(57)【要約】    【課題】天然物由来で安全性が高く、抗糖化性の高い素材を提供することを目的とする。    【解決手段】緑豆種皮の溶媒抽出物を用いることで、天然物由来の安全な抗糖化機能を有する食品添加用組成物及び抗糖化剤を得ることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑豆種皮の溶媒抽出物を含有する、抗糖化機能を有する食品添加用組成物。
【請求項２】
緑豆種皮の溶媒抽出物を含有する抗糖化剤。
【請求項３】
溶媒が、有機溶媒である、請求項２記載の抗糖化剤。
【請求項４】
有機溶媒がエタノール、メタノールまたはアセトンである、請求項３記載の抗糖化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗糖化機能を有する食品添加用組成物及び抗糖化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖化反応は古くから食品の世界で知られており、食品を加熱することでアミノ酸と糖が反応し、味や香り、食感に変化がもたらされることが示されてきた。一方、近年では生体反応としてのタンパク質糖化反応が注目されてきている。この生体内における糖化反応は、身体の中のタンパク質が体内に摂取された糖と反応して、変性される現象と考えられている。そして、化学反応を繰り返していくことによって、最終糖化産物AGEｓ(Advanced Glycation endproducts)を生成する。このAGEsが生体内の様々な反応を阻害することによって、皮膚老化、糖尿病合併症、動脈硬化、認知症、癌等種々の疾患を引き起こすと考えられている。
【０００３】
例えば、生体内に存在するタンパク質として、コラーゲンが挙げられる。コラーゲンは体内でもその存在量が多く、更に半減期が長く代謝サイクルの長いタンパク質であるため、体内に存在する糖質と反応することで、AGEｓが蓄積しやすいと考えられている。また、コラーゲンが糖化されることにより、通常は起こりえない架橋反応が起こり、それらが老化の原因の一つとして考えられている。コラーゲンの糖化は、皮膚のハリ低下や、骨粗しょう症、変形性関節症などの伸展に深く関与していると考えられており、糖化反応を抑制することは老化現象や各種の疾患を抑制することにつながることが考えられる。
【０００４】
糖化反応阻害剤としては、例えばアミノグアニジンが挙げられる。アミノグアニジンは組織でのAGEｓの蓄積を抑制し、加齢に伴う心臓血管や腎臓の機能低下の保護作用を果たすことが知られているが(非特許文献１)、肝障害等の副作用が引き起こされる可能性があることから、安全性が危惧されている。
【０００５】
また、天然の抗糖化素材としては、例えばブドレジャアキシラリス葉抽出物を有効成分とするもの(特許文献１)や、キンモクセイからの抽出物を有効成分とするもの(特許文献２)が挙げられるが、いまだ十分とはいえず、天然物由来で、かつ食経験もあり、安全で有用な抗糖化素材が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開2011-102270号公報
【特許文献２】特開2013-23487号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Proc. Natl. Acad. Sci. USA  Vol. 93, pp. 3902-3907, 1996
【非特許文献２】Food Chemistry 106 p475-481,2008
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従来の天然物由来の抗糖化剤では抗糖化性が十分といえず、天然物由来で安全性が高く、抗糖化活性の高い素材を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記の課題に対して鋭意研究を重ねた結果、緑豆種皮の溶媒抽出物が高い抗糖化活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
即ち、本発明は、
（１）緑豆種皮の溶媒抽出物を含有する、抗糖化機能を有する食品添加用組成物、
（２）緑豆種皮の溶媒抽出物を含有する抗糖化剤、
（３）溶媒が、有機溶媒である、（２）記載の抗糖化剤、
（４）有機溶媒がエタノール、メタノールまたはアセトンである、（３）記載の抗糖化剤、
である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、抗糖化剤の有効成分は天然物由来の緑豆種皮の溶媒抽出物であり、従来から食経験もあることから、安全性の高い抗糖化機能を有する食品添加用組成物及び抗糖化剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を具体的に説明する。
【００１３】
（抗糖化剤）
本発明の抗糖化剤は、緑豆種皮溶媒抽出物を含有する。
緑豆種皮溶媒抽出物の抗糖化作用は、例えば、糖化反応を阻害し、最終糖化生成物（ＡＧＥｓ）の生成を抑制することにより発揮されると考えられる。本発明において、例えば、コラーゲン抗糖化アッセイキットver.2（コスモバイオ社）を用いて測定した抗糖化活性がコントロールよりも高くなるものを、「抗糖化」と定義する。
【００１４】
（緑豆）
