(57)【要約】【課題】疾病を治療する治療レベルの薬を送達しながら、患者の副作用をも減少させることができる、新たなナノ粒子製剤及びそのようなナノ粒子及び組成物を製造する方法を提供することを目的とする。【解決手段】ビンカアルカロイドを３〜２０重量％及び生体適合性ポリマーを７０〜９７重量％含み、該生体適合性ポリマーは、ａ）ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、及びｂ）上記ａ）とポリ（乳）酸ホモポリマー又はポリ乳酸−コ−グリコール酸との組み合わせからなる群から選択され、前記ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは１５〜２０ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び４〜６ｋＤａの数平均分子量を有するポリエチレングリコールを含み、その粒径が７０〜１４０ｎｍである治療用ナノ粒子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビンカアルカロイドを３〜２０重量パーセント及び
生体適合性ポリマーを７０〜９７重量パーセント含む治療用ナノ粒子であって、
該生体適合性ポリマーは、
ａ）ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、及び
ｂ）上記ａ）とポリ（乳）酸ホモポリマー又はポリ乳酸−コ−グリコール酸との組み合わせからなる群から選択され、
前記ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、１５〜２０ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び４〜６ｋＤａの数平均分子量を有するポリエチレングリコールを含み、
その粒径が、７０〜１４０ｎｍである治療用ナノ粒子。
【請求項２】
ビンカアルカロイドが、ビノレルビン又はビンクリスチン又はそれらの医薬的に許容される塩である請求項１の治療用ナノ粒子。
【請求項３】
粒径が、８０〜１３０ｎｍである請求項１又は２の治療用ナノ粒子。
【請求項４】
ビンカアルカロイド化合物を９〜１６重量％含有する請求項１〜３のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項５】
ビンカアルカロイド化合物を３〜９重量％含有する請求項１〜４のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項６】
粒子が、室温でリン酸緩衝液中に放置した場合、治療剤の２％未満を迅速に放出する請求項１〜５のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項７】
粒子が、室温でリン酸緩衝液中に放置した場合、治療剤の７％未満を迅速に放出する請求項１〜６のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項８】
粒子が、室温でリン酸緩衝液中に放置した場合、治療剤の１０％未満を迅速に放出する請求項１〜７のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項９】
生体適合性ポリマーが、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである請求項１〜８のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１０】
治療用ナノ粒子が、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー４０〜５０重量％及びポリ（乳）酸ホモポリマー４０〜４９重量％含む請求項１〜９のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１１】
治療用ナノ粒子が、ジブロックポリ（乳）−コ−ポリグリコール酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーのポリ（乳）−コ−ポリグリコール酸部分が、グリコール酸５０モル％及びポリ乳酸５０モル％を含む請求項１〜１０のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１２】
ポリ（乳）酸ホモポリマーが、８〜１２ｋＤａの重量平均分子量を有する請求項１〜１１のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１３】
ポリ（乳）酸ホモポリマーが、１０ｋＤａの重量平均分子量を有する請求項１〜１１のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１４】
ジブロックポリ（乳）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、１６ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び５ｋＤａの数平均分子量を有するポリエチレングリコールを含む請求項１〜１３のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１５】
治療用ナノ粒子は、ビノレルビン又はその薬学的に許容される塩を１０〜２０重量パーセント含む請求項１〜１４のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１６】
治療用ナノ粒子は、ビノレルビン又はその薬学的に許容される塩を３〜１０重量パーセント含む請求項１〜１４のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１７】
標的化リガンドに共有結合するジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約０．２〜約１０重量％含む請求項１〜１６のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１８】
ビノレルビン又はビンクリスチン又はそれらの医薬的に許容される塩１０〜２０重量パーセント、
ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、
任意にポリ乳酸ホモポリマーを含み、
ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、１５〜２０ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び４〜６ｋＤａの数平均分子量を有するポリエチレングリコールを含み、
その粒径が、７０〜１４０ｎｍである治療用ナノ粒子。
【請求項１９】
ビノレルビン又はビンクリスチン又はそれらの医薬的に許容される塩２〜２０重量パーセント、
ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーから選択されるジブロックポリマー、
任意にポリ乳酸ホモポリマーを含み、
ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、１５〜２０ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び４〜６ｋＤａの数平均分子量を有するポリエチレングリコールを含み、
その粒径が、７０〜１４０ｎｍである治療用ナノ粒子。
【請求項２０】
ポリ（乳）酸ホモポリマーは、１０ｋＤａの重量平均分子量を有する請求項１８又は１９の治療用ナノ粒子。
【請求項２１】
治療用ナノ粒子が、ジブロックポリマー４０〜４５重量％と、ホモポリマー４０〜４５重量％含有する請求項１８〜２０の治療用ナノ粒子。
【請求項２２】
粒子が、室温でリン酸緩衝液中に放置した場合、治療剤の４％未満を迅速に放出する請求項１８〜２１のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２３】
粒子が、室温でリン酸緩衝液中に放置した場合、治療剤の２％未満を迅速に放出する請求項１８〜２２のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２４】
さらにセチルアルコールを含む請求項１〜２３のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか１つに記載の治療用ナノ粒子の複数と、
薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬的に許容される組成物。
【請求項２６】
薬学的に許容される賦形剤が糖である請求項２５に記載の医薬的に許容される組成物。
【請求項２７】
薬学的に許容される賦形剤が蔗糖である請求項２６に記載の医薬的に許容される組成物。
【請求項２８】
ビノレルビン又はビンクリスチン又は薬学的に許容されるそれらの塩を、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコール及び任意にホモポリマーと混合し、１０〜４０％の固形分を含む第１の有機相を形成し、ここで、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、１５〜２０ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び４〜６ｋＤａの数平均分子量を有するポリエチレングリコールを含み、
該第１の有機相を、第１の水溶液と混合して第２の相を形成し、
該第２の相を乳化して乳化相を形成し、
該乳化相を、急冷して急冷相を形成し、
薬剤可溶化剤を前記急冷相に添加して未封入治療薬の可溶化相を形成し、及び
該可溶化相をろ過してナノ粒子を回収し、ビノレルビン又はビンクリスチン３〜２０重量％それぞれ含有する治療用ナノ粒子のスラリーを形成し、ここで、ナノ粒子の粒径が７０〜１４０ｎｍであることを含む複数の治療用ナノ粒子の製造方法。
【請求項２９】
ろ過は、濃縮、ダイアフィルトレートを含み、最終的に、可溶化相をろ過する請求項２８の複数の治療用ナノ粒子の製造方法。
【請求項３０】
ビノレルビン又はビンクリスチンあるいはそれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択される治療薬１０〜２０重量パーセント及び
ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含み、
前記治療薬が制御された放出速度で放出され、粒径が７０〜１４０ｎｍである徐放性用ナノ粒子。
【請求項３１】
治療薬が、投与から少なくとも１日以上の期間にわたって放出される請求項３０の徐放性用ナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許出願第６１／０６１７６０号、出願日２００８年６月１６日；米国特
許出願第６１／１０５９１６号、出願日２００８年１０月１６日、米国特許出願第６１／
１０６７７７号、出願日２００８年１０月２０日；米国特許出願第６１／１６９５１４号
、出願日２００９年４月１５日；米国特許出願第６１／１７５２０９号、出願日２００９
年５月４日；米国特許出願第６１／０６１７０４号、出願日２００８年６月１６日；米国
特許出願第６１／１６９５１９号、出願日２００９年４月１５日；米国特許出願第６１／
１７５２１９出願日２００９年５月４日；米国特許出願６１／０６１６９７号、出願日２
００８年６月１６日；米国特許出願第６１／０８８１５９号、出願日２００８年８月１２
日；米国特許出願第６１／１６９５４１号、出願日２００９年４月１５日；米国特許出願
第６１／１７５２２６号、出願日２００９年５月４日；米国特許出願第６１／１７３７８
４号、出願日２００９年４月２９日；米国特許出願第６１／１８２３００号、出願日２０
０９年５月２９日の優先権を主張するものであり、それらはすべて、参照によりその全体
が本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
ある薬を患者（例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的とするか、特定の患部組織を
標的とするが、正常組織は標的としない）に送達するシステム、もしくは薬剤の放出をコ
ントロールするシステムは、長らく有益であるとされてきた。
例えば、活性剤を含有し、特定の組織もしくは細胞型、例えば特定の疾病組織において
位置する能力を有する治療剤は、治療を必要としない体の組織中に存在する薬剤の量を減
少させる可能性がある。これは、周囲の非癌組織を死滅させることなく、細胞毒性用量の
薬剤が癌細胞に送達されることが望ましい、癌等の疾患を治療する場合に特に重要である
。さらに、そのような治療剤は、抗癌治療によく見られる、望ましくない、また時には生
命を脅かす副作用を軽減するはずである。例えば、ナノ粒子治療剤は、その小サイズのた
めに、例えば、有効な時間安定に残存したまま、標的化又は制御された送達を可能にする
