(57)【要約】【課題】センチネルリンパ節の正確な位置を特定し、高感度且つ高分解能でセンチネルリンパ節を検査して、癌細胞・癌組織の転移が有るか否かを判断するための情報を提供可能な方法と装置を提供する。【解決手段】少なくとも２つの腹腔鏡を用い、観察範囲に照明光を照射して得た可視光画像と、その観察範囲に第１の励起光を照射して得た第１の蛍光画像とを重畳表示して、センチネルリンパ節の位置を確認するステップと、位置を確認したセンチネルリンパ節の中から選択したセンチネルリンパ節に対し、そのセンチネルリンパ節のサイズに合わせた第２の励起光を照射するステップと、その第２の励起光を照射して得た第２の蛍光を受光して第２の蛍光画像を表示するステップ、及び、第２の励起光を照射して得た第２の蛍光から蛍光スペクトルを測定して表示するステップの一方又は両方の表示ステップとを有する方法と装置によって上記課題を解決する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの腹腔鏡を用い、観察範囲内にあるセンチネルリンパ節への癌細胞・癌組織の転移の判断のための情報を提供する検査方法であって、
前記観察範囲に照明光を照射して得た可視光画像と、前記観察範囲に第１の励起光を照射して得た第１の蛍光画像とを重畳表示して、前記センチネルリンパ節の位置を確認する位置確認ステップと、
位置を確認した前記センチネルリンパ節の中から選択したセンチネルリンパ節に対し、該センチネルリンパ節のサイズに合わせた第２の励起光を照射する第２励起光照射ステップと、
前記第２の励起光を照射して得た第２の蛍光を受光して第２の蛍光画像を表示する第２蛍光画像表示ステップ、及び、前記第２の励起光を照射して得た第２の蛍光から蛍光スペクトルを測定して表示する蛍光スペクトル表示ステップの一方又は両方の表示ステップと、を有することを特徴とする、腹腔鏡を用いた検査方法。
【請求項２】
前記第２の蛍光画像と前記第１の蛍光画像とを重畳表示する、又は、前記第２の蛍光画像と前記可視光画像とを重畳表示する、請求項１に記載の検査方法。
【請求項３】
少なくとも２つの腹腔鏡を用い、観察範囲内にあるセンチネルリンパ節への癌細胞・癌組織の転移の判断のための情報を提供する検査装置であって、前記腹腔鏡のいずれかが下記（Ａ）〜（Ｅ）を備えることを特徴とする、腹腔鏡を用いた検査装置。  
（Ａ）前記観察範囲に照明光を照射するための照明光照射用手段、
（Ｂ）前記観察範囲に第１の励起光を照射するための第１の励起光照射用手段、
（Ｃ）前記センチネルリンパ節に第２の励起光を照射するための第２の励起光照射用手段、
（Ｄ）前記照明光を照射して得た可視光と、前記第１の励起光を照射して得た、前記センチネルリンパ節検出用蛍光物質から発する第１の蛍光と、前記第２の励起光を照射して得た、前記癌細胞・癌組織検出用蛍光物質から発する第２の蛍光と、を受光して画像化するための画像撮像用手段、
（Ｅ）前記第１の励起光を照射して得た、前記観察範囲から発する第１の蛍光及び前記第２の励起光を照射して得た前記癌細胞・癌組織検出用蛍光物質から発する第２の蛍光を受光して蛍光測定するための蛍光測定用手段。
【請求項４】
前記腹腔鏡のうち第１の腹腔鏡が、前記画像撮像用手段を備え、
前記腹腔鏡のうち第２の腹腔鏡が、前記照明光照射用手段と、前記第１の励起光照射用手段と、前記第２の励起光照射用手段と、前記第１及び第２の蛍光測定用手段とを備える、請求項３に記載の検査装置。
【請求項５】
前記腹腔鏡のうち第１の腹腔鏡が、前記照明光照射用手段と、前記画像撮像用手段とを備え、
前記腹腔鏡のうち第２の腹腔鏡が、前記第１の励起光照射用手段と、前記第２の励起光照射用手段と、前記第１及び第２の蛍光測定用手段とを備える、請求項３に記載の検査装置。
【請求項６】
前記照明光を照射するための照明光源と、
前記第１の励起光を照射するための第１の励起光源と、
前記第２の励起光を照射するための第２の励起光源と、
前記可視光を画像化するための可視光撮像装置と、
前記第１の蛍光又は第２の蛍光を画像化するための蛍光撮像装置と、
前記可視光撮像装置及び蛍光撮像装置で得た画像情報を処理する画像処理装置と、
前記第１及び第２の蛍光から蛍光スペクトルを測定するための蛍光スペクトル測定装置と、
前記各光源及び装置を制御するための制御装置と、
前記装置からの出力結果を表示する表示装置と、
を少なくとも備える、請求項３〜５のいずれか１項に記載の検査装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腹腔鏡を用いた検査方法及び検査装置に関し、さらに詳しくは、センチネルリンパ節への癌細胞・癌組織の転移判断のための情報を提供する検査方法及び検査装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に固形癌の手術では、病変部を切除すると共に、その病変部の周囲で癌の転移が疑われる複数のリンパ節を切除することが多い（「リンパ節廓清」と呼ばれる。）。リンパ節廓清は、癌の根治のためには有効である。しかしながら、例えば早期胃癌に限った場合では、リンパ節への転移比率は３％〜１０％程度であり、転移していない９０％以上の患者にとっては無用なリンパ節廓清が行われたことになり、患者の負担が大きいという難点がある。
【０００３】
癌の原発巣からリンパ管に入った癌細胞が最初に到達するリンパ節をセンチネルリンパ節（Ｓｅｎｔｉｎｅｌ−Ｌｙｍｐｈ−Ｎｏｄｅ）といい、癌がリンパ節に転移している場合には、必ずセンチネルリンパ節に転移があると考えられている（これをセンチネルリンパ節理論という。）。このセンチネルリンパ節理論によれば、早期癌の手術では、センチネルリンパ節を見つけ、生検（患部の一部を切り取って顕微鏡等で調べる検査）し、迅速に病理検査を行うことにより、リンパ節への癌の転移の有無を判定することができる。センチネルリンパ節に癌が転移していない場合は、腹腔鏡手術による病変部だけの切除で済むか、又は、リンパ節廓清そのものが不要となる。一方、センチネルリンパ節に癌が転移している場合は、転移状況に応じたリンパ節廓清が必要となる。例えばリンパ節に転移している胃癌の場合には、リンパ節廓清を伴う胃１／２以上の切除手術が必要となる。
【０００４】
こうしたリンパ節は臓器の外側にある。そのため、癌の転移があるかどうかは、内視鏡で発見することができず、臓器の外側から観察する必要がある。
【０００５】
近年、蛍光色素を用いて病変組織を検出する蛍光色素法が提案されている。例えば特許文献１には、励起光によって蛍光を発する光感受性物質（例えばシアニン系色素）を蛍光診断薬として予め生体に投与し、その光感受性物質の励起波長帯域にある励起光を照射し、病変部に集積した光感受性物質から蛍光を生じさせ、生じた蛍光を受光して、病変部の局在範囲及び浸潤範囲を検出する方法が提案されている。そして、この方法は、センチネルリンパ節にも適用可能であると提案されている。
【０００６】
特許文献２には、そうしたセンチネルリンパ節を生体組織表面から容易に且つ高精度に検出するための検出システムが提案されている。この検出システムは、近赤外蛍光色素であるインドシアニングリーンを予め腫瘍周囲に局部的に注入し、所定時間後に開腹手術を行い、観察部に励起光を照射してインドシアニングリーンを発光させるシステムである。具体的には、同文献の図２に示されているように、観察部に励起光照射ユニットから近赤外励起光を照射する。センチネルリンパ節には、インドシアニングリーンが蓄積されているため、そのインドシアニングリーンが近赤外蛍光を発し、その近赤外蛍光は、イメージインテンシファイアで増幅され、蛍光板で可視化像に変換される。観察者は、ハーフミラーを透過した通常像と、ミラー及びハーフミラーを反射した可視化像とを同時に観察する。励起光及び蛍光は、センチネルリンパ節を覆っている脂肪等の生体組織により吸収されにくい近赤外波長の光であるため、生体組織の表面からセンチネルリンパ節を検出することができる。
【０００７】
開腹手術は患者の負担が大きいため、最近では、例えば特許文献３に示すような腹腔鏡を利用した非開腹手術が行われるようになってきた。この特許文献３に記載の腹腔鏡は、患者に空けられた小さな穴から内部に腹腔鏡を挿入し、患部の画像を取得して診断するものである。同文献で提案されている腹腔鏡は、挿入される所定長さの先端部を有し、この先端部には患部の画像を取得し、取得した患部の画像を伝達する機構が設けられている。画像を伝達する機構は、剛性のある部材で形成された長いシースチューブと、このシースチューブ内に配置され、画像を伝達する手段の外表面を横切って流体を流し、そこから画像の邪魔になる物を除去するための手段とを備えている。
【０００８】
特許文献４には、センチネルリンパ節の位置を容易に迅速に特定できる腹腔鏡診断装置及びセンチネルリンパ節の検査方法が提案されている。この検査方法によれば、撮像用腹腔鏡から照射される白色照明光の照射位置及び照射範囲と、励起用腹腔鏡から照射される励起光の照射位置及び照射範囲とを変えることができ、センチネルリンパ節の探索範囲を任意に変更できる。撮像用腹腔鏡の観察範囲より広い範囲で励起用腹腔鏡による探索が行えるので、センチネルリンパ節の位置探索を迅速に行うことができる。また、撮像用腹腔鏡によって照射した白色照明光の観察対象に向けて励起用腹腔鏡から励起光を照射するので、白色照明光の反射光から得られるカラー画像と蛍光物質から発した蛍光から得られる蛍光画像とを同じ撮像用腹腔鏡で重畳的に取得してモニタに表示することができる。また、その画像取得と蛍光分光測定部で取得した蛍光スペクトルとを同時に取得し、モニタに表示することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開ＷＯ９８／４８８４５
【特許文献２】特開２００１−２９９６７６号公報
【特許文献３】特開平６−２２９０２号公報
【特許文献４】特開２０１３−１５３９５１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
現状の手術では、センチネルリンパ節への癌の転移は、切開して採取したセンチネルリンパ節を生検（病理検査）して判定するために、すぐに判断ができない。そのため、内臓の手術においては、生検の結果を確認する前に、転移している場合と同じ手術が行われているのが現状である。例えば胃癌の場合は、６０％程度が早期癌で、センチネルリンパ節には転移していない場合があり、このような患者に対しても手術が行われるため、患者に大きな負担をさせていることになる。
【００１１】
また、特許文献２で提案されている技術は、励起光を照射する腹腔鏡と、白色照明光を照射する腹腔鏡とが同一の腹腔鏡である。そのため、照射される励起光は、観察部の広い範囲に照射されることから、癌細胞に結合した蛍光物質が微量である場合には、その蛍光物質は微弱な蛍光しか発光せず、癌が転移しているセンチネルリンパ節の特定が著しく困難となる。また、従来は、励起光と白色照明光とを切り替える装置を用いて交互に照射し、蛍光測定時に白色照明光の影響を受けない工夫がされていたが、この技術のように、同一の腹腔鏡を用いた場合、励起光の照射位置と白色照明光の照射位置とが一致するというメリットがある。しかしながら、励起光と白色照明光とで照射位置や照射範囲を変えることができないので、センチネルリンパ節を探索する場合、腹腔鏡の照射範囲に探索範囲が限定されてしまい、センチネルリンパ節の位置を正確に且つ迅速に探索するには限界があった。そのため、センチネルリンパ節を探索して癌の転移先を検査することには限界があった。
【００１２】
