(57)【要約】【課題】単位色素あたりの光音響信号が大きい粒子を提供する。【解決手段】本発明の粒子は、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素と、マトリックス材料として、油、脂肪酸または脂肪酸エステルと、界面活性剤とを有する粒子であって、マトリックス材料の重量割合が５０％以上であること特徴とする。【選択図】図１
2015044789.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素と、マトリックス材料として、油、脂肪酸または脂肪酸エステルと、界面活性剤とを有する粒子であって、前記粒子の重量のうち前記マトリックス材料の重量割合が５０％以上であることを特徴とする粒子。
【請求項２】
前記疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素が化学式（１）または（２）で表されることを特徴とする請求項１に記載の粒子。
【化１】
2015044789.tif 000010
（式中、Ｒ２０１乃至Ｒ２２４は各々が同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表し、
Ｒ１０１、Ｒ１０２は、各々が同一でも異なっていてもよく、−ＯＨ、−ＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１２、−ＯＳｉ（−Ｒ１３）（−Ｒ１４）（−Ｒ１５）、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表し、
ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は各々が同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。）
【化２】
2015044789.tif 000011
（式中、Ｒ３０１乃至Ｒ３１６は各々が同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表し、
Ｍは、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｃｏ、及びＳｉのいずれかの元素を示し、
Ｒ４０１、Ｒ４０２はＭの元素により存在しなくてもよく、または、以下に示す構造を表し、Ｒ４０１、Ｒ４０２は、各々が同一でも異なっていてもよく、−ＯＨ、−ＯＲ５０１、−ＯＣＯＲ５０２、−ＯＳｉ（−Ｒ５０３）（−Ｒ５０４）（−Ｒ５０５）、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表し、
Ｒ５０１、Ｒ５０２、Ｒ５０３、Ｒ５０４、Ｒ５０５は各々が同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。）
【請求項３】
前記疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素が、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｂｉｓ（ｔｒｉｈｅｘｙｌｓｉｌｙｌｏｘｉｄｅ）またはＺｉｎｃ  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅであることを特徴とする請求項１または２に記載の粒子。
【請求項４】
前記マトリックス材料がオレイン酸、またはキャノーラ油、オレイン酸コレステロールであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項５】
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項６】
前記界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステルであることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項７】
前記界面活性剤がＴｗｅｅｎ  ２０またはＴｗｅｅｎ  ８０であることを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の粒子。
【請求項８】
疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素と、水よりも熱膨張率が高い分子と、界面活性剤とを有する粒子であって、前記粒子の重量のうち前記マトリックス材料の重量割合が５０％以上であることを特徴とする粒子。
【請求項９】
疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素と、水よりも比熱容量が低い分子と、界面活性剤とを有する粒子であって、前記粒子の重量のうち前記マトリックス材料の重量割合が５０％以上であることを特徴とする粒子。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の粒子と分散媒とを含む光音響イメージング用の造影剤。
【請求項１１】
添加剤をさらに有することを特徴とする請求項１０に記載の光音響イメージング用の造影剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素と、油、脂肪酸または脂肪酸エステルと、界面活性剤を有する粒子を用いた光音響イメージング用造影剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、非侵襲的に診断ができるイメージング方法として、光音響イメージング法が注目されている。光音響イメージング法は、光を照射された測定対象の分子が放出する熱が起こす体積膨張により生じる音響波の強度と音響波の発生位置を検出することで、測定対象の画像を得る方法である。光音響イメージング法において、測定対象部位からの蛍光の大きさや音響波の強度を大きくするための造影剤として色素を用いることができる。
【０００３】
ここで、非特許文献１には、色素としてシリコンナフタロシアニン誘導体（以下、ＳｉＮｃと略すことがある）をキャノーラ油に溶解し、界面活性剤と混合することで、色素を可溶化した例が開示されている。光線力学療法への応用を指向し、動物実験を行っている。
【０００４】
一方、特許文献１には、色素としてフタロシアニン色素を用いて、抗酸化ビタミン等のマトリックス材料を含む粒子を作製し、光化学療法に用いた例が開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】：Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９５，  Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．１２
