(57)【要約】【課題】目的細胞および非目的細胞を含む検体から目的細胞を正確に、かつ高感度で検出することができる検出チップを提供すること。【解決手段】検出チップは、目的細胞および目的細胞よりも小さい非目的細胞を含む検体から、目的細胞を検出するための検出チップであって、検体が流れる流路と、流路内に配置された、目的細胞を検出するための検出部と、流路内の検出部より上流に配置された、非目的細胞の少なくとも一部を除去するための凹凸形状を含む除去部と、を有する。【選択図】図３
2015117940.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
目的細胞および前記目的細胞よりも小さい非目的細胞を含む検体から、前記目的細胞を検出するための検出チップであって、
前記検体が流れる流路と、
前記流路内に配置された、前記目的細胞を検出するための検出部と、
前記流路内の前記検出部より上流に配置された、前記非目的細胞の少なくとも一部を除去するための凹凸形状を含む除去部と、
を有する、検出チップ。
【請求項２】
前記非目的細胞は、白血球または血小板であり、
前記凹凸形状は、幅が０．１〜２１μｍの範囲内である溝を１または２以上含む、請求項１に記載の検出チップ。
【請求項３】
前記溝の深さは、０．１〜１０．５μｍの範囲内である、請求項２に記載の検出チップ。
【請求項４】
前記流路内における前記検体の移動方向に対する前記溝の角度は、４５°以上であって、かつ９０°未満である、請求項２に記載の検出チップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、目的細胞および非目的細胞を含む検体から目的細胞を検出するための検出チップに関する。
【背景技術】
【０００２】
循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）や循環血管内皮細胞（ＣＥＣ）、循環血管内皮前駆細胞（ＣＥＰ）、各種幹細胞など（以下「希少細胞」または「目的細胞」もいう）は、病態に応じて血液中に極めて稀に存在する。このような希少細胞の検出は、臨床的に有用であることは明らかであるが、極めて難しい。近年、様々な細胞分離手法を応用して希少細胞の検出が試みられており、様々な検出装置が製品化されている。
【０００３】
特許文献１には、目的細胞のみを捕捉して検査するバイオセンサが提案されている。特許文献１に記載のバイオセンサは、検体を流すための流路と、目的細胞を捕捉するためのバイオ認識表面素子と、バイオ認識表面素子を流路内の目的細胞を捕捉する位置に配置するためのセンサー素子と、を有する。バイオ認識表面素子は、例えば多孔質の材料で形成されており、孔の内面に目的細胞を捕捉するプローブ（抗体）が配置されている。
【０００４】
特許文献１に記載のバイオセンサは、センサー素子によりバイオ認識表面素子を、目的細胞を捕捉する位置に移動させる。そして、このバイオセンサでは、バイオ認識表面素子のプローブに目的細胞が接触することにより、目的細胞のみを捕捉する。
【０００５】
また、希少細胞を検出する方法としては、顕微鏡を用いて行われる場合がある。この方法では、細胞懸濁液を平面状に展開した後、顕微鏡により全細胞を観察して、希少細胞を検出する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２００９−５２０９８２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、特許文献１に記載のバイオセンサは、プローブ（抗体）と反応しない目的細胞が存在した場合、全ての目的細胞を捕捉することができない。よって、特許文献１に記載のバイオセンサでは、目的細胞の検出感度が低下してしまうおそれがある。
【０００８】
また、上記した顕微鏡を用いる希少細胞の検出方法では、各細胞が重ならないように平面状に展開する必要があるため、検出装置が大型化してしまうという問題があった。また、各細胞が重なってしまった場合、目的細胞を正確に検出することができないおそれがあった。
