(57)【要約】【課題】観察倍率などの観察条件を変えた場合でも、マイクロウェルの識別情報などの容器に付された情報を視認可能とする培養容器を提供すること。【解決手段】複数のマイクロウェルを備え、マイクロウェル内の被観察物の観察を補助する情報表示を、被観察物の観察と同時に観察可能な位置に有し、前記情報表示が、ａ）第１の観察条件において視認可能な第１の情報表示と、ｂ）前記第１の観察条件とは異なる第２の観察条件において視認可能であり、かつ第１の情報表示を同種の情報を示す第２の情報表示とを含む培養容器。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のマイクロウェルを備えた培養容器であって、
前記マイクロウェル内の被観察物の観察を補助する情報表示を、前記被観察物の観察と同時に観察可能な位置に有し、
前記情報表示が、
ａ）第１の観察条件において視認可能な第１の情報表示と、
ｂ）前記第１の観察条件とは異なる第２の観察条件において視認可能であり、かつ前記第１の情報表示と同種の情報を示す第２の情報表示と
を含む、前記培養容器。
【請求項２】
前記情報表示の示す情報が、培養容器の識別情報および角度情報、マイクロウェルの識別情報、形状情報および性状情報、ならびに被観察物の大きさ、色および状態を判断するための観察支援情報からなる群から選択される、請求項１に記載の培養容器。
【請求項３】
前記第２の情報表示が、前記第１の情報表示とは異なる大きさで表示されている、請求項１または２に記載の培養容器。
【請求項４】
前記第２の情報表示が、前記第１の情報表示と比較して前記マイクロウェルから遠方に設けられており、かつ前記第１の情報表示よりも大きい、請求項１〜３のいずれか１項に記載の培養容器。
【請求項５】
前記第２の情報表示が、前記第１の情報表示とは異なる材料を用いて設けられている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の培養容器。
【請求項６】
前記第１の情報表示が図形を含み、前記第２の情報表示が文字を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の培養容器。
【請求項７】
前記第１の観察条件と前記第２の観察条件との相違が、観察倍率または観察用光源の相違である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の培養容器。
【請求項８】
前記情報表示が、さらに前記第１の観察条件および前記第２の観察条件のいずれとも異なる第３の観察条件において視認可能であり、かつ前記第１の情報表示と同種の情報を示す第３の情報表示を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロウェルを備えた培養容器に関する。より詳細には、マイクロウェル内の細胞などの被観察物の観察を補助する情報表示が冗長化されて付された培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
ライフサイエンス分野の研究開発において、複数のマイクロウェルを備えた培養容器内で培養した細胞を顕微鏡で観察し画像を取得することが行われている。そのような培養容器を用いて培養する細胞の一例としては、体外受精または顕微授精における受精卵が挙げられる。とりわけ受精卵を培養する際には、得られた画像データを取り違えてしまうと致命的なミスに繋がる可能性が高い。そのため、画像がいずれのマイクロウェルのものであるかを画像データから容易に判別可能であることが望ましい。
【０００３】
例えば、特許文献１に記載の細胞培養用容器では、複数設けられた培養系収容区画のそれぞれを認識するための識別記号や起点となる記号が表示されていてもよいとされている。また、特許文献２に記載の細胞培養容器では、複数設けられた細胞培養穴に臨んだ位置に、各細胞培養穴を特定する数字、英文字などの符号を表示することが記載されている。特許文献１および２に記載されている態様では、細胞を培養する領域ごとに固有の識別情報が一つずつ付されていることを前提としていると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２８０２９８号公報
【特許文献２】特開２００７−１８５１１０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
培養容器のマイクロウェル内の培養細胞の画像データの取得は、一つのマイクロウェルのみを拡大して撮影する場合、隣り合う二つのマイクロウェルを一つの画像に収めて撮影する場合、あるいは培養容器に存在する複数のマイクロウェルを一つの画像に収めて撮影する場合など、目的によって様々な観察倍率で行われる。
