(57)【要約】【課題】白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより善玉アディポカインの産生を促進する、あるいは、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進することにより、生体内の脂肪の蓄積を抑制して、糖尿病や高血圧、脂質代謝異常症、動脈硬化症等の生活習慣病や高血圧や高脂血症、耐糖能障害等のリスクファクターが一個人に集積した状態であるメタボリックシンドロームの予防や治療に有用である脂肪蓄積抑制剤、及び該脂肪蓄積抑制剤を含有する飲食品、飼料、医薬等の脂肪蓄積抑制用製品を提供することを課題とする。【解決手段】バターオイルを有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。本発明の脂肪蓄積抑制剤は、哺乳類の乳を原料としているため、簡便且つ経済的に製造することができ、日常的に安全に長期間摂取することが可能である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バターオイルを有効成分とする脂肪蓄積抑制剤。
【請求項２】
前記バターオイルが牛乳由来であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項３】
前記バターオイルを一日あたり５００ｍｇ〜４０００ｍｇ投与することを特徴とする請求項１乃至２に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項４】
脂肪蓄積抑制効果が善玉アディポカインの分泌を促進することを特徴とする請求項１乃至３に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項５】
脂肪蓄積抑制効果がエネルギー代謝を亢進することを特徴とする請求項１乃至３に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項６】
脂肪蓄積抑制効果が、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することを特徴とする請求項１乃至４に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項７】
脂肪蓄積抑制効果が、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進することを特徴とする請求項１乃至３、５に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項８】
脂肪蓄積抑制効果が、褐色脂肪細胞を活性化することを特徴とする請求項１乃至３、５に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を含むことを特徴とする脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料又は脂肪蓄積抑制用医薬品。
【請求項１０】
請求項１乃至８のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を経口摂取することによる脂肪の蓄積を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより善玉アディポカインの産生を促進する作用や、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進する作用を有し、生体内での脂肪蓄積抑制効果に優れ、メタボリックシンドロームの予防や治療に有用で、安定性及び安全性に優れた脂肪蓄積抑制剤に関する。本発明は、さらに該脂肪蓄積抑制剤を含有する、脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料又は脂肪蓄積抑制用医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、我が国のみならず世界的な、生活習慣、特に、食習慣の変化に伴い、先進国を中心とした糖尿病や高血圧、脂質代謝異常症、動脈硬化症等の疾患の増加が大きな社会問題となっている。また、我が国では、循環器系の疾患である心血管疾患と脳血管疾患が死因の約３分の１を占め、その数が年々増加し医療費を圧迫しているため、国政レベルの対策が講じられている。このような生活習慣に起因する疾病は、我が国では生活習慣病と呼ばれており、生体内での過剰な脂肪蓄積がその主要な要因一つと考えられている。また、過剰な脂肪蓄積に伴う肥満に加え、高血圧や高脂血症、耐糖能障害等のリスクファクターが一個人に集積した状態はメタボリックシンドロームとして、広く認識されており、最近では、ヒト以外の哺乳動物、特に、家庭で飼育されているペット等においても、生体内での過剰な脂肪の蓄積が寿命を短縮させることが、動物愛護の観点から大きな社会問題となっている。
【０００３】
白色脂肪組織は白色脂肪細胞から構成されており、白色脂肪細胞は生体内の過剰なエネルギーを脂肪として蓄える働きを有する。また、白色脂肪細胞に脂肪が蓄積して肥大化するとともに、白色脂肪細胞が分化し、その数が増加した状態は肥満と呼ばれている。したがって、白色脂肪前駆細胞から白色脂肪細胞への分化を抑制し、白色脂肪細胞の数を減少させることによって、生体内の過剰な脂肪の蓄積を抑制することが可能である。また、白色脂肪細胞はアディポネクチンやＴＮＦ−α、レジスチンなどのアディポカインや遊離脂肪酸をはじめとする様々な物質を分泌することが知られている。最近の研究では、肥大化した脂肪細胞のアポトーシスを促進したり、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより、肥大化した脂肪細胞を小型の脂肪細胞に置き換えることによって、アディポネクチン等、インスリン抵抗性を改善する善玉アディポカインの分泌を促進し、ＴＮＦ−αやレジスチン等、インスリン抵抗性を惹起する悪玉アディポカインや遊離脂肪酸等の分泌を抑制して、生体内の過剰な脂肪蓄積を抑制できることが報告されている（特許文献１、２）。
