(57)【要約】【課題】柿の有効利用を図るため、通常は破棄されている蔕部分において、シャックリ止めや抗菌活性以外の新たな機能性を有する有効成分を含有する薬剤および当該有効成分を抽出する抽出方法を提供する。【解決手段】柿蔕のアルコール抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤、血圧上昇抑制剤、および、柿蔕をアルコールに接触させて有効成分を抽出する抽出工程を有する柿蔕の抽出方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
柿蔕のアルコール抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤。
【請求項２】
柿蔕のアルコール抽出物を有効成分とする血圧上昇抑制剤。
【請求項３】
柿蔕をアルコールに接触させて有効成分を抽出する抽出工程を有する柿蔕の抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、柿蔕の抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤、血圧上昇抑制剤および柿蔕の抽出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
柿は、通常、柿果実や柿果実を用いた加工食品を食用とするため、広く栽培されている。柿の果実を食用とする際には、果実以外の蔕（ヘタ）などを分離して果実部分を使用していた。柿の利用については、例えば以下のことが公知である。
【０００３】
特許文献１には、柿果肉、剥いた柿皮、柿蔕を任意の配合比率で配合して加工することが記載してある。特許文献２には、未成熟柿の果実と蔕とを分離して当該蔕を除去することが記載してある。
柿の蔕部分は柿蒂（シテイ）と呼ばれ、柿蒂湯といわれる漢方薬として広く流通している。柿蒂湯の主な効能はシャックリ（吃逆）止めである。柿蒂湯に関しては、非特許文献１に、強直性間代性てんかんに対する柿蒂湯の効果について記載されている。
また、非特許文献２には、柿蔕に含まれるとされるウルソール酸、オレアノール酸に関して、虫歯菌に対する抗菌活性を有することが記載してある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２８８３７３号公報
【特許文献２】特開２００８−６３３３２号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Minami E, Shibata H, Nomoto M, Fukuda T., “Effect of shitei-to, a traditional Chinese medicine formulation, on pentylenetetrazol-induced kindling in mice.” Phytomedicine. 2000 Mar;7(1):69-72.
【非特許文献２】小西ら、「齲蝕原因菌に対する柿蔕抽出成分の抗菌効果」、日本歯科保存学雑誌 51(3), 299-307, 2008-06-30
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述したように、柿は、果実だけにとどまらず、果皮や蔕部分にも用途がある。しかし、殆どの場合が柿の果実を対象とした食用に利用されるため、特に蔕部分については、除去された後に殆どが破棄されている。
【０００７】
従って、本発明の目的は、柿の有効利用を図るため、通常は破棄されている蔕部分において、シャックリ止めや抗菌活性以外の新たな機能性を有する有効成分を含有する薬剤および当該有効成分を抽出する抽出方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは柿の蒂部分の更なる有効利用について検討した結果、柿の蔕をアルコールで処理して得られた抽出物を有効成分とする組成物が、血糖値上昇抑制作用および血圧上昇抑制作用を有することを見出した。
【０００９】
即ち、上記目的を達成するため、以下の［１］〜［３］に示す発明を提供する。
［１］柿蔕のアルコール抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤。
