(57)【要約】【課題】ヒト皮膚に適用する絆創膏や貼付剤を含む被検物質の皮膚刺激(痒み)の評価方法において、テープの硬さや透湿度による物理刺激だけでなく、粘着剤成分による化学刺激などを含めて総合的及び客観的に当該被検物質を評価できる方法を提供する。【解決手段】非ヒト動物の皮膚に被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定する。前記非ヒト動物の皮膚は、少なくとも一部の体毛が除去されていることが好ましく、当該体毛が除去された皮膚の毛周期が休止期にあることがさらに好ましい。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト動物の皮膚に被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする、被検物質による痒みの評価方法。
【請求項２】
非ヒト動物の皮膚から少なくとも一部の体毛を除去し、当該体毛が除去された皮膚に被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする、被検物質による痒みの評価方法。
【請求項３】
前記体毛が除去された皮膚の毛周期が休止期にある請求項２に記載の評価方法。
【請求項４】
前記評価に用いられる非ヒト動物が、生後４５〜９０日齢のマウスである請求項１〜３の何れか一項に記載の評価方法。
【請求項５】
前記体毛が除去された皮膚領域が、マウスの背部、好ましくは頭側背部である請求項１〜４の何れか一項に記載の評価方法。
【請求項６】
前記被検物質が、ヒト皮膚用粘着テープ又は外用剤である請求項１〜５の何れか一項に記載の評価方法。
【請求項７】
ヒト皮膚用粘着テープが、貼付材又は貼付剤(経皮吸収剤)である請求項６に記載の評価方法。
【請求項８】
ヒト皮膚用粘着テープが、貼付材である請求項６又は７に記載の評価方法。
【請求項９】
前記被検物質を皮膚に適用後、５〜６０分間にわたって前記動物の引っ掻き行動を測定する請求項１〜８の何れか一項に記載の評価方法。
【請求項１０】
基材及び／又は粘着剤成分の異なる複数のヒト皮膚用粘着テープを用意し、請求項１〜９の何れか一項に記載の方法により、前記それぞれの粘着テープの痒みを評価し、相対的に痒みの程度の少ない粘着テープを選択することを特徴とするヒト皮膚用粘着テープのスクリーニング方法。
【請求項１１】
毛周期が同期して休止期にある皮膚領域の少なくとも一部の体毛が除去されていることを特徴とする、痒みの評価用非ヒトモデル動物。
【請求項１２】
前記動物が、生後４５〜９０日齢のマウスである請求項１１に記載の非ヒトモデル動物。
【請求項１３】
前記体毛を除去する領域がマウスの頭側背部である請求項１２に記載の非ヒトモデル動物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚に適用する絆創膏や貼付剤等の皮膚用粘着テープ及び外用剤等についての皮膚刺激(痒み)の定量方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
痒みは、皮膚等に起こる、引っ掻き反射を引き起こす感覚をいう。痒みが起きる原因は、ヒスタミンなどの化学物質による刺激、アトピー性皮膚炎や接触性皮膚炎等の皮膚疾患及び、閉塞性黄疸や糖尿病などの病気や心理的要因、ストレスなど多岐にわたるが、皮膚用粘着テープなどの異物との接触も１つの原因として挙げられる。
このような異物による皮膚刺激性を評価する方法としては、特許文献１には、貼付材の粘着面同士を貼りあわせて圧着した後、１８０度角定速剥離強度試験を行い、その接着力によって皮膚刺激を評価する方法が開示されている。しかし、この評価方法で得られるものは貼付材の接着力による皮膚からの剥離時の皮膚刺激(痛み)であり、貼付中の皮膚刺激(痒み)を評価することはできないという問題がある。
【０００３】
特許文献２には、貼付材の引張試験及び貼付後の表皮の厚みから皮膚刺激を評価する方法が開示されている。しかし、引張試験からは貼付材の硬さによる物理的刺激は評価できるものの、透湿度のような要因を含めた物理刺激や化学刺激を評価することは難しいという問題がある。また、貼付材剥離後の皮膚の組織切片から表皮厚みを測定し、貼付中の皮膚刺激を評価する方法も開示されているが、表皮厚みと痒みとの相関性は不明であり、貼付中のなんらかの刺激を評価することはできるものの、痒みを評価するのは難しいと考えられる。
