(57)【要約】【課題】本発明は、癌細胞吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有する癌細胞吸着ウイルスを固定した癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス、癌細胞吸着デバイスの作成方法及び癌細胞除去装置を提供することを課題とする。【解決手段】２種以上の生体適合性高分子２２、２３が積層された高分子積層膜２１と、高分子積層膜２１の一面２１ａに固定され、生理活性を具備した癌細胞吸着ウイルス１１と、を有する癌細胞吸着膜３１を用いることによって前記課題を解決できる。【選択図】図９
2015043700.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２種以上の生体適合性高分子が積層された高分子積層膜と、前記高分子積層膜の一面に固定され、生理活性を具備した癌細胞吸着ウイルスと、を有することを特徴とする癌細胞吸着膜。
【請求項２】
前記高分子積層膜が、正電荷を有する生体適合性高分子の膜と、負電荷を有する生体適合性高分子の膜とが交互に積層されていることを特徴とする請求項１に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項３】
前記正電荷を有する生体適合性高分子が、ポリ−Ｌ−リシン、キトサン、グリコールキトサン、ポリアルギニンの群から選択されるいずれか一の高分子であることを特徴とする請求項２に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項４】
前記負電荷を有する生体適合性高分子が、アルギン酸、ヒアルロン酸、デキストラン硫酸の群から選択されるいずれか一の高分子であることを特徴とする請求項２又は３に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項５】
前記高分子積層膜の層数が、４層以上であることを特徴とする請求項２〜４のいずれか１項に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項６】
前記癌細胞吸着ウイルスが、空間部を覆うエンベロープ膜と、前記空間部内に離散されたＲＮＡ断片と、前記エンベロープ膜の外膜面に林立するように形成されたタンパク質と、を有しており、
前記タンパク質が、癌細胞のレセプターの吸着可能な第１のタンパク質を有することを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項７】
前記第１のタンパク質がＨＮタンパク質であり、前記エンベロープ膜が脂質二分子膜であることを特徴とする請求項６に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項８】
前記癌細胞吸着ウイルスが、不活性化センダイウイルス（ＨＶＪ−Ｅ）であることを特徴とする請求項７に記載の癌細胞吸着膜。
【請求項９】
基材と、前記基材の一面に形成された膜とを有し、前記膜が請求項１〜８のいずれか１項に記載の癌細胞吸着膜であることを特徴とする癌細胞吸着デバイス。
【請求項１０】
Ｌａｙｅｒ−ｂｙ−Ｌａｙｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ法（ＬｂＬ法）を用いた高分子積層膜作成工程と、湿式成膜法を用いた癌細胞吸着ウイルス固定工程とを有することを特徴とする癌細胞吸着デバイスの作成方法。
【請求項１１】
癌細胞吸着ウイルス固定工程が、癌細胞吸着ウイルス濃度を１２０ＨＡＵ／ｍＬ以上とした分散溶液に高分子積層膜を浸漬してから、引き上げ・乾燥して、前記高分子積層膜の一面に癌細胞吸着ウイルスを固定する工程であることを特徴とする請求項１０に記載の癌細胞吸着デバイスの作成方法。
【請求項１２】
液導入開口部と、液排出開口部と、前記２つの開口部に連通され、液の流路となる空間部を有し、前記空間部内に、請求項１〜８のいずれか１項に記載の癌細胞吸着膜が形成されていることを特徴とする癌細胞除去装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス、癌細胞吸着デバイスの作成方法及び癌細胞除去装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、ナノ粒子を構成因子とするナノデバイスを構築するため、ナノ粒子を所望の態様で配列させる研究や、タンパク質の配列方法が開発されている。
例えば、φ１０ｎｍ程度の球状タンパク質であるフェリチンを基板上に並べ、この内部に酸化鉄を生成させたのち、前記タンパク質を燃焼除去することでＦｅナノ粒子のドット配列を形成させる方法が開示されている（特許文献１、２）。
ここでは、タンパク質を基板上に並べる工程が重要なステップとされている。
【０００３】
タンパク質と同様に、ウイルスを基板上に固定することにより、新たな生体応用デバイスを構築できる可能性がある。
高分子多層膜の膜間に荷電ウイルスを挟みこんだ研究が開示されている（非特許文献１）。高分子多層膜は、Ｌａｙｅｒ−ｂｙ−Ｌａｙｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ法（ＬｂＬ法）により作成されている（非特許文献１、２）。
【０００４】
しかし、ここで開示されたデバイスは、半導体デバイスへの応用に向けた無機粒子の創製が主な目的となっており、生体応用デバイスへの応用や利用は検討されていない。そのため、下地膜となるＬｂＬ膜を構成する高分子は生体適合性を有さない。細胞培養又は生体応用可能なデバイスを構築した場合に、拒絶反応や免疫反応を生じさせるおそれがある。また、利用されたウイルスが植物に感染するものであり、動物細胞に対しウイルス自体が有する活性を発現せず、有効な細胞培養又は生体応用デバイスとならないという課題があった。
【０００５】
ＨＶＪ−Ｅは、生理活性を有する代表的なウイルスである。
【０００６】
ＨＶＪ−Ｅを、マウスに形成した大腸癌に注入することにより、注入後３週間で癌細胞がほとんど消滅したとの報告がある（非特許文献３〜５）。ＨＶＪ−Ｅレセプター（受容体）を発現した癌細胞は、ＨＶＪ−Ｅのみで細胞死が誘導される。この細胞死誘導のメカニズムは、ウイルスＲＮＡゲノム断片が、細胞内核酸受容体によって認識されて、活性化されるシグナルによる癌細胞選択的な細胞死誘導によるメカニズムである。しかし、癌細胞によっては、また別のシグナル径路が働いて、結果的には癌細胞選択的な細胞死誘導が起こる。一方、正常細胞も受容体を発現しているが、細胞死は誘導されない。
