(57)【要約】【課題】試料から発せられるラマン散乱光をより感度高く測定するためのチップを提供する。【解決手段】基材と、前記基材に対向して配置された試料保持部と、前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有するラマン散乱光測定用チップを提供する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材と、
前記基材に対向して配置された試料保持部と、
前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、
前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、
前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有する
ラマン散乱光測定用チップ。
【請求項２】
さらに前記光波長選択領域は前記励起光を反射する
請求項１に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項３】
前記試料保持部全体が光透過性を有する
請求項１に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項４】
前記試料保持部は少なくとも前記試料との接触部分にゲル状物質を備える
請求項１に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項５】
前記試料保持部は、合成石英からなる
請求項３に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項６】
第１の空間と、第２の空間と、前記第１の空間と前記第２の空間とを連絡する流路と、を有し、
前記流路に前記測定部が形成されている
請求項１に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項７】
前記流路は分岐部を有し、
前記第１の空間及び前記第２の空間は前記分岐部を介して第３の空間と連絡している
請求項６に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項８】
前記試料は細胞を含む
請求項１に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項９】
前記試料保持部は少なくとも前記試料との接触部分に細胞外基質を備える
請求項８に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項１０】
前記試料保持部及び前記試料収容部は共に細胞外基質からなる
請求項８に記載のラマン散乱光測定用チップ。
【請求項１１】
基材と、
前記基材に対向して配置された試料保持部と、
前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、
前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、
前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有する
ラマン散乱光測定用チップと、
前記光波長選択領域へ前記照明光を照射する第１の光源と、
前記光波長選択領域と対向する部分に前記励起光を照射する第２の光源と、を有する
ラマン散乱光測定装置。
【請求項１２】
前記照明光及び前記励起光の照射位置と前記ラマン散乱光測定用チップの水平方向における相対位置を変化させる駆動機構を備える
請求項１１に記載のラマン散乱光測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、ラマン散乱光測定用チップ及びラマン散乱光測定装置に関する。より詳しくは、試料から発せられるラマン散乱光の測定において感度を向上させる技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
ラマン散乱光を測定して、試料の分析に用いることが行われている。しかし、ノイズなどによって、試料から発せられるラマン散乱光を高感度に測定することが困難な場合もあった。
【０００３】
ノイズを抑えて試料から発せられるラマン散乱光をより高感度に測定するために、例えば、特許文献１には、「容器内に配された該容器と異なる材質のシート部材上の試料に励起光を照射してラマン散乱光を検出する検出手順を含む、ラマン散乱光測定方法」が開示されている。当該方法では、試料用容器の底面にシート部材を設置することによって、対物レンズの焦点の位置が試料用容器から離れ、ノイズとなる試料用容器由来のラマン散乱光の検出の強度を低下させることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−１７４４９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記特許文献１に記載されているラマン散乱光の測定方法によって、ノイズを抑えて試料から発せられるラマン散乱光をより高感度に測定することができる。しかし、試料から発せられるラマン散乱光自体が微弱な場合もあり、さらなる改良が求められている。
【０００６】
そこで、本開示は、試料から発せられるラマン散乱光をより感度高く測定するためのチップを提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題解決のため、本開示は、基材と、前記基材に対向して配置された試料保持部と、前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有するラマン散乱光測定用チップを提供する。
さらに前記光波長選択領域は前記励起光を反射するように構成されていてもよい。
また、前記試料保持部全体が光透過性を有していてもよい。
前記試料保持部は、少なくとも前記試料との接触部分にゲル状物質を備えることもできる。前記試料保持部は、合成石英からなっていてもよい。
上記ラマン散乱光測定用チップは、第１の空間と、第２の空間と、前記第１の空間と前記第２の空間とを連絡する流路と、を有し、前記流路に前記測定部が形成されていてもよい。
また、前記流路は分岐部を有し、前記第１の空間及び前記第２の空間は前記分岐部を介して第３の空間と連絡していてもよい。
前記試料は細胞を含むものとすることができる。
前記試料保持部は少なくとも前記試料との接触部分に細胞外基質を備えていてもよい。
