(57)【要約】【課題】脳内セロトニンに対して経口摂取により増加作用を発揮する組成物の提供。【解決手段】ツバキ葉を蒸煮、乾燥して乾燥ツバキ葉を得、得られた乾燥ツバキ葉を蒸留水またはエタノール抽出した抽出物をイオン交換樹脂カラムにかけ、２０％エタノール溶出液を濃縮乾燥することにより得られたエピカテキンを含有する脳内セロトニン増加剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エピカテキンを含有するツバキ葉抽出物。
【請求項２】
前記エピカテキンの含有率が２４．７〜４４．０９％である請求項１に記載のツバキ葉抽出物。
【請求項３】
ツバキ葉からのエピカテキン含有抽出物の調製方法であって、
ツバキ葉を蒸煮、乾燥して乾燥ツバキ葉を得、
得られた乾燥ツバキ葉を蒸留水またはエタノール抽出した抽出物をイオン交換樹脂カラムにかけ、
２０％エタノール溶出液を濃縮乾燥することによりエピカテキン含有抽出物を得ることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エピカテキン含有抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン；５−ＨＴ）は生理的活性アミンの一種であり、インドールアミン類に属する。人体には約１０ｍｇあり、その２％が中枢神経系に存在し、重要な神経伝達物質として知られている。縫線核など脳幹から大脳・脊髄に広範囲に投射する中枢セロトニン作動性経路は、その多くの受容体サブタイプを介して、情緒と気分、睡眠と覚醒、食欲、運動、体温及び認知の調節に関与している（非特許文献１、２）。
【０００３】
脳内神経伝達物質セロトニンは、精神の安定に関わる物質であり、５−ＨＴの増加はストレスに対しそれを軽減させる効果がある。ストレスに特に関係するのが５−ＨＴ、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ドーパミン（ＤＡ）、およびノルアドレナリン（ＮＡ）であり（非特許文献３）、５−ＨＴが不足すると、気分が不安定となり、寝付きや寝起きが悪くなる等、精神的に不安定な状態になる。目覚めとともに５−ＨＴの増加が起こり、５−ＨＴが増加すると脳が活性化し、すっきりした状態となり、精神的にも前向きで、落ち着いた気分になることが一般的に知られている（非特許文献４）。
例えばうつ発症時には脳内の情動や睡眠に関係する中枢のモノアミン神経細胞においてＮＡや５−ＨＴの欠乏が生じ、その結果、化学的伝達が不十分となり、抑うつの症状が心身両面におこると考えられている（非特許文献５）。特に抑うつに関与する主要な因子は５−ＨＴであると考えられており（非特許文献６）、自殺者の脳では５−ＨＴ濃度が低下していることも知られている（非特許文献７）。従って、５−ＨＴを増加させることができれば、朝、昼間のすっきり感を向上させ、気分を落ち着かせ、ストレス緩和、抑うつの改善につながると考えられる。
【０００４】
これまでにセロトニン放出促進作用、セロトニン再吸収阻害作用等、脳内セロトニンの増加作用が報告されている素材には、ケール、プロポリス又はその抽出物（特許文献１１）、Ｎ−アニソイル−γ−アミノ酪酸又はｐ−アニス酸（特許文献１２）、グリシン（非特許文献９）、セントジョーンズワート（非特許文献１０）などがあり、薬剤としても、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）があるが、食欲不振や体重増加、または減少、性欲異常などの副作用を伴う場合もあり、セロトニン増加素材の選択肢の一つとして、安定性及び安全性がある素材が必要とされている。
【０００５】
エピカテキンすなわち３，３’，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラバンは、カテキン類に含まれるフラボノイドの一つで、樹脂の皮や幹に広く含まれ、ガンビア、ビンロウシなどに特に多量に含まれる。また、構造上２位と３位の炭素が不斉炭素になっており、同一化学構造でも４種の構造をとり得る。これらは（−）−カテキン、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−エピカテキンと区別される。ここでのエピカテキンは（−）−エピカテキンであり、さまざまな生理作用を有することが知られている。例えばこれまでに膵β細胞保護剤（特許文献１）、認知機能改善のための方法及び組成物（特許文献２）、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤（特許文献３）、抗酸化剤及びその製造方法並びに該抗酸化剤を含有する飲食品（特許文献４）、美白用皮膚外用剤（特許文献５）、ビフィズス菌増殖促進剤（特許文献６）、血管系の健康改善に有用な熱処理されたカカオ製品（特許文献７）、アディポネクチン分泌促進組成物および該組成物を含有する飲食品（特許文献８）、消臭剤組成物（特許文献９）、トリプターゼ活性阻害剤およびその利用（特許文献１０）等が開示されている。
【０００６】
脳、あるいは５−ＨＴに関しては、マイクロダイアリシス法を用いた脳内灌流試験で、カテキン類がラット脳海馬の５−ＨＴ放出増加作用を有し、特にエピカテキンは、エピカテキンガレートや（＋）−カテキンなど、他のカテキン類に比べ、約１００倍以上の増加作用があることがわかっている。また、カテキンについては経口投与でも５−ＨＴの放出がみられた（非特許文献８）。また、シナプトソームを単離培養した試験系において、エピカテキンにセロトニン調節に寄与するセロトニン取り込み阻害効果があることも報告されている（非特許文献１１）。しかしながら、これら研究では、エピカテキンを経口摂取した場合については評価しておらず、また、エピカテキンを摂取しても腸管吸収により硫酸抱合、グルクロン酸抱合され、エピカテキンそのものとして脳には移行しないため、非特許文献１１の結果では、セロトニンへの作用が抱合体にあるかどうかは判断できない。
