０２４３】
アルミニウム塩は、Ａｌ３＋用量が１投与量あたり０．２〜１．０ｍｇであるように本発明のワクチンに含まれ得る。
【０２４４】
一実施形態では、本発明の使用のためのアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））またはミョウバン誘導体であり、例えば、リン酸緩衝液中の抗原とミョウバンとを混合し、続いて水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基の漸増およびこれによる沈殿によって、インサイチュで形成される。
【０２４５】
本発明のワクチン処方物中での使用のための別のアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または結晶性オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）であり、これは、約５００ｍ２／ｇという表面積を有する優れた吸着剤である。あるいは、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウム（水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基のいくつかまたは全ての代わりにリン酸基を含む）が提供される。本明細書に提供される好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは、アモルファスであり、酸性、塩基性および中性の媒質中で可溶性である。
【０２４６】
別の実施形態では、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムの両方を含む。そのさらに特定の実施形態では、アジュバントは、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または９：１超という重量比（リン酸アルミニウム対水酸化アルミニウム）のような、水酸化アルミニウムよりも多量のリン酸アルミニウムを有する。さらに詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、１ワクチン用量あたり０．４〜１．０ｍｇ、または１ワクチン用量あたり０．４〜０．８ｍｇ、または１ワクチン用量あたり０．５〜０．７ｍｇ、または１ワクチン用量あたり約０．６ｍｇ存在する。
【０２４７】
一般には、好ましいアルミニウムベースのアジュバント（単数または複数）、または複数のアルミニウムベースのアジュバントの比、例えば、水酸化アルミニウムに対するリン酸アルミニウムは、分子間の静電気引力の最適化によって選択され、その結果この抗原は、所望のｐＨでアジュバントと反対の電荷を担持する。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）は、ｐＨ７．４でリゾチームを吸着するが、アルブミンは吸着しない。アルブミンが標的であるならば、水酸化アルミニウムアジュバントが選択される（ｉｅｐ  １１．４）。あるいは、リン酸塩での水酸化アルミニウムの前処理によってその等電点が低くなり、水酸化アルミニウムは、さらに塩基性の抗原についての好ましいアジュバントになる。
【０２４８】
（Ｂ．オイル−エマルジョン）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なオイル−エマルジョン組成物としては、スクアレン−水エマルジョン、例えば、５％スクアレン、０．５％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート（ポリソルベート８０、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、および０．５％ソルビタントリオレアート（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標）８５）、例えば、ＭＦ５９（登録商標）（マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロンの粒子に処方した）が挙げられる。ＷＯ９０／１４８３７を参照のこと。また、Ｐｏｄｄａ，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４〜４２３７を参照のこと。ＭＦ５９（登録商標）は、ＦＬＵＡＤＴＭインフルエンザウイルスの三価サブユニットワクチン中でアジュバントとして用いられる。
【０２４９】
この組成物での使用のための特に好ましいアジュバントは、サブミクロンの水中油型エマルジョンである。本明細書での使用のための好ましいサブミクロンの水中油型エマルジョンは、種々の量のＭＴＰ−ＰＥを必要に応じて含んでいるスクアレン／水エマルジョンであり、例えば、４〜５％（ｗ／ｖ）のスクアレン、０．２５〜１．０％（ｗ／ｖ）ＴＷＥＥＮＴＭ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）、および／または０．２５〜１．０％のＳＰＡＮ  ８５ＴＭ（ソルビタントリオレアート）、および必要に応じてＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ（ｈｕｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｐｈｏｒｙｌｏｘｙ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含んでいるサブミクロンの水中油型エマルジョン、例えば、「ＭＦ５９」として公知のサブミクロンの水中油型エマルジョン（国際公開番号ＷＯ９０／１４８３７；米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号、ならびにＯｔｔら、Ｖａｃｃｉｎｅ
Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．およびＮｅｗｍａｎ，ＭＪ．編集）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５，第２７７〜２９６頁）である。ＭＦ５９は、４〜５％（ｗ／ｖ）のスクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％（ｗ／ｖ）ＴＷＥＥＮＴＭ８０、および０．５％（ｗ／ｖ）ＳＰＡＮ  ８５ＴＭを含み、必要に応じて、種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含み、Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）などのマイクロフルイダイザーを用いてサブミクロンの粒子に処方される。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、約０〜５００μｇ／用量、より好ましくは０〜２５０μｇ／用量、そして最も好ましくは０〜１００μｇ／用量の量で存在し得る。本明細書において用いる場合、「ＭＦ５９−０」という用語は、ＭＴＰ−ＰＥを欠く上記のサブミクロンの水中油型エマルジョンを指すが、「ＭＦ５９−ＭＴＰ」という用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含む処方物を指す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、１用量あたり１００μｇのＭＴＰ−ＰＥを含む等である。本明細書における使用のための別のサブミクロンの水中油型エマルジョンであるＭＦ６９は、４．３％（ｗ／ｖ）のスクアレン、０．２５％（ｗ／ｖ）のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート（ポリソルベート８０、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、および０．７５％（ｗ／ｖ）ソルビタントリオレアート（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標）８５）および必要に応じてＭＴＰ−ＰＥを含む。さらに別のサブミクロンの水中油型エマルジョンは、ＳＡＦとしても公知のＭＦ７５であり、１０％のスクアレン、０．４％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート（ポリソルベート８０、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、５％プルロニック−ブロックのポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含んでいる（これもサブミクロンのエマルジョンへとマイクロフルイダイズされる）。ＭＦ７５−ＭＴＰは、１用量あたり１００〜４００μｇのＭＴＰ−ＰＥなどのＭＴＰを含むＭＦ７５処方物を意味する。
【０２５０】
サブミクロンの水中油型エマルジョン、サブミクロンの水中油型エマルジョンを作製する方法、および組成物中の使用のための、ムラミルペプチドなどの免疫刺激剤は、ＷＯ９０／１４８３７および米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号に詳細に記載されている。
【０２５１】
完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もまた、本発明におけるアジュバントとして用いられてもよい。
【０２５２】
（Ｃ．サポニン処方物）
サポニン処方物はまた、本発明におけるアジュバントとして用いられ得る。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根およびさらに花において見出されるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種の群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹の樹皮から単離されたサポニンは、アジュバントとして広範に研究されている。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ  ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライズベール（ｂｒｉｄｅｓ  ｖｅｉｌ））、およびＳａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ソープルート（ｓｏａｐ  ｒｏｏｔ））から商業的に入手され得る。サポニンアジュバント処方物としては、精製された処方物、例えば、ＱＳ２１、および液体処方物、例えば、ＩＳＣＯＭが挙げられる。
