(57)【要約】【課題】脂肪細胞の脂肪蓄積及びＧＰＤＨの活性を抑制する効果が良好で、且つ、細胞毒性の少ないＧＰＤＨ活性抑制剤を提供することにある。【解決手段】式（Ｉ）で示す化合物、及びその誘導体からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、ＧＰＤＨ活性抑制剤。［化１］2015189691.tif 000013  （前記式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して水素原子又は水酸基であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、それぞれ独立して水素原子又はメチル基であり、Ｒ5は、水素原子、−ＣＯＯＨ、又は−ＣＨ2ＯＨである。）【選択図】図１
2015189691.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示す化合物、及びその誘導体からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、ＧＰＤＨ活性抑制剤。
【化１】
2015189691.tif 000011
（前記式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して水素原子又は水酸基であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、それぞれ独立して水素原子又はメチル基であり、Ｒ5は、水素原子、−ＣＯＯＨ、又は−ＣＨ2ＯＨである。）
【請求項２】
前記式（Ｉ）で示す化合物のうち、下記の式（ＩＩ）で示すポモル酸と、１９−エピポモル酸と、それらの誘導体とからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、請求項１に記載のＧＰＤＨ活性抑制剤。
【化２】
2015189691.tif 000012
【請求項３】
前記式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で示す化合物は、カキ、リンゴ及びナシを含む果実から抽
出されたものである、請求項１又は２に記載のＧＰＤＨ活性抑制剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のＧＰＤＨ活性抑制剤を含む、食品添加物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のＧＰＤＨ活性抑制剤を配合した、食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウルサン系環状トリテルペン類のグリセロール３−リン酸脱水素酵素（以下、「ＧＰＤＨ」という。）活性抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代人の脂質や糖質の過剰摂取及び運動不足等の原因で、肥満は世界中で健康を脅かす大きな課題となっている。肥満関連疾患の発症、死亡率が年々上昇している中、種々の側面で肥満対策が取り組まれている。
【０００３】
薬理学的な観点から、肥満の成因に関する種々の研究が行われてきた。脂肪前駆細胞から脂肪細胞への分化過程において、前駆細胞の状態ではほとんど活性が検出されず、脂肪細胞に分化することにより活性が増加する複数の酵素が発見された。これらの酵素は、脂肪細胞の分化に関与する重要な因子であると認識され、特にＧＰＤＨは、１０００倍も酵素活性が上昇するので、脂肪細胞に分化されたマーカー酵素として利用されている。
【０００４】
また、ＧＰＤＨ活性を抑制することにより脂肪細胞への分化を抑制可能であることから、このようなＧＰＤＨ活性抑制剤により肥満の治療や予防することが考えられる。引用文献１及び引用文献２には、下記の式（ＩＩＩ）で示すオレアノール酸及び式（ＩＶ）で示すウルソール酸を含むトリテルペン類化合物がグリセロリン酸脱水素酵素の活性抑制剤や抗肥満剤の有効成分として使用することが開示されている。
【０００５】
【化１】
2015189691.tif 000003
【０００６】
【化２】
2015189691.tif 000004
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平９−６７２４９号公報
【特許文献２】国際公開第２００３／０１１２６７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、これら化合物のいずれも、ＧＰＤＨ活性を抑制するために比較的高い濃度が要求されている。
【０００９】
