(57)【要約】【課題】  抗癌剤治療開始後の抗癌剤に曝露された癌組織及び／又は癌細胞を培養する方法を提供する。【解決手段】  分子内に疎水性部分と親水性部分とを有し、ゾル−ゲル転移温度を有する高分子化合物を含み、ゾル−ゲル転移温度より低い温度で可逆的にゾル状態を示す熟可逆性ハイドロゲル（ＴＧＰ）を用いて抗癌剤曝露後の癌細胞を培養する。ＴＧＰゲル中においては正常細胞及び繊維芽細胞により阻害されることなく抗癌剤によりダメージを受けた癌細胞が立体的に増殖して細胞塊を形成する。【選択図】  図１
2015000030.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子内に疎水性部分と親水性部分とを有し、ゾル−ゲル転移温度を有する高分子化合物を含み、前記ゾル−ゲル転移温度より低い温度で可逆的にゾル状態を示すことを特徴とする抗癌剤曝露後の癌細胞培養担体。
【請求項２】
分子内に疎水性部分と親水性部分とを有し、ゾル−ゲル転移温度を有する高分子化合物を含み、前記ゾル−ゲル転移温度より低い温度で可逆的にゾル状態を示す培養担体を用いることを特徴とする抗癌剤曝露後の癌細胞培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願に係る発明は、抗癌剤曝露後の癌細胞培養担体及び抗癌剤曝露後の癌細胞培養方法に係る。
【背景技術】
【０００２】
癌の治療において最初に選択される抗癌剤投与は患者の負担が他の治療法と比較して少ない反面、最適薬剤の選定が難しい。
最適薬剤の選択のため、患者から採取した癌細胞検体を培養して複数種の候補抗癌剤に曝露させ、癌細胞あるいは癌組織の増殖状況を観察する抗癌剤感受性試験が行われる。
【０００３】
抗癌剤感受性試験には様々な方法があるが、多くの方法では固形癌もしくは浮遊癌いずれかしか試験することができない。また、これらの方法では癌細胞以外の正常細胞及び繊維芽細胞が増殖してしまうことにより、試験精度への影響、不要細胞除去処理の煩雑さが問題となる。
【０００４】
特許第３１９０１４７号公報にこのような問題を解決した癌細胞培養用担体が示され、特開平１１−１６９７０３号公報に癌細胞培養用担体として使用する熟可逆性ハイドロゲル（Thermo reversible Gelation Polymer：ＴＧＰ）が示されている。
【０００５】
このＴＧＰは、親水性ポリマーと感温性ポリマーのブロック共重合体であり、２２℃以下でゾル、２２度以上でゲルとなる転移点を有する高分子物質である。ＴＧＰを培養担体とすると固形癌組織が３次元的に増殖し、繊維芽細胞の増殖は認められないという特性があり、極めて生体内に近い培養環境下で培養することができ、高い試験精度で試験を行うことが可能である。
【０００６】
また、ＴＧＰは２２℃以下でゾル、２２度以上でゲルとなる転移点を有するため、３７℃という生体内の温度で培養した癌組織を含むゲルを２２℃以下に冷却することにより、癌組織のみを容易に取り出すことが出来る。
【０００７】
一般的に薬剤は濃度に依存して細胞毒性を示し、抗癌剤のみが細胞毒性（殺細胞作用）を示すわけではないが、特に抗癌剤は細胞分裂を阻止するように作用するため、細胞活性を障害する。また、抗癌剤は癌細胞のみでなく正常な細胞にも作用する。
抗癌剤の薬理作用は、（１）細胞中のＤＮＡを標的として細胞を障害するもの、（２）細胞内にある微小管に作用して細胞を障害するもの、（３）癌細胞の増殖に関与する特定の分子に作用して細胞増殖を抑制するもの、の３種類に分けられ、（１）と（２）は殺細胞性抗癌剤、（３）は分子標的薬と呼ばれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第３１９０１４７号公報
【特許文献２】特開平１１−１６９７０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
抗癌剤治療が開始される前の癌組織及び癌細胞は抗癌剤に曝露されていないため、培養が可能である。
抗癌剤治療が開始された後の癌組織には抗癌剤に暴露された癌細胞以外に癌細胞ではない正常細胞及び繊維芽細胞が含まれており、抗癌剤の影響を受けていないこれら正常細胞及び繊維芽細胞が癌細胞よりも先に増殖するため癌細胞の増殖が妨げられている。