［２］柿蔕のアルコール抽出物を有効成分とする血圧上昇抑制剤。
［３］柿蔕をアルコールに接触させて有効成分を抽出する抽出工程を有する柿蔕の抽出方法。
【００１０】
本発明の血糖値上昇抑制剤および血圧上昇抑制剤は、柿蔕をアルコールで抽出して得られた抽出物に含まれる成分を有効成分とする。
【００１１】
血糖値上昇抑制剤は、例えば腸内でα-グルコシダーゼ阻害活性の働きを阻害し、糖の分解・吸収を阻害するα-グルコシダーゼ阻害活性を有するものであり、有効量の血糖値上昇抑制剤を摂取することで、血糖値の上昇を抑制することが期待される。
【００１２】
血圧上昇抑制剤は、例えば血圧の上昇に関与するアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）を阻害するアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有するものであり、有効量の血圧上昇抑制剤を摂取することで、血圧の上昇を抑制することが期待される。
【００１３】
本発明で使用する柿は、食用の果実として広く栽培されているものであり、入手は容易である。また、本発明は、通常は破棄されている柿の蔕部位を有効利用しているため、材料費を抑制することができる。また、アルコール抽出に際してそのまま利用可能であり、必要に応じて切断・粉砕処理を行えばよいため、取り扱いも容易である。
【００１４】
本発明で使用するアルコールは、抽出物を医薬品や食品として利用することを鑑みると、入手が容易、かつ人体に対する安全性を備えたエタノール等を用いるのがよい。
【００１５】
即ち、本発明により、破棄されていた蔕を有効利用できるとともに、簡易なアルコール抽出を行うことのみで、血糖値上昇抑制作用および血圧上昇抑制作用という新たな機能性を有する有効成分を含有する薬剤を容易に得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行った結果を示す写真図である。
【図２】薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行った結果を示す写真図である。
【図３】ＧＣ−ＭＳ分析を行った結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態を図面に基づいて説明する。
本発明は、柿の蒂部分の更なる有効利用を図るため、柿蔕をアルコールで処理して得られた抽出物を有効成分とする組成物を、血糖値上昇抑制剤或いは血圧上昇抑制剤として利用するものである。
【００１８】
本発明で使用する柿の部位は、果実以外の蔕部分である。蔕は、花弁が枯れ果実が熟したあとにも枯れずについている萼（宿存萼）のことをいう。用いられる柿の品種に特に制限はなく、分類学上でDiospyros kakiに属するものであれば何れも用いることができるが、入手が容易である等の理由から、例えば富有柿や次郎柿等とするのがよい。柿は、通常の収穫時期よりも早い時期に収穫された幼果（着果後３０〜６０日程度）、或いは、通常の収穫時期に収穫された成熟果実（着果後１５０〜１８０日程度）を利用するのがよい。収穫した柿から果実を取り除いて蔕を採取し、当該蔕を乾燥或いは非乾燥状態として利用する。蔕を乾燥する場合は、公知の手法及び装置により乾燥処理を行えばよい。また、採取された蔕は、そのままの形態で、或いは適宜切断・粉砕する等して利用する。蔕を切断・粉砕する場合は、公知の手法及び装置により切断・粉砕処理を行えばよい。
【００１９】
得られた柿蔕はアルコールによって処理される。本発明で利用できるアルコールは、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール等がよい。また、これらアルコールおよび水の混合溶液、上述した複数のアルコールおよび水を混合した溶液、或いは、上述したアルコールの複数を混合した溶液を利用してもよい。アルコールおよび水の混合比率は特に限定されるものではない。本明細書では、アルコールとして１００％エタノールを使用した場合について説明する。
【００２０】
本発明の柿蔕の抽出方法は、柿蔕をエタノールに接触させて有効成分を抽出する抽出工程を有する。当該抽出工程では、採取後に上述した処理を適宜行った柿蔕に対してエタノールを接触させ、浸漬、攪拌又は還流することにより、抽出物（抽出液）を得る。
【００２１】
