(57)【要約】【課題】Ｓ１００Ａ８の過剰発現に関連して生じる各種症状や疾患の予防又は治療に有用な、Ｓ１００Ａ８発現抑制剤の提供。【解決手段】ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物を有効成分とするＳ１００Ａ８発現抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物を有効成分とするＳ１００Ａ８発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ１００Ａ８の発現を抑制するＳ１００Ａ８発現抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｓ１００Ａ８（別名：カルグラニュリンＡ又はＭＲＰ−８）は、カルシウム応答性を有するカルシウム結合タンパク質である（非特許文献１）。Ｓ１００Ａ８は、カルシウム結合タンパク質のカルシウム結合部位に共通してみられるＥＦハンド（ＥＦ−ｈａｎｄ）と呼ばれる立体構造を有する。
【０００３】
近年、急性期応答、創傷治癒及び乾癬などの角化亢進に伴い、Ｓ１００Ａ８の発現が亢進することが報告されている（非特許文献２〜４）。また、Ｓ１００Ａ８はケラチン繊維と結合するなど、細胞外及び細胞内における分子間相互作用に関与することが報告されている（非特許文献５〜６）。
さらに、Ｓ１００Ａ８の機能として、好中球及び単球の遊走活性を上昇させること（非特許文献７）及び抗菌活性を示すこと（非特許文献８）が報告されている。
【０００４】
また最近では、顆粒放出能を有する細胞系における活性型Ｓ１００Ａ８を制御することで、顆粒放出反応を制御できることが見出されている（特許文献１）。すなわち、上記細胞系を、活性型Ｓ１００Ａ８を増加せしめる処理に供することで、該細胞系は顆粒放出し、一方、活性型Ｓ１００Ａ８を減少せしめる処理に供することで、該細胞系の顆粒放出が減少する。例えば、顆粒放出能を有する細胞系である好中球を、活性型Ｓ１００Ａ８を減少せしめる処理に供することによって、好中球の顆粒放出反応を抑制し、血管内膜の障害を抑制できることが報告されている。
【０００５】
一方、ナス科の植物であるハシリドコロは、アトロピンを含み、副交感神経遮断作用を有することが知られている。また、ケシ科のハナビシソウ（California poppy）には、鎮痙、鎮静、鎮痛、催眠、利尿等の薬理作用があることが知られている。
【０００６】
しかしながら、これらの植物にＳ１００Ａ８の発現を抑制する作用があることは全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第００／１８９７０号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Donato, R., Biochim. Biophys. Acta., 1450, 191-231, 1999
【非特許文献２】Thorey, I.S.ら, J. Biol. Chem., 276, 35818-25, 2001
【非特許文献３】Siegenthaler, G.ら, J. Biol. Chem., 272, 9371-77, 1997
【非特許文献４】Broome, AM.ら, J. Histochem. Cytochem., 51, 675-685, 2003
【非特許文献５】Donato, R., International J. Biochem. & Cell Biology, 33, 637-668, 2001
【非特許文献６】Goebeler, M.ら, Biochem. J., 309, 419-424, 1995
【非特許文献７】Geczy, C.L., Biochim. Biophys. Acta., 1313, 246-253, 1996
【非特許文献８】Murthy, A.R.K.ら, J. Immunol., 151, 6291-6301, 1993
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｓ１００Ａ８の過剰発現に関連して生じる各種症状や疾患の予防又は治療に有用な、Ｓ１００Ａ８発現抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、Ｓ１００Ａ８の発現を調節する天然物質について検討したところ、ハシリドコロ又はハナビシソウの抽出物にＳ１００Ａ８の発現を抑制する作用があることを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物を有効成分とするＳ１００Ａ８発現抑制剤、に係るものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、Ｓ１００Ａ８の過剰発現に関連して生じる各種症状や疾患、例えば、乾癬、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性心筋梗塞時の虚血後再灌流障害、糸球体腎症、のう胞性線維症、リューマチ性関節炎、慢性気管支炎、脳血管レン縮、喘息、末梢循環障害、狭心症、高血圧症又は動脈硬化等の好中球の顆粒放出による血管内膜障害関連疾患の予防又は治療に有用なＳ１００Ａ８発現抑制剤が提供される。本発明に係るＳ１００Ａ８発現抑制剤は、有効成分として天然物質に由来するものを含有することから、医薬、医薬部外品又は化粧料として安全に使用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明において用いられる、「ハシリドコロ」とは、ナス科ハシリドコロ属のハシリドコロ（学名：Scopolia japonica）を意味する。
