(57)【要約】      （修正有）【課題】安全性に優れ、うつ病、不安障害、睡眠障害、ホルモン恒常性障害を示すストレス性情動系障害改善効果を有する医薬用油脂組成物を提供すること。【解決手段】構成脂肪酸中に、炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸を３０〜９０重量％含む医薬用油脂組成物。該油脂組成物は、構成脂肪酸中の炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸量に占める炭素数１６〜２２の飽和脂肪酸量の比（Ｃ１６〜２２／Ｃ１２〜２４）が、０．５以上であることが好ましい。該組成物の上昇融点は、１０℃〜４０℃であることが好ましい。前記油脂組成物は２分子の飽和脂肪酸と１分子の不飽和脂肪酸により構成されるトリグリセリドを好ましくは６０重量％以上含む油脂組成物であり、前記２分子の飽和脂肪酸は、好ましくは炭素数１６と１８の飽和脂肪酸よりなり、また１分子の不飽和脂肪酸の炭素数は好ましくは炭素数１８の一価不飽和脂肪酸よりなる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
構成脂肪酸中に炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸を３０〜９０重量％含む油脂組成物であるストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物。 
【請求項２】
構成脂肪酸中の炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸量に占める炭素数１６〜２２の飽和脂肪酸量の比（Ｃ１６〜２２／Ｃ１２〜２４）が０．５以上である請求項１に記載の医薬用油脂組成物。
【請求項３】
上昇融点が１０℃〜４０℃である請求項１又は２に記載の医薬用油脂組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、うつ病，不安障害，睡眠障害，ホルモン恒常性障害を示すストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、加齢や食生活等の生活習慣や社会的、身体的ストレス等に起因する情動障害が大きな社会問題となっている。それらを解決するべく種々の手段の検討がなされ、脳の主要構成成分である油脂についても多くの検討が行われてきた。
【０００３】
たとえば、難治てんかんの治療として，飽和脂肪酸鎖からなるトリグリセリドを含むケトン食が知られており，特に小児てんかんの発作の抑制に非常に有効とされる（非特許文献１）。またケトン食がアルツハイマー病やパーキンソン病の認知障害に効果があるといった報告（非特許文献２）があり、飽和脂肪酸である中鎖脂肪酸と長鎖脂肪酸の組み合わせによるうつ病改善が提案されている（特許文献１）。一方、ケトン食以外の油脂（トリグリセリド）例えば，エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）のうつ病抑制効果（非特許文献３）や，ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が消失したラットの活動量上昇や不安様行動（非特許文献４）が報告されている。しかしながら、主に海洋性の油脂（ＥＰＡ，  ＤＨＡを含有する）を用いた研究結果は情動障害に対するそれら油脂の明確な効果を指示していないとの報告がある（非特許文献５）。他方、必須脂肪酸であるαリノレン酸とリノール酸を含む植物性油脂の摂食は，ＥＰＡやＤＨＡを含む魚油を摂取する場合より情動行動が安定するとの報告があり、リノレン酸及びリノレン酸誘導体の効果が示されている。（非特許文献６）さらにはリノール酸及びその誘導体によるアルツハイマー病並びにてんかんの治療剤が提案され（特許文献２）、オレイン酸及びその誘導体による神経保護作用も提案されている（特許文献３）。
これらの知見は、ヒトのレベルにおいても油脂が情動に少なからぬ影響をもたらす可能性が示されているものの、作用メカニズムを含め検討手段が多様であり、脳機能改善とりわけストレス性情動障害に対して、如何なる油脂分子種や組成が効果を示すのか明らかではない。