【０００４】
近年、痒みの評価方法としてcompound48/80をマウスに皮下注射することによって痒みの指標とされる引っ掻き行動が惹起されることが報告され（非特許文献１参照）、これに続いて、特許文献３には動物の引っ掻き行動を測定し、鎮痒物質をスクリーニングする方法（スクラッチ試験）が開示されている。このようにスクラッチ試験は動物の引っ掻き行動から皮膚刺激、特に痒みを評価するために確立された方法であるが、外用剤の鎮痒効果の評価に用いられることが多く、絆創膏や貼付剤そのものの皮膚刺激を客観的に評価する方法は知られていなかった。
【０００５】
また、一般的に貼付材の皮膚刺激の評価として、ウサギの皮膚一次刺激性試験や累積皮膚刺激性試験において目視判定が行なわれている。しかし、貼付材剥離後の皮膚の紅斑をDraizeらの基準(非特許文献２)により段階的スコアによって判定したものであり、軽微な差異を評価する上で好ましいものではなく、また紅斑と痒みの相関性も不明であった。
貼付材の皮膚刺激の指標としては、ヒトによる官能試験によっても評価は可能であるが、より客観的な評価が必要とされている。また、角質剥離量を評価することもできるが、貼付中の痒みとの相関性は不明である。さらに、薬剤を含有する貼付剤については、未承認の製剤をスクリーニングのためにヒトに貼付することには問題があるといえる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第３４０７８９５号公報
【特許文献２】特許第４１９７５１１号公報
【特許文献３】特許第４４３７２５１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Kuraisi Y. et al., Eur. J. Pharmacol., 275, 229-233 (1995)
【非特許文献２】Draize J. H., The Journal of pharmacology and experimental therapeutics, 1944年, 第82巻, p 377
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ヒト皮膚に適用する絆創膏や貼付剤を含む被検物質の皮膚刺激(痒み)の評価方法において、テープの硬さや透湿度による物理刺激だけでなく、粘着剤成分による化学刺激などを含めて総合的及び客観的に当該被検物質を評価できる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
【００１０】
［１］非ヒト動物の皮膚に被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする、被検物質による痒みの評価方法。
［２］非ヒト動物の皮膚から少なくとも一部の体毛を除去し、当該体毛が除去された皮膚に被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする、被検物質による痒みの評価方法。
［３］前記体毛が除去された皮膚の毛周期が休止期にある［２］に記載の評価方法。
［４］前記評価に用いられる非ヒト動物が、生後４５〜９０日齢のマウスである［１］〜［３］に記載の評価方法。
［５］前記体毛が除去された皮膚が、マウスの背部、好ましくは頭側背部である［１］〜［４］何れかに記載の評価方法。
［６］前記被検物質が、ヒト皮膚用粘着テープ又は外用剤である［１］〜［５］の何れかに記載の評価方法。
［７］ヒト皮膚用粘着テープが貼付材又は貼付剤(経皮吸収剤）であるである［１］〜［５］の何れかに記載の評価方法。
［８］ヒト皮膚用粘着テープが、貼付材である［１］〜［６］の何れかに記載の評価方法。
［９］前記被検物質を皮膚に適用後、５〜６０分間にわたって前記動物の引っ掻き行動を測定する［１］〜［８］の何れかに記載の評価方法。
【００１１】
［１０］基材及び／又は粘着剤成分の異なる複数のヒト皮膚用粘着テープを用意し、［１］〜［９］の何れかに記載の方法により、前記それぞれの粘着テープの皮膚刺激（痒み）を評価し、相対的に皮膚刺激（痒み）の程度の少ない粘着テープを選択することを特徴とするヒト皮膚用粘着テープのスクリーニング方法。
