(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳動物の免疫系及び／又は造血細胞の発生、分化又は機能を直接的又は間接的に含む、広範な変性状態或いは異常状態のための新たな治療に寄与する他のリンホカインの有益な活性を増強又は強化するリンホカイン様分子に対する新規レセプター並びにサイトカイン様組成物に対する類似性を示すリガンドについての新たなレセプターおよび関連する化合物、及びそれらの使用のための方法の提供。【解決手段】ＩＬ−１２Ｒβ１と結合する特定のアミノ酸配列のサイトカインレセプターサブユニット（ＤＣＲＳ５）又はその１から３２８からなるポリペプチドに結合する抗体或いはその抗原結合フラグメント。前記の抗体又はそのフラグメントと接触させることを含むＤＣＲＳ５の検出方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２又は配列番号２のアミノ酸１〜３２８からなるポリペプチドに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
サンプルを、請求項１に記載の抗体又はフラグメントと接触させることを含む、配列番号２のアミノ酸配列を有するＤＣＲＳ５を検出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳動物の生理機能（免疫系の機能を含む）に影響を与える、組成物および
方法に関する。特に、本発明は、発生および／または免疫系を調節する方法を提供する。
これらの物質の診断的使用および治療的使用もまた開示される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
組換えＤＮＡ技術とは一般に、ドナー供給源由来の遺伝情報を、（例えば、宿主への導
入を通して）その後の処理のためにベクター中に組み込み、それにより、移入された遺伝
情報が新たな環境においてコピーおよび／または発現される技術をいう。通常、遺伝情報
は、所望のタンパク質産物をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）から誘導され
た相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態で存在する。キャリアは頻繁に、後の複製のためのｃ
ＤＮＡを宿主中に組み込み、そしていくつかの場合には実際にこのｃＤＮＡの発現を制御
し、そしてそれによって宿主におけるコード産物の合成を導く能力を有する、プラスミド
である。例えば、非特許文献１を参照のこと。
【０００３】
かなり長い間、哺乳動物免疫応答が、「免疫ネットワーク」と呼ばれる、一連の複雑な
細胞性相互作用に基づくことが知られている。近年の研究は、このネットワークの内部活
動に新たな洞察を提供した。免疫応答の多くは実際に、リンパ球、マクロファージ、顆粒
球および他の細胞のネットワーク様相互作用の周囲を廻ることが明らかなままであるが、
免疫学者は現在一般に、リンホカイン、サイトカインまたはモノカインとして公知の可溶
性タンパク質が、これらの細胞相互作用を制御する際に重要な役割を果たすという見解を
支持する。従って、細胞調節因子の単離、特徴付けおよび作用機構にかなりの興味が存在
し、その理解は、多数の医学的異常（例えば、免疫系の障害）診断および治療において著
しい進歩を導く。
【０００４】
リンホカインは明らかに、細胞活性を種々の方法で媒介する。例えば、非特許文献２；
および非特許文献３を参照のこと。これらは、多能性造血幹細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅ
ｒａｔｉｏｎ）、成長（ｇｒｏｗｔｈ）および／または複雑な免疫系を作り上げる多様な
細胞性系列を含む莫大な数の子孫への分化を支持することが示された。健常な免疫応答の
ためには、細胞性成分間の適切かつバランスのとれた相互作用が必要である。リンホカイ
ンが他の薬剤とともに投与された場合、異なる細胞系列はしばしば、異なる様式で応答す
る。
【０００５】
免疫応答に特に重要である細胞系列としては、以下の２つのクラスのリンパ球が挙げら
れる：Ｂ細胞（これは、免疫グロブリン（異物を認識して結合し、その除去をもたらす能
力を有するタンパク質）を産生および分泌し得る）およびリンホカインを分泌し、そして
免疫ネットワークを作り上げるＢ細胞および種々の他の細胞（他のＴ細胞を含む）を誘導
または抑制する種々のサブセットのＴ細胞。これらのリンパ球は、他の多くの細胞型と相
互作用する。
【０００６】
種々の免疫障害をより良好に理解し、そして処置するための研究は、免疫系の細胞をイ
ンビトロで維持することが通常できないことによって妨げられている。免疫学者は、これ
らの細胞の多くを培養することが、Ｔ細胞および他の細胞の上清（これは、多くのリンホ
カインを含めて、種々の増殖因子を含む）の使用を通して達成され得ることを見出した。
【０００７】
形態形成発生を調節する種々の増殖因子および調節因子が存在する。サイトカインにつ
いての多くのレセプターが公知である。しばしば、機能的レセプターには少なくとも２つ
の重要なサブユニットが存在する。例えば、非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６
；非特許文献７；非特許文献８；ならびに非特許文献９を参照のこと。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉ    ｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版）第１〜３巻，ＣＳＨ  Ｐ    ｒｅｓｓ，ＮＹ
【非特許文献２】Ｐａｕｌ編（１９９６）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ    ｏｇｙ第３版，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ
【非特許文献３】Ｔｈｏｍｓｏｎ編（１９９４）Ｔｈｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｈａｎ    ｄｂｏｏｋ第２版，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ
【非特許文献４】Ｈｅｉｎｒｉｃｈら（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３４：２    ９７−３１４
【非特許文献５】ＧｏｎｄａおよびＤ’Ａｎｄｒｅａ（１９９７）Ｂｌｏｏｄ  ８９    ：３５５−３６９
【非特許文献６】Ｐｒｅｓｋｙら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓ    ｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１４００２−１４００７
【非特許文献７】ＤｒａｃｈｍａｎおよびＫａｕｓｈａｎｓｋｙ（１９９５）Ｃｕｒ    ｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２：２２−２８
【非特許文献８】Ｔｈｅｚｅ（１９９４）Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．５    ：３５３−３６８
【非特許文献９】ＬｅｍｍｏｎおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ（１９９４）Ｔｒｅ    ｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９：４５９−４６３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前述のことから、新たな可溶性タンパク質およびそれらのレセプター（リンホカインに
類似する可溶性タンパク質およびそれらのレセプターを含む）の発見および開発が、例え
ば、免疫系および／または造血細胞の発生、分化または機能を直接的または間接的に含む
、広範な変性状態または異常状態のための新たな治療に寄与するはずであることが明らか
である。特に、他のリンホカインの有益な活性を増強または強化するリンホカイン様分子
に対する新規レセプターの発見および理解は、非常に有利である。本発明は、サイトカイ
ン様組成物に対する類似性を示すリガンドについての新たなレセプターおよび関連する化
合物、ならびにそれらの使用のための方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、サイトカインレセプターに関連した新規レセプター（例えば、ＤＮＡＸサイ
トカインレセプターサブユニット（ＤＣＲＳ）と称される、霊長類のサイトカインレセプ
ター様分子構造体）およびそれらの生物学的活性に関する。特に、本発明は、ＤＣＲＳ５
と称される１つのサブユニットの説明を提供する。本発明は、ポリペプチド自体をコード
する核酸、ならびにそれらの産生および使用のための方法を包含する。本発明の核酸は、
本明細書中に含まれるクローニングされた相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列へのそれらの
相同性によって部分的に特徴付けられる。さらに、本発明は、レセプターサブユニットＤ
ＣＲＳ５およびＩＬ−１２Ｒβ１とのｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンドの適合を提供し、こ
の対形成は、アゴニストおよびアンタゴニストに対する試薬に基づいた、アゴニストおよ
びアンタゴニストの使用のための指標の洞察を提供する。
【００１１】
本発明は、配列番号２の細胞内部分の少なくとも１０個連続したアミノ酸を含む実質的
に純粋なまたは組換えポリペプチドを提供する。特定の実施形態では、このポリペプチド
は以下である：配列番号２の細胞内部分の少なくとも２５個連続したアミノ酸を含む；配
列番号２の細胞内部分を含む組換え体である；配列番号２の非細胞内部分の少なくとも１
０個連続したアミノ酸をさらに含む；配列番号２の細胞外部分の少なくとも２５個のアミ
ノ酸を含む；成熟した配列番号２を含む；または実質的に純粋な天然ポリペプチドである
。他では、この組換えポリペプチドは以下である：表１の成熟配列からなる；非グリコシ
ル化ポリペプチドである；ヒト由来である；配列番号２の少なくとも４０個連続したアミ
ノ酸を含む；配列番号２の少なくとも１５個連続したアミノ酸の少なくとも３個の非重複
セグメントを示す；配列番号２の天然の多型改変体である；少なくとも約３０アミノ酸の
長さを有する；霊長類ＤＣＲＳ５に特異的である少なくとも２個の非重複エピトープを示
す；天然グリコシル化状態で少なくとも３０ｋＤの分子量を有する；合成ポリペプチドで
ある；無菌形態にある；水溶液もしくは緩衝化溶液中に存在する；固体基材に結合してい
る；別の化学的部分に結合している；またはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドと物理的に会
合している。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、以下を提供する：配列番号２の細胞内部分の少なくとも６個
連続したアミノ酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントを含む、実質的に純粋なも
しくは組換えポリペプチド；配列番号２の細胞内部分の少なくとも１２個連続したアミノ
酸を含む、実質的に純粋なもしくは組換えポリペプチド；または成熟した配列番号２を含
む、実質的に純粋な天然配列ポリペプチド。特定の形態では、配列番号２の細胞内部分の
少なくとも６個連続したアミノ酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントを含むポリ
ペプチドは、ここで、別個の非重複セグメントが：第一の少なくとも１２個のアミノ酸を
含む；第一の少なくとも７個のアミノ酸および第二の少なくとも９個のアミノ酸を含む；
少なくとも６個のアミノ酸の第三の別個のセグメントを含む；またはＲ３５５−Ｌ３７３
、Ｐ３７８−Ｌ４０５、Ｖ４０７−Ｄ４２６、Ｋ４２８−Ｄ４３９、Ｐ４４１−Ｖ４５２
、Ｉ４５４−Ｇ４６０、Ｉ４６５−Ｔ５８７もしくはＮ５９２−６０６のうちの１つを含
む：あるいはこのポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも６個連続したア
ミノ酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントをさらに含む。あるいは、配列番号２
の細胞内部分の少なくとも１２個連続したアミノ酸を含むポリペプチドは、以下のポリペ
プチドである：少なくとも１２個連続したアミノ酸セグメントが、Ｒ３５５−Ｌ３７３、
Ｐ３７８−Ｌ４０５、Ｖ４０７−Ｄ４２６、Ｋ４２８−Ｄ４３９、Ｐ４４１−Ｖ４５２、
Ｉ４５４−Ｇ４６０、Ｉ４６５−Ｔ５８７もしくはＮ５９２−６０６のうちの１つを含む
；またはこのポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも６個連続したアミノ
酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントをさらに含む。または、成熟した配列番号
２を含む、純粋な天然配列ポリペプチドは、精製エピトープまたは検出エピトープをさら
に含み得る。このようなポリペプチドは以下であり得る：表１の成熟配列からなる；非グ
リコシル化ポリペプチドである；ヒト由来である；配列番号２の少なくとも４０個連続し
たアミノ酸を含む；配列番号２の少なくとも１５個連続したアミノ酸の少なくとも３個の
非重複セグメントを示す；配列番号２の天然の多型改変体である；少なくとも約３０アミ
ノ酸の長さを有する；霊長類ＤＣＲＳ５に特異的である少なくとも２個の非重複エピトー
プを示す；天然のグリコシル化状態で少なくとも３０ｋＤの分子量を有する；合成ポリペ
プチドである；無菌形態にある；水溶液もしくは緩衝化溶液中に存在する；固体基材に結
合している；別の化学的部分に結合している；またはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドと物
理的に会合している。
【００１３】
例えば以下を含む、種々の他の組成物が提供される：ＩＬ−１２Ｒβ１タンパク質と合
わされた実質的に純粋なポリペプチド；またはキャリア中のこのようなポリペプチド（こ
こで、このキャリアは、水、生理食塩水および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物であ
る；ならびに／または経口的、直腸的、鼻腔内、局所的または非経口的な投与のために処
方される）。
【００１４】
このようなポリペプチドおよび以下を含むキットが提供される：このポリペプチドを含
む区画；ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む区画；ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０もしくはｐ４
０／ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドを含む区画；またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃
棄に関する使用説明書。
【００１５】
ＤＣＲＳ５の細胞内部分に特異的に結合する、例えば、抗体由来の抗原結合部位を含む
、抗体および他の結合化合物が提供され、ここで：この結合化合物は、容器中に存在する
；このポリペプチドは、ヒト由来である；この結合化合物は、Ｆｖ、ＦａｂもしくはＦａ
ｂ２フラグメントである；この結合化合物は、別の化学的部分に結合している；またはこ
の抗体は：表１の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起される；成熟ＤＣＲＳ５
に対して惹起される；精製ヒトＤＣＲＳ５に対して惹起される；免疫選択される；ポリク
ローナル抗体である；変性したＤＣＲＳ５に結合する；少なくとも３０μＭの、抗原に対
するＫｄを示す；ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む、固体基材に結合されて
いる；無菌組成物である；または放射性標識もしくは蛍光標識を含め、検出可能に標識さ
れている。結合化合物および以下を含むキットもまた提供される：この結合化合物を含む
区画；区画であって、ｐ４０ポリペプチド；ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリ
ペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む、区画；抗体を含む区
画であって、この抗体が、ｐ４０ポリペプチド；ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；ＤＣＲＳ５
ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドに選択的に結合する、区
画；またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄に関する使用説明書。
【００１６】
例えば、抗原：抗体複合体を産生する方法であって、適切な条件下で、霊長類ＤＣＲＳ
５ポリペプチドと抗体とを接触させ、それによって複合体を形成させる工程を包含する、
方法また提供される。このような方法においては、以下であり得る：この複合体が、他の
サイトカインレセプターから精製される；この複合体が、他の抗体から精製される；接触
させる工程が、インターフェロンを含むサンプルとである；接触させる工程が、抗原の定
量的検出を可能にする；接触させる工程が、抗体を含むサンプルとである；または接触さ
せる工程が、前記抗体の定量的検出を可能にする。他の組成物（例えば、無菌の結合化合
物、または結合化合物およびキャリアを含む組成物）が提供される：ここで、このキャリ
アは：水、生理食塩水および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物である；ならびに／ま
たは経口的、直腸的、鼻腔内、局所的または非経口的な投与のために処方される。
【００１７】
本発明はまた、ＤＣＲＳ５ポリペプチドをコードする、単離されたまたは組換え核酸を
提供し、ここで：ＤＣＲＳ５はヒト由来である；あるいはこの核酸は：表１の抗原性ペプ
チド配列をコードする；表１の複数の抗原性ペプチド配列をコードする；少なくとも１３
ヌクレオチドにわたって、このセグメントをコードする天然のｃＤＮＡに対する同一性を
示す；発現ベクターである；複製起点をさらに含む；天然の供給源由来である；検出可能
な標識を含む；合成ヌクレオチド配列を含む；６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満である
；霊長類由来である；天然の全長コード配列を含む；ＤＣＲＳ５をコードする遺伝子につ
いてのハイブリダイゼーションプローブである；またはＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物も
しくは変異誘発プライマーである。細胞が以下であるものを含めて、この組換え核酸を含
む細胞が提供される：原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺
乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞。
【００１８】
キットの実施形態としては、この核酸および以下を含むキットが挙げられる：この核酸
を含む区画；核酸を含む区画であって、この核酸が、ｐ４０ポリペプチド；ＩＬ−Ｂ３０
ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチ
ドをコードする、区画；ｐ４０ポリペプチド；ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；ＤＣＲＳ５ポ
リペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む、区画；抗体を含む
区画であって、この抗体が、ｐ４０ポリペプチド；ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；ＤＣＲＳ
５ポリペプチド；および／もしくはＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドに選択的に結合する、
区画；またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄に関する使用説明書。
【００１９】
他の核酸実施形態としては、以下である実施形態が挙げられる：３０分間、３０℃で、
そして２Ｍ未満の塩の洗浄条件下で、細胞内部分をコードする配列番号１の部分にハイブ
リダイズする；または少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類Ｄ
ＣＲＳ５の細胞内部分に対する同一性を示す。好ましくは、このような核酸は、以下であ
る核酸である：洗浄条件が、４５℃および／もしくは５００ｍＭ塩；または５５℃および
／もしくは１５０ｍＭ塩；またはこのストレッチが少なくとも５５ヌクレオチドまたは７
５ヌクレオチドである。
【００２０】
治療的使用としては、細胞の生理機能または発達を調節する方法であって、この細胞を
、以下と接触させる工程を包含する方法が挙げられる：霊長類ＤＣＲＳ５の細胞外部分お
よび／または霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１の細胞外部分を含む複合体である、ｐ４０／ＩＬ−
Ｂ３０のアンタゴニスト；霊長類ＤＣＲＳ５および／または霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１を含
む複合体を結合する抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト；ＤＣＲＳ５に
結合する抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト；ＩＬ−１２Ｒβ１に対す
る抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト；ＤＣＲＳ５もしくはＩＬ−１２
Ｒβ１に対するアンチセンス核酸である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト；また
は霊長類ＤＣＲＳ５および／もしくは霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１を含む複合体を結合する抗
体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアゴニスト。１つの型の方法では、この接触させる工
程は、アンタゴニストとであり、そして、この接触させる工程は、ＩＬ−１２、ＩＬ−１
８、ＴＮＦまたはＩＦＮγに対するアンタゴニストとの組合せにおいてである；あるいは
この細胞は、慢性ＴＨ１媒介性疾患の徴候もしくは症状を示す；多発性硬化症、慢性関節
リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患、糖尿病、乾癬もしくは敗血症の症状もしくは徴
候を示す；または同種異系移植を受けている宿主由来である。逆に、この方法は、アゴニ
ストと接触させ得、そして：この接触させる工程は、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦま
たはＩＦＮγとの組合せにおいてである；あるいはこの細胞は、慢性Ｔｈ２応答の徴候も
しくは症状を示す；腫瘍、ウイルスもしくは真菌の増殖に罹っている；ワクチンを受けて
いる；またはアレルギー応答に罹っている宿主由来である。
上記目的を達成するために、本発明は、例えば、以下の手段を提供する：
（項目１）  実質的に純粋なポリペプチドまたは組換えポリペプチドであって、配列
番号２の細胞内部分の少なくとも１０個連続したアミノ酸を含む、ポリペプチド。
（項目２）  項目１に記載のポリペプチドであって、ここで：
ａ）前記ポリペプチドが、配列番号２の細胞内部分の少なくとも２５個連続したアミノ
酸を含む；
ｂ）前記ポリペプチドが、配列番号２の細胞内部分を含む組換え体である；
ｃ）前記ポリペプチドが、配列番号２の非細胞内部分の少なくとも１０個連続したアミ
ノ酸をさらに含む；
