(57)【要約】      （修正有）【課題】通風又は高尿酸血症の処置に使用する為の、キサンチンオキシダーゼ阻害剤及び使用方法の提供。【解決手段】2015160847.tif 000031（Ｒ１〜Ｒ５は、Ｈ、ヒドロキシル、ニトロ、フルオロ、スルホニル、アルデヒド等）、及び2015160847.tif 000032から選択される化合物又は薬学的に許容される塩。【選択図】図１
2015160847.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の
【化１１】
2015160847.tif 000022
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、および
【化１２】
2015160847.tif 000023
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物を含む、通風又は高尿酸血症の処置に使用するための組成物。
【請求項２】
前記化合物が、
【化１３】
2015160847.tif 000024
からなる群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
さらに、第２の治療剤を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記第２の治療剤が、抗通風薬である、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記抗通風薬が、アロプリノール、ベンズブロマロン、コルヒチン、プロべネシドおよびスルフィンピラゾンからなる群から選択される、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
前記第２の治療剤が、抗炎症剤である、請求項３記載の組成物。
【請求項７】
前記第２の治療剤が、抗酸化剤である、請求項３記載の組成物。
【請求項８】
前記化合物が、経口投与に適している、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
有効量の
【化１４】
2015160847.tif 000025
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、ならびに
【化１５】
2015160847.tif 000026
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物を含む、尿酸生成又は活性酸素種生成の低下に使用するための組成物。
【請求項１０】
前記化合物が、
【化１６】
2015160847.tif 000027
からなる群から選択される、請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
有効量の
【化１７】
2015160847.tif 000028
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、ならびに
【化１８】
2015160847.tif 000029
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物を含む、細胞におけるキサンチンオキシダーゼ活性を阻害するための組成物であって、該組成物は細胞と接触されることを特徴とする、組成物。
【請求項１２】
前記化合物が、
【化１９】
2015160847.tif 000030
からなる群から選択される、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われることを特徴とする、請求項１１記載の組成物。
【請求項１４】
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われることを特徴とする、請求項１１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
通風は、高尿酸血症、すなわち、血液中における異常に高いレベルの尿酸により引き起こされる。通風は、通常、急性の炎症性関節炎および通風結節、腎臓結石又は通風腎症として表れる。通風は、先進国における成人の１−２％に悪影響を及ぼし、男性における炎症性関節症の最も一般的な症状を示す。米国では、通風性関節症が、毎年、数百万の外来患者の訪問を占める。さらに、通風および高尿酸血症は、慢性疾患、例えば、高血圧、糖尿病、メタボリックシンドロームならびに腎臓および心血管の疾患に関連する。
【０００２】
キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）は、モリブドフラビンタンパク質型のキサンチン酸化還元酵素（ＸＯＲ）である。前記ＸＯは、ヒトにおけるプリンの異化において重要な役割を果たす。前記ＸＯは、ヒポキサンチンのキサンチンへの酸化を触媒し、ついで、キサンチンの尿酸への酸化を触媒する。その一方で、活性酸素種（ＲＯＳ）、例えば、スーパーオキシドおよびＨ２Ｏ２は、このプロセス中に産生される。尿酸は、ＲＯＳによる高分子の傷害を防止するための抗酸化剤としての役割を果たす。しかしながら、尿酸の過剰産生は、高尿酸血症の原因となり、通風および他の疾患をもたらし得る。このため、正常なレベルで尿酸を維持することは、通風および関連の障害の予防のための重要な治療目的を意味する。初期の通風を有するほとんどの患者に関して、尿酸の過剰産生は、高尿酸血症の第一の要因である。
【０００３】
現在、２つ薬剤が、通風を処置するために開発されている。アロプリノールは、慢性通風に最も一般的に使用される治療であり、４０年以上の間、臨床で使用されてきている。アロプリノールは、ＸＯ活性を阻害することにより、尿酸産生を低下させ、第一選択の尿酸低下薬物療法として使用される。ヒポキサンチンの構造異性体であるアロプリノールは、ＸＯにより、オキシプリノールにヒドロキシル化される。前記オキシプリノールは、天然の酵素のＭｏ−ＯＨ基と置き換わって、還元型のモリブデン中心に密接に配位する。残念なことに、まれではあるが、アロプリノールは、２０％に近い死亡率の、生命を脅かす副作用、例えば、発熱、皮膚発疹、好酸球増加症、肝炎および腎毒性からなる過敏症候群を有する。アロプリノールは、２つの生命を脅かす皮膚病変である、スティーブンス−ジョンソン症候群（ＳＪＳ）および中毒性表皮剥離症（ＴＥＮＳ）の原因にもなる。非プリンのキサンチンオキシダーゼ阻害剤であるフェブキソスタットは、欧州および米国において、通風の管理に関して承認されてきた。フェブキソスタット治療に関連する副作用としては、血清肝臓酵素の上昇、吐き気、下痢、関節痛、頭痛および発疹があげられる。高尿酸血症および通風の処置および予防に利用可能な薬剤は、限られたままである。従って、安全で効果的なキサンチンオキシダーゼ阻害剤が必要とされる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本願明細書において、小分子のキサンチンオキシダーゼ阻害剤が提供される。通風又は高尿酸血症の処置のその使用のための方法も提供される。本願明細書に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の種類としては、下記化学構造：
