(57)【要約】【課題】クリルオイルの新たな利用法として終末糖化物質生成抑制方法を提供する。【解決手段】本発明は、高脂肪、高ショ糖摂取によって生じる終末糖化物質の生成を抑制する終末糖化物質生成抑制方法であって、５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制することを特徴とし、特に、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することを含む。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
高脂肪、高ショ糖摂取によって生じる終末糖化物質の生成を抑制する終末糖化物質生成抑制方法であって、
５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、
血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制する、
ことを特徴とする終末糖化物質生成抑制方法。
【請求項２】
前記クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給する、
ことを特徴とする請求項１に記載の終末糖化物質生成抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クリルオイルの新たな有効な利用法としての終末糖化物質生成抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クリルオイル（Ｋｒｉｌｌ−Ｏｉｌ）は、海中に生息するプランクトンの一種である南極オキアミから得られる有益な油脂である。このクリルオイルは、ω−３系脂肪酸であるＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）やＥＰＡ（アイコサペンタエン酸）を含むリン脂質、アスタキサンチンなどを含むため、高い健康増進機能が期待される。実際のところ、その有益性に関し、世界中で動脈硬化、女性の更年期障害、月経前症候群、抗炎症作用などについての報告がなされている。
【０００３】
なお、現在の食生活では、ω−６系脂肪酸（トウモロコシ油、ごま油など）が過剰になり、ω−３系脂肪酸（魚油、しそ油、亜麻仁油など）が不足していることが指摘されている。また、青魚の魚油に含まれているＥＰＡやＤＨＡは通常、トリグリセリドと結合しているので流動性があるものの、高度不飽和脂肪酸となるので酸化されやすい、という弱点がある。
【０００４】
これに対し、クリルオイルは、従来のトリグリセリド結合型に加え、リン脂質結合型のω−３系脂肪酸を含むため、ω−３系脂肪酸（ＥＰＡ、ＤＨＡ）の吸収が魚油と比較して２倍以上であるという報告があり、より多くの可能性が期待されている。
【０００５】
特許文献１や特許文献２には、オキアミ油を含む薬品がコレステロールやＬＤＬ（低密度リポたんぱく質）を低下させることが記載されている。また、特許文献１や特許文献２、特許文献３には、オキアミ油がサイトカインと呼ばれる生理活性物質の一種であるＩＬ（インターロイキン、ＩｎｔｅｒＬｅｕｋｉｎ）−１やＩＬ−８を抑制することによって、関節炎の緩和に寄与することが報告されている。特許文献４には、抗酸化作用のあるポリフェノール類との組み合わせおよびカロティノイド、トコフェロール類との組み合わせでのＩＬ−１の抑制が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第５１３５５６８号公報
【特許文献２】特許第５２２８１８５号公報
【特許文献３】特開２０１３−７３２７８号公報
【特許文献４】特表２００９−５０６０４４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
前述のようにクリルオイルには、サイトカインの一つであるＩＬ−１の抑制が知られている。しかしながら、このＩＬ−１の抑制だけであれば、前述の特許文献４に示されるように抗酸化作用のあるポリフェノール類との組み合わせ、カロティノイド、トコフェロール類との組み合わせでも達成されるので、必ずしもクリルオイルを使用する必要はない。
【０００８】
本発明者らは、クリルオイルの新たな有効な利用法として、終末糖化物質生成抑制方法を提供することを目的とする。クリルオイルの供給によって、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンの生成が抑制されることが分かったからである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記目的を達成するため、本発明は、高脂肪、高ショ糖摂取によって生じる終末糖化物質の生成を抑制する終末糖化物質生成抑制方法であって、５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制することを特徴とする。特に、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することが好ましい。
【００１０】
なお、「高脂肪、高ショ糖摂取」とは、現代人の食事状況を表し、現代人の食生活で陥りやすい甘いものや炭水化物、脂肪の過剰摂取の状態を表す。通常、メタボリックシンドロームなどと称される。また、ジャンクフードの摂取や過栄養状態を表す。
【発明の効果】
【００１１】
