(57)【要約】      （修正有）【課題】雌雄同株植物の自家受粉により高度に雌雄同株性の後代を作出し、また正常な雌性及び正常な雌雄同株性パパイア植物と交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代を作出する、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物の提供。【解決手段】変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを有するパパイア植物の種子、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを有するパパイア植物の植物及び植物の部分、並びに変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを有するパパイア植物の後代を作出する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物又は植物の部分であって、前記変異対立遺伝子は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株パパイア植物の自家受粉により、雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％をもたらし、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物を花粉親として正常な雌パパイアと交雑した場合、雌雄同株性Ｆ１植物９０〜１００％及び雌性Ｆ１植物０〜１０％をもたらす、パパイア植物又は植物の部分。
【請求項２】
前記植物又は植物の部分が、祖先の１つとしてパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを含む系統を有する、請求項１に記載のパパイア植物又は植物の部分。
【請求項３】
請求項１に記載の植物からクローンとして増殖させたパパイア植物又はその部分。
【請求項４】
パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの種子であって、前記栽培品種のサンプル種子の標本が、ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−１２０８６１で寄託されている、種子。
【請求項５】
請求項４に記載の種子を栽培することによって作出された、パパイア植物又はその部分。
【請求項６】
請求項２又は５に記載の植物に由来する原形質体若しくは細胞から作出される組織培養物であって、前記細胞又は原形質体が、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌しべ、葯、花、種子、新芽、幹、果実及び葉柄から成る群から選択される植物の部分から作出される、組織培養物。
【請求項７】
変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する、請求項６に記載の組織培養物から再生したパパイア植物。
【請求項８】
２つのパパイア植物を交雑するステップと、その結果生じたパパイア種子を収穫するステップとを含み、少なくとも一方のパパイア植物が、請求項２又は５に記載のパパイア植物である、Ｆ１パパイア種子を作出する方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法によって作出されたＦ１パパイア種子。
【請求項１０】
請求項９に記載の種子を栽培することによって作出された、Ｆ１パパイア植物又はその部分。
【請求項１１】
前記パパイア植物の少なくとも一方が遺伝子導入されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
請求項２又は５に記載の植物に除草剤抵抗性を付与する遺伝子を導入するステップを含む、除草剤抵抗性パパイア植物を作出する方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法によって作出された除草剤抵抗性パパイア植物であって、前記遺伝子が、グリフォセート、スルホニル尿素、イミダゾリノン、ジカンバ、グルフォシネート、フェノキシプロピオン酸、Ｌ−フォスフィノスリシン、シクロヘキソン、シクロヘキサンジオン、トリアジン、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸、ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ（ＨＰＰＤ）阻害剤及びベンゾニトリルから成る群から選択される除草剤に対する抵抗性を付与する、除草剤抵抗性のパパイア植物。
【請求項１４】
請求項２又は５に記載のパパイア植物に有害生物又は昆虫抵抗性を付与する遺伝子を導入するステップを含む、有害生物又は昆虫抵抗性のパパイア植物を作出する方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法によって作出された、有害生物又は昆虫抵抗性のパパイア植物。
【請求項１６】
バチルス・チューリンゲンシス（Ｂｔ）エンドトキシンを遺伝子がコードする、請求項１５に記載のパパイア植物。
【請求項１７】
請求項２又は５に記載のパパイア植物に病害抵抗性を付与する遺伝子を導入するステップを含む、病害抵抗性のパパイア植物を作出する方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法によって作出された病害抵抗性のパパイア植物。
【請求項１９】
パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ又は変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物に所望の形質を導入する方法であって、
（ａ）種子の代表サンプルがＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−１２０８６１で寄託されているＥＷＳ−２４９９ｍ植物、又は変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物を、所望の形質を含む別のパパイア栽培品種の植物と交雑するステップであり、前記所望の形質が、雄性不稔、除草剤抵抗性、昆虫抵抗性、非生物的なストレス耐性、改変された脂肪酸代謝、改変された炭水化物代謝、改変された種子収量、改変された油パーセント、改変されたタンパク質パーセント、改変された果実収量、増強された栄養価、改善された加工特性、改変された鉄欠乏クロロシス及び細菌性病害、真菌性病害若しくはウイルス性病害に対する抵抗性から成る群から選択される、ステップと、
（ｂ）所望の形質を有する１つ又は複数の後代植物を選択するステップと、
（ｃ）選択された後代植物をパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと戻し交配して、戻し交配後代植物を作出するステップと、
（ｄ）所望の形質を有する戻し交配後代植物を選択するステップと、
（ｅ）ステップ（ｃ）及び（ｄ）を連続して２回以上反復して、選択され３回以上戻し交配した、所望の形質を含む後代植物を作出するステップと
を含む、方法。
【請求項２０】
前記植物が所望の形質を有し、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する、請求項１９に記載の方法によって作出されたパパイア植物。
【請求項２１】
前記所望の形質が除草剤抵抗性であり、前記抵抗性が、イミダゾリノン、ジカンバ、シクロヘキサンジオン、スルホニル尿素、グリフォセート、グルフォシネート、フェノキシプロピオン酸、Ｌ−フォスフィノスリシン、トリアジン、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸、ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ（ＨＰＰＤ）阻害剤及びベンゾニトリルから成る群から選択される除草剤に対して付与される、請求項２０に記載のパパイア植物。
【請求項２２】
前記所望の形質が昆虫抵抗性であり、昆虫抵抗性が、バチルス・チューリンゲンシスのエンドトキシンをコードする遺伝子によって付与される、請求項２０に記載のパパイア植物。
【請求項２３】
前記所望の形質が病害抵抗性である、請求項２０に記載のパパイア植物。
【請求項２４】
請求項５に記載の植物又はその部分を得るステップと、前記植物又はその植物の部分から植物産物商品を製造するステップとを含む、植物産物商品を製造する方法。
【請求項２５】
請求項２４の方法によって製造された植物産物商品。
【請求項２６】
変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを異なる遺伝的背景に導入する方法であって、
（ａ）請求項１０に記載のＦ１植物を得るステップと、
（ｂ）変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを持たないレシピエント親植物に前記Ｆ１植物を戻し交配して、戻し交配後代植物を作出するステップと、
（ｃ）変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する戻し交配後代植物を選択するステップと、
（ｄ）前記レシピエント親に前記戻し交配後代植物を戻し交配するステップと、
（ｅ）ステップ（ｃ）及び（ｄ）を連続して２回以上反復して、選択され３回以上戻し交配した、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する後代植物を作出するステップと、
（ｆ）得られた種子を収穫するステップと
を含む、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の種子から作出されたパパイア植物であって、前記植物が、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有し、前記雌雄同株パパイア植物の自家受粉により雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％を作出し、前記雌雄同株植物を花粉親として正常な雌パパイアと交雑した場合、雌雄同株性Ｆ１植物９０〜１００％及び雌性Ｆ１植物０〜１０％を作出する、パパイア植物。
【請求項２８】
請求項２又は５に記載の植物若しくはその部分を変異誘発物質と接触させるステップと、新たな若しくは改変された形質を少なくとも１つ有する植物を選択するステップとを含む、突然変異体パパイア植物を作出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、雌雄同株植物の自家受粉により高度に雌雄同株性の後代を作出し、また正常な雌性及び正常な雌雄同株性パパイア植物と交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代を作出する、ＥＷＳＭＨＰと命名される変異対立遺伝子を有するパパイア植物及び植物の部分に関する。更に、本発明は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを有するパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍに関する。本出願に引用される全ての刊行物を、参照により本明細書に組み入れる。
【背景技術】
【０００２】
[0002]どのような新規の望ましい植物生殖質も、開発には多くのステップがある。植物育種は、現在の生殖質の問題点及び弱点の分析と定義、計画目標の確立、並びに特定の育種目的の定義から始まる。次のステップは、計画目標に合う形質を備えている生殖質の選択である。目標は、親の生殖質由来の望ましい形質の組み合わせを改善した単一品種に集約することである。これらの重要な形質には、それだけには限らないが、高い果実収量、種子収量、病害及び昆虫に対する抵抗性、上質の幹及び根、乾燥及び熱に対する耐性、改変した脂肪酸プロファイル、非生物的なストレス耐性、構成形質の改善並びに優れた農業品質があり得る。
【０００３】
[0003]最終ステップである出荷及び流通に至るこれらの過程は、パパイアの場合、十分な世代数を経て植物の型及び形質の均一性と選択に注意を払いつつ８〜１５年かかることがある。従って、新たな栽培品種の開発は、正確な将来計画、資源の効率的な使用、方向性の最小限の変更、並びに多世代にわたる均一性及び形質の自己選択の時間を必要とする時間のかかる過程である。
【０００４】
[0004]パパイア（カリカ・パパイアＬ．（Ｃａｒｉｃａ  ｐａｐａｙａ  Ｌ．））は、東南アジア（タイ、フィリピン、ベトナム、インドネシア）及び南アジア（インド、スリランカ、バングラデシュ）、中央アメリカ（ブラジル、メキシコ、エクアドル、コロンビア）並びにアフリカ（ナイジェリア、エチオピア、ケニヤ）の多くの国を含めた多くの熱帯、亜熱帯国において重要な果樹商品である。しかしながら、パパイアは、熱帯アメリカ原産であると考えられている（Ｍｏｒｔｏｎ、１９８７年）。パパイアは、気温２１〜３３℃の範囲の地域で最も良く生育し、明るく有機物に富む水はけの良い土壌で最も良く生長する（Ｐｒｏｓｅａ）。
【０００５】
[0005]パパイアは、極めて独特な性発現を有する。パパイアは、一般に３つの主要な性型、すなわち１）雄しべがある（雄性）；２．雌雄同株（雌雄両性）；及び３．雌しべがある（雌性）という性型を有する雌雄混株の植物種である。雄花は、雄しべしかない花か又は雄しべが支配的な花かのいずれかより成る、長く垂れ下がった自由に分岐している花序を特徴とする。雌木は、通常、雌しべしかなく、黄緑色の茶碗形の萼を持つ長さ３〜５．５ｃｍの、５つ又は６つの花だけから成る短い花序を有する。雌雄同株木は、主に雌雄両性の花から成る、比較的短く花が少ない花序を有する。
【０００６】
[0006]雌雄同株植物は、売買業者及び消費者に好まれる長く円筒形の果実を実らせるので、多くの国において、パパイア栽培者は雌雄同株植物だけを栽培することを好む。雌株は、大きな種子腔が有るほぼ丸い果実を実らせ、それ故、丸い形状のため輸送に理想的でない。大部分のパパイア栽培者は、１丘当たり３本以上の幼植物を植え、花芽形成の間に１丘当たり１本の雌雄同株植物だけを残して全ての雌木は伐採される。この系は、より多くの種子を必要とし、３本以上の幼植物を最初に栽培するので競合が起こり、時には作物が発達した後の段階で木のサイズが不均一になる。それ故、高い割合で雌雄同株木を作出することができるパパイア品種が、パパイア栽培者にとって好ましいことになる。雌雄同株植物だけを好む国において現在実施されているような１丘当たり３本以上の植物の植付けが完全に解消されることになるので、純種の育種雌雄同株パパイアの同定は、パパイア生産に革命をもたらす可能性がある。
【０００７】
[0007]パパイアは、３つの固有の染色体を有し、すなわち雄の場合はＹ、雌雄同株の場合はＹｈ、雌の場合はＸである。Ｓｔｏｒｅｙ（１９３８年）は、パパイアにおいて観察される異なる分離比を例示した。例えば、雌雄同株植物の自家受粉により、雌雄同株６７％及び雌３３％の分離が得られることになる。雌花を両性花由来の花粉で授粉することにより、雌５０％及び雌雄同株５０％の分離で後代が得られることになる。雌花を雄株由来の花粉で授粉することにより、雌５０％及び雄５０％の分離で後代が得られることになる。これらの興味深い比率は、ＹＹ、ＹｈＹ及びＹｈＹｈ遺伝子型の任意の組み合わせが致死的になるような、Ｙ及びＹｈ染色体に連鎖する致死遺伝子があるという仮説を導いた（Ｓｔｏｒｅｙ、１９５３年；１９６９年）。従って、全ての雄及び雌雄同株パパイアは、性ヘテロ接合体（雄＝ＸＹ、雌雄同株−ＸＹｈ）にならざるをえない。分離比を下の表１〜３に更に例示する。雌パパイアが雄パパイアと交雑した場合の分離比を表１に示す。雌パパイアが雌雄同株（ｈｅｒｍａ）パパイアと交雑した場合の分離比を表２に示す。雌雄同株（ｈｅｒｍａ）が雌雄同株パパイアと交雑した場合の分離比を表３に示す。
【表１】
2015198647.tif 000002
【表２】
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【表３】
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【０００８】
[0008]早期にパパイア植物の性別を検出する必要性があったため、パパイア性発現と関連するマーカーの同定又は開発は、一部の研究者にとっての目標であった。１９３０年代に、Ｈｏｆｍｅｙｒ（１９３９年）は、性決定遺伝子座に連鎖する２つの形態学的なマーカー、花色及び幹色を発見した。しかしながら、これらの２つの形態学的なマーカーは、約２４及び４０ｃＭ離れており、少しの予測値しか得られなかった。
【０００９】
[0009]分子基盤技術の開発により、パパイアの性別と関連するＰＣＲに基づくマーカーが使用されるようになった。１９９０年代には、より多くの研究が行われて、性連鎖ＤＮＡマーカーが開発／同定され、それによりパパイアの性型が決定された。報告された最初の性連鎖ＤＮＡマーカーは、（ＧＡＴＡ）４反復を含有するマイクロサテライトであった（Ｐａｒａｓｎｉｓら、１９９９年）。他の研究グループにより、ランダム増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）マーカーを使用して、４つの配列特性化増幅領域（ＳＣＡＲ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  ｒｅｇｉｏｎ）マーカーが開発され、それにより性型が予測された（Ｐａｒａｓｎｉｓら、２０００年；Ｕｒａｓａｋｉら、２００２年；Ｄｅｐｕｔｙら、２００２年）。
【００１０】
[0010]マーカーは、極めて初期の幼植物段階でパパイア植物の性別を決定する早期検出方法を提供するが、これらのマーカーを日常的に行う費用は高く、種子自体の費用より著しく高額である。他の研究グループは、雌雄同株植物をクローニングし、無性生殖で増殖させ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ由来パパイア幼植物を販売することによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術を使用した。この方法により、雌雄同株植物を１００％植付けることが保証されるが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ由来パパイア幼植物の費用は極めて高く、雌雄同株パパイア植物の大規模増殖には専用の施設及び設備を必要とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
[0011]それ故、性遺伝子型判定用のマーカーを使用したり、雌雄同株植物をｉｎ  ｖｉｔｒｏクローニングすることなく雌雄同株植物を高い割合で作出する方法が、大いに望まれることになった。
【００１２】
[0012]従来技術の前述した例及びそれに関する限定は、例示的なものであり限定することを意図しない。従来技術の他の限定は、明細書を読めば当業者には明らかになる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
[0013]以下の実施形態及びその態様は系、ツール及び方法と組み合わせて論じられるが、それらは典型例であることを意味し、範囲を限定するものではない。様々な実施形態において、上記の問題のうち１つ又は複数が低減又は解消されているが、それ以外の改善を対象とした他の実施形態もある。
【００１４】
[0014]本発明の一態様において、カリカ・パパイアＬ．から得られるＥＷＳＭＨＰと命名される新規変異対立遺伝子が提供され、この新規変異対立遺伝子は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物の自家受粉により、高度に雌雄同株性の後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）をもたらし、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物を花粉親として正常な雌パパイアと交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）をもたらす。本発明は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する植物、種子、果実並びに花粉及び胚珠など他の植物の部分に関する。本発明は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物を、それ自体と又は別のパパイア品種と交雑したり、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物の突然変異生成又は形質転換によって変異体を創出したりすることにより、９０〜１００％が雌雄同株植物のパパイア品種を作出する方法に更に関する。本発明は、前記方法によって作出されたパパイア植物に更に関する。
【００１５】
[0015]本発明により、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するＥＷＳ−２４９９ｍと命名される新たなパパイア栽培品種が得られる。従って、この発明は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの種子、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの植物及び植物の部分、別の品種の台木にパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを接ぎ木することによってパパイア植物を作出する方法、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを、それ自体と又は別のパパイア栽培品種と交雑すること、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの突然変異生成、細胞培養、形質転換又はＥＷＳ−２４９９ｍの遺伝物質、形質若しくは属性を移動させる他の方法による変異体の創出、並びにパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを親として使用し９０％以上の雌雄同株後代をもたらす自然受粉したＦ１雑種パパイアを作出する方法に関する。
【００１６】
[0016]この発明は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍへ遺伝子導入又は突然変異体形質を遺伝子移入する方法並びにこれらの方法によって作出されたパパイア植物及び植物の部分にも関する。この発明は、パパイア栽培品種又はパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍから得られる育種栽培品種及び植物の部分、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍから得られる他のパパイア栽培品種又は植物の部分を作出する方法、並びにこれら作出方法の使用から得られるパパイア植物、品種及びそれらの部分にも関する。この発明は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを別のパパイア栽培品種と交雑することによって作出されたパパイア種子、植物及び植物の部分に更に関する。従って、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを使用する現在又は将来に存在する任意の方法は、自家受粉、戻し交配、雑種生産、個体群への交雑、幹細胞などを含むがこれに限定されないこの発明の一部である。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを使用して作出される全ての植物又はＥＷＳ−２４９９ｍ若しくはＥＷＳＭＨＰ対立遺伝子を含有するパパイア植物との交雑から得られるパパイア植物は、この発明の範囲内である。パパイア栽培品種を他の異なるパパイア植物との交雑に使用して、優れた特性を持つ第１世代（Ｆ１）パパイア雑種種子及び植物を作出できると有利である。
【００１７】
[0017]別の態様において、本発明は、組織培養に使用する再生可能な細胞又はパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの幹細胞を提供する。組織培養物又は幹細胞は、前述のパパイア植物の生理的及び形態的特徴を全て有する植物を再生し、実質的に前述のパパイア植物と同じ遺伝子型を有する植物を再生できるようになることが好ましい。そのような組織培養において再生可能な細胞には、胚、原形質体、分裂組織細胞、カルス、花粉、葉、胚珠、葯、子葉、胚軸、雌しべ、根、根端、花、種子、葉柄、さや、果実又は幹が好ましい。また更に、本発明は、本発明の組織培養物、幹細胞又はゲノム導入の他の手段から再生したパパイア植物を提供する。
