(57)【要約】【課題】神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つによって特徴づけられる病状を有する対象を治療する方法を提供する。【解決手段】本願発明は、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することによって神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つによって特徴づけられる病状を治療する方法を提供する。神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つによって特徴づけられる病状を治療するための候補薬剤として化合物を同定するスクリーニング法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを、神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴付けられる病状を有する対象におけるフマル酸ジメチルまたはフマル酸モノメチルの効果の指標とする方法であって、該方法は、フマル酸ジメチルまたはフマル酸モノメチルによる該対象の治療の間または後に、該対象由来の試料において、該少なくとも１つの遺伝子の発現レベルをエキソビボで測定する工程を包含し、該少なくとも１つの遺伝子は、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、Ｚｃ３ｈｌ２ａ、Ｇｇｔ１、Ｓｒｘｎ１およびＳｑｓｔｍ１からなる群より選択される、方法。
【請求項２】
前記測定が、フマル酸ジメチルまたはフマル酸モノメチルによる前記対象の治療の間に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記測定が、フマル酸ジメチルまたはフマル酸モノメチルによる前記対象の治療の後に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記治療が治療有効量のフマル酸ジメチルまたはフマル酸モノメチルによる治療である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記治療が治療有効量のフマル酸ジメチルによる治療である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記治療が、フマル酸ジメチルから本質的になる経口用医薬製剤による治療である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記治療が、２４０ｍｇのフマル酸ジメチルを含有する経口用医薬製剤による治療である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記治療が、１日２回の前記経口用医薬製剤による治療である、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記治療が、第１の投与期間のための経口用医薬製剤の第１の用量と、第２の投与期間のための経口用医薬製剤の第２の用量による治療であり、該経口用医薬製剤の第１の用量が、該第１の投与期間にわたる１日あたり２〜３回の１２０ｍｇのフマル酸ジメチルを含有し、該経口用医薬製剤の第２の用量が、該第２の投与期間にわたる１日あたり２回の２４０ｍｇのフマル酸ジメチルを含有する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療が、第１の投与期間のための経口用医薬製剤の第１の用量と、第２の投与期間のための経口用医薬製剤の第２の用量による治療であり、該経口用医薬製剤の第１の用量が、該第１の投与期間にわたる１日あたり２〜３回の１２０ｍｇのフマル酸ジメチルを含有し、該経口用医薬製剤の第２の用量が、該第２の投与期間にわたる１日あたり３回の２４０ｍｇのフマル酸ジメチルを含有する、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１の投与期間が少なくとも１週間である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記経口用医薬製剤が、丸剤、錠剤、ミクロ錠剤、丸薬、マイクロ丸薬、カプセル、ミクロ錠剤を含有するカプセル、または液体製剤の形態である、請求項６〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記経口用医薬製剤が腸溶性コーティングされたミクロ錠剤を含有するカプセルの形態である、請求項６〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象がヒト患者である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００９年４月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／１７３，７９７号、および２００９年５月４日に出願された同第６１／１７５，２７０号に対する優先権を主張する。これにより、これらの出願の両方の全体の開示は、参照により本明細書に組込まれる。
【０００２】
神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つによって特徴づけられる病状を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することによって治療する方法を提供する。増加したアストログリオーシスによって特徴づけられる病状を有する対象において、アストログリオーシスを減少させる方法であって、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することを含む方法も提供する。神経保護を、それを必要としている対象に提供する方法であって、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することを含む方法も提供する。神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つによって特徴づけられる病状を治療するための候補薬剤として化合物を同定するスクリーニング法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
アストロサイトは、脳の主要な細胞成分である。これらのグリア細胞は、脳の全質量の約９０％を占め、ヒト成人の脳において、ニューロンの数を５〜１０倍上回る。１９８０年の初頭に、アストロサイトの２種類、すなわち繊維状アストロサイトおよび原形質性アストロサイトが特徴づけられた。繊維状アストロサイト（１型）は星のような形を有し、通常、白質に見られ、有髄繊維と毛細血管の間を走る長い突起を有し、かつ血液脳関門（ＢＢＢ）の周りにエンドフィートという血管構造を形成する。逆に、原形質性アストロサイト（２型）は枝状に分かれ、短い突起を有し、神経突起を包み、灰白質に存在する。
【０００４】
グリア細胞、ミクログリアおよびアストロサイトの活性化は、多発性硬化症（ＭＳ）を含む神経変性疾患および神経炎症性疾患の病理生理学の一因のメカニズムとして意味づけられている。疾患の初期段階において、アストロサイトは、炎症細胞を動員するサイトカインおよびケモカインを分泌することができる。病気が進行するにつれて、アストログリオーシスは、グリア性瘢痕、軸索損傷、および脱髄の一因となると考えられている。ミクログリアは、ＥＡＥ発症（後）の発達および進行において重要な役割を担うことが示されている。ミクログリアによって生産される炎症誘発性サイトカインは疾患を悪化させ、ケモカインは炎症部位に白血球を動員する。フマル酸ジメチル（ＤＭＦ）は、現在、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）の第ＩＩＩ相臨床試験中の試験治療（薬）ＢＧ０００１２の有効成分である。ＲＲＭＳの第ＩＩｂ相試験において、ＢＧ０００１２は、ガドリニウム増強脳損傷を顕著に減少させた。前臨床試験において、ＤＭＦはマウスおよびラットのＥＡＥにおけるＣＮＳ炎症を阻害することが示されている。ＤＭＦは、ここでＥＡＥと関連するアストログリオーシスおよびミクログリア活性化を抑制することができることが見出された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
神経炎症の発症におけるミクログリアおよびアストロサイトの役割についての特定の限定されない態様を図２に示す。神経変性および神経炎症におけるアストログリオーシスの役割についての証拠の中に、神経変性および神経炎症によって特徴づけられる疾患の一例である多発性硬化症（ＭＳ）の研究の証拠がある。そのモデルの中のげっ歯類のＭＳモデルにおいて、疾患症状および軸索損傷の開始に先立って、アストロサイトおよびミクログリアの活性化が起こる。さらに、ミクログリアの選択的除去により、ＥＡＥ疾患の重症度および炎症が軽減される。疾患の炎症中にアストログリオーシスが増加するので、ＭＳ患者の臨床的証拠が、アストロサイトの役割についてのさらなる証拠をもたらす。さらに、活性化アストロサイトは、二次性進行型ＭＳにおける顕著な細胞型として報告され、ミクログリアの再活性化はＭＳ疾患の炎症の推進力として関わっている。
【０００６】
