(57)【要約】【課題】本発明は、長期間タンパク質の活性を保持したまま保存することが可能なタンパク質含有スプレー剤を提供することを目的とする。【解決手段】実質的に水を含まない界面活性剤に分散されたタンパク質が充填されていることを特徴とするスプレー剤、及び、タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させて保存することを特徴とするタンパク質の保存方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に水を含まない界面活性剤に分散されたタンパク質が充填されていることを特徴とするスプレー剤。
【請求項２】
２５℃で８週間保存後のタンパク質の残存活性率が９０％以上である請求項１に記載の剤。
【請求項３】
さらにゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂及び糖からなる群より選択される１又は２以上を含む請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
タンパク質が抗体、酵素、ペプチド及びサイトカインからなる群より選択される１又は２以上である請求項１〜３のいずれかに記載の剤。
【請求項５】
さらにアルコール及び／又はシリコンオイルを含む請求項１〜４のいずれかに記載の剤。
【請求項６】
タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させて保存することを特徴とするタンパク質の保存方法。
【請求項７】
２５℃で８週間保存後のタンパク質の残存活性率が９０％以上である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
さらにゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂及び糖からなる群より選択される１又は２以上を含む請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
タンパク質が抗体、酵素、ペプチド及びサイトカインからなる群より選択される１又は２以上である請求項６〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
さらにアルコール及び／又はシリコンオイルを含む請求項６〜９のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質含有スプレー剤及び長期間タンパク質の保存方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
抗体、酵素等の機能性タンパク質の保存方法として、凍結保存法、凍結乾燥法等がある。しかし、これらの保存方法により保存したタンパク質は使用時に溶液に戻す必要があり、手間がかかる、簡便に使用できないといった問題がある。保存タンパク質の簡便な使用を実現するために、タンパク質含有水系溶液にアルギニンと有機酸との塩（例えば、特許文献１）、アミノ酸及びその誘導体の少なくとも一方（例えば、特許文献２）等を含有することで、タンパク質活性の損失を防止する方法等の溶液状態での保存方法も検討されているが、必ずしも満足のいくものではない。
また、機能性タンパク質を有効成分とするスプレー剤が市販されているが、１ヶ月を超えて優れたタンパク質活性を保つスプレー剤はまだない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００９−３４０９５
【特許文献２】特開２０１１−２４１２０６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、長期間タンパク質の活性を保持したまま保存することが可能なタンパク質含有スプレー剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、上記課題を解決するために、以下の各発明を包含する。
［１］実質的に水を含まない界面活性剤に分散されたタンパク質が充填されていることを特徴とするスプレー剤。
［２］２５℃で８週間保存後のタンパク質の残存活性率が９０％以上である前記［１］に記載の剤。
［３］さらにゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂及び糖からなる群より選択される１又は２以上を含む前記［１］又は［２］に記載の剤。
［４］タンパク質が抗体、酵素、ペプチド及びサイトカインからなる群より選択される１又は２以上である前記［１］〜［３］のいずれかに記載の剤。
［５］さらにアルコール及び／又はシリコンオイルを含む前記［１］〜［４］のいずれかに記載の剤。
［６］タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させて保存することを特徴とするタンパク質の保存方法。
［７］２５℃で８週間保存後のタンパク質の残存活性率が９０％以上である前記［６］に記載の方法。
［８］さらにゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂及び糖からなる群より選択される１又は２以上を含む前記［６］又は［７］に記載の方法。
［９］タンパク質が抗体、酵素、ペプチド及びサイトカインからなる群より選択される１又は２以上である前記［６］〜［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］さらにアルコール及び／又はシリコンオイルを含む前記［６］〜［９］のいずれかに記載の方法。
【０００６】
本発明は、上記課題を解決するために、さらに以下の各発明を包含する。
［１１］タンパク質及び液化ガスを含有し、耐圧容器に充填されていることを特徴とする活性が高く保持されたタンパク質を含有する剤。
［１２］さらに界面活性剤を含有することを特徴とする前記［１１］に記載の剤。
［１３］スプレー剤であって、実質的に水を含まない界面活性剤に分散されたタンパク質が充填されていることを特徴とする前記［１２］に記載の剤。
［１４］２５℃で２４週間保存後のタンパク質の残存活性率が９０％以上である前記［１１］〜［１３］のいずれかに記載の剤。
［１５］さらにゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂及び糖からなる群より選択される１又は２以上を含む前記［１１］〜［１４］のいずれかに記載の剤。
［１６］タンパク質が抗体、酵素、ペプチド及びサイトカインからなる群より選択される１又は２以上である前記［１１］〜［１５］のいずれかに記載の剤。
［１７］ゼオライトが銀ゼオライトであり、抗体が抗インフルエンザ抗体である前記［１１］〜［１６］に記載の剤。
［１８］さらにアルコール及び／又はシリコンオイルを含む前記［１１］〜［１７］のいずれかに記載の剤。
［１９］耐圧容器にタンパク質及び液化ガスを充填してタンパク質を保存することを特徴とするタンパク質の保存方法。
［２０］タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させて保存することを特徴とする前記［１９］に記載の方法。
［２１］２５℃で２４週間保存後のタンパク質の残存活性率が９０％以上である前記［１９］又は［２０］に記載の方法。
［２２］さらにゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂及び糖からなる群より選択される１又は２以上を含む前記［１９］〜［２１］のいずれかに記載の方法。
［２３］タンパク質が抗体、酵素、ペプチド及びサイトカインからなる群より選択される１又は２以上である前記［１９］〜［２２］のいずれかに記載の方法。
