(57)【要約】【課題】本発明は、生物学的な手段によって農業上有用な植物に種々の好ましい性質を付与することを目的とする。【解決手段】本発明は、コマモナス（Comamonas）属細菌をキク科植物等の農業上有用な植物に人為的に感染させることにより、これらの植物の生育を促進し、収量を増加させ、及び/又は病害抵抗性を付与するための方法、並びに、コマモナス（Comamonas）属細菌を含む微生物製剤に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物に病害抵抗性を付与する方法。
【請求項２】
コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物の収量を増加させる能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物の収量を増加させる方法。
【請求項３】
コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物の生育を促進する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物の生育を促進する方法。
【請求項４】
農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
農業上有用な植物が、キク科植物である、請求項１〜３のいずれか１項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記細菌がComamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記細菌がComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する細菌を有効成分として含有する、農業上有用な植物用の微生物製剤。
【請求項９】
農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物である、請求項８に記載の微生物製剤。
【請求項１０】
前記細菌がComamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、又はその変異株である、請求項８又は９に記載の微生物製剤。
【請求項１１】
前記細菌がComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、又はその変異株である、請求項８又は９に記載の微生物製剤。
【請求項１２】
Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株。
【請求項１３】
Comamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はエンドファイトであるComamonas属細菌を植物に人為的に感染させて該植物の生育を促進する方法、該植物の収量を増加させる方法及び/又は該植物に病害抵抗性を付与する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまでの化学農薬を中心とした病害虫防除技術は、効率的な食糧確保に貢献してきた。ところが近年、栽培の効率性だけでなく、安心・安全といった領域を含めた無農薬、減農薬による環境保全型農業が望まれ、それに適合した病害虫防除技術（例えば微生物農薬）や生産性の向上技術が必要とされている。
【０００３】
農業分野では、依然として、作物の生育促進には化学肥料が使用され、また、病虫害に対しては化学合成農薬が使用されている。また、一部では微生物や微生物が生産する物質を用いた微生物農薬も知られている。しかし、農薬の原体を化学合成により製造する際には、多量のエネルギーが投入されるという問題、環境への負荷が大きいという問題などがある。また、一方、現在使用されている環境負荷が小さい微生物農薬は高価であり、安定した防除効果が得られないため、品質や収量が減少してしまう問題がある。
【０００４】
このような状況において、植物に共生する微生物であるエンドファイトのなかに、病害虫の防除や収量の増加などの、植物に有益な特性を付与する微生物が報告されている（特許文献１〜９）。しかし、知られるエンドファイトの種類が少ないため、この分野での実用化のためには、実用化の可能性の高い微生物の探索と応用が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開2013-042695号公報
【特許文献２】特開2011-051902号公報
【特許文献３】特開2009-232721号公報
【特許文献４】特開2009-067717号公報
【特許文献５】特開2009-051771号公報
【特許文献６】特開2009-050206号公報
【特許文献７】特開2003-300805号公報
【特許文献８】特開2003-274779号公報
【特許文献９】特開2002-223747号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、微生物学的な手段によって農業上有用な植物に対し有益な性質を付与することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下の特徴を包含する。
（１）コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物に病害抵抗性を付与する方法。
