(57)【要約】 【課題】  アルコール発酵飲料又は発酵食品を製造する過程で生じる副産物（発酵粕）から得られるものであって、生体安全性にすぐれた美容用及び健康増進用の機能性素材を提供することを目的する。【解決手段】    本発明は、酒粕から得られる水溶性のスフィンゴ糖脂質、又は当該水溶性のスフィンゴ糖脂質を含む酒粕の抽出物を配合してなる化粧料或いは飲食品であって、格段にすぐれたフィラグリン分解酵素活性促進作用、コラーゲン産生促進作用、及び線維芽細胞賦活作用を有し、これらの相乗作用により、皮膚のシワ、タルミの予防、改善効果、及び皮膚のキメ、ハリ、ツヤの向上効果を有する。【選択図】図１
2015232072.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酒粕に含まれる水溶性スフィンゴ糖脂質。
【請求項２】
酒粕に含まれる水溶性スフィンゴ糖脂質又は当該水溶性スフィンゴ糖脂質を含む酒粕の抽出物を配合してなる化粧料。
【請求項３】
酒粕に含まれる水溶性スフィンゴ糖脂質又は当該水溶性スフィンゴ糖脂質を含む酒粕の抽出物を配合してなる飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酒粕由来の水溶性のスフィンゴ糖脂質、及び当該スフィンゴ糖脂質を含む酒粕の抽出物を有効成分とする化粧料及び飲食品等に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、アルコール発酵飲料や発酵食品を製造する過程で生じる副産物（発酵粕）の利用が提案されており、例えば、酒粕や焼酎粕の抽出物を配合した入浴剤、化粧品、抗酸化剤、アトピー性皮膚炎や湿疹の予防、治療剤が提案されている（特許文献１〜５）。また、発酵粕である大麦焼酎粕、醤油粕又はビール粕から、健康食品や化粧品等の機能性素材として有用なスフィンゴ脂質を製造する方法も提案されている（特許文献６〜９）。
【０００３】
【特許文献１】特開平05-310590号
【特許文献２】特開平08-168378号
【特許文献３】特開平03-232811号
【特許文献４】特開2005-015456号
【特許文献５】特開2009-292785号
【特許文献６】特開2012-228246号
【特許文献７】特開2000-080394号
【特許文献８】特開2012-126910号
【特許文献９】特開2007-082427号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記発酵粕の抽出には、メタノール、エタノール、クロロホルム、ヘキサンなどの有機溶媒が使用されることが多く、特に、それらの発酵粕からスフィンゴ脂質であるセラミドを得る際には、その収率を向上させるために有機溶媒が使われていた。しかし、有機溶媒を使用すると、生体安全性の点で問題があり、さらには、得られる成分が水に溶解しないという問題点もあった。
そこで、本発明者らは、発酵粕である酒粕に水に容易に溶解するスフィンゴ糖脂質が含まれること、及び当該スフィンゴ糖脂質を含む酒粕の水溶性溶媒の抽出物が、格段にすぐれた肌のシワ、タルミの予防、改善効果、及び肌のキメ、ハリ、ツヤの向上効果を有することを見出して、本発明を完成させるに至った。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、酒粕由来の水溶性のスフィンゴ糖脂質である。
また、本発明は、酒粕に含まれる水溶性スフィンゴ糖脂質又は当該水溶性スフィンゴ糖脂質を含む酒粕の抽出物を配合してなる化粧料である。
また、本発明は、酒粕に含まれる水溶性スフィンゴ糖脂質又は当該水溶性スフィンゴ糖脂質を含む酒粕の抽出物を配合してなる飲食品である。
ここで、化粧料なる文言は、所謂化粧料のほかに医薬部外品をも含む広義で用いる。
【発明の効果】
【０００６】
本発明に係る酒粕由来の水溶性のスフィンゴ糖脂質は、水に容易に溶解することから、化粧品や健康食品の機能性素材として有用である。また、本発明に係る水溶性のスフィンゴ糖脂質を含む酒粕抽出物は、フィラグリン分解酵素活性促進効果、コラーゲン産生促進及び線維芽細胞賦活効果を有し、これらの相乗作用により、肌のシワ、タルミの予防、改善効果、及び肌のキメ、ハリ、ツヤの向上効果を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、本発明に係る酒粕抽出物に含まれるスフィンゴ糖脂質の分析結果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の原料として用いる酒粕としては、特定の酒粕に限られるものでないが、コメを原料とし、これを麹菌及び酵母で発酵して得られる清酒の酒粕が好ましい。酒粕は生のままでも、また、保存性の点で凍結乾燥して水分除去したものや、その粉砕物をも利用可能である。使用される麹菌としては、清酒の製造に使用できる麹菌（例えば、黄麹菌等）、酵母（例えば、Saccharomyces cerevisiae等）であればよい。
【０００９】
以下に、酒粕を抽出する方法の好ましい具体例を挙げる。
まず、酒粕を溶媒と混合して懸濁液を調製する。ここで溶媒としては、水とエタノール、プロパノールなどの低級アルコール類との混合液、水とエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどのグリコール類との混合液などを用いることができるが、水溶性スフィンゴ糖脂質が多く含まれること、酒粕抽出物の有効性、安全性の観点から水単独が最も好ましい。