［２４］さらにアルコール及び／又はシリコンオイルを含む前記［１９］〜［２３］のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、長期間タンパク質の活性を保持したタンパク質含有スプレー剤、及び長期間タンパク質の活性を保持することができるタンパク質の保存方法を提供することができる。本発明は、タンパク質を液状で保存するため、その使用が簡便であるいう利点も有している。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】８週間保存後の抗体残存活性率（％）を示す。
【図２】４週間および８週間保存後の酵素残存活性率（％）を示す。
【図３】８週間および２４週間保存後の抗体残存活性率（％）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、実質的に水を含まない界面活性剤に分散されたタンパク質が充填されていることを特徴とするスプレー剤（以下、「本発明のスプレー剤」という。）を提供する。
【００１０】
本発明のスプレー剤において、実質的に水を含まないとは、タンパク質が分散した界面活性剤の水分含有率が０．５質量％以下、好ましくは０．３質量％以下であることをいう。実質的に水を含まないことは、タンパク質が分散した界面活性剤に塩化コバルト紙を漬けて青色の紙が赤変しないことを目視にて確認することができる。
【００１１】
本発明のスプレー剤において界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤の何れも使用でき、これらの界面活性剤の１種または２種以上を組み合わせて使用することができるが、非イオン界面活性剤であることが好ましい。非イオン界面活性剤としては、例えば、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル等の直鎖脂肪酸と低級アルコールとのエステル；パルミチン酸セチル、ミリスチン酸ミリスチル等の直鎖脂肪酸と直鎖高級アルコールとのエステル；ミリスチン酸オクチルドデシル、オレイン酸オクチルドデシル等の直鎖脂肪酸と分岐高級アルコールとのエステル；イソステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸エチル等の分岐脂肪酸と低級アルコールとのエステル；２−エチルヘキサン酸セチル、２−エチルヘキサン酸ステアリル等の分岐脂肪酸と直鎖高級アルコールとのエステル；イソステアリン酸イソセチル、ジメチルオクタン酸オクチルドデシル、イソノナン酸イソノニル等の分岐脂肪酸と分岐高級アルコールとのエステル；トリカプリン酸グリセリル、トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル、トリウンデシル酸グリセリル等の直鎖脂肪酸と多価アルコールとのエステル；トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、トリイソパルミチン酸グリセリル、トリイソステアリン酸グリセリル等の分岐脂肪酸と多価アルコールとのエステル；乳酸ミリスチル、乳酸セチル、クエン酸トリオクチルドデシル、リンゴ酸ジイソステアリル等のヒドロキシカルボン酸（乳酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸等）とアルコールとのエステル；トリイソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル、ポリオキシエチレンオレイン酸グリセリル、モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル等のポリオキシエチレン付加型の脂肪酸エステル等が挙げられる。本発明においては直鎖脂肪酸と低級アルコールとのエステル、ポリオキシエチレン付加型の脂肪酸エステルが好ましく、中でも、ミリスチン酸イソプロピル、トリイソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリルがさらに好ましく、これらを組み合わせることが特に好ましい。
【００１２】
界面活性剤の含有量は、特に限定されないが、タンパク質が分散している液（以下、原液という。）中１〜９９質量％が好ましく、１０〜９０質量％がより好ましく、２０〜８０質量％がより好ましく、３０〜７０質量％がさらに好ましく、４０〜６０質量％が特に好ましい。
【００１３】
本発明のスプレー剤において、分散とは、主として懸濁状態を意味する。
【００１４】
本発明のスプレー剤に適用されるタンパク質としては特に限定されないが、中でも生理活性タンパク質が好適に適用される。
生理活性タンパク質には、天然由来のもの、遺伝子組換え法により得られたものが含まれる。生理活性タンパク質としては例えば、抗体、酵素、ペプチド、サイトカイン等が挙げられる。生理活性タンパク質の中でも抗体が好ましい。
【００１５】
抗体は、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよい。また、完全な抗体分子でもよく、抗原に特異的に結合し得る抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ等）でもよい。これらの抗体は当業者に周知の方法により作製することができる。ポリクローナル抗体は、例えば以下のようにして作製し、取得することができる。すなわち、抗原をＰＢＳに溶解し、所望により通常のアジュバント（例えばフロイント完全アジュバント）を適量混合したものを免疫原として鳥類又は哺乳類（マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウマ、等）を免疫する。免疫方法は特に限定されないが、例えば、１回または適当な間隔で複数回、皮下注射、筋肉注射または腹腔内注射する方法が好ましい。次いで、常法に従い、免疫した動物から血液を採取して血清を分離し、ポリクローナル抗体画分を精製することにより取得することができる。哺乳類と比べ鳥類は大変高い免疫能力を持ち、鳥類の雌が有する抗体は卵となって体外に排出される。そのため、例えば、ニワトリに抗原を接種し、抗原に特異的な抗体をニワトリ体内に形成させ、このニワトリが産卵した卵の全卵、卵黄または卵白に含有される特異的抗体が利用されている。モノクローナル抗体は、上記免疫された哺乳類等から得た免疫細胞（例えば脾細胞）とミエローマ細胞とを融合させてハイブリドーマを得、当該ハイブリドーマの培養物から抗体を採取することによって得ることができる。また、抗体遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主細胞に導入し、遺伝子組換え技術を用いて組換え型のモノクローナル抗体を産生させることもできる。さらに、ファージディスプレイ法を用いて作製することもできる。
抗体の免疫グロブリンクラスは特に限定されないが、例えばＩｇＹ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ等が挙げられる。
【００１６】
抗体としては、例えば、病原微生物に対する抗菌作用（例えば、抗真菌作用、抗ウイルス作用、抗細菌作用等）を有する抗体を好適に用いることができる。抗ウイルス作用を有する抗体として、例えば、抗インフルエンザウイルス抗体、抗インフルエンザウイルス鶏卵抗体等を好適に用いることができる。抗インフルエンザウイルス鶏卵抗体として、例えば、全卵粉末（ＯＶＯＰＲＯＮ−Ｆｌｕ（商品名）、株式会社ファーマフーズ製）等が挙げられる。全卵粉末を用いる場合、例えば、公知の脱脂工程、公知の抽出工程を経てＩｇＹを抽出することもできる。例えば、具体的には後述の実施例を参考にすることができる。
【００１７】