ために体内で、認識を逃れることができる。
【０００３】
またそのような治療ならびに／あるいは徐放及び／または標的治療を提供する治療剤は
、有効量の薬を送達できねばならない。ナノ粒子の大きさを送達性に有利な程度に小さく
保ちつつ、各ナノ粒子に適切な量の薬剤が会合したナノ粒子システムを製造することは挑
戦となるかもしれない。例えば、ナノ粒子に多量の治療薬を装填することが望ましい一方
で、高すぎる薬剤装填を使用するナノ粒子製剤は、実際の治療での使用には大きすぎるナ
ノ粒子となる。さらに、例えば、治療剤の実質的に制限された速さでの又は迅速な放出と
なるように、安定性を維持する治療用ナノ粒子が望ましい。
【０００４】
従って、癌等の疾病を治療する治療レベルの薬を送達しながら、患者の副作用をも減少
させることができる、新たなナノ粒子製剤及びそのようなナノ粒子及び組成物を製造する
方法が必要である。
【発明の開示】
【０００５】
一態様において、本発明は、活性剤もしくは治療薬、例えば、ビノレルビン又はビンク
リスチン又はそれらの医薬的に許容される塩及び１、２もしくは３種類の生体適合性ポリ
マーを含む治療用ナノ粒子を提供する。例えば、本明細書中で開示するのは、治療薬（例
えば、ビノレルビン又はビンクリスチン）を約１〜約２０重量パーセント；生体適合性ポ
リマーを約５０〜約９９重量パーセント、例えば、生体適合性ポリマーを約７０〜約９９
重量パーセント含む治療用ナノ粒子である。
例えば、生体適合性ポリマーは、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコー
ルコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）もしくはジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（グ
リコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー（例えば、ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）で
あってもよく、生体適合性ポリマーは、２以上の異なる生体適合性ポリマーを含んでいて
もよい。例えば、治療用ナノ粒子は、ポリ乳酸ホモポリマーのようなホモポリマーを含ん
でいてもよい。例えば、開示の治療用ナノ粒子は、ビンカアルカロイドを約１〜約２０重
量パーセント；及び生体適合性ポリマーを約７０〜約９９重量パーセント含んでいてもよ
い。ここで、生体適合性ポリマーは、
ａ）ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー
ｂ）ジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコール
コポリマー
ｃ）上記ａ）とポリ（乳）酸ホモポリマーの組み合わせ、及び
ｄ）上記ｂ）とポリ（乳）酸ホモポリマーの組み合わせからなる群から選択される。
【０００６】
開示のナノ粒子の直径は、例えば、約６０ｎｍ〜約１２０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１２０
ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１４０ｎｍ又は約８０ｎｍ〜約１３０ｎｍとすることができる。
【０００７】
開示のナノ粒子は、２５℃で少なくとも５日間安定、例えば、蔗糖溶液中のようなイン
ビトロにおいて、５日間にわたって安定とすることができる。ある実施形態では、開示の
ナノ粒子は、室温又は３７℃でリン酸緩衝液中に放置した場合、活性剤（例えば、ビンカ
アルカロイド）の２％未満、５％未満、７％未満、１０％未満を実質的に迅速に放出され
るかもしれない。
【０００８】
例示の治療用ナノ粒子は、ビンカアルカロイドを約１〜約２０重量パーセント；生体適
合性ポリマーを約７０〜約９９重量パーセント含み、生体適合性ポリマーは、
ａ）ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー
ｂ）ジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコール
コポリマー
ｃ）上記ａ）とポリ（乳）酸ホモポリマーの組み合わせ（例えば、ジブロックポリ（乳
）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー）、及び
ｄ）上記ｂ）とポリ（乳）酸ホモポリマーの組み合わせからなる群から選択される。
ビンカアルカロイドは、例えば、ビノレルビン又はビンクリスチン又はそれらの医薬的
に許容される塩を含んでいてもよい。
例えば、意図するナノ粒子は、ビンカアルカロイド化合物を約９〜約１６重量パーセン
ト含んでいてもよい。他の実施形態では、意図するナノ粒子は、ビンカアルカロイド化合
物を約３〜約９重量パーセント含んでいてもよい。開示のナノ粒子は、ビノレルビシン又
はその医薬的に許容される塩を約１０〜約２０重量パーセント含んでいてもよい。さらに
、開示のナノ粒子は、ビノレルビシン又はその医薬的に許容される塩を約３〜約１０重量
パーセント含んでいてもよい。
【０００９】
例えば、開示のナノ粒子は、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコ
ポリマーである生体適合性ポリマーを含んでいてもよい。開示のナノ粒子の一部を構成す
るジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５〜約２０
ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸及び約４〜約６ｋＤａの数平均分子量を有するポ
リエチレングリコールを含んでいてもよい。
ジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポ
リマーは、約１５〜約２０ｋＤａ、例えば、１６ｋＤａの数平均分子量を有するポリ乳酸
−コ−グリコール酸及び約４〜約６ｋＤａ、例えば、５ｋＤａの数平均分子量を有するポ
リエチレングリコールを含んでいてもよい。意図するジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（
グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーのポリ（乳）酸−コ−ポリグリ
コール酸コポリマーは、一実施形態では、約５０モル％のグリコール酸及び約５０モル％
のポリ乳酸を含んでいてもよい。
【００１０】
開示の治療用ナノ粒子は、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポ
リマー約４０〜約５０重量％及びポリ（乳）酸ホモポリマー約４０〜約４９重量％である
生体適合性ポリマーを含んでいてもよい。そのようなポリ（乳）酸ホモポリマーは、例え
ば、約８〜約１２ｋＤａ、例えば、約１０ｋＤａの数平均分子量を有していてもよい。
【００１１】
任意の実施形態では、開示のナノ粒子は、さらに、約０．２〜約１０重量％の標的化リ
ガンドに共有結合したジブロックポリ（乳）酸−コ−ポリグリコール酸−ポリエチレング
リコールを含んでいてもよい。
【００１２】
例示の治療用ナノ粒子は、ビンカアルカロイド又はその医薬的に許容される塩を約１０
〜約２０重量パーセント又はビンカアルカロイド又はその医薬的に許容される塩を約３〜
約１０重量パーセント；
ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー又は
ポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー及び
ポリ（乳）酸ホモポリマー、例えば、約１０ｋＤａの数平均分子量を有するポリ（乳）酸
ホモポリマーから選択されるジブロックポリマーを含んでいてもよい。そのような治療用
ナノ粒子は、ある実施形態では、約４０〜約４５重量パーセントのジブロックポリマー及
び約４０〜約４５重量％のホモポリマーを含んでいてもよい。ある実施形態では、開示の
ナノ粒子は、さらにセチルアルコールを含有していてもよい。
【００１３】
また、ここに開示の医薬的に許容される組成物は、複数の開示の治療用ナノ粒子と、医
薬的に許容される賦形剤を含む。例示の医薬的に許容される賦形剤は、蔗糖等の糖が挙げ
られる。
【００１４】
ここに開示の前立腺、乳または非小細胞肺ガンの治療方法は、開示の治療用ナノ粒子を
含む組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む。
【００１５】
他の実施形態では、複数の治療用ナノ粒子は、ビノレルビン又はビンクリスチンあるい
はそれらの医薬的に許容される塩と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコ
ールもしくはジブロックポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリ
コールポリマー及び任意にホモポリマーを、有機溶剤に混合して、約１０〜約４０％の固
形分を含む第１の有機相を形成し、第１の有機相を、第１の水溶液に混合して第２の相を
形成し、第２の相を乳化して乳化相を形成し、乳化相を急冷して急冷相を形成し、薬物可
溶化剤を急冷相に添加して未封入の治療薬の可溶化相を形成し及び可溶化相をろ過してナ
ノ粒子を回収し、これによって、ビノレルビン又はビンクリスチンを約３〜約２０重量％
でそれぞれ含む治療用ナノ粒子のスラリーを形成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】開示されたナノ粒子を形成する乳化プロセスのフローチャートである。
【図２】開示された乳化プロセスの流れ図である。
【図３】急冷した粒度における粗エマルションの製造の結果を示す。固形分が３０％のプラシーボ有機（Ｐｌａｃｅｂｏ  ｏｒｇａｎｉｃ）を使用し、Ｗ：Ｏ＝５：１で、標準的な水相（１％コール酸ナトリウム、２％ベンジルアルコール、４％酢酸エチル）を使用して乳化した。
【図４】得られた粒度におけるフィード圧の効果を示す。
【図５】粒度の規模に対する依存を示す。
【図６】粒度に対する固形分濃度の効果を示す。
【図７】ビノレルビンを含む例示的に開示されたナノ粒子のインビトロ放出性を示す。
【図８】ビンクリスチンもしくはドセタキセルを含む開示されたナノ粒子のインビトロ放出性を示す。
【図９】ラットにおけるビンクリスチン及びビンクリスチンＰＴＮＰの薬物動態を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、一般的に、活性薬剤もしくは治療薬もしくは薬を含むポリマーナノ粒子及び
治療用ナノ粒子の製造及び使用方法に関する。一般に「ナノ粒子」とは、直径が１０００
ｎｍ未満、例えば、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍの粒子を指す。開示の治療用ナノ粒子は、
直径が約６０〜約１２０ｎｍ、もしくは約７０〜約１３０ｎｍ、もしくは約６０〜約１４
０ｎｍ、もしくは約７０〜約１４０ｎｍのナノ粒子を含むことができる。
【００１８】
開示のナノ粒子は、抗腫瘍薬等の活性剤、例えばビンカアルカロイド剤（例えばビノレ
ルビン、ビンクリスチン又はそれらの医薬的に許容される塩）を、約０．２〜約３５重量
パーセント、約３〜約４０重量パーセント、約５〜約３０重量パーセント、約１〜約２０
重量パーセント、１０〜約３０重量パーセント、１５〜２５重量パーセント、もしくは約
４〜約２５重量パーセントを含むことができる。
【００１９】
ここに開示のナノ粒子は、１種、２種、３種もしくはそれ以上の生体適合性ポリマー及
び／または生分解性ポリマーを含む。例えば、生体適合性ポリマー（例えば、ポリ乳酸及
びポリエチレングリコール）を含む１種以上のコポリマー（例えば、ジブロックポリマー
）等の１種、２種、３種もしくはそれ以上の生体適合性ポリマー６０〜９９重量％と、任
意に約０〜５０重量％のホモポリマー、例えば、ポリ乳酸等の生体適合性ポリマーを含む
ことができる。
【００２０】
ポリマー
いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、ポリマー及び治療薬のマトリック
スを含む。いくつかの実施形態において、治療薬及び／または標的化部分（すなわち、低
分子量ＰＳＭＡリガンド）は、ポリマーマトリックスの少なくとも一部分と会合したもの
とすることができる。例えば、いくつかの実施形態において、標的化部分（例えば、リガ
ンド）は、ポリマーマトリックスの表面に共有結合で会合することができる。いくつかの
実施形態において、共有結合会合は、リンカーによって媒介される。治療薬は、ポリマー
マトリックスの表面と会合するか、ポリマーマトリックスで封入するか、ポリマーマトリ
ックスに包囲されているか、及び／またはその全体に分散したものとすることができる。
【００２１】
種々のポリマー及びポリマーからの粒子形成方法が、薬剤送達の分野において知られて
