(57)【要約】【課題】細胞培養容器の収容部において培養液中の気泡が、培養液面の縁部に集まるようにする。【解決手段】本発明の細胞培養容器１００は、底部１０と周壁部２０とを備え内部に収容空間３０が形成され上方に開口した収容部４０を有し、前記収容部４０の周壁面２１は底面１１から開口４１に向かって収容空間３０が広がるように形成されており、周壁面２１は、底面１１から開口４１に進むに従って、階段状に立ち上がったＮ個（Ｎは３以上）の段付き部２２ｎを少なくとも備えることを特徴とする。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
底部と前記底部の周縁に立設した周壁部とを備え、内部に細胞及び培養液を収容するための収容空間が形成され上方に開口した収容部を備える細胞培養容器であって、
前記周壁部の表面のうち前記収容空間を囲う周壁面は、前記収容部の底面から開口に向かって前記収容空間が広がるように形成されており、
前記周壁面は、前記収容部の底面から開口に進むに従って、階段状に立ち上がったＮ個の段付き部を少なくとも備え、
Ｎは３以上の整数であり、
前記各段付き部は、前記収容部の底面から開口に向かう方向に延びる内側面と、前記内側面に連続すると共に前記底部の中央から周縁に向かう方向に延びる上面とを有することを特徴とする細胞培養容器。
【請求項２】
前記各段付き部において、
前記上面の、前記底部の中央から周縁に向かう方向の幅が０．１〜２．０ｍｍである、
請求項１の細胞培養容器。
【請求項３】
前記各段付き部は、前記内側面と前記上面とが交差した稜線を有しており、
前記Ｎ個の段付き部を、前記収容部の底面に最も近いものから順に、第１段付き部から第Ｎ段付き部までとし、
ｎを１以上、Ｎ−１以下の整数とし、
隣接する第ｎ段付き部と第ｎ＋１段付き部の稜線同士を最短距離で結ぶ仮想線と、前記収容部の底面とのなす傾斜角をθ（ｎ）としたとき、
θ（１）は７５°以下であり、
θ（Ｎ−１）はθ（１）よりも小さく、且つ
ｎが１〜Ｎ−２の整数である範囲内ではθ（ｎ＋１）がθ（ｎ）以下である
請求項１又は２の細胞培養容器。
【請求項４】
前記収容部の底面と周壁面とが、水接触角が４０°以上の面である、請求項１〜３のいずれか１項の細胞培養容器。
【請求項５】
前記収容部の底面に、細胞の位置決めをするための窪みが形成されている、請求項１〜４のいずれか１項の細胞培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロドロップ法などの少量の培養液中での細胞培養に適した細胞培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
培養系で精子と卵子とを体外受精させて受精卵（接合子）を作製して、さらに受精卵を卵割、桑実胚、胚盤胞の段階を経て、透明帯から孵化した脱出胚盤胞の段階まで培養することが可能となり、この卵割から胚盤胞の段階にある受精卵を子宮に移植して産子を得る補助的生殖技術（ＡＲＴ）が、家畜領域のみならずヒトの不妊医療でも確立されている。
【０００３】
体外受精においては、容器中に培養液のドロップを作り、この中に受精卵を入れて体外培養するマイクロドロップ法が用いられることが多い。従来、このマイクロドロップ法には、細胞培養容器として、底面が単一平面であり、直径が３０〜６０ｍｍのシャーレが使用され、シャーレの底面に、培養液のドロップを、間隔をあけて複数個作製する方法が使用されてきた。
【０００４】
この培養液ドロップの作製については、定められた手段は確立されておらず、培養液の使用量も各クリニックや病院の経験に基づき、多様な培養液量が用いられている。そのため、用いられている培養液量の範囲は、数十μｌ〜数百μｌとかなりの幅がある。しかし、そのような多様な培養液量にそれぞれ対応する細胞培養容器を準備するのはコストの点で問題があり、通常のシャーレで多様な大きさのドロップを作成しているのが現状である。
【０００５】
一方、通常のシャーレでドロップを作成するとドロップ形成位置が定まらず、振動等でドロップがずれてしまうといった問題があった。ドロップがずれてしまうと、その中で培養して観察していた受精卵の特定が難しくなるという問題があった。また、複数のドロップが合流してしまうと、さらに受精卵の特定が難しくなるという問題があった。したがって、ドロップの位置が制御でき、受精卵培養作業時や培養時の振動による影響を抑制できる手段が求められていた。
【０００６】
例えば、特許文献１には、マイクロドロップ法のように少量の培養液中での細胞培養を目的とした使用方法においても、収容区画内を底部下方から顕微鏡観察が可能であり、容器内部を無駄なく区画して使用できる細胞培養容器として、収容区画の壁面を底面の鉛直方向に対して傾斜した状態で配置し、さらに収容区画を小容量に設計した細胞培養容器が記載されている。しかし、この容器では、培養液の最小使用量と想定される１０μｌの容量に対応するように収容区画を設計した場合、１００μｌ〜２００μｌ等のより大容量に対応するには収容区画の側壁をかなりの高さにする必要があり、作業性に悪影響を与えてしまう。また、５０μｌ程度を上限とした設計とすると、より大容量の培養液を収容しようとすると収容区画から溢れてしまうという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第４６６５５８９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記問題を解決する手段として、細胞及び培養液を収容する区画（以下、収容部と称する）の周壁部の表面のうち、収容部内空間を囲う周壁面を、収容部の内部空間が底面から開口に向かって広がるように傾斜させることが考えられる（図４）。しかし、周壁面をこのように傾斜させた場合、周壁面が垂直な場合と比較して、収容部内に収容された培養液の液面が中央部で高く外縁部で低い。この傾向は周壁面を水接触角の大きい（すなわち親水性の低い）表面とした場合に特に顕著である。
【０００９】
培養液に気泡が含まれることがあるが、培養液液面の中央部が高い場合には培養液中に浮遊した気泡は中央部の液面付近に集まる。液面中央部に気泡が集まると、底面に配置した細胞の観察が困難である。
【００１０】
上記の通り、収容部の周壁面を、収容部の内部空間が底面から開口に向かって広がるように傾斜させた場合に、収容部に収容された培養液の液面の中央部が盛り上がり、気泡が集中しやすいという課題が存在する。本発明は当該課題を解決することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決する手段として、本発明では以下の発明を細胞培養容器する。すなわち、本発明の細胞培養容器は、底部と前記底部の周縁に立設した周壁部とを備え、内部に細胞及び培養液を収容するための収容空間が形成され上方に開口した収容部を備え、
前記周壁部の表面のうち前記収容空間を囲う周壁面は、前記収容部の底面から開口に向かって前記収容空間が広がるように形成されており、
前記周壁面は、前記収容部の底面から開口に進むに従って、階段状に立ち上がったＮ個の段付き部を少なくとも備え、
Ｎは３以上の整数であり、
前記各段付き部は、前記収容部の底面から開口に向かう方向に延びる内側面と、前記内側面に連続すると共に前記底部の中央から周縁に向かう方向に延びる上面とを有することを特徴とする。
【００１２】
前記特徴を備える細胞培養容器の収容部に培養液を収容するとき、培養液の液面は、周壁面に形成された段付き部の内側面に接する縁において高くなる。このため、培養液中の気泡は液面の縁が段付き部の内側面と接する部分に集まり易く、液面の中央部に集中し難いため、細胞の観察が容易となる。
【００１３】
本発明の好適な形態では、各段付き部において、前記上面の、前記底部の中央から周縁に向かう方向の幅が０．１〜２．０ｍｍである。
【００１４】
収容部に収容される培養液の液量に応じて培養液の液面の縁は段付き部の上面又は内側面と接するが、各段付き部の上面の幅が前記範囲内にあれば、培養液の液面の縁は、大部分の液量の範囲において段付き部の内側面と接することができるため、本発明の効果（液面の縁が段付き部の内側面と接することにより液面の高さが他の部分より高くなる効果）を実現することができる。
【００１５】
本発明の他の好適な形態では、前記各段付き部は、前記内側面と前記上面とが交差した稜線を有しており、
