(57)【要約】      （修正有）【課題】骨長の低下の回復、関節軟骨の亀裂及び／又はびらんの抑制、関節軟骨の厚さの増大、関節感覚の増大に有用な、軟骨の増殖および分化促進剤の提供。【解決手段】ベタイン（別名：トリメチルグリシン）を含む軟骨の増殖および分化促進剤。該ベタインとしては、多くの植物や動物から抽出されたもの、又は生合成物から抽出した天然由来のものを使用することができる。特に、ビート（甜菜）から常法により抽出、精製したものを用いるのが好ましい。形態としては、液状、粉末状、顆粒状、ペースト状等であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベタインを含む、軟骨の増殖および分化促進剤。
【請求項２】
軟骨が、成長板である、請求項１に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【請求項３】
軟骨の増殖および分化の促進が、骨長の伸長である、請求項２に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【請求項４】
骨長の伸長が、高ホモシステイン血症における骨長の低下の回復である、請求項３に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【請求項５】
軟骨の増殖および分化の促進が、関節軟骨の亀裂および/またはびらんの抑制である、請求項１に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【請求項６】
軟骨の増殖および分化の促進が、関節軟骨の厚さの増大である、請求項１に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【請求項７】
軟骨の増殖および分化の促進が、関節間隙の増大である、請求項１に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベタインを含む、軟骨の増殖および分化促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ベタインは別名トリメチルグリシンといい、ビート（甜菜）中に比較的多く（０．０７〜０．３０％）存在し、１９世紀中頃ビート糖の廃糖蜜からはじめて単離されている。ビート以外の植物及び動物にも広く見いだされ、動物ではエビ、カニ、イカ、貝類などの水産物に多く含まれており、植物では麦芽、キノコ類、植物の葉、タケノコ、種子などに含まれ、小麦のフスマには約０．３５％も含有されている。このため、我々のベタインの食経験は古くより豊富であり、安全性の高い天然成分といえる。
【０００３】
生体内のメチオニンサイクルにおける悪玉アミノ酸である、ホモシステインの低減にベタインが有効であることが知られている。ホモシステインは、動脈硬化、心筋梗塞、骨粗鬆症の危険因子であり、変形性関節症患者は、血中ホモシステイン値が高い人が多い。ベタインは、ホモシステインを再メチル化することによって、ホモシステインの血中濃度を低下させることが知られている（特許文献１）。また、マウス軟骨細胞株において、コラーゲン繊維蓄積量を増加させることが知られている（非特許文献１）。しかし、生体内でのベタインの軟骨に対する具体的な作用や機序は知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−１５５２３４号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】近藤みさな等、「高ホモシステイン誘導変形性関節症モデル軟骨細胞に対するペダインの影響」、第５５回日本薬学会関東支部大会講演要旨集、Ｊ１１、２０１１年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、軟骨の増殖および分化促進剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは鋭意研究の結果、驚くべきことに、ベタインが、軟骨の増殖および分化促進に有用であることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、下記のとおりである。
［１］ベタインを含む、軟骨の増殖および分化促進剤。
［２］軟骨が、成長板である、上記［１］に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
