(57)【要約】      （修正有）【課題】関節リウマチを治療するための更なる且つ改善された医薬組成物の提供。【解決手段】ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とメトトレキサートとを含む医薬組成物であって、前記剤と、メトトレキサートとは、単一剤形中に存在してもよく、別個の剤形中に存在してもよい。前記剤形は、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかからなってもよい。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤は、ポリペプチド、タンパク質、又は抗体であり得る。前記剤が抗体である場合、モノクローナル抗ＣＤ４抗体であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとを含む医薬組成物。
【請求項２】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとを別々に含むキット。
【請求項３】
剤が、非経口投与に適した請求項１及び２のいずれかに記載の医薬組成物又はキット。
【請求項４】
剤が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与に適した請求項３に記載の医薬組成物又はキット。
【請求項５】
メトトレキサートが、経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与に適した請求項１から４のいずれかに記載の医薬組成物又はキット。
【請求項６】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤が、抗体、前記抗体の断片、又は前記抗体の誘導体である請求項１から５のいずれかに記載の医薬組成物又はキット。
【請求項７】
抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である請求項６に記載の医薬組成物又はキット。
【請求項８】
剤が、抗ＣＤ４抗体、前記抗体の断片、又は前記抗体の誘導体である請求項６及び７のいずれかに記載の医薬組成物又はキット。
【請求項９】
剤が、マウスモノクローナル抗体Ｂ−Ｆ５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む配列を含むヒト化抗ＣＤ４抗体であって、前記抗体の抗体特異性及び抗体親和性の少なくともいずれかに実質的に影響を与えない変異を配列中に任意に有してもよい請求項８に記載の医薬組成物又はキット。
【請求項１０】
剤が、以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメイン、又は配列番号１及び配列番号２の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むＶドメインを有するヒト化抗ＣＤ４抗体である請求項８に記載の医薬組成物又はキット：
−Ｈ鎖Ｖドメイン：
ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
−Ｌ鎖Ｖドメイン：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）。
【請求項１１】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤が、０．２ｍｇ〜１０ｍｇの用量で対象に投与される請求項１から１０のいずれかに記載の医薬組成物又はキット。
【請求項１２】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤が、０．２ｍｇ〜５ｍｇの用量で対象に投与される請求項１１に記載の医薬組成物又はキット。
【請求項１３】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤が、０．５ｍｇ〜３ｍｇの用量で対象に投与される請求項１２に記載の医薬組成物又はキット。
【請求項１４】
医薬組成物又は剤が、静脈内投与用であり、且つ０．５ｍＬ〜５００ｍＬの投与体積で提供されるか、又は０．５ｍＬ〜５００ｍＬの投与体積に希釈するための形態で提供される請求項１から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
医薬組成物又は剤が、０．５ｍＬ〜１．５ｍＬの投与体積を提供するか、又は前記投与体積で提供されるのに適した請求項１から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】
医薬組成物又は剤が、１５ｍＬ〜２５ｍＬの投与体積を提供するか、又は前記投与体積で提供されるのに適した請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
医薬組成物が、皮下投与又は筋肉内投与に適し、且つ０．１ｍＬ〜３ｍＬの投与体積で提供される請求項１から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１８】
医薬組成物又は剤が、単回用量として使用するのに適した請求項１から１７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１９】
医薬組成物又は剤が、複数回用量の一部として使用するのに適した請求項１から１７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２０】
複数回用量のうちの各用量が１週間に１回投与される請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程と、（ｂ）メトトレキサートを投与する工程とを含み、前記工程（ａ）及び工程（ｂ）を、同時に、別々に、又は連続的に実施してもよく、且ついずれの順序で実施してもよい、患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項２２】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程を含む、メトトレキサートを用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項２３】
メトトレキサートを投与する工程を含む、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項２４】
リウマチ性疾患が、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、及び強直性脊椎炎から選択される請求項２１から２３のいずれかに記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項２５】
リウマチ性疾患が、関節リウマチである請求項２４に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項２６】
（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程と、（ｂ）メトトレキサートを投与する工程とを含み、前記工程（ａ）及び工程（ｂ）を、同時に、別々に、又は連続的に実施してもよく、且ついずれの順序で実施してもよい、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に対して応答しない患者の関節リウマチの治療方法。
【請求項２７】
ＤＭＡＲＤが、メトトレキサートである請求項２６に記載の患者の関節リウマチの治療方法。
【請求項２８】
剤が、非経口投与される請求項２１〜２７のいずれかに記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項２９】
剤が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与される請求項２８に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項３０】
メトトレキサートが、経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与される請求項２１から２９のいずれかに記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項３１】
剤が、０．２ｍｇ〜１０ｍｇの量で患者に投与される請求項２１から３０のいずれかに記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項３２】
剤が、０．２ｍｇ〜５ｍｇの量で患者に投与される請求項３１に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項３３】
剤が、０．５ｍｇ〜３ｍｇの量で患者に投与される請求項３２に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項３４】
剤が、静脈内投与され、且つ投与終了から３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が２．５μｇ／ｍＬ未満である請求項３１に記載の治療方法。
【請求項３５】
剤が、静脈内投与され、且つ投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が０．３μｇ／ｍＬ未満である請求項３２に記載の治療方法。
【請求項３６】
剤が、静脈内投与され、且つ投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が０．１μｇ／ｍＬ未満である請求項３３に記載の治療方法。
【請求項３７】
剤が、１週間に１回静脈内投与され、且つ２回目の投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が２．５μｇ／ｍＬ未満である請求項３１に記載の治療方法。
【請求項３８】
剤が、１週間に１回静脈内投与され、且つ２回目の投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が０．３μｇ／ｍＬ未満である請求項３２に記載の治療方法。
【請求項３９】
剤が、１週間に１回静脈内投与され、且つ２回目の投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が０．１μｇ／ｍＬ未満である請求項３３に記載の治療方法。
【請求項４０】
剤が、１週間に１回静脈内投与され、且つ任意の回数の投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が２．５μｇ／ｍＬ未満である請求項３１に記載の治療方法。
【請求項４１】
剤が、１週間に１回静脈内投与され、且つ任意の回数の投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が０．３μｇ／ｍＬ未満である請求項３２に記載の治療方法。
【請求項４２】
剤が、１週間に１回静脈内投与され、且つ任意の回数の投与終了の３時間後の患者の血漿中における前記剤の最高濃度が０．１μｇ／ｍＬ未満である請求項３３に記載の治療方法。
【請求項４３】
剤が、２μｇ／ｋｇ〜１５０μｇ／ｋｇの量で患者に投与される請求項２１〜３０のいずれかに記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項４４】
剤が、２μｇ／ｋｇ〜７５μｇ／ｋｇの量で患者に投与される請求項４３に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項４５】
剤が、５μｇ／ｋｇ〜４５μｇ／ｋｇの量で患者に投与される請求項４４に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項４６】
剤が、０．１ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に投与される請求項２１〜３０のいずれかに記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項４７】
剤が、０．１ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜２．５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に投与される請求項４６に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項４８】