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）抗原に対して向けられる自己免疫活性が原因の自己免疫疾患である。この疾患は、ＣＮＳの一部の炎症により特徴づけられ、神経軸索の周囲の髄鞘の喪失（脱髄）、軸索喪失、ならびにニューロン、オリゴデンドロサイトおよびグリア細胞の結果として生ずる死を引き起こす。ＭＳおよび現在の治療法の包括的な考察については、例えば、ＭｃＡｌｐｉｎｅ’ｓ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ｂｙ  Ａｌａｓｔａｉｒ  Ｃｏｍｐｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２００６を参照されたい。
【０００７】
世界中で推定２５０万人がＭＳを患っている。ＭＳは、若年成人において、ＣＮＳの最も一般的な疾患の１つである。ＭＳは、慢性的で、進行性の身体障害性疾患であり、この疾患は、一般に、思春期後のある時にその被害者を襲い、その診断は、一般に、２０〜４０歳の間に行われるが、発症はもっと早くに起こる可能性がある。この疾患は直接的に遺伝するものではないが、遺伝子感受性がその発達に一翼を担う。ＭＳは、異種性の臨床的、病理学的および免疫学的な表現型を有する複雑な疾患である。
【０００８】
ＭＳの以下の４つの主要な臨床型がある：１）明確に規定された再発によって特徴づけられ、完全に回復するか、または回復時に後遺症および欠陥が残る再発寛解型ＭＳ（ＲＲ−ＭＳ）；疾患の再発の間の期間は、疾患進行がないことにより特徴づけられる；２）最初の再発寛解の経過後、時折再発、軽い寛解、および停滞状態を伴うか、または伴わない進行によって特徴づけられる二次性進行型ＭＳ（ＳＰ−ＭＳ）；３）発症から時折停滞状態になり、一時的に少し改善が認められる疾患進行によって特徴づけられる一次性進行型ＭＳ（ＰＰ−ＭＳ）；ならびに４）明確な急性再発を伴い、完全に回復するか、または回復しない進行性疾患発症によって特徴づけられる進行性再発型ＭＳ（ＰＲ−ＭＳ）；再発の間の期間は、進行が継続することにより特徴づけられる。
【０００９】
臨床的に、この病気は、ほとんどの場合、再発寛解型疾患として、および、それほどではないにせよ、神経障害の着実な進行として症状が見つかる。再発寛解型ＭＳ（ＲＲ−ＭＳ）は、局所性または多巣性の神経機能障害の再発性発作の形で症状が見つかる。発作は、長年にわたり、外見的には不規則に生じ、寛解し、再発し得る。寛解は不十分である場合が多く、１つの発作の後に別の発作が起きて、段階的な下方への進行が結果として起き、永続的神経障害が増加する。ＲＲ−ＭＳの通常の経過は、度重なる再発によって特徴づけられ、患者の大多数では、結果として生ずる疾患進行の開始が伴う。この疾患の後の経過は予測できないが、再発寛解型疾患を有するほとんどの患者は、二次的進行性疾患をいつかは発症する。再発寛解段階において、再発は臨床的に不活性である期間と交互に起き、エピソードの間の神経障害の存在に応じて後遺症によって特徴づけられ得、また特徴づけられない場合もある。再発寛解段階中の再発の間の期間は臨床的に安定である。一方、進行性ＭＳ患者は、上記で定義した通り、発症からまたはエピソードの期間後のいずれか一方で、障害が着実に増加するが、この意味は、新たな再発のさらなる発生を排除するものではない。
【００１０】
ＭＳの症状は、ある程度、白質の局所炎症性脱髄性病変の形成によって反映され、これは急性および再発性疾患を有する患者の顕著な特徴である。進行性疾患を有する患者において、より広範囲の意味で、脳は、正常な外見の白質における散在性ではあるが広範な（主に軸索）損傷および灰白質、特に、皮質における大規模な脱髄に影響を受ける。
【００１１】
ＭＳの最新の治療法は、炎症の減少および免疫系の抑制または調節を目的としている。２００６年現在、ＭＳの利用可能な治療は、炎症および新しいエピソードの数を減少させるが、これらの治療の全てが、疾患進行に効果を及ぼすわけではない。多数の臨床試験が、慢性的なＭＳにおける炎症の抑制が、持続した疾患進行の間の身体的障害の蓄積を、ほとんどの場合有意に制限しないことを示しており、このことは、神経損傷および炎症が独立した病理であることを示唆する。したがって、ＭＳの進行した段階において、神経変性は、顕著な炎症が存在しなくても進行するようである。それゆえに、脱髄の緩徐化、または修復機構としてＣＮＳの再ミエリン化の促進、そうでなければ、軸索喪失およびニューロンの死を防ぐことが、特に、ＳＰ−ＭＳなどのＭＳの進行型の場合において、ＭＳの治療の重要な目的のいくつかである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
フマル酸ジメチル（ＤＭＦ）などのフマル酸エステルが、以前に、ＭＳの治療のために提案されている（例えば、Ｓｃｈｉｍｒｉｇｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２００６，１３（６）：６０４−１０；Ｄｒｕｇｓ  Ｒ＆Ｄ，２００５，６（４）：２２９−３０；米国特許第６，４３６，９９２号を参照）。
【００１３】
フマル酸ジメチル（ＤＭＦ）が、インビボおよびインビトロでアストロサイトの活性化を減少させ、かつＤＭＦが、初代アストロサイトのリポ多糖（ＬＰＳ）刺激によって誘導される炎症性サイトカインおよび炎症誘発性シグナル伝達を阻害する証拠を本明細書に提供する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉ：
【化１】
2015044855.tif 000002
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は（Ｃ１−６）アルコキシである）の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含み、
前記治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が前記対象において結果的に抑制される方法。
（項目２）
神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状が、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加によってさらに特徴づけられる、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物を前記対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が前記対象において結果的に上昇する、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記の少なくとも１つの化合物が、前記の少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記の少なくとも１つの化合物がフマル酸ジメチルおよびフマル酸モノメチルから選択される、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）である、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がフマル酸モノメチル（ＭＭＦ）である、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がＤＭＦおよびＭＭＦである、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを減少させるのに十分な量および十分な期間、前記の少なくとも１つの化合物が投与される、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状が、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症から選択される、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状が多発性硬化症（ＭＳ）である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記対象がＭＳを患っていない、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
増加したアストログリオーシスによって特徴づけられる病状を有する対象においてアストログリオーシスを減少させる方法であって、治療有効量の式Ｉ：
【化２】
2015044855.tif 000003
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択される）
の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む方法。
（項目１４）
治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が前記対象において結果的に抑制される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物を前記対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が前記対象において結果的に上昇する、項目１３または１４に記載の方法。
（項目１６）
