(57)【要約】【課題】磁性粒子を効率よく除去できる、標的物質の精製装置及び精製方法を提供すること。【解決手段】内部にプラグ状の液体を含み、長手方向を有するキャピラリーを装着可能な装着部と、前記キャピラリーに磁力を印加し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を保持可能な磁力印加機構と、前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制限する制御機構と、前記制御機構によって前記磁性体の移動を制限しながら、前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、を有する、標的物質の精製装置とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
内部にプラグ状の液体を含み、長手方向を有するキャピラリーを装着可能な装着部と、
前記キャピラリーに磁力を印加し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を保持可能な磁力印加機構と、
前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制限する制御機構と、
前記制御機構によって前記磁性体の移動を制限しながら、前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、
を有する、標的物質の精製装置。
【請求項２】
内部にプラグ状の液体を含み、長手方向を有するキャピラリーと、
前記キャピラリーに磁力を印加し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を保持可能な磁力印加機構と、
前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制限する制御機構と、
前記制御機構によって前記磁性体の移動を制限しながら、前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、
を有する、標的物質の精製装置。
【請求項３】
前記標的物質が核酸であって、
前記キャピラリーが、
オイルからなる第１プラグ、
オイルと相分離し、核酸を着脱可能に保持する磁性体を洗浄する洗浄液からなる第２プラグ、
オイルからなる第３プラグ、
オイルと相分離し、前記核酸を着脱可能に保持する磁性体から前記核酸を溶出する溶出液からなる第４プラグ、
オイルからなる第５プラグ、
を、順に内部に備えている、請求項１または２に記載の標的物質の精製装置。
【請求項４】
前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で、前記磁性体を移動させる移動機構を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の標的物質の精製装置。
【請求項５】
前記磁力印加機構は永久磁石を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の標的物質の精製装置。
【請求項６】
前記送液機構が加圧手段を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の標的物質の精製装置。
【請求項７】
前記加圧手段がプランジャーである、請求項６に記載の標的物質の精製装置。
【請求項８】
前記送液機構が吸引手段を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の標的物質の精製装置。
【請求項９】
前記吸引手段が真空ポンプである、請求項８に記載の標的物質の精製装置。
【請求項１０】
前記キャピラリーが、両端に着脱可能な封止手段を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の標的物質の精製装置。
【請求項１１】
標的物質の精製方法であって、
プラグ状の液体を有するキャピラリー内に、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を導入する工程と、
前記キャピラリーの外から磁力を加えて、前記液体内に、前記磁性体を保持する工程と、
前記液体内で前記標的物質を前記磁性体から溶出させる工程と、