また、特許文献２で提案されている技術では、連続的に蛍光画像を計測できない、臓器が動いている、腹腔鏡の手ぶれ等の原因によって、可視光画像と蛍光画像とが正確に同じ位置を観察できず、センチネルリンパ節の検出精度が低下する等の問題がある。このため、可視光画像と蛍光画像との同時測定への要請がある。さらに、特許文献２で提案されている技術では、蛍光物質（検査試薬）の注入時からの蛍光強度の時間変化を詳細に計測できず、センチネルリンパ節の最適な検出時間の把握が難しく、センチネルリンパ節の検出効率と検出精度が適正化できておらず、いずれも改善の必要がある。また、励起光と白色照明光とが同時に照射されるので、白色照明光による蛍光波長帯でのノイズが発生し、蛍光の感度が悪化するという問題があった。また、センチネルリンパ節の検出は、リンパの形状とモニタ上での相対輝度とから判定していたが、相対輝度は、蛍光物質（検査試薬）の投薬や注入からの時間に依存するので、適切な時間の画像を選定して判断する必要があり、センチネルリンパ節の位置により測定誤差が大きくなるという懸念もあった。
【００１３】
また、センチネルリンパ節の位置が分かったとしても、センチネルリンパ節に癌が転移しているか否かは、センチネルリンパ節を摘出し、病理検査によって行う必要がある。そのため、病理検査の結果を待つ時間がかかり、患者に対する負担が大きかった。また、迅速な病理検査ができない場合には、従来のようなリンパ節廓清の大手術が行われていた。こうしたことから、腹腔鏡によるその場でのセンチネルリンパ節への転移の検査が望まれている。
【００１４】
また、特許文献３で提案されている技術は、腹腔鏡で撮像する際に、腹腔鏡が汚れて画像を撮像することができないことを防止するために、腹腔鏡を洗浄することができるようにしたものであり、癌による病変部の特定や癌の転移を検査するための技術については提案されていない。
【００１５】
また、特許文献４で提案されている技術は、腹腔鏡によりセンチネルリンパ節の位置を容易に迅速に特定できる診断装置と検査方法に関するものであるが、癌の転移を検査するための技術については提案されていない。
【００１６】
本発明は、上記の問題点を解決するためになされたものであり、その目的は、センチネルリンパ節の正確な位置を特定し、高感度且つ高分解能でセンチネルリンパ節を検査して、癌細胞・癌組織の転移が有るか否かを判断するための情報を提供可能な検査方法及び検査装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
（１）上記課題を解決するための本発明に係る検査方法は、少なくとも２つの腹腔鏡を用い、観察範囲内にあるセンチネルリンパ節への癌細胞・癌組織の転移の判断のための情報を提供する検査方法であって、
前記観察範囲に照明光を照射して得た可視光画像と、前記観察範囲に第１の励起光を照射して得た第１の蛍光画像とを重畳表示して、前記センチネルリンパ節の位置を確認する位置確認ステップと、
位置を確認した前記センチネルリンパ節の中から選択したセンチネルリンパ節に対し、該センチネルリンパ節のサイズに合わせた第２の励起光を照射する第２励起光照射ステップと、
前記第２の励起光を照射して得た第２の蛍光を受光して第２の蛍光画像を表示する第２蛍光画像表示ステップ、及び、前記第２の励起光を照射して得た第２の蛍光から蛍光スペクトルを測定して表示する蛍光スペクトル表示ステップの一方又は両方の表示ステップと、を有することを特徴とする。
【００１８】
本発明に係る検査方法において、前記第２の蛍光画像と前記第１の蛍光画像とを重畳表示する、又は、前記第２の蛍光画像と前記可視光画像とを重畳表示する、ように構成することができる。
【００１９】
（２）上記課題を解決するための本発明に係る検査装置は、少なくとも２つの腹腔鏡を用い、観察範囲内にあるセンチネルリンパ節への癌細胞・癌組織の転移の判断のための情報を提供する検査装置であって、前記腹腔鏡のいずれかが下記（Ａ）〜（Ｅ）を備えることを特徴とする。
【００２０】
（Ａ）前記観察範囲に照明光を照射するための照明光照射用手段、
（Ｂ）前記観察範囲に第１の励起光を照射するための第１の励起光照射用手段、
（Ｃ）前記センチネルリンパ節に第２の励起光を照射するための第２の励起光照射用手段、
（Ｄ）前記照明光を照射して得た可視光と、前記第１の励起光を照射して得た、前記センチネルリンパ節検出用蛍光物質から発する第１の蛍光と、前記第２の励起光を照射して得た、前記癌細胞・癌組織検出用蛍光物質から発する第２の蛍光と、を受光して画像化するための画像撮像用手段、
（Ｅ）前記第１の励起光を照射して得た、前記観察範囲から発する第１の蛍光及び前記第２の励起光を照射して得た前記癌細胞・癌組織検出用蛍光物質から発する第２の蛍光を受光して蛍光測定するための蛍光測定用手段。
【００２１】
本発明に係る検査装置において、前記腹腔鏡のうち第１の腹腔鏡が、前記画像撮像用手段を備え、前記腹腔鏡のうち第２の腹腔鏡が、前記照明光照射用手段と、前記第１の励起光照射用手段と、前記第２の励起光照射用手段と、前記第１及び第２の蛍光測定用手段とを備えるように構成することができる。
【００２２】
本発明に係る検査装置において、前記腹腔鏡のうち第１の腹腔鏡が、前記照明光照射用手段と、前記画像撮像用手段とを備え、前記腹腔鏡のうち第２の腹腔鏡が、前記第１の励起光照射用手段と、前記第２の励起光照射用手段と、前記第１及び第２の蛍光測定用手段とを備えるように構成することができる。
【００２３】
本発明に係る検査装置において、
前記照明光を照射するための照明光源と、
前記第１の励起光を照射するための第１の励起光源と、
前記第２の励起光を照射するための第２の励起光源と、
前記可視光を画像化するための可視光撮像装置と、
前記第１の蛍光又は第２の蛍光を画像化するための蛍光撮像装置と、
前記可視光撮像装置及び蛍光撮像装置で得た画像情報を処理する画像処理装置と、
前記第１及び第２の蛍光から蛍光スペクトルを測定するための蛍光スペクトル測定装置と、
前記各光源及び装置を制御するための制御装置と、
前記装置からの出力結果を表示する表示装置と、
を少なくとも備えるように構成することができる。
【発明の効果】
【００２４】
本発明に係る検査方法及び検査装置によれば、センチネルリンパ節の正確な位置を特定し、高感度且つ高分解能でセンチネルリンパ節を検査して、癌細胞・癌組織の転移が有るか否かを判断するための情報を提供することができる。
【００２５】
詳しくは、この検査方法及び検査装置によれば、リンパ管・リンパ節、癌細胞・癌組織から発生する蛍光画像によりその位置を捉え、また励起光照射により発生した蛍光を受光しそのスペクトル情報から位置情報が正しいか確認することができるので、癌転移の有無についてその場で情報を得ることができる。得られた検査結果と他の検査結果及び医師の診断により、癌の転移の判断を短時間で行うことができ、適切な治療方針の決定に役立つことができる。手術が必要な場合には、手術時間を短縮でき、また無用なリンパ節廓清を無くすことができるので、患者への負担を軽減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本発明に係る検査装置の一例（ケース１）を示す構成図、及び位置観察ステップを示す説明図である。
【図２】図１の検査装置を用いて第２励起光照射ステップを示す説明図である。
【図３】本発明に係る検査装置の他の一例（ケース２）を示す構成図、及び位置観察ステップを示す説明図である。
【図４】図３の検査装置を用いて第２励起光照射ステップを示す説明図である。
【図５】本発明に係る検査装置の他の一例（３本の腹腔鏡）を示す構成図である。
【図６】ケース１の検査装置で用いた励起光照射用の腹腔鏡の一例を示す断面図である。
【図７】ケース１の検査装置で用いた撮像用の腹腔鏡の一例を示す断面図である。
【図８】ケース１の検査装置で用いた励起光照射用の腹腔鏡の他の一例を示す断面図である。
【図９】ケース２の検査装置で用いた励起光照射用の腹腔鏡の一例を示す断面図である。
【図１０】ケース２の検査装置で用いた撮像用の腹腔鏡の一例を示す断面図である。
【図１１】リレーレンズ系を使用した撮像用の腹腔鏡、撮像装置、及び画像処理部の一例を示す構成図である。
【図１２】撮像用の腹腔鏡に接続される撮像装置及び画像処理部の一例を示す構成図である。
【図１３】モニタの表示画像の一例を示す説明図である。
【図１４】撮像装置の構成例である。
【図１５】蛍光測定部の一例を示す説明図である
【図１６】蛍光測定部の他の一例を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明の実施形態について図面を参照しながら説明する。なお、本発明の技術的範囲は、以下の記載や図面にのみ限定されるものではない。
【００２８】
［検査方法］
本発明に係る検査方法は、図１〜図４に示すように、少なくとも２つの腹腔鏡１０，２０を用い、観察範囲Ｐ内にあるセンチネルリンパ節Ｓへの癌細胞・癌組織の転移の判断のための情報を提供する検査方法である。そして、その主要な構成は、センチネルリンパ節Ｓの位置を確認するステップと、第２の励起光Ｃを照射するステップと、第２蛍光画像を表示するステップ及び／又は蛍光スペクトルを表示する表示ステップと、を有する。
【００２９】
詳しくは、位置確認ステップは、図１及び図３に示すように、観察範囲Ｐに照明光Ａを照射して得た可視光画像と、観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射して得た第１の蛍光画像とを重畳表示して、センチネルリンパ節の位置を確認するステップである。第２励起光照射ステップは、図２及び図４に示すように、位置を確認した前記センチネルリンパ節の中から選択したセンチネルリンパ節Ｓに対し、該センチネルリンパ節Ｓのサイズに合わせた第２の励起光Ｃを照射するステップである。表示ステップは、図２及び図４に示すように、その第２の励起光Ｃを照射して得た第２の蛍光ｃを受光して第２の蛍光画像を表示するステップ（第２蛍光画像表示ステップという。）、及び、第２の励起光Ｃを照射して得た第２の蛍光ｃから蛍光スペクトルを測定して表示するステップ（蛍光スペクトル表示ステップという。）、の一方又は両方の表示ステップである。
【００３０】
検査方法が上記各ステップで構成されることにより、センチネルリンパ節Ｓの正確な位置を特定し、高感度且つ高分解能でセンチネルリンパ節Ｓを検査して、癌細胞・癌組織の転移が有るか否かを判断するための情報を提供することができる。さらに詳しく説明すれば、第１の励起光Ａの照射によりリンパ管・リンパ節から発生する第１の蛍光を画像化した蛍光画像によりその位置を捉えることができ、また第２の励起光Ｃの照射によりセンチネルリンパ節Ｓから発生した第２の蛍光ｃを測定したスペクトル情報から癌細胞・癌組織の転移の有無についての情報を、その場で得ることができる。得られた検査結果、他の検査結果及び医師の診断により、癌細胞・癌組織の転移の判断を短時間で行うことができ、適切な治療方針の決定に役立つことができる。手術が必要な場合には、手術時間を短縮でき、また無用なリンパ節廓清を無くすことができるので、患者への負担を軽減することができる。
【００３１】
本発明に係る検査方法は、早期癌への対応に極めて有効である。例えば、腹腔鏡によって癌が胃の外から見える場合は、もはや早期癌ではなく、胃を大きく切除する手術が一般的に行われている。この発明では、図１３（Ａ）に示すように、他の一般的な検査手段で予め癌の病変部Ｃ’の存在とおよその位置がわかっている場合、その病変部Ｃ’の癌が近くに転移しているか否かを、病変部Ｃ’近くのセンチネルリンパ節Ｓを検査し、判断情報を提供するという検査方法である。
【００３２】
［検査装置］
本発明に係る検査装置１は、図１〜図４に示すように、少なくとも２つの腹腔鏡１０，２０を用い、観察範囲Ｐ内にあるセンチネルリンパ節Ｓへの癌細胞・癌組織の転移の判断のための情報を提供する検査装置である。そして、腹腔鏡１０，２０のいずれかが下記（Ａ）〜（Ｅ）の各手段を備えることに特徴がある。