［１１］毛周期が同期して休止期にある皮膚領域の少なくとも一部の体毛が除去されていることを特徴とする、皮膚刺激（痒み）の評価用非ヒトモデル動物。
［１２］前記動物が、生後４５〜９０日齢のマウスである［１１］に記載の非ヒトモデル動物。
［１３］前記体毛を除去する領域がマウスの背部、好ましくは頭側背部である［１２］に記載の非ヒトモデル動物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の方法により、絆創膏や貼付剤等そのものの貼付中の皮膚刺激(痒み)を評価することができると共に、毛が生える動物の場合において、毛周期の休止期にあたる動物を用いることで、試験数日前に除毛操作をしても当日まで毛が伸びず、当日の除毛操作が必要ないため、サンプル適用直前までの刺激を最低限に抑制することができる。そのため、被検物質に由来する皮膚刺激のみをより正確に反映することができる。また、ヒトによる官能試験ではなく、動物の引っ掻き行動回数を数えるため、客観性及び定量性の点でも優れ、未承認の薬剤を含有する貼付剤も評価できる。
本発明の方法は、設計中の絆創膏、貼付剤、粘着剤について皮膚刺激(痒み)の観点からのスクリーニングに利用でき、同じ基材に異なる粘着剤を塗布したものを使用すれば、粘着剤による皮膚刺激を比較することも可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の方法を用いてテープＡの皮膚刺激（痒み）を評価した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
［定義］
本明細書において使用する「非ヒト動物」という用語は、脊椎動物に属する動物を包含し、好ましくは哺乳動物を意味する。更なる好ましい一実施態様において、非ヒト動物は齧歯類である。特に、齧歯類は、ハツカネズミ属（Mus）（例えば、マウス）又はクマネズミ属（Ratius）（例えば、ラット）、又はアナウサギ属（Oryctologus）（例えば、ウサギ）又はゴールデンハムスター属（Mesocricetus）（例えば、ハムスター）から選択されてよい。特に好ましい非ヒト動物は、入手や飼育の容易性及び取り扱い易さの観点からマウス又はラットである。
【００１５】
本明細書において使用する「毛周期」という用語は、毛髪の成長サイクルを意味し、（１）成長期（毛包細胞が分裂を繰り返し、毛髪が活発に成長する期間）、（２）退行期（毛髪の成長が弱まり、毛包が萎縮する期間）、及び（３）休止期（毛包が完全に退縮し、休止している期間）、の順に３つの期からなる周期をいう。毛周期は、多くの動物では一生繰り返される。本明細書において、「休止期」とは、上述したように、毛包の幹細胞が新たな増殖や分化などを起こさず休止している時期をいう。
【００１６】
本明細書において使用する「ヒト皮膚用粘着テープ」という用語は、支持体と粘着剤が積層された粘着テープ又はシート状であり、ヒト皮膚に適用できるものをいう。ヒト皮膚用粘着テープの中には「貼付剤」と「貼付材」が含まれる。貼付剤は、粘着剤中に全身あるいは局所で作用することを目的とした薬物を含有し、一方、貼付材は薬物を含まないものとする。具体的には、貼付剤としては、パップ剤（水系）、プラスター剤（非水系）などが挙げられる。貼付材としては、サージカルテープ、創傷被覆材（ハイドロコロイド材、ウレタンフォーム材、救急絆創膏）、ドレッシング材、ハイドロゲル材、テーピングテープ、粘着包帯、穿刺部保護材が例として挙げられるがこれらに限定されない。
【００１７】
本明細書において使用する「外用剤」という用語は、薬物を含み通常皮膚に適用される形態の組成物を意味し、クリーム、軟膏、液状、フォーム（泡状）、及び乳液等の種々の形態を含むが、ただし貼付剤を除くものとする。
【００１８】
［評価に用いられる非ヒト動物］