【化１】
2015160847.tif 000003
の化合物およびその薬学的に許容され得る塩があげられる。これらの化合物において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、同時に水素ではなく、ならびに、Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである、その場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない。本願明細書に記載の適切なキサンチンオキシダーゼ阻害剤としては、例えば、下記化合物：
【化２】
2015160847.tif 000004
があげられる。
【０００５】
本願明細書に記載の方法に適したキサンチンオキシダーゼ阻害剤としては、下記化合物：
【化３】
2015160847.tif 000005
およびその薬学的に許容され得る塩もあげられる。
【０００６】
本願明細書において、対象における通風又は高尿酸血症を処置するための方法も提供される。対象における通風又は高尿酸血症を処置する方法は、有効量の、本願明細書に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤を、前記対象に投与することを含む。場合により、対象における通風又は高尿酸血症を処置するための方法は、さらに、第２の治療剤、例えば、抗通風薬（例えば、アロプリノール、ベンズブロマロン、コルヒチン、プロべネシド又はスルフィンピラゾン）、抗炎症剤又は抗酸化剤を、前記対象に投与することを含むことが出来る。場合により、前記化合物は、前記対象に経口で投与される。
【０００７】
本願明細書では、さらに、対象における尿酸産生および／又は活性酸素種産生を低下させるための方法が提供される。前記方法は、有効量の、本願明細書に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤を、前記対象に投与することを含む。場合により、前記尿酸産生および／又は活性酸素種産生を低下させるための方法は、さらに、通風又は高尿酸血症を有する対象を選択することを含む。
【０００８】
本願明細書では、細胞におけるキサンチンオキシダーゼ活性を阻害する方法も提供される。前記方法は、有効量の本願明細書に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤と、細胞を接触させることを含む。場合により、前記接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。場合により、前記接触は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。前記方法は、さらに、前記化合物とキサンチンオキシダーゼとを、一定期間（例えば、少なくとも１時間、少なくとも５時間、少なくとも１０時間又は１時間から２０時間）、プレインキュベートすることを含むことが出来る。場合により、前記プレインキュベートは、室温で行われることが出来る。場合により、前記プレインキュベート工程は、前記細胞を前記化合物と接触させる前に行われる。
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
有効量の
【化１１】
2015160847.tif 000006
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、および
【化１２】
2015160847.tif 000007
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物を含む、通風又は高尿酸血症の処置に使用するための組成物。
（項目２）
前記化合物が、
【化１３】
2015160847.tif 000008
からなる群から選択される、上記項目に記載の組成物。
（項目３）
さらに、第２の治療剤を含む、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目４）
前記第２の治療剤が、抗通風薬である、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目５）
前記抗通風薬が、アロプリノール、ベンズブロマロン、コルヒチン、プロべネシドおよびスルフィンピラゾンからなる群から選択される、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目６）
前記第２の治療剤が、抗炎症剤である、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目７）
前記第２の治療剤が、抗酸化剤である、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目８）
前記化合物が、経口投与に適している、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目９）
有効量の
【化１４】
2015160847.tif 000009
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、ならびに
【化１５】
2015160847.tif 000010
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物を含む、尿酸生成又は活性酸素種生成の低下に使用するための組成物。
（項目１０）
前記化合物が、
【化１６】
2015160847.tif 000011
からなる群から選択される、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
有効量の
【化１７】
2015160847.tif 000012
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、ならびに
【化１８】
2015160847.tif 000013
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物と、細胞を接触させることを含む、細胞におけるキサンチンオキシダーゼ活性を阻害する方法。
（項目１２）
前記化合物が、
【化１９】
2015160847.tif 000014
からなる群から選択される、上記項目のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、上記項目のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、上記項目のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１１Ａ）
有効量の
【化１７】
2015160847.tif 000015
