(57)【要約】【課題】白金化合物を、亜急性毒性の低い脂質ベ−スの製剤の一部として投与しすることを含む方法を提供すること【解決手段】本発明は、患者の腹腔内に癌治療に有効な量の脂質ベ−スの白金化合物製剤を投与することを含む、患者の癌を治療する方法である。ある態様において、本発明は、患者の腹腔内に癌治療に有効な量の脂質ベ−スの白金製剤を投与することを含む、患者の癌を治療する方法を特徴とする。いくつかの態様において、白金製剤中の白金化合物は、約０．８ｍｇ／ｍｌ乃至約１．２ｍｇ／ｍｌの濃度で、腹腔内投与される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願
本願は、２００４年１１月８日に出願された米国仮特許出願第６０／６２６，０２９号、および２００５年４月１５日に出願された米国仮特許出願第６０／６７１，５９３号の優先権を主張する。
【０００２】
序文
非経口経路での投与として、生体の様々な部分への注射がある。非経口経路としては、静脈（ｉｖ）、すなわち、静脈から直接血管系に投与する経路、動脈（ｉａ）、すなわち、動脈から直接血管系に投与する経路、腹腔内（ｉｐ）、すなわち、腹腔への投与、皮下（ｓｃ）すなわち、皮下からの投与、筋肉内（ｉｍ）、すなわち、筋肉内への投与、皮内（ｉｄ）、すなわち、皮膚層間への投与が挙げられる。非経口経路は、多くの点で経口経路より好ましい。例えば、投与される薬物の一部もしくは全部が胃腸管で分解されるであろう場合、非経口投与が好ましい。同様に、緊急の症例で迅速な対応が必要な場合、非経口投与が経口投与より通常好ましい。
【０００３】
化学療法の、ｉｐ投与での腹膜空間への局所送達は、局所に発生した癌、例えば、卵巣癌や結腸癌などに対する安全かつ有効な治療であることがわかっている。
【０００４】
卵巣癌などの癌への対応における抗悪性腫瘍薬の腹腔内投与の概念は、多くの研究者たちの興味を引き付けてきた。実際、臨床診療に導入される第１の細胞毒性薬物であるアルキル化剤の腹腔内送達についての実験が１９５０年代の初めに最初に行われている。Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ．，１９８６，  １３，  ２１９−２４２。
【０００５】
しかしながら、卵巣癌の治療における局所投与の問題点と潜在性の双方が徹底的に研究されるようになったのは１９７０年代になってからであった。Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ．，１９８６，  １３，  ２１９−２４２；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  １９９１，  １８  （ｓｕｐｐｌ  ３），  ２４８−２５４。腹腔内への薬物送達の実験の合理的な方法の開発における重要な出来事は、今では古典的な論文となったＤｅｄｒｉｃｋら（国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ））の論文の発表であった。そこで、初めて、卵巣癌への対応でのこのアプローチの健全な薬物速度論による合理的根拠が提示された。Ｄｅｄｒｉｃｋ  ＲＬ，  Ｍｙｅｒｓ  ＣＥ，  Ｂｕｎｇａｙ  ＰＭ  ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．  Ｒｅｐ．，  １９７８，  ６２，  １−９。
【０００６】
シスプラチン−シス−ジアミン−ジクロロ白金（ＩＩ）は、癌の全身的治療に用いられる、より有効な抗腫瘍薬の１つである。この化学治療薬は、実験動物の腫瘍モデルおよび、子宮内膜、膀胱、卵巣および睾丸の腫瘍、ならびに頭頚部の扁平上皮癌などの、ヒト腫瘍の治療において非常に有効である（Ｓｕｒら、１９８３  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ４０  （５）：  ３７２−３７６；Ｓｔｅｅｒｅｎｂｅｒｇら、１９８８  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２１  （４）：２９９−３０７）。シスプラチンはまた、肺癌、ＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣの両方の治療にも広く用いられている（Ｓｃｈｉｌｌｅｒら、２００１  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ６１  （Ｓｕｐｐｌ  １）：３−１３）。他の活性白金化合物（以下において定義する）は、癌治療において有用である。
【０００７】
他の癌の化学治療薬と同様、シスプラチンなどの活性白金化合物は、典型的に毒性が高い。シスプラチンの主な短所は、主要な用量依存的因子であるその極端な腎毒性、循環半減期が僅か数分という腎臓からの迅速な排出、およびその血漿タンパク質に対する強い親和性である（Ｆｒｅｉｓｅら、１９８２  Ａｒｃｈ  Ｉｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ  Ｔｈｅｒ．  ２５８（２）：１８０−１９２）。
【０００８】
活性白金化合物の毒性を最小限にするための試みとしては、化学療法、アナログの合成（Ｐｒｅｓｔａｙｋｏら、１９７９  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ．  ６（１）：１７−３９；Ｗｅｉｓｓら、１９９３  Ｄｒｕｇｓ．  ４６  （３）：３６０−３７７）、免疫治療およびリポソームへの閉じ込めの組み合わせがあった（Ｓｕｒら、１９８３；Ｗｅｉｓｓら、１９９３）。シスプラチンを含み、リポソームに閉じ込められた抗悪性腫瘍薬は、抗腫瘍活性を保持しながら、フリーな形状の物質と比較して毒性が低い（Ｓｔｅｅｒｅｎｂｅｒｇら、１９８７；Ｗｅｉｓｓら、１９９３）。
【０００９】
しかしながら、シスプラチンは、その生理活性物質の水溶性が室温で約１．０ｍｇ／ｍｌと低く、脂溶性が低く、この両方の特性によって生理活性物質／脂質比率が低くなるため、リポソームまたは脂質複合体に効率的に閉じ込めることが困難である。
【００１０】
シスプラチンを含有するリポソームおよび脂質複合体には、別の問題、すなわち、組成物の安定性の問題がある。特に、生理活性物質の力価の維持および貯蔵中のリポソーム中での生理活性物質の保持の問題が認識されており（Ｆｒｅｉｓｅら、１９８２；Ｇｏｎｄａｌら、１９９３；Ｐｏｔｋｕｌら、１９９１、Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  １６４  （２）：６５２−６５８；Ｓｔｅｅｒｅｎｂｅｒｇら、１９８８；Ｗｅｉｓｓら、１９９３）、また、シスプラチンを含有するリポソームの貯蔵寿命が４℃で数週間程度ということが報告されている（Ｇｏｎｄａｌら、１９９３  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２９Ａ  （１１）：１５３６−１５４２；Ｐｏｔｋｕｌら、１９９１）。
【００１１】
Ａｌｂｅｒｔｓらは、ｉｖシスプラチンと比較して、ｉｐシスプラチンは、ＩＩＩ期の卵巣癌患者において生存率を有意に高めること、毒性を有意に減らし、そして残留腫瘍量を２ｃｍ以下にすることを示した。Ａｌｂｅｒｔｓ  Ｄ．Ｓ．ら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  １９９６，  ３３５（２６），  １９５０−５。しかしながら、ｉｐシスプラチンには、用量依存的毒性である腎毒性における向上が認められないなどのいくつかの短所がある。
【００１２】
さらに、前臨床および臨床データの双方から、卵巣癌の治療において薬物送達の腹腔内経路を採用することに関するあらゆる利点は、悪性の患者のうち、相対的に輪郭のはっきりした小さなサブセットに限られることがしっかりと確立している。Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ．，１９８６，  １３，  ２１９−２４２；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  １９９１，  １８（ｓｕｐｐｌ  ３），  ２４８−２５４；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ，  Ｒｅｉｃｈｍａｎ  Ｂ，  Ｈａｋｅｓ  Ｔら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  １９９１，  ９，  １８０１−１８０５。例えば、Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  ＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒ（ＭＳＫＣＣ）で、進行卵巣癌のサルベ−ジ治療として、組み合わせシスプラチンベ−スの治療を受けた一連の患者において、最大残留腫瘍質量を測定したところ、３２％（１７／５０）がｉｐ治療開始時において、直径の最大値で１ｃｍ以下であり、手術で完全寛解に達したことが証明された。それと比較して、少なくとも１つの腫瘍の大きさが最大径で１ｃｍ以上の患者においては、僅か５％未満（２／３９）であった。Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ，  Ｒｅｉｃｈｍａｎ  Ｂ，  Ｈａｋｅｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  １９９１，  ９，  １８０１−１８０５。ますます増える癌の有害な作用を克服するための投与の直接経路以上のものが必要であることが明らかである。
【００１３】