【０００９】
本発明は、かかる点に鑑みてなされたものであり、目的細胞および非目的細胞を含む検体から目的細胞を正確に、かつ高感度で検出することができる検出チップを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の検出チップに関する。
【００１１】
［１］目的細胞および前記目的細胞よりも小さい非目的細胞を含む検体から、前記目的細胞を検出するための検出チップであって、前記検体が流れる流路と、前記流路内に配置された、前記目的細胞を検出するための検出部と、前記流路内の前記検出部より上流に配置された、前記非目的細胞の少なくとも一部を除去するための凹凸形状を含む除去部と、を有する、検出チップ。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、検体から目的細胞を正確に、かつ高精度に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、実施の形態１に係る検出チップの断面図である。
【図２】図２Ａ，Ｂは、傾斜面の構成を示す図である。
【図３】図３Ａ，Ｂは、検出チップの使用方法を説明するための図である。
【図４】図４は、実施の形態２に係る検出チップの断面図である。
【図５】図５は、実施例における除去部の拡大写真である。
【図６】図６は、比較例における除去部の拡大写真である。
【図７】図７は、実施例および比較例において検出した細胞数を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施の形態について、図面を参照して詳細に説明する。本実施の形態に係る検出チップは、目的細胞および非目的細胞を含む検体から非目的細胞を除去し、目的細胞の検出を行うためのデバイスである。
【００１５】
（実施の形態１）
図１は、実施の形態１に係る検出チップ１００の断面図である。図２Ａ，Ｂは、傾斜面１４１の構成を示す図である。図２Ａは、傾斜面１４１の平面図であり、図２Ｂは、図２Ａに示されるＡ−Ａ線の断面図である。
【００１６】
図１に示されるように、検出チップ１００は、底板１１０、枠板１２０、天板１３０および導入部１４０を有する。実施の形態１に係る検出チップ１００では、底板１１０、枠板１２０および天板１３０をこの順番で積層して固定することで、除去部１５０、検出部１６０および流路１７０が形成される。
【００１７】
底板１１０は、検出チップ１００の底部となる。底板１１０の形状は、特に限定されず、検出チップ１００の形状に応じて適宜設計されうる。本実施の形態では、底板１１０の形状は、矩形の薄板である。底板１１０の厚みは、特に限定されないが、検出チップ１００の強度を維持する観点から、１〜１０ｍｍの範囲内であることが好ましい。底板１１０の素材は、特に限定されず、公知のマイクロプレートなどと同じ素材であってもよい。底板１１０の素材の例には、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリジメチルシロキサン、ポリメチルメタクリレート、環状オレフィンコポリマーなどの樹脂が含まれる。詳細は後述するが、底板１１０の中央部分には、目的細胞を捕捉するための捕捉体（たとえば、１次抗体）が配置されていてもよい。また、底板の表面は平面だけでなく細胞を捕捉可能な立体構造を有してもよい。たとえば、深さ２０〜５００μｍ、直径２０〜５００μｍ程度のマイクロチャンバー構造が一例としてあげられる。
【００１８】
