(57)【要約】【課題】子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することのできるマツタケ菌糸体培地用添加剤を提供する。【解決手段】マツタケ菌糸体培地用添加剤であって、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含むマツタケ菌糸体培地用添加剤である。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
マツタケ菌糸体培地用添加剤であって、
マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含むことを特徴とするマツタケ菌糸体培地用添加剤。
【請求項２】
前記マツ科樹木粉砕物が、マツ科樹木の根を粉砕したものである請求項１記載のマツタケ菌糸体培地用添加剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載のマツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地。
【請求項４】
マツタケ菌糸体培地用添加剤の製造方法であって、
マツ科樹木を粉砕する工程と、粉砕により得たマツ科樹木粉砕物から水を用いてデンプンを含む固形分を分離する工程とを含む請求項１又は２記載のマツタケ菌糸体培地用添加剤の製造方法。
【請求項５】
マツタケ菌糸体の培養方法であって、
マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含む培地を作製し、該培地にマツタケ菌を接種することを特徴とするマツタケ菌糸体の培養方法。
【請求項６】
マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、培地に添加して使用されるマツタケ菌糸体培地用添加剤、及びマツタケ菌糸体の培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
マツタケ、バカマツタケ、ホンシメジ、アミタケ、ショウロ、ポルチーニ、トリュフ、ジロール、ハナイグチといった菌根性きのこの人工栽培は、従前から研究され、麦やトウモロコシなど穀類を栄養源とした培地が開発されている。このうち、マツタケの人工栽培については多くの試みがあるが、人工栽培が困難であり、子実体の発生にはまだ成功しておらず、未だ実用化されていないのが現状である。
【０００３】
例えば、特許文献１には、トリコローマ属菌を３Ｗ／Ｖ％以上のでん粉類を含む培地に接種し通気攪拌下で培養するトリコローマ属菌の培養方法について記載されており、培地中に添加されるでん粉類の例として、米でんぷん、小麦粉でんぷん、ばれいしょでんぷん、さつまいもでん粉、コーンスターチ、デキストリンが挙げられている。また、特許文献２には、水湿潤状態の麦を含む培地に、菌根性キノコ類の菌糸を接種し、３０℃以下の温度で培養する菌根性キノコ類の人工栽培方法が記載されており、従来不可能とされていた菌根性キノコ類の人工栽培が可能となるとされている。
【０００４】
一方、非特許文献１には、アカマツの根にデンプン粒が存在していることが記載されており、非特許文献２には、アカマツ林より採集した松の根をアルカリ性エタノール抽出や熱水抽出して得られた上清がマツタケの生育に影響をおよぼすものであると記載されている。
【０００５】
しかしながら、特許文献１、２、非特許文献１及び２のいずれにも、マツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を用いることについての記載はなく、マツタケ菌糸体を培養することの更なる改善が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開昭５５−１１８３８９号公報
【特許文献２】特開平７−１１５８４４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】小川真，「マツタケの生物学」，ｐ．７０−７２，１９７８
【非特許文献２】小川真他，まつたけの培養に関する研究「第３報まつたけの栄養生長におよぼす天然生育促進因子の影響」，日菌報，Ｖｏｌ．１７，ｐ．４９２−４９８，１９７６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は上記課題を解決するためになされたものであり、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することのできるマツタケ菌糸体培地用添加剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題は、マツタケ菌糸体培地用添加剤であって、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含むマツタケ菌糸体培地用添加剤を提供することによって解決される。
【００１０】