前記試料保持部及び前記試料収容部は共に細胞外基質からなるものとすることもできる。
【０００８】
本開示はまた、基材と、前記基材に対向して配置された試料保持部と、前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有するラマン散乱光測定用チップと、前記光波長選択領域へ前記照明光を照射する第１の光源と、前記光波長選択領域と対向する部分に前記励起光を照射する第２の光源と、を有するラマン散乱光測定装置を提供する。
上記ラマン散乱光測定装置は、前記照明光及び前記励起光の照射位置と前記ラマン散乱光測定用チップの水平方向における相対位置を変化させる駆動機構を備えていてもよい。
【発明の効果】
【０００９】
本開示により、試料から発せられるラマン散乱光をより感度高く測定するためのチップ等が提供される。なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本開示中に記載された何れかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本開示の第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置の一例を示す模式図である。
【図２】Ａは、図１に示すラマン散乱光測定用チップの平面図であり、Ｂは、ＡのＰ１−Ｐ１線の矢視断面図である。
【図３】Ａ及びＢは、光波長選択領域を説明するための模式図である。
【図４】Ａは、第１実施形態の変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置のラマン散乱光測定用チップの一例を示す平面模式図であり、Ｂは、ＡのＰ２−Ｐ２線の矢視断面図である。
【図５】本開示の第２実施形態に係るラマン散乱光測定装置の一例を示す模式図である。
【図６】本開示の第３実施形態に係るラマン散乱光測定装置の一例を示す模式図である。
【図７】Ａは、図６に示すラマン散乱光測定用チップの平面図であり、Ｂは、ＡのＰ３−Ｐ３線の矢視断面図である。
【図８】Ａは、第３実施形態の変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置のラマン散乱光測定用チップの一例を示す平面模式図であり、Ｂは、ＡのＰ４−Ｐ４線の矢視断面図である。
【図９】実験例１におけるラマン散乱光の測定を説明するための模式図である。
【図１０】実験例１において測定されたラマンスペクトルを示す図面代用グラフである。
【図１１】実験例２において測定されたラマンスペクトルを示す図面代用グラフである。
【図１２】実験例３において測定されたラマンスペクトルを示す図面代用グラフである。
【図１３】実験例４で用いた細胞の位相差像を示す図面代用写真である。
【図１４】実験例４において測定されたラマンスペクトルを示す図面代用グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本開示を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本開示の代表的な実施形態を示したものであり、これにより本開示の範囲が狭く解釈されることはない。また、説明は、以下の順序で行う。
１．第１実施形態
（試料収容部が空隙として構成されている例）
２．第１実施形態の変形実施形態
（試料収容部が細胞外基質で構成されている例）
３．第２実施形態
（光照射位置を走査するための構成を有する例）
４．第３実施形態
（測定対象が通流する流路に測定部が設けられている例）
５．第３実施形態の変形実施形態
（分取部を備える例）
【００１２】
１．第１実施形態
本開示の第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置の一例を図１に示す。図１に示すように、ラマン散乱光測定装置Ｄ１は、少なくとも、第１の光源１と、第２の光源２と、ラマン散乱光測定用チップ３ａと、を有する。ラマン散乱光測定装置Ｄ１の各構成について、順に説明する。
【００１３】
（１）第１の光源
第１の光源１は、ラマン散乱光測定装置Ｄ１において、後述するラマン散乱光測定用チップ３ａに設けられた光波長選択領域へ、照明光（図１、矢印Ｌ１１）を照射するための構成である。第１の光源１は、試料の透過像を撮像するための照明光を出射することができればよく、公知の光源の中から自由に選択することができる。例えば、第１の光源１として、ハロゲンランプ等の白色光源を採用することもできる。この白色光源から発せられる照明光は、可視域の波長帯を広く含む光である。
【００１４】
ラマン散乱光測定装置Ｄ１では、第１の光源１からラマン散乱光測定用チップ３ａに収容された試料へ照明光（図１、矢印Ｌ１１）が照射される。そして、試料を透過した後の照明光、又は試料により回折散乱した照明光（図１、矢印Ｌ１２）は、対物レンズ４１を経て、結像レンズ４２によって撮像部５１に結像して、試料の像が撮像される。なお、撮像される試料の像は、明視野像でも暗視野像でも構わないが、色素を含有しない種類の細胞のような、透明な試料を撮像する場合には、位相差像や暗視野像が好ましい。
【００１５】
（２）第２の光源
第２の光源２は、ラマン散乱光測定装置Ｄ１において、後述するラマン散乱光測定用チップ３ａに設けられた、光波長選択領域と対向する部分に励起光（図１、矢印Ｌ２１）を照射するための構成である。第２の光源２は、試料への励起光を出射することができればよく、公知の光源の中から自由に選択することができる。第２の光源２には、例えば、半導体レーザーや固体レーザー等の波長の線幅の短い光源を採用することができる。線幅の短い波長とは、例えば、５３２ｎｍ、７８５ｎｍ、１０６４ｎｍ等である。
【００１６】
ラマン散乱光測定装置Ｄ１では、第２の光源２から、ラマン散乱光測定用チップ３ａに収容された試料へ励起光（図１、矢印Ｌ２１）が照射される。励起光は、結像レンズ４２、対物レンズ４１を介して試料に照射され、励起光が照射された試料からはラマン散乱光（図１、矢印Ｌ２２）が生じる。このラマン散乱光は、対物レンズ４１及び結像レンズ４２を介してラマン散乱光検出部５２で検出される。また、例えば、ラマン散乱光検出部５２に、分光器や光検出器を備えることにより、ラマン散乱光検出部５２に入射したラマン散乱光を分光して、スペクトルとして検出してもよい。
【００１７】