前記Ｎ個の段付き部を、前記収容部の底面に最も近いものから順に、第１段付き部から第Ｎ段付き部までとし、
ｎを１以上、Ｎ−１以下の整数とし、
隣接する第ｎ段付き部と第ｎ＋１段付き部の稜線同士を最短距離で結ぶ仮想線と、前記収容部の底面とのなす傾斜角をθ（ｎ）としたとき、
θ（１）は７５°以下であり、
θ（Ｎ−１）はθ（１）よりも小さく、且つ
ｎが１〜Ｎ−２の整数である範囲内ではθ（ｎ＋１）がθ（ｎ）以下である。
【００１６】
本発明のこの形態では、周壁面の傾斜が、底部から開口に向かうに従ってなだらかになるため、底部から開口に向かうに従って単位高さあたりに収容できる培養液量が急激に増える。このため、幅広い培養液量の培養に対応可能である。
【００１７】
本発明の他の好適な形態では、前記収容部の底面と周壁面とが、水接触角が４０°以上の面である。
【００１８】
本発明のこの形態では、収容部の底面及び周壁面が水溶液である培養液によって濡れにくいため、培養液が収容部内で移動しやすく収容部の底面に集まり易い。
【００１９】
本発明の他の好適な形態では、前記収容部の底面に、細胞の位置決めをするための窪みが形成されている。
【００２０】
本発明のこの形態では、細胞の移動を抑制することができ、細胞をそれぞれ特定した状態で観察、評価、判定が可能である。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の細胞培養容器では、収容部に収容された培養液の液面は、階段状の段付き部が形成された周壁面に接する部分で高くなるため、培養液中の気泡がこの部分に集中しやすく、液面中央部での細胞の観察が容易である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１（ａ）は本発明の細胞培養容器の一実施形態の平面図である。図１（ｂ）は図１（ａ）に示した本発明の細胞培養容器のＡ−Ａ’断面図である。
【図２】図２は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための断面図である。
【図３】図３は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部による効果を説明するための断面図である。
【図４】図４は、収容部の周壁面が段付き部を有していない細胞培養容器に培養液を加えた場合の状態を説明するための断面図である。
【図５】図５は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための断面図である。
【図６】図６は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための断面図である。
【図７】図７は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための平面図である。
【図８】図８は、図７の平面図により示す細胞培養容器のＸ−Ｘ’断面図である。
【図９】図９は、図７の平面図により示す細胞培養容器のＹ−Ｙ’断面図である。
【図１０】図１０は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための断面図である。
【図１１】図１１は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための断面図である。
【図１２】図１２は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための断面図である。
【図１３】図１３は本発明の細胞培養容器の一実施形態における収容部の構成を説明するための平面図である。
【図１４】図１４は、図１３の平面図により示す細胞培養容器のＸ−Ｘ’断面図である。
【図１５】図１５は、図１３の平面図により示す細胞培養容器のＹ−Ｙ’断面図である。
【図１６】図１６（ａ）は本発明の細胞培養容器の一実施形態の平面図である。図１６（ｂ）は図１６（ａ）に示した本発明の細胞培養容器のＢ−Ｂ’断面図である。
【図１７】図１７（ａ）は、本発明の細胞培養容器を用いた場合に、培養液Ｄの液面ＤＳの縁が段付き部２２ｎの内側面２３ｎと接する部分を鉛直方向の平面に沿って切った端面の模式図である。図１７（ｂ）は、図４に示す細胞培養容器を用いた場合に、培養液Ｄの液面ＤＳの縁が周壁部１２０の周壁面１２１と接する部分を鉛直方向の平面に沿って切った端面の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の細胞培養容器を、図面に示す実施形態を参照して説明するが、本発明の範囲はこれらの実施形態には限定されない。なお、本明細書の図面では各構成の寸法及び形状に関わらず同じ機能を有する構成は同じ符号を付しており、特段の相違点を除き説明を省略する。
【００２４】
図１に、本発明の細胞培養容器の一例である細胞培養容器１００を示す。
細胞培養容器１００は、底部１０と底部１０の周縁に立設した周壁部２０とを備え、内部に細胞及び培養液を収容するための収容空間３０が形成され上方に開口した収容部４０を備える。
【００２５】
なお、本発明において「上下方向」とは、収容部の底面に垂直な方向を指す。そして本発明において、上下方向に沿って収容部の底面から開口に向かう方向を上方、上下方向に沿って収容部の開口から底面に向かう方向を下方とする。また本発明において、特に断りのない限り、ある部位の「高さ」とは、該部位の上下方向位置を、収容部の底面を原点とし、収容部の底面よりも上方をプラス、収容部の底面よりも下方をマイナスとして、収容部の底面から該部位までの上下方向に沿った距離を表示したものである。
【００２６】
細胞培養容器１００は好ましくは図示するように上方に開口しており、収容部４０はその底部に設けられる。収容部４０を備える細胞培養容器１００の例としては、図１に示すように、周壁部２０の外縁から下方に延びる、収容部４０の周囲を囲う内壁部６０と、内壁部６０の下端から外方に張り出す外縁底部７０と、外縁底部７０の外縁から上方に延び、細胞培養容器１００の周囲を囲う外壁部５０とを備える例が挙げられる。図示するように、外縁底部７０の上面７１と、底部１０の上面１１（収容部４０の底面）とは、平行であり且つ同一平面上にあることが好ましいがこれには限定されない。収容部４０における周壁部２０の外縁と、外壁部５０とを接続する方式は特に限定されない。例えば、周壁部２０の外縁と外壁部５０の下端とが、周壁部２０の外縁から外方に張り出し外壁部５０の下端に接続する鍔部（図示せず）により接続されていてもよい。該鍔部の上面は、底部１０の上面１１と平行であってもよいし、上面１１に対し、周壁部２０の外縁から外壁部５０の下端に進むに従って高さが増す又は高さが減じるように傾斜していてもよい。
【００２７】
１つの細胞培養容器１００に含まれる収容部４０の個数は図示した例では１のみであるが、２以上、例えば２〜４であってもよい。
【００２８】
外壁部５０の開口端である上端の内周側輪郭を、底面１１に垂直な方向から平面視したときの図形の形状は、例えば円状（円形および楕円形を含む）等の任意の形状であることができ、好ましくは円形であり、その開口幅（前記図形において、該図形の重心を間に介して対向する、該図形の周縁上の一対の点の間の距離の最大値）は好ましくは３０〜６０ｍｍである。
【００２９】
次に、図２を参照し収容部４０の特徴について詳述する。
収容部４０において、周壁部２０の表面のうち収容空間３０を囲う周壁面２１は、底面１１から開口４１に向かって、収容空間３０が広がるように形成されている。このように構成することで、収容空間３０に培養液Ｄ（図３）を入れたとき、培養液Ｄのドロップを底面１１の付近で安定して形成することが可能であり、振動等があってもドロップが移動したり崩れたりするのを防止することができる。また、開口近くに進むほど収容空間３０の単位高さ当たりに収容できる培養液Ｄの容量が増加するため、幅広い培養液量のドロップを収容空間３０内に形成することができる。なお、ドロップは５ｍｌ以下の液体の塊を指し、その形状は特に限定されない。
【００３０】
細胞培養容器１００は通常、底面１１が水平となるように設置され使用される。収容部４０の底面１１及び開口４１の輪郭を底面１１に垂直な方向から平面視したときの形状は特に限定されないが、好ましくは互いに相似であり、好ましくは円状（円形および楕円形を含む）である。
【００３１】