本発明に係る終末糖化物質生成抑制方法では、５．０重量％のクリルオイルを所定量供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制する。終末糖化物質（ＡＧＥｓ：非酵素的にたんぱく質と糖質が反応してできる老化物質）であるカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）の生成を抑制することで、生体の老化抑制効果が期待できる。具体的には、老人班、老化性のシミ、そばかすなどの発現抑制、肝臓や血液中のマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）濃度の抑制効果により、生体内の過酸化を抑制し、老化抑制効果が期待できる。
【００１２】
なお、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することが好ましい。後述する実施例にて示すように、クリルオイルのみに比べてクリルオイルとリンゴンベリーとの併用であっても同様な効果が期待できるからである。なお、このリンゴンベリー水溶液は、リンゴンベリーのエキス抽出液であって、有効成分としてのレスベラトロールを３５重量％含んでいる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実験例２に対応させて標準コントロール群、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）群、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）群、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（Ｌｉｎｇｏｎ  ｂｅｒｒｙ）群の各群のラットの血中における各測定項目の測定結果を示したグラフであって、（ａ）は尿酸（ＵＡ）値、（ｂ）はグルコース（ＧＬＵ）値、（ｃ）はインスリン（ＩＮＳ）値、（ｄ）は中性脂肪（ＴＧ）値、（ｅ）は総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）値、（ｆ）はＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）値を示している。
【図２】実験例２に対応させて標準コントロール群、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）群、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）群、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（Ｌｉｎｇｏｎ  ｂｅｒｒｙ）群の各群のラットの血中における各測定項目の測定結果を示したグラフであって、（ａ）はＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）値、（ｂ）はマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）値、（ｃ）はインターロイキン−１ベーター（ＩＬ−１β）値、（ｄ）は腫瘍懐死因子−α（ＴＮＦ−α）値、（ｅ）は血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）値、（ｆ）はカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）値、（ｇ）は蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）値を示している。
【図３】実験例３に対応させて標準コントロール、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）群、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）群、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（Ｌｉｎｇｏｎ  ｂｅｒｒｙ）群の各群のラットの肝臓又は脳における各測定項目の測定結果を示したグラフであって、（ａ）は肝臓中の中性脂肪（ＴＧ）値、（ｂ）は肝臓中の総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）値、（ｃ）は肝臓中のマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）値、（ｄ）は脳内のマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）値を示している。
【図４】実験例５に対応させて示す肝臓組織標準コントロール群の肝臓組織（Ａ）の顕微鏡写真（左上）、高脂肪、高ショ糖食（ＨＦＨＳ）群の肝臓組織（Ｂ）の顕微鏡写真（右上）、ＨＦＨＳ＋クリルオイル群の肝臓組織（Ｃ）の顕微鏡写真（左下）、ＨＦＨＳ＋クリルオイル＋リンゴンベリー（ＬＢ）群の肝臓組織（Ｄ）の顕微鏡写真（右下）をである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