（２）コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物の収量を増加させる能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物の収量を増加させる方法。
（３）コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物の生育を促進する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物の生育を促進する方法。
（４）農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物である、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）農業上有用な植物が、キク科植物である、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（６）前記細菌がComamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株である、（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（７）前記細菌がComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株である、（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（８）コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する細菌を有効成分として含有する、農業上有用な植物用の微生物製剤。
（９）農業上有用な植物が、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物である、（８）に記載の微生物製剤。
（１０）前記細菌がComamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、又はその変異株である、（８）又は（９）に記載の微生物製剤。
（１１）前記細菌がComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、又はその変異株である、（８）又は（９）に記載の微生物製剤。
（１２）Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株。
（１３）Comamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株。
【０００８】
本明細書において「コマモナス（Comamonas）属細菌」は、農業上有用な植物体内に共生して植物に病害抵抗性を付与する能力、植物の収量を増加させる能力、又は植物の生育を促進する能力を有する、エンドファイト細菌を指す。一般に、「エンドファイト」なる用語は、植物に共生する微生物をいう。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、微生物学的な手段、すなわちエンドファイトとして使用可能なComamonas属細菌（例えばNITE P-01769株又はNITE P-01770株）によって、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物について、該植物の生育を促進し、該植物の収量を増加し、及び／又は該植物に病害抵抗性を付与することが可能となる。例えばキク科作物に対して、植物の生育を促進し、葉などの植物体構成成分の収量を増加させることが可能になる。後述の実施例で例証するように、例えばレタスで、無処理区を100%とした際の重量比で、温室栽培において105〜107％、圃場栽培において104〜105％の生育促進が認められた。その他の植物についても、数%から二十数%の生育促進が認められた。また、病害についても、無処理区と比較して、根こぶ病の発病株率が14〜24%減少し、根こぶセンチュウによる病害の発病株率が57%〜86%減少した。本発明の細菌を農業分野で使用することによって、減農薬、無農薬栽培においても、増収が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、圃場栽培において用いた露地圃場の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１.細菌
本発明に用いることができる細菌は、コマモナス（Comamonas）属に属する細菌であって、農業上有用な植物、例えば、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物の体内に共生して、該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の生育（生長）を促進する能力、及び/又は、該植物の収量を増加する能力を有する細菌であれば特に限定されない。
【００１２】
本明細書では、コマモナス（Comamonas）は、上記のいずれか１つ、２つ又は３つの能力を植物体に付与することができるエンドファイト細菌であり、自然界から単離された細菌だけでなく、そのような細菌に突然変異処理を施して産生された変異体も包含する。
【００１３】
上記細菌の具体例として、新規のComamonas細菌である、Comamonas sp. MYK102（受託番号 NITE P-01769；以下では、単に「NITE P-01769株」と称することもある。）又はComamonas sp. MYK103（受託番号 NITE P-01770；以下では、単に「NITE P-01770株」と称することもある。）、或いは、上記のいずれか１つ又は複数の能力を有する、その変異株が挙げられる。