そこで、本発明者等は新たに情動障害に対して効果を示す油脂を検索するため、α２，３−シアル酸転移酵素（ＳＴ３Ｇａｌ  ＩＶ）遺伝子欠損マウスを用いた。このマウスはてんかん症状を示さずに、うつ・不安障害を示し且つ脳成長ホルモンや，脂質代謝関連分子の発現量が著しく変化する。本発明者等は、このマウスを情動障害のモデルとして、うつ・不安障害等の情動障害を改善する油脂を鋭意検討し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明はストレス性情動系障害改善効果を持つ医薬用油脂組成物に関わる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特願２００９−２９７９９８
【特許文献２】特願平１−２７８８１２
【特許文献３】特願２００８−５２６８５９
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｂａｉｌｅｙ  ＥＥら．  Ｅｐｉｌｅｐｓｙ  Ｂｅｈａｖ，  ２００５，６：４−８
【非特許文献２】Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ＳＴら  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ  （Ｌｏｎｄ）．２００９，  ６：３１．
【非特許文献３】Ｒｏｓｓ  ＢＭら  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｄｉｓ．  ２００７，６：２１．
【非特許文献４】Ｂｈａｔｉａ  ＨＳら  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１１，６：ｅ２８４５１．
【非特許文献５】Ｈｅｇａｒｔｙ  ＢＤらＡｃｔａ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ  Ｓｃａｎｄ  ２０１１，１２４：４２−５１
【非特許文献６】Ｂｅｅｚｈｏｌｄ  ＢＬらＮｕｔｒ  Ｊ．２０１０，１；９：２６．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、ストレス性情動系障害改善効果を有する医薬用油脂組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、上記目的を達成すべく、α２，３−シアル酸転移酵素（ＳＴ３Ｇａｌ  ＩＶ）遺伝子欠損マウスを用いて種々の脂肪酸構成を持つ油脂、トリグリセリドにつき鋭意研究を重ねた結果、構成脂肪酸中に炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸を３０〜９０重量％以上含む油脂組成物にストレス性情動系障害を改善する効果を見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、
（１） 構成脂肪酸中に炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸を３０〜９０重量％以上含む油脂組成物であるストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物。
（２） 構成脂肪酸中の炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸量に占める炭素数１６〜２２の飽和脂肪酸量の比（Ｃ１６〜２２／Ｃ１２〜２４）が０．５以上である（１）に記載の医薬用油脂組成物。
（３） 上昇融点が１０℃〜４０℃である（１）又は（２）記載の医薬用油脂組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物は古くから食経験の豊富な食用油脂の一部を構成するトリグリセリドであるため安全性に優れ、該ストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物そのもの、またはこれを主成分とするストレス性情動系障害を改善する様々な食品に配合することができる。これによりストレス性情動系障害を改善する食品組成物を安全かつ容易に得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】恐怖条件付け試験として対照食及び試験食群のそれぞれの恐怖刺激に対するすくみ行動（％、平均±標準誤差）を示した図である。分散分析の後、個々の群間の統計的有意差の表示は****p ＜ 0.0001、 **p ＜ 0.01、*p ＜ 0.05とした。またKOはα2,3-シアル酸転移酵素遺伝子完全欠失マウス、WTは野生型マウスを表す。