［３］軟骨の増殖および分化の促進が、骨長の伸長である、上記［２］に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
［４］骨長の伸長が、高ホモシステイン血症における骨長の低下の回復である、上記［３］に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
［５］軟骨の増殖および分化の促進が、関節軟骨の亀裂および/またはびらんの抑制である、上記［１］に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
［６］軟骨の増殖および分化の促進が、関節軟骨の厚さの増大である、上記［１］に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
［７］軟骨の増殖および分化の促進が、関節間隙の増大である、上記［１］に記載の軟骨の増殖および分化促進剤。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の組成物は、軟骨の増殖および分化を促進することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】各処理群の血漿ホモシステイン（Ｈｃｙ）濃度を示す。
【図２】各処理群の体重等を示す。
【図３】各処理群の骨長等を示す。
【図４】各処理群の海綿骨密度等を示す。
【図５】各処理群の骨強度を示す。
【図６】各処理群の摂食量を示す。
【図７】各処理群の関節軟骨の亀裂・びらんを示す。
【図８】各処理群の関節軟骨の厚さを示す。
【図９】各処理群の関節間隙を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明においては、ベタインを有効成分として使用する。ベタインは、多くの植物や動物から抽出されたもの、又は生合成物から抽出した天然由来のものを使用することができる。特に、ビート（甜菜）から常法により抽出、精製したものを用いるのが好ましいが、ビート由来のベタインに限定されるものではない。形態も液状、粉末状、顆粒状、ペースト状等どのようなものでも使用することができ、特に限定されるものではない。
【００１１】
本発明に係る組成物は、ヒト又はヒトを除く動物に経口投与を行う。投与量は、例えばヒトにおいては、１日あたりベタインとして２０〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは３０〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の量にて投与するのが有効である。ヒトを除く動物においては、ヒトへの投与量から所定の換算を行って投与量を設定すればよい。
【００１２】
医薬品の場合、その形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等をあげることができる。これらの各種製剤は、常法にしたがって有効成分を賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００１３】
療養用食品組成物としての形態についても限定はなく、肝機能障害者が食しやすいように固体状（粉末、顆粒状その他）、ゲル状、ペースト状、液状ないしは懸濁状など、さらには、これらを通常の食品に添加、混合するなど、適宜選択することができる。
【００１４】
以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【実施例】
【００１５】
１．動物実験
動物は、７週齢ｄｄＹ雄性マウス（東京実験動物式会社）６４匹を用いた。マウスは恒温恒湿度（室温：２１±１℃、湿度：４５〜５０％）、１２時間明暗サイクル（明期：７：００〜１９：００）の環境下で飼育を行った。本実験は、城西大学動物実験指針に基づき、「実験動物の飼育及び保管に関する基準」（昭和５５年３月総理府告示第６号）に基づいて行われた。