【０００６】
例えば、高い観察倍率で一つのマイクロウェルのみを拡大して撮影する場合、そのマイクロウェルの識別情報は、撮影範囲となるマイクロウェルの近傍に設けられ、その倍率において判別可能であり、かつ撮影範囲に容易に収めることができるようマイクロウェルに対して十分に小さい表示とする必要がある。
【０００７】
一方、低い観察倍率で培養容器に存在する複数のウェルを一つの画像に収めて撮影する場合、そのような小さな表示は判別が難しい。画像内に判別可能な識別情報がなければ、画像データを他の倍率で撮影した画像データあるいは画像データとは別に設けた識別データなどと紐付ける必要があるが、手間がかかる上、誤った識別情報を付してしまうリスクも生じる。
【０００８】
また、培養細胞の観察では、可視光のみならず、水銀ランプやレーザー光を光源とした蛍光観察もよく行われるが、一つの表示を複数の光源で判別可能とするにはそれ相応の工夫が必要であり、手間がかかる。
【０００９】
本発明は、観察倍率や観察視野の中心位置などの観察条件を変えた場合でも、マイクロウェルの識別情報などの容器に付された情報を視認可能とする培養容器を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上述したような問題を検討した結果、複数のマイクロウェルを備えた培養容器において、マイクロウェルの識別情報などのマイクロウェル内の被観察物の観察を補助する情報表示を冗長化して設けることにより、異なる複数の観察条件で観察した場合であっても、いずれの観察像にも該情報表示が収められるようにすることに想到し、本発明の培養容器を作製するに至った。本発明の要旨は以下のとおりである。
【００１１】
（１）複数のマイクロウェルを備えた培養容器であって、
前記マイクロウェル内の被観察物の観察を補助する情報表示を、前記被観察物の観察と同時に観察可能な位置に有し、
前記情報表示が、
ａ）第１の観察条件において視認可能な第１の情報表示と、
ｂ）前記第１の観察条件とは異なる第２の観察条件において視認可能であり、かつ前記第１の情報表示と同種の情報を示す第２の情報表示と
を含む、前記培養容器。
（２）前記情報表示の示す情報が、培養容器の識別情報および角度情報、マイクロウェルの識別情報、形状情報および性状情報、ならびに被観察物の大きさ、色および状態を判断するための観察支援情報からなる群から選択される、（１）に記載の培養容器。
（３）前記第２の情報表示が、前記第１の情報表示とは異なる大きさで表示されている、（１）または（２）に記載の培養容器。
（４）前記第２の情報表示が、前記第１の情報表示と比較して前記マイクロウェルから遠方に設けられており、かつ前記第１の情報表示よりも大きい、（１）〜（３）のいずれかに記載の培養容器。
（５）前記第２の情報表示が、前記第１の情報表示とは異なる材料を用いて設けられている、（１）〜（４）のいずれかに記載の培養容器。
（６）前記第１の情報表示が図形を含み、前記第２の情報表示が文字を含む、（１）〜（５）のいずれかに記載の培養容器。
（７）前記第１の観察条件と前記第２の観察条件との相違が、観察倍率または観察用光源の相違である、（１）〜（６）のいずれかに記載の培養容器。
（８）前記情報表示が、さらに前記第１の観察条件および前記第２の観察条件のいずれとも異なる第３の観察条件において視認可能であり、かつ前記第１の情報表示と同種の情報を示す第３の情報表示を含む、（１）〜（７）のいずれかに記載の培養容器。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の培養容器によれば、マイクロウェルを倍率などが異なる２以上の観察条件で観察した際に、いずれの条件下で得た観察像にもマイクロウェル内の被観察物の観察を補助する情報表示を視認可能な状態で含めることができる。本発明の培養容器を用いて撮影したマイクロウェル内の細胞などの被観察物の画像データは、いずれにおいても情報表示が視認可能であり、利便性が高く、画像データの取り違えのリスクも低い。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の培養容器の一実施態様の上面図である。
【図２】本発明の培養容器の一実施態様の垂直断面図である。
【図３】本発明の培養容器の一実施態様の被観察物収容部の拡大上面図である。
【図４】図３の被観察物収容部を高倍率で観察した場合と低倍率で観察した場合の視野の例を示す図である。
【図５】本発明の培養容器の別の実施態様の被観察物収容部の拡大上面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