前記磁性体の移動を制限しながら、前記標的物質が溶出した前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させ、前記キャピラリーから外に出す工程、
を含む方法。
【請求項１２】
前記標的物質が核酸であって、
前記キャピラリーが、
オイルからなる第１プラグ、
オイルと相分離し、核酸を着脱可能に保持する磁性体を洗浄する洗浄液からなる第２プラグ、
オイルからなる第３プラグ、
オイルと相分離し、前記核酸を着脱可能に保持する磁性体から前記核酸を溶出する溶出液からなる第４プラグ、
オイルからなる第５プラグ、
を、順に内部に備えており、
前記標的物質を着脱可能に保持する磁性体は、第１プラグ側の端から前記キャピラリー内に導入され、
前記磁性体は、前記キャピラリーの外から加えられた磁力によって、前記溶出液に移動し、
前記標的物質は、前記溶出液中で、前記磁性体から溶出し、
前記標的物質が溶出した前記溶出液は、第５プラグ側の端に移動し、当該端から外に出る、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で、前記磁性体を移動させる工程を有する、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記キャピラリー内を加圧することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を、前記キャピラリー長手方向に移動させる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
プランジャーによって加圧する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記キャピラリー内部を吸引することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を、前記キャピラリー長手方向に移動させる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
真空ポンプによって吸引する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記キャピラリーが両端に着脱可能な封止手段を有し、前記キャピラリーを垂直に保持し、前記封止手段を開閉することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標的物質の精製装置及び精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
シリカ粒子等の核酸結合性固相担体とカオトロピック剤を用いて、生体材料からより簡便に核酸を抽出する方法が、Boomらにより報告された（非特許文献１参照）。このBoomらの方法を含め、シリカ等の核酸結合性固相担体とカオトロピック剤を用いて核酸を担体に吸着させ、抽出する方法は、主に、（１）カオトロピック剤存在下、核酸結合性固相担体に核酸を吸着させる工程（吸着工程）、（２）非特異的に結合した夾雑物及びカオトロピック剤を除くため、洗浄液にて核酸の吸着した担体を洗浄する工程（洗浄工程）、および（３）水または低塩濃度緩衝液にて核酸を担体から溶出させる工程（溶出工程）の３工程からなる（特許文献１及び２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１１-１４６７８３号公開公報
【特許文献２】特開２００９−２０７４５９号公開公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】J.Clin.Microbiol.,vol.28 No.3, p.495-503 (1990)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、担体として使用する磁性粒子は一つ一つが非常に小さな微粒子であり、さらにその表面は親水性であるため、外部からの磁力による操作が不十分だと水溶液である溶出液内に一部残留することがある、という課題がある。磁性粒子が溶出液に残留すると、その後の増幅反応の際、検出用の励起光を遮り、反応を検出することを阻害することがある。
【０００６】