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−２４６０１３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、非特許文献１に開示されたＳｉＮｃを含む可溶化物は、色素を動物に投与可能な形態に可溶化させたのみであり、光音響イメージング法に用いる場合に、単位色素あたりの光音響信号が小さいという問題がある。また、粒径を制御しておらず、光音響イメージング法に用いる場合には不適当である。
【０００８】
また、特許文献１に開示されたフタロシアニン色素を含有する粒子は、光化学療法への利用の観点からマトリックス材料を選択しており、光音響イメージング法に用いる場合に、単位色素あたりの光音響信号が小さいという問題がある。
【０００９】
そこで本発明は、光音響信号を増幅可能なマトリックス材料を選択することにより、単位色素あたりの光音響信号が大きい粒子を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素と、マトリックス材料として、油、脂肪酸または脂肪酸エステルと、界面活性剤を有する粒子であって、マトリックス材料の重量割合が５０％以上であることを特徴とする粒子に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、光音響信号を増幅可能なマトリックス材料を備えることにより、光音響用の造影剤として用いたときに単位色素あたりの光音響信号が大きい粒子を提供することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の実施形態１に係る粒子について説明するための図である。
【図２】本発明の実施例Ａ１、Ａ２、比較例Ｂ１の結果について説明するための図である。
【図３】本発明の実施例Ｃ１、比較例Ｄ１の結果について説明するための図である。
【図４】本発明の実施例Ｅ１、Ｅ２、比較例Ｆ１、Ｆ２の結果について説明するための図である。
【図５】本発明の実施例Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、及び比較例Ｈ１の結果を示すグラフである。
【図６】本発明の実施例Ｊ１、Ｊ２、Ｊ３、及び比較例Ｋ１の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。  
【００１４】
（実施形態の構成）
本実施形態に係る粒子は、図１に示すように、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素１０１、マトリックス材料１０２、粒子表面には界面活性剤１０３を有する粒子である。また、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素が、別途示す化学式（１）または（２）で示される。そして、本実施形態に係る粒子の重量のうち、マトリックス材料の重量割合が５０％以上であることを特徴とする。本実施形態に係る疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素は、疎水性が高い構造を有し、また、親水性の官能基を有していないことから、血清などの水溶液中においても、粒子外に漏出しにくい。
【００１５】
粒子がマトリックス材料を有することによって、光音響信号の強度が大きくなる理由について説明する。
【００１６】
まず、光音響信号の強度は熱膨張率と比例関係にあり、比熱容量と反比例の関係にあることが知られている。また、一般的に水よりも油、脂肪酸または脂肪酸エステルといったマトリックス材料の方が、熱膨張率が高く、比熱容量が低い。そのため、粒子中にマトリックス材料が存在し、色素周囲にマトリックス材料が存在する状態は、マトリックス材料が存在せず、色素周囲に水が存在する状態に比べて光音響信号の強度が大きくなる。なお、水の熱膨張率は０．２［１０−３／℃］であり、水の比熱容量は４１８２［Ｊ／ｋｇ℃］である。
【００１７】
（疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素）
本発明において色素とは、６００ｎｍ乃至１３００ｎｍの範囲に含まれる波長の光を吸収することのできる化合物と定義する。また、本実施形態において疎水性の色素とは、実施例で後述する薄層液体クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと略すことがある）法によって算出したＲｆ値が０以上、０．５０以下である色素と定義する。
【００１８】
本実施形態において疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素の構造は、下記の化学式（１）または（２）で示される。
【００１９】
【化１】
2015044789.tif 000003
（式中、Ｒ２０１乃至Ｒ２２４は各々が同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。
また、Ｒ１０１、Ｒ１０２は各々が同一でも異なっていてもよく、−ＯＨ、−ＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１２、−ＯＳｉ（−Ｒ１３）（−Ｒ１４）（−Ｒ１５）、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。
ここで、Ｒ１１乃至Ｒ１５は各々が同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。）
【００２０】
【化２】
2015044789.tif 000004
（式中、Ｒ３０１乃至Ｒ３１６は各々が同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。
式中、Ｍは、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｃｏ、Ｓｉのうちいずれかの元素を示す。
Ｒ４０１、Ｒ４０２はＭの元素により存在しなくてもよく、または、以下に示す構造を表す。Ｒ４０１、Ｒ４０２は、各々が同一でも異なっていてもよく、−ＯＨ、−ＯＲ５０１、−ＯＣＯＲ５０２、−ＯＳｉ（−Ｒ５０３）（−Ｒ５０４）（−Ｒ５０５）、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基または、炭素数１〜１８のアルキル基若しくは芳香族基であってハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。