【００３３】
（Ａ）観察範囲Ｐに照明光Ａを照射するための照明光照射用手段、
（Ｂ）観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射するための第１の励起光照射用手段、
（Ｃ）センチネルリンパ節Ｓに第２の励起光Ｃを照射するための第２の励起光照射用手段、
（Ｄ）照明光Ａを照射して得た可視光ａと、第１の励起光Ｂを照射して得た、センチネルリンパ節検出用蛍光物質から発する第１の蛍光ｂと、第２の励起光Ｃを照射して得た、癌細胞・癌組織検出用蛍光物質から発する第２の蛍光ｃと、を受光して画像化するための画像撮像用手段、
（Ｅ）第１の励起光Ｂを照射して得た、観察範囲Ｐから発する前記第１の蛍光ｂ、及び第２の励起光Ｃを照射して得た、癌細胞・癌組織検出用蛍光物質から発する前記第２の蛍光ｃを受光して蛍光測定するための蛍光測定用手段。
【００３４】
なお、この検査方法は、図１〜図４に示すような２本の腹腔鏡１０，２０で構成された検査装置１（１Ａ，１Ｂ）を主に用いているが、図５に示すような３本の腹腔鏡１０，２０，３０で構成された検査装置（１Ｃ）を用いてもよい。
【００３５】
以下では、２本の腹腔鏡１０，２０を用いた検査装置１について説明する。
【００３６】
図１及び図２に示すケース１の検査装置１Ａは、腹腔鏡１０が、照明光照射機能と、第１励起光照射機能と、第１蛍光受光機能と、第２励起光照射機能と、第２蛍光受光機能とを担い、腹腔鏡２０が、撮像機能を担っている。一方、図３及び図４に示すケース２の検査装置１Ｂは、腹腔鏡１０が、第１励起光照射機能と、第１蛍光受光機能と、第２励起光照射機能と、第２蛍光受光機能とを担い、腹腔鏡２０が、照明光照射機能と、撮像機能とを担っている。なお、図５に示す検査装置１Ｃは、腹腔鏡１０が、照明光照射機能と、第１励起光照射機能とを担い、腹腔鏡２０が、第１蛍光受光機能と、第２励起光照射機能と、第２蛍光受光機能とを担い、腹腔鏡３０が、撮像機能を担っている。
【００３７】
［検査方法／ケース１］
先ず、ケース１の検査装置１Ａを用いた場合の検査方法について説明する。検査方法は、上記のとおり、センチネルリンパ節Ｓの位置を確認するステップと、第２励起光Ｃを照射するステップと、第２蛍光画像を表示する表示ステップ及び／又は蛍光スペクトルを表示する表示ステップとを有する。ここで用いるケース１の検査装置１Ａは、腹腔鏡１０が、照明光照射機能と、第１励起光照射機能と、第１蛍光受光機能と、第２励起光照射機能と、第２蛍光受光機能とを担い、腹腔鏡２０が、撮像機能を担っている。なお、撮像機能を有する腹腔鏡２０を「撮像用腹腔鏡２０」ともいう。
【００３８】
（位置観察ステップ）
位置確認ステップでは、図１に示すように、腹腔鏡１０から観察範囲Ｐに照明光Ａを照射し、可視光ａを腹腔鏡２０で受光して得た可視光画像と、腹腔鏡１０から観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射し、第１の蛍光ｂを腹腔鏡２０で受光して得た第１の蛍光画像とを重畳表示して、センチネルリンパ節の位置を確認する。
【００３９】
先ず、検査する前に、患者には、リンパ節に浸入し、近赤外線である第１の励起光Ｂの照射により発光する第１の蛍光物質を予め投与しておくか、又はその第１の蛍光物質を検査前に直接注入する。第１の蛍光物質としては、インドシアニングリーンを挙げることができる。さらに、患者には、癌細胞・癌組織と特異結合し、第２の励起光Ｃの照射により発光する第２の蛍光物質を予め投与しておく。第２の蛍光物質としては、タラポルフィリン、レザフィリン、ヘマトポルフィリン、５-アミノレブリン酸等を挙げることができる。
【００４０】
そして、患者に２つの小さな挿入口Ｈを形成し、腹部に炭酸ガスを注入して膨らまし、これら２つの挿入口Ｈそれぞれに腹腔鏡１０，２０を挿入する。こうした準備が終了した後、撮像用腹腔鏡２０の観察範囲Ｐに、腹腔鏡１０から照明光Ａを照射する。照明光Ａは可視光領域の白色光等が使用される。そして、撮像用腹腔鏡２０で観察範囲Ｐで反射した可視光ａを受光し、その可視光ａを撮像装置９０に導光させる。撮像装置９０に導光された可視光ａは、図１２に示すように、撮像装置９０に設けられたダイクロイックミラー９２を透過してＣＣＤカメラ９３で撮像される。ＣＣＤカメラ９３で撮像された可視光の画像は、可視光画像処理部１２０に供給されて可視光画像処理され、記録装置（図示しない）に保存する。処理画像は、図１３（Ａ）に示すように、表示の指示に従って観察範囲Ｐの可視光画像がモニタ２００に表示される。モニタ２００に表示された可視光画像によって、病変部Ｃ’のある臓器の外側を確認することができる。
【００４１】
照明光Ａを照射するための照明光照射用光源としては、ハロゲンランプ等のランプや白色ＬＥＤ光源を使用できる。第１の励起光Ｂを照射するための第１励起光線源としては、ハロゲンランプや赤外線レーザー光源等の近赤外線源を使用できる。このうち、広い波長の光を発するハロゲンランプを使用する場合は、見たい可視光画像に使う波長帯以外の波長は光学フィルタを用いてカットすることが好ましい。例えば、可視光画像を撮像する場合は、第１の蛍光物質を励起する第１の励起光Ｂから照射される近赤外線や、第２の蛍光物質を励起する第２の励起光Ｃから照射される波長を、光学フィルタでカットして、可視光画像を形成するのに必要な波長の光を用いることが好ましい。近赤外線を照射する場合も同様であり、光学フィルタで不要な光をカットして、可視光画像を形成するのに必要な波長の光を用いることが好ましい。波長の選定は、レーザー光源やＬＥＤ光源を用いると容易であり、且つ不要な波長が少ないので、照射部の発熱も低減できる。
【００４２】
次いで、図１３（Ｂ）に示すように、病変部Ｃ’の周辺部に存在するセンチネルリンパ節Ｓの特定を行う。センチネルリンパ節Ｓの特定は、図１に示すように、第１励起光源６０を点灯させ、腹腔鏡１０から波長が７００ｎｍ〜８３０ｎｍ（一例として７８０ｎｍ）の第１の励起光Ｂ（近赤外線）を観察範囲Ｐに照射して行う。第１の蛍光物質として例えばインドシアニングリーンを患者に投与した場合、このインドシアニングリーンに波長が７００ｎｍ〜８３０ｎｍの近赤外線を照射すると、インドシアニングリーンは、波長が８３０ｎｍ〜８５０ｎｍの蛍光（第１の蛍光ｂ）を発光する。
【００４３】
このようにして発光した第１の蛍光ｂを腹腔鏡２０で受光して撮像装置９０に導光する。撮像装置９０に導光された第１の蛍光ｂは、図１２に示すように、ダイクロイックミラー９２によって近赤外線ＣＣＤカメラ９４に導かれ、近赤外線ＣＣＤカメラ９４は、この第１の蛍光ｂを画像化して撮像する。この際、近赤外線ＣＣＤカメラ９４のレンズの前方には、第２フィルタ９６を装着し、第１の励起光Ｂの照射により発光する波長が８３０ｎｍ以上（一例として８５０ｎｍ）の第１の蛍光ｂ又は８３０〜８５０ｎｍ（一例として８５０ｎｍ）の第１の蛍光ｂのみを近赤外線ＣＣＤカメラ９４に導いて撮像する。撮像された第１の蛍光ｂは、蛍光画像処理部１３０に供給され、図１３（Ｂ）に示すように、蛍光画像処理部１３０に処理された第１の蛍光画像がモニタ２００に表示される。なお、図１３（Ｃ）は、可視光画像と第１の蛍光画像とを重畳的に表示したものである。このモニタ２００の表示に基づいてセンチネルリンパ節Ｓの特定が医師により行われる。
【００４４】
可視光画像と第１の蛍光画像とが同じ位置を撮影していることが、得られた結果に基づいた診断にとって重要となる。そのためには、腹腔鏡２０で両方の画像が撮影できることは便利である。また、腹腔鏡１０で照明光Ａの照射と第１の励起光Ｂの照射の両方が行えることも便利である。
【００４５】
（第２励起光照射ステップ）
第２励起光照射ステップでは、図２に示すように、位置を確認したセンチネルリンパ節Ｓ１，Ｓ２，Ｓ３等の中から選択したセンチネルリンパ節Ｓに対し、そのセンチネルリンパ節Ｓのサイズに合わせた第２の励起光Ｃを腹腔鏡２０から照射する。
【００４６】
先ず、特定されたセンチネルリンパ節Ｓに、腹腔鏡１０から第２の励起光Ｃを照射する。患者には、癌細胞・癌組織に特異結合する第２の蛍光物質を予め投与しているので、センチネルリンパ節Ｓに第２の励起光Ｃを照射することで第２の蛍光物質が励起されて第２の蛍光物質に特有の第２の蛍光ｃが検出された場合においては、そのセンチネルリンパ節Ｓに癌細胞・癌組織の存在を確認することができる。こうしたステップによって、センチネルリンパ節Ｓに癌細胞・癌組織が転移しているか否かを検査することができる。
【００４７】
第２の励起光Ｃは、可視光領域の光であり、その第２の励起光Ｃの照射によって生じた第２の蛍光ｃも可視光領域の蛍光である。それらの波長は第２の蛍光物質の種類によって決まるので、その種類に応じた波長の第２の励起光Ｃを照射する。なお、第２の蛍光物質としては、タラポルフィリン、レザフィリン、ヘマトポルフィリン、５-アミノレブリン酸等を挙げることができる。こうした第２の蛍光物質から第２の蛍光ｃを生じさせる第２の励起光Ｃとしては、例えば６６４ｎｍのピーク波長を持つ光を挙げることができ、その結果として生じる第２の蛍光としては、６７２ｎｍのピーク波長を持つ光を挙げることができる。また、第２の励起光Ｃとして、例えば４０５ｎｍのピーク波長を持つ光も挙げることができ、その結果として生じる第２の蛍光ｃとしては、６３３ｎｍのピーク波長をもつ光を挙げることができる。
【００４８】
第２の励起光Ｃを当てるサイズは、照射するセンチネルリンパ節Ｓと同じサイズであることが望ましい。そのため、第２の励起光Ｂを照射する腹腔鏡１０には、センチネルリンパ節Ｓと同じ大きさ程度のサイズに絞って第２の励起光Ｃを照射させるための励起光絞り手段が設けられている。センチネルリンパ節Ｓは、外径が約１ｍｍ〜２ｍｍであるので、腹腔鏡１０では、第２の励起光Ｃのサイズを、センチネルリンパ節Ｓと同じ程度の約０．０５ｍｍ〜２．５ｍｍの範囲に絞って照射する。好ましくは０．１ｍｍ〜１ｍｍの範囲である。励起光を絞ると励起光の強度が増すことから、特定されたセンチネルリンパ節Ｓに強度の高い励起光を照射することも可能になるという利点も併せ持つ。強度が高まった第２の励起光Ｃを照射することにより、センチネルリンパ節Ｓに含有される第２の蛍光物質が微量でも、励起光の強度に比例した第２の蛍光強度が得られるので、比較的高い蛍光強度が得られる。また、センチネルリンパ節Ｓと同程度のサイズで照射した第２の励起光Ｃの焦点位置を移動させれば、癌の位置を特定することも可能であり、高感度、高分解能の観察も可能になる。
【００４９】
このように、第２の励起光Ｃをセンチネルリンパ節Ｓと同じ程度の大きさで当てる効果は、検査対象とするセンチネルリンパ節の周囲に存在する癌細胞・癌組織からのノイズとなる蛍光を低減することができ、検査の精度を高めることにつながる。
【００５０】
（表示ステップ）
表示ステップは、上記した第２の励起光照射ステップで第２の励起光Ｃを照射し、得られた第２の蛍光ｃを処理して表示するステップである。この表示ステップでは、表示方法を第２蛍光画像だけの表示とするか、蛍光スペクトルだけの表示とするか、その両方とするかを任意に選択することができる。すなわち、この表示ステップでは、第２の励起光Ｃを照射して生じた第２の蛍光ｃを腹腔鏡２０で受光し、受光した第２の蛍光ｃを画像化して第２の蛍光画像を表示する。また、蛍光スペクトル表示ステップでは、第２の励起光Ｃを照射して生じた第２の蛍光ｃを腹腔鏡２０で受光し、受光した第２の蛍光ｃから蛍光スペクトルを測定して表示する。この表示ステップでは、第２蛍光画像の表示と、蛍光スペクトル測定結果の表示とを併せて行ってもよいし、第２蛍光画像の表示だけを行ってもよいし、蛍光スペクトル測定結果の表示だけを行ってもよい。なお、第２蛍光画像の表示と、蛍光スペクトル測定結果の表示とを併せて行う場合、それらを別々に表示してもよいし、並べて表示してもよい。