シスプラチンに加えて、他の多くの抗悪性腫瘍薬が、卵巣癌のサルベ−ジ治療として、ｉｐ経路で送達される際の安全性と潜在性に関して研究されている。これらには、カルボプラチン、パクリタキセル、ミトキサントロン、ドキソルビシン、マイトマイシン−Ｃ，５−フルオロウウラシル、メトトレキサ−ト、チオテパ、組換えインタ−フェロン−α、組換えインタ−フェロン−γ、インタ−ロイキン２、および腫瘍壊死因子が含まれる。Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ．，１９８６，  １３，  ２１９−２４２；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  １９９１，  １８（ｓｕｐｐｌ  ３），  ２４８−２５４；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ，  Ｒｅｉｃｈｍａｎ  Ｂ，  Ｈａｋｅｓ  Ｔ  ｅｔａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  １９９１，  ９，  １８０１−１８０５；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  悪性疾患の管理における抗腫瘍薬の局所送達（Ｒｅｇｉｏｎａｌ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｔｄｉｓｅａｓｅ）。Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ：  Ｔｈｅ  Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１；  Ｂｅｒｅｋ  Ｊ．Ｓ．，  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ，  １９９２，  １，  ２６−２９；  Ｍａｒｋｍａｎ  Ｍ，  Ｂｅｒｅｋ  Ｊ．Ｓ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ，  １９９２，  １，  ３０−３４；  Ａｌｂｅｒｔｓ  Ｄ．Ｓ．，  Ｌｉｕ  Ｐ．Ｙ．，  ＨａｎｎｉｇａｎＥ．Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，１９９５，  １４，  ２７３ａ；  Ｒｏｗｉｎｓｋｙ  Ｅ．Ｋ．，  Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ  Ｒ．Ｃ．，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  １９９５，  ３３２，  １００４−１０１４。レジメンの組み合わせが研究されている。
【００１４】
白金化合物のｉｐ投与の進歩にもかかわらず、白金化合物の標的組織中の用量依存的毒性および薬物濃度の低さから、大半の治療は、患者の延命を向上させることができない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の目的は、白金化合物を、亜急性毒性の低い脂質ベ−スの製剤の一部として投与しすることを含む方法であって、症例によっては、脂質製剤なしで白金化合物が投与される場合の２倍の量を投与する、癌を治療する方法を提供することである。
【００１６】
本発明はまた、経口投与の場合にしばしばみられる胃腸管での分解を回避するために、局所投与によって白金化合物を導入することによって、癌を治療することを目的とする。
【００１７】
本発明は、本明細書に提示した脂質ベ−スの白金製剤の、効率的な腹腔内投与の実現に起因するものである。
【００１８】
ある態様において、本発明は、患者の腹腔内に癌治療に有効な量の脂質ベ−スの白金製剤を投与することを含む、患者の癌を治療する方法を特徴とする。いくつかの態様において、白金製剤中の白金化合物は、約０．８ｍｇ／ｍｌ乃至約１．２ｍｇ／ｍｌの濃度で、腹腔内投与される。いくつかの態様において、白金製剤中の白金化合物は、約０．９ｍｇ／ｍｌ乃至約１．１ｍｇ／ｍｌの濃度で、腹腔内投与される。いくつかの態様において、白金製剤中の白金化合物は、約１ｍｇ／ｍｌの濃度で、腹腔内投与される。
【００１９】
いくつかの態様において、本発明は、上記方法に関し、白金化合物は、シスプラチン、カルボプラチン（ジアミン（ｌ，１−シクロブタンジカルボキシラト）−白金（ＩＩ））、テトラプラチン（オルマプラチン）（テトラクロロ（１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ’）−白金（ＩＶ））、チオプラチン（ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎ）（ビス（Ｏ−エチルジチオカルボナ−ト）白金（ＩＩ））、サトラプラチン、ネダプラチン、オキサプラチン、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、イプロプラチン、トランスプラチン、ロバプラチン、シス−アミンジクロロ（２−メチルピリジン）白金、ＪＭ１１８（シス−アンミンジクロロ（ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ）（シクロヘキシルアミン）白金（ＩＩ））、ＪＭ１４９（シス−アンミンジクロロ（シクロヘキシルアミン）−トランス−ジヒドロキソ白金（ＩＶ））、ＪＭ２１６（ビス−アセタト−シス−アンミンジクロロ（シクロヘキシルアミン）白金（ＩＶ））、ＪＭ３３５（トランス−アンミンジクロロ（シクロヘキシルアミン）ジヒドロキソ白金（ＩＶ））、（トランス、トランス、トランス）ビス−ミュ−−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュ−−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、およびその混合物からなる群から選択される。
【００２０】
いくつかの態様において、本発明は、上記方法に関し、脂質は、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵ホスファチジルグリセロ−ル（ＥＰＧ）、卵ホスファチジルイノシト−ル（ＥＰＩ）、卵ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、卵ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＥＰＥ）、卵ホスファチジン酸（ＥＰＡ）、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、大豆ホスファチジルグリセロ−ル（ＳＰＧ）、大豆ホスファチジルセリン（ＳＰＳ）、大豆ホスファチジルイノシト−ル（ＳＰＩ）、大豆ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＳＰＥ）、大豆ホスファチジン酸（ＳＰＡ）、硬化卵ホスファチジルコリン（ＨＥＰＣ）、硬化卵ホスファチジルグリセロ−ル（ＨＥＰＧ）、硬化卵ホスファチジルイノシト−ル（ＨＥＰＩ）、硬化卵ホスファチジルセリン（ＨＥＰＳ）、硬化卵ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＨＥＰＥ）、硬化卵ホスファチジン酸（ＨＥＰＡ）、硬化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、硬化大豆ホスファチジルグリセロ−ル（ＨＳＰＧ）、硬化大豆ホスファチジルセリン（ＨＳＰＳ）、硬化大豆ホスファチジルイノシト−ル（ＨＳＰＩ）、硬化大豆ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＨＳＰＥ）、硬化大豆ホスファチジン酸（ＨＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＭＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびジステアロイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＳＰＧ）、ジオレイルホスファチジル−エタノ−ルアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、パルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロ−ル（ＰＳＰＧ）、モノオレオイル−ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＭＯＰＥ）、コレステロ−ル、エルゴステロ−ル、ラノステロ−ル、トコフェロ−ル、脂肪酸のアンモニウム塩、リン脂質のアンモニウム塩、グリセリドのアンモニウム塩、ミリスチルアミン、パルミチルアミン、ラウリルアミン、ステアリルアミン、ジラウリルエチルホスホコリン（ＤＬＥＰ）、ジミリストイルエチルホスホコリン（ＤＭＥＰ）、ジパルミトイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）およびジステアロイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）、Ｎ−（２、３−ジ−（９−（Ｚ）−オクタデセニルオキシ）−プロップ（ｐｒｏｐ）−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１、２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、ホスファチジルグリセロ−ル類（ＰＧｓ）、ホスファチジン酸類（ＰＡｓ）、ホスファチジルイノシト−ル類（Ｐｌｓ）、ホスファチジルセリン類（ＰＳｓ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジミリストイルホスファチジルイノシト−ル（ＤＭＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジルイノシト−ル（ＤＰＰＩ）、ジステアロイルホスファチジルイノシト−ル（ＤＳＰＩ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ならびにその混合物からなる群から選択される。いくつかの態様において、脂質ベ−スの白金製剤中の脂質は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）などのリン脂質、またはコレステロ−ルなどのステロ−ル、またはその両方である。さらに別の態様において、脂質は、５０〜６５ｍｏｌ％のＤＰＰＣと３５〜５０ｍｏｌ％コレステロ−ルの混合物である。