【０００７】
癌細胞のＨＶＪ−Ｅレセプターに吸着したＨＶＪ−Ｅは癌細胞の細胞死を誘導するが、ＨＶＪ−Ｅレセプターのない癌細胞に対しては、細胞死（アポトーシス）を誘導しない。つまり、癌細胞がＨＶＪ−Ｅレセプターを発現するかしないか、ＨＶＪ−Ｅレセプターを有するか有さないかが、抗癌作用を活性化するかしないかを決定し、その癌細胞が選択的に細胞死へ誘導するか否かを決定する。
【０００８】
しかし、ＨＶＪ−Ｅを初めとして、高分子積層膜上に生理活性を有するウイルスを固定した例は報告されていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００６−１９０８８３号公報
【特許文献２】特開２００５−２２５８８７号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｌｖｏｖ，Ｙ．Ｈａａｓ，Ｈ．Ｄｅｃｈｅｒ，Ｇ．Ｍｏｈｗａｌｄ，Ｈ．，Ｌａｎｇｍｕｉｒ、１９９４，１０，４２３２−４２３６
【非特許文献２】Ｄｅｃｈｅｒ，Ｇ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９７，２７７，１２３２
【非特許文献３】Ｋａｎｅｄａ，Ｙ．Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｔ．Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｔ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓ．Ｉｋｅｇａｍｉ，Ｈ．Ｓｕｚｕｋｉ，  Ｎ．Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｈ．Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｒ．Ｋｏｔａｎｉ，Ｈ．  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００２，６，２１９
【非特許文献４】Ｋｕｒｏｏｋａ，Ｍ．Ｋａｎｅｄａ，Ｙ．，Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓ，２００７，６７，２２７−２３６
【非特許文献５】大阪大学医学部  金田安史研究室ＨＰ  http://www.med.osaka-u.ac.jp/pub/gts/research_a.html
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させるといった生理活性能を有するウイルスを固定した癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス、癌細胞吸着デバイスの作成方法及び癌細胞除去装置を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、上記事情を鑑みて、試行錯誤を繰り返すことにより、異なる電荷で荷電した高分子を交互に積層した高分子膜を用いれば、その膜上に多数の癌細胞吸着ウイルスを固定させることができ、癌細胞吸着ウイルスに癌細胞を吸着させることにより、癌細胞吸着膜として用いることができ、これを用いることにより、癌細胞吸着デバイス及び癌細胞除去装置を提供できることを見出した。
具体的には、癌細胞吸着ウイルスであるＨＶＪ−Ｅを高密度に配列・固定した面を形成し、レセプターを備えた癌細胞を含む血液を、前記面上を流通させることにより、前記面に固定されたＨＶＪ−Ｅで、血液中から癌細胞を吸着・除去できる可能性を見出し、本発明を完成した。
本発明は、以下の構成を有する。
【００１３】
（１）２種以上の生体適合性高分子が積層された高分子積層膜と、前記高分子積層膜の一面に固定され、生理活性を具備した癌細胞吸着ウイルスと、を有することを特徴とする癌細胞吸着膜。
【００１４】
（２）前記高分子積層膜が、正電荷を有する生体適合性高分子の膜と、負電荷を有する生体適合性高分子の膜とが交互に積層されていることを特徴とする（１）に記載の癌細胞吸着膜。
（３）前記正電荷を有する生体適合性高分子が、ポリ−Ｌ−リシン、キトサン、グリコールキトサン、ポリアルギニンの群から選択されるいずれか一の高分子であることを特徴とする（２）に記載の癌細胞吸着膜。
（４）前記負電荷を有する生体適合性高分子が、アルギン酸、ヒアルロン酸、デキストラン硫酸の群から選択されるいずれか一の高分子であることを特徴とする生体適合性高分子であることを特徴とする（２）又は（３）に記載の癌細胞吸着膜。
【００１５】
（５）前記高分子積層膜の層数が、４層以上であることを特徴とする（２）〜（４）のいずれかに記載の癌細胞吸着膜。
（６）前記癌細胞吸着ウイルスが、空間部を覆うエンベロープ膜と、前記空間部内に離散されたＲＮＡ断片と、前記エンベロープ膜の外膜面に林立するように形成されたタンパク質と、を有しており、前記タンパク質が、癌細胞のレセプターの吸着可能な第１のタンパク質を有することを特徴とする（１）〜（５）のいずれかに記載の癌細胞吸着膜。
【００１６】
（７）前記第１のタンパク質がＨＮタンパク質であり、前記エンベロープ膜が脂質二分子膜であることを特徴とする（６）に記載の癌細胞吸着膜。
（８）前記癌細胞吸着ウイルスが、不活性化センダイウイルス（ＨＶＪ−Ｅ）であることを特徴とする（７）に記載の癌細胞吸着膜。
【００１７】
（９）基材と、前記基材の一面に形成された膜とを有し、前記膜が（１）〜（８）のいずれかに記載の癌細胞吸着膜であることを特徴とする癌細胞吸着デバイス。
（１０）Ｌａｙｅｒ−ｂｙ−Ｌａｙｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ法（ＬＢＬ法）を用いた高分子積層膜作成工程と、湿式成膜法を用いた癌細胞吸着ウイルス固定工程とを有することを特徴とする癌細胞吸着デバイスの作成方法。
（１１）癌細胞吸着ウイルス固定工程が、癌細胞吸着ウイルス濃度を１２０ＨＡＵ／ｍＬ以上とした分散溶液に高分子積層膜を浸漬してから、引き上げ・乾燥して、前記高分子積層膜の一面に癌細胞吸着ウイルスを固定する工程であることを特徴とする（１０）に記載の癌細胞吸着デバイスの作成方法。
【００１８】
