(57)【要約】【課題】優れた抗癌作用を有する抗癌剤を提供する。【解決手段】式（Ｉ）【化１】2015117182.tif 000012（式中、Ａｒ１はフェニル又は４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル、Ａｒ２は置換又は非置換のフェニル）で示される化合物又はその塩；及び前記化合物又はその塩を含有する抗癌剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）
【化１】
2015117182.tif 000011
（式中、Ａｒ１はフェニル基又は４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル基であり、Ａｒ２は置換又は非置換のフェニル基である。）
で示される化合物又はその塩。
【請求項２】
前記式（Ｉ）においてＡｒ２が、少なくともオルト位がメトキシ基で置換されているフェニル基である請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物又はその塩を含有する抗癌剤。
【請求項４】
癌が神経芽腫、肺癌、大腸癌、子宮癌又は乳癌である請求項３に記載の抗癌剤。
【請求項５】
癌が神経芽腫である請求項３に記載の抗癌剤。
【請求項６】
癌の進展及び／又は転移の抑制のための請求項３〜５のいずれか１項に記載の抗癌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗癌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔｒｋファミリー受容体チロシンキナーゼであるＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ及びＴｒｋＣは、神経栄養因子をリガンドとするシグナル受容体である。神経栄養因子には、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５があるが、ＴｒｋＢにはＢＤＮＦ及びＮＴ−４／５が作用する。ＢＤＮＦは一般に、神経細胞の増殖や分化、生存を調節することが報告されている（特許文献１）。
【０００３】
通常、接着性細胞は、その足場とする細胞外マトリックスとの相互作用を通して生存や増殖を調節しているが、その相互作用を失うとアポトーシスが誘導される。このような現象を「アノイキス（Ａｎｏｉｋｉｓ）」と呼ぶ。近年、ＴｒｋＢの活性化によって細胞のアノイキスが特異的に抑制されることが報告された（非特許文献１）。本文献から、ＴｒｋＢを過剰に発現し、アノイキス耐性を有するヒト腫瘍が、リンパ管や血管への浸潤を通して転移する可能性が示唆された。
【０００４】
ＴｒｋＢを過剰に発現する腫瘍の一種として、神経芽腫が知られている。神経芽腫は交感神経系の腫瘍であり、小児の頭部以外の固形腫瘍では最も多い癌である。ＴｒｋＢを発現している神経芽腫は、進行性が強く、場合により致死的となる。ＴｒｋＢ発現腫瘍はＢＤＮＦを自己で分泌するか、又は傍分泌生存回路を有することが知られており、それにより、腫瘍の生存延長や、薬剤耐性、血管新生が引き起こされる。
【０００５】
神経芽腫の治療法としては、現在、手術療法や化学療法が行われている。化学療法で使用される抗癌剤は、がんの進行度や悪性度に応じて、主にビンクリスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、ドキソルビシン、ピラルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、エトポシド等が使用されており、これらを組み合わせた多剤併用療法が行われている。
【０００６】
一方、神経芽腫等を対象とした新規化合物の開発も試みられており、特許文献１にはＴｒｋＢ阻害剤が開示されている。
【０００７】
本発明者らは、先に、特定のアリールチオアセトアミド誘導体及びアリールオキシアセトアミド誘導体が抗癌作用を有することを見出し、特許出願を行っている（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００８−５４３７６２号公報
【特許文献２】特開２０１３−９５７４３号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Nature, 2004 Aug 26: 430(7003): 973-974; 1034-1039
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、特許文献２に記載の化合物を化学修飾し、より優れた作用を有する抗癌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、特許文献２に記載の次式（Ａ）：
【化１】
2015117182.tif 000002
で示される化合物（Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−クロロフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド）の１，２，４−トリアゾール環の５位に結合している４−クロロフェニル基をフェニル基又は４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル基に置き換えると、抗癌作用が著しく向上することを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は以下の発明を包含する。
【００１２】
（１）下記式（Ｉ）
【化２】
2015117182.tif 000003
（式中、Ａｒ１はフェニル基又は４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル基であり、Ａｒ２は置換又は非置換のフェニル基である。）
で示される化合物又はその塩。
（２）前記式（Ｉ）においてＡｒ２が、少なくともオルト位がメトキシ基で置換されているフェニル基である前記（１）に記載の化合物又はその塩。
（３）前記（１）又は（２）に記載の化合物又はその塩を含有する抗癌剤。
（４）癌が神経芽腫、肺癌、大腸癌、子宮癌又は乳癌である前記（３）に記載の抗癌剤。
（５）癌が神経芽腫である前記（３）に記載の抗癌剤。
（６）癌の進展及び／又は転移の抑制のための前記（３）〜（５）のいずれかに記載の抗癌剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、優れた抗癌作用を有する抗癌剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
