(57)【要約】    【課題】  長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、放射線造血障害の回復に効果的な放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物の提供。    【解決手段】  アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体の細胞壁破砕物とアガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体の培養液から遠心分離又は濾過により菌糸体を除去した菌糸体抽出物との混合物と、クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物であるクロレラ・グロス・ファクターを含有する放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物とクロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を含有することを特徴とする放射線造血障害回復剤。
【請求項２】
上記クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物がクロレラ・グロス・ファクターである請求項１記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項３】
上記クロレラ・グロス・ファクターの乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が４０００乃至６０００である請求項２記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項４】
上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである請求項１乃至３の何れか１項に記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項５】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体が細胞壁破砕物である請求項１乃至４の何れか１項に記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項６】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体抽出物が、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体の培養液から遠心分離又は濾過により菌糸体を除去したものである請求項１乃至５の何れか１項に記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項７】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．０５乃至１：０．５である請求項１乃至６の何れか１項に記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項８】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物と、クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物の乾燥重量比が１：２乃至９：１である請求項１乃至７の何れか１項に記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項９】
経口投与剤である請求項１乃至８の何れか１項に記載の放射線造血障害回復剤。
【請求項１０】
アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物とクロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を含有することを特徴とする放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１１】
上記クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物がクロレラ・グロス・ファクターである請求項１０記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１２】
上記クロレラ・グロス・ファクターの乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が４０００乃至６０００である請求項１１記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１３】
上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである請求項１０乃至１２の何れか１項に記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１４】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体が細胞壁破砕物である請求項１０乃至１３の何れか１項に記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１５】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体抽出物が、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体の培養液から遠心分離又は濾過により菌糸体を除去したものである請求項１０乃至１４の何れか１項に記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１６】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．０５乃至１：０．５である請求項１０乃至１５の何れか１項に記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【請求項１７】