収容部の底面の面積は、通常用いられる小容量の培養液、例えば１０μｌ〜１００μｌの培養液のドロップを収容でき、かつ１０μｌ〜１００μｌの培養液のドロップによって底面の全面を覆うことが可能であり、ドロップの高さが０．３５ｍｍ以上、より好ましくは０．５ｍｍ以上となる面積が好ましい。したがって、底面の面積は、好ましくは０．７５ｍｍ２以上、より好ましくは３ｍｍ２以上、さらに好ましくは９ｍｍ２以上であり、好ましくは８０ｍｍ２以下、より好ましくは２０ｍｍ２以下、更に好ましくは１６ｍｍ２以下である。底面１１の面積を０．７５ｍｍ２以上とすることにより、複数の細胞、好ましくはヒト受精卵を、互いが重なることなく、底面に配置して培養することができる。複数の細胞、特に受精卵を、同じ系で培養することにより、培養液内部に蓄積したタンパク質、ホルモン、酵素等の細胞分泌物が互いの細胞に作用するパラクライン効果を期待できる。また、細胞同士が平面上で重なっていると、顕微鏡等による細胞や受精卵の評価が困難であることから、底面は一定の面積を有することが好ましい。また、収容部の底面に、細胞の位置決めをするための窪みを形成する場合も、底面はある程度の面積を有することが好ましい。また、収容部の底面の面積を、８０ｍｍ２以下とすることにより、小容量の培養液のドロップでも、底面の全面を覆うことが可能になり、すなわち、ドロップが収容部の底面上で大きく移動することを防止できる。底面の最大幅（底面の輪郭を平面視した図形において、該図形の重心を間に介して対向する、該図形の周縁上の一対の点の間の距離の最大値であり、底面が円の場合は直径）は好ましくは１ｍｍ以上、より好ましくは２ｍｍ以上、更に好ましくは３．５ｍｍ以上であり、好ましくは１０ｍｍ以下、より好ましくは５ｍｍ以下、更に好ましくは４．５ｍｍ以下である。
【００３２】
収容部４０の容量は、例えば１００μｌ〜３ｍｌ、特に２００μｌ〜１ｍｌである。この容量を一定以下とすることにより、細胞分泌物によるオートクライン効果や複数の細胞の相互作用によるパラクライン効果を期待できる。また、たとえば受精卵培養時には２日間培養後に培養液を半分だけ新しい培養液に交換するなどの作業を行う培養手法を実施することもある。これらの作業時には、培養液が２００μｌ以上あることで作業が容易となる。
【００３３】
収容部４０の周壁面２１は、底面１１から開口４１に進むに従って、階段状に立ち上がったＮ個の段付き部２２ｎ（ここでｎは１〜Ｎの整数）を少なくとも備える。以下、Ｎ個の段付き部２２ｎ（ｎは１〜ｎの整数）を、収容部４０の底面１１に最も近いものから順にそれぞれ、第１段付き部２２１、第２段付き部２２２、・・・、第Ｎ段付き部２２Ｎとする。すなわち段付き部２２ｎは底面１１からｎ個目に位置する段付き部を指す。図２では、Ｎが６である実施形態を例示する。各段付き部２２ｎは収容部４０の底面１１から開口４１に向かう方向に延びる内側面２３ｎと、内側面２３ｎに連続すると共に底部１１の中央から周縁に向かう方向に延びる上面２４ｎとを有する。
【００３４】
周壁面２１にＮ個の段付き部２２ｎを設けることにより、図３に示すように、培養液Ｄの液面の縁は、底面１１から開口４１に向かう方向に延びる内側面２３ｎと接し、接した部分において液面が高くなり易い。これに対して、図４に示すように、収容部１４０として、底部１１０と、底部１１０の周縁から上方に向け立設した周壁部１２０とを少なくとも備え、収容部１４０は上方に開口しており、収容部１４０の内部に、細胞及び培養液を収容するための収容空間１３０が形成され、収容部１４０の周壁面１２１が、収容部１４０の底面１１１から開口１４１に向かって、収容空間１３０が広がるように形成されている細胞培養容器を用いた場合には、培養液Ｄの液面の高さは、周壁面１２１と接する縁の部分において低く、液面の中央部分において高くなり易い。このような違いが生じる機構を図１７に基づいて説明する。図１７（ａ）は、本発明の細胞培養容器を用いた場合に、培養液Ｄの液面ＤＳの縁部が段付き部２２ｎの内側面２３ｎと接する部分を鉛直方向の平面に沿って切った端面の模式図である。図１７（ｂ）は、図４に示す細胞培養容器を用いた場合に、培養液Ｄの液面ＤＳの縁部が周壁部１２０の周壁面１２１と接する部分を鉛直方向の平面に沿って切った端面の模式図である。Ｈは水平面を示し、Ｅは、培養液Ｄの液面ＤＳと、段付き部２２ｎの内側面２３ｎ又は周壁部１２０の周壁面１２１との接点を示す。収容部４０における段付き部２２ｎの内側面２３ｎと、収容部１４０における周壁部１２０の周壁面１２１とを同じ素材で形成した場合、同一条件では培養液Ｄとの接触角は同一になる（図１７においてθとする）。θが９０°未満である場合、本発明の収容部４０の内側面２３ｎに接する培養液Ｄの液面ＤＳは、接点Ｅにおいて高く、接点Ｅから収容部４０の内方に近づくほど低い（図１７（ａ））。一方、θが９０°未満であり且つ周壁面１２１の底面１１１に対する傾斜角よりもθが大きい場合、周壁面１２１に接する培養液Ｄの液面ＤＳは、接点Ｅにおいて低く、接点Ｅから収容部１４０の内方に近づくほど高い（図１７（ｂ））。θが９０°以上の場合であっても、本発明の内側面２３ｎを備える収容部４０を用いる場合、傾斜した周壁面１２１を備える収容部１４０を用いる場合と比較して、液面ＤＳの中央近傍での上方への突出度合は小さい。
【００３５】
このため、本発明の細胞培養容器１００の収容部４０に培養液Ｄを収容するときに培養液Ｄに気泡３５が含まれている場合、気泡３５は周壁面２１の段付き部２２ｎの近傍に集まり易く、培養液Ｄの液面の中央部の観察が容易になる。
【００３６】
本発明において、隣接する段付き部２２ｎと段付き部２２ｎ＋１は、好ましくは、下方の段付き部２２ｎの上面２４ｎの外縁と、上方の段付き部２２ｎ＋１の内側面２３ｎ＋１の底面方向端とが連続するように形成されている。段付き部２２ｎの上面２４ｎと、段付き部２２ｎ＋１の内側面２３ｎ＋１とが交差する谷線は、稜線２６ｎ、２６ｎ＋１と平行であることが好ましい。
【００３７】
本発明の細胞培養容器１００の収容部４０の周壁面２１には、段付き部２２ｎが階段状に形成されているため、収容される培養液Ｄの液量を、液面ＤＳの縁が、第ｎ段付き部２２ｎの内側面２３ｎと接する液量から増加させたとき、液面ＤＳの縁は段付き部２２ｎの開口方向端（稜線２６ｎ）を乗り越え、上面２４ｎを通り、第ｎ＋１段付き部２２ｎ＋１の内側面２３ｎ＋１の底面方向端に達する。上面２４ｎは底部１１の中央から周縁に向かう方向に延びるように形成されているため、液面ＤＳが上面２４ｎと接することとなる培養液Ｄの液量の範囲のとき、液面ＤＳが縁から中央に向けて下がるように形成される上記の効果は生じない。しかしながら、内側面２３ｎの開口方向端（稜線２６ｎ）と内側面２３ｎ＋１の底面方向端とは、底面１１からの高さが略同じであるため、液面ＤＳが上面２４ｎと接する液量の範囲は比較的狭く、大部分の液量の範囲において培養液Ｄの液面ＤＳの縁は内側面２３ｎ又は２３ｎ＋１に接し、上記の効果を達成できる。
【００３８】
更に好ましい実施形態では、各段付き部２２ｎでの上面２４ｎの底部１０の中央から周縁に向かう方向の幅は好ましくは０．１〜２．０ｍｍである。培養液Ｄの液面ＤＳの縁は、培養液Ｄを収容部４０に入れる際に生じる液流や振動により揺らぐため、上面２４ｎの幅が前記範囲にあれば、実質的に全ての液量の範囲で、液面ＤＳの縁は内側面２３ｎに接することが可能であり、本発明の効果を達成することができる。
【００３９】
また、各段付き部２２ｎにおいて、内側面２３ｎの底面１１から開口４１に向かう方向の幅は好ましくは０．１〜２．０ｍｍである。内側面２３ｎの前記幅が０．１ｍｍ以上の場合、液面ＤＳの縁が内側面２３ｎに安定的に保持され易いため、本発明で見込んでいる、液面ＤＳが中央部に近づくほど下がる形状になり易い。一方、内側面２３ｎの前記幅が２．０ｍｍ以下の場合、各段付き部２２ｎが操作時のピペット操作の際の物理的障害となり難く、且つ、収容部４０の容量を適切な範囲に設定し易い。
【００４０】
段付き部２２ｎの個数を示すＮは３以上の整数であり、好ましくは３〜４０、より好ましくは４〜２０、例えば８である。Ｎが３以上のとき、収容部４０の容量の上限と上面２４ｎの前記幅の上限とを適切な範囲に両立させることが容易である。一方、Ｎが４０以下であると、収容部４０の容量の下限と内側面２３ｎの前記幅の下限を適切な範囲に両立させることが容易である。
【００４１】
