(57)【要約】【課題】タウ親和性とアミロイド親和性とを併せ持つ、放射性ヨウ素標識化合物を提供する。【解決手段】本発明は、Ｎ，Ｎ-ジメチルベンゼンアミン部位を含む放射性ヨウ素標識化合物又はその塩である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される放射性ヨウ素標識化合物又はその塩。
【化１】
2015089879.tif 000009
〔式中、Ｘが放射性ヨウ素原子であり、Ｙが硫黄原子又は酸素原子であり、Ｚが窒素原子又は炭素原子である。〕
【請求項２】
前記一般式（１）中、Ｙが硫黄原子である、請求項１に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩。
【請求項３】
前記一般式（１）中、Ｚが窒素原子である、請求項１又は２に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩。
【請求項４】
前記放射性ヨウ素原子が、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ又は１３１Ｉである、請求項１乃至３いずれか一項に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩。
【請求項５】
請求項１乃至４いずれか一項に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩を含み、タウタンパク質の画像化に用いられる、画像化剤。
【請求項６】
請求項１乃至４いずれか一項に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩を含み、アミロイドの画像化に用いられる、画像化剤。
【請求項７】
請求項１乃至４いずれか一項に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩を含む、放射性医薬。
【請求項８】
請求項１乃至４いずれか一項に記載の放射性ヨウ素標識化合物又はその塩を含む、アルツハイマー病診断剤。
【請求項９】
下記一般式（２）で表される化合物又はその塩。
【化２】
2015089879.tif 000010
〔式中、Ｒがトリアルキルスタニル基又はトリアルキルシリル基であり、Ｙが硫黄原子又は酸素原子であり、Ｚが窒素原子又は炭素原子である。〕
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性ヨウ素標識化合物、及び、これを含む放射性医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（以下、ＡＤという）は、認知症の原因となる疾患として知られている。近年、先進各国では社会の高齢化に伴いＡＤ患者数が急激に増加しており、社会的な問題となっている。
【０００３】
ＡＤは、脳内にアミロイドβペプチド（Ａβ）が沈着することを発端として発症すると考えられており（アミロイド仮説、非特許文献１）、Ａβを標的とした治療剤の開発の試みがある（特許文献１、非特許文献２）。また、近年、Ａβを非侵襲的に画像化するための薬剤が種々開発され（例えば、非特許文献３）、脳内Ａβの蓄積量の生前評価が可能になりつつある。
【０００４】
一方、ＡＤは、タウタンパク質の異常凝集が原因となるタウオパチーと呼ばれる疾患の一種でもあると考えられている。タウオパチー患者の脳内にはタウタンパク質の凝集体が発現しており、このような病理的な変性の広がりが、神経細胞死の広がりやＡＤの重症度に関係していると考えられている。
【０００５】
そこで、近年、凝集化タウタンパク質を非侵襲的に画像化する試みもなされている（特許文献２、非特許文献４〜１０）。
【０００６】
非特許文献６では、タウリガンドの［１１Ｃ］ＰＢＢ３の脳内集積は、海馬を含む領域で増加が始まり、アルツハイマー病の発症と進行に伴って広範な領域で増加をきたすことが示されている。これに対して、Ａβリガンドの［１１Ｃ］ＰＩＢの脳内集積は、海馬領域への集積はあまり見られず、Ａβが多量に蓄積する大脳皮質で集積が認められ、病気が進行しても、集積量や分布にほとんど変化が見られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２０１１−５２２８８２号公報
【特許文献２】国際公開第２０１１／１０８２３６号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｇ．ＭｃＫｈａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９８４，３４，ｐ．９３９−９４４
【非特許文献２】Ｂｙｕｎ，Ｊｉ  Ｈｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００８），１８（２０），５５９１−５５９３。
【非特許文献３】Ｍｅｎｇｃｈａｏ  Ｃｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１１，２１，ｐ．４１９３−４１９６
【非特許文献４】Ｃｈｉｅｎ  ＤＴ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，（２０１３）  ｉｎ  ｐｒｅｓｓ．
【非特許文献５】Ｃｈｉｅｎ  ＤＴ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，３４，４５７−６８（２０１３）
【非特許文献６】Ｍａｒｕｙａｍａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，７９，１０９４−１０８（２０１３）
【非特許文献７】Ｏｋａｍｕｒａ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ，５４，１４２０−７（２０１３）．
【非特許文献８】Ｍａｔｓｕｍｕｒａ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２１，３３５６−６２（２０１３）
【非特許文献９】Ｍａｔｓｕｍｕｒａ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２，５９６−６００（２０１１）
【非特許文献１０】Ｏｎｏ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２，２６９−７５（２０１１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、アルツハイマー病の発症時における、異常タウとＡβとの発現領域が異なることに着目し、タウ親和性とアミロイド親和性との双方に親和性の高い化合物を用いることで、アルツハイマー病の進行度をより正確に判定できると考えた。
【００１０】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、タウ親和性とアミロイド親和性とを併せ持つ、放射性ヨウ素標識化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の一態様によれば、下記一般式（１）で表される放射性ヨウ素標識化合物又はその塩が提供される。また、本発明の他の態様によれば、この放射性ヨウ素標識化合物若しくはその塩を含み、タウタンパク質の画像化、若しくは、アミロイドの画像化に用いられる、画像化剤、放射性医薬、又は、アルツハイマー病診断剤が提供される。
【００１２】
【化１】
2015089879.tif 000002
〔式中、Ｘが放射性ヨウ素原子であり、Ｙが硫黄原子又は酸素原子であり、Ｚが窒素原子又は炭素原子である。〕
【００１３】
さらに、本発明の他の態様によれば、
下記一般式（２）で表される化合物又はその塩。
【００１４】
【化２】
2015089879.tif 000003
〔式中、Ｒがトリアルキルスタニル基又はトリアルキルシリル基であり、Ｙが硫黄原子又は酸素原子であり、Ｚが窒素原子又は炭素原子である。〕
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、タウ親和性とアミロイド親和性とを併せ持つ、放射性ヨウ素標識化合物が提供される
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミンの合成スキームの一例を示す図である。