【００５１】
第２の励起光Ｃを照射して生じた第２の蛍光ｃは、図２に示すように、腹腔鏡１０で受光され、蛍光受光用光ファイバケーブル２７で蛍光測定部８０に導光される。なお、第２の励起光Ｃを特定したセンチネルリンパ節Ｓの場所に正しく照射できるように、第２の励起光Ｃの照射位置を表示するレーザーポインタ等の目印機能を腹腔鏡１０に設けてもよい。レーザーポインタとしては、各種のものを適用でき、例えば緑色等のレーザーポインタを用いることができる。
【００５２】
蛍光測定部８０が「蛍光検出器」である場合、蛍光検出器は、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃの波長のみを検出するように光学フィルタを選択して設ける等して設定しておく。この蛍光検出器が、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃを検出すれば、測定結果表示制御部１６０は、蛍光検出器が第２の蛍光ｃを検出したことをモニタ２００に表示する。そのため、医師は、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃの波長を検出したか否かをモニタ２００の表示によって判断することができる。蛍光検出器が、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃを検出し、その結果がモニタ２００に表示されれば、センチネルリンパ節Ｓには癌細胞・癌組織と結合した第２の蛍光物質が存在することになる。その場合には、センチネルリンパ節Ｓに癌細胞・癌組織が転移していることが判明する。
【００５３】
例えば、図１３（Ｃ）に示すように、近赤外線ＣＣＤカメラ９４が撮像した第１の蛍光ａに基づいて画像処理された第１の蛍光画像をモニタ２００に表示すると、センチネルリンパ節Ｓの位置を視覚的に特定することができる。この場合、重畳画像処理部１４０によって、可視光画像と第１の蛍光画像とをモニタ２００に重畳的に表示させることで、位置を視覚的に正確に把握することができる。この可視光画像と第１の蛍光画像の重畳画像は、リアルタイムに重畳する処理であることが好ましい。
【００５４】
また、図１３（Ｅ）に示すように、検査するセンチネルリンパ節をモニタの中心に来るように腹腔鏡２０と腹腔鏡１０とを調整することで、センチネルリンパ節の検査をしやすくする。具体的には、検査するセンチネルリンパ節をモニタの中心に来る位置で重畳画像を作成する。検査するセンチネルリンパ節に腹腔鏡１０から出射する第２の励起光Ｃが照射できるように、そのセンチネルリンパ節Ｓに第２の励起光Ｃを照射して得た第２の蛍光強度をモニタに表示し、更に撮像用の腹腔鏡１０で第２の励起光Ｃの照射位置画像をモニタに表示する。照射位置画像でモニタ上の第２の励起光Ｃの照射位置が重畳画像の前記センチネルリンパ節Ｓの場所にくるように、腹腔鏡１０の照射位置を調整する。照射位置が決まったら、第２の蛍光強度のモニタで第２の蛍光ｃが観察されるかを確認する。前記第２の励起光Ｃの照射スポット径がセンチネルリンパ節と同じ程度であるので、そのセンチネルリンパ節で蛍光が検出されるかを確認する。
【００５５】
これに対し、蛍光測定部８０が「分光器」である場合、分光器に導光された第２の蛍光ｃは、分光器によって蛍光波長スペクトルが測定される。この測定結果は、蛍光スペクトルの波形及び指定された波長の強度の数値がモニタ２００に表示される。医師は、こうしたモニタ２００の表示を分析することで、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃが含まれているか否かを判断する。分析の結果、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃの波長が存在すれば、センチネルリンパ節Ｓには癌細胞・癌組織と結合した第２の蛍光物質が存在することになる。その場合には、センチネルリンパ節Ｓに癌細胞・癌組織が転移していることが判明する。なお、検査装置１にモニタ２００のみを設け、分光された蛍光波長スペクトルの結果をモニタ２００に併せて表示してもよい。また、蛍光測定部８０が「分光器」である場合にも、図１４や図１６に示すように、必要に応じて分光器の入射部手前に光学フィルタを選択して設置することで、ノイズとなる波長帯を遮断したり、測定に必要な波長だけを透過させることで波長スペクトルを正確に分析することができる。
【００５６】
以上の表示ステップから、本発明に係る検査方法は、癌細胞・癌組織の転移の診断に役立てることができる。すなわち、センチネルリンパ節検査ステップで得られた結果と、他の検査結果や医師の判断とに基づいて転移の診断を行うことができ、治療方針を決めることができる。
【００５７】
なお、可視光画像と、第１の蛍光画像と、第２の蛍光画像と、第２の蛍光強度の測定結果とを任意に組み合わせて、癌細胞・癌組織が転移したセンチネルリンパ節及び癌細胞・癌組織の位置を視認化するステップを、視認化ステップということができる。
【００５８】
（第２の蛍光強度の測定）
センチネルリンパ節Ｓに癌細胞・癌組織が存在する場合、その癌細胞・癌組織は第２の蛍光物質と特異結合する。しかし、センチネルリンパ節は小さく、癌細胞・癌組織に特異結合された第２の蛍光物質から発する第２の蛍光は蛍光強度が弱い。そのため、第２の励起光Ｃを観察範囲内でセンチネルリンパ節よりも広い範囲（第１の励起光Ｂの照射範囲と同程度に広い範囲）に照射した場合は、第２の蛍光ｃのスペクトルが測定できない可能性が高い。こうしたことから、第２の励起光Ｃをセンチネルリンパ節Ｓの大きさと同じ大きさに絞り、センチネルリンパ節Ｓに照射することが望ましい。
【００５９】
センチネルリンパ節Ｓに、その大きさと同程度の第２の励起光Ｃを照射することによって、癌細胞・癌組織と特異結合した第２の蛍光物質から発する第２の蛍光ｃを選択的に検出できる。したがって、第１の蛍光画像を基にして、特定したセンチネルリンパ節Ｓの位置に腹腔鏡１０を固定し、その腹腔鏡１０から第２の励起光Ｃを照射し、照射した位置から第２の蛍光ｃが検出されるかどうか（第２の蛍光ｃが出るか出ないか）を確認して癌細胞・癌組織がセンチネルリンパ節Ｓに転移しているかどうかを判断することができる。
【００６０】
以上説明したケース１の検査装置１を用いた検査方法によれば、観察範囲Ｐの所定のセンチネルリンパ節と同じ大きさに第２の励起光Ｃを照射するため、高感度で高分解能の診断を行うことができる。また、癌細胞・癌組織が転移しているか否か、転移している場合にはどの位置に転移しているかを正確に診断することができる。
【００６１】
例えば、第２の蛍光ｃでセンチネルリンパ節に例えば胃癌の転移が見つからなかった場合は、１０ｍｍ程度の大きさの早期の胃癌Ｃ’の部分を切除することになる。胃癌が胃の外側にある場合は、その部分を腹腔鏡手術で切除することができ、胃の内側にある場合は、内視鏡手術で切除することができる。その後においては、後述のように、第２の励起光Ｃを広く当てることにより、癌細胞・組織が残っている場合、第２の蛍光ｃが光るので、癌の取り残しが有るか否かを確認できる。
【００６２】
（検査方法の応用）
検査方法の応用例として、上記した本発明に係る検査方法で提供されたセンチネルリンパ節Ｓへの転移情報を基にして、病変部Ｃ’の癌細胞・癌組織を切除した後にも適用することができる。すなわち、その癌細胞・癌組織を切除した後に、切除した部分に癌細胞・癌組織が残っていないことを確認するために、上記本発明に係る検査方法を行うことができる。
【００６３】
すなわち、病変部Ｃ’を切除した部分に第２の励起光Ｃを照射した結果、第２の蛍光画像で観察され、又は第２の蛍光スペクトルや第２蛍光強度が検出されれば、病変部Ｃ’に癌細胞・癌組織の取り残しがあることがわかる。また、病変部Ｃ’を切除した部分に第２の励起光Ｂを照射した結果、第２の蛍光画像で観察できず、又は第２の蛍光スペクトルや第２蛍光強度が検出されなければ、病変部Ｃ’に癌細胞・癌組織の取り残しがないことがわかる。そのため、この検査方法を適用した観察や検出によって、癌細胞・癌組織の切除手術が確実に行われたか否かの確認ができる。癌細胞・癌組織が残っていた場合は、第２の蛍光画像で観察された部分、又は第２の蛍光スペクトルや第２蛍光強度が検出された部分を除去する。このとき、第２の励起光Ｃを広く照射して第２の蛍光ｃが光るか光らないかを検出すれば、癌細胞・癌組織の取り残しを広い範囲で確認することができる。
【００６４】
なお、この応用例は腹腔鏡によるものに限らず、例えば内視鏡に同じ機能を持たせることでも行うことができる。
【００６５】
また、切除後に上記検査方法を適用して観察する範囲は、当初の観察範囲よりも拡げてもよい。癌細胞・癌組織を切除した後に、当初の範囲よりも拡げて観察することにより、切除した癌細胞・癌組織の周辺に存在する可能性のある他の癌細胞・癌組織を見つけ、引き続いて切除するのが有効であるか否かの判断情報とすることができる。本発明に係る検査方法は、こうした再検査手段としても有効に利用することができる。
【００６６】
［検査方法／ケース２］
ケース２の検査装置１Ｂを用いた場合の検査方法も、上記のとおり、センチネルリンパ節Ｓの位置を確認するステップと、第２の励起光Ｃを照射するステップと、第２蛍光画像を表示する表示ステップ及び／又は蛍光スペクトルを表示する表示ステップとを有するが、ここで用いるケース２の検査装置１Ｂは、図３及び図４に示すように、腹腔鏡１０が、第１励起光照射機能と、第１蛍光受光機能と、第２励起光照射機能と、第２蛍光受光機能とを担い、腹腔鏡２０が、照明光照射機能と、撮像機能とを担っている。
【００６７】
各機能は、ケース１の検査装置１Ａと同じであるので、ここではその説明を省略するが、大きな違いは、このケース２の検査装置１Ｂは、撮像用の腹腔鏡２０が、照射用の腹腔鏡を兼ねている点であり、それ以外はケース１の検査装置と同じである。
【００６８】
［検査方法／ケース３］
ケース３の検査装置１Ｃを用いた場合の検査方法も上記のとおり、センチネルリンパ節Ｓの位置を確認するステップと、第２の励起光Ｃを照射するステップと、第２蛍光画像を表示する表示ステップ及び／又は蛍光スペクトルを表示する表示ステップとを有するが、ここで用いるケース３の検査装置１Ｃは、図５に示すように、腹腔鏡１０が、照明光照射機能と、第１励起光照射機能とを担い、腹腔鏡２０が、第１蛍光受光機能と、第２励起光照射機能と、第２蛍光受光機能とを担い、腹腔鏡３０が、撮像機能を担っている。
【００６９】
各機能は、ケース１の検査装置１Ａと同じであるので、ここではその説明を省略するが、大きな違いは、このケース３の検査装置１Ｃは、３本の腹腔鏡に役割を分担させている点である。
【００７０】
［検査装置の構成］
次に、図１〜図５に示した各検査装置１（１Ａ，１Ｂ，１Ｃ）の構成を説明する。検査装置１は、照明光照射用手段、第１の励起光照射用手段、第２の励起光照射用手段、画像撮像用手段、蛍光測定用手段を備えている。以下では、ケース１の検査装置１Ａを例にして、腹腔鏡１０が、照明光照射用手段、第１の励起光照射用手段、第２の励起光照射用手段、蛍光測定用手段として機能し、腹腔鏡２０が、画像撮像用手段として機能する場合について説明するが、必要に応じてケース２の検査装置１Ｂについても説明する。
【００７１】
腹腔鏡１０は、観察範囲Ｐに照明光Ａを照射する手段であるとともに、観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂ（近赤外線）及び第２の励起光Ｃを照射する手段である。さらに、観察範囲Ｐ内でリンパ節やリンパ管を検出するための第１の蛍光物質及び癌細胞・癌組織を検出するための第２の蛍光物質の一方又は両方から発する蛍光ｂ，ｃによる蛍光画像を導光する手段である。腹腔鏡２０は、観察範囲Ｐで反射した可視光ａによる可視光と第１の蛍光物質及び第２の蛍光物質の一方又は両方から発する蛍光ｂ，ｃとを撮像装置９０に導光する手段である。
