(57)【要約】      （修正有）【課題】レスベラトロールよりも活性の強いレスベラトロール誘導体又はその薬学的に許容可能な塩を劇的に高い割合で含有する機能性エキスの効率的な製造方法の提供。【解決手段】式（１）に示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を高含有するエキスの製造方法であって、原料としてアブラナ科の植物の抽出物を用いることを特徴とするエキスの製造方法。2015007016.tif 000009【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レスベラトロールとシナピン酸類とを反応させる工程を有する、式（１）：
【化１】
2015007016.tif 000008
に示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を高含有するエキスの製造方法であって、
前記シナピン酸類の原料としてアブラナ科の植物の抽出物を用いることを特徴とするエキスの製造方法。
【請求項２】
アブラナ科の植物が、からし、ブロッコリー、ケール、キャベツ、チンゲン菜、野沢菜、および大根からなる群より選ばれる１種以上の植物である請求項１に記載のエキスの製造方法。
【請求項３】
アブラナ科の植物の使用部位が種子、新芽、葉部または根である請求項１または２に記載のエキスの製造方法。
【請求項４】
アブラナ科の植物の抽出物をエタノール、含水エタノール、水または塩基水を用いて得る請求項１〜３のいずれかに記載のエキスの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のレスベラトロール誘導体の含有量を劇的に高めた、新たな機能性を付与したエキスを製造する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の多様化により高血圧、動脈硬化、糖尿病等の生活習慣病が国内のみならず国外でも深刻な問題となっており、クオリティ・オブ・ライフ（ＱＯＬ）低下や医療費高騰等の悪影響を及ぼしている。生活習慣病のリスクファクターの１つである肥満を防止するために、新制度の導入や薬の研究開発が数多く行われている。例えば、日本では２００８年から、生活習慣病の早期発見、早期予防、高騰する医療費の軽減を期待して、特定検診・特定保健指導が義務化されている。また、アメリカにおいては、子どもの３分の１以上、成人の３分の２以上が過体重や肥満であることを深刻に受け止め、２０１１年に食事の新ガイドラインが農務省と保健福祉省により共同で発表され、さらに２０１３年度では１３年ぶりに抗肥満薬が承認されている。
【０００３】
しかしながら、食物がありふれた現代社会においては、規則正しい食事摂取や、摂取カロリーの制限の実行は困難である場合が少なくない。そのため、制度導入後も肥満者の割合は変わらず、依然高い状態で推移している（非特許文献１、２）。また、抗肥満薬はどれも効果効能に付随する中枢への直接作用や習慣性などの危険性から、高度肥満患者のみにその使用は限られており、安全性や限定性に課題がある。さらに、薬に依存しすぎる治療というのも好ましくないという考えもある。そこで、増加し続ける肥満者に対する対策手段として、安全でかつ、日常生活でも簡単に導入可能でありながら長く継続性も見込める画期的な機能性食品または機能性食品素材の開発が望まれているのが現状であった。
【０００４】
一方、発明者らは、これまでに式（１）：
【化１】
2015007016.tif 000002
に示される新規のレスベラトロール誘導体の開発に成功しており（特許文献１）、抗癌活性だけでなく、アディポネクチン産生促進作用（特許文献２）、リポプロテインリパーゼ活性促進作用および脂質異常症改善作用（特許文献３）、摂食抑制作用および脂肪蓄積抑制作用（特許文献４）、サーチュイン発現増強作用およびサーチュイン活性促進作用（特許文献５）などの様々な高い生理活性があることも確認している。したがって、本発明者らは、前記のようなエビデンスに基づき、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体が上記の現状を解決しうる物質であると考えている。また、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の製造方法は、金属塩存在下でレスベラトロールとシナピン酸類とを加熱するという非常に簡便な方法であり、食品に関しても応用可能なものであることから、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を精製するだけでなく、この化合物を含有する安全性の高い食品エキスについても開発を行ってきた。