したがって、本発明の課題は、脂肪細胞の脂肪蓄積及びＧＰＤＨの活性を抑制する効果が良好で、且つ、細胞毒性の少ないＧＰＤＨ活性抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、脂肪細胞の脂肪蓄積及びＧＰＤＨの活性を抑制することを目的として、さらに、細胞毒性を極力抑えるべく、種々のトリテルペン類化合物を検討してきた。その結果、ポモル酸がＧＰＤＨ活性抑制効果を有することを見出した。ポモル酸の構造は、下記の式（ＩＩ）で示す。
【００１１】
【化３】
2015189691.tif 000005
【００１２】
さらに、ポモル酸と類似した構造を有する物質について更に探索した結果、特定のトリテルペン類がＧＰＤＨ活性抑制効果を奏することを見出し、本発明に想到した。
【００１３】
すなわち、本発明は、次の通りの構成をとるものである。
【００１４】
［１］式（Ｉ）で示す化合物、及びその誘導体からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、ＧＰＤＨ活性抑制剤。
【００１５】
【化４】
2015189691.tif 000006
（前記式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して水素原子又は水酸基であり、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、それぞれ独立して水素原子又はメチル基であり、Ｒ5は、水素原子、−ＣＯＯＨ、又は−ＣＨ2ＯＨである。）
【００１６】
［２］前記式（Ｉ）で示す化合物のうち、下記の式（ＩＩ）で示すポモル酸と、１９−エピポモル酸と、それらの誘導体とからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、前記［１］のＧＰＤＨ活性抑制剤。
【００１７】
【化５】
2015189691.tif 000007
【００１８】
［３］前記式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で示す化合物は、カキ、リンゴ及びナシを含む果実
から抽出されたものである、前記［１］又は「２」のＧＰＤＨ活性抑制剤。
【００１９】
［４］前記［１］〜［３］のいずれか１つのＧＰＤＨ活性抑制剤を含む、食品添加物。
【００２０】
［５］前記［１］〜［３］のいずれか１つのＧＰＤＨ活性抑制剤を配合した、食品。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、ＧＰＤＨの活性を抑制することができる。これにより、脂肪細胞の蓄積の低減効果が期待できる。また、本発明に係るＧＰＤＨ活性抑制剤によれば、比較的低濃度でＧＰＤＨ活性の抑制効果が達成できるため、細胞毒性の低減効果も期待できる。
【００２２】
ここで、式（Ｉ）で示すトリテルペン類化合物は、１９位に水酸基を有することを特徴としており、当該部位がＧＰＤＨの活性発現に関与することは、高いＧＰＤＨ活性抑制効果を示す原因の１つであると推測される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明の実施例１で抽出したポモル酸のＮＭＲスペクトルデータを示す。
【図２】本発明に係るポモル酸の脂肪細胞ＧＰＤＨ活性抑制効果を示すグラフである。
【図３】本発明に係るポモル酸による脂肪細胞の脂肪蓄積抑制効果を示すグラフである。
【図４】本発明に係るポモル酸による脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）の細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図５】カキ果皮由来のトリテルペノイド類のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図６】異なる品種のカキの乾燥果皮中におけるポモル酸、オレアノール酸及びウルソール酸の含有量を測定した結果を示すグラフである。
【図７】各種の果実における、ポモル酸、ベツリン酸、オレアノール酸及びウルソール酸の含有量を測定した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、実施例を挙げて、本発明を詳細に説明する。
【００２５】
［実施例１：ポモル酸の抽出］
本発明は、下記の抽出方法により、カキの果皮からポモル酸を抽出して使用した。
【００２６】
凍結乾燥したカキ果皮をミルサーで粉砕後、約２０ｇの粉末に対してアセトンを添加して抽出した。抽出は、室温で１時間浸漬することにより行い、その後、当該抽出溶液を吸引濾過して回収した。残渣は色が出なくなるまでアセトンによる抽出を繰り返した。抽出液はロータリーエバポレーターを用いて減圧濃縮した。得た濃縮物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶出液：ベンゼン：酢酸エチル（１０：１→５：１）で展開した後、ベンゼン：酢酸エチル（１：１）に変更］を用いて、ポモル酸を含む画分を得た。
【００２７】