本発明の方法では、非ヒト動物を用いて被検物質による皮膚刺激（痒み）を評価することを特徴とする。非ヒト動物は、身体の一部又は全体の毛周期が同期している動物が好ましい。この毛周期は、身体部位及びヒトの場合には毛１本ごとに相違するが、マウスでは体表全体の毛の周期が概ね同調することが分かっている。マウスの毛周期の最初の休止期は極めて短く、生後１９〜２１日頃であるが、その後、成長期及び退行期を経て、第２の休止期は長く、生後４０〜９０日頃まで続くと推定される。毛周期は一生の間繰り返されるため、特定の期間に限定されるものではないが、期間の長さ及び毛周期の同期性の観点から、生後４５〜９０日齢のマウスを用いることが好ましく、より好ましくは生後４５〜７５日齢のマウスであり、最も好ましくは、生後４９日〜５６日齢（７〜８週齢）のマウスを用いる。なお、毛が全身に生えていない状態或いはほぼ全身に毛が生えていないヘアレスラットやヘアレスマウスも「非ヒト動物」に含まれるものとする。この場合は、毛周期を考えずに被検物質を投与することが可能であるが、好ましくは生後４５日〜９０日のマウスを用いる。
【００１９】
［評価対象となる被検物質］
本発明の方法の対象となる被検物質は、皮膚用粘着テープ及び外用剤など特に限定されるものではないが、好ましくは、ヒト皮膚用粘着テープ（貼付剤、貼付材）が挙げられる。一般に、貼付材や貼付剤は、支持体の片面に粘着剤層が形成された構造を有している。支持体としては、例えば、塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのフィルム類；和紙などの紙類；ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリエステルなどの繊維からなる不織布；編布；発泡体などを用いることができる。粘着剤層は、前記支持体の片面に設けられており、貼付材を皮膚に取り外し可能に固定する役割を果たす。当該粘着剤層は、少なくとも１種の粘着剤を含む。また、必要に応じて、軟化剤、粘着付与剤、ｐＨ調整剤、薬効成分、充填剤、酸化防止剤（抗酸化剤、防腐剤）、着色料、香料等の任意成分を含んでいてもよい。
薬効成分としては特に限定されないが、痒みを非ヒト動物の引っ掻き行動を測定することで判断しているため、抗ヒスタミン剤などの鎮痒物質は薬効成分として含まないことが望ましい。その他の薬効成分としては、自律神経系作用薬、体性神経系作用薬、中枢神経系作用薬、交感神経興奮薬、交感神経遮断薬、副交感神経興奮薬、副交感神経遮断薬、局所麻酔薬、全身麻酔薬、平滑筋作用薬、平滑筋弛緩薬、非ステロイド性抗炎症薬、ステロイド性抗炎症薬、抗喘息薬、子宮収縮薬、鎮痛・催眠薬、抗うつ薬、抗痛風薬、抗セロトニン薬、心臓血管系作用薬、強心薬、抗不整脈薬、抗高脂血症薬、利尿薬、呼吸器系作用薬、消化器系作用薬、血液・造血臓器作用薬、皮膚・粘膜作用薬、イミダゾール系抗真菌薬、ホルモン、ビタミン、抗感染症薬、抗悪性腫瘍薬、抗糖尿病薬、制吐剤等が挙げられる。
皮膚用粘着テープは、粘着剤層の支持体とは反対の面の保護の為に、シリコーンなどで剥離処理をした剥離紙を積層しておくか、巻回体としておくことが好ましい。
【００２０】
当該粘着剤層が含む粘着剤の種類は特に限定されないが、例えば、ウレタン系粘着剤、アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤、シリコーン系粘着剤等が挙げられる。
ウレタン系粘着剤としては、ポリオールとポリイソシアネート化合物を反応させて得られるウレタン樹脂からなるものが挙げられる。ポリオールとしては、例えば、ポリエーテルポリオール、ポリエステルポリオール、ポリカーボネートポリオール、ポリカプロラクトンポリオール等がある。ポリイソシアネート化合物としては、例えば、ジフェニルメタンジイソシアネート、トリレンジイソシアネート、ヘキサメチレンジイソシアネート等が挙げられる。
【００２１】
ウレタン系粘着剤は安全性が高く、医療用高分子材料として実用されている。透湿度が高く皮膚に対して密着性がよく、柔軟で馴染みが良く、低刺激性の粘着剤となる。従って、人体に貼付する用途に適しており、医療用貼付材用の粘着剤として好適である。また、粘着性、安全性、材料としての安定性、経済性等全てを充足する。
【００２２】
