(57)【要約】      （修正有）【課題】安全で実用性が高い運動様作用を有する組成物、該組成物を含有する筋肉増強剤、ＨＤＬコレステロール上昇剤、及び動物用飼料の提供。【解決手段】レスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理して得られる運動様作用を有する組成物。該組成物を含有する筋肉増強剤、ＨＤＬコレステロール上昇剤及び動物用飼料。下式で表わされる等の３種類のレスベラトロール誘導体を含む前記運動様作用を有する組成物。2015193547.tif 000011【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理して得られることを特徴とする運動様作用を有する組成物。
【請求項２】
式（１）：
【化１】
2015193547.tif 000008
、式（２）：
【化２】
2015193547.tif 000009
及び式（３）：
【化３】
2015193547.tif 000010
で示される３種類のレスベラトロール誘導体を含有する請求項１記載の運動様作用を有する組成物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の運動様作用を有する組成物を含有することを特徴とする筋肉増強剤。
【請求項４】
運動様作用がミオスタチン分泌抑制作用である請求項３に記載の筋肉増強剤。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の運動様作用を有する組成物を含有することを特徴とするＨＤＬコレステロール上昇剤。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の運動様作用を有する組成物を含有することを特徴とする動物用飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理するまったく新しい方法によって得られる運動様作用を有する組成物、該組成物を有効成分とする筋肉増強剤及びＨＤＬコレステロール上昇剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在、発酵、合成など様々な方法を用いて高機能成分が取得され、食料品や医薬品などの幅広い分野に利用されている。しかし、有用性と実用性を両立させるものは数が限られている。さらに未だ報告されていない新規な化合物を含有する組成物では、生産の難しさから有用性と実用性を両立させることがより困難である。
【０００３】
本発明者らは、単離も容易であり、かつ簡便な方法で、さらに食品由来の成分を用いて高い機能性を有する新規な化合物を含有する組成物を作製する画期的な方法を見出している（特許文献１）。しかし、その用途範囲は広いとはいえず、見出されていない用途が数多くあるものと推察される。
【０００４】
過剰なストレスや食物摂取、運動不足が蔓延している現在の社会生活においては、これらが原因となるメタボリックシンドロームが大きな社会問題になっている。メタボリックシンドロームとは、内蔵脂肪型肥満に加えて高血糖、高血圧、脂質異常のうち二つ以上を併せ持った状態であり、脳梗塞・動脈硬化・心筋梗塞などの循環器系疾患のリスクが高くなった状態をいう。
【０００５】
メタボリックシンドロームの予防には適度な運動が最も効果的である。しかし、時間の限られた現代社会において、運動を定期的に実施するのが困難である場合が多い。また、継続的な運動も日常生活との兼ね合いから続かないことが多い。そのような場合において簡易的な運動装置も数多く開発されているが運動としての効果と継続性に問題がある場合が多い。
【０００６】
運動効果の有効性は認められているが、実社会生活において継続的な運動の実施に課題を有する現状を打開するために、運動効果をより増強したり、摂取することで運動せずに運動した場合に得られる効果を発揮させる薬剤の開発が進められている。このような薬剤としては例えば、カテキンは基礎代謝の向上や脂質代謝の向上が報告されている（特許文献２）。この場合、脂質代謝の向上や基礎代謝の向上が運動様効果といえる。しかし、その作用は脂質に限定されている。
また、化合物であるＡＩＣＡＲ（５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミドリボヌクレオチド）はＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ）を活性化することで運動様効果を発揮するとされている。しかし、用途が医薬品のみであるため健常人には使用できない。メタボリックシンドローム等は治療も重要であるが、予防することがより重要になってくる。従って、運動様作用及び使用用途がより広く、且つ安全な素材の開発が求められている。
【０００７】
運動により変化する生理学的現象として、ミオスタチンの分泌抑制がある。ミオスタチン（ＧＤＦ−８）とは、筋肉増殖抑制因子であり、筋肉発達抑制ホルモンとして報告されている（非特許文献１）。このホルモンは運動によって血中濃度が減少することが報告されている（非特許文献２）。従って、ミオスタチンの分泌を抑制したり、作用を阻害することは筋肉の増強および運動機能の向上には有用である。
