(57)【要約】【課題】クッシング症候群の原因となる分子病態を解明し、より効果的な検査方法を提供することを課題とする。またクッシング症候群の検査のためのバイオマーカーを提供し、さらに当該バイオマーカーに着目したクッシング症候群治療剤を提供することを課題とする。【解決手段】クッシング症候群において、cAMP依存性プロテインキナーゼの触媒サブユニットをコードする遺伝子であるPRKACA遺伝子に変異を有する場合があることを見出し、本発明を完成した。本発明の検査方法により、クッシング症候群の検査を効果的に行うことができる。特に従来診断が困難であった、ACTH非依存性クッシング症候群の検査を有効に行うことができる。さらには変異型PRKACAを、クッシング症候群検査のためのバイオマーカーとすることができる。そして、変異型PRKACAを標的とする、クッシング症候群治療薬の開発に貢献しうる。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの触媒サブユニットであるPRKACAの変異型を検出することを特徴とする、クッシング症候群の検査方法。
【請求項２】
変異型PRKACAが、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの調節サブユニットであるPRKAR1Aとの相互作用を阻害する変異型PRKACAである、請求項１に記載のクッシング症候群の検査方法。
【請求項３】
変異型PRKACAが、配列番号１に示すアミノ酸配列のうち第206番目のアミノ酸がロイシン（L）からアルギニン（R）に変異したL206R変異型PRKACAである、請求項１に記載のクッシング症候群の検査方法。
【請求項４】
採取した検体から、PRKACAの変異型をコードする遺伝子を検出することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１に記載のクッシング症候群の検査方法。
【請求項５】
採取した検体から、PRKACAの変異型を検出することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１に記載のクッシング症候群の検査方法。
【請求項６】
L206R変異型PRKACAからなる、クッシング症候群検査用バイオマーカー。
【請求項７】
変異型PRKACAを阻害しうる物質を有効成分として含む、クッシング症候群治療剤。
【請求項８】
変異型PRKACAが、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの調節サブユニットであるPRKAR1Aとの相互作用を阻害する変異型PRKACAである、請求項７に記載のクッシング症候群治療剤。
【請求項９】
変異型PRKACAが、L206R変異型PRKACAである、請求項７に記載のクッシング症候群治療剤。
【請求項１０】
PRKACAの作用を制御しうる物質をスクリーニングすることを特徴とする、クッシング症候群治療剤のスクリーニング方法。
【請求項１１】
PRKACAの作用を制御しうる物質のスクリーニングが、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの触媒サブユニットであるPRKACAと調節サブユニットであるPRKAR1Aとの相互作用を調節しうる物質であることを特徴とする、請求項１０に記載のクッシング症候群治療剤のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クッシング症候群の検査方法、クッシング症候群の検査のためのバイオマーカー、さらに当該バイオマーカーに着目したクッシング症候群の治療剤並びに治療剤のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クッシング症候群では過剰なコルチゾールの分泌により、高血圧、II型糖尿病、中心性肥満、骨粗しょう症やうつ病などの症状を呈するが、その原因となる分子病態はこれまで不明であった。副腎におけるコルチゾールの生合成は、脳下垂体前葉から分泌される副腎皮質刺激ホルモン（以下「ACTH」ともいう。）によって調節される。ACTHが分泌され副腎皮質細胞のメラノコルチン-2受容体に結合すると、サイクリックAMP（cAMP）の産生が増加し、cAMP依存性プロテインキナーゼ（以下、「PKA」ともいう。）が活性化される。活性化したPKAによりステロイド生合成に関わる酵素の発現が誘導され、コルチゾールが産生される。下垂体腺腫や異所からの異常なACTH分泌は、クッシング症候群の主要な原因となる（ACTH依存性クッシング症候群）。また、副腎皮質腫瘍が、ACTHによる制御から逸脱してコルチゾールを自律的かつ過剰に産生する場合もあり、クッシング症候群のもう1つの主要な原因となる（ACTH非依存性クッシング症候群）。