前記の少なくとも１つの化合物が、前記の少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される、項目１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記の少なくとも１つの化合物が、前記の少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される、項目１３〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記の少なくとも１つの化合物がフマル酸ジメチルおよびフマル酸モノメチルから選択される、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）である、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がフマル酸モノメチル（ＭＭＦ）である、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がＤＭＦおよびＭＭＦである、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを減少させるのに十分な量および十分な期間、前記の少なくとも１つの化合物が投与される、項目１３〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
増加したアストログリオーシスによって特徴づけられる病状が、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症から選択される、項目１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状が多発性硬化症（ＭＳ）である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記対象がＭＳを患っていない、項目１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
候補神経保護剤として化合物を特定する方法であって、
ａ）標的の細胞、組織、または哺乳類において、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つを誘発することと、
ｂ）前記標的の細胞、組織、または哺乳類において、前記化合物の存在下で、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つの少なくとも１つマーカーの発現を測定することと、
ｃ）前記標的の細胞、組織、または哺乳類において、前記化合物の非存在下で、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つの少なくとも１つマーカーの発現を測定することと
を含み、
その際、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つの少なくとも１つマーカーの発現が、前記化合物の非存在下でのその発現に対して、前記化合物の存在下で減少する場合、前記化合物を候補神経保護剤として特定する方法。
（項目２７）
ｄ）少なくとも１つの化合物の存在下でアストログリオーシスを測定することと、
ｅ）少なくとも１つの化合物の非存在下でアストログリオーシスを測定することと
をさらに含み、
その際、アストログリオーシスは、前記化合物の非存在下におけるアストログリオーシスのレベルに対して、前記化合物の存在下で減少する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記少なくとも１つマーカーが、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現レベルである、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
神経保護を、それを必要としている対象に提供する方法であって、治療有効量の式Ｉ：
【化３】
2015044855.tif 000004
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は（Ｃ１−６）アルコキシである）の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含み、
その際、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が前記対象において結果的に抑制される方法。
（項目３０）
神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状が、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加によってさらに特徴づけられる、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物を前記対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が前記対象において結果的に上昇する、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
前記の少なくとも１つの化合物が、前記の少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される、項目２９〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記の少なくとも１つの化合物がフマル酸ジメチルおよびフマル酸モノメチルから選択される、項目２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）である、項目２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がフマル酸モノメチル（ＭＭＦ）である、項目２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
前記対象に投与される唯一の活性薬剤がＤＭＦおよびＭＭＦである、項目２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを減少させるのに十分な量および十分な期間、前記の少なくとも１つの化合物が投与される、項目２９〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状が、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症から選択される、項目２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状が多発性硬化症（ＭＳ）である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記対象がＭＳを患っていない、項目２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の効果】
【００１４】
神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状を有する対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、この方法は、治療有効量の式Ｉ：
【００１５】
【化１】
2015044855.tif 000005
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は（Ｃ１−６）アルコキシである）の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現がこの対象において結果的に抑制される。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状は、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加によってさらに特徴づけられる。いくつかの実施形態において、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物をこの対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現がこの対象において結果的に上昇する。いくつかの実施形態において、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加は、この対象において、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が抑制されることなく達成される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物は、この少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物はフマル酸ジメチルおよびフマル酸モノメチルから選択される。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）である。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はフマル酸モノメチル（ＭＭＦ）である。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はＤＭＦおよびＭＭＦである。いくつかの実施形態において、対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを減少させるのに十分な量および十分な期間、この少なくとも１つの化合物を投与する。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症から選択される。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状は多発性硬化症（ＭＳ）である。いくつかの実施形態において、この対象はＭＳを患っていない。いくつかの実施形態において、この対象は再発寛解型多発性硬化症を患い、治療は、臨床的再発の頻度を減少させ、身体的障害の蓄積を遅らせる。いくつかの実施形態において、この対象は再発寛解型多発性硬化症を患い、治療は、臨床症状の悪化の頻度を減少させる。