前記式（Ｉ）においてＡｒ２で表されるフェニル基は、例えばＣ１−６−アルコキシ基、Ｃ１−６−アルキル基、Ｃ２−６−アルケニル基、Ｃ２−６−アルキニル基、芳香族基、アシル基、水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ハロゲン原子、アラルキル基、アラルキルオキシ基、ニトロ基、アミノ基、Ｃ１−６−アルキルアミノ基、ジＣ１−６−アルキルアミノ基等から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。
【００１６】
Ｃ１−６−アルコキシ基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、好ましくはメトキシ基が挙げられる。
【００１７】
Ｃ１−６−アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられる。
【００１８】
前記Ｃ１−６−アルキル基は、芳香族基、アシル基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、Ｃ１−６−アルコキシ基、アミノ基、Ｃ１−６−アルキルアミノ基、ジＣ１−６−アルキルアミノ基等から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。
【００１９】
Ｃ２−６−アルケニル基としては、例えばビニル基、１−プロペニル基、アリル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基が挙げられる。
【００２０】
Ｃ２−６−アルキニル基としては、例えばエチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル（プロパルギル）基、３−ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基が挙げられる。
【００２１】
芳香族基としては、例えばフェニル基、トリル基、ナフチル基等の芳香族炭化水素基；フリル基、チエニル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基（１，２，３−トリアゾリル基、１，２，４−トリアゾリル基）、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、キノリル基、イソキノリル基等の芳香族複素環基が挙げられる。
【００２２】
前記芳香族基は、Ｃ１−６−アルキル基、Ｃ２−６−アルケニル基、Ｃ２−６−アルキニル基、芳香族基、アシル基、水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ハロゲン原子、Ｃ１−６−アルコキシ基、アラルキル基、アラルキルオキシ基、ニトロ基、アミノ基、Ｃ１−６−アルキルアミノ基、ジＣ１−６−アルキルアミノ基等から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。
【００２３】
アシル基としては、例えばホルミル基、アセチル基、プロピオニル基（プロパノイル基）、ブチリル基（ブタノイル基）、バレリル基（ペンタノイル基）、ヘキサノイル基等のＣ１−６−脂肪族アシル基；ベンゾイル基、トルオイル基等の芳香族アシル基（アロイル基）が挙げられる。
【００２４】
ハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
アラルキル基としては、例えばベンジル基、フェネチル基が挙げられる。
【００２５】
アラルキルオキシ基としては、例えばベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基が挙げられる。
前記アラルキル基及びアラルキルオキシ基は、芳香族基、アシル基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、Ｃ１−６−アルコキシ基、アミノ基、Ｃ１−６−アルキルアミノ基、ジＣ１−６−アルキルアミノ基等から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。
【００２６】
Ａｒ２としては、少なくともＣ１−６−アルコキシ基で置換されているフェニル基（例えば、Ｃ１−６−アルコキシ基で置換されたフェニル基、Ｃ１−６−アルコキシ基及びハロゲン原子で置換されたフェニル基）が好ましく、少なくともオルト位がメトキシ基で置換されているフェニル基（例えば、２−メトキシフェニル基、４−フルオロ−２−メトキシフェニル基、５−フルオロ−２−メトキシフェニル基）が更に好ましい。
【００２７】
前記式（Ｉ）で示される化合物の塩としては、薬学的に許容される塩が好ましく、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、ピロ硫酸、メタリン酸等の無機酸、又はクエン酸、安息香酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、スルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸）等の有機酸との塩が挙げられる。また、フェノール性水酸基又はカルボキシル基を有する場合には、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩として用いることもできる。
【００２８】
前記式（Ｉ）で示される本発明化合物は、例えば、以下に示す方法により製造することができる。
【化３】
2015117182.tif 000004
（式中、Ａｒ１はフェニル基又は４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル基であり、Ａｒ２は置換又は非置換のフェニル基である。）
【００２９】
チオール化合物（１）のエタノール溶液にクロロ酢酸エチルと水酸化ナトリウムを加えて反応させて、トリアゾリルチオ酢酸エチル（２）を得る。トリアゾリルチオ酢酸エチル（２）を、塩化鉄（III）及び酢酸の存在下、ジメトキシテトラヒドロフランと反応させて、４−（１−ピロリル）トリアゾリルチオ酢酸エチル（３）を得る。次いで、化合物（３）を、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール及びカルボジイミドの存在下、アニリン化合物と反応させることにより本発明の化合物（Ｉ）を製造することができる。
【００３０】