クリルオイルは、前述のように主に南氷洋で取れる南極オキアミから得られ、不飽和脂肪酸の多くがリン脂質と結合している油脂（リン脂質結合型）である。クリルオイルは、青魚の油として知られるＥＰＡとＤＨＡ、抗酸化物質であるアスタキサンチンを豊富に含む。生活習慣病の予防や脳の活性化、月経前症候群（ＰＭＳ）女性の更年期障害、月経前症候群、抗炎症作用の改善に効果があると報告されている。なお、南極オキアミは、動物プランクトンの一種で、最も大型な種において体長が５〜６ｃｍ、体重が１〜２ｇにまで成長する。南極オキアミは、クジラをはじめとする様々な生物に捕食され、南極海の生態系を支える重要な役割を担っている。
【００１５】
このクリルオイルに多量に含まれるω−３系脂肪酸と結合しているリン脂質は、細胞を構成する主要成分であり、細胞膜の機能で重要な役割を果たす。また、細胞膜や細胞内膜を経由する物質の輸送にリン脂質が必須であるため、身体の細胞・組織・器官の機能は様々なリン脂質や脂肪酸の働きにより成り立っていると認められる。そして、このクリルオイルは、ＩＬ−１β関連のみならず、ＴＮＦ−αといったサイトカイン及びＰＡＦ−ＡＨといったサイトカイン様作用をもつ物質の抑制効果を有し、合計３種類のサイトカインを抑制することで慢性炎症の抑制効果を得ることができる。
【００１６】
なお、サイトカインとは、細胞から放出され、種々の細胞間情報伝達分子となる微量生理活性タンパク質であり、通常低分子量（分子量は８万以下、３万以下が多数）で、糖鎖を持つものが多い。体液を通って細胞表面の高親和性受容体などに結合し、多面的な生物活性を発現する。
【００１７】
これらのサイトカインの作用は、免疫、炎症に関係したものが多く知られ、細胞の増殖、分化、細胞死、あるいは創傷治癒など作用は多様（多面的生物活性）であり、異なる構造のサイトカインにおいて共通の活性を示すことがある（重複性作用）。様々な細胞内シグナル伝達経路をへて、細胞のＤＮＡやＲＮＡ、タンパク質合成のパターンを変化させ、細胞の働きを変えることが知られるが、解明されていない部分も非常に多い。
【００１８】
これらのサイトカインのうち、後述する実施例（実験例１〜実験例５）で抑制作用を測定したサイトカインについて説明する。
【００１９】
＜ＩＬ−１（インターロイキン−１、ＩｎｔｅｒＬｅｕｋｉｎ−１）＞
ＩＬ−１は、サイトカインとして一番先に同定され、後述する実験例では、その一つであるＩＬ−１βを用いた。
【００２０】
＜ＴＮＦ−α（癌懐死因子または腫瘍壊死因子、Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ）＞
ＴＮＦ−αは、主にマクロファージにより産生され、固形がんに対して出血性の壊死を生じさせるサイトカインとして発見された。癌懐死因子または腫瘍壊死因子といえば一般にＴＮＦ−αを指していることが多い。
【００２１】
＜ＰＡＦ−ＡＨ（血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ、Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ−Ａｃｅｔｙｌｈｙｄｒｏｌａｓｅ＞
ＰＡＦ−ＡＨは、ヒト血漿由来の血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼである。サイトカインであるＰＡＦ（血小板凝集素活性化因子）を失活させる酵素として知られてきた。アテローム性動脈硬化症のほか、炎症性血管内皮細胞障害、ＣＶＤｓ（心血管障害）、慢性腎臓障害などに深く関与し、ＰＡＦ−ＡＨの上昇抑制により、これらの障害に対する抑制や改善に相関があると認められている。
【００２２】
＜ＣＭＬ（カルボキシメチルリジン、Ｃａｒｂｏｘｙ（Ｍｅｔｈｙｌ）Ｌｙｓｉｎｅ）＞
ＣＭＬは、ＡＧＥ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、タンパク質への糖の非酵素的付加反応によって形成される終末糖化物質の総称）の主要な構造体の一つで、加齢とともに体内に蓄積され、この反応（ＡＧＥ化）がタンパク質を変性させ、機能を低下させるため、老化の一因子と考えられている。老化に伴う蓄積は、血管などの組織の硬化の一因とされ、皮膚の老化にも関与すると考えられている。
【００２３】
終末糖化物質（ＡＧＥｓ（蛍光終末糖化物質））は、タンパク質の糖化反応（メイラード反応）によってつくられる。ＡＧＥｓが人類の身体のさまざまな老化に共通の物質（より正確に言えば、生体化学反応による生成物）として関わっていることがわかってきた。現在、数十種類もの化合物がＡＧＥｓとして知られている。
【００２４】
クリルオイルは、ω−３系脂肪酸の一種であるＤＨＡやＥＰＡ、抗酸化物質であるアスタキサンチンが豊富に含まれているため、生活習慣病の予防・改善効果、女性特有の悩みを改善する効果、心疾患を予防する効果等の働きが期待され、既に研究されている。ＤＨＡやＥＰＡは、海中のような低温の環境でも固まることがなく、例えば、魚油は−４０℃でも液体のままである。ＥＰＡには、血管壁の細胞膜を柔らかくする働きがあり、血流を改善する効果がある。また、勢いよく血液が流れても血圧が高くなるのを防ぐ働きがある。同時に赤血球の細胞膜も柔らかくするため、血流が改善され血液がサラサラの状態になる。このようなＤＨＡやＥＰＡは、血流や血管の健康を守る力を持っている。
【００２５】