この他、ラマン散乱光測定装置Ｄ１には、ラマン散乱光測定のための光路と、試料を透過した後の照明光、又は試料により回折散乱した照明光を撮像部５１へ導光するための光路の一部を共有するための光路切機構４３が備えられていてもよい。また、ラマン散乱光測定装置Ｄ１においては、絞りやミラー等、公知の顕微鏡等に備えられる構成を、必要に応じて適宜採用することもできる。さらに、撮像部５１は、取得した試料の像をユーザが視認できるように、モニター等の表示装置に接続されていてもよい。
【００１８】
（３）ラマン散乱光測定用チップ
ラマン散乱光測定用チップ３ａは、ラマン散乱光測定装置Ｄ１において、測定対象の試料を収容するための構成である。図２に、ラマン散乱光測定用チップ３ａの構成を模式的に示す。図２Ａは、図１に示すラマン散乱光測定用チップ３ａの平面図であり、図２Ｂは、図２ＡのＰ１−Ｐ１線の矢視断面図である。
【００１９】
本開示において「チップ」とは、後述する基材を含んで構成され、試料を収容する領域や、試料を測定する測定部等の各構造を備えるものである。また、後述する第３実施形態におけるラマン散乱光測定用チップのように、「チップ」には、流路等の微細構造が設けられていてもよい。
【００２０】
ラマン散乱光測定用チップ３ａは、図２Ａに示すように、少なくとも測定部３１を有する。そして、測定部３１は、基材３１１と、基材３１１に対向して配置された試料保持部３１２と、基材３１１と試料保持部３１２との間に設けられた試料収容部３１３と、を有する。測定部３１の各構成について順に説明する。なお、ラマン散乱光測定用チップ３ａ全体に対して測定部３１が占める割合は、図２に示す割合には限定されない。測定部３１の大きさは、測定対象とする試料の大きさやラマン散乱光測定装置Ｄ１の大きさ等に応じて適宜設計できる。
【００２１】
＜基材＞
基材３１１は、ラマン散乱光測定用チップ３ａにおいて、試料保持部３１２と共に試料収容部３１３を形成するための構成である。また、基材３１１の、試料収容部３１３と接する面Ｆ１には、光波長選択領域３１１ａが形成されている。
【００２２】
基材３１１は、例えば、図２Ｂに示すような板状の部材であってもよく、ブロック状であってもよい。光波長選択領域３１１ａが後述する特性を備えることができる限り、基材３１１の形状は特に限定されない。また、光波長選択領域３１１ａが後述する特性を備えるように構成される限り、基材３１１の材質についても、公知の材料の中から適宜採用できる。基材３１１の材料としては、例えば、「Ｂ２７０」（高透明度クラウンガラス）や「ＢＫ７」（硼珪酸ガラス）などの白板ガラス等が挙げられる。
【００２３】
図３Ａ及び図３Ｂは、図２Ｂに示す断面図と同様に、図２Ａに示すＰ１−Ｐ１線の矢視断面図である。また、図３Ａ及び図３Ｂに示すラマン散乱光測定用チップ３ａは、試料収容部３１３に試料Ｓが収容された状態を示す。
【００２４】
図３Ａ及び図３Ｂに示すように、光波長選択領域３１１ａは、基材３１１側から試料収容部３１３内の試料Ｓへ照射された照明光（図３Ａ、矢印Ｌ１１）を透過する。加えて、光波長選択領域３１１ａは、試料保持部３１２側から試料収容部３１３内の試料Ｓへ照射された励起光（図３Ｂ、矢印Ｌ２１）によって試料Ｓから発せられるラマン散乱光（図３Ｂ、矢印Ｌ２２ｂ）を反射する。即ち、光波長選択領域３１１ａは、光を、その波長に応じて、透過させたり反射したりする領域である。
【００２５】
光波長選択領域３１１ａを上述した特性を備える領域とするために、例えば、基材３１１の試料収容部３１３と接する面Ｆ１に、光学膜が形成されていてもよい。また、基材３１１とは別の部材に光学膜体が形成されて、当該部材を試料収容部３１３と接する面Ｆ１に設けて、基材３１１に光波長選択領域３１１ａを形成することもできる。
【００２６】
光学膜としては、例えば公知の光学フィルタの中から、試料の特性や励起光の波長等に合わせて、適切なものを採用することができる。光学フィルタとしては、例えば、短い波長帯の光を透過する一方、長い波長帯の光を透過させないショートパスフィルタが挙げられる。また、長い波長帯の光を透過する一方、短い波長帯の光を透過させないロングパスフィルタを採用することもできる。
【００２７】
一例として、第２の光源２から発せられる励起光（図３Ｂ、矢印Ｌ２１）の波長が７８５ｎｍであり、ラマン散乱光検出部５２において、ストークスラマン散乱光を４０００ｃｍ−１程度のシフトまで測定する場合を想定する。この場合、７８５ｎｍを切替波長とするショートパスフィルタを採用することにより、反射する波長帯を７８５ｎｍより長くし、かつ、透過する波長帯を７８５ｎｍ以下とする、光波長選択領域３１１ａを基材３１１に形成することができる。また、第１の光源１から発せられる照明光についても、７８５ｎｍ以下の光が、光波長選択領域３１１ａを透過する。このように、光波長選択領域３１１ａは、照明光（図１、矢印Ｌ１１参照）を透過して、ラマン散乱光を反射させることができる。
【００２８】
また、一例として、第２の光源２から発せられる励起光（図３Ｂ、矢印Ｌ２１）の波長が５３２ｎｍであり、ラマン散乱光検出部５２において、ストークスラマン散乱光を４０００ｃｍ−１程度のシフトまで測定する場合を想定する。この場合、例えば、５３２ｎｍを切替波長とするショートパスフィルタを採用することにより、光波長選択領域３１１ａにおいて反射される波長帯を５３２ｎｍより長くすることができる。また、例えば、６７６ｎｍを切替波長とするロングパスフィルタを採用することにより、光波長選択領域３１１ａにおいて反射される波長帯を６７６ｎｍ未満とすることができる。このように、５３２ｎｍを切替波長とするショートパスフィルタ、又は６７６ｎｍを切替波長とするロングパスフィルタを光波長選択領域３１１ａに採用することにより、光波長選択領域３１１ａにおいて、測定対象とする波長帯のラマン散乱光を反射させることができる。
【００２９】
なお、光学膜については、設計上の切替波長を境に完全に反射と透過を切り替えることは困難であるため、設計や製造による光学特性のだれを考慮してもよい。例えば、上述した励起光の波長を７８５ｎｍとする場合には、切替波長を７８５ｎｍより短波長側に設定することが望ましい。
【００３０】
ラマン散乱光測定用チップ３ａでは、上述した光波長選択領域３１１ａが基材３１１に形成されていることにより、測定部３において照射光（図３Ａ、矢印Ｌ１１）を試料収容部３１３に収容された試料Ｓに照射することが可能となる。また、試料Ｓから発せられたラマン散乱光（図３Ｂ、矢印Ｌ２２ａ，Ｌ２２ｂ）のうち、基材３１１側へ発せられたラマン散乱光（図３、矢印Ｌ２２ｂ）は、光波長選択領域３１１ａにおいて反射できるようになる。
【００３１】
