(57)【要約】【課題】本発明は、牛樟芝の有効成分含有量および種類量を増加させる牛樟芝の培養方法を提供する。【解決手段】該牛樟芝の培養方法では、主に照射光波長を変えることにより、培養した牛樟芝の有効成分含有量および種類量を増加し、さらに培地含水量、培地の組成成分およびその比率、培養温度などの環境要因を調整することにより、牛樟芝の有効成分含有量および種類の増加に寄与する。【選択図】図１
2015037396.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
牛樟芝の培養方法であって、
種菌を培地中に接種し、少なくとも１つの培養条件下で培養し、
前記培養条件は、緑色光と青色光とからなる群より選択された光照射環境を含むことを特徴とする牛樟芝の培養方法。
【請求項２】
前記光照射環境における照射光強度は、１〜２０μｍｏｌ／ｓ・ｍ２であることを特徴とする請求項１に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項３】
前記光照射環境が青色光照射である場合、前記光照射環境における照射光強度は、２〜１６μｍｏｌ／ｓ・ｍ２であることを特徴とする請求項２に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項４】
前記光照射環境が緑色光照射である場合、前記光照射環境における照射光強度は、１１〜２０μｍｏｌ／ｓ・ｍ２であることを特徴とする請求項２に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項５】
前記培養条件は、２５〜３５℃の培養温度をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項６】
前記培地は、粉末状の基材及び水を含むことを特徴とする請求項１に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項７】
前記粉末状の基材は、少なくとも１つの全粒穀物を有することを特徴とする請求項６に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項８】
前記粉末状の基材は、苦蕎麦粉と、玄米粉と、ハトムギ粉とからなる群より選択されることを特徴とする請求項７に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項９】
前記粉末状の基材は、所定の比率の苦蕎麦粉と、玄米粉と、ハトムギ粉とからなることを特徴とする請求項８に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１０】
前記粉末状の基材において、ハトムギ粉の含有量が最も低く、苦蕎麦粉の含有量がその次に低く、玄米粉の含有量が最も高いことを特徴とする請求項９に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１１】
前記粉末状の基材において、ハトムギ粉の含有量が最も低く、玄米粉の含有量がその次に低く、苦蕎麦粉の含有量が最も高いことを特徴とする請求項９に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１２】
前記粉末状の基材の組成比として、ハトムギ粉が１で、玄米粉がハトムギ粉の１０〜２倍で、苦蕎麦粉がハトムギ粉の２〜１０倍であることを特徴とする請求項９に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１３】
玄米粉、苦蕎麦粉及びハトムギ粉の組成比は、９：２：１であることを特徴とする請求項１２に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１４】
前記培地の含水量は、３５〜５５％であることを特徴とする請求項６に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１５】
前記培地の含水量は、３５〜５０％であることを特徴とする請求項１４に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１６】