枠板１２０は、底板１１０および天板１３０の間に配置された薄板である。枠板１２０の外形は、底板１１０の外形と同じである。枠板１２０は、第１貫通孔１２１を有する。第１貫通孔１２１は、枠板１２０の中央部分に形成されている。第１貫通孔１２１の形状は、特に限定されない。本実施の形態では、第１貫通孔１２１の形状は、直方体である。また、第１貫通孔１２１の大きさは、後述の検出部１６０に応じて適宜設定される。また、枠板１２０の厚みも特に限定されず、検出部１６０の高さ（深さ）に応じて適宜設定される。たとえば、枠板１２０の厚みは、２０〜１０００μｍの範囲内である。枠板１２０の素材は、特に限定されず、底板１１０と同じ樹脂を使用することができる。枠板１２０は、両面に粘着層を配置して、底板１１０および天板１３０に貼り合わせてもよい。すなわち、枠板１２０は、底板１１０と同じ樹脂を使用した樹脂フィルム（樹脂基板）を基板とした両面粘着シートであってもよい。
【００１９】
天板１３０は、枠板１２０の上に配置された薄板である。天板１３０の外形は、底板１１０および枠板１２０の外形と同じである。天板１３０は、第２貫通孔１３１および第３貫通孔１３２を有する。第２貫通孔１３１および第３貫通孔１３２は、枠板１２０に積層したときに第１貫通孔１２１にそれぞれ連通するように天板１３０の長辺方向の両側に配置されている。第２貫通孔１３１および第３貫通孔１３２の形状は、特に限定されない。本実施の形態では、第２貫通孔１３１および第３貫通孔１３２の形状は、円柱形状である。第２貫通孔１３１には導入部１４０が接続されており、第３貫通孔１３２にはポンプ部１５０が接続される。天板１３０の厚みは、必要な強度および顕微鏡の焦点距離を確保できれば特に限定されない。たとえば、天板１３０の厚みは、１〜１０ｍｍの範囲内である。天板１３０の素材は、特に限定されず、底板１１０および枠板１２０と同じ樹脂を使用することができる。
【００２０】
導入部１４０は、第２貫通孔１３１に接続されている。導入部１４０は、傾斜面１４１を有する。
【００２１】
図２Ａ，Ｂに示されるように、傾斜面１４１は、後述の凹凸形状を有する。傾斜面１４１は、略平板状であり、検出チップ１００の長辺方向の端部から中央部に向かうにつれて、天板１３０との距離が短くなるように、配置されている。検出チップ１００の長辺方向において、天板１３０と傾斜面１４１との角度は、特に限定されない。天板１３０に対する傾斜面１４１の角度は、０°超であって４５°未満であることが好ましい。導入部１４０は、天板１３０と一体に成形されていてもよいし、別体として成形してもよい。本実施の形態では、導入部１４０は、天板１３０と一体に成形されている（図１参照）。
【００２２】
ポンプ部１８０は、ピペット１８１およびポンプ１８２を有する。ピペット１８１は、第３貫通孔１３２に対して着脱自在に構成されている。ポンプ１８２は、流路１７０の内容（検体や試薬）物を検出チップ１００の外部に排出する。
【００２３】
上述したように、底板１１０、枠板１２０および天板１３０を積層して固定するとともに、導入部１４０を接続することで、除去部１５０検出部１６０および流路１７０が形成される。
【００２４】
除去部１５０は、検体から非目的細胞の少なくとも一部を除去する。除去部１５０の上流側は、解放されており、検体を導入できるようになっている。また、除去部１５０の下流端は、検出部１６０の導入口１６１に接続されている。
【００２５】
除去部１５０は、上述した傾斜面１４１を有する。傾斜面１４１は、天板１３０に対して所定の角度を有する。天板１３０に対する傾斜面１４１の角度は、０°超であって４５°未満であることが好ましい。天板１３０に対する傾斜面１４１の角度が上記の範囲内であれば、非目的細胞を検体から適切に除去できるとともに、目的細胞が検出部１６０に流れ込む。天板１３０に対する傾斜面１４１の角度が０°以下の場合、検体が導入口１６１（検出部１６０）に向かって流れない。一方、天板１３０に対する傾斜面１４１の角度が４５°超の場合、検体の流速が速すぎて、検体から非目的細胞を除去できないおそれがある。
【００２６】
検体の種類は、特に限定されない。検体の例には、血液、血液の希釈液などが含まれる。検体に含まれる目的細胞は、非目的細胞より大きい。また、目的細胞には、血液循環癌細胞（ＣＴＣ）や循環血管内皮細胞（ＣＥＣ）、循環血管内皮前駆細胞（ＣＥＰ）、循環胎児細胞、抗原特異的Ｔ細胞、各種幹細胞などが含まれる。また、非目的細胞は、血液中に含まれる細胞であってもよいし、細胞成分であってもよい。非目的細胞は細胞の場合、白血球などであり、細胞成分の場合、血小板などである。