そこで、本発明は、磁性粒子を効率よく除去できる、標的物質の精製装置及び精製方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一実施態様は、内部にプラグ状の液体を含み、長手方向を有するキャピラリーを装着可能な装着部と、前記キャピラリーに磁力を印加し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を保持可能な磁力印加機構と、前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制限する制御機構と、前記制御機構によって前記磁性体の移動を制限しながら、前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、を有する、標的物質の精製装置である。
【０００８】
本発明の他の実施態様は、内部にプラグ状の液体を含み、長手方向を有するキャピラリーと、前記キャピラリーに磁力を印加し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を保持可能な磁力印加機構と、前記磁性体のキャピラリー長手方向の移動を制限する制御機構と、前記制御機構によって前記磁性体の移動を制限しながら、前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させる送液機構と、を有する、標的物質の精製装置である。
【０００９】
上記いずれの実施態様においても、前記標的物質が核酸であって、前記キャピラリーが、オイルからなる第１プラグ、オイルと相分離し、核酸を着脱可能に保持する磁性体を洗浄する洗浄液からなる第２プラグ、オイルからなる第３プラグ、オイルと相分離し、前記核酸を着脱可能に保持する磁性体から前記核酸を溶出する溶出液からなる第４プラグ、オイルからなる第５プラグ、を、順に内部に備えていてもよい。また、前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で、前記磁性体を移動させる移動機構を有してもよい。また、前記磁力印加機構は永久磁石を有してもよい。また、前記送液機構が加圧手段を有してもよく、前記加圧手段がプランジャーであってもよい。あるいは、前記送液機構が吸引手段を有してもよく、前記吸引手段が真空ポンプであってもよい。あるいは、前記キャピラリーが、両端に着脱可能な封止手段を有してもよい。
【００１０】
本発明のさらなる実施態様は、標的物質の精製方法であって、プラグ状の液体を有するキャピラリー内に、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を導入する工程と、前記キャピラリーの外から磁力を加えて、前記液体内に、前記磁性体を保持する工程と、前記液体内で前記標的物質を前記磁性体から溶出させる工程と、前記磁性体の移動を制限しながら、前記標的物質が溶出した前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させ、前記キャピラリーから外に出す工程、を含む方法である。本法は、前記標的物質が核酸であって、前記キャピラリーが、オイルからなる第１プラグ、オイルと相分離し、核酸を着脱可能に保持する磁性体を洗浄する洗浄液からなる第２プラグ、オイルからなる第３プラグ、オイルと相分離し、前記核酸を着脱可能に保持する磁性体から前記核酸を溶出する溶出液からなる第４プラグ、オイルからなる第５プラグ、
を、順に内部に備えており、前記標的物質を着脱可能に保持する磁性体は、第１プラグ側の端から前記キャピラリー内に導入され、前記磁性体は、前記キャピラリーの外から加えられた磁力によって、前記溶出液に移動し、前記標的物質は、前記溶出液中で、前記磁性体から溶出し、前記標的物質が溶出した前記溶出液は、第５プラグ側の端に移動し、当該端から外に出る、方法であってもよい。また、前記キャピラリーの長手方向と交わる面内で、前記磁性体を移動させる工程を有してもよい。また、前記キャピラリー内を加圧することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を、前記キャピラリー長手方向に移動させてもよく、プランジャーによって加圧してもよい。あるいは、前記キャピラリー内部を吸引することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を、前記キャピラリー長手方向に移動させてもよく、真空ポンプによって吸引してもよい。