図１〜３は本発明の培養容器の一実施態様を示す図である。本発明の培養容器１は、底部２と側壁３とを有し、底部に、細胞を収容するための複数のマイクロウェル４が配置されてなる被観察物収容部５を有する。これら複数のマイクロウェルには、それぞれ、第１の情報表示６および第２の情報表示７が付されている。第１の情報表示６および第２の情報表示７は、被観察収容部５内の被観察物の観察を補助する情報、例えば個々のマイクロウェルの識別情報、形状情報および性状情報、培養容器の識別情報および角度情報、ならびに被観察物の大きさ、色および状態を判断するための観察支援情報などを示す。なお、本明細書において「マイクロウェル」とは、開口部の開口幅（開口部の外縁が円形である場合はその直径）が、０．０５〜１．０ｍｍであり、好ましくは０．１５ｍｍ以上、より好ましくは０．２５ｍｍ以上、さらに好ましくは０．２８ｍｍ以上であり、好ましくは０．５ｍｍ未満、さらに好ましくは０．３４ｍｍ未満であるウェルを意味する。このようなサイズのマイクロウェルは、特に受精卵などの細胞である被観察物を個別に収容するのに適している。
【００１５】
図３に示したような実施態様の場合、第１の情報表示６は、マイクロウェルごとに対になってドットの形態で付されている。ドットで表される第１の情報表示６のその対となるマイクロウェルに対する相対位置は個々に異なっている。このマイクロウェルとドットとの相対位置の違いにより、単一のマイクロウェルを拡大して観察するだけで、複数のマイクロウェルにおける当該マイクロウェルの位置を特定することができる。マイクロウェルと第１の情報表示６であるドットの相対位置は、ドットのマイクロウェルに対する距離および角度により特定される。
【００１６】
一方、第２の情報表示７は、図３に示したような実施態様の場合、マイクロウェルごとに対になってアルファベットの形態で付されており、第１の情報表示６であるドットよりもかなり大きく表示されている。マイクロウェルの数にも影響されるが、単一のマイクロウェルだけではなく複数個のマイクロウェルを同時に観察しようとすると、非常に小さいドットは低倍率では見えづらい上、観察に用いている顕微鏡のレンズの汚れあるいはマイクロウェル周辺へのゴミの付着などにより識別ができなくなってしまう可能性がある。しかし、第２の情報表示７としてアルファベットが各マイクロウェルに比較的大きく付されているため、低倍率であっても容易に観察しているマイクロウェルの位置を特定することができる。また、アルファベットはその表示によって角度も表すことができるため、万が一培養容器自体が正しくない角度で観察用顕微鏡にセットされていたとしても、あるいは観察により得た画像データにおいて向きの情報に誤りがあったとしても、アルファベットの向きによりそれを検出することができる。すなわち、第２の情報表示であるアルファベットは、第１の情報表示であるドットと同種のマイクロウェルの識別情報を提供すると同時に、培養容器の向きの情報も提供しているといえる。両者はマイクロウェルの識別情報という同種の情報を提供する関係にある。図４に、図３の実施態様の培養容器の同一部分を高倍率で観察した場合と低倍率で観察した場合の視野の例を示す。
【００１７】
マイクロウェルは、好ましくは受精卵等の被観察物を個別に収容するために好適な凹部を形成し、そのサイズは微小である。具体的には、培養容器の上面視における各マイクロウェルの開口部の面積は、０．１９７ｍｍ２以下、さらに好ましくは０．０９１ｍｍ２以下であり、好ましくは０．０１７ｍｍ２以上、より好ましくは０．０４９ｍｍ２以上、さらに好ましくは０．０６１ｍｍ２以上である。マイクロウェルは、壁面と開口部を有する凹部を形成し、細胞培養容器の底部に直接窪みとして設けられた凹部でもよいし、底部から突出した部材により形成される凹部でもよい。したがって、上面視における各マイクロウェルの開口部の面積は、換言すれば、マイクロウェルの開口部の外縁が形成する図形の面積である。マイクロウェルの開口部の外縁が形成する図形は特に制限されず、三角形および四角形等の多角形の形状でもよく、円（円形、略円形、楕円形および略楕円形を含む）の形状でもよいが、好ましくは円形である。
【００１８】
本発明の培養容器の底部には、マイクロウェルが複数あり、好ましくは４個以上、さらに好ましくは８個以上、例えば１０個以上で、好ましくは５０個以下、より好ましくは３０個以下の個数で配置されている。本発明の培養容器は受精卵等の細胞を各マイクロウェルに１個ずつ配置して、複数の細胞を同時に培養する用途に適している。受精卵等の細胞を同一系内に複数近接して配置した状態で培養することにより、良好なパラクライン効果やオートクライン効果を期待することができる。ここで、同一系内の培養は、隔離されておらず流通可能な培養液内、好ましくは同一の培養液のドロップ内の培養を意味する。
