(57)【要約】【課題】新たなＧＬＰ−１産生促進組成物を提供する。【解決手段】玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体を3〜15重量％含有する画分を有効成分とするＧＬＰ−１産生促進組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体を3〜15重量％含有する画分を有効成分とするＧＬＰ−１産生促進組成物。
【請求項２】
経口剤である請求項１に記載のＧＬＰ−１産生促進組成物。
【請求項３】
請求項１〜２のいずれかに記載のＧＬＰ−１産生促進組成物を含有する糖尿病治療剤。
【請求項４】
請求項１〜２のいずれかに記載のＧＬＰ−１産生促進組成物を含有する空腹感軽減用組成物。
【請求項５】
請求項１〜２のいずれかに記載のＧＬＰ−１産生促進組成物を含有するダイエット用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１産生促進組成物およびその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管ホルモンの一種である、グルカゴン様ペプチド−１；glucagon-like peptide-1(以下、ＧＬＰ−１と略記する。）は近年その生理作用に注目が集まっている。
ＧＬＰ−１は、主として膵臓に作用し、β細胞のインスリン放出をグルコース濃度依存的に促進することが知られている。また、グルカゴンの分泌を抑制し、胃の空洞化を遅らせ、末梢のグルコース処理を高めると言われている。
【０００３】
ＧＬＰ−１の投与によりインスリン非依存型糖尿病患者において食後のグルコースレベルが正常化され得ることから、ＧＬＰ−１は糖尿病の治療薬としての可能性を有している。また、ＧＬＰ−１はインスリン依存型糖尿病患者において血糖コントロールを改善する作用も有していることが知られている。さらに、ＧＬＰ−１のインスリン放出促進作用は血漿グルコース濃度に依存しているため、低い血漿グルコース濃度ではインスリン放出が低いため、低血糖症を招かないメリットがある。このため、必要時に、血中ＧＬＰ−１量をコントロールすることによって、安全性の高い糖尿病治療が可能になるものと期待されている。
【０００４】
血中ＧＬＰ−１量をコントロールする方法として、ＧＬＰ−１を直接経口又は注射剤として投与することができるが、ＧＬＰ−１は２〜６分と非常に短い血漿中半減期のため、その治療剤としての可能性が限定されているため、生体内でＧＬＰ−１を誘導する方法が検討されている。
【０００５】
ＧＬＰ−１産生あるいは分泌を誘導する物質として特開２００６−１１７５６６号公報にはサッカロミセス酵母から得られるマンナンがＧＬＰ−１の分泌を促進することが開示されている（特許文献１）。また特開２００６−１９９６９４号公報にはプロスタグランジン受容体のアゴニストがＧＬＰ−１の分泌促進することが開示されている（特許文献２）。その他多数のＧＬＰ分泌促進剤が報告されているが、ＧＬＰ−１分泌又は産生促進作用と化合物の相互関係は明らかになっていないため、現在のところトライアンドエラーの繰り返しで探索が行われている。
またＧＬＰ−１には空腹感を抑制する作用が有することが知られており、ダイエットに係る研究でも注目されている（非特許文献１）。したがって、生体内ＧＬＰ−１の産生を促進すれば空腹感を抑制することができ、肥満ダイエット食品に応用できれば肥満症などの患者の体重減少効果を期待できる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−１１７５６６号公報
【特許文献２】特開２００６−１９９６９４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１，１９９８，５１５−５２０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者は、植物由来ステロイド配糖体画分の研究を行い、その新しい用途と作用について研究を進めたところ、玄米糠由来のアシル化ステロイド（ステロール）配糖体（以下、「ＡＳＧと略称する場合がある」）を含有する抽出画分にＧＬＰ−１産生促進作用を見出し、本発明を完成させた。
本発明は、玄米糠由来ステロール配糖体を有効成分とするＧＬＰ−１産生促進剤及びこのＧＬＰ−１産生促進組成物の利用法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
すなわち、本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体を3〜15重量％含有する画分を有効成分とするＧＬＰ−１産生促進組成物。
（２）経口剤である（１）のＧＬＰ−１産生促進組成物。
（３）（１）〜（２）のいずれかに記載のＧＬＰ−１産生促進組成物を含有する糖尿病治療剤。
（４）（１）〜（２）のいずれかに記載のＧＬＰ−１産生促進組成物を含有する空腹感軽減用組成物。