ｄ）前記ポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも２５個のアミノ酸を含
む；
ｅ）前記ポリペプチドが、成熟した配列番号２を含む；または
ｆ）前記ポリペプチドが、実質的に純粋な天然ポリペプチドである、
ポリペプチド。
（項目３）  項目１に記載の組換えポリペプチドであって、該ポリペプチドが：
ａ）表１の成熟配列からなる；
ｂ）非グリコシル化ポリペプチドである；
ｃ）ヒト由来である；
ｄ）配列番号２の少なくとも４０個連続したアミノ酸を含む；
ｅ）配列番号２の少なくとも１５個連続したアミノ酸の少なくとも３個の非重複セグメ
ントを示す；
ｆ）配列番号２の天然の多型改変体である；
ｇ）少なくとも約３０アミノ酸の長さを有する；
ｈ）霊長類ＤＣＲＳ５に特異的である少なくとも２個の非重複エピトープを示す；
ｉ）天然のグリコシル化状態で少なくとも３０ｋＤの分子量を有する；
ｊ）合成ポリペプチドである；
ｋ）無菌形態にある；
ｌ）水溶液もしくは緩衝化溶液中に存在する；
ｍ）固体基材に結合している；
ｎ）別の化学的部分に結合体化している；または
ｏ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドと物理的に会合している、
ポリペプチド。
（項目４）  組成物であって、以下：
ａ）配列番号２の細胞内部分の少なくとも６個連続したアミノ酸の少なくとも２個の別
個の非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチドもしくは組換えポリペプチド
；
ｂ）配列番号２の細胞内部分の少なくとも１２個連続したアミノ酸を含む、実質的に純
粋なポリペプチドもしくは組換えポリペプチド；または
ｃ）成熟した配列番号２を含む、実質的に純粋な天然配列ポリペプチド
から選択される物質の組成物。
（項目５）  ポリペプチドであって：
１）項目４ａに記載のポリペプチドであって、ここで：
ａ）前記別個の非重複セグメントが：
ｉ）第一の少なくとも１２個のアミノ酸を含む；
ｉｉ）第一の少なくとも７個のアミノ酸および第二の少なくとも９個のアミノ酸を
含む：
ｉｉｉ）少なくとも６個のアミノ酸の第三の別個のセグメントを含む；または
ｉｖ）Ｒ３５５−Ｌ３７３、Ｐ３７８−Ｌ４０５、Ｖ４０７−Ｄ４２６、Ｋ４２８
−Ｄ４３９、Ｐ４４１−Ｖ４５２、Ｉ４５４−Ｇ４６０、Ｉ４６５−Ｔ５８７もしくはＮ
５９２−６０６のうちの１つを含む：あるいは
ｂ）前記ポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも６個連続したアミノ
酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントをさらに含む；
２）項目４ｂに記載のポリペプチドであって、ここで：
ａ）該少なくとも１２個連続したアミノ酸セグメントが、Ｒ３５５−Ｌ３７３、Ｐ３
７８−Ｌ４０５、Ｖ４０７−Ｄ４２６、Ｋ４２８−Ｄ４３９、Ｐ４４１−Ｖ４５２、Ｉ４
５４−Ｇ４６０、Ｉ４６５−Ｔ５８７もしくはＮ５９２−６０６のうちの１つを含む；ま
たは
ｂ）前記ポリペプチドが、配列番号２の細胞外部分の少なくとも６個連続したアミノ
酸の少なくとも２個の別個の非重複セグメントをさらに含む：あるいは
３）精製エピトープまたは検出エピトープをさらに含む、項目４ｃのポリペプチド
である、ポリペプチド。
（項目６）  項目４に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドが：
ａ）表１の成熟配列からなる；
ｂ）非グリコシル化ポリペプチドである；
ｃ）ヒト由来である；
ｄ）配列番号２の少なくとも４０個連続したアミノ酸を含む；
ｅ）配列番号２の少なくとも１５個連続したアミノ酸の少なくとも３個の非重複セグメ
ントを示す；
ｆ）配列番号２の天然の多型改変体である；
ｇ）少なくとも約３０アミノ酸の長さを有する；
ｈ）霊長類ＤＣＲＳ５に特異的である少なくとも２個の非重複エピトープを示す；
ｉ）天然のグリコシル化状態で少なくとも３０ｋＤの分子量を有する：
ｊ）合成ポリペプチドである；
ｋ）無菌形態にある；
ｌ）水溶液もしくは緩衝化溶液中に存在する；
ｍ）固体基材に結合している；
ｎ）別の化学的部分に結合体化している；または
ｏ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドと物理的に会合している、
ポリペプチド。
（項目７）  組成物であって：
ａ）ＩＬ−１２Ｒβ１タンパク質と組み合わされた、項目４に記載の実質的に純粋なポ
リペプチド；または
ｂ）項目４に記載のポリペプチドおよびキャリアであって、ここで、該キャリアは：
ｉ）水、生理食塩水および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物である；ならびに／
または
ｉｉ）経口的、直腸的、鼻腔内、局所的または非経口的な投与のために処方される、
ポリペプチドおよびキャリア
を含む、組成物。
（項目８）  キットであって、該キットは、項目４に記載のポリペプチドおよび：
ａ）該ポリペプチドを含む区画；
ｂ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチドを含む区画；
ｃ）ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０もしくはｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドを含む区画；ま
たは
ｄ）該キット中の試薬の使用もしくは廃棄に関する使用説明書
を備える、キット。
（項目９）  抗体由来の抗原結合部位を含む結合化合物であって、該結合化合物は、
項目１に記載のポリペプチドの細胞内部分に特異的に結合し、ここで：
ａ）該結合化合物は、容器中に存在する；
ｂ）該ポリペプチドは、ヒト由来である；
ｃ）該結合化合物は、Ｆｖ、ＦａｂもしくはＦａｂ２フラグメントである；
ｄ）該結合化合物は、別の化学的部分に結合体化している；または
ｅ）該抗体は：
ｉ）表１の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起される；
ｉｉ）成熟ＤＣＲＳ５に対して惹起される；
ｉｉｉ）精製ヒトＤＣＲＳ５に対して惹起される；
ｉｖ）免疫選択される；
ｖ）ポリクローナル抗体である；
ｖｉ）変性したＤＣＲＳ５に結合する；
ｖｉｉ）少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示す；
ｖｉｉｉ）ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む、固体基材に結合されてい
る；
ｉｘ）無菌組成物である；または
ｘ）放射性標識もしくは蛍光標識を含み、検出可能に標識されている、
結合化合物。
（項目１０）  キットであって、項目９に記載の結合化合物および：
ａ）該結合化合物を含む区画；
ｂ）区画であって、以下：
ｉ）ｐ４０ポリペプチド；
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；
ｉｉｉ）ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくは
ｉｖ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチド
を含む、区画；
ｃ）抗体を含む区画であって、該抗体が、以下：
ｉ）ｐ４０ポリペプチド；
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；
ｉｉｉ）ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくは
ｉｖ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチド
に選択的に結合する、区画；または
ｄ）該キット中の試薬の使用もしくは廃棄に関する使用説明書
を備える、キット。
（項目１１）  抗原：抗体複合体を産生する方法であって、適切な条件下で、霊長類
ＤＣＲＳ５ポリペプチドと項目９に記載の抗体とを接触させ、それによって該複合体を形
成させる工程を包含する、方法。
（項目１２）  項目１１に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記複合体が、他のサイトカインレセプターから精製される；
ｂ）前記複合体が、他の抗体から精製される；
ｃ）前記接触させる工程が、インターフェロンを含むサンプルとの接触である；
ｄ）前記接触させる工程が、前記抗原の定量的検出を可能にする；
ｅ）前記接触させる工程が、前記抗体を含むサンプルとの接触である；または
ｆ）前記接触させる工程が、前記抗体の定量的検出を可能にする、
方法。
（項目１３）  組成物であって、以下：
ａ）項目９に記載の無菌の結合化合物、または
ｂ）項目９に記載の結合化合物およびキャリアであって、ここで、該キャリアは：
ｉ）水、生理食塩水および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物である；ならびに／
または
ｉｉ）経口的、直腸的、鼻腔内、局所的または非経口的な投与のために処方される、
ポリペプチドおよびキャリア
を含む、組成物。
（項目１４）  項目１に記載のＤＣＲＳ５ポリペプチドをコードする、単離された核
酸または組換え核酸であって、ここで、
ａ）ＤＣＲＳ５が、ヒト由来であるか；または
ｂ）該核酸が、
ｉ）表１の抗原性ペプチド配列をコードする；
ｉｉ）表１の複数の抗原性ペプチド配列をコードする；
ｉｉｉ）少なくとも１３ヌクレオチドにわたって、このセグメントをコードする天然
ｃＤＮＡに対する同一性を示す；
ｉｖ）発現ベクターである；
ｖ）複製起点をさらに含む；
ｖｉ）天然の供給源由来である；
ｖｉｉ）検出可能な標識を含む；
ｖｉｉｉ）合成ヌクレオチド配列を含む；
ｉｘ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満である；
ｘ）霊長類由来である；
ｘｉ）天然の全長コード配列を含む；
ｘｉｉ）ＤＣＲＳ５をコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーションプローブ
である；または
ｘｉｉｉ）ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物もしくは変異誘発プライマーである。
（項目１５）  項目１４に記載の組換え核酸を含む、細胞または組織。
（項目１６）  項目１５に記載の細胞であって、ここで該細胞が：
ａ）原核生物細胞；
ｂ）真核生物細胞；
ｅ）細菌細胞；
ｄ）酵母細胞；
ｅ）昆虫細胞；
ｆ）哺乳動物細胞；
ｇ）マウス細胞；
ｈ）霊長類細胞；または
ｉ）ヒト細胞
である、細胞。
（項目１７）  キットであって、該キットは、項目１４に記載の核酸および：
ａ）該核酸を含む区画；
ｂ）核酸を含む区画であって、該核酸が、以下：
ｉ）ｐ４０ポリペプチド；
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；
ｉｉｉ）ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくは
ｉｖ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチド
をコードする、区画；
ｃ）区画であって、以下：
ｉ）ｐ４０ポリペプチド；
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；
ｉｉｉ）ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくは
ｉｖ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチド
を含む、区画；
ｄ）抗体を含む区画であって、該抗体が、以下：
ｉ）ｐ４０ポリペプチド；
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド；
ｉｉｉ）ＤＣＲＳ５ポリペプチド；および／もしくは
ｉｖ）ＩＬ−１２Ｒβ１ポリペプチド
に選択的に結合する、区画；または
ｅ）該キット中の試薬の使用もしくは廃棄に関する使用説明書
を備える、キット。
（項目１８）  核酸であって、ａ）３０分間、３０℃で、そして２Ｍ未満の塩の洗浄
条件下で、細胞内部分をコードする配列番号１の部分にハイブリダイズする；またはｂ）
少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類ＤＣＲＳ５の細胞内部分
に対する同一性を示す。
（項目１９）  ａ）前記洗浄条件が、４５℃および／もしくは５００ｍＭ塩；または
ｂ）前記ストレッチが少なくとも５５ヌクレオチドである、項目１８に記載の核酸。
（項目２０）  ａ）前記洗浄条件が、５５℃および／もしくは１５０ｍＭ塩；または
ｂ）前記ストレッチが少なくとも７５ヌクレオチドである、項目１８に記載の核酸。
（項目２１）  細胞の生理機能または発達を調整する方法であって、該方法は、該細
胞を、以下：
ａ）以下を含む複合体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト：
ｉ）霊長類ＤＣＲＳ５の細胞外部分；および／もしくは
ｉｉ）霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１の細胞外部分；
ｂ）以下を含む複合体を結合する抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト
：
ｉ）霊長類ＤＣＲＳ５；および／もしくは
ｉｉ）霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１；
ｃ）ＤＣＲＳ５に結合する抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト；
ｄ）ＩＬ−１２Ｒβ１に対する抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト；
ｅ）ＤＣＲＳ５もしくはＩＬ−１２Ｒβ１に対するアンチセンス核酸であるｐ４０／Ｉ
Ｌ−Ｂ３０のアンタゴニスト；または
ｆ）以下を含む複合体を結合する抗体である、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアゴニスト：
ｉ）霊長類ＤＣＲＳ５；および／もしくは
ｉｉ）霊長類ＩＬ−１２Ｒβ１
と接触させる工程を包含する、方法。
（項目２２）  項目２１に記載の方法であって、ここで、前記接触させる工程が、ア
ンタゴニストとの接触であり、そして：
ａ）該接触させる工程が、以下：
ｉ）ＩＬ−１２；
ｉｉ）ＩＬ−１８；
ｉｉｉ）ＴＮＦ；または
ｉｖ）ＩＦＮγ
に対するアンタゴニストとの組合せにおいてである；あるいは
ｂ）前記細胞が、以下：
ｉ）慢性Ｔｈ１媒介性疾患の徴候もしくは症状を示す；
ｉｉ）多発性硬化症、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患、糖尿病、乾
癬もしくは敗血症の症状もしくは徴候を示す；または
ｉｉｉ）同種異系移植を受けている
宿主由来である、方法。
（項目２３）  項目２１に記載の方法であって、ここで、前記接触させる工程が、ア
ゴニストとの接触であり、そして：
ａ）該接触させる工程が、以下：
ｉ）ＩＬ−１２；
ｉｉ）ＩＬ−１８；
ｉｉｉ）ＴＮＦ；または
ｉｖ）ＩＦＮγ
との組合せにおいてである；あるいは
ｂ）前記細胞が、以下：
ｉ）慢性ＴＨ２応答の徴候もしくは症状を示す；
ｉｉ）腫瘍、ウイルスもしくは真菌の増殖に罹っている；
ｉｉｉ）ワクチンを受けている；または
ｉｖ）アレルギー応答に罹っている
宿主由来である、方法。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
（大要）
Ｉ．概要
ＩＩ．活性
ＩＩＩ．核酸
Ａ．コードするフラグメント、配列、プローブ
Ｂ．変異誘発、キメラ、融合物
Ｃ．核酸の作製
Ｄ．含むベクター、細胞
ＩＶ．タンパク質、ペプチド
Ａ．フラグメント、配列、免疫原、抗原
Ｂ．ムテイン
Ｃ．アゴニスト／アンタゴニスト、機能的等価物
Ｄ．タンパク質の作製
Ｖ．核酸、タンパク質の作製
Ａ．合成
Ｂ．組換え体
Ｃ．天然の供給源
ＶＩ．抗体
Ａ．ポリクローナル
Ｂ．モノクローナル
Ｃ．フラグメント；Ｋｄ
Ｄ．抗イディオタイプ抗体
Ｅ．ハイブリドーマ細胞株
ＶＩＩ．キット、診断および定量
Ａ．ＥＬＩＳＡ
Ｂ．コードするｍＲＮＡのアッセイ
Ｃ．定性的／定量的
Ｄ．キット
ＶＩＩＩ．治療組成物、方法
Ａ．組合せ組成物
Ｂ．単位用量
Ｃ．投与
ＩＸ．スクリーニング
（Ｉ．概要）
本発明は、構造的および生物学的の両方の特定の規定された特性を有する哺乳動物（本
明細書中では霊長類）サイトカインレセプター様サブユニット分子のアミノ酸配列および
ＤＮＡ配列を提供し、この分子は、ＤＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット５（Ｄ
ＣＲＳ５）と称される。これらの分子をコードする種々のｃＤＮＡは、霊長類（例えば、
ヒト）のｃＤＮＡ配列ライブラリーから入手された。他の霊長類または他の哺乳動物の対
応物もまた所望される。
【００２２】
さらに、本発明は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンドとレセプターサブユニットＤＣＲＳ
５およびＩＬ−１２Ｒβ１との適合を提供し、この対形成は、アゴニストおよびアンタゴ
ニストに対する試薬に基づいた、アゴニストおよびアンタゴニストの使用のための指標の
洞察を提供する。
【００２３】
適用可能な標準的な方法のうちのいくつかは、例えば、以下に記載または参照される：
Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９
８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ
，（第２版），第１３巻，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，
ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期補充物）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；これらの各々は、本明細書中に参考として援用される。
【００２４】
霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ５コードセグメントのヌクレオチド（配列番号１）
および対応するアミノ酸配列（配列番号２）を表１に示す。予測されるシグナル配列が示
されるが、細胞型に依存し得るか、またはいずれかの方向のいくつかの残基であり得る。
潜在的Ｎグリコシル化部位は、アスパラギン残基６、２４、５８、１１８、１５７、２０
９および２５０にある。ジスルフィド結合は、２９位のシステイン残基と７８位のシステ
イン残基との間に見出されるようである；そして保存されたＣ ＣＸＷモチーフは、１１
０位／１２１位／１２３位に見出される。２１９位のトリプトファン；および２８１〜２
８５のＷｘｘＷＳモチーフが注目される。約１〜約１０１のセグメントは、Ｉｇドメイン
であり；約１０２〜約１９５のセグメントはサイトカイン結合ドメイン１であり；約１９
６〜約２９７のセグメントはサイトカイン結合ドメイン２であり；約２９８〜約３３０の
セグメントはリンカーであり；約３２９〜約３５４のセグメントは膜貫通セグメントであ
り；そして約３５６〜約６０６のセグメントは細胞内ドメインである。細胞内の特徴とし
ては、Ｙ３７４−Ｉ３７７、Ｙ４６１−Ｑ４６４およびＹ５８８−Ｑ５９１の推定ＳＨ２
結合部位；ならびに４０６、４２７、４４０および４５３の潜在的に重要なチロシン残基
が挙げられる。これらの部位および境界が注目される。
【００２５】
ＯＲＦは、上記で示すように、．．．ＣＨＧ／ＧＩＴ．．．で切断されると予測される
推定シグナル配列を含む。３２８アミノ酸の予測細胞外ドメインには、推定膜貫通セグメ
ントが続いており、そして最終的に約２５２アミノ酸の細胞質ドメインが続いている。リ
ガンド結合機能は、細胞外ドメインに存在すると推定される。
【００２６】
逆方向の翻訳核酸配列を表２に提供する。
【００２７】
【表１】
2015110576.tif 000002
2015110576.tif 000003
2015110576.tif 000004
2015110576.tif 000005
【００２８】
【表２】
2015110576.tif 000006
【００２９】
【表３】
2015110576.tif 000007
2015110576.tif 000008
2015110576.tif 000009
「ＩＬ−３０Ｒ」の細胞外ドメインの最も近縁のものは、ＩＬ−６シグナル伝達因子（
ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）ｇｐ１３０およびＩＬ−１２Ｒβ２である。いく
らかより近縁でないものは、ＧＣＳＦレセプター、レプチンレセプター、白血病阻害因子
レセプターおよびＣＮＴＦレセプターである。従って、「ＩＬ−３０Ｒ」は、サイトカイ
ンレセプタースーパーファミリーのクラスＩ部門（ｂｒａｎｃｈ）のメンバーであり、Ｉ
Ｌ−６Ｒ／ＩＬ−１２Ｒファミリーに密接に関連している。
【００３０】
表３は、霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ５（ＩＬ−３０Ｒ）との霊長類レセプター
サブユニットの利用可能な配列の比較を示す。ＤＣＲＳ５は、ＩＬ−６レセプターサブユ
ニットｇｐ１３０（例えば、ＩＬ−６Ｒサブユニット）およびＩＬ−１２Ｒβ２サブユニ
ットに対する類似性を示す。ＤＣＲＳ５は、βサブユニットの構造的特徴を示すが、タン
パク質の相互作用およびシグナル伝達の実際の順序は、未解明のままである。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、用語ＤＣＲＳ５は、表１に示されるアミノ酸配列を含む
タンパク質を記載するように使用される。多くの場合、それらの実質的なフラグメントは
、例えば、さらなる細胞外セグメントを含め、機能的または構造的に等価である。本発明
はまた、配列が提供されるそれぞれのＤＣＲＳ５対立遺伝子のタンパク質のバリエーショ
ン（例えば、ムテインまたは他の構築物）を含む。代表的には、このような改変体は、標
的領域との約１０％未満の配列の相違を示し、従ってしばしば、１重置換と１１重置換と
の間の置換（例えば、２重、３重、５重、７重など）を有する。これはまた、記載される
タンパク質の対立遺伝子改変体および他の改変体（例えば、天然の多型）を包含する。代
表的に、これは、その対応する生物学的リガンドに、おそらく、αレセプターサブユニッ
トとの二量体化状態において、例えば、少なくとも約１００ｎＭ、通常約３０ｎＭより良
好、好ましくは約１０ｎＭより良好、そしてより好ましくは約３ｎＭより良好な高い親和
性で結合する。この用語はまた、この哺乳動物タンパク質の関連した天然に存在する形態
（例えば、対立遺伝子、多型改変体および代謝改変体）をいうように本明細書中で使用さ
れる。好ましい形態のレセプター複合体は、リガンド−レセプター相互作用に適切な親和
性および選択性で適切なリガンドを結合する。
【００３２】
本発明はまた、表１中のアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列同一性を有する、タンパ
ク質またはペプチドの組合せを包含する。本発明は、比較的わずかな（例えば、好ましく
は約３〜５より少ない）置換を有する配列改変体を包含する。
【００３３】
実質的なポリペプチド「フラグメント」または「セグメント」は、少なくとも約８アミ
ノ酸、一般的に少なくとも１０アミノ酸、より一般的に少なくとも１２アミノ酸、しばし
ば少なくとも１４アミノ酸、よりしばしば少なくとも１６アミノ酸、代表的に少なくとも
１８アミノ酸、より代表的に少なくとも２０アミノ酸、通常は少なくとも２２アミノ酸、
より通常は少なくとも２４アミノ酸、好ましくは少なくとも２６アミノ酸、より好ましく
は少なくとも２８アミノ酸、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも約３０以上の
アミノ酸のアミノ酸残基のストレッチである。異なるタンパク質のセグメントの配列は、
適切な長さのストレッチにわたって互いに比較され得る。多くの状況では、フラグメント
は、インタクトなサブユニットの機能的特性を示し得る。例えば、膜貫通レセプターの細
