(57)【要約】【課題】  高い抗リーシュマニア活性を示す抗リーシュマニア化合物を提供する。【解決手段】  抗リーシュマニア化合物は、化学式（１）【化１６】2015147755.tif 000017で表される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）
【化１２】
2015147755.tif 000013
で表される抗リーシュマニア化合物。
【請求項２】
化学式（２）
【化１３】
2015147755.tif 000014
で表される抗リーシュマニア化合物。
【請求項３】
化学式（３）
【化１４】
2015147755.tif 000015
で表される抗リーシュマニア化合物。
【請求項４】
化学式（４）
【化１５】
2015147755.tif 000016
で表される抗リーシュマニア化合物。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか一項に記載の抗リーシュマニア化合物及びその薬理上許容される塩を有効成分として含有する抗リーシュマニア薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高い抗リーシュマニア活性を有する抗リーシュマニア化合物及び抗リーシュマニア薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
リーシュマニア症は、鞭毛型の寄生原虫類であるリーシュマニア属の原虫に感染することを原因として発症する感染症であり、リーシュマニア属の原虫は貪食マクロファージの偏性細胞内寄生体である。リーシュマニア症は、ＷＨＯにより六大熱帯病の１つに指定されている。また、リーシュマニア症は、吸血昆虫である雌のサシチョウバエを媒介とする生物媒介の感染症であり、サシチョウバエの吸血時に皮膚や内蔵等、哺乳類宿主の体内にリーシュマニア原虫が侵入することにより感染する。リーシュマニア症の症状は軽いものから命に関わる重いものまであるが、主に治療薬として用いられている５価のアンチモンは強い副作用を引き起こすことが知られている。なお、AmphotericinBは本来抗真菌薬として用いられ、これがリーシュマニア症の治療にも用いられているに過ぎない。従って、副作用のリスクの低い新薬が求められる。また、副作用を抑制した薬として、AmphotericinB （AmBisome）があるが、薬価が高いという問題があった。
【０００３】
一方で、海藻由来の代謝物は、抗リーシュマニア活性を示すことが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。しかし、この文献においては海藻由来のどの化合物が抗リーシュマニア活性を有するかについて化合物の特定は行われていない。
【０００４】
また、非特許文献２によれば、リーシュマニアの治療に用いる薬として有用である新規な環状デプシペプチドの創出につき鋭意検討する中で、海綿動物であるAaptos Cliataに着目し、これらの抽出物の分画を進めたところ、純粋な活性ペプチドの単離に成功し、これらをCiliatamides A-Cと命名した。また、非特許文献３には、Cliatamides A-Cの全合成に成功したことが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Y.Freile-Pelegrin, D. Robledo, M. J. Chan-Bacab, B. O. Orrtega-Morales, “Antileishmanial propertie of tropical marine algae extract”, Fitoterapia ,(Holland) ,Elsevier, 2008, 79, p. 374-377
【非特許文献２】Yoichi Nakao, Shizuka Kawatsu, Chikane Okamoto, Masaaki Okamoto, Yoshitsugu Matsumoto, Shigeki Matsunaga,Rob. W. M. van Soest, and Nobuhiro Fusetani, “Ciliatamides A−C, Bioactive Lipopeptides from the Deep-Sea Sponge Aaptos ciliate”, J. Nat. Prod. 2008, 71, p469−472.
