(57)【要約】      （修正有）【課題】癌及び骨分解の処理のためのコロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−）の阻害の為にチロシンキナーゼ受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）に特異的な抗体、該抗体を含んでなる組成物、及び該組成物を用いた処置方法の提供。【解決手段】ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、特定のアミノ酸配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる、抗体、該抗体をコードする核酸配列、該核酸配列を含んでなるベクター、及び該抗体、該核酸配列又は該ベクターと薬学上許容される担体を含んでなる医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸もしくは配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ、または、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸もしくは配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸または配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項３】
配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸または配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなるＣＤＲの群から選択される、少なくとも２、３、４または５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ、または、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲからなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項５】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項６】
配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなるＣＤＲの群から選択される、少なくとも２、３、４または５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２もしくは１３のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号１４、１５もしくは１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項８】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項９】
配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１０】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２もしくは１３のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号１４、１５もしくは１６のいずれか１つで示される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１２】
配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるような少なくとも２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８もしくは１９のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号２０、２１もしくは２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１４】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１５】
配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８もしくは１９のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号２０、２１もしくは２２のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１８】
配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるような少なくとも２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４もしくは２５のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号２６、２７もしくは２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２０】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２１】
配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４もしくは２５のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号２６、２７もしくまたは２８のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２３】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２４】
配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるような少なくとも２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２６】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２８】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２９】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項３０】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項３１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項３２】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項３３】
可変領域が、１つ、より好ましくは２つ、いっそうより好ましくは３つ、確かに好ましくは４つのヒトＦＲを含んでなる、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３４】
可変領域が配列番号６で示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
可変領域が配列番号６で示される、請求項３４に記載の抗体。
【請求項３６】
可変領域が配列番号９で示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３７】
可変領域が配列番号９で示される、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、２つの可変領域を含んでなり、該可変領域が、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；ならびに配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域からなる群から選択される、抗体。
【請求項３９】
配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域；ならびに配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる、請求項３８に記載の抗体。
【請求項４０】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４２】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４３】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号６で示されるような可変領域と、配列番号９で示されるような可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４４】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域；ならびに配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４５】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４６】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４８】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号６で示されるような重鎖可変領域と、配列番号９で示されるような軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項４９】
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、抗体フラグメント、ダイアボディーおよびＦｄを含んでなる群から選択される、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５０】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２で示される２つの重鎖と、配列番号４で示される２つの軽鎖を含んでなる、抗体。
【請求項５１】
請求項１〜５０のいずれか一項に記載の抗体のアミノ酸配列と少なくとも８０、好ましくは少なくとも８５、より好ましくは少なくとも９０、いっそうより好ましくは少なくとも９８％相同なアミノ酸配列を有する抗体。
【請求項５２】
放射線増感剤、受容体および／または細胞傷害性薬剤とコンジュゲートされている、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５３】
請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体をコードする核酸配列。
【請求項５４】
請求項５３に記載の核酸配列を含んでなるベクター。
【請求項５５】
請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列または請求項５４に記載のベクターと薬学上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項５６】
前記組成物が対象化合物をさらに含んでなる、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
（ｉ）請求項５７に記載の医薬組成物、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列または請求項５４に記載のベクターと、（ｉｉ）対象化合物を含んでなる、パーツキット。
【請求項５８】
前記対象化合物が、治療化合物、好ましくは、癌治療薬または骨量低下の処置に有用な化合物である、請求項５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキット。
【請求項５９】
破骨細胞活性の上昇に関連する疾患の処置のための、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６０】
癌の処置のための、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６１】
転移癌に罹患している患者において骨に対する転移癌を予防または治療するための、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６２】
薬剤の製造における、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６３】
癌を有する患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６４】
破骨細胞活性の上昇に関連する疾患を有する患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６５】
炎症性腸疾患を有する患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【請求項６６】
関節リウマチに罹患している患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体、請求項５３に記載の核酸配列、請求項５４に記載のベクター、請求項５５もしくは５６に記載の医薬組成物または請求項５７に記載のパーツキットの使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
ＣＳＦ−１（コロニー刺激因子−１）は、特に種々のタイプの細胞により発現されるサイトカインである。それはＣＳＦ−１の受容体（ＣＳＦ−１Ｒ）を発現する単核食細胞系列細胞の分化、成長および生存因子である(SHERR. Colony-stimulating factor-1 receptor, blood. 1990, vol.75, no.1 , p.1-12)。ＣＳＦ−１Ｒは、細胞内キナーゼドメインと、５つの免疫グロブリン様サブドメインで構成されたリガンド結合細胞外領域を含有するｃ−ｆｍｓ癌原遺伝子(protoonogene)によりコードされているチロシンキナーゼ受容体である。ＣＳＦ−１Ｒに応答すると、生存、成長、分化および可逆的な機能変化の増大が起こる。このｃ−ｆｍｓ遺伝子はそれ自体、マクロファージ分化マーカーである。ｃ−ｆｍｓの発現程度は、リゾチームおよびマクロファージ特異的タンパク質チロシンホスファターゼをはじめとする他のマクロファージ特異的遺伝子の発現程度よりも強い(HUME, et al. Regulation of CSF-1 receptor expression. Molecular reproduction and development. 1997, vol.46, no.1 , p.46-52)。
【０００２】
単核食細胞系列の細胞の他、ＣＳＦ−１Ｒは多種のヒト腫瘍によっても発現される。乳癌では、ＣＳＦ−１Ｒ発現はより大きな腫瘍サイズおよび低い生存率と関連している(KLUGER, et al. Macrophage colony-stimulating factor-1 receptor expression is associated with poor outcome in breast cancer by large cohort tissue microarray analysis. Clinical cancer research. 2004, vol.10, no.1 , p.173-7; SCHOLL, et al. Anti-colony-stimulating factor-1 antibody staining in primary breast adenocarcinomas correlates with marked inflammatory cell infiltrates and prognosis. Journal of the National Cancer Institute. 1994, vol.86, no.2, p.120-6)。上皮卵巣癌では、大多数の原発腫瘍および転移がＣＳＦ−１Ｒを強く発現し、転移が頻繁にＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒを同時発現する。ＣＳＦ−１Ｒはまた腫瘍浸潤マクロファージによっても発現される(CHAMBERS, et al. Overexpression of epithelial macrophage colony-stimulating factor (CSF-1) and CSF-1 receptor: a poor prognostic factor in epithelial ovarian cancer, contrasted with a protective effect of stromal CSF-1. Clinical Cancer Research. 1997, vol.3, no.6, p.999-1007)。卵巣癌および子宮内膜癌では、ノーザンブロット分析は、極めて多くの腫瘍がＣＳＦ−１とＣＳＦ−１Ｒを同時発現するが、ＣＳＦ−１Ｒの発現は、正常な子宮内膜組織サンプルにおいては弱くしか検
出されないことを示す(BAIOCCHI, et al. Expression of the macrophage colony-stimulating factor and its receptor in gynecologic malignancies. Cancer. 1991, vol.67, no.4, p.990-6)。
子宮頸癌では、ＣＳＦ−１Ｒ発現は、正常な子宮内膜と比較して腫瘍間質と腫瘍上皮の双方でアップレギュレーションされている(KIRMA, et al. Elevated expression of the oncogene c-fms and its ligand, the macrophage colony-stimulating factor-1, in cervical cancer and the role of transforming growth factor-beta1 in inducing c-fms expression. Cancer res.. 2007, vol.67, no.5, p.1918-26)。腎臓癌では、高レベルのＣＳＦ−１Ｒを発現する腫瘍関連マクロファージの浸潤が腫瘍の進行に関連している(HEMMERLEIN, et al. Expression of acute and late-stage inflammatory antigens, c-fms, CSF-1, and human monocytic serine esterase 1, in tumor-associated macrophages of renal cell carcinomas. Cancer immunology, immunotherapy. 2000, vol.49, no.9, p.485-92)。ＣＳＦ−１Ｒは、１００％近くの前立腺上皮内新生物または癌サンプルにより発現される(IDE, et al. Expression of colony-stimulating factor 1 receptor during prostate development and prostate cancer progression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.. 2002, vol.99, no.22
, p.14404-9)。また、ＣＳＦ−１Ｒ発現は、急性骨髄芽球性白血病およびＢ細胞慢性リンパ性白血病でも検出されている(RAMBALDI, et al. Expression of the macrophage colony-stimulating factor and c-fms genes in human acute myeloblasts leukemia cells. Journal of Clinical Investigation. 1988, vol.81 , no.4, p.1030-5)。
【０００３】
免疫組織化学およびin situハイブリダイゼーションにより行われた研究では、浸潤性乳癌細胞におけるＣＳＦ−１発現の特異性が示されたが、管内性または非浸潤性腫瘍細胞では、このような産生は見られなかった(SCHOLL, et al. Anti-colony-stimulating factor-1 antibody staining in primary breast adenocarcinomas correlates with marked inflammatory cell infiltrates and prognosis. Journal of the National Cancer Institute. 1994, vol.86, no.2, p.120-6 ; TANG, et al. M-CSF (monocyte colony stimulating factor) and M-CSF receptor expression by breast tumour cells: M-CSF mediated recruitment of tumour infiltrating monocytes?. Journal of cellular biochemistry. 1992, vol.50, no.4, p.350-6)。浸潤性腫瘍細胞によるＣＳＦ−１の産生は患者の血漿におけるその濃度の上昇と相関があり、この場合には、正常な被験体における３００ｐｇ／ｍｌ未満に対して１０００ｐｇ／ｍｌを超え得る。高い血清濃度はこの疾患の進行段階および好ましくない短い予後と相関がある(SCHOLL, et al. Circulating levels of colony-stimulating factor 1 as a prognostic indicator in 82 patients with epithelial ovarian cancer. British journal of cancer. 1994, vol.69, no.2, p.342-6; SCHOLL. Circulating levels of the macrophage colony stimulating factor CSF-1 in primary and metastatic breast cancer patients. A pilot study. Breast cancer research and treatment. 1996, vol.39, no.3, p.275-83)。さらに、ＣＳＦ−１は腫瘍細胞の運動と浸潤を刺激することが実証されている(DORSCH, et al. Macrophage colony-stimulating factor gene transfer into tumor cells induces macrophage infiltration but not tumor suppression. European journal of immunology. 1993, vol.23, no.1 , p.186-90; WANG, et al. Induction of monocyte migration by recombinant macrophage colony-stimulating factor. Journal of immunology. 1988, vol.141 , no.2, p.575-9; FILDERMAN, et al. Macrophage colony-stimulating factor (CSF-1) enhances invasiveness in CSF-1 receptor-positive carcinoma cell lines. Cancer res. 1992, vol.52, no.13, p.3661-6)。