剤が、０．２５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜１．５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に投与される請求項４７に記載の患者のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項４９】
単回用量の剤が患者に投与される請求項２１〜４８のいずれかに記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５０】
複数回用量の剤が患者に投与される請求項２１〜４８のいずれかに記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５１】
剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかが、最高１週間に１回投与される請求項５０に記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５２】
剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかが、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回投与される請求項５１に記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５３】
非ステロイド性抗炎症薬、抗炎症性ステロイド、金化合物、抗マラリア薬、葉酸、シクロスポリン、レフルノミド、アザチオプリン、スルファサラジン、ｄ−ペニシラミン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、ミノサイクリン、及びクロラムブシルから選択される、疾患の治療に好適な更なる治療剤を投与する工程を更に含む請求項２１から５２のいずれかに記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５４】
リウマチ性疾患が関節リウマチであり、且つ治療が米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコア付けシステムに従って、患者の疾患を少なくともＡＣＲ５０改善する請求項２１から５３のいずれかに記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５５】
治療が米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコア付けシステムに従って、患者の疾患を少なくともＡＣＲ７０改善する請求項５４に記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５６】
治療が、治療開始後６週目から８週目の間に少なくともＡＣＲ７０応答を患者にもたらす請求項５５に記載のリウマチ性疾患の治療方法。
【請求項５７】
医療において同時に、別々に、又は連続的に使用するための複合製剤としてのＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサート。
【請求項５８】
リウマチ性疾患の治療における、請求項５７に記載の同時に、別々に、又は連続的に使用するための複合製剤としてのＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサート。
【請求項５９】
患者のリウマチ性疾患の治療における、同時に、別々に、又は連続的に使用するための複合製剤を製造するためのＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサートの使用。
【請求項６０】
メトトレキサートを用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療において使用するための、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤。
【請求項６１】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療において使用するための、メトトレキサートを含む組成物。
【請求項６２】
リウマチ性疾患が、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、及び強直性脊椎炎から選択される請求項５８〜６１のいずれかに記載の使用。
【請求項６３】
リウマチ性疾患が、関節リウマチである請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に対して応答しない患者のリウマチ性疾患の治療において、請求項５７に記載の同時に、別々に、又は連続的に使用するための複合製剤としてのＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサート。
【請求項６５】
ＤＭＡＲＤが、メトトレキサートである請求項６５に記載の剤。
【請求項６６】
剤が、非経口投与に適した請求項５７から６５のいずれかに記載の使用。
【請求項６７】
剤が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与に適した請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
メトトレキサートが、経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与に適した請求項５７から６７のいずれかに記載の使用。
【請求項６９】
剤が、０．２ｍｇ〜１０ｍｇの量で患者に投与される請求項５７から６８のいずれかに記載の使用。
【請求項７０】
剤が、静脈内投与に適し、且つ投与から３時間後の患者の血漿中の最高濃度を２．５μｇ／ｍＬ未満とすることができる請求項６９に記載の使用。
【請求項７１】
剤が、２μｇ／ｋｇ〜１５０μｇ／ｋｇの量で患者に投与される請求項５７から６８のいずれかに記載の使用。
【請求項７２】
剤が、０．１ｍｇ／ｍ２〜５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に投与される請求項５７から６８のいずれかに記載の使用。
【請求項７３】
剤が、単回用量として投与するのに適した請求項５７から７２のいずれかに記載の使用。
【請求項７４】
剤が、複数回用量の一部として投与するのに適した請求項５７から７２のいずれかに記載の使用。
【請求項７５】
剤が、最高１週間に１回投与するのに適した請求項７４に記載の使用。
【請求項７６】
複合製剤が、非ステロイド性抗炎症薬、抗炎症性ステロイド、金化合物、抗マラリア薬、葉酸、シクロスポリン、レフルノミド、アザチオプリン、スルファサラジン、ｄ−ペニシラミン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、ミノサイクリン、及びクロラムブシルから選択される、疾患の治療に好適な更なる治療剤を更に含む請求項５７から７２のいずれかに記載の使用。
【請求項７７】
リウマチ性疾患が関節リウマチであり、且つ複合製剤が米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコア付けシステムに従って、患者の疾患を少なくともＡＣＲ５０改善可能である請求項５８から７６のいずれかに記載の使用。
【請求項７８】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤が、抗体、前記抗体の断片、又は前記抗体の誘導体である請求項２１から７７のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項７９】
抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である請求項７８に記載の方法又は使用。
【請求項８０】
剤が、抗ＣＤ４抗体、前記抗体の断片、又は前記抗体の誘導体である請求項７８及び７９のいずれかに記載の方法又は使用。
【請求項８１】
剤が、マウスモノクローナル抗体Ｂ−Ｆ５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む配列を含むヒト化抗ＣＤ４抗体であって、前記抗体の抗体特異性及び抗体親和性の少なくともいずれかに実質的に影響を与えない変異を配列中に任意的に有していてもよい請求項８０に記載の方法又は使用。
【請求項８２】
剤が、以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメイン、又は配列番号１及び配列番号２の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むＶドメインを有するヒト化抗ＣＤ４抗体である請求項８０に記載の方法又は使用：
−Ｈ鎖Ｖドメイン：
ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
−Ｌ鎖Ｖドメイン：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）。
【請求項８３】
請求項１から２０のいずれかに記載の剤及びメトトレキサートを含む医薬組成物又はキットを調製することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リウマチ性疾患の治療に関する。本発明は、ヒト化モノクローナル抗体等のＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、薬剤メトトレキサートとを含む非常に有効な医薬組成物に関する。本発明の組成物及びキットは、関節リウマチの治療に特に有効である。本発明は、前記剤とメトトレキサートとを含む医薬組成物又はキットに加えて、前記組成物及びキットを用いる使用及び治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リウマチ性疾患は、結合組織、特に関節及びそれに関連する構造を冒す疾患群であり、炎症、変性、又は代謝異常を特徴とする。リウマチ性疾患の例は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、及び強直性脊椎炎である。
【０００３】
関節リウマチ（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）は、関節及び周囲組織の慢性炎症を引き起こす自己免疫疾患であり、他の組織及び身体器官を冒す場合もある。前記疾患は、通常は、自己組織に対して寛容であるＴ細胞が、「自己」分子、即ちホストの細胞により生成される分子を認識し反応するときに生じる。抗原提示細胞（ＡＰＣ）により行われる自己抗原の提示による「自己反応性」Ｔ細胞の活性化は、前記Ｔ細胞のクローン増殖、及び特定組織への遊走を導き、炎症及び組織破壊を誘導する。
【０００４】
広範な関節リウマチの治療法が現在利用可能であり、例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン等の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に分類される、疼痛及び炎症を制御するための第一選択薬が挙げられる。関節リウマチの二次治療としては、体内のコルチゾンホルモンの合成物であるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン及びデキサメタゾン）、遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）、又は疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、例えば、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、メトトレキサート、ペニシリンアミン、シクロホスファミド、金塩、アザチオプリン、レフルノミド等が挙げられる。
【０００５】
新たにＲＡであると診断された患者の多くは、メトトレキサート（ＭＴＸ）等のＤＭＡＲＤを最初に処方される。ＭＴＸ（４−アミノ−Ｎ１０−メチルプテロイルグルタミン酸）は、葉酸の類似体であり、例えば、皮膚、血液、胃腸組織、及び免疫系に関与する組織で見出される細胞等の、活発に増殖している細胞にとって重要な形態の葉酸の生成を妨害することが知られている。ＭＴＸがＲＡの重篤度を低下させる機序は、完全には明らかになっていないが、抗炎症性作用において何らかの役割を果たしていると考えられ、プリン合成の阻害、アデノシン放出の促進、炎症促進性サイトカインの生成阻害、炎症の調節等の前記作用についての薬理学的機序が多数提唱されている（非特許文献１）。ＭＴＸは、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）と呼ばれる酵素の活性を阻害することも知られており、また幾つかの他の酵素にも干渉する。
