(57)【要約】【課題】シート状細胞培養物を容易に取り出すことができるシート状細胞培養物保存容器およびシート状細胞培養物保存容器の使用方法を提供する。【解決手段】シート状細胞培養物Ｃを載置するための培養物載置領域Ｒを有する底面３と底面３の周縁に沿って形成された周壁部４とを有すると共に培養物載置領域Ｒに開口部５が形成され且つシート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓと共に収容するための培養物収容容器１と、開口部５を介して培養物収容容器１の内部と連通する連通容器とを備え、開口部５を通して連通容器から培養物収容容器１内へ保存液Ｓを流入させることにより培養物載置領域Ｒに載置されているシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓ中に浮遊するシート状細胞培養物保存容器。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シート状細胞培養物を載置するための培養物載置領域を有する底面と前記底面の周縁に沿って形成された周壁部とを有すると共に前記培養物載置領域に開口部が形成され且つシート状細胞培養物を保存液と共に収容するための培養物収容容器と、
前記開口部を介して前記培養物収容容器の内部と連通する連通容器と、
を備え、
前記開口部を通して前記連通容器から前記培養物収容容器内へ前記保存液を流入させることにより前記培養物載置領域に載置されている前記シート状細胞培養物が前記保存液中に浮遊するシート状細胞培養物保存容器。
【請求項２】
前記連通容器は、前記培養物収容容器を内包すると共に前記培養物収容容器の底面よりも下方に配置された底面と前記培養物収容容器の周壁部よりも外側に配置された周壁部とを有し且つ前記開口部を介して前記培養物収容容器の内部と連通する外側容器を有する請求項１に記載のシート状細胞培養物保存容器。
【請求項３】
前記培養物収容容器は、前記外側容器に対して位置が固定されており、前記シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させた後に元に戻す、あるいは、前記外側容器に新たに前記保存液を添加して前記外側容器における水位を前記培養物収容容器における水位よりも一時的に上昇させることにより、前記外側容器内の前記保存液が前記開口部を通して前記培養物収容容器内へ流入する請求項２に記載のシート状細胞培養物保存容器。
【請求項４】
前記培養物収容容器は、前記外側容器に対して上下方向に移動可能に配置され、
前記外側容器に対して前記培養物収容容器を押し下げて前記外側容器における水位を前記培養物収容容器における水位よりも一時的に上昇させることにより、前記外側容器内の前記保存液が前記開口部を通して前記培養物収容容器内へ流入する請求項２に記載のシート状細胞培養物保存容器。
【請求項５】
前記連通容器は、前記開口部を介し前記培養物収容容器内に連通して内部が前記保存液で満たされると共に内部容積を変化させる可動部を有する密閉室を有し、
前記可動部により前記密閉室の内部の容積を縮小することで前記密閉室内の前記保存液が前記開口部を通して前記培養物収容容器内に流入する請求項１に記載のシート状細胞培養物保存容器。
【請求項６】
シート状細胞培養物を載置するための培養物載置領域を有する底面と前記底面の周縁に沿って形成された周壁部とを有すると共に前記培養物載置領域に開口部が形成された培養物収容容器と、前記開口部を介して前記培養物収容容器の内部と連通する連通容器と、を備えるシート状細胞培養物保存容器の前記培養物収容容器にシート状細胞培養物を保存液と共に収容し、
前記開口部を介して前記連通容器から前記培養物収容容器内へ前記保存液が流入させることにより前記培養物載置領域に載置されている前記シート状細胞培養物が前記保存液中に浮遊するシート状細胞培養物保存容器の使用方法。
【請求項７】
前記培養物収容容器は、前記連通容器に内包されると共に前記連通容器に対して位置が固定されており、前記シート状細胞培養物を前記保存液中に浮遊させる際に、前記シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させた後に元に戻す、あるいは、前記連通容器に新たに前記保存液を添加して前記連通容器における水位を前記培養物収容容器における水位よりも一時的に上昇させることにより、前記連通容器内の前記保存液が前記開口部を通して前記培養物収容容器内へ流入する請求項６に記載のシート状細胞培養物保存容器の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シート状細胞培養物保存容器およびシート状細胞培養物保存容器の使用方法に関し、特に、シート状細胞培養物を保存液と共に収容するシート状細胞培養物保存容器およびシート状細胞培養物保存容器の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、心筋梗塞等の重症心不全治療の解決策として再生医療が検討されている。