【０２５３】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ
Ｔｈｉｎ  Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰ−ＴＬＣ））および逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｒｅｖｅｒｓｅｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ−ＨＰＬＣ））を用いて精製されている。これらの技術を用いる特定の精製された画分は、特定されており、これはＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含んでいる。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の作製方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール、例えば、コレステロールを含んでもよい（ＷＯ９６／３３７３９を参照のこと）。
【０２５４】
サポニンおよびコレステロールの組み合わせは、免疫刺激複合体（Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ（ＩＳＣＯＭ））と呼ばれる特有の粒子を形成するために用いられ得る。ＩＳＣＯＭは代表的にはまた、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質を含む。任意の公知のサポニンは、ＩＳＣＯＭで用いられ得る。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、１つ以上のＱｕｉｌ  Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣを含む。ＩＳＣＯＭはさらに、ＥＰ０１０９９４２、ＷＯ９６／１１７１１およびＷＯ９６／３３７３９に記載される。必要に応じて、ＩＳＣＯＭＳは、追加の界面活性剤（単数または複数）を欠いてもよい。ＷＯ００／０７６２１を参照のこと。
【０２５５】
サポニンベースのアジュバントの開発の概説は、Ｂａｒｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：２４７〜２７１に見出され得る。また、Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：３２１〜３３８も参照のこと。
【０２５６】
（Ｄ．ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ））
ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もまた、本発明でアジュバントとして用いてもよい。これらの構造は一般には、必要に応じてリン脂質と組み合わされるかまたはリン脂質と処方される、ウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。それらは一般には、非病原性、非複製性であり、かつ一般には天然のウイルスゲノムを少しも含まない。このウイルスタンパク質は、組み換え産生されてもよいし、または全ウイルスから単離されてもよい。ビロゾームまたはＶＬＰにおける使用に適切なこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、コアまたはカプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（例えば、コートタンパク質）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）由来のタンパク質が挙げられる。ＶＬＰは、さらにＷＯ０３／０２４４８０、ＷＯ０３／０２４４８１、およびＮｉｉｋｕｒａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００２）２９３：２７３〜２８０；Ｌｅｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）５２４６〜５３５５；Ｐｉｎｔｏ，ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１８８：３２７〜３３８；ならびにＧｅｒｂｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５（１０）：４７５２〜４７６０に考察される。ビロゾームはさらに、例えば、Ｇｌｕｃｋら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００２）２０：Ｂ１０〜Ｂ１６に考察される。免疫増強性の再構成したインフルエンザビロゾーム（ＩＲＩＶ）を、鼻腔内の三価のＩＮＦＬＥＸＡＬＴＭ製品｛Ｍｉｓｃｈｌｅｒ  ＆  Ｍｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０  補遺５：Ｂ１７−２３｝およびＩＮＦＬＵＶＡＣ  ＰＬＵＳＴＭ製品において、サブユニット抗原送達系として用いる。
【０２５７】
（Ｅ．細菌または微生物の誘導物）
本発明における使用に適切なアジュバントとしては、以下のような細菌または微生物の誘導体が挙げられる。
【０２５８】
（１）腸内細菌のリポポリサッカリド（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
このような誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、３  Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａと４，５または６アシル化鎖との混合物である。３  Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小型粒子」型は、ＥＰ０  ６８９  ４５４に開示される。このような３ｄＭＰＬの「小型粒子」は、０．２２ミクロンの膜を通して滅菌濾過するのに十分小さい（ＥＰ０  ６８９  ４５４を参照のこと）。他の非毒性のＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリル脂質Ａ模倣物、例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体、例えば、ＲＣ５２９が挙げられる。Ｊｏｈｎｓｏｎら、（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ９：２２７３〜２２７８を参照のこと。
【０２５９】
（２）脂質Ａ誘導体
脂質Ａ誘導体としては、ＯＭ−１７４などのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ由来の脂質Ａの誘導体が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、Ｍｅｒａｌｄｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：２４８５〜２４９１；およびＰａｊａｋ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：８３６〜８４２に記載される。
【０２６０】
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフを含んでいるヌクレオチド配列が挙げられる（非メチル化シトシン、続いてグアノシンを含んでおり、リン酸結合によって連結される配列）。細菌の二重鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチド（パリンドロームまたはポリ（ｄＧ）配列を含んでいる）もまた、免疫刺激性であることが示されている。
【０２６１】
ＣｐＧはヌクレオチド修飾／アナログ、例えば、ホスホロチオエート修飾を含んでもよく、かつ二本鎖であってもまたは単鎖であってもよい。必要に応じて、グアノシンは、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどのアナログで置き換えられてもよい。可能性のあるアナログ置換の例については、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３１（９）：２３９３〜２４００；ＷＯ０２／２６７５７およびＷＯ９９／６２９２３を参照のこと。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果はさらに、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）９（７）：８３１〜８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ，ら、ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）３２：１７９〜１８５；ＷＯ９８／４０１００；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号および米国特許第６，４２９，１９９号に考察されている。
【０２６２】