また、褐色脂肪細胞は、白色脂肪細胞と同様に脂肪を貯蔵するものの、ミトコンドリアに存在する脱共役タンパク質１（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １：ＵＣＰ１）の働きにより、電子伝達系におけるＡＴＰ合成を経ずに脂肪を熱へ変換する。生体内では、白色脂肪細胞によるエネルギーの貯蔵ならびにＡＴＰ合成系を介したエネルギーの補給と、褐色脂肪細胞の熱産生によるエネルギーの消費により、全身のエネルギー消費や体脂肪の調節が行われていると考えられている。最近の研究では、褐色脂肪細胞には胚発生初期時にすでに細胞運命が決定している「既存型」と成人において様々な環境要因等により白色脂肪細胞から分化誘導される「誘導型」の２種類が存在することが分かっている（非特許文献１）。ヒトでは、「既存型」の褐色脂肪細胞は、肩甲骨周辺と首の後ろ、わきの下など限られた場所に少量存在し、加齢とともに減少するが、長期の寒冷刺激やＰＰＡＲγアゴニストの投与などの環境要因等により、成人の白色脂肪組織に存在する白色脂肪前駆細胞が「誘導型」の褐色脂肪細胞に分化することが報告されている。したがって、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進して、生体における過剰な脂肪の蓄積を抑制し、メタボリックシンドローム等を予防または改善することが可能である。
【０００４】
従来から、生体内の脂肪の蓄積を抑制する医薬として、肥満治療薬であるオルリスタットや高脂血症の治療薬であるフィブラートなどが知られている。しかし、これらの医薬品を用いた場合、かゆみや食欲不振などの副作用を伴うことがある。また、これらの物質を使用するには医師による処方箋が必要であり、安全性やコストの面から現在のところ飲食品に添加できない状況にある。さらに、生体内の脂肪の蓄積を抑制するためには、生活習慣、特に、食習慣を見直すことが重要であることから、日常的に安全に摂取することが可能で、長期間摂取しても安全上問題のない、脂肪蓄積抑制効果が期待できるような飲食品や飼料の開発が望まれている。
【０００５】
牛乳、乳製品は古来より食されてきたことから、日常的に安全に長期間摂取することが可能な食品であり、それらの摂取によって、生体内の脂肪の蓄積が抑制することが疫学調査により報告されている。また、乳に含まれるタンパク質であるκ-カゼインやラクトフェリンには、それぞれ、脂肪細胞における脂肪の蓄積を抑制することや脂質代謝を改善することが知られている（特許文献３、４）。しかしながら、バターオイルに、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより善玉アディポカインの産生を促進する作用や、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進する作用を介した、優れた生体内の脂肪蓄積を抑制する効果があることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−２８０４９号公報
【特許文献２】特開２０１１−１５３０９３号公報
【特許文献３】特開２００９−１９０９８０号公報
【特許文献４】ＷＯ２００３／０５７２４５
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｋａｊｉｍｕｒａ，  Ｓ.  ｅｔ．  ａｌ．：  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．,  ２０１０，１１：２５７−２６２，  ２０１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより善玉アディポカインの産生を促進する作用や、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進する作用に優れ、生体内での脂肪の蓄積を抑制し、メタボリックシンドロームの予防または改善に有用で、安定性及び安全性に優れた脂肪蓄積抑制剤、及び該脂肪蓄積抑制剤を配合した脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料又は脂肪蓄積抑制用医薬品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記の課題を解決するため鋭意検討を進めたところ、バターオイルに、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより善玉アディポカインの産生を促進する作用や、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進する作用を介した、顕著な生体内の脂肪蓄積抑制効果があることを見出した。
すなわち本発明は、以下の様態を含むものである。
（１）バターオイルを有効成分とする脂肪蓄積抑制剤。
（２）前記バターオイルが牛乳由来であることを特徴とする上記（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（３）前記バターオイルを一日あたり５００ｍｇ〜４０００ｍｇ投与することを特徴とする上記（１）乃至（２）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（４）脂肪蓄積抑制効果が善玉アディポカインの分泌を促進することを特徴とする上記（１）乃至（３）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（５）脂肪蓄積抑制効果がエネルギー代謝を亢進することを特徴とする上記（１）乃至（３）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（６）脂肪蓄積抑制効果が、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することを特徴とする上記（１）乃至（４）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（７）脂肪蓄積抑制効果が、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進することを特徴とする上記（１）乃至（３）、（５）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（８）脂肪蓄積抑制効果が、褐色脂肪細胞を活性化することを特徴とする上記（１）乃至（３）、（５）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（９）上記（１）乃至（８）のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を含むことを特徴とする脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料又は脂肪蓄積抑制用医薬品。