【０００５】
しかし、本発明者らが検討を進めたところ、本発明の原料として用いるレスベラトロールおよびシナピン酸は、共に食経験豊かな天然物質であり、誘導体を含め多くの有用性の開示があるという優れた面がある一方で、いずれも微量成分であり、中でもレスベラトロールは高価な素材であるために、効率的に生成反応に用いられないと式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の製造コストが跳ね上がるという点、そもそも生成反応自体が効率的に進まないと食品エキスを大量に作製するためには多大な時間と労力、コストがかかってしまい、結局、多くの人に供給できないという点が問題であった。さらに、シナピン酸は、植物の二次代謝産物の一つであり、リンゴ果実、穀物、樹木の主成分であるリグニンやリグナンの前駆体として植物界に広く存在することは知られているが、前記のように式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を大量に生成する場合、食品として単独で入手できる素材は現在のところ存在しないという問題点があった。そして、現在までは、特許文献１における実施例７を超える効率的な製法が存在しなかったこともあり、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を高い割合で含有する食品エキスを大量に製造することは非常に困難な状況にあった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１２−２４６２４３号公報
【特許文献２】特開２０１３−０１０７２１号公報
【特許文献３】特開２０１３−０４７１９４号公報
【特許文献４】特願２０１２−２８０８８８号
【特許文献５】特開２０１２−２４６２４２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】厚生労働省  国民健康・栄養調査結果の概要（２０１０年）
【非特許文献２】シンシアＬ.オグデン、外３名、“アメリカ合衆国における肥満の罹患率２００９年〜２０１０年（Prevalence of Obesity in the United States, 2009-2010）”、nchs  Data  Brief，No．82，January２０１２[平成２５年６月６日検索]、インターネット（ＵＴＬ：http://www.cdc.gov/nchs/data/databriefs/db82.pdf）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、レスベラトロールやシナピン酸類に関する前記の状況を鑑みて、目的とするレスベラトロール誘導体を高含有するエキスの効率的な製造方法を確立すべく鋭意検討した結果、意外にも、シナピン酸類の原料として、アブラナ科植物の抽出物を用いることで、目的とするレスベラトロール誘導体を高い割合で含有するエキスの製造に成功し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
したがって、本発明は、レスベラトロールよりも活性の強いレスベラトロール誘導体又はその薬学的に許容可能な塩を、既に本発明者らが報告している特許文献１〜５に記載の方法よりも劇的に高い割合で含有する機能性エキスの効率的な製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の要旨は、
〔１〕レスベラトロールとシナピン酸類とを反応させる工程を有する、式（１）：
【化２】
2015007016.tif 000003
に示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を高含有するエキスの製造方法であって、
前記シナピン酸類の原料としてアブラナ科の植物の抽出物を用いることを特徴とするエキスの製造方法、
〔２〕アブラナ科の植物が、からし、ブロッコリー、ケール、キャベツ、チンゲン菜、野沢菜、および大根からなる群より選ばれる１種以上の植物である前記〔１〕に記載のエキスの製造方法、
