(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｃ−１位に構造多様性を持たせたシアル酸誘導体及びクリック反応によるその製造方法。【解決手段】式［１］で表される２−デオキシ２，３−デヒドロシアル酸誘導体2015117233.tif 000042（Ｒ１はチオカルボキシル基、チオアミド基、アシルスルホンアミド基又はスルホニルアミジン基）【選択図】図２
2015117233.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
【化１】
2015117233.tif 000035
「式中、Ｒ１は、保護されていてもよいチオカルボキシル基、チオアミド基、アシルスルホンアミド基またはスルホニルアミジン基を；Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ３は、水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体。
【請求項２】
Ｒ１が、保護されていてもよいチオカルボキシル基またはチオアミド基である請求項１に記載の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体。
【請求項３】
Ｒ１が、アシルスルホンアミド基またはスルホニルアミジン基である請求項１に記載の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体。
【請求項４】
Ｒ２が、保護されていてもよいヒドロキシル基である請求項１〜３に記載の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体。
【請求項５】
Ｒ２が、アミノ基またはグアニジノ基である請求項１〜３に記載の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体。
【請求項６】
請求項１〜５に記載の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体の多価性構造体。
【請求項７】
一般式（１ａ′）
【化２】
2015117233.tif 000036
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を、
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ３は、水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体に、
一般式（２）
【化３】
2015117233.tif 000037
「式中、Ｒ7は、有機基を意味する」
で表されるアジド化合物を反応させることを特徴とする
一般式（１ｂ）
【化４】
2015117233.tif 000038
「式中、Ｒ7は、有機基を; Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ３は、水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体またはそれらの多価性構造体の製造方法。
【請求項８】
一般式（１ｃ）
【化５】
2015117233.tif 000039
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体に、
一般式（２）
【化６】
2015117233.tif 000040
「式中、Ｒ7は、有機基を意味する」
で表されるアジド化合物を反応させることを特徴とする
一般式（１ｄ）
【化７】
2015117233.tif 000041
「式中、Ｒ7は、有機基を; Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ３は、水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体およびそれらの多価性構造体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体およびその製造法、より具体的にはＣ−１位にアシルスルホンアミドまたはスルホニルアミジンを導入した２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体およびそれらのクリック反応による製造方法並びに、２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体の多価性構造体およびその製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザ治療薬として使用されているオセルタミビル（Oseltamivir）やザナミビル（Zanamivir）は、ノイラミニダーゼが触媒するシアリル糖鎖からのシアル酸切断反応の遷移状態アナローグを基に開発された。
遷移状態アナローグの代表的な１つの構造に、Zanamivir の母骨格にもなっている２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸骨格があり、ノイラミニダーゼ阻害剤開発研究において汎用されている。
シアル酸Ｃ−１位のカルボン酸は生理的条件下でマイナスの電荷を持っており、阻害剤開発研究の分子設計段階においてはこの電荷とノイラミニダーゼアミノ酸側鎖との水素結合が重要視されてきた（非特許文献１）。
従って、カルボン酸には手を加えずそのまま利用するか、プロドラッグ化してエステル結合に変換する手法が多用されてきた（非特許文献２）。
最近、Ｃ−１位にリン酸基（非特許文献３）やアミド結合（非特許文献４）を導入した例が報告された。
リン酸基そのものが導入された例では、マイナス電荷は保持されたがＣ−１位の構造多様性は無い。またアミド結合の導入ではマイナス電荷が犠牲にされており、いくつかの誘導体が示されているものの、その構造はアミノ酸側鎖程度の小さなものばかりであった。
Zanamivirのグアニジンユニットの代わりにスルホニルアミジンがＣ−４位に導入された例はあるものの（非特許文献５）、スルホニルアミジンのＣ−１位への導入は達成されていない。
【０００３】
一方、本発明者らは、チオアミドを用いる新規クリック型反応を報告している（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】J. N. Varghese et al. Protein Sci., 1995, 4, 1081-1087.
【非特許文献２】Z. Y. Liu et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007, 17, 4851-4854.
【非特許文献３】J. J. Shie et al. J. Am. Chem. Soc., 2011,133, 17959-17965.
【非特許文献４】E. Feng et al. J. Med. Chem., 2013, 56, 671-684.
【非特許文献５】R. Nishino et al. Bioorg. Med. Chem., 2011, 19, 2418-2427.
【非特許文献６】M. Aswad et al. Chem, Commun., 2013,49, 10242-10244
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
シアル酸遷移状態アナローグのＣ−１位に構造多様性を持たせたシアル酸誘導体の開発はまだほとんど未開拓であり、新規なノイラミニダーゼ阻害剤となりうる可能性を秘めている。  
また近年、薬剤耐性をもつ変異ウィルスが実際に出現したり、強毒性変異ウィルスの出現が懸念されたりしていることから、変異ウィルスの出現に対して迅速に対応できる化合物ライブラリーや、その作製における簡便な合成戦略が新たなニーズとして生じている現状にある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
アシルスルホンアミドやスルホニルアミジンをＣ−１位に導入したシアル酸遷移状態アナローグ（２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体）を作製し、Ｃ−１位へ電荷や水素結合ユニットを導入しつつ、多価性構造を含む構造多様性を持たせることで、前述の課題を解決する。
アシルスルホンアミドの合成ではスルホクリック反応を、また、スルホニルアミジンの合成ではチオアミドを用いたクリック反応を利用して、多価性構造を含む構造多様性を持たせるための合成簡略化を達成しつつ、ライブラリー化する。
得られた化合物のノイラミニダーゼ阻害活性評価を、同様に作成した光プローブを用いて簡単にスクリーニングする。
以下に本発明を詳細に説明する。
【０００７】
本発明において、アルキル基とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチルおよびヘキシル基などの直鎖状または分岐鎖状のＣ１−６アルキル基；アリール基とは、フェニル、インデニル、ナフチルなどを；アルアルキル基とは、ベンジルトリチルなどのアリール基が置換したアルキル基を；アシル基とは、アセチル、ベンゾイなどのアルキル基またはアリール基が置換したカルボニル基を；有機基とは、アルキル基、アシルアミノ基で置換されていてもよいアリール基、光アフィニティ分子、ポリエチレングリコール誘導体、アクリル酸系ポリマー、デンドロン、デンドリマーを代表例とする高分子化合物を意味する。
【０００８】
本発明に使用されるチオカルボキシル基の保護基としては、通常のカルボキシル基の保護基として使用される基であればよく、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１,１−ジメチルプロピル、ブチルおよびtert-ブチルなどの低級アルキル基；フェニルおよびナフチルなどのアリール基；ベンジル、ジフェニルメチル、トリチル、p-ニトロベンジル、p-メトキシベンジル、フルオレニルメチル、２,４,６−トリメトキシベンジルおよびビス(p-メトキシフェニル)メチルなどが挙げられる。