【０００６】
ＲＡの治療薬の別の群は、生物学的応答調節剤（ＢＲＭ）と呼ばれ、例えば、モノクローナル抗体が挙げられる。これらの例は、アダリムマブ、インフリキシマブ、及びエタネルセプト等の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）に対する拮抗剤であり、前記拮抗剤は、ＴＮＦ−α受容体に結合するか、又はＴＮＦ−αタンパク質自体に直接結合することにより機能する。関節リウマチの治療用として、幾つかのＴＮＦ−α阻害剤がＦＤＡにより承認されており、例えば、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、及びエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））等である。ＴＮＦ−αは、関節リウマチにおける重要なメディエータの代表的なものであり、ＲＡ患者の滑膜内の活性化マクロファージにより主に生成される。炎症促進性サイトカインとして作用するので、ＴＮＦ−αは、ＲＡ患者の滑膜組織に大量に存在する。ＴＮＦ−αは、血液から炎症組織に白血球を誘引するケモカインの生成及び放出を誘導する（非特許文献２）。滑膜の炎症の媒介に加えて、ＴＮＦ−αは、関節破壊及び軟骨分解にも関与している。更に、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の抑制活性を阻害することもできる（非特許文献３）。
【０００７】
場合によっては、ＲＡ患者は、上記薬剤の組み合わせを用いて治療される。具体的には、ＤＭＡＲＤは、第一治療として用いられることが多い。しかし、疾患管理が成されていない患者では、例えば、ＴＮＦ−α拮抗剤等の生物学的薬剤等の最近承認された治療と前記第一治療とを併用することが望ましい場合もある。ＭＴＸと幾つかのモノクローナル抗体（エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、及びアナキンラ）との組み合わせは、ＭＴＸ治療単独と比べて高い治療効果を導くことが報告されている（非特許文献１）。しかし、ＭＴＸは、様々な薬理学的作用を及ぼすので、その臨床効果は、複数の標的に起因する可能性がある（非特許文献４）。したがって、ＭＴＸが、如何にして単剤として有効である薬剤の治療活性、延いては有効性に影響を及ぼしているのかを予測するのは容易ではない。
【０００８】
多数の薬剤が現在利用可能であるにもかかわらず、全ての患者が上記治療に対して良好に応答する訳ではなく、また多数の副作用が存在する。例えば、ＴＮＦ−α治療は、免疫系をダウンレギュレートするので、治療された患者が感染症及び疾患に罹患しやすくなる。したがって、代替療法を開発することが依然として必要とされている。
【０００９】
ＣＤ４＋Ｔ細胞が、自己免疫の開始及び維持において主要な役割を果たしていることは、一般的に認められている。したがって、関節リウマチ等の疾患の治療において免疫抑制剤として、ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面分子に対するｍＡｂ、具体的には抗ＣＤ４ｍＡｂを用いることが提唱されている。
【００１０】
更なる研究の一例は、様々な自己免疫疾患で試験されている抗ＣＤ４  Ｂ−Ｆ５抗体（マウスＩｇＧ１抗ヒトＣＤ４）である。関節リウマチ患者において、１日量のＢ−Ｆ５を用いたプラセボ対照試験で見られた結果は、有意な改善を示さなかった（非特許文献５）。しかし、特許文献１では、親マウスＢ−Ｆ５に類似のＣＤ４結合性を有するヒト化Ｂ−Ｆ５（以後ｈＢ−Ｆ５又はＢＴ０６１と称する）抗体が開発された。非ステロイド性抗炎症薬ジクロフェナクも併せて投与されている患者におけるマウスＢ−Ｆ５抗体のヒト化物の効果の予備試験では、有効な免疫抑制の徴候が見られ、これは、１０日間の治療で用いたとき患者において有効な臨床効果が得られることを示す。
【００１１】
前記研究は、非特許文献６にも記載されている。非特許文献６は、１５０ｍｇのジクロフェナクと同時に、５ｍｇのｈＢ−Ｆ５を１日おきに５回静脈内注入することによる、１１人の関節リウマチ患者の治療について記載している。
【００１２】
特許文献１では、前記抗体が、ＣＤ４＋Ｔ細胞の特定のサブセット、即ちＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を活性化可能であると記載されている。これら細胞は、末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞の５％〜１０％を占め、一旦刺激されると、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の応答を抑制する能力に加えて、Ｂ細胞の活性化及びクローン増殖を阻害する能力も有する。したがって、これら細胞は、免疫系の制御において重要な地位を占める。特に、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞は、末梢における免疫ホメオスタシスの維持、並びに自己免疫及び病原性免疫応答の制御に関与している。
【００１３】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化させる機序を介した関節リウマチの治療は、研究の重要な道筋を示すものであり、関節リウマチに罹患している患者に対する第ＩＩ相臨床試験におけるｈＢ−Ｆ５の使用が、特許文献２〜４で論じられている。
【００１４】
しかし、いずれの新規治療法も、現在の治療法と組み合わせて有益な治療効果を得ることに成功し得るかどうかを予測するのは容易ではない。上述のように、これはＭＴＸを用いる場合に特に当てはまる。
【００１５】
幾つかの研究が、ＭＴＸは、制御性Ｔ細胞に対して負の効果を有するので、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の活性化に依存する治療機序を有する剤との併用療法において、ＭＴＸが用いられるのを妨げる可能性が高いことを示唆する知見を報告している。非特許文献７及び８は、ＭＴＸが利用可能なＴリンパ球の数を減少させ得ることを示唆する知見を報告している。Ｗａｓｃｈｅｒらは、高用量のＭＴＸを１２週間静脈内投与したところ、抹消血リンパ球の総数が有意に（Ｐ＜０．０１）減少し、Ｂリンパ球（Ｐ＜０．００５）及びＴリンパ球（Ｐ＜０．０５）に対して好ましい減少効果を有するリンパ球サブセットが著しく再分配されたことを報告している。非特許文献８は、低用量（７．５ｍｇ）によるＲＡ患者の治療を反映する濃度において、ＭＴＸが、インビトロでＴリンパ球のアポトーシスを誘導する効果を有することを報告している。
【００１６】
更に、非特許文献９により実施されたインビトロ実験は、制御性Ｔ細胞の生存性に対するＭＴＸの影響について報告している。５０ｎＭ（分析したうち最も高い濃度）のインビトロ濃度では、Ｔｒｅｇ細胞の抑制活性は、９４％から８８％に有意に減少した（Ｐ＜０．０５）。これは、ＭＴＸの存在が、Ｔｒｅｇ抑制を阻害する可能性があることを示唆する。
【００１７】
更に、非特許文献１０は、天然のＴｒｅｇ細胞が、大量の葉酸受容体４（ＦＲ４）を恒常的に発現していることを報告している。ＭＴＸは、葉酸類似体であるので、ＭＴＸもＴｒｅｇ細胞に取り込まれる可能性があることが示唆されている。かかる取り込みが、この細胞集団内の代謝に干渉する可能性がある。
【００１８】
更に、多くの抗体の治療活性が、Ｆｃ受容体発現細胞上のＦｃ受容体により影響を受けることが知られている。幾つかの抗体では、活性状態になるためには、Ｆｃ受容体発現細胞上のＦｃ受容体に結合しなければならない場合さえもある。しかし、ＭＴＸ療法は、インビボにおいて、単球におけるＦｃガンマＲ１の発現を低下させることが知られている（非特許文献１１及び１２）。単球におけるＦｃ受容体発現を低下させるＭＴＸの作用は、ＭＴＸと、治療用抗ＴＮＦ−α抗体インフリキシマブとを用いて治療された患者でも示されている（非特許文献１３）。結果として、ＭＴＸは、Ｆｃ受容体結合抗体の活性に負の影響を与えると一般的に考えられる。したがって、ＭＴＸは、抗体のＴｒｅｇ活性化能に負の影響を与えると予測される。
【００１９】
上記を鑑みて、ＭＴＸは、ｈＢ−Ｆ５等の、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の活性化を介して機能する剤の治療能に対して負の影響を有すると予測される。したがって、併用療法アプローチの結果を予測することはできないということが分かる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】国際公開第２００４／０８３２４７号パンフレット
【特許文献２】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５２８０９号
【特許文献３】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５２８１１号
【特許文献４】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５２８１０号
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｓｗｉｅｒｋｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００６
【非特許文献２】Ｔｒａｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００８
【非特許文献３】Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８
【非特許文献４】Ｗｅｓｓｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８
【非特許文献５】Ｗｅｎｄｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏ１；２５（８）：１４５７−６１，１９９８
【非特許文献６】Ｗｉｊｄｅｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｅｒ，ＥＵＬＡＲ  ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｊｕｎｅ  ２００５
【非特許文献７】Ｗａｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）
【非特許文献８】Ｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）
【非特許文献９】Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６
【非特許文献１０】Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７
【非特許文献１１】Ｗｉｊｎｇａａｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４
【非特許文献１２】Ｗｉｊｎｇａａｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５
【非特許文献１３】Ｗｉｊｎｇａａｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
上記先行技術を考慮し、本発明の目的は、関節リウマチを治療するための更なる且つ改善された医薬組成物を開発することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
したがって、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとを含む医薬組成物を提供する。更に、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとを別々に含むキットを提供する。
【００２４】
本発明者らは、予想外なことに、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとの組み合わせが治療効果を有し、驚くべきことに、抗体に関連する副作用の数を減少させることに関して有利であることを見出した。また、前記組み合わせは、驚くべきことに、高水準の治療効果に達する速度に関しても有利である。
【００２５】
したがって、本発明は、また、（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程と、（ｂ）メトトレキサートを投与する工程とを含み、工程（ａ）及び工程（ｂ）を同時に、別々に、又は連続的に実施してもよく、且ついずれの順序で実施してもよい、患者のリウマチ性疾患の治療方法を提供する。
【００２６】