胞外ドメインは、リガンド結合特徴を保持し得、そしてこれを使用して可溶性レセプター
様複合体を調製し得る。
【００３４】
アミノ酸配列相同性または配列同一性は、残基の一致を最適化することによって決定さ
れる。いくつかの比較では、必要に応じてギャップが導入され得る。例えば、Ｎｅｅｄｌ
ｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３；Ｓａｎｋｏｆｆ
ら（１９８３）Ｔｉｍｅ  Ｗａｒｐｓ，Ｓｔｒｉｎｇ  Ｅｄｉｔｓ，ａｎｄ  Ｍａｃｒｏ
ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ  Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎの第１章，Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，Ｒｅａｄ
ｉｎｇ，ＭＡ；およびＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，
ＣＡからのソフトウェアパッケージ；およびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎ
ｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ
，ＷＩを参照のこと；これらの各々は、本明細書中に参考として援用される。これは、保
存的置換を一致として考慮する場合、変動する。保存的置換としては代表的に、以下のグ
ループ内での置換が挙げられる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン
；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リ
ジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。相同なアミノ酸配列は、そのサ
イトカイン配列における天然の対立遺伝子バリエーションおよび種間バリエーションを含
むことが意図される。代表的な相同タンパク質または相同ペプチドは、表１のアミノ酸配
列セグメントと、５０％〜１００％の相同性（ギャップが導入され得る場合）〜６０％〜
１００％相同性（保存的置換が含まれる場合）を有する。相同性の限度は、少なくとも約
７０％、一般に少なくとも７６％、より一般的に少なくとも８１％、しばしば少なくとも
８５％、よりしばしば少なくとも８８％、代表的には少なくとも９０％、より代表的には
少なくとも９２％、通常は少なくとも９４％、より通常は少なくとも９５％、好ましくは
少なくとも９６％、そしてより好ましくは少なくとも９７％、そして特に好ましい実施形
態では、少なくとも９８％以上である。相同性の程度は、比較されるセグメントの長さに
伴って変動する。相同タンパク質または相同ペプチド（例えば、対立遺伝子改変体）は、
表１に記載される実施形態（特に細胞内部分）と大部分の生物学的活性を共有する。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「生物学的活性」は、シグナル伝達、炎症応答、先
天免疫および／またはサイトカイン様リガンドによる形態形成的発生に対する効果を限定
することなく記載するように使用される。例えば、これらのレセプターは、ホスファター
ゼ活性またはホスホリラーゼ活性を媒介すべきであり、これらの活性は、標準的な手順に
よって容易に測定される。例えば、Ｈａｒｄｉｅら編（１９９５）Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ  Ｋｉｎａｓｅ  ＦａｃｔＢｏｏｋ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ  ７０：３７５−３８８
；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ  ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（１９９１）
Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４４
９−４６３；およびＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：７３６−７３８
を参照のこと。レセプターまたはその部分は、一般的基質または特異的基質を標識するた
めのリン酸標識酵素として有用であり得る。サブユニットはまた、認識抗体を惹起する機
能的な免疫原または抗体を結合し得る抗原であり得る。
【００３６】
例えば、ＤＣＲＳ５の、用語リガンド、アゴニスト、アンタゴニストおよびアナログは
、（例えば、レセプターが天然のレセプターまたは抗体である場合の）リガンド−レセプ
ター相互作用の特徴をいう。細胞性応答は代表的には、レセプターチロシンキナーゼ経路
によって媒介されるようである。
【００３７】
また、リガンドは、上記レセプターもしくはそのアナログが結合する天然のリガンドま
たはその天然のリガンドの機能的アナログである分子のいずれかとして役立つ分子である
。機能的アナログは、構造的改変を有するリガンドであり得るか、または適切なリガンド
結合決定基と相互作用する分子形状を有する、完全に無関係の分子であり得る。このリガ
ンドは、アゴニストまたはアンタゴニストとして作用し得る。例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら
編（１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。
【００３８】
合理的薬物設計はまた、レセプターまたは抗体および他のエフェクターもしくはリガン
ドの分子形状の構造研究に基づき得る。例えば、Ｈｅｒｚら（１９９７）Ｊ．Ｒｅｃｅｐ
ｔ．Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１７：６７１−７７６；およびＣｈａ
ｉｋｅｎら（１９９６）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３６９−３７５を
参照のこと。エフェクターは、リガンド結合に応じて他の機能を媒介する他のタンパク質
またはこのレセプターと通常相互作用する他のタンパク質であり得る。どの部位が特定の
他のタンパク質と相互作用するかを決定するための１つの手段は、物理的構造決定（例え
ば、Ｘ線結晶学または二次元ＮＭＲ技術）である。これらは、どのアミノ酸残基が分子接
触領域を形成するかに関するガイダンスを提供する。タンパク質の構造決定の詳細な説明
については、例えば、本明細書中に参考として援用される、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏ
ｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００３９】
（ＩＩ．活性）
サイトカインレセプター様タンパク質は、多数の異なる生物学的活性（例えば、（例え
ば、ＳＴＡＴ４を介した）細胞内シグナル伝達、細胞増殖の調節）を有するか、またはリ
ン酸代謝において、特定の基質（代表的にタンパク質）に添加されるかもしくは特定の基
質から除去される。このようなことは一般に、炎症機能、他の先天免疫応答、または形態
学的効果の調節をもたらす。サブユニットはおそらく、リガンドに対する特異的低親和性
結合を有する。
【００４０】
ＤＣＲＳ５は、ＪＡＫ経路を通したレセプターシグナル伝達の特有のモチーフを有する
。例えば、Ｉｈｌｅら（１９９７）Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  １５（補遺１．１）：１０５
−１１１；Ｓｉｌｖｅｎｎｏｉｎｅｎら（１９９７）ＡＰＭＩＳ  １０５：４９７−５０
９；Ｌｅｖｙ（１９９７）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅ
ｗ  ８：８１−９０；ＷｉｎｓｔｏｎおよびＨｕｎｔｅｒ（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  
Ｂｉｏｌ．６：６６８−６７１；Ｂａｒｒｅｔｔ（１９９６）Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ  Ｃ
ｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０：１−１５；ならびにＢｒｉｓｃｏｅら（１
９９６）Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄ．Ｂ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．３
５１：１６７−１７１を参照のこと。特に興味深いのは、上記のＳＨ２結合モチーフであ
る。
【００４１】
サイトカインレセプターサブユニットの生物学的活性は、代表的には特定の様式におい
て、しかし、時々は非特異的な様式で、基質へのリン酸部分の添加または除去に関連して
いる。標準的方法によって、例えば、Ｈａｒｄｉｅら編（１９９５）Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  ＦａｃｔＢｏｏｋ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ．２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ  ７０：３７５−３８
８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ  ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（１９９１
）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４
４９−４６３；ならびにＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：７３６−７
３８に記載されるように、基質が同定され得るか、または酵素的活性についての条件がア
ッセイされ得る。
【００４２】
レセプターサブユニットは組み合わされて、（例えば、リガンドを結合するためまたは
抗体を調製するために有用であり得る）機能的複合体を形成し得る。これらは、検出また
は定量を含め、実質的な診断的用途を有する。レセプターとｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガン
ドとの機能的結合は、このレセプターが有用である臨床的指標に重要な洞察を提供する。
従って、アンタゴニストおよびアゴニストは、予測された機能的効果を有する。
【００４３】
（ＩＩＩ．核酸）
本発明は、例えば、対応するポリペプチド（好ましくは、生物学的に活性であるポリペ
プチド）をコードするための、（例えば、これらのタンパク質もしくは密接に関連するタ
ンパク質またはそれらのフラグメントをコードする）単離された核酸またはフラグメント
の使用を意図する。さらに、本発明は、（例えば、ＤＣＲＳ５単独の、または他のもの（
例えば、ＩＬ−１２Ｒβ１（Ｓｈｏｗｅら（１９９６）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．７９５：４１３−４２５；Ｇａｔｅｌｙら（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１６：４９５−５２１；ＧｅｎＢａｎｋ  Ｕ０３１８７，ＮＭ ００５５３５を参
照のこと）サブユニット）と組み合わせた）特有の配列を有する、このようなタンパク質
またはポリペプチドの組合せをコードする、単離されたＤＮＡまたは組換えＤＮＡを包含
する。代表的に、この核酸は、適切な条件下で、表１に示される核酸配列セグメントとハ
イブリダイズし得るが、好ましくは、表３に記載されるレセプターの、対応するフラグメ
ントとはハイブリダイズし得ない。この生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチド
は、全長タンパク質またはフラグメントであり得、そして表１に示すものに対して代表的
に非常に相同な（例えば、重大な同一性ストレッチを示す）アミノ酸配列のセグメントを
有する。さらに、本発明は、ＤＣＲＳ５タンパク質に等価であるフラグメント（例えば、
細胞内部分）を有するタンパク質をコードする、単離された核酸もしくは組換え核酸また
はそれらのフラグメントの使用を包含する。単離された核酸は、それぞれの調節配列（例
えば、プロモーター、エンハンサー、ポリＡ付加シグナルおよび天然の遺伝子由来の他の
もの）を５’隣接部（ｆｌａｎｋ）および３’隣接部に有し得る。上記の通りの組合せ（
例えば、リガンドアンタゴニストとして、ＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１とを組合せるこ
と、またはそれらの細胞外リガンド結合部分を組み合わせること）もまた提供される。例
えば、診断的有用性はまた明らかに、多型または他の改変体の重要事項である。
【００４４】
「単離された」核酸は、実質的に純粋な（例えば、天然ではネイティブな配列に付随す
る他の成分（例えば、リボソーム、ポリメラーゼおよび起源種由来の隣接ゲノム配列）か
ら分離された）核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは混合ポリマー）である。この用語は
、その天然に存在する環境から取り出された核酸配列を包含し、そしてそれによって天然
に存在する組成物とは区別され得る、組換えＤＮＡ単離物もしくはクローニングされたＤ
ＮＡ単離物、および化学合成されたアナログもしくは異種の系によって生物学的に合成さ
れたアナログを包含する。実質的に純粋な分子としては、完全に純粋または実質的に純粋
のいずれかの、単離された形態の分子が挙げられる。
【００４５】
単離された核酸は一般に、分子の均質組成物であるが、いくつかの実施形態においては
、不均質性（好ましくは微量）を含む。この不均質性は代表的に、ポリマーの末端または
所望の生物学的機能もしくは活性に重要でない部分に見出される。
【００４６】
「組換え」核酸は代表的に、その産生法またはその構造によって規定される。その産生
法に関して（例えば、プロセスによって作製される産物）、このプロセスは、（例えば、
ヌクレオチド配列においてヒトの介入を含む）組換え核酸技術の使用である。代表的に、
この介入は、インビトロでの操作を含むが、特定の環境下では、この介入は、より古典的
な動物育種技術を含み得る。あるいは、これは、天然では互いに連続していない２つのフ
ラグメントの融合物を含む配列を作製することによって作製される核酸であり得るが、こ
れは、天然の産物（例えば、それらの天然の状態において見出されるような、天然に存在
する変異体）を除外することを意味する。従って、例えば、細胞を、天然に存在しないベ
クターで形質転換することによって作製される産物は、任意の合成オリゴヌクレオチドプ
ロセスを用いて誘導される配列を含む核酸と同様に包含される。このようなプロセスはし
ばしば、代表的には、制限酵素配列認識部位を導入もしくは除去しながら、または何らか
の構造−機能解析のために、例えば、あるコドンを、同じまたは保存的アミノ酸をコード
する冗長なコドンで置換することによって行われる。あるいは、このプロセスを行って、
所望の機能の核酸セグメントを一緒に連結して、（例えば、融合タンパク質をコードする
）通常利用可能な天然の形態で見出されない機能の所望の組合せを含む単一の遺伝的実体
が作製される。制限酵素認識部位はしばしば、このような人工的操作の標的であるが、他
の部位特異的標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、制御配列または
他の有用な特徴）は設計により取り込まれ得る。同様の概念は、組換え（例えば、融合）
ポリペプチドについて意図される。これは、ＤＣＲＳ５の二量体反復物またはＤＣＲＳ５
のＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットとの融合物を含む。特に含まれるのは、遺伝暗号の冗長
性によって、ＤＣＲＳ５のフラグメントに対する等価なポリペプチドおよび種々の異なる
関連分子（例えば、他のサイトカインレセプターファミリーのメンバー）由来の配列の融
合物をコードする合成核酸である。
【００４７】
核酸の状況での「フラグメント」は、少なくとも約１７ヌクレオチド、一般に少なくと
も２１ヌクレオチド、より一般的に少なくとも２５ヌクレオチド、通常は少なくとも３０
ヌクレオチド、より通常は少なくとも３５ヌクレオチド、しばしば少なくとも３９ヌクレ
オチド、よりしばしば少なくとも４５ヌクレオチド、代表的には少なくとも５０ヌクレオ
チド、より代表的には少なくとも５５ヌクレオチド、通常は少なくとも６０ヌクレオチド
、より通常は少なくとも６６ヌクレオチド、好ましくは少なくとも７２ヌクレオチド、よ
り好ましくは少なくとも７９ヌクレオチド、そして特に好ましい実施形態では、少なくと
も８５以上のヌクレオチド（９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００な
どを含む）の連続したセグメントである。代表的に、異なる遺伝的配列のフラグメントは
、適切な長さのストレッチ（特に、規定されたセグメント（例えば、以下に記載のドメイ
ン））にわたって互いに比較され得る。
【００４８】
ＤＣＲＳ５をコードする核酸は、それ自体または近縁のタンパク質をコードする、遺伝
子種、ｍＲＮＡ種およびｃＤＮＡ種、ならびに多型改変体、対立遺伝子改変体または遺伝
的改変体をコードするＤＮＡを、例えば、異なる個体または関連の種から同定するために
特に有用である。このようなスクリーニングのための好ましいプローブは、レセプターの
うちの、異なる多型改変体間で保存されている領域またはレセプターのうちの、特異性を
欠くヌクレオチドを含む領域であり、そして好ましくは全長もしくはそれに近い。他の状
況では、多型改変体特異的配列は、より有用である。ＤＣＲＳ５の多型改変体とＩＬ−１
２Ｒβ１の改変体との組合せもまた調査分析され得る。
【００４９】
本発明はさらに、本明細書中に示される単離されたＤＮＡと同一であるかまたは高度に
相同である核酸配列を有する、組換え核酸分子および組換えフラグメントを包含する。特
に、この配列はしばしば、転写、翻訳およびＤＮＡ複製を制御するＤＮＡセグメントに作
動可能に連結される。これらのさらなるセグメントは代表的に、所望の核酸セグメントの
発現を補助する。
【００５０】
相同または高度に同一な核酸配列は、互いに（例えば、ＤＣＲＳ５配列と）比較された
場合、有意な類似性を示す。核酸における相同性の基準は、配列比較による、当該分野で
一般に使用される相同性についての尺度であるか、またはハイブリダイゼーション条件に
基づくかのいずれかである。匹敵するハイブリダイゼーション条件は、以下でさらに詳細
に記載される。
【００５１】
核酸配列比較の状況における実質的な同一性とは、比較した場合、適切なヌクレオチド
の挿入または欠失を伴って最適に整列したとき、セグメントまたはそれらの相補鎖のいず
れかが、そのヌクレオチドの少なくとも約６０、一般に少なくとも６６、通常は少なくと
も７１％、しばしば少なくとも７６％、よりしばしば少なくとも８０％、通常少なくとも
８４％、より通常少なくとも８８％、代表的には少なくとも９１％、より代表的には少な
くとも約９３％、好ましくは少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６〜９
８％以上、そして特定の実施形態では、このヌクレオチドの約９９％以上の高さ（例えば
、構造ドメインをコードするセグメントまたは記載される他のセグメントを含む）におい
て同一であることを意味する。あるいは、このセグメントが、選択的ハイブリダイゼーシ
ョン条件下で、代表的には表１から誘導される配列を用いた鎖またはその相補体にハイブ
リダイズする場合、実質的同一性が存在する。代表的には、少なくとも約１４ヌクレオチ
ド、より代表的には少なくとも約６５％、好ましくは少なくとも約７５％、そしてより好
ましくは少なくとも約９０％のストレッチにわたって少なくとも約５５％の相同性が存在
する場合、選択的ハイブリダイゼーションが生じる。本明細書中に参考として援用される
、Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３
を参照のこと。記載されるように、相同性比較の長さは、より長いストレッチにわたり得
、そして特定の実施形態では、少なくとも約１７ヌクレオチド、一般に少なくとも約２０
ヌクレオチド、通常は少なくとも約２４ヌクレオチド、通常は少なくとも約２８ヌクレオ
チド、代表的には少なくとも約３２ヌクレオチド、より代表的には少なくとも約４０ヌク
レオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチド、そしてより好ましくは少なくとも
約７５〜１００以上のヌクレオチドのストレッチにわたる。これとしては、例えば、１２
５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０などお
よび他の長さが挙げられる。
【００５２】
ハイブリダイゼーションの状況において相同性をいう際、ストリンジェントな条件は、
ハイブリダイゼーション反応において代表的に制御される、塩、温度、有機溶媒および他
のパラメーターのストリンジェントな組み合わされた条件である。ストリンジェントな温
度条件は、通常約３０℃を超える、より通常は約３７℃を超える、代表的には約４５℃を
超える、より代表的には約５５℃を超える、好ましくは約６５℃を超える、そしてより好
ましくは約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常、約５００ｍ
Ｍ未満、通常約４００ｍＭ未満、より通常は約３００ｍＭ未満、代表的に約２００ｍＭ未
満、好ましくは約１００ｍＭ未満、そしてより好ましくは約８０ｍＭ未満であり、さらに
は約５０ｍＭまたは２０ｍＭ未満まで下がりさえする。しかし、パラメーターの組合せは
、任意の単一のパラメーターの限度よりもさらにずっと重要である。例えば、本明細書中
に参考として援用される、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．３１：３４９−３７０を参照のこと。
【００５３】
単離されたＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿入および
ヌクレオチドストレッチの逆位によって容易に改変され得る。これらの改変は、このタン
パク質またはその誘導体をコードする新規なＤＮＡ配列をもたらす。これらの改変された
配列を使用して、変異体タンパク質（ムテイン）を産生し得るかまたは改変体種の発現を
増強し得る。増強された発現は、遺伝子の増幅、転写増大、翻訳増大および他の機構を含
み得る。このような変異ＤＣＲＳ５は、上記に示すような、しかし、欠失、置換または挿
入のいずれによってであるかかかわらず、天然に見出される他のサイトカインレセプター
様タンパク質のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する、ＤＣＲＳ５の定義を含む
（ｉｎｉｔｉｏｎ）。特に、「部位特異的変異ＤＣＲＳ５」は、表１のタンパク質と実質
的配列同一性を有し、そして代表的には本明細書中に開示される形態の生物学的活性また
は効果の大部分を共有するタンパク質を包含する。種々の天然の多型改変体配列もまた同
定される。
【００５４】
部位特異的変異部位は所定であるとはいえ、変異体は、部位特異的である必要はない。
哺乳動物ＤＣＲＳ５変異誘発は、発現と結び付いたアミノ酸の挿入または欠失を遺伝子中
に作製することによって達成され得る。置換、欠失、挿入または多くの組合せが作製され
て、最終的な構築物に到達され得る。挿入物としては、アミノ末端融合物またはカルボキ
シ末端融合物が挙げられる。ランダム変異誘発は、標的コドンで行われ得、次いで発現さ
れる哺乳動物ＤＣＲＳ５変異体は、所望の活性についてスクリーニングされ得、構造と活
性との関係のいくつかの局面を提供する。既知配列を有するＤＮＡ中の所定の部位で置換
変異を作製するための方法は、例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発によって当該分野で周
知である。Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）ならびにＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および