【０００３】
ACTH非依存性クッシング症候群の病態生理は広く研究されているものの、コルチゾールの自律的な産生の原因となる分子病態は不明であった。本症候群で呈する症状の多くは、一般の集団においても高頻度に見られるため、時に診断が難しく、長期間にわたって適切な治療がなされないケースがあることが問題とされている。また、クッシング症候群の他にも副腎腫瘍が原因となり高血圧を呈する疾患（原発性アルドステロン症・褐色細胞腫）が存在し、これらを正確に鑑別する必要がある。これらのことから、ACTH非依存性クッシング症候群において特徴的に認められる分子病態を解明することが、臨床的な側面からも非常に重要であると考えられる。
【０００４】
PRKAR1A遺伝子はPKAの「調節サブユニット」をコードする遺伝子であり、PRKACA遺伝子は、PKAの「触媒サブユニット」をコードする遺伝子である。PKAは、通常時はPRKACAに調節サブユニットであるPRKAR1Aが結合し不活性の状態となっている。ACTHの刺激により細胞内のcAMPの濃度が上昇すると、PKAの触媒サブユニットが調節サブユニットから解離して酵素活性を発揮し、コルチゾールの産生を促すことが知られている。
【０００５】
両側副腎過形成とクッシング症候群を呈する疾患として、カーニー複合と呼ばれる稀な遺伝性疾患がある。この疾患では、PKAの調節サブユニットをコードするPRKAR1A遺伝子に先天性の変異があることが知られている。この変異により、調節サブユニットのタンパク発現量が減少するため、PKAの活性が高レベルとなることが明らかとされている（非特許文献１）。カーニー複合は非常に稀な疾患であるため、ACTH非依存性クッシング症候群のうちPRKAR1A遺伝子の変異によって説明される症例はごく一部にすぎない。クッシング症候群の原因となる分子病態を解明し、より効果的な検査方法や治療方法の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Nature Genetics, Vol.26, September 2000, p.89-92
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、クッシング症候群の原因となる分子病態を解明し、効果的な検査方法を提供することを課題とする。またクッシング症候群の検査のためのバイオマーカーを提供し、さらに当該バイオマーカーに着目したクッシング症候群の治療剤並びに治療剤のスクリーニング方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、クッシング症候群において、PKAの触媒サブユニットをコードする遺伝子であるPRKACA遺伝子に変異を有する場合があることを見出し、本発明を完成した。これまでに、他の疾患においてもPRKACA遺伝子の変異の報告はなされていない。他の内分泌疾患において、背景技術の欄で言及したPRKAR1A遺伝子のほか、GNAS遺伝子やPDE8B遺伝子、PDE11A遺伝子など、PKAの活性に影響を与える遺伝子の変異は知られているが、PKAの触媒サブユニット自体の変異は知られていない。
【０００９】
即ち本発明は、以下よりなる。
１．サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの触媒サブユニットであるPRKACAの変異型を検出することを特徴とする、クッシング症候群の検査方法。
２．変異型PRKACAが、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの調節サブユニットであるPRKAR1Aとの相互作用を阻害する変異型PRKACAである、前項１に記載のクッシング症候群の検査方法。
３．変異型PRKACAが、配列番号１に示すアミノ酸配列のうち第206番目のアミノ酸がロイシン（L）からアルギニン（R）に変異したL206R変異型PRKACAである、前項１に記載のクッシング症候群の検査方法。
４．採取した検体から、PRKACAの変異型をコードする遺伝子を検出することを特徴とする、前項１〜３のいずれか１に記載のクッシング症候群の検査方法。
５．採取した検体から、PRKACAの変異型を検出することを特徴とする、前項１〜３のいずれか１に記載のクッシング症候群の検査方法。
６．L206R変異型PRKACAからなる、クッシング症候群検査用バイオマーカー。