【０００９】
本発明に使用されるヒドロキシル基の保護基としては、通常のヒドロキシル基の保護基として使用される基であればよく、例えば、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、メトキシアセチル、フェノキシアセチル、ピバロイル、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、３,４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、１,１−ジメチルプロポキシカルボニルおよびジフェニルメトキシカルボニルなどのアシル基；メチル、tert-ブチル、２,２,２−トリクロロエチルおよび２−トリメチルシリルエチルなどの低級アルキル基；アリルなどの低級アルケニル基；ベンジル、p-メトキシベンジル、ジフェニルメチルおよびトリチルなどのアル低級アルキル基；テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニルおよびテトラヒドロチオピラニルなどの含酸素および含硫黄複素環式基などが挙げられる。
【００１０】
本発明に使用されるアミノ基の保護基としては、通常のアミノ基の保護基として使用される基であればよく、例えば、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、メトキシアセチル、フェノキシアセチル、ピバロイル、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、３,４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、メトキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、１,１−ジメチルプロポキシカルボニルおよびジフェニルメトキシカルボニルなどのアシル基が挙げられる。
【００１１】
本発明は、一般式［１］で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体およびそれらの多価性構造体並びにそれらの製造法である。
【化１】
2015117233.tif 000003
【００１２】
「式中、Ｒ１は、保護されていてもよいチオカルボキシル基、チオアミド基、アシルスルホンアミド基またはスルホニルアミジン基を；Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ３は、水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
【００１３】
本発明における多価性構造とは、１分子中の２カ所以上に一般式［１］のシアル酸誘導体が導入された骨格を意味する。その母骨格としては、例えば、ポリエチレングリコール誘導体、アクリル酸系ポリマー、デンドロン、デンドリマーを代表例とする高分子化合物などが挙げられる。
さらに詳細には、本発明の第一の発明は、
【００１４】
【化２】
2015117233.tif 000004
【００１５】
「式中、Ｒ１aは、水素原子または保護基を；Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ３は、水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される新規な２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ａ］である。さらに
【００１６】
【化３】
2015117233.tif 000005
【００１７】
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ7は、有機基を、それぞれ、意味する。」
で表される２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ｂ］および以下の製造法である。
【００１８】
【化４】
2015117233.tif 000006
【００１９】
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ7は、有機基を、それぞれ、意味する。」
さらに、本発明の第二の発明は、
【００２０】
【化５】
2015117233.tif 000007
【００２１】
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を、それぞれ、意味する。」
で表される新規な２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ｃ］である。さらに
【００２２】
【化６】
2015117233.tif 000008
【００２３】
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ7は、有機基を、それぞれ、意味する。」
で表される２，３−デヒドロシアル酸誘導体［１ｄ］および以下の製造方法である。
【００２４】
【化７】
2015117233.tif 000009
【００２５】
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ7は、有機基を、それぞれ、意味する。」
【発明の効果】
【００２６】
本発明は以下の効果を発揮する。
１．マイナス電荷を持つアシルスルホンアミドをＣ−１位へクリック導入できる。
２．アシルスルホンアミドをＣ−１位へ導入した光プローブをクリック作製できる。
３．水素結合能を持つスルホニルアミジンをＣ−１位へクリック導入できる。
４．スルホニルアミジンをＣ−１位へ導入した光プローブをクリック作製できる。
５．作製した光プローブを用いて簡便な阻害活性スクリーニングを行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ウェルシュ菌由来のノイラミニダーゼに対する光プローブのラベル化
【図２】光プローブを利用した阻害剤簡易スクリーニング
【図３】蛍光測定による阻害剤活性評価
【発明を実施するための形態】
【００２８】
２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ａ］の製造方法について説明する
【化８】
2015117233.tif 000010
【００２９】
「式中、Ｒ2a、保護されたヒドロキシル基またはグアニジノ基を；Ｒ１aa、Ｒ3a、Ｒ4a、Ｒ5aおよびＲ6aは、同一または異なって保護基を、それぞれ意味を有する。」
なお、２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ａ］は、［１ａａ］を適宜脱保護することで得ることができる。
【００３０】
一般式［３ａ］のシアル酸化合物に、トリフェニルホスフィン水素化臭素塩を溶媒中で反応させることで一般式「４ａ」の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応で用いられる溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、特に限定されないが、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフランなどが挙げられる。
反応温度は、使用される溶媒により適宜決めればよいが、０℃〜９０℃、好ましくは６０℃〜８０℃である。
【００３１】
一般式「４ａ」の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物に、ジイミダゾールケトンのような縮合剤でトリメトキシメタンチオールなどのチオールを溶媒中で反応させることにより一般式［１ａａ］のＣ１−アシルスルホンアミド−２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応で用いられる溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素、エーテルなどが挙げられる。
反応温度は、使用される溶媒により適宜決めればよいが、０℃〜５０℃、好ましくは１０℃〜３５℃である。
【００３２】
次に、２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ｂ］の製造方法について説明する
【化９】
2015117233.tif 000011
【００３３】
「式中、Ｒ１a’は保護基を、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、上記と同様の意味を有する。」
【００３４】
一般式［１ａ’］を一般式［１ａ”］のチオカルボン酸とした後、一般式［２］のスルホニルアジド誘導体を、溶媒中で反応させることにより一般式［１ｂ］のＣ１−アシルスルホンアミド−２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応で用いられる溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、例えば、メタノールなどアルコールが挙げられる。
反応温度は、使用される溶媒により適宜決めればよいが、０℃〜９０℃、好ましくは１０℃〜３５℃である。
【００３５】
次に、２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ｃ］の製造方法について説明する
【化１０】
2015117233.tif 000012
【００３６】
「式中、Ｒ2aは、保護されたヒドロキシル基またはグアニジノ基を；Ｒ2bは、ヒドロキシル基またはグアニジノ基を；Ｒ、Ｒ’、Ｒ3a、Ｒ4a、Ｒ5aおよびＲ6aは、同一または異なって保護基を、それぞれ意味を有する。」
なお、２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ｃ］は、［１ｃａ］を適宜脱保護することで得ることができる。