【００１８】
[0018]上記の典型的な態様及び実施形態に加えて、更なる態様及び実施形態が、添付の表のデータと組み合わせた以下の説明の研究によって明らかになる。これらの説明及びデータは例示並びに／又は説明を目的とするものであり、本発明の限定の定義を意図するものでないことは明白に理解されよう。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
[0019]続く説明及び表において、いくつかの用語が使用される。そのような用語が、定められた範囲を含めて本明細書及び特許請求の範囲の明白で一貫した理解を得るために、以下の定義を定める：
【００２０】
[0020]非生物的なストレス。本明細書では、非生物的なストレスとは、環境中にある生物ではない化学的及び物理的因子全てに関する。非生物的なストレスの例には、それだけには限らないが、干ばつ、洪水、塩分、ｐＨ、栄養要件、明暗要件、ＣＯ２要件、気温及び気候変動がある。
【００２１】
[0021]対立遺伝子。いずれか１つ又は複数の遺伝子配列の代替形態。二倍体細胞又は生物において、所与の配列の２つの対立遺伝子は一般に、一対の相同染色体で対応する遺伝子座を占有する。
【００２２】
[0022]改変。上方調節、下方調節又は遺伝子抑制若しくはスプライシング／挿入／欠失の利用。
【００２３】
[0023]戻し交配。育種家が、後代を親の遺伝子型の１つに１回又は複数回戻して交雑する過程。１つ又は複数の遺伝子座変換を１つの遺伝的背景から別の遺伝的背景に導入するために一般的に用いられる。
【００２４】
[0024]育種。生きている生物又は細胞の遺伝子操作。
【００２５】
[0025]細胞。本明細書では細胞は、単離されているか、組織培養物中にあるか又は植物若しくは植物の部分に組み入れられているかに関わらない植物細胞を含める。
【００２６】
[0026]細胞培養。細胞又は「組織培養物」は、同じ若しくは異なる型の単離された細胞又は植物の部分に組織されているそのような細胞の集合体を含む組成物を示す。組織培養物の典型的な型は、原形質体、カルス、植物凝集塊、並びに植物又は胚、花粉、花、種子、さや、葉柄、葉、幹、根、根端、葯、雌しべなどの植物の部分において完全な組織培養物を生成することができる植物細胞である。
【００２７】
[0027]植物産物商品。ＥＷＳ−２４９９ｍ植物若しくはその部分から完全に得られる産物又はＥＷＳ−２４９９ｍ植物若しくはその部分から得られる１つ又は複数の成分を含有する産物。植物産物商品には、それだけには限らないが、パパイン、食肉軟化剤、抗酸化剤、氷砂糖、保存果実、茶、シャンプー、化粧水、石鹸、美容クリーム及び化粧品などの美容化粧品、フラボノイド、燃料、果汁、パルプ、果皮、種子、タンパク質単離物、タンパク質濃縮物、酢、アルコール、薬剤、脱臭剤、プラスチック、酵素、ゼリー状のソース並びに蜂蜜がある。
【００２８】
[0028]子葉。子葉は、種子葉の一種である。子葉は、種子の食物貯蔵組織を含有する。
【００２９】
[0029]他花受粉。異なる植物由来の２つの配偶子の結合による受精。
【００３０】
[0030]二倍体。２組の染色体を有する細胞又は生物。
【００３１】
[0031]胚。胚とは、成熟した種子の中に含有される小さい植物である。
【００３２】
[0032]ＥＷＳＭＨＰ。本発明のパパイア変異対立遺伝子。ＥＷＳＭＨＰ変異対立遺伝子は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物の自家受粉により、高度に雌雄同株性の後代植物（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）をもたらし、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物を花粉親として正常な雌パパイアと交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代植物（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）をもたらす。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する。
【００３３】
[0033]Ｆ＃。記号「Ｆ」は、雑種世代を意味し、＃は、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３のように世代数である。
【００３４】
[0034]遺伝子。本明細書では、「遺伝子」とは、ある種のタンパク質又はＲＮＡ鎖、時には生物において機能がある特定のタンパク質をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡに対応する遺伝的単位のことを指す。
【００３５】
[0035]遺伝子抑制。転写若しくは翻訳レベルでの、又はプラスミドの導入による遺伝子の発現の妨害若しくは抑圧。
【００３６】
[0036]遺伝子型。細胞又は生物の遺伝子構成のことを指す。
【００３７】
[0037]接ぎ木。別の植物の幹又は台木の溝、切り口などの中で生長し続ける、それらに挿入された植物の蕾、新芽若しくは接ぎ穂、或はそのような操作から得られる植物、接合した台木及び接ぎ穂、又は接ぎ穂が挿入された場所。
【００３８】
[0038]一倍体。二倍体における染色体２組のうち１組を有する細胞又は生物。
【００３９】
[0039]高度に雌雄同株性の後代植物。本明細書では、雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％であることを示す。
【００４０】
[0040]胚軸。胚軸とは、子葉と根の間の胚又は幼植物部分である。従って、胚軸は、新芽と根の間の移行部と考えることができる。
【００４１】
[0041]連鎖。同じ染色体上にある対立遺伝子は、それらの伝達が無関係の場合に偶発的に予想される頻度より高い頻繁で一緒に分離する傾向がある現象のことを指す。
【００４２】
[0042]連鎖不平衡。両親から子孫へと分離する場合に、対立遺伝子（複数）が、それら対立遺伝子の個々の頻度から予想されるより大きな頻度で連鎖群内に一緒に残る傾向がある現象のことを指す。
【００４３】
[0043]遺伝子座。ＤＮＡの定義済みのセグメント。
【００４４】
[0044]核酸。リン酸、糖並びにプリン及びピリミジン塩基の複数の反復単位から成る酸性の鎖状生体高分子。
【００４５】
[0045]パパイア輪点ウイルス（ＰＲＳＶ）。パパイアを感染させるポチウイルス属ポチウイルス科の病原性植物ウイルス。
【００４６】
[0046]系統。植物の系列又は系譜的な系統のことを指す。
【００４７】
[0047]系統距離。系統から証明される、先祖の連鎖に基づく世代間の関係。先祖の所与の出発点からの系統の距離によって測定できる。
【００４８】
[0048]パーセント同一性。本明細書ではパーセント同一性とは、２つのパパイア品種のホモ接合対立遺伝子の比較のことを指す。パーセント同一性は、統計的に有意な、開発した２品種のホモ接合対立遺伝子の数を比較することによって決定される。例えば、パパイア品種１とパパイア品種２の間で９０％のパーセント同一性とは、２つの品種が遺伝子座の９０％で同じ対立遺伝子を有することを意味している。
【００４９】
[0049]パーセント類似性。本明細書ではパーセント類似性とは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなどのパパイア品種のホモ接合対立遺伝子と別の植物との比較のことを指し、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍのホモ接合対立遺伝子が、他の植物の対立遺伝子のうち少なくとも１つで一致する場合、その対立遺伝子は類似しているとスコア化される。パーセント類似性は、統計的に有意な遺伝子座の数を比較し、類似の対立遺伝子を含む遺伝子座の数をパーセンテージで記録することによって決定される。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと別の植物の間で９０％のパーセント類似性とは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍが、遺伝子座の９０％で他の植物の対立遺伝子のうち少なくとも１つと一致することを意味している。
【００５０】
[0050]髄。本明細書では、「髄」という用語は、外皮の白い肉質部分のことを指す。
【００５１】
[0051]植物。本明細書では、「植物」という用語は、種子、子実、果実、棘又は葯が除去された植物を含めた、未成熟の若しくは成熟した植物全体への言及を含む。植物を作出することになる種子、幹細胞、気中取り木、細胞培養又は胚も植物であるとする。植物という用語は、同様にパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの「木」を含むべきである。
【００５２】
[0052]植物高さ。植物高さは、土壌の表面から植物の最上部節で採寸され、センチメートル又はインチで測定される。植物の幅も、センチメートル又はインチで測定される。
【００５３】
[0053]植物の部分。本明細書では、「植物の部分」（又は、パパイア植物若しくはその任意の部分）という用語は、原形質体、葉、幹、根、根端、葯、雌しべ、種子、子実、胚、花粉、胚珠、子葉、胚軸、果実、花、新芽、枝、組織、葉柄、細胞、樹液、油、抗酸化物質、栄養分、枝及び／又は葉の「葉脈」、樹皮、全体又は部分としての花、全体又は部分としての果実、外皮、パルプ、幹細胞、ゲノム、分裂組織細胞などを含むが、これに限定されない。植物の部分という用語は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの「木」又はその部分も同様に含むものとする。
【００５４】
[0054]後代。本明細書では、２つのパパイア植物の交雑から作出されるＦ１パパイア植物を含み、少なくとも１つの植物がパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを含み、後代は、それに続くＦ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ９及びＦ１０世代の交雑を更に含むが、これに限定されない。
【００５５】
[0055]量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）。量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）とは、通常連続的に分布するある程度数値で表せる形質を制御する遺伝的遺伝子座のことを指す。
【００５６】
[0056]再生。再生とは、組織培養、種子、気中取り木、接ぎ木、細胞培養、幹細胞又はゲノム導入による植物若しくは植物の部分の発達のことを指す。
【００５７】
[0057]単一遺伝子変換（変換）。単一遺伝子変換（変換）は、類似遺伝子型植物としても知られており、戻し交配と呼ばれる植物育種技術によって開発された植物のことを指し、品種に導入された単一遺伝子の他に、戻し交配技術又は遺伝子操作によってその品種の所望の形態学的及び生理的特徴の基本的に全てが回復される。
【００５８】
[0058]幹細胞又は前駆細胞。分化した細胞へと発達する又は他の幹細胞へと分裂する能力を有する植物、植物の部分若しくは成植物組織で見つかる未分化の細胞である。幹細胞は、任意の型の分化細胞に発達することができる。幹細胞を使用して、病害若しくは損傷によって傷ついた又は破壊された組織を置き換える、又は新たな植物若しくは植物の部分を作出することが潜在的に可能だが、この目的に対する胚性幹細胞の使用には議論の余地がある。
【００５９】
[0059]パパイア変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰは、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物の自家受粉により高度に雌雄同株性の後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）を作出し、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物を花粉親として正常な雌パパイアと交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）を作出する。本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰは遺伝性であり、多くの異なるパパイア株へ導入されている。
【００６０】
[0060]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、雌雄同株植物の自家受粉により高度に雌雄同株性の後代（９０〜１００％）を作出する変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する新たな近交パパイア株である。対照的に、正常な雌雄同株植物の自家受粉は、およそ３分の２の雌雄同株植物及び３分の１の雌株を生成することになる。更に、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍが正常な雌株と交雑した場合、９０％を超えるＦ１後代が雌雄同株であった。対照的に、正常な雌パパイアと正常な雌雄同株パパイア植物との交雑の正常な性分離は、１：１（雌：雌雄同株）である。
【００６１】
[0061]変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、Ｅａｓｔ−Ｗｅｓｔ  Ｓｅｅｄ育種系統の多様な個体群から得られた高度に雌雄同株性の近交系である。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍが、Ｃｈａｎ−Ｔａｉら（米国特許第７，０３４，２０７号）の源と比べて完全に異なる形態学的に独特な源から得られるという点で、本発明はＣｈａｎ−Ｔａｉらによって記載される突然変異体パパイア株ＴＳＳ７号と異なる。特に、Ｃｈａｎ−Ｔａｉらのパパイアは、ハワイで普及している自然受粉性のＳｏｌｏパパイア品種であるＳｕｎｒｉｓｅから得られたが、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、Ｅａｓｔ−Ｗｅｓｔ  Ｓｅｅｄ育種材料の分離集団から得られた。同様に、本明細書において変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰと命名されるＥＷＳ−２４９９ｍの、高度に雌雄同株性になる形質の遺伝的な制御及び発現は、Ｃｈａｎ−Ｔａｉらの制御及び発現と完全に異なる。Ｃｈａｎ−Ｔａｉらは、自家授粉した場合に突然変異体株の発現の全てが雌雄同株（１００％）であり、全てが雌雄同株性の突然変異体品種ＴＳＳ７号を正常な雌と交雑した場合、雌と雌雄同株植物の分離が１：１（５０：５０）であることについて特許請求しており、この分離は、Ｓｔｏｒｅｙ（１９３８年；１９５３年）によって記載された正常な雌と正常な雌雄同株植物との交雑と類似している。本発明の、高度に雌雄同株性の株ＥＷＳ−２４９９ｍは、自家受粉により必ずしも１００％の雌雄同株性発現を得られない（その代わりに雌雄同株９０％〜１００％及び雌０〜１０％を得られる）が、両親の一方としてＥＷＳ−２４９９ｍ雌雄同株性の株を使用するＦ１後代において高度に雌雄同株性の形質の発現が得られ（雌雄同株９０％〜１００％及び雌０〜１０％）、この比は、全てが雌雄同株突然変異体株であるＴＳＳ７号を正常な雌パパイア植物と交雑した場合、Ｃｈａｎ−Ｔａｉらによって得られる雌雄同株５０％：雌５０％の分離（２００３年、２００６年）と大きな相違がある。
【００６２】
[0062]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、パパイア輪点ウイルス（ＰＲＳＶ）に対する中程度の抵抗性、平均果実長２８。０ｃｍの際立って長く細い円筒形の果実、及び濃い黄色の果肉色によっても区別される。
【００６３】
[0063]以下の品種説明情報に記載の通り、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、均一性及び安定性を示した。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、十分な世代及び年数にわたり植物の型及び形質の均一性を注意深く観察しながら自家授粉された。均一性及び形質について継続的に観察し、選択しながら株を増やした。
【００６４】
[0064]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、以下の形態的及び他の特徴（タイ国チェンマイで採取したデータに主に基づく）を有し、これらの特徴を、米国特許第７，０３４，２０７号に報告されているパパイア株ＴＳＳ７号の形態的特徴と比較して示す。
【表４−１】
2015198647.tif 000005
【表４−２】
2015198647.tif 000006
【００６５】
[0065]この発明は、第１の親パパイア植物を第２の親パパイア植物と交雑することによってパパイア植物を作出する方法も対象とし、第１又は第２のパパイア植物は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍである。更に、第１と第２の親パパイア植物の両方が、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍであってもよい。従って、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを使用する任意の方法：自家受粉、戻し交配、雑種育種及び個体群への交雑は、この発明の一部である。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ及び／又は祖先であるＥＷＳ−２４９９ｍから得られたＥＷＳＭＨＰ対立遺伝子を含有するパパイア株を使用して開発された任意の植物は、この発明の範囲内である。
【００６６】
[0066]更なる方法には、それだけには限らないが、微粒子噴射（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）媒介送達、ＤＮＡ注入、エレクトロポレーションなど、直接遺伝子導入法を使用して植物組織に導入した発現ベクターがある。発現ベクターは、微粒子銃装置を用いる微粒子噴射媒介送達を使用するか又はアグロバクテリウム媒介形質転換を使用するかいずれかによって植物組織に導入されることが、より好ましい。本発明の原形質を用いて得られた形質転換体植物は、この発明の範囲内にあるものとする。
【実施例】
【００６７】
実施例１．近交系ＥＷＳ−２４９９ｍの開発及び変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの同定
[0067]黄色い果肉を持つ、分離しているＥａｓｔ−Ｗｅｓｔ  Ｓｅｅｄ育種系統に由来の自家受粉後代（ＥＷＳ−４４５と符号化した）を、タイ国チェンマイにおいて評価し、植物高さ、植物生長力、ＰＲＳＶに対する相対的な抵抗性若しくは感染性、着果、傷跡形成又は奇形及び果実割れを含めた様々な形態学的形質に関して区別されることが判明した。雌雄同株の個々の植物は、改善されたＰＲＳＶ抵抗性、強い植物生長力、優れた着果、性奇形に対する感度の低さ、及び果実割れの少なさに基づいてこの個体群から選択された。選択した個々の植物の雌雄同株花は、雌雄同株花に袋をかぶせることによって自家受粉させた。
【００６８】
[0068]選択した植物（雌雄同株）の自家受粉を数世代行い、同じ望ましい植物の特徴、すなわちＰＲＳＶに対する中程度の抵抗性、強い植物生長力、優れた着果、奇形に対する感度の低さ及び果実割れの少なさ又は雌性不稔に関して選択した。上記の特徴に加えて、雌及び雌雄同株木の分離も各選択株について決定した。
【００６９】
[0069]ＥＷＳ−４４５を６世代自家受粉した後に、Ｓｔｏｒｅｙ（１９３８年、１９５３年）に記載されたように予想される２：１（ｈｅｒｍａ：雌）又は雌雄同株６７％及び雌３３％の分離とは対照的に、１つの近交系（ＥＷＳ−４４５−３−０−７−６−６−３）は、９０％以上の雌雄同株を作出したので、雌雄同株花対雌花の数の異状分離を示した。２：１（雌雄同株対雌）の正常な予想される分離を示した２つの他の姉妹株（ＥＷＳ−４４５−３−０−７−６−６−１及びＥＷＳ−４４５−３−０−７−６−６−２）とは対照的に、この近交系（ＥＷＳ−４４５−３−０−７−６−６−３）には、突然変異を意味する「ｍ」を付した新たな符号ＥＷＳ−２４９９ｍを与えた。２つの正常に分離している株には、正常な分離を意味する「ｎ」を付してそれぞれＥＷＳ−２４９７ｎ及びＥＷＳ−２４９８ｎと符号化した。ＥＷＳ−２４９９ｍの突然変異体形質は、本明細書において変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰと命名される。突然変異が遺伝性かどうか調べるために、無作為に選択したＥＷＳ−２４９９ｍの雌雄同株植物の２つ（ＥＷＳ−２４９９ｍ−１及びＥＷＳ−２４９９ｍ−２と符号化した）を２世代自家受粉し、性分離について調べた。比較のために、同様にしてＥＷＳ−２４９７ｎ及びＥＷＳ−２４９８ｎ各々の無作為に選択した雌雄同株植物も２世代自家受粉した。
【００７０】
実施例２．自家受粉による正常な雌雄同株パパイア植物の分離様式
[0070]上記の通り、正常な雌雄同株パパイア植物の自家受粉により、雌雄同株６７％及び雌３３％の分離が得られることになる。正常な雌雄同株パパイア株ＥＷＳ−２４９７ｎ及びＥＷＳ−２４９８ｎを２世代自家受粉し、結果として得られた後代の分離を観察した。表５で示されるように、正常な雌雄同株パパイア株ＥＷＳ−２４９７ｎ及びＥＷＳ−２４９８ｎ並びにこの２つを自家受粉させた後代により、雌雄同株植物５９．８〜６７．１％対雌３２．９〜４０．２％の分離比が得られ、雌雄同株６７％対雌３３％の予想される分離比と類似していた。
【００７１】
実施例３．変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物の自家受粉による分離様式
[0071]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを２世代自家受粉し、得られた後代の分離様式を観察した。表５で示されるように、ＥＷＳ−２４９９ｍの自家受粉により、雌雄同株９４．１〜１００％対雌０〜５．９％に分離した後代が得られ、パパイアＥＷＳ−２４９９ｍの分離様式が、雌雄同株６７％対雌３３％に分離する正常な雌雄同株パパイアの分離様式と明らかに異なり、固有であることが示された。
【００７２】
[0072]要約すると、ＥＷＳ−２４９７ｎ（正常）、ＥＷＳ−２４９８ｎ（正常）及びＥＷＳ−２４９９ｍ（突然変異体）並びにこれら３つの次の自家受粉世代を自家受粉した後代の性分離（雌及び雌雄同株）の結果を、表５に表す。表５、列１は符号名を示し、列２は位置を示し、ＴＨはタイを示し、ＰＨはフィリピンを示し、列３は評価した年を示し、列４は開花期に評価した植物総数を示し、列５は雌雄同株性（Ｈ）の後代の数を示し、列６は雌（Ｆ）の後代の数を示し、列７は雌雄同株性の後代のパーセンテージを示し、列８は雌の後代のパーセンテージを示し、列９は予想される分離比を示し、列１０は雌雄同株性の後代の予想されるパーセンテージを示し、列１１は雌の後代の予想されるパーセンテージを示し、列１２はカイ二乗値
2015198647.tif 000007
を示し、列１３は統計的有意性を示し、「＊＊＊」はＰ＜０．００１、カイ二乗臨界値、１ｄｆ＝６．６３５で有意性が高いことを示し、「ｎｓ」は統計的に有意ではないことを示す。
【表５】
2015198647.tif 000008
【００７３】
[0073]表５で示されるように、ＥＷＳ−２４９９ｍ及び自家受粉により変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するＥＷＳ−２４９９ｍ由来株（ＥＷＳ−２４９９ｍ−１、ＥＷＳ−２４９９ｍ−１−１、ＥＷＳ−２４９９ｍ−２、ＥＷＳ−２４９９ｍ−２−１、ＥＷＳ−２４９９ｍ−２−２）、の雌雄同株対雌株の性分離は、雌雄同株後代９４．１％〜１００％であり、この分離はカイ二乗適合度（ｐ＜０．００１）に基づいて、雌雄同株２／３対雌１／３の予想される分離から著しく外れていた。対照的に、雌雄同株対、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有しない正常に分離する株（ＥＷＳ−２４９７ｎ及びＥＷＳ−２４９８ｎ）及び自家受粉によりそれらに由来する株（ＥＷＳ−２４９７ｎ−１、ＥＷＳ−２４９７ｎ−１−１、ＥＷＳ−２４９７ｎ−１−２、ＥＷＳ−２４９８ｎ−１及びＥＷＳ−２４９８ｎ−１−１）の雌株の分離又は比は、およそｈｅｒｍａ６６．７％：雌３３．３％であり、２：１（雌雄同株：雌）の分離に基づいて予想された通りであった。
【００７４】