【非特許文献３】Jana A. Lewis, R. Nathan Daniels, and Craig W. Lindsley, “Total Synthesis of Ciliatamides A-C: Stereochemical Revision and the Natural Product-Guided Synthesis of Unnatural Analogs, Org. Lett., 2008, 10, p4545-4548.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ところで、一般的に医薬等の分野においては、ある化合物に有用な生理活性が見出された場合には、その生理活性に係る作用機構、活性部位等を解明するために、その化合物の類縁体を合成し、それらの生理活性を評価している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らはCiliatamides A-Cの類縁体の合成を進めたところ、本発明に係る生理活性を有する化合物を見出した。
【０００８】
即ち、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は、
化学式（１）
【化１】
2015147755.tif 000002
で表される。
【０００９】
また、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は化学式（２）
【化２】
2015147755.tif 000003
で表される。
【００１０】
また、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は化学式（３）
【化３】
2015147755.tif 000004
で表される。
【００１１】
また、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は化学式（４）
【化４】
2015147755.tif 000005
で表される。
【００１２】
また、本発明に係る抗リーシュマニア薬は、化学式（１）〜（４）の何れかで表される化合物及びその薬理上許容される塩を有効成分として含有する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、高い抗リーシュマニア活性を示す抗リーシュマニア化合物及び抗リーシュマニア薬を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の抗リーシュマニア化合物について説明する。本発明のリーシュマニア化合物は、化学式（１）
【化５】
2015147755.tif 000006
で表される。
【００１５】
また、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は化学式（２）
【化６】
2015147755.tif 000007
で表される。
【００１６】
また、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は化学式（３）
【化７】
2015147755.tif 000008
で表される。
【００１７】
また、本発明に係る抗リーシュマニア化合物は化学式（４）
【化８】
2015147755.tif 000009
で表される。
【００１８】
化学式（１）〜（４）の何れかで表される抗リーシュマニア化合物は、アミノ酸、アミン類及び脂肪酸を用いて合成することができる。合成手順としては、Ｎ末端が保護基で保護されたアミノ酸とアミン類とを有機溶媒に溶解させ、縮合剤及び添加剤の存在下で縮合させジペプチドを得る。その後、ジペプチドから保護基を除去し、有機溶媒中、縮合剤及びアミン系塩基の存在下で、脂肪酸との縮合を通常の縮合試薬を用いて行うことが好ましい。
【００１９】
アミノ酸としては、一般式（５）
【化９】
2015147755.tif 000010
（一般式（５）中、Ｒは水素原子またはメチル基、Ｒ2はメチル基、イソプロピル基、ベンジル基を示す。また、Ｒ2の「〜」で示す結合はＤ体、Ｌ体の何れかであることを示している。）
で表されるものを用いることができる。
【００２０】
即ち、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｄ−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−フェニルアラニン、Ｌ−バリン、Ｄ−バリン、Ｎ−メチル−Ｌ−バリン、Ｎ−メチル−Ｄ−バリン等を用いることができる。
これらのなかでも、Ｎ−メチル−Ｄ−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−バリンを用いることが好ましい。
【００２１】
アミン類としては、一般式（６）
Ｒ1−ＮＨ2  ・・・（６）
で表されるものを用いることができる。ここで、Ｒ1としては、シクロヘプチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基および４−ヘプチル基を用いることができる。これらのなかでも、シクロヘプチル基、４−ヘプチル基を用いることが好ましい。
【００２２】
脂肪酸としては、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸のいずれも用いることができ、一般式（７）
【化１０】
2015147755.tif 000011
（一般式（７）中、Ｒ4は、炭素数１〜２０、好ましくは炭素数３〜１７の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表されるものを用いることができる。これらのなかでも、飽和脂肪酸としては、直鎖の飽和脂肪酸を用いることが好ましく、デカン酸（Ｒ4＝Ｃ9Ｈ19）を用いることがより好ましい。また、不飽和脂肪酸としては、二重結合を１つ有するモノ不飽和脂肪酸を用いることが好ましく、９−デセン酸（Ｒ4＝Ｃ9Ｈ17）を用いることがより好ましい。
【００２３】
保護基としては、ベンジルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基)、フルオレニルメトキシカルボニル基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基などを挙げることができる。これらのなかでもＢｏｃ基を用いることが好ましい。