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴのように、ＴＬＲ９に向けられてもよい。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（パート３）：６５４〜６５８を参照のこと。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮのように、Ｔｈ１免疫応答を誘導するために特異的であってもよいし、またはＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮのように、Ｂ細胞応答を誘導するためにさらに特異的であってもよい。ＣｐＧ−ＡおよびＣｐＧ−ＢのＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（８）：４０６１〜４０６８；Ｋｒｉｅｇ，ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２）２３（２）：６４〜６５およびＷＯ０１／９５９３５に考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮである。
【０２６３】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端がレセプター認識のためにアクセス可能であるように構築される。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列をそれらの３’末端で結合して、イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）を形成してもよい。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら、ＢＢＲＣ（２００３）３０６：９４８〜９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（パート３）：６６４〜６５８；Ｂｈａｇａｔら、ＢＢＲＣ（２００３）３００：８５３〜８６１およびＷＯ０３／０３５８３６を参照のこと。
【０２６４】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体は、本発明のアジュバントとして用いられ得る。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（すなわち、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）由来である。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、ＷＯ９５／１７２１１に、そして親のアジュバントとしては、ＷＯ９８／４２３７５に記載されている。好ましくは、このアジュバントは、無毒化ＬＴ変異体、例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇである。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、以下：
【０２６５】
【化２３】
2015193659.tif 000105
の参考文献に見出すことができる。アミノ酸置換についての数的な参照は好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９５）１５（６）：１１６５−１１６７に示されるＡＤＰリボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０２６６】
（Ｆ．生体付着剤および粘膜付着剤）
生体付着剤および粘膜付着剤もまた、本発明におけるアジュバントとして用いられ得る。適切な生体付着剤としては、エステル化ヒアルロン酸マイクロスフェア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅ．７０：２６７〜２７６）または粘膜付着剤、例えば、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリドおよびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明においてアジュバントとして用いられ得る。ＷＯ９９／２７９６０を参照のこと。
【０２６７】
（Ｇ．微小粒子）
微小粒子も、本発明のアジュバントとして用いられ得る。微小粒子（すなわち、直径で約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、さらに好ましくは直径で約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径で約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）は、生分解性であってかつ非毒性である材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成され、ポリ（ラクチド  コ  グリコリド）が好ましく、必要に応じて、負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳで）または正に荷電した表面（例えば、陽イオン性界面活性剤、例えば、ＣＴＡＢで）を有するように処理される。
【０２６８】
（Ｈ．リポソーム）
アジュバントとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、米国特許第５，９１６，５８８号、および欧州特許第０  ６２６  １６９号に記載される。
【０２６９】
（Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物）
本発明における使用に適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる。ＷＯ９９／５２５４９。このような処方物としてはさらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステルサーファクタント（ＷＯ０１／２１２０７）、およびオクトキシノールのような、少なくとも１つの追加の非イオン性サーファクタントと組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステルサーファクタント（ＷＯ０１／２１１５２）が挙げられる。
【０２７０】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０２７１】
（Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ））
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、
【０２７２】
【化２４】
2015193659.tif 000106
に記載される。
【０２７３】
（Ｋ．ムラミルペプチド）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮアセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【０２７４】
（Ｌ．イミダゾキノリン化合物）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なイミダゾキノリン化合物の例としては、Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２）２７（７）：５７１〜５７７；Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ（２００３）４（２）：２１４〜２１８；ならびに米国特許第４，６８９，３３８号、同第５，３８９，６４０号、同第５，２６８，３７６号、同第４，９２９，６２４号、同第５，２６６，５７５号、同第５，３５２，７８４号、同第５，４９４，９１６号、同第５，４８２，９３６号、同第５，３４６，９０５号、同第５，３９５，９３７号、同第５，２３８，９４４号、および同第５，５２５，６１２号にさらに記載されるイミキモドおよびそのアナログが挙げられる。
【０２７５】
（Ｍ．チオセミカルバゾン化合物）
チオセミカルバゾン化合物の例、ならびに本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な全ての化合物について処方、製造およびスクリーニングする方法としては、ＷＯ０４／６０３０８に記載されるものが挙げられる。チオセミカルバゾンは特に、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核球の刺激に有効である。
【０２７６】
（Ｎ．トリプタントリン化合物）
トリプタントリン化合物の例、ならびに本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な全ての化合物について処方、製造およびスクリーニングする方法としては、ＷＯ０４／６４７５９に記載されるものが挙げられる。トリプタントリン化合物は特に、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核球の刺激に有効である。
【０２７７】
本発明はまた、上記で特定されたアジュバントの１つ以上の局面の組み合わせを含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が本発明において用いられ得る：
（１）サポニンおよび水中油型エマルジョン（ＷＯ９９／１１２４１）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３を参照のこと）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ１２（必要に応じて＋ステロール）（ＷＯ９８／５７６５９）；
（５）例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの３ｄＭＰＬの組み合わせ（欧州特許出願０８３５３１８、０７３５８９８および０７６１２３１を参照のこと）；
（６）ＳＡＦ（１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有しており、サブミクロンのエマルジョンにマイクロフルイダイズされているか、またはボルテックスされてそれより大きい粒子サイズのエマルジョンを生じる）。
【０２７８】
