(57)【要約】【課題】イネ科植物由来ＰＰＡＲ組成物に含まれる阻害物質を効率よく除去し、活性の高いＰＰＡＲ組成物を得ること。【解決手段】サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物から得られるイネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法であって、前記イネ科植物抽出物を炭素吸着材に接触させる工程を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物から得られるイネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法であって、前記イネ科植物抽出物を炭素吸着材に接触させる工程を含むＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法。
【請求項２】
前記イネ科植物の梢頭部を、アセトンを含む抽出溶媒により抽出し、ＰＰＡＲα活性を有する抽出画分を前記イネ科植物抽出物とする請求項１に記載のＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法。
【請求項３】
前記イネ科植物抽出物をクロマトグラフ法により分離し、ＰＰＡＲ活性阻害物質を除去する工程を含む請求項１または２に記載のＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法。
【請求項４】
サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物から得られるイネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物を炭素吸着材に接触させてあるＰＰＡＲ活性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＰＰＡＲ）活性組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＰＡＲは、ステロイド受容体、レチノイド受容体やサイロイド受容体等と同様、核内受容体スーパーファミリーに属するリガンド依存性の転写因子であり、これまでに組織分布を異にする三種のアイソフォーム（α型、δ（またはβ）型、γ型）がヒトをはじめ種々の動物種で同定されている（非特許文献１を参照）。この内ＰＰＡＲαは、脂肪酸の異化能の高い肝臓や腎臓、骨格筋等に発現しており、特に肝臓において高発現が認められ（非特許文献２を参照）、脂肪酸の代謝や細胞内輸送に関連する遺伝子（たとえば、アシルＣｏＡ合成酵素、脂肪酸結合タンパク質やリポ蛋白リパーゼなど）およびコレステロールや中性脂質の代謝に関連するアポリポ蛋白（ＡＩ、ＡＩＩ、ＣＩＩＩ）遺伝子の発現を正または負に制御している。ＰＰＡＲδは、神経細胞を中心として生体内各組織に普遍的に発現している。現時点ではＰＰＡＲδの生理的意義については不明である。ＰＰＡＲγは、脂肪細胞に高発現していて脂肪細胞の分化に関与している（非特許文献３を参照）。このようにＰＰＡＲの各アイソフォームは特定の臓器や組織において特異的な機能を果たしている。
【０００３】
このようなＰＰＡＲ活性組成物が、イネ科植物に含有されていることは知られており、具体的にモロコシ属植物に含まれているＰＰＡＲ活性組成物の抽出物は特許文献１に記載されている。ところが、一般に、同じ科に属する植物であっても、属が異なる植物が、同種の活性物質を生産するとしても、その活性物質が、他の属の植物から得られた活性物質と同等の活性を有するとは限らず、また、何らかの要因で活性が阻害されている場合もありえる。そのため、このような活性物質を探索する場合には、植物ごとに特有の抽出手法、分離手法を開発しなければならないことも多く、容易に活性物質を開発することができるわけではない。
【０００４】
そこで、本発明者らは、簡易な手法で効率よく得ることができるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性組成物を提供することを目的としてサトウキビ由来のＰＰＡＲ組成物を先に見出している（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−１６１６５６号公報
【特許文献２】特開２０１３−１９３９８７号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １９９２年，  ８９巻，  ４６５３〜４６５７頁
【非特許文献２】Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  １９９６年，  １３７巻，  ３５４〜３６６頁
【非特許文献３】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １９９６年，  ３７巻，  ９０７〜９２５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、特許文献２の構成によると、上記サトウキビ由来ＰＰＡＲ組成物には、阻害物質が含まれることがわかっており、その阻害物質により、ＰＰＡＲ組成物の活性が抑制されているため、この阻害物質を有効に低減させ、ＰＰＡＲ組成物の活性を向上することが求められる。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、上記サトウキビ等イネ科植物由来ＰＰＡＲ組成物に含まれる阻害物質を効率よく除去し、活性の高いＰＰＡＲ組成物を得る点にある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
