(57)【要約】      （修正有）【課題】従来の疼痛の治療とは異なるタイプの、疼痛の治療に有用な医薬組成物の提供。【解決手段】、患者の疾患を治療するための医薬組成物であって、前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液の上清を含むことを特徴とする医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の疾患を治療するための医薬組成物であって、
前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液を含むことを特徴とする
医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であって、
前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液が、細胞を除去したものであることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の医薬組成物であって、
前記細胞の除去が、遠心分離及び／又はフィルタ濾過によって行われることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の医薬組成物であって、
前記細胞の除去が、当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収した上で、当該上清から、さらにフィルターを用いて、細胞その他を濾過することにより除去することによって
行われることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記患者の疾患が、疼痛であることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記患者の疾患が、慢性疼痛又はリュウマチ性疼痛であることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記患者から取得した組織の培養が、前記患者の自己血から得た血清を添加した培養液中で行われることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記患者から取得した組織の培養が、３日〜９日間行われることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記患者から取得した組織が、脂肪組織であることを特徴とする
医薬組成物。
【請求項１０】
患者の疾患の治療方法であって、
有効量の前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液を含む医薬組成物を前記患者に投与することを特徴とする
治療方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の治療方法であって、
前記患者の疾患が、疼痛であることを特徴とする
治療方法。
【請求項１２】
患者の疾患を治療するための医薬組成物の製造方法であって、
前記患者から取得した組織を培養するステップ、
培養して得られた培養液から細胞を除去するステップ、
を含むことを特徴とする
製造方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の製造方法であって、
前記患者から取得した組織を培養する前記ステップが、前記患者から取得した組織を、前記患者の自己血から得た血清を添加した培養液中で培養するステップであることを特徴とする
製造方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の製造方法であって、
前記細胞を除去するステップが、遠心分離及び／又はフィルタ濾過によって行われることを特徴とする
製造方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の医薬組成物であって、
前記細胞を除去するステップが、ステップ１により得られる当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収した上で、当該上清から、さらにフィルターを用いて、細胞その他を濾過することにより除去するステップを含むことを特徴とする
医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１２に記載の製造方法であって、
前記患者から取得した組織を培養する前記ステップが、前記患者から取得した組織を３日〜９日間培養するステップであることを特徴とする
製造方法。
【請求項１７】
請求項１２に記載の製造方法であって、
前記患者から取得した組織を培養する前記ステップが、前記患者から取得した脂肪組織を培養するステップであることを特徴とする
製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疼痛の治療に有用な組成物および当該組成物を用いた疼痛の治療方法に関する。