ここで、Ｒ５０１乃至Ｒ５０５は各々が同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、アセトキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、及び炭素数１〜１８のアルキル基から選択される一若しくは複数の官能基で置換されているか若しくは未置換のものを表す。）
【００２１】
本実施形態に係る疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素は、共役二重結合を有するため、特定の波長の光を吸収することができ、光音響イメージングに用いることが可能である。
【００２２】
また、本実施形態に係る疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素は、６００ｎｍ乃至１３００ｎｍの範囲から選択される少なくとも１つの波長におけるモル吸光係数が１０６Ｍ−１ｃｍ−１以上であることが好ましい。
【００２３】
前記疎水性金属ナフタロシアニン色素としては、例えば、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｂｉｓ（ｔｒｉｈｅｘｙｌｓｉｌｙｌｏｘｉｄｅ）、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｄｉｏｃｔｙｌｏｘｉｄｅ、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ、Ｂｉｓ（ｄｉ−ｉｓｏｂｕｔｙｌ  ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌｏｘｙ）  ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅを挙げることが出来る。
【００２４】
前記疎水性金属フタロシアニン色素としては、例えば、Ｚｉｎｃ  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ、Ｃｏｐｐｅｒ（ＩＩ）  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ、Ｃｏｂａｌｔ  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ、Ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｓｉｌｉｃｏｎ−［ｂｉｓ  ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘｙ］−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅを挙げることが出来る。
【００２５】
（界面活性剤）
本実施形態に係る粒子は、界面活性剤を有している。本実施形態における界面活性剤としては、特に限定されることはなく、粒子を形成することができればいかなるものでもよい。例えば非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、高分子界面活性剤又はリン脂質等を使用することができる。これらの界面活性剤は、１種類のみを用いてもよいし、２種類以上を用いてもよい。
【００２６】
前記非イオン性界面活性剤としては、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０及びＴｗｅｅｎ（登録商標）８５等のポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、Ｂｒｉｊ（登録商標）５８、Ｂｒｉｊ（登録商標）７６、Ｂｒｉｊ（登録商標）９８、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−３０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｎ−１０１、Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ−４０、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＯ５３０、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＯ６３０、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＯ７２０並びにＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＯ７３０等を挙げることができる。
【００２７】
また、前記アニオン性界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホネート、デシルベンゼンスルホネート、ウンデシルベンゼンスルホネート、トリデシルベンゼンスルホネート、ノニルベンゼンスルホネート並びにこれらのナトリウム、カリウム及びアンモニウム塩等を挙げることができる。
【００２８】
また、前記カチオン性界面活性剤としては、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、塩化ヘキサデシルピリジニウム、塩化ドデシルトリメチルアンモニウム及び塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム等を挙げることができる。
【００２９】
また、前記高分子界面活性剤としては、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール等を挙げることができる。ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールの市販品としては、プルロニックＦ６８（ＢＡＳＦ社製）、プルロニックＦ１２７（ＢＡＳＦ社製）等を挙げることができる。
【００３０】
前記リン脂質としては、アミノ基、ＮＨＳ基、マレイミド又はメトキシ基のいずれかの官能基とＰＥＧ鎖を有するホスファチジル系リン脂質、リン酸ジエステル結合を有するリン脂質を挙げることができる。
【００３１】
