(57)【要約】【課題】ワンショット送液あるいは連続送液などを行ったとしても、細胞が剥離してしまったり、複数個重なったりしてしまうことがなく、検出対象である細胞の検出性や回収数を向上させることができる細胞展開用デバイスを提供する。【解決手段】細胞展開用デバイスであって、細胞展開領域部Ａの予め設定された形状において、細胞懸濁液が平均的速度Ｖで流れる領域を第１領域Ｄ、第１領域Ｄより細胞懸濁液が速く流れる領域を第２領域Ｃ1、Ｃ2、第１領域Ｄの速度より細胞懸濁液が遅く流れる領域を第３領域Ｅ1、Ｅ2とした場合に、第２領域Ｃ1、Ｃ2に位置するマイクロチャンバー３６の深さを深くするとともに、第３領域Ｅ1、Ｅ2に形成されたマイクロチャンバー３６の深さを浅くし、これにより、第１領域、第２領域および第３領域における細胞懸濁液の流れる速度を近似させるようにしたことを特徴とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のマイクロチャンバーを備えた細胞展開領域部が形成されたマイクロチャンバーチップと、
前記マイクロチャンバーと一体に設けられ、前記複数のマイクロチャンバー上に平面方向に広がる流路を形成する流路形成枠体と、
前記流路形成枠体に設けられ、前記マイクロチャンバー上の流路に細胞懸濁液を流入させる入口部と、
前記流路形成枠体に設けられ、前記マイクロチャンバー上の流路から細胞懸濁液を流出させる出口部と、を有する細胞展開用デバイスであって、
前記細胞展開領域部の予め設定された形状において、細胞懸濁液が平均的速度で流れる領域を第１領域、前記第１領域より細胞懸濁液が速く流れる領域を第２領域、前記第１領域より細胞懸濁液が遅く流れる領域を第３領域とした場合に、
前記第２領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さを前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーよりも深くするとともに、前記第３領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さを前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーよりも浅くした、細胞展開用デバイス。
【請求項２】
前記第２領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さは、前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの６／５〜１０／５の深さである、請求項１に記載の細胞展開用デバイス。
【請求項３】
前記第３領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さは、前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの１／５〜４／５の深さである、請求項１または２に記載の細胞展開用デバイス。
【請求項４】
前記マイクロチャンバーの内径が２０〜５００μｍである、請求項１〜３のいずれかに記載の細胞展開用デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、希少細胞の検出に用いられる細胞展開用デバイスに関する。
【背景技術】
【０００２】
循環腫瘍細胞〔ＣＴＣ〕、循環血管内皮細胞〔ＣＥＣ〕、循環血管内皮前駆細胞〔ＣＥＰ〕、各種幹細胞等（本明細書において、まとめて「希少細胞」という。）は病態に応じて全血中に極めて稀に存在する細胞である。希少細胞の検出は臨床的な有用性が明らかであるにもかかわらず、その検出は極めて難しい。近年様々な細胞分離手法を応用してその検出が試みられ製品化がなされている。
【０００３】
例えば、特許文献１では、複数のマイクロチャンバーを備えたマイクロチャンバーチップの各マイクロチャンバー内に細胞を収容し、収容された複数の細胞中に特定の細胞が存在するか否かを確認することが開示されている。
【０００４】
特許文献１の細胞展開用デバイス１０では、図３に示したように、マイクロチャンバーチップ２上に広がる細胞展開部Ａに、縦方向に約５０個、横方向に約２００個のマイクロチャンバー４が形成されている。
【０００５】
このように複数のマイクロチャンバー４が形成された細胞展開用デバイス１０では、マイクロチャンバーチップ２上に細胞懸濁液を添加・滴下することが開示されているが、各マイクロチャンバー４にどのように添加・滴下するかに関しては、詳細が記載されていない。推測するのみである。