各内側面２３ｎは、収容部４０を底面１１に垂直な平面に沿って切った断面図において、好ましくは直線状である。また、各上面２４ｎは、収容部４０を底面１１に垂直な平面に沿って切った断面図において、好ましくは直線状である。
【００４２】
本発明において、各段付き部の内側面が「収容部の底面から開口に向かう方向」に延びているとは、収容部を、底面に対し垂直な平面に沿って切った切断面において、段付き部の内側面が収容部の底面に対して垂直又は略垂直な方向に延びていることを指し、具体的には、前記切断面において段付き部の内側面が、収容部の底面となす角度が８０〜１００°、より好ましくは８５〜９５°、より好ましくは８８〜９２°、最も好ましくは９０°である方向に延びていることを指す。段付き部の内側面が収容部の底面となす角度とは、収容部を底面に対し垂直な平面に沿って切った切断面において、段付き部の内側面を含む平面と収容部の底面を含む平面とが、当該段付き部が位置する側に形成する角の角度を指す。他の表現を用いれば、段付き部の内側面の法線と、収容部の底面の法線とが成す角のうち最も小さい角（鋭角）の絶対値が好ましくは８０〜９０°、より好ましくは８５〜９０°、より好ましくは８８〜９０°、最も好ましくは９０°である。段付き部の内側面がこの範囲にある場合に、収容部の底面が水平となるように細胞培養容器を設置すると、段付き部の内側面は鉛直方向又は略鉛直方向に向くことになるため、培養液の液面の外縁が接触したときに、接触部分で培養液の液面が高くなり本発明の効果が顕著に奏される。
【００４３】
本発明において、各段付き部の上面が「底部の中央から周縁に向かう方向」に延びているとは、収容部を、底面に対し垂直な平面に沿って切った断面図において、段付き部の上面が収容部の底面に対して平行又は略平行な方向に延びていることを指し、具体的には、前記切断面において段付き部の上面が、収容部の底面となす角度が−１０〜＋１０°、より好ましくは−５〜＋５°、より好ましくは−２〜＋２°、最も好ましくは０°である方向に延びていることを指す。段付き部の上面が収容部の底面となす角度とは、収容部を底面に対し垂直な平面に沿って切った切断面において、段付き部の内側面を含む平面と収容部の底面を含む平面とが形成する鋭角の角度を、段付き部の上面の収容部内方の端部が外方の端部よりも底面に近い位置となる場合にプラスの値、段付き部の上面の収容部内方の端部が外方の端部よりも底面から遠い位置にある場合にマイナスの値、段付き部の上面の収容部内方の端部と外方の端部とが底面から等距離にある場合にゼロとなるように表示したものである。他の表現を用いれば、段付き部の上面の法線と、収容部の底面の法線とが成す角のうち最も小さい角（鋭角）の絶対値が好ましくは０〜１０°、より好ましくは０〜５°、より好ましくは０〜２°、最も好ましくは０°である。段付き部の上面がこの範囲にある場合に、収容部の底面が水平となるように細胞培養容器を設置すると、段付き部の上面は水平方向又は略水平方向に向くことになるため、培養液の液面の縁が上面２４ｎに接することとなる培養液の液量の範囲を小さくすることが可能である。
【００４４】
なお、本発明において収容部の底面は好ましくは平面であるが、これには限定されない。底面が平面でない場合は、底面の周縁の線を含む平面を「収容部の底面」とみなす。平面でない底面としては、中央部が上方に突出した凸や、中央部が下方に窪んだ凹面が例示できる。
【００４５】
収容部４０の周壁面２１において、Ｎ個の段付き部２２ｎは、周壁面２１の周方向の全体に渡って形成されていてもよいし、周方向に連続した１つ又は複数の一部領域のみに形成されていてもよい。
【００４６】
周壁面２１の、Ｎ個の段付き部２２ｎが周方向に連続した１つの領域のみに形成されている収容部の例が、図７〜９及び図１３〜１５にそれぞれ示す収容部１５０である。収容部１５０では、周壁面２１の、Ｎ個の段付き部２２ｎが形成された領域以外の部分は、底面に対して垂直な平面に沿った切断面上で直線状となる傾斜面２５により構成されている。傾斜面２５は、Ｎ個の段付き部２２ｎの上面２４ｎと内側面２３ｎとが交差した稜線２６ｎを最短距離でつないで形成される仮想の傾斜面と同一面上にある。このような形態の収容部１５０であっても、培養液の液面の縁は、内側面２３ｎと接する部分において高くなるため気泡は当該部分に集まることができる。
【００４７】
Ｎ個の段付き部２２ｎは、収容部４０の底面１１の近傍から開口４１の近傍まで形成される。
【００４８】
各段付き部２２ｎは、上面２４ｎと内側面２３ｎとが交差した稜線２６ｎを有する。稜線２６ｎは、底部１１に垂直な方向から平面視したとき、底部１１の外周の線と平行であることが好ましい。Ｎ本の稜線２６ｎは、底面１１に垂直な平面に投影した像が互いに平行となり、尚且つ、底面１１に平行な面に投影した像も互いに平行となることが好ましい（すなわち、各稜線２６ｎが互いに平行であることが好ましい）。
【００４９】
Ｎ個の段付き部２２ｎの稜線２６ｎは、それらを最短距離で繋いで形成される仮想面が、収容部４０の底面１１から開口４１に向かって収容空間３０が広がるように形成されていれば特に限定されないが、好ましくは、前記仮想面が、下方に狭まり上方に広がった仮想の円錐台の側面となるように形成される。このような仮想の円錐台の側面は、稜線２６１と接する部分から、稜線２６Ｎと接する部分に至るまで、底面１１に対する傾斜角が同一であってもよいし、変化していてもよいが、より好ましくは、稜線２６Ｎに近づくほど、底面１１に対する傾斜角が緩やかとなるよう変化することが好ましい。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態では、隣接する第ｎ段付き部２２ｎと第ｎ＋１段付き部２２ｎ＋１との稜線２６ｎ、２６ｎ＋１同士を最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎと、収容部４０の底面１１とのなす傾斜角をθ（ｎ）としたとき（この場合、ｎは１〜Ｎ−１の整数である）、
θ（１）は７５°以下であり、
θ（Ｎ−１）はθ（１）よりも小さく、且つ
ｎが１〜Ｎ−２の整数である範囲内ではθ（ｎ＋１）がθ（ｎ）以下である
という条件を満たす。
【００５１】
仮想線Ｌｎは直線である。隣接する稜線同士が互いに平行であるとき、それらを最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎは、各稜線に直交する直線である。
【００５２】
傾斜角θ（ｎ）の定義において「底面」とは、「底面を含む平面」を意味する。傾斜角θ（ｎ）は、仮想線Ｌｎが底面を含む平面と成す角のうち最も小さい角（鋭角）の角度を指す。
【００５３】
上記条件を満たす実施形態では、開口４１に最も近い段付き部２２Ｎ−１、２２Ｎの稜線を結ぶ仮想線ＬＮ−１は、底面１１に最も近い段付き部２２１、２２２の稜線を結ぶ仮想線Ｌ１よりも、底面１１に対する傾斜角がなだらかであり、ｎが１〜Ｎ−２の整数の範囲内の少なくとも１か所以上でθ（ｎ＋１）はθ（ｎ）よりも小さい。
【００５４】
θ（１）は、７５°以下であり、好ましくは７０°以下、より好ましくは６５°以下である。θ（１）を７５°以下とすることにより、底面１１近傍に収容された細胞をピペット等により容易に扱うことができ、操作性が高まる。収容された細胞は、通常、顕微鏡等により観察されるが、底面１１近傍の周壁面２１が垂直ではなく、ある程度傾斜していることによって、顕微鏡観察下でも、斜めからピペット等を挿入することが可能になる。また、θ（１）は、好ましくは４０°以上、より好ましくは４５°以上、さらに好ましくは５０°以上である。θ（１）を４０°以上とすることにより、底面１１近傍の周壁面２１がドロップを支持し、ドロップが安定に維持され、ドロップが移動したり崩れたりするのを防止できる。
【００５５】
θ（Ｎ−１）は、好ましくは１０°以上、より好ましくは１５°以上、さらに好ましくは２０°以上である。θ（Ｎ−１）を１０°以上とすることにより、培養液のドロップを底面１１近傍に集めることができる。θ（Ｎ−１）の角度が小さすぎると、ドロップが底面１１の方へ流れず、培養液収容部の壁面に残ってしまうおそれがある。更にθ（Ｎ−１）を１０°以上とすることにより、重力を駆動源として、培養液を底面１１の中心方向へ移動させやすい。θ（Ｎ−１）は、好ましくは６０°以下、より好ましくは５５°以下、さらに好ましくは５０°以下である。θ（Ｎ−１）を６０°以下とすることにより、１００μｌ〜３ｍｌといった大容量の培養液を収容することが可能になる。また、θ（Ｎ−１）を６０°以下とすることにより、開口面積が広がるため、底面１１近傍の内部の細胞や培養液のピペット等による操作性が高まる。また、底面１１近傍の細胞を顕微鏡等に観察する際にも都合がよい。