【００３７】
一般式［３ｂ］のシアル酸化合物に、トリフェニルホスフィン水素化臭素塩を溶媒中で反応させることで一般式「４ａ」の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応で用いられる溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、特に限定されないが、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフランなどが挙げられる。
反応温度は、使用される溶媒により適宜決めればよいが、０℃〜９０℃、好ましくは６０℃〜８０℃である。
【００３８】
一般式［４ｂ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物の保護されたアミノ基をさらに別種の保護基を導入して一般式［４ｃ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応は、アミノ基に保護基を導入する公知の方法に準じて行えばよい。
【００３９】
一般式［４ｃ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物をアンモニア水で処理することにより一般式［５ａ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応は、メタノールなどの溶媒中で、室温で行えばよい。
【００４０】
一般式［５ａ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物の水酸基に保護基を導入することにより一般式［５ｂ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応は、水酸基に保護基を導入する公知の方法に準じて行えばよい。
【００４１】
一般式［５ｂ］の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物にローソン試薬を反応させることにより一般式［１ｃａ］のＣ１−チオアミド−２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応で用いられる溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、特に限定されないが、例えば、テトラヒドロフランなどエーテル類やトルエンなどが挙げられる。
反応温度は、使用される溶媒により適宜決めればよいが、０℃〜１１０℃、好ましくは２０℃〜５０℃である。
【００４２】
２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体［１ｄ］の製造方法について説明する
【化１１】
2015117233.tif 000013
【００４３】
「式中、Ｒ２は、保護されていてもよいヒドロキシル基、アミノ基またはグアニジノ基を；
Ｒ３は、水素原子または保護基を；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なって水素原子または保護基を；Ｒ7は、有機基を、それぞれ、意味する。」
【００４４】
一般式［１ｃ］のＣ１−チオアミド−２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物に、一般式［２］のスルホニルアジド誘導体を、溶媒中で反応させることにより一般式［１ｄ］のＣ１−スルホニルアミジン−２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸化合物を得ることができる。
この反応で用いられる溶媒は、反応に悪影響を及ぼさない限り特に限定されないが、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、水、含水溶媒、アルコール類が挙げられる。
反応温度は、使用される溶媒により適宜決めればよいが、０℃〜１００℃、好ましくは１０℃〜３５℃である。
以下、本発明を実施例で説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４５】
実施例１
＜Ｃ１−チオカルボニル−２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体の合成＞
【化１２】
2015117233.tif 000014
【００４６】
（１）D-glycero-D-ido-Nonulopyranosonic acid,5-(acetylamino)-2,6-anhydro-3,5- dideoxy-, metyl ester,2,4,7,8,9-pentaacetateシアル誘導体[3b-2](2.60g, 5.0mmol）とトリフェニルホスフィン臭化水素塩「PPh3・HBr：Triphenylphosphine hydrobromide」（170mg, 0.5mmol）を、窒素雰囲気下、脱水したアセトニトリル（25mL）と無水酢酸（2mL）に溶解し、80℃で19時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム(5 g)を加えて反応を停止し、不溶物を濾別した後、溶媒を留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（0.5%の酢酸を含む酢酸エチル：メタノール=20：1）にて精製し、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-(acetylamino)2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, 4,7,8,9-tetraacetate [4b-2]の無色固体(2.27g, 99%)を得た。
【００４７】
ESI-MS : calcd for MNa+, C19H25NO12SNa : 482.1274; found 482.0816.
【００４８】
（２）[4b-2] (919 mg, 2.0mmol）、ジイミダゾールケトン(CDI, 400mg, 2.4mmol）、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP, 60mg, 0.2mmol）を、窒素雰囲気下、脱水したジクロロメタン（20mL）に溶解し、室温で90分撹拌した。この溶液に、2,4,6-トリメトキシベンジルチオール（833mg, 4.0mmol）の脱水ジクロロメタン溶液（30mL）を加え、その後室温で16時間撹拌した。溶媒留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール=50：1）にて精製し、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid,5-(acetylamino)2,6-anhydro-3,5-dideoxy-,  4,7,8,9-tetraacetate, (2,4,6-trimethoxyphenyl)methyl ester [1a-1]
無色固体（945mg, 72%）を得た。
【００４９】
1H NMR (500 MHz, CDCl3) : 6.10(s,2H),5.89(d,J=5.5Hz,1H),5.48-5.51(m,2H),
5.31-5.40(m,2H),4.37-4.50(m,3H),4.24(s,2H),4.17(dd,J=20.0,10.0Hz,1H),3.81(s,6H),
3.80(s,3H),2.09(s,3H),2.08(s,3H),2.04(s,3H),1.95(s,3H),1.93 ppm (s,3H)
ESI-MS:calcd for MNa+,C29H37NO14SNa:678.1832;found 677.9701.
【００５０】
実施例２
＜Ｃ１−アシルスルホンアミドを持つ２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体のスルホクリック合成＞
【化１３】
2015117233.tif 000015
【００５１】
[1a-1] (100mg, 0.153 mmol) 、トリエチルシラン(32μL）、トリフルオロ酢酸(384μL）をジクロロメタン6.4mLに溶解し、室温で24時間撹拌後、溶媒留去、真空乾燥した。
次いで、ベンゼンスルホニルアジド（R = H, 74.8mg, 0.425mmol）またはp-トルエンスルホニルアジド（R = Me, 77.4mg, 0.425mmol）と、メタノール2.0mL、2,6-ルチジン64μLを加え、室温で17時間撹拌した。溶媒留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (メタノール:酢酸エチル=1:10) で精製して、[1b-1] (R=H；69.7mg, 67%)の無色固体および(R = Me ；91.1mg, 97%))  の無色固体をそれぞれ得た。
【００５２】
・Ｒ＝Ｈの［１ｂ−１］
1H NMR (300 MHz, CDCl3 + 2 drops of CD3OD):8.13(d,J=7.8Hz,2H),7.67(t,J=7.8Hz,1H),
7.56(t,J=7.8Hz,2H),5.91(d,J=2.4Hz,1H),5.34-5.58(m,3H),4.22-4.42(m,3H),4.12
(dd,J=13.5,6.0Hz,1H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),2.05(s,3H),2.04(s,3H),1.87 ppm (s,3H)
ESI-MS:calcd for MNa+,C25H30N2O13SNa:621.1,found 621.0.
【００５３】
・Ｒ＝Ｍｅの［１ｂ−１］
ESI-MS:calcd for MNa+,C26H32N2O13SNa:635.2;found 635.0.