酵素としては、例えば加水分解酵素、異性化酵素、酸化還元酵素、転移酵素、合成酵素、脱離酵素等が挙げられ、より詳細には、リゾチーム、プロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースイソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アシルトランスフェラーゼ、スルホトランスフェラーゼ、脂肪酸シンターゼ、リン酸シンターゼ、クエン酸シンターゼ、ペクチンリアーゼ等が挙げられる。
【００１８】
ペプチドとしては、アミノ酸の個数が例えば約２〜５０個の有用ペプチド化合物が挙げられ、特にアミノ酸組成を限定するものではなく、ジペプチド、トリペプチド等が含まれる。
サイトカインとしては例えば、インターフェロン、ＩＬ−１、ＩＬ−６等が挙げられる。
【００１９】
その他のタンパク質として、例えば成長ホルモン、エリスロポエチン、インスリン、顆粒状コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、ナトリウム利尿ペプチド、血液凝固第ＶＩＩＩ因子、ソマトメジン、グルカゴン、成長ホルモン放出因子、血清アルブミン、カルシトニン等が挙げられる。
【００２０】
本発明のスプレー剤に適用されるタンパク質は、特に限定されないが、そのままの状態で実質的に水を含まない界面活性剤に分散させてもよいし、水系溶媒に溶解する工程及び／又は凍結乾燥工程を経た粉末の状態で、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させてもよいが、水系溶媒に溶解する工程及び凍結乾燥工程を経た粉末の状態であることが好ましい。この場合、粉末の平均粒子径は０．０１〜１００μｍが好ましく、０．１〜５０μｍがさらに好ましく、０．１〜５μｍが特に好ましい。
【００２１】
タンパク質の含有量は、特に限定されないが、原液中０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましく、０．０３質量％以上がより好ましく、０．０５質量％以上がさらに好ましく、０．０７質量％以上が特に好ましい。また、タンパク質の含有量は、特に限定されないが、原液中９９質量％以下が好ましく、９０質量％以下がより好ましく、７０質量％以下がより好ましく、５０質量％以下がさらに好ましく、４０質量％以下がさらに好ましく、２０質量％以下がさらに好ましく、１０質量％以下がさらに好ましく、５質量％以下がさらに好ましく、１質量％以下がさらに好ましく、０．５質量％以下がさらに好ましく、０．３質量％以下がさらに好ましく、０．２質量％以下が特に好ましい。
【００２２】
本発明のスプレー剤においては、ゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂等の多孔質物質、糖等を含んでいてもよい。
多孔質物質の形状、使用量及び平均粒子径は適宜に選択変更でき、また、適宜調整することができる。形状としては例えば、粉状、粒状、顆粒状、ペレット状、塊状等が挙げられるが、粒状、粉状が好ましい。また、使用量としてはタンパク質の質量の１〜１０００倍が好ましく、５０〜６００倍がさらに好ましく、１００〜５５０倍が特に好ましい。平均粒子径としては０．０１〜１００μｍが好ましく、０．１〜５０μｍがさらに好ましく、０．１〜５μｍが特に好ましい。
糖としては、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコール；スクロース、トレハロース等の非還元二糖類；ラフィノース等の非還元三糖類等の非還元オリゴ糖類等が挙げられる。
【００２３】
本発明のスプレー剤において、ゼオライトを含んでいることが好ましく、銀ゼオライトを含んでいることがより好ましい。例えば、タンパク質が抗インフルエンザウイルス抗体である場合に、銀ゼオライトを含むことにより、抗インフルエンザウイルス抗体の抗インフルエンザ効果が相乗的に増大すると共に、スプレー剤の抗インフルエンザ効果も増大する。
【００２４】
本発明のスプレー剤においては、アルコールを含んでいてもよい。アルコールとしては特に限定されないが、低級アルコールであることが好ましい。低級アルコールとしては、例えば炭素数が２〜５の直鎖又は分岐鎖の１価のアルコールを好ましく使用することができる。１価の低級アルコールとしては、例えばエタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール（ｎ−アミルアルコール）、２−ペンタノール（ｓｅｃ−アミルアルコール）、２−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、３−メチル−１−ブタノール、２−メチル−２−ブタノール、３−メチル−２−ブタノール、２，２−ジメチル−１−プロパノール（ネオペンチルアルコール）等が挙げられる。中でもエタノール、プロパノール、イソプロピルアルコールが好ましく、エタノールがさらに好ましい。
低級アルコールは、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２５】
アルコールは必須の成分ではないが、本発明のスプレー剤がアルコールを含有する場合、アルコールの含有量は、タンパク質が分散している液（以下、原液という。）中１〜５０質量％が好ましく、１０〜４０質量％がさらに好ましく、２０〜３０質量％が特に好ましい。
【００２６】
本発明のスプレー剤においては、シリコンオイルを含んでいてもよい。シリコンオイルとしては特に限定されないが、例えばメチルポリシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、架橋型メチルポリシロキサン、高重合メチルポリシロキサン、環状シリコーン、アルキル変性シリコーン、架橋型アルキル変性シリコーン、アミノ変性シリコーン、ポリエーテル変性シリコーン、ポリグリセリン変性シリコーン、架橋型ポリエーテル変性シリコーン、架橋型アルキルポリエーテル変性シリコーン、シリコーン・アルキル鎖共変性ポリエーテル変性シリコーン、シリコーン・アルキル鎖共変性ポリグリセリン変性シリコーン、ポリエーテル変性分岐シリコーン、ポリグリセリン変性分岐シリコーン、アクリルシリコン、フェニル変性シリコーン、シリコーンレジン等が挙げられる。中でもメチルポリシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサンが好ましい。
【００２７】
シリコンオイルは必須の成分ではないが、本発明のスプレー剤がシリコンオイルを含有する場合、シリコンオイルの含有量は、原液中１〜３０質量％が好ましく、３〜２０質量％がさらに好ましく、５〜９質量％が特に好ましい。
【００２８】
上記のように、アルコール等を含有する場合、界面活性剤の含有量は、使用する界面活性剤の種類により異なるが、直鎖脂肪酸と低級アルコールとのエステル又はポリオキシエチレン付加型の脂肪酸エステルの場合では、原液中１０〜７０質量％が好ましく、３０〜５０質量％がさらに好ましく、３５〜４５質量％が特に好ましい。
【００２９】
上記のように、アルコール等を含有する場合、タンパク質の含有量は、使用するタンパク質の種類により異なるが、原液中０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましく、０．０３質量％以上がより好ましく、０．０５質量％以上がさらに好ましく、０．０７質量％以上が特に好ましい。また、アルコール等を含有する場合、タンパク質の含有量は、使用するタンパク質の種類により異なるが、原液中９９質量％以下が好ましく、９０質量％以下がより好ましく、７０質量％以下がより好ましく、５０質量％以下がさらに好ましく、４０質量％以下がさらに好ましく、２０質量％以下がさらに好ましく、１０質量％以下がさらに好ましく、５質量％以下がさらに好ましく、１質量％以下がさらに好ましく、０．５質量％以下がさらに好ましく、０．１質量％以下がさらに好ましく、０．０８質量％以下がさらに好ましく、０．０７５質量％以下が特に好ましい。