〔構成１〕
そこで、上記課題を解決するための本発明の特徴構成は、サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物から得られるイネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法であって、前記イネ科植物抽出物を炭素吸着材に接触させる工程を含む点にある。
【００１０】
〔作用効果１〕
上記目的のため本発明者等は、鋭意研究の結果、サトウキビおよびソルガムに充分高いＰＰＡＲ活性物質が含まれていることを明らかにした（特許文献２参照）。特に、サトウキビでは、製糖過程で捨てられている梢頭部から抽出した抽出液にＰＰＡＲ活性を見出した。
【００１１】
この構成において抽出されるＰＰＡＲ活性物質は、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲβ、ＰＰＡＲγいずれも含むことがわかっている。ＰＰＡＲβの生理活性が現状でわかっていないとしても、これら物質は医薬品、機能性食品成分として有効に機能すると考えられるもので、利用性が高い。
【００１２】
このようなイネ科植物抽出液の抽出方法は特に限定されないが、溶媒抽出、水蒸気蒸留、超臨界抽出技術を用いた二酸化炭素による抽出など種々抽出操作を用いることができる。さらに、当該抽出物は、精製して用いることもできるが、飲食品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、または粗抽出物あるいは半精製抽出物のような形態で使用できる。
【００１３】
なお、本発明でいうＰＰＡＲ活性物質とは、ＰＰＡＲのリガンド結合領域に結合する能力（活性）を有する化合物を含む物質であり、ＰＰＡＲ活性組成物とは、このような物質を成分として含有し、上記活性を備えた組成物をさす。ＰＰＡＲリガンド活性は、たとえば、ＰＰＡＲリガンド結合領域とＧＡＬ４との融合タンパクに対する結合をルシフェラーゼの発現で評価するレポーター・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁）や、ＰＰＡＲリガンド結合領域を含むタンパクを用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８１３〜８１９頁）などにより測定することができる。これらのアッセイにおいて、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較し、溶媒対照よりも高い活性を示し、なおかつ用量依存性が認められるサンプルを「ＰＰＡＲ活性あり」と評価する。
【００１４】
また、得られたイネ科植物抽出液には、活性阻害物質を含有していることがわかっている。ＰＰＡＲ活性物質については、物質として構造決定されているものもあるが、実際には活性だけが確認され、構造不明なものも多く、活性阻害物質についても、どのようなＰＰＡＲ活性物質に対して、どのような構造の物質が活性阻害物質として働くのかは明らかになっていない。
【００１５】
しかし本発明者らが鋭意研究した結果、ＰＰＡＲ活性物質が活性阻害物質と共存するＰＰＡＲ活性組成物に炭素吸着材を作用させると、ＰＰＡＲ活性組成物のＰＰＡＲ活性が向上することを見出した。これは、活性阻害物質が炭素吸着材に対して不安定であるか、吸着性が高いのに対し、ＰＰＡＲ活性物質が活性阻害物質に比べて炭素吸着材に対して安定で、吸着しにくいという性質を有していることによると考えられる。この性質を利用することにより、イネ科植物抽出液中から活性阻害物質を除去することができるので、ＰＰＡＲ活性物質の活性が有効に引き出せる。
【００１６】
尚、炭素吸着材としては、多孔質グラファイトカーボン、活性炭、炭素分子ふるい等の種々公知の炭素系材料が利用でき、ＰＰＡＲ活性物質、活性阻害物質に対して同様に作用するものと考えられる。
【００１７】
〔構成２〕
また、イネ科植物の梢頭部をアセトンを含む抽出溶媒により抽出し、ＰＰＡＲα活性を有する抽出画分を前記イネ科植物抽出物としてもよい。
【００１８】
〔作用効果２〕
イネ科植物として、サトウキビ、ソルガム、トウモロコシを対象としてＰＰＡＲ活性物質を抽出する場合、その梢頭部を抽出することによってＰＰＡＲ活性物質が有効に抽出できる。この梢頭部は、たとえばサトウキビにおいては精糖工程で最初に廃棄される部分であり、資源としては容易に確保することができるものである。また、単純に廃棄される廃棄物から、ＰＰＡＲ活性組成物を抽出することができれば、廃棄物の有効利用を図ることができるとともに、廃棄にかかるエネルギーコストの節約につながる。
【００１９】
なお、梢頭部とは、植物の成長する尖端部で、サトウキビであれば、先端から二節程度の糖度の低い部分をさす。サトウキビの梢頭部は、通常廃棄処分されている。
【００２０】