【００５４】
実施例３
＜スルホクリックによるアシルスルホンアミド型光プローブの合成＞
【化１４】
2015117233.tif 000016
【００５５】
（１）2-(2-(2-(2-(5-(2-oxohexahydro-1H-thieno[3,4-d]imidazole-4-yl)pentanamido) ethoxy)- ethoxy)-4-(3-(trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl) benzensulfonyl azide [7b]
アジ化ナトリウム(51mg, 0.78mmol)に水(0.1mL)、トルエン(1mL)を加えて、氷冷下で撹拌した。そこにトリフルオロメタンスルホン酸無水物(0.11mL, 0.65mmol)を加えて、氷冷下で3時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム(17mg)加え、塩基性であることを確認した。さらに炭酸水素ナトリウム(66mg)、水(0.2mL)、トルエン(0.1mL)、2-(2-(2-(2-(5-(2-oxohexahydro- 1H-thieno[3, 4-d] imidazole-4-yl)pentanamido)ethoxy)- ethoxy)-4-(3- (trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl) benzensulfonylamido (95mg, 0.15mmol)、tertブチルアルコール(1mL)を加えて、室温で50時間撹拌した。クロロホルム(10mL)を加え硫酸マグネシウムで乾燥後、エバポレーターで濃縮した反応液を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム〜メタノール：クロロホルム=1:30〜1:15)で精製して、2-(2-(2-(2-(5-(2-oxohexahydro-1H-thieno[3, 4-d]imidazole-4-yl) pentanamido)ethoxy) ethoxy)-4-(3-(trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl)benzensulfonyl azide [7b]の白色固体 (98mg, 98%)を得た。
【００５６】
1H NMR (300 MHz,CD3OD)δ:7.61(d,J=8.5Hz,1H),6.94(d,J=8.5Hz,1H),6.91(s,1H),
4.51(dd,J=5.2Hz,7.4Hz,1H),4.41(dd,J=4.4Hz,7.7Hz,1H),3.95(dd,J=4.7Hz,4.4Hz,2H),
3.71(dd,J=3.0Hz,6.3Hz,2H),3.64(dd,J=2.2Hz,5.5Hz,2H),3.55(t,5.2Hz,2H),
3.40(t,J=6.6Hz,3H),3.20-3.14(m,1H),2.93(dd,J=4.9Hz,12.9Hz,1H),2.74(d,J=7.1Hz,1H),
2.20(t.J=7.1Hz,2H),1.74-1.59(m,4H),1.44(dd,J=1.4Hz,5.5Hz,2H)
ESI-MS m/z:calcd for C24H31F3N8O7S2Na:687.16;found 687.16
【００５７】
（２）[1a-1](14.4mg, 0.022mmol) 、トリエチルシラン(4.5μL)、トリフルオロ酢酸(58μL)をジクロロメタン(1.5mL)に溶解し、室温で24時間撹拌後、溶媒留去、真空乾燥した。
次いで、[7b] (31.3mg, 0.044mmol)、メタノール0.5mL、2,6-ルチジン(10μL)を加え、室温で22時間撹拌した。溶媒留去後、分取TLC（PLC）(5%の濃アンモニア水を含むメタノール:クロロホルム=1:5)で精製して、[1b-2]の淡黄色油状物(15.5mg, 65%) を得た。
【００５８】
ESI-MS :calcd for MNa+,C43H56F3N7O18S2Na:1102.2973;found 1102.1980.
【００５９】
（３）[1b-2](7mg, 0.00７mmol)に、0.5mLのメタノールと28%メトキシナトリウム／メタノール(50μL, 0.014mmol)を加え、窒素雰囲気下、室温で2時間撹拌した。溶媒留去後、逆相HPLCで精製して、[1b-3]の白色固体(1.46mg, 23%)を得た。
【００６０】
ESI-MS:calcd for MH+,C35H49F3N7O14S2:912.2731;found 912.2730.
【００６１】
実施例４
＜Ｃ１−チオアミド基を持つ２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体の合成１＞
【化１５】
2015117233.tif 000017
【００６２】
・D-glycero-D-ido-Nonulopyranosonic acid, 
5-(acetylamino)-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, metyl ester, 4,7,8,9-tetraacetate [3b-1]
D-glycero-D-ido-Nonulopyranosonic acid,5-(acetylamino)-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, 
metyl ester (3.2g, 10mmol)にピリジン(35mL)と無水酢酸(40mL)を加え、窒素下、室温で14時間撹拌した。反応液をエバポレーターで濃縮し、酢酸エチルで希釈して1N-塩酸で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルムおよびメタノール：クロロホルム= 1:50)で精製して、D-glycero-D-ido-Nonulopyranosonic acid,5-(acetylamino)-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, metyl ester,4,7,8,9-tetraacetate [3b-1]の白色固体(5.0g, 93%)を得た。
【００６３】
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-(acetylamino)2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, metyl ester, 4,7,8,9-tetraacetate [4b-1]
[3b-1] (5.0g 9.4mmol)にトリフェニルホスフィン・臭化水素(0.3g, 0.9mmol)とアセトニトリル(50mL)を加え、アルゴン雰囲気下、60℃で20時間撹拌した。炭酸水素ナトリウムでクエンチして溶液を濾過し、溶媒を減圧留去後ジクロロメタンで希釈して飽和炭酸水素水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン:酢酸エチル=1:5)で精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid,5-(acetylamino)2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, metyl ester,4,7,8,9-tetraacetate [4b-1]の白色固体(3.9g, 88%)を得た。
【００６４】
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-[acetyl[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, metyl ester, 4,7,8,9-tetraacetate [4c-1]
[4b-1](2.0g, 4.2mmol)に二炭酸ジ-tert-ブチル（2.8g, 8.4mmol)とN,N-ジメチル-4-アミノピリジン(1.0g, 4.2mmol)とテトラヒドロフラン(40mL)を加え、アルゴン雰囲気下で3時間還流した。反応液を室温に戻してから減圧留去後、塩化メチレンで希釈して冷やした0.5 N-塩酸と飽和炭酸水素水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (エタノール:塩化メチレン=1:20)で精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid,5-[acetyl[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-, metyl ester, 4,7,8,9-tetraacetate [4c-1]の茶色油状物質(2.3g, 97%)を得た。
【００６５】
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-amide [5a-1]
[4c-1](2.2g, 3.8mmol)にアンモニア水(10mL)とメタノール(3mL)を加え、室温で2時間撹拌後、アンモニア水(5mL)を追加しさらに5時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、メタノールとエチルエーテルを用いた再沈殿より精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2- enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-amide [5a-1]の薄茶色固体(0.85g, 63%)を得た。
【００６６】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS) δ:5.80(d,J=2.5Hz,1H),4.61(s,1H),