〔３〕アブラナ科の植物の使用部位が種子、新芽、葉部または根である前記〔１〕または〔２〕に記載のエキスの製造方法、
〔４〕アブラナ科の植物の抽出物をエタノール、含水エタノール、水または塩基水を用いて得る前記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のエキスの製造方法、
に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の含有量が高い食品エキスを効率的に製造することができる。この食品エキスは、レスベラトロールよりも活性の強い式（１）に示されるレスベラトロール誘導体が高含有されているため、前述のように強力な種々の生理活性を示すことがさらに可能となり、結果的に、肥満者が増大し続けているという現代社会が抱えている大きな問題を解決しうる可能性がある。また、食品エキスという形態であるため安全性にも優れ、さらに反応後残存したレスベラトロール自体もエキス内に含まれることから、レスベラトロール自体の機能性も期待できる。さらに、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体はサーチュイン遺伝子発現を促進する点から、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を含有する前記食品エキスには延命効果も期待でき、総じてＱＯＬ向上に寄与することが期待できる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明は、レスベラトロールとシナピン酸類とを反応させる工程を有する、式（１）：
【化３】
2015007016.tif 000004
に示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を高含有するエキスの製造方法であって、
前記シナピン酸類の原料としてアブラナ科の植物の抽出物を用いることを特徴とする。
【００１３】
シナピン酸類の原料として用いるアブラナ科植物について説明する。キャベツに代表されるアブラナ科植物は特有の成分としてグルコシノレート類を含んでおり、健康機能性を有する植物として近年注目を浴びている。また、アブラナ科植物は栄養価が高いことで知られ、各種料理に使用されるほか、粉砕や搾汁などにより飲料に加工され広く食卓に供されている。よく食されているアブラナ科植物の例としては、からし、ブロッコリー、キャベツ、チンゲン菜、野沢菜、大根があり、そのほか青汁原料として使用されているケールなどが挙げられる。
取扱やすいという観点から、アブラナ科植物は液状、ペースト状のもののみならず、粉末状にも加工される。本発明でも後述の実施例では粉末状のものを使用しているが、それに限定されるものではない。粉末状のものとしては、例えば、ブロッコリーパウダー、ブロッコリースプラウトエキス、ブロッコリースプラウトパウダー、ケールパウダー、キャベツパウダー、大根葉パウダー、チンゲン菜パウダー、野沢菜パウダー、イエローマスタード（洋からし）、オリエンタルマスタード（和からし）、からし粉などが挙げられる。
また、本発明で用いる場合においては、和からし、洋からしといったアブラナ科植物の形態、生理、生態、交雑不稔性等の性質により限定されるものではない。これらのアブラナ科植物は単独でまたは２種類以上のものを併用することができ、併用時の組み合わせには特に限定はない。
なお、入手可能であれば他のアブラナ科植物も使用することができる。
【００１４】
また、シナピン酸類にはシナピン酸およびシナピン酸の誘導体が含まれる。シナピン酸の誘導体としては、シナピン酸の塩、エーテル、エステル等の誘導体が挙げられるが、本発明の製造方法では、これらの誘導体も原料として使用することができる。
【００１５】
アブラナ科植物の抽出に使用する部位としては、原料のシナピン酸類を多く含んでいる部位であればよく、特に限定はないが、種子、新芽、葉部または根が好ましい。また、抽出しやすくする観点から、前記の使用部位を粉砕してもよい。粉砕の手段および粉砕物の大きさは特に限定はない。
【００１６】
抽出を行うことで、アブラナ科植物からシナピン酸類を効率的に得ることができる。抽出溶媒としてはエタノールまたは含水エタノール、水、塩基水から用途によって適宜選択すればよい。例えば、シナピン酸だけを抽出するのであれば、エタノールを用いることが一般的であると考えるが、アブラナ科植物の中でも特にからしやブロッコリースプラウトを用い、塩基水で抽出することで、他の植物、抽出溶媒を用いるよりも、シナピン酸誘導体を多く抽出することができるため、最終的に式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の生成量を多くすることができる。
