(57)【要約】      （修正有）【課題】干渉核酸又はその前駆体を、リポペプチド、脂質、及び天然または合成ポリマーなどの種々の成分と組み合わせて用いる一連の新規な化合物、組成物、製剤及び方法の提供。【解決手段】２〜１００アミノ酸残基を有するペプチドを含み、該ペプチドの少なくとも一方の末端に、天然もしくは合成脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシド由来の親油性テール部を有するリポペプチド化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｒ３−Ｊ−｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎ−Ｚ−Ｒ４      式Ｉ
（式中、
Ｒ１は、独立して、各存在に対して、アミノ酸の非水素側鎖であり；
｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎは、中心ペプチドであって、
Ｒ２およびＲＮは、互いに独立して、水素であるか、または炭素、酸素、窒素、イオウおよび水素原子からなり、１〜２０個の炭素原子を有する有機基であるか、またはＣ（１〜２２）アルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキルアルキル、Ｃ（３〜１８）アルケニル、Ｃ（３〜１８）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルカノイル、Ｃ（１〜５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、Ｃ（１〜５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１〜５）アルキル、シアノ−Ｃ（１〜５）アルキル、アリール−Ｃ（１〜５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１〜５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり；
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、天然もしくは合成脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシド由来の親油性テール部であり、該テール部は、ステロイド、または炭素、酸素、窒素、イオウおよび水素原子からなり、１〜２０個の炭素原子を有する有機基、または置換もしくは非置換のＣ（１２〜２２）アルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル−アルキル、Ｃ（３〜１８）アルケニル、Ｃ（３〜１８）アルキニル、またはスフィンガニン、（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−１，３−オクタデカンジオール、イコサスフィンガニン、スフィンゴシン、フィトスフィンゴシン、シス−４−スフィンゲニン、またはセラミドを含んでいてもよく；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、またはマレイミド、チオエーテル、アミド、システアミド、システイン、チオールを含むリンカー、またはジスルフィド基、または１〜４００個の原子を含むポリエチレンオキシドもしくはポリプロピレンオキシド基、またはＣ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、およびＰの群から選択される１〜２００個の原子を含むリンカーであり；
Ｊは、（Ｃ＝Ｏ）、Ｏ、またはマレイミド、チオエーテル、アミド、システアミド、システイン、チオールを含むリンカー、またはジスルフィド基、または１〜４００個の原子を含むポリエチレンオキシドもしくはポリプロピレンオキシド基、またはＣ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、およびＰの群から選択される１〜２００個の原子を含むリンカーである；ならびに
ｎは、４〜１００である）に示す構造を含む、化合物。
【請求項２】
中心ペプチドのアミノ酸配列が、Ｒ４−２０（配列番号:１）またはＨＨＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＨＨＫ（配列番号：１３）から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
中心ペプチドのアミノ酸配列が、ＧＡＬＦＬＡＦＬＡＡＡＬＸａａＬＭＧＬＷＸａａＱＸａａＫＫＫＲＫＶ（配列番号：２９１）、ＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号：２９２）、ＷＷＨＨＫＫＲＲＣＣＲＲＫＫＨＨＷＷ（配列番号：９４）、ＸａａＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶＸａａ（配列番号：２９３）、ＷＸａａＱＰＫＫＫＲＫＸａａ（配列番号：２９４）、ＸａａＸａａＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号：２９５）、ＬＩＲＬＷＸａａＨＬＩＨＩＷＦＱＸａａＲＲＬＫＷＫＫＫ（配列番号：２９７）、ＱＮＲＲＬＫＷＫＫＫ（配列番号：２９８）、ＸａａＱＮＲＲＬＫＷＫＫＫＸａａ（配列番号：２９９）およびＱＸａａＲＲＬＫＷＫＫＫ（配列番号：３００）（式中、Ｘａａは、独立して、各存在に対して、Ｌ、Ａ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、ＲまたはＫである）よりなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
中心ペプチドに側鎖が連結されており、該側鎖が、３，５−ジヨードチロシン、１−メチルヒスチジン、２−メチルブタン酸、２−ｏ−アニシルプロパン酸、メソ−酒石酸、４，６−ジメチルピリミジンアミン、ｐ−フタル酸、クレアチニン、ブタン酸、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−ナフチルアミン、ペンタン酸、４−メチルペンタン酸、Ｎ−メチルアニリン、１，１０−フェナントロリン、３−ピリジンカルボン酸、ヘキサン酸、プロパン酸、４−アミノ安息香酸、２−メチルプロパン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、シクロヘキサンカルボン酸、キノリン、３−キノリンアミン、２−アミノ安息香酸、４−ピリジンカルボン酸、ノナン酸、メラミン、８−キノリノール、トリメチル酢酸、６−メトキシキノリン、４−（メチルアミノ）安息香酸、ｐ−メチルアニリン、３−（メチルアミノ）安息香酸、リンゴ酸、Ｎ−エチルアニリン、２−ベンジルピリジン、３，６−ジニトロフェノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、２，５−ジメチルピペラジン、ｐ−フェネチジン、５−メチルキノリン、２−フェニルベンゾイミダゾール、ピリジン、ピコリン酸、３，５−ジヨードチロシン、ｐ−アニシジン、２−（メチルアミノ）安息香酸、２−チアゾールアミン、グルタル酸、アジピン酸、イソキノリン、イタコン酸、ｏ−フタル酸、ベンゾイミダゾール、ピペラジン、ヘプタン二酸、アクリジン、フェナントリジン、コハク酸、メチルコハク酸、４−メチルキノリン、３−メチルピリジン、７−イソキノリノール、マロン酸、メチルマロン酸、２−メチルキノリン、２−エチルピリジン、２−メチルピリジン、４−メチルピリジン、ヒスタミン、ヒスチジン、マレイン酸、シス−１，２−シクロヘキサンジアミン、３，５−ジメチルピリジン、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、カコジル酸、ペリミジン、クエン酸、イソクエン酸、２，５−ジメチルピリジン、パパベリン、６−ヒドロキシ−４−メチルプテリジン、Ｌ−サイロキシン、３，４−ジメチルピリジン、メトキシピリジン、トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン、２，５−ピリジンジアミン、ｌ−１−メチルヒスチジン、ｌ−３−メチルヒスチジン、２，３−ジメチルピリジン、キサントプテリン、１，２−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、アロキサン酸、２，６−ジメチルピリジン、Ｌ−カルノシン、２−ピリジンアミン、Ｎ−ｂ−アラニルヒスチジン、ピロカルピン、１−メチルイミダゾール、１Ｈ−イミダゾール、２，４−ジメチルピリジン、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、チロシンアミド、５−ヒドロキシキナゾリン、１，１−シクロプロパンジカルボン酸、２，４，６−トリメチルピリジン、ベロナール、２，３−ジクロロフェノール、１，２−エタンジアミン、１−イソキノリンアミン、およびその組合せから選択される放出性官能基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の１種類以上の化合物およびＲＮＡ薬剤を含む組成物。
【請求項６】
前記ＲＮＡ薬剤がｓｉＲＮＡである、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
前記ＲＮＡ薬剤がマイクロＲＮＡである、請求項５記載の組成物。
【請求項８】
１種類以上の非カチオン性脂質およびポリマー脂質をさらに含む、請求項５記載の組成物。
【請求項９】
前記ＲＮＡ薬剤がｓｉＲＮＡである、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＲＮＡ薬剤がマイクロＲＮＡである、請求項８記載の組成物。
【請求項１１】
前記非カチオン性脂質が、ＤＤＰＥ、ＤＬＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＤＰＣ、ＤＰＰＳ、ＤＳＰＳ、コレステロール、ラノステロール、スチグマスタノール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモステロール、７−デヒドロコレステロール、ペグ化コレステロール、酢酸コレステリル、アラキドン酸コレステリル、酪酸コレステリル、ヘキサン酸コレステリル、カプリル酸コレステリル、ｎ−デカン酸コレステリル、ドデカン酸コレステリル、ミリスチン酸コレステリル、パルミチン酸コレステリル、ベヘン酸コレステリル、ステアリン酸コレステリル、ネルボン酸コレステリル、ペラルゴン酸コレステリル、ｎ−バレリアン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、エライジン酸コレステリル、エルカ酸コレステリル、ヘプタン酸コレステリル、リノールエライジン酸コレステリル、リノール酸コレステリル、ならびにその混合物および誘導体から選択される、請求項８記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリマー脂質が、ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００、ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００、ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００、ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−７５０、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００、硫酸コレステリルナトリウム、ペグ化コレステロール、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物から選択される、請求項８記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の１種類以上の化合物および干渉ＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物。
【請求項１４】
干渉ＲＮＡ薬剤を細胞に送達するための組成物であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の１種類以上の化合物を１種類以上の干渉ＲＮＡ薬剤と一緒に含む組成物。
【請求項１５】
細胞または哺乳動物における遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の１種類以上の化合物を１種以上の干渉ＲＮＡ薬剤と一緒に含む組成物。
【請求項１６】
関節リウマチ、炎症性疾患、肝臓疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、肝炎およびインフルエンザを含めたウイルス疾患、ならびに癌を含めた疾患、障害または病状の処置のための医薬の製造のための、１種類以上の干渉ＲＮＡ薬剤と一緒での請求項１〜４のいずれか１項に記載の１種類以上の化合物を含む組成物の使用。
【請求項１７】
関節リウマチ、炎症性疾患、肝臓疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、肝炎およびインフルエンザを含めたウイルス疾患、ならびに癌を含めた疾患、障害または病状の処置のための、１種類以上の干渉ＲＮＡ薬剤と一緒に請求項１〜４のいずか１項に記載の１種類以上の化合物を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、細胞への種々の分子の送達に有用な脂質などの新規な薬物送達向上剤に関する。本発明は、かかる薬剤の一連の化合物、組成物、製剤、方法および使用を提供し、最終的に、薬物送達、治療薬、ならびに疾患および病状（例えば、被検体における遺伝子の発現または活性のモジュレーションに応答するもの）の診断および処置、に関する。より詳しくは、本発明は、化合物、リポソーム、ラメラベシクル、エマルジョン、ミセル、懸濁液、粒子、溶液および他の形態の送達向上組成物および製剤、ならびに治療方法およびこのような送達物質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
被検体への治療用化合物の送達は、該化合物が標的細胞もしくは組織に達する能力の制限によって、または細胞内での該化合物の進入もしくは輸送の制限によって妨げられることがあり得る。治療用物質の送達は、一般に、細胞膜によって制限される。このような送達に対する障壁および制限により、ある結果を得るのに望ましい濃度よりずっと高い濃度の化合物を使用する必要性が生じ得、これは、毒性効果および副作用のリスクをもたらす。
【０００３】
送達のストラテジーの一例は、脂質またはポリマー担体分子を用いて細胞内への化合物の輸送を改善することである。このような物質は、細胞内への選択的進入に存在する機構を利用するが、依然として核酸およびタンパク質などの外因性分子は排除し得るものである。例えば、カチオン性脂質は、薬物薬剤と相互作用し、細胞膜との接触をもたらし得るものである。また、脂質分子は、薬物薬剤用の担体としてリポソームまたは粒子に組織化させたものであり得る。リポソーム薬物担体は、薬物分子を分解から保護するとともに、その細胞による取込みを改善するものであり得る。また、リポソーム薬物担体は、静電気的および他の相互作用によって特定の化合物をカプセル封入または結合するものであり得、負電荷を有する細胞膜と相互作用して膜を通過する輸送を起こすものであり得る。
【０００４】
調節性ＲＮＡの理解、ならびにとりわけ、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、ＲＮＡｉ療法、ＲＮＡ系薬物、アンチセンス療法、および遺伝子療法の開発により、細胞内への活性核酸薬剤の導入に有効な手段の必要性が増大している。一般に、核酸は、細胞または原形質内で限定的な期間のみ安定である。しかしながら、核酸系薬剤は、組成物および製剤中で安定化され得、次いで、これを細胞内送達のために分散させ得る。
【０００５】
必要とされているものは、最終的に、細胞保護および比較的低い毒性を維持する治療薬としての使用のための核酸薬剤の細胞内およびインビボ送達のための組成物および製剤である。さらに、細胞に二本鎖ＲＮＡを送達してＲＮＡ干渉の応答をもたらすための組成物および方法の必要性が存在する。さらに、選択した細胞、組織または区画に干渉ＲＮＡを送達し、遺伝子発現を、表現型または疾患状態が改変される様式でモジュレートするための組成物および方法の必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
簡単な概要
本発明は、干渉核酸またはその前駆体を、リポペプチド、脂質、および天然または合成ポリマーなどの種々の成分と組み合わせて用いる一連の新規な化合物、組成物、製剤および方法を提供することにより、このような必要性を満たし、さらなる目的および利点を実現するものである。
【０００７】
一部の実施形態において、本発明は、２〜１００アミノ酸残基と、該ペプチドの少なくとも一方の末端または少なくとも１つのアミノ酸残基に結合された親油性基とを有するペプチド、ならびにその塩および使用を包含する。親油性基は、該ペプチドのＮ末端、Ｃ末端または両末端に結合され得る。親油性基は、少なくとも１つの内部アミノ酸残基（すなわち、該ペプチドのＮ末端またはＣ末端アミノ酸残基でないアミノ酸残基）に結合され得る。親油性基は、いずれかの末端または両末端と、少なくとも１つの内部アミノ酸残基に結合され得る。
【０００８】
この概要は、本発明の詳細説明、ならびに添付の実施例および特許請求の範囲とともに全体として本開示を包含する。
（項目１）
式Ｉ：
Ｒ３−Ｊ−｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
（式中、
Ｒ１は、独立して、各存在に対して、アミノ酸の非水素側鎖であり；
｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎは、中心ペプチドであり；
Ｒ２およびＲＮは、互いに独立して、水素であるか、または炭素、酸素、窒素、イオウおよび水素原子からなり、１〜２０個の炭素原子を有する有機基であるか、またはＣ（１〜２２）アルキル、（６〜１２）シクロアルキル、（６〜１２）シクロアルキルアルキル、Ｃ（３〜１８）アルケニル、Ｃ（３〜１８）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルカノイル、Ｃ（１〜５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、Ｃ（１〜５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１〜５）アルキル、シアノ−Ｃ（１〜５）アルキル、アリール−Ｃ（１〜５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１〜５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり；
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、天然もしくは合成脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシド由来の親油性テール部であり、該テール部は、ステロイド、または炭素、酸素、窒素、イオウおよび水素原子からなり、１〜２０個の炭素原子を有する有機基、または置換もしくは非置換のＣ（１〜２２）アルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル−アルキル、Ｃ（３〜１８）アルケニル、Ｃ（３〜１８）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、またはスフィンガニン、（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−１，３−オクタデカンジオール、イコサスフィンガニン、スフィンゴシン、フィトスフィンゴシン、シス−４−スフィンゲニン、またはセラミドを含んでいてもよく；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、またはマレイミド、チオエーテル、アミド、システアミド、システイン、チオールを含むリンカー、またはジスルフィド基、または１〜４００個の原子を含むポリエチレンオキシドもしくはポリプロピレンオキシド基、Ｃ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、およびＰの群から選択される１〜２００個の原子を含むリンカーであり；
Ｊは、（Ｃ＝Ｏ）、Ｏ、またはマレイミド、チオエーテル、アミド、システアミド、システイン、チオールを含むリンカー、またはジスルフィド基、または１〜４００個の原子を含むポリエチレンオキシドもしくはポリプロピレンオキシド基、Ｃ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、およびＰの群から選択される１〜２００個の原子を含むリンカーである；ならびに
ｎは、２〜１００である）
に示す構造を含む、項目１に記載の化合物。
（項目２）
中心ペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１〜３００および３５０〜３５６からなる群より選択される、項目１に記載の化合物。
（項目３）
中心ペプチドのアミノ酸配列が、ＧＡＬＦＬＡＦＬＡＡＡＬＸａａＬＭＧＬＷＸａａＱＸａａＫＫＫＲＫＶ（配列番号２９１）、ＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号２９２）、ＷＷＨＨＫＫＲＲＣＣＲＲＫＫＨＨＷＷ（配列番号９４）、ＸａａＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶＸａａ（配列番号２９３）、ＷＸａａＱＰＫＫＫＲＫＸａａ（配列番号２９４）ＸａａＸａａＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号２９５）、ＬＩＲＬＷＸａａＨＬＩＨＩＷＦＱＸａａＲＲＬＫＷＫＫＫ（配列番号２９７）、ＱＮＲＲＬＫＷＫＫＫ（配列番号２９８）、ＸａａＱＮＲＲＬＫＷＫＫＫＸａａ（配列番号２９９）、およびＱＸａａＲＲＬＫＷＫＫＫ（配列番号３００）からなる群より選択され、ここで、Ｘａａは、独立して、各存在に対して、Ｌ、Ａ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、Ｒ、またはＫである、項目１に記載の化合物。
（項目４）
中心ペプチドに側鎖が連結されており、該側鎖が、３，５−ジヨードチロシン、１−メチルヒスチジン、２−メチルブタン酸、２−ｏ−アニシルプロパン酸、メソ−酒石酸、４，６−ジメチルピリミジナミン、ｐ−フタル酸、クレアチニン、ブタン酸、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−ナフチルアミン、ペンタン酸、４−メチルペンタン酸、Ｎ−メチルアニリン、１，１０−フェナントロリン、３−ピリジンカルボン酸、ヘキサン酸、プロパン酸、４−アミノ（ａｎｉｍｏ）安息香酸、２−メチルプロパン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、シクロヘキサンカルボン酸、キノリン、３−キノリンアミン、２−アミノ安息香酸、４−ピリジンカルボン酸、ノナン酸、メラミン、８−キノリノール、トリメチル酢酸、６−メトキシキノリン、４−（メチルアミノ）安息香酸、ｐ−メチルアニリン、３−（メチルアミノ）安息香酸、リンゴ酸、Ｎ−エチルアニリン、２−ベンジルピリジン、３，６−ジニトロフェノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、２，５−ジメチルピペラジン、ｐ−フェネチジン、５−メチルキノリン、２−フェニルベンゾイミダゾール、ピリジン、ピコリン酸、３，５−ジヨード（ｄｉｉｏｄｉ）チロシン、ｐ−アニシジン、２−（メチルアミノ）安息香酸、２−チアゾールアミン、グルタル酸、アジピン酸、イソキノリン、イタコン酸、ｏ−フタル酸、ベンゾイミダゾール、ピペラジン、ヘプタン二酸、アクリジン、フェナントリジン、コハク酸、メチルコハク酸、４−メチルキノリン、３−メチルピリジン、７−イソキノリノール、マロン酸、メチル（ｍｅｔｈｙ）マロン酸、２−メチルキノリン、２−エチルピリジン、２−メチルピリジン、４−メチルピリジン、ヒスタミン、ヒスチジン、マレイン酸、シス−１，２−シクロヘキサンジアミン、３，５−ジメチルピリジン、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、カコジル酸、ペリミジン、クエン酸、イソクエン酸、２，５−ジメチルピリジン、パパベリン、６−ヒドロキシ−４−メチルプテリジン、Ｌ−サイロキシン、３，４−ジメチルピリジン、メトキシピリジン、トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン、２，５−ピリジンジアミン、ｌ−１−メチルヒスチジン、ｌ−３−メチルヒスチジン、２，３−ジメチルピリジン、キサントプテリン、１，２−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、アロキサン酸、２，６−ジメチルピリジン、Ｌ−カルノシン、２−ピリジンアミン、Ｎ−ｂ−アラニルヒスチジン、ピロカルピン、１−メチルイミダゾール、１Ｈ−イミダゾール、２，４−ジメチルピリジン、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、チロシンアミド、５−ヒドロキシ（ｈｙｄｏｘｘｙ）キナゾリン、１，１−シクロプロパンジカルボン酸、２，４，６−トリメチルピリジン、ベロナール、２，３−ジクロロフェノール、１，２−エタンジアミン、１−イソキノリンアミン、およびその組合せから選択される放出性官能基を含む、項目１に記載の化合物。
（項目５）
干渉ＲＮＡ薬剤および１種類以上の項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物。
（項目６）
前記干渉ＲＮＡ薬剤がｓｉＲＮＡである、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記干渉ＲＮＡ薬剤がｍｄＲＮＡである、項目５に記載の組成物。
（項目８）
干渉ＲＮＡ薬剤、１種類以上の項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る、１種類以上の非カチオン性脂質、およびポリマー脂質を含む医薬組成物。
（項目９）
前記干渉ＲＮＡ薬剤がｓｉＲＮＡである、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記干渉ＲＮＡ薬剤がｍｄＲＮＡである、項目８に記載の組成物。
（項目１１）
前記１種類以上の化合物が
（Ｃ２０）−（Ｈ）８（Ｒ）８（Ｈ）８Ｋ−ＮＨ−（Ｃ２０）（配列番号１３）
である、項目８に記載の組成物。
（項目１２）
前記非カチオン性脂質が、ＤＤＰＥ、ＤＬＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＯＰＥ、ＤＬｉｎＰＥ、ＤＬｅｎＰＥ、ＤＡＲＡＰＥ、ＤＤＨＡＰＥ、ＤＰｈＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＤＰＣ、ＤＰＰＳ、ＤＳＰＳ、コレステロール、ラノステロール、スチグマスタノール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモステロール、７−デヒドロコレステロール、ペグ化コレステロール、酢酸コレステリル、アラキドン酸コレステリル、酪酸コレステリル、ヘキサン酸コレステリル、カプリル酸コレステリル、ｎ−デカン酸コレステリル、ドデカン酸コレステリル、ミリスチン酸コレステリル、パルミチン酸コレステリル、ベヘン酸コレステリル、ステアリン酸コレステリル、ネルボン酸コレステリル、ペラルゴン酸コレステリル、ｎ−バレリアン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、エライジン酸コレステリル、エルカ酸コレステリル、ヘプタン酸コレステリル、リノールエライジン酸コレステリル、リノール酸コレステリル、ならびにその混合物および誘導体から選択される、項目８に記載の組成物。
（項目１３）
前記ポリマー脂質が、ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００、ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００、ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００、ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−７５０、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００、硫酸コレステリルナトリウム、ペグ化コレステロール、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物から選択される、項目８に記載の組成物。
（項目１４）
項目８に記載の組成物を調製すること、および細胞を該組成物で処理することを含む、干渉ＲＮＡ薬剤を細胞に送達するための方法。
（項目１５）
項目８に記載の組成物を調製すること、および細胞を該組成物で処理することを含む、細胞における遺伝子の発現を阻害するための方法。
（項目１６）
項目８に記載の組成物を調製すること、および該組成物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における遺伝子の発現を阻害するための方法。
（項目１７）
疾患、障害または病状の処置のための医薬の製造のための項目８に記載の組成物の使用。
（項目１８）
疾患または病状が、癌、代謝疾患もしくは代謝障害、または炎症性疾患である、項目１７に記載の使用。
（項目１９）
ウイルス感染の処置のための医薬の製造のための項目８に記載の組成物の使用。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
詳細説明
本発明は、一般的に、ＲＮＡ干渉、ＲＮＡ治療薬の送達、および脂質の化学の分野に関する。より詳しくは、本発明は、リボ核酸の組成物および製剤、ならびにその医薬のため、および治療薬としての送達のための使用に関する。本発明は、一般的に、哺乳動物における遺伝子発現の遺伝子特異的阻害のためのＲＮＡ干渉におけるリボ核酸の使用方法に関する。
【００１０】
本発明は、干渉核酸またはその前駆体を、種々の成分、例えば、リポペプチド、脂質、リポイド部分、および天然または合成ポリマーとの組み合わせで含む一連の組成物、製剤および方法を提供する。
【００１１】
一部の態様において、本発明は、細胞、組織、器官および生きている動物、例えば、哺乳動物およびヒトへの核酸、例えば、ＲＮＡｉ誘導剤、アンチセンスＲＮＡ薬剤、またはＤＮＡの送達を助長する新規な組成物を提供する。
【００１２】
リポペプチド
本発明は、干渉ＲＮＡ薬剤またはアンチセンスＲＮＡの送達および投与のための一連のリポペプチドを提供する。該リポペプチドは、カチオン性または非カチオン性であり得る。本明細書で用いる場合、非カチオン性は、中性およびアニオン性を含む。カチオン性リポペプチドは、１つ以上のカチオン性部位を有するものであり得る。
【００１３】
本開示のリポペプチドは、ペプチドのＮ末端またはＣ末端、または該ペプチドの両末端の核酸送達向上基またはリポイド基を置換することにより形成され得る。一部の態様において、該核酸送達基またはリポイド基は、該ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基のα−炭素または１つ以上のアミン基に連結され得、各アミン基は、該ペプチドのアミノ酸残基のα−炭素、またはＮ末端、Ｃ末端の組合せ、該ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基のα−炭素、または１つ以上のアミン基に隣接しており、各アミン基は、該ペプチドのアミノ酸残基のα−炭素に隣接している。一部の実施形態において、該ペプチドのコア部には、２つ以上の連続するアミノ酸、または２〜１００アミノ酸残基（すなわち、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸残基）のペプチドが含まれ得る。