前記種菌は、破砕した牛樟芝の菌塊を培養して得られたものであることを特徴とする請求項１に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１７】
光照射しない環境で１５日間培養する一方の培養条件と、光照射環境で少なくとも１５日間培養する他方の培養条件とからなる２つの培養条件を含むことを特徴とする請求項１〜１６のいずれか一項に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１８】
前記一方の培養条件の培養温度は、前記他方の培養条件の培養温度より低いことを特徴とする請求項１７に記載の牛樟芝の培養方法。
【請求項１９】
前記一方の培養条件の培養温度が２５℃で、前記他方の培養条件の培養温度が２５〜３５℃であることを特徴とする請求項１８に記載の牛樟芝の培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真菌培養方法に関し、特に牛樟芝の培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
樟芝とも呼ばれる牛樟芝（Antrodia cinnamomea）は、台湾固有の真菌類で、主に台湾の海抜約４５０〜１５００メートルの山岳部における牛樟樹の腐敗した樹洞に成長する。近年の研究によれば、牛樟芝は、極めて栄養価が高くて、多くの生理活性を有していることが見出されている。そのため、現在、市場には、極めて貴重な真菌としての牛樟芝に対する需要量が増加している。更に言えば、牛樟芝の主な有効成分は、多糖体、ポリフェノール類化合物、および指標とした生成物のトリテルペン類（triterpene）を含む。また、研究の結果によれば、多糖体は、免疫力を高め、抗腫瘍効果を有することが見出された。ポリフェノール類化合物は、生物体の還元剤として見られ、フリーラジカルの消去、酸化防止および悪玉コレステロール酸化の抑制などの機能を有し、かつ癌細胞の増殖に必要な酵素を抑えることにより、癌抑制効果を達成することが考えられている。トリテルペン類は、癌細胞の細胞死を促進し、肝癌細胞の増殖を阻害し、肝臓の修復、肝臓機能の改善、抗炎症、脂質降下、血圧降下、脳卒中予防および免疫調節などの作用を有ることが証明された。しかしながら、牛樟芝が寄生した牛樟樹が保護植物であり、かつ牛樟樹の成長が遅いため、自然環境で大量の牛樟芝を入手することは困難である。したがって、牛樟芝の入手や、牛樟芝の有効成分含有量を効果的に増加させることは、生物医学産業の重要な研究テーマになっている。
【０００３】
牛樟芝の有効成分は、培養方法および培養条件によって変わる。現在、牛樟芝の培養方法としては、主に液体培養法、固体培養法および原木栽培法がある。液体培養法では、所定の比率の炭素源および窒素源から調製した液体培地で牛樟芝を培養する。そのメリットとして、低コスト、培養期間が短く、７〜１４日間のみで牛樟芝を培養することが可能である。しかし、培養された牛樟芝のトリテルペン含有量が低く、かつ含有するトリテルペン類は、野生の牛樟芝に含まれる独特なトリテルペン類と異なる。固体培養方法では、天然穀物と水とからなる固体培地で牛樟芝を培養し、かつ人工で温度と湿度を制御することにより、培養された牛樟芝のトリテルペン含有量が比較的に高い。しかしながら、長い培養期間、約３〜６ヶ月が必要とし、さらに用いた培地によって、培養された牛樟芝に含まれる有効成分が異なるため、大規模の生産時に、品質が不均一になるおそれがある。それ以外に、野生の牛樟芝に含まれる独特なトリテルペン類成分をカバーすることができない。原木栽培法では、牛樟樹を培地とし、野生の牛樟芝の子実体と同じ成分を培養することができるという利点をもちながら、人工で培養環境の制御を加えることにより、牛樟芝の子実体の品質の安定性を向上させる。しかしながら、原木栽培法では、１〜３年の培養期間を必要とし、かつ牛樟樹が保護植物であって取得することが困難であるため、培養にかかるコストが増加し、大量生産が困難になる。
【０００４】