上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物と、クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物の乾燥重量比が１：２乃至９：１である請求項１０乃至１６の何れか１項に記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射線造血障害の回復に有用な放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
特開平７−２５８１０７号公報には、ヒメマツタケの子実体から分離される複合成分を活用した、抗癌剤投与、放射線照射による免疫抑制状態下における赤血球、白血球、血小板の減少防止と抗体産生回復作用等の生物活性を示す免疫能低下改善作用を有する経口投与剤及び飲食品が開示されている。
【０００３】
しかしながら、放射線造血障害の回復に有用な放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物については、更なる改善が求められるところである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平７−２５８１０７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、放射線造血障害の回復に効果的な放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物は、次のように表すことができる。
【０００７】
(1) アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物とクロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を含有することを特徴とする放射線造血障害回復剤。
【０００８】
(2) 上記クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物がクロレラ・グロス・ファクターである(1)記載の放射線造血障害回復剤。
【０００９】
(3) 上記クロレラ・グロス・ファクターの乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が４０００乃至６０００である(2)記載の放射線造血障害回復剤。
【００１０】
(4) 上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである(1)乃至(3)の何れかに記載の放射線造血障害回復剤。
【００１１】
(5) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体が細胞壁破砕物である(1)乃至(4)の何れかに記載の放射線造血障害回復剤。
【００１２】
(6) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体抽出物が、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体の培養液から遠心分離又は濾過により菌糸体を除去したものである(1)乃至(5)の何れかに記載の放射線造血障害回復剤。
【００１３】
(7) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．０５乃至１：０．５である(1)乃至(6)の何れかに記載の放射線造血障害回復剤。
【００１４】
(8) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物と、クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物の乾燥重量比が１：２乃至９：１である(1)乃至(7)の何れかに記載の放射線造血障害回復剤。
【００１５】
(9) 経口投与剤である(1)乃至(8)の何れかに記載の放射線造血障害回復剤。
【００１６】
(10) アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物とクロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を含有することを特徴とする放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００１７】
(11) 上記クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物がクロレラ・グロス・ファクターである(10)記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００１８】
(12) 上記クロレラ・グロス・ファクターの乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が４０００乃至６０００である(11)記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００１９】
(13) 上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである(10)乃至(12)の何れかに記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００２０】
(14) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体が細胞壁破砕物である(10)乃至(13)の何れかに記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００２１】
(15) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体抽出物が、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体の培養液から遠心分離又は濾過により菌糸体を除去したものである(10)乃至(14)の何れかに記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００２２】
(16) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．０５乃至１：０．５である(10)乃至(15)の何れかに記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【００２３】