【００１４】
一部の態様において、本発明は、式Ｉ：
Ｒ３−Ｊ−｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
（式中、
Ｒ１は、独立して、各存在に対して、アミノ酸の非水素側鎖であり；
｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎは、中心ペプチドであり；
Ｒ２およびＲＮは、互いに独立して、水素であるか、または炭素、酸素、窒素、イオウおよび水素原子からなり、１〜２０個の炭素原子を有する有機基であるか、または、Ｃ（１〜２２）アルキル、（６〜１２）シクロアルキル、（６〜１２）シクロアルキルアルキル、Ｃ（３〜１８）アルケニル、Ｃ（３〜１８）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルカノイル、Ｃ（１〜５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルコキシ、Ｃ（１〜５）アルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、Ｃ（１〜５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１〜５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１〜５）アルキル、シアノ−Ｃ（１〜５）アルキル、アリール−Ｃ（１〜５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１〜５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり；
Ｒ３およびＲ４は、互いに独立して、天然もしくは合成脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシド由来の親油性テール部であり、該テール部は、ステロイド、または炭素、酸素、窒素、イオウおよび水素原子からなり、１〜２０個の炭素原子を有する有機基、または置換もしくは非置換のＣ（１〜２２）アルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル、Ｃ（６〜１２）シクロアルキル−アルキル、Ｃ（３〜１８）アルケニル、Ｃ（３〜１８）アルキニル、Ｃ（１〜５）アルコキシ−Ｃ（１〜５）アルキル、またはスフィンガニン、（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−１，３−オクタデカンジオール、イコサスフィンガニン、スフィンゴシン、フィトスフィンゴシン、シス−４−スフィンゲニン、またはセラミドを含んでいてもよく；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、またはマレイミド、チオエーテル、アミド、システアミド、システイン、チオールを含むリンカー、またはジスルフィド基、または１〜４００個の原子を含むポリエチレンオキシドもしくはポリプロピレンオキシド基、Ｃ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、およびＰの群から選択される１〜２００個の原子を含むリンカーであり；
Ｊは、（Ｃ＝Ｏ）、Ｏ、またはマレイミド、チオエーテル、アミド、システアミド、システイン、チオールを含むリンカー、またはジスルフィド基、または１〜４００個の原子を含むポリエチレンオキシドもしくはポリプロピレンオキシド基、またはＣ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、およびＰの群から選択される１〜２００個の原子を含むリンカーである；ならびに
ｎは、２〜１００である）
に示される一連のリポペプチド構造を提供する。
【００１５】
例えば、中心ペプチドが核酸に結合し得る本開示のリポペプチドが作製され得る。
【００１６】
例えば、中心ペプチドが両親媒性アミノ酸配列であり得る本開示のリポペプチドが作製され得る。例えば、該ペプチドは、疎水性配列ドメインまたはモチーフを構成する複数の非極性または疎水性アミノ酸残基を有するものであり得、該ドメインまたはモチーフは、電荷を有する配列ドメインまたはモチーフを構成する電荷を有する複数のアミノ酸残基に連結すると、両親媒性ペプチドが得られ得る。
【００１７】
例えば、中心ペプチドが、Ｐｏｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、４：１、Ｍｗ ２０，０００−５０，０００；Ｐｏｌｙ−Ｏｒｎ−Ｔｒｐ、４：１、Ｍｗ ２０，０００−５０，０００；メリチンタンパク質の断片またはバリアント、およびヒストンタンパク質（例えば、ヒストンＨ１、ヒストンＨ２Ａ、ヒストンＨ２Ｂ、ヒストンＨ３もしくはヒストンＨ４）の断片またはバリアントであり得る本開示のリポペプチドが作製され得る。
【００１８】
例えば、中心ペプチドが多数のカチオン性部位または正電荷を有する多数の残基を有する本開示のリポペプチドが作製され得る。
【００１９】
中心ペプチドは、正電荷を有する約２〜約４５個の残基；正電荷を有する約３〜約４５個の残基；正電荷を有する約４〜約４５個の残基；正電荷を有する約５〜約４５個の残基；正電荷を有する約１０〜約４５個の残基；正電荷を有する約１５〜約４５個の残基；正電荷を有する約２０〜約４５個の残基；正電荷を有する約２５〜約４５個の残基；正電荷を有する約３０〜約４５個の残基； 正電荷を有する約３５〜約４５個の残基；正電荷を有する約４０〜約４５個の残基を含むものであり得る。
【００２０】
該ペプチドは、チオール化された実質的ポリリジンペプチドであってもよい。これは、少なくとも３、４、５、６、７、８程度のチオール基を含むものであってもよく、チオール基を２つしか有しないものであってもよい。
【００２１】
例えば、中心ペプチドが、アルギニン（Ａｒｇ）ｎ（配列番号３４１）、ホモアルギニン（ｈｏｍｏＡｒｇ）ｎ（側鎖−（ＣＨ２）４ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ノルアルギニン（ｎｏｒＡｒｇ）ｎ（側鎖−（ＣＨ２）２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ノル−ノルアルギニン（ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ）ｎ（側鎖−（ＣＨ２）ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、オルニチン（Ｏｍ）ｎ、リジン（ＬｙＳ）ｎ、（配列番号３４２）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）ｎ（配列番号３４３）（式中、ｎは、２〜１００である）である本開示のリポペプチドが作製され得る。
【００２２】
例えば、中心ペプチドが、（Ａｒｇ，Ｈｉｓ）ｎ、（Ｌｙｓ，Ｈｉｓ）ｎ、（Ａｒｇ，Ｌｙｓ）ｎ、Ｈｉｓ−（Ａｒｇ）ｎ−Ｈｉｓ（配列番号３４４）、Ｈｉｓ−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｈｉｓ（配列番号３４５）、（Ｈｉｓ）ｎ−（Ａｒｇ）ｎ−（Ｈｉｓ）ｎ（配列番号３４６）、または（Ｈｉｓ）ｎ−（Ｌｙｓ）ｎ−（Ｈｉｓ）ｎ（配列番号３４７）（式中、ｎは、２〜１００である）である本開示のリポペプチドが作製され得る。
【００２３】
本開示のリポペプチドの中心ペプチドの例としては、表１に示したものが挙げられる。
【００２４】
【表１−１】
2015078214.tif 000002
【００２５】
【表１−２】
2015078214.tif 000003
【００２６】
【表１−３】
2015078214.tif 000004
【００２７】
【表１−４】
2015078214.tif 000005
【００２８】
【表１−５】
2015078214.tif 000006
【００２９】
【表１−６】
2015078214.tif 000007
【００３０】
【表１−７】
2015078214.tif 000008
【００３１】
【表１−８】
2015078214.tif 000009
【００３２】
【表１−９】
2015078214.tif 000010
【００３３】
【表１−１０】
2015078214.tif 000011
【００３４】
【表１−１１】
2015078214.tif 000012
【００３５】
【表１−１２】
2015078214.tif 000013
【００３６】
【表１−１３】
2015078214.tif 000014
本開示のリポペプチドの中心ペプチドの例としては、表２に示したものが挙げられる。
【００３７】
【表２】
2015078214.tif 000015
ここで、表２中のＸａａは、独立して、各存在に対して、Ｌ、Ａ、Ｑ、Ｈ、Ｅ、Ｒ、またはＫである。
【００３８】
本開示のアミノ酸残基は、Ｄ−またはＬ−不斉中心であり得る。
【００３９】
例えば、中心ペプチドがロイシン、バリン、アラニン、セリンのみ、またはその組合せを含む非カチオン性リポペプチドが作製され得る。
【００４０】
例えば、中心ペプチドが、細胞または組織特異的標的化ペプチドであり得る本開示のリポペプチドが作製され得る。例えば、該ペプチドは、細胞表面（ｓｕｒｆａｃｔ）受容体と相互作用するリガンドもしくはその断片、または特定の細胞もしくは組織型の細胞表面上の脂質、ペプチド、糖類およびその組合せに選択的に結合する（ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｂｉｎｄｓ）ペプチドであり得る。中心ペプチドは、以下の細胞型：肝細胞、内皮細胞、神経細胞、心筋細胞、骨格筋細胞（筋芽細胞または筋管）、平滑筋細胞、線維芽細胞、赤血球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、白血球、骨芽細胞、軟骨細胞、成体幹細胞、胚性幹細胞、および腫瘍細胞の１つ以上を標的化するものであり得る。
【００４１】
例えば、中心ペプチドが膜融合ペプチドまたはその断片であり得る本開示のリポペプチドが作製され得る。
【００４２】
例えば、中心ペプチドがＳＮＡＲＥ（可溶性（ｓｏｌｕｔａｂｌｅ）ＮＳＦ結合受容体）ペプチドまたはその断片（ｆｒａｇｅｍｅｎｔ）であり得る本開示のリポペプチドが作製され得る。例えば、中心ペプチドは、ｖ−ＳＮＡＲＥまたはｔ−ＳＮＡＲＥであり得る。中心ペプチドは、ＮＳＦ（Ｎ−エチルマレイミド（ａｍａｌｅｉｍｉｄｅ）感受性因子）またはＳＮＡＰ（可溶性ＮＳＦ結合タンパク質）であり得る。
【００４３】
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは、構造１
【００４４】
【化１】
2015078214.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ＲＮ、Ｊ、Ｚ、Ｒ３、Ｒ４、およびｎは、上記に規定のとおりである）
で表される。
【００４５】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１８アルキル、または（Ｃ１８：ｌ）アルケニルであり得る。
【００４６】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対してリポイド基であり得る。
【００４７】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、膜を通過する送達または細胞による取込みをもたらすのに充分な親油性の特質または親油性（水／オクタノール分配などによって規定）を付与する脂質様テール部から選択され得る。一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、細胞膜アンカーリングをもたらすのに充分な親油性の特質または親油性を付与する脂質様テール部から選択され得る。このようなテール部は、アミノ酸脂質構造において使用すると、両親媒性分子をもたらす。脂質様テール部は、とりわけ、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、またはガングリオシドに由来するものであり得、ステロイドを含むことがあり得る。
【００４８】
一部の特定の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、グリセロール主鎖を有する脂質様テール部であり得る。
【００４９】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃβアルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１８アルキル、Ｃ１９アルキル、Ｃ２０アルキル、Ｃ２１アルキル、またはＣ２２アルキルであり得る。
【００５０】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、下記の構造：
【００５１】
【化２】
2015078214.tif 000017
の１つを有する親油性テール部であり得る。
【００５２】
上記構造において、Ｘは、上記構造ＩのＺ、Ｊ、Ｎ、またはα−炭素を表し、数字表示、例えば「１８：３」にて原子の１つとしてカウントする。一部の実施形態において、Ｘは、炭素、窒素、または酸素原子であり得る。
【００５３】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、下記の構造：
【００５４】
【化３】
2015078214.tif 000018
（式中、Ｘは、上記に規定のとおりである）
の１つを有する親油性テール部であり得る。
【００５５】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、コレステロール、ステロールまたはステロイド（ゴナン、エストラン、アンドロスタン、プレグナン、コラン、コレスタン、エルゴスタン、カンペスタン、ポリフェラスタン、スチグマスタン、ゴルゴスタン、ラノスタン、シクロアルタンなど）、ならびに前述の任意のもののステロールまたは動物性ステロール誘導体、ならびにその生物学的中間体および前駆体（例えば、コレステロール、ラノステロール、スチグマスタノール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモステロール、７−デヒドロコレステロール、ならびにその混合物および誘導体が挙げられ得る）を含むものであり得る選択した脂質様テール部であり得る。
【００５６】
一部の特定の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、脂肪酸様テール部、例えば、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）アルケニル、パルミチン酸（Ｃ１６：０）アルケニル、ステアリン酸（Ｃ１８：０）アルケニル、オレイン酸（Ｃ１８：１、炭素９に二重結合）アルケニル、リノール酸（Ｃ１８：２、炭素９または１２に二重結合）アルケニル、リノレン（ｌｉｎｏｎｅｎｉｃ）酸（Ｃ１８：３、炭素９、１２または１５に二重結合）アルケニル、アラキドン酸（Ｃ２０：４、炭素５、８、１１または１４に二重結合）アルケニル、およびエイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５、炭素５、８、１１、１４または１７に二重結合）アルケニル由来のテール部に由来するものであり得る。脂肪酸様テール部の他の例は、Ｄｏｎａｌｄ ＶｏｅｔおよびＪｕｄｉｔｈ Ｖｏｅｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第３版（２００５），ｐ．３８３を見るとよい。
【００５７】
一部の実施形態において、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３およびＲ４は、独立して、各存在に対して、イソプレノイドに由来するものであり得る。
【００５８】
一部の実施形態において、Ｒ３が上記の親油性基であり得、Ｒ２、ＲＮおよびＲ４が水素であり得る。
【００５９】
一部の実施形態において、Ｒ４が上記の親油性基であり得、Ｒ２、ＲＮおよびＲ３が水素であり得る。
【００６０】
一部の実施形態において、Ｒ３とＲ４が上記の親油性基であり得、Ｒ２とＲＮが水素であり得る。
【００６１】
一部の実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ２が上記の親油性基であり得、ＲＮが水素であり得る。
【００６２】
一部の実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、ＲＮが上記の親油性基であり得、Ｒ２が水素であり得る。
【００６３】
一部の実施形態において、Ｒ３とＲＮが上記の親油性基であり得、Ｒ２とＲ４が水素であり得る。
【００６４】
一部の実施形態において、ＲＮとＲ４が上記の親油性基であり得、Ｒ２とＲ３が水素であり得る。
【００６５】
一部の実施形態において、ＲＮとＲ２が上記の親油性基であり得、Ｒ３とＲ４が水素であり得る。
【００６６】
一部の実施形態において、Ｒ４とＲ２が上記の親油性基であり得、Ｒ３とＲＮが水素であり得る。
【００６７】
一部の実施形態において、Ｒ３とＲ２が上記の親油性基であり得、Ｒ４とＲＮが水素であり得る。
【００６８】
一部の実施形態において、親油性基は、任意の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個の連続するアミノ酸残基のα−炭素に連結され得る。一部の実施形態において、親油性基は、中心ペプチドの１つおきのアミノ酸残基のα−炭素に連結され得る。一部の実施形態において、親油性基は、中心ペプチドの任意の２つの連続するアミノ酸残基のα−炭素に連結され得、該２つの連続するアミノ酸残基は各々、親油性基がα−炭素に連結されていない中心ペプチド内のアミノ酸残基に隣接している。
【００６９】
一部の実施形態において、親油性基は、任意の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個の連続するアミノ酸残基のアミン基に連結され得、該アミン基は、中心ペプチドのアミノ酸残基のα−炭素に隣接している。一部の実施形態において、親油性基は、中心ペプチドの１つおきのアミノ酸残基のアミン基に連結され得る。一部の実施形態において、親油性基は、中心ペプチドの任意の２つの連続するアミノ酸残基のアミン基に連結され得、該２つの連続するアミノ酸残基は各々、親油性基がアミン基に連結されていない中心ペプチド内のアミノ酸残基に隣接しており、該アミン基は、中心ペプチドの該アミノ酸残基のα−炭素に隣接している。
【００７０】
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造２で表され、式中、ｚは、０〜２０（すなわち、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは、０〜９８（すなわち、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、または９８）である。
【００７１】
【化４】
2015078214.tif 000019
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造３で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７２】
【化５】
2015078214.tif 000020
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造４で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７３】
【化６】
2015078214.tif 000021
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造５で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７４】
【化７】
2015078214.tif 000022
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造６で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７５】
【化８】
2015078214.tif 000023
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造７で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７６】
【化９】
2015078214.tif 000024
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造８で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７７】
【化１０】
2015078214.tif 000025
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造９で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７８】
【化１１】
2015078214.tif 000026
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造１０で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００７９】
【化１２】
2015078214.tif 000027
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造１１で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００８０】
【化１３】
2015078214.tif 000028
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造１２で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００８１】
【化１４】
2015078214.tif 000029
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造１３で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００８２】
【化１５】
2015078214.tif 000030
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造１４で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００８３】
【化１６】
2015078214.tif 000031
一部の実施形態において、式Ｉに相当する一連のリポペプチドは構造１５で表され、式中、ｚは０〜２０であり、Ｘは、独立して各存在に対して任意のアミノ酸であり、Ｒ１は上記に規定のとおりであり、ｎは０〜９８である。
【００８４】
【化１７】
2015078214.tif 000032
本明細書で用いる場合、用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸と天然に存在しないアミノ酸を包含する。アミノ酸の例としては、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌが挙げられる。したがって、本発明のリポペプチドは、遺伝子コードアミノ酸から作製されたもの、天然に存在する非遺伝子コードアミノ酸、または合成アミノ酸であり得る。アミノ酸の一例としては、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、２，３−ジアミノ酪酸、２，４−ジアミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸、４−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，２’−ジアミノピメリン酸、６−アミノヘキサン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、デスモシン、オルニチン、シトルリン、Ｎ−メチルイソロイシン、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、フェニルグリシン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン（ｓａｃｒｏｓｉｎｅ）、Ｎ−エチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、４−オキソ−シクロヘキシルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、シクロヘキシルアラニン、ｔ−ブチルアラニン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、３−クロロアラニン、３−ベンゾチエニルアラニン、４−ハロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、ペニシラミン、２−チエニルアラニン、メチオニン、メチオニンスルホキシド、ホモアルギニン、ノルアルギニン、ノル−ノルアルギニン、Ｎ−アセチルリジン、Ｎ−アミノフェニルアラニン、Ｎ−メチルバリン、ホモシステイン、ホモセリン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、６−Ｎ−メチルリジン、ノルバリン、Ｏ−アリル−セリン、Ｏ−アリル−トレオニン、α−アミノヘキサン酸、α−アミノ吉草酸、およびピログルタミン酸が挙げられる。
【００８５】
本明細書で用いる場合、用語「アミノ酸」は、α−アミノ酸とβ−アミノ酸を包含する。
【００８６】
他のアミノ酸残基は、Ｆａｓｍａｎ，ＣＲＣ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８９）を見るとよい。
【００８７】
一般に、化合物は、１つ以上のキラル中心を含むことがあり得る。１つ以上のキラル中心を含む化合物としては、「異性体」、「立体異性体」、「ジアステレオマー」、「エナンチオマー」、「光学異性体」または「ラセミ混合物」と示されるものが挙げられ得る。立体化学命名法の規則、例えば、Ｃａｈｎ，ＩｎｇｏｌｄおよびＰｒｅｌｏｇの立体異性体の命名規則、ならびに立体化学の測定および立体異性体の分離のための方法は当該技術分野で知られている。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ Ｂ． Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ “Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，第５版，２００１を参照のこと。本開示の化合物および構造は、指定した化合物または構造について存在すると理解され得る可能なあらゆる異性体、立体異性体、ジアステレオマー、エナンチオマーおよび／または光学異性体を包含するものとし、その任意の混合物、ラセミ物化合物などを包含する。
【００８８】
用語「親油性基」または「リポイド基」または「脂質様テール部」または「脂溶性テール部」は、本明細書で用いる場合、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルキルアミノ、アリール、アシル、ヘテロアリール、複素環、ヘテロシクリル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、アロイル、およびアラルキル基 （その置換異型を含む）をいう。
【００８９】
用語「アルキル」は、本明細書で用いる場合、１〜２２個の炭素原子を含む分枝鎖もしくは非分枝鎖、置換もしくは非置換の飽和脂肪族基をいう。この定義は、例えば、アルコキシ、アルカノイル、アラルキルなどの他の基、および以下に定義する他の基のアルキル部分にも適用する。用語「シクロアルキル」は、本明細書で用いる場合、３〜１２個の炭素原子を含む置換もしくは非置換の環状飽和アルキル環をいう。用語「アルケニル」は、本明細書で用いる場合、分枝鎖もしくは非分枝鎖、置換もしくは非置換の不飽和アルキル、または２〜２２個の炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有するシクロアルキルをいう。用語「アルキニル」は、本明細書で用いる場合、分枝鎖もしくは非分枝鎖、置換もしくは非置換の不飽和アルキル、または２〜２２個の炭素原子と少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有するシクロアルキルをいう。
【００９０】
用語「アルコキシ」は、本明細書で用いる場合、酸素原子に共有結合されたアルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニル基をいう。用語「アルカノイル」は、本明細書で用いる場合、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキルをいい、これは、択一的に「アシル」と称されることもあり得る。用語「アルカノイルオキシ」は、本明細書で用いる場合、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基をいう。用語「アルキルアミノ」は、本明細書で用いる場合、−ＮＲＲ’基（式中、ＲおよびＲ’は各々、水素またはアルキルのいずれかであり、ＲとＲ’の少なくとも一方はアルキルである）をいう。アルキルアミノとしては、ＲとＲ’が環を形成しているピペリジノなどの基が挙げられる。用語「アルキルアミノアルキル」は、−アルキル−ＮＲＲ’をいう。
【００９１】
用語「アリール」は、本明細書で用いる場合、各環内の原子が４〜１２個であり、少なくとも１つの環が芳香族である任意の安定な単環式、二環式または多環式の炭素環系をいう。アリールの一例としては、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、およびビフェニルが挙げられる。アリール置換基が二環式であり環の１つが非芳香族である場合、結合は芳香族環に対してであることは理解されよう。アリールは置換または非置換であり得る。
【００９２】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書で用いる場合、各環内の原子が４〜１２個であり、少なくとも１つの環が芳香族であり、酸素、窒素およびイオウから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む任意の安定な単環式、二環式または多環式の炭素環系をいう。ヘテロアリールの一例としては、アクリジニル、キノキサリニル、ピラゾリル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、およびテトラヒドロキノリニルが挙げられる。ヘテロアリールとしては、含窒素ヘテロアリールＮ−オキシド誘導体が挙げられる。
【００９３】
用語「複素環」または「ヘテロシクリル」は、本明細書で用いる場合、原子が５〜２２個であり、環内原子の１〜４個が、酸素、窒素およびイオウから選択されるヘテロ原子である芳香族または非芳香族環系をいう。したがって、複素環は、ヘテロアリールまたはそのジヒドロもしくはテトラヒドロ（ｔｅｔｒａｔｈｙｄｒｏ）型であり得る。
【００９４】
用語「アロイル」は、本明細書で用いる場合、芳香族カルボン酸（置換安息香酸など）に由来するアリール原子団をいう。用語「アラルキル」は、本明細書で用いる場合、アルキル基に結合されたアリール基（例えば、ベンジル基）をいう。
【００９５】
用語「カルボキシル」は、本明細書で用いる場合、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−の基を表す。用語「カルボニル」および「アシル」は、本明細書で用いる場合、酸素原子が炭素原子に二重結合で結合された基＞Ｃ＝Ｏをいう。用語「ヒドロキシル」は、本明細書で用いる場合、−ＯＨまたは−Ｏ−をいう。用語「ニトリル」または「シアノ」は、本明細書で用いる場合、−ＣＮをいう。用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）、およびヨード（−Ｉ）をいう。
【００９６】