[0074]表５で示されるように、パパイアＥＷＳ−２４９９ｍの近交系の自家受粉により、高度に雌雄同株性の自然受粉品種を得ることができる。本明細書において変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰと命名される突然変異体形質は遺伝性であり、他の優良株に導入することができ、それ故、突然変異体近交パパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍから得られる突然変異体形質を使用して、（予想される６７％でなく）９０％以上の雌雄同株を作出することができる高度に雌雄同株性の自然受粉品種を開発することができる。
【００７５】
実施例４．他の遺伝的背景への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0075]ＥＷＳＭＨＰと命名された本発明の新規遺伝因子が、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物の自家受粉により高度に雌雄同株性の後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）の作出、及び変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する雌雄同株植物を花粉親として正常な雌パパイアと交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）の作出を伝える能力があることは、予想外であった。変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰは、追加の修飾遺伝子を有する可能性がある新規優性対立遺伝子であると考えられている。変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを様々なパパイア植物に使用し、そのパパイア間で導入できることが本発明の特色である。
【００７６】
実施例５．パパイア株ＥＷＳ−１５３６への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0076]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−１５３６が変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有しない正常な雌雄同株パパイア植物、ＥＷＳ−２４９７ｎと交雑した場合、得られた後代は、およそ雌雄同株５２％対雌４８％に分離し、Ｓｔｏｒｅｙ（１９３８年、１９５３年）によって記載された正常な分離と類似していた。しかしながら、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−１５３６が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９５．５％対雌株４．５％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００７７】
実施例６．パパイア株ＥＷＳ−７４１への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0077]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−７４１が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９６．０％対雌株４．０％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００７８】
実施例７．パパイア株ＥＷＳ−７７５への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0078]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−７７５が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９７．９％対雌株２．１％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００７９】
実施例８．パパイア株Ｍａｒａｄｏｌへの変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0079]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物Ｍａｒａｄｏｌが、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９５．０％対雌株５．０％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００８０】
実施例９．パパイア株ＥＷＳ−２６８０への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0080]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−２６８０が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９８．３％対雌株１．７％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００８１】
実施例１０．パパイア株ＥＷＳ−９９７への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0081]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−９９７が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９４．５％対雌株５．５％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００８２】
実施例１１．パパイア株ＥＷＳ−１１６３への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0082]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−１１６３が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９５．７％対雌株４．３％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００８３】
実施例１２．パパイア株ＥＷＳ−１４０７への変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰの導入
[0083]表６で示されるように、正常な雌パパイア植物ＥＷＳ−１４０７が、本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと交雑した場合、得られた後代は、雌雄同株９７．１％対雌株２．９％の比で分離したことから、この分離は、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰが遺伝性であり、後代に含有されていることを示す。
【００８４】
[0084]要約すると、下記の表６は、正常雌パパイア植物と正常に分離しているｈｅｒｍａ株ＥＷＳ−２４９７ｎ及び突然変異体パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍとの異なる組の交雑から得られるＦ１後代の性分離分析の結果を示す。表６、列１は交雑に使用した雌株を示し、列２は雄親を示し、列３は交雑の型を示し、列４は移植日を示し、列５は開花期に評価した植物の総数を示し、列６は雌雄同株性（Ｈ）のＦ１後代の数を示し、列７は雌（Ｆ）のＦ１後代の数を示し、列８は雌雄同株性のＦ１後代のパーセンテージを示し、列９は雌のＦ１後代のパーセンテージを示し、列１０は予想される分離比を示し、列１１は雌雄同株性のＦ１後代の予想されるパーセンテージを示し、列１２は雌のＦ１後代の予想されるパーセンテージを示し、列１３はカイ二乗値
2015198647.tif 000009
を示し、列１４は統計的有意性を示し、「＊＊＊」はＰ＜０．００１、カイ二乗臨界値、１ｄｆ＝６．６３５で有意性が高いことを示し、「ｎｓ」は統計的に有意ではないことを示す）。
【表６】
2015198647.tif 000010
【００８５】
[0085]表６で示されるように、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍとの交雑は全て、正常な雌と交雑した場合９４％を超える雌雄同株性のＦ１後代を作出したが、正常な雌と交雑した正常な雌雄同株パパイアは、雌雄同株性Ｆ１後代を５０％作出する。これらの結果は、上記Ｆ１後代が、１：１又は雌５０％及び雌雄同株５０％に分離したので、花粉親として全てが雌雄同株の突然変異体株ＴＳＳ７号を使用してＣｈａｎ−Ｔｓａｉら（２００３年、２００６年）によって観察された分離比と明らかに異なり、Ｓｔｏｒｅｙ（１９３８年、１９５３年）によって記載された正常な分離と類似していた。
【００８６】
[0086]更に、表６で示されるように、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰは、突然変異体パパイア株ＥＷＳ−２４９９ｍと他のパパイア植物の間で直ちに導入される。ＥＷＳＭＨＰ変異対立遺伝子の存在は、正常な雌パパイアと交雑し、その結果生じたＦ１後代を高度に雌雄同株性の後代（雌雄同株性植物９０〜１００％及び雌株０〜１０％）について分析することによって、直ちに決定することができる。
本発明の更なる実施形態
【００８７】
[0087]新たな分子生物学的技術の出現により、特定のタンパク質産物をコードしているなど、特定の機能を持つ遺伝要素の単離及び特徴付けが可能になった。植物生物学の分野の科学者は、植物のゲノムの操作に強い関心を持ち、外来の遺伝要素、又は天然若しくは内在性の遺伝要素の更なる又は改変された変形を含有及び発現させ、それにより特定の方法で植物の形質を改変した。異なる種由来か同じ種由来かに関わらず、形質転換又は様々な育種方法を使用してゲノムに導入される任意のＤＮＡ配列は、本明細書において総称して「導入遺伝子」と称される。本発明のいくつかの実施形態において、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ及び／若しくは高度に雌雄同株形質を持つＥＷＳ−２４９９ｍから得られる株の遺伝子導入変異体は、少なくとも１個の導入遺伝子を含有してもよく、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個及び／又は多くて１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３若しくは２個含有することができる。過去１５〜２０年にわたり、遺伝子導入植物を作出する方法がいくつか開発されてきたが、本発明は特許請求されたパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの遺伝子導入変異体にも関する。
【００８８】
[0088]核酸又はポリヌクレオチドとは、直鎖状若しくは分岐状、一本若しくは二本鎖、又はこれらのハイブリッドであるＲＮＡ若しくはＤＮＡのことを指す。この用語は、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドも包含する。これらの用語は、遺伝子のコード領域の３’と５’両末端に位置する非翻訳配列：コード領域の５’末端から上流へ少なくともおよそ１０００ヌクレオチドの配列及び遺伝子のコード領域の３’末端から下流へ少なくともおよそ２００ヌクレオチドの配列も包含する。あまり一般でない塩基、イノシン、５−メチルシトシン、６−メチルアデニン、ヒポキサンチン及びその他なども、アンチセンス、ｄｓＲＮＡ及びリボザイム対合に使用できる。例えば、ウリジン及びシチジンのＣ−５プロピン類似体を含有するポリヌクレオチドは、高い親和性でＲＮＡに結合し、遺伝子発現の強力なアンチセンス阻害剤になることが示された。リン酸ジエステル骨格、又はＲＮＡのリボース糖基中の２’−ヒドロキシに対する修飾など、他の修飾を製作することもできる。アンチセンスポリヌクレオチド及びリボザイムは、完全にリボヌクレオチドから成ることができ、又は混合されたリボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドを含有することもできる。本発明のポリヌクレオチドは、ゲノム調製、ｃＤＮＡ調製、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成、ＲＴ−ＰＣＲ、及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ転写を含めた任意の手段によって製造することができる。
【００８９】
[0089]本発明の一実施形態は、所望の形質を更に含むパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを作出するプロセスであって、品種ＥＷＳ−２４９９ｍのパパイア植物及び／又は高度にｈｅｒｍａ形質を持つＥＷＳ−２４９９ｍから得られる株に所望の形質を付与する導入遺伝子を導入するステップを含むプロセスである。別の実施形態は、このプロセスによって作出された産物である。一実施形態において、所望の形質は、除草剤抵抗性、昆虫抵抗性、病害抵抗性、低下したフィチン酸塩、又は改変された脂肪酸若しくは炭水化物代謝、のうちの１つ又は複数であることができる。特定の遺伝子は、当技術分野において公知の任意の遺伝子又はイミダゾリノン、ジカンバ、スルホニル尿素、グリフォセート、グルフォシネート、トリアジン、ベンゾニトリル、シクロヘキサンジオン、フェノキシプロピオン酸、及びＬ−フォスフィノスリシンに対する抵抗性を付与するポリヌクレオチド；バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；フィターゼ、ＦＡＤ−２、ＦＡＤ−３、ガラクチノール合成酵素若しくはラフィノース合成酵素をコードするポリヌクレオチド；又はダイズシスト線虫、落葉病、根腐疫病、パパイア輪点ウイルス、突然死症候群、細菌性菌核病又はエルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）種に起因する枝枯れ病、コレトトリカム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ）種に起因する炭疽病、オイジウム・カリカエ（Ｏｉｄｉｕｍ  ｃａｒｉｃａｅ）に起因するウドンコ病、フィチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種に起因する立ち枯れ病、コリネスポラ・カシコーラ（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ  ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）に起因するコリネスポラ斑点病、セルコスポラ・パパイア（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｐａｐａｙａ）に起因するセルコスポラ黒斑病、アスペリスポリウム・カリカエ（Ａｓｐｅｒｉｓｐｏｒｉｕｍ  ｃａｒｉｃａｅ）に起因する黒斑病若しくはメロイドジン（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ）種に起因する根こぶ線虫に対する抵抗性を付与するポリヌクレオチドを含めた本明細書に挙げた遺伝子でもよい。
【００９０】
[0090]生物学的及び物理学的な植物形質転換手順を含めて、多くの植物形質転換方法が開発された。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌｉｃｋ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、６７〜８８頁（１９９３年）にあるＭｉｋｉら、「Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｆｏｒｅｉｇｎ  ＤＮＡ  ｉｎｔｏ  Ｐｌａｎｔｓ」及びＡｒｍｓｔｒｏｎｇ、「Ｔｈｅ  Ｆｉｒｓｔ  Ｄｅｃａｄｅ  ｏｆ  Ｍａｉｚｅ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、Ｍａｙｄｉｃａ、４４：１０１〜１０９頁（１９９９年）を参照されたい。加えて、植物細胞若しくは組織形質転換並びに植物再生用の発現ベクター及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養方法が使用可能である。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌｉｃｋ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、８９〜１１９頁（１９９３年）にあるＧｒｕｂｅｒら、「Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ」を参照されたい。
【００９１】
[0091]植物育種分野で周知である伝統的な育種技術を使用して、特定のパパイア植物のゲノムに操作された遺伝形質を、次いで別の品種のゲノムに移動させてもよい。例えば、戻し交配手法を一般に使用して、形質転換したパパイア栽培品種からすでに開発したパパイア栽培品種へ導入遺伝子を移動させ、その後得られた戻し交配変換植物は導入遺伝子（複数可）を含むことになる。
【００９２】
[0092]形質転換を使用して、植物ゲノムに様々な遺伝要素を導入することができる。様々な遺伝要素には、それだけには限らないが、遺伝子、コード配列、誘導可能であり構成的な組織特異的プロモーター、増強配列並びにシグナル及び標的化配列がある。例えば、米国特許第６，１１８，０５５号に挙げられる形質、遺伝子及び形質転換方法を参照されたい。
【００９３】
[0093]植物形質転換は、植物細胞で機能する発現ベクターの構築を含む。植物細胞で機能する発現ベクターは、調節要素（例えば、プロモーター）の制御下にある、又はそれに機能するように連結された遺伝子を含むＤＮＡを含む。発現ベクターは、上記のような機能するように連結された遺伝子／調節要素の組合せを１つ又は複数含有してもよい。ベクター（複数可）は、プラスミドの形態であってもよく、単独で又は他のプラスミドと組み合わせて使用して、下記のような形質転換方法を用いて形質転換されたパパイア植物を生成し、それによってパパイア植物（複数可）の遺伝物質に導入遺伝子を組み入れることができる。
パパイア形質転換用の発現ベクター：マーカー遺伝子
【００９４】
[0094]発現ベクターは、負の選択、すなわち選択可能なマーカー遺伝子を含有しない細胞の増殖を阻害すること、又は正の選択、すなわち遺伝子マーカーによってコードされる産物に対してスクリーニングすることのいずれかによってマーカーを含有する形質転換細胞を回収することが可能になる調節要素（例えば、プロモーター）に機能するように連結された遺伝子マーカーを少なくとも１つ含む。植物形質転換に際して一般に使用される多くの選択可能なマーカー遺伝子は、形質転換分野で周知であり、例えば、抗生物質若しくは除草剤であり得る選択的な化学薬品を代謝的に解毒する酵素をコードする遺伝子、又は阻害剤に非感受性である改変された標的をコードする遺伝子を含む。いくつかの正の選択方法も、当技術分野において公知である。
【００９５】
[0095]植物形質転換に一般に使用される選択可能なマーカー遺伝子の１つは、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩ（ｎｐｔＩＩ）遺伝子であり、植物調節シグナルの制御下にある場合、カナマイシンに対する抵抗性を付与する。Ｆｒａｌｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８０：４８０３頁（１９８３年）。別の一般に使用される選択可能なマーカー遺伝子は、抗生物質ハイグロマイシンに対する抵抗性を付与するハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子である。Ｖａｎｄｅｎ  Ｅｌｚｅｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、５：２９９頁（１９８５年）。
【００９６】
[0096]抗生物質に対する抵抗性を付与する細菌起源の更なる選択可能なマーカー遺伝子には、ゲンタマイシンアセチルトランスフェラーゼ、ストレプトマイシンホスホトランスフェラーゼ及びアミノグリコシド−３’−アデニルトランスフェラーゼ、ブレオマイシン抵抗性決定因子がある（Ｈａｙｆｏｒｄら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、８６：１２１６頁（１９８８年）；Ｊｏｎｅｓら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２１０：８６頁（１９８７年）；Ｓｖａｂら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１４：１９７頁（１９９０年）；Ｈｉｌｌｅら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、７：１７１頁（１９８６年））。他の選択可能なマーカー遺伝子は、グリフォセート、グルフォシネート又はブロモキシニルなどの除草剤に対する抵抗性を付与する（Ｃｏｍａｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３１７：７４１〜７４４頁（１９８５年）；Ｇｏｒｄｏｎ−Ｋａｍｍら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、２：６０３〜６１８頁（１９９０年）；Ｓｔａｌｋｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４１９〜４２３頁（１９８８年））。
【００９７】
[0097]細菌起源でない植物形質転換に対する選択可能なマーカー遺伝子には、例えば、マウスジヒドロ葉酸還元酵素、植物５−エノールピルビルシキミ酸−３−リン酸合成酵素、及び植物アセト乳酸合成酵素がある（Ｅｉｃｈｈｏｌｔｚら、Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、１３：６７頁（１９８７年）；Ｓｈａｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３３：４７８頁（１９８６年）；Ｃｈａｒｅｓｔら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．、８：６４３頁（１９９０年））。
【００９８】
[0098]植物形質転換用の別の種類のマーカー遺伝子は、形質転換細胞の直接的な遺伝子選択ではなく、仮定として形質転換された植物細胞を抗生物質などの毒性物質に対する抵抗性に関してスクリーニングする必要がある。これらのマーカー遺伝子を遺伝子又は遺伝子調節配列に融合して遺伝子発現を調査することができるので、これらのマーカー遺伝子は、特定の組織中にある遺伝子の発現の分布様式を定量化若しくは可視化するのに特に有用であり、しばしばレポータ遺伝子と称される。仮定の形質転換細胞をスクリーニングするために一般に使用される遺伝子には、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ及びクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼがある（Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ａ．、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．、５：３８７頁（１９８７年）；Ｔｅｅｒｉら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、８：３４３頁（１９８９年）；Ｋｏｎｃｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：１３１頁（１９８７年）；ＤｅＢｌｏｃｋら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、３：１６８１頁（１９８４年））。
【００９９】
[0099]植物組織を破壊する必要なくｉｎ  ｖｉｖｏでＧＵＳ活性を可視化する方法が使用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ２９０８、ＩＭＡＧＥＮＥ  ＧＲＥＥＮ、１〜４頁（１９９３年）；Ｎａｌｅｗａｙら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１１５：１５１ａ（１９９１年））。しかしながら、ＧＵＳ活性を可視化するこれらｉｎ  ｖｉｖｏの方法は、低い感度、高い蛍光バックグラウンド、及び選択可能なマーカーとしてのルシフェラーゼ遺伝子の使用に関連する制限のため、形質転換細胞の回収に有用であると認められていなかった。