本発明では、クリルオイルの単体使用ばかりでなく、リンゴンベリー（Ｌｉｎｇｏｎ  ｂｅｒｒｙ、ＬＢ）等の抗酸化物質を併用してもよい。抗酸化物質としてリンゴンベリー（ＬＢ）に限らず、ポリフェノール類としてブルーベリー類、アロニア、アサイ、黒豆皮、カシス、ブドウ種子、ブドウ皮、椿の花などの抽出物、フラボノイド類としてフランス海岸松などの松類の木皮や樹液抽出物、カテキン類として茶葉、柿類の抽出物、カロティノイド類としてアスタキサンチン、フコキサンチン、ゼアキサンチン、ルテインなどの動植物抽出カロティノイド類、ビタミンＡ、ＣおよびビタミンＥに代表されるトコフェロール類、ビタミンＢ２、葉酸、クロロフィルなどの抗酸化物質等を用いてもよい。また、クリルオイルと抗酸化物質との混合割合としては、クリルオイルに対して０．００１％〜５０％の配合であって、より好ましくは０．０１％〜１０％の配合が好ましい。
【実施例】
【００２６】
以下に示す実験例１〜５は、大連医科大学（中国）中日合作医薬科学研究所に依頼して行ったものであり、試験報告書及び同訳文を上申書に添付した。
【００２７】
［実験例１］
標準コントロール、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ（リンゴンベリー）を１４週間に亘って与えた各群のラット（Ｒａｔ）の体重（ｇ）、給餌量（ｇ）、飲水量（ｍｌ）、体重１００ｇ当たりの肝臓重量（ｇ）、体重１００ｇ当たりの後腹壁脂肪重量（ｇ）について群間比較した。詳細な実験条件については、後述する。その結果を表１に示した。
【００２８】
なお、表１中のａ、ｂ、ｃは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロール群に対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
ｃ：ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に対して有意差が認められる。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
上記表１より明らかなように、実験終了（１４週間後）時の体重は、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群（ＨＦＨＳのみの群、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群）で増加していた。また、ＨＦＨＳのみの群に対し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で体重が増加していた。
【００３１】
給餌量（１日当たり）は、すべての群で有意な差がなかった。
【００３２】
飲水量（１日当たり）は、ＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が他群と比較して有意に少なかった。これは、ＬＢ抽出物の０．５％水溶液を飲水としたことによるものと考えられる。
【００３３】
体重に対する肝臓重量は、すべての群で有意な差がなかった。ただし、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で他の群より少ない傾向があった。
【００３４】
体重に対する後腹壁蓄積脂肪は、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群で有意に増加していた。ただし、ＨＦＨＳのみの群と比較し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で有意に低い値を示した。
【００３５】
これらの結果より、ＨＦＨＳ群に対し、クリルオイル（ＫＯ）を供給したことにより、内臓脂肪の付着が抑制されていると考えられる。
【００３６】
［実験例２］
標準コントロール、ＨＦＨＳ、ＨＦＨＳ＋ＫＯ又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢを１４週間与えたＲａｔの各群において、血液生化学性状に与える影響を群間比較した。
【００３７】
測定項目は、尿酸（ＵＡ）、グルコース（ＧＬＵ）、インスリン（ＩＮＳ）、中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、ＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）、マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）、インターロイキン−１ベーター（ＩＬ−１β）、癌懐死因子−α（ＴＮＦ−α）、血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）であり、その結果を表２及び図１，２に示した。
【００３８】
なお、表２中のａ、ｂ、ｃは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロール群に対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
ｃ：ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に対して有意差が認められる。
【００３９】
【表２】
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【００４０】
上記表２、図１、２より各測定項目について、以下のことが明らかになった。
【００４１】
ＵＡ（尿酸）、ＧＬＵ（グルコース）、ＩＮＳ（インスリン）については、すべての群で有意な差を認めなかった。
【００４２】
中性脂肪（ＴＧ）については、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群はすべて有意に上昇していた。しかし、ＨＦＨＳのみの群と比較し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で低い傾向があった。
