(57)【要約】【課題】静脈出血だけでなく、動脈出血のような圧力を伴う出血に対しても適用可能な止血材を提供する。【解決手段】前記止血材は、１つの酸型カルボキシメチルセルロース繊維層と２つのアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層とを少なくとも含み、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の順に積層されている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つの酸型カルボキシメチルセルロース繊維層と２つのアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層とを少なくとも含み、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の順に積層されていることを特徴とする、止血材。
【請求項２】
アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の三層構造からなる、請求項１に記載の止血材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の三層構造を有する止血材に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の止血材として、酸化セルロース製剤、ゼラチン製剤、微繊維性コラーゲン製剤、血液凝固蛋白質を含む微繊維性コラーゲン製剤の４種が知られ、医薬品或いは医療機器として既に使用されている。
酸化セルロース製剤は、主構造を構成しているポリ無水グルコン酸がヘモグロビンと著しい親和性をもち、これと塩を形成することによって止血作用を示す。この凝血促進作用は血液凝固機序に対する作用ではなく、寧ろ物理的効果と考えられている。即ち、血液の浸潤により酸化セルロース製剤が膨張し褐色若しくは黒色のゼラチン状の塊となって凝血物の形成を促進し、局部の止血補助剤として効果を発揮し、約２週間で患部から消失吸収されるものである。
微繊維性コラーゲン製剤は、牛真皮などから抽出した天然コラーゲンを主な構成物としており、血液との接触により血小板凝集の形成を介して止血を行う。
また、凝固蛋白質を含む微繊維性コラーゲン製剤は、微繊維性コラーゲンの作用の他、内在するトロンビンとフィブリノーゲンの反応により直接フィブリンを形成して止血する。
【０００３】
しかしながら、酸化セルロース製剤は血液凝固機序に直接作用しないため、凝血作用が弱く、更に処置した患部から完全に吸収されるのに約２週間を要するため、その間患部の炎症、癒着を引き起こす原因となる。
ゼラチン製剤は動物由来の材料であるため、狂牛病、ウィルス性肝炎をはじめとする様々な感染症の要因となる可能性が高い。
また、微繊維性コラーゲン製剤は完全に吸収されるのに１ヶ月以上要し、その間患部の炎症、癒着を起こす可能性が高い。更に材料が牛由来のため、狂牛病、未知のウィルスによる感染等の危険性を持っている。
すなわち、上記各止血材を用いた従来の方法による止血は、体内吸収性が悪く、炎症、癒着などを引き起こし易く、さらには未知の感染症に罹患する可能性がある危険性を有するものである。
【０００４】
また、特許文献１には、天然或いは再生セルロース繊維のセルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を、カルボキシメチル基の置換度（エーテル化度）が０．５〜１．０未満となるように部分的にカルボキシメチル化した可溶性創傷治癒止血セルロース繊維について記載されている。
上記可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、カルボキシメチル基がＮａ型であり、血液と接触することにより迅速に溶解し、著しい止血効果を示すが、血液との接触にてのみ止血効果を示すもの、すなわち、血液中の血小板及びフィブリノーゲンと相互作用して止血効果を示すものであり、大量の出血の創部では血小板やフィブリノーゲンとの接触が不充分となるため、止血効果は低くなる。
【０００５】
更に、特許文献２には、セルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を置換度（エーテル化度）が０．５〜１．０未満となるように部分的にカルボキシメチル化した天然或いは再生セルロースに、凝固蛋白質を付与してなる可溶性創傷治癒止血セルロース繊維について記載している。
上記凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、血液と接触することにより迅速に溶解し、著しい止血効果を示し、更にはセルロース繊維に付与されている凝固蛋白質、すなわち、トロンビン、フィブリノーゲン及び血液凝固第１３因子の作用により更に著しい止血効果を発揮する。しかしながら、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、カルボキシメチル基がＮａ型であり、大量の血液と接触すると迅速に溶解し、物理的に脆弱、すなわち、動脈出血のような圧力を伴う出血を止血するに難点がある。