なお、エピカテキンを含む原料素材としては、緑茶葉、カカオ豆、ぶどうの種、リンゴの皮、大豆、ソラマメ、ツバキの葉等がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−７４５２号公報
【特許文献２】特表２００９−５３９９９１号公報
【特許文献３】特開平０６−９３９１号公報
【特許文献４】特開２００７−２５４５０８号公報
【特許文献５】特開平１０−１２０５４６号公報
【特許文献６】特開２００６−２９８８２１号公報
【特許文献７】特表２００９−５０１１６１号公報
【特許文献８】特開２００６−１３１５１２号公報
【特許文献９】特開平０９−３８１８３号公報
【特許文献１０】特開２００７−１８６４５７号公報
【特許文献１１】特開２００３−３００８９２号公報
【特許文献１２】特開２００２−１５４９５６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Annuals New York Academy of Science, 600, 9-35, 1990
【非特許文献２】Pharmacology Biochemistry and Behavior,54,129-141,1996
【非特許文献３】「新バイオサイエンスシリーズ  ストレス探求−分子レベルで見ると−」、科学同人、京都、８１−９１、１９９４
【非特許文献４】セロトニン欠乏脳−キレる脳・欝の脳を鍛え直す−、日本放送出版協会、東京、４９−５６、２００３
【非特許文献５】「うつ病の科学と健康−一般医のための−」、朝倉書店、東京、１５−２０、１９８７
【非特許文献６】Journal of Pharmacy and Pharmacology, 57, 651-656, 2005
【非特許文献７】The British Journal of Psychiatry, 113(505), 1407-1411, 1967
【非特許文献８】日本栄養食糧学会要旨集、２Ｄ−１３ｐ、２００８
【非特許文献９】Psychiatry and Clinical Neurosciences, 65, 142-149, 2011
【非特許文献１０】British Journal of Pharmacology, 142, 414-418, 2004
【非特許文献１１】Phytomedicine, 14, 396-402, 2007
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
脳内セロトニンに対して経口摂取により増加作用を発揮する組成物の提供。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記したように、従来技術においては、エピカテキンを経口摂取した場合についての検討は全くなされていない。そこで、本発明はエピカテキンを経口摂取させた場合においても脳内セロトニンを増加させるか否かについて詳細に検討した。その結果、ラットにエピカテキンを胃内投与することにより単回経口摂取させるだけで、脳内セロトニンが増加することを確認した。また、エピカテキンの原料素材としてツバキ葉を見出し、抽出物中のエピカテキンを高濃度化した組成物について、脳内セロトニンが増加することを確認した。つまり、本発明の解決手段は、エピカテキン含有物、特にツバキ葉抽出物を経口摂取することで脳内セロトニン増加作用を発揮させることである。
すなわち、本発明の目的は、脳内セロトニン量を増加させることであり、研究の結果、エピカテキンを胃内投与することにより単回摂取させるだけで、脳内セロトニンが増加することを見出した。さらに、ツバキ葉から他のカテキン類を含まず、エピカテキンだけを高含有する組成物の調製方法を確立し、脳内セロトニンに対する増加作用を見出した。
【発明の効果】
【００１１】
エピカテキンの経口摂取においても脳内セロトニンを有効に増加させ、さらに、ツバキ葉から他のカテキン類を含まず、エピカテキンだけを高含有する組成物の調製方法を確立した。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】エピカテキン投与による５−ＨＴ放出量を示すグラフである。
【図２】カテキン混合物投与による５−ＨＴ放出量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、エピカテキンを含有するツバキ葉抽出物に関する。
【００１４】
また、本発明は、エピカテキンの含有率が２４．７〜４４．０９％であるツバキ葉抽出物に関する。
【００１５】
さらに、本発明は、ツバキ葉からのエピカテキン含有抽出物の調製方法であって、
ツバキ葉を蒸煮、乾燥して乾燥ツバキ葉を得、
得られた乾燥ツバキ葉を蒸留水またはエタノール抽出した抽出物をイオン交換樹脂カラムにかけ、
２０％エタノール溶出液を濃縮乾燥することによりエピカテキン含有抽出物を得ることを特徴とする方法に関する。
【００１６】
さらにまた、本発明は、エピカテキンを含有する脳内セロトニン増加剤を含有する食品に関する。
【００１７】
本発明は、経口摂取した場合に脳内セロトニンレベルを上昇させる効果を発揮する組成物に関する。セロトニンは気分や覚醒との関連がある脳内神経伝達物質であり、一般的に、気分をスッキリさせたり、集中力を高めたりすると言われている。よって、セロトニンレベルを上昇させる組成物には、気分転換、集中力アップといった効能を付与できる可能性があり、菓子や健康食品の機能性素材としての製品応用が期待できる。
【００１８】