ホスファチジル系リン脂質としては、３−（Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌｏｘｙｇｌｕｔａｒｙｌ）  ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ，  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ−ｃａｒｂａｍｙｌ  ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、Ｎ−（３−ｍａｌｅｉｍｉｄｅ−１−ｏｘｏｐｒｏｐｙｌ）  ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ−ｃａｒｂａｍｙｌ  ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＭＡＬ）、Ｎ−（ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）−ｃａｒｂａｍｙｌ  ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ−ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＮＨ２）、Ｎ−（Ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ２０００）−１，２−ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ，  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＤＳＰＥ−０２０ＣＮ）、Ｎ−（Ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ５０００）−１，２−ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ，  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＤＳＰＥ−０５０ＣＮ）等を挙げることができる。
【００３２】
リン酸ジエステル結合を有する脂質としては、１，２−Ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＳＰＥ）、１，２−Ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＰＰＥ）、１，２−Ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＭＰＥ）、１，２−Ｄｉｌａｕｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＬＰＥ）、１，２−Ｄｉｏｌｅｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＯＰＥ）、１，２−Ｄｉｌｉｎｏｌｅｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＬｏＰＥ）、１，２−Ｄｉｅｒｕｃｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＤＥＰＥ）、１，２−Ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｌ−ｓｅｒｉｎｅ（ＤＳＰＳ）、１，２−Ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｌ−ｓｅｒｉｎｅ（ＤＰＰＳ）、１，２−Ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｌ−ｓｅｒｉｎｅ（ＤＭＰＳ）、１，２−Ｄｉｏｌｅｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｌ−ｓｅｒｉｎｅ（ＤＯＰＳ）、１，２−Ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＳＰＣ）、１，２−Ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＰＰＣ）、１，２−Ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＭＰＣ）、１，２−Ｄｉｌａｕｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＬＰＣ）、１，２−Ｄｉｏｌｅｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＯＰＣ）、１，２−Ｄｉｌｉｎｏｌｅｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＬｏＰＣ）などを挙げることができる。
【００３３】
（マトリックス材料）
上記のマトリックス材料とは、上記疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素を内包できるものであればどのようなものでもよいが、光音響信号の増幅効果を考えると、熱膨張率が大きく、比熱容量が小さい材料を用いることが好ましい。
【００３４】
本実施形態におけるマトリックス材料の例としては、油、脂肪酸、脂肪酸エステルなどを挙げることが出来る。
【００３５】
油としては、サラダ油、オリーブオイル、サフラワー油、キャノーラ油、ごま油、コーン油、しそ油、大豆油、ベニバナ油、菜種油、パーム油、綿実油、えごま油、落花生油、香味油、ひまわり油、やし油、米油（米糠油）、とうもろこし油などが挙げられる。
【００３６】
また、脂肪酸としては、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸またはリノレン酸が挙げられる。
【００３７】
また、脂肪酸エステルとしては、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸もしくはリノレン酸構造を有するトリグリセリド、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸もしくはリノレン酸構造を有するアルキルエステル、または、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸もしくはリノレン酸とのエステル結合を有するコレステロールなどが挙げられる。
【００３８】
マトリックスを多く含む場合、血清などの水溶液中においても、色素が粒子外に漏出しにくいことから、マトリックス材料の粒子全体に対する重量割合は５０％以上であることが好ましい。
【００３９】
（粒子の製造方法）  
本発明の粒子の製造方法としては、公知の方法を利用することが出来る。例えば、Ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ法、Ｎａｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ法等を挙げることが出来る。
【００４０】
本製造方法で用いる溶媒としては、ヘキサン、シクロへキサン、ヘプタン等の炭化水素類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒類、及びピリジン誘導体を挙げることが出来る。これらの溶媒は、単独で使用してもよく、任意に混合して使用してもよい。
【００４１】
Ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ法においては、従来公知の乳化手法によってエマルションを調製することが可能である。従来公知の方法とは、例えば、断続振とう法、プロペラ型攪拌機、タービン型攪拌機等のミキサーを利用する攪拌法、コロイドミル法、ホモジナイザー法、超音波照射法等がある。これらの方法は、単独で用いることも、あるいは複数を組み合わせて用いることも可能である。また、エマルションは１段階の乳化によって調製しても良いし、多段階の乳化によって調製しても良い。但し、乳化手法は、本発明の目的を達成できる範囲において上記手法に限定されない。
【００４２】
Ｎａｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ法においては、従来公知の、界面活性剤分散水溶液に有機溶媒分散液を混合し撹拌する方法、あるいは、有機溶媒分散液に界面活性剤分散水溶液を混合し撹拌する方法によって粒子を調製することが可能である。
【００４３】
また、本製造方法においては、上記疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素が可溶なマトリックス材料を用いた場合は、色素溶解マトリックス材料溶液と界面活性剤を混合することが可能である。その際、従来公知の、色素溶解マトリックス材料溶液と界面活性剤の混合溶液に、分散媒を混合し撹拌する方法、または、分散媒に、色素溶解マトリックス材料溶液と界面活性剤の混合溶液を混合し撹拌する方法によって粒子を調製することが可能である。
【００４４】
（疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素を含む材料を溶解させた有機溶媒分散液）
Ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ法における、使用する界面活性剤分散水溶液と有機溶媒分散液の重量比としては、水中油（Ｏ／Ｗ）型のエマルションを形成することができれば特に限定はない。好ましくは、有機溶媒分散液と水溶液の重量比が、１：２〜１：１０００となる範囲である。
【００４５】
Ｎａｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ法における、使用する界面活性剤分散水溶液と有機溶媒分散液の重量比としては、粒子を回収することが出来れば特に限定はない。好ましくは、有機溶媒分散液と水溶液の重量比が、１：１〜１：１０００となる範囲である。
【００４６】
（疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素を含む材料を溶解させた有機溶媒分散液中の材料濃度）
有機溶媒分散液中における疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素の濃度はこれらが溶解する範囲であれば特に限定されない。好ましい濃度として、０．０００５〜３００ｍｇ／ｍＬとすることができる。
【００４７】
有機溶媒分散液中におけるマトリックス材料の濃度は、これらが溶解する範囲であれば特に限定されない。好ましい濃度として、０．３〜１００ｍｇ／ｍＬとすることができる。また、有機溶媒分散液中における疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素とマトリックス材料の重量比は、好ましくは、１００：１〜１：１０００の範囲である。
【００４８】
（粒子分散液中からの有機溶媒留去）
留去は、従来知られる何れの方法でも実施可能であるが、加熱によって除去する方法、あるいはエバポレーター等の減圧装置を利用した方法を挙げることができる。
【００４９】
Ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ法において、加熱による除去の場合の加熱温度は、Ｏ／Ｗ型のエマルションを維持できれば特に限定されないが、好ましい温度は０℃から８０℃の範囲である。
【００５０】
Ｎａｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ法において、加熱による除去の場合の加熱温度は、粒子の収率が低下する高次凝集が防げれば特に限定されないが、好ましい温度は０℃から８０℃の範囲である。
【００５１】
但し、留去は、本発明の目的を達成できる範囲において上記手法に限定されない。
【００５２】
（粒子分散液の精製）
作製した粒子分散液の精製は、従来知られる何れの方法でも実施可能である。例えば、サイズ排除カラムクロマトグラフィー法、限外濾過法、透析法、遠心分離法を挙げることが出来る。但し、精製方法は、本発明の目的を達成できる範囲において上記手法に限定されない。
【００５３】
（粒子）
本実施形態に係る粒子は、上記の疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素を有した粒子であればどのような形状でもよく、真球状、楕円状、平面状、一次元のひも状などのいずれでもよい。本実施形態に係る粒子のサイズ（粒径）は特に制限されないが、１ｎｍ以上２００ｎｍ以下であることが好ましい。
【００５４】
（造影剤）
本実施形態に係る造影剤は、上記の本実施形態に係る粒子と、分散媒を有する。上記の分散媒は、液状の物質であり、例えば生理食塩水、注射用蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ、以下ＰＢＳと略すことがある）などが挙げられる。また本実施形態に係る造影剤は、必要に応じて薬理上許容できる添加物を有していても良い。
【００５５】
本実施形態に係る造影剤は、上記粒子を分散媒に予め分散させておいてもよいし、本実施形態に係る粒子と分散媒とをキットにしておき、生体内に投与する前に粒子を分散媒に分散させて使用してもよい。
【００５６】
本実施形態に係る粒子は、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素が漏出しにくいため、粒子内に疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素が多く含まれる。含まれる色素が多いほど光吸収量が増加するため、本実施形態に係る粒子は、後述するように、光音響イメージング用途として好適である。
【００５７】
（添加剤）
本実施形態に係る造影剤は、凍結乾燥時に使用する添加剤を含んでいてもよい。添加剤の一例としてグルコース、ラクトース、マンニトール、ポリエチレングリコール、グリシン、塩化ナトリウム、リン酸水素ナトリウムが挙げられる。添加剤は１種類のみを用いても、複数種類を併用してもよい。
【００５８】
（光音響イメージング法）
