(57)【要約】【課題】肺炎球菌血清型１４の糖を含む組み合わせの提供。【解決手段】髄膜炎菌リポオリゴ糖と肺炎球菌血清型１４莢膜糖とは、ヒト組織と交差反応できる抗原を共有する。本発明は、これらの２つの抗原を共投与した場合に自己反応性抗体の生成を最小限にするための種々の方法を提供する。本発明は、髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含む免疫原性組成物であって、前記ＬＯＳおよび／または前記ＣＳ１４が、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含まない組成物を提供する。【選択図】図３
2015163651.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮出願第６１／１６２，９９６号（２００９年３月２４日出願）からの優先権を主張する。この出願の完全な内容は、参考として本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、混合ワクチン、特に肺炎球菌血清型１４莢膜糖とリポオリゴ糖成分（例えばＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから）との両方を含有するものの分野にある。
【背景技術】
【０００３】
肺炎球菌としても知られるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、グラム陽性球状細菌である。現在の肺炎球菌ワクチンは、莢膜糖に基づく。承認された小児ワクチンは、（ａ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆからの結合体化糖の７価混合物であるＰＲＥＶＮＡＲ（商標）、（ｂ）血清型１、５および７Ｆについてもカバーする１０価結合体混合物であるＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（商標）、ならびに（ｃ）血清型３、６Ａおよび１９Ａについてもカバーする１３価結合体混合物であるＰＲＥＶＮＡＲ１３（商標）である。その他の９価、１０価、１１価および１３価結合体の組合せも公知である。
【０００４】
髄膜炎菌としても公知のＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは、グラム陰性の球状細菌である。現在の髄膜炎菌ワクチンも、莢膜糖に基づく。これらは、１価血清群Ｃ結合体ワクチン（ＭＥＮＪＵＧＡＴＥ（商標）、ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣ（商標）、ＮＥＩＳＶＡＣ−Ｃ（商標））と、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙについての４価結合体混合物（ＭＥＮＡＣＴＲＡ（商標））とを含む。血清群Ｂ（「ＭｅｎＢ」）に対する一般的な使用のために承認された有用なワクチンは、現在のところ存在しない。ＭｅｎＢワクチンを作製するための現在の研究努力は、外膜小胞（例えばＭＥＮＺＢ（商標）、ＨＥＸＡＭＥＮ（商標）、ＮＯＮＡＭＥＮ（商標））またはリポオリゴ糖および外膜タンパク質のような外膜からの精製された成分に焦点を当てている。外膜小胞（ＯＭＶ）に基づくＭｅｎＢワクチンが、近年、注目されている。例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅおよびＲＩＶＭ／ＮＶＩはそれぞれ、小胞に基づく製品を有する。
【０００５】
参考文献１（非特許文献１）は、１３価肺炎球菌結合体ワクチン（「１３ｖＰｎＣ」、ＷｙｅｔｈのＰＲＥＶＮＡＲ  １３ＴＭ）と９価ＭｅｎＢ外膜小胞ワクチン（ＮＯＮＡＭＥＮ（商標）、ＮＶＩ）とを組み合わせることにより形成された、肺炎球菌とＭｅｎＢの両方に対して免疫化するための組成物を開示している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｄｏｂｂｅｌｓｔｅｅｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００７）２５：２４９１〜６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
髄膜炎菌血清群Ｂと肺炎球菌の両方に対して防御するためのさらなる、そして改良された混合ワクチンに対する必要性がまだ存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の開示
本発明者は、参考文献１の混合ワクチンでの問題点を同定した。１３ｖＰｎＣ成分は、肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）を含み、ＭｅｎＢ成分中の小胞は、細菌外膜のリポオリゴ糖（ＬＯＳ；ＬＰＳともいう）成分を含む。本発明者は、ＬＯＳ（少なくとも髄膜炎菌イムノタイプＬ２、Ｌ３、Ｌ４およびＬ７について）とＣＳ１４とが、四糖構造Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃを共有することを認識した。この四糖は、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）として公知であり、ヒト、特に母乳にも存在し、ラクト−Ｎ−ネオテトラオシルセラミド（パラグロボシドとしても公知）の末端部分としても存在し、これは、ＡＢＨおよびＰ１血液型スフィンゴ糖脂質ならびにいくつかのガングリオシドの生合成前駆体である。ＬＮｎＴエピトープは、通常、ヒト組織においてｉｎ  ｖｉｖｏで末端シアリル化（ＭｅｎＢでも見られるが、ＣＳ１４では見られない）により、いくつかの状況（例えば低温）において遮蔽されているが、これは、免疫到達可能になり、このエピトープへの抗体の結合は、溶血を導く。この近づきやすさは、寒冷凝集素症またはＡＩＨＡ（自己免疫性溶血性貧血）として公知の自己免疫反応を導く。
【０００９】
本発明者は、ＭｅｎＢのＬＯＳおよびＣＳ１４の両方におけるＬＮｎＴ構造の存在が、これらの抗原のいずれかを患者に投与することにより、抗ＬＮｎＴ抗体のレベルの増加をもたらす可能性があり得ることを意味することを認識した。これらの２つの抗原を共投与した場合、抗原をワクチンアジュバントと共に投与した場合は特に、非常に高レベルの抗ＬＮｎＴ抗体が惹起される危険性がある。よって、ＭｅｎＢのＬＯＳとＣＳ１４を共に含む混合ワクチンは、ワクチンを冬の間に投与する場合は特に、患者においてＡＩＨＡの原因となる危険性がより高いことがある。本発明は、このようなワクチンにおけるＬＮｎＴエピトープの免疫原性効果を制限することによりこの危険性を減少させることを目的とし、ＭｅｎＢと肺炎球菌抗原とを共投与する場合に自己反応性抗体を生成する危険性を最小限にする種々の方法を提供する。
【００１０】
第１の態様において、ＬＮｎＴエピトープを、ＬＯＳもしくはＣＳ１４のいずれかまたは両方において破壊する。よって、本発明は、髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含む免疫原性組成物であって、前記ＬＯＳおよび／または前記ＣＳ１４が、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含まない組成物を提供する。免疫原性組成物は、典型的には、アジュバントをさらに含む。エピトープがＬＯＳおよびＣＳ１４の一方にだけ存在する場合、これは、ＬＯＳに存在しないことが好ましい。
【００１１】
第２の態様において、ＬＮｎＴエピトープは、ＬＯＳおよびＣＳ１４の両方に保持されるが、ワクチンはアジュバント無添加である。よって、本発明は、髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含むアジュバント無添加免疫原性組成物であって、前記ＬＯＳおよび前記ＣＳ１４が共にＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含む組成物を提供する。例えば、ＬＯＳは、髄膜炎菌イムノタイプＬ２またはＬ３（またはこれらの両方の混合物が含まれ得る）からであり得る。
【００１２】
第３の態様において、ＬＮｎＴエピトープは、ＬＯＳおよびＣＳ１４の両方に保持されるが、用量が低レベルに低減される。よって、本発明は、髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含む免疫原性組成物であって、（ｉ）前記ＬＯＳおよび前記ＣＳ１４が共にＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、（ｉｉ）ＬＯＳの濃度が５μｇ／ｍｌ未満であり、（ｉｉｉ）ＣＳ１４の濃度が５μｇ／ｍｌ未満である組成物を提供する。
【００１３】
第４の態様において、ワクチンは、ＭｅｎＢに対するＬＮｎＴ含有ＬＯＳを用いるが、肺炎球菌に対するタンパク質抗原を用いることにより、ＭｅｎＢおよび１４型肺炎球菌の両方に対して作製される。よって、本発明は、髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌ポリペプチド抗原とを含む免疫原性組成物であって、（ｉ）前記ＬＯＳが、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、（ｉｉ）前記肺炎球菌ポリペプチドが、血清型１４肺炎球菌に対して有効な免疫応答を惹起でき、（ｉｉｉ）前記組成物が、肺炎球菌血清型１４莢膜糖を含まない組成物を提供する。
【００１４】
第５の態様において、ワクチンは、ＬＮｎＴ含有ＣＳ１４莢膜糖を用いるが、ＭｅｎＢに対する非ＬＯＳ抗原を用いることにより、ＭｅｎＢおよび１４型肺炎球菌の両方に対して作製される。よって、本発明は、髄膜炎菌ポリペプチドと肺炎球菌血清型１４莢膜糖とを含む免疫原性組成物であって、（ｉ）前記肺炎球菌血清型１４莢膜糖が、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、（ｉｉ）前記髄膜炎菌ポリペプチドが、血清群Ｂ髄膜炎菌に対して有効な免疫応答を惹起でき、（ｉｉｉ）前記組成物が、髄膜炎菌リポオリゴ糖を含まない組成物を提供する。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、１以下の髄膜炎菌ＰｏｒＡ血清サブタイプを含み、例えば、これらは、ＰｏｒＡ外膜タンパク質を含まないことがある。
【００１６】
髄膜炎菌リポオリゴ糖
髄膜炎菌ＬＯＳは、細菌の外膜の外側の単層で見出されるグルコサミンベースのリン脂質である。これは、リピドＡ部分とコアオリゴ糖領域とを含み、リピドＡ部分は、膜において疎水性アンカーとして作用する。オリゴ糖コア中の不均質性が、異なる髄膜炎菌株の間での構造的および抗原的多様性を生じ、これは、株を１２のイムノタイプ（Ｌ１〜Ｌ１２）に細分するために用いられている。図１は、Ｌ３イムノタイプについてのコアの糖を示す。ＨｅｐＩ（ヘプトース）に連結したα鎖は、シアル酸キャップを有するＬＮｎＴ四糖を含有する。同じ構造が、イムノタイプＬ７およびＬ９において観察される。Ｌ２およびＬ４イムノタイプは、Ｌ３と同じα鎖を含むが、ＨｅｐＩＩに付着するβおよび／またはγ鎖が異なる。ＫＤＯＩ残基（２−ケト−３−デオキシ−オクツロソン酸）は、ＬＯＳのリピドＡ部分に付着し、しばしば、第２のＫＤＯ残基（図１においてＫＤＯＩＩと示す）にも連結している。
【００１７】
Ｌ２およびＬ３α鎖は、ＬＮｎＴ四糖を含む。本発明がＬＮｎＴ四糖を含まないＬＯＳを用いる場合、これは、異なるイムノタイプから（例えばＬ１、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６またはＬ８から）のＬＯＳを用い得る。いくつかの実施形態において、しかし、Ｌ２および／またはＬ３エピトープ（それらのＬＮｎＴエピトープ以外）を保持することが望ましいことがある。これは、α鎖内でＬＮｎＴ四糖を合成する能力が破壊されるように操作された変異体株を用いることにより、便利に達成できる。関連する生合成付加を担う酵素のノックアウトによりこの目的が達成されることが公知である（例えば参考文献２〜７を参照されたい）。例えば、ＬｇｔＢ酵素のノックアウトは、ＬＮｎＴの末端ガラクトースの付加を妨げると共に、α鎖の末端シアル酸の下流の付加も妨げる。ＬｇｔＡ酵素のノックアウトは、ＬＮｎＴのＮ−アセチル−グルコサミンの付加および、下流の付加も妨げる。ＬｇｔＡノックアウトは、問題の株がｌｇｔＣ遺伝子を有する場合（例えばＬ３イムノタイプを有する血清群Ｂ髄膜炎菌のＭＣ５８株は、ｌｇｔＡとｌｇｔＢとｌｇｔＥとからなり、ｌｇｔＣおよびｌｇｔＤを含まない）に、ＬｇｔＣノックアウトを伴い得る。同様に、ＬｇｔＥおよび／またはＧａｌＥ酵素のノックアウトは、内部ガラクトースの付加を妨げ、ＬｇｔＦのノックアウトは、ＨｅｐＩ残基へのグルコースの付加を妨げる。これらのノックアウトのいずれも、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ７またはＬ９イムノタイプ株におけるＬＮｎＴ四糖の破壊のために、単独または組み合わせて用いることができる。有用な免疫原性を保持しながらＬＮｎＴエピトープが除去されたＬＯＳを提供するので、少なくともＬｇｔＢのノックアウトが好ましい。
【００１８】
ＬＮｎＴエピトープを破壊する変異以外に、ｇａｌＥ遺伝子のノックアウトも、有用な改変ＬＯＳを提供し、リピドＡ脂肪トランスフェラーゼ遺伝子も同様にノックアウトされ得る［８］。少なくとも１つの第１級Ｏ連結脂肪酸を、ＬＯＳから除去してよい［９］。ＬＯＳ分子あたりの第２級アシル鎖の数が低減されたＬＯＳを用いることもできる［１０］。ＬＯＳは、典型的に、少なくともＧｌｃＮＡｃ−Ｈｅｐ２ホスホエタノールアミン−ＫＤＯ２−リピドＡ構造を含む［１１］。ＬＯＳは、ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ三糖を含むが、ＬＮｎＴ四糖を欠くことがある。
【００１９】
ＬＯＳは、本発明の組成物中に種々の形態で含まれ得る。これは、精製された形態にてそれ自体で用いてよい。これは、担体タンパク質と結合体化してよい。これは、髄膜炎菌外膜小胞内に存在してよい。これは、髄膜炎菌外膜小胞と結合体化してよい。
【００２０】
ＬＯＳが結合体化されている場合、結合体化は、ＬＯＳ中のリピドＡ部分を介するか、または任意のその他の適切な部分、例えばそのＫＤＯ残基によるものであってよい。ＬＯＳのリピドＡ部分が存在しない場合、このような代替の連結が必要となる。ＬＯＳについての結合体化技術は、参考文献９、１１、１２、１３などから公知である。これらの結合体のために好ましい担体タンパク質は、ジフテリアもしくは破傷風毒素またはそのトキソイドもしくは変異体のような細菌毒素である。これらは、結合体ワクチンにおいて通常用いられる。ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体が有用である［１４］。その他の適切な担体タンパク質は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質複合体［１５］、合成ペプチド［１６、１７］、熱ショックタンパク質［１８、１９］、百日咳タンパク質［２０、２１］、サイトカイン［２２］、リンホカイン［２２］、ホルモン［２２］、成長因子［２２］、Ｎ１９［２４］のような種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［２３］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅからのタンパク質Ｄ［２５〜２７］、ニューモリシン［２８］またはその非毒性誘導体［２９］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［３０］、鉄取り込みタンパク質［３１］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅからの毒素ＡまたはＢ［３２］、組換えＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａエキソタンパク質Ａ（ｒＥＰＡ）［３３］などを含む。
【００２１】
ＬＯＳは、小胞内に存在し得る。このような小胞は、髄膜炎菌外膜を破壊するかまたは小疱形成（ｂｌｅｂｂｉｎｇ）させて、外膜からのタンパク質成分とＬＯＳとを含む小胞を形成することにより得られる任意のプロテオリポソーム性小胞を含む。よって、この用語は、ＯＭＶ（時に、「小疱（ｂｌｅｂ）」ともよばれる）、微小胞（ＭＶ［３４］）および「未変性ＯＭＶ」（「ＮＯＭＶ」［３５］）を含む。
【００２２】
ＭＶおよびＮＯＭＶは、細菌の成長中に自発的に形成され、培養培地中に放出される、天然に存在する膜小胞である。ＭＶは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａをブロス培養培地中で培養し、全細胞をブロス培養培地中のより小さいＭＶから分離し（例えばろ過または低速遠心分離により、より小さい小胞でなく細胞だけをペレットにすることにより）、次いで、ＭＶを、細胞を除いた培地から回収する（例えばろ過、ＭＶの分別沈殿（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）もしくは凝集形成、高速遠心分離によりＭＶをペレットにすることにより）ことにより得ることができる。ＭＶの生成において用いる株は、通常、培養において生成されるＭＶの量に基づいて選択でき、例えば、参考文献３６および３７は、ＭＶの生成が高いＮｅｉｓｓｅｒｉａについて記載している。
【００２３】
ＯＭＶは、細菌から人工的に調製され、洗浄剤処理（例えばデオキシコール酸塩）を用いて、または洗浄剤でない手段（例えば参考文献３８を参照されたい）により調製してよい。ＯＭＶを形成する技術は、細菌を胆汁酸塩洗浄剤（例えばリトコール酸、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、コール酸、ウルソコール酸などの塩、デオキシコール酸ナトリウム［３９および４０］が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａを処理するために好ましい）で、洗浄剤を沈殿させないように十分に高いｐＨにて処理すること［４１］を含む。その他の技術は、洗浄剤の実質的な非存在下で［３８］、超音波処理、均質化、微小流動化、キャビテーション、浸透圧ショック、粉砕、フレンチプレス、ブレンドなどのような技術を用いて行ってよい。洗浄剤を全く用いないかまたは少量で用いる方法は、ＮｓｐＡのような有用な抗原を保持できる［３８］。よって、方法は、約０．５％またはより低い、例えば約０．２％、約０．１％、＜０．０５％もしくはゼロのデオキシコール酸塩を含むＯＭＶ抽出緩衝液を用いてよい。
【００２４】