【００５６】
θ（１）とθ（Ｎ−１）は、θ（１）＞θ（Ｎ−１）の関係を満たすように選択されるが、θ（１）とθ（Ｎ−１）の差は、好ましくは１５°〜４０°、より好ましくは２０°〜３５°である。より具体的には、θ（１）が４５°〜７５°であり、かつθ（Ｎ−１）が１０°〜４０°であるような細胞培養容器が好ましく、θ（１）が４５°〜６５°であり、かつθ（Ｎ−１）が１０°〜３０°であるような細胞培養容器がさらに好ましい。
【００５７】
本発明の細胞培養容器１００において、収容部４０の底面１１と周壁面２１とは、水接触角が４０°以上の面であることが好ましい。本発明において水接触角とは温度２５℃において測定された水接触角を指す。水接触角が４０°以上である場合、図４に示す容器のように周壁面１２１が平滑な傾斜面であると培養液の液面が上に凸になり易く気泡が液面中央部に集まり易いという問題があるが、本発明の細胞培養容器１００を用いることによりこの問題を解消又は少なくとも軽減することができる。また、接触角が小さい（水に対し濡れ性の高い）樹脂材料は、接触角が大きい（水に対し濡れ性の低い）樹脂材料を表面処理して親水化し形成されることが一般的であるが、表面処理された親水性表面は経時的に劣化しやすい傾向がある。４０°以上という大きい接触角の樹脂材料により細胞培養容器を製造すれば経時的な劣化が少なく長期間安定的に使用することが可能である。容部４０の底面１１と周壁面２１の水接触角は、更に好ましくは５０°以上である。前記水接触角の上限は特に限定されないが、好ましくは１００°以下、より好ましくは７０°以下である。水溶液である培養液が本発明の細胞培養容器の収容部に収容され段付き部の内側面と液体が接する場合に、水接触角が１００°以下であれば培養液の液面は上に凸になりにくく、平坦又は下に凸となる。更に水接触角が７０°以下であれば培養液の液面は下に凸になり易く、安定的に気泡が周縁に集中し易い。
【００５８】
底面１１には、例えば図１６に示すように、細胞を位置決めするための窪み１６０が形成されていることが好ましい。図１６に示す細胞培養容器１００は、底部１０の表面である底面１１に窪み１６０が複数形成されている収容部４０を備えるという点を除いて、図１等に示す細胞培養容器１００と同様の構成を備える。図１６において図１等で示した構成と同一の機能を有する構成には同一の符号を付し、それらの説明を省略する。窪み内に細胞を配置することにより、細胞の移動を抑制することができ、細胞をそれぞれ特定した上で評価や判定を行うことができる。この窪みの形状は特に制限されないが、開口部の外縁が円形であり、窪みの壁面が、最も低い位置から外縁に進むに従って高くなるように傾斜した曲面を有することが好ましい。窪みの壁面は、好ましくは円錐状または円錐台状の部分を含む。円錐状または円錐台状の部分は、培養容器の底部側に、円錐の頂点または円錐台の上面および下面のうち面積の狭い方がくるように形成される。円錐状には、円錐および楕円錐、これらに類似の形状、例えば、円錐または楕円錐の頂点が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。円錐台状には、円錐台および楕円錐台、これらに類似の形状、例えば、円錐台または楕円錐台の上面または下面と円錐面との接合部が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。なお、窪み部１６０は、上記に限らず、多角錐状、多角錐台状などの形態であってもよい。
【００５９】
窪みの寸法は、少なくとも１つの細胞を収容可能な寸法であれば特に制限されない。ここで、窪みの寸法は、窪みの開口部の外縁が形成する図形の最長径の長さをさす。従って、窪みの開口部の外縁が円形である場合、その直径は、培養する細胞の最大寸法と同じかそれより大きいものとなる。本発明の細胞培養容器により受精卵を培養する場合、胚盤胞の段階まで培養することが望ましいため、円形の開口部の直径は、胚盤胞の段階の細胞の最大寸法より大きいものであることが望ましい。胚盤胞の段階の細胞の最大寸法は通常１００μｍ〜２８０μｍであることから、円形の開口部の直径は、通常１００μｍ以上である。
【００６０】
例えば、ヒト受精卵の場合、窪みの開口部の直径は、通常１００μｍ以上、好ましくは２００μｍ以上、さらに好ましくは２５０μｍ以上であり、通常１０００μｍ以下、好ましくは９００μｍ以下、さらに好ましくは８００μｍ以下である。また、上記窪みの開口部の直径は、Ｘ＋α（ここでＸは細胞の最大寸法を表す）と規定することもできる。ここで、αは、好ましくは０．０１ｍｍ以上、さらに好ましくは０．０２ｍｍ以上である。
【００６１】
収容部４０の周壁面２１は、更に、底面１１に最も近い段付き部２２１の内側面２３１の下端と底面１１の周縁との間に、収容空間３０に向け突出した凸部２８を有していてもよい。凸部２８は、最も突出した部分が、段付き部２２１の稜線２６１と底面１１の周縁とを最短距離で繋ぐ線を超えない範囲で形成されている限りその形状は特に限定されない。
【００６２】
更に、収容部４０の周壁面２１のうち、底面１１から最も離れた第Ｎ段付き部２２Ｎの上面２４Ｎの外縁端と、周壁面２１の上端である開口４１とを接続する面の形態は特に限定されないが、好ましくは、底面１１から開口４１に向かう方向に延びる面であり、特に好ましくは、当該面の、底面１１から開口４１に向かう方向の幅が０．３ｍｍ以下である。
【００６３】
本発明の細胞培養容器の材質は特に制限されない。具体的には、金属、ガラス、およびシリコン等の無機材料、プラスチック（例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂）で代表される有機材料を挙げることができる。本発明の培養容器は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、プラスチック材料からなる培養容器を製造する場合には、慣用の成形法、例えば射出成形により製造することができる。
【００６４】
＜周壁面の傾斜角が１回変化する実施形態＞
図示する収容部４０、１５０の実施形態のうち、図１〜３、図５〜１１、図１３〜１６に示す実施形態では更に、
ｎが１以上ｍ−２以下（ここで、ｍは２以上Ｎ−１以下の整数）のとき、θ（ｎ＋１）とθ（ｎ）とは等しく、
ｎがｍ−１のとき、θ（ｎ＋１）はθ（ｎ）よりも小さく、
ｍがＮ−２以下である場合は更に、ｎがｍ以上Ｎ−２以下のとき、θ（ｎ＋１）とθ（ｎ）とは等しい
という条件を満たす。すなわち、仮想線Ｌ１〜ＬＮ−１のうち、Ｌ１〜Ｌｍ−１は同一の直線であり、底面１１との傾斜角度がθ（１）であり、Ｌｍ〜ＬＮ−１は同一の直線であって、底面１１との傾斜角度がθ（Ｎ−１）である。この実施形態では、仮想線の傾斜角がＬｍ−１とＬｍとの間で１回変化しているということができる。
【００６５】
上記仮想線の傾斜角がＬｍ−１とＬｍとの間で１回変化する本実施形態では更に好ましくは以下の特徴を備える。
θ（１）及びθ（Ｎ−１）の好適な範囲については既に述べた通りである。
【００６６】
収容部４０の、底面１１から稜線２６ｍまでの部分の容量は、通常用いられる小容量の培養液、例えば１０μｌ〜１００μｌ、特に３０μｌ〜７０μｌの培養液を収容できる容量である。底面１１から稜線２６ｍまでの部分の容量を一定以下とすることにより、使用する培養液量を減少させつつ安定に培養させることで低コスト化が期待できる。さらに、培養液のドロップの大きさが小さいことで、細胞分泌物によるオートクライン効果や複数の細胞の相互作用によるパラクライン効果を期待できる。
【００６７】
底面１１を基準とした稜線２６ｍの高さは、通常１〜５ｍｍ、好ましくは２〜４ｍｍである。前記部分の深さが一定以下となるように設計することで、収容された細胞や培養液をピペット等で容易に取り扱うことができ、操作性の点で有利である。また、顕微鏡によって収容された細胞を観察することも容易である。例えば、前記部分に１００μｌ程度の培地を収容する場合に、作業性を確保するため４５°程度のピペット挿入角度を維持するには、θ（１）を７５°以下にすることが好ましい。具体的には、稜線２６ｍの高さ位置の収容空間３０の幅が２．５ｍｍであり、その際に底面１１を基準とした稜線２６ｍの高さが４ｍｍある場合、θ（１）を９０°とするとピペットの挿入角度は４５°を超えてしまうが、θ（１）を７５°以下とすることで高さを４〜５ｍｍとしても４５°程度の挿入角度を確保できる。