【図２】Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（ＳＢＴＡ）の合成スキームの一例を示す図である。
【図３】Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン（ＳＢＴＨ）の合成スキームの一例を示す図である。
【図４】４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（ＳＢＦ）の合成スキームの一例を示す図である。
【図５】Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン（ＳＢＯＸ）の合成スキームを示す図である。
【図６】Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（［１２５Ｉ］ＳＢＴＡ）及び４−［２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾリル）ジアゼニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンアミン（［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３）の正常マウスの体内分布を示す図である。
【図７】アルツハイマー病患者脳組織切片を用いた、ＳＢＴＡによる老人斑（ＳＰ）及び神経原線維変化（ＮＦＴ）の描出を示す図である。（ａ）がＳＰの描出を示し、（ｂ）がＮＦＴの描出を示す。
【図８】アルツハイマー病患者脳組織切片を用いた、ＳＢＴＨによる老人斑（ＳＰ）及び神経原線維変化（ＮＦＴ）の描出を示す図である。（ａ）がＳＰの描出を示し、（ｂ）がＮＦＴの描出を示す。
【図９】アルツハイマー病患者脳組織切片を用いた、ＳＢＦによる老人斑（ＳＰ）及び神経原線維変化（ＮＦＴ）の描出を示す図である。（ａ）がＳＰの描出を示し、（ｂ）がＮＦＴの描出を示す。
【図１０】アルツハイマー病患者脳組織切片を用いた、ＳＢＯＸによる老人斑（ＳＰ）及び神経原線維変化（ＮＦＴ）の描出を示す図である。（ａ）がＳＰの描出を示し、（ｂ）がＮＦＴの描出を示す。
【図１１】アルツハイマー病患者脳組織切片を用いた、ＳＢＴＡによる蛍光染色、及び、Ｇａｌｌｙａｓ染色による神経原線維変化（ＮＦＴ）描出を示す図である。（ａ）が蛍光染色画像であり、（ｂ）がＧａｌｌｙａｓ染色画像である。
【図１２】アルツハイマー病患者脳組織切片を用いた、本発明に係る化合物による老人斑（ＳＰ）描出、及び、神経原線維変化（ＮＦＴ）描出を示す図である。（ａ）が健常人脳組織切片のオートラジオグラムであり、（ｂ）がアルツハイマー病患者脳組織切片のオートラジオグラムであり、（ｃ）がＳＰの免疫染色画像であり、（ｄ）がＮＦＴの免疫染色画像である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明に係る化合物は、具体的には以下の化合物が挙げられる。
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン
・放射性ヨウ素標識４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン
【００１８】
本発明において、「放射性ヨウ素」とは、ヨウ素の放射性同位体であれば特に限定されないが、単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）等の核医学画像診断に用いられる放射性核種が好ましく、より好ましくは１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ又は１３１Ｉであり、１２３Ｉが更に好ましい。
【００１９】
上記一般式（１）で表される化合物は、塩を形成していてもよく、該塩としては酸付加塩、例えば無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩など）、有機酸塩（例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など）などが挙げられる。また、上記一般式（１）で表される化合物またはその塩は水和物であってもよい。
【００２０】
本発明の放射性ヨウ素標識化合物は、好ましくは、下記一般式（３）又は（４）に示す化合物である。
【化３】
2015089879.tif 000004
【００２１】
【化４】
2015089879.tif 000005
【００２２】
一般式（３）及び（４）中、Ｘ，Ｙ，Ｚの定義は、上記一般式（１）と同じである。一般式（３）で表される化合物は、上記一般式（１）中、Ｙが硫黄原子である化合物であり、一般式（４）で表される化合物は、上記一般式（１）中、Ｚが窒素原子である化合物である。
【００２３】
一般式（３）に表される化合物としては、
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（式（３）中、Ｚが窒素原子の化合物。）
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン（式（３）中、Ｚが炭素原子の化合物。）
が挙げられる。
【００２４】
また、一般式（４）に表される化合物としては、
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（式（４）中、Ｙが硫黄原子の化合物。）
・放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン（式（４）中、Ｙが酸素原子の化合物。）
【００２５】
中でも、放射性ヨウ素標識Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（一般式（３）中、Ｚが窒素原子であり、一般式（４）中、Ｙが硫黄原子の放射性ヨウ素標識化合物）が好ましい。
【００２６】
続いて、上記一般式（１）で表される放射性ヨウ素標識化合物又はその塩の製造方法について説明する。一般式（１）で表される放射性ヨウ素標識化合物又はその塩は、上記一般式（２）で表される化合物又はその塩を用いて放射性ヨウ素化反応を実行することにより、得ることができる。
【００２７】
上記一般式（２）中、Ｒで示されるトリアルキルスズ基としては、トリ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）スズ基が挙げられ、トリブチルスズ基がより好ましい。トリアルキルシリル基としては、トリ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）シリル基が挙げられ、トリメチルシリル基がより好ましい。
【００２８】
上記一般式（２）で表される化合物は、塩を形成してもよい。塩としては、上記一般式（１）が形成しうる塩と同様なものを採用することができる。
【００２９】
上記一般式（２）で表される化合物は、例えば、図１、３〜５に示すスキームで調製することができる。
【００３０】
放射性ヨウ素化反応は、上記一般式（２）で表される化合物又はその塩に対し、放射性ヨウ化アルカリ金属塩を作用させることで実行することができる。放射性ヨウ化アルカリ金属塩は、放射性ヨウ素とアルカリ金属との塩であればよく、例えば、放射性ヨウ化ナトリウム、放射性ヨウ化カリウム等が挙げられる。
【００３１】
上記一般式（２）で表される化合物と放射性ヨウ化アルカリ金属塩との反応は、酸性条件下で行い、さらに酸化剤を反応させることにより行なわれる。酸化剤としては、クロラミン−Ｔ、過酸化水素、過酢酸、等が用いられる。
【００３２】
得られた一般式（１）の放射性ヨウ素標識化合物を放射性医薬として用いる場合には、未反応の放射性ヨウ素イオン及び不溶性の不純物を、メンブランフィルター、種々の充填剤を充填したカラム、ＨＰＬＣ等により精製することが望ましい。
【００３３】
本発明に係る放射性医薬は、上記得られた一般式（１）の放射性ヨウ素標識化合物を所望により適当なｐＨに調整された水又は生理食塩水、あるいはリンゲル液等に配合させた液として調製することができる。この場合における本化合物の濃度は、配合された本化合物の安定性が得られる濃度以下とすることが好ましい。本化合物の投与形態は、注射剤が好ましく、投与量は、投与された化合物の分布を画像化するために十分な濃度であれば特に限定する必要はない。
【００３４】