【００７２】
こうした腹腔鏡１０，２０を備えた検査装置１は、例えば腹腔鏡１０から観察範囲Ｐに照明光Ａ及び第１の励起光Ｂを照射するので、照明光Ａの可視光画像と第１の励起光Ｂの照射により第１の蛍光物質から発光した蛍光画像とにより、病変部のある臓器の外側周辺の広い範囲でセンチネルリンパ節Ｓの正確な位置の特定と分布がわかる。そして、第２の蛍光物質から第２の蛍光ｃを発生させるための第２の励起光Ｃを照射するので、その第２の励起光Ｃを、センチネルリンパ節の大きさにほぼ等しい大きさのスポットサイズに絞り込んで当てることにより、高感度且つ高分解能でセンチネルリンパ節を検査することができ、センチネルリンパ節に存在する癌細胞・癌組織の検査を実現できる。また、検査対象のセンチネルリンパ節に第１の励起光Ｂを照射し、その第１の励起光Ｂで生じた第１蛍光画像を撮影することで、検査対象のセンチネルリンパ節の位置と励起光の照射位置との確認を表示手段（モニタ）２００上で行うことができる。
【００７３】
（腹腔鏡１０）
図６は、ケース１の検査装置１Ａで用いられる腹腔鏡１０Ａの一例を示す断面構成図である。腹腔鏡１０Ａは、図６に示すように、照明光照射用光ファイバ３０１を照明光照射用手段として備え、第１励起光照射用光ファイバ３０３を第１の励起光照射用手段として備え、第２励起光照射用光ファイバ３０２を第２の励起光照射用手段として備え、蛍光受光用光ファイバ３０４を蛍光測定用手段として備えている。
【００７４】
図６に示す腹腔鏡１０Ａは、細長い円筒状のシースチューブ３０５内に、シールドパイプ３０２ａ内に挿入された第２励起光照射用光ファイバ３０２が１本配置されている。その第２励起光照射用光ファイバ３０２の周りには、４本の第１励起光照射用光ファイバ３０３が配置されている。その第２励起光照射用光ファイバ３０２と第１励起光照射用光ファイバ３０３の周りには、複数の蛍光受光用光ファイバ３０４が配置され、さらにその周りのシースチューブ３０５の内壁面には、複数の照明光照射用光ファイバ３０１が配置されている。なお、シールドパイプ３０２ａは、第２励起光照射用光ファイバ３０２から漏れた励起光が他の光ファイバに影響することを防ぐように作用する。また、腹腔鏡１０Ａの先端には、レンズ等が設けられていてもよく、光の広がりを調製することができる。
【００７５】
各光ファイバの本数や配置は特に限定されないが、図６に示すような配置関係にすることが好ましい。シースチューブ３０５内には、樹脂等の充填剤を含んでいてもよく、その充填剤が接着剤であることが好ましい。なお、図８の例は、シースチューブ３０５内の中心に１本の第２励起光照射用光ファイバ３０２と４本の第１励起光照射用光ファイバ３０３とを配置し、シースチューブ３０５の内壁面側に蛍光受光用光ファイバ３０４と照明光照射用光ファイバ３０１とを配置した例であり、特に、励起光照射用光ファイバ３０２，３０３と蛍光受光用光ファイバ３０４との間隔を空けた例を示す断面構成図である。
【００７６】
腹腔鏡１０Ａは、各光ファイバが分岐部（図示しない）で分岐される。分岐された各光ファイバは、図１に示すように、それぞれに配線されて接続される。例えば、照明光照射用光ファイバ３０１は、照明光照射用光ファイバケーブル１４として照明光源５０に接続し、第１励起光照射用光ファイバ３０３は、第１励起光照射用光ファイバケーブル１５として第１励起光源６０に接続し、第２励起光照射用光ファイバ３０２は、第２励起光照射用光ファイバケーブル２６として第２励起光源７０に接続し、蛍光受光用光ファイバ３０４は、蛍光受光用光ファイバケーブル２７として蛍光測定部８０に接続している。なお、それぞれの光ファイバケーブルは、バンドル構造としたり、保護カバーが設けられていたり、接着剤等の固定手段で固定されていてもよい。
【００７７】
なお、図９は、ケース２の検査装置１Ｂで用いられる腹腔鏡１０Ｂの一例を示す断面構成図である。腹腔鏡１０Ｂは、図９に示すように、複数の光ファイバで構成された光ファイババンドルであり、第１励起光照射用光ファイバ３０３を第１の励起光照射用手段として備え、第２励起光照射用光ファイバ３０２を第２の励起光照射用手段として備え、蛍光受光用光ファイバ３０４を蛍光測定用手段として備えている。このケース２の検査装置１Ｂは、ケース１の検査装置１Ａとは異なり、腹腔鏡１０Ｂが照明光照射用手段を有さないので、図９に示す腹腔鏡１０Ｂも照明光照射用光ファイバ３０１を有していない。それ以外は、腹腔鏡１０Ａの構成と同じである。
【００７８】
（腹腔鏡２０）
図７は、ケース１の検査装置１Ａで用いられる腹腔鏡２０Ａの一例を示す断面構成図である。腹腔鏡２０Ａは、図７に示すように、撮像用光ファイババンドル３１０を画像撮像用手段として備えている。この腹腔鏡２０Ａは、細長い円筒状のシースチューブ３１３内の中央に、撮像用光ファイババンドル３１０が配置されている。その撮像用光ファイババンドル３１０の周りには充填剤３１１が充填されている。こうした配置は特に限定されないが、図７に示すような配置関係にすることが好ましい。また、図示はしないが、撮像用光ファイババンドル３１０の先端側に集光用レンズがあってもよい。撮像用光ファイババンドルは、図１に示すように、撮像用ファイバケーブル２７として撮像装置９０に接続している。
【００７９】
なお、図１０は、ケース２の検査装置１Ｂで用いられる腹腔鏡２０Ｂの一例を示す断面構成図である。この腹腔鏡２０Ｂは、図１０に示すように、撮像用光ファイババンドル３１０を画像撮像用手段としてシースチューブ３１３内の中央に備え、照明光照射用光ファイバ３１２を照明光照射用手段としてシースチューブ３１３の内壁面側に備えている。こうした配置は特に限定されないが、図１０に示すような配置関係にすることが好ましい。また、図示はしないが、撮像用光ファイババンドル３１０の先端側に集光用レンズがあってもよい。撮像用光ファイババンドル３１０は、図３に示すように、撮像用ファイバケーブル４１として撮像装置９０に接続し、照明光照射用光ファイバ３０１は、照明光照射用光ファイバケーブル１４として照明光源５０に接続している。
【００８０】
これらの腹腔鏡１０，２０は、患者に装着される。腹腔鏡１０，２０の患者への装着は、図１〜図４に示すように、腹腔鏡１０、２０にホルダ１１，２１を取り付け、患者に形成された挿入口Ｈから予め腹部に炭酸ガスを導入して膨らませておき、腹腔鏡１０，２０の先端から内部に挿入して行う。ホルダ１１，２１は、円筒状に形成された部材であり、患者の外皮に形成された挿入口Ｈの内側（内壁部）に挿入されて配置され、そのホルダ１１，２１によって腹腔鏡１０，２０を挿入口Ｈに気密に保持することができる。ホルダ１１，２１の中央は、軸方向に延びる貫通部を有し、シースチューブ１２，２２は、その貫通部に挿入されてホルダ１１，２１に保持される。
【００８１】
腹腔鏡１０，２０の先端には、その先端を密閉する透明封止部１３，２４が設けられていることが好ましい。この透明封止部１３，２４は、ガラスやプラスチックフィルム等の透明な部材で構成されており、光ファイバの先端から出射される照明光Ａ及び第１の励起光Ｂ（近赤外線）を観察範囲Ｐを含む広い範囲に照射できるようになっているとともに、可視光ａ、第１の蛍光ｂ及び第２の蛍光ｃを受光できるようになっている。
【００８２】
ケース１の検査装置１Ａでは、図１に示すように、腹腔鏡１０は、広い観察範囲Ｐに照明光Ａと第１の励起光Ｂを照射する。ここでいう「観察範囲Ｐ」は、センチネルリンパ節を検出するための第１の蛍光物質を観察する範囲のことである。図１に示すように、照明光Ａと第１の励起光Ｂとを広い観察範囲Ｐに照射することにより、撮像用の腹腔鏡２０を用いて内蔵表面Ｑを容易に観察できると共に、照明光Ａの強度分布の影響も小さくでき、受光強度が撮像する観察範囲Ｐで均一化できる。
【００８３】
広い観察範囲Ｐに照射するためには、腹腔鏡１０の先端構造を任意に設計して行う。腹腔鏡１０の先端に透明封止部１３だけを設けたものであってもよいし、腹腔鏡１０の先端に透明封止部１３を設けると共に、先端と透明封止部１３との間にレンズ（図示しない）を設けてもよい。
【００８４】
一方、ケース２の検査装置１Ｂでは、図３に示すように、腹腔鏡１０は、広い観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射し、腹腔鏡２０は、広い観察範囲Ｐに照明光Ａを照射する。図３に示すように、腹腔鏡１０，２０それぞれによって、第１の励起光Ｂと照明光Ａとを広い観察範囲Ｐに照射することにより、撮像用の腹腔鏡２０を用いて内蔵表面Ｑを容易に観察できると共に、照明光Ａの強度分布の影響も小さくでき、受光強度が撮像する観察範囲Ｐで均一化できる。なお、透明封止部１３とレンズは上記の場合と同様である。
【００８５】
（撮像用腹腔鏡の機能）
撮像用の腹腔鏡２０は、図１〜図４に示すように、腹腔鏡１０（ケース１の検査装置）又は腹腔鏡２０（ケース２の検査装置）から照射した照明光Ａが観察範囲Ｐで反射した可視光ａ、腹腔鏡１０（ケース１，２の検査装置）から照射した第１の励起光Ｂにより励起され、観察範囲Ｐ内でリンパ節、リンパ管を検出するための第１の蛍光物質から発する第１の蛍光ｂ、及び、腹腔鏡１０（ケース１，２の検査装置）から観察範囲Ｐ内の特定のセンチネルリンパ節と同じ大きさに絞って照射した第２の励起光Ｃにより励起され、癌細胞・癌組織を検出するための第２の蛍光物質から発する第２の蛍光ｃ、のいずれか１又は２以上の光を導光して画像化するための画像伝送手段である。
【００８６】
こうした撮像用の腹腔鏡２０は、光ファイバケーブル４１を介して撮像装置９０に接続されており、その撮像装置９０は、導光された可視光ａを可視光画像とし、導光された第１の蛍光ｂを第１の蛍光画像とし、導光された第２の蛍光ｃを第２の蛍光画像とする。画像化された可視光画像と第１の蛍光画像とにより、病変部Ｃ’の周辺の広い範囲でセンチネルリンパ節の正確な位置の特定と分布を検知できる。また、第２の蛍光物質から発した第２の蛍光ｃを画像化した第２の蛍光画像を撮影することで、検査対象である特定のセンチネルリンパ節の位置と励起光の照射位置とを表示手段（モニタ）上で確認することができる。
【００８７】
（撮像装置）
撮像装置９０は、撮像用の腹腔鏡２０に接続されて、その撮像用の腹腔鏡２０に導光された可視光ａを画像化して可視光画像とし、一方、腹腔鏡２０に導光された第１の蛍光ｂを画像化して第１の蛍光画像とし、その腹腔鏡２０に導光された第２の蛍光ｃを画像化して第２の蛍光画像とすることができる。
【００８８】
具体的には、図１１及び図１２に示すように、外殻をなすハウジング９１と、ハウジング９１の内部に設けられた光分離手段であるダイクロイックミラー９２（光分離手段９２ともいう。）と、ダイクロイックミラー９２によって分離された光を撮像するＣＣＤカメラ９３と、蛍光を撮像する近赤外線ＣＣＤカメラ９４とを備えている。
【００８９】
光分離手段９２は、腹腔鏡２０から延びる光ファイババンドル４１が導光した可視光ａ及び蛍光（第１の蛍光ｂ、第２の蛍光ｃ）を分離すると共に、画像処理部１１０に接続されている。具体的には、ダイクロイックミラー９２は、光ファイバケーブル４１内を導光する可視光ａや蛍光ｂ，ｃの進行方向に対して斜めに傾けられて配置されている。このダイクロイックミラー９２は、可視光をそのまま透過させ、蛍光を透過させることなく反射させるように作用する。
【００９０】
（制御）