（７）ＲＩＢＩＴＭアジュバントシステム（ＲＡＳ），（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）（２％スクアレン、０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、ならびにモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸＴＭ）を含んでいる）；ならびに
（８）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（例えば、３ｄＰＭＬ）。
【０２７９】
（９）１つ以上の無機塩（例えば、アルミニウム塩）＋免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列）。
【０２８０】
（Ｏ．ヒト免疫調節物質）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節物質としては、サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−Ｉ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子が挙げられる。
【０２８１】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンとの使用のための好ましいアジュバントである。細菌の毒素および生体付着剤は、経鼻ワクチンなどの粘膜送達ワクチンとの使用のための好ましいアジュバントである。
【０２８２】
上記で引用した特許、特許出願および文献記事の全ての内容は、本明細書において詳細に示されるかのように参照によって援用される。
【０２８３】
（治療方法）
本発明は、上記の組成物を用いて１つ以上のグラム陽性の（例えば、連鎖球菌および／またはブドウ球菌の）細菌（例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、および／またはＳ．ａｕｒｅｕｓ）に対する免疫応答を誘導または増大するための方法を提供する。本発明はまた、１つ以上のグラム陽性の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）細菌（例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、および／またはＳ．ａｕｒｅｕｓ）に対する免疫応答を誘導または増大することにおける使用のための上記の組成物を提供する。この免疫応答は好ましくは防御的であり、かつ抗体および／または細胞媒介性の免疫（全身性免疫および粘膜免疫を含む）を含み得る。免疫応答は追加免疫応答を包含する。
【０２８４】
ティーンエイジャーおよび小児（幼児および乳児を含む）は、予防的使用のためのワクチンを投与され得る；治療用ワクチンは代表的には、ティーンエイジャーまたは成人に投与される。小児を意図するワクチンはまた、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために成人にも投与され得る。
【０２８５】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅによって生じる疾患としては、限定するものではないが、新生児敗血症、髄膜炎、および肺炎、および妊婦感染（例えば、子宮における、羊水における、帝王切開術後、および尿路における）が挙げられる。
【０２８６】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって生じる疾患としては、限定するものではないが、肺炎、菌血症、中耳炎、髄膜炎、静脈洞炎、腹膜炎および関節炎が挙げられる。
【０２８７】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓによって生じる疾患としては、限定するものではないが、丹毒咽頭炎（例えば、連鎖球菌咽頭炎）、猩紅熱、膿痂疹、蜂巣炎、敗血症、壊疽性筋膜炎、筋炎、トキシックショック症候群、ならびにリウマチ熱および急性糸球体腎炎などの続発症が挙げられる。
【０２８８】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ａｕｒｅｕｓによって生じる疾患としては、限定するものではないが、軽度の皮膚感染、膿痂疹、腫脹（ｂｏｉｌ）、蜂巣炎、毛嚢炎、せつ（ｆｕｒｕｎｃｌｅ）、よう（ｃａｒｂｕｎｃｌｅ）、熱傷様皮膚症候群、膿瘍、肺炎、髄膜炎、骨髄炎、心内膜炎、トキシックショック症候群、および敗血症が挙げられる。
【０２８９】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｓｕｉｓによって生じる疾患としては、限定するものではないが、ブタのＳ．ｓｕｉｓ感染およびブタまたはブタの生成物に曝露されたヒトにおける髄膜炎、敗血症、肺炎、心内膜炎、関節炎、および敗血性ショックが挙げられる。
【０２９０】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｅｑｕｉによって生じる疾患としては、限定するものではないが、ウマ、イヌおよびラクダ科の患者（例えば、馬、ロバ、ラバ、イヌ、ラクダおよびヒトコブラクダ）における「腺疫（ｓｔｒａｎｇｌｅｓ）」ならびに転移性の腺疫が挙げられる。
【０２９１】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｕｂｅｒｉｓによって生じる疾患としては、限定するものではないが、ウシの乳腺炎が挙げられる。
【０２９２】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅによって生じる疾患としては、限定するものではないが、例えば、ウマ、ウシおよびブタの乳腺炎が挙げられる。
【０２９３】
本発明によって予防または処置され得る、Ｓ．ｉｎｉａｅによって生じる疾患としては、限定するものではないが、魚のＳ．ｉｎｉａｅ感染および感染した魚の取り扱いの際の皮膚損傷後のヒトにおける侵襲性の感染が挙げられる。
【０２９４】
（免疫応答の有効性を決定するための試験）
治療処置の有効性を評価する１方法は、本発明の組成物の投与後に細菌感染をモニタリングする工程を包含する。予防的処置の有効性を評価する１方法は、組成物の投与後に本発明の組成物中のＣｎａ＿Ｂドメインに対する免疫応答をモニタリングする工程を包含する。
【０２９５】
本発明の免疫原性組成物の構成要素のタンパク質の免疫原性を評価する別の方法は、Ｃｎａ＿Ｂドメインを組み換え的に産生すること、およびイムノブロットによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングすることである。タンパク質と患者の血清との間の陽性の反応は、この患者が該当のタンパク質に対して従前に免疫応答を上昇（ｍｏｕｎｔ）させたこと；すなわちこのタンパク質が免疫原であることを示す。この方法はまた、イムノドミナントタンパク質および／またはエピトープを特定するために用いられ得る。
【０２９６】
治療処置の有効性をチェックする別の方法は、本発明の組成物の投与後に感染をモニタリングする工程を包含する。予防的処置の有効性をチェックする１方法は、組成物の投与後、Ｃｎａ＿Ｂドメインに対する全身的（例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ産生のレベルをモニタリングする）および粘膜的（例えば、ＩｇＡ産生のレベルをモニタリングする）の両方で、免疫応答をモニタリングする工程を包含する。代表的には、血清特異的抗体応答は、免疫後だがチャレンジ前に決定され、一方で粘膜特異的抗体身体応答は、免疫後かつチャレンジ後に決定される。
【０２９７】
本発明のワクチン組成物は、宿主、例えば、ヒト投与の前にインビトロおよびインビボの動物モデルで評価され得る。特に有用なマウスモデルとしては、腹腔内免疫の後に、腹腔内チャレンジまたは鼻腔内チャレンジが続くモデルが挙げられる。
【０２９８】
本発明の免疫原性組成物の有効性はまた、インビボで動物モデルにグラム陽性の（例えば、ブドウ球菌または連鎖球菌の）細菌をチャレンジすることによって決定され得る（例えば、免疫原性組成物を用いたモルモットまたはマウス）。この免疫原性組成物は、チャレンジの血清型と同じ血清型由来であってもそうでなくてもよい。
【０２９９】
インビボの有効性モデルとしては限定するものではないが以下が挙げられる：（ｉ）ヒトグラム陽性の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）細菌血清型を用いるマウス感染モデル；（ｉｉ）マウスで特に毒性であるＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＭ２３株などのマウス適合性連鎖球菌株を用いるマウスモデルである、マウス疾患モデル、ならびに（ｉｉｉ）ヒト連鎖球菌単離体を用いる霊長類モデル。他のインビボモデルは、下の実施例に開示される。
【０３００】
免疫応答は、Ｔｈ１免疫応答およびＴｈ２応答の一方であってもまたは両方であってもよい。免疫応答は、改善、または増強、または変更された免疫応答であり得る。免疫応答は、全身性および粘膜の免疫応答の一方または両方であってもよい。好ましくは、この免疫応答は、増強された全身性および／または粘膜応答である。
【０３０１】
増強された全身性免疫および／または粘膜免疫は、増強されたＴｈ１および／またはＴｈ２免疫応答に反映される。好ましくは、増強された免疫応答としては、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡの産生の増大が挙げられる。
【０３０２】
好ましくは、粘膜免疫応答は、Ｔｈ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答としては、ＩｇＡ産生の増大が挙げられる。
【０３０３】
活性化されたＴｈ２細胞は、抗体産生を増強し、従って、細胞外感染への応答に有用である。活性化Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０のうちの１つ以上を分泌し得る。Ｔｈ２免疫応答は、将来の防御のためにＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡおよび記憶Ｂ細胞の産生を生じ得る。