【０００８】
さらに、俗に善玉コレステロールと呼ばれるＨＤＬコレステロールの上昇も運動により変化する生理的現象のひとつである。このＨＤＬコレステロールは組織から余剰なコレステロールを引き出す作用を有することがよく知られている。この作用により動脈硬化をはじめとする循環器系疾患の予防に効果を有するといわれている。これまで動脈硬化の危険因子として総コレステロール値が注目されてきた。従ってスタチン系薬剤等のコレステロール値を下げる医薬品や特定保健用食品が販売されているが、近年、悪玉コレステロールと呼ばれるＬＤＬコレステロールとＨＤＬコレステロールの差（ＬＨ比）が循環器系疾患の発症率と高い相関があるとして注目されている。そして、ＨＤＬコレステロール値は肥満や運動不足によって数値が下がることや、一定期間の運動療法によってその数値が改善されることも知られている。
【０００９】
これらの運動様作用についての有効性を実現するために本発明者らが注目したのが一定の有効性と高い安全性を兼ね備えた機能性成分として有名なレスベラトロールである。
【００１０】
赤ワインに含まれていることで有名なレスベラトロールは１９９７年、高い抗ガン作用があることが報告された（非特許文献３）。この報告によりレスベラトロールに注目が集まり、多くの疾病に効果があることが明らかにされつつある（非特許文献４）。フランスにおいて循環器系疾患の発症率が著しく低い「フレンチパラドックス」とよばれる現象は赤ワインの摂取量と相関があることが知られており、レスベラトロールの抗酸化作用・抗炎症作用などによる心血管保護作用が要因であるといわれている。
【００１１】
前記のレスベラトロールはまた運動機能や筋肉のエネルギー代謝に有用な効果を示すことが先行技術で報告されている。たとえばレスベラトロールを有効成分とする持久力向上剤（特許文献３）、レスベラトロールを有効成分とするミトコンドリア生合成を維持する又は増強する組成物（特許文献４）が報告されている。また、レスベラトロールは１日１５０ｍｇ３０日間摂取のヒト臨床試験において筋肉組織の代謝に重要な因子であるＡＭＰＫが活性化されることが報告され（非特許文献５）、同時にインスリン抵抗性指数であるＨＯＭＡ−Ｒの改善も認められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特願２０１３−２６７４７３号公報
【特許文献２】特開２００４−１６１６１６号公報
【特許文献３】特許第４７３９１６１号公報
【特許文献４】特表２０１２−５２４０３３号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】ＮＡＴＵＲＥ，３８７，ｐ８３−９０（１９９７）
【非特許文献２】Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｓｐｏｒｔｓ  Ｅｘｃｒｃ．，４２（１１），ｐ２０２３−２０２９（２０１０）
【非特許文献３】Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５（１０），ｐ２１８−２２０（１９９７）
【非特許文献４】Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，５，ｐ４９３−５０６（２００６）
【非特許文献５】Ｃｅｌｌ，１３４，ｐ４０５−４１５（２００８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明者らが発明した技術で得られた新規化合物を含む組成物の効果を鋭意検討した結果、驚くべきことに、レスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理した組成物にミオスタチン分泌抑制作用に伴う筋肉増強作用、ＨＤＬコレステロール上昇作用が認められ、運動様作用を有することを見出すことに初めて成功し、本発明を完成するに至った。
【００１５】
したがって、本発明は、安全で実用性が高い運動様作用を有する組成物、該組成物を含有する筋肉増強剤、ＨＤＬコレステロール上昇剤、及び動物用飼料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の要旨は、
〔１〕レスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理して得られることを特徴とする運動様作用を有する組成物、
〔２〕式（１）：
【００１７】
【化１】
2015193547.tif 000002
【００１８】
、式（２）：
【００１９】
【化２】
2015193547.tif 000003
【００２０】
及び式（３）：
【００２１】
【化３】
2015193547.tif 000004
【００２２】
で示される３種類のレスベラトロール誘導体を含有する請求項１記載の運動様作用を有する組成物、
〔３〕前記〔１〕又は〔２〕に記載の運動様作用を有する組成物を含有することを特徴とする筋肉増強剤、
〔４〕運動様作用がミオスタチン分泌抑制作用である前記〔３〕に記載の筋肉増強剤、