ケース１の検査装置１Ａにおいて、腹腔鏡１０は、図１に示すように、照明光照射用光ファイバケーブル１４を介して照明光源５０に接続され、第１励起光照射用光ファイバケーブル１５を介して第１励起光源６０に接続され、第２励起光照射用光ファイバケーブル２６を介して第２励起光源７０に接続され、蛍光受光用光ファイバケーブル２７を介して蛍光測定部８０に接続されている。照明光照射用光ファイバケーブル１４は、照明光源５０が発する照明光Ａを腹腔鏡１０の先端まで導光し、第１励起光照射用光ファイバケーブル１５は、第１励起光源６０が発する第１の励起光Ｂを腹腔鏡１０の先端まで導光し、第２励起光照射用光ファイバケーブル２６は、第２励起光源７０が発する第２の励起光Ｃを腹腔鏡１０の先端まで導光する。
【００９１】
照明光源５０は、照明光Ａを発する光源であれば特に限定されない。例えば、ハロゲンランプ、水銀ランプ若しくは白色ＬＥＤ等の白色光を発するもの、又は、可視光を発するものを使用することができる。
【００９２】
第１励起光源６０は、第１の励起光Ｂを発する光源であれば特に限定されないが、波長が７００ｎｍ〜８３０ｎｍの近赤外線を発する光源が好ましい。第１励起光源６０として、ハロゲンランプや水銀ランプを用いる場合は、７００ｎｍ未満の波長をカットして使用することが好ましい。また、７００ｎｍ〜８３０ｎｍの波長帯のＬＥＤ光源やレーザー光源を使用してもよい。
【００９３】
第２励起光源７０は、レーザー光を発する半導体レーザーと、半導体レーザーをＯＮ／ＯＦＦするドライバとを備えている。第２励起光源７０の励起光としては、発光させる蛍光物質の種類にもよるが、波長が４００〜１３００ｎｍのレーザー光を使用することが好ましく、６００〜１１００ｎｍのレーザー光を使用することがより好ましく、使用する蛍光物質に応じて選択して使用する。
【００９４】
腹腔鏡１０の制御は、制御装置１００で行われる。制御装置１００は、上記した位置観察ステップで照明光Ａと第１の励起光Ｂのタイミングを制御するタイミング制御部１５０を備えている。タイミング制御部１５０は、照明光源５０及び第１励起光源６０に接続され、さらに後述の第２励起光源７０に接続されて、照明光源５０の点灯と消灯を制御し、第１励起光源６０の点灯と消灯を制御し、さらに後述する第２励起光源７０の点灯と消灯を制御する。照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０は、相互に関連づけられてタイミングが制御される。なお、タイミングの制御は、光を遮断するシャッターを設けて、そのシャッターを開閉させてタイミングを制御する方法でもよい。
【００９５】
こうしたタイミング処理部１５０は、（ａ）照射させる光源を適宜に切り換えて、観察範囲Ｐに照明光Ａを照射して観察範囲Ｐの可視光画像を取得して全体を検査すること、（ｂ）観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射して、第１の蛍光物質に基づく第１の蛍光画像を取得して、第１の蛍光物質が含有されている場所を特定すること、（ｃ）可視光画像と第１の蛍光画像とを合成して、リンパ管やセンチネルリンパ節の位置を検査すること、（ｄ）観察範囲Ｐの所定部位（センチネルリンパ節）に第２の蛍光物質を励起させる第２の励起光Ｃを照射して、第２の蛍光ｃを発生させ、第２の蛍光物質が結合する癌細胞・癌組織が存在するかを検査すること、等を行うことができる。こうした検査結果や他の検査結果が総合され、治療方針が決定されることになる。
【００９６】
なお、観察範囲Ｐに照明光Ａのみを照射する場合には、照明光源５０のみを点灯させ、第１励起光源６０を消灯すると共に、後述する第２励起光源７０のドライバをＯＦＦにする。また、観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂのみを照射する場合には、第１励起光源６０のみを点灯させ、照明光源５０を消灯すると共に、後述する第２励起光源７０のドライバをＯＦＦにする。また、観察範囲Ｐに照明光Ａと第１の励起光Ｂの両方を照射する場合には、照明光源５０及び第１励起光源６０を共に点灯すると共に、後述する第２励起光源７０のドライバをＯＦＦにする。また、観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射すると共に、観察範囲Ｐ内の所定のセンチネルリンパ節に第２の励起光Ｃを照射する場合には、第１励起光源６０を点灯すると共に第２励起光源７０のドライバをＯＮにし、照明光源５０を消灯するように制御する。なお、観察範囲Ｐの所定のセンチネルリンパ節に後述する第２の励起光Ｃのみを照射する場合には、照明光源５０及び第１励起光源６０を消灯し、第２励起光源７０のドライバをＯＮにする。これら光源のＯＮ，ＯＦＦは、相互に関連づけられて制御され、その制御は、シャッターを設けて、シャッターを開閉させるタイミングを制御する等して行われる。
【００９７】
タイミング制御部１５０には、後述する画像処理部１１０の重畳画像処理部１４０が接続されており、モニタ２００に表示させる画像の種類を照明光、近赤外線及び励起光の照射に関連づけて選択するように制御している。モニタ２００への表示制御の詳細は後述する。
【００９８】
（画像処理部）
受光した可視光や蛍光等を画像化する画像処理は、画像処理部１１０で行う。その画像処理部１１０は、図１１及び図１２に示すように、可視光画像処理部１２０と蛍光画像処理部１３０と重畳画像処理部１４０とを備え、さらに画像切り換え部（図示しない）を備えている。
【００９９】
可視光画像処理部１２０は、可視光を画像化して可視光画像にするための処理部である。詳しくは、可視光画像処理部１２０は、光分離手段９２によって分離された可視光をＣＣＤカメラ９３で取り込んで、その可視光を画像化した可視光画像をモニタ２００に映し出すための処理部である。この可視光画像処理部１２０では、撮像装置９０のハウジング９１内に設けられたＣＣＤカメラ９３に接続され、そのＣＣＤカメラ９３が撮像した可視光（照明光が反射したもの。）を取り込んで画像化して可視光画像（カラー画像等）を得ている。
【０１００】
蛍光画像処理部１３０は、蛍光（主に第１の蛍光）を画像化して蛍光画像（主に第１の蛍光画像）にするための処理部である。詳しくは、光分離手段９２によって分離された蛍光を近赤外線ＣＣＤカメラ９４で取り込んで、その蛍光を画像化した蛍光画像をモニタ２００に映し出すための処理部である。この蛍光画像処理部１３０では、撮像装置９０のハウジング９１内に設けられた近赤外線ＣＣＤカメラ９４に接続され、その近赤外線ＣＣＤカメラ９４が撮像した蛍光（第１の蛍光物質から発光した蛍光。）を取り込んで画像化して蛍光画像を得ている。
【０１０１】
重畳画像処理部１４０は、可視光画像処理部１２０で得られた可視光画像と、蛍光画像処理部１３０で得られた蛍光画像とを重ね合わせて画像化した重畳画像をモニタ２００に表示可能に処理する処理部である。画像を重ね合わせる処理は、第２の蛍光物質を励起する第２の励起光Ｃの照射位置（すなわち特定のセンチネルリンパ節の位置）を、可視光画像、蛍光画像又は重畳画像に重ね合わせる場合も同様の処理により行うことができる。
【０１０２】
重畳画像処理部１４０は、既述したタイミング制御部１５０に接続されている。そのため、モニタ２００に表示させる画像の選択は、タイミング処理部１５０で制御される照明光Ａ、第１の励起光Ｂ及び第２の励起光Ｃの照射のタイミングに関連づけられている。
【０１０３】
モニタ２００に任意の画像を表示させるためのタイミング処理部１５０の制御としては、以下の例を挙げることができる。例えば、（１）観察範囲Ｐに照明光Ａのみを照射するように照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０が制御されている場合は、モニタ２００には、可視光ａを画像化した可視光画像が表示される。（２）また、観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂのみを照射するように照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０が制御されている場合は、モニタ２００には、第１の蛍光物質から発した第１の蛍光ｂを画像化した第１の蛍光画像が表示される。（３）また、観察範囲Ｐ内の所定のセンチネルリンパ節に第２の励起光Ｃのみを照射するように照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０が制御されている場合は、モニタ２００には、第２の蛍光物質から発した第２の蛍光ｃを画像化した第２の蛍光画像が表示される。
【０１０４】
これに対し、（４）照明光Ａと第１の励起光Ｂとが同時に照射されるか又は交互に照射されるが、第２の励起光Ｃは照射されないように照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０が制御されている場合は、モニタ２００には、可視光画像及び第１の蛍光画像が重畳的に表示される。（５）また、第２の励起光Ｃが照射されるが、照明光Ａと第１の励起光Ｂとは照射されないように照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０が制御されている場合は、モニタ２００には、予め撮像された可視光画像、第１の蛍光画像及び第２の蛍光画像が重畳的に表示される。そして、モニタ２００への画像の表示は、各画像単体、選定された２つの画像、又は３つすべての重畳画像を選択することができる。（６）また、蛍光測定部８０を使用して波長スペクトルを測定する場合は、特定のセンチネルリンパ節に特異結合される第２の蛍光物質は微量であるために、観察範囲Ｐに照射される照明光がノイズとなることから、照明光源５０と第１励起光源６０をＯＦＦにして第２の蛍光を検出することが好ましい。
【０１０５】
この検査装置１では、モニタ２００に表示させる画像を、観察範囲Ｐに照射する照明光Ａ、第１の励起光Ｂ及び第２の励起光Ｃを照射するタイミングに関連づけて自動的に切り換える自動モードの切り換え手段を備えていてもよいし、医師が手動で切り換える手動モードの切り換え手段を備えていてもよい。手動モードでの切り換え手段は、医師の判断に基づいて、モニタ２００に表示させる画像の種類を自由に選択できる。
【０１０６】
なお、第２の蛍光物質から第２の蛍光ｃを発光させるために照射する第２の励起光Ｃが近赤外光から赤外光の波長範囲である場合は、その光を近赤外線ＣＣＤカメラで測定して画像化し、上記した可視光画像と蛍光画像とを重ね合わせた重畳画像にさらに重ね合わせてもよい。また、第２の蛍光物質から第２の蛍光ｃを発光させるために照射する第２の励起光Ｃが可視光の波長範囲である場合は、その光をＣＣＤカメラで測定して画像化し、上記した可視光画像と蛍光画像とを重ね合わせた重畳画像にさらに重ね合わせてもよい。これらの重ね合わせを行うことで、目的とした場所（センチネルリンパ節）に第２の励起光Ｃが照射されているか否かを確認することができる。
【０１０７】
画像切り換え部（図示しない）は、可視光画像、蛍光画像又は重畳画像がモニタ２００に選択的に表示させるための処理部である。なお、撮像した画像や画像処理した後の画像は、記録装置（図示しない）に記録することができ、さらにその記録装置に記録された画像を用いてモニタ２００に表示することもできる。
【０１０８】
可視光Ａを撮像するＣＣＤカメラ９３は、図１１及び図１２に示すように、撮像用の腹腔鏡２０の出射端とダイクロイックミラー９２の中心とを結ぶ直線上の位置で、ダイクロイックミラー９２の後方に設けられ、レンズをダイクロイックミラー９２に向けてセットされている。一方、蛍光を撮像する近赤外線ＣＣＤカメラ９４は、図１１及び図１２に示すように、撮像用の腹腔鏡２０の出射端とダイクロイックミラー９２の中心とを結ぶ直線に直交する位置であり且つダイクロイックミラー９２の側方の位置に設けられ、レンズをダイクロイックミラー９２に向けてセットされている。これらのＣＣＤカメラ９３，９４を備えた撮像装置９０には、可視光や反射励起光をカットして蛍光のみが近赤外線ＣＣＤカメラ９４に取り込まれるように、近赤外線ＣＣＤカメラ９４とダイクロイックミラー９２との間に第１フィルタ９５が取り付けられている。