抽出条件として、抽出温度に関しては、抽出に用いる溶媒の凝固点以上から沸点以下であれば任意に設定が可能であり、好ましくは柿蒂中に含まれる成分の変性や反応による消失等が生じ難く、かつ抽出効率が比較的良好な常温〜溶媒の沸点の温度範囲とするのがよい。抽出圧力に関しては、具体的には１．０〜２．５ｋｇ／ｃｍ２の範囲内で適宜設定するのがよい。柿蒂に対する溶媒の重量比率は、例えば柿蒂：溶媒を２：１〜１：５０の範囲内で任意に設定することができるが、これに限定されるものではない。抽出時間に関しては特に制限はなく、好ましくは数時間から数日とするのがよい。
【００２２】
柿蒂の抽出物は上述した溶媒及び抽出条件によって得られた抽出物（抽出液）をそのまま利用してもよいが、当該抽出液を更に精製して用いることも可能である。精製方法としては、具体的には濾紙やメンブランフィルター等を用いた濾過法、分液操作法、蒸留法、昇華法、沈殿法、再結晶化法、遠心分離法、減圧濃縮法、ｐＨ調製、塩析等の方法が挙げられ、これらの方法の１種もしくは２種以上が選択されるが、これらの手法に限定されるものではない。
【００２３】
また、得られた抽出物（抽出液）は、適当な溶媒で希釈したり、濃縮して用いてもよく、さらに減圧乾固する等して乾燥粉末としたり、ペースト状に調製してもよい。
【００２４】
このようにして調製された柿蔕の抽出物に、水、アルコール類、多価アルコール類、界面活性剤、酸、アルカリ、増粘剤、賦形剤、防腐剤等を添加した組成物とすることも可能である。当該組成物の形状として、液状である他、固形状、粉末状、顆粒状、ペレット状、ゲル状、粘液状等とすることができる。
【００２５】
当該組成物は、医薬品として経口、経腸、経粘膜、注射等により投与できる。その投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は静脈内注射、筋肉注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、上述した組成物に、さらに薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて添加することができる。投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口投与用製剤として用いる場合の該製剤中の柿蔕の抽出物の含有量は、例えば０．１〜７０質量％程度とすることが好ましい。
【００２６】
医薬として使用する場合、成人１人当たりの１日の投与量は、年齢、体重、性別、投与方法などの種々の要因によって異なるが、経口投与の場合は上記植物体又はその抽出物（固形分換算）として、例えば０．１〜５０００ｍｇを１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。
【００２７】
当該組成物は、食品として用いる場合の形態としては、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。また、前記組成物は、種々の飲料、スナック類、乳製品、調味料、でんぷん加工製品、加工肉製品等に適宜配合してもよい。
【００２８】
種々の形態の食料品を調製するには、上述した抽出物あるいは組成物に、さらに他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて添加することができる。柿蔕中の有効成分を効率よく利用するため、工業的にも用いることが容易で、食品の風味を損なわない形態として、抽出物に前記添加物を添加するのが好ましい。当該食料品中の柿蔕の抽出物の含有量は、一般的に例えば０．００２〜５質量％程度とすることが好ましい。
【００２９】
本発明において、柿蔕をエタノール等のアルコールで処理して得られた抽出物を有効成分とする組成物は、血糖値上昇抑制作用および血圧上昇抑制作用を有する。即ち、当該組成物は、柿蔕のアルコール抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤或いは血圧上昇抑制剤として利用することができる。
【００３０】