７．変異型PRKACAを阻害しうる物質を有効成分として含む、クッシング症候群治療剤。
８．変異型PRKACAが、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの調節サブユニットであるPRKAR1Aとの相互作用を阻害する変異型PRKACAである、前項７に記載のクッシング症候群治療剤。
９．変異型PRKACAが、L206R変異型PRKACAである、前項７に記載のクッシング症候群治療剤。
１０．PRKACAの作用を制御しうる物質をスクリーニングすることを特徴とする、クッシング症候群治療剤のスクリーニング方法。
１１．PRKACAの作用を制御しうる物質のスクリーニングが、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼの触媒サブユニットであるPRKACAと調節サブユニットであるPRKAR1Aとの相互作用を調節しうる物質であることを特徴とする、前項１０に記載のクッシング症候群治療剤のスクリーニング方法。
【００１０】
さらに本発明は、以下も含まれる。
１２．変異型PRKACAを標的とすることを特徴とする、クッシング症候群の治療方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の検査方法により、クッシング症候群の検査を効果的に行うことができる。特に従来診断が困難であった、ACTH非依存性クッシング症候群の検査を有効に行うことができる。さらには変異型PRKACAを、クッシング症候群検査のためのバイオマーカーとすることができる。そして、変異型PRKACAを標的とする、クッシング症候群治療薬の開発に貢献しうる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】クッシング症候群におけるPRKACAの変異の部位を示す図である。並行して行ったGNAS遺伝子の変異の部位も示す図である。（実施例１）
【図２】PKAの立体構造を示す図であり、触媒サブユニット（Cサブユニット：PRKACA）及び調節サブユニット（Rサブユニット：PRKAR1A）が結合している立体構造を示す図である。（実施例１）
【図３】変異型PRKACA保有患者について、1 mgデキサメサゾン抑制試験におけるコルチゾール値を測定し、野生型PRKACA患者と比較した結果を示す図である。（実施例２）
【図４】変異型PRKACAのPRKAR1Aとの相互作用に対する機能解析を示す図である。(A) HEK293T細胞に野生型又は変異型PRKACA（いずれもHA配列を付加）を発現させ、そこから抽出したタンパク溶液を用いた解析を示す。(B) 精製した野生型／変異型PRKACAタンパク（HA配列を付加）ならびにPRKAR1Aタンパク（FLAG配列を付加）を用いた解析を示す。いずれにおいても、変異型PRKACAはPRKAR1Aとは結合しない。（実施例３）
【図５】変異型PRKACAのPKA活性に及ぼす影響を確認した結果を示す図である。変異型PRKACAはPRKAR1Aとは結合しないため、PRKAR1AによるPKA制御作用が発揮されず、PKAの高い活性が認められる。（実施例４）
【発明を実施するための形態】
【００１３】
副腎からのコルチゾール分泌が慢性的に分泌過剰になり、特徴的な症候を呈する状態をクッシング症候群という。この場合ACTH分泌が過剰となり二次的にコルチゾール分泌が増加する場合をACTH依存性クッシング症候群といい、副腎から自律的にコルチゾールが過剰産生される場合をACTH非依存性クッシング症候群又は副腎性クッシング症候群という。本明細書における「クッシング症候群」は、ACTH非依存性クッシング症候群、ACTH依存性クッシング症候群のいずれであっても良いが、特に好ましくはACTH非依存性クッシング症候群をいう。
【００１４】
本発明のクッシング症候群の検査方法は、cAMP依存性プロテインキナーゼ（PKA）の触媒サブユニットであるPRKACAの変異型を検出することを特徴とする。本発明者らは、クッシング症候群のうち副腎腺腫を伴う症例を対象として、全エクソンシークエンスによる網羅的な遺伝子変異解析を行い、PRKACA遺伝子の変異がクッシング症候群と密接に関連していることを見出した。そして、PRKACAの変異により触媒サブユニット（PRKACA）と調節サブユニット（PRKAR1A）が結合しなくなり、cAMPの濃度に依存せず、触媒サブユニットによるPKA酵素活性が高いレベルを維持していることが考えられ、コルチゾールの産生を促すことでクッシング症候群に至っているものと考えられた。
【００１５】