あるいは、前記キャピラリーが両端に着脱可能な封止手段を有し、前記キャピラリーを垂直に保持し、前記封止手段を開閉することによって、前記標的物質が溶出した前記液体を前記キャピラリー長手方向に移動させてもよい。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によって、磁性粒子を効率よく除去できる、標的物質の精製装置及び精製方法を提供することが可能になった。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の一実施形態に係る、核酸の精製装置の模式図である。
【図２】本発明の一実施形態に係る、キャピラリー内のプラグ近傍の拡大図である。
【図３】本発明の一実施形態に係る、反応容器と物質抽出用装置を有する核酸の精製装置の模式図である。
【図４】本発明の一実施形態に係る、核酸の精製装置の使用方法を示す模式図である。
【図５】本発明の一実施形態に係る、核酸の精製装置の使用方法について、具体的手順を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的に実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
＝＝標的物質の精製装置＝＝
図１左図に示すように、本発明の標的物質の精製装置８０の一実施形態は、プラグ状の液体１０を有するキャピラリー１２と、キャピラリー１２内で、標的物質を着脱可能に保持する磁性体Ｍと、キャピラリー１２に磁力を印加し、磁性体を保持する磁力印加機構１４と、磁性体のキャピラリー１２長手方向の移動を停止させる制御機構１６と、制御機構１６によって磁性体Ｍの移動を停止させながら、液体をキャピラリー１２長手方向に移動させる送液機構１８と、を有する。
【００１４】
プラグ状の液体１０は、水溶液であることが好ましく、塩溶液、特にバッファーであることが好ましい。キャピラリー１２は、複数のプラグを有していても良いが、その場合、プラグ状の液体とプラグ状の液体を独立に存在させるため、プラグの間に、プラグ状のワックスまたはオイルを設けることが好ましい。
【００１５】
キャピラリー１２は、内部に空洞を有し、当該空洞内に液体を長手方向に流通させることのできるチューブ状の部分（チューブ部とも呼ぶ）を有する。チューブ部は、長手方向を有するが、屈曲してもよい。チューブ部の内部の空洞は、液体がチューブ部内でプラグ形状を維持できれば、大きさ、形状ともに特に限定されない。また、チューブ部の内部の空洞の大きさや長手方向に垂直な断面の形状は、チューブ部の長手方向に沿って変化してもよい。液体がチューブ部内でプラグ形状を維持できるかどうかについては、チューブ部の材質、液体の種類等の条件に依存するので、チューブ部の長手方向に垂直な断面の形状は、液体がチューブ部内でプラグ形状を維持できる範囲内で適宜に設計される。チューブ部の外形の長手方向に垂直な断面の形状も限定されない。さらにチューブ部の肉厚も特に限定されない。チューブ部の内部の空洞の長手方向に垂直な断面が円形である場合、チューブ部の内径（内部の空洞の長手方向に垂直な断面における円の直径）は、例えば、０．５ｍｍ以上３ｍｍ以下とすることができる。チューブ部の内径がこの範囲であると、チューブ部の材質、液体の種類において広範な範囲で液体のプラグを形成しやすいので好ましい。チューブ部の材質は、特に限定されないが、例えば、ガラス、高分子、金属などとすることができる。チューブ部の材質にガラスや高分子などの可視光において透明性を有する材質を選択すると、チューブ部の外部から内部（空洞内）を観察することができるのでより好ましい。また、チューブ部の材質に、磁力を透過する物質や非磁性体を選択すると、チューブ部に磁性粒子Ｍを通過させる場合などに、チューブ部の外から磁力を与えることによってこれを行うことが容易化されるため好ましい。
【００１６】
標的物質は限定されず、核酸（ＤＮＡやＲＮＡなど）やタンパク質などの高分子であっても、化合物などの低分子であっても良い。磁性体Ｍの形状は特に限定されないが、粒子状であることが好ましい。標的物質を着脱可能に保持するため、磁性体Ｍは、標的物質に着脱可能に結合するか、または標的物質に着脱可能に結合する標的物質結合物質を有する。例えば、標的物質が核酸の場合、磁性体Ｍはシリカ粒子などの核酸結合分子を有しても良く、標的物質が抗体の場合、磁性体ＭはProteinAなどの抗体結合分子を有しても良い。