【００１４】
上記のComamonas sp. MYK102及びComamonas sp. MYK103は、野生のキクから単離された菌株の中から、収量についての選抜試験により選抜され、単離された株である。Comamonas sp. MYK102及びComamonas sp. MYK103は、2008年3月5日に、国内寄託機関である、独立行政法人製品評価技術基盤機構、特許微生物寄託センター（〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に本出願人により寄託され、それぞれ、受託番号 NITE P-01769及びNITE P-01770が付与されている。なお、「NITE P-01769」及び「NITE P-01770」の受託証中の微生物の識別の表示は、当初それぞれ「Delftia sp. MYK102」及び「Delftia sp. MYK103」となっていたが、2014年2月28日付で表示の変更が認められ、それぞれ「Comamonas sp. MYK102」及び「Comamonas sp. MYK103」に修正された。
【００１５】
このNITE P-01769株及びNITE P-01770株は、種々の細菌の属及び種について、16SrDNA遺伝子の部分配列（本件の場合、Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）株については配列番号1、及びComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）株については配列番号2）を用いて、相同性検索を行った。その結果、Comamonas sp. MYK102については、相同性の高い上位3種についてComamonas koreensis strain IHB B 1392と99%、Comamonas sp. D1と99%、Comamonas sp. TWNG17と99%の高い配列同一性が確認されたことから、Comamonas属に属する新規の細菌であると考えられた。また、Comamonas sp. MYK102は、Delftia sp. TS40とも97%の配列相同性を示した。
【００１６】
同様に、Comamonas sp. MYK103については、相同性の高い上位3種についてComamonas koreensis strain IHB B 1392と99%、Comamonas sp. D1と99%、Comamonas sp. TWNG17と99%の高い配列同一性が確認されたことから、Comamonas属に属する新規の細菌であると考えられた。また、Comamonas sp. MYK103は、Delftia sp. TS40とも97%の配列相同性を示した。
【００１７】
また、NITE P-01769株は、表１に示す基質資化能力を、NITE P-01770株は表２に示す基質資化能力を、それぞれ有している。
【００１８】
【表１】
2015143215.tif 000002
【００１９】
【表２】
2015143215.tif 000003
【００２０】
本発明で使用できる細菌としては、新規Comamonas属細菌であるNITE P-01769株又はNITE P-01770株と同等の上記能力を有する細菌、例えば、Comamonas属に属し、上記のいずれか１つ又は複数の能力を有し、及び、NITE P-01769株又はNITE P-01770株と同一の上記の基質資化性を有する細菌や、Comamonas属に属し、上記のいずれか１つ又は複数の能力を有し、及び、配列番号1又は配列番号2に示す塩基配列を少なくとも一部分に含む16SrDNAを有する細菌が挙げられるがこれらには限定されない。さらにまた、NITE P-01769株又はNITE P-01770株が人為的に突然変異誘発処理されて産生されたその変異株であって、農業上有用な植物、例えばアブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物、の体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の生育を促進する能力、及び/又は、該植物の収量を増加させる能力を有する変異株もまた、本発明で使用することができる。
【００２１】
本発明で使用できるComamonas属細菌を自然界から分離するときには、農業上有用な植物の根、茎、葉などの植物体構成部から、該植物に共生する細菌類を培養により分離し、上記の能力のいずれかについて、並びに/或いは、上記の配列番号1又は配列番号2に示す塩基配列との配列同一性、及び/又は、上記の基質資化性について、選抜試験を行い得る。
【００２２】
また、突然変異誘発処理を行う場合には、NITE P-01769株又はNITE P-01770株に対し任意の適当な変異原を用いて突然変異が行われ得る。
【００２３】
ここで、「変異原」なる用語は、広義の意味を有し、例えば変異原作用を有する薬剤のみならずUV照射等の高エネルギー線照射のような変異原作用を有する処理も含むものとする。適当な変異原の例として、エチルメタンスルホネート、UV照射、ガンマ線照射、X線照射、重イオンビーム照射、N−メチル−N'−ニトロ−N−ニトロソグアニジン、ブロモウラシルのようなヌクレオチド塩基類似体、及びアクリジン類が挙げられるが、他の任意の効果的な変異原もまた使用され得る。