上記ＰＰＡＲ活性物質は、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲβ、ＰＰＡＲγいずれも含むが、現状で最も用途が確立している物質がＰＰＡＲα活性物質である。そこで、後述の実施形態より、サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物の梢頭部をアセトンを含む抽出溶媒により抽出した場合に、特にＰＰＡＲα活性物質が効率よく抽出される。
【００２１】
ＰＰＡＲα活性を有する画分を得ることにより、ＰＰＡＲα活性物質を単離同定し、より活性を高めて利用することができる可能性があり、物質単位にまで単離するまでもなく、ＰＰＡＲ活性組成物として、より活性の高い状態で使用することが可能となる。
【００２２】
〔構成３〕
また、前記イネ科植物抽出物をクロマトグラフ法により分離し、ＰＰＡＲ活性阻害物質を除去する工程を含むことが好ましい。
【００２３】
〔作用効果３〕
前記抽出物のＰＰＡＲ活性を有する画分を、クロマトグラフ法により分離することにより、ＰＰＡＲ活性組成物を活性阻害のない高活性な状態で利用することができるようになる。
【００２４】
なお、クロマトグラフ法によりＰＰＡＲ活性阻害物質を除去する工程は、炭素吸着材に接触させる工程に先立って行ってもよいし、炭素吸着材に接触させる工程の後に行ってもよい。いずれの場合であってもＰＰＡＲ活性阻害物質を除去してＰＰＡＲ活性組成物を高活性な状態とすることができる。
【００２５】
〔構成４〕
また、上記目的を達成するための本発明のＰＰＡＲ活性組成物の特徴構成は、サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物から得られるイネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物を炭素吸着材に接触させてある点にある。
【００２６】
〔作用効果４〕
サトウキビ、ソルガム、トウモロコシから選ばれるいずれかのイネ科植物から得られるイネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物を炭素吸着材に接触させると、上記ＰＰＡＲ活性組成物の活性化方法により活性の高められたものになっているから、より利用効果の高いＰＰＡＲ活性組成物を提供することができる。
【発明の効果】
【００２７】
したがって、サトウキビ等の廃材から少量で有効となるＰＰＡＲ活性成分を得ることができ、メタボリックシンドローム改善の健康食品や飲料および医薬品としての活用が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】カラム分離工程後の各画分のＰＰＡＲα活性を示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下に、本発明のＰＰＡＲ活性組成物を説明する。なお、以下に好適な実施例を記すが、これら実施例はそれぞれ、本発明をより具体的に例示するために記載されたものであって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々変更が可能であり、本発明は、以下の記載に限定されるものではない。
【００３０】
〔ＰＰＡＲ活性組成物の抽出〕
サトウキビの梢頭部を、アセトンを含む抽出溶媒により抽出し（抽出工程）、得られた抽出成分を炭素吸着材に接触させる（吸着工程）さらに、クロロホルム、メタノール混合溶媒を溶出液としたクロマトグラフ法により分離する（カラム分離工程）。これにより、高メタノール溶媒抽出画分として、ＰＰＡＲ活性組成物を抽出することができる。
【００３１】
＜抽出工程＞
サトウキビ梢頭部を選別し、十分に乾燥させたものを細断、粉砕して抽出用試料を得た。試料２０ｇを７０％アセトン４００ｍＬに懸濁し、室温で１６時間撹拌した後遠心分離して上清を回収した。さらに７０％アセトン２００ｍＬに懸濁し、遠心分離して上清を回収する操作を１０回繰り返し、すべての上清を併せて抽出液とした。抽出液は減圧下で濃縮し、１０回分（サトウキビ梢頭部２００ｇ分）をまとめて３００ｍｌまで濃縮し、アセトンを除去した後、ジエチルエーテル２００ｍｌで２回抽出し、減圧下で濃縮乾固させ、２．４３ｇの抽出物（イネ科植物抽出物）を得た。抽出物をクロロホルム２０ｍＬに溶解し、ＰＰＡＲ活性組成物を含有する抽出液を得た。
【００３２】
＜吸着工程＞
得られた抽出液０．５ｍｌを下記グラファイトカーボンカラムに添加した後、さらにメタノール２０ｍＬにて溶出させ、溶出液を濃縮乾固して抽出物を得た。
得られた抽出物を、使用した抽出液０．５ｍＬあたり５ｍＬのクロロホルムに溶解し、ＰＰＡＲ活性組成物を含有する抽出液とした。
【００３３】
（グラファイトカーボンカラム）
カラムサイズ：φ１２ｍｍ  ×  ０．５ｃｍ、
充填剤：ＳａｍｐｌｉＱ  Ｃａｒｂｏｎ  ＳＰＥ（アジレント社製炭素吸着材）
性状：非多孔質
比表面積：１００ｍ2／ｇ
粒径：３７〜１２５μｍ
使用量：５００ｍｇ、
充填溶媒：メタノール
【００３４】
尚、ここでは、グラファイトカーボンは非多孔質のものを採用している。この場合、比表面積は十分大きく、多孔質のものを用いるのに比べてＰＰＡＲ活性組成物の低分子量化合物の非特異的吸着が排除される点で好ましいと考えられる。
【００３５】
