(57)【要約】【課題】グラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく制御することができる微生物フロックを製造するための微生物製剤、微生物フロック及びその製造方法を提供する。【解決手段】クオラムセンシング活性化物質を取り込み可能な微生物フロックを形成するフロック形成菌を有する微生物製剤、フロック形成菌によって形成された微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を有することを特徴とするクオラムセンシング活性化用微生物フロック、並びに、フロック形成菌と、前記フロック形成菌とは通常共生しない、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を共培養する工程を含むことを特徴とするクオラムセンシング活性化用微生物フロックの製造方法により上記課題を解決した。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
クオラムセンシング活性化物質を取り込み可能な微生物フロックを形成するフロック形成菌を有することを特徴とする、微生物製剤。
【請求項２】
前記フロック形成菌が、バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、マイクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌、エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、アシドボラックス（Ａｃｉｄｖｏｒａｘ）属細菌、スフィンゴモナス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）属細菌、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属細菌、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属細菌、モルガネラ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ）属細菌、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属細菌、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌のいずれかであることを特徴とする、請求項１に記載の微生物製剤。
【請求項３】
さらに、前記クオラムセンシング活性化物質を有することを特徴とする請求項１又は２に記載の微生物製剤。
【請求項４】
さらに、前記フロック形成菌とは通常共生しない、前記クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を含むことを特徴とする請求項３に記載の微生物製剤。
【請求項５】
さらに、前記微生物フロックの凝集性を高めるための凝集剤を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の微生物製剤。
【請求項６】
フロック形成菌によって形成された微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を有することを特徴とするクオラムセンシング活性化用微生物フロック。
【請求項７】
さらに、前記フロック形成菌とは通常共生しない、前記クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を有することを特徴とする請求項６に記載のクオラムセンシング活性化用微生物フロック。
【請求項８】
フロック形成菌と、前記フロック形成菌とは通常共生しないクオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を、培養液を介して共培養する工程を含むことを特徴とするクオラムセンシング活性化用微生物フロックの製造方法。
【請求項９】
前記培養液に微生物フロックの凝集性を高めるための凝集剤を添加する工程を含む、請求項８に記載のクオラムセンシング活性化用微生物フロックの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物間情報伝達機構のひとつである、グラム陰性細菌のクオラムセンシングを制御する微生物フロックを製造するための微生物製剤、微生物フロック及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クオラムセンシングは、細胞密度依存性の遺伝子発現機構である。クオラムセンシングは、例えば、バイオフィルム形成、日和見感染症の病原性因子の生産、活性汚泥菌叢における硝化過程や脱窒過程の促進等、同一のメカニズムで多様な微生物機能を制御する。したがって、多様な微生物機能を制御するためにクオラムセンシングを制御する方法が提案されている。例えば、非特許文献１及び特許文献１，２には、クオラムセンシングを阻害する方法が提案されている。
【０００３】
非特許文献１には、グラム陰性細菌のクオラムセンシングにおいて、シグナル伝達物質として合成されるオートインデューサーであるＮ−アシル−Ｌ−ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）を、ヒドロゲルによって固定化したシクロデキストリンに吸着させて、クオラムセンシングを抑制する方法が提案されている。シクロデキストリンとしては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等を用いている。
【０００４】
特許文献１には、所定の置換基で修飾したシクロデキストリン誘導体によってＡＨＬを再現性よく、高い選択率でトラップし、クオラムセンシングを阻害する方法が提案されている。
【０００５】
特許文献２には、イタコン酸、架橋剤（ＥＧＤＭＡ）及び１，１−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）を含むイタコン酸系の高分子化合物によってＡＨＬを吸着させ、クオラムセンシングを阻害する方法が提案されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｎ．Ｋａｔｏ，Ｔ．Ｍｏｒｏｈｏｓｈｉ，Ｈ．Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ａｎｄ  Ｔ．Ｉｋｅｄａ，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｑｕｏｒｕｍ  Ｓｅｎｓｉｎｇ  ｉｎ  Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ  ｂｙ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎ−Ａｃｙｌｈｏｍｅｓｅｒｉｎｅ  Ｌａｃｔｏｎｅｓ  ｏｎ  Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｇｅｌ”Ｔｒａｎｓ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，３０，８１５−８１８，２００５
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００９−２８０７３６号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／０８７４５４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
非特許文献１及び特許文献１，２で提案された技術では、グラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく阻害するために、高濃度の、シクロデキストリン、シクロデキストリン誘導体、イタコン酸系の高分子化合物等の水溶液を用いて、グラム陰性細菌に効率よく接触又は作用させなければならないという課題がある。この課題は、グラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化する場合においても同様であるが、活性化する場合の効率性に言及した文献は見当たらない。
【０００９】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであって、その目的は、微生物反応、具体的にはグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく制御することができる微生物フロックを製造するための微生物製剤を提供することにある。また、微生物フロック及びその製造方法を提供することにある。さらには、微生物製剤又は微生物フロックを使用して、フロック内部のクオラムセンシングを活性化させる方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は以下の特徴を有する。
（１）クオラムセンシング活性化物質を取り込み可能な微生物フロックを形成するフロック形成菌を有することを特徴とする、微生物製剤。
（２）上記（１）において、フロック形成菌が、バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、マイクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌、エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、アシドボラックス（Ａｃｉｄｖｏｒａｘ）属細菌、スフィンゴモナス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）属細菌、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属細菌、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属細菌、モルガネラ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ）属細菌、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属細菌、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌のいずれかであることが好ましい。
（３）上記（１）又は（２）において微生物製剤は、さらに、クオラムセンシング活性化物質を有することが好ましい。
（４）上記（３）において、微生物製剤はさらに、前記フロック形成菌とは通常共生しない、前記クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を含むことが好ましい。
（５）上記（１）〜（４）のいずれかにおいて、微生物製剤はさらに、前記フロックの凝集性を高めるための凝集剤を含むことが好ましい。
（６）フロック形成菌によって形成された微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を有することを特徴とするクオラムセンシング活性化用微生物フロック。
（７）上記（６）において、クオラムセンシング活性化用微生物フロックはさらに、前記フロック形成菌とは通常共生しない、前記クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を有することが好ましい。
（８）フロック形成菌と、前記フロック形成菌とは通常共生しない、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を共培養する工程を含むことを特徴とするクオラムセンシング活性化用微生物フロックの製造方法。
（９）上記（８）においてさらに、培養液に微生物フロックの凝集性を高めるための凝集剤を添加する工程を含むことが好ましい。
【００１１】
すなわち、本発明者らが鋭意検討を行った結果、フロック形成菌として、例えば活性汚泥から単離したバチラス・セレウス(Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ) ＫＯ−５株と、クオラムセンシングを有し、クオラムセンシング活性化物質である下式（Ｉ）で示されるＮ−アシル−Ｌ−ホモセリンラクトン（以下、「ＡＨＬ」という。）を産生するグラム陰性細菌として、例えば土壌から単離したセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＡＳ−１とを用いて、それらを共培養することにより、微生物フロックが形成され、その微生物フロック内部において、セラチア・マルセッセンスＡＳ−１の密度が増大することを見出した。また、微生物フロック内部において、ＡＨＬを介したクオラムセンシングによるプロディジオシン産生が活性化されていることを見出した。このようにして本発明者らは本発明を完成させた。
【００１２】
【化１】
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【００１３】
式（Ｉ）中、Ｒは水素原子、ヒドロキシル基又はオキソ基を表し、ｎは０〜１８の整数を表す。
【００１４】
上記課題を解決するための本発明に係る微生物製剤は、クオラムセンシング活性化物質を取り込み可能なフロックを形成するフロック形成菌を有することを特徴とする。さらに、前記微生物製剤は、前記フロック形成菌とは通常共生しない、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を含んでいてもよい。
【００１５】
この発明に係る微生物製剤によれば、培養することによって微生物フロックが形成され、その微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌の密度を増大させることができる。この微生物フロックは、土壌、廃水、河川、湖、地下水等の被処理物中のグラム陰性細菌を吸着し、微生物フロック中のグラム陰性細菌が産生したクオラムセンシング活性化物質により、吸着したグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。
【００１６】
本発明に係る微生物製剤は、フロックの凝集性を高めるための凝集剤を含んでもよい。この発明によれば、強度の高い微生物フロックを形成することができる。
【００１７】
上記課題を解決するための本発明に係る微生物フロックは、フロック形成菌によって形成された微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を有することを特徴とする。さらに、前記微生物フロック内部には、前記フロック形成菌とは通常共生しない、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を有していてもよい。
【００１８】
この発明によれば、土壌、廃水、河川、湖、地下水等の被処理物に加えることによって被処理物中のグラム陰性細菌を吸着することができ、微生物フロック中のグラム陰性細菌が産生したクオラムセンシング活性化物質により、吸着したグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。
【００１９】
上記課題を解決するための本発明に係る微生物フロックの製造方法は、クオラムセンシングを活性化する微生物フロックの製造方法であって、フロック形成菌と、前記フロック形成菌とは通常共生しない、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を共培養する工程を含むことを特徴とする。
【００２０】
この発明によれば、形成された微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌の密度が増大した微生物フロックを製造することができる。この微生物フロックは、土壌、廃水、河川、湖、地下水等の被処理物中のグラム陰性細菌を吸着し、微生物フロック中のグラム陰性細菌が産生したクオラムセンシング活性化物質により、吸着したグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。
【００２１】
本発明に係る微生物フロックの製造方法は、培養液に微生物フロックの凝集性を高めるための凝集剤を添加する工程を含んでもよい。この発明によれば、強度の高い微生物フロックを得ることができる。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、グラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく制御することができる微生物フロックを製造するための微生物製剤を提供することができる。
【００２３】
本発明によれば、グラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく制御することができる微生物フロック及びその製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】クオラムセンシング活性化物質（オートインデューサー）を産生するグラム陰性細菌（以下、ＱＳ菌）としてセラチア菌、フロック形成菌としてバチラス菌を使用し、セラチア菌（ＱＳ菌）のみ（▲）、及び、セラチア菌（ＱＳ菌）とバチラス菌（フロック形成菌）とのＯＤ６００比の混合割合が１：１（○）、１：２（■）又は１：３（●）である各混合溶液を所定時間培養し、各培養液中のプロディジオシンの産生量を５３４ｎｍの吸光度で測定した結果を示す図である。
【図２】ＱＳ菌としてセラチア菌、フロック形成菌としてバチラス菌を使用し、セラチア菌（ＱＳ菌）のみ（○）を培養し、又は、１ｍＭ（▲）若しくは１０ｍＭ（●）となるようにＣａＣｌ２を培養液に加えてセラチア菌（ＱＳ菌）とバチラス菌（フロック形成菌）を所定時間共培養し、各培養液中のプロディジオシンの産生量を５３４ｎｍの吸光度で測定した結果を示す図である。
【図３】（ａ）は凝集剤としてポリグルタミン酸カルシウム塩を添加して３０分間振盪培養したセラチア菌（ＱＳ菌）培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）はセラチア菌（ＱＳ菌）及びバチラス菌（フロック形成菌）を含まない１／２ＬＢ液体培地にポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を添加した１／２ＬＢ液体培地における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）はセラチア菌（ＱＳ菌）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１０時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図４】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．４８のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含むセラチア菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して２５℃で１２時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．６のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含むセラチア菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して２５℃で１２時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が１．２のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含むセラチア菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して２５℃で１２時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｄ）は吸光度（ＯＤ６００）が１．８のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含むセラチア菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して２５℃で１２時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図５】バチラス菌（フロック形成菌）未添加でポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含むセラチア菌（ＱＳ菌）培養液を培養し、又は、吸光度（ＯＤ６００）が０．４８、０．６、１．２、１．８の各バチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含むセラチア菌（ＱＳ菌）培養液を混合して培養し、各培養液中のプロディジオシンの産生量を５３４ｎｍの吸光度で測定した結果を示す図である。