(17) 上記アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物と、クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物の乾燥重量比が１：２乃至９：１である(10)乃至(16)の何れかに記載の放射線造血障害回復用飲食組成物。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、放射線造血障害の回復に効果的である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】7.0 Gyの放射線照射したマウスの生存率を示す図である。
【図２】胸腺の組織切片（HE染色）の顕微鏡写真である。
【図３】脾臓の組織切片（HE染色）の顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
[1] 本発明の放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物は、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物とクロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を含有する。
【００２７】
(1) アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物
【００２８】
本発明におけるアガリクス・ブラゼイ・ムリルは、アガリクス科に属する食用キノコのAgaricus blazei Murrill（ヒメマツタケ）である。
【００２９】
(1-1) 本発明に用いるアガリスク・ブラゼイ・ムリル（Agaricus blazei Murrill）の子実体としては、細胞壁が破壊されたものを用いることが好ましい。
【００３０】
(1-2) アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体抽出物としては、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの菌糸体の培養液から遠心分離又は濾過により菌糸体を除去したものを用いることが好ましい。これを例えば必要な濃度に濃縮した濃縮液として用いることもでき、また、乾燥粉末化させて用いることもできる。
【００３１】
(1-3) 本発明におけるアガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物としては、その子実体の細胞壁破壊物と菌糸体抽出液との混合物を乾燥粉末化したものを用いることができるが、他の形態を除外するものではない。
【００３２】
アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物としては、例えば、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．０５乃至１：０．５のものを用いることができる。このアガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物の混合物として好ましいのは、それらの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．１乃至１：０．２の混合物であり、更に好ましいのは、それらの子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比が１：０．１８の混合物である。
【００３３】
本発明におけるアガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物は、例えば、粉末状であってもよく、水等の飲料用の液体に溶解又は分散したものであってもよい。
【００３４】
(2) クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物
【００３５】
本発明におけるクロレラとは、クロレラ属(Chlorella) に属する単細胞緑藻類であって、例えば、Chlorella pyrenoidosa、Chlorella ellipsoidea 、Chlorella vulgaris 、Chlorella regularis 等を挙げることができる。本発明に最も適しているのは、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）である。
【００３６】
本発明の放射線造血障害回復剤及び放射線造血障害回復用飲食組成物の製造に用いるクロレラの細胞壁破砕物は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち、先ずクロレラ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような連続湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。
【００３７】
上記連続湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを流入液体と混和・回転することにより、流入液体中の物質を摩砕するものである。
【００３８】
クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を得るための熱水抽出においては、このようにして細胞壁が破砕されたクロレラを、そのまま用いることもできるが、例えば、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用してもよい。
【００３９】
クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物は、クロレラの細胞壁破砕物の濃縮液を加熱して水溶性成分を抽出し、固液分離を行って不溶性固形分を除去することにより得ることができる。これを例えば必要な濃度に濃縮した濃縮液として用いることもでき、また、乾燥粉末化させて用いることもできる。
【００４０】