前記のようにして得られる生成物を精製するには、通常用いられる手法、例えばシリカゲル等を担体として用いたカラムクロマトグラフィーやメタノール、エタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、水等を用いた再結晶法によればよい。カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒としては、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトン、ヘキサン、ジクロロメタン、酢酸エチル、及びこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００３１】
本発明の抗癌剤は、慣用される他の抗癌剤や免疫抑制剤等を、所望する治療効果を考慮して適宜併用することができる。この場合には、必要に応じて、後述の投与量を適宜増減することができる。
【００３２】
本発明の抗癌剤が適用される癌の種類は、特に限定されず、例えば悪性黒色腫、悪性リンパ腫、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、直腸癌、結腸癌、尿管腫瘍、胆嚢癌、胆管癌、胆道癌、乳癌、肝癌（肝臓癌）、膵臓癌、睾丸腫瘍、上顎癌、舌癌、口唇癌、口腔癌、咽頭癌、喉頭癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、甲状腺癌、脳腫瘍、カポジ肉腫、血管腫、白血病、真性多血症、神経芽腫、網膜芽腫、骨髄腫、膀胱腫、肉腫、骨肉腫、筋肉腫、皮膚癌、基底細胞癌、皮膚付属器癌、皮膚転移癌、皮膚黒色腫等が挙げられる。好ましくは、神経芽腫、肺癌、大腸癌、子宮癌又は乳癌であり、特に好ましくは、神経芽腫である。
本発明の抗癌剤は、各種癌の進展及び／又は転移の抑制のために用いることもできる。
【００３３】
以下、本発明の化合物（Ｉ）の投与量及び製剤化について説明する。
本発明の化合物（Ｉ）はそのまま、あるいは慣用の製剤担体と共に動物及びヒトに投与することができる。投与形態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤等の経口剤、注射剤、坐剤、塗布剤、貼付剤等の非経口剤が挙げられる。
【００３４】
経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。
【００３５】
この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。
【００３６】
結合剤としては、例えばデンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴールが挙げられる。
【００３７】
崩壊剤としては、例えばデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。
【００３８】
界面活性剤としては、例えばラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０が挙げられる。
【００３９】
滑沢剤としては、例えばタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコールが挙げられる。
【００４０】
流動性促進剤としては、例えば軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウムが挙げられる。
【００４１】
注射剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を用いることができる。更に必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、注射剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。更に、必要に応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加えてもよい。
【００４２】
その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布剤、貼付剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に従って製造される。
【００４３】
本発明の製剤は、剤形、投与経路等により異なるが、１日１〜数回から１〜数回／週〜月の投与が可能である。
【００４４】
経口剤として所望の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で化合物（Ｉ）の重量として１〜２００ｍｇを、１日数回に分けての服用が適当である。
【００４５】
非経口剤として所望の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で化合物（Ｉ）の重量として１日１〜５０ｍｇの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当である。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【００４７】
［実施例１］Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物１）の合成
【化４】
2015117182.tif 000005
【００４８】
（１）２−（４−アミノ−５−フェニル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チオ酢酸エチルの合成
４−アミノ−５−フェニル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（２．０６ｇ，１０．７ｍｍｏｌ）のエタノール（１００ｍｌ）溶液にクロロ酢酸エチル（１．３７ｍｌ，１２．８ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（０．４ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて３時間撹拌した。反応溶液を吸引ろ過してエタノールで再結晶することで２−（４−アミノ−５−フェニル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チオ酢酸エチル（１．６２ｇ，５４％）を白色固体として得た。
【００４９】
（２）２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチルの合成