【０００４】
ＣＳＦ−１はまた骨髄系列の前駆体に対して走化効果を有し、これが腫瘍において単球の浸潤を促進する。しかしながら、これらの単球の存在は、免疫系による腫瘍の破壊を観察するには十分でない(DORSCH, et al. Macrophage colony-stimulating factor gene transfer into tumor cells induces macrophage infiltration but not tumor suppression. European journal of immunology. 1993, vol.23, no.1, p.186-90)。乳房、卵巣または膵臓の腫瘍に罹患している患者に共通に見られる高い血清含量で、ＣＳＦ−１はこれらの単球の、腫瘍抗原を提示し得る樹状細胞へではなく、マクロファージへの分化を方向づけ、従って、腫瘍細胞に対する有効な細胞傷害性免疫応答を誘導する(SCHOLL. Circulating levels of the macrophage colony stimulating factor CSF-1 in primary and metastatic breast cancer patients. A pilot study. Breast cancer research and treatment. 1996, vol.39, no.3, p.275-83; BARON, et al. Modulation of MHC class II transport and lysosome distribution by macrophage-colony stimulating factor in human dendritic cells derived from monocytes. Journal of cell science. 2001, vol.114, no.pt5, p.999-1010)。
【０００５】
ＣＳＦ−１はまた、破骨細胞の増殖および分化にも必須である(CECCHINI, et al. Role of CSF-1 in bone and bone marrow development. Molecular reproduction and development. 1997, vol.46, no.1, p.75-83)。破骨細胞は、骨の発達、ホメオスタシスおよび修復の際に、石灰化した骨の分解を主として担う造血径前駆体に由来する、ＣＳＦ−１Ｒを発現する多核細胞である。骨粗鬆症、悪性の高カルシウム血症、関節リウマチ、腫瘍転移およびパジェット病などの種々の骨格障害では、破骨細胞による骨の吸収が骨芽細胞による骨形成を上回り、骨量の低下、骨格の脆弱性および骨折をもたらす(BRUZZANITI, et al. Molecular regulation of osteoclast activity. Reviews in endocrine. 2006, vol.7, no.1-2, p.123-39)。例えば、進行した乳癌を有する患者は骨に転移を起こすことが多い。骨転移は難治性疼痛および腫瘍による骨の欠損（骨溶解）のための骨折の高いリスクをもたらし、これは破骨細胞活性の増大によって引き起こされる(CICEK, et al. Breast cancer bone metastasis and current small therapeutics. Cancer metastasis reviews. 2006, vol.25, no.4, p.635-44)。骨溶解は高レベルの循環ＣＳＦ−１と関連していることが示されている(KITAURA, et al. The journal of clinical investigation. M-CSF mediates TNF-induced inflammatory osteolysis. 2005, vol.115, no.12, p.3418-27)。
【０００６】
ＣＳＦ−１経路はまた、炎症性腸疾患などの疾患の腸管炎症の媒介(MARSHALL, et al. Blockade of colony stimulating factor-1 (CSF-I) leads to inhibition of DSS-induced colitis. Inflammatory bowel diseases. 2007, vol.13, no.2, p.219-24)、急性同種移植片拒絶の際のマクロファージ増殖(JOSE, et al. Blockade of macrophage colony-stimulating factor reduces macrophage proliferation and accumulation in renal allograft rejection. American journal of transplantation. 2003, vol.3, no.3, p.294-300)および感染マクロファージにおけるＨＩＶ−１複製(KUTZA, et al. Macrophage colony-stimulating factor antagonists inhibit replication of HIV-1 in human macrophages. Journal of immunology. 2000, no.164, p.4955-4960)にも関与している。
【０００７】
これらの理由で、癌および骨分解の処置に種々の化合物によるＣＳＦ−１活性の阻害が提案されている。
【０００８】
背景技術
ＷＯ０１／３０３８１は、腫瘍疾患の処置用薬剤の製造におけるＣＳＦ−１活性の阻害剤の使用に関する。ＣＳＦ−１活性の阻害のために提案される２つのアプローチは、ＣＳＦ−１活性自体の抑制とＣＳＦ−１Ｒの活性の抑制である。ＣＳＦ−１またはその受容体に対する中和抗体はＣＳＦ−１活性の阻害剤として好ましい。
【０００９】
ＷＯ０３／０５９３９５は、ＣＳＦ−１活性を阻害することができる物質と細胞傷害性活性を有する物質を含んでなる、癌の処置のための組合せ物を記載している。
【００１０】
ＷＯ２００５／０６８５０３は、対象にＣＳＦ−１に対する抗体を投与することにより、骨溶解、癌転移および癌転移に関連する骨の欠損を予防および治療するための方法を開示している。
【００１１】
ＥＰ１４８８７９２Ａは、ＣＳＦ−１Ｒチロシンキナーゼ活性を有効に阻害することによる分化、増殖またはメディエーターの放出の選択的阻害を示す単環式および／または二環式アリールまたはヘテロアリールキナゾリン化合物の使用に関するものである。この出願はまた、異常な細胞増殖を阻害することを目的とした薬剤の製造のためのこのような化合物の使用に関するものでもある。
【００１２】
ＵＳ２００５０５９１１３は、ａＣＳＦ−１と特異的に結合する抗体およびその抗原結合部分に関するものである。この発明はまた、ヒト抗ＣＳＦ−１抗体およびその抗原結合部分に関するものでもある。この出願発明はまた、ヒト抗ＣＳＦ−１抗体を含んでなる重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子を用いる遺伝子療法も提供する。
【発明の開示】
【００１３】
本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合する抗体に関する。
【００１４】
出願全体を通じて用いられているように、「a」および「an」は、文脈がそうではないことを明示していない限り、「少なくとも１つ」、「少なくとも第一」、「１以上」または「複数」の示された成分または工程を意味するものとして用いられる。例えば、「a cell」は、その混合物を含め、複数の細胞を示す。
【００１５】
「および／または」とは、本明細書で用いる場合は常に、「および」、「または」と「この用語によって結ばれた要素の総てまたは他のいずれかの組合せ」という意味を含む。
【００１６】
本明細書において「約」または「およそ」とは、示された値または範囲の２０％以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内を意味する。
【００１７】
本明細書において「含んでなる(comprising and comprise)」とは、そのパーツキット、生成物、組成物および方法が示されている成分または工程を含むが、他を排除するものではないことを意味するものとする。「から本質的になる」は、生成物、組成物および方法を定義するために用いる場合、任意の本質的に重要なもの以外の成分または工程を排除することを意味する。従って、記載の成分から本質的になる組成物は、微量夾雑物および薬学上許容される担体を排除するものではない。「からなる」は、他の成分または工程のわずかな要素も排除することを意味する。
【００１８】
本明細書において「と特異的に結合する」とは、タンパク質およびその他の生物産物の異種集団の存在下で、標的タンパク質の存在を決定付ける結合反応を意味する。よって、示されたアッセイ条件下で、本発明による抗体はＣＳＦ−１Ｒの少なくとも一部と優先的に結合し、試験サンプル中に存在する他の成分とは有意な量では結合しない。本発明による抗体とＣＳＦ−１Ｒ標的の間の特異的結合とは、その結合親和性が少なくとも１０３Ｍ−１、好ましくは１０５Ｍ−１、１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１または１０１０Ｍ−１であることを意味する。
【００１９】
本明細書において「ＣＳＦ−１Ｒ」とは、ヒトＣＳＦ１受容体を意味する。ヒトＣＳＦ−１受容体はすでに配列決定されており、そのアミノ酸配列は配列番号２９に示されている。
【００２０】
本明細書において「抗体」または「Ａｂ」は広義で用いられる。よって、「抗体」または「Ａｂ」は、天然物でも、または慣例のハイブリドーマ技術、組換え型技術により作製されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの人工物でも、および／またはその機能的フラグメントであってもよい。本発明の抗体は、完全な免疫グロブリン分子、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、単一特異性抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、動物抗体（例えば、ラクダ抗体）、キメラ抗体、ならびにその一部、フラグメント、領域、ペプチドおよび誘導体（限定されるものではないが、酵素的切断、ペプチド合成または組換え技術などの任意の公知の技術によって提供される）、例えば、軽鎖を欠く免疫グロブリン（例えば、米国特許第６，００５，０７９号参照）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、抗体フラグメント、ダイアボディー、Ｆｄ、ＣＤＲ領域、または抗原もしくはエピトープと結合し得る抗体の任意の部分またはペプチド配列の双方を含むものとする。抗体は、それが分子と特異的に反応し、それにより、その分子と抗体が結合することができる場合に、「分子と結合することができる」と言う。抗体フラグメントまたは部分は完全な抗体のＦｃフラグメントを欠いてもよく、循環から速やかに排除され、完全な抗体より低い非特異的組織結合を持ち得る。抗体の例は完全な抗体から、パパイン（Ｆａｂフラグメントの作製のため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの作製のため）などの酵素を用いたタンパク質分解切断によって作製され得る。例えば、Wahl et al., 24 J. Nucl. Med. 316-25 (1983)参照。抗体の一部は、上記方法のいずれかにより作製可能であり、あるいは組換え分子の一部を発現することにより作製可能である。例えば、組換え抗体のＣＤＲ領域を単離し、適当な発現ベクターにサブクローニングすることができる。
【００２１】
本明細書において「可変領域」とは、結合認識特異性の決定基を含む軽鎖（ＶＬ）または重鎖（ＶＨ）の可変領域またはドメインを意味する。可変ドメインは抗原認識に関与し、抗原結合部位を形成する。本明細書において「フレームワーク領域」とは、同種の異なる抗体間で少なくとも８５％相同な（すなわち、ＣＤＲ以外）軽鎖および重鎖可変領域の部分を意味する。本明細書において「相同」とは、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム(SMITH, et al. Identification of common molecular subsequences. Journal of Molecular Biology. 1981, no.147, p.195-7)を用いてアラインした際に、示されている同じアミノ酸のパーセンテージをほぼ有する、２つのポリペプチドのアミノ酸の比較を意味する。例えば、「８５％相同」とは、最適にアラインされた際に８５％のアミノ酸同一性を有する、２つのポリペプチドのアミノ酸の比較を意味する。重鎖および軽鎖双方の可変領域は、Ｋａｂａｔのデータベース(Kabat et al.,前掲)で定義される超可変配列の３つのストレッチ、すなわち、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＦＲ１とＦＲ２の間に位置するＣＤＲ１、ＦＲ２とＦＲ３の間に位置するＣＤＲ２、およびＦＲ３とＦＲ４の間に位置するＣＤＲ３）が挿入された４つのフレームワーク部分領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含んでなるセグメントに分割される。特定の部分領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定しない場合、他により示されるフレームワーク領域は、単一の天然免疫グロブリン鎖の可変領域内のＦＲの組合せを表す。本明細書において、ＦＲはフレームワーク領域を構成する４つの部分領域の１つを表し、ＦＲ’はその４つの部分領域の２以上を表す。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は、構成要素である軽鎖と重鎖のフレームワーク領域の組合せであり、ＣＤＲの配置およびアラインに役立つ。ＣＤＲは、抗原のエピトープに結合特異性と親和性を付与する抗体の結合部位の形成を主として担う。抗原結合領域を提供するＨまたはＬ鎖の可変領域内には、特異性の異なる抗体間で極めて多様なために「超可変」と呼ばれるより小さな配列がある。このような超可変領域は、「相補性決定領域」または「領域」と呼ばれる。これらのＣＤＲ領域は、特定の抗原決定基構造に対する抗体の基本的特異性を説明する。ＣＤＲは、可変領域内のアミノ酸の不連続なストレッチを表すが、種にかかわらず、重鎖可変領域および軽鎖領域内のこれらの重要なアミノ酸配列の位置取りは、可変鎖のアミノ酸配列内でも同様の位置を持つことが分かっている。
総ての抗体の可変重鎖および軽鎖がそれぞれ３つのＣＤＲ領域を有し、個々の軽（Ｌ）鎖および重（Ｈ）鎖については、他（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３と呼ばれる）とは不連続である。認知されているＣＤＲ領域は、Kabat et al, 252 J. Biol. Chem. 6609-16 (1977)により記載されており、直鎖アミノ酸配列の調査の際にこれらの規則を適用することにより、ＣＤＲループを同定することができる。とはいえ、ＣＤＲ−Ｈ３ループを定義するための規則は変動がある可能性があり（Chapter 4, Antibody Engineering: Methods & Protocols, (Lo, ed. Humana Press, Totowa, NJ, 2004)参照）、いくつかのＣＤＲ−Ｈ３ループの実際の境界は、円偏光二色性、核磁気共鳴またはＸ線結晶学などの実験技術なしでは同定不能である。総ての哺乳類種で、抗体ペプチドは定常領域（すなわち、保存性が高い）と可変領域を含み、後者の中にＣＤＲと、重鎖または軽鎖の可変領域内、ＣＤＲ外のアミノ酸配列で構成される、いわゆる「フレームワーク領域」がある。これらのＣＤＲ領域はＣｈｏｔｈｉａ命名法(CHOTHIA and LESK. Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins (1987) J Mol Biol. 1987 Aug 20;196(4):901-17)を用いて定義することもできる。よって、ある特定の実施形態では、ＣＤＲはＫａｂａｔにより定義されるＣＤＲであり、他の実施形態では、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａにより定義されるＣＤＲである。抗体のＣＤＲ領域により認識される抗原決定基に関しては、これはまた「エピトープ」とも呼ばれる。言い換えれば、エピトープは、抗体により認識され、結合され得る任意の分子の一部を意味する（対応する抗体結合領域はパラトープと呼ぶことができる）。一般に、エピトープは、例えばアミノ酸または糖側鎖など、化学的に活性な表面基からなり、特定の三次元構造特徴ならびに特定の電荷特徴を有する。
【００２２】
本明細書において「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」とは、単一のクローンに由来する抗体を意味する。モノクローナル抗体は、HARLOW. Antibodies: A Laboratory manual. 2nd edition. Cold Spring Harbor: Laboratory press, 1988およびHAMMERLING, et al. Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas. New York: Elsevier, 1981. p.563-681に開示されているものなどのハイブリドーマ技術を用いて作製することができる。
【００２３】
本明細書において「ヒト抗体」とは、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来するか、または密接に適合する可変領域と定常領域を有する抗体を意味する。本発明のヒト抗体はヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってはコードされないアミノ酸残基（例えば、in vitroにおけるランダムまたは部位指定突然変異誘発により、またはin vivoにおける体細胞突然変異により導入された突然変異）を含み得る。よって、本明細書において「ヒト抗体」とは、タンパク質の実質的に総ての部分がヒト生殖細胞系抗体と実質的に同じ抗体を意味する。「実質的に同じ」とは、ヒト生殖細胞系抗体の核酸配列と少なくとも８０％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、いっそうより好ましくは９５％相同な核酸配列を有する抗体を意味する。
【００２４】
本明細書において「Ｆａｂ」とは、重鎖および軽鎖の可変領域を含み、結合活性を示す抗体分子の領域を意味する。「Ｆａｂ」は、１つの重鎖と１つの軽鎖の凝集物（一般にＦａｂとして知られる）を含み、その凝集物が特定の抗原または抗原ファミリーと選択的に反応することができる限り、上記はいずれも共有結合的凝集であっても非共有結合的凝集であってもよい。Ｆａｂフラグメントは、ＶＬと、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを含んでなる第二のポリペプチドとを含んでなるヘテロ二量体である。好ましい実施形態では、この抗体はＦａｂ’フラグメントである。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆａｂ’フラグメントが抗体「ヒンジ領域」に由来する１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端におけるいくつかの残基を含むという点でＦａｂフラグメントとは異なる。
【００２５】
「Ｆ（ａｂ’）２」とは、抗体のペプシン処理により得られる抗体フラグメントまたは組換え技術などの他の技術により得られる等価のタンパク質を意味する。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは２つの抗原結合部位を含んでなお、抗原を架橋することができる。
【００２６】
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。
この領域は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの、強固な非共有結合的会合の二量体からなる。各可変ドメインの３つのＣＤＲはＶＨ  ＶＬ二量体の表面の抗原結合部位を定義すべく相互作用するのはこの構成である。合わせて考えると、６つのＣＤＲは抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含んでなるＦｖの半分）でさえ、完全な結合部位よりも親和性は低いものの、抗原を認識し、抗原と結合する能力を有する。