【００２７】
除去部１５０は、流路１７０内に配置され検体から非目的細胞の少なくとも一部を除去するための凹凸形状を有する傾斜面１４１を含む。凹凸形状には、溝形状、複数の凹部形状、複数の凸部形状、またはこれらの組み合わせの形状などが含まれる。本実施の形態では、凹凸形状は、溝形状である。
【００２８】
溝１４２は、非目的細胞を内側に取り込む。溝１４２の数は、特に限定されず、１つであってもよいし、２つ以上であってもよい。本実施の形態では、溝１４２は、傾斜面１４１に複数配置されている。また、隣接する溝１４２間距離も特に限定されず、０〜１００μｍの範囲内である。隣接する溝１４２間距離は、限られた傾斜面１４１の面積で非目的細胞を数多く除去するため、小さい（０μｍ）方が好ましい本実施の形態では、溝１４２間距離は、０μｍである。すなわち、本実施の形態では、溝１４２は、傾斜面の全体に連続して配置されている。溝１４２の幅方向の断面形状は、特に限定されない。溝１４２の幅方向の断面形状には、Ｖ字形状、Ｕ字形状が含まれる。本実施の形態では、溝の幅方向の断面形状は、Ｖ字形状である（図２Ｂ参照）。
【００２９】
流路１７０内における検体の移動方向に対する溝１４２の角度は、４５°以上であって、かつ９０°未満であることが好ましい。なお、非目的細胞を効果的に除去する観点から、流路１７０内における検体の移動方向に対する溝１４２の角度は、９０°であることがさらに好ましい。また、溝１４２の軸線は、上記の条件を満たすことができれば、曲線であってもよいし、直線であってもよい。本実施の形態では、溝１４２の軸線は、所定の曲率を有する曲線である。ここで、「検体の移動方向に対する溝１４２の角度」とは、溝１４２の軸線上において、検体の流れる方向を示す直線と、当該軸線上の接線とがなす角度のうち、小さい角度を意味する。また、「溝１４２の軸線」とは、溝１４２の幅方向における断面の中心を結ぶ線を意味する。本実施の形態では、流路１７０内における検体の移動方向に対する溝１４２の角度は、９０°であり、かつ溝１４２の軸線は、導入口１６１を平面視したときの形状（円）と同心の円弧である。
【００３０】
溝１４２の幅は、０．１〜２１μｍの範囲内であることが好ましい。溝１４２の幅が０．１μｍ未満の場合、非目的細胞を溝１４２の内側に取り込むことができないおそれがある。一方、溝１４２の幅が２０μｍ超の場合、非目的細胞のみならず、目的細胞も取り込んでしまう。溝１４２の幅の上限値（２１μｍ）は、以下のデータに基づいて設定した。
【００３１】
目的細胞の直径（平均直径）は、複数種の血液循環癌細胞を光学顕微鏡で撮影し、当該撮影結果から各血液循環癌細胞の平均的な投影面積が３９６〜７９６μｍ２であると報告されている（American Journal of Pathology, Vol.156, No.1, 57-63, January 2000）。よって、目的細胞とする各血液循環癌細胞の形状を球と仮定すると、目的細胞の直径は、２２〜３２μｍであると算出した。したがって、溝１４２の上限値を２１μｍと設定した。なお、表１に血液細胞の種類と、各血液細胞の直径を示す。
【００３２】
【表１】
2015117940.tif 000003
【００３３】
このように、溝１４２は、非目的細胞を内側に取り込むことができるが、目的細胞を内側に取り込むことはできない大きさに構成されている。
【００３４】
また、溝１４２の深さは、非目的細胞を取り込むことができれば特に限定されないが、０．１〜１０．５μｍの範囲内であることが好ましい。溝１４２の幅が０．１μｍ未満の場合、非目的細胞が溝１４２に引っ掛からないため、非目的細胞を内側に取り込むことができないおそれがある。一方、溝１４２の幅が１０．５μｍ超の場合、非目的細胞を取り込む効果が飽和する。
【００３５】