ＯＭＶ調製のための有用なプロセスは、参考文献４２に記載され、高速遠心分離の代わりにむしろ粗ＯＭＶに対する限外ろ過を含む。プロセスは、限外ろ過を行った後に超遠心分離のステップを含んでよい。
【００２５】
本発明で用いるための小胞は、任意の髄膜炎菌株から調製できる。小胞は、通常、血清群Ｂ株からであるが、Ａ、Ｃ、Ｗ１３５またはＹのようなＢ以外の血清型からこれらを調製することが可能である（例えば参考文献４１は、血清群Ａについてのプロセスを開示する）。株は、任意の血清型（例えば１、２ａ、２ｂ、４、１４、１５、１６など）、任意の血清サブタイプ、および任意のイムノタイプ（例えばＬ１；Ｌ２；Ｌ３；Ｌ３，３，７；Ｌ１０など）のものであってよい。髄膜炎菌は、高度侵襲性および高度病原性の系列を含む任意の適切な系列、例えば以下の７つの高度侵襲性系列のいずれか：サブグループＩ；サブグループＩＩＩ；サブグループＩＶ−１；ＥＴ−５菌群（ｃｏｍｐｌｅｘ）；ＥＴ−３７菌群；Ａ４クラスタ；系列３からであってよい。これらの系列は、多座位酵素電気泳動（ＭＬＥＥ）により規定されているが、多座位配列タイピング（ＭＬＳＴ）を用いても髄膜炎菌が分類されている［参考文献４３］。例えば、ＥＴ−３７菌群は、ＭＬＳＴによりＳＴ−１１菌群であり、ＥＴ−５菌群は、ＳＴ−３２であり（ＥＴ−５）、系列３は、ＳＴ４１／４４である、などである。小胞は、以下のサブタイプの１つを有する株から調製できる：Ｐ１．２；Ｐ１．２，５；Ｐ１．４；Ｐ１．５；Ｐ１．５，２；Ｐ１．５，ｃ；Ｐ１．５ｃ，１０；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．７，１６ｂ；Ｐ１．７ｈ，４；Ｐ１．９；Ｐ１．１５；Ｐ１．９，１５；Ｐ１．１２，１３；Ｐ１．１３；Ｐ１．１４；Ｐ１．２１，１６；Ｐ１．２２，１４。
【００２６】
本発明で用いられる小胞は、野生型髄膜炎菌株または変異体髄膜炎菌株から調製し得る。例えば、参考文献４４は、改変ｆｕｒ遺伝子を有するＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓから得られる小胞の調製を開示している。参考文献５１は、ｎｓｐＡ発現が、ｐｏｒＡおよびｃｐｓノックアウトと同時に上方調節されるはずであることを教示している。ＯＭＶ生成のためのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのさらなるノックアウト変異体は、参考文献３、５１および５２に開示されている。参考文献４５は、ｆＨＢＰが上方調節された小胞を開示している。参考文献４６は、６つの異なるＰｏｒＡサブタイプを発現するように改変された株からの小胞の構築を開示している。これらのまたはその他の変異体は全て、本発明で用いることができる。
【００２７】
よって、本発明で用いられる株は、いくつかの実施形態において、１より多いＰｏｒＡサブタイプを発現する。６価および９価のＰｏｒＡ株が、以前に構築されている。株は、２、３、４、５、６、７、８または９のＰｏｒＡサブタイプ：Ｐ１．７，１６；Ｐ１．５−１，２−２；Ｐ１．１９，１５−１；Ｐ１．５−２，１０；Ｐ１．１２−１，１３；Ｐ１．７−２，４；Ｐ１．２２，１４；Ｐ１．７−１，１および／またはＰ１．１８−１，３，６を発現してよい。その他の実施形態において、しかし、株は、ＰｏｒＡ発現について下方調節されてよく、すなわち、ＰｏｒＡの量が野生型のレベルに対して（例えば参考文献５０に開示されるＨ４４／７６株に対して）少なくとも２０％（例えば≧３０％、≧４０％、≧５０％、≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、≧９５％など）低減されているかまたはノックアウトさえされている。
【００２８】
有利には、髄膜炎菌のＬｇｔＢ−ｖｅ株から調製された小胞は、組合せ調製物において抗ＣＳ１４応答を改善することが示されている。
【００２９】
ＬＯＳは、参考文献４７に記載されるような固定（すなわち相変動性でない）ＬＯＳイムノタイプを有する株（例えば遺伝子操作された髄膜炎菌株）からであってよい。例えば、Ｌ２およびＬ３  ＬＯＳイムノタイプを固定してよい。このような株は、イムノタイプ間のスイッチング率が、元の野生型株に対して１／２未満に（＞１／５０にさえ）低減されてよい。参考文献４７は、ｌｇｔＡおよび／またはｌｇｔＧ遺伝子生成物の改変によりこの結果をどのようにして達成できるかについて開示している。
【００３０】
いくつかの実施形態において、株は、あるタンパク質を過剰発現（対応する野生型株に対して）してよい。例えば、株は、ＮｓｐＡ、タンパク質２８７［４８］、ｆＨＢＰ［４５］、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［４９］、Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ［４９］などを過剰発現してよい。
【００３１】
いくつかの実施形態において、株は、参考文献３および５０〜５２に開示されるノックアウトおよび／または過剰発現変異体の１または複数を含んでよい。下方調節および／またはノックアウトのために有用な遺伝子は、（ａ）Ｃｐｓ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｐｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［５０］；（ｂ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｐｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｈｏＰ、ＰｉｌＣ、ＰｍｒＥ、ＰｍｒＦ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［５１］；（ｃ）ＥｘｂＢ、ＥｘｂＤ、ｒｍｐＭ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＧａｌＥ、ＬｂｐＡ、ＬｐｂＢ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡおよび／またはＴｂｐＢ［５２］；ならびに（ｄ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＯｐＡ、ＯｐＣ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＤ、ＳｙｎＡ、ＳｙｎＢおよび／またはＳｙｎＣ［３］を含む。
【００３２】
変異体株を用いる場合、いくつかの実施形態において、これは、所望によりＬＮｎＴ破壊変異（複数可）に加えて、以下の特徴の１もしくは複数または全てを有してよい。（ｉ）上方調節されたＴｂｐＡ；（ｉｉ）上方調節されたＮｈｈＡ；（ｉｉｉ）上方調節されたＯｍｐ８５；（ｉｖ）上方調節されたＬｂｐＡ；（ｖ）上方調節されたＮｓｐＡ；（ｖｉ）ノックアウトされたＰｏｒＡ；（ｖｉｉ）下方調節またはノックアウトされたＦｒｐＢ；（ｖｉｉｉ）下方調節またはノックアウトされたＯｐａ；（ｉｘ）下方調節またはノックアウトされたＯｐｃ；（ｘ）欠失されたｃｐｓ遺伝子複合体。
【００３３】
有利には、小胞中のＬＯＳは、ＬＯＳとタンパク質成分とを小胞中で連結するように（「小疱内」結合体化［３］）処理できる。
【００３４】
ＬＯＳは、例えばＬ３について、そのヘプトースＩＩ残基に付着したＧｌｃＮａｃ残基上でＯ−アセチル化されてよい［５３］。
【００３５】
免疫原性組成物は、１より多い型のＬＯＳ、例えば髄膜炎菌イムノタイプＬ２およびＬ３からのＬＯＳを含むことができる。例えば、参考文献５４に開示されるＬＯＳの組合せを用いてよい。
【００３６】
いくつかの実施形態において、ＬＯＳは、５μｇ／ｍｌ未満、例えば≦４μｇ／ｍｌ、≦３μｇ／ｍｌ、≦２μｇ／ｍｌ、≦１μｇ／ｍｌで組成物中に存在する。この低濃度は、ＣＳ１４がＬＮｎＴエピトープを保持する場合に有用であり得る。
【００３７】
ＬＯＳ抗原は、好ましくは、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００３８】
肺炎球菌血清型１４莢膜糖
本発明の組成物は、肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）を含む。参考文献５５は、ＣＳ１４が、図２に示す反復構造を含むことを報告している。
【００３９】
本発明で用いられるＣＳ１４糖は、通常、野生型反復単位を含むが、いくつかの実施形態において、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含まないように改変され得る。この改変は、１もしくは複数の関連する生合成酵素のノックアウト、あるいは四糖中の４つの残基の１もしくは複数を改変するような糖の化学的および／または酵素的処理により達成できる。例えば、Ｃｙｔｏｐｈａｇａ  ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃａの培養上清から精製されたエンド−β−ガラクトシダーゼは、ＣＳ１４を含む影響を受けやすい多糖のガラクトースβ（１→４）グルコース結合の加水分解を触媒する［５５］。
【００４０】
ＣＳ１４は、Ｎ−アセチル化されていてよい。参考文献５６に記載されるように、例えば、これは、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％より多くＮ−アセチル化されてよい。
【００４１】
ＣＳ１４は、典型的には、組成物中に結合体として含まれる。このような結合体に適切な担体タンパク質は、ジフテリアもしくは破傷風毒素またはそのトキソイドもしくは変異体のような上記の例えば細菌毒素、例えばＣＲＭ１９７、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質複合体、合成ペプチド、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｎ１９のような種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅからのタンパク質Ｄ、ニューモリシンまたはその非毒性誘導体、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ、鉄取り込みタンパク質、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅからの毒素ＡまたはＢ、ｒＥＰＡなどである。ＣＳ１４に特に有用な担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄである。ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）に見られるＣＲＭ１９７は、非常に有用である。
【００４２】
担体分子は、ＣＳ１４に、直接またはリンカーを介して共有結合によって結合体化してよい。種々のリンカー、例えば遊離の−ＮＨ２基（例えばアミノ化により糖に導入される）とアジピン酸（例えばジイミド活性化を用いて）とのカップリングと、次いで得られた糖−アジピン酸中間体へのタンパク質のカップリングにより形成し得る［５７、５８］アジピン酸リンカーが公知である。別の好ましい型の連結は、改変糖の遊離のヒドロキシル基とＣＤＩとの反応［５９、６０］と、その後のタンパク質との反応によりカルバメート連結を形成することにより形成され得るカルボニルリンカーである。その他のリンカーは、β−プロピオンアミド［６１］、ニトロフェニル−エチルアミン［６２］、ハロアシルハロゲン化物［６３］、グリコシド結合による連結［６４］、６−アミノカプロン酸［６５］、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）［６６］、アジピン酸ジヒドラジドＡＤＨ［６７］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［６８］などを含む。カルボジイミド縮合も用いることができる［６９］。
【００４３】
還元的アミノ化によるＣＳ１４の結合体化を用いることができる。糖は、過ヨウ素酸塩を用いてまず酸化してアルデヒド基を導入し、これが、次いで、担体タンパク質との直接的な共有結合による連結を、還元的アミノ化により例えばリジンのε−アミノ基に形成できる。糖が分子あたりに複数のアルデヒド基を含む場合、この連結技術は、複数のアルデヒドが複数の担体アミンと反応した架橋生成物を導くことができる。
【００４４】
ＣＳ１４糖は、肺炎球菌から調製される全長のインタクトな糖を含んでよく、かつ／または全長の糖のフラグメントを含んでよく、すなわち、糖は、細菌において見られる天然の莢膜糖よりも短くてよい。糖は、よって、解重合されてよく、この解重合は、糖の精製中もしくはその後であるが、結合体化の前に生じる。解重合は、糖の鎖長を低減する。解重合は、免疫原性のために最適な鎖長を提供し、かつ／または糖の物理的管理しやすさのために鎖長を低減するために用いることができる。Ｐｒｅｖｎａｒ（商標）に見られるインタクトなＣＳ１４が好ましい。
【００４５】
いくつかの実施形態において、ＣＳ１４は、組成物中に５μｇ／ｍｌ未満、例えば≦４μｇ／ｍｌ、≦３μｇ／ｍｌ、≦２μｇ／ｍｌ、≦１μｇ／ｍｌで存在する。この低濃度は、ＬＯＳがＬＮｎＴエピトープを保持する場合に有用であり得る。約４μｇ／ｍｌの濃度が便利である。
【００４６】
ＣＳ１４抗原は、好ましくは、ＣＳ１４と結合する抗莢膜抗体を惹起でき、例えば≧０．２０μｇ／ｍＬの抗ＣＳ１４抗体レベルを惹起できる［７０］。抗体は、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）および／またはオプソニン作用活性（ＯＰＡ）の測定により評価してよい。ＥＩＡ法は、広範に確認されており、抗体濃度とワクチン効力との間に関連が存在する。
【００４７】
代替の髄膜炎菌抗原
本発明のいくつかの実施形態において、組成物は、ＬＮｎＴ含有ＣＳ１４莢膜糖を含むが、ＭｅｎＢに対する非ＬＯＳ抗原を含む。ＬＯＳの代替として、ｆＨＢＰ、２８７、ＮａｄＡ、ＮｓｐＡ、ＨｍｂＲ、ＮｈｈＡ、Ａｐｐおよび／またはＯｍｐ８５のようなポリペプチド抗原が挙げられる。これらの抗原は、精製ポリペプチド、例えば組換えポリペプチドとして有用に存在する。
【００４８】
髄膜炎菌抗原は、好ましくは、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００４９】
ｆＨＢＰ（Ｈ因子結合タンパク質）
本発明の組成物は、ｆＨＢＰ抗原を含んでよい。ｆＨＢＰ抗原は、詳細に特徴決定されている。ｆＨＢＰ抗原は、タンパク質「７４１」（参考文献８１中の配列番号２５３５および２５３６）、「ＮＭＢ１８７０」、「ＧＮＡ１８７０」［参考文献７１〜７３］、「Ｐ２０８６」、「ＬＰ２０８６」または「ＯＲＦ２０８６」［７４〜７６］としても公知である。これは、天然ではリポタンパク質であり、全ての髄膜炎菌血清群にわたって発現されている。ｆＨｂｐのＣ末端免疫優性ドメイン（「ｆＨｂｐＣ」）の構造は、ＮＭＲにより決定されている［７７］。タンパク質のこの部分は、８本鎖のβバレルを形成し、その鎖は、種々の長さのループで接続されている。バレルの前には、短いαヘリックスとフレキシブルＮ末端テイルがある。
【００５０】
ｆＨＢＰ抗原は、３つの別々のバリアントに当てはまり［７８］、ある所定のファミリーに対して産生された血清が、同じファミリー内で殺菌性であるが、その他の２つのファミリーの１つを発現する株に対しては活性でない、すなわちファミリー内交差防御が存在するが、ファミリー間交差防御は存在しないことが見出されている。本発明は、単一ｆＨＢＰバリアントを用いることができるが、２または３のバリアントからのｆＨＢＰを含むことが有用である。
【００５１】
本発明が単一ｆＨＢＰバリアントを用いる場合、組成物は、（ａ）配列番号１と少なくともａ％の配列同一性を有し、かつ／または配列番号１からの少なくともｘ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；あるいは（ｂ）配列番号２と少なくともｂ％の配列同一性を有し、かつ／または配列番号２からの少なくともｙ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列；あるいは（ｃ）配列番号３と少なくともｃ％の配列同一性を有し、かつ／または配列番号３からの少なくともｚ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドを含んでよい。
【００５２】
本発明が２または３のバリアントからのｆＨＢＰを用いる場合、組成物は、（ａ）配列番号１と少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１からの少なくともｘ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１ポリペプチド；（ｂ）配列番号２と少なくともｂ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号２からの少なくともｙ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２ポリペプチド；および／あるいは（ｃ）配列番号３と少なくともｃ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号３からの少なくともｚ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第３ポリペプチドから選択される２または３の異なるｆＨＢＰの組合せを含んでよい。第１、第２および第３ポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を有する。
【００５３】
本発明が２つのバリアントからのｆＨＢＰを用いる場合、組成物は、（ａ）配列番号１と少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１からの少なくともｘ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１ポリペプチドと、（ｂ）配列番号２と少なくともｂ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号２からの少なくともｙ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２ポリペプチドとの両方を含み得る。第１および第２ポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を有する。
【００５４】