〔５〕前記〔１〕又は〔２〕に記載の運動様作用を有する組成物を含有することを特徴とするＨＤＬコレステロール上昇剤、
〔６〕前記〔１〕又は〔２〕に記載の運動様作用を有する組成物を含有することを特徴とする動物用飼料
に関する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の運動様作用を有する組成物は、安全性が高く、製造方法も簡便なものであることから実用性が高いため、新規の運動様作用を有する組成物として有用である。
本発明の運動様作用を有する組成物は、ミオスタチン分泌抑制作用を有することから、筋肉増強剤の有効成分として有用である。
また、本発明の運動様作用を有する組成物は、ＨＤＬコレステロール上昇作用を有することから、ＨＤＬコレステロール上昇剤として有用である。
また、本発明の運動様作用を有する組成物を食品、医薬品、医薬部外品及び動物用飼料に配合することで、運動様作用の点で筋肉増強やＨＤＬコレステロール上昇を期待した機能性のある食品、筋肉が減衰する筋ジストロフィーや低ＨＤＬコレステロール血症などを治療するための医薬品、筋肉増強やＨＤＬコレステロール上昇を目的とした医薬部外品及び成長促進や肉質改善を目的とした動物用飼料にすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は実施例１で製造した本発明の運動様作用を有する組成物のクロマトグラムを示す。番号はそれぞれ１：ＵＨＡ４００２、２：ＵＨＡ４００３、３：ＵＨＡ４０２２に対応している。
【図２】図２は実施例２で得られたラットの体重あたりの筋湿重量を示すグラフである。筋組織として大腿四頭筋、長指伸筋、前けい骨筋、ヒラメ筋、足底筋を採取・重量測定し、各筋組織の体重あたりの筋湿重量を算出した。図中、「コントロール」は高脂肪食群、「発明品」は１％発明品含有高脂肪食群を示す。また「＊」はt検定において高脂肪食群と有意差（ｐ＜０．０５）を有するものを示す。
【図３】図３は実施例２で得られたラットの総筋重量を示すグラフである。総筋重量とは大腿四頭筋、長指伸筋、前けい骨筋、ヒラメ筋、足底筋重量の和であり、総筋重量から体重あたりの総筋重量を算出した。図中、「コントロール」は高脂肪食群、「発明品」は１％発明品含有高脂肪食群を示す。また「＊」はt検定において高脂肪食群と有意差（ｐ＜０．０５）を有するものを示す。
【図４】図４は実施例３で得られたラットの血中ミオスタチン濃度を示すグラフである。  図中、「コントロール」は高脂肪食群、「０．１〜１．０％発明品」は、それぞれ０．１％、０．５％、１．０％発明品含有高脂肪食群を示す。また「＊」はt検定において高脂肪食群と有意差（ｐ＜０．０５）を有するものを示す。
【図５】図５は実施例４で得られたラットの血中コレステロール、ＬＤＬ／ＶＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール濃度を示すグラフである。図中、「コントロール」は高脂肪食群、「０．１〜１．０％発明品」は０．１％、０．５％、１．０％発明品含有高脂肪食群を示す。また「＊」はt検定において高脂肪食群と有意差（ｐ＜０．０５）を有するものを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の運動様作用を有するレスベラトロール加熱処理組成物は、レスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理することで得られることを特徴とする。
【００２６】
本発明において、「運動様作用を有する組成物」とは、ヒト又は非ヒト動物に投与することで、運動によって生じる生理学的な現象の発生を促進したり、又は前記現象を運動を行わずに発生させることができる組成物という。
「筋肉増強剤」とは、ヒト又は非ヒト動物において筋肉量を増大させることができる薬剤をいう。
「ミオスタチン分泌抑制作用」とは、ヒト又は非ヒト動物において血中ミオスタチン濃度を減少させる作用をいう。
また「ＨＤＬコレステロール上昇剤」とは、ヒト又は非ヒト動物において血中ＨＤＬコレステロール濃度を上昇させることができる薬剤をいう。
本発明では、これらの作用を少なくとも１つ有する組成物を「運動様作用を有する組成物」という。
なお、ヒト又は非ヒト動物への運動様作用は、具体的には、後述の実施例に記載の方法により測定することで確認することができる。
【００２７】
本発明者らは、鋭意検討した結果、レスベラトロールを加熱処理することで、有害な試薬や工程を必要とせずに運動様作用を有する組成物を効率的で安全に製造することができることを見出した。
【００２８】
本発明では、原料としてレスベラトロールを用いる。
【００２９】
レスベラトロールにはトランス体とシス体の構造異性体が存在するが、加熱や紫外線によってトランス体とシス体の変換が一部生じる。したがって、本発明で使用するレスベラトロールとしては、トランス体でもシス体でも、あるいはトランス体とシス体の混合物であってもよい。
【００３０】
また、レスベラトロールには、薬学的に許容可能な塩も含まれる。薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬学的に許容可能な塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００３１】