【０００６】
ところで、本発明の止血材とは技術分野が異なる「癒着防止材」に関する発明について、特許文献３には、「酸型カルボキシメチルセルロースからなる構造体（繊維シート、フィルム、又はスポンジ）を、外側からアルカリ処理し、前記アルカリ処理を、酸型カルボキシメチルセルロースが全てアルカリ金属型カルボキシメチルセルロースに変換される前に終了することを特徴とする、カルボキシメチルセルロース構造体の製造方法」（請求項９）と、「前記カルボキシメチルセルロース構造体を含むことを特徴とする癒着防止材」（請求項７）が記載されている。
【０００７】
カルボキシメチルセルロース構造体がフィルムである場合には、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース層−酸型カルボキシメチルセルロース層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース層の三層構造をとることが予想されるが、本発明では各層が繊維層である点、そして、本発明の用途が止血材である点で、両者は相違する。特許文献３に記載のフィルムを止血材として使用した場合、フィルム層は繊維層よりも含水率が高いため、止血作用で最も重要なイベントである初期の吸水効率が低くなる欠点がある。従って、特許文献３に記載のフィルムを止血材として使用したとしても、止血効果は低くなる。
【０００８】
また、カルボキシメチルセルロース構造体が繊維シートである場合には、特許文献３の段落［００３１］に「ＣＭＣからなる構造体がフィルムである場合、その表面はフィルム表面を意味するが、ＣＭＣからなる構造体が繊維シート（例えば、編物、織布、不織布）である場合、その表面は、見掛けのシート表面ではなく、各構成繊維の繊維表面を意味する。また、外側部分及び内側部分についても、フィルムである場合は、そのまま、フィルムの外側部分及び内側部分を意味するが、繊維シートの場合は、繊維シートとしての外側部分及び内側部分を意味するのではなく、各構成繊維における外側部分及び内側部分を意味する。」と記載されていることから明らかなとおり、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の三層構造をとるものではなく（繊維の横断面を観察すると、繊維の中心部分が酸型カルボキシメチルセルロースのままで、繊維表面に近い外周部分がアルカリ金属型カルボキシメチルセルロースに変換された構造をとることが予想される）、本発明とは構造の点で全く異なる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特許第３０５７４４６号明細書
【特許文献２】特許第３５７６０６３号明細書
【特許文献３】ＷＯ２０１１／１２１８５８号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明の課題は、従来技術の前記の欠点を解消し、静脈出血だけでなく、動脈出血のような圧力を伴う出血に対しても適用可能な止血材を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、
［１］１つの酸型カルボキシメチルセルロース繊維層と２つのアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層とを少なくとも含み、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の順に積層されていることを特徴とする、止血材、
［２］アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の三層構造からなる、［１］の止血材
に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の止血材によれば、静脈出血だけでなく、動脈出血のような圧力を伴う出血に対しても止血することができる。また、本発明の止血材は、癒着防止作用を有する酸型カルボキシメチルセルロース繊維層を含むため、癒着防止効果も備えており、止血完了後、術後に癒着が起こる可能性がある場合でも、別途、癒着防止材を用意する必要がない。