【００２１】
さらに別の態様において、治療される癌は下記から選択される。メラノ−マ、精巣（生殖細胞）骨肉腫、軟組織サルコ−マ、甲状腺癌、結腸癌、卵巣癌、腎臓の癌、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膀胱癌、子宮癌、肺癌、胃癌、肝臓癌、子宮内膜癌、または頭頚部の扁平上皮癌。いくつかの態様において、治療される癌は、卵巣または結腸癌である。
【００２２】
さらに別の態様において、本発明は前記方法に関し、脂質ベ−スの白金化合物製剤中での白金化合物と脂質との比率が重量比で１：５乃至１：５０である。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤は、平均直径が０．０１ミクロン乃至３．０ミクロンであるリポソ−ムを含む。
【００２３】
さらに別の態様において、本発明は、前記方法に関し、脂質がＤＰＰＣとコレステロ−ルとの混合物であり、脂質ベ−スの白金化合物製剤中での白金化合物と脂質との比率が重量比で１：５乃至１：５０であり、脂質ベ−スの白金化合物製剤は、平均直径が０．０１ミクロン乃至３．０ミクロンであるリポソ−ムを含む。さらに別の態様において、白金化合物は、シスプラチンである。
【００２４】
さらに別の態様において、本発明は、前記方法に関し、脂質がＤＰＰＣとコレステロ−ルとの重量比２：１の混合物であり、脂質ベ−スの白金化合物製剤中での白金化合物と脂質との比率が重量比１：２０であり、脂質ベ−スの白金化合物製剤が、平均直径が０．４０ミクロンのリポソ−ムを含み、前記白金化合物がシスプラチンである。
【００２５】
さらに別の態様において、患者はヒトである。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤は、少なくとも３週間に１回投与される。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤は、少なくとも３週間に２回投与される。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤は、少なくとも３週間に３回投与される。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤中の白金化合物の量は、６０ｍｇ／ｍ２以上、１００ｍｇ／ｍ２以上、１４０ｍｇ／ｍ２以上、または１８０ｍｇ／ｍ２以上である。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤中の白金化合物の量が１００ｍｇ／ｍ２以上であり、前記脂質ベ−スの白金化合物製剤は、少なくとも３週間に１回投与される。
【００２６】
別の態様において、本発明は、前記方法に関し、脂質ベ−スの白金化合物は、（ａ）白金化合物と疎水性マトリクス輸送システムとを組み合わせること；（ｂ）該混合物を第１の温度で確立すること；（ｃ）その後、該混合物を第２の温度で確立することによって、調製することができる。尚、第２の温度は、第１の温度より低い。ステップ（ｂ）および（ｃ）は、白金化合物のカプセル化を向上させるのに効果的である。さらに別の態様において、第１の温度は、約４℃〜約７０℃である。さらに別の態様において、第２の温度は、約−２５℃〜約２５℃である。さらに別の態様において、ステップｂ）およびｃ）は、約５〜３００分維持される。
【００２７】
本発明のこれらの態様、および他の態様、そしてそれらの特徴および特性は、明細書、図面および請求の範囲によって明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、脂質ベ−スのシスプラチンのｉｐ投与（Ｌ−ＣＤＤＰ−ｉｐ）の毒性は、シスプラチンのｉｐ投与（ＣＤＤＰ−ｉｐ）の場合と比較して大きく減少することを示す図である。
【図２】図２は、脂質ベ−スのシスプラチンを腹腔内投与および静脈内投与した場合の血流中のシスプラチンの量が、フリ−のシスプラチンを腹腔内投与した場合と比較して、増加していることを示す図である。
【図３】図３は、脂質ベ−スのシスプラチンを静脈内投与した場合の血流中のシスプラチンの量が、フリ−のシスプラチンを腹腔内投与した場合と比較して、増加していることを示す図である。
【図４】図４は、脂質ベ−スのシスプラチンからのシスプラチンの腎臓における量が、フリ−のシスプラチンを腹腔内投与した場合と比較して、増加していることを示す図である。
【図５】図５は、脂質ベ−スのシスプラチンからのシスプラチンの肝臓における量が、フリ−のシスプラチンを腹腔内投与した場合と比較して、増加していることを示す図である。
【図６】図６は、脂質ベ−スのシスプラチンからのシスプラチンの肺における量が、フリ−のシスプラチンを腹腔内投与した場合と比較して、増加していることを示す図である。
【図７】図４は、脂質ベ−スのシスプラチンを腹腔内投与した場合の、シスプラチンの脾臓における量が、フリ−のシスプラチンを腹腔内投与した場合と比較して増加していることを示す図である。
【図８】図８は、脂質ベ−スのシスプラチンと、腹腔内投与されたフリ−のシスプラチンからの白金の、血液／腎臓濃度比を示す図である。
【図９】図９は、フリ−のシスプラチンが静脈内または腹腔内に送達された場合の血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベルの増加が、いずれかの方法で投与された脂質ベ−スのシスプラチンと比較して増加していることを示す図である。
【図１０】図１０は、生存可能なヒト卵巣癌細胞株ＳＫ−ＯＶ３−ｉｐ１を移植されたマウスの、フリ−のシスプラチンおよび脂質ベ−スのシスプラチンをｉｐ投与した後の生存率を示す図である。
【図１１】図１１は、生存可能なＬ１２１０腫瘍細胞を移植されたマウスの、脂質ベ−スのシスプラチンと、非周期的温度のシスプラチンリポソ−ムと、可溶性シスプラチンをｉｐ投与した後の生存率を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
Ｉ．定義
便宜上、本発明の更なる説明の前に、明細書、実施例、添付した請求の範囲で用いられているいくつかの用語をここに集めた。これらの定義は、開示の他の場所に鑑みて読み取り、当業者によって理解されるべきである。他に特に記載のない限り、本明細書において用いられている全ての技術的および科学的用語は、当該技術分野の当業者によって理解されるものと同じ意味を持つ。
【００３０】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書においては、該冠詞の文法上の目的語が１または１より多い（すなわち、少なくとも１である）ことをを意味する。例えば、「ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ」は、１つのエレメントまたは１より多くのエレメントを意味する。
【００３１】
用語「バイオアベイラブル」は技術的に認識されており、それが投与された患者または被験者が、投与された量、またはその一部を吸収され、組み込み、そうでなければ、生理学的に利用することができる、本発明の形態を表す。
【００３２】
本明細書において用いられている用語「癌を治療する際の有効量」は、癌を治療するのに有効な脂質ベ−スの白金化合物製剤の量を意味する。ある態様において、脂質ベ−スの白金化合物製剤の癌を治療する際の有効量は、ヒトにおけるｉｐ送達では典型的に約１００ｍｇ／ｍ２である。
【００３３】
用語「ＣＤＤＰ」は、シスジアミンジクロロ白金を表す。それは本明細書において「シスプラチン」と互換可能に用いられる。
【００３４】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、包括的な、オ−プンな意味で用いられ、更に別のエレメントを含み得ることを意味する。
【００３５】
用語「疎水性マトリクス輸送システム」は、下記の溶媒注入プロセスにおいて調製される脂質／溶媒混合物である。
【００３６】
本明細書において用いられている用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、「限定されないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」を意味する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」と「限定されないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」は互換可能に用いられる。
【００３７】
本発明で用いられている用語「腹腔内」または「腹腔内に」または「ｉｐ」は、例えば、白金化合物などの抗新生物作用薬といった治療薬の、患者の腹膜キャビティ−への投与を意味する。本発明で用いられている用語「腹膜キャビティ−」は、腹骨盤壁を裏打ちし、内臓を包囲する漿膜を意味する。
【００３８】
用語「Ｌ−ＣＤＤＰ」は、本明細書においてシスジアミンジクロロ白金の脂質ベ−スの製剤を意味し、本明細書において「脂質ベ−スのシスプラチン」と互換可能に用いられる。
【００３９】
本発明で用いられている用語「脂質ベ−スの白金化合物」は、脂質と白金化合物を含む組成物を意味する。いくつかの態様において、脂質ベ−スの白金化合物は、リポソ−ムの形態で存在することができる。いくつかの態様において、脂質ベ−スの白金化合物中の白金化合物と脂質の比率は、重量比で約１：５乃至１：５０である。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物中の白金化合物と脂質の比率は、約１：５乃至約１：３０とすることができる。さらに別の態様において、脂質ベ−スの白金化合物中の白金化合物と脂質の比率は、重量比で約１：５乃至約１：２５とすることができる。なお別の態様において、白金化合物はシスプラチンとすることができる。