本実施形態に係る造影剤は、光音響イメージング法に用いることができる。なお、本明細書において、光音響イメージングは、光音響トモグラフィー（断層撮影法）を含む概念である。本実施形態に係る造影剤を用いた光音響イメージング法は、本実施形態に係る造影剤を検体もしくは前記検体から得られる試料に投与する工程と、前記検体もしくは前記検体から得られる試料にパルス光を照射する工程と、前記検体内もしくは前記検体から得られる試料内に存在する前記粒子由来物質の光音響信号を測定する工程と、を少なくとも有することを特徴とする。
【００５９】
本実施形態に係る造影剤を用いた光音響イメージング法の一例は以下の通りである。すなわち、本実施形態に係る造影剤を検体に投与し、あるいは前記検体より得られた臓器等の試料に添加する。なお、前記検体とは、ヒト、実験動物やペット等、その他、特に限定されることなく、あらゆる生物を指し、前記検体中もしくは検体より得られた試料としては、臓器、組織、組織切片、細胞、細胞溶解物などを挙げることができる。前記粒子の投与あるいは添加後、前記検体等に対し近赤外波長域のレーザーパルス光を照射する。
【００６０】
本実施形態に係る光音響イメージング法において、照射される光の波長は使用するレーザー光源により選択することが可能である。本実施形態に係る光音響イメージング法においては、効率良く音響信号を取得するために、生体内における光の吸収、拡散の影響が少ない「生体の窓」と呼ばれる６００ｎｍ乃至１３００ｎｍの、近赤外光領域の波長の光を照射することが好ましい。
【００６１】
本実施形態に係る造影剤からの光音響信号（音響波）を、音響波検出器、例えば圧電トランスデューサで検出し、電気信号に変換する。この音響波検出器より得られた電気信号に基づき、前記検体等の内の吸収体の位置や大きさ、あるいはモル吸光係数などの光学特性値分布を計算することができる。例えば、造影剤が基準とする閾値以上で検出されれば、その検体に前記粒子由来物質が存在すると推定され、又は、前記検体より得られた試料に前記粒子由来の物質が存在すると推定することができる。
【００６２】
本発明では、色素の漏出を抑制することで、色素の集積による消光を起こさせ、照射されたパルス光のエネルギーが蛍光発光に用いられることを防ぎ、より多くの熱エネルギーに変換することができる。そのため、より効率的に音響信号を取得することが可能となる。また、マトリックス材料の熱膨張効果により、単位色素当たりの信号強度が大きい粒子を提供することが出来る。
【実施例】
【００６３】
以下に、本発明の特徴をさらに明らかにするために実施例に沿って本発明を説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではなく、材料、組成条件、反応条件等は、同様な機能、効果を有する造影剤が得られる範囲で自由に変えることが出来る。
【００６４】
（分析方法）
粒径測定は、動的光散乱解析装置（大塚電子製、ＥＬＳＺ−２）を用いて行った。
光源として半導体レーザーを用いて測定を行い、キュムラント径の値を粒径として採用した。
サンプル中の界面活性剤濃度は、ＮＭＲ測定（Ｂｒｕｋｅｒ社製、ＡＶＡＮＣＥ  ５００；共鳴周波数：５００ＭＨｚ；測定核種：  １Ｈ；測定温度：室温；溶媒：重クロロホルム）により算出した。
また、サンプル中の疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素濃度は、吸光度測定（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製、 Ｌａｍｂｄａ Ｂｉｏ ４０）により算出した。
サンプルを凍結乾燥した後、固体重量を算出し、界面活性剤重量、疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン重量濃度を減ずることで、マトリックス重量を算出した。
【００６５】
（光音響特性評価方法）
光音響信号の計測は、パルスレーザー光をサンプルに照射し、サンプルから光音響信号を圧電素子を用いて検出し、高速プリアンプで増幅後、デジタルオシロスコープで取得した。具体的な条件は以下の通りである。光源として、チタンサファイアレーザ（Ｌｏｔｉｓ製）を用いた。波長は７５０ｎｍ、７８０ｎｍ、エネルギー密度は１２ｍＪ／ｃｍ２、パルス幅は２０ナノ秒、パルス繰返しは１０Ｈｚの条件とした。超音波トランスデューサとしては、型式Ｖ３０３（Ｐａｎａｍｅｔｒｉｃｓ−ＮＤＴ製）を用いた。中心帯域は１ＭＨｚ、エレメントサイズはφ０．５、測定距離は２５ｍｍ（Ｎｏｎ−ｆｏｃｕｓ）、アンプは＋３０ｄＢ（超音波プリアンプ Ｍｏｄｅｌ ５６８２  オリンパス製）の条件である。測定容器としては、ポリスチレン製キュベットで、光路長０.１ｃｍ、サンプル容量は約２００μＬであった。計測器は、ＤＰＯ４１０４（テクトロニクス製）を用いて、トリガー：光音響光をフォトダイオードで検出、Ｄａｔａ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ: １２８回（１２８パルス）平均の条件で測定を行った。
【００６６】
（疎水性金属ナフタロシアニン色素または疎水性金属フタロシアニン色素の疎水性度評価方法）
疎水性金属フタロシアニン色素の疎水性度を比較するために、薄層液体クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと略すことがある）法を用いて評価を行った。
展開用プレートとしてＴＬＣガラスプレート ＲＰ−１８（メルク社製）、展開溶媒としてリチウムクロライドを１重量パーセント含有したメタノール溶液を用いた。  
定法に従って、色素溶液を原線上にスポットし、相対移動距離（以下、Ｒｆ値と略すことがある）を以下の式に基づいて算出した。
Ｒｆ値＝原線から成分のスポット中心までの距離／原線から溶媒先端までの距離
【００６７】
（実施例Ａ１）
色素として、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｂｉｓ（ｔｒｉｈｅｘｙｌｓｉｌｙｌｏｘｉｄｅ）＜Ｒｆ値＝０＞（シグマアルドリッチ社製）１０ｍｇにオレイン酸（東京化成製）２．０ｍＬを添加した。
７０℃で１５分間加熱撹拌を行った後、孔径０．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、色素溶解マトリックス材料溶液を調製した。
界面活性剤として、Ｔｗｅｅｎ８０（日油製）６０ｍｇを添加し、１５分間撹拌した。撹拌しながら、超純水１３．０ｍＬを添加し、粒子分散液を作製した。
回収した粒子分散液を、孔径１．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、粒子（Ａ−１）を得た。
【００６８】
（実施例Ａ２）
Ｔｗｅｅｎ８０（日油製）の使用量を１２ｍｇに変更した以外は、実施例Ａ１と同様に作製し、粒子（Ａ−２）を得た。
【００６９】
（比較例Ｂ１）