4.35(dd,J=2.5Hz,8.8Hz,1H),4.16(d,J=10.7Hz,1H),3.87-3.81(m,2H),3.73-3.65(m,4H),
1.47(s,9H)
ESI-MS m/z calcd for C14H24N2O8Na: 371.14;found 371.05, 
calcd for C14H24N2O8K:387.12;found 387.03
【００６７】
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid,2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5- [[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-amide, 4,7,8,9-tetraacetate [5b-1]
[5a-1](0.83g, 2.4mmol)にピリジン(10mL)と無水酢酸(15mL)を加え、窒素雰囲気下、室温で24時間撹拌した。反応液をエバポレーターで濃縮し、酢酸エチルで希釈して1N塩酸と飽和食塩液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5- [[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-amide, 4,7,8,9-tetraacetate [5b-1]の茶色固体(1.1g, 93%)を得た。
【００６８】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS)δ:6.84(s,1H),5.94(d,J=2.5Hz,1H),5.57-5.54(m,2H),5.48-5.47(s,br,2H),4.49(d,J=9.6Hz,1H),4.37(d,J=11.2,1H),4.25(d,J=11.5Hz,1H),4.13-4.02(m,3H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.06(s,6H),1.41(s,9H)
ESI-MS m/z calcd for C22H32N2O12Na:539.19;found 539.12
【００６９】
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5- [[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-thioamide, 4,7,8,9-tetraacetate [1ca-1]
[5b-1] (1.1g, 2.2mmol)にローソン試薬(0.68g, 1.7mmol)とテトラヒドロフラン(8mL)を加え、アルゴン雰囲気下、40℃で4時間撹拌した。反応液をエバポレーターで濃縮し、塩化メチレンで希釈して水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル:ヘキサン=1:2)で精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5- [[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-thioamide, 4,7,8,9-tetraacetate [1ca-1]の黄色固体(0.75g, 63%)を得た。
【００７０】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS)δ:8.15(s,1H),7.57(s,1H),6.41(d,J=2.7Hz,1H),5.57(dd,J=2.5Hz,6.5Hz,1H),5.49-5.47(m,2H),4.43(d,J=8.9Hz,1H),4.29(dd,J=11Hz,4Hz,2H),4.13-3.99(m,2H),2.15(s,3H),2.08(s,3H),2.06(s,3H),2.05(s,3H),1.41(s,9H)
ESI-MS m/z calcd for C14H24N2O11SNa:555.16;found555.13, calcd for C14H24N2O11SK:571.14;found 571.18
【００７１】
実施例５
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-amino-thioamide, 4,7,8,9-tetraacetate [1ca-2]
【化１６】
2015117233.tif 000018
【００７２】
[1ca-1](0.15g, 0.3mmol)にトリフルオロ酢酸／塩化メチレン(50%)溶液を1mL加えて、室温で1時間30分撹拌した。塩化メチレンで希釈して飽和炭酸水素水溶液と飽和食塩液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン:酢酸エチル=1:5〜1:10)で精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-amino-thioamide, 4,7,8,9-tetraacetate [1ca-2]の黄色油状  (91mg, 75%)を得た。
【００７３】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS)δ:8.09(s,1H),7.55(s,1H),6.34(d,J=2.5Hz,1H), 5.56-5.52(m,3H),5.35(dd,J=2.8Hz,8.5Hz,1H),4.31-4.13(m,3H),3.94(d,J=10.4Hz,1H), 2.98(dd,J= 8.5Hz,10.5Hz,1H),2.18(s,3H),2.14(s,6H),2.08(s,3H)
ESI-MS m/z calcd for C17H25N2O9S:433.13;found 433.13
【００７４】
実施例６
・(1S,2R)-1-((2S,3R,4S)-3-acetamido-4-acetoxy-6-carbamothioyl-3, 4-dihydro-2H- pyran-2-yl)propane-1,2,3-triyltriacetate D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-(acetylamino)-thioamide, 4,7,8,9-tetraacetate [1ca-3]
【化１７】
2015117233.tif 000019
【００７５】
[1ca-2] (90mg, 0.21mmol)に無水酢酸(0.3mL)、ピリジン(1.5mL)を加えて、窒素雰囲気下、室温で2時間30分撹拌した。酢酸エチルで希釈して1N塩酸と飽和食塩液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン: 酢酸エチル=1:10)で精製して、(1S,2R)-1-((2S,3R,4S)-3-acetamido-4-acetoxy-6-carbamothioyl-3, 4-dihydro-2H- pyran-2-yl)propane-1,2,3-triyltriacetate D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-(acetylamino)-thioamide, 4,7,8,9-tetraacetate [1ca-3]の黄色油状(54mg, 59%)を得た。
【００７６】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS)δ:8.15(s,1H),7.55(s,1H),6.41(d,J=2.5Hz,1H), 5.67(dd,J=2.7Hz,8.8Hz,1H),5.50-5.44(m,1H),5.39(d,J=2.0Hz,1H),5.36(t,J=1.9Hz,1H), 4.42-4.29(m,4H),4.09(dd,J=6.9Hz,12.4Hz,1H),2.15(s,3H),2.13(s,3H),2.08(s, H), 2.06(s,3H)
ESI-MS m/z calcd for C19H26N2O10SNa:497.12;found 497.12
【００７７】
実施例７
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-(acetylamino)- thioamide [1ca-4]
【化１８】
2015117233.tif 000020
【００７８】
[1ca-3](49mg, 0.10mmol)にメトキシナトリウム(50μL)、メタノール(0.5mL)を加えて、窒素雰囲気下、室温で3時間撹拌した。反応液に活性化したイオン交換樹脂を加えて10分撹拌した。溶液を濾過後、溶媒を減圧留去し、残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー (メタノール:水=1:3)で精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-(acetylamino)- thioamide [1ca-4]の黄色固体(18mg, 58%)を得た。
【００７９】
1H NMR (300 MHz,CD3OD)δ:6.32(d,J= 2.8Hz,1H),4.41(dd,J=2.7Hz,8.8Hz,1H),4.19(dd,J=1.1Hz,10.9Hz,1H),3.96(dd,J=8.9Hz,10.7Hz,1H),3.84-3.79(m,3H),3.67(dd,J= 5.2Hz,11.3Hz,1H),3.56(d,J=11.3Hz,1H),2.05(s,3H)
ESI-MS m/z calcd for C11H18N2O6SNa:329.08;found 329.08
【００８０】
実施例８
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-4,7,8,9-tetraacetate-benzene-sulfamoylpropanimidamide [1da-1]