【００２７】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨドメインとＶＬドメインを含んでなり、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、ｓｃＦｖはさらにＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーを含んでなり、これによりｓｃＦｖは抗原結合に望ましい構造を形成することができる(LENNARD. Standard protocols for the construction of scFv libraries. Methods in molecular biology. 2002, no.178, p.59-71)。
【００２８】
本明細書において「抗体フラグメント」とは、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上のフラグメントを意味する。
【００２９】
「ダイアボディー」とは、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを意味し、これらのフラグメントは、同じポリペプチド鎖（ＶＨ  ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含んでなる。同じ鎖の２つのドメイン間の対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、これらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとの対合を余儀なくされ、２つの抗原結合部位を作り出す。
ダイアボディーは１つまたは１を超えるエピトープと結合し得る。ダイアボディーは、POLJAK. Production and structure of diabodies. Structure. 1994, vol.2, no.12, p.1121-3., HUDSON, et al. High avidity scFv multimers; diabodies and triabodies. Journal of immunological methods. 1999, vol.231, no.1-2, p.177-89およびKIPRIYANOV. Generation of bispecific and tandem diabodies. Methods in molecular biology . 2002, no.178, p.317-31により詳しく記載されている。
【００３０】
抗体フラグメントの製造のために種々の技術が開発されている。従来、これらのフラグメントは完全抗体のタンパク質加水分解消化により誘導されていた。しかしながら、現在、これらのフラグメントは組換え宿主細胞により直接生産することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖ抗体フラグメントは総て、大腸菌(E. coli)で発現させ、そこから分泌させることができ、従って、これらのフラグメントを大量に生産することができる。抗体フラグメントの生産のための技術は当業者に自明である。他の実施形態では、選択される抗体は単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。
【００３１】
本明細書において「ドメイン抗体」（ｄＡｂ）は、抗体の重鎖（ＶＨ）または軽鎖（ＶＬ）のいずれかの可変領域に相当する、抗体の最小機能的結合単位からなる。ドメイン抗体はおよそ１３ｋＤａ、または全抗体の１０分の１未満の大きさの分子量を有する。
【００３２】
本明細書において「Ｆｄ」とは、ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなる抗体フラグメントを意味する。
【００３３】
「抗体」または「Ａｂ」はまた、当業者に周知の他の抗体フラグメント、例えば、HOLLIGER, et al. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nature biotechnology. 2005, vol.23, no.9, p.1126-36およびHOOGENBOOM, et al. Natural and designer binding sites made by phage display technology. Immunology today. 2000, vol.21, no.8, p.371-8を意味する。
【００３４】
一実施形態によれば、本発明の抗体は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、または配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または
（ｉｉ）配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、または配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ
を含んでなる。
【００３５】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、または
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなるＣＤＲの群から互いに独立に選択される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００３６】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、または
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなるＣＤＲの群から互いに独立に選択される２、３、４または５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００３７】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉｉｉ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなるＣＤＲの群から互いに独立に選択される２個、いっそうより好ましくは３個のＣＤＲ、または
（ｉｖ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、または
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなるＣＤＲの群から互いに独立に選択される２個、いっそうより好ましくは３個のＣＤＲ
を含んでなる。
【００３８】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、および
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群において互いに独立に選択される少なくとも１つのＣＤＲ；または
（ｉｉ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群において互いに独立に選択される少なくとも１つのＣＤＲ
を含んでなる。
【００３９】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群において互いに独立に選択される少なくとも１つのＣＤＲ
を含んでなる。
【００４０】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群において互いに独立に選択される２、３、４または５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００４１】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉｖ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群において互いに独立に選択される２個、いっそうより好ましくは３個のＣＤＲ、または
（ｉｖ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群において互いに独立に選択される２個、いっそうより好ましくは３個のＣＤＲを含んでなる。
【００４２】
一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１１、１２もしくは１３のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ、または（ｉｉ）配列番号１４、１５もしくは１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００４３】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００４４】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００４５】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号１１、１２もしくは１３のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号１４、１５もしくは１６のいずれか１つで示される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００４６】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００４７】
好ましい一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６のいずれか１つで示されるような２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００４８】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号１７、１８もしくは１９のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号２０、２１もしくは２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００４９】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００５０】
好ましい一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００５１】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号１７、１８もしくは１９のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号２０、２１もしくは２２のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００５２】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示される少なくとも１つのＣＤＲセットを含んでなる。
【００５３】
好ましい一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるような２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００５４】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号２３、２４もしくは２５のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号２６、２７もしくは２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００５５】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００５６】
好ましい一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００５７】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号２３、２４もしくは２５のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号２６、２７もしくまたは２８のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００５８】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるような少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる。
【００５９】
好ましい一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４、２５、２６、２７または２８のいずれか１つで示されるような２、３、４、５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる。
【００６０】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列
で示されるようなＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６１】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるようなＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６２】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２および１３で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６３】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１４、１５および１６で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６４】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８および１９で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６５】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２０、２１および２２で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６６】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４および２５で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６７】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２６、２７および２８で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる。
【００６８】
好ましい実施形態では、前記可変領域は、１つ、より好ましくは２つ、いっそうより好ましくは３つ、確かに好ましくは４つのフレームワーク領域、より好ましくはヒトＦＲをさらに含んでなる。本明細書において「ヒトＦＲ」は、天然ヒト抗体のフレームワーク領域と少なくとも７５％相同なフレームワーク領域である。
【００６９】
好ましい一実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号６で示されるようなアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる。
【００７０】
より好ましい実施形態では、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号６で示されるような可変領域を含んでなる。
【００７１】
別の好ましい実施形態では、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号９で示されるようなアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる。
【００７２】
別のより好ましい実施形態では、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号９で示されるような可変領域を含んでなる。
【００７３】
別の実施形態では、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列、および
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列
で示されるようなＣＤＲを含んでなる可変領域；
（ｉｉ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるようなＣＤＲを含んでなる可変領域；
（ｉｉ）配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；
（ｉｉｉ）配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；
（ｉｖ）配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；
（ｖ）配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；
（ｖｉ）配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；ならびに
（ｖｉｉ）配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域の群において互いに独立に選択される２つの可変領域を含んでなる。
【００７４】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、および
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ
を含んでなる第一の可変領域と
（ｉｉ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ
を含んでなる第二の可変領域
を含んでなる。
【００７５】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１１、１２および１３で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）配列番号１４、１５および１６で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
を含んでなる。
【００７６】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１７、１８および１９で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２０、２１および２２で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
を含んでなる。
【００７７】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２３、２４および２５で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２６、２７および２８で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
を含んでなる。
【００７８】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号６で示されるような可変領域と、
（ｉｉ）配列番号９で示されるような可変領域
を含んでなる。
【００７９】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるようなＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるようなＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなる。
【００８０】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号１１、１２および１３で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１４、１５および１６で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる。
【００８１】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号１７、１８および１９で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２０、２１および２２で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる。
【００８２】
別の実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号２３、２４および２５で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２６、２７および２８で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる。
【００８３】
好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ｉ）配列番号６で示されるような重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号９で示されるような軽鎖可変領域を含んでなる。
【００８４】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、および