本発明のクッシング症候群の検査方法において「PRKACAの変異型を検出する」とは、PRKACAの変異によってPKA酵素活性が高いレベルを維持しているような型のPRKACAを検出することをいう。例えば、PRKACAの変異によって触媒サブユニット（PRKACA）と調節サブユニット（PRKAR1A）が結合しない立体構造であって、触媒作用を有する変異型PRKACAが挙げられる。変異型PRKACAがPRKAR1Aと結合しないことで、触媒サブユニットであるPRKACAはPRKAR1Aと恒常的に解離しており、PKA酵素活性を発揮される状態となる。その結果コルチゾールの産生を促すと考えられる。そのような性質を有する変異型であればPRKACAのいずれの部位が変異していてもよく、特に限定されないが、例えばGenBank Accession No.NP_002721（cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit alpha isoform 1 [Homo sapiens]）（配列番号１）に示すアミノ酸配列で特定されるPRKACAに関し、第206番目のアミノ酸がロイシン（L）からアルギニン（R）に変異したもの（以下、「L206R変異型PRKACA」という。）が挙げられる。
【００１６】
PRKACAの変異型を検出する方法は、「変異型PRKACA」の発現や「変異型PRKACA」そのものを検出しうる方法であればよく、特に限定されない。例えば遺伝子レベルの検出であってもよいし、タンパク質レベルの検出であってもよい。
【００１７】
遺伝子レベルでの変異型PRKACAの検出は、自体公知の方法を応用して実施することができる。例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（以下、「PCR」と略称する）により、所望の位置の塩基を含むPRKACA遺伝子の部分配列を増幅し、得られた増幅産物の塩基配列をシークエンス法、例えばダイレクトシークエンシング法により配列決定する方法を用いることができる。配列決定法としてはシークエンス法以外に、ハイブリダイゼーション法及び制限酵素断片長多型（RFLP）解析法等が利用できる。
【００１８】
例えば、L206R変異型PRKACA遺伝子を検出するために、以下の配列番号２〜４に示すプライマーを使用して、PCRにより被検試料中のDNAについてL206R変異に関連する部分配列を増幅し、検出することができる。プライマーは以下に限定されず、適宜必要な配列を構築することができる。
PRKACA_L206（Forward primer）：GGGAGGCTCCTACTTTGCTC  （配列番号２）
PRKACA_L206（Reverse primer）：CAGCAGGGCTACATTCAGGT  （配列番号３）
PRKACA_L206_FFPE（Forward primer）：GGGAGGCTCCTACTTTGCTC（配列番号２）
PRKACA_L206_FFPE（Reverse primer）：GGTGACAGACTTCGGTTTCG（配列番号４）
【００１９】
タンパク質レベルで変異型PRKACAを検出する方法についても特に限定されず、自体公知の方法を応用して実施することができる。PRKACAタンパク質内の変異は、変異の位置、例えばPRKACAタンパク質の第206番目のアミノ酸についてロイシン（L）からアルギニン（R）等のアミノ酸を確認することで検出することができる。例えば、変異の部位を検出可能な抗体を用いた免疫学的手法により検出することもできる。タンパク質活性の機能的検出に基づく方法によることもできる。また、タンパク質の変異に基づく立体構造の違いを解析することによっても検出することができる。
【００２０】
タンパク質活性の機能的検出方法としては、被検試料中のPRKACAについて、PRKAR1Aとともに作用させてPKAの活性を確認することで実施することができる。
【００２１】
本発明は、本発明の検査方法を実施するための検査用試薬や検査用キットも含まれる。検査用試薬としては、例えば配列番号２〜４で示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを検査用プライマー試薬とすることができる。また、検査用キットとしては、配列番号２〜４で示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドによるプライマーセットや必要な緩衝液等を含む検査用キットが挙げられる。
【００２２】