用語「置換（された）」は、本明細書で用いる場合、１つ以上の置換または置換基を有する原子をいい、該置換または置換基は同じであっても異なっていてもよく、水素置換基を包含する場合があり得る。したがって、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アロイル、およびアラルキルという用語は、本明細書で用いる場合、置換異型を包含する基をいう。置換異型としては、直鎖、分枝鎖、および環状の異型、ならびに該基の任意の炭素原子に結合された１つ以上の水素と置き換えられた１つ以上の置換基を有する基が挙げられる。該基の炭素原子に結合され得る置換基としては、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アロイル、アラルキル、アシル、ヒドロキシル、シアノ、ハロ、ハロアルキル、アミノ、アミノアシル、アルキルアミノアシル、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプト、ニトロ、カルバミル、カルバモイル、および複素環が挙げられる。例えば、エチルという用語には、限定されないが、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨＦＣＨ３、−ＣＦ２ＣＨ３、−ＣＨＦＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦＣＨＦ２、−ＣＨＦＣＦ３、−ＣＦ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２ＣＨＦ２、−ＣＦ２ＣＦ３、および上記の他の異型が包含される。
【００９７】
充分に塩基性である本発明のペプチドまたはタンパク質の組成物の薬学的に許容され得る塩は、例えば、無機または有機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、クロロスルホン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、または酒石酸、ならびにアルカン−またはアレーンスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、クロロベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびカンファースルホン酸）などとの酸付加塩であり得る。
【００９８】
充分に酸性である本発明のペプチドまたはタンパク質の組成物の薬学的に許容され得る塩は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩）、またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩）、またはアンモニウム塩、または生理学的に許容され得るカチオンをもたらす有機塩基との塩、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン、ピペリジン、モルホリンまたはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの塩であり得る。例えば、Ｂｅｒｇｅら，Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ６６：１，１９７１を参照のこと。
【００９９】
本発明の一部の化合物、ペプチドおよび／またはタンパク質の組成物は、１つ以上のキラル中心および／または幾何異性中心（Ｅ−およびＺ−異性体）を有するものであり得、本発明は、かかるあらゆる光学異性体、ジアステレオ異性体および幾何異性体を包含することを理解されたい。
【０１００】
本発明は、本明細書に開示した化合物、ペプチドおよび／またはタンパク質の組成物の任意のあらゆる互変異性形態、溶媒和または非溶媒和形態、および水和または非水和形態を包含する。
【０１０１】
調節性ＲＮＡおよびＲＮＡ干渉の使用
一部の態様において、本開示は、一般的に、調節性ＲＮＡおよびＲＮＡ干渉、アンチセンス治療薬、ならびにＲＮＡ治療薬の送達の分野に関する。より詳しくは、本発明は、リボ核酸の組成物および製剤、ならびにその医薬のため、および治療薬としての送達のための使用に関する。本発明は、一般的に、疾患状態または表現型を改変するための、細胞または哺乳動物における遺伝子発現の遺伝子特異的阻害のためのＲＮＡ干渉におけるリボ核酸の使用方法に関する。
【０１０２】
ＲＮＡ干渉は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と称される二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって媒介される配列特異的転写後遺伝子サイレンシング方法をいう。Ｆｉｒｅら，Ｎａｔｕｒｅ ３９１：８０６，１９９８、およびＨａｍｉｌｔｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９５０−９５１，１９９９を参照のこと。ＲＮＡｉは、多様な動植物が共有しており、外来遺伝子の発現に対して進化的に保存された細胞の防御機構と考えられている。Ｆｉｒｅら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ． ７５：３５８，１９９９を参照のこと。
【０１０３】
したがって、ＲＮＡｉは、遺伝子発現のサイレンシングに低分子非コードＲＮＡが使用されるユビキタスな内因性の機構である。Ｄｙｋｘｈｏｏｒｎ，Ｄ．Ｍ．およびＪ． Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． ５：３７７−４０２，２００６を参照のこと。ＲＮＡｉにより、細胞の死、分化および発生に関与している重要な遺伝子が調節され得る。また、ＲＮＡｉにより、トランスポゾンおよびウイルスにコードされた遺伝子エレメントの侵入からゲノムが保護され得る。ｓｉＲＮＡが細胞内に導入されると、これは、内因性のＲＮＡｉ機構に結合して、高特異性を有する相補的な配列を含むｍＲＮＡの発現を破壊する。任意の疾患原因遺伝子および任意の細胞型または組織が潜在的に標的化され得る。この手法は、遺伝子機能の解析および薬物標的の発見と確認に、急速に利用されている。また、ＲＮＡｉの利用は、治療に対して非常に有望であるが、インビボでの細胞内へのｓｉＲＮＡの導入は、依然として重要な課題である。
【０１０４】
ＲＮＡｉの機構は、まだ充分に特徴付けがなされていないが、標的ｍＲＮＡの切断によるものである。ＲＮＡｉ応答は、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として知られるエンドヌクレアーゼ複合体が関与しており、該複合体は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な単鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央部で起こる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． ７５：１８８，２００１）。
【０１０５】
ＲＮＡｉを行なう様式の一例は、細胞内にｓｉＲＮＡを導入すること、または細胞内でｓｉＲＮＡを発現させることである。別の例の様式は、ダイサーと称される内因性リボヌクレアーゼＩＩＩ酵素を利用することである。ダイサーの活性の一例は、長鎖のｄｓＲＮＡをｓｉＲＮＡにプロセッシングすることである。Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９５０−９５１，１９９９；Ｂｅｒｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ ４０９：３６３，２００１を参照のこと。ダイサー由来のｓｉＲＮＡは、典型的には、全体が約２１〜２３ヌクレオチド長であり、約１９塩基対の二本鎖部分を有する。Ｈａｍｉｌｔｏｎら（上掲）；Ｅｌｂａｓｈｉｒら，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ． １５：１８８，２００１を参照のこと。本質的に、長鎖のｄｓＲＮＡは細胞内に、ｓｉＲＮＡの前駆体として導入され得る。
【０１０６】
本発明は、調節性ＲＮＡ、干渉核酸またはその前駆体を、種々の成分、例えば、脂質、アミノ酸脂質、および天然または合成ポリマーとの組み合わせで含む一連の組成物、製剤および方法を提供する。
【０１０７】
用語「ｄｓＲＮＡ」は、本明細書で用いる場合、少なくとも１つのリボヌクレオチド分子を含み、例えば、ＲＮＡ干渉（「ＲＮＡｉ」）または遺伝子サイレンシングを配列特異的様式で促進することにより遺伝子発現を阻害または下方調節し得る任意の核酸分子をいう。本開示のｄｓＲＮＡは、ダイサーの好適な基質、またはＲＮＡｉによる遺伝子サイレンシングを媒介するためのＲＩＳＣとの会合に好適な基質であり得る。ｄｓＲＮＡの一方または両方の鎖は、さらに、末端リン酸基（５’−リン酸または５’，３’−二リン酸など）を含んでいてもよい。本明細書で用いる場合、ｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも１つのリボヌクレオチドに加え、さらに、置換、化学修飾ヌクレオチド、および非ヌクレオチドを含んでいてもよい。一部の特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、ヌクレオチドの位置の約１００％までリボヌクレオチドを含むものである。
【０１０８】
ｄｓＲＮＡ分子の例は、例えば、米国特許出願第１１／６８１，７２５号、米国特許第７，０２２，８２８号および同第７，０３４，００９号、ならびにＰＣＴ国際特許出願公開公報ＷＯ／２００３／０７０８９７を見るとよい。
【０１０９】
また、本明細書で用いる場合、用語「ｄｓＲＮＡ」は、配列特異的ＲＮＡｉを媒介し得る核酸分子を示すのに使用する他の用語、とりわけ、例えば、メロデュプレックスＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）、ニックの入ったｄｓＲＮＡ（ｎｄｓＲＮＡ）、ギャップのあるｄｓＲＮＡ（ｇｄｓＲＮＡ）、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉オリゴヌクレオチド、低分子干渉置換型オリゴヌクレオチド、低分子干渉修飾型オリゴヌクレオチド、化学修飾ｄｓＲＮＡ、転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）と同義であることを意味する。用語「高分子二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ」は、約４０塩基対（ｂｐ）より長く約１００ｂｐ以上、特に約３００ｂｐ〜約５００ｂｐまでの任意の二本鎖ＲＮＡをいう。高分子ｄｓＲＮＡの配列は、ｍＲＮＡのセグメントを表すものであってもよく、ｍＲＮＡ全体を表すものであってもよい。二本鎖構造は、自己相補的な核酸分子によって、または２つ以上の相違する相補的な核酸分子鎖のアニーリングによって形成され得る。
【０１１０】
一部の態様において、ｄｓＲＮＡは、第１の鎖（アンチセンス）と第２の鎖（センス）を含む２つの別々のオリゴヌクレオチドを含み、該アンチセンス鎖とセンス鎖は、自己相補的であり（すなわち、各鎖は、他方の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、この別々の２つの鎖が二本鎖または二本鎖構造を形成し、例えば、該二本鎖領域は約１５〜約２４塩基対または約２６〜約４０塩基対である）、アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその一部分（例えば、ヒトｍＲＮＡ）内のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、該標的核酸分子またはその一部分に対応する（すなわち、相同な）ヌクレオチド配列を含む（例えば、約１５〜約２５ヌクレオチドまたは約２６〜約４０ヌクレオチドのセンス鎖が標的核酸またはその一部分に対応する）。
【０１１１】
一部の態様において、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡの自己相補的なセンス鎖とアンチセンス鎖が核酸系リンカーまたは非核酸系リンカーによって一緒に連結された単一のオリゴヌクレオチドから合成され得る。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子の第１（アンチセンス）と第２（センス）の鎖は、本明細書に記載の当該技術分野で知られたヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカーによって共有結合される。一部の実施形態において、第１のｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも１つの第２のｄｓＲＮＡ分子に当該技術分野で知られたヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカーによって共有結合され、ここで、第１のｄｓＲＮＡ分子は、同じ、または異なる、またはその任意の組合せであり得る複数の他のｄｓＲＮＡ分子に連結され得る。一部の実施形態において、連結されたｄｓＲＮＡに、該連結されたｄｓＲＮＡとのメロデュプレックスを形成する第３の鎖を含めてもよい。
【０１１２】
いくつかの点において、本明細書に記載のｄｓＲＮＡ分子は、３つ以上の鎖、例えば、「Ａ」（第１またはアンチセンス）鎖、「Ｓ１」（第２）鎖、および「Ｓ２」（第３）鎖を有し、該「Ｓ１」鎖と「Ｓ２」鎖は「Ａ」鎖の非オーバーラップ領域に相補的であり、該領域と塩基対（ｂｐ）を形成しているメロデュプレックスＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）を形成する（例えば、ｍｄＲＮＡは、Ａ：Ｓ１Ｓ２の形態を有するものであり得る）。Ｓ１鎖、Ｓ２鎖またはそれ以上の鎖は、本質的に一緒に「Ａ」鎖に対するセンス鎖を構成する。「Ｓ１」鎖と「Ａ」鎖のアニーリングによって形成される二本鎖領域は、「Ｓ２」鎖と「Ａ」鎖のアニーリングによって形成される二本鎖領域と相違し、この領域とオーバーラップしない。ｍｄＲＮＡ分子は「ギャップのある」分子（０ヌクレオチドから約１０ヌクレオチドまでの範囲の「ギャップ」を意味する）である。一部の実施形態において、Ａ：Ｓ１二本鎖はＡ：Ｓ２二本鎖とギャップによって分離されて、「Ａ」鎖内に少なくとも１つの非対合ヌクレオチド（約１０個までの非対合ヌクレオチド）が生じており、該非対合ヌクレオチドは、Ａ：Ｓ１二本鎖とＡ：Ｓ２二本鎖の間の位置に存在し、「Ａ」鎖、「Ｓ１」鎖または「Ｓ２」鎖の１つ以上の３’末端の任意の１つ以上の非対合ヌクレオチドとは異なる。一部の実施形態において、Ａ：Ｓ１二本鎖はＡ：Ｂ２二本鎖と、Ａ：Ｓ１二本鎖とＡ：Ｓ２二本鎖との間のゼロヌクレオチドのギャップ（すなわち、ポリヌクレオチド分子において、２つのヌクレオチド間のホスホジエステル結合のみが破壊または欠失しているニック）によって分離されており、これは、ニックの入ったｄｓＲＮＡ（ｎｄｓＲＮＡ）とも称され得る。例えば、Ａ：Ｓ１Ｓ２は、合わせて合計約１４塩基対〜約４０塩基対である少なくとも２つの二本鎖領域を有し、該二本鎖領域が約０〜約１０ヌクレオチドのギャップによって分離されており、任意選択で平滑末端を有するｄｓＲＮＡで構成されていてもよく、Ａ：Ｓ１Ｓ２は、１０ヌクレオチドまでのギャップによって分離された少なくとも２つの二本鎖領域を有し、該二本鎖領域の少なくとも１つは約５塩基対〜１３塩基対を含むｄｓＲＮＡを含むものであってもよい。
【０１１３】
本明細書に記載のように、３つ以上の鎖を含むｄｓＲＮＡ分子は、「メロデュプレックス」ＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）と称されることがあり得る。ｍｄＲＮＡ分子の例は、米国特許仮出願第６０／９３４，９３０号および同第６０／９７３，３９８号を見るとよい。
【０１１４】
ｄｓＲＮＡまたは高分子ｄｓＲＮＡは、置換または修飾を含むものであってもよく、該置換または修飾は、主鎖のリン酸基の結合、糖鎖、塩基またはヌクレオシドにおけるものであり得る。かかるヌクレオシドの置換としては、天然の非標準ヌクレオシド（例えば、５−メチルウリジンまたは５−メチルシチジンまたは２−チオリボチミジン）が挙げられ得、かかる主鎖、糖鎖またはヌクレオシドの修飾としては、アルキルまたはヘテロ原子での置換または付加（メチル、アルコキシアルキル、ハロゲン、窒素もしくはイオウなど）、あるいは当該技術分野で知られた他の修飾が挙げられ得る。
【０１１５】
用語「ピリミジン」は、本明細書で用いる場合、慣用的なピリミジン塩基、例えば、標準的なピリミジン塩基であるウラシルとシトシンをいう。また、ピリミジンという用語は、天然の非標準的ピリミジン塩基または酸、例えば、５−メチルウラシル、４−チオウラシル、プソイドウラシル、ジヒドロウラシル、オロチン酸、５−メチルシトシンなど、ならびに化学修飾塩基または「ユニバーサル塩基」などを包含することが想定され、これらは、本開示の核酸分子内の標準的なピリミジンの代わりに使用され得る。本開示のｄｓＲＮＡにおける使用に適したピリミジンの例としては、米国特許第６，８４６，８２７号（引用により本明細書に組み込まれる）に開示されたものが挙げられる。
【０１１６】
用語「プリン」は、本明細書で用いる場合、慣用的なプリン塩基、例えば、標準的なプリン塩基であるアデニンとグアニンをいう。また、プリンという用語は、天然の非標準的プリン塩基または酸、例えば、Ｎ２−メチルグアニン、イノシン、２，６−アミノプリンなど、ならびに化学修飾塩基または「ユニバーサル塩基」などを包含することが想定され、これらは、本開示の核酸分子内の標準的なプリンの代わりに使用され得る。
【０１１７】
また別の実施形態において、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、式：
【０１１８】
【化１８】
2015078214.tif 000033
（式中、ＸはＯまたはＣＨ２であり、ＹはＯであり、ＺはＣＨ２であり；Ｒ１は、アデニン、シトシン、グアニン、ヒポキサンチン、ウラシル、チミン、２，６−ジアミノプリン、Ｃ−フェニル、Ｃ−ナフチル、イノシン、アゾールカルボキサミド、１−β−Ｄ−リボフラノシル−４−ニトロインドール、１−β−Ｄ−リボフラノシル−５−ニトロインドール、１−β−Ｄ−リボフラノシル−６−ニトロインドール、または１−β−Ｄ−リボフラノシル−３−ニトロピロールおよび複素環からなる群より選択され、該複素環は、置換１，３−ジアジン、非置換１，３−ジアジンおよび非置換７Ｈイミダゾ［４，５］ｌ，３ジアジンからなる群より選択され；Ｒ２、Ｒ３は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＤＭＴＯ、ＴＢＤＭＳＯ、ＢｎＯ、ＴＨＰＯ、ＡｃＯ、ＢｚＯ、ＯＰ（ＮｉＰｒ２）Ｏ（ＣＨ２）２ＣＮ、ＯＰＯ３Ｈ、二リン酸、および三リン酸からなる群より選択され、該Ｒ２とＲ３は一緒にＰｈＣＨＯ２、ＴＩＰＤＳＯ２またはＤＴＢＳＯ２であってもよい）
を有する１つ以上のヌクレオチドを含む。
【０１１９】
また別の実施形態において、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、１つ以上のユニバーサル結合ヌクレオチドを含む。ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例としては、Ｃ−フェニル、Ｃ−ナフチル、イノシン、アゾールカルボキサミド、１−β−Ｄ−リボフラノシル−４−ニトロインドール、１−β−Ｄ−リボフラノシル−５−ニトロインドール、１−β−Ｄ−リボフラノシル−６−ニトロインドール、または１−β−Ｄ−リボフラノシル−３−ニトロピロールが挙げられる。一部の特定の態様において、本開示は、ＲＮＡｉにより標的遺伝子の発現を低減させるｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡの使用方法、および１つ以上のｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡを含む組成物を提供し、ここで、少なくとも１つのｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖のアンチコドン内の第１、第２または第３の位置に１つ以上のユニバーサル結合ヌクレオチドを含み、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、細胞によって発現されるＲＮＡなどの標的配列に特異的に結合し得るものである。標的ＲＮＡの配列が１つ以上の単一ヌクレオチド置換を含む場合、ユニバーサル結合ヌクレオチドを含むｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、標的ＲＮＡに特異的に結合する能力を保持しており、それにより遺伝子サイレンシングを媒介し、その結果、標的のｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシングの逸出が克服される。
【０１２０】
上記の組成物の非限定的な例としては、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ分子のアンチセンス鎖のアンチコドン内のチロシン（ＡＵＡ）またはフェニルアラニン（ＡＡＡもしくはＧＡＡ）、システイン（ＡＣＡもしくはＧＣＡ）、ヒスチジン（ＡＵＧもしくはＧＵＧ）、アスパラギン（ＡＵＵもしくはＧＵＵ）、イソロイシン（ＵＡＵ）およびアスパラギン酸（ＡＵＣもしくはＧＵＣ）のアンチコドンの修飾が挙げられる。
【０１２１】
例えば、一部の特定の実施形態において、ＡＵＡが対応するコドンであるイソロイシンのアンチコドンＵＡＵは、第３位のウリジン（Ｕ）ヌクレオチドがユニバーサル結合ヌクレオチドイノシン（Ｉ）で置換され、アンチコドンＵＡＩがもたらされるように修飾され得る。イノシンは、アデノシン（Ａ）、ウリジン（Ｕ）、およびシチジン（Ｃ）ヌクレオチドとヌクレオチド対合し得るが、グアノシン（Ｇ）とはしない例示的なユニバーサル結合ヌクレオチドである。この修飾アンチコドンＵＡＩにより、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ分子の特異的結合能が増大し、したがって、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡが、コード鎖の対応する位置内にＡＵＡ、ＵＵＡおよびＣＵＡのいずれか１つを有するｍＲＮＡと対合することが可能となり、それにより、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡが特異的に結合し得る利用可能なＲＮＡ分解標的の数が増大する。
【０１２２】
あるいはまた、アンチコドンＡＵＡはまた、あるいは択一的に、アンチコドンの第３または第２位のユニバーサル結合ヌクレオチドを、ＵＡＩ（第３位の置換）またはＵＩＵ（第２位の置換）で表されるアンチコドン（１つまたは複数）によってＡＵＡ、ＣＵＡおよびＵＵＡならびにＡＡＡ、ＡＣＡおよびＡＵＡに特異的に結合し得るｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡが得られるように置換することにより修飾され得る。
【０１２３】
一部の特定の態様において、本明細書に開示したｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、約１ユニバーサル結合ヌクレオチド〜約１０ユニバーサル結合ヌクレオチドを含むものであり得る。一部の特定の態様において、ここに開示したｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、標的遺伝子の配列に相同なセンス鎖と、センス鎖に相補的なアンチセンス鎖とを含むものであり得るが、１つ以上のユニバーサル結合ヌクレオチドでの置き換え以外は相補的なｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖の少なくとも１つのヌクレオチドは、１つ以上のユニバーサル結合ヌクレオチドで置き換えられているものとする。
【０１２４】
１つ以上のユニバーサル結合ヌクレオチドが置換される位置に関係なく、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ分子は標的遺伝子およびその１つ以上のバリアントに結合し得るものであり、それにより、ダイサーまたはＲＩＳＣ複合体による該標的遺伝子またはそのバリアントの分解が助長され得ることは理解されよう。したがって、本開示のｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、細胞内に導入してＴＮＦ遺伝子またはそのバリアントの被標的化転写後遺伝子サイレンシングを媒介するのに適している。ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡが細胞内に挿入されると、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ二本鎖が解かれ、アンチセンス鎖がｍＲＮＡとアニーリングし、ダイサー基質が形成されるか、またはアンチセンス鎖がタンパク質の合成に負荷され、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）が形成される。
【０１２５】
また別の実施形態において、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、１つ以上の２’−糖鎖置換を含む。２’−糖鎖置換の非限定的な例としては、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−２−メトキシエチル、２’−糖鎖置換がハロゲンであるもの、または２’−糖鎖置換が２’−フルオロであるもの、または２’−糖鎖置換が２’−Ｏ−アリルであるものが挙げられる。
【０１２６】
また別の実施形態において、ｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡは、少なくとも１、２、３、４、５またはそれ以上の塩基対（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の塩基対）を含み（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、各塩基対が２，６−ジアミノプリンと対合した５−メチルウリジン塩基を含み、各塩基対の５−メチルウリジンがガイド鎖（アンチセンス鎖）内に存在するか、または各塩基対の５−メチルウリジンがパッセンジャー鎖（センス鎖）内に存在する。
【０１２７】
本開示の任意の一実施形態において、該ＲＮＡの二本鎖領域内に２，６−ジアミノプリンと対合した５−メチルウリジン塩基を含む塩基対 
は以下のようなものであり得る：
【０１２８】
【化１９】
2015078214.tif 000034
この概略図において、５−メチルウリジン（ｕｒｉｄｎｅ）：２，６−ジアミノプリン塩基対は、３つの水素結合（鎖線は水素結合を表す）を有する。該塩基対は、１つ、２つまたは３つの水素結合を有するものであり得、好ましくは該塩基対は、１つの水素結合、より好ましくは２つの水素結合、最も好ましくは３つの水素結合を有する。
【０１２９】
本開示の任意の一実施形態において、該ＲＮＡの二本鎖領域は、
【０１３０】
【化２０】
2015078214.tif 000035
を含む少なくとも１つの非標準塩基対を含む。
【０１３１】
この概略図において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、独立して、炭素、酸素、窒素、イオウ、水素、セレン、ケイ素、ハロゲン、塩素、フッ素および臭素から選択される１〜２０（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）個の原子からなる任意の１つまたはそれ以上の有機基である。断続線は、上記構造内に存在または非存在のいずれかである任意選択の結合を示す。この概略図において、上記構造に水素結合は表示していない。しかしながら、かかる水素結合は、Ｒ４とＲ７の水素結合供与基と水素結合受容基間、Ｒ５の水素結合供与基と上記のピリミジン構造の第３位の窒素（水素結合受容体）間、およびＲ６とＲ９の水素結合供与基と水素結合受容基間に形成され得る。本開示の一実施形態において、Ｒ４が水素結合供与基を有し、Ｒ７が水素結合受容基を有し、Ｒ５が水素結合供与基を有し、Ｒ６が水素結合供与基を有し、Ｒ９が水素結合受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ４が水素結合受容基を有し、Ｒ７が水素結合供与基を有し、Ｒ５が水素結合供与基を有し、Ｒ６が水素結合供与基を有し、Ｒ９が水素結合受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ４が水素結合受容基を有し、Ｒ７が水素結合供与基を有し、Ｒ５が水素結合供与基を有し、Ｒ６が水素結合受容基を有し、Ｒ９が水素結合供与基を有する。
【０１３２】
本開示の任意の一実施形態において、該ＲＮＡの二本鎖領域は、
【０１３３】
【化２１】
2015078214.tif 000036
を含む少なくとも１つの非標準塩基対を含む。
【０１３４】
この概略図において、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、独立して、炭素、酸素、窒素、イオウ、水素、セレン、ケイ素、ハロゲン、塩素、フッ素および臭素から選択される１〜２０（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）個の原子からなる任意の１つまたはそれ以上の有機基である。断続線は、上記構造内に存在または非存在のいずれかである任意選択の結合を示す。上記の２つの構造の置換基間の鎖線は、水素結合の存在を示す（この概略図には３つの水素結合が示されている）。別の実施形態において、Ｒ４は供与基を有し、Ｒ７は受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ４が受容基を有し、Ｒ７が受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ５が供与基を有し、Ｒ８が受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ５が受容基を有し、Ｒ８が受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ６が供与基を有し、Ｒ９が受容基を有する。別の実施形態では、Ｒ６が受容基を有し、Ｒ９が受容基を有する。
【０１３５】
本開示の別の態様は、非環式ヌクレオチドモノマーを含むｍｄＲＮＡまたはｄｓＲＮＡである。好ましい実施形態において、非環式ヌクレオチドモノマーは、２’−３’−セコ−ヌクレオチドモノマーである。好ましくは、非環式ヌクレオチドモノマーは、モノマーＥ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、ＩまたはＪ（下記参照）からなる群より選択される。
【０１３６】
【化２２】
2015078214.tif 000037
非環式ヌクレオチドモノマーの他の例は、例えば、ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／６４４１７（引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１３７】
また、本明細書で用いる場合、用語「ＲＮＡｉ」は、配列特異的ＲＮＡ干渉を示すのに使用する他の用語、例えば、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳の阻害、またはエピジェネティクスなどに相当することを意味する。例えば、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、エピジェネティクスにより遺伝子を、転写後レベルまたは転写前レベルまたはその任意の組合せでサイレンシングするために使用され得る。
【０１３８】
一部の態様において、本発明は、１種類以上の標的転写物に標的化される１種類以上のＲＮＡｉ誘導剤を、１種類以上の送達成分とともに含む組成物を提供する。送達成分の例としては、リポペプチド、脂質、結合リポイド部分または天然または合成結合ポリマーを有するペプチド、およびポリマー脂質が挙げられる。
【０１３９】
本発明の組成物および製剤は、ＲＮＡｉ誘導存在体（ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｄＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはＲＮＡｉ誘導ベクターなど）をそのままの哺乳動物被検体の細胞に送達するために使用され得、またこのような薬剤を培養細胞に送達するためにも使用され得る。