いる。いくつかの実施形態において、本開示は、少なくとも１つのポリマー、例えば、例
えば、ジブロックコポリマー等のコポリマーであってもよい第１のポリマーと、任意に例
えばホモポリマー等であってもよいポリマーとのナノ粒子を対象とする。
【００２２】
本発明によれば、あらゆるポリマーを使用することができる。ポリマーは天然ポリマー
であってもよいし、非天然（合成物）ポリマーであってもよい。ポリマーは、ホモポリマ
ーもしくは２つ以上のモノマーを含むコポリマーとすることができる。配列の点では、コ
ポリマーはランダム、ブロック、もしくはランダムとブロック配列の組み合わせを含むこ
とができる。意図するポリマーは、生体適合性及び／又は生体分解性である。
【００２３】
本明細書で使用される「ポリマー」という用語は、当該技術分野において使用される通
常の意味を付与される、すなわち、共有結合的な結合によって接続される、１つもしくは
複数の反復ユニット（モノマー）を含む分子構造である。該反復ユニットは、すべて同一
であるか、またはいくつかの場合において、ポリマーの中に２つ以上の種類の反復ユニッ
トが存在していてもよい。いくつかの場合において、ポリマーは、生物学的に由来する、
すなわち、バイオポリマーである。ポリマーの非限定的な例には、ペプチドもしくはタン
パク質が含まれる。いくつかの場合において、例えば、後に記載される生物学的部分のよ
うな、追加の部分も該ポリマー中に存在していてもよい。ポリマーの中に２種類以上の反
復ユニットが存在する場合、このポリマーは「コポリマー」であると言われる。ポリマー
を用いるいずれの実施形態においても、用いられるポリマーは、場合によってはコポリマ
ーである可能性があることを理解されたい。該コポリマーを形成する反復ユニットは、任
意の様式で配置させることができる。例えば、反復ユニットは、ランダムな順序で、交互
の順序で、またはブロックコポリマーとして配置されていてもよく、すなわち、それぞれ
が第１の反復ユニット（例えば、第１のブロック）を含む１つもしくは複数の領域と、そ
れぞれが第２の反復ユニット（例えば、第２のブロック）を含む１つもしくは複数の領域
とを含む等の配置が可能である。ブロックコポリマーは、２つ（ジブロックコポリマー）
、３つ（トリブロックコポリマー）、またはそれより多い数の別個のブロックを有するこ
とができる。
【００２４】
開示の粒子はコポリマーを含むことができ、いくつかの実施形態において、通常２つ以
上のポリマーの共有結合的な結合によって互いに会合された２つ以上のポリマー（本明細
書に記載されるような）について記載する。したがって、コポリマーは、共に複合化され
てブロックコポリマーを形成する第１のポリマー及び第２のポリマーを含むことができ、
第１のポリマーは該ブロックコポリマーの第１のブロックとすることができ、第２のポリ
マーは該ブロックコポリマーの第２のブロックとすることができる。当業者は、ブロック
コポリマーは、いくつかの場合において、複数のポリマーのブロックを含有することがで
きること、また「ブロックコポリマー」は、本明細書で使用される場合、単一の第１のブ
ロック及び単一のブロックのみを有するブロックコポリマーのみに限定されないことを理
解する。例えば、ブロックコポリマーは、第１のポリマーを含む第１のブロック、第２の
ポリマーを含む第２のブロック及び第３のポリマーまたは第１のポリマーを含む第３のブ
ロック等を含むことができる。いくつかの場合において、ブロックコポリマーは、任意の
数の第１のポリマーの第１のブロック及び第２のポリマーの第２のブロック（そして特定
の場合においては、第３のブロック、第４のブロック等）を含むことができる。また、ブ
ロックコポリマーは、いくつかの場合において、他のブロックコポリマーからも形成され
ていてもよいことを理解されたい。例えば、第１のブロックコポリマーは、複数の種類の
ブロックを含有する新しいブロックコポリマーを形成するために別のポリマー（ホモポリ
マー、バイオポリマー、別のブロックコポリマー等である可能性がある）と複合化するこ
とができ及び／または他の部分（例えば、ポリマー以外の部分）と複合化することができ
る。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポ
リマー）は両親媒性であってもよい。すなわち、親水性の部位及び疎水性の部位を有する
か、または比較的親水性である部位及び比較的疎水性である部分を有していてもよい。親
水性ポリマーは、一般的に水を引き付けるポリマーであってもよく、疎水性ポリマーは、
一般的に水をはじくポリマーであってもよい。親水性または疎水性ポリマーは、例えば、
ポリマーのサンプルを製造し、水との接触角を測定することによって、識別することがで
きる（典型的には、ポリマーは６０°未満の接触角を有し、一方、疎水性ポリマーは約６
０°を上回る接触角を有する）。いくつかの場合において、２つ以上のポリマーの親水性
は、互いに比較して測定することができる。すなわち、第１のポリマーは、第２のポリマ
ーよりも親水性である可能性がある。例えば、第１のポリマーは、第２のポリマーよりも
小さい接触角を有する可能性がある。
【００２６】
一セットの実施形態において、本明細書中で考えられるポリマー（例えば、コポリマー
、例えば、ブロックコポリマー）は、生体適合性ポリマー、すなわち、生体内に挿入また
は注入された場合に、例えば、Ｔ細胞応答を介した免疫系による有意な炎症及び／または
ポリマーの急性拒絶を起こさず、典型的には有害反応を誘発しないポリマー、を含む。従
って、本明細書中で考えられる治療用粒子は、非免疫原性とすることができる。本明細書
中で用いる非免疫原性という用語は、その自然な状態において、通常、循環抗体、Ｔ細胞
、もしくは反応性免疫細胞を全く誘発しないか、もしくは最低限のレベルでしか誘発せず
、通常個体において個体自身に対する免疫反応を誘発しない、内在性増殖因子を指す。
【００２７】
生体適合性は、免疫系の少なくとも一部分による物質の拒絶を指し、すなわち、対象に
埋め込まれた非生体適合性の物質は、免疫系による物質の拒絶を適切に抑制することがで
きないほど重度であり、しばしば対象からこの物質を除去しなければならないような程度
となり得る免疫応答を対象に引き起こす。生体適合性を判定するための簡単な試験の１つ
は、ポリマーを生体外で細胞に曝露することであってもよい。生体適合性ポリマーは、典
型的には中程度の濃度、例えば、５０μｇ／１０６細胞の濃度では、有意な細胞死を引き
起こさないポリマーである。例えば、生体適合性ポリマーは、線維芽細胞または上皮細胞
等の細胞に暴露されると、このような細胞によって貪食されても、または取り込まれても
、約２０％未満の細胞死を引き起こす可能性がある。本発明の様々な実施形態において有
用である可能性がある生体適合性ポリマーの非限定的な例には、ポリジオキサノン（ＰＤ
Ｏ）、ポリヒドロキシアルカン酸、ポリヒドロキシブチレート、ポリ（セバシン酸グリセ
ロール）、ポリグリコリド、ポリ乳酸、ＰＬＧＡ、ポリカプロラクトン、あるいはこれら
の及び／または他のポリマーを含むコポリマーもしくは誘導体が含まれる。
【００２８】
ある実施形態において、考えられる生体適合性ポリマーは生分解性とすることができる
。すなわち、ポリマーは、化学的に及び／または生物学的に、身体等の生理的環境内で分
解できる。本明細書中で使用する「生分解性」ポリマーは、細胞内に導入された場合、細
胞機構（生物学的に分解可能）によって、及び／または、加水分解（化学的に分解可能）
等の化学的過程によって、細胞に有意な毒性効果を及ぼすことなく、細胞が再利用できる
か、または排出できる成分に分解され得るポリマーである。ある実施形態において、生分
解性ポリマーならびにそれらの分解副産物は、生体適合性とすることができる。
【００２９】
例えば、考えられるポリマーは、水に曝露されると（例えば、対象内で）、瞬時に加水
分解するポリマーであってもよく、このポリマーは、熱に曝露されると（例えば、約３７
℃の温度で）、分解することができる。ポリマーの分解は、使用されるポリマーまたはコ
ポリマーに依存して、様々な速度で起こりうる。例えば、該ポリマーの半減期（ポリマー
の５０％が、モノマー及び／または他のポリマー以外の部分に分解され得る時間）は、ポ
リマーに依存して、数日間、数週間、数ヶ月間、または数年間とすることができる。この
ポリマーは、いくつかの場合において、例えば、リゾチーム（例えば、比較的低いｐＨを
有する）への曝露を介して、例えば、酵素活性または細胞機構によって、生物学的に分解
され得る。いくつかの場合において、該ポリマーは、細胞に有意な毒性効果を及ぼすこと
なく、細胞が再利用できるか、または排出できるモノマー及び／または他のポリマー以外
の部分に分解され得る（例えば、ポリ乳酸は、加水分解されて乳酸を形成することができ
、ポリグリコリドは、加水分解されてグリコール酸等を形成することができる）。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、本明細書において集合的に「ＰＬＧＡ」と
称される、ポリ（乳酸‐コ‐グリコール酸）及びポリ（ラクチド‐コ‐  グリコリド）等
の乳酸及びグリコール酸単位を含むコポリマー、本明細書において「ＰＧＡ」と称される
グリコール酸単位を含むホモポリマー、ならびに、本明細書において集合的に「ＰＬＡ」
と称される、ポリ‐Ｌ‐乳酸、ポリ‐Ｄ‐乳酸、ポリ‐Ｄ、Ｌ‐乳酸、ポリ‐Ｌ‐ラクチ
ド、ポリ‐Ｄ‐ラクチド、及びポリ‐Ｄ、Ｌ‐ラクチド等の乳酸単位、を含むポリエステ
ルとすることができる。いくつかの実施形態において、例示的なポリエステルは、例えば
、ポリヒドロキシ酸、ラクチド及びグリコリドのペグ化ポリマー及びコポリマー（例えば
、ペグ化ＰＬＡ、ペグ化ＰＧＡ、ペグ化ＰＬＧＡ）、ならびにそれらの誘導体を含む。い
くつかの実施形態において、ポリエステルは、例えば、ポリ酸無水物、ポリ（オルトエス
テル）、ペグ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ペグ化ポリ（カプロ
ラクトン）、ポリリジン、ペグ化ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ペグ化ポリ（エ
チレンイミン）、ポリ（Ｌ‐ラクチド‐コ‐Ｌ‐リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポ
リ（４‐ヒドロキシ‐Ｌ‐プロリンエステル）、ポリ［α‐（４‐アミノブチル）‐Ｌ‐
グリコール酸］、及びそれらの誘導体を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、該ポリマーはＰＬＧＡとすることができる。ＰＬＧＡは
、生体適合性及び生分解性の乳酸とグリコール酸とのコポリマーであり、乳酸：グリコー
ル酸の比率によって、様々な形態のＰＬＧＡが特徴付けられる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−
乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸とすることができる。ＰＬＧＡの分解率は、乳酸−グリコール
酸の比率を変更することによって調節することができる。いくつかの実施形態において、
本発明にしたがって使用されるＰＬＧＡは、約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０
、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５、または約１５：８５の乳酸：グリコール
酸のモル比率によって特徴付けられる。
【００３２】
いくつか実施形態において、該ナノ粒子のポリマー（例えば、ＰＬＧＡブロックコポリ
マーまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー）内の乳酸対グリコール酸モノマーの比
率を最適化することにより、水の取り込み、治療剤の放出（例えば、「徐放」）及びポリ
マー分解動態等のナノ粒子のパラメータを最適化することができる。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、１つもしくは複数のアクリルポリマーとす
ることができる。特定の実施形態において、アクリルポリマーは、例えば、アクリル酸と
メタアクリル酸とのコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタ
クリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、
ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタアクリル酸）、メタアクリル酸アルキルアミドコポリマ
ー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタアクリル酸ポリアクリルアミド）、アミ
ノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシア
ノアクリレート、及び上記ポリマーのうちの１つもしくは複数を含む組み合わせ、を含む
。該アクリルポリマーは、アクリル酸エステル及びメタアクリル酸エステルと低含有量の
四級アンモニウム基との完全に重合したコポリマーを含むことができる。
【００３４】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、カチオン性ポリマーとすることができる。
一般的に、カチオン性ポリマーは、負電荷を有する核酸の鎖（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡま
たはその誘導体）を縮合及び／または保護することができる。ポリ（リジン）、ポリ（エ
チレンイミン）（ＰＥＩ）、及びポリ（アミドアミン）デンドリマー等のアミン含有ポリ
マーの使用が、開示の粒子のいくつかの実施形態では考えられる。
【００３５】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解可能なポリエ
ステルとすることができる。これらのポリエステルの例には、ポリ（Ｌ‐ラクチド‐コ‐
Ｌ‐リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４‐ヒドロキシ‐Ｌ‐プロリンエステル
）を含む。ポリ（エチレングリコール）反復単位を含有するポリマー（例えば、コポリマ
ー、例えば、ブロックコポリマー）も、「ペグ化」ポリマーと称することができる。その
ようなポリマーは、炎症及び／又は免疫原性（例えば、免疫応答を刺激する能力）を制御
することができ、及び／又は、ポリエチレングリコール基の存在によって、細網内皮系（
ＲＥＳ）を経由する循環系からのクリアランスの割合を低減させることができる。
【００３６】
ある場合には、例えば、ポリマー表面に親水性層を作ることによって、ポリマーと生物
学的部分との間の電荷相互作用を減少させるために、ペグ化を利用することができ、それ
は、生物学的部分との相互作用からポリマーを遮蔽するかもしれない。ある場合には、ポ
リエチレングリコールの反復単位の追加は、例えば、細胞によるトランスフェクション／
取り込み効率を減少させながら、食細胞系によるポリマーの取り込みを減少させることに
より、ポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）のプラズマ半減期
を増加させるかもしれない。
当業者は、例えば、開環重合技術（ＲＯＭＰ）等を用いて、ＥＤＣ（１‐エチル‐３‐
（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）及びＮＨＳ（Ｎ‐ヒドロキシス
クシンイミド）を使用して、アミンで終端するＰＥＧ基とポリマーを反応させる、ポリマ
ーのペグ化のための方法及び技術を理解するであろう。
【００３７】
例えば、ＰＥＧがリガンドに結合していない場合、ＰＥＧは末端基を含むことができる
と考えられる。例えば、ＰＥＧは末端がヒドロキシル基、メトキシ基もしくはその他のア
ルコキシル基、メチル基もしくはｏｒアルキル基、アリール基、カルボン酸基、アミン基
、アミド基、アセチル基、グアニジノ基、もしくはイミダゾール基とすることができる。
その他の考えられる末端基は、アジド基、アルキン基、マレイミド基、アルデヒド基、ヒ
ドラジド基、ヒドロキシルアミン基、アルコキシアミン基もしくはチオール部分を含む。
【００３８】
本明細書中で開示する粒子は、ＰＥＧを含んでもよく、含まなくてもよい。また、特定
の実施形態は、ポリ（エステル‐エーテル）、例えば、エステル結合（例えば、Ｒ−Ｃ（
Ｏ）−Ｏ−Ｒ’結合）及びエーテル結合（例えば、Ｒ−Ｏ−Ｒ’結合）によって連結され
た反復単位を有するポリマーを含有するコポリマーを対象とする。本発明のいくつかの実
施形態において、カルボキシル酸基を含有する、加水分解性ポリマー等の生分解性ポリマ
ーは、ポリ（エチレングリコール）反復単位と複合化させてポリ（エステル−エーテル）
を形成することができる。
【００３９】
ある実施形態において、ポリマーの分子量は、本明細書中で開示する効果的な治療のた
めに最適化される。例えば、ポリマーの分子量は、粒子の分解率（特に、生分解性ポリマ
ーの分子量が調節される場合）、溶解度、水の取り込み、及び薬剤放出動態に影響する。
さらなる例として、該ポリマーの分子量は、治療される対象において、妥当な期間内（数
時間から１〜２週間、３〜４週間、５〜６週間、７〜８週間等の範囲）に該ナノ粒子が生
分解するように調節することができる。開示の粒子は、例えば、ＰＥＧとＰＬＧＡとのコ
ポリマーを含むことができ、ＰＥＧは、１０００〜２００００Ｄａ、例えば、５０００〜
２００００Ｄａ、例えば、１００００〜２００００Ｄａの分子量を有し、ＰＬＧＡは、５
０００〜１００００Ｄａ、例えば、２００００〜７００００Ｄａ、例えば、２００００〜
５００００Ｄａの分子量を有することができる。
【００４０】
例えば、ここに開示する例示的な治療用ナノ粒子としては、ポリ（乳）酸−ポリ（エチ
レン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エ
チレン）グリコールコポリマーを約１０〜約９９重量パーセント、もしくはポリ（乳）酸
−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）
酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約約２０〜約８０重量パーセント、約４０
〜約８０重量パーセント、もしくは約３０〜約５０重量パーセント、もしくは約７０〜約
９０重量パーセント含むものを挙げられる。例示的なポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グ
リコールコポリマーは、約１５〜約２０ｋＤａの数平均分子量、もしくはポリ（乳）酸を
約１０〜約２５ｋＤａ及び約４〜約６の数平均分子量、もしくはポリ（エチレン）グリコ
ールを約２ｋＤａ〜約１０ｋＤａ含有することができる。
【００４１】
開示のナノ粒子は、ポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−コ−ポリ（グリコール）酸（
ＰＥＧを含まない、例えば、ＰＬＡのホモポリマー）を約１〜約５０重量パーセントを任
意に含むことができ、もしくは、ポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−コ−ポリ（グリコ
ール）酸を約１〜約５０重量パーセント、もしくは約１０〜約５０重量パーセントもしく
は約３０〜約５０重量パーセント任意に含むことができる。例えば、ポリ（乳）もしくは
ポリ（乳）−コ−ポリ（グリコール）酸は、約５〜約１５ｋＤａ、もしくは約５〜約１２
ｋＤａの数平均分子重量を有することができる。例示的なホモポリマーＰＬＡは、約５〜
約１０ｋＤａの数平均分子量を有することができる。例示的なＰＬＧＡは、約８〜約１２
ｋＤａの数平均分子量を有することができる。
【００４２】
特定の実施形態において、開示のポリマーは、脂質と複合化、例えば、「末端キャップ
化」されていてもよく、脂質末端ＰＥＧを含んでいてもよい。後述するように、該ポリマ
ーの脂質部位は、別のポリマーとの自己組織化のために使用することができ、ナノ粒子の
形成を促進する。例えば、親水性ポリマーは、疎水性ポリマーとともに自己組織化する脂
質と複合化することができる。
【００４３】
例示的な脂質は、長鎖（例えば、Ｃ８−Ｃ５０）、置換又は非置換炭化水素等の脂肪酸
を含んでいてもよい。ある実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１０−Ｃ２０脂肪酸または
その塩とすることができる。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１５−Ｃ２０
脂肪酸またはその塩とすることができる。いくつかの実施形態において、脂肪酸は不飽和
、一価不飽和または多価不飽和とすることができる。例えば、脂肪酸基は、酪酸、カプロ
ン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、アラキン酸、ベヘン酸、またはリグノセリン酸のうちの１つもしくは複数とすること
ができる。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、
バクセン酸、リノール酸、αリノレン酸、γリノレン酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、
アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、またはエルカ酸のうちの１
つもしくは複数とすることができる。
【００４４】
特定の実施形態においては、脂質は式Ｖ及びその塩である。
2015098493.tif 000002
式中、Ｒはそれぞれ独立してＣ１‐３０アルキルである。
式Ｖの１つの実施形態において、該脂質は１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３
−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）及びその塩、例えば、ナトリウム塩である。
【００４５】
１つの実施形態において、任意の小分子標的化部分は、このナノ粒子の脂質成分に結合
され、例えば、共有結合的に結合される。例えば、ここで意図するものは、治療薬を含む
ナノ粒子、官能化及び非官能化ポリマーを含むポリマーマトリックス及び脂質及び低分子
量標的化リガンドである。ここで、標的化リガンドは、このナノ粒子の脂質成分に結合さ
れ、例えば、共有結合的に結合される。
【００４６】
標的化部分
本明細書中で提供するのは、任意の標的化部分、すなわち、膜成分、細胞表面受容体、
前立腺特異的膜抗原等の生物学的部分に結合する、または会合する部分を含むナノ粒子で
ある。該粒子の表面上に存在する標的化部分は、特定の標的サイト、例えば、腫瘍、患部
、組織、器官、細胞の型等に、粒子が局在化できるようにする。したがって、該薬剤また
は他のペイロードは、いくつかの場合において、該粒子から放出させることができ、特定
の標的部位と局所的に相互作用させることができる。
【００４７】
本発明のある実施形態において、標的化部分は、低分子量リガンド、例えば、低分子量
ＰＳＭＡリガンドを含む。例えば、標的化部位は、用いられる標的化部分に依存して、対
象の身体の患部、組織、器官、細胞型等に該粒子を局在化させることができる。例えば、
低分子量ＰＳＭＡリガンドは、前立腺癌細胞に局在化させることができる。対象はヒトま
たは非ヒト動物とすることができる。対象の例には、イヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ウサギ、
ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、霊長類、ヒト等
の動物が含まれるが、これらに限定されない。
【００４８】
考えられる標的化部分は、小分子を含む。特定の実施形態において、「小分子」という
用語は、天然に生じるかまたは人工的に作製される（例えば、化学的合成によって）、比
較的低い分子量を有する、タンパク質、ポリペプチドまたは核酸以外の有機化合物を指す
。小分子は、典型的には複数の炭素−炭素結合を有する。特定の実施形態において、小分
子は約２０００ｇ／ｍｏｌ未満のサイズである。いくつかの実施形態において、小分子は
約１５００ｇ／ｍｏｌ未満または約１０００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態
において、小分子は約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満、例えば、約
１００ｇ／ｍｏｌ〜約６００ｇ／ｍｏｌ、または約２００ｇ／ｍｏｌ〜約５００ｇ／ｍｏ
ｌである。
例えば、リガンドは、以下のような低分子量ＰＳＭＡリガンドとすることができる。
2015098493.tif 000003
及びその鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマーまたはラ
セミ体である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、前立腺癌の腫瘍に関連する細胞を標的とするために用い
ることができる小分子標的化部分は、２‐ＰＭＰＡ、ＧＰＩ５２３２、ＶＡ‐０３３、フ
ェニルアルキルホスホンアミダート等のＰＳＭＡペプチダーゼ阻害剤ならびに／またはそ
れらの類似体及び誘導体を含む。いくつかの実施形態において、前立腺癌の腫瘍に関連す
る細胞を標的とするために用いることができる小分子標的化部分は、２−ＭＰＰＡ及び３
−（２−メルカプトエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸誘導体等のチオール及
びインドールチオール誘導体を含む。いくつかの実施形態において、前立腺癌の腫瘍に関