キャノーラ油をオレイン酸に変更した以外は、非特許文献１に従って、色素可溶化溶液を作製し、粒子（Ｂ−１）を得た。
【００７０】
（実施例Ｃ１）
色素として、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｂｉｓ（ｔｒｉｈｅｘｙｌｓｉｌｙｌｏｘｉｄｅ）（シグマアルドリッチ社製）５．０ｍｇにキャノーラ油（シグマアルドリッチ社製）２．５ｍＬを添加した。
７０℃で１５分間加熱撹拌を行った後、孔径０．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、色素溶解マトリックス材料溶液を調製した。
色素溶解マトリックス材料溶液８８．０ｍｇに、界面活性剤としてＴｗｅｅｎ８０（日油製）７５ｍｇを添加し、１５分間撹拌した。撹拌しながら、超純水１３．０ｍＬを添加し、粒子分散液を作製した。
回収した粒子分散液を、孔径１．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、粒子（Ｃ−１）を得た。
【００７１】
（比較例Ｄ１）
非特許文献１に従って、色素可溶化溶液を作製し、粒子（Ｄ−１）を得た。
【００７２】
（実施例Ｅ１）
色素として、Ｚｉｎｃ  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ＜Ｒｆ値＝０．１０＞（シグマアルドリッチ社製）１０ｍｇにオレイン酸（東京化成製）２．０ｍＬを添加した。
７０℃で１５分間加熱撹拌を行った後、孔径０．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、色素溶解マトリックス材料溶液を調製した。
界面活性剤として、Ｔｗｅｅｎ２０（日油製）６０ｍｇを添加し、１５分間撹拌した。撹拌しながら、超純水１３．０ｍＬを添加し、粒子分散液を作製した。
回収した粒子分散液を、孔径１．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、粒子（Ｅ−１）を得た。
【００７３】
（実施例Ｅ２）
界面活性剤として、Ｔｗｅｅｎ８０を用いた以外は、実施例Ｅ１と同様に作製し、粒子（Ｅ−２）を得た。
【００７４】
（比較例Ｆ１）
色素として、Ｚｉｎｃ  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ（シグマアルドリッチ社製）８．８ｍｇをクロロホルム  １６．０ｍＬに溶解させた。
界面活性剤として、Ｔｗｅｅｎ２０（和光純薬工業（株）製）１８００ｍｇを、超純水２００ｍＬに添加し、界面活性剤分散水溶液を調製した。
界面活性剤分散水溶液を撹拌しながら、有機溶媒分散液を滴下して、エマルション準備液を調製した。
エマルション準備液を、超音波分散装置（トミー製、ＵＤ−２００）を用いて、強度目盛１０、１分３０秒間超音波照射をすることにより、エマルションを作製した。
エマルション中のクロロホルムを取り除くために、４０℃で４時間加熱撹拌を行い、粒子分散液を作製した。
回収した粒子分散液を、孔径０．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、粒子（Ｆ−１）を得た。
【００７５】
（比較例Ｆ２）
色素として、Ｚｉｎｃ  ２，９，１６，２３−ｔｅｔｒａ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−２９Ｈ，３１Ｈ−ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ（シグマアルドリッチ社製）  １１．５ｍｇをクロロホルム  ２０．９ｍＬに溶解させ、色素溶液を調製した。
この色素溶液のうち０．８ｍＬを、クロロホルム０．８ｍＬで希釈して、色素濃度を０．２８ｍｇ／ｍＬの溶液を作製し、次に用いた。
マトリックス材料として、ＰＬＧＡ（和光純薬工業（株）製）  ５ｍｇを添加した後、有機溶媒分散液を調製した。
界面活性剤として、Ｔｗｅｅｎ２０（和光純薬工業（株）製）１８０ｍｇを、超純水２０ｍＬに添加し、界面活性剤分散水溶液を調製した。
界面活性剤分散水溶液を撹拌しながら、有機溶媒分散液を滴下して、エマルション準備液を調製した。
エマルション準備液を、超音波分散装置（トミー製、ＵＤ−２００）を用いて、強度目盛４、１分３０秒間超音波照射をすることにより、エマルションを作製した。
エマルション中のクロロホルムを取り除くために、４０℃で２時間加熱撹拌を行い、粒子分散液を作製した。
得られた粒子分散液を、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。
回収した粒子を、超純水を用いて洗浄を行った。その後、４℃、２００００Ｇ、４５分間遠心分離することにより回収した。
回収した粒子分散液を、孔径０．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、粒子（Ｆ−２）を得た。
【００７６】
（実施例Ｇ１）
色素として、Ｓｉｌｉｃｏｎ  ２，３−ｎａｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  ｂｉｓ（ｔｒｉｈｅｘｙｌｓｉｌｙｌｏｘｉｄｅ）（シグマアルドリッチ社製）０．８８ｍｇ、をクロロホルム  １．６ｍＬに溶解させた。
マトリックス材料として、キャノーラ油（シグマアルドリッチ社製）１０．０ｍｇを添加し、有機溶媒分散液を調製した。
界面活性剤として、１，２−Ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＤＳＰＣ）（日油製）６．９ｍｇを有機溶媒分散液に添加した。
界面活性剤として、Ｔｗｅｅｎ８０（日油製）３．２ｍｇを、超純水２０ｍＬに添加し、界面活性剤分散水溶液を調製した。
界面活性剤分散水溶液を撹拌しながら、有機溶媒分散液を滴下して、エマルション準備液を調製した。
エマルション準備液を、超音波分散装置（トミー製、ＵＤ−２００）を用いて、強度目盛１０、１分３０秒間超音波照射をすることにより、エマルションを作製した。
エマルション中のクロロホルムを取り除くために、４０℃で４時間加熱撹拌を行い、粒子分散液を作製した。
回収した粒子分散液を、透析膜（スペクトラム・ラボラトリーズ製、分画分子量  ３００００００）、および溶媒として超純水を用いた透析による精製を行った。
孔径１．２０マイクロメートルのフィルターでろ過して、粒子（Ｇ−１）を得た。
【００７７】
（実施例Ｇ２）
超純水の添加量を２００ｍＬに変更し、その界面活性剤分散水溶液を２０ｍＬ使用するように変更した以外は、実施例Ｇ１と同様に作製し、粒子（Ｇ−２）を得た。
【００７８】
（実施例Ｇ３）
超純水の添加量を２０００ｍＬに変更し、その界面活性剤分散水溶液を２０ｍＬ使用するように変更した以外は、実施例Ｇ１と同様に作製し、粒子（Ｇ−３）を得た。