定期補充物）もまた参照のこと。特に有用な構築物は、ＩＬ−１２Ｒβ１セグメントに関
連したＤＣＲＳ５の細胞外部分である。
【００５５】
ＤＮＡ中の変異は通常、コード配列をリーディングフレームから外すべきでなく、そし
て好ましくはハイブリダイズして二次ｍＲＮＡ構造（例えば、ループまたはヘアピン）を
生じ得る相補的領域を作製しない。
【００５６】
ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．
２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホルアミダイト法は、適切な合成ＤＮ
Ａフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントはしばしば、相補鎖を合成し、そして鎖
を適切な条件下で一緒にアニーリングすること、または適切なプライマー配列を有するＤ
ＮＡポリメラーゼを用いて相補鎖を付加することのいずれかによって入手される。
【００５７】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術はしばしば、変異誘発において適用され得る。あ
るいは、変異誘発プライマーは、規定された変異を所定の部位で作製するために通常使用
される方法である。例えば、Ｉｎｎｉｓら編（１９９０）ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：
Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ならびにＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈお
よびＤｖｅｋｓｌｅｒ編（１９９５）ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＣＳＨ，ＮＹを
参照のこと。
【００５８】
本発明の特定の実施形態は、記載されるレセプター配列を含む組合せ組成物に関する。
他の実施形態では、この配列の機能的部分は、融合タンパク質をコードするように連結さ
れ得る。他の形態では、記載された配列の改変体が置換され得る。
【００５９】
（ＩＶ．タンパク質、ペプチド）
上記のように、本発明は、霊長類ＤＣＲＳ５（例えば、その配列が表１に開示され、そ
して上記に記載される）を包含する。対立遺伝子改変体および他の改変体もまた意図され
、これらとしては、例えば、このような配列の部分と他の部分（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ
１、エピトープタグおよび機能的ドメインが挙げられる）とを組み合わせた融合タンパク
質が挙げられる。
【００６０】
本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらの霊長類またはげっ歯類のタンパク
質由来のセグメントを用いた異種融合タンパク質）を提供する。異種融合タンパク質は、
同じ様式では天然では通常融合されていない、タンパク質またはセグメントの融合物であ
る。従って、ＤＣＲＳ５と別のサイトカインレセプターとの融合産物は、代表的には、単
一翻訳産物として作製された、代表的なペプチド結合において融合された配列を有し、そ
して各供給源ペプチドから誘導された特性（例えば、配列または抗原性）を示す、連続し
たタンパク質分子である。同様の概念が異種核酸配列に適用される。複合体への、種々の
指定されたタンパク質の組合せもまた提供される。
【００６１】
さらに、新たな構築物は、種改変体を含め、他の関連したタンパク質（例えば、サイト
カインレセプターまたはＴｏｌｌ様レセプター）由来の同様の機能的ドメインまたは構造
的ドメインを組み合わせることから作製され得る。例えば、リガンド結合セグメントまた
は他のセグメントは、異なる新たな融合ポリペプチドまたはフラグメントの間で「交換」
され得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１３
３０−１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：
１５９８５−１５９９２（これらの各々は、本明細書中に参考として援用される）を参照
のこと。従って、特異性の新たな組合せを示す新たなキメラポリペプチドは、レセプター
結合特異性の機能的結合からもたらされる。例えば、他の関連したレセプター分子由来の
リガンド結合ドメインは、このタンパク質または関連したタンパク質の他のドメインに付
加され得るかまたはこのドメインと置換され得る。得られるタンパク質はしばしば、ハイ
ブリッドの機能および特性を有する。例えば、融合タンパク質は、特定の細胞内（ｓｕｂ
ｃｅｌｌｕｌａｒ）細胞小器官への融合タンパク質の隔離を提供するのに役立ち得る標的
化ドメインを含み得る。
【００６２】
候補融合パートナーおよび候補融合配列は、種々の配列データベース（例えば、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ，ｃ／ｏ  ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，Ｃ
Ａ；およびＢＣＧ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ（これらは各々
、本明細書中に参考として援用される））から選択され得る。特に、表１および表３に提
供されるポリペプチド配列の組合せが特に好ましい。改変体形態のタンパク質は、記載さ
れる組合せで置換され得る。
【００６３】
本発明は特に、サイトカイン様リガンドに結合する、および／またはシグナル伝達にお
いて影響を受ける、ムテインを提供する。ヒトＤＣＲＳ５とサイトカインレセプターファ
ミリーの他のメンバーとの構造的整列は、保存的特徴／保存的残基を示す。表３を参照の
こと。ヒトＤＣＲＳ５配列とサイトカインレセプターファミリーの他のメンバーとの整列
は、種々の構造的および機能的に共有された特徴を示す。また、Ｂａｚａｎら（１９９６
）Ｎａｔｕｒｅ  ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３：１
７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ  
２０：３７４−３７６；ならびにＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ  
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：２６３−２６９を参照のこと。
【００６４】
マウス配列またはヒト配列のいずれかでの置換が特に好ましい。逆に、リガンド結合相
互作用領域から離れた保存的置換はおそらく、大部分のシグナル伝達活性を保存する；そ
して細胞内ドメインから離れた保存的置換はおそらく、大部分のリガンド結合特性を保存
する。
【００６５】
霊長類ＤＣＲＳ５の「誘導体」としては、アミノ酸配列変異体、グリコシル化改変体、
代謝誘導体および他の化学的部分との共有結合結合体または凝集結合体が挙げられる。共
有結合誘導体は、ＤＣＲＳ５アミノ酸側鎖中に見出される基への、またはＮ末端での、例
えば、当該分野で周知である手段による官能基の結合によって調製され得る。これらの誘
導体としては、カルボキシル末端の、またはカルボキシル側鎖を含む残基の、脂肪族エス
テルまたはアミド、ヒドロキシル基含有残基のＯアシル誘導体、およびアミノ末端アミノ
酸またはアミノ基含有残基（例えば、リジンもしくはアルギニン）のＮアシル誘導体が挙
げられ得るがこれらに限定されない。アシル基は、それによってアルカノールアロイル種
を形成する、アルキル部分（Ｃ３〜Ｃ１８のノルマルアルキルを含む）の群から選択され
る。
【００６６】
特に、例えば、その合成およびプロセシングの間の、またはさらなるプロセシング工程
における、ポリペプチドのグリコシル化パターンを改変することによって作製される、グ
リコシル化の変更が含まれる。これを達成するための特に好ましい手段は、通常このよう
なプロセシングを提供する細胞由来のグリコシル化酵素（例えば、哺乳動物グリコシル化
酵素）にポリペプチドを暴露することによる。脱グリコシル化（ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａ
ｔｉｏｎ）酵素もまた意図される。他のマイナーな改変（リン酸化されたアミノ酸残基（
例えば、ホスホチロシン、ホスホセリンまたはホスホトレオニン）を含む）を有する同じ
一次アミノ酸配列のバージョンもまた包含される。
【００６７】
主な誘導体の群は、レセプターまたはそのフラグメントと他のタンパク質のポリペプチ
ドとの共有結合結合体である。これらの誘導体は、組換え培養において（例えば、Ｎ末端
融合物）、または反応性側鎖基を通してタンパク質を架橋させる際のそれらの有用性が当
該分野で公知の薬剤の使用によって、合成され得る。架橋剤での好ましい誘導体化部位は
、遊離アミノ基、糖質部分およびシステイン残基である。
【００６８】
レセプターと他の同種タンパク質または異種タンパク質との間の融合ポリペプチドもま
た提供される。同種ポリペプチドは、異なるレセプターの間での融合物であり得、例えば
、複数の異なるサイトカインリガンドについての結合特異性を示すハイブリッドタンパク
質、または広まったかもしくは弱まった基質特異性効果を有し得るレセプターを生じる。
同様に、誘導体タンパク質の特性または活性の組合せを示す異種融合物が構築され得る。
代表例は、所望のリガンドの存在または位置が容易に決定され得るような、レポーターポ
リペプチド（例えば、ルシフェラーゼ）とレセプターのセグメントまたはドメイン（例え
ば、リガンド結合セグメント）との融合物である。例えば、これによって本明細書中に参
考として援用される、Ｄｕｌｌら，米国特許第４，８５９，６０９号を参照のこと。他の
遺伝子融合パートナーとしては、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、細
菌性β−ガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、β−ラクタマーゼ、αアミラーゼ
、アルコールデヒドロゲナーゼおよび酵母α接合因子が挙げられる。例えば、Ｇｏｄｏｗ
ｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：８１２−８１６を参照のこと。標識タン
パク質はしばしば、タンパク質の記載された組合せにおいて置換される。記載したように
、ＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１との会合が特に重要である。
【００６９】
ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ，Ｌｅｔｔｓ．
２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホルアミダイト法は、適切な合成ＤＮ
Ａフラグメントを生じる。二本鎖フラグメントはしばしば、相補鎖を合成し、そして鎖を
適切な条件下で一緒にアニーリングすること、または適切なプライマー配列を用い、ＤＮ
Ａポリメラーゼを用いて相補鎖を付加することのいずれかによって入手される。
【００７０】
このようなポリペプチドもまた、リン酸化、スルホン化、ビオチン化、または他の部分
（特に、リン酸基と類似の分子形状を有する部分）の付加もしくは除去によって化学的に
改変されたアミノ酸残基を有し得る。いくつかの実施形態では、改変は、有用な標識試薬
であるか、または精製標的（例えば、親和性リガンド）として役立つ。
【００７１】
融合タンパク質は代表的に、組換え核酸法または合成ポリペプチド法のいずれかによっ
て作製される。核酸操作および発現のための技術は一般に、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら
（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎ
ｕａｌ（第２版），第１  ３巻，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ，およびＡｕｓｕｂｅｌら編（１９８７および定期補充物）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌ
ｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（これらは各々、本明細書中に参考として援用される）に記載さ
れている。ポリペプチドの合成のための技術は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６
３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌ
ｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３２：３４１−３４７；およびＡｔｈｅｒｔｏｎら（
１９８９）Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａ
ｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄに記載されている
；これらの各々は、本明細書中に参考として援用される。より大きなポリペプチドを作製
するための方法についてＤａｗｓｏｎら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：７７６−
７７９もまた参照のこと。
【００７２】
本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化におけるバリエーション以外のＤＣＲ
Ｓ５の誘導体の使用を意図する。このような誘導体は、化学部分との共有結合的または凝
集的な会合を含み得る。これらの誘導体は一般に、以下の３つのクラスに分類される：（
１）塩、（２）側鎖および末端残基の共有結合改変、ならびに（３）例えば、細胞膜との
吸着複合体。このような共有結合的または凝集的な誘導体は、免疫原として、免疫アッセ
イにおいて試薬として、または（例えば、レセプターまたは他の結合分子（例えば、抗体
）のアフィニティー精製のための）精製方法において有用である。例えば、サイトカイン
リガンドは、サイトカインレセプター、抗体または他の同様の分子のアッセイまたは精製
における使用のために、当該分野で周知である方法によって固体支持体（例えば、臭化シ
アン活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）に共有結合することによって固定され得るか、またはグ
ルタルアルデヒド架橋を用いてもしくはこれを用いずにポリオレフィン表面に吸着され得
る。このリガンドはまた、診断アッセイにおける使用のために、検出可能な基で標識され
得る（例えば、クロラミンＴ手順によって放射性ヨウ素標識され得る、希土キレートへと
共有結合され得る、または別の蛍光部分へと結合体化され得る）。
【００７３】
本発明の組合せ（例えば、ＤＣＲＳ５を含む）は、記載される組合せについて特異的な
（例えば、他のサイトカインレセプターファミリーのメンバー間を区別し得る）抗血清ま
たは抗体の産生のための免疫原として使用され得る。複合体を使用して、このタンパク質
を含む種々の形態の不純な調製物での免疫によって調製されたモノクローナル抗体または
抗原結合フラグメントをスクリーニングし得る。特に、用語「抗体」はまた、天然の抗体
の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖなど）を包含する。精製され
たＤＣＲＳ５はまた、内因性レセプターに対する抗体産生を導く、上昇したレベルの発現
または免疫学的障害の存在に応じて生成された抗体を検出するための試薬として使用され
得る。さらに、ＤＣＲＳ５フラグメントはまた、すぐ下に記載されるように、本発明の抗
体を産生するための免疫原として役立ち得る。例えば、本発明は、表１に示されるアミノ
酸配列もしくはそのフラグメントもしくは種々の相同ペプチドに対する結合親和性を有す
るか、またはそれらに対して惹起される、抗体を意図する。特に、本発明は、ネイティブ
なＤＣＲＳ５の外部タンパク質表面に露出していると予測されているかもしくは実際に露
出している特異的フラグメントに対して結合親和性を有するか、またはそれらのフラグメ
ントに対して惹起されている、抗体を意図する。タンパク質の組合せの複合体もまた有用
であり、そしてそれらに対する抗体調製物が作製され得る。
【００７４】
特定の他の実施形態では、（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ１とのＤＣＲＳ５の細胞外リガン
ド結合セグメントの）可溶性構築物は、このリガンドについての結合組成物であり得、そ
してリガンド媒介性シグナル伝達をブロックするためのリガンドアンタゴニストまたは抗
原のいずれかとして有用であり得る。これらは、診断的（例えば、リガンドについての組
織学的標識のために）または治療的（例えば、リガンドアンタゴニストとして）のいずれ
かで有用であり得る。
【００７５】
レセプターリガンドに対する生理学的応答のブロッキングは、おそらく競合阻害を通し
た、レセプターに対するリガンドの結合の阻害からもたらされ得る。従って、本発明のイ
ンビトロアッセイはしばしば、抗体もしくはこれらの抗体の抗原結合セグメント、可溶性
レセプター構築物、または固相基材に結合されたフラグメントを使用する。これらのアッ
セイはまた、リガンド結合領域の変異および改変または（例えば、シグナル伝達機能もし
くは酵素機能に影響を与える）他の変異および改変のいずれかの効果の診断決定を可能に
する。
【００７６】
本発明はまた、競合的薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、例えば、ここで、
レセプター複合体またはフラグメントに対する中和抗体は、リガンドまたは他の抗体に対
する結合について試験化合物と競合する。このようにして、中和抗体またはフラグメント
を使用して、レセプターに対する１以上の結合部位を共有するポリペプチドの存在を検出
し得、そしてまたこれを使用して、レセプター上の、そうでなければリガンドを結合し得
る結合部位を占有し得る。ＤＣＲＳ５の細胞外（すなわち、リガンド結合）ドメインとＩ
Ｌ−１２Ｒβ１とを組合せた可溶性レセプター構築物は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンド
の競合結合についての有用なアンタゴニストであり得る。
【００７７】
（Ｖ．核酸およびタンパク質の作製）
タンパク質またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤＮＡライブ
ラリーのスクリーニング、または広範な種々の細胞株もしくは組織サンプルから調製され
たゲノムライブラリーのスクリーニングによって入手され得る。天然の配列は、標準的方
法および本明細書中に（例えば、表１に）提供される配列を用いて単離され得る。他の種
対応物は、配列データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）の検索と組み合わせた、または
この検索により、ハイブリダイゼーション技術によって、または種々のＰＣＲ技術によっ
て、同定され得る。
【００７８】
このＤＮＡは、全長レセプターまたはフラグメントの合成のための広範な種々の宿主細
胞において発現され得、このレセプターまたはフラグメントは次いで、例えば、ポリクロ
ーナル抗体もしくはモノクローナル抗体を作製するために；結合研究のために；改変され
たリガンド結合もしくはキナーゼ／ホスファターゼドメインの構築および発現のために；
ならびに構造／機能研究のために使用され得る。改変体またはフラグメントは、適切な発
現ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞において発現され得る。こ
れらの分子は、組換え宿主に由来する夾雑物以外にはタンパク質夾雑物も細胞性夾雑物も
実質的に含まなくてもよく、それゆえ、薬学的に受容可能なキャリアおよび／または希釈
剤と組み合わされた場合、薬学的組成物中で特に有用である。このタンパク質またはその
部分は、他のタンパク質との融合物として発現され得る。記載されたタンパク質またはそ
れらをコードする核酸の組合せは特に興味深い。
【００７９】
発現ベクターは代表的に、通常、適切な宿主細胞中で認識される適切な遺伝的制御エレ
メントに作動可能に連結された、所望のレセプター遺伝子、そのフラグメントまたは遺伝
子の組合せを含む、自己複製するＤＮＡ構築物またはＲＮＡ構築物である。これらの制御
エレメントは、適切な宿主内での発現をもたらし得る。複数の遺伝子は、協調して発現さ
れ得、そしてポリシストロン性メッセージに存在し得る。発現をもたらすために必要な特
定の型の制御エレメントは、使用される最終的な宿主細胞に依存する。一般に、遺伝的制
御エレメントは、原核生物プロモーター系または真核生物プロモーター発現制御系を含み
得、そして代表的には転写プロモーター、転写の開始を制御するための必要に応じたオペ
レーター、ｍＲＮＡ発現のレベルを上昇させるための転写エンハンサー、適切なリボソー
ム結合部位をコードする配列ならびに転写および翻訳を終結させる配列を含み得る。発現
ベクターはまた通常、宿主細胞に依存してベクターを複製させる複製起点を含む。
【００８０】
本発明のベクターとしては、上記のようなタンパク質または生物学的に活性な等価なポ
リペプチドの組合せをコードするＤＮＡを含むベクターが挙げられる。このＤＮＡは、ウ
イルス性プロモーターの制御下にあり得、そして選択マーカーをコードし得る。本発明は
さらに、このようなタンパク質をコードする真核生物ｃＤＮＡを原核生物宿主または真核
生物宿主において発現し得るような発現ベクターの使用を意図し、ここで、このベクター
は、この宿主と適合性であり、そしてここで真核生物ｃＤＮＡは、このベクターを含む宿
主の増殖によって問題のｃＤＮＡを発現するようにこのベクター中に挿入されている。通
常、発現ベクターは、それらの宿主細胞における安定な複製のために、または細胞あたり
の所望の遺伝子の総コピー数を大いに増大させる増幅のために設計される。発現ベクター
が宿主細胞において複製するのを要求することは常に必要なわけではなく、例えば、その
宿主細胞によって認識される複製起点を含まないベクターを用いて、種々の宿主において
タンパク質またはそのフラグメントの一過性の発現をもたらすことは可能である。組換え
によって宿主ＤＮＡへのタンパク質コード部分の組込みを引き起こすベクターを使用する
こともまた可能である。
【００８１】
本明細書中で使用される場合、ベクターとしては、プラスミド、ウイルス、バクテリオ
ファージ、組込み可能なＤＮＡフラグメントおよび宿主のゲノムへのＤＮＡフラグメント
の組込みを可能にする他のビヒクルが挙げられる。発現ベクターは、作動可能に連結され
た遺伝子の発現をもたらす遺伝的制御エレメントを含む、特化されたベクターである。プ
ラスミドは、最も普通に使用される形態のベクターであるが、等価な機能を果たし、そし
て当該分野で公知であるかまたは公知となる、他の全ての形態のベクターは、本明細書中
での使用のために適切である。例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓら（１９８５および補充物）Ｃｌ
ｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉ
ｅｒ，Ｎ．Ｙ．，およびＲｏｄｒｉｇｕｅｚら編（１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｓｕ
ｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｔｈ
ｅｉｒ  Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ（これらは本明細書中に参
考として援用される）を参照のこと。
【００８２】
形質転換された細胞は、組換えＤＮＡ技術を用いて構築されたベクターで形質転換また
はトランスフェクトされた細胞（好ましくは哺乳動物）である。形質転換された宿主細胞
は通常、所望のタンパク質を発現するが、そのＤＮＡをクローニング、増幅および操作す
る目的のためには、その対象タンパク質を発現する必要はない。本発明はさらに、形質転
換された細胞を栄養培地中で培養し、従ってタンパク質が蓄積するのを可能にすることを