検出部１６０は、目的細胞を検出するために、目的細胞が重ならないように展開させる。検出部１６０の形状は、特に限定されない。本実施の形態では、検出部１６０の形状は、直方体である。検出部１６０は、底板１１０の表面の中央部分（底面）と、第１貫通孔１２０の内周面（側面）と、天板１３０の裏面の中央部分（天面）とから構成される。底面には、例えば目的細胞を捕捉するための捕捉体（たとえば、１次抗体）が配置されていてもよい。検出部１６０の底面に１次抗体を配置する方法は、特に限定されない。たとえば、１次抗体を結合させたＳＡＭ膜（Self-Assembled Monolayer：「自己組織化単分子膜」ともいう）または高分子材料膜を底面に配置すればよい。ＳＡＭ膜の例には、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）１１−ＳＨなどの置換脂肪族チオールで形成された膜が含まれる。また、高分子材料の例には、ポリエチレングリコールやＭＰＣポリマーなどが含まれる。
【００３６】
検出部１６０は、導入口１６１および排出口１６２を有する。導入口１６１は、非目的細胞を除去した検体を検出部１６０に導入させる。導入口１６１は、検出部１６０の端部に配置されており、除去部１５０に接続されている。排出口１６２は、検出部１６０の検体を外部に排出する。排出口１６２は、検出部１６０において、導入口１６１と対向して配置されている。上述の第２貫通孔１３１および第２貫通孔１３１は、底板１１０、枠板１２０および天板１３０を積層することで、有底の導入口１６１および有底の排出口１６２となる。
【００３７】
流路１７０は、検出チップ１００内に形成される。上述したように、流路１７０は、底板１１０、枠板１２０および天板１３０を積層することで形成される。すなわち、本実施の形態における流路１７０は、導入部１４０の上流端部から排出口１６２までをいう。
【００３８】
次いで、検出チップ１００の使用方法について説明する。ここでは、本実施の形態に係る検出チップ１００を用いて、目的細胞を１次抗体に結合させた後、１次抗体に結合させた目的細胞を染色して、目的細胞を検出する方法について説明する。
【００３９】
図３Ａ，Ｂは、検出チップ１００の使用方法を説明するための図である。図３Ａは、除去部１５０における非目的細胞の取り込みを説明するための模式図であり、図３Ｂは、検出部１６０における目的細胞および１次抗体の結合を説明するための模式図である。
【００４０】
まず、検体を除去部１５０から導入する。このとき、除去部１５０（溝１４２）は、検体から非目的細胞の少なくとも一部を除去する。具体的には、検体が除去部１５０に導入されると、小さい非目的細胞のみが溝１４２の内部に取り込まれる。一方、大きな目的細胞は、溝１４２の内部に取り込まれることなく、除去部１５０の下流（導入口１６１）に向かって流れる（図３Ａ参照）。このようにして、検出チップ１００の除去部１５０では、非目的細胞および目的細胞を含む検体から、非目的細胞を除去する。なお、非目的細胞は、完全に除去される必要はなく、一部が除去されればよい。
【００４１】
そして、検体は、検出部１６０に導入される。検出部１６０に導入された検体の目的細胞は、底面に配置された１次抗体（捕捉体）と結合する（抗原抗体反応）。このとき、１次抗体（捕捉体）に目的細胞を確実に捕捉させる（抗原抗体反応させる）ため、ポンプ部１５０を駆動して検体を検出部１６０内で往復させる。そして、検体に含まれる目的細胞は、確実に捕捉体（１次抗体）に捕捉される（図３Ｂ参照）。この後、流路１７０内の検体は除去され、流路１７０内は洗浄液で洗浄される。
【００４２】
次いで、目的細胞を標識する標識液を検出部１６０に導入する。そして、染色液に含まれる標識物質は、目的細胞に結合する。この後、目的細胞を標識しなかった流路１７０内の標識液は除去され、流路１７０内は洗浄液で洗浄される。最後に、顕微鏡などで観察することにより、目的細胞を検出する。
【００４３】