【０００６】
例えば、このような細胞展開用デバイス１０では、図４の断面図に例示したように、平板状のマイクロチャンバーチップ２との間に流路５を形成する板状の流路形成枠体８を配置し、この流路５と連通するように流路形成枠体８には入口部３と出口部７を形成し、入口部３から出口部７に向かって流路５内に細胞懸濁液を導入することにより、マイクロチャンバーチップ２上に細胞懸濁液を展開することが考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】ＷＯ２０１０／０２７００３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、このようにして細胞懸濁液を導入するとしても、細胞展開用デバイス１０の流路５は、図５に模式的に示したように、細胞懸濁液が導入される入口部３や出口部７の口径が、細胞展開部Ａの幅Ｂよりも狭く形成されている。このような場合には、流路５において液体の流速にばらつきが生じてしまうため、細胞懸濁液を流路全体に渡って均一に展開する作業は困難になってしまう。
その詳細な理由は以下の通りである。
【０００９】
すなわち、細胞展開用デバイス１０の流速の大きさを大別すれば、例えば図５において、矩形の細胞展開部Ａは流路幅が一定であり、しかも流路の大部分を占めているため、矩形の細胞展開部Ａは平均的な流速を示すことになる。この矩形の細胞展開部Ａを第１領域Ｄとする。
【００１０】
また、例えば図５において、入口部３の直下から矩形の細胞展開部Ａに向かって流路幅が次第に広くなる上流側の三角形状部分（第２領域Ｃ1とする）では、細胞懸濁液の流速は平均的な流速より速くなる。これと同様に、細胞展開部Ａの終端部から出口部７に向かって流路幅が次第に狭くなる下流側の三角形状部分（第２領域Ｃ2とする）も平均的な流速より速くなる。
【００１１】
さらに、図５における細胞展開部Ａより幅方向の外側部分（第３領域Ｅ1および第３領域Ｅ2とする）は、流路が側壁部分に近くなるので、平均的な流速に比べて遅くなる。
このように、細胞展開用デバイス１０では、流路５における全体の流速にばらつきが生じてしまうことから、細胞懸濁液を流路全体に渡って略均一に展開することは困難である。
【００１２】
一方、希少細胞の検出にあたっては、細胞懸濁液をマイクロチャンバーチップ２上に展開した後に、マイクロチャンバー４内に入り損ねた細胞の位置を移動させて近隣のマイクロチャンバー４内に落とし込むため、短時間の間欠送液、いわゆるワンショット送液を行ったり、あるいは、１つのマイクロチャンバー４内に重層して収容されてしまった細胞の一部を、マイクロチャンバー４外に出すため、ワンショット送液より大きな流速で洗浄液の連続送液を行うことなどが行われている。
【００１３】
ところが、このような場合に、細胞展開用デバイス１０の位置によって流速にばらつきが生じてしまうと、保持させたい希少細胞が保持されずに剥離したり、あるいはマイクロチャンバー４内で細胞が複数個重なったりして、検出対象である細胞の検出性や回収数の低下が生じさせたりすることが考えられる。
【００１４】
このような問題は、細胞展開時にも生じるが、ワンショット送液時や連続送液時に生じ易い。
【００１５】
本発明は、このような実情に鑑み、特に、細胞懸濁液を展開したり、ワンショット送液あるいは連続送液などを行った場合であっても、必要な細胞がマイクロチャンバーより剥離したり、マイクロチャンバー内の複数個の細胞が重なってしまうことがなく、検出対象である細胞の検出性や回収率を向上させることができる細胞展開用デバイスを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、鋭意検討した結果、細胞展開用デバイス内に生じる流速分布に違いが存在することに着目し、この流速分布を全体的に平均化することによって細胞の回収率を著しく向上させ得ることを見出し、本発明の完成に至った。
【００１７】
すなわち、本発明は、下記［１］〜［３］に示される細胞展開用デバイスを提供する。
［１］
複数のマイクロチャンバーを備えた細胞展開領域部が形成されたマイクロチャンバーチップと、
前記マイクロチャンバーと一体に設けられ、前記複数のマイクロチャンバー上に平面方向に広がる流路を形成する流路形成枠体と、
前記流路形成枠体に設けられ、前記マイクロチャンバー上の流路に細胞懸濁液を流入させる入口部と、
前記流路形成枠体に設けられ、前記マイクロチャンバー上の流路から細胞懸濁液を流出させる出口部と、を有する細胞展開用デバイスであって、