また、本発明は、前記エピカテキンを含有する脳内セロトニン増加剤を含有する飲食品を提供する。飲食品とは、生鮮食品、肉、魚などの動物性食品、穀物、野菜などの植物性食品、乳製品、パン、インスタント食品などの加工食品、菓子類などの嗜好食品、甘味料、調味料等の調理調味用材料、健康食品、特別用途食品、水、清涼飲料水、アルコール飲料、茶などの飲料、食品加工材料、食品添加物などを含む。
【実施例】
【００１９】
[実施例１]
エピカテキンの脳内セロトニン放出促進効果試験
【００２０】
（試験動物）
本試験では、Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（２７０〜３１０ｇ、８〜１０週齢）を用いた。ラットは、室温約２４℃及び湿度４５〜５０％の環境下で、１２時間明暗サイクルで飼育した。また飼育中の食餌と水は自由摂取とした。
【００２１】
（試薬類）
本試験で用いた試薬は、（−）−エピカテキン[ＥＣ(Ｗａｋｏ、大阪)、純度９８％以上]およびカテキン混合物[Ｍｉｘ (Ｗａｋｏ、大阪)、カテキン類として８５％以上；（−）−エピガロカテキンガレート（以下、ＥＧＣＧ）約３６．２％、（−）−エピガロカテキン（以下、ＥＧＣ）約２３．２％、（−）−エピカテキンガレート（以下、ＥＣＧ）約１０．６％、ＥＣ  約７．４％、（＋）−カテキン（以下、ＣＡ）約２．４％、（−）−ガロカテキン約５．７％、（−）−ガロカテキンガレート約１．６％などを含有]をそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇとなるよう調製し、各試薬を０．５ｍｌもしくは１ｍｌの生理食塩水（０．９％  ＮａＣｌ）に溶解させ、各溶液を、経口ゾンデを使用して直接ラット胃内に投与した。なお、コントロールとしては同量の生理食塩水を用いた。ここで各投与群は、一群あたりラット４〜５匹を使用した。
【００２２】
（試験法）
ラットをペントバルビタール・ナトリウムで麻酔し、ガイドカニューレをＰａｘｉｎｏｓとＷａｔｓｏｎの脳地図を参考にして埋め込んだ。ガイドカニューレが完全に固定されていることを確認し、ダミーカニューレを挿入した。ラットが回復後、ペントバルビタール・ナトリウムで麻酔し、ガイドカニューレに透析用プローブを挿入して、透析液（標準リンゲル液）を灌流（灌流速度１μｌ／ｍｉｎ）した。透析液は２０分ごとに、５−ＨＴ量を高速液体クロマトグラフィーにより測定した。６０分後、ＥＣあるいはＭｉｘをラット胃内に投与し、５−ＨＴの最大放出量が観察されるまで測定を続けた。データはすべて平均値（ｍｅａｎ）±標準偏差値（ＳＤ）で表し、統計処理は、統計解析ソフトＳＰＳＳ１７．０Ｊを用いＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定（ｎｏｎ−ｐａｉｒｅｄ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ）および一元配置分散分析を用い、危険率５％未満で有意差ありと判定した。
【００２３】
（結果）
上記脳内５−ＨＴ放出促進効果試験で得られた結果を図１及び２に示す。
図１から判るように、ＥＣを投与した場合、５−ＨＴの放出量はＥＣ  １ｍｇ／ｋｇ投与で１１０±１６％、１０ｍｇ／ｋｇ投与で１３３±１０％、５０ｍｇ／ｋｇ投与で５１３±５３５％、１００ｍｇ／ｋｇ投与で９８７±６４３％となり、５−ＨＴの放出量はＥＣ濃度依存的に増加した（図１）。ＥＣ  １ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ投与での５−ＨＴ放出量に大きな差異はなかった。また、最も高濃度のＥＣ  １００ｍｇ／ｋｇを投与した場合の５−ＨＴ放出量は、ＥＣ  １ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇを投与した場合のそれと比較して有意な増加がみられた。
一方、図２に示すように、カテキン混合物であるＭｉｘを投与した場合、５−ＨＴの放出量は、Ｍｉｘ  １ｍｇ／ｋｇ投与で１１３±１２％、１０ｍｇ／ｋｇ投与で１３５±１７％、５０ｍｇ／ｋｇ投与で１４８±３９％、１００ｍｇ／ｋｇ投与で２２７±１１２％であり、Ｍｉｘ投与の場合でも濃度依存的に５−ＨＴ量は増加する傾向を示した。
【００２４】
Ｍｉｘ １ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ投与の５−ＨＴ放出量を比較すると同程度の増加を示し、ＥＣ、Ｍｉｘどちらも１０ｍｇ／ｋｇ程度では、脳海馬からの５−ＨＴ放出量を大幅に増加させる濃度ではないことが判明した。
さらに、ＥＣ １ｍｇ／ｋｇ投与とＥＣ １００ｍｇ／ｋｇ投与を比較すると、５−ＨＴ放出量に約９倍の差があった。それに対し、Ｍｉｘ １ｍｇ／ｋｇ投与とＭｉｘ １００ｍｇ／ｋｇ投与においては、カテキン類濃度に１００倍の差がありながら５−ＨＴ放出量の差は約２倍であった。
また、ＥＣ  ５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇ投与は、Ｍｉｘ  ５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇ投与よりも約４〜５倍も高い５−ＨＴ放出量の増加を示した。
以上より、経口摂取においてカテキン混合物投与よりもエピカテキン投与の方がより顕著に脳内セロトニンが増加することを確認した。
【００２５】
[実施例２]
ツバキ葉からのエピカテキン高含有組成物の調製−１
ツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）の葉５．４７７ｋｇを沸騰水浴上で５分間蒸煮処理後に温風乾燥し、乾燥ツバキ葉１．８９ｋｇを得た。乾燥ツバキ葉に１８．９Ｌの蒸留水を加え、４時間室温で静置抽出した。不溶物を濾過で除去し、濾液をダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）を３Ｌ充填したカラムに供し、６Ｌの蒸留水、６Ｌの１０％エタノール、６Ｌの２０％エタノールで順に溶出した。２０％エタノール溶出液を減圧濃縮し、凍結乾燥を行い、２３．５２ｇのエピカテキン高含有画分（エピカテキン含有率２４．７％）を得た。
【００２６】
[実施例３]
ツバキ葉からのエピカテキン高含有組成物の調製−２
ツバキ葉１５１．６４ｇを沸騰水浴上で５分間蒸煮処理後に温風乾燥し、乾燥ツバキ葉５８．４８ｇを得た。乾燥ツバキ葉に１．１７５Ｌの蒸留水を加え、一晩室温で静置抽出した。不溶物を濾過で除去後、濾液を凍結乾燥し、ツバキ葉水抽出物１２．１８ｇを得た。ツバキ葉水抽出物のエピカテキン含有率は３．１２％であった。得られたツバキ葉水抽出物１０ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）を２５０ｍＬ充填したカラムに供し、１Ｌの蒸留水、１Ｌの１０％エタノール、１Ｌの２０％エタノールで順に溶出した。２０％エタノール溶出液を減圧濃縮し、凍結乾燥を行い、０．９３２ｇのエピカテキン高含有画分（エピカテキン含有率３２．９４％）を得た。
【００２７】
[実施例４]
ツバキ葉からのエピカテキン高含有組成物の調製−３
ツバキ葉９０．１２ｇを沸騰水浴上で５分間蒸煮処理後に温風乾燥し、乾燥ツバキ葉３４．５０ｇを得た。乾燥ツバキ葉に６９０ｍＬの７０％エタノールを加え、一晩室温で静置抽出した。不溶物を濾過で除去後、濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥を行い、ツバキ葉７０％エタノール抽出物６．５８ｇを得た。ツバキ葉７０％エタノール抽出物のエピカテキン含有率は６．７５％であった。得られたツバキ葉７０％エタノール抽出物１ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）を２５０ｍＬ充填したカラムに供し、１Ｌの蒸留水、１Ｌの１０％エタノール、１Ｌの２０％エタノールで順に溶出した。２０％エタノール溶出液を減圧濃縮し、凍結乾燥を行い、０．１２ｇのエピカテキン高含有画分（エピカテキン含有率４４．０９％）を得た。
【００２８】
[実施例５]
エピカテキン高含有画分の脳内５−ＨＴ放出促進効果試験
実施例２で得たエピカテキン高含有画分を試料とし、実施例１と同様の方法で脳内５−ＨＴレベルに対する効果を検証し、エピカテキン高含有画分の経口投与により脳内５−ＨＴレベルが増加することを確認した。
【００２９】
[実施例６]
本発明のエピカテキン高含有画分含有脳内セロトニン増加剤を含有するチョコレート、トローチ、チューインガム、キャンディ、グミゼリー、飲料を常法にて製造した。以下にそれらの処方を示した。なお、これらによって本発明品の範囲を制限するものではない。
【００３０】
チョコレートの処方
カカオマス                            ２０．０重量％
砂糖                                  ４２．０
全脂粉乳                              ２０．０
ココアバター                          １７．０
エピカテキン                            ０．４
レシチン                                ０．５
香料                                    ０．１        
１００．０
【００３１】
チョコレートの処方
カカオマス                            ２０．０重量％
砂糖                                  ４１．４
全脂粉乳                              ２０．０
ココアバター                          １７．０
実施例２のエピカテキン高含有画分        １．０
レシチン                                ０．５
香料                                    ０．１        
１００．０
【００３２】
トローチの処方
ブドウ糖                              ７３．３重量％
乳糖                                  １６．０
アラビアガム                            ６．０
香料                                    １．０
モノフルオロリン酸ナトリウム            ０．７
エピカテキン                            １．０
乳糖                                    ２．０          
１００．０
【００３３】
トローチの処方
ブドウ糖                              ７２．３重量％
乳糖                                  １６．０
アラビアガム                            ６．０
香料                                    １．０
モノフルオロリン酸ナトリウム            ０．７
実施例３のエピカテキン高含有画分        ２．０
乳糖                                    ２．０          
１００．０