前記レスベラトロールは、ブドウ果皮から抽出・精製した天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であってもよい。天然由来のレスベラトロールを用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、後述のように所望の生成反応が進み最終的に本発明の運動様作用を有する組成物が得られることから、レスベラトロール以外の成分を含む混合物も使用できる。
ただし、有効性を十分に発揮させる組成物を生成させるためには一定量のレスベラトロールが必要なことから、レスベラトロール換算で１重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。
前記レスベラトロールを含有する混合物としては、ブドウ果皮、ワイン、ワイン濃縮パウダー、メリンジョ、リンゴンベリー、ピーナッツ、イタドリ根もしくは根茎、パッションフルーツ種子等の原料からの抽出物、これらの抽出物の凍結乾燥品等が挙げられる。
【００３２】
本発明では、レスベラトロールを適切な溶媒に溶解若しくは分散させる。この際、溶媒としては、特に限定はなく、水、水と有機溶媒の混合液、有機溶媒のいずれでもよい。水と有機溶媒の混合液の場合には、その配合比や有機溶媒の種類については特に制限はない。中でも、水やメタノール、エタノールのみの溶媒や、水とメタノール、水とエタノール等の混合液を使用することが、安全性やコスト面から好ましい。前記の加熱反応後に得られる組成物に対して最終的な精製を十分に適用せずにその組成物を医薬品、医薬部外品、動物用飼料等に使用する場合には、安全性や法規面から溶媒として水やエタノール、含水エタノールを使用することが望ましい。
【００３３】
前記のようにして得られるレスベラトロールを含有する溶液（以下、レスベラトロール含有溶液ともいう。）中のレスベラトロールの濃度について特に制限はない。レスベラトロールの濃度が高いほど、溶媒使用量が少なくてすむ等のメリットもあるため、レスベラトロールは飽和濃度以上として溶液中において完全に溶解していなくともよい。
【００３４】
次に、前記レスベラトロール含有溶液のｐＨをアルカリ性となるように調整する。調整方法として、例えば、レスベラトロール含有溶液を調製した後にアルカリ化剤を添加してｐＨを調整してもよいし、前記溶液の調製時に前もって溶媒のｐＨを調整しておいてもよい。レスベラトロール含有溶液の加熱開始時のｐＨは８．０以上であれば、効率的に後述のように複数の有用なレスベラトロール誘導体を生成する反応が進むので好ましく、ｐＨ１３．０を超えると反応と同時に、他の反応や目的化合物の分解も一方で生じるために最終的なレスベラトロール誘導体群の回収量が低下する傾向がある。したがって、反応開始時のｐＨは８〜１３．０が望ましい。
【００３５】
前記アルカリ化剤としては、特に制限はないが、安全性、効率及びコスト面からは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどが望ましい。反応時のｐＨ変化を極力抑える場合が生じた際には、緩衝溶液を用いてもよいが、必ずしも必要な手法ではない。
【００３６】
次に、アルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液を加熱処理する。この加熱処理により、レスベラトロールどうしを環化反応させることで、有用な化合物が生成する。このような有用な化合物としては、式（１）：
【００３７】
【化４】
2015193547.tif 000005
【００３８】
、式（２）：
【００３９】
【化５】
2015193547.tif 000006
【００４０】
、式（３）：
【００４１】
【化６】
2015193547.tif 000007
【００４２】
で示される種類のレスベラトロール誘導体が挙げられる。
【００４３】
前記レスベラトロール誘導体において、炭素−炭素２重結合は、トランス体又はシス体であってもよく、シス体とトランス体との混合物を含む。
【００４４】
前記レスベラトロール誘導体としては、その薬学的に許容可能な塩であってもよい。
【００４５】
前記レスベラトロール誘導体の薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩； マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩； アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩； アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００４６】
本発明において前記レスベラトロール誘導体を形成するための環化反応とは、レスベラトロールどうしが重合反応することで６員環を形成する反応をいう。