「ハナビシソウ」とは、ケシ科ハナビシソウ属のハナビシソウ（学名：Eschscholzia californica）を意味し、別名、カリフォルニアポピーとも称される。
【００１４】
本発明においては、斯かる植物の、全草、葉、茎、芽、花、蕾、根、根茎若しくは種子、又はこれらを組み合わせて使用することが可能であるが、ハシリドコロについては種子をそのまま又は粉砕して用いるのが好ましく、ハナビシソウについては、茎又は葉をそのまま又は粉砕して用いるのが好ましい。
斯かる植物は、そのまま若しくはそれを圧搾することにより得られる搾汁、植物体自身を乾燥した乾燥物若しくはその粉砕物、あるいはこれらから抽出した抽出物として用いることができるが、抽出物として用いるのが好ましい。
【００１５】
抽出物としては、植物体を常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出すること等、公知の抽出方法により得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末が挙げられる。
公知の抽出方法としては、例えば、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超臨界抽出、超音波抽出及びマイクロ波抽出等が挙げられる。
【００１６】
当該抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類等が挙げられ、これらは単独又は混合物として用いることができる。このうち、水、アルコール系（アルコール類及び／又は多価アルコール類）溶剤、及び水−アルコール系混合溶剤を用いるのが好ましく、水−アルコール系混合溶剤が好ましい。さらに、アルコール類としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールがより好ましく、エタノールがさらに好ましい。また、多価アルコール類としてはブチレングリコールがより好ましい。
より好適な水−アルコール系混合溶剤としては、２０％（ｖ／ｖ）以上、好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上、そして９５％（ｖ／ｖ）以下、９０％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液が挙げられる。例えば、２０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、好ましくは５０〜９０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液が挙げられる。
【００１７】
上記抽出溶剤を用いた抽出は、例えば、植物体１質量部に対して５質量部以上６０質量部以下、好ましくは５質量部以上３０質量部以下の溶剤を用い、４℃以上１００℃以下にて、１時間以上３０日間以下、好ましくは１０℃以上３０℃以下にて、１０日間以上２５日間以下、抽出することにより行うことができる。 
【００１８】
上記の抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１９】
本発明の抽出物は、化粧品、医薬部外品又は医薬品として許容し得る規格に適合し本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよく、さらに得られた粗精製物を公知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
【００２０】
後記実施例に示すように、ハシリドコロ抽出物及びハナビシソウ抽出物は、Ｓ１００Ａ８の発現を抑制することから、その有効量をヒトに投与することにより、生体内においてＳ１００Ａ８の発現を抑制することができる。
したがって、ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物は、Ｓ１００Ａ８の発現抑制剤となり得、Ｓ１００Ａ８の発現を抑制するために使用できる。尚、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
また、ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物は、Ｓ１００Ａ８の発現抑制剤を製造するために使用することができる。
【００２１】
ここで、「Ｓ１００Ａ８発現抑制」とは、Ｓ１００Ａ８をコードする遺伝子レベル及び／又はＳ１００Ａ８タンパク質レベルでの発現抑制を意味する。尚、Ｓ１００Ａ８発現抑制の評価は、例えば、正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞などの細胞系を用い、当該細胞からタンパク質又はｍＲＮＡを抽出し、Ｓ１００Ａ８タンパク質量又はＳ１００Ａ８をコードするｍＲＮＡ量を、ＥＬＩＳＡやウエスタンブロッティング、或いはＰＣＲやノーザンハイブリダイゼーションを用いて、測定することにより行うことができる。