【００６８】
本実施形態において、θ（Ｎ−１）の角度が小さすぎると、培養液の量が、収容部４０の稜線２６ｍ以下の部分の容量より大きい場合、培養液が該部分のある中心部にうまく集まらず、ドロップが片側に偏った状態となったり、ドロップが分離したりするおそれがあり、安定性の高いドロップを形成できない場合があるが、θ（Ｎ−１）を１０°以上とすれば、重力を駆動源として、培養液を底面１１の中心方向へ移動させやすい。本実施形態では、好ましくは、θ（Ｎ−１）は６０°以下、より好ましくは５５°以下、さらに好ましくは５０°以下である。θ（Ｎ−１）を６０°以下とすることにより、１００μｌ〜３ｍｌといった大容量の培養液を収容することが可能になる。
【００６９】
本実施形態において、θ（１）とθ（Ｎ−１）間の角度差が４０°以下の場合、培養液が稜線２６ｍよりも上方にまで入った場合、急激な角度変化がないことで、より安定的に培養液のドロップを中心に保持可能となる。角度差が１５°以上の場合には収容部４０の稜線２６ｍよりも上方の容量が多い設計がしやすくなる。
【実施例】
【００７０】
本発明の細胞培養容器を実際に製造した。以下、細胞培養容器１００のうち収容部４０、１５０の、底面１１の重心を通り底面１１に垂直な平面に沿った断面図を参照して説明する。細胞培養容器１００の収容部４０、１５０以外の部分の構成は、図１を参照して既に説明した通りである。
【００７１】
（実施例１／図５）
図５に示す収容部４０は、周壁面２１の全周にわたってＮ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは１６である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円を形成する。隣接する稜線２６ｎと稜線２６ｎ＋１とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎが底面１１となす角度θ（ｎ）は、ｎが１〜１０の範囲で等しくθ（１）であり、ｎが１１〜１５の範囲で等しくθ（１５）である。開口４１の開口幅は１２．８ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは３．３５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６１１が形成する円の直径が７．８ｍｍであり、θ（１）が５０°であり、θ（１５）が２２°である。収容部４０の底面１１から稜線２６１１までの高さは２．３５ｍｍである。ｎが１〜１１のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．２ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．１７ｍｍである。ｎが１２〜１６のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．０８ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．２ｍｍである。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００７２】
この収容部４０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部４０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６１１よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６１１よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００７３】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００７４】
（実施例２／図２）
図２に示す収容部４０は、周壁面２１の全周にわたってＮ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは６である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円を形成する。隣接する稜線２６ｎと稜線２６ｎ＋１とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎが底面１１となす角度θ（ｎ）は、ｎが１〜３の範囲で等しくθ（１）であり、ｎが４〜５の範囲で等しくθ（５）である。開口４１の開口幅は１２．８ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは３．３５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６４が形成する円の直径が７．８ｍｍであり、θ（１）が５０°であり、θ（５）が２２°である。収容部４０の底面１１から稜線２６４までの高さは２．３５ｍｍである。ｎが１〜４のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．５ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．４２５ｍｍである。ｎが５、６のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．２０２ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．５ｍｍである。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００７５】
上記の収容部４０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部４０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６４よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６４よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００７６】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００７７】
（実施例３／図６）
図６に示す収容部４０は、周壁面２１の全周にわたってＮ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは３である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円を形成する。隣接する稜線２６１と稜線２６２とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌ１が底面１１となす角度をθ（１）とし、隣接する稜線２６２と稜線２６３とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌ２が底面１１となす角度をθ（２）とする。開口４１の開口幅は１２．８ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは３．３５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６２が形成する円の直径が７．８ｍｍであり、θ（１）が５０°であり、θ（２）が２２°である。収容部４０の底面１１から稜線２６２までの高さは２．３５ｍｍである。内側面２３１及び２３２の底面１１に垂直な方向の幅は１．０ｍｍであり、上面２４１及び２４２の底面１１に平行な方向の幅は０．８５ｍｍである。内側面２３３の底面１１に垂直な方向の幅は０．４０４ｍｍであり、上面２４３の底面１１に平行な方向の幅は０．２３５ｍｍである。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００７８】