【図２】強制水試験による２日目の対照食及び試験食群のそれぞれの不動化率（％、平均±標準誤差）を示した図である。分散分析の後、個々の群間の統計的有意差の表示は各々p値によりしめした。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明を具体的に説明する。なお、本発明において、「％」は「重量％」を意味する。
【００１２】
本発明の油脂組成物は構成脂肪酸中に炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸を３０〜９０重量％含む油脂組成物である必要があり、好ましくは４０〜８０重量％、さらに好ましくは５０〜７０重量％である。炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸の含有量が３０重量％未満であるとストレス性情動系障害を改善する効果が十分でなく、また９０重量％を超えると融点が高くなりすぎて、摂取した場合の体内への吸収が十分でなくストレス性情動系障害を改善する効果が発揮されない。
【００１３】
本発明の油脂組成物は構成脂肪酸中の炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸量に占める炭素数１６〜２２の飽和脂肪酸量の比（Ｃ１６〜２２／Ｃ１２〜２４）が０．５以上が好ましく、より好ましくは０．７以上、さらに好ましくは０．９以上である。
【００１４】
本発明の油脂組成物は上昇融点が１０℃〜４０℃であるのが好ましい。またさらに好ましくは１５〜３６℃である。上昇融点が１０℃未満であると十分な飽和脂肪酸を含む油脂組成物が得られにくいため、ストレス性情動系障害を改善する効果が発揮されにくい。また上昇融点が４０℃を超えると融点が高くなりすぎて、摂取した場合の体内への吸収が十分でなくストレス性情動系障害を改善する効果が発揮されない。
【００１５】
本発明の油脂組成物は２分子の飽和脂肪酸と１分子の不飽和脂肪酸により構成されるトリグリセリドを３０重量％以上含む油脂組成物であることが好ましく、より好ましくは４５重量％、さらに好ましくは６０重量％である。ここで２分子の飽和脂肪酸は、炭素数１２から２４の脂肪酸より選択されるが、より好ましくは炭素数１６と１８の飽和脂肪酸よりなる。また１分子の不飽和脂肪酸の炭素数は１２〜２４の脂肪酸より選択されるが、より好ましくは一価の不飽和脂肪酸でありさらに好ましくは炭素数１８の一価不飽和脂肪酸よりなる。
【００１６】
前記の２分子の飽和脂肪酸と１分子の不飽和脂肪酸により構成されるトリグリセリドは飽和脂肪酸２分子がグリセロールの１位又は３位に結合し、不飽和脂肪酸がグリセロールの２位に結合したトリグリセリドであることが好ましい。
【００１７】
本発明のストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物は、動物性食用油脂並びに植物食用油脂に由来するものであり、当該脂肪酸分子を含むトリグリセリドを既存の技術を用いて分別することにより得られる。また、当該脂肪酸やそのエステル体とトリグリセリド間、又は当該脂肪酸をその構成成分に含有するトリグリセリドどうしをエステル交換にすることにより得られる。その際のエステル交換には酵素エステル交換法、化学触媒を用いたエステル交換法等が利用できる。
【００１８】
また、これらのトリグリセリドは、トリグリセリド合成の常法にしたがって合成することができ、例えば、脂肪酸エステル誘導体を用い、グリセリン、モノグリセリド及びジグリセリドと脂肪酸を結合させることにより当該のトリグリセリドを得ることができる。
【００１９】
本発明のストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物を摂取する際、そのまま摂取することも可能であるが、摂取を容易にするため、生理活性のない、もしくは乏しい賦形材（例えば難消化性のデキストリンやオリゴ糖等）と組み合わせることができる。
また、ストレス性情動系障害の改善効果を有する他の物質、例えばアミノ酸、ビタミンや植物油脂、ペプチド、蛋白質、食物繊維等と組み合わせて、相加あるいは相乗効果を期待することもできる。
【００２０】