前記細胞展開領域部の予め設定された形状において、細胞懸濁液が平均的速度で流れる領域を第１領域、前記第１領域より細胞懸濁液が速く流れる領域を第２領域、前記第１領域より細胞懸濁液が遅く流れる領域を第３領域とした場合に、
前記第２領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さを前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーよりも深くするとともに、前記第３領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さを前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーよりも浅くした、細胞展開用デバイス。
【００１８】
［２］
前記第２領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さは、前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの６／５〜１０／５の深さである、［１］に記載の細胞展開用デバイス。
【００１９】
［３］
前記第３領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの深さは、前記第１領域に対応する位置に形成されたマイクロチャンバーの１／５〜４／５の深さである、［１］または［２］に記載の細胞展開用デバイス。
【００２０】
［４］
前記マイクロチャンバーの内径が２０〜５００μｍである、［１］〜［３］のいずれかに記載の細胞展開用デバイス。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、各マイクロチャンバーに細胞懸濁液中の細胞を適切に捕捉させることができる。また、細胞懸濁液を展開した後に、ワンショット送液あるいは連続送液など各種送液を行ったとしても、局所的な位置でマイクロチャンバーから細胞が剥離したり、細胞が複数個重なったりしてしまうという不具合を可及的に防止することができる。
【００２２】
これにより、検査対象である細胞の検出性を良好にし、かつ細胞の回収数を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、本発明の好ましい実施の形態によるマイクロデバイスを示した概略平面図である。
【図２】図２は、図１のＸ−Ｘ線方向の概略断面図である。
【図３】図３は、特許文献１に開示されている細胞展開用デバイスにおいて、細胞懸濁液が流れる部分を模式的に示した概略図である。
【図４】図４は、細胞展開用デバイスをその流路方向に沿って切断した模式的断面図である。
【図５】図５は、細胞展開用デバイスの具体例を模式的に示した上面図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明の好ましい実施の形態に係る細胞展開用デバイスについて図面を参照しながら詳細に説明する。
なお、本発明は、様々な形状の流路を備えた細胞展開用デバイスに適用することができる。すなわち、図３に一例を示した細胞展開用デバイス１０の形状、あるいはそのデバイス１０に具備される流路５の形状、あるいは流路５の経路などは何ら限定されないが、以下の説明では、細胞展開用デバイスの形状と流路の形状が［図５］に近似する場合を例にして説明する。
【００２５】
図１は、本発明の好ましい実施の形態に係る細胞展開用デバイス３０を示した概略図で、図２はその断面図である。なお、図１において、図５と同一の要素については同一符号を付して説明する。
【００２６】
図１および図２に示したように、細胞展開用デバイス３０は、複数のマイクロチャンバー３６が形成されたマイクロチャンバーチップ３１と、複数のマイクロチャンバー３６上に、一つの流路３５が形成されるように、周囲に枠状のシール部材３４を介してマイクロチャンバーチップ３１と一体化された流路形成枠体３２と、流路形成枠体３２に設けられた入口部３と、入口部３から流路３５に導入された細胞懸濁液を流路３５から導出させるために流路形成枠体３２に設けられた出口部７等とを有する。
【００２７】
マイクロチャンバーチップ３１は、マイクロチャンバーアレイ〔ＭＣＡ〕とも称され、この実施の形態では、その表面にマイクロチャンバー３６が１４，０００〜２０，０００個程度形成されている。
【００２８】
マイクロチャンバーとは、一個以上の細胞を「収容」し、「保持」することができる凹状の微細穴をいい、有底であることが好ましい。