アクリル系粘着剤としては、例えば、ブチルアクリレート、イソノニルアクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、イソオクチルアクリレート、ｎ−オクチルアクリレート等の炭素数４〜１２のアルキル基を有するアクリル酸エステルまたはメタアクリル酸エステルの単独重合体；これらの（メタ）アクリル酸エステルを主成分とし、他のモノマーとして（メタ）アクリル酸、スチレン、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、アクリルアミド、ヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシプロピルアクリレート等の共重合可能な他のモノマーの１種以上と共重合してなる共重合体等が挙げられる。他のモノマーは、通常２〜５０質量％の範囲で用いられる。
【００２３】
ゴム系粘着剤としては、例えば、天然ゴム、スチレン−イソプレン−スチレンブロック共重合体、ポリイソブチレン、ポリブテン、ポリイソプレン、これらの２種以上の混合物等のゴム状弾性体に、ロジン系樹脂、テルペン系樹脂、クマロン−インデン樹脂、石油系樹脂等の粘着付与剤を添加したものを挙げることができる。ゴム系粘着剤には、必要に応じて、液状ポリブテン、液状ポリイソブチレン、鉱油等の軟化剤；酸化チタン、酸化亜鉛等の充填剤；ブチルヒドロキシトルエン等の酸化防止剤等を添加することができる。これらの中でも、粘着性の観点から、スチレン−イソプレン−スチレンブロック共重合体を主基剤としたものが好ましい。
【００２４】
シリコーン系粘着剤としては、例えば、シリコーンゴムとシリコーンレジンの混合物又は部分縮合物が挙げられる。シリコーンゴムとしては、両末端にシラノール基のようなケイ素官能基を有する高分子量の直鎖状ポリジオルガノシロキサンが挙げられ、シリコーンレジンとしては、１官能性シロキサン単位と４官能性シロキサン単位を含み、分子中にシラノール基又はトリアルキルシリル基のようなケイ素官能基を有する分岐状もしくは網状構造を有するポリオルガノシロキサンが挙げられる。より具体的には、このようなシリコーンゴムとしては、ポリジメチルシロキサンの長鎖の共重合体を、シリコーンレジンとしては、ＭＱレジン（Ｍ単位（（ＣＨ３）３ＳｉＯ１／２）とＱ単位（ＳｉＯ２）からなる３次元構造のシリコーンレジン)を挙げることができる。
【００２５】
前記粘着剤層に任意成分として含まれる軟化剤は、粘着剤の弾性を低下させて柔軟性を付与すると共に、粘着性を向上させることができるため、必要に応じて添加される。軟化剤としては、例えば、流動パラフィン、流動イソパラフィン、ナフテン油等の鉱油；オリーブ油、オリーブスクワラン等の植物油；ラノリン、タートル油、ミツロウ等の動物油；脂肪酸トリグリセライド、シリコーンオイル等の合成油等が挙げられる。
【００２６】
粘着付与剤は粘着剤に適度な粘着性を付与することができるため、必要に応じて添加される。粘着付与剤としては、例えば、天然ロジン誘導体、クマロン−インデン樹脂、テルペンオリゴマー、脂肪族石油樹脂、アルキル変性フェノール樹脂、ポリテルペン樹脂、ガムロジン、ロジンエステル、油性フェノール樹脂、石油系炭化水素樹脂等が挙げられる。
【００２７】
ｐＨ調整剤は、必要に応じて添加される。例えば、カラヤガム、クエン酸、リン酸、リン酸水素ナトリウム、無水リン酸水素ナトリウム、ペクチン、無水クエン酸、アルカリ金属水酸化物、有機酸の緩衝液等が挙げられる。これらのｐＨ調整剤を用いて、粘着剤層を正常な皮膚のｐＨに合わせ、ｐＨ４．０〜６．０の範囲に調整することができる。
【００２８】
さらに前記粘着剤層には、薬効成分として、例えば、抗菌剤、消炎鎮痛剤、ステロイド剤、麻酔剤、抗真菌剤、ビタミン剤等を含むことができる。これらの薬剤は、経皮吸収により全身又は局所においてその効果を発揮したり、あるいは貼付された部位において、局所的に効果を発揮するが、皮膚刺激や痒みの原因となることもある。
【００２９】
さらに、本発明の方法に用いる被検物質には軟膏等の他剤形の外用剤であってもよい。被検物質としての外用剤の形態は、クリーム、軟膏、液状、フォーム（泡状）、乳液等の通常皮膚に適用される外用剤の形態であれば特に制限されない。なお、当該外用剤には、その形態に応じて、通常用いられる薬学的に許容される担体や添加剤が配合されていてもよい。
【００３０】
［皮膚刺激（痒み）の評価方法］