血糖値上昇抑制作用は、例えば腸内でα-グルコシダーゼ阻害活性の働きを阻害し、糖の分解・吸収を阻害するα-グルコシダーゼ阻害活性を有することにより達成される。α-グルコシダーゼ（ＡＧＨ）はデンプンが分解されて生じるマルトースなどの二糖類を分解してグルコースにする。このグルコースが血液中に入ると血糖値が上昇する。そのためＡＧＨを阻害することは、生じるグルコース量を減らし血糖値の上昇を抑制することができると考えられている。α-グルコシダーゼ阻害活性は、例えばラット小腸由来酵素を用いて評価することができる。
【００３１】
血圧上昇抑制作用は、例えば血圧の上昇に関与するアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）を阻害するアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有することにより達成される。血圧上昇には昇圧機構（レニン・アンジオテンシン系）と降圧機構（キニン・カリクレイン系）が関与しており、アンジオテンシン変換酵素は両方の系に作用する酵素である。アンジオテンシン変換酵素により、アンジオテンシンIは血管収縮作用を有するアンジオテンシンIIに変換される。さらに、同酵素は血圧を下げるブラジキニンを不活性化させる作用も有しており、これら２つの系の作用が血圧上昇に関与する。そのためアンジオテンシン変換酵素を阻害することで、血圧の上昇を抑制することができると考えられている。アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG) から切り出されてくる 3-Hydroxybutyric acid (3HB) を酵素法により検出することができる。
【００３２】
また、上述した組成物は、抗肥満作用、抗酸化活性を有する。
抗肥満効果は、腸内でβ-リパーゼの働きを阻害し、脂肪の分解・吸収を阻害するβ-リパーゼ阻害活性を有することにより達成される。抗酸化活性は、酸素が関与する有害な反応を減弱もしくは除去する活性を有する。
【実施例】
【００３３】
〔実施例１〕
富有柿および次郎柿の幼果および成熟果をそれぞれ別の時期に採取し、採取後、ただちに果皮、果実、種子、蔕部位に分けて−８０℃にて保存した。比較例として、漢方薬である「柿蔕（シテイ、中国産）」（以下、漢方薬柿蔕と称する）は市販のものを購入した（（株）中屋彦十郎薬局より入手可能）。
【００３４】
富有柿および次郎柿の幼果および成熟果において、それぞれ３．０ｇの柿蔕を３０ｍＬの１００％エタノールに接触させ、４℃にて３日間抽出した（抽出工程）。抽出液を４５〜５０℃、１８０分の条件で減圧乾固したのち、得られた抽出物を１０重量％となるように１００％エタノールに再溶解し（エタノール画分）、試料溶液とした。このとき、エタノールに不溶かつ水に可溶である成分の析出が見られた。そこでエタノール可溶成分（エタノール画分）を回収したのち、残留したエタノール不溶成分を１０重量％となるように水に再溶解した（水画分）。果皮、果実、種子についても同様の処理を行って試料溶液を作製した。
【００３５】
漢方薬柿蔕は、１００％エタノール、熱水、水、酢酸エチルを用いた抽出を行った。１００％エタノールおよび酢酸エチルを用いた抽出は、上述した富有柿および次郎柿のエタノールに準じた手法で行った。
熱水抽出については、処方に従って熱水抽出を行った。即ち、１．０ｇの柿蔕に対して１００ｍＬの割合となるように水を加え、１００℃の熱水に接触させて熱水抽出を行った。抽出後は上述の条件で減圧乾固処理を行い、１０重量％となるように水に再溶解した。
水抽出については、この熱水抽出に準じた手法で行った。
【００３６】
富有柿幼果および次郎柿幼果の蔕、果皮、種子、果実（エタノール抽出原液）について、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行った。
試料溶液をＴＬＣプレート（２０ｃｍ×２０ｃｍ、Kieselgel 60 F254、メルク社）にチャージしたのち、２時間の展開を行った（展開溶媒：クロロホルム-酢酸エチル-ギ酸＝５：４：１）。展開終了後、検出試薬を噴霧し、１１０℃にてプレートを加熱した。検出試薬は、有機化合物全般を対象とするp-アニスアルデヒドおよび抗酸化活性を検出するＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル）を用いた。発色後、呈色したスポットの観察を行った。結果を図１に示した。
【００３７】