【００１９】
マイクロウェル間のピッチは１ｍｍ以下、好ましくは０．７ｍｍ以下、さらに好ましくは０．４５ｍｍ以下である。観察装置として、１／２インチのＣＣＤ素子、４、１０、２０倍の対物レンズを備えたものがよく用いられる。このような観察装置で、４倍の対物レンズを選択した場合の観察可能な視野はおよそ１．６ｍｍ×１．２ｍｍであり、この観察視野内に２個以上、好ましくは３個以上、より好ましくは４個以上のマイクロウェルが含まれるように設計することが好ましい。
【００２０】
マイクロウェル間のピッチは近接するマイクロウェルの中心間の距離である（例えば、図３のａ）。マイクロウェルの中心は、マイクロウェルの開口部の外縁が形成する図形の重心とし、外縁が円形であればその円の中心をさす。マイクロウェル間のピッチは通常平均ピッチをさし、平均ピッチは、あるマイクロウェルに関しては、近接する全てのマイクロウェルとのピッチから平均値を算出したものをさす。マイクロウェル間のピッチは、マイクロウェルの開口部の外縁の寸法より大きい。マイクロウェルの開口部の外縁の寸法は、開口部の外縁が円形であればその直径をさし、そうでなければ開口部の外縁が形成する図形の最大径と最短径の平均値とする。近接する複数のマイクロウェルは、正方格子状または最密充填状に配置されていることが好ましい。例えば、２５個のマイクロウェルを５×５の正方格子状に配置する場合を挙げることができる。正方格子状または最密充填状に配置することにより、培養容器の底部における各マイクロウェルの位置の特定が、識別子との組み合わせでさらに容易になり、自動化処理に適用しやすい。
【００２１】
複数のマイクロウェルの配置は、正方格子または最密充填の配置から、一部が欠落したような配置でもよい。例えば、８個以上のマイクロウェルが、平行四辺形の辺上および頂点上に等しいピッチで配置され、被観察物収容部を構成している場合が挙げられる。平行四辺形には、正方形、長方形、菱形およびそれ以外の平行四辺形が包含される。マイクロウェルが平行四辺形の辺上および頂点上に配置されるとは、マイクロウェルの開口部の外縁が形成する図形の重心が平行四辺形の辺上および頂点上に配置されることをさす。例えば、図３に示す実施態様では、８個のマイクロウェルが、正方形の４つの頂点に１つずつ配置され、かつ４つの辺の中点に１つずつ配置されている。
【００２２】
図３の実施態様ではドットで表される第１の情報表示は、上記のように複数配置されたマイクロウェルの近傍に付される。単一のマイクロウェルを拡大して観察する場合にも観察領域に入り込むよう、第１の情報表示はマイクロウェルに対して十分に小さく、かつ可能な限りマイクロウェルの近傍にあることが好ましい。好ましくは、第１の情報表示は、マイクロウェルの開口部が形成する図形の内部に収まるサイズである。より具体的には、培養容器の上面視における第１の情報表示は、ドットあるいはそれに準ずる図形とする場合、面積が０．００５ｍｍ２以下、好ましくは０．００３ｍｍ２以下であり、０．０００３ｍｍ２以上、好ましくは０．００１２ｍｍ２以上である。一例としては、円形のドットの場合は直径が０．０３〜０．０７ｍｍ、特に０．０４〜０．０６ｍｍの範囲のサイズ、とりわけ０．０５ｍｍのサイズとすることが好ましい。また、第１の情報表示とマイクロウェルとの距離は、マイクロウェルの開口部が形成する図形の重心と第１の情報表示を形成する図形の重心との距離として定義される。したがって、第１の情報表示とマイクロウェルの開口部の外縁との距離は、好ましくはマイクロウェルの開口幅の１／２０より大きく、マイクロウェル間のピッチよりも小さい。距離が近すぎると成形が困難であり、遠すぎると観察しにくくなる等の理由による。具体的には、第１の情報表示とマイクロウェルとの距離は、好ましくは０．１５ｍｍ以下、より好ましくは０．１ｍｍ以下、さらに好ましくは０．０７ｍｍ以下である。
【００２３】