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ
を含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲ
を含んでなる可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００８５】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１１、１２および１３で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）配列番号１４、１５および１６で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００８６】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１７、１８および１９で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２０、２１および２２で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００８７】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２３、２４および２５で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２６、２７および２８で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００８８】
より好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号６で示されるような可変領域と、
（ｉｉ）配列番号９で示されるような可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００８９】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）
・配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、
・配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、および
・配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ
を含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）
・配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、
・配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、および
・配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲ
を含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００９０】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１１、１２および１３で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号１４、１５および１６で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００９１】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１７、１８および１９で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２０、２１および２２で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００９２】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２３、２４および２５で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２６、２７および２８で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
【００９３】
より好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号６で示されるような重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号９で示されるような軽鎖可変領域
を含んでなるｓｃＦｖである。
いっそうより好ましい実施形態では、配列番号６および９で示されるようなアミノ酸配列内で少なくとも１つのアミノ酸が置換されている（表１および表２に従う）ｓｃＦｖが提供される。確かに好ましい実施形態では、配列番号６および９で示されるようなアミノ酸配列内で表１および表２に示されている総てのアミノ酸が置換されている（表１および表２に従う）ヒト抗体が提供される。
【００９４】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２で示されるような重鎖を含んでなる。
【００９５】
別の好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号４で示されるような軽鎖を含んでなる。
【００９６】
より好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２で示されるような重鎖と配列番号４で示されるような軽鎖を含んでなる。
【００９７】
いっそうより好ましい実施形態によれば、本発明の抗体はＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２で示されるような２つの重鎖と配列番号４で示されるような２つの軽鎖を含んでなる。この特定の抗体は本願を通じてＣＸＩＩＧ６と呼ばれる。
【００９８】
別の好ましい実施形態によれば、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるようなＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるようなＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるようなＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるヒト抗体に関する。
【００９９】
別の実施形態によれば、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１１、１２および１３で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖変領域と、
（ｉｉ）配列番号１４、１５および１６で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるヒト抗体に関する。
【０１００】
別の実施形態によれば、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号１７、１８および１９で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２０、２１および２２で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるヒト抗体に関する。
【０１０１】
別の実施形態によれば、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号２３、２４および２５で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号２６、２７および２８で示されるような３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなるヒト抗体に関する。
【０１０２】
好ましい実施形態によれば、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ｉ）配列番号６で示される重鎖可変領域と、
（ｉｉ）配列番号９で示される軽鎖可変領域
を含んでなるヒト抗体に関する。
より好ましい実施形態では、配列番号６および９で示されるようなアミノ酸配列内で少なくとも１つのアミノ酸が置換されている（表１および表２に従う）ヒト抗体が提供される。いっそうより好ましい実施形態では、配列番号６および９で示されるようなアミノ酸配列内で表１および表２に示されている総てのアミノ酸が置換されている（表１および表２に従う）ヒト抗体が提供される。
【表１】
2015096522.tif 000002
【表２】
2015096522.tif 000003
【０１０３】
本発明による抗体、より具体的には、ヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＥなどの種々のイソ型であり得る。好ましい実施形態では、本発明による抗体、より具体的には、ヒト抗体はＩｇＧである。
【０１０４】
関連の実施形態では、このヒト抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の修飾または非修飾定常領域を含んでなる。好ましい実施形態では、この定常領域は、ある特性を増強または減弱するように修飾されていてもよいヒトＩｇＧＩまたはＩｇＧ４である。
【０１０５】
ＩｇＧＩの場合、定常領域、特にヒンジ領域またはＣＨ２領域への修飾は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を含むエフェクター機能を増強または減弱し得る。他の実施形態では、ＩｇＧ２定常領域は抗体−抗原凝集物の形成を低下するように修飾する。ＩｇＧ４の場合、定常領域、特にヒンジ領域への修飾は、ハーフ抗体の形成を低下させ得る。
【０１０６】
所望の結合親和性は、その抗体の１以上のアミノ酸が突然変異されても保存される。これらの変異体は抗体中の少なくとも１つのアミノ酸が異なる残基で置換されている。別の実施形態によれば、本発明は、上記のようにＣＳＦ１と特異的に結合し、ＣＤＲに含まれる少なくとも１つのアミノ酸が保存的に置換されている抗体を提供する。保存的置換を表３に示す。
【表３】
2015096522.tif 000004
【０１０７】
本発明はまた、親和性成熟（affinity maturation）により本発明の抗体を修飾する方法に関する。
【０１０８】
本明細書において「親和性成熟」とは、１以上のＣＤＲに含まれる１以上のアミノ酸の置換であって、その置換が、そのような置換を持たない親抗体に比べてＣＳＦ−１Ｒに対する抗体の親和性の向上をもたらす場合を意味する。親和性成熟法は当技術分野で公知である。例えば、MARKS, et al. By-passing immunization: building high affinity human antibodies by chain shuffling. Biotechnology. 1992, vol.10, no.7, p.779-83; BARBAS, et al. In vitro evolution of a neutralizing human antibody to human immunodeficiency virus type 1 to enhance affinity and broaden strain cross-reactivity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1994, vol.91, no.9, p.3809-13; SCHIER. Identification of functional and structural amino-acid residues by parsimonious mutagenesis. Gene. 1996, vol.169, no.2, p.147-55; YELTON. Affinity maturation of the BR96 anti-carcinoma antibody by codon-based mutagenesis. J. Immunol.. 1995, vol.155, no.4, p.1994-2004; JACKSON, et al. In vitro antibody maturation. Improvement of a high affinity, neutralizing antibody against IL- 1 beta. J. immunol. 1995, vol.154, no.7, p.3310-9およびHAWKINS, et a
l. Selection of phage antibodies by binding affinity. Mimicking affinity maturation. Journal of molecular biology. 1992, vol.226, no.3, p.889-96に開示されている方法を参照。
【０１０９】
本発明はまた、従前に記載されているような親和性成熟により得られる、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合する抗体に関する。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明は、従前に記載されている抗体のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、いっそうより好ましくは少なくとも９８％相同なアミノ酸配列を有する、従前に記載されている抗体の変異体を提供する。
【０１１１】
別の実施形態では、本発明による抗体は１を超えるエピトープと特異的に結合する。例えば、本発明による抗体は、ＣＳＦ−１Ｒの２つの異なるエピトープと結合し得る。あるいは、本発明による抗体は、ＣＳＦ−１Ｒと、かつ、別の分子と結合することができる。
本明細書において、１を超えるエピトープと特異的に結合する抗体は架橋抗体であり得る。例えば、ある抗体はアビジンと、他のものはビオチンと結合させることができる。架橋抗体は当技術分野で周知の任意の共有結合的架橋法を用いて作製し得る。抗体フラグメントから二重特異性抗体を作出するための技術もまた記載されている（例えば、BRENNAN, et al. Preparation of bispecific antibodies by chemical recombination of monoclonal immunoglobulin G1 fragments. Science. 1985, vol.229, no.4708, p.81-3およびSHALABY, et al. Development of humanized bispecific antibodies reactive with cytotoxic lymphocytes and tumor cells overexpressing the HER2 protooncogene. The Journal of experimental medicine. 1992, vol.175, no.1 , p.217-25, KOSTELNY, et al. Formation of a bispecific antibody by the use of leucine zippers. J. Immunol.. 1992, vol.148, no.5, p.1547-33参照）。
【０１１２】
好ましい実施形態によれば、本発明による、１を超えるエピトープと特異的に結合する抗体はダイアボディーである。
【０１１３】
別の好ましい実施形態によれば、本発明による、１を超えるエピトープと特異的に結合する抗体は、ZAPATA, et al. Engineering linear F(ab')2 fragments for efficient production in Escherichia coli and enhanced antiproliferative activity. Protein engineering. 1995, vol.8, no.10, p.1057-62に記載されているような直鎖抗体である。
【０１１４】
本発明による抗体は、グリコシル化型であっても非グリコシル化型であってもよい。
【０１１５】
本明細書において「グリコシル化」とは、抗体と共有結合されている炭水化物単位の存在を意味する。
【０１１６】
別の実施形態では、本発明による抗体は放射線増感剤、受容体および／または細胞傷害性薬剤とコンジュゲートされている。
【０１１７】
本明細書において「放射線増感剤」とは、細胞を放射線療法に対してより高い感受性とする分子を意味する。放射線増感剤としては、限定されるものではないが、メトロニダゾール、ミゾニダゾール、デスメチルミゾニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ミノラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ１０６９、ＳＲ４２３３、Ｅ０９、ＲＢ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦＵｄＲ）、ヒドロキシ尿素およびシスプラチンが挙げられる。
【０１１８】
本明細書において「受容体」とは、リガンドと特異的に結合することができる化合物を意味する。本発明の好ましい実施形態によれば、受容体はビオチンである。
【０１１９】
本明細書において、細胞傷害剤とは、細胞に直接的に有毒であり、生殖または成長を妨げる化合物を意味する。好ましい実施形態によれば、本発明において用いられる細胞傷害性薬剤は、癌治療薬、毒素（例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の酵素的に活性な毒素もしくはそのフラグメント）または放射性同位元素からなる群から選択される。
【０１２０】
別の実施形態では、本発明による抗体は標識剤とコンジュゲートされる。
【０１２１】
本明細書において「標識剤」とは、検出可能な化合物を意味する。標識剤はそれ自体検出可能であり得る（例えば、放射性同位元素標識もしくは蛍光標識）か、または酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物の化学修飾を触媒し得る。
【０１２２】
本明細書において「コンジュゲートされる」とは、本発明による抗体と標識剤が共有結合または非共有結合されることを意味する。
【０１２３】
「共有結合」とは、所望によりクロスリンカーまたは他の活性化剤を介した反応性官能基間のカップリングを意味する（例えば、HERMANSON. Bioconjugate techniques. Academic press, 1996参照）。本発明による抗体および／またはコンジュゲート薬剤は、例えば活性化されたカルボニル基（in situで活性化されたものを含む）上もしくはイミドエステル上での置換を介して、飽和炭素原子もしくはヘテロ原子に対する還元的アミノ化、求核置換により、芳香環に対する反応により、それらのカップリングを可能となるように修飾可能である。特に、カップリングはホモ二官能性またはヘテロ二官能性架橋試薬を用いて行うことができる。種々の部分に存在し得るアミン基のカップリングには、グルタルアルデヒド、コハク酸、およびＤＭＳ（スベリイミド酸ジメチル）のようなビスイミドエステルを含むホモ二官能性クロスリンカーが使用可能である。多くの例がHERMANSON. Bioconjugate techniques. Academic press, 1996. p.118-228に示されており、当業者によく知られている。ヘテロ二官能性クロスリンカーとしては、アミン反応性基とスルフヒドリル反応性基、カルボニル反応性基とスルフヒドリル反応性基、およびスルフヒドリル反応性基と光反応性リンカーの双方を有するものが挙げられる。好適なヘテロ二官能性クロスリンカーは、例えば、HERMANSON. Bioconjugate techniques. Academic press, 1996. p.229-285に記載されている。例としては、例えば、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＭＢＰ（スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート）、ＳＭＰＴ（スクシンイミジルオキシカルボニル−メチル（−２−ピリジルジチオ）トルエン）、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＳＩＡＢ（Ｎ−スクシンイミジル（４ヨードアセチル）アミノベンゾエート）、ＧＭＢＳ（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル）、ＳＩＡＸ（スクシンイミジル−６−ヨードアセチルアミノヘキソネート、ＳＩＡＣ（スクシンイミジル−４−ヨードアセチルアミノメチル）、ＮＰＩＡ（ｐ−ニトロフェニルヨードアセテート）がある。他の例は炭水化物含有分子（例えば、ｅｎｖ糖タンパク質、抗体）とスルヒドリル反応性基をカップリングさせるのに有用である。例としては、ＭＰＢＨ（４−（４−Ｎマレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド）およびＰＤＰＨ（４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド（Ｍ２Ｃ２Ｈおよび３−２（２−ピリジルジチオ）プロピルオニルヒドラジド）がある。
【０１２４】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明の抗体をコードする核酸配列に関する。
【０１２５】
「核酸配列」とは、ヌクレオチドの直鎖配列を意味する。ヌクレオチドはポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドまたは両者の混合物の直鎖配列のいずれかである。本発明においてポリヌクレオチドの例は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、および一本鎖および二本鎖ＤＮＡとＲＮＡの双方の混合物を有するハイブリッド分子がある。さらに、本発明のポリヌクレオチドは１以上の修飾ヌクレオチドを有し得る。