【０１００】
[0100]最近では、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする遺伝子が、原核及び真核細胞における遺伝子発現用のマーカーとして利用されている（Ｃｈａｌｆｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６３：８０２頁（１９９４年））。ＧＦＰ及びＧＦＰの突然変異体が、スクリーン可能なマーカーとして使用されてもよい。
パパイア形質転換用の発現ベクター：プロモーター
【０１０１】
[0101]発現ベクターに含まれる遺伝子は、調節要素（例えば、プロモーター）を含むヌクレオチド配列によって駆動されなければならない。他の調節要素として数種類のプロモーターが形質転換分野で周知であり、単独で又はプロモーターと組み合わせて使用できる。
【０１０２】
[0102]本明細書では、「プロモーター」は、転写開始点より上流にあり、ＲＮＡポリメラーゼ及び転写を開始するための他のタンパク質の認識と結合に関与するＤＮＡの領域への言及を含む。「植物プロモーター」とは、植物細胞において転写を開始することができるプロモーターである。発達制御下にあるプロモーターの例には、葉、根、種子、繊維組織、木部導管、仮導管又は厚膜組織など特定の組織において転写を優先的に開始するプロモーターがある。そのようなプロモーターは、「組織優先」と称される。特定の組織においてのみ転写を開始するプロモーターは、「組織特異的」と称される。「細胞型」特異的プロモーターは、１つ又は複数の器官にある特定の細胞型、例えば根又は葉の脈管細胞において発現を主に駆動する。「誘導可能」プロモーターは、環境制御下にあるプロモーターである。誘導可能なプロモーターによる転写に作用できる環境条件の例には、嫌気性条件又は光の存在がある。組織特異的、組織優先、細胞型特異的、及び誘導可能なプロモーターは、「非構成的」プロモーターの種類を構成する。「構成的」プロモーターとは、殆どの環境条件下で活性があるプロモーターのことである。
【０１０３】
[0103]Ａ．誘導可能なプロモーター−誘導可能なプロモーターは、パパイアにおいて発現する遺伝子に機能するように連結される。任意に、誘導可能なプロモーターは、パパイアにおいて発現する遺伝子に機能するように連結されているシグナル配列をコードするヌクレオチド配列に機能するように連結される。誘導可能なプロモーターの場合、転写の速度は、誘導剤に応答して増加する。
【０１０４】
[0104]本発明において、任意の誘導可能なプロモーターを使用することができる。Ｗａｒｄら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２：３６１〜３６６頁（１９９３年）を参照されたい。典型的な誘導可能なプロモーターには、それだけには限らないが、銅に応答するＡＣＥＩ系に由来するプロモーター（Ｍｅｔｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：４５６７〜４５７１頁（１９９３年））；ベンゼンスルホンアミド除草剤セーフナーに応答するトウモロコシ由来Ｉｎ２遺伝子（Ｈｅｒｓｈｅｙら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２２７：２２９〜２３７頁（１９９１年）；Ｇａｔｚら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２４３：３２〜３８頁（１９９４年））；又はＴｎ１０由来Ｔｅｔリプレッサー（Ｇａｔｚら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２２７：２２９〜２３７頁（１９９１年））がある。誘導可能なプロモーターは、植物が通常応答しない誘導剤に応答するプロモーターであることが特に好ましい。典型的な誘導可能なプロモーターは、ステロイドホルモン遺伝子由来の誘導可能なプロモーター、糖質コルチコイド応答要素、糖質コルチコイドホルモンによって誘導される転写活性である（Ｓｃｈｅｎａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：１０４２１〜１０４２５頁（１９９１年））。
【０１０５】
[0105]Ｂ．構成的プロモーター−構成的プロモーターは、パパイアにおいて発現する遺伝子に機能するように連結される、又は構成的プロモーターは、パパイアにおいて発現する遺伝子に機能するように連結されているシグナル配列をコードするヌクレオチド配列に機能するように連結される。
【０１０６】
[0106]本発明において、多くの異なる構成的プロモーターを利用することができる。典型的な構成的プロモーターには、それだけには限らないが、ＣａＭＶ由来３５Ｓプロモーターなど植物ウイルス由来プロモーター（Ｏｄｅｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３１３：８１０〜８１２頁（１９８５年））、並びに稲アクチン（ＭｃＥｌｒｏｙら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、２：１６３〜１７１頁（１９９０年））；ユビキチン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１２：６１９〜６３２頁（１９８９年）；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１８：６７５〜６８９頁（１９９２年））；ｐＥＭＵ（Ｌａｓｔら、Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．、８１：５８１〜５８８頁（１９９１年））；ＭＡＳ（Ｖｅｌｔｅｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、３：２７２３〜２７３０頁（１９８４年））；及びトウモロコシＨ３ヒストン（Ｌｅｐｅｔｉｔら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２３１：２７６〜２８５頁（１９９２年）；Ａｔａｎａｓｓｏｖａら、Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２（３）：２９１〜３００頁（１９９２年））のような遺伝子に由来するプロモーターがある。ブラシカ・ナパス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ）ＡＬＳ３構造遺伝子の５’側のＸｂａＩ／ＮｃｏＩ断片であるＡＬＳプロモーター（又は前記ＸｂａＩ／ＮｃｏＩ断片に類似するヌクレオチド配列）は、特に有用な構成的プロモーターを表す。ＰＣＴ国際公開第９６／３０５３０号パンフレットを参照されたい。
【０１０７】
[0107]Ｃ．組織特異的又は組織優先プロモーター−組織特異的プロモーターは、パパイアにおいて発現する遺伝子に機能するように連結される。任意に、組織特異的プロモーターは、パパイアにおいて発現する遺伝子に機能するように連結されているシグナル配列をコードするヌクレオチド配列に機能するように連結される。組織特異的プロモーターに機能するように連結された対象となる遺伝子で形質転換された植物は、特定の組織において単独に又は優先的に導入遺伝子のタンパク質産物を産生する。
【０１０８】
[0108]本発明において、任意の組織特異的又は組織優先プロモーターを利用することができる。典型的な組織特異的又は組織優先プロモーターには、それだけには限らないが、ファゼオリン遺伝子由来プロモーターなど根優先プロモーター（Ｍｕｒａｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３：４７６〜４８２頁（１９８３年）；Ｓｅｎｇｕｐｔａ−Ｇｏｐａｌａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３３２０〜３３２４頁（１９８５年））；ｃａｂ若しくはルビスコ由来プロモーターなど葉特異的及び光誘導プロモーター（Ｓｉｍｐｓｏｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、４（１１）：２７２３〜２７２９頁（１９８５年）；Ｔｉｍｋｏら、Ｎａｔｕｒｅ、３１８：５７９〜５８２頁（１９８５年））；ＬＡＴ５２由来プロモーターなど葯特異的プロモーター（Ｔｗｅｌｌら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２１７：２４０〜２４５頁（１９８９年））；Ｚｍ１３由来プロモーターなど花粉特異的プロモーター（Ｇｕｅｒｒｅｒｏら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２４４：１６１〜１６８頁（１９９３年））；又はａｐｇ由来プロモーターなど花粒粉優先プロモーター（Ｔｗｅｌｌら、Ｓｅｘ．Ｐｌａｎｔ  Ｒｅｐｒｏｄ．、６：２１７〜２２４頁（１９９３年））がある。
細胞内区画にタンパク質を標的化するためのシグナル配列
【０１０９】
[0109]葉緑体、液胞、ペルオキシソーム、グリオキシソーム、細胞壁若しくはミトコンドリアなど細胞内区画への、又はアポプラストに分泌するための導入遺伝子によって産生されたタンパク質の輸送は、対象となるタンパク質をコードする遺伝子の５’及び／若しくは３’領域にシグナル配列をコードしているヌクレオチド配列を機能するように連結することによって果たされる。構造遺伝子の５’及び／又は３’末端にある標的化配列は、タンパク質合成並びにコードされているタンパク質が最終的に区分されるプロセッシングの間に決定できる。
【０１１０】
[0110]シグナル配列の存在は、細胞内オルガネラ若しくは細胞内区画か又はアポプラストへの分泌のいずれかにポリペプチドを仕向ける。多くのシグナル配列は、当技術分野において公知である。例えば、Ｂｅｃｋｅｒら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２０：４９頁（１９９２年）；Ｋｎｏｘ，Ｃら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、９：３〜１７頁（１９８７年）；Ｌｅｒｎｅｒら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、９１：１２４〜１２９頁（１９８９年）；Ｆｒｏｎｔｅｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、３：４８３〜４９６頁（１９９１年）；Ｍａｔｓｕｏｋａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８８：８３４頁（１９９１年）；Ｇｏｕｌｄら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１０８：１６５７頁（１９８９年）；Ｃｒｅｉｓｓｅｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｊ．、２：１２９頁（１９９１年）；Ｋａｌｄｅｒｏｎら、Ｃｅｌｌ、３９：４９９〜５０９頁（１９８４年）；Ｓｔｅｉｆｅｌら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、２：７８５〜７９３頁（１９９０年）を参照されたい。
外来タンパク質遺伝子及び農業遺伝子
【０１１１】
[0111]本発明による遺伝子導入植物を用いて、外来タンパク質を商業的な量で産生することができる。従って、当技術分野においてよく理解されている、形質転換された植物の選択及び増殖技術により、従来の方法で収穫される複数の遺伝子導入植物が得られ、対象となる組織又は全生物量から外来タンパク質をその後抽出することができる。植物生物量からのタンパク質抽出は、例えば、Ｈｅｎｅｙ  ａｎｄ  Ｏｒｒ、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１１４：９２〜６頁（１９８１年）に記述されている公知の方法によって果たされる。
【０１１２】
[0112]好ましい実施形態によると、外来タンパク質の商業的な生産のために生成した遺伝子導入植物は、パパイア植物である。別の好ましい実施形態において、対象となる生物量は種子である。高い発現レベルを示す比較的少ない数の遺伝子導入植物の場合、主に従前通りのＲＦＬＰ、ＰＣＲ及びＳＳＲ分析によって遺伝子地図を作成することができ、遺伝子地図により組み込まれたＤＮＡ分子のおおよその染色体位置を同定する。遺伝子地図に関する典型的な方法論については、Ｇｌｉｃｋ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、２６９：２８４頁（１９９３年）を参照されたい。染色体位置に関する地図情報は、対象の遺伝子導入植物の所有権保護に有用である。
【０１１３】
[0113]Ｗａｎｇらは、「Ｌａｒｇｅ  Ｓｃａｌｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｍａｐｐｉｎｇ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ」Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８０：１０７７〜１０８２頁（１９９８年）について記述しており、類似の能力が、パパイアゲノムでも次第に使用可能になってきている。染色体位置に関する地図情報は、対象の遺伝子導入植物の所有権保護に有用である。無許可に増殖が行われ、他の生殖質との交雑種が製作された場合、組込み領域の地図を疑わしい植物の類似の地図と比較して、疑わしい植物が対象の植物と共通の生まれを有するかどうか決定することができる。地図の比較は、ハイブリダイゼーション、ＲＦＬＰ、ＰＣＲ、ＳＳＲ及び塩基配列決定を含み、その全てが従前通りの技術である。ＳＮＰも、単独で又は他の技術と組み合わせて使用できる。
【０１１４】
[0114]同様に、本発明によって、植物を遺伝子操作して、農業対象の様々な表現型を発現させることができる。パパイアの形質転換によって、遺伝子の発現を改変して、病害抵抗性、昆虫抵抗性、除草剤抵抗性、農業、子実品質及び他の形質を増強することができる。形質転換を使用して、雄性不稔を制御する又は制御を助けるＤＮＡ配列を挿入することもできる。パパイアに天然のＤＮＡ配列及びパパイアに外来のＤＮＡ配列を形質転換し、それらを使用して天然又は外来のタンパク質のレベルを改変することができる。タンパク質の発現を改変する目的で様々なプロモーター、標的化配列、増強配列及び他のＤＮＡ配列をゲノムに挿入することができる。特定の遺伝子の活性の減少（別名遺伝子抑制又は遺伝子抑圧）は、植物の遺伝子操作のいくつかの態様に対して望ましい。
【０１１５】
[0115]遺伝子を抑制する多くの技術が当業者に周知であり、ノックアウト（Ｍｕなどの転移因子の挿入（Ｖｉｃｋｉ  Ｃｈａｎｄｌｅｒ、Ｔｈｅ  Ｍａｉｚｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１１８章（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  １９９４年））又は部位特異的組込みに使用するＦＲＴ及びＬｏｘなど他の遺伝要素によってなど）、アンチセンス技術（例えば、Ｓｈｅｅｈｙら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、８５：８８０５〜８８０９頁（１９８８年）；及び米国特許第５，１０７，０６５号、第５，４５３，５６６号及び第５，７５９，８２９号を参照されたい）；相互抑圧効果（例えば、Ｔａｙｌｏｒ、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、９：１２４５頁（１９９７年）；Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、８（１２）：３４０〜３４４頁（１９９０年）；Ｆｌａｖｅｌｌ、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９１：３４９０〜３４９６頁（１９９４年）；Ｆｉｎｎｅｇａｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２：８８３〜８８８頁（１９９４年）；Ｎｅｕｈｕｂｅｒら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２４４：２３０〜２４１頁（１９９４年））；ＲＮＡ干渉（Ｎａｐｏｌｉら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、２：２７９〜２８９頁（１９９０年）；米国特許第５，０３４，３２３号；Ｓｈａｒｐ、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、１３：１３９〜１４１頁（１９９９年）；Ｚａｍｏｒｅら、Ｃｅｌｌ、１０１：２５〜３３頁（２０００年）；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９５：１５５０２〜１５５０７頁（１９９８年））、ウイルス誘導遺伝子抑制（Ｂｕｒｔｏｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１２：６９１〜７０５頁（２０００年）；Ｂａｕｌｃｏｍｂｅ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏ．、２：１０９〜１１３頁（１９９９年））；標的ＲＮＡ特異的リボザイム（Ｈａｓｅｌｏｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ、３３４：５８５〜５９１頁（１９８８年））；ヘアピン構造（Ｓｍｉｔｈら、Ｎａｔｕｒｅ、４０７：３１９〜３２０頁（２０００年）；国際公開第９９／５３０５０号パンフレット；国際公開第９８／５３０８３号パンフレット）；マイクロＲＮＡ（Ａｕｋｅｒｍａｎ＆Ｓａｋａｉ、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１５：２７３０〜２７４１頁（２００３年））；リボザイム（Ｓｔｅｉｎｅｃｋｅら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１１：１５２５頁（１９９２年）；Ｐｅｒｒｉｍａｎら、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．、３：２５３頁（１９９３年））；オリゴヌクレオチド媒介標的修飾（例えば、国際公開第０３／０７６５７４号パンフレット及び国際公開第９９／２５８５３号パンフレット）；Ｚｎフィンガー標的分子（例えば、国際公開第０１／５２６２０号パンフレット、国際公開第０３／０４８３４５号パンフレット及び国際公開第００／４２２１９号パンフレット）；並びに他の方法又は当業者に公知の上記の方法の組合せを含むがそれに限定されない。
【０１１６】
[0116]同様に、本発明によって、農業遺伝子を、形質転換した植物で発現させることができる。より具体的には、植物を遺伝子操作して、農業対象の様々な表現型を発現させることができる。この点において関与する典型的な遺伝子について、それだけには限らないが以下に分類する：
１．有害生物又は病害に対する抵抗性を付与し、以下をコードする遺伝子：
【０１１７】
[0117]Ａ．植物病害抵抗性遺伝子。植物防御は、植物中にある病害抵抗性遺伝子（Ｒ）の産物と病原体中にある対応する非病原性（Ａｖｒ）遺伝子の産物との特異的相互作用によってしばしば活性化される。植物品種を、１つ又は複数のクローン化された抵抗性遺伝子で形質転換して、特定の病原菌株に対して抵抗性である植物を操作することができる。例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６６：７８９頁（１９９４年）（クラドスポリウム・フルブム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｆｕｌｖｕｍ）に抵抗性のトマトＣｆ−９遺伝子のクローニング）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６２：１４３２頁（１９９３年）（シュードモナス・シリンガエ病原型トマト（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ）に抵抗性のトマトＰｔｏ遺伝子はプロテインキナーゼをコードする）；Ｍｉｎｄｒｉｎｏｓら、Ｃｅｌｌ、７８：１０８９頁（１９９４年）（シュードモナス・シリンガエに抵抗性のシロイヌナズナＲＳＰ２遺伝子）；ＭｃＤｏｗｅｌｌ＆Ｗｏｆｆｅｎｄｅｎ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２１（４）：１７８〜８３頁（２００３年）；及びＴｏｙｏｄａら、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒｅｓ．、１１（６）：５６７〜８２頁（２００２年）を参照されたい。
【０１１８】
[0118]Ｂ．ダイズシスト線虫などの有害生物に対する抵抗性を付与する遺伝子。例えば、ＰＣＴ国際公開第９６／３０５１７号パンフレット及びＰＣＴ国際公開第９３／１９１８１号パンフレットを参照されたい。
【０１１９】
[0119]Ｃ．バチルス・チューリンゲンシスタンパク質、その誘導体又はそれを見本にした合成ポリペプチド。例えば、Ｂｔ  δ−エンドトキシン遺伝子のクローニング及びヌクレオチド配列を開示しているＧｅｉｓｅｒら、Ｇｅｎｅ、４８：１０９頁（１９８６年）を参照されたい。更に、δ−エンドトキシン遺伝子をコードしているＤＮＡ分子は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、Ｍａｎａｓｓａｓ  Ｖｉｒｇｉｎｉａから、例えば、ＡＴＣＣ登録番号４００９８、６７１３６、３１９９５及び３１９９８の下で購入することができる。
【０１２０】
[0120]Ｄ．レクチン。例えば、いくつかのクリビア・ミニアタ（Ｃｌｉｖｉａ  ｍｉｎｉａｔａ）マンノース結合レクチン遺伝子のヌクレオチド配列を開示しているＶａｎ  Ｄａｍｍｅら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２４：２５頁（１９９４年）を参照されたい。
【０１２１】
[0121]Ｅ．アビジンなどビタミン結合タンパク質。害虫に対する殺幼虫剤としてのアビジン及びアビジン相同体の使用を教示するＰＣＴ米国特許仮出願第９３／０６４８７号を参照されたい。
【０１２２】
[0122]Ｆ．酵素阻害剤、例えば、プロテアーゼ又はプロテイナーゼ阻害剤若しくはアミラーゼ阻害剤。例えば、Ａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：１６７９３頁（１９８７年）（稲システインプロテイナーゼ阻害剤のヌクレオチド配列）；Ｈｕｕｂら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２１：９８５頁（１９９３年）（タバコプロテイナーゼ阻害剤ＩをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列）；Ｓｕｍｉｔａｎｉら、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、５７：１２４３頁（１９９３年）（ストレプトマイセス・ニトロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｎｉｔｒｏｓｐｏｒｅｕｓ）α−アミラーゼ阻害剤のヌクレオチド配列）；及び米国特許第５，４９４，８１３号（Ｈｅｐｈｅｒ  ａｎｄ  Ａｔｋｉｎｓｏｎ、１９９６年２月２７日に発行される）を参照されたい。
【０１２３】
[0123]Ｇ．エクジステロイド若しくは幼若ホルモン、その変異体、それに基づく模倣体、又はそのアンタゴニスト若しくはアゴニストなど、昆虫特異的ホルモン又はフェロモン。例えば、クローン化された、幼若ホルモンの不活性化物質である幼若ホルモンエステラーゼのバキュロウイルス発現についてのＨａｍｍｏｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ、３４４：４５８頁（１９９０年）による開示を参照されたい。
【０１２４】