図３の実施態様ではアルファベットで表される第２の情報表示は、第１の情報表示と同様にマイクロウェルの近傍に付されるが、第１の情報表示と比較してマイクロウェルから遠方に設けられており、かつ第１の情報表示よりも大きく表示されていることが好ましい。第２の情報表示は、複数個のウェル、例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個もしくは９個、または１０個以上、あるいはマイクロウェル全体の個数の１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、もしくは９０％以上、または全てのマイクロウェルが観察視野に入る倍率で観察した際に視認可能とすることが好ましい。例えば対物レンズ４倍かつ接眼レンズ１０倍の４０倍の観察倍率で観察した場合に視認可能とするのであれば、その大きさは、文字であればＤＴＰポイントで０．０２５ポイント以上、好ましくは０．１２５ポイント以上であり、ドットあるいはそれに準ずる図形とする場合、表示幅が０．０１ｍｍ以上、好ましくは０．０５ｍｍ以上、表示面積が０．０００１ｍｍ２以上、好ましくは０．００１５ｍｍ２以上である。また、肉眼で観察した場合に視認可能とするのであれば、その大きさは、文字であればＤＴＰポイントで１ポイント以上、好ましくは５ポイント以上であり、ドットあるいはそれに準ずる図形とする場合、表示幅が０．４ｍｍ以上、好ましくは２ｍｍ以上、表示面積が０．１６ｍｍ２以上、好ましくは４ｍｍ２以上である。
【００２４】
第１の情報表示および第２の情報表示は、好ましくは被観察物収容部内のマイクロウェルのすべてに付されるが、それら情報表示が付されていないマイクロウェルが数個（例えば、被観察物収容部に含まれるマイクウェル全体の個数の１０％以下で）含まれていても、本発明に包含される。細胞が収容されず、観察対象でないマイクロウェルが存在する場合に、そのようなマイクロウェルには情報表示は不要であるためである。
【００２５】
第１の情報表示および第２の情報表示は、図３の実施態様ではそれぞれドットおよびアルファベットとしたが、それらの形状は特に制限されない。図形とする場合には、円、三角形、四角形、その他の多角形、矢印、バーコードなどの任意のものでよく、文字とする場合には、アラビア数字、ローマ数字、アルファベット、ギリシャ文字、カタカナ、ひらがななど任意の文字とすることができる。第１の情報表示と第２の情報表示は、必ずしも異なる形状で表示されている必要はなく、本発明の目的が達成される範囲内であれば同じ形状で付されていてもよい。
【００２６】
図３に示したような実施態様とする場合、ドットで示される第１の情報表示はマイクロウェルの最近傍に微小サイズで付されるため、成形が容易な単純な形状、すなわち円、三角形、四角形などの図形を含むことが好ましく、より好ましくは第１の情報表示は図形からなる。培養容器は、射出成型で製造される場合が多いため、あまり複雑な形状を微小サイズで成形することが困難だからである。微小サイズで付す情報表示を単純な形状とすることで、培養容器の製造時における歩留り低下を回避し、製造コストを下げることができる。
【００２７】
第１の情報表示の形状を単純にすると提供できる情報が少ないが、例えば図３の実施態様のようにマイクロウェルに対する相対位置という情報を付加することにより、マイクロウェルの位置情報が提供可能である。あるいは、マイクロウェルに対して複数のドットを設けて点字のように意味を持たせれば、それ以上の情報も提供可能となる。また、本発明の培養容器は、第１の情報表示に加えて、それと同種の情報を示す第２の情報表示を併せて有する。第２の情報表示は、必要であれば第１の情報表示よりも広い面積を使って表示することができるため、その情報量を増やすこともできる。第２の情報表示は文字を含むことが好ましく、より好ましくは第２の情報表示は文字からなる。第２の情報表示によって第１の情報表示による情報の不足を補うことができる。また、第１の情報表示が何らかの理由で消えてしまった場合、あるいは観察時にレンズの汚れや培養容器中のゴミなどの干渉により第１の情報表示が観察できなかった場合に、第２の情報表示はフェールセーフとしての役割も果たすことができる。このように第１の情報表示に加えて第２の情報表示を有することは、情報の冗長化を行っているといえる。
【００２８】
本発明の培養容器において、第２の情報表示は、第１の情報表示を視認可能な第１の観察条件とは異なる第２の観察条件において視認可能であることを特徴とする。ここで、観察条件としては、観察倍率、観察視野の中心位置の変更または観察用光源の種類が挙げられる。観察倍率は、顕微鏡を用いてマイクロウェル内の被観察物を観察する際の拡大倍率を意味するが、観察倍率１倍は肉眼観察を意味する。第１の観察条件と第２の観察条件の違いが観察倍率の違いである場合、その倍率の差は２倍以上、好ましくは２．５倍以上である。具体例としては、第１の観察条件が１個のマイクロウェルのみが観察視野に入るような観察倍率とし、第２の観察条件が２個以上、好ましくは３個以上、より好ましくは４個以上のマイクロウェルが観察視野に入るような観察倍率とする場合が挙げられる。観察視野の中心位置の変更とは、培養容器と顕微鏡との相対位置を変更することを意味する。観察視野の中心位置を変更する際には、併せて観察倍率を変更しても、あるいは観察倍率を変更してもよい。