（１２）液導入開口部と、液排出開口部と、前記２つの開口部に連通され、液の流路となる空間部を有し、前記空間部内に、（１）〜（８）のいずれかに記載の癌細胞吸着膜が形成されていることを特徴とする癌細胞除去装置。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の癌細胞吸着膜は、２種以上の生体適合性高分子が積層された高分子積層膜と、前記高分子積層膜の一面に固定され、生理活性を具備した癌細胞吸着ウイルスと、を有する構成なので、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有する癌細胞吸着ウイルスを固定した膜とすることができる。
【００２０】
本発明の癌細胞吸着デバイスは、基材と、前記基材の一面に形成された膜とを有し、前記膜が先に記載の癌細胞吸着膜である構成なので、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するようにできる。
【００２１】
本発明の癌細胞吸着デバイスの作成方法は、Ｌａｙｅｒ−ｂｙ−Ｌａｙｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ法（ＬｂＬ法）を用いた高分子積層膜作成工程と、湿式成膜法を用いた癌細胞吸着ウイルス固定工程とを有する構成なので、癌細胞吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有する癌細胞吸着デバイスを容易に、かつ、短時間で作成できる。
【００２２】
本発明の癌細胞除去装置は、液導入開口部と、液排出開口部と、前記２つの開口部に連通され、液の流路となる空間部を有し、前記空間部内に、先に記載の癌細胞吸着膜が形成されている構成なので、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するようにできる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明の第１の実施形態である癌細胞除去装置の一例を示す模式図であって、正面図（ａ）と、（ａ）におけるＡ−Ａ’線における断面図（ｂ）である。
【図２】本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイスの一例を示す模式図であって、正面図（ａ）と、（ａ）におけるＢ−Ｂ’線における断面図（ｂ）である。
【図３】本発明の実施形態である癌細胞吸着ウイルスの一例を示す模式図である。
【図４】ＨＶＪ−Ｅの作成方法の一例を示す工程図である。
【図５】癌細胞吸着デバイスの作成方法の一例を示す工程図である。
【図６】癌細胞吸着デバイスの作成方法の一例を示す工程図である。
【図７】癌細胞吸着デバイスの作成方法の一例を示す工程図である。
【図８】ＬｂＬ法により形成した高分子積層膜の最表層表面への細胞吸着ウイルスの固定の原理図である。
【図９】癌細胞吸着デバイスの作成方法の一例を示す工程図である。
【図１０】癌細胞除去方法の一例を説明する図である。
【図１１】癌細胞除去方法の一例を説明する図である。
【図１２】癌細胞除去方法の一例を説明する図である。
【図１３】本発明の第２の実施形態である癌細胞除去装置の一例を示す断面模式図である。
【図１４】瓶に調製したＨＶＪ−Ｅ分散溶液の写真である。
【図１５】金電極を有する水晶子を備えた基板の写真である。
【図１６】ＨＶＪ−Ｅの金表面への吸着量（固定量）と浸漬時間の関係を示すグラフである。
【図１７】高分子積層膜の層数と厚さの関係を示すグラフである。
【図１８】高分子積層膜のＬｂＬ膜厚とＨＶＪ−Ｅの吸着量との関係を示すグラフである。
【図１９】分散溶液におけるＨＶＪ−Ｅ濃度とＨＶＪ−Ｅの吸着量との関係を示すグラフである。
【図２０】用いたガラス基板の写真（ａ）、調製したＰＬＬ分散溶液、ＡＬＧ分散溶液、ＨＶＪ−Ｅ分散溶液の写真（ｂ）である。
【図２１】ガラス基板をＰＬＬ分散溶液に浸漬した状態を示す写真（ａ）、ガラス基板をＡＬＧ分散溶液に浸漬した状態を示す写真（ｂ）、ガラス基板をｐＫＨ  ｌａｂｅｌｅｄのＨＶＪ−Ｅ分散溶液に浸漬した状態を示す写真（ｃ）である。
【図２２】ＨＶＪ−Ｅ吸着前蛍光観察写真（ａ）とＨＶＪ−Ｅ吸着後の蛍光観察写真（ｂ）である。
【図２３】ＨＶＪ−Ｅ吸着１１層被膜基板の写真である。
【図２４】ＨＶＪ−Ｅ吸着１１層被膜基板の吸収スペクトルである。
【図２５】ＨＶＪ−Ｅ吸着１１層被膜基板の２８０ｎｍの吸収強度を示すグラフである。
【図２６】ＨＶＪ−Ｅ吸着表面のＡＦＭ写真である。
【図２７】親水性評価実験の結果を示す写真である。
【図２８】ＨＶＪ−Ｅ吸着前後の接触角の変化の高分子層依存性を示すグラフである。
【図２９】癌細胞の表面への吸着写真であって、ＬｂＬ  １１ｓｔｅｐ  ｓｕｒｆａｃｅ（ａ）と、ＬｂＬ  １１ｓｔｅｐ＋ＨＶＪ−Ｅ  ｓｕｒｆａｃｅ（ｂ）である。
【図３０】Ｗｉｔｈｏｕｔ  ＨＶＪ−ＥとＷｉｔｈ  ＨＶＪ−Ｅへの細胞のアスペクト比を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
（本発明の第１の実施形態）
以下、添付図面を参照しながら、本発明の実施形態である癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス、癌細胞吸着デバイスの作成方法及び癌細胞除去装置について説明する。
【００２５】
＜癌細胞除去装置＞
図１は、本発明の第１の実施形態である癌細胞除去装置の一例を示す模式図であって、正面図（ａ）と、（ａ）におけるＡ−Ａ’線における断面図（ｂ）である。
図１に示すように、本発明の実施形態である癌細胞除去装置５１は、液導入開口部５１ａと、液排出開口部５１ｂと、前記２つの開口部に連通され、液の流路となる空間部３５ｃと、空間部３５ｃ内に配置した癌細胞吸着デバイス４１とからなる。
前記液としては、血液を用いることができる。
【００２６】
癌細胞除去装置５１は外形が略筒状の部材３５であり、一端側開口部が液導入開口部５１ａとされ、他端側開口部が液排出開口部５１ｂとされ、筒内が空間部３５ｃとされている。
【００２７】
液としては、血液を用いたときは、液導入開口部５１ａと動脈に接合し、液排出開口部５１ｂを静脈に接合し、血液を液導入開口部５１ａから癌細胞除去装置５１の空間部３５ｃ内に導入し、液排出開口部５１ｂから排出することにより、空間部３５ｃ内に配置した癌細胞吸着デバイス３１で、血液中に浮遊する癌細胞を吸着させ、癌細胞を除去してから、癌細胞を含有しない血液を排出することができる。
【００２８】
＜癌細胞吸着デバイス＞