更に、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程を含む、メトトレキサートを用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療方法を提供する。或いは、本発明は、メトトレキサートを投与する工程を含む、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療方法を提供する。
【００２７】
更に、本発明は、（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程と、（ｂ）メトトレキサートを投与する工程とを含み、工程（ａ）及び工程（ｂ）を同時に、別々に、又は連続的に実施してもよく、且ついずれの順序で実施してもよい、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に対して応答しない患者の関節リウマチの治療方法を提供する。
【００２８】
更に、本発明は、医療において同時に、別々に、又は連続的に使用するための複合製剤として、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサートを提供する。１つの態様では、本発明は、リウマチ性疾患の治療において同時に、別々に、又は連続的に使用するための複合製剤として、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサートを提供する。別の態様では、本発明は、メトトレキサートを用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療において使用するための、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を提供する。更に別の態様では、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療において使用するための、メトトレキサートを含む組成物を提供する。
【００２９】
更なる態様では、本発明は、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に対して応答しない患者のリウマチ性疾患の治療において同時に、別々に、又は連続的に用いるための複合製剤として、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサートを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
以下の図面を参照して、ほんの一例として本発明を例証する。
【図１】図１は、実施例１における２人のドナー（対象１及び対象２）から採取したＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を用いて実施したインビトロ増殖アッセイの結果である。
【図２Ａ】図２Ａは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）及びＫｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）により公開された第ＩＩＩ相臨床試験において報告された最も有効な用量群の患者と比べたときの、実施例２に記載される臨床試験の過程において少なくともＡＣＲ２０スコアに達した患者の割合（％）を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）及びＫｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）により公開された第ＩＩＩ相臨床試験において報告された最も有効な用量群の患者と比べたときの、実施例２に記載される臨床試験の過程において少なくともＡＣＲ２０スコアに達した患者の割合（％）を示すグラフである。図２Ｂは、プラセボで補正されている。
【図３Ａ】図３Ａは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）及びＫｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）により公開された第ＩＩＩ相臨床試験において報告された最も有効な用量群の患者と比べたときの、実施例２に記載される臨床試験の過程において少なくともＡＣＲ５０スコアに達した患者の割合（％）を示すグラフである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）及びＫｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）により公開された第ＩＩＩ相臨床試験において報告された最も有効な用量群の患者と比べたときの、実施例２に記載される臨床試験の過程において少なくともＡＣＲ５０スコアに達した患者の割合（％）を示すグラフである。図３Ｂは、プラセボで補正されている。
【図４Ａ】図４Ａは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）及びＫｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）により公開された第ＩＩＩ相臨床試験において報告された最も有効な用量群の患者と比べたときの、実施例２に記載される臨床試験の過程において少なくともＡＣＲ７０スコアに達した患者の割合（％）を示すグラフである。
【図４Ｂ】図４Ｂは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）及びＫｅｙｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）により公開された第ＩＩＩ相臨床試験において報告された最も有効な用量群の患者と比べたときの、実施例２に記載される臨床試験の過程において少なくともＡＣＲ７０スコアに達した患者の割合（％）を示すグラフである。図４Ｂは、プラセボで補正されている。
【図５】図５は、ヒト化Ｂ−Ｆ５のＶＨ領域をコードするプラスミドの断片のヌクレオチド配列（配列番号３）である。Ｖ領域をコードする配列には下線を引き、対応するポリペプチド配列（配列番号１５）をヌクレオチド配列の下に示す。
【図６】図６は、ヒト化Ｂ−Ｆ５のＶＫ領域をコードするプラスミドの断片のヌクレオチド配列（配列番号４）である。Ｖ領域をコードする配列には下線を引き、対応するポリペプチド配列（配列番号２）をヌクレオチド配列の下に示す。
【図７】図７は、Ｂ−Ｆ５のヒト化型（即ち、ＢＴ０６１）の設計に用いる、マウスＢ−Ｆ５ＶＫ（配列番号６）、ＦＫ−００１（配列番号７、８、９、及び１０）、Ｌ４Ｌ（配列番号１６）、及びＬ４Ｍ（配列番号２）のポリペプチド配列のアラインメントである。
【図８】図８は、Ｂ−Ｆ５のヒト化型の設計に用いる、マウスＢ−Ｆ５ＶＨ（配列番号５）、Ｍ２６（配列番号１１、１２、１３、及び１４）、Ｈ３７Ｌ（配列番号１）、及びＨ３７Ｖ（配列番号１５）のポリペプチド配列のアラインメントである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
上記のように、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとを含む医薬組成物を提供する。更に、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとを別々に含むキットを提供する。
【００３２】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤と、メトトレキサートとは、単一剤形中に存在してもよく、別個の剤形中に存在してもよい。前記剤形は、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかからなってもよい。或いは、前記剤形は、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかを含んでもよく、更に担体又は賦形剤等の薬剤的に許容可能な成分を更に含んでもよい。
【００３３】
本発明の１つの態様では、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかは、非経口投与、好ましくは、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与に適応している。前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかは、皮下投与に適していることが最も好ましい。
【００３４】
本発明のこの態様の１つの実施形態では、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかは、静脈内投与に適応し、０．５ｍＬ〜５００ｍＬの投与体積で提供されるか、又は０．５ｍＬ〜５００ｍＬの投与体積に希釈するための形態で提供される。別の実施形態では、前記組成物は、皮下投与又は筋肉内投与に適しており、０．１ｍＬ〜３ｍＬの投与体積で提供される。或いは、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかは、０．５ｍＬ〜１．５ｍＬ、又は１５ｍＬ〜２５ｍＬの投与体積を提供するのに適している。
【００３５】
別の態様では、メトトレキサートは、経口投与に適応しており、錠剤形態であってもよい。
【００３６】
本発明の更なる態様では、前記組成物又はキットは、単回用量として使用するのに適していてもよく、又は複数回用量の一部として使用するのに適していてもよく、具体的には、複数回用量の場合、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、又は８週間に１回、前記用量の一部が投与される。
【００３７】
この態様の１つの実施形態では、本発明のキットは、前記剤及びメトトレキサートの用量を別々に複数個含む。更なる実施形態では、別々に包装されている医薬組成物の用量を複数個含む用量パックが提供される。
【００３８】
１つの特定の実施形態では、任意的にメトトレキサートを含んでいてもよい前記剤は、皮下投与に適しており、非医療従事者でも容易に投与できるように、希釈する必要のない、直ぐに投与できる形態で提供される。
【００３９】
本発明で使用するのに好適な剤は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤である。前記剤は、ポリペプチド、タンパク質、又は抗体であり得る。前記剤が抗体である場合、前記剤は、モノクローナル抗体であり得る。前記剤は、モノクローナル抗ＣＤ４抗体であることが好ましい。また、前記抗体は、ＩｇＧ１抗体であることが好ましい場合もあり、非修飾抗原であってもよい。
【００４０】
本発明で使用するのに最も好適な抗体は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能なヒト化抗ＣＤ４抗体、前記抗体の断片、又は前記抗体の誘導体である。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な抗体の例は、Ｂｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００７），Ｖｏｌ．３７：ｐａｇｅｓ１２１７−１２２３）で論じられており、また国際公開第２００４／０８３２４７号パンフレットに記載されている。
【００４１】
一般的に、本発明で使用される抗体は、ＣＤ４に結合可能な１以上の可変ドメインを含む。前記抗体は、ヒト定常領域（Ｆｃ）を含んでいてもよい。この定常領域は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプに由来する定常ドメインから選択することができる。好ましい定常領域は、ＩｇＧ、特にＩｇＧ１の定常ドメインから選択される。
【００４２】
また、本発明は、抗体の任意の断片を含む。前記断片は、前記抗体の抗原結合領域又はＶ領域を含むことが好ましく、特にＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆｖ断片、及びｓｃＦｖ断片である。
【００４３】
本発明の特に好ましい態様では、前記抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ４抗体Ｂ−Ｆ５に由来するヒト化抗ＣＤ４抗体、前記抗体の断片、又は前記抗体の誘導体である。前記抗体は、マウスモノクローナル抗体Ｂ−Ｆ５の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む配列を含むヒト化抗ＣＤ４抗体であってもよく、前記抗体は、抗体の特異性及び抗体の親和性の少なくともいずれかに実質的に影響を与えない変異を配列中に任意的に含んでいてもよい。