前記環化反応を効率的に進ませるために、アルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液の加熱温度は１１０℃以上に調整することが好ましい。また、使用する溶媒の沸点から考え、加圧加熱が望ましい。例えば、開放容器にアルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液を入れ、溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加熱する、密閉容器にアルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液を入れ、前記容器を加熱する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加熱する、超臨界装置やプレッシャークッカー等の装置を用い加圧加熱する等、少なくとも部分的にアルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液の温度が１１０℃以上に達するように加熱することが好ましい。前記レスベラトロール誘導体などの回収効率面から、アルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液の温度が均一に１１０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、３０〜１２０分の加熱時間が望ましい。また、加熱は、一度でもよいし、複数回に分けて繰り返し加熱してもよい。複数回に分けて加熱する場合、蒸発した溶媒を補うために溶媒を新たに追加して行うことが好ましい。
【００４７】
前記加熱処理による前記式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体などの生成反応の終了は、例えば、後述のようにＨＰＬＣによる成分分析により生成量を確認して判断すればよい。具体的には、前記の生成をクロマトグラム上で確認されているかを評価すればよい。
なお、前記式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体の生成量については、本発明の運動様作用を有する組成物中に多いほど遅筋形成促進作用が強くなるので好ましいが、具体的には、それぞれの総量が本発明の運動様作用を有する組成物中に１重量％以上であればよい。
また、式（１）、式（２）、式（３）で表されるレスベラトロール誘導体のそれぞれの含有比率については特に限定はない。
【００４８】
また、風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記反応物を濃縮して式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体の濃度を高める、あるいは前記反応物を脱塩精製し、式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体の濃度を高めたものを得ることができる。前記濃縮や精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等の溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出して式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体を濃縮できる。また、カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。たとえば担体として合成吸着剤を用いて濃縮することが可能である。また、前記濃縮や精製には、再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。
中でも、合成吸着剤を用いることで、前記式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体を吸着させ、その後、溶出することで容易に濃縮、精製ができる。前記合成吸着剤としては、例えば、三菱化学株式会社製のダイヤイオン（登録商標）ＨＰシリーズ、セパビーズ（登録商標）ＳＰシリーズなどの芳香族系合成吸着剤、オルガノ株式会社製のアンバーライト（登録商標）ＸＡＤシリーズなどのスチレン系合成吸着剤などが挙げられる。
【００４９】
また、前記濃縮物や生成物を必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒除去することで、粉末状の固形物を得ることができる。
【００５０】
なお、本発明の運動様作用を有する組成物を安全な原料のみを用いて製造した場合には、そのまま食品、医薬品、医薬部外品又は動物用飼料に使用することが可能である。例えば、天然由来のレスベラトロールを含水エタノール溶媒に溶解し、水酸化ナトリウムや炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどのアルカリ化剤を添加して加熱処理した場合には、得られる反応液を食品、医薬品、医薬部外品又は動物用飼料の原料の一つとして使用することが可能である。
【００５１】