２−（４−アミノ−５−フェニル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チオ酢酸エチル（１．６２ｇ，５．８ｍｍｏｌ）に塩化鉄（III）（０．９０ｇ，５．５ｍｍｏｌ）、水（５ｍｌ）、酢酸（０．１ｍｌ）、ジメトキシテトラヒドロフラン（０．９０ｍｌ，７．０ｍｍｏｌ）を順に加えて６０℃にて２時間加熱した。その後、酢酸エチルと蒸留水を加え、抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、残渣をカラム（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製して、２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチル（０．７５ｇ，４０％）を茶色固体として得た。
【００５０】
（３）２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸の合成
蒸留水（４ｍｌ）とメタノール（１２ｍｌ）の混合液に２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチル（３６０ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（０．２ｇ，５ｍｍｏｌ）を加えて室温にて９０分間撹拌した。反応溶液を１Ｎ塩酸により中和させ、酢酸エチルと蒸留水を加え、抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（０．２４ｇ，７３％）を白色固体として得た。
【００５１】
（４）Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物１）の合成
２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（０．１５ｇ，０．５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．０７ｇ，０．５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．１ｇ，０．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．１４ｍｌ，１ｍｍｏｌ）と２−メトキシアニリン（０．０７ｍｌ，０．６ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１６時間撹拌した。反応溶液に炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加えて抽出し、更に水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層に１Ｎ塩酸を加えて酸性にした後、抽出し、更に水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、残渣をカラム（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３−１：５）で精製してＮ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（６０ｍｇ，３０％）を薄い茶色固体として得た。
【００５２】
1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) 4.07 (s, 3H), 4.23 (s, 2H), 6.54 (dd, J = 2.2Hz, 2H), 6.95 (dd, J = 2.2Hz, 2H), 7.01 (bd, 1H), 7.09 (bt, 1H), 7.20 (bt, 1H), 7.48-7.59 (m, 5H), 8.48 (bd, 1H), 9.80 (s, 1H)
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) 35.42, 55.83, 110,10, 110.52, 120.05, 120.86, 124.06, 124.38, 126.25, 127.71, 129.06, 130.94, 148.54, 165.83
【００５３】
［実施例２］Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物２）の合成
【化５】
2015117182.tif 000006
【００５４】
（１）４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸ヒドラジドの合成
４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸メチル（３．６４ｇ，２０ｍｍｏｌ）をヒドラジン一水和物（２．５ｍｌ）に加えて６０℃にて１５分間加熱後、エタノール（１０ｍｌ）を加えて８０℃にて更に４時間加熱還流した。反応溶液の溶媒を減圧下で留去した後、残渣を氷浴で冷やし、氷水にて吸引ろ過した。更にエタノールにより再結晶することで４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸ヒドラジドを白色固体として得た。
【００５５】
（２）４−アミノ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオールの合成
４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸ヒドラジド（２０ｍｍｏｌ）のエタノール（１２５ｍｌ）溶液に二硫化炭素（１．８２ｍｌ，３０ｍｍｏｌ）を滴下し、水酸化カリウム（１．７ｇ，３０ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１６時間撹拌した。反応溶液にジエチルエーテル（２００ｍｌ）を加えて吸引ろ過して白色固体を得た。この固体にヒドラジン一水和物（６ｍｌ）と蒸留水（４ｍｌ）を加えて１１３℃にて３時間加熱還流した。反応溶液を氷浴で冷やし、濃塩酸を加えると白色固体が析出した。これを吸引ろ過して、エタノールで再結晶することで４−アミノ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（２．２３ｇ，４７％）を白色固体として得た。
【００５６】
（３）２−［［４−アミノ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチルの合成