【００４４】
抗体の例は、国際公開第２００４／０８３２４７号パンフレットに提供されており、前記文献には、マウスＢ−Ｆ５抗体の数種のヒト化物の作製について開示されている。具体的には、国際公開第２００４／０８３２４７号パンフレットは、以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメインを有するヒト化抗体ＢＴ０６１（ｈＢ−Ｆ５）の作製について開示している：
−Ｈ鎖Ｖドメイン：ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳ  ＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）、
−Ｌ鎖Ｖドメイン：ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧ  ＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）。
【００４５】
前記抗体の誘導体も本発明で使用するのに適している。前記誘導体としては、配列番号１又は配列番号２と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列により定義されるＶドメインを有する誘導体が挙げられる。
【００４６】
特に好ましい抗体は、マウスＢ−Ｆ５ｍＡｂの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、且つＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化させるｈＢ−Ｆ５の能力を保持している抗体である。ＶＨドメイン及びＶＫドメイン内のＣＤＲの位置を図７及び８に示す。かかる抗体は、結合特異性及び結合親和性の少なくともいずれかに実質的に影響を与えない変異をＣＤＲ配列中に任意的に有していてもよい。
【００４７】
一般的に、本発明で用いられる抗体は、ヒト定常領域（Ｆｃ）を更に含む。この定常領域は、上記定常ドメインから選択することができる。
【００４８】
また、本発明は、Ｖ領域を含むｈＢ−Ｆ５抗体又はその誘導体の任意の断片を含む。これは、特に、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆｖ断片、及びｓｃＦｖ断片を含む。
【００４９】
ｈＢ−Ｆ５抗体を調製するために、ＢＴ０６１抗体のＨ鎖又はＬ鎖のＶドメインをコードするポリヌクレオチドを、ヒトＨ鎖又はＬ鎖の定常領域をコードするポリヌクレオチドと融合させてもよい。この方法で得られる完全なＨ鎖及びＬ鎖を発現させるために、タンパク質を分泌させるシグナルペプチドをコードする配列を付加してもよい。
【００５０】
上記ポリヌクレオチドは、発現ベクター内で、選択されたホスト細胞における転写及び翻訳を制御できる適切な制御配列に連結されている。これら組換えＤＮＡコンストラクトは、周知の組換えＤＮＡ技術及び遺伝子工学技術により得ることができ、且つホスト細胞に導入することができる。
【００５１】
有用なホスト細胞は、原核細胞又は真核細胞であり得る。好適な真核細胞の中でも、一例として、植物細胞、サッカロミセス属等の酵母細胞、ショウジョウバエ属やスポドプテラ属等の昆虫細胞、及びＨｅＬａ、ＣＨＯ、３Ｔ３、Ｃ１２７、ＢＨＫ、ＣＯＳ等の哺乳類細胞が挙げられる。
【００５２】
本発明で用いられるＢＴ０６１（ｈＢ−Ｆ５）抗体は、前記抗体をコードする核酸配列を含む発現ベクターを含むホスト細胞を、前記抗体の発現に好適な条件下で培養し、前記ホスト細胞培養物から前記抗体を回収することにより得ることができる。
【００５３】
本発明の更なる態様は、前記剤及びメトトレキサートを含むキット又は医薬組成物を調製することを含む方法である。
【００５４】
上記のように、本発明は、リウマチ性疾患に罹患している又は罹患しやすい患者を治療するための医学的使用及び方法を更に提供する。具体的には、１つの態様では、（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程と、（ｂ）メトトレキサートを投与する工程とを含み、工程（ａ）及び工程（ｂ）を同時に、別々に、又は連続的に実施してもよく、且ついずれの順序で実施してもよい、患者のリウマチ性疾患の治療方法を提供する。この態様の１つの実施形態では、工程（ａ）及び工程（ｂ）は、同日に実施される。この態様の別の実施形態では、工程（ａ）及び工程（ｂ）は、１週間以内に実施される。
【００５５】
別の態様では、本発明は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を投与する工程を含む、メトトレキサートを用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療方法と、メトトレキサートを投与する工程を含む、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤を用いた治療を受けている患者のリウマチ性疾患の治療方法とを提供する。
【００５６】
リウマチ性疾患は、結合組織、特に関節及び関連構造を冒す疾患として定義され、特に、炎症、変性、又は代謝障害を特徴とする。本発明の好ましい態様では、リウマチ性疾患は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、又は強直性脊椎炎である。
【００５７】
関節リウマチの治療が好ましい。関節リウマチの場合、ＡＣＲスコア付けを用いて治療の臨床的有効性を評価することができる。
【００５８】
ＡＣＲスコア付けは、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）により設定された、治療を受けた患者が示す関節リウマチの症候を評価する方法であり、パラメータのコアセット（Ｆｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，１９９５，３８（６），７２７−７３５）を測定することにより行われる。このシステムでは、圧痛関節数及び腫脹関節数が少なくとも２０％改善され、且つＡＣＲコアセットの残り５項目、即ち、患者及び医師による全般評価、疼痛、運動機能障害、及びＣ反応性タンパク質（ＣＰＲ）又は赤血球沈降速度（ＥＳＲ）等の急性期反応物質のうちの３項目が少なくとも２０％改善されることをＡＣＲ２０の値と定義する。同様に、ＡＣＲ５０及びＡＣＲ７０スコアは、それぞれ、少なくとも５０％及び少なくとも７０％の改善と定義される。
【００５９】
本発明の更なる態様では、前記治療は、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に応答しない患者に行われてもよい。応答しない患者とは、ＤＭＡＲＤを用いた治療に対して不十分な応答を示す患者である。特に、患者が、長期間臨床的に活性状態にある関節リウマチに罹患している場合、例えば、薬剤を投与しても患者においてＡＣＲ２０が達成されない場合、薬剤を投与しても関節の構造的損傷の進行を阻害できない場合、又は薬剤に対する初期応答が治療中経時的に失われる場合、患者は不十分な応答を示す。
【００６０】
ＤＭＡＲＤの例は、例えば、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、メトトレキサート、ペニシリンアミン、シクロホスファミド、金塩、アザチオプリン、レフルノミド等である。
【００６１】
上記のように、前記剤及びメトトレキサートは、任意の好適な方法で患者に投与することができる。具体的には、前記剤及びメトトレキサートは、例えば、静脈内注入、筋肉内注入、又は皮下注入により、非経口的に投与してもよい。前記剤の投与については、静脈内投与又は皮下投与が特に好ましい。更に、メトトレキサートは、経口投与してもよい。
【００６２】
前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかの投与体積は、投与方法によって変化する。用量が静脈内注入により投与される場合、投与体積は、０．１ｍＬ又は０．５ｍＬから最高５００ｍＬであり得、好ましくは１５ｍＬ〜２５ｍＬであり、典型的には約２０ｍＬである。用量が皮下注入又は筋肉内注入により投与される場合、投与体積は、０．１ｍＬ〜３ｍＬであり得、好ましくは０．５ｍＬ〜１．５ｍＬ、典型的には約１ｍＬである。
【００６３】
投与頻度は、治療の有効性に干渉しない限り、特に限定されない。前記治療は、単回用量又は複数回用量を含み得る。複数回用量は、少なくとも以下の基準に基づいて投与されることが好ましい：１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、１２週間に１回、２４週間に１回、１暦月に１回、６暦月に１回、又は１年に１回。したがって、前記用量は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、又は少なくとも１年間間隔で投与される（即ち、前記用量は、１週間に１回、２週間に１回、１ヶ月に１回、６ヶ月に１回、又は１年に１回服用される）。前記用量は、少なくとも２週間〜３週間に１回投与されることが特に好ましい。
【００６４】
治療の長さは、特に限定されないが、治療が無期限に続けられるか、又は患者にとって管理可能な水準に症状が軽減されるまで治療が続けられることが、自己免疫疾患の治療において典型的である。一般的に、治療は、少なくとも１ヶ月間対象に対して行われる。
【００６５】
前記剤及びメトトレキサートは、治療有効量、即ち、リウマチ性疾患の寛解、予防、又は治療に有効な量で投与される。
【００６６】
具体的には、疾患が関節リウマチである場合、前記剤及びメトトレキサートは、好ましくはＡＣＲ５０応答、より好ましくはＡＣＲ７０応答をもたらすのに有効な量で投与される。
【００６７】
本発明の１つの態様では、前記剤は、０．２ｍｇ〜１０ｍｇ、より好ましくは０．２〜６．２５ｍｇ、最も好ましくは０．２ｍｇ〜３ｍｇの用量で対象に投与される。これら用量は、用量を静脈内投与する場合に特に好ましい。
【００６８】
前記剤がヒト化抗体ＢＴ０６１である場合、本発明者らは、驚くべきことに、以下の表１に示されるように、静脈内注入の終了３時間後、健常ボランティアの血漿中を循環している抗体の有効Ｃｍａｘ値が、予測よりも遥かに低いことを見出した。これは、標的の介在するクリアランスが予測よりも速いことを反映していると考えられる。
【００６９】
【表１】
2015172060.tif 000002
【００７０】
したがって、本発明の好ましい実施形態では、０．２ｍｇ〜１０ｍｇの剤を静脈内投与すると、投与３時間後の患者の血漿中の剤の最高濃度は、２．５μｇ／ｍＬ未満になる。０．２ｍｇ〜５ｍｇの剤を静脈内投与すると、投与３時間後の患者の血漿中の剤の最高濃度は、０．３μｇ／ｍＬ未満になることが好ましい。０．５ｍｇ〜３ｍｇの剤を静脈内投与すると、投与３時間後の患者の血漿中の剤の最高濃度は、０．１μｇ／ｍＬ未満になることが更により好ましい。これら値は、剤の任意の回数の投与後と、剤の１回目の投与後及び／又は２回目の投与後との少なくともいずれかに得られる。
【００７１】
また、用量は、対象の体表面積（ＢＳＡ）に基づいて算出することもできる。体表面積（ＢＳＡ）は、任意の既知の方法に従って算出することができる。ＢＳＡ算出法の例は、Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒの式：（ＢＳＡ（ｍ２）＝（［身長（ｃｍ）×体重（ｋｇ）］／３６００）１／２（Ｍｏｓｔｅｌｌｅｒ  ＲＤ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  １９８７  Ｏｃｔ  ２２；３１７（１７）：１０９８）；ＤｕＢｏｉｓ及びＤｕＢｏｉｓの式：ＢＳＡ（ｍ２）＝０．２０２４７×身長（ｍ）０．７２５×体重（ｋｇ）０．４２５（ＤｕＢｏｉｓ  Ｄ；ＤｕＢｏｉｓ  ＥＦ．，Ａｒｃｈ  Ｉｎｔ  Ｍｅｄ  １９１６  １７：８６３−７１）；Ｈａｙｃｏｃｋの式：ＢＳＡ（ｍ２）＝０．０２４２６５×身長（ｃｍ）０．３９６４×体重（ｋｇ）０．５３７８（Ｈａｙｃｏｃｋ  Ｇ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９７８  ９３：１：６２−６６）；Ｇｅｈａｎ及びＧｅｏｒｇｅの式：ＢＳＡ（ｍ２）＝０．０２３５×身長（ｃｍ）０．４２２４６×体重（ｋｇ）０．５１４５６（Ｇｅｈａｎ  ＥＡ，ａｎｄ  Ｇｅｏｒｇｅ  ＳＬ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｒｅｐ  １９７０  ５４：２２５−３５）；及びＢｏｙｄの式ＢＳＡ（ｍ２）＝０．０００３２０７×身長（ｃｍ）０．３×体重（グラム）（０．７２８５−（０．０１８８×ＬＯＧ（グラム））である。
【００７２】