【００４３】
総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）については、標準コントロール群との比較でＨＦＨＳのみの群が有意に上昇した。標準コントロール群と比較し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢは有意な差がなく、むしろ減少傾向が認められた。
【００４４】
ＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）については、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に高い値を示した。標準コントロール群との比較では有意差がなかった。しかし、標準コントロール群より多少、高い傾向を示した。
【００４５】
ＬＤＬ−コレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）については、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。標準コントロール群との比較では有意差が認められず、仮に認められてもわずかであった。
【００４６】
マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）については、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。
【００４７】
また、サイトカイン（炎症起因物質）に対する抑制効果は、以下の通りである。
【００４８】
インターロイキン−１ベーター（ＩＬ−１β）については、ＭＤＡと同じ傾向であった。すなわち、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。
【００４９】
癌懐死因子−α（ＴＮＦ−α）については、ＭＤＡおよびＩＬ−１βと同様な傾向であった。すなわち、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。
【００５０】
血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）については、他のサイトカインと同様な傾向であった。すなわち、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。さらに、ＨＦＨＳ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ群よりＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。
【００５１】
これら得られたサイトカインの値から、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）によって生じる全身的な炎症は、クリルオイル（ＫＯ）が供給されることにより、ＩＬ−１βばかりでなく、炎症に関与するあらゆるサイトカインが抑制されることを通じて抑えられる、と考えることができる。
【００５２】
さらに、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）の血中における変化は、ＨＦＨＳ群のすべてで標準コントロール群よりも有意に高い値を示し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。一方、蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）においては、すべての群で有意な変化がなかった。すなわち、本実験例２においては、ＣＭＬが生体内で産生される程度の障害が生じたが、蛍光ＡＧＥｓが生体内で産生されるまでの重度の障害は生じていなかったと推察される。
【００５３】
ＣＭＬ及び蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）の生成は、一概にはいえないものの、蛍光ＡＧＥｓが産生される前にＣＭＬが産生されると考えられている。これは、生体内防御作用により、まず、無毒化されたＡＧＥｓであると考えられるＣＭＬが優先的に作られ、次に処理できない過剰分が蛍光ＡＧＥｓとして産生されると考えられるからである。しかし、最近の研究において、透析患者の悪性化した患者の血液中に多量のＣＭＬが存在し、悪化と正の相関が認められていることから、血中のＣＭＬ上昇がＩＩ型糖尿病患者や慢性腎臓炎の障害のバロメーターとして利用することができる可能性がある。
また、ＣＭＬは非酵素的タンパク質と結合した終末糖化物質に含まれる。蛍光ＡＧＥｓも生化学的にＣＭＬと同様な部類に分類されるが、蛍光ＡＧＥｓが反応性の高いＧｌｙｃｅｒ−ＡＧＥｓである点でＣＭＬと相違する。ただし、ＣＭＬは、蛍光ＡＧＥｓが安定化することで産生される可能性も示唆されている。
【００５４】
［実験例３］
標準コントロール、ＨＦＨＳ、ＨＦＨＳ＋ＫＯ又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢを１４週間与えたＲａｔの各群において、肝臓と脳に与える影響を群間比較した。測定項目は、ＴＧ（中性脂肪）、Ｔ−ＣＨＯ（総コレステロ−ル）、およびＭＤＡ（マロンデアルデヒド）である。その結果を表３及び図３に示した。