【００３０】
本発明のスプレー剤において、上記のようにアルコール等を含有する場合、実質的に水を含まないとは、原液の水分含有率が０．５質量％以下、好ましくは０．３質量％以下であることをいう。実質的に水を含まないことは、タンパク質が分散した界面活性剤に塩化コバルト紙を漬けて青色の紙が赤変しないことを目視にて確認することができる。
原液の粘度は特に限定されないが、例えば約８℃で測定した動粘度が５０〜２００ｃＳｔであることが好ましく、１００〜２００ｃＳｔであることがさらに好ましく、１６０〜１８０ｃＳｔであることが特に好ましい。
【００３１】
本発明のスプレー剤においては、上記の成分の他に、噴射剤、粘度調整剤、生理活性成分、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、キレート剤、保湿成分、薬剤等の各種成分を、本発明の目的を損なわない範囲で使用することができる。噴射剤として、例えばプロパン、ｎ-ブタン、イソブタン、イソペンタン、ペンタン、ジメチルエーテル、液化石油ガス（ＬＰＧ）、液化天然ガス等が挙げられる。中でもＬＰＧが好ましい。これらは、単独で使用しても良いし、若しくは２種類以上併用してもよい。また、環境面及び安全面から、炭酸ガスや窒素ガスを使用することもできる。噴射剤の充填量は、全充填量に対して５０〜９９質量％が好ましく、６０〜９５質量％がさらに好ましく、９０〜９５質量％が特に好ましい。本発明のスプレー剤は、上記原料を使用して、公知方法又は自体公知の方法に従って製造されうる。
【００３２】
本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／界面活性剤の質量比が、１／１０００以上であることが好ましく、１／８００以上であることがより好ましく、１／７００以上であることがさらに好ましく、１／６００以上であることがさらに好ましく、１／５５０以上であることが特に好ましい。また、本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／界面活性剤の質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることがさらに好ましく、１／５００以下であることが特に好ましい。
【００３３】
本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／アルコールの質量比が、１／１０００以上であることが好ましく、１／７００以上であることがより好ましく、１／５００以上であることがさらに好ましく、１／４００以上であることがさらに好ましく、１／３５０以上であることが特に好ましい。また、本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／アルコールの質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／２００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることが特に好ましい。
【００３４】
本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／シリコンオイルの質量比が、１／１０００以上であることが好ましく、１／５００以上であることがより好ましく、１／３００以上であることがさらに好ましく、１／２００以上であることがさらに好ましく、１／１００以上であることが特に好ましい。また、本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／シリコンオイルの質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／５０以下であることがさらに好ましく、１／８０以下であることが特に好ましい。
【００３５】
本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／ゼオライトの質量比が、１／１００００以上であることが好ましく、１／１０００以上であることがより好ましく、１／７００以上であることがさらに好ましく、１／５００以上であることがさらに好ましく、１／４００以上であることが特に好ましい。また、本発明のスプレー剤の原液の成分組成の１例として、タンパク質／シリコンオイルの質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／２００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることがさらに好ましく、１／３５０以下であることが特に好ましい。
【００３６】
本発明のスプレー剤は、長期間、タンパク質の活性を高く保持することができる。より詳細には、原液を遮光及び密閉条件下、２５℃で８週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９８％以上である。ここで、本発明においてタンパク質の残存活性率とは、保存初日のタンパク質活性を示す値に対する保存後のタンパク質活性を示す値の割合（％）をいい、各タンパク質活性を示す値はブランクの値を差し引いていることを前提とする。タンパク質の測定は、公知の方法で行うことができ、例えば、免疫化学的方法（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ、ＲＩＡ、免疫組織化学的方法、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー等）、質量分析による方法等が挙げられる。免疫化学的方法が好ましく、ＥＬＩＳＡがさらに好ましい。これらの方法は、常法に従い行うことができる。
【００３７】
本発明のスプレー剤は、長期間、タンパク質の活性を高く保持することができる。より詳細には、本発明のスプレー剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で２４週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９６％以上である。さらに、本発明のスプレー剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で１年間保存した後、タンパク質の残存活性率が４０％以上であり、好ましくは５０％以上であり、さらに好ましくは６０％以上であり、さらに好ましくは７０％以上であり、さらに好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上であり、特に好ましくは９３％以上である。
【００３８】
本発明のスプレー剤は、通常のスプレー容器を使用でき、また防錆等の目的で容器内部表面を樹脂コーティングしたエアゾール容器、ディスペンサーを備えたスプレー容器、トリガースプレー容器等を使用することもできる。内袋を利用した二重容器を利用して噴霧することもできる。
本発明のスプレー剤は、例えば、粉末状のタンパク質を界面活性剤等の液体に分散させた原液と噴射剤をスプレー容器に充填することにより作製することができる。原液中には適宜、多孔質物質等を含有させてもよい。
本発明のスプレー剤は、遮光状態で保存することが好ましく、また密閉状態で保存することが好ましい。
【００３９】
本発明のスプレー剤のスプレー容器として、特にエアゾール容器が、その使用が簡便である点で、好適に使用される。
【００４０】
本発明のスプレー剤は、長期間、タンパク質の活性を高く保持することができるので、タンパク質を有効成分とする抗ウイルススプレー剤、マスク用抗花粉スプレー剤、デオドラントスプレー剤、水虫予防スプレー剤等として好適に使用することができる。例えば、抗ウイルススプレー剤等として使用する場合、市販のマスクやフィルターに噴霧することにより容易にそれらにウイルス捕捉能を付与することができる。また、デオドラントスプレー剤等として使用する場合、直接人体に使用することもできる。