マウスは１週間の予備飼育後、通常食（Ｎ）群、コントロール食（Ｃ、葉酸：０．０００１％）群、高ホモシステイン血症誘導食（Ｍ、葉酸：０．０００１％、Ｍｅｔ：２％）群、Ｍ＋Ｂｅ低添加食（ＭＬＢ、葉酸：０．０００１％、Ｍｅｔ：２％、Ｂｅ：１％）群、Ｍ＋Ｂｅ高添加食（ＭＨＢ、葉酸：０．０００１％、Ｍｅｔ：２％、Ｂｅ：３％）群の５群に分け、２０週間の飼育を行った。本実験では、Ｎ群以外の４群において、コリンを非添加とした（表１）。Ｂｅの添加はＨａｙｅｓ，  Ｋ．Ｃ．らの研究において、Ｂｅを１〜５％添加した食餌で長期飼育しても毒性は見られなかったことから、本実験ではＢｅの添加濃度を１％と３％とした。Ｂｅはニッテンベタイン（Ｂｅ、Ｌｏｔ．１００６０５  甜菜より抽出：日本甜菜製糖株式会社）を使用した。飼育中、１週間毎に各群すべてのマウスで体重を測定した。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
飼育終了後、ペントバルビタールナトリウム（ソムノペンチル(R)）麻酔下で腹部大動脈から全採血を行った後、肝臓、両腎臓、脾臓、平目筋（右後肢）重量を測定した。右後肢大腿骨は摘出後トリミングを行い、７０％エタノールで固定し、使用時まで４℃で保存した。左後肢は筋肉を残したまま７０％エタノールで固定し、使用時まで４℃で保存した。解剖後３日間はエタノールの交換を行った。
【００１８】
血液は血漿分離用と血清分離用に分けて保存した。血漿用血液は、２Ｎａ・ＥＤＴＡ処理済みの１．５ｍＬチューブに入れ（最終濃度５ｍＭ）、転倒混和後、２０００ｒｐｍ、２０分間遠心し、上清を新しい１．５ｍＬチューブに９０μＬずつ分注した。また、血清用血液は、１．５ｍＬチューブに入れ３０分以上常温静置し、１２０００ｒｐｍ、１５分間遠心し、上清を新しい１．５ｍＬチューブに分注した。得られた血液サンプルは使用時まで−８０℃で保存した。
【００１９】
２．血漿サンプルの蛍光化
血漿サンプルの蛍光化は、Ｇｉｌｆｉｘらの文献をもとにして行った（Gilfix, B.M., D.W. Blank, and D.S. Rosenblatt, Novel reductant for determination of total plasma homocysteine. Clin Chem, 1997. 43(4): p. 687-8.）。−８０℃で保存した血漿サンプルを氷上融解し、１００ｇ／Ｌ  ＴＣＥＰ［Ｔｒｉｓ（２−カルボキシエチルホスフィン）塩酸塩］水溶液９μＬを入れボルテックスを行い３０分間氷上静置した。氷上静置後、１ｍｍｏｌ／Ｌ  ２Ｎａ・ＥＤＴＡを含む１００ｇ／Ｌ  ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）を９０μＬ入れ、ボルテックス後１２０００ｒｐｍ、１０分間遠心した。上清を新しいチューブに１００μＬ移し、１．５５ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＯＨ水溶液２０μＬ、４ｍｍｏｌ／Ｌ  ２Ｎａ・ＥＤＴＡを含む０．１２５ｍｏｌ／Ｌホウ酸緩衝液２５０μＬ、１ｇ／Ｌ  ＳＢＤ−Ｆ（４−フルオロ−７−スルホベンゾフラザンアンモニウム塩）を含むホウ酸緩衝液１００μＬを入れボルテックス、フラッシングを行った。６０℃のウォーターバスで６０分間インキュベート後、氷上で十分に冷却し測定まで−３０℃で保存した。
【００２０】
３．血漿Ｈｃｙ濃度の測定
血漿Ｈｃｙ濃度の測定はＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて行った。測定条件は既報告の条件を参考にして決定した（Ubbink, J.B., W.J. Hayward Vermaak, and S. Bissbort, Rapid high-performance liquid chromatographic assay for total homocysteine levels in human serum. J Chromatogr, 1991. 565(1-2): p. 441-6., Araki, A. and Y. Sako, Determination of free and total homocysteine in human plasma by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. J Chromatogr, 1987. 422: p. 43-52.）。
【００２１】
４．骨長測定法
７０％エタノールに保存した右後肢大腿骨を用いて骨長の測定を行った。骨長は大転子から膝関節までの長さとし、デジタルノギス（シンワ測定株式会社）を用いて測定した。各サンプルとも５回ずつ測定し、平均値をそのサンプルの骨長とした。
【００２２】
５．ｐＱＣＴ（末梢定量的コンピューター断層撮影）法