【００５５】
なお、表３中のａ、ｂは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロールに対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
【００５６】
【表３】
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【００５７】
上記表３及び図３より明らかなように、肝臓中の中性脂肪（ＴＧ）は、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群はすべて有意に上昇していた。しかし、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）は、ＨＦＨＳのみの群が他の群と比較し、有意に高い値を示した。
【００５８】
マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）においては、肝臓における群間比較において、ＨＦＨＳのみの群が他の群と比較し、有意に高い値を示した。一方、脳における群間比較においては、有意差が認められなかった。
【００５９】
したがって、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）に対し、クリルオイル（ＫＯ）が供給されることにより、肝臓中のＴ−ＣＨＯの上昇を抑制するとともに、肝臓の過酸化を抑制していると考えることができる。なお、脳内の過酸化に対する影響は認められない。
【００６０】
［実験例４］
標準コントロール、ＨＦＨＳ又はＨＦＨＳ＋ＫＯを１４週間与えたＲａｔの各群において、脳の構成脂肪酸に与える影響を群間比較し、その結果を表４に示した。
【００６１】
なお、表４中のａ、ｂは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロールに対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
【００６２】
【表４】
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【００６３】
上記表４より、脳の構成脂肪酸は、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群で、標準コントロール群又はＨＦＨＳのみの群に対して有意差が認められることが分かる。特徴的なのは、パルミトオレイン酸（Ｃ１６：１）が有意に上昇し、アラキドン酸（Ｃ２２：６）が有意に低下していたことである。したがって、摂取する油脂の違いによって、脳内の構成脂肪酸が変化することが認められた。
【００６４】
［実験例５］
標準コントロール、ＨＦＨＳ、ＨＦＨＳ＋ＫＯ又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢを１４週間与えたＲａｔの各群において、肝臓組織の組織学的所見を表５及び図４に示した。
【００６５】
なお、表４中のａ、ｂは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロールに対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
【００６６】
【表５】
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【００６７】
上記表５から明らかなように、ＨＦＨＳ群は他の群と比較し、脂肪変性、炎症および全体的な組織学的な違いにおいて有意差が認められた。ＨＦＨＳ群の肝臓が形態学的に異なった所見が認められることは、図４からも判断可能である。
【００６８】
また、図４より明らかなように、標準コントロール群は一般的な肝臓組織であった一方、ＨＦＨＳ群において、明らかな脂肪変性と炎症所見が認められた。
【００６９】
ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群では組織学的にマイルドな脂肪変性と炎症が認められた。
【００７０】
したがって、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）に対し、クリルオイル（ＫＯ）が供給されることにより、肝臓中に生じる組織学的な脂肪変性や炎症が抑制されると考えることができる。
【００７１】
以下、上記実験例１〜５における実験条件などについて説明する。
【００７２】
〔実験条件〕
実験に用いた動物は、スプラギュ−ダウレイ（ＳＤ）系特定病原体除去（ＳＰＦ）ラット（Ｒａｔ）、体重２４０〜２９０ｇ（Ｄａｌｉａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ動物センターから購入）である。１週間予備飼育してから実験に使用した。プラスチックケージにおいて、オガ屑チップの床敷き上で飼育した。
【００７３】
実験環境は、温度２３〜２５℃、湿度５０〜６０％で明暗を各１２時間とし、室内換気回数１２回／時間で飼育した。飲水は、水道水を煮沸冷却したものを自由摂取で与えた。
【００７４】
〔実験群分〕
実験群は４群として、各群を１０匹とした。
【００７５】
１．標準コントロール群に対し、標準的なラットの食餌（既定食、Ｎｏｒｍａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｄｉｅｔ）を与えた。