【００２４】
縮合剤としては、Ｎ−エチル−Ｎ’−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ・ＨＣｌ）、ヘキサフルオロリン酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−トリス（ピロリジノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイト（ＰｙＢＯＰ）などを挙げることができる。これらのなかでもＰｙＢＯＰを用いることが好ましい。また、これらの縮合剤は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２５】
また、添加剤としては、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ)、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）などを挙げることができる。これらの添加剤は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２６】
有機溶媒としては、例えば、アセトニトリル等のニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン化溶媒、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等のエーテル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等のアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等のスルホキシド、アセトン等のケトン、メタノール、エタノール等のアルコール等が挙げられる。これら溶媒は、１種を単独で用いてもよいし、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２７】
即ち、上記アミノ酸、アミン類及び脂肪酸を用いて合成される抗リーシュマニア化合物は、一般式（８）
【化１１】
2015147755.tif 000012
（一般式（８）中、Ｒは水素原子またはメチル基、Ｒ1はシクロヘプチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基および４−ヘプチル基、Ｒ2はメチル基、イソプロピル基、ベンジル基、Ｒ3は炭素数２〜２１、好ましくは炭素数４〜１８の直鎖または分岐のアルキノイル基を示す。また、Ｒ2の「〜」で示す結合はＤ体、Ｌ体の何れかであることを示している。）
で表される。
【００２８】
なお、上記化学式（１）で表される抗リーシュマニア化合物は、一般式（８）において、Ｒがメチル基、Ｒ1がシクロヘプチル基、Ｒ2がイソプロピル基であって立体配置がＤ、Ｒ3が９−デセノイル基である場合である。また、上記化学式（２）で表される抗リーシュマニア化合物は、一般式（８）において、Ｒがメチル基、Ｒ1が４−ヘプチル基、Ｒ2がベンジル基であって立体配置がＤ、Ｒ3が９−デセノイル基である場合である。また、上記化学式（３）で表される抗リーシュマニア化合物は、一般式（８）において、Ｒがメチル基、Ｒ1がシクロヘキシル基、Ｒ2がベンジル基であって立体配置がＤ、Ｒ3が９−デセノイル基である場合である。また、上記化学式（４）で表される抗リーシュマニア化合物は、一般式（８）において、Ｒがメチル基、Ｒ1がベンジル基、Ｒ2がベンジル基であって立体配置がＤ、Ｒ3が９−デセノイル基である場合である
【００２９】
一般式（６）で表される化合物、特に化学式（１）〜（４）の何れかで表される化合物は、例えば医薬品分野の抗原虫薬、特に抗リーシュマニア薬として有用である。化学式（１）〜（４）の何れかで表される化合物などの一般式（８）で表される化合物は、単独で用いてもよいし、又は一般に製剤上許容される添加剤と共に混和し、製剤化してもよい。また、投与形態としては、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、エキス剤等の経口剤を用いた投与形態または、注射剤、液剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤、パップ剤、ローション剤等の非経口剤を用いた投与形態等が挙げられるが、特に制限はなく、治療目的等に応じて適宜選択することができる。
【００３０】
また、錠剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、散剤の場合には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等の添加剤を含有させることができる。賦形剤としては、デンプン、カルボキシメチルセルロース、白糖、デキストリン、コーンスターチ等を挙げることができる。
【００３１】
結合剤としては、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルメロースナトリウム、エチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、アルファー化デンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロＷ ピルスターチ、プルラン、ポリビニルピロリドン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ 、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ 、メタクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコール、アラビアゴム、アラビアゴム末、寒天、ゼラチン、白色セラック、トラガント、精製白糖、マクロゴールが挙げられる。
【００３２】
崩壊剤としては、結晶セルロース、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、トラガントが挙げられる。
【００３３】
滑沢剤としては、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、乾燥水酸化アルミニウムゲル、タルク、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ロウ類、水素添加植物油、ポリエチレングリコールが挙げられる。