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒドから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、同時に水素ではなく、ならびに、
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない）又はその薬学的に許容され得る塩、ならびに
【化１８】
2015160847.tif 000016
又はその薬学的に許容され得る塩からなる群から選択される化合物を含む、細胞におけるキサンチンオキシダーゼ活性を阻害するための組成物であって、該組成物は細胞と接触されることを特徴とする、組成物。
（項目１２Ａ）
前記化合物が、
【化１９】
2015160847.tif 000017
からなる群から選択される、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目１３Ａ）
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われることを特徴とする、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
（項目１４Ａ）
前記接触が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われることを特徴とする、上記項目のうちのいずれかに記載の組成物。
【０００９】
（摘要）
小分子のキサンチンオキシダーゼ阻害剤および通風又は高尿酸血症の処置にそれを使用するための方法が提供される。
１つ以上の実施態様の詳細は、以下の図面および記載において説明される。他の特徴、目的および利点は、前記記載および図面ならびに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、尿酸形成の初速度を測定することによるＸＯ活性についての、ＤＮＳＡの阻害作用を示すグラフである。
【図２】図２は、尿酸形成の初速度を測定することによるＸＯ活性についての、ＮＨＢＡの阻害作用を示すグラフである。
【図３】図３は、尿酸形成の初速度を測定することによるＸＯ活性についての、ＨＮＢＡの阻害作用を示すグラフである。
【図４】図４は、尿酸形成の初速度を測定することによるＸＯ活性についての、ＤＮＨＢＡの阻害作用を示すグラフである。
【図５】図５は、２０μＭの濃度で、本願明細書に記載の化合物のキサンチンオキシダーゼ阻害作用を比較するグラフである。コントロールは、添加された阻害剤が存在しない。
【図６】図６は、ＸＯ活性についての、ＤＮＳＡとＸＯとのプレインキュベートの影響を説明するグラフである。
【図７】図７は、阻害剤であるＤＮＳＡおよびＤＨＮＢと２０時間、プレインキュベートした後の、ＸＯ活性を説明するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
詳細な説明
本願明細書では、小分子のキサンチンオキシダーゼ阻害剤および、対象における通風又は高尿酸血症の処置のその使用のための方法が提供される。前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は、対象における通風又は高尿酸血症を処置するのに有効な量で投与される。
【００１２】
Ｉ．  化合物
本願明細書に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の種類は、式Ｉ：
【化４】
2015160847.tif 000018
およびその薬学的に許容され得る塩で表される。
【００１３】
式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、スルホニルおよびアルデヒド（すなわち、−ＣＨＯ）から選択される。場合により、前記スルホニルは、メチルスルホニル又はスルホン酸である。
【００１４】
又は、式Ｉにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、同時に水素ではない。
【００１５】
さらに、式Ｉにおいて、Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＯＨであり、および、Ｒ４がニトロである、その場合、Ｒ１およびＲ５が、同時に水素ではない（すなわち、前記式Ｉの化合物は、３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（ＤＨＮＢ）ではない。）。
【００１６】
式Ｉとしては、例えば、下記化合物：
【化５−１】
2015160847.tif 000019
【化５−２】
2015160847.tif 000020
があげられる。
【００１７】
本願明細書に記載の方法に有用な、更なるキサンチンオキシダーゼ阻害剤としては、下記化合物：
【化６】
2015160847.tif 000021
およびその薬学的に許容され得る塩があげられる。
【００１８】
ＩＩ．  薬学的組成物
本願明細書に記載の化合物又はその誘導体は、薬学的組成物に提供されることが出来る。意図される投与形式に応じて、前記薬学的組成物は、固体状、半固体状又は液状の剤形の形態、例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、粉末、液体又は懸濁液、好ましくは、正確な用量の単独投与に適した単位の剤形であることが出来る。前記組成物は、治療的に有効量の、本願明細書に記載の化合物又はその誘導体を、薬学的に許容され得るキャリアとの組み合わせで含むであろう。さらに、前記組成物は、他の薬剤、医薬品、キャリア又は希釈剤を含むことが出来る。薬学的に許容され得るは、生物学的に又は他に望ましくなくない材料を意味する。前記材料は、許容し得ない生物学的作用を引き起こすことなく、又は、前記薬学的組成物に含まれる他の成分と有害な方法で相互作用することなく、前記選択された化合物と共に、個体に投与されることが出来る。
【００１９】
本願明細書で使用する時、前記キャリアの用語は、任意の賦形剤、希釈剤、充填材、塩、バッファー、安定剤、可溶化剤、脂質、安定剤又は、薬剤配合での使用に関する分野において周知の他の材料を包含する。組成物での使用についてのキャリアの選択は、前記組成物に関する、意図される投与経路により決まるであろう。薬学的に許容され得るキャリアの調製およびこれらの材料を含む配合は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ｅｄ．  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｐａ．，  ２００５に記載されている。生理的に許容され得るキャリアとしては、例えば、バッファー、例えば、リン酸バッファー、クエン酸バッファーおよび他の有機酸によるバッファー；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリジン；単糖類、二糖類および他の炭化水素、例えば、グルコース、マンノースもしくはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールもしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；ならびに／又は、非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）（ＩＣＩ，  Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）（ＢＡＳＦ；Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ、ＮＪ）があげられる。