（１０）上記（１）乃至（８）のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を経口摂取することによる脂肪の蓄積を抑制する方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、白色脂肪前駆細胞から小型の白色脂肪細胞への分化を促進することにより善玉アディポカインの産生を促進する作用や、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進する作用が顕著であり、脂肪の蓄積を抑制して、糖尿病や高血圧、脂質代謝異常症、動脈硬化症等の生活習慣病や高血圧、高脂血症、耐糖能障害等のリスクファクターが一個人に集積した状態であるメタボリックシンドロームの予防や治療に有用である。また、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、哺乳類の乳を原料としているため、簡便且つ経済的に製造することができ、日常的に安全に長期間摂取することが可能である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の脂肪蓄積抑制剤の有効成分であるバターオイルは、乳等省令にて定義されるものであり、公知の方法で調製されたものを使用することが可能である。例えば、生乳から分離したクリームを遠心分離等により脱水して脂肪分を９９．３重量％以上に濃縮したり、常法により製造されたバターを６０℃前後で加温融解した後に遠心分離等によりほとんどすべての水相成分を除去し、脂肪分を９９．３重量％以上に濃縮することにより、バターオイルを調製することが可能であり、必要に応じて炭酸水素ナトリウムや水酸化ナトリウム等のアルカリ製剤を用いて中和することもできる。また、上記のように調製したバターオイルは、凍結乾燥や噴霧乾燥等により乾燥することも可能である。
【００１２】
本発明のバターオイルは、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ等の哺乳類の乳から調製されるものや、市販されているバターオイル等、すべてのバターオイルを使用することが可能である。
【００１３】
本発明のバターオイルは、そのまま脂肪蓄積抑制剤として使用してもよいが、必要に応じて、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に製剤化して用いることも出来る。また、凍結乾燥や噴霧乾燥等により乾燥したバターオイルについても、そのまま脂肪蓄積抑制剤として使用することも可能であり、常法に従い、製剤化して用いることもできる。
さらに、これらを製剤化した後に、これを栄養剤やヨーグルト、飲料、ウエハース等の飲食品、栄養組成物、飼料及び医薬品に配合することも可能である。
【００１４】
本発明の脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料及び脂肪蓄積抑制用医薬品とは、このバターオイルのみを含む場合の他に、安定剤や糖類、脂質、フレーバー、ビタミン、ミネラル、フラボノイド、ポリフェノール等、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる原材料等を含有することができる。また、本発明の有効成分であるバターオイルに加えて、脂肪蓄積抑制作用を示す他の成分、例えば、κ−カゼインやラクトフェリン等とともに使用することも可能である。
また、そのような脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料又は脂肪蓄積抑制用医薬品を原材料として、他の飲食品等に通常含まれる原材料等を配合して調製することも可能である。
【００１５】
脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料及び脂肪蓄積抑制用医薬品におけるバターオイルの配合量については、バターオイルが乳に由来する食品であることから、特に制限はなく、多量の摂取によっても安全性に全く問題はない。但し、本発明で白色脂肪前駆細胞や褐色脂肪前駆細胞等に作用して脂肪蓄積抑制効果を発揮させるためには、成人一人一日あたり本発明のバターオイルを５００ｍｇから４０００ｍｇ、好ましくは、５００ｍｇから２０００ｍｇ経口摂取できるように、飲食品や栄養組成物、飼料及び医薬等への配合量を調整すれば良い。
【００１６】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、上記の有効成分に適当な助剤を添加して任意の形態に製剤化して、経口投与が可能な脂肪蓄積抑制用組成物とすることができる。製剤化に際して、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤又は賦形剤を用いることができる。賦形剤としては、例えばショ糖、乳糖、デンプン、結晶性セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシルメチルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組み合わせて加えることができる。
【００１７】
以下に実施例、試験例を示し、本発明について詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１８】
（バターオイルの製造）
遠心分離機を用いて、生乳から分離したクリーム（脂肪分４７％）１０ｋｇの脂肪分を濃縮して、脂肪分８０％のクリームを調製した。次に、調製したクリームをホモゲナイザーで均質処理した後、遠心分離機と真空チャンバーを用いて脱水処理して、本発明のバターオイル（実施例品１）４．６ｋｇを得た。このようにして得られたバターオイルは、乳脂肪分が９９．８％であり、そのまま本発明の脂肪蓄積抑制剤として使用可能である。
【００１９】
［試験例１］
白色脂肪前駆細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞の白色脂肪細胞への分化に対する、バターオイルの効果を調べた。