ここで、「保持」とは、マイクロチャンバーに収容された細胞が、細胞展開用のマイクロチャンバーチップの流路に対する染色液や洗浄液の送液等によってマイクロチャンバー外に出難いことをいう。
【００２９】
また、マイクロチャンバー３６の開口上部の直径は、２０μｍ〜５００μｍであることが好ましい。該直径が２０μｍ〜５００μｍの範囲内であると、マイクロチャンバー３６内に好適に細胞を収容、保持することができる。
【００３０】
マイクロチャンバー３６の深さは、マイクロチャンバー１つあたりに細胞を１０〜１５個程度収容できることが好ましく、典型的には、マイクロチャンバー３６の深さは、２０μｍ〜５００μｍである。
【００３１】
マイクロチャンバー３６の形状は、底部が平坦な逆円錐形であるが、これに限定されない。
マイクロチャンバーチップ３１の材料としては、例えば、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリジメチルシロキサン〔ＰＤＭＳ〕、ポリメチルメタクリレート〔ＰＭＭＡ〕、環状オレフィンコポリマー〔ＣＯＣ〕などのポリマーが挙げられる。マイクロチャンバーチップ１は、成形されたポリマーに、金属、ガラス、石英ガラスなどからなる基板を貼り合わせたような複数の材料を組み合わせたものであってもよい。
【００３２】
マイクロチャンバーチップ３１の製造方法は、金型基材表面にマイクロチャンバー３６の形状に対応する凸部を有する金型を用いて成形する方法であってもよく、上記ポリマーや金属、ガラスなどからなる基板に直接加工（例えばリソグラフィーによる微細加工、掘削加工、ＬＩＧＡプロセスなど）を施しマイクロチャンバーを形成する方法であってもよいが、生産性の観点から、金型を用いて成形する製造方法が好ましい。
【００３３】
マイクロチャンバーチップ３１は、必要に応じて、表面処理を施すことができる。表面処理としては、例えばプラズマ処理（酸素プラズマ処理など）やコロナ放電処理、または親水性ポリマーやタンパク質、脂質等でコーティングする処理などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
表面処理により、細胞がマイクロチャンバー３６の内壁に吸着することなく底面に集積しやすくなるため、顕微鏡下の明視野による細胞観察が容易となる。
細胞展開用デバイス１０のマイクロチャンバーチップ３１上には、主として細胞懸濁液を流すための流路３５が形成されている。
【００３５】
流路３５は、細胞懸濁液をマイクロチャンバーチップ３１上で流通させることが可能なものであれば、この例に限定されない。
図１および図２に示す流路３５の例では、マイクロチャンバーチップ３１の上面を底面とし、さらに、マイクロチャンバーチップ３１と一体化して設けられた流路形成枠体３２とシール部材３４とにより流路３５が画成されている。
【００３６】
この流路３５は、流路形成枠体３２の入口部３と出口部７とに連通しており、入口部３から流入した細胞懸濁液が矢印で示す方向に流れて、出口部７から導出できるようになっている。
【００３７】
マイクロチャンバーチップ３１と流路形成枠体３２とは、観察やメンテナンスのしやすさの観点から、係合や螺子固定、粘着等の手段で互いに取り付け・取り外し可能に構成されていることが好ましい。
【００３８】
流路３５の高さＴ、すなわち、マイクロチャンバーチップ３１のマイクロチャンバー３６以外の表面部分から天井部までの距離（以下「天井の高さ」ともいう。）は、５０μｍ〜５００μｍであることが好ましい。
【００３９】
天井の高さが５０μｍ〜５００μｍの範囲内であると、マイクロチャンバーチップ３１のマイクロチャンバー３６以外の表面部分に付着した細胞を液流の力で容易に動かすことが可能となる。また、細胞がマイクロチャンバーチップ３１の表面に沈降するまでの時間を短縮することができる。さらに、流路内の細胞の目詰まり等が発生しにくくなり、細胞が円滑に展開することができることから好ましい。
【００４０】
流路形成枠体３２の材料としては、例えばマイクロチャンバーチップ３１と同じ材料を用いることが好ましい。
ここで、流路形成枠体３２に対し、上記のようなマイクロチャンバーチップ３１と同様の表面処理（プラズマ処理やコロナ放電処理の電気的処理や、目的の希少細胞以外の夾雑物と好適に結合するような親水性ポリマー、タンパク質、脂質等によるコーティング処理等）を施してもよい。
【００４１】