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の止血材は、少なくとも１つの酸型カルボキシメチルセルロース繊維層と、少なくとも２つのアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層とを含み、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の順に積層されている限り、所望に応じて、それ以外のカルボキシメチルセルロース層、例えば、非繊維形状（例えば、フィルム又はスポンジ）の酸型カルボキシメチルセルロース層、任意形状のアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース層、酸型とアルカリ金属型とが混在したカルボキシメチルセルロース層や、カルボキシメチルセルロース以外の材料からなる繊維層または非繊維層を含むことができるが、その大部分（例えば、６０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上）が酸型カルボキシメチルセルロース繊維層又はアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層であることが好ましく、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の三層構造であることがより好ましい。
【００１４】
本明細書において、「カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）」とは、特に断らない限り、水に難溶な酸型カルボキシメチルセルロース（狭義のカルボキシメチルセルロース）と、水に易溶なアルカリ金属型カルボキシメチルセルロースとを包含する意味で使用する。
酸型カルボキシメチルセルロースは、カルボキシメチル基が実質的に全て酸型であり、水難溶性である。一方、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロースは、ｐＨ７．４でカルボキシメチル基が解離しており、陰イオンの状態にあるため、水可溶性である。アルカリ金属型カルボキシメチルセルロースとしては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカリウムなどを挙げることができる。ここで、「実質的に全て」とは、好ましくはカルボキシメチル基の７０％以上が酸型であること、より好ましくはカルボキシメチル基の８０％以上が酸型であること、さらに好ましくは９０％以上が酸型であることを意味する。
【００１５】
酸型カルボキシメチルセルロース又はアルカリ金属型カルボキシメチルセルロースは、カルボキシメチル基が、実質的に酸型又はアルカリ金属型のいずれか一方の状態にある状態をいうが、酸型又はアルカリ金属型のいずれであるかは、例えば、逆滴定法（特開平１１−２４６６０１号公報）により分析することができる。
具体的には、分析対象であるカルボキシメチルセルロース繊維１ｇを細かく切り、すり合わせ三角フラスコ（５０ｍＬ）中に入れ、硝酸メタノール溶液２５ｍＬ（メタノール１００ｍＬと硝酸１０ｍＬの混合液）を加えて１時間振とうし、完全な酸型の試料とする。次いで、ガラスフィルター（Ｇ３）で吸引ろ過することにより試料をトラップし、８００ｇ／Ｌメタノール溶液（無水メタノール１００ｍＬと水２０ｍＬの混合液）１２０ｍＬ（４０ｍＬ×３回）で試料を洗浄し、最後に無水メタノール２５ｍＬで洗浄後、吸引ろ過し、フィルター上の試料を１０５℃で２時間乾燥する。さらに、完全な酸型となった試料０．２ｇを精密に秤量し、すり合わせ三角フラスコ（１００ｍＬ）に入れ、８００ｇ／Ｌメタノール８ｍＬおよび０．１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム標準液２０ｍＬを加え、２５℃で３０分間振とうし、酸型の試料をナトリウム型にする。そして、余剰の水酸化ナトリウム量を規定度既知の０．０５ｍｏｌ／Ｌの硫酸でフェノールフタレインを指示薬として滴定することにより求め、それより全エーテル化度（すなわち、アルカリ金属型化度）を求める。
【００１６】
一方、これとは別に、カルボキシメチルセルロース繊維１ｇを細かく切り、ガラスフィルター（Ｇ３）に入れる。８００ｇ／Ｌメタノール溶液（無水メタノール１００ｍＬと水２０ｍＬの混合液）１２０ｍＬ（４０ｍＬ×３回）で試料を洗浄し、最後に無水メタノール２５ｍＬで洗浄後、吸引ろ過し、フィルター上の試料を１０５℃で２時間乾燥する。さらに、試料０．２ｇを精密に秤量し、すり合わせ三角フラスコ（１００ｍＬ）に入れ、８００ｇ／Ｌメタノール８ｍＬおよび０．１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム標準液２０ｍＬを加え、２５℃で３０分間振とうし、試料をナトリウム型にする。そして、余剰の水酸化ナトリウム量を規定度既知の０．０５ｍｏｌ／Ｌの硫酸でフェノールフタレインを指示薬として滴定することにより求め、それより酸型化度を求める。
全エーテル化度に対する酸型化度の割合を求めることで、酸型又はアルカリ金属型のいずれであるか、あるいは、カルボキシメチル基がどの程度、酸型化されているかを求めることができる。
【００１７】