生体に投与された本放射性ヨウ素標識化合物の分布は、公知の方法にて画像化することができ、例えば［１２３Ｉ］ヨウ素標識化合物の場合はＳＰＥＣＴ装置を用いて画像化することができる。このようにして得られた画像により、タウタンパク質やアミロイドを画像化することができ、例えば、アルツハイマー病を非侵襲的に診断することが可能になる。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
【００３６】
本実施例で用いる略語は、以下のように定義される。
ＳＢＴＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン
ＳＢＴＨ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン
ＳＢＦ：４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン
ＳＢＯＸ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン
［１２５Ｉ］ＳＢＴＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−［１２５Ｉ］ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン
【００３７】
本実施例において、ＮＭＲ分析の結果は、日本電子社製、ＪＮＭ４００のＮＭＲ装置（島津製作所社製）を用いて測定した結果を示すものである。
また、本実施例において、「室温」は２５℃である。
【００３８】
（実施例１）ＳＢＴＡ標識前駆体化合物（化合物４）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（ＳＢＴＡ標識前駆体化合物）は、図１に示すスキームに沿って合成した。
【００３９】
実施例１−１：Ｎ−（４−ブロモ−２−ヨードフェニル）−アセタミド（化合物１）の合成
４−ブロモ−２−ヨードアニリン（１．４９ｇ，５．００ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５．０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（４７３μＬ，５ｍｍｏｌ）を加えて室温で１２時間撹拌した。反応終了後、水（５０ｍＬ）を加え、クロロホルム（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１を収量１．５０ｇ（収率８８．５％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ）。
【００４０】
実施例１−２：６−ブロモ−２−メチル−ベンゾチアゾール（化合物２）の合成
実施例１−１に示す方法で合成した化合物１（６７８ｍｇ，２．００ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（４．００ｍＬ）に溶解し、硫化ナトリウム九水和物（７２１ｍｇ，６．００ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（３８．０ｍｇ，０．２００ｍｍｏｌ）を加えた後、８０℃で８時間撹拌した。室温に戻し、濃塩酸（１．６ｍＬ）を加え、８０℃でさらに１２時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物２を収量１３４ｍｇ（収率２９．５％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．９５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．８２（ｓ，３Ｈ）。
【００４１】
実施例１−３：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ブロモ−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（化合物３）の合成
実施例１−２に示す方法で合成した化合物２（２２７ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）をメタノール（５．００ｍＬ）に溶解し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド（１４９ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（１２０ｍｇ，３．００ｍｍｏｌ）を加え、撹拌下２４時間加熱還流させた。析出した結晶を濾取し、メタノールおよび精製水で洗浄して化合物３を収量１７９ｍｇ（収率５０．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．９４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ）。
【００４２】
実施例１−４：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（化合物４）の合成
実施例１−３に示す方法で合成した化合物３（１３０ｍｇ，０．３６０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０．０ｍＬ）に溶解し、ビス（トリブチルスズ）（３６４μＬ，０．７３０ｍｍｏｌ）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（１８０ｍｇ，０．１１６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．００ｍＬ）加えて、撹拌下８時間加熱還流させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物４を収量１０４ｍｇ（収率５０.０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．８９−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０２（ｓ，６Ｈ），０．８７−１．５９（ｍ，２７Ｈ）。
【００４３】
（実施例２）非放射性ＳＢＴＡ（化合物７）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾール）エテニル］−ベンゼンアミン（非放射性ＳＢＴＡ）は、図２に示すスキームに沿って合成した。
【００４４】
実施例２−１：Ｎ−（２，４−ジヨードフェニル）−アセタミド（化合物５）の合成
２，４−ジヨードアニリン（１．００ｇ，２．９０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０．０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（２７４μＬ，２．９０ｍｍｏｌ）を加えて室温で１２時間撹拌した。反応終了後、水（５０ｍＬ）を加え、クロロホルム（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物５を収量７８６ｍｇ（収率７０．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．０８（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ）。
【００４５】
実施例２−２：６−ヨード−２−メチル−ベンゾチアゾール（化合物６）の合成
実施例２−１に示す方法で合成した化合物５（８７６ｍｇ，２．２０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（４．００ｍＬ）に溶解し、硫化ナトリウム九水和物（１．５９ｇ，６．６０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（４２．０ｍｇ，０．２２０ｍｍｏｌ）を加えた後、８０℃で１２時間撹拌した。室温に戻し、濃塩酸（２．０ｍＬ）を加え、８０℃でさらに１２時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物６を収量３０２ｍｇ（収率５０．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１６（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），２．８２（ｓ，３Ｈ）。