本発明には、例えば、乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値（乾燥粉末状態のクロレラ・グロス・ファクターを７５００重量倍の水に溶解させた溶液について分光光度計により波長２６０ｎｍでの光学密度を測定し、それを７５００倍した値）が４０００乃至６０００のクロレラ・グロス・ファクターを用いることができる。好ましくは、乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が４５００乃至５５００（より好ましくは４９００乃至５１００或いは５０×１０２）のクロレラ・グロス・ファクターである。
【００４１】
(3) 本発明におけるアガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物と、クロレラ・グロス・ファクターの乾燥重量比は、例えば１：２乃至９：１とすることができるが、好ましくは１：１乃至４：１である。
【００４２】
この配合比は、乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が５０００のクロレラ・グロス・ファクターを基準とすることが好ましい。
【００４３】
乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値が５０００以外のクロレラ・グロス・ファクターを用いる場合は、アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物に対するクロレラ・グロス・ファクターの乾燥重量比は、乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値に反比例した値（例えば、当該ＯＤ値が５０００で当該乾燥重量比１：０．３であれば、ＯＤ値が２５００では１：０．６）を採用することができる。
【００４４】
本発明の放射線造血障害回復剤は、経口投与が好ましいが、その他、放射線造血障害回復剤として通常採用し得る他の各種剤形において適用可能である。
【００４５】
本発明の放射線造血障害回復剤における経口投与の形態に特に限定はないが、例えば、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤とすることができる。
【００４６】
また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。
【００４７】
賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）等を挙げることができる。
【００４８】
結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチ／レセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。
【００４９】
崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００５０】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。
【００５１】
コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。
【００５２】
着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。
【００５３】
なお、本発明の放射線造血障害回復剤のヒトの服用量は、１日当り例えば５０ｍｇ乃至２０００ｍｇ／ｋｇ程度が好ましい。
【実施例】
【００５４】
アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物とクロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物を含有する組成物の経口投与による放射線造血障害回復効果についての試験を行った。
【００５５】
１．被験物質
【００５６】
(1) アガリスク・ブラゼイ・ムリルの子実体と菌糸体抽出物との混合物
【００５７】
アガリスク・ブラゼイ・ムリル（姫マツタケ［岩出１０１株］）の子実体の細胞壁破砕物と菌糸体抽出液との混合物の乾燥粉末（子実体と菌糸体抽出物の乾燥重量比は１：０．１８）［商品名：ATOP パワフル健康食品社製］を用いた。
【００５８】
(2) クロレラの細胞壁破砕物の熱水抽出物
【００５９】
冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］  WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末が得られた。
【００６０】
得られた細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末を水に分散及び溶解させた濃縮液を加熱して抽出した水溶性成分の乾燥粉末（クロレラ・グロス・ファクター［乾燥粉末状態における波長２６０ｎｍのＯＤ値は５０×１０２］）［商品名：クロレラＣ．Ｇ．Ｆ Ｗ−５０００ サン・クロレラ社製］を用いた。
【００６１】
(3) 被験物質（ABM-C）として、前記アガリスク・ブラゼイ・ムリル（姫マツタケ［岩出１０１株］）の子実体の細胞壁破砕物と菌糸体抽出液との混合物70重量%と前記細胞壁破砕クロレラの熱水抽出物30重量%（乾燥重量比）からなる組成物を用いた。
【００６２】
なお、酵素的分析によって、ABM-Cはキノコ成分の指標としてのβ-Dグルカン／抗腫瘍活性成分を18.7%含有することが示された。
【００６３】
２．供試動物
【００６４】
体重３０−３４ｇ及び７週齢の雄のICR/Slcマウス（SPF：特定病原体未感染）を日本エスエルシー株式会社から入手した。これらにＣＥ−７固形飼料（日本クレア株式会社製）及び水を自由に摂取させた。
【００６５】
３．放射線照射
【００６６】
マウスへの１回照射により、PHILIPS MG 226/4.5（日本フィリップス社製  工業用Ｘ線検査装置の商品名）から0.36 Gy/min（200 kv、9 mA）の線量率で5.0 Gyまたは7.0 Gyの放射線照射を行った。各群はマウス10匹とした。
【００６７】
４．単細胞浮遊液の調製
【００６８】
マウスを頸椎脱臼によって安楽死させた後、大腿骨および脾臓を摘出し、単細胞浮遊液の調製に用いた。
【００６９】
骨髄細胞（BMC）は、21ゲージ針を付けた5 mlシリンジを用いて、両大腿骨を無菌的にEagle's MEM培地（Grand Island, NY, U.S.A.）またはDMEM培地（日水製薬社製）で繰り返し洗い流した後、得られた細胞を消毒綿に通すことによって調製した。BMCは各アッセイに適切な濃度に調節した。
【００７０】