３Ｔ３-Ｌ１細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する高グルコースダルベッコ変法基礎培地（ＤＭＥＭ）で培養した。コンフルーエントに達してから２日後に、白色脂肪細胞への分化を誘導する物質であるインスリン、イソブチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、デキサメタゾン（ＤＥＸ）を、それぞれ１０μｇ／ｍｌ、０．５ｍＭ、０．２５μＭ含む１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭに交換して２日間培養した。次に、インスリンを５μｇ／ｍｌ含む１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭに交換し、さらに６日間培養した。また、白色脂肪細胞への分化誘導開始時より、上記培地に実施例品１のバターオイル（終濃度：１５０μg／ｍｌ、エタノールに溶解）を添加した。培養後、細胞を冷ホルマリン／ＰＢＳで固定し、０．５％  Ｏｉｌ  ｒｅｄ  Ｏ染色液を添加し脂肪分を染色した。ＰＢＳで洗浄後、白色脂肪細胞の写真を撮影して、画像解析ソフト（ＩｍａｇｅＪ、ＮＩＨ）を用いて脂肪細胞の面積を測定するとともに、イソプロパノールにより抽出した色素の５１０ｎｍにおける吸光度を測定して細胞内の脂肪蓄積量を半定量化し、白色脂肪細胞への分化の程度を確認した。また、脂肪細胞分化のマスター因子であるＰｐａｒγ２遺伝子の発現を調べるために、培養後の細胞からＴｒｉｚｏｌ試薬（ライフテクノロジー社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。逆転写反応はＨｉｇｈ―Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ライフテクノロジー社製）を用いた。得られたｃＤＮＡを使用して、ＳＹＢＲ  Ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  ＴａｑＩＩ（タカラバイオ社製）でリアルタイムＰＣＲを用い、Ｐｐａｒγ２遺伝子の発現量を測定した。なお、遺伝子発現量を評価するための内部標準として、１８Ｓ遺伝子の発現量を使用し、解析には以下のプライマーを用いた。
Ｐｐａｒγ２遺伝子の発現解析に用いたプライマー
Ｐｐａｒγ２−Ｆ；ｔｇｃｔｇｔｔａｔｇｇｇｔｇａａａｃｔｃｔｇ
Ｐｐａｒγ２−Ｒ；ｃｔｇｔｇｔｃａａｃｃａｔｇｇｔａａｔｔｔｃｔｔ
その結果、表１から表３に示したように、バターオイルの添加により、脂肪蓄積量とＰｐａｒγ２遺伝子の発現量が有意に高値を示したものの、コントロールに比べ、白色脂肪細胞の平均面積が有意に減少した。したがって、本発明のバターオイルは白色脂肪前駆細胞から白色脂肪細胞への分化を促進するものの、分化した白色脂肪細胞は小型であることがわかった。
【００２０】
【表１】
2015117207.tif 000002
数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝３）を示す。
※は、コントロール（無添加）と比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００２１】
【表２】
2015117207.tif 000003
数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝４）を示す。
※は、コントロール（無添加）と比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００２２】
【表３】
2015117207.tif 000004
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝３）を示す。
※は、コントロール（無添加）と比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００２３】
［試験例２］
白色脂肪前駆細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞の褐色脂肪細胞への分化に対する、バターオイルの効果を調べた。
３Ｔ３-Ｌ１細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭで培養した。コンフルーエントに達してから２日後に、褐色脂肪細胞へ分化させるために、インスリン、ＩＢＭＸ、ＤＥＸ、トリヨードサイロニン（Ｔ３）をそれぞれ１０μｇ／ｍｌ、０．５ｍＭ、０．２５μＭ、５０ｎＭ含む１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭに交換して２日間培養した。次に、インスリン、ＩＢＭＸ、Ｔ３、ロジグリタゾン、Ａ−８３−０１をそれぞれ５μｇ／ｍｌ、０．５ｍＭ、５０ｎＭ、１μＭ、２μＭ含む１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭに交換し、さらに６日間培養した。また、褐色脂肪細胞への分化誘導開始時より上記培地に、実施例品１のバターオイル（終濃度：１５０μg／ｍｌ、エタノールに溶解）を添加した。８日間培養した細胞を、インスリンを含む１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭにイソプロテノール（Ｉｓｏ）を１０μＭ添加した培地で４時間培養した後、全ＲＮＡの抽出ならびにｃＤＮＡの合成を行った。その後、リアルタイムＰＣＲを行い、褐色脂肪細胞特異的遺伝子であるＵＣＰ１遺伝子の発現量を測定した。なお、解析には以下のプライマーを用いた。
ＵＣＰ１遺伝子の発現解析に用いたプライマー
ＵＣＰ１−Ｆ；ｃｃａａａｇｔｃｃｇｃｃｔｔｃａｇａ
ＵＣＰ１−Ｒ；ｇｇｃａａｔｃｃｔｔｃｔｇｔｔｔｔｔｇｃ
その結果、表４から明らかなように、バターオイルはＵＣＰ１遺伝子の発現量を有意に増加させた。したがって、本発明のバターオイルは白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進することがわかった。
【００２４】
【表４】
2015117207.tif 000005
数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝４）を示す。