或いは、細菌に変異を導入する他の手段には、遺伝子組換え法を利用する方法がある。
【００２４】
本発明に用いられる細菌は、振とう培養等の通常の培養法により、Comamonas属細菌について通常使用されるような条件下で培養されうる。培養に用いる培地としては炭素源としてグルコース、シュークロース、デンプン、デキストリンなどの糖類を、窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩等の無機窒素源、または、酵母エキス、コーン・スティープ・リーカー、肉エキス、小麦胚芽、ポリペプトン、サトウキビ絞り粕（バカス）、ビールカス、大豆粉、米糠、魚粉等の有機窒素源を、無機塩としてリン酸一カリ、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄等の、リン、カリウム、マンガン、マグネシウム、鉄等を含む塩類を、それぞれ含有する合成または天然の培地が挙げられる。培養温度は、通常、20〜37℃、好ましくは27〜32℃で、12〜48時間、好気的条件下で行うことができる。
【００２５】
本発明の方法には、細菌の培養液をそのまま使用することができるが、細菌の培養液を膜分離、遠心分離、濾過分離等の方法により分離した、細菌の高濃度物を用いることもできる。
【００２６】
本発明の方法ではまた、細菌の培養液を乾燥させたものを使用することができる。また、細菌の培養液を活性炭、珪藻土、タルク、ゼオライト、ピートモス、パーライト、ベントナイト、モンモリナイト、バーミュキュライト等の多孔吸着体に吸着させ乾燥させたものを使用することができる。多孔吸着体は、１種類でもよいし、複数の担体を組合せて用いてもよい。乾燥方法は通常の方法でよく、例えば凍結乾燥、減圧乾燥でよい。これらの乾燥物は乾燥後さらにボールミル等の粉砕手段で粉砕されてもよい。
【００２７】
細菌は、上記の培養液、高濃度物又は乾燥物としてそれ自体単独で本発明の用途に用いることができるが、更なる他の任意成分と組み合わせて通常の微生物製剤と同様の形態（例えば粉剤、水和剤、粒剤、乳剤、液剤、懸濁液、フロアブル剤、塗布剤等の形態）に製剤化して用いることもできる。組み合わせて使用することができる任意成分としては例えば固体担体、補助剤のような植物への適用が許容される材料が挙げられる。
【００２８】
２．農業上有用な植物
本発明の方法で使用可能な対象植物は、以下のものに限定されないが、例えばアブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される農業上有用な植物が挙げられる。
【００２９】
本明細書で使用される「農業上有用な植物」は、例えば野菜類、穀類植物などの作物、果樹などの農業において生産対象となる植物を指す。
【００３０】
アブラナ科植物としては、例えばアブラナ、カブ、チンゲンサイ、ノザワナ、カラシナ、タカナ、コブタカナ、水菜、コールラビー、ルッコラ、クレソン、タアサイ、カリフラワー、キャベツ、ケール、ハクサイ、コマツナ、ダイコン、ハツカダイコン、ブロッコリー、メキャベツ、ワサビ、セイヨウワサビ、シロイヌナズナが挙げられる。
【００３１】
イネ科植物としては、例えばイネ、コムギ、オオムギ、ライムギ、ライコムギ、ハトムギ、ソルガム、エンバク、トウモロコシ、サトウキビ、アワ、ヒエなどの穀類が挙げられる。イネ科植物としてはさらに、例えばシバ、バッファローグラス、バミューダグラス、ウィーピンググラス、センチピードグラス、カーペットグラス、ダリスグラス、キクユグラス、セントオーガスチングラスなどの飼料または牧草が挙げられる。
【００３２】
マメ科植物としては、例えばダイズ、アズキ、ラッカセイ、インゲンマメ、エンドウマメ、ハナマメ、ソラマメ、ササゲ、ヒヨコマメ、リョクトウ、レンズマメ、ライマメ、バンバラマメが挙げられる。
【００３３】
キク科植物としては、例えばレタス、サニーレタス、シュンギク、キクなどが挙げられる。
【００３４】
ユリ科植物としては、例えばタマネギ、ネギ、ラッキョウ、ニンニク、ニラ、アサツキ、ユリ、アスパラガス、エシャロット、ワケギなどが挙げられる。
【００３５】
ナス科植物としては、例えばナス・トマト・ピーマン・シシトウ・トウガラシ、ジャガイモ、クコ、パプリカ、ハラペーニョ、ハバネロなどが挙げられる。
【００３６】
セリ科植物としては、ニンジン、ミツバ、パセリ、セロリ、セリ、アシタバ、スープセロリ、チャーベル、フェンネルなどが挙げられる。
【００３７】
３．病害
本発明の細菌が、上記の農業上有用な植物の体内に共生することによって病害抵抗性を付与する、対象の植物病として、以下のものに限定されないが、例えば以下のものが挙げられる。
【００３８】
アブラナ科の植物病は、例えば軟腐病、黒はん細菌病、苗立枯れ病、べと病、い黄病、モザイク病、根こぶ病、白はん病、しり腐れ病などが挙げられる。
【００３９】
イネ科植物の植物病は、例えばいもち病、白葉枯病、苗立枯病、紋枯病、ばか苗病などが挙げられる。
マメ科植物の植物病は、例えば灰色かび病、さび病、うどんこ病、などが挙げられる。
【００４０】
キク科植物の植物病は、例えばモザイク病、軟腐病、腐敗病、うどんこ病、べと病などが挙げられる。
【００４１】
ユリ科植物の植物病は、例えば軟腐病、べと病、い縮病、乾腐病、さび病、いちょう病、茎枯れ病、はん点病などが挙げられる。
【００４２】
ナス科植物の植物病は、例えばモザイク病、黄化えそ病（TSWV）、青枯れ病、かいよう病、褐色根腐れ病、苗立枯れ病、うどんこ病、半身いちょう病、葉かび病などが挙げられる。
【００４３】