【００４１】
本発明のスプレー剤は、長期間、タンパク質の活性を高く保持することができるので、タンパク質が病原微生物に対する抗菌作用（例えば、抗真菌作用、抗ウイルス作用、抗細菌作用等）を有する場合、タンパク質を有効成分とする抗菌剤としても好適に使用することができる。例えば、抗菌剤として使用する場合、市販のマスクやフィルターに抗菌剤を付着させることにより容易にそれらに菌捕捉能を付与することができる。
【００４２】
本発明は、タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させて保存することを特徴とするタンパク質の保存方法（以下、「本発明の保存方法」という。）を提供する。
本発明の保存方法において、実質的に水を含まないとは、本発明のスプレー剤と同様に定義される。また、分散とは、主として懸濁状態を意味する。
本発明の保存方法において適用される、界面活性剤、タンパク質は、本発明のスプレー剤において適用されるものが好ましい。また、本発明の保存方法においても、本発明のスプレー剤と同様にゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂、糖、アルコール、シリコンオイル等を含んでいてもよい。
本発明の保存方法により、長期間タンパク質の活性を高く保持することができる。より詳細には、原液を遮光及び密閉条件下、２５℃で８週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９８％以上である。また、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で２４週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９６％以上である。さらに、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で１年間保存した後、タンパク質の残存活性率が４０％以上であり、好ましくは５０％以上であり、さらに好ましくは６０％以上であり、さらに好ましくは７０％以上であり、さらに好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上であり、特に好ましくは９３％以上である。タンパク質の測定は、本発明のスプレー剤と同様に公知の方法で行うことができる。
本発明の保存方法は、長期間タンパク質の活性を高く保持することができるので、液状でタンパク質を長期に保存することが望まれる医薬製剤、医薬部外品、機能性補助食品、食品添加剤等に好適に使用することができる。
【００４３】
本発明は、タンパク質及び液化ガスを含有し、耐圧容器に充填されている、活性が高く保持されたタンパク質を含有する剤（以下、「本発明のタンパク質含有剤」という。）を提供する。
【００４４】
本発明のタンパク質含有剤において適用されるタンパク質は、本発明のスプレー剤において適用されるタンパク質が好ましい。
【００４５】
本発明のタンパク質含有剤において適用される液化ガスとして、例えばプロパン、ｎ-ブタン、イソブタン、イソペンタン、ペンタン、ジメチルエーテル、液化石油ガス（ＬＰＧ）、液化天然ガス等が挙げられる。中でもＬＰＧが好ましい。
【００４６】
本発明のタンパク質含有剤において、耐圧容器に、タンパク質及び液化ガスを充填する。タンパク質の充填割合は特に限定されないが、例えば、０．０００１質量％以上であることが好ましく、０．００１質量％以上であることがより好ましく、０．００２質量％以上であることがより好ましく、０．００３質量％以上であることがさらに好ましく、０．００４質量％以上であることが特に好ましい。また、タンパク質の充填割合は特に限定されないが、例えば、９９．９質量％以下であることが好ましく、５０質量％以下であることがより好ましく、１０質量％以下であることがさらに好ましく、１質量％以下であることがさらに好ましく、０．１質量％以下であることがさらに好ましく、０．０５質量％以下であることがさらに好ましく、０．０１質量％以下であることが特に好ましい。
【００４７】
液化ガスの充填割合は特に限定されないが、例えば、０．１質量％以上であることが好ましく、５０質量％以上であることがより好ましく、７０質量％以上であることがより好ましく、９０質量％以上であることがより好ましく、９１質量％以上であることがさらに好ましく、９３質量％以上であることが特に好ましい。液化ガスの充填割合は特に限定されないが、例えば、９９．９質量％以下であることが好ましく、９９．５質量％以下であることがより好ましく、９９質量％以下であることがさらに好ましく、９８．５質量％以下であることがさらに好ましく、９８質量％以下であることが特に好ましい。
【００４８】
本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／液化ガスの質量比が、１／１０００００以上であることが好ましく、１／５００００以上であることがより好ましく、１／３００００以上であることがさらに好ましく、１／２００００以上であることがさらに好ましい。また、本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／液化ガスの質量比が、１／１０以下であることが好ましく、１／１００以下であることがより好ましく、１／１０００以下であることがさらに好ましく、１／１００００以下であることがさらに好ましく、１／１５０００以下であることがさらに好ましく、１／１８０００以下であることが特に好ましい。
【００４９】
本発明のタンパク質含有剤において、耐圧容器は、アルミニウム製、ガラス製、ステンレス性、プラスチック等の樹脂製等の容器を使用でき、また防錆等の目的で容器内部表面を樹脂コーティングしたエアゾール容器、ディスペンサーを備えたスプレー容器、トリガースプレー容器等を使用することもできる。内袋を利用した二重容器を利用して噴霧することもできる。特にエアゾール容器が、その使用が簡便である点で、好適に使用される。
【００５０】
本発明のタンパク質含有剤は、さらに界面活性剤を含んでいてもよい。本発明のタンパク質含有剤において適用される界面活性剤は、本発明のスプレー剤において適用されるものが好ましい。
【００５１】
本発明のタンパク質含有剤は、例えば、粉末状のタンパク質を界面活性剤等の液体に分散させたタンパク質含有剤及び液化ガスを耐圧容器に充填することにより作製することができる。タンパク質含有剤中には適宜、多孔質物質等を含有させてもよい。
【００５２】
本発明のタンパク質含有剤は、遮光状態で保存することが好ましく、また密閉状態で保存することが好ましい。
【００５３】
本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／界面活性剤の質量比が、１／１０００以上であることが好ましく、１／８００以上であることがより好ましく、１／７００以上であることがさらに好ましく、１／６００以上であることがさらに好ましく、１／５５０以上であることが特に好ましい。また、本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／界面活性剤の質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることがさらに好ましく、１／５００以下であることが特に好ましい。
【００５４】
本発明のタンパク質含有剤の形態は特に限定されず、耐圧容器に充填されていればよいが、例えば、スプレー剤の形態で好適に用いることができ、スプレー剤はエアゾールスプレー剤であることが特に好ましい。
【００５５】