【図６】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図７】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図８】バチラス菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１若しくは０．３の各バチラス菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、バチラス菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０、０．１、０．３の各バチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図９】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含む緑膿菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．２のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含む緑膿菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含む緑膿菌（ＱＳ菌）培養液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図１０】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のバチラス菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は緑膿菌（ＱＳ菌）及びバチラス菌（フロック形成菌）を含まない１／２ＬＢ液体培地にポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を添加した１／２ＬＢ液体培地における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｄ）はポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を添加して３０分間振盪培養した緑膿菌（ＱＳ菌）培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図１１】バチラス菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．２、０．３の各バチラス菌希釈液を培養した培養液（○）、又は、バチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０、０．１、０．２、０．３の各バチラス菌希釈液と、ポリグルタミン酸カルシウム塩（凝集剤）を含む緑膿菌（ＱＳ菌）培養液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図１２】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＰ．オリジハビタンス（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＰ．エルギノーサ（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＰ．オリジハビタンス（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＰ．エルギノーサ（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図１３】Ｐ．オリジハビタンス（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＰ．オリジハビタンス（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、Ｐ．オリジハビタンス（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各Ｐ．オリジハビタンス（フロック形成菌）希釈液と、Ｐ．エルギノーサ（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図１４】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＰ．エルギノーサ（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＰ．エルギノーサ（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図１５】アシネトバクター菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１若しくは０．３の各アシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、アシネトバクター菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０、０．１、０．３の各アシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、Ｐ．エルギノーサ（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図１６】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１の大腸菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３の大腸菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１の大腸菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図１７】大腸菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１若しくは０．３の各大腸菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、大腸菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０、０．１、０．３の各大腸菌（フロック形成菌）希釈液と、緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図１８】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のエロモナス細菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のエロモナス細菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のエロモナス細菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図１９】エロモナス細菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１若しくは０．３の各エロモナス細菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、エロモナス細菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０、０．１、０．３の各エロモナス細菌（フロック形成菌）希釈液と、緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図２０】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＡ．ハイドロフィラ（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＡ．エスピー（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＡ．ハイドロフィラ（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＡ．エスピー（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図２１】Ａ．ハイドロフィラ（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＡ．ハイドロフィラ（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、Ａ．ハイドロフィラ（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各Ａ．ハイドロフィラ（フロック形成菌）希釈液と、Ａ．エスピー（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図２２】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のセラチア菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のエロモナス細菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のセラチア菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のエロモナス細菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図２３】セラチア菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３のセラチア菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、セラチア菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各セラチア菌（フロック形成菌）希釈液と、エロモナス細菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図２４】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシドボラックス菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のセラチア菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシドボラックス菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のセラチア菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図２５】アシドボラックス菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシドボラックス菌希釈液を培養した培養液（○）、又は、アシドボラックス菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各アシドボラックス菌（フロック形成菌）希釈液と、セラチア菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図２６】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３の緑膿菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のクロモバクテリウム菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３の緑膿菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のクロモバクテリウム菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図２７】クロモバクテリウム菌（ＱＳ菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１のクロモバクテリウム菌（ＱＳ菌）希釈液を培養し、又は、緑膿菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の緑膿菌（フロック形成菌）希釈液と、クロモバクテリウム菌（ＱＳ菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１のクロモバクテリウム菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養し、生産されたビオラセインの量を５９５ｎｍの吸光度で測定した結果を示す図である。
【図２８】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図２９】アシネトバクター菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、アシネトバクター菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各アシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図３０】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３の大腸菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のシノリゾビウム菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３の大腸菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｃ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のシノリゾビウム菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図３１】大腸菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の大腸菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、大腸菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各大腸菌（フロック形成菌）希釈液と、シノリゾビウム菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図３２】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のシノリゾビウム菌（ＱＳ菌）希釈液とを混合して３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のシノリゾビウム菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図３３】アシネトバクター菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、アシネトバクター菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０若しくは０．３の各アシネトバクター菌（フロック形成菌）希釈液と、シノリゾビウム菌（ＱＳ菌）希釈液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【図３４】（ａ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１のセラチア菌（フロック形成菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。（ｂ）は吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液における粒子の粒子径分布を測定した結果を示す図である。
【図３５】緑膿菌（ＱＳ菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌（ＱＳ菌）希釈液に、ポリ塩化アルミニウムを添加した後、セラチア菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１のセラチア菌（フロック形成菌）希釈液と混合して培養し、顕微鏡で観察した結果を示す図である。
【図３６】セラチア菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．２、０．３の各セラチア菌（フロック形成菌）希釈液を培養した培養液（○）、又は、セラチア菌（フロック形成菌）の初期吸光度（ＯＤ６００）が０、０．１、０．２、０．３の各セラチア菌（フロック形成菌）希釈液と、ポリ塩化アルミニウムを含む緑膿菌（ＱＳ菌）培養液を混合して培養した培養液（●）を、２４穴マイクロプレートに分取して静置することによってバイオフィルムを形成させ、バイオフィルムの形成量をクリスタルバイオレット染色による吸光度測定により評価した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明に係る微生物製剤、微生物フロックを製造する方法、及びその方法により得られる微生物フロックについて、図面を参照しつつ説明する。なお、本発明は以下の実施形態及び実験例に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
【００２６】
［微生物製剤］
本実施形態の微生物製剤は、クオラムセンシング活性化物質を取り込み可能なフロックを形成するフロック形成菌を有する。なお、本実施形態においてクオラムセンシング活性化物質とは、微生物反応のクオラムセンシングを活性化することのできる物質である。
【００２７】
微生物反応のクオラムセンシングでは、バクテリアはオートインデューサーと呼ばれる化学物質を介して周囲の菌体密度を感知し、菌体密度がある一定値を超えたことを感知すると、様々な遺伝子の転写・発現が活性化される。例えば、グラム陰性細菌はオートインデューサーとしてアシル化ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）類を産生することが知られている。
【００２８】
本実施形態の微生物製剤に、活性化したい微生物反応の対象となる細菌（例えばグラム陰性細菌）内で生産するレセプタータンパク質と複合体を作ることのできるクオラムセンシング活性化物質を含有させることにより、所望の微生物反応のクオラムセンシングを活性化することができる。例えば、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＡＳ―１株は、２種類のＡＨＬ、すなわちＮ−ヘキサノイル、Ｎ-３-オキソ−ヘキサノイルホモセリンラクトンを、同一の細胞内で生産する。従って、本実施形態の微生物製剤に、Ｎ−ヘキサノイル、Ｎ-３-オキソ−ヘキサノイルホモセリンラクトンのいずれか１種類あるいは２種類以上を含有させることにより、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＡＳ―１株のレセプターと上記ＡＨＬが複合体を形成し、クオラムセンシングを活性化することができる。また、上記２種類のＡＨＬ以外でも、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＡＳ―１株のレセプターと複合体を形成し得るＡＨＬであれば、含有させることによりクオラムセンシングを活性化することができる。
【００２９】
なお、クオラムセンシング活性化物質としては、グラム陰性細菌の反応においては主にアシル化ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）類が挙げられる。また、グラム陽性細菌の反応ではペプチドが、放線菌の反応ではＡ-ファクターなどが挙げられる。
【００３０】
（フロック形成菌）
フロック形成菌は、培養することによって微生物フロック（以下、単にフロック、あるいは微生物凝集体、バイオフロックとも呼ばれる。）を形成する細菌である。フロック形成菌としては、例えば、バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、マイクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌、エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、アシドボラックス（Ａｃｉｄｖｏｒａｘ）属細菌、スフィンゴモナス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）属細菌、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属細菌、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属細菌、モルガネラ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ）属細菌、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属細菌、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌等を挙げることができる。
【００３１】
バチラス属細菌としては、例えば、バチラス・アルカロフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｃａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチラス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｖｅｉ）、バチラス・アミノボランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｉｎｏｖｏｒａｎｓ）、バチラス・アミロリキファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチラス・アネウリノリチクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｅｕｒｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）、バチラス・アンシラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチラス・アクイマリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｑｕａｅｍａｒｉｓ）、バチラス・アトロファエウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｔｒｏｐｈａｅｕｓ）、バチラス・ボロニフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｏｒｏｎｉｐｈｉｌｕｓ）、バチラス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、バチラス・カルドリティカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｌｄｏｌｙｔｉｃｕｓ）、バチラス・セントロスポルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｎｔｒｏｓｐｏｒｕｓ）、バチラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）、バチラス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチラス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチラス・ファーマス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｉｒｍｕｓ）、バチラス・フラボサーマス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｏｔｈｅｒｍｕｓ）、バチラス・フシフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）、バチラス・グロビニ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｇｉｉ）、バチラス・インファーナス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｆｅｒｎｕｓ）、バチラス・ラルバエ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｒｖａｅ）、バチラス・ラテロスポルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）、バチラス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチラス・リシェニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチラス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチラス・メセンテリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓ）、バチラス・ムシラギノサス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓｕｓ）、バチラス・ミコイデス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ）、バチラス・ナットー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｎａｔｔｏ）、バチラス・パントテニチカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｎｔｏｔｈｅｎｔｉｃｕｓ）、バチラス・ポリミキサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）、バチラス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチラス・シュリジェリー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｃｈｌｅｇｅｌｉｉ）、バチラス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、バチラス・スファエリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）、バチラス・スポロサーモデュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｏｒｏｔｈｅｒｍｏｄｕｒａｎｓ）、バチラス・ステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチラス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチラス・サーモグルコシデシウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｉｕｓ）、バチラス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バチ���ス・ウェイヘンステファネンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｗｅｉｈｅｎｓｔｅｐｈａｎｅｎｓｉｓ）等を挙げることができる。
