(57)【要約】【課題】Ｒｇ３を高い濃度で含有し、着色が低減され、且つ色安定性に優れたニンジン抽出物の製造方法の提供。【解決手段】下記の工程（１）〜（３）を含むニンジン抽出物の製造方法。（１）ニンジンを、水中で９５〜１００℃、０．５〜５０時間、加熱抽出する工程（２）（１）で得られた加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去して粗ニンジン抽出物を得る工程（３）（２）で得られた粗ニンジン抽出物を、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製する工程【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の工程（１）〜（３）を含むニンジン抽出物の製造方法。
（１）ニンジンを、水中で９５〜１００℃、０．５〜５０時間、加熱抽出する工程
（２）（１）で得られた加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去して粗ニンジン抽出物を得る工程
（３）（２）で得られた粗ニンジン抽出物を、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製する工程
【請求項２】
加熱抽出の時間が１５〜３０時間である請求項１記載の方法。
【請求項３】
請求項１又は２記載の製造方法により得られるニンジン抽出物。
【請求項４】
ニンジンの加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去した後に、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製することを特徴とするニンジン抽出物の着色低減方法。
【請求項５】
ニンジンの加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去した後に、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製することを特徴とするニンジン抽出物の色安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニンジン抽出物の製造方法、着色低減方法及び色安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニンジン（オタネニンジン、Panax ginseng）は古くから知られる薬用植物である。薬効成分としてはジンセノシドが知られており、これまでに５０種以上のジンセノシドがニンジンから単離されている。ニンジン又はジンセノシドの効果としては、よく知られている強壮作用に加え、近年では、抗腫瘍作用、抗動脈硬化／抗高血圧作用、抗ストレス作用、免疫調節作用、抗炎症／抗アレルギー作用、抗糖尿病作用、中枢神経への作用、記憶や学習向上、神経保護、神経伝達物質放出若しくは取り込み作用等の多岐にわたる効果が見出されている（非特許文献１、２）。更に最近、ニンジンの抽出物にＣＧＲＰの応答性を促進する作用があることが見出されている（特許文献１）。
【０００３】
ニンジンに含まれるジンセノシドは、主としてジンセノシドＲｂ１やＲｂ２であり、ジンセノシドＲｇ３はほとんど含まれていない。ジンセノシドＲｇ３はニンジンを蒸して乾燥した紅参において、わずかに含まれることが知られている。
【０００４】
ジンセノシドＲｇ３は、血液循環改善、勃起不全改善、疲労回復、高血圧、動脈硬化、抗血栓、脳卒中の治療及び予防、脳機能改善に使用することができ、また血管弛緩作用、血小板凝集抑制作用、脳神経細胞保護作用、抗癌作用を有することが報告されている（特許文献２〜４）。
【０００５】
斯かるジンセノシドＲｇ３の含有量を向上させるために、ニンジンを水又は有機溶媒を抽出した後に、その抽出物を酸で加水分解して、加水分解溶液をマクロポーラス樹脂により吸着させる手法（特許文献２）や、ニンジンに酢を加えて加熱抽出する手法や（特許文献３）、ニンジンを高温で加熱処理する手法（特許文献５）が試みられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１２−１１６７６３号公報
【特許文献２】特表２００９−５００４３２号公報
【特許文献３】特表２００７−５２０４１８号公報
【特許文献４】特表２００６−５０２０８２号公報
【特許文献５】特表平１１−５０１３２２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Advances in Food and Nutrition Research, 2009, 55:1-99