【０３０４】
Ｔｈ２免疫応答は、Ｔｈ２免疫応答に関連する１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０）の増大、またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡおよび記憶Ｂ細胞の産生の増大のうちの１つ以上を包含し得る。好ましくは、増強されたＴｈ２免疫応答は、ＩｇＧ１産生の増大を包含する。
【０３０５】
Ｔｈ１免疫応答は、ＣＴＬの増大、Ｔｈ１免疫応答に関連する１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦβ）の増大、活性化マクロファージの増大、ＮＫ活性の増大、またはＩｇＧ２ａの産生の増大のうちの１つ以上を包含し得る。好ましくは、増強されたＴｈ１免疫応答は、ＩｇＧ２ａ産生の増大を包含する。
【０３０６】
本発明の免疫原性組成物、詳細には、本発明の１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメインを含んでいる免疫原性組成物は、単独で用いられても、または他のグラム陽性細菌の抗原（例えば、連鎖球菌またはブドウ球菌の抗原）と組み合わせて、必要に応じて、Ｔｈ１および／またはＴｈ２応答を惹起し得る免疫調節性剤とともに用いられてもよい。
【０３０７】
本発明はまた、１つ以上の免疫調節性剤、例えば、無機塩、例えば、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含んでいるオリゴヌクレオチドを含んでいる免疫原性組成物を含む。最も好ましくは、免疫原性組成物は、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含んでいるオリゴヌクレオチドの両方を包含する。あるいは、免疫原性組成物は、ＡＤＰリボシル化毒素、例えば、無毒化ＡＤＰリボシル化毒素およびＣｐＧモチーフを含んでいるオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、１つ以上の免疫調節性剤は、アジュバントを含む。このアジュバントは、Ｔｈ１アジュバントおよびＴｈ２アジュバントからなる群の１つ以上から選択され得る。
【０３０８】
本発明の組成物は、好ましくは、細胞媒介性の免疫応答、および体液性の免疫応答の両方を惹起して、グラム陽性細菌の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）感染に効率的に取り組む。この免疫応答は好ましくは、持続性（例えば、中和）抗体、および１つ以上のグラム陽性細菌の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）抗原に対する曝露の際に急速に応答し得る細胞媒介性の免疫を誘導する。
【０３０９】
１つの特に好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、中和抗体応答を惹起する１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（単数または複数）、および細胞媒介性免疫応答を惹起する、１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（単数または複数）を含む。この方法では、中和抗体応答は、最初のグラム陽性細菌の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）感染を予防または阻害するが、増強されたＴｈ１細胞応答を惹起し得る細胞媒介性免疫応答はさらに、グラム陽性細菌の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）感染の広がりを予防する。
【０３１０】
本発明の組成物は一般には、患者に直接投与される。本発明の組成物は、種々の異なる経路を介して、単独でまたは組成物の一部として投与され得る。特定の経路は、より有効な免疫応答（好ましくは、ＣＭＩ応答）の生成を生じるということで、または副作用を誘導する可能性が低いということで、または投与が容易であるということで、特定の組成物に好適であり得る。
【０３１１】
送達方法としては、非経口注射（例えば、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射、筋肉内注射、または間質性注射）および直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）（例えば、ＷＯ  ９９／２７９６１を参照のこと）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（例えば、ＷＯ０２／０７４２４４およびＷＯ０２／０６４１６２を参照のこと）、鼻腔内（例えば、ＷＯ０３／０２８７６０を参照のこと）、眼球、耳、および肺または他の粘膜投与が挙げられる。
【０３１２】
例えば、本発明の組成物は、全身経路、もしくは粘膜経路、もしくは経皮経路を介して投与されてもよく、または、特定の組織へ直接投与されてもよい。本明細書において用いる場合、「全身投与」という用語は、限定するものではないが、投与の任意の非経口経路を包含する。詳細には、非経口投与としては限定するものではないが、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内または胸骨内の注射、静脈内、動脈内または腎臓透析の注入技術が挙げられる。好ましくは、全身性、非経口投与は、筋肉内注射である。本明細書において用いる場合、「粘膜投与」という用語は、限定するものではないが、経口投与、鼻腔内投与、膣内投与、直腸内投与、気管内投与、腸内投与および眼科投与を包含する。
【０３１３】
投薬処置は、単一用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであってもよい。複数回用量は、一次免疫スケジュールで、および／または追加免疫スケジュールで用いられ得る。複数回用量スケジュールでは、種々の用量は、同じ経路または異なる経路で、例えば、非経口の一次免疫および粘膜の追加免疫、粘膜の一次免疫および非経口の追加免疫などによって与えてもよい。
【０３１４】
本発明の組成物は、種々の形態で調製され得る。例えば、組成物は、注射用として、液体溶液または懸濁物として調製されてもよい。注射前の液体ビヒクルにおける溶液、または懸濁物について適切な固体型も調製され得る（例えば、凍結乾燥組成物）。組成物は、経口投与のために、例えば、錠剤またはカプセル、スプレーとして、またはシロップとして（必要に応じて矯味矯臭されて）調製され得る。組成物は、肺投与のために、例えば、吸入器として、微細粉末またはスプレーを用いて、調製されてもよい。組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製されてもよい。組成物は、経鼻、耳または眼の投与用に、例えば、滴剤として調製されてもよい。組成物は、合わせた組成物が患者に投与される直前に再構成されるように、キット型で設計されてもよい。このようなキットは、液体型の１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原または他の抗原および１つ以上の凍結乾燥抗原を含んでもよい。
【０３１５】
ワクチンとして用いられる免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（またはこの抗原をコードする核酸分子）、および必要に応じて抗体などの任意の他の成分を含む。「免疫学的に有効な量」とは、単回用量でもしくは一連の一部として個体に投与される場合、測定可能な免疫応答を増大するか、または臨床症状を予防もしくは軽減する量である。
【０３１６】
本発明の免疫学的組成物は、抗生物質処置レジメンと組み合わせて投与されてもよい。一実施形態では、抗生物質は、本発明の１つ以上のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（またはその抗原をコードする核酸分子）の投与の前に投与される。
【０３１７】
別の実施形態では、この抗生物質は、本発明のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原の投与に続いて投与される。連鎖球菌の感染の処置における使用に適切な抗生物質の例としては限定するものではないが、ペニシリン、またはその誘導体、またはクリンダマイシン、セファロスポリン、グリコペプチド（例えば、バンコマイシン）、およびサイクロセリンが挙げられる。
【０３１８】
しかし、組成物中の活性因子の量は、処置されるべき個体の健康および身体的状態、処置されるべき個体の年齢、分類学的群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類、など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の保護の程度、ワクチンの処方、医学的状況の処置医による評価、および他の関連の要因に依存して変化する。この量は、慣用的な試験を通じて決定され得る比較的広範囲におさまる。
【０３１９】
（キット）
本発明はまた、本発明の組成物の１つ以上の容器を含むキットを提供する。組成物は、個々の抗原が可能である場合、液体型であってもよいし、または凍結乾燥されてもよい。組成物に適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジおよび試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックを含めて種々の材料から形成され得る。容器は、無菌のアクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針で刺すことが可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。