上述した画分をロータリーエバポレーターで濃縮乾固した後、エタノールに溶解し、分取用液体クロマトグラフィ（以下、ＬＣと略す。）を用いてポモル酸を精製した。
【００２８】
ＬＣによる精製条件は、下記に示す。
システム：  Waters 600E Multisolvent delivery system
カラム：  Aqua C18（２５０×１０ｍｍ，粒子径５μｍ、製品名phenomenex）
カラム温度：  ３７℃
溶離液：  移動相Ａ液が水であり、移動相Ｂ液がアセトニトリルである。
グラジエント条件：  ０分（Ｂ：８０％）→１２．５分（１００％）→３０分（１００％）→３２．５分（８０％）
流量：  ４．４４ｍＬ／分
検出：  ＵＶ波長２００ｎｍ
【００２９】
上述した条件で精製し、目的のポモル酸（白色固体、約１２ｍｇ）を得た。
【００３０】
当該濃縮物であるポモル酸の1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（メタノール−ｄ4、８００ＭＨｚ）データは、図１に示す。ピーク付近の数字は、対応する番号の炭素に結合している水素によるピークを表す。
【００３１】
［実施例２：ポモル酸によるＧＰＤＨ活性抑制効果の測定］
上記の方法で得られたポモル酸に対して、そのＧＰＤＨ活性及び脂肪蓄積の抑制効果について測定した。当該測定では、細胞分子レベルで行われており、脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）を使用した。脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）は、休止期に入ると脂肪細胞へと分化する性質を持っているが、インスリン、デキサメタゾン（ＤＥＸ）、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）などの薬剤で刺激することにより効率よく分化することが知られている。
【００３２】
（脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）培養方法）
脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）は、下記の手順で培養した。
【００３３】
１．３Ｔ３−Ｌ１細胞の播種
（１）液体窒素から凍結アンプル（細胞数０．５×１０6〜１．０×１０6）を取り出し、３７℃の湯浴で、細胞が約半分程度融解するまで攪拌した。
【００３４】
（２）１５ｍＬの遠沈管に３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地（１０％新生仔牛血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、品番１６０１０１６７）を含むＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、品番１０５９０１０）を５ｍＬ入れ、アンプル中の約半分程度融解した細胞を全量移し、軽く攪拌した後１０００ｒｐｍで２分間遠心した。
【００３５】
（３）上清を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を１５ｍＬ添加し、７５ｃｍ2の培養フラスコに細胞を播種した。
【００３６】
（４）インキュベーター内（３７℃、５％ＣＯ2）で培養した。
【００３７】
２．３Ｔ３−Ｌ１細胞の継代
（１）７２時間後に古い培養液を取り除き、５ｍＬ程度のリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略し）を静かに加え、細胞層を洗浄した。
【００３８】
（２）ＰＢＳを取り除き、０．２５％トリプシン含有１ｍＭ  ＥＤＴＡ溶液（和光純薬製）を２ｍＬ加え、細胞になじませた。
【００３９】
（３）位相差顕微鏡で細胞の状態を観察し、細胞が円球化しつつあれば、フラスコを軽くたたいて完全に細胞をはがし、５ｍＬ程度の３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を加えて遠沈管に移し、１０００ｒｐｍで２分間遠心した。
【００４０】
（４）上清を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を３ｍＬ添加し、細胞数を計測した。
【００４１】
（５）細胞濃度が３×１０3〜５．５×１０3／ｃｍ2となるように３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地で希釈し、７５ｃｍ2培養フラスコに播種した。
【００４２】
３．３Ｔ３−Ｌ１細胞の分化誘導
（１）７２時間後に古い培養液を取り除き、５ｍＬ程度のＰＢＳを静かに加え、細胞層を洗浄した。
【００４３】
（２）ＰＢＳを取り除き、０．２５％トリプシン含有１ｍＭ  ＥＤＴＡ溶液（和光純薬製）を２ｍＬ加え、細胞になじませた。
【００４４】