本発明で用いる各繊維層を構成する酸型カルボキシメチルセルロース及びアルカリ金属型カルボキシメチルセルロースの置換度（エーテル化度）は、例えば、０．５〜１．５、好ましくは０．５〜１、より好ましくは０．６〜０．９である。その分子量（プルランを指標とした場合）は、例えば、２万〜２００万Ｄａ、好ましくは２万〜１００万Ｄａ、より好ましくは２万〜５０万Ｄａである。
【００１８】
本発明で用いる各繊維層は、繊維シート（布帛）形状である限り、特に限定されるものではないが、例えば、編物、織布、不織布などを挙げることができる。
【００１９】
酸型カルボキシメチルセルロース繊維の平均繊維径は、止血材として充分な強度を有し、所望により血液凝固蛋白質を付与した場合にその血液凝固作用が充分に発揮できる限り、特に限定されるものではないが、下限として、５μｍ以上であることが好ましく、１０μｍ以上であることが好ましい。上限としては、３０μｍ以下であることが好ましく、２５μｍ以下であることがより好ましい。
【００２０】
酸型カルボキシメチルセルロース繊維層の目付は１０〜３００ｇ／ｍ２であることが好ましく、１０〜４０ｇ／ｍ２であることがより好ましい。
特に、酸型カルボキシメチルセルロース繊維層が織布である場合には、その目付は、４０〜３００ｇ／ｍ２であることが好ましく、８０〜２５０ｇ／ｍ２であることがより好ましい。酸型カルボキシメチルセルロース繊維層が不織布である場合には、その目付は、１０〜１５０ｇ／ｍ２であることが好ましく、１５〜８０ｇ／ｍ２であることがより好ましい。
【００２１】
アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維の平均繊維径は、迅速に血液中の水分を吸収してコロイドを形成して、充分な止血作用が発揮できる限り、特に限定されるものではないが、下限として、５μｍ以上であることが好ましく、１０μｍ以上であることが好ましい。上限としては、３０μｍ以下であることが好ましく、２５μｍ以下であることがより好ましい。
【００２２】
アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の目付は１０〜３００ｇ／ｍ２であることが好ましく、１０〜４０ｇ／ｍ２であることがより好ましい。
特に、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層が織布である場合には、その目付は、４０〜３００ｇ／ｍ２であることが好ましく、８０〜２５０ｇ／ｍ２であることがより好ましい。アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層が不織布である場合には、その目付は、１０〜１５０ｇ／ｍ２であることが好ましく、１５〜８０ｇ／ｍ２であることがより好ましい。
【００２３】
本発明の止血材では、１つの酸型カルボキシメチルセルロース繊維層と、２つのアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層とを、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層−酸型カルボキシメチルセルロース繊維層−アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層の順に積層する。それ以外のカルボキシメチルセルロース層、あるいは、カルボキシメチルセルロース以外の材料からなる層を更に含む場合には、前記三層構造の外側、あるいは、前記三層構造の任意の層間のいずれにも配置することができるが、迅速に血液中の水分と接触できるように、２つのアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層をできるだけ外側になるように（より好ましくは最外層として）配置することが好ましい。
【００２４】
本発明の止血材は、易溶性で、血液中の水分を吸収してコロイドを作るアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層を、三層構造の外層として含むため、血液と接触することにより迅速に溶解し、著しい止血効果を示す。また、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維と比較して難溶性で、強度を有する酸型カルボキシメチルセルロース繊維層を、三層構造の内層として含むため、外層のアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層が溶解しても、静脈出血だけでなく、動脈出血のような圧力を伴う出血に対しても止血することができる。
【００２５】
本発明の止血材は、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層と酸型カルボキシメチルセルロース繊維層とを別々に調製し、それぞれを貼り付けることにより製造することができる。