【００１７】
塩基水については、一種類もしくは数種類の塩基を混合し作製してもよい。併用時の組み合わせには特に限定はないが食品エキスを作製するため、塩基としては以下に示すような食品添加物の中から選ぶことが好ましい。例えば、炭酸カリウム（無水）（製造用剤）、炭酸ナトリウム（製造用剤）、炭酸水素ナトリウム（製造用剤）、リン酸水素二カリウム（乳化剤、製造用剤）、リン酸水素二ナトリウム（乳化剤、製造用剤）、水酸化カリウム（製造用剤）、水酸化ナトリウム（製造用剤）、水酸化カルシウム（強化剤、製造用剤）、酸化カルシウム（強化剤、製造用剤として用いられる造礁サンゴ焼成カルシウム、貝殻焼成カルシウム、うに殻焼成カルシウム、卵殻焼成カルシウムなどの主成分）等が挙げられる。中でも、効率面から水酸化ナトリウムが好ましい。これらの塩基は、２種類以上を組み合わせてもよい。また、前記塩基の濃度と塩基水のｐＨについては特に限られたものではなく、効率的に目的の生成反応が進行する条件とすればよい。例えば、水酸化ナトリウムであれば、６Ｍ溶液を使用する際に、アブラナ科植物の抽出液がゲル化するため、３Ｍ程度の溶液が好ましい。前記食品添加物の併用時に関しても、同様のことがいえる。
【００１８】
前記抽出方法は公知の方法で行えばよく、例えば、アブラナ科植物を抽出溶媒に浸漬後、抽出時間および温度が、それぞれ、２時間〜２４時間および１５〜１１０℃の範囲で適宜選択すればよい。次いで、遠心分離などで植物体などを沈殿させてから上澄み液を回収したり、濾過により植物体を除いた濾液を回収して、これをアブラナ科植物の抽出物とすることができる。また、得られた抽出物を濃縮することで、さらにシナピン酸類の濃度を高めた抽出物を作製し、反応に用いることもできる。後述するが、からしやブロッコリースプラウトの塩基抽出液を濃縮し反応に用いることが好ましい。前記濃縮方法としては、例えば、エバポレータによる減圧濃縮、逆浸透膜濃縮などが挙げられる。
【００１９】
以上のようにして得られる抽出物は、シナピン酸類の含有量が高いため、精製せずにそのまま使用しても、後述のように所望の生成反応が進み最終的に式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を含有したエキスが得られる。
【００２０】
また、同じく原料として用いるレスベラトロールについても説明する。レスベラトロールにはトランス体とシス体の構造異性体が存在するが、加熱や紫外線によってトランス体とシス体の変換が一部生じる。本発明で用いるレスベラトロールとしては、トランス体でもシス体でも、あるいはトランス体とシス体の混合物であってもよい。また、レスベラトロールは完全に精製されたものである必要はなく、後述のように所望の生成反応が進み最終的に式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を含有したエキスが得られることから、レスベラトロール以外の成分を含む混合物も使用できる。ただし、前記レスベラトロール誘導体の回収率の観点からは、レスベラトロール換算で１重量％以上含有される、他の成分も含む混合物が原料として望ましい。
また、レスベラトロールには、塩、エーテル、エステル等の誘導体もあるが、本発明の製造方法では、これらの誘導体も原料として使用することができる。
前記レスベラトロールとしては、ブドウ果皮、ピーナッツ、コケモモ、パッションフルーツの種子、メリンジョの実等の原料からの抽出物、凍結乾燥品等を使用してもよい。
【００２１】
本発明の製造方法では、レスベラトロールとアブラナ科植物の抽出物とを単純に混合してもよいし、必要により適切な溶媒を添加してレスベラトロールやアブラナ科植物の抽出物中のシナピン酸類を溶解または懸濁させてもよい。この際、溶媒が水のみであれば、レスベラトロールやシナピン酸類の水への溶解度が著しく低いために、含水エタノールや、エタノールに溶解させればよい。水とエタノールの配合比については特に制限はなく、原料のレスベラトロール等が十分に溶解すればよい。レスベラトロールとアブラナ科植物の抽出物とを混合した溶液中のレスベラトロールおよびシナピン酸類の濃度についても特に制限はない。また、レスベラトロールは前記溶液中において反応前に完全に溶解していなくともよいが、溶解している方が生成反応が進みやすいため、レスベラトロールがある程度溶解する比率になるよう調節してエタノールを加える方が好ましい。