【００１６】
増加したアストログリオーシスによって特徴づけられる病状を有する対象においてアストログリオーシスを減少させる方法も提供する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、治療有効量の式Ｉ：
【００１７】
【化２】
2015044855.tif 000006
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択される）の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現がこの対象において結果的に抑制される。いくつかの実施形態において、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物をこの対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現がこの対象において結果的に上昇する。いくつかの実施形態において、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加は、この対象において、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が抑制されることなく達成される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物は、この少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物は、この少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物はフマル酸ジメチルおよびフマル酸モノメチルから選択される。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）である。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はフマル酸モノメチル（ＭＭＦ）である。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はＤＭＦおよびＭＭＦである。いくつかの実施形態において、対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを減少させるのに十分な量および十分な期間、この少なくとも１つの化合物を投与する。いくつかの実施形態において、増加したアストログリオーシスによって特徴づけられる病状は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症から選択される。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状は多発性硬化症（ＭＳ）である。いくつかの実施形態において、この対象はＭＳを患っていない。いくつかの実施形態において、この対象は再発寛解型多発性硬化症を患い、治療は、臨床的再発の頻度を減少させ、身体的障害の蓄積を遅らせる。いくつかの実施形態において、この対象は再発寛解型多発性硬化症を患い、治療は、臨床症状の悪化の頻度を減少させる。
【００１８】
候補神経保護剤として化合物を特定する方法も提供する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、ａ）標的の細胞、組織、または哺乳類において、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つを誘発すること、ｂ）この標的の細胞、組織、または哺乳類において、この化合物の存在下で、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つの少なくとも１つマーカーの発現を測定すること、ならびにｃ）この標的の細胞、組織、または哺乳類において、この化合物の非存在下で、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つの少なくとも１つマーカーの発現を測定することを含み、その際、神経変性および神経炎症のうちの少なくとも１つの少なくとも１つマーカーの発現が、この化合物の非存在下でのこの発現に対して、この化合物の存在下で減少する場合、この化合物を候補神経保護剤として特定する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、さらに、ｄ）少なくとも１つの化合物の存在下でアストログリオーシスを測定すること、およびｅ）少なくとも１つの化合物の非存在下でアストログリオーシスを測定することを含み、その際、アストログリオーシスは、この化合物の非存在下におけるアストログリオーシスのレベルに対して、この化合物の存在下で減少する。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つマーカーは、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現レベルである。
【００１９】
それを必要としている対象に神経保護を提供する方法も提供する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、治療有効量の式Ｉ：
【００２０】
【化３】
2015044855.tif 000007
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は（Ｃ１−６）アルコキシである）の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することを含み、その際、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現がこの対象において結果的に抑制される。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状は、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加によってさらに特徴づけられる。いくつかの実施形態において、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物をこの対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現がこの対象において結果的に上昇する。いくつかの実施形態において、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現の増加は、この対象において、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が抑制されることなく達成される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物は、この少なくとも１つの化合物、ならびに担体、アジュバント、および賦形剤から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される媒体を含む医薬組成物として処方される。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物はフマル酸ジメチルおよびフマル酸モノメチルから選択される。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）である。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はフマル酸モノメチル（ＭＭＦ）である。いくつかの実施形態において、対象に投与される唯一の活性薬剤はＤＭＦおよびＭＭＦである。いくつかの実施形態において、対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを減少させるのに十分な量および十分な期間、この少なくとも１つの化合物を投与する。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症から選択される少なくとも１つの症状によって特徴づけられる病状は、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症から選択される。いくつかの実施形態において、神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状は多発性硬化症（ＭＳ）である。いくつかの実施形態において、この対象はＭＳを患っていない。いくつかの実施形態において、この対象は再発寛解型多発性硬化症を患い、治療は、臨床的再発の頻度を減少させ、身体的障害の蓄積を遅らせる。いくつかの実施形態において、この対象は再発寛解型多発性硬化症を患い、治療は、臨床症状の悪化の頻度を減少させる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１Ａ】ラットＥＡＥモデルにおけるＤＭＦの用量反応を示すグラフである。
【図１Ｂ】ＢＧＯＯＯ１２によるグリア細胞阻害を示す画像である。
【図２】神経炎症の発症におけるアストロサイトおよびミクログリアの役割に関する様々な分子メディエーターを示す図である。
【図３Ａ】ＤＭＦ処理を行った場合と行わなかった場合のラット脊髄アストロサイトの染色を示す画像である。