【００２６】
本発明で用いるアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム繊維層は、以下の製造方法に限定されるものではないが、例えば、天然或いは再生セルロース繊維からなる繊維シートを水酸化ナトリウム水溶液で処理後、モノクロロ酢酸溶液と反応させ、所望の置換度（エーテル化度）となるようにカルボキシメチル化することにより得ることができる。
【００２７】
本発明で用いる繊維状の酸型カルボキシメチルセルロース繊維層は、以下の製造方法に限定されるものではないが、例えば、カルボキシメチル基の全てがアルカリ金属型（好ましくはＮａ型）であるアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維からなる繊維シートを用意し、その構造を維持した状態で充分に酸処理を行うことにより調製することができる。
酸処理に用いる強酸としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸などを用いることができる。酸濃度としては、例えば、０．０１〜４．８規定、好ましくは０．１〜３．６規定、より好ましくは０．５〜２．４規定であることができる。
アルカリ金属型カルボキシメチルセルロースは、水に易溶であるため、酸処理を行う際の溶媒として、低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール）を主体とするアルコール水溶液（アルコール濃度として、例えば、６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上）を用いることが好ましい。また、水と混ざり合う性質を持つ有機溶媒（例えば、アセトン、アセトニトリル）を用いても良い。
【００２８】
カルボキシメチルセルロース繊維層同士の貼り付けは、特に限定されるものではないが、例えば、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維が溶解しないように、アルコール水溶液（例えば、エタノール水溶液）を各繊維層の一方または両方の接触面に噴霧または塗布し、熱溶着により貼り付けることができる。
【００２９】
本発明の止血材は、止血作用を有する各種の血液凝固蛋白質、例えば、トロンビン、フィブリノーゲン、血液凝固第XIII因子、血液凝固第VIII因子、血液凝固第IX因子、α２−プラスミンインヒビター、ヘモコアグラーゼ、イプシロンアミノカプロン酸、トラネキサム酸、アプロチニン、カルシウム、又はリジン等を含むことができる。これらの血液凝固蛋白質は、止血材を構成する任意の層、例えば、酸型カルボキシメチルセルロース繊維層、アルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層、それ以外のカルボキシメチルセルロース層、及び／又は、カルボキシメチルセルロース以外の材料からなる層に付与することができる。
【００３０】
例えば、トロンビンを酸型カルボキシメチルセルロース繊維層及び／又はアルカリ金属型カルボキシメチルセルロース繊維層に付与する場合、その方法は、止血材として使用した際にトロンビンの血液凝固作用が充分に発揮できるように付与されている限り、特に限定されるものではないが、例えば、物理的付与、例えば、塗布、噴霧、浸漬により、あるいは、化学的結合により、付与することができる。
【００３１】
トロンビンの物理的付与は、適当な溶媒（例えば、水、生理食塩水、緩衝液）に溶解したトロンビン溶液を所望の繊維層に対して、例えば、塗布、噴霧、浸漬することにより行うことができる。トロンビン溶液で処理した後のカルボキシメチルセルロース繊維層は、凍結乾燥等により乾燥させて用いることもできる。なお、トロンビン溶液には、アルブミン、ポリエチレングリコール、アルギニン、ヒアルロン酸ナトリウム、グリセリン、マンニトール、塩化カルシウムやコラーゲン等を安定化剤や添加剤として加えても良い。
【００３２】
トロンビンの化学的結合としては、例えば、カルボジイミド試薬で処理したカルボキシメチルセルロース繊維層に、トロンビンを含む溶液を加えて反応することにより行うことができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００３４】
《実施例１：本発明止血材の調製》
（１）ナトリウム型カルボキシメチルセルロース及び酸型カルボキシメチルセルロース不織布の作製