検出試薬としてp-アニスアルデヒドを使用した場合（図１左側）、富有柿幼果および次郎柿幼果において、蔕、果皮、果実、種子のそれぞれに出現するスポットの数と色が異なっていた。これにより、蔕、果皮、果実、種子のそれぞれによって含有する成分が異なるものと認められた。
【００３８】
漢方薬柿蔕においては、エタノール、水、熱水抽出、酢酸エチル抽出で抽出された試料において、それぞれに出現するスポットの数と色が異なっていた。これにより、漢方薬柿蔕においては、抽出方法によって回収される成分は異なるものと認められた。
【００３９】
検出試薬としてＤＰＰＨを用いた場合（図１右側）、富有柿幼果、次郎柿幼果および漢方薬柿蔕において、抗酸化活性を示すスポットや強度の差異が確認された。また、富有柿幼果および次郎柿幼果においては、蔕、果皮、果実、種子のそれぞれにおいても抗酸化活性を示すスポットや強度の差異が確認された。
漢方薬柿蔕においては、ＤＰＰＨを用いた抗酸化活性の検出では、酢酸エチル抽出液に抗酸化活性を有する化合物は検出されなかったことから、抗酸化活性に関与する化合物は主に親水性化合物であることが判った。
【００４０】
〔実施例２〕
実施例１で調製した富有柿，次郎柿の柿蔕（幼果，成熟果）の試料溶液を用いて以下の実験を行った。漢方薬柿蔕は、熱水抽出を行った試料溶液を使用した。
【００４１】
それぞれの試料（エタノール抽出原液）について、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行った。結果を図２に示した。
【００４２】
検出試薬としてp-アニスアルデヒドを使用した場合（図２左側）、富有柿（成熟果実：実験例１−１、幼果：実験例２−１）、次郎柿（成熟果実：実験例３−１、幼果：実験例４−１）、漢方薬柿蔕（比較例１−１）において、それぞれに出現するスポットの数と色が異なっていた。これにより、蔕においてはそれぞれの品種によって含有する成分が異なるものと認められた。
また、富有柿、次郎柿の成熟果、幼果の比較においてもスポットの数と色に相違が見られた。これより、柿の熟度によっても蔕が含有する成分が異なるものと認められた。
【００４３】
検出試薬としてＤＰＰＨを用いた場合（図２右側）、富有柿（成熟果実：実験例１−２、幼果：実験例２−２）は、次郎柿（成熟果実：実験例３−２、幼果：実験例４−２）、漢方薬柿蔕（比較例１−２）よりも抗酸化活性を示すスポットが多く確認された。また、富有柿においても成熟果実（実験例１−２）および幼果（実験例２−２）において発色強度の差異が確認された。これにより、抗酸化活性は、品種および熟度によって異なるものと認められた。
【００４４】
〔実施例３〕
実施例１で調製した富有柿（幼果，成熟果）、次郎柿（幼果）および漢方薬柿蔕のエタノール画分および水画分について、α-グルコシダーゼ阻害活性（血糖値上昇抑制作用）を調べた。
【００４５】
酵素液は以下のようにして調製した。即ち、１．０ｇラット腸管アセトンパウダーを０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍＬに懸濁し、氷冷下にて３０分間攪拌処理を行った。その後遠心分離を行い（１２０００ｒｐｍ×１０分、４℃）、上清を粗酵素液とした。調製した酵素液は−８０℃にて保存した。
【００４６】
蒸留水０．４８ｍＬに２５０ｍＭマルトース水溶液０．４ｍＬを基質として加えた。この反応液に各抽出液（エタノール画分および水画分、終濃度：１〜２０ｍｇ／ｍＬ）０．１ｍＬを阻害剤として添加し、攪拌後３７℃で５分間プレインキュベートを行った。その後、０．０２ｍＬのα−グルコシダーゼ粗酵素液を添加し、３７℃で４０分反応を行った。反応終了後、１．０ｍＬの０．２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を添加し、反応を停止させた。同反応にて生成したグルコースはグルコースＣＩＩ−テストワコーを用いて測定した。残存活性を求めたのち５０％阻害濃度（ＩＣ５０、ｍｇ／ｍｌ）を算出した。結果を表１に示した（値が小さいほど高い活性であることを示す）。
【００４７】
【表１】
2015166317.tif 000002
【００４８】
漢方薬柿蔕については、水画分にのみ活性（ＩＣ５０＝１６．７ｍｇ／ｍｌ）が確認された。
富有柿（成熟果）の蔕については、エタノール画分（ＩＣ５０＝５．８ｍｇ／ｍＬ）、水画分（ＩＣ５０＝１５．７ｍｇ／ｍＬ）に活性が確認され、エタノール画分のほうが高い活性を有していた。