遺伝子レベルで検出するための被検試料は、ヒト由来の血液、髄液、気管支肺胞洗浄液、痰、又は他の体液、あるいは組織などの検体から調製した核酸試料を用いることができる。核酸試料の調製は、自体公知の調製法により実施できる。本発明に係る遺伝子変異の検出には、核酸試料として、ゲノムDNA、cDNA又はRNAのいずれも使用可能である。タンパク質レベルで検出するための被検試料も、ヒト由来の血液、髄液、気管支肺胞洗浄液、痰、又は他の体液、あるいは組織などの検体から調製した試料を使用することができ、試料の調製は自体公知の方法により実施できる。
【００２３】
本発明は、クッシング症候群検査用バイオマーカーも包含される。クッシング症候群検査用バイオマーカーとしては、変異型PRKACAが挙げられ、特にL206R変異型PRKACAが挙げられる。バイオマーカーとしては、変異の部分を含むのであれば、PRKACAをコードする遺伝子の部分オリゴヌクレオチドやPRKACAタンパク質の部分ポリペプチドであってもよい。これら遺伝子、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド等を検出することによって、クッシング症候群の検査を実施することができる。クッシング症候群の診断のためには、遺伝子レベルでの検査方法やタンパク質レベルでの検査方法を組み合わせて行ってもよい。
【００２４】
本発明は、「クッシング症候群治療剤」も包含される。具体的には本発明における変異型PRKACAの分子標的薬をクッシング症候群治療剤として使用することができる。本発明は、変異型PRKACAを分子標的とする治療方法にも及ぶ。
【００２５】
本発明は、「クッシング症候群治療剤のスクリーニング方法」、具体的には変異型PRKACAを標的とするクッシング症候群治療剤のスクリーニング方法が包含される。例えば、「正常PRKACA」と「変異型PRKACA」が生体に混在する場合に、変異型PRKACAのみを検出し、阻害しうる候補化合物をスクリーニングする方法により、クッシング症候群治療剤となり得る物質を選別することができる。候補化合物は、低分子化合物、核酸物質、タンパク質等いずれの物質であってもよい。
【実施例】
【００２６】
本発明について理解を深めるために、以下に本発明を実施例に示してより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではないことはいうまでもない。
【００２７】
（実施例１）遺伝子変異解析１
本実施例では、クッシング症候群のうち副腎腺腫を伴う症例を対象として、全エクソンシークエンスによる網羅的な遺伝子変異解析を行なった。ACTH非依存性クッシング症候群と診断され、インフォームドコンセントが得られた65名の患者について、東京大学の倫理委員会によって承認されたプロトコルに従って、本発明のための全エクソンシークエンスによる網羅的な遺伝子変異解析を行った。ゲノムDNAは、副腎皮質腫瘍及び正常な副腎皮質、末梢血の検体から抽出して得た。その結果、PRKACA遺伝子の変異がクッシング症候群と密接に関連していることを見出した。
【００２８】
まず、8名の患者の腫瘍DNAならびに正常DNAについて、全エキソンシークエンス解析を行った。ゲノム領域のうち、タンパク質をコードする全エクソン領域（Exome）を、ヒト全エクソンキャプチャキットであるSureSelect Human All Exon V4 （アジレント・テクノロジー株式会社）を用いて濃縮し、HiSeq2000（Illumina 社）を用いて塩基配列を決定した。腫瘍DNAの配列と正常DNAの配列を比較することにより、体細胞変異を確認した。これらのシークエンスデータは、The European Genome-phenome Archive (EGA)において、Accession No. EGAS00001000661で寄託されている。8名のうち4名でcAMP依存性プロテインキナーゼ（PKA）のCサブユニットをコードする遺伝子に体細胞性変異を認めた。遺伝子の変異は617番目の塩基であるチミン（T）のグアニン（G）への置換が認められた。当該変異は、配列番号１に示すアミノ酸配列のうち第206番目のアミノ酸がロイシン（L）からアルギニン（R）への置換（L206R変異型PRKACA）に該当する。また、他の内分泌疾患にて変異の知られているGNAS遺伝子の変異を1例に認めた。
【００２９】
上記結果に基づき、追加した57例について同様にPRKACA遺伝子の変異をサンガ―シークエンス法にて確認したところ、L206R変異型PRKACAは、57例中30例で確認された。同じ57名について、GNAS遺伝子の変異も確認したところ、10名にR201C（6名）及びR201H（4名）の変異を認めた。PRKACA遺伝子の変異をもつ症例とGNAS遺伝子の変異を持つ症例は重複していなかった（図１Ａ）。合計65名中34名（52.3％）にPRKACAの変異を認め、11名（16.9％）にGNASの変異を認めた（図１、２）。以下、PRKACAの変異について、検討した結果を示す。以下「変異型PRKACA」は「L206R変異型PRKACA」を意味する。