重症心筋梗塞等においては、心筋細胞が機能不全に陥り、さらに、線維芽細胞の増殖および間質の線維化が進行して、心不全を呈するようになる。心不全の進行に伴い、心筋細胞は傷害されてアポトーシスに陥るが、心筋細胞は殆ど細胞分裂を起こさないため、心筋細胞数が減少して、心機能の低下がさらに進むこととなる。
このような重症心不全患者に対し、サイトカイン徐放による心臓の回復を促す目的で細胞移植法が適用されることがあり、既に自己骨格筋芽細胞による臨床応用が開始されている。
【０００３】
近年、細胞移植に用いられる細胞の一例として、組織工学を応用した温度応答性培養皿を用いることによって、成体の心筋以外の部分に由来する細胞を含む心臓に適用可能な三次元に構成された細胞培養物と、その製造方法が提案されている（特許文献１）。
【０００４】
しかしながら、このような細胞培養物は比較的薄いシート状をなすため脆弱である。かかるシート状細胞培養物を培養基材から剥離するために、ピペッティングおよびスクレーピングなどによる機械的手法、またはトリプシンなどを用いて酵素処理を施す通常の付着細胞剥離法を用いると、シート状細胞培養物の構造が壊れる、あるいは細胞が損傷するおそれがある。このため、特許文献１では、温度応答性材料がコートされた培養皿で細胞を培養し、温度を変化させて同材料の疎水性を変化させることによりシート状細胞培養物を剥離する、などの方法が用いられている。しかしながら、かかる培養皿は高価であるうえ、培養皿の温度が低下するまでの待機時間または細胞種に応じた多様な剥離状態に起因して、剥離時にシート状細胞培養物構造の破壊または細胞の損傷などの問題が生じるおそれがある。
【０００５】
そこで、シート状細胞培養物の剥離を穏やかに行うために、凹部と凸部とが秩序的に配置された表面構造を有し、表面が高分子で被覆された細胞培養支持体が提案されている（特許文献２）。このような細胞培養支持体を用いて製造された細胞構造体は、液体の流れなどの流体力学的な力またはピンセットのような器具による機械的な力を用いて細胞培養支持体から穏やかに剥離することが可能となる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２００７−５２８７５５号公報
【特許文献２】特開２００９−１７８０５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、上記のように細胞培養容器から剥離されたシート状細胞培養物は、例えば、保存液が入れられたシート状細胞培養物保存容器に移されて移植作業が行われる直前まで保存容器内で保存されるため、移植時にヘラなどの移植デバイスを用いてシート状細胞培養物保存容器から取り出す際に、シート状細胞培養物はシート状細胞培養物保存容器の底面に密着するように沈んでおり、移植デバイスを保存容器の底面とシート状細胞培養物との間に挿入して取り出すことが困難であった。このため、移植デバイスを強引に挿入するなどしてシート状細胞培養物が損傷する、または取り出されたシート状細胞培養物が折れ曲がるなどして移植作業に支障をきたすおそれがあった。
【０００８】
この発明は、このような従来の問題点を解消するためになされたもので、シート状細胞培養物を容易に取り出すことができるシート状細胞培養物保存容器およびシート状細胞培養物保存容器の使用方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この発明に係るシート状細胞培養物保存容器は、シート状細胞培養物を載置するための培養物載置領域を有する底面と底面の周縁に沿って形成された周壁部とを有すると共に培養物載置領域に開口部が形成され且つシート状細胞培養物を保存液と共に収容するための培養物収容容器と、開口部を介して培養物収容容器の内部と連通する連通容器と、を備え、開口部を通して連通容器から培養物収容容器内へ保存液を流入させることにより培養物載置領域に載置されているシート状細胞培養物が保存液中に浮遊するものである。
【００１０】
ここで、連通容器は、培養物収容容器を内包すると共に培養物収容容器の底面よりも下方に配置された底面と培養物収容容器の周壁部よりも外側に配置された周壁部とを有し且つ開口部を介して培養物収容容器の内部と連通する外側容器を有することが好ましい。
【００１１】
また、培養物収容容器は、外側容器に対して位置が固定されており、シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させた後に元に戻す、あるいは、外側容器に新たに保存液を添加して外側容器における水位を培養物収容容器における水位よりも一時的に上昇させることにより、外側容器内の保存液が開口部を通して培養物収容容器内へ流入するのが好ましい。
【００１２】
また、培養物収容容器は、外側容器に対して上下方向に移動可能に配置され、外側容器に対して培養物収容容器を押し下げて外側容器における水位を培養物収容容器における水位よりも一時的に上昇させることにより、外側容器内の保存液が開口部を通して培養物収容容器内へ流入することもできる。
【００１３】