意図する。このタンパク質は、培養物から、または特定の例では培養培地からのいずれか
から、回収され得る。
【００８３】
本発明の目的のためには、核配列が互いに機能的に関連している場合、核配列は作動可
能に連結されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤＮＡは、プレタ
ンパク質として発現されるか、このポリペプチドを細胞膜へと指向させることもしくはこ
のポリペプチドの分泌に関与する場合、このポリペプチドに作動可能に連結されている。
プロモーターは、ポリペプチドの転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結され
ている；リボソーム結合部位は、翻訳を可能にするように配置されている場合、コード配
列に作動可能に連結されている。通常、作動可能に連結されたとは、連続し、そしてリー
ディングフレームが一致していることを意味するが、特定の遺伝的エレメント（例えば、
リプレッサー遺伝子）は、連続して連結されていないが、オペレーター配列に依然として
結合し、このことは次いで発現を制御する。
【００８４】
適切な宿主細胞としては、原核生物、下等真核生物および高等真核生物が挙げられる。
原核生物としては、グラム陰性生物およびグラム陽性生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび
Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の両方が挙げられる。下等真核生物としては、酵母（例えば、Ｓ
．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ）ならびにＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ属の
種が挙げられる。高等真核生物としては、非哺乳動物起源（例えば、昆虫細胞および鳥類
）および哺乳動物起源（例えば、ヒト、霊長類および齧歯類）の両方の、動物細胞由来の
確立された組織培養細胞株が挙げられる。
【００８５】
原核生物宿主ベクター系としては、多くの異なる種のための広範な種々のベクターが挙
げられる。本明細書中で使用される場合、Ｅ．ｃｏｌｉおよびそのベクターは、他の原核
生物において使用される等価なベクターを含むように包括的に使用される。ＤＮＡを増幅
するための代表的なベクターは、ｐＢＲ３２２またはその誘導体の多くである。レセプタ
ーまたはそのフラグメントを発現するために使用され得るベクターとしては、以下を含む
ようなベクターが挙げられるがこれらに限定されない：ｌａｃプロモーター（ｐＵＣシリ
ーズ）；ｔｒｐプロモーター（ｐＢＲ３２２  ｔｒｐ）；Ｉｐｐプロモーター（ｐＩＮシ
リーズ）；λｐＰもしくはｐＲプロモーター（ｐＯＴＳ）；またはハイブリッドプロモー
ター（例えば、ｐｔａｃ（ｐＤＲ５４０））。Ｂｒｏｓｉｕｓら（１９８８）「Ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ  Ｌａｍｂｄａ，ａｎｄ  Ｉｐｐ  
ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ」，Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅｓ，
（ＲｏｄｒｉｇｕｅｚおよびＤｅｎｈａｒｄｔ編），Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓ
ｔｏｎ，第１０章，２０５−２３６頁（これは本明細書中に参考として援用される）を参
照のこと。
【００８６】
下等真核生物（例えば、酵母およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ）は、ＤＣＲＳ５配列
含有ベクターで形質転換され得る。本発明の目的のためには、最も普通の下等真核生物宿
主は、パン酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである。これは、下
等真核生物を包括的に示すために使用されるが、多数の他の株および種もまた利用可能で
ある。酵母ベクターは代表的に、複製起点（組換え型の場合を除く）、選択遺伝子、プロ
モーター、レセプターまたはそのフラグメントをコードするＤＮＡ、ならびに翻訳終結、
ポリアデニル化および転写終結のための配列からなる。酵母についての適切な発現ベクタ
ーは、３ホスホグリセレートキナーゼおよび種々の他の解糖酵素遺伝子のプロモーターの
ような構成的プロモーター、またはアルコールデヒドロゲナーゼ２プロモーターもしくは
メタロチオネインプロモーターのような誘導性プロモーターを含む。適切なベクターとし
ては、以下の型の誘導体が挙げられる：自己複製する低コピー数（例えば、ＹＲｐシリー
ズ）、自己複製する高コピー数（例えば、ＹＥｐシリーズ）；組込み型（例えば、ＹＩｐ
シリーズ）またはミニ染色体（例えば、ＹＣｐシリーズ）。
【００８７】
高等真核生物の組織培養細胞は通常、機能的に活性なインターロイキンまたはレセプタ
ータンパク質の発現のために好ましい宿主細胞である。原則として、無脊椎動物供給源由
来であるか脊椎動物供給源由来であるかにかかわらず、多くの高等真核生物の組織培養細
胞株（例えば、昆虫バキュロウイルス発現系）が実行可能である。しかし、哺乳動物細胞
が好ましい。このような細胞の形質転換またはトランスフェクションおよび増殖は、慣用
的手順となっている。有用な細胞株の例としては、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスタ
ー卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ベビーラット腎臓（ＢＲＫ）細胞株、昆虫細胞株、鳥類細胞株
、およびサル（ＣＯＳ）細胞株が挙げられる。このような細胞株についての発現ベクター
は通常、複製起点、プロモーター、翻訳開始部位、ＲＮＡスプライス部位（ゲノムＤＮＡ
を使用する場合）、ポリアデニル化部位および転写終結部位を含む。これらのベクターは
また通常、選択遺伝子または増幅遺伝子を含む。適切な発現ベクターは、例えば、アデノ
ウイルス、ＳＶ４０、パルボウイルス、ワクシニアウイルスまたはサイトメガロウイルス
由来のような供給源から誘導されたプロモーターを保有する、プラスミド、ウイルスまた
はレトロウイルスであり得る。適切な発現ベクターの代表例としては、ｐＣＤＮＡ１；ｐ
ＣＤ（Ｏｋａｙａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．５：１１３６−１１
４２を参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ  ポリＡ（Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ  
５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡ
Ｃ  ３７３またはｐＡＣ  ６１０）が挙げられる。
【００８８】
分泌タンパク質およびいくつかの膜タンパク質について、オープンリーディングフレー
ムは通常、そのＮ末端でシグナルペプチドに共有結合した、成熟産物または分泌産物から
なるポリペプチドをコードする。このシグナルペプチドは、成熟ポリペプチドまたは活性
なポリペプチドの分泌の前に切断される。切断部位は、高い程度の精度で、経験的法則（
例えば、ｖｏｎ−Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｄ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ  １４：４６８３−４６９０およびＮｉｅｌｓｅｎら（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ  
Ｅｎｇ．１０：１−１２）から予測され得、そしてシグナルペプチドの正確なアミノ酸組
成はしばしば、その機能に重要ではないようである（例えば、Ｒａｎｄａｌｌら（１９８
９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１１５６−１１５９；Ｋａｉｓｅｒら（１９８７）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ  ２３５：３１２−３１７）。本発明の成熟タンパク質は、標準的方法を用いて
容易に決定され得る。
【００８９】
これらのポリペプチドを、特異的または規定のグリコシル化パターンを提供する系にお
いて発現することがしばしば望ましい。この場合、通常のパターンは、その発現系によっ
て天然で提供されるパターンである。しかし、このパターンは、このポリペプチド（例え
ば、非グリコシル化形態）を、異種発現系に導入された適切なグリコシル化タンパク質に
暴露することによって改変され得る。例えば、レセプター遺伝子は、哺乳動物または他の
グリコシル化酵素をコードする１以上の遺伝子で同時形質転換され得る。このアプローチ
を用いて、特定の哺乳動物グリコシル化パターンが、原核生物細胞または他の細胞におい
て達成され得る。原核生物細胞における発現は代表的に、非グリコシル化形態のタンパク
質をもたらす。
【００９０】
ＤＣＲＳ５の供給源は、例えば、上記に記載される、組換えＤＣＲＳ５を発現する、真
核生物宿主または原核生物宿主であり得る。この供給源もまた、細胞株であり得るが、他
の哺乳動物細胞株もまた本発明によって意図され、好ましい細胞株はヒト種由来である。
【００９１】
配列が公知であるので、霊長類ＤＣＲＳ５、それらのフラグメントまたは誘導体は、ペ
プチドを合成するための従来のプロセスによって調製され得る。これらとしては、以下に
記載されるようなプロセスが挙げられる：ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）
Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓ
ｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびにＢｏｄａｎｓｚｋ
ｙ（１９８４）Ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；これらの各々は、本明細書
中に参考として援用される。例えば、アジドプロセス、酸塩化物プロセス、酸無水物プロ
セス、混合無水物プロセス、活性エステルプロセス（例えば、ｐニトロフェニルエステル
、Ｎヒドロキシスクシンイミドエステル、もしくはシアノメチルエステル）、カルボジイ
ミダゾールプロセス、酸化的還元プロセス、またはジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｄ
ＣＣＤ）添加プロセスが使用され得る。固相合成および液相合成は両方とも、上記のプロ
セスに適用可能である。同様の技術は、部分的ＤＣＲＳ５配列について使用され得る。
【００９２】
ＤＣＲＳ５タンパク質、そのフラグメントまたは誘導体は、一般に、末端アミノ酸に対
してアミノ酸を１つづつ順番に縮合させることを含む、いわゆる段階的プロセスによって
、またはペプチドフラグメントを末端アミノ酸に対してカップリングすることによっての
いずれかによって、ペプチド合成において代表的に用いられるような上記のプロセスに従
って適切に調製される。カップリング反応において使用されないアミノ基は代表的に、不
適切な位置でのカップリングを防ぐために保護されなければならない。
【００９３】
固相合成が採用される場合、Ｃ末端アミノ酸は、そのカルボキシル基を通して、不溶性
のキャリアまたは支持体へと結合される。この不溶性キャリアは、反応性カルボキシル基
に対する結合能力を有する限り、特に限定されない。このような不溶性キャリアの例とし
ては、ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂またはブロモメチル樹脂）、ヒドロキ
シメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔアルキルオキシカルボニルヒドラジド化樹脂な
どが挙げられる。
【００９４】
アミノ基が保護されたアミノ酸は、その活性化されたカルボキシル基と以前に形成され
たペプチドまたは鎖の反応性アミノ基との縮合を通して順番に結合されて、ペプチドが少
しずつ合成される。完全な配列を合成した後、このペプチドは、不溶性キャリアから切り
離されて、このペプチドが産生される。この固相アプローチは、本明細書中に参考として
援用される、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：
２１４９−２１５６によって一般に記載される。
【００９５】
調製されるタンパク質およびそのフラグメントは、ペプチド分離によって（例えば、抽
出、沈澱、電気泳動、種々の形態のクロマトグラフィー、免疫親和性などによって）反応
混合物から単離および精製され得る。本発明のレセプターは、所望の使用に依存して種々
の程度の純度で入手され得る。精製は、本明細書中に開示されるタンパク質精製技術（以
下を参照のこと）の使用によって、または免疫吸着アフィニティークロマトグラフィー（
ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂａｎｔ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）
の方法において本明細書中に記載される抗体の使用によって達成され得る。この免疫吸着
アフィニティークロマトグラフィーは、この抗体を固体支持体に最初に連結し、次いで連
結した抗体を、適切な細胞の可溶化溶解産物、このレセプターを発現する他の細胞の溶解
産物、またはＤＮＡ技術（以下を参照のこと）の結果によってこのタンパク質を産生する
細胞の溶解産物もしくは上清と接触させることによって実施される。
【００９６】
一般に、精製したタンパク質は、少なくとも約４０％純粋、普通少なくとも約５０％純
粋、通常少なくとも約６０％純粋、代表的には少なくとも約７０％純粋、より代表的には
少なくとも約８０％純粋、好ましくは少なくとも約９０％純粋、そしてより好ましくは少
なくとも約９５％純粋、そして特定の実施形態では、９７％〜９９％以上純粋である。純
度は通常、重量基準であるが、モル基準であってもよい。異なるアッセイは、必要に応じ
て適用される。個々のタンパク質が精製され得、その後合わされ得る。
【００９７】
（ＶＩ．抗体）
抗体は、天然に存在するネイティブな形態およびそれらの組換え形態の両方の、種々の
哺乳動物（例えば、霊長類）のＤＣＲＳ５タンパク質およびそのフラグメントに対して惹
起され得、その差は、活性なレセプターに対する抗体は、ネイティブなコンホメーション
にしか存在しないエピトープを認識する可能性がより高いことである。ＤＣＲＳ５とＩＬ
−１２Ｒβ１との組合せ（例えば、官能基）によって提示されるエピトープを認識する抗
体もまた意図される。変性させた抗原の検出もまた、例えば、ウェスタン分析において有
用であり得る。抗イディオタイプ抗体もまた意図され、これは、天然のレセプターまたは
抗体のアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である。
【００９８】
タンパク質の所定のフラグメントに対する抗体（結合フラグメントおよび単鎖バージョ
ンを含む）は、このフラグメントと免疫原性タンパク質との結合体を用いた動物の免疫に
よって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞から調製される
。これらの抗体は、正常タンパク質もしくは欠損タンパク質に対する結合についてスクリ
ーニングされ得るか、またはアゴニスト活性もしくはアンタゴニスト活性についてスクリ
ーニングされ得る。これらのモノクローナル抗体は通常、少なくとも約１ｍＭ，、より通
常は少なくとも約３００μＭ、代表的には少なくとも約１００μＭ、より代表的には少な
くとも約３０μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少なくとも
約３μＭまたはより良好なＫＤで結合する。
【００９９】
本発明の抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、顕著な診断価値または治療価値を有
し得る。これらは、このレセプターに結合し、かつリガンドに対する結合を阻害するかも
しくはこのレセプターが生物学的応答を誘発する（例えば、その基質に作用する）能力を
阻害する、強力なアンタゴニストであり得る。これらはまた、非中和抗体として有用であ
り得、そして毒素または放射性核種に対してカップリングされて、産生細胞またはインタ
ーロイキンの供給源に局在した細胞に結合し得る。さらに、これらの抗体は、薬物または
他の治療剤に、直接的、またはリンカーによって間接的のいずれかで、結合体化され得る
。
【０１００】
本発明の抗体はまた、診断適用において有用であり得る。捕捉抗体または非中和抗体と
して、これらは、リガンドまたは基質の結合を阻害することなく、このレセプターに結合
し得る。中和抗体として、これらは、競合結合アッセイにおいて有用であり得る。これら
はまた、リガンドを検出または定量する際に有用である。これらは、ウェスタンブロット
分析、またはそれぞれのタンパク質の免疫沈降もしくは免疫精製のための試薬として使用
され得る。同様に、核酸およびタンパク質は、アフィニティー精製法またはアフィニティ
ー検出法のために固体支持体に固定され得る。基材は、例えば、固体樹脂ビーズまたはプ
ラスチックシートであり得る。
【０１０１】
タンパク質フラグメントは、免疫原として作用されるべき融合ポリペプチドまたは共有
結合ポリペプチドとして、他の物質（特に、ポリペプチド）と連結され得る。哺乳動物サ
イトカインのレセプターおよびフラグメントは、種々の免疫原（例えば、キーホールリン
ペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、破傷風トキソイドなど）に融合または共有結
合され得る。Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｏｅｂｅｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｖｉｓｉ
ｏｎ，ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ，１９６９；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｄｏｖｅｒ
Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびにＷｉｌｌｉａｍｓら（１９６
７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ，第１巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと；これ
らの各々は、ポリクローナル抗血清の調製方法の記載に関して本明細書中に参考として援
用される。代表的な方法は、抗原での動物の超免疫を含む。次いで、この動物の血液は、
反復免疫のすぐ後に収集され、そしてγグロブリンが単離される。
【０１０２】
いくつかの例では、モノクローナル抗体を種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯
類、霊長類、ヒトなど）から調製することが望ましい。このようなモノクローナル抗体を
調製するための技術の説明は、以下に見出され得る：例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（編）Ｂａ
ｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版），Ｌａｎｇｅ  Ｍ
ｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ  Ａｌｔｏｓ，ＣＡおよびその中の参
考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏ
ｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびに特にＫｏｈｌ
ｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（これ
は、モノクローナル抗体を生成する１つの方法を考察する）。これらの参考文献の各々は
、本明細書中に参考として援用される。手短にまとめると、この方法は、動物に免疫原を
注射することを含む。次いでこの動物は屠殺され、そして細胞がその脾臓から採取され、
次いでこれは骨髄腫細胞と融合される。この結果は、インビトロで繁殖し得る、ハイブリ
ッド細胞または「ハイブリドーマ」である。次いで、ハイブリドーマの集団はスクリーニ
ングされて個々のクローンが単離され、このクローンの各々は、この免疫原に対する単一
の抗体種を分泌する。このようにして、得られる個々の抗体種は、免疫原性物質上で認識
される特異的部位に応じて生成された、免疫動物由来の、不死化されてクローン化された
単一Ｂ細胞の産物である。
【０１０３】
他の適切な技術は、抗原性ポリペプチドに対する、あるいはファージまたは類似のベク
ター中の抗体のライブラリーの選択に対する、リンパ球のインビトロ暴露を含む。Ｈｕｓ
ｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｌａｒｇｅ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏ
ｒｉａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｒｅｐｅｒ
ｔｏｉｒｅ  ｉｎ  Ｐｈａｇｅ  Ｌａｍｂｄａ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−
１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６（これ
らの各々は、これにより、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。本発明の
ポリペプチドおよび抗体（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）は、改変して、または改
変せずに、使用され得る。頻繁に、このポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナル
を提供する物質を共有結合的または非共有結合的のいずれかで連結することによって標識
される。広範な種々の標識および結合体化技術は公知であり、そして科学文献および特許
文献の両方において広範に報告されている。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基
質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが挙げられる。この
ような標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，
８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２
７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げら
れる。また、組換えまたはキメラの免疫グロブリンは、産生され得る（Ｃａｂｉｌｌｙ，
米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）；またはトランスジェニックマウス中に
作製され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１
４６−１５６）。これらの参考文献は、本明細書中に参考として援用される。
【０１０４】
本発明の抗体はまた、ＤＣＲＳ５のタンパク質またはペプチドを単離する際にアフィニ
ティークロマトグラフィーのために使用され得る。カラムが調製され得、ここで、この抗
体は固体支持体（例えば、粒子（例えば、アガロース、Ｓｅｐｈａｄｅｘなど））に結合
されており、細胞溶解産物をこのカラムに通過させ得、カラムを洗浄し得、続いて軽度変
性剤（ｍｉｌｄ  ｄｅｎａｔｕｒａｎｔ）の濃度を増大させ得、それによって、精製タン
パク質が放出される。あるいは、このタンパク質を使用して、抗体を精製し得る。適切な
交叉吸収（ｃｒｏｓｓ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）または除去が適用され得る。