【００３４】
また、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤の場合には、水や植物油等の一般的に用いられる不活性な希釈剤の他、着色剤、矯味剤、着香剤等を添加剤として含有させてもよい。
【００３５】
また、注射剤の場合には、懸濁液、乳濁液、用時溶解剤等の添加剤を含有させることができる。また、軟膏剤、坐剤の場合には、脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、パラフィン、ろう、樹脂、プラスチック、基剤、グリコール類、高級アルコール、水、乳化剤、懸濁化剤等を添加剤として含有させることができる。また、パップ剤の場合にはグリセリン、水、水溶性高分子、吸水性高分子等を添加物として含有させることができる。また、ローション剤の場合には、溶剤、乳化剤、懸濁化剤等を添加剤として含有させることができる。
【００３６】
本発明の抗リューシュマニア化合物は、食品、チューインガム、飲料等に添加して、いわゆる特定保健用食品（例えば、抗リーシュマニア食品）やサプリメント等に含有させることもできる。
【００３７】
なお、上述の化学式（１）〜（４）の何れかで表される化合物などの一般式（６）で表される化合物は、これらの化合物の薬理上許容される塩を含む概念である。すなわち、本発明は、ヒト又は動物の体内で代謝されることによって上記化合物及びアミドに変化して薬理活性を示す生化学的前駆物質を含む。本発明において、薬理上許容される塩とは、上記の化合物を酸または塩基で処理することにより得られる塩であって、著しい毒性を有さず、医薬として使用され得る塩をいう。このような酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸等の無機酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸等の有機酸等による付加塩があげられ、塩基による塩としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等のアルカリ土類金属水酸化物、グアニジン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン等の有機塩基による塩があげられる。
【実施例】
【００３８】
以下、本発明について実施例を用いてより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。
【００３９】
（実施例１）
（化学式（１）で表される化合物の合成）
化学式（１）で表される化合物を次の手順により得た。
シクロヘプチルアミン34.5 mg（ 0.30 mmol）を塩化メチレン1 mLに溶解させ、そこにＮ末端をＢｏｃ基で保護したＮ−メチル−Ｄ−バリン（Boc-N-Me-L-Val） 42 mg（0.18 mmol）、EDCI・HCl 54 mg (0.28 mmol)、HOBt 36.5 mg (0.27 mmol)を順に加え、最後にジクロロメタン1 mLを加えて、4 時間室温撹拌した。反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20 mLを加え、その後酢酸エチル(2×20mL)により抽出を行った。5%の炭酸水素ナトリウム水溶液 (20 mL) を用いて有機層を洗浄し、さらにブライン(20 mL)で有機層を脱水後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。さらに真空ポンプで乾燥をし、黄色油状のジペプチド１を得た（30 mg, 収率51 %）。
【００４０】
次に、30 mg（0.092 mmol）のジペプチド１を4M 塩酸／ジオキサン溶液2 mLに溶解させ、3時間室温において撹拌を行い、溶媒を減圧留去し、Boc基を除去した白色粉末を得た。この白色粉末を塩化メチレン 1.0 mLに溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン39 mg（0.30 mmol）、PyBOP 157 mg (0.30 mmol)、9-デセン酸17 mg (0.10 mmol)を順に加え、最後にジクロロメタン1 mLを加えて、14時間室温において撹拌を行った。反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20 mLを加え抽出を行った。さらに、反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20mLを加え、その後酢酸エチル(2×20 mL)により抽出を行った。5%の炭酸水素ナトリウム水溶液(20 mL)を用いて有機層を洗浄し、さらにブライン(20 mL)で有機層を脱水後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過、ろ液の減圧留去を行った。そして、残留物質をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：n-ヘキサン=4：6）により単離精製し、化学式（１）で表される化合物を得た。(淡黄色油状：26 mg, 収率74 %)、さらに順相高速液体クロマトグラフィー（HPLC）［Inertsil, 250×20 mm, 溶媒  酢酸エチル：n-ヘキサン=3：7, 流速： 2.0 mL/min, 検出器：示差屈折計］によりτR＝29 minのピークを集め、再度精製を行った。
1H NMR(500MｚCDCl3) δ（ppm） 5.80 (ddt, J=17.0, 10.1, 6.9 Hz), 4.98 (ddt, J=17.0, 1.8, 1.5 Hz), 4.92 (ddt, J=10.1, 1.8, 1.4 Hz) デセン酸オレフィン、4.45 (d, J=11.5 Hz), 2.28（ｍ）,0.94, (d, J=6.5 Hz), 0.81 (d, 6.5 Hz) バリン、6.11（br.d J=7.3）, 3.86 (m)へプチルアミンNH、α-CH; HR-FABMS：[M+H]+m/z 379.3322 (m/z 379.3325 calcd for C23H43N2O2).