【００４０】
本明細書において用いられている用語「哺乳動物」は、当該技術において公知であり、哺乳動物の例としては、ヒト、霊長類、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、および齧歯動物（例えば、マウスやラット）が挙げられる。
【００４１】
当該方法によって治療される「患者」、「被験者」、または「宿主」は、ヒトまたは非ヒト動物のいずれであってもよい。
【００４２】
用語「薬学的に許容される塩」は、技術的に認識されており、化合物の非毒性の無機もしくは有機の酸添加塩を意味する。例えば、本発明の組成物中に含有されるものが含まれる。
【００４３】
用語「溶媒注入」は、１以上の脂質を、少量、好ましくは最少量のプロセス相溶性溶媒（ｐｒｏｃｅｓｓ  ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｓｏｌｖｅｎｔ）に溶解して、脂質懸濁液もしくは溶液（好ましくは溶液）を作製すること、次いで該溶液を、生理活性物質を含有する水性媒体に注入することを含む。典型的に、プロセス相溶性溶媒は、透析処理のような水性プロセスにおいて洗浄され得るものである。冷却／加温サイクルが行われた組成物は、溶媒注入、溶媒注入によって作製されることが好ましい。溶媒としては、アルコ−ル類が好ましく、そして好ましいアルコ−ルはエタノ−ルである。
【００４４】
「エタノ−ル注入」は、溶媒注入の１つのタイプであり、１以上の脂質を少量、好ましくは最少量のエタノ−ルに溶解し、脂質溶液を形成し、ついで該溶液を、生理活性物質を含有する水性媒体に注入することを含む。「少」量の溶媒とは、注入プロセスにおいて、リポソ−ムまたは脂質複合体を形成するのに適合する量である。
【００４５】
用語「治療薬」は、技術的に認識されており、被験者において局所的もしくは全身的に作用する、生物学的、生理学的、もしくは薬理学的に活性のある物質である、あらゆる化学的部分を意味する。「薬物」とも呼ばれる治療薬の例は、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  ＲｅｆｅｒｅｎｃｅおよびＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓなどの公知の文献に記載されており、例えば、限定されないが、医薬品類；ビタミン類；ミネラルサプリメント類；疾患もしくは病気の治療、予防、診断、治療もしくは軽減のために用いられる物質；生体の構造もしくは機能に影響を及ぼす物質；または生理学的環境におかれたあとで生物学的活性を示す、もしくはより活性的になるプロドラッグ類が含まれる。
【００４６】
用語「治療指標」は、技術的に認識された語であり、薬物の毒性の定量評価と薬物の効果の定量評価の比率、例えば、動物の場合、ＬＤ５０／ＥＤ５０を表す。用語「ＬＤ５０」は、技術的に認識されており、試験生物の５０％に死の反応を引き起こす所与の毒性物質の用量を意味する。これは時に、平均致死用量とも呼ばれる。用語「ＥＤ５０」は、技術的に認識されており、平均有効用量と呼ばれる。
【００４７】
用語「治療」は、技術的に認識されており、あらゆる障害および疾患の少なくとも１つの症状を治癒ならびに軽減させることを言う。
【００４８】
ＩＩ．脂質
抗悪性腫瘍薬のｉｐもしくはｉｖ送達のためのリポソ−ムを作製する際に用いられる脂質は、合成、半合成または天然に存在する脂質であることができ、リン脂質、トコフェロ−ル、ステロ−ル、脂肪酸、アルブミンなどのグリコプロテイン、負帯電脂質、陽イオン性脂質を含む。リン脂質としては、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵ホスファチジルグリセロ−ル（ＥＰＧ）、卵ホスファチジルイノシト−ル（ＥＰＩ）、卵ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＥＰＥ）、およびホスファチジン酸（ＥＰＡ）などの脂質；その大豆対応物（ｓｏｙａ  ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ）である、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、ＳＰＧ、ＳＰＳ、ＳＰＩ、ＳＰＥ、およびＳＰＡ；その硬化卵および大豆対応物（例えば、ＨＥＰＣ、ＨＳＰＣ）、炭素数１２〜２６の鎖を含有する２および３のグリセロ−ル位置における脂肪酸のエステル結合およびコリン、グリセロ−ル、イノシト−ル、セリン、エタノ−ルアミンを含むグリセロ−ルのＩ位置における異なる頭基（ｈｅａｄ  ｇｒｏｕｐ）から構成された他のリン脂質、ならびに対応するホスファチジン酸があげられる。これらの脂肪酸の鎖は、飽和であっても不飽和であってもよく、そのリン脂質は、異なる鎖長および異なる不飽和度の脂肪酸で構成してもよい。特に、製剤の組成物は、ＤＰＰＣを含むことができる。他の例としては、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびジミリストイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびジパルミトイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、およびジステアロイルホスファチジルグリセロ−ル（ＤＳＰＧ）、ジオレイルホスファチジル−エタノ−ルアミン（ＤＯＰＥ）およびパルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）やパルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロ−ル（ＰＳＰＧ）のような混合リン脂質、およびモノオレオイル−ホスファチジルエタノ−ルアミン（ＭＯＰＥ）のような単一アシル化リン脂質（ｓｉｎｇｌｅ  ａｓｙｌａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ）を含むことができる。
【００４９】
ステロ−ルは、コレステロ−ル、コレステロ−ルヘミスクシナ−トを含むコレステロ−ルのエステル、コレステロ−ル硫酸水素塩およびコレステロ−ルサルフェ−トを含むコレステロ−ルの塩、エルゴステロ−ル、エルゴステロ−ルヘミスクシナ−トを含むエルゴステロ−ルのエステル、エルゴステロ−ル硫酸水素塩およびエルゴステロ−ルサルフェ−トを含むエルゴステロ−ルの塩、ラノステロ−ル、ラノステロ−ルヘミスクシナ−トを含むラノステロ−ルのエステル、ラノステロ−ル硫酸水素塩およびラノステロ−ルサルフェ−トを含むラノステロ−ルの塩を含むことができる。トコフェロ−ルは、トコフェノ−ル、トコフェノ−ルヘミスクシナ−トを含むトコフェノ−ルのエステル、トコフェノ−ル硫酸水素塩およびトコフェノ−ルサルフェ−トを含むトコフェノ−ルの塩を含むことができる。用語「ステロ−ル化合物」は、ステロ−ル、トコフェロ−ルなどを含む。
【００５０】
陽イオン性脂質は、脂肪酸のアンモニウム塩、リン脂質およびグリセリドを含むことができる。脂肪酸は、飽和であっても不飽和であってもよい、炭素数１２〜２６の鎖を含有する脂肪酸を含む。具体例としては、ミリスチルアミン、パルミチルアミン、ラウリルアミンおよびステアリルアミン、ジラウリルエチルホスホコリン（ＤＬＥＰ）、ジミリストイルエチルホスホコリン（ＤＭＥＰ）、ジパルミトイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）およびジステアロイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）、Ｎ−（２、３−ジ−（９−（Ｚ）−オクタデセニルオキシ）−プロップ−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、および１、２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）が挙げられる。
【００５１】
使用することができる負帯電脂質は、ホスファチジルグリセロ−ル類（ＰＧｓ）、ホスファチジン酸類（ＰＡｓ）、ホスファチジルイノシト−ル類（Ｐｌｓ）、およびホスファチジルセリン類（ＰＳｓ）を含むことができる。例としては、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＭＰＡ、ＤＰＰＡ、ＤＳＰＡ、ＤＭＰＩ、ＤＰＰＩ、ＤＳＰＩ、ＤＭＰＳ、ＤＰＰＳ、およびＤＳＰＳが挙げられる。
【００５２】
ＩＩＩ．リポソ−ム
リポソ−ムは、閉じ込めた水性ボリュ−ムを含有する、完全に閉じた脂質二重層膜である。抗癌性の化合物の非経口送達に用いるリポソ−ムは、単ラメラ小胞（プロセシング単一膜二重層）もしくは多重ラメラ小胞（多層膜二重層を特徴とするタマネギ様構造であり、隣とは水溶性層によってそれぞれ分離している）。二重層は、２つの脂質単一層からなる。疎水性「尾（ｔａｉｌ）」領域と親水性の「頭（ｈｅａｄ）」領域からなる。膜二重層の構造は、脂質単一層の疎水性（無極性）の「尾」が二重層の中心を向き、一方、親水性の「頭」が水相を向いた構造となっている。
【００５３】
リポソ−ムは、種々の方法（例えば、Ｃｕｌｌｉｓ  ら（１９８７）を参照されたい）によって作製することができる。Ｂａｎｇｈａｍ’ｓの処置（Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  （１９６５））は、通常の多重ラメラ小胞（ＭＬＶｓ）を作製する。Ｌｅｎｋら（米国特許第４，５２２，８０３号、第５，０３０，４５３号および第５，１６９，６３７号）、Ｆｏｕｎｔａｉｎら（米国特許第４，５８８，５７８号）、ならびにＣｕｌｌｉｓら（米国特許第４，９７５，２８２号）は、それらの水性コンパ−トメントのそれぞれにほぼ等しい層間溶質分散を持つ多重ラメラリポソ−ムを作製する方法を開示している。Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ら、米国特許第４，２３５，８７１号は、オリゴラメラリポソ−ムの逆相蒸発法による調製を開示している。