このとき、前記マツ科樹木粉砕物が、マツ科樹木の根を粉砕したものであることが好適であり、マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地が本発明の好適な実施態様である。
【００１１】
また、このとき、マツタケ菌糸体培地用添加剤の製造方法であって、マツ科樹木を粉砕する工程と、粉砕により得たマツ科樹木粉砕物から水を用いてデンプンを含む固形分を分離する工程とを含むマツタケ菌糸体培地用添加剤の製造方法を提供することも本発明の好適な実施態様である。
【００１２】
また、上記課題は、マツタケ菌糸体の培養方法であって、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含む培地を作製し、該培地にマツタケ菌を接種するマツタケ菌糸体の培養方法を提供することによっても解決される。
【００１３】
さらに、上記課題は、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む組成物を提供することによっても解決される。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することのできるマツタケ菌糸体培地用添加剤が提供される。特に、マツタケ菌糸を垂直方向に成長させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を分離する工程を示した図である。
【図２】実施例１において培養して得られたマツタケ菌糸体の写真である（スケールバー：１ｃｍ）。
【図３】コントロールとして、グルコースを含むＨＹＰＯＮＥＸ培地を用いてマツタケ菌を培養して得られた結果を示した写真である（スケールバー：１ｃｍ）。
【図４】ＨＹＰＯＮＥＸ培地（培地Ａ、Ｂ及びＣ）を用いてマツタケ菌を培養して得られた結果を示した写真である（スケールバー：１ｍｍ）。
【図５】本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を用いてホンシメジ菌を培養して得られた結果を示した写真である（スケールバー：１ｃｍ）。
【図６】本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を用いてアミタケ菌を培養して得られた結果を示した写真である（スケールバー：１ｃｍ）。
【図７】本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を用いてショウロ菌を培養して得られた結果を示した写真である（スケールバー：１ｃｍ）。
【図８】本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を用いてポルチーニ菌を培養して得られた結果を示した写真である（スケールバー：１ｃｍ）。
【図９】比較例６〜９において得られた各試料を示した写真である。
【図１０】実施例１及び比較例６〜９において得られた各試料の波長５１０ｎｍにおける吸光度を示したグラフである。
【図１１】実施例１及び比較例６〜９において得られた各試料を用いて行った培養試験の結果を示す写真である。
【図１２】アカマツ細根をヨウ素染色、又はトルイジンブルー染色を行って得られた写真である。
【図１３】アカマツの根をヨウ素染色して得られた写真である（スケールバー：２００μｍ）。
【図１４】コムギのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図１５】トウモロコシのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図１６】ジャガイモのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図１７】サツマイモのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図１８】ソバのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図１９】キャッサバのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図２０】可溶性デンプン（試薬）を示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【図２１】チュウゴクグリのデンプンを示した写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、マツタケ菌糸体培地用添加剤であって、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含むことを特徴とするマツタケ菌糸体培地用添加剤である。本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を培地に添加することにより、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することが可能となった。