【００４１】
（実施例２）
（化学式（２）で表される化合物の合成）
化学式（２）で表される化合物を次の手順により得た。
４−ヘプチルアミン240 mg（2.1 mmol）をDMF 3 mLに溶解させ、そこにＮ末端をＢｏｃ基で保護したＮ−メチル−Ｄ−フェニルアラニン（N-Boc-N-Me-D-Phe） 292 mg（1.1 mmol）、EDCI・HCl 313 mg (1.6 mmol)、HOBt 322 mg（2.4 mmol）を順に加え、最後にジクロロメタン3 mLを加えて、16 時間室温撹拌した。反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20 mLを加え、その後酢酸エチル(2×20mL)により抽出を行った。5%の炭酸水素ナトリウム水溶液 (20 mL) を用いて有機層を洗浄し、さらにブライン(20 mL)で有機層を脱水後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル；ヘキサン  = 3  : 7）により精製し、黄色油状のジペプチド２を得た。（158 mg, 収率40 %）
【００４２】
次に、158 mg（0.42 mmol）のジペプチド２を4M 塩酸／ジオキサン溶液2 mLに溶解させ、2時間室温において撹拌を行い、溶媒を減圧留去し、Boc基を除去した白色粉末を得た。この白色粉末をDMF 2 mLに溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン172 mg（1.3 mmol）、PyBOP 442 mg (0.85 mmol)、9-デセン酸143 mg (0.84 mmol)を順に加え、最後にジクロロメタン2 mLを加えて、14時間室温において撹拌を行った。反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20 mLを加え抽出を行った。さらに、反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20mLを加え、その後酢酸エチル(2×20 mL)により抽出を行った。5%の炭酸水素ナトリウム水溶液(20 mL)を用いて有機層を洗浄し、さらにブライン(20 mL)で有機層を脱水後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過、ろ液の減圧留去を行った。そして、残留物質をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：n-ヘキサン=1：4）により単離精製し、化学式（２）で表される化合物を得た。(淡黄色油状：134 mg, 収率37 %)、さらに逆相高速液体クロマトグラフィー（ODS-HPLC）［Inertsil, 250×20 mm, 溶媒  アセトニトリル：水=9：1, 流速 2.0 mL/min, 検出器：UV 254 nm］によりτR＝25 minのピークを集め、再度精製を行った。HR-FABMS：[M+H]+  m/z 429.3482 (m/z 429.3481 calcd for C27H45N2O2).
【００４３】
（実施例３）
（化学式（３）で表される化合物の合成）
化学式（３）で表される化合物を次の手順により得た。
シクロヘキシルアミン76 mg（0.75 mmol）をDMF 1 mLに溶解させ、そこにＮ末端をＢｏｃ基で保護したＮ−メチル−Ｄ−フェニルアラニン（N-Boc-N-Me-D-Phe） 140 mg（0.50 mmol）、EDCI・HCl 192 mg (1.0 mmol)、HOBt 135 mg（1.0 mmol）を順に加え、最後にジクロロメタン1 mLを加えて、5 時間室温撹拌した。反応溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル（60 mL）で溶解し、1M塩酸20 mL、5%の炭酸水素ナトリウム水溶液 (20 mL) 、さらにブライン(20 mL)で有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤をろ過し、ろ液を減圧濃縮、乾燥をし、黄色油状のジペプチド３を得た。
【００４４】
このジペプチド３を4M 塩酸／ジオキサン溶液2 mLに溶解させ、2時間室温において撹拌を行い、溶媒を減圧留去し、Boc基を除去した白色粉末を得た。この白色粉末をDMF と塩化メチレンの混合溶媒（1：1、1.0 mL）に溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン97 mg（0.75 mmol）、HBTU 379 mg (1.0 mmol)、9-デセン酸127 mg (0.75 mmol)を順に加え,室温で5.5時間撹拌した。反応溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル（60 mL）で溶解し、1M塩酸20 mL、5%の炭酸水素ナトリウム水溶液 (20 mL) 、さらにブライン(20 mL)で有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤をろ過し、ろ液を減圧濃縮、乾燥をした。そして、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル：n-ヘキサン=0 : 100, 50: 50, 100 : 0）により精製し、化学式（３）で表される化合物を得た (無色油状：177 mg, 収率85 %)。HR-FABMS：[M+H]+  m/z 413.3179 (m/z 413.3168 calcd for C26H41N2O2).