富有柿（幼果）の蔕については、エタノール画分のみに活性（ＩＣ５０＝２．５ｍｇ／ｍＬ）が確認され、これは成熟果よりも高い活性であった。
次郎柿（幼果）の蔕については、エタノール画分のみに活性（ＩＣ５０＝６．６ｍｇ／ｍＬ）が確認され、これは富有柿幼果に次いで高い活性であった。
【００４９】
以上より、富有柿（幼果）、次郎柿（幼果）の蔕については、果実、種子、果皮よりもα-グルコシダーゼ阻害活性が高いものと認められた。また、富有柿（成熟果）の蔕については、果実、果皮よりもα-グルコシダーゼ阻害活性が高いものと認められた。
【００５０】
〔実施例４〕
実施例１で調製した富有柿，次郎柿の柿蔕（幼果，成熟果）および漢方薬柿蔕の水画分について、アンジオテンシン変換酵素阻害活性（血圧上昇抑制作用）を調べた。
本試験は、血圧上昇に関与するアンジオテンシン変換酵素に対する阻害活性をエースキット−ダブルエスティー（アンジオテンシン変換酵素阻害活性測定キット）（（株）同仁化学研究所）を用いて測定し、阻害率（ＩＣ５０）を求めた。同キットは活性測定上、試料を溶解に用いる有機溶媒とその濃度に対する制限があるため、水画分のみ阻害活性を調べた。
【００５１】
試験はキットの使用方法に沿って行った。つまり、超純水で調製したアンジオテンシン変換酵素とアミノアシラーゼ混合液２０μＬ、基質溶液（3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)）２０μＬ、試料溶液２０μＬを混合し、３７℃で１時間反応させた。これに、３−ヒドロキシブチル酸デヒドロゲナーゼと補酵素の混合液２００μＬを添加して１０分間室温で反応させた。反応後４５０ｎｍの吸光度測定を行い、得られたデータをもとに阻害率を算出した。結果を表２に示した（値が小さいほど高い活性であることを示す）。
【００５２】
【表２】
2015166317.tif 000003
【００５３】
この結果、品種による活性の差はあるが、何れの柿蔕においてもアンジオテンシン変換酵素に対する阻害活性が見られた。富有柿（成熟果）にて最も高い活性が見られた。
【００５４】
〔実施例５〕
実施例１で調製した富有柿、次郎柿および漢方薬柿蔕のエタノール画分および水画分について、β-リパーゼ阻害活性（抗肥満作用）を調べた。
【００５５】
５０μＬの蛍光性のメチルウンベリフェロンオレイン酸エステル溶液に２５μＬの試料溶液（終濃度：２．５〜２５００ｍｇ／ｍＬ）を添加し、３７℃で５分間プレインキュベートした。その後、２５μＬのβ−リパーゼを添加し、３７℃で３０分間酵素反応を行った。反応終了後、５０μＬの１００ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ４．２）を添加して反応を停止させ、励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍにて、遊離した４−メチルウンベリフェロンの蛍光を測定した。残存活性を求めたのち５０％阻害濃度（ＩＣ５０、μｇ／ｍＬ）を算出した。結果を表３に示した（値が小さいほど高い活性であることを示す）。
【００５６】
【表３】
2015166317.tif 000004
【００５７】
漢方薬柿蔕については、両画分に活性が確認され、水画分（ＩＣ５０＝７．２μｇ／ｍＬ）のほうが高い阻害活性を有していた。
富有柿（成熟果）の蔕については、両画分に活性がみられたが、水画分（ＩＣ５０＝５．７μｇ／ｍＬ）のほうが高い阻害活性を有していた。
富有柿（幼果）の蔕については、両画分に活性がみられたが、水画分（ＩＣ５０＝２３．１μｇ／ｍＬ）のほうが高い阻害活性を有していた。
次郎柿（成熟果）の蔕については、両画分に活性がみられたが、水画分（ＩＣ５０＝１．７μｇ／ｍＬ）に高い阻害活性があり、試験したもののなかでは最も高い活性であった。
次郎柿（幼果）の蔕については、両画分に活性がみられ、水画分（ＩＣ５０＝６．９μｇ／ｍＬ）のほうが高い阻害活性を有していた。
【００５８】
以上より、富有柿および次郎柿の蔕には、果皮、果実、種子の何れの部位よりも高いβ-リパーゼ阻害活性を有するものと認められた。
【００５９】
〔実施例６〕
実施例１で調製した富有柿、次郎柿および漢方薬柿蔕のエタノール抽出原液について、ポリフェノール量の定量および抗酸化活性の定量を行った。
【００６０】