また、得られた組成物は公知の方法を用いて溶解性を向上させてもよい。たとえばシクロデキストリンを添加する方法などが挙げられるが、特に限定はない。
【００５２】
以上のようにして得られる式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体を含む本発明の運動様作用を有する組成物は、優れた運動様作用を有する。したがって、本発明の運動様作用を有する組成物は、優れた運動様作用を有する組成物であり、筋肉増強剤、ミオスタチン分泌抑制剤及びＨＤＬコレステロール上昇剤として好適に使用することができる。
【００５３】
本発明の運動様作用を有する組成物は、有効成分として組成物のみからなるものであってもよいが、前記組成物をエタノール又はエタノール含有水溶液等の溶媒に溶解した液剤としたり、公知の方法で乳剤、懸濁剤としたりしてもよい。液剤、乳剤又は懸濁剤中の本発明の運動様作用を有する組成物の含有量は、固形分として０．００１重量％以上であればよい。
【００５４】
本発明の運動様作用を有する組成物は、医薬品として製剤化してもよい。この製剤形態としては特に限定されず、例えば、注射剤、坐剤、点眼剤、軟膏剤、エアゾール剤等の非経口剤、錠剤、被覆錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、トローチ剤、チュアブル錠、シロップ剤等の経口剤等が挙げられる。製剤化の際には、薬学的に許容される担体、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、希釈剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤等が用いられる。
【００５５】
担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、マルトース、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、イノシトール、デキストラン、ソルビトール、アルブミン、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５６】
滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール及びこれらの混合物等が挙げられる。
結合剤としては、例えば、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、水、エタノール、リン酸カリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５７】
崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５８】
希釈剤としては、例えば、水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類及びこれらの混合物等が挙げられる。
安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５９】
等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ホウ酸、ブドウ糖、グリセリン及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００６０】
ｐＨ調整剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００６１】
さらに本発明の運動様作用を有する組成物は、増量剤、可溶化剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、抗酸化剤、細菌抑制剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を含んでいてもよい。
【００６２】
また、錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施したりすることもできる。また、胃溶性又は腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、公知の可溶化処理を施すこともできる。
【００６３】
本発明の運動様作用を有する組成物を使用する場合、例えば、本発明の運動様作用を有する組成物の摂取量は、所望の効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択されるが、例えば、成人１日当たり、固形分として約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ／ｋｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。
【００６４】
また、本発明の運動様作用を有する組成物を医薬部外品の形態に製剤化してもよい。医薬部外品としては特に限定されないが、例えば、ドリンク剤等の栄養補助医薬部外品が好ましい。この場合、有効成分であるエキスの医薬部外品における含有量は、固形分として０．００１〜３０重量％程度であればよい。
【００６５】