７０％エタノール保存の右後肢大腿骨（骨長測定と同サンプル）を測定に使用した。実験動物用Ｘ線ＣＴ装置（Ｌａｔｈｅｔａ、ＡＬＯＫＡ）を用い、ｐＱＣＴ法によって測定した。測定条件として、大腿骨遠位端および大腿骨近位端から０．０５ｍｍごとに８０箇所測定した。測定したｐＱＣＴデータはＬａｔｈｅｔａに付属の解析ソフトウェアを用いて骨計測モードで解析した。得られたデータから、骨幅、海綿骨密度、皮質骨密度について比較した。
【００２３】
６．骨強度測定
７０％エタノール保存の右後肢大腿骨（骨長測定と同サンプル）を用いて骨強度の測定を行った。測定機器はＥＺ−１００Ｎ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）を用い、３点曲げ試験法を行った。
【００２４】
７．組織標本作成（非脱灰標本）
７０％エタノール保存の左後肢を用いて組織標本を作製した。
【００２５】
７−１  検体の確認・軟部組織除去
７０％エタノールで固定した検体から軟部組織を除去した。
【００２６】
７−２  軟Ｘ線撮影
軟Ｘ線撮影装置（モデル：ＳＯＦＴＥＸ  Ｍ−６０、ＴＹＰＥ：Ｍ６０）を用いて、検体のＸ線撮影を行った。撮影条件は、出力菅電圧：４０ｋＶＡ、出力菅電流：３ｍＡ、撮影時間：２０秒とした。
【００２７】
７−３  切断（トリミング）
技工用マイクロモーター（モデル：ハイパーテックII、ＴＹＰＥ：＃９３７０６Ｊ）を用いて、膝関節を温存し不必要な部位切断した。
【００２８】
７−４  ブロック染色（ビリャヌエバ骨染色）
必要部位のみを残した検体をビリャヌエバ骨染色溶液に６〜７日間浸し、染色を行った。
【００２９】
７−５  脱水およびメチルメタクリレートモノマー（ＭＭＡ）浸透
検体を浸していたビリャヌエバ骨染色溶液を７０％エタノールに交換し、真空乾燥機にて０．０５Ｍｐａ、３回吸引を行った。続いて、９０％エタノールに交換し、真空乾燥機にて０．０５Ｍｐａ、３回吸引を行った。その後、９５％エタノールに交換し、真空乾燥機にて０．０５Ｍｐａ、３回吸引を行った。溶液を１００％エタノールに交換し、０．０５Ｍｐａ、３０分間吸引を行った。再び１００％エタノールに交換し、０．０５Ｍｐａ、３０分吸引を行い、２時間放置した。２時間の放置後、溶液をアセトンに交換し、０．０５Ｍｐａ、３０分間の吸引後、２時間放置した。混合液（アセトン：ＭＭＡ＝１：３）に交換し、２４時間浸した。その後、ＭＭＡに交換し、２４時間放置し、再びＭＭＡに交換し、２４時間放置した。
【００３０】
７−６  包埋（ＭＭＡ樹脂）
検体をポリプロピレン製樹脂容器に入れ、ＭＭＡ樹脂で包埋した。ＭＭＡ樹脂は、メタクリル酸メチルモノマー１００ｍＬ、メタクリル酸メチルポリマー４０ｇ、過酸化ベンゾイル１ｇをマグネチックスターラーで３日間攪拌し作成した。
【００３１】
７−７  重合
包埋した検体をインキュベーター（ＩＣＶ−３００）内に移し、庫内温度を３０℃から約２週間で４３℃まで上昇させ、重合を行った。
【００３２】
７−８  ブロック成形
ＭＭＡ樹脂包埋が完了した検体から、ダイヤモンドソーを用いて不要な樹脂を切断した。
【００３３】
７−９  薄切
検体を、ロータリーミクロトーム（ライカＲＭ２２５５）を用いて厚さ５μｍの薄切切片を作製した。
【００３４】
７−１０  封入（マウント）
切片は、光硬化封入剤クリアシールを用いてスライドガラスに封入した。光硬化には、可視光照射器（ＭＲ−１０２Ｂ）を使用した。
【００３５】
８．関節軟骨評価
左後肢から作成した膝関節温存脛骨近位部前額断切片（骨組織：厚さ５μｍ）を用いて関節軟骨評価を行った。計測機器はＨｉｓｔｏｍｅｔｒｙ  ＲＴ  デジタイザ、ソフトはＣＳＳ−８４０海綿骨計測バージョン（株式会社  システムサプライ）、顕微鏡は落射型蛍光偏光顕微鏡  ＯＬＹＭＰＵＳ  ＢＸ−５３を用いた。計測領域は、脛骨近位部外側関節軟骨、脛骨近位部内側関節軟骨、大腿骨遠位部外側関節軟骨、大腿骨遠位部内側関節軟骨とした。計測時の顕微鏡倍率は、接眼レンズ１０×対物レンズ１０×中間変倍１．０の４００倍、実計測倍率１２９．２７７倍である。
【００３６】
８−１  関節軟骨厚計測
関節軟骨厚は、軟骨長および軟骨面積から算出した。計測ソフトには関節軟骨長および関節軟骨面積の計測項目が含まれていないため、海綿骨計測時のパラメータを代用して測定を行った。
【００３７】
８−２  軟骨細胞数
大腿骨遠位部外側関節軟骨における細胞数を計測した。
【００３８】
８−３  軟骨変性