【０３２０】
キットはさらに、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、またはデキストロース溶液を含む第二の容器を備え得る。このキットはまた、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、およびシリンジを含めて、エンドユーザーに有用な他の材料を含んでもよい。このキットはまた、別の活性因子、例えば、抗生物質を有する第二または第三の容器を含んでもよい。
【０３２１】
このキットはまた、連鎖球菌の細菌に対する免疫を誘導する方法について、またはグラム陽性細菌の（例えば、連鎖球菌のおよび／またはブドウ球菌の）感染を処置するための書面の説明を含む添付文書を備えてもよい。この添付文書は、承認されていない草案の添付文書であってもよいし、または食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ））または他の管理当局によって承認された添付文書であってもよい。
【０３２２】
本開示に引用される、全ての特許、特許出願、および引用文献は、参照によって本明細書に明確に援用される。上記の開示は概して、本発明を記載する。以下の特定の実施例を参照することによってさらに完全な理解を得ることが可能であり、この実施例は、例示の目的で提供するだけであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０３２３】
（実施例１）
（Ｃｎａ＿Ｂドメインの免疫原性）
ＧＡＳタンパク質Ｃｐａ＿Ｍ１８のＣｎａ＿Ｂドメインを、隣接するドメイン（Ｆｂ−シグナル）と一緒にＰＥＴ２１ｂベクター中にクローニングした。図１Ａ〜図１Ｂを参照のこと。Ｈｉｓ−タグ組み換えタンパク質を、活性化キレートセファロース高速流カラムを用いて精製した。図２を参照のこと。
【０３２４】
クローニングされたＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインに対する抗血清を、各々２０μｇの組み換えＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂタンパク質を用いて３回、１０ＣＤ１雌性マウスを免疫することによって得た。次にＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂ血清を、Ｃｎａ＿Ｂドメインを含んでいる種々のヒト病原体由来の種々の精製Ｈｉｓタグ組み換えタンパク質に対するウエスタンブロット実験によって調べた。結果を図３Ａ〜図３Ｄに示す。これらの実験によって、Ｃｎａ＿Ｂドメインが免疫原性であること、およびこれに対して惹起された抗血清がＧＡＳ＿ＣｐａおよびＦ２タンパク質、ならびにＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅおよびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの線毛成分（防御抗原であることが報告されている）を認識することが示される（Ｍａｉｏｎｅら、２００５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９，１４８〜１５０；Ｒｏｓｉｎｉら、２００６  Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏ．６１，１２６〜１４１およびＧｉａｎｆａｌｄｏｎｉら、２００７，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７５，１０５９〜１０６２）。実施例５は、血清中の抗体がＨｉｓタグと反応した可能性に取り組むように設計した実験を報告する；図２０も参照のこと。
【０３２５】
Ｃｎａ＿Ｂ抗血清の反応性を、ウエスタンブロットを用いてｃｐａ＿Ｍ１８タンパク質について特異的な抗血清の反応性と比較した。結果を図４Ａ〜図４Ｂに示す。試験した全てのタンパク質とのより高い反応性をＣｎａ＿Ｂ抗血清について観察した。詳細には、試験した全てのＧＢＳ＿５９の改変体（ＳＡＬ  １４８６）が、抗Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ血清によって検出されたが、抗Ｃｐａ＿Ｍ１８血清によって検出された改変体は１つだけであった。
【０３２６】
（実施例２）
（オプソニン食作用アッセイ）
特定の血清および分化したＨＬ−６０細胞を用いるＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ＧＢＳ）のオプソニン食作用性の殺傷を、インビトロで検討して、組み換えＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインが防御抗体を惹起するか否かを試験した。ＧＢＳを、５ｍｌのＴｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈ（ＴＨＢ）中で指数関数中期まで増殖させ（ＯＤ６００＝０．３）、次いで３０００×ｇで、４℃で１０分間遠心分離し、ＰＢＳ１×で洗浄し、ＯＰ緩衝液（ＨＢＳＳ，０．１％ゼラチン、１０％ウシ胎仔血清）中で懸濁し、約２×１０７ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度に希釈した。ＧＢＳ細胞（約２×１０５ＣＦＵ）を、冷却した９６ウェルマイクロタイタープレートのウェル上で、熱不活化マウス血清（反応物中の最終濃度１：１０）と混合し、次いで、分化したＨＬ６０（１〜２×１０６細胞）および仔ウサギ補体（ｂａｂｙ  ｒａｂｂｉｔ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）を、ＧＢＳ細胞に氷上で添加した（最終反応容積１２５μｌ）。この混合物を３７℃で６０分間インキュベートし、４００〜５００×ｇで混合した。インキュベーション期間の終わりに氷にサンプルを戻すことによって食作用を終わらせた。インキュベーションの直前（時間０）および１時間後（時間１時間）、２５μｌのアリコートを、滅菌蒸留水中に希釈し（２５μｌのサンプル＋２２５μｌの水、次いで１：１０および１：１００）、５％ヒツジ血液を含むトリプシンダイズ寒天（Ｔｒｙｐｔｉｃ  ｓｏｙ  ａｇａｒ）プレートにまいた。そのプレートを３７℃で一晩インキュベートした。
【０３２７】
結果を図５に示す。ＧＡＳ＿Ｍ１８＿Ｃｎａ＿Ｂ＿Ｆｂ血清は、ＧＢＳ株５１５（これは、ピリン（ｐｉｌｉｎ）タンパク質ＳＡＬ  １４８２、ＳＡＬ  １４８６およびＳＡＬ
１４８７中でＣｎａ＿Ｂドメインを発現する）およびＪＭ１００９８株（これは、防御的ピリンＳＡＮ  １５１８およびＳＡＮ  １５１９を発現した）の殺傷を媒介する。
【０３２８】
さらなるオプソニン食作用実験によって、ＧＡＳ＿Ｍ１８＿ｃｐａ（Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインを含んでいるタンパク質全体）が、同様に細菌を殺傷できるということが指摘され、このことはＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインに対して惹起された抗体が、実際に細菌殺傷を担うということを示唆している。
【０３２９】
Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ＧＡＳ）についての適切なオプソニン食作用系がない場合、線毛を欠くＧＢＳの変異体株であるＲ１３、ならびにＧＡＳ線毛Ｍ１およびＧＡＳ線毛Ｍ６を補完された同じＧＢＳ  Ｒ１３株をオプソニン食作用実験で試験した。結果を図６に示す。これらの実験では、ＧＡＳ＿Ｍ１８＿Ｃｎａ＿Ｂ＿Ｆｂ抗血清が、ＧＡＳ線毛Ｍ１を発現するＧＢＳ  Ｒ１３株の殺傷を媒介し、そして線毛Ｍ６を発現するＧＢＳ  Ｒ１３株の殺傷を低い程度に媒介することが示される。
【０３３０】
Ｆｂ−シグナルドメインは、ＧＡＳ  Ｃｐａタンパク質にのみ存在し、抗体媒介性の殺傷が示されたＧＢＳピリンでは存在しないので、本発明者らは、実施例１で試験した全てのタンパク質に存在するＣｎａ＿Ｂドメインに集中した。これらのタンパク質のアミノ酸配列をアラインメントして、それらのＣｎａ＿Ｂドメインのアミノ酸配列を比較した（図７〜図１３）。これらのアラインメントによって、コンセンサス配列ＧＸＹＸＬＸＥＸＸＸＸＸＧＹ（配列番号７４）を有する、本明細書で「Ｇボックス」と名付けられた、保存された領域が特定された。
【０３３１】
（実施例３）
（ＧＢＳチャレンジ後のＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂ免疫マウスの生存）
３０匹のＣＤ１雌性マウスを、実施例１に記載のように調製したＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ
Ｓｐｙ＿Ｍ１８＿０１２６タンパク質の組み換えＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインを用いて、１、２０および３４日目に免疫した。１０匹のマウスに、２０μｇの組み換えタンパク質が含有される１００μｌの＿ＰＢＳ＋１００μｌのフロイント不完全アジュバントをＩＰ注射した。陽性コントロールとして、５匹のマウスに、２０μｇのＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＧＢＳ５９（ＳＡＬ＿１４８６）タンパク質が含有される１００μｌのＰＢＳ＋１００μｌのフロイント不完全アジュバントを注射し、および５匹のマウスに２０μｇのＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＧＢＳ  １５２３（ＳＡＮ  １５１８）タンパク質が含有される１００μｌのＰＢＳ＋１００μｌのフロイント不完全アジュバントを注射した。陰性コントロールとして、１０匹のマウスにＰＢＳに加えてフロイント不完全アジュバントを注射した。
【０３３２】