【００３４】
チューインガムの処方
ガムベース                            ２０．０重量％
砂糖                                  ５４．７
グルコース                            １５．３
水飴                                    ９．３
エピカテキン                            ０．２
香料                                    ０．５          
１００．０
【００３５】
チューインガムの処方
ガムベース                            ２０．０重量％
砂糖                                  ５４．４
グルコース                            １５．３
水飴                                    ９．３
実施例４のエピカテキン高含有画分        ０．５
香料                                    ０．５          
１００．０
【００３６】
キャンディの処方
砂糖                                  ５０．０重量％
水あめ                                ３４．０
クエン酸                                ２．０
エピカテキン                            ０．６
香料                                    ０．２
水                                      残            
１００．０
【００３７】
キャンディの処方
砂糖                                  ５０．０重量％
水あめ                                ３４．０
クエン酸                                ２．０
実施例３のエピカテキン項含有画分        １．０
香料                                    ０．２
水                                      残            
１００．０
【００３８】
グミゼリーの処方
ゼラチン                              ６０．０重量％
水あめ                                ２０．５
砂糖                                    ８．５
植物油脂                                ４．５
マンニトール                            ３．０
リンゴ酸                                ２．０
エピカテキン                            １．０
香料                                    ０．５          
１００．０
【００３９】
グミゼリーの処方
ゼラチン                              ５９．０重量％
水あめ                                ２０．０
砂糖                                    ８．５
植物油脂                                ４．５
マンニトール                            ３．０
リンゴ酸                                ２．０
実施例２のエピカテキン高含有画分        ２．５
香料                                    ０．５          
１００．０
【００４０】
飲料の処方
オレンジ果汁                          ３０．０重量％
異性化糖                              １５．２４
クエン酸                                ０．１０
ビタミンＣ                              ０．０４
香料                                    ０．１０
エピカテキン                            ０．１０
水                                      残          
１００．０
【００４１】
飲料の処方
オレンジ果汁                          ３０．０重量％
異性化糖                              １５．２４
クエン酸                                ０．１０
ビタミンＣ                              ０．０４
香料                                    ０．１０
実施例２のエピカテキン高含有画分        ０．５０
水                                      残          
１００．０
【産業上の利用可能性】
【００４２】
ツバキ葉抽出物含有脳内セロトニン増加剤は、種々の製品への適用が可能である。
【図１】
2015221818.tif 000002
【図２】
2015221818.tif 000003