【０１４０】
また、本発明は、１種類以上のＲＮＡｉ誘導存在体を、哺乳動物の体内の器官および組織に送達するための方法を提供する。一部の実施形態において、ＲＮＡｉ誘導存在体と１種類以上のリポペプチド成分を含む組成物が、種々の経路によって導入され、体内で輸送され、１つ以上の器官または組織の細胞によって取り込まれ、そこで標的転写物の発現がモジュレートされる。
【０１４１】
本発明は、種々のリポペプチド、脂質、または核酸の治療用送達および遺伝子サイレンシングＲＮＡに有用な結合リポイド部分もしくは天然または合成ポリマーを有するペプチドを有する薬学的に許容され得る核酸組成物を提供する。特に、本発明は、標的核酸配列の翻訳または遺伝子の発現を低減、下方調節またはサイレンシングするために、ｄｓＲＮＡをインビトロおよびインビボ送達するための組成物および方法を提供する。このような組成物および方法は、哺乳動物の疾患の予防および／または処置のために使用され得る。
【０１４２】
本発明の例示的な方法では、リボ核酸分子（ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｄＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡなど）をリポペプチドと接触させて組成物を製剤化し、これが、細胞または被検体（哺乳動物など）に投与され得る。一部の実施形態において、本発明は、核酸含有組成物を細胞と接触させることにより、干渉ＲＮＡ薬剤（ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｄＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡなど）を細胞内送達するための方法を提供する。
【０１４３】
例示的な実施形態において、本発明は、核酸分子（二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、メロデュプレックスＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）、または低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）など）を、核酸分子の細胞内送達を向上させる組成物を形成するためのリポペプチドと混合または複合体形成された状態で含む組成物を包含する。一部の実施形態において、本発明の送達組成物は、干渉ＲＮＡ薬剤と、１種類、２種類またはそれ以上のリポペプチドと、１種類以上のポリマー脂質とを含むものであり得る。
【０１４４】
一部の特定の実施形態において、リポペプチドと核酸のＮ／Ｐ比は、約０．５〜約８、約１〜約４、または約１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９もしくは約４である。
【０１４５】
本発明の組成物は、干渉ＲＮＡ薬剤が組み込まれ得る安定な粒子を形成するものであり得る。本発明の組成物および製剤には、さらに、送達向上成分または賦形剤が含まれ得る。
【０１４６】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、約５ｎｍ〜約４００ｎｍの直径を有する安定なＲＮＡ−脂質粒子を含むものである。一部の実施形態において、該粒子は、約１０ｎｍ〜約３００ｎｍの均一な直径を有するものであり得る。一部の実施形態において、該粒子は、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの均一な直径を有するものであり得る。
【０１４７】
本発明の例示的な組成物において、干渉ＲＮＡ薬剤は、標的細胞を裸のｄｓＲＮＡと接触させた場合と比べてｄｓＲＮＡの細胞内送達を向上させる組成物を形成するためのリポペプチドと混合または複合体形成され得る。
【０１４８】
ＲＮＡの送達および投与のための脂質
本発明の一部の態様において、リポペプチドおよびさらなる脂質が、ＲＮＡ成分の送達および投与のために使用される。より詳しくは、本発明の組成物は、１種類以上のリポペプチド（カチオン性であり得る）を、他のカチオン性脂質および非カチオン性脂質とともに含むものであり得る。
【０１４９】
カチオン性脂質は、モノカチオン性またはポリカチオン性であり得る。非カチオン性脂質としては、中性脂質、および特定のｐＨにおいて正味電荷がほぼゼロである脂質（例えば、両性脂質）が挙げられる。また、非カチオン性脂質にはアニオン性脂質も包含される。
【０１５０】
一部の実施形態において、組成物は、ＲＮＡ成分と、リポペプチドおよび（非リポペプチド）カチオン性脂質との混合物または複合体である。一部の実施形態において、組成物は、１種類以上の干渉ＲＮＡ薬剤と、１種類以上のリポペプチドおよび１種類以上のカチオン性脂質との混合物または複合体であり得る。
【０１５１】
カチオン性脂質の例としては、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ビス（ジミリストイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＭＴＡＰ）；１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；３−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）；３β−［Ｎ’，Ｎ’−ジグアニジノエチル−アミノエタン）カルバモイルコレステロール（ＢＧＴＣ）；２−（２−（３−（ビス（３−アミノプロピル）アミノ）プロピルアミノ）アセトアミド）−Ｎ，Ｎ−ジテトラデシルアセトアミド（ＲＰＲ２０９１２０）；その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１５２】
カチオン性脂質の例としては、１，２−ジアルケノイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＥＰＣ）、例えば、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリンなど、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１５３】
ポリカチオン性脂質の例としては、テトラメチルテトラパルミトイルスペルミン（ＴＭＴＰＳ）、テトラメチルテトラオレイルスペルミン（ＴＭＴＯＳ）、テトラメチル（ｍｅｔｈｌｙ）テトララウリルスペルミン（ＴＭＴＬＳ）、テトラメチルテトラミリスチルスペルミン（ＴＭＴＭＳ）、テトラメチルジオレイルスペルミン（ＴＭＤＯＳ）、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１５４】
ポリカチオン性脂質の例としては、２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジオクタデシルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ）；２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（Ｚ）−オクタデカ−９−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ−９−エン）；２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（９Ｚ、１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＬｉｎＧＳ）；３−β−（Ｎ４−（Ｎ，Ｎ８−ジカルボベンゾキシスペルミジン）カルバモイル）コレステロール（ＧＬ−６７）；（９Ｚ，９’Ｚ）−２−（２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンタンアミド）プロパン−１，３−ジイル−ジオクタデス−９−エノエート（ＤＯＳＰＥＲ）；２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパナミニウム（ｐｒｏｐａｎａｍｉｎｉｕｍ）トリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）；その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１５５】
カチオン性脂質の例としては、表３に示したものが挙げられる。
【０１５６】
【表３】
2015078214.tif 000038
カチオン性脂質の例は、米国特許第４，８９７，３５５号；同第５，２７９，８３３号；同第６，７３３，７７７号；同第６，３７６，２４８号；同第５，７３６，３９２号；同第５，３３４，７６１号；同第５，４５９，１２７号；同第５，２０８，０３６号；同第５，２６４，６１８号；同第５，２８３，１８５号；同第５，７５３，６１３号；同第５，７８５，９９２号；および米国特許出願公開第２００５／００６４５９５号に記載されている。
【０１５７】
一部の実施形態において、該組成物は、ＲＮＡ成分と、リポペプチドおよび非カチオン性脂質との混合物または複合体である。一部の実施形態において、該組成物は、１種類以上のＲＮＡ成分と、１種類以上のリポペプチドおよび１種類以上の非カチオン性脂質との混合物または複合体である。非カチオン性脂質には、中性、両性、およびアニオン性脂質が包含される。
【０１５８】
一部の実施形態において、該組成物は、ＲＮＡ成分と、カチオン性リポペプチドおよび（非リポペプチド）非カチオン性または中性脂質との混合物または複合体である。
【０１５９】
一部の実施形態において、該組成物は、１種類以上のＲＮＡ成分と、１種類以上のカチオン性リポペプチド、１種類以上の（非リポペプチド）カチオン性脂質、および１種類以上の（非リポペプチド）非カチオン性または中性脂質との混合物または複合体である。
【０１６０】
非カチオン性脂質の例としては、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＬＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＧ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＳＧ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＬＰＡ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＭＰＡ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＰＰＡ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＳＰＡ）；１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−０−エチル−３−ホスホコリン（クロリドまたはトリフレート；ＤＰｅＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＬＰＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＭＰＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（アンモニウム塩；ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＰＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロ （ナトリウム塩；ＤＳＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（ナトリウム塩；ＤＳＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ナトリウム塩；ＤＰＰＳ）；１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＬｉｎｏＰＣ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（アンモニウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−４ｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；１−ステアロイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；およびその混合物が挙げられる。
【０１６１】
非カチオン性脂質の例としては、ポリマー化合物およびポリマー−脂質コンジュゲートまたはポリマー脂質、例えば、分子量３００、５００、１０００、１５００，２０００、３５００、５０００、または１０，０００のＰＥＧ領域を有するペグ化脂質、例えば、ポリエチレングリコール、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−５０００）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール７５０）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−７５０）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；硫酸コレステリルナトリウム（ＳＣＳ）；その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１６２】
非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質（ＤＯＰＥ−ＰＥＧ、ＤＬＰＥ−ＰＥＧ、ＤＤＰＥ−ＰＥＧ ＤＬｉｎＰＥ−ＰＥＧなど）、およびジアシルグリセロール−ＰＥＧ−２０００、−５０００または−１０，０００が挙げられる。
【０１６３】
非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質、例えば多分枝鎖ペグ化化合物、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＴＥ０２０およびＤＳＰＥ−ＡＭ０５３０Ｋが挙げられる。
【０１６４】
非カチオン性脂質の例としては、ＤＳＰＥ−ＰＧ８Ｇポリグリセリン脂質などのポリマー脂質が挙げられる。
【０１６５】
非カチオン性脂質の例としては、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジデカノイルホスファチジルコリン（ＤＤＰＣ）、ジフィタノイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰｈＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、および１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰｈＰＣ）が挙げられる。
【０１６６】
非カチオン性脂質の例としては、コレステロール、ステロール、およびステロイド（ゴナン、エストラン、アンドロスタン、プレグナン、コラン、コレスタン、エルゴスタン、カンペスタン、ポリフェラスタン、スチグマスタン、ゴルゴスタン、ラノスタン、シクロアルタンなど）、ならびに前述の任意のもののステロールまたは動物性ステロール誘導体、ならびにその生物学的中間体および前駆体（例えば、コレステロール、ラノステロール、スチグマスタノール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモステロール、７−デヒドロコレステロール、ならびにその混合物および誘導体が挙げられ得る）が挙げられる。
【０１６７】
非カチオン性脂質の例としては、ペグ化コレステロール、およびコレスタン３−オキソ（Ｃ１〜２２アシル）誘導体、例えば、酢酸コレステリル、アラキドン酸コレステリル、酪酸コレステリル、ヘキサン酸コレステリル、カプリル酸コレステリル、ｎ−デカン酸コレステリル、ドデカン酸コレステリル、ミリスチン酸コレステリル、パルミチン酸コレステリル、ベヘン酸コレステリル、ステアリン酸コレステリル、ネルボン酸コレステリル、ペラルゴン酸コレステリル、ｎ−バレリアン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、エライジン酸コレステリル、エルカ酸コレステリル、ヘプタン酸コレステリル、リノールエライジン酸コレステリル、リノール酸コレステリルなど、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１６８】
非カチオン性脂質の例としては、植物ステロール、例えば、フィトステロール、β−シトステロール、カンプエステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、δ−７−スチグマステロール、δ−７−アベナステロールに由来する化合物ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１６９】
非カチオン性脂質の例としては、胆汁酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、リトコール酸、メチル−リトコール酸、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１７０】
非カチオン性脂質の例としては、ステロイド、例えば、グルココルチコイド、コルチゾール、ヒドロコルチゾン、コルチコステロン、Δ５−プレグネノロン、プロゲステロン、デオキシコルチコステロン、１７−ＯＨ−プレグネノロン、１７−ＯＨ−プロゲステロン、１１−ジオキシコルチゾール、デヒドロエピアンドロステロン、デヒドロエピアンドロステロン硫酸塩、アンドロステンジオン、アルドステロン、１８−ヒドロキシコルチコステロン、テトラヒドロコルチゾール、テトラヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾン、６α−メチルプレジソン（ｐｒｅｄｉｓｏｎｅ）、９α−フルオロ−１６α−ヒドロキシプレドニゾロン、９α−フルオロ−１６α−メチルプレドニゾロン、９α−フルオロコルチゾールに由来する化合物、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１７１】
非カチオン性脂質の例としては、ステロイド、例えば、アンドロゲン（ａｄｒｏｇｅｎ）、テストステロン、ジヒドロテストステロン、アンドロステンジオール、アンドロステンジオン、アンドロステンジオン、３α，５α−アンドロスタンジオールに由来する化合物、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１７２】
非カチオン性脂質の例としては、ステロイド、例えば、エストロゲン、エストリオール、エストロン、エストラジオール、ならびにその混合物および誘導体に由来する化合物が挙げられる。
【０１７３】
非カチオン性脂質の例としては、ルミステロールおよびビタミンＤ化合物に由来する化合物が挙げられる。
【０１７４】
非カチオン性脂質の例としては、表４に示すＣ１０：０〜Ｃ２２：６ホスホエタノールアミンの範囲の脂質が挙げられる。
【０１７５】
【表４】
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アニオン性脂質の例としては、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル−ＤＬ−グリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルイノシトール（ｐｉ（４）ｐ、ｐｉ（４，５）ｐ２）、カルジオリピン（ナトリウム塩）、リゾホスファチド、水素添加リン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド、フィトスフィンゴシン、スフィンガニン、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１７６】
一部の特定の態様において、リポペプチドは、核酸（例えば、ＲＮＡ）を含めない送達成分の約１０％〜約１００モル％の割合である。他の一部の実施形態において、リポペプチドは、送達成分の約２０％〜約８０％、もしくは約３０％〜約７０％、もしくは約４０％〜約６０モル％の割合であるか、または送達成分の約２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５モル％の割合である。
【０１７７】
さらなる送達脂質
本発明の一部の態様において、アミノ酸脂質とさらなる非アミノ酸脂質が、調節性ＲＮＡ成分、ＲＮＡアンタゴニスト、干渉ＲＮＡ、または核酸の送達および投与のために使用され得る。より詳しくは、本発明の組成物は、１種類以上のアミノ酸脂質を、非アミノ酸カチオン性脂質および非アミノ酸非カチオン性脂質とともに含むものであり得る。
【０１７８】
非アミノ酸カチオン性脂質は、モノカチオン性またはポリカチオン性であり得る。非アミノ酸カチオン性脂質の一例としては、中性脂質、および特定のｐＨにおいて正味電荷がほぼゼロである脂質（例えば、両性脂質）が挙げられる。また、非アミノ酸非カチオン性脂質には、アニオン性脂質も包含される。
【０１７９】
一部の実施形態において、組成物は、ＲＮＡ成分とアミノ酸脂質および非アミノ酸カチオン性脂質との混合物または複合体である。一部の実施形態において、該組成物は、１種類以上の調節ＲＮＡ薬剤または干渉ＲＮＡ薬剤と１種類以上のアミノ酸脂質および１種類以上の非アミノ酸カチオン性脂質との混合物または複合体であり得る。
【０１８０】
本開示の化合物および組成物は、活性剤を生物体の細胞、組織、器官または領域に送達するための種々の標的化リガンドもしくは標的化剤と混合され得るか、またはこれらに結合され得る。標的化剤の例としては、抗体、受容体のリガンド、ペプチド、タンパク質、レクチン、（多）糖類、ガラクトース、マンノース、シクロデキストリン、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アプタマー、およびポリアミノ酸が挙げられる。
【０１８１】
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ビス（ジミリストイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＭＴＡＰ）；１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；３−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｉ）；３β−［Ｎ’，Ｎ’−ジグアニジノエチル−アミノエタン）カルバモイルコレステロール（ＢＧＴＣ）；２−（２−（３−（ビス（３−アミノプロピル）アミノ）プロピルアミノ）アセトアミド）−Ｎ，Ｎ−ジテトラデシルアセトアミド（ＲＰＲ２０９１２０）；その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１８２】
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、１，２−ジアルケノイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＥＰＣｓ）、例えば、１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１８３】
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、１，２−ジステアリルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎジメチル−３−アミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、および１，２−ジリノレニルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）が挙げられる。
【０１８４】
非アミノ酸ポリカチオン性脂質の例としては、テトラメチルテトラパルミトイルスペルミン（ＴＭＴＰＳ）、テトラメチルテトラオレイルスペルミン（ＴＭＴＯＳ）、テトラメチルテトララウリルスペルミン（ＴＭＴＬＳ）、テトラメチルテトラミリスチルスペルミン（ＴＭＴＭＳ）、テトラメチルジオレイルスペルミン（ＴＭＤＯＳ）、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１８５】
非アミノ酸ポリカチオン性脂質の例としては、２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジオクタデシルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ）；２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（Ｚ）−オクタデカ−９−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ−９−エン）；２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（９Ｚ、１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＬｉｎＧＳ）；３−β−（Ｎ４−（Ｎ１Ｎ８−ジカルボベンゾキシスペルミジン）カルバモイル）コレステロール（ＧＬ−６７）；（９Ｚ，９’Ｚ）−２−（２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンタンアミド）プロパン−１，３−ジイル−ジオクタデス−９−エノエート（ＤＯＳＰＥＲ）；２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパナミニウム トリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）；その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１８６】
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、ＤＳ４０４−２８ ＢＧＴＣ（ＣＡＳ １８２０５６−０６−０）、ＤＯＳＰＥＲ（ＣＡＳ １７８５３２−９２−８）、ＧＬ−６７ （１７９０７５−３０−０）、ＲＰＲ２０９１２０（ＣＡＳ ４３３２９２−１３−８）、ＤＯＧＳ（１２０５０−７７−７）、ＤＯＧＳ（９−エン、Ｃ１８：ｌ）、ＤＬｉｎＧＳ（Ｃ１ ８：２）、およびＤＯＴＭＡ（１０４１６２−４８−３）が挙げられる。
【０１８７】
非アミノ酸カチオン性脂質の例は、米国特許第４，８９７，３５５号；同第５，２７９，８３３号；同第６，７３３，７７７号；同第６，３７６，２４８号；同第５，７３６，３９２号；同第５，３３４，７６１号；同第５，４５９，１２７号；米国特許出願公開第２００５／００６４５９５号；米国特許第５，２０８，０３６号；同第５，２６４，６１８号；同第５，２７９，８３３号；同第５，２８３，１８５号；同第５，７５３，６１３号；および同第５，７８５，９９２号に記載されている。
【０１８８】
一部の実施形態において、該組成物は、ＲＮＡ成分と、アミノ酸脂質および非アミノ酸非カチオン性脂質との混合物または複合体である。一部の実施形態において、該組成物は、１種類以上のＲＮＡ成分と、１種類以上のアミノ酸脂質および１種類以上の非アミノ酸非カチオン性脂質との混合物または複合体である。
【０１８９】
非アミノ酸非カチオン性脂質には、中性、両性、およびアニオン性脂質が包含される。したがって、非カチオン性両性脂質には、カチオン性ヘッド基が含まれることがあり得る。
【０１９０】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＬＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＧ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＳＧ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＬＰＡ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＭＰＡ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＰＰＡ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＳＰＡ）；１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−Ｏ−エチル−３−ホスホコリン（クロリドまたはトリフレート；ＤＰｅＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＬＰＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＭＰＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（アンモニウム塩；ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＰＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロ（ナトリウム塩；ＤＳＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（ナトリウム塩；ＤＳＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ナトリウム塩；ＤＰＰＳ）；１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＬｉｎｏＰＣ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（アンモニウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−４ｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；１−ステアロイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；およびその混合物が挙げられる。
【０１９１】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー化合物およびポリマー−脂質コンジュゲートまたはポリマー脂質、例えば、分子量３００、５００、１０００、１５００，２０００、３５００、または５０００のＰＥＧ領域を有するペグ化脂質、例えば、ポリエチレングリコール、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−５０００）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール７５０）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−７５０）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；硫酸コレステリルナトリウム（ＳＣＳ）；その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０１９２】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質、例えば、ＤＯＰＥ−ＰＥＧ、ＤＬＰＥ−ＰＥＧ、ＤＤＰＥ−ＰＥＧ ＤＬｉｎＰＥ−ＰＥＧ、およびジアシルグリセロール−ＰＥＧ−２０００または−５０００などが挙げられる。
【０１９３】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質、例えば多分枝鎖ペグ化化合物、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＴＥ０２０およびＤＳＰＥ−ＡＭ０５３０Ｋなどが挙げられる。
【０１９４】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ＤＳＰＥ−ＰＧ８Ｇポリグリセリン脂質などのポリマー脂質が挙げられる。