【化１９】
2015117233.tif 000021
【００８１】
[1ca-1](40mg, 0.075mmol)にベンゼンスルホニルアジド(69mg, 0.38mmol)、クロホホルム(1.5mL)を加えて、47時間加熱還流した。溶媒を減圧留去し、残渣をPTLC (ヘキサン:酢酸エチル=1:1)で精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-4,7,8,9-tetraacetate-benzene-sulfamoylpropanimidamide [1da-1]の白色個体(37mg, 76%)を得た。
【００８２】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS)δ:8.18(br,s,1H),7.94(d,J=8.5Hz,1H),7.51(m,3H),7.29(br,s,1H),6.07(d,J=2.5Hz,1H),5.54(dd,J=2.0Hz,8.8Hz,1H),5.45-5.44(m,2H),4.44(d,J=10.2H,1H),4.34(dd,J=13.5Hz,1H),4.24(d,J=10.4Hz,1H),4.03-3.99(m,2H),2.13(s,3H),2.11(s,3H),2.06(s,3H),2.05(s,3H),1.39(s,9H)
ESI-MS m/z calcd for C28H37N3O13SNa:678.19;found 678.09, calcd for C28H37N3O13SK:694.17; found 694.04
【００８３】
実施例９
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-4,7,8,9-tetraacetate-(p-acetoamidobenzene)-sulfamoylpropanimidamide [1da-2]
【化２０】
2015117233.tif 000022
【００８４】
[1da-2](120mg, 0.23mmol)に4-acetamidobenzenesulfonyl azide (24mg, 0.10mmol)、クロロホルム(1mL)を加えて、52時間加熱還流した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン:酢酸エチル=1:1〜1:2〜酢酸エチル)で精製して、・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]-4,7,8,9-tetraacetate-(p-acetoamidobenzene)-sulfamoylpropanimidamide [1da-2]の白色固体(51mg, 72%)を得た。
【００８５】
1H NMR (300 MHz, CDCl3, 標準物質 TMS)δ:8.12(s,1H),8.07(br,s,1H),7.82(d,J=8.5Hz,2H),7.63(d,J=8.7Hz,2H),7.34(s,1H),5.99(d,J=2.5Hz,1H),5.54(dd,J=2.5Hz,11.5Hz,1H),5.44(br,s,1H),4.70(br,s,1H),4.30 (dd,J=8.5Hz,13.1Hz,2H),4.02(m,2H),2.20(s,H),2.13(s,3H),2.11(s,3H),2.05(s,3H),2.04(s,3H),1.39(s,9H)
ESI-MS m/z calcd for C31H40N4O14S:713.23;found 712.87, calcd for C30H40N4O14SNa:735.22;found 734.78, calcd for C30H40N4O14SK:751.19;found 750.71
【００８６】
実施例１０
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetyl-ethoxy)carbonyl]amino]-(p-acetoamidobenzene)-sulfamoylpropanimidamide [1da-3]
【化２１】
2015117233.tif 000023
【００８７】
[1da-2](51mg, 0.07mmol)にメトキシナトリウム(0.1mL)、メタノール(1mL)を加えて、窒素雰囲気下、室温で4時間撹拌した。水でクエンチして溶媒を減圧留去し、残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー (メタノール: 水=1:1)で精製して、D-glycero-D-galacto- Non-2-enonic acid, 2,6-anhydro-3,5-dideoxy-5-[[(1,1-dimetylethoxy)carbonyl]amino]- (p-acetoamidobenzene)-sulfamoylpropanimidamide [1da-3]の白色固体(29mg, 76%)を得た。
【００８８】
1H NMR (300 MHz,CD3OD)δ:7.84(d,J=8.8Hz,2H),7.70(d,J=8.8Hz,2H),5.87(d,J=2.2Hz,1H),4.32(dd,J=2.5Hz,8.8Hz,1H),4.13(d,J=10.8Hz,1H),3.85-3.79(m,2H),3.70-3.60(m,3H),2.15(s,3H),1.45(s,9H)
ESI-MS m/z calcd for C22H32N4O10SNa:567.17;found 567.13
【００８９】
実施例１１
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-acetylamino-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-benzene-sulfamoylpropanimidamide [1db-1]
【化２２】
2015117233.tif 000024
【００９０】
[1ca-4](20mg, 0.065mmol)とベンゼンスルホニルアジド(0.33mmol)とを水(1mL)に溶解し、80℃で45時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-acetylamino-2,6-anhydro-3,5-dideoxy-benzene-sulfamoylpropanimidamide [1db-1] (50%)を得た。
【００９１】
1H NMR (300 MHz, CD3OD):7.91(d,J= 1.7Hz,2H),7.60-7.51(m,3H),5.96(d,J=4.7Hz,1H),4.40(dd,J=2.4Hz,8.8Hz,1H),4.19(d,J=9.4Hz,2H),3.97(dd,J=8.8Hz,10.7Hz,1H),3.83-3.78(m,2H),3.63(dd,J=5.8Hz,11.8Hz,1H),3.58(d,J=9.1Hz,1H),2.03 ppm(s,3 H).
ESI-MS:calcd for [MH+]-,C17H22N3O8S:428.1133;found 428.1144.
【００９２】
実施例１２
実施例１１と同様にして以下の化合物を得た。
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-acetylamino-2,6-anhydro-3,5-dideoxy--p-acetylaminobenzene-sulfamoylpropanimidamide [1db-2]
【化２３】
2015117233.tif 000025
【００９３】
1H NMR (300 MHz, CD3OD):7.85(d,J=9.1Hz,2H),7.73(d,J=9.1Hz,2H),5.97(d,J=2.5Hz,1H),4.40(dd,J=2.5Hz,8.5Hz,1H),4.18(dd,J=1.1Hz,11.0Hz,1H),3.95(dd,J=8.8Hz,10.7Hz,1H),3.82-3.78(m,2H),3.67(dd,J=6.1Hz,12.1Hz,1H),3.58(d,J=0.9Hz,9.1Hz,1H),2.15(s,3H),2.03 ppm(s,3H).
ESI-MS:calcd for [MH+]- ,C19H25N4O9S:485.1342 ;found 485.1436.
【００９４】
実施例１３
実施例１１と同様にして以下の化合物を得た。
・D-glycero-D-galacto-Non-2-enonic acid, 5-acetylamino-2,6-anhydro-3,5-dideoxy--methansulfamoylpropanimidamide [1db-2]
【化２４】
2015117233.tif 000026
【００９５】
1H NMR (300 MHz, CD3OD):6.00(d,J=2.5Hz,1H),4.46-4.42(m,1H),4.42(d,J=10.7Hz,1H),
3.99(t,J=11.7Hz,1H),3.84-3.81(m,2H),3.71-3.60(m,3 H),2.98(s,3H),2.05 ppm(s,3H).
ESI-MS : calcd for MNa+,C12H21N3O8SNa:390.0947;found 390.0353.
【００９６】
実施例１４
＜クリック反応によるプローブの合成＞
【化２５】
2015117233.tif 000027
【００９７】
（１）[1ca-3] (8mg, 0.017mmol) と[7a] (33mg, 0.050mmol) をエタノール(0.5mL)に溶解し、27 時間加熱還流した。溶媒留去後、分取用TLC (メタノール：クロロホルム=1:10)で精製して、淡黄色油状物質[1dc-1] (3mg, 17%) を得た。
【００９８】
ESI-MS :calcd for MNa+,C43H57F3N8O17S2Na:1101.3133;found 1101.3130.