セリ科植物の植物病は、例えばモザイク病、軟腐病、黒葉枯れ病、はん点病、うどんこ病、菌核病などが挙げられる。
【００４４】
４．病害抵抗性の付与、収量増加、及び生育促進のための微生物学的方法
本発明の方法は、Comamonas属に属し、農業上有用な上記の植物の体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加する能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む。
【００４５】
植物に病害抵抗性を付与することは、植物が病害による影響、例えば病原菌病、ウイルス病などによる植物被害、を抑制又は防止することに導く。
【００４６】
植物の収量を増加することは、例えば、野菜であれば、例えば葉、根、根茎、種子などの食用部分を、穀類であれば、種子を、果樹であれば、実を、それぞれ増収穫させることを意味する。
【００４７】
植物の生育（生長）を促進することは、本発明の細菌を接種しない対照と比較して植物の成長を早めることを意味する。
【００４８】
植物への施用方法としては、種子コート、幼植物への潅注、塗布、または噴霧処理する方法などが挙げられる。特に、種子または植物体に人為的に傷を付け菌液の噴霧処理、塗布する方法が好ましい。その他の施用条件としては播種時、育苗期など圃場定植前に施用することが望ましい。また、さらに圃場栽培中に植物、場合により植物根部周囲の土壌、に噴霧処理することで効果の高発現が期待できる。
【００４９】
1つの例として、本発明の細菌を、植物に人為的に感染させるには、圃場に植えつける前の幼苗（例えば１〜4枚の本葉が出た時期の苗）に菌液を散布することができる。散布後約3〜15日目に、苗を圃場に定植し得る。植物体内に侵入した菌がやがて、植物に共生するようになると考えられる。
【００５０】
菌液の濃度は、１×105〜1×109個/ml、又はそれ以上であるが、これらの濃度範囲に限定されない。菌を懸濁する媒体は、水又は培地であることが好ましい。通常、高濃度菌液を水又は培地で所定濃度に希釈して使用することができる。
【００５１】
本発明の方法は、具体的には、次の第1から第3の態様からなる。
本発明の方法は、第1の態様により、コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物に病害抵抗性を付与する方法を提供する。
【００５２】
本発明の方法は、第2の態様により、コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物の収量を増加させる能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物の収量を増加させる方法を提供する。
【００５３】
本発明の方法は、第3の態様により、コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物の生育を促進する能力を有する細菌を、該植物に人為的に感染させる工程を含む、農業上有用な植物の生育を促進する方法を提供する。
【００５４】
５．微生物製剤
本発明はさらに、コマモナス（Comamonas）属に属し、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する細菌を有効成分として含有する、農業上有用な植物用の微生物製剤を提供する。
【００５５】
農業上有用な植物の例は、上で具体的に例示した、アブラナ科植物、キク科植物、マメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、ユリ科植物及びセリ科植物から選択される植物である。
【００５６】
好ましい細菌は、Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）若しくはComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、又はその変異株である。
【００５７】
微生物製剤は、細菌の高濃度物、細菌の培養液を乾燥させたものなどを使用することができる。また、細菌の培養液を活性炭、珪藻土、タルク、ゼオライト、ピートモス、パーライト、ベントナイト、モンモリナイト、バーミュキュライト等の多孔吸着体に吸着させ乾燥させたものを使用することができる。多孔吸着体は、１種類でもよいし、複数の担体を組合せて用いてもよい。乾燥方法は通常の方法でよく、例えば凍結乾燥、減圧乾燥でよい。これらの乾燥物は乾燥後さらにボールミル等の粉砕手段で粉砕されてもよい。
【００５８】
細菌は、上記の培養液、高濃度物又は乾燥物としてそれ自体単独で本発明の用途に用いることができるが、更なる他の任意成分と組み合わせて通常の微生物製剤と同様の形態（例えば粉剤、水和剤、粒剤、乳剤、液剤、懸濁液、フロアブル剤、塗布剤等の形態）に製剤化して用いることもできる。組み合わせて使用することができる任意成分としては例えば固体担体、補助剤のような植物への適用が許容される材料が挙げられる。
【００５９】
本発明はさらに、Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）又はComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）、或いは、農業上有用な植物体内に共生して該植物に病害抵抗性を付与する能力、該植物の収量を増加させる能力、及び/又は、該植物の生育を促進する能力を有する、その変異株を提供する。
【００６０】