【００１７】
本発明の精製装置８０は、磁力印加機構１４及び制御機構１６を有する磁力印加部２０を備える。キャピラリー１２の外からキャピラリー１２に磁力を印加し、キャピラリー１２内の磁性体Ｍを保持可能で、その磁性体Ｍの移動を制御する磁力印加機構１４は、当業者によって容易に設計されうる。例えば、磁力印加機構１４は永久磁石などの磁力印加体を有し、磁力印加体の磁力によって磁性体Ｍを保持可能である。制御装置１６は、磁性体Ｍのキャピラリー１２長手方向の移動を制御し、任意に停止させることができる。これは、例えば、磁力印加機構１４を移動させ、好ましい位置で停止させることのできる機構を設けることで実現可能となる。また、この制御機構１６は、キャピラリー１２の長手方向と交わる面内、特に直交する面内で、磁性体Ｍを移動させること、すなわち磁性体Ｍを揺動させることができるほうが好ましい。例えば、磁性体Ｍは、距離の近い磁力印加体の方に引き寄せられるため、二つの磁力印加体を設け、一方の磁力印加体がキャピラリーに近接していると、その磁力印加体の側に磁性体Ｍが引き寄せられる。その後、その磁力印加体がキャピラリー１２から離れ、逆側の磁力印加体がキャピラリー１２に近接すると、今度は逆側の磁力印加体に磁性体Ｍが引き寄せられる。これにより、磁性体Ｍを前後方向に移動させることができる。一対の磁力印加体を前後方向に揺動させると、磁性体Ｍが前後方向に往復移動することになる。このように、磁性体Ｍをプラグ状の液体１０中で移動させると、磁性体Ｍに液体が接しやすくなり、液体の洗浄効果や溶出効果が高まる。
【００１８】
この精製装置８０の有する送液機構１８は、プラグ状の液体１０をキャピラリー１２長手方向に移動させ、キャピラリー端部２４から、液体を吐出することができる機構であって、例えば、キャピラリー１２内部の液体に圧力を加え、その圧力によって液体を移動させる加圧手段であってもよく、キャピラリー１２内部を吸引し、内部を陰圧にすることで液体を移動させる吸引手段であってもよい、加圧手段の例として図１に例示したピストンやプランジャーなどでもよく、吸引手段の例として真空ポンプなどでもよい。ピストンやプランジャーは、キャピラリー１２の内径と同じ直径を有し、直接キャピラリー１２に嵌めて用いるものが好ましく、図１右図に示したように、ピストンやプランジャーをキャピラリー１２内に押し込むことによって、プラグ状の液体をキャピラリー１２長手方向に移動させることができる。また、真空ポンプの場合は、例えば、枝付きフラスコの口にキャピラリー１２を通したゴム栓を嵌め、枝にはアスピレーターなどの真空ポンプを接続してフラスコ内を減圧することにより、プラグ状の液体をキャピラリー１２長手方向に移動させることができる。その他、キャピラリー１２が両端に、キャップなどの着脱可能な封止手段を有し、キャピラリー１２を垂直に保持し、封止手段を開閉することによって、標的物質が溶出した液体を、重力によってキャピラリー１２長手方向に移動させ、吐出させて回収しても良い。あるいは、キャピラリー１２の一方の端に、揮発性が高く、瞬間的にオイルと混和しない液体からなるプラグを設け、その側の端を封止し、そのプラグを加熱することによって、揮発性の高い液体は気化し、標的物質が溶出した液体をキャピラリー１２長手方向の、揮発性の高い液体のプラグと逆の端の方向に移動させることができる。
＝＝標的物質の精製方法＝＝
以上のような構成を有する精製装置８０を用い、標的物質を精製することができる。例えば、まず、細胞やウイルスなど、そこから標的物質を精製したいサンプルを溶解液などで溶解したり、抽出液などで抽出したりする。そして、標的物質を着脱可能に保持することのできる磁性体Ｍを加え、標的物質を結合させる。この標的物質着脱可能に保持する磁性体Ｍは、遠心チューブなどを用い、緩衝液などで洗浄することができる。その後、プラグ状の液体１０を有するキャピラリー１２内に、標的物質を着脱可能に保持する磁性体Ｍを導入する。導入方法は特に限定されないが、同じ種類の液体に懸濁した磁性体Ｍをキャピラリー１２の端部２４よりキャピラリー１２内に導入し、プラグ状の液体１０に合一させればよい。
【００１９】