【００９９】
（２）[1dc-1](3mg, 0.003mmol) に28%ナトリウムメトキド／メタノール(10μL, 0.002mmol) を加え、150μLのメタノールに溶解し、アルゴン雰囲気下、室温で2.5 時間撹拌した。5% 酢酸水溶液を加えてクエンチし、溶媒留去後、逆相HPLCで精製して白色固体[1dc-2](0.4mg, 15%) を得た。
【０１００】
ESI-MS:calcd for MH+ ,C35H50F3N8O13S2:911.2891;found 911.2896.
【０１０１】
実施例１５
＜４位にグアニジノ基を導入したシアル酸誘導体の合成＞
・(2R,3R,4S)-S-2,4,6-trimethoxybenzyl 3-acetamido-4-guanidino-2-((1S,2R)-1,2,3-trihydroxypropyl)-3,4-dihydro-2H-pyran-6-carbothioate [1e]
【化２６】
2015117233.tif 000028
【０１０２】
ザナミビル水和物（120mg、１水和物として 0.34mmol）にDMSO（3mL）を加えて、加熱溶解後、室温まで冷却した。この溶液に、2,4,6-トリメトキシベンジルチオール（364mg, 1.7mmol）とDMT-MM（141mg、0.51mmol）を加え、室温で２４時間撹拌した。途中、４時間後、８時間後にそれぞれDMT-MM（70mg、0.25mmol）加えた。この反応溶液にイオン交換水（30mL）を加え、CHCl3（10mL）で５回洗浄後、水層をエバポレートした。続いて、残渣中のDMSOを真空減圧留去した。残渣を少量のMeOHに溶解し、EtOAc より再沈殿させ、生成した固体を濾別したのち真空乾燥して、淡黄色固体[1e]（165mg, 92%）を得た。
【０１０３】
1H NMR (400MHz,CD3OD):6.18(s,3H),5.71(d,J=2.0Hz,1H),4.45-4.40(m,2H),4.24-4.17(m,3H),
3.88-3.80(m,2H),3.79(s,3H),3.78(s,6H),3.66-3.62(m,2H),2.00ppm(s,3H).
HRESI-MS : calcd for MH+,C22H33N4O9S:529.1968;found 529.1958.
【０１０４】
実施例１６
・(2R,3R,4S)-3-acetamido-4-guanidino-N-(methylsulfonyl)-2-((1S,2R)-1,2,3- trihydroxypropyl)-3,4-dihydro-2H-pyran-6-carboxamide [1f]
【化２７】
2015117233.tif 000029
【０１０５】
化合物[1e]（42mg,0.08mmol）に、CH2Cl2（1mL）、TFA（1mL）、Et3SiH（0.25mL）を加えて、室温で16時間撹拌した。溶媒を減圧留去した後に、3時間真空乾燥した。残渣にイオン交換水（2mL）とMeOH（1mL）を加え、続いてメタンスルホニルアジド（48mg, 0.4mmol）と2,6-ルチジン（0.5mL）を加えて、室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー (イオン交換水)で精製した。得られた固体にMeOHを加えて遠心分離し、上清をエバポレートして真空乾燥することで、[1f]を白色固体(22mg, 68%)として得た。
【０１０６】
1H NMR (300MHz,D2O):5.93(d,J=2.0Hz,1H),4.58-4.52(m,2H),4.32(d,J=10.7Hz,1H),
3.92-3.86(m,2H),3.78-3.64(m,2H),3.39(s,3H),2.03ppm(s,3H).
HRESI-MS : calcd for MH+,C13H24N5O8S:410.1346;found 410.1328.
【０１０７】
実施例１７
【化２８】
2015117233.tif 000030
【０１０８】
（１）市販のPEG-diamine（60mg,0.096mmol）のジオキサン（1.5mL）溶液に、4-スルホニルアジド安息香酸スクシンイミジルエステル（93mg、0.29mmol）を室温で加え、50℃で24時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、分取薄層液体クロマトグラフィー（PLC、メタノール：クロロホルム=1:8）により精製し、[1g]を無色油状物質(57mg, 57%)として得た。
【０１０９】
1H NMR (300MHz,CDCl3):8.11(d,J=8.1Hz,4H), 8.11(d,J=8.1Hz,4H), 7.87(t,J=5.4Hz,2H), 7.08(t,J=5.4Hz,2H), 3.98(s,4H), 3.70-3.57(m,28H), 3.53-3.44(m,8H), 3.33(dd,J=6.6,13.5Hz 4H), 1.91(quint,J=5.7Hz, 4H), 1.75ppm(quint,J=6.6Hz,4H).
HRESI-MS : calcd for MNa+,C42H64N10O17S2Na:1067.3790;found 1067.3792.
【０１１０】
（２）アルゴン雰囲気下、[1a-1]（26mg, 0.04mmol）にジクロロメタン（0.2mL）、トリエチルシラン（0.25mL）、TFA（0.6mL）を0℃で加えて20分間撹拌後、室温で1.5時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、アセトニトリルとメタノールでそれぞれ共沸した。残渣に、[1g]（10mg, 0.01mmol）、MeOH（1mL）、2,6-ルチジン（6mL）を加えてアルゴン雰囲気下、室温で21時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、分取薄層液体クロマトグラフィー（PLC、メタノール：クロロホルム=1:5）により精製し、[1h-2]を無色油状物質(16mg, 86%)として得た。
【０１１１】
1H NMR (300MHz,CD3OD): 8.09(d,J=8.7Hz,4H), 7.94(d,J=8.7Hz,4H), 5.82(d,J=2.7Hz,2H), 4.64-4.55(m,6H), 4.34(d,J=6.9Hz,2H), 4.12(d,J=10.5Hz,2H), 3.99(s,4H), 3.84-3.78(m,4H), 3.68-3.47(m,40H), 2.01(s,6H), 1.89(quint,J=6.6Hz,4H), 1.76ppm(quint,J=6.6Hz,4H).
ESI-MS : calcd for [M-H+]-,C80H113N8O39S2:1873.6546;found 1873.6901.