[0124]Ｈ．発現により、影響を受けた有害生物の生理機能をかく乱させる昆虫特異的ペプチド又は神経ペプチド。例えば、Ｒｅｇａｎ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９：９頁（１９９４年）（発現クローニングにより、昆虫利尿ホルモン受容体をコードするＤＮＡを得られる）；Ｐｒａｔｔら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．、１６３：１２４３頁（１９８９年）（アロスタチン（ａｌｌｏｓｔａｔｉｎ）は、ディプロプテラ・プンタタ（Ｄｉｐｌｏｐｔｅｒａ  ｐｕｎｔａｔａ）に同定される）；Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、３０（１）：３３〜５４頁（２００４年）；Ｚｊａｗｉｏｎｙ、ＪＮａｔ  Ｐｒｏｄ、６７（２）：３００〜３１０頁（２００４年）；Ｃａｒｌｉｎｉ＆Ｇｒｏｓｓｉ−ｄｅ−Ｓａ、Ｔｏｘｉｃｏｎ、４０（１１）：１５１５〜１５３９頁（２００２年）；Ｕｓｓｕｆら、Ｃｕｒｒ  Ｓｃｉ．、８０（７）：８４７〜８５３頁（２００１年）；Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｏｓ＆Ｏｌｉｖｅｉｒａ、Ｔｏｘｉｃｏｎ、４４（４）：３８５〜４０３頁（２００４年）の開示を参照されたい。昆虫特異的、麻痺性神経毒をコードする遺伝子を開示している、Ｔｏｍａｌｓｋｉらの米国特許第５，２６６，３１７号も参照されたい。
【０１２５】
[0125]Ｉ．ヘビ、スズメバチなどによって、天然に生産される昆虫特異的毒。例えば、サソリ昆虫毒ペプチドをコードする遺伝子の植物における異種発現の開示に関するＰａｎｇら、Ｇｅｎｅ、１１６：１６５頁（１９９２年）を参照されたい。
【０１２６】
[0126]Ｊ．モノテルペン、セスキテルペン、ステロイド、ヒドロキサム酸、フェニルプロパノイド誘導体又は殺虫活性がある別の非タンパク質分子の過剰蓄積に関与する酵素。
【０１２７】
[0127]Ｋ．生物活性分子の、翻訳後修飾を含めた修飾に関与する酵素；例えば、天然か合成かに関わらず、糖分解酵素、タンパク質分解酵素、脂肪分解酵素、ヌクレアーゼ、シクラーゼ、トランスアミナーゼ、エステラーゼ、ヒドロラーゼ、ホスファターゼ、キナーゼ、ホスホリラーゼ、ポリメラーゼ、エラスターゼ、キチナーゼ及びグルカナーゼ。カラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列を開示するＰＣＴ国際公開第９３／０２１９７号パンフレット（Ｓｃｏｔｔら）を参照されたい。キチナーゼをコードする配列を含有するＤＮＡ分子は、例えば、ＡＴＣＣ登録番号３９６３７及び６７１５２の下で入手することができる。タバコスズメガ幼虫のキチナーゼをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を教示するＫｒａｍｅｒら、Ｉｎｓｅｃｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２３：６９１頁（１９９３年）、パセリｕｂｉ４−２ポリユビキチン遺伝子のヌクレオチド配列を提供するＫａｗａｌｌｅｃｋら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２１：６７３頁（１９９３年）、米国特許第７，１４５，０６０号、第７，０８７，８１０号及び第６，５６３，０２０号も参照されたい。
【０１２８】
[0128]Ｌ．シグナル伝達を刺激する分子。例えば、マングビーンカルモジュリンのｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列についてのＢｏｔｅｌｌａら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２４：７５７頁（１９９４年）、及びトウモロコシカルモジュリンｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列を提供するＧｒｉｅｓｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１０４：１４６７頁（１９９４年）による開示を参照されたい。
【０１２９】
[0129]Ｍ．疎水性モーメントペプチド（ｍｏｍｅｎｔ  ｐｅｐｔｉｄｅ）。真菌植物病原体を阻害するタキプレシンのペプチド誘導体を開示するＰＣＴ国際公開第９５／１６７７６号パンフレット及び米国特許第５，５８０，８５２号、並びに病害抵抗性を付与する合成抗菌ペプチドを教示するＰＣＴ国際公開第９５／１８８５５号パンフレット及び米国特許第５，６０７，９１４号を参照されたい。
【０１３０】
[0130]Ｎ．膜透過酵素、チャネル形成因子又はチャネル遮断因子。例えば、遺伝子導入タバコをシュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）に対して抵抗性にするセクロピン−β細胞溶解性ペプチド類似体の異種発現についてのＪａｙｎｅｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ、８９：４３頁（１９９３年）の開示を参照されたい。
【０１３１】
[0131]Ｏ．ウイルス侵入タンパク質又はそれに由来する複合毒素。例えば、形質転換した植物細胞におけるウイルスコートタンパク質の蓄積は、コートタンパク質遺伝子が由来するウイルス、並びに近縁のウイルスによって生じるウイルス感染及び／又は病害の発症に対する抵抗性を与える。Ｂｅａｃｈｙら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．、２８：４５１頁（１９９０年）を参照されたい。アルファルファモザイクウイルス、キュウリモザイクウイルス及びタバコモザイクウイルスに対するコートタンパク質媒介抵抗性が、形質転換した植物に付与された。
【０１３２】
[0132]Ｐ．昆虫特異的抗体又はそれに由来する抗毒素。従って、昆虫の腸内の重要な代謝機能を標的とする抗体は、作用を受けた酵素を不活性化して、昆虫を死滅させることになる。Ｔａｙｌｏｒら、要約＃４９７、Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｉｎｔ’ｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｌａｎｔ−Ｍｉｃｒｏｂｅ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ（Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ、Ｓｃｏｔｌａｎｄ  １９９４年）（一本鎖抗体断片の生成による遺伝子導入タバコにおける酵素的不活性化）を参照されたい。
【０１３３】
[0133]Ｑ．ウイルス特異的抗体。例えば、組換え抗体遺伝子を発現している遺伝子導入植物がウイルスの攻撃から防御されることを示す、Ｔａｖｌａｄｏｒａｋｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３６６：４６９頁（１９９３年）を参照されたい。
【０１３４】
[0134]Ｒ．病原体又は寄生生物によって天然に生産される成長停止タンパク質。従って、真菌エンド−α−１，４−Ｄ−ポリガラクツロナーゼは、植物細胞壁のホモ−α−１，４−Ｄ−ガラクツロナーゼを可溶化することによって真菌のコロニー形成及び植物の養分放出を促進する。Ｌａｍｂら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４３６頁（１９９２年）を参照されたい。豆エンドポリガラクツロナーゼ阻害タンパク質をコードする遺伝子のクローニング及び特徴付けについては、Ｔｏｕｂａｒｔら、Ｐｌａｎｔ  Ｊ．、２：３６７頁（１９９２年）に記載されている。
【０１３５】
[0135]Ｓ．植物によって天然に生産される成長停止タンパク質。例えば、Ｌｏｇｅｍａｎｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：３０５頁（１９９２年）は、オオムギリボソーム不活性化遺伝子を発現している遺伝子導入植物が、真菌病害に対する抵抗性を増大させたことを示した。
【０１３６】
[0136]Ｔ．全身獲得抵抗性（ＳＡＲ）応答及び／又は病原性関連遺伝子に関与する遺伝子。Ｂｒｉｇｇｓ，Ｓ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、５（２）（１９９５年）；Ｐｉｅｔｅｒｓｅ＆Ｖａｎ  Ｌｏｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏ．、７（４）：４５６〜６４頁（２００４年）；及びＳｏｍｓｓｉｃｈ、Ｃｅｌｌ、１１３（７）：８１５〜６頁（２００３年）。
【０１３７】
[0137]Ｕ．抗真菌性遺伝子。Ｃｏｒｎｅｌｉｓｓｅｎ  ａｎｄ  Ｍｅｌｃｈｅｒｓ、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１０１：７０９〜７１２頁（１９９３年）；Ｐａｒｉｊｓら、Ｐｌａｎｔａ、１８３：２５８〜２６４頁（１９９１年）；及びＢｕｓｈｎｅｌｌら、Ｃａｎ．Ｊ．ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｐａｔｈ．、２０（２）：１３７〜１４９頁（１９９８年）を参照されたい。米国特許第６，８７５，９０７号も参照されたい。
【０１３８】
[0138]Ｖ．フモニシン、ビューベリシン、モニリホルミン、及びゼラレノン並びにその構造関連誘導体などに対する解毒遺伝子。例えば、米国特許第５，７９２，９３１号を参照されたい。
【０１３９】
[0139]Ｗ．シスタチン及びシステインプロテイナーゼ阻害剤。米国特許第７，２０５，４５３号を参照されたい。
【０１４０】
[0140]Ｘ．デフェンシン遺伝子。国際公開第０３／０００８６３号パンフレット及び米国特許第６，９１１，５７７号を参照されたい。
【０１４１】
[0141]上に列挙した病害又は有害生物抵抗性遺伝子（Ａ〜Ｘ）のいずれも、形質転換及び交雑を含むがこれに限定されない様々な手段によって、請求されるパパイア栽培品種に導入することができる。
２．除草剤に対する抵抗性を付与する遺伝子、例えば：
【０１４２】
[0142]Ａ．イミダゾリノン又はスルホニル尿素など、生長点又は分裂組織を阻害する除草剤。この範疇にある典型的な遺伝子は、例えば、Ｌｅｅら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、７：１２４１頁（１９８８年）及びＭｉｋｉら、Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．、８０：４４９頁（１９９０年）にそれぞれ記載されるように、突然変異体ＡＬＳ及びＡＨＡＳ酵素をコードする。
【０１４３】
[0143]Ｂ．グリフォセート（突然変異体５−エノールピルビルシキミ酸−３−リン酸合成酵素（ＥＰＳＰＳ）及びａｒｏＡ遺伝子のそれぞれによって付与される抵抗性）及びグルフォシネート（フォスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＴ）及びストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ＰＡＴ  ｂａｒ遺伝子）など他のホスホノ化合物、ピリジノキシ又はフェノキシプロピオン酸並びにシクロヘキサンジオン（ＡＣＣアーゼ阻害剤コード遺伝子）。例えば、グリフォセート抵抗性を付与することができるＥＰＳＰＳの形状のヌクレオチド配列を開示しているＳｈａｈらの米国特許第４，９４０，８３５号を参照されたい。Ｂａｒｒｙらの米国特許第５，６２７，０６１号も、ＥＰＳＰＳ酵素をコードする遺伝子について記載している。米国特許第６，５６６，５８７号、第６，３３８，９６１号、第６，２４８，８７６号、第６，０４０，４９７号、第５，８０４，４２５号、第５，６３３，４３５号、第５，１４５，７８３号、第４，９７１，９０８号、第５，３１２，９１０号、第５，１８８，６４２号、第４，９４０，８３５号、第５，８６６，７７５号、第６，２２５，１１４号、第６，１３０，３６６号、第５，３１０，６６７号、第４，５３５，０６０号、第４，７６９，０６１号、第５，６３３，４４８号、第５，５１０，４７１号、ＲＥ第３６，４４９号、ＲＥ第３７，２８７号及び第５，４９１，２８８号；並びに国際公開欧州特許第１１７３５８０号、国際公開第０１／６６７０４号パンフレット、欧州特許第１１７３５８１号及び欧州特許第１１７３５８２号も参照されたい。これらはこの目的のために参照により本明細書に組み入れられる。この目的のために参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，７７６，７６０号及び第５，４６３，１７５号により完全に記載されるように、グリフォセート抵抗性は、グリフォセート酸化還元酵素をコードする遺伝子を発現する植物にも与えられる。加えて、グリフォセート抵抗性は、グリフォセートＮ−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子の過剰発現によって植物に与えることができる。例えば、米国特許第７，４６２，４８１号を参照されたい。突然変異体ａｒｏＡ遺伝子をコードするＤＮＡ分子は、ＡＴＣＣ登録番号３９２５６で入手することができ、突然変異体遺伝子のヌクレオチド配列は、Ｃｏｍａｉらの米国特許第４，７６９，０６１号に開示されている。Ｋｕｍａｄａらの欧州特許第０  ３３３  ０３３号及びＧｏｏｄｍａｎらの米国特許第４，９７５，３７４号は、Ｌ−フォスフィノスリシンなどの除草剤に対する抵抗性を付与するグルタミンシンセターゼ遺伝子のヌクレオチド配列を開示している。ＰＡＴ遺伝子のヌクレオチド配列は、Ｌｅｅｍａｎｓらの欧州特許第０２４２２４６号に提供され、ＤｅＧｒｅｅｆら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、７：６１頁（１９８９年）は、フォスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼ活性をコードするキメラｂａｒ遺伝子を発現する遺伝子導入植物の作出について記載している。フェノキシプロピオン酸並びにセトキシジム及びハロキシホップなどのシクロヘキソンに対する抵抗性を付与する遺伝���の典型は、Ｍａｒｓｈａｌｌら、Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．、８３：４３５頁（１９９２年）に記載されるＡｃｃ１−Ｓ１、Ａｃｃ１−Ｓ２及びＡｃｃ２−Ｓ３遺伝子である。
【０１４４】
[0144]Ｃ．トリアジン（ｐｓｂＡ及びｇｓ＋遺伝子）及びベンゾニトリル（ニトリラーゼ遺伝子）など光合成を阻害する除草剤。Ｐｒｚｉｂｉｌａら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、３：１６９頁（１９９１年）は、突然変異体ｐｓｂＡ遺伝子をコードしているプラスミドによるクラミドモナスの形質転換について記載している。ニトリラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列は、Ｓｔａｌｋｅｒの米国特許第４，８１０，６４８号に開示されており、これらの遺伝子を含有するＤＮＡ分子は、ＡＴＣＣ登録番号５３４３５、６７４４１及び６７４４２の下で入手可能である。グルタチオンＳ−トランスフェラーゼをコードしているＤＮＡのクローニング及び発現については、Ｈａｙｅｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、２８５：１７３頁（１９９２年）に記載されている。
【０１４５】
[0145]Ｄ．アセトヒドロキシ酸合成酵素は、この酵素を発現する植物を複数の型の除草剤に対して抵抗性にすることが判明しており、この酵素は様々な植物に導入されてきた。Ｈａｔｔｏｒｉら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２４６：４１９頁（１９９５年）を参照されたい。除草剤に対する耐性を付与する他の遺伝子には、ラットチトクロムＰ４５０７Ａ１と酵母ＮＡＤＰＨ−チトクロムＰ４５０酸化還元酵素とのキメラタンパク質をコードしている遺伝子（Ｓｈｉｏｔａら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１０６：１７頁（１９９４年））；グルタチオン還元酵素及びスーパーオキシドジスムターゼの遺伝子（Ａｏｎｏら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、３６：１６８７頁（１９９５年））；並びに様々なホスホトランスフェラーゼの遺伝子（Ｄａｔｔａら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２０：６１９頁（１９９２年））がある。
【０１４６】
[0146]Ｅ．プロトポルフィリノーゲン酸化酵素（ｐｒｏｔｏｘ）は、葉緑素の生産に必要であり、全ての植物の生存に必要である。ｐｒｏｔｏｘ酵素は、様々な除草化合物の標的になる。ｐｒｏｔｏｘ酵素を標的とする除草剤は、存在する異なる種の植物全ての生長も阻害し、全ての種の植物を全破壊する。これらの除草剤に対して抵抗性である改変されたｐｒｏｔｏｘ活性を含有する植物の開発については、米国特許第６，２８８，３０６号、第６，２８２，８３７号、第５，７６７，３７３号及び国際公開第０１／１２８２５号パンフレットに記載されている。
【０１４７】
[0147]上に挙げた除草剤遺伝子（Ａ〜Ｅ）のいずれも、形質転換及び交雑を含むがこれに限定されない様々な手段によって、請求されるパパイア栽培品種に導入することができる。
３．付加価値形質を付与する又はそれに寄与する遺伝子、例えば：
【０１４８】
[0148]Ａ．例えば、ステアリル−ＡＣＰ不飽和化酵素のアンチセンス遺伝子で植物を形質転換して、植物のステアリン酸含量を増加させることによる、改変された脂肪酸代謝。Ｋｎｕｌｔｚｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：２６２５頁（１９９２年）を参照されたい。
【０１４９】
[0149]Ｂ．低フィチン酸含有量：１）フィターゼをコードする遺伝子の導入は、フィチン酸の分解を増強し、形質転換した植物に更に多くの遊離リン酸を増やす。例えば、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）フィターゼ遺伝子のヌクレオチド配列の開示については、Ｖａｎ  Ｈａｒｔｉｎｇｓｖｅｌｄｔら、Ｇｅｎｅ、１２７：８７頁（１９９３年）を参照されたい。２）フィチン酸含有量を減少させる遺伝子の上方調節。フィチン酸含有量を減少させる遺伝子の上方調節は、例えば、トウモロコシにおいて、Ｒａｂｏｙら、Ｍａｙｄｉｃａ、３５：３８３頁（１９９０年）など、低レベルのフィチン酸によって特徴付けられるトウモロコシ突然変異体に同定されるＬＰＡ対立遺伝子など１つ又は複数の対立遺伝子と関連するＤＮＡをクローニングし、次いで再導入することによって、並びに／又は国際公開第０２／０５９３２４号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０００９０１号、国際公開第０３／０２７２４３号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００７９２４７号、国際公開第９９／０５２９８号パンフレット、米国特許第６，１９７，５６１号、米国特許第６，２９１，２２４号、米国特許第６，３９１，３４８号、国際公開第２００２／０５９３２４号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００７９２４７、国際公開第９８／４５４４８号パンフレット、国際公開第９９／５５８８２号パンフレット及び国際公開第０１／０４１４７号パンフレットのようにイノシトールキナーゼ活性を改変することによって果たされる。
【０１５０】
[0150]Ｃ．例えば、デンプンの分岐様式を改変する酵素をコードする遺伝子又はＮＴＲ及び／若しくはＴＲＸなどチオレドキシンを改変する遺伝子で植物を形質転換すること（この目的のため参照により組み入れる米国特許第６，５３１，６４８号を参照されたい）、並びに／又はｃｓ２７若しくはＴＵＳＣ２７若しくはｅｎ２７などのガンマゼインノックアウト又は突然変異体（この目的ため参照により組み入れる米国特許第６，８５８，７７８号、米国特許出願公開第２００５／０１６０４８８号及び第２００５／０２０４４１８号を参照されたい）により得られる改変された炭水化物組成。Ｓｈｉｒｏｚａら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１７０：８１０頁（１９８８年）（ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ）フルクトシルトランスフェラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列）；Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、２００：２２０頁（１９８５年）（バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）レバンスクラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列）；Ｐｅｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：２９２頁（１９９２年）（バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼを発現する遺伝子導入植物の作出）；Ｅｌｌｉｏｔら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２１：５１５頁（１９９３年）（トマトインベルターゼ遺伝子のヌクレオチド配列）；Ｓｏｇａａｒｄら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：２２４８０頁（１９９３年）（オオムギα−アミラーゼ遺伝子の部位特異的変異誘発）；Ｆｉｓｈｅｒら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１０２：１０４５頁（１９９３年）（トウモロコシ内胚乳デンプン分枝酵素ＩＩ）；国際公開第９９／１０４９８号パンフレット（ＵＤＰ−Ｄ−キシロース４−エピメラーゼ、Ｆｒａｇｉｌｅ１及び２、Ｒｅｆ１、ＨＣＨＬ、Ｃ４Ｈの修飾による消化性の改善並びに／又はデンプン抽出）；米国特許第６，２３２，５２９号（デンプンレベルの修飾による高脂肪種子の作出方法（ＡＧＰ））を参照されたい。上記の脂肪酸修飾遺伝子を使用して、デンプンと油経路の相互関係を通じてデンプン含有量及び／又は組成に影響を及ぼすこともできる。
【０１５１】
[0151]Ｄ．ＦＡＤ−２遺伝子の修飾によるオレイン酸の上昇及び／又はＦＡＤ−３遺伝子の修飾によるリノレン酸の低下。米国特許第６，０６３，９４７号、第６，３２３，３９２号及び国際公開第９３／１１２４５号パンフレットを参照されたい。
【０１５２】
[0152]Ｅ．国際公開第０１／１２８００号パンフレットなど、コンジュゲートしたリノレン酸又はリノール酸含有量の改変。ＬＥＣ１、ＡＧＰ、Ｄｅｋ１、Ｓｕｐｅｒａｌ１、ｍｉ１ｐｓ、及びＩｐａ１、Ｉｐａ３、ｈｐｔ又はｈｇｇｔなど様々なＩｐａ遺伝子の改変。例えば、国際公開第０２／４２４２４号パンフレット、国際公開第９８／２２６０４号パンフレット、国際公開第０３／０１１０１５号パンフレット、国際公開第０２／０５７４３９号パンフレット、米国特許第６，４２３，８８６号、第６，１９７，５６１号、第６，８２５，３９７号、第７，１５７，６２１号、米国特許出願公開第２００３／００７９２４７号及びＲｉｖｅｒａ−Ｍａｄｒｉｄ，Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９２：５６２０〜５６２４頁（１９９５年）を参照されたい。
【０１５３】
[0153]Ｆ．トコフェロール又はトコトリエノールの変更など、抗酸化物質の含有量若しくは組成の改変。例えば、米国特許第６，７８７，６８３号、第７，１５４，０２９号、国際公開第００／６８３９３号パンフレット（フィチルプレニル転移酵素（ｐｐｔ）の変更による抗酸化物質レベルの操作を含む）；国際公開第０３／０８２８９９号パンフレット（ホモゲンチジン酸ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ（ｈｇｇｔ）の変更による）を参照されたい。
【０１５４】