連する細胞を標的とするために用いることができる小分子標的化部分は、ヒドロキサマー
ト誘導体を含む。いくつかの実施形態において、前立腺癌の腫瘍に関連する細胞を標的と
するために用いることができる小分子標的化部分は、ＺＪ  ４３、ＺＪ  １１、ＺＪ  １
７、ＺＪ  ３８等のＰＢＤＡ及び尿素系の阻害剤ならびに／またはそれらの類似体及び誘
導体、アンドロゲン受容体標的物質（ＡＲＴＡ）、プトレシン、スペルミン、及びスペル
ミジン等のポリアミン、酵素グルタミン酸カルボキシラーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）の阻害剤
、別名ＮＡＡＧペプチダーゼもしくはＮＡＡＬＡＤアーゼを含む。
【００５０】
本発明の別の実施形態において、標的化部分は、ΗｅＲ２、ＥＧＦＲ、もしくはｔｏｌ
ｌ受容体を標的とするリガンドとすることができる。
例えば、考えられる標的化部分は核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物、もし
くは脂質を含むことができる。例えば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する
核酸標的化部分（例えば、アプタマー、例えば、Ａ１０アプタマー）とすることができる
。一般に、アプタマーは特定の標的、例えばポリペプチド、に結合するオリゴヌクレオチ
ド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、もしくは類似体もしくはそれらの誘導体）である。いくつ
かの実施形態において、標的化部分は、細胞表面受容器に対する自然発生もしくは合成リ
ガンド、例えば、発育因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリン等とすることができる
。標的化部分は抗体とすることができ、この用語は、抗体フラグメント、抗体の特徴的な
部、単鎖標的化部分を含むよう意図とされており、これらは、例えば、ファージディスプ
レイ法等の手順を使用して同定できる。
標的化部分は、長さが最長約５０残基である標的化ペプチドもしくは標的化ペプチド模
倣薬であってもよい。例えば、標的化部分は、アミノ酸配列順序、ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫ
Ａ、アリールＱＫＬＮもしくはＡＸＹＬＺＺＬＮを含むことができ、ここでＸ及びＺは、
可変アミノ酸、もしくはそれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣薬である。特定の実
施形態において、標的化部分は、アミノ酸配列順序ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、アリールＱ
ＫＬＮもしくはＡＸＹＬＺＺＬＮを含むペプチドであり、ここでＸ及びＺは、可変アミノ
酸であり、かつ長さが２０、５０もしくは１００残基未満である。ＣＲＥＫＡ  （Ｃｙｓ
Ａｒｇ  ＧＩｕ  Ｌｙｓ  Ａｌａ）ペプチドもしくはそれらのペプチド模倣薬、もしく
はオクタペプチドＡＸＹＬＺＺＬＮのペプチドもまた、ペプチド、もしくはそれらの保存
的変異体もしくはペプチド模倣薬と同様、ＩＶ型コラーゲンと結合、もしく複合体を形成
する標的化部分として考えられ、もしくは標的組織基底膜（例えば、血管の基底膜）も標
的化部分として使用することができる。
【００５１】
例示的な標的化部分は、標的ＩＣＡＭ（細胞接着分子、例えば、ＩＣＡＭ−Ｉ）ペプチ
ドを含む。
【００５２】
本明細書中で開示する標的化部分は、一般に開示のポリマーもしくはコポリマー（例え
ば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）に結合しており、かかるポリマー複合体は開示されたナノ粒子の一
部を形成することができる。例えば、開示の治療用ナノ粒子は、任意にＰＬＡ−ＰＥＧも
しくはＰＬＧＡ−ＰＥＧを約０．２〜約１０重量パーセントを含むことができ、該ＰＥＧ
は標的化リガンド（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンド）で官能化されている。考えられ
る治療用ナノ粒子は、例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧリガンド又はポリ（乳）酸−コ−ポリ（グ
リコール）酸−ＰＥＧリガンド約０．２〜約１０モルパーセントを含む。例えば、ＰＬＡ
−ＰＥＧ−リガンドは、約１０ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のＰＬＡと、約４０
００〜約８０００Ｄａの数平均分子量のＰＥＧを含むことができる。
【００５３】
ナノ粒子
開示のナノ粒子は、実質的に球状であるか（すなわち、該粒子は概して球状に見える）
、または非球状の構造を有していてもよい。例えば、該粒子は、膨張または縮小すると、
非球状の構造を採ってもよい。いくつかの場合において、該粒子はポリマーブレンドを含
むことができる。例えば、ポリマーブレンドは、ポリエチレングリコールを含む第１のポ
リマーと、第２のポリマーとを含むことができる。
【００５４】
開示のナノ粒子は、約１μｍ未満の特徴的寸法を有することができ、該粒子の特徴的寸
法は、該粒子と同じ体積を有する真球の直径である。例えば、粒子は、約３００ｎｍ未満
、約２００ｎｍ未満、約１５０ｎｍ未満、約１００ｎｍ未満、約５０ｎｍ未満、約３０ｎ
ｍ未満、約１０ｎｍ未満、約３ｎｍ未満、場合によっては約１ｎｍ未満とすることができ
る粒子の特徴的寸法を有していてもよい。具体的な実施形態において、開示のナノ粒子は
、約７０ｎｍ〜２００ｎｍ、約７０ｎｍ〜１８０ｎｍ、約８０ｎｍ〜１３０ｎｍ、約８０
ｎｍ〜約１２０ｎｍの直径を有することができる。
【００５５】
一セットの実施形態において、粒子は内部及び表面を有していてもよいが、表面は内部
とは異なる組成物を有する、すなわち、少なくとも１つの化合物が内部に存在するが、表
面には存在しない（逆の場合も同様）、及び／または、少なくとも１つの化合物が内部に
存在し、表面では異なる濃度で存在する可能性がある。例えば、１つの実施形態において
、本発明のポリマー複合体の標的化部分（すなわち、低分子量ＰＳＭＡリガンド）等の化
合物は、該粒子の内部及び表面の両方に存在し、該粒子の表面では内部よりも高い濃度と
することができるが、いくつかの場合において、該粒子の内部の濃度は実質的に非ゼロで
ある、すなわち、該粒子の内部には検出可能な量の化合物が存在する。
【００５６】
いくつかの場合において、粒子の内部は粒子の表面よりも疎水性である。例えば、粒子
の内部は粒子の表面に対して比較的疎水性であってもよく、薬剤または他のペイロードは
疎水性であるかもしれないため、比較的疎水性である粒子の中心と容易に会合する。薬剤
または他のペイロードは、こうして粒子の内部に包含され、そのため粒子を取り囲む外部
環境から保護することができる（逆の場合も同様）。例えば、対象に投与される粒子内に
包含される薬剤または他のペイロードは、対象の体から保護され、体は、少なくとも所定
時間薬剤から実質的に分離される。
【００５７】
例えば、本明細書中で開示するのは、第１の非官能化ポリマー；任意の第２の非官能化
ポリマー；標的化部分を含む任意の官能化ポリマー；及び治療薬を含む治療用ポリマーナ
ノ粒子である。
特定の実施形態において、第１の非官能化ポリマーは、ＰＬＡ、ＰＬＧＡ又はＰＥＧあ
るいはそれらのコポリマーであり、例えば、ジブロックコポリマーＰＬＡ−ＰＥＧである
。例えば、例示的なナノ粒子は、密度が約０．０６５ｇ／ｃｍ３、もしくは約０．０１〜
約０．１０ｇ／ｃｍ３のＰＥＧコロナを有していてもよい。
【００５８】
開示のナノ粒子は、例えば、糖類を含むことができる溶液中で、少なくとも約３日間、
約４日間もしくは少なくとも約５日間、室温もしくは２５℃で、安定となり得る。
【００５９】
いくつかの実施形態において、開示のナノ粒子は、薬剤放出の速度を増大させることが
できる脂肪族アルコールをも含むことができる。例えば、開示のナノ粒子は、Ｃ８−Ｃ３
０アルコール等のセチルアルコール、オクタノール、ステアリルアルコール、アラキジル
アルコール、ドコサナール、もしくはオクタソナール（ｏｃｔａｓｏｎａｌ）を含むこと
ができる。
【００６０】
ナノ粒子は徐放性を有することができ、例えば、患者、例えば、患者の特定部位に、長
時間にわたり、例えば、１日、１週間又はそれ以上の期間にわたって、ある量の活性剤を
送達できる。いくつかの実施形態において、開示のナノ粒子は、例えば室温及び／または
３７℃のリン酸緩衝液中に入れた場合、活性剤（例えば、ビンカアルカロイド）の約２％
未満、約４％未満、約５％未満、もしくは約１０％未満を、実質的に直ちに（例えば、約
１分間〜約３０分間かけて）放出する。
【００６１】
ある実施形態において、本発明は、
１）ポリマーマトリックス及び
２）任意に、粒子の連続的または不連続的なシェルを形成するポリマーマトリックスを
囲む、または該マトリックスの中に分散される、両親媒性の化合物または層を含む。両親
媒性層は、該ナノ粒子内への水の浸透を減少させることができ、そのため薬剤の封入効率
を高め、薬剤の放出を遅延する。さらに、これらのナノ粒子で保護されている両親媒性層
は、適時に封入された薬剤及びポリマーを放出することによって、治療的な利点をもたら
すことができる。
【００６２】
本明細書で使用される「両親媒性」という用語は、分子が極性部位及び非極性部位の両
方を有する特性を指す。両親媒性化合物は、長い疎水性の尾に結合した極性の頭を有する
ことが多い。いくつかの実施形態において、極性部位は水中で可溶性である一方、非極性
部位は水中では不溶性である。また、極性部位は、形式上の正電荷または形式上の負電荷
のいずれか一方を有することができる。あるいは、極性部位は、形式上の正電荷及び形式
上の負電荷の両方を有することができ、両性イオンつまり内塩とすることができる。例示
的な両親媒性化合物は、例えば、１つまたは複数の天然由来の脂質、界面活性剤または親
水性及び疎水性部分の両方を有する合成化合物を含む。
【００６３】
両親媒性化合物の具体例には、０．０１〜６０（脂質の重量／ポリマーの重量）の間、
最も好ましくは０．１〜３０（脂質の重量／ポリマーの重量）の間の比率で取り込まれる
、１、２−ジステアロイル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパ
ルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（
ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファ
チジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジテトラコサノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）及び
ジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬＰＣ）等のリン脂質が含まれるが、これらに限
定されない。使用することができるホスホリン脂質には、ホスファチジン酸、飽和及び不
飽和脂質の両方を有するホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホス
ファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、リゾホ
スファチジル誘導体、カルジオリピン、及びβ‐アシル‐イ‐アルキルホスホリン脂質が
含まれるが、これらに限定されない。ホスホリン脂質の例には、ジオレオイルホスファチ
ジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジペンタデカノイルホスファチジル
コリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン（Ｄ
ＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファ
チジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジトリコ
サノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）、ジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬ
ＰＣ）等のホスファチジルコリン及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ま
たは１‐ヘキサデシル‐２‐パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン等のホスファ
チジルエタノールアミンが含まれるが、これらに限定されない。不斉アシル鎖を有する合