図２は、本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイスの一例を示す模式図であって、正面図（ａ）と、（ａ）におけるＢ−Ｂ’線における断面図（ｂ）である。
図２に示すように、本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイス４１は、基材２５と、基材２５の一面２５ａに形成された本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１とからなる。
【００２９】
基材２５の形状は、板状とされている。しかし、これに限られるものではなく、形状は用途に応じて決定することができる。
基材２５の材料は、高分子膜を付着可能な材料であればよい。例えば、ガラス、金属、Ｓｉ、細胞培養基材等を用いることができる。金属としては、金等を用いることができる。
【００３０】
＜癌細胞吸着膜＞
図２に示すように、本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、２種以上の生体適合性高分子が積層された高分子積層膜２１と、高分子積層膜２１の一面２１ａに固定され、生理活性を具備した癌細胞吸着ウイルス１１と、を有する。
【００３１】
高分子積層膜２１は、正電荷を有する生体適合性高分子（ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ）の膜２２と、負電荷を有する生体適合性高分子（ａｎｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ）の膜２３と、が交互に積層されてなる。つまり、高分子積層膜２１は、異なる電荷を有する高分子の膜２２、２３が交互に積層されている。
生体適合性高分子は、糖鎖を骨格に有する高分子であり、拒絶反応、免疫反応、細胞傷害性が認められないものである。
【００３２】
正電荷を有する生体適合性高分子（ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ）としては、次式（１）に示すポリ−Ｌ−リシン（Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ：ＰＬＬ）やキトサン、グリコールキトサン、ポリアルギニンなどを代表例とする生体適合性高分子を挙げることができる。式（１）のｎは任意の自然数である。
【００３３】
【化１】
2015043700.tif 000003
【００３４】
負電荷を有する生体適合性高分子（ａｎｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ）としては、次式（２）に示すアルギン酸（ＡＬＧ）やヒアルロン酸、デキストラン硫酸などを代表例とする生体適合性高分子を挙げることができる。式（２）のｍ、ｎはそれぞれ任意の自然数である。
【００３５】
【化２】
2015043700.tif 000004
【００３６】
これらの高分子は、癌細胞吸着ウイルスであるＨＶＪ−Ｅの吸着量を、高分子積層膜の膜厚を調製することにより制御できるという利点を有する。また、これらの高分子は、どのような基材表面への修飾も可能であるという利点を有する。
【００３７】
高分子積層膜２１は、例えば、一面を負電荷とした基板２５に、正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２を成膜してから、負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３を成膜し、その後、これらの膜を交互に成膜することにより、形成する。
【００３８】
高分子積層膜２１の最表層は、正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２とされている。最表層が正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２であることにより、負電荷を有する癌細胞吸着ウイルス１１を、最表層の一面に、短時間で、容易に、かつ、多量に固定することができる。
【００３９】
高分子積層膜２１の層数は、奇数層となる。最も基板側の層（最下層）と、最表層が正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２とされるためである。
【００４０】
高分子積層膜２１の層数は、４層以上とするのが好ましい。この範囲とすることにより、最表層の一面の平坦性が優れ、かつ、前記一面内の電荷の面内バラツキを低減することができ、所望の量の癌細胞吸着ウイルス１１を、最表層の一面に、短時間で、容易に、かつ、多量に固定することができる。
【００４１】
最表層に固定する癌細胞吸着ウイルス１１の吸着量は４００ｎｇ以上とすることが好ましい。
【００４２】
図３は、本発明の実施形態である癌細胞吸着ウイルスの一例を示す模式図である。
図３に示すように、本発明の実施形態である癌細胞吸着ウイルス１１は、空間部２ｃを覆うエンベロープ膜２と、空間部２ｃ内に離散されたＲＮＡ断片８と、エンベロープ膜２の外膜面２ａに林立するように形成された第１のタンパク質４と、第２のタンパク質６と、を有している。第１のタンパク質６は、エンベロープ膜２を膜外部から空間部２ｃ内に向けて貫くように形成されている。
第１のタンパク質４は、癌細胞のレセプターの吸着可能なタンパク質であり、第２のタンパク質６は、細胞内侵入可能なタンパクである。
【００４３】
癌細胞吸着ウイルス１１としては、不活性化センダイウイルス（ＨＶＪ−Ｅと略記する。）を代表例とした癌細胞レセプターに吸着可能なエンベロープウイルスを挙げることができる。
ＨＶＪ−Ｅでは、エンベロープ膜は脂質二分子膜であり、第１のタンパク質４と第２のタンパク質６は、それぞれウイルス由来のＨＮタンパク質と、Ｆタンパク質となる。
【００４４】
ＨＶＪ−Ｅは、センダイウイルス（ＨＶＪと略記する。）の内部のＲＮＡが破壊されたウイルスである。ＲＮＡの破壊により、ウイルスの持つ毒性や増殖能が不活性化される。
図４は、ＨＶＪ−Ｅの作成方法の一例を示す工程図である。
図４に示すように、ＨＶＪにＵＶ照射することにより、その内部のＲＮＡを破壊して、ＨＶＪ−Ｅを作成することができる。
【００４５】
ＨＶＪ−Ｅは、前立腺癌やグリオーマなどのヒト癌に対して選択的な細胞死を誘導することができる。
【００４６】