【００２２】
本発明の製造方法では、レスベラトロールとアブラナ科植物の抽出物との混合溶液中に金属塩を添加する。前記金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩等が挙げられる。前記金属塩の混合物としては、例えば、金属塩を数種類含むミネラルプレミックスが挙げられる。また、複数の金属塩を含む混合物として、ミネラルウォーターも挙げることができる。
なお、前記金属塩の含有量としては、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を生成可能な量であればよく、特に限定はない。
【００２３】
前記混合溶液のｐＨは、９．０未満に調整することが好ましい。調整方法としては、例えば、レスベラトロール、アブラナ科植物の抽出物および金属塩を混合した後にｐＨ調整剤を添加して調整してもよいし、塩基水を用いて抽出した場合であるならば、レスベラトロール、金属塩と混合する前に、前もってアブラナ科植物の抽出物のｐＨをｐＨ調整剤で調整しておいてもよい。式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の反応開始時の前記混合溶液のｐＨが９．０以上であれば、他の反応や目的化合物の分解も一方で生じるために最終的な式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の回収量が低下する。したがって、反応開始時の前記混合溶液のｐＨは３．０以上９．０未満が望ましい。
【００２４】
次に、金属塩存在下で、レスベラトロールとアブラナ科植物の抽出物との混合液を加熱処理する。この加熱処理により、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の生成反応を行う。生成反応を効率的に進ませるために、加熱温度は１１０℃以上に調整することが好ましい。また、使用する溶媒の沸点から考え、加圧加熱が望ましい。例えば、開放容器にレスベラトロールとアブラナ科植物の抽出物、金属塩の混合液を入れ、溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加熱する、密閉容器にレスベラトロールとアブラナ科植物の抽出物、金属塩の混合液を入れて前記容器を加熱する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加熱する、超臨界装置を用いて加圧加熱する等、少なくとも部分的に溶液温度が１１０℃以上に達するように加熱することが好ましい。回収効率面から、溶液温度が均一に１１０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜１２０分の加熱時間が望ましい。また、加熱は、一度でもよいし、複数回に分けて繰り返し加熱してもよい。複数回に分けて加熱する場合、蒸発した溶媒を補うために溶媒を新たに追加して行うことが好ましい。
【００２５】
また、前記反応液を、必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒除去することで、粉末状の式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を高含有するエキス（以下、レスベラトロール誘導体高含有エキスという。）を得ることができる。本発明の製造方法で得られるエキスは、以前に本件出願人が提出した特許文献１の実施例７に記載の方法と比べて約２倍以上の濃度の式（１）に示されるレスベラトロール誘導体を含有するエキスとなっている。
また、前記エキスは粉末状にすることで、さまざまなものに添加することが可能となり、さらに用途が広がることになる。
【００２６】
本発明において、式（１）に示されるレスベラトロール誘導体には、その薬学的に許容可能な塩も含まれる。薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２７】
前記加熱処理による式（１）に示されるレスベラトロール誘導体の生成反応の終了は、例えば、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる定量分析により生成量を確認して判断すればよい。