より具体的には、本発明は、一態様において、疼痛の症状を呈する患者に対して、当該患者本人（自己）の組織を構成する細胞が、当該患者本人（自己）の血清を含有する培養液中で産生する生理活性物質を用いて疼痛を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
２０歳以上男女を対象とした調査では、日本では成人の４．４人に１人の割合で慢性疼痛を有している。これは、日本において、約２３００万人が慢性疼痛を有していることを意味する。
【０００３】
慢性疼痛の原因となっている病名・症状は、腰痛（５５．７％）、四十肩・五十肩、肩こり（２７．９％）、頭痛・片頭痛（２０．７％）である。そして、慢性疼痛を有している者のうち、約７割の人が、やる気の喪失や精神的なストレスを感じている。
【０００４】
アメリカにおいては、慢性疼痛の罹患者数は、心臓疾患、糖尿病および癌の罹患者の合計数よりも多い。実際、アメリカにおいては、約５０００万人が慢性疼痛に罹患し、治療のために１年あたり約１０００億ドルを費やしている。
【０００５】
残念なことに、最も強い入手可能な鎮痛薬の多くは、深刻な副作用を有する。それらの副作用としては、嗜癖、依存症、心臓発作・脳卒中の増加などのリスクが挙げられる。
【０００６】
さらに、多くの疼痛の症状、特に慢性疼痛の症状は、現存する薬物療法によって効果的に治療できない。
【０００７】
ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（２００４年では２８億ドル；Ｇ．Ｄ．Ｓｅａｒｌｅ  &  Ｃｏ．、米国、イリノイ州、スコーキー）およびＶＩＯＸＸ（登録商標）（２００４年では１４億ドル、Ｍｅｒｃｋ  &  Ｃｏ．社、米国、ニュージャージー州、ホワイトハウス・ステーション）などの薬物の収益を考慮するまでもなく、疼痛の症状、特に慢性疼痛の症状に対する効果的な治療は、ヒトの健康に非常に役立つことは間違いない。
【０００８】
従って、効果的な疼痛の治療について、未だ対処されていないニーズがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、従来の疼痛の治療とは異なるタイプの、疼痛の治療に有用な組成物を提供することにある。
【００１０】
より具体的には、本発明は、一態様において、疼痛の症状を呈する患者に対して、当該患者本人（自己）の組織構成細胞が、当該患者本人（自己）の血清を含有する培養液中で産生する生理活性物質を用いて疼痛を治療することに関する。このような治療法は、薬や化学物質を使用することがなく、また、他人や他の動物由来の成分を使うことがない点で優れている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上述の課題を解決するために、本発明は以下の特徴を備える。
【００１２】
<医薬組成物>
本発明の医薬組成物は、一態様において、患者の疾患を治療するための医薬組成物であって、前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液を含むことを特徴とする医薬組成物である。
【００１３】
前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液は、本発明の医薬組成物において、そのまま用いることもできるが、細胞を除去した上で用いることもできる。細胞の除去の方法としては、例えば、（１）当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収する方法、及び／又は、（２）フィルターを用いて細胞その他を除去する、ことができる。好ましくは、当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収した上で、当該上清から、さらにフィルターを用いて、細胞その他を濾過することにより除去することができる。
【００１４】
ここで、前記患者の疾患は、疼痛、特に、慢性疼痛やリュウマチ性疼痛であり得る。
【００１５】
また、前記患者から取得した組織の培養は、一態様において、前記患者の自己血から得た血清を添加した培養液中で行うことができる。
【００１６】
また、前記患者から取得した組織の培養は、一態様において、３日〜９日間行われることができる。
【００１７】
また、前記患者から取得した組織は、一態様において、脂肪組織であってもよい。
【００１８】
<治療方法>
本発明の患者の治療方法は、一態様において、有効量の前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液を含む医薬組成物を前記患者に投与することを特徴とする治療方法である。
【００１９】
前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液は、本発明の治療方法において、そのまま用いることもできるが、細胞を除去した上で用いることもできる。細胞の除去の方法としては、例えば、（１）当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収する方法、及び／又は、（２）フィルターを用いて細胞その他を除去する、ことができる。好ましくは、当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収した上で、当該上清から、さらにフィルターを用いて、細胞その他を濾過することにより除去することができる。