【０１２６】
本発明の好ましい実施形態によれば、本発明による核酸配列はベクター内に含まれる。
【０１２７】
このベクターはプラスミドまたはウイルス起源であってよく、適当であれば、トランスフェクション効率および／またはベクターの安定性を改良する１以上の物質と組み合わせてもよい。これらの物質は当業者に入手可能な文献に広く記載されている（例えば、FELGNER, et al. Cationic liposome mediated transfection. Proceedings of the Western Pharmacology Society. 1989, vol.32, p.115- 21; HODGSON, et al. Virosomes: cationic liposomes enhance retroviral transduction. Nature biotechnology. 1996, vol.14, no.3, p.339-42; REMY, et al. Gene transfer with a series of lipophilic DNA-binding molecules. Bioconjugate chemistry. 1994, vol.5, no.6, p.647-54参照）。非限定例として、この物質はポリマー、脂質、特に、陽イオン脂質、リポソーム、核タンパク質または中性脂質であり得る。これらの物質は単独で用いても組み合わせて用いてもよい。考えられる組合せとしては、陽イオン脂質（ＤＯＧＳ、ＤＣ−ＣＨＯＬ、スペルミン−ｃｈｏｌ、スペルミジン−ｃｈｏｌなど）、リソリン脂質（例えば、ヘキサデシルホスホコリン）および中性脂質（ＤＯＰＥ）と組み合わせた組換えプラスミドベクターがある。
【０１２８】
好ましい実施形態によれば、本発明で使用可能な陽イオン脂質はＥＰ９０１４６３Ｂに記載されている陽イオン脂質、より好ましくは、ｐｃＴＧ９０である。
【０１２９】
本発明の範囲内で使用可能なプラスミドの選択肢は膨大である。それらはクローニングベクターおよび／または発現ベクターであり得る。一般的な方法では、それらは当業者に既知であり、それらの多くが市販されているとともに、遺伝子操作の技術を用いてそれらを構築または修飾することもできる。挙げられる例としては、ｐＢＲ３２２(Gibco BRL)、ｐＵＣ(Gibco BRL)、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ(Stratagene)、ｐＲＥＰ４、ｐＣＥＰ４(Invitrogene)またはｐ  Ｐｏｌｙ(LATHE, et al. Plasmid and bacteriophage vectors for excision of intact inserts. Gene. 1987, vol.57, no.2-3, p.193-201)に由来するプラスミドがある。好ましくは、本発明において用いられるプラスミドは、生産細胞および／または宿主細胞において複製の開始を保証する複製起点を含む（例えば、大腸菌での産生を意図するプラスミドにはＣｏｌＥＩ基点が選択され、哺乳類宿主細胞でプラスミドが自己複製することを望む場合にはｏｒｉＰ／ＥＢＮＡ１系が選択される(LUPTON, et al. Mapping genetic elements of Epstein-Barr virus that facilitate extrachromosomal persistence of Epstein-Barr virus-derived plasmids in human cells. Molecular and cellular biology. 1985, vol.5, no.10, p.2533-42; YATES, et al. Stable replication of plasmids derived from Epstein-Barr virus in various mammalian cells. Nature. 1985, vol.313, no.6005, p.812-5）。このプラスミドは加えて、トランスフェクト細胞の選択または同定を可能とする選択遺伝子を含み得る（栄養要求性突然変異の補足、抗生物質体制をコードする遺伝子など）。本来、プラスミドは所定の細胞におけるその維持および／またはその安定性を改良する付加的要素を含み得る（単量型でのプラスミドの維持を促進するｃｅｒ配列(SUMMERS, et al. Multimerization of high copy number plasmids causes instability: ColE1 encodes a determinant essential for plasmid monomerization and stability. Cell. 1984, vol.36, no.4, p.1097-103)、細胞ゲノムに組み込むための配列）。
【０１３０】
ウイルスベクターに関しては、ポックスウイルス（ワクシニアウイルス、特に、ＭＶＡ、カナリア痘ウイルスなど）由来、アデノウイルス由来、レトロウイルス由来、ヘルペスウイルス由来、αウイルス由来、泡沫状ウイルス由来またはアデノウイルス随伴ウイルス由来のベクターを考えることができる。複製適格または複製欠陥ウイルスベクターを使用することができる。組み込まれないベクターを用いるのが好ましい。この点において、アデノウイルスベクターおよびポックスウイルス由来ベクター、より好ましくは、ワクシニアウイルスおよびＭＶＡは、本発明の実施に特に極めて好適である。
【０１３１】
好ましい実施形態によれば、本発明のウイルスベクターは修飾ワクシニアウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）に由来する。ＭＶＡベクターおよびこのようなベクターを作製する方法は欧州特許ＥＰ８３２８６ＡおよびＥＰ２０６９２０Ａ、ならびにSUTTER, et al. Nonreplicating vaccinia vector efficiently expresses recombinant genes. Proa Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1992, vol.89, no.22, p.10847-51に詳しく記載されている。より好ましい実施形態によれば、本発明による核酸配列はＭＶＡベクターの欠失Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶおよびＶＩに、いっそうより好ましくは欠失ＩＩＩに挿入することができる(MEYER, et al. Mapping of deletions in the genome of the highly attenuated vaccinia virus MVA and their influence on virulence. The Journal of general virology. 1991, vol.72, no.Pt5, p.1031-8; SUTTER, et al. A recombinant vector derived from the host range-restricted and highly attenuated MVA strain of vaccinia virus stimulates protective immunity in mice to influenza virus. Vaccine. 1994, vol.12, no.11, p.1032-40)。
【０１３２】
レトロウイルスは、分裂細胞に感染し、ほとんどの場合には組み込まれる特性を有し、この点において、癌に関する使用に特に適当である。本発明による組換えレトロウイルス遺伝子は一般にＬＴＲ配列、キャプシド形成領域、およびレトロウイルスＬＴＲまたは下記のものなどの内在プロモーターの制御下に置かれた本発明によるヌクレオチド配列を含む。組換えレトロウイルスはいずれの起源（ネズミ、霊長類、ネコ、ヒトなど）のレトロウイルスに由来してもよく、特には、ＭｏＭｕＬＶ（モロニーネズミ白血病ウイルス）、ＭＶＳ（ネズミ肉腫ウイルス）またはＦｒｉｅｎｄネズミレトロウイルス（Ｆｂ２９）に由来してもよい。それは、ウイルス粒子を構築するために必要とされるウイルスポリペプチドｇａｇ、ｐｏｌおよび／またはｅｎｖをトランスで供給し得るキャプシド形成細胞系統で増殖される。このような細胞系統は文献に記載されている（ＰＡ３１７、Ｐｓｉ  ＣＲＩＰ  ＧＰ＋Ａｍ−１２など）。本発明によるレトロウイルスベクターは、特にＬＴＲ（プロモーター領域を真核細胞プロモーターで置換）またはキャプシド形成領域（異種キャプシド形成領域、例えばＶＬ３Ｏタイプで置換）に修飾を含み得る（米国特許第５７４７３２３号参照）。
【０１３３】
ベクターが宿主生物または環境内で増殖することを避けるために、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ４およびＬ１−Ｌ５領域から選択される、複製に必須な少なくとも１つの領域の全部または一部を欠いたアデノウイルスベクターを用いることも好ましい。Ｅ１領域の欠失が好ましい。しかしながら、それは、欠陥のある必須機能が相補的細胞系統および／またはヘルパーウイルスの手段によりトランスで補足される程度に、特にＥ２、Ｅ４および／またはＬ１−Ｌ５領域の全部または一部に影響を及ぼす他の修飾／質質と組み合わせることもできる。この点において、当技術分野の現状の第２世代ベクターを用いることが可能である（例えば、国際出願ＷＯ９４／２８１５２およびＷＯ９７／０４１１９参照）。例として、Ｅ１領域およびＥ４転写単位の主部分の主要部分の欠失が特に極めて有利である。クローニング能力を高める目的で、アデノウイルスベクターは非必須Ｅ３領域の全部または一部を付加的に欠いてもよい。別法によれば、キャプシド形成に必須な配列、すなわち５’および３’ＩＴＲ（逆方向末端反復配列）とキャプシド形成領域を保持した最小アデノウイルスベクターを用いることも可能である。様々なアデノウイルスベクターおよびそれらを作製する技術が知られている（例えば、GRAHAM, et al. Methods in molecular biology. Edited by MURREY. The human press inc, 1991. p.109-128)。
【０１３４】
さらに、本発明によるアデノウイルスベクターの起源は、種の観点と血清型の観点の双方から多様であり得る。該ベクターはヒトまたは動物（イヌ、トリ、ウシ、ネズミ、ヒツジ、ブタ、サルなど）起源のアデノウイルスのゲノムに由来するか、あるいは少なくとも２種の異なる起源のアデノウイルスゲノムフラグメントを含んでなるハイブリッドに由来する。より詳しくは、イヌ起源のＣＡＶ−１またはＣＡＶ−２アデノウイルス、トリ起源のＤＡＶアデノウイルスまたはウシ起源のＢａｄ３型アデノウイルスが挙げられる(ZAKHARCHUK, et al. Physical mapping and homology studies of egg drop syndrome (EDS-76) adenovirus DNA. Archives of virology. 1993, vol.128, no.1-2, p.171-6; SPIBEY, et al. Molecular cloning and restriction endonuclease mapping of two strains of canine adenovirus type 2. The Journal of general virology. 1989, vol.70, no.Pt 1 , p.165-72 ; JOUVENNE, et al. Cloning, physical mapping and cross-hybridization of the canine adenovirus types 1 and 2 genomes. Gene. 1987, vol.60, no.1 , p.21-8; MITTAL, et al. Development of a bovine adenovirus type 3-based expression vector. The Journal of general virology. 1995, vol.76, no. Pt 1, p.93-102)。しかしながら、好ましくは、血清型Ｃアデノウイルス、特に２または５型血清型Ｃアデノウイルスに由来するヒト起源のアデノウイルスベクターが好ましい。
【０１３５】
本明細書において「複製適格」とは、トランス補足の不在下でも宿主細胞で複製し得るウイルスベクターに関する。
【０１３６】
好ましい実施形態によれば、複製適格ベクターは複製適格アデノウイルスベクターである。これらの複製適格アデノウイルスベクターは当業者に周知である。これらのうち、ＯＮＹＸ−０１５ウイルス(BISCHOFF, et al. An adenovirus mutant that replicates selectively in p53-deficient human tumor cells. Science. 1996, vol.274, no.5286, p.373-6; He HEISE, et al. An adenovirus E1A mutant that demonstrates potent and selective systemic anti-tumoral efficacy. Nature Medicine. 2000, vol.6, no.10, p.1134-9; WO 94/18992)のように、５５ｋＤ  Ｐ５３インヒビターをコードするＥ１ｂ領域に欠失があるアデノウイルスベクターが特に好ましい。従って、このウイルスはｐ５３欠陥新生物細胞に選択的に感染してそれを死滅させるために使用可能である。当業者ならば、確立された技術に従い、アデノウイルス５または他のウイルスでｐ５３阻害遺伝子を突然変異および破壊することもできる。Ｅ１Ａ  Ｒｂ結合領域に欠失があるアデノウイルスベクターも本発明で使用可能である。例えば、Ｅ１Ａ領域に２４塩基対の欠失を有する突然変異アデノウイルスであるデルタ２４ウイルス(FUEYO, et al. A mutant oncolytic adenovirus targeting the Rb pathway produces anti-glioma effect in vivo. Oncogene. 2000, vol.19, no.1, p.2-12)。デルタ２４はＲｂ結合領域に欠失を有し、Ｒｂと結合しない。従って、この突然変異ウイルスの複製は正常細胞ではＲｂにより阻害される。しかしながら、Ｒｂが不活化されて、細胞が新生物化すると、デルタ２４はもはや阻害されない。代わりに、突然変異ウイルスは効率的に複製し、Ｒｂ欠陥細胞を溶解させる。
【０１３７】
本発明によるアデノウイルスベクターは、ライゲーションまたは相同組換え（例えば、国際出願ＷＯ９６／１７０７０参照）により大腸菌Escherichia coli（E.coli）においてin vitroで、または相補的細胞系統で組換えにより作製することができる。
【０１３８】
本発明の好ましい実施形態によれば、ベクターは本発明による抗体の発現に必要な要素をさらに含んでなる。
【０１３９】
発現に必要な要素は、核酸配列がＲＮＡへと転写され、ｍＲＮＡがポリペプチドへと翻訳され得る総ての要素からなる。これらの要素は、特に調節型であっても構成型であってもよいプロモーターを含んでなる。当然、プロモーターは選択されるベクターおよび宿主細胞に適したものである。挙げられる例としては、ＰＧＫ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）、ＭＴ（メタロチオネイン；MCIVOR. Human purine nucleoside phosphorylase and adenosine deaminase: gene transfer into cultured cells and murine hematopoietic stem cells by using recombinant amphotropic retroviruses. Molecular and cellular biology. 1987, vol.7, no.2, p.838-46）、α−１−アンチトリプシン、ＣＦＴＲ、界面活性剤、免疫グロブリン、アクチン(TABIN, et al. Adaptation of a retrovirus as a eucaryotic vector transmitting the herpes simplex virus thymidine kinase gene. Molecular and cellular biology. 1982, vol.2, no.4, p.426-36)およびＳＲα(TAKEBE, et al. SR alpha promoter: an efficient and versatile mammalian cDNA expression system composed of the simian virus 40 early promoter and the R-U5 segment of human T-cell leukemia virus type 1 long terminal repeat. Molecular and cellular biology. 1988, vol.8, no.1, p.466-72)遺伝子の真核細胞プロモーター、ＳＶ４０ウイルス（シミアンウイルス）の初期プロモーター、ＲＳＶ（ラウス肉腫ウイルス）のＬＴＲ、ＨＳＶ−
１  ＴＫプロモーター、ＣＭＶウイルス（サイトメガロウイルス）の初期プロモーター、ワクシニアウイルスのｐ７．５Ｋ  ｐＨ５Ｒ、ｐＫ１Ｌ、ｐ２８およびｐ１１プロモーター、ｐ１１Ｋ７．５などのキメラプロモーター、およびＥ１ＡおよびＭＬＰアデノウイルスプロモーターがある。プロモーターは腫瘍または癌細胞で発現を刺激するプロモーターでもよい。乳癌および前立腺癌で過剰発現されるＭＵＣ−１遺伝子(CHEN, et al. Breast cancer selective gene expression and therapy mediated by recombinant adenoviruses containing the DF3/MUC1 promoter. The Journal of clinical investigation. 1995, vol.96, no.6, p.2775-82)、結腸癌で過剰発現されるＣＥＡ（癌胎児性抗原を表す）遺伝子(SCHREWE, et al. Cloning of the complete gene for carcinoembryonic antigen: analysis of its promoter indicates a region conveying cell type-specific expression. Molecular and cellular biology. 1990, vol.10, no.6, p.2738-48)、黒色腫で過剰発現されるチロシナーゼ遺伝子(VILE, et al. Use of tissue-specific expression of the herpes simplex virus thymidine kinase gene to inhibit growth of established murine melanomas following direct intratumoral injection of DNA. Cancer res.. 1993, vol.53, no.17, p.3860-4)、乳癌および膵臓癌で過剰発現されるＥＲＢＢ−２遺伝子(HARRIS, et al. Gene therapy for cancer using tumour-specific prod
rug activation. Gene therapy. 1994, vol.1 , no.3, p.170-5)および肝臓癌で過剰発現されるα−フェトプロテイン遺伝子(KANAI, et al. In vivo gene therapy for alpha-fetoprotein-producing hepatocellular carcinoma by adenovirus-mediated transfer of cytosine deaminase gene. Cancer res.. 1997, vol.57, no.3, p.461-5)のプロモーターが特に挙げられる。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期プロモーターが特に極めて好ましい。
【０１４０】
しかしながら、ワクシニアウイルス由来のベクター（例えばＭＶＡベクターについて）が用いられる場合、チミジンキナーゼ７．５Ｋ遺伝子のプロモーターおよびｐＨ５Ｒプロモーターが特に好ましい。
【０１４１】
必要な要素として、宿主細胞で本発明によるヌクレオチド配列の発現またはその維持を改善する付加的要素をさらに含んでもよい。イントロン配列、分泌シグナル配列、核局在配列、ＩＲＥＳ型の翻訳の再開始のための内部部位、転写終結ポリＡ配列、三分割リーダーおよび複製起点が特に挙げられる。これらの要素は当業者に知られている。分泌シグナル配列としては、配列番号５および／または８で示されるようなポリペプチドをコードする配列が特に好ましい。
【０１４２】
本発明による組換えベクターは対象とする１以上の付加的遺伝子も含むことができ、これらの遺伝子は同じ調節要素（ポリシストロニックカセット）または独立要素の制御下に置くことができる。特に挙げられる遺伝子は、インターロイキンＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ケモカイン（例えばＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＸＣＬ−１４）、インターフェロン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、および先天性免疫および血管形成に作用する因子（例えば、ＰＡＩ−１、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤を表す）をコードする遺伝子である。特定の一実施形態では、本発明による組換えベクターはＩＬ−２をコードする対象遺伝子を含んでなる。
【０１４３】