本発明の細菌は、振とう培養等の通常の培養法により、Comamonas属細菌について通常使用されるような、上記の条件下で培養されうる。
【００６１】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の技術的範囲は、それらの実施例によって制限されないものとする。
【実施例】
【００６２】
［実施例１］
Comamonas sp. MYK102（受託番号NITE P-01769）株及びComamonas sp. MYK103（受託番号NITE P-01770）株の単離
野生のキクを切断後に、70%エタノールに30秒、2.5%次亜塩素酸ナトリウム溶液に5分浸すことにより表面殺菌を行った。その後植物体を、乳鉢に移し滅菌した生理食塩水1mlと海砂を適量加えながら磨砕し、全量、1.5mlチューブに移した。その上澄み液を100μl、Nutrient Agar培地に塗布し、30℃で数日間培養した。この操作によって培地上でシングルコロニーを単離した。単離された菌株を圃場において生育させ、病害抵抗性選抜試験を行い標題の菌株を選抜し単離した。
【００６３】
［実施例２］
菌液の調製
実施例１で単離したNITE P-01769およびNITE P-01770株をNB培地にて24時間振とう培養した。菌密度1.0×109 cell / mlの培養液を接種菌液として、以下の実験に用いた。
【００６４】
［実施例３］
温室栽培レタスにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土とバーミキュライトを等量ずつ混合した培土をセルトレーに充填し、1セルあたり3粒ずつレタス種子(品種：グリーンウェーブ)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００６５】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ7%増加、5%増加していた（表3）。
【００６６】
【表３】
2015143215.tif 000004
【００６７】
［実施例４］
圃場栽培レタスにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
2013年8月7日：本葉1枚が完全展開したレタス苗（品種：レタイーナ）にNITE P-01769およびNITE P-01770の菌懸濁液（菌密度1×108個/ml）を育苗トレイ（288穴）１枚あたり500 ml潅注処理した。その後、慣行栽培と同様に露地圃場（図１）へ定植し栽培管理した。
【００６８】
2013年9月23日：定植からおよそ40日後に収穫し、新鮮重量を計量した。１処理区あたり植物体300個体以上を計量し、同様の試験を3反復実施した。
【００６９】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の新鮮重量が増加していた。無処理区と比較し、新鮮重量はそれぞれ5%増加、4%増加していた（表4）。
【００７０】
【表４】
2015143215.tif 000005
【００７１】
［実施例５］
温室栽培コマツナにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり2粒ずつ種子(品種：夏楽天)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ播種した。本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を2反復実施した。
【００７２】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ5%増加、10%増加していた（表5）。
【００７３】
【表５】
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【００７４】
［実施例６］
温室栽培シュンギクにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり3粒ずつ種子(品種：中葉しゅんぎく)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を2反復実施した。
【００７５】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ4%増加、6%増加していた（表6）。
【００７６】
【表６】
2015143215.tif 000007
【００７７】
［実施例７］
温室栽培ダイズにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり2粒ずつ種子(品種：早生枝豆)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を3反復実施した。
【００７８】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ9%増加、11%増加していた（表7）。
【００７９】
【表７】
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【００８０】
［実施例８］
温室栽培イネにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり2粒ずつ種子(品種：日本晴)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体を乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を2反復実施した。