本発明の皮膚刺激（痒み）の評価方法は、上述した非ヒト動物において、非ヒト動物の皮膚に被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする。また、別の態様としては、前記非ヒト動物の皮膚から少なくとも一部の体毛を除去し、当該体毛が除去された皮膚に上述した被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする。また、別の態様としては、毛周期が休止期にある皮膚から少なくとも一部の体毛を除去し、当該体毛が除去された皮膚に上述した被検物質を適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することを特徴とする。毛周期が体表全体の皮膚で同期しているという観点から、好ましい非ヒト動物はマウスであり、その種類や雌雄の別は問わないが、当該非ヒト動物の少なくとも一定の皮膚領域が、毛周期の休止期にあればよい。商業的に入手できる系統化されたもの、例えば、ｄｄＹ系、Ｃ３Ｈ系、ＢＡＬＢ／ｃ系、ＩＣＲ系マウス、ヘアレスマウスが使用できるが、それぞれの系統により遺伝的な背景や表現形が異なっている点に注意する必要がある。ヒスタミンの皮内投与に対して反応するＩＣＲ系マウスを使用した場合は、ヒスタミンが産生されることにより惹起される刺激の評価に適しているが、痒みの原因は必ずしもヒスタミンに限定されないことから、用いる被検物質に合わせて各種系統のマウスを適宜選択して使用するか、あるいは複数系統のマウスを用いて評価することができる。痒みのメディエーターとしては、ヒスタミンの他にもプロスタグランジン、セロトニン、インターロイキン６、トリペプターゼ等が知られている。これらの物質は、皮膚表皮と真皮の境界部に存在する神経終末に作用すると考えられるが、本発明の方法は、これら末梢性の痒みに限定されず、動物個体を用いていることから、心的要因やストレス等の中枢性の痒みについても評価することができると考えられる。
【００３１】
本発明の１つの実施形態において、非ヒト動物としてマウスを用いる場合の典型的な評価手順は以下のとおりである。
（１）試験前日までに、生後４５〜９０日齢のマウスの背部皮膚から少なくとも一部の体毛を除去する。マウスの場合、体毛を除去する皮膚領域は、グルーミング行動と区別するために背部の皮膚を用いることが好ましく、さらに、マウスが引っ掻きを行なうのに可能な範囲という観点から頭側背部領域がさらに好ましい。なお、頭側背部は、マウスの背部の領域を等分した頭側の領域を指す。
体毛の除去方法については特に限定されないが、例えば剃毛、脱毛クリームなどを用いることができる。剃毛はバリカンで範囲を決めつつ軽く刈った後、脱毛クリームを用いてもよい。脱毛クリームの方が皮膚を傷つける可能性が低く好ましいが、皮膚を傷つけなければシェーバーを用いて剃毛してもよい。ヘアレスマウスは、必要な場合に体毛を除去する。
【００３２】
従来は、試験前日に剃毛しても翌日には毛が伸びて貼付材が貼れなくなるため再剃毛が必要となり、試験直前に皮膚を傷つける原因となっていたが、本発明の方法を用いることにより試験数日前に除毛操作をしても当日まで毛が伸びず、当日の除毛操作が必要ないため、サンプル適用直前までの刺激を最低限に抑制することができ、そのため被検物質による皮膚刺激（痒み）をより正確に評価することができる。
【００３３】
（２）試験当日、除毛した皮膚領域に被検物質を適用する。皮膚用粘着テープの場合は、貼付材を貼付し、その後所定の時間におけるマウスの引っ掻き行動を測定する。
【００３４】
（３）評価方法は、処置あるいは試験薬剤を適用または適用しないマウスに対して、引っ掻き行動を測定することで行うことができる。引っ掻き行動の指標としては引っ掻き行動回数、引っ掻き行動時間、引っ掻きによる皮膚状態の変化等を使用することができるが、好ましくは引っ掻き行動回数を使用する。引っ掻き行動の測定は、直接目視により行っても良いが、無人環境下にて記録・測定することが好ましい。例えば、行動の記録には、上方からの観察が可能な上方向が開放、透明などのケージを使用し、ビデオカメラ等を使用した記録、観察を行うことが望ましい。マウスの行動観察においては、あらかじめ観察環境への順化を行った後、引っ掻き行動を測定することが好ましい。引っ掻き行動回数は、マウスが後肢を上げて、被検物質の適用範囲あるいは除毛範囲を引っ掻き、床に足を下ろすまでの一連の動作を１回として計測する。計測時間は１匹あたり、３０分間以上、好ましくは３０〜１２０分間とする。引っ掻き行動の回数を比較する方法が好ましいが、本発明はこれに限定されない。
【００３５】