成ホスホリン脂質（例えば、６個の炭素からなる１個のアシル鎖及び１２個の炭素からな
るもう１本のアシル鎖を有する）も使用することができる。
【００６４】
ある特定の実施形態において、両親媒性化合物は、レシチン及び／又は特に、ホスファ
チジルコリンが挙げられる。
【００６５】
ナノ粒子の製造
本発明の別の態様は、開示のナノ粒子の製造システム及び方法を対象とする。ある実施
形態において、２つ以上の異なるポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ジブロックコ
ポリマー及びホモポリマー）を用いることにより、粒子の特性を制御することができる。
【００６６】
特定の実施形態では、ここに開示の方法は、例えば、約１〜約４０重量％、約１〜約３
０重量％、例えば、約１０〜約２５重量％の多量の封入治療薬又は約５〜約２０重量％の
治療薬を含むナノ粒子を形成する。
【００６７】
ある実施形態において、図１及び２に示すようなプロセス等のナノエマルションプロセ
ス（ｎａｎｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｓｓ）を提供する。例えば、治療薬、第１の
ポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧもしくはＰＬＧＡ−ＰＥＧ）及び第２のポリマー（例
えば、（ＰＬ（Ｇ）ＡもしくはＰＬＡ）を、有機溶液と混合して、第１の有機相を形成す
る。第１の相は、固形分を約５〜約５０重量％、例えば、約５〜約４０％、もしくは約１
０〜約３０％、例えば、約１０％、１５％、２０％含むことができる。第１の有機相は、
第１の水溶液と混合して第２の相を形成することができる。
有機溶液は、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、イソプロピ
ルアルコール、酢酸イソプロピル、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、ジクロロメタ
ン、クロロホルム、アセトン、ベンジルアルコール、トウィーン８０、スパン８０等及び
それらの組み合わせを含むことができる。
ある実施形態において、有機相は、ベンジルアルコール、酢酸エチル及びそれらの組み
合わせを含むことができる。第２の相は、固形分が約１〜５０重量％、例えば、約５〜４
０重量％とすることができる。水溶液は水であってもよく、任意にコール酸ナトリウム、
酢酸エチル及びベンジルアルコールのうち１つ以上と併用してもよい。
【００６８】
例えば、油もしくは有機相は、非溶媒（水）と部分的にしか混和性でない溶媒を使用す
ることができる。従って、十分に低い比率で混合し、及び／または有機溶媒で事前に飽和
した水を使用した場合、油相は液状のままである。油相は、液滴として水溶液中に乳化す
ることができ、例えば、ホモジナイザーもしくはソニケータ等の高エネルギー分散システ
ムを用いて剪断しナノ粒子とすることができる。エマルションの水性部分、別名「水相」
は、コール酸ナトリウムからなる、酢酸エチル及びベンジルアルコールで予め飽和させた
界面活性剤溶液としてもよい。
【００６９】
エマルション相を形成するための第２の相の乳化は、１回もしくは２回の乳化工程で行
うことができる。例えば、一次エマルションを製造し、次に乳化してファインエマルショ
ンを形成することができる。一次エマルションは、例えば、単純な混合、高圧ホモジナイ
ザー、プローブソニケータ、攪拌バーもしくはロータステータホモジナイザーを用いて形
成することができる。一次エマルションは、例えば、プローブソニケータもしくは高圧ホ
モジナイザーに使用によって、例えば、ホモジナイザーを１回、２回、３回もしくはそれ
以上の回数通過させ、ファインエマルションに形成することができる。例えば、高圧ホモ
ジナイザーを使用する場合、用いる圧力は、約４０００〜約８０００ｐｓｉ、もしくは約
４０００〜約５０００ｐｓｉ、例えば、４０００もしくは５０００ｐｓｉであってもよい
。
【００７０】
溶媒の蒸発もしくは希釈はいずれも、溶媒の抽出を完了させ、粒子を固化させるのに必
要かもしれない。抽出の動態をよりよく制御し、より適応性の高いプロセスを行うために
は、水での急冷による溶媒の希釈を使用することができる。例えば、エマルションは、有
機溶媒を全て溶解して急冷相を形成するのに十分な濃度まで冷水中に希釈することができ
る。急冷は、少なくとも部分的に約５℃もしくはそれ以下の温度で行うことができる。例
えば、急冷するのに使用する水は、室温未満の温度（例えば、約０〜約１０℃、もしくは
約０〜約５℃）とすることができる。
【００７１】
いくつかの実施形態において、この段階では全ての治療薬を粒子内に封入せず、薬剤可
溶化剤を急冷相に加えて、可溶化相を形成する。薬剤可溶化剤としては、例えば、トウィ
ーン８０、トウィーン２０、ポリビニルピロリドン、シクロデキストラン、硫酸ドデシル
ナトリウム、もしくはコール酸ナトリウムが挙げられる。例えば、急冷したナノ粒子の懸
濁液にトウィーン−８０を加えて、遊離薬剤を可溶化し、薬剤の結晶の形成を防止するこ
とができる。いくつかの実施形態において、薬剤可溶化剤と治療薬の比率は、約１００：
１〜約１０：１である。
【００７２】
可溶化相は、ナノ粒子を回収するため濾過してもよい。例えば、限外濾過膜は、を使用
して、ナノ粒子懸濁液を濃縮し、有機溶媒、遊離薬剤及びその他の加工助剤（界面活性剤
）を実質的に除去することができる。例示的な濾過は、タンジェンシャルフロー濾過シス
テムを使用して行うことができる。例えば、ナノ粒子は保持するが、溶質、ミセル、及び
有機溶媒は透過させるのに適した細孔径の膜を用いて、ナノ粒子を選択的に分離すること
ができる。分子量カットオフが約３００−５００ｋＤａ（〜５−２５ｎｍ）の例示的な膜
を使用することができる。
【００７３】
ダイアフィルトレーションは、定容アプローチを使用して行うことができる。つまり、
透析濾過液（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｅ、冷脱イオン水、例えば、約０℃〜約５℃、もしく
は０℃〜約１０℃）を、濾液を懸濁液から取り除く速度と同じ速度で供給懸濁液に加える
ことができる。いくつかの実施形態において、濾過は、第１の温度約０℃〜約５℃、もし
くは０℃〜約１０℃及び第２の温度である約２０℃〜約３０℃、もしくは１５℃〜約３５
℃を使用する第１の濾過を含むことができる。例えば、濾過は、約１〜約６ダイアボリュ
ームを約０℃〜約５℃で処理すること及び少なくとも１ダイアボリューム（例えば、約１
〜約３もしくは約１−２ダイアボリューム）を約２０℃〜約３０℃で処理することを含む
ことができる。
【００７４】
ナノ粒子懸濁液を精製及び濃縮した後、粒子を１つか２つ以上の殺菌フィルター及び／
またはデプスフィルターを、例えば、深さ−０．２μｍの前置フィルターを使用して通過
させることができる。
【００７５】
ナノ粒子を製造する実施形態において、治療薬、例えば、ビノレルビン又はビンクリス
チン及びポリマー（ホモポリマー及びコポリマー）の混合物からなる有機相を形成する。
有機相は、界面活性剤及び任意の溶解した溶媒からなる水相と、約１：５の比率（油相：
水相）で混合してもよい。単純な混合下に、もしくはロータステータホモジナイザーを使
用して二相を混合して、一次エマルションを形成することができる。次に、例えば、高圧
ホモジナイザーを使用して一次エマルションをファインエマルションに形成する。そのよ
うなファインエマルションを、その後、混合しながら脱イオン水を加えて急冷する。例示
的な急冷液：エマルションの比率は、約８．５：１である。トウィーンの溶液（例えば、
トウィーン８０）を急冷液（ｑｕｅｎｃｈ）に加えて、トウィーン全体で、例えば、約２
％とすることができる。これは、遊離した未封入の薬剤を溶解する役割を果たすかもしれ
ない。名声されたナノ粒子を、遠心分離もしくは限外濾過／ダイアフィルトレーションの
いずれかによって単離する。
【００７６】
治療薬
本発明によれば、例えば、治療剤（例えば、抗癌剤）、診断薬（例えば、造影剤、放射
性核種ならびに蛍光、発光、及び磁性部分）、予防薬（例えば、ワクチン）、及び／また
は栄養補助剤（例えば、ビタミン、ミネラル等）を含む、任意の薬剤を、開示のナノ粒子
によって送達することができる。本発明によって送達される例示的な薬剤には、小分子（
例えば、細胞毒性薬）、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、及びマイクロＲＮＡ薬）
、タンパク質（例えば、抗体）、ペプチド、脂質、炭水化物、ホルモン、金属、放射性元
素及び化合物、薬剤、ワクチン、免疫学的薬剤等、及び／またはそれらの組み合わせが含
まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、該送達される薬剤は、
癌（例えば、抗腫瘍剤）の治療に有用な薬剤である。
【００７７】
例えば、標的化部分は、対象の特定の部位を標的化すること、または粒子をこの部位に
局在化させることができ、該ペイロードをそれらの部位に送達することができる。
ある特定の実施形態において、薬剤を、該粒子から徐放様式で放出させることができ、
特定の患部（例えば、腫瘍）と局所的に相互作用することができる。用語「徐放」という
用語は、一般的に、選択された部位での、または制御可能な速度、間隔及び／もしくは量
での物質（例えば、薬剤）の放出を包含することを意味する。徐放は、実質的に持続的な
送達、パターン化された送達（例えば、定期的または不定期的な時間の間隔で中断される
、一定期間にわたる断続的な送達）及び選択された物質のボーラスの送達（例えば、比較
的短時間（例えば、数秒間または数分間）の場合は、所定の個別の量として）を包含する
が、必ずしもこれらに限定されない。
【００７８】
活性剤もしくは薬剤としては、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、ビンクリ
スチン、タキサン、パクリタキセル（ＤＨＡ−パクリタキセルもしくはＰＧ−パクリタキ
セル等のその誘導体）もしくはドセタキセル等の字照るペン誘導体等の治療薬が挙げられ
る。他の実施形態では、活性剤又は薬剤としては、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビン
クリスチン又はビンデシン等のビンカアルカロイドとすることができる。
【００７９】
医薬製剤
ここに開示のナノ粒子は、薬学的に許容される担体と組み合わせて医薬組成物を形成す
ることができる。当業者に理解されるように、該担体は、下記に記載する投与経路、標的
組織の場所、送達される薬剤、薬剤の送達の時間的経過等に基づいて選択することができ
る。
【００８０】
本発明の医薬組成物及びここに開示の粒子は、経口及び非経口経路を含む当該技術分野
で既知である任意の手段を用いて患者に投与することができる。本明細書で使用される「
患者」という用語は、ヒト及び、例えば、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、及び魚類を含
むヒト以外の動物を指す。例えば、ヒト以外の動物は哺乳類（例えば、げっ歯類、マウス
、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類、またはブタ）とすることができる。特定
の実施形態において、非経口経路が、消化管中に見出される消化酵素との接触を避けられ
るので望ましい。かかる実施形態によると、本発明の組成物は、注入によって（例えば、
静脈内、皮下または筋肉内、腹腔内への注入）、経直腸的に、経膣的に、局所的に（粉末
剤、クリーム剤、軟膏、またはドロップ剤を用いて）、または吸入によって（スプレーを
用いて）、投与することができる。
【００８１】
ある具体的な実施形態において、開示されたナノ粒子は、それを必要とする対象に、例
えば、静脈内点滴または注入によって、全身的に投与することができる。
【００８２】
注射用製剤、例えば、滅菌注射用の水性または油性の懸濁液は、好適な分散剤または湿
潤剤及び懸濁化剤を用いて、既知の技術にしたがって処方することができる。滅菌された
注射用製剤は、例えば、１、３‐ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許
容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射液、懸濁液、またはエマルションであってもよい
。使用することができる許容されるビヒクル及び溶媒には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．
Ｐ．、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。また、滅菌済みの固定油が、溶媒または懸濁
媒体として従来使用されている。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む
、任意の無刺激性の固定油を使用することができる。また、オレイン酸等の脂肪酸が、注