ＨＶＪ−Ｅのレセプターであるガングリオシド（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ）は、多くの癌細胞で高発現が認められる。ガングリオシドとは、糖鎖上に１つ以上のシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸：略称  ＮＡＮＡ、Ｎｅｕ５Ａｃ）を結合しているスフィンゴ糖脂質の一種である。
【００４７】
＜癌細胞吸着デバイスの作成方法＞
本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイスの作成方法は、高分子積層膜作成工程と、癌細胞吸着ウイルス固定工程とからなる。
【００４８】
（高分子積層膜作成工程）
高分子積層膜は、静電吸着を利用するＬａｙｅｒ−ｂｙ−Ｌａｙｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ法（ＬｂＬ法）により行った。これにより、強固に安定した多層膜を形成できる。
図５〜７は、癌細胞吸着デバイスの作成方法の一例を示す工程図である。
【００４９】
まず、板状の基材２５を用意し、その一面２５ａを負電荷でチャージする。
次に、図５に示すように、その一面２５ａ上に正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２を成膜する。これが高分子積層膜２１の第１層２１Ａとなる。
成膜方法は、基材を、正電荷を有する生体適合性高分子を分散させた溶液中に一定時間浸漬してから、引き上げ後、乾燥して、成膜するディッピング法（ディップ法）を用いる。
【００５０】
正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２の膜厚は、分散溶液における正電荷を有する生体適合性高分子の濃度及び浸漬時間により決定される。
分散溶液における正電荷を有する生体適合性高分子の濃度は、１．０〜５０ｍｇ／ｍＬとすることが好ましい。
浸漬時間は、５〜１５分とすることが好ましい。
溶媒としてはｐＨ６〜７．４のリン酸緩衝液等を用いる。
【００５１】
次に、図６に示すように、正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２上に、負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３を成膜する。これが高分子積層膜２１の第２層２１Ｂとなる。
負電荷を有する生体適合性高分子を分散させた溶液を用いる他は前工程と同様のディッピング法を用いて成膜する。
【００５２】
負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３の膜厚は、分散溶液における負電荷を有する生体適合性高分子の濃度及び浸漬時間により決定される。
分散溶液における負電荷を有する生体適合性高分子の濃度は、１．０〜５．０ｍｇ／ｍＬとすることが好ましい。
浸漬時間は、５〜１５分とすることが好ましい。
溶媒としてはｐＨ６．０〜７．４のリン酸緩衝液等を用いる。
【００５３】
次に、最表層の負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３上に、正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２を成膜する。これが高分子積層膜２１の第３層２１Ｃとなる。
次に、最表層の正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２上に、負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３を成膜する。これが高分子積層膜２１の第４層２１Ｄとなる。
【００５４】
次に、図７に示すように、最表層の負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３上に、正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２を成膜する。これが高分子積層膜２１の第５層２１Ｅとなる。
以上により、第５層からなる高分子積層膜２１を形成する。
【００５５】
（癌細胞吸着ウイルス固定工程）
図８は、ＬｂＬ法により形成した高分子積層膜の最表層表面への細胞吸着ウイルスの固定の原理図である。最表層が正電荷とされた高分子積層膜を、負電荷を有する細胞吸着ウイルスを分散させた溶液中に浸漬することにより、静電吸着により、最表層に細胞吸着ウイルスが固定される。
【００５６】
図９は、癌細胞吸着デバイスの作成方法の一例を示す工程図である。
図９に示すように、最表層の正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２（第５層２１Ｅ）上に、癌細胞吸着ウイルス１１を固定する。
癌細胞吸着ウイルス１１を分散させた溶液を用いる他は前工程と同様のディッピング法を用いて固定する。
【００５７】
癌細胞吸着ウイルス１１の吸着量（固定量）は、分散溶液における癌細胞吸着ウイルス１１濃度及び浸漬時間により決定される。
分散溶液における癌細胞吸着ウイルス１１濃度は、１２０ＨＡＵ／ｍＬ以上とすることが好ましい。
浸漬時間は、１〜１２０分とすることが好ましい。
溶媒としてはリン酸緩衝液等を用いる。
【００５８】
なお、高分子膜の成膜方法及び固定方法としては、先に記載したディッピング法の他スピンコーティング法、キャスト法などの湿式成膜プロセスを用いてもよい。
以上により、癌細胞吸着デバイス４１を形成することができる。
【００５９】
＜癌細胞除去装置の癌細胞除去方法＞
図１０〜１２は、癌細胞除去方法の一例を説明する図である。
まず、図１０に示すように、癌細胞除去装置５１の液導入開口部５１ａから、レセプター６４を有する癌細胞６３を含む血液６１を導入する。
血液の導入を続けると、図１１に示すように、血液は癌細胞吸着デバイス４１に達し、癌細胞吸着膜２１の最表層に固定された癌細胞吸着ウイルス１１に、癌細胞のレセプターが結合する。
血液の導入をさらに続けると、図１２に示すように、血液は液排出開口部５１ｂに達し、癌細胞を含まない血液６１を排出することができる。
【００６０】
（本発明の第２の実施形態）
＜癌細胞除去装置＞
図１３は、本発明の第２の実施形態である癌細胞除去装置の一例を示す断面模式図である。
本発明の実施形態である癌細胞除去装置１０５１は、図１３に示すように、癌細胞吸着デバイスが空間部内に配置される代わりに、略筒状の部材自体を基材として、その内壁面に膜が形成された他は第１の実施形態と同様の構成とされている。