【００５４】
単ラメラ小胞は、例えば、Ｃｕｌｌｉｓ  ら（米国特許第５，００８，０５０号）やＬｏｕｇｈｒｅｙら（米国特許第５，０５９，４２１号）らの抽出といった多くの技法によってＭＬＶから作製することができる。超音波処理や均質化処理を用いて、より小さな単ラメラリポソ−ムをより大きなリポソ−ムから作製することができる（例えば、Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら（１９６８）；  Ｄｅａｍｅｒ  とＵｓｔｅｒ  （１９８３）；およびＣｈａｐｍａｎら（１９６８））。
【００５５】
Ｂａｎｇｈａｍら（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６５，  １３：２３８−２５２）のオリジナルのリポソ−ムの調製は、リン脂質を有機溶媒中に懸濁させ、蒸発させて乾燥させて反応容器上にリン脂質を残すことで行われる。次に、適量の水相を添加し、該混合物を「膨張」させ、得られた多重ラメラ小胞（ＭＬＶ）からなるリポソ−ムを機械的手段によって分散させる。この調製によって、Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら  （Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ，  Ａｃｔａ．，１９６７，  １３５：６２４−６３８）によって記載された、小さな超音波処理された単ラメラ小胞の開発の基礎が提供される。
【００５６】
単ラメラ小胞（ＬＵＶｓ）を作製する技法、例えば、逆相蒸発法、注入処置、界面活性希釈などを用いて、リポソ−ムを作製することができる。リポソ−ムを作製するためのこれらおよび他の方法は、テキストＬｉｐｏｘｏｍｅｓ，  Ｍａｒｃ  Ｏｓｔｒｏ，ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８３，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １に見出すことができる。その関連部分を引用によって本明細書に援用する。また、Ｓｚｏｋａ，  Ｊｒ．ら（１９８０，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．，  ９：４６７）も参照されたい。その関連部分を引用によって本明細書に援用する。
【００５７】
小胞を作製するための他の技法としては、逆相蒸発小胞（ＲＥＶ）を調製するものが挙げられる。Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら、米国特許第４，２３５，８７１号。用いることができる別のクラスのリポソ−ムとしては、ほぼ等量のラメラ溶質分散を持つことを特徴とするものが挙げられる。このクラスのリポソ−ムは、安定した多ラメラ（ｐｌｕｒｉｌａｍｅｌｌａｒ）小胞（ＳＰＬＶ）と呼ばれる。米国特許第４，５２２，８０３号（Ｌｅｎｋら）に定義されている。また、米国特許第４，５８８，５７８号（Ｆｏｕｎｔａｉｎら）に記載されているように単相性の小胞、ならびに冷凍および解凍した、上記多重ラメラ小胞（ＦＡＴＭＬＶ）が挙げられる。
【００５８】
種々のステロ−ルおよびそれらの水溶性誘導体、例えば、コレステロ−ルヘミスクシナ−トなどを用いてリポソ−ムを調製した；特にＪａｎｏｆｆらの、「ステロイド性リポソ−ム（“Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ”）」というタイトルの米国特許第４，７２１，６１２（１９９８年６月２６日発行）、ＭａｙｈｅｗらのＰＣＴ国際公開第ＷＯ８５／００９６８号（１９８５年５月１４日発行）は、アルファ−トコフェロ−ルおよびそれらのいくつかの誘導体を含む薬物をリポソ−ムにカプセル化することによって薬物の毒性を減少させる方法を記載している。また、種々のトコフェロ−ルおよびそれらの水溶性誘導体を用いて、リポソ−ムリポソ−ムを作製する。例えば、Ｊａｎｏｆｆらの、「アルファトコフェロ−ルベ−スの小胞（“ＡｌｐｈａＴｏｃｏｐｈｅｒｏｌ−Ｂａｓｅｄ  Ｖｅｓｉｃｌｅｓ”）」というタイトルのＰＣＴ国際公開第８７／０２２１９（１９８７年４月２３日発行）を参照されたい。
【００５９】
リポソ−ムを調製する別の方法は、「溶媒注入」プロセスである。溶媒注入は、１以上の脂質を少量、好ましくは最少量のプロセス相溶性溶媒（ｐｒｏｃｅｓｓ  ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｓｏｌｖｅｎｔ）に溶解して、脂質懸濁液もしくは溶液（好ましくは溶液）を形成すること、次いで該溶液を、例えば、白金化合物を含有する水性媒体に注入することを含む。典型的に、プロセス相溶性溶媒は、透析処理のような水性プロセスにおいて洗浄され得るものである。冷却／加温サイクルが行われた組成物は、溶媒注入、好ましくはエタノ−ル注入によって作製される。
【００６０】
脂質ベ−スの白金化合物製剤を作製するプロセスとしては、白金化合物を適切な疎水性マトリックスと混合すること、そして該混合物を２つの別個の温度の１以上のサイクルに付すことを含んでも良い。該プロセスは、活性の白金化合物の結合を作製すると考えられている。
【００６１】
水溶液中、白金化合物がシスプラチンである場合、直径が数ミクロンを超える大きな不溶性の凝集物が形成される。脂質二重層などの両親媒性マトリックスシステムの存在下では、シスプラチン−脂質が結合される。例えば、結合は、内部水溶性空間、脂質二重層の炭化水素コア領域、もしくはリポソ−ムインタ−フェ−スもしくは頭基に形成されるかもしれない。プロセスの加温サイクル中、シスプラチンは、脂質マトリックスよりもプロセス混合物の水溶性領域部分において大きな割合で溶液に戻ると考えられている。複数の冷却／加温サイクルを適用した結果、シスプラチンは、脂質マトリックスからさらに蓄積される。本発明を、提案された理論に限定するわけではないが、実験では、シスプラチン−脂質結合体は、界面二重層領域に隣接した周辺をより疎水性かつ簡素にすることが示されている。この結果、活性白金化合物の高レベルの閉じ込めが、冷却／加温サイクルにしたがって繰り返される。
【００６２】
そのプロセスは、白金化合物とマトリクス輸送システムとを組み合わせること、より高温と低温の間でサイクルを行うことを含む。サイクルは複数回行うことが好ましい。２回以上、もしくは３回以上行うことがより好ましい。サイクルの低温の部分は例えば、約−２５℃〜約２５℃とすることができる。より好ましくは、該ステップは、約−５℃〜約２５℃、もしくは約１℃〜約２０℃とすることができる。作製の便宜を図るため、また、所望の温度を確実に確立するために、より低温および高温ステップを一定期間、例えば、５〜３００分もしくは３０〜６０分間、維持することができる。加温のステップは、反応容器を、約４℃〜約７０℃に加温することを含む。より好ましくは、加温ステップは、反応容器を、約４５℃〜約５５℃に加熱することを含む。上記温度範囲は、ジホスファチジルコリン（ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｃｈｏｌｉｎｅ）（ＤＰＰＣ）およびコレステロ−ルを含む脂質組成物の使用にとって特に好ましい。
【００６３】
温度サイクリングを検討する別の方法は、サイクルの高温ステップと低温ステップの間の温度差の観点からのものである。この温度差は、例えば、約２５℃以上、例えば、約２５℃乃至７０℃、好ましくは、約４０℃乃至約５５℃である。高温ステップと低温ステップの温度は、活性白金化合物の閉じ込めの増加に基づいて選択される。理論に制限されるわけではないが、上の温度効果は、加工された混合物中の活性白金化合物の溶解度を上昇させるに十分なものを選択することが有用である。好ましくは、高温ステップ温度は、約５０℃以上である。温度はまた、脂質組成物中の脂質の遷移温度以下および以上となるように選択することもできる。
【００６４】
該方法に適切な温度は、、場合によって、該方法に用いられる脂質組成物によって変化し、それは、通常の実験によって決定することができる。
【００６５】
本発明の脂質ベ−スの白金製剤中に認められる白金化合物と脂質との比率は、重量比で約１：５乃至約１：５０である。より好ましくは、達成される白金化合物と脂質の比率は、重量比で約１：５乃至約１：３０である。最も好ましくは、達成される白金化合物と脂質の比率は、重量比で約１：５乃至約１：２５である。
【００６６】
リポソ−ムの直径の平均値は、約０．０１ミクロン乃至約３．０ミクロン、好ましくは、約０．１〜１．０ミクロンの範囲である。より好ましくは、直径の平均値は約０．２〜０．５ミクロンである。リポソ−ム生成物の徐放性は、脂質膜の性質および組成物中の他の添加剤（例えば、ステロ−ル）の性質によって調整することができる。
【００６７】
本発明の好ましい態様において、リポソ−ムは、約５０〜約１００ｍｏｌ％のＤＰＰＣおよび約０〜約５０ｍｏｌ％のコレステロ−ルを含有する。より好ましくは、リポソ−ムは、約５０〜約６５ｍｏｌ％のＤＰＰＣおよび約３５〜約５０ｍｏｌ％のコレステロ−ルを含有する。
【００６８】
リポソ−ムは、共係属中の米国特許第１０／３８３，００４（２００３年３月５日出願）；第１０／６３４，１４４号（２００３年８月４日出願）、第１０／２２４，２９３号（２００２年８月２０日出願）；および第１０／６９６，３８９号（２００３年１０月２９日出願）に記載の方法によって調製される。これらの明細書を本明細書にその全体を引用によって援用する。
【００６９】
ＩＶ．白金化合物