上記の収容部４０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部４０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６２よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６２よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００７９】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００８０】
（実施例４／図７〜９）
図７〜９に示す収容部１５０は、周壁面２１のうち底面１１から開口４１に延びる、周方向に幅ｗ（＝１ｍｍ）の領域に、Ｎ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは３である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円の円弧の一部を形成する。隣接する稜線２６１と稜線２６２とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌ１が底面１１となす角度をθ（１）とし、隣接する稜線２６２と稜線２６３とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌ２が底面１１となす角度をθ（２）とする。開口４１の開口幅は１２．８ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは３．３５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６２は直径が７．８ｍｍの円の円弧の一部であり、θ（１）が５０°であり、θ（２）が２２°である。収容部１５０の底面１１から稜線２６２までの高さは２．３５ｍｍである。内側面２３１及び２３２の底面１１に垂直な方向の幅は１．０ｍｍであり、上面２４１及び２４２の底面１１に平行な方向の幅は０．８５ｍｍである。内側面２３３の底面１１に垂直な方向の幅は０．４０４ｍｍであり、上面２４３の底面１１に平行な方向の幅は０．２３５ｍｍである。
【００８１】
周壁面２１の、３個の段付き部２２ｎが形成された領域以外の領域は、垂直切断面が平坦な傾斜面２５により構成されている。傾斜面２５は、３個の段付き部２２ｎの上面２４ｎと内側面２３ｎとが交差した稜線２６ｎを最短距離でつないで形成される仮想の傾斜面と同一面である。傾斜面２５における稜線１５１は、段付き部２２２の稜線２６２と同一の円の円弧を構成しており、傾斜面２５のうち底面１１の周縁から稜線１５１までの部分は、底面１１に対する傾斜角がθ（１）である、下方に狭まり上方に広がった円錐台の側面である。傾斜面２５のうち稜線１５１から開口４１までの部分は、底面１１に対する傾斜角がθ（２）である、下方に狭まり上方に広がった円錐台の側面である。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００８２】
上記の収容部１５０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部１５０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６２及び稜線１５１よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、段付き部２６ｎが形成された領域と液面とが接する部分に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６２及び稜線１５１よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、段付き部２６ｎが形成された領域と液面とが接する部分に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００８３】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００８４】
（実施例５／図１０）
図１０に示す収容部４０は、周壁面２１の全周にわたってＮ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは１６である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円を形成する。隣接する稜線２６ｎと稜線２６ｎ＋１とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎが底面１１となす角度θ（ｎ）は、ｎが１〜４の範囲で等しくθ（１）であり、ｎが５〜１５の範囲で等しくθ（１５）である。開口４１の開口幅は１０．３ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは２．４５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６５が形成する円の直径が５．８ｍｍであり、θ（１）が５０°であり、θ（１５）が２２°である。ｎが１〜５のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．２ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．１７ｍｍである。ｎが６〜１５のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．０８ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．２ｍｍである。ｎが１６のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．０８ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．０３５ｍｍである。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００８５】
上記の収容部４０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部４０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６５よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６５よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００８６】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００８７】
（実施例６／図１１）
図１１に示す収容部４０は、周壁面２１の全周にわたってＮ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは１６である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円を形成する。隣接する稜線２６ｎと稜線２６ｎ＋１とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎが底面１１となす角度θ（ｎ）は、ｎが１のときθ（１）であり、ｎが２〜１５の範囲で等しくθ（１５）である。開口４１の開口幅は１０．３ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは２．４５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６５が形成する円の直径が５．８ｍｍであり、θ（１）が５０°であり、θ（１５）が２２°である。ｎが１〜２のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．５ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．４２５ｍｍである。ｎが３〜５のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．２０２ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．５ｍｍである。ｎが１６のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．２０２ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．２３５ｍｍである。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００８８】