【００２０】
ここで、前記患者の疾患は、疼痛、特に、慢性疼痛やリュウマチ性疼痛であり得る。
【００２１】
また、前記患者から取得した組織の培養は、一態様において、前記患者の自己血から得た血清を添加した培養液中で行われることができる。
【００２２】
また、前記患者から取得した組織の培養は、一態様において、３日〜９日間行われることができる。
【００２３】
また、前記患者から取得した組織は、一態様において、脂肪組織であってもよい。
【００２４】
<製造方法>
本発明の医薬組成物の製造方法は、一態様において、患者の疾患を治療するための医薬組成物の製造方法であって、（１）前記患者から取得した組織を培養するステップ、及び、（２）培養して得られた培養液から細胞を除去するステップ、を含むことを特徴とする製造方法である。
【００２５】
細胞の除去の方法としては、例えば、（１）当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収する方法、及び／又は、（２）フィルターを用いて細胞その他を除去する、ことができる。好ましくは、当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収した上で、当該上清から、さらにフィルターを用いて、細胞その他を濾過することにより除去することができる。
【００２６】
ここで、前記患者の疾患は、疼痛、特に、慢性疼痛やリュウマチ性疼痛であり得る。
【００２７】
また、前記患者から取得した組織の培養は、一態様において、前記患者の自己血から得た血清を添加した培養液中で行われることができる。
【００２８】
また、前記患者から取得した組織の培養は、一態様において、３日〜９日間行われることができる。
【００２９】
また、前記患者から取得した組織は、一態様において、脂肪組織であってもよい。
【発明の効果】
【００３０】
本発明の医薬組成物は、疼痛（特に、慢性疼痛やリュウマチ性疼痛）の治療に有利に利用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明の医薬組成物は、患者自身から取得した組織を培養して得られる培養液を含む。
【００３２】
患者自身から取得する組織としては、脂肪組織が好ましいが、これに限定されない。
【００３３】
また、患者自身から組織を取得する方法としては、特に限定はない。例えば、脂肪吸引を用いることができる。また、別の方法としては、手術創縁から切りだすこともできる。
【００３４】
患者自身から取得した組織の培養は、組織そのものを培養しても良いが、例えば、メスを用いて細切りにし、さらに、酵素処理することによって得られた細胞を培養することによって行うことができる。
【００３５】
患者自身から取得した組織の培養は、周知の手法で行うことができる。一態様においては、患者自身の自己血から得た血清を添加した培養液（例えば、ＤＭＥＭ／Ｆ１２  フェノールレッド（−））中で行うことができる。
【００３６】
患者自身から取得した組織の培養の期間については、特に限定はない。例えば、３日〜９日間行われることができる。
【００３７】
本発明の医薬組成物においては、患者自身から取得した組織を培養して得た培養液を用いる。前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液は、本発明の医薬組成物において、そのまま用いることもできるが、細胞を除去した上で用いることもできる。細胞の除去の方法としては、例えば、（１）当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収する方法、及び／又は、（２）フィルターを用いて細胞その他を除去する、ことができる。好ましくは、当該培養液に遠心分離を行い、当該培養液の遠心分離後の上清を回収した上で、当該上清から、さらにフィルターを用いて、細胞その他を濾過することにより除去することができる。また、前記培養液は、使用する前は、例えば、低温（例えば、凍結または４℃）で保存することができる。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、このようにして集められた培養液を含むものである。かかる培養液には、患者自身から取得した組織（又は、組織から解離して得られる細胞）を培養する際に産生された各種の生理活性物質が含まれていると考えられる。したがって、本発明の医薬組成物の驚くべき顕著な効果は、そのような各種の生理活性物質が、患者の身体において、器質的及び／又は機能的な損傷の治癒に有効に働く結果であると推察される。
【００３９】
本発明の医薬組成物は、基本的に、患者本人に由来する成分に基づくものであり、副作用の観点からも、特に好ましいといえる。
【００４０】
本発明の医薬組成物の患者への投与の仕方に限定はない。例えば、前記患者から取得した組織を培養して得られる培養液（培養液から細胞を除去したものを含む、例えば、遠心分離後の上清やフィルター後のろ液を含む）を、生理食塩水やラクテックリンゲル液に希釈した上で、点滴により、患者に対して、静注投与することができる。また、そのような希釈をすることなく、患者に対して、投与することもできる。