また、連通容器は、開口部を介し培養物収容容器内に連通して内部が保存液で満たされると共に内部容積を変化させる可動部を有する密閉室を有し、可動部により密閉室の内部の容積を縮小することで密閉室内の保存液が開口部を通して培養物収容容器内に流入することもできる。
【００１４】
この発明に係るシート状細胞培養物保存容器の使用方法は、シート状細胞培養物を載置するための培養物載置領域を有する底面と底面の周縁に沿って形成された周壁部とを有すると共に培養物載置領域に開口部が形成された培養物収容容器と、開口部を介して培養物収容容器の内部と連通する連通容器と、を備えるシート状細胞培養物保存容器の培養物収容容器にシート状細胞培養物を保存液と共に収容し、開口部を介して連通容器から培養物収容容器内へ保存液が流入させることにより培養物載置領域に載置されているシート状細胞培養物が保存液中に浮遊するものである。
【００１５】
ここで、培養物収容容器は、連通容器に内包されると共に連通容器に対して位置が固定されており、シート状細胞培養物を保存液中に浮遊させる際に、シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させた後に元に戻す、あるいは、連通容器に新たに保存液を添加して連通容器における水位を培養物収容容器における水位よりも一時的に上昇させることにより、連通容器内の保存液が開口部を通して培養物収容容器内へ流入することが好ましい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、シート状細胞培養物を容易に取り出すことができるシート状細胞培養物保存容器およびシート状細胞培養物保存容器の使用方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】この発明の実施の形態１に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す斜視図である。
【図２】実施の形態１に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示し、（Ａ）は上面図、（Ｂ）は断面図である。
【図３】実施の形態１に係るシート状細胞培養物保存容器の使用方法を示す断面図である。
【図４】実施の形態１の変形例に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す断面図である。
【図５】実施の形態１の他の変形例に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す断面図である。
【図６】実施の形態２に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示し、（Ａ）は上面図、（Ｂ）は断面図である。
【図７】実施の形態２の変形例に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す上面図である。
【図８】実施の形態２の他の変形例に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示し、（Ａ）は上面図、（Ｂ）は断面図である。
【図９】実施の形態３に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す断面図である。
【図１０】実施の形態３に係るシート状細胞培養物保存容器の使用方法を示す断面図である。
【図１１】実施の形態４に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す断面図である。
【図１２】実施の形態４の変形例に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す断面図である。
【図１３】実施の形態４の他の変形例に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す断面図である。
【図１４】メッシュ素材の生地で覆われた開口部を示す斜視図である。
【図１５】開閉弁で覆われた開口部を示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、この発明の実施の形態を添付図面に基づいて説明する。
実施の形態１
図１に、実施の形態１に係るシート状細胞培養物保存容器の構成を示す。このシート状細胞培養物保存容器は、シート状細胞培養物を保存液Ｓと共に収容するための培養物収容容器１と、培養物収容容器１の外側に配置された外側容器２とを有する。
【００１９】
図２（Ａ）および（Ｂ）に、シート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓと共に収容したシート状細胞培養物保存容器を示す。
培養物収容容器１は、上部が開放された円筒形状で、いわゆるシャーレのような形状を有する。培養物収容容器１は、シート状細胞培養物Ｃを載置するための培養物載置領域Ｒを有する底面３と、底面３の周縁に沿って形成された周壁部４とを有する。
【００２０】