（３）位相差顕微鏡で細胞の状態を観察し、細胞が円球化しつつあれば、フラスコを軽くたたいて完全に細胞をはがし、５ｍＬ程度の３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を加えて遠沈管に移し、１０００ｒｐｍで２分間遠心した。
【００４５】
（４）上清を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を３ｍＬ添加し、細胞数を計測した。
【００４６】
（５）３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を用い、細胞濃度を８．０×１０4ｃｅｌｌｓ／３ｍＬに調製し、６ウェルプレートに播種した。
【００４７】
（６）インキュベーター内（３７℃、５％ＣＯ2）で４日間培養した。
【００４８】
（７）３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞分化培地（インスリン、デキサメタゾン、３−イソブチル−１−メチルキサンチンを添加）に交換し、３日間培養した。
【００４９】
（８）３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞分化培地を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地（５μｇ／ｍＬインスリン含有）に交換し、６日間培養した。上述した培地にはポモル酸、ウルソール酸、オレアノール酸のそれぞれを１μｇ／ｍＬ〜５μｇ／ｍＬの範囲（具体的には、１μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ）で添加した。さらに、対照群として、未処理の培地、及び０．１％ＤＭＳＯを添加した培地を用意した。
【００５０】
［ＧＰＤＨ活性測定］
培養した細胞を回収し、酵素を抽出した。下記の方法により、ＧＰＤＨ活性測定キット（プライマリーセル製）を用いてそれぞれの試験区のＧＰＤＨ活性を測定した。
【００５１】
（測定原理）
下記の式で示す反応において、ＧＰＤＨが酵素として働き、還元型のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）を酸化型のＮＡＤに変換する。そのため、還元型のＮＡＤＨの減少を波長３４０ｎｍの吸光度変化で測定することにより、ＧＰＤＨの活性を測定することができる。
【００５２】
【化６】
2015189691.tif 000008
【００５３】
（ＧＰＤＨ活性測定操作の手順）
【００５４】
１．反応基質溶液の調製
反応基質のバイアル１本に対して精製水４．２ｍＬを加えて溶解し、その溶液を反応基質溶液とした。反応基質溶液は使用するまで氷上で保管しておいた。
【００５５】
２．酵素抽出溶液の調製
酵素抽出試薬の袋の内容物を精製水２００ｍＬで溶解し、その溶液を酵素抽出液とする。反応基質溶液は使用するまで氷上で保管しておいた。
【００５６】
３．検体の調製
（１）６ウェルプレートで培養した細胞を、上記の方法で用意した。
【００５７】
（２）培養液を除去した後、１ウェルあたり１ｍＬのＰＢＳで２回洗浄した。
【００５８】
（３）ＰＢＳを除去した後、酵素抽出溶液を１ウェルあたり１．０ｍＬ加え、ピペティングして細胞を剥がし１．５ｍＬチューブに回収した。
【００５９】
（４）チューブを氷上等で冷却しながら超音波破砕機を用いて細胞を破砕した。
【００６０】
（５）超音波処理した溶液を、冷却遠心（４℃、１２８００×ｇ、５分間）で分離した上清を検体とした。調製した検体を調製当日中に酵素活性を測定した。
【００６１】
４．測定方法
（１）９６ウェルプレートに検体２０μＬずつ入れ室温に戻した。
【００６２】
（２）各検体に反応基質溶液を８０μＬずつ加えて、数回ピペッティングした後波長３４０ｎｍにおける吸光度の減少を経時測定し、１分間当りの吸光度の変化量（ΔＯ．Ｄ．
）を求めた。測定は、７分間行った。
【００６３】
５．活性値の計算
検体１ｍＬ当りのＧＰＤＨが１分間に１μｍｏｌｅのＮＡＤＨを消費する活性を１Ｕとし、下記の式に基づいて、ＧＰＤＨ活性を求めた。
【００６４】
【数１】
2015189691.tif 000009
【００６５】
６．ポモル酸等の脂肪細胞ＧＰＤＨ活性抑制効果の測定結果
図２は、トリテルペン類の脂肪細胞ＧＰＤＨ活性抑制効果を示す。横軸は、測定対象を表し、左から右の順で、未処理、ＤＭＳＯによる処理、１μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬのポモル酸による処理、１μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬのウルソール酸による処理、並びに５μｇ／ｍＬのオレアノール酸による処理の細胞を示す。縦軸は、上記の数式に基づいて算出したＧＰＤＨ活性値を示す。
【００６６】