牛樟芝の有効成分の生産量と生産コストの両方を考慮すると、現在、固体培養法による牛樟芝の培養が多く選択されている。しかしながら、既存技術における種々の欠点、例えば、培養された牛樟芝を粒子状の固体培地から分離しにくく、培地が付着しているため製品として使用が制限されること、または、培養された牛樟芝の子実体が薄く、その有効成分生産量も共に減少すること、が存在している。また、牛樟芝を液体培養するときに照射光波長を変更することによって、牛樟芝の有効成分含有量に作用する。しかし、青色光は、トリテルペン含有量を増加させることなく、細胞外多糖類の含有量のみを増加させる。一方、赤色光は、トリテルペン含有量に作用するが、細胞外多糖類の含有量に影響しない。したがった、現在、牛樟芝の有効成分含有量を増加させるとともに、生産コストを効果的に制御可能な牛樟芝の培養方法は、提供されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の主な目的は、牛樟芝の有効成分含有量および種類を増加させるための牛樟芝の培養方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明に係る牛樟芝の培養方法では、種菌を培地中に接種し、少なくとも１つの培養条件下で培養し、前記培養条件は、緑色光と青色光とからなる群より選択された光照射環境を含む。光照射環境における照射光強度は、１〜２０μｍｏｌ／ｓ・ｍ２である。好適には、青色光強度は、２〜１６μｍｏｌ／ｓ・ｍ２である。好適には、緑色光強度は、１１〜２０μｍｏｌ／ｓ・ｍ２である。
【０００７】
前記培養条件は、２５〜３５℃の培養温度を含む。
前記培地は、粉末状の基材と水とを含み、前記粉末状の基材は、少なくとも１つの全粒穀物、例えば、苦蕎麦粉、玄米粉、ハトムギ粉、または少なくとも２つの前記粉末を所定の比率で混合したものを有する。
【０００８】
前記粉末状の基材は、苦蕎麦粉と、玄米粉と、ハトムギ粉とを混合したものである。ここで、ハトムギ粉の含有量が最も低く、玄米粉の含有量が最も高く、苦蕎麦粉の含有量がハトムギ粉の含有量と玄米粉の含有量との間であり、または、ハトムギ粉の含有量が最も低く、苦蕎麦粉の含有量が最も高く、玄米粉の含有量がハトムギ粉の含有量と苦蕎麦粉の含有量との間である。具体的に、好適には、前記粉末状の基材の組成比として、ハトムギ粉が１で、玄米粉がハトムギ粉の１０〜２倍で、苦蕎麦粉がハトムギ粉の２〜１０倍であり、例えば、玄米粉と、苦蕎麦粉と、ハトムギ粉との組成比は、９：２：１である。
【０００９】
前記培地の含水量は、３５〜５５％である。好適には、前記培地の含水量は、３５〜５０％である。
【００１０】
前記種菌は、破砕した牛樟芝の菌塊を培養して得られたものであるため、可視状態で真菌を均一に分配し、接種に寄与し、さらに汚染を回避することが可能である。
【００１１】
さらにいうと、本発明に係る方法は、光照射しない環境で約１５日間培養することと、光照射環境で少なくとも約１５日間培養することとからなる２つの培養条件を含む。
【００１２】
前記一方の培養条件の培養温度は、前記他方の培養条件の培養温度より低く、具体的に、前記一方の培養条件の培養温度が２５℃で、前記他方の培養条件の培養温度が２５〜３５℃である。
【００１３】
本発明に係る牛樟芝の培養方法によれば、牛樟芝の有効成分含有量および種類を増加させ、牛樟芝の培養に必要とするコストを低減させることにより、大量生産していろんな製品の原料とすることができ、牛樟芝の経済的付加価値を向上させる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、強度の異なる緑色光で牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【図２】図２は、強度の異なる青色光で牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【図３】図３は、含水量の異なる玄米粉末を固体培地として牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【図４】図４は、含水量の異なる苦蕎麦粉末を固体培地として牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【図５】図５は、含