【００１０】
酒粕と上記の溶媒との混合比は、水の単独使用又は混合液の使用のいずれの場合も、製造作業性と水溶性スフィンゴ糖脂質の収率の観点から、重量比で、１：１〜１：１０００、好ましくは、１：５〜１：１００、さらに好ましくは、１：１０〜１：５０である。酒粕の量比が大き過ぎると液が粘性を持つため、ろ過操作などが困難となって収量が低下する傾向にあり好ましくない。
【００１１】
抽出物の調製に際して、抽出物のｐＨに特に限定はないが、一般には４〜８の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。
【００１２】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば水を抽出溶媒とする場合であれば、抽出温度は４〜９０℃の範囲が好ましく、さらには、４０〜８５℃の範囲がより好ましい。また、抽出時間は、０．５〜４８時間の範囲が好ましく、さらには、０．５〜１２時間がより好ましい。
【００１３】
ここで得られる抽出物を、一般にはｐＨを３〜７に調整した上、これをそのまま化粧料、飲食等に配合するか、又は、必要ならば減圧濃縮などにより所定の濃度に調整した上で、化粧料又は飲食品（美容用若しくは健康用の経口組成物）等に配合する。また、場合によっては、スプレードライ法、凍結乾燥法などの常法に従って粉末化してもよい。
【００１４】
また、本発明に係る抽出物には、極性が高い水溶性のスフィンゴ糖脂質（グルコシルセラミド）が含まれる。このスフィンゴ糖脂質を精製して、化粧品又は健康食品用の配合剤として使用することもできる。
【００１５】
以上のようにして得られる本発明に係る酒粕抽出物又はそれに含まれるスフィンゴ糖脂質を配合してなる化粧料（医薬部外品も含む）としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パックなどの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉などのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、シャンプー、ヘアコンディショナー、ヘアクリームなどの毛髪用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。また、飲食品（美容用又は健康用の経口組成物）としては、美容飲料、栄養ドリンク、スポーツドリンク、ニアウォーター、ビタミン飲料、ミネラル飲料、アルコール飲料などの飲料；各種スープ類（粉末スープも含む）、乳製品、ゼリー、キャンディ、錠菓、ガム等の食品；錠剤、液状、顆粒状又はゼリー状の健康食品・飲料等に配合することができるが、本発明はこれに限るものではなく、経口摂取できる飲食品等に配合することができる。
【００１６】
化粧料における酒粕抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に０．００２〜１０．０重量％、好ましくは０．０２〜７．０重量％の範囲である。また、毛髪用化粧料の場合は、抽出物の固形分として、一般的には０．００００１〜５．０重量％（固形分重量％、以下同じ）であり、好ましくは、０．０００１〜３．０重量％である。また、美容用若しくは健康用の経口組成物における酒粕抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、０．１〜１５重量％の範囲が好ましい。
【００１７】
化粧料又は飲食品（美容用若しくは健康用の経口組成物）には、酒粕抽出物又はスフィンゴ糖脂質のほかに、通常化粧料又は経口組成物に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、乳化剤乃至乳化助剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、酒粕抽出物又はスフィンゴ糖脂質の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分を組み合わせて配合することも何ら差し支えない。
【００１８】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、ユズ種子油、柑橘類由来の油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００１９】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
【００２０】
乳化剤乃至乳化助剤としては、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀など）等を配合することもできる。
【００２１】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００２２】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００２３】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液等がある。
【００２４】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。
【００２５】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００２６】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）、シャクヤク抽出物、シラン根（白及）抽出物等がある。