【００２２】
すでに述べたように、急性期応答、創傷治癒及び乾癬などの角化亢進に伴い、Ｓ１００Ａ８の発現が亢進することが報告され（非特許文献２〜４）、また、顆粒放出能を有する細胞系における活性型Ｓ１００Ａ８を制御することで、顆粒放出反応を制御でき、例えば、顆粒放出能を有する細胞系である好中球を、活性型Ｓ１００Ａ８を減少せしめる処理に供することによって、好中球の顆粒放出反応を抑制し、血管内膜の障害を抑制できることが報告されている（特許文献１）ことから、Ｓ１００Ａ８発現抑制剤は、Ｓ１００Ａ８過剰発現に関連して生じる症状又は疾患、例えば、乾癬；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；急性心筋梗塞時の虚血後再灌流障害；糸球体腎症；のう胞性線維症；リューマチ性関節炎；慢性気管支炎；脳血管レン縮；喘息；末梢循環障害、狭心症、高血圧症又は動脈硬化等の好中球の顆粒放出による血管内膜障害関連疾患、の予防又は治療等に有用であると云える。
【００２３】
上記、Ｓ１００Ａ８発現抑制剤は、Ｓ１００Ａ８の発現を抑制するため、Ｓ１００Ａ８過剰発現に関連して生じる症状又は疾患を予防又は改善するための化粧品、医薬品又は医薬部外品として、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤として使用できる。
【００２４】
上記医薬品又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与は経口でも非経口でもよい。経口投与のための剤型としては、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形製剤、ならびにエリキシル、シロップおよび懸濁液のような液剤が挙げられ、非経口投与のための剤型としては、注射、輸液、局所、外用剤、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。好ましくは、当該医薬品又は医薬部外品は、皮膚外用剤の形態であり得る。
【００２５】
上記製剤には、薬学的に許容される担体を配合することができる。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、滑沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該医薬品や医薬部外品は、Ｓ１００Ａ８発現抑制作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００２６】
上記化粧品は、本発明の植物又はその抽出物、あるいは必要に応じて化粧品として許容される担体及び／又は他の有効成分や化粧成分を組みあわせて、常法により製造することができる。
斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、滑沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該化粧品は、本発明の弾性線維形成促進作用が失われない限り、他の有効成分や化粧成分、例えば、保湿剤、美白剤、紫外線保護剤、細胞賦活剤、洗浄剤、角質溶解剤、メークアップ成分（例えば、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、チーク、口紅、アイメーク、アイブロウ、マスカラ、その他）等を含有していてもよい。化粧品とする場合の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧品に使用され得る任意の形態が挙げられる。
【００２７】
上記各製剤（医薬品、医薬部外品、化粧品）における本発明の植物又はその抽出物の含有量は、例えば、乾燥物換算で、製剤全質量の０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上であり、且つ５質量％以下、好ましくは１質量％以下である。また、０．００１〜５質量％、好ましくは０．０１〜１質量％が挙げられる。
【００２８】
本発明の植物又はその抽出物を医薬品として、或いは医薬品に配合して使用する場合の投与量は、患者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、通常、本発明の植物（乾燥物換算）として、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ以上であり、且つ１００ｍｇ／ｋｇ以下、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ以下であり、また、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【００２９】
また、投与又は摂取対象としては、それを必要としている若しくは希望している動物であれば特に限定されないが、例えば、Ｓ１００Ａ８の過剰発現に関連して生じる症状又は疾患の予防又は改善を必要とする若しくは希望するヒトが挙げられる。