上述した光波長選択領域３１１ａは、さらに、第２の光源２から発せられる励起光（図３Ｂ、矢印Ｌ２１）を反射するように構成されていてもよい。励起光が反射することにより、試料Ｓに繰り返し励起光が照射され、試料Ｓから発せられるラマン散乱光（図３Ｂ、矢印Ｌ２２ａ，Ｌ２２ｂ）を増強することができる。光波長選択領域３１１ａにおける励起光の反射率は、試料Ｓから発せられるラマン散乱光の強度や、励起光のラマン散乱光検出部５２への漏れ込み強度等に合わせて適宜設定できる。
【００３２】
＜試料保持部＞
試料保持部３１２は、ラマン散乱光測定用チップ３ａにおいて、基材３１１と共に、試料収容部３１３を形成するための構成である（図２Ｂ参照）。また、ラマン散乱光測定用チップ３ａに収容された試料Ｓは、試料保持部３１２の、試料収容部３１３と接する面Ｆ２に保持することができる。
【００３３】
試料保持部３１２は、少なくとも光波長選択領域３１１ａと対向する部分（対向部分）３１２ａが光透過性を有する。試料保持部３１２の材質は、対向部分３１２ａに光透過性を有する限り、公知の材料の中から適宜採用できる。例えば、ガラス等、光透過性を有する材料を対向部分３１２ａに用いることで、試料保持部３１２においては、少なくとも対向部分３１２ａに光透過性を備えることができる。また、光透過性を有する材料を試料保持部３１２として用いることにより、試料保持部３１２全体が光透過性を有するように構成されていてもよい。
【００３４】
試料保持部３１２には、例えば、合成石英ガラス等の合成石英からなる部材や、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）等を用いることが好ましい。これらは、光透過性を有しているため、試料保持部３１２として用いることにより、試料保持部３１２全体に光透過性を備えることができる。さらに、合成石英からなる部材やＰＤＭＳから発せられるラマン散乱光は、特定の波数帯に強いピークを生じないため、試料Ｓのラマン散乱光を測定する際に、試料保持部３１２から発せられるラマン散乱光に由来するノイズを低減できる。特に、合成石英からなる部材は、広い波数帯で測定されるラマンスペクトルが平坦であるため、試料保持部３１２に合成石英からなる部材を採用することにより、試料保持部３１２に由来するノイズを抑えて、より感度高く試料Ｓのラマン散乱光を測定することができる。なお、合成石英からなる部材やＰＤＭＳを、試料保持部３１２の対向部分３１２ａにのみ用いることもできる。
【００３５】
試料Ｓのラマン散乱光測定において試料保持部３１２に由来するノイズを低減するため、試料保持部３１２の少なくとも試料Ｓとの接触部分に、高い強度でラマン散乱光を発しない材料が備えられていてもよい。このような材料としては、例えば、ゲル状物質が挙げられる。ゲル状物質は、液体成分と、当該液体成分を保持するためのゲル化成分と、から構成される。ゲル化成分としては、例えば、合成高分子であるポリアクリル酸や、コラーゲン等の細胞外基質を構成するタンパク質、アガロース等の多糖類が挙げられる。
【００３６】
上述した試料保持部３１２では、対向部分３１２ａが光透過性を有することにより、試料を透過した後の照明光、又は試料により回折散乱した照明光（図３Ａ、矢印Ｌ１２）を透過させることができる。この結果、ラマン散乱光測定装置Ｄ１を用いた試料Ｓの測定では、試料Ｓの像を撮像することができる。
【００３７】
また、図３Ｂに示すように、ラマン散乱光測定用チップ３ａでは、対向部分３１２ａが光透過性を有することにより、試料収容部３１３に収容された試料Ｓへ励起光（図３Ｂ、矢印Ｌ２１）を照射することができる。
【００３８】
＜試料収容部＞
試料収容部３１３は、ラマン散乱光測定用チップ３ａにおいて、試料を収容するための領域である（図２Ａ及び図２Ｂ再度参照）。また、図２Ｂに示すラマン散乱光測定用チップ３ａでは、試料収容部３１３は、基材３１１と試料保持部３１２との間に形成された空隙として形成されている。このような空隙は、例えば、図２Ｂに示すように、基材３１１と試料保持部３１２との間にスペーサー３１３ａを配置することで、形成することができる。スペーサー３１３ａの高さｈは、収容する試料の大きさや性質などに応じて適宜設定することができる。
【００３９】
本開示の第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１において、試料は、ラマン散乱光を分析に用いることが可能な試料であれば、その種類は特に限定されない。試料としては、例えば、高分子材料や金属化合物、生体試料などが挙げられる。また、試料については、細胞を含むものとすることもできる。細胞のラマン散乱光を測定する際には、染色等の前処理を行うことなく個々の細胞を測定することもできるため、細胞をより簡便に分析することができる。このため、ラマン散乱光測定装置Ｄ１は細胞の分析に好適に用いられ得る。試料Ｓに細胞が含まれる場合、例えば、試料保持部３１２の試料収容部３１３と接する面Ｆ２など、試料保持部３１２の試料Ｓとの接触部分には、細胞外基質が備えられていてもよい（図２Ｂ、図３Ａ参照）。
【００４０】
試料収容部３１３への試料Ｓの導入は、例えば、試料収容部３１３の高さｈが十分に細い場合には、毛細管現象を利用して試料Ｓを含む液体を導入することもできる。また、毛細管現象を利用して試料Ｓを導入する場合には、試料Ｓの導入をより簡便にするために、ラマン散乱光測定用チップ３ａは、試料保持部３１２と基材３１１とが重なり合わない部分を有している方が好ましい（図２Ａ及び図２Ｂ参照）。
【００４１】
本開示の第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１では、ラマン散乱光測定用チップ３ａに測定部３１が設けられている。測定部３１には、ラマン散乱光を反射する光波長選択領域３１１ａが形成され、光波長選択領域３１１ａと対向する部分３１２ａは、光透過性を有する。このため、試料Ｓから発せられるラマン散乱光が微弱な場合であっても、全方向に発せられるラマン散乱光のうち、基材３１１側へ発せられるラマン散乱光についても光波長選択領域３１１ａによって反射させて、ラマン散乱光検出部５２へ導光することができる。この結果、ラマン散乱光測定装置Ｄ１では、より高感度にラマン散乱光を測定できる。
【００４２】
さらに、第２の光源２から発せられる励起光についても光波長選択領域３１１ａにおいて反射するように構成した場合、反射した励起光が試料Ｓに再び照射され、試料Ｓからラマン散乱光が再度発せられる。このため、より効率的に試料Ｓのラマン散乱光を測定できる。
【００４３】