【００２８】
また、レスベラトロール誘導体高含有エキスは、原料であるレスベラトロールおよびアブラナ科植物の抽出物の安全性が確認されていることから、これら同様に安全性に優れたものであると考えられるため、食品に配合して使用することができる。
【００２９】
前記食品としては、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子等、どのような形態でもよく、菓子類の中でも、その容量等から保存や携帯に優れた、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット等が挙げられるが、特に限定はない。また、レスベラトロール誘導体高含有エキスをワインに添加することで、ワインの健康機能効果をさらに増強した新規なワインとすることもできる。この新規なワインのように、嗜好性と健康機能効果の双方を持ち合わせた飲食品は、社会ニーズの非常に高い分野の飲食品であり、このニーズに十分応えることもまた可能である。なお、食品には、機能性食品、健康食品、健康志向食品等も含まれる。本発明の効果が損なわれない範囲内で、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料、または素材と組み合わせることも可能である。
【００３０】
さらに、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤、または飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。
【００３１】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。
【実施例】
【００３２】
（実施例１：アブラナ科植物の抽出液の選択）
各種のアブラナ科植物の抽出液と式（１）に示されるレスベラトロール誘導体（以下、ＵＨＡ１０２８という）の生成量との関係について検討を行った。アブラナ科植物として、表１に示す種々のもの（ブロッコリースプラウトエキス末−３〔ビーエイチエヌ（株）製〕、ブロッコリースプラウトパウダー〔（株）スプラウト製〕、ケール０．３パウダー、ＡＤキャベツ０．８パウダー〔アスザックフーズ（株）製〕、キャベツパウダー、ケールマイクロパウダー、ブロッコリーパウダー、大根葉パウダー、チンゲン菜パウダー、野沢菜パウダー〔こだま食品（株）製〕、イエローマスタード（洋からし）、オリエンタルマスタード（和からし）〔エスビー食品（株）製〕、からし粉Ｍ３１０〔小林桂（株）製〕）などパウダーを用意した。各パウダー５０ｍｇにエタノールまたは、５０％含水エタノール５ｍＬを加え、３時間、８０℃の恒温槽で静置し、抽出処理を行った。比較対象として、リンゴエキスパウダー〔マリーンバイオ（株）製〕、ナチュラルアップルパウダーＣ０６１１１２〔長岡香料（株）製〕、アップリンＡＦＰＯＭＭ９０５１〔ユニテックフーズ（株）製〕も同様にそれぞれパウダー５０ｍｇにエタノールまたは、５０％含水エタノール５ｍＬを加え、３時間、８０℃の恒温槽で静置し、抽出処理を行った。抽出後全てのサンプルに、それぞれの溶媒を加え元の５ｍＬにメスアップし、遠心分離（１５０×１００ｒｐｍ）してパウダーを除いた後の上澄み液を反応に用いた。
レスベラトロール〔（株）Ｔｅｃｈｎｏ  ｓｃｉｅｎｃｅ製〕１０ｍｇに、ミネラルウォーター（商品名「ゲロルシュタイナー」ポッカサッポロフード＆ビバレッジ（株）製：以下ミネラルウォーターは全て「ゲロルシュタイナー」を使用した。）１ｍＬ、アブラナ科植物またはリンゴの抽出液１ｍＬを混合し、この混合液（ｐＨ６．０〜８．０）を、オートクレーブ〔三洋電機（株）製、「ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ」〕にて１３０℃、３０分間加熱した。得られた反応溶液を、メスフラスコを用い、メタノールで１０ｍＬにメスアップし、さらにメタノールで１０倍希釈した。この液１０μＬをＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、エキス中のＵＨＡ１０２８の定量を行った。その結果を表１に示す。なお、表中に示している数値は、レスベラトロールを１０ｍｇ用いて生成できたＵＨＡ１０２８の量（μｇ）である。