したがって、前記剤は、０．１ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜５ｍｇ／ｍ２、好ましくは０．１ｍｇ／ｍ２〜２．５ｍｇ／ｍ２、最も好ましくは０．２５ｍｇ／ｍ２〜１．５ｍｇ／ｍ２の用量で対象に投与することができる。或いは、本発明の更なる態様において、前記剤が、２μｇ／ｋｇ〜１５０μｇ／ｋｇ、好ましくは２μｇ／ｋｇ〜７５μｇ／ｋｇ、最も好ましくは５μｇ／ｋｇ〜４５μｇ／ｋｇの用量で対象に投与されるように、対象の体重に基づいて用量を算出してもよい。上記のように、これら投与量は、前記剤が静脈内投与される場合に特に好ましい。
【００７３】
上記のように、本発明の１つの態様では、前記剤及びメトトレキサートの少なくともいずれかは、皮下投与される。一般的に、当該技術分野において既知であるように、皮下投与量は、同等の治療効果を得るためには、静脈内投与量よりも多くなければならない。本発明者らは、抗体ＢＴ０６１を用いた関節リウマチ患者の単剤療法試験において、２ｍｇを静脈内投与した後に得られる治療効果が、５０ｍｇを皮下投与した後に得られる治療効果と略同等であることを示した。これらの結果を以下の表２に示す。
【００７４】
【表２】
2015172060.tif 000003
【００７５】
したがって、本発明の更に好ましい態様では、前記剤は、２０ｍｇ〜８０ｍｇ、より好ましくは３０ｍｇ〜７０ｍｇの用量で、患者に皮下投与又は筋肉内投与される。或いは、前記剤は、８ｍｇ／ｍ２〜５０ｍｇ／ｍ２、又は０．２ｍｇ／ｋｇ〜１．５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与することができる。本発明のこの態様では、投与は、最高約２週間に１回であることが特に好ましい。この段落に記載される本発明の態様は、本出願に記載される本発明の他の態様及び好ましい特徴と組み合わせてもよいことに留意する。
【００７６】
本発明によれば、前記医薬組成物又はキットは、メトトレキサート（ＭＴＸ）を更に含む。ＲＡのＭＴＸ治療は、当該技術分野において周知であり、本発明において、ＭＴＸは、既に記載された投与量で投与されることが予想される。具体的には、本発明では、ＭＴＸは、通常５ｍｇ〜３０ｍｇ、好ましくは７．５ｍｇ〜３０ｍｇ、最も好ましくは１０ｍｇ〜２５ｍｇの用量で投与される。場合によっては、前記用量は、ＭＴＸを用いた患者の前処理又はこの薬剤に対する寛容性に依存する。
【００７７】
別の態様では、本発明の方法は、リウマチ性疾患の治療に好適な更なる治療剤を投与する工程を更に含む。更なる治療剤は、以下の剤のうちの１以上を含む：非ステロイド性抗炎症薬、抗炎症性ステロイド、金化合物、抗マラリア薬、葉酸、シクロスポリン、レフルノミド、アザチオプリン、スルファサラジン、ｄ−ペニシラミン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、ミノサイクリン、及びクロラムブシル。これら更なる治療剤は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びＭＴＸと別々に、同時に、又は連続的に投与してもよい。
【００７８】
上述のように、本発明者らは、驚くべきことに、本発明の医薬組成物及びキットが、リウマチ性疾患を治療可能であることを示した。具体的には、以下の実施例２に示すように、関節リウマチの治療により前記疾患は著しく改善される。したがって、前記疾患が関節リウマチである本発明の更なる態様では、前記治療は、米国リウマチ学会のスコア付けシステムに従って、少なくともＡＣＲ２０、好ましくは少なくともＡＣＲ５０、より好ましくは少なくともＡＣＲ７０、患者の疾患を改善する。換言すれば、患者の米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコアに従って、疾患パラメータを少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７０％改善する。
【００７９】
最も好ましくは、前記治療は、治療の開始後６週間から８週間の間に、患者に少なくともＡＣＲ７０応答をもたらす。
【００８０】
実施例２及び関連図面からも分かるように、本発明の治療は、多数の患者において関節リウマチを改善する能力を有する。したがって、本発明の治療方法は、患者の少なくとも２０％に対して、少なくともＡＣＲ２０の疾患状態改善をもたらすことにより、関節リウマチを治療可能である。更に、本発明の治療方法は、患者の少なくとも１０％に対して、少なくともＡＣＲ５０、より好ましくはＡＣＲ７０の疾患状態改善をもたらすことにより、関節リウマチを治療可能である。
【実施例】
【００８１】
次に以下の実施例を用いて本発明を更に説明する。
【００８２】
（実施例１：新たに単離されたＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を用いる抗体ＢＴ０６１のインビトロ増殖アッセイ）
＜方法＞
＜＜ヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞の単離＞＞
健常対照ドナーから５０ｍＬのＥＤＴＡ血液試料を採取した。既に記載されている通り、末梢血サンプルから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ヘルパーＴ細胞、及びキラーＴ細胞（Ｔｒｅｓｐ）を単離した（Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【００８３】
＜＜インビトロ増殖アッセイ＞＞
新たに単離したＴｒｅｇを、１μｇ／ｍＬのプレートに結合している抗体（ＢＴ０６１）、１μｇ／ｍＬの可溶性ＢＴ０６１、又は培地と共に４８時間プレインキュベートした。
【００８４】
２人のドナー（対象１及び対象２）から得られた新たに単離したＴｒｅｇ（２．５×１０４個、ドナーＡ）を、１μｇ／ｍＬの可溶性ＢＴ０６１又はプレートに結合しているＢＴ０６１のいずれかと共に４８時間プレインキュベートした。次いで、アロ刺激を行うために、Ｔ細胞が枯渇し且つ放射線照射された（３０グレイ）２×１０５個のＰＢＭＣ（ドナーＡ）の存在下で、第２のドナー（ドナーＢ）に由来するキラー細胞（Ｔｒｅｓｐ）としての１×１０５個のＴ細胞に、２．５×１０４個のプレインキュベートしたＴｒｅｇを移した。４日間刺激した後、１ウェル当たり１μＣｉの［３Ｈ］チミジンを添加し、更に１６時間後、増殖を測定した。
【００８５】
＜結果＞
Ｔｒｅｓｐ増殖のＴｒｅｇ媒介性阻害の割合を、Ｔｒｅｇの欠如下でＰＢＭＣと共にインキュベートされたＴｒｅｓｐの増殖を抑制する割合として図１に示す。２人のドナー（対象１及び対象２）から得られたＴｒｅｇについての結果を示す。斜線入り棒グラフは、可溶性抗体と共にプレインキュベートされたＴｒｅｇ細胞から得られた結果を表し、黒色棒グラフは、プレートに結合している抗体と共にプレインキュベートされたＴｒｅｇ細胞から得られた結果を表す。対照として、培地で処理したＴｒｅｇ（白色の棒グラフ）の抑制活性を示す。棒グラフ上の数字は、Ｔｒｅｓｐ増殖の阻害割合を表す。
【００８６】
図１が示すように、プレートに結合している抗体又は可溶性抗体と共にプレインキュベートしたＴｒｅｇは、培地のみと共にインキュベートしたＴｒｅｇとは対照的に、アロ刺激されたＴｒｅｓｐの平均的な増殖応答を低下させることができた。更に、プレートに結合している抗体による抑制は、可溶性抗体による抑制に比べて強かった。
【００８７】
インビボにおける生理学的条件下で、ＩｇＧ１抗体としてのＢＴ０６１は、Ｆｃ受容体発現細胞のＦｃ受容体に結合すると予測される。この相互作用により、均一に分布しているＢＴ０６１（ＣＤ４に結合している）は、標的細胞及びＦｃ受容体発現細胞の局所相互作用部位に動員されるので、ＢＴ０６１、延いてはＣＤ４の架橋が導かれる。ＢＴ０６１とＦｃ受容体発現細胞との相互作用は、プレートに結合している抗体で観察したときＴｒｅｇ標的細胞に、細胞表面上の極めて接近している位置に幾つかの標的分子（ＣＤ４）を補充する両方の機序と類似のシグナルを付与する。
【００８８】
（実施例２：関節リウマチ患者における臨床試験）
本発明の医薬組成物及びキットがＲＡを有効に治療する能力を、ＲＡに罹患している患者において示した。
【００８９】
ＭＴＸと併用したＢＴ０６１について研究した複合試験は、中程度〜重篤なＲＡ患者で実施された無作為プラセボ対照二重盲験第ＩＩ相試験を含んでいた。試験の開始前に少なくとも３ヶ月間、全ての患者に一定用量のＭＴＸを投与し、試験過程中１週間当たり１５ｍｇ〜２０ｍｇを全ての患者に経口投与又は筋肉内投与し続けた。
【００９０】
患者を３群に分けた。群Ｉの患者（１４人の患者）には、０．５ｍｇのＢＴ０６１及び１５ｍｇ〜２０ｍｇのＭＴＸを静脈内投与した。群ＩＩの患者（４２人の患者）には、２．０ｍｇのＢＴ０６１及び１５ｍｇ〜２０ｍｇのＭＴＸを静脈内投与した。群ＩＩＩの患者（１４人の患者）には、１５ｍｇ〜２０ｍｇのＭＴＸを投与した。患者に対する投与は、８週間に亘って１週間に１回実施した。
【００９１】
静脈内投与では、医学的に認められている手順に従って前記剤を前腕静脈に注入する。
【００９２】
ＡＣＲパラメータ（米国リウマチ学会ＡＣＲのホームページ）を評価することにより、特に圧痛関節数及び腫脹関節数と、以下のＣ反応性タンパク質（ＣＰＲ）及び赤血球沈降速度（ＥＳＲ）レベルとを調べることにより、投与期間中１週間に１回、及び投与後何週間にも亘って治療の有効性を評価した。また、これらパラメータは、０日目の「ベースライン」値を得るために試験前にも評価した。
【００９３】
Ｋｅｙｓｔｏｎｅら（２００４−トライアルＤＥ０１９）による抗ＴＮＦ−α抗体Ｈｕｍｉｒａ（アダリムマブ）及びＫｅｙｓｔｏｎｅら（２００９−前向き試験（Ｇｏ−Ｆｏｒｗａｒｄ  ｔｒｉａｌ））によるＳｉｍｐｏｎｉ（ゴリムマブ）を含む２つの公開されている第ＩＩＩ相試験で得られた最も有効な用量群の結果と、２ｍｇのＢＴ０６１＋ＭＴＸを投与した用量群ＩＩの患者から得られたデータとを比較した試験結果を図２〜４に示す。全ての試験について最も有効な用量群を示す。
比較目的のために含まれる先行技術の結果は、医薬組成物の用量が最適化された第ＩＩＩ相試験の結果であることに留意すべきである。
【００９４】
具体的には、図２Ａ及びＢは、ＡＣＲ２０スコアに達した２ｍｇ用量群患者の割合を示し、一方、図３Ａ及びＢ並びに図４Ａ及びＢは、それぞれＡＣＲ５０並びにＡＣＲ７０に達した２ｍｇ用量群患者の割合を示す。
【００９５】
図２〜４から分かるように、治療用抗ＴＮＦ−α抗体を用いた臨床試験では、ＡＣＲスコアの改善により測定したとき、最高治療活性に達するには通常数ヶ月必要である。一般的に、３ヶ月後にＡＣＲ２０応答を示す患者の割合は最高になり、平坦域に達する。ＡＣＲ５０では、４ヶ月後に平坦域に達し、ＡＣＲ７０では、６ヶ月後に平坦域に達する。
【００９６】
しかし、本発明の複合療法の結果は、多数の相違点を示す。具体的には、プラセボ補正された結果を示す図（図２Ｂ、３Ｂ、及び図４Ｂ）では、治療効果の発生が遅れ、ＡＣＲ２０スコアに達する患者の割合が８週目まで５％を超えないことが分かる。しかし、発生後治療効果は急速に上昇し、その結果、９週目にＡＣＲ５０に達している患者の割合は、ＴＮＦ−α抗体、Ｈｕｍｉｒａ、及びＳｉｍｐｏｎｉを用いた第ＩＩＩ相試験でＡＣＲ５０に達した患者の割合に匹敵する。ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、及びＡＣＲ７０に達した患者の割合は、７週目から９週目にかけて急速に上昇し、その結果、９週目までにＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、及びＡＣＲ７０に達した患者の割合は、それぞれ２５％、１８％、及び１７％になった。Ｈｕｍｉｒａ及びＳｉｍｐｏｎｉを用いた試験では、治療開始後２４週目〜２６週目まで、このＡＣＲ７０患者の割合には達しないことに留意すべきである。
【００９７】
更に、本発明者らは、ＢＴ０６１とＭＴＸとの併用療法で見られる副作用数が、ＢＴ０６１のみを用いて実施された試験で見られる副作用数よりも少ないため、ＭＴＸは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化させる治療抗体の副作用を低減する能力を有することを認めた。
【００９８】
これら結果は、リウマチ性疾患の治療における本発明のＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤とＭＴＸとの組み合わせの有効性及び驚くべき利点を示す。
【図１】
2015172060.tif 000004
【図２Ａ】
2015172060.tif 000005
【図２Ｂ】
2015172060.tif 000006
【図３Ａ】
2015172060.tif 000007
【図３Ｂ】
2015172060.tif 000008
【図４Ａ】