本発明が２つのバリアントからのｆＨＢＰを用いる場合、組成物は、（ａ）配列番号１と少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１からの少なくともｘ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第１ポリペプチドと、（ｂ）配列番号３と少なくともｃ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号３からの少なくともｚ隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含む第２ポリペプチドとの両方を含み得る。第１および第２ポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を有する。
【００５５】
ａの値は、少なくとも８５であり、例えば８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい。ｂの値は、少なくとも８５であり、例えば８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい。ｃの値は、少なくとも８５であり、例えば８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５またはそれより大きい。ａ、ｂおよびｃの値は、本質的に互いに関連しない。
【００５６】
ｘの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｙの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｚの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｘ、ｙおよびｚの値は、本質的に互いに関連しない。配列番号１、２または３のフラグメントは、好ましくは、関連する配列番号のエピトープを含む。
【００５７】
有用な組成物は、配列番号３と少なくとも９０％（例えば少なくとも９３％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号３からの少なくとも４０隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み得る。
【００５８】
いくつかの実施形態において、ｆＨＢＰポリペプチド（複数可）は、例えばＮ末端システインにて脂質付加され、通常、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システインを形成する。その他の実施形態において、これらは脂質付加されない。
【００５９】
ｆＨＢＰの投与は、好ましくは、配列番号１、２または３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起する。本発明で用いるために有利なｆＨＢＰ抗原は、被験体への投与の後に殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００６０】
１または複数のｆＨＢＰポリペプチドが存在する場合、ｆＨＢＰの全用量は、６０μｇ／用量から２００μｇ／用量の間であってよい。
【００６１】
２８７
本発明の組成物は、２８７抗原を含んでよい。２８７抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ２１３２（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２７３８８；本明細書において配列番号９）として含まれた。多くの株からの２８７抗原の配列が、それ以降公開されている。例えば、２８７の対立遺伝子型は、参考文献８０の図５および１５、参考文献８１の実施例１３および図２１（その中の配列番号３１７９〜３１８４）で見ることができる。２８７抗原の種々の免疫原性フラグメントも報告されている。
【００６２】
本発明で用いるために好ましい２８７抗原は、（ａ）配列番号９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号９からのエピトープを含む。
【００６３】
本発明の最も有用な２８７抗原は、被験体に投与した後に、配列番号９のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利な２８７抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００６４】
ＮａｄＡ（ナイセリア付着因子Ａ）
本発明の組成物は、ＮａｄＡ抗原を含んでよい。ＮａｄＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ１９９４（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２７２５６；本明細書において配列番号１０）として含まれた。多くの株からのＮａｄＡ抗原の配列がそれ以降公開され、ナイセリアの付着因子としてのタンパク質活性は、詳細に文書化されている。ＮａｄＡの種々の免疫原性フラグメントも報告されている。
【００６５】
本発明で用いるために好ましいＮａｄＡ抗原は、（ａ）配列番号１０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１０からのエピトープを含む。
【００６６】
本発明の最も有用なＮａｄＡ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１０のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＮａｄＡ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。配列番号６は、あるそのようなフラグメントである。
【００６７】
ＮｓｐＡ（ナイセリア表面タンパク質Ａ）
本発明の組成物は、ＮｓｐＡ抗原を含んでよい。ＮｓｐＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ０６６３（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２５８８８；本明細書において配列番号１１）として含まれた。抗原は、参考文献８２および８３から、以前に公知であった。多くの株からのＮｓｐＡ抗原の配列が、それ以降公開されている。ＮｓｐＡの種々の免疫原性フラグメントも報告されている。
【００６８】
本発明で用いるために好ましいＮｓｐＡ抗原は、（ａ）配列番号１１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１１からのエピトープを含む。
【００６９】
本発明の最も有用なＮｓｐＡ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１１のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＮｓｐＡ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００７０】
ＨｍｂＲ
本発明の組成物は、髄膜炎菌ＨｍｂＲ抗原を含んでよい。全長ＨｍｂＲ配列は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ１６６８（本明細書において配列番号７）として含まれた。参考文献８４は、異なる株からのＨｍｂＲ配列（本明細書において配列番号８）を報告している。配列番号７と８は、１アミノ酸長異なり、９４．２％の同一性を有する。
【００７１】
本発明は、全長ＨｍｂＲ配列を含むポリペプチドを用いることができるが、部分的なＨｍｂＲ配列を含むポリペプチドを頻繁に用いる。よって、いくつかの実施形態において、本発明に従って用いられるＨｍｂＲ配列は、配列番号７と少なくともｉ％（ここで、ｉの値は、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９またはそれより多い）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでよい。別の実施形態において、本発明に従って用いられるＨｍｂＲ配列は、配列番号７からの少なくともｊ連続アミノ酸のフラグメント（ここで、ｊの値は、７、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い）のフラグメントを含んでよい。別の実施形態において、本発明に従って用いられるＨｍｂＲ配列は、（ｉ）配列番号７と少なくともｉ％の配列同一性を有し、かつ／または（ｉｉ）配列番号７からの少なくともｊ連続アミノ酸のフラグメントを含むアミノ酸配列を含んでよい。
【００７２】
ｊアミノ酸の好ましいフラグメントは、配列番号７からのエピトープを含む。このようなエピトープは、通常、ＨｍｂＲの表面上にあるアミノ酸を含む。有用なエピトープは、ヘモグロビンとのＨｍｂＲの結合に関与するアミノ酸を有するものを含む。なぜなら、これらのエピトープと結合する抗体は、宿主のヘモグロビンと結合する細菌の能力を遮断できるからである。ＨｍｂＲの位相幾何学およびその重要な機能的残基は、参考文献８５において調べられた。
【００７３】
本発明の最も有用なＨｍｂＲ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号７のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＨｍｂＲ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００７４】
参考文献３１とは異なって、本発明のＨｍｂＲ抗原は、通常、莢膜糖抗原に結合体化されない。
【００７５】
ＮｈｈＡ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｈｉａホモログ）
本発明の組成物は、ＮｈｈＡ抗原を含んでよい。ＮｈｈＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ０９９２（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２６２３２；本明細書において配列番号１２）として含まれた。多くの株からのＮｈｈＡ抗原の配列がそれ以降公開され、例えば参考文献８０および８６であり、ＮｈｈＡの種々の免疫原性フラグメントが報告されている。これは、Ｈｓｆとしても公知である。
【００７６】
本発明で用いるために好ましいＮｈｈＡ抗原は、（ａ）配列番号１２と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１２の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１２からのエピトープを含む。
【００７７】
本発明の最も有用なＮｈｈＡ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１２のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＮｈｈＡ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００７８】
Ａｐｐ（付着および貫通タンパク質（ａｄｈｅｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ））
本発明の組成物は、Ａｐｐ抗原を含んでよい。Ａｐｐ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ１９８５（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２７２４６；本明細書において配列番号１３）として含まれた。多くの株からのＡｐｐ抗原の配列がそれ以降公開されている。Ａｐｐの種々の免疫原性フラグメントが報告されている。
【００７９】
本発明で用いるために好ましいＡｐｐ抗原は、（ａ）配列番号１３と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１３の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１３からのエピトープを含む。
【００８０】
本発明の最も有用なＡｐｐ抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＡｐｐ抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００８１】
Ｏｍｐ８５（８５ｋＤａ  外膜タンパク質）
本発明の組成物は、Ｏｍｐ８５抗原を含んでよい。Ｏｍｐ８５抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８についての公開されたゲノム配列［７９］中に、遺伝子ＮＭＢ０１８２（ＧｅｎＢａｎｋ受理番号ＧＩ：７２２５４０１；本明細書において配列番号１４）として含まれた。多くの株からのＯｍｐ８５抗原の配列がそれ以降公開されている。Ｏｍｐ８５についてのさらなる情報は、参考文献８７および８８で見出すことができる。Ｏｍｐ８５の種々の免疫原性フラグメントも報告されている。
【００８２】
本発明で用いるために好ましいＯｍｐ８５抗原は、（ａ）配列番号１４と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１４の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１４からのエピトープを含む。
【００８３】
本発明の最も有用なＯｍｐ８５抗原は、被験体に投与した後に、配列番号１４のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起できる。本発明で用いるために有利なＯｍｐ８５抗原は、被験体に投与した後に、殺菌性抗髄膜炎菌抗体を惹起できる。
【００８４】
代替の肺炎球菌抗原
組成物中にＣＳ１４を含むよりもむしろ、いくつかの実施形態において、ワクチンは、ＭｅｎＢに対して防御するためのＬＮｎＴ含有ＬＯＳを含むが、肺炎球菌に対するタンパク質抗原を含む。肺炎球菌ポリペプチドは、血清型１４肺炎球菌に対して有効な免疫応答を惹起できる。
【００８５】
組成物は、（１）ｓｐｒ００５７抗原、（２）ｓｐｒ０２８６抗原、（３）ｓｐｒ０５６５抗原、（４）ｓｐｒ１０９８抗原、（５）ｓｐｒ１３４５抗原、（６）ｓｐｒ１４１６抗原、（７）ｓｐｒ１４１８抗原、（８）ｓｐｒ０８６７抗原、（９）ｓｐｒ１４３１抗原、（１０）ｓｐｒ１７３９抗原、（１１）ｓｐｒ２０２１抗原、（１２）ｓｐｒ００９６抗原、（１３）ｓｐｒ１４３３抗原および／または（１４）ｓｐｒ１７０７抗原の１または複数を含んでよい。
【００８６】
組成物は、（１）ＰｓｐＡポリペプチド、（２）ＰｓａＡポリペプチド、（３）ＰｓｐＣポリペプチド、（４）ＬｙｔＡポリペプチド、（５）ＰｈｔＡポリペプチド、（６）ＰｈｔＡポリペプチド、（７）ＰｈｔＡポリペプチドおよび／または（８）ＰｈｔＤポリペプチドの１または複数を含んでよい。
【００８７】
組成物は、ＲｒｇＡ、ＲｒｇＢおよび／またはＲｒｇＣのような肺炎球菌ピリ繊毛のサブユニットを含んでよい。
【００８８】
肺炎球菌ポリペプチド抗原は、好ましくは、被験体に投与した後に、防御抗体を惹起できる。
【００８９】
ｓｐｒ００５７
元の「ｓｐｒ００５７」配列は、参考文献８９中に「ベータ−Ｎ−アセチル−ヘキソサミニダーゼ前駆体」（ＧＩ：１５９０２１０１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ００５７のアミノ酸配列を、配列番号１８として本明細書中に示す。
【００９０】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ００５７ポリペプチドは、（ａ）配列番号１８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ００５７タンパク質は、配列番号１８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号１８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号１８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号３２であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ（ｓｏｒｔａｓｅ）認識配列とを欠いている。
【００９１】
ｓｐｒ０２８６
元の「ｓｐｒ０２８６配列」は、参考文献８９中に「ヒアルロン酸リアーゼ前駆体」（ＧＩ：１５９０２３３０を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ０２８６のアミノ酸配列を、配列番号１９として本明細書中に示す。
【００９２】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ０２８６ポリペプチドは、（ａ）配列番号１９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ０２８６タンパク質は、配列番号１９のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号１９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号１９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号１９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号３３であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ認識配列とを欠いている。その他の適切なフラグメントは、配列番号３４および３５である。
【００９３】
ｓｐｒ０５６５
元の「ｓｐｒ０５６５」配列は、参考文献８９中に「ベータ−ガラクトシダーゼ前駆体」（ＧＩ：１５９０２６０９を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ０５６５のアミノ酸配列を、配列番号２０として本明細書中に示す。
【００９４】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ０５６５ポリペプチドは、（ａ）配列番号２０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ０５６５タンパク質は、配列番号２０のバリアントを含む（例えば配列番号６６；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２０からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２０のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２０の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号３６であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ認識配列とを欠いている。その他の適切なフラグメントは、配列番号３７および３８である。