（５）（１）〜（２）のいずれかに記載のＧＬＰ−１産生促進組成物を含有するダイエット用食品。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体が新たなＧＬＰ−１産生促進剤として提供される。特に化学式（１）で示される化合物がＧＬＰ−１産生促進組成物として有効である。本発明のＧＬＰ−１産生促進組成物は、濃度依存的にＧＬＰ−１産生促進作用を示す。本発明のＧＬＰ−１産生促進組成物は、経口摂取により小腸または大腸に存在するＧＬＰ−１産生細胞を刺激し、持続的にＧＬＰ−１産生を促進させるため、血中内のＧＬＰ−１濃度が上昇し、膵臓のβ細胞のＧＬＰ−１受容体と結合する。その結果インスリン分泌により血糖が低下するため、糖尿病用剤として利用することができる。
また空腹感を抑制する組成物を得ることができる。この組成物は、食事と同時又は食後に摂取することで、食事後の空腹を感じる時間を遅延させる効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体が濃度依存的にヒト大腸細胞由来の培養細胞にＧＬＰ−１産生を促進させることを示すグラフである。
【図２】玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体が対照に比して満腹感を持続させる効果を有することを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明に用いる玄米糠抽出物に含まれるアシル化ステロール配糖体は、通常混合物である。アシル化ステロール配糖体の構成糖は主にグルコースである。構成ステロールはβ−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール等である。アシル基は主にグルコースの６位が、脂肪酸によってアシル化されており、構成脂肪酸は主にリノール酸、オレイン酸、パルミチン酸である（帯大研報，10，（1977）507〜514）。
【００１３】
本発明に用いられるアシル化ステロール配糖体を３〜１５質量％含有する玄米糠抽出物は、アシル化ステロール配糖体を３〜１５質量％含有すればよく、抽出方法は任意である。
【００１４】
本発明に用いられる玄米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体の含有量の測定は以下の方法により行うことができる。
(１) 玄米糠抽出物を適量秤取し、クロロホルム／メタノール混液（クロロホルム：メタノール＝2：1）を加え、メスフラスコにてメスアップする。
(２) (２)で得られた溶液は成分濃度に応じて適宜希釈し、分析用試料溶液とする。
(３)標品はEsterified Steryl Glucoside(フナコシ社製)とし、高速液体クロマトグラフ(HPLC)法によりアシル化ステロール配糖体の濃度を算出する。
(４)高速液体クロマトグラフ法による分析条件
分析装置：HPLC
移動相A：メタノール：水 = 95：5（v/v）
移動相B：クロロホルム = 100（v/v）
ポンプ：Model 582 solvent delivery system
分析カラム：LiChrospher Si60（5μm）HPLC-Cartridge（MERCK社製）
検出器：荷電化粒子検出器（コロナダイオネクス社製）
Injection Volume：20μL
カラムオーブン：40℃（FLO社製 model 502）
分析時間：40min
脱泡装置：uniflows Degasys Ultimate DV3003
流速 ：1mL/min
グラジェント条件
以下に示すとおり
0-15分
移動相A：1％ → 25％、移動相B： 99％ → 75％
15-20分
移動相A：25％ → 90％、移動相B： 75％ → 10％
20-25分
移動相A：90％、移動相B： 10％
25-30分
移動相A：90％ → 1％、移動相B： 10％ → 99％
30-40分
移動相A：1％、移動相B： 99％
【００１５】
[ＡＳＧ構成成分の分析]
上記のＨＰＬＣ法で分離したＡＳＧをＬＣマススペクトル法で分析し、構成する糖質、脂肪酸、ステロールを分析した。
ＬＣ／ＭＳの条件は以下のとおりである。
検出器：ＬＣＭＳ−２０２０（島津製作所社製）、ＡＰＣＩ：ポジティブモード、カラム：ＵＧ１２０（５μｍ、４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ×２５０ｍｍ  （資生堂社製）、カラム温度：５５℃、流速  １ｍＬ/ｍin、注入量  ２０μＬ、移動相  アセトン：メタノール＝５０：５０（ｖ/ｖ）、分析時間  １３０分。
分析結果を下記の表1に示す。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
本発明に用いられる玄米糠抽出物の抽出方法としては、溶媒抽出法、超臨界抽出法等が挙げられる。
具体的な抽出操作を以下に示す。また、得られた玄米糠抽出物をカラムクロマトグラフィーで生成し、アシル化ステロール配糖体を濃縮してもよい。
（抽出方法  溶媒抽出方法）