ポリフェノール量の定量は、フォーリン・チオカルト法を用いて測定した。各抽出液０．０９ｍＬに０．４５ｍＬの５０％フォーリン・チオカルト試薬を添加し、攪拌した。３分後、０．４５ｍＬの０．４Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を加えて攪拌後、５５℃で５分間インキュベートした。反応液を１時間放冷して気泡を除き、７６５ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき、ポリフェノール量は没食子酸を用いて検量線を作成し、試料新鮮重１．０ｇあたりの没食子酸相当量（ｍｇ−没食子酸相当量／１．０ｇ）にて算出した。
【００６１】
抗酸化活性は、褐色試験管を用いた遮光条件下で測定した。１．０ｍＬの１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）に０．５Ｍ  ＤＰＰＨエタノール溶液２．０ｍＬを添加後攪拌し、試料溶液１．０ｍＬを添加した。２４℃で２０分インキュベートした後、５２５ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき、抗酸化活性はｔｒｏｌｏｘを用いて検量線を作成し、試料新鮮重１．０ｇあたりのｔｒｏｌｏｘ相当量（μｍｏｌ−ｔｒｏｌｏｘ相当量／１．０ｇ）にて算出した。
【００６２】
それぞれの結果を表４に示した。
【００６３】
【表４】
2015166317.tif 000005
【００６４】
蔕部位ではポリフェノール量（７．２５ｍｇ−没食子酸相当量／１．０ｍｇ）、抗酸化活性（１０．０９μｍｏｌ−トロロックス相当量／１．０ｍｇ）共に、富有柿（幼果）が最も高い値を示した。また、種子、果実、果皮では富有柿（幼果）種子（ポリフェノール量：２０．４７ｍｇ、抗酸化活性：１２．４２μｍｏｌ）および次郎柿（幼果）種子（ポリフェノール量：１３．９１ｍｇ、抗酸化活性：６．１７μｍｏｌ）で高いポリフェノール量と抗酸化活性値を示した。漢方薬柿蔕は富有柿，次郎柿と比較してポリフェノール量および抗酸化活性は低かった。
【００６５】
〔実施例７〕
実施例１で調製した富有柿，次郎柿の柿蔕（幼果，成熟果）および漢方薬柿蔕のエタノール抽出液を減圧乾固して、ＧＣ−ＭＳ分析を行った。
【００６６】
ＧＣ−ＭＳ分析に際し、各試料はトリメチルシリル誘導体化（ＴＭＳ誘導体化）を行った。ＧＣ−ＭＳ分析には、ＧＣ装置としてAgilent 6890N（アジレントテクノロジー製）を使用し、カラムとしてＪ＆Ｗ  ＤＢ−５（アジレントテクノロジー製、３０ｍ×０．２５ｍｍ−ｉ．ｄ．、膜厚０．２５μｍ）を使用し、ＭＳ検出器としてAgilent 5972（アジレントテクノロジー製）を使用した。
また、ウルソール酸、オレアノール酸、ベツリン酸、β-シトステロールを同様にＴＭＳ誘導体化し、保持時間およびフラグメントイオンピークの比較を行った。結果を図３に示した。
【００６７】
ＧＣ−ＭＳ分析では富有柿および次郎柿における顕著な成分の差（ピークの相違）は見られなかった。
富有柿，次郎柿および漢方薬柿蔕を比較すると、保持時間２０．０００〜２５．０００分にて、富有柿，次郎柿の蔕にはあるが、漢方薬柿蔕にはない成分が確認された。また、漢方薬柿蔕にて８．５９８分に富有柿，次郎柿の蔕には見られないピークが確認された。このように、ＧＣ−ＭＳにて、富有柿および次郎柿と、漢方薬柿蔕とにおける含有成分の違いが示された。
尚、いずれの蔕においても、トリテルペノイド類（保持時間、ウルソール酸：２９．６８３分、オレアノール酸：２９．２０６分、ベツリン酸：２９．３２６分）とβ−シトステロール（２７．２５６分）が検出された。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明は柿蔕の抽出方法に利用でき、抽出された組成物は、血糖値上昇抑制作用および血圧上昇抑制作用を有する医薬品および食品として利用できる。
【図３】
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【図１】
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【図２】
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