【非特許文献２】Phytochemical Analysis, 2008, 19:2-16
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
このうち、ニンジンを加熱により加水分解する方法は、処理の簡便化の点で好ましいが、低い反応効率や、得られる処理液が着色するおそれがあり、改良の余地があった。
【０００９】
本発明は、Ｒｇ３を高い濃度で含有し、着色が低減され、且つ色安定性に優れたニンジン抽出物の製造方法を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ニンジンを熱水抽出して得られるニンジン抽出物の調製法について検討した結果、加熱抽出物をエタノール処理し、その後樹脂を充填した吸着カラムで精製することにより、着色の低減及び色安定性を向上させることができ、更にＲｇ３を高い濃度で含有できることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明は、下記に係るものである。
１）下記の工程（１）〜（３）を含むニンジン抽出物の製造方法。
（１）ニンジンを、水中で９５〜１００℃、０．５〜５０時間、加熱抽出する工程
（２）（１）で得られた加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去して粗ニンジン抽出物を得る工程
（３）（２）で得られた粗ニンジン抽出物を、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製する工程
２）１）に記載の製造方法により得られるニンジン抽出物。
３）ニンジンの加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去した後に、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製することを特徴とするニンジン抽出物の着色低減方法。
４）ニンジンの加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去した後に、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製することを特徴とするニンジン抽出物の色安定化方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の製造方法によれば、着色が低減されるとともに、色安定性の優れたＲｇ３高含有ニンジン抽出物を得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書において、ニンジンとは、ウコギ科トチバニンジン属のオタネニンジン（Panax ginseng）をさす。
またニンジンには、新鮮根をそのまま乾燥した生干ニンジン、周皮や細根を除いて乾燥した白参、蒸したのちに乾燥した紅参などの種類があり、本発明においては、いずれも用いることができる。特に紅参は、蒸す工程でマロニル化ジンセノシドの脱マロニル化が進行するとともに、ジンセノシドＲｇ２の２０位の糖が脱離したジンセノシドＲｇ３を含むため好ましい。
【００１４】
上記ニンジンは、いずれの任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、根、根茎、仮球茎、球茎、塊茎、種子等、又はそれらの組み合わせを使用することができるが、根茎を用いるのが好ましく、細根を用いることが最も好ましい。上記部位は、そのまま加熱抽出に付されてもよく、又は粉砕、切断若しくは乾燥された後に加熱抽出に付されてもよい。
【００１５】
（１）加熱抽出
本工程では、上述のニンジンに水を加え、加熱抽出し、加熱抽出物を得る工程である。
抽出方法としては、特に制限されず、既知の方法、例えばバッチ攪拌式、連続流通式や、ソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行うことができる。加熱処理の際には蒸留水、イオン交換水等を用いることができる。また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う抽出が望ましい。
得られる加熱抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００１６】