【００２７】
美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、４−ＨＰＢ（ロドデノール、４−(４−ヒドロキシフェニル）−４−ブタノール））、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００２８】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシドなどのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）などが挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００２９】
生理活性成分としては、美白又は抗老化成分として、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、ダマスクバラ抽出物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus  amaryllifolius  Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia  flava  Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が上げられ、抗老化成分として、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（水ナス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米醗酵エキス、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、アロエ抽出物、ミツイシコンブ抽出物、アナアオサ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus  joazeiro)抽出物、未成熟のモモ抽出物、未成熟のキウイ抽出等がある。
【００３０】
次に、及び試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００３１】
実施例１．酒粕抽出物の実施例（１）
清酒粕５０ｇに精製水を４５０ｇ添加し８０℃で１時間撹拌抽出した。抽出後、抽出液を濾過し、淡黄色透明の酒粕抽出液を６８０ｇ得た。
【００３２】
実施例２．酒粕抽出物の実施例（２）
酒粕５０ｇに精製水を４５０ｇ添加し、８０℃で1時間撹拌抽出した。抽出液を濾過し、得られた液に活性炭１．７５ｇを加え４０℃で１時間撹拌した。濾過により活性炭を除去し、無色透明の酒粕抽出液を６５０ｇ得た。
【００３３】
実施例３．スフィンゴ糖脂質の分析試験
実施例１の抽出物に含まれるスフィンゴ糖脂質（グルコシルセラミド）を、以下の条件に基づいて、薄層クロマトグラフィーにより分析した。なお、比較対象として、米由来のグルコシルセラミドも同様に分析した。
（１）展開溶媒：ジクロロメタン：メタノール：水＝６５：１６：２
（２）呈色試薬：ナフトレゾルシン硫酸試液
（３）呈色方法：上記展開溶媒で原点から８ｃｍまで展開後、ナフトレゾルシン硫酸試液を噴霧後、加熱する。
【００３４】
薄層クロマトグラフィーにより分析結果を図１に示す。図１において、スポットＡ１が米由来のグルコシルセラミドであり、スポットＢ１及びＢ２が本発明に係る酒粕抽出物に含まれるグルコシルセラミドである。図１に示すように、本発明に係る酒粕抽出物に含まれるグルコシルセラミドは、米由来のセラミドとは明確に異なるものであり、米由来のセラミドより極性が高く、水に溶解しやすいことが明らかとなった。
【００３５】
実施例４．酒粕抽出物からのスフィンゴ糖脂質の精製法
酒粕抽出物からのスフィンゴ糖脂質（グルコシルセラミド）を精製する方法として以下の例が挙げられるが、本発明に係るグルコシルセラミドの精製方法は本実施例に限るものではない。
実施例１の酒粕抽出物を減圧濃縮機にて溶媒を留去した。酒粕抽出物１０ｇに対し、脂質溶出溶媒（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）を１００ｍＬ加えて１８時間撹拌し、濃縮物中の脂質成分を含む脂質抽出液を得た。脂質抽出液を減圧濃縮機にて溶媒を留去し、脂質成分を得た。脂質成分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ジクロロメタン：メタノール＝２０：１→５：１）にて精製し、グルコシルセラミドを得た。以上のように精製したグルコシルセラミドは、化粧品、飲食品用の機能性素材として利用することができる。
【００３６】
処方例１．クリーム
［Ａ成分］  部
流動パラフィン  ５．０
パラフィン  ５．０
グリセリルモノステアレート  ２．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート  ６．０
フェノキシエタノール  ０．１
［Ｂ成分］  部
実施例１の抽出物溶液  ５．０
グリセリン  ５．０
カルボキシメチルモノステアレート  ０．１
精製水  全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料  適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