【００４６】
実施例２−３：化合物７（非放射性ＳＢＴＡ）の合成
実施例２−２に示す方法で合成した化合物６（２７５ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）をメタノール（５．００ｍＬ）に溶解し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド（１４９ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（１２０ｍｇ，３．００ｍｍｏｌ）を加え、撹拌下２４時間加熱還流させた。析出した結晶を濾取し、メタノールおよび精製水で洗浄して、化合物７を収量２０３ｍｇ（収率５０．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．１４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ）。
【００４７】
（実施例３）ＳＢＴＨ標識前駆体化合物（化合物１３）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン（ＳＢＴＨ標識前駆体化合物）は、図３に示すスキームに沿って合成した。
【００４８】
実施例３−１：６−ブロモ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（化合物８）の合成
４−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（８０８ｍｇ，４．００ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（５．００ｍＬ）に溶解し、メチルメルカプトアセテート（３７５μＬ）、トリチルアミン（１．５ｍＬ）を加え、８０℃で３時間撹拌した。精製水を２０ｍＬ加え、析出した白色固体を濾取し、精製水で洗浄して化合物８を収量７００ｍｇ（収率６４．８％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．４０（ｓ，１Ｈ），８．２２（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．８，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）。
【００４９】
実施例３−２：６−ブロモ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−メタノール（化合物９）の合成
水素化アルミニウムリチウム（７５６ｍｇ，１９．９ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２０．０ｍＬ）に懸濁させ、氷冷下で撹拌した。実施例３−１に示す方法で合成した化合物８（１．７９ｇ，６．６４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０．０ｍＬ）に溶解した。得られた化合物８の溶液を、水素化アルミニウムリチウム溶液に氷冷下でゆっくり滴下した後、室温で３時間撹拌した。飽和硫酸ナトリウム水溶液を過剰に加え、硫酸ナトリウム粉末により脱水した。ガラスフィルターで濾過した後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物９を収量１．２０ｇ（収率７４．７％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．９５（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）。
【００５０】
実施例３−３：６−ブロモ−２−（ブロモメチル）−ベンゾ［ｂ］チオフェン（化合物１０）の合成
実施例３−２に示す方法で合成した化合物９（１．２０ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）を、ジエチルエーテル（１０．０ｍＬ）に溶解し、三臭化リン（２３５μＬ，２．４８ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下して室温で１時間撹拌した。反応終了後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和し、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、化合物１０を収量１．５１ｇ（収率１００％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．９３（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），４．７５（ｓ，２Ｈ）。
【００５１】
実施例３−４：Ｐ−（６−ブロモ−ベンゾ［ｂ］チエン−２−イルメチル）−ホスホン酸ジエチルエステル（化合物１１）の合成
実施例３−３に示す方法で合成した化合物１０（１．５１ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）をトルエン（４０．０ｍＬ）に溶解し、亜リン酸トリエチル（４．１７ｍＬ，２４．８ｍｍｏｌ）を加えて撹拌下４４時間加熱還流させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１１を収量２．４７ｇ（収率１００％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．９０（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０７−４．１９（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝２１．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２８−１．３９  （ｍ，３Ｈ）。
【００５２】
実施例３−５：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ブロモ−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン（化合物１２）の合成
実施例３−４に示す方法で合成した化合物１１（２．８１ｇ，７．７６ｍｍｏｌ）をメタノール（３０．０ｍＬ）に溶解し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド（１．１６ｇ，７．７６ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（７．７６ｍＬ，３８．８ｍｍｏｌ）を加え、撹拌下２４時間加熱還流させた。析出した結晶を濾取し、メタノールおよび精製水で洗浄して化合物１２を収量５００ｍｇ（収率１８．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．８７（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．４１（ｍ，３Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，２Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ）。
【００５３】
実施例３−６：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン（化合物１３）の合成
実施例３−５に示す方法で合成した化合物１２（１７９ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０．０ｍＬ）に溶解し、ビス（トリブチルスズ）（５０１μＬ，１．００ｍｍｏｌ）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（２４８ｍｇ，０．２１５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．００ｍＬ）加えて、撹拌下３時間加熱還流させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１０、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１３を収量１００ｍｇ（収率３５．１％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．８３（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０９−７．１３（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９７（ｓ，６Ｈ），０．８８−１．６０（ｍ，２７Ｈ）。