【００７９】
（比較例Ｈ１）
Ｔｗｅｅｎ８０（日油製）の使用量を３２．０ｍｇに変更した以外は、実施例Ｇ１と同様に作製し、粒子（Ｈ−１）を得た。
【００８０】
（実施例Ｊ１）
Ｔｗｅｅｎ８０（日油製）の使用量を３２．０ｍｇ、マトリックスとして、オレイン酸コレステロールを１０．０ｍｇ使用するように変更した以外は、実施例Ｇ１と同様に作製し、粒子（Ｊ−１）を得た。
【００８１】
（実施例Ｊ２）
Ｔｗｅｅｎ８０（日油製）の使用量を３．２ｍｇに変更した以外は、実施例Ｊ１と同様に作製し、粒子（Ｊ−２）を得た。
【００８２】
（実施例Ｊ３）
超純水の添加量を２００ｍＬに変更し、その界面活性剤分散水溶液を２０ｍＬ使用するように変更した以外は、実施例Ｊ１と同様に作製し、粒子（Ｊ−３）を得た。
【００８３】
（比較例Ｋ１）
マトリックスを使用しない以外は、実施例Ｊ１と同様に作製し、粒子（Ｋ−１）を得た。
【００８４】
図２に、上記で得られた粒子（Ａ−１）、（Ａ−２）、（Ｂ−１）における、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）の比を示す。
表１に、上記で得られた粒子（Ａ−１）、（Ａ−２）、（Ｂ−１）における、マトリックス材料の重量割合を示す。
【表１】
2015044789.tif 000005
【００８５】
本実施例で作製した粒子（Ａ−１）、（Ａ−２）は、比較例の粒子（Ｂ−１）に対して、マトリックス材料の重量割合が高く、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）が高かった。したがって、本実施例に係る粒子は光音響イメージング用の造影剤として好適である。
【００８６】
図３に、上記で得られた粒子（Ｃ−１）、（Ｄ−１）、における、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）の比を示す。
表２に、上記で得られた粒子（Ｃ−１）、（Ｄ−１）、における、マトリックス材料の重量割合を示す。
【表２】
2015044789.tif 000006
【００８７】
本実施例で作製した粒子（Ｃ−１）は、比較例の粒子（Ｄ−１）に対して、高いマトリックス材料の重量割合を示しており、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）が高かった。したがって、本実施例に係る粒子は光音響イメージング用の造影剤として好適である。
【００８８】
図４に、上記で得られた粒子（Ｅ−１）、（Ｅ−２）、（Ｆ−１）、（Ｆ−２）における、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７５０ｎｍ）の比を示す。
表３に、上記で得られた粒子（Ｅ−１）、（Ｅ−２）、（Ｆ−１）、（Ｆ−２）における、マトリックス材料の種類と重量割合を示す。
【表３】
2015044789.tif 000007
【００８９】
本実施例で作製した粒子（Ｅ−１）、（Ｅ−２）は、比較例の粒子（Ｆ−１）、（Ｆ−２）に対して、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７５０ｎｍ）が高かった。したがって、本実施例に係る粒子は光音響イメージング用の造影剤として好適である。
【００９０】
図５に、上記で得られた粒子（Ｇ−１）、（Ｇ−２）、（Ｇ−３）、（Ｈ−１）における、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）の比を示す。
表４に、上記で得られた粒子（Ｇ−１）、（Ｇ−２）、（Ｇ−３）、（Ｈ−１）における、マトリックス材料の重量割合を示す。
【表４】
2015044789.tif 000008
【００９１】
本実施例で作製した粒子（Ｇ−１）、（Ｇ−２）、（Ｇ−３）は、比較例の粒子（Ｈ−１）に対して、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）が高かった。したがって、本実施例に係る粒子は光音響イメージング用の造影剤として好適である。
【００９２】
図６に、上記で得られた粒子（Ｊ−１）、（Ｊ−２）、（Ｊ−３）、（Ｋ−１）における、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）の比を示す。
表５に、上記で得られた粒子（Ｊ−１）、（Ｊ−２）、（Ｊ−３）、（Ｋ−１）における、マトリックス材料の重量割合を示す。
【表５】
2015044789.tif 000009
【００９３】
本実施例で作製した粒子（Ｊ−１）、（Ｊ−２）、（Ｊ−３）は、比較例の粒子（Ｋ−１）に対して、単位色素当たりの光音響信号強度（波長７８０ｎｍ）が高かった。したがって、本実施例に係る粒子は光音響イメージング用の造影剤として好適である。
【００９４】
（腫瘍集積性確認）
腫瘍集積性の確認においては、雌の非近交系ＢＡＬＢ／ｃ  Ｓｌｃ−ｎｕ／ｎｕマウス（購入時６週齢）（日本エスエルシー株式会社）を用いた。マウスに担癌させる前の１週間、標準的な食餌、寝床を用い、自由に食餌および飲料水を摂取できる環境下でマウスを順応させた。ｃｏｌｏｎ２６（マウス大腸癌細胞）を、マウスに皮下注射した。実験時までに、腫瘍は全て定着しており、マウスの体重は１７〜２２ gであった。担癌させたマウスのマウス尾部に粒子（Ｇ−２）分散液を、１００μＬ（色素として１３  ｎｍｏｌ）静脈注射した。
【００９５】
次に粒子分散液を投与したマウスを投与２４時間後に安楽死させた後、ｃｏｌｏｎ２６腫瘍を摘出した。腫瘍組織をプラスチックチューブに移し、腫瘍組織の重量に対し１．２５倍量の１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００水溶液を添加し、ホモジネートした。次いで、腫瘍組織重量の２０．２５倍量のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を加えた。Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標） ＣＬｘ Ｉｎｆｒａｒｅｄ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを用いて、ホモジネート溶液の蛍光強度を測定し腫瘍組織中の色素量を定量した。
その結果、粒子（Ｇ−２）の腫瘍集積量は、８％ＩＤ／ｇであった。したがって、本実施例に係る粒子は光音響イメージング用の造影剤として好適である。
【図２】
2015044789.tif 000012
【図３】
2015044789.tif 000013
【図４】
2015044789.tif 000014
【図５】
2015044789.tif 000015
【図６】
2015044789.tif 000016
【図１】
2015044789.tif 000017