以上のように、実施の形態１に係る検出チップ１００は、溝１４２が非目的細胞の少なくとも一部を取り込むように形成されているため、検体から非目的細胞を取り除き、目的細胞を正確に、かつ漏れなく検出することができる。
【００４４】
（実施の形態２）
実施の形態２に係る検出チップ２００は、除去部２５０の配置が実施の形態１に係る検出チップ１００と異なる。そこで、主として実施の形態１に係る検出チップ１００と異なる部分について説明する。図４は、実施の形態２に係る検出チップ２００の断面図である。
【００４５】
図４に示されるよう、実施の形態２に係る検出チップ２００は、底板２１０、枠板１２０天板２３０および導入部２４０を有する。検出チップ２００では、底板２１０、枠板１２０および天板２３０をこの順番で積層して固定することで、除去部２５０、検出部１６０および流路２７０が形成される。
【００４６】
底板２１０の形状は、矩形の略板状である。底板２１０には、検出部１６０の底面となる底部２１１が配置されている。底部２１１は、底板２１０の中央部分に配置された平面部分である。
【００４７】
枠板１２０は、第１貫通孔１２１を有し、底板２１０と同じ大きさに形成されている。天板２３０は底板２１０および枠板１２０と同じ大きさに形成されている。天板２３０は、導入口１６１となる第２貫通孔１３１と、排出口１６２となる第３貫通孔１３２とを有する。本実施の形態では、導入口１６１の上流端は、解放されており、検体を直接導入するようになっている。
【００４８】
導入部２４０は、傾斜面２１２を有する。傾斜面２１２は、底部２１１の端部に連なって配置されている。傾斜面２１２は、底板２１０の一方の端部から中央部分に向かうにつれて、底部２１１との距離が短くなるように配置されている。
【００４９】
除去部２５０は、導入口１６１および検出部１６０の間に配置されている。除去部２５０は、傾斜面２１２を有し、実施の形態１と同様の溝構造を有する。
【００５０】
検出部１６０は、導入口１６１および排出口１６２を有する。導入口１６１は、非目的細胞を除去した検体を検出部１６０に流入させる。導入口１６１は、除去部２５０より上流に配置されている。排出口１６２は、検出部１６０の検体を外部に排出する。排出口１６２は、検出部１６０において、導入口１６１と対向して配置されている。
【００５１】
流路２７０は、検出チップ２００内に形成される。流路２７０は、底板２１０、枠板１２０および天板２３０を積層することで形成される。すなわち、本実施の形態における流路２７０は、導入口１６１から排出口１６２までをいう。
【００５２】
次いで、検出チップ２００の使用方法について説明する。
【００５３】
まず、検体を導入口１６１から導入する。このとき、除去部２５０（溝１４２）は、検体から非目的細胞を除去する。具体的には、検体が除去部２５０に導入されると、小さい非目的細胞のみが溝１４２の内部に取り込まれる。一方、大きな目的細胞は、溝１４２の内部に取り込まれることなく、検出部１６０に向かって流れる。
【００５４】
そして、検体は、検出部１６０に導入される。検出部１６０に導入された検体の目的細胞は、底面に配置された１次抗体（捕捉体）と結合する（抗原抗体反応）。次いで、目的細胞を標識する標識液を検出部１６０に導入して、目的細胞を染色する。最後に、顕微鏡などで観察することにより、目的細胞を検出する。
【００５５】
以上のように、実施の形態２に係る検出チップ２００は、実施の形態１に係る検出チップ１００と同様の効果を有する。
【００５６】
なお、上記の実施の形態では、検出部１６０に捕捉体（１次抗体）が配置された例を示したが、検出部１６０に捕捉体が配置されていなくてもよい。この場合、除去部１５０，２５０で非目的細胞が除去された検体（目的細胞）は、検出部１６０に直接固定される。
【００５７】
以下、本発明の実施例を参照して詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されない。
【実施例】
【００５８】
［実施例］
１．細胞懸濁液の調製