【００５４】
（実施例４）非放射性ＳＢＴＨ（化合物１４）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾ［ｂ］チオフェン）エテニル］−ベンゼンアミン（非放射性ＳＢＴＨ）は、図３に示すスキームに沿って合成した。
実施例３に示す方法で合成した化合物１３（１００ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ）をクロロホルム（４０ｍＬ）に溶解し、ヨウ素のクロロホルム溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を５ｍＬ加え、室温で２０分撹拌した。飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液で反応を停止させた後、クロロホルム（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１０、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１４を収量２０ｍｇ（収率２８．１％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．０７（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．４１（ｍ，３Ｈ），７．０６−７．１０（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ）。
【００５５】
（実施例５）ＳＢＦ標識前駆体化合物（化合物２１）の合成
４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（ＳＢＦ標識前駆体化合物）は、図４に示すスキームに沿って合成した。
【００５６】
実施例５−１：４−ブロモ−２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（化合物１５）の合成
４−ブロモフェノール（６．５０ｍＬ，６１．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（３２ｍＬ）を加えた。塩化マグネシウム（８．７４ｇ，９１．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０分撹拌した。パラホルムアルデヒド（１２．３ｇ，４１１ｍｍｏｌ）を加え、撹拌下４時間加熱還流した。室温に戻した後、希塩酸を用いてｐＨ２．０にした。ジエチルエーテル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１５を収量６．１２ｇ（収率５０．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １１．１（ｓ，１Ｈ），９．８６（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５−７．２０（ｍ，２Ｈ）。
【００５７】
実施例５−２：６−ブロモ−２−ベンゾフランカルボン酸エチルエステル（化合物１６）の合成
実施例５−１に示す方法で合成した化合物１５（５．００ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、ブロモ酢酸エチル（２．７７ｍＬ，２５．０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１０．４ｇ，７５．０ｍｍｏｌ）を加えた後、１０５℃で４時間撹拌した。室温に戻し、ジエチルエーテル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１６を収量４．４０ｇ（収率６５．７％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．７７（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５８】
実施例５−３：６−ブロモ−２−ベンゾフランメタノール（化合物１７）の合成
水素化アルミニウムリチウム（１．８７ｇ，４９．３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（５０．０ｍＬ）に懸濁させ、氷冷下で撹拌した。実施例５−２に示す方法で合成した化合物１６（４．４０ｇ，１６．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５０．０ｍＬ）に溶解した。得られた化合物１６の溶液を、水素化アルミニウムリチウム溶液に氷冷下でゆっくり滴下した後、室温で１時間撹拌した。飽和硫酸ナトリウム水溶液を過剰に加え、硫酸ナトリウム粉末により脱水した。ガラスフィルターで濾過した後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１７を収量２．１０ｇ（収率５６．６％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．６３（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），４．６５（ｓ，２Ｈ）。
【００５９】
実施例５−４：６−ブロモ−２−（ブロモメチル）−ベンゾフラン（化合物１８）の合成
実施例５−３に示す方法で合成した化合物１７（２．１０ｇ，９．２９ｍｍｏｌ）を、ジエチルエーテル（１０．０ｍＬ）に溶解し、三臭化リン（４４１μＬ，４．６５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下して室温で１時間撹拌した。反応終了後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和し、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１０、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、目的物１８を収量１．８０ｇ（６７．３％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．６６（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．５，１Ｈ），６．７２（ｓ，１Ｈ），４．５６（ｓ，２Ｈ）。
【００６０】
実施例５−５：Ｐ−（６−ブロモ−ベンゾフラン−２−イルメチル）−ホスホン酸ジエチルエステル（化合物１９）の合成
実施例５−４に示す方法で合成した化合物１８（１．８０ｇ，６．２５ｍｍｏｌ）をトルエン（２０．０ｍＬ）に溶解し、亜リン酸トリエチル（１．１６ｍＬ，６．８８ｍｍｏｌ）を加えて撹拌下２４時間加熱還流させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物１９を収量２．３０ｇ（収率１００％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．６１（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０９−４．１６（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｄ，Ｊ＝２１．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２９−１．３６（ｍ，３Ｈ）。
【００６１】
実施例５−６：４−［（１Ｅ）−２−（６−ブロモ−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（化合物２０）の合成