【０１１２】
（３）[1h-2]（7.6mg, 4.1mmol）にメタノール（1mL）と28% NaOMe/MeOH溶液（8mL, 41mmol）を加え、室温で4時間撹拌した。陽イオン交換カラム（Dowex50W x 8）と逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール：水＝2：3）により精製し、[1h-1]を無色油状物質(5.03mg, 80%)として得た。
【０１１３】
1H NMR (300MHz,CD3OD): 8.02(d,J=8.7Hz,4H), 7.89(d,J=8.7Hz,4H), 5.71(d,J=2.7Hz,2H), 5.55(m,6H), 4.47-4.36(m,4H), 4.28-4.18(m,4H), 3.98(s,4H), 3.68-3.47(m,20H), 3.37-3.28(m,20H), 2.09(s,6H), 2.05(s,6H), 2.03(s,6H), 2.01(s,6H), 1.92-1.87(m,10H), 1.76ppm(quint,J=6.0Hz,4H).
ESI-MS : calcd for [M-H+]-,C64H97N8O31S2:1537.5701;found 1537.5940.
【０１１４】
実施例１８
【化２９】
2015117233.tif 000031
【０１１５】
アルゴン雰囲気下、化合物[1e]（95mg, 0.18mmol）にジクロロメタン（1mL）を加えて、氷浴で10分間撹拌後、TFA（2mL）とトリエチルシラン（1mL）を加えた。氷浴を外した後、室温で12時間撹拌し、溶媒を減圧留去して、6時間真空乾燥した（反応容器A）。その間、別の反応容器を用いて、PEGを誘導化した。PEG-diamine2（33mg, 0.04mmol）をDMF（1.35mL）に溶解し、トリエチルアミン（32mL、0.24mmol）と4-スルホニルアジド安息香酸スクシンイミジルエステル（65mg、0.2mmol）を加え、室温で2.5時間撹拌した後、溶媒を減圧留去した。残渣にメタノール（0.5mL x 3回）を加えて溶解し、その溶液を前述の反応容器Aに加えた。続けてイオン交換水（2mL）と2,6-ルチジン（0.25mL）を加え、室温で18時間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（H2O〜H2O：MeOH = 1：1）にて精製した。得られた無色物質にイオン交換水と28%アンモニア水を数滴加え、クロロホルムで５回洗浄した。水層を凍結乾燥し、化合物[1i]を無色固体（41.2mg、89%）として得た。
【０１１６】
1H NMR (300MHz,D2O): 8.16(d,J=8.4Hz,4H), 8.05(d,J=8.4Hz,4H), 5.90(d,J=2.4Hz,2H), 5.55(m,6H), 4.63(d,J=9.3Hz,2H), 4.56(d,J=10.5Hz,2H), 4.39(t,J=9.9Hz,2H), 4.15-4.04(m,4H), 3.93(t,J=6.0Hz,4H), 3.85-3.76(m,32H), 3.72-3.65(m,8H), 3.42(t,J=6.9Hz,4H), 2.67(t,J=6.3Hz,4H), 2.22(s,6H), 2.10(quint,J=6.3Hz,4H), 1.93ppm(quint,J=6.6Hz,4H).
HRESI-MS : calcd for M+2H+,C72H118N14O31S2:1738.7529;found 869.3807 (z=2).
【０１１７】
実施例１９
＜アミジン光プローブによるウェルシュ菌由来ノイラミニダーゼの特異的光ラベル＞
【０１１８】
氷冷下でPCR用チューブに表１のように溶液を調製した。37 ℃で30 分間インキュベーションし、365nmで15 秒間光照射、その後5×SDS sample bufferを2.5μL加えて1 時間の室温変性を行った。10% SDS PAGE (24mA、1 時間) を行うことで分子量ごとにタンパクを分けて、ブロッティング (20V、45分) をしてタンパクをメンブレンに転写した。ブロッティング後のメンブレンをカゼイン溶液で1 時間ブロッキングした。カゼイン溶液を捨て、10mLのTPBSにストレプトアビジン−ＨＲＰ5μL加えてよく混ぜたものを加えて30 分振とうした。ストレプトアビジン溶液を捨て、TPBSで10 分洗浄を3 回行い、洗浄後のメンブレンにイムノスター試薬を加えることで化学発光を検出した。結果を図１に示す。
【０１１９】
【表１】
2015117233.tif 000032
【０１２０】
実施例２０
＜アミジン光プローブとウェルシュ菌由来ノイラミニダーゼによるアミジン導入シアル酸誘導体の阻害効果の評価＞
【化２６】
2015117233.tif 000033
【０１２１】
氷冷下でPCR用チューブに表２のように溶液を調製した。37 ℃で30 分間インキュベーションし、365 nmで15 秒間光照射、その後5×SDS sample bufferを2.5 μL加えて1 時間の室温変性を行った。10% SDS PAGE (24 mA、1 時間) を行うことで分子量ごとにタンパクを分けて、ブロッティング (20 V、45 分) をしてタンパクをメンブレンに転写した。ブロッティング後のメンブレンをカゼイン溶液で1 時間ブロッキングした。カゼイン溶液を捨て、10 mLのTPBSにストレプトアビジン・HRPを5 μL加えてよく混ぜたものを加えて30 分振とうした。ストレプトアビジン溶液を捨て、TPBSで10 分洗浄を3 回行い、洗浄後のメンブレンにイムノスター試薬を加えることで化学発光を検出した。結果を図２に示す。
【０１２２】
【表２】
2015117233.tif 000034
【０１２３】
実施例２１
＜蛍光測定によるアシルスルホンアミド導入シアル酸誘導体のノイラミニダーゼ阻害効果の評価＞
市販のヒト細胞由来ノイラミニダーゼ（Recombinant influenza A H5N1, Shanghai-2013）を 1U/mL、化合物[1f]については、0,2,4,8,16,32,64,128,200,400,1000 nM、化合物[1h-1]については、0, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 200, 400, 1000 mMおよび化合物[1i]については、0,1,10,25,50,80,100,200,500,1000 nMをとなるように緩衝液（32.5mM MES, 4mM CaCl2, pH 6.5）を用いて溶液調製した。37℃で10分間インキュベーションした後、MUNANA（2-(4-Methylumbelliferyl)-a-D-N-acetylneuraminic acid sodium salt hydrate）の緩衝溶液を 10 mMとなるように加え、さらに同温度で30分間インキュベーションした。阻害剤濃度が異なるそれぞれの溶液をグリシン緩衝液（pH 10.7）で希釈後、蛍光測定（励起波長 365nm、観測波長 450nm）を行った。結果を図３に示した。
【産業上の利用可能性】
【０１２４】
本発明の２−デオキシ−２，３−ジデヒドロシアル酸誘導体は、新たな抗ウィルス薬として、また、その開発段階における母骨格として有用である。また、本発明の光プローブを利用して治療薬候補化合物のスクリーニングを行うことができる。
【図１】
2015117233.tif 000043
【図２】
2015117233.tif 000044
【図３】
2015117233.tif 000045