脛骨近位部外側関節軟骨の軟骨変性を観察した。軟骨変性の評価は、国際関節症学会（ＯＡＲＳＩ）の定めたマウス軟骨組織変性評価スコアに準じて評価した。
スコアの基準を以下に示す。
０＝正常
０．５＝構造上の破壊なくサフラニンＯ染色の染色性低下のみ
１＝軟骨欠損なく、微細な線維化のみ
２＝垂直方向の浅層下への亀裂とわずかな表層の欠損
３＝石灰化軟骨層への表層から２５％未満内の垂直方向への亀裂もしくはびらん
４＝石灰化軟骨層への表層から２５％以上５０％未満の垂直方向への亀裂もしくはびらん
５＝石灰化軟骨層への表層から５０％以上７５％未満の垂直方向への亀裂もしくはびらん
６＝石灰化軟骨層への表層から７５％以上の垂直方向への亀裂もしくはびらん
【００３９】
９−４関節間隙
関節間隙は、大腿骨および脛骨の関節軟骨で挟まれている部位を計測した。
【００４０】
結果
（１）体重・体長・臓器重量
飼育終了時の体重、体長は、Ｎ群と比較してＭ群で有意に低下した。一方、ＭＬＢ群ではＮ群と同程度だった。また、肝臓、脾臓、平目筋重量では５群間で差はなかった。腎臓重量はＮ群と比較し、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で有意に増加した。
【００４１】
（２）摂食量
体重１ｇあたりの摂食量は、Ｎ群は１４．０１±０．４５ｇ、Ｃ群は１５．０７±０．６４ｇ、Ｍ群は２１．４６±０．７６ｇ、ＭＬＢ群は１７．６７±０．５３ｇ、ＭＨＢ群は２１．３１±０．６７ｇだった。Ｎ群と比較して、Ｍ群、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で摂食量は有意に高値を示した。また、ＭＬＢ群と比較して、Ｍ群、ＭＨＢ群で摂食量は有意に高値を示した。
【００４２】
（３）血漿Ｈｃｙ値
血漿Ｈｃｙ濃度を測定した結果、Ｎ群は１９．１４±３．６５μＬ、Ｃ群は２４．２６±３．３１μＬ、Ｍ群は７４．６９±９．５３μＬ、ＭＬＢ群は５３．５１±１１．５２μＬ、ＭＨＢ群は３９．０５±４．５４μＬだった。Ｎ群と比較して、Ｍ群、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で血漿Ｈｃｙ濃度が有意に増加した。また、Ｍ群と比較しＭＬＢ群、ＭＨＢ群ともに血漿Ｈｃｙ濃度が有意に減少した。
【００４３】
（４）骨長
骨長を測定した結果、Ｎ群は１７．１１±０．０８ｍｍ、Ｃ群は１７．２４±０．１４ｍｍ、Ｍ群は１６．８５±０．１０ｍｍ、ＭＬＢ群は１７．３０±０．０９ｍｍ、ＭＨＢ群は１７．２０±０．１０ｍｍだった。骨長は、Ｎ群と比較してＭ群は低値だった。一方、ＭＬＢ群はＮ群と同程度だった。
【００４４】
（５）骨幅
ｐＱＣＴ法で得られたデータから、一次海綿骨辺りの骨幅を解析したＮ群は２．８８±０．０３ｍｍ、Ｃ群は２．８６±０．０２ｍｍ、Ｍ群は２．９１±０．０２ｍｍ、ＭＬＢ群は２．８８±０．０３ｍｍ、ＭＨＢ群は２．９１±０．０４ｍｍだった。骨幅は５群間で差はなかった。
【００４５】
（６）骨密度
ｐＱＣＴ法で得られたデータから、一次海綿骨密度および二次海綿骨辺りの皮質骨密度を解析した。海綿骨密度は、Ｎ群は５３９．１±１２．３ｍｇ／ｃｍ３、Ｃ群は５３４．７±１２．３ｍｇ／ｃｍ３、Ｍ群は５２１．１±１０．１ｍｇ／ｃｍ３、ＭＬＢ群は５５３．８±１２．０ｍｇ／ｃｍ３、ＭＨＢ群は５４２．７±９．６３ｍｇ／ｃｍ３だった。また、皮質骨密度は、Ｎ群は６２４．０±３．５４ｍｇ／ｃｍ３、Ｃ群は６０９．２±３．１４ｍｇ／ｃｍ３、Ｍ群は６３６．９±１．６１ｍｇ／ｃｍ３、ＭＬＢ群は６０５．０±２．８４ｍｇ／ｃｍ３、ＭＨＢ群は６０７．０±４．６８ｍｇ／ｃｍ３だった。海綿骨密度は５群間で有意な差はなかった。皮質骨密度は、Ｎ群と比較してＭ群には有意な差はなかったが、Ｃ群、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群では有意に低下した。
【００４６】
（７）骨強度
骨強度の測定した結果、最大点荷重は、Ｎ群は２９．５０±１．９８Ｎ、Ｃ群は２５．６１±０．７０Ｎ、Ｍ群は２５．６７±０．９９Ｎ、ＭＬＢ群は２５．３２±０．８９Ｎ、ＭＨＢ群は２５．１０±０．９６Ｎだった。また、破断エネルギーは、Ｎ群は１０．３４±０．９５ｍＪ、Ｃ群は７．３６±０．５６ｍＪ、Ｍ群は８．７３±０．４０ｍＪ、ＭＬＢ群は７．７６±０．４２ｍＪ、ＭＨＢ群は６．８３±０．３２ｍＪだった。最大点荷重および破断エネルギーは、Ｎ群と比較し他の４群全てで低下傾向であったが、有意な差はなかった。