本発明はまた、本発明による核酸配列を含んでなる細胞に関する。好ましい実施形態では、本発明による細胞は真核細胞、より好ましくは哺乳類細胞である。発現用宿主として利用可能な哺乳類細胞は当技術分野で公知であり、限定されるものではないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞およびその他多くのものなどの多くの不死化細胞系統が含まれる。好適な付加的真核細胞には、酵母およびその他の真菌が含まれる。
【０１４４】
本発明はまた、抗体の発現を許容する条件下で本発明による細胞を培養すること、および細胞または細胞周囲の培地から抗体を精製することを含んでなる本発明による抗体を生産するための方法に関する。
【０１４５】
別の実施形態では、本発明は、本発明による抗体、核酸配列またはベクターのいずれか１つと薬学上許容される担体とを含んでなる医薬組成物に関する。好ましい実施形態では、医薬組成物は対象化合物をさらに含んでなる。
【０１４６】
薬学上許容される担体は、好ましくは等張性、低張性または弱高張性であり、例えばスクロース溶液のような比較的低イオン強度を有する。さらに、このような担体は溶媒または水性もしくは部分的水性の液体、例えば非発熱性無菌水を含有してもよい。加えて、医薬組成物のｐＨはin vivo使用の要件を満たすように調整および緩衝化される。医薬組成物は、薬学上許容される希釈剤、アジュバントまたは賦形剤、ならびに可溶化剤、安定剤および保存剤を含んでもよい。注射投与の場合、水性、非水性または等張性溶液中の処方物が好ましい。それは、使用時に適切な希釈剤で再構成することができる、液体または乾燥形（粉末、凍結乾燥品など）の単回用量または多回用量として提供することができる。
【０１４７】
本発明はまた、（ｉ）本発明による医薬組成物、抗体、核酸配列またはベクターと、（ｉｉ）対象化合物を含んでなるパーツキットに関する。
【０１４８】
本明細書において「対象化合物」とは、治療化合物、好ましくは、癌治療薬または骨量低下の処置に有用な化合物に関する。
【０１４９】
好ましい実施形態によれば、癌治療薬は、アドレキサン（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子処方物）、アドリアマイシン（塩酸ソルビシン）、アドルシル（フルオロウラシル）、アルダラ（イミキモド）、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化ヒ素、アバスチン（ベバシズマブ）、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ボルテゾミブ、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサール（塩酸イリノテカン）、カペシタビン、カルボプラチン、セツキシマブ、シスプラチン、クラフェン（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（クロファラビン）、クロラール（クロファラビン）、シクロホスファミド、シタラビン、シトサール−Ｕ（シタラビン）、サイトキサン（シクロホスファミド）、ダコゲン（デシタビン）、ダサチニブ、デシタビン、デポサイト（リポソーマルシタラビン）、デポフォーム（リポソーマルシタラビン）、塩酸デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキシル（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム、Ｄｏｘ−ＳＬ（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、エフデックス（フルオロウラシル）、エレンス（塩酸エピルビシン）、エロクサチン（オキサリプラチン）、エメンド（アプレピタント）、塩酸エピルビシン、エルビタックス（セツキシマブ）、塩酸エルロチニブ、エバセット（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、アビスタ（塩酸ラロキシフェン）、エキセメスタン、ファスロデックス（フルベストラント）、フェマラ（レトロゾール）、フルオロプレックス（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、フルベストラント、ゲフィチニブ、塩酸ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（塩酸ゲムシタビン）、グリベック（メシル酸イマチニブ）、ヘルセプチン（トラスツズマブ）、ハイカムチン（塩酸トポテカン）、メシル酸イマチニブ、イミキモド、イレッサ（ゲフィチニブ）、塩酸イリノテカン、イキサベピロン、イグゼンプラ（イキサベピロン）、ケオキシフェン（塩酸ラロキシフェン）、ケピバンス（パリフェルミン）、二トシル酸ラパチニブ、レナリドマイド、レトロゾール、レブラン（アミノレブリン酸）、リポドックス（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、リポソーマルシタラビン、メタゾラストン（テモゾロマイド）、メトトレキサート、マイロサール（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子処方物）、ネララビン、ネオサール（シクロホスファミド）、ネクサバール（トシル酸ソラフェニブ）、ニロチニブ、ノルバデックス（クエン酸タモキシフェン）、オンキャスパー（ペグアスパラガーゼ）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子処方物、パリフェルミン、パニツムマブ、パラプラット(Paraplat)（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、ペグアスパラガーゼ、ペメトレキセド二ナトリウム、プラチノール−ＡＱ（シスプラチン）、プラ��ノール（シスプラチン）、塩酸ラロキシフェン、レブリミド（レナリドマイド）、リツキサン（リツキシマブ）、リツキシマブ、スクレロゾール胸腔内エアゾール（タルク）、トシル酸ソラフェニブ、スプリセル（ダサチニブ）、無菌タルクパウダー（タルク）、無菌タルク（タルク）、リンゴ酸スニチニブ、スーテント（リンゴ酸スニチニブ）、シノビール(Synovir)（サリドマイド）、タルク、クエン酸タモキシフェン、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（塩酸エルロチニブ）、ターグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テモダール（テモゾロマイド）、テモゾロマイド、テムシロリムス、サロミド（サリドマイド）、サリドマイド、トテクト(Totect)（塩酸デクスラゾキサン）、塩酸トポテカン、トリセル（テムシロリムス）、トラスツズマブ、トリセノックス（三酸化ヒ素）、タイカーブ(Tykerb)（二トシル酸ラパチニブ）、ベクチビックス（パニツムマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ビダザ（アザシチジン）、ボリノスタット、ゼローダ（カペシタビン）、ザインカード（塩酸デクスラゾキサン）、ゾレンドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）およびゾメタ（ゾレンドロン酸）からなる群から選択される。
【０１５０】
本発明の好ましい実施形態によれば、骨量低下の処置に有用な化合物は、ビホスフォネート、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）（例えば、テリパラチド（フォルテオ））、ラネリック酸ストロンチウム、デノスマブまたはカルシトニン、またはその組合せである。より好ましい実施形態によれば、ビホスフォネートは、アレンドロネート（フォサマックス、フォサマックスプラスＤ）、エチドロネート（ダイドロネル）、イバンドロネート（ボニバ）、パミドロネート（アレディア）、リセドロネート（アクトネル、アクトネルＷ／カルシウム）、チルドロネート（スケリッド）およびゾレンドロン酸（レクラスト、ゾメタ）からなる群から選択される。より好ましい実施形態によれば、ＳＥＲＭは、ラロキシフェン（エビスタ）、バゼドキシフェン／プレマリン（アプレラル(Aprelal)）およびタモキシフェンからなる群から選択される。
【０１５１】
別の実施形態によれば、本発明は、破骨細胞活性の上昇に関連する疾患の処置のための、本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。このような疾患としては、限定されるものではないが、内分泌障害（高コルチコイド症、性機能不全症、原発性または続発性副甲状腺機能亢進、甲状腺機能亢進症）、高カルシウム血症、欠乏状態（くる病／骨軟化症、壊血病、栄養失調）、慢性疾患（吸収不良症候群、慢性腎不全（腎性骨形成異常）、慢性肝臓疾患（肝性骨形成異常）、薬剤（グルココルチコイド（グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症）、アンドロゲン抑制療法、アロマターゼ阻害療法、ヘパリン、アルコール）、および遺伝病（骨形成不全症、ホモシスチン尿症）、骨粗鬆症、大理石骨病、関節炎および関節リウマチに関連する骨の炎症、歯周病、繊維性形成異常および／またはパジェット病が挙げられる。
【０１５２】
別の実施形態によれば、本発明は、炎症および／または自己免疫に関連する疾患の処置のための、本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。このような疾患としては、限定されるものではないが、血清反応陰性脊椎関節症（乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、炎症性腸疾患に関連する脊椎関節症）、人工関節のゆるみ、結合組織疾患（若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）および狼瘡腎炎、硬皮症、シェーグレン症候群、混合型結合組織疾患、多発性筋炎、皮膚筋炎）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、ホウィップル病、肉芽腫性回結腸炎に関連する関節炎、炎症性皮膚症状（自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、皮膚炎）、炎症性肺疾患（肺胞炎、肺繊維症、類肉腫症、喘息、気管支炎、閉塞性細気管支炎）、炎症性腎疾患（糸球体腎炎(glomerulonethritis)、腎（臓）の同種移植片拒絶、尿細管炎症）、アテローム性動脈硬化症、全身性脈管炎（側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ウェゲナー肉芽腫、チャーグ・ストラウス症候群、顕微鏡的多発性血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホ・シェンライン紫斑病、本態性寒冷グロブリン血症性脈管炎およびその他の小血管性脈管炎、ベーチェット病）、マクロファージ活性化疾患（マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人スティル病、血球貪食症候群）、リウマチ性多発性筋痛、原発性胆汁性硬変、硬変性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型真性糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーブス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン−バレー症候群、アジソン病および／またはレイノー現象、グッドパスチャー症候群が挙げられる。
【０１５３】
別の実施形態によれば、本発明は、癌の処置のための、本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。
【０１５４】
本明細書において「癌」とは、限定されるものではないが、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質細胞癌、肺胞細胞癌、未分化癌、基底様癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、renaladinol癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板肝細胞癌、濾胞性癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟髄膜癌、髄様癌、黒色性癌、髄膜癌、子宮間膜癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌腫、汗腺癌、移行上皮癌、管状細胞癌、エナメル芽細胞肉腫、血管血友病肉腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質肉腫、ユーイング肉腫、神経束肉腫、巨細胞肉腫、顆粒膜肉腫、免疫芽球肉腫、傍骨性骨肉腫、coppices肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、austiogenci肉腫、骨膜肉腫、細網細胞肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨおよびびまん性リンパ腫を意味する。好ましい実施形態によれば、本発明による方法は骨に対する転移癌の処置に向けられ、その転移癌は乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、血液細胞悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫を含む）、頭頸部癌、胃腸管癌（食道癌、胃癌、結腸癌、腸管癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胆管または胆嚢の癌を含む）、女性生殖管の悪性腫瘍（卵巣癌、子宮内膜癌、膣癌および子宮頸癌を含む）、膀胱癌、脳癌（神経芽腫を含む）、肉腫、骨肉腫ならびに皮膚癌（悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む）である。
【０１５５】
本発明はさらに、癌治療薬による化学療法処置を受けている癌患者の処置を改善するための方法であって、該患者を上記で開示されたような方法で同時処置することを含んでなる方法に関する。
【０１５６】
本発明はさらに、細胞傷害剤または放射線療法の細胞傷害有効性を改善する方法であって、そのような処置を必要とする患者を上記で開示されたような方法で同時処置することを含んでなる方法に関する。
【０１５７】
本発明はさらに、ビホスフォネート、選択性エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）（例えば、テリパラチド（Ｆｏｒｔｅｏ））、ラネリック酸ストロンチウム、デノスマブもしくはカルシトニン、またはその組合せによる処置を受けている、破骨細胞活性の上昇に関連する疾患を有する患者の処置を改善するための方法であって、該患者を上記で開示されたような方法で同時処置することを含んでなる方法に関する。
【０１５８】
別の実施形態では、本発明の抗体の使用は、転移癌に罹患している患者において骨に対する転移癌を予防または治療するための薬剤の製造において意図される。関連の実施形態では、転移癌は乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、血液細胞悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫を含む）、頭頸部癌、胃腸管癌（食道癌、胃癌、結腸癌、腸管癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胆管または胆嚢の癌を含む）、女性生殖管の悪性腫瘍（卵巣癌、子宮内膜癌、膣癌および子宮頸癌を含む）、膀胱癌、脳癌（神経芽腫を含む）、肉腫、骨肉腫ならびに皮膚癌（悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む）である。
【０１５９】
別の実施形態によれば、本発明は、薬剤の製造における本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。
【０１６０】
別の実施形態によれば、本発明は、癌を有する患者を処置するための薬剤の製造における本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。
【０１６１】
別の実施形態によれば、本発明は、破骨細胞活性の上昇に関連する疾患を有する患者を処置するための薬剤の製造における本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。
【０１６２】
別の実施形態によれば、本発明は、炎症性疾患、より具体的には、炎症性腸疾患を有する患者を処置するための薬剤の製造における本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。
【０１６３】
別の実施形態によれば、本発明は、関節リウマチに罹患している患者を処置するための薬剤の製造における本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの使用に関する。
【０１６４】
本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットの投与は当業者に公知の任意の手段によって達成し得る。好ましい投与経路としては、限定されるものではないが、皮内、皮下、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、舌下、気管内通気、吸入、眼、膣および直腸がある。好ましい実施形態によれば、本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットは全身送達される。
【０１６５】
投与は単回用量または一定時間をおいた後に１回または数回繰り返される用量で行うことができる。望ましくは、本発明による抗体、核酸配列、ベクター、医薬組成物またはパーツキットは１週間おいて１〜１０回投与される。
【０１６６】
一般的な指針として、該抗体の好適な用量は約２ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。本発明によるベクターの好適な用量は、ＭＶＡベクターでは、約１０４〜１０１０ｐｆｕ（プラーク形成単位）、望ましくは、約１０５〜１０８ｐｆｕで様々であり、アデノウイルス系ベクターでは、約１０５〜１０１３ｉｕ（感染単位）、望ましくは、約１０７〜１０１２ｉｕで様々である。ベクタープラスミドに基づく組成物は１０μｇ〜２０ｍｇの間、有利には１００μｇ〜２ｍｇの間の用量で投与し得る。
【０１６７】
本発明による使用または方法が癌の処置のためである場合、本発明の方法または使用は１以上の慣例の治療法（例えば、放射線照射、化学療法および／または外科術）と組み合わせて行うことができる。複数の治療アプローチの使用は患者により広い基礎的介入を提供する。一実施形態では、本発明の方法は外科的介入の前または後に行うことができる。
別の実施形態では、それは放射線療法（例えば、γ線照射）の前または後に行うことができる。当業者ならば、使用可能な適当な放射線療法プロトコールおよびパラメーターを容易に処方することができる（例えば、PEREZ. Principles and practice of radiation oncology. 2nd edition. LIPPINCOTT, 1992参照）。
【実施例】
【０１６８】
発明を実施するための様式
ＣＳＦ−１ＲでトランスフェクトされたＮＩＨ／３Ｔ３細胞の、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６による特異的染色
Ｂ４−８００−５細胞系統は、全長ヒトＣＳＦ−１Ｒをコードする発現プラスミドでＮＩＨ／３Ｔ３細胞を安定的にトランスフェクトすることにより作製した。Ｂ４−８００−５細胞における細胞表面ＣＳＦ−１Ｒ発現は、抗ヒトＣＳＦ−１Ｒ  ｍＡｂ  ６１７０１（マウスＩｇＧ１、R&D Systems）または２−４Ａ５−４（ラットＩｇＧ１，ｋ、GeneTex）で間接的に免疫染色し、イソ型対照と比較することにより確認した（図１の上および中央のパネル）。ハイブリドーマＣＸＩＩＧ６または陰性対照ハイブリドーマの細胞上清を、Ｂ４−８００−５細胞または親ＮＩＨ／３Ｔ３細胞の免疫染色に用いた（図１の下のパネル）。
【０１６９】
フローサイトメトリー分析は、ハイブリドーマＣＸＩＩＧ６からの培養上清がＢ４−８００−５細胞を選択的に染色したことを示し、細胞表面ＣＳＦ−１Ｒに対するｍＡｂの特異性が証明された。
【０１７０】
細胞表面ＣＳＦ−１Ｒに対するＣＳＦ−１の結合の阻害
３×１０５  ＴＨＰ−１細胞（ヒトＣＳＦ−１Ｒ陽性単球性白血病細胞系統）を、ハイブリドーマ培養上清、ナイーブまたは抗ＣＳＦ−１Ｒ免疫マウスからの血清（１：１０００希釈）、ｍＡｂ抗ＣＳＦ−１Ｒ  ２−４Ａ５−４(GeneTex)または対照ラットＩｇＧ１（１０μｇ／ｍｌ）のいずれかのの存在下、または試薬無しで、４℃にて３０分間インキュベートした。冷ＰＢＳで２回洗浄した後、細胞を１μｇ／ｍｌのビオチン化組換えヒトＣＳＦ−１とともに３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、さらに４℃にて３０分間、１０μｇ／ｍｌストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８(Invitrogen)とともにインキュベートした。ＰＢＳで洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで固定した後、細胞染色をフローサイトメトリーにより分析した。
【０１７１】
対照サンプルと比較した場合の蛍光強度の低下は、細胞表面ＣＳＦ−１Ｒに対するＣＳＦ−１の結合の阻害を反映する。ＣＳＦ−１Ｒ免疫マウスからの血清はＴＨＰ−１細胞に対するＣＳＦ−１の結合を遮断する（図２）。陰性対照ハイブリドーマ上清または無関連のｍＡｂは効果を示さず、ハイブリドーマＣＸＩＩＧ６からの培養上清は、ｍＡｂ  ２−４Ａ５−４（左下のパネル）と同様に、ＴＨＰ−１細胞に対するＣＳＦ−１の結合を阻害する（図２の右下のパネル）。
【０１７２】
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６結合部位の位置決定