細胞懸濁液は、希少細胞を含んでいる可能性がある、例えばヒトなどの血液、リンパ液、組織液、体腔液などであり、希釈液などで適宜希釈されていてもよい。また、細胞懸濁液は、生体由来のものに限定されず、試験・研究等のために人工的に細胞を懸濁させて調製した細胞の分散液であってもよい。特に、血液から赤血球を分離した後の細胞懸濁液を適用することがＣＴＣ等の希少細胞の回収・検出には好適である。
【００４２】
希少細胞としては、例えば癌細胞などが挙げられる。特に、細胞懸濁液が血液または血液由来検体である場合、希少細胞は、ＣＴＣ〔循環腫瘍細胞または循環癌細胞〕、ＣＥＣ〔循環血管内皮細胞〕およびＣＥＰ〔循環血管内皮前駆細胞〕のいずれか一種以上の細胞であってもよい。
【００４３】
このような細胞懸濁液に含まれる種々の細胞の直径は、１０〜１００μｍであることが好ましいが、少なくともマイクロチャンバー３６の直径より小さいことが必要である。
本実施の形態における細胞展開用デバイス１０のマイクロチャンバーチップ３１、流路形成枠体３２、流路３５、細胞懸濁液などの各要素は、上記のような構成になっているが、以下、要部の構成についてさらに説明する。
【００４４】
今、細胞展開用デバイス３０において、マイクロチャンバー３６の深さが全て同じ深さであると仮定する。このような場合に、細胞懸濁液が入口部３から導入されて出口部７で導出される細胞懸濁液の流速は、前述したように、マイクロチャンバーチップ３１の略中央部に位置する第１領域Ｄは、平均的な流速Ｖを示す。
【００４５】
入口部３から第１領域Ｄに続く第２領域Ｃ1では、平均的な流速Ｖより速くなる。また、第１領域Ｄの終端部から出口部７に向かう第２領域Ｃ2も、平均的な流速Ｖより速くなる。
【００４６】
これに対し、第１領域Ｄよりも両幅方向外側部分、すなわち第３領域Ｅ1と第３領域Ｅ2では、シール部材３４の側壁部分が位置するので、平均的な流速Ｖに比べて遅くなる。
そこで、本発明者は、領域Ｄのように平均的な流速Ｖを示す領域を例えば第１領域とし、領域Ｃ1、Ｃ2のように平均的な流速Ｖより速い領域を第２領域とし、領域Ｅ1、Ｅ2のように平均的な流速Ｖより遅い領域を第３領域とした場合に、第２領域に含まれる複数個のマイクロチャンバーの深さを深くし、さらに、第３領域に含まれる複数個のマイクロチャンバーの深さを浅くなるように設定すれば、流路３５の全体の流速が平均化することを見出した。
【００４７】
よって、本実施の形態によれば、平均的な流速Ｖを示す第１領域Ｄに含まれるマイクロチャンバー３６の深さを全て同じ深さとし、第２領域Ｃ1と第２領域Ｃ2では、この領域Ｃ1、Ｃ2に含まれる複数個のマイクロチャンバー３６の深さを、第１領域Ｄのマイクロチャンバー３６の深さに比べて深くなるように設定し、第３領域Ｅ1と第３領域Ｅ2に含まれる複数個のマイクロチャンバー３６の深さを、第１領域Ｄに含まれるマイクロチャンバー３６の深さに比べて浅くなるように設定した。
【００４８】
その具体的な割合として、第２領域Ｃ1、第２領域Ｃ2に含まれるマイクロチャンバー３６の深さは、第１領域Ｄに形成されるマイクロチャンバー３６の深さと比較して、６／５〜１０／５の割合で深く設定することが好ましい。
【００４９】
また、第３領域Ｅ1、第３領域Ｅ2に含まれるマイクロチャンバー３６の深さは、第１領域Ｄに含まれるマイクロチャンバー３６の深さと比較して、１／５〜４／５の割合で浅く設定することが好ましい。
【００５０】
このように、各領域におけるマイクロチャンバー３６の深さを設定すれば、各マイクロチャンバー３６へ適切に細胞を捕捉させることが可能になった。
このような設定であれば、細胞展開を行った後に、各種の送液を行ったとしても、各マイクロチャンバー３６から細胞が剥離したり、細胞が複数個重なってしまうとことが防止された。なお、実験によれば、正常に細胞が格納された部分が全体のどの程度であるかを調べたところ、本実施の形態では、面積比で１５〜２０％、検出感度が向上した。
【００５１】
以上、本発明の好ましい実施の形態について説明したが、本発明は、この実施の形態に何ら限定されない。
例えば、上記実施の形態では、マイクロチャンバーチップ３１の一方側に配置された入口部３と、マイクロチャンバーチップ３１の他方側に配置された出口部７とが直線的な配置で構成されているが、これに代え、例えば、マイクロチャンバーチップ３１の中央部に入口部３が配置され、この入口部３から導入された溶液が、例えば放射状に広がり、そして１あるいは複数個設けられた出口部から溶液が導出されるような流路を備えた細胞展開用デバイスにも適用可能である。
【００５２】