【０１９５】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジフィタノイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰｈＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、および１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰｈＰＣ）が挙げられる。
【０１９６】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、コレステロール、ステロール、およびステロイド（ゴナン、エストラン、アンドロスタン、プレグナン、コラン、コレスタン、エルゴスタン、カンペスタン、ポリフェラスタン、スチグマスタン、ゴルゴスタン、ラノスタン、シクロアルタンなど）、ならびに前述の任意のもののステロールまたは動物性ステロール誘導体、ならびにその生物学的中間体および前駆体（例えば、コレステロール、ラノステロール、スチグマスタノール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモステロール、７−デヒドロコレステロール、ならびにその混合物および誘導体が挙げられ得る）が挙げられる。
【０１９７】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ペグ化コレステロール、およびコレスタン３−オキソ（Ｃ１〜２２アシル）誘導体、例えば、酢酸コレステリル、アラキドン酸コレステリル、酪酸コレステリル、ヘキサン酸コレステリル、カプリル酸コレステリル、ｎ−デカン酸コレステリル、ドデカン酸コレステリル、ミリスチン酸コレステリル、パルミチン酸コレステリル、ベヘン酸コレステリル、ステアリン酸コレステリル、ネルボン酸コレステリル、ペラルゴン酸コレステリル、ｎ−バレリアン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、エライジン酸コレステリル、エルカ酸コレステリル、ヘプタン酸コレステリル、リノールエライジン酸コレステリル、リノール酸コレステリルなど、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１９８】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、植物ステロール、例えば、フィトステロール、β−シトステロール、カンプエステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、δ−７−スチグマステロール、δ−７−アベナステロールに由来する化合物、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０１９９】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、胆汁酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、グリココール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、リトコール酸、メチル−リトコール酸、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０２００】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ステロイド、例えば、グルココルチコイド、コルチゾール、ヒドロコルチゾン、コルチコステロン、Δ５−プレグネノロン、プロゲステロン、デオキシコルチコステロン、１７−ＯＨ−プレグネノロン、１７−ＯＨ−プロゲステロン、１１−ジオキシコルチゾール、デヒドロエピアンドロステロン、デヒドロエピアンドロステロン硫酸塩、アンドロステンジオン、アルドステロン、１８−ヒドロキシコルチコステロン、テトラヒドロコルチゾール、テトラヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾン、６α−メチルプレジソン、９α−フルオロ−１６α−ヒドロキシプレドニゾロン、９α−フルオロ−１６α−メチルプレドニゾロン、９α−フルオロコルチゾールに由来する化合物、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０２０１】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ステロイド、例えば、アンドロゲン、テストステロン、ジヒドロテストステロン、アンドロステンジオール、アンドロステンジオン、アンドロステンジオン、３α，５α−アンドロスタンジオールに由来する化合物、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０２０２】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ステロイド、例えば、エストロゲン、エストリオール、エストロン、エストラジオールに由来する化合物、ならびにその混合物および誘導体が挙げられる。
【０２０３】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ルミステロールおよびビタミンＤ化合物に由来する化合物が挙げられる。
【０２０４】
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、Ｃ１０：０〜Ｃ２２：６の範囲のテール部を有する脂質、例えば、ＤＤＰＥ （Ｃ１０：０）（ＣＡＳ ２５３６８５−２７−７）、ＤＬＰＥ （Ｃ１２：０）（ＣＡＳ ５９７５２−５７−７）、ＤＳＰＥ （Ｃ１８：０）（ＣＡＳ １０６９−７９−０）、ＤＯＰＥ （Ｃ１８：ｌ）（ＣＡＳ ４００４−０５−１）、ＤＬｉｎＰＥ （Ｃ １８：２）（ＣＡＳ ２０７０７−７１−５）、ＤＬｅｎＰＥ （Ｃ １８：３）（ＣＡＳ ３４８１３−４０−６）、ＤＡＲＡＰＥ （Ｃ２０：４）（ＣＡＳ ５６３４−８６−６）、ＤＤＨＡＰＥ （Ｃ２２：６）（ＣＡＳ １２３２８４−８１−１）、ＤＰｈＰＥ （１６：０［（ＣＨ３）４］）（ＣＡＳ ２０１０３６−１６−０）が挙げられる。
【０２０５】
非アミノ酸アニオン性脂質の例としては、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル−ＤＬ−グリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルイノシトール（ｐｉ（４）ｐ、ｐｉ（４，５）ｐ２）、カルジオリピン（ナトリウム塩）、リゾホスファチド、水素添加リン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド、フィトスフィンゴシン、スフィンガニン、その薬学的に許容され得る塩、およびその混合物が挙げられる。
【０２０６】
投与のための組成物および製剤
本発明の核酸組成物および製剤は、例えば、静脈内、非経口または腹腔内経路によって全身送達がもたらされる種々の経路によって投与され得る。一部の実施形態において、ｓｉＲＮＡは、例えば、標的組織（肺もしくは肝臓など）または炎症組織の細胞内に細胞内送達され得る。本開示には、被検体の細胞を取り出し、取り出した細胞にｓｉＲＮＡ薬剤を送達し、被検体に該細胞を再導入することによる、ｓｉＲＮＡ薬剤の送達のための組成物および方法が包含される。一部の実施形態において、本発明は、インビボでのｓｉＲＮＡ送達のための方法を提供する。核酸組成物は被検体に、静脈内、皮下または腹腔内投与され得る。一部の実施形態において、本発明は、哺乳動物被検体の肺への干渉ＲＮＡのインビボ送達のための方法を提供する。
【０２０７】
一部の実施形態において、本発明は、哺乳動物被検体の疾患または障害の処置方法を提供する。干渉ＲＮＡ、リポペプチド、ならびに任意選択で非カチオン性脂質、ポリマー脂質、および１種類以上の送達向上成分または賦形剤を含む本発明の組成物の治療有効量が、遺伝子の発現または過剰発現（これは、該組成物によって低下、低減、下方調節、またはサイレンシングされ得る）と関連している疾患または障害を有する被検体に投与され得る。
【０２０８】
本発明は、被検体に治療有効量の組成物を投与することにより、肺の疾患、例えば、呼吸困難、喘息、嚢胞性線維症、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎、または気腫などを処置するための方法を包含する。
【０２０９】
本発明は、関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、ウイルス疾患（例えば、肝炎およびインフルエンザ）、または癌を処置するための方法を包含する。
【０２１０】
本開示の組成物および製剤は、インビトロでのさまざまな細胞への薬物薬剤または生体活性剤の送達のために使用され得る。インビトロ送達が想定される細胞の例としては、とりわけ、上皮細胞（Ａ５４９など）、不死化細胞株（ＨｅＬａなど）、ヘパトーマ細胞（ＨｅｐＧ２など）、ラット神経膠肉腫細胞（９Ｌ／ＬａｃＺなど）、ヒト単球細胞（ＴＨＰ−１など）、メイディン・ダービー・イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、種々の線維芽細胞細胞株、および種々の血清の存在下または非存在下で培養した一次細胞が挙げられる。
【０２１１】
本開示の組成物および製剤は、インビボでのさまざまな細胞、組織または器官への薬物薬剤または生体活性剤の送達のために使用され得る。インビボでの薬剤送達モダリティとしては、経表面、腸内、および非経口経路が挙げられる。インビボでの薬剤送達モダリティの例としては、粒子または液滴の吸入、鼻内または鼻咽頭内への液滴、粒子または懸濁液の送達、経皮および経粘膜経路、ならびに筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、心臓内、髄腔内、骨内、腹腔内、および硬膜外経路による注射または注入が挙げられる。
【０２１２】
一部の実施形態において、薬剤は、哺乳動物被検体由来の細胞、組織または器官への直接曝露によってエキソビボで投与され得る。
【０２１３】
本開示の組成物または製剤を用いて送達される薬物薬剤または生体活性剤は、任意の形態、例えば、純粋形態、結晶質形態、固形形態、ナノ粒子、凝縮形態、複合体形態、またはコンジュゲート形態などで見られるものであり得る。
【０２１４】
また、本発明は、哺乳動物の体内の器官および組織への１種類以上のＲＮＡｉ誘導存在体の送達のための方法を提供する。一部の実施形態において、ＲＮＡｉ誘導存在体、１種類以上のアミノ酸脂質、および１種類以上のさらなる脂質成分を含む組成物が、種々の経路によって導入され、体内で輸送され、１つ以上の器官または組織の細胞によって取り込まれ、そこで標的転写物の発現がモジュレートされる。
【０２１５】
本発明に有用なリボ核酸薬剤は、種々の遺伝子に標的化され得る。標的として好適なヒト遺伝子の例としては、とりわけ、ＴＮＦ、ＰＬＫｌ、ＢＩＲＣ５、ＡＰＯＢ、ＦＬＴｌ、ＶＥＧＦファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＰＤＧＦＲファミリー、ＢＣＲ−ＡＢＬ、およびＭＡＰＫファミリーが挙げられる。標的として好適なヒト遺伝子およびその核酸配列の例としては、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３３３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３３９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３４０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３４１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５０５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５２４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５２６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５２７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５３２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５３３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５４２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５４８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５６０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５６３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５９７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５９９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６２２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６２５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６２７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６３１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６３５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６４４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６４９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６５１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６６２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６７２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６７６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６７８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６９５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６９７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６９８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７１１、米国特許仮出願第６１／０８６，４３５号、および米国特許仮出願第６１／０８６，４４５号に開示されたものが挙げられる。
【０２１６】
本発明の組成物および方法は被検体に、さまざまな粘膜経由の投与様式、例えば、経口、経直腸、経膣、鼻腔内、肺内、もしくは経皮送達、または目、耳、皮膚もしくは他の粘膜表面への経表面送達によって投与され得る。本発明の一部の態様において、粘膜組織層には上皮細胞層が包含される。上皮細胞は、肺、気管、気管支、肺胞、鼻、口腔、表皮、または胃腸のものであり得る。本発明の組成物は、慣用的なアクチュエーター、例えば、機械的噴霧デバイス、ならびに加圧式で電動式のもの、または他の型のアクチュエーターなどを用いて投与され得る。
【０２１７】
本発明の組成物は、当業者にわかるさまざまな方法によって鼻内または肺内スプレー剤として水性液剤にて投与されてもよく、スプレー剤の形態にて施与されてよい。本発明の組成物の肺内送達は、該組成物を液滴、粒子またはスプレー（これは、例えば、エーロゾル化されたもの、霧状（ａｔｏｍｉｚｅ／ｎｅｂｕｌｉｚｅ）にされたものであり得る）の形態で投与することによりによって行なわれ得る。肺内送達は、該組成物を液滴、粒子またはスプレーの形態で、鼻道または気道経由で投与することにより行なわれ得る。該組成物の粒子、スプレー剤またはエーロゾル剤は、液状形態または固形形態のいずれかであり得る。鼻内スプレー剤としての液状形態の施与に好ましい系は、米国特許第４，５１１，０６９号に開示されている。かかる製剤は、本発明による組成物を水に溶解して水性液剤を得、前記溶液を滅菌状態にすることにより簡便に調製され得る。製剤は反復用量容器にて、例えば、米国特許第４，５１１，０６９号に開示された密封施与系にて提示され得る。他の好適な鼻内スプレー剤送達系は、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ，Ｙ．Ｗ． Ｃｈｉｅｎ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５；および米国特許第４，７７８，８１０号に記載されている。さらなるエーロゾル剤の送達形態としては、例えば、圧縮空気式−、ジェット式−、超音波式−、および圧電式ネブライザーが挙げられ得、これらは、医薬用溶媒、例えば、水、エタノールまたはその混合物に溶解または懸濁させた生体活性剤を送達するものである。
【０２１８】
本発明の鼻内および肺内スプレー剤用液剤は、典型的には、表面活性剤、例えば、非イオン界面活性剤（例えば、ポリソルベート−８０）、および１種類以上のバッファーを用いて任意選択で製剤化された薬物または送達対象薬物を含む。本発明の一部の実施形態において、鼻内スプレー剤用液剤には、さらに、噴射剤が含まれる。鼻内スプレー剤用液剤のｐＨは約ｐＨ６．８〜７．２であり得る。また、使用される医薬用溶媒は、ｐＨ４〜６のわずかに酸性の水性バッファーであってもよい。化学安定性を向上または維持するための他の成分、例えば、保存料、界面活性剤、分散剤またはガスを添加してもよい。
【０２１９】
一部の実施形態において、本発明は、本発明の組成物を含有する溶液と、肺内、粘膜経由または鼻腔内スプレー剤またはエーロゾル剤用のアクチュエーターとを含む医薬品である。
【０２２０】
本発明の組成物の投薬形態は、液滴剤もしくは乳剤の形態、またはエーロゾル剤の形態の液状であり得る。
【０２２１】
本発明の組成物の投薬形態は固形であってもよく、投与前に液体中で再構成されるものであってもよい。固形投薬形態は粉末剤として投与されてもよい。固形投薬形態はカプセル剤、錠剤またはゲル剤の形態であってもよい。
【０２２２】
組成物を本発明における肺内送達用に製剤化するため、生体活性剤は、種々の薬学的に許容され得る添加剤または送達向上成分、ならびに活性剤（１種類または複数種）の分散用の基剤または担体と合わされ得る。添加剤または送達向上成分の例としては、ｐＨ調整剤、例えば、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸、およびその混合物が挙げられる。他の添加剤または送達向上成分としては、局所麻酔剤（例えば、ベンジルアルコール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸着阻害剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０）、可溶性向上剤（例えば、シクロデキストリンおよびその誘導体）、安定剤（例えば、血清アルブミン）、ならびに還元剤（例えば、グルタチオン）が挙げられる。粘膜経由送達の組成物が液状である場合、製剤の張度（統一のため０．９％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液の張度に関して測定）は、典型的には、投与部位の粘膜に実質的に不可逆的な組織損傷が誘導されない値に調整される。一般的に、液剤の張度は、約１／３〜３、より典型的には１／２〜２、ほとんどの場合３／４〜１．７の値に調整される。
【０２２３】
生体活性剤は基剤またはビヒクル中に分散させ得、基剤またはビヒクルは、活性剤および任意の所望の添加剤の分散能を有する親水性化合物を含むものであり得る。基剤は、適当な広範な担体、例えば限定されないが、ポリカルボン酸またはその塩、無水カルボン酸（例えば、無水マレイン酸）と他のモノマー（例えば、（メタ）アクリル酸メチル、アクリル酸など）とのコポリマー、親水性ビニルポリマー（ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなど）、セルロース誘導体（ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなど）、および天然ポリマー（キトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸など）、ならびにその無毒性の金属塩から選択され得る。生分解性ポリマーは、例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）コポリマー、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）コポリマーおよびその混合物が基剤または担体として選択され得る。あるいはまたはさらに、合成脂肪酸エステル、例えば、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステルなどが担体として使用され得る。親水性ポリマーおよび他の担体は、単独または組合せで使用され得、部分結晶化、イオン結合、架橋などによって、担体に構造の完全性の向上が付与され得る。担体は、鼻粘膜への直接適用のためのさまざまな形態で、例えば、流動体または粘性溶液、ゲル、ペースト、粉末、ミクロスフェアおよびフィルムにて提供され得る。選択した担体の使用により、この状況において、生体活性剤の吸収の促進がもたらされ得る。
【０２２４】
生体活性剤は基剤または担体と、さまざまな方法に従って合わされ得、活性剤の放出は、拡散、担体の崩壊、または水路への製剤の会合によるものであり得る。場合によっては、活性剤は、適当なポリマー、例えば、イソブチル２−シアノアクリレート（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌら，Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ４３：１−５，１９９１参照）で作製し、鼻粘膜に適用される生体適合性分散媒体中に分散させたマイクロカプセル剤（ミクロスフェア）またはナノカプセル剤（ナノスフェア）中に分散させ、これにより、長期間にわたる持続性送達および生物学的活性がもたらされる。
【０２２５】
粘膜経由、鼻内または肺内送達用の製剤には、親水性低分子量化合物が基剤または賦形剤として含まれ得る。かかる親水性低分子量化合物は、水溶性の活性剤（生理活性ペプチドまたはタンパク質など）が基剤中から体表面（ここで活性剤が吸収される）に拡散し得る通過手段をもたらす。親水性低分子量化合物は、任意選択で、粘膜または投与雰囲気から水分を吸収し、水溶性の活性ペプチドを溶解させるものである。親水性低分子量化合物の分子量は、一般的に１０，０００以下、好ましくは３，０００以下である。親水性低分子量化合物の例としては、ポリオール化合物、例えば、オリゴ糖、二糖および単糖、例えば、スクロース、マンニトール、ラクトース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−エリトロース、Ｄ−リボース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、ラクツロース、セロビオース、ゲンチオビオース（ｇｅｎｔｉｂｉｏｓｅ）、グリセリン、ポリエチレングリコールなど、およびその混合物が挙げられる。親水性低分子量化合物のさらなる例としては、Ｎ−メチルピロリドン、アルコール（例えば、オリゴビニルアルコール、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコールなど）、およびその混合物が挙げられる。
【０２２６】
本発明の組成物には、択一的に、薬学的に許容され得る担体物質として、適切な生理学的条件に対する必要に応じて、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、および湿潤剤、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレイン酸など、およびその混合物が含まれ得る。固形組成物には、慣用的な無毒性の薬学的に許容され得る担体が使用され得、該担体としては、例えば、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。
【０２２７】
本発明の一部の特定の実施形態において、生体活性剤は、時限放出製剤にて、例えば、低速放出ポリマーを含む組成物にて投与され得る。活性剤は、即時放出に対する保護をもたらす担体、例えば、制御放出ビヒクル、例えば、ポリマー系のマイクロカプセル封入送達系または生体接着性ゲルを用いて調製され得る。本発明の種々の組成物における活性剤の長期送達は、該組成物中に吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼラチン）を含めることによりもたらされ得る。
【０２２８】
本発明の一部の特定の実施形態において、ｓｉＮＡ組成物には、１種類以上の天然または合成界面活性剤が含まれ得る。特定の天然界面活性剤がヒト肺において見い出されており（肺内界面活性剤）、これは、肺胞の空気−液体界面で単層を形成しているリン脂質とタンパク質の複合体混合物であり、呼息時に表面張力をほぼゼロまで低下させ、肺胞の崩壊を抑制する。肺内界面活性剤の９０％（重量基準）より多くはリン脂質で構成されており、ほぼ４０〜８０％がＤＰＰＣであり、残部は不飽和ホスファチジルコリンＰＯＰＧ、ＰＯＰＣおよびホスファチジルグリセロールである。該界面活性剤の残り１０％（重量基準）は、血漿タンパク質およびアポタンパク質（表面タンパク質（ＳＰ）−Ａ、ＳＰ−Ｂ、ＳＰ−ＣおよびＳＰ−Ｄなど）で構成されている。
【０２２９】
本発明に使用され得る天然界面活性剤の例としては、ＳＵＲＶＡＮＴＡ（商標）（ベラクタント）、ＣＵＲＯＳＵＲＦ（商標）（ポラクタントα）およびＩＮＦＡＳＵＲＦ（商標）（カルファクタント）、およびその混合物が挙げられる。
【０２３０】
合成界面活性剤の例としては、シナプルチド；ジパルミトイルホスファチジルコリン、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロールおよびパルミチン酸の組合せ；ＳＵＲＦＡＸＩＮ（商標）（ルシナクタント）；ならびにＥＸＯＳＵＲＦ（商標）（コルホスセリル）；チロキサポール、ＤＰＰＣ、およびヘキサデカノールを含むものであり得る成分；ならびにその混合物が挙げられる。
【０２３１】
本発明の組成物は、当該技術分野で知られた方法によって調製され得る。脂質組成物の作製方法としては、エタノール注射法および押出し法（規定の孔径の積層ポリカーボネート膜フィルターを有するノザン Ｌｉｐｉｄｓ Ｌｉｐｅｘ Ｅｘｔｒｕｄｅｒシステムを使用）が挙げられる。プローブチップと浴型超音波装置を用いる超音波処理を使用すると、均一なサイズの脂質粒子が得られ得る。核酸成分の添加なしで均一で単分散の粒径が得られ得る。インビトロトランスフェクション組成物では、核酸成分は、さらなるバッファー成分によってトランスフェクション薬剤を作製および安定化させた後に添加され得る。インビボ送達組成物では、核酸成分は製剤の一部である。
【０２３２】
バッファーのエタノールでの段階的置換を伴う混合手順を使用すると、狭いホモ分散粒径分布が得られ得る。脂質成分とリポペプチドはＵＳＰ無水エタノールに溶解させ得、ＲＮＡ成分は水性バッファーに、例えば０．９ｍｇ／ｍＬで溶解させ得る。両混合物は、ＨＰＬＣミキシングティー内の２０ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ７．２）中にインジェクトされ得る。エタノールの初期濃度は、脂質では９０％およびＲＮＡ成分では０％であり得る。４５％エタノール混合物に混合後、ＲＮＡ−脂質粒子は、直ちに、最終濃度３０％のエタノールを有するクエン酸バッファー中に希釈され得る。エタノールとクエン酸バッファーは、２Ｋ ＭＷＣＯ膜を有するＰｉｅｒｃｅ透析カセット内での一夜透析によってＰＢＳ（ｐＨ７．２）で交換され得る。各ｓｉＲＮＡ脂質粒子の粒径調整およびＰＡＧＥゲル解析を行なうと、良好な捕捉が確認され得る。ＰＡＧＥゲルの結果により、ｓｉＲＮＡが、多処理工程への曝露後も無傷であることが確認され得る。
【０２３３】
核酸成分、リポペプチド、および任意のさらなる成分は、最初に適当な培地（例えば、細胞培養培地）中で一緒に混合され得、その後、１種類以上のさらなる脂質または化合物が混合物に添加され得る。あるいはまた、リポペプチドを最初に適当な培地（細胞培養培地など）中で一緒に混合し、その後、核酸成分を添加してもよい。
【０２３４】
本発明の一部の特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、１種類以上のリポペプチドまたは１種類以上のリポペプチドと非カチオン性脂質の組合せと混合される。
【０２３５】
また、干渉ＲＮＡ薬剤を、リポペプチドまたはポリマー脂質と複合体形成またはコンジュゲートさせ、１種類以上の非カチオン性脂質または１種類以上の非カチオン性脂質とカチオン性脂質の組合せと混合してもよい。
【０２３６】
干渉ＲＮＡ薬剤とリポペプチドは、最初に一緒に混合された後、１種類以上の非カチオン性脂質が添加され得るか、または非カチオン性脂質とカチオン性脂質の組合せが適当な培地（細胞培養培地など）に添加され得る。あるいはまた、リポペプチドと脂質成分を最初に混合した後、ＲＮＡ薬剤を適当な培地に添加してもよい。
【０２３７】
ＲＮＡ治療薬およびＲＮＡ干渉
本発明は、ＲＮＡ干渉によって遺伝子発現をモジュレートするための組成物および方法を提供する。本発明の組成物は、リボ核酸薬剤を細胞に送達し、ＲＮＡｉの応答をもたらし得るものである。本発明に有用な核酸薬剤の例としては、二本鎖核酸、修飾または分解抵抗性核酸、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＮＡ、ｍｄＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、単鎖核酸、ＤＮＡ−ＲＮＡキメラ、アンチセンス核酸、およびリボザイムが挙げられる。本明細書で用いる場合、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＮＡ、およびｓｈＲＮＡという用語は、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＮＡ、およびｓｈＲＮＡのそれぞれの前駆体を包含する。例えば、ｓｉＲＮＡという用語は、ダイサー基質として好適なＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡを包含する。
【０２３８】
メロデュプレックスＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）は、米国特許仮出願第６０／９３４，９３０号ならびに国際特許出願公開公報ＷＯ／２００７／０５６１５３に記載されている。
【０２３９】
本発明に有用なリボ核酸薬剤は、種々の遺伝子に標的化され得る。例えば、本発明のｓｉＲＮＡ薬剤は、ＴＮＦ−α遺伝子の一領域に相補的な配列を有するものであり得る。本発明の一部の実施形態において、該化合物および組成物は、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の発現を調節するのに有用である。ＴＮＦ−αは、例えば肺疾患において生じる炎症過程に関連している可能性があり、抗炎症効果を有することがあり得る。本発明の組成物の送達によるＴＮＦ−αのブロックは、関節リウマチの徴候および／または症状の処置または予防に有用であり得る。本発明は、ＲＮＡ干渉によってＴＮＦ−αの発現および活性をモジュレートするための組成物および方法を提供する。
【０２４０】
ＴＮＦ−αの発現および／または活性は、細胞に、例えばｓｉＲＮＡ分子Ｉｎｍ−４を送達することによりモジュレートされ得る。Ｉｎｍ−４は、マウスＴＮＦ−α遺伝子と配列相同性を有する二本鎖２１−ｎｔ ｓｉＲＮＡ分子である。Ｉｎｍ−４は、センス鎖に３’ｄＴｄＴ突出端およびアンチセンス鎖に３’ｄＡｄＴ突出端を有する。Ｉｎｍ−４の一次構造は：