５．血球数
【００７１】
末梢血はヘパリン処理したチューブを用いる眼窩静脈叢穿刺によって採取した。
【００７２】
WBC（白血球）、RBC（赤血球）およびPLT（血小板）数は、リン酸緩衝生理食塩液（PBS）またはチュルク液で適切に希釈した後、自動血球計算器を用いて測定した。
【００７３】
白血球分画は、血液塗抹を固定し、メイ-グリュンワルド・ギムザ法で染色することによって測定した。
【００７４】
６．統計解析
【００７５】
数値はすべて平均±S.E.として示す。差の有意性はStudentのt検定によって判定した。5%未満（P<0.05）の確率を有意であるとみなした。
【００７６】
７．結果
【００７７】
(1) 放射線に誘発された死亡に及ぼす被験物質の影響
【００７８】
致死量の放射線を照射したマウスの生存期間が被験物質によって延長するか否かを次のように検討した。
【００７９】
0日目に5.0 Gyの放射線照射を行ったマウスの群及び同じく0日目に7.0 Gyの放射線照射を行ったマウスの群に対し、被験物質600 mg/kg用量を1日目から10日目まで1日2回経口投与した。一方、同様に5.0 Gy及び7.0 Gyの放射線照射を行って被験物質の投与を行わない両群を対照とした。
【００８０】
生存期間を30日間にわたって毎日確認した結果、5.0 Gyを照射したマウスでは、放射線による死亡が認められなかった。
【００８１】
一方、7.0 Gyの放射線照射したマウスの30日間累積生存率は、図１に示すような結果となり、7.0 Gyの放射線を照射し且つ被験物質を投与したマウスの生存期間は、7.0 Gyの放射線を照射し被験物質を投与しなかった対照より有意に延長した。
【００８２】
(2) 血球および造血前駆細胞数に及ぼす被験物質の回復作用
【００８３】
0日目に5.0 Gyの放射線照射を行ったマウスの群に対し、被験物質600 mg/kg用量を1日目から10日目まで1日2回経口投与した。
【００８４】
一方、0日目に5.0 Gyの放射線照射を行い、被験物質を投与しないマウスの群、及び、放射線照射を行わず、被験物質を投与しないマウスの群を対照とした。
【００８５】
BFU-E（赤芽球系前駆細胞）、CFU-E（エリスロポエチン  依存性単球系前駆細胞）、CFU-GM（顆粒球マクロファージ系前駆細胞）の測定を、一部改変したMetcalfの方法（参照文献：The hemopoietic stem and progenitor cells demonstrable using in vitro cloning techniques. In: The hemopoietic colony stimulating factors. Elsevier Amsterdam pp 27-54 1984; The basic biology of hematopoiesis. In: The hemmatopoietic colony stimulating factors. Elsevier Amsterdam pp 1-26 1984）に従って行った。
【００８６】
BFU-EおよびCFU-Eの測定では2×106細胞／mlのBMCおよび脾細胞を用い、CFU-GMの測定では2×105細胞／mlの各細胞を用いた。
【００８７】
これらの細胞を、2.0%メチルセルロース水溶液2 ml（参照文献：Iscove NN, Sieber F, et al.: Erythroid colony formation in cultures of human marrow: Analysis of the requirement for erythropoietinby gel filtration and affinity chromatography on agarose-concanavalin A. J Cell Physiol 83(2): 309-320 1974）、熱不活化したウシ胎仔血清1.5 ml（FCS：Sigma Chemical Co.社製, St. Louis, Mo., U.S.A.）、10-2 M 2-メルカプトエタノール50 μl、アメリカヤマゴボウ分裂促進因子（PWM）（GIBCO社製, Grand Island, NY, U.S.A.）で刺激したマウス脾細胞調整培地（PWM-SCM）0.5 ml、及びエリスロポエチン2 U/ml（Sigma Chemical Co.社製, St. Louis, Mo., U.S.A.）と混合した。
【００８８】
混合液1 mlを35 mm径のペトリ皿（Falcon社製, No 1008 U.S.A.）に注入し、5%CO2を含む37℃の加湿した大気中で7日間培養した。培養はすべて4連で行った。
【００８９】
10日目に血球および造血前駆細胞を分離し、3連で測定した。結果を表１に示す。
【００９０】
【表１】
2015078160.tif 000002
［表１において、BFU-E（赤芽球系前駆細胞）、CFU-E（エリスロポエチン依存性単球系前駆細胞）、CFU-GM（顆粒球マクロファージ系前駆細胞）。
数値は平均±S.E.として示す（n=10）。
* P<0.05、5.0 Gyの放射線を照射した対照マウスと比較して有意差あり。
# P<0.05、非照射の対照マウスと比較して有意差あり。］
【００９１】
5.0 Gyの放射線を照射し被験物質を投与した群では、表１に示すように末梢血のRBC、PLT、WBC、顆粒球、リンパ球及び単球が増加した。
【００９２】
5.0 Gyの放射線を照射し、被験物質を投与しなかった群では、放射線非照射の対照群と比較してきわめて有意な血球数の減少が認められた。
【００９３】
放射線を照射した被験物質投与群のBFU-E及びCFU-GM、特にCFU-GMは、5.0 Gyの放射線を照射した対照群のそれぞれの値と比較して高かった。
【００９４】
放射線を照射した被験物質投与マウスは、良好な全身徴候、体重測定値および摂餌量を示した。
【００９５】
(3) 脾臓指数（体重１０ｇ当りの脾臓重量）、胸腺指数（体重１０ｇ当りの胸線重量）、脾細胞数およびヒツジ赤血球（SRBC）の定量的溶血（QHS：ヒツジ赤血球に対する抗体産生力）に及ぼす被験物質の影響
【００９６】
0日目に5.0 Gyの放射線照射を行ったマウスの群に対し、被験物質600 mg/kg用量を1日目から10日目まで1日2回経口投与した。
【００９７】
一方、0目に5.0 Gyの放射線照射を行い、被験物質を投与しないマウスの群、放射線照射を行わず、被験物質を投与しないマウスの群、及び、放射線照射を行わず、被験物質600 mg/kg用量を1日目から10日目まで1日2回経口投与したマウスの群を対照とした。