本発明のタンパク質含有剤は、実質的に水を含まない界面活性剤に分散されていてもよい。本発明のタンパク質含有剤において、実質的に水を含まないとは、本発明のスプレー剤と同様に定義される。また、分散とは、主として懸濁状態を意味する。
【００５６】
また、本発明のタンパク質含有剤において、本発明のスプレー剤と同様にゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂、糖、アルコール、シリコンオイル等を含んでいてもよく、中でも銀ゼオライトが特に好ましい。例えば、タンパク質が抗インフルエンザウイルス抗体である場合に、銀ゼオライトを含むことにより、抗インフルエンザウイルス抗体の抗インフルエンザ効果が相乗的に増大すると共に、スプレー剤の抗インフルエンザ効果も増大する。
【００５７】
本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／ゼオライトの質量比が、１／１００００以上であることが好ましく、１／１０００以上であることがより好ましく、１／７００以上であることがさらに好ましく、１／５００以上であることがさらに好ましく、１／４００以上であることが特に好ましい。また、本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／ゼオライトの質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／２００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることがさらに好ましく、１／３５０以下であることが特に好ましい。
【００５８】
本発明のタンパク質含有剤においては、アルコールを含んでいてもよい。アルコールは、本発明のスプレー剤において適用されるものが好ましい。
【００５９】
本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／アルコールの質量比が、１／１０００以上であることが好ましく、１／７００以上であることがより好ましく、１／５００以上であることがさらに好ましく、１／４００以上であることがさらに好ましく、１／３５０以上であることが特に好ましい。また、本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／アルコールの質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／２００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることが特に好ましい。
【００６０】
本発明のタンパク質含有剤においては、シリコンオイルを含んでいてもよい。アルコールは、本発明のスプレー剤において適用されるものが好ましい。
【００６１】
本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／シリコンオイルの質量比が、１／１０００以上であることが好ましく、１／５００以上であることがより好ましく、１／３００以上であることがさらに好ましく、１／２００以上であることがさらに好ましく、１／１００以上であることが特に好ましい。また、本発明のタンパク質含有剤の成分組成の１例として、タンパク質／シリコンオイルの質量比が、１／０．０１以下であることが好ましく、１／０．１以下であることがより好ましく、１／１以下であることがさらに好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、１／１００以下であることがさらに好ましく、１／２００以下であることがさらに好ましく、１／３００以下であることがさらに好ましく、１／３５０以下であることが特に好ましい。
【００６２】
本発明のタンパク質含有剤においては、上記の成分の他に、粘度調整剤、生理活性成分、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、キレート剤、保湿成分、薬剤等の各種成分を、本発明の目的を損なわない範囲で使用することができる。これらは、単独で使用しても良いし、若しくは２種類以上併用してもよい。本発明のタンパク質含有剤は、上記原料を使用して、公知方法又は自体公知の方法に従って製造されうる。
【００６３】
本発明のタンパク質含有剤は、長期間、タンパク質の活性を高く保持することができる。より詳細には、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で８週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９８％以上である。さらに、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で２４週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９６％以上である。さらに、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で１年間保存した後、タンパク質の残存活性率が４０％以上であり、好ましくは５０％以上であり、さらに好ましくは６０％以上であり、さらに好ましくは７０％以上であり、さらに好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上であり、特に好ましくは９３％以上である。タンパク質の測定は、本発明のスプレー剤と同様に公知の方法で行うことができる。
【００６４】
本発明のタンパク質含有剤は、長期間、タンパク質の活性を高く保持することができるので、タンパク質を有効成分とする抗ウイルス剤、抗菌剤、マスク用抗花粉剤、デオドラント剤、水虫予防剤等として好適に使用することができる。例えば、抗ウイルス剤、抗菌剤等として使用する場合、市販のマスクやフィルターにタンパク質を噴霧することにより容易にそれらにウイルス（又は菌）捕捉能を付与することができる。また、デオドラント剤等として使用する場合、直接人体に使用することもできる。
【００６５】
本発明は、耐圧容器にタンパク質及び液化ガスを充填してタンパク質を保存するタンパク質の保存方法（以下、「本発明の保存方法（２）」という。）を提供する。
【００６６】
本発明の保存方法（２）において、実質的に水を含まないとは、本発明のタンパク質含有剤と同様に定義される。また、分散とは、主として懸濁状態を意味する。
【００６７】
本発明の保存方法（２）において適用される、タンパク質、液化ガスは、本発明のタンパク質含有剤において適用されるものが好ましい。また、本発明の保存方法（２）においても、本発明のスプレー剤と同様にゼオライト、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ベントナイト、多孔質樹脂、糖、アルコール、シリコンオイル等を含んでいてもよく、中でも銀ゼオライトが特に好ましい。例えば、タンパク質が抗インフルエンザウイルス抗体である場合に、銀ゼオライトを含むことにより、抗インフルエンザウイルス抗体の抗インフルエンザ効果が相乗的に増大すると共に、スプレー剤の抗インフルエンザ効果も増大する。
【００６８】
本発明の保存方法（２）により、長期間タンパク質の活性を高く保持することができる。より詳細には、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で８週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９８％以上である。さらに、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で２４週間保存した後、タンパク質の残存活性率が９０％以上であり、好ましくは９５％以上であり、さらに好ましくは９６％以上である。さらに、タンパク質含有剤を遮光及び密閉条件下、２５℃で１年間保存した後、タンパク質の残存活性率が４０％以上であり、好ましくは５０％以上であり、さらに好ましくは６０％以上であり、さらに好ましくは７０％以上であり、さらに好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上であり、特に好ましくは９３％以上である。タンパク質の測定は、本発明のスプレー剤と同様に公知の方法で行うことができる。