また本発明の油脂組成物と他の食品素材を組み合わせた食品組成物としては米飯、パン、シリアル等の主食、レトルト食品、乾燥食品、冷凍食品等の加工食品、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料、バター、マーガリン等の油脂加工食品、飲料、デザート、アイスクリーム等の嗜好品、また錠剤やカプセルタイプのサプリメントといった食品形態が例示されるが特に限定するものではない。また情動障害を有する人のための特定保健用食品として「ストレス性情動系障害の改善」の旨が表示に付された、ストレス性情動系障害の改善効果を有する食品組成物も例示される。
【００２１】
上記食品組成物には食品素材に加えて、酸味料や調味料等の食品添加物を添加することもできる。またレトルト処理等の加熱工程、熱風乾燥等乾燥工程、急速凍結等の冷凍工程といった、様々な食品加工工程を付すことができる。これにより様々な食品形態に対応することができる。 
【実施例】
【００２２】
以下に本発明の実施例を示すが、この発明は実施例に制限されるものではない。実施例中の部及び％は特に断りがない場合は重量基準を示すものである。
【００２３】
（ＳｔＯＳｔ含有脂の調製）
構成脂肪酸中のオレイン酸含量が８６％の高オレイン酸ヒマワリ油３０重量部とステアリン酸エチル７０重量部を混合した後、１，３位選択性のあるリパーゼを用いてエステル交換を行い、反応油を得た。この反応油よりエチルエステルを蒸留により留去し、アセトンを用いて溶剤分別を行った上で、高融点部として得られた油脂組成物に対し常法に従い精製を行いＳｔＯＳｔ含有脂を得た。但しＳｔ：ステアリン酸、Ｏ：オレイン酸である。
【００２４】
（ＰＯＰ含有油脂の調製）
パームミッドフラクション「パーメル２６；不二製油株式会社製」を、アセトンを用いて溶剤分別を行い、高融点部として得られた油脂組成物に対し、常法に従い精製を行い、
ＰＯＰ含有脂を得た。但しＰ：パルミチン酸、Ｏ：オレイン酸である。
【００２５】
（脂肪酸組成、上昇融点の分析方法）
脂肪酸組成、上昇融点の分析は日本油化学会の基準油脂分析法に従って分析した。
【００２６】
（実施例１）前記ＳＯＳｔ含有脂５０重量％及び前記ＰＯＰ含有油脂５０重量％を混合し、実施例１の油脂組成物を得た。実施例１の油脂組成物は２分子の飽和脂肪酸（パルミチン酸又はステアリン酸）と１分子の不飽和脂肪酸（オレイン酸）により構成されるトリグリセリドを８６．０重量％含んでいた。
【００２７】
（比較例１）魚油を比較例１の油脂組成物とした。
【００２８】
（比較例２）大豆油を比較例２の油脂組成物とした。
【００２９】
実施例及び比較例の油脂組成物の脂肪酸組成（％）、融点（℃）を表１に示す
表１
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【００３０】
（試験例）
１．情動障害モデルマウスの作成
本発明のストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物の効果を検索するため、ＳＴ３Ｇａｌ  ＩＶゲノム配列の第３エクソンをＣｒｅ配列で挟んだターゲット遺伝子をＥＳ（ＭＳ１２）細胞に導入したマウスを作成した後，受精卵へのＣＡＧ−ｐｒｏｍｏｔｅｒ−Ｃｒｅの導入によりα２，３−シアル酸転移酵素遺伝子完全欠失マウス（以下、欠損マウスとする）を作成した。
【００３１】
２．試験用飼料の調製 
２−Ａ．対照（無添加）
対照食に，ＡＩＮ９３Ｇ（大豆油油脂含量７％）を用いた。
２−Ｂ．試験群（当該油脂含有）
基本となる飼料はＡＩＮ９３Ｇとし、油脂種として，実施例１の油脂組成物を用い油脂の総含量は２０％とした飼料を調整した。比較群には、比較例１の魚油，比較例２の大豆油をそれぞれ利用し，同様にして飼料を調製した。なお実施例１利用の飼料と比較例１利用の飼料にはそれぞれに必須脂肪酸であるリノール酸等を含有する大豆油２％を加えて、食餌組成中の油脂含量を２０％とした。
【００３２】
その他栄養成分を含む飼料組成を表２に記載した。
表２
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【００３３】
各飼料中の材料を混ぜて成形した後、凍結乾燥機し，窒素ガス充てん後−８０℃の冷凍庫にて保存し、一夜室温にて解凍した後使用した。
【００３４】
３．飼育と摂餌