【００２９】
観察用光源の種類としては、自然光、水銀ランプ、キセノンランプ、紫外線ＬＥＤ、レーザー光（Ａｒ、Ａｒ−Ｋｒ、Ｈｅ−Ｎｅ、Ｈｅ−Ｃｄ、半導体、Ｔｉ：Ｓ等）などが挙げられる。自然光以外の光源は、主に蛍光観察に用いられる。第１の観察条件と第２の観察条件の違いを観察用光源の違いとする場合、第１の情報表示および第２の情報表示はそれぞれの光源に適した材料で付されている。例えば、観察用光源として、自然光と、蛍光観察用の光源とを用いる場合、第１の情報表示および第２の情報表示のいずれか一方は、蛍光材料を用いて付されている。第１の観察条件と第２の観察条件の違いを観察用光源の違いとする場合、第１の情報表示と第２の情報表示の大きさおよびそれぞれのマイクロウェルからの位置が等しくなってもよい。
【００３０】
第１の情報表示と第２の情報表示は、図３に示した実施態様のように個々のマイクロウェルを識別するための識別情報を示すのみならず、他の情報を示してもよい。それら情報表示が示す情報としては、培養容器の識別情報および角度情報、マイクロウェルの識別情報、形状情報および性状情報、ならびに被観察物の大きさ、色および状態を判断するための観察支援情報が挙げられる。なお、この点については後述する図５を参照されたい。
【００３１】
培養容器の識別情報とは、複数のマイクロウェルを備えた培養容器自体を識別するための情報である。培養容器の角度情報とは、培養容器を観察すべき方向を確認するための情報であり、少なくとも上下左右のいずれかを示す。マイクロウェルの識別情報とは、個々のマイクロウェルを識別するための情報である。マイクロウェルの形状情報とは、マイクロウェルの形状（例えばマイクロウェル底面の形状）を示す情報である。マイクロウェルの性状情報とは、マイクロウェルの底面の表面加工（例えば親水性加工、粗面加工、薬品の付与）などの状態を示す情報である。被観察物の大きさ、色および状態を判断するための観察支援情報とは、観察の際に参考とできるような色見本、大きさ見本、状態見本（例えば受精卵の分割状態の見本）スケールなどを意味する。
【００３２】
第１の情報表示と第２の情報表示が示す情報は、同種の情報である。ここで同種の情報とは、少なくとも一方が他方の情報を包含するより多い情報量を提供するものであるか、あるいは両者が同等の情報量を提供するものであることを意味し、両者の情報が同一であることを妨げない。同種の情報の例として図３の実施態様の場合に沿って説明する。第１の情報表示であるドットは、個々のマイクロウェルを識別する情報を提供し、第２の情報表示であるアルファベットは、同様に個々のマイクロウェルを識別する情報を提供し、さらにその向きによって培養容器の角度情報も提供する。第２の情報表示であるアルファベットは、第１の情報表示であるドットが示す情報を包含し、さらに追加の情報も提供していることになる。同種の情報とは、そのドットとアルファベットが提供する情報のような関係を意味する。同種の情報を２以上付すことで、情報の冗長性が得られ、フェールセーフとなる。
【００３３】
本発明の培養容器において、情報表示はマイクロウェル内の被観察物の観察と同時に観察可能な位置に有する。その位置とは、好ましくはマイクロウェルが設けられている培養容器の底部である。上面視にて視認可能であれば培養容器の底部の被観察物収容部が設けられている面に限られず、透明な培養容器であれば被観察物収容部が設けられている面と反対の面、あるいは培養容器底部の内部に情報表示が付されていてもよいが、培養容器の製造の容易さを考えると底部の被観察物収容部が設けられている面に付すことが好ましい。情報表示は、底部に凸状または凹状のいずれの態様で付してもよい。
【００３４】
情報表示は、培養容器の製造時に培養容器と一体として形成することができる。そのようにして付された情報表示は、培養容器と同じ材質からなる。培養容器の作製と同時に情報表示も付されるようにすることで、製造コストの低減が図れる。また、そのようにして付された情報表示は、容易には消失せず、長期の細胞培養時の頻回な培養操作や消毒用エタノールでの清拭の際にも耐えることができる。あるいは、必要に応じて情報表示は印刷やレーザーマーキングなどにより付してもよい。そのようにすれば、射出成型用金型の変更などを伴わずに情報表示を変更することができる。
【００３５】