水の使用量としては、ニンジン（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは１ｍＬ以上、より好ましくは５ｍＬ以上、好ましくは１００ｍＬ以下、より好ましくは５０ｍＬ以下である。また、好ましくは１〜１００ｍＬ、より好ましくは５〜２０ｍＬである。
加熱温度は、Ｒｇ３生成の観点から、９５℃以上１００℃以下であり、また９５〜１００℃である。好ましくは１００℃である。
また、上記加熱時間は、処理向上の観点から、０．５時間以上、好ましくは１時間以上、より好ましくは１５時間以上であり、５０時間以下、好ましくは３０時間以下である。また０．５〜５０時間、好ましくは１〜５０時間、より好ましくは１５〜３０時間の範囲である。
【００１７】
（２）エタノール処理
本工程は、（１）で得られた加熱抽出物に、エタノールを加えて、濾過等で沈殿物を除去して、粗ニンジン抽出物を得る工程である。当該工程では、抽出したＲｇ３量を低減することなく、着色成分を除去することができる。
【００１８】
本工程ではエタノールの濃度が、着色成分の除去の観点から、６０容量％以上、好ましくは７０容量％以上、９５容量％以下、好ましくは９０容量％以下となるようにエタノールを添加する。また６０〜９５容量％、好ましくは７０〜９０容量％の範囲となるようにエタノールを添加する。
エタノールの使用量としては、ニンジン（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは５ｍＬ以上、より好ましくは１０ｍＬ以上、好ましくは２００ｍＬ以下、より好ましくは１００ｍＬ以下である。また、好ましくは５〜２００ｍＬ、より好ましくは１０〜１００ｍＬである。
【００１９】
処理温度は、処理向上の観点からから、０℃以上、好ましくは１０℃以上、４０℃以下、好ましくは３０℃以下である。また０〜４０℃、より好ましくは１０〜３０℃の範囲、又は室温である。
また、処理時間は、処理向上の観点から、３０分以上、好ましくは１時間以上、２０時間以下、好ましくは５時間以下である。また１〜２０時間、好ましくは１〜５時間の範囲である。
【００２０】
エタノール処理の後に沈殿物を除去された溶液は、減圧下でエタノールを除去して、粗ニンジン抽出物とすることができる。
【００２１】
（３）吸着カラム処理
本工程は、（２）で得られた粗ニンジン抽出物を、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製する工程である。
具体的には、上記粗ニンジン抽出物を、上記吸着カラムに通液して、疎水性成分を吸着させ、次いで好ましくは１０〜５０容量％のエタノールを通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、好ましくは３０〜８０％のエタノールで疎水性成分を溶出させて、その溶出物を回収して、ニンジン抽出物を得ることができる。
【００２２】
粗ニンジン抽出物を、吸着カラムを通液させる前に、水とエタノール、メタノール、イソプロピルアルコールの混合溶媒等の溶剤を加えることができる。
【００２３】
充填するマクロポーラス樹脂としては、特表２００９−５００４３２号公報に記載されたものを用いることができ、具体的には、親水性ビニルポリマー樹脂（東ソー社製「トヨパールＨＷ４０」）、スチレン−ジビニルベンゼン樹脂（三菱化学社製「セパビーズＳＰ−８５０」）、ゲル型合成樹脂（三菱化学社製「ダイヤイオンＨＰ−２０」）が挙げられる。
【００２４】
樹脂に吸着した吸着物は、例えばエタノール以外にも、メタノール、イソプロピルアルコール等の溶出液で溶出させて、回収することができる。
【００２５】
溶出液の使用量としては、ニンジン（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは１ｍＬ以上、より好ましくは５ｍＬ以上、好ましくは１００ｍＬ以下、より好ましくは５０ｍＬ以下である。また、好ましくは１〜１００ｍＬ、より好ましくは５〜５０ｍＬである。
【００２６】
後記実施例に示すように、上述の工程を経たニンジン抽出物は、着色の低減（試験例１）、及び優れた色安定性（試験例２）を有する。
【００２７】
また、得られるニンジン抽出物における下記式で示されるＲｇ３の含有量は、乾燥した時に残る残量である固形分量で、好ましくは１質量％以上、より好ましくは３質量％以上、好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下である。また好ましくは１〜２０質量％、より好ましくは３〜１０質量％である。
【００２８】
【化１】
2015212260.tif 000002
【００２９】