４−アミノ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（２．２３ｇ，９．４ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍｌ）溶液に水酸化ナトリウム（０．４ｇ，１０ｍｍｏｌ）とクロロ酢酸エチル（１．２ｍｌ，１１．３ｍｍｏｌ）を加えて室温にて３時間撹拌した。反応溶液を吸引ろ過し、エタノールにより再結晶することで２−［［４−アミノ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチル（１．４７ｇ，４８％）を白色固体として得た。
【００５７】
（４）２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチルの合成
２−［４−アミノ−５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ酢酸エチル（１．４７ｇ，４．５ｍｍｏｌ）に塩化鉄（III）（０．７２ｇ，４．４ｍｍｏｌ）、水（１６ｍｌ）、酢酸（０．２ｍｌ）、ジメトキシテトラヒドロフラン（０．８６ｍｌ，６．５ｍｍｏｌ）を順に加えて６０℃にて３時間加熱した。その後、酢酸エチルと蒸留水を加え、抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチル（０．８４ｇ，４９％）を油状物質として得た。
【００５８】
（５）２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸の合成
蒸留水（４ｍｌ）とメタノール（１２ｍｌ）の混合液に２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸エチル（０．８４ｇ，２．２４ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（０．２ｇ，５ｍｍｏｌ）を加えて室温にて３時間撹拌した。反応溶液を１Ｎ塩酸により中和させ、酢酸エチルと蒸留水を加え、抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（６２１ｍｇ，８０％）を油状物質として得た。
【００５９】
（６）Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物２）の合成
２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（２００ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１２０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．１８ｍｌ，１．２ｍｍｏｌ）と２−メトキシアニリン（０．０８ｍｌ，０．７ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１６時間撹拌した。反応溶液に１Ｎ塩酸と酢酸エチルを加えて抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、残渣をカラム（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３−１：５）で精製してＮ−（２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（４８ｍｇ，１８％）を薄い茶色の固体として得た。
【００６０】
1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) 3.75 (s, 2H), 3.99 (s, 2H), 4.33 (s, 2H), 6.49 (dd, J = 2.3Hz), 6.80-7.26 (m, 6H), 7.38 (dd, J = 2.3Hz), 8.13 (bd, 1H), 9.77 (s, 1H), 9.79 (s, 1H)
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) 35.50, 55.79, 55.91, 108.30, 110.13, 110.51, 114.95, 116.29, 120.11, 120.21, 120.99, 121.03, 124.17, 127.62, 146.64, 148.05, 148.53, 153.53, 165.81
【００６１】
［実施例３］Ｎ−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物３）の合成
【化６】
2015117182.tif 000007
【００６２】
実施例１（３）で得られた２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（９０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（４０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（６０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．０９ｍｌ，０．６ｍｍｏｌ）と５−フルオロ−２−メトキシアニリン（０．０４ｍｌ，０．３６ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１６時間撹拌した。反応溶液に炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加えて抽出し、更に水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層に１Ｎ塩酸を加えて酸性にした後、抽出し、更に水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、残渣をカラム（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３−１：５）で精製してＮ−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−［［５−フェニル−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（２０ｍｇ，１６％）を薄い茶色固体として得た。
【００６３】