【００９５】
ｓｐｒ０５６５のバリアント形態は、本明細書中の配列番号３９である。免疫化のためのこのバリアント形態の使用は、参考文献９０に報告されている（その中の配列番号１７８）。有用なｓｐｒ０５６５ポリペプチドは、（ａ）配列番号３９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号３９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含み得る。これらのポリペプチドは、配列番号３９のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号３９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号３９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号３９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【００９６】
配列番号３９の免疫原性フラグメントは、参考文献９０の表１に同定されている。
【００９７】
ｓｐｒ０５６５は天然において長いポリペプチド（＞２０００ａａ）であるので、フラグメントを発現させることがより便利であり得る。よって、本発明で用いるためのｓｐｒ０５６５の適切な形態は、１５００アミノ酸未満の長さ（例えば＜１４００、＜１３００、＜１２００、＜１１００など）であり得る。ｓｐｒ０５６５のこのような短い形態は、「ｓｐｒ０５６５Ａ」（配列番号３７）および「ｓｐｒ０５６５Ｂ」（配列番号３８）を含む。
【００９８】
ｓｐｒ１０９８
元の「ｓｐｒ１０９８」配列は、参考文献８９中に「ソルターゼ」（ＧＩ：１５９０３１４１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１０９８のアミノ酸配列を、配列番号２１として本明細書中に示す。
【００９９】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１０９８ポリペプチドは、（ａ）配列番号２１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１０９８タンパク質は、配列番号２１のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２１からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２１のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２１の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４０であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。
【０１００】
ｓｐｒ１３４５
元の「ｓｐｒ１３４５」配列は、参考文献８９中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３３８８を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１３４５のアミノ酸配列を、配列番号２２として本明細書中に示す。
【０１０１】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１３４５ポリペプチドは、（ａ）配列番号２２と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２２の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１３４５タンパク質は、配列番号２２のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２２からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２２のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２２の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４１であり、これは、天然のリーダーペプチド配列とソルターゼ認識配列とを欠いている。
【０１０２】
ｓｐｒ１４１６
元の「ｓｐｒ１４１６」配列は、参考文献８９中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３４５９を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４１６のアミノ酸配列を、配列番号２３として本明細書中に示す。
【０１０３】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４１６ポリペプチドは、（ａ）配列番号２３と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２３の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４１６タンパク質は、配列番号２３のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２３からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２３のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２３の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１０４】
ｓｐｒ１４１８
元の「ｓｐｒ１４１８」配列は、参考文献８９中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３４６１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４１８のアミノ酸配列を、配列番号２４として本明細書中に示す。
【０１０５】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４１８ポリペプチドは、（ａ）配列番号２４と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２４の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４１８タンパク質は、配列番号２４のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２４からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２４のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２４の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１０６】
ｓｐｒ０８６７
元の「ｓｐｒ０８６７」配列は、参考文献８９中に「エンド−ベータ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ」（ＧＩ：１５９０２９１１を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ０８６７のアミノ酸配列を、配列番号２５として本明細書中に示す。
【０１０７】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ０８６７ポリペプチドは、（ａ）配列番号２５と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２５の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ０８６７タンパク質は、配列番号２５のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２５からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２５のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２５の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４２であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。
【０１０８】
ｓｐｒ１４３１
元の「ｓｐｒ１４３１」配列は、参考文献８９中に「１，４−ベータ−Ｎ−アセチルムラミダーゼ」（ＧＩ：１５９０３４７４を参照されたい）としてアノテートされた。これは、「ＬｙｔＣ」として公知であり、免疫化のためのその使用は、参考文献１０４に報告されている。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４３１のアミノ酸配列を、配列番号２６として本明細書中に示す。
【０１０９】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４３１ポリペプチドは、（ａ）配列番号２６と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２６の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４３１タンパク質は、配列番号２６のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２６からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２６のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２６の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４３であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。
【０１１０】
ｓｐｒ１７３９
「ｓｐｒ１７３９」ポリペプチドは、ニューモリシン（例えばＧＩ：１５９０３７８１を参照されたい）である。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１７３９のアミノ酸配列を、配列番号２７として本明細書中に示す。
【０１１１】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１７３９ポリペプチドは、（ａ）配列番号２７と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２７の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１７３９タンパク質は、配列番号２７のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２７からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２７のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２７の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１１２】
ワクチン接種で用いるためのニューモリシンの変異体形態は、当該技術において公知であり［２９、９１〜９６］、これらの変異体形態は、本発明で用いてよい。解毒化は、例えば３４アミノ酸、４５アミノ酸、７アミノ酸［９８］などを欠失するＣ末端切断（例えば参考文献９７を参照されたい）により達成できる。さらなる変異は、配列番号２７に従って番号付けすると、Ｐｒｏ３２５→Ｌｅｕ（例えば配列番号４４）および／またはＴｒｐ４３３→Ｐｈｅ（配列番号４５）を含む。これらの変異は、Ｃ末端切断と組み合わせて、例えばＰｒｏ３２５→Ｌｅｕ変異を７ｍｅｒ切断と組み合わせる（例えば配列番号４６）ことができる。
【０１１３】
ｓｐｒ２０２１
元の「ｓｐｒ２０２１」配列は、参考文献８９中に「一般ストレスタンパク質ＧＳＰ−７８１」（ＧＩ：１５９０４０６２を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ２０２１のアミノ酸配列を、配列番号２８として本明細書中に示す。
【０１１４】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ２０２１ポリペプチドは、（ａ）配列番号２８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ２０２１タンパク質は、配列番号２８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ある適切なフラグメントは、配列番号４７であり、これは、天然のリーダーペプチド配列を欠いている。
【０１１５】
参考文献９０は、ｓｐｒ２０２１を、ＧｂｐＢに対する相同性を有する分泌４５ｋＤａタンパク質としてアノテートし、免疫原としてのその使用を開示している（その中の配列番号２４３；ＳＰ２２１６）。ｓｐｒ２０２１の免疫原性フラグメントは、参考文献９０の表１（第７３頁）に同定されている。ｓｐｒ２０２１の別の有用なフラグメントは、参考文献９９の配列番号１として開示される（本明細書の配列番号２８のアミノ酸２８〜２７８）。
【０１１６】
ｓｐｒ００９６
元の「ｓｐｒ００９６」配列は、参考文献８９中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０２１４０を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ００９６のアミノ酸配列を、配列番号２９として本明細書中に示す。
【０１１７】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ００９６ポリペプチドは、（ａ）配列番号２９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号２９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ００９６タンパク質は、配列番号２９のバリアントを含む（例えば配列番号４０；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号２９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号２９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１１８】
配列番号２９に対するそのＣ末端付近に挿入物を有するｓｐｒ００９６のバリアント形態は、本明細書中の配列番号４８である。免疫化のためのこのバリアントの使用は、参考文献９０に報告されており（その中の配列番号１５０）、ここでは、ＬｙｓＭドメインタンパク質としてアノテートされている。よって、本発明で用いるためのｓｐｒ００９６は、（ａ）配列番号４８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号４８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含んでよい。これらのポリペプチドは、配列番号４８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号４８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号４８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号４８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。配列番号４８の免疫原性フラグメントは、参考文献９０の表１に同定されている。
【０１１９】
ｓｐｒ００９６ポリペプチドは、二量体、例えばホモ二量体の形態で用いてよい。
【０１２０】
ｓｐｒ１４３３
元の「ｓｐｒ１４３３」配列は、参考文献８９中に「仮想タンパク質」（ＧＩ：１５９０３４７６を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１４３３のアミノ酸配列を、配列番号３０として本明細書中に示す。
【０１２１】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１４３３ポリペプチドは、（ａ）配列番号３０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号３０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１４３３タンパク質は、配列番号３０のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号３０からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号３０のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号３０の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１２２】
ｓｐｒ１７０７
元の「ｓｐｒ１７０７」配列は、参考文献８９中に「ＡＢＣトランスポーター基質結合タンパク質−オリゴペプチド輸送」（ＧＩ：１５９０３７４９を参照されたい）としてアノテートされた。参照の目的のために、Ｒ６株で見出される全長ｓｐｒ１７０７のアミノ酸配列を、配列番号３１として本明細書中に示す。
【０１２３】
本発明で用いるために好ましいｓｐｒ１７０７ポリペプチドは、（ａ）配列番号３１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号３１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１７０７タンパク質は、配列番号３１のバリアントを含む（例えば配列番号１００；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号３１からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号３１のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号３１の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１２４】