【００７６】
２．高脂肪、高ショ糖食（ＨＦＨＳ）群に対し、ＨＦＨＳ食 （１０％（Ｗ／Ｗ）ラード及び５％（Ｗ／Ｗ）トウモロコシ油を含む１５.０％（Ｗ／Ｗ）の脂肪及び３０％（Ｗ／Ｗ））を与えた(１５.０％(W/W)Fat ,１０.０％Lard ＆ corn oil, ３０％(W/W) Sucrose)。
【００７７】
３．ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に対し、ＨＦＨＳ食に含まれるラードの全量をクリルオイル（ＫＯ）に置き換えた食餌を与えた（ＨＦＨＳdiet containing ＫＯ, in which ５.０％ (W/W) corn oil was replace to ＫＯ）。
【００７８】
４．ＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群に対し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に与えた食餌に加え、リンゴンベリー抽出物を０.５％（Ｗ／Ｗ）含む、リンゴンベリー水溶液を飲水として与えた。リンゴンベリー水溶液は、褐色の遮光給水瓶から自由摂取させた。なお、このリンゴンベリー水溶液は、リンゴンベリーのエキス抽出液であって、有効成分としてのレスベラトロールを３５重量％含んでいる。また、内容液を毎日交換した（ＨＦＨＳ containing ＫＯ diet and consuming drinking fluid containing ０.５％ ＬＢ extract  (W/V) group (The drinking fluids containing ＬＢ extract were freshly prepared, changed daily and protected from light to prevent the decomposition of ＬＢ extract by using a brown glass drinking bottle.ＬＢ：Lingonberry Extract(Resveratrol:３５％ contacted )。
【００７９】
〔飼育期間〕
飼育期間は１４週間である。ＨＦＨＳ食餌は、−２０℃で凍結保管し、毎日必要に適した量を与えた。
【００８０】
〔動物の観察〕
一般的な健康状況（目視的観察）観察は、毎日（朝９時と夕方４時）行った。動物の体重は、１週間に１度測定し、飼料摂取量及び飲水摂取量は毎日１回測定した。
【００８１】
〔採血および組織サンプルの収集〕
実験期間終了時に１６時間絶食させた後、エーテル麻酔で処理した。採血は、後腹壁動脈から行った。血清は、採血後１５００ＲＰＭの遠心分離によって分離収集し、分析まで−８０℃で保管した。
【００８２】
脳、肝臓、後腹壁脂肪組織（サイトカイン測定用組織）は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。脳組織試料は−８０℃で貯蔵した。肝臓、後腹壁脂肪組織は重量を測定した。一対の肝臓試料は、各々のラットから採取した。一対の肝臓の一方は−８０℃で貯蔵し、もう一方は中性のホルマリン緩衝液（ｐＨ７．４）で固定した。
【００８３】
〔生化学分析〕
血清生化学分析として、中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、高比重コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）、低比重コレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）は酵素法で分析した。グルコース（ＧＬＵ）は、グルコースオキシダーゼ法で、尿酸（ＵＡ）は、ウリケース法で分析した。測定機器は自動生化学分析計（７０６０型、日立）を使用した。インスリン（ＩＮＳ）レベルはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した。
【００８４】
マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、癌壊死因子（ＴＮＦ−α）、血小板凝集素活性化因子アセチルハイドラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）とカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）は酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ）で分析した。蛍光ＡＧＥｓは、蛍光分析計で測定した。
【００８５】
測定条件は、血清試料をＰＢＳで５００倍に希釈し、Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶフィルター（０.２２μｍ、ミリポア）でフィルトレーション（濾過）した。バックグラウンド蛍光スペクトルは、スリット幅１ｎｍ、Ｅｘ：３７０ｎｍ、Ｅｍ：４４５ｎｍで３回測定した。ついで、血清試料についての蛍光極大吸収を測定した。
【００８６】
〔まとめと考察〕
以上の実験結果から、クリルオイル（ＫＯ）単体使用又はクリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（リンゴンベリー）の併用により、高脂肪高ショ糖食によって血液中や肝臓中で起こるコレステロ−ル上昇が抑制され、なおかつ過酸化が抑制されることが理解できる。