レーヨン製不織布（サイズ２０ｃｍ×１００ｃｍ、目付１９ｇ／ｍ２、厚さ０．２６ｍｍ、１０枚）３８ｇを反応容器に入れ、水酸化ナトリウム含有エタノール水溶液（２．９ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム、１１ｍｏｌ／Ｌエタノール）２．７６Ｌを添加し、室温で１７時間インキュベートした。更に、モノクロロ酢酸含有エタノール水溶液（３．４ｍｏｌ／Ｌモノクロロ酢酸、１３．４ｍｏｌ／Ｌエタノール）１．６５Ｌを添加し、５０℃で６時間インキュベートした。７０％メタノール水溶液、８０％メタノール水溶液で順次、洗浄後、塩酸含有メタノール水溶液（１．２ｍｏｌ／Ｌ塩酸、９０％メタノール）でｐＨ６．０〜８．０に中和した。中和後、８０％メタノール水溶液、１００％メタノールで順次、洗浄後、乾燥し、カルボキシルメチル基がＮａ型のカルボキシメチルセルロース不織布を得た。
得られたＮａ型カルボキシメチルセルロース不織布の内、３枚を硝酸含有メタノール水溶液（１．３ｍｏｌ／Ｌ硝酸、９０％メタノール）４Ｌ中で室温にて２時間振とうすることにより、カルボキシルメチル基が全てＨ型（酸化型）である酸型カルボキシメチルセルロース不織布に変換した。８０％メタノール水溶液、１００％メタノールで順次、洗浄後、乾燥した。
【００３５】
（２）三層構造からなる本発明止血材の調製
実施例１（１）で作製したＮａ型カルボキシメチルセルロース不織布（２０ｃｍ×１００ｃｍ）の上に６０％エタノールで充分に湿らせた酸型カルボキシメチルセルロース（２０ｃｍ×１００ｃｍ）を載せた。さらに、もう１枚のＮａ型カルボキシメチルセルロース（２０ｃｍ×１００ｃｍ）を二層の上に載せ、Ｎａ型／酸型／Ｎａ型の三層構造とした後、すばやくアイロン掛け（温度１８０度乃至２１０度、ＳＡＮＹＯ製スチームアイロンＡ−８２）し、水分とエタノールを飛ばして三層構造の本発明止血材を作製した。なお、５０％エタノールでは水分が速やかに飛ばないため本発明止血材は硬くなり、７０％エタノールでは水分不足で層間の接着が弱くなった。５５％〜６５％が好ましく、６０％エタノールが最も好ましい条件と思われる。
【００３６】
《実施例２：本発明止血材の動脈出血への有効性の評価》
本実施例では比較用の止血材として、（１）ガーゼ、（２）特許第３５７６０６３号の明細書の実施例に記載の手順に従って調製した、凝固蛋白質を含む可溶性セルロースからなる止血材を使用した。本発明止血材として、（３）実施例１（２）で調製した三層構造の止血材を使用した。
体重約４０ｋｇのブタ（６頭）を仰向けにし、全身麻酔下で、両側の頚動脈及び両側の大腿動脈（全４箇所）を４ｃｍ露出させた。１８Ｇのショートベベル注射針にて動脈を穿刺し、ただちに、１．５ｃｍ角に切った止血材を貼付し、スポンジで軽く１分間圧迫し、５分間止血状態を観察した。５分間止血されていた状態を「Ａ」、２分間だけ止血できた状態を「Ｂ」、最初から止血できない状態を「Ｆ」とした。止血実験中の全身血圧も記録した（穿刺の１分前から３０秒毎に穿刺後５分まで）。
止血操作の順序は、止血材（１）、（２）、（３）の順序で、止血部位は左頚動脈→右頚動脈→右大腿動脈→左大腿動脈の順序で実施した。即ち、１頭目は左頚動脈を止血材（１）、右頚動脈を止血材（２）、右大腿動脈を止血材（３）、左大腿動脈を止血材（１）で止血した。
【００３７】
結果を表１に示す。止血率（％）は次式：
｛（Ａ評価の穿刺部位数）／（全穿刺部位数）｝×１００
で計算した。
明らかに、本発明止血材（３）が最も有効であった。この結果は、三層構造における内層の物理的に強い酸化型カルボキシメチルセルロースが、外層の止血作用のあるＮａ型カルボキシメチルセルロースの支持層となって動脈出血の阻止に有効性を発揮していると思われる。
【００３８】
【表１】
2015096081.tif 000002
【００３９】
《実施例３：肝切除部位の止血に対する本発明止血材の有効性の評価》
止血材としては実施例２と同じ止血材（１）〜（３）を使用した。
体重約４０ｋｇのブタ（全１２頭）を全身麻酔下で正中切開し、開腹し、肝臓左内側葉の尾側の適当な箇所をＶ字切開し（切離部分の重量は３〜４ｇを目安とした）、出血している血管の止血処理を行うことなく、止血材を貼付し、スポンジで１分間圧迫後、５分後の止血効果を評価した。５分後に止血できた場合を「Ａ」、５分後に止血できなかった場合を「Ｆ」とした。
肝臓左内側葉の切離部位は１頭当たり３箇所とし、止血材（１）〜（３）の貼付部位は１頭毎にローテションして止血効果を評価した。
【００４０】
結果を表２に示す。止血率（％）は実施例２と同様に、次式：
｛（Ａ評価であった切離部位数）／（全切離部位数）｝×１００
で計算した。
明らかに、本発明止血材（３）が最も有効であった。この結果は、三層構造における内層の物理的に強い酸化型カルボキシメチルセルロースが、外層の止血作用のあるＮａ型カルボキシメチルセルロースの支持層となって肝臓切離部位からの動脈出血及び静脈出血の阻止に有効性を発揮していると思われる。
【００４１】
【表２】
2015096081.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明の止血材は、静脈出血だけでなく、動脈出血のような圧力を伴う出血に対しても適用可能な止血材である。また、癒着防止効果も備えており、癒着防止材としても使用可能である。