[0154]Ｇ．種子の必須アミノ酸の改変。例えば、米国特許第６，１２７，６００号（種子中の必須アミノ酸の蓄積を増加させる方法）；米国特許第６，０８０，９１３号（種子中の必須アミノ酸の蓄積を増加させるバイナリ方法）；米国特許第５，９９０，３８９号（高リジン）；米国特許第５，８５０，０１６号（種子中のアミノ酸組成の変更）；米国特許第５，８８５，８０２号（高メチオニン）；米国特許第５，８８５，８０１号（高トレオニン）；米国特許第６，６６４，４４５号（植物アミノ酸生合成酵素）；米国特許第６，４５９，０１９号（リジン及びトレオニンを増加させる）；米国特許第６，４４１，２７４号（植物トリプトファン合成酵素βサブユニット）；米国特許第６，３４６，４０３号（メチオニン代謝酵素）；米国特許第５，９３９，５９９号（高硫黄）；米国特許第５，９１２，４１４号（メチオニンの増加）；米国特許第５，６３３，４３６号（含硫アミノ酸含有量の増加）；米国特許第５，５５９，２２３号（植物の栄養価を改善するためにプログラム可能なレベルの必須アミノ酸を含有する、定義済み構造を持つ合成貯蔵タンパク質）；米国特許第６，１９４，６３８号（ヘミセルロース）；米国特許第７，０９８，３８１号（ＵＤＰＧｄＨ）；米国特許第６，１９４，６３８号（ＲＧＰ）；米国特許第６，３９９，８５９号、第６，９３０，２２５号、第７，１７９，９５５号及び第６，８０３，４９８号；米国特許出願公開第２００４／００６８７６７号；国際公開第９９／４０２０９号パンフレット（種子中のアミノ酸組成の変更）；国際公開第９９／２９８８２号パンフレット（タンパク質のアミノ酸含有量を改変する方法）；国際公開第９８／２０１３３号パンフレット（必須アミノ酸のレベルを増強したタンパク質）；国際公開第９８／５６９３５号パンフレット（植物アミノ酸生合成酵素）；国際公開第９８／４５４５８号パンフレット（必須アミノ酸を高いパーセンテージで有する操作された種子タンパク質）；国際公開第９８／４２８３１号パンフレット（リジンを増加させる）；国際公開第９６／０１９０５号パンフレット（トレオニンを増加させる）；国際公開第９５／１５３９２号パンフレット（リジンを増加させる）；国際公開第０１／７９５１６号パンフレット；及び国際公開第００／０９７０６号パンフレット（ＣｅｓＡ：セルロース合成酵素）を参照されたい。
４．雄性不稔を制御する遺伝子：
【０１５５】
[0155]Ｂｒａｒらの米国特許第４，６５４，４６５号及び第４，７２７，２１９号に開示される、雄性不稔を付与する、ゲノム内の別々の位置にある複数の突然変異体遺伝子、並びに米国特許第３，８６１，７０９号及び第３，７１０，５１１号においてＰａｔｔｅｒｓｏｎにより記載される染色体転座など、遺伝的に雄性不稔を付与する使用可能な方法がいくつかある。これらの方法に加えて、Ａｌｂｅｒｔｓｅｎらの、米国特許第５，４３２，０６８号は、雄性稔性に重要な遺伝子を同定するステップと、雄性稔性に重要なこの天然の遺伝子を抑制するステップと、雄性稔性に必須の遺伝子から天然のプロモーターを除去するステップと、そのプロモーターを誘導可能なプロモーターで置き換えるステップと、遺伝子操作したこの遺伝子を植物に戻して挿入するステップとを含み、従って誘導可能なプロモーターが「オン」でなく、その結果雄性稔性遺伝子が転写されないので雄性不稔になる植物を作製する、核雄性不稔の系について記載している。稔性は、プロモーターを誘導、又は「オン」にすることにより回復し、これにより雄性稔性を付与する遺伝子が転写可能になる。
【０１５６】
[0156]Ａ．タペータム特異的プロモーターの制御下にあり、化学的Ｎ−Ａｃ−ＰＰＴの適用がある脱アセチル化酵素遺伝子の導入。国際公開第０１／２９２３７号パンフレットを参照されたい。
【０１５７】
[0157]Ｂ．様々なおしべ特異的プロモーターの導入。国際公開第９２／１３９５６号パンフレット及び国際公開第９２／１３９５７号パンフレットを参照されたい。
【０１５８】
[0158]Ｃ．ｂａｒｎａｓｅ及びｂａｒｓｔａｒ遺伝子の導入。Ｐａｕｌら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９：６１１〜６２２頁（１９９２年）を参照されたい。
【０１５９】
[0159]核雄性及び雌性不稔系並びに遺伝子の更なる例については、米国特許第５，８５９，３４１号、第６，２９７，４２６号、第５，４７８，３６９号、第５，８２４，５２４号、第５，８５０，０１４号、及び第６，２６５，６４０号も参照のこと、全てを参照により本明細書に組み入れる。
５．部位特異的ＤＮＡ組込みのための部位を作製する遺伝子：
【０１６０】
[0160]部位特異的ＤＮＡ組込みのための部位の作製には、ＦＬＰ／ＦＲＴ系に使用可能なＦＲＴ部位及び／又はＣｒｅ／Ｌｏｘｐ系に使用可能なＬｏｘ部位の導入がある。例えば、参照により本明細書に組み入れられるＬｙｚｎｉｋら、Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔｓ、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ、２１：９２５〜９３２頁（２００３年）及び国際公開第９９／２５８２１号パンフレットを参照されたい。使用できる他の系には、ファージＭｕのＧｉｎ組換え酵素（Ｍａｅｓｅｒら、（１９９１年）；Ｖｉｃｋｉ  Ｃｈａｎｄｌｅｒ、Ｔｈｅ  Ｍａｉｚｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１１８章（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  １９９４年））；大腸菌のＰｉｎ組換え酵素（Ｅｎｏｍｏｔｏら、（１９８３年））；及びｐＳＲ１プラスミドのＲ／ＲＳ系（Ａｒａｋｉら、（１９９２年））がある。
６．非生物的なストレス抵抗性に影響を及ぼす遺伝子：
【０１６１】
[0161]非生物的なストレス抵抗性（開花、さや及び種子の発達、窒素利用効率の増強、窒素反応性の改変、乾燥抵抗性又は耐乾性、寒冷抵抗性又は耐寒性及び塩抵抗性又は耐塩性を含むがこれに限定されない）に影響を及ぼし、ストレス下で収量を増加させる遺伝子。例えば、：リンゴ酸の変更によって水使用効率が改変される国際公開第００／７３４７５号パンフレット；凍結、高塩分及び乾燥といった植物に対する負の効果を緩和し、植物表現型に他の正の効果を付与するのに有効な、ＣＢＦ遺伝子及び転写因子を含めた遺伝子について記載している米国特許第５，８９２，００９号、第５，９６５，７０５号、第５，９２９，３０５号、第５，８９１，８５９号、第６，４１７，４２８号、第６，６６４，４４６号、第６，７０６，８６６号、第６，７１７，０３４号、第６，８０１，１０４号、国際公開第２０００／０６００８９号パンフレット、国際公開第２００１／０２６４５９号パンフレット、国際公開第２００１／０３５７２５号パンフレット、国際公開第２００１／０３４７２６号パンフレット、国際公開第２００１／０３５７２７号パンフレット、国際公開第２００１／０３６４４４号パンフレット、国際公開第２００１／０３６５９７号パンフレット、国際公開第２００１／０３６５９８号パンフレット、国際公開第２００２／０１５６７５号パンフレット、国際公開第号２００２／０１７４３０パンフレット、国際公開第２００２／０７７１８５号パンフレット、国際公開第２００２／０７９４０３号パンフレット、国際公開第２００３／０１３２２７号パンフレット、国際公開第２００３／０１３２２８号パンフレット、国際公開第２００３／０１４３２７号パンフレット、国際公開第２００４／０３１３４９号パンフレット、国際公開第２００４／０７６６３８号パンフレット、国際公開第９８／０９５２１号パンフレット及び国際公開第９９／３８９７７号パンフレット；植物中のアブシジン酸が改変され、その結果収量を増加及び／又は非生物的なストレスに対する耐性を増大させるなど植物の表現型が改善される、米国特許出願公開第２００４／０１４８６５４号及び国際公開第０１／３６５９６号パンフレット；サイトカイニン発現が修飾され、その結果乾燥耐性などストレス耐性が増大及び／又は収量が増加した植物を得られる国際公開第２０００／００６３４１号パンフレット、国際公開第０４／０９０１４３号パンフレット、米国特許第７，５３１，７２３号及び第６，９９２，２３７号を参照されたい。国際公開第０２／０２７７６号パンフレット、国際公開第２００３／０５２０６３号パンフレット、特開２００２−２８１９７５号広報、米国特許第６，０８４，１５３号、国際公開第０１／６４８９８号パンフレット、並びに米国特許第６，１７７，２７５号及び第６，１０７，５４７号（窒素利用の増強及び改変された窒素反応性）も参照されたい。エチレン変更については、米国特許出願公開第２００４／０１２８７１９号、第２００３／０１６６１９７号及び国際公開第２０００／３２７６１号パンフレットを参照されたい。非生物的なストレスの植物転写因子又は転写調節因子については、例えば、米国特許出願公開第２００４／００９８７６４号又は第２００４／００７８８５２号を参照されたい。
【０１６２】
[0162]収量、開花、植物生長及び／若しくは植物構造など植物の生長並びに農業形質に影響を及ぼす他の遺伝子及び転写因子を、植物に導入又は遺伝子移入することができる。例えば、国際公開第９７／４９８１１号パンフレット（ＬＨＹ）、国際公開第９８／５６９１８号パンフレット（ＥＳＤ４）、国際公開第９７／１０３３９号パンフレット、米国特許第６，５７３，４３０号（ＴＦＬ）、第６，７１３，６６３号（ＦＴ）、第６，７９４，５６０号、第６，３０７，１２６号（ＧＡＩ）、国際公開第９６／１４４１４号パンフレット（ＣＯＮ）、国際公開第９６／３８５６０号パンフレット、国際公開第０１／２１８２２号パンフレット（ＶＲＮ１）、国際公開第００／４４９１８号パンフレット（ＶＲＮ２）、国際公開第９９／４９０６４号パンフレット（ＧＩ）、国際公開第００／４６３５８号パンフレット（ＦＲＩ）、国際公開第９７／２９１２３号パンフレット、国際公開第９９／０９１７４号パンフレット（Ｄ８及びＲｈｔ）、国際公開第２００４／０７６６３８号パンフレット、及び国際公開第００４／０３１３４９号パンフレット（転写因子）を参照されたい。
パパイアの形質転換方法
【０１６３】
[0163]生物学的及び物理学的な植物形質転換手順を含めて、多くの植物形質転換方法が開発された。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌｉｃｋ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、６７〜８８頁（１９９３年）にあるＭｉｋｉら、「Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｆｏｒｅｉｇｎ  ＤＮＡ  ｉｎｔｏ  Ｐｌａｎｔｓ」を参照されたい。加えて、植物細胞若しくは組織形質転換並びに植物再生用の発現ベクター及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養方法が使用可能である。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌｉｃｋ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、８９〜１１９頁（１９９３年）にあるＧｒｕｂｅｒら、「Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ」を参照されたい。
【０１６４】
[0164]Ａ．アグロバクテリウム媒介形質転換−植物に発現ベクターを導入する１つの方法は、アグロバクテリウムの天然の形質転換系に基づく。例えば、Ｈｏｒｓｃｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２７：１２２９頁（１９８５年）を参照されたい。Ａ．ツメフアシェンス（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）及びＡ．リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）は、植物細胞を遺伝的に形質転換する植物病原性土壌細菌である。Ａ．ツメフアシェンス及びＡ．リゾゲネスのＴｉ及びＲｉプラスミドはそれぞれ、植物の遺伝的な形質転換に関与する遺伝子を保有する。例えば、Ｋａｄｏ，Ｃ．Ｉ．、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ．、１０：１頁（１９９１年）を参照されたい。アグロバクテリウムベクター系の説明及びアグロバクテリウム媒介遺伝子導入の方法については、Ｇｒｕｂｅｒら、上記、Ｍｉｋｉら、上記、及びＭｏｌｏｎｅｙら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、８：２３８頁（１９８９年）によって提供される。１９９６年１０月８日に発行された米国特許第５，５６３，０５５号（Ｔｏｗｎｓｅｎｄ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍａｓ）も参照されたい。
【０１６５】
[0165]Ｂ．直接遺伝子導入−アグロバクテリウム媒介形質転換に代わるものとして総称して直接遺伝子導入と称される植物形質転換の方法がいくつか開発された。植物の形質転換に一般に適用可能な方法は微粒子噴射媒介形質転換であり、１〜４μｍと測定される微粒子噴射体の表面にＤＮＡが保有されている。植物細胞壁及び膜を貫通するのに十分な３００〜６００ｍ／ｓの速度に微粒子噴射体を加速する微粒子銃装置を用いて、発現ベクターは植物組織に導入される。Ｓａｎｆｏｒｄら、Ｐａｒｔ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、５：２７頁（１９８７年）；Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｊ．Ｃ．、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、６：２９９頁（１９８８年）；Ｋｌｅｉｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈ．、６：５５９〜５６３頁（１９８８年）；Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｊ．Ｃ．、Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｌａｎｔ、７：２０６頁（１９９０年）；Ｋｌｅｉｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：２６８頁（１９９２年）。１９９１年５月１４日発行の米国特許第５，０１５，５８０号（Ｃｈｒｉｓｔｏｕら）及び１９９４年６月２１日発行の米国特許第５，３２２，７８３号（Ｔｏｍｅｓら）も参照されたい。
【０１６６】
[0166]植物へＤＮＡを物理的に送達する別の方法は、標的細胞の超音波処理である。Ｚｈａｎｇら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：９９６頁（１９９１年）。別法として、リポソームとスフェロプラストの融合を使用して植物に発現ベクターを導入した。Ｄｅｓｈａｙｅｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、４：２７３１頁（１９８５年）；Ｃｈｒｉｓｔｏｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：３９６２頁（１９８７年）。ＣａＣｌ２沈殿、ポリビニルアルコール又はポリ−Ｌ−オルニチンを使用する原形質体へのＤＮＡの直接の取り込みも報告されている。Ｈａｉｎら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．、１９９：１６１頁（１９８５年）及びＤｒａｐｅｒら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２３：４５１頁（１９８２年）。原形質体並びに全細胞及び組織のエレクトロポレーションについても記載されている（Ｄｏｎｎら、第７回Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＩＡＰＴＣ、Ａ２〜３８、５３頁（１９９０年）の要約；Ｄ’Ｈａｌｌｕｉｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、４：１４９５〜１５０５頁（１９９２年）；及びＳｐｅｎｃｅｒら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２４：５１〜６１頁（１９９４年））。
【０１６７】
[0167]パパイア標的組織の形質転換後に、当技術分野において周知の再生及び選択方法を使用して、上記の選択可能なマーカー遺伝子の発現により形質転換細胞、組織及び／又は植物の優先的な選択が可能になる。
【０１６８】
[0168]前述の形質転換方法を通常使用して、遺伝子導入品種が作出されるようになった。次いで遺伝子導入品種を別の品種（形質転換していない又は形質転換した）と交雑して、新たな遺伝子導入品種を作出することが可能である。別法として、植物育種分野で周知である伝統的な戻し交配技術を使用して、前述の形質転換技術を用いて特定のパパイア株内に操作した遺伝形質を別の株に移動させることが可能である。例えば、戻し交配手法を使用して、公の非優良品種から優良品種へ、又はゲノム内に外来遺伝子を含有する品種からその遺伝子を含有しない品種（単数）又は品種（複数）へ操作した形質を移動させることが可能である。本明細書では「交雑」とは、文脈に応じて、単純なｘとｙとの交雑又は戻し交配のプロセスのことを指すことができる。
ＳＳＲ及び第１世代後代による遺伝子マーカープロファイル
【０１６９】
[0169]表現型の観察に加えて、遺伝子型によって植物を同定することもできる。植物の遺伝子型は、同じ品種若しくは近親の品種の植物を同定することができる遺伝子マーカープロファイルによって特徴付けることができ、又は系統を決定若しくは確認するために使用することができる。遺伝子マーカープロファイルは、制限断片長多型法（ＲＦＬＰ）、ランダム増幅多型ＤＮＡ法（ＲＡＰＤ）、任意プライム化ポリメラーゼ連鎖反応法（Ａｒｂｉｔｒａｒｉｌｌｙ  Ｐｒｉｍｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）（ＡＰ−ＰＣＲ）、ＤＮＡ増幅フィンガープリント法（ＤＡＦ）、配列特性化増幅領域法（ＳＣＡＲ）、増幅断片長多型法（ＡＦＬＰ）、単純配列反復法（ＳＳＲ）（マイクロサテライトとも称する）及び単一ヌクレオチド多型法（ＳＮＰ）などの技術によって得ることができる。例えば、Ｃｒｅｇａｎら、「Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｌｉｎｋａｇｅ  Ｍａｐ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ」、Ｃｒｏｐ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、３９：１４６４〜１４９０頁（１９９９年）及びＢｅｒｒｙら、「Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ａｎｃｅｓｔｒｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓｉｍｐｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｒｅｐｅａｔ  Ｐｒｏｆｉｌｅｓ：Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｍａｉｚｅ  Ｉｎｂｒｅｄ  Ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｖａｒｉｅｔｉｅｓ」、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１６５：３３１〜３４２頁（２００３年）を参照されたい。これら各々の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
[0170]これらの目的で使用される特定のマーカーは、どんな特定の組のマーカーにも制限されないが、品種を区別する手段を提供する任意の型のマーカー及びマーカープロファイルを含むことが想定される。比較方法の１つは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍに対するホモ接合遺伝子座だけを使用することである。
【０１７１】
[0171]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ並びにパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの植物の部分及び植物細胞の同定に使用されるばかりでなく、遺伝的なプロファイルを使用して、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの使用により作出されたパパイア植物を同定する又はパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの使用により作出された後代植物の系統を検証することができる。遺伝子マーカープロファイルは、育種及び戻し交配変換体の開発にも有用である。
【０１７２】
[0172]本発明は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に寄託されているパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの標本サンプルから得られる分子的及び生理的データによって特徴付けられるパパイア植物を含む。開示したパパイア植物又は植物細胞と別のパパイア植物又は細胞との組合せによって形成され、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍのホモ接合対立遺伝子を含むパパイア植物が、本発明によって更に提供される。
【０１７３】
[0173]ＳＳＲ多型を使用する遺伝子マーカープロファイルを実行する手段は、当技術分野において周知である。ＳＳＲとは、マイクロサテライトなど、反復しているヌクレオチド配列の多型に基づく遺伝子マーカーである。複対立遺伝子が存在してもよいという点で、ＳＳＲに基づくマーカー系は、他のマーカー系と比較して連鎖分析において非常に有益になり得る。この種のマーカーの別の長所は、隣接するプライマーの使用により、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）でＳＳＲの検出を達成することができ、それによって手間のかかるサザンハイブリダイゼーションの必要性が解消されるということである。ＰＣＲ検出は、反復ＤＮＡの多型性セグメントに隣接する２つのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して行われる。ＤＮＡの熱変性、それに続く低温での相補配列へのプライマーのアニーリング、及びＤＮＡポリメラーゼによるアニールしたプライマーの伸長の反復サイクルが、方法論の主要な部分を構成する。
【０１７４】
[0174]増幅後に、増幅産物の電気泳動によってマーカーをスコア化することができる。マーカーの遺伝子型のスコア化は増幅された断片のサイズに基づき、断片の塩基対の数によって測定できる。使用されるプライマー又は実験法の変形は、報告される断片サイズに影響を及ぼすが、使用される特定のプライマー又は実験室に関係なく相対値は一定のままでなければならない。品種を比較する場合、全てのＳＳＲプロファイルが同じ研究室で実行されることが好ましい。
【０１７５】
[0175]親としてパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを含む植物は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと同じホモ接合対立遺伝子を含むことになるので、パパイア植物ＥＷＳ−２４９９ｍのＳＳＲプロファイルを使用してそのような植物を同定することができる。パパイア栽培品種は、すべての関連する遺伝子座で基本的にホモ接合性なので、殆どの遺伝子座は、存在する対立遺伝子の型が１つしかないはずである。対照的に、Ｆ１後代の遺伝子マーカープロファイルは、Ｆ１後代の両親の合計になるはずであり、例えば一方の親が特定の遺伝子座で対立遺伝子ｘについてホモ接合性であり、他方の親がその遺伝子座で対立遺伝子ｙについてホモ接合性だった場合、次にＦ１後代はその遺伝子座でｘｙ（ヘテロ接合性）になる。選択及び育種によって作出された後代の以降の世代は、その遺伝子座の位置に関して遺伝子型ｘ（ホモ接合性）、ｙ（ホモ接合性）又はｘｙ（ヘテロ接合性）になることが予想される。Ｆ１植物を自家受粉又は連続した雑種世代に対して同朋交配する場合、前記遺伝子座は、その位置に関してｘ又はｙのいずれかになるはずである。
【０１７６】
[0176]加えて、開発において、戻し交配変換、導入遺伝子又は遺伝的不稔性因子を含むパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの使用により実質的に利益を得ている植物及び植物の部分は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍに対して高いパーセント同一性がある分子マーカープロファイルを有することによって同定することができる。そのようなパーセント同一性は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、又は９９．９％同一である可能性がある。
【０１７７】