【０１０９】
さらに、撮像装置９０には、第１の蛍光物質が発する第１の蛍光ｂのみを近赤外線ＣＣＤカメラ９４に透過させる第２フィルタ９６が用意されており、その第２フィルタ９６をレンズの前方で撮像装置９０に着脱自在であるように構成できる。この第２フィルタ９６が第１の蛍光物質以外の蛍光物質が発する蛍光をカットするので、近赤外線ＣＣＤカメラ９４は、第１の蛍光物質が発する第１の蛍光ｂのみを撮像することができる。また、第１の蛍光物質の種類を変えた場合、着脱可能な第２フィルタ９６を交換するだけで、他の蛍光物質（蛍光波長帯が異なる物質）に対しても使用することができる。
【０１１０】
こうして構成された撮像装置９０では、撮像用の腹腔鏡２０で受光した可視光ａは、ダイクロイックミラー９２を透過してＣＣＤカメラ９３に導かれる。ＣＣＤカメラ９３は、導かれた可視光を撮像して画像化し、画像化された画像を画像処理部１１０に供給する。一方、撮像用の腹腔鏡２０で受光した蛍光ａ，ｂは、ダイクロイックミラー９２への進入方向に対して直角方向に反射し、近赤外線ＣＣＤカメラ９４に導かれる。
【０１１１】
この近赤外線ＣＣＤカメラ９４で第１の蛍光ｂを撮像する場合には、レンズの前方に第２フィルタ９６を装着し、第１の蛍光ｂと反射近赤外線とを分離するための近赤外線カットフィルタである第２フィルタ９６で反射近赤外線をカットし、近赤外線ＣＣＤカメラ９４には第１の蛍光ｂのみを導く。
【０１１２】
また、後述する腹腔鏡２０から第２の蛍光物質が特異結合している特定のセンチネルリンパ節に第２の励起光Ｃを照射し、その照射位置を撮像する場合には、照射する第２の励起光Ｃの波長又は第２の蛍光ｃの波長に応じて照明光照射用ＣＣＤカメラ９３又は近赤外線ＣＣＤカメラ９４を選択して用いる。第２の蛍光物質を選定することによって適用可能な第２の励起光Ｃの波長と第２の蛍光ｃの波長が決まるので、その第２の励起光Ｃの波長と第２の蛍光ｃの波長に対応してダイクロイックミラー９２やフィルタ９５，９６の波長特性を選定する。一方、第２の蛍光物質から発した第２の蛍光ｃを撮像する場合には、レンズの前方にある第２フィルタ９６をその第２の蛍光ｃに適合したフィルタ９５，９６に交換する。近赤外線ＣＣＤカメラ９４は、導かれた第２の蛍光ｃを撮像して画像化し、その画像を画像処理部１１０に供給する。第２の蛍光cが可視光である場合は、ＣＣＤカメラ９３の手前に第２の蛍光ｃに適合したフィルタを設けるか（着脱や切替可能であってもよい）、近赤外線ＣＣＤ９４の位置に可視光用ＣＣＤを設ける等する。
【０１１３】
図１４は、第２の励起光Ｃが可視光の場合で、第２の励起光Ｃの波長と第２の蛍光ｃの波長が近い場合に好ましく用いられる撮像装置５００（図１４では撮像装置９０を符号５００で示す。）の構成例である。図１４に示す撮像装置５００には、撮像用光ファイバケーブル５０１（図１４ではケーブル４１を符号５０１で示す。）がコネター部５０２を介して接続されている。そのコネクター部５０２から撮像装置５００内には、可視光ａ、第１の励起光Ｂ、第２の励起光Ｃ、第１の蛍光ｂ及び第２の蛍光ｃが導光される。導光された各光は、コリメートレンズ５０３で拡大されてダイクロイックミラー５０８に至る。ダイクロイックミラー５０８は可視光波長を透過するので、可視光領域の可視光ａと第２の励起光Ｃとが透過する。透過した可視光ａと第２の励起光Ｃのうち、第２の励起光Ｃは光学フィルタ５０７でカットされ、可視光ａがコリメートレンズ５０６で集光され、可視光画像の撮像装置５１０で撮像される。一方、ダイクロイックミラー５０８で反射した近赤外線（第１の励起光Ｂ、第１の蛍光ｂ）は、第１の励起光Ｂをカットする光学フィルタ５０９を通過した後にコリメートレンズ５０３で集光され、近赤外線（第１の蛍光ｂ）の撮像装置の撮像装置５０４で撮像される。
【０１１４】
以上説明した撮像装置９０（５００）によれば、可視光ａを画像化した可視光画像をモニタ２００に表示することで、観察範囲Ｐの全体の状況を詳細に把握することができる。また、第１の励起光Ｂの照射により第１の蛍光物質から発光した第１の蛍光ｂを画像化した蛍光画像をモニタ２００に表示することで、第１の蛍光物質が含有されている場所を正確に特定することができる。そして、第１の蛍光ｂに基づく蛍光画像により、センチネルリンパ節の位置を特定し、病変部Ｃ’の近傍に位置するセンチネルリンパ節に、第２の蛍光物質から第２の蛍光ｃを発光させるための第２の励起光Ｃをセンチネルリンパ節Ｓと同じ大きさまで絞って高密度のエネルギーで照射することにより、発光した第２の蛍光ｃを検知することができ、第２の蛍光物質が結合するもの（癌細胞又は癌組織に特異結合する物質）の存在を検出できる。
【０１１５】
さらに、撮像用の腹腔鏡２０で受光した光を撮像装置９０（５００）で画像化することにより、照明光Ａの照射範囲を映す可視光画像と、第２の励起光Ｃの照射により発光した第２の蛍光ｂ（第２の蛍光物質の濃度が比較的高い場合に計測が可能。第２の蛍光ｂの波長に応じて照明光照射用ＣＣＤカメラ９３又は近赤外線ＣＣＤカメラ９４を選択して用いる。）から得られた第２の蛍光画像とを重畳画像としてモニタ２００に表示することができる。その結果、照明光Ａの照射範囲とセンチネルリンパ節の位置とを画像で確認することができる。その結果、センチネルリンパ節を特定する時間を短縮でき、手術時間を短縮できる。
【０１１６】
（測定結果表示制御部）
測定結果表示制御部１６０は、腹腔鏡１０で受光した第２の蛍光ｃの強度やスペクトルを測定する蛍光測定部８０に接続されており、その蛍光測定部８０で得た測定結果をモニタ２００に表示させる制御を行う。蛍光測定部８０には、蛍光受光用光ファイバ２７が接続されている。
【０１１７】
蛍光測定部８０は、予め設定された所望の波長の蛍光のみを検出する蛍光検出器であることが好ましい。そうした蛍光検出器としては、所望の蛍光波長又は波長帯を透過させる光学フィルタが好ましく、具体的には、反射励起光をカットして、受光した蛍光のみを透過させるように機能する光学フィルタを用いることが好ましい。なお、蛍光測定部８０で第１の蛍光ｂと第２の蛍光ｃとを測定する場合は、第１の蛍光ｂと第２の蛍光ｃとを分離する光学的手段（光分離手段）を設け、各蛍光を検出できる別々の検出器を設けることで蛍光強度を独立に測定することが好ましい。
【０１１８】
このように、蛍光測定部８０が予め設定された波長の蛍光を検出する蛍光検出器を備えているので、その蛍光検出器として、使用する蛍光物質の蛍光波長又は波長帯を透過させる光学フィルタを用いれば、例えば癌細胞・癌組織に特異結合する第２の蛍光物質（又は癌細胞・癌組織に特異結合する物質に結合する第２の蛍光物質）が発する第２の蛍光の波長のみを検出することができる。その結果、こうして得られた蛍光測定結果と、既に得られた画像とを総合することにより、特定されたセンチネルリンパ節に癌細胞・癌組織が存在するか（即ち転移があるか）の検査をその場で行うことができる。
【０１１９】
センチネルリンパ節Ｓに第２の蛍光物質が存在する場合、この第２の蛍光物質からは特定波長の第２の蛍光が発光される。蛍光検出器は、検出する第２の蛍光の波長が予め設定されており、センチネルリンパ節Ｓに存在する第２の蛍光物質が発光する第２の蛍光のみを検出する。その結果、センチネルリンパ節Ｓで癌細胞・癌組織と特異結合している第２の蛍光物質とは異なる波長の蛍光が発せられても、こうした蛍光を検出することがなく、癌細胞・癌組織と特異結合した第２の蛍光物質からの第２の蛍光のみを検出して、癌細胞・癌組織がセンチネルリンパ節Ｓにあるか否かを正確に検査することができる。第２の蛍光物質の種類を変えて検査する場合には、蛍光検出部に内蔵されたフィルタを交換する。
【０１２０】
また、蛍光測定部８０は、蛍光受光用光ファイバケーブル２７で導光された蛍光を予め設定された範囲に分光する分光器を備えていてもよい。分光器は、検出された蛍光を、その蛍光の波長スペクトル分布の時間的変化として測定することができる。その結果、分光された蛍光の波長スペクトルを分析することで、分光器に導光された蛍光がどの蛍光物質が発したものであるかの特定が行えるとともに、蛍光物質の結合状態、又はノイズ成分を特定したり分析したりすることができる。なお、分光器を使用した場合でも、必要に応じて分光器の入射部手前に光学フィルタを選択し設置することで、ノイズとなる波長帯を遮断したり、測定に必要な波長だけを透過させることで波長スペクトルを正確に分析することができるようになる。このフィルタは使用する蛍光試薬とそれに合わせた第２の励起光、第２の蛍光に合せて切替可能であることが好ましい。こうした分光器を備えた検査装置１は、癌細胞・癌組織に特異結合した第２の蛍光物質（又は癌細胞・癌組織に特異結合する物質に結合する第２の蛍光物質）が発する第２の蛍光の波長スペクトルを特定することができるので、特定されたセンチネルリンパ節の位置に癌が存在するか（転移があるか否か）の診断に有効である。
【０１２１】
センチネルリンパ節Ｓに癌細胞・癌組織と結合した第２の蛍光物質が存在する場合、この第２の蛍光物質からは第２の蛍光物質に応じた波長の蛍光が発光される。分光器は、取り込まれた蛍光の波長スペクトルを測定する。分光器で測定した波長スペクトルを第２の蛍光物質の蛍光波長スペクトルと比較することで第２の蛍光物質の存在を特定できる。即ち、センチネルリンパ節Ｓに存在する癌細胞・癌組織と結合した第２の蛍光物質が発光した蛍光であるか、それ以外の蛍光物質が発光した蛍光であるかを識別することができる。
【０１２２】
（測定結果表示制御部）
蛍光測定部８０が、蛍光検出器として光学フィルタを適用した場合は、測定結果表示制御部１６０は、蛍光検出器が第２の蛍光物質が発する第２の蛍光ｃを検出したことをモニタ２００に表示するように制御する。
【０１２３】
一方、蛍光測定部８０が、蛍光検出器として分光器を適用した場合は、測定結果表示制御部１６０は、分光された各波長の分光結果をモニタ２００に表示する。モニタ２００への表示は、波長毎に蛍光強度を数値化して表示すると共に、数値化された蛍光強度に基づいて波長毎にグラフを表示する。医師は、モニタ２００に表示された数値及びグラフを分析することによって、第２の蛍光物質が発する第２の蛍光が検出されているか否かを判断する。
【０１２４】
蛍光測定部８０は、制御装置１００の測定結果表示制御部１６０に接続されていて、蛍光測定部８０が第２の蛍光物質からの蛍光を検出した際に、測定結果表示制御部１６０からの指令に基づいて検出結果をモニタ２００に表示する。なお、この検査装置１では、検出結果を表示するモニタ２００を画像表示用のモニタ２００とは別途に設けているが、モニタ２００だけを設け、検出結果をモニタ２００に表示するように構成してもよい。
【０１２５】
図１５は、蛍光測定部の一例を示す説明図であり、図１６は、蛍光測定部の他の一例を示す説明図である。蛍光測定部も図１４に示した撮像装置と同様、受光する励起光（第１の励起光Ｂ、第２の励起光Ｃ）の強度が大きいので、光学フィルタでカットすることが望ましい。蛍光（第１の蛍光ｂ、第２の蛍光ｃ）の受光強度は、受光する励起光の１／１０００〜１／１００００と小さいので、高感度で蛍光を計測するためには、光学フィルタでカットする必要がある。
【０１２６】
図１５は、可視光から近赤外まで測定できるＣＣＤ分光器を備えた蛍光測定部（図１５では蛍光測定部８０をＣＣＤ分光器５２３で示す。）である。このＣＣＤ分光器では、回折格子で分光された光をＣＣＤ素子等、ライン状又は面状の受光素子で強度を測定することができる。各素子の位置が波長に対応し、各波長の受光強度を同時に測定することができる。