本発明において用いることができる白金化合物は、腫瘍性細胞の発達、成熟、または伝播を阻害する特性を発揮するあらゆる化合物を含む。限定されないが、白金化合物の例としては、シスプラチン、カルボプラチン（ジアミン（ｌ，１−シクロブタンジカルボキシラト）−白金（ＩＩ））、テトラプラチン（オルマプラチン）（テトラクロロ（１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ’）−白金（ＩＶ））、チオプラチン（ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎ）（ビス（Ｏ−エチルジチオカルボナ−ト）白金（ＩＩ））、サトラプラチン、ネダプラチン、オキサプラチン、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、イプロプラチン、トランスプラチン、ロバプラチン、シス−アミンジクロロ（２−メチルピリジン）白金、ＪＭ１１８（シス−アンミンジクロロ（ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ）（シクロヘキシルアミン）白金（ＩＩ））、ＪＭ１４９（シス−アンミンジクロロ（ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ）（シクロヘキシルアミン）−トランス−ジヒドロキソ白金（ＩＶ））、ＪＭ２１６（ビス−アセタト−シス−アンミンジクロロ（ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ）（シクロヘキシルアミン）白金（ＩＶ））、ＪＭ３３５（トランス−アンミンジクロロ（ａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏ）（シクロヘキシルアミン）ジヒドロキソ白金（ＩＶ））、および（トランス、トランス、トランス）ビス−ミュ−−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュ−−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリドが挙げられる。別の態様において、白金化合物は、シスプラチンである。環境によって、シスプラチンは、２つの負帯電原子が２つの中性水分子によって置換されたカチオン性アクア形で存在することもできる。アクア形シスプラチンがカチオン性なので、グリセロ−ルなどのアニオン性の脂質が、脂質ベ−スの製剤を安定化させる助けとなるが、シスプラチンへの放出を阻害することもする。非アクア中性の形態のシスプラチンは、安定化しがたいが、異なる放出カイネティクスを持っている。本発明の利点は、いくつかの態様において、脂質ベ−スのシスプラチン製剤は、中性シスプラチンと中性脂質とを含んでいる。中性、非アクアの形態のシスプラチンと、カチオン性、非アクア性の形態のシスプラチンの間に平衡があるので、低ｐＨおよび高ＮａＣｌ濃度の製剤を調製することによって、中性、非アクア形のシスプラチンを達成できる。この態様において、カチオン性、アクア形のシスプラチンの実質的な量は、中性、非アクア形のシスプラチンが細胞内に送達されるまで形成されない。
【００７０】
別の態様において、白金化合物とともに他の治療薬を用いることもできる。他の治療薬は、抗癌性の特徴を有していてもよい。抗癌性の化合物の例としては、限定されないが、アルトレタミン、アメトプテリン、アムルビシン、アナマイシン、３酸化ヒ素、アスパラギナ−ゼ、ＢＣＧ、ベンジルグアニン、ビスアントレン、硫酸ブレオマイシン、ブスルファンカルムスチン、カケクチン、クロラブシル（ｃｈｌｏｒａｂｕｃｉｌ）、２−クロロデオキシアデノシン、シクロホスファミド、シトシンアラビノシド、ダカルバジンミダゾ−ルカルボキサミド、ダクチノマイシン、ダウノマイシン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン、デキシフォスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、デキサメタゾン、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、ディブロモダルシト−ル、塩化ジブロスピジウム、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ドキソルビシン、エリナフィド、エピポドフィロトキシン、エストラムスチン、フロクスウリジン、フルオロウウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、フルダラビン、フォテムスチン、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、グルフォスファミド、ゴセレリン、ＧＰＸ１００、ヒドロキシ尿素、イダルビシンＨＣＬ、イホスファミド、トシル酸インプロスルファン、イソホスファミド、インタ−フェロンアルファ、インタ−フェロンアルファ２ａ、インタ−フェロンアルファ２ｂ、インタ−フェロンアルファｎ３、インタ−フェロンガンマ、インタ−ロイキン２、イリノテカン、イロフルベン（ｉｒｏｆｕｌｖｅｎ）、ロイコボリンカルシウム、ロイプロリド、レバミゾ−ル、ロムスチン、メゲストロ−ル、Ｌ−フェニルアラニンマスタ−ド、Ｌ−サルコリシン、メルファランヒドロクロリド、メクロレタミン、ＭＥＮ１０７５５、メルカプトプリン、ＭＥＳＮＡ、メチルプレドニソロン、メトトレキサ−ト、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、ニムスチン、パクリタキセル、ピナフィド、ピラルビシン、プリカマイシン、プレドニマスチン、プレドニソン、プロカルバジン、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、プミテパ、ラノムスチン、セルテネフ、ストレプトゾシン、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タソネルミン、テモゾロミド、６−チオグアニン、チオテパ、チラパジミン（ｔｉｒａｐａｚｉｍｉｎｅ）、トリエチレンチオフォスポラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｏｒａｍｉｄｅ）、トロホスファミド、腫瘍壊死因子、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、酒石酸ビノレルビン、およびゾルビシンが挙げられる。
【００７１】
本発明の方法に用いられる好適な白金化合物として、薬学的に許容される添加塩および白金化合物の複合物も含まれる。化合物が１以上のキラル中心を有するかもしれない場合、他に記載がない限り、本発明は、それぞれの特有のラセミ化合物、ならびにそれぞれの特有のノンラセミ化合物を含む。
【００７２】
白金化合物が不飽和の炭素−炭素二重結合を有している場合、シス（Ｚ）およびトランス（Ｅ）アイソマ−の両方が本発明の範囲に含まれる。腫瘍性の化合物が、ケト−エノ−ル互変異性体、例えば、（化１）および（化２）などの互変異性型で存在する場合、それぞれの互変異性型は、平衡状態で存在する場合も、Ｒ’で適切に置換されてロックされている場合のいずれも、本発明の範囲に含まれると考えられる。任意に起こる任意の置換基の意味は、他で起こる他の置換基の意味から独立している。
【化１】
2015098498.tif 000002
【化２】
2015098498.tif 000003
【００７３】
本発明の方法に用いられる好適な白金化合物として、白金化合物のプロドラッグが含まれる。プロドラッグは、あらゆる共有結合した担体であり、活性のある親化合物をｉｎ  ｖｉｖｏで放出すると考えられる。
【００７４】
本発明は、部分的に、担体をより効率的に処理する方法であって、これまでに開示されているものと比較して腎毒性が低いものを開示している。脂質ベ−スの製剤およびｉｐ送達を用いることによって、より力価の高い、有効な癌治療が達成される。
【００７５】
Ｖ．投与量
本発明のあらゆる組成物の投与量は、症状や、患者の年齢や体重、治療される、または予防される障害の性質および重篤度、投与経路、ならびに当該組成物の剤型によって変化するであろう。当該製剤のあらゆるものは、単回投与してもよいし、分割投与してもよい。本発明のあらゆる組成物の投与量は、本明細書において教示されているように、当該技術分野の当業者に公知の技術によって、容易に決定されるであろう。
【００７６】
いくつかの態様においては、当該化合物の投与量は、一般的に、体重１ｋｇあたり、約０．０１ｎｇ乃至約１０ｇ、特に、約１ｎｇ乃至約０．１ｇ、さらに特に、約１００ｎｇ乃至約５０ｍｇである。
【００７７】
投与量はまた、一般的にｍｇ／ｍ２として投与されることもある。これは、生体の表面積辺りの薬物（例えば、白金化合物）のミリグラム数を表す。通常、白金化合物の投与量は、約６０ｍｇ／ｍ２以上、１００ｍｇ／ｍ２以上、１４０ｍｇ／ｍ２以上、または１８０ｍｇ／ｍ２以上である。約１４０ｍｇ／ｍ２以上の投与量は、通常許容の上限であると考えられているが、白金化合物は、白金化合物の亜急性毒性を減少させる脂質ベ−スの製剤の一部として投与されることが本発明の利点である。したがって、本発明者らは、通常よりも高用量の白金化合物を、望ましくない毒性副作用を引き起こすことなく患者に投与することができるかもしれないと考えた。用量を増やすことによって、投与間の持続性のサイクルを長くすることができ、患者にとってより好都合になるかもしれない。例えば、投与量は通常、ほぼ３週間に１回患者に投与される。もし、白金化合物の投与量をより高用量にして安全に投与することができれば、サイクル時間を４、５、６、７、もしくは８週間に１回と長くすることができるかもしれない。サイクル時間が長くなるということは、療養所に行く回数が減ること、また、患者が投与プロセスを受ける回数が減ることを意味する。
【００７８】
有効な用量または量、および製剤の投与のタイミングに対する可能な影響は、本発明のあらゆる特定の組成物について確認しておく必要がある。これは、１群以上の動物（好ましくは、群内の動物数は少なくとも５例）、または適切であれば、ヒトでのトライアルを用いて本明細書に記載のル−チンの実験において行うことができる。あらゆる関連する組成物および治療方法もしくは予防方法は、該組成物を投与することによって、および１以上の適用可能なインデックスを測定し、これらのインデックスの治療後の数値を治療前のインデックスと比べることによって、投与の効果を評価することによって行うことができる。