本発明の第２の実施形態である癌細胞除去装置１０５１は、液導入開口部（図示略）と、液排出開口部（図示略）と、前記２つの開口部に連通され、液の流路となる空間部１０３５ｃと、空間部１０３５ｃの内壁面に形成された癌細胞吸着膜３１とからなる。
基材となる略筒状の部材１０３５と、癌細胞吸着膜３１とから、癌細胞吸着デバイス１０４１が構成されている。
【００６１】
この構成としても、液として血液を用い、液導入開口部と動脈に接合し、液排出開口部を静脈に接合し、血液を液導入開口部から癌細胞除去装置１０５１の空間部３５ｃ内に導入し、液排出開口部から排出することにより、空間部１０３５ｃ内に配置した癌細胞吸着膜３１で、血液中に浮遊する癌細胞を吸着させ、癌細胞を除去してから、癌細胞を含有しない血液を排出することができる。
【００６２】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、２種以上の生体適合性高分子２２、２３が積層された高分子積層膜２１と、高分子積層膜２１の一面に固定され、生理活性を具備した癌細胞吸着ウイルス１１と、を有する構成なので、糖鎖を骨格に有する生体適合性高分子により、拒絶反応、免疫反応、細胞傷害性を発生させずに使用することができ、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させるというような生理活性を有する癌細胞吸着ウイルスを固定した膜とすることができる。
【００６３】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、高分子積層膜２１が、正電荷を有する生体適合性高分子の膜２２と、負電荷を有する生体適合性高分子の膜２３とが交互に積層されている構成なので、強固で、平坦な高分子積層膜を形成することができ、その一面に癌細胞吸着ウイルスを安定して固定できる。
【００６４】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、前記正電荷を有する生体適合性高分子が、ポリ−Ｌ−リシン、キトサン、グリコールキトサン、ポリアルギニンの群から選択されるいずれか一の高分子である構成なので、高分子多層膜を安定して作成できる。
【００６５】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、前記負電荷を有する生体適合性高分子が、アルギン酸、ヒアルロン酸、デキストラン硫酸の群から選択されるいずれか一の高分子である構成なので、高分子多層膜を安定して作成できる。
【００６６】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、高分子積層膜２１の層数が、４層以上である構成なので、最表層の平坦性が優れ、かつ、電荷の面内バラツキを低減することができ、所望の量の癌細胞吸着ウイルスを、最表層の一面に、短時間で、容易に、かつ、多量に固定することができ、癌細胞吸着ウイルスを安定して固定できる。
【００６７】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、癌細胞吸着ウイルス１１が、空間部２ｃを覆うエンベロープ膜２、空間部２ｃ内に離散されたＲＮＡ断片８と、エンベロープ膜２の外膜面２ａに林立するように形成されたタンパク質４、６と、を有しており、前記タンパク質が、癌細胞のレセプターの吸着可能な第１のタンパク質４を有する構成なので、癌細胞のレセプターの吸着可能な第１のタンパク質により、癌細胞のレセプターを吸着して、癌細胞吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するようにできる。
【００６８】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、第１のタンパク質４がＨＮタンパク質であり、前記エンベロープ膜が脂質二分子膜である構成なので、癌細胞のレセプターの吸着可能なＨＮタンパク質により、癌細胞のレセプターを吸着して、癌細胞吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するようにできる。
【００６９】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜３１は、癌細胞吸着ウイルス１１が、不活性化センダイウイルス（ＨＶＪ−Ｅ）である構成なので、ＨＶＪ−Ｅを代表例とした癌細胞レセプターに吸着可能なエンベロープウイルスにより、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するようにできる。
【００７０】
本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイス４１は、基材２５と、基材２５の一面２５ａに形成された膜とを有し、前記膜が癌細胞吸着膜３１である構成なので、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するとともに、基材を有し、取り扱いが容易なデバイスとして利用することができる。
【００７１】
本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイス４１の作成方法は、Ｌａｙｅｒ−ｂｙ−Ｌａｙｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ法（ＬｂＬ法）を用いた高分子積層膜作成工程と、湿式成膜法を用いた癌細胞吸着ウイルス固定工程とを有する構成なので、所望の厚さの高分子積層膜を形成して、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させるというような生理活性を有する癌細胞吸着デバイスを容易に、かつ、短時間で作成できる。
【００７２】
本発明の実施形態である癌細胞吸着デバイス４１の作成方法は、癌細胞吸着ウイルス固定工程が、癌細胞吸着ウイルス濃度を１２０ＨＡＵ／ｍＬ以上とした分散溶液に高分子積層膜を浸漬してから、引き上げ・乾燥して、前記高分子積層膜の一面に癌細胞吸着ウイルスを固定する工程である構成なので、最適な量のウイルスを固定した癌細胞吸着デバイスを容易に、かつ、短時間で作成できる。
【００７３】