【００６９】
本発明の保存方法（２）は、長期間タンパク質の活性を高く保持することができるので、タンパク質を長期に保存することが望まれる医薬製剤、医薬部外品、機能性補助食品、食品添加剤等に好適に使用することができる。
【実施例】
【００７０】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００７１】
実施例１：抗体
［１．ＩｇＹ抽出物含有粉末の作製］
インフルエンザウイルスで免役した鶏から得られた抗インフルエンザウイルス鶏卵抗体を含有する全卵粉末（ＯＶＯＰＲＯＮ−Ｆｌｕ（商品名）、株式会社ファーマフーズ製）５００ｇをエタノール（９９．５％特級）２．５Ｌに懸濁し、３０分間、室温でスターラーにて混合した後、ブフナー漏斗及びろ紙（Ｎｏ．１３１、アドバンテック東洋株式会社製）を用いて吸引ろ過した。残渣をエタノール（９９．５％特級）２．５Ｌに懸濁し、３０分間、室温でスターラーにて混合した後、ブフナー漏斗及びろ紙（Ｎｏ．１３１、アドバンテック東洋株式会社製）で吸引ろ過した。残渣をトレイに広げて、室温で４８時間乾燥させた。
上記操作により、脱脂した粉末２００ｇを０．５質量％塩化ナトリウム水溶液４Ｌに懸濁し、３０分間、室温でスターラーにて混合した後、さらにセライト（Ｃｅｌｉｔｅ５４５ＲＶＳ、ナカライテスク株式会社）を１００ｇ加え、ブフナー漏斗及びろ紙（Ｎｏ．１３１、アドバンテック東洋株式会社製）を用いてろ過した。回収したろ液３Ｌに対し、４５０ｇの硫酸二ナトリウムを徐々に添加し、３０分間、室温でスターラーにて混合した後、２０分間、室温、１０，０００ｒｐｍで遠心した。上清を除き、沈殿を６００ｍＬの１０ｍＭリン酸水素二ナトリウムに懸濁させた。該懸濁液６００ｍＬに対し、硫酸二ナトリウム９０ｇを徐々に添加し、３０分間、室温でスターラーにて混合した後、２０分間、室温、１０，０００ｒｐｍで遠心した。上清を除き、沈殿を６００ｍＬの１０ｍＭリン酸水素二ナトリウムに懸濁させた。該懸濁液６００ｍＬに対し、硫酸二ナトリウム９０ｇを徐々に添加し、３０分間、室温でスターラーにて混合した後、２０分間、室温、１０，０００ｒｐｍで遠心した。上清を除き、沈殿を１５０ｍＬの１０ｍＭリン酸水素二ナトリウムに溶解し、直径２８．６ｍｍヴィスキングチューブ（株式会社日本メディカルサイエンス）に封入後、５Ｌの１０ｍＭリン酸水素二ナトリウムに３時間浸し透析を行った。同透析をさらに３回繰り返した後、ヴィスキングチューブ内の溶液を１０分間、１０℃、１０，０００ｒｐｍで遠心した。上清を０．８μｍのフィルターでろ過し、タンパク質量をＢＣＡキット（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）にて測定し、１０ｍＭリン酸水素二ナトリウムを加えて１〜４ｍｇ／ｍＬのＩｇＹ抽出液を作製した。
ＩｇＹ抽出液の半量（ｗ／ｖ）の銀イオン含有ゼオライト（商品名ゼオミックＡＷ１０−Ｎ、シナネンゼオミック社製）をＩｇＹ抽出液に添加し、３６時間凍結乾燥させ、ＩｇＹ抽出物含有粉末を得た。ＩｇＹ抽出物含有粉末中のＩｇＹ／ゼオライトの質量比は１／３９９であった。
【００７２】
［２．試料の調製］
（実験例１）
上記ＩｇＹ抽出物含有粉末１ｋｇに対し、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ−ＥＸ、日光ケミカルズ製）  ０．８８ｋｇ、トリイソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル（ＴＧＩ−２０、日光ケミカルズ製）  ０．４８ｋｇ、メチルポリシロキサン（ＫＦ９６Ａ−５ｃｓ、信越シリコーン製）  ０．０８ｋｇ、デカメチルシクロペンタシロキサン（ＫＦ−９９５、信越シリコーン製）  ０．１６ｋｇ及びエタノール（９９度合成無変性エタノール、日本アルコール販売製）  ０．８ｋｇを混合し懸濁液を作製した。該懸濁液１．７ｇ及びＬＰガス２３．３ｇを缶（スプレーボトル）に充填した。
（比較例１）
ＩｇＹ抽出物含有粉末１ｇをポリ袋（ユニパック  Ｄ−８、生産日本社）に入れてチャックを閉めた。
（比較例２）
実験例１の懸濁液に等容量の蒸留水を加えた混合液２０ｍＬを５０ｍＬのポリプロピレン製遠沈管に入れてふたを閉めた。
（比較例３）
ＩｇＹ抽出物含有粉末を１５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように蒸留水に溶解した。該水溶液２０ｍＬを５０ｍＬポリプロピレン製遠沈管に入れてふたを閉めた。
【００７３】
［３．保存方法］
実験例１及び比較例１〜３の試料を２５℃にて恒温器（遮光状態）で保存した。一定の期間（ｄａｙ０、８週間）経過後、サンプルを採取し−２０℃にて保管した。各試料は、測定前に室温に戻して、活性測定に供した。
【００７４】
［４．抗体活性の測定に用いる試料の調製］
（実験例１）
スプレーボトルをポリ袋内で噴射し、内容物を回収した。内容物１００ｍｇを１．５ｍＬチューブに量りとり、１００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（１０００ｍＬ容メスシリンダーに、リン酸水素２ナトリウム  １．１５ｇ、塩化ナトリウム  ８．０ｇ、リン酸二水素カリウム  ０．２ｇ、塩化カリウム  ０．２ｇ、アジ化ナトリウム  ０．２ｇを加え、蒸留水にて定容した。以下ＰＢＳという。）を加えた。３０分間放置後、５分間、室温、１２０００ｒｐｍで遠心させ、上清を回収し、抗体活性の測定に用いた。
（比較例１）
ＩｇＹ抽出物含有粉末を１５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように蒸留水に溶解し、該水溶液を、抗体活性の測定に用いた。
（比較例２、３）
比較例２、３のサンプルをそのまま、抗体活性の測定に用いた。
【００７５】
［５．試薬の調製］
（１）ＰＢＳ−Ｔ溶液
１０００ｍＬ容メスシリンダーに、リン酸水素二ナトリウム  １．１５ｇ、塩化ナトリウム  ８．０ｇ、リン酸二水素カリウム  ０．２ｇ、塩化カリウム  ０．２ｇ、アジ化ナトリウム  ０．２ｇ、Ｔｗｅｅｎ２０  ０．５ｇを加え、蒸留水にて定容した。
（２）ブロッキング溶液
ＰＢＳ溶液５０ｍＬにＢＳＡ１．５ｇを溶解した。
（３）抗原コーティング用緩衝液
１０００ｍＬ容メスシリンダーに、炭酸ナトリウム  １．５９ｇ、炭酸水素ナトリウム  ２．９３ｇを加え、蒸留水にて定容した。
（４）基質溶解液
蒸留水８００ｍＬに、塩化マグネシウム六水和物  ０．１ｇ、アジ化ナトリウム  ０．２ｇを溶解した。その後、ジエタノールアミン９７ｍＬを加えた。塩酸にてｐＨ９．５に調整した後、１０００ｍＬ容メスフラスコに移し、蒸留水にて定容した。
【００７６】
［６．残存抗体活性の測定］
（１）ＥＬＩＳＡプレートの作製
発育鶏卵を用いて培養したインフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１株）を、最終濃度０．２％のホルムアルデヒド溶液にて不活化した。不活化後、ＢＣＡキット（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）にてタンパク濃度を測定し、ＥＬＩＳＡ用固相化抗原溶液とした。ＥＬＩＳＡ用固相化抗原溶液は、抗原コーティング用緩衝液で希釈し、タンパク量５μｇ／ｍＬに調製し、９６ｗｅｌｌＥＬＩＳＡ用プレートに５０μＬ／ｗｅｌｌ添加した。４℃にて一晩放置した。ｗｅｌｌ内の抗原コーティング用緩衝液を除去し、ＰＢＳ−Ｔ溶液２００μＬ／ｗｅｌｌで３度洗浄した。ブロッキング溶液２００μＬ／ｗｅｌｌを添加した。３７℃、約２時間放置した。ｗｅｌｌ内のブロッキング溶液を除去し、ＰＢＳ−Ｔ溶液２００μＬ／ｗｅｌｌで３度洗浄した。室温で３０分程度乾燥した。