ＣＳＦ−１Ｒ上の、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の結合部位を特定するため、５つの細胞外免疫グロブリン様ドメイン（Ｍｅｔ  １〜ＧＬｕ  ５１２、R&D Systems）かＣＳＦ−１Ｒの細胞外領域の、３つのみのＮ末端免疫グロブリン様ドメイン（Ｍｅｔ  １〜Ｓｅｒ  ２９０）のいずれか（双方ともＣ末端でヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と融合）を含んでなる可溶型のヒトＣＳＦ−１Ｒを用いてウエスタンブロットを行った。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃと融合された可溶型のＥＧＦＲ(R&D Systems)を陰性対照としても用いた。
【０１７３】
各可溶性受容体１００ｎｇを天然状態で電気泳動に付した後、ニトロセルロースシートに転写し、ハイブリドーマ上清、ウサギｐＡｂ  ｃ−ｆｍｓ／ＣＳＦ−１Ｒ  Ｈ３００(Santa Cruz Biotechnology)、マウスｍＡｂ  ６１７０１(R&D Systems)またはナイーブまたはＣＳＦ−１Ｒ免疫マウスからの血清のいずれかでプロービングした。
【０１７４】
可溶型のＣＳＦ−１Ｒは双方とも、ｐＡｂ  ｃ−ｆｍｓ／ＣＳＦ−１Ｒ  Ｈ３００、ｍＡｂ  ６１７０１または免疫マウスからの血清でブロービングした際にブロードバンドとして検出された。ナイーブマウス血清または陰性対照ハイブリドーマ上清では検出可能なシグナルは見られなかった。ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清はＣＳＦ−１Ｒ１−２９０：ＦｃならびにＣＳＦ−１Ｒ１−５１２：Ｆｃを認識したが、ＥＧＦＲ：Ｆｃは認識せず、このことはＣＸＩＩＧ６がヒトＣＳＦ−１Ｒの３つのＮ末端免疫グロブリン様ドメイン内（残基１〜２９０の間）にあるエピトープと特異的に結合することを示唆する。
【０１７５】
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６による可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒの特異的遮断
ＣＳＦ−１依存性ネズミ骨髄性白血病Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞系統（＃ＣＲＬ−１８３８、ＡＴＣＣ）を用いて、ヒトおよびネズミＣＳＦ−１Ｒに対するＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清の遮断活性を評価した。５ｎｇの可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒ（ＣＳＦ−１Ｒ１−５１２：Ｆｃ、R&D Systems製）を、白色９６ウェルマイクロプレートにて、ハイブリドーマ上清、ｍＡｂ  ６１７０１(R&D Systems)またはネズミイソ型対照ｍＡｂのいずれかの希釈シリーズとともにインキュベートした。次に、これらの培養ウェルに、ＣＳＦ−１の不在下で一晩培養した１０Ｅ４  Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞を、０．１ｎｇのヒトＣＳＦ−１とともに最終アッセイ容量１００μｌとして加えた。培養物を３７℃で４８時間インキュベートし、細胞増殖ＥＬＩＳＡ(Roche)を用い、ＢｒｄＵの組み込みにより増殖を定量した。
【０１７６】
可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒは、陰性対照ＩｇＧ１を含む、または含まない陰性ハイブリドーマ上清の存在下で示される場合と同様に、ヒトＣＳＦ−１により媒介されるＭ−ＮＦＳ−６０細胞の増殖を完全に阻害した（図３；３ウェルの平均＋／−ＳＥＭ）。これに対し、ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清および陽性対照ｍＡｂ  ６１７０１は双方とも、用量依存的に細胞増殖を回復させることができ、それらが可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒを中和することができたことを示す。
【０１７７】
このアッセイにおいて、低希釈率のＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清の存在下でのＭ−ＮＦＳ−６０細胞の活発な増殖は、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６がＭ−ＮＦＳ−６０細胞によって発現されたネズミＣＳＦ−１Ｒを遮断することができなかったことを示した。さらに、可溶性ＣＳＦ−１Ｒの不在下で行ったネズミＣＳＦ−１で補助したＭ−ＮＦＳ−６０増殖アッセイでは、ｍＡｂ  ＡＦＳ９８抗マウスＣＳＦ−１Ｒ(eBioscience)で処理すると、細胞増殖に劇的な濃度依存性の低下が起こった（データは示されていない）。ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清は、陰性対照抗体および陰性ハイブリドーマ上清と同様に、細胞増殖の低下を引き起こさなかった。これらの結果は、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６が特異的にヒトＣＳＦ−１Ｒを標的とすることを証明する。
【０１７８】
ヒト破骨細胞分化およびマトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）分泌の阻害
破骨細胞は、健常な血液ドナーからのＰＢＭＣの傾瀉によって得られたヒト単球から作製した。要するに、単球を９６ウェルプレートに２×１０Ｅ４細胞／ウェルで播種し、ハイブリドーマ培養上清、ｍＡｂｓ抗ヒトＣＳＦ−１Ｒ  ６１７０１(R&D Systems)または２−４Ａ５−４(GeneTex)、ｍＡｂ抗ヒトＣＳＦ−１  ２６７３０(R&D Systems)、ネズミまたはラットイソ型対照、またはナイーブおよびＣＳＦ−１Ｒ免疫マウスからの血清のいずれかをハイブリドーマ培養培地で希釈したもので４５分間処理した。これらの培養ウェルに完全ａ−ＭＥＭ培地をヒトＣＳＦ−１およびＲＡＮＫＬ（PeproTech、それぞれ２５および４０ｎｇ／ｍｌ）とともに、または伴わずに加えた。ハイブリドーマ上清、ｍＡｂまたは／およびサイトカインを含む、もしくは含まない培地を９日間、３日おきに補充した。９日目に馴化培養上清を採取し、ＥＬＩＳＡアッセイ(R&D Systems)を用い、全ヒトＭＭＰ−９をアッセイした。破骨細胞の形成は、Sigma-Aldrichからの白血球酸性ホスファターゼキットを用い、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）の染色により評価した。
【０１７９】
ＣＳＦ−１＋ＲＡＮＫＬは、単球の破骨細胞（大きな多核ＴＲＡＰ陽性細胞として定義される）への分化を誘導したが、サイトカインの不在下ではＴＲＡＰ陽性破骨細胞は見られなかった。０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＳＦ−１  ｍＡｂ  ２６７３０を加えると、ＭＭＰ−９分泌の欠如により示されるように、破骨細胞分化が完全に排除された。同濃度の抗ＣＳＦ−１Ｒ  ｍＡｂｓ  ６１７０１または２−４Ａ５−４および免疫マウス血清（１：１０００希釈）は、破骨細胞の形成を部分的にだけ阻害した（図４；サイトカイン有り（＋）または無し（−）；３ウェルの平均＋／−ＳＥＭ；＊：２ウェルの平均）。１：２０または１：１００希釈のＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ培養上清で処理すると、２つの陰性対照ハイブリドーマ上清（Ａ、Ｂ）に比べ、ＭＭＰ−９生産のレベルが有意に減少した。これらの結果は、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６が、細胞表面ＣＳＦ−１Ｒの機能を遮断することにより、ヒト単球から破骨細胞への分化を阻害することを証明する。
【０１８０】
ＣＳＦ−１ＲのＣＳＦ−１依存性リン酸化の阻害
ヒトＣＳＦ−１Ｒを発現するプラスミドでＮＩＨ／３Ｔ３細胞を暗的的にトランスフェクトすることにより得られたＢ４−８００−５細胞系統を用いて、ＣＳＦ−１依存性ＣＳＦ−１Ｒリン酸化に対するＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清の効果を検討した。細胞を２×１０Ｅ５細胞／６０ｍｍペトリ皿で播種し、４８〜７２時間培養した。３７℃で１時間血清飢餓状態にした後、細胞を３７℃で１時間、ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清、ｍＡｂ  ２−４Ａ５−４(NeoMarkers)またはイソ型対照ｍＡｂ（陰性ハイブリドーマ上清で希釈）のいずれかを含有する培養培地で処理し、次に、３７℃で５分間、１００ｎｇ／ｍｌのｈＣＳＦ−１で刺激するか、または刺激しないままとした。次に、細胞層を溶解させ、全タンパク質を抽出した。１０μｇのタンパク質を、ウエスタンブロットを、ウサギｐＡｂ  ｃ−ｆｍｓ／ＣＳＦ−１Ｒ  Ｈ３００またはウサギｐＡｂ  ｐ−ｃ−ｆｍｓ／ＣＳＦ−１Ｒ（Ｔｙｒ７０８）−Ｒ(Santa Cruz Biotechnology)のいずれか、その後、ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンＨＲＰでプロービングすることにより分析した。
【０１８１】
ＣＳＦ−１の不在下では、ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清でもｍＡｂ  ２−４Ａ５−４でも、７０８番でリン酸化されたＣＳＦ−１Ｒに特異的な抗体で見られたような受容体のリン酸化は誘導されず、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６単独では促進作用を示さないことが示された。ＣＳＦ−１で刺激すると、イソ型対照処理細胞では非刺激細胞に比べてＣＳＦ−１Ｒの量が減少し、ＣＳＦ−１ＲはＴｙｒ７０８でリン酸化された（データは示されていない）。ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清またはｍＡｂ  ２−４Ａ５−４で前処理しても、ＣＳＦ−１Ｒの消失は高まらなかった。ＣＳＦ−１Ｒのリン酸化は、ＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清またはｍＡｂ  ２−４Ａ５−４で処理した後に低下した。これらの結果は、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６がＣＳＦ−１ＲのＣＳＦ−１依存性リン酸化を遮断することができることを示す。
【０１８２】
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の交差反応性
チロシンキナーゼ受容体のＩＩＩ型サブファミリーに属し、細胞外Ｉｇ様ドメインにおいてＣＳＦ−１Ｒと相同性を示す一連の精製可溶性受容体：可溶性ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、Ｆｌｔ−３およびＰＤＧＦＲβ（Ｆｃ融合タンパク質として発現される４つ総て）に対してＥＬＩＳＡによりｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の交差反応性を試験するとともに、ＰＤＧＦＲαおよびＳＣＦＲ（ｃ−ｋｉｔ）をR&D Systemsから入手し、ＥＬＩＳＡプレートを被覆するのに用いた。チロシンキナーゼ受容体のＥＧＦＲサブファミリーからの可溶性ＥＧＦＲ(R&D Systems)を陰性対照として用いた。
【０１８３】
ハイブリドーマＣＸＩＩＧ６（ＣＸＩＩＧ６  ＳＮ）または陰性対照ハイブリドーマ、または抗ＣＳＦ−１ＲマウスＩｇＧ１  ６１７０１(R&D Systems)から培養上清を、抗体濃度５００ｎｇ／ｍｌで被覆したＥＬＩＳＡプレート上でインキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートを洗浄した後、結合した抗体を、ペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇ(Sigma)を用いて明らかにし、ＯＤ(450-540nm)を測定した。図５に示されている結果は、ｍＡｂ  ６１７０１同様、ＣＸＩＩＧ６はＣＳＦ−１Ｒと強く結合したが、他のいずれのチロシンキナーゼ受容体にも特異的シグナルは検出されなかった。このことは、試験した種々のＩＩＩ型チロシンキナーゼ受容体のうち、ＣＸＩＩＧ６がＣＳＦ−１Ｒに特異的であることを示す。
【０１８４】
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６用の発現ベクターの構築
ＤＧ４４哺乳類細胞系統においてｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６を生産するために、ＣＸＩＩＧ６重鎖および軽鎖をコードする遺伝子のクローニングにＯｐｔｉＣＨＯ（商標）抗体発現キット（Invitrogen、カタログ番号１２７６２−０１９）を用いた。ＯｐｔｉＣＨＯ（商標）抗体発現キットは、（１）ＣＭＶプロモーターの下流に目的遺伝子のクローニングを可能とする二シストロン性のプラスミドｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）ベクター（目的遺伝子の転写は、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）によりジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）要求性選択マーカーから隔てられ、同じｍＲＮＡで目的遺伝子と選択マーカーの転写が可能となる）；（２）ＣＭＶプロモーターに下流に目的遺伝子のクローニングを可能とするｐｃＤＮＡ（商標）３．３ベクター（このｐｃＤＮＡ（商標）３．３はジェネティシン（登録商標）を用いて選択が可能なネオマイシン耐性遺伝子を含む）を含む。
このｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）およびｐｃＤＮＡ（商標）３．３ベクターは、目的遺伝子のｍＲＮＡの３’末端の適切なプロセシングを命令するＴＫポリＡ配列を含む。
【０１８５】
特異的プライマー（表４参照）を合成し、全ＣＸＩＩＧ６重鎖および軽鎖遺伝子のＰＣＲ増幅およびクローニングに用いた（それぞれ配列番号１および配列番号３；それぞれ図６および図７参照）。逆方向プライマーは効率的な真核生物の翻訳のためのＫｏｚａｋコンセンサス配列を含んだ(KOZAK M. An analysis of 5'-noncoding sequences from 699 vertebrate messenger RNAs. Nucleic Acids Res. 1987, 15(20):8125-8148)。
【０１８６】
【表４】
2015096522.tif 000005
【０１８７】
ＣＸＩＩＧ６重鎖を、プラスミドｐＴＧ１７７５３（図８）を鋳型とし、ＯＴＧ１８９２９およびＯＴＧ１８９３０を用いてＰＣＲ増幅し、ベクターｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）−ＴＯＰＯ（登録商標）（ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）−ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニング（登録商標）キット、Invitrogen、カタログ番号１２７４４−０１７−０１）およびｐｃＤＮＡ（商標）３．３−ＴＯＰＯ（登録商標）ベクター（ｐｃＤＮＡ（商標）３．３−ＴＯＰＯ（商標）ＴＡクローニング（登録商標）キット、Invitrogen、カタログ番号Ｋ８３００−０１）にクローニングし、それぞれｐＴＧ１７７８６およびｐＴＧ１７７８９を得た。
【０１８８】
ＣＸＩＩＧ６軽鎖を、プラスミドｐＴＧ１７７２７（図９）を鋳型とし、ＯＴＧ１８９３１およびＯＴＧ１８９３２を用いてＰＣＲ増幅し、ベクターｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）−ＴＯＰＯ（登録商標）（ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）−ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニング（登録商標）キット、Invitrogen、カタログ番号１２７４４−０１７−０１）およびｐｃＤＮＡ（商標）３．３−ＴＯＰＯ（登録商標）ベクター（ｐｃＤＮＡ（商標）３．３−ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニング（登録商標）キット、Invitrogen、カタログ番号Ｋ８３００−０１）にクローニングし、それぞれｐＴＧ１７７８８およびｐＴＧ１７７８７を得た。
【０１８９】
ＣＭＶプロモーターならびにｐＴＧ１７７８６、ｐＴＧ１７７８７、ｐＴＧ１７７８８およびｐＴＧ１７７８９のＴＫポリＡシグナルを含む全発現カセットのヌクレオチド配列を配列決定し、それらの理論的配列との一致が見られた。
【０１９０】
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６からのキメラ抗体の作製
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の可変ドメインをヒト定常領域と組み合わせた。
【０１９１】
キメラ軽鎖（キメラＣＸＩＩＧ６  Ｉｇκ鎖と呼ぶ）を作製するため、ＣＸＩＩＧ６  ＶＫドメイン（配列番号３から）をコードする配列とヒトＩＧＫＣ領域（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｊ００２４１）をコードする配列を連結することにより理論的配列を設計した。このＸｂａｌ  ＮｏｔＩ  ＤＮＡフラグメントは、５’末端にネズミ型（上記のｐＴＧ１７７８７およびｐＴＧ１７７８８の場合）において用いたものと同じ非翻訳配列（Ｋｏｚａｋ配列を含む）を保持していた。このキメラＣＸＩＩＧ６軽鎖配列を、ＣＨＯでの発現用にコドンを最適化し、合成オリゴヌクレオチドから構築し、ＧｅｎｅＡｒｔ  ＡＧを介してｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）（図１０）にサブクローニングした。得られたキメラＣＸＩＩＧ６軽鎖（可変領域および定常領域）の、コドンを最適化した核酸配列は配列番号３４に示す通りである。得られたプラスミドをｐＴＧ１７８９５と呼んだ（図１１）。
【０１９２】
キメラ重鎖ＩｇＧ１およびＩｇＧ４（それぞれキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１およびキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ４鎖と呼ぶ）を作製するため、ＣＸＩＩＧ６  ＶＨドメイン（配列番号１から）をコードする配列とヒトＩＧＨＧ１Ｃ領域（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｊ００２２８）またはヒトＩＧＨＧ４Ｃ領域（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｋ０１３１６）のいずれかをコードする配列を連結することにより理論的配列を設計した。これらのＸｂａＩ  ＮｏｔＩ  ＤＮＡフラグメントは、５’末端にネズミ型（上記のｐＴＧ１７７８７およびｐＴＧ１７７８８の場合）において用いたものと同じ非翻訳配列（Ｋｏｚａｋ配列を含む）を保持していた。次に、キメラＣＸＩＩＧ６重鎖を、ＣＨＯでの発現用にコドンを最適化し、合成し、ＧｅｎｅＡｒｔ  ＡＧによりＸｂａＩ  ＮｏｔＩを介してｐＴＧ１７８１２（図１２）にクローニングした。得られたキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１重鎖（可変領域および定常領域）の、コドンを最適化した核酸配列は配列番号３５に示す通りであり、得られたプラスミドをｐＴＧ１７８６８と呼んだ（図１３）。得られたキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ４重鎖（可変領域および定常領域）の、コドンを最適化した核酸配列は配列番号３６に示す通りであり、得られたプラスミドをｐＴＧ１７８６９と呼んだ（図１４）。
【０１９３】
ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６からのヒト抗体の作製
ヒト化軽鎖変異体を作製するため、配列番号９で示されるような軽鎖可変領域内で表２に従うアミノ酸置換を行った。
【０１９４】
ＤＮＡ配列は、ＣＸＩＩＧ６  ＶＫドメイン（配列番号３から）の置換を有する改変配列とヒトＩＧＫＣ領域（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｊ００２４１）をコードする配列を連結することにより設計した。このＸｂａＩ  ＮｏｔＩ  ＤＮＡフラグメントは、５’末端にネズミ型（上記のｐＴＧ１７７８７およびｐＴＧ１７７８８の場合）において用いたものと同じ非翻訳配列（Ｋｏｚａｋ配列を含む）を保持していた。次に、このヒト化ＣＸＩＩＧ６軽鎖配列を、ＣＨＯでの発現用にコドンを最適化し、合成オリゴヌクレオチドから構築し、ＧｅｎｅＡｒｔ  ＡＧによりＸｂａＩ  ＮｏｔＩを介してｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）（図１０）にクローニングした。得られたヒト化ＣＸＩＩＧ６軽鎖変異体およびプラスミドを図１５に一覧化する。
【０１９５】
ヒト化重鎖変異体を作製するため、配列番号６で示されるような重鎖可変領域内で表１に従うアミノ酸置換を行った。
【０１９６】
