(57)【要約】      （修正有）【課題】アルカリフォスファターゼ活性化能、すなわち毛乳頭細胞活性化能を持ち、育毛・発毛効果に優れ、且つ安全性の高い育毛剤の提供。【解決手段】式（１）2015117189.tif 000006［式（１）中、Ｒは、炭素数１０〜２２のアシル基を表し、Ｍは、水素、アルカリ金属、１／２アルカリ土類金属、置換若しくは無置換のアンモニウム、又はこれらの組み合わせを表す。］で表される環状ホスファチジン酸を有効成分として含有する育毛剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表される環状ホスファチジン酸を有効成分として含有する育毛剤。
【化１】
2015117189.tif 000005
［式（１）中、Ｒは、炭素数１０〜２２のアシル基を表し、Ｍは、水素、アルカリ金属、１／２アルカリ土類金属、置換若しくは無置換のアンモニウム、又はこれらの組み合わせを表す。］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は環状ホスファチジン酸を有効成分として含有することを特徴とする頭髪の育毛・発毛効果に優れた育毛剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪の脱毛、薄毛には、栄養障害、遺伝、加齢、血行不良、性ホルモン等が関わっていると考えられている。すなわち、これらの要因が原因となって、毛髪の一生を示すヘアサイクルに変化が起き、脱毛や薄毛につながるものと考えられている。通常のヘアサイクルは、それぞれ一定の期間を有する成長期、退行期、休止期を繰り返すことが知られている。一方、脱毛、薄毛が観察されるときは、脱毛部では成長期が短くなることによる髪の毛の軟毛化、毛包のミニチュア化が起こり、髪が十分に育たないまま退行期へと移行する現象が認められる。このため髪毛の産毛化が進行し、脱毛、薄毛へと繋がっていると考えられる。
【０００３】
また、毛成長のメカニズムについては、毛乳頭細胞や毛母細胞の活性化が関係していると考えられている。すなわち、毛乳頭細胞は種々の発毛シグナルと呼ばれる伝達物質を制御し、ヘアサイクルにおいて重要な役割を担っている。一方、毛母細胞は毛乳頭細胞からのシグナルを受けとり、細胞分裂を繰り返すことで毛髪を形成する。そのため育毛において、毛乳頭細胞の活性化における発毛シグナルの制御が重要であると考えられる。
【０００４】
ここで、毛乳頭細胞活性化の指標の一つとしてアルカリフォスファターゼを挙げることができる。アルカリフォスファターゼは毛乳頭マーカーと言われ、成長期で発現のピークとなることが知られている。また高いアルカリフォスファターゼ活性を有する毛乳頭細胞は、高い毛包誘導能を有するとの報告もある。
【０００５】
非特許文献１は、当該アルカリフォスファターゼの活性化能を持つ物質としてバルプロ酸ナトリウムを開示している。また、特許文献１は、バルプロ酸ナトリウムが脱毛防止又は育毛促進効果を有することを開示している。
また、男性型脱毛症の治療には、伝統的に天然物由来の物質が用いられてきており、例えば、特許文献２では、リゾホスファチジン酸が開示されている。
しかし、いずれも育毛剤の有効成分としては満足できるものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１２−５２６７９９
【特許文献２】再表０１／０１２１４１
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Soung-Hoon Lee et al. Valproic Acid Induces Hair Regeneration in Murine Model and Activates Alkaline Phosphatase Activity in Human Dermal Papilla Cells  April 2012 Volume 7 Issue 3 e34152
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１及び非特許文献１が開示するバルプロ酸ナトリウムは、抗けいれん薬などとしても用いられており、使用に当たっては副作用が発現するおそれがある。また、従来の天然物由来品は、育毛効果の実感があまり得られないという問題がある。
【０００９】
そこで、本発明の課題は、アルカリフォスファターゼ活性化能、すなわち毛乳頭細胞活性化能を持ち、育毛・発毛効果に優れ、且つ安全性の高い育毛剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために、アルカリフォスファターゼ活性化能を持つ物質の探索について鋭意検討を重ねた結果、環状ホスファチジン酸が毛乳頭細胞における優れたアルカリフォスファターゼ活性化能を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明によれば、式（１）で表される環状ホスファチジン酸を有効成分として含有する育毛剤が提供される。