【００３７】
処方例２．クリーム
処方例１のＢ成分に含まれる実施例１の抽出物溶液に代えて、実施例２の抽出物溶液５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００３８】
処方例３．乳液
［Ａ成分］  部
流動パラフィン  ６．０
オリーブ油  １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート  ２．０
大豆レシチン  １．５
メチルパラベン  ０．１５
［Ｂ成分］  部
実施例１の抽出物溶液  ２．０
グリセリン  ３．０
１、３−ブチレングリコール  ２．０
カルボキシメチルセルロース  ０．３
コラーゲン  ０．１
精製水  全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］
香料  適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００３９】
処方例４．乳液
処方例３のＢ成分に含まれる実施例１の抽出物溶液に代えて、実施例２の抽出物溶液２．０部を用いるほかは、処方例３と同様にして化粧水を得た。
【００４０】
処方例５．ローション
［Ａ成分］  部
実施例１の抽出物溶液  ２．０
エタノール  １０．０
グリセリン  ３．０
１、３−ブチレングリコール  ２．０
フェノキシエタノール  ０．２
クエン酸  ０．１
クエン酸ナトリウム  ０．３
カルボキシビニルポリマー  ０．１
香料  適量
水酸化カリウム  適量
精製水  全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００４１】
処方例６．化粧水
［Ａ成分］  部
オリーブ油  １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール  ５．０
［Ｂ成分］  部
実施例１の抽出物溶液  ５．０
エタノール  ５．０
グリセリン  ５．０
１，３−ブチレングリコール  ５．０
水酸化カリウム  適量
精製水  全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］  部
香料  適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。
【００４２】
処方例７．乳液
［Ａ成分］  部
流動パラフィン  ６．０
ホホバ油  １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート  ２．０
大豆レシチン  １．５
メチルパラベン  ０．１５
エチルパラベン  ０．０３
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液  ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド  ２．０
水酸化カリウム  ０．５
グリセリン  ３．０
１、３−ブチレングリコール  ２．０
カルボキシメチルセルロース  ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム      ０．０１
精製水  全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］
香料  適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００４３】
処方例８．乳液
処方例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム２．０部を用いるほかは処方例と同様にして乳液を得た。
【００４４】
処方例９．乳液
処方例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例５と同様にして乳液を得た。
【００４５】
処方例１０．乳液
処方例７のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン２．０部を用いるほかは処方例５と同様にして乳液を得た。
【００４６】
処方例１１．乳液
［Ａ成分］  部
流動パラフィン  ６．０
ホホバ油  １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート  ２．０
大豆レシチン  １．５
メチルパラベン  ０．１５
エチルパラベン  ０．０３
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液  ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド  ２．０
アルブチン  ３．０
水酸化カリウム  ０．５
グリセリン  ３．０
１、３−ブチレングリコール  ２．０
カルボキシメチルセルロース  ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム      ０．０１
精製水  全量が１００部となる量 
［Ｃ成分］
香料  適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００４７】
処方例１２．リキッドファンデーション
［Ａ成分］  部