本発明の実施形態である癌細胞除去装置５１は、液導入開口部５１ａと、液排出開口部５１ｂと、２つの開口部５１ａ、５１ｂに連通され、液の流路となる空間部３５ｃを有し、空間部３５ｃ内に、癌細胞吸着膜３１が形成されている構成なので、癌細胞を吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させる生理活性を有するようにできる。
【００７４】
本発明の実施形態である癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス、癌細胞吸着デバイスの作成方法及び癌細胞除去装置は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の技術的思想の範囲内で、種々変更して実施することができる。本実施形態の具体例を以下の実施例で示す。しかし、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００７５】
（実施例１）
（試験例１）
癌細胞吸着ウイルスであるＨＶＪ−Ｅの吸着量（固定量）を、ディッピング法の浸漬時間の関数として調べた。
まず、図１４に示すように、瓶にＨＶＪ−Ｅ分散溶液を調製した。ＨＶＪ−Ｅ分散溶液における癌細胞吸着ウイルスであるＨＶＪ−Ｅの濃度は、１２０〜６０００ＨＡＵ／ｍＬとした。溶媒としてはリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を用いた。
次に、図１５に示す金電極を有する水晶子を備えた基板を、ＨＶＪ−Ｅ分散溶液に浸漬した。金電極の面積Ａは、０．１９６５ｃｍ２であり、クオーツ上に成膜されていた。
このとき、水晶子の端子を電流測定器に接続し、水晶子マイクロバランス法  （ＱＣＭ）により、ＨＶＪ−Ｅの金表面への吸着量（固定量）の評価を行った。水晶子マイクロバランス法  （ＱＣＭ）では、クオーツからの発振周波数から、金電極への付着量を算出する。
図１６が、ＨＶＪ−Ｅの金表面への吸着量（固定量）と浸漬時間の関係を示すグラフである。
【００７６】
（試験例２）
高分子積層膜の層数と厚さの関係を調べた。
まず、ＰＬＬ分散溶液及びＡＬＧ分散溶液を調製した。それぞれ分散溶液の高分子濃度は、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬとした。溶媒としてはリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を用いた。
次に、先に示した金電極を有する水晶子を備えた基板を、交互にＰＬＬ分散溶液及びＡＬＧ分散溶液に浸漬して、ＬｂＬ法により高分子積層膜を形成した。
このとき、水晶子の端子を電流測定器に接続し、水晶子マイクロバランス法  （ＱＣＭ）により、金表面への高分子の層数と厚さの関係を調べた。
【００７７】
図１７は、高分子積層膜の層数と厚さの関係を示すグラフである。Ｐｏｌｙｍｅｒ  ｄｅｎｓｉｔｙを１ｇ／ｃｍ３として換算したところ、１Ｈｚ＝０．０２７２６（ｎｍ）であった。
【００７８】
（試験例３）
高分子積層膜の膜厚とウイルス吸着量の関係を調べた。
まず、膜厚が０以上５０ｎｍの範囲で膜厚の異なる、１０種のＬｂＬ法により高分子積層膜を形成した。
次に、これらのサンプルを１２０分（２時間）、ＨＶＪ−Ｅ分散溶液に浸漬して、ＨＶＪ−Ｅの吸着量（固定量）を調べた。溶媒はリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を用い、濃度は１２００ＨＡＵ／ｍＬとした。
【００７９】
図１８は、高分子積層膜のＬｂＬ膜厚とＨＶＪ−Ｅの吸着量との関係を示すグラフである。
高分子積層膜へのＨＶＪ−Ｅの吸着量は、ＬｂＬ膜厚を変えることでコントロール可能であった。具体的には、０〜４ｎｍの範囲と、４ｎｍ（３層）〜５５ｎｍ（１７層）の範囲に特性が分かれた。それぞれの領域では、一定の傾きの線形特性を示した。金表面にＨＶＪ−Ｅが吸着しにくいことから、０〜４ｎｍの範囲の傾きが急であることは、膜が低密度で空孔部が多く存在することによると考察した。
４ｎｍの厚さとした場合、空孔部がなくなり、膜の本来の吸着特性を示したと考察した。
【００８０】
図１９は、分散溶液におけるＨＶＪ−Ｅ濃度とＨＶＪ−Ｅの吸着量との関係を示すグラフである。
１１層の高分子積層膜を用いた。
３０００ＨＡＵ／ｍＬ以上では、吸着量は飽和した。吸着表面が３０００ＨＡＵ／ｍＬ程度で無くなったためと考察した。
【００８１】
（試験例４）
金電極を有する水晶子を備えた基板の代わりに、ガラス基板を用いた他は試験例１と同様にして、デバイスを作製した。
高分子積層膜の膜厚とウイルス吸着量の関係を調べた。
【００８２】
ガラス基材表面に高分子を修飾してから、その表面にＨＶＪ−Ｅを吸着させた。
図２０は、用いたガラス基板の写真（ａ）、調製したＰＬＬ分散溶液、ＡＬＧ分散溶液、ＨＶＪ−Ｅ分散溶液の写真（ｂ）である。
ＨＶＪ−Ｅ分散溶液は、ＨＶＪ−Ｅを、赤色蛍光を有するｐＫＨ２６標識薬でラベル化し、赤色蛍光色素を含有した分散溶液とした。
【００８３】
図２１は、ガラス基板をＰＬＬ分散溶液に浸漬した状態を示す写真（ａ）、ガラス基板をＡＬＧ分散溶液に浸漬した状態を示す写真（ｂ）、ガラス基板を、ｐＫＨ２６で標識をしたＨＶＪ−Ｅ分散溶液に浸漬した状態を示す写真（ｃ）である。
【００８４】
次に、蛍光顕微鏡の励起光を照射して、ｐＫＨ標識ＨＶＪ−Ｅ吸着表面の蛍光観察を行った。
図２２は、ＨＶＪ−Ｅ吸着前蛍光観察写真（ａ）とＨＶＪ−Ｅ吸着後の蛍光観察写真（ｂ）である。
図２２に示すように、ＨＶＪ−Ｅ上のｐＫＨ２６蛍光色素由来の赤色蛍光が観察された。
【００８５】
ガラス基板に１１層の高分子膜を形成して、１１層のガラス基板を作成した。
次に、その基板を、濃度が１２０ＨＡＵ／ｍＬ、１２００ＨＡＵ／ｍＬ、６０００ＨＡＵ／ｍＬの分散溶液に２時間浸漬してから、引き上げ乾燥して、ＨＶＪ−Ｅ吸着ＬｂＬ膜付きガラス基板を作成した。
図２３は、ＨＶＪ−Ｅ吸着１１層被膜基板の写真である。いずれも透明であった。
【００８６】
濃度が１２０ＨＡＵ／ｍＬ、１２００ＨＡＵ／ｍＬ、６０００ＨＡＵ／ｍＬの分散溶液に２時間浸漬してから、引き上げ乾燥したときの基板のＨＶＪ−Ｅ吸着ＬｂＬ膜付きガラス基板のＵＶ−ｖｉｓ測定を行った。図２４は、ＨＶＪ−Ｅ吸着１１層被膜基板の２８０ｎｍの吸収強度を示すグラフである。図２５は、ＨＶＪ−Ｅ吸着１１層被膜基板のＵＶ吸収強度のフルスペクトルである。
１２００ＨＡＵ／ｍＬ、６０００ＨＡＵ／ｍＬの分散溶液を使用したサンプルの２８０ｎｍの吸収強度が大きかった。２８０ｎｍの吸収は、タンパク質由来のものであるので、ガラスに対しても、高分子積層膜が形成され、ＨＶＪ−Ｅが吸着されたことが示された。