【００３２】
アシネトバクター属細菌としては、例えば、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アシネトバクター・ブーヴェティイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂｏｕｖｅｔｉｉ）、アシネトバクター・カルコアセチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ゲルネリ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｇｅｒｎｅｒｉ）、アシネトバクター・ヘモリチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ジョンソニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、アシネトバクター・ジュニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｕｎｉｉ）、アシネトバクター・ルオフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｌｗｏｆｆｉｉ）、アシネトバクター・パルブス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｐａｒｖｕｓ）、アシネトバクター・レイディオレジステンス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔｅｎｓ）、アシネトバクター・シンドレリ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｃｈｉｎｄｌｅｒｉ）、アシネトバクター・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）、アシネトバクター・タンドイイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｔａｎｄｏｉｉ）、アシネトバクター・チェルンベルギアエ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｔｊｅｒｎｂｅｒｇｉａｅ）、アシネトバクター・タウネリ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｔｏｗｎｅｒｉ）、アシネトバクター・ウルシンギイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｕｒｓｉｎｇｉｉ）、アシネトバクター・べネチアヌス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｖｅｎｅｔｉａｎｕｓ）等を挙げることができる。
【００３３】
マイクロバクテリウム属細菌としては、例えば、マイクロバクテリウム・アルボレセンス（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）、マイクロバクテリウム・バルケリ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂａｒｋｅｒｉ）、マイクロバクテリウム・エステラロマティカム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｓｔｅｒａｒｏｍａｔｉｃｕｍ）、マイクロバクテリウム・フラバム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｕｍ）、マイクロバクテリウム・イムペリアレ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｍｐｅｒｉａｌｅ）、マイクロバクテリウム・ラクチカム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｃｕｍ）、マイクロバクテリウム・リクエファシエンス（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、マイクロバクテリウム・ルテオラム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｕｔｅｏｌｕｍ）、マイクロバクテリウム・オキシダンス（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｘｙｄａｎｓ）、マイコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ）、マイクロバクテリウム・サペルダエ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｐｅｒｄａｅ）、マイクロバクテリウム・テラエ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｒｒａｅ）、マイクロバクテリウム・テスタセウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｅｓｔａｃｅｕｍ）、マイクロバクテリウム・トリコテセノリティクム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｏｌｙｔｉｃｕｍ）等を挙げることができる。
【００３４】
エロモナス属細菌としては、例えば、エロモナス・アロサッカロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ａｌｌｏｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ）、エロモナス・ベスチアルム（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｂｅｓｔｉａｒｕｍ）、エロモナス・キャビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃａｖｉａｅ）、エロモナス・エンシェレイア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｅｎｃｈｅｌｅｉａ）、エロモナス・エンテロペロゲネス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｅｎｔｅｒｏｐｅｌｏｇｅｎｅｓ）、エロモナス・オイクレノフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｅｕｃｒｅｎｏｐｈｉｌａ）、エロモナス・ハイドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、エロモナス・ジャンダエイ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｊａｎｄａｅｉ）、エロモナス・メディア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍｅｄｉａ）、エロモナス・モルスコルム（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍｏｌｌｕｓｃｏｒｕｍ）、エロモナス・ポポフィイ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｐｏｐｏｆｆｉｉ）、エロモナス・パンクタータ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ）、エロモナス・サルモニシダ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ）、エロモナス・シュベルティイ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｃｈｕｂｅｒｔｉｉ）、エロモナス・シミアエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｉｍｉａｅ）、エロモナス・ベロニイ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｖｅｒｏｎｉｉ）等を挙げることができる。
【００３５】
シュードモナス属細菌としては、例えば、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・アルカリゲネス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・アンギリセプチカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｎｇｕｉｌｌｉｓｅｐｔｉｃａ）、シュードモナス・アルゼンチネンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｒｇｅｎｔｉｎｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・ボルボリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｂｏｒｂｏｒｉ）、シュードモナス・シトロネロリス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｔｒｏｎｅｌｌｏｌｉｓ）、シュードモナス・フラベセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）、シュードモナス・ニトロレデュセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ）、シュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）、シュードモナス・シュードアルカリゲネス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、シュードモナス・レシノボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｓｉｎｏｖｏｒａｎｓ）、シュードモナス・ストラミネア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｒａｍｉｎｅａ）、シュードモナス・アガリシ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｇａｒｉｃｉ）、シュードモナス・アスプレニ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｓｐｌｅｎｉｉ）、シュードモナス・アウランティアカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒａｎｔｉａｃａ）、シュードモナス・オーレオファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ）、シュードモナス・クロロラフィス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）、シュードモナス・コルガータ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、シュードモナス・フラギ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｒａｇｉ）、シュードモナス・ルンデンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｌｕｎｄｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・タエトロレンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔａｅｔｒｏｌｅｎｓ）、シュードモナス・アゾトフォーマンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｚｏｔｏｆｏｒｍａｎｓ）、シュードモナス・ブラッシカセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｒｕｍ）、シュードモナス・ブレネリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｂｒｅｎｎｅｒｉ）、シュードモナス・セドリナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｄｒｉｎａ）、シュードモナス・コルガータ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・ゲサルディ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｅｓｓａｒｄｉｉ）、シュードモナス・リバネンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｌｉｂａｎｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・マンデリイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｎｄｅｌｉｉ）、シュードモナス・マルギナリス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｒｇｉｎａｌｉｓ）、シュードモナス・メジテラネア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａ）、シュードモナス・ミグレ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｉｇｕｌａｅ）、シュードモナス・ムシ���レンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｕｃｉｄｏｌｅｎｓ）、シュードモナス・オリエンタリス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、シュードモナス・ロデシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｒｈｏｄｅｓｉａｅ）、シュードモナス・シンキサンタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｎｘａｎｔｈａ）、シュードモナス・チベルバレンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔｈｉｖｅｒｖａｌｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・トラーシイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔｏｌａａｓｉｉ）、シュードモナス・ベロニイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｖｅｒｏｎｉｉ）、シュードモナス・デニトリフィカンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、シュードモナス・ペルツシノゲナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｅｒｔｕｃｉｎｏｇｅｎａ）、シュードモナス・クレモリコロラタ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｃｏｌｏｒａｔａ）、シュードモナス・フルバ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｕｌｖａ）、シュードモナス・モンテイリィ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｏｎｔｅｉｌｉｉ）、シュードモナス・モッセリイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｏｓｓｅｌｉｉ）、シュードモナス・オリジハビタンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚｉｈａｂｉｔａｎｓ）、シュードモナス・パラフルバ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｒａｆｕｌｖａ）、シュードモナス・プレコグロシシダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｌｅｃｏｇｌｏｓｓｉｃｉｄａ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｂａｌｅａｒｉｃａ）、シュードモナス・ルテオラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｌｕｔｅｏｌａ）、シュードモナス・スツッツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ）、シュードモナス・アミグダリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｍｙｇｄａｌｉ）、シュードモナス・アベラナエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｖｅｌｌａｎａｅ）、シュードモナス・カリカパパヤエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａｅ）、シュードモナス・シクホリイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ）、シュードモナス・コロナファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｏｎａｆａｃｉｅｎｓ）、シュードモナス・フィクセレクタエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｉｃｕｓｅｒｅｃｔａｅ）、シュードモナス・メリアエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｌｉａｅ）、シュードモナス・サバスタノイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓａｖａｓｔａｎｏｉ）、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）、シュードモナス・トマト（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔｏｍａｔｏ）、シュードモナス・ビリディフラバ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖａ）、シュードモナス・アビエタニフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｂｉｅｔａｎｉｐｈｉｌａ）、シュードモナス・アガリシ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｇａｒｉｃｉ）、シュードモナス・アルカリフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｃａｌｉｐｈｉｌａ）、シュードモナス・アルカノリティカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｋａｎｏｌｙｔｉｃａ）、シュードモナス・アミロデラモサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｍ���ｌｏｄｅｒａｍｏｓａ）、シュードモナス・アスプレニ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｓｐｌｅｎｉｉ）、シュードモナス・アゾチフィゲンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｚｏｔｉｆｉｇｅｎｓ）、シュードモナス・カンナビナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃａｎｎａｂｉｎａ）、シュードモナス・コスタンチーニ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｓｔａｎｔｉｎｉｉ）、シュードモナス・クルシビエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｒｕｃｉｖｉａｅ）、シュードモナス・エクストレモリエンタリス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｅｘｔｒｅｍｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、シュードモナス・フレデリクスベーゲンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｒｅｄｅｒｉｋｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・フスコバギナエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｕｓｃｏｖａｇｉｎａｅ）、シュードモナス・ゲリディコラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｅｌｉｄｉｃｏｌａ）、シュードモナス・グリモンティイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｒｉｍｏｎｔｉｉ）、シュードモナス・インディカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｉｎｄｉｃａ）、シュードモナス・ジェッセニイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｊｅｓｓｅｎｉｉ）、シュードモナス・ジンジュエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｊｉｎｊｕｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・キロネンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｋｉｌｏｎｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・ナックムッシ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｋｎａｃｋｍｕｓｓｉｉ）、シュードモナス・コーリエンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｋｏｒｅｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・リニ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｌｉｎｉ）、シュードモナス・ルテア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｌｕｔｅａ）、シュードモナス・オティティディス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｔｉｔｉｄｉｓ）、シュードモナス・パチャストレラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｃｈａｓｔｒｅｌｌａｅ）、シュードモナス・パレロニアナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｌｌｅｒｏｎｉａｎａ）、シュードモナス・フィクロフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌａ）、シュードモナス・レプチリボラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｐｔｉｌｉｖｏｒａ）、シュードモナス・ルベセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｒｕｂｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・サロモニ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓａｌｏｍｏｎｉｉ）、シュードモナス・サーモトレランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、シュードモナス・トレマエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔｒｅｍａｅ）、シュードモナス・ウムソンゲンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｕｍｓｏｎｇｅｎｓｉｓ）、シュードモナス・バンコウベレンシス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｖａｎｃｏｕｖｅｒｅｎｓｉｓ）等を挙げることができる。
【００３６】
エンテロバクター属細菌としては、例えば、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・アムニゲナス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｍｎｉｇｅｎｕｓ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、エンテロバクター・アスブリアエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｓｂｕｒｉａｅ）、エンテロバクター・クロアカエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、エンテロバクター・ディソルベンス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｄｉｓｓｏｌｖｅｎｓ）、エンテロバクター・ジェルゴビエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｇｅｒｇｏｖｉａｅ）、エンテロバクター・ホルメシェイ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｈｏｒｍａｅｃｈｅｉ）、エンテロバクター・インターメディウス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、エンテロバクター・コベイ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｋｏｂｅｉ）、エンテロバクター・ルドウィギイ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｌｕｄｗｉｇｉｉ）、エンテロバクター・ニミプレスラリス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｎｉｍｉｐｒｅｓｓｕｒａｌｉｓ）、エンテロバクター・オリゼ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｏｒｙｚａｅ）、エンテロバクター・ピリヌス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｒｉｎｕｓ）、エンテロバクター・ラディシンシタンス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｒａｄｉｃｉｎｃｉｔａｎｓ）、エンテロバクター・テイロレ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｔａｙｌｏｒａｅ）、エンテロバクター・サカザキ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓａｋａｚａｋｉｉ）等を挙げることができる。
【００３７】
アシドボラックス属細菌としては、例えば、アシドボラックス・アヴェナエ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ）、アシドボラックス・デラフィールデイ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｄｅｌａｆｉｅｌｄｉｉ）、アシドボラックス・ファシリス（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ）、アシドボラックス・テンペランス（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｔｅｍｐｅｒａｎｓ）、アシドボラックス・バレリアネラ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｖａｌｅｒｉａｎｅｌｌａｅ）等を挙げることができる。
【００３８】
スフィンゴモナス属細菌としては、例えば、スフィンゴモナス・アドハエシバ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｄｈａｅｓｉｖａ）、スフィンゴモナス・アロマティシボランス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ）、スフィンゴモナス・アサッカロリティカ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃａ）、スフィンゴモナス・アスタキサンチニファシエンス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎｉｆａｃｉｅｎｓ）、スフィンゴモナス・バエクリュンエンシス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｂａｅｋｒｙｕｎｇｅｎｓｉｓ）、スフィンゴモナス・カプスラータ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｃａｐｓｕｌａｔａ）、スフィンゴモナス・エロデア（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｅｌｏｄｅａ）、スフィンゴモナス・コレエンシス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｋｏｒｅｅｎｓｉｓ）、スフィンゴモナス・マクロゴルタビダス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｒｏｇｏｌｔａｂｉｄｕｓ）、スフィンゴモナス・マリー（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｉ）、スフィンゴモナス・メロニス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍｅｌｏｎｉｓ）、スフィンゴモナス・パラポウシモビリス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｐａｒａｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓ）、スフィンゴモナス・ポウシモビリス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓ）、スフィンゴモナス・ファイロスファエラエ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｐｈｙｌｌｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スフィンゴモナス・エスピー（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）、スフィンゴモナス・ズバルチカ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｕｂａｒｃｔｉｃａ）、スフィンゴモナス・サブテラニア（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａ）、スフィンゴモナス・テラーエ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｔｅｒｒａｅ）、スフィンゴモナス・トゥルーペリ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｔｒｕｅｐｅｒｉ）、スフィンゴモナス・ウイッチ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｗｉｔｔｉｃｈｉｉ）、スフィンゴモナス・ゼノファーガ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｘｅｎｏｐｈａｇａ）、スフィンゴモナス・ヤノイクエ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｙａｎｏｉｋｕｙａｅ）等を挙げることができる。
【００３９】
シゲラ属細菌としては、例えば、シゲラ・ボイデイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｂｏｙｄｉｉ）、シゲラ・ディゼンテリエ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ・フレキシネリー（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソンネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）等を挙げることができる。
【００４０】
セラチア属細菌としては、例えば、セラチア・エントモフィラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｅｎｔｏｍｏｐｈｉｌａ）、セラチア・フィカリア（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｉｃａｒｉａ）、セラチア・フォンチコラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｏｎｔｉｃｏｌａ）、セラチア・グリメッシィ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｇｒｉｍｅｓｉｉ）、セラチア・リケファシエンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、セラチア・オドリフェラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ）、セラチア・プリムティカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｌｙｍｕｔｈｉｃａ）、セラチア・プロテアマクランス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｒｏｔｅａｍａｃｕｌａｎｓ）、セラチア・クイニボランス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｑｕｉｎｉｖｏｒａｎｓ）、セラチア・ルビダエア（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｒｕｂｉｄａｅａ）、セラチア・シンバイオティカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｓｙｍｂｉｏｔｉｃａ）等を挙げることができる。
【００４１】
モルガネラ属細菌としては、例えば、モルガネラ・モルガニイ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ）等を挙げることができる。
【００４２】
ノカルディア属細菌としては、例えば、ノカルディア・アマラエ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｍａｒａｅ）、ノカルディア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ノカルディア・ブラジリエンシス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ノカルディア・カーネア（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｃａｒｎｅａ）、ノカルディア・コラリ−ナ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｃｏｒａｌｌｉｎａ）、ノカルディア・シリアシゲオルジカ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｃｙｒｉａｃｉｇｅｏｒｇｉｃａ）、ノカルディア・ダソンヴィレイ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ）、ノカルディア・エレガンス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｅｌｅｇａｎｓ）、ノカルディア・ファルシニカ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｆａｒｃｉｎｉｃａ）、ノカルディア・ノバ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｎｏｖａ）、ノカルディア・オパカ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｏｐａｃａ）、ノカルディア・ルブラ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｒｕｂｒａ）、ノカルディア・セリオラエ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｅｒｉｏｌａｅ）、ノカルディア・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐ．）、ノカルディア・トランスバレンシス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｔｒａｎｓｖａｌｅｎｓｉｓ）、ノカルディア・ユニフォーミス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ノカルディア・バクシニー（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｖａｃｃｉｎｉｉ）等を挙げることができる。
【００４３】
ロドコッカス属細菌としては、例えば、ロドコッカス・バイコヌレンシス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｂａｉｋｏｎｕｒｅｎｓｉｓ）、ロドコッカス・エクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ）、ロドコッカス・コプロフィラス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）、ロドコッカス・コリネバクテリオイデス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）、ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）、ロドコッカス・ファシアンス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｓｃｉａｎｓ）、ロドコッカス・グロベルルス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｌｏｂｅｒｕｌｕｓ）、ロドコッカス・ジョスティイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｊｏｓｔｉｉ）、ロドコッカス・コレエンシス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｋｏｒｅｅｎｓｉｓ）、ロドコッカス・マンシャネシス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａａｎｓｈａｎｅｎｓｉｓ）、ロドコッカス・マリノナセンス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａｒｉｎｏｎａｓｃｅｎｓ）、ロドコッカス・オパカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｐａｃｕｓ）、ロドコッカス・ペルコラタス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｒｃｏｌａｔｕｓ）、ロドコッカス・ピリジノボランス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｒｉｄｉｎｉｖｏｒａｎｓ）、ロドコッカス・ロドクロウス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）、ロドコッカス・ロドニイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｈｏｄｎｉｉ）、ロドコッカス・ルーバー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｕｂｅｒ）、ロドコッカス・ツキサムエンシス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｕｋｉｓａｍｕｅｎｓｉｓ）、ロドコッカス・ラティスラビエンシス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｗｒａｔｉｓｌａｖｉｅｎｓｉｓ）、ロドコッカス・ゾフィイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｚｏｐｆｉｉ）等を挙げることができる。
【００４４】