ここまで、第１の情報表示と第２の情報表示の２種の情報表示を付すことについて説明したが、情報表示は２種に限られず必要に応じて３種以上付してもよい。例えば第３の情報表示は、第１の観察条件および第２の観察条件のいずれとも異なる第３の観察条件において視認可能であり、かつ第１の情報表示と同種の情報を示すことが好ましい。情報表示が４種以上付されている場合もこれと同様である。情報表示が３種以上付されている場合における観察条件の違いとしては、観察倍率、観察視野の中心位置の変更または観察用光源の種類などのいずれか一つによる違い、あるいはそのような観察条件の二つ以上に関係する違い（例えば観察倍率が異なり、かつ観察用光源の種類が異なる場合）が挙げられる。
【００３６】
図５は、本発明の培養容器におけるマイクロウェルと各情報表示の別の実施態様を示した図である（被観察物収容部の外周を示す線は省略している）。この実施態様において、８個のマイクロウェルのうち暗色で示した２個のマイクロウェル５４’はその表面加工が他のマイクロウェル５４と異なっている。第１の情報表示５６は、図３におけるものと同様にドットで示され、マイクロウェルとの相対位置によって各マイクロウェルを識別するための情報を提供する。第２の情報表示５７は、第１の情報表示５６と同様にドットで示されているが、その表面に蛍光材料が付されており、蛍光観察を行う際に視認しやすくなっている。第３の情報表示５８は、文字により、各マイクロウェルを識別するための情報「１〜８」に加えて、マイクロウェルの表面状態を識別するための情報「α」および培養容器自体を識別するための情報「Ｅ５Ａ」も提供する。第４の情報表示５９は二次元バーコードで付され、該二次元バーコードには培養容器を識別するための情報、および該培養容器におけるマイクロウェルの配置やマイクロウェルの表面加工の状態などを特定するための情報が含まれている。
【００３７】
本発明の培養容器は、底部と側壁とを有し、底部と側壁とから形成される空間に液体を収容可能である。底部の形状は特に制限されず、三角形および四角形等の多角形の形状でもよく、円（円形、略円形、楕円形および略楕円形を含む）の形状でもよく、側壁は底部の外縁を囲うように形成される。本発明の培養容器において、通常、底部と反対側は開口しており、開口部の形状は好ましくは底部の形状と同一である。好ましくは、開口部が円形で、開口幅（例えば、図２のｒ）が、好ましくは３０〜６０ｍｍ、特に３５ｍｍのものが用いられる。これは従来の細胞培養に用いられているシャーレと同等のサイズであり、汎用のシャーレから簡便に作製できること、および既存の培養装置等に適合しやすいことから、上記のようなサイズのものが好ましい。なお、本発明の培養容器は、通常のシャーレと同様に蓋を有していてもよい。
【００３８】
マイクロウェルの深さは、マイクロウェルの開口部から最深部までを垂直に測った深さをいい、好ましくは０．０５〜０．５ｍｍである。マイクロウェルの深さは、浅過ぎると、培養容器の輸送時や細胞の分裂時などに細胞が動き、細胞がマイクロウェルの範囲外に出てしまう恐れがあるため、確実に細胞をマイクロウェル内に保持できるように設定される。例えば、細胞をマイクロウェル内に保持するには、深さが細胞の最大径の１／３以上であることが好ましく、１／２以上であることがさらに好ましい。一方、深過ぎると、マイクロウェル内に培養液や細胞を導入することが難しくなるため、細胞をマイクロウェル内に保持しつつ、深過ぎない値になるよう適宜設定される。例えば、深さの上限をマイクロウェルの開口部の開口幅に対して３倍以下とすることができる。さらに、培養液の導入を容易にするためには、深さはマイクロウェルの開口幅の１倍以下であることが好ましく、１／２以下であることが特に好ましい。
【００３９】
マイクロウェルの壁面、特に傾斜面の表面粗さは、大きい値であると、顕微鏡で透過観察を行った画像を輪郭抽出処理に付す際に、傾斜面上の凹凸に起因して明瞭な輪郭が得られない恐れがあるため、可能な限り小さい値であることが好ましい。具体的には、最大高さＲｙ（粗さ曲線からその平均線の方向に基準長さだけを抜き取り、この抜き取り部分における山頂線と谷底線との間隔をいう）が１．０μｍ未満、特に０．５μｍ未満であることが好ましい。なお、傾斜面の表面粗さは、培養容器の鋳型を作製する際に磨き処理を施す等して、鋳型の加工精度を高めることにより小さくすることができる。
【００４０】
マイクロウェルは、培養容器の底部において、複数配置され、被観察物収容部を構成する。このようなマイクロウェルの群から構成される被観察物収容部は、底部に複数群配置されていてもよく、それらの群は互いに近接していなくてもよい。
【００４１】