【図３Ｂ】アペリオ（Ａｐｅｒｉｏ）社のカラーデコンボリューションを用いた形態学的定量を示す画像である。
【図３Ｃ】腹側の灰白質領域および白質領域を示す画像である。
【図３Ｄ】腹側の灰白質および白質におけるＧＦＡＰ陽性染色の形態学的定量を示すグラフである。
【図４Ａ】ＢＧ２０００１２がＧＦＡＰの発現を阻害することを示すグラフである。
【図４Ｂ】ＢＧ２０００１２が、ＬＰＳに誘発されるＴＮＦ発現を阻害することを示すグラフである。
【図４Ｃ】アストロサイトにおけるＢＧ０００１２に対するインビトロでのＰＤ反応を示すグラフである。
【図４Ｄ】ＢＧ０００１２処理後のアストロサイトの生存率を示すグラフである。
【図５】ＢＧ０００１２が、初代アストロサイトのＬＰＳ刺激によって誘発される炎症性サイトカインおよび炎症誘発性シグナル伝達を阻害すること示す画像である。
【図６】図６Ａ：培養アストロサイトにおけるグルタチオンレベルを示すグラフである。図６Ｂ：培養アストロサイトの代謝活性を示すグラフである。図６Ｃ：培養アストロサイトの細胞生存率を示すグラフである。
【図７】図７Ａ：ＭＭＦで処理した細胞の蛍光トレースの生データのグラフである。図７Ｂ：ＭＭＦで処理した細胞におけるＣａ＋＋動員を示すグラフである。図７Ｃ：非線形回帰分析データを示すグラフである。
【図８】図８Ａ：培養アストロサイトの細胞生存率を示すグラフである。図８Ｂ：培養アストロサイトの代謝活性を示すグラフである。図８Ｃ：培養アストロサイトにおけるＡＴＰレベルを示すグラフである。
【図９】ＤＭＦおよびＭＭＦが、ラットおよびヒトの初代アストロサイトにおいて、Ｎｒｆ２の細胞レベルを増加させることを示す画像である。
【図１０】ラットの初代アストロサイトにおける、ＤＭＦ刺激による標準的なシグナル伝達経路を示すグラフである。
【図１１】ラットの初代アストロサイトにおける、ＤＭＦの影響を受ける主要な細胞機能を示すグラフである。
【図１２】ＤＭＦ処理は、ＥＡＥの間、ミエリン喪失を減少させる（ラット脊髄）ことを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
神経変性および神経炎症の少なくとも１つによって特徴づけられる病状は、神経変性および神経炎症の経過のいずれかまたは両方により、対象の神経系が正常に機能できなくなることにつながる病状である。正常機能の喪失は、中枢神経系（例えば、脳、脊髄）および末梢神経系のいずれかまたは両方にあり得る。そのような病状の例として、副腎白質萎縮症（ＡＬＤ）、アルコール依存症、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、毛細血管拡張性運動失調症、（シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病としても知られる）バッテン病、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、脳性麻痺、コケイン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レビー小体型認知症、神経ボレリア症、マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、多発性硬化症、ナルコレプシー、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ペリツェウス・メルツバッヘル病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、（バッテン病としても知られる）シュピールマイアー・フォークト・シェーグレン・バッテン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スチール・リチャードソン・オルツェウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＬＨＯＮ（レーバー遺伝性視神経萎縮症）、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌスてんかん；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパチーおよび外眼筋麻痺；ニューロパチー；胃腸；脳症）、カーンズ・セイヤー症候群（ＫＳＳ）、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリアミオパチー、およびフリードライヒ失調症が挙げられるが、それらに限定されない。
【００２３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することにより、「神経保護」を引き起こす、すなわち別の言い方をすると、この患者にこの化合物を投与することの効果は神経保護である。神経保護には、傷害または損傷の後の神経系、神経系の細胞、構造、および機能の維持、救助、回復、ならびに再生のうちの少なくとも１つが含まれる。いくつかの実施形態において、神経保護には、第１の神経保護および第２の神経保護のうちの少なくとも１つが含まれる。「第１の神経保護」は、ＣＮＳ内に存在する神経系細胞（ニューロン、オリゴデンドロサイト、アストロサイト、およびミクログリアから選択される少なくとも１つの細胞型）の構造および／または機能の直接的な調節を含む保護である。「第２の神経保護」は、典型的には、ＣＮＳの外に存在する少なくとも１つの細胞型（例えば、免疫細胞）の構造または機能の調節を含む保護である。第２の神経保護において、この少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩は、典型的には、ＣＮＳの外に存在する少なくとも１つの細胞型に、直接的にまたは間接的に作用して、その少なくとも１つの細胞型の構造および／または機能を調節する。その後、その少なくとも１つの細胞型は、直接的に、または別の方法で、ＣＮＳ内に存在する神経系細胞（ニューロン、オリゴデンドロサイト、アストロサイト、およびミクログリアから選択される少なくとも１つの細胞型）の構造および／または機能を調節する。いくつかの実施形態において、神経保護には、対象における神経変性または神経炎症の重症度の軽減またはその速度の減少が含まれる。神経系、神経系の細胞、構造、および機能の「維持」には、本明細書に開示される疾患もしくは病状の少なくとも１つの兆候または症状の進行に先立ち、少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与して、この疾患もしくは病状の結果として生じる重症度を軽減し、かつ／またはこの疾患および／もしくは病状の発症率を低下させる実施形態が含まれる。
【００２４】
いくつかの実施形態において、治療される病状は、例えば、この対象の神経系細胞における炎症誘発性遺伝子の発現増加によって特徴づけられる。アストログリオーシスを経験している対象の場合は、例えば、この対象において、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の炎症誘発性遺伝子の発現が増加する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することにより、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、およびＺｃ３ｈｌ２ａから選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が結果的に抑制される。
【００２５】
神経保護遺伝子の特定例、すなわち、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１も本明細書に開示する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をこの対象に投与することにより、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現が結果的に上昇する。
【００２６】
「治療有効量」という用語は、対象における神経変性もしくは神経炎症によって特徴づけられる病状の少なくとも１つの症状の発症の予防もしくは遅延または改善をもたらすか、またはアストログリオーシスの減少などの所望の生物学的結果を獲得する化合物もしくはその薬学的に許容される塩のその量を表す。
【００２７】
いくつかの実施形態において、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、Ｎｆｋｂｉａ、Ｎｆｋｂｉｚ、Ｔｎｆａｉｐ２、Ｚｃ３ｈｌ２ａ、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１から選択される少なくとも１個の遺伝子の発現レベルを対象において測定する。いくつかの実施形態において、この遺伝子の発現を、その遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルを調べることによって測定する。いくつかの実施形態において、この遺伝子の発現を、その遺伝子によってコードされるタンパク質産物の発現レベルを調べることによって測定する。いくつかの実施形態において、このタンパク質産物を、この対象の脳脊髄液中で測定する。いくつかの実施形態において、治療の開始前、治療中、および治療後から選択される少なくとも１つの時点において、発現レベルを測定する。
【００２８】