また、本発明の運動様作用を有する組成物は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤又は飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。
【実施例】
【００６６】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。
【００６７】
（実施例１：レスベラトロールアルカリ加熱処理組成物の調製）
レスベラトロールアルカリ加熱処理組成物を以下の手順で行った。トランス−レスベラトロール（（株）ＴＥＣＮＯ  ＳＣＩＥＮＣＥ社製）４０ｇに、１０％炭酸ナトリウム（和光純薬工業（株）社製）水溶液を４００ｍＬ加えて、レスベラトロール含有水溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液を圧力鍋（ゼロ活力なべ、アサヒ軽金属工業株式会社製）にて１２８℃、１２０分間加熱し、レスベラトロール誘導体含有溶液を調製した。
【００６８】
次いで、レスベラトロール誘導体含有溶液を４．０ｋｇの合成吸着剤ダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）に全量供した。前記合成吸着剤を蒸留水２４Ｌで洗浄後、１００％エタノール１６Ｌで溶出させ、得られた溶出液から減圧乾燥にて溶媒を除去し、固体状のレスベラトロールアルカリ加熱処理組成物２２ｇを得た。
【００６９】
得られたレスベラトロールアルカリ加熱処理組成物を２ｍｇ／ｍＬの濃度でメタノールに溶解させ、そのうち１０μＬをＨＰＬＣにより分析した。
【００７０】
ＨＰＬＣ分析は下記の条件にて行った。
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  ＵＧ８０カラム（４．６ｍｍＩ．Ｄ.×２５０ｍｍ、資生堂株式会社製）
移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、和光純薬株式会社製）／Ｈ2Ｏ
移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル（和光純薬株式会社製）
勾配（容量％）：１００％Ａ／０％Ｂから０％Ａ／１００％Ｂまで３３分、０％Ａ／１００％Ｂを７分（すべて直線）
【００７１】
得られたクロマトグラムを図１に示す。レスベラトロールアルカリ加熱処理組成物中にはレスベラトロールのピーク（溶出時間１５分）とは異なる複数のピークが検出できた。
【００７２】
次に、得られた反応物のうち、図１の（１）、（２）、（３）に示されるピークに含まれる化合物を分取ＨＰＬＣにより単離し、常法により乾燥したところ、（１）、（２）に示されるピークに含まれる化合物は淡褐色粉末状の物質、式（３）に示されるピークに含まれる化合物は褐色粉末状の物質となった。
【００７３】
次いで、前記３種類の化合物の分子量を、特開２０１１−２５１９１４号公報の実施例２に記載の方法に従って、高分解能Ｎｅｇａｔｉｖｅ−ＦＡＢ−ＭＳ（高速原子衝撃質量分析）にて測定し、核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定を行った結果、（１）のピークに含まれる化合物は、前記式（１）で表される化合物（以下、ＵＨＡ４００２という。）、（２）のピークに含まれる化合物は前記式（２）で表される化合物（以下、ＵＨＡ４００３という。）（３）のピークに含まれる化合物は前記式（３）で表される化合物（以下ＵＨＡ４０２２という。）であることがわかった。
【００７４】
また、レスベラトロールのかわりにレスベラトロール含有素材（サンブライト（株）製、商品名「ビネアトロール２０M」）を用いた以外は上記と同様にした場合においても、ＵＨＡ４００２、ＵＨＡ４００３およびＵＨＡ４０２２を含有するレスベラトロールアルカリ加熱処理組成物を調製することができた。
【００７５】
以下の実施例においてはレスベラトロールより製造したレスべラトロールアルカリ加熱処理組成物を用いて検討を行った。
【００７６】
（実施例２：筋肉増強作用の検討）
実施例１で得られたレスべラトロールアルカリ加熱処理組成物（以下、本発明品ともいう。）の運動様作用として筋肉増強作用を調べた。
本発明品の筋肉増強作用の検証には、９週齢のＳＤラット雄（日本クレア株式会社製）を用いた。具体的には、８週齢のＳＤラットを７日間の予備飼育（飼料：通常食）を行った後、各群の平均体重がほぼ等しくなるように各群３匹として２群（高脂肪食群、本発明品１％含有高脂肪食群）に分け、それぞれに試験飼料を７日間自由摂取させた。
試験終了後、１６時間絶食させた後に剖検し、大腿四頭筋、長指伸筋、前けい骨筋、ヒラメ筋、足底筋を採取した。各筋肉重量を測定し、体重当りの筋肉重量（ｇ％）を算出した。統計解析はＭｉｃｒｏｓｏｆｔ社のＥｘｃｅｌのｔ検定を用いて行い、有意水準を５％未満とした。
【００７７】
結果を図２及び図３に示す。図２に示すように本発明品によって有意な筋肉の増加が認められ、図３に示すように総筋重量においても有意な増加が認められた。従って、本発明品は新規な筋肉増強剤として有用であることがわかる。