【０１０５】
この抗体をまた使用して、発現ライブラリーを特定の発現産物についてスクリーニング
し得る。通常、このような手順において使用される抗体は、抗体結合によって抗原の存在
の容易な検出を可能にする部分を用いて標識される。
【０１０６】
サイトカインレセプターに対して惹起された抗体をまた用いて、抗イディオタイプ抗体
を惹起する。これらは、このタンパク質の発現に関連した種々の免疫学的状態またはこの
タンパク質を発現する細胞を検出または診断する際に有用である。これらはまた、天然に
存在するリガンドについての競合的レセプターインヒビターまたは置換物であり得る、こ
のリガンドのアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である。レセプターサブユニッ
トまたは組合せに対する特定の抗体は活性化抗体として役立ち得、この活性化抗体は、シ
グナル伝達をもたらしてそれによって例えば、リガンドアゴニストとして役立ち得る。
【０１０７】
規定された免疫原（例えば、配列番号２のアミノ酸配列からなる免疫原）に対して作製
された抗体に特異的に結合するかまたは特異的に免疫反応性であるサイトカインレセプタ
ータンパク質は代表的に、免疫アッセイにおいて決定される。この免疫アッセイは代表的
に、例えば、配列番号２のタンパク質に対して惹起されたポリクローナル抗血清を使用す
る。この抗血清は、（好ましくは同じ種由来の）他のサイトカインレセプターファミリー
のメンバー（例えば、ＩＬ−１２Ｒβ２レセプターサブユニットまたはＩＬ−６レセプタ
ーサブユニットｇｐ１３０に対して低い交叉反応性を有するように選択され、そしてあら
ゆるこのような交叉反応性は、この免疫アッセイにおける使用の前に免疫吸収によって除
去される。
【０１０８】
免疫アッセイにおいて使用するための抗血清を産生するために、このタンパク質（例え
ば、配列番号２のタンパク質）は、本明細書中に記載される通りに単離される。例えば、
組換えタンパク質は、哺乳動物細胞株中で産生され得る。適切な宿主（例えば、マウスの
近交系系統（例えば、Ｂａｌｂ／ｃ））は、代表的には標準的なアジュバント（例えば、
Ｆｒｅｕｎｄアジュバント）および標準的なマウス免疫プロトコル（Ｈａｒｌｏｗおよび
Ｌａｎｅ，前出を参照のこと）を用いて選択されたタンパク質で免疫される。あるいは、
本明細書中に開示された配列から誘導され、かつキャリアタンパク質に結合体化された合
成ペプチドは、免疫原として使用され得る。ポリクローナル血清が収集され、そして免疫
アッセイ（例えば、免疫原が固体支持体に固定された固相免疫アッセイ）において、この
免疫原タンパク質に対して力価測定される。１０４以上の力価を有するポリクローナル抗
血清が選択され、そして他のサイトカインレセプターファミリーのメンバー（例えば、ｇ
ｐ１３０またはＩＬ−１２Ｒβ１）に対するそれらの交叉反応性について、競合結合免疫
アッセイ（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前出，５７０−５７３頁に記載される
競合結合免疫アッセイ）を用いて試験される。好ましくは、少なくとも２つのサイトカイ
ンレセプターファミリーのメンバーは、この決定において使用される。これらのサイトカ
インレセプターファミリーのメンバーは、本明細書中に記載されるような標準的な分子生
物学およびタンパク質化学の技術を用いて、組換えタンパク質として産生され得、そして
単離され得る。
【０１０９】
競合結合形式の免疫アッセイは、交叉反応性決定のために使用され得る。例えば、配列
番号２のタンパク質は、固体支持体に固定され得る。このアッセイに添加されたタンパク
質は、固定された抗原に対するこの抗血清の結合と競合する。上記のタンパク質が、固定
されたタンパク質に対するこの抗血清のタンパク質を競合する能力は、タンパク質（例え
ば、ｇｐ１３０またはＩＬ−１２Ｒβ２のタンパク質）と比較される。上記のタンパク質
についての交叉反応性パーセントが、標準的算出を用いて算出される。上記に列挙したタ
ンパク質の各々と１０％未満の交叉反応性を有する抗血清が選択され、そしてプールされ
る。次いで、交叉反応性抗体は、上記のタンパク質を用いた免疫吸収によってプールされ
た抗血清から除去される。
【０１１０】
次いで、免疫吸収およびプールされた抗血清を上記のように競合結合免疫アッセイにお
いて使用して、免疫原タンパク質（例えば、配列番号２のＤＣＲＳ５様タンパク質）に対
する第二のタンパク質を比較する。この比較を行うために、この２つのタンパク質は、広
い濃度範囲で各々アッセイされ、そして固定されたタンパク質に対するこの抗血清の結合
の５０％を阻害するために必要とされる各タンパク質の量が決定される。必要とされる第
二のタンパク質の量が、必要とされる選択されたタンパク質のタンパク質量の二倍よりも
少ないならば、第二のタンパク質は、この免疫原に対して生成された抗体に特異的に結合
するといわれる。
【０１１１】
これらのサイトカインレセプタータンパク質が、多くの同定された遺伝子を含む相同タ
ンパク質のファミリーのメンバーであることが理解される。特定の遺伝子産物（例えば、
ＤＣＲＳ５）に関して、この用語は、本明細書中に開示されたアミノ酸配列だけでなく、
対立遺伝子改変体、非対立遺伝子改変体または種改変体である他のタンパク質をもいう。
この用語が、従来の組換え技術（例えば、単一部位変異）を用いる意図的な変異によって
、またはそれぞれのタンパク質をコードするＤＮＡの短いセクションを切り出すことによ
って、または新たなアミノ酸を置換することによって、または新たなアミノ酸を付加する
ことによって導入された非天然変異を含むこともまた理解される。このような重要でない
変更は代表的に、元の分子の免疫的個性（ｉｍｍｕｎｏｉｄｅｎｔｉｔｙ）および／また
はその生物学的活性を実質的に維持する。従って、これらの変更としては、指定された天
然に存在するＤＣＲＳ５タンパク質と特異的に免疫反応性であるタンパク質が挙げられる
。変更されたタンパク質の生物学的特性は、適切な細胞株中でこのタンパク質を発現し、
そして適切な効果（例えば、トランスフェクトされたリンパ球に対する効果）を測定する
ことによって決定され得る。重要でないとみなされる特定のタンパク質改変としては、全
体として、サイトカインレセプターファミリーについて上記の通りの、類似の化学的特性
を有する、アミノ酸の保存的置換が挙げられる。タンパク質をサイトカインレセプターの
タンパク質と最適に整列することによって、および免疫的個性を決定するために本明細書
中に記載される従来の免疫アッセイを使用することによって、本発明のタンパク質組成物
を決定し得る。
【０１１２】
さらに、レセプターサブユニットに対する抗体は、機能的レセプターに対するリガンド
結合を立体化学的にブロックするのに役立ち得る。このような抗体は、サブユニット単独
またはＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１との組合せのいずれかに対して惹起され得る。抗体
アンタゴニストが生じる。
【０１１３】
（ＶＩＩ．キット、診断および定量）
天然に存在する形態および組換え形態の両方の本発明のサイトカインレセプター様分子
は、キットおよびアッセイ方法において特に有用である。例えば、これらの方法はまた、
例えば、これらのタンパク質についてのリガンドを結合活性についてスクリーニングする
ために適用され得る。アッセイを自動化するいくつかの方法が近年開発されており、その
結果、１年あたり数万の化合物のスクリーニングが可能である。例えば、ＢＩＯＭＥＫ自
動化ワークステーション，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔ
ｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，およびＦｏｄｏｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：
７６７−７７３（これは本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。後者は、固
体支持体上で合成された複数の規定されたポリマーによって結合を試験するための手段を
記載する。リガンドまたはアゴニスト／アンタゴニスト相同タンパク質についてスクリー
ニングするために適切なアッセイの開発は、本発明によって提供されるような、活性な状
態の、大量の精製された可溶性サイトカインレセプターの入手可能性によって大いに促進
され得る。
【０１１４】
精製されたＤＣＲＳ５は、上記のリガンドスクリーニング技術における使用のためにプ
レートに直接コーティングされ得る。しかし、これらのタンパク質に対する非中和抗体は
、例えば、診断的使用において有用な、それぞれのレセプターを固相に固定するための捕
捉抗体として使用され得る。
【０１１５】
本発明はまた、ＤＣＲＳ５タンパク質またはそのリガンドの存在を検出するための種々
の診断キットおよび診断方法におけるＤＣＲＳ５、そのフラグメント、ペプチドおよびそ
れらの融合産物の使用を意図する。あるいは、またはさらに、この分子に対する抗体は、
このキットおよび方法に組み込まれ得る。代表的には、このキットは、ＤＣＲＳ５ペプチ
ドもしくは遺伝子セグメントまたは一方もしくは他方を認識する試薬のいずれかを含む区
画を有する。代表的に、認識試薬は、ペプチドの場合、レセプターもしくは抗体であり、
または遺伝子セグメントの場合、通常、ハイブリダイゼーションプローブである。他のキ
ット成分は、このリガンド／レセプター対合のｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０またはＩＬ−１２Ｒ
β１ポリペプチドに関連した他のタンパク質または試薬を含み得る。
【０１１６】
サンプル中のＤＣＲＳ５の濃度を決定するための好ましいキットは代表的に、ＤＣＲＳ
５に対して既知の結合親和性を有する標識化合物（例えば、リガンドまたは抗体）、ポジ
ティブコントロールとしてのＤＣＲＳ５（天然に存在するかまたは組換え体）の供給源、
および結合した標識化合物を遊離の標識化合物から分離するための手段（例えば、試験サ
ンプル中のＤＣＲＳ５を固定するための固相）を含む。試薬を含む区画および使用説明書
は通常提供される。適切な核酸またはタンパク質を含有するキットもまた提供される。
【０１１７】
哺乳動物ＤＣＲＳ５もしくはペプチドフラグメントまたはレセプターフラグメントに特
異的な抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、上昇したレベルのリガンドおよび／また
はそのフラグメントの存在を検出するための診断適用において有用である。診断アッセイ
は、均質（遊離試薬と抗体−抗原複合体との間の分離工程を伴わない）または不均質（分
離工程を伴う）であり得る。種々の商業的アッセイ（例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ
）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、酵素増幅
免疫アッセイ技術（ＥＭＩＴ）、基質標識蛍光免疫アッセイ（ＳＬＦＩＡ）など）が存在
する。例えば、未標識の抗体は、標識されかつサイトカインレセプターまたはその特定の
フラグメントに対する抗体を認識する第二の抗体を用いることによって用いられ得る。こ
れらのアッセイはまた、文献に広範に考察されている。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａ
ｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃ
ＳＨ．ならびにＣｏｌｉｇａｎ編（１９９１および定期補充物）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏ
ｒｋを参照のこと。
【０１１８】
抗イディオタイプ抗体は、サイトカインレセプターのアゴニストまたはアンタゴニスト
として役立つ、同様の用途を有し得る。これらは、適切な環境下では治療試薬として有用
であるはずである。
【０１１９】
頻繁に、診断アッセイについての試薬は、アッセイの感度を最適化するようにキット中
に供給される。本発明に関して、アッセイ、プロトコルおよび標識の性質に依存して、標
識抗体もしくは未標識抗体、または標識リガンドのいずれかが提供される。これは通常、
他の添加物（例えば、緩衝剤、安定剤、シグナル産生について必要な物質（例えば、酵素
についての基質）など）とともにある。好ましくは、このキットはまた、内容物の適切な
使用および使用後の内容物の廃棄に関する使用説明書を含む。代表的には、このキットは
、各有用な試薬についての区画を有し、そして試薬の適切な使用および廃棄に関する使用
説明書を含む。望ましくは、この試薬は、乾燥した凍結乾燥粉末として提供され、ここで
、この試薬は、アッセイを実施得するために適切な濃度を有する水性媒体中で再構成され
得る。
【０１２０】
診断アッセイの上記の構成要素は、改変することなく使用され得るか、または種々の方
法で改変され得る。例えば、標識は、検出可能なシグナルを直接的または間接的に提供す
る部分を共有結合的または非共有結合的に連結することによって達成され得る。これらの
アッセイの多くでは、試験化合物、サイトカインレセプターまたはそれに対する抗体は、
直接的または間接的のいずれかで標識され得る。直接的標識についての可能性は、標識基
を含む：放射性標識（例えば、１２５Ｉ）、酵素（米国特許第３，６４５，０９０号）（
例えば、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼ）、ならびに蛍光強度、波長の
シフトまたは蛍光偏光における変化をモニタリングし得る蛍光標識（米国特許第３，９４
０，４７５号）。両方の特許は、本明細書中に参考として援用される。間接的標識の可能
性は、一つの構成要素のビオチン化、続いて上記の標識基のうちの１つにカップリングし
たアビジンに対する結合を含む。
【０１２１】
結合したリガンドを遊離のリガンドから分離するか、あるいは結合した試験化合物を遊
離の試験化合物から分離する多数の方法もまた存在する。サイトカインレセプターは、種
々のマトリックスに固定され得、続いて洗浄され得る。適切なマトリックスとしては、Ｅ
ＬＩＳＡプレート、フィルター、およびビーズのようなプラスチックが挙げられる。この
レセプターをマトリックスに固定する方法としては、プラスチックへの直接接着、捕捉抗
体の使用、化学的カップリングおよびビオチンアビジンが挙げられるがこれらに限定され
ない。このアプローチにおける最後の工程は、例えば、有機溶媒（例えば、ポリエチレン
グリコール）または塩（例えば、硫酸アンモニウム）を利用する方法を含むいくつかの方
法のうちのいずれかによる、抗体／抗原複合体の沈澱を含む。他の適切な分離技術として
は、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０（９）：１４５７−１４６１
に記載されるフルオレセイン抗体磁化性粒子法および二重抗体磁性粒子分離（例えば、米
国特許第４，６５９，６７８号に記載される通り）が挙げられるがこれらに限定されない
（これらの各々は、本明細書中に参考として援用される）。
【０１２２】
タンパク質またはフラグメントを種々の標識に対して連結するための方法は、文献に広
範に報告されており、本明細書での詳細な考察を必要としない。この技術の多くは、ペプ
チド結合を形成するためのカルボジイミドもしくは活性なエステルの使用、メルカプト基
と活性化ハロゲン（例えば、クロロアセチル）の反応によるチオエーテルの形成、または
連結のための活性化オレフィン（例えば、マレイミド）などをのいずれかを通した、活性
化されたカルボキシル基の使用を含む。融合タンパク質はまた、これらの適用において用
途を見出す。
【０１２３】
本発明の別の診断局面は、サイトカインレセプターの配列から得られたオリゴヌクレオ
チドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、免疫学的障害を有する
ことが疑われる患者におけるそれぞれのサイトカインレセプターのレベルを検出するため
のプローブとして使用され得る。ＲＮＡおよびＤＮＡの両方のヌクレオチド配列の調製、
この配列の標識およびこの配列の好ましい大きさは、文献において豊富に記載および考察
されている。通常、オリゴヌクレオチドプローブは、少なくとも約１４ヌクレオチド、通
常少なくとも約１８ヌクレオチドを有するはずであり、そしてポリヌクレオチドプローブ
は、数キロ塩基までを有し得る。種々の標識が用いられ得、最も通常は、放射性核種（特
に３２Ｐ）が用いられ得る。しかし、ポリヌクレオチドへの導入のためにビオチンで改変
したヌクレオチドを用いるような、他の技術もまた用いられ得る。次いで、ビオチンは、
アビジンまたは抗体への結合のための部位として役立ち、アビジンまたは抗体は、広範な
種々の標識（例えば、放射性核種、蛍光剤、酵素など）で標識され得る。あるいは、特異
的二重鎖（ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二重鎖またはＤＮ
Ａ−タンパク質二重鎖を含む）を認識し得る抗体が用いられ得る。次いで、この抗体は標
識され得、そしてアッセイが実施され得、ここで、この二重鎖は表面に結合されており、
その結果、この表面上で二重鎖が形成されると、この二重鎖に結合した抗体の存在が検出
され得る。新規のアンチセンスＲＮＡに対するプローブの使用は、核酸ハイブリダイゼー
ション、プラスおよびマイナスのスクリーニング、組換えプロービング、ハイブリッド翻
訳放出（ＨＲＴ）およびハイブリッド翻訳阻害（ＨＡＲＴ）のような従来技術において実
施され得る。これはまた、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のような増幅技術を含む。
【０１２４】
他のマーカーの定性的または定量的な存在についても試験する診断キットもまた意図さ
れる。診断または予後は、マーカーとして使用される複数の指標の組合せに依存し得る。
従って、キットは、マーカーの組合せについて試験し得る。例えば、Ｖｉａｌｌｅｔら（
１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｓ．１：８９−
９７を参照のこと。機能的レセプターシグナル伝達の相違を反映し得る多型バリエーショ
ンの検出は、治療ストラテジーを決定する際に有用であり得る。リガンドに対する、より
大きいかまたはより小さい応答を反映するバリエーションは、応答性／非応答性の患者プ
ールのサブセット化（ｓｕｂｓｅｔｔｉｎｇ）を可能にし得る。
【０１２５】
（ＶＩＩＩ．治療有用性）
本発明は、顕著な治療的価値を有する試薬を提供する。例えば、Ｌｅｖｉｔｚｋｉ（１
９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．８：２３９−２４４を参照のこと。
サイトカインレセプター（天然に存在するかまたは組換え体）、そのフラグメント、ムテ
インレセプターおよび抗体は、このレセプターまたは抗体に対する結合親和性を有すると
同定された化合物とともに、このレセプターまたはそれらのリガンドの異常な発現を示す
状態の処置において有用であるはずである。このような異常は代表的に、免疫学的障害に
よって症状が発現する。本明細書中に参考として援用される、ＷＯ  ０１／１８０５１を
参照のこと。さらに、本発明は、このリガンドに対する応答の異常な発現または異常な誘
発に関連した種々の疾患または障害において治療的価値を提供するはずである。例えば、
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンドは、細胞媒介性免疫（例えば、抗腫瘍活性）の発達、体液
性免疫および細胞性免疫の上昇、ならびに抗ウイルス効果に関与することが示唆されてい
る。特に、このリガンドは、ＮＫ細胞およびＴ細胞を活性化するようである。治療は、Ｉ
Ｌ−１８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ、ＩＦＮγ、放射線治療／化学療法、アジュバントまたは
抗腫瘍化合物、抗ウイルス化合物もしくは抗真菌化合物と組み合わされ得る。
【０１２６】
逆に、ＴＮＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１８もしくはＩＬ−１２のアンタゴニストと、または
ＩＬ−１０もしくはステロイドと組み合わされ得るアンタゴニストは、慢性Ｔｈ１媒介性
疾患、自己免疫または移植および／もしくは拒絶状態、多発性硬化症、乾癬、慢性炎症状
態、慢性関節リウマチ、変形性関節症あるいは炎症性腸疾患において示され得る。アンタ
ゴニストは、このレセプターサブユニットに対する抗体、可溶性レセプター構築物、また
はこのレセプターサブユニットのうちの１以上に対するアンチセンス核酸の形態をとり得
る。ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンドとレセプターサブユニットＤＣＲＳ５およびＩＬ−１
２Ｒβ１との適合は、このアゴニストおよびアンタゴニストの使用のための指標について
の洞察を提供する。
【０１２７】
治療的には、記載されるｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０活性に基づいて、このサイトカインのア
ンタゴニストが、例えば、可溶性ＩＬ−１２Ｒβ１を伴うかもしくは伴わない可溶性ＤＣ
ＲＳ５またはいずれかのレセプターサブユニットに対する抗体によってもたらされ得る。
アンタゴニストは、望ましくない免疫応答もしくは炎症応答のインヒビターとして、記憶
Ｔ細胞を標的とするために、またはＩＬ−１２／ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、または他
の抗炎症剤もしくは免疫抑制剤との組合せにおいて有用であり得る。臨床的指標は、慢性
の炎症または移植状態であり得る。種々の多型は、レセプターの機能を増強または減少さ
せ得、そして有性の場合、治療剤として有用であり得る。このような改変体の同定は、応
答性または非応答性の患者のプールのサブセット化を可能にし得る。試薬は、検出試薬も
しくは標識試薬または記憶Ｔ細胞および／もしくはＮＫ細胞についての除去試薬として有
用であり得る。
【０１２８】
遺伝子治療は、例えば、腫瘍免疫治療のためのアジュバントとして、所望の細胞集団を
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンドに対して応答性にして、腫瘍浸潤リンパ球、Ｔ細胞または
ＮＫ細胞の活性化を容易にし得る。アンチセンスストラテジーを適用して、例えば、レセ
プター応答性を妨害し得る。
【０１２９】
種々の異常な状態は、ノーザンブロット分析によってＩＬ−１２  ｐ４０および／また
はＩＬ−Ｂ３０の両方のｍＲＮＡを産生することが示されている細胞型において公知であ
る。Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏ
ｒｎら，Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．；およびＷｅａｔｈｅｒａｌｌら（編
）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。多くの他の医学的状態および疾
患は、本明細書中に提供されるアゴニストまたはアンタゴニストによる処置に対して応答
性である。例えば、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ編（１９９１）Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏ
ｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ；ならびにＳａｍｔｅｒら（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．を参照のこ
と。処置についての他の同様の指標としては、骨再造形、性機能障害、神経変性疾患の予
防、痴呆、ストレスなどが挙げられる。これらの問題は、本明細書中に提供される組成物
を用いた予防または処置に対して感受性であるべきである。
【０１３０】
組換えサイトカインレセプター、ムテイン、それらに対するアゴニストもしくはアンタ
ゴニスト抗体、または抗体は精製され得、次いで患者に投与され得る。これらの試薬は、
治療的使用のために、例えば、生理学的に無害の安定剤および賦形剤を伴う従来の薬学的