「治療」という用語は、統計的に有意な程度または当業者が検出できる程度のいずれか一方まで、対象における神経変性もしくは神経炎症によって特徴づけられる病状の少なくとも１つの症状の発症を予防もしくは遅延するか、または改善するのに効果的な量、方法、および／または機序で治療法を施すことを表す。有効量、方法、または機序は対象に応じて変えることができ、かつその対象に合わせて調整されてもよい。本明細書で言及する神経障害については、本発明の方法によって提供される治療が、障害の病状を改善する（または有害作用を軽減する）ことを目標としており、必ずしも完全にこれらの障害を排除または治癒させることを目標とするわけではない。
【００２９】
特に特定しない限り、「ＭＭＦ」という用語は、酸の形態のフマル酸モノメチル（「ＭＨＦ」としても知られるフマル酸メチル水素）ならびにその対応する塩を表す。
【００３０】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、治療有効量の式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を、この病状を有する対象に投与することを含み：
【００３１】
【化４】
2015044855.tif 000008
、式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＯＨ、Ｏ−、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択される。（Ｃ１−６）アルコキシは、例えば、（Ｃ１−５）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−３）アルコキシ、エトキシ、メトキシ、（Ｃ２−３）アルコキシ、（Ｃ２−４）アルコキシ、（Ｃ２−５）アルコキシ、および（Ｃ１−６）アルコキシから選択することができる。式Ｉの化合物のいくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩は、金属（Ｍ）カチオンの塩であり、Ｍは、アルカリ、アルカリ土類、またはＬｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｚｎ、Ｓｒ、Ｍｇ、Ｆｅ、もしくはＭｎなどの遷移金属であり得る。限定されない説明的な実施形態において、式Ｉの化合物は、フマル酸ジメチル（Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＣＨ３である）またはフマル酸モノメチル（Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＯ−もしくはＯＨであり、例えば、フマル酸モノメチルの薬学的に許容される塩、例えば、具体的に、Ｃａ−ＭＭＦ）である。
【００３２】
特定の実施形態において、本発明の方法は、神経変性および／または神経炎症の減少を対象にもたらす。これらの神経保護作用は、必ずしも損傷または変性の全てを排除するわけではないが、むしろ変性の進行を遅らせるかもしくはさらに停止させるか、または変性プロセスの開始を防ぐか、または障害の病態を改善する。本発明の方法は、中枢神経系、例えば、海馬、小脳、脊髄、皮質（例えば、運動皮質または体性感覚皮質）、線条体、前脳基底部（コリン作動性ニューロン）、腹側中脳（黒質の細胞）、および青斑（中枢神経系の神経アドレナリン細胞（ｎｅｕｒｏａｄｒｅｎａｌｉｎｅ  ｃｅｌｌ））などの神経系のいずれかの部分に神経保護を提供し得る。
【００３３】
いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を、この対象における神経変性および神経炎症の少なくとも１つを低下させるのに十分な量でかつ十分な期間投与する。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物を、この対象におけるアストログリオーシスを低下させるのに十分な量でかつ十分な期間投与する。いくつかの実施形態において、この少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を、この対象に神経保護をもたらすのに十分な量でかつ十分な期間投与する。
【００３４】
本発明の方法は、ＤＭＦおよびＭＭＦから選択される、治療有効量の少なくとも１つの化合物でこの対象を治療することを含み得る。ＤＭＦおよびＭＭＦの場合、その治療有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇまたは約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）の範囲であり得る。有効量は、当業者が認めるように、投与経路、賦形剤の利用、および他の治療薬の使用を含む他の治療薬との併用の可能性によっても変化するであろう。例えば、対象に投与されるＤＭＦまたはＭＭＦの有効量は、例えば、経口的には、１日あたり約０．１ｇ〜約１ｇ、例えば、１日あたり２００ｍｇ〜約８００ｍｇ（例えば、１日あたり約２４０ｍｇ〜約７２０ｍｇ；１日あたり約４８０ｍｇ〜約７２０ｍｇ；１日あたり約７２０ｍｇ）であり得る。例えば、１日あたり約７２０ｍｇは、２、３、４、または６つの等しい用量の別々の投与で投与されてもよい。
【００３５】
本方法のいくつかの実施形態において、フマル酸ジメチル１２０ｍｇがこの医薬製剤中に存在する。本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤を、１日あたり３回（ＴＩＤ）この患者に投与する。本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤を、１日あたり２回（ＢＩＤ）この患者に投与する。
【００３６】
本方法のいくつかの実施形態において、フマル酸ジメチル２４０ｍｇがこの医薬製剤中に存在する。本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤を、１日あたり３回（ＴＩＤ）この患者に投与する。本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤を、１日あたり２回（ＢＩＤ）この患者に投与する。
【００３７】
本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤を、この患者が食事をとる少なくとも１時間前もしくは１時間後に投与する。
【００３８】
本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤を投与することは、第１の投与期間に、この医薬製剤の第１の用量をこの患者に投与すること、ならびに、第２の投与期間に、この医薬製剤の第２の用量をこの患者に投与することをさらに含む。本方法のいくつかの実施形態において、第１の投与期間は少なくとも１週間である。本方法のいくつかの実施形態において、この医薬製剤の第１の用量はフマル酸ジメチルを１２０ｍｇ含み、第１の投与期間に、この医薬製剤を１日あたり３回（ＴＩＤ）この患者に投与する。本方法のいくつかの実施形態において、第１の医薬製剤の第２の用量はフマル酸ジメチルを２４０ｍｇ含み、第２の投与期間に、第１の医薬製剤を１日あたり３回（ＴＩＤ）この患者に投与する。本方法のいくつかの実施形態において、第１の医薬製剤の第２の用量はフマル酸ジメチルを２４０ｍｇ含み、第２の投与期間に、第１の医薬製剤を１日あたり２回（ＢＩＤ）この患者に投与する。本方法のいくつかの実施形態において、第２の投与期間の間に、この患者が顔面紅潮または胃腸障害を経験する場合、１週間〜１カ月間、フマル酸ジメチルを１２０ｍｇ含む第１の医薬製剤の用量を、１日あたり３回（ＴＩＤ）この患者に投与する。
【００３９】
治療化合物（例えば、ＤＭＦまたはＭＭＦ）を、神経障害の治療のために、この化合物の送達を可能にする任意の方法によって投与することができる。例えば、この治療化合物を、丸剤、錠剤、ミクロ錠剤、丸薬、マイクロ丸薬、（例えば、ミクロ錠剤を含む）カプセル、座薬、経口投与用の液体製剤によって、および栄養補助食品の形態で投与することができる。この薬学的に許容される組成物は、周知の薬学的に許容される賦形剤を含むことができ、例えば、この組成物が活性薬剤を含む水溶液である場合、この組成物は、等張食塩水、５％グルコース、または他のものであり得る。シクロデキストリンなどの可溶化剤、または当業者に周知の他の可溶化剤を、この治療化合物の送達のための医薬賦形剤として利用することができる。例えば、ＤＭＦおよび／またはＭＭＦを含むいくつかの製剤についての米国特許第６，５０９，３７６号および同第６，４３６，９９２号を参照されたい。投与経路として、これらの組成物を経口投与、鼻腔内投与、経皮投与、皮下投与、皮内投与、経膣投与、口腔内投与、眼内投与、筋肉内投与、頬側投与、直腸投与、経粘膜投与、または吸入による投与、もしくは静脈内投与することができる。ＤＭＦまたはＭＭＦは経口投与が好ましい。
【００４０】
いくつかの実施形態において、本発明による方法は、本質的に、腸溶性コーティングミクロ錠剤の形態のフマル酸ジメチル６０〜２４０ｍｇ（例えば、１２０ｍｇ）からなる医薬製剤を含むカプセルを経口投与することを含む。いくつかの実施形態において、このようなミクロ錠剤の平均直径は１〜５ｍｍ、例えば、１〜３ｍｍまたは２ｍｍである。
【００４１】