【００９８】
10日目に、マウスを放血によって安楽死させた後、体重、脾臓および胸腺の重量を測定した。
【００９９】
また、別のマウスについて、10日目に、SRBC（2×108／マウス）を腹腔内投与することによってマウスを免疫処置した。その4日後に、マウスを安楽死させた後、脾細胞の浮遊液（1×107細胞／ml）を調製した。
【０１００】
0.2%SRBC 1 mlおよび10%モルモット血清1 ml（補体血清）を細胞浮遊液1 mlと混合した後、その混合液を37℃で1時間培養した。
【０１０１】
次いで、2,000 rpmで10分間遠心分離した後、その上清を413 nmの光電比色計によって分析した（参照文献：Itoh H, Noda H, et al,: Immunological analyses of inhibition of lung metastases by fucoidan (GIV-A) prepared from brown seaweed Sargassum thunbergii. Anticancer Res 15: 1937-1948, 1995）。
【０１０２】
結果を表２に示す。
【０１０３】
【表２】
2015078160.tif 000003
［表２において、ODは光学密度であり、数値は平均±S.E.である（n=8）。
* P<0.05、放射線非照射の対照マウスと比較して有意差あり。
# P<0.05、5.0 Gyの放射線を照射した対照マウスと比較して有意差あり。］
【０１０４】
被験物質を投与した群では、胸腺および脾臓指数が増加した。5.0 Gyの放射線照射を行って被験物質を投与しなかった群では、胸腺及び脾臓指数と共に、体重が顕著に減少した。脾臓指数に対する被験物質の回復作用は、胸腺指数に対するものより強かった。
【０１０５】
脾細胞数およびQHSは、放射線照射を行って被験物質を投与しないマウスで顕著に減少した。放射線照射を行って被験物質を投与した場合、脾細胞数およびQHSが有意に増加した。
【０１０６】
(4) 胸腺および脾臓に及ぼす被験物質の影響に関する病理組織学的検査
【０１０７】
0日目に7.0 Gyの放射線照射を行ったマウスの群に対し、被験物質600 mg/kg用量を1日目から10日目まで1日2回経口投与した。
【０１０８】
一方、0日目に7.0 Gyの放射線照射を行い、被験物質を投与しないマウスの群を対照とした。
【０１０９】
10日目に脾臓および胸腺の臓器を10%ホルマリンで固定し、パラフィン包埋および薄切（厚さ6 μm）を行った後、ヘマトキシリン・エオシンで染色し、顕微鏡検査を行った。
【０１１０】
図２は、胸腺の組織切片（HE染色）についてのものであって、（a）及び（b）はそれぞれ対照マウスについての１００倍及び４００倍の顕微鏡写真、（c）及び（d）はそれぞれ被験物質投与マウスについての１００倍及び４００倍の顕微鏡写真である。
【０１１１】
対照群では、核崩壊、核濃縮および多数の濃染細胞が認められた。詳細な観察では、濃染した細胞群に染色質の濃縮や核周辺部への凝縮がみられることが示された。胸腺のリンパ球は皮質で急激に減少し、顕著な細網細胞の増殖が認められた。皮質は委縮し、胸腺体は消失した。
【０１１２】
0日目の放射線照射後、1日目より被験物質を投与した群では、10日目に胸腺構造および実質細胞が回復し始めた。リンパ球は大きく腫脹し、染色質は豊富であった。また、リンパ球数も増加した。胸腺の構造およびリンパ球数は、10日目に有意に回復した。
【０１１３】
図３は、胸腺の組織切片（HE染色）についてのものであって、（a）及び（b）はそれぞれ対照マウスについての１００倍及び４００倍の顕微鏡写真、（c）及び（d）はそれぞれ被験物質投与マウスについての１００倍及び４００倍の顕微鏡写真である。
【０１１４】
対照群の脾臓では、0日目の7.0 Gyの放射線照射後、赤脾髄の造血細胞がほぼ消失した。白脾髄のリンパ球数は減少し、またリンパ濾胞も10日目に小さくなった。破壊された赤血球または多量のヘモジデリン沈着が赤脾髄で認められた。
【０１１５】
脾臓の重量および赤脾髄の造血細胞は、0日目の放射線照射後、1日目より被験物質を投与した群で増加した。ヘモジデリン沈着は減少し、また赤脾髄の造血細胞は10日目に有意に増加した。
【０１１６】
８．血球および造血前駆細胞数に及ぼすアガリクス由来物質の回復作用
【０１１７】
「被験物質600 mg/kg用量を1日2回経口投与」を、「アガリクス・ブラゼイ・ムリルの子実体から抽出される非水溶性多糖体である(1→6)-β-D-グルカン蛋白複合体50 mg/kg用量を1日2回経口投与」又は「アガリクス・ブラゼイ・ムリルの培養菌糸体又は培養濾液から分離される水溶性多糖体であるグルコマンナン蛋白複合体50 mg/kg用量を1日2回経口投与」に替えた以外は、上記『血球および造血前駆細胞数に及ぼす被験物質の回復作用』と同様に処置及び測定を行った。結果を表３に示す。
【０１１８】
なお、前記(1→6)-β-D-グルカン蛋白複合体は、Antitumor Activity and some properties of water-insoluble hetero-glycans from "himematutake," the fruiting body of Agaricus blazei murill.（Agric. Biol. Chem., 54(11), 2897-2905, 1990）記載のように得ることができる。また前記グルコマンナン蛋白複合体は、特許第４０５７１０７号記載のように得ることができる。
【０１１９】
【表３】
2015078160.tif 000004
［表３において、BFU-E（赤芽球系前駆細胞）、CFU-E（エリスロポエチン依存性単球系前駆細胞）、CFU-GM（顆粒球マクロファージ系前駆細胞）。
数値は平均±S.E.として示す（n=10）。
* P<0.05、5.0 Gyの放射線を照射した対照マウスと比較して有意差あり。
# P<0.05、非照射の対照マウスと比較して有意差あり。］
【０１２０】
なお、本明細書中の水溶液の濃度は原則として質量容量%である。
【図１】
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【図２】
2015078160.tif 000006
【図３】
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