ＤＮＡ配列は、ＣＸＩＩＧ６  ＶＨドメイン（配列番号１から）の置換を有する改変配列とヒトＩＧＨＧ１Ｃ領域（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：Ｊ００２２８）をコードする配列を連結することにより設計した。このＸｂａＩ  ＡｐａＩ  ＤＮＡフラグメントは、５’末端にネズミ型（上記のｐＴＧ１７７８７およびｐＴＧ１７７８８の場合）において用いたものと同じ非翻訳配列（Ｋｏｚａｋ配列を含む）を保持していた。次に、このＤＮＡ配列を、ＣＨＯでの発現用にコドンを最適化し、合成し、ＧｅｎｅＡｒｔ  ＡＧによりＸｂａＩ  ＡｐａＩを介してｐＴＧ１７８１２（図１２）にクローニングした。得られたヒト化ＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１重鎖変異体およびプラスミドを図１６に一覧化する。
【０１９７】
組換えネズミＣＸＩＩＧ６およびキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１のin vitro阻害活性
精製組換えネズミＣＸＩＩＧ６（従前に記載の通り）およびそのキメラＩｇＧ１変異体（従前に記載されているようなキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１）が可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒを遮断することができたかどうかを判定するため、Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞増殖および破骨細胞分化モデル（従前に記載の通り）で用量応答試験を行った。Rockland(Rockland, 010-0141)からの精製ポリクローナルネズミＩｇＧ２ａおよび本出願者が作製したキメラＩｇＧ１を対照抗体として並行して試験した。細胞を、ＳＰＲバイオセンサーアッセイにおいて抗原結合により測定される、ある濃度範囲の活性抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体に曝すことにより遮断効果を評価した。ｍＡｂｓ  ＣＸＩＩＧ６とそれらの個々の対照ｍＡｂとの比較は、同量の全抗体をロードすることによって行った（Ｆｃ結合によるＳＰＲバイオセンサーアッセイ）。
【０１９８】
Ｍ−ＮＦＳ−６０バイオアッセイ：  Ｍ−ＮＦＳ−６０バイオアッセイでは、細胞を、５０ｎｇ／ｍｌのヒト可溶性ＣＳＦ−１Ｒおよび１ｎｇ／ｍｌのヒトＣＳＦ−１の存在下、０．２３ｎｇ／ｍｌ〜０．５μｇ／ｍｌの活性ｍＡｂｓ  ＣＸＩＩＧ６（組換えネズミＣＸＩＩＧ６；キメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１）または相当濃度の対照ｍＡｂで４８時間処理した。図１７に示される結果は、Ｍ−ＮＦＳ−６０細胞の増殖が、両ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６（組換えネズミＣＸＩＩＧ６；キメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１）の濃度の上昇に応答して増大したことを示し、それらが可溶性ＣＳＦ−１ＲとＣＳＦ−１の結合（３ウェルの平均＋／−ＳＥＭ）に拮抗作用を示すことを証明する。キメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１は、細胞増殖の回復において組換えネズミＣＸＩＩＧ６と同等の効果があった。対照ネズミＩｇＧ２ａおよびキメラＩｇＧ１は、それらそれぞれの濃度範囲で、可溶性ＣＳＦ−１ＲによるＣＳＦ−１の中和に効果が無かった。
【０１９９】
破骨細胞バイオアッセイ：  破骨細胞バイオアッセイでは、傾瀉ヒト単球を、２５ｎｇ／ｍｌのＣＳＦ−１(ImmunoTools)および４０ｎｇ／ｍｌのＲＡＮＫＬの存在下、０．８５ｎｇ／ｍｌ〜０．６２μｇ／ｍｌの活性ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６（組換えネズミＣＸＩＩＧ６；キメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１）とともに８日間インキュベートした。培地および総ての添加薬剤を４日目と６日目に補充し、６〜８日間馴化した培養培地にて全ＭＭＰ−９を測定した。図１８に示されている結果は、対照抗体と比較して、組換えネズミＣＸＩＩＧ６およびそのキメラ変異体（キメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１）がそれぞれ、破骨細胞分化と並行するＭＭＰ−９生産を有意に低下させたことを示し、増殖の遅延が起こったことを示唆している（図１８；３ウェルの平均＋／−ＳＥＭ）。
【０２００】
これらの結果を考え合わせると、精製組換えネズミＣＸＩＩＧ６およびキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１は細胞表面ならびに可溶性のヒトＣＳＦ−１Ｒを阻害することが示される。
【図面の簡単な説明】
【０２０１】
【図１】ＣＳＦ−１ＲでトランスフェクトされたＮＩＨ／３Ｔ３細胞の、ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６による特異的染色を示す。
【図２】ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の存在下での細胞表面ＣＳＦ−１Ｒに対するＣＳＦ−１の結合の阻害を示す。
【図３】ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６による可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒの特異的遮断を示す（「ｃｔｒｌ」は対照を意味し、「ｎｅｇ  ＳＮ」は陰性対照ハイブリドーマ上清を示す）。
【図４】ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の存在下でのヒト破骨細胞分化およびマトリックス−メタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）分泌の阻害を示す（「ｃｔｒｌ」は対照を意味し、「ＣＸＩＩＧ６  ＳＮ」はＣＸＩＩＧ６ハイブリドーマ上清を意味し、「ｎｅｇ  ＳＮ」は陰性対照ハイブリドーマ上清を示す）。
【図５】ｍＡｂ  ＣＸＩＩＧ６の、ＣＳＦ−１Ｒと相同性を有する他のチロシンキナーゼ受容体との非交差反応性を示す（「ＳＮ」はハイブリドーマ上清を意味する）。
【図６】ＣＸＩＩＧ６重鎖の核酸配列（配列番号１）および推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す。ヌクレオチド配列に付加されたクローニングのための制限部位を含むプライマー配列を下線で示す。制限部位を下線と斜体で示す。Ｖ−ドメインのアミノ酸配列を太字で強調する。
【図７】ＣＸＩＩＧ６軽鎖の核酸配列（配列番号３）および推定アミノ酸配列（配列番号４）を示す。ヌクレオチド配列に付加されたクローニングのための制限部位を含むプライマー配列を下線で示す。制限部位を下線と斜体で示す。Ｖ−ドメインのアミノ酸配列を太字で強調する。
【図８】プラスミド構築物ｐＴＧ１７７５３を示す。
【図９】プラスミド構築物ｐＴＧ１７７２７を示す。
【図１０】プラスミド構築物ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）を示す。
【図１１】プラスミド構築物ｐＴＧ１７８９５を示す。
【図１２】プラスミド構築物ｐＴＧ１７８１２を示す。
【図１３】プラスミド構築物ｐＴＧ１７８６８を示す。
【図１４】プラスミド構築物ｐＴＧ１７８６９を示す。
【図１５】ヒト化ＣＸＩＩＧ６軽鎖変異体を示す。
【図１６】ヒト化ＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１重鎖変異体を示す。
【図１７】組換えネズミＣＸＩＩＧ６およびキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１による可溶性ヒトＣＳＦ−１Ｒの特異的遮断を示す。
【図１８】組換えネズミＣＸＩＩＧ６およびキメラＣＸＩＩＧ６  ＩｇＧ１の存在下でのヒト破骨細胞分化およびマトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）分泌の阻害を示す。
【参照文献】
【０２０２】
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2015096522.tif 000007
2015096522.tif 000008
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2015096522.tif 000014
【図１】
2015096522.tif 000015
【図２】
2015096522.tif 000016
【図３】
2015096522.tif 000017
【図４】
2015096522.tif 000018
【図５】
2015096522.tif 000019
【図６】
2015096522.tif 000020
【図７】
2015096522.tif 000021
【図８】
2015096522.tif 000022
【図９】
2015096522.tif 000023
【図１０】
2015096522.tif 000024
【図１１】
2015096522.tif 000025
【図１２】
2015096522.tif 000026
【図１３】
2015096522.tif 000027
【図１４】
2015096522.tif 000028
【図１５】
2015096522.tif 000029
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年12月26日(2014.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸もしくは配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ、または、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸もしくは配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項２】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸または配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項３】
配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸または配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列の少なくとも５つの連続するアミノ酸を含んでなるＣＤＲの群から選択される、少なくとも２、３、４または５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ、または、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲからなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項５】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項６】
配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなるＣＤＲの群から選択される、少なくとも２、３、４または５個、いっそうより好ましくは６個のＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２もしくは１３のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号１４、１５もしくは１６のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項８】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８もしくは１９のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号２０、２１もしくは２２のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項９】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４もしくは２５のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または配列番号２６、２７もしくは２８のいずれか１つで示されるようなアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１０】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１２】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１３】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１４】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１５】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１６】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、可変領域を含んでなり、該可変領域が配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体。
【請求項１８】
可変領域が、１つ、より好ましくは２つ、いっそうより好ましくは３つ、確かに好ましくは４つのヒトＦＲを含んでなる、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
可変領域が配列番号６で示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１０〜１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
可変領域が配列番号６で示される、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
可変領域が配列番号９で示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１０〜１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
可変領域が配列番号９で示される、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、２つの可変領域を含んでなり、該可変領域が、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域；ならびに配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域からなる群から選択される、抗体。
【請求項２４】
配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域；ならびに配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる可変領域を含んでなる、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号２の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号２の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域；ならびに配列番号４の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、配列番号４の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲおよび配列番号４の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項２６】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１１、１２および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、配列番号１４、１５および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項２７】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号１７、１８および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２０、２１および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項２８】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２３、２４および２５で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２６、２７および２８で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項２９】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号６で示されるような重鎖可変領域と、配列番号９で示されるような軽鎖可変領域を含んでなる、抗体。
【請求項３０】
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、抗体フラグメント、ダイアボディーおよびＦｄを含んでなる群から選択される、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３１】
ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、配列番号２で示される２つの重鎖と、配列番号４で示される２つの軽鎖を含んでなる、抗体。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の抗体のアミノ酸配列と少なくとも８０、好ましくは少なくとも８５、より好ましくは少なくとも９０、いっそうより好ましくは少なくとも９８％相同なアミノ酸配列を有する抗体。
【請求項３３】
放射線増感剤、受容体および／または細胞傷害性薬剤とコンジュゲートされている、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３４】
請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体をコードする核酸配列。
【請求項３５】
請求項３４に記載の核酸配列を含んでなるベクター。
【請求項３６】
請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列または請求項３５に記載のベクターと薬学上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項３７】
前記組成物が対象化合物をさらに含んでなる、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
（ｉ）請求項３６に記載の医薬組成物、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列または請求項３５に記載のベクターと、（ｉｉ）対象化合物を含んでなる、パーツキット。
【請求項３９】
前記対象化合物が、治療化合物、好ましくは、癌治療薬または骨量低下の処置に有用な化合物である、請求項３７に記載の医薬組成物または請求項３８に記載のパーツキット。
【請求項４０】
破骨細胞活性の上昇に関連する疾患の処置のための、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキット。
【請求項４１】
癌の処置のための、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキット。
【請求項４２】
転移癌に罹患している患者において骨に対する転移癌を予防または治療するための、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキット。
【請求項４３】
薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列、請求項３５に記載のベクター、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキットの使用。
【請求項４４】
癌を有する患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列、請求項３５に記載のベクター、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキットの使用。
【請求項４５】
破骨細胞活性の上昇に関連する疾患を有する患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列、請求項３５に記載のベクター、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキットの使用。
【請求項４６】
炎症性腸疾患を有する患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列、請求項３５に記載のベクター、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキットの使用。
【請求項４７】
関節リウマチに罹患している患者を処置するための薬剤の製造における、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体、請求項３４に記載の核酸配列、請求項３５に記載のベクター、請求項３６、３７もしくは３９に記載の医薬組成物または請求項３８もしくは３９に記載のパーツキットの使用。
【外国語明細書】
2015096522000001.pdf