【００３０】
（実施例２）変異型PRKACAと臨床的特徴（コルチゾール）
本実施例では、変異型PRKACAについて臨床的意義を確認した。L206R変異型PRKACA保有患者について、1 mgデキサメタゾン抑制試験（DST）によるコルチゾール値を測定し、臨床的特徴を確認した。野生型PRKACA保有患者と比べて、変異型PRKACA保有患者はコルチゾール値が有意に高かった（図３）。
なお、デキサメサゾン抑制試験とは、クッシング症候群が疑われる場合に行われる検査方法として公知であり、糖質コルチコイドのアゴニストであるデキサメサゾンを投与して副腎皮質刺激ホルモンの分泌を抑制したのちに血中糖質コルチコイドを測定する方法である。
【００３１】
（実施例３）変異型PRKACAの機能解析１
PRKACAに調節サブユニットPRKAR1Aが結合することによりPKAは不活性の状態となる。PRKAR1AはPKAの調節サブユニットであり、PRKACAはPKAの触媒サブユニットである。本実施例では、L206R変異型PRKACAの、PRKAR1Aとの相互作用に対する機能解析を行った。
【００３２】
HEK293T細胞に野生型又は変異型のPRKACA（触媒サブユニット）の遺伝子（いずれもHA配列を付加）を各々導入し発現させ、培養細胞からタンパクを回収した。抗HA抗体を用いて、外因性に発現させた、PRKACAタンパク質（触媒サブユニット）に対して免疫沈降操作を行った後、抗PRKAR1A（調節サブユニット）抗体を用いてウェスタンブロットにより解析した。
【００３３】
野生型の触媒サブユニットを発現させた細胞では調節サブユニットも共に沈降したのに対し、変異型の触媒サブユニットを発現させた細胞では、調節サブユニットの共沈降は見られなかった（図４Ａ）。これにより、変異型PRKACAでは調節サブユニットPRKAR1Aと結合しないことが確認された。精製タンパクを用いた解析においても、変異型PRKACAは調節サブユニットPRKAR1Aと結合しないことが確認された（図４Ｂ）。
【００３４】
（実施例４）変異型PRKACAの機能解析２
本実施例では、変異型触媒サブユニットのPKA活性に及ぼす影響を確認した。触媒サブユニットと調節サブユニットが結合しないことにより、cAMP非存在下においても触媒サブユニットが遊離し酵素活性を示すことが予想された。野生型PRKACA又は変異型PRKACAを発現させたHEK293T細胞の溶解液におけるPKA活性を測定した。PKA活性は、基礎値又はフォルスコリン刺激下における値を測定した。フォルスコリンはアデニル酸シクラーゼを活性化することにより、細胞内のcAMP濃度を上昇させる作用を有する。PKA活性は、PKAキナーゼ活性キット（ENZO）を用いてELISA法にて測定した。
【００３５】
野生型PRKACAを発現させた細胞においては、PKA活性の基礎値は低値であったが、フォルスコリンの刺激により活性上昇を認めた。一方、変異型PRKACAの場合はフォルスコリンの刺激がない場合でも、高いPKA活性を示した（図５）。
【００３６】
以上の各実施例の結果より、クッシング症候群において変異型PRKACAが高頻度に認められることが確認された。これにより、変異型PRKACAを検出することで、クッシング症候群の診断を行うことができると考えられた。さらに、変異型PRKACAがPKA調節サブユニットであるPRKAR1Aとは結合しないことが確認されたこと、それに伴い細胞質においてPKA活性がcAMP濃度に関わらず恒常的に高くなり、その結果としてクッシング症候群を示すと考えられた。これにより、変異型PRKACAを標的とすることで、クッシング症候群の治療方法に応用できると考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
以上詳述したように、本発明の変異型PRKACAを検出することによりクッシング症候群の検査を行うことができ、さらには変異型PRKACAを、クッシング症候群検査のためのバイオマーカーとすることができる。そして、変異型PRKACAを標的とする、クッシング症候群治療薬の開発に貢献しうる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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