ここで、培養物載置領域Ｒとは、シート状細胞培養物Ｃが載置される領域を仮想的に設定したものである。このため、培養物載置領域Ｒは、シート状細胞培養物Ｃの大きさおよび種類などに応じて位置および範囲が変更されるものであり、例えば、底面３の中央部付近に設定することができる。
また、培養物載置領域Ｒ内には、複数の開口部５が形成されている。これにより、複数の開口部５をシート状細胞培養物Ｃと重なるように配置することができる。なお、培養物収容容器１内の保存液Ｓの液揺れなどに応じてシート状細胞培養物Ｃの位置は移動されることがあるため、培養物載置領域Ｒを底面３全体にわたって設定すると共に複数の開口部５を底面３全体にわたって形成し、培養物収容容器１内でシート状細胞培養物Ｃの位置が移動しても、シート状細胞培養物Ｃの直下にいずれかの開口部５が存在するように配置することが好ましい。また、複数の開口部５は、それぞれシート状細胞培養物Ｃが開口部５内に大きく入り込まない程度の径で形成されることが好ましく、例えば０．１ｍｍ〜２．０ｍｍの径で形成される。
【００２１】
外側容器２は、培養物収容容器１と同様にシャーレのような形状を有し、その中央部に培養物収容容器１を内包している。また、外側容器２は、培養物収容容器１の底面３よりも下方に配置された底面６と、培養物収容容器１の周壁部４よりも外側に配置された周壁部７とを有し、培養物収容容器１と外側容器２とを接続する固定部８により外側容器２に対して培養物収容容器１の位置が固定されている。このように、外側容器２に対して間隔を開けて培養物収容容器１が配置されることにより、外側容器２内には複数の開口部５を介して培養物収容容器１の内部と連通し且つ培養物収容容器１の外側に保存液Ｓを溜めるための液溜め部９が形成される。すなわち、液溜め部９は、培養物収容容器１の周壁部４と底面３を外側から覆うように形成されており、周壁部４の上部と周壁部７の上部の間に環状の受け入れ口１０を有する。
ここで、外側容器２は、複数の開口部５を介して培養物収容容器１の内部と連通しており、本発明の連通容器を構成するものである。
【００２２】
このように、複数の開口部５を介して互いに連通する培養物収容容器１内と外側容器２内には保存液Ｓが収容される。さらに、保存液Ｓが収容された培養物収容容器１内には、シート状細胞培養物Ｃが収容される。
なお、培養物収容容器１に収容されるシート状細胞培養物Ｃは、シート状に培養された細胞であればよく、特に限定されるものではないが、例えば、筋芽細胞（例えば、骨格筋芽細胞）、心筋細胞、線維芽細胞、滑膜細胞、上皮細胞、内皮細胞などが挙げられる。
【００２３】
次に、シート状細胞培養物保存容器の使用方法について説明する。
まず、細胞培養容器などでシート状に培養されたシート状細胞培養物Ｃは、細胞培養容器から剥離された後、シート状細胞培養物保存容器の培養物収容容器１に移されて、例えば細胞移植作業の直前まで、培養物収容容器１内において保存液Ｓと共に保存される。培養物収容容器１内に移されたシート状細胞培養物Ｃは、保存液Ｓ中に沈み、図２（Ａ）および（Ｂ）に示すように、培養物収容容器１の底面３上に設定された培養物載置領域Ｒに載置される。
【００２４】
一般的に、シート状細胞培養物Ｃは、ヘラなどの移植デバイスを用いて培養物収容容器１内から取り出されるが、上記のようにシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓ中に沈んで底面３上に載置されると、移植デバイスをシート状細胞培養物Ｃと底面３との間に挿入して取り出すことが困難となる。
【００２５】
そこで、作業者は、シート状細胞培養物Ｃを培養物収容容器１内から取り出す際に、図３（Ａ）に示すように、シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させる。これにより、培養物収容容器１内の保存液Ｓが、培養物収容容器１の上部から外側容器２の受け入れ口１０を介して液溜め部９内へと移される。
ここで、外側容器２の周壁部７は、培養物収容容器１の周壁部４よりも高く伸びていることが好ましい。これにより、培養物収容容器１内から外側容器２内に移される保存液Ｓが、外側容器２の周壁部７で確実に受け止められるため、保存液Ｓを減じることなく確実に外側容器２に移すことができる。また、培養物収容容器１が外側容器２の中央部に内包されているため、外側容器２の液溜め部９が培養物収容容器１を囲むように形成されており、シート状細胞培養物保存容器をいずれの方向に傾斜させても、培養物収容容器１内の保存液Ｓを外側容器２内に移すことができる。
【００２６】
続いて、作業者が、傾斜させたシート状細胞培養物保存容器を元の状態に戻すと、図３（Ｂ）に示すように、外側容器２における水位Ｌ１が培養物収容容器１における水位Ｌ２よりも上昇される。このため、図３（Ｃ）に示すように、外側容器２における水位Ｌ１と培養物収容容器１における水位Ｌ２が一致するまで、外側容器２内の保存液Ｓが、複数の開口部５を通して培養物収容容器１内へ穏やかに流入する。