配列番号３１とは４アミノ酸異なるｓｐｒ１７０７のバリアント形態は、本明細書中の配列番号４９である。免疫化のための配列番号４９の使用は、参考文献９０に報告されている（その中の配列番号２２０）。よって、本発明で用いるためのｓｐｒ１７０７ポリペプチドは、（ａ）配列番号４９と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号４９の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含み得る。これらのポリペプチドは、配列番号４９のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号４９からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号４９のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号４９の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１２５】
配列番号４９の免疫原性フラグメントは、参考文献９０の表１に同定されている。
【０１２６】
ＰｓｐＡ
ＰｓｐＡは、肺炎球菌表面タンパク質Ａである。参照の目的のために、全長ＰｓｐＡのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５０である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｓｐＡはｓｐｒ０１２１である［８９］。
【０１２７】
本発明で用いるために好ましいＰｓｐＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５０と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５０の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｓｐＡタンパク質は、配列番号５０のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５０からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５０のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５０の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１２８】
免疫化のためのＰｓｐＡの使用は、なかでも参考文献１００に報告されている。これは、ＰｓｐＣと組み合わせて有利に投与できる。
【０１２９】
ＰｓａＡ
ＰｓａＡは、肺炎球菌表面付着因子である。参照の目的のために、全長ＰｓａＡのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５１である。
【０１３０】
本発明で用いるために好ましいＰｓａＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５１と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５１の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｓａＡタンパク質は、配列番号５１のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５１からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５１のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５１の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。ＰｓａＡの有用なフラグメントは、参考文献９９に配列番号３として開示されている（本明細書中の配列番号５１のアミノ酸２１〜５１９に相当）。
【０１３１】
免疫化のためのＰｓａＡの使用は、参考文献１０１に報告されている。これは、ＰｓｐＡおよび／またはＰｓｐＣと組み合わせて使用できる。
【０１３２】
ＰｓｐＣ
ＰｓｐＣは、肺炎球菌表面タンパク質Ｃ［１０２］であり、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）としても公知である。免疫化のためのその使用は、参考文献１０３および１０４に報告されている。Ｒ６株において、これはｓｐｒ１９９５であり、参照のために、全長ｓｐｒ１９９５のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５２である。
【０１３３】
本発明で用いるために好ましいＰｓｐＣポリペプチドは、ａ）配列番号５２と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５２の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのｓｐｒ１９９５タンパク質は、配列番号５２のバリアントを含む（例えば配列番号２７；以下を参照されたい）。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５２からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５２のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５２の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１３４】
ＰｓｐＣのバリアントは、「Ｈｉｃ」として公知である。これは、参考文献１０５の図１に示すＰｓｐＣと類似しており、ここでは、これはＨ因子（ｆＨ）と結合すると報告されている。参照の目的のために、全長Ｈｉｃのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５３である。Ｈｉｃタンパク質は、本発明において、ＰｓｐＣポリペプチドに加えてまたはその代わりに用いてよい。
【０１３５】
本発明で用いるために好ましいＨｉｃポリペプチドは、（ａ）配列番号５３と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５３の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＨｉｃタンパク質は、配列番号５３のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５３からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５３のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５３の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１３６】
ＰｓｐＣおよび／またはＨｉｃは、ＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡと組み合わせて有利に用いることができる。
【０１３７】
ＬｙｔＡ
ＬｙｔＡは、Ｎ−アセチルムラモイル−Ｌ−アラニンアミダーゼ（自己溶解素）である。参照の目的のために、全長ＬｙｔＡのアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５４である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＬｙｔＡは、ｓｐｒ１７５４である［８９］。
【０１３８】
本発明で用いるために好ましいＬｙｔＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５４と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５４の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＬｙｔＡタンパク質は、配列番号５４のバリアント（例えばＧＩ：１８５６８３５４）を含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５４からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５４のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５４の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１３９】
特に異種乱雑（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）Ｔヘルパーエピトープと融合したＬｙｔＡコリン結合ドメインを含む形態での、免疫化のためのＬｙｔＡの使用は、参考文献１０６に報告されている。
【０１４０】
ＰｈｔＡ
ＰｈｔＡは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質（ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｔｒｉａｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）Ａである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＡ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５５である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｈｔＡはｓｐｒ１０６１である［８９］。
【０１４１】
本発明で用いるために好ましいＰｈｔＡポリペプチドは、（ａ）配列番号５５と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５５の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＡタンパク質は、配列番号５５のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５５からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５５のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５５の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１４２】
免疫化のためのＰｈｔＡの使用は、参考文献１０７および１０８に報告されている。
【０１４３】
ＰｈｔＢ
ＰｈｔＢは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質Ｂである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＢ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５６である。残基５７８のＸａａは、リジンであり得る。
【０１４４】
本発明で用いるために好ましいＰｈｔＢポリペプチドは、（ａ）配列番号５６と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５６の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＢタンパク質は、配列番号５６のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５６からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５６のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５６の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１４５】
免疫化のためのＰｈｔＢの使用は、参考文献１０７、１０８および１０９に報告されている。
【０１４６】
ＰｈｔＤ
ＰｈｔＤは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質Ｄである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＤ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５７である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｈｔＤはｓｐｒ０９０７である［８９］。
【０１４７】
本発明で用いるために好ましいＰｈｔＤポリペプチドは、（ａ）配列番号５７と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５７の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＤタンパク質は、配列番号５７のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５７からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５７のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５７の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１４８】
免疫化のためのＰｈｔＤの使用は、参考文献１０７、１０８および１１０に報告されている。
【０１４９】
ＰｈｔＥ
ＰｈｔＥは、肺炎球菌ヒスチジン三連タンパク質Ｅである。参照の目的のために、全長ＰｈｔＥ前駆体のアミノ酸配列は、本明細書中の配列番号５８である。Ｒ６ゲノムにおいて、ＰｈｔＥはｓｐｒ０９０８である［８９］。
【０１５０】
本発明で用いるために好ましいＰｈｔＥポリペプチドは、（ａ）配列番号５８と５０％以上の同一性（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれより多い）を有し、かつ／または（ｂ）配列番号５８の少なくとも「ｎ」連続アミノ酸のフラグメント（ここで、「ｎ」は７以上である（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多い））を含むアミノ酸配列を含む。これらのＰｈｔＥタンパク質は、配列番号５８のバリアントを含む。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号５８からのエピトープを含む。その他の好ましいフラグメントは、配列番号５８のＣ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）および／またはＮ末端から１または複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５またはそれより多い）を欠失しているが、配列番号５８の少なくとも１つのエピトープを保持している。その他のフラグメントは、１または複数のタンパク質ドメインを欠いている。
【０１５１】
免疫化のためのＰｈｔＥの使用は、参考文献１０７および１０８に報告されている。
【０１５２】
ハイブリッドポリペプチド
代替の髄膜炎菌または肺炎球菌抗原を本発明で用いる場合、これらは、個別の分離したポリペプチドとして組成物中に存在してよい。１より多いこのような抗原を用いる場合、しかし、これらは、分離したポリペプチドとして存在する必要はない。代わりに、少なくとも２（例えば２、３、４、５またはそれより多い）の抗原は、参考文献１１１中に髄膜炎菌抗原について開示されるように、単一ポリペプチド鎖（「ハイブリッド」ポリペプチド）として発現され得る。ハイブリッドポリペプチドは、２つの主な利点を提供する。第１に、それ自体では不安定または発現が乏しいことがあるポリペプチドが、この問題を克服する適切なハイブリッドパートナーを加えることにより援助され得る。第２に、商業的な製造が単純化される。なぜなら、ともに抗原的に有用な２つのポリペプチドを生成するために、１回の発現および精製を使用することしか必要とされないからである。
【０１５３】
ハイブリッドポリペプチドは、上に開示されるように２以上の髄膜炎菌および／または肺炎球菌のポリペプチド配列を含んでよい。２、３、４、５、６、７、８、９または１０の抗原からのアミノ酸配列からなるハイブリッドが有用である。特に、２または３の抗原のような２、３、４または５の抗原からのアミノ酸配列からなるハイブリッドが好ましい。
【０１５４】
ハイブリッドポリペプチドは、式ＮＨ２−Ａ−｛−Ｘ−Ｌ−｝ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘは、上で論じたように、二者択一の髄膜炎菌または肺炎球菌抗原のアミノ酸配列であり、Ｌは、任意選択のリンカーアミノ酸配列であり、Ａは、任意選択のＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは、任意選択のＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは、２以上の整数である（例えば２、３、４、５、６など））で表すことができる。通常、ｎは、２または３である。
【０１５５】
−Ｘ−部分が、その野生型形のリーダーペプチド配列を有する場合、これは、ハイブリッドタンパク質に含めてよいか、またはハイブリッドタンパク質から省いてよい。いくつかの実施形態において、リーダーペプチドは、ハイブリッドタンパク質のＮ末端にある−Ｘ−部分のもの以外は削除され、すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドが保持されるが、Ｘ２・・・Ｘｎのリーダーペプチドは省かれる。このことは、全てのリーダーペプチドを削除し、Ｘ１のリーダーペプチドを−Ａ−部分として用いることと等しい。
【０１５６】