実施例５−５に示す方法で合成した化合物１９（１．７４ｇ，５．０３ｍｍｏｌ）をメタノール（３０．０ｍＬ）に溶解し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド（７５０ｍｇ，５．０３ｍｍｏｌ）、５ｍｏｌ／Ｌナトリウムメトキシドのメタノール溶液（５．００ｍＬ，２５．０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌下１５時間加熱還流させた。析出した結晶を濾取し、メタノールおよび精製水で洗浄して化合物２０を収量４７５ｍｇ（収率２７．７％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．６０（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．５１（ｓ，１Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ）。
【００６２】
実施例５−７：４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（化合物２１）の合成.
実施例５−６に示す方法で合成した化合物２０（１７１ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０．０ｍＬ）に溶解し、ビス（トリブチルスズ）（５０１μＬ，１．００ｍｍｏｌ）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（２４８ｍｇ，０．２１５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．００ｍＬ）加えて、撹拌下３時間加熱還流させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１０、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物２１を収量８８．０ｍｇ（収率３１．８％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．５６（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８.７Ｈｚ，２Ｈ），７．２３−７．２７（ｍ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．５４（ｓ，１Ｈ），３．００（ｓ，  ６Ｈ），０．８７−１．６０（ｍ，２７Ｈ）。
【００６３】
（実施例６）非放射性ＳＢＦ（化合物２２）の合成
４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾフラニル）エテニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルベンゼンアミン（非放射性ＳＢＦ）は、図４に示すスキームに沿って合成した。
実施例５に示す方法で合成した化合物２１（８８．０ｍｇ，０．１６０ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１０ｍＬ）に溶解し、ヨウ素のクロロホルム溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を３ｍＬ加え、室温で１時間撹拌した。飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液で反応を停止させた後、クロロホルム（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１０、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物２２を収量６０ｍｇ（収率９６．９％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．７９（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．２２−７．２４（ｍ，２Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．４９（ｓ，１Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）。
【００６４】
（実施例７）ＳＢＯＸ標識前駆体化合物（化合物２４）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン（ＳＢＯＸ標識前駆体化合物）は、図５に示すスキームに沿って合成した。
【００６５】
実施例７−１：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ブロモ−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン（化合物２３）の合成
２−アミノ−５−ブロモフェノール（９３５ｍｇ，５．００ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ケイ皮酸（９５５ｍｇ，５．００ｍｍｏｌ）をポリリン酸（１２ｇ）に溶解し、１８０℃で１時間撹拌した。室温に戻し、精製水を加えて炭酸カリウムで中和した後、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／１、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物２３を収量１３０ｍｇ（収率７．６０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．７１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），７．４７−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ）。
【００６６】
実施例７−２：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−トリブチルスタニル−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン（化合物２４）の合成
実施例７−１に示す方法で合成した化合物２３（１３０ｍｇ，０．３８０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２０．０ｍＬ）に溶解し、ビス（トリブチルスズ）（３８１μＬ，０．７６０ｍｍｏｌ）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（１８９ｍｇ，０．１６０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１０．０ｍＬ）加えて、撹拌下３時間加熱還流させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物２４を収量３０．０ｍｇ（収率１４．２％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．７１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ），０．８８−１．５８（ｍ，２７Ｈ）。
【００６７】
（実施例８）非放射性ＳＢＯＸ（化合物２５）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−［（１Ｅ）−２−（６−ヨード−２−ベンゾオキサゾールイル）エテニル］−ベンゼンアミン（非放射性ＳＢＯＸ）は、図５に示すスキームに沿って合成した。
実施例７に示す方法で合成した化合物２４（３０．０ｍｇ，５．０×１０−２ｍｍｏｌ）をクロロホルム（３０ｍＬ）に溶解し、ヨウ素のクロロホルム溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を３ｍＬ加え、室温で１時間撹拌した。飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液で反応を停止させた後、クロロホルム（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル／へキサン（１／４、体積比）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、化合物２５を収量１０ｍｇ（収率５０．０％）で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．８３（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ）。