【００４５】
（実施例４）
（化学式（４）で示される化合物の合成）
化学式（４）で示される化合物を次の手順により得た。
ベンジルアミン53 mg（0.50 mmol）をDMF 0.5 mLに溶解させ、そこにＮ末端をＢｏｃ基で保護したＮ−メチル−Ｄ−フェニルアラニン（N-Boc-N-Me-D-Phe） 140 mg（0.50 mmol）、EDCI・HCl 144 mg (0.75 mmol)、HOBt 101 mg (0.75 mmol）を順に加え、最後にジクロロメタン0.5 mLを加えて、6.5 時間室温撹拌した。反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20 mLを加え、その後酢酸エチル(2×20mL)により抽出を行った。5%の炭酸水素ナトリウム水溶液 (20 mL) を用いて有機層を洗浄し、さらにブライン(20 mL)で有機層を脱水後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。さらに真空ポンプで乾燥をし、黄色油状のジペプチド４を得た。
【００４６】
このジペプチド４を4M 塩酸／ジオキサン溶液1.3 mLに溶解させ、3時間室温において撹拌を行い、溶媒を減圧留去し、Boc基を除去した白色粉末を得た。この白色粉末をDMF 0.7 mLに溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン129 mg（1.05 mmol）、HBTU 196 mg (0.52 mmol)、9-デセン酸72 mg (0.42 mmol)を順に加え、最後にジクロロメタン0.7 mLを加えて、14時間室温において撹拌を行った。反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20 mLを加え抽出を行った。さらに、反応溶媒を減圧留去し、1M塩酸20 mL及び酢酸エチル20mLを加え、その後酢酸エチル(2×20 mL) により抽出を行った。5%の炭酸水素ナトリウム水溶液(20 mL)を用いて有機層を洗浄し、さらにブライン(20 mL)で有機層を脱水後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過、ろ液の減圧留去を行った。そして、残留物質をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン）により単離精製し、化学式（４）で表される化合物を得た(淡黄色油状：72 mg, 収率34 %)。HR-FABMS：[M+H]+  m/z 421.2852 (m/z 421.2855 calcd. for C27H37N2O2).
【００４７】
（in vitro抗リーシュマニア活性測定）
上述した手順により得られた化学式（１）〜（４）で表される化合物のそれぞれについて下記に示す条件の下、生理活性測定を行った。リーシュマニア原虫として、Leishmania.major promastigotes （MHOM/UZ/91/PM2）を選択し、蛍光蛋白egfp遺伝子を導入したL.major／egfp promastigotesを用いて、上記化合物をサンプルとして下記の条件で成長阻害率を求めた。
【００４８】
（測定手順）
25℃において96-穴プレートを用いて10 ％ウシ胎児血清、25 mM Hepes Buffer（MC Biomedicals Inc. , LLC）および10μg/mL Tunicamycin（SIGMA-ALDRICH inc. , USA）を添加した199培地（日水製薬, Tokyo, Japan）中でL.major／egfp  promastigotesを培養した。次に、96穴プレート（Black microplate, NUNC, Denmark）の各ウェルにL.major／egfp 原虫100 μL（1×106 cell／ｍＬ）及びサンプル溶液100 μL（DMSOに溶解）を加え、低温インキュベータ（SANYO, Japan）を用いて25℃で72時間培養を行った。その後、蛍光マイクロプレート読み取り装置（Fluoroscan Ascent FL, 大日本製薬, Osaka, Japan）を用いて励起光485 nm、放射光538 nmでL.major／egfp promastigotesの蛍光シグナルを測定した。評価は、標準物質としてAmphotericin Bを用いた場合の成長阻害率を100％としたときの、化学式（１）〜（４）で表される化合物それぞれについて成長阻害率を求めることにより行った。
【００４９】
その結果、化学式（１）で表される化合物の成長阻害率は９５％、化学式（２）で表される化合物の成長阻害率は９８％、化学式（３）で表される化合物の成長阻害率は９０％、化学式（４）で表される化合物の成長阻害率は９１％であった。