1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) 4.01 (s, 3H), 4.36 (s, 2H), 6.48 (dd, J = 2.3Hz, 2H), 6.90-7.14 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 2.3Hz, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.55 (dd, 2H), 7.62 (dd, 1H), 8.06 (dd, 1H), 9.84 (s, 1H)
【００６４】
［実施例４］Ｎ−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物４）の合成
【化７】
2015117182.tif 000008
【００６５】
実施例２（５）で得られた２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（２００ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（８０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１２０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．１８ｍｌ，１．２ｍｍｏｌ）と５−フルオロ−２−メトキシアニリン（０．０８ｍｌ，０．７ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１６時間撹拌した。反応溶液に１Ｎ塩酸と酢酸エチルを加えて抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、残渣をカラム（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３−１：５）で精製してＮ−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（３０ｍｇ，１１％）を薄い茶色の固体として得た。
【００６６】
1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) 3.74 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.35 (s, 2H), 6.48 (dd, J = 2.3Hz, 2H), 6.81-7.21 (m, 4H), 7.38 (dd, J = 2.3Hz, 2H), 8.08 (bd, 1H), 9.78 (s, 1H), 9.97 (s, 1H)
【００６７】
［実施例５］Ｎ−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（化合物５）の合成
【化８】
2015117182.tif 000009
【００６８】
実施例２（５）で得られた２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］酢酸（１００ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（４０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（６０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．０９ｍｌ，０．６ｍｍｏｌ）と４−フルオロ−２−メトキシアニリン（０．０４ｍｌ，０．３５ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１６時間撹拌した。反応溶液に１Ｎ塩酸と酢酸エチルを加えて抽出した。更に水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、残渣をカラム（ヘキサン：酢酸エチル＝１：３−１：５）で精製してＮ−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−［［５−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−４−（１Ｈ−ピロール−１−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］アセトアミド（４５ｍｇ，３３％）を黒色の固体として得た。
【００６９】
1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) 3.75 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.31 (s, 2H), 6.48 (dd, J = 2.3Hz, 2H), 6.82-7.13 (m, 3H), 7.38 (dd, J = 2.3Hz, 2H), 7.56-7.86 (m, 2H), 9.77 (s, 1H), 9.80 (s, 1H)
13C-NMR (100MHz, CDCl3) 35.35, 55.92, 56.02, 105.73, 108.27, 110.55, 112.01, 114.96, 120.22, 120.94, 124.59, 125.58, 146.67, 148.02, 148.18, 160.89, 160.97, 174.52
【００７０】
［実施例６］
表１に示す被検化合物を、ヒト神経芽腫由来細胞である、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ／ＴｒｋＢ細胞に作用させて、各化合物のＩＣ５０を求めた。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ／ＴｒｋＢ細胞は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞にＴｒｋＢを過剰発現させた細胞株である。試験方法は以下の通りである。
【００７１】
１０％ＦＢＳ ＲＰＭＩ１６４０培地により培養したＳＨ−ＳＹ５Ｙ／ＴｒｋＢ細胞を、培地１ｍＬ中に１×１０４個含まれるように調製し、２４ウェルプレートに播種した。細胞を一晩培養し、各被検化合物をＤＭＳＯ溶液に溶解させ、培地により希釈し、各化合物の濃度０〜０．３μＭの範囲で培養細胞に処理した。６日後（化合物３〜５については７日後）、細胞数を細胞計数盤により測定し、対数グラフよりＩＣ５０を求めた（表１）。
【表１】
2015117182.tif 000010
【００７２】
表１からわかるように、本発明の化合物は、特許文献２に記載の化合物６に比して、６倍以上の抗癌作用を有する。また、化合物７は、前記式（Ｉ）におけるＡｒ１が本願発明の化合物１及び３と同一であるにもかかわらず、前記式（Ｉ）におけるＡｒ２が置換又は非置換のフェニル基でないため、抗癌作用が著しく劣る。