【００６８】
（実施例９）１２５Ｉ標識合成
１２５Ｉ標識には、実施例１に示す方法で合成した［１２５Ｉ］ＳＢＴＡの標識前駆体化合物（化合物４）を用い、スズ−ヨウ素交換反応により標識した。［１２５Ｉ］ＮａＩ（０．１〜０．２ｍＣｉ（３．７〜７．４ＭＢｑ），比放射能８１．４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）を添加し、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１００μＬ）、３体積％過酸化水素水溶液（１００μＬ）に各標識前駆体化合物のエタノール溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を１５０μＬ加えた。室温で１０分間反応させた後、還元剤として飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（２００μＬ）を加え、反応を停止させた。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００μＬ）を加え、反応液を中和した後、酢酸エチルで目的物を抽出した。無水硫酸ナトリウムを充填したカラムを通し脱水した後、窒素ガスにより溶媒を留去した。［１２５Ｉ］ＳＢＴＡは、実施例２で合成した非放射性化合物を標品として、逆相ＨＰＬＣ［（装置）ＬＣ−２０ＡＴポンプ、ＳＰＤ−２０Ａ  ＵＶ検出器（λ＝２５４ｎｍ、（カラム）ナカライテスク、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  Ｃ１８、５Ｃ１８−ＭＳＩＩ、４．６×１５０ｍｍ、（流速）０．１ｍＬ／分、（移動相）水：アセトニトリル＝２：８、体積比）を用いて精製し、酢酸エチルで目的物を抽出した。無水硫酸ナトリウムを充填したカラムを通し脱水した後、窒素ガスにより溶媒を留去し、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡを放射化学的収率４７．０％、放射化学的純度９９％以上で得た。
【００６９】
（実施例１０）正常マウス体内放射能分布実験
実施例９で得た［１２５Ｉ］ＳＢＴＡを１０体積％のエタノールを含む生理食塩水で希釈し、１群５匹の５週齢ｄｄＹマウス（雄２６−２８ｇ）に、尾静脈より１匹あたり８．５１−１１．１ｋＢｑ、１００μＬ投与し、２，１０，３０，６０分後に断頭、採血後、臓器を取り出し、γカウンター（パーキンエルマー社製ＷＩＺＡＲＤ３１４８０）で測定した。また、比較のため、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡに代えて、非特許文献９記載の４−［２−（６−［１２５Ｉ］ヨード−２−ベンゾチアゾリル）ジアゼニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンアミン（［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３）を用いて同様な実験を行った。結果を表１、２、図６に示す。表１中、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡについて、各臓器の％ＩＤ／ｇ（胃のみ％ＩＤ）の平均値±標準偏差を示す。表２は、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡ及び［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３について、投与２分、６０分後の脳の％ＩＤ／ｇの平均値、及び、その比率（２分後／６０分後）を示す。図６は、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡ及び［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３の脳の％ＩＤ／ｇの経時変化をそれぞれ示す。結果は以下の表２に併せて表記した。
【００７０】
【表１】
2015089879.tif 000006
【００７１】
【表２】
2015089879.tif 000007
【００７２】
表１、２、図６で示すように、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡは脳内タウをイメージングするのに十分な脳移行性を示した。また、投与後２分／６０分の脳内放射能の比は０．３から１．１に向上し，ＰＤＢ−３において問題となっていた脳内放射能滞留に改善が認められた。
【００７３】
（実施例１１）ＬｏｇＰ値の測定
１２ｍＬのテストチューブに０．３７ＭＢｑの［１２５Ｉ］ＳＢＴＡ、又は、［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３を加え、１−オクタノール（３．０ｍＬ）とＰＢＳ（−）（ｐＨ７．４）（３．０ｍＬ）を摘下し、２分間ボルテックスした後に遠心分離（１０分、２０００ｒｐｍ）にかけた。１−オクタノール層及びＰＢＳ（−）相を５００μＬずつとり、２つのチューブに移送した。１−オクタノール相の残渣（１ｍＬ）を別のチューブに移送した。該テストチューブに１−オクタノール（２．０ｍＬ）及びＰＢＳ（−）（３．０ｍＬ）を滴下し、ボルテックス、遠心分離及び放射能測定を繰り返した。各チューブの放射能量は、γカウンター（パーキンエルマー社製ＷＩＺＡＲＤ１４７０）で測定した。分配係数（ｒ）は、数式（１）に従って算出した。結果は表２に示した。［１２５Ｉ］ＳＢＴＡのＬｏｇ  Ｐ値は［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３に比べて低減した。
ｒ＝（カウント数／１−オクタノールの液量（μＬ）／（カウント数／ＰＢＳ（−）の液量（μＬ）・・・（１）
【００７４】
（実施例１２）タウタンパク質およびＡβ１−４２凝集体を用いたインビトロ結合実験
実施例２、４、６、８で合成した各化合物の、タウ及びＡβ凝集体に対する親和性を定量的に評価するために［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３を用いた競合阻害実験を行い、阻害定数（Ｋｉ）を算出した。
（１）Ａβ１−４２凝集体の作製
Ａβ１−４２は、ペプチド研究所社から購入した。ＰＢＳ（―）（ｐＨ７．４）を用い、Ａβ１−４２が０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度になるように調製した。３７℃で４２時間インキュベートし、これをＡβ１−４２凝集体溶液とした。凝集体溶液は、種々の実験に用いるまで−７８℃で保存した。
（２）タウタンパク凝集体の作製
Ｔａｕ−４４１発現ベクターを大腸菌（ＢＬ２１）に導入後、培養し、タウタンパクを抽出、精製した。精製したタウタンパク（１ｍｇ／ｍＬ）にヘパリン（０．１ｍｇ／ｍＬ）を加え、５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＭＥＳ（ｐＨ６．８，１００ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム水溶液，０．５ｍｍｏｌ／Ｌグリコールエーテルジアミン四酢酸水溶液）中３７℃で３日間インキュベートし、凝集体を作製した。凝集体の生成は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び、チオフラビンＳ（ＴｈＳ）による蛍光飽和実験により確認した。
（３）タウタンパク質およびＡβ１−４２凝集体を用いたインビトロ結合実験