複数のマイクロウェルが配置されてなる被観察物収容部は、それらを囲む内壁により、培養容器内のその他の部分と隔てられていてもよい（例えば、図１および２における８）。複数のマイクロウェルの群が培養容器の底部に存在する場合は、群ごとに内壁で囲まれることが好ましい。培養容器を受精卵の培養に用いる場合、通常、培養容器に受精卵を含む培養液の液滴を形成し、液滴をオイルで覆うことにより培養液の乾燥が防止されている。近接して形成されたマイクロウェルの群をさらに内壁で囲むことにより、その内部に培養液を収容して安定なドロップを形成し、培養液の分散を防ぐことができる。培養液をミネラルオイル等のオイルで覆う場合も同様である。
【００４２】
本発明の培養容器の材質は、特に制限されない。具体的には、金属、ガラス、およびシリコン等の無機材料、プラスチック（例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂）で代表される有機材料を挙げることができる。本発明の培養容器は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、プラスチック材料からなる培養容器を製造する場合には、慣用の成形法、例えば射出成形により製造することができる。
【００４３】
本発明の培養容器は、培養細胞の非特異的接着を防止し、また培養液のドロップが表面張力によって偏ることを防止する観点から、プラズマ処理などの表面親水化処理することが好ましい。製造後の容器に付着している菌数（バイオバーデン数）が１００ｃｆｕ／容器以下であることが好ましい。また、さらにγ線滅菌などの滅菌処理を施されていることがより好ましい。
【００４４】
本発明の培養容器は、受精卵の発育を促進するような表面処理または表面コートがなされていてもよい。特に、受精卵の発育を促進するために、他の器官の細胞（例えば、子宮内膜細胞や卵管上皮細胞）と共培養をする場合、これらの細胞をあらかじめ培養容器に接着させる必要がある。このような場合に、培養容器の表面に細胞接着性の材料をコートすると有利である。
【００４５】
培養対象となる細胞は、特に制限されないが、例えば、受精卵、卵細胞、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）およびｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞）が挙げられる。卵細胞は、未受精の卵細胞をさし、未成熟卵母細胞および成熟卵母細胞が含まれる。受精卵は、受精後、卵割により２細胞期、４細胞期、８細胞期と細胞数が増えていき、桑実胚を経て、胚盤胞へと発生する。受精卵には、２細胞胚、４細胞胚および８細胞胚などの初期胚、桑実胚、胚盤胞（初期胚盤胞、拡張胚盤胞および脱出胚盤胞を含む）が含まれる。胚盤胞は、胎盤を形成する潜在能力がある外部細胞と胚を形成する潜在能力がある内部細胞塊からなる胚を意味する。ＥＳ細胞は胚盤胞の内部細胞塊から得られる未分化な多能性または全能性細胞をさす。ｉＰＳ細胞は、体細胞（主に線維芽細胞）へ数種類の遺伝子（転写因子）を導入することにより、ＥＳ細胞に似た分化万能性を持たせた細胞をさす。すなわち、本発明において細胞には、受精卵や胚盤胞のように複数の細胞の集合体も包含される。
【００４６】
本発明の培養容器は、好ましくは哺乳動物および鳥類の細胞、特に哺乳動物の細胞の培養に好適である。哺乳動物は、温血脊椎動物をさし、例えば、ヒトおよびサルなどの霊長類、マウス、ラットおよびウサギなどの齧歯類、イヌおよびネコなどの愛玩動物、ならびにウシ、ウマおよびブタなどの家畜が挙げられる。本発明の培養容器は、ヒトの受精卵の培養に特に好適である。
【００４７】
例えば受精卵を培養する場合には、通常、培養後に、子宮への移植に適した良質な受精卵であるか否かが判別される。判別は画像解析装置により自動で行ってもよいし、顕微鏡等により目視により手動で行ってもよい。培養細胞の自動判別においては、顕微鏡により取得された培養容器内の細胞の画像をＣＣＤカメラ等の検出装置によって撮像し、得られた画像を輪郭抽出処理に付し、画像中の細胞に該当する部分を抽出し、抽出された細胞の画像を画像解析装置で解析することによりその質を判別することができる。画像の輪郭抽出処理については、例えば、特開２００６−３３７１１０号に記載された処理を利用できる。
【符号の説明】
【００４８】
１：培養容器
２：底部
３：側壁
４：マイクロウェル
５：被観察物収容部
６：第１の情報表示
７：第２の情報表示
８：内壁
１０：高倍率観察時の視野
２０：低倍率観察時の視野
５４：マイクロウェル
５６：第１の情報表示
５７：第２の情報表示
５８：第３の情報表示
５９：第４の情報表示
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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