【００７９】
投与された患者に最も有効な治療効果をもたらすであろう特定の当該組成物の正確な投与時間と量は、当該組成物の活性、ファ−マコキネティックス、およびバイオアベイラビイティ、患者の生理学的条件（年齢、性別、疾患の種類やステ−ジ、全身の状態、所与の投与量に対する反応性、治療方法を含む）、投与経路、などによって変わる。本明細書に提示するガイドラインを用いて、治療を最適化することができる。例えば、最適な時間および／または投与量を決定することができる。それは、患者をモニタ−する、投与量および／またはタイミングを調節するといったことを含めて、ル−チンの実験以上のことを必要としない。
【００８０】
患者は、治療を受けながら、治療期間中の所定の時点において、１以上の関連するインデックスを測定することによって、健康状態をモニタ−されることができる。組成物、量、投与時間、製剤を含む治療は、そのようなモニタ−の結果に基づいて最適化することができる。同じパラメ−タ−を測定することによって向上を測定するために、患者を定期的に再検査することもある。投与される当該組成物の量の調整、および可能であれば、投与時間の調整は、これらの再検査に基づく。
【００８１】
治療は、該化合物の最適用量未満の少量で開始し、その後、最適な治療効果が得られるまで、徐々に用量を増加させることができる。
【００８２】
当該組成物の使用によって、該組成物に含有される、あらゆる個別の薬物（例えば、抗癌性の化合物）の必要投与量を減少させるかもしれない。なぜなら、異なる物質どうしが、開始および効果の持続性を補い得るからである。
【００８３】
当該組成物の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的処置、例えば、ＬＤ５０やＥＤ５０を測定することによって決定できる。
【００８４】
細胞培養アッセイおよび動物実験をから得られたデ−タを用いて、ヒトでの使用のための投与量の範囲を作製することができる。当該組成物の投与量は、好ましくは、毒性を全くもたないか、持つとしても僅かな状態で、ＥＤ５０を含む濃度の範囲内で循環する程度である。該投与量は、この範囲内で、採用される投与形態および用いられる投与経路によって変更することができる。本発明の組成物の、治療的有効量は、細胞培養アッセイによって最初に推定することができる。
ＶＩ．製剤
【００８５】
抗癌性化合物製剤は、リポソ−ムの水溶性分散液を含むことができる。該製剤は、脂質添加剤を含有し、リポソ−ム、および塩／緩衝液を形成し、適切なオスモル濃度とｐＨを提供する。薬学的添加剤は、当該組成物またはその成分を、ある器官もしくは体の一部から、他の器官もしくは体の一部へと、運搬もしくは輸送することに関与する液体、希釈剤、溶媒、またはカプセル化剤とすることができる。各添加剤は、当該組成物およびその成分と相溶性があり、患者に有害でないという意味において「許容可能」でなければならない。好適な添加剤としては、トレハロ−ス、ラフィノ−ス、マンニト−ル、スクロ−ス、ロイシン、トリロイシン、および塩化カルシウムがあげられる。他の好適な添加剤の例としては、（１）ラクト−ス、およびグルコ−スなどの糖類；（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；（３）セルロ−スおよびその誘導体、例えば、カルボキシルメチルセルロ−スナトリウム、エチルセルロ−ス、および酢酸セルロ−スなど；（４）粉末化されたトラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）カカオ脂や坐剤用ワックスなどの添加剤；（９）ピ−ナッツオイル、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリ−ブオイル、コ−ン油、および大豆油などの油類；（１０）プロピレングリコ−ルなどのグリコ−ル；（１１）グリセリン、ソルビト−ル、マンニト−ルおよびポリエチレングリコ−ルなどのポリオ−ル；（１２）オレイン酸エチルやラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムや水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱因子を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコ−ル；（２０）リン酸緩衝液；ならびに（２１）薬学的製剤に採用される他の非毒性相溶性物質が含まれる。
【実施例】
【００８６】
実施例１
脂質ベ−スの製剤として投与した場合のシスプラチンのｉｖまたはｉｐ投与による亜急性毒性の減少。ＩＣＲマウス（雄および雌、６〜７週齢）を２４群に分けた。各群は１０匹のマウスを含むものとする。５匹のマウスを、標準的な餌と水を自由に摂取できる状態にして各ケ−ジに収容した。各群のマウスに、以下のようにして製剤した脂質ベ−スのシスプラチン製剤を注射した。ここで用いる該脂質ベ−スのシスプラチン製剤は、１ｍｇ／ｍｌのシスプラチン、１６ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣ、および０．９％ＮａＣｌ中７．９ｍｇ／ｍｌコレステロ−ルを含有するものとした。サンプルのアリコ−ト（５０％）を、４℃までの冷却および５０℃までの加温のサイクルを３回行うことによって処理した。試験管中のアリコ−トを冷凍によって冷却し、水浴にて加熱した。その結果閉じ込められなかったシスプラチン（フリ−のシスプラチン）を透析処理によって洗浄した。リポソ−ム形態の脂質ベ−スのシスプラチンをｉｖ（尾の静脈）もしくはｉｐ経路で注射した。リポソ−ムの平均径は、約０．３９μｍとした。製剤、投与量、投与経路を表１に示す。
【００８７】
【表１】
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【００８８】
投与開始前の最初の１週間は、実験終了までマウスの体重を２日ごとに測定した。マウスを毎日観察し、死亡について記録した。生存率と投与後時間（日数）の対比を各製剤、各投与経路ごとに計算した（図１）。各注入経路での各製剤のＬＤ１０、ＬＤ５０、およびＬＤ９０を推定した。コンピュ−タに適した結果を表２に示した。
【００８９】
【表２】
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【００９０】
この結果から、ｉｐによる脂質ベ−スのシスプラチンの亜急性毒性は、ｉｐによるシスプラチンのそれより２倍低いことがわかるが、ｉｖによる脂質ベ−スのシスプラチンの場合は、同様の大きな変化は認められなかった。
【００９１】
実施例２
ファ−マコキネティックス、ならびに脂質ベ−スのシスプラチンおよびシスプラチンをｉｐおよびｉｖ注射された動物における器官分布（パ−トＩ）。マウス（実施例１と同じ）を２４匹ずつ４つの群に分けた。それらに対して、ｉｐ脂質ベ−スのシスプラチン（１２ｍｇ／ｋｇ）、ｉｐシスプラチン（１２ｍｇ／ｋｇ）、ｉｖ脂質ベ−スのシスプラチン（８ｍｇ／ｋｇ）、およびｉｖシスプラチン（８ｍｇ／ｋｇ）の注射を別々に行った。脂質ベ−スのシスプラチン製剤は、実施例１と同様の方法で調製した。各指定時間ポイントは、例えば、注射後２〜５分、２０分、４０分、２時間、８時間、１日、２日、および３日、または５日とした。各群のマウス３匹ずつに３５〜５０ｍｇ／ｋｇのネンブタ−ルをｉｐ注射して麻酔をかけ、血液を採取し、心臓、腎臓、肝臓、肺、小腸、および脾臓を切除し、４倍の純粋を添加してホモジナイズした。各サンプルの白金濃度を、ＡＡ法によって測定した。Ｐｔの含有量（１ｍｌの血液中もしくは１グラムの組織中のＰｔ（μｇ））を計算し、２つの異なる経路における各製剤の運動特性を表すのに用いた。
【００９２】
得られた結果によれば、血液中、脂質ベ−スのシスプラチンのＣｍａｘおよびＡＵＣは、シスプラチンより、それぞれ３倍、および６倍高かった（図２）。
【００９３】
実施例３
ファ−マコキネティックス、ならびに脂質ベ−スのシスプラチンおよびシスプラチンをｉｐおよびｉｖ注射された動物における器官分布（パ−トＩＩ）。６０匹のＩＣＲマウス（雌、７週齢）を４つの群に分けた。それらに対して、Ｌ−ＣＤＤＰまたはＣＤＤＰの腹腔内注射または静脈注射を別々に行った。用量は、ｉｐによるＬ−ＣＤＤＰについては１２ｍｇ／ｋｇ、他の治療群については８ｍｇ／ｋｇとした。各指定時間ポイントにおいて、３〜４匹のマウスには、７０ｍｇ／ｋｇのネンブタ−ルをｉｐ注射して麻酔をかけた（例えば、３分、２０分、４０分、および２時間、８時間、２４時間、４８時間、および７２時間）。大静脈から血液を採取した。十二指腸、腎臓、肝臓、肺、および脾臓を含む臓器をマウスから切除した。血液および臓器サンプルを希釈液中（サンプル重量の４倍）にてホモジナイズし、硝酸で消化した。各サンプルの白金濃度を、Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｐｌａｓｍａ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（ＩＣＰ−ＭＳ）によって測定した。ファ−マコキネティックスプロファイル（図３〜７、全てＹ軸が１グラムの組織または注射された用量のｍｇあたりの体液中のＰｔ、μｇの濃度を表す）および各製剤のパラメ−タ（図３および４）をシミュレ−トし、計算した。以下のことがわかった。１）脾臓中の白金の摂取は、注射経路に関わらず、リポソ−ム製剤によって有意に高められた。ＡＵＣおよびＣ最大は、ＣＤＤＰのそれより２６〜４７倍高かった。ｐ＜０．０００３；２）ｉｐ注射による。ＡＵＣの循環およびＬ−ＣＤＤＰの排除ｔ１／２は、ＣＤＤＰより４倍および１５倍高かった（ｐ＜０．００６）が、この現象は、ｉｖ注射後には認められなかった；３）ＡＵＣおよびＬ−ＣＤＤＰのｔ１／２も、ｉｖによるＬ−ＣＤＤＰのそれより高かった（ｉｐ対ｉｖ：ＡＵＣ、１．９倍、ｐ＝０．０４；ｔ１／２、５．７倍、ｐ＝０．００６）；４）ｉｖによるＬ−ＣＤＤＰの肺および肝臓での白金の摂取は、ｉｖによるＣＤＤＰよりわずかに高かった（肺：ｐ＝０．０４３；肝臓：ｐ＝０．０５１）；５）Ｌ−ＣＤＤＰの腎臓での白金の摂取は、ＣＤＤＰより高かった（ｐ＝０．０４６）。これらの結果は、該製剤および投与経路の双方がＰＫおよび薬物分布に重要な役割を果たすことを意味する。またｉｐによるＬ−ＣＤＤＰは徐放機能を示した。