【００４１】
本発明の医薬組成物の患者への投与の頻度には特に限定はない。しかしながら、本発明の医薬組成物は、場合によっては、月１度の投与によっても、十分な治療効果を発揮することができるため、コンプライアンスの観点からも好ましい。
【００４２】
なお、本明細書において用いられる用語は、特定の実施態様を説明するために用いられるのであり、発明を限定する意図ではない。
また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記述された事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを意図するものであり、それ以外の事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを排除しない。
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語（技術用語及び科学用語を含む。）は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
第一の、第二のなどの用語が種々の要素を表現するために用いられる場合があるが、これらの要素はそれらの用語によって限定されるべきではないことが理解される。これらの用語は一つの要素を他の要素と区別するためのみに用いられているのであり、例えば、第一の要素を第二の要素と記し、同様に、第二の要素は第一の要素と記すことは、本発明の範囲を逸脱することなく可能である。
【００４３】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、しかしながら、本発明はいろいろな態様により具現化することができ、ここに記載される実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【００４４】
<実施例１>●１●疼痛症候群
症例１．３６歳、女性、尺側神経領域痛
【００４５】
（１）脂肪組織採取と試料調製
腹部脂肪組織に脂肪吸引用の針を刺し、シリンジ内に脂肪組織を約１０ｃｃ吸引した（ツメッセント法）。組織をシャーレに移し、メスを用いてさらに細切した。細切した組織を遠心管に移し、０．５％トリプシン溶液２５ｍＬを入れて、３７℃で３０分間酵素処理を行った。続いて、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を除去した。
遠心管に沈殿した細胞を、自己血から得た血清を１０％添加した培養液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２  フェノールレッド（−））３０ｍＬで再浮遊させ、懸濁液とした。
懸濁液を２個の細胞培養用７５ｃｍ２フラスコに移し、３７℃、５％炭酸ガス、１００％湿度の培養装置内で培養した。培養３日目に培養液を遠心管に移し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を保存（４℃）した。遠心した上清から、ポアサイズ０．４５μｍのフィルターを用いて、濾液を得た（以下、３日目培養上清という。）。培養液を除いた２個のフラスコ内には、その底面に細胞が存在する。この２個のフラスコに、さらに、自己血から得た血清を１０％添加した上記培養液を各々１５ｍＬ添加し、培養を継続した。
同様に培養を継続し、６日目、９日目の培養上清を得た（以下、６日目培養上清、９日目培養上清という。）。各培養上清は４℃で保存した。
【００４６】
（２）投与方法
２０ｍＬの培養上清を５００ｍＬの点滴用生理食塩液に希釈した。続いて、患者の上腕の静脈に３時間かけて点滴により投与した。
【００４７】
（３）病歴
この患者の病歴は、次のとおりである。
【表１】
2015078125.tif 000002
【００４８】
（４）治療結果
以下に、培養上清投与後の治療効果をＶＡＳを用いて示す。ここで、ＶＡＳとは、視覚アナログ尺度（Ｖｉｓｕａｌ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｓｃａｌｅ）を意味する。ＶＡＳは、患者の疼痛のスコアリング方法の一つである。ＶＡＳにおいては、「最大の痛み」を１０とし、「痛み無し」を０とする。
【表２】
2015078125.tif 000003
【００４９】
<実施例２>●２●多発性関節リュウマチ
症例１．８０歳、女性、右大腿骨頚部骨折、心筋梗塞、腰椎圧迫骨折、関節リュウマチ
【００５０】
（１）脂肪組織採取と試料調製
大腿骨頚部骨折の手術の際に、手術創縁より約１０ｇの脂肪組織を切り出した。組織をシャーレに移し、メスを用いてさらに細切した。細切した組織を遠心管に移し、０．５％トリプシン溶液２５ｍＬを入れて、３７℃で３０分間酵素処理を行った。続いて、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を除去した。
遠心管に沈殿した細胞を、自己血から得た血清を１０％添加した培養液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２  フェノールレッド（−））３０ｍＬで再浮遊させ、懸濁液とした。