特に、マツタケ菌糸を垂直方向に成長させることができる。この理由について本発明者は、以下のように推察している。すなわち、マツタケ菌糸体培地用添加剤を加えることにより、マツタケ菌に備わっている糖質分解酵素によって、マツタケ菌糸体培地用添加剤に含まれるデンプン等の糖質が分解されてグルコース等を含む栄養分となり、当該栄養分がマツタケ菌に利用される。その結果、菌糸密度の高いコロニーが得られ、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することができるようである。しかも、マツタケ菌糸を垂直方向に成長させることができる。ここで、後述する実施例と比較例で対比されているように、本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤の代わりに、グルコースを培地に添加した場合には、マツタケ菌糸を垂直方向に成長させることが困難であった。したがって、マツタケ菌糸の成長には、本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤が重要であることが分かる。
【００１７】
本発明で用いられるマツ科樹木としては、粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離することによりデンプンを含む固形分が得られるものであれば特に限定されない。アカマツ、クロマツなどのマツ属；アカエゾマツ、エゾマツなどのトウヒ属；ツガ、コメツガなどのツガ属；カラマツなどのカラマツ属からなる群から選択される少なくとも１種のマツ科樹木が好適に用いられる。中でも、マツ属、トウヒ属及びツガ属からなる群から選択される少なくとも１種のマツ科樹木がより好適に用いられ、マツ属からなるマツ科樹木が特に好適に用いられる。
【００１８】
本発明で用いられるマツ科樹木における部位は特に限定されない。樹皮、枝、葉、幹、根、花、種子等のいずれの部位を用いてもよいが、本発明の効果がより発現する点で、根が好適に用いられる。中でも、直径１ｃｍ以下のマツ科樹木の根がより好適に用いられる。
【００１９】
本発明で用いられるマツ科樹木は、一定期間乾燥させたものであることが好ましい。このことにより、マツ科樹木を粉砕しやすくなる利点を有する。乾燥方法としては特に限定されず、凍結乾燥法や自然乾燥による乾燥方法等が採用される。なかでも、日陰で自然乾燥させる方法が好適である。マツ科樹木の含水率としては、５〜７０％が好ましい。
【００２０】
また、本発明で用いられるマツ科樹木粉砕物としては、マツ科樹木を粉砕して得られたものであればよく、粉砕する手段としては特に限定されない。粉砕する手段としては、ハンマークラッシャー等を用いた切削加工、ノコギリ、グラインダー等を用いた切断加工、ミル等を用いた磨砕処理、液体窒素や冷凍機を用いた凍結融解処理、セルラーゼ等を用いた酵素処理、爆砕器等を用いた爆砕処理、酸やアルカリ処理等が挙げられる。中でも、切削加工により粉砕する手段が好適に採用される。
【００２１】
本発明で用いられるマツ科樹木粉砕物の大きさとしては特に限定されないが、マツ科樹木粉砕物からデンプンを含む固形分を分離する効率が高くなる観点から、マツ科樹木粉砕物の直径が０．１〜５ｍｍであることが好ましい。マツ科樹木粉砕物の直径が０．１ｍｍ未満の場合、マツ科樹木粉砕物からデンプンを含む固形分を分離することが困難となるおそれがあり、０．２ｍｍ以上であることがより好ましい。一方、マツ科樹木粉砕物の直径が５ｍｍを超える場合、マツ科樹木粉砕物からデンプンを含む固形分を分離する効率が低くなるおそれがあり、３ｍｍ以下であることがより好ましい。
【００２２】
上述のようにして得られたマツ科樹木粉砕物から、水を用いてデンプンを含む固形分を分離することにより、本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を得ることができる。したがって、マツ科樹木を粉砕する工程と、粉砕により得たマツ科樹木粉砕物から水を用いてデンプンを含む固形分を分離する工程とを含むマツタケ菌糸体培地用添加剤の製造方法が本発明の好適な実施態様である。デンプンを含む固形分を分離する方法としては、マツ科樹木粉砕物に水を添加して振盪後にろ過処理を行う方法が好適に採用される。そして、得られたろ液を静置するか、又は遠心分離することにより、沈殿物としてデンプンを含む固形分を分離することができる。沈殿物を分離して乾燥させると、多糖類であるアミロースとアミロペクチンを含むデンプンを主成分とする固形分が得られる。ここで、本発明者は、得られたろ液における上清部分を培地に添加して培養試験を行ったところ、マツタケ菌糸の成長を確認することができなかった。したがって、マツタケ菌糸の成長には、沈殿物として得られるデンプンを含む固形分が重要であることが分かる。
【００２３】