【００８７】
上記実験例１〜実験例５から、一般的にクリルオイル（ＫＯ）の効果として考えられていたサイトカインによる炎症抑制メカニズムが、ＩＬ−１β抑制による抗炎症作用のみではなく、ＴＮＦ−αおよびＰＡＦ−ＡＨのような様々なサイトカインの抑制を通じていることが判明した。したがって、クリルオイル（ＫＯ）の供給により全身的に、あらゆる炎症に対して抑制できる可能性が理解される。
【００８８】
動脈硬化の原因として知られる血管内皮細胞や血液そのものの炎症の抑制に対し、ＰＡＦ−ＡＨが関与することが知られるが、上記実験例１〜実験例５から、クリルオイル（ＫＯ）の供給により、ＰＡＦ−ＡＨの生成が抑制されることが初めて分かった。したがって、クリルオイル（ＫＯ）の供給により、ＰＡＦ−ＡＨの生成抑制を通じて動脈硬化の緩和、予防等することができる可能性が理解される。
【００８９】
また、最近、老化の最大の問題であると指摘されている終末糖化物質の一つであるＣＭＬ（カルボキシメチルリジン）の生成を、上記実験例１〜実験例５から、クリルオイル（ＫＯ）の供給により、抑制することができることが初めて分かった。したがってクリルオイル（ＫＯ）単体使用又はクリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（リンゴンベリー）の併用により、血管内皮細胞および血液そのものの炎症を抑制し、さらに生体内過酸化の抑制やコレステロ−ル上昇抑制、および終末糖化物質の生体内合成を抑制することによって、生体への有益な効果をもたらす可能性を示すことができた。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
したがって、本発明は、高脂肪、高ショ糖摂取によって生じる終末糖化物質の生成を抑制する終末糖化物質生成抑制方法であって、５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制することを通じ、生体の老化抑制効果が期待できる。具体的には、老人班、老化性のシミ、そばかすなどの発現抑制のほか、肝臓や血液中のマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）濃度の抑制効果を通じて生体内の過酸化を抑制し、老化抑制効果が期待できる。なお、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することでも同様な効果が期待できる。
【００９１】
ここで、終末糖化物質には蛍光性を有するＡＧＥｓ群とＣＭＬのように非蛍光性のものがある。蛍光性のものは、不安定で反応性が高いが、ＣＭＬは安定した最終生成物質で不可逆的であると考えられる。したがって、クリルオイル（ＫＯ）を供給することにより、蛍光性を有するＡＧＥｓ群の段階で生成抑制できれば、ＣＭＬ等の不可逆的な最終糖化物質の蓄積が生じず、生体への有益な効果をもたらす可能性がある。
【００９２】
さらに、蛍光性を有するＡＧＥｓ群は、Ｔｏｘｉｃ−ＡＧＥｓ、Ｒｅｃｅｐｔｅｒ−ＡＧＥｓなどと称され、毒性を有する可能性が示唆されている。したがって、クリルオイル（ＫＯ）を供給することにより、蛍光性を有するＡＧＥｓ群の段階で生成抑制できれば、ＡＧＥｓ群の毒性に対する危険性が低減されて生体への有益な効果をもたらす可能性がある。なお、ＣＭＬはｎｏｎ−Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓと呼ばれ、生体内で無毒化経路をたどって無毒化されているが、その無毒化経路が飽和することにより  Ｔｏｘｉｃ−ＡＧＥｓが増加する可能性があるので、クリルオイル（ＫＯ）を供給することによりＣＭＬ等の最終糖化物質の生成抑制によっても、生体への有益な効果をもたらす可能性がある。
【００９３】
上記実験例２では、クリルオイル（ＫＯ）を供給することにより、ＣＭＬの生成抑制効果が認められることで、終末糖化物質の生成抑制効果が認められた。この効果は、実験例２から、サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＰＡＦ−ＡＨの生成抑制、ＭＤＡの生成抑制のほか、総コレステロールの生成抑制、ＬＤＬ−コレステロールの生成抑制、ＨＤＬ−コレステロール値の上昇等により、血管内皮細胞に対してカルボニル化やグリケーションといった酸化ストレスが抑制された結果であると考えられる。
【００９４】
本発明では、クリルオイル（ＫＯ）単体使用又はクリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（リンゴンベリー）の併用により、ＨＦＨＳ食の連続的な摂取で生じるメタボリックシンドロームを介して発症する肥満、動脈硬化、糖尿病、全身炎症などの患者の血液中や肝臓中における脂質変性によって生じたアテロ−ム性動脈硬化、又は老化に伴う指標であるＰＡＦ−ＡＨの抑制と終末糖化物質類に含まれるＣＭＬの抑制効果を確認した。このことから、ＨＦＨＳ食の継続によるメタボリックシンドロームの進行具合を、血中のＣＭＬおよびＰＡＦ−ＡＨの値を測定することで確認することができる可能性がある。
【００９５】
また、クリルオイル（ＫＯ）は、Ｆｉｓｈ−ＯＩＬとは別の経路で生体に吸収され、生体内で有効利用されている点においても注目されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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