水量の異なるハトムギ粉末を固体培地として牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【図６】図６は、異なる温度変化で牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【図７】図７は、組成比の異なる固体培地で牛樟芝を培養し、各牛樟芝の各有効成分含有量を測定した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明による牛樟芝の培養方法では、照射光の波長を変更させることにより、培養された牛樟芝の有効成分含有量および有効成分の種類を増加させ、さらに培地の含水量、培地の組成成分および成分の組成比、培養温度などの環境要因を調整することにより、牛樟芝の有効成分含有量および有効成分の種類の増加に更に寄与する。
【００１６】
説明すべき点は、本発明の明細書および特許請求範囲に使用される用語は、単なる例であり、本発明の明細書および特許請求範囲を制限するものではないことである。
【００１７】
培地とは、真菌類を培養するための液体培地および固体培地を含むものを称する。
【００１８】
全粒穀物とは、イネ類、ホウキモロコシ類、キビ類、麦類、マメ類およびナッツ類、例えば、玄米、米、ホウキモロコシ、トウモロコシ、小麦、アワ、米、モロコシ、エンバク、大麦、蕎麦、大豆、リョクトウ、ダイズ、トウアズキ、黒豆、クルミ、ヨクイニン、カボチャの種などのものを称する。
以下では、図面を参照しながら、本考案の実施例に対して詳しく説明する。
【００１９】
＜実施例１＞
種菌の調製
本実施例の牛樟芝の菌株（BCRC 35396）は、台湾新竹食品工業発展研究の生物資料保存および研究センターに提供され、牛樟芝の菌糸で満たされるまで２５℃、斜面培地にて培養された。ここで、斜面培地は、２％ブドウ糖、２％麦芽エキス、０．１％蛋白分解物（Peptone）、および２％コロイドから調製された。
【００２０】
牛樟芝の菌糸体が成長した斜面菌種を、適切な量で、牛樟芝の培地とするペトリ皿に移植し、ペトリ皿において牛樟芝の菌糸が半径３．５ｃｍの円形状に成長するまで培養した。ここで、牛樟芝の培地とするペトリ皿は、斜面培地と同様に調製された。調製された培地を８等分し、培養終了後の培地であるペトリ皿を８等分し、それぞれ調合した８本の液体培地に入れた。ここで、液体培地は、２％ブドウ糖、２％麦芽エキス、および０．１％蛋白分解物から調製された。次に、前記各液体培地の菌塊を完全破砕した後、２５℃、１００ｒｐｍのインキュベーターに入れて５日間培養して、以下の実施例で用いる。
【００２１】
＜実施例２＞
細胞内多糖類の測定法
被測定試料の粉末１００ｍｇと蒸留水１０ｍｌとを遠心分離管に入れ、滅菌した後８０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清液を回収した。前記上清液と９５％アルコールとを１：４の体積比で混合し、この混合物における多糖体を沈殿させるように４℃の冷蔵庫で２４時間静置した。次に、混合物を８０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、当該上清液を除去することで沈殿物を得た。前記沈殿物を水酸化ナトリウムで再溶解、希釈し、フェノール硫酸法（Phenol-sulfuric acid assay）で細胞内多糖類の濃度を測定した。希釈した後の溶液を５％のフェノール溶液と混合し、濃硫酸５ｍｌを加えて１０分間混合し、さらに２５℃の恒温水槽で１５分間反応させ、分光光度計で波長４９０ｎｍにおける吸光度を測定し、ブドウ糖標準液の濃度とその吸光度の標準曲線とを参照することにより、前記被測定試料における多糖類の濃度を知ることができる。
【００２２】
＜実施例３＞
総ポリフェノール含有量の測定
被測定試料である菌糸体を取って、固定倍率（１：２０）のメタノールで、５０℃、１３０ｒｐｍの水溝において１２時間抽出反応した後に、８０００ｒｐｍで５分間遠心分離することにより、上清液を得た。当該上清液に２％炭酸ナトリウム６ｍｌを添加し均一に混合した。さらに、フェノール試薬（Folin-Clocalteu's phenol reagent）を添加し約３０分間反応させた後、７３０ｎｍの波長でその吸光度を測定し、既知濃度の標準没食子酸（Gallic acid）の検量線と比較することにより、当該被測定試料の総ポリフェノール含量を算出した。