【００２０】
注射剤に適した、本願明細書に記載の化合物又はその誘導体を含む組成物は、生理的に許容され得る無菌の水溶液もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液又はエマルジョンならびに無菌の注射可能な溶液もしくは分散液内に再構成するための無菌の粉末を含むことが出来る。適切な水性および非水性のキャリア、希釈剤、溶媒又は媒体としては、例えば、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの適切な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）および注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルがあげられる。適切な流動性が、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用により、分散液の場合には必要な粒径の維持により、および、界面活性剤の使用により、維持されることが出来る。
【００２１】
これらの組成物は、補助剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含むことも出来る。微生物の活動の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等により促進されることが出来る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム等が含まれることも出来る。注射可能な剤形の持続性吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用により、およそもたらされることが出来る。
【００２２】
本願明細書に記載の化合物又はその誘導体の経口投与に関する固体状の剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末および顆粒があげられる。このような固体状の剤形では、本願明細書に記載の化合物又はその誘導体は、少なくとも１つの不活性な慣例の賦形剤（又はキャリア）、例えば、クエン酸ナトリウム、第二リン酸カルシウム又は（ａ）充填材もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、（ｂ）バインダー、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖およびアカシア、（ｃ）湿潤剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカのデンプン、アルギン酸、特定の複雑ケイ酸塩および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶液遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイトならびに（ｉ）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体状のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム又はそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合には、前記剤形は、緩衝剤を含むことも出来る。
【００２３】
類似の種類の固体状の組成物は、賦形剤、例えば、ラクトース又は乳糖および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟充填ゼラチンカプセルおよび硬充填ゼラチンカプセルにおける充填剤として使用されることも出来る。
【００２４】
固体状の剤形、例えば、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶コーティングおよび当該分野において公知の他のものにより調製されることが出来る。前記剤形は、乳白剤を含むことができ、遅延性の方法で腸管の特定部分に、活性な化合物または組成物を放出する、このような組成物であることも出来る。使用されることが出来る埋め込み組成物は、例えば、ポリマー性物質およびワックスである。前記活性な化合物は、マイクロ−被包性の形態であることもでき、適切な場合、１つ以上の上記賦形剤を含む。
【００２５】
本願明細書に記載の化合物又はその誘導体の経口投与に関する液体状の剤形としては、薬学的に許容され得るエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル剤があげられる。前記活性な化合物に加えて、前記液体状の剤形は、当該分野において一般的に使用される不活性な希釈剤、例えば、水もしくは他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル、具体的には、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ひまし油、ゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル又はこれらの物質の混合物等を含むことが出来る。
【００２６】
このような不活性な希釈剤に加えて、前記組成物は、更なる薬剤、例えば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤又は芳香剤を含むことも出来る。
【００２７】
懸濁液は、前記活性な化合物に加えて、更なる薬剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、ベントナイト、寒天、トラガント又はこれらの物質の混合物等を含むことが出来る。
【００２８】
直腸投与に関する、本願明細書に記載の化合物又はその誘導体の組成物は、場合により、坐剤である。前記坐剤は、前記化合物を、適切な非刺激性の賦形剤又はキャリア、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコールもしくは坐剤ワックスと混合することにより調製されることが出来る。前記坐剤ワックスは、常温で固体状であるが、体温では液体状であるため、直腸又は膣腔において溶け、前記活性な化合物を放出する。
【００２９】