マウスを３回目の注射後に交配して、新生児にＧＢＳ株Ａ９０９またはＧＢＳ株５１５のいずれかの致死用量をチャレンジした。Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂで免疫した母由来の８０匹の新生児およびＰＢＳでの８０匹、ならびにＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＧＢＳ５９（ＳＡＬ＿１４８６）またはＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ  ＧＢＳ１５２３（ＳＡＮ  １５１８）で免疫した母由来の各々４０匹の新生児をチャレンジした。新生児の生存を４日間モニターした。Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインで免疫した新生児についての生存率は、それぞれＡ９０９株および５１５株でのチャレンジ後に４２％および４４％であった。その結果を下の表３８に示す。
【０３３３】
【表３８】
2015193659.tif 000107
同様の実験の結果を図２４に示す。
【０３３４】
（実施例４）
（ＥＬＩＳＡアッセイ）
ＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８血清中の特異的抗Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗体の評価は、ＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８タンパク質およびＣｎａ＿Ｂドメインの両方をコーティングすることによって行い、これは、ＥＬＩＳＡ実験においてＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８血清の連続希釈によって連続的にチャレンジした（表３９および４０）。ＯＤ５４０＝１に相当する希釈は、各々のタンパク質についてのＥＬＩＳＡ力価を示した（表４０）。図１９は、ＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８についてＹ＝１（ＯＤ５４０）である場合、ＥＬＩＳＡ力価が６２７．８１４であったことを示す。同様に、コーティングしたＣｎａ＿Ｂドメインをチャレンジした場合、ＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８についてＹ＝１（ＯＤ５４０）である場合、ＥＬＩＳＡの力価は３１８．０６１となった。この実験によって、ＧＡＳ＿Ｃｐａ＿Ｍ１８タンパク質血清に含まれる抗体の約半分がＣｎａ＿Ｂドメインに特異的であることが示された。
【０３３５】
【表３９】
2015193659.tif 000108
【０３３６】
【表４０】
2015193659.tif 000109
（実施例５）
（ＧＡＳ  Ｃｎａ＿Ｂ＿Ｆｂドメイン血清とＧＡＳおよびＧＢＳ株との交差反応性のＦＡＣＳ分析）
本実施例は、ＧＡＳ  Ｃｎａ＿Ｂ＿Ｆｂドメイン抗血清がＧＡＳおよびＧＢＳの両株と交差反応することを示す。
【０３３７】
クローニングされたＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂドメインに対する抗血清およびＣｎａ＿Ｂドメイン（「Ｃｎａ＿Ｂ＿Ｍ６」；配列番号１４５）のみに対する抗血清は、各々２０μｇの組み換えＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂタンパク質または２０μｇの組み換えＭ６＿Ｃｎａ＿ＢドメインでＣＤ１雌性マウスを３回免疫することによって得た。
【０３３８】
種々のＧＡＳおよびＧＢＳ株に対する交差ハイブリダイゼーション特異性は、蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）を用いて確認した。８０チャネルの閾値を陽性シフトと指定した；１５０チャネルを、極めて陽性のシフトと指定した。
【０３３９】
結果は表４１に示す。図１８も参照のこと。
【０３４０】
【表４１】
2015193659.tif 000110
（実施例６）
（腹腔内免疫後の皮下感染からのインビボ防御）
本実施例は、種々のＣｎａ＿Ｂドメイン抗原で腹腔内免疫したマウスが、ＧＡＳ皮下感染モデルで皮膚病変面積の減少を示すことを示す。
【０３４１】
マウスは、２０μｇのＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂ＿Ｍ１８ドメインを用いて、１、２１および３５日目に３回腹腔内に免疫し、３回目の免疫の２週後に、１０９ｃｆｕのＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ株ＳＦ３７０＿Ｍ１の皮下注射によってチャレンジした。病変面積は、ＱＵＡＮＴＩＴＹ  ＯＮＥ（登録商標）方法（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて病変の写真で画素数を評価することによって測定した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を、陰性コントロールとして用い、Ｍ１タンパク質（「ｅｍｍ−１」）を陽性コントロールとして用いた。ＧＡＳ  Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原「Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ＿Ｍ１８」での免疫の結果を、図２１および図２５に示す。ＧＢＳキメラＣｎａ＿Ｂドメイン抗原での免疫の結果を図２５に示す。キメラＧＢＳ  Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原は、実施例８に記載される「ＧＢＳ＿５９（５１５）−リンカー−ＧＢＳ＿６７」（配列番号１２９）であった。
【０３４２】
（実施例７）
（腹腔内免疫後のＳ．ａｕｒｅｕｓチャレンジからのインビボ防御）
本実施例は、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原での腹腔内免疫がマウス腎膿瘍モデルにおけるＳ．ａｕｒｅｕｓコロニー形成に対して防御することを示す。
【０３４３】
マウス（各々の実験について１０匹のマウス）をＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ＿Ｍ１８；２０μｇ／マウス）を用いるか、または種々のＳ．ａｕｒｅｕｓ抗原を用いて、以下のスケジュールで免疫した：０日目、最初の免疫、および１４日目、第二の免疫。チャレンジは２４日目に行った。免疫は、腹腔内に行った。免疫した動物は、２４日目にＳ．ａｕｒｅｕｓ  Ｎｅｗｍａｎ株の細菌懸濁物の静脈内注射によってチャレンジした。Ｎｅｗｍａｎ株の培養物を、遠心分離し、２回洗浄し、ＰＢＳ中に希釈した後にチャレンジした。２８日目に、マウスを安楽死させた。腎臓を取り出して、１％のＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００中にホモジナイズして、アリコートを希釈して、ＣＦＵを三連で決定するために寒天培地上にまいた。ＰＢＳは、陰性コントロールとして用いた。結果を図２２に示す（「Ｃｎａ＿Ｂ」はＣｎａ＿Ｂ−Ｆｂ＿Ｍ１８である）。
【０３４４】
（実施例８）
（キメラＣｎａ＿Ｂドメイン抗原のクローニングおよび発現）
以下のキメラＣｎａ＿Ｂドメイン抗原をクローニングして、ＧＢＳ５９−Ｃｎａ＿Ｂを第一のドメインとしてその溶解度の高さに起因して用い、ｐＥＴ１５発現ベクター中で発現させた。
【０３４５】
下に示す配列番号１２７は、ＧＢＳ株５１５由来のＳＡＬ  １４８６のＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ５９」）、リンカー配列およびＧＢＳ株２６０３Ｖ／Ｒ由来のＳＡＧ  ０６４５のＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ８０」）を含んでいる、Ｈｉｓ−タグＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（「ＧＢＳ＿５９（５１５）−リンカー−ＧＢＳ＿８０」；配列番号１４０）のアミノ酸配列である。キメラ配列から上流の６つのヒスチジン残基は太字である。アミノ酸リンカー配列は太字である。下線のアミノ酸を追加して、タンパク質のフォールディングを促進した。
【０３４６】
【化２５】
2015193659.tif 000111
下に示す配列番号１２８は、ＧＢＳ株５１５由来のＳＡＬ  １４８６のＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ５９」）、リンカー配列およびＧＢＳ株ＣＯＨ１由来のＳＡＮ  １５１８のＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ１５２３」）を含んでいる、Ｈｉｓ−タグＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（「ＧＢＳ＿５９（５１５）−リンカー−ＧＢＳ＿１５２３」；配列番号１４１）のアミノ酸配列である。キメラ配列から上流の６つのヒスチジン残基は太字である。アミノ酸リンカー配列は太字である。下線のアミノ酸を追加して、タンパク質のフォールディングを促進した。
【０３４７】
【化２６】
2015193659.tif 000112
下に示す配列番号１２９は、ＧＢＳ株５１５由来のＳＡＬ  １４８６のＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ５９」）、リンカー配列およびＧＢＳ株５１５由来のＳＡＬ  １４８７の２つのＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ６７」）（第２のドメインはイタリック体である）を含んでいる、Ｈｉｓ−タグＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（「ＧＢＳ＿５９（５１５）−リンカー−ＧＢＳ＿６７」；配列番号１４２）のアミノ酸配列である。キメラ配列から上流の６つのヒスチジン残基は太字である。アミノ酸リンカー配列は太字である。下線のアミノ酸を追加して、タンパク質のフォールディングを促進した。