【００２３】
＜実施例４＞
トリテルペン類含有量の測定
被測定試料１００ｍｇと５０％エタノール３ｍｌとを遠心分離管中に混合し、３０分間超音波振動をかけながら抽出を行い、さらに８０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遠心分離管から上清液３ｍｌを取り出してバイアルに入れ、そして遠心分離管で上述したアルコールの添加、抽出および遠心分離などの工程を繰り返した後に、上清液３ｍｌを取り出してバイアルに入れた。当該バイアルにおける上清液を乾燥することによって得ることのできる乾燥物に、水３ｍｌとクロロホルム３ｍｌとを添加して当該乾燥物を再溶解し、３０分間超音波振動をかけながら抽出を行うことによって、その下層液を取り出し、そして、５％炭酸水素ナトリウム３ｍｌを添加してから、３０分間超音波振動をかけながら抽出を行い、ｐH値を２〜３に調整し、その下層液を取出して乾燥し、飽和状態のエタノール２ｍｌを添加し、波長２４５ｎｍによって吸光度を測定することにより、当該被測定試料におけるトリテルペン類含有量を得ることができる。
【００２４】
＜実施例５＞
培養用照射光の波長および強度に関する分析
玄米をミル装置で粉末状に粉砕し、玄米粉２５ｇをガラス板上に置いて、水１５ｇと均一混合した。この混合物を減菌した後、牛樟芝を培養するための固体粉末の培地として用いた。実施例１により培養された牛樟芝種菌を、５％の接種菌量で前記固体粉末の培地に接種し、封入した後に２５℃の恒温にてインキュベーターで１５日間培養し、その後、光照射を行った。本実施例において、照射光の波長によって2つの実験グループに分けた。第１実験グループでは、緑色光を照射し、第２実験グループでは、青色光を照射した。さらに、各実験グループは、照射光の強度によって4つの群に分けた。各実験グループの各前記第１群が空白で、各前記第２群における照射光の強度が１〜２ μｍｏｌ／ｓ・ｍ２、各前記第３群における照射光の強度が１５〜１６μｍｏｌ／ｓ・ｍ２、各前記第４群における照射光の強度が１９〜２０μｍｏｌ／ｓ・ｍ２であった。各群に対し、照射光によって１５日間培養した後、各群で成長した牛樟芝をそれぞれ回収し、２４時間乾燥し、さらに粉砕してから実施例２〜４の方法で各群の牛樟芝におけるトリテルペン類、総ポリフェノール、および細胞内多糖類の含有量を測定した。各群に対して、上記の工程を三回繰り返した。各群の牛樟芝における各有効成分含有量を統計した結果を図１および図２に示す。図１と図２は、それぞれ、第１実験グループと第２実験グループで測定した結果を示す。
【００２５】
図１に示した結果から、第１実験グループの第２〜４群において、細胞内多糖類の含有量は、それぞれ６６．３８  ｍｇ／ｇ、９６．５５ ｍｇ／ｇ、および６０．１９ ｍｇ／ｇで、総ポリフェノール含有量は、それぞれ、３８．８６ ｍｇ／ｇ、４３．７１ ｍｇ／ｇ、および２５．４６ ｍｇ／ｇで、粗トリテルペン含有量は、それぞれ、２２．２８ ｍｇ／ｇ、３９．６４ ｍｇ／ｇ、および１７．８１ ｍｇ／ｇであることが分かった。図２に示した結果から、第２実験グループの第２〜４群において、細胞内多糖類の含有量は、それぞれ、７９．７８  ｍｇ／ｇ、７３．８３ ｍｇ／ｇ、および４１．６１ ｍｇ／ｇで、総ポリフェノール含有量は、それぞれ、２７．４６ ｍｇ／ｇ、４１．９０ ｍｇ／ｇ、および、２９．０９ ｍｇ／ｇで、粗トリテルペン含有量は、それぞれ、２２．５９ ｍｇ／ｇ、２２．３９ ｍｇ／ｇ、および１３．１５ ｍｇ／ｇであることが分かった。さらにいうと、緑色光強度１５〜１６ μｍｏｌ／ｓ・ｍ２で照射し培養した後、得られた総ポリフェノール含有量は、光照射されない群による総ポリフェノール含有量の２．６９倍で、かつ粗トリテルペン含有量は、光照射されない群による粗トリテルペン含有量の２．９２倍である。青色光強度１５〜１６μｍｏｌ／ｓ・ｍ２で照射し培養した後、得られた総ポリフェノール含有量は、光照射されない群による総ポリフェノール含有量の２．５３倍で、かつ粗トリテルペン含有量は、光照射されない群による粗トリテルペン含有量の２．７０倍である。