ステアリン酸  ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール  ２．０
セトステアリルアルコール  ０．２
液状ラノリン  ２．０
流動パラフィン  ３．０
ミリスチン酸イソプロピル  ８．５
プロピルパラベン  ０．０５
［Ｂ成分］
実施例２の抽出物溶液  ２．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム  ０．２
ベントナイト  ０．５
プロピレングリコール  ４．０
トリエタノールアミン  １．１
メチルパラベン  ０．１
精製水  全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン  ８．０
タルク  ４．０
着色顔料  適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
【００４８】
処方例１３．クリームファンデーション
［Ａ成分］  部
ステアリン酸  ５．０
セタノール  ２．０
モノステアリン酸グリセリル  ３．０
流動パラフィン  ５．０
スクワラン  ３．０
ミリスチン酸イソプロピル  ８．０
ポリオキシエチレン（２０）モノステアリン酸グリセリル  ２．０
プロピルパラベン  ０．１
［Ｂ成分］  部
実施例１の抽出物溶液  ２．５
ソルビトール  ３．０
１，３−ブチレングリコール  ５．０
トリエタノールアミン  １．５
メチルパラベン  ０．１
精製水  全量が１００部となる量
［Ｃ成分］  部
酸化チタン  ８．０
タルク  ２．０
カオリン  ５．０
ベントナイト  １．０
着色顔料  適量
［Ｄ成分］  部
香料  ０．３
Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却してクリームファンデーションを得た。
【００４９】
処方例１４．ボディシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム  ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）  ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド  ３．０
メチルパラベン  ０．１
［Ｂ成分］  部
実施例１の抽出物溶液  ５．０
１，３−ブチレングリコール  ２．０
精製水  全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
【００５０】
処方例１５．育毛用化粧料
［成分］  部
グリチルリチン酸ジカリウム  ０．１
モノニトログアヤコールナトリウム  ０．０２
塩酸ピリドキシン  ０．０３
ｌ−メントール  ０．８
タマサキツヅラフジ根エキス  ０．３
褐藻エキス  ０．３
オタネニンジンエキス ０．３
ゲンチアナエキス  ２．０
実施例１の抽出物溶液  ３．５
トリメチルグリシン  ０．５
乳酸  ０．２
１，３−ブチレングリコール  １０．０
フェノキシエタノール  ０．２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油  ０．４
Ｌ−アルギニン  適量
エタノール  ２０
精製水  全量が１００部となる量
上記の成分を十分攪拌混合して育毛料を得た。
【００５１】
処方例１６．ヘアシャンプー
［Ａ成分］  部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム  １０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム  ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン  １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド  ４．０
メチルパラベン  ０．１
［Ｂ成分］
クエン酸 ０．１
実施例１の抽出物溶液  ２．０
１，３−ブチレングリコール  ２．０
精製水  全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してヘアシャンプーを得た。
【００５２】
処方例１７．ヘアコンディショナー
［Ａ成分］  部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油  １．０  
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム  １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム  ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル １．０
セタノール  ３．２
ステアリルアルコール  １．０
メチルパラベン  ０．１
［Ｂ成分］
実施例１の抽出物溶液  ２．０
１，３−ブチレングリコール  ５．０
精製水  全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してヘアリンスを得た。
【００５３】
処方例１８．美容飲料
実施例１の抽出物  １０．０
コラーゲン  ８．０
クエン酸  ０．１
甘味料（スクロース）  ０．０１
酸化防止剤（ビタミンＣ）０．０１
精製水  全量が１００部となる量
【００５４】
処方例１９．錠剤
実施例１の抽出物溶液  ２０．０