また、例えば、金を基材３１１にコートした場合、金のコーティング部分は、上述した励起光及びラマン散乱光を反射することができ、測定されるラマン散乱光の強度を高めることができる。しかし、金のコーティング部分は、照明光を透過できないため、照明光の照射による試料Ｓの撮像が困難となる。これに対して、第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１では、ラマン散乱光測定用チップ３ａに設けられた測定部３１の光波長選択領域３１１ａが照明光を透過する。
【００４４】
このため、ラマン散乱光測定装置Ｄ１では、ラマン散乱光の測定のみならず、照明光を照射された試料Ｓの像を撮像することもできる。従って、照明光による試料Ｓの観察と、試料Ｓから発せられるラマン散乱光の取得を一台の装置で両立することができる。この結果、撮像された試料Ｓの像に基づき、予め試料Ｓの位置を特定することができるため、試料Ｓ中に複数の測定対象が含まれている場合であっても、特定の測定対象、又は特定の測定対象部位に対してのみラマン散乱分光測定を行うことができ、ラマン散乱光の高速な測定を実現できる。
【００４５】
また、上述した本実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１では、試料保持部３１２は、試料に対して、第２の光源２からの励起光が入射する側に配置されるため、試料保持部３１２から発せられるラマン散乱光がノイズとなるおそれがある。例えば、上述した合成石英なる部材等を試料保持部３１２として用いることにより、ノイズを低減して試料Ｓから発せられるラマン散乱光をより感度高く測定することができる。
【００４６】
２．第１実施形態の変形実施形態
図４に、第１実施形態の変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１１に備えられるラマン散乱光測定用チップ３ｂを示す。図４Ａは、ラマン散乱光測定用チップ３ｂの平面模式図であり、図４Ｂは、図４ＡのＰ２−Ｐ２線の矢視断面図である。なお、ラマン散乱光測定用チップ３ｂ以外の構成は、第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同一であるため、その説明は省略する。また、ラマン散乱光測定用チップ３ｂの各構成のうち、第１実施形態と同一の構成については同一の符号を付し、その説明は省略する。
【００４７】
＜ラマン散乱光測定用チップ＞
本変形実施形態のラマン散乱光測定用チップ３ｂは、試料保持部３１２１及び試料収容部３１３１が共に細胞外基質からなる。このため、図４Ｂに示すように、試料Ｓは、試料収容部３１３１を構成する細胞外基質に包埋された状態で、ラマン散乱光測定用チップ３ｂに収容されている。また、試料保持部３１２１を構成する細胞外基質と試料収容部３１３１を構成する細胞外基質については、各々、種類の異なる細胞外基質とすることもできるが、同じ細胞外基質を用いて、一体成形することもできる。
【００４８】
細胞外基質からなるゲルは、分子構造が緩いため、ゲル自体からのラマン散乱光に由来するスペクトルは平坦となる。このため、細胞外基質から発せられるラマン散乱光は、試料からのラマンスペクトルに対してノイズとなり難い。また、試料Ｓに細胞が含まれる場合には、細胞外基質によって、細胞の周囲とのガス交換が可能となる。
【００４９】
細胞外基質は、試料Ｓとする細胞の種類等に合わせて適宜選択することができる。細胞外基質としては、例えば、コラーゲン、ゼラチン等が挙げられる。また、細胞外基質以外でも、例えば、試料保持部３１２１及び試料収容部３１３１を共にアガロースで構成することもできる。これらの細胞外基質やアガロース等の濃度は、試料Ｓとする細胞の性質等に合わせて適宜設定できる。
【００５０】
ラマン散乱光測定用チップ３ｂを用いる場合には、例えば、細胞外基質と試料Ｓとを予め混合した後、当該試料Ｓを細胞外基質と共に基材３１１の上に積層することにより、測定に用いることができる。なお、本変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１１においては、基材３１１側から試料収容部３１３１内の試料Ｓへ照明光が照射され、かつ試料保持部３１２１側から試料収容部３１３１内の試料Ｓへ励起光が照射されるように構成されている限り、ラマン散乱光測定用チップ３ｂの載置の向きは限定されない。例えば、上述した細胞外基質やアガロースの濃度等により、試料保持部３１２１及び試料収容部３１３１の流動性が高い場合には、第１の光源１、第２の光源２等の配置を変えるなどすることにより、基材３１１を下方にしてラマン散乱光を測定することもできる。
【００５１】
本変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１１においては、試料保持部３１２１及び試料収容部３１３１を、共に細胞外基質で構成することにより、試料保持部３１２１から発せられるラマン散乱光に由来するノイズを低減して、試料Ｓのラマン散乱光をより感度高く測定できる。さらに、試料Ｓが細胞を含む場合には、試料Ｓ周辺におけるガス交換が可能となるため、比較的長期間、細胞培養を行いながらラマン散乱の測定を行うことができる。第１実施形態の変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１１の他の効果は、上述した第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同様である。
【００５２】
３．第２実施形態
図５は、本開示の第２実施形態に係るラマン散乱光測定装置の構成例を示す模式図である。図５中、符号Ｄ２で示すラマン散乱光測定装置は、照明光及び励起光の照射位置とラマン散乱光測定用チップ３ａの水平方向における相対位置を変化させる駆動機構６を備える。なお、第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同一の構成については同一の符号を付し、その説明は省略する。
【００５３】
＜駆動機構＞
図５に示す駆動機構６は、ラマン散乱光測定用チップ３ａを矢印Ｘ１で示す方向へ移動させるための構成である。ラマン散乱光測定用チップ３ａが移動することにより、照明光及び励起光の照射位置が変化する。即ち、ラマン散乱光測定用チップ３ａにおける光波長選択領域３１１ａ広がり方向へ照明光及び励起光を走査しながら試料Ｓから発せられるラマン散乱光を測定することができる。
【００５４】