上記の収容部４０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部４０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６２よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６２よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００８９】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００９０】
（実施例７／図１２）
図１２に示す収容部４０は、周壁面２１の全周にわたってＮ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは３である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円を形成する。隣接する稜線２６１と稜線２６２とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌ１が底面１１となす角度θ（１）と、隣接する稜線２６２と稜線２６３とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌ２が底面１１となす角度θ（２）とはともに２２°である。開口４１の開口幅は１０．３ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは２．４５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６１が形成する円の直径が５．８ｍｍである。内側面２３１の底面１１に垂直な方向の幅は１．０ｍｍであり、上面２４１の底面１１に平行な方向の幅は０．８５ｍｍである。内側面２３２の底面１１に垂直な方向の幅は０．４０４ｍｍであり、上面２４１の底面１１に平行な方向の幅は１．０ｍｍである。内側面２３３の底面１１に垂直な方向の幅は０．４０４ｍｍであり、上面２４３の底面１１に平行な方向の幅は０．２３５ｍｍである。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００９１】
上記の収容部４０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部４０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６１よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合、培養液中の気泡は、液面の縁部に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００９２】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【００９３】
（実施例８／図１３〜１５）
図１３〜１５に示す収容部１５０は、周壁面２１のうち底面１１から開口４１に延びる、周方向に幅ｗ（＝１ｍｍ）の領域に、Ｎ個の段付き部２２ｎ（ｎ＝１〜Ｎ）を有しており、ここでＮは１６である。底面１１は細胞培養容器１００の設置時に水平となる平坦面であり、底面１１の輪郭は円である。各段付き部２２ｎの内側面２３ｎは底面１１に垂直な方向に延び、上面２４ｎは底面１１に平行な方向に延びており、内側面２３ｎを底面１１に垂直な方向から平面視したとき、各内側面２３ｎは底面１１の中心を中心とした同心円の円弧の一部を形成する。隣接する稜線２６ｎと稜線２６ｎ＋１とを最短距離で結ぶ仮想線Ｌｎが底面１１となす角度θ（ｎ）は、ｎが１〜４の範囲で等しくθ（１）であり、ｎが５〜１５の範囲で等しくθ（１５）である。開口４１の開口幅は１０．３ｍｍであり、内壁６０の上端の底面１１からの高さは２．４５ｍｍであり、底面１１が形成する円の直径が３．８ｍｍであり、稜線２６５は直径５．８ｍｍの円の円弧の一部であり、θ（１）が５０°であり、θ（１５）が２２°である。ｎが１〜５のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．２ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．１７ｍｍである。ｎが６〜１５のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．０８ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．２ｍｍである。ｎが１６のとき、内側面２３ｎの底面１１に垂直な方向の幅は０．０８ｍｍであり、上面２４ｎの底面１１に平行な方向の幅は０．０３５ｍｍである。
【００９４】
周壁面２１の、N個の段付き部２２ｎが形成された領域以外の領域は、垂直切断面が平坦な傾斜面２５により構成されている。傾斜面２５は、N個の段付き部２２ｎの上面２４ｎと内側面２３ｎとが交差した稜線２６ｎを最短距離でつないで形成される仮想の傾斜面と同一面である。傾斜面２５における稜線１５１は、段付き部２２５の稜線２６５と同一の円の円弧を構成している。傾斜面２５における谷線１５２は、段付き部２２１６の上面２４１６の外縁側の基部と同一の円の円弧を構成している。傾斜面２５のうち底面１１の周縁から稜線１５１までの部分は、底面１１に対する傾斜角がθ（１）である、下方に狭まり上方に広がった円錐台の側面である。傾斜面２５のうち稜線１５１から谷線１５２までの部分は、底面１１に対する傾斜角がθ（１５）である、下方に狭まり上方に広がった円錐台の側面である。
周壁面２１の水接触角は７０°（測定温度２５℃）である。
【００９５】
上記の収容部１５０を備えた細胞培養容器１００を底面１１が水平になるように設置し、収容部１５０内に水溶液である培養液を、液面の縁部が稜線２６５及び稜線１５１よりも底面１１に近い高さ位置となるように加えた。培養液中の気泡は、段付き部２６ｎが形成された領域と液面とが接する部分に集まり、液面の中央部には認められなかった。続いて、前記培養液を加え、液面の縁部が稜線２６５及び稜線１５１よりも開口４１に近い高さ位置となるようにした。この場合もまた、培養液中の気泡は、段付き部２６ｎが形成された領域と液面とが接する部分に集まり、液面の中央部には認められなかった。
【００９６】
一方、周壁面に段付き部を有していない収容部を備えた細胞培養容器を用いて同様の実験を行ったところ、気泡は培養液の液面の中央部付近に集まり易かった。
【符号の説明】
【００９７】
１００・・細胞培養容器
４０、４１、１５０・・収容部
１０・・底部
１１・・底面
２０・・周壁部
２１・・周壁面
２２ｎ・・段付き部
２３ｎ・・内側面
２４ｎ・・上面
２６ｎ・・稜線
３０・・収容空間
３５・・気泡
４１・・開口
１６０・・窪み
Ｌｎ・・仮想線
Ｄ・・培養液
【図１】
2015195762.tif 000003
【図２】
2015195762.tif 000004
【図３】
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【図４】
2015195762.tif 000006
【図５】
2015195762.tif 000007
【図６】
2015195762.tif 000008
【図７】
2015195762.tif 000009
【図８】
2015195762.tif 000010
【図９】
2015195762.tif 000011
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2015195762.tif 000017
【図１６】
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【図１７】
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