１２×７５ｍｍのガラスチューブに５体積％エタノール水溶液（８５０μＬ）、実施例２で合成した非放射性ＳＢＴＡ、実施例４で合成した非放射性ＳＢＴＨ、実施例６で合成した非放射性ＳＢＦ、実施例８で合成した非放射性ＳＢＯＸの各１００％エタノール溶液（５０μＬ）、及び、［１２５Ｉ］ＰＤＢ−３の１００％エタノール溶液（５０μＬ）を混和し、最後に、上記（１）で調製した２．５μｇ／ｍＬのＡβ１−４２凝集体溶液（５０μＬ）、あるいは、上記（２）で調製した１０μｇ／ｍＬのタウ凝集体溶液（５０μＬ）を加えてボルテックスし、室温で３時間静置した。非特異的結合は、過剰の非放射性ＰＤＢ−３（４−［２−（６−ヨード−２−ベンゾチアゾリル）ジアゼニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンゼンアミン、調製法は非特許文献９参照）の各１００％エタノール溶液（５０μＬ）を用いて算出した。３時間後、混合溶液をＭ−２４Ｒ  ｃｅｌｌ  ｈａｒｖｅｓｔｅｒ、ＧＦ／Ｂ  ｆｉｌｔｅｒを用いて吸引濾過し、フィルターに残存した放射能をγカウンター（パーキンエルマー社製ＷＩＺＡＲＤ３１４８０）で測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０を用いて阻害曲線を作成し、ＩＣ５０を算出し、Ｋｉ値をＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いて計算した。結果を表３に示す。
【００７５】
【表３】
2015089879.tif 000008
【００７６】
表３に示すとおり、ヘテロ環の種類により、タウ凝集体への結合親和性、Ａβ凝集体との親和性に差が認められた。中でも、ＳＢＴＡはタウ凝集体に対して最も高い結合親和性を示すと同時に、Ａβ凝集体との選択的結合性に関しても最も高い値を示した。
【００７７】
（実施例１３）アルツハイマー病患者剖検脳組織切片を用いた、老人斑及び神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）描出実験
（１）蛍光観察
京都大学大学院医学研究科より提供されたアルツハイマー病（ＡＤ）患者剖検脳切片に、実施例２で得た非放射性ＳＢＴＡ、実施例４で得た非放射性ＳＢＴＨ、実施例６で合成した非放射性ＳＢＦ、実施例８で合成した非放射性ＳＢＯＸの５０体積％エタノール水溶液（２５０μｍｏｌ／Ｌ）を３０分間反応させ、エタノールで洗浄後、蛍光顕微鏡を用いて、ＢＺフィルタＧＦＰ−ＢＰ（励起波長（４５０−４９０ｎｍ）、吸収波長（５１０−５６０ｎｍ）、ダイクロイックミラー波長（４９５ｎｍ））で蛍光観察した結果を示す。
（２）Ｇａｌｌｙａｓ染色
非放射性ＳＢＴＡを使用した脳切片については、ＮＦＴの染色の可否を確認するため、蛍光観察を行った同一切片をＧａｌｌｙａｓ染色により染色した。まず、キシレン洗浄（１５分×２）、エタノール（１分×２）、９０体積％エタノール水溶液（１分×１）、８０体積％エタノール水溶液（１分×１）、７０体積％エタノール水溶液（１分×１）および精製水洗浄（２．５分×２）をすることで脱パラフィン処理を行った。水洗した後、以下の手順により、Ｇａｌｌｙａｓ染色を行った後、顕微鏡で観察した。
ｉ）０．３体積％過マンガン酸カリウム溶液（１０分間）
ｉｉ）２体積％シュウ酸水溶液（３分）
ｉｉｉ）硝酸ランタン水溶液※１（１時間）
ｉｖ）精製水（５分間×３）
ｖ）アルカリヨウ化銀水溶液※２（１−２分間）
ｖｉ）０．５体積％酢酸水溶液（５分間×３）
ｖｉｉ）還元液※３（２０分間)
ｖｉｉｉ）０．５体積％酢酸水溶液（５分間×３）
ｉｘ）０．５体積％塩化金水溶液※４（１５分間）
ｘ）精製水（５分間×３）
ｘｉ）２体積％チオ硫酸ナトリウム水溶液（２分間）
ｘｉｉ）流水洗浄（５分間）
ｘｉｉｉ）精製水（５分間×３）
ｘｉｖ）封入
※１  硝酸ランタン水溶液組成：
硝酸ランタン（２００ｍｇ），酢酸ナトリウム３水和物（１ｇ），精製水（５０ｍＬ）
※２  アルカリヨウ化銀水溶液組成：
水酸化ナトリウム（２ｇ），ヨウ化カリウム（５ｇ），精製水（５０ｍＬ），硝酸銀（１７．５ｍｇ）
※３  還元液組成：
下記（Ａ）液と（Ｂ）液とを別々に調製し、それぞれを２５ｍＬずつ混合したもの。
（Ａ液）：精製水（１Ｌ），硝酸アンモニウム（２ｇ），硝酸銀（２ｇ），ケイタングステイン酸（１０ｇ），３５％ホルムアルデヒド（５．１ｍＬ）
（Ｂ液）：精製水（１Ｌ），炭酸ナトリウム（５０ｇ）
※４  塩化金水溶液組成：
塩化金（２５０ｍｇ），精製水（５０ｍＬ）
【００７８】
結果を図７〜１１に示す。図７はＳＢＴＡの結果であり、図８はＳＢＴＨの結果であり、図９はＳＢＦの結果であり、図１０はＳＢＯＸの結果である。図７（ａ）、図８（ａ）、図９（ａ）、図１０（ａ）は、老人斑（ＳＰ）の描出像を示し、図７（ｂ）、図８（ｂ）、図９（ｂ）、図１０（ｂ）は、神経原線維濃縮体（ＮＦＴ）の描出像を示す。図７（ａ）、図８（ａ）、図９（ａ）、図１０（ａ）で示すように、全ての化合物において老人斑が明瞭に描出された。一方、ＮＦＴについては、図７（ｂ）、図８（ｂ）、図９（ｂ）、図１０（ｂ）で示すように、ヘテロ環構造の種類によりＮＦＴの染色結果に差が認められた。中でもＳＢＴＡが最も明瞭にＮＦＴを描出した。
【００７９】
図１１（ａ）は、図７（ｂ）よりも倍率を低くしたＳＢＴＡの蛍光観察画像であり、図１１（ｂ）はＧａｌｌｙａｓ染色画像である。図示するように、ＳＢＴＡによる蛍光染色画像とがＧａｌｌｙａｓ染色画像とが一致した。
【００８０】
（実施例１４）アルツハイマー病（ＡＤ）患者剖検脳組織切片を用いたインビトロオートラジオグラフィー
（１）インビトロオートラジオグラフィー
ＡＤ患者脳組織切片及び健常人脳組織切片は、京都大学大学院医学研究科より提供されたものを使用した。キシレン洗浄（１５分×２）、エタノール（１分×２）、９０体積％エタノール水溶液（１分×１）、８０体積％エタノール水溶液（１分×１）、７０体積％エタノール水溶液（１分×１）および精製水洗浄（２．５分×２）をすることで脱パラフィン処理を行った。実施例９で得た［１２５Ｉ］ＳＢＴＡを５０体積％エタノール水溶液を用いて１５ｋＢｑ／ｍＬに希釈した。調製した［１２５Ｉ］ＳＢＴＡの溶液を、それぞれ、切片上に滴下し１時間静置した。その後、５０体積％エタノール水溶液で１分×２回洗浄した。ＢＡＳイメージングプレート（富士フィルム社製）に２４時間固定した後、ＢＡＳ５０００スキャナーシステム（富士フィルム社製）を用い分析を行った。
（２）免疫染色
オートラジオグラフィーで使用した脳切片の隣接切片を用いて、老人斑（ＳＰ）及び神経原線維変化（ＮＦＴ）の染色を行った。ＳＰの免疫染色における一次抗体には、抗Ａβ１−４２モノクローナル抗体（ＢＣ０５、ＷＡＫＯ社製）を、ＮＦＴの免疫染色における抗体には、抗リン酸化タウモノクローナル抗体（ＡＴ８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いた。キシレン洗浄（１５分×２）、エタノール（１分×２）、９０体積％エタノール水溶液（１分×１）、８０体積％エタノール水溶液（１分×１）、７０体積％エタノール水溶液（１分×１）および精製水洗浄（２．５分×２）をすることで脱パラフィン処理を行った。抗原の賦活化には０．０１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ６．８）中オートクレーブ（１５分）および蟻酸処理（５分）を行った。流水で洗浄（５分）した後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（２分）で洗浄した。１次抗体（上記の抗体（ＢＣ０５又はＡＴ８））と１時間反応させた後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（５分×３）で洗浄した。ヒストファイン  シンプルステイン  ＭＡＸ−ＰＯ（ＭＵＬＴＩ）（ニチレイバイオサイエンス社製）と３０分間反応させた後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（３分×３）およびＴＢＳ（５分）で洗浄した。最後に、ＤＡＢ溶液と室温で１分間反応させた。蒸留水で１分間洗浄し反応を停止させ、封入後、顕微鏡で観察した。
【００８１】
結果を図１２に示す。図１２（ａ）が健常人脳組織切片のオートラジオグラムであり、図１２（ｂ）がＡＤ患者脳組織切片のオートラジオグラムであり、図１２（ｃ）が、図１２（ｂ）中ａの領域のＳＰの免疫染色画像であり、図１２（ｄ）が図１２（ｂ）中ｂの領域のＮＦＴの免疫染色画像である。放射能分布は、ＳＰの蓄積部位とも一致し、かつ、ＮＦＴの蓄積部位と一致する結果が得られた。また、健常者脳組織切片には顕著な放射能集積が認められなかったことより、［１２５Ｉ］ＳＢＴＡは脳組織切片への非特異的結合が少ないことが明らかになった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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