本願明細書に記載の化合物又はその誘導体の局所投与に関する剤形としては、軟膏、粉末、スプレーおよび吸入剤があげられる。本願明細書に記載の化合物又はその誘導体は、必要とされ得る場合、生理的に許容され得るキャリアおよび任意の保存剤、バッファー又は噴射剤と、無菌条件下で混合される。点眼剤、軟膏、粉末および溶液も、前記組成物の範囲内であると検討される。
【００３０】
前記組成物は、１つ以上の本願明細書に記載の化合物と、薬学的に許容され得るキャリアとを含むことが出来る。本願明細書で使用する時、薬学的に許容され得る塩の用語は、正当な医療判断の範囲内にあり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等なしに、対象の組織との接触に使用するのに適しており、妥当な利益／リスク比と釣り合っており、ならびに、本願明細書に記載の化合物、可能であれば、両性イオン型のその意図された用途に有効である、本願明細書に記載の化合物又はその誘導体のそれらの塩を意味する。前記塩の用語は、本願明細書に記載の化合物の、比較的に非毒性の無機および有機の酸付加塩を意味する。これらの塩は、前記化合物の単離および精製中に、又は、その遊離塩基型における精製化合物を、適切な有機もしくは無機酸と別々に反応させ、これにより形成された塩を単離することにより、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製されることが出来る。典型的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリル酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、メタンスルホン酸塩、ラウリル硫酸塩等があげられる。これらは、アルカリ金属およびアルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等および非毒性のアンモニウム、四級アンモニウムに基づくカチオンならびにアミンカチオン、例えば、制限されず、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン等を含むことが出来る。少なくとも本願明細書に教示の組成物に関して、参照により組み込まれる、Ｓ．Ｍ．  Ｂａｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．（１９７７）６６，  １を参照のこと。
【００３１】
本願明細書に記載の化合物および組成物又はその薬学的に許容され得る塩の投与は、治療的に有効量の、本願明細書に記載の化合物および組成物又は本願明細書に記載のその薬学的に許容され得る塩を使用して、障害の処置に有効な期間に行われることが出来る。本願明細書に記載の化合物および組成物又は本願明細書に記載のその薬学的に許容され得る塩の有効量は、当業者により決定されることができ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約０．５から約２００ｍｇ／ｋｇの、哺乳類についての典型的な投与量を含み、１回の投与又は個々の分割された用量、例えば、１日あたり１から４回の形式で投与されることが出来る。又は、前記投与量は、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約０．５から約１５０ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約０．５から１００ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約０．５から約７５ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約０．５から約５０ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約０．５から約２５ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約１から約２０ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約１から約１０ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約２０ｍｇ／ｋｇ、１日あたりに活性な化合物の体重あたり約１０ｍｇ／ｋｇ又は１日あたりに活性な化合物の体重あたり約５ｍｇ／ｋｇであることが出来る。任意の具体的な対象に関する具体的な用量レベルおよび投与頻度は、変動されることができ、各種の要因、例えば、使用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および活性の長さ、対象の人種、年齢、体重、全体的な健康、性別および食事、投与の方式およびタイミング、排出速度、薬剤の組み合わせならびに具体的な症状の重症度によるであろうことを、当業者は理解するであろう。
【００３２】
ＩＩＩ．  前記化合物の製造方法
本願明細書に記載の化合物は、有機合成の当業者に公知の各種の方法又は当業者に理解されるそれらのバリエーションで調製されることが出来る。本願明細書に記載の化合物は、容易に入手できる開始材料から調製されることが出来る。最適な反応条件は、使用される具体的な反応物質又は溶媒により変動し得るが、このような条件は、当業者により決定されることが出来る。
【００３３】
本願明細書に記載の式Ｉおよび前記化合物のバリエーションは、各化合物に関して記載される種々の組成の追加、削除又は移動を含む。同様に、１つ以上のキラル中心が分子に存在する場合、前記分子のキラリティーは、変化されることが出来る。さらに、化合物合成は、種々の化学基の保護および脱保護に影響を与えることが出来る。前記保護および脱保護の使用ならびに適切な保護基の選択は、当業者により決定されることが出来る。前記保護基の化学的性質は、例えば、参照により組み込まれる、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ４ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ２００６に見出されることが出来る。
【００３４】
本願明細書に記載の化合物を産生する反応は、溶媒において行われることが出来る。前記溶媒は、有機合成の当業者により選択されることが出来る。溶媒は、前記開始材料（反応物質）、中間体又は生成物と、前記反応が行われる条件、すなわち、温度および圧力下において、実質的に非反応性であることが出来る。反応は、１つの溶媒において、又は、２つ以上の溶媒の混合物で行われることが出来る。生成物又は中間体の形成は、当該分野において公知の任意の適切な方法に基づいてモニターされることが出来る。例えば、生成物の形成は、分光学的手段、例えば、各磁気共鳴分光測定法（例えば、１Ｈもしくは１３Ｃ）、赤外分光測定法、分光法（例えば、ＵＶ−可視）又は質量分析により、又は、クロマトグラフィー、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィーによりモニターされることが出来る。