【化１】
2015117189.tif 000002
［式（１）中、Ｒは、炭素数１０〜２２のアシル基を示し、Ｍは、水素、アルカリ金属、１／２アルカリ土類金属、置換若しくは無置換のアンモニウム、又はこれらの組み合わせを示す。］
【発明の効果】
【００１２】
本発明の育毛剤は、頭皮等に適用することにより、適用部位において優れた養毛・育毛効果を発揮する。また、安全性が高く、副作用もほとんど示さない。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例及び比較例に係る各育毛剤試料液のアルカリフォスファターゼ活性化能を比較したグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の育毛剤は、下記の式（１）で表される環状ホスファチジン酸が有効成分として含有されていることを特徴とする。
【化２】
2015117189.tif 000003
［式（１）中、Ｒは、炭素数１０〜２２のアシル基を示し、Ｍは、水素、アルカリ金属、１／２アルカリ土類金属、置換若しくは無置換のアンモニウム、又はこれらの組み合わせを示す。］
【００１５】
式（１）のＲで示される炭素数１０〜２２のアシル基（アルカノイル基）としては、炭素数１０〜２２の飽和アシル基、及び、炭素数１０〜２２で１〜６個の不飽和結合を有するアシル基が挙げられる。酸化などの劣化が生じにくく、色や臭気などの経時変化も起こりにくいため、飽和アシル基が好ましい。飽和アシル基として炭素数１０〜２２の飽和アシル基が好ましく、炭素数１４〜１８の飽和アシル基がさらに好ましい。
【００１６】
炭素数１０〜２２の飽和アシル基の具体例として、カプリン酸（Ｃ１０：０）、ラウリン酸（Ｃ１２：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、マルガリン酸（Ｃ１７：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）、ノナデカン酸（Ｃ１９：０）、アラキジン酸（Ｃ２０：０）、ヘネイコサン酸（Ｃ２１：０）、ベヘニン酸（Ｃ２２：０）等に由来する残基が挙げられる。なかでも、取扱いのしやすさ、及び活性の強さなどの点からミリスチン酸（Ｃ１４：０）、ペンタデカン酸（Ｃ１５：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）に由来する残基などの炭素数１４〜１８の飽和アシル基が好ましい。
【００１７】
炭素数１０〜２２で１〜６個の不飽和結合を有するアシル基の具体例として、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、エライジン酸（Ｃ１８：１）、バクセン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、アラキドン酸（Ｃ２０：４）、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５）、エルカ酸（Ｃ２２：１）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６）等に由来する残基が挙げられる。なかでも、ミリストレイン酸（Ｃ１４：１）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、エライジン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、リノレン酸（Ｃ１８：３）に由来する残基が好ましい。
【００１８】
式（１）のＭで示されるアルカリ金属としては、ナトリウム、カリウム等が挙げられる。また、１／２アルカリ土類金属としては、マグネシウム、カルシウム等が挙げられる。さらに、アンモニウム基とは、「ＮＨ4」で表される原子団であり、Ｈが他の基に置換された置換基を有するものであっても、無置換のものであってもよい。
上記アンモニウム基の置換基の具体例としては、トリエタノールアミン基が挙げられる。
Ｍは、育毛剤としての効果、及び安定性の点で、ナトリウム、カリウム又はこれらの組み合わせが好ましい。
【００１９】
次に、本発明の育毛剤の有効成分である環状ホスファチジン酸の製造方法例について説明する。
本発明に用いられる式（１）に示す環状ホスファチジン酸は、公知の製造方法で合成することができる。例えば、特許第３１９５８３３号公報に記載されている酵素反応により得たものを使用することができる。
【００２０】
酵素反応による環状ホスファチジン酸の具体的製造例としては、次の方法を挙げることができる。すなわち、水素添加大豆リン脂質由来のリゾホスファチジルコリンと酵素ホスホリパーゼＤを、酢酸緩衝液（ｐＨ５〜６程度）中で１〜２０時間程度反応させることによって、水素添加大豆由来の環状ホスファチジン酸を製造する方法である。また、本法により得られる環状ホスファチジン酸は、常法に準じて、抽出、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）などにより精製することができる。