に受容可能なキャリアまたは希釈剤中で、さらなる活性成分と組み合わされ得る。これら
の組合せは、無菌（例えば、濾過される）であり得、そして投薬形態にされ得る（例えば
、投薬バイアル中での凍結乾燥または安定化された水性調製物中での貯蔵によって）。本
発明はまた、補体結合性でない、抗体またはその結合フラグメントの使用を意図する。
【０１３１】
サイトカインレセプターまたはそのフラグメントを用いたリガンドスクリーニングを実
施して、このレセプターに対する結合親和性を有する分子を同定し得る。次いで、その後
の生物学的アッセイを利用して、固有の刺激活性をブロックし得る競合結合を推定のリガ
ンドが提供し得るか否かを決定し得る。レセプターフラグメントは、リガンドの活性をブ
ロックするという点で、ブロッカーまたはアンタゴニストとして使用され得る。同様に、
固有の刺激活性を有する化合物は、このレセプターを活性化し得、従って、リガンドの活
性を刺激する（例えば、シグナル伝達を誘導する）という点で、アゴニストである。本発
明はさらに、サイトカインレセプターに対する抗体の、アンタゴニストとしての治療的使
用を意図する。
【０１３２】
効果的な治療のために必要な試薬の量は、多くの異なる要因（投与手段、標的部位、試
薬の生理学的寿命、薬理学的寿命、患者の生理学的状態、および投与される他の医薬（ｍ
ｅｄｉｃａｎｔ）を含む）に依存する。従って、処置投薬量は、力価測定されて、安全性
および効力が最適化されるべきである。代表的に、インビトロで使用される投薬量は、こ
れらの試薬のインサイチュでの投与のために有用な量における有用なガイダンスを提供し
得る。特定の障害の処置についての有効用量の動物試験は、ヒトでの投薬量のさらなる予
測指標を提供する。種々の考慮事項が、例えば、Ｇｉｌｍａｎら編（１９９０）Ｇｏｏｄ
ｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓ
ｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；およ
びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７
版（１９９０），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．
（これらの各々は、これにより、本明細書中に参考として援用される）に記載されている
。投与方法は、それらの中および以下で、例えば、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与ま
たは筋肉内投与、経皮拡散などについて考察されている。薬学的に受容可能なキャリアと
しては、水、生理食塩水、緩衝液および例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ†
＆  Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙに記載される他の化合物が挙げられる
。推定リガンドとそのレセプターとの間の親和性結合または代謝回転数が高いようである
ので、低投薬量のこれらの試薬は、最初は有効であると期待される。そしてシグナル伝達
経路は、極めて少量のリガンドが効果を有し得ることを示唆する。従って、投薬量の範囲
は通常、適切なキャリアを伴って、１ｍＭ濃度未満、代表的には約１０μＭ濃度未満、通
常約１００ｎＭ未満、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモル濃度）未満、そして最も好ましく
は約１ｆＭ（フェムトモル濃度）未満の量であると期待される。徐放処方物または徐放装
置はしばしば、連続投与のために利用される。
【０１３３】
サイトカインレセプター、そのフラグメント、ならびに抗体またはそのフラグメント、
アンタゴニストおよびアゴニストは、処置されるべき宿主に直接投与され得るか、または
、その化合物の大きさに依存して、それらの投与前にそれらをキャリアタンパク質（例え
ば、オボアルブミンまたは血清アルブミン）に結合体化することが所望され得る。治療処
方物は、多くの従来の投薬処方物において投与され得る。活性成分を単独で投与すること
は可能であるが、活性成分を薬学的処方物として提示することが好ましい。処方物は、上
記に規定されるような、少なくとも１つの活性成分を、その１以上の受容可能なキャリア
と一緒に含む。各キャリアは、他の成分と適合性であり、かつ患者に対して有害でないと
いう意味で薬学的かつ生理学的の両方で受容可能でなければならない。処方物としては、
経口投与、直腸投与、鼻腔内投与または非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与
および皮内投与を含む）に適切な処方物が挙げられる。処方物は、単位投薬量形態で便利
に提示され得、そして製薬分野で周知の方法によって調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａ
ｎら編（１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇ
ａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．
，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら編（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｄｅｋ
ｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら編（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄ
ｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；およびＬｉｅｂｅｒｍ
ａｎら編（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉ
ｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹを参照のこと。本発明の治療は、他
の治療剤（特に、他のサイトカインレセプターファミリーのメンバーのアゴニストまたは
アンタゴニスト）と組み合わされ得るかまたはそれとともに使用され得る。
【０１３４】
（ＩＸ．スクリーニング）
ＤＣＲＳ５またはそのフラグメントを用いた薬物スクリーニングを実施して、このレセ
プターサブユニットに対して結合親和性を有する化合物を同定し得る（関連成分の単離を
含む）。次いで、その後の生物学的アッセイを利用して、この化合物が固有の刺激活性を
有するか否かを、それゆえ、このリガンドの活性をブロックするという点でこの化合物が
ブロッカーまたはアンタゴニストであるか否かを決定し得る。
【０１３５】
さらに、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０リガンドと、ＩＬ−１２Ｒβ１を有するＤＣＲＳ３の機
能的レセプターとの一致は、正のシグナル伝達制御を有するアンタゴニストおよびアゴニ
ストについてのスクリーニングを可能にする。低分子または抗体スクリーニングが行われ
得る。
【０１３６】
薬物スクリーニングの１つの方法は、別のサイトカインレセプターサブユニット（例え
ば、ＩＬ−１２Ｒβ１）との組み合わせでＤＣＲＳ５を発現する、組換えＤＮＡ分子で安
定に形質転換された、真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利用する。このシグナ
ル伝達は、ＳＴＡＴ４を使用すると考えられる。他の機能的レセプターとは孤立してレセ
プターを発現する細胞が単離され得る。生存形態または固定形態のいずれかの、このよう
な細胞は、標準的な抗体／抗原またはリガンド／レセプター結合アッセイのために使用さ
れ得る。細胞性応答を検出するための高感度の方法を記載する、Ｐａｒｃｅら（１９８９
）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：２４３−２４７；およびＯｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：４００７−４０１１もまた参照のこ
と。競合アッセイは特に有用であり、ここで、この細胞は、このリガンドに対する既知の
結合親和性を有する、標識されたレセプターまたは抗体（例えば、１２５Ｉ抗体）および
その結合組成物に対する結合親和性が測定される試験サンプルと接触およびインキュベー
トされる。次いで、結合した標識結合組成物および遊離の標識結合組成物が分離されて、
リガンド結合の程度が評価される。結合した試験化合物の量は、既知の供給源に対する標
識レセプター結合の量に逆に比例する。多くの技術を使用して、結合したリガンドを遊離
のリガンドから分離し、リガンド結合の程度を評価し得る。この分離工程は代表的に、フ
ィルターへの接着とその後の洗浄、プラスチックへの接着とその後の洗浄、または細胞膜
の遠心分離のような手順を含み得る。生存細胞をまた使用して、サイトカイン媒介機能（
例えば、ＳＴＡＴ４シグナル伝達など）に対する薬物の効果についてスクリーニングし得
る。いくつかの検出方法（例えば、近接高感度検出システム）は、分離工程の除去を可能
にする。
【０１３７】
本発明の広範な範囲は、以下の実施例を参照して最良に理解される。実施例は、本発明
を特定の実施形態に限定することを意図しない。
【実施例】
【０１３８】
（実施例）
（Ｉ．一般的方法）
標準的方法のいくつかは、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎ
ｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐ
ｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版），第１−３巻，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ
Ｙ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および補充物）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋにおいて記載または参照される。タンパク質精製のための方法としては、硫酸
アンモニウム沈澱、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのよう
な方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期補充物）；Ｃｏｌ
ｉｇａｎら編（１９９６）および定期補充物，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉ
ｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；
Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，第１８２巻およびこのシ
リーズの他の巻；ならびにタンパク質精製製品の使用についての製造業者の文献（例えば
、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．またはＢｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃ
ｈｍｏｎｄ，ＣＡ）を参照のこと。組換え技術との組合せは、適切なセグメント（例えば
、ＦＬＡＧ配列またはプロテアーゼによって除去可能な配列を介して融合され得る等価物
）に対する融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｒｉｆｉｃａ
ｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｍｅｔａｌ  
Ｃｈｅｌａｔｅ  Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」、Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉ
ｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２：８７−９８，Ｐ
ｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅ
ｓｓ：Ｔｈｅ  Ｈｉｇｈ  Ｌｅｖｅｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ＆  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐ
ｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＱＵＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒ
ｔｈ，ＣＡを参照のこと。
【０１３９】
コンピュータ配列分析は、例えば、ＧＣＧ（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およびＧｅｎＢ
ａｎｋ供給源製のソフトウェアプログラムを含めて、入手可能なソフトウェアプログラム
を用いて行われる。例えば、ＧｅｎＢａｎｋなどからの公の配列データベースもまた使用
された。
【０１４０】
例えば、本明細書中に参考として援用される米国特許第５，７８９，１９２号（ＩＬ−
１０レセプター）に記載されるような、ＩＬ−１０レセプターに適用可能な多くの技術は
、ＤＣＲＳ５に適用され得る。
【０１４１】
（ＩＩ．機能的クローニング）
抗ｈＩＬ−１２Ｒβ１抗体がｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に対するヒトＴ細胞の応答をブロッ
クし、そしてｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０はＩＬ−１２Ｒβ１に結合することが観察された。こ
のことは、ＩＬ−１２Ｒβ１がｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０についてのレセプター複合体のサブ
ユニットの１つであることを示唆した。
【０１４２】
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に応答するがＩＬ−１２には応答しないマウスＴ細胞集団、およ
びＩＬ−１２には応答するがｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０には応答しない別の集団が同定された
。さらに、組換えｍＩＬ−１２Ｒβ１およびｍＩＬ−１２Ｒβ２を発現するＢａ／Ｆ３細
胞がＩＬ−１２には応答するが、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０には応答しないことが観察された
。これらの結果は集合的に、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０についてのレセプター複合体が、ＩＬ
−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２ではない少なくとも１つの他のサブユニットを含む
ことを示した。従って、発現クローニングストラテジーを発明して、この第二のレセプタ
ー成分を単離した。
【０１４３】
ｃＤＮＡライブラリーを、Ｋｉｔ２２５細胞（ＩＬ−１２およびｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０
の両方に応答するＩＬ−２依存性ヒトＴ細胞株）由来のｍＲＮＡから調製した。このｃＤ
ＮＡライブラリーを、レトロウイルス発現ベクターｐＭＸを用いて作製した。組換えｈＩ
Ｌ−１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３細胞にこのｃＤＮＡライブラリーを感染させ、ＩＬ
−３中で３〜４日間回復させ、次いで洗浄し、そして９６ウェルプレート中で、５０ｎｇ
／ｍｌの過剰なｈｐ４０／ｈＩＬ−Ｂ３０（ｈｙｐｅｒ−ｈｐ４０／ｈＩＬ−Ｂ３０）を
含有する培地中に約１５，０００細胞／ウェルでプレーティングした。ＷＯ  ０１／１８
０５１を参照のこと。培養物に約５日毎にさらに過剰なｈｐ４０／ｈＩＬ−Ｂ３０を補充
した。約２週間後、５％〜１０％のウェルは、細胞増殖を示した。細胞を各ウェルから回
収し、過剰なｈｐ４０／ｈＩＬ−Ｂ３０中で、より大きな培養物中で個々に増殖させ、そ
して過剰なｈｐ４０／ｈＩＬ−Ｂ３０に対する増殖依存性について試験した。
【０１４４】
増殖についてｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０依存性である細胞を、ＰＣＲによってレトロウイル
スｃＤＮＡ挿入物について分析した。分析した４０を超える単離物のうち、１つを除く全
てが、新規レセプターＤＣＲＳ５をコードするｃＤＮＡを含んでいた。この候補ヒトｃＤ
ＮＡを発現ベクター中にクローニングし、そしてｈＩＬ−１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ
３細胞中にトランスフェクトした。これらの細胞は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に対して応答
性となった；従って、本発明者らは、この新規ｃＤＮＡが、機能的なＩＬ−Ｂ３０レセプ
ターサブユニットである所望のＤＣＲＳ５をコードすると結論した。
【０１４５】
（ＩＩＩ．全長ＤＣＲＳ５の特徴；染色体位置決定）
ＤＣＲＳ５の細胞質ドメインは、他のサイトカインレセプター細胞質ドメイン（これは
、このファミリーの分子における共通の観察結果である）に対して全体としては近縁では
ない。この細胞質ドメインは、７個のｔｙｒ残基を含み、このうちの少なくとも３個は、
認識可能なＳＨ２結合モチーフの一部である：ＹＥＤＩ、ＹＫＰＱおよびＹＦＰＱ。この
ＹＥＤＩモチーフは、チロシンホスファターゼｓｈｐ２について同定された結合部位に類
似する。後者の２つのモチーフは、それぞれＳｔａｔ１／Ｓｔａｔ３またはＳｔａｔ３を
結合することが公知の配列に非常に類似している。ＹＫＰＱモチーフはまた、近傍の隣接
配列と一緒になって、Ｓｔａｔ１〜３を結合することが公知である、Ｓｔａｔ４およびＩ
Ｌ−１２Ｒβ２中のモチーフにある程度まで類似する。これは、予備的なデータと一致し
、このことは、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０がＩＬ−１２と同様にＳｔａｔ４を活性化すること
を示唆する。
【０１４６】
ＤＣＲＳ５配列から誘導されたＰＣＲプライマーを使用して、ヒトｃＤＮＡライブラリ
ーをプローブする。配列（好ましくは配列の末端に隣接する配列）は、例えば、表１から
誘導され得る。霊長類、齧歯類または他の種のＤＣＲＳ５についての全長ｃＤＮＡは、例
えば、λｇｔ１０ファージのＤＮＡハイブリダイゼーションスクリーニングによってクロ
ーニングされている。ＰＣＲ反応を、Ｔ．ａｑｕａｔｉｃｕｓ  Ｔａｑｐｌｕｓ  ＤＮＡ
ポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を適切な条件下で用いて行う。
【０１４７】
染色体展開物（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｓｐｒｅａｄ）を調製する。インサイチュハイ
ブリダイゼーションを、７２時間にわたって培養したフィトヘマグルチニン刺激ヒトリン
パ球から入手した染色体調製物について行う。５−ブロモデオキシウリジンを、培養の最
後の７時間にわたって添加して（６０μｇ／ｍｌ培地）、ハイブリダイゼーション後の良
好な品質の染色体分染を確実にした。
【０１４８】
プライマーの助けを借りて増幅したＰＣＲフラグメントを、適切なベクター中にクロー
ニングする。このベクターを、３Ｈを用いたニック翻訳によって標識する。放射性標識プ
ローブを、分裂中期展開物に対して、Ｍａｔｔｅｉら（１９８５）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．
６９：３２７−３３１に記載されるように２００ｎｇ／ｍｌハイブリダイゼーション溶液
の最終濃度でハイブリダイズする。
【０１４９】
核追跡エマルジョン（ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｒａｃｋ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ；ＫＯＤＡＫ  
ＮＴＢ２）を用いてコーティングした後、スライドを暴露する。分染手順の間の銀粒子の
あらゆるすべりを回避するために、染色体展開物を、緩衝化Ｇｉｅｍｓａ溶液で最初に染
色し、そして分裂中期を写真撮影する。次いで、蛍光色素−光分解−Ｇｉｅｍｓａ（ＦＰ
Ｇ）法によってＲバンド染色を行い、そして分裂中期を分析前に再度写真撮影する。
【０１５０】
同様の適切な方法を、他の種について使用する。
【０１５１】
（ＩＶ．ＤＣＲＳ５  ｍＲＮＡの位置決定）
ヒト複数組織ブロット（カタログ番号１、２）および癌細胞株ブロット（カタログ番号
７７５７−１）（１レーンあたり約２μｇのポリ（Ａ）＋ＲＮＡを含む）を、Ｃｌｏｎｔ
ｅｃｈ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から購入する。プローブを、例えば、Ａｍｅｒｓｈ
ａｍ  Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅランダムプライマー標識キット（ＲＰＮ１６３３）を用いて［
α−３２Ｐ］ｄＡＴＰで放射性標識する。プレハイブリダイゼーションおよびハイブリダ
イゼーションを、例えば、０．５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４、７％  ＳＤＳ、０．５Ｍ  ＥＤＴ
Ａ（ｐＨ８．０）中で６５℃で行う。高ストリンジェンシーの洗浄を、例えば、２×ＳＳ
Ｃ、０．１％  ＳＤＳ中で４０分間にわたる最初の２回の洗浄、続いて０．１×ＳＳＣ、
０．１％  ＳＤＳ中での２０分間にわたる洗浄を用いて６５℃で行う。次いで、メンブレ
ンを、増感スクリーンの存在下で−７０℃でＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に暴露する。ｃ
ＤＮＡライブラリーサザンによる、より詳細な研究は、選択された適切なヒトＤＣＲＳ５
クローンを用いて行われて、造血細胞サブセットまたは他の細胞サブセット中でのそれら
の発現が調べられる。
【０１５２】
あるいは、２つの適切なプライマーを、表１から選択する。ＲＴ−ＰＣＲは、メッセー
ジの存在について選択した適切なｍＲＮＡサンプルについて使用して、ｃＤＮＡ（例えば
、遺伝子を発現するサンプル）を産生する。
【０１５３】
全長クローンを、ＰＣＲシグナルによって予め選択された適切な組織由来のｃＤＮＡラ
イブラリーのハイブリダイゼーションによって単離し得る。ノーザンブロットを行い得る
。
【０１５４】
ＤＣＲＳ５をコードする遺伝子についてのメッセージを、適切な技術（例えば、ＰＣＲ
、免疫アッセイ、ハイブリダイゼーションまたは他の技術）によってアッセイする。組織
および器官のｃＤＮＡ調製物を、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅ
ｗ，ＣＡから入手し得る。天然の発現の供給源の同定は、記載される通り、有用である。
そして、機能的レセプターサブユニット対合の同定は、どの細胞が、サイトカインリガン
ドの各々の生理学的応答性をもたらすレセプターサブユニットの組合せを発現するかを予
測することを可能にする。
【０１５５】
マウスでの分布について、例えば、サザン分析を行い得る：一次増幅ｃＤＮＡライブラ
リー由来のＤＮＡ（５μｇ）を適切な制限酵素で消化して挿入片を遊離させ、１％アガロ
ースゲルで泳動し、そしてナイロンメンブレン（ＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒおよびＳｃｈｕｅ
ｌｌ，Ｋｅｅｎｅ，ＮＹ）に移した。
【０１５６】
マウスｍＲＮＡ単離のためのサンプルとしては以下が挙げられ得る：休止マウス線維芽
細胞性Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセプターに対するＢｒａ
ｆ融合物）トランスフェクト細胞（コントロール）（Ｃ２０１）；Ｔ細胞（ＴＨ１に偏向
）（脾臓由来のＭｅｌｌ４明ＣＤ４＋細胞（ＩＦＮ−γおよび抗ＩＬ−４を用いて７日間