射液の調製に使用される。１つの実施形態において、本発明の複合体は、１％（ｗ／ｖ）
カルボキシメチルセルロースナトリウム及び０．１％（ｖ／ｖ）トウィーン（登録商標）
８０を含む担体液に懸濁される。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過
によって、または使用前に、滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解または分散させるこ
とができる滅菌固形組成物の形態である滅菌薬剤を組み込むことによって、滅菌すること
ができる。
【００８３】
経口投与のための固形剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、及び顆粒剤を含む
。かかる固形剤形において、封入されたまたは封入されていない複合体は、クエン酸ナト
リウムもしくはリン酸カルシウム等の、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される賦
形剤または担体、及び／または（ａ）ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸等の充填剤もしくは増量剤、（ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシア等の結合剤、（ｃ）グリセロール等の保湿剤、（ｄ）寒天‐寒天、炭酸カルシウム、イモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（ｅ）パラフィン等の溶液遅延剤、（ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、（ｇ）例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノステアリン酸塩等の湿潤剤、（ｈ）カオリン及びベントナイトクレイ等の吸収剤、ならびに（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤、またそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合は、該剤形は、緩衝剤も含んでいてもよい。
【００８４】
開示されたナノ粒子は、投与の簡便性及び投与量の均一性のために、投与単位形態で処
方することができる。本明細書で使用される「投与単位形態」という表現は、治療される
患者に適切であるナノ粒子の物理的な個別単位を指す。いずれのナノ粒子についても、細
胞培養アッセイまたは動物モデル（通常、マウス、ウサギ、イヌ、またはブタ）において
、治療上有効な用量を始めに予測することが可能である。動物モデルは、望ましい濃度範
囲及び投与経路を達成するためにも使用することができる。そのような情報は、その後、
ヒトにおいて有用な用量及び投与経路を決定するために使用することができる。ナノ粒子
の治療効果及び毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順、例えば、
ＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効である用量）及びＬＤ５０（集団の５０％に
おいて致死的である用量）を用いて決定することができる。毒性効果と治療効果との用量
比は治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。いくつかの実施形態
において、高い治療係数を示す医薬組成物が有用である可能性がある。細胞培養アッセイ
または動物試験から得られたデータは、ヒトに使用するための用量の範囲を処方する際に
使用することができる。
【００８５】
例示的な実施形態において、治療薬及び薬学的に許容される賦形剤を各々含む複数のナ
ノ粒子を含む医薬品組成物を開示する。
【００８６】
いくつかの実施形態において、凍結に適した組成物が意図され、それは、ここに開示さ
れたナノ粒子と、凍結に適した溶液とを含み、例えば、蔗糖溶液がをナノ粒子懸濁液に加
える。蔗糖は、例えば、凍結の際に粒子が凝集するのを防ぐ抗凍結剤として作用させるこ
とができる。例えば、本明細書中で提供するのは、複数の開示されたナノ粒子、蔗糖及び
水を含むナノ粒子製剤であって；ここで、例えば、ナノ粒子／蔗糖／水は、約５〜１０％
／１０〜１５％／８０〜９０％（ｗ／ｗ／ｗ）である。
【００８７】
治療の方法
ある実施形態において、開示された治療用粒子は、疾患、疾病及び／または病状の１つ
もしくは複数の症状もしくは特徴の治療、緩和、寛解、軽減、発症の遅延、進行の阻害、
重症度の軽減及び／または発生率を低下させるために使用することができる。例えば、開
示の治療用粒子は、例えば、ビノレルビン又はビンクリスチン又はそれらの薬学的に許容
される塩を含み、それを必要とする患者に対して、前立腺癌、乳癌、肺非小細胞癌のよう
な肺癌等のガンを治療するために用いることができる。また、ここで意図するものは、開
示のナノ粒子を用いて、前立腺癌、肺非小細胞癌、結腸直腸癌及び膠芽腫を治療する方法
である。
【００８８】
癌（例えば、前立腺癌、乳癌）の治療のための開示された方法は、それ必要とする対象
に、所望の結果を達成するために必要な量及び時間で、治療上有効な量の開示された治療
用粒子を投与するステップを含む。本発明の特定の実施形態において、本発明の標的分子
の「治療上有効な量」は、癌の１つもしくは複数の症状もしくは特徴の治療、緩和、寛解
、軽減、発症の遅延、進行の阻害、重症度の軽減及び／または、例えば治療を受けている
ガンの症状又は特徴の１以上の発生率を低下させるために効果的な量である。
【００８９】
ここで開示されるものは、治療上有効な量の開示された治療用粒子を、健常な個体（す
なわち、いずれの癌の症状も示さない及び／または癌であると診断されていない対象）に
投与するステップを含む治療プロトコルである。例えば、健常な個体は、癌を発症する及
び／または癌の症状を発症する前に、本発明の標的分子で免疫を受けることができ、リス
クのある個体（例えば、癌の家族歴を有する患者、癌の発症に関連する１つもしくは複数
の遺伝子の突然変異を保持する患者、癌の発症に関連する遺伝子多型を有する患者、癌の
発症に関連するウイルスに感染している患者、癌の発症に関連する習慣及び／または生活
様式を有する患者等）は、癌の発症と実質的に同時（例えば、４８時間以内、２４位内、
または１２時間以内）に治療を受けることができる。当然、癌を有することが分かってい
る個体は、いつでも本発明の治療を受けることができる。
【００９０】
他の実施形態において、開示のナノ粒子は、癌細胞（例えば、前立腺癌細胞）の増殖を
阻害するために使用することができる。本明細書で使用される「癌細胞の増殖を阻害する
」という用語は、治療を行っていない対照癌細胞の観察されるまたは予想される増殖の速
度と比較して癌細胞の増殖の速度が減少されるような、癌細胞の増殖及び／または遊走速
度の任意の遅延、癌細胞の増殖及び／または遊走の停止、または癌細胞の死滅を指す。「
増殖を阻害する」という用語は、癌細胞もしくは腫瘍のサイズの縮小または消滅及びその
転移可能性の減少を指すものであってもよい。好ましくは、細胞レベルでのかかる阻害は
、対象における癌のサイズを縮小させる、増殖を遅延させる、癌の侵襲を減少させる、ま
たは転移を予防もしくは阻害することができる。当業者は、様々な好適な指標のいずれか
を用いて、癌細胞の増殖が阻害されているかどうかを容易に判定することができる。
【００９１】
癌細胞増殖の阻害は、例えば、細胞周期Ｇ２／Ｍでの停止のように、例えば、細胞周期
の特定の段階での癌細胞の停止によって証明される。癌細胞増殖の阻害は、癌細胞または
腫瘍のサイズの直接的または間接的な測定によっても証明することができる。ヒト癌患者
において、かかる測定は、通常、磁気共鳴画像、コンピュータ断層撮影、及びＸ線等の周
知の造影方法を用いて行われる。癌細胞増殖は、循環する癌胎児抗原、前立腺特異的抗原
、または他の癌細胞増殖に相関する癌特異的抗原のレベルを判定することにより、間接的
にも判定することができる。癌増殖の阻害は、通常、対象の生存期間の延長及び／または
健康と福祉の増加にも相関している。
【００９２】
実施例
ここで本発明を全般的に説明するが、本発明のある態様及び実施形態を説明する目的の
みで含まれ、いかなる方法でも本発明を制限することを意図したものではない以下の例を
参照することで、より容易に理解し得るであろう。
【００９３】
実施例１：ＰＬＡ−ＰＥＧの調製
ｄ、ｌ−ラクチドと、マクロ開始剤としてのα−ヒドロキシ−ω−メトキシポリ（エチ
レングリコール）との開環重合によって合成し、２−エチルヘキサン酸スズ（ＩＩ）を触
媒として使用して高温で、以下に示すとおり行う（ＰＥＧ  Ｍｎ  〜５０００Ｄａ；ＰＬ
Ａ  Ｍｎ  〜１６０００Ｄａ；ＰＥＧＰＬＡ  Ｍｎ  〜２１０００Ｄａ）
2015098493.tif 000004
【００９４】
ポリマーをジクロロメタン中に溶解し、ヘキサンとジエチルエーテルの混合物中で沈殿
させることによって、ポリマーを精製する。この工程から回収したポリマーは、オーブン
で乾燥させる。
【００９５】
実施例２：ナノ粒子の製造−乳化プロセス
ビノレルビンとポリマー（ホモポリマー、コポリマー、及びリガンドを有するコポリマ
ー）の混合物からなる有機相を形成する。有機相と水相を、約１：５の比率（油相：水相
）で混合する。ここで、水相は、界面活性剤及び数種類の溶解された溶媒からなる。高い
薬剤装填を達成するために、有機相中に約３０％の固形分を使用する。
【００９６】
この二相を単純な混合下に、もしくはロータステータホモジナイザーを使用して混合す
ることによって、一次粗エマルションを形成する。ロータ／ステータは均質な乳白色の溶
液を生じたが、攪拌バーは粗い見た目のエマルションを生じた。攪拌バーの方法では、油
相の液滴の供給槽側への付着が著しくなることが観察され、粗エマルションのサイズは品
質に重要なプロセスパラメータではないが、歩留り損失もしくは相分離を防ぐために適度
な細かさが必要であることを示唆している。従って、大規模においては高速ミキサーが適
している可能性があるが、ロータステータを粗エマルション形成の標準分析法として使用
する。
【００９７】
次に、高圧ホモジナイザーを使用して一次エマルションをファインエマルションに形成
する。粗エマルションのサイズは、ホモジナイザーを連続して（１０３回）通過させた後
の粒度に有意に影響しない。Ｍ−１１０−ＥＨ（図３）。
【００９８】
ホモジナイザーのフィード圧は、得られた粒度に有意な影響を有すること判明した。空
気圧及び電気式Ｍ−１１０ＥＨホモジナイザーの両方において、フィード圧を低下させる
と粒度も減少することが判明した（図４）。従ってＭ−１１０ＥＨに使用する、標準操作
圧は相互作用チャンバあたり４０００〜５０００ｐｓｉであり、これは単位あたりの最小
加工圧である。またＭ−１  １０ＥＨは、相互作用チャンバの数が１もしくは２で選べる
。これには、制限的なＹチャンバが標準で付随し、直列でより非制限的な２００μｍのＺ
チャンバが付随する。Ｙチャンバを取り外し、代わりにブランクのチャンバ（ｂｌａｎｋ
ｃｈａｍｂｅｒ）を使用した場合、粒度が実際に減少したことが判明した。さらに、Ｙ
チャンバを取り外すと、加工中のエマルションの流量が有意に増大した。
【００９９】
２〜３回通過させた後では粒度は有意に減少せず、連続して通過させると粒度が増加す
ることさえあった。結果を図５にまとめる。
【０１００】
粒度に対する規模の影響は、驚くべき規模依存性を示した。傾向としては、２〜１０ｇ
のバッチサイズの範囲では、バッチが大きいほど小さい粒子が生成する。この規模依存性
は、１０ｇ規模より大きなバッチを考慮した場合、なくなることが実証された。油相に使
用した固形分の量は約３０％であった。図６は、粒度に対する固形分濃度の影響を示す
。
【０１０１】
表Ａ：乳化プロセスパラメータの概要
【表１】
2015098493.tif 000005
【０１０２】
その後、ファインエマルションを所定温度の脱イオン水に加えて混合しながら急冷する
。急冷ユニット操作では、エマルションを冷水性急冷液に攪拌下に加える。これは、油相
溶媒の大部分を抽出し、下流の濾過においてナノ粒子を効果的に硬化する役割を果たす。
急冷液を冷却することによって、薬剤の封入が有意に改善された。急冷液：エマルション
の比率は、約５：１である。
【０１０３】
トウィーン８０の３５％（ｗｔ％）溶液を急冷液に加えて、全体で約２％のトウィーン
８０を得る。エマルションを急冷した後、薬剤可溶化剤として作用するトウィーン８０の
溶液を加え、濾過中に未封入の薬剤を効果的に除去することを可能とする。表Ｂは、各急
冷プロセスパラメータを示す。
表Ｂ：急冷プロセスパラメータの概要
【表２】
2015098493.tif 000006
【０１０４】
温度は、十分に希薄な懸濁液（溶媒の濃度が十分に低い）で、粒子のＴｇ未満に保つた
めに十分低く維持せねばならない。Ｑ：Ｅ（急冷液：エマルション）比率が十分に高くな