懸濁液を２個の細胞培養用７５ｃｍ２フラスコに移し、３７℃、５％炭酸ガス、１００％湿度の培養装置内で培養した。培養３日目に培養液を遠心管に移し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を保存（４℃）した。遠心した上清から、ポアサイズ０．４５μｍのフィルターを用いて、濾液を得た（以下、３日目培養上清という。）。培養液を除いた２個のフラスコ内には、その底面に細胞が存在する。この２個のフラスコに、さらに、自己血から得た血清を１０％添加した上記培養液を各々１５ｍＬ添加し、培養を継続した。
同様に培養を継続し、６日目の培養上清を得た（以下、６日目培養上清という。）。各培養上清は４℃で保存した。
【００５１】
（２）投与方法
２０ｍＬの培養上清を５００ｍＬのラクテックリンゲル液に希釈した。続いて、患者の上腕の静脈に３時間かけて点滴により投与した。
【００５２】
（３）病歴
この患者の病歴は、次のとおりである。すなわち、この患者は、２０１１年６月１０日に、大腿骨頚部骨折接合術を受けている。
【００５３】
（４）治療結果
以下に、培養上清投与後の治療効果をＶＡＳを用いて示す。
【表３】
2015078125.tif 000004
【００５４】
症例２．７３歳、女性、多発性関節リュウマチ、腎盂腎炎、高血圧、緑内障
【００５５】
（１）脂肪組織採取と試料調製
腹壁脂肪組織から約１ｃｍ角の組織を切り出した。組織をシャーレに移し、メスを用いてさらに細切した。細切した組織を遠心管に移し、０．５％トリプシン溶液２５ｍＬを入れて、３７℃で３０分間酵素処理を行った。続いて、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を除去した。
遠心管に沈殿した細胞を、自己血から得た血清を１０％添加した培養液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２  フェノールレッド（−））３０ｍＬで再浮遊させ、懸濁液とした。
懸濁液を２個の細胞培養用７５ｃｍ２フラスコに移し、３７℃、５％炭酸ガス、１００％湿度の培養装置内で培養した。培養３日目に培養液を遠心管に移し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を保存（４℃）した。遠心した上清から、ポアサイズ０．４５μｍのフィルターを用いて、濾液を得た。（以下、３日目培養上清という。）培養液を除いた２個のフラスコ内には、その底面に細胞が存在する。この２個のフラスコに、さらに、自己血から得た血清を１０％添加した上記培養液を各々１５ｍＬ添加し、培養を継続した。
【００５６】
（２）投与方法
２０ｍＬの培養上清を５００ｍＬの点滴用生理食塩液に希釈した。続いて、患者の上腕の静脈に３時間かけて点滴により投与した。
【００５７】
（３）治療結果
以下に、培養上清投与後の治療効果を示す。
【表４】
2015078125.tif 000005
【００５８】
症例３．７０歳、女性、多発性関節リュウマチ、高血圧症
【００５９】
（１）脂肪組織採取と試料調製
腹壁脂肪組織からシリンジ内に脂肪組織を約１０ｃｃ吸引した（ツメッセント法）。組織をシャーレに移し、メスを用いてさらに細切した。細切した組織を遠心管に移し、０．５％トリプシン溶液２５ｍＬを入れて、３７℃で３０分間酵素処理を行った。続いて、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を除去した。
遠心管に沈殿した細胞を、自己血から得た血清を１０％添加した培養液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２  フェノールレッド（−））３０ｍＬで再浮遊させ、懸濁液とした。
懸濁液を２個の細胞培養用７５ｃｍ２フラスコに移し、３７℃、５％炭酸ガス、１００％湿度の培養装置内で培養した。培養３日目に培養液を遠心管に移し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を保存（４℃）した。遠心した上清から、ポアサイズ０．４５μｍのフィルターを用いて、濾液を得た（以下、３日目培養上清という。）。培養液を除いた２個のフラスコ内には、その底面に細胞が存在する。この２個のフラスコに、さらに、自己血から得た血清を１０％添加した上記培養液を各々１５ｍＬ添加し、培養を継続した。
【００６０】
（２）投与方法
２０ｍＬの培養上清を５００ｍＬのラクテックリンゲル液に希釈した。続いて、患者の上腕の静脈に３時間かけて点滴した。
【００６１】
（３）治療結果
以下に、培養上清投与後の治療効果を示す。
【表５】
2015078125.tif 000006
【００６２】
以上述べたとおり、驚くことに、本発明の医薬組成物、すなわち、患者から取得した組織を培養して得られる培養液を含む医薬組成物は、疼痛（とりわけ、慢性疼痛やリュウマチ性疼痛）に顕著な効果があることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の医薬組成物は、疼痛（特に、慢性疼痛やリュウマチ性疼痛）の治療に有利に利用することができる。