（２）測定
ＰＢＳ及び各試料溶液をＥＬＩＳＡプレートに５０μＬ／ｗｅｌｌ添加した。３７℃、１時間放置した。ｗｅｌｌ内の溶液を除去し、ＰＢＳ−Ｔ溶液２００μＬ／ｗｅｌｌで３度洗浄した。標識２次抗体溶液を、５０μＬ／ｗｅｌｌ添加した。３７℃、１時間放置した。ｗｅｌｌ内の溶液を除去し、ＰＢＳ−Ｔ溶液２００μＬ／ｗｅｌｌで５度洗浄した。発色基質（４−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ  ｈｅｘａｈｙｄｒａｔｅ  ５ｍｇ  ｐｅｒ  ｔａｂｌｅｔ、シグマアルドリッチジャパン株式会社）を基質溶解液に１タブレット／５ｍＬの割合で溶解した。５０μＬ／ｗｅｌｌ添加した。プレートを３７℃、２０分間放置した。２Ｎ  ＮａＯＨを５０μＬ／ｗｅｌｌ添加した。マイクロプレートリーダーにより波長４０５ｎｍで測定した。試料調製当日（ｄａｙ０）の試料の吸光度からからブランクの吸光度を差し引いた値（以下、吸光度差という。）に対する、８週間後の吸光度差の百分率（％）を求め、残存抗体活性率とした。
【００７７】
［７．結果］
８週間経過後の残存酵素活性率の結果を図１に示した。８週間経過後の残存酵素活性率は、実験例１は９８．９％であり非常に優れた保存性を有することが確認された。一方、比較例１は９５．３％、比較例２は８６．８％、比較例３は２７．４％（図示されていない）であった。
８週間経過後において、実験例１は水を含む比較例２よりも優れた保存性を示したことから、本発明の効果を得るためには、実質的に水を含まないことが重要であることが示された。さらに驚くべきことに、実験例１は凍結乾燥した粉末である比較例１よりも優れた保存性を示した。
以上より、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させることにより、抗体を８週間という長期にわたって安定して保存できることが確認された。
【００７８】
実施例２：酵素
［１．試薬の調製］
（１）原液
エタノール（９９度合成無変性エタノール、日本アルコール販売製）  ３３．３ｇ、ミリスチン酸イソプロピル（日光ケミカルズ製）  ３６．７ｇ、トリイソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル（日光ケミカルズ製）  ２０．０ｇ、メチルポリシロキサン（信越シリコーン製）  ３．４ｇ、デカメチルシクロペンタシロキサン（信越シリコーン製）  ３．４ｇを混合した。
（２）トリス緩衝液
Ｔｒｉｚｍａ  ｂａｓｅ（シグマ・アルドリッチ）水溶液を、ＨＣｌ（和光純薬工業）溶液を用いてｐＨ７．８に調整し、終濃度０．１ｍｏｌ／Ｌに調製した。
【００７９】
［２．試料の調製］
（実験例２）
１．５ｍＬ容遠心管に酵素粉末（プロテアーゼＰ「アマノ」３ＳＤ・天野エンザイム製）  １０ｍｇを量りとり、原液（上記（１））  １ｍＬを加えて懸濁液を作製した。
（比較例４）
酵素粉末  １０ｍｇを１．５ｍＬ容遠心管に量りとった。
（比較例５）
１．５ｍＬ容遠心管に酵素粉末  １０ｍｇを量りとり、蒸留水  １ｍＬを加えて懸濁液を作製した。
【００８０】
［３．保存方法］
実験例２及び比較例４、５の試料を２５℃にて恒温器（遮光状態）で保存した。一定の期間（ｄａｙ０、４週間、８週間）経過後、サンプルを採取し−２０℃にて保管した。各試料は、測定前に室温にて融解した。
【００８１】
［４．残存酵素活性の測定］
各サンプルに蒸留水１ｍＬを加えて１２，０００ｒｐｍ、１０分間、４℃にて遠心を行った。水相から１００μＬを１．５ｍＬ容遠心管に採取し、トリス緩衝液１５０μＬを混合した。５％アゾカゼイン水溶液（シグマ・アルドリッチ製）１００μＬを加え、卓上ミキサーで１０秒間撹拌後に、５０℃水浴上で３０分静置した。１０％トリクロロ酢酸（和光純薬工業製）を加え、卓上ミキサーで１０秒間撹拌した後、３，０００ｒｐｍ、１０分間、２５℃にて遠心を行った。上清を採取し、３６６ｎｍの吸光度を測定した。試料調製当日（ｄａｙ０）の試料の吸光度からからブランクの吸光度を差し引いた値（以下、吸光度差という。）に対する、４週間後および８週間後の吸光度差の百分率（％）を求め、残存酵素活性率とした。
【００８２】
［５．結果］
４週間および８週間経過後の残存酵素活性率の結果を図２に示した。４週間経過後の残存酵素活性率は、実験例２は９８．９％であり非常に優れた保存性を有することが確認された。一方、比較例４は９６．４％、比較例５は３１．２％であった。８週間経過後の残存酵素活性率は、実験例２は９９．８％であり非常に優れた保存性を有することが確認された。一方、比較例４は９８．２％、比較例５は１９．７％であった。
４週間経過後および８週間経過後において、実験例２は比較例５よりも優れた保存性を示したことから、本発明の効果を得るためには、水を含まないことが重要であることが示された。さらに驚くべきことに、実験例２は粉末である比較例４よりも優れた保存性を示した。
以上より、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させることにより、酵素を８週間という長期にわたって安定して保存できることが確認された。
【００８３】
実施例３：抗体の長期保存（２４週間）
実施例１の実験例１及び比較例１〜３の試料を２５℃にて恒温器（遮光状態）で保存した。一定の期間（ｄａｙ０、８週間、２４週間）経過後、実施例１と同じ方法で、サンプルを採取し、−２０℃にて活性測定まで保管した。各試料は、測定前に室温に戻して、活性測定に供した。
【００８４】
残存抗体活性の測定は、実施例１［６．残存抗体活性の測定］に記載の方法で行った。
試料調製当日（ｄａｙ０）の試料の吸光度からからブランクの吸光度を差し引いた値（以下、吸光度差という。）に対する、８週間、２４週間後の吸光度差の百分率（％）を求め、残存抗体活性率とした。
【００８５】
８週間、２４週間経過後の残存酵素活性率の結果を図３に示した。２４週間経過後の残存酵素活性率は、実験例１は９６．１％であり非常に優れた保存性を有することが確認された。一方、比較例１は９５．２％、比較例２は２９．８％、比較例３は２．９％であった。
２４週間経過後において、実験例１は水を含む比較例２よりも優れた保存性を示したことから、本発明の効果を得るためには、実質的に水を含まないことが重要であることが示された。さらに驚くべきことに、実験例１は凍結乾燥した粉末である比較例１よりも優れた保存性を示した。
以上より、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させることにより、抗体を２４週間という長期にわたって安定して保存できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００８６】
本発明のスプレー剤は、タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させることで、長期間タンパク質の活性を保持することができるため、タンパク質を含有するスプレー剤として好適に簡便に使用することができる。また、本発明の保存方法は、タンパク質を、実質的に水を含まない界面活性剤に分散させることで、長期間タンパク質の活性を保持することができるため、タンパク質の保存方法として有効に利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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