[0177]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍのＳＳＲプロファイルを使用して、従属品種及びパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの使用から本質的に開発された他の後代品種、並びにそれらの細胞及び他の植物の部分を同定することもできる。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを使用して作出される後代植物及び植物の部分は、パパイア栽培品種の遺伝的寄与が、パーセント同一性又はパーセント類似性で測定して少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは９９．５％ある分子マーカープロファイルを有することによって同定できる。そのような後代は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの系統距離内にあるものとして更に特徴付けることができ、例えばパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ以外のパパイア植物への、又は祖先としてパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを有する植物以外のパパイア植物への他家受粉が、１、２、３、４若しくは５回未満であると特徴付けられる。固有の分子プロファイルは、ＳＮＰ及びＲＦＬＰなど他の分子ツールで同定されてもよい。
【０１７８】
[0178]上記の植物のＳＳＲ遺伝子マーカープロファイルを決定したが、上記の植物のどちらの親にも現れなかったいくつかの固有のＳＳＲプロファイルも同定できる。そのような固有のＳＳＲプロファイルは、育種過程の間の組換え又は突然変異から起こり得る。いくつかの固有の対立遺伝子の組合せは、植物品種、そのような品種から作出されるＦ１後代及びそのような品種から作出される後代を同定する手段を提供する。
単一遺伝子変換
【０１７９】
[0179]「パパイア植物」という用語が本発明の文脈において使用される場合、この用語は、パパイア品種の任意の単一遺伝子変換も含む。本明細書で使用される用語、単一遺伝子変換された植物とは、戻し交配と呼ばれる植物育種技術によって開発されたパパイア植物のことを指し、戻し交配技術により、品種に導入された単一遺伝子の他に、品種の所望の形態学的及び生理的特徴の基本的に全てが回復される。本発明と共に戻し交配方法を使用して、品種の特徴を改善する又は品種に特徴を導入することができる。本明細書では用語「戻し交配」とは、雑種後代をまた反復親に反復交雑すること、すなわち、反復親に１、２、３、４、５、６、７、８回又はそれ以上戻し交配することを指す。所望の特徴の遺伝子に寄与する親のパパイア植物は、１回親又はドナー親と称される。この術語は、戻し交配手順において１回親は１回使用され、従って繰り返し使用しないという事を指す。１回親から遺伝子（単数）又は遺伝子（複数）が導入される親パパイア植物は、戻し交配手順において数回使用される反復親として公知である（Ｐｏｅｈｌｍａｎ＆Ｓｌｅｐｅｒ（１９９４年）；Ｆｅｈｒ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃｕｌｔｉｖａｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２６１〜２８６頁（１９８７年））。典型的な戻し交配手順において、対象となる起源品種（反復親）は、導入しようとする対象の単一遺伝子を保有する第２の品種（１回親）に交雑される。上記の交雑から得られた後代が次いで反復親に再び交雑され、パパイア植物を得るまでこの交雑過程が反復され、１回親から導入された単一遺伝子の他に、反復親の所望の形態学的及び生理的特徴の基本的に全てが変換された植物に回復される。
【０１８０】
[0180]適切な反復親の選択は、良好な戻し交配手順に重要なステップである。戻し交配手順の目標は、起源品種中にある単一の形質又は特徴を改変又は置換することである。これを果たすには、反復品種の単一遺伝子が１回親からの所望の遺伝子で修飾又は置換され、一方で起源品種の所望の遺伝的、従って所望の生理的及び形態学的な構成の残りの全てが基本的に保持される。特定の１回親の選択は、戻し交配の目的によって決まり、主要な目的の１つは、植物にいくつかの農学的に重要な形質を付加することである。厳密な戻し交配手順は、改変される特徴又は形質によって決まり、適当な試験手順が決定されることになる。導入される特徴が優性対立遺伝子である場合、戻し交配方法は単純化されるが、劣性対立遺伝子も導入することができる。この例では、後代の試験を導入して、所望の特徴が成功裏に導入されたかどうか決定する必要があり得る。
【０１８１】
[0181]新品種の開発において通常は選択されないが、戻し交配技術によって改善できる多くの単一遺伝子形質が同定されてきた。単一遺伝子形質は、遺伝子導入されてもよいし、又は導入されなくてもよい。これらの形質の例には、それだけには限らないが、雄性不稔、蝋様デンプン、除草剤抵抗性、細菌性、真菌性又はウイルス性病害に対する抵抗性、昆虫抵抗性、雄性稔性、栄養価の向上、産業使用、収量安定性、及び収量の増強がある。上記の遺伝子は、通常、核によって受け継がれる。上記の単一遺伝子形質のいくつかは、米国特許第５，９５９，１８５号、第５，９７３，２３４号及び第５，９７７，４４５号に記載されており、その開示を特に参照により本明細書に組み入れる。
パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍへの新たな形質又は遺伝子座の導入
【０１８２】
[0182]品種ＥＷＳ−２４９９ｍ、並びに雌雄同株植物の自家受粉により高度に雌雄同株性の後代を作出し、また正常な雌性及び正常な雌雄同株性パパイア植物と交雑した場合、高度に雌雄同株性のＦ１後代を作出するＥＷＳＭＨＰと命名された変異対立遺伝子を含有するパパイア植物は、新たな遺伝子座又は形質を遺伝子移入することができる新たな基礎遺伝的多様性を表している。直接形質転換及び戻し交配とは、上記の遺伝子移入を果たすために使用できる２つの重要な方法を表す。戻し交配変換及び単一遺伝子座変換という用語は、戻し交配計画の産物を命名するために互換的に使用される。
パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの戻し交配変換
【０１８３】
[0183]反復親として利用されるパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと戻し交配することによってＤＮＡ配列が導入される場合、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ又は変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物の戻し交配変換が生じる。天然に存在するＤＮＡ配列と遺伝子導入ＤＮＡ配列の両方が、戻し交配技術によって導入されてもよい。少なくとも２回の交雑、少なくとも３回の交雑、少なくとも４回の交雑、少なくとも５回の交雑などを含め少なくとも２回以上の戻し交配において、戻し交配変換は、形質又は遺伝子座変換を持つ植物を作出できる。分子マーカー支援育種又は選択を利用して、戻し交配変換を達成するのに必要な戻し交配の数を減らすことができる。戻し交配変換が、わずか２回の戻し交配で製作できることが実証されており、例えば、Ｏｐｅｎｓｈａｗ，Ｓ．Ｊ．ら、Ｍａｒｋｅｒ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｂａｃｋｃｒｏｓｓ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄａｔａ、Ｃｒｏｐ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ、Ｏｒｅｇｏｎ（１９９４年８月）を参照されたい。
【０１８４】
[0184]戻し交配変換方法の複雑さは、導入される形質の型（単一遺伝子か又は連鎖していない遺伝子と比較して近くに連鎖している遺伝子か）、形質の発現のレベル、遺伝の型（細胞質性か又は核か）、及び交雑に含まれる両親の型によって決まる。分類が比較的容易な単一遺伝子形質の場合、戻し交配方法が有効であり、管理が比較的容易であることは当技術分野の技術者に理解されている（Ｈａｌｌａｕｅｒら、Ｃｏｒｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ、Ｓｐｒａｇｕｅ  ａｎｄ  Ｄｕｄｌｅｙ、第３編（１９９８年）を参照されたい）。戻し交配変換によって導入できる所望の形質には、それだけには限らないが、不稔性（核及び細胞質性）、稔性回復、栄養強化、乾燥耐性、窒素利用、改変された脂肪酸プロファイル、低フィチン酸、産業的増強、病害抵抗性（細菌性、真菌性又はウィルス性）、昆虫抵抗性及び除草剤抵抗性がある。加えて、ＦＲＴ部位、Ｌｏｘ部位、又は他の部位特異的組込み部位など遺伝子移入部位自体が、戻し交配によって挿入され、特定の植物品種への１つ又は複数の対象となる遺伝子の直接挿入に利用されてもよい。本発明のいくつかの実施形態において、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍに戻し交配できる遺伝子座の数は、少なくとも１、２、３、４若しくは５個及び／又は最大６、５、４、３若しくは２個までである。病害抵抗性に関する導入遺伝子が、同じ発現ベクター中に除草剤抵抗性に関する導入遺伝子も含有するなど、単一の遺伝子座はいくつかの導入遺伝子を含有することができる。除草剤抵抗性に関する遺伝子は、選択可能なマーカー及び／又は表現型形質として使用することができる。部位特異的組込み系の単一遺伝子座変換により、変換された遺伝子座において複数の遺伝子の組込みが可能になる。
【０１８５】
[0185]戻し交配変換は、優性対立遺伝子又は劣性対立遺伝子いずれの導入の結果でもよい。対象となる形質を含有する後代の選択は、優性対立遺伝子と関連する形質に対する直接選択によって果たされる。戻し交配によって導入される導入遺伝子は、優性の単一遺伝子形質として通常は機能し、分類が比較的容易である。劣性対立遺伝子によって導入される形質に対する後代の選択は、戻し交配第１世代を栽培し、自家受粉させて、どの植物が劣性対立遺伝子を保有しているか決定することが必要である。劣性形質は、対象となる遺伝子座の存在を決定するために更なる後代を連続した戻し交配世代で試験する必要があり得る。安定して遺伝子移入された形質を持つ戻し交配変換は、変換された形質に関して選択しながら反復親に対して更に戻し交配することによって維持することもできるが、通常は、最後の戻し交配世代を自家受粉して、導入された遺伝子（複数可）に関して純粋な育種後代を得る。
【０１８６】
[0186]対象となる形質に対する選択と同様に、後代は反復親の表現型に関して選択される。戻し交配は同系交配の一形態であり、連続した戻し交配の後に反復親の特色が自動的に回復される。Ｐｏｅｈｌｍａｎ、Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｆｉｅｌｄ  Ｃｒｏｐｓ、２０４頁（１９８７年）。Ｐｏｅｈｌｍａｎは、１〜４回又はそれより多い戻し交配を示唆しているが、上記のように、必要な戻し交配の回数は、分子マーカーの使用により減らすことができる。遺伝的に類似しているドナー親など他の因子も、必要な戻し交配の回数を減らし得る。Ｐｏｅｈｌｍａｎが示すように、戻し交配は、単純に受け継がれる優性の容易に認識される形質に対しては最も容易である。
【０１８７】
[0187]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ又は変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物に形質若しくは遺伝子座を付加する又はそれを修飾する１つのプロセスは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの種子から栽培されるパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ植物を所望の形質若しくは遺伝子座を含む別のパパイア栽培品種の植物と交雑するステップと、所望の形質若しくは遺伝子座を含むＦ１後代植物を選択して、選択したＦ１後代植物を作出するステップと、選択した後代植物をパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ植物と交雑して戻し交配後代植物を作出するステップと、所望の形質若しくは遺伝子座及びパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの形態的特徴を有する戻し交配後代植物を選択して、選択した戻し交配後代植物を作出するステップと、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍに対して連続して３回以上戻し交配して前記形質若しくは遺伝子座を含む選択した第４代以上の戻し交配後代植物を作出するステップとを含む。改変されたパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、同じ環境条件で栽培された場合に５％の有意水準で決定された通り、表４に挙げたパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの生理的及び形態学的特徴を有するとして更に特徴付けることができ、並びに／又はＳＳＲマーカーで決定された変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア栽培品種に対するパーセント類似性若しくは同一性によって特徴付けることもできる。ドナー親が非常に近縁であるか又は選択ステップにおいてマーカーが使用される場合など適当な状況において、上記の方法はより少ない戻し交配で利用することができる。使用できる所望の形質には、核酸の発現又は阻害によって形質に影響を及ぼすことになる当技術分野において公知の核酸があり、その核酸の幾つかを本明細書に挙げる。所望の遺伝子座は、ＦＲＴ、Ｌｏｘ及び部位特異的組込みのための他の部位の遺伝子移入を含み、その遺伝子移入は、機能する核酸が組込み部位に挿入される場合、所望の形質に影響を及ぼすことができる。
【０１８８】
[0188]加えて、プロセスの最後に、遺伝子移入した形質又は遺伝子座を持つパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを異なるパパイア植物と交雑するサブステップと、結果として得られる第１世代の後代パパイア種子を収穫するサブステップとを含むステップを付け加えることにより、本明細書に記載される上記のプロセス及び他の類似のプロセスを使用して第１世代の後代パパイア種子を作出することができる。
組織培養
【０１８９】
[0189]品種の更なる増殖は、組織培養及び再生によって起こすことができる。パパイアの様々な組織の組織培養及びそこからの植物の再生については周知であり、広く発表されている。例えば、Ｋｏｍａｔｓｕｄａ，Ｔ．ら、Ｃｒｏｐ  Ｓｃｉ．、３１：３３３〜３３７頁（１９９１年）；Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｐ．Ａ．ら、Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．、８２：６３３〜６３５頁（１９９１年）；Ｋｏｍａｔｓｕｄａ，Ｔ．ら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  Ｏｒｇａｎ  Ｃｕｌｔｕｒｅ、２８：１０３〜１１３頁（１９９２年）；Ｄｈｉｒ，Ｓ．ら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、１１：２８５〜２８９頁（１９９２年）；Ｐａｎｄｅｙ，Ｐ．ら、Ｊａｐａｎ  Ｊ．Ｂｒｅｅｄ．、４２：１〜５頁（１９９２年）；及びＳｈｅｔｔｙ，Ｋ．ら、Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、８１：２４５〜２５１頁（１９９２年）；並びに１９９１年６月１８日に発行されたＣｏｌｌｉｎｓらの米国特許第５，０２４，９４４号、及び１９９１年４月１６日に発行されたＲａｎｃｈらの米国特許第５，００８，２００号を参照されたい。従って、この発明の別の態様は、生長並びに分化により、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの生理的及び形態的特徴を有するパパイア植物又はＥＷＳＭＨＰ変異対立遺伝子を有するパパイア植物を作出する細胞を提供することである。
【０１９０】
[0190]本明細書では、「組織培養物」という用語は、同じ若しくは異なる型の単離された細胞又は植物の部分に組織されているそのような細胞の集合体を含む組成物を示す。組織培養物の典型的な型は、原形質体、カルス、植物凝集塊、並びに植物又は胚、花粉、花、種子、さや、葉柄、葉、幹、根、根端、葯、雌しべなど植物の部分において完全な組織培養物を生成することができる植物細胞である。植物組織培養物を調製し、維持する手段は、当技術分野において周知である。例として、器官を含む組織培養物を使用して、再生植物が作出された。米国特許第５，９５９，１８５号、第５，９７３，２３４号及び第５，９７７，４４５号は、特定の技術について記載しており、その開示を参照により本明細書に組み入れる。
パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを使用する他のパパイア品種の開発
【０１９１】
[0191]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなどのパパイア品種は、種子及び果実生産用として一般に開発される。しかしながら、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア品種は、新たなパパイア品種を開発するために使用できる育種材料源も提供する。当技術分野において公知であり、パパイア植物育種計画に使用される植物育種技術には、それだけには限らないが、循環選択、バルク選択、集団選択、戻し交配、系統育種、自然受粉育種、制限断片長多型によって強化された選択、遺伝子マーカーによって強化された選択、倍加半数体の製作及び形質転換がある。これらの技術の組合せが、しばしば使用される。植物育種計画におけるパパイア品種の開発は、ホモ接合性品種の開発及び評価を一般に必要とする。新品種を評価するために多くの分析方法が使用可能である。最も古く、最も伝統的な分析方法は、表現型形質の観察であるが、遺伝子型分析も使用できる。
更なる育種方法
【０１９２】
[0192]この発明は、第１の親パパイア植物を第２の親パパイア植物と交雑することによってパパイア植物を作出する方法を対象とし、第１又は第２の親パパイア植物は、パパイア品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物である。他方の親は、合成又は天然の個体群の一部であるパパイア植物など、他の任意のパパイア植物でもよい。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなどの変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物を使用する任意の方法：自家受粉、同朋交配、戻し交配、個体選択、系統育種、バルク選択、雑種生産、個体群への交雑などは、この発明の一部である。これらの方法は当技術分野において周知であり、より一般に使用されるいくつかの育種方法を以下に記載する。育種方法の説明については、いくつかの参考図書の１つに見られる（例えば、Ａｌｌａｒｄ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ（１９６０年）；Ｓｉｍｍｏｎｄｓ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃｒｏｐ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ（１９７９年）；Ｓｎｅｅｐら（１９７９年）；Ｆｅｈｒ、「Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｃｕｌｔｉｖａｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、第７章、Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ、Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ、第２追補、Ｗｉｌｃｏｘ編（１９８７年））。
【０１９３】
[0193]更なるパパイア植物の開発において、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物で使用できる育種方法を以下に記載する。そのような育種方法の一実施形態は、栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍのパパイア植物若しくはその部分を得るステップと、育種材料源として前記植物若しくは植物の部分を利用するステップと、栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと共通の分子マーカーを持つ並びに／又は表４に挙げた特徴から選択される形態学的及び／若しくは生理的特徴を持つパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代植物を選択するステップとを含む、パパイア植物育種計画において栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代パパイア植物を開発する方法である。パパイア植物育種計画において使用できる育種ステップには、系統育種、戻し交配、突然変異育種、及び循環選択がある。これらのステップと組み合わせて、ＲＦＬＰによって強化された選択、遺伝子マーカーによって強化された選択（例えば、ＳＳＲマーカー）及び倍加半数体の製作などの技術を利用することができる。
【０１９４】
[0194]別の方法は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代パパイア植物など変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイアの個体群を作出するステップを含み、ここでこのステップは、栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを別のパパイア植物と交雑するサブステップと、それにより平均して５０％の対立遺伝子がパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍから得られるパパイア植物の個体群を作出するサブステップとを含む。上で作出した個体群の植物は、選択されてもこれらの連続した雑種世代から生じるパパイア栽培品種と繰り返し自家受粉又は同朋交配されてもよい。この発明の一実施形態は、この方法によって作出されたパパイア栽培品種であり、その栽培品種は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍ由来の対立遺伝子の少なくとも５０％を獲得している。
【０１９５】
[0195]植物育種の当業者は、２つの植物品種の形質を評価して、その２品種によって発現される２つの形質間に有意差がないかどうか決定する方法を知っているはずである。例えば、Ｆｅｈｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｔ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃｕｌｔｉｖａｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２６１〜２８６頁（１９８７年）を参照されたい。従って、本発明は、表４に挙げた形質からなる群から選択される、栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの少なくとも２つの形質の組合せを含むパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代パパイア植物、又は発明の概要に挙げた形質の組合せを含む栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを含み、そのため同じ環境条件で栽培した場合、前記後代パパイア植物は、５％の有意水準で決定された通り前記形質に関してパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと著しい違いがない。本明細書に記載される技術を用いて、分子マーカーを使用して、前記後代植物をパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代植物として同定することができる。平均形質値を使用して、形質の違いが有意かどうか決定することができ、その形質は、同じ環境条件で栽培された植物において測定されることが好ましい。そのような品種が開発されれば、収量、病害抵抗性、有害生物抵抗性及び極限環境条件における植物の性能などの形質を維持又は改善するために生殖質母体を全体として成長させることが重要なので、その価値は実質的である。