マツ科樹木粉砕物に対して加える水の量は特に限定されないが、マツ科樹木粉砕物１重量部に対して、２〜２０重量部の水が好適に用いられる。加える水の量が２重量部未満の場合、マツ科樹木粉砕物がペースト状となってしまい沈殿物の分離が不充分になり、効率良くデンプンを含む固形分を得ることができないおそれがあり、５重量部以上であることがより好ましい。一方、加える水の量が２０重量部を越える場合、沈殿処理の効率が低下し、効率良くデンプンを含む固形分を得ることができないおそれがあり、１０重量部以下であることがより好ましい。
【００２４】
本発明で用いられる水とは、純粋であっても、水を主成分とし他の成分を含有する液体であってもよく、水を５０重量％以上含む液体であれば特に限定されない。他の成分としては特に限定されず、脱水や乾燥処理に使用される溶媒を用いることができる。例えば、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等のアルコールなどを他の成分として用いることができる。
【００２５】
本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤は、デンプンを含む固形分を含むことを特徴とする。このことにより、本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を用いてマツタケ菌糸を培養した場合に、マツタケ菌糸を垂直方向に成長させることができる。本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤は、粉末であっても液体であっても構わない。分散性が良好である観点からは、本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤は、粉末であることが好ましい。デンプンの含有量としては特に限定されないが、固形分全量に対して２０重量％以上であることが好ましく、３０重量％以上であることがより好ましく、４０重量％以上であることが更に好ましい。
【００２６】
本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤は、固体培地、液体培地、菌床培地等の既存培地に添加して用いることができる。すなわち、マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地が本発明の好適な実施態様である。こうして得られる本発明の培地により、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することができる。更に、デンプンを含むことにより、既存培地の保水性、支持性、着色性、展着性、糊化性、ゲル化性、粘性、弾性、安定性、乳化性、分散性、硬化性などの性状を改善させることができる。また、既存培地の浸透圧上昇の影響によるマツタケ菌の成長阻害現象を抑制することができる。既存培地の具体例としては、浜田培地、太田培地、ＨＹＰＯＮＥＸ培地、ＰＤＡ培地、モルト培地、エビオス・ショ糖寒天培地、酵母エキス・グルコース寒天培地、酵母エキス・麦芽エキス寒天培地、ノークランス培地、ハーゲム寒天培地、ペプトン・デキストロース寒天培地、ペプトン・デキストロース・イースト寒天培地、ポテトデキストロース寒天培地、ワックスマン寒天培地、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｍｅｌｉｎ−Ｎｏｒｋｒａｎｓ培地などが挙げられ、植物や微生物の抽出液、無機塩類等を含んでいてもよい。本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を培地に添加する量としては特に限定されないが、１０〜２００ｇ／Ｌ（培地）となるように添加することが好ましく、２０〜１５０ｇ／Ｌ（培地）となるように添加することがより好ましい。
【００２７】
本発明では、上述のようにして得られた培地にマツタケ菌を接種することにより、マツタケ菌糸体を培養することができる。すなわち、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む固形分を含む培地を作製し、該培地にマツタケ菌を接種することを特徴とするマツタケ菌糸体の培養方法が本発明の好適な実施態様である。本発明により、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸を培養することができる。特に、マツタケ菌糸を垂直方向に成長させることができる。したがって、マツ科樹木を粉砕して得たマツ科樹木粉砕物から水を用いて分離して得られたデンプンを含む組成物も本発明の実施態様である。本発明において、接種するマツタケ菌としては特に限定されず、マツタケ菌糸の他、マツタケの子実体、シロ、胞子、厚膜胞子であっても構わない。本発明のように、マツタケ菌糸体を培養することができれば、新たな食品産業を開拓することができる。また、本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤は、樹木を材料とするため、伐採や運搬作業、植林作業、苗木の育成など、林業への波及効果も大きいものである。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例を用いて本発明を更に具体的に説明する。