（４）皮膚刺激（痒み）の評価は、例えば、上記方法において計測される引っ掻き回数について、被検物質を適用した場合と適用しない場合の測定値を比較して行う。
具体的には、被検物質を適用しない場合に対して、被検物質を適用した場合に計測されるマウスの引っ掻き回数が有意に増加したときに、被検物質による皮膚刺激（痒み）が発生していると判断される。なお、実験結果は、通常の統計学的処理に従って評価することができる。皮膚刺激（痒み）の原因がどのようなものかを把握するために、例えば、特定の薬効成分を含む貼付剤と含まない貼付剤とを調製し、これらを被検物質として適用した場合の引っ掻き回数の測定値を比較することで、当該薬効成分が皮膚刺激（痒み）の原因になるか否かを推測することができる。
【００３６】
［ヒト皮膚用粘着テープのスクリーニング方法］
上記の皮膚刺激（痒み）の評価方法は、皮膚刺激（痒み）の少ないヒト皮膚用粘着テープのスクリーニング方法として用いることができる。
すなわち、本発明のスクリーニング方法は、基材及び／又は粘着剤成分の異なる複数のヒト皮膚用粘着テープを用意し、毛周期が休止期にある皮膚領域から体毛が除去された非ヒト動物の皮膚に前記それぞれのヒト皮膚用粘着テープを適用し、それによって惹起される前記動物の引っ掻き行動を測定することにより前記それぞれの粘着テープの皮膚刺激（痒み）を評価し、相対的に皮膚刺激（痒み）の程度の少ない粘着テープを選択することを特徴とする。
【００３７】
当該方法により、ヒトに貼付した場合に、皮膚刺激（痒み）を軽減するという観点から高品質な皮膚用粘着テープを選択することができる。また、ヒトによる官能試験ではなく、動物の引っ掻き行動回数を数えるため、客観性及び定量性の点でも優れ、未承認の薬剤を含有する貼付剤を評価する上でも安全性等の観点で優れている。
【００３８】
［モデル動物］
本発明の異なる観点において、毛周期が同期して休止期にある皮膚領域の少なくとも一部の体毛が除去されていることを特徴とする、皮膚刺激（痒み）の評価用非ヒトモデル動物が提供される。本発明のモデル動物は、身体の一部又は全体の毛周期が同期している非ヒト動物であれば特に限定するものではないが、扱いやすさ及び商業的な入手容易性の観点から、生後４５〜９０日齢のマウスが好ましい。
【００３９】
上記体毛を除去する領域は、皮膚の毛周期が同期している領域であれば特に限定されないが、マウスが引っ掻き可能な範囲という観点からマウスの頭側背部が好ましい。
体毛の除去方法についても上述したように、バリカンやシェーバーによる物理的剃毛、又は脱毛クリームなどを用いることができる。
このようにして作製された脱毛皮膚モデル動物は、皮膚刺激（痒み）の評価を行うために有用なモデル動物となりえる。
【実施例】
【００４０】
以下に本発明の詳細について実施例等を挙げて説明する。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４１】
[実施例１]
１  試験前日にバリカンと脱毛クリームでオスの７週齢ＩＣＲマウスの頭側背部の皮膚を３×３ｃｍの範囲で剃毛した。
２  試験当日、試験用ケージにて１時間順化した。
３  剃毛部位に２×２ｃｍのテープＡ（アセテートクロスにアクリル系樹脂を塗布したもの）を貼付し、無人の状態でビデオ撮影した。
４  テープ貼付による引っ掻き行動が痒みであることを証明するため、テープ貼付１５分前にナロキソン／生食溶液（２ｍｇ／ｋｇ体重）を尾側背部に皮下投与した。
５  貼付後１時間の引っ掻き回数を測定し、皮膚刺激（痒み）の指標とした。
【００４２】
その結果を図１に示した。図１には、テープＡを貼付した場合の対照として、テープＡを貼付しなかった場合、及びテープＡを貼付すると共にナロキソン又は生理食塩水を皮下投与したときのマウス一匹あたり、１時間の引っ掻き回数を示した。それぞれの実験は、４匹のマウスを用いて行い、測定した引っ掻き回数の平均値と標準誤差を示す。
テープＡを貼付することにより引っ掻き行動回数が増加したため、テープＡに何らかの皮膚刺激があると考えられる。この引っ掻き行動はナロキソン投与により抑制されたため、テープＡ貼付による引っ掻き行動は痒みによるものと考えられた。
【図１】
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