場合により、本願明細書に記載の化合物は、商業的な供給元から取得されることが出来る。前記化合物は、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ）又はＯａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｉｎｃ．（Ｗｅｓｔ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）から取得されることが出来る。
【００３５】
ＩＶ．  使用方法
対象における通風および高尿酸血症を処置又は予防をする方法が提供される。前記方法は、有効量の、本願明細書に記載の１つ以上の化合物又は組成物又はその薬学的に許容され得る塩を、前記対象に投与することを含む。前記「有効量」の表現は、方法における化合物の量を説明するのに使用される場合、所望の薬理的効果又は他の効果を達成する化合物の量、例えば、尿酸産生減少をもたらす量を意味する。本願明細書に記載の化合物および組成物又はその薬学的に許容され得る塩は、ヒト、例えば、制限されず、小児および老人の集合ならびに動物、例えば、獣医用途において、通風又は高尿酸血症を処置するのに有用である。場合により、前記方法は、上昇した尿酸レベルに関連する症状、例えば、慢性通風性関節症、急性の炎症性関節症、尿酸腎症、腎臓結石又は通風結節を処置するのに使用されることが出来る。
【００３６】
本願明細書では、さらに、対象における尿酸産生および／又は活性酸素種産生を低下させる方法が記載される。前記方法は、本願明細書に記載の１つ以上の化合物又を、前記対象に投与することを含む。場合により、前記方法は、さらに、通風又は高尿酸血症を有する対象を選択することを含むことが出来る。
【００３７】
本願明細書に記載の方法は、さらに、第２の治療剤を前記対象に投与することを含むことが出来る。このため、前記提供された組成物および方法は、１つ以上の更なる薬剤を含むことが出来る。前記１つ以上の更なる薬剤および本願明細書に記載の化合物又はその薬学的に許容され得る塩は、任意の順序、例えば、付随して、同時又は連続しての投与で投与されることが出来る。連続的な投与は、数日間隔以下の単位で、時間的に間隔をあけられることが出来る。前記方法は、前記１つ以上の更なる薬剤および／または本願明細書に記載の化合物もしくはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグの１回より多い投与を含むことも出来る。前記１つ以上の更なる薬剤および本願明細書に記載の化合物もしくは薬学的に許容され得る塩もしくはそのプロドラッグの投与は、同一又は異なる経路および同時又は連続的によることが出来る。
【００３８】
治療剤としては、制限されず、抗通風薬があげられる。例えば、前記抗通風薬は、アロプリノール、ベンズブロマロン、コルヒチン、プロべネシド又はスルフィンピラゾンであることが出来る。治療剤としては、抗炎症剤もあげられる。適切な抗炎症剤の例としては、例えば、ステロイドおよび非ステロイドの抗炎症剤（例えば、イブプロフェンおよびプレドニゾン）があげられる。前記治療剤は、例えば、抗酸化剤であることも出来る。適切な抗酸化剤の例としては、例えば、α−トコフェロール、β−カロテン、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、カフェ酸、ルテイン、リコピン、セレン、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、ビタミンＡ、ビタミンＣおよびビタミンＥがあげられる。適切な抗酸化剤の更なる例としては、推定抗酸化植物、例えば、ブドウ種子、緑茶、コガネバナ、アメリカ人参、イチョウ等があげられる。
【００３９】
前述の治療剤のいずれかが、本願明細書に記載の組成物との任意の組み合わせで使用されることが出来る。組み合わせは、付随して（例えば、混合物）、別々にであるが同時に（例えば、同じ対象における別々の静脈ラインによる）又は連続して（例えば、まず、前記化合物又は薬剤の１つが与えられ、続けて第２のものが与えられる。）のいずれかで投与される。このため、前記組み合わせの用語は、２つ以上の薬剤の、付随して、同時又は連続しての投与を意味するのに使用される。
【００４０】
本願明細書に記載の方法および化合物は、予防的および治療的処置の両方に有用である。予防的使用に関して、治療的に有効量の、本願明細書に記載の化合物および組成物又はその薬学的に許容され得る塩は、通風又は高尿酸血症の発病前（例えば、通風又は高尿酸血症の明確なサインの前）、初期の発病中（例えば、通風又は高尿酸血症の初期サインおよび兆候に基づく）又は進行後に、対象に投与される。予防的な投与は、通風又は高尿酸血症の兆候が表れる前の数日から数年間起こることが出来る。治療的処置は、通風又は高尿酸血症が診断された後に、治療的に有効量の、本願明細書に記載の化合物および組成物又はその薬学的に許容され得る塩を、対象に投与することを含む。
【００４１】
本願明細書に記載の方法および化合物は、細胞におけるキサンチンオキシダーゼ活性を阻害するのにも有用である。前記方法は、有効量の本願明細書に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤と、細胞を接触させることを含む。場合により、前記接触は、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる。場合により、前記接触は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。
【００４２】
前記方法は、さらに、前記化合物とキサンチンオキシダーゼとを、一定期間（例えば、少なくとも１時間、少なくとも５時間、少なくとも１０時間又は１時間から２０時間）、プレインキュベートすることを含むことが出来る。場合により、前記プレインキュベートは、室温で行われることが出来る。場合により、前記プレインキュベート工程は、前記細胞を前記化合物と接触させる前に行われる（すなわち、前記化合物とキサンチンオキシダーゼとが共にインキュベートされる。）。
【００４３】
Ｖ．  キット
対象における通風又は高尿酸血症を処置又は予防をするためのキットも提供される。キットは、本願明細書に記載の化合物又は組成物のいずれかを含むことが出来る。例えば、キットは、本願明細書に記載の式Ｉの化合物又は前記化合物のいずれかを含むことが出来る。キットは、さらに、１つ以上の更なる薬剤、例えば、抗通風薬（例えば、アロプリノール、ベンズブロマロン、コルヒチン、プロべネシド又はスルフィンピラゾン）、抗炎症剤又は抗酸化剤を含むことが出来る。キットは、本願明細書に記載の化合物又は組成物のいずれかの経口製剤を含むことが出来る。さらに、キットは、前記キットの使用のための指示書（例えば、対象を処置するための説明書）、容器、前記化合物もしくは組成物を投与するための手段および／またはキャリアを含む。
【００４４】