【００２９】
実施例１
(乾燥微粉の調製）
１０年生アカマツの根株を採取し、直径１ｃｍ以下の根を水道水で洗浄後、自然乾燥させた（含水率：６０重量％）。日陰で７日間自然乾燥させ、次いで４０℃で２４時間乾燥させたアカマツの根１００ｇを、ハンマークラッシャー（三庄インダストリー製「ＮＨ−３４」）を用いて粉砕することにより、粉砕物である直径０．３〜２ｍｍの乾燥微粉を得た。
【００３０】
（マツタケ菌糸体培地用添加剤の調製）
得られたアカマツの根の乾燥微粉に１０００ｍＬの水を加えて良く振盪後、０．４ｍｍ目の網でろ過した。この操作を３回繰り返した。得られたろ液をメスシリンダーに入れて１〜２時間静置し、メスシリンダーの底にデンプンを含む固形分を含んだ分離物が沈殿した。次に上澄みを廃棄した後、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ  ５Ｃ）を用いて分離物をろ過し、ろ紙ごと冷蔵庫内（４℃）で２４時間乾燥させることにより、マツタケ菌糸体培地用添加剤である約１０ｇの粉末（デンプン：７０重量％、木粉：３０重量％）を得た。本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤を分離する工程を図１に示す。
【００３１】
（マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地の調製）
グルコースを含まないＨＹＰＯＮＥＸ培地（改変太田明氏考案培地；ＨＹＰＯＮＥＸ０．５ｇ／Ｌ、イーストエキス２ｇ／Ｌ、寒天１５ｇ／Ｌ、蒸留水１０００ｍＬ）に、上記得られた粉末を１００ｇ／Ｌ（Ｗ／Ｖ）となるように添加し、オートクレーブ滅菌（１０５℃、１０分間）した後、滅菌シャーレに３０ｍＬずつ分注し、自然冷却によって固化させることにより、マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地を得た。
【００３２】
（マツタケ菌糸体の培養）
上記得られた培地に対して、マツタケ菌を接種し、２４℃、暗黒条件下で３カ月培養すると、子実体の発生時と同様に垂直方向に菌糸が伸長し、子実体原基を形成し、子実体形成能力を有するマツタケ菌糸体を培養することができた。得られたマツタケ菌糸体を図２に示す。
【００３３】
比較例１：ＨＹＰＯＮＥＸ培地を用いた培養
コントロールとして、グルコースを含むＨＹＰＯＮＥＸ培地（太田明氏考案；グルコース１０ｇ／Ｌ、ＨＹＰＯＮＥＸ０．５ｇ／Ｌ、イーストエキス２ｇ／Ｌ、寒天１５ｇ／Ｌ、蒸留水１０００ｍＬ）を用いて３カ月マツタケ菌の培養を行った。得られた結果を図３に示す。
【００３４】
（ＨＹＰＯＮＥＸ培地を用いた培養試験の比較）
また、ＨＹＰＯＮＥＸ培地の組成をそれぞれ変更（培地Ａ：グルコース０ｇ／Ｌ、培地Ｂ：グルコース１０ｇ／Ｌ、培地Ｃ：グルコース０ｇ／Ｌ、マツタケ菌糸体培地用添加剤（デンプン）４０ｇ／Ｌ）し、６０日間マツタケ菌の培養を行った。得られた結果を図４に示す。
【００３５】
比較例２：マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地を用いたホンシメジ菌の培養
実施例１において、マツタケ菌を接種する代わりにホンシメジ菌を接種した以外は、実施例１と同様にしてホンシメジ菌を３カ月培養した。得られたホンシメジ菌糸の写真を図５に示す。
【００３６】
比較例３：マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地を用いたアミタケ菌の培養
実施例１において、マツタケ菌を接種する代わりにアミタケ菌を接種した以外は、実施例１と同様にしてアミタケ菌を３カ月培養した。得られたアミタケ菌糸の写真を図６に示す。
【００３７】
比較例４：マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地を用いたショウロの菌の培養
実施例１において、マツタケ菌を接種する代わりにショウロ菌を接種した以外は、実施例１と同様にしてショウロ菌を３カ月培養した。得られたショウロ菌糸の写真を図７に示す。
【００３８】
比較例５：マツタケ菌糸体培地用添加剤を含む培地を用いたポルチーニ菌の培養
実施例１において、マツタケ菌を接種する代わりにポルチーニ菌を接種した以外は、実施例１と同様にしてポルチーニ菌を３カ月培養した。得られたポルチーニ菌糸の写真を図８に示す。
【００３９】
比較例６：水抽出
実施例１と同様にして得たアカマツの根の乾燥微粉０．８ｇ（生試料２ｇ×４０％）に、滅菌水１００ｍＬを３回に分けて加え、それぞれ３０分間振盪後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、５分間）により上清を分離した。この上清を０．４５μｍの滅菌フィルターでろ過後、さらに０．２μｍの滅菌フィルターでろ過した。こうして得られた試料を試料ａとした。
【００４０】