ラマン散乱光測定装置Ｄ２において、駆動機構６は、照明光及び励起光の照射位置とラマン散乱光測定用チップ３ａの、水平方向における相対位置を変化させることが可能であればよく、駆動機構６は、図５示す構成には限定されない。駆動機構６は、例えば公知の走査型顕微鏡等の構成から適宜設計できる。
【００５５】
例えば、駆動機構６としてガルバノミラー等を採用して、ミラーの回転によって、照明光及び励起光の照射位置を変化させてもよい。この他、駆動部６によって、ラマン散乱光測定用チップ３ａの代わりに第１の光源１、第２の光源及び撮像部５１等を移動させて、散乱光測定用チップ３ａにおける照明光及び励起光の照射位置を変化させてもよい。また、ラマン散乱光測定装置Ｄ１においては、ラマン散乱光測定用チップ３ａと、第１の光源１等の光学系の両方が移動可能となるように駆動部６が構成されていてもよい。
【００５６】
図５に示す駆動機構６の構成では、一軸方向における相対位置の変化を示したが、直行する２軸に関して、移動可能となるように駆動機構６が構成されていてもよい。この結果、相対位置を２次元的に変化させて試料Ｓを測定できる。また、ラマン散乱光測定装置Ｄ２において、第１の光源１及び第２の光源２は、ライン光源として構成されていてもよい。この場合、駆動機構６による相対位置の変化が一軸方向のみであっても、２次元的に相対位置を変化させた場合と同じように、試料Ｓを測定できる。
【００５７】
本実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ２では、照明光及び励起光の照射位置とラマン散乱光測定用チップ３ａの水平方向における相対位置を変化させることができる。このため、撮像位置やラマン散乱光の測定位置を走査しながら、撮像又は測定を行うことができ、試料Ｓ内でのラマン散乱光の分布を得ることもできる。第２実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ２の他の効果は、上述した第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同様である。
【００５８】
４．第３実施形態
図６は、本開示の第３実施形態に係るラマン散乱光測定装置の一例を示す模式図である。図６中符号Ｄ３で示すラマン散乱光測定装置は、ラマン散乱光測定用チップ３ｃを有する。さらに、ラマン散乱光測定装置Ｄ３は、後述するラマン散乱光測定用チップ３ｃ内に設けられた流路に試料Ｓを通流させるための構成として、送液部７１，７２を有していてもよい。
【００５９】
ラマン散乱光測定装置Ｄ３において、ラマン散乱光測定用チップ３ｃと送流部７１，７２以外の構成は、上述した第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同一の構成である。第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同一の構成については同一の符号を付し、その説明は省略する。
【００６０】
＜ラマン散乱光測定用チップ＞
図７にラマン散乱光測定用チップ３ｃの構成を模式的に示す。図７Ａは、図６に示すラマン散乱光測定用チップ３ｃの平面図であり、図７Ｂは、図７ＡのＰ３−Ｐ３線の矢視断面図である。図７Ａに示すように、ラマン散乱光測定用チップ３ｃは、第１空間（第１の空間）３２１と、第２空間（第２の空間）３２２と、第１空間３２１と第２空間３２２とを連絡する流路３４と、を有し、流路３４に測定部３１が形成されている。
【００６１】
ラマン散乱光測定用チップ３ｃにおいて、第１空間３２１と第２空間３２２は、試料Ｓを収容するための空間である。また、流路３４は、試料Ｓを第１空間３２１から第２空間３２２へ通流させるための構成である。
【００６２】
図７Ｂに示すラマン散乱光測定用チップ３ｃでは、第１空間３２１、第２の空間３２２及び流路３４は、共に試料保持部３１２に形成された溝として構成されている。試料保持部３１２への、第１空間３２１、第２空間３２２及び流路３４の成形は、マイクロチップ等における微細加工技術等によって行うことができる。そして、流路３４の少なくとも一部には、上述した測定部３１が形成されている。また、測定部３１の流路３４に対する大きさは、測定対象とする試料の大きさ等に合わせて、適宜設定できる。例えば、流路３４の大きさは、試料Ｓを、測定対象とする単位に分けて通流させることができる大きさに形成されていることが好ましい。
【００６３】
また、上述した測定部３１の機能を損なわない限り、第１空間３２１、第２空間３２２及び流路３４の構成は、基材３１１側に設けられていてもよく、一部が基材３１１に設けられ、他の部分が試料保持部３１２に設けられていてもよい。光波長選択領域の３１１ａにおける波長選択性の精度を十分に確保するためには、基材３１１の光波長選択領域が形成される部分は平坦であることが好ましいため、流路４３等の微細構造は、試料保持部３１２へ成形することが好ましい。
【００６４】
ラマン散乱光測定装置Ｄ３を用いた試料Ｓの測定では、ラマン散乱光測定用チップ３ｃにおいて、先ず、試料Ｓ１を含む液体が導入口３２１１から第１空間３２１へ導入される（図７Ｂ）。その後、試料Ｓ１は、流路３４を通流して（矢印Ｘ２参照）、測定部３１まで達する（試料Ｓ２参照）。そして、試料Ｓ２に対しては、測定部３１を通過する際、撮像とラマン散乱光の測定が行われる。撮像とラマン散乱光の測定については上述した通りである。測定部３１を通過した試料Ｓ３は、流路３４を通流して（矢印Ｘ３参照）、第２空間３２２に達し、第２空間３２２に収容される。
【００６５】
＜送液部＞
送液部７１，７２は、ラマン散乱光測定装置Ｄ３において、試料Ｓを含む液体を第１空間３２１へ導入して、流路３４を通流させ、第２空間３２２へ送流するための構成である（図６再度参照）。液体は、送液部７１，７２としては、例えば、送液ポンプ等を採用することができる。また、送液部７１，７２は、試料Ｓを収容する容器や、廃液を回収する容器と連結することにより、流路３４内に試料Ｓを連続的に通流させることもできる。なお、流路３４を通流した液体は、第２空間３２２に排出口３２２１を設けることにより排出することもできる。
【００６６】
本実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３では、ラマン散乱光測定用チップ３ｃに流路３４を形成して、試料Ｓを通流させることにより、上述した第２実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ２における駆動機構６を有していない場合であっても、試料Ｓを連続的に測定することができる。ラマン散乱光測定装置Ｄ３は、例えば、液体によって通流可能な粒子状の試料Ｓに対して好適であり、このような試料Ｓとしては、例えば細胞懸濁液が挙げられる。第３実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３の他の効果は、上述した第１実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ１と同様である。