【００４７】
（８）関節軟骨評価
８−１  関節軟骨長
軟骨長を計測した結果、脛骨外側軟骨長は、５群間に差はなかった。脛骨内側軟骨長は、Ｎ群と比較してＭ群で増加傾向だった。大腿骨外側軟骨長は、Ｎ群と比較して、Ｃ群で低下傾向、Ｍ群、ＭＨＢ群で増加傾向を示した。Ｃ群とＭ群には有意な差がみられた。大腿骨内側長は、Ｎ群と比較してＭＨＢ群で増加傾向だった。
【００４８】
８−２  軟骨面積
軟骨面積を計測した結果、脛骨外側軟骨面積は、Ｎ群と比較して、Ｃ群、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で増加傾向だった。脛骨内側軟骨面積は、Ｎ群と比較して、Ｃ群で低値だった。一方、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群は高値を示し、Ｃ群との間に有意な差があった。大腿骨外側軟骨面積は、Ｎ群と比較して、Ｃ群で低値だった。一方、ＭＨＢ群で有意に増加した。大腿骨内側軟骨面積は、Ｎ群と比較して、ＭＭＨＢ群で有意に増加した。一方、ＭＬＢ群は増加傾向があった。
【００４９】
８−３  関節軟骨厚
関節軟骨厚は、軟骨長および軟骨面積から算出した。また、大腿部遠位部および脛骨近位部、外側関節軟骨および内側関節軟骨の平均軟骨厚も算出した。脛骨外側軟骨厚は、５群間に差はみられなかった。脛骨内側軟骨厚は、Ｎ群と比較して、Ｃ群で低値だった。一方、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群は高値を示し、Ｃ群とＭＬＢ群との間に有意な差があった。大腿骨外側軟骨厚は、Ｎ群と比較して、Ｃ群で低値だった。一方、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で増加傾向だった。大腿骨内側軟骨厚は、Ｎ群と比較して、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で有意に増加した。上記４部位を組み合わせて評価を行った結果、外側の軟骨厚は、５群間で差はみられなかった。内側の軟骨厚は、Ｎ群と比較して、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で増加傾向だった。大腿骨遠位部の軟骨厚は、Ｎ群と比較しＭ群で差はなかったが、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で有意に増加した。また、脛骨近位部の軟骨厚は５群間に有意な差はなかったが、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群で増加傾向だった。
【００５０】
８−４  軟骨変性スコア
脛骨外側の関節軟骨において軟骨変性の程度を評価し、ＯＡＲＳＩ評価に準じ評価した。各群の平均軟骨変性スコアは、Ｎ群は２．３３、Ｃ群は３．２５、Ｍ群は５．２５、ＭＬＢ群は２．２５、ＭＨＢ群は３．３３だった。Ｍ群でスコアが高かったが、ＭＬＢ群、ＭＨＢ群ではスコアが低下していた。
【００５１】
８−５  関節腔域
関節の外側および内側の関節腔域を測定した。外側関節腔域は、Ｎ群は７５．１９±１０．９０ｍｍ２、Ｃ群は１２８．００±１８．７９ｍｍ２、Ｍ群は７９．８８±１１．８７ｍｍ２、ＭＬＢ群は１１７．５８±２．４６ｍｍ２、ＭＨＢ群は１４１．２８±４１．９９ｍｍ２だった。また、内側関節腔域は、Ｎ群は９５．４２±１１．８８ｍｍ２、Ｃ群は１２３．６１±４２．８３ｍｍ２、Ｍ群は７６．２８±１３．６２ｍｍ２、ＭＬＢ群は１０４．５３±１７．８２ｍｍ２、ＭＨＢ群は１６５．５８±５４．２５ｍｍ２だった。外側および内側ともに５群間に有意差はみられなかったが、両側ともＭＬＢ群、ＭＨＢ群で増加傾向であった。
【００５２】
ベタイン摂取は、骨幅には影響を与えなかったが、骨長を伸長させた。骨長を伸長させるためには、成長板軟骨の増殖と分化が必須であることから、ベタインが軟骨の分化を促進させることを示す。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明の組成物は、軟骨の増殖および分化の促進に有用である。
【図１】
2015160817.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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