フロック形成菌として、より具体的には、バチラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）ＫＯ−５株、バチラス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）ＫＯ−８株、アシネトバクター・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）ＫＯ−２５株、アシネトバクター・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）ＫＯ−５８株、アシネトバクター・ジョンソニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＫＯ−２３株、アシネトバクター・ジョンソニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＫＯ−１００株、エンテロバクター・クロアカエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）ＫＯ−３株、エンテロバクター・クロアカエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）ＫＯ−９株、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）ＫＯ−１９株、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）ＫＯ−３１株、マイコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ）ＫＯ−１０株、マイコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ）ＫＯ−１７株、ノカルディア・アマラエ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｍａｒａｅ）ＫＯ−４６株、ノカルディア・アマラエ（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｍａｒａｅ）ＫＯ−９０株、ノカルディア・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐ．）ＫＯ−７２株、ノカルディア・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐ．）ＫＯ−１０２株、ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＫＯ−２９株、ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＫＯ−８５株、ロドコッカス・ファシアンス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｓｃｉａｎｓ）ＫＯ−４８株、ロドコッカス・ファシアンス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｓｃｉａｎｓ）ＫＯ−６４株、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＫＯ−６７株、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＫＯ−８６株、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＫＯ−５１株、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＫＯ−９９株、シュードモナス・オリジハビタンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚｉｈａｂｉｔａｎｓ）ＡＯ−３６３株、シュードモナス・オレオボランス  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）ＡＯ−３３９株、スフィンゴモナス・パウシモビリス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓ）ＫＯ−７７株、スフィンゴモナス・パウシモビリス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓ）ＫＯ−１１２株、スフィンゴモナス・エスピー（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＫＯ−９１株、スフィンゴモナス・エスピー（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＫＯ−１２１株、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）ＡＯ−２９５株、エロモナス・キャビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃａｖｉａｅ）ＡＯ−３９５株、エロモナス・ハイドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）ＡＯ−３７６株、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＡＯ−６８株、アシドボラックス・テンペランス  Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｔｅｍｐｅｒａｎｓ）ＡＯ−２３６株、等を挙げることができる。
【００４５】
本実施形態の微生物製剤は、上記フロック形成菌を培養して製造される。培養は、フロック形成菌が生育可能な培養条件下で適宜行われる。培養液としては、フロック形成菌が生育可能であれば特に制限されるものではなく、例えば、ＬＢ培地、ＮＢ培地、ＳＣＤ培地、ＨＩＡ培地、Ｒ２Ａ培地等を挙げることができる。培養の温度は、フロック形成菌が生育可能な温度範囲であればよく、通常、５〜６０℃の範囲内である。フロック形成菌が好気性細菌である場合には、培養は、酸素供給可能な状態で行われる。一方、フロック形成菌が嫌気性細菌である場合には、培養は、酸素フリーの状態、例えば、５％ＣＯ２ガス中で行われる。
【００４６】
本実施形態の微生物製剤は、上記のように培養した培養液をそのまま用いることもできるが、遠心分離等の手段を用いて集菌した菌体を水等に分散して懸濁液として用いてもよい。さらに、培養液や懸濁液を凍結乾燥等により乾燥させた乾燥菌体として用いることもできる。
【００４７】
本実施形態の微生物製剤の形状は特に限定はなく、液体、錠剤、粉末、粒剤、カプセル、ペレット等の任意の剤型とすることができ、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、シュクロース、スキムミルク等の賦形剤やその他フラクトオリゴ糖など各種のプロバイオティクス成分等の任意成分を配合することもできる。これらの形状の微生物製剤は、公知の方法に従って得ることができる。
【００４８】
本実施形態の微生物製剤は、哺乳動物に直接経口投与してもよく、飼料や餌等に混ぜて投与してもよい。なお、本実施形態の微生物製剤の投与対象である哺乳動物としては、ヒト、馬、牛、豚、ヒツジ、山羊等が例示できる。
【００４９】
本実施形態の微生物製剤は、土壌、廃水、河川、湖、地下水等に直接散布してもよい。また、本実施形態の微生物製剤は、野菜、草花等に散布してもよい。さらには、本実施形態の微生物製剤は、ヒトの皮膚や、ヒトの口腔内・鼻腔内の粘膜等に塗布・付着してもよい。
【００５０】
本実施形態の微生物製剤は、さらにクオラムセンシング活性化物質を含有することが好ましい。クオラムセンシング活性化物質としては、アシル化ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）類、ペプチド、Ａ-ファクターなどが挙げられる。
【００５１】
クオラムセンシング活性化物質を含有する微生物製剤は、微生物反応のクオラムセンシングを活性化することができる。例えば、土壌、廃水、河川、湖、地下水等の被処理物中に本実施形態の微生物製剤を加えた場合、本実施形態の微生物製剤が被処理物中のグラム陰性細菌を吸着してフロックを形成する。こうして形成されたフロック内部には本実施形態の微生物製剤由来のクオラムセンシング活性化物質、例えばアシル化ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）が含まれているため、吸着したグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。
活性化させるクオラムセンシングを発生させるグラム陰性細菌の例としては、下記に述べる（グラム陰性細菌）の項目に挙げられるものと同一であるため、ここでは省略する。
【００５２】
（グラム陰性細菌）
本実施形態の微生物製剤は、前記フロック形成菌とは通常共生しない、或いは共生する、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を含んでいてもよい。
グラム陰性細菌には、クオラムセンシング活性化物質を産生するものが存在する。本実施形態では、グラム陰性細菌として、クオラムセンシング活性化物質を産生するものを用いることができる。クオラムセンシング活性化物質は、例えば、ＡＨＬ、シュードモナスキノロンシグナル（ＰＱＳ）等である。シュードモナスキノロンシグナルとしては、例えば、２−ヘプチル−４−キノロン、２−ヘプチル−３−ヒドロキシ−４−キノロン等を挙げることができる。
【００５３】
クオラムセンシング活性化物質としてＡＨＬを産生するグラム陰性細菌としては、例えば、「フロック形成菌」の項で例示したセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属細菌やシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属細菌の他、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌、シノリゾビウム（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属細菌等を挙げることができる。
【００５４】
より具体的には、セラチア属細菌としては、例えば、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＡＳ−１株、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）ＵＵ−３株等のセラチア・マルセッセンス等を挙げることができる。また、シュードモナス属細菌としては、例えば、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１株等のシュードモナス・エルギノーサや、シュードモナス・クロロラフィス・サブエスピー・オーランティアカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ａｕｒａｎｔｉａｃａ）ＵＵ−1５株等のシュードモナス・クロロラフィス等を挙げることができる。
【００５５】
エロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属細菌としては、例えば、エロモナス・エスピー（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＵＵ−６株、エロモナス・エスピー（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＵＵ−７株、等のエロモナス・エスピー等を挙げることができる。クロモバクテリウム属細菌としては、例えば、クロモバクテリウム・ビオラセウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）ＡＴＣＣ１２４７２株等のクロモバクテリウム・ビオラセウム等を挙げることができる。シノリゾビウム（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属細菌としては、シノリゾビウム・エスピー（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）
ＵＵ−１２株、シノリゾビウム・エスピー（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）ＵＵ−１３株等のシノリゾビウム・エスピー等を挙げることができる。
【００５６】
クオラムセンシング活性化物質としてシュードモナスキノロンシグナルを産生するグラム陰性細菌としては、例えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌等を挙げることができる。シュードモナス属細菌としては、例えば、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１株等のシュードモナス・エルギノーサ等を挙げることができる。
【００５７】
本実施形態において用いられるグラム陰性細菌は、上記フロック形成菌として選択された細菌とは通常共生しないものを用いてもよいし、上記フロック形成菌として選択された細菌と通常共生する細菌を用いてもよい。
【００５８】
本実施形態の微生物製剤は、上記のようなグラム陰性細菌を含有することにより、フロック形成菌を培養すると同時にグラム陰性細菌も培養することができ、その結果、該グラム陰性細菌から産生されたオートインデューサーをクオラムセンシング活性化物質としてフロック内部に取り込ませることができるので好適である。
【００５９】
本実施形態の微生物製剤は、培養によって形成される微生物フロックの強度を高めるために凝集剤をさらに含んでいてもよい。このように凝集剤を含ませることにより、撹拌等によって崩壊しにくい微生物フロックを得ることができる。凝集剤としては、培養によって形成される微生物フロックの強度を高めることができるものであれば特に制限されるものではなく、例えば、塩化カルシウム、水酸化カルシウム等のカルシウム塩；硫酸アルミニウム、アルミン酸ナトリウム、塩基性塩化アルミニウム等のアルミニウム塩；塩化第二鉄等の鉄塩；ポリ塩化アルミニウム等の無機凝集剤；ポリグルタミン酸、ポリエチレンイミン、ポリメタクリル酸エステル、ポリアクリル酸エステル、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリルアミド、ポリオキシエチレン等の有機凝集剤を挙げることができる。
【００６０】
凝集剤の濃度は、凝集剤の種類によって異なるが、０．１ｍｇ〜１０ｇ／Ｌであることが、形成された微生物フロックの浮遊性や形成される微生物フロックの大きさ等の観点から好ましい。さらには、１０ｍｇ〜５ｇ／Ｌであることが好ましい。
【００６１】
凝集剤の濃度が０．１ｍｇ／Ｌ未満の場合、形成される微生物フロックの強度が低いため好ましくない。また、凝集剤の濃度が１０ｇ／Ｌを超えると、微生物フロックの凝集が進みすぎて、ほとんどの菌体は凝集し沈降してしまうため好ましくない。本発明においては、菌体を完全に凝集させず、微生物フロックが液体中に浮遊する状態である方が、クオラムセンシング活性化を制御しやすく好ましい。
【００６２】
［クオラムセンシング活性化用微生物フロック］
本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックは、フロック形成菌によって形成された微生物フロック内部に、クオラムセンシング活性化物質を有することを特徴とする。
【００６３】
クオラムセンシング活性化物質は、例えば、ＡＨＬ、シュードモナスキノロンシグナル（ＰＱＳ）等である。シュードモナスキノロンシグナルとしては、例えば、２−ヘプチル−４−キノロン、２−ヘプチル−３−ヒドロキシ−４−キノロン等を挙げることができる。なお、本発明において「微生物フロック」とは、微生物の凝集体を意味する。
【００６４】
この微生物フロックの内部に、クオラムセンシング活性化物質としてＡＨＬを有する場合には、微生物フロックは、当該ＡＨＬと複合体を形成し得るレセプタータンパク質を菌体内で生産するグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。また、微生物フロックの内部に、クオラムセンシング活性化物質としてシュードモナスキノロンシグナルを有する場合には、微生物フロックは、当該シュードモナスキノロンシグナルと複合体を形成し得るレセプタータンパク質を菌体内で生産するシュードモナス属細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。
【００６５】
より具体的には、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックは、例えば、廃水に加えられることによって廃水中の硝化細菌を吸着することができ、微生物フロック中のクオラムセンシング活性化物質により、吸着した硝化細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。したがって、廃水中のアンモニアを硝酸へと効率よく酸化することができる。
【００６６】
本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックは、上記フロック形成菌を培養して形成された微生物フロック内部にクオラムセンシング活性化物質を有する。クオラムセンシング活性化物質がどのような形態で微生物フロック内部に取り込まれるかは明らかではないが、水素結合、疎水性相互作用、あるいは、イオン結合により取り込まれていると考えられる。
【００６７】
クオラムセンシング活性化物質の微生物フロック内部への取り込み方としては、単離された化合物を微生物フロック内部に取り込ませてもよいし、あるいは、クオラムセンシング活性化物質を産生する細菌等を微生物フロック内部に取り込ませ、微生物フロック内部で目的のクオラムセンシング活性化物質を産生させてもよい。
【００６８】
微生物フロック内部へのクオラムセンシング活性化物質あるいは細菌の取り込みは、公知の手段で行うことができる。例えば、フロック形成菌とグラム陰性細菌を共培養することにより、内部にクオラムセンシング活性化物質を取り込んだ微生物フロックを形成することができる。
【００６９】
クオラムセンシング活性化物質を取り込んだ微生物フロック内部においては、クオラムセンシング活性化物質（オートインデューサー）の密度が増大し、ＡＨＬのようなオートインデューサーを介したクオラムセンシング、例えば、プロディジオシン産生やバイオフィルムの形成を活性化させることができる。
【００７０】
本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックによれば、例えば、土壌、廃水、河川、湖、地下水等の被処理物中のグラム陰性細菌を吸着して微生物フロックを形成し、フロック内部の高密度のクオラムセンシング活性化物質（オートインデューサー）により、吸着したグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。
【００７１】
本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックは、前記フロック形成菌とは通常共生しない、あるいは前記フロック形成菌と通常共生する、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を有してもよい。上記のようなグラム陰性細菌を含有することにより、該グラム陰性細菌から産生されたオートインデューサーをクオラムセンシング活性化物質としてフロック内部に取り込ませることができるので好適である。
【００７２】
なお、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックが吸着する硝化細菌としては、例えば、ニトロソモナス・ユーロピア（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｏｐａｅａ）、ニトロソモナス・マリーナ（Ｎｉｔｏｒｏｓｏｍｏｎａｓｕ  ｍａｒｉｎａ）、ニトロソモナス・オリゴトロファ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｏｌｉｇｏｔｒｏｐｈａ）、ニトロソモナス・コミュニス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）等のニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）属細菌；ニトロソコッカス・モビリス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｏｂｉｌｉｓ）等のニトロソコッカス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌；ニトロソスピラ・マルチフォルミス（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｉｓ）、ニトロソスピラ・テヌイス（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ  ｔｅｎｕｉｓ）等のニトロソスピラ（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ）属細菌；ニトロソロバス・マルティフォルミス（Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｉｓ）等のニトロソロバス（Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ）属細菌；ニトロソビブリオ・テヌイス（Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ  ｔｅｎｕｉｓ）等のニトロソビブリオ（Ｎｉｔｒｏｓｏｖｉｂｒｉｏ）属細菌；ニトロバクター・ウィノグラドスキィ（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｗｉｎｏｇｒａｄｓｋｙｉ）、ニトロバクター・アルカリカス（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｌｋａｌｉｃｕｓ）、ニトロバクター・ブルガリス（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ニトロバクター・ハンブルゲンシス（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｈａｍｂｕｒｇｅｎｓｉｓ）等のニトロバクター（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌；ニトロコッカス・モビリス（Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｏｂｉｌｉｓ）等のニトロコッカス（Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌；ニトロスピナ・グラシリス（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｎａ  ｇｒａｃｉｌｉｓ）等のニトロスピナ（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｎａ）属細菌；ニトロスピラ・マリーナ（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａ  ｍａｒｉｎａ）、ニトロスピラ・モスコヴィエンシス（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａ  ｍｏｓｃｏｖｉｅｎｓｉｓ）等のニトロスピラ（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａ）属細菌等のグラム陰性細菌を挙げることができる。
【００７３】