【００９４】
【表３】
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【００９５】
【表４】
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【００９６】
２サイド対数順位検定を用いてＡＵＣまたはＣ最大値中のＬ−ＣＤＤＰ対ＣＤＤＰの有意さを評価した。統計的に有意な対（ｐ＜０．０５）を上付き文字で標識した。それらのＰ値は、以下のとおりである。ｃ、ｐ＝０．０４６；ｄ、ｐ＝０．００８；ｅ、ｐ＝０．０００２；ｆ、ｐ＝０．０００１；ｇ、ｐ＝０．０００３；ｈ、ｐ＝０．０００２。
【００９７】
実施例４
腎毒性。ＩＣＲマウス（雌、７週齢）を各群３〜４匹ずつの４つの群に分けた。それらに対して、ｉｖまたはｉｐによって、最大耐量（ＭＴＤ）のＬ−ＣＤＤＰまたはＣＤＤＰを注射した。注射の４日後、マウスにネンブタ−ルをｉｐ注射して麻酔をかけた。血液を採取し、血清を単離した。アンテック診断（Ａｎｔｅｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において、比色法によって血中尿素窒素（ＢＵＮ）を定量的に測定し、十二指腸、心臓、腎臓、肝臓、肺、および脾臓を含む臓器をマウスから切除し、１０％緩衝ホルマリンを用いて固定した。固定した組織をＨおよびＥ染色の標準的な処置で処理した。Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒの病理学の専門家Ｄｒ．  Ｃａｒｍａｎ  Ｔｏｒｎｏｓは、腎臓組織を検査して、各腎臓組織サンプルに毒性階級を付与した。その階級付けは、腎毒性のための一般病理学に基づいて行った。
【００９８】
病理学的結果は、投与経路にかかわらず、ＣＤＤＰが、治療を受けたマウスの５０％より多くにおいて重篤な腎毒性を引き起こしたが、Ｌ−ＣＤＤＰは、いかなる腎毒性も引き起こさなかったことを示している。ＢＵＮテストから同様の結論が得られる（図９）、ここでは、ｉｖによるＣＤＤＰは、正常の対照群と比較してＢＵＮレベルを６．８倍上昇させている（ｐ＝０．００８）、また、ｉｐによるＣＤＤＰは、ＢＵＮ蓄積がはるかに少なく、正常の対照群と比較してわずか２．１倍の上昇に杉なった。しかし、いずれの経路によってもＬ−ＣＤＤＰを注射されたものは、ＢＵＮレベルの上昇を引き起こさなかった。
【００９９】
実施例５
ネズミＬ１２１０腫瘍モデルにおける脂質ベ−スのシスプラチンの前臨床ｉｎ  ｖｉｖｏ  抗腫瘍活性。この実験の目的は、局所ｉｐ投与による体腔に閉じ込められた腫瘍（腹水Ｌ１２１０白血病）に対する脂質ベ−スのシスプラチンのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を評価することである。脂質ベ−スのシスプラチンを、生存可能なＬ１２１０腫瘍細胞のためのフリ−のシスプラチンと比較する。試験項目および材料を下の表５に示す。脂質ベ−スのシスプラチンは、実施例１と同様にして調製した。
【０１００】
【表５】
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【０１０１】
下記に概略を示した処置を表６にまとめた。
１．  ０日目、６群（各群５匹の雄マウス）、および１群（９匹の対照雄動物）に、マウス１匹あたり１００万個の生存可能Ｌ１２１０細胞をｉｐ注射により接種する。
２．  シスプラチン溶液または脂質ベ−スのシスプラチンのいずれかを、５匹ずつのマウスからなる群に対して、用量を増量しながら投与する。シスプラチン溶液：３、７、および１１日目、３．０ｍｇ／Ｋｇおよび４．５ｍｇ／Ｋｇの濃度でｉｐ投与する。各用量レベルは、５匹ずつの１群を示している。脂質ベ−スのシスプラチン：３、７、および１１日目、３．０、４．５、６．０および９．０ｍｇ／Ｋｇの濃度でｉｐ投与する。対照群は、治療を施さない９匹のマウスを含む。
３．  マウスを毎日モニタ−し、死亡および／または臨床的な疾患の徴候について調べた。実験の終了点とするために安楽死の日付を記録した。７群に分けた合計３９匹のマウスを実験に用いた。終了点における生存率を評価し、％Ｔ／Ｃ（治療群の生存率のパ−セント中間値：対照群の生存率のパ−セント中間値）で表した。
【０１０２】
【表６】
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【０１０３】
本実験から得られた結果を表７にまとめる。
【表７】
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【０１０４】
各群のマウスの５０％の死亡の日付を測定し、初期％治療／対照（Ｔ／Ｃ）値を上記表中に記録した。最適用量のとき、脂質ベ−スのシスプラチン中のシスプラチンは、フリ−なシスプラチンと比較して抗腫瘍活性を失わない。
【０１０５】
実施例６
ヒト卵巣癌異種移植片に対するＬ−ＣＤＤＰの抗腫瘍活性。ヌ−ドマウス（雌、６〜７週齢）に、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫ−ＯＶ３−ｉｐ１（１．５ｘ１０６細胞／マウス）の腹腔内接種を行った。接種１週間後、該マウスを無作為に３群（各群５匹）に分けた。１つの群のマウスに対してＣＤＤＰおよびＭＴＤの単回ｉｐボラス注射（８ｍｇ／ｋｇ）を行い、現在の化学療法を模倣した（陽性対照）。別の１つの群には、Ｌ−ＣＤＤＰおよびＭＴＤの単回ｉｐボラス注射（２３ｍｇ／ｋｇ）を行った。処置を施さなかった第３の群のマウスを陰性対照とした。該マウスを毎日観察した。マウスの死亡を記録し、寿命の延び（ＩＬＳ）を計算した。結果を図１０に示す。  
【０１０６】
実施例７
周期的温度噴出プロセスによって調製した脂質ベ−スのシスプラチンと、非周期的温度のシスプラチンリポソ−ムとの比較。周期的温度噴出プロセスによって調製した脂質ベ−スのシスプラチンは、実施例１と同様にして調製した。それは、１．１ｍｇ／ｍｌのシスプラチンおよび２７ｍｇ／ｍｌの総脂質とを含有していた。非周期的温度のシスプラチンリポソ−ムは、下記の処理によって調製した。
【０１０７】
１．  ＤＰＰＣ（３．０ｇ）とコレステロ−ル（１．２ｇ）を２０ｍＬのエタノ−ル中に共溶解した。
２．  シスプラチン（２００ｍｇ）を０．９％食塩水（２００ｍｌ）中に溶解した。
３．  脂質／エタノ−ル溶液を、十分に攪拌しながらシスプラチン溶液中に注入した（リポソ−ム形成）。
４．  脂質−シスプラチン懸濁液を透析し、閉じ込められていないシスプラチンを洗浄した。
５．  得られたポソ−ムシスプラチンは、０．０３ｍｇ／ｍｌの総シスプラチン（７５％の総シスプラチンが閉じ込められ、２５％が閉じ込められなかった）；総脂質濃度を２１ｍｇ／ｍｌとした。
【０１０８】
マウスに、シスプラチンの量の代わりに脂質の量をベ−スとした治療を含む等量のシスプラチンを与えた。非周期温度シスプラチンリポソ−ムにおいて、脂質対シスプラチンの比率が非常に高く、実施例１で調製された脂質ベ−スの製剤中のシスプラチンの量と等しくするのに必要な多量の脂質を投与することができないからである。
【０１０９】
雌ＤＢＡ／２マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ）を用いた。０日目、３０匹のマウスに、２ｘ１０６個のＬ１２１０細胞をｉｐ注射した。１日目、該マウスの体重を計測し、無作為に１０匹ずつの３群に分けた。５日目、マウスに対し、可溶性シスプラチン溶液（６ｍｇ／ｋｇ）、脂質ベ−スのシスプラチン（６ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ）、または非周期温度シスプラチンリポソ−ム（脂質対脂質ベ−スのシスプラチンの比率は等しい。０．２ｍｇ／ｋｇ）の単回腹腔内ボラス注射を行った。生存率をモニタ−した。１０日目にマウスの体重を測定した。開始時の体重より２０％以上減少したマウスをＣＯ２吸入により安楽死させた。それらの死亡日をデ−タシ−トに記録した。生存率の中間値をＰｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄによって計算した。
【０１１０】
両タイプのシスプラチン製剤を、移植した製造可能なＬ１２１０腫瘍細胞とともにマウスに腹腔内投与した実験の結果を図１１に示した。脂質ベ−スのシスプラチンを腹腔内投与されたマウスと、可溶性シスプラチンを腹腔内投与されたの生存率曲線の間に有意差は認められなかった（ｐ＝０．２０）。シスプラチンで治療した群の全ての生存率曲線は、非周期温度シスプラチンリポソ−ムを受けたマウスと有意に異なっていた（それぞれ、ｐ＝０．００３５、およびｐ＜０．０００１）。生存率の中間値の日数は、脂質ベ−スのシスプラチンについては、１９であった。ｉｐ；フリ−のシスプラチンについては、１９．５、および非周期温度シスプラチンリポソ−ムについては、１４であった。
【０１１１】
引用による援用
本明細書に示したすべての文献および特許は、引用によって援用する。
【０１１２】
均等物
当業者は、ル−チンの実験以上のことをすることなく、本明細書に記載した本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識、または突き止めることができるであろう。そのような均等物は、添付の請求項に包含されることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【外国語明細書】
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