【００２１】
本発明の育毛剤は、有効成分である式（１）に示す環状ホスファチジン酸以外の成分を、育毛効果を阻害しない範囲で含有することができる。
例えば、大豆リン脂質、卵黄リン脂質、水素添加大豆リン脂質、水素添加卵黄リン脂質などの天然由来のリン脂質や、その他、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリンなどを含むことができる。天然由来のリン脂質の場合、なかでも、ホスファチジルコリン含量が６０重量％以上である水素添加大豆リン脂質が好ましく、ホスファチジルコリン含量が８０重量％以上である水素添加大豆リン脂質がさらに好ましい。
【００２２】
上記本発明の育毛剤に配合可能な水素添加大豆リン脂質は、例えば、水とヘキサンやアルコールなどとの２相分配により大豆リン脂質を抽出精製し、その後、水素添加をすることにより得ることができる。また、水素添加された大豆リン脂質を、アセトンやアルコールなどの溶媒を用いて晶析精製して得てもよいし、液体クロマトグラフィーなどにより分離精製して得てもよい。
【００２３】
本発明の育毛剤は、その他に、湿潤剤、増粘剤、乳化剤、分散剤、清涼化剤、防腐剤などを含んでもよく、また、その他の育毛有効成分を配合してもよい。また、スプレー剤形とする場合は、スプレー式ヘアトニック等に使用される炭酸ガス、ＬＰＧ等を含有させることができる。
【００２４】
本発明の育毛剤は、様々な剤形にて調整することができ、例えば、ローション、乳液、ジェル、ヘアトニック、スプレー等として利用することができる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例および比較例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【００２６】
まず、育毛効果の評価方法について説明する。
１．細胞培養
ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡株式会社製）を毛乳頭細胞増殖培地（東洋紡株式会社製）に懸濁後播種し、２４時間培養した。培養後、下記の各実施例及び比較例に係る育毛剤試料液を表１に記載の各濃度で添加し、さらに７２時間培養した。該培養後、下記に示すアルカリフォスファターゼ活性を測定した。
【００２７】
２．アルカリフォスファターゼ活性測定
上記、各実施例及び比較例に係る培養した細胞を、１０％中性緩衝ホルマリン液（和光純薬工業株式会社製）を用いて固定化した。固定化後、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（和光純薬工業株式会社製）を加えて３７℃で３時間インキュベーションし、アルカリフォスファターゼ染色を行った。
染色後、ＰＯＷＥＲＳＣＡＮ  ＭＸ（ＤＳファーマバイオメディカル（株）製）で、４０５ｎｍの吸光強度を測定し、試薬無添加時の吸光強度を０としたときの、実施例及び比較例の試薬のアルカリフォスファターゼ活性（ＡＬＰ相対吸光強度）を算出した。
「ＡＬＰ相対吸光強度」が大きいほど、アルカリフォスファターゼ活性化能が高く、育毛効果が高いと判断できる。
【００２８】
実施例１
Ｒが水素添加大豆油由来脂肪酸残基であり、Ｍがナトリウムである環状ホスファチジン酸を３８％エタノールに溶解させた後、毛乳頭細胞増殖培地に、表１に示す３種類の濃度となるように溶解させ、実施例１として、濃度を変化させた育毛剤試料液３点を準備した。
当該実施例１の各濃度の育毛剤試料液について、上記１．及び２．の評価方法に従って育毛効果を評価した。結果を図１に示す。
【００２９】
比較例１
実施例１の環状ホスファチジン酸の代わりに、リゾホスファチジン酸（Avanti Polar Lipids社製）を使用し、表１に示す濃度とした以外は、実施例１と同様にして各濃度の試料液を調製し、育毛効果を評価した。結果を図１に示す。
【００３０】
比較例２
実施例１の環状ホスファチジン酸の代わりに、バルプロ酸ナトリウム（Sigma-Aldrich Co. Ltd.製）を使用し、表１に示す濃度とした以外は、実施例１と同様にして各濃度の試料液を調製し、育毛効果を評価した。結果を図１に示す。
【００３１】
比較例３
実施例１の環状ホスファチジン酸の代わりに、ミノキシジル硫酸塩（Sigma-Aldrich Co. Ltd.製）を使用し、表１に示す濃度とした以外は、実施例１と同様にして各濃度の試料液を調製し、育毛効果を評価した。結果を図１に示す。
【００３２】
【表１】
2015117189.tif 000004
【００３３】
図１から明らかなように、実施例１の環状ホスファチジン酸を有効成分とする育毛剤は、各比較例の試料液と比べ高いアルカリフォスファターゼ活性を示した。すなわち、本発明の一実施形態である実施例１の育毛剤は、顕著に優れた育毛効果を有することが確認された。
【図１】
2015117189.tif 000007