【００３３】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析は以下条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「カプセルパック  Ｃ１８」（２．０ｍｍｉ．ｄ．×１５０ｍｍ）
移動相：Ａ・・・Ｈ2Ｏ（０．１％ギ酸（ＨＣＯＯＨ）），Ｂ・・・アセトニトリル（０．１％ＨＣＯＯＨ）
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入：１０μＬ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：１００％Ａ／０％Ｂから０％Ａ／１００％Ｂまで３３分間、１００％Ｂで７分間（全て直線）
【００３４】
【表１】
2015007016.tif 000005
【００３５】
表１の結果より、アブラナ科植物（ブロッコリー、ケール、キャベツ、チンゲン菜、野沢菜、大根、からし）を原料として反応を行うと、リンゴを原料に用いる場合に比べて、ＵＨＡ１０２８が多く生成することが確認された。中でも、ブロッコリー、ケールおよびからし、特にブロッコリースプラウトエキス末−３、ブロッコリースプラウトパウダー、イエローマスタード（洋からし）、オリエンタルマスタード（和からし）、からし粉Ｍ３１０を原料として用いた場合には、リンゴを原料に用いるよりも特にＵＨＡ１０２８生成量が顕著に増加することが確認された。反応にシナピン酸だけが利用されているのであれば、エタノール抽出を行った場合の方が、ＵＨＡ１０２８は生成すると予測されるが、上記の結果から、素材によってはシナピン酸よりもシナピン酸誘導体を多く含有していて、そちらを主に抽出した方が反応効率が良くなる場合があることが明らかとなった。同時に、同じ植物起源であっても、ブロッコリーとブロッコリースプラウトのように使用部位によって、シナピン酸またはシナピン酸誘導体の含有量に差があり、素材の選択のみならず使用部位からも、ＵＨＡ１０２８生成量に大きな差が生じることも確認された。以上のことから、素材にからしやブロッコリースプラウトを用いることがより好ましいと考えられるが、広く流通しているという観点から、からしやブロッコリースプラウトが手に入らない場合には、アブラナ科植物全般から適宜選択し反応に用いることが好ましいと考えられる。
【００３６】
（実施例２：抽出溶媒の検討）
抽出溶媒の種類と、ＵＨＡ１０２８の生成量との関係について検討を行った。オリエンタルマスタード（和からし）５０ｍｇを、表２に示すそれぞれの溶媒５ｍＬに浸漬後、３時間、８０℃の恒温槽で静置し、抽出処理を行った。抽出処理後、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いて抽出したサンプルに関しては、１規定塩酸を用いてｐＨを８．３に調整した。そのときの全量は１０ｍＬとなった。このサンプル以外のものに関しては、それぞれの溶媒を用いて全量が１０ｍＬになるように調整した。アブラナ科植物の抽出液全てを１０ｍＬに調整した後、遠心分離（１５０×１００ｒｐｍ）してパウダーを除き上澄み液を反応に用いた。
レスベラトロール１０ｍｇに、ミネラルウォーター１ｍＬ、オリエンタルマスタード（和からし）の抽出液２ｍＬ、エタノール３ｍＬを加え混合し、この混合液（ｐＨ７．０〜８．５）を、オートクレーブにて１３０℃、３０分間加熱した。得られた反応溶液を、メスフラスコを用い、メタノールで１０ｍＬにメスアップし、さらにメタノールで１０倍希釈した。この液１０μＬをＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、エキス中のＵＨＡ１０２８の定量を行った。その結果を表２に示す。なお、分析条件等は実施例１と同様である。
【００３７】
【表２】
2015007016.tif 000006
【００３８】
表２の結果より、抽出溶媒がエタノールまたは含水エタノール、水、塩基水であってもＵＨＡ１０２８は生成していることが確認された。この中で塩基水を使用したときにＵＨＡ１０２８が一番多く生成している理由としては、細胞壁等にリグニンやリグナンの前駆体の形で、組み込まれていたシナピン酸類が塩基で処理を行うことで大量に遊離してきたからであると考えられる。水やエタノールで抽出するよりも、塩基水で抽出した方が安定して高い値を示す傾向にあったため、塩基水を用いた方が好ましいといえるが、ｐＨを調整する際に塩が生成するため、脱塩過程などの手間を考えると、エタノールまたは、含水エタノール、水で抽出した抽出液を用いて、ＵＨＡ１０２８がある程度量生成していれば、そちらを選択するのも好ましい。今回の系であれば、５０％含水エタノールを用いて抽出処理を行うことも好ましいことが明らかになった。