本願明細書で使用する時、処置、処置する又は処置することの用語は、疾患又は症状の１つ以上の兆候を低下させる方法を意味する。このため、本開示の方法では、処置は、前記疾患又は症状の１つ以上の兆候の重症度の、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の低下を意味することが出来る。例えば、疾患を処置するための方法は、コントロールと比較して、対象における前記疾患の１つ以上の兆候又はサインの１０％の低下がある場合、処置であると見なされる。本願明細書で使用する時、コントロールは、未処置の症状を意味する。このため、前記低下は、自然又はコントロールのレベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は、１０％と１００％との間の任意のパーセントの低下であることが出来る。処置は、前記疾患、症状又は、前記疾患もしくは症状の兆候の治癒または完全な除去を必ずしも意味しないことが理解される。
【００４５】
本願明細書で使用する時、疾患又は障害を予防する、予防することおよび予防の用語は、対象が前記疾患又は障害の１つ以上の兆候を示し始める前又は、同兆候を示し始めるのとほぼ同時に起こす行動、例えば、組成物又は治療剤の投与を意味する。前記行動は、前記疾患又は障害の１つ以上の兆候の開始又は重症度の阻害又は遅延をする。
【００４６】
本願明細書で使用する時、減少、低下又は阻害への言及としては、コントロールのレベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上の変化があげられる。このような用語は、完全な除去を含むことが出来るが、必ずしも含む必要はない。
【００４７】
本願明細書で使用する時、対象は、哺乳類および非哺乳類の両方を意味する。哺乳類としては、例えば、ヒト；非ヒトの霊長類、例えば、類人猿およびサル；ウシ；ウマ；ヒツジ；ラット；マウス；ブタ；およびヤギがあげられる。非哺乳類としては、例えば、魚類および鳥類があげられる。
【００４８】
この出願全体を通して、種々の刊行物が参照されている。これらの刊行物の開示は、その内容において、参照によりこの出願に組み込まれる。
【実施例】
【００４９】
下記の実施例は、本開示の主題に基づく方法および結果を説明するために、以下に説明される。これらの実施例は、本願明細書に開示の主題の全ての態様を含むことを意図しておらず、むしろ典型的な方法および結果を説明する。これらの実施例は、当業者に明らかな、本願明細書に記載の主題の均等物およびバリエーションを除くことを意図していない。
【００５０】
努力は、数値（例えば、量、温度等）に関する正確さを確保するのになされたが、一部のエラーおよび偏差が、構成されるであろう。特に断らない限り、部は、重量部であり、温度は、℃であるか、又は、室温であり、圧力は、大気圧であるか、又は、大気圧付近である。反応条件、例えば、成分の濃度、温度、圧力ならびに、本記載の方法から取得される生成物の純度および収量を最適化するのに使用されることが出来る他の反応範囲および条件の数多くのバリエーションおよび組み合わせが存在する。合理的でルーチンな実験のみが、このようなプロセス条件を最適化するのに必要であろう。
【００５１】
牛乳由来のキサンチンオキシダーゼ、キサンチン、アロプリノール、３−ニトロベンズアルデヒド、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド、３−ヒドロキシ−４−ニトロベンズアルデヒド、イソフタルアルデヒド（すなわち、ｍ−ベンジルジアルデヒド）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液、硝酸カリウム（ＫＮＯ２）、ポリエチレングリコール４００、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）タングストリン酸ナトリウム水和物、二酸化マンガン（ＭｎＯ２）、ジエチレン−トリアミン−ペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、ＥＤＴＡ、硫酸第一鉄アンモニウム、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、次亜塩素酸ナトリウム、ＤＰＰＨ、５，５’−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ホウ化水素ナトリウム、過硫酸カリウム、アスコルビン酸および（±）−α−トコフェロールは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から取得された。アラントキサンアミド（ＨＰＬＣによる純度＞９８％）は、Ｎａｎｊｉｎｇ  Ｃｈｅｍｌｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．（Ｎａｎｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ）から取得された。３，５−ジニトロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒドは、ＩＮＤＯＦＩＮＥ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｉｎｃ．（Ｈｉｌｌｓｂｏｒｏｕｇｈ、ＮＪ）から取得された。３，５−ジニトロサリチルアルデヒドおよびフタルジアルデヒドは、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ（Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）から取得された。３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（ＤＨＮＢ）は、ＶＷＲ  Ｉｎｃ（Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ）から取得された。
【００５２】
データは、ネガティブコントロールと比較して、平均±標準偏差（ＳＤ）として表される。統計的有意差は、スチューデントｔ−検定（両側）により決定された。Ｐ＜０．０５の値が、有意であると見なされた。
【００５３】
実施例１：ＸＯ阻害アッセイ
ＤＮＳＡ、ＮＨＢＡ、ＨＮＢＡ、ＤＮＨＢＡ、３−ニトロベンズアルデヒド、ｍ−ベンジルジアルデヒド、ｐ−ベンジルジアルデヒドおよびＤＨＮＢのキサンチンオキシダーゼ活性が、連続的な分光光度速度測定を使用して測定された。反応混合物は、６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ７．４）における尿酸および５ｍＵ／ｍＬの活性を有する２０ｎＭ  ＸＯを含み、本願明細書に記載の化合物を含むか、又は、含まないことで調製された。前記化合物とＸＯとの、２５℃で１０分間のプレインキュベート後、尿酸の形成を開始するために、５０μＭ  キサンチンが添加された。２９５ｎｍでの尿酸の吸収の増加が、モニターされた。アロプリノールが、ポジティブコントロールとして使用された。前記酵素の動態解析に関して、比較的低い濃度のキサンチンが使用された。全ての化合物、例えば、アロプリノールは、水又は水溶液に溶解された。水が、ネガティブコントロールとして使用された。