硝化細菌として、具体的には、ニトロソモナス・ユーロピア（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｏｐａｅａ）ＵＵ−２０６株、ニトロソモナス・ユーロピア（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｅｕｒｏｐａｅａ）ＵＵ−２１５株、ニトロバクター・ウィノグラドスキィ（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｗｉｎｏｇｒａｄｓｋｙｉ）ＵＵ−２３２株、ニトロバクター・ウィノグラドスキィ（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｗｉｎｏｇｒａｄｓｋｙｉ）ＵＵ−２３８株、ニトロソスピラ・マルチフォルミス（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｉｓ）ＵＵ−２５１株、ニトロソスピラ・マルチフォルミス（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｉｓ）ＵＵ−２５５株、ニトロコッカス・モビリス（Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｏｂｉｌｉｓ）ＵＵ−２６２株、ニトロコッカス・モビリス（Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｏｂｉｌｉｓ）ＵＵ−２７０株等のグラム陰性細菌を挙げることができる。
【００７４】
また、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックは、廃水中の脱窒菌も吸着することができるので、微生物フロック中のクオラムセンシング活性化物質により、吸着した脱窒菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。したがって、廃水中の硝酸を窒素ガスへと効率よく還元することができる。
【００７５】
なお、脱窒菌としては、例えば、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・デニトリフィカンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、シュードモナス・スタツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ）、パラコッカス・デニトリフィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、アゾスピリラム・リポフェラム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ）、アルカリゲネス・ファエカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）等のグラム陰性細菌を挙げることができる。
【００７６】
脱窒菌として、具体的には、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＵＵ−２２５株、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＵＵ−２２８株、シュードモナス・デニトリフィカンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）ＵＵ−２４１株、シュードモナス・デニトリフィカンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）ＵＵ−２４７株、シュードモナス・スタツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ）ＵＵ−２８３株、シュードモナス・スタツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ）ＵＵ−２８５株、パラコッカス・デニトリフィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）ＵＵ−２１８株、パラコッカス・デニトリフィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）ＵＵ−２２１株、アゾスピリラム・リポフェラム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ）ＵＵ−２８８株、アゾスピリラム・リポフェラム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ）ＵＵ−２９０株、アルカリゲネス・ファエカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＵＵ−２９５株、アルカリゲネス・ファエカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）ＵＵ−２９８株等のグラム陰性細菌を挙げることができる。
【００７７】
その他、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックは、有害物質で汚染された土壌、河川、湖、地下水等に加えられることによって、それらに存在する有害物質分解能を有するグラム陰性細菌を吸着することができるので、微生物フロック中のクオラムセンシング活性化物質により、吸着した有害物質分解能を有するグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。したがって、土壌、河川、湖、地下水等の汚染物質を効率よく浄化することができる。なお、有害物質分解能を有するグラム陰性細菌は、微生物フロックと一緒に有害物質で汚染された土壌や地下水等に加えてもよい。
【００７８】
有害物質分解能を有するグラム陰性細菌としては、例えば、メチロシスチス・エスピー（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．）Ｍ株、メチロシスチス・エスピー（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．）ＵＵ−３０５株、マイコバクテリウム・エスピー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＴＣＥ−２８株、マイコバクテリウム・エスピー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＵＵ−３０８株等のトリクロロエチレンを分解するグラム陰性細菌；アルカリゲネス・ファエカリス・エスピー（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｓｐ．）ＢＭ−２株、アルカリゲネス・エスピー（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｓｐ．）ＵＵ−３２０株等のテトラクロロエチレンを分解するグラム陰性細菌；ブラディリゾビウム・エスピー（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）ＳＳ−１株、ブラディリゾビウム・エスピー（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）ＵＵ−３５３等のトリクロロ酢酸を分解するグラム陰性細菌等を挙げることができる。
【００７９】
バイオフィルムを形成するとともに、抗菌活性を有する物質を産生するグラム陰性細菌を微生物農薬として、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックとともに野菜や果物等の植物の葉に散布して貼付することにより、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックが微生物農薬としてのグラム陰性細菌を吸着し、微生物フロック中のクオラムセンシング活性化物質により、吸着したグラム陰性細菌のクオラムセンシングを効率よく活性化することができる。したがって、微生物農薬としてのグラム陰性細菌による抗菌活性を有する物質の産生が効率よく行われ、野菜や果物等の植物に害を及ぼす微生物の殺菌を効率よく行うことができる。
【００８０】
微生物農薬としてのグラム陰性細菌としては、例えば、シュードモナス・エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＣＡＢ−０２株、シュードモナス・クロロラフィス・サブエスピー・オーランティアカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ａｕｒａｎｔｉａｃａ）ＳｔＦＲＢ５０８株、シュードモナス・クロロラフィス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）ＵＵ−４０８株、シュードモナス・クロロラフィス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）ＵＵ−４１３株、シュードモナス・オーランティアカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒａｎｔｉａｃａ）ＵＵ−４２２株、シュードモナス・オーランティアカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒａｎｔｉａｃａ）ＵＵ−４２７株、シュードモナス・オーレオファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ）ＵＵ−４３５株、シュードモナス・オーレオファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ）ＵＵ−４３６株、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）ＵＵ−４４３株、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）ＵＵ−４４６株、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）ＵＵ−４５１株、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）ＵＵ−４５３株、パントエア・エスピー（Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｐ．）ＵＵ−４６４株、パントエア・エスピー（Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｐ．）ＵＵ−４６８株、エルウィニア・トレタナ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｔｏｌｅｔａｎａ）ＵＵ−４７５株、エルウィニア・トレタナ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｔｏｌｅｔａｎａ）ＵＵ−４７７株等を挙げることができる。
【００８１】
なお、本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックを構成するフロック形成菌及びクオラムセンシング活性化物質を産生する細菌等の各構成要素は、既述した「微生物製剤」の説明欄で詳しく説明したとおりであるので、ここではその説明を省略する。
【００８２】
［微生物フロックの製造方法］
本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックの製造方法は、形成された微生物フロック内部に、前記フロック形成菌とは通常共生しない、あるいは前記フロック形成菌と通常共生する、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌の密度が増大した微生物フロックを製造する方法である。すなわち、その製造方法は、フロック形成菌と、該フロック形成菌とは通常共生しない、あるいは該フロック形成菌と通常共生する、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌を共培養する工程を含んでいる。
【００８３】
フロック形成菌とグラム陰性細菌との共培養は、両細菌が生育可能な培養条件下で適宜行われる。
【００８４】
共培養の培養液としては、フロック形成菌とグラム陰性細菌とが生育可能であれば特に制限されるものではなく、例えば、ＬＢ培地、ＮＢ培地、ＳＣＤ培地、ＨＩＡ培地、Ｒ２Ａ培地等を挙げることができる。
【００８５】
共培養の温度は、フロック形成菌とグラム陰性細菌とが生育可能な温度範囲であればよく、通常、５〜６０℃の範囲内である。
【００８６】
フロック形成菌とグラム陰性細菌が好気性細菌である場合には、共培養は、酸素供給可能な状態で行われる。一方、フロック形成菌とグラム陰性細菌が嫌気性細菌である場合には、共培養は、酸素フリーの状態、例えば、５％ＣＯ２ガス中で行われる。
【００８７】
本実施形態のクオラムセンシング活性化用微生物フロックの製造方法は、培養液に凝集剤を添加する工程を含んでもよい。この工程によって、形成される微生物フロックの強度を高めることができる。したがって、撹拌等によって崩壊しにくい微生物フロックを得ることができる。なお、凝集剤の種類及び濃度等は、既述した「微生物製剤」の説明欄で詳しく説明したとおりであるので、ここではその説明を省略する。
【実施例】
【００８８】
以下の実施例等によって本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は以下の実施例によって何ら限定されるものではない。
【００８９】
［実施例１］
（微生物フロックの作製）
フロック形成菌としてバチラス菌、クオラムセンシング活性化物質を産生するグラム陰性細菌（ＱＳ菌）としてセラチア菌を使用した。
【００９０】
栃木県宇都宮市の土壌から、Ｎ−ヘキサノイルホモセリンラクトン及びＮ−（３−オキソ−ヘキサノイル）ホモセリンラクトン等のＡＨＬを産生するとともに、ＡＨＬを介したクオラムセンシング活性化により赤色色素であるプロディジオシンを産生するセラチア・マルセッセンスＡＳ−１株（以下、本実施例において「セラチア菌」という。）を単離した。また、栃木県県央浄化センターより採取した活性汚泥から、微生物フロックを形成するバチラス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）ＫＯ−５株（以下、本実施例において「バチラス菌」という。）を単離した。１／２ＬＢ液体培地を用いてセラチア菌を３０℃で１０時間、バチラス菌を３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、セラチア菌の培養液を１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のセラチア菌希釈液を調製した。また、バチラス菌の培養液を１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３、０．６又は０．９の各バチラス菌希釈液を調製した。その後、セラチア菌希釈液と各バチラス菌希釈液を２ｍＬずつ混合して、セラチア菌とバチラス菌とのＯＤ６００比が、１：１、１：２、１：３となる２つの菌体の混合溶液をそれぞれ調製し、２５℃で振盪培養を行い、微生物フロックを作製した。
【００９１】
［評価１］
（プロディジオシン産生能の評価）
２５℃での振盪培養開始時、並びに２５℃での振盪培養後６、１０及び２４時間後に、１ｍＬの培養液をそれぞれ回収し、ＡＨＬを介したクオラムセンシングの活性化の指標としてプロディジオシンの産生量を測定した。また、コントロールとして、セラチア菌２ｍＬに１／２ＬＢ液体培地２ｍＬを加え、２５℃での振盪培養開始時、並びに２５℃での振盪培養後６、１０及び２４時間後に、１ｍＬの培養液をそれぞれ回収し、プロディジオシンの産生量を測定した。なお、プロディジオシンの産生量は以下の手順により測定した。回収した各培養液を遠心分離して上清を除去した。４％の１Ｍ塩酸を含むエタノールを１ｍＬ加え、ボルテックスで撹拌し、菌体を破砕した。破砕後、再度遠心分離を行い、上清を１５０μＬ回収し、蒸留水で１０倍に希釈した。この希釈溶液の吸光度を、プロディジオシンの極大吸収波長である５３４ｎｍで測定し、菌体の破砕液の上清における吸光度を算出した。その結果を図１に示す。
【００９２】
図１に示すように、コントロールでは、１０時間の培養で、ＡＨＬを介したクオラムセンシング活性化によるプロディジオシンの産生量が一定となり、クオラムセンシングの活性化が最大となった。これに対して、セラチア菌とバチラス菌とを共培養したものは、１０時間の培養後もプロディジオシンの産生量が増大した。また、セラチア菌に対するバチラス菌の混合割合を増加させることにより、ＡＨＬを介したクオラムセンシングの活性化をより増大できることが確認できた。セラチア菌とバチラス菌との混合割合が１：３である混合溶液を２４時間共培養したものは、プロディジオシンの産生量がコントロールに比べて約１．６倍であった。
【００９３】
［評価２］
（形成された微生物フロックとクオラムセンシングの活性化の評価）
デジタルマイクロスコープ（品番：ＭＳ−２００、朝日光学機製作所製）で各種培養液を観察したところ、コントロールでは、数μｍ以上のサイズの微生物フロックが確認できなかった。これに対して、セラチア菌とバチラス菌とを共培養したものには、培養初期で数十μｍの微生物フロックが多く観察され、１５時間の培養後に１００μｍ〜３００μｍ程度の微生物フロックが多く観察された。また、セラチア菌とバチラス菌との混合割合に依らず、どの共培養においても、培養開始から１０時間以降に、形成された微生物フロックの全体が、ＡＨＬを介したクオラムセンシング活性化により産生されたプロディジオシンによって赤色で染色されているのが確認された。このことから、微生物フロック内部にセラチア菌が取り込まれて、微生物フロック内におけるセラチア菌の濃度が高まり、効果的にクオラムセンシングを活性化できることが示された。
【００９４】
［実施例２］
（凝集剤としてカルシウム塩を用いた微生物フロックの作製）
実施例１で調製した吸光度（ＯＤ６００）が０．３のセラチア菌希釈液と、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のバチラス菌希釈液をそれぞれ５０ｍＬずつ混合した。混合溶液１００ｍＬに、最終濃度が１ｍＭ又は１０ｍＭとなるようにＣａＣｌ２水溶液を混合し、２５℃で振盪培養し、微生物フロックを作製した。
【００９５】
［評価３］
（形成された微生物フロックとクオラムセンシングの活性化の評価）
２５℃での振盪培養開始時、並びに２５℃での振盪培養後３、７及び２４時間後に、１ｍＬの培養液をそれぞれ回収し、［評価１］に記載の方法と同様に培養液の５３４ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を図２に示す。また、［評価２］に記載の方法と同様に培養液中の微生物フロックを観察した。
【００９６】
微生物フロックの観察により、Ｃａ２＋イオンの存在下でセラチア菌とバチラス菌とを共培養することによって微生物フロックが強化されることが確認できた。また、図２に示すように、ＣａＣｌ２の添加量に応じて、ＡＨＬを介したクオラムセンシングの活性化をより増大できることが確認できた。セラチア菌とバチラス菌とのＯＤ６００比の混合割合が１：１である混合溶液を２４時間共培養したものは、プロディジオシンの産生量がコントロールに比べて約１．３倍となっていたが（図１参照）、１０ｍＭのＣａＣｌ２存在下で培養したものは、コントロールに比べて約１．６倍となっており、凝集剤の添加によりＡＨＬを介したクオラムセンシングの活性化をより増大できることが示された。
【００９７】
［実施例３］
（凝集剤としてポリグルタミン酸カルシウム塩を用いた微生物フロックの作製）
セラチア菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１０時間振盪培養した。ポリグルタミン酸カルシウム塩（品番：ＰＧα２１Ｃａ、ポリグルインターナショナル製）を培養液に２．５ｇ/Ｌとなるように添加し、更に３０分間振盪培養した。これとは別に、バチラス菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．４８、０．６、１．２、１．８の各バチラス菌希釈液を調製した。ポリグルタミン酸カルシウム塩を含むセラチア菌培養液２ｍＬと各バチラス菌希釈液２ｍＬを混合し、２５℃で１２時間振盪培養し、微生物フロックを作製した。
【００９８】
［評価４］
（微生物フロックの粒子径評価）
ポリグルタミン酸カルシウム塩を添加して３０分間振盪培養したセラチア菌培養液を顕微鏡で観察すると、数多くの数μｍ程度の微生物フロックと、少数の百μｍ程度の微生物フロックが観察された。この培養液中の粒子の粒子径分布をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ−３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて測定した。また、セラチア菌及びバチラス菌を含まない１／２ＬＢ液体培地にポリグルタミン酸カルシウム塩を添加した１／２ＬＢ液体培地、及び、ポリグルタミン酸カルシウム塩を添加しないでセラチア菌のみを培養した培養液（セラチア菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１０時間振盪培養した培養液）についても同様に、培養液中の粒子の粒子径分布をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置のバッチ式セルを用いて測定した（それぞれ図３（ｂ）及び図３（ｃ）参照）。その結果、ポリグルタミン酸カルシウム塩を添加して培養したセラチア菌培養液においては、セラチア菌の大きさに相当する０．９μｍの粒子径のものと共に４．５μｍ程度の粒子径のものが確認できた（図３（ａ）参照）。
【００９９】
各バチラス菌希釈液を、ポリグルタミン酸カルシウム塩を含むセラチア菌培養液と混合して１２時間振盪培養した各培養液を顕微鏡で観察すると、どの培養液においても数多くの数μｍ程度の微生物フロックと、少数の百μｍ程度の微生物フロックが観察された。これらの培養液中の粒子の粒子径分布を、レーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置のバッチ式セルを用いてそれぞれ測定した。各培養液に対して測定した結果を図４（ａ）〜図４（ｄ）に示す。図４（ａ）〜図４（ｄ）に示すように、どの培養液においても０．９μｍ付近と７μｍ付近の粒子径のものが観察された。なお、本評価で用いたレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置の測定上限は６００μｍであり、この装置では沈殿せず培養液に浮遊しているフロックの粒子径のみが測定されるため、培養液に沈殿しているフロックは測定されないが、バチラス菌希釈液を混合して培養した培養液において、赤色を呈する数ｍｍ程度の不溶物の沈殿が目視で観察された。これに対し、ポリグルタミン酸カルシウム塩を添加して３０分間振盪培養したセラチア菌培養液では、数ｍｍ程度の不溶物は沈殿していなかった。以上の結果から、セラチア菌と、バチラス菌と、高分子凝集剤であるポリグルタミン酸カルシウム塩を共存させることで、凝集性が高くなり、沈降しやすい微生物フロックを製造できることが確認できた。