【００８７】
次に、ＨＶＪ−Ｅ吸着表面のＡＦＭ観察を行った。
図２６は、ＨＶＪ−Ｅ吸着表面のＡＦＭ写真であって、ＬｂＬ表面（ａ）、１２０ＨＡＵ／ｍＬ濃度サンプル表面（ｂ）、１２００ＨＡＵ／ｍＬ濃度サンプル表面（ｃ）、６０００ＨＡＵ／ｍＬ濃度サンプル表面（ｄ）のＡＦＭ写真である。
６０００ＨＡＵ／ｍＬ濃度サンプル表面（ｄ）から、２５０ｎｍの大きさのウイルス１個１個が面内にぎっしりと固定されていることがわかる。
【００８８】
次に、表面の親水性評価実験を行った。
まず、ビーカーに水を満たした。
次に、水中でビーカー底面に平行となるように、サンプル基板を配置した。
次に、サンプル基板に垂直な方向に向けたシリンダ先端部から、１．０ｍＬ程度の球状の空気の泡を放出した。
空気の泡は、形状を保ったまま、サンプル基板表面に達した。その状態で写真を撮影した。
【００８９】
図２７は、親水性評価実験の結果を示す写真であって、ＰＬＬ１ｓｔｅｐ（ａ）、５ｓｔｅｐ（ｂ）、１１ｓｔｅｐ（ｃ）、ＨＶＪ−Ｅ＋１ｓｔｅｐ（ｄ）、ＨＶＪ−Ｅ＋５ｓｔｅｐ（ｅ）、ＨＶＪ−Ｅ＋１１ｓｔｅｐ（ｆ）である。
親水性表面の場合は、接触角が小さくなり、球状となり、組成性表面の場合は、接触角が大きくなり、球の形状が保たれない。
図２７の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）では、接触角が約５０度であり、球の形状が保たれていないことから、疎水性表面であることがわかる。一方、図２７の（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）では、接触角が約３０度であり、球の形状が保たれていることから、親水性表面であることがわかる。
【００９０】
図２８は、ＨＶＪ−Ｅ吸着前後の接触角の変化の高分子層依存性を示すグラフである。
ＨＶＪ−Ｅを吸着させると、接触角は約５０度から約３０度となり、より親水的な表面が構築された。
以上により、ＨＶＪ−Ｅが固定されたと考察した。 
【００９１】
（試験例５）
癌細胞のＨＶＪ−Ｅ表面への吸着を確かめるために、細胞実験を行った。
まず、２枚の細胞培養基材（ＴＣＰＳ）上に、Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅとアルギン酸の濃度をそれぞれ１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬに調整したリン酸緩衝溶液（ｐＨ  ７．４）を用いてＬｂＬ修飾を１１層行った。
【００９２】
ＬｂＬ修飾後、片方の基材上にのみ、ＨＶＪ−Ｅを１２００ＨＡＵ／ｍＬの濃度に調整したリン緩衝液を加え、２時間、ＨＶＪ−Ｅを吸着させた。
ＨＶＪ−Ｅの吸着有り・無し、それぞれの表面に対し、ヒト悪性中皮腫細胞（ＭＳＴＯ）細胞を１．０×１０４ｃｅｌｌ播種し、２４時間インキュベーターで培養した。
ＨＶＪ−Ｅの吸着有りの表面に細胞培養したサンプルを、ＬｂＬ  １１ｓｔｅｐ＋ＨＶＪ−Ｅ  ｓｕｒｆａｃｅサンプルと呼ぶ。また、ＨＶＪ−Ｅの吸着無しの表面に細胞培養したサンプルを、ＬｂＬ  １１ｓｔｅｐ  ｓｕｒｆａｃｅサンプルと呼ぶ。
【００９３】
２４時間後、細胞を赤色蛍光色素であるｐｈａｌｌｏｉｄｉｎで染色したのち、蛍光顕微鏡で細胞の伸展度を観察した。
図２９は、癌細胞の表面への吸着写真であって、ＬｂＬ  １１ｓｔｅｐ  ｓｕｒｆａｃｅ（ａ）と、ＬｂＬ  １１ｓｔｅｐ＋ＨＶＪ−Ｅ  ｓｕｒｆａｃｅ（ｂ）である。図２９に示すように、（ａ）では細胞が伸展せず丸い形状であったのに対し、（ｂ）では細胞が伸展している様子が観察された。
【００９４】
更に、細胞の伸展度を、細胞の長軸方向と短軸方向の長さの差からアスペクト比として算出した。アスペクト比が１に近いほど細胞が丸く、０に近いほど細胞が進展していることを意味する。通常、細胞と基材の相互作用が強いほど、ＭＳＴＯ細胞は伸展することが知られており、アスペクト比は０に近づく。
図３０は、Ｗｉｔｈｏｕｔ  ＨＶＪ−ＥとＷｉｔｈ  ＨＶＪ−Ｅへの細胞のアスペクト比を示すグラフである。
ＨＶＪ−Ｅの吸着有りの表面に細胞培養したサンプルを、Ｗｉｔｈ  ＨＶＪ−Ｅサンプルと呼ぶ。また、ＨＶＪ−Ｅの吸着無しの表面に細胞培養したサンプルを、Ｗｉｔｈｏｕｔ  ＨＶＪ−Ｅサンプルと呼ぶ。
図３０に示すように、本実験において細胞のアスペクト比はＨＶＪ−Ｅ無しの表面では１に近く、ＨＶＪ−Ｅありの場合は０に近い。
つまり、ＨＶＪ−Ｅが表面に存在することで細胞がより伸展しやすくなっていることが示された。本実験から癌細胞とＨＶＪ−Ｅ吸着表面に強い相互作用が存在することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明の癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス、癌細胞吸着デバイスの作成方法及び癌細胞除去装置に関するものであり、癌細胞吸着・除去でき、癌細胞を選択的に殺す、あるいは、免疫系の細胞を活性化させるというような生理活性を生じさせることができ、医療機器装置産業、医療用材料産業等において利用可能性がある。
なお、本発明の癌細胞吸着膜、癌細胞吸着デバイス及び癌細胞除去装置の効果は、癌細胞の吸着のみならず、レセプターに吸着したＨＶＪ−Ｅが活性化して、癌細胞の細胞死を効率的に誘導することができ、抗癌化作用を高めることができる効果も奏すると推察している。
【符号の説明】
【００９６】
２…エンベロープ膜、２ａ…癌細胞吸着ウイルス、２ｃ…空間部、４…第１のタンパク質、６…第２のタンパク質、８…ＲＮＡ断片、１１…癌細胞吸着ウイルス、２１…高分子積層膜、２１ａ…一面、２１Ａ…第１層、２１Ｂ…第２層、２１Ｃ…第３層、２１Ｄ…第４層、２１Ｅ…第５層、２２…正電荷を有する生体適合性高分子の膜、２３…負電荷を有する生体適合性高分子の膜、２５…基材、２５ａ…一面、３１…癌細胞吸着膜、３５…部材、３５ｃ…空間部、４１…癌細胞吸着デバイス、５１…癌細胞除去装置、５１ａ…液導入開口部、５１ｂ…液排出開口部、６１…血液、６３…癌細胞、６４…レセプター、１０３５…部材、１０３５ｃ…空間部、１０４１…癌細胞吸着デバイス、１０５１…癌細胞除去装置。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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