細胞懸濁液は、まず、ＭＢ２３１細胞を培養し、トリプシン処理により回収した後、ＰＢＳ１０ｍＬを添加して細胞液を懸濁させた。次いで、懸濁液を２００Ｇで４分間遠心分離した。遠心分離後の上清を除去した後、再度ＰＢＳ１０ｍＬを添加して細胞懸濁液を調製した。なお、この細胞懸濁液（検体）に含まれる血液循環癌細胞（ＣＴＣ）である目的細胞（ＭＢ２３１）および非目的細胞（白血球）の数は、血球計算盤により算出した。細胞懸濁液に含まれる目的細胞（ＭＢ２３１）の数は、１．０×１０３個であった。また、細胞懸濁液に含まれる非目的細胞の数は、５．０×１０６個であった。
【００５９】
２．検出部の前処理および細胞の収容
溝の幅が１５μｍ、溝の深さが１０μｍ、傾斜面の角度が３０°の除去部を有する実施の形態１に係る検出チップを作製した。検出部内にＰＢＳを送液した。次いで、除去部に上記の細胞懸濁液１００μＬを２０μＬ／ｍｉｎで送液し、１分間静止しすることで、検体中の目的細胞を底板に結合させた。次いで、ＰＥ（フィコエリスリン）標識済み抗サイトケラチン抗体染色液を検出部内に送液して３０分間静止することで、ＭＢ２３１を染色した。最後に、ＰＢＳ３００μＬを１００μＬ／ｍｉｎで導入して、染色液を検出チップから排出した。
【００６０】
３．目的細胞の検出
顕微鏡を用いて、染色されたＭＢ２３１の数を調べた。
【００６１】
４．結果
図５は、実施例における除去部の拡大写真である。図７は、実施例および比較例において検出した細胞数を示すグラフである。図５に示されるように、実施の形態１に係る検出チップでは、溝に複数の非目的細胞が取り込まれていることが確認された。これにより、検出部に導入された検体は、目的細胞の割合が高く、非目的細胞の割合が低いことがわかる。また、図７に示されるように、検出した細胞数は、検出チップ内に導入したＭＢ２３１数の約９５％であった。したがって、実施の形態１に係る検出チップを用いることで、目的細胞（ＭＢ２３１）を正確に、かつ高感度に検出することができた。
【００６２】
［比較例］
１．目的細胞の検出
除去部に溝を有さない比較例に係る検出チップを作製した。比較例に係る検出チップを用いたこと以外は、実施例と同様に行った。
【００６３】
２．結果
図６は、比較例における除去部の拡大写真である。図６に示されるように、比較例に係る検出チップでは、除去部に非目的細胞が検出されなかった。これにより、検出部では、目的細胞および非目的細胞が重なってしまい、１次抗体（捕捉体）と目的細胞が結合せず、目的細胞が検出チップの外部に排出されたものと考えられる。また、図７に示されるように、検出した細胞数は、検出チップ内に導入したＭＢ２３１数の約４０％であった。したがって、比較例に係る検出チップでは、目的細胞（ＭＢ２３１）を適切に検出できなかった。
【００６４】
以上の結果から、本発明に係る検出チップでは、目的細胞を正確に、かつ高感度にすることができることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明の検出チップは、正確に、かつ高感度で目的細胞を検出することができるため、例えば疾患の検査などに有用である。
【符号の説明】
【００６６】
１００，２００  検出チップ
１１０  底板
１２０  枠板
１２１  第１貫通孔
１３０，２３０  天板
１３１  第２貫通孔
１３２  第３貫通孔
１４０，２４０  導入部
１４１、２１２  傾斜面
１４２  溝
１５０，２５０  除去部
１６０  検出部
１６１  導入口
１６２  排出口
１７０，２７０  流路
１８０  ポンプ部
１８１  ピペット
１８２  ポンプ
２１１  底部
【図１】
2015117940.tif 000004
【図２】
2015117940.tif 000005
【図３】
2015117940.tif 000006
【図４】
2015117940.tif 000007
【図７】
2015117940.tif 000008
【図５】
2015117940.tif 000009
【図６】
2015117940.tif 000010