市場に流通している玄米糠を選別した後にノルマルヘキサンなどの溶媒を用いて脱脂する。得られた油、脱脂糠などの粗原料を蒸留装置により脱溶媒し、さらにノルマルヘキサン、アセトン、エタノールなどの溶媒によって抽出する。得られた抽出液を、脱溶剤装置を用いて再度脱溶剤することで玄米糠抽出物を得ることができる。玄米糠抽出物はその他の成分として、トリグリセライド油、レシチンを含む。
【００１８】
本発明のＧＬＰ−１産生促進組成物は、糖尿病治療剤、空腹感軽減用組成物、ダイエット用食品として、あるいは動物用医薬として利用することができる。剤型は、公知の方法により助剤とともに任意の形態に製剤化して、経口摂取（投与）することができる。カプセル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液状として摂取（投与）できる。
摂取（投与）量は、摂取（投与）方法と、対象者の年齢、病状や一般状態等によって変化し得るが、成人では体重1kg当たり通常、１日当たり有効成分として0.１〜500mgが適当である。
【００１９】
＜玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体の調製について＞
１．糠成分を採取する玄米は、玄米又は発芽玄米を原料として用いることができる。発芽玄米は公知の方法により調製することができる。本出願人は、発芽玄米について多数の提案をしており、例えば、特許第３４２３９２７号公報、特許第３６１１８０４号公報、特許第３７３８０２５号公報等に開示された発芽玄米の製法によって得ることができる。
玄米又は発芽玄米を5〜15％程度搗精して糠成分を採取する。この糠成分を最初にヘキサンにて脱脂する。この脱脂工程は、一般の糠を脱脂して米糠油を採取する方法と同様である。したがって、脱脂処理後の廃棄される米糠を使用することもできる。
本発明では、例えば、この脱脂糠を原料として、さらに、有機溶媒を用いてアシル化ステロール配糖体画分を抽出する。
その他の方法としては、玄米糠を物理的に圧縮して得られた油からアシル化ステロール配糖体を抽出する事も出来る。
【００２０】
２．本発明に係る発芽玄米糠由来のアシル化ステロール配糖体とは式（１）に示す構造のステロール配糖体を含有する。このアシル化ステロール配糖体を以下ＡＳＧと略称する。
【００２１】
【化１】
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(i) 化学式（１）中のXは以下の群から選択されるいずれかである。
パルミトイル基
オレオイル基
リノレオイル基
(ii) 化学式（１）中のＹは以下の群から選択されるいずれかである。
β-シトステリル基
カンペステリル基
スチグマステリル基
有機溶媒による玄米糠抽出物中にはアシル化ステロール配糖体を３％以上含有する組成物が本発明の実施上好ましい。また高度に精製したアシル化ステロール配糖体を食品中に直接配合してもよい。アシル化ステロール配糖体を食品に配合する場合は３％以上の濃度
にすることが好ましい。
【実施例】
【００２２】
以下に実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２３】
＜実施例１＞
市場に流通している玄米糠を選別し胚乳や異物を除いた玄米糠を得た。得られた選別済みの玄米糠1kgに対して50Lの割合でノルマルヘキサンを用い脱脂した。この脱脂作業を3回繰り返し、脱脂糠を得た。得られた脱脂糠を蒸留装置により溶媒を除去した。得られた
脱脂糠8kgに対し、50Lの割合のエタノールによって70℃にて1時間、3回抽出し、得られた抽出液について、脱溶剤装置を用いて脱溶剤を行った。脱溶剤した抽出物をろ過することで得られた玄米糠抽出物のアシル化ステロール配糖体の含有量は３．4質量％であった。
【００２４】
＜実施例２＞
参考例1で得られた玄米糠抽出物20gに対し20mlのヘキサンとクロロホルムを1：1の割合で混合した溶媒を加えた。シリカゲルにヘキサン：クロロホルムを1：1の割合で混合した溶媒を加えて膨潤させ、直径5cm、長さ60cmのカラム内に充填し、その後に、同組成の溶媒を十分に浸透させた。玄米糠抽出物とヘキサンとクロロホルムの混合溶液をカラム上に注ぎ、完全にシリカゲル内に浸透させた。その後、ヘキサンとクロロホルムを1:1の割合で混合した溶媒1000mlを加え、カラム下部から排出した。ヘキサンとクロロホルムの溶媒がすべて排出された後に、さらにクロロホルムを2000ml加え、カラム下部から排出した。
クロロホルムがすべて排出された後にクロロホルム：メタノールを9:1の割合で混合した溶媒1000mlを加え、溶出液を回収した。得られた溶出液について、エバポレーターを用いて脱溶媒した。得られた玄米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体の含有量は12．0質量％であった。
【００２５】
試験例
［細胞培養試験］
NCI-H716細胞(ヒト結腸がん由来細胞)を1×105cellsを75cm2 の細胞培養フラスコに播種し、10% FBS含有RPMI1640培地で14日間、３７℃、5％ＣＯ２条件下で、培養を行った。なお NCI-H716細胞は、ATCC（American Type Culture Collection）から入手した。