※は、コントロール（無添加）と比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００２５】
［試験例３］
褐色脂肪細胞の活性化に対する、バターオイルの効果を調べた。
褐色脂肪前駆細胞であるＨＢ２細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭで培養した。コンフルーエントに達してから２日後に、２０ｎＭのインスリンを含む１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭに、実施例品１のバターオイル（終濃度：１５０μg／ｍｌ、エタノールに溶解）を添加した培地に交換して８日間培養した後、上記培地に１０μＭのＩｓｏを添加した培地に交換し、さらに４時間培養した。その後、試験例２と同様の方法で全ＲＮＡを抽出してＵＣＰ１遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲにて解析した。なお、遺伝子発現量を評価するための内部標準として、ＴＡＴＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ遺伝子の発現量を使用した。その結果、表５に示したように、バターオイルは褐色脂肪細胞のＵＣＰ１遺伝子の発現を有意に増加させた。したがって、本発明のバターオイルは褐色脂肪細胞を活性化することがわかった。
【００２６】
【表５】
2015117207.tif 000006
数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝４）を示す。
※は、コントロール（無添加）と比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００２７】
［試験例４］
善玉アディポカインであるアディポネクチンの分泌と褐色脂肪細胞の活性化に対する、バターオイルの効果を調べた。
６週齢の雄性Ｆｉｓｈｅｒラットを８匹ずつ、実施例品１のバターオイルをラット体重１ｋｇあたり５００ｍｇ投与する群と実施例品１のバターオイルをラット体重１ｋｇあたり１５００ｍｇ投与する群に分け、１日１回ゾンデで経口投与し、溶媒である水のみを投与する群（コントロール）とアディポネクチンの分泌と褐色脂肪細胞の活性化に対する効果を比較検証した。なお、すべてのラットには、高脂肪食を４週間自由に摂取させた。試験終了後に、血液に分泌されたアディポネクチン量をマウス／ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬製）を用いて測定した。また、摘出した腸管膜脂肪を用いて、試験例２と同様にＵＣＰ１遺伝子の発現量を解析した。その結果を、表６、７に示す。バターオイルを体重１ｋｇ当たり５００ｍｇ以上投与した群では、ラット血清中のアディポネクチン濃度が有意に増加した。また、腸間膜脂肪におけるＵＣＰ１遺伝子の発現量は、バターオイルを体重１ｋｇ当たり５００ｍｇ以上投与した群で、コントロールに比べ有意に増加した。したがって、バターオイルは、優れたアディポネクチン分泌促進効果を有するとともに、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進することがわかった。また、その効果は、ラット体重１ｋｇあたり５００ｍｇ以上摂取した場合に認められることが明らかとなった。
【００２８】
【表６】
2015117207.tif 000007
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝８）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００２９】
【表７】
2015117207.tif 000008
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝８）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【実施例２】
【００３０】
（脂肪蓄積抑制用カプセル剤の調製）
表８に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、本発明の脂肪蓄積抑制用カプセル剤を製造した。
【００３１】
【表８】
2015117207.tif 000009
【実施例３】
【００３２】
（脂肪蓄積抑制用液状栄養組成物の調製）
実施例品１のバターオイル５０ｇと乳化剤２０ｇを４，９３０ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで３０分間撹拌混合して５０ｇ／５ｋｇのバターオイル溶液を得た。このバターオイル溶液５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１７．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機 (第１種圧力容器、ＴＹＰＥ: ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製)で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の脂肪蓄積抑制用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。
【実施例４】
【００３３】
（脂肪蓄積抑制用飲料の調製）
脱脂粉乳３００ｇを４０８ｇの脱イオン水に溶解した後、実施例品１のバターオイル１ｇと乳化剤１ｇを溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の脂肪蓄積抑制用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。
【実施例５】
【００３４】
（イヌ用脂肪蓄積抑制用飼料の調製）
実施例品１のバターオイル２ｋｇと乳化剤１ｋｇを９７ｋｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３，６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合して２ｇ／１００ｇのバターオイル溶液を得た。このバターオイル溶液１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明の脂肪蓄積抑制用飼料１００ｋｇを製造した。