｛−Ｘ−Ｌ−｝のｎの場合のそれぞれについて、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、存在してよいかまたは存在しなくてよい。例えば、ｎ＝２である場合、ハイブリッドは、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであってよい。リンカーアミノ酸配列（複数可）−Ｌ−は、典型的には短い（例えば２０以下のアミノ酸、すなわち２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）。例としては、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（すなわちＧｌｙｎ（ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）を含む）およびヒスチジンタグ（すなわちＨｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い））が含まれる。その他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーは、ＧＳＧＧＧＧ（配列番号１５）またはＧＳＧＳＧＧＧＧ（配列番号１６）であり、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドがＢａｍＨＩ制限部位から形成されるので、クローニングおよび操作の助けとなり、（Ｇｌｙ）４テトラペプチドが、典型的なポリグリシンリンカーである。特に最後のＬｎとして用いるためのその他の適切なリンカーは、Ｌｅｕ−Ｇｌｕジペプチドまたは配列番号５９である。
【０１５７】
−Ａ−は、任意選択のＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には短い（例えば４０以下のアミノ酸、すなわち４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）。例としては、タンパク質輸送を指示するリーダー配列、またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えばヒスチジンタグ、すなわちＨｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い））が含まれる。その他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。Ｘ１がそれ自体のＮ末端メチオニンを欠失している場合、−Ａ−は、Ｎ末端メチオニン、例えばＭｅｔ−Ａｌａ−Ｓｅｒを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８アミノ酸を有する）、または単一Ｍｅｔ残基であることが好ましい。
【０１５８】
−Ｂ−は、任意選択のＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には短い（例えば４０以下のアミノ酸、すなわち３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）。例としては、タンパク質輸送を指示する配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えばヒスチジンタグ、すなわちＨｉｓｎ（ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）を含む、例えば配列番号１７）、またはタンパク質安定性を増進する配列が含まれる。その他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。
【０１５９】
髄膜炎菌ポリペプチド抗原の特に有用な組み合わせは、参考文献１１１および１１２に開示され、本発明の組成物は、よって、（１）「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「９３６」タンパク質；（３）「９５３」タンパク質；（４）「２８７」タンパク質；および（５）ｆＨＢＰタンパク質の１、２、３、４または５つを含んでよい。例えば、組成物は、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を有する第１ポリペプチド；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を有する第２ポリペプチド；および（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を有する第３ポリペプチドとを含んでよい。
【０１６０】
アジュバント
本発明の組成物は、免疫学的アジュバントを含んでよい。よって、例えば、これらは、アルミニウム塩アジュバントまたは水中油型エマルジョン（例えば水中スクアレンエマルジョン）を含んでよい。その他のアジュバントも用いてよい。
【０１６１】
適切なアルミニウム塩は、水酸化物（例えばオキシ水酸化物）、リン酸塩（例えばヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）（例えば、参考文献１１３の第８および９章を参照されたい）またはそれらの混合物を含む。塩は、任意の適切な形態を取り得る（例えばゲル、結晶、非晶質など）。抗原の塩への吸着が代表的である。患者に投与するための組成物中のＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは、５ｍｇ／ｍｌ未満、例えば≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどである。好ましい範囲は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌである。最大で０．８５ｍｇ／用量が好ましい。ＣＳ１４および髄膜炎菌抗原と共に用いるための好ましいアルミニウム塩アジュバントは、リン酸アルミニウムである。
【０１６２】
種々の水中油型エマルジョンアジュバントが公知である。これらは、典型的には、少なくとも１種の油と少なくとも１種の界面活性剤とを含み、油（複数可）および界面活性剤（複数可）は、生分解性（代謝可能）であり、生体適合性である。エマルジョン中の油滴は、通常、直径５μｍ未満であり、サブミクロンの直径さえ有してよく、これらの小さいサイズは、マイクロフルイダイザーを用いて安定なエマルジョンを得ることにより達成される。２２０ｎｍ未満のサイズの液滴は、フィルタ滅菌に供することができるので好ましい。
【０１６３】
本発明は、動物（例えば魚類）または植物の供給源からのもののような油を用いることができる。植物油の供給源は、堅果、種子および穀粒を含む。ピーナツ油、大豆油、ココナツ油およびオリーブ油が、最も一般的に入手可能な堅果油の例である。例えばホホバ豆から得られるホホバ油を用いることができる。種子油は、紅花油、綿実油、ひまわり種子油、ごま種子油などを含む。穀粒の群において、コーン油が最も容易に入手可能であるが、小麦、オート麦、ライ麦、米、テフ、ライ小麦などのようなその他の穀類の穀粒の油も用いてよい。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素脂肪酸エステルは、種子油中に天然に存在しないが、堅果油および種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離およびエステル化により調製し得る。哺乳動物の乳からの脂肪および油は代謝可能であり、よって、本発明の実施において用いてよい。動物の供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、けん化およびその他の手段の手順は、当該技術において周知である。ほとんどの魚類は、容易に回収し得る代謝可能な油を含有する。例えば、タラ肝油、サメ肝油および鯨ろうのような鯨油は、本明細書において用い得る魚油のいくつかの例である。いくつかの分岐鎖油が、５炭素イソプレンユニットで生化学的に合成され、通常、テルペノイドとよばれる。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンとして公知の分岐不飽和テルペノイドを含有し、これは、本明細書において特に好ましい。スクアレンの飽和類似体であるスクワランも好ましい油である。スクアレンおよびスクワランを含む魚油は、商業的な供給源から容易に入手可能であるか、または当該技術において公知の方法により得ることができる。その他の好ましい油は、トコフェロールである。油の混合物を用いることができる。
【０１６４】
組成物がトコフェロールを含む場合、α、β、γ、δ、εまたはξトコフェロールのいずれを用いることもできるが、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、いくつかの形態、例えば異なる塩および／または異性体を取ることができる。塩は、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩などのような有機塩を含む。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールの両方を用いることができる。好ましいα−トコフェロールは、ＤＬ−α−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩は、コハク酸塩である。
【０１６５】
界面活性剤は、それらの「ＨＬＢ」（親水性／親油性比）により分類できる。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６のＨＬＢを有する。本発明は、それらに限定されないが、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的にＴｗｅｅｎとよばれる）、特にポリソルベート２０およびポリソルベート８０；線状ＥＯ／ＰＯブロックコポリマーのようなＤＯＷＦＡＸ（商標）の商標の下で販売されるエチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー；反復エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が変動し得るオクトキシノール、特にオクトキシノール−９（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；ホスファチジルコリン（レシチン）のようなリン脂質；トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）のようなラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪酸エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知である）；ならびにソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５）およびソルビタンモノラウレートのようなソルビタンエステル（一般的にＳＰＡＮとして公知である）を含む界面活性剤を用いることができる。エマルジョンに含めるために好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレエート）、レシチンおよびＴｒｉｔｏｎＸ−１００である。
【０１６６】
界面活性剤の混合物、例えばＴｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物を用いることができる。ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）のようなポリオキシエチレンソルビタンエステルと、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）のようなオクトキシノールとの組み合わせも適切である。別の有用な組み合わせは、ラウレス−９とポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールとを含む。
【０１６７】
界面活性剤の好ましい量（重量％）は、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えばＴｗｅｅｎ８０）０．０１〜１％、特に約０．１％；オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００またはＴｒｉｔｏｎシリーズのその他の洗浄剤）０．００１〜０．１％、特に０．００５〜０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（例えばラウレス９）０．１〜２０％、好ましくは０．１〜１０％、特に０．１〜１％または約０．５％である。
【０１６８】
本発明で有用な具体的な水中油型エマルジョンアジュバントは、それらに限定されないが、以下のものを含む：
・スクアレンとＴｗｅｅｎ８０とＳｐａｎ８５とのサブミクロンのエマルジョン。エマルジョンの容量での組成は、約５％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０および約０．５％Ｓｐａｎ８５であり得る。重量の点において、これらの比率は、４．３％スクアレン、０．５％ポリソルベート８０および０．４８％Ｓｐａｎ８５になる。このアジュバントは、参考文献１１３の第１０章および参考文献１１７の第１２章により詳細に記載されるように、「ＭＦ５９」［１１４〜１１６］として公知である。ＭＦ５９エマルジョンは、シトレートイオン、例えば１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝剤を含んでよい。
・スクアレンとトコフェロールとポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）とのエマルジョン。エマルジョンは、リン酸緩衝生理食塩水を含んでよい。これは、Ｓｐａｎ８５（例えば１％で）および／またはレシチンも含んでよい。これらのエマルジョンは、２〜１０％スクアレン、２〜１０％トコフェロールおよび０．３〜３％Ｔｗｅｅｎ８０を有してよく、スクアレン：トコフェロールの重量比は、より安定なエマルジョンが得られるので、好ましくは≦１である。スクアレンとＴｗｅｅｎ８０とは、約５：２の容量比または約１１：５の重量比で存在してよい。あるこのようなエマルジョンは、Ｔｗｅｅｎ８０をＰＢＳ中に溶解して２％溶液を得て、次いで９０ｍｌのこの溶液を、（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌスクアレン）の混合物と混合し、次いで混合物を微小流動化する（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓｅ）ことにより作製できる。得られるエマルジョンは、１００〜２５０ｎｍ、好ましくは約１８０ｎｍの平均直径のサブミクロンの油滴を有し得る。エマルジョンは、３−脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３ｄ−ＭＰＬ）も含んでよい。この型の別の有用なエマルジョンは、１ヒト用量あたりに０．５〜１０ｍｇスクアレン、０．５〜１１ｍｇトコフェロールおよび０．１〜４ｍｇポリソルベート８０を含んでよい［１１８］。
・スクアレンとトコフェロールとＴｒｉｔｏｎ洗浄剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）とのエマルジョン。エマルジョンは、３ｄ−ＭＰＬも含んでよい。エマルジョンは、リン酸塩緩衝剤を含有してよい。
・ポリソルベート（例えばポリソルベート８０）とＴｒｉｔｏｎ洗浄剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−１００）とトコフェロール（例えばα−トコフェロールスクシネート）とを含むエマルジョン。エマルジョンは、これらの３成分を、約７５：１１：１０の質量比で含んでよく（例えば７５０μｇ／ｍｌポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００および１００μｇ／ｍｌα−トコフェロールスクシネート）、これらの濃度は、抗原からのこれらの成分のいずれの寄与も含むべきである。エマルジョンは、スクアレンも含んでよい。エマルジョンは、３ｄ−ＭＰＬも含んでよい。水相は、リン酸塩緩衝剤を含有してよい。
・スクワランとポリソルベート８０とポロキサマー４０１（「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｌ１２１」）とのエマルジョン。エマルジョンは、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４中で処方できる。このエマルジョンは、ムラミルジペプチドについての有用な送達媒体であり、スレオニル−ＭＤＰとともに「ＳＡＦ−１」アジュバント中で用いられている［１１９］（０．０５〜１％Ｔｈｒ−ＭＤＰ、５％スクワラン、２．５％ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１および０．２％ポリソルベート８０）。これは、「ＡＦ」アジュバントでのようにＴｈｒ−ＭＤＰなしで用いることもできる［１２０］（５％スクワラン、１．２５％ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１および０．２％ポリソルベート８０）。微小流動化が好ましい。
・スクアレンと水性溶媒とポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン界面活性剤（例えばポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）と疎水性非イオン界面活性剤（例えばソルビタンモノオレエートまたは「Ｓｐａｎ８０」のようなソルビタンエステルまたはマンニドエステル）とを含むエマルジョン。エマルジョンは、好ましくは、熱可逆性であり、かつ／または少なくとも９０％の油滴（容量による）が２００ｎｍ未満のサイズである［１２１］。エマルジョンは、アルジトール、凍結保護剤（例えばドデシルマルトシドおよび／またはスクロースのような糖）、および／またはアルキルポリグリコシドの１または複数も含んでよい。このようなエマルジョンは、凍結乾燥してよい。
・０．５〜５０％の油と、０．１〜１０％のリン脂質と、０．０５〜５％の非イオン界面活性剤とを含むエマルジョン。参考文献１２２に記載されるように、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロンの液滴サイズが有利である。・代謝不可能油（例えば軽鉱油（ｌｉｇｈｔ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｏｉｌ））と少なくとも１種の界面活性剤（例えばレシチン、Ｔｗｅｅｎ８０またはＳｐａｎ８０）とのサブミクロンの水中油型エマルジョン。ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン親油性物質結合体（例えば脂肪族アミンをデスアシルサポニンに、グルクロン酸のカルボキシル基を介して付加することにより生成される、参考文献１２３に記載されるＧＰＩ−０１００）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ｄｉｍｅｔｈｙｉｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）ブロミドおよび／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンのような添加物を含んでよい。