この治療化合物は、持続放出性または制御放出性の医薬製剤の形態で投与することができる。当業者は、このような製剤を様々な技術によって調製することができる。例えば、この製剤は、この治療化合物、速度制御ポリマー（すなわち、この治療化合物を投薬形態から放出する速度を制御する物質）および任意選択で、他の賦形剤を含み得る。速度制御ポリマーのいくつかの例として、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシプロピルアルキルセルロース（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルイソプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルブチルセルロースおよびヒドロキシプロピルヘキシルセルロース）、ポリ（エチレン）オキシド、アルキルセルロース（例えば、エチルセルロースおよびメチルセルロース）、カルボキシメチルセルロース、親水性セルロース誘導体、およびポリエチレングリコール、ならびに国際特許ＷＯ２００６／０３７３４２、ＷＯ２００７／０４２０３４、ＷＯ２００７／０４２０３５、ＷＯ２００７／００６３０８、ＷＯ２００７／００６３０７、およびＷＯ２００６／０５０７３０に記載の組成物が挙げられる。
【００４２】
フマル酸ジメチルを患者に投与するいくつかの実施形態において、このＤＭＦを、腸溶性コーティングミクロ錠剤を含むカプセルの中に処方する。この製剤を、本明細書では「ＢＧ−１２」または「ＢＧ０００１２」と称する。これらの錠剤のコーディングは、異なる層でできている。第１の層は、メタクリル酸−メタクリル酸メチル共重合体／イソプロピルアルコール溶液であり、これは、次に適用される水懸濁液の可能性のある加水分解から錠剤コアを分離する。その後、この錠剤の腸溶性コーティングを、メタクリル酸−アクリル酸エチル共重合体水性懸濁液によって与える。これらのカプセルの全成分および定量的組成を表１に示す。
【００４３】
【表１】
2015044855.tif 000009
【００４４】
製造工程および工程管理は以下を含む：
【００４５】
Ａ）有効成分および非有効成分の重さを量り、各出発物質を適切なラベル（命名、バッチ番号、量）で識別する。
【００４６】
Ｂ）混合：有効成分フマル酸ジメチルおよびミクロ錠剤のコアの全ての賦形剤を含む粉末混合物を調製する。
【００４７】
Ｃ）打錠：回転プレスには複数の穿孔具、粉体除去装置が装備され、この粉末混合物を所定の仕様に従って打錠する。
【００４８】
Ｄ）膜コーティング：一般に用いられている膜コーティング法に従って、膜コーティング装置を用いて分離液を噴霧することによって、ミクロ錠剤のコアを分離する。膜コーティング容器の中で、この分離したコアに腸溶性コーティング懸濁液を噴霧する。ミクロ錠剤の胃抵抗およびこの有効成分の含有量を制御する。
【００４９】
Ｅ）カプセル充填：ミクロ錠剤の有効成分に基づいて、カプセルあたり有効成分１２０ｍｇに相当する量でカプセルを充填する。カプセルの充填重量およびカプセルの長さを制御する。
【００５０】
Ｆ）包装：これらのカプセルを、ブリスターマシンで、熱形成されたＰＶＣ／ＰＥ／ＰＶｄＣ−アルミニウムブリスターに包装する。
【００５１】
例えば、米国特許第７，３２０，９９９号の５〜７欄の実施例ならびに国際特許ＷＯ２００６／０３７３４２、ＷＯ２００７／０４２０３４、ＷＯ２００７／０４２０３５、ＷＯ２００７／００６３０８、ＷＯ２００７／００６３０７、およびＷＯ２００６／０５０７３０の中にある、ＤＭＦおよびＭＭＦを合成および処方する追加の方法を提供する。
【００５２】
本発明を、以下の実施例にさらに詳細に記載するが、これらの実施例は特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【００５３】
実施例
方法
ラットＥＡＥ：
雌ブラウンノルウェーラット（チャールズリバーラボラトリーズ社）に、０日目に、ラットあたりＩＦＡ中のＭＯＧ１−１２５を１００μｇ用いて、尾の基部に皮内投与で免疫化する。３日目に、ＤＭＦ（ＢＧ０００１２）を毎日５、２５、５０、１００、２００ｍｇ／ｋｇを１日１回、０．８％ＨＰＭＣ中の懸濁液として経口で送達した。１グループあたり６匹。スコア０＝疾患なし、１＝尾の麻痺、２＝後肢の衰弱、３＝後肢の麻痺、４＝後肢の麻痺および前肢の衰弱、５＝瀕死または死。動物実験委員会のガイドラインに従って、インビボでの実験手順を実施した。
【００５４】
アストロサイトの初代培養：
皮質、海馬および線条体のラットアストロサイト（ロンザ社、クロンテック社）を、メーカーの手順書に記載されるとおりに培養した。ＤＭＦのＤＭＳＯによる限界希釈液を加え、６〜２４時間培養し、大腸菌ＬＰＳ（シグマ社）で刺激した。キアゲン社のＲｎｅａｓｙ法を用いてＲＮＡを調製した。
【００５５】
組織学および形態計測：
腰髄切片を、免疫組織化学のためのＦＦＰＥ切片として調製し、ＧＦＡＰ抗体（ダコ（ＤＡＫＯ）社）、ＩＢＡ−１（和光純薬工業）、ＣＤ３（ダコ社）を用いてダコ社の自動免疫組織化学染色装置で処理した。形態学的分析のために、アペリオ社のスペクトルカラーデコンボリューションソフトウェアを用いた。
【００５６】
発現解析：
キアゲン社のＲＮｅａｓｙ法を用いて、素早く凍結した腰髄切片から全ＲＮＡを調製した。アプライドバイオサイエンス社のＴａｑＭａｎプローブを用いて特定の転写産物を増幅し、ＧＡＰＤＨハウスキーピングプローブを用いて標準化した。
【００５７】
実施例１
フマル酸ジメチル（ＤＭＦ）の経口投与可能な製剤であるＢＧ０００１２は、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）の第ＩＩＩ相試験中である。第ＩＩｂ相試験において、ＢＧ−１２は、ガドリニウム増強脳損傷を顕著に減少させ、Ｔ１低強度ブラックホール（ｈｙｐｏｉｎｔｅｎｓｅ  ｂｌａｃｋ  ｈｏｌｅ）を減少させた。ＢＧ０００１２の有効成分であるフマル酸ジメチル（ＤＭＦ）を、ラットＥＡＥモデルで試験した。図１Ａに示すように、実験的に誘発したＥＡＥのラットを様々な用量のＤＭＦで処理すると、用量依存的にＥＡＥの症状を軽減した。２００ｍｇ／ｋｇのＤＭＦでの処理は、完全に疾患を抑止した（図１Ａ）。
【００５８】
図１Ｂは、媒体またはＢＧ０００１２で処理したラットの脊髄の断面を示す。パネルａ〜ｆの処理および染色は以下のとおりである：
ａ．ルクソール・ファストブルー／媒体
ｂ．ルクソール・ファストブルー／ＢＧ０００１２
ｃ．ＧＦＡＰ／媒体
ｄ．ＧＦＡＰ／ＢＧ０００１２
ｅ．ＩＢＡ１／媒体
ｆ．ＩＢＡ１／ＢＧ０００１２
【００５９】
図１Ｂに示すように、活性化されたアストロサイトおよびミクログリアは、ＢＧ０００１２で処理した脊髄において著しく減少し、ミエリンは保たれた。
【００６０】
実施例２
この実施例は、ＢＧ０００１２がインビボでアストロサイトの活性化を減少させることを示す。具体的には、ＤＭＦで処理したラットの脊髄は、媒体のみで処理されたラットの脊髄よりも、灰白質において活性化されたアストロサイトは少ない。図３Ａは、活性化アストロサイロを特定するためにＧＦＡＰ抗体で染色した脊髄の断面を示す。パネル（ａ）および（ｂ）は、それぞれ、５倍および２０倍の倍率で示した、媒体のみで処理したラットの脊髄の断面であり、一方、パネル（ｃ）および（ｄ）は、それぞれ、５倍および２０倍の倍率で示した、１００ｍｇ／ｋｇのＤＭＦで処理したラットの脊髄の断面である。
【００６１】
図３Ｂは、アペリオ社のカラーデコンボリューションを用いる形態学的定量を示す。
【００６２】
図３Ｃは、腹側の灰白質領域および白質領域を示すラットの脊髄の断面を示す。これらの領域を、形態計測用に選択した。図３Ｄは、腹側の灰白質および白質におけるＧＦＡＰ陽性染色の形態学的定量を示す。
【００６３】
実施例３
この実験は、ＢＧ０００１２が初代培養アストロサイトの活性化を減少させることを示す。図４Ａは、示した濃度でＤＭＦ刺激を６時間および２４時間した後のＧＦＡＰ発現の定量ＰＣＲ分析を示す。示すように、ＤＭＦは濃度依存的にＧＦＡＰ発現を阻害する。
【００６４】
図４Ｂは、示した濃度でＤＭＦ刺激を２４時間し、収集の４時間前に、０、１０、および３０ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを加えた後のＴＮＦ発現の定量ＰＣＲ分析を示す。示すように、ＬＰＳは用量依存的にＴＮＦ発現を誘導し、その誘導されたＴＮＦ発現は、ＤＭＦにより用量依存的に抑制される。
【００６５】
図４Ｃは、示した濃度でＤＭＦ刺激を６時間および２４時間した後のＮＱＯ１発現の定量ＰＣＲ分析を示す。示すように、ＤＭＦは濃度依存的にＮＱＯ１発現を誘導する。６時間の暴露による誘導と比較して、２４時間のＤＭＦへの暴露によってより高いレベルでＮＱＯ１が誘導されることはデータからも明らかである。
【００６６】
最後に、図４Ｄは、アストロサイトをＢＧＯＯＯ１２（ＤＭＦ）または媒体（ＤＭＳＯ）で処理した２４時間後のＭＴＴアッセイの結果を示す。このデータは、アストロサイトの生存率が、ＢＧＯＯＯ１２処理により損なわれないことを示す。
【００６７】
実施例４
図５は、ＢＧＯＯＯ１２が、初代アストロサイトのＬＰＳ刺激によって誘導される炎症性サイトカインおよび炎症誘発性シグナル伝達を阻害することを示す。示すように、初代アストロサイトを０、１０、および１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで処理し、また、示すように、０、３、１０、または３０μＭのＤＭＦで処理した。各条件下の各遺伝子の発現の大きさを０〜１のスケールで示し、色の違いは、条件が変わると各遺伝子の発現が変化することを示す。最も濃い緑色は、検出できない発現（０）を示し、もっとも鮮やかな赤色はその遺伝子について測定された最も高い発現（１）を示す。一般的に言えば、このデータは、これらの遺伝子の発現がＬＰＳ処理によって増加し、全てのマーカーは１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ処理によって誘導されることを示す。これらのマーカーの多くの誘導された発現は、ＤＭＦ処理によって抑制された。特に、Ｃｃｌ２０、Ｃｃｌ３、Ｃｃｌ４、Ｃｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１０、Ｃｘｃｌ２、Ｃｘｃｌ３、Ｃｘｃｌ６、ＩＬ１ａ、ＩＩ１ｂ、Ｔｎｆ、Ｉｆｉｔ３、およびＺｃ３ｈｌ２ａの誘導が強く抑制された。