【００２６】
そのため、全体からいうと、図１および図２に示した結果から、緑色光照射または青色光照射に関わらず、いずれの場合も牛樟芝の有効成分含有量または種類を増加ことができ、青色光を照射した場合、光強度が２〜１６ μｍｏｌ／ｓ・ｍ２であるときに得られた各有効成分含有量は最も高く、緑色光を照射した場合、光強度が１１〜２０μｍｏｌ／ｓ・ｍ２であるときに得られた各有効成分含有量は最も高いことが見られる。
【００２７】
＜実施例６＞
固体培地含水量の分析
玄米粉末を適切な量で、相対的な割合の水と培養容器で混合し、それぞれ第１群および第２群としての、含水量５５％の玄米粉末の固体培地および含水量４５％の玄米粉末の固体培地を調製した。次に、各群の固体培地に５％の種菌を接種し、３ヶ月間培養し、さらに３ヶ月目に培養したときに、成長した牛樟芝をその固体培地から分離させ、実施例２〜４の方法で、各群において培養された牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図３に示す。
【００２８】
上記の工程と同様に、牛樟芝を培養するための、含水量の異なる苦蕎麦粉末の固体培地、および含水量の異なるハトムギ粉末の固体培地をそれぞれ調製し、さらに、上記の玄米粉末の固体培地と同様に、含水量に応じて第１群と第２群とに分け、その後、各群の固体培地で牛樟芝を培養した。３ヶ月間培養した牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図４および図５に示す。図４は、含水量の異なる苦蕎麦粉末の固体培地で培養した結果を示す図である。図５は、含水量の異なるハトムギ粉末の固体培地で培養した結果を示す図である。
【００２９】
図３に示した結果から、含水量５５％の玄米粉末の固体培地で培養した牛樟芝の細胞内多糖類含有量２．４２ ｍｇ／ｇ、総ポリフェノール含有量４６．３８ ｍｇ／ｇ、粗トリテルペン含有量５１．８４ ｍｇ／ｇに比べ、含水量４５％の玄米粉末の固体培地で培養した牛樟芝の有効成分含有量のいずれも増加し、細胞内多糖類、総ポリフェノール、および粗トリテルペンの含有量が、それぞれ、３３．５５ ｍｇ／ｇ、４１．６０ ｍｇ／ｇ、および５１．８４ ｍｇ／ｇであることが分かった。
【００３０】
図４に示した結果から、含水量５５％の苦蕎麦粉末の固体培地で培養した牛樟芝では、細胞内多糖類含有量が５．０１ ｍｇ／ｇ、総ポリフェノール含量が３３．９０ ｍｇ／ｇ、粗トリテルペン含有量が２３．９５ ｍｇ／ｇであり、一方、含水量４５％の苦蕎麦粉末の固体培地で培養した牛樟芝では、細胞内多糖類含有量が４３．０２ ｍｇ／ｇで、総ポリフェノール含量が３６．２７ ｍｇ／ｇで、粗トリテルペン含有量が４４．８２ ｍｇ／ｇであることが分かった。言い換えれば、含水量４５％の苦蕎麦粉末の固体培地で培養して得られた牛樟芝の各有効成分含有量のいずれも、含水量５５％の苦蕎麦粉末の固体培地で培養して得られた牛樟芝の各有効成分含有量より高い。
【００３１】
図５に示した結果から、含水量５５％のハトムギ粉末の固体培地で培養した牛樟芝の細胞内多糖類含有量２．８４ ｍｇ／ｇ、総ポリフェノール含量２６．５３ ｍｇ／ｇ、粗トリテルペン含有量８．４１ ｍｇ／ｇに比べ、含水量４５％のハトムギ粉末の固体培地で培養した牛樟芝の有効成分含有量のいずれも増加し、細胞内多糖類、総ポリフェノールおよび粗トリテルペンの含有量が、それぞれ、１８．７０ ｍｇ／ｇ、２８．２０ ｍｇ／ｇ、および２０．０６ ｍｇ／ｇであることが分かった。
【００３２】
図３〜図５によると、含水量４５％の固体培地で培養した牛樟芝の各有効成分含有量のいずれも、含水量５５％の固体培地で培養した牛樟芝の各有効成分含有量より高いことが示された。
【００３３】
＜実施例７＞
培養温度の分析