そのため、抗癌剤治療が開始された後の抗癌剤に曝露された癌組織及び／又は癌細胞は培養できないと考えられ、実際に培養できなかった。
【００１０】
抗癌剤を変更する必要が生じた場合、あるいは他の抗癌剤を追加して併用する必要が生じた場合には抗癌剤治療開始後の癌組織及び／又は癌細胞の抗癌剤感受性試験を行う必要があるが、患者の癌組織及び／又は癌細胞検体を培養することができないため、試験を行うことが出来なかった。
【００１１】
本出願に係る発明は、抗癌剤治療開始後の抗癌剤に曝露された癌組織及び／又は癌細胞を培養する方法を提供することを課題とする。
【００１２】
正常細胞組織の増殖に関しても、繊維芽細胞が正常細胞を上回る速度で増殖し、正常細胞の増殖を阻害することがある。幹細胞に関しても全く同様の事が言え、幹細胞が本来なるべき細胞に分化する事が出来なくなるため、継代が出来なくなることがある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者等はＴＧＰを培養担体にすると抗癌剤に曝露された後の癌組織及び／又は癌細胞が増殖し、培養が可能であることを発見した。
【００１４】
この出願においては、このことを利用して、抗癌剤に曝露された後の癌組織及び／又は癌細胞を培養する方法を提供する。
【００１５】
また、この出願においては、ＴＧＰを培養担体にすることにより正常細胞・組織を培養担体から取り出すのを容易にし、正常細胞・組織をＴＧＰ上に継代させる方法を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
正常細胞、組織、幹細胞の増殖に於いてＴＧＰを使用する事によって、繊維芽細胞の増殖が抑制され、その結果細胞・組織が増殖する事が可能となる。
【００１７】
また、継代に関して言えば、ＴＧＰ内で三次元的に逡巡した細胞・組織は、その温度を変異点以下に導く事で、ゲルからゾルに変化する為、容易に取り出して新たなでＴＧＰ上に継代させる事が可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ＴＧＰ培地による抗癌剤に曝露後の本発明の癌細胞培養写真
【図２】コラーゲン培地による抗癌剤に曝露後の従来の癌細胞培養写真
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、発明の実施形態を説明する。
抗癌剤フルオロシラフルを投与され、その後の手術により摘出した癌性腹水患者の腹水を検体として用いて本発明で用いる熟可逆性ハイドロゲル（Thermo reversible Gelation Polymer：ＴＧＰ）と従来一般的に用いられているコラーゲンゲルとで各々７日間培養して、顕微鏡で比較観察した。
【００２０】
図１に示したのは培養担体としてＴＧＰを用いた培養結果の顕微鏡写真である。
ＴＧＰゲルの繊維芽細胞が増殖し難いという特性により、癌細胞が効率良く増殖し、更に癌細胞同士が結合して画面中央にある立体の塊になる。この塊は生体内の癌細胞と良く似た性質を示す。
その上、繊維芽細胞がほとんど観察されずほぼ純粋に癌細胞を得ることが出来る。
【００２１】
癌組織を培養した４１例中ＴＧＰ中の培養で増殖しなかった症例は１症例２．４４％のみであり、他の４０症例９７．７６％では増殖した。
【００２２】
図２に示したのはコラーゲンゲルを培養担体として用いた比較例の顕微鏡写真であり、画面中に細長く見える増殖し易い繊維芽細胞が増殖し、抗癌剤に曝露された左下部に見える癌細胞は繊維芽細胞にうずもれる様な形で僅かしか増殖していない。
細胞数をみると圧倒的に繊維芽紳胞が多く、癌細胞は図１の写真と比較して１／１０程度しか認められない。
【００２３】
実施例では抗癌剤としてフルオロシラフルを投与した例を挙げたが、その他の抗癌剤テガフール・ギメラシル・ オテラシルカリウム，グムシタビン，シスプラチン，オキサリプラチン，カルボプラチン，ドセタキセル，パクリタキセル，ビンクリスチン，イリノテカン，ドキソルビシン，アドリアマイシン，マイトマイシンでも同様な差異が認められている。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明は癌治療分野だけでなく、新規抗癌剤の開発に有用であり、癌治療以外にも様々な薬剤の開発に有用である。
【図１】
2015000030.tif 000003
【図２】
2015000030.tif 000004