2015172060.tif 000009
【図４Ｂ】
2015172060.tif 000010
【図５】
2015172060.tif 000011
【図６】
2015172060.tif 000012
【図７】
2015172060.tif 000013
【図８】
2015172060.tif 000014
【配列表】
2015172060000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成27年6月11日(2015.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能なヒト化抗ＣＤ４抗体と、メトトレキサートとを別々に含むキットであって、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメインと、Ｌ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
前記Ｈ鎖Ｖドメイン及び前記Ｌ鎖Ｖドメインが、下記（ａ）及び（ｂ）の少なくともいずれかであるキット：
（ａ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹで表されるアミノ酸配列を含み、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴで表されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、配列番号１の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、配列番号２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【請求項２】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、非経口投与用である請求項１に記載のキット。
【請求項３】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、筋肉内投与用、静脈内投与用、又は皮下投与用である請求項２に記載のキット。
【請求項４】
メトトレキサートが、経口投与用、筋肉内投与用、静脈内投与用、又は皮下投与用である請求項１から３のいずれかに記載のキット。
【請求項５】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメイン、又は配列番号１及び配列番号２の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むＶドメインを有する請求項１から４のいずれかに記載のキット：
−Ｈ鎖Ｖドメイン：
ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
−Ｌ鎖Ｖドメイン：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）。
【請求項６】
０．２ｍｇ〜１０ｍｇの用量のヒト化抗ＣＤ４抗体を含み、前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が静脈内投与用である請求項１から５のいずれかに記載のキット。
【請求項７】
０．２ｍｇ〜５ｍｇの用量のヒト化抗ＣＤ４抗体を含み、前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が静脈内投与用である請求項６に記載のキット。
【請求項８】
０．５ｍｇ〜３ｍｇの用量のヒト化抗ＣＤ４抗体を含み、前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が静脈内投与用である請求項７に記載のキット。
【請求項９】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、静脈内投与用であり、且つ０．５ｍＬ〜５００ｍＬの投与体積で提供される請求項１から８のいずれかに記載のキット。
【請求項１０】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．５ｍＬ〜１．５ｍＬの投与体積を提供するか、又は前記投与体積で提供される請求項１から８のいずれかに記載のキット。
【請求項１１】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、１５ｍＬ〜２５ｍＬの投与体積を提供するか、又は前記投与体積で提供される請求項１から８のいずれかに記載のキット。
【請求項１２】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、皮下投与用又は筋肉内投与用であり、且つ０．１ｍＬ〜３ｍＬの投与体積で提供される請求項１から５のいずれかに記載のキット。
【請求項１３】
２０ｍｇ〜８０ｍｇの用量のヒト化抗ＣＤ４抗体を含み、前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が皮下投与用である請求項１から５、又は１２のいずれかに記載のキット。
【請求項１４】
５ｍｇ〜３０ｍｇの用量のメトトレキサートを含む請求項１から１３のいずれかに記載のキット。
【請求項１５】
ヒト化抗ＣＤ４抗体及びメトトレキサートの用量を別々に複数個含む請求項１から１４のいずれかに記載のキット。
【請求項１６】
少なくとも８個のメトトレキサートの用量と、少なくとも８個のヒト化抗ＣＤ４抗体の用量とを含む請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
患者におけるリウマチ性疾患を治療するための複合製剤であって、
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤及びメトトレキサートを含み、
前記剤が、ヒト化抗ＣＤ４抗体であり、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメインと、Ｌ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
前記Ｈ鎖Ｖドメイン及び前記Ｌ鎖Ｖドメインが、下記（ａ）及び（ｂ）の少なくともいずれかであり、
前記剤と、前記メトトレキサートとが、１週間以内に投与されることを特徴とする複合製剤：
（ａ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹで表されるアミノ酸配列を含み、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴで表されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、配列番号１の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、配列番号２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【請求項１８】
メトトレキサートを用いた治療を受けている患者におけるリウマチ性疾患を治療するためのＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤であって、
前記剤が、ヒト化抗ＣＤ４抗体であり、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメインと、Ｌ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
前記Ｈ鎖Ｖドメイン及び前記Ｌ鎖Ｖドメインが、下記（ａ）及び（ｂ）の少なくともいずれかであるＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤：
（ａ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹで表されるアミノ酸配列を含み、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴで表されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、配列番号１の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、配列番号２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【請求項１９】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能なヒト化抗ＣＤ４抗体を用いた治療を受けている患者におけるリウマチ性疾患を治療するためのメトトレキサートを含む組成物であって、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメインと、Ｌ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
前記Ｈ鎖Ｖドメイン及び前記Ｌ鎖Ｖドメインが、下記（ａ）及び（ｂ）の少なくともいずれかであるメトトレキサートを含む組成物：
（ａ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹで表されるアミノ酸配列を含み、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴで表されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、配列番号１の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、配列番号２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【請求項２０】
リウマチ性疾患が、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、及び強直性脊椎炎から選択される請求項１７から１９のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２１】
リウマチ性疾患が、関節リウマチである請求項２０に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２２】
疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に対して応答しない患者におけるリウマチ性疾患を治療するためのＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤であって、
前記患者が、前記剤と、メトトレキサートとを１週間以内に投与される患者であり、
前記剤が、ヒト化抗ＣＤ４抗体であり、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメインと、Ｌ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
前記Ｈ鎖Ｖドメイン及び前記Ｌ鎖Ｖドメインが、下記（ａ）及び（ｂ）の少なくともいずれかであるＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤：
（ａ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹで表されるアミノ酸配列を含み、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴで表されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、配列番号１の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、配列番号２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【請求項２３】
疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を用いた治療に対して応答しない患者におけるリウマチ性疾患を治療するためのメトトレキサートを含む組成物であって、
前記患者が、前記組成物と、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能なヒト化抗ＣＤ４抗体とを１週間以内に投与される患者であり、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、Ｈ鎖Ｖドメインと、Ｌ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
前記Ｈ鎖Ｖドメイン及び前記Ｌ鎖Ｖドメインが、下記（ａ）及び（ｂ）の少なくともいずれかであるメトトレキサートを含む組成物：