【００７８】
（実施例３：ミオスタチン分泌抑制作用の検討）
本発明品の運動様作用としてミオスタチン分泌抑制作用を調べた。本発明品のミオスタチン分泌抑制作用の検証には、９週齢のＳＤラット雄（日本クレア株式会社製）を用いた。具体的には、８週齢のＳＤラットを７日間の予備飼育（飼料：通常食）を行った後、各群の平均体重がほぼ等しくなるように各群５匹として４群（高脂肪食群、本発明品０．１％含有高脂肪食、本発明品０．５％含有高脂肪食群、本発明品１％含有高脂肪食群）に分け、それぞれに試験飼料を２１日間自由摂取させた。
試験終了後、１６時間絶食させた後に血液を採取し、血清及び血漿を調製した。ミオスタチンＥＬＩＳＡキット（ＵＳＣＮ社製）を用いて得られた血漿中のミオスタチン濃度を定量した。方法はキット付属のプロトコールに準じて実施した。得られた結果の統計解析はＭｉｃｒｏｓｏｆｔ社のＥｘｃｅｌのｔ検定を用いて行い、有意水準を５％未満とした。
【００７９】
結果を図４に示す。図４に示すように本発明品によって有意なミオスタチン濃度の減少が認められた。従って、本発明品は新規なミオスタチン分泌抑制を伴う筋肉増強剤として有用であることがわかる。
【００８０】
（実施例４：ＨＤＬコレステロール上昇作用の検討）
本発明品の運動様作用としてＨＤＬコレステロール上昇作用を調べた。本発明品のＨＤＬコレステロール上昇作用の検討には実施例３で得られたラットの血清を用いて行った。ＨＤＬ  ａｎｄ  ＬＤＬ／ＶＬＤＬ定量キット（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ社製）を用いてＨＤＬコレステロールとＬＤＬ／ＶＬＤＬコレステロールを測定した。方法はキット付属のプロトコールに準じて実施した。得られた結果の統計解析はＭｉｃｒｏｓｏｆｔ社のＥｘｃｅｌのｔ検定を用いて行い、有意水準を５％未満とした。
【００８１】
結果を図５に示す。図５に示すように本発明品によって有意なＨＤＬコレステロールの上昇が認められた。従って、本発明品は新規なＨＤＬコレステロール上昇剤として有用であることがわかる。
【００８２】
なお、本発明者らは、前記式（１）〜（３）で表されるレスベラトロール誘導体について「白色脂肪細胞の褐色様細胞分化促進剤」（特願２０１３−１５７６５９）や「遅筋形成促進剤」（特願２０１３−１５７６６０）を報告しているものの、前記レスベラトロール誘導体が筋肉増強作用、ミオスタチン分泌抑制作用、ＨＤＬコレステロール上昇作用の運動様作用に関連することは報告していない。従って、筋肉増強作用やＨＤＬコレステロール上昇作用などの運動様作用は、本発明で初めて見出した新規の用途である。
【００８３】
（実施例５：本発明品を含有する食品）
実施例１と同様にして得られた本発明品１ｇをあらかじめ１００ｍＬのエタノールに溶解させ、これに砂糖５００ｇ、水飴４００ｇを混合溶解し、生クリーム１００ｇ、バター２０ｇ、練乳７０ｇ、乳化剤１．０ｇを混合した後、真空釜にて−５５０ｍｍＨｇ減圧させ、１１５℃の条件下で濃縮し、水分値３．０重量％のミルクハードキャンディを得た。このミルクハードキャンディは、菓子として食べ易いものであることはもちろん、筋肉増強やＨＤＬコレステロール上昇を期待した機能性食品としても利用できる。
【００８４】
（実施例６：本発明品を含有する医薬品）
実施例１と同様にして得られた本発明品１ｇをエタノールに溶解し、得られた溶液を微結晶セルロースに吸着させて、減圧乾燥した。この微結晶セルロースに吸着された本発明品１０重量部、コーンスターチ２３重量部、乳糖１２重量部、カルボキシメチルセルロース８重量部、微結晶セルロース３２重量部、ポリビニルピロリドン４重量部、ステアリン酸マグネシウム３重量部、タルク８重量部を混合し打錠することで、本発明品を含む打錠剤を得た。この打錠剤は筋肉が減衰する筋ジストロフィーや低ＨＤＬコレステロール血症などの治療薬としても利用できる。
【００８５】
（実施例７：本発明品を含有する医薬部外品）
実施例１と同様にして得られた本発明品１．２ｇをエタノールに溶解させて得られたエタノール溶液１０ｍＬ、タウリン２０ｇ、ビタミンＢ１硝酸塩０．１２ｇ、安息香酸ナトリウム０．６ｇ、クエン酸４ｇ、砂糖６０ｇ及びポリビニルピロリドン１０ｇを精製水に溶解し、全量を１０００ｍＬにメスアップした。なお、ｐＨは、希塩酸を用いて３．２に調整した。得られた溶液１０００ｍＬのうち５０ｍＬをガラス瓶に充填し、８０℃で３０分間滅菌して、医薬部外品であるドリンク剤を得た。このドリンク剤は筋肉増強やＨＤＬコレステロール上昇を目的とした医薬部外品としても利用できる。
【００８６】
（実施例８：本発明品を含有する動物用飼料）
実施例１と同様にして得られた本発明品５０ｇ、粉末の大豆粕、魚肉ミンチ、米ヌカ、小麦、とうもろこしを混合し、これに大豆油、ビタミン類、ミネラル類を加えて成型し、動物用飼料１ｋｇを得た。得られた動物用飼料は成長促進や肉質改善を目的とした動物用飼料としても利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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