図２に示すように、当該測定では、未処理の、及びＤＭＳＯによる処理の脂肪細胞のＧＰＤＨ活性を基準とした。ポモル酸を使用した場合、細胞内濃度が１μｇ／ｍＬである時、抑制活性がほとんど示さなかったことに対して、２．５μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬのいずれも、顕著なＧＰＤＨ活性の抑制効果を示した。また、ポモル酸の濃度の増加につれて、当該抑制活性効果が向上する傾向にあった。一方、ウルソール酸、及びオレアノール酸のそれぞれを同様な濃度で使用した場合、ＧＰＤＨ活性の抑制効果を示さなかったことが確認された。
【００６７】
従って、本発明に係るポモル酸は、比較的低濃度においても顕著なＧＰＤＨ活性の抑制効果を示すことが分かった。
【００６８】
［実施例３：ポモル酸による脂肪細胞の脂肪蓄積抑制効果の測定］
（オイルレッドＯ染色法）
【００６９】
さらに、オイルレッドＯ染色法により、ポモル酸による脂肪細胞の脂肪蓄積抑制効果を測定した。本実施例では、２．５μｇ／ｍＬのポモル酸を測定対象とした。
【００７０】
（原理）
アゾ色素（ズダンＩＩＩ等）は、無極性かつ脂溶性であるため、組織に触れると組織内脂質に溶け込み、結果として脂肪染色ができる。さらに、染色された脂肪球を抽出液で抽出し、色素量を定量することによって脂肪量を推測することができる。
【００７１】
（手順）
（１）脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ1）を脂肪細胞に分化誘導後、２．５μｇ／ｍＬのポモル酸を添加した培地で３日間培養した。
【００７２】
（２）培養した細胞を１０％のホルマリンで固定し、ＰＢＳで洗浄後、乾燥してオイルレッドＯ染色液（０．５％のオイルレッド６０％の２−プロパノール溶液）で２０分間染色した。６０％の２−プロパノール、ＰＢＳの順で洗浄した後、乾燥した。
【００７３】
（３）１００％の２−プロパノールを加えてオイルレッドＯを抽出し、５１０ｎｍの吸光度を測定して比較した。
【００７４】
図３は、測定した結果を示す。横軸は測定対象であり、縦軸は、５１０ｎｍの吸光度である。吸光度が低くなると、染色された色素の量が少ないことを意味するし、すなわち、脂肪量が少ないことを示す。
【００７５】
従って、図３に示す測定結果により、ポモル酸未添加の場合と比較して、２．５μｇ／ｍＬのポモル酸を添加した場合がより小さい吸光度を示し、つまり、脂肪量が少ないことがわかった。よって、ポモル酸は、脂肪細胞の脂肪蓄積抑制効果を有することが確認された。
【００７６】
［実施例４：ポモル酸による脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）の細胞毒性試験］
さらに、ポモル酸の添加濃度による生細胞への細胞毒性の有無を測定した。当該測定は、ＭＴＴ細胞増殖キット（Ｒｏｃｈｅ  品番１１  ４６５  ００７）により脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）の生細胞数の変化を観測した。
【００７７】
（ＭＴＴ試験の原理）
ＭＴＴ（３−（４，５−ジ−メチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、ミトコンドリアにある脱水素酵素により還元され、ホルマザン色素が生じる。色素量は代謝活性のある細胞数と相関するため、色素を可溶化して比色法（吸光度５５０〜６００ｎｍ）で定量することにより、生細胞数を測定する。
【００７８】
以下、本発明に係るポモル酸による生細胞への細胞毒性を測定するＭＴＴ試験の手順を説明する。
【００７９】
（１）脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）をマルチウェルプレートに２０００ｃｅｌｌ／１００μＬずつ播種した。
【００８０】
（２）インキュベーター内（３７℃、５％ＣＯ2）で４日間培養した。
【００８１】
（３）３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞分化培地（インスリン、デキサメタゾン、３−イソブチル−１−メチルキサンチンを添加）に交換し、３日間培養した。
【００８２】
（４）３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞分化培地を取り除き、３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地（５μｇ／ｍＬインスリン含有）あるいは３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞培養用培地（インスリン不含有）に交換し培養した。上述した培地にはポモル酸を０μｇ／ｍＬ（ＤＭＳＯのみ）、１μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬで添加した。
【００８３】