本発明は、要は、通常は、流速が速くなる部分のマイクロチャンバー３６の深さを浅くし、これに対し流速が遅くなる部分のマイクロチャンバー３６の深さを深くなるように設定すれば良く、平面視でみる流路の形状に何ら限定されない。
【実施例】
【００５３】
以下、本発明についての実施例を挙げてさらに詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されない。
【００５４】
（１）細胞懸濁液の調整
リン酸緩衝液（ＰＢＳ）にヒト白血病血球細胞（ＣＥＭ）を２×１０5個添加し、さらにヒト乳癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）を１０3個添加し、最終体積が６８μｌとなるように調整した。
【００５５】
（２）細胞展開デバイスの作成
マイクロチャンバーが形成されているマイクロチャンバーチップの表面に、縦１５ｍｍ、横６８ｍｍ、高さ１００μｍの流路を形成するように、入口部と出口部を備えたアクリル（ＰＭＭＡ）製の流路形成部材とマイクロチャンバーチップを厚み１００μｍのシール部材（両面シール）で貼り合わせ、図２のような細胞展開用デバイスを形成した。
【００５６】
（３）細胞染色溶液の調整
３％ＢＳＡおよび１％Ｔｗｅｅｎ含有ＰＢＳ溶液にＡＬｅｘａ６４７標識抗ヒトサイトケラチン抗体を１μｇ/ｍｌ添加し、細胞染色液とした。
【００５７】
（４）細胞検出工程
上記細胞展開用デバイスを用いて、入口部側から３０％エタノール溶液を流速１ｍｌ／ｍｉｎで１５０μｌ注入し、続けてＰＢＳ溶液４５０μｌを１ｍｌ／ｍｉｎで注入し、マイクロチャンバー内の気泡抜きを行った。次に調整した細胞懸濁液を６８μｍを入口部側から流速１ｍｌ／ｍｉｎで注入し、細胞展開用デバイスに細胞導入した。１分間静置し細胞を自重させた後、間欠送液を連続的に１０回行い、細胞をマイクロチャンバーへ導入した。次に、細胞染色溶液１５０μｌを流速１００μｌ／ｍｉｎで送液し、３０分静置して染色反応を行い、ＰＢＳ４５０μｌを１００μｌ／ｍｉｎで送液して染色試薬を除去した。最後に蛍光顕微鏡を用いて波長６５０ｎｍで励起したマイクロチャンバー内の細胞数をカウントし、検出した細胞数とした。
【００５８】
上記細胞展開用デバイスへ入口部３から試薬を注入し、マイクロチャンバー内の気泡抜き工程、細胞導入工程、細胞をマイクロチャンバー内に格納する工程、細胞を染色する工程を経て、蛍光顕微鏡でマイクロチャンバー内に格納されたＭＤＡ−ＭＢ２３１の細胞数を算出した。また、流路壁面から１ｍｍ以内のマイクロチャンバー内の細胞を観察したところ、細胞の重なりが観察され、流路拡大部および流路縮少部のマイクロチャンバー内の細胞を観察すると、細胞剥離が認められた。
【００５９】
［実施例］
流路幅が徐々に広がるインレット部（第２領域Ｃ1）および流路幅が徐々に狭まるアウトレット部（第２領域Ｃ2）には、開口部が１２０μｍ、底面が９０μｍ、深さ１００μｍのマイクロチャンバーが配置され、流路幅が一様になる中央部（第１領域Ｄ1）には、開口部が１２０μｍ、底面が９０μｍ、深さ５０μｍのマイクロチャンバーが配置され、開口部が１２０μｍ、底面が９０μｍ、深さ１０μｍのマイクロチャンバーが流路壁面から１ｍｍまでの範囲に配置され（第３領域Ｅ1、Ｅ2）、流路高さが１００μｍのマイクロデバイスを用いた。
【００６０】
上記インレット部側から試薬を注入し、マイクロチャンバー内の気泡抜き工程、細胞導入工程、細胞をマイクロチャンバー内に格納する工程、細胞を染色する工程を経て、蛍光顕微鏡でマイクロチャンバー内に格納された細胞数を算出し、比較例の細胞数と比較したところ、細胞数が１５％増加していた。
【００６１】
［比較例］
開口部が１２０μｍ、底面が９０μｍ、深さ５０μｍのマイクロチャンバーが流路全体に配置され、流路高さは１００μｍのマイクロデバイスを用いた。
なお、比較例での、マイクロチャンバーの深さは全て９０μｍとした。
【符号の説明】
【００６２】
３          入口部
７          出口部
３０        細胞展開用デバイス
３２        流路形成部材
３５        流路
３６        マイクロチャンバー
Ａ          細胞展開部
Ｃ1、Ｃ2    第２領域
Ｄ          第１領域
Ｅ1、Ｅ2    第３領域
Ｔ          流路の高さ
【図１】
2015122987.tif 000003
【図２】
2015122987.tif 000004
【図３】
2015122987.tif 000005
【図４】
2015122987.tif 000006
【図５】
2015122987.tif 000007