【００６７】
５．第３実施形態の変形実施形態
図８に、第３実施形態の変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３１に備えられるラマン散乱光測定用チップ３ｄを示す。図８Ａは、ラマン散乱光測定用チップ３ｄの平面模式図であり、図８Ｂは、図８Ａに示すＰ４−Ｐ４線の矢視断面図である。なお、ラマン散乱光測定用チップ３ｄと、後述する分取部８以外の構成は、第３実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３と同一であるため、その説明は省略する。また、ラマン散乱光測定用チップ３ｄの各構成のうち、第３実施形態と同一の構成については同一の符号を付し、その説明は省略する。
【００６８】
＜ラマン散乱光測定用チップ＞
図８Ａに示すように、ラマン散乱光測定用チップ３ｄにおいて、流路３４は分岐部３５を有し、第１空間３２１及び第２空間３２２は、分岐部３５を介して第３空間（第３の空間）３２３と連絡している。第３空間３２３は、上述した第１空間３２１及び第２空間３２２と同様に、試料Ｓを収容するための空間である。なお、第３空間についても、第２空間３２２と同様に、排出口３２３１を設けることができる。
【００６９】
第３空間３２３は、上述した第１空間３２１等と同様に、試料保持部３１２に成形することができる。また、成形方法についても上述した通りである。この他、ラマン散乱光測定用チップ３ｄにおいては、分岐部３５と測定部３１との間の流路３４に、後述する分取部８の構成の一部が挿入されていてもよい。
【００７０】
＜分取部＞
分取部８は、ラマン散乱光測定用チップ３ｄにおいて、流路３４を通流した試料Ｓを、当該試料Ｓの測定結果に応じて、第２空間３２２又は第３区間３２３のいずれか一方に通流させるための構成である。分取部８の構成は、試料を測定結果に応じて、所望の空間へ集めることができればよく、公知の構成から自由に設計することができる。例えば、測定部３１と分岐部３５の間の流路３４に、試料Ｓに対して、測定結果に応じて電荷を付与するための荷電部を設け（図８において荷電部は不図示）、分取部８に電極対８１，８１を設けることで、電荷が付与された試料Ｓを、その電荷に応じて所望の空間へ通流させることができる。
【００７１】
なお、図８Ａに示すラマン散乱光測定用チップ３ｄでは、分岐部３５が１カ所設けられた例を示しているが、複数の分岐部３５を設け、各々と連絡する空間を設けることにより試料Ｓを３つ以上に分けることも可能である。
【００７２】
本変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３１では、ラマン散乱光測定用チップ３ｄに第３空間３２３及び分岐部３５が設けられていることにより、測定部３１によって行われた測定の後、試料Ｓを２つに分けることができる。さらに、ラマン散乱光測定装置Ｄ３１に分取部８が設けられることにより、ラマン散乱光の測定結果に応じて、試料Ｓを２つに分けることができる。このため、測定結果に応じた試料Ｓの回収をより簡便に行うことができる。第３実施形態の変形実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３１の他の効果は、上述した第３実施形態に係るラマン散乱光測定装置Ｄ３と同様である。
【００７３】
なお、上記に記載された効果はあくまで例示であって、限定されるものではなく、また他の効果があってもよい。
【００７４】
本開示は、以下のような構成もとることができる。
（１）基材と、前記基材に対向して配置された試料保持部と、前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有するラマン散乱光測定用チップ。
（２）さらに前記光波長選択領域は前記励起光を反射する上記（１）に記載のラマン散乱光測定用チップ。
（３）前記試料保持部全体が光透過性を有する上記（１）又は（２）に記載のラマン散乱光測定用チップ。
（４）前記試料保持部は少なくとも前記試料との接触部分にゲル状物質を備える上記（１）〜（３）のいずれかに記載のラマン散乱光測定用チップ。
（５）前記試料保持部は、合成石英からなる上記（３）に記載のラマン散乱光測定用チップ。
（６）第１の空間と、第２の空間と、前記第１の空間と前記第２の空間とを連絡する流路と、を有し、前記流路に前記測定部が形成されている
上記（１）〜（５）のいずれかに記載のラマン散乱光測定用チップ。
（７）前記流路は分岐部を有し、前記第１の空間及び前記第２の空間は前記分岐部を介して第３の空間と連絡している上記（６）に記載のラマン散乱光測定用チップ。
（８）前記試料は細胞を含む上記（１）〜（７）のいずれかに記載のラマン散乱光測定用チップ。
（９）前記試料保持部は少なくとも前記試料との接触部分に細胞外基質を備える上記（８）に記載のラマン散乱光測定用チップ。
（１０）前記試料保持部及び前記試料収容部は共に細胞外基質からなる上記（８）に記載のラマン散乱光測定用チップ。
（１１）基材と、前記基材に対向して配置された試料保持部と、前記基材と前記試料保持部との間に設けられた試料収容部と、を有する測定部を備え、前記基材の前記試料収容部と接する面に、前記基材側から前記試料収容部内の前記試料へ照射される照明光を透過し、かつ前記試料保持部側から前記試料収容部内の前記試料へ照射された励起光によって前記試料から発せられるラマン散乱光を反射する光波長選択領域が形成され、前記試料保持部は少なくとも前記光波長選択領域と対向する部分が光透過性を有するラマン散乱光測定用チップと、前記光波長選択領域へ前記照明光を照射する第１の光源と、前記光波長選択領域と対向する部分に前記励起光を照射する第２の光源と、を有するラマン散乱光測定装置。
（１２）前記照明光及び前記励起光の照射位置と前記ラマン散乱光測定用チップの水平方向における相対位置を変化させる駆動機構を備える上記（１１）に記載のラマン散乱光測定装置。
【実施例】
【００７５】
１．実験例１
本実験例では、基材に光学膜を形成することにより、試料から発せられるラマン散乱光の測定の感度が向上するか検証した。
【００７６】
＜材料と方法＞