【０１００】
［評価５］
（プロディジオシン産生能の評価）
実施例３において、各バチラス菌希釈液を、ポリグルタミン酸カルシウム塩を含むセラチア菌培養液と混合して１２時間振盪培養した各培養液をそれぞれ１ｍＬ回収し、［評価１］に記載の方法と同様にプロディジオシンの産生量を測定した。また、コントロールとして、セラチア菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１０時間振盪培養し、２．５ｇ/Ｌとなるようにポリグルタミン酸カルシウム塩を添加して更にバチラス菌未添加で１２時間振盪培養した培養液（混合時のバチラス菌希釈液の吸光度（ＯＤ６００）が０のもの）を準備し、プロディジオシンの産生量を測定した。その結果を図５に示す。
【０１０１】
図５に示すように、バチラス菌未添加のコントロールの吸光度は１．６９であるのに対し、吸光度（ＯＤ６００）が１．２のバチラス菌希釈溶液を混合して培養した場合には吸光度が４．８０であり、コントロールに比べて約２．８倍となっていた。このことから、凝集剤の添加によりＡＨＬを介したクオラムセンシングの活性化をより増大できることが示された。
【０１０２】
［実施例４］
（微生物フロックの作製）
本実施例では、実施例１に記載のセラチア菌の代わりに、ＱＳ菌として、ＡＨＬとしてＮ−ブタノイルホモセリンラクトン及びＮ−（３−オキソ−ドデカノイル）ホモセリンラクトンを、シュードモナスキノロンシグナル（ＰＱＳ）として２−ヘプチル−４−キノロン及び２−ヘプチル−３−ヒドロキシ−４−キノロンを産生する緑膿菌標準株であるシュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１株（以下、本実施例において「緑膿菌」という。）を用いた。緑膿菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、緑膿菌の培養液を１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌希釈液を調製した。これとは別に、バチラス菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養し、１／２ＬＢ液体培地で希釈して吸光度（ＯＤ６００）が０．１及び０．３の各バチラス菌希釈液を調製した。その後、緑膿菌希釈液３ｍＬと各バチラス菌希釈液３ｍＬを混合して３０℃で１時間振盪培養し、微生物フロックを作製した。
【０１０３】
［評価６］
（微生物フロックの粒子径評価）
各バチラス菌希釈液を、緑膿菌希釈液と混合して１時間振盪培養した各培養液を顕微鏡で観察すると、どの培養液においても５０μｍ程度の微生物フロックと、５００μｍ程度の微生物フロックが観察された。これらの培養液中の粒子の粒子径分布を、レーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置のバッチ式セルを用いて測定した（図６（ａ）及び図６（ｂ）参照）。また、緑膿菌のみを１時間振盪培養した培養液（吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液）、及び、バチラス菌のみを１時間振盪培養した培養液（吸光度（ＯＤ６００）が０．１のバチラス菌希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液）についても同様に、培養液中の粒子の粒子径分布をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置のバッチ式セルを用いて測定した（それぞれ図７（ａ）及び図７（ｂ）参照）。その結果、緑膿菌単独の培養では０．６μｍ程度の粒子径のものが、バチラス菌単独の培養では５０μｍおよび５００μｍ程度の粒子径のものが確認できた。緑膿菌と混合するバチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の場合には、得られる粒子径はバチラス菌単独の場合と類似しているが、緑膿菌と混合するバチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の場合には、０．８μｍと主に６０μｍの粒子径のものが観測され、緑膿菌との混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。
【０１０４】
［評価７］
（バイオフィルム形成能の評価）
各バチラス菌希釈液を、緑膿菌希釈液と混合して１時間振盪培養した各培養液２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルム（狭義のバイオフィルムを意味し、微生物フロックを含まない。）を形成させた。また、緑膿菌希釈液を混合していない各バチラス菌希釈液を１時間振盪培養し、各培養液２ｍＬを２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。その後、各ウェルの培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えて除去する洗浄操作を２回実施した。洗浄後、０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置してバイオフィルムを染色した。染色後、染色液を除去し、上記洗浄操作を２回実施した。次いで、エタノール１ｍＬを添加して６０分間静置し、バイオフィルムからクリスタルバイオレットをエタノールに抽出した。この抽出液をエタノールで５倍希釈し、５９５ｎｍの吸光度を測定し、抽出液の吸光度を算出した。その結果を図８に示す。
【０１０５】
図８に示すように、バチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約１．２倍に増大した。バチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約１．３倍に増大した。これらのことから、緑膿菌とバチラス菌の混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１０６】
［実施例５］
（凝集剤としてポリグルタミン酸カルシウム塩を用いた微生物フロックの作製）
実施例４で調製した緑膿菌希釈液に、ポリグルタミン酸カルシウム塩を２．５ｇ/Ｌとなるように添加し、３０分間振盪培養した。これとは別に、バチラス菌を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．２、０．３の各バチラス菌希釈液を調製した。ポリグルタミン酸カルシウム塩を含む緑膿菌培養液３ｍＬと、各バチラス菌希釈液３ｍＬを混合して３０℃で１時間振盪培養し、微生物フロックを作製した。
【０１０７】
［評価８］
（微生物フロックの粒子径評価）
各バチラス菌希釈液を、ポリグルタミン酸カルシウム塩を含む緑膿菌培養液と混合して１時間振盪培養した各培養液を顕微鏡で観察すると、どの培養液においても１ｍｍよりも大きい微生物フロックが観察された。これらの培養液中の粒子の粒子径分布を、レーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置のバッチ式セルを用いてそれぞれ測定した（図９（ａ）〜図９（ｃ）参照）。また、緑膿菌のみを１時間振盪培養した培養液（実施例４で調製した緑膿菌希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液）、バチラス菌のみを１時間振盪培養した培養液（吸光度（ＯＤ６００）が０．１のバチラス菌希釈液３ｍＬに１／２ＬＢ液体培地３ｍＬを加えて３０℃で１時間振盪培養した培養液）、緑膿菌及びバチラス菌を含まない１／２ＬＢ液体培地にポリグルタミン酸カルシウム塩を添加した１／２ＬＢ液体培地、及び、ポリグルタミン酸カルシウム塩を添加して３０分間振盪培養した緑膿菌培養液についても同様に、培養液中の粒子の粒子径分布をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置のバッチ式セルを用いて測定した（図１０（ａ）〜図１０（ｄ）参照）。その結果、緑膿菌とポリグルタミン酸カルシウム塩を含む培養液では１０μｍ程度の粒子径のものが、バチラス菌のみを含む培養液には５００μｍ程度の粒子径のものが確認できた（（図１０（ｄ）及び（図１０（ｂ）参照）。これに対し、緑膿菌、ポリグルタミン酸カルシウム塩、バチラス菌を含む培養液では、１μｍ以下の粒子径のものしか観測されなかった（図９（ａ）〜図９（ｃ）参照）。このように、緑膿菌、ポリグルタミン酸カルシウム塩、バチラス菌を含む培養液において、緑膿菌由来の１０μｍの粒子径のもの、バチラス菌由来の５００μｍの粒子径のものが消失していることから、緑膿菌、ポリグルタミン酸カルシウム塩、バチラス菌を混合して共培養すると、フロック径が１ｍｍ以上まで増大することが確認できた。
【０１０８】
［評価９］
（バイオフィルム形成能の評価）
各バチラス菌希釈液を、ポリグルタミン酸カルシウム塩を含む緑膿菌培養液と混合して１時間振盪培養した各培養液２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で４８時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。また、ポリグルタミン酸カルシウム塩を含む緑膿菌培養液を混合していない各バチラス菌希釈液を１時間振盪培養し、各培養液２ｍＬを２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で４８時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。その後、［評価７］と同様の方法でバイオフィルムをクリスタルバイオレットで染色し、エタノールを用いてバイオフィルムからクリスタルバイオレットを抽出した。この抽出液を１０倍希釈し、５９５ｎｍの吸光度を測定し、抽出液の吸光度を算出した。その結果を図１１に示す。
【０１０９】
図１１に示すように、ポリグルタミン酸カルシウム塩の存在下で、バチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約３．１倍に増大した。また、バチラス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．２および０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約４．０倍に増大した。
【０１１０】
以上のことから、ポリグルタミン酸カルシウム塩の存在下で、緑膿菌とバチラス菌を共培養することにより、大きな微生物フロックを効率よく製造することができ、バイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１１１】
［実施例６］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、緑膿菌シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１、以下、この実施例において「Ｐ．エルギノーサ」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＰ．エルギノーサ希釈液を調製した。
【０１１２】
これとは別に、フロック形成菌として、緑膿菌シュードモナス・オリジハビタンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚｉｈａｂｉｔａｎｓ  ＡＯ−３６３、以下、この実施例において「Ｐ．オリジハビタンス」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＰ．オリジハビタンス菌希釈液を調製した。Ｐ．エルギノーサ希釈液３ｍＬとＰ．オリジハビタンス希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１１３】
［評価１０］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
Ｐ．エルギノーサ希釈液とＰ．オリジハビタンス希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、Ｐ．エルギノーサ単独の培養では０．６μｍ、Ｐ．オリジハビタンス単独の場合には０．８μｍ、２０μｍおよび３００μｍ程度の粒子径が観測された。Ｐ．エルギノーサとＰ．オリジハビタンスを混合すると、０．８μｍと主に２００μｍの粒子径が観測され、混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図１２（ａ）〜図１２（ｃ）に示す。
【０１１４】
［評価１１］
（バイオフィルム形成量の評価）
Ｐ．エルギノーサ希釈液３ｍＬとＰ．オリジハビタンス希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養して作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図１３に示す。
【０１１５】
Ｐ．オリジハビタンスの初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、Ｐ．エルギノーサ単独の場合に比べ約３倍に増大した。以上のことより、Ｐ．エルギノーサとＰ．オリジハビタンスの混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１１６】
［実施例７］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、緑膿菌シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１、以下、この実施例において「Ｐ．エルギノーサ」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＰ．エルギノーサ希釈液を調製した。
【０１１７】
これとは別に、フロック形成菌として、アシネトバクター菌アシネトバクター・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．ＫＯ−２５、以下、この実施例において「アシネトバクター菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．３のアシネトバクター菌希釈液を調製した。Ｐ．エルギノーサ希釈液３ｍＬと各アシネトバクター菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１１８】
［評価１２］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
Ｐ．エルギノーサ希釈液とアシネトバクター菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、Ｐ．エルギノーサ単独の培養では０．６μｍ、アシネトバクター菌単独の場合には０．９μｍ、３０μｍおよび３００μｍ程度の粒子径が観測された。Ｐ．エルギノーサとアシネトバクター菌を混合すると、０．９μｍと主に３５０μｍの粒子径が観測され、混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図１４（ａ）〜図１４（ｃ）に示す。
【０１１９】
［評価１３］
（バイオフィルム形成量の評価）
Ｐ．エルギノーサ培養液３ｍＬと各アシネトバクター菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図１５に示す。
【０１２０】
アシネトバクター菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、Ｐ．エルギノーサ単独の場合に比べ約１．６倍に増大し、アシネトバクター菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３では約１．８倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１２１】
［実施例８］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、緑膿菌シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１、以下本実施例において「緑膿菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌希釈液を調製した。これとは別に、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＯ−２９５、以下本実施例において「大腸菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．３の大腸菌希釈液を調製した。緑膿菌希釈液３ｍＬと大腸菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１２２】
［評価１４］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
緑膿菌希釈液と大腸菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、緑膿菌単独の培養では０．６μｍ、大腸菌単独の場合には３００μｍ程度の粒子径が観測された。緑膿菌と大腸菌を混合すると、０．６μｍと主に６０μｍの粒子径が観測され、緑膿菌との混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図１６（ａ）〜図１６（ｃ）に示す。
【０１２３】
［評価１５］
（バイオフィルム形成量の評価）
緑膿菌希釈液３ｍＬと大腸菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図１７に示す。
【０１２４】
大腸菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約１．２倍に増大し、大腸菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３では約１．８倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１２５】
［実施例９］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、緑膿菌シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１、以下、本実施例において「緑膿菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌として、エロモナス菌エロモナス・キャビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃａｖｉａｅ  ＡＯ−３９５、以下、本実施例において「エロモナス細菌」と称する）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．３のエロモナス細菌希釈液を調製した。緑膿菌希釈液３ｍＬとエロモナス細菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１２６】
［評価１６］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
緑膿菌希釈液とエロモナス細菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、緑膿菌単独の培養では０．６μｍ、エロモナス細菌単独の場合には０．９μｍ、３５μｍ、２６０μｍ程度の粒子径が観測された。緑膿菌とエロモナス細菌を混合すると、１μｍと主に３００μｍの粒子径が観測され、緑膿菌との混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図１８（ａ）〜（ｃ）に示す。
【０１２７】
［評価１７］
（バイオフィルム形成量の評価）
緑膿菌希釈液３ｍＬとエロモナス細菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。該バイオフィルムをマイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図１９に示す。
【０１２８】
エロモナス細菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約１．６倍に増大し、エロモナス細菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は約２倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１２９】
［実施例１０］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、エロモナス細菌エロモナス・エスピー（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．ＵＵ−６、以下本実施例において「Ａ．エスピー」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のＡ．エスピー希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌として、エロモナス菌エロモナス・ハイドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ  ＡＯ−３７６、以下本実施例において「Ａ．ハイドロフィラ」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のＡ．ハイドロフィラ希釈液を調製した。Ａ．エスピー希釈液３ｍＬとＡ．ハイドロフィラ希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１３０】
［評価１８］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
Ａ．エスピー希釈液とＡ．ハイドロフィラ希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、Ａ．ハイドロフィラ単独の培養では１．５μｍ、９μｍ程の粒子径が、Ａ．エスピー単独の場合には１．５μｍ、３５μｍ程度の粒子径が観測された。Ａ．エスピーとＡ．ハイドロフィラを混合すると、１．５μｍと主に１５μｍの粒子径が観測され、Ａ．エスピーとＡ．ハイドロフィラとの混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図２０（ａ）〜（ｃ）に示す。
【０１３１】
［評価１９］
（バイオフィルム形成量の評価）
Ａ．エスピー希釈液３ｍＬとＡ．ハイドロフィラ希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図２１に示す。
【０１３２】