ここで、複数の開口部５は、シート状細胞培養物Ｃが載置された培養物載置領域Ｒ内に形成されている。このため、複数の開口部５を通して保存液Ｓが外側容器２から培養物収容容器１内へ穏やかに流入することにより、その保存液Ｓが培養物載置領域Ｒに載置されているシート状細胞培養物Ｃの裏面側を徐々に押し上げ、シート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に浮遊させることができる。
【００２７】
これにより、保存液Ｓ中に浮遊したシート状細胞培養物Ｃと培養物収容容器１の底面３との間には、移植デバイスＤを挿入するための隙間Ｇが生じるため、図３（Ｄ）に示すように、移植デバイスＤをシート状細胞培養物Ｃと培養物収容容器１の底面３との間にスムーズに挿入することができる。
なお、複数の開口部５は、シート状細胞培養物Ｃの全面に重なるように配置されるのが好ましいが、シート状細胞培養物Ｃの一部と重なるように配置されてもよい。複数の開口部５がシート状細胞培養物Ｃの一部と重なる場合でも、シート状細胞培養物Ｃの少なくとも一部を浮遊させることができる。シート状細胞培養物Ｃの一部のみが浮遊する場合でも、その一部分を起点として移植デバイスＤをシート状細胞培養物Ｃと底面３との間に挿入していくことができる。
【００２８】
このようにして、移植デバイスＤ上に載せられたシート状細胞培養物Ｃが、培養物収容容器１内から取り出されて、細胞移植に供される。
【００２９】
本実施の形態によれば、培養物収容容器１と外側容器２との間に生じた水位差により保存液Ｓを培養物収容容器１内に穏やかに流入させるため、シート状細胞培養物Ｃを損傷することなく保存液Ｓ中に浮遊させることができる。また、シート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に浮遊させることで、シート状細胞培養物Ｃの折れ曲がりを抑制し、全体を広げた状態でシート状細胞培養物Ｃと培養物収容容器１の底面３との間に隙間Ｇを形成することができる。さらに、シート状細胞培養物保存容器を傾斜させるだけでシート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に容易に浮遊させることができ、シート状細胞培養物Ｃと培養物収容容器１の底面３との隙間Ｇに移植デバイスＤをスムーズに挿入することができる。これにより、シート状細胞培養物Ｃの損傷を抑制すると共に全体を広げた状態でシート状細胞培養物Ｃが取り出されるため、細胞移植作業を妨げることなく円滑に進行することができる。
【００３０】
なお、上記の実施の形態によれば、シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させた後に元に戻すことで外側容器２における水位Ｌ１を培養物収容容器１における水位Ｌ２よりも一時的に上昇させたが、外側容器２と培養物収容容器１との間に水位差が生じればよく、これに限られるものではない。
【００３１】
例えば、図２（Ａ）および（Ｂ）に示すシート状細胞培養物保存容器に対して、図４に示すように、ピペットＰなどを用いて外側容器２の液溜め部９内に新たに保存液Ｓを添加して、外側容器２における水位Ｌ１を培養物収容容器１における水位Ｌ２よりも一時的に上昇させることができる。これにより、外側容器２内の保存液Ｓが複数の開口部５を通して培養物収容容器１内に穏やかに流入し、培養物収容容器１内のシート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に浮遊させることができる。
このように、シート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に浮遊させる際に、シート状細胞培養物保存容器を傾斜させる必要がないため、シート状細胞培養物Ｃの位置を培養物載置領域Ｒ内に安定して留めることができる。このため、シート状細胞培養物Ｃが移動して皺などが発生すること、またはシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓと共に培養物収容容器１から外側容器２に移動することがなく、シート状細胞培養物Ｃを培養物収容容器１からスムーズに取り出すことができる。
【００３２】
また、外側容器２は、図５に示すように、下部１１が培養物保存容器１の周壁部４に近接すると共に上部１２が下部１１から大きく外側に開くように形成された周壁部１３を有することができる。このため、液溜め部９の受け入れ口１０が、周壁部４と周壁部１３の上部１２との間に幅広に形成され、受け入れ口１０から下方に延びる液溜め部９の一部分が、周壁部４と周壁部１３の下部１１との間に細く形成されることになる。
これにより、シート状細胞培養物保存容器を傾斜させた際に、培養物保存容器１内の保存液Ｓが幅広に形成された受け入れ口１０内に確実に受容されるため、保存液Ｓを減じることなく確実に外側容器２に移すことができる。また、傾斜させたシート状細胞培養物保存容器を元の状態に戻した際に、受け入れ口１０内に受容された保存液Ｓが、液溜め部９の細く形成された部分を徐々に通過するため、保存液Ｓを培養物保存容器１内に時間をかけて流入させることができ、これによりシート状細胞培養物Ｃを長時間にわたって浮遊させることができる。このため、シート状細胞培養物Ｃと培養物収容容器１の底面３との間に移植デバイスＤを着実に挿入することができる。