【０３４８】
【化２７】
2015193659.tif 000113
下に示す配列番号１３０は、ＧＢＳ株５１５由来のＳＡＬ  １４８６のＣｎａ＿Ｂドメイン（「ＧＢＳ５９」）、ＧＢＳ株２６０３Ｖ／Ｒ由来のＳＡＧ  ０６４５のＣｎａ＿Ｂドメイン、リンカー配列、ＧＢＳ株ＣＯＨ１由来のＳＡＮ  １５１８のＣｎａ＿Ｂドメイン、および別のリンカー配列を含んでいる、Ｈｉｓ−タグＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（「ＧＢＳ＿５９（５１５）−ＧＢＳ＿８０−リンカー−ＧＢＳ＿１５２３−リンカー」；配列番号１４３）のアミノ酸配列である。キメラ配列から上流の６つのヒスチジン残基は太字である。アミノ酸リンカー配列は太字である。下線のアミノ酸を追加して、タンパク質のフォールディングを促進した。
【０３４９】
【化２８】
2015193659.tif 000114
【０３５０】
【化２９】
2015193659.tif 000115
下に示す配列番号１３１は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＳｄｒＤタンパク質のＣｎａ＿Ｂドメインを含んでおり、かつＳｄｒＤタンパク質に自然に存在する「リンカー」アミノ酸（太字）を含んでいるＨｉｓ−タグＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（「ＳＡ  Ｃｎａ＿Ｂ−ＳｄｒＤ」；配列番号１４４）のアミノ酸配列である。キメラ配列から上流の６つのヒスチジン残基は太字である。
【０３５１】
【化３０】
2015193659.tif 000116
（実施例９）
（Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原での腹腔内免疫は、マウス腎膿瘍モデルにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓコロニー形成に対して防御する）
本実施例は、Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原での腹腔内免疫が、マウス腎膿瘍モデルにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓコロニー形成に対して防御することを示す。
【０３５２】
マウス（各実験について１０匹のマウス）を以下のスケジュールでＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（Ｃｎａ＿Ｂ−Ｆｂ＿Ｍ１８；２０μｇ／マウス）で免疫した：最初の免疫は０日目、および第二の免疫は１４日目。チャレンジは、２４日目に行った。免疫は、腹腔内で行った。免疫した動物は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｎｅｗｍａｎ株の細菌懸濁物の静脈内注射によって２４日目にチャレンジした。Ｎｅｗｍａｎ株の培養物を遠心分離して、２回洗浄し、ＰＢＳ中に希釈した後にチャレンジした。２８日目に、マウスを安楽死させた。腎臓を取り出して、１％のＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００中にホモジナイズして、アリコートを希釈して、ＣＦＵを三連で決定するために寒天培地上にまいた。ブドウ球菌タンパク質ＩｓｄＢを陽性コントロールとして用い、ミョウバンを陰性コントロールとして用いた。Ｃｎａ＿Ｂドメイン抗原で免疫したマウスは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓのチャレンジ後に腎臓のコロニー形成率の低下を示した。結果を図２３に示す。
【０３５３】
（実施例１０）
（Ｃｎａ＿Ｂ＿ＳｄｒＤは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染に対して敗血症マウスモデルにおいて防御をもたらす）
本実施例は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓタンパク質ＳｄｒＤ（図２６Ａ，Ｂ）のＣｎａ＿Ｂドメイン（配列番号１３４〜１３８）を含んでいるＣｎａ＿Ｂドメイン抗原（図２７；配列番号１３２）が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染に対して敗血症マウスモデルで防御を付与することを示す。
【０３５４】
各１４匹のマウスの群をＣｎａ＿Ｂ  ＳｄｒＤ  抗原（２０μｇ／マウス、ミョウバン中）またはポアを形成できないＳ．ａｕｒｅｕｓのα−ヘモリシンの変異型（２０μｇ／マウス、ミョウバン中）（ＨｌａＨ３５Ｌ；例えば、Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ  ＆  Ｓｃｈｎｅｅｗｉｎｄ，「Ｖａｃｃｉｎｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｓｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ，」Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００８
Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １８；２０５（２）：２８７〜２９４を参照のこと）を用いて免疫した。コントロールのマウスにはミョウバンを注射した。
【０３５５】
マウスは、以下のスケジュールで免疫した：０日目に最初の免疫および１４日目に第二の免疫。チャレンジは２４日目に行った。免疫は、腹腔内で行った。免疫した動物を、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＵＳＡ３００の細菌懸濁物の腹腔内注射によって２４日目にチャレンジした。ＵＳＡ３００の株の培養物を遠心分離して、２回洗浄し、ＰＢＳ中に希釈した後にチャレンジした。マウスを１４日間毎日モニタリングして、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ｐｏｌｉｃｉｅｓに従って、人道的なエンドポイントの出現で安楽死させた。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＵＳＡ３００でのチャレンジ２週間後の生存パーセント
を図２８に示す。これらの結果、Ｃｎａ＿Ｂ＿ＳｄｒＤでの免疫は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓチャレンジに対して高い防御を付与することが示され、これによってこのドメインは潜在的に極めて良好なワクチン候補物として示唆される。
【０３５６】
【表４２−１】
2015193659.tif 000117
【０３５７】
【表４２−２】
2015193659.tif 000118
【０３５８】
【表４２−３】
2015193659.tif 000119
【０３５９】
【表４２−４】
2015193659.tif 000120
【０３６０】
【表４２−５】
2015193659.tif 000121
【０３６１】
【表４２−６】
2015193659.tif 000122
【０３６２】
【表４２−７】
2015193659.tif 000123
【図１】
2015193659.tif 000124
【図２】
2015193659.tif 000125
【図４】
2015193659.tif 000126
【図５】
2015193659.tif 000127
【図６】
2015193659.tif 000128
【図１０】
2015193659.tif 000129
【図１１】
2015193659.tif 000130
【図１２】
2015193659.tif 000131
【図１３】
2015193659.tif 000132
【図１４】
2015193659.tif 000133
【図１５】
2015193659.tif 000134
【図１６】
2015193659.tif 000135
【図１８】
2015193659.tif 000136
【図１９】
2015193659.tif 000137
【図２０】
2015193659.tif 000138
【図２１】
2015193659.tif 000139
【図２２】
2015193659.tif 000140
【図２３】
2015193659.tif 000141
【図２４】
2015193659.tif 000142
【図２５】
2015193659.tif 000143
【図２６Ａ】
2015193659.tif 000144
【図２６Ｂ】
2015193659.tif 000145
【図２７】
2015193659.tif 000146
【図２８】
2015193659.tif 000147
【図３】
2015193659.tif 000148
【図７】
2015193659.tif 000149
【図８】
2015193659.tif 000150
【図９】
2015193659.tif 000151
【図１７】
2015193659.tif 000152
【配列表】
2015193659000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成27年7月30日(2015.7.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
抗体は、これが、免疫化学アッセイで用いられる場合、他のタンパク質によって提供される検出シグナルよりも少なくとも５倍、１０倍、または２０倍高い検出シグナルを提供する場合、本発明によるＣｎａ＿Ｂドメインに対して特異的に結合する。好ましくは、Ｃｎａ＿Ｂドメインに特異的に結合する抗体は、溶液からＣｎａ＿Ｂドメイン抗原を免疫沈降し得る。いくつかの実施形態では、Ｃｎａ＿Ｂドメインに特異的に結合する抗体は、少なくとも３０％（例えば、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００％）のＧＢＳ株５１５のオプソニン食作用を誘導する。
【外国語明細書】
2015193659000001.pdf