生後２４日齢から実験対象マウスを母マウスから放し，４匹ずつ雄と雌に分離しケージで飼育した（同腹子を基準に分ける）。同日（２４日齢）から，離乳し各種飼料を摂食させた。各種飼料内の油脂の酸化を防ぐため，飼料は２日に１度，新鮮な飼料を供した。
【００３５】
４．情動観察試験
４−Ａ．恐怖条件付け試験
マウスを，バックグラウンド音５５ｄＢの環境下（２００ルクスの明箱）に入れ１分後に，６５ｄＢの音（ホワイトノイズ）を１０秒間聞かせた（条件刺激：ＣＳ）。このＣＳの最後の１秒間にフットショック（０．３ｍＡ，  １秒，無条件刺激：ＵＳ）を与えた。この一連のＣＳとＵＳの刺激を２回行い，フットショックの間隔は２０秒とした。明箱に入れられていた３分間のうち，最後の１．５分間を解析した。（２日目）１日目と同じ環境（５５ｄＢ，  明箱）に５分間マウスを入れ，後の３分間を解析した。このテストでは，マウスがその空間を記憶しており，すくみ行動（フリーズ）を示すかどうかを観察した。（文脈的恐怖条件付け：海馬・扁桃体恐怖記憶）。（３日目）１?２日目と異なる環境（５０ルクスの暗箱）にマウス入れ，１分後に１分間６５ｄＢ（ホワイトノイズ）の音を聞かせる。１日目に聞かせられた音（６５ｄＢ，  ３０秒）をきっかけに示す，すくみ行動（フリーズ）の程度を観察するもので，後半の２分間を解析した。
【００３６】
４−Ｂ．強制水試験
強制水試験は，1010ルクスの白熱灯の下，水温２４℃の水を高さ15cmまで入れた，直径11cmの透明な筒にマウスを６分間入れ，遊泳距離と不動時間を１日に１度，２日間自動計測した。
【００３７】
５.  試験結果
５−Ａ．恐怖条件付け試験
８０日間飼料を摂食した欠損マウス及び野生型マウスを用いて，恐怖条件付け試験を実施した。
１日目に，マウスは音条件試験とフットショック無条件試験を組み合わせた刺激によりすくみ行動を観察したところ、対照食を摂食した欠損マウスと野生型間でそのすくみ行動のレベルに差はなく，油脂種を変えても差はなく条件付けに対して影響を示さなかった。
２日目に，マウスは文脈的恐怖条件付け試験を行った。対照食では欠損マウスと野生型マウス間で差はなく空間認知に関する恐怖記憶に異常がなかった。野生型マウスでは実施例１の油脂組成物や比較例２の大豆油を利用した飼料を摂食すると，対照食時のすくみ行動をより抑制したが，欠損マウスは実施例１の油脂組成物や比較例２の大豆油を利用した飼料摂食の影響を受けなかった。その一方で，欠損マウスと野生型マウス共に比較例１の魚油利用飼料の摂食により，すくみ行動のレベルが著しく亢進した。
３日目に，マウスは手がかり（音）恐怖条件付け試験を受けた。欠損マウスは，野生型マウスに比べ音刺激に対して著しいすくみ行動を示した。この欠損マウスが示す著しいすくみ行動は，実施例１の油脂組成物を利用した飼料摂食により，野生型マウスのレベルにまで抑制された。野生型は，摂食油脂種の影響を全く受けなかった。
【００３８】
図１恐怖条件付け試験
【００３９】
５−Ｂ．強制水試験結果
９０日間飼料を摂食した欠損マウス及び野生型マウスを用いて，強制水試験を実施した。対照食を摂食した欠損マウスと野生型マウスは共に，２日目には，その不動時間を延長した。一方で，油脂量を２０％に増量した餌を摂食した野生型のマウスは，実施例１の油脂組成物，比較例１の魚油又は比較例２の大豆油を利用した飼料のどれを摂っても，不動時間を１日目に戻し（短縮し），うつ様症状を改善した。その一方で，欠損マウスが実施例１の油脂組成物や比較例１の魚油利用の飼料摂食した場合は，うつ様症状の改善が見られた。しかし大豆油利用飼料を摂食した欠損マウスは，１日目，２日目共に不動時間を延長し，うつ様症状の亢進を示した。
【００４０】
図２強制水試験
【００４１】
これらの結果より、実施例１の油脂組成物は比較例１の魚油及び比較例２の大豆油に対して、恐怖条件でのすくみ行動の改善や強制水泳試験でのうつ様症状の改善又は憎悪を抑制することが判った。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明のストレス性情動系障害を改善する医薬用油脂組成物は古くから食経験の豊富な食用油脂の一部を構成するトリグリセリドであるため安全性に優れる。
【図１】
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【図２】
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