・鉱油と、非イオン親油性エトキシ化脂肪アルコールと、非イオン親水性界面活性剤（例えばエトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）とを含むエマルジョン［１２４］。
・鉱油と、非イオン親水性エトキシ化脂肪アルコールと、非イオン親油性界面活性剤（例えばエトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）とを含むエマルジョン［１２４］。
・サポニン（例えばＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）とステロール（例えばコレステロール）とが、らせん状ミセルとして会合しているエマルジョン［１２５］。
【０１６９】
水中油型エマルジョンは、それら自体でアジュバントとして、またはさらなる免疫賦活性化合物、例えば免疫賦活性オリゴヌクレオチド、３ｄ−ＭＰＬなどのための担体として用いることができる。
【０１７０】
医薬組成物
本発明は、患者に投与するための医薬組成物に関する。これらは、典型的には、薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体の詳細な考察は、参考文献１２６で入手可能である。
【０１７１】
有効投薬容量は、日常的に確立できるが、組成物の典型的なヒト用量は、例えば筋肉内注射について約０．５ｍｌの容量である。これは、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）製品、ＲＩＶＭ  ＯＭＶベースのワクチンおよびＭｅＮＺＢ（商標）についての投薬容量である。これらの投薬容量は、筋肉内注射について典型的であるが、同様の用量をその他の送達経路のために用いてよく、例えば噴霧化（ａｔｏｍｉｓａｔｉｏｎ）用の鼻内ＯＭＶベースのワクチンは、１スプレーあたり約１００μｌまたは約１３０μｌの容量を有して４回のスプレーで投与して、約０．５ｍｌの合計用量を与えてよい。
【０１７２】
本発明の組成物のｐＨは、通常、６から８の間、より好ましくは６．５から７．５の間（例えば約７）である。ＲＩＶＭ  ＯＭＶベースのワクチンのｐＨは７．４であり［１２７］、ｐＨ＜７．５が、本発明の組成物について好ましい。ＲＩＶＭ  ＯＭＶベースのワクチンは、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝剤を用いることによりｐＨを維持し、本発明の組成物における安定なｐＨは、緩衝剤、例えばＴｒｉｓ緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、リン酸塩緩衝剤またはヒスチジン緩衝剤を用いることにより維持してよい。よって、本発明の組成物は、通常、緩衝剤を含む。
【０１７３】
組成物は、滅菌され、かつ／または発熱物質を含まなくてもよい。本発明の組成物は、ヒトに関して等張であってよい。
【０１７４】
患者に投与するための本発明の組成物は、免疫原性であり、より好ましくはワクチン組成物である。本発明によるワクチンは、予防的（すなわち感染を防止する）または治療的（すなわち感染を処置する）のいずれかであってよいが、典型的には予防的である。ワクチンとして用いられる免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原（複数可）と、必要に応じて任意のその他の成分とを含む。「免疫学的有効量」により、単回用量または連続するものの一部のいずれかとしてその量を個体に投与することが、処置または予防のために有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康および体調、年齢、処置される個体の分類群（例えば非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、望まれる防御の程度、ワクチンの処方、医療状態についての処置医の評価およびその他の関連する因子に依存して変動する。この量は、日常的な試験により決定できる比較的広い範囲にあると予測される。本発明の組成物の抗原含量は、通常、１用量あたりのタンパク質の量で表される。１ｍｌあたり約０．９ｍｇタンパク質の用量が、ＯＭＶベースの鼻腔内ワクチンについて典型的である。
【０１７５】
髄膜炎菌および肺炎球菌は、身体の種々の領域に影響し、よって、本発明の組成物は、種々の液体の形態で調製してよい。例えば、組成物は、溶液または懸濁液のいずれかとしての注射用剤として調製してよい。組成物は、例えば吸入器により、微細な噴霧（ｓｐｒａｙ）を用いての肺投与のために調製してよい。組成物は、例えばスプレー剤またはドロップ剤として鼻、耳または眼投与のために調製してよい。筋肉内投与のための注射用剤が典型的である。
【０１７６】
本発明の組成物は、多回用量フォーマットで包装される場合は特に、抗菌剤を含んでよい。チオメルサールおよび２−フェノキシエタノールのような抗菌剤が、ワクチン中で通常見られるが、水銀を含まない防腐剤を用いるか、または防腐剤を全く用いないことが好ましい。
【０１７７】
本発明の組成物は、洗浄剤、例えばＴｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含んでよい。洗浄剤は、通常、低いレベル、例えば＜０．０１％で存在する。
【０１７８】
本発明の組成物は、張度を得るためにナトリウム塩（例えば塩化ナトリウム）を含んでよい。１０±２ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌの濃度、例えば約９ｍｇ／ｍｌが典型的である。
【０１７９】
処置方法
本発明は、本発明の組成物を哺乳類に投与するステップを含む、哺乳類における免疫応答を惹起するための方法も提供する。免疫応答は、好ましくは、髄膜炎菌と肺炎球菌との両方に対して防御的であり（少なくとも、組成物中にある髄膜炎菌イムノタイプと肺炎球菌血清型（血清型１４を含む）とについて）、好ましくは抗体を含む。方法は、既に初回刺激（ｐｒｉｍｅ）された患者における追加免疫応答を惹起し得る。
【０１８０】
哺乳類は、好ましくはヒトである。ワクチンが予防用である場合、ヒトは、好ましくは、小児（例えば、よちよち歩きの幼児または幼児）または１０代の若者であり、ワクチンが治療用である場合、ヒトは好ましくは成人である。小児用を意図するワクチンは、例えば安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために、成人に投与してもよい。
【０１８１】
本発明は、医薬品として用いるための本発明の組成物も提供する。医薬品は、好ましくは、上記のように、哺乳類における免疫応答を惹起するために用いられ（すなわちこれは免疫原性組成物である）、より好ましくはワクチンである。
【０１８２】
本発明は、（ｉ）髄膜炎菌ＬＯＳおよびＣＳ１４（ＬＯＳおよび／またはＣＳ１４は、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含まない）、（ｉｉ）髄膜炎菌ＬＯＳおよびＣＳ１４、しかしアジュバントを含まない（ＬＯＳおよびＣＳ１４は共にＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含む）、（ｉｉｉ）髄膜炎菌ＬＯＳおよび肺炎球菌ポリペプチド抗原（ＬＯＳは、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、肺炎球菌ポリペプチドは、血清型１４肺炎球菌に対して有効な免疫応答を惹起できる）、または（ｉｖ）髄膜炎菌ポリペプチドおよびＣＳ１４（ＣＳ１４は、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、髄膜炎菌ポリペプチドは、血清群Ｂ髄膜炎菌に対して有効な免疫応答を惹起できる）の、哺乳類における免疫応答を惹起するための医薬品の製造における使用も提供する。
【０１８３】
これらの使用および方法は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓおよび／またはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを原因とする疾患、例えば細菌性（またはより具体的には髄膜炎菌および／もしくは肺炎球菌性）髄膜炎もしくは敗血症の予防および／または処置のためであることが好ましい。
【０１８４】
治療処置の効力を確認するある方法は、本発明の組成物の投与後の髄膜炎菌および／または肺炎球菌への感染を監視することを含む。予防的処置の効力を確認するある方法は、組成物の投与後の抗原に対する免疫応答を監視することを含む。本発明の組成物の免疫原性は、それらを試験被験体（例えば１２〜１６ヶ月齢の小児、または動物モデル［１２８］）に投与し、次いで、髄膜炎菌についての血清殺菌性抗体（ＳＢＡ）およびＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を含む標準的なパラメータを決定することにより決定できる。これらの免疫応答は、通常、組成物の投与の４週間後付近に決定され、組成物の投与前に決定された値と比較される。少なくとも４倍または８倍のＳＢＡの増加が好ましい。組成物の１回より多い用量を投与する場合、１回より多い投与後測定を行ってよい。
【０１８５】
本発明の組成物は、通常、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内または組織の間隙の空間へ）または任意のその他の適切な経路により達成してよい。本発明は、全身および／または粘膜免疫を惹起するために用いてよい。大腿または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針を介して（例えば皮下針）であってよいが、無針注射を代わりに用いてよい。典型的な筋肉内用量は、０．５ｍｌである。
【０１８６】
投薬処置は、単回用量計画または多回用量計画であり得る。多回用量は、一次免疫化計画および／または追加免疫化計画で用い得る。一次用量計画の後に、追加用量計画を行い得る。初回刺激用量間（例えば４〜１６週間）、および初回刺激と追加刺激との間の適切なタイミングは、日常的に決定できる。
【０１８７】
本発明のいくつかの実施形態において、肺炎球菌および髄膜炎菌の抗原は、別々であるが共投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）してよく、すなわち２つの抗原を、同時、別々または逐次的に投与してよい。典型的には、しかし、２つの抗原を、同時の組み合わせた投与のために混合する。
【０１８８】
さらなる抗原
上で論じた髄膜炎菌および肺炎球菌抗原を含むことと共に、組成物は、さらなる病原体（複数可）からのさらなる抗原（複数可）を含み得る。例えば、組成物は、以下のさらなる抗原の１または複数を含んでよい：
−表面抗原ＨＢｓＡｇのようなＢ型肝炎ウイルスからの抗原。
−所望によりパータクチンおよび／または凝集原２および３とも組み合わせた、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）のようなＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの抗原。
−ジフテリアトキソイドのようなジフテリア抗原。
−破傷風トキソイドのような破傷風抗原。
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ（Ｈｉｂ）からの、典型的には結合体化された糖抗原。
−不活化ポリオウイルス抗原。
【０１８９】
ジフテリア抗原が組成物に含まれる場合、破傷風抗原と百日咳抗原も含むことが好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原と百日咳抗原も含むことが好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原と破傷風抗原も含むことが好ましい。ＤＴＰの組み合わせが、よって、好ましい。
【０１９０】
さらに、組成物は、さらなる髄膜炎菌または肺炎球菌抗原を含んでよい。
【０１９１】
ＣＳ１４抗原に加えて、例えば、組成物は、１または複数のその他の肺炎球菌血清型からの莢膜糖を含むことができる。よって、血清型１４に加えて、組成物は、以下の肺炎球菌血清型の１または複数からの莢膜糖を含んでよい：１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび／または３３Ｆ。組成物は、複数の血清型、例えば合計で２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３またはそれより多い血清型を含んでよい。７価、９価、１０価、１１価および１３価の結合体の組合せが、２３価の結合体化されていない組合せと同様に当該技術において既に公知である。例えば、１０価の組合せは、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆからの糖を含んでよい。１１価の組合せは、血清型３からの糖をさらに含み得る。１２価の組合せは、１０価混合物に、血清型６Ａおよび１９Ａ；６Ａおよび２２Ｆ；１９Ａおよび２２Ｆ；６Ａおよび１５Ｂ；１９Ａおよび１５Ｂ；または２２Ｆおよび１５Ｂを加えてよい。１３価の組合せは、１１価混合物に、血清型１９Ａおよび２２Ｆ；８および１２Ｆ；８および１５Ｂ；８および１９Ａ；８および２２Ｆ；１２Ｆおよび１５Ｂ；１２Ｆおよび１９Ａ；１２Ｆおよび２２Ｆ；１５Ｂおよび１９Ａ；１５Ｂおよび２２Ｆ；６Ａおよび１９Ａなどを加えてよい。有用な１３価の組合せは、参考文献１２９、１３０および１３１に開示されるようにして調製された、例えば全て別々にＣＲＭ１９７に結合体化された血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９、１９Ｆおよび２３Ｆからの莢膜糖を含む。あるこのような組合せは、血清型６Ｂの糖を約８μｇ／ｍｌで、およびその他の１２の糖をそれぞれ約４μｇ／ｍｌの濃度で含む。別のこのような組合せは、血清型６Ａおよび６Ｂの糖をそれぞれ約８μｇ／ｍｌで、およびその他の１１の糖をそれぞれ約４μｇ／ｍｌで含む。
【０１９２】
組成物が１より多い肺炎球菌結合体を含む場合、それぞれの結合体は、同じ担体タンパク質または異なる担体タンパク質を用いてよい。参考文献１３２は、多価肺炎球菌結合体ワクチン中に異なる担体タンパク質を用いる場合の潜在的な利点について記載している。
【０１９３】
組成物が１より多い血清型からの糖抗原を含む場合、これらは好ましくは別々に調製され、別々に結合体化され、それから組み合わされる。
【０１９４】
髄膜炎菌ＬＯＳまたはポリペプチド抗原に加えて、組成物は、担体タンパク質に通常結合体化される髄膜炎菌莢膜糖を含んでよい。本発明の組成物は、髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの１、２、３または４つ、例えばＡ＋Ｃ、Ａ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙなどからの莢膜糖の１または複数の結合体を含んでよい。血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹの４つ全てからの糖を含む成分が理想的である。
【０１９５】
血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖は、Ｃ３位およびＣ４位に部分的Ｏ−アセチル化を有する（α１→６）連結Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノースアミン−１−ホスフェートのホモポリマーである。Ｃ３位でのアセチル化は、７０〜９５％であり得る。糖を精製するために用いる条件は、脱Ｏ−アセチル化をもたらし得る（例えば塩基性条件下で）が、このＣ３位にてＯＡｃを保持することが有用である。いくつかの実施形態において、血清群Ａの糖中のマンノースアミン残基の少なくとも５０％（例えば少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれより多く）が、Ｃ３位にてＯ−アセチル化される。アセチル基は、加水分解を防ぐために、ブロック基で置き換えることができ［１３３］、このような改変糖は、本発明の意味において、まだ血清群Ａの糖である。
【０１９６】
血清群Ｃの莢膜糖は、（α２→９）連結シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸または「ＮｅｕＮＡｃ」）のホモポリマーである。糖の構造は、→９）−ＮｅｕｐＮＡｃ７／８ＯＡｃ−（α２→と記載される。ほとんどの血清群Ｃ株は、シアル酸残基のＣ７および／またはＣ８にてＯ−アセチル基を有するが、臨床単離株の約１５％は、これらのＯ−アセチル基を欠く［１３４、１３６］。ＯＡｃ基の存在または非存在は、ユニークエピトープを生じ、糖と結合する抗体の特異性は、Ｏ−アセチル化された株（ＯＡｃ＋）および脱Ｏ−アセチル化された株（ＯＡｃ−）に対するその殺菌活性に影響し得る［１３６〜１３８］。本発明で用いられる血清群Ｃの糖は、ＯＡｃ＋またはＯＡｃ−株のいずれかから調製してよい。許諾されたＭｅｎＣ結合体ワクチンは、ＯＡｃ−（ＮＥＩＳＶＡＣ−Ｃ（商標））およびＯＡｃ＋（ＭＥＮＪＵＧＡＴＥ（商標）およびＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣ（商標））糖の両方を含む。いくつかの実施形態において、血清群Ｃ結合体の生成のための株は、例えば、血清型１６、血清サブタイプＰ１．７ａ，１などのＯＡｃ＋株である。よって、Ｃ：１６：Ｐ１．７ａ，１  ＯＡｃ＋株を用いてよい。Ｃ１１株のような血清サブタイプＰ１．１中のＯＡｃ＋株も有用である。
【０１９７】
血清群Ｗ１３５の糖は、シアル酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃ株の糖と同様に、これは、変動性のＯ−アセチル化を有するが、シアル酸７位および９位においてである［１３９］。この構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−α−（１→と記載される。
【０１９８】
血清群Ｙの糖は、二糖反復単位がガラクトースの代わりにグルコースを含む以外は、血清群Ｗ１３５の糖と同様である。血清群Ｗ１３５と同様に、これは、シアル酸７位および９位において変動性のＯ−アセチル化を有する［１３９］。血清群Ｙの構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇｌｃ−α−（１→と記載される。