【０２４１】
【化２３】
2015078214.tif 000040
である。
【０２４２】
ＴＮＦ−αの発現および／または活性は、細胞に、例えば、ｓｉＲＮＡ分子ＬＣ２０を送達することによりモジュレートされ得る。ＬＣ２０は、ヒトＴＮＦ−α遺伝子と配列相同性を有する二本鎖２１−ｎｔ ｓｉＲＮＡ分子である。ＬＣ２０は、ヒトＴＮＦ−αの３’−ＵＴＲ領域に対して指向される。ＬＣ２０は、１９塩基対と、センス鎖に３’ｄＴｄＴ突出端およびアンチセンス鎖に３’ｄＡｄＴ突出端とを有する。そのナトリウム塩形態の分子量は１４，２９８である。ＬＣ２０の一次構造は：
【０２４３】
【化２４】
2015078214.tif 000041
である。
【０２４４】
β−ガラクトシドレポーター細胞株を使用し、種々の製剤のＲＮＡｉ活性をアッセイした。Ｌａｃ−Ｚの構造は：
【０２４５】
【化２５】
2015078214.tif 000042
である。
【０２４６】
本発明のｓｉＲＮＡは、ウイルス遺伝子の一領域に相補的な配列を有するものであり得る。例えば、本発明の一部の組成物および方法は、インフルエンザのウイルスゲノムの発現を調節するのに有用である。
【０２４７】
これに関連して、本発明は、ＲＮＡ干渉によってインフルエンザの発現および感染活性をモジュレートするための組成物および方法を提供する。インフルエンザの発現および／または活性は、細胞に、例えば、インフルエンザのＲＮＡポリメラーゼサブユニットの一領域に相補的な配列を有する低分子干渉ＲＮＡ分子を送達することによりモジュレートされ得る。例えば、表５に、インフルエンザのＲＮＡポリメラーゼサブユニットと配列相同性を有する二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を示す。
【０２４８】
【表５】
2015078214.tif 000043
本発明のｓｉＲＮＡは、インフルエンザのＲＮＡポリメラーゼサブユニットの一領域に相補的な配列を有するものであり得る。
【０２４９】
本発明は、インフルエンザのｍＲＮＡに対して指向され、インフルエンザＲＮＡを有効に下方調節し、それによりインフルエンザ感染を低減、予防または改善するｓｉＮＡを投与するための組成物および方法を提供する。
【０２５０】
一部の実施形態において、本発明は、被検体に、有効量のＲＮＡｉ誘導化合物（低分子干渉オリゴヌクレオチド分子、またはその前駆体など）を含む組成物を投与することにより、被検体において標的転写物の発現を阻害するための組成物および方法を提供する。ＲＮＡｉでは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を標的化し、翻訳を減衰させる低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が使用される。本発明において使用されるｓｉＲＮＡは、例えば、ｓｉＲＮＡにプロセッシングされる長鎖のｄｓＲＮＡなどのダイサープロセッシングの前駆体であってもよい。本発明は、標的転写物の発現または標的転写物にコードされたペプチドもしくはタンパク質の活性と関連している疾患または病状の処置または予防方法を提供する。
【０２５１】
ＲＮＡｉに基づく治療ストラテジーは、ウイルスまたは微生物の増殖または機能を遮断することにより、ならびに疾患経路内の内因性遺伝子産物の機能を遮断することにより、広範な疾患を処置するために使用され得る。
【０２５２】
一部の実施形態において、本発明は、ＲＮＡｉ誘導存在体（低分子干渉オリゴヌクレオチド分子など）、およびその前駆体の送達に新規な組成物および方法を提供する。特に、本発明は、被検体の細胞、組織、および／または器官の１種類以上の転写物に標的化されるＲＮＡｉ誘導存在体を含む組成物を提供する。
【０２５３】
ｓｉＲＮＡは、相補的な約１９ヌクレオチド長の領域を有する２つのＲＮＡ鎖であり得る。ｓｉＲＮＡは、任意選択で、１つまたは２つの単鎖突出端またはループを含む。
【０２５４】
ｓｈＲＮＡは、自己相補的な領域を有する単一のＲＮＡ鎖であってもよい。単一のＲＮＡ鎖は、幹部とループおよび、任意選択で、該ＲＮＡの５’および／または３’部分に１つ以上の非対合部分を有するヘアピン構造を形成したものであり得る。
【０２５５】
活性な治療用薬剤は、ヌクレアーゼ分解インビボに対する改善された抵抗性、および／または改善された細胞内取込みを有し、ＲＮＡｉ活性を保持している化学修飾ｓｉＮＡであり得る。
【０２５６】
本発明のｓｉＲＮＡ薬剤は、標的遺伝子の一領域に相補的な配列を有するものであり得る。本発明のｓｉＲＮＡは、２９〜５０塩基対を有するものであって、例えば、標的遺伝子の一領域に相補的な配列を有するｄｓＲＮＡであり得る。あるいはまた、該二本鎖核酸はｄｓＤＮＡであり得る。
【０２５７】
一部の実施形態において、活性剤は、遺伝子産物の発現をモジュレートし得る低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、または低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）であり得る。
【０２５８】
被検体の特定の疾患状態と関連している１つ以上の異なる遺伝子（例えば、その発現が、選択した疾患状態と関連している原因因子または寄与因子として異常に高いことがわかっている多数の遺伝子のいずれか）の発現を標的化する同等の方法および組成物が提供される。
【０２５９】
本発明のＲＮＡｉ誘導化合物は、疾患状態の既知の他の処置剤とともに投与してもよい。
【０２６０】
一部の実施形態において、本発明は、送達向上化合物と混合または複合体形成またはコンジュゲートさせた低分子核酸分子（低分子干渉核酸、低分子干渉ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、または低分子ヘアピンＲＮＡなど）を含む組成物を取り上げて記載する。
【０２６１】
本明細書で用いる場合、用語「低分子干渉核酸」、「ｓｉＮＡ」、「低分子干渉ＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「低分子干渉核酸分子」、「低分子干渉オリゴヌクレオチド分子」および「化学修飾低分子干渉核酸分子」は、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）または遺伝子サイレンシングを配列特異的様式で媒介することにより、遺伝子発現またはウイルス複製を阻害または下方調節し得る任意の核酸分子をいう。
【０２６２】
一部の実施形態において、ｓｉＮＡは、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域を含む二本鎖ポリヌクレオチド分子であり、アンチセンス領域が、発現の下方調節のための標的リボ核酸分子内のヌクレオチド配列またはその一部分に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域が、標的リボ核酸配列またはその一部分に対応する（すなわち、配列が実質的に同一である）ヌクレオチド配列を含むものである。
【０２６３】
「ｓｉＮＡ」は、低分子干渉核酸を意味し、例えば、鎖長の短い二本鎖の核酸であるｓｉＲＮＡ、または任意選択で、より長鎖のｓｉＲＮＡ前駆体である。本発明において有用なｓｉＮＡの長さは、一部の実施形態において、ほぼ２０〜５０ｂｐであることが好ましい。しかしながら、有用なｓｉＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）の長さに特に制限はない。例えば、ｓｉＮＡは、最初に細胞に前駆体形態で提示され得、該前駆体形態は、標的細胞への送達時または送達後に存在し、遺伝子サイレンシング活性を発揮するｓｉＮＡの最終またはプロセッシング形態とは相当異なる。ｓｉＮＡの前駆体形態は、例えば、送達時点または送達後にプロセッシング、分解、改変または切断されて細胞内で活性となり、遺伝子サイレンシングを媒介するｓｉＮＡをもたらす前駆体配列エレメントを含むものであり得る。一部の実施形態において、有用なｓｉＮＡは、例えば、ほぼ１００〜２００塩基対、または５０〜１００塩基対、または約５０塩基対未満の前駆体長さを有するものであって、標的細胞内で活性なプロセッシングｓｉＮＡをもたらすものである。他の一部の実施形態において、有用なｓｉＮＡまたはｓｉＮＡ前駆体は、ほぼ１０〜４９ｂｐ、または１５〜３５ｂｐ、または約２１〜３０ｂｐ長のものである。
【０２６４】
本発明の一部の実施形態において、ポリヌクレオチド送達向上ポリペプチドは、慣用的なｓｉＮＡよりも大きな核酸分子（例えば、ｓｉＮＡの高分子核酸前駆体）の送達を容易にするために使用される。例えば、本明細書の方法および組成物は、所望のｓｉＮＡの「前駆体」である大きな核酸送達を向上させるために使用され得、該前駆体アミノ酸は、標的細胞への送達前、送達中または送達後に切断あるいはプロセッシングされ、標的細胞内で遺伝子発現をモジュレートする活性なｓｉＮＡが形成され得る。
【０２６５】
例えば、ｓｉＮＡ前駆体ポリヌクレオチドは、２つ以上のループ構造と、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域を含む幹部とを有する環状の単鎖ポリヌクレオチドとして選択され得、アンチセンス領域が標的核酸分子内のヌクレオチド配列またはその一部分に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域が標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有し、該環状のポリヌクレオチドは、インビボまたはインビトロのいずれかでプロセッシングされて、ＲＮＡｉを媒介し得る活性なｓｉＮＡ分子が生成され得る。
【０２６６】
本発明のｓｉＮＡ分子、特に非前駆体形態は、３０塩基対未満、または約１７〜１９ｂｐ、または１９〜２１ｂｐ、または２１〜２３ｂｐのものであり得る。
【０２６７】
ｓｉＲＮＡは、哺乳動物の系内で選択的遺伝子サイレンシングを媒介するものであり得る。また、短鎖ループと１９〜２７塩基対の幹部を有するヘアピンＲＮＡも、該幹部の二本鎖の配列に相同な遺伝子の発現を選択的にサイレンシングする。哺乳動物細胞では、低分子ヘアピンＲＮＡがｓｉＲＮＡに変換され、選択的遺伝子サイレンシングが媒介され得る。
【０２６８】
ＲＩＳＣは、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する単鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域内で起こる。２１ヌクレオチドのｓｉＲＮＡ二本鎖は、２つのヌクレオチド３’突出端を含む場合、典型的に最も活性である。
【０２６９】
２−ヌクレオチド３’突出端を有する２１量体ｉＲＮＡ二本鎖の３’突出端セグメントのデオキシリボヌクレオチドでの置き換えは、ＲＮＡｉ活性に対して有害効果を有しないものであり得る。ｓｉＲＮＡの各末端において４ヌクレオチドまでをデオキシリボヌクレオチドで置き換えることが許容され得るが、完全にデオキシリボヌクレオチドで置換すると、ＲＮＡｉ活性は得られない。
【０２７０】
あるいはまた、ｓｉＮＡは、単一または多様なｓｉＮＡをコードし、標的細胞内でのその発現を指令するポリヌクレオチドベクターによって発現される単一または多様な転写産物として送達され得る。このような実施形態において、標的細胞内で発現されるｓｉＲＮＡの最終転写産物の二本鎖部分は、例えば、１５〜４９ｂｐ、１５〜３５ｂｐ、または約２１〜３０ｂｐ長であり得る。
【０２７１】
本発明の一部の実施形態において、２つの鎖が対合しているｓｉＮＡの二本鎖領域には、隆起部、ミスマッチ部分またはその両方が含まれ得る。２つの鎖が対合しているｓｉＮＡの二本鎖部分は、完全に対合したヌクレオチドセグメントに限定されず、例えば、ミスマッチ（対応するヌクレオチドが相補的でない）、隆起部（一方の鎖に対応する相補的なヌクレオチドがない）、または突出端による非対合部分が含まれていてもよい。非対合部分は、ｓｉＮＡの形成が妨げられない程度に含まれ得る。一部の実施形態において、「隆起部」は１〜２非対合ヌクレオチドであり得、２つの鎖が対合しているｓｉＮＡの二本鎖領域には、約１〜７つ、または約１〜５つの隆起部が含まれ得る。また、ｓｉＮＡの二本鎖領域内に含まれる「ミスマッチ」部分は、約１〜７つ、または約１〜５つ存在し得る。ミスマッチの場合、たいてい、ヌクレオチドの一方がグアニンであり、他方がウラシルである。かかるミスマッチは、例えば、センスＲＮＡをコードする対応ＤＮＡ内のＣからＴ、ＧからＡへの変異またはその混合型によるものであり得るが、他の原因もまた想定される。
【０２７２】
本発明のｓｉＮＡの末端構造は、ｓｉＮＡが、標的遺伝子の発現をサイレンシングする活性を保持している限り、平滑端または付着（突出）端のいずれであってもよい。付着（突出）端構造は３’突出端に限定されず、遺伝子サイレンシング誘導活性が保持される限り、５’突出端構造も含む。また、突出端ヌクレオチドの数は２または３ヌクレオチドに限定されず、遺伝子サイレンシング誘導活性が保持される限り、任意のヌクレオチド数であり得る。例えば、突出端には、１〜約８ヌクレオチド、または２〜４ヌクレオチドが含まれ得る。
【０２７３】
付着（突出）末端構造を有するｓｉＮＡの長さは、対合している二本鎖部分と各末端の任意の突出端部分に関して表示され得る。例えば、２−ｂｐ ３’アンチセンス突出端を有する２５／２７量体ｉＮＡ二本鎖は、２５量体のセンス鎖と２７量体のアンチセンス鎖を有し、対合している部分は２５ｂｐの長さを有する。
【０２７４】
任意の突出端配列は、標的遺伝子に対して低特異性を有するものであってもよく、標的遺伝子配列に対して相補的（アンチセンス）または同一（センス）でないものであってもよい。ｓｉＮＡは、遺伝子サイレンシング活性を保持している限り、その突出端部分に低分子量構造、例えば、天然ＲＮＡ分子（ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、または人工ＲＮＡ分子など）が含まれていてもよい。
【０２７５】
ｓｉＮＡの末端構造は、二本鎖核酸の一方側の両方の末端同士がリンカー核酸（例えば、リンカーＲＮＡ）によって連結された幹部−ループ構造を有するものであり得る。二本鎖領域（幹部部分）の長さは、例えば、１５〜４９ｂｐ、または１５〜３５ｂｐ、または約２１〜３０ｂｐ長であり得る。あるいはまた、標的細胞内で発現されるｓｉＮＡの最終転写産物である二本鎖領域の長さは、例えば、ほぼ１５〜４９ｂｐ、または１５〜３５ｂｐ、または約２１〜３０ｂｐ長であり得る。
【０２７６】
ｓｉＮＡは、標的核酸分子内のヌクレオチド配列またはその一部分に相補的なヌクレオチド配列を有する単鎖ポリヌクレオチドを含むものであり得、該単鎖ポリヌクレオチドは、末端リン酸基（５’−リン酸（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚら，Ｃｅｌｌ． １１０：５６３−５７４，２００２、およびＳｃｈｗａｒｚら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ ７０：５３７−５６８，２００２参照）、または５’，３’−二リン酸を含むものであり得る。
【０２７７】
本明細書で用いる場合、ｓｉＮＡ分子という用語は、天然に存在するＲＮＡまたはＤＮＡのみを含む分子に限定されず、化学修飾ヌクレオチドおよび非ヌクレオチドも包含する。一部の実施形態において、本発明の低分子干渉核酸分子は、２’−ヒドロキシ（２’−ＯＨ）含有ヌクレオチドがないものである。一部の実施形態において、低分子干渉核酸は、ＲＮＡｉを媒介するための２’−ヒドロキシ基を有するヌクレオチドの存在を必要とせず、したがって、本発明の低分子干渉核酸分子は、任意選択でリボヌクレオチド（例えば、２’−ＯＨ基を有するヌクレオチド）を全く含まないものである。しかしながら、ｓｉＮＡ分子内にＲＮＡｉを補助するためのリボヌクレオチドの存在を必要としないｓｉＮＡ分子は、２’−ＯＨ基を有する１つ以上のヌクレオチドを含む結合リンカー（１つもしくは複数）または他の結合もしくは会合された基、部分もしくは鎖を有することがあり得る。ｓｉＮＡ分子には、ヌクレオチド位置の少なくとも約５、１０、２０、３０、４０または５０％にリボヌクレオチドが含まれ得る。
【０２７８】
本明細書で用いる場合、ｓｉＮＡという用語は、配列特異的ＲＮＡｉを媒介し得る核酸分子、とりわけ、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、マイクロＲＮＡ分子、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、低分子干渉オリゴヌクレオチド分子、低分子干渉核酸分子、低分子干渉修飾型オリゴヌクレオチド分子、化学修飾ｓｉＲＮＡ分子、および転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）分子などを包含する。
【０２７９】
一部の実施形態において、ｓｉＮＡ分子は、分離したセンスおよびアンチセンス配列または領域を含み、センス領域とアンチセンス領域が、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカー分子によって共有結合されているか、あるいはイオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用および／またはスタッキング相互作用によって非共有結合されている。
【０２８０】
「アンチセンスＲＮＡ」は、標的遺伝子ｍＲＮＡに相補的な配列を有し、標的遺伝子ｍＲＮＡに結合することによりＲＮＡｉを誘導し得るＲＮＡ鎖である。
【０２８１】
「センスＲＮＡ」は、アンチセンスＲＮＡに相補的な配列を有するＲＮＡ鎖であり、その相補的なアンチセンスＲＮＡにアニーリングしてｓｉＲＮＡを形成する。
【０２８２】
本明細書で用いる場合、用語「ＲＮＡｉ構築物」または「ＲＮＡｉ前駆体」は、ＲＮＡｉ誘導化合物、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ヘアピンＲＮＡなど、およびインビボで切断されてｓｉＲＮＡを形成し得る他のＲＮＡ種をいう。また、本明細書におけるＲＮＡｉ前駆体は、細胞内でｄｓＲＮＡもしくはヘアピンＲＮＡを形成する転写物、および／またはインビボでｓｉＲＮＡを生成させ得る転写物をもたらし得る発現ベクター（ＲＮＡｉ発現ベクターとも称される）を包含する。
【０２８３】
ｓｉハイブリッド分子は、ｓｉＲＮＡと同様の機能を有する二本鎖核酸である。ｓｉハイブリッドは、二本鎖ＲＮＡ分子ではなく、ＲＮＡ鎖とＤＮＡ鎖で構成されている。好ましくは、ＲＮＡ鎖が、標的ｍＲＮＡに結合するアンチセンス鎖である。ＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖のハイブリダイゼーションによって得られるｓｉハイブリッドは、ハイブリダイズした相補部分と、好ましくは少なくとも１つの３’突出末端とを有する。
【０２８４】
本発明における使用のためのｓｉＮＡは、２つの別々のオリゴヌクレオチドから合成されたものであり得、この場合、一方の鎖がセンス鎖であり、他方がアンチセンス鎖であり、アンチセンス鎖とセンス鎖は自己相補的である（すなわち、各鎖は、他方の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む；例えば、アンチセンス鎖とセンス鎖が二本鎖または二本鎖構造を形成している場合などであって、例えば、該二本鎖領域は約１９塩基対である）。アンチセンス鎖は、標的核酸分子内のヌクレオチド配列またはその一部分に相補的なヌクレオチド配列を含むものであり得、センス鎖は、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むものであり得る。あるいはまた、ｓｉＮＡは、単一のオリゴヌクレオチドから合成されたものであり得、この場合、ｓｉＮＡの自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域は、核酸系または非核酸系リンカー（１つまたは複数）によって連結されている。
【０２８５】
一部の実施形態において、細胞内送達のためのｓｉＮＡは、二本鎖、非対称二本鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造を有し、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域を有するポリヌクレオチドであって、アンチセンス領域が、別個の標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域が、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むものであり得る。
【０２８６】
ｓｉＮＡにおいて行なわれ得る化学修飾の例としては、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合、２’−デオキシリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチド、「ユニバーサル塩基」ヌクレオチド、「非環式」ヌクレオチド、５−Ｃ−メチルヌクレオチド、および末端グリセリルおよび／または逆位デオキシ脱塩基残基の組込みが挙げられる。
【０２８７】
ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域には、その３’末端にホスホロチオエートヌクレオチド間結合が含まれていてもよい。アンチセンス領域には、その５’末端に約１〜約５個のホスホロチオエートヌクレオチド間結合が含まれていてもよい。ｓｉＮＡ分子の３’末端ヌクレオチド突出端に、核酸糖鎖、塩基または主鎖が化学修飾されたリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドが含まれていてもよい。３’末端ヌクレオチド突出端に、１つ以上のユニバーサル塩基リボヌクレオチドが含まれていてもよい。３’末端ヌクレオチド突出端に、１つ以上の非環式ヌクレオチドが含まれていてもよい。
【０２８８】
例えば、化学修飾ｓｉＮＡは、１、２、３、４、５、６、７、８つ、またはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を一方の鎖に有するものであってもよく、１〜８つ、またはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を各鎖に有するものであってもよい。ホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、ｓｉＮＡ二本鎖の一方または両方のオリゴヌクレオチド鎖に、例えば、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖に存在させ得る。
【０２８９】
ｓｉＮＡ分子には、１つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合が、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖の３’末端、５’末端、３’末端と５’末端の両方に含まれ得る。例えば、例示的なｓｉＮＡ分子は、１、２、３、４、５つ、またはそれ以上の連続したホスホロチオエートヌクレオチド間結合を、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖の５’末端に含むものであり得る。
【０２９０】
一部の実施形態において、ｓｉＮＡ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のピリミジンホスホロチオエートヌクレオチド間結合を、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖に含む。
【０２９１】
一部の実施形態において、ｓｉＮＡ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のプリンホスホロチオエートヌクレオチド間結合を、センス鎖、アンチセンス鎖または両方の鎖に含む。
【０２９２】
ｓｉＮＡ分子は環状核酸分子を含ものであってもよく、該ｓｉＮＡは、約３８〜約７０、例えば、約３８、４０、４５、５０、５５、６０、６５または７０ヌクレオチド長であり、約１８〜約２３、例えば、約１８、１９、２０、２１、２２または２３塩基対を有し、該環状オリゴヌクレオチドは、約１９塩基対と２つのループを有するダンベル形状の構造を形成している。
【０２９３】
環状ｓｉＮＡ分子は、２つのループモチーフを含むものであり得、該ｓｉＮＡ分子の一方または両方のループ部分が生分解性である。例えば、環状ｓｉＮＡ分子のループ部分はインビボで変換されることがあり得、３’−末端突出端（約２つのヌクレオチドを含む３’末端ヌクレオチド突出端など）を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子が生成され得る。
【０２９４】
ｓｉＮＡ分子内の修飾ヌクレオチドは、アンチセンス鎖、センス鎖または両方に存在し得る。例えば、修飾ヌクレオチドは、ノザンコンホメーション（例えば、ノザンプソイド回転環（ｐｓｅｕｄｏｒｏｔａｔｉｏｎ ｃｙｃｌｅ）；例えば、Ｓａｅｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ編，１９８４参照）を有するものであり得る。ノザンコンフィギュレーションを有するヌクレオチドの例としては、ロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ、４’−Ｃ−メチレン−（Ｄ−リボフラノシル）ヌクレオチド）、２’−メトキシエトキシ（ＭＯＥ）ヌクレオチド、２’−メチル−チオ−エチル、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−クロロヌクレオチド、２’−アジドヌクレオチド、および２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが挙げられる。
【０２９５】
化学修飾ヌクレオチドは、ヌクレアーゼ分解に対して抵抗性であると同時にＲＮＡｉ媒介能を維持しているのものであり得る。
【０２９６】
二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖は、末端キャップ部分、例えば、逆位デオキシ脱塩基部分を、センス鎖の３’末端、５’末端、または３’末端と５’末端の両方に有するものであってもよい。
【０２９７】
コンジュゲートの例としては、Ｖａｒｇｅｅｓｅら，米国特許出願第１０／４２７，１６０号（２００３年４月３０日出願）（引用により、図面を含むその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されたコンジュゲートおよびリガンドが挙げられる。
【０２９８】
本発明の一部の実施形態において、該コンジュゲートは化学修飾ｓｉＮＡ分子に、生分解性リンカーによって共有結合され得る。例えば、コンジュゲート分子は、化学修飾ｓｉＮＡ分子のセンス鎖、アンチセンス鎖のいずれか、または両方の鎖の３’末端に結合され得る。
【０２９９】
一部の実施形態において、コンジュゲート分子は、化学修飾ｓｉＮＡ分子のセンス鎖、アンチセンス鎖のいずれか、または両方の鎖の５’末端に結合される。一部の実施形態において、コンジュゲート分子は、化学修飾ｓｉＮＡ分子のセンス鎖、アンチセンス鎖のいずれか、または両方の鎖、またはその任意の組合せの３’末端と５’末端の両方に結合される。
【０３００】
一部の実施形態において、コンジュゲート分子は、生体の系（例えば、細胞）内への化学修飾ｓｉＮＡ分子の送達を助長する分子を含むものであり得る。
【０３０１】
一部の実施形態において、化学修飾ｓｉＮＡ分子に結合されたコンジュゲート分子は、ポリエチレングリコール、ヒト血清アルブミン、または細胞内取込みを媒介し得る細胞の受容体に対するリガンドである。化学修飾ｓｉＮＡ分子に結合され得る本発明で想定される具体的なコンジュゲート分子の例は、Ｖａｒｇｅｅｓｅら，米国特許出願公開第２００３／０１３０１８６号および同第２００４／０１１０２９６号に記載されている。
【０３０２】
ｓｉＮＡは、ｓｉＮＡのセンス領域をｓｉＮＡのアンチセンス領域に連接するヌクレオチド、非ヌクレオチドまたはヌクレオチド／非ヌクレオチド混合型のリンカーを含むものであってもよい。一部の実施形態において、ヌクレオチドリンカーは、３、４、５、６、７、８、９または１０ヌクレオチド長であり得る。一部の実施形態において、ヌクレオチドリンカーは核酸アプタマーであり得る。本明細書で用いる場合、用語「アプタマー」または「核酸アプタマー」は、標的分子に特異的に結合する核酸分子であって、天然環境で標的分子によって認識される配列を含む核酸分子を包含する。あるいはまた、アプタマーは、天然状態では核酸に結合しない標的分子に結合する核酸分子であり得る。
【０３０３】
例えば、アプタマーは、タンパク質のリガンド結合ドメインに結合させ、それにより天然に存在するリガンドと該タンパク質との相互作用を妨げるために使用され得る。例えば、Ｇｏｌｄら，Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６４：７６３，１９９５；ＢｒｏｄｙおよびＧｏｌｄ，Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ７４：５，２０００；Ｓｕｎ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ２：１００，２０００；Ｋｕｓｓｅｒ，Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ７４：２１，２０００；ＨｅｒｍａｎｎおよびＰａｔｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：８２０，２０００；ならびにＪａｙａｓｅｎａ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４５：１６２８，１９９９を参照のこと。
【０３０４】
非ヌクレオチドリンカーは、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、脂質、ポリ炭化水素、または他のポリマー化合物（例えば、ポリエチレングリコール（２〜１００個のエチレングリコール単位を有するものなど））であり得る。具体例としては、ＳｅｅｌａおよびＫａｉｓｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １８：６３５３，１９９０、およびＮｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５：３１１３，１９８７；ＣｌｏａｄおよびＳｃｈｅｐａｒｔｚ，Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１３：６３２４，１９９１；ＲｉｃｈａｒｄｓｏｎおよびＳｃｈｅｐａｒｔｚ，Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１３：５１０９，１９９１；Ｍａら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２７：２５８５，１９９３、ならびにＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１７５１，１９９３；Ｄｕｒａｎｄら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １８：６３５３，１９９０；ＭｃＣｕｒｄｙら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ７０：２８７，１９９１；Ｊａｓｃｈｋｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ５４：３０１−３０４，１９９３；Ｏｎｏら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：９９１４，１９９１；Ａｒｎｏｌｄら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９８９／０２４３９；Ｕｓｍａｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９５／０６７３１；Ｄｕｄｙｃｚら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９５／１１９１０、ならびにＦｅｒｅｎｔｚおよびＶｅｒｄｉｎｅ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７７５：４０００，１９９１に記載のものが挙げられる。