本実施例には、３つの実験群があった。各群において、それぞれ、玄米をミル装置で粉末状に粉砕し、玄米粉２５ｇをガラス板上において含水量４５％に水分を調整することにより、固体培地を形成した。当該固体培地を減菌した後、実施例１の種菌を５％の種菌量で各群の固体培地に接種した。その後、各群において、異なる培養温度で牛樟芝を培養した。ここで、第１群では、２５℃の恒温培養室で牛樟芝を３０日間固体培養した。第２群では、まず、２５℃の恒温培養室で牛樟芝を１５日間固体培養し、次に、培養温度３０℃で１５日間培養した。第３群では、まず、２５℃の恒温培養室で牛樟芝を１５日間固体培養し、次に、培養温度３５℃で１５日間培養した。培養された各群の牛樟芝を回収し、実施例２〜４の方法で、各群の牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図６に示す。
【００３４】
図６に示した結果から、第1群で得られた各有効成分含有量に比べ、第２群および第３群で得られた各有効成分含有量が増加したことが分かった。更には、第２群で得られた総ポリフェノールおよび粗トリテルペン含有量は、それぞれ、２３．２７ ｍｇ／ｇおよび２３．５１ ｍｇ／ｇであり、これは第１群で得られた数値より大幅に高い。第１群で得られた細胞内多糖類含有量に比べ、第３群で得られた細胞内多糖類含有量（121.26 ｍｇ／ｇ）が増加したことが分かった。そのため、図６によると、牛樟芝を１５日間培養した後に温度を３０〜３５℃に上昇することにより、その有効成分含有量の増加に寄与することが示された。総ポリフェノールおよび粗トリテルペンの含有量を増加させるように、温度を３０℃に調整し培養することが好ましい。細胞内多糖類含有量を増加させるように、温度を３５℃に調整し培養することが好ましい。
【００３５】
＜実施例８＞
固体培地組成の分析
まず、玄米、苦蕎麦およびハトムギをそれぞれ粉末状に粉砕し、異なる比率で含水量４５％の固体培地を４群調製した。各群の培地に用いる各成分比率は以下のとおりである。第１群では、玄米粉のみを用いた。第２群では、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉の組成比率は、５：２：１であった。第３群では、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉の組成比率は、７：２：１であった。第４群では、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉の組成比率は、９：２：１であった。各群の固体培地を減菌した後、実施例１の種菌を５％の接菌量で各群の固体培地中に接種し、牛樟芝を３ヶ月間培養し、実施例２〜４の方法で、各群の牛樟芝の有効成分含有量を測定した。その結果を図７に示す。
【００３６】
図７に示した結果から、他の３群で測定した各有効成分含有量に比べ、第４群で測定した各有効成分含有量が高く、つまり、第４群で用いた固体培地の組成比率（玄米粉：苦蕎麦粉：ハトムギ粉＝９：２：１）は、牛樟芝の有効成分含有量の増加に寄与することが分かった。さらにいうと、図７によると、玄米粉、苦蕎麦粉およびハトムギ粉を混合することでして調製された固体培地において、ハトムギ粉の比率が低いほど、牛樟芝の粗トリテルペン含有量の増加に寄与することが示された。
【００３７】
上述した各実施例およびその説明によれば、本発明による牛樟芝の培養方法は、照射光源と光強度を制御することにより、培養した牛樟芝の有効成分含有量を増加させ、しかも、他の培養条件に対する制御、例えば、培養温度に対する二段階の制御、培地組成の調合、培地含水量の調整などを加えることで、牛樟芝の有効成分含有量のさらなる増加が可能であることが分かった。そのため、本発明に係る牛樟芝の培養方法によれば、牛樟芝の子実体の厚さを増加させ、その有効成分の生産量を効果的に上げることが可能である。さらに、培養した牛樟芝は、培地から完全に分離されることが可能であり、将来の商業的な利用価値と変化性を向上させる。
【００３８】
以上、異なる実施例により本発明を詳しく説明したが、当該分野の技術を熟知するものは本発明の主旨を脱しない範囲内で、明細書の実施例に対して各種の変更や修正を加えることができ、これらの変更や修正は本発明の保護範囲に属する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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