緑豆(Vigna radiataの種子)は、インド、中国、東南アジアの地域等を中心に、古くから食品または食品原料として使われてきた。緑豆を発芽させた緑豆スプラウトはもやしとして、また緑豆由来の澱粉は春雨の原料として、現在も世界中で広く食されており、豆類の中でも非常に食経験が豊富なものとして知られている。さらに、解熱及び解毒効果が高く、中国では古くから漢方薬としても用いられている。
【００１５】
緑豆の効能として中国では古くから漢方薬としても用いられており、解熱及び解毒効果が高いことが知られている。また、非特許文献２に示されているように、抗糖化効果があるとも言われているが、これは緑豆丸豆の効果であり、豆のどの部分が抗糖化効果に作用しているのかどうかを示すものはない。緑豆丸豆の効果はもちろんではあるが、例えば緑豆春雨の副産物として存在する緑豆の種皮にこのような効果が認められることは非常に意義のあることである。
【００１６】
原料となる緑豆種皮は、丸緑豆を水浸漬したのち分離し、分離した種皮を乾燥することで回収しても良いし、丸緑豆から脱皮機等を用いて種皮を回収しても良いし、廃棄物とされている緑豆種皮を利用しても良い。
【００１７】
（溶媒）
また、抽出溶媒としては、極性溶媒が好ましい。例えば、水や、エタノール、メタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、アセトン、プロピレングリコール、グリセリンなどの有機溶媒が挙げられ、これらを単独で、または2種以上を組み合わせて用いることができる。
抽出溶媒に水を用いる場合、温度は好ましくは20〜100℃、より好ましくは50〜100℃、さらにより好ましくは80〜100℃であり、処理時間は、好ましくは5分〜120分、より好ましくは10〜40分である。
また、エタノールやメタノール等の有機溶媒の場合、室温または溶媒の沸点以下の温度で使用することが望ましい。処理時間は好ましくは5分〜120分、より好ましくは10〜40分である。
抽出操作は2回以上行っても良い。
抽出溶媒として、有機溶媒を用いると、緑豆種皮溶媒抽出物の抗糖化活性が高くなる点で好ましく、この中でも、エタノール、メタノール、アセトンがより好ましい。さらに、エタノールが食品用途として用いる際にはより好ましい。
抽出溶媒は2種以上を組み合わせて用いてもよく、例えば水とエタノール、メタノール、アセトン等の有機溶媒を用いる場合、有機溶媒の使用比率は、溶媒の全体に対して50〜95容量％が好ましく、55〜90容量％がより好ましく、60〜85容量％がさらに好ましい。
【００１８】
抽出後は、遠心分離、濾過などの適当な分離手段によって沈殿物または不溶性画分を除き、上清または可溶性画分を回収することができる。さらに、上記抽出後の沈殿物または不溶性画分について、再度同様の抽出処理を行って、上清または可溶性画分を回収することもできる。
【００１９】
得られた緑豆種皮溶媒抽出物は、液状または溶媒除去した固形のいずれの形態でも用いられ得る。また、溶媒除去のためには、濃縮や乾燥などの処理に供しても良い。乾燥法としては、公知の任意の方法が用いられ得るが、例えば、風乾法、加熱乾燥法、スプレードライ法、凍結乾燥法などが挙げられる。
【００２０】
抗糖化剤として用いる緑豆種皮溶媒抽出物が抗糖化性を発揮できる量は、例えば、コラーゲン抗糖化アッセイキットver.2（コスモバイオ社）を用いて測定した場合に、緑豆種皮溶媒抽出物の乾燥物の濃度として、好ましくは0.04〜10mg/ml、より好ましくは0.1〜10mg/ml、さらに好ましくは0.2〜5mg/mlである。
【００２１】
本発明の緑豆種皮の溶媒抽出物は、抗糖化機能を有する食品添加用組成物として、種々の飲食品に添加することができる。ここで、飲食品としては特に限定されるものではなく、一般的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品等を幅広く含むものである。
【００２２】
本発明の緑豆種皮の溶媒抽出物は、また、抗糖化剤として利用できる。このような抗糖化剤は飲食品、化粧品、皮膚塗布剤、医薬品としても用いることができ、その形態は特に限定されるものではない。
ここで、飲食品としては特に限定されるものではなく、一般的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品等を幅広く含むものである。
【００２３】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらの実施例によってその技術範囲が限定されるものではない。
【実施例】
【００２４】
（製造例）
（緑豆種皮乾燥物の調製）
緑豆丸豆を水に1時間浸漬した後、水中で丸豆を撹拌することにより、種皮と豆(実)に分離した。得られた種皮を真空凍結乾燥器（ADVANTEC社）もしくは乾燥器（50℃）（タバイ社）を使用して、緑豆種皮乾燥物を得た。また、得られた緑豆種皮乾燥物はミクロパウダー（ウエスト社）を用いて微細化して用いた。
【００２５】
（実施例１）
水を用いて緑豆種皮乾燥物の抽出を行った。10gの緑豆種皮乾燥物を100mlの精製水に分散させて、90℃で20分間加熱した後、遠心機（KUBOTA8420）を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。また、遠心分離後の残渣に100mlの精製水を加え、90℃で20分間加熱した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。2回目と同様、さらに残渣に精製水を加え、3回抽出操作を行った。得られた全ての上清を凍結乾燥に供し、緑豆種皮水抽出物を得た。
【００２６】
（実施例２）
水2重量部、エタノール(純度99.5%)8重量部を混合し、80%エタノール溶液を作製した。10gの緑豆種皮乾燥物を100mlの80%エタノール溶液に分散させて、スターラーで20分間撹拌した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。また、遠心分離後の残渣に100mlの80%エタノール溶液を加え、20分間撹拌した後、3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。2回目と同様、さらに残渣に80%エタノール溶液を加え、3回抽出操作を行った。得られた全ての上清を70℃加温にて濃縮した後、凍結乾燥に供し、緑豆種皮エタノール抽出物を得た。
【００２７】
（実施例３）
水2重量部、アセトン(純度99.0%)8重量部を混合し、80%アセトン溶液を作製した。10gの緑豆種皮乾燥物を100ｍｌの80%アセトン溶液に分散させて、スターラーで20分間撹拌した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。また、遠心分離後の残渣に100mlの80%アセトン溶液を加え、20分間撹拌した後、3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。2回目と同様、さらに残渣に80%アセトン溶液を加え、3回抽出操作を行った。得られた全ての上清を70℃加温にて濃縮した後、凍結乾燥に供し、緑豆種皮アセトン抽出物を得た。
【００２８】
（抗糖化活性の検討）
コラーゲン抗糖化アッセイキットver.2（コスモバイオ社）を用いて、抗糖化活性の測定を行った。すなわち、コラーゲン溶液50μｌを96wellのマイクロプレートに充填し、ゲル状のコラーゲンの上に実施例1、２、３およびアミノグアニジン（陽性コントロール）を40μｌ重層した。なお、アミノグアニジン及びサンプル溶液は各濃度になるように、緩衝液に溶解した。その後、さらに500mMグリセルアルデヒド溶液10μｌを重層し、生成したAGEｓを蛍光プレートリーダー(励起波長335nm、蛍光波長460nm)で測定した。なお、グリセルアルデヒドの代わりに緩衝液を加えたものの蛍光値を測定し、被験物質由来の蛍光値を補正した。生成率は、陰性コントロール（被験物質を混和しないサンプル）を100%とし、陰性コントロールに対するグリセルアルデヒド由来のAGEｓ(Advanced Glycation endproducts、最終糖化産物)生成率を百分率で表した。なお、ＡＧＥｓ生成率の数値が低いほど、抗糖化活性が高いことを示す。
【００２９】
抗糖化活性の結果を表１に示す。
【００３０】
（表１）
2015182990.tif 000002
【００３１】
実施例１〜３の結果から、緑豆種皮溶媒抽出物にはAGEｓ生成抑制による、抗糖化活性があることが示された。また、熱水抽出物よりも、有機溶媒であるエタノールやアセトン抽出物の方が効果が高かった。
【００３２】
次に、緑豆丸豆、脱皮緑豆、および緑豆種皮の抗糖化活性の比較検討を行った。
【００３３】
（比較例１）
緑豆丸豆はミクロパウダー（ウエスト社）を用いて微細化して用いた。
緑豆丸豆粉砕物10gを50mlのエタノール（純度99.5%）に分散させて、スターラーで20分間撹拌した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。これを、緑豆丸豆エタノール抽出物原液とした。
【００３４】
（比較例２）
脱皮緑豆はミクロパウダー（ウエスト社）を用いて微細化して用いた。
脱皮緑豆粉砕物10gを50mlのエタノール（純度99.5%）に分散させて、スターラーで20分間撹拌した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。これを、脱皮緑豆エタノール抽出物原液とした。
【００３５】
（実施例４）
緑豆種皮乾燥物10gを50mlのエタノール（純度99.5%）に分散させて、スターラーで20分間撹拌した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。これを、緑豆種皮エタノール抽出物原液とした。
【００３６】
（実施例５）
緑豆種皮乾燥物10gを50mlのメタノール（純度99.8%）に分散させて、スターラーで20分間撹拌した後、遠心機を用いて3300ｒｐｍで20分間、遠心分離を行い、上清を回収した。これを、緑豆種皮メタノール抽出物原液とした。
【００３７】
得られた被験試料を用いて、抗糖化活性の検討を行った。方法は、実施例１〜３と同様である。なお、エタノールおよびメタノール抽出物原液については、被験試料を含んでいない溶媒由来の蛍光値を補正し、AGEｓ生成率を算出した。
【００３８】
抗糖化活性の結果を表２に示す。なお、表中のサンプル溶液の希釈率は、抽出物原液を1/1とし、それぞれの溶媒で5倍、50倍に希釈したものをそれぞれ、1/5、1/50として表した。
【００３９】
（表２）
2015182990.tif 000003
【００４０】
比較例１〜２、実施例４〜５の結果から、溶液の状態においても緑豆種皮溶媒抽出物は濃度依存的に抗糖化活性を示し、その抗糖化活性は、緑豆丸豆や脱皮緑豆よりも非常に強いことが示された。
【００４１】
これらの結果から、緑豆種皮溶媒抽出物はAGEｓ生成抑制効果による抗糖化活性を有し、さらに緑豆丸豆や脱皮緑豆よりも著しく強い活性を持つことが示された。