Ａ．エスピーの初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、Ａ．ハイドロフィラ単独の場合に比べ約２３倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１３３】
［実施例１１］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、エロモナス細菌エロモナス・エスピー（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．ＵＵ−７、以下本実施例において「エロモナス細菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のエロモナス細菌希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌としてセラチア菌セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ  ＡＯ−６８、以下本実施例において「セラチア菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のセラチア菌希釈液を調製した。エロモナス細菌希釈液３ｍＬとセラチア菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１３４】
［評価２０］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
エロモナス細菌希釈液とセラチア菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、エロモナス菌単独の培養では１．２μｍ、１３０μｍ程の粒子径が、セラチア菌単独の場合には０．９μｍ、３５μｍ程度の粒子径が観測された。エロモナス菌とセラチア菌を混合すると、０．９μｍと主に３５μｍの粒子径が観測され、混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図２２（ａ）〜（ｃ）に示す。
【０１３５】
［評価２１］
（バイオフィルム形成量の評価）
エロモナス菌希釈液３ｍＬとセラチア菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図２３に示す。
【０１３６】
エロモナス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、セラチア菌単独の場合に比べ約１０倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１３７】
［実施例１２］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、セラチア菌セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ  ＵＵ−３、以下本実施例において「セラチア菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のセラチア菌希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌としてアシドボラックス菌アシドボラックス・テンペランス（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｔｅｍｐｅｒａｎｓ  ＡＯ−２３６、以下本実施例において「アシドボラックス菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシドボラックス菌希釈液を調製した。セラチア菌希釈液３ｍＬとアシドボラックス菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１３８】
［評価２２］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
セラチア菌希釈液とアシドボラックス菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、アシドボラックス菌単独の培養では１．５μｍ、２３μｍ、１８０μｍ程の粒子径が、セラチア菌単独の場合には１．５μｍ程度の粒子径が観測された。セラチア菌とアシドボラックス菌を混合すると、１．７μｍと５μｍの粒子径が観測され、混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図２４（ａ）〜（ｃ）に示す。
【０１３９】
［評価２３］
（バイオフィルム形成量の評価）
セラチア菌希釈液３ｍＬとアシドボラックス菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図２５に示す。
【０１４０】
アシドボラックス菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、セラチア菌単独の場合に比べ約７倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１４１】
［実施例１３］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌としてクロモバクテリウム菌クロモバクテリウム・ビオラセウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ、以下本実施例において「クロモバクテリウム菌」と称する。）ＡＴＣＣ１２４７２株を１５時間培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のクロモバクテリウム菌希釈液を調製した。これとは別に、緑膿菌シュードモナス・オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ  ＡＯ−３３９、以下本実施例において「緑膿菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３の緑膿菌希釈液を調製した。クロモバクテリウム菌希釈液３ｍＬと緑膿菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１４２】
［評価２４］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
クロモバクテリウム菌希釈液と緑膿菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、クロモバクテリウム菌単独の培養では０．９μｍ、２０μｍ程度の粒子径が観測された。緑膿菌単独の場合には１．１μｍ、３０μｍ程度の粒子径が観測された。クロモバクテリウム菌と緑膿菌を混合すると、１．１μｍと主に４０μｍの粒子径が観測され、緑膿菌との混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図２６に示す。
【０１４３】
［評価２５］
（ビオラセイン生産量測定）
クロモバクテリウム菌希釈液３ｍＬと緑膿菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック４ｍＬを試験管に分取し、３０℃で２４時間振とう培養することで紫色素ビオラセインを生産させた。試験管で２４時間振盪培養した後に、培養液２００μＬを１．５ｍＬマイクロチューブに分取した。ここに１０％のＳＤＳ溶液を１００μＬ添加し、１０秒ボルテックスした。さらに水飽和ブタノールを９００μＬ添加し、５秒ボルテックス後、１２５００ｒｐｍで５分間遠心分離させることでビオラセインを上層に抽出した。上層の５９５ｎｍにおける吸光度を測定し、ビオラセイン生産量を決定した。その結果を図２７に示す。
【０１４４】
ビオラセインの生産量は、クロモバクテリウム菌単独の場合に比べ約１９倍に増大し、クロモバクテリウム菌と緑膿菌の混合フロックを作ることでビオラセイン生産量が向上することが確認できた。
【０１４５】
［実施例１４］
（微生物フロックの作製）  
ＱＳ菌として、緑膿菌シュードモナス・クロロラフィス・サブエスピー・オーランティアカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ａｕｒａｎｔｉａｃａ  ＵＵ-1５株、以下本実施例において「緑膿菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌としてアシネトバクター菌アシネトバクター・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．ＫＯ−２５、以下本実施例において「アシネトバクター菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌希釈液を調製した。緑膿菌希釈液３ｍＬとアシネトバクター菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１４６】
［評価２６］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
緑膿菌希釈液とアシネトバクター菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、緑膿菌単独の培養では０．１５μｍ、０．９μｍ程の粒子径が、アシネトバクター菌単独の場合には０．７μｍ、８０μｍ程度の粒子径が観測された。緑膿菌とアシネトバクター菌を混合すると、０．８μｍと主に２００μｍの粒子径が観測され、混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図２８に示す。
【０１４７】
［評価２７］
（バイオフィルム形成量の評価）
緑膿菌希釈液３ｍＬとアシネトバクター菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出される。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図２９に示す。
【０１４８】
アシネトバクター菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、緑膿菌単独の場合に比べ約１．３倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１４９】
［実施例１５］
（微生物フロックの作製）  
ＱＳ菌として、シノリゾビウム菌シノリゾビウム・エスピー（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ、以下本実施例において「シノリゾビウム菌」と称する。）ＵＵ−１２株を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のシノリゾビウム菌希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌として大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＡＯ−２９５、以下本実施例において「大腸菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３の大腸菌希釈液を調製した。シノリゾビウム菌希釈液３ｍＬと大腸菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１５０】
［評価２８］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
シノリゾビウム菌希釈液と大腸菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、シノリゾビウム菌単独の培養では０．８μｍ、２６０μｍ程の粒子径が、大腸菌単独の場合には０．８μｍ、１３０μｍ程度の粒子径が観測された。シノリゾビウム菌と大腸菌を混合すると、０．８μｍと主に７０μｍの粒子径が観測され、シノリゾビウム菌との混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図３０に示す。
【０１５１】
［評価２９］
（バイオフィルム形成量の評価）
シノリゾビウム菌希釈液３ｍＬと大腸菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図３１に示す。
【０１５２】
大腸菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、シノリゾビウム菌単独の場合に比べ約２倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１５３】
［実施例１６］
（微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として、シノリゾビウム菌シノリゾビウム・エスピー（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ、以下本実施例において「シノリゾビウム菌」と称する。）ＵＵ−１３株を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１のシノリゾビウム菌希釈液を調製した。これとは別に、フロック形成菌としてアシネトバクター菌アシネトバクター・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  ＫＯ−２５、以下本実施例において「アシネトバクター菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．３のアシネトバクター菌希釈液を調製した。シノリゾビウム菌希釈液３ｍＬとアシネトバクター菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１５４】
［評価３０］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
シノリゾビウム菌希釈液とアシネトバクター菌希釈液を混合し１時間振盪培養した培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、シノリゾビウム菌単独の培養では０．８μｍ、１３０μｍ程の粒子径が、アシネトバクター菌単独の場合には０．７μｍ、８０μｍ程度の粒子径が観測された。シノリゾビウム菌とアシネトバクター菌を混合すると、１μｍと主に９０μｍの粒子径が観測され、シノリゾビウム菌との混合培養により得られるフロックサイズが異なることが確認できた。結果を図３２に示す。
【０１５５】
［評価３１］
（バイオフィルム形成量の評価）
シノリゾビウム菌希釈液３ｍＬとアシネトバクター菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを、２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で７２時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。マイクロプレートで７２時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍＬを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加えこれを除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで５倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図３３に示す。
【０１５６】
アシネトバクター菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．３の共培養液から形成されるバイオフィルム量は、シノリゾビウム菌単独の場合に比べ約２．３倍に増大した。混合フロックを作ることでバイオフィルム形成能が向上することが確認できた。
【０１５７】
［実施例１７］
（無機凝集剤を添加した微生物フロックの作製）
ＱＳ菌として緑膿菌シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１、以下本実施例において「緑膿菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地を用いて希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌希釈液を調製した。
【０１５８】
ポリ塩化アルミニウム（南海化学株式会社製、１０〜１１％水溶液）を培養液に３０ｍｇ／Ｌとなるように添加し更に３０分間振盪培養した。これとは別に、フロック形成菌としてセラチア菌セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ  ＡＯ−６８、以下本実施例において「セラチア菌」と称する。）を１／２ＬＢ液体培地を用いて３０℃で１６時間振盪培養した。培養後、１／２ＬＢ液体培地で希釈し、吸光度（ＯＤ６００）が０．１、０．２、０．３の各セラチア菌希釈液を調製した。ポリ塩化アルミニウムを含む緑膿菌希釈液３ｍＬと、各セラチア菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し微生物フロックを作製した。
【０１５９】
［評価３２］
（混合微生物フロックの粒子径評価）
培養初期ＯＤを０．１とした緑膿菌またはセラチア菌を１時間振盪培養し、培養液をレーザー回折/散乱式粒子径分布測定装置（品番：ＬＡ―３００、測定上限６００μｍ、堀場製作所製）のバッチ式セルを用いて粒子径分布測定すると、緑膿菌では１μｍ以下の粒子径のみが、セラチア菌では１μｍ以下の粒子径と共に４０μｍほどの粒径が観測された。結果を図３４に示す。初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１の緑膿菌にポリ塩化アルミニウムを添加し、さらに初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１のセラチア菌を混合し１時間振盪培養して、実体顕微鏡（品番：Ｍ１６５Ｃ、Ｌｅｉｃａ製）で観察すると約６００μｍ以上の大きなフロックが観察された。結果を図３５に示す。
【０１６０】
［評価３３］
（バイオフィルム形成量の評価）
ポリ塩化アルミニウムを含む緑膿菌希釈液３ｍＬと、各セラチア菌希釈液３ｍＬを混合し、３０℃で１時間振盪培養し作製した微生物フロック２ｍＬを２４穴マイクロプレートに分取し、３０℃で４８時間静置することでマイクロプレートにバイオフィルムを形成させた。
【０１６１】
マイクロプレートで４８時間静置した後に、マイクロピペットで培養液を静かに除去し、蒸留水２ｍＬを加え除去する洗浄操作を２回実施した。ここへ染色液として０．１％クリスタルバイオレット水溶液１ｍLを添加し、２０分間静置することでバイオフィルムを染色した。マイクロピペットで染色液を除去し、蒸留水２ｍＬを加え除去する洗浄操作を２回実施した。エタノール１ｍＬを添加し６０分間静置すると、バイオフィルムからクリスタルバイオレットがエタノールに抽出された。得られた溶液をエタノールで１０倍希釈し、クリスタルバイオレット抽出液の吸光度を５９５ｎｍで測定した。その結果を図３６に示す。
【０１６２】
セラチア菌の初期吸光度（ＯＤ６００）が０．１では、緑膿菌の単独の場合に比べてバイオフィルム形成量は約１．２倍、初期吸光度（ＯＤ６００）が０．２および０．３の場合では約１．４倍に増大した。緑膿菌、セラチア菌、ポリ塩化アルミニウムの混合で作製した微生物フロックを用いると、バイオフィルム形成能が向上したことが確認できた。
【図１】
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【図２】
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【図８】
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【図１１】
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【図１３】
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【図１５】
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【図１７】
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【図１９】
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【図２１】
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【図２３】
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【図２５】
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【図２９】
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【図３１】
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【図３３】
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【図３６】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図９】
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【図１０】
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【図１２】
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【図１４】
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【図１６】
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【図１８】
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【図２０】
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【図２２】
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【図２４】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図３０】
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【図３２】
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【図３４】
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【図３５】
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