培養後、マトリゲルを塗布した24 well plateに4×104cells/wellとなるように播種し、10%FBS含有DMEM培地で1日間培養を行った。
その後、Hanks緩衝液で2回洗浄し、試験試料を添加し、無血清DMEM培地で2時間培養を行った。培養終了後、培養液中に産生されたＧＬＰ−１量を「GLP-1 ELISA kit (Glucagon-Like Peptide-1  Cat＃EGLP-35K：Millipore社)」を用いて測定した。なお、コントロールは1％DMSOとし、陽性対照として用いたオレオイルエタノールアミド(OEA)は、ＧＬＰ−１産生促進査証を有することが知られている化合物である。このＯＥＡを100μMとなるように添加した。
【００２６】
[試験物質] 
実施例1及び2で得られたアシル化ステロール配糖体（ＡＳＧ）を含有する玄米からの抽出物を試験に用いた。ＡＳＧを含有する玄米糠抽出物の濃度が1000μg/ml/1％DMSO(ジメチルスルフォキシド)となるように、DMEM(FBS-,PS-)培地で溶解し、最終培養液中のＡＳＧを3.4％含有する玄米糠抽出物の濃度は、２５０μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌになるように、12.0％含有する玄米糠抽出物の濃度は333μｇ/ｍｌになるよう添加した。
【００２７】
[結果]
ＧＬＰ−１測定結果はＤＭＳＯのみの場合に得られる測定値を１としたとき、オレオイルエタノールアミド(OEA)、ＡＳＧを含む組成物２５０μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌのそれぞれの相対値として求めた。測定結果を図１に示す。ＡＳＧにＯＥＡと同等以上のＧＬＰ−１産生促進作用が確認され、さらに濃度依存性も認められた。
なお玄米糠由来の脂質画分であってＡＳＧを含有しないものにはＧＬＰ−１産生促進効果が認められなかった。
【００２８】
試験例
［満腹感の持続性の確認試験］
実施例１で得た玄米糠抽出物が満腹感を持続させる作用を有することを確認した。
（１）方法
・対象
健常な成人男性15名
・試験食品
被験品は、玄米糠抽出物185.6mgを含むソフトカプセル錠剤とした。プラセボカプセルは、玄米糠抽出物を含まないソフトカプセル錠剤とした。
・試験デザイン
試験デザインは、プラセボ群を対象とするランダム化したクロスオーバー二重盲検比較試験とした。摂取量は玄米糠抽出物カプセル、プラセボカプセルともに指定食摂取後に9粒を水250mlとともに摂取した。玄米糠抽出物摂取日とプラセボ摂取日は、ウォッシュアウトを1週間以上あけて実施した。
・検査方法
主観的自覚観察（ＶＡＳ）による満腹感調査を行った。
【００２９】
（２）試験結果
・主観的自覚観察（満腹度測定)
測定結果を図２に示す。指定食摂取60分後と90分後において、プラセボ群に比較し玄米糠抽出物摂取群で有意な差がみられた。
・本試験の評価
本試験では、健常者が玄米糠抽出物を摂取することによって、満腹感が維持するか検討した。その結果、本試験では、プラセボ群に比較して玄米糠抽出物群の満腹感調査で有意な差が見られた。
したがって本発明の組成物は満腹感の持続作用を有することが確認された。
【００３０】
以下に本発明のＡＳＧを用いた経口剤の処方例を示す。
処方例１
[カプセル剤]
組成
ＡＳＧ１０％含有組成物            １００ｍｇ
ミツロウ                            １０ｍｇ
ぶどう種子オイル                  １１０ｍｇ
上記成分を混合し、ゼラチンおよびグリセリンからなるカプセル基剤中に充填し、軟カプセルを得た。
【００３１】
処方例２
[錠剤]
組成
ＡＳＧ１０％含有組成物             １５０ｍｇ
セルロース                           ８０ｍｇ
デンプン                             ２０ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル                   ２ｍｇ
上記成分を混合、打錠し、錠剤を得た。
【００３２】
処方例３
[液剤]
組成                                  （配合；質量％）
果糖ブドウ糖液糖                      ５．００
クエン酸                            １０．４
Ｌ−アスコルビン酸                    ０．２０
香料                                  ０．０２
色素                                  ０．１０
ＡＳＧ１０％含有組成物                １．００
水                                  ８２．２８
【図１】
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【図２】
2015063508.tif 000006