斯くして得られるニンジン抽出物を、そのまま又は適宜な溶媒で希釈した希釈液とすること、或いは濃縮や乾燥粉末としたり、ペースト状に調製することができる。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００３０】
上述した実施形態に関し、本発明は更に以下の態様が開示されるが、本発明はこれらの実施態様に限定されない。
＜１＞下記の工程（１）〜（３）を含むニンジン抽出物の製造方法。
（１）ニンジンを、水中で９５〜１００℃、０．５〜５０時間、加熱抽出する工程
（２）（１）で得られた加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去して粗ニンジン抽出物を得る工程
（３）（２）で得られた粗ニンジン抽出物を、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製する工程
＜２＞ニンジンの加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去した後に、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製することを特徴とするニンジン抽出物の着色低減方法。
＜３＞ニンジンの加熱抽出物を、エタノール濃度が６０〜９０容量％となるようにエタノールを添加し、沈殿物を除去した後に、マクロポーラス樹脂を充填した吸着カラムで精製することを特徴とするニンジン抽出物の色安定化方法。
＜４＞前記＜２＞又は＜３＞において、ニンジンの加熱抽出物は、水中で９５〜１００℃、０．５〜３０時間、加熱抽出する工程により得られたものである。
＜５＞前記＜１＞又は＜４＞において、加熱抽出工程における水の使用量としては、ニンジン（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは１ｍＬ以上、より好ましくは５ｍＬ以上、好ましくは１００ｍＬ以下、より好ましくは５０ｍＬ以下であり、また好ましくは１〜１００ｍＬ、より好ましくは５〜２０ｍＬである。
＜６＞前記＜１＞、＜４＞又は＜５＞において、加熱抽出工程における加熱温度は、好ましくは１００℃である。
＜７＞前記＜１＞、＜４＞〜＜６＞において、加熱抽出工程における加熱時間は、好ましくは１時間以上、より好ましくは１５時間以上で、５０時間以下、好ましくは３０時間以下であり、また好ましくは１〜５０時間、より好ましくは１５〜３０時間の範囲である。
＜８＞前記＜１＞〜＜７＞において、エタノール処理工程では、エタノールの濃度が、６０容量％以上、好ましくは７０容量％以上、９５容量％以下、好ましくは９０容量％以下、また６０〜９５容量％、好ましくは７０〜９０容量％の範囲となるようにエタノールを添加する。
＜９＞前記＜１＞〜＜８＞において、エタノール処理工程におけるエタノールの使用量としては、ニンジン（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは５ｍＬ以上、より好ましくは１０ｍＬ以上、好ましくは２００ｍＬ以下、より好ましくは１００ｍＬ以下であり、また好ましくは５〜２００ｍＬ、より好ましくは１０〜１００ｍＬである。
＜１０＞前記＜１＞〜＜９＞において、エタノール処理工程における処理温度は、０℃以上、好ましくは１０℃以上、４０℃以下、好ましくは３０℃以下であり、また０〜４０℃、より好ましくは１０〜３０℃の範囲又は室温である。
＜１１＞前記＜１＞〜＜１０＞において、エタノール処理工程における処理時間は、３０分以上、好ましくは１時間以上、２０時間以下、好ましくは５時間以下であり、また１〜２０時間、好ましくは１〜５時間の範囲である。
＜１２＞前記＜１＞〜＜１１＞において、吸着カラム処理工程では、エタノール処理工程で得られた粗ニンジン抽出物を、吸着カラムに通液して、疎水性成分を吸着させ、次いで好ましくは１０〜５０容量％のエタノールを通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、好ましくは３０〜８０％のエタノールで疎水性成分を溶出させて、その溶出物を回収する。
＜１３＞前記＜１＞、＜５＞〜＜１２＞に記載の製造法により得られるニンジン抽出物。＜１４＞前記＜１３＞において、Ｒｇ３含有量は乾燥した時に残る残量である固形分量で、好ましくは１質量％以上、より好ましくは３質量％以上、好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下であり、また好ましくは１〜２０質量％、より好ましくは３〜１０質量％である。
【実施例】
【００３１】