偏向させた）；Ｔ２００）；Ｔ細胞（ＴＨ２に偏向）（脾臓由来のＭｅｌｌ４明ＣＤ４＋
細胞（ＩＬ−４および抗ＩＦＮ−γを用いて７日間偏向させた）；Ｔ２０１）；Ｔ細胞（
高度にＴＨ１に偏向）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：
１３５７−１３６７を参照のこと；２時間、６時間、１６時間にわたって抗ＣＤ３を用い
て活性化し、プールした；Ｔ２０２）；Ｔ細胞（高度にＴＨ２に偏向）（Ｏｐｅｎｓｈａ
ｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７を参照のこと；２時
間、６時間、１６時間にわたって抗ＣＤ３を用いて活性化し、プールした；Ｔ２０３）；
ＣＤ４４−ＣＤ２５＋プレＴ細胞（胸腺から選別された）（Ｔ２０４）；ＴＨ１  Ｔ細胞
クローンＤ１．１（抗原を用いた最後の刺激後、３週間にわたって休止）（Ｔ２０５）；
ＴＨ１  Ｔ細胞クローンＤ１．１（１０μｇ／ｍｌ  ＣｏｎＡで１５時間にわたって刺激
した）（Ｔ２０６）；ＴＨ２  Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（抗原を用いた最後の刺激後、
３週間にわたって休止）（Ｔ２０７）；ＴＨ２  Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（１０μｇ／
ｍｌ  ＣｏｎＡで１５時間にわたって刺激した）（Ｔ２０８）；脾臓由来のＭｅｌｌ４＋
未刺激（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞（休止）（Ｔ２０９）；Ｍｅｌｌ４＋  Ｔ細胞（ＩＦＮ−γ
／ＩＬ−１２／抗ＩＬ−４を６時間、１２時間、２４時間にわたって用いてＴｈ１に対し
て偏向し、プールした）（Ｔ２１０）；Ｍｅｌｌ４＋  Ｔ細胞（ＩＬ−４／抗ＩＦＮ−γ
を６時間、１３時間、２４時間にわたって用いてＴｈ２に対して偏向し、プールした）（
Ｔ２１１）；未刺激の成熟Ｂ細胞の白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；未刺激のＢ細胞株
ＣＨ１２（Ｂ２０１）；脾臓由来の未刺激の大きなＢ細胞（Ｂ２０２）；全脾臓由来のＢ
細胞（ＬＰＳ活性化）（Ｂ２０３）；脾臓由来のメトリザマイド富化樹状細胞（休止）（
Ｄ２００）；骨髄由来の樹状細胞（休止）（Ｄ２０１）；単球細胞株ＲＡＷ  ２６４．７
（ＬＰＳを４時間用いて活性化）（Ｍ２００）；ＧＭおよびＭ−ＣＳＦを用いて誘導した
骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４（休止）（Ｍ２０２）
；マクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１０（０．５時間、１時間、３時間
、６時間、１２時間でプール）（Ｍ２０３）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋
ＩＬ−１０（０．５時間、１時間、３時間、５時間、１２時間でプール）（Ｍ２０４）；
エアゾールチャレンジマウスの肺組織（Ｔｈ２プライマー、エアゾールＯＶＡチャレンジ
、７時間、１４時間、２３時間でプール）（Ｇａｒｌｉｓｉら（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃ
ａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ７５：７５−
８３を参照のこと；Ｘ２０６）；Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｕｌｕｓ感染肺組織（Ｃｏｆｆ
ｍａｎら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４５：３０８−３１０を参照のこと；Ｘ２００
）；全成人肺（正常）（Ｏ２００）；全肺（ｒａｇ−１）（Ｓｃｈｗａｒｚら（１９９３
）Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ４：２４９−２５２；Ｏ２０５を参照のこと）；
ＩＬ−１０  Ｋ．Ｏ．脾臓（Ｋｕｈｎら（１９９１）Ｃｅｌｌ  ７５：２６３−２７４を
参照のこと；Ｘ２０１）；全成人脾臓（正常）（Ｏ２０１）；全脾臓（ｒａｇ−１）（Ｏ
２０７）；ＩＬ−１０  Ｋ．Ｏ．パイアー斑（Ｏ２０２）；全パイアー斑（正常）（Ｏ２
１０）；ＩＬ−１０  Ｋ．Ｏ．腸間膜リンパ節（Ｘ２０３）；全腸間膜リンパ節（正常）
（Ｏ２１１）；ＩＬ−１０  Ｋ．Ｏ．結腸（Ｘ２０３）；全結腸（正常）（Ｏ２１２）；
ＮＯＤマウス膵臓（Ｍａｋｉｎｏら（１９８０）Ｊｉｋｋｅｎ  Ｄｏｂｕｔｓｕ  ２９：
１−１３を参照のこと；Ｘ２０５）；全胸腺（ｒａｇ−１）（Ｏ２０８）；全腎臓（ｒａ
ｇ−１）（Ｏ２０９）；全心臓（ｒａｇ−１）（Ｏ２０２）；全脳（ｒａｇ−１）（Ｏ２
０３）；全精巣（ｒａｇ−１）（Ｏ２０４）；全肝臓（ｒａｇ−１）（Ｏ２０６）；ラッ
ト正常関節組織（Ｏ３００）；およびラット関節炎関節組織（Ｘ３００）。
【０１５７】
ヒトｍＲＮＡ単離についてのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：末梢血単核細胞
（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）（休止）（Ｔ１００）；末梢血単核細胞（
抗ＣＤ３を用いて２時間、６時間、１２時間にわたって活性化し、プールした）（Ｔ１０
１）；Ｔ細胞（ＴＨ０クローンＭｏｔ  ７２）（休止）（Ｔ１０２）；Ｔ細胞（ＴＨ０ク
ローンＭｏｔ  ７２）（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて３時間、６時間、１２時間に
わたって活性化し、プールした）（Ｔ１０３）；Ｔ細胞（ＴＨ０クローンＭｏｔ  ７２）
（特異的ペプチドを用いて２時間、７時間、１２時間にわたってアネルギー処理し、プー
ルした）（Ｔ１０４）；Ｔ細胞（ＴＨ１クローンＨＹ０６）（休止）（Ｔ１０７）；Ｔ細
胞（ＴＨ１クローンＨＹ０６）（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて３時間、６時間、１
２時間にわたって活性化し、プールした）（Ｔ１０８）；Ｔ細胞（ＴＨ１クローンＨＹ０
６）（特異的ペプチドを用いて２時間、６時間、１２時間にわたってアネルギー処理し、
プールした）（Ｔ１０９）；Ｔ細胞（ＴＨ２クローンＨＹ９３５）（休止）（Ｔ１１０）
；Ｔ細胞（ＴＨ２クローンＨＹ９３５）（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３を用いて２時間、７
時間、１２時間にわたって活性化し、プールした）（Ｔ１１１）；Ｔ細胞ＣＤ４＋ＣＤ４
５ＲＯ（抗ＣＤ２８、ＩＬ−４および抗ＩＦＮ−γ中で２７日間にわたって偏向し（ｐｏ
ｌａｒｉｚｅ）、ＴＨ２偏向し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を用いて４時間活性化しＴ細
胞た）（Ｔ１１６）；Ｔ細胞腫瘍株ＪｕｒｋａｔおよびＨｕｔ７８（休止）（Ｔ１１７）
；プールしたＴ細胞クローンＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ７８３．１３、Ｔ
ｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９（休止）（Ｔ１１８）；Ｔ細胞ランダムγδ  Ｔ細胞
クローン（休止）（Ｔ１１９）；脾細胞（休止）（Ｂ１００）；脾細胞（抗ＣＤ４０およ
びＩＬ−４を用いて活性化）（Ｂ１０１）；プールしたＢ細胞ＥＢＶ株ＷＴ４９、ＲＳＢ
、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１．２２１、ＲＭ３、ＨＳＹ（休止）（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株Ｊ
Ｙ（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間活性化し、プールした）（Ｂ１
０３）；プールしたＮＫ  ２０クローン（休止）（Ｋ１００）；プールしたＮＫ  ２０ク
ローン（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて６時間にわたって活性化）（Ｋ１０１）；
ＮＫＬクローン（ＬＧＬ白血病患者の末梢血から誘導される）（ＩＬ−２処理）（Ｋ１０
６）；ＮＫ細胞傷害性クローン６４０−Ａ３０−１（休止）（Ｋ１０７）；造血前駆体株
ＴＦ１（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間にわたって活性化し、プー
ルした）（Ｃ１００）；Ｕ９３７前単球株（休止）（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株（Ｐ
ＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６時間にわたって活性化し、プールした）（
Ｍ１０１）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０を用いて１時間、２時間、
６時間、１２時間、２４時間にわたって活性化し、プールした）（Ｍ１０２）；溶出した
単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０を用いて１時間、２時間、６時間、１２時間、２４
時間にわたって活性化し、プールした）（Ｍ１０３）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ
、抗ＩＬ−１０を用いて４時間、１６時間にわたって活性化し、プールした）（Ｍ１０６
）；溶出した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０を用いて４時間、１６時間にわたって
活性化し、プールした）（Ｍ１０７）；溶出した単球（１時間にわたって活性化したＬＰ
Ｓ）（Ｍ１０８）；溶出した単球（６時間にわたって活性化したＬＰＳ）（Ｍ１０９）；
ＤＣ  ７０％  ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日間由来）（休止
）（Ｄ１０１）；ＤＣ  ７０％  ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２
日間由来）（ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間にわたって活性化）（Ｄ１０２
）；ＤＣ  ７０％  ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日間由来）（
ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて６時間にわたって活性化）（Ｄ１０３）；ＤＣ  ９
５％  ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日間由来、ＦＡＣＳ選別、
ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化し、プールした）（Ｄ１
０４）；ＤＣ  ９５％  ＣＤ１４＋（ｅｘ  ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαで１２日
間、ＦＡＣＳ選別、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化し、
プールした）（Ｄ１０５）；ＤＣ  ＣＤ１ａ＋  ＣＤ８６＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、
ＴＮＦαで１２日間由来、ＦＡＣ選別、ＰＭＡおよびイオノマイシンを用いて１時間、６
時間にわたって活性化し、プールした）（Ｋ１０６）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−
４で５日間由来）（休止）（Ｄ１０７）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４で５日間由
来）（休止）（Ｄ１０８）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４で５日間由来）（ＬＰＳ
で４時間、１６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０９）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、Ｉ
Ｌ−４で５日間由来）（ＴＮＦα、単球スープで４時間、１６時間にわたって活性化し、
プールした）（Ｄ１１０）；平滑筋腫Ｌ１１良性腫瘍（Ｘ１０１）；正常子宮筋層Ｍ５（
Ｏ１１５）；悪性平滑筋肉腫ＧＳ１（Ｘ１０３）；肺線維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５（ＰＭＡ
およびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活性化し、プールした）（Ｃ１０１）
；腎臓上皮癌細胞株ＣＨＡ（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１時間、６時間にわたって活
性化し、プールした）（Ｃ１０２）；腎臓胎児２８週雄（Ｏ１００）；肺胎児２８週雄（
Ｏ１０１）；肝臓胎児２８週雄（Ｏ１０２）；心臓胎児２８週雄（Ｏ１０３）；脳胎児２
８週雄（Ｏ１０４）；胆嚢胎児２８週雄（Ｏ１０６）；小腸胎児２８週雄（Ｏ１０７）；
脂肪組織胎児２８週雄（Ｏ１０８）；卵巣胎児２５週雌（Ｏ１０９）；子宮胎児２５週雌
（Ｏ１１０）；精巣胎児２８週雄（Ｏ１１１）；脾臓胎児２８週雄（Ｏ１１２）；成体胎
盤２８週（Ｏ１１３）；および１２歳のときから炎症にかかった扁桃（Ｘ１００）。
【０１５８】
同様のサンプルは、評価のために他の種において単離され得る。
【０１５９】
（Ｖ．ＤＣＲＳ５の種対応物のクローニング）
種々のストラテジーは、（好ましくは他の霊長類または齧歯類から）ＤＣＲＳ５の種対
応物を得るために使用される。１つの方法は、近縁種ＤＮＡプローブを用いた交叉ハイブ
リダイゼーションによる。進化的に類似の種を中間工程として入れることは有用であり得
る。別の方法は、遺伝子間の類似性ブロックまたは相違ブロック（例えば、高度に保存さ
れたかまたは保存されていないポリペプチド配列またはヌクレオチド配列の領域）の同定
に基づいた特異的ＰＣＲプライマーを用いることによる。
【０１６０】
データベース検索は、類似の配列を同定し得、そして適切なプローブの産生を可能にし
得る。
【０１６１】
（ＶＩ．哺乳動物ＤＣＲＳ５タンパク質の産生）
適切な（例えば、ＧＳＴ）融合構築物は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現のために
操作される。例えば、マウスＩＧＩＦ  ｐＧｅｘプラスミドは構築物され、そしてＥ．ｃ
ｏｌｉ中に形質転換される。新鮮に形質転換された細胞は、例えば、５０μｇ／ｍｌアン
ピシリンを含むＬＢ培地中で増殖され、そしてＩＰＴＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ
，ＭＯ）を用いて誘導される。一晩の誘導後、細菌は収集され、そしてＤＣＲＳ５タンパ
ク質を含むペレットが単離される。このペレットは、例えば、２リットルのＴＥ緩衝液（
５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−塩基（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡおよび２ｍＭペファブロ
ック（ｐｅｆａｂｌｏｃ））中で均質化される。この物質を、マイクロフルイダイザー（
Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）に３回通過させる。流動化された上
清は、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＧＳ−３ローターで１３，０００ｒｐｍで１時間にわたってスピ
ンダウンされる。サイトカインレセプタータンパク質を含む得られる上清は濾過され、５
０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−塩基（ｐＨ８．０）中で平衡化されたグルタチオン−ＳＥＰＨＡＲＯ
ＳＥカラムに通される。ＤＣＲＳ５−ＧＳＴ融合タンパク質を含む画分はプールされ、そ
して例えば、トロンビン（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｂｅｎｄ，ＩＮ）で切断される。次いで、切断されたプールは
、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−塩基中で平衡化されたＱ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥカラムに通される
。ＤＣＲＳ５を含む画分はプールされ、そして冷蒸留Ｈ２Ｏ中で希釈されて伝導率が下げ
られ、そして新鮮なＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに単独で、または免疫親和性抗体カラ
ムと連続して通される。ＤＣＲＳ５タンパク質を含む画分がプールされ、アリコートに分
けられ、そして−７０℃のフリーザー中で保存される。
【０１６２】
サイトカインレセプタータンパク質とのＣＤスペクトルの比較は、このタンパク質が正
確に折り畳まれていることを示唆し得る。Ｈａｚｕｄａら（１９６９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６４：１６８９−１６９３を参照のこと。
【０１６３】
（ＶＩＩ．ＤＣＲＳ５について特異的な抗体の調製）
近交系Ｂａｌｂ／ｃマウスは、組換え形態のタンパク質（例えば、精製したＤＣＲＳ５
）または安定なトランスフェクトＮＩＨ−３Ｔ３細胞で腹腔内免疫される。動物は、さら
なるアジュバントを含むかまたは含まないタンパク質を適切な時点で追加免疫されて、抗
体産生がさらに刺激される。血清は収集されるか、または収集された脾臓を用いてハイブ
リドーマが産生される。
【０１６４】
あるいは、Ｂａｌｂ／ｃマウスは、内因性細胞または外因性細胞のいずれかである、こ
の遺伝子もしくはそのフラグメントで形質転換した細胞で免疫されるか、またはこの抗原
の発現について富化された単離された膜で免疫される。血清が適切な時点で、代表的には
多数のさらなる投与後に収集される。種々の遺伝子治療技術は、例えば、免疫応答を生じ
るためのタンパク質をインサイチュで産生する際に有用であり得る。血清または抗体の調
製物は、交叉吸収または免疫選択されて、規定の特異性および高親和性の実質的に純粋な
抗体が調製され得る。
【０１６５】
モノクローナル抗体が作製され得る。例えば、脾細胞は、適切な融合パートナーと融合
され、そしてハイブリドーマは、標準的な手順によって増殖培地中で選択される。ハイブ
リドーマ上清は、ＤＣＲＳ５に結合する抗体の存在について、例えば、ＥＬＩＳＡまたは
他のアッセイによってスクリーニングされる。特異的ＤＣＲＳ５実施形態を特異的に認識
する抗体もまた選択または調製され得る。
【０１６６】
別の方法では、合成ペプチドまたは精製タンパク質は、免疫系に対して提示されて、モ
ノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が作製される。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ編（
１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｗｉｌ
ｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ
ｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。適切な状況では、結合試薬は、（例えば、蛍光もしくは
他のもので）上記の通りに標識されるかまたはパニング方法のために基材に固定されるか
のいずれかである。核酸もまた、動物内の細胞中に導入されて抗原を産生し得、この抗原
は、免疫応答を惹起するのに役立つ。例えば、Ｗａｎｇら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：４１５６−４１６０；Ｂａｒｒｙら（１９９４）Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １６：６１６−６１９；およびＸｉａｎｇら（１９９５）Ｉｍｍ
ｕｎｉｔｙ  ２：１２９−１３５を参照のこと。
【０１６７】
（ＶＩＩＩ．ＤＣＲＳ５を有する融合タンパク質の産生）
例えばＩＬ−１２Ｒβ１配列を合わせる実施形態を含め、種々の融合構築物は、ＤＣＲ
Ｓ５を用いて作製される。適切な遺伝子の一部分は、エピトープタグ（例えば、ＦＬＡＧ
タグ）またはツーハイブリッドシステム構築物に融合される。例えば、Ｆｉｅｌｄｓおよ
びＳｏｎｇ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４０：２４５−２４６を参照のこと。
【０１６８】
エピトープタグは、発現クローニング手順において使用され、抗ＦＬＡＧ抗体を用いて
検出されて、結合パートナー（例えば、それぞれのサイトカインレセプターについてのリ
ガンド）が検出され得る。このツーハイブリッドシステムはまた使用されて、ＤＣＲＳ５
に特異的に結合するタンパク質が単離され得る。
【０１６９】
（ＩＸ．構造活性関係）
特定の残基の重要性についての情報は、標準的な手順および分析を用いて決定される。
標準的な変異誘発分析は、例えば、多くの異なる改変体を所定の位置（例えば、上記で同
定した位置）で作製し、そして改変体の生物学的活性を評価することによって行われる。
これは、活性を改変する位置を決定する程度まで、または特定の位置に焦点を当てて、置
換されると生物学的活性を保持、ブロックもしくは調節するかのいずれかであり得る残基
を決定するために行われ得る。
【０１７０】
あるいは、天然の改変体の分析は、どの位置が天然の変異に耐えるかを示し得る。これ
は、個体間の、または系統もしくは種をまたがったバリエーションの集団分析から生じ得
る。選択された個体由来のサンプルは、例えば、ＰＣＲ分析および配列決定によって分析
される。これは、集団多型の評価を可能にする。
【０１７１】
（Ｘ．ＤＣＲＳ５とＩＬ−１２Ｒβ１との同時発現）
それぞれの遺伝子をコードするベクターは、細胞中にトランスフェクトされ得る。好ま
しくは、このようなベクターは、どの細胞が好首尾に形質転換されたかを同定するための
選択マーカーを有する。２つの遺伝子の同時発現は、遺伝子産物が正確に会合して活性な
レセプター複合体を形成するのを可能にする。
【０１７２】
あるいは、機能的ダイマーの会合を引き起こす方法の使用が利用可能である。例えば、
Ｏ’Ｓｈｅａら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４５：６４６−６４８；Ｋｏｓｔｅｌｎ
ｙら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３；およびＰａｔｅｌ
ら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：３０３８６−３０３９１を参照のこと
。細胞外ドメインの発現および例えば、Ｆｏｓ／Ｊｕｎロイシンジッパー親和性によって
駆動される物理的会合は、診断的使用または治療的使用のために結合化合物として作用す
るはずであるリガンド結合構築物をもたらす。
【０１７３】
本明細書中の全ての引用物は、あたかも各々の個々の刊行物または特許出願が具体的か
つ個々に参考として援用されると示されたかのような程度まで、本明細書中に参考として
援用される。
【０１７４】
本発明の多くの改変およびバリエーションは、当業者に明らかであるように、本発明の
趣旨および範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書中に記載される特定の実施形
態は、例としてのみ提供され、そして本発明は、このような請求の範囲に権利が与えられ
る全範囲の等価物とともに添付の特許請求の範囲によって限定される；そして本発明は、
例として本明細書中に提示された特定の実施形態によって限定されない。
【配列表】
2015110576000001.app