【００８１】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ3%増加、3%増加していた（表8）。
【００８２】
【表８】
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【００８３】
［実施例９］
温室栽培ナスにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり2粒ずつ種子(品種：中長なす)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体から双葉を除去した後に乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を2反復実施した。
【００８４】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ26%増加、5%増加していた（表9）。
【００８５】
【表９】
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【００８６】
［実施例１０］
温室栽培ネギにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり2粒ずつ種子(品種：おてがる小ねぎ)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体を乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を2反復実施した。
【００８７】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ23%増加、13%増加していた（表10）。
【００８８】
【表１０】
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【００８９】
［実施例１１］
温室栽培ニンジンにおけるエンドファイト接種効果
１）方法
培養土をセルトレーに充填し、1セルあたり2粒ずつ種子(品種：五寸人参)を播種した。ガラス温室内で栽培し、本葉が1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした後、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。本葉が3枚以上展開するまで栽培した後、地際部から植物体を切除し収穫した。植物体を乾燥させ、乾物重量を計量した。１処理区あたり植物体10個体とし、同様の試験を2反復実施した。
【００９０】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において植物の乾物重量が増加していた。無処理区と比較し、乾物重量はそれぞれ7%増加、7%増加していた（表11）。
【００９１】
【表１１】
2015143215.tif 000012
【００９２】
［実施例１２］
温室栽培コマツナにおける根こぶ病に対するエンドファイト接種効果
１）方法
根こぶ病多発圃場から採取した汚染土壌と培養土を等量混合しセルトレーに充填し、1セルあたり3粒ずつ種子(品種：夏楽天)を播種し、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。ガラス温室内で栽培し、本葉1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした。本葉が5枚以上展開するまで栽培した後、根こぶ病の発生の有無を観察した。
【００９３】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において根こぶ病の発病株率が減少していた。無処理区と比較し、発病株率はそれぞれ24%減少、14%減少していた（表12）。
【００９４】
【表１２】
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【００９５】
［実施例１３］
温室栽培シュンギクにおける根こぶセンチュウに対するエンドファイト接種効果
１）方法
根こぶセンチュウ多発圃場から採取した汚染土壌と培養土を等量混合しセルトレーに充填し1セルあたり3粒ずつ種子(品種：中葉しゅんぎく)を播種し、実施例２で調製した菌液を1セルあたり100 μlずつ接種した。ガラス温室内で栽培し、本葉1枚展開後に1セルあたり植物体1本に間引きした。本葉が4枚以上展開するまで栽培した後、根こぶセンチュウによる病害発生の有無を観察した。
【００９６】
２）結果
NITE P-01769処理区およびNITE P-01770処理区において根こぶセンチュウによる病害の発病株率が減少していた。無処理区と比較し、発病株率はそれぞれ86%減少、57%減少していた（表13）。
【００９７】
【表１３】
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【産業上の利用可能性】
【００９８】
本発明は、Comamonas属細菌をキク科植物等の農業上有用な植物に人為的に感染させることにより、これらの植物の生育を促進し、収量を増加させ、及び/又は病害抵抗性を付与するため、農業上有用である。
【図１】
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【配列表】
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