【０１９９】
本発明に従って用いられる糖は、上記のようにＯ−アセチル化されてよい（例えば、天然の莢膜糖で見られるのと同じＯ−アセチル化パターンで）か、またはこれらは、糖の環の１または複数の位置にて部分的もしくは完全に脱Ｏ−アセチル化されてよいか、またはこれらは、天然の莢膜糖に比べて過剰Ｏ−アセチル化されてよい。
【０２００】
結合体中の糖部分は、髄膜炎菌から調製される全長の糖を含んでよく、かつ／または全長の糖のフラグメントを含んでよく、すなわち、糖は、細菌で見られる天然の莢膜糖より短くてよい。糖は、よって、解重合されてよく、この解重合は、糖の精製中もしくはその後であるが、結合体化の前に生じる。解重合は、糖の鎖長を低減する。ある解重合法は、過酸化水素の使用を伴う。過酸化水素を糖に加え（例えば１％の最終Ｈ２Ｏ２濃度まで）、混合物を、次いで、所望の鎖長の低減が達成されるまでインキュベートする（例えば約５５℃にて）。別の解重合法は、酸加水分解を伴う。その他の解重合法は、当該技術において公知である。本発明に従って用いるための結合体を調製するために用いる糖は、これらの解重合法のいずれによっても得ることができる。解重合は、免疫原性のために最適な鎖長を提供し、かつ／または糖の物理的管理しやすさのために鎖長を低減するために用いることができる。いくつかの実施形態において、糖は、以下の範囲の平均重合度（Ｄｐ）を有する：Ａ＝１０〜２０；Ｃ＝１２〜２２；Ｗ１３５＝１５〜２５；Ｙ＝１５〜２５。Ｄｐよりもむしろ分子量の点において、有用な範囲は、全ての血清型について＜１００ｋＤａ；５ｋＤａ〜７５ｋＤａ；７ｋＤａ〜５０ｋＤａ；８ｋＤａ〜３５ｋＤａ；１２ｋＤａ〜２５ｋＤａ；１５ｋＤａ〜２２ｋＤａである。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、髄膜炎菌血清群Ａ株、Ｃ株、Ｗ１３５株およびＹ株のそれぞれからの糖についての平均分子量は、特にＭＡＬＬＳにより決定して、５０ｋＤａより高く、例えば≧７５ｋＤａ、≧１００ｋＤａ、≧１１０ｋＤａ、≧１２０ｋＤａ、≧１３０ｋＤａなどであってよく［１４０］、１５００ｋＤａまででさえあってよい。例えば、ＭｅｎＡの糖は、５０〜５００ｋＤａ、例えば６０〜８０ｋＤａの範囲であってよく、ＭｅｎＣの糖は、１００〜２１０ｋＤａの範囲であってよく、ＭｅｎＷ１３５の糖は、６０〜１９０ｋＤａ、例えば１２０〜１４０ｋＤａの範囲であってよく、かつ／またはＭｅｎＹの糖は、６０〜１９０ｋＤａ、例えば１５０〜１６０ｋＤａの範囲であってよい。
【０２０２】
組成物中の血清型あたりの髄膜炎菌の糖の質量は、通常、１μｇから２０μｇの間、例えば血清型あたり２から１０μｇの間、または約４μｇもしくは約５μｇもしくは約１０μｇである。１より多い血清型からの結合体が含まれる場合、これらは、実質的に等しい質量で存在してよく、例えば、各血清型の糖の質量が、互いの＋１０％以内である。等しい比率の代替として、２倍の質量の血清群Ａの糖を用いてよい。したがって、ワクチンは、ＭｅｎＡの糖を１０μｇと、ＭｅｎＣ、Ｗ１３５およびＹの糖をそれぞれ５μｇで含んでよい。
【０２０３】
有用な担体タンパク質および連結化学は、上で論じている。有用な担体は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよびＣＲＭ１９７を含む。
【０２０４】
１：５（すなわち過剰のタンパク質）から５：１の間（すなわち過剰の糖）の糖：タンパク質比率（ｗ／ｗ）、例えば１：２から５：１の間の比率および１：１．２から〜１：２．５の間の比率の結合体を用いてよい。参考文献１４１に記載されるように、混合物中の異なる髄膜炎菌血清群結合体は、異なる糖：タンパク質の比率を有することができ、例えば、あるものは１：２から１：５の間の比率を有してよく、別のものは５：１から１：１．９９の間の比率を有する。
【０２０５】
参考文献１４２に記載されるように、混合物は、直接の糖／タンパク質連結を有する１つの結合体と、リンカーを介する連結を有する別の結合体とを含むことができる。この取り合わせは、異なる髄膜炎菌血清群からの糖結合体を用いる場合に特に当てはまり、例えばＭｅｎＡおよびＭｅｎＣの糖はリンカーを介して結合体化してよく、ＭｅｎＷ１３５およびＭｅｎＹの糖は、担体タンパク質と直接結合体化してよい。
【０２０６】
全般
本発明の実施は、そうでないと記載しない限り、当該技術の技量内の化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を用いる。このような技術は、文献に詳細に説明されている。例えば参考文献１４３〜１４９などを参照されたい。
【０２０７】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる」を包含し、例えばＸを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなり得るか、または何か追加のもの、例えばＸ＋Ｙを含み得る。
【０２０８】
数値ｘに関する「約」との用語は、任意選択であり、例えばｘ±１０％を意味する。
【０２０９】
本発明が「エピトープ」に関する場合、このエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／またはＴ細胞エピトープであってよいが、通常、Ｂ細胞エピトープである。このようなエピトープは、経験的に同定できる（例えばＰＥＰＳＣＡＮ［１５０、１５１］または類似の方法を用いて）か、またはこれは予想できる（例えばＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原インデックス（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｉｎｄｅｘ）［１５２］、行列に基づくアプローチ［１５３］、ＭＡＰＩＴＯＰＥ［１５４］、ＴＥＰＩＴＯＰＥ［１５５、１５６］、ニューラルネットワーク［１５７］、ＯｐｔｉＭｅｒ＆ＥｐｉＭｅｒ［１５８、１５９］、ＡＤＥＰＴ［１６０］、Ｔｓｉｔｅｓ［１６１］、親水性［１６２］、抗原インデックス［１６３］または参考文献１６４〜１６８に開示される方法などを用いて）。エピトープは、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位により認識され、それと結合する抗原の部分であり、これらは、「抗原決定基」とよぶこともできる。
【０２１０】
本発明が、「精製された」抗原を用いる場合、この抗原は、それが天然に存在する環境から分離されている。例えば、抗原は、存在する任意のその他の精製された抗原に由来するもの以外のその他の髄膜炎菌成分を実質的に有さない。精製された抗原の混合物は、２つの抗原が天然に混合されて存在していても、それぞれの抗原を別々に精製し、次いでそれらを再び組み合わせることにより典型的に調製される。
【０２１１】
２つのアミノ酸配列間のパーセンテージ配列同一性についての言及は、整列させたときに、アミノ酸のそのパーセンテージが、２つの配列の比較において同じであることを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当該技術において公知のソフトウェアプログラム、例えば参考文献１６９の７．７．１８節に記載されるものを用いて決定できる。好ましいアラインメントは、１２のギャップ開始ペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティでのアフィンギャップ検索、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスを用いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムにより決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献１７０に開示されている。
【０２１２】
「実質的に」との語句は、「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないことがある。必要であれば、「実質的に」との語句を、本発明の定義から省くことができる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含む免疫原性組成物であって、前記ＬＯＳおよび／または前記ＣＳ１４が、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含まない、組成物。
（項目２）
前記四糖が、ＣＳ１４中に存在する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
アジュバントを含む、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記ＬＯＳが、ＬｇｔＢ酵素活性を欠く髄膜炎菌株から調製される、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記ＬＯＳが、ＧａｌＥ酵素活性を欠く髄膜炎菌株から調製される、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目６）
前記ＬＯＳが、ＬｇｔＡおよび／またはＬｇｔＥ酵素活性を欠く髄膜炎菌株から調製される、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目７）
前記ＬＯＳが、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖の末端ガラクトースを欠く、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目８）
前記ＬＯＳが、髄膜炎菌外膜小胞内に存在する、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目９）
前記ＬＯＳが、前記小胞中のタンパク質に結合体化されている、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記小胞が、ＴｂｐＡを過剰発現する髄膜炎菌から調製される、項目８または項目９に記載の組成物。
（項目１１）
前記ＬＯＳが、担体タンパク質に結合体化されている、項目１から６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
結合体化が、前記ＬＯＳ中のリピドＡ部分を介するか、またはＫＤＯ残基によるものであり得る、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
１または複数の髄膜炎菌ポリペプチドと肺炎球菌血清型１４莢膜糖とを含む免疫原性組成物であって、（ｉ）前記肺炎球菌血清型１４莢膜糖が、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、（ｉｉ）前記髄膜炎菌ポリペプチドが、血清群Ｂ髄膜炎菌に対して有効な免疫応答を惹起でき、（ｉｉｉ）前記組成物が、髄膜炎菌リポオリゴ糖を含まない、組成物。
（項目１４）
前記髄膜炎菌ポリペプチド（複数可）が、ｆＨＢＰを含む、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記ｆＨＢＰが、配列番号１と少なくとも８５％の配列同一性を有し、かつ／または配列番号１からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記ｆＨＢＰが、配列番号２と少なくとも８５％の配列同一性を有し、かつ／または配列番号２からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、項目１４に記載の組成物。
（項目１７）
前記ｆＨＢＰが、配列番号３と少なくとも８５％の配列同一性を有し、かつ／または配列番号３からの少なくとも７隣接アミノ酸のフラグメントからなるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、項目１４に記載の組成物。
（項目１８）
前記ｆＨＢＰが、脂質付加されている、項目１４、１５、１６または１７に記載の組成物。
（項目１９）
前記ｆＨＢＰが、配列番号１、２または３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドと結合できる抗体を惹起する、項目１４、１５、１６、１７または１８に記載の組成物。
（項目２０）
髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含むアジュバント無添加免疫原性組成物であって、前記ＬＯＳおよび前記ＣＳ１４が共にＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含む、組成物。
（項目２１）
髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌血清型１４莢膜糖（ＣＳ１４）とを含む免疫原性組成物であって、（ｉ）前記ＬＯＳおよび前記ＣＳ１４が共にＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、かつ（ｉｉ）ＬＯＳの濃度が５μｇ／ｍｌ未満であり、（ｉｉｉ）ＣＳ１４の濃度が５μｇ／ｍｌ未満である、組成物。
（項目２２）
前記ＣＳ１４が、担体タンパク質に結合体化されている、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２３）
前記担体タンパク質が、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドまたはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄである、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
髄膜炎菌リポオリゴ糖（ＬＯＳ）と肺炎球菌ポリペプチド抗原とを含む免疫原性組成物であって、（ｉ）前記ＬＯＳが、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ四糖を含み、（ｉｉ）前記肺炎球菌ポリペプチドが、血清型１４肺炎球菌に対して有効な免疫応答を惹起でき、（ｉｉｉ）前記組成物が、肺炎球菌血清型１４莢膜糖を含まない、組成物。
（項目２５）
アルミニウム塩アジュバントを含む、項目１から１９、項目１から１９に従属する場合の項目２１から２４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２６）
前記アルミニウム塩が、リン酸アルミニウムである、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
前記項目のいずれかに記載の組成物を哺乳類に投与するステップを含む、前記哺乳類における免疫応答を惹起するための方法。
【図面の簡単な説明】
【０２１３】
【図１】図１は、Ｌ３イムノタイプについてのコアの糖を示す。
【図２】図２は、参考文献５５からのＣＳ１４の反復構造を示す。
【図３】図３は、動物の群における抗ＬＮｎＴ  ＩｇＧ力価を示す。図３は、ＲＬＵ／ｍｌで測定されるＧＭＴ値を示す。
【図４】同様に、図４は、抗ＣＰ１４  ＩｇＧ力価を示す。図４は、ＲＬＵ／ｍｌで測定されるＧＭＴ値を示す。
【発明を実施するための形態】
【０２１４】
マウスを、（ｉ）０．４μｇ用量でのＰＲＥＶＮＡＲ（商標）ワクチン、（ｉｉ）ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）と組み合わせた、血清群Ｂ髄膜炎菌の野生型ＭＣ５８株から調製した１０μｇ用量での外膜小胞、または（ｉｉｉ）ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）と組み合わせた、ΔｌｇｔＢノックアウトを有する血清群Ｂ髄膜炎菌のＭＣ５８株から調製した１０μｇ用量での外膜小胞で免疫化した。全ての組成物は、水酸化アルミニウムアジュバントを加えることにより処方した。
【０２１５】
血清を、とりわけ肺炎球菌血清型１４莢膜糖およびＬＮｎＴエピトープに対する抗体について、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを用いて分析した。
【０２１６】
図３は、第１日および第２１日の免疫化後の第３４日での３群についての抗ＬＮｎＴ応答を示す。ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）ワクチン単独では、ブランク対照の約２倍の抗ＬＮｎＴ応答を惹起した（０．２対０．１２）。ＬＯＳ含有ＯＭＶを加えることにより、応答が増加した（０．７）が、ＬｇｔＢ−ｖｅ  ＯＭＶにおいて、増加はより低かった（０．５）。群（ｉｉｉ）における増加対群（ｉ）における増加は、ＯＭＶのアジュバント効果の可能性によるものであり得る（参考文献５１を参照されたい）。
【０２１７】
図４は、第３４日での抗ＣＳ１４応答を示す。両方のＯＭＶ調製物が抗ＣＳ１４応答を増加させた。有利には、より大きい増加が、ＬｇｔＢ−ｖｅ  ＯＭＶを用いて見られた。
【０２１８】
これらのデータは不完全で、十分に決定的ではなく、抗ＬＮｎＴアッセイは、低いシグナルだけを与えたが、これらは、ＣＳ１４およびＬｇｔＢ−ｖｅ  ＯＭＶを組み合わせて、ＣＳ１４と野生型ＯＭＶとを組み合わせるよりもよい結果を得ることができることを示す。
【０２１９】
本発明は、例としてのみ記載され、本発明の範囲および精神内に留まったまま改変を行うことができることが理解される。
【０２２０】
参考文献
【０２２１】
【化１】
2015163651.tif 000003
【０２２２】
【化２】
2015163651.tif 000004
【０２２３】
【化３】
2015163651.tif 000005
【０２２４】
【化４】
2015163651.tif 000006
【数１】
2015163651.tif 000007
【数２】
2015163651.tif 000008
【数３】
2015163651.tif 000009
【数４】
2015163651.tif 000010
【数５】
2015163651.tif 000011
【数６】
2015163651.tif 000012
【数７】
2015163651.tif 000013
【数８】
2015163651.tif 000014
【数９】
2015163651.tif 000015
【数１０】
2015163651.tif 000016
【数１１】
2015163651.tif 000017
【図１】
2015163651.tif 000018
【図２】
2015163651.tif 000019
【図３】
2015163651.tif 000020
【図４】
2015163651.tif 000021
【外国語明細書】
2015163651000001.pdf