【００３０】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物を有効成分とするＳ１００Ａ８発現抑制剤。
【００３１】
＜２＞Ｓ１００Ａ８発現抑制剤を製造するためのハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物の使用。
＜３＞Ｓ１００Ａ８発現抑制に使用するためのハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物。
＜４＞ハシリドコロ及びハナビシソウから選ばれる植物又はその抽出物を用いるＳ１００Ａ８発現抑制方法。
＜５＞前記＜３＞において、使用は非治療的使用である。
＜６＞前記＜４＞において、方法は非治療的方法である。
＜７＞前記＜４＞において、用いる対象は、Ｓ１００Ａ８の過剰発現に関連して生じる症状又は疾患の予防又は改善を必要とする若しくは希望するヒトである。
＜８＞＜７＞において、Ｓ１００Ａ８の過剰発現に関連して生じる症状又は疾患は、例えば、乾癬、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性心筋梗塞時の虚血後再灌流障害、糸球体腎症、のう胞性線維症、リューマチ性関節炎、慢性気管支炎、脳血管レン縮、喘息、末梢循環障害、狭心症、高血圧症又は動脈硬化等の好中球の顆粒放出による血管内膜障害関連疾患である。
【実施例】
【００３２】
製造例１  ハシリドコロ抽出物の調製
ナス科ハシリドコロ属のハシリドコロ  Ｓｃｏｐｏｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ（中国東北地区産）の種子粉砕物４０ｇに５０ｖｏｌ％ＥｔＯＨ４００ｍＬを加え、室温で２２日間抽出を行い、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、溶媒を留去して固形分２．３ｇを得た。これに５０ｖｏｌ％ＥｔＯＨ  ２３０ｍＬを加えて溶解し、評価サンプル（固形分１．０ｗ／ｖ％）とした。
【００３３】
製造例２  ハナビシソウ抽出物の調製
ケシ科ハナビシソウ属のハナビシソウ  Ｅｓｃｈｓｃｈｏｌｚｉａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ（アメリカ産）の全草細断物５０ｇに５０ｖｏｌ％  ＥｔＯＨ５００ｍＬを加え、室温で１５日間抽出を行い、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、溶媒を留去して固形分４．９ｇを得た。これに５０ｖｏｌ％ＥｔＯＨ  ４９０ｍＬを加えて溶解し、評価サンプル（固形分１．０ｗ／ｖ％）とした。
【００３４】
実施例１  Ｓ１００Ａ８の発現抑制効果
（１）材料及び方法
試験には、正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞（Ｃ００１５Ｃ、Ｓｔｒａｉｎ  Ｎｏ：９０１１０９、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いた。
まず、１穴あたり添加剤含有Ｅｐｉｌｉｆｅ培地２ｍＬを含有する６穴プレートに、細胞をプレーティングし、５０〜６０％コンフルエントになるまで培養した。なお、培養は５％ＣＯ２、３７℃条件下で行った。５０〜６０％コンフルエントに達した後、細胞を試験に用いるために、被験物質添加２４時間前に、培地を添加剤不含のＥｐｉｌｉｆｅ培地（以下、「Ｅｐｉｌｉｆｅ（−）培地」という）２ｍＬに交換し、馴化させた。
【００３５】
次いで、培地を、１．５ミリモル濃度のカルシウムを含むＥｐｉｌｉｆｅ（−）培地に交換し、さらに、製造例１及び２で調製した被験物質を０．１％ｖｏｌ濃度（すなわち、２μＬを添加）となるように直接培地中に添加することで、試験を開始した。試験開始から４８時間培養した後、培地を吸引除去し、ＰＢＳ（−）で細胞を２回洗浄した。洗浄後、１穴あたりＲＩＰＡバッファー１５０μＬを添加し、細胞からタンパク質を抽出した。
【００３６】
ＢＭＡ社が提示する方法に従ってＭＲＰ８  ＥＬＩＳＡキット（Ｓ−１００７、ＢＭＡ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を用い、各被験物質に供した細胞から得られたタンパク質１０μｇをＥＬＩＳＡに供し、当該サンプル中のＳ１００Ａ８タンパク質量を算出した。なお、対照として、被験物質を添加せず溶媒のみを添加した以外は上記と同様にして培養した細胞を用いた。
【００３７】
（２）結果
対照（溶媒コントロール添加時）におけるＳ１００Ａ８蛋白質発現量を１．００とした時のＳ１００Ａ８蛋白質発現量相対値を求めた。結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
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【００３９】
表１から明らかなように、ハシリドコロ抽出物及びハナビシソウ抽出物は、正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞においてＳ１００Ａ８タンパク質の発現を抑制した。