平行して、キャピラリー１２の外から磁力を加えて、液体内に磁性体Ｍを保持する。例えば、図２に示すように、右側の磁力印加機構１４をプラグ状の液体１０のすぐ外側に設置することにより、磁性体Ｍを液体内に保持することが可能になる、また、磁力印加機構１４の移動を制御する制御機構１６により、磁力印加機構１４をキャピラリー１２長手方向に移動させたり、任意に停止させたりすることによって、キャピラリー１２内で磁性体Ｍを任意に移動させたり、キャピラリー１２長手方向の特定の位置に保持することが可能である（図４Ａ）。
【００２０】
そして、液体内に磁性体Ｍを保持したまま、液体内で標的物質を磁性体Ｍから溶出させる。この溶出方法は特に限定されず、標的物質と磁性体Ｍが有する標的物質結合物質との結合様式によって、適宜決定することができる。例えば、核酸とシリカの場合、液体をキャピラリーごと加熱してもよく、抗体と抗原の場合、液体に酸を加え、ｐＨを酸性にすることによって抗体と抗原を分離することができる。なお、この際、上述したように、キャピラリー１２の長手方向と交わる面内、特に直交する面内で、磁性体Ｍを揺動させることにより、磁性体Ｍに対する液体の効果を向上させることができる。
【００２１】
その後、図１右図に示すように、磁性体Ｍのキャピラリー１２長手方向の移動を停止させながら、標的物質が溶出した液体をキャピラリー１２長手方向に移動させ、キャピラリー１２の端２４から吐出し、この液体を回収することによって、磁性体に結合させた標的物質を回収することが可能になる。
【００２２】
液体状のプラグを複数にし、一方を、標的物質を着脱可能に保持する磁性体Ｍを洗浄するための洗浄液とし、もう一方を、磁性体Ｍから標的物質を溶出させる溶出液とすることもできる。すなわち、キャピラリー１２が、オイルからなる第１プラグ、オイルと相分離し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体を洗浄する洗浄液からなる第２プラグ、オイルからなる第３プラグ、オイルと相分離し、標的物質を着脱可能に保持する磁性体Ｍから標的物質を溶出する溶出液からなる第４プラグ、オイルからなる第５プラグ、を、順にその内部に備えている。プラグが１つの時と同様にして、標的物質を着脱可能に保持する磁性体Ｍを洗浄液に導入する。磁力印加機構１４の移動を制御する制御機構１６によって、磁性体Ｍを溶出液まで移動させる。そして、上述したように、溶出液中で標的物質を溶出させ、溶出液をキャピラリーの端から吐出させ、回収する。この際、洗浄液を有するプラグをさらに複数にすることで、洗浄効果を高めることも可能になる。
＝＝核酸を精製する場合の実施例＝＝
図３に示すように、本実施例の核酸の精製装置は、反応容器１００と物質抽出用装置３００を有する。反応容器１００は、長手方向を有するチューブ１１０と、チューブ１１０の一端に設けられた開口部１２０側に接続するプランジャー１３０を有する。また、チューブ１１０は開口部１２０とは反対側の端部に開口部１４０を有し、チューブ１１０内部には開口部１４０側から開口部１２０側へ、オイルからなる第１プラグ２００、洗浄液からなる第２プラグ２１０、オイルからなる第３プラグ２２０、溶出液からなる第４プラグ２３０、オイルからなる第５プラグ２４０が充填されている。ここで、洗浄液および溶出液はオイルとは混和しない水溶液である。また、物質抽出用装置３００は、反応容器１００を装着するための装着部３２０、反応容器１００のチューブ１１０側面から磁力を印加する永久磁石３２０Ａ，Ｂと、プランジャー１３０を押し、反応容器１００内の液体を送液するための送液機構３３０、およびチューブ１１０の一部を加熱するための加熱部３４０を有する。なお、本実施例では、オイルとして、シリコーンオイルを用いた。また、洗浄液には７６質量％のグアニジン塩酸塩の水溶液を用いた。さらに溶出液として滅菌水を用いた。
【００２３】
以下、この核酸の精製装置を用いてヒト血液からの核酸抽出を行う方法を詳述する。
【００２４】
まず、図４に示すように、容量３ｍＬのポリエチレン型容器（吸着容器１５０）に、３７５μＬの吸着液、及び１μＬの磁性粒子（磁性粒子Ｍ〉分散液を収容した。吸着液の組成は、７６質量％のグアニジン塩酸塩、１．７質量％のエチレンジアミン四酢酸二水素二ナトリウムニ水和物、及び１０質量％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの水溶液（東洋紡製、ＭａｇＥｘｔｒａｃｔｏｒ−Ｇｅｎｏｍｅ−、ＮＰＫ−１）である。また、磁性粒子分散液としては、５０体積％の磁性シリカ粒子及び２０質量％の塩化リチウムを含有したものを用いた。