【０３０５】
「非ヌクレオチドリンカー」は、１つ以上のヌクレオチド単位の代わりに核酸鎖内に組み込まれ得る基または化合物（例えば、糖鎖および／またはリン酸基いずれかの置換）であって、残りの塩基がその酵素活性を発揮することを可能にするものをいう。該基または化合物は、例えば、一般に認知されているヌクレオチド塩基（アデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンなど）を糖鎖のＣ１位に含まない脱塩基であってもよい。
【０３０６】
一部の実施形態において、修飾ｓｉＮＡ分子は、主鎖にリン酸基修飾、例えば、１つ以上のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、モルホリノ、アミダート カルバメート、カルボキシメチル、アセトアミダート、ポリアミド、スルホネート、スルホンアミド、スルファメート、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、および／またはアルキルシリル置換を有するものであり得る。オリゴヌクレオチド主鎖の修飾の例は、ＨｕｎｚｉｋｅｒおよびＬｅｕｍａｎｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｉｎ Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ＶＣＨ，ｐｐ．３３１−４１７，１９９５、ならびにＭｅｓｍａｅｋｅｒら，Ｎｏｖｅｌ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＡＣＳ，ｐｐ．２４−３９，１９９４に示されている。
【０３０７】
ｓｉＮＡ分子（化学修飾されたものであってもよい）は、（ａ）ｓｉＮＡ分子の２つの相補鎖の合成；および（ｂ）二本鎖ｓｉＮＡ分子が得られるのに適した条件下での２つの相補鎖の互いのアニーリングによって合成され得る。一部の実施形態において、ｓｉＮＡ分子の相補部分の合成は、固相オリゴヌクレオチド合成または固相タンデムオリゴヌクレオチド合成によるものである。
【０３０８】
オリゴヌクレオチド（例えば、特定の修飾型オリゴヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのないオリゴヌクレオチドの一部分）は、当該技術分野で知られ、例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２１１：３−１９，１９９２；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９９／５４４５９；Ｗｉｎｃｏｔｔら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：２６７７−２６８４，１９９５；Ｗｉｎｃｏｔｔら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏ． ７４：５９，１９９７；Ｂｒｅｎｎａｎら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ． ６１：３３−４５，１９９８；およびＢｒｅｎｎａｎ，米国特許第６，００１，３１１号に記載されたプロトコルを用いて合成される。ＲＮＡ（本発明の特定のｓｉＮＡ分子を含む）の合成は、例えば、Ｕｓｍａｎら，Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １０９：７８４５，１９８７；Ｓｃａｒｉｎｇｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １８：５４３３，１９９０；およびＷｉｎｃｏｔｔら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：２６７７−２６８４，１９９５；Ｗｉｎｃｏｔｔら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏ． ７４：５９，１９９７に記載された一般的な手順に従う。
【０３０９】
「非対称ヘアピン」は、本明細書で用いる場合、アンチセンス領域と、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含むものであり得るループ部分と、センス領域とを含む直鎖ｓｉＮＡ分子であって、センス領域が、アンチセンス領域と塩基対合してループを有する二本鎖が形成されるのに充分な相補ヌクレオチドを有する程度にアンチセンス領域より少ないヌクレオチドを含むものである。
【０３１０】
「非対称二本鎖」は、本明細書で用いる場合、センス領域とアンチセンス領域を含む２つの別々の鎖を有するｓｉＮＡ分子であって、センス領域が、アンチセンス領域と塩基対合して二本鎖が形成されるのに充分な相補ヌクレオチドを有する程度にアンチセンス領域より少ないヌクレオチドを含むものである。
【０３１１】
「遺伝子発現をモジュレートする」とは、本明細書で用いる場合、標的遺伝子の発現を上方調節または下方調節することであり、細胞内に存在するｍＲＮＡのレベル、ｍＲＮＡの翻訳、または標的遺伝子にコードされたタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの合成の上方調節または下方調節も包含され得る。
【０３１２】
用語「阻害する」、「下方調節する」または「発現を低減する」は、本明細書で用いる場合、遺伝子の発現、または１種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードするＲＮＡ分子もしくは同等ＲＮＡ分子のレベル、または標的遺伝子にコードされた１種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットのレベルもしくは活性が、本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察されるものより下まで低減されることを意味する。
【０３１３】
「遺伝子サイレンシング」は、本明細書で用いる場合、細胞における遺伝子発現の一部または完全な阻害をいい、「遺伝子ノックダウン」と称されることもあり得る。遺伝子サイレンシングの程度は、当該技術分野で知られた方法（その一部は、国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９９／３２６１９に要約されている）によって測定され得る。
【０３１４】
本明細書で用いる場合、用語「リボ核酸」および「ＲＮＡ」は、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子をいう。リボヌクレオチドは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位置にヒドロキシル基を有するヌクレオチドである。これらの用語は、二本鎖ＲＮＡ、単鎖ＲＮＡ、単離ＲＮＡ、例えば、部分精製ＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換えにより産生させたＲＮＡ、ならびに、１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、修飾および／または改変により天然に存在するＲＮＡと異なる修飾型および改変型のＲＮＡを包含する。ＲＮＡの改変としては、非ヌクレオチド物質の付加（ｓｉＮＡの末端（１つもしくは複数）または内部に対するものなど、例えば、ＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドにおいて）が挙げられ得る。
【０３１５】
ＲＮＡ分子内のヌクレオチドには、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドが含まれる。このような改変ＲＮＡは類縁体と称されることがあり得る。
【０３１６】
「高度に保存された配列領域」により、標的遺伝子内の１つ以上の領域のヌクレオチド配列が、世代間または生体の系間であまり有意に異ならないことを意図する。
【０３１７】
「センス領域」により、ｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列が、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域と相補性を有することを意図する。また、ｓｉＮＡ分子のセンス領域は、標的核酸配列と相同性を有する核酸配列を含むものであり得る。
【０３１８】
「アンチセンス領域」により、ｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列が標的核酸配列と相補性を有することを意図する。また、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域は、該ｓｉＮＡ分子のセンス領域と相補性を有する核酸配列を含むものであり得る。
【０３１９】
「標的核酸」により、その発現または活性がモジュレートされる任意の核酸配列を意図する。標的核酸はＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。
【０３２０】
「相補性」により、核酸が別の核酸配列と、従来のワトソン・クリック結合様式または従来のものでない他の結合様式のいずれかによって、水素結合（１つまたは複数）を形成し得ることを意図する。
【０３２１】
用語「生分解性リンカー」は、本明細書で用いる場合、ある分子を別の分子に（例えば、生体活性分子をｓｉＮＡ分子に、またはｓｉＮＡ分子のセンス鎖とアンチセンス鎖を）連結させる生分解性リンカーとして設計された核酸または非核酸リンカー分子をいう。生分解性リンカーは、その安定性が、特定の目的（特定の組織または細胞型への送達など）のためにモジュレートされ得るように設計される。核酸系生分解性リンカー分子の安定性は、例えば、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、および化学修飾ヌクレオチド（２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、２’−アミノ、２’−Ｏ−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−Ｏ−アリル、および他の２’−修飾または塩基修飾ヌクレオチドなど）の組合せによって、種々にモジュレートされ得る。生分解性核酸リンカー分子は、二量体、三量体、四量体またはそれより長鎖の核酸分子（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド）であってもよく、リン系結合（例えば、ホスホルアミダートまたはホスホジエステル結合）を有する単一のヌクレオチドを含むものであってもよい。また、生分解性核酸リンカー分子は、核酸主鎖、核酸糖鎖、または核酸塩基修飾を含むものであってもよい。
【０３２２】
本明細書に記載の２’−修飾ヌクレオチドに関連して、「アミノ」により、修飾型または非修飾であり得る２’−ＮＨ２または２’−０−ＮＨ２を意図する。かかる修飾された基は、例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，米国特許第５，６７２，６９５号およびＭａｔｕｌｉｃ−Ａｄａｍｉｃら，米国特許第６，２４８，８７８号に記載されている。
【０３２３】
本発明（ｔｈｅｎ ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）における使用のための核酸分子の送達のための補助的または補足的な方法は、例えば、Ａｋｈｔａｒら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ． ２：１３９，１９９２；“Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，” Ａｋｈｔａｒ編，１９９５，Ｍａｕｒｅｒら，Ｍｏｌ． Ｍｅｍｂｒ． Ｂｉｏｌ． ７（５：１２９−１４０，１９９９；ＨｏｆｌａｎｄおよびＨｕａｎｇ，Ｈａｎｄｂ． Ｅｘｐ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １３７：１６５−１９２，１９９９；ならびにＬｅｅら，ＡＣＳ Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ． ７５２：１８４−１９２，２０００に記載されている。Ｓｕｌｌｉｖａｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９４／０２５９５には、さらに、酵素的核酸分子の送達のための一般的な方法が記載されている。
【０３２４】
核酸分子は、１種類以上のさらなる成分、例えば、薬学的に許容され得る担体、希釈剤、賦形剤、佐剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、または保存料を含む製剤にて投与され得る。
【０３２５】
本明細書で用いる場合、用語「担体」は、薬学的に許容され得る固形または液状の充填剤、希釈剤またはカプセル封入材料を意味する。含水液状担体には、薬学的に許容され得る添加剤、例えば、酸性化剤、アルカリ化剤、抗菌性保存料、抗酸化剤、緩衝剤、キレート化剤、錯化剤、可溶化剤、保湿剤、溶媒、懸濁化剤および／または増粘剤、等張剤、湿潤剤など、または他の生体適合性の物質が含有され得る。上記カテゴリーの成分の例は、Ｕ．Ｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，１９９０、ｐｐ．１８５７−１８５９、ならびにＲａｙｍｏｎｄ Ｃ． Ｒｏｗｅら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第５版，２００６、および“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”第２１版，２００６， Ｄａｖｉｄ Ｂ． Ｔｒｏｙ編を見るとよい。
【０３２６】
保存料の例としては、フェノール、メチルパラベン、パラベン、ｍ−クレゾール、チオメルサール、塩化ベンジルアルコニウム、およびその混合物が挙げられる。
【０３２７】
界面活性剤の例としては、オレイン酸、トリオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート、レシチン、ホスファチジルコリン、種々の長鎖ジグリセリドおよびリン脂質、ならびにその混合物が挙げられる。
【０３２８】
リン脂質の例としては、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、およびホスファチジルエタノールアミン、およびその混合物が挙げられる。
【０３２９】
分散剤の例としては、エチレンジアミンテトラ酢酸が挙げられる。
【０３３０】
ガスの例としては、窒素、ヘリウム、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、ハイドロフルオロカーボン（ＨＦＣ）、二酸化炭素、空気、およびその混合物が挙げられる。
【０３３１】
一部の特定の実施形態において、ｓｉＮＡおよび／またはポリペプチドは、リポソーム内にカプセル封入してもよく、リポソームの内側または外側に存在させてもよく、リポソーム層内に存在させてもよく、イオン導入によって投与してもよく、他の媒体（例えば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル剤、生体接着性ミクロスフェア、もしくはタンパク質系ベクター）内に組み込んでもよい。例えば、Ｏ’ＨａｒｅおよびＮｏｒｍａｎｄ，国際特許出願公開公報ＷＯ／２０００／５３７２２を参照のこと。あるいはまた、核酸組成物は、直接注射または注入ポンプの使用によって局所送達され得る。本発明の核酸分子の直接注射は、皮下、筋肉内または皮内のいずれであれ、標準的な針とシリンジによる方法論、またはＣｏｒｎｙら，Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５：２３３０−２３３７，１９９９、およびＢａｒｒｙら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９９／３１２６２に記載されたものなどの無針手法を用いて行なわれ得る。
【０３３２】
本発明の組成物は、医薬用薬剤として有効に使用され得る。医薬用薬剤は、患者の疾患状態または他の有害な状態の発生もしくは重症度を予防、モジュレートするもの、または処置する（１つ以上の症状を検出可能もしくは測定可能な程度まで軽減する）ものである。
【０３３３】
一部の実施形態において、本発明は、脂質と結合、複合体形成またはコンジュゲートさせ、薬学的に許容され得る担体（希釈剤、安定剤またはバッファーなど）を用いてさらに製剤化され得る１種類以上のポリ核酸、典型的には１種類以上のｓｉＮＡの存在または投与を特徴とする医薬組成物および方法を提供する。
【０３３４】
典型的には、ｓｉＮＡは、被検体の疾患状態または有害な状態と関連している原因因子または寄与因子として高レベルで発現される遺伝子を標的化するものである。これに関連して、ｓｉＮＡは、該遺伝子の発現を、１つ以上の関連疾患症状の重症度または再発が予防、軽減または低減されるレベルまで有効に下方調節するものである。あるいはまた、標的遺伝子の発現が疾患または他の有害な状態の結果または続発症として必ずしも上昇していない種々の相違する疾患モデルであっても、標的遺伝子の下方調節によって、遺伝子発現の低減（すなわち、選択したｍＲＮＡおよび／または標的遺伝子のタンパク質産物のレベルの低減）により治療成果が得られる。あるいはまた、本発明のｓｉＮＡは、低発現の遺伝子に標的化され得、それにより、標的遺伝子の産物または活性によって発現が負に調節された「下流」遺伝子の上方調節がもたらされ得る。
【０３３５】
本発明のこのｓｉＮＡは、任意の形態で、例えば、経皮または局所注射（例えば、乾癬を処置するために乾癬プラーク部位、または乾癬性関節炎もしくはＲＡに罹患した患者の関節内への局所注射）で投与され得る。より詳細な実施形態において、本発明は、ＴＮＦ−αのｍＲＮＡに対して指向されるｓｉＮＡの治療有効量を投与するための製剤および方法を提供する。これは、ＴＮＦ−α ＲＮＡを有効に下方調節し、それにより１つ以上のＴＮＦ−α関連炎症状態が低減または予防される。動物被検体の選択した疾患状態と関連している１つ以上の異なる遺伝子（例えば、その発現が、選択した疾患状態と関連している原因因子または寄与因子として異常に高いことがわかっている多数の遺伝子のいずれか）の発現を標的化する同等の方法および組成物が提供される。
【０３３６】
また、本発明の組成物は、経口投与のための錠剤、カプセル剤またはエリキシル剤、経直腸投与のための坐剤、注射による投与のための滅菌液剤、懸濁剤、および当該技術分野で知られた他の形態として製剤化および使用され得る。
【０３３７】
薬理学的組成物または製剤は、投与、例えば、全身投与、細胞または患者（例えば、ヒトなど）への投与に適した形態の組成物または製剤をいう。好適な形態は、一部において、用途または進入経路（例えば、経口、経皮、経上皮、または注射）に依存する。かかる形態は、該組成物または製剤が標的細胞 （すなわち、負電荷を有する核酸が送達に望ましい細胞）に達するのを妨げないものであるのがよい。例えば、血流中に注射される薬理学的組成物は可溶性であるのがよい。他の要素は当該技術分野で知られており、毒性などの考慮事項が挙げられる。
【０３３８】
「全身投与」により、インビボでの全身吸収、または血流中への薬物の蓄積後の全身への分布を意図する。全身吸収をもたらす投与経路としては、限定されないが、静脈内、皮下、腹腔内、吸入、経口、肺内および筋肉内が挙げられる。
【０３３９】
本発明の核酸分子の製剤化に適した薬剤の例としては、Ｐ−糖タンパク質阻害薬（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ８５など）（これにより、ＣＮＳ内への薬物の進入が向上し得る）（Ｊｏｌｌｉｅｔ−ＲｉａｎｔおよびＴｉｌｌｅｍｅｎｔ，Ｆｕｎｄａｍ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １３：１６−２６，１９９９）；生分解性ポリマー、例えば、脳内埋入後の徐放送達のためのポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）ミクロスフェア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，Ｄ． Ｆ．ら，Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ５：４７−５８，１９９９，Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）；および負荷ナノ粒子、例えば、ポリブチルシアノアクリレート製のもの（これにより、薬物が血液脳関門を通過して送達され得、神経内取込み機構が改変され得る）（Ｐｒｏｇ． Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｌ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２５：９４１−９４９，１９９９）が挙げられる。本発明の核酸分子の送達ストラテジーの他の例としては、Ｂｏａｄｏら，Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ５７：１３０８−１３１５，１９９８；Ｔｙｌｅｒら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ４２７：２８０−２８４，１９９９；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ． ９２：５５９２−５５９６，１９９５；Ｂｏａｄｏ，Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． ７５：７３−１０７，１９９５；Ａｌｄｒｉａｎ−Ｈｅｒｒａｄａら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２６：４９１０−４９１６，１９９８；およびＴｙｌｅｒら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ． ９６：７０５３−７０５８，１９９９に記載された物質が挙げられる。
【０３４０】
また、本発明は、保存または投与のために調製される組成物であって、医薬有効用量の所望の化合物を薬学的に許容され得る担体または希釈剤中に含む組成物を含む。治療的使用のための許容され得る担体または希釈剤は、製薬分野でよく知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ編 １９８５）に記載されている。例えば、保存料、安定剤、色素およびフレーバー剤が供給され得る。このようなものとしては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。また、抗酸化剤および懸濁化剤が使用され得る。
【０３４１】
医薬有効用量は、ある程度の疾患状態の症状の予防、その発生の抑止、処置、または軽減がもたらされるのに必要とされる用量である。０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の量の活性核酸が投与されるのがよい。
【０３４２】
水性懸濁剤には、活性物質が、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤と混合された状態で含有される。かかる賦形剤は、懸濁化剤（カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピル−メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムなど）であり；分散剤または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、またはエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステルとへキシトールとの縮合生成物（モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールなど）、またはエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステルとへキシトール無水物との縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリエチレンソルビタン）であり得る。また、水性懸濁剤には、１種類以上の保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピル）、１種類以上の着色剤、１種類以上のフレーバー剤、および１種類以上の甘味剤（スクロースまたはサッカリンなど）が含有され得る。
【０３４３】
油性懸濁剤は、活性成分を、植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナッツ油、または鉱油（例えば、液状パラフィン）中に懸濁することにより製剤化され得る。油性懸濁剤には、増粘剤、例えば、蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールが含有され得る。口当たりのよい経口調製物を得るため、甘味剤およびフレーバー剤を添加してもよい。このような組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって保存することができる。
【０３４４】
水の添加による水性懸濁剤の調製に適した分散性粉末剤および顆粒剤では、活性成分が、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種類以上の保存料との混合物の状態で提供される。また、さらなる賦形剤、例えば、甘味剤、フレーバー剤および着色剤を存在させてもよい。
【０３４５】
また、本発明の医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態であり得る。油相は、植物油または鉱油またはこれらの混合物であり得る。好適な乳化剤は、天然ゴム（例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム）、天然に存在するホスファチド（例えば、ダイズ、レシチン、および脂肪酸とへキシトールのエステルまたは部分エステル）、無水物（例えば、モノオレイン酸ソルビタン）、前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンモノオレイン酸ソルビタン）であり得る。また、エマルジョンに甘味剤およびフレーバー剤を含めてもよい。
【０３４６】
医薬組成物は、滅菌された注射用の水性または油性懸濁剤の形態であり得る。この懸濁剤は、上記の適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用し、既知の技術に従って製剤化され得る。また、滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口に許容され得る希釈剤または溶媒中の滅菌された注射用の液剤または懸濁剤（例えば、１，３−ブタンジオール中の液剤）であってもよい。とりわけ、使用され得る許容され得るビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液である。また、滅菌された固定油は、溶媒または懸濁媒体として慣用的に使用されている。この目的のため、任意の無刺激性の固定油、例えば、合成モノ−またはジ−グリセリドが使用され得る。また、オレイン酸などの脂肪酸は、注射用剤の調製における有用性が見い出されている。
【０３４７】
また、ｓｉＮＡは、例えば、薬物の経直腸投与のための坐剤の形態で投与され得る。このような組成物は、薬物を、常温では固形であるが直腸温度では液状となり、したがって直腸内で融解して該薬物を放出する適当な非刺激性の賦形剤と混合することにより調製され得る。かかる物質としては、ココアバターおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０３４８】
ｓｉＮＡは、ヌクレアーゼ抵抗性基、例えば、２’−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｈによる修飾によって安定性が向上するように広範に修飾され得る。概説については、ＵｓｍａｎおよびＣｅｄｅｒｇｒｅｎ，ＴＩＢＳ １７：３４，１９９２；Ｕｓｍａｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．５７：１６３，１９９４を参照のこと。ｓｉＮＡ構築物は、一般的な方法を用いてゲル電気泳動によって精製してもよく、高圧液体クロマトグラフィーおよび水中への再懸濁によって精製してもよい。
【０３４９】
修飾（塩基、糖鎖および／またはリン酸基）を有する核酸分子の化学合成により、該分子の血清リボヌクレアーゼによる分解が抑制され得、それにより効力が増大し得る。例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９２／０７０６５；Ｐｅｒｒａｕｌｔら，Ｎａｔｕｒｅ ３４４：５６５，１９９０；Ｐｉｅｋｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３，３１４，１９９１；ＵｓｍａｎおよびＣｅｄｅｒｇｒｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．７７：３３４，１９９２；Ｕｓｍａｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９３／１５１８７；ならびにＲｏｓｓｉら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９１／０３１６２；Ｓｐｒｏａｔ，米国特許第５，３３４，７１１号；ならびにＧｏｌｄら，米国特許第６，３００，０７４号を参照のこと。上記の参考文献にはすべて、本明細書に記載の核酸分子の塩基、リン酸基および／または糖鎖部分に対して行なわれ得る種々の化学修飾が記載されている。
【０３５０】
当該技術分野において、核酸分子に導入され得る糖鎖、塩基およびリン酸基の修飾であって、ヌクレアーゼの安定性と有効性の有意な向上を伴う修飾が報告された例がいくつかある。例えば、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ抵抗性基、例えば、２’−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｈ、ヌクレオチド塩基修飾による修飾によって安定性が向上するように、および／または生物学的活性が向上するように修飾される。概説については、ＵｓｍａｎおよびＣｅｄｅｒｇｒｅｎ，ＴＩＢＳ １７：３４，１９９２；Ｕｓｍａｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．３１：１６３，１９９４；Ｂｕｒｇｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５：１４０９０，１９９６を参照のこと。核酸分子の糖鎖の修飾は、当該具術分野において広範に報告されている。Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９２／０７０６５；Ｐｅｒｒａｕｌｔら Ｎａｔｕｒｅ ３４４：５６５−５６８，１９９０；Ｐｉｅｋｅｎら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３１４−３１７，１９９１；ＵｓｍａｎおよびＣｅｄｅｒｇｒｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．７７：３３４−３３９，１９９２；Ｕｓｍａｎら 国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９３／１５１８７；Ｓｐｒｏａｔ，米国特許第５，３３４，７１１号およびＢｅｉｇｅｌｍａｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２５１０２，１９９５；Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９７／２６２７０；Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，米国特許第５，７１６，８２４号；Ｕｓｍａｎら，米国特許第５，６２７，０５３号；Ｗｏｏｌｆら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９８／１３５２６；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，Ｋａｒｐｅｉｓｋｙら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３９：１１３１，１９９８；ＥａｒｎｓｈａｗおよびＧａｉｔ，Ｂｉｏｐｏｔｙｍｅｒｓ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）４８：３９−５５，１９９８；ＶｅｒｍａおよびＥｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６７：９９−１３４，１９９８；ならびにＢｕｒｌｉｎａら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５：１９９９−２０１０，１９９７を参照のこと。かかる刊行物には、触媒作用をモジュレートすることなく核酸分子内に糖鎖、塩基および／またはリン酸基の修飾などを組み込む位置を決定するための一般的な方法およびストラテジーが記載されている。かかる教示に鑑み、ｓｉＮＡが細胞においてＲＮＡｉを促進する能力が有意に阻害されない限り、同様の修飾が、本明細書に記載のようにして、本発明のｓｉＮＡ核酸分子を修飾するために使用され得る。