い場合、溶媒の濃度が高いため粒子が可塑化し、薬剤の漏れが起こる可能性がある。逆に
、もっと低い温度では、低Ｑ：Ｅ比率（〜−３：１）での薬剤の封入を増加させることが
でき、プロセスをより効率的に行うことができる。
【０１０５】
次に、タンジェンシャルフロー濾過プロセスによってナノ粒子を単離し、ナノ粒子懸濁
液を濃縮、溶媒、遊離薬剤、及び薬剤可溶化剤を急冷液から水中へ緩衝交換する。分画分
子量カットオフ（ＭＷＣＯ）が３００の再生セルロース膜を使用する。
【０１０６】
定容ダイアフィルトレーション（ＤＦ）を行って、急冷液、遊離薬剤及びトウィーン８
０を除去する。定容ＤＦを行うには、濾液を除去するのと同じ比率で、緩衝剤を保持液槽
に加える。ＴＦＦ操作のプロセスパラメータの概要を、表Ｃに示す。クロスフロー速度は
、溶液が供給経路を通過する流速や、膜を透過する流速を指す。この流れが、膜を詰まら
せ及び濾液の流れを限定する分子を押し流す力を供給する。膜間差圧（ｔｒａｎｓｍｅｍ
ｂｒａｎｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）は、透過性の分子を膜を通過させる力である。
表Ｃ：ＴＦＦパラメータ
【表３】
2015098493.tif 000007
【０１０７】
次に、濾過したナノ粒子のスラリーを、ワークアップ（ｗｏｒｋｕｐ）中に高温まで熱
サイクルにかける。ナノ粒子を２５℃の温度へ初めて曝露した後非常に迅速に、少量（一
般に５〜１０％）の封入された薬剤がナノ粒子から放出される。この現象のため、ワーク
アップ中を通して低温に保持しているバッチは、薬剤が遊離しやすく、もしくは送達中や
凍結せずに保管している間に薬剤が結晶を形成しやすい。ワークアップ中にナノ粒子のス
ラリーを高温に曝露することによって、この「緩やかに封入された」薬剤を除去すること
で、薬剤装填が少し低下する一方、生成物の安定性を改善することができる。２５℃での
処理の前の低温処理の量として５ダイアボリュームを使用する。
【０１０８】
濾過プロセス後に、ナノ粒子懸濁液を滅菌用フィルター（絶対孔径（Ａｂｓｏｌｕｔｅ
）０．２μｍ）を通過させる。プロセスに対する適切な濾過面積／時間を使用するために
、前置フィルターを使用して、滅菌用フィルターを保護する。値は、表Ｄに概要を示すと
おりである。
表Ｄ：
【表４】
2015098493.tif 000008
【０１０９】
濾過トレインは、Ｅｒｔｅｌ  Ａｌｓｏｐ  Ｍｉｃｒｏｍｅｄｉａ  ＸＬデプスフィル
ターＭ９５３Ｐ膜（公称孔径（Ｎｏｍｉｎａｌ）０．２μｍ）であり；Ｐａｌｌ  ＳＵＰ
ＲＡｃａｐ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｉｔｚ  ＥＫＳＰデプスフィルター媒体（公称孔径０．１〜
０．３μｍ）；Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｕｐｏｒ  ＥＫＶ０．６５／
０．２ミクロン滅菌グレードＰＥＳフィルター。
【０１１０】
デプスフィルターについてはナノ粒子１ｋｇあたり０．２ｍ２濾過表面積を、滅菌用フ
ィルターについてはナノ粒子１ｋｇあたり１．３ｍ２の濾過表面積を使用することができ
る。
【０１１１】
実施例３  抗凍結剤
脱イオン水単独中でナノエマルションナノ粒子の懸濁液を凍結すると、粒子が凝集する
。これは、ナノ粒子表面でのＰＥＧ鎖の結晶化及びもつれのためであると考えられている
。糖系の添加剤（蔗糖、トレハロース、もしくはマンニトール）は、凍結解凍条件下で、
希薄な（〜１０ｍｇ／ｍｌ）ナノ粒子懸濁液に対して１ｗｔ％の低濃度で、これらのナノ
粒子を凍結保護するように作用し得る。ある製剤は、蔗糖を１０ｗｔ％含むが、これは必
要量に対して過剰量の蔗糖であり、生理食塩水と同じ浸透圧である。
【０１１２】
表Ｅは、１６／５ＰＬＡ−ＰＥＧコポリマーが凍結解凍による凝集を起こしにくいこと
を示す。
【表５】
2015098493.tif 000009
【０１１３】
実施例４  インビトロ放出
Ａインビトロ放出方法を用いて、周囲条件と３７℃の条件の両方でこれらのナノ粒子か
らの初期バースト相放出を調べた。沈下条件を維持し、ナノ粒子が放出試料に入るのを防
ぐために、透析システムを設計した。１００ｎｍ粒子のペレット化が可能な超遠心分離機
を得た後、透析膜を取り除き、遠心分離を用いて放出された薬剤を封入された薬剤から分
離した。
【０１１４】
透析システムは以下の通りである：ＤＩ水中のドセタキセルナノ粒子のスラリー３ｍＬ
（約２５０μｇ／ｍＬ薬剤／ＰＬＧＡ／ＰＬＡナノ粒子、固体濃度２．５ｍｇ／ｍＬに対
応する）を、ピペットによって３００ｋＤａＭＷＣＯ透析器のインナーチューブ内に入れ
る。ナノ粒子は、この媒体あの懸濁液である。透析器を、放出された媒体（ＰＢＳ中２．
５％ヒドロキシルベータシクロデキストリン）１３０ｍｌを含有するガラスびん内に入れ
、これを、膜と外側溶液の界面における不攪拌水層の形成を防ぐため、振盪機を使用して
連続して１５０ｒｐｍで攪拌する。所定の時点において、試料の一定分量（１ｍＬ）をｏ
ｕｔｅｒ溶液（透析物）から抜き取り、そのビノレルビン濃度をＨＰＬＣによって分析し
た。
【０１１５】
遠心分離器は、同様の条件で、懸濁液分配量を低下させ、透析袋なしで運転した。６０
，０００ｇ／３０分間で試料を遠心分離し、上清をアッセイしてビノレルビンの含有量を
調べ、放出されたビノレルビンを測定する。
【０１１６】
実施例５：粒径分析
粒度を２種類の技術、動的光散乱（ＤＬＳ）及びレーザー回折によって分析する。Ｂｒ
ｏｏｋｈａｖｅｎ  ＺｅｔａＰａｌｓ機器を使用して、２５℃、希水性懸濁液中で、９０
°で散乱させた６６０ｎｍレーザーを使用してＤＬＳを行い、キュムラント法及びＮＮＬ
Ｓ法（ＴＰ００８）を使用して分析する。Ｈｏｒｉｂａ  ＬＳ９５０機器を使用し、希水
性懸濁液中で、９０°で散乱させたＨｅＮｅレーザー（６３３ｎｍ）及びＬＥＤ（４０５
ｍ）の双方を使用してレーザー回折を行い、Ｍｉｅ光学モデル（ＴＰ００９）を使用して
分析する。ＤＬＳからの出力は、粒子の流体力学的半径と関連しており、これはＰＥＧの
「コロナ」を含むが、一方でレーザー回折装置はＰＬＡ粒子の「コア」の幾何学的サイズ
と更に密接に関連している。
【０１１７】
実施例６  ビノレルビンナノ粒子
ナノ粒子バッチを、実施例２の全般的な手順を使用して、８０％（ｗ／ｗ）ポリマー−
ＰＥＧもしくはホモポリマーＰＬＡを有するポリマー−ＰＥＧを４０％（ｗ／ｗ）で製造
し、各バッチの全固形分％を５％、１５％及び３０％とした。使用した溶媒は次のとおり
であった：２１％ベンジルアルコール及び７９％酢酸エチル（ｗ／ｗ）。２グラムのバッ
チサイズ毎に、薬剤４００ｍｇを使用し、１６−５ポリマー−ＰＥＧ１．６ｇもしくは１
６−５ポリマー−ＰＥＧ０．８ｇ＋１０ｋＤａ  ＰＬＡ（ホモポリマー）０．８ｇを使用
した。ジブロックポリマー１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧもしくはＰＬＧＡ−ＰＥＧ（５０：
５０Ｌ：Ｇ）を使用し、ホモポリマーを使用する場合は、以下のものを使用した：ＰＬＡ
（Ｍ＝６．５ｋＤａ、Ｍｗ＝１０ｋＤａ、及びＭｗ／Ｍ＝１．５５）。
【０１１８】
有機相（薬剤及びポリマー）を２ｇのバッチで調製する：シンチレーションバイアル２
０ｍＬに薬剤及びポリマーを加える。固形分濃度％において必要な溶媒の質量を、以下に
示す：
ｉ．固形分５％：ベンジルアルコール７．９８ｇ＋酢酸エチル３０．０２ｇ
ｉｉ．固形分１５％：ベンジルアルコール２．３８ｇ＋酢酸エチル８．９５ｇ
ｉｉｉ．固形分３０％：ベンジルアルコール０．９８ｇ＋酢酸エチル３．６９ｇ
【０１１９】
水に、０．５％コール酸ナトリウム、２％ベンジルアルコール及び４％酢酸エチルを加
えて水溶液を調製する。瓶に、コール酸ナトリウム７．５ｇ、ＤＩ水１４０２．５ｇ、ベ
ンジルアルコール３０ｇ及び酢酸エチル６０ｇを加え、攪拌プレート上で溶解するまで混
合する。
【０１２０】
エマルションの形成については、水相と油相の比率は５：１である。有機相を水溶液中
に注ぎ、ＩＫＡを使用して１０秒間室温で均質化し、粗エマルションを形成する。溶液を
９Ｋｐｓｉ（ゲージ上は４５ｐｓｉ）で２回別々にホモジナイザー（１１０Ｓ）に通し、
ナノエマルションを形成する。
【０１２１】
エマルションを＜５℃の急冷液（Ｄ．Ｉ．水）中に攪拌プレート上で攪拌しながら注ぐ
。急冷液とエマルションの比率は８：１である。水中３５％（ｗ／ｗ）トウィーン８０を
急冷液に２５：１＝トウィーン８０：薬剤の比率で加える。ＴＦＦでナノ粒子を濃縮し、
５００ｋＤａ  ポールカセット（２膜）を用いたＴＦＦで急冷液を〜１００ｍＬに濃縮す
る。冷ＤＩ水の〜２０ダイアボリューム（２リットル）を用いてダイアフィルトレーショ
ンを使用し、該容量を最低ボリュームまで下げ、次に、最終的なスラリー、〜１００ｍＬ
を回収する。濾過していない最終的なスラリーの固形分濃度を、風袋を差し引いた２０ｍ
Ｌシンチレーションバイアルを使用し、最終的なスラリー４ｍＬを加えて調べ、真空でｌ
ｙｏ／オーブンで乾燥させ、乾燥させたスラリー４ｍＬ中のナノ粒子の重量を調べる。濃
縮蔗糖（０．６６６ｇ／ｇ）を、最終的なスラリー試料に加えて、１０％蔗糖を得た。
【０１２２】
０．４５ｕｍ濾過の最終的なスラリーの固形分濃度を、蔗糖を加える前に最終的なスラ
リーサンプル約５ｍＬを０．４５μｍシリンジフィルターで濾過することによって調べた
；風袋を差し引いたシンチレーションバイアル２０ｍＬに、濾過した試料４ｍＬを加え、
真空下で凍結乾燥機／オーブンで乾燥させる。
【０１２３】
濾過していない最終的なスラリーの残りの試料を、蔗糖とともに凍結した。
ビノレルビン製剤：
【表６】
2015098493.tif 000010
＊＝試料で行ったインビトロ放出
【０１２４】
インビトロ放出を、固形分３０％の３種類の製剤で行った：１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ
；１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ＋ＰＬＡ；及び１６−５  ＰＬＧＡ−ＰＥＧ＋ＰＬＡ、及び
３７℃で、気室において尿素１０％ＰＢＳ溶液を放出媒体として使用して、インビトロ放
出データを集めた。下記の表及び図７は、その結果を示す。
【表７】
2015098493.tif 000011
【０１２５】
実施例７−ビンクリスチン  ナノ粒子
ビンクリスチンを含むナノ粒子製剤を、実施例２の全般的な手順を使用して製造した。
ビンクリスチン製剤：
【表８】
2015098493.tif 000012
ビンクリスチン製剤の分析的特徴付け：
【表９】
2015098493.tif 000013
【０１２６】
インビトロ放出をビンクリスチン製剤で行い、及び３７℃で、気室において尿素１０％
ＰＢＳ溶液を放出媒体として使用してインビトロ放出データを集めた。図８は、これらの
ナノ粒子のいくつかのインビトロ放出を示す。
【０１２７】
実施例８  薬物動態
実施例７で製造したようなビンクリスチンを有するナノ粒子の薬物動態（ＰＫ）を、ス
ピローグ−ドーリー（ＳＤ）ラットで調べた。ラット（オスのスピローグドーリー、約３
００ｇ、頚静脈にカニューレを挿入）に、遊離薬剤もしくは薬剤を封入した受動的標的化
ナノ粒子（薬剤１０ｗｔ％、ポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ、ＭＰＬＡ＝１６Ｄａ；ＭＰＥＧ
＝５Ｄ、ＰＴＮＰ）９０ｗｔ）を、０．５ｍｇ／ｋｇを、薬剤５ｍｇ／ｋｇ及び０時間目
におけるＰＴＮＰ＝０で、単回静脈内投与量０．５ｍｇ／ｋｇで与えた。投与後様々な時
間に、頚静脈のカニューレからリチウムヘパリンを含有するチューブへ血液試料を採取し
、血漿を調製した。血漿から薬剤を抽出し、次いでＬＣＭＳ分析を行うことによって、血
漿中濃度を調べた。
【０１２８】
図９は、ビンクリスチン及びビンクリスチンＰＴＮＰのＰＫプロファイルを示す。
【０１２９】
均等物
当業者は、本明細書に記載される、本発明の特定の実施形態の多くの均等物を、通常の
ルーチン実験を用いて理解するか、または確認することができる。かかる均等物は、以下
の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【０１３０】
参照による援用
本明細書に引用されるすべての特許、公開特許出願、ウェブサイト、及び他の参考文献
の内容全体は、参照によりそれらの全体がここに明示的に援用される。
【図１】
2015098493.tif 000014
【図２】
2015098493.tif 000015
【図３】
2015098493.tif 000016
【図４】
2015098493.tif 000017
【図５】
2015098493.tif 000018
【図６】
2015098493.tif 000019
【図７】
2015098493.tif 000020
【図８】
2015098493.tif 000021
【図９】
2015098493.tif 000022