また、グラファイトカーボンの粒径は、小さすぎると、圧力損失が大きくなり溶出速度が遅くなり、大きすぎると溶出速度が速くなり除去効率が落ちるから、３０〜４００μｍが好ましい。
【００３６】
＜カラム分離工程＞
前記抽出液１．０ｍＬを１０倍希釈した後、１．０ｍＬを下記シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて表１記載の溶媒を用いて２１画分に分離した。各画分は濃縮乾固後、ＤＭＳ０１００μＬに溶解し、抽出液とした。
【００３７】
（シリカゲルカラム）
カラムサイズ：φ１２ｍｍ  ×  ３ｃｍ、
充填剤：シリカゲル  ６０Ｎ（関東化学社製シリカゲル）
性状：球状、中性、
粒径：４０−５０μｍ
使用量：２．０ｇ、
充填溶媒：クロロホルム
【００３８】
【表１】
2015196651.tif 000003
【００３９】
〔ＰＰＡＲ活性〕
各画分についてＰＰＡＲα活性を調べた結果を図１（グラファイトカーボンカラム処理）に示す。併せて、吸着工程を行うことなく、カラム分離工程を行って得られた抽出液（未処理）についての各画分のＰＰＡＲα活性を示す。活性はＥｎＢｉｏ  ＲＣＡｓｆｏｒｐｐＡＲａ（藤倉化成製）を用いて測定した。結合活性は、陽性対照物質ＧＷ７４６７（終濃度  ５００ｎＭ）の活性を１００とした場合の相対活性（％）で表した。
【００４０】
その結果、第１１画分（図中Ｆｒ．１１、以下同様に対応して記載する）付近でＰＰＡＲα活性が高く、表２に示す濃縮乾固された各画分の重量分布からも、活性の高い物質は、主に第７画分〜第１５画分付近で溶出していることがわかる。
【００４１】
【表２】
2015196651.tif 000004
【００４２】
ここで、図１を参照すると、第１３〜第１５画分のＰＰＡＲα活性が、吸着工程により、大きく向上していることがわかる。全体としては、吸着工程の有無でＰＰＡＲα活性が約３倍に向上していることが別途確認されている。すなわち、重量分布からはＰＰＡＲα活性の高い物質が存在すると推定されるにもかかわらずＰＰＡＲα活性が低い第１３〜第１５画分については、吸着工程を行わない場合に、何らかの物質による活性阻害が生じていることが予想され、吸着工程により、その物質が除去されているものと考えられる。また、同様に、他の画分にも活性阻害物質が含まれていることが考えられるが、他の画分に活性阻害物質が含まれていたとしても、その阻害物質が、カラム分離工程により有効に除去されることが明らかである。
【００４３】
したがって、イネ科植物抽出物をクロマトグラフ法により分離するカラム分離工程だけでは分離できない溶出成分を、炭素吸着材に接触させる吸着工程により有効に除去することができることがわかった。
【００４４】
なお、吸着工程後の第１１画分のＬＣ／ＭＳ分析を行ったところ、既知のＰＰＡＲα活性物質から生じるフラグメントピークが観測されないことから、今般抽出されたＰＰＡＲα活性物質は、ＰＰＡＲα活性物質としては未知の物質であることが明らかになっている。また、阻害物質も未知であることから、炭素吸着材による吸着工程が活性向上に有用であることを見出した点については、今後イネ科植物抽出物を主成分とするＰＰＡＲ活性組成物を利用するうえで有用である。
【００４５】
〔その他〕
上記実施例においては、吸着工程を行う場合にグラファイトカーボンを用いたが、一般的にグラファイトカーボンはカラムの充填剤として用いられ、種々物質に対する吸脱着性能を発揮するものと考えられる炭素質材料であるから、これに限らずグラファイトカーボンと同様の吸脱着性能を発揮するたとえば活性炭、モレキュラーシーブカーボン等の炭素質材料からなる炭素吸着材を用い、イネ科植物抽出物を炭素吸着材に接触させる吸着工程を行うことで同様の効果が期待できることが明らかである。
【００４６】
また、イネ科植物としてサトウキビを用いたが同じイネ科の植物であれば同様のＰＰＡＲ活性物質および阻害物質を含有していることが明らかであるので、ソルガム等他のイネ科植物を利用することも有効である。
【００４７】
また、イネ科植物抽出物を炭素吸着材に接触させる吸着工程はクロマトグラフ法により分離し、ＰＰＡＲ活性阻害物質を除去するカラム分離工程の前に行ったが、吸着工程とカラム分離工程とは必ずしもこの順で行う必要はなく、逆に行ってもよい。また更に、本発明は、その他の分離工程を含むことを妨げるものではない。
【００４８】
また、イネ科植物抽出物を得るための抽出工程を行うための抽出溶媒は、アセトンに限らず、カラム分離工程で用いたクロロホルム等他の溶媒を利用可能であることが明らかであり、中でもＰＰＡＲ活性物質に対する溶解度が高いものが好ましい。
【００４９】
上記実施例においてはＰＰＡＲα活性物質を対象としたがイネ科植物は、ＰＰＡＲα活性物質以外にもＰＰＡＲβ活性物質や、ＰＰＡＲγ活性物質も含有しており、同様の手法（イネ科植物抽出物を炭素吸着材に接触させる吸着工程）により活性化することができる。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
したがって、サトウキビ廃材等からより活性の高いＰＰＡＲ活性成分を得ることができ、たとえば、メタボリックシンドローム改善の健康食品や飲料および医薬品としての活用が可能となる。
【図１】
2015196651.tif 000005