（５）２４時間後、４８時間後、７２時間後に各ウェルに１０μＬずつＭＴＴ標識試薬を添加し、ＣＯ2インキュベーターで４時間培養した。
【００８４】
（６）その後、可溶化溶液を１００μＬずつ加えて３７℃で一晩加温してホルマザンを溶解させた。
【００８５】
（７）５５０ｎｍの吸光度を測定した。
【００８６】
評価の結果は図４に示す。ポモル酸が１μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬの場合、細胞毒性を示さないことに対して、５μｇ／ｍＬ以上の場合、生細胞の経時的減少が見られ、細胞毒性を有することが確認された。
【００８７】
すなわち、ポモル酸を２．５μｇ／ｍＬ含有する場合、顕著なＧＰＤＨ活性抑制効果を有すると共に、細胞毒性を示さないことがわかった。
【００８８】
本発明に係る式（ＩＩ）で示すポモル酸は、上述したようにカキから抽出されるものを使用してもよく、また、抽出されたポモル酸の量は、下記に示すＨＰＬＣにより定量化可能である。
【００８９】
［実施例５：ポモル酸等の定量］
果実の果皮から抽出されるポモル酸、オレアノール酸、及びウルソール酸を含むトリテルペノイド類は、下記のＨＰＬＣにより定量化可能である。
【００９０】
カキの果実果皮を凍結乾燥し、ミルサーで粉砕した。０．２５ｇの粉末を取り、色が出なくなるまでアセトンによる抽出を繰り返した。抽出液はロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、さらに、エタノールで一定量（２ｍＬ）に希釈した。
【００９１】
本発明で使用したポモル酸を含むトリテルペノイド類の分析には、ＨＰＬＣ（島津製作所製）を用いた。当該ＨＰＬＣによる分析条件は、下記に示す。
【００９２】
カラム：  Ｃ３０カロテノイドカラム（２５０×４．６ｍｍ、粒子径５μｍ、ＹＭＣ製  ）、
カラム温度：  ３７℃、
移動相：  ０．１％酢酸含有８０％アセトニトリル、
流速：  ０．６ｍＬ／ｍｉｎ、
検出：  ＵＶ波長２００ｎｍ。
【００９３】
図５は、「平核無」カキの果皮由来のトリテルペノイド類（ポモル酸、オレアノール酸、ウルソール酸）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。外部標準法により、検量線を用いて目的のトリテルペノイド類の含有量を算出した。
【００９４】
その結果、「平核無」カキの乾燥果皮１ｇあたりには、１．６４ｍｇのポモル酸（保持時間：１０．５分）、１．７３ｍｇのオレアノール酸（保持時間：２０分）、及び５．２３ｍｇのウルソール酸（保持時間：２２．５分）を含有することが確認された。
【００９５】
また、上述した定量法により、異なる品種のカキにおいて、その乾燥果皮中に含まれるポモル酸、オレアノール酸及びウルソール酸の量を測定した。その測定結果は、図６に示す。
［その他の実施例］
【００９６】
図７に示すように、抽出対象をカキの他に、リンゴ、ブドウ、ナシ、モモに拡大したところ、リンゴとナシとからも、本発明の式（ＩＩ）で示すポモル酸を抽出可能であることが明らかであった。
【００９７】
また、本発明に係るポモル酸は、上述した手法により抽出したものに限定することなく、合成化学や発酵、酵素反応等のバイオテクノロジーの手法により合成又は生成したものを含む。
【００９８】
また、本発明は、式（ＩＩ）で示すポモル酸と比較して１９位の不斉炭素原子の立体配置だけが異なる１９−エピポモル酸を含む。当該１９−エピポモル酸は、下記の式（Ｖ）で示す構造を有する。
【００９９】
【化７】
2015189691.tif 000010
【０１００】
また、本発明は、式（Ｉ）で示す化合物、式（ＩＩ）で示すポモル酸又は式（Ｖ）で示す１９−エピポモル酸の如何なる誘導体を含む。これらの誘導体は、例えば、種々の目的に応じて、上述した化合物の各官能基に対して保護基が付与されたもの、及び、上述した化合物に対して、ＧＰＤＨ活性抑制効果を妨害しないことを前提で化学的、発酵等の手法を用いる種々の変更を施したものを含む。
【０１０１】
さらに、本発明に係る式（Ｉ）で示す化合物、式（ＩＩ）で示すポモル酸又は式（Ｖ）で示す１９−エピポモル酸は、食品添加剤の成分として使用することができる。
【０１０２】
本発明に係る食品添加剤は、例えば、清涼飲料等に添加されるものである。
【０１０３】
さらに、本発明に係る式（Ｉ）で示す化合物、式（ＩＩ）で示すポモル酸又は式（Ｖ）で示す１９−エピポモル酸は、食品の成分として使用することができる。
【０１０４】
本発明に係る食品は、例えば、栄養食品類及び菓子類である。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
本発明は、医薬品及び食品等の分野に適用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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