【００６８】
実施例５
この実施例は、ＤＭＦ（ＢＧ０００１２）が、ラットにおいて、慢性再発ＥＡＥ（ｃｒＥＡＥ）と関連するアストログリオーシスおよびミクログリアの活性化を阻害することができることを示すデータを提供する。
【００６９】
ｃｒＥＡＥは、ブラウンノルウェーラットにおけるＭＯＧ／ＩＦＡの皮内免疫によって誘発された。免疫後最初の３日に、１日間隔でＢＧ０００１２を経口投与した。ＢＧ０００１２は、全ての処理群において疾患の平均臨床スコアを下げた。媒体処理群の２．２９（ｎ＝６、ＳＤ＝１．２９）と比較して、１００ｍｇ／ｋｇの処理群については、２８日目の平均疾患スコアが０．７１（ｎ＝６、ＳＤ＝１．１７）であった。腰髄切片の免疫組織化学は、活性化アストロサイトのマーカーであるＧＦＡＰ、および活性化ミクログリアのマーカーであるＩＢＡ−１の染色が減少したことを示した。
【００７０】
脊髄のｍＲＮＡの定量ＰＣＲは、媒体処理群と比較して、ＢＧ０００１２処理群において、ＩＢＡ−１およびＧＦＡＰのｍＲＮＡが、それぞれ、５２％および５４％減少したことを示した。
【００７１】
ラットの初代アストロサイト細胞およびＲＡＷ２６４．７マクロファージ細胞を用いて、特定のアストロサイト細胞およびミクログリア細胞に対するＢＧ０００１２の直接的効果をインビトロで試験した。ＢＧ０００１２の存在下でＬＰＳ刺激を行うと、アストロサイトおよびマクロファージのＴＮＦ−ａのｍＲＮＡが、それぞれ、７７％および５９％結果的に減少した。ＬＰＳ刺激細胞の網羅的な遺伝子発現プロファイリングは、ＢＧ０００１２が両方の細胞型において、多くの炎症誘発性遺伝子産物を阻害することができることを示した。
【００７２】
これらの研究結果は、反応性グリオーシスの抑制およびマクロファージ機能の阻害が、ＢＧ０００１２の抗炎症およびＣＮＳ神経保護の２重の作用機序の一部としてのＢＧ０００１２の治療効果に寄与し得ることを示す。
【００７３】
本明細書に報告するデータは、ＢＧ０００１２が再発するラットＥＡＥの疾患を阻害することを示す。組織学的分析は、ＢＧ０００１２で処理した脊髄において、アストロサイト活性化マーカーのレベルが減少することを示した。インビトロデータは、ＢＧ０００１２がアストロサイトの活性化を直接阻害することができることを示唆する。最後に、ＬＰＳで刺激した初代アストロサイトにおいて、炎症誘発性遺伝子の発現は、ＢＧ０００１２処理後に減少する。これらの研究結果は、反応性グリオーシスの抑制ならびに抗炎症およびＣＮＳ神経保護の２重の作用機序におけるＢＧ０００１２の役割を指摘する。
【００７４】
実施例６
この実施例は、培養したアストロサイトに対するＭＭＦの効果を解析する。具体的には、これらの結果は、ＭＭＦ処理が細胞の還元電位を上方制御し、Ｈ２Ｏ２に誘発されるＣａ＋＋動員を減少させ、Ｈ２Ｏ２に誘発される細胞死を減少させることを示す。
【００７５】
ヒト脊髄アストロサイトの初代培養物を、ＭＭＦまたは（希釈剤対照としての）ＤＭＳＯの滴定で２４時間処理した。化合物と２４時間インキュベーションした後、細胞を増殖培地で１回洗浄し、細胞浸透性基質であるモノクロロビマンとインキュベートした。グルタチオンと結合すると、この基質は蛍光を増加する。ＭＭＦで処理した際、細胞グルタチオンレベルの明瞭な濃度依存的増加が観察された。図６Ａ。同様なＭＭＦ処理細胞も細胞浸透性基質であるリザズリンとインキュベートした。これは、細胞の酸化還元機構によるレゾルフィンへの還元の際、蛍光を増加させ、細胞の代謝活性の１つの指標（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅアッセイ）として用いられる。このアッセイは、処理細胞のこの基質を還元する能力において、明瞭なＭＭＦ濃度依存的増加があるという点で、（図６Ａと）同様の結果を示す。図６Ｂ。グルタチオンおよび代謝活性の増加が、単にＭＭＦ処理に反応する細胞増殖によるものではないことを確実とするために、並行して、細胞皿をカルセインＡＭとインキュベートした。細胞エステラーゼがこの分子を切断し、蛍光代謝産物を生成し、それが細胞の生存率および関連する全細胞数の測定手段をもたらす。いかなる大幅な濃度依存的変化も観察されなかった。図６Ｃ。これらのデータを総合すると、ＭＭＦ処理は、ヒト脊髄の培養アストロサイトにおける抗酸化反応を上方制御し、酸化的攻撃の際、神経保護の利点を提供し得る。
【００７６】
別の実験において、ヒト脊髄アストロサイトの初代培養物をＭＭＦまたは（希釈剤対照としての）ＤＭＳＯの滴定で２４時間処理した。化合物と２４時間インキュベーションした後、細胞をＨＢＳＳで１回洗浄し、カルシウム４（モレキュラーデバイス社）ローディング色素とインキュベートした。この色素は細胞に浸透し、細胞内の遊離Ｃａ＋＋と結合すると、蛍光を増加させる。その後、細胞を５０ｍＭのＨ２Ｏ２で処理し、蛍光変化を観察した。図７Ａは、ＭＭＦが用量依存的に細胞内Ｃａ＋＋の動員を減少させたことを示す細胞の蛍光トレースの生データを示す。図７Ｂはベースラインを超える蛍光強度の変化（ＤＲＦＵ）の定量化を示し、３０ｍＭのＭＭＦがＣａ＋＋の蓄積を（Ｈ２Ｏ２を含まない対照と比較して）バックグランドレベルまで減少させ、Ｈ２Ｏ２処理に対する保護が用量依存的であることを示す。このデータを非線形回帰にあてはめると、ＥＣ５０＝５．４ｍＭであることが明らかになる。図７Ｃ。これらのデータは、ＭＭＦが細胞内Ｃａ＋＋の放出を抑制することができ、これが、下流のアポトーシスカスケードの開始を防ぐことにより、神経保護の利点を提供し得ることを示唆する。
【００７７】
別の実験において、ヒト脊髄アストロサイトの初代培養物をＭＭＦまたは（希釈剤対照としての）ＤＭＳＯの滴定で２４時間処理した。化合物と２４時間インキュベーションした後、細胞をＨＢＳＳで１回洗浄し、５００ｍＭのＨ２Ｏ２で２時間処理し、その後、通常の増殖培地で洗浄し、２４時間さらにインキュベートした。図８Ａは、細胞生存率を観察するために図６と同じカルセインＡＭ技法を用いた結果を示し、一過的に５００ｍＭのＨ２Ｏ２で処理した後、２４時間の回復期を設けた場合に、顕著な減少が観察された。この生存率の減少は、濃度依存的にＭＭＦによって弱められる。図８Ｂは、基質レザズリンの細胞依存的還元による測定と同様の効果が、細胞代謝において観察されたことを示す。図８Ｃは、細胞のＡＴＰレベルを調べることによって、いくらかより中程度のＭＭＦ依存的保護効果が観察されたが、明瞭な濃度依存的反応が観察されたことを示す。興味深いことに、最も高い濃度のＭＭＦが細胞のＡＴＰレベルを減少させるように思われる。総合すると、これらのデータは、ＭＭＦが、ヒト脊髄アストロサイトにおいて、酸化ストレスに対する神経保護である反応を引き起こすことを示唆する。
【００７８】
実施例７
上記に示したように処理したアストロサイト培養物から全ての細胞溶解物を調製した。ウエスタンブロットによりＮｒｆ２を検出した。ハウスキーピングタンパク質の対照として、ＧＡＰＤＨを含めた。図９に示した結果は、ＤＭＦおよびＭＭＦが、ラットおよびヒトの初代アストロサイトにおいてＮｒｆ２のレベルを増加させることを示す。
【００７９】
実施例８
ＤＭＦで処理したアストロサイトにおける遺伝子発現の網羅的解析を、アフィメトリクス社のＧｅｎｅＣｈｉｐ技術を用いて行った。未処理のアストロサイトと比較して、ＤＭＦ処理細胞において、転写物のレベルが有意（ｐ＜１０-７）に増加したものを、ＤＭＦにより影響を受ける遺伝子として特定した。得られた遺伝子リストをＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  ＩＰＡデータベースを用いて注釈を付けた。図１０に示すように、ＤＭＦは、グルタチオン代謝を調節すると知られる遺伝子を含む、Ｎｒｆ２標的遺伝子の発現を活性化する。図１１に示すように、ＤＭＦによる網羅的な遺伝子発現の調節は、神経系の発達、機能、および疾患と関連するアストロサイトの機能に対する効果を示す。本アッセイで特定された、細胞保護作用およびグルタチオン代謝に関わる特異的遺伝子には、Ｇｓｔａ２、Ｇｓｔａ３、Ｇｃｌｃ、Ｇｇｔ１、Ｔｘｎｒｄ１、Ｓｒｘｎ１、Ｓｑｓｔｍ１、およびＮｑｏ１が含まれるが、これらに限定されない。
【００８０】
実施例９
図１２に示すように、ＤＭＦ処理は、ラットの脊髄において、ＥＡＥの間のミエリン喪失を減らす。ＥＡＥの脊髄の形態計測分析を、アペリオ社のソフトウェアを用いて行った。組織学的変化を、アペリオ社のＩｍａｇｅ  Ｓｃｏｐｅソフトウェアｖ１０．１を用いて定量化した。カラーデコンボリューションアルゴリズムを用いて、茶色のＤＡＢ染色（ＧＦＡＰおよびＩＢＡ−１免疫染色）または明るいターコイズブルー染色（ルクソール・ファストブルー）のいずれか一方についての強度閾値を選択した。各強度閾値に対する強く陽性染色されたピクセルの割合によって、陽性染色を特定した。１匹のラットあたり３つの腰髄切片を定量化し、強い陽性ピクセルの割合の値を平均して最終強度値を得た。
【図１Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図５】
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【図１Ａ】
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【図２】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【外国語明細書】
2015044855000001.pdf