本実験例では、試料としてポリスチレン製の球（直径６μｍ）を用いた（図９、Ｓ参照）。試料Ｓを、金をコートした基材、光学膜としてショートパスフィルタ（切替波長７５０ｎｍ）を形成した基材、及び合成石英ガラスの、各々の上に載せて（図９、３１１参照）、試料側から励起光（波長７８５ｎｍ、図９、Ｌ２１参照）を照射してラマン散乱光（図９、Ｌ２２参照）を測定した。また、ラマン散乱光については、分光して、ラマンスペクトルを得た。
【００７７】
＜結果＞
本実験例の結果を図１０に示す。図１０の横軸は、ラマンシフト（ｃｍ−１）を示し、縦軸は、強度（ａ．ｕ．）を示す。金をコートした基材上に試料Ｓを載せてラマン散乱光を測定すると、最も感度良くラマン散乱光を検出できた。これは、金が、励起光とラマン散乱光の両方を反射するためである。また、金をコートした基材を用いた場合、１０００ｃｍ−１におけるピーク強度は５９３３．２１９であった。また、ショートパスフィルタが形成された基材に試料Ｓを載せてラマン散乱光を測定すると、１０００ｃｍ−１におけるピーク強度は、３９２４．６８１であった。これは、合成石英ガラスを用いた場合の１０００ｃｍ−１におけるピーク強度（４１２．３２７４）に比べて９．５倍程度高い値である。一方、合成石英は、励起光とラマン散乱光のいずれも反射しないため、測定されたラマン散乱光は他の基材に比べて微弱であった。
【００７８】
本実験例の結果、光学膜が形成された基材に試料を載せてラマン散乱光を測定すると、試料から発せられるラマン散乱光が反射し、反射しない基材に比べて高感度にラマン散乱光を検出できることが明らかとなった。
【００７９】
２．実験例２
本実験例では、ラマン散乱光測定用チップの試料保持部に好適な材料を検討した。
【００８０】
＜材料と方法＞
合成石英ガラス、金をコートした基材、及びスライドガラス（水板ガラス）の各々に対して励起光（７８５ｎｍ）を照射して、ラマン散乱光を測定した。また、ラマン散乱光については、分光して、ラマンスペクトルを得た。
【００８１】
＜結果＞
図１１に本実験例の結果を示す。図１１の横軸は、ラマンシフト（ｃｍ−１）を示し、縦軸は、強度（ａ．ｕ．）を示す。スライドガラスからは広範囲の波数に渡って強いラマン散乱が発せられることが示された。一方、金がコーティングされた基材では、ラマン散乱分光スペクトルが全波数に渡っておよそ平坦であった。また、合成石英ガラスも、金がコーティングされた基材と同様に、全波数に渡ってラマン散乱分光スペクトルが平坦であった。従って、石英ガラス等、光透過性を有する合成石英からなる部材は、試料保持部に好適であることが示された。
【００８２】
３．実験例３
本実験例では、ラマン散乱光測定用チップの試料保持部に好適な材料を検討した。
【００８３】
＜材料と方法＞
ポリスチレン製の培養ディッシュ及び板状のポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）の各々に対して励起光（７８５ｎｍ）を照射して、ラマン散乱光を測定した。また、ラマン散乱光については、分光して、ラマンスペクトルを得た。
【００８４】
＜結果＞
図１２に本実験例の結果を示す。図１２の横軸は、ラマンシフト（ｃｍ−１）を示し、縦軸は、強度（ａ．ｕ．）を示す。また、図１２において、破線はポリスチレン製の培養ディッシュ（ＰＳ）を示し、実線はＰＤＭＳを示す。図１２に示すように、ポリスチレンから得られたラマンスペクトルにおいては、複数の波数帯で強いピークが見られた。一方、ＰＤＭＳのラマンスペクトルは、ＰＳに比べてピークの数も少なく、各ピークの強度も弱かった。従って、ＰＤＭＳは試料保持部の材料として好適であることが示された。特に、ＰＤＭＳに由来するラマンスペクトルのピークが試料から得られるラマンスペクトルのピークから外れていれば、ＰＤＭＳを試料保持部として用いた場合、試料保持部に由来するラマン散乱光の影響を受けることなく、試料のラマン散乱光を測定することができる。
【００８５】
４．実験例４
図１に示す装置を用いて、透過光による試料の撮像と、試料のラマン散乱光の測定を行った。
【００８６】
＜材料と方法＞
本実験例では、図１に示すラマン散乱光測定装置を用いた。また、試料として、骨髄系共通前駆細胞（common myeloid progenitor、ＣＭＰ）と巨核球/赤芽球前駆細胞（megakaryocyte/erythroid progenitor、ＭＥＰ）とが混合されたものを用いた。これらの細胞は、予め固定した後、図３に示すラマン散乱光測定用チップ内に収容した。ラマン散乱光を測定するための励起光には、波長７８５ｎｍの光を用いた。
【００８７】
＜結果＞
図１３及び図１４に本実験例の結果を示す。図１３は、光学倍率４０倍の位相差像の画像である。図１４は位相差観察した各細胞に対してラマン散乱分光測定を行った結果である。図１４の横軸は、ラマンシフト（ｃｍ−１）を示し、縦軸は、強度（ａ．ｕ．）を示す。また、Ａ〜Ｉの各アルファベットは、図１３において、各細胞に付されたアルファベットに対応する。
【００８８】
Ａ〜Ｉの各細胞について測定されたラマン散乱光については、図１４の縦線（図１４、矢印参照）で示す波数において、細胞ごとの違いを捉えることができた。このように、照明光により得た画像に基づき、予めラマン散乱光の測定する位置を決めることで、より効率的にラマン散乱光を測定できる。
【符号の説明】
【００８９】
Ｓ：試料、Ｄ１，Ｄ１１，Ｄ２，Ｄ３，Ｄ３１：ラマン散乱光測定装置、１：第１の光源、２：第２の光源、３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ：ラマン散乱光測定用チップ、３１：測定部、３１１：基材、３１１ａ：光波長選択領域、３１２，３１２１：試料保持部、３１２ａ：対向部分、３１３，３１３１：試料収容部、３１３ａ：スペーサー、３２１：第１空間（第１の空間）、３２１１：導入口、３２２：第２空間（第２の空間）、３２２１：排出口、３２３：第３空間（第３の空間）、３２３１：排出口、３４：流路、３５：分岐部、４１：対物レンズ、４２：結像レンズ、４３：光路切替機構、５１：撮像部、５２：ラマン散乱光検出部、６：駆動部、７１，７２：送液部、８：分取部、８１：電極対
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１４】
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【図１３】
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