【００５４】
ＤＮＳＡは、無細胞系において効果的にＸＯ活性を阻害する
２０ｎＭ  ＸＯが、増加する濃度のＤＮＳＡ、ＤＮＨＢＡ、ＨＮＢＡおよびＮＨＢＡと混合された場合、前記尿酸形成の初速度は、濃度依存が、ＸＯ活性の低下を反映して、前記コントロールと比較して低下することを示した（図１−４）。ＤＮＳＡは、約２．５μＭのＩＣ５０値でＸＯ活性を、有意に阻害した。ＮＨＢＡに関するＩＣ５０値は、ＸＯ活性の強力な阻害を示す、５μＭであった。ＨＮＢＡおよびＤＮＨＢＡに関するＩＣ５０値は、それぞれ、１７μＭおよび２０μＭであった。
【００５５】
ＤＮＳＡおよび関連する化合物は、ＸＯ阻害の構造−活性関係を示す
複数の他の化合物によるＸＯ活性の阻害も、測定された。試験された化合物は、２つのニトロ基又は２つのアルデヒド基（−ＣＨＯ）を有する。２０μＭの濃度において、ＸＯを阻害するための各化合物の能力が、アロプリノールおよび３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（ＤＨＮＢ）のそれと比較された（図５）。これらの化合物は、類似の構造を有するが、ＸＯを阻害するためのその能力は異なった。１つ以上のニトロ基を有する化合物、例えば、ＨＮＢＡ、ＮＨＢＡ、ＤＮＳＡおよびＤＮＨＢＡは、ＸＯについて強力な阻害作用を有する。前記ジニトロ化合物であるＤＮＳＡは、前記アッセイにおいて、ＸＯについて、アロプリノールよりさらに強力な阻害作用を示した。
【００５６】
実施例２：時間−依存性阻害
ＤＮＳＡとＸＯとの動的反作用は、分光光度法により測定された。前記ＤＮＳＡの減衰は、リン酸バッファーにおける２０ｎＭ  ＸＯと２０μＭ  ＤＮＳＡとを含む系において、３６６ｎｍでモニターされた。３６６ｎｍでのＤＮＳＡの減衰係数は、１２，８３０Ｍ−１ｃｍ−１と測定された。質量分析およびＨＰＬＣによる生成物分析用の試料は、１ｍＬのリン酸バッファー（ｐＨ７．４）において、０．３Ｕ  ＸＯと４ｍｇのＤＮＳＡとを３日間混合することにより調製された。前記ＤＮＳＡ／ＸＯ試料は、４０％のアセトニトリル／水の移動相による、２５０×４．６ｍｍ、５ミクロンのＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ−１８（２）Ｌｕｎａカラムを備える、ＨＰＬＣ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＢｉｏＬｏｇｉｃ  ＤｕｏＦｌｏｗ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）により分析した。
【００５７】
ＤＮＳＡは、短期間の経時変化研究において、ＸＯを不可逆的に阻害する
ＤＮＳＡは、アロプリノールのそれと類似する、ＸＯ活性の時間−依存性阻害を示した。ＤＮＡＳがＸＯと、２５℃で、０、２、５又は１０分間プレインキュベートされた後、５０μＭ  キサンチンが、前記反応混合物に添加され、ＸＯ活性が３分間記録された。ＸＯ活性についてのＤＮＳＡの阻害作用は、プレインキュベート時間の増加とともに向上した。図６に示されるように、２０μＭ  ＤＮＳＡは、プレインキュベートなしで１０％のＸＯ活性を阻害した。しかしながら、ＤＮＳＡとＸＯとの２分のプレインキュベートは、５０％のＸＯ活性を阻害するＤＮＳＡをもたらした。ＤＮＳＡとＸＯとの１０分間のプレインキュベート後に、ＸＯ活性は、ほとんど完全に阻害された（おおよそ９５％の阻害）。加えて、プレインキュベートは、他の化合物、例えば、ＤＮＨＢＡ、ＨＮＢＡおよびＮＨＢＡのＸＯ活性についての、ＸＯ活性阻害作用を向上した。
【００５８】
ＤＨＮＢは、例えば、２０時間のインキュベート後に、ＸＯ活性の回復（すなわち、阻害作用の損失）をもたらす、そのカルボン酸に経時的に変換される。しかしながら、ＤＮＳＡとＸＯとの室温での２０時間のプレインキュベート後には、ＤＮＳＡは、カルボン酸に変換されなかった。図７に示されるように、プレインキュベートされたＸＯ／ＤＮＳＡ（５μＭ又は１０μＭ）試料は、ＸＯ活性を示さず、ＨＰＬＣ分析は、新たな成分を示さなかった。これらの結果は、ＤＮＳＡが変換されないため、そのキサンチンオキシダーゼ阻害作用を維持されたことを示す。しかしながら、ＸＯ／ＤＨＮＢ試料に関して、ＤＨＮＢは、ＤＨＮＢ−ＣＯＯＨに完全に変換されたため、ＸＯ活性の回復（すなわち、阻害作用の損失）をもたらした。
【００５９】
実施例３：マウスにおける急性毒性アッセイ
Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、群あたりに３匹のマウスを含む群にランダム化された。前記群は、ＰＥＧ４００の経口媒体溶液、２００ｍｇ／ｋｇの前記試験化合物又はアロプリノール（２００ｍｇ／ｋｇ）を受けた。各マウスは、２８日間毎日、全身の健康状態をモニターされ、マウスの死亡率、体重および挙動が、記録された。マウスは、処置群内で繁殖もされた。その子孫は、健康状態、例えば、毛生に関して観察された。
【００６０】
前記マウスの群（３匹のマウス／群）は、２００ｍｇ／ｋｇ用量のＤＮＳＡ、ＮＨＢＡ、ＨＮＢＡ、ＤＮＨＢＡおよびアロプリノールを、マウスにおけるこれらの化合物の潜在的な毒性を決定するために、経口強制飼育により処置された。コントロールのマウスは、前記媒体溶液を受けた。前記動物は、３日間毎日観察された。前記処置されたマウスは、一般毒性の何らの兆候も示さなかった。
【００６１】
添付の特許請求の範囲の化合物および方法は、本願明細書に記載の特定の化合物および方法による範囲に限定されない。本願明細書に記載の特定の化合物および方法は、前記特許請求の範囲の少しの態様の説明として意図している。機能的に同等の任意の化合物および方法は、この開示の範囲内である。本願明細書に示され、記載されたものに加えて、前記化合物および方法の種々の修飾は、前記添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。さらに、ある典型的な化合物、方法ならびにこれらの化合物および方法の態様のみが、具体的に記載されているが、具体的に言及されない場合でも、他の化合物および方法ならびに前記化合物および方法の種々の特徴の組み合わせは、前記添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。このため、工程、要素、成分又は組成の組み合わせは、本願明細書に明確に言及されていることが出来る。ただし、明確に記載されていなくとも、工程、要素、成分および組成の全ての他の組み合わせが含まれる。
【図１】
2015160847.tif 000033
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図５】
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【図７】
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