【０１２７】
図１６は、励起光（第１の励起光Ｂ、第２の励起光Ｃ）と蛍光（第１の蛍光ｂ、第２の蛍光ｃ）とが混ざった光が受光用光ファイバケーブル５３１（図１６ではケーブル２７を符号５３１で示す。）で導光され、その受光用光ファイバケーブル５３１がコネクター部５３２を介して蛍光測定部５５０（図１６では蛍光測定部８０を符号５５０で示す。）に接続されている。そのコネクター部５３２から蛍光測定部５５０内には、励起光と蛍光が導光される。励起光と蛍光は、コリメートレンズ５３５で拡大されてダイクロイックミラー５３６に至り、励起光と蛍光のうちの可視光成分はダイクロイックミラー５３６を透過する。通過した可視光のうち、強度が大きい第２の励起光Ｃをカットできる光学フィルタ５３７で第２の励起光Ｃがカットされ、第１の蛍光ｂが蛍光測定部５３４で測定される。一方、ダイクロイックミラー５３６で反射した光のうち、強度が大きい近赤外線をカットできる光学フィルタ５３９で第１の励起光Ｂがカットされ、第２の蛍光ｃが蛍光測定部５３３で測定される。
【０１２８】
図１５及び図１６の蛍光測定部に示すように、励起光（第１の励起光Ｂ、第２の励起光Ｃ）と蛍光（第１の蛍光ｂ、第２の蛍光ｃ）との波長が近い場合には、特定の波長をカットできる光学フィルタを用いることにより、得ようとする第１の蛍光ｂや第２の蛍光ｃを受光して画像化することができる。
【０１２９】
（モニタ）
モニタ２００は、観察範囲Ｐの画像を映し出すモニタであり、表示モード選択スイッチ（図示しない）により、可視光画像、第１の励起光Ｂの照射により発光する第１の蛍光物質の第１の蛍光画像、及び、第２の励起光Ｃの照射により発光する第２の蛍光物質の第２の蛍光画像、の各画像をそれぞれ単独に表示できるようになっている。また、モニタ２００は、表示モード選択スイッチ（図示しない）により、可視光画像と第１の蛍光画像とを重畳した重畳画像を表示したり、その重畳画像に第２の励起光Ｃを照射した可視光画像をさらに重畳した重畳画像を表示したり、さらにその第２の励起光Ｃにより励起された蛍光画像をさらに重畳した重畳画像を表示したりすることができる。こうした重畳画像に対しては、それぞれの画像をモニタ２００で見やすくするための画像処理を施すことができる。また、各画像は、記録装置（図示しない）に保存してもよいし、保存した画像をモニタ２００や別のモニタに表示してもよい。
【０１３０】
モニタ２００は、蛍光測定部８０の測定結果を表示するモニタであり、上記した蛍光強度の測定結果と、蛍光スペクトルの測定結果とを表示できる。
【０１３１】
以上説明したように、本発明に係る検査装置１は、（ａ）照明光Ａを照射して、癌による病変部をモニタに表示し、（ｂ）第１の励起光Ｂを照射して、センチネルリンパ節に含有される第１の蛍光物質を発光させることでセンチネルリンパ節をモニタに表示し、（ｃ）特定されたセンチネルリンパ節に第２の励起光Ｃをセンチネルリンパ節Ｓと同じ大きさで照射して、癌細胞・癌組織に特異結合した第２の蛍光物質（又は癌細胞・癌組織に特異結合する物質に結合する第２の蛍光物質）を発光させて腹腔鏡で高感度に検出できる検出部に分光器を用いることで、第２の蛍光ｃの波長スペクトルを測定でき、蛍光物質の波長スペクトルの判定も行うことができる。さらに、（ｄ）撮像用の腹腔鏡により、第２の励起光Ｃの照射位置と第２の蛍光（第２の蛍光物質の濃度が比較的高い場合に計測が可能）とをモニタに表示することができ、第２の励起光Ｃの照射位置とセンチネルリンパ節の位置とを画像で確認することができる。よって、本発明に係る検査装置１は、癌細胞・癌組織の転移を検査する好適な検査装置となる。
【０１３２】
＜検査＞
検査装置１を利用して患者に癌の転移があるか否かを診断する場合、患者には癌細胞・癌組織と特異結合する試薬である第２の蛍光物質を予め投与しておく。癌の転移がある場合は、癌細胞・癌組織は、センチネルリンパ節Ｓに存在しており、患者に投与した第２の蛍光物質は、センチネルリンパ節Ｓに存在する癌細胞・癌組織と特異結合している。この第２の蛍光物質と特異結合した癌細胞・癌組織に励起光を照射すると、第２の蛍光物質は励起されて蛍光を発する。
【０１３３】
検査装置１は、予め照明光Ａを照射して得た可視光画像と、第１の励起光Ｂを照射して得た第１の蛍光画像とを用いて、病変部近傍のセンチネルリンパ節Ｓを特定し、そのセンチネルリンパ節Ｓにだけ第２の励起光Ｃを照射する。その結果、特定したセンチネルリンパ節だけからの第２の蛍光ｃを検出でき、病変部等にある癌細胞・癌組織からの第２の蛍光ｃと区別できる。
【０１３４】
また、得られた可視光画像と第１の蛍光画像との畳重画像により、第１の励起光Ｂの照射位置をモニタ２００で確認できるので、照射位置がずれたとしても判断ができ、確実に特定したセンチネルリンパ節に照射することができる。その結果、センチネルリンパ節の部位で発生した第２の蛍光ｃの検査を行うことができる。
【０１３５】
検査装置１では、観察範囲Ｐに存在する所定のセンチネルリンパ節であるセンチネルリンパ節Ｓと同等の範囲か又は所定のセンチネルリンパ節と同じ大きさに絞って第２の励起光Ｃを照射するので、高い強度の第２の励起光Ｃを第２の蛍光物質に照射することができる。そのため、観察範囲Ｐの所定のセンチネルリンパ節に含まれる第２の蛍光物質が微量であっても、確実に第２の蛍光物質から第２の蛍光ｃを発光させて、第２の蛍光物質と特異結合した癌細胞・癌組織の位置を正確に特定することができる。これにより、センチネルリンパ節に存在する癌細胞・癌組織を検査することが可能である。
【０１３６】
また、第２の励起光Ｃを絞っているので、近くに癌細胞・癌組織があったとしても、その影響を受けにくく、検査の正確度を大幅に向上できる。その結果、高感度且つ高分解能でセンチネルリンパ節Ｓの検査が行える。そして、センチネルリンパ節Ｓよりも照射された第２の励起光Ｃの外径をセンチネルリンパ節Ｓと同じ程度に絞ることにより、他の部位の癌細胞・癌組織の影響を大幅に削減できる。
【０１３７】
腹腔鏡１０で照明光Ａを照射して観察する範囲は、癌による病変部Ｃ’のある臓器を含む広い範囲である。まず、こうした広い範囲から病変部の周りのセンチネルリンパ節Ｓ自体を特定する。センチネルリンパ節Ｓ自体を特定するために、本発明の検査装置１では、第１励起光源６０を用いて、観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射する。患者には、第１の励起光Ｂの照射によって発光する第１の蛍光物質を予め投与しておくか、その場で病変部に注入する。例えば、第１の蛍光物質としてインドシアニングリーンを患者に投与した場合、このインドシアニングリーンに波長が７００〜８３０ｎｍの近赤外線が第１の励起光Ｂとして照射されると、インドシアニングリーンは、波長が８３０〜８５０ｎｍの蛍光ｂを発光する。そして、波長が８３０〜８５０ｎｍの蛍光を透過させる光学フィルタを用いて蛍光分離し検出器で検出する。
【０１３８】
観察範囲Ｐに第１の励起光Ｂを照射すれば、リンパ管やリンパ節の位置が蛍光画像モニタできる。蛍光画像と可視光画像を交互に撮影して畳重画像を作成することで、病変部とリンパ管、リンパ節との位置関係が畳重画像によって分かる。その結果、医師がセンチネルリンパ節Ｓを特定できるという格別の効果を奏することになる。病変部の特定からセンチネルリンパ節の特定までを本発明の検査装置１だけで短時間で行える。
【０１３９】
本発明に係る検査装置１及び検査方法は、腹腔鏡１０には照明光源５０、第１励起光源６０及び第２励起光源７０を接続し、腹腔鏡２０に観察範囲Ｐの所定のセンチネルリンパ節と同等の範囲か又は所定のセンチネルリンパ節と同じ程度の大きさに絞って第２の励起光Ｃを照射させる絞り手段を設けたことを基礎として、種々の特徴を備えるものである。
【符号の説明】
【０１４０】
１，１Ａ，１Ｂ，１Ｃ  検査装置
１０、１０Ａ，１０Ａ’，１０Ｂ  腹腔鏡
１１  患者装着用のホルダ
１２  シースチューブ
１３  透明封止部
１４  照明光照射用光ファイバケーブル
１５  第１励起光照射用光ファイバケーブル
２０，２０Ａ，２０Ｂ  腹腔鏡
２１  患者装着用のホルダ
２２  シースチューブ
２４  透明封止部
２６  第２励起光照射用光ファイバケーブル
２７  蛍光受光用光ファイバケーブル
２９  分岐部
３０  撮像用腹腔鏡
３１  患者装着用のホルダ
３２  シースチューブ
３３  透明封止部
３４  拡大手段
３４１  レンズ
３５  リレーレンズ系
３５１  レンズ
４１  撮像用光ファイバケーブル
５０  照明光源
６０  第１励起光源
７０  第２励起光源
８０  蛍光測定部
９０  撮像装置
９１  ハウジング
９１Ａ  コネクター
９２  ダイクロイックミラー（光分離手段）
９３  ＣＣＤカメラ
９４  近赤外線ＣＣＤカメラ
９５  第１フィルタ
９６  第２フィルタ
１００  制御装置
１１０  画像処理部
１２０  可視光画像処理部
１３０  蛍光画像処理部
１４０  重畳画像処理部
１５０  タイミング制御部
１６０  測定結果表示制御部
２００  モニタ
３０１  照明光照射用光ファイバ
３０２  第２励起光照射用光ファイバ
３０２ａ  シールドパイプ
３０３  第１励起光照射用光ファイバ
３０３ａ  シールドパイプ
３０４  蛍光受光用光ファイバ
３０５  シースチューブ
３０６  充填剤
３１０  撮像用光ファイバ
３１１  充填剤
３１２  照明光照射用光ファイバ
３１３  シースチューブ
５００  撮像装置
５０１  撮像用光ファイバケーブル
５０２  コネクター部
５０３  コリメートレンズ
５０４  近赤外線の撮像装置
５０５  近赤外線
５０６  コリメートレンズ
５０７  第２励起光カット用光学フィルタ
５０８  ダイクロイックミラー
５０９  第１励起光カット用光学フィルタ
５１０  可視光画像の撮像装置
５２１  蛍光受光用光ファイバケーブル
５２２  コネクター部
５２３  ＣＣＤ分光器
５３１  蛍光受光用光ファイバケーブル
５３２  コネクター部
５３３  第１の蛍光測定器
５３４  第２の蛍光測定器
５３５  コリメートレンズ
５３６  ダイクロイックミラー
５３７  光学フィルタ
５３８  コリメートレンズ
５３９  光学フィルタ
５５０  蛍光測定部
【０１４１】
Ａ  照明光
ａ  可視光
Ｂ  第１の励起光
ｂ  第１の蛍光
Ｃ  第２の励起光
ｃ  第２の蛍光
Ｈ  腹腔鏡の挿入口
Ｐ  観察範囲
Ｑ  内臓表面          
Ｓ，Ｓ１，Ｓ２，Ｓ３  センチネルリンパ節
Ｒ  リンパ管
Ｃ’  病変部（癌）
【図１】
2015173917.tif 000003
【図２】
2015173917.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
2015173917.tif 000007
【図６】
2015173917.tif 000008
【図７】
2015173917.tif 000009
【図８】
2015173917.tif 000010
【図９】
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【図１０】
2015173917.tif 000012
【図１１】
2015173917.tif 000013
【図１２】
2015173917.tif 000014
【図１３】
2015173917.tif 000015
【図１４】
2015173917.tif 000016
【図１５】
2015173917.tif 000017
【図１６】
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