試験例１：エタノール処理及び吸着カラム処理による着色低減効果
（１）抽出処理
紅参（新和物産より入手）２０ｇを粉砕し、イオン交換水２００ｍＬを加え、漢方煎じ器（ＥＫ−ＳＡ１０型）で１００℃、３０時間熱水抽出した後、下記表１の各溶媒を添加し、１時間放置した後に濾過して、処理液１〜３を得た。
【００３２】
【表１】
2015212260.tif 000003
【００３３】
得られた各処理液の着色度は、ＨＩＴＡＣＨＩの分光光度計（型式Ｕ−２００１型）を用い、ガラスセルにサンプルを滴下して測定した。分析時の分光光度計の測定波長は４５０ｎｍに設定した。
着色低減率は、「着色低減率（％）＝１−（処理液の吸光度／処理液３の吸光度）×１００」により求めた。
Ｒｇ３量は、下記表２の条件のもと、ＨＰＬＣで定量した値である。
【００３４】
【表２】
2015212260.tif 000004
【００３５】
上記表１より、ニンジンの加熱抽出物をエタノール又はエタノール水溶液で処理した処理液１、２は、エタノール処理を行ってない処理液３に対して、粗ニンジン抽出物中のＲｇ３量を低減することなく、着色が低減された。
【００３６】
（２）カラム吸着処理
上記処理液１の２００ｍＬに水２００ｍＬ加え、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）を充填した吸着カラムに通液させた。次いで、４０容量％エタノール０．６Ｌで洗浄し、最後に６０容量％エタノール１Ｌで回収して、６０容量％エタノール画分を乾燥して表３の実施例１の固形分１．４５ｇを得た。
【００３７】
上記処理液２の２００ｍＬにエタノール６０ｍＬ及び水１４０ｍＬ加え、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）を充填した吸着カラムに通液させた。次いで、４０容量％エタノール０．６Ｌで洗浄し、最後に６０容量％エタノール１Ｌで回収して、６０容量％エタノール画分を乾燥して表３の実施例２の固形分１．９０ｇを得た。
【００３８】
また、上記処理液１、２の各１０ｍＬに、活性炭（カルボラフィン（日本エンバイロケミカルズ社製））１００ｍｇを混合し、室温で１時間撹拌を行った後に、濾過を行って、表３の比較例１、２のニンジン抽出物を得た。
【００３９】
また、上記処理液３の２００ｍＬに、エタノール１４０ｍＬ及び水６０ｍＬ加え、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学社製）を充填した吸着カラムに通液させた。次いで、４０容量％エタノール０．６Ｌで洗浄し、最後に６０容量％エタノール１Ｌで回収して、６０容量％エタノール画分を乾燥して表３の比較例３の固形分１．９８ｇを得た。
【００４０】
得られた各抽出物を、上記と同様の方法で着色度及びＲｇ３量、並びに着色低減率（着色低減率（％）＝１−（処理前の吸光度／処理後の吸光度）×１００）を測定し、その結果を下記表３に示す。
【００４１】
【表３】
2015212260.tif 000005
【００４２】
上記表３の結果より、吸着カラム処理をした実施例１、２のニンジン抽出物は、吸着カラム処理前のものに比べて、着色を低減した。また活性炭処理をした比較例１、２は、着色を低減するが、ニンジン抽出物中のＲｇ３量が大幅に低減した。また、エタノール処理をしない比較例３は、着色が低減されなかった。
【００４３】
試験例２：色安定性
上記実施例１と同様の方法で得られたニンジン抽出物Ａ、及び上記比較例１と同様の方法で得られたニンジン抽出物Ｂの着色度、並びに６０℃で１か月放置した後の着色度を、上記と同様の方法で測定し、その結果を下記表４に示す。
【００４４】
【表４】
2015212260.tif 000006
【００４５】
上記表４の結果より、エタノール抽出処理及び吸着カラム処理をしたニンジン抽出物Ａは、吸着カラム処理をしなかったニンジン抽出物Ｂに対して、色安定性が向上した。
【００４６】
試験例３：抽出条件の検討
紅参（新和物産より入手）１００ｇを粉砕し、イオン交換水８５０ｍＬを加え、下記表５に示す条件で抽出した。粗抽出液にエタノール３４００ｍＬを加えた後、濾過し、溶媒を除き抽出物を得た。それぞれについて、抽出物を乾燥した時に残る残量である固形分量（固形分）１ｇ当たりのＲｇ３量を求めた（Ｒｇ３の定量は、試験例１で示した方法と同様）。結果を表５に併せて示す。
【００４７】
【表５】
2015212260.tif 000007
【００４８】
表５より、ニンジン抽出は、９０℃を超える温度で行うことが好ましく、１００℃、３０時間で行うことが最適であることが確認された。