（ａ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、ＤＣＲＭＹ、ＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧ、及びＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹで表されるアミノ酸配列を含み、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹ、ＬＡＳＩＬＥＳ、及びＱＨＳＲＥＬＰＷＴで表されるアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記Ｈ鎖Ｖドメインが、配列番号１の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記Ｌ鎖Ｖドメインが、配列番号２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【請求項２４】
ＤＭＡＲＤが、メトトレキサートである請求項２２から２３のいずれかに記載のＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２５】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、非経口投与される請求項１７から２４のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２６】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与される請求項２５に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２７】
メトトレキサートが、経口投与、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与される請求項１７から２６のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２８】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．２ｍｇ〜１０ｍｇの量で患者に静脈内投与される請求項１７から２７のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項２９】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．２ｍｇ〜５ｍｇの量で患者に投与される請求項２８に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３０】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．５ｍｇ〜３ｍｇの量で患者に投与される請求項２９に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３１】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、２μｇ／ｋｇ〜１５０μｇ／ｋｇの量で患者に静脈内投与される請求項１７から２７のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３２】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、２μｇ／ｋｇ〜７５μｇ／ｋｇの量で患者に投与される請求項３１に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３３】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、５μｇ／ｋｇ〜４５μｇ／ｋｇの量で患者に投与される請求項３２に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３４】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．１ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に静脈内投与される請求項１７から２７のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３５】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．１ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜２．５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に投与される請求項３４に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３６】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．２５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜１．５ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に投与される請求項３５に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３７】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、２０ｍｇ〜８０ｍｇの量で患者に皮下投与される請求項１７から２７のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３８】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、８ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）〜５０ｍｇ／ｍ２（患者の体表面積）の量で患者に皮下投与される請求項１７から２７のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項３９】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、０．２ｍｇ／ｋｇ〜１．５ｍｇ／ｋｇの量で患者に皮下投与される請求項１７から２７のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４０】
ヒト化抗ＣＤ４抗体の単回用量が、患者に投与される請求項１７から３９のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４１】
ヒト化抗ＣＤ４抗体の複数回用量が、患者に投与される請求項１７から３９のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４２】
ヒト化抗ＣＤ４抗体及びメトトレキサートの少なくともいずれかが、最高１週間に１回投与される請求項４１に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４３】
ヒト化抗ＣＤ４抗体及びメトトレキサートの少なくともいずれかが、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回投与される請求項４２に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４４】
メトトレキサート及びヒト化抗ＣＤ４抗体が、少なくとも８週間投与される請求項４１から４３のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４５】
疾患の治療のために更なる治療剤が患者に投与されるものであり、前記更なる治療剤が、非ステロイド性抗炎症薬、抗炎症性ステロイド、金化合物、抗マラリア薬、葉酸、シクロスポリン、レフルノミド、アザチオプリン、スルファサラジン、ｄ−ペニシラミン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、ミノサイクリン、及びクロラムブシルから選択される請求項１７から４４のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４６】
リウマチ性疾患が関節リウマチであり、且つ複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物が米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコア付けシステムに従って、患者の疾患を少なくともＡＣＲ５０改善可能である請求項１７から４５のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４７】
患者の疾患の改善が、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコア付けシステムに従って少なくともＡＣＲ７０である請求項４６に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４８】
患者における少なくともＡＣＲ７０応答が、治療開始後６週目から８週目の間にもたらされる請求項４７に記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項４９】
ヒト化抗ＣＤ４抗体が、以下のポリペプチド配列により定義されるＶドメイン、又は配列番号１及び配列番号２の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含むＶドメインを有する請求項１７から４８のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物：
−Ｈ鎖Ｖドメイン：
ＥＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＣＲＭＹＷＬＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＳＶＫＳＥＮＹＧＡＮＹＡＥＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＳＡＳＹＹＲＹＤＶＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
−Ｌ鎖Ｖドメイン：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）。
【請求項５０】
メトトレキサートが、５ｍｇ〜３０ｍｇの量で患者に投与される請求項１７から４９のいずれかに記載の複合製剤、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞を活性化可能な剤、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項５１】
ヒト化抗ＣＤ４抗体と、メトトレキサートとを別々に含むキットであって、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、配列番号１により定義されるＨ鎖Ｖドメインと、配列番号２により定義されるＬ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを有するキット。
【請求項５２】
メトトレキサートを用いた治療を受けている患者におけるリウマチ性疾患を治療するためのヒト化抗ＣＤ４抗体であって、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、配列番号１により定義されるＨ鎖Ｖドメインと、配列番号２により定義されるＬ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを有するヒト化抗ＣＤ４抗体。
【請求項５３】
ヒト化抗ＣＤ４抗体を用いた治療を受けている患者におけるリウマチ性疾患を治療するためのメトトレキサートを含む組成物であって、
前記ヒト化抗ＣＤ４抗体が、配列番号１により定義されるＨ鎖Ｖドメインと、配列番号２により定義されるＬ鎖Ｖドメインと、ＩｇＧ１定常ドメインとを有するメトトレキサートを含む組成物。
【請求項５４】
リウマチ性疾患が、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、及び強直性脊椎炎から選択される請求項５２から５３のいずれかに記載のヒト化抗ＣＤ４抗体、又はメトトレキサートを含む組成物。
【請求項５５】
リウマチ性疾患が、関節リウマチである請求項５４に記載のヒト化抗ＣＤ４抗体、又はメトトレキサートを含む組成物。