【００２５】
ヒトから採取した血液を、ピペットを用いて吸着容器１５０の口から５０μＬ入れ、吸着容器１５０に蓋をして手で３０秒間振って撹絆し、血液に含まれる核酸を磁性粒子Ｍに吸着させた（図４（イ）参照）。その後、吸着容器１５０の蓋を外し，反応容器１００の第１プラグ側の開口部１３０を吸着容器１５０に挿入し、プランジャー１３０を開口部１２０側にスライドさせる。その結果、吸着容器１５０内の磁性粒子Ｍは吸着液と共に反応容器１００のチューブ部１１０内に充填される（図４（ロ）参照）。そして、プランジャー１３０が接続したチューブ１１０を物質抽出用装置３００に備えられた装着部３２０に装着する。このときチューブの開口部１２０側が開口部１４０に対し鉛直上向きになるように設置する。また、反応容器１００は、開口部１２０が永久磁石３２０Ａ，Ｂを通過し、さらに永久磁石３２０Ａ，Ｂがチューブ１１０の第１プラグの位置にくるように装着される。その結果、磁性粒子Ｍは永久磁石３２０Ａ，Ｂからの磁力によって、チューブ１１０内の第１プラグが配置される位置まで移動する（図５（イ）参照）。永久磁石３２０Ａと永久磁石３２０Ｂは一定の間隔が設けられ、チューブ１１０を挟み込むように向かい合っている。また、永久磁石３２０Ａおよび３２０Ｂは、それぞれのチューブ１１０との距離が変化するように、チューブ長手方向に直交する軸上を往復運動する。
【００２６】
永久磁石３２０Ａ，Ｂをチューブ長手方向と直交する軸上を往復運動させながら、プランジャー１３０を開口部１４０側に押すことで、チューブ内の液体を移動させる。プランジャー１３０によってチューブ内を加圧することで、洗浄液からなる第２プラグ２１０は磁力印加部が往復している軸上にくる。その結果、磁性粒子Ｍはオイルからなる第１プラグから第３プラグへ相対的に移動する。引き続きプランジャー１３０による送液を行いながら、永久磁石３２０Ａ，Ｂの往復移動をすることで、磁性粒子Ｍは洗浄液によって洗浄され、磁性粒子Ｍの周囲にある夾雑物が除去される（図５（口）および（ハ）参照）。さらに、プランジャー１３０による送液を行うことで第２プラグは開口部１４０側に移動し、永久磁石３２０Ａ，Ｂが往復する軸上の位置にはオイルからなる第３プラグ２２０が位置するようになる。また、磁性粒子を第２プラグ２１０と策３プラグ２２０の界面が通過するときは、永久磁石３２０Ａ，Ｂの往復運動を停止し、一方の永久磁石３２０Ａあるいは３２０Ｂがチューブ側面に接近した状態でいることが望ましい、その結果、第２プラグを構成する洗浄液が磁性粒子Ｍの周囲に多く残った状態で、磁性粒子Ｍが第３プラグに入ることを避けられる（図５（ロ）および（ニ）参照）。引き続きプランジャー１３０による送液を行うことで第３プラグは開口部１４０に移動し、永久磁石３２０Ａ，Ｂが往復運動する軸上の位置には溶出液からなる第５プラグ２３０が位置するようになる。磁性粒子Ｍが第５プラグのチューブ長手方向の中間近くにくる位置まで送液された後、送液を一旦停止し、加熱部３４０によって溶出液をチューブ側面から加熱しながら、永久磁石３２０Ａ，Ｂを往復運動させることで、磁性粒子Ｍに吸着した核酸を溶出液２３０中に溶出させる（図５（ホ）参照）。以上の工程によって、増幅反応を行う核酸の、溶出液中への溶出が可能となる。溶出した核酸を含む溶出液２３０はプランジャー１３０を開口部１４０側に押すことで、開口部１４０から吐出され（図５（へ）参照）増幅反応用容器に第３プラグ２２０および第５プラグ２４０を構成するオイルの一部あるいは全部とともに充填することで、増幅反応容器に自動で抽出物を含む溶出液を導入することが可能になる。
【符号の説明】
【００２７】
１０…プラグ状の液体、１２…キャピラリー、１４…磁力印加機構、１６…制御機構、１８…送液機構、２０…磁力印加部、２４…キャピラリー端部、８０…精製装置、１００…反応容器、１１０…チューブ、１２０…開口部、１３０…プランジャー、１４０…開口部、１５０…吸着容器、２００…第１プラグ、２１０…第２プラグ、２２０…第３プラグ、２３０…第４プラグ、２４０…第５プラグ、３００…物質抽出用装置、３２０…装着部、３２０Ａ、３２０Ｂ…永久磁石、３３０…送液機構、３４０…加熱部、Ｍ…磁石粒子
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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