ビタミンＣ  ２０．０
脂肪酸エステル  １０．０
乳酸カルシウム  ２０．０
乳糖  ３０．０
上記重量部の各成分を混合した後、加圧成形し、錠剤とした。
【００５５】
試験例１．フィラグリン分解酵素活性亢進評価
＜実験方法＞
正常ヒト表皮角化細胞を増殖添加剤含有HuMedia-KG2（登録商標）［クラボウ社製］にて２×１０５個/mLに調製し、９６穴マイクロプレートに１００μＬを播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間後、終濃度が２．０％となるように実施例１の抽出物を含んだ増殖添加剤含有HuMedia-KB2（登録商標）［クラボウ社製］に交換して培養した。また、終濃度が２．０％となるように３０％ 1,3−ブチレングリコールを含んだ培養液を追添加した試験区をcontrolとして設定した。７２時間後、それぞれの試験区の細胞培養上清を除去し０．１４Ｍ 塩化ナトリウムおよび０．１％Tween20を含む100ｍＭトリス-塩酸緩衝液(pH8.0) ２０μＬを用いて細胞を破砕したものを粗酵素液とした。粗酵素液に対し、バッファーとして１０ｍＭ ＤＴＴおよび５ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（pH7.5） ３０μＬ、基質として１００ｍＭ citrulline-MCAを含む上記バッファー５０μＬを加え、撹拌しながら３７℃で90分間反応させた。反応終了後、蛍光プレートリーダー（フルオロスキャン アセント、Thermo Labsystems社製）を用いて蛍光強度（励起波長：355nm、蛍光波長：460nm）を測定し、これをフィラグリン分解酵素活性とした。また、同様の培養操作を行った別プレートを用意し、培養上清を除去した後、Hoechst33342溶液１００μＬを添加し、３７℃で１時間反応させた。反応終了後、蛍光プレートリーダーを用いて蛍光強度（励起波長：355nm、蛍光波長：460nm）を測定し、ＤＮＡ量とした。得られた数値を用いて、ＤＮＡ当たりのフィラグリン分解酵素活性を算出した。
【００５６】
試験例１の結果を表１に示す。
［表１］
2015232072.tif 000003
【００５７】
表１に示すように、本発明に係る、水溶性のスフィンゴ糖脂質を含む実施例１の抽出物は、皮膚の角層を健全に保つアミノ酸の産生に関与するフィラグリン分解酵素活性を亢進する効果を有することから、皮膚の保湿機能、バリア機能を改善し、また、シワ、キメを改善し、さらには、魚鱗症、老人性乾皮症又はアトピー性皮膚炎、その他アミノ酸の欠乏による皮膚疾患を改善することができる。
【００５８】
試験例２．線維芽細胞賦活評価試験
＜実験方法＞
ヒト真皮由来線維芽細胞(NB1RGB)を０．５％ＮＣＳ含有イーグル最少必須培地にて１×１０５個／ｍＬに調製し、９６穴マイクロプレートに１００μＬを播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間後、終濃度が１．０％又は２．０％となるように実施例１の抽出物を含んだ培養液を追添加して培養した。また、終濃度が２．０％となるように３０％ 1,3−ブチレングリコールを含んだ培養液を追添加した試験区をcontrolとして設定した。７２時間後、それぞれの試験区の細胞培養上清を除去し０．０３％のＭＴＴを添加して３７℃に１時間保持した後、生成したホルマザンをイソプロパノールで抽出し、吸光マイクロプレートリーダー（Model 680、バイオラッド社製）を用いて波長５７０ｎｍ−６３０ｎｍでＭＴＴ値を測定した。
【００５９】
試験例２の結果を表２に示す。
［表２］
2015232072.tif 000004
【００６０】
表２に示すように、本発明に係る、水溶性のスフィンゴ糖脂質を含む実施例１の抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれた線維芽細胞賦活作用を有することから、皮膚を健全化すると共に、老化を防止することができる。
【００６１】
試験例３．線維芽細胞コラーゲン合成評価試験
＜実験方法＞
ヒト真皮由来線維芽細胞(NB1RGB)を０．５％ＮＣＳ含有イーグル最少必須培地にて１×１０５個／ｍＬに調製し、９６穴マイクロプレートに１００μＬを播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間後、終濃度が１．０又は２．０％となるように酒粕抽出液を含んだ培養液を追添加して培養した。また、終濃度が２．０％となるように３０％ 1,3−ブチレングリコールを含んだ培養液を追添加した試験区をcontrolとして設定した。5日後、それぞれの試験区の細胞培養上清を除去し０．０５％シリウスレッド溶液を添加し、細胞内コラーゲンを染色した後、十分に洗浄した。次に０．１％ＮａＯＨ含有メタノールで抽出し、吸光マイクロプレートリーダー（Model 680、バイオラッド社製）を用いて波長５４０ｎｍでコラーゲン量を測定した。
【００６２】
試験例３の結果を表１に示す。
［表３］
2015232072.tif 000005
【００６３】
表３に示すように、本発明に係る、水溶性のスフィンゴ糖脂質を含む実施例１の抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたコラーゲン合成促進効果を有することから、皮膚を健全化すると共に、皮膚のタルミ、ハリ、ツヤを改善することができる。
【図１】
2015232072.tif 000006