【００３９】
（実施例３：塩基水の検討）
塩基水とＵＨＡ１０２８の生成量の関係について検討を行った。オリエンタルマスタード（和からし）５０ｍｇを、表３に示すそれぞれの溶媒５ｍＬに浸漬後、３時間、８０℃の恒温槽で静置し、抽出処理を行った。１Ｍの塩基を用いて抽出したものは１規定塩酸で、２Ｍ、３Ｍ、６Ｍの塩基で抽出したものは、それぞれ２規定、３規定、６規定の塩酸でｐＨを８．８に調整した。水を用いてアブラナ科植物の抽出液全てを１０ｍＬに調整した後、遠心分離（１５０×１００ｒｐｍ）してパウダーを除き上澄み液を反応に用いた。
レスベラトロール１０ｍｇに、ミネラルウォーター１ｍＬ、オリエンタルマスタード（和からし）の抽出液２ｍＬ、エタノール３ｍＬを加え混合し、この混合液（ｐＨ７.０〜８．５）を、オートクレーブにて１３０℃、３０分間加熱した。得られた反応溶液を、メスフラスコを用い、メタノールで１０ｍＬにメスアップし、さらにメタノールで１０倍希釈した。この液１０μＬをＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、エキス中のＵＨＡ１０２８の定量を行った。その結果を表３に示す。なお、分析条件等は実施例１、２と同様である。
【００４０】
【表３】
2015007016.tif 000007
【００４１】
表３の結果より、抽出溶媒に水酸化ナトリウム溶液を用いた場合、濃度をある程度濃くしていき、ｐＨの値をより大きくした方が、ＵＨＡ１０２８生成量増加につながることが確認された。６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を使用した際に、少し生成量が減少しているのは、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液により抽出された、オリエンタルマスタード（和からし）由来の抽出液がゲル化したためであると考えられる。このことから、水酸化ナトリウム溶液を使用する際には、６Ｍ以下の濃度で特に２Ｍ〜３Ｍの濃度で抽出を行うことが好ましいことが明らかになった。また、１Ｍ炭酸水素ナトリウムを使用した場合の結果から、使用する塩基によって最適濃度やｐＨが変動することも明らかになった。よって、濃度とｐＨについては特に限定されたものではなく、使用する塩基によって、効率的に目的の反応が進行する条件を適宜選択すればよい。
【００４２】
（実施例４：ＵＨＡ１０２８含有エキスの生成方法検討）
反応を繰り返すことでＵＨＡ１０２８の生成量が増加するか検討を行った。オリエンタルマスタード（和からし）２．５ｇを、３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍＬに浸漬後、２時間、９０℃の水浴中で攪拌、抽出処理を行った。得られたオリエンタルマスタード（和からし）の抽出液に３規定塩酸を加えてｐＨを８．８に調整し脱塩、濃縮を経て、濃縮抽出液を得てこれを反応に用いた。
レスベラトロール１０ｍｇに、ミネラルウォーター１ｍＬ、濃縮オリエンタルマスタード（和からし）抽出液１ｍＬ、水１ｍＬ、エタノール１ｍＬを加え混合し、この混合液（ｐＨ７．０）を、オートクレーブにて１３０℃、６０分間加熱した。一度反応の終わった反応溶液に、さらに前述の濃縮抽出液１ｍＬ、水１ｍＬを加え、同様にオートクレーブにて１３０℃、６０分間加熱した。二度反応をかけた後の反応液を、メタノールにて１０ｍＬにメスアップし、さらにこの液をメタノールで１０００倍希釈した。この液１０μＬをＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析し、エキス中のＵＨＡ１０２８の定量を行った。なお、分析条件は実施例１、２、３と同様である。ＵＨＡ１０２８は、１８９６．０μｇ生成していた。
【００４３】
また、生成反応を繰り返していくとＵＨＡ１０２８の生成量が増加することが確認された。以上の結果をみると、本発明の製造方法では、特許文献１の実施例７に記載のようなリンゴを用いた合成法と比べてＵＨＡ１０２８の含有量が数十倍高く、劇的な高含有量のエキスを得ることができていることから、非常に効率よく目的とする食品エキスが得られていることが明らかとなった。また、この手法を繰り返していくことにより、画期的な機能性を有する食品エキスが効率的に得られることが確認された。