【０１９６】
[0196]パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍとの雑種関係によって特徴付けることもでき、例えば、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの一定回数の育種交雑範囲内にあると特徴付けられる。育種交雑は、後代に新たな遺伝的性質を導入するための交雑であり、既存の遺伝的な対立遺伝子の間で選択するために行われる自己又は同胞交雑などの交雑と区別される。系統における育種交雑の回数が少ないほど、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍとその後代との関係はより近い。例えば、本明細書に記載される方法によって作出された後代は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの１、２、３、４又は５回の育種交雑範囲内にあることができる。
【０１９７】
[0197]本明細書では「植物」という用語は、パパイア植物を再生することができる植物細胞、植物原形質体、植物細胞組織培養物、胚、花粉、胚珠、花、さや、葉、根、根端、葯、子葉、胚軸、分裂組織細胞、幹、雌しべ、葉柄など、植物又は植物の部分において完全な植物カルス、植物凝集塊並びに植物細胞を含む。
系統育種
【０１９８】
[0198]系統育種は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物とパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍに存在しない又はそれを補う望ましい特徴を１つ又は複数有する別のパパイア栽培品種など、２つの遺伝子型を交雑することから始める。２つの起源親から、所望の特徴の全てが得られない場合、他の源を育種個体群に含めることができる。系統方法において、優れた植物が自家受粉され、連続した雑種世代において選択される。以降の雑種世代において、自家受粉及び選択の結果として、ヘテロ接合の状態は同質の品種に代わる。通常は系統育種法において、Ｆ１からＦ２；Ｆ２からＦ３；Ｆ３からＦ４；Ｆ４からＦ５；など５代以上の連続した雑種世代の自家受粉及び選択が実施される。充分な回数の同系交配の後に、連続した雑種世代は、開発された品種の種子を増やすために使用されることになる。開発された品種は、約９５％以上の遺伝子座でホモ接合対立遺伝子を含むことが好ましい。
【０１９９】
[0199]戻し交配は、戻し交配変換を作製するために使用する他に系統育種と組み合わせて使用することもできる。前述の通り、戻し交配を使用して一品種であるドナー親から反復親と呼ばれる開発される品種へ１つ又は複数の特に望ましい形質を導入することができ、反復親は全体的に優れた農業特徴を有するが、望ましい形質（単数）又は形質（複数）を欠いている。しかし、同じ手順を使用して後代を反復親の遺伝子型に近づけることができるが、同時に初期段階で戻し交配を止めて自家受粉及び選択を始めることによって、１回親の構成要素の多くを保持することもできる。例えば、パパイア栽培品種を別の品種と交雑して、第１世代後代植物を作出することができる。次いで、第１世代後代植物を親品種の一方と戻し交配して、ＢＣ１又はＢＣ２を作製することができる。後代を自家受粉させ、選択することにより新しく開発された品種は、反復親の属性の多く、更に１回親の所望の属性のいくつかを有する。この手法は、新たなパパイア品種で使用する反復親の有用性及び強さに影響を与える。
【０２００】
[0200]従って、この発明の実施形態は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物の戻し交配変換を行う方法であり、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの植物を所望の形質を含むドナー植物と交雑するステップと、所望の形質を含むＦ１後代植物を選択するステップと、選択したＦ１後代植物をパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの植物に対して戻し交配するステップとを含む。この方法は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの分子マーカープロファイルを入手するステップと、その分子マーカープロファイルを使用して所望の形質及びパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの分子マーカープロファイルを持つ後代植物を選択するステップとを更に含むことができる。一実施形態において、所望の形質は、ドナー親に存在する突然変異体遺伝子又は導入遺伝子である。
循環選択及び集団選択
【０２０１】
[0201]循環選択とは、植物育種計画において使用されて、植物の個体群を改善する方法である。パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍは、循環選択計画での使用に適している。本方法は、後代を形成するために互いに他花受粉している個々の植物を必要とする。後代が栽培され、任意の数の選択方法によって優れた後代が選択され、その後代は個々の植物、半同胞後代、完全同胞後代、及び自家受粉後代を含む。選択した後代を互いと他花受粉させて、別の個体群の後代を形成する。この個体群を植え、再び優れた植物を選択して互いと他花受粉させる。循環選択は循環過程であり、従って所望の回数反復することができる。循環選択の目的は、個体群の形質を改善することである。次いで改善された個体群を育種材料源として使用して、合成栽培品種の作出を含めた商業又は育種用の新たな品種を得ることができる。合成栽培品種とは、いくつか選択した品種の異系交配によって形成され結果として得られる後代のことである。
【０２０２】
[0202]集団選択は、分子マーカーによって強化された選択と組み合わせて使用する場合に有用な技術である。集団選択において、個体からの種子は、表現型又は遺伝子型に基づいて選択される。次いでこれらの選択した種子を一括して使用し、次世代を栽培する。バルク選択は、バルク区画に植物の個体群を栽培するステップと、植物を自家授粉させるステップと、バルク内の種子を収穫するステップと、次いでバルク内で収穫した種子のサンプルを使用して次世代を植えるステップとを必要とする。また、自家授粉の代わりに指向性授粉も育種計画の一部として使用することが可能である。
突然変異育種
【０２０３】
[0203]突然変異育種とは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍなど、変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物に新たな形質を導入する別の方法である。自発的に生じる又は人工的に誘導される突然変異は、植物育種家にとって有用な多様性源になり得る。人工の突然変異生成の目標は、所望の特徴に対する突然変異率を増加させることである。突然変異率は、温度、長期間の種子貯蔵、組織培養条件、Ｘ線、γ線（例えば、コバルト６０又はセシウム１３７）、中性子（原子炉におけるウラン２３５の核分裂の産物）、β線（リン３２又は炭素１４などの放射性同位元素から発される）若しくは紫外線放射（２５００〜２９００ｎｍが好ましい）などの放射線、又は化学的変異誘発物質（塩基類似体（５−ブロモウラシル）など）、関連化合物（８エトキシカフェイン）、抗生物質（ストレプトニグリン）、アルキル化剤（スルファマスタード、ナイトロジェンマスタード、エポキシド、エチレンアミン、硫酸塩、スルホン酸塩、スルホン、ラクトン）、アジ化物、ヒドロキシルアミン、亜硝酸又はアクリジンを含めた多くの異なる手段によって増加させることができる。突然変異生成によって所望の形質が観察されたら、次いでその形質を伝統的な育種技術によって既存の生殖質に組み入れることができる。突然変異育種の詳細については、Ｆｅｈｒ、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃｕｌｔｉｖａｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９３年）に見ることができる。突然変異育種は、ゲノム中の誘導された特定領域を標的化する方法（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｌｏｃａｌ  Ｌｅｓｉｏｎｓ  ＩＮ  Ｇｅｎｏｍｅｓ）（ＴＩＬＬＩＮＧ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ法（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒ−Ｌｉｋｅ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ  Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）（ＴＡＬＥＮ）及びクラスター調節間ショートパリンドロームリピート法（Clustered Regulatory Interspaced Short Palindromic Repeats）（ＣＲＩＳＰＲ）などの技術の使用も含む。加えて、他のパパイア植物に作製された突然変異を使用して、そのような突然変異を含むパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの戻し交配変換を作出することができる。
分子マーカーによる育種
【０２０４】
[0204]アイソザイム電気泳動法、制限断片長多型法（ＲＦＬＰ）、ランダム増幅多型ＤＮＡ法（ＲＡＰＤ）、任意プライム化ポリメラーゼ連鎖反応法（ＡＰ−ＰＣＲ）、ＤＮＡ増幅フィンガープリント法（ＤＡＦ）、配列特性化増幅領域法（ＳＣＡＲ）、増幅断片長多型法（ＡＦＬＰ）、単純配列反復法（ＳＳＲ）及び単一ヌクレオチド多型法（ＳＮＰ）などの技術を使用することにより同定されるマーカーを含む分子マーカーは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍを利用する植物育種方法において使用することができる。
【０２０５】
[0205]アイソザイム電気泳動法及びＲＦＬＰ法は、遺伝的組成を決定するために広く使用されてきた。Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ  ａｎｄ  Ｏｌｓｅｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｎｋａｇｅ  Ｍａｐ  ｏｆ  Ｓｏｙｂｅａｎ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  Ｌ．Ｍｅｒｒ．）、６．１３１〜６．１３８頁（１９９３年）。Ｓ．Ｊ．Ｏ’Ｂｒｉｅｎ（編）、Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍａｐｓ：Ｌｏｃｕｓ  Ｍａｐｓ  ｏｆ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｅｎｏｍｅｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて、約３６５個のＲＦＬＰ、１１個のＲＡＰＤ（ランダム増幅多型ＤＮＡ）、３個の古典的マーカー及び４個のアイソザイム遺伝子座を含む２５個の連鎖群から成る分子遺伝学的連鎖地図が開発された。Ｒ．Ｌ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ａｎｄ  Ｉ．Ｋ．Ｖａｓｉｌ（編）、ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ、Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ中にあるＳｈｏｅｍａｋｅｒ，Ｒ．Ｃ．１９９４年、ＲＦＬＰ  Ｍａｐ  ｏｆ  Ｓｏｙｂｅａｎ、２９９〜３０９頁も参照されたい。
【０２０６】
[0206]ＳＳＲ技術は、現在最も効率的で実用的なマーカー技術である。多くのマーカー遺伝子座を日常的に使用することができ、ＳＳＲを使用すると、ＲＦＬＰと比較してマーカー遺伝子座当たりより多くの対立遺伝子を見出すことができる。例えば、Ｄｉｗａｎ  ａｎｄ  Ｃｒｅｇａｎは、ダイズにおいて２６個もの対立遺伝子を持つ多型性が高いマイクロサテライト遺伝子座について記載している。（Ｄｉｗａｎ，Ｎ．ａｎｄ  Ｃｒｅｇａｎ．Ｐ．Ｂ．、Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｉｚｉｎｇ  ｏｆ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ−ｌａｂｅｌｅｄ  ｓｉｍｐｌｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｒｅｐｅａｔ（ＳＳＲ）ｍａｒｋｅｒｓ  ｔｏ  ａｓｓａｙ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｏｙｂｅａｎ、Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．、９５：２２０〜２２５頁（１９９７年）。単一ヌクレオチド多型を使用して、本発明の固有の遺伝的組成及びその固有の遺伝的組成を保持している後代品種を同定することもできる。様々な分子マーカー技術を組み合わせて使用して、全体の分解能を向上させることができる。
【０２０７】
[0207]分子マーカーの使用の１つは、量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）マッピングである。ＱＴＬマッピングはマーカーの使用であり、ＱＴＬは、量的形質に対して測定可能な効果を有する対立遺伝子と密接に連鎖していることが知られている。育種過程における選択は、正の効果がある対立遺伝子に連鎖しているマーカーの蓄積及び／又は負の効果がある対立遺伝子に連鎖しているマーカーの植物ゲノムからの除去に基づく。
【０２０８】
[0208]分子マーカーを使用して、育種過程の間に質的な形質を選択することもできる。例えば、戻し交配育種計画の間に、対立遺伝子に密接に連鎖しているマーカー又は対象となる実在の対立遺伝子内に配列を含有するマーカーを使用して、対象となる対立遺伝子を含有する植物を選択することができる。マーカーを使用して、反復親のゲノムを選択することもでき、ドナー親のゲノムを除外することもできる。この手順を使用することにより、選択した植物中に残っているドナー親からのゲノムの量を最小化することができる。上記手順を使用して、戻し交配計画に必要な、反復親へまた交雑する回数を減らすこともできる。選択過程における分子マーカーの使用は、遺伝子マーカーによって強化された選択としばしば呼ばれる。交雑を通じて遺伝子プロファイルを追跡する手段が得られることにより、分子マーカーを使用して、植物の親品種又は原種として特定の源の生殖質を同定及び除外することもできる。
倍加半数体の作出
【０２０９】
[0209]育種計画において倍加半数体の作出を使用して、ホモ接合性表現型を持つ植物を開発することもできる。例えば、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍが親であるパパイア植物を使用して、倍加半数体植物を作出することができる。倍加半数体は、ヘテロ接合植物の一組の染色体（１Ｎ）を倍加して完全にホモ接合性の個体を作出することによって作出される。例えば、Ｗａｎら、「Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｏｕｂｌｅｄ  Ｈａｐｌｏｉｄ  Ｐｌａｎｔｓ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｎｔｈｅｒ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍａｉｚｅ  Ｃａｌｌｕｓ」、Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、７７：８８９〜８９２頁（１９８９年）及び米国特許第７，１３５，６１５号を参照されたい。上記過程はヘテロ接合源からホモ接合植物を得るために必要な自家受粉の世代を省略するので、この方法は有利になり得る。
【０２１０】
[0210]様々な植物に対して一倍体誘導系が開発されて、一倍体の組織、植物及び種子が作出された。一倍体誘導系は、選択した株（雌として）を誘導株と交雑することによって、任意の遺伝子型から一倍体植物を作出することができる。トウモロコシの場合そのような誘導株には、Ｓｔｏｃｋ６（Ｃｏｅ、Ａｍ．Ｎａｔ．、９３：３８１〜３８２頁（１９５９年）；Ｓｈａｒｋａｒ  ａｎｄ  Ｃｏｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、５４：４５３〜４６４頁（１９６６年）；ＫＥＭＳ（Ｄｅｉｍｌｉｎｇ，Ｒｏｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｇｅｉｇｅｒ，Ｖｏｒｔｒ．、Ｐｆｌａｎｚｅｎｚｕｃｈｔｇ、３８：２０３〜２２４頁（１９９７年）；又はＫＭＳ及びＺＭＳ（Ｃｈａｌｙｋ，Ｂｙｌｉｃｈ＆Ｃｈｅｂｏｔａｒ、ＭＮＬ、６８：４７頁（１９９４年）；Ｃｈａｌｙｋ＆Ｃｈｅｂｏｔａｒ、Ｐｌａｎｔ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ、１１９：３６３〜３６４頁（２０００年））；並びに無限成長配偶体（ｉｇ）突然変異（Ｋｅｒｍｉｃｌｅ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１６６：１４２２〜１４２４頁（１９６９年）がある。これらの開示は、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２１１】
[0211]一倍体植物を得る方法については、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．ら、Ｊｏｕｒｎ．ｏｆ  Ｈｅｒｅｄｉｔｙ、７１（１）：９〜１４頁（１９８０年）；Ｐｏｌｌａｃｓｅｋ，Ｍ．Ａｇｒｏｎｏｍｉｅ、（Ｐａｒｉｓ）１２（３）：２４７〜２５１頁（１９９２年）；Ｃｈｏ−Ｕｎ−Ｈａｉｎｇら、Ｊｏｕｒｎ．ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏｌ．、３９（３）：１８５〜１８８（１９９６年）；Ｖｅｒｄｏｏｄｔ，Ｌ．ら、９６（２）：２９４〜３００頁（１９９８年２月）；ＥＵＣＡＲＰＩＡ、Ｂｅｒｌｉｎ  Ｇｅｒｍａｎｙによって組織された、Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（１９８５年９月８〜１３日）；Ｃｈａｌｙｋら、Ｍａｉｚｅ  Ｇｅｎｅｔ  Ｃｏｏｐ．Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ、６８：４７頁（１９９４年）にも開示されている。
【０２１２】
[0212]従って、この発明の実施形態は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと別のパパイア植物の交雑、若しくは変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有するパパイア植物と別のパパイア植物との交雑から種子を作出する、又は得るステップと、Ｆ１種子若しくはＦ１植物又は任意の連続した雑種世代に倍加半数体方法を適用するステップとによって、実質的にホモ接合性のパパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの後代植物を製作するプロセスである。トウモロコシにおける研究に基づくと、上記のような方法は、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍと類似の遺伝的性質又は特徴を持つ品種を作出するのに必要とされる世代数を少なくすることができる。Ｂｅｒｎａｒｄｏ，Ｒ．ａｎｄ  Ｋａｈｌｅｒ，Ａ．Ｌ．、Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．、１０２：９８６〜９９２頁（２００１年）を参照されたい。
【０２１３】
[0213]特に、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの分子マーカープロファイルを保持する種子を作製するプロセスが考察され、その作製プロセスは、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍが親であるＦ１種子を得る又は作出するステップと、倍加半数体を誘導して減数分裂分離を起こさずに後代を作製するステップと、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの分子マーカープロファイルを入手するステップと、パパイア栽培品種ＥＷＳ−２４９９ｍの分子マーカープロファイルを保持する後代を選択するステップとを含む。
【０２１４】
[0214]異なる形質及び作物に一般に使用される他の育種方法の説明は、いくつかの参考文献の１つに見られる（例えば、Ａｌｌａｒｄ（１９６０年）；Ｓｉｍｍｏｎｄｓ（１９７９年）；Ｓｎｅｅｐら（１９７９年）；Ｆｅｈｒ（１９８７年））。
【０２１５】
[0215]本明細書において特に明記されない又は文脈によって明確に否定されない限り、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」並びに本発明について記載している文脈における（特に以下の特許請求の範囲の文脈における）類似の指示対象の使用は、単数及び複数の両方を網羅するものと解釈されるべきである。用語「含む」、「有する」、「含む」及び「含有する」は、特に明記しない限り、制限のない用語（すなわち、「を含むがこれに限定されない」という意味）として解釈される。本明細書における数値範囲の説明は、単にその範囲内に該当する各数値を個別に指す略記法としての役割しか意図しておらず、本明細書において別段の指示がない限り、各数値は、本明細書において個別に列挙されたものとして明細書に組み入れられる。例えば、範囲１０〜１５が開示される場合、１１、１２、１３及び１４も開示される。本明細書において特に明記されない又は文脈よって明確に否定されない限り、本明細書に記載される全ての方法は任意の適切な順序で実行することができる。本明細書で使用されるあらゆる例又は例示的な言い回し（例えば、「など」）は、単に本発明をよりよく説明することだけを意図し、特に主張しない限り、本発明の範囲に制限を加えるものではない。明細書中のいずれの言葉も、特許請求されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すと解釈されないものとする。
寄託情報
【０２１６】
[0216]上で開示し、添付の特許請求の範囲に記載した本発明の変異対立遺伝子ＥＷＳＭＨＰを含有する、Ｈｏｒｔｉｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｅ．Ａｓｉａ）Ｌｔｄ．に独占所有権があるパパイア種子の寄託は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａで行われた。寄託日は、２０１４年１月２０日であった。２，５００粒の種子の寄託は、この出願の出願日の前からＨｏｒｔｉｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｅ．Ａｓｉａ）Ｌｔｄ．によって維持されたものと同じ寄託から採取された。制限の全ては，特許が付与されたときに取消不能の条件で撤回され、寄託は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８０１〜１．８０９の要件の全てを満たすものとする。ＡＴＣＣ登録番号は、ＰＴＡ−１２０８６１である。寄託は、３０年間若しくは最後の要求後５年間又は特許の権利行使可能期間のうちいずれか長い期間保管所に維持されることになり、その期間中必要に応じて交換されることになる。
【０２１７】
[0217]いくつかの典型的な態様及び実施形態について上述したが、当業者は、その特定の改変、入れ替え、追加及び下位の組合せについて認識している。従って、以下に記載の添付の特許請求の範囲及びそれに続いて記載される特許請求の範囲は、真の本質及び範囲内にあるものとして、全ての修飾、入れ替え、追加及び下位の組合せを含むと解釈されることを意図する。
【外国語明細書】
2015198647000001.pdf