比較例７：アルカリ性エタノール抽出
実施例１と同様にして得たアカマツの根の乾燥微粉４０ｇ（生試料１００ｇ×４０％）を、蒸留水３００ｍＬと４０％ＮａＯＨ  ６０ｍＬとを加えた溶液中に入れ、８０℃で１時間加熱した。冷却後、９５％エタノール１４０ｍＬを添加し、遠心分離（４，０００ｒｐｍ、３０分間）により上清を分離した。この上清に対して、１Ｎ  ＨＣＬを滴下してｐＨ６．５に調製し、３０℃に設定した送風乾燥機で風乾後、蒸留水５０ｍＬを加えて水溶液を調製した。こうして得られた試料を試料ｂ−イとした。更に、同様の操作で別途得た試料ｂ−イに対し、活性炭（関東化学製）１０ｇを加えて３０分経過後にろ液を採取し、得られた試料を試料ｂ−ロとした。
【００４１】
比較例８：熱水抽出
実施例１と同様にして得たアカマツの根の乾燥微粉１２ｇ（生試料３０ｇ×４０％）に、蒸留水９０ｍＬを加え、１００℃で２時間抽出した後、遠心分離（４，０００ｒｐｍ、３０分間）により上清を分離した。この上清を、３０℃に設定した送風乾燥機で風乾後、蒸留水５０ｍＬを加えて水溶液を調製した。こうして得られた試料を試料ｃ−イとした。更に、同様の操作で別途得た試料ｃ−イに対し、活性炭（関東化学製）１０ｇを加えて３０分経過後にろ液を採取し、得られた試料を試料ｃ−ロとした。
【００４２】
比較例９：８０％エタノール抽出
実施例１と同様にして得たアカマツの根の乾燥微粉１２ｇ（生試料３０ｇ×４０％）に、８０％エタノール１００ｍＬを加え、８０℃で１時間抽出した後、遠心分離（４，０００ｒｐｍ、３０分間）により上清を分離した。この上清を、３０℃に設定した送風乾燥機で風乾後、蒸留水３０ｍＬを加えて水溶液を調製した。こうして得られた試料を試料ｄ−イとした。更に、同様の操作で別途得た試料ｄ−イに対し、活性炭（関東化学製）１０ｇを加えて３０分経過後にろ液を採取し、得られた試料を試料ｄ−ロとした。比較例６〜９において得られた各試料の写真を図９に示す。
【００４３】
（デンプンの含有量の比較）
市販のアミロース／アミロペクチン測定キット（日本バイオコン）を用いて、上記得られた試料ａ、試料ｂ−イ、試料ｂ−ロ、試料ｃ−イ、試料ｃ−ロ、試料ｄ−イ、試料ｄ−ロ及び本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤（試料Ｅ）に含まれるデンプンの含有量を以下のようにして測定した。
【００４４】
測定キットの手順に従って、上記各試料１ｍＬ（Ｅは２５ｍｇ）に、ＣｏｎＡ溶液を加えて２５ｍＬに調整後、このうち０．５ｍＬに１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液４．０ｍＬを添加した（Ｉ液）。このＩ液に、アミログルコシダーゼ／α−アミラーゼ溶液０．１ｍＬを加えて、４０℃、１０分間インキュベートした（II液）。このII液１ｍＬに、ＧＯＰＯＤ試薬溶液４ｍＬを添加し、４０℃、２０分間インキュベートした後、分光光度計（Ｍａｌｃｏｍ製ＥＳ−２）で波長５１０ｎｍで３回測定した。なお、前処理の脱脂処理は省略した。
【００４５】
分光光度計による５１０ｎｍにおける吸光度は、試料Ｅを除き、いずれも吸光度０．１を下回り、信頼できる値が得られなかった（図１０）。そのため、試料Ｅを除き、比較例６〜９で得られた各試料には、デンプンは含まれていないと判定した。比較例６では、遠心分離処理や、２回の滅菌フィルター処理が行われており、水溶性が低く、沈殿物として回収されるデンプンが試料ａには含まれていないと考えられる。同様に、比較例７〜９においても、遠心分離処理が行われており、最終的な抽出物にはデンプンが含まれていないと考えられる。
【００４６】
（培養試験の比較）
実施例１で得られた本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤（試料Ｅ）、及び比較例６〜９で得られた各試料（試料ａ、試料ｂ−イ、試料ｂ−ロ、試料ｃ−イ、試料ｃ−ロ、試料ｄ−イ及び試料ｄ−ロ）をそれぞれ下記培地に１００ｇ／Ｌ（Ｗ／Ｖ）となるように添加し、下記培養条件で３０日間培養し、観察した。
接種菌株：美星７７
基本培地：グルコースを含まないＨＹＰＯＮＥＸ培地（改変太田明氏考案培地；ＨＹＰＯＮＥＸ０．５ｇ／Ｌ、イーストエキス２ｇ／Ｌ、寒天１５ｇ／Ｌ、蒸留水１０００ｍＬ）に各試料を１００ｇ／Ｌ（Ｗ／Ｖ）となるように添加
滅菌条件：１０５℃、１０分間加圧滅菌
培養条件：２４℃、暗黒
培養期間：３０日間
【００４７】
本発明のマツタケ菌糸体培地用添加剤（試料Ｅ）を添加した培地のみで、マツタケ菌糸の成長が確認された（試験区Ｅ）。コントロール（試験区Ｅ）を含め、比較例６〜９で得られた各試料を添加した培地ではいずれもマツタケ菌糸の成長を確認できなかった（試験区ａ〜ｄ）。得られた培養試験の結果を図１１に示す。
【図１】
2015159779.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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