【０３５１】
ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合および／または５’−メチルホスホネート結合によるオリゴヌクレオチドヌクレオチド間結合の化学修飾によって安定性が改善され得るが、過剰に修飾すると、多少の毒性または活性の低下がもたらされることがあり得る。したがって、核酸分子を設計する場合、このようなヌクレオチド間結合の量は、最小限にしておくのがよい。このような結合の濃度を少なくすることにより、毒性を下げ、該分子の有効性の増大および特異性の上昇がもたらされるようにするのがよい。
【０３５２】
一実施形態において、本発明では、１つ以上のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、モルホリノ、アミダートカルバメート、カルボキシメチル、アセトアミダート、ポリアミド、スルホネート、スルホンアミド、スルファメート、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、および／またはアルキルシリル置換を含む主鎖のリン酸基の修飾を有する修飾ｓｉＮＡ分子を取り上げて記載する。オリゴヌクレオチド主鎖修飾の概説については、ＨｕｎｚｉｋｅｒおよびＬｅｕｍａｎｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｉｎ Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ＶＣＨ，１９９５，ｐｐ．３３１−４１７，ならびにＭｅｓｍａｅｋｅｒら，”Ｎｏｖｅｌ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，”ＡＣＳ，１９９４，ｐｐ．２４−３９を参照のこと。
【０３５３】
核酸分子の送達方法は、Ａｋｈｔａｒら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２：１３９，１９９２；“Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”Ａｋｈｔａｒ編，１９９５；Ｍａｕｒｅｒら，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．７（５：１２９−１４０，１９９９；ＨｏｆｌａｎｄおよびＨｕａｎｇ，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１６５−１９２，１９９９；ならびにＬｅｅら，ＡＣＳＳｙｍｐ．Ｓｅｒ．７５２：１８４−１９２，２０００に記載されている。Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，米国特許第６，３９５，７１３号、およびＳｕｌｌｉｖａｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９４／０２５９５には、さらに、核酸分子の送達のための一般的な方法が記載されている。このようなプロトコルは、事実上任意の核酸分子の送達に使用され得る。核酸分子は細胞に、当業者にわかるさまざまな方法、例えば限定されないが、リポソーム、イオン導入、または他の媒体（生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１０：１０６８−１０７４，１９９９；Ｗａｎｇら，国際特許出願公開公報ＷＯ／２００３／４７５１８およびＷＯ／２００３／４６１８５）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ならびにＰＬＣＡミクロスフェア（例えば、米国特許第６，４４７，７９６号および米国特許出願公開第ＵＳ２００２／１３０４３０号）、生分解性ナノカプセル剤、および生体接着性ミクロスフェアなど）中への組込み、またはタンパク質系ベクター（Ｏ’ＨａｒｅおよびＮｏｒｍａｎｄ、国際特許出願公開公報ＷＯ／２０００／５３７２２）による内部または外部からのカプセル封入によって投与され得る。あるいはまた、核酸／ビヒクルの組合せは、直接注射または注入ポンプの使用によって局所送達される。本発明の核酸分子の直接注射は、皮下、筋肉内または皮内のいずれであれ、標準的な針とシリンジによる方法論、またはＣｏｒｎｙら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５：２３３０−２３３７，１９９９、およびＢａｒｒｙら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９９／３１２６２に記載されたものなどの無針手法を用いて行なわれ得る。本発明の分子は、医薬用薬剤として使用され得る。医薬用薬剤は、被検体の疾患状態を予防、その発生をモジュレート、または処置する（症状をある程度軽減する、好ましくはあらゆる症状を軽減する）ものである。
【０３５４】
「ＲＮＡ」により、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意図する。「リボヌクレオチド」により、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位置にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意図する。この用語は、二本鎖ＲＮＡ、単鎖ＲＮＡ、単離ＲＮＡ、例えば、部分精製ＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換えにより産生させたＲＮＡ、ならびに、１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変により天然に存在するＲＮＡと異なる改変型ＲＮＡを包含する。かかる改変としては、非ヌクレオチド物質の付加（ｓｉＮＡの末端（１つもしくは複数）または内部に対するものなど、例えば、ＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドにおいて）が挙げられ得る。また、本発明のＲＮＡ分子内のヌクレオチドには、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドが含まれ得る。このような改変ＲＮＡは類縁体または天然に存在するＲＮＡの類縁体と称されることがあり得る。
【０３５５】
「キャップ構造」により、オリゴヌクレオチドのいずれかの末端に組み込まれた化学修飾を意図する（例えば、Ａｄａｍｉｃら，米国特許第５，９９８，２０３号（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。このような末端修飾により、核酸分子がエキソヌクレアーゼ分解から保護され、細胞内への送達および／または局在が補助され得る。キャップは、５’末端（５’−キャップ）または３’−末端（３’−キャップ）に存在させてもよく、両末端に存在させてもよい。非限定的な例において、５’−キャップとしては、限定されないが、グリセリル、逆位デオキシ脱塩基残基（部分）；４’，５’−メチレンヌクレオチド；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド；炭素環式ヌクレオチド；１，５−アンヒドロへキシトールヌクレオチド；Ｌ−ヌクレオチド；α−ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート結合；トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−セコヌクレオチド；非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド部分；３’−３’−逆位脱塩基部分；３’−２’−逆位ヌクレオチド部分；３’−２’−逆位脱塩基部分；１，４−ブタンジオールリン酸基；３’−ホスホルアミダート；ヘキシルリン酸基；アミノヘキシルリン酸基；３’−リン酸；３’−ホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；または橋絡もしくは非橋絡メチルホスホネート部分が挙げられる。
【０３５６】
３’−キャップの例としては、限定されないが、グリセリル、逆位デオキシ脱塩基残基（部分）、４’，５’−メチレンヌクレオチド；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド；５’−アミノ−アルキルリン酸基；１，３−ジアミノ−２−プロピルリン酸基；３−アミノプロピルリン酸基；６−アミノヘキシルリン酸基；１，２−アミノドデシルリン酸基；ヒドロキシプロピルリン酸基；１，５−アンヒドロへキシトールヌクレオチド；Ｌ−ヌクレオチド；α−ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート；トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−セコヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆位ヌクレオチド部分；５’−５’−逆位脱塩基部分；５’−ホスホルアミダート；５’−ホスホロチオエート；１，４−ブタンジオールリン酸基；５’−アミノ；橋絡および／または非橋絡５’−ホスホルアミダート、ホスホロチオエートおよび／またはホスホロジチオエート、橋絡または非橋絡メチルホスホネートならびに５’−メルカプト部分が挙げられる（より詳細については、ＢｅａｕｃａｇｅおよびＬｙｅｒ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９：１９２５，１９９３を参照のこと；引用により本明細書に組み込まれる）。
【０３５７】
用語「非ヌクレオチド」により、１つ以上のヌクレオチド単位の代わりに核酸鎖内に組み込まれ得る任意の基または化合物（例えば、糖鎖および／またはリン酸基いずれかの置換）であって、残りの塩基がその酵素活性を発揮することを可能にするものを意図する。該基または化合物は、一般に認知されているヌクレオチド塩基（アデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンなど）を含まず、したがって、ｌ’位置に塩基がないため、脱塩基である。
【０３５８】
「ヌクレオチド」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で認識されているとおりのものであり、天然の塩基（標準的）、および当該技術分野でよく知られた修飾塩基が包含される。かかる塩基は一般的に、ヌクレオチドの糖鎖部分の１’位置に存在する。ヌクレオチドは、一般的に、塩基、糖鎖およびリン酸基で構成されている。ヌクレオチドは、糖鎖、リン酸基および／または塩基部分が修飾されていないもの、または修飾されているものであり得る（互換的に、ヌクレオチド類縁体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準的ヌクレオチドなどとも称される；例えば、ＵｓｍａｎおよびＭｃＳｗｉｇｇｅｎ（上掲）；Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９２／０７０６５；Ｕｓｍａｎら，国際特許出願公開公報ＷＯ／１９９３／１５１８７；Ｕｈｌｍａｎ ＆ Ｐｅｙｍａｎ（上掲）（すべて、引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。当該技術分野では、修飾核酸塩基の例がいくつか知られており、これらは、Ｌｉｍｂａｃｈら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：２１８３，１９９４に要約されている。核酸分子に導入され得る塩基修飾の非限定的な一例としては、イノシン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、プソイドウラシル、２、４、６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）または６−アザピリミジンまたは６−アルキルピリミジン（例えば、６−メチルウリジン）、プロピンなど（Ｂｕｒｇｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５５：１４０９０，１９９６；Ｕｈｌｍａｎ ＆ Ｐｅｙｍａｎ（上掲））が挙げられる。この態様における「修飾塩基」は、１’位のアデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルまたはその等価物以外のヌクレオチド塩基を意図する。
【０３５９】
「標的部位」または「標的配列」または「被標的化配列」により、アンチセンス領域内に標的配列に相補的な配列を含むｓｉＮＡ構築物によって媒介されるの切断のために「標的化される」標的核酸（例えば、ＲＮＡ）内の配列を意図する。
【０３６０】
ｓｉＮＡ分子は、カチオン性脂質と複合体形成させてもよく、リポソーム内に封入してもよく、あるいは細胞または組織に送達してもよい。核酸または核酸複合体は、注射、注入ポンプまたはステントによって、バイオポリマーに組み込まれた状態で、または組込み無しで局所投与され得る。別の実施形態では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を、本発明のｓｉＮＡ化合物、ポリペプチドまたは両方に共有結合させ得る。結合させるＰＥＧは、任意の分子量、好ましくは約２，０００〜約５０，０００ダルトン（Ｄａ）であり得る。
【０３６１】
センス領域はアンチセンス領域に、ポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーなどのリンカー分子によって連結され得る。
【０３６２】
「逆位反復配列」は、該反復配列が転写されると、二本鎖ｓｉＲＮＡが形成され得るように配置されたセンスエレメントとアンチセンスエレメントを含む核酸配列をいう。逆位反復配列には、任意選択で、該反復配列の２つのエレメント間にリンカーまたは非相同配列（自己切断リボザイムなど）が含まれることがあり得る。逆位反復配列のエレメントは、二本鎖ＲＮＡが形成されるのに充分な長さを有する。典型的には、逆位反復配列の各エレメントは、約１５〜約１００ヌクレオチド長、好ましくは約２０〜３０塩基ヌクレオチド、好ましくは約２０〜２５ヌクレオチド長、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である。
【０３６３】
「核酸」は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそのポリマーであって、単鎖形態または二本鎖形態のものをいう。該用語は、既知ヌクレオチド類縁体または修飾主鎖残基もしくは結合を含む核酸であって、合成、天然および非天然であり、参照核酸と同様の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと同様の様式で代謝される核酸を包含する。かかる類縁体の例としては、限定されないが、、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【０３６４】
「高分子二本鎖ＲＮＡ」は、約４０ｂｐより大きい、例えば１００ｂｐ以上、特に３００ｂｐより大きいサイズを有する任意の二本鎖ＲＮＡをいう。高分子ｄｓＲＮＡの配列は、ｍＲＮＡのセグメントを表すものであってもよく、ｍＲＮＡ全体を表すものであってもよい。高分子ｄｓＲＮＡの最大サイズは、本明細書において限定されない。二本鎖ＲＮＡは修飾塩基を含むものであってもよく、該修飾は、リン酸基糖鎖主鎖またはヌクレオシドに対するものであり得る。かかる修飾は、窒素もしくはイオウヘテロ原子または任意の他の当該技術分野で知られた修飾を含むものであり得る。
【０３６５】
二本鎖構造は、自己相補的なＲＮＡ鎖（ヘアピンもしくはマイクロＲＮＡに存在するものなど）によって、または２つの相違する相補的なＲＮＡ鎖のアニーリングによって形成され得る。
【０３６６】
「オーバーラップ」は、２つのＲＮＡ断片が、一方の鎖における複数のヌクレオチドがオーバーラップした配列を有する場合をいい、例えば、該複数のヌクレオチド（ｎｔ）の数は２〜５ヌクレオチド程度の小さいもの、または５〜１０ヌクレオチドまたはそれ以上である。
【０３６７】
「１つ以上のｄｓＲＮＡ」は、一次配列に基づいて互いに異なるｄｓＲＮＡをいう。
【０３６８】
「標的遺伝子またはｍＲＮＡ」は、対象の任意の遺伝子またはｍＲＮＡをいう。実際には、遺伝子試験または配列決定によって既に同定されている任意の遺伝子が標的となり得る。標的遺伝子またはｍＲＮＡとしては、発生遺伝子および調節遺伝子ならびに代謝遺伝子もしくは構造遺伝子または酵素をコードする遺伝子が挙げられ得る。標的遺伝子は、表現型が研究対象である細胞において、または生物体において、表現型の特徴に直接または間接的に影響が及ぼされる様式で発現させ得る。標的遺伝子は内因性または外因性のものであり得る。かかる細胞としては、成体もしくは胚性の動物もしくは植物の体内の任意の細胞（例えば、配偶子）、または任意の単離細胞（不死化細胞株に存在するものなど）または一次培養細胞が挙げられる。
【０３６９】
本明細書に挙げたすべての刊行物、参考文献、特許、特許出願公開公報および特許出願は、各々、引用によりその全体が具体的に本明細書に組み込まれる。
【０３７０】
本発明を一部の特定の実施形態に関して説明したが、多くの詳細事項は例示の目的で示したものであり、当業者には、本発明がさらなる実施形態を包含すること、および本明細書に記載した詳細事項の一部は、本発明から逸脱することなく大幅に変更されることがあり得ることが自明であろう。本発明は、かかるさらなる実施形態、変形例および均等物を包含する。特に、本発明は、種々の例示した構成要素および実施例の特徴、用語または要素の任意の組合せを包含する。
【０３７１】
本発明を説明する際に本明細書で、および特許請求の範囲で用いた用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および同様の用語は、単数形と複数形の両方を含むと解釈されたい。用語「含む」、「を有する」、「含んでいる」および「を含有する」は、非限定的用語であり、例えば、「限定されないが、〜を含む」を意味すると解釈されたい。本明細書におけるある範囲の値に対する記載は、個々について、当該範囲内の値がいくつか明示されていようと、そうでなかろうと、当該範囲内に含まれる任意の個々の各値が、本明細書においてあたかも個々に記載されているかのごとく示されているものとする。例えば、「４〜１２」という範囲は、限定されないが、値５、５．１、５．３５、および４以上１２以下の任意の他の自然数、整数、分数または有理数の値を含む。本明細書で用いた具体的な値は、例示であって本発明の範囲を限定するものでないことは理解されよう。
【０３７２】
本明細書に示した技術用語の定義は、記載がなければ、当業者にわかる当該用語から連想される意味を含むものであり、本発明の範囲の限定を意図するものではないと解釈されたい。本明細書に示した技術用語の定義は、当該技術分野における択一的な定義、または引用により本明細書に、該択一的定義が本明細書に示した定義と矛盾する程度まで組み込まれた定義よりも優先されると解釈されたい。
【０３７３】
本明細書に示した実施例、および本明細書で用いた例示的な文言は、単なる例示の目的のためであって、本発明の範囲の限定を意図するものではない。
【０３７４】
例示の羅列（本発明に適した化合物または分子の羅列など）が示されている場合、当業者には、羅列した化合物または分子の混合物もまた好適であることが自明であろう。
【実施例】
【０３７５】
実施例１
９Ｌ細胞におけるＬａｃＺ遺伝子発現ノックダウンのインビトロアッセイ
９Ｌ／ＬａｃＺは、細菌ガラクトシダーゼをコードするＬａｃＺ遺伝子を安定的に発現するラット神経膠肉腫細胞株である。ＬａｃＺ遺伝子ノックダウンの測定は、活性に基づいたインビトロでの干渉ＲＮＡ送達製剤の一次アッセイとして使用され得る。
【０３７６】
ＬａｃＺ遺伝子ノックダウンの測定のため、９Ｌ／ＬａｃＺ細胞をＲＮＡｉ製剤でトランスフェクトし、β−ガラクトシダーゼアッセイを、トランスフェクションの３日後に回収した細胞において行なった。タンパク質濃度を定量するためのさらなるアッセイを行なった。
【０３７７】
９Ｌ／ＬａｃＺ細胞を８０００細胞／ウェル（９６ウェル）で平板培養し、培地中で一晩インキュベートした。トランスフェクションの時点で、コンフルエンシーは約１５〜２０％であった。トランスフェクション複合体は、干渉ＲＮＡをＯｐｔｉＭＥＭ（商標）培地に添加し、ボルテックスし、別途、送達製剤をＯｐｔｉＭＥＭ（商標）培地に添加し、ボルテックスし、最後に培地中の干渉ＲＮＡを培地中の送達製剤と混合してトランスフェクション複合体を作製することにより調製した。インキュベーションした細胞の培地を、新鮮無血清培地（血清を含なまいＯｐｔｉＭＥＭ（商標））と交換し、トランスフェクション複合体を各ウェルに添加した。細胞を５時間インキュベートし、次いで、１００マイクロリットルの完全培地（ＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清）の添加後、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌日、トランスフェクションの２４時間後、培地を新鮮完全培地に交換し、細胞をさらに４８時間、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０３７８】
ＬａｃＺ遺伝子ノックダウンのため、回収した９Ｌ／ＬａｃＺ細胞をＰＢＳ中で洗浄し、Ｍ−ＰＥＲ（商標）試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）中で溶解させ、室温で１５分間インキュベートした。ライセートを各ウェルから採取し、Ｍｉｃｒｏ ＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いたタンパク質アッセイ、およびＡｌｌ−ｉｎ−Ｏｎｅ（商標）β−ガラクトシダーゼアッセイ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いたβ−ｇａｌアッセイを行なった。
【０３７９】
Ａ５４９細胞におけるＰＰＩＢ遺伝子発現ノックダウンのインビトロアッセイ
シクロフィリンＢ（ＰＰＩＢ）遺伝子ノックダウンの測定は、活性に基づいたインビトロでの干渉ＲＮＡ送達製剤の一次アッセイとして使用され得る。シクロフィリンＢ（ＰＰＩＢ）遺伝子発現ノックダウンは、Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞において測定した。ＰＰＩＢ遺伝子ノックダウンの測定のため、Ａ５４９細胞を干渉ＲＮＡ製剤でトランスフェクトし、トランスフェクションの２４時間後に全ＲＮＡを調製し、ＰＰＩＢ ｍＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲによってアッセイした。標準化のため、３６Ｂ４（酸性のリボソームホスホタンパク質ＰＯ）ｍＲＮＡ発現のＱＲＴ−ＰＣＲを行なった。
【０３８０】
Ａ５４９細胞を７，５００細胞／ウェル（９６ウェル）で播種し、培地中で一晩インキュベートした。トランスフェクションの時点でコンフルエンシーは約５０％であった。トランスフェクション複合体は、干渉ＲＮＡを培地（ＯｐｔｉＭＥＭ（商標））に添加し、ボルテックスし、別途、送達製剤を培地（ＯｐｔｉＭＥＭ（商標））に添加し、ボルテックスし、最後に培地中の干渉ＲＮＡを培地中の送達製剤と混合し、２０分間室温でインキュベートしてトランスフェクション複合体を作製することにより調製した。インキュベーションした細胞の培地を、新鮮ＯｐｔｉＭＥＭ（商標）と交換し、トランスフェクション複合体を各ウェルに添加した。細胞を３７℃および５％ＣＯ２で５時間インキュベートし、次いで、完全培地を添加し（最終ウシ胎仔血清濃度１０％まで）、トランスフェクションの２４時間後までインキュベーションを継続した。
【０３８１】
ＰＰＩＢ遺伝子ノックダウンのため、細胞を溶解させ、ＲＮＡを調製した（Ｉｎｖｉｓｏｒｂ ＲＮＡ Ｃｅｌｌ ＨＴＳ ９６−Ｋｉｔ／Ｃ，Ｉｎｖｉｔｅｋ，Ｂｅｒｌｉｎ、またはＲＮｅａｓｙ ９６ Ｋｉｔ，Ｑｉａｇｅｎ）。ＤＮＡ Ｅｎｇｉｎｅ Ｏｐｔｉｃｏｎ２サーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）において、Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ｑＲＴ−ＰＣＲキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、定量的ＲＴ−ＰＣＲを行なった。
【０３８２】
ＰＰＩＢに使用したプライマーは：
【０３８３】
【化２６】
2015078214.tif 000044
であった。
【０３８４】
３６Ｂ４では、プライマーは：
【０３８５】
【化２７】
2015078214.tif 000045
であった。
【０３８６】
マウスにおけるインフルエンザウイルス力価のノックダウンのインビボアッセイ
マウスにおけるインフルエンウイルス力価のノックダウンの測定は、干渉ＲＮＡリポペプチド送達製剤の有効性のインビボ評価として使用され得る。
【０３８７】
このアッセイでは、典型的には、５０ｕＬの干渉ＲＮＡリポペプチド製剤、または対照群としてＰＢＳを、ケタミン／キシラジンで麻酔した７〜９週齢のＢａｌｂ／Ｃマウスに鼻腔内投与した。毎日の投与を、第−２日、第−１日および第０日の連続３日間行なった。最後の投与の４時間後、感染が誘導された。
【０３８８】
インフルエンザ感染は、インフルエンＡ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４（ＰＲ８、サブタイプＨｌＮｌ）を用いて誘導した。感染のため、５０μｌの２０ｐｆｕ ＰＲ８（０．３％ＢＳＡ／ｌＸＰＢＳ／ＰＳ中で希釈）を、ケタミン／キシラジンで麻酔したマウスに鼻腔内投与した。感染の４８時間後、肺を採取し、６００ｕＬの０．３％ＢＳＡ／ｌＸＰＢＳ／ＰＳ中でホモジナイズした。ホモジネートを凍結／解凍を２回行ない、ウイルスを放出させた。ＴＣＩＤ５０アッセイ（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｏｓｅ ５０）を行ない、肺ホモジネート中のウイルスの力価を測定した。平底９６ウェルプレートに、ウェル１つあたり２×１０４個のＭＤＣＫ細胞を播種し、２４時間後、血清含有培地を除去した。３０ｕＬの肺ホモジネートを、未希釈または希釈（１０倍〜１０７倍（１０倍ずつ段階的））のいずれかとし、４連でウェルに添加した。１時間のインキュベーション後、４μｇ／ｍｌのトリプシンを含有する１７０μｌの感染培地（ＤＭＥＭ／０．３％ＢＳＡ／１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＰＳ）を各ウェルに添加した。３７℃の４８時間のインキュベーション後、培養上清み中のウイルスの有無を、ニワトリ赤血球の血球凝集によって測定した。スピアマン−カルバーの式を使用し、ウイルス力価を推定した。
【０３８９】
ｓｉＲＮＡ濃度のＳＹＢＲ（商標）Ｇｏｌｄアッセイ
製剤中のｄｓＲＮＡの濃度は、ＳＹＢＲ（商標）Ｇｏｌｄアッセイによって、以下のようにして測定され得る。１０ｕｌのｄｓＲＮＡ製剤を１００ｕｌのＭｅＯＨに添加し、５５℃で５分間インキュベートする。５０ｕｌのヘパリン（２００ｍｇ／ｍｌ）を添加し、溶液を５５℃で５分間インキュベートする。７９０ｕｌのＰＢＳ（リン酸基緩衝生理食塩水）を添加し、試料を微量遠心管内でスピンダウンし、ペレット化する。９０ｕｌのペレット試料を１０ｕｌのＳＹＢＲ（商標）Ｇｏｌｄ試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）とともにインキュベートする。Ｅｍ５３５ｎｍにおける蛍光を読み取る（励起４９５ｎｍ）。
【０３９０】
実施例２
本開示の一部の二本鎖ＲＮＡの構造を表６に示す。
【０３９１】
【表６】
2015078214.tif 000046
実施例３
本開示の活性ＲＮＡ製剤は、干渉ＲＮＡをバッファーまたは細胞培養培地中に溶解させ、ボルテックスし、別途、送達製剤をバッファーまたは細胞培養培地と混合し、ボルテックスし、最後に干渉ＲＮＡ混合物を送達製剤混合物と混合して、活性ＲＮＡｉトランスフェクション製剤を作製することにより調製され得る。
【０３９２】
送達製剤を調製するため、リポペプチドを他の脂質および／または賦形剤とともに、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ中で可溶化させ、Ｎ２下で乾燥させ、５％デキストロース含有１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）中で水和させ得る。混合物には、超音波処理または押出し、透析および／またはタンジェンシャルフロー濾過が行なわれ得る。
【０３９３】
本開示の例示的な干渉ＲＮＡ製剤を表７に示す。この実施例では、リポペプチドにより、干渉ｓｉＲＮＡ治療薬の細胞内送達のための該ペプチド自体の製剤がもたらされる。リポペプチドの量を、活性ＲＮＡ薬剤を含めていない送達成分に対するモルパーセントで示す。
【０３９４】
【表７】
2015078214.tif 000047
本開示の例示的な干渉ＲＮＡ製剤を表８に示す。この実施例では、リポペプチドにより、干渉ｓｉＲＮＡ治療薬の細胞内送達のための該ペプチド自体の製剤がもたらされる。リポペプチドの量を、活性ＲＮＡ薬剤を含めていない送達成分に対するモルパーセントで示す。前の表の各ペプチドの親油性基の長さを「（ＣＸ）」で表す。ここで、「Ｘ」は、親油性基内の炭素の数を表す。例えば、Ｃ２０は、２０炭素鎖長を有する親油性基を表す。
【０３９５】
【表８】
2015078214.tif 000048
本開示の例示的なＲＮＡｉ製剤を表９に示す。この実施例では、リポペプチドを非カチオン性脂質と合わせて共送達製剤にしている。
【０３９６】
【表９】
2015078214.tif 000049
本開示の例示的なＲＮＡｉ製剤を表１０に示す。この実施例では、リポペプチドをカチオン性脂質、非カチオン性脂質、およびペグ化脂質と合わせて多成分送達製剤にしている。
【０３９７】
【表１０】
2015078214.tif 000050
本開示のＲＮＡｉ製剤のためのさらなる脂質の例を表１１に示す。
【０３９８】
【表１１】
2015078214.tif 000051
実施例４
本開示の干渉ＲＮＡ組成物の実施例製剤のノックダウン活性を表１２に示す。
【０３９９】
【表１２】
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表１２のリポペプチドでは、結果により、少なくとも２つのリポペプチド（Ｃ２０）−（Ｈ）８（Ｒ）８（Ｈ）８Ｋ−ＮＨ−（Ｃ２０）（配列番号１３）と（Ｃ１８）−ＨＨＨＨＨＫＨＨＨＫＫＫＨＫＨＫＫＫ−システアミド（配列番号３５５）が、少なくともＡ５４９／ＰＰＩＢアッセイにおいて、Ｑｎｅｇおよびビヒクル（ビヒクルのデータは表示せず）の両方と比べて有意なノックダウンを示すことが示された。
【配列表】
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【外国語明細書】
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【配列表】
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