【００３３】
実施の形態２
実施の形態１では、外側容器２の中央部に内包されるように培養物収容容器１を配置したが、培養物収容容器１は外側容器に内包されていればよく、これに限られるものではない。
【００３４】
例えば、図６（Ａ）および（Ｂ）に示すように、培養物収容容器１を一方に片寄るように内包する外側容器２１を設けることができる。この外側容器２１は、培養物収容容器１の底面３よりも下方に配置された底面２２と、培養物収容容器１の周壁部４の半面に対してその外側に配置された壁部２３とを有する。すなわち、底面２２は培養物収容容器１の底面３の全体を覆うように配置され、壁部２３は培養物収容容器１の周壁部４の半面を覆うように配置されている。また、外側容器２１は、複数の開口部５を介して培養物収容容器１の内部と連通し、その内部には保存液Ｓが収容されている。これにより、外側容器２１と培養物収容容器１との間には、保存液Ｓを溜めるための液溜め部２４が形成される。この液溜め部２４は、培養物収容容器１の底面３全体を覆うと共に周壁部４の半面を覆うように形成されており、周壁部４の上部と壁部２３の上部との間に受け入れ口２５を有する。
【００３５】
次に、図６（Ａ）および（Ｂ）に示すシート状細胞培養物保存容器の使用方法について説明する。
シート状細胞培養物保存容器からシート状細胞培養物Ｃを取り出す際には、シート状細胞培養物保存容器は、外側容器２１の壁部２３側を下方に且つ壁部２３の反対側を上方にするように一旦傾斜され、培養物収容容器１内の保存液Ｓが受け入れ口２５を介して外側容器２１の液溜め部２４内に移された後、元の状態へと戻される。これにより、外側容器２１における水位が培養物収容容器１における水位よりも上昇されるため、外側容器２１内の保存液Ｓが複数の開口部５を通して培養物収容容器１内に流入する。
【００３６】
この時、液溜め部２４は、培養物保存容器１の周壁部４の半面のみを覆うように形成されており、培養物収容容器１から移された保存液Ｓは、液溜め部２４の奥部２４ａでせき止められて、その全てが複数の開口部５へと向けられる。このため、外側容器２１内に移された保存液Ｓを損失なく複数の開口部５を通して培養物収容容器１内に流入させることができ、シート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に確実に浮遊させることができる。
【００３７】
本実施の形態によれば、液溜め部２４が培養物保存容器１の周壁部４の半面のみを覆うように形成されているため、シート状細胞培養物保存容器を一旦傾斜させた後に元に戻した際に、外側容器２１内に移された保存液Ｓを損失なく複数の開口部５へと向かわせることができ、培養物収容容器１内に収容されたシート状細胞培養物Ｃを確実に浮遊させることができる。
【００３８】
なお、培養物収容容器１の周壁部４の縁部には、外側容器２１の壁部２３に対向する位置に、保存液Ｓを外側容器２１の受け入れ口２５に注ぎ入れるための注ぎ口を設けることが好ましい。例えば、図７に示すように、三角形状の横断面を有し、先端部に向かって側部が収束する注ぎ口２６を設けることができる。これにより、シート状細胞培養物保存容器を傾斜した際に、培養物収容容器１内の保存液Ｓを容易に外側容器２１内に移すことができる。また、培養物収容容器１内の保存液Ｓを注ぎ口２６の先端部から外側容器２１内に狭い範囲で注ぎ入れることができるため、外側容器２１の受け入れ口２５を小さく形成することができる。このように、受け入れ口２５を小さく形成することで、外側容器２１内に移された保存液Ｓをさらに損失なく複数の開口部５に向かわせることができ、培養物収容容器１内に収容されたシート状細胞培養物Ｃをより確実に浮遊させることができる。
【００３９】
また、外側容器２１は、外側容器２１の受け入れ口２５に接続し且つ培養物収容容器１の周壁部４の外周に沿って延びる液受け部を設けて、培養物収容容器１内から受け入れ口２５以外の部分に保存液Ｓが移された際に、その保存液Ｓを液受け部により受け入れ口２５まで導くのが好ましい。
例えば、図８（Ａ）および（Ｂ）に示すように、受け入れ口２５と共に培養物収容容器１の周壁部４を囲むように液受け部２７を設けることができる。この液受け部２７は、受け入れ口２５に両側から接続された底面２８と、壁部２３の両側部に接続され且つ培養物収容容器１の周壁部４の外側を囲むように配置された壁部２９とを有する。この液受け部２７が保存液Ｓを受け入れ口２５まで導くため、シート状細胞培養物保存容器をいずれの方向に傾斜させても培養物保存容器１内から外側容器２１内に保存液Ｓを移すことができる。このため、作業者は、培養物保存容器１内から外側容器２１内に保存液Ｓを移す際に、シート状細胞培養物保存容器を傾斜させる方向に気を配る必要がなく、作業を安定して進行することができる。
【００４０】
実施の形態３
実施の形態１および２では、培養物保存容器は外側容器に対して位置が固定されていたが、培養物保存容器を外側容器に対して上下方向に移動可能に配置することもできる。
【００４１】
例えば、図９に示すように、実施の形態１のシート状細胞培養物保存容器において固定部８に換えて培養物保存容器１と外側容器２とを弾性的に接続する弾性部材３１を設け、培養物保存容器１を外側容器２に対して上下方向に移動可能に配置することができる。
シート状細胞培養物保存容器からシート状細胞培養物Ｃを取り出す際には、図１０に示すように、外側容器２に対して培養物保存容器１を押し下げて外側容器２における水位Ｌ１を培養物保存容器１における水位Ｌ２よりも一時的に上昇させる。これにより、外側容器２における水位Ｌ１と培養物収容容器１における水位Ｌ２が一致するまで、外側容器２内の保存液Ｓが、複数の開口部５を通して培養物保存容器１内へ穏やかに流入し、培養物保存容器１の底面３の培養物載置領域Ｒに載置されているシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓ中に浮遊される。
【００４２】
本実施の形態によれば、シート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に浮遊させる際に、シート状細胞培養物保存容器を傾斜させる必要がないため、シート状細胞培養物Ｃの位置を培養物載置領域Ｒ内に安定して留めることができる。このため、シート状細胞培養物Ｃが移動して皺などが発生する、またはシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓと共に培養物収容容器１から外側容器２に移動することがなく、シート状細胞培養物Ｃを培養物収容容器１からスムーズに取り出すことができる。
【００４３】
実施の形態４
実施の形態１〜３では、連通容器は培養物収容容器１を内包する外側容器から構成されたが、連通容器は、開口部を介して培養物収容容器１の内部と連通していればよく、これに限られるものではない。例えば、連通容器は、複数の開口部を介し培養物収容容器内に連通して内部が保存液で満たされると共に内部容積を変化させる可動部を有する密閉室を有し、可動部により密閉室の内部の容積を縮小することで開口部を通して密閉室内の保存液を培養物収容容器内に流入させることもできる。
【００４４】
例えば、図１１（Ａ）に示すように、実施の形態１のシート状細胞培養物保存容器において外側容器２に換えて培養物保存容器１の底面３の下側に連通容器４１を配置することができる。
連通容器４１は、培養物保存容器１の底面３よりも下方に配置された底面４２と、培養物保存容器１の周壁部４の下端からの延長線上に配置された周壁部４３とを有し、底面４２と周壁部４３とが互いに接続されている。これにより、連通容器４１には、底面３、底面４２、および周壁部４３で囲まれた密閉室４４が形成され、密閉室４４は複数の開口部５を介し培養物保存容器１内に連通して内部が保存液Ｓで満たされている。
また、連通容器４１の底面４２は、伸縮可能な可動部４５から構成されており、この可動部４５を伸縮させることで密閉室４４の内部容積を変化させることができる。なお、可動部４５は、連通容器４１の底面４２の全面に形成せずに、底面４２の一部に設けてもよい。
【００４５】
シート状細胞培養物保存容器からシート状細胞培養物Ｃを取り出す際には、図１１（Ｂ）に示すように、作業者が外側から可動部４５を押圧して密閉室４４の内部容積を縮小させる。これにより、密閉室４４内の保存液Ｓが複数の開口部５を通して培養物保存容器１内に押し出され、密閉室４４内の保存液Ｓを培養物保存容器１内に流入させることができる。そして、培養物保存容器１内に流入した保存液Ｓにより、培養物保存容器１の底面３の培養物載置領域Ｒに載置されているシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓ中に浮遊される。
【００４６】
本実施の形態によれば、作業者による可動部４５の押圧に応じて密閉室４４が縮小されるため、複数の開口部５から培養物保存容器１内に流入する保存液Ｓの水圧を容易に調節することができ、シート状細胞培養物Ｃの浮遊量を容易に制御することができる。
【００４７】
なお、上記の実施の形態３では、可動部４５は、連通容器４１の底面４２に配置されたが、密閉室４４の内部容積を変化させることができればよく、これに限られるものではない。
例えば、図１２に示すように、可動部４６を連通容器４１の周壁部４７に配置することもできる。すなわち、連通容器４１は、弾性変形可能な底面４５に換えて設けられた剛性を有する底面４８と、底面４８に接続されると共に剛性を有する周壁部４７とから構成され、この周壁部４７の一部に可動部４６が配置される。シート状細胞培養物保存容器からシート状細胞培養物Ｃを取り出す際には、シート状細胞培養物保存容器を支持台の上に置いた状態で、作業者が可動部４６を横側から押圧して密閉室４４の内部容積を縮小させる。これにより、密閉室４４内の保存液Ｓを複数の開口部５を通して培養物保存容器１内へ流入させ、培養物保存容器１の培養物載置領域Ｒに載置されているシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓ中に浮遊する。
このように、シート状細胞培養物保存容器を支持台の上に置いた状態で可動部４６を押圧することができるため、シート状細胞培養物Ｃの位置を培養物載置領域Ｒ内に安定して留めることができる。このため、シート状細胞培養物Ｃが移動して皺などが発生することを抑制し、シート状細胞培養物Ｃを培養物収容容器１からスムーズに取り出すことができる。
【００４８】
また、可動部は、連通容器４１の周壁部の外側に配置することもできる。
例えば、図１３に示すように、連通容器４１が、それぞれ剛性を有する底面４９と周壁部５０とから構成され、この周壁部５０の外側に着脱自在に連結されたシリンジからなる可動部５１を配置することができる。この可動部５１は、内部に保存液Ｓを収容すると共に連通容器４１の周壁部５０の内側と連通している。すなわち、可動部５１の内部は、密閉室４４の一部を構成するものである。
シート状細胞培養物保存容器からシート状細胞培養物Ｃを取り出す際には、シート状細胞培養物保存容器を支持台の上に置いた状態で、作業者がシリンジのプランジャを押し下げることで可動部５１を押圧して可動部５１の内部の容積、すなわち密閉室４４の一部を縮小させる。これにより、可動部５１内の保存液Ｓが周壁部５０の内側に配置された密閉室４４内に供給され、押し出された密閉室４４内の保存液Ｓが複数の開口部５を通して培養物保存容器１内に流入し、培養物保存容器１の培養物載置領域Ｒに載置されているシート状細胞培養物Ｃが保存液Ｓ中に浮遊する。
【００４９】
このように、シート状細胞培養物保存容器を支持台の上に置いた状態で可動部５１を押圧することができるため、シート状細胞培養物Ｃの位置を培養物載置領域Ｒ内に安定して留めることができ、シート状細胞培養物Ｃが移動して皺などが発生することを抑制することができる。また、可動部５１を連通容器４１の周壁部５０の外側に配置することで、連通容器４１の高さを低くすることができ、これに伴いシート状細胞培養物収容容器の高さを低くすることができる。このため、細胞移植作業の妨げ、例えば作業者の腕がシート状細胞培養物保存容器の上部に接触することなどを抑制し、細胞移植作業を円滑に進めることができる。さらに、可動部５１を着脱自在に連通容器４１に連結することにより、シート状細胞培養物Ｃを取り出す時だけ可動部５１を取り付ければよく、シート状細胞培養物保存容器をコンパクトに構成することができる。
【００５０】
なお、可動部５１は、周壁部５０の外側に配置され且つ内部容積を変化させて保存液Ｓを密閉室４４内に供給できればよく、シリンジに限られるものではない。例えば、内部に保存液Ｓを収容した袋状の可動部を設けることもでき、この可動部を外側から押し潰すように押圧することにより内部容積が縮小し、保存液Ｓを密閉室４４内に注入することができる。
【００５１】
また、実施の形態１〜４において、開口部５は、連通容器から流入する保存液Ｓを通しながらも、シート状細胞培養物Ｃが開口部５内に入り込まないような構造とすることができる。
例えば、図１４に示すように、開口部５をメッシュ素材の生地６１で覆うことで、連通容器から流入する保存液Ｓを通し且つシート状細胞培養物Ｃが開口部５内に入り込まないようにすることができる。また、図１５に示すように、開口部５を開閉可能に設けられた開閉弁６２で覆うこともできる。この開閉弁６２は、連通容器から流入する保存液Ｓの水圧により開かれるもので、これにより連通容器から流入する保存液Ｓを通し且つシート状細胞培養物Ｃが開口部５内に入り込まないようにすることができる。
このように、培養物保存容器の底部に載置されたシート状細胞培養物Ｃが開口部５内に入り込むことを抑制することで、シート状細胞培養物Ｃの損傷を抑制することができる。
【００５２】
また、実施の形態１〜４において、開口部５は、円形状に形成されているが、連通容器内と培養物保存容器内とを連通することができればよく、これに限られるものではない。例えば、矩形状またはライン状に形成することができる。
また、実施の形態１〜４において、培養物収容容器の培養物載置領域Ｒには、複数の開口部５が形成されていたが、連通容器から流入する保存液Ｓによりシート状細胞培養物Ｃを保存液Ｓ中に浮遊させることができればよく、培養物載置領域Ｒに１つの開口部を形成することもできる。
【符号の説明】
【００５３】
１  培養物収容容器、２，２１  外側容器、３  底面、４  周壁部、５  開口部、６，２２，４２，４８，４９  底面、７，１３，４３，４７，５０  周壁部、８  固定部、９，２４  液溜め部、１０，２５  受け入れ口、１１  周壁部の下部、１２  周壁部の上部、２３  壁部、２６  注ぎ口、２７  液受け部、２８  底面、２９  壁部、３１  弾性部材、４１  連通容器、４４  密閉室、４５，４６，５１  可動部、６１  生地、６２  開閉弁、Ｃ  シート状細胞培養物、Ｓ  保存液、Ｒ  培養物載置領域、Ｌ１  外側容器における水位